(57)【要約】  本発明は可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物に関する。また、前記組成物の調製方法、並びにその用途に関するもので、ドライアイ症候群や関節疾患又は関節障害の予防及び治療に有用な組成物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物の調製方法であって、前記組成物は６〜７．５からなるｐＨにおいて、濁りがなく粘性が高い溶液であり、前記方法は
（１）平均分子量が約１０〜約２５０ｋＤａの範囲で、且つ脱アセチル化度が６０％を        越えるキトサンを、カルボキシル基を含む弱酸のカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）        と前記キトサンのアミノ基（−ＮＨ２）のモル比が、約１：１又は１：１．０５        のような１：０．９〜１：１．１からなる範囲で、前記弱酸の水溶液へ溶解する        工程と、
（２）グリセロールを添加する工程と、
（３）弱塩基の水溶液の添加によって、ｐＨ値を６〜７．５からなるｐＨに調整する工        程と、
（４）水蒸気殺菌の工程と、を含み、
これにより、６〜７．５からなるｐＨにおいて、濁りがなく粘性が高い溶液である可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌組成物を形成することを特徴とする、方法。
【請求項２】
前記弱酸が乳酸である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記弱塩基がコハク酸ソーダ及びソルビン酸カリウムから選ばれる請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
− 工程（１）において、前記キトサンが０．０５〜３％（ｗ/ｗ）からなる濃度で存    在し、前記弱酸が０．１２〜０．２２％（ｗ/ｗ）からなる濃度で存在する乳酸であ    り、
− 工程（２）において、前記グリセロールが０．４〜１％（ｗ/ｗ）からなる濃度で存在し、
− 工程（３）において、前記弱塩基が１．０〜１．７％（ｗ/ｗ）からなる濃度で存    在するコハク酸ソーダである、
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
工程（１）の前記キトサンが約１５０〜約１８０ ｋＤａの範囲の平均分子量（ＭＷ）と、６０〜７５モル％からなる脱アセチル化度（ＤＤ）と、を有する請求項１乃至４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
工程（１）の前記キトサンがアミン型のキトサンである請求項１乃至５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
工程（１）の前記キトサンが菌類由来、特にはＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ 由来のキトサンである請求項１乃至６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
キトサンが、工程（１）において、溶解されたプルランを含む弱酸の水溶液中に溶解される請求項１乃至７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれか１項に記載の方法によって得ることができる溶解されたキトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物。
【請求項１０】
前記キトサンが約１５０〜約１８０ ｋＤａの範囲の平均分子量（ＭＷ）と、６０〜７５モル％からなる脱アセチル化度（ＤＤ）と、を有する、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記キトサンがＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓのような菌類由来である請求項９又は１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記キトサンがアミン型で存在する請求項９乃至１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が１０〜５００ ｍＰａ.ｓからなる粘度を有する請求項９乃至１２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記組成物が１５０〜３５０  ｍＯｓｍ／ｋｇからなるモル浸透圧濃度を有する請求項９乃至１３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記組成物が、非ニュートンレオロジー挙動、抗菌活性及び／又は抗リパーゼ活性を示す請求項９乃至１４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１６】
前記組成物がプルランを含む請求項９乃至１５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
請求項９乃至１６のいずれか１項に記載の組成物と、少なくとも１種類の医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む医薬組成物。
【請求項１８】
カルボキシル基を含む弱酸とグリセロール中に溶解された非水溶性キトサンとを含み、前記キトサンが約１５０〜約１８０ ｋＤａの範囲の平均分子量と、６０〜７５モル％からなる脱アセチル化度（ＤＤ）と、を有する、加熱殺菌医薬水性組成物。
【請求項１９】
前記弱酸が乳酸であり、グリセロールが全組成物基準で約０．２〜約１％（ｗ/ｗ）の範囲の濃度で存在し、前記組成物が眼科用組成物である請求項１８に記載の水性組成物。
【請求項２０】
前記キトサンがアミン型で存在し、且つＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓのような菌類由来である請求項１８又は１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が、１０〜５００ ｍＰａ.ｓからなる粘度、１５０〜３５０  ｍＯｓｍ／ｋｇからなるモル浸透圧濃度を有し、非ニュートンレオロジー挙動、抗菌活性及び／又は抗リパーゼ活性を示す請求項１６乃至２０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記キトサンが約０．０５〜約３％（ｗ/ｗ）からなる濃度で存在する請求項１８乃至２１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物がコハク酸ソーダ及びソルビン酸カリウムから選択される弱塩基を更に含む請求項１８乃至２２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２４】
前記組成物が、約０．１２〜約０．２２％（ｗ/ｗ）からなる濃度の乳酸と、約１．０〜約１．７％（ｗ/ｗ）からなる濃度のコハク酸ソーダと、を含む請求項１８乃至２３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２５】
更にプルランを含む請求項１８乃至２４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２６】
ドライアイ症候群、特には眼瞼炎を伴うドライアイ、環境状態又はコンタクトレンズによって引き起こされる目の痒み、乾性角結膜炎、目の表面又は関連する目の前端構造物のシェーグレン症候群細菌性感染症の予防及び／又は治療用途のための請求項１５乃至２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２７】
薬剤としての用途のための請求項９乃至２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記組成物が関節内組成物である請求項９乃至２５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２９】
変形性関節症及び乾癬性関節炎から選択される関節疾患又は関節障害の予防及び／又は治療の用途のための請求項９乃至２５のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、加熱殺菌後にｐＨが中性のｐＨに近づく、濁りがなく粘性が高くかつ安定な溶液を形成するキトサンを含む新規な組成物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
キトサンは、天然の生体高分子物質であるポリ（Ｎ―アセチル―Ｄ―グルコサミン）の名前でも知られているキチンの、アルカリによる部分的又は実質的に脱Ｎ―アセチル化されて得られるキチン誘導体として知られている。
キトサンは、フリーのアミノ基（―ＮＨ２）とアセチル基を有しており、Ｎ―アセチル―Ｄ―グルコサミン単位とＤ―グルコサミン単位の割合で特徴づけることができ、それは、全部がアセチル化されたポリマーの脱アセチル化度（ＤＤ）によって表される。
溶解度や粘度等の重要な性質に影響を与えるキトサンのパラメータは、脱アセチル化されたモノマーのパーセントで表されると理解される脱アセチル化度（ＤＤ）と平均分子量（ＭＷ）である。
【０００３】
キトサンは、生分解性、生体適合性、生体接着性、清菌性で知られており、更には、創傷治癒、薬物吸収、組織再生を促進させるものとしても知られている。
このような固有の性質により、キトサンは例えば眼科用途、再生医療、創傷治癒等、多くの化粧品や医薬用途に使用されている。
従って、キトサンの効果及びその多岐にわたる用途に鑑みて、キトサンを含む無菌で安定な組成物を製造する多くの試みがなされてきた。
【０００４】
特許文献１には、多糖を実質的に分解せずに非水溶性キトサンを含む多糖組成物を殺菌する方法が開示されている。本法においては、非水溶性キトサンをまず水中に分散した後に、高圧水蒸気によって殺菌して、約７以上のｐＨのキトサン懸濁液を形成する。この懸濁液の懸濁キトサン粒子は、最終的に無菌の酸の中に溶解されて最終ｐＨに下げ、殺菌されたキトサン液となる。
【０００５】
非特許文献１には、塩酸とグリセロールに溶解したキトサンのフリー塩基を含む、オートクレーブで処理した後の最終ｐＨが約５．２５である組成物が開示されている。この溶液にグリセロールフォスフェートを添加することによって、ｐＨを約７．１４まで上げて、濁った溶液を得る（沈殿が生成する）。
【０００６】
このようなキトサンを含む無菌組成物の開発にもかかわらず、既知のキトサン組成物の性質を更に向上させること、特に加熱殺菌の後に、安定で、濁りがなく粘性が高く、医薬として安定な中性のｐＨ付近のキトサンを含む水性製剤の提供が引き続き求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】ＷＯ ９７/００７１３９
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｊａｒｒｙら, ２００２, Ｃｈｅｍ. Ｐｈａｒｍ. Ｂｕｌｌ., ５０（１０）: １３３５−１３４０
【発明の概要】
【０００９】
本発明は、加熱殺菌後において中性のｐＨに近いｐＨにおいて濁りがなく粘性が高い溶液を形成するキトサンとグリセロールを含む加熱殺菌組成物の調製方法、及び前記方法によって得られる組成物へ向けられている。特に、本発明は、本発明の方法による非水溶性キトサン（アミンキトサン）の加熱殺菌前の溶解が、凝集物の生成を回避し、眼科用途に適切な濁りのない溶液の調製を可能とした予期せぬ発見と関連する。本発明の特別な観点によれば、加熱殺菌前の非水溶性キトサン（アミンキトサン）を含む溶液における凝集物の生成を回避することは、既に凝集物を生成した後の加熱殺菌が、かかる凝集物の除去の達成を困難にし、手間とコストの上昇をもたらすことに鑑みて、効果的である。本発明の第１の観点は、可溶化キトサンとグリセロールを含む加熱殺菌水性組成物の調製方法に関するもので、前記組成物は６〜７．５からなるｐＨ、特に６〜７からなるｐＨにおいて、濁りがなく粘性が高い溶液であり、前記方法は、
（１）平均分子量が１０〜２５０ kＤaの範囲で、且つ脱アセチル化度が６０％を越えるキトサンを、カルボキシル基を含む弱酸の水溶液中に溶解する工程と、
（２）グリセロールを添加する工程と、
（３）弱塩基の水溶液の添加によってｐＨ値を６〜７．５からなるｐＨに調整する工程と、
（４）水蒸気殺菌をする工程と、を含み、
これにより、６〜７．５からなるｐＨにおいて、濁りがなく粘性が高い溶液である可溶化キトサンとグリセロールを含む加熱殺菌組成物を形成することを特徴とする。
【００１０】
本発明の第２の観点は、ここに記載される調製方法で得られた可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物に関するもので、特には、前記加熱殺菌水性組成物と、少なくとも一種類の医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む医薬組成物に関する。
【００１１】
本発明の第３の観点は、可溶化キトサンとグリセロールからなり、６〜７．５からなるｐＨを有し、かつ濁りがなく粘性が高い溶液を形成する加熱殺菌水性組成物を提供する。
【００１２】
第４の観点において、ここに記載される組成物は、薬剤として、特には眼科用組成物として使用される。
【００１３】
本発明の第５の観点は、ドライアイ症候群、目の表面又は関連する目の前端構造物のシェーグレン（Ｓｊｏｇｒｅｎ‘ｓ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）症候群細菌性感染症の治療への用途に関する。
【００１４】
本発明の第６の観点は、関節疾患の治療への適用のための、ここに記載される組成物を提供する。
【００１５】
本発明の第７の観点は、ドライアイ症候群、目の表面又は関連する目の前端構造物のシェーグレン症候群細菌性感染症の薬剤の製造のための、ここに記載される組成物の用途に関する。
【００１６】
本発明の第８の観点は、関節疾患の治療用薬剤の製造のための、ここに記載される組成物の用途を提供する。
【００１７】
更に、本発明の第９の観点は、キトサンに敏感な細菌によって引き起こされる目の表面又は関連する前端構造物のシェーグレン症候群細菌性感染症及び／又は関節疾患の予防方法及び／又は治療方法に関連するもので、ここに記載される組成物を、治療上、必要に応じた有効量投与することを含む。
【００１８】
本発明の特徴及び効果は、以下の詳細な記載から明確になるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】実施例２による０．５％キトサンとグリセロールとを含む組成物の加熱殺菌前（１）と加熱殺菌後（２）のレオロジープロファイルである。
【図２】実施例６による１％キトサンとグリセロールを含む組成物の加熱殺菌前（１）と加熱殺菌後（２）のレオロジープロファイルである。
【図３】実施例２による０．５％キトサンとグリセロールとを含む本発明の製剤における、ムチン存在下（３）と、ムチン存在下（２）及びムチン溶液存在下（１）のヒアルロン酸溶液との比較である、実施例８に記載の粒子径（Ａ）及び濁度（Ｂ）測定に基づく本発明の組成物の粘膜付着性である。
【図４】実施例７による２％キトサンとグリセロールとを含む組成物の加熱殺菌前（１）と加熱殺菌後（２）のレオロジープロファイルである。
【図５】実施例１０による２％キトサンとグリセロールとを含む組成物の加熱殺菌前（１）と加熱殺菌後（２）のレオロジープロファイルである。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
キトサンは、ランダムに分布するβ―（１−４）結合のＤ−グルコサミン（脱アセチル単位）とＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン（アセチル単位）から構成される直鎖状の多糖である。キトサンは、貝類や菌類に見られる天然の生体高分子物質であるポリ（Ｎ―アセチル―Ｄ―グルコサミン）の名前でも知られているキチンの、部分的又は実質的な脱アセチル化、典型的にはエビやその他の甲殻貝類、又は菌類の壁の苛性ソーダによる処理によって得ることができる。キトサンは、Ｍｕｃｏｒ属、Ａｂｓｉｄｉａ属、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ属のような菌類の細胞壁に存在する天然のキトサンからの抽出によっても得ることができる。特別な観点によれば、本発明のキトサンは菌類由来である。キトサンサンプルに適用される「脱アセチル化度（ＤＤ）」とは、キトサンサンプルの高分子鎖の中に存在するＮ―アセチル―Ｄ―グルコサミン単位とＤ―グルコサミン単位の平均含量の全量に対するＤ―グルコサミン単位の相対的平均含量を意味する。
【００２１】
キトサンの脱アセチル化度（ＤＤ）の決定方法として、いくつかの方法が適用できる。例えば、ニンヒドリン法  （Ｃｕｒｏｔｔｏ、Ａｒｏｓ、１９９３, Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ, ２１１ （２）： ２４０-２４１）、赤外線分光法（ＩＲ）（Ｂｒｕｇｎｅｒｏｔｔｏら、２００１, Ｐｏｌｙｍｅｒ, ４２ （８）： ３５６９-３５８０）、線形電位差滴定法（ＬＰＴ）（Ｂａｌaｚｓ、Ｓｉｐｏｓ、２００７, Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, ３４２ （１）: １２４-１３０）、円扁光二色性分光法 （Ｄｏｍａｒｄ、１９８７, Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ, ９ （６）： ３３３-３３６）、臭化水素滴定法 （Ｂａｘｔｅｒら、１９９２, Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ, １４ （３）： １６６-１６９）、ＧＰＣ法 （Ａｉｂａ、１９８６, Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ, ８ （３）： １７３-１７６）、紫外線（ＵＶ）分光法 （Ｔａｎら、１９９８, Ｔａｌａｎｔａ, ４５ （４）： ７１３-７１９）、核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）（Ｚｈａｎｇら、２００５, Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ, ３４０ （１１）： １９１４-１９１７）、酵素的測定法 （Ｎａｎｊｏら、１９９１, Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ, １９３ （２）： １６４-１６７）、及び元素分析法 （Ｇｕｐｔａ、Ｊａｂｒａｉｌ、２００６, ＣａｒｂｏｈｙＤｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ, ６６ （１）: ４３-５４）等である。
【００２２】
「アセチル化度（ＤＡ）」とは、キトサンサンプルの高分子鎖の中に存在するＮ―アセチル―Ｄ―グルコサミン単位及びＤ―グルコサミン単位の平均含量の全量に対するＮ―アセチル―Ｄ―グルコサミン単位の相対的平均含量を指す。
「弱」酸とは、当業者においてよく知られているもので、溶液中で部分的にのみイオン化されている酸を意味する。本発明による弱酸は、乳酸、グルコン酸、コハク酸、ソルビン酸、及びクエン酸等を含む。更に本発明による弱酸は乳分泌酸を含む。
「弱」塩基とは、当業者においてよく知られているもので、溶液中で部分的にのみイオン化されている塩基を意味する。本発明による弱塩基は、コハク酸ソーダ、乳酸ソーダ、ソルビン酸カリウム、及びグルコン酸カリウム等を含む。
本発明による「水蒸気殺菌」とは、ヨーロッパ薬局方ガイドラインに準拠する条件による殺菌を意味し、例えば前記ガイドラインによるオートクレーブのようなものである。
【００２３】
「ドライアイ症候群」は、別名で「ドライアイ」、「乾性角結膜炎」（ＫＣＳ）、又は「眼表面疾患」とも呼ばれている。ドライアイ症候群は、眼表面の乱れを引き起こし、種々の症状や徴候の原因となったり、また生活の質に影響する可能性がある。ドライアイ症候群に罹患した患者は、乾燥した、砂が入ったような／チクチクするような、又はぼやけた感覚、焼けるような又は痒い感覚、赤目（結膜炎）、視力障害、異物感、光に対する過敏を感じることもある。ドライアイ症候群は一般的に、涙生成の低下、過度な涙の蒸発、涙層に通常見られる粘液又は脂質の生成異常、又はこれらの組み合わせによって引き起こされる。
【００２４】
「眼瞼炎」とは、急性（潰瘍性又は非潰瘍性）又は慢性（マイボーム腺機能不全、脂漏性眼瞼炎）の眼瞼縁の炎症を意味する。症状や徴候は、赤化や浮腫を伴う眼瞼縁の痒さや焼けるような感覚を含む。急性の潰瘍性眼瞼炎は、眼瞼縁の睫毛由来の細菌性感染（通常は、ブドウ球菌）によって通常引き起こされ、それには睫毛毛包やマイボーム腺も関与している。急性の潰瘍性眼瞼炎は、ウイルス（例えば単純ヘルペス、水痘帯状疱疹）によっても引き起こされる。急性の潰瘍性眼瞼炎は、同じ部位のアレルギー反応によって、通常引き起こされる（例えば、強い痒さ、擦り、発疹を引き起こすアトピー性眼瞼皮膚炎や季節的アレルギー性眼瞼結膜炎、又は皮膚眼瞼結膜炎の場合には接触過敏）。慢性の眼瞼炎は、原因不明の非感染性炎症である。眼瞼中のマイボーム腺は、水性の涙層の上に脂質層を形成することによって涙の蒸発を抑える脂質（マイボーム）を生成する。マイボーム腺の機能不全においては、脂質の構成が異常で、腺の導管及び開口部が固くてワックス状の栓で塞がれることがある。二次的な細菌定着が、眼瞼縁の上に発達するスケールの上にしばしば起こる。マイボーム腺が塞がれることもある。マイボーム腺機能不全又は脂漏性眼瞼炎に罹った大部分の患者は、涙蒸発の増加や、二次的乾性角結膜炎を有する。
【００２５】
ここで「関節疾患又は関節障害」とは、関節、骨、筋肉、軟骨、及び他の結合組織を破壊し、身体の運動を妨げる又は停止させる、１００を超える異なった疾患又は条件から構成される複雑な一群の筋骨格障害を指す。より具体的には、関節、筋肉、又は他の組織に炎症又は損傷を起こさせるこれらの条件を指す。この用語は、変形性関節症、関節リューマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎を含む。
【００２６】
「医薬的に許容される」とは、生物学的であるかどうかに関わらず、不適切ではない物質からなる担体を指す。
「担体」とは、医薬製剤の中に含まれる活性物質以外のあらゆる成分を指し、例えば、希釈剤、結合剤、潤滑剤、崩壊剤、充填剤、色材、湿潤又は乳化剤、ｐＨ緩衝剤、保存剤等である。
【００２７】
ここで使用される「治療」とは、哺乳類、特にはヒトの病気のあらゆる治療を網羅するもので、（ａ）病気に罹ったようだがまだ罹ったとは診断されていない対象が病気から免れる、（ｂ）病気を阻止する、即ち病気の進行を止める、又は病気から回復させる、即ち病気及び／又はその症状又は状態からの回復を起こさせること等を含む。
本発明による治療又は方法の「効能」は、本発明の使用又は方法に応じて生起する病気又は状態の経過における変化に基づいて測定することができる。例えば、本発明によるドライアイ症候群の治療効能は、目の乾燥度合、砂が入ったような／チクチクするような感覚、ぼやけた感覚、焼けるような又は痒い感覚、赤目、視力障害、異物感、光に対する過敏、涙液層破壊時間（ｔＢＵＴ）、フルオロセイン染色、涙液モル浸透圧濃度に対する影響によって測定可能である。
【００２８】
ここで使用される「有効量」とは、病気の症状の感知できる改善をもたらす、本発明による組成物又はその医薬製剤の量を指し、前記組成物を投与された対象において、それらの症状は、ドライアイ症候群の場合には、例えば、目の乾燥度合、砂が入ったような／チクチクするような感覚、ぼやけた感覚、焼けるような又は痒い感覚、赤目、視力障害、異物感、光に対する過敏のようなものであり、関節疾患の場合には、炎症、又は関節もしくは筋肉の損傷の感知できる改善である。
ここで使用される「対象」とは、哺乳類を指す。例えば、本発明で意図される哺乳類は、ヒト、霊長類、並びに牛、羊、豚、馬等の家畜、実験用げっ歯類等を含む。
【００２９】
［本発明による調製方法］
本発明の第１の観点は、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物の調製方法を提供するものであり、前記組成物は中性ｐＨ近傍のｐＨ、例えば６〜７．５からなるｐＨにおいて、濁りがなく粘性が高い溶液であり、前記方法は、
（１）平均分子量が１０〜２５０ ｋＤａの範囲で、且つ脱アセチル化度が６０％を越えるキトサンを、カルボキシル基を含む弱酸の水溶液中に溶解する工程と、
（２）グリセロールを添加する工程と、
（３）弱塩基の水溶液の添加によって、ｐＨ値を、中性ｐＨ近傍のｐＨ 、例えば６〜７．５からなるｐＨに調整する工程と、
（４）水蒸気殺菌をする工程と、を含み、
これによって、前記ｐＨにおいて、濁りがなく粘性が高い溶液である可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌組成物を形成することを特徴とする。
【００３０】
本発明の特別な形態において、上記工程（１）において、前記弱酸のカルボキシル基（-ＣＯＯＨ）と前記キトサンのアミノ基（-ＮＨ２）のモル比が、１：０．９〜１：１．１、特に約１：１又は１：１．０５からなる、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物の上記調製方法が提供される。
前記キトサンのアミノ基（-ＮＨ２）の濃度は、キトサンのＤＤに依存する。例えば、６５モル％のＤＤを有するキトサンの場合、前記弱酸のカルボキシル基と反応可能なアミノ基（-ＮＨ２）が６５モル％存在する。残りの３５モル％は、キトサンのアセチル基（-ＣＯＣＨ３）に相当する。
【００３１】
例えば、本発明による方法の特別な形態において、工程（１）において、ＭＷが１７３ ｋＤａでアセチル化度が３５モル％のキトサンが、弱酸として最終濃度が０．１７５％（ｗ/ｗ）である乳酸の水溶液中で、最終濃度が０．５％（ｗ/ｗ）で溶解される。
いかなる特別な理論と関連付けられものではないが、本発明者らは、前記弱酸のカルボキシル基（-ＣＯＯＨ）と前記キトサンのアミノ基（-ＮＨ２）のモル比がここに示された範囲にあれば、キトサンの弱酸水溶液への溶解を改善することができ、本発明の組成物の安定性を改善することができることを見出した。
本発明によるキトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌組成物の調製方法の特別な形態において、キトサンの溶解は、室温で撹拌によって行われる。
【００３２】
本発明によるキトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌組成物の調製方法の特別な形態において、工程（１）の前記弱酸は乳酸、グルコン酸、コハク酸、ソルビン酸、クエン酸の間から選択され、及び／又は工程（３）の前記弱塩基はコハク酸ソーダ、乳酸ソーダ、ソルビン酸カリウム、グルコン酸カリウムの間から選択される。
【００３３】
別の特別な形態において、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物の調製方法が提供され、前記殺菌された組成物は、６〜７．５からなるｐＨにおいて濁りがなく粘性が高い溶液であり、前記方法は、
（１）平均分子量が約１５０〜約１８０ ｋＤａの範囲で、且つ脱アセチル化度  が６０モル％を越える、例えば６０〜７５モル％であるキトサンを、乳酸のカルボキシル基（-ＣＯＯＨ）と前記キトサンのアミノ基（-ＮＨ２）のモル比が、約１：１又は１：１．０５を含む１：０．９〜１：１．１からなる範囲で、前記乳酸の水溶液へ溶解する工程と、
（２）グリセロールを添加する工程と、
（３）コハク酸ソーダの水溶液の添加によって、ｐＨ値を６〜７．５からなるｐＨに調整する工程と、
（４）１２１℃で１５分間、水蒸気殺菌をする工程と、を含み、
これによって、濁りがなく粘性が高い溶液である可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌組成物を形成することを特徴とする。
【００３４】
本発明の更に別の特別な形態において、
−工程（１）において、前記キトサンが０．０５〜３％(ｗ/ｗ)からなる濃度、特に０．３〜０．７５％（ｗ/ｗ）、より特別には約０．５％（ｗ/ｗ）で存在し、前記弱酸が乳酸で０．１２〜０．２２％（ｗ/ｗ）からなる濃度、特に０．１６〜０．１９％（ｗ/ｗ）で存在し、前記弱酸のカルボキシル基（-ＣＯＯＨ）と前記キトサンのアミノ基（-ＮＨ２）のモル比が約１：１．０５であり、
−工程（２）において、前記グリセロールが０．４〜１％（ｗ/ｗ）からなる濃度、特に０．４〜０．６％（ｗ/ｗ）、又は約０．４％ （ｗ/ｗ）、例えば０．３６％（ｗ/ｗ）、０．３７％（ｗ/ｗ）、０．３８％（ｗ/ｗ）、０．３９％（ｗ/ｗ）、０．４０％（w/w)、０．４１％（ｗ/ｗ）、０．４２％（ｗ/ｗ）、０．４３％（ｗ/ｗ）、０．４４％（ｗ/ｗ）、若しくは０．４５％（ｗ/ｗ）、又は約０．５％（ｗ/ｗ）、例えば０．４６％（ｗ/ｗ）、０．４７％（ｗ/ｗ）、０．４８％（ｗ/ｗ）、０．４９%(ｗ/ｗ)、０．５０％（ｗ/ｗ）、０．５１％（ｗ/ｗ）、０．５２％（ｗ/ｗ）、０．５３％（ｗ/ｗ）、０．５４％（ｗ/ｗ)、若しくは０．５５％（ｗ/ｗ）で存在し、工程（３）において、前記弱塩基が、１．０〜１．７％（ｗ/ｗ）からなる濃度、特に約１．４％（ｗ/ｗ）の濃度で存在するコハク酸ソーダである、
可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物の上記調製方法が提供される。
【００３５】
本発明の更に別の特別な形態において、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物の調製方法が提供され、前記組成物は６〜７．５からなるｐＨにおいて濁りがなく粘性が高い溶液であり、前記方法は、
（１）平均分子量が１５０，０００と１８０，０００の範囲で、且つ脱アセチル化度が６５〜７０モル％であるキトサンを、濃度が０．１２〜０．２２％（ｗ/ｗ）、又は約０．１６％（ｗ/ｗ）、約０．１７％（ｗ/ｗ）、約０．１８％（ｗ/ｗ）、若しくは約０．１９％（ｗ/ｗ） からなる乳酸水溶液中に、濃度が約０．５％（ｗ/ｗ）で溶解する工程と、
（２）最終濃度が０．４〜１％（ｗ/ｗ）、特には０．４〜０．６％（ｗ/ｗ）、又は約０．４％ （ｗ/ｗ）、例えば０．３６％（ｗ/ｗ）、０．３７％（ｗ/ｗ）、０．３８％（ｗ/ｗ）、０．３９％（ｗ/ｗ）、０．４０％（w/w)、０．４１％（ｗ/ｗ）、０．４２％（ｗ/ｗ）、０．４３％（ｗ/ｗ）、０．４４％（ｗ/ｗ）、若しくは０．４５%(ｗ/ｗ)、又は約０．５％（ｗ/ｗ）、例えば０．４６％（ｗ/ｗ）、０．４７％（ｗ/ｗ）、０．４８％（ｗ/ｗ）、０．４９％（ｗ/ｗ）、０．５０％（ｗ/ｗ)、０．５１％（ｗ/ｗ）、０．５２％（ｗ/ｗ）、０．５３％（ｗ/ｗ）、０．５４％（ｗ/ｗ）、若しくは０．５５%(ｗ/ｗ)からなるグリセロールを添加する工程と、
（３）最終濃度が約１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸水溶液を添加してｐＨを約６．５に調整する工程と、
（４）１２１℃で１５分間、オートクレーブ処理する工程と、を含み、
これによって、濁りがなく粘性が高い（例えば粘度が約１８ ｍＰａ.ｓ）溶液である加熱殺菌組成物を形成することを特徴とする。
【００３６】
本発明による方法の更なる形態において、工程（１）のキトサンは、キトサンのアミン型である。
本発明による方法の更なる形態において、工程（１）のキトサンは、キトサン塩基である。
本発明による方法の更なる形態において、工程（１）のキトサンは、動物由来である。
本発明による方法の更なる形態において、工程（１）のキトサンは、菌類由来で、特にＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ由来である。
本発明による方法の更なる形態において、工程（１）のキトサンは、菌類由来のキトサンアミンで、特にＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ由来である。
【００３７】
更なる形態において、本発明による方法は、更にプルラン、特にはＭＷが１０〜３，０００ ｋＤａであるプルランを、グリセロール添加、ｐＨ調整、オートクレーブ処理工程の前に、乳酸のような弱酸の水溶液に溶解する工程を含み、これによって、ｐＨが６〜７．５、特に６〜約７の濁りがなく粘性が高いキトサンとプルランとを含む加熱殺菌組成物を生成する。
【００３８】
更なる別の形態において、本発明による方法は、グリセロール添加工程の前の工程（１）においてキトサンが溶解された乳酸のような弱酸水溶液中に、可溶化プルラン、特には１０〜３，０００ ｋＤａの範囲のＭＷを有するプルランが提供される前工程を含む。
特別な形態において、本発明による方法によって得られた可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌組成物は、安定で濁りがなく、無色、粘性が高い溶液である。
【００３９】
［本発明の組成物］  本発明の別の観点において、ここに記載された調製方法によって得られる、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物が提供される。
前記組成物は、ｐＨが６〜７．５からなり、特にはｐＨが６〜約７からなる、濁りがなく粘性が高い溶液である。
有利な態様において、前記組成物は安定である。即ち、キトサンポリマーは実質的に分解せず、又その溶液は、加熱殺菌及び／又は保存後において、その粘度と外観を保持する。
特別な態様において、前記組成物は平均分子量（ＭＷ）が約１５０〜約１８０ ｋＤａの範囲で、且つ脱アセチル化度（ＤＤ）が６０〜７５モル％からなるキトサンを含む。
別の態様において、前記組成物はＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ のような菌類由来のキトサンを含む。
別の態様において、前記組成物はアミン型で存在するキトサンを含む。
更に別の態様において、前記組成物はキトサン塩基を含む。
【００４０】
特別な態様において、ここに記載される調製方法によって得られる可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物は、以下に述べる特徴を少なくとも一つ示す。
−前記組成物は１０〜５００ ｍＰａ.ｓからなる粘度を有する。
−前記組成物は１５０〜３５０ ｍＯｓｍ／ｋｇからなるモル浸透圧濃度を有する。
−前記組成物は非ニュートンレオロジー挙動を示す。
−前記組成物は抗菌活性及び／又は抗リパーゼ活性を有する。
【００４１】
更なる観点において、本発明は、ｐＨが６〜７．５からなり、前記ｐＨにおいて、特に加熱殺菌後において、濁りがなく粘性が高い溶液を形成する、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物を提供する。
特別な態様において、本発明による組成物は、前記組成物において、懸濁液中に視認される粒子が実質的に存在しないことを意味する濁りのない溶液を形成する。
特別な態様において、本発明による組成物は、殺菌及び／又は保存後にキトサンポリマーが実質的に分解しないことを意味する、加熱殺菌後において安定である。
特別な観点において、本発明は、平均分子量が約１０〜約２５０ ｋＤａの範囲で、且つ脱アセチル化度が６０％を超え、ｐＨが６〜７．５、特に６〜約７からなり、前記ｐＨにおいて殺菌後に安定で、濁りがなく粘性が高い溶液を形成する、可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物を提供する。
【００４２】
特別な形態において、本発明による組成物は、ここに記載された可溶化キトサンとグリセロールとを含む加熱殺菌水性組成物と、少なくとも一種類の医薬的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤と、を含む医薬組成物である。
更に特別な形態において、本発明による加熱殺菌水性組成物は、更にプルランを含む。
更に特別な形態において、本発明による加熱殺菌水性組成物は、更に分子量が約１０〜約３，０００ ｋＤａの範囲にあるプルランを含む。
更に特別な形態において、本発明による加熱殺菌水性組成物は、更に分子が約１０ ｋＤａであるプルランを含む。
更に特別な形態において、本発明による加熱殺菌水性組成物は、更に濃度が約０．５〜約３％の範囲にあるプルランを含む。
【００４３】
特別な観点において、本発明による組成物は、薬剤として、より具体的には眼科用組成物として使用される。
特別な形態において、本発明による加熱殺菌水性組成物は、局所使用の眼科用組成物である。
別の特別な形態において、本発明による加熱殺菌水性組成物は、関節内組成物である。
更なる観点において、本発明は、医薬製剤、特には眼科用組成物又は関節内組成物の調製に資するための、本発明による加熱殺菌水性組成物の用途を提供する。
従って、他の一つの特別な観点は、キトサンが約１０〜約２５０ ｋＤａの範囲にある平均分子量と、６０％を超える脱アセチル化度を有しており、組成物が６〜７．５からなるｐＨであり、且つ前記ｐＨにおいて加熱殺菌後においても濁りがなく粘性が高い溶液を形成する、可溶化キトサンとグリセロールとを含む水性眼科用組成物に関する。
【００４４】
特別な形態において、キトサンが約１５０〜１８０ ｋＤａの範囲にある平均分子量と、６０〜７５モル％からなる脱アセチル化度（ＤＤ）と、を有する、可溶化キトサンとグリセロールとを含む眼科用加熱殺菌水性組成物を提供する。
前記組成物の特別な形態において、前記キトサンはアミン型で存在し、及び／又はＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ のような菌類由来である。
特別な形態において、前記組成物は、粘度が１０〜５００ ｍＰａ.ｓからなり、モル浸透圧濃度が１５０〜３５０ ｍＯｓｍ/ｋｇ（例えば約２５０〜３００ ｍＯｓｍ/ｋｇ）からなり、非ニュートンレオロジー挙動を示し、抗菌活性及び／又は抗リパーゼ活性を有する。
本発明の特別な観点によれば、弱酸が乳酸である、本発明の方法又は製剤を提供する。
本発明の特別な観点によれば、塩基酸がコハク酸ソーダ及びソルビン酸カリウムから選択される、本発明の方法又は製剤を提供する。
【００４５】
前記組成物の別の特別な形態において、組成物全量に基づき、前記キトサンは約０．０５〜約３％ （ｗ/ｗ）の濃度範囲、前記グリセロールは０．２〜２％ （ｗ/ｗ）の濃度範囲で存在する。特別な形態によれば、本発明の組成物は眼科用組成物であり、グリセロールは、組成物全量に基づき、０．２〜１％ （ｗ/ｗ）の濃度範囲で存在する。
前記組成物の別の特別な形態において、前記弱酸のカルボキシル基（-ＣＯＯＨ）と前記キトサンのアミノ基（-ＮＨ２）のモル比が、１：０．９〜１：１．１、特に約１：１又は１：１．０５からなる。
別の特別な形態において、前記組成物は、更に、濃度が約０．１２〜約０．２２％（ｗ/ｗ）からなる乳酸と、濃度が１．０〜１．７％（ｗ/ｗ）からなるコハク酸ソーダと、を含む。
更に特別な形態において、前記組成物は、更に、プルランとアルギン酸塩とからなる群から選択されるポリマーを含む。
【００４６】
別の特別な観点は、キトサンが約１０〜約２５０ ｋＤａの範囲にある平均分子量と、６０％を超える脱アセチル化度と、を有し、組成物が６〜７．５、特に６〜約７からなるｐＨを有し、加熱殺菌後においても前記ｐＨにおいて濁りがなく粘性が高い溶液を形成する、可溶化キトサンとグリセロールとを含む、関節内注射用の水性組成物に関する。
本発明の別の観点の一つの形態において、本発明で使用されるキトサンは、平均分子量が約１０〜約２５０ ｋＤａの範囲、特に約２０〜約２２０ ｋＤａの範囲、更に特別には約５０〜約２２０ ｋＤａの範囲、更に特別には約１００〜約２２０ ｋＤａの範囲、更に特別には約１４０〜約２００ ｋＤａの範囲、更に特別には約１５０〜約１８０ ｋＤａの範囲、更に特別には約１５９〜約１７５ ｋＤａの範囲、又は約１５５ ｋＤａ、１５６ ｋＤａ、１５７ ｋＤａ、１５８ ｋＤａ、１５９ ｋＤａ、１６０ ｋＤａ、１６１ ｋＤａ、１６２ ｋＤａ、１６３ ｋＤａ、１６４ ｋＤａ、１６５ ｋＤａ、１６６ ｋＤａ、１６７ ｋＤａ、１６８ ｋＤａ、１６９ ｋＤａ、１７０ ｋＤａ、１７１ ｋＤａ、１７２ ｋＤａ、１７３ ｋＤａ、１７４ ｋＤa、若しくは１７５ ｋＤａである。
本発明で使用されるキトサンの平均分子量は、サイズ排除クロマトグラフィーによって決定することができる （Ｎｇｕｙｅｎ ら, ２００９, Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｐｏｌｙｍｅｒ, ７５, ５２８-５３３)。
【００４７】
別の形態において、本発明で使用されるキトサンは、脱アセチル化度（ＤＤ）が６０％を超え、特には６０〜９０モル％、更に特には６０〜８０モル％、更に特には６０〜７５モル％、更に特には６５〜７０モル％、又は約６５モル％又は約７０モル％からなり、それらはアセチル化度（ＤＡ）が４０％よりも低く、特には１０〜４０モル％、更に特には２０〜４０モル％、更に特には２５〜４０モル％、更に特には３０〜３５モル％、又は約３０モル％若しくは３５モル％にそれぞれ相当する。
【００４８】
更なる形態において、キトサンは、カニ、エビ、イカの平板骨、コウイカ、昆虫のような甲殻類を含む動物由来である。
更なる形態において、キトサンは、菌類由来である。子嚢菌類、接合菌類、担子菌類、不完全菌類を含む種々の菌類の菌糸は、キチン及びキトサンの代替資源である （Ｐｏｃｈａｎａｖａｎｉｃｈ、Ｓｕｎｔｏｒｎｓｕｋ、２００２, Ｌｅｔｔ. ｉｎ Ａｐｐｌ. Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ., ３５： １７−２１）。例えば、本発明の組成物に含まれる前記キトサンは、Ａｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ, Ａｇａｒｉｃｕｓ ｈｏｒｔｅｎｓｉｓ, Ａｒｍｉｌｌａ ｍｅｌｌｅａ, Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ, Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ ａｕｒｉｃｕｌａｊｕｄａｅ, Ｇｏｎｇｒｏｎｅｌｌａ ｂｕｔｌｅｒｉ, Ｌｅｎｔｉｎｕｌａ ｅｄｏｄｅｓ, Ｍｕｃｏｒ ｒｏｕｘｉｉ, Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｏｓｔｒｅａｔｕｓ, Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｓａｊｏ-ｃａｊｕ, Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ ｅｒｙｎｇｉｉ, Ｔｒａｍｅｔｅｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ、特にはいわゆる「白キノコ」と呼ばれるＡｇａｒｉｃｕｓ ｂｉｓｐｏｒｕｓ （Ａ. ｂｉｓｐｏｒｕｓ）を含むキノコ類から、（１）タンパク質とアルカリ可溶多糖類を除去するアルカリ処理、（２）キチンとキトサンを分離する酸還流、（３）アルカリ条件でのキトサンの析出の３工程からなる典型的な抽出操作のような、当業者においてよく知られた方法によって、抽出することができる。アルカリ処理によるタンパク質の除去は、通常、９５℃で１〜６時間、又は１２１℃で０．２５〜１時間、１ＮのＮａＯＨを用いてなされる。酸処理によるキトサンの分離は、通常、９５℃で３〜１４時間、２〜１０％の酢酸又は塩酸を用いてなされる。キトサンを製造する別の方法は、Ｎｗｅら、２０１０, Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ, Ｍａｇｄｙ Ｅｌｎａｓｈａｒ Ｅｄｉｔｏｒ, ｃｈａｐｔｅｒ ７： １３５-１６２に記載された酵素法を含む。本発明による菌類由来のキトサンを含む有利な組成物は、動物タンパク質がなく、動物由来のキトサンと比べて分子量及び脱アセチル化度の変動が低いというような有利な特質を示す。
本発明の前記組成物は、抗菌活性、特には帯電防止又は殺菌活性を効果的に示す。
本発明の前記組成物は、抗リパーゼ活性を効果的に示す。
【００４９】
別の特別な形態において、キトサンのアミン型（遊離のアミノ基（-ＮＨ２）を含む）が本発明において使用される。
別の特別な形態において、キトサン塩基が本発明において使用される。
【００５０】
別の特別な形態において、本発明の組成物は、６〜７．５、特には６〜約７、更には６．５〜約７、例えば約６．５からなるｐＨを有する。
別の形態において、本発明による組成物は、全組成物に基づいて、約０．０５〜約３％（ｗ/ｗ）の範囲、特には約０．２〜約１％（ｗ/ｗ） の範囲、更には約０．５〜約０．７５％（ｗ/ｗ） の範囲、又は約０．５％（ｗ/ｗ）の濃度であるキトサンを含む。
本発明の目的のために、キトサンの濃度は、使用するキトサンの平均分子量及び脱アセチル化度に従い、又、組成物の好ましい粘度に従って調整される。
典型的には、本発明の組成物は、１０〜５００ ｍＰａ.ｓ、例えば１０〜１００ ｍＰａ.ｓからなる粘度、又は、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４ ｍＰａ.ｓのような約２０ ｍＰａ.ｓの粘度を有する。
典型的には、本発明の組成物は擬塑性及び粘弾性を示す。
これらの性質は、本発明による組成物を、眼科の適用における人工涙としての用途、再生医療のための関節内注射に適応させる。
典型的には、本発明の組成物は非ニュートンレオロジー挙動を示す。このレオロジー挙動は、本発明の組成物を、例えばドライアイ症候群の治療のための人工涙のような眼科用途での使用において、特に適切なものとする。
【００５１】
一つの形態において、本発明による組成物中のグリセロールの濃度は、０．２〜２％ （ｗ/ｗ）、特には０．４〜１％ （ｗ/ｗ）、更には０．４〜０．６％ （ｗ/ｗ）、又は約０．４％（ｗ/ｗ）、例えば０．３６％（ｗ/ｗ）、０．３７％（ｗ/ｗ）、０．３８％（ｗ/ｗ）、０．３９％（ｗ/ｗ）、０．４０％（ｗ/ｗ）、０．４１％（ｗ/ｗ）、０．４２％（ｗ/ｗ）、０．４３％（ｗ/ｗ)、０．４４％（ｗ/ｗ）、若しくは０．４５％（ｗ/ｗ）、又は約０．５％（ｗ/ｗ）、例えば０．４６％（ｗ/ｗ）、０．４７％（ｗ/ｗ）、０．４８％（ｗ/ｗ）、０．４９％（ｗ/ｗ）、０．５０％（ｗ/ｗ）、０．５１％（ｗ/ｗ）、０．５２％（ｗ/ｗ）、０．５３％（ｗ/ｗ）、０．５４％（ｗ/ｗ）、若しくは０．５５％（ｗ/ｗ）からなる。
本発明による組成物において、グリセロールは、組成物の付着性を減じ、水蒸気殺菌の際にキトサンの保護としても作用することができる。グリセロールは、浸透物質としても作用することができ、本発明による組成物の浸透圧保護の役割も果たすことができる。
典型的には、本発明による組成物のモル浸透圧濃度は、１５０〜３５０ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇ、特には２４０〜３４０ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇ、例えば約２８０又は３００ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇからなる。
【００５２】
更なる形態において、本発明の組成物は、中性ｐＨ７に近いｐＨ付近、例えばｐＨが６を超える、６．２を超える約６．５、６．５を超える約７、又は６．５〜約７からなるｐＨにおいて、安定且つ濁りがない。
本発明による組成物の一つの効果は、生理的なｐＨである７．４、又は中性ｐＨ付近のｐＨにおけるオートクレーブ処理の後に、従来技術における組成物と方法の場合における、典型的にはキトサンの析出に繋る塩基の添加をすることなく、安定且つ濁りのない溶液を形成することである。
特別な形態において、本発明の組成物は、例えば１２１℃で１５分間のオートクレーブ処理による殺菌を含む加熱殺菌の後、前記ｐＨにおいて安定で且つ濁りがなく粘性が高い溶液を形成する。更には、本発明の組成物は、加熱殺菌の後、前記ｐＨにおいて、安定で濁りのない、無色で粘性が高い溶液を形成する。
【００５３】
［治療用途］
本発明の別の観点は、組成物、特にはここに記載したように、ドライアイ症候群、特には眼瞼炎を伴うドライアイ、環境状態又はコンタクトレンズによって引き起こされる目の痒み、乾性角結膜炎、キトサン感受性細菌による目の表面又は関連する目の前端構造物のシェーグレン症候群細菌性感染症の治療眼科用組成物に関する。
本発明の更なる別の観点において、変形性膝関節症、乾癬性関節炎を含む関節疾患の治療用途に、ここに記載される組成物が提供される。
本発明の別の観点は、ドライアイ症候群、特には眼瞼炎を伴うドライアイ、環境状態又はコンタクトレンズによって引き起こされる目の痒み、乾性角結膜炎、キトサン感受性細菌による目の表面又は関連する目の前端構造物のシェーグレン症候群細菌性感染症の治療のための薬剤の製造用として、ここに記載される組成物を提供する。
本発明の更に別の観点において、変形性関節症、関節リューマチ、乾癬性関節炎、若年性関節炎を含む関節疾患治療のための薬剤の製造用として、ここに記載される組成物が提供される。
【００５４】
本発明の更に別の観点において、ここに記載される組成物を、治療上、必要に応じた有効量を投与することからなる、ドライアイ症候群、眼瞼炎を伴うドライアイ、環境状態又はコンタクトレンズによって引き起こされる目の痒み、乾性角結膜炎、キトサン感受性細菌による目の表面又は関連する目の前端構造物のシェーグレン症候群細菌性感染症を含むドライアイ症候群の、予防方法及び／又は治療方法を提供する。
本発明の更に別の観点において、ここに記載される組成物を、治療上、必要に応じた有効量を投与することからなる、変形性関節症、乾癬性関節炎を含む関節疾患の、予防方法及び／又は治療方法を提供する。
【００５５】
［投与方法］
本発明の組成物は、以下に限るものではないが、経口で、非経口で、舌下で、経皮的に、経粘膜で、局所的に、眼球内に、又はこれらの組み合わせを含むあらゆる方法によって投与することができる。
眼科用途としては、本発明による組成物の適切な投与方法は、例えば人工涙又は硝子体内及び結膜下投与のような局所投与がある。
関節疾患の治療における治療用途のためには、関節内注射は、本発明による組成物投与の適切な方法である。
【００５６】
特別な形態によれば、実施例の組成物は、1回分ごと、又は適切な多数回の保存料を含まない容器のいずれかにパッケージすることができる。例えば、眼科用途としては、実施例の組成物は、便利な点滴の形で、目につけることによって局所的に投与されてもよい。
【００５７】
［組み合わせ］
本発明によれば、本発明による組成物は、単独で投与されてもよいし、又は、治療しようとしている病気の予防及び／又は治療において有用な共存薬剤との組み合わせとして投与されてもよい。
例えば、眼瞼炎を伴うドライアイ症候群の治療としては、キトサンとグリセロールとを含む本発明による組成物は、更に、抗生物質、抗炎症剤、抗緑内障製品（プロスタグランジン、ベータアドレナリンブロッカー）、抗アレルギー製品と共に投与されてもよい。
例えば、キトサンとグリセロールとを含む本発明による組成物は、更に、アルギン酸塩又はプルランのようなゲル化剤と共に投与されてもよい。
【００５８】
本発明は、対象とする病気の予防及び／又は治療における有用な他の治療処方又は助剤を臨床的に有効量投与する前、同時、又は続けて、キトサンとグリセロールとを含む本発明による組成物を個人に投与することからなる当該薬剤の投与を包含する。前記助剤と同時に投与されるキトサンとグリセロールとを含む本発明による組成物は、同じ又は異なる組成物で、及び、同じ又は異なる投与経路で、投与することができる。
【００５９】
ここに引用される文献は、引用によってその全体が本明細書に組み込まれる。本発明は、ここに記載された特殊な形態によって範囲が限定されるものではなく、当該形態は発明の個々の観点の単一の例とすることを意図したものであり、機能的に同等の方法及び構成は、本発明の範囲内にある。実際、本発明の種々の修飾は、ここに示され、記載されたものに加えて、前述の記載と添付図面から、当業者において自明となるであろう。かかる修飾は、添付の特許請求の範囲内に収まるように意図されている。
本発明は記載されており、以下に示す例は、例証として挙げられたもので、限定するものではない。
【実施例】
【００６０】
実施例1：本発明によるキトサン（０．５％）とグリセロールとを含む組成物の製造
平均分子量が１７３ ｋＤａで、アセチル化度が３５モル％の菌類由来キトサン０．５００ｇを、０．１９４ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。得られた水溶液は、０．５％のキトサン、０．１７５（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）のグリセロールを含み、１８ ｍＰａ.ｓの粘度、６．５のｐＨ、３０４ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。
【００６１】
実施例２：本発明によるキトサン（０．５％）とグリセロールとを含む組成物の製造
分子量が１７２ ｋＤａで、アセチル化度が３２モル％の菌類由来キトサン０．５００ｇを、０．２０４５ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。この溶液の加熱殺菌前後のレオロジープロファイルが調べられる。得られた水溶液は、加熱殺菌前に、０．５％のキトサン、０．１８４％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）のグリセロールを含み、２０ ｍＰａ.ｓの粘度、６．５のｐＨ、３１８ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。オートクレーブ処理後、得られた溶液は濁りがなく粘性が高く、１８ ｍＰａ.ｓの粘度、６．４のｐＨ、３２２ ｍＯｓｍｏｌ/ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。図１に示されるように、加熱殺菌前後の０．５％のキトサンを含む本発明による組成物のレオロジープロファイルは、加熱殺菌の間、グリセロールが製剤の著しい動的粘度低下から保護していることを示す。
【００６２】
実施例３：本発明によるキトサン（０．４％）、グリセロール、プルマンを含む組成物の製造
１．００ｇのプルラン（１０ ｋＤａ）を、０．１９４ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する。プルランが完全に溶解した後、平均分子量が１５９ ｋＤａで、アセチル化度が３１モル％の菌類由来キトサン０．４００ｇを溶解する。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。得られた水溶液は、０．４％のキトサン、１．０％のプルラン、０．１７５％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）を含み、４４ ｍＰａ.ｓの粘度、６．５のｐＨ、３２０  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。
【００６３】
実施例４：本発明によるキトサン（０．３％）、グリセロール、プルマンを含む組成物の製造
１．００ｇのプルランを、０．１９４ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する。プルランが完全に溶解した後、分子量が１５９ ｋＤａで、アセチル化度が３１モル％の菌類由来キトサン０．３００ｇを溶解する。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。得られた水溶液は、０．３％のキトサン、１．０％のプルラン、０．１７５％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）を含み、２７ ｍＰａ.ｓの粘度、６．６のｐＨ、３１８  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。
【００６４】
実施例５：本発明によるキトサン（０．４％）、グリセロール、プルマンを含む組成物の製造
０．５０ｇのプルラン（１０ ｋＤａ）を、０．１９４ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する。プルランが完全に溶解した後、平均分子量が１５９ ｋＤａで、アセチル化度が３１モル％の菌類由来キトサン０．４００ｇを溶解する。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。得られた水溶液は、０．４％のキトサン、０．５％のプルラン、０．１７５％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）を含み、３３ ｍＰａ.ｓの粘度、６．５のｐＨ、３２５  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。
【００６５】
実施例６：本発明によるキトサン（１％）とグリセロールとを含む組成物の製造
平均分子量が１５９ ｋＤａで、アセチル化度が３１モル％の菌類由来キトサン１．００ｇを、０．４１４ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する（溶解時間：５〜９時間）。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。得られた水溶液は、１．０％のキトサン、０．３７２％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）のグリセロールを含み、７３ ｍＰａ.ｓの粘度、６．４のｐＨ、３０７  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。図２に示されるように、加熱殺菌前後の１％のキトサンを含む本発明による組成物のレオロジープロファイルは、加熱殺菌の間、グリセロールが製剤の著しい粘度低下から保護していることを示す。
【００６６】
実施例７：本発明によるキトサン（２%）とグリセロールとを含む組成物の製造
平均分子量が１５９ ｋＤａで、アセチル化度が３１モル％の菌類由来キトサン２．０ｇを、０．８２８ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する（溶解時間：５〜９時間）。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。得られた水溶液は、２．０％のキトサン、０．７４４％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）のグリセロールを含み、８０２ ｍＰａ.ｓの粘度、６．１のｐＨ、３１０  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。図４に示されるように、加熱殺菌前後の２％のキトサンを含む本発明による組成物のレオロジープロファイルは、加熱殺菌の間、グリセロールがキトサンを、製剤の著しい粘度低下から保護していることを示す。
【００６７】
実施例８：粘膜付着性
粘膜付着性が、二つの方法、即ちｉｎ ｖｉｔｒｏにおける粒子径試験と濁度試験により、標準０．１８％ヒアルロン酸点眼溶液と比較することによって評価された。粒子径試験により、菌類由来のキトサンとムチンの間にサイズが１ｍｍの凝集体が生成していることが指摘された。このことは、粘膜付着性があることを示唆する。他方、ムチンとヒアルロン酸との間には凝集体は生成しなかった。同じ結果が濁度試験からも得られた。即ち、キトサン製剤をムチンと混合すると濁度が大きく増加するが、ヒアルロン酸をムチンと混合すると濁度の上昇の徴は見られなかった（図３）。
【００６８】
実施例９：抗リパーゼ活性
抗リパーゼ活性は、ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社のＬｉｐａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ ＩＩを用いて測定された。リパーゼ活性に応じて無色から黄色に変色するプローブ（ＤＴＮＢ）の存在下、リパーゼ基質がキトサン（０．５％）とグリセロール（０．６２５％）を含む組成物に添加される。菌類由来のキトサンとグリセロールとを含む組成物の存在下、プローブは無色のまま、又は僅かに黄色味を帯びる。このことは、本発明による組成物が抗リパーゼ活性を有することを示唆する。本発明の組成物が抗リパーゼ活性を有するということは、本発明の用途に対する、更なる効果と言ってもよい。
【００６９】
実施例１０：本発明によるキトサン（０．５％）とグリセロールとを含む組成物の製造
平均分子量が１００〜２５０ ｋＤａで、アセチル化度が２８モル％の動物由来キトサン（Ｈｅｐｐｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｈｉｔｏｓａｎ社（ドイツ））０．５００ｇを、０．２１９ｇの乳酸（９０％）を含む５５ｇの水溶液に、室温でマグネチックスターラで撹拌しながら溶解する。キトサンが完全に溶解した後、０．６２５ｇのグリセロール８５％と、１．４ｇのコハク酸ソーダを含む４２．３ｇの水溶液をキトサン溶液に加えて、ｐＨを約６．５まで、モル浸透圧濃度を約３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇまで高める。水を加えて最終容積を１００ｇとする。次に、この溶液を１２１℃で１５分間オートクレーブ処理する。加熱殺菌前後のこの溶液のレオロジープロファイルが調べられる。得られた水溶液は、０．５％のキトサン、０．１９７％（ｗ/ｗ）の乳酸、１．４０％（ｗ/ｗ）のコハク酸ソーダ、０．５３１％（ｗ/ｗ）のグリセロールを含み、加熱殺菌前に、１８ ｍＰａ.ｓの粘度、６．５のｐＨ、３１８  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。オートクレーブ処理後、得られた溶液は、濁りがなく粘性が高く、１７ ｍＰａ.ｓの粘度、６．５のｐＨ、３１５  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇのモル浸透圧濃度を有する。図５に示されるように、加熱殺菌前後の０．５％のキトサンを含む本発明による組成物のレオロジープロファイルは、加熱殺菌の間、グリセロールが製剤を著しい動的粘度低下から保護していることを示す。
【００７０】
実施例１１：他の方法と比べた、本発明の方法によるキトサン（０．５％）を含む組成物の製造
菌類由来の０．５％キトサンを含む製剤が異なった方法で調製された。即ち、（ａ）比較のための方法：全ての賦形剤（乳酸、コハク酸ソーダ、グリセロール）が混合され、得られた溶液が加熱殺菌により殺菌され、その後キトサンが添加された。（ｂ）本発明の方法：キトサンが乳酸に溶解され、次にコハク酸ソーダとグリセロールが添加され、最終溶液が加熱殺菌により殺菌された。（ｃ）比較のための方法：キトサンがコハク酸ソーダとグリセロール溶液に添加され、得られた懸濁液が加熱殺菌により殺菌され、その後にキトサンを溶解するために、乳酸が添加された。ｐＨ及びモル浸透圧濃度が測定された。それらの結果が表１に示されている。
【００７１】
【表１】
2017533186.tif 000002
【００７２】
上記結果は、本発明の方法（ｂ）のみが、粒子が見られない最終製剤を与えており、従って眼科用組成物の調製に適していることを示す。
【００７３】
実施例１２：比較用製剤と比べた、本発明によるキトサン（１％）を含む組成物
二つの異なったパーセントのキトサン製剤の数種類を、表２に示す異なった酸に溶解した。菌類由来のキトサンを完全に溶解するために、十分な量の酸を添加した。その後、種々の塩基を加えてｐＨを６．５まで上げた。それぞれの溶液の濁度とモル浸透圧濃度が評価された。これらの結果を表２に示す。
【００７４】
【表２】
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【００７５】
これらのデータは、強酸又は強塩基を使用すると、溶液の濁度が高すぎるので（比較例１〜４）、本発明の方法においては、弱酸及び弱塩基の使用が必要であるという事実を支持する。更に、モル浸透圧濃度の結果は、乳酸（弱酸）とコハク酸塩又はソルビン酸塩（弱塩基）は、眼科用途に適切な目標モル浸透圧濃度である３００  ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇに到達可能なことから、眼科用溶液の用途に特に適していることを示した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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