(57)【要約】  １つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤を用いて、例えば式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の１つまたは複数の化合物、その薬学的に許容できる塩、および／またはその医薬組成物を用いて癌を治療する方法が本明細書に記載される。１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤を用いて、例えば式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の１つまたは複数の化合物、その薬学的に許容できる塩、および／またはその医薬組成物を用いて癌を治療する方法が本明細書に記載される。
2017530940.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を治療する方法であって、癌に罹患している被験体にＰＲＭＴ５阻害剤を投与する工程を含む方法。
【請求項２】
前記癌がリンパ腫である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記リンパ腫が、マントル細胞リンパ腫である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記癌が乳癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記乳癌が、トリプルネガティブ乳癌である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記癌が膵臓癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記癌が急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記癌が多発性骨髄腫（ＭＭ）である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記癌が結腸癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌がｐ５３陽性である、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌の腫瘍増殖が約５０％超阻害される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記癌のメチルマークが約８０％超減少される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式２：
【化１】
2017530940.tif 000027
（式中、Ｘが、−Ｃ（ＲＸＣ）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲＸＮ−であり、ここで、ＲＸＣの各例が、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式３：
【化２】
2017530940.tif 000028
（式中、ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式４：
【化３】
2017530940.tif 000029
（式中、Ｘが、−Ｃ（ＲＸＣ）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲＸＮ−であり、ここで、ＲＸＣの各例が、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式５：
【化４】
2017530940.tif 000030
（式中、ａおよびｂの各例が、独立して、１または２であり、かつＸが、−Ｃ（ＲＸＣ）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲＸＮ−であり、ここで、ＲＸＣの各例が、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式Ａ：
【化５】
2017530940.tif 000031
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式Ｂ：
【化６】
2017530940.tif 000032
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式Ｃ：
【化７】
2017530940.tif 000033
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式Ｅ：
【化８】
2017530940.tif 000034
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＰＭＲＴ５阻害剤が、式Ｆ：
【化９】
2017530940.tif 000035
の化合物またはその薬学的に許容できる塩である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
２つ以上のＰＲＭＴ５阻害剤が前記被験体に投与される、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体がまた、さらなる治療剤で治療されている、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記被験体が癌に罹患していると診断する工程をさらに含む、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記被験体が以前に癌の治療をされている、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記ＰＲＭＴ５阻害剤が、１つまたは複数のさらなる薬剤を含む医薬組成物中にある、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性の癌に罹患している被験体を特定するための方法であって、
（ａ）被験体から取得された生体試料中のｐ５３の存在または非存在を検出する工程と；
（ｂ）ｐ５３が前記試料中に存在する場合、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性の癌に罹患している前記被験体を特定する工程と
を含む方法。
【請求項２８】
ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を前記被験体に投与する工程をさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性でない癌に罹患している被験体を特定するための方法であって、
（ａ）被験体から取得された生体試料中のｐ５３の存在または非存在を検出する工程と；
（ｂ）ｐ５３が前記試料に存在しない場合、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性でない癌に罹患している前記被験体を特定する工程と
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、２０１５年７月２０日に出願された「ＰＲＭＴ５  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国仮特許出願第６２／１９４，４５９号明細書、２０１５年４月１６日に出願された「ＰＲＭＴ５  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国仮特許出願第６２／１４８，７１３号明細書、および２０１４年８月４日に出願された「ＰＲＭＴ５  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」という名称の米国仮特許出願第６２／０３３，０９５号明細書の、米国特許法第１１９条（ｅ）の下での利益を主張するものであり、これらのそれぞれの全内容が参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
遺伝子発現のエピジェネティック制御は、タンパク質産生および細胞分化の重要な生物学的決定因子であり、多くのヒトの疾患においてかなりの病因的役割を担う。
【０００３】
エピジェネティック制御は、そのヌクレオチド配列を変化させずに、遺伝物質の遺伝的修飾に関与する。典型的に、エピジェネティック制御は、クロマチンの転写的に活性な状態と不活性な状態との間で立体配座転移を制御するＤＮＡおよびタンパク質（例えば、ヒストン）の選択的かつ可逆的な修飾（例えば、メチル化）によって媒介される。これらの共有結合修飾は、メチルトランスフェラーゼ（例えば、ＰＲＭＴ５）などの酵素によって制御することができ、それらの多くは、ヒトの疾患を引き起こし得る特異的な遺伝子変異と関連している。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本開示の態様は、１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤を用いて、癌を治療する方法に関する。疾病に関連するクロマチン修飾酵素（例えば、ＰＲＭＴ５）は、癌を含む増殖性疾患などの疾病において役割を果たす。
【０００５】
ある実施形態において、本開示の態様は、癌に罹患している被験体にＰＲＭＴ５阻害剤（例えば、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物）を投与することにより、癌を治療するための方法を提供する。ある実施形態において、癌はリンパ腫（例えば、マントル細胞リンパ腫）である。ある実施形態において、癌は乳癌（例えば、トリプルネガティブ乳癌）である。ある実施形態において、癌は膵臓癌である。ある実施形態において、癌は多発性骨髄腫（ＭＭ）である。ある実施形態において、癌は急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ）である。ある実施形態において、癌は結腸癌である。ある実施形態において、癌は、ｐ５３欠損によって特徴付けられない（例えば、癌はｐ５３陽性癌である）。
【０００６】
本明細書に記載されるように有用であるＰＲＭＴ５阻害剤の非限定的な例としては、後述される式Ａ〜Ｆの化合物が挙げられる。
【０００７】
ある実施形態において、本開示は、式Ａ：
【化１】
2017530940.tif 000003
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ａのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ａの安息香酸塩を提供する。
【０００８】
ある実施形態において、本開示は、式Ｂ：
【化２】
2017530940.tif 000004
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｂのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｂの安息香酸塩を提供する。
【０００９】
ある実施形態において、本開示は、式Ｃ：
【化３】
2017530940.tif 000005
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｃのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｃの安息香酸塩を提供する。
【００１０】
ある実施形態において、本開示は、式Ｄ：
【化４】
2017530940.tif 000006
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｄのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｄの安息香酸塩を提供する。
【００１１】
ある実施形態において、本開示は、式Ｅ：
【化５】
2017530940.tif 000007
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｅのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｅの安息香酸塩を提供する。
【００１２】
ある実施形態において、本開示は、式Ｆ：
【化６】
2017530940.tif 000008
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｆのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｆの安息香酸塩を提供する。
【００１３】
ＰＲＭＴ５阻害剤の他の非限定的な例が、以下の公開特許出願国際公開第２０１１／０７９２３６号パンフレット、国際公開第２０１４／１００６９５号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７１６号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７１９号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７３０号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７６４号パンフレット、および国際公開第２０１４／１００７３４号パンフレット、ならびに米国仮特許出願第６２／０１７，０９７号明細書および同第６２／０１７，０５５号明細書に開示され、それぞれの開示内容が参照により本明細書に援用される（例えば、これらの特許出願に記載される一般的および具体的な化合物が参照により本明細書に援用され、本明細書に記載されるように癌を治療するのに使用され得る）。ある実施形態において、ＰＲＭＴ５阻害剤は、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）である。ＰＲＭＴ５に対するｓｉＲＮＡが、例えばＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００９  Ａｐｒ；７（４）：５５７−６９、およびＢｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２０１２  Ｓｅｐ  １；４４６（２）：２３５−４１に記載されている。
【００１４】
ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療が、約２５％超、約５０％超、約７５％超、約９０％超（例えば、２５％〜５０％、５０％〜７５％、７５％〜９０％、または９０％〜１００％）だけ癌の腫瘍増殖を阻害する。ある実施形態において、ＰＲＭＴ５阻害剤は、約５０％以上だけ癌の腫瘍増殖を阻害するのに十分な量で投与される。
【００１５】
ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、癌のメチルマークが、約５０％超、約７５％超、約８０％超（例えば、５０％〜７５％、５０％〜８０％、８０％〜９０％、８０％〜１００％、または９０％〜１００％）減少される。ある実施形態において、ＰＲＭＴ５阻害剤は、癌のメチルマークを約８０％以上だけ減少させるのに十分な量で投与される。
【００１６】
ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、被験体の体重減少が、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約８％未満、または約５％未満（例えば、２０％〜１０％、１０％〜５％、約８％、約６％、約５％、約４％、または５％〜０％）である。したがって、ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、被験体の体重減少が約８％以下である量で、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含む。ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、被験体の体重減少が約６％以下である量で、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含む。ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、被験体の体重減少が約４％以下である量で、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含む。
【００１７】
ある態様において、本開示は、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性の癌に罹患している被験体を特定する方法であって、被験体から生体試料を取得する工程と；ｐ５３の存在または非存在を検出する工程（例えば、ｐ５３の存在または非存在を検出するアッセイを行う工程）と；ｐ５３が試料中に存在する（例えば、通常のレベルで存在する）場合、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性の癌に罹患している被験体を特定する工程とを含む方法に関する。ある実施形態において、本方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程をさらに含む。
【００１８】
ある態様において、本開示は、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性でない癌に罹患している被験体を特定する方法であって、被験体から生体試料を取得する工程と；ｐ５３の存在または非存在を検出する工程（例えば、ｐ５３の存在または非存在を検出するアッセイを行う工程）と；ｐ５３が試料に存在しない場合、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性でない癌に罹患している被験体を特定する工程とを含む方法に関する。ある実施形態において、本方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含まない治療計画を被験体に対して実施する工程をさらに含む。
【００１９】
ある実施形態において、組成物は、下式：式Ａ、式Ｂ、式Ｃ、式Ｄ、式Ｅ、または式Ｆのうちの１つを有するＰＲＭＴ５阻害剤を含む。
【００２０】
ある実施形態において、２つ以上のＰＲＭＴ５阻害剤が被験体に投与される。
【００２１】
ある実施形態において、被験体はまた、さらなる治療剤で治療されている。
【００２２】
ある実施形態において、被験体は、治療の開始前に癌に罹患していると診断されている。ある実施形態において、被験体は以前に癌の治療をされている。
【００２３】
本発明の他の特徴および利点が、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかである。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】４日目の式Ｂで処理されたＺ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞のｓＤＭＡウエスタンブロットを示す。
【図２】式Ｂで処理されたＺ−１３８細胞において行われたＩＣＷアッセイからのＩＣ５０（ｎＭ）結果を示す。Ｎ＝１。阻害率パーセントを測定し、化合物の濃度当たりトリプリケートウェルを用いて、ＩＣ５０曲線を生成した。上部が１００％に固定された正規化された用量反応曲線の４−パラメータフィット（ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ  ｆｉｔ）を用いたＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて、ＩＣ５０値を計算した。
【図３】式Ｂで処理されたＭａｖｅｒ−１細胞において行われたＩＣＷアッセイからのＩＣ５０（ｎＭ）結果を示す。Ｎ＝１。阻害率パーセントを測定し、化合物の濃度当たりトリプリケートウェルを用いて、ＩＣ５０曲線を生成した。上部が１００％に固定された正規化された用量反応曲線の４−パラメータフィットを用いたＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて、ＩＣ５０値を計算した。
【図４】マントル細胞リンパ腫細胞株Ｚ−１３８において行われた長期増殖アッセイの代表的な試料を示す。アッセイを技術的トリプリケートにおいて行い、１４日間にわたって細胞生存を読み取った。増殖曲線（上部パネル）をＥｘｃｅｌで計算した。ＩＣ５０（下部パネル）およびＩＣ９０（図示せず）値を、曲線の上部および下部をそれぞれ１００％および０％に固定した、非線形回帰分析を用いてＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍで計算した。表中のＩＣ５０値がマイクロＭで示される。
【図５】式Ｂで処理されたＺ−１３８細胞において行われたＨＴＰアッセイからのＩＣ５０結果を示す。Ｎ＝１。ＩＣ５０データがｎＭで示される。
【図６】式Ｂでの処理の際のＭＣＬ株の遺伝子発現変化を示す。各試料についてのリアルタイムＰＣＲをデュプリケートで行った。倍率変化を、比較Ｃｔ法（−２−ΔΔＣｔ）を用いて計算した。Ｎ＝１。
【図７】式Ｂで処理されたＺ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞のアネキシン−Ｖ染色を示す。Ｎ＝１。
【図８】Ｚ−１３８異種移植片モデルにおける式Ｂの有効性を示す  −  試験された全ての用量が５０％超のＴＧＩを示す。
【図９】Ｍａｖｅｒ−１異種移植片モデルにおける式Ｂの有効性を示す  −  試験された全ての用量が５０％超のＴＧＩを示す。
【図１０】Ｚ−１３８異種移植片モデルにおける式Ａの有効性を示す  −  試験された全ての用量が５０％超のＴＧＩを示す。
【図１１】Ｍａｖｅｒ−１異種移植片モデルにおける式Ａの有効性を示す  −  試験された全ての用量が５０％超のＴＧＩを示す。
【図１２】代用組織におけるインビボでのメチルマーク阻害を示す。式Ｂを用いたＺ−１３８細胞有効性試験からの骨髄試料のｓＤＭＡウエスタンブロット分析。
【図１３】乳癌細胞株（ＳＫＢＲ−３、ＺＲ−７５−１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８）において行われた総細胞死数アッセイからのデータを提供する。ＭＣＬ細胞株（Ｚ−１３８）を陽性対照として使用した。
【図１４】式ＡおよびＢのＰＲＭＴ５阻害剤で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞のｓｕｂＱ異種移植片モデルの腫瘍増殖阻害を示す。
【図１５】ＰＲＭＴ５阻害剤で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４６８乳癌細胞のｓｕｂＱ異種移植片モデルのメチルマーク応答を示す。
【図１６】式ＣおよびＤのＰＲＭＴ５阻害剤で処理された膵臓細胞を示す。
【図１７】式ＣおよびＤのＰＲＭＴ５阻害剤で処理されたＭｉａｐａｃａ−２膵臓癌細胞中のメチルマークのＣＳＴ−Ｈ４Ｒ３ｍｅ２ｓ抗体ブロットを示す。
【図１８】膵臓癌細胞株（Ｍｉａｐａｃａ−２、Ｐａｎｃ−１）中の病巣形成および細胞形態の影響を示す。
【図１９】膵臓癌細胞株（Ｍｉａｐａｃａ−２、Ｐａｎｃ−１）中の２Ｄ増殖試験を示す。式Ｄで処理された４、６および１３日目における発育阻止濃度（ｇ  ＩＣ５０）の計算。
【図２０】式Ｃで処理されたヘム癌細胞株における増殖の阻害を示すデータを示す。
【図２１】式Ｃの化合物での処理によるＰＲＭＴ５阻害が、ＭＤＭ４スプライシングを軽減し、ｐ５３発現を増加させることを示す。
【図２２】ｐ５３が欠損した細胞が、ｐ５３を有する細胞より式Ｃの化合物での処理によってＰＲＭＴ５阻害に対して感受性が低いことを示す。
【図２３】式ＣのＰＭＲＴ５阻害剤に応答して、マントル細胞リンパ腫細胞株Ｚ１３８中のＧ１期停止および細胞死を示す。
【図２４】式ＣのＰＲＭＴ５阻害剤に応答して、ｐ５３経路活性の誘導におけるＭＤＭ４スプライシングの役割を示す。
【図２５】完全長（ＦＬ）ＭＤＭ４を過剰発現するＺ−１３８細胞が、ＰＲＭＴ５阻害に対する感受性が低いことを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本開示の態様は、１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤を用いて癌を治療するための方法を提供する。ある実施形態において、１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤が、癌に罹患している被験体に投与される。ある実施形態において、被験体は、ＰＲＭＴ５阻害剤での治療前に癌に罹患していると診断されている。ある実施形態において、被験体は、リンパ腫、乳癌、または膵臓癌に罹患している。ある実施形態において、被験体は、ＰＲＭＴ５阻害剤での治療前にリンパ腫、乳癌、または膵臓癌に罹患していると診断されている。しかしながら、１つまたは複数の他の癌に罹患している（例えば、罹患していると診断されている）被験体もＰＲＭＴ５阻害剤で治療し得ることを理解されたい。
【００２６】
ある実施形態において、１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤が、癌を治療または予防するために（例えば、癌の再発のリスクを防止または軽減するために）単独で投与される。ある実施形態において、１つまたは複数のさらなる治療剤（例えば、化学療法剤および／またはホルモン療法剤）および／またはさらなる治療処置（例えば、放射線および／または外科手術）に加えて、１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤が提供される。
【００２７】
ＰＲＭＴ５阻害剤が、１つまたは複数の薬学的に許容できる溶媒および／または緩衝液および／または塩とともに医薬組成物中に提供され得ることを理解されたい。ある実施形態において、ＰＲＭＴ５阻害剤が、乾燥形態（例えば、粉末、固体、または結晶形態）で提供される。ある実施形態において、ＰＲＭＴ５阻害剤が、液体形態（例えば、溶液または懸濁液）で提供される。しかしながら、ＰＲＭＴ５阻害剤が、本明細書に記載される他の形態で提供され得ることを理解されたい。
【００２８】
タンパク質アルギニンメチルトランスフェラーゼ５（ＰＲＭＴ５）が、アルギニンの２個のω−グアニジノ窒素原子に対する２つのメチル基の付加を触媒して、標的タンパク質のアルギニン（ｓＤＭＡ）のω−ＮＧ、Ｎ’Ｇ対称性ジメチル化をもたらす。ＰＲＭＴ５は、核ならびに細胞質において機能し、その基質は、ヒストン、スプライソソームタンパク質、転写因子を含む（例えば、Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１，ＰＮＡＳ  １０８：２０５３８−２０５４３を参照）。ＰＲＭＴ５は、一般に、タンパク質複合体の一部として機能する。ＰＲＭＴ５のタンパク質複合体が、様々な成分を有し得る一方、それらは、一般に、タンパク質ＭＥＰ５０（メチロソームタンパク質５０）を含む。さらに、ＰＲＭＴ５は、補因子ＳＡＭ（Ｓ−アデノシルメチオニン）とともに作用する。
【００２９】
ＰＲＭＴ５は、多様な生物学的過程の調節におけるその役割を考えると、修飾の魅力的な標的である。本明細書に記載されるように、ＰＲＭＴ５は、癌細胞増殖に関連する過程に関与し、ＰＲＭＴ５の阻害は、癌細胞増殖を遅らせるかまたは停止させ、および／または癌細胞死、例えば、アポトーシスを引き起こすことができる。本明細書に記載される化合物、ならびにその薬学的に許容できる塩および組成物が、癌を治療するのに有用なＰＲＭＴ５の有効な阻害剤であることが分かった。
【００３０】
本明細書に記載されるように有用なＰＲＭＴ５阻害剤の非限定的な例としては、後述されるように式１〜５およびＡ〜Ｆの化合物が挙げられる。
【００３１】
一般に上述されるように、ＰＲＭＴ５阻害剤として有用な化合物が本明細書に提供される。ある実施形態において、本開示は、式（１）：
【化７】
2017530940.tif 000009
（式中：
【化８】
2017530940.tif 000010
が、単結合または二重結合を表し；
Ｒ１２が、水素、ハロゲン、または任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキルであり；
Ｒ１３が、水素、ハロゲン、任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、−ＮＲＡ１ＲＡ２、または−ＯＲ１であり；
ＲＡ１およびＲＡ２がそれぞれ、独立して、水素、任意選択的に置換されるＣ１〜３アルキル、任意選択的に置換されるアシル、または窒素保護基であり、またはＲＡ１およびＲＡ２が、介在する窒素原子と一緒になって、任意選択的に置換される３〜６員複素環を形成し；
Ｒ１が、水素、Ｒｚ、または−Ｃ（Ｏ）Ｒｚであり、ここで、Ｒｚが、任意選択的に置換されるＣ１〜６アルキルであり；
Ｌが、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−，−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）Ｏ−、または−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−であり；
各Ｒが、独立して、水素または任意選択的に置換されるＣ１〜６脂肪族であり；
Ａｒが、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する単環式または二環式芳香環であり、ここで、Ａｒが、原子価が許容する場合、０、１、２、３、４、または５つのＲｙ基で置換され；または
Ａｒが、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有する単環式または二環式複素環であり、ここで、Ａｒが、原子価が許容する場合、０、１、２、３、４、または５つのＲｙ基で置換され；
各Ｒｙが、独立して、ハロ、−ＣＮ、−ＮＯ２、任意選択的に置換される脂肪族、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−ＯＲＡ、−Ｎ（ＲＢ）２、−ＳＲＡ、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＡ、−Ｃ（Ｏ）ＳＲＡ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＯＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＮＲＢＣ（Ｏ）ＲＡ、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＮＲＢＣ（Ｏ）Ｎ（ＲＢ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＮＲＢＣ（Ｏ）ＯＲＡ、−ＳＣ（Ｏ）ＲＡ、−Ｃ（＝ＮＲＢ）ＲＡ、−Ｃ（＝ＮＮＲＢ）ＲＡ、−Ｃ（＝ＮＯＲＡ）ＲＡ、−Ｃ（＝ＮＲＢ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＮＲＢＣ（＝ＮＲＢ）ＲＢ、−Ｃ（＝Ｓ）ＲＡ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（ＲＢ）２、−ＮＲＢＣ（＝Ｓ）ＲＡ、−Ｓ（Ｏ）ＲＡ、−ＯＳ（Ｏ）２ＲＡ、−ＳＯ２ＲＡ、−ＮＲＢＳＯ２ＲＡ、または−ＳＯ２Ｎ（ＲＢ）２からなる群から選択され；
各ＲＡが、独立して、水素、任意選択的に置換される脂肪族、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、および任意選択的に置換されるヘテロアリールからなる群から選択され；
各ＲＢが、独立して、水素、任意選択的に置換される脂肪族、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、および任意選択的に置換されるヘテロアリールからなる群から選択され、または２つのＲＢ基が、それらの介在原子と一緒になって、任意選択的に置換される複素環を形成し；
Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８がそれぞれ、独立して、水素、ハロ、または任意選択的に置換される脂肪族であり；
各Ｒｘが、独立して、ハロ、−ＣＮ、任意選択的に置換される脂肪族、−ＯＲ’、および−Ｎ（Ｒ’’）２からなる群から選択され；
Ｒ’が、水素または任意選択的に置換される脂肪族であり；
各Ｒ’’が、独立して、水素または任意選択的に置換される脂肪族であり、または２つのＲ’’基が、それらの介在原子と一緒になって、複素環を形成し；および
ｎが、原子価が許容する場合、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０である）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。
【００３２】
特定の実施形態において、式（２）：
【化９】
2017530940.tif 000011
（式中、Ｘが、−Ｃ（ＲＸＣ）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲＸＮ−であり、ここで、ＲＸＣの各例が、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００３３】
特定の実施形態において、式（３）：
【化１０】
2017530940.tif 000012
（式中、ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００３４】
特定の実施形態において、式（４）：
【化１１】
2017530940.tif 000013
（式中、Ｘが、−Ｃ（ＲＸＣ）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲＸＮ−であり、ここで、ＲＸＣの各例が、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００３５】
特定の実施形態において、式（５）：
【化１２】
2017530940.tif 000014
（式中、ａおよびｂの各例が、独立して、１または２であり、かつＸが、−Ｃ（ＲＸＣ）２−、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲＸＮ−であり、ここで、ＲＸＣの各例が、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールであり；ＲＸＮが、独立して、水素、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、任意選択的に置換されるヘテロアリール、−Ｃ（＝Ｏ）ＲＸＡ、または窒素保護基であり；ＲＸＡが、任意選択的に置換されるアルキル、任意選択的に置換されるカルボシクリル、任意選択的に置換されるヘテロシクリル、任意選択的に置換されるアリール、または任意選択的に置換されるヘテロアリールである）
の化合物またはその薬学的に許容できる塩が提供される。
【００３６】
ある実施形態において、本開示は、式Ａ：
【化１３】
2017530940.tif 000015
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ａのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ａの安息香酸塩を提供する。
【００３７】
ある実施形態において、本開示は、式Ｂ：
【化１４】
2017530940.tif 000016
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｂのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｂの安息香酸塩を提供する。
【００３８】
ある実施形態において、本開示は、式Ｃ：
【化１５】
2017530940.tif 000017
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｃのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｃの安息香酸塩を提供する。
【００３９】
ある実施形態において、本開示は、式Ｄ：
【化１６】
2017530940.tif 000018
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｄのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｄの安息香酸塩を提供する。
【００４０】
ある実施形態において、本開示は、式Ｅ：
【化１７】
2017530940.tif 000019
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｅのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｅの安息香酸塩を提供する。
【００４１】
ある実施形態において、本開示は、式Ｆ：
【化１８】
2017530940.tif 000020
の化合物またはその薬学的に許容できる塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｆのコハク酸塩を提供する。ある実施形態において、本開示は、式Ｆの安息香酸塩を提供する。
【００４２】
ＰＲＭＴ５阻害剤の他の非限定的な例が、以下の公開特許出願国際公開第２０１１／０７９２３６号パンフレット、国際公開第２０１４／１００６９５号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７１６号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７１９号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７３０号パンフレット、国際公開第２０１４／１００７６４号パンフレット、および国際公開第２０１４／１００７３４号パンフレット、ならびに米国仮特許出願第６２／０１７，０９７号明細書および同第６２／０１７，０５５号明細書に開示され、それぞれの開示内容が参照により本明細書に援用される（例えば、これらの特許出願に記載される一般的および具体的な化合物が参照により本明細書に援用され、本明細書に記載されるように癌を治療するのに使用され得る）。ある実施形態において、ＰＲＭＴ５阻害剤は、核酸（例えば、ｓｉＲＮＡ）である。ＰＲＭＴ５に対するｓｉＲＮＡが、例えばＭｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００９  Ａｐｒ；７（４）：５５７−６９、およびＢｉｏｃｈｅｍ  Ｊ．２０１２  Ｓｅｐ  １；４４６（２）：２３５−４１に記載されている。
【００４３】
ある実施形態において、癌（例えば、リンパ腫、例えばマントル細胞リンパ腫、乳癌、例えばトリプルネガティブ乳癌、または膵臓癌）などの増殖性疾患を治療する方法であって、癌に罹患している被験体に有効量の、本明細書に記載されるＰＲＭＴ５阻害剤化合物（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物）、またはその薬学的に許容できる塩、またはその医薬組成物を投与する工程を含む方法が提供される。特定の実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、リンパ腫を治療するのに有用である。ある実施形態において、リンパ腫はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。ある実施形態において、リンパ腫は急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ）である。ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、膵臓癌を治療するのに有用である。ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、乳癌を治療するのに有用である。ある実施形態において、乳癌はエストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）である。ある実施形態において、乳癌はプロゲステロン受容体陰性（ＰＲ−）である。ある実施形態において、乳癌はＨＥＲ２陰性である。ある実施形態において、乳癌はＥＲ−およびＰＲ−である。ある実施形態において、乳癌はＥＲ−およびＨＥＲ２陰性である。ある実施形態において、乳癌はＰＲ−およびＨＥＲ２陰性である。ある実施形態において、乳癌は、エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性およびＨＥＲ２陰性である（本明細書において「トリプルネガティブ乳癌」とも呼ばれる）。ある実施形態において、乳癌は、ＨＥＲ２陽性、エストロゲン受容体陽性、および／またはプロゲステロン受容体陽性である。例えば、ある実施形態において、乳癌はＨＥＲ２およびエストロゲン受容体陽性である。ある実施形態において、乳癌はＨＥＲ２およびプロゲステロン受容体陽性である。ある実施形態において、乳癌はエストロゲンおよびプロゲステロン受容体陽性である。ある実施形態において、乳癌は、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、浸潤性乳管癌（ＩＤＣ）、炎症性乳癌、乳頭パジェット病、葉状腫瘍、血管肉腫、腺様嚢胞癌、低悪性腺扁平上皮癌、髄様癌、粘液癌、乳頭癌、管状腺癌、化生癌、微小乳頭癌、混合癌、または別の乳癌タイプであり得る。ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、多発性骨髄腫（ＭＭ）を治療するのに有用である。ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、ｐ５３欠損によって特徴付けられない癌を治療するのに有用である（例えば、癌は、ｐ５３陽性癌である）。
【００４４】
投与が想定される「被験体」としては、以下に限定はされないが、ヒト（例えば、任意の年齢層の男性または女性、例えば、小児の被験体（例えば、乳児、幼児、青年）または成人の被験体（例えば、若年成人、中高年））および／または他の非ヒト動物、例えば、非ヒト哺乳動物（例えば、霊長類（例えば、カニクイザル、アカゲザル）；ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、および／またはイヌなどの商業に関連する哺乳動物）、鳥類（例えば、ニワトリ、カモ、ガチョウ、および／またはシチメンチョウなどの商業に関連する鳥類）、げっ歯類（例えば、ラットおよび／またはマウス）、は虫類、両生類、および魚類が挙げられる。特定の実施形態において、非ヒト動物は、哺乳動物である。非ヒト動物は、任意の発育段階の雄または雌であり得る。非ヒト動物は、トランスジェニック動物であり得る。
【００４５】
「病態」、「疾患」、および「障害」は、本明細書において同義的に使用される。
【００４６】
「治療する」、「治療すること」および「治療」は、病態の重症度を軽減し、または病態の進行を遅延させまたは遅らせる、被験体が病態に罹患している間に行われる行動（「治療的処置」）を包含する。「治療する」、「治療すること」および「治療」は、病態の重症度を抑制または軽減する、被験体が病態に罹患し始める前に行われる行動（「予防的処置」）も包含する。
【００４７】
化合物の「有効量」は、所望の生体反応を引き起こす、例えば、病態を治療するのに十分な量を指す。当業者によって理解されるように、本明細書に記載される化合物の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、化合物の薬物動態、治療される病態、投与方法、ならびに被験体の年齢および健康などの要因に応じて変化し得る。有効量は、治療処置および予防処置のための治療的に有効な量および予防的に有効な量を包含する。
【００４８】
化合物の「治療的に有効な量」は、病態の処置に有効な治療を提供するか、または病態に関連する１つまたは複数の症状を遅延させるかまたは最小限に抑えるのに十分な量である。化合物の治療的に有効な量は、単独でまたは他の治療と組み合わせて、病態の処置に有効な治療を提供する、治療剤の量を意味する。「治療的に有効な量」という用語は、全体的な治療を改善し、症状または病態の原因を軽減または回避し、または別の治療剤の治療効果を促進する量を包含し得る。
【００４９】
化合物の「予防的に有効な量」は、病態、または病態に関連する１つまたは複数の症状を予防するかまたはその再発を予防するのに十分な量である。化合物の予防的に有効な量は、単独でまたは他の剤と組み合わせて、病態の予防における予防効果を提供する、治療剤の量を意味する。「予防的に有効な量」という用語は、全体的な予防を改善し、または別の予防薬の予防効果を促進する量を包含し得る。
【００５０】
本明細書において使用される際、「メチルトランスフェラーゼ」という用語は、供与体分子から受容体分子、例えば、タンパク質のアミノ酸残基またはＤＮＡ分子の核酸塩基へとメチル基を転移することができるトランスフェラーゼクラス酵素を表す。メチルトランスフェラーゼは、典型的に、メチル供与体としてのＳ−アデノシルメチオニン（ＳＡＭ）中の硫黄に結合された反応性メチル基を使用する。ある実施形態において、本明細書に記載されるメチルトランスフェラーゼは、タンパク質メチルトランスフェラーゼである。ある実施形態において、本明細書に記載されるメチルトランスフェラーゼは、ヒストンメチルトランスフェラーゼである。ヒストンメチルトランスフェラーゼ（ＨＭＴ）は、ヒストンタンパク質のリジンおよびアルギニン残基への１つまたは複数のメチル基の転移を触媒する、ヒストン修飾酵素（ヒストン−リジンＮ−メチルトランスフェラーゼおよびヒストン−アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼを含む）である。特定の実施形態において、本明細書に記載されるメチルトランスフェラーゼは、ヒストン−アルギニンＮ−メチルトランスフェラーゼである。
【００５１】
特定の実施形態において、提供される化合物は、ＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、野生型ＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、突然変異体ＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、例えば、本明細書に記載されるアッセイにおいて測定した際に、ＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、ＰＲＭＴ５は、ヒトに由来する。特定の実施形態において、提供される化合物は、１０μＭ以下のＩＣ５０でＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、１μＭ以下のＩＣ５０でＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、０．１μＭ以下のＩＣ５０でＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、１０μＭ以下のＥＣ５０で細胞中のＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、１μＭ以下のＥＣ５０で細胞中のＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、０．１μＭ以下のＥＣ５０で細胞中のＰＲＭＴ５を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、１０μＭ以下のＥＣ５０で細胞増殖を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、１μＭ以下のＥＣ５０で細胞増殖を阻害する。特定の実施形態において、提供される化合物は、０．１μＭ以下のＥＣ５０で細胞増殖を阻害する。ある実施形態において、提供される化合物は、他のメチルトランスフェラーゼよりＰＲＭＴ５に対して選択的である。特定の実施形態において、提供される化合物は、１つまたは複数の他のメチルトランスフェラーゼと比べて、ＰＲＭＴ５に対して、少なくとも約１０倍選択的であり、少なくとも約２０倍選択的であり、少なくとも約３０倍選択的であり、少なくとも約４０倍選択的であり、少なくとも約５０倍選択的であり、少なくとも約６０倍選択的であり、少なくとも約７０倍選択的であり、少なくとも約８０倍選択的であり、少なくとも約９０倍選択的であり、または少なくとも約１００倍選択的である。
【００５２】
本開示は、本明細書に記載される化合物、例えば、本明細書に記載される式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物、またはその薬学的に許容できる塩と、任意選択的に薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。本明細書に記載される化合物、またはその塩が、水和物、溶媒和物、または多形体などの様々な形態で存在し得ることが当業者によって理解されよう。特定の実施形態において、提供される組成物は、本明細書に記載される２つ以上の化合物を含む。特定の実施形態において、本明細書に記載される化合物、またはその薬学的に許容できる塩は、医薬組成物中に有効量で提供される。特定の実施形態において、有効量は、治療的に有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、ＰＲＭＴ５を阻害するのに有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、ＰＲＭＴ５媒介性疾患（例えば、ＰＲＭＴ−５媒介性癌）を治療するのに有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、予防的に有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、ＰＲＭＴ５媒介性疾患を予防するのに有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、ＰＲＭＴ５媒介性疾患（例えば、ＰＲＭＴ−５媒介性癌）を予防するのに有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、癌（例えば、リンパ腫、例えばマントル細胞リンパ腫、乳癌、例えばトリプルネガティブ乳癌、または膵臓癌）を治療するのに十分な量である。
【００５３】
薬学的に許容できる賦形剤は、所望の特定の剤形に適するように、あらゆる溶媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散体、懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存料、固体結合剤、潤滑剤などを含む。医薬組成物の薬剤の製剤化および／または製造における一般的な考慮事項が、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５）に見ることができる。
【００５４】
「薬学的に許容できる塩」は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずにヒトおよび他の動物の組織と接触した状態で使用するのに好適であり、かつ妥当なベネフィット／リスク比に見合う塩を指す。薬学的に許容できる塩は、当該技術分野において周知である。例えば、Ｂｅｒｇｅらが、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９７７）６６：１−１９において詳細に薬学的に許容できる塩を説明している。本明細書に記載される化合物の薬学的に許容できる塩は、好適な無機および有機酸および塩基から誘導されるものを含む。薬学的に許容できる非毒性酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸とともに、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、またはマロン酸などの有機酸とともに、あるいはイオン交換などの当該技術分野において使用される他の方法を用いることによって形成されるアミノ基の塩である。他の薬学的に許容できる塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、樟脳スルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩（ｐｅｃｔｉｎａｔｅ）、過硫酸塩、３−フェニルプロピオネート、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。適切な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらなる薬学的に許容できる塩としては、適切な場合、第四級塩が挙げられる。
【００５５】
本明細書に記載される医薬組成物は、薬理学の技術分野において公知の任意の方法によって調製され得る。一般に、このような調製方法は、本明細書に記載される化合物（「活性成分」）を、担体および／または１つまたは複数の他の補助的な成分と合わせる工程と、次に、必要であるかおよび／または望ましい場合、生成物を、所望の単回または複数回用量単位へと成形および／または包装する工程とを含む。
【００５６】
医薬組成物は、単回単位用量として、および／または複数の単回単位用量として、大量に調製、包装、および／または販売され得る。本明細書において使用される際、「単位用量」は、所定の量の活性成分を含む医薬組成物の個別の量である。活性成分の量は、一般に、被験体に投与され得る活性成分の投与量および／または例えば、このような投与量の２分の１または３分の１などの、このような投与量の好都合な割合に等しい。
【００５７】
本開示の医薬組成物中の活性成分、薬学的に許容できる賦形剤、および／または任意のさらなる成分の相対量は、治療される被験体の属性、サイズ、および／または病態に応じて、さらに組成物が投与される経路に応じて変化することになる。例として、組成物は、０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得る。
【００５８】
提供される医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容できる賦形剤としては、不活性希釈剤、分散剤および／または造粒剤、表面活性剤および／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存料、緩衝剤、平滑剤、および／または油が挙げられる。カカオ脂および坐薬ワックスなどの賦形剤、着色剤、コーティング剤、甘味料、香味料、および芳香剤も、組成物中に存在し得る。
【００５９】
例示的な希釈剤としては、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、リン酸水素カルシウム、リン酸ナトリウムラクトース、スクロース、セルロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、ソルビトール、イノシトール、塩化ナトリウム、乾燥でんぷん、トウモロコシでんぷん、粉砂糖、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００６０】
例示的な造粒剤および／または分散剤としては、ジャガイモでんぷん、トウモロコシでんぷん、タピオカでんぷん、でんぷんグリコール酸ナトリウム、粘土、アルギン酸、グアーガム、柑橘類の絞りかす、寒天、ベントナイト、セルロースおよび木材製品、天然海綿、カチオン交換樹脂、炭酸カルシウム、シリケート、炭酸ナトリウム、架橋ポリ（ビニル−ピロリドン）（クロスポビドン）、ナトリウムカルボキシメチルでんぷん（でんぷんグリコール酸ナトリウム）、カルボキシメチルセルロース、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース（クロスカルメロース）、メチルセルロース、アルファでんぷん（スターチ１５００）、微結晶性でんぷん、水不溶性でんぷん、カルシウムカルボキシメチルセルロース、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）、ラウリル硫酸ナトリウム、第四級アンモニウム化合物、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００６１】
例示的な表面活性剤および／または乳化剤としては、天然乳化剤（例えば、アカシア、寒天、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、トラガカント、コンドラックス（ｃｈｏｎｄｒｕｘ）、コレステロール、キサンタン、ペクチン、ゼラチン、卵黄、カゼイン、羊毛脂、コレステロール、ワックス、およびレシチン）、コロイド粘土（例えば、ベントナイト（ケイ酸アルミニウム）およびＶｅｅｇｕｍ（ケイ酸アルミニウムマグネシウム））、長鎖アミノ酸誘導体、高分子量アルコール（例えば、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール、トリアセチンモノステアレート、エチレングリコールジステアレート、モノステアリン酸グリセリル、およびプロピレングリコールモノステアレート、ポリビニルアルコール）、カルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）（例えば、カルボキシポリメチレン、ポリアクリル酸、アクリル酸ポリマー、およびカルボキシビニルポリマー）、カラギーナン、セルロース誘導体（例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、粉末セルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース）、ソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（Ｔｗｅｅｎ２０）、ポリオキシエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ６０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（Ｔｗｅｅｎ８０）、ソルビタンモノパルミテート（Ｓｐａｎ  ４０）、ソルビタンモノステアレート（Ｓｐａｎ  ６０）、ソルビタントリステアレート（Ｓｐａｎ  ６５）、グリセリルモノオレエート、ソルビタンモノオレエート（Ｓｐａｎ  ８０））、ポリオキシエチレンエステル（例えば、ポリオキシエチレンモノステアレート（Ｍｙｒｊ  ４５）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエトキシ化ヒマシ油、ポリオキシメチレンステアレート、およびＳｏｌｕｔｏｌ）、スクロース脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル（例えば、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（商標））、ポリオキシエチレンエーテル、（例えば、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ  ３０））、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ジエチレングリコールモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、オレイン酸ナトリウム、オレイン酸カリウム、オレイン酸エチル、オレイン酸、ラウリン酸エチル、ラウリル硫酸ナトリウム、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８、ポロキサマー１８８、臭化セトリモニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ベンザルコニウム、ドクサートナトリウム、および／またはそれらの混合物が挙げられる。
【００６２】
例示的な結合剤としては、でんぷん（例えば、トウモロコシでんぷんおよびでんぷん糊）、ゼラチン、糖類（例えば、スクロース、グルコース、デキストロース、デキストリン、糖蜜、ラクトース、ラクチトール、マンニトールなど）、天然および合成ゴム（例えば、アカシア、アルギン酸ナトリウム、アイリッシュモスの抽出物、パンワーガム（ｐａｎｗａｒ  ｇｕｍ）、ガティガム（ｇｈａｔｔｉ  ｇｕｍ）、イサポール皮の粘液（ｍｕｃｉｌａｇｅ  ｏｆ  ｉｓａｐｏｌ  ｈｕｓｋ）、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、微結晶性セルロース、酢酸セルロース、ポリ（ビニル−ピロリドン）、ケイ酸アルミニウムマグネシウム（Ｖｅｅｇｕｍ）、およびカラマツアラビノガラクタン）、アルギネート、ポリエチレンオキシド、ポリエチレングリコール、無機カルシウム塩、ケイ酸、ポリメタクリレート、ワックス、水、アルコール、および／またはそれらの混合物が挙げられる。
【００６３】
例示的な保存料としては、酸化防止剤、キレート剤、抗菌性保存料、抗真菌性保存料、アルコール保存料、酸性保存料、および他の保存料が挙げられる。
【００６４】
例示的な酸化防止剤としては、αトコフェロール、アスコルビン酸、パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、モノチオグリセロール、メタ重亜硫酸カリウム、プロピオン酸、没食子酸プロピル、アスコルビン酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、および亜硫酸ナトリウムが挙げられる。
【００６５】
例示的なキレート剤としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）ならびにその塩および水和物（例えば、エデト酸ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸二カリウムなど）、クエン酸ならびにその塩および水和物（例えば、クエン酸一水和物）、フマル酸ならびにその塩および水和物、リンゴ酸ならびにその塩および水和物、リン酸ならびにその塩および水和物、ならびに酒石酸ならびにその塩および水和物が挙げられる。例示的な抗菌性保存料としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、ベンジルアルコール、ブロノポール、セトリミド、塩化セチピリジニウム、クロルヘキシジン、クロロブタノール、クロロクレゾール、クロロキシレノール、クレゾール、エチルアルコール、グリセリン、ヘキセチジン、イミド尿素、フェノール、フェノキシエタノール、フェニルエチルアルコール、硝酸フェニル水銀、プロピレングリコール、およびチメロサールが挙げられる。
【００６６】
例示的な抗真菌性保存料としては、ブチルパラベン、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、安息香酸カリウム、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、プロピオン酸ナトリウム、およびソルビン酸が挙げられる。
【００６７】
例示的なアルコール保存料としては、エタノール、ポリエチレングリコール、フェノール、フェノール化合物、ビスフェノール、クロロブタノール、ヒドロキシベンゾエート、およびフェニルエチルアルコールが挙げられる。
【００６８】
例示的な酸性保存料としては、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、β−カロテン、クエン酸、酢酸、デヒドロ酢酸、アスコルビン酸、ソルビン酸、およびフィチン酸が挙げられる。
【００６９】
他の保存料としては、トコフェロール、酢酸トコフェロール、メシル酸デテロキシム（ｄｅｔｅｒｏｘｉｍｅ  ｍｅｓｙｌａｔｅ）、セトリミド、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、エチレンジアミン、ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＬＳ）、ラウリルエーテル硫酸ナトリウム（ＳＬＥＳ）、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、Ｇｌｙｄａｎｔ  Ｐｌｕｓ、Ｐｈｅｎｏｎｉｐ、メチルパラベン、Ｇｅｒｍａｌｌ  １１５、Ｇｅｒｍａｂｅｎ  ＩＩ、Ｎｅｏｌｏｎｅ、Ｋａｔｈｏｎ、およびＥｕｘｙｌが挙げられる。特定の実施形態において、保存料は、酸化防止剤である。他の実施形態において、保存料は、キレート剤である。
【００７０】
例示的な緩衝剤としては、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、塩化アンモニウム、炭酸カルシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、グルビオン酸カルシウム、グルコヘプトン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、Ｄ−グルコン酸、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、プロパン酸、レブリン酸カルシウム、ペンタン酸、第二リン酸カルシウム、リン酸、第三リン酸カルシウム、水酸化カルシウムリン酸塩、酢酸カリウム、塩化カリウム、グルコン酸カリウム、カリウム混合物、第二リン酸カリウム、第一リン酸カリウム、リン酸カリウム混合物、酢酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、第二リン酸ナトリウム、第一リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム混合物、トロメタミン、水酸化マグネシウム、水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱性物質除去水、等張食塩水、リンゲル液、エチルアルコール、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００７１】
例示的な平滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、シリカ、タルク、麦芽、ベヘン酸グリセリル、水添植物油、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ロイシン、ラウリル硫酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００７２】
例示的な天然油としては、アーモンド油、キョウニン油、アボカド油、ババス油、ベルガモット油、カシス種子油、ボラジ油、カデ油、カミツレ油、キャノーラ油、カラウェー油、カルナバ油、ヒマシ油、ケイ皮油、カカオ脂、ヤシ油、タラ肝油、コーヒー油、トウモロコシ油、綿実油、エミュー油、ユーカリ油、月見草油、魚油、アマニ油、ゲラニオール、ヒョウタン（ｇｏｕｒｄ）油、ブドウ種油、ヘーゼルナッツ油、ヒソップ油、ミリスチン酸イソプロピル、ホホバ油、ククイナッツ油、ラバンジン油、ラベンダー油、レモン油、アオモジ（ｌｉｔｓｅａ  ｃｕｂｅｂａ）油、マカデミアナッツ油、ゼニアオイ油、マンゴー種子油、メドウフォーム種子油、ミンク油、ニクズク油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラフィー油、パーム油、パーム核油、トウニン油、ピーナッツ油、ケシ油、カボチャ種子油、菜種油、ぬか油、ローズマリー油、ベニバナ油、ビャクダン油、サザンカ（ｓａｓｑｕａｎａ）油、セイバリー油、シーバックソーン油、ゴマ油、シアバター、シリコーン油、ダイズ油、ヒマワリ油、ティーツリー油、アザミ油、椿油、ベチバー油、クルミ油、および小麦胚芽油が挙げられる。例示的な合成油としては、以下に限定はされないが、ステアリン酸ブチル、カプリル酸トリグリセリド、カプリン酸トリグリセリド、シクロメチコン、セバシン酸ジエチル、ジメチコン３６０、ミリスチン酸イソプロピル、鉱油、オクチルドデカノール、オレイルアルコール、シリコーン油、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００７３】
経口および非経口投与用の液体剤形としては、薬学的に許容できる乳剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁液、シロップおよびエリキシル剤が挙げられる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの当該技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤、可溶化剤およびエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（例えば、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルなどの乳化剤、およびそれらの混合物を含み得る。不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味料、香味料、および芳香剤などの補助剤を含み得る。非経口投与の特定の実施形態において、本明細書に記載される化合物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（商標）、アルコール、油、変性油、グリコール、ポリソルベート、シクロデキストリン、ポリマー、およびそれらの混合物などの可溶化剤と混合される。
【００７４】
注射用製剤、例えば、滅菌した注射用水性または油性懸濁液が、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて、公知の技術にしたがって製剤化され得る。滅菌した注射用製剤が、非毒性の非経口的に許容できる希釈剤または溶媒中で、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液としての、滅菌した注射用溶液、懸濁液または乳剤であり得る。用いられ得る許容できるビヒクルおよび溶媒は、中でも特に、水、リンゲル液、米国薬局方（Ｕ．Ｓ．Ｐ．）グレードおよび等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌固定油は、溶媒または懸濁媒体として好都合に用いられる。このために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含む任意の無刺激固定油が用いられ得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射用製剤に使用される。
【００７５】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルタを介したろ過によって、または使用前に、滅菌水または他の滅菌した注射用媒体に溶解または分散され得る滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって滅菌され得る。
【００７６】
薬剤の効果を延長するために、皮下または筋肉内注射からの薬剤の吸収を遅らせるのが望ましいことが多い。これは、難水溶性の結晶性または非晶質材料の液体懸濁液の使用によって達成され得る。次に、薬剤の吸収速度は、その溶解速度に応じて決まり、溶解速度は、今度は、結晶サイズおよび結晶形態に応じて決まり得る。あるいは、非経口投与される薬剤形態の遅延吸収は、薬剤を油ビヒクルに溶解または懸濁させることによって行われる。
【００７７】
直腸または膣内投与用の組成物は、典型的に、本明細書に記載される化合物を、周囲温度で固体であるが体温で液体であり、したがって、直腸または膣腔内で溶融し、活性成分を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコールまたは坐薬ワックスなどの好適な非刺激性賦形剤または担体と混合することによって調製され得る坐薬である。
【００７８】
経口投与用の固体剤形としては、カプセル剤、錠剤、丸薬、粉剤、および顆粒が挙げられる。このような固体剤形において、活性成分は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの不活性な薬学的に許容できる賦形剤または担体および／またはａ）でんぷん、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸などの充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロース、およびアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモまたはタピオカでんぷん、アルギン酸、特定のシリケート、および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土などの吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物などの潤滑剤と混合される。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、剤形は、緩衝剤を含み得る。
【００７９】
同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として用いられ得る。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸薬、および顆粒の固体剤形は、腸溶コーティングおよび医薬品製剤化の技術分野において周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製され得る。それらは、乳白剤を任意選択的に含んでいてもよく、腸管の特定の部分のみでまたはそこで優先的に、任意選択的に、遅延させるように、活性成分を放出する組成物でできていてもよい。使用され得る埋め込み型組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。同様のタイプの固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いて、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として用いられ得る。
【００８０】
活性成分は、上述される１つまたは複数の賦形剤を含むマイクロカプセル化形態であり得る。錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸薬、および顆粒の固体剤形は、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび医薬品製剤化の技術分野において周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製され得る。このような固体剤形において、活性成分は、スクロース、ラクトース、またはでんぷんなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合され得る。このような剤形は、通常の慣行どおりに、不活性希釈剤以外のさらなる物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロースなどの、錠剤化潤滑剤および他の錠剤化助剤を含み得る。カプセル剤、錠剤、および丸薬の場合、剤形は、緩衝剤を含み得る。それらは、乳白剤を任意選択的に含んでいてもよく、腸管の特定の部分のみでまたはそこで優先的に、任意選択的に、遅延させるように、活性成分を放出する組成物でできていてもよい。使用され得る埋め込み型組成物の例としては、ポリマー物質およびワックスが挙げられる。
【００８１】
提供される化合物の局所および／または経皮投与用の剤形は、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、粉剤、液剤、噴霧剤、吸入剤および／または貼付剤を含み得る。一般に、活性成分は、薬学的に許容できる担体および／または必要とされ得る際に任意の所望の保存料および／または緩衝液と、滅菌条件下で混合される。さらに、本開示は、経皮パッチの使用を包含し、経皮パッチは、身体への活性成分の制御された送達を提供する追加の利点を有することが多い。このような剤形は、例えば、活性成分を適切な媒体中に溶解および／または分散させることによって調製され得る。その代わりにまたはそれに加えて、速度が、速度制御膜を提供することによって、および／または活性成分をポリマーマトリックスおよび／またはゲル中に分散させることによって制御され得る。
【００８２】
本明細書に記載される皮内用医薬組成物を送達するのに使用するための好適なデバイスは、米国特許第４，８８６，４９９号明細書；同第５，１９０，５２１号明細書；同第５，３２８，４８３号明細書；同第５，５２７，２８８号明細書；同第４，２７０，５３７号明細書；同第５，０１５，２３５号明細書；同第５，１４１，４９６号明細書；および同第５，４１７，６６２号明細書に記載されるものなどの短い針状のデバイスを含む。皮内用組成物は、ＰＣＴ公報の国際公開第９９／３４８５０号パンフレットに記載されるものおよびその機能的均等物などの、皮膚への針の有効貫通長さを限定するデバイスによって投与され得る。液体ジェット式注射器によって、および／または角質層を貫通し、真皮に達するジェットをもたらす針によって、液体ワクチンを真皮に送達するジェット式注射デバイスが好適である。ジェット式注射デバイスは、例えば、米国特許第５，４８０，３８１号明細書；同第５，５９９，３０２号明細書；同第５，３３４，１４４号明細書；同第５，９９３，４１２号明細書；同第５，６４９，９１２号明細書；同第５，５６９，１８９号明細書；同第５，７０４，９１１号明細書；同第５，３８３，８５１号明細書；同第５，８９３，３９７号明細書；同第５，４６６，２２０号明細書；同第５，３３９，１６３号明細書；同第５，３１２，３３５号明細書；同第５，５０３，６２７号明細書；同第５，０６４，４１３号明細書；同第５，５２０，６３９号明細書；同第４，５９６，５５６号明細書；同第４，７９０，８２４号明細書；同第４，９４１，８８０号明細書；同第４，９４０，４６０号明細書；およびＰＣＴ公報の国際公開第９７／３７７０５号パンフレットおよび国際公開第９７／１３５３７号パンフレットに記載される。圧縮ガスを使用して、粉末形態のワクチンを、皮膚の外層を通して真皮へと加速させる発射式の（ｂａｌｌｉｓｔｉｃ）粉末／粒子送達デバイスが好適である。その代わりにまたはそれに加えて、従来の注射器が、皮内投与の従来のマントー法（ｍａｎｔｏｕｘ  ｍｅｔｈｏｄ）に使用され得る。
【００８３】
局所投与に適した製剤としては、以下に限定はされないが、塗布剤、ローション、クリーム、軟膏および／またはペーストなどの水中油型および／または油中水型乳剤、および／または液剤および／または懸濁液などの、液体および／または半液体製剤が挙げられる。局所投与可能な製剤は、例えば、約１％〜約１０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含み得るが、活性成分の濃度は、溶媒中の活性成分の溶解限度程度の高さであり得る。局所投与用の製剤は、本明細書に記載されるさらなる成分の１つまたは複数をさらに含み得る。
【００８４】
提供される医薬組成物は、口腔を介して経肺投与に適した製剤中で調製、包装、および／または販売され得る。このような製剤は、活性成分を含み、かつ約０．５〜約７ナノメートルまたは約１〜約６ナノメートルの範囲の直径を有する乾燥粒子を含み得る。このような組成物は、噴射剤の流れを、粉末を分散させるように導くことができる乾燥粉末リザーバを含むデバイスを用いた、および／または密閉容器中の低沸点の噴射剤に溶解および／または懸濁された活性成分を含むデバイスなどの自己推進型の（ｓｅｌｆ  ｐｒｏｐｅｌｌｉｎｇ）溶媒／粉末分注容器を用いた投与のために、乾燥粉末の形態であるのが好都合である。このような粉末は、重量で粒子の少なくとも９８％が０．５ナノメートル超の直径を有し、数で粒子の少なくとも９５％が７ナノメートル未満の直径を有する粒子を含む。あるいは、重量で粒子の少なくとも９５％が１ナノメートル超の直径を有し、数で粒子の少なくとも９０％が６ナノメートル未満の直径を有する。乾燥粉末組成物は、糖などの固体微粉末希釈剤を含んでいてもよく、単位用量形態で提供されるのが好都合である。
【００８５】
低沸点の噴射剤は、一般に、大気圧で６５°Ｆ未満の沸点を有する液体噴射剤を含む。一般に、噴射剤は、組成物の５０〜９９．９％（ｗ／ｗ）を占めてもよく、活性成分は、組成物の０．１〜２０％（ｗ／ｗ）を占め得る。噴射剤は、液体非イオン性および／または固体アニオン性界面活性剤および／または固体希釈剤（これは、活性成分を含む粒子と同程度の粒度を有し得る）などのさらなる成分をさらに含み得る。
【００８６】
肺送達用に製剤化された医薬組成物は、液剤および／または懸濁液の液滴の形態で活性成分を提供し得る。このような製剤は、活性成分を含む、任意選択的に滅菌した水性および／または希アルコール液剤および／または懸濁液として調製、包装、および／または販売され得、任意の噴霧および／または霧化デバイスを用いて好都合に投与され得る。このような製剤は、以下に限定はされないが、サッカリンナトリウムなどの着香料、揮発性油、緩衝剤、表面活性剤、および／またはヒドロキシ安息香酸メチルなどの保存料を含む１つまたは複数のさらなる成分をさらに含み得る。この投与経路によって提供される液滴は、約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均直径を有し得る。
【００８７】
肺送達に有用であると本明細書に記載される製剤は、医薬組成物の鼻腔内送達に有用である。鼻腔内投与に適した別の製剤は、活性成分を含み、約０．２〜５００マイクロメートルの平均粒子を有する粗粉末である。このような製剤は、鼻孔に近接して保持された粉末の容器から鼻道を通して急速吸入によって投与される。
【００８８】
経鼻投与用の製剤は、例えば、約０．１％（ｗ／ｗ）程度から１００％（ｗ／ｗ）もの活性成分を含んでいてもよく、本明細書に記載されるさらなる成分の１つまたは複数を含み得る。提供される医薬組成物は、口腔投与用の製剤中で、調製、包装、および／または販売され得る。このような製剤は、例えば、従来の方法を用いて作製される錠剤および／または舐剤の形態であってもよく、例えば、０．１〜２０％（ｗ／ｗ）の活性成分、口腔で溶解可能および／または分解可能な組成物を含む残りの部分および、任意選択的に、本明細書に記載されるさらなる成分の１つまたは複数を含有し得る。代わりに、口腔投与用の製剤は、活性成分を含む、粉剤および／またはエアロゾル化および／または霧化された液剤および／または懸濁液を含み得る。このような粉末化、エアロゾル化、および／または霧化された製剤は、分散された場合、約０．１〜約２００ナノメートルの範囲の平均粒度および／または液滴径を有していてもよく、本明細書に記載されるさらなる成分の１つまたは複数をさらに含み得る。
【００８９】
提供される医薬組成物は、眼内投与用の製剤中で、調製、包装、および／または販売され得る。このような製剤は、例えば、水性または油性液体担体中に、液剤および／または懸濁液の例えば０．１／１．０％（ｗ／ｗ）の活性成分を含む点眼剤の形態であり得る。このような液滴は、緩衝剤、塩、および／または１つまたは複数の他の本明細書に記載されるさらなる成分をさらに含み得る。有用な他の眼内投与可能な製剤としては、微結晶形態および／またはリポソーム製剤で活性成分を含むものが挙げられる。点耳剤および／または点眼剤は、本開示の範囲内であると考えられる。
【００９０】
本明細書に提供される医薬組成物の説明は、主に、ヒトへの投与に適した医薬組成物に関するが、このような組成物が、一般に、あらゆる種類の動物への投与に適していることが当業者によって理解されよう。組成物を様々な動物への投与に適するようにするための、ヒトへの投与に適した医薬組成物の改変は、よく理解されており、通常の技能を有する獣医学的薬理学者は、通常の実験によりこのような改変を設計および／または実行することができる。
【００９１】
本明細書に提供される化合物は、典型的に、投与の容易さおよび投薬の均一性のために、投薬単位形態で製剤化される。しかしながら、提供される組成物の一日の総使用量が、妥当な医学的判断の範囲内で担当医によって決定されることが理解されよう。任意の特定の被験体または生物の特定の治療的に有効な用量レベルは、治療される疾患、障害、または病態および障害の重症度；用いられる特定の活性成分の活性；用いられる特定の組成物；被験体の年齢、体重、全体的な健康、性別および食事；投与の時間、投与経路、および用いられる特定の活性成分の排出速度；治療の持続時間；用いられる特定の活性成分と組み合わせてまたは同時に使用される薬剤；および医学技術分野で周知の類似の要因を含む、様々な要因に応じて決まる。
【００９２】
本明細書に提供される化合物および組成物は、腸内（例えば、経口）、非経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、髄腔内、皮下、脳室内、経皮、皮内、経直腸、膣内、腹腔内、局所（粉剤、軟膏、クリーム、および／または点滴剤などによる）、経粘膜、経鼻、口腔、舌下；気管内注入、気管支内注入、および／または吸入による；および／または経口噴霧、経鼻噴霧、および／またはエアゾールとしてなどを含む任意の経路によって投与され得る。特に考えられる経路は、経口投与、静脈内投与（例えば、全身性静脈注射）、血液および／またはリンパ液供給による局所的な投与、および／または患部への直接投与である。一般に、最も適切な投与経路は、薬剤の性質（例えば、胃腸管の環境内でのその安定性）、および／または被験体の病態（例えば、被験体が経口投与に耐えられるかどうか）を含む様々な要因に応じて決まる。
【００９３】
有効量を達成するのに必要とされる化合物の正確な量は、例えば、被験体の種、年齢、および全身状態、副作用または障害の重症度、特定の化合物の属性、投与方法などに応じて、被験体ごとに変化することになる。所望の投薬量は、１日に３回、１日に２回、１日に１回、２日に１回、３日に１回、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、または４週間に１回送達され得る。特定の実施形態において、所望の投薬量は、複数回投与（例えば、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、１３回、１４回、またはそれを超える回数の投与）を用いて送達され得る。
【００９４】
特定の実施形態において、７０ｋｇの成人への１日に１回または複数回の投与のための化合物の有効量は、単位剤形当たり約０．０００１ｍｇ〜約３０００ｍｇ、約０．０００１ｍｇ〜約２０００ｍｇ、約０．０００１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約０．００１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約０．１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１０００ｍｇ、約１ｍｇ〜約１００ｍｇ、約１０ｍｇ〜約１０００ｍｇ、または約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇの化合物を含み得る。
【００９５】
特定の実施形態において、所望の治療効果を得るために、本明細書に記載される化合物は、１日に１回または複数回、１日当たり被験体体重の、約０．００１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、または約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇを送達するのに十分な投薬レベルで投与され得る。
【００９６】
ある実施形態において、本明細書に記載される化合物は、１日に１回または複数回、複数日にわたって投与される。ある実施形態において、投与計画は、数日間、数週間、数ヶ月間、または数年間にわたって継続される。
【００９７】
本明細書に記載される用量範囲が、提供される医薬組成物の成人への投与のための指針を提供することが理解されよう。例えば、子供または青年に投与される量は、医師または当業者が決定することができ、成人に投与される量より少ないかまたは同じであり得る。
【００９８】
本明細書に記載される化合物または組成物が、１つまたは複数のさらなる治療効果のある薬剤と組み合わせて投与され得ることも理解されよう。特定の実施形態において、本明細書に提供される化合物または組成物は、その生物学的利用能を改善し、その代謝を軽減および／または改変し、その排出を阻害し、および／または身体内でのその分布を改変する１つまたは複数のさらなる治療効果のある薬剤と組み合わせて投与される。用いられる治療法は、同じ障害に対する所望の効果を達成することができ、および／またはそれは、異なる効果を達成し得ることも理解されよう。
【００９９】
ある実施形態において、本明細書に記載される２つ以上のＰＲＭＴ５阻害剤（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ））の２つ以上の化合物が、被験体を治療するのに使用され得る。例えば、第１のＰＲＭＴ５阻害剤化合物または組成物が、１つまたは複数のさらなるＰＲＭＴ５阻害剤化合物または組成物と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。ある実施形態において、組成物は、本明細書に記載される２つ以上のＰＲＭＴ５阻害剤の混合物を含む。
【０１００】
特定の実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤化合物または組成物が、１つまたは複数のさらなる治療効果のある薬剤（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物でない治療効果のある薬剤、またはＰＲＭＴ５阻害剤でない治療効果のある薬剤と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。
【０１０１】
一般に、各ＰＲＭＴ５阻害剤および／または他の薬剤は、その薬剤のために決定された用量および／またはタイムスケジュールで投与される。この組合せに用いられるさらなる治療効果のある薬剤が、単一の組成物中で一緒に投与されるかまたは異なる組成物中で別個に投与され得ることがさらに理解されよう。投与計画において用いるための特定の組合せは、提供される化合物と、さらなる治療効果のある薬剤との適合性および／または達成される所望の治療効果を考慮に入れることになる。一般に、併用されるさらなる治療効果のある薬剤が、それらが個別に用いられるレベルを超えないレベルで用いられることが予測される。ある実施形態において、併用されるレベルは、個別の用いられるレベルより低くなる。
【０１０２】
例示的なさらなる治療効果のある薬剤としては、以下に限定はされないが、薬剤化合物（例えば、連邦規制基準（ｔｈｅ  Ｃｏｄｅ  ｏｆ  Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ（ＣＦＲ））によって示されるように、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって承認される化合物）などの有機小分子、ペプチド、タンパク質、炭水化物、単糖類、オリゴ糖、多糖類、核タンパク質、ムコタンパク質、リポタンパク質、合成ポリペプチドまたはタンパク質、タンパク質に結合される小分子、糖タンパク質、ステロイド、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ヌクレオチド、ヌクレオシド、オリゴヌクレオチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド、脂質、ホルモン、ビタミン、および細胞が挙げられる。
【０１０３】
例えば、本明細書に記載される治療方法は、化学療法、放射線治療、および／または細胞増殖抑制剤と併用して実施され得る。本明細書に記載される治療方法は、抗ＶＥＧＦまたは抗血管新生因子、および／またはｐ５３再活性化剤と併用して実施される。癌化学療法剤の例としては、限定はされないが、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）；エルロチニブ；ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））；メシル酸イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））；オキサリプラチン；アントラサイクリン−イダルビシンおよびダウノルビシン；ドキソルビシン；メルファランおよびクロラムブシルなどのアルキル化剤；シス−白金、メトトレキサート、ならびにビンデシンおよびビンブラスチンなどのアルカロイドが挙げられる。細胞増殖抑制剤は、細胞の成長および増殖を阻害または抑制することができる任意の薬剤である。癌の治療に使用される細胞増殖抑制剤の例は、パクリタキセル、５−フルオロウラシル、５−フルオロウリジン、マイトマイシン−Ｃ、ドキソルビシン、およびゾタロリムスである。他の癌治療薬としては、マリマスタットなどの、マトリックスメタロプロテアーゼの阻害剤、増殖因子アンタゴニスト、シグナル伝達阻害剤およびプロテインキナーゼＣ阻害剤が挙げられる。
【０１０４】
別の実施形態において、本明細書に記載される医薬組成物は、抗ＶＥＧＦ剤と併用して投与される。抗ＶＥＧＦ剤のいくつかの例としては、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ、ＣＰ−５４７，６３２、ＡＧ１３７３６、ＡＧ２８２６２、ＳＵ５４１６、ＳＵ１１２４８、ＳＵ６６６８、ＺＤ−６４７４、ＺＤ４１９０、ＣＥＰ−７０５５、ＰＫＣ  ４１２、ＡＥＥ７８８、ＡＺＤ−２１７１、ソラフェニブ、バタラニブ、ペガプタニブ八ナトリウム、ＩＭ８６２、ＤＣ１０１、アンジオザイム、Ｓｉｒｎａ−０２７、カプロスタチン、ネオバスタット、ラニビズマブ、サリドマイド、およびＡＧＡ−１４７０、フマギリンの合成類似体（代替名：アメバシリン、フギリン、フマジルＢ、フマジル）（Ａ．Ｇ．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｆ１０２８）、アスペルギルス・フミガーツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｅｓ）から分泌されるアンジオ阻害（ａｎｇｉｏ−ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ）化合物が挙げられる。
【０１０５】
本明細書において使用される際、「抗ＶＥＧＦ剤」という用語は、ＶＥＧＦ受容体タンパク質の機能を阻害することを含む、ＶＥＧＦタンパク質の機能を阻害することによって、細胞の成長、増殖および生存を促進するシグナル伝達経路に直接の影響を生じる任意の化合物または薬剤を指す。本明細書において使用される際の「薬剤」または「化合物」という用語は、アンチセンス核酸などの修飾および非修飾核酸、ｓｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡなどのＲＮＡｉ剤、ペプチド、ペプチド模倣薬、受容体、リガンド、および抗体を含む、任意の有機または無機分子を意味する。好ましいＶＥＧＦ阻害剤としては、例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）の抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体、ＶＥＧＦ  Ｔｒａｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ａｖｅｎｔｉｓ）が挙げられる。さらなるＶＥＧＦ阻害剤としては、ＣＰ−５４７，６３２（３−（４−ブロモ−２，６−ジフルオロ−ベンジルオキシ）−５−［３−（４−ピロリジン１−イル−ブチル）−ウレイド］−イソチアゾール−４−カルボン酸アミド塩酸塩；Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．，ＮＹ）、ＡＧ１３７３６、ＡＧ２８２６２（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、ＳＵ５４１６、ＳＵ１１２４８、＆ＳＵ６６６８（旧Ｓｕｇｅｎ  Ｉｎｃ．、現Ｐｆｉｚｅｒ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ））、ＺＤ−６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＶＥＧＦ−Ｒ２および−Ｒ１を阻害するＺＤ４１９０（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＣＥＰ−７０５５（Ｃｅｐｈａｌｏｎ  Ｉｎｃ．，Ｆｒａｚｅｒ，ＰＡ）、ＰＫＣ  ４１２（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＥＥ７８８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＺＤ−２１７１）、ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）（ＢＡＹ  ４３−９００６、ソラフェニブ；Ｂａｙｅｒ  ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよびＯｎｙｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、バタラニブ（ＰＴＫ−７８７、ＺＫ−２２２５８４としても知られている：Ｎｏｖａｒｔｉｓ＆Ｓｃｈｅｒｉｎｇ：ＡＧ）、ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブ八ナトリウム、ＮＸ−１８３８、ＥＹＥ−００１、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．／Ｇｉｌｅａｄ／Ｅｙｅｔｅｃｈ）、ＩＭ８６２（グルファニド二ナトリウム、Ｃｙｔｒａｎ  Ｉｎｃ．（Ｋｉｒｋｌａｎｄ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＵＳＡ））、ＶＥＧＦＲ２選択的モノクローナル抗体ＤＣ１０１（ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．）、アンジオザイム、Ｒｉｂｏｚｙｍｅ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ）およびＣｈｉｒｏｎ（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）製の合成リボザイム、Ｓｉｒｎａ−０２７（ｓｉＲＮＡベースのＶＥＧＦＲ１阻害剤、Ｓｉｒｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）カプロスタチン、ＶＥＧＦ受容体の可溶性細胞外ドメイン、ネオバスタット（Ａｅｔｅｒｎａ  Ｚｅｎｔａｒｉｓ  Ｉｎｃ；Ｑｕｅｂｅｃ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）およびそれらの組合せが挙げられる。
【０１０６】
ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤化合物または組成物は、乳癌を治療するのに有効な１つまたは複数のさらなる治療効果のある薬剤（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物でない治療効果のある薬剤、またはＰＲＭＴ５阻害剤でない治療効果のある薬剤）と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。例示的な化合物としては、限定はされないが：Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ（メトトレキサート）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（パクリタキセルアルブミン安定化小粒子製剤）、Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシンＰＦＳ（登録商標）（ドキソルビシン塩酸塩）、アドリアマイシンＲＤＦ（登録商標）（ドキソルビシン塩酸塩）、Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）（フルオロウラシル）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）（エベロリムス）、アナストロゾール、Ａｒｅｄｉａ（登録商標）（パミドロン酸二ナトリウム）、Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）（アナストロゾール）、Ａｒｏｍａｓｉｎ（エキセメスタン）、カペシタビン、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）（シクロホスファミド）、シクロホスファミド、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）（シクロホスファミド）、ドセタキセル、ドキソルビシン塩酸塩、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）（フルオロウラシル）、Ｅｌｌｅｎｃｅ（登録商標）（エピルビシン塩酸塩）、エピルビシン塩酸塩、エベロリムス、エキセメスタン、Ｆａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）（トレミフェン）、Ｆａｓｌｏｄｅｘ（登録商標）（フルベストラント）、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）（レトロゾール）、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、Ｆｏｌｅｘ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｆｏｌｅｘ  ＰＦＳ（登録商標）（メトトレキサート）、フルベストラント、ゲムシタビン塩酸塩、Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）（ゲムシタビン塩酸塩）、ゴセレリン酢酸塩、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）（トラスツズマブ）、イキサベピロン、Ｉｘｅｍｐｒａ（登録商標）（イキサベピロン）、Ｋａｄｃｙｌａ（登録商標）（Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン）、ラパチニブジトシラート、レトロゾール、Ｍｅｇａｃｅ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、酢酸メゲストロール、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｍｅｘａｔｅ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｍｅｘａｔｅ−ＡＱ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）（シクロホスファミド）、Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）（タモキシフェンクエン酸塩）、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化小粒子製剤、パミドロン酸二ナトリウム、Ｐｅｒｊｅｔａ（登録商標）（パーツズマブ）、パーツズマブ、タモキシフェンクエン酸塩、Ｔａｘｏｌ（登録商標）（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）（ドセタキセル）、トラスツズマブ、トレミフェン、Ｔｙｋｅｒｂ（登録商標）（ラパチニブジトシラート）、ゼローダ（登録商標）（カペシタビン）、およびＺｏｌａｄｅｘ（登録商標）（ゴセレリン酢酸塩）が挙げられる。
【０１０７】
ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤化合物または組成物は、リンパ腫、非ホジキンリンパ腫および／またはマントル細胞リンパ腫を治療するのに有効な１つまたは複数のさらなる治療効果のある薬剤（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物でない治療効果のある薬剤、またはＰＲＭＴ５阻害剤でない治療効果のある薬剤）と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。例示的な化合物としては、限定はされないが：Ａｂｉｔｒｅｘａｔｅ（登録商標）（メトトレキサート）、Ａｄｃｅｔｒｉｓ（登録商標）（ブレンツキシマブベドチン）、アドリアマイシンＰＦＳ（登録商標）（ドキソルビシン塩酸塩）、アドリアマイシンＲＤＦ（登録商標）（ドキソルビシン塩酸塩）、Ａｍｂｏｃｈｌｏｒｉｎ（登録商標）（クロラムブシル）、Ａｍｂｏｃｌｏｒｉｎ（登録商標）（クロラムブシル）、Ａｒｒａｎｏｎ（登録商標）（ネララビン）、Ｂｅｃｅｎｕｍ（登録商標）（カルムスチン）、Ｂｅｌｅｏｄａｑ（登録商標）（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、Ｂｅｘｘａｒ（登録商標）（トシツモマブおよびヨウ素Ｉ  １３１トシツモマブ）、ＢｉＣＮＵ（登録商標）（カルムスチン）、Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標）（ブレオマイシン）、ブレオマイシン、ボルテゾミブ、ブレンツキシマブベドチン、Ｃａｒｍｕｂｒｉｓ（登録商標）（カルムスチン）、カルムスチン、クロラムブシル、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）（シクロホスファミド）、シクロホスファミド、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）（シクロホスファミド）、デニロイキンディフチトクス、ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標）（リポソームシタラビン）、ドキソルビシン塩酸塩、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）（ダカルバジン）、Ｆｏｌｅｘ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｆｏｌｅｘ  ＰＦＳ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｆｏｌｏｔｙｎ（登録商標）（プララトレキサート）、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、Ｉｍｂｒｕｖｉｃａ（登録商標）（イブルチニブ）、Ｉｎｔｒｏｎ  Ａ（登録商標）（組み換えインターフェロンα−２ｂ）、Ｉｓｔｏｄａｘ（登録商標）（ロミデプシン）、レナリドミド、Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標）（クロラムブシル）、Ｌｉｎｆｏｌｉｚｉｎ（登録商標）（クロラムブシル）、リポソームシタラビン、Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｍｅｘａｔｅ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｍｅｘａｔｅ−ＡＱ（登録商標）（メトトレキサート）、Ｍｏｚｏｂｉｌ（登録商標）（プレリキサフォル）、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）（メクロレタミン塩酸塩）、ネララビン、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）（シクロホスファミド）、Ｏｎｔａｋ（登録商標）（デニロイキンディフチトクス）、プレリキサフォル、プララトレキサート、組み換えインターフェロンα−２ｂ、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（登録商標）（レナリドミド）、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（リツキシマブ）、リツキシマブ、ロミデプシン、トシツモマブおよびヨウ素Ｉ  １３１トシツモマブ、Ｔｒｅａｎｄ（登録商標）（ベンダムスチン塩酸塩）、Ｖｅｌｂａｎ（登録商標）（ビンブラスチン硫酸塩）、Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標）（ボルテゾミブ）、Ｖｅｌｓａｒ（登録商標）（ビンブラスチン硫酸塩）、ビンブラスチン硫酸塩、Ｖｉｎｃａｓａｒ  ＰＦＳ（登録商標）（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ボリノスタット、Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標）（イブリツモマブチウキセタン）、およびＺｏｌｉｎｚａ（登録商標）（ボリノスタット）が挙げられる。
【０１０８】
ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数のＰＲＭＴ５阻害剤化合物または組成物は、膵臓癌を治療するのに有効な１つまたは複数のさらなる治療効果のある薬剤（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物でない治療効果のある薬剤、またはＰＲＭＴ５阻害剤でない治療効果のある薬剤）と同時に、その前に、またはその後に投与され得る。例示的な化合物としては、限定はされないが：Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）（パクリタキセルアルブミン安定化小粒子製剤）、Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）（フルオロウラシル）、Ａｆｉｎｉｔｏｒ（登録商標）（エベロリムス）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標）（フルオロウラシル）、エルロチニブ塩酸塩、エベロリムス、Ｆｌｕｏｒｏｐｌｅｘ（登録商標）（フルオロウラシル）、フルオロウラシル、ゲムシタビン塩酸塩、Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）（ゲムシタビン塩酸塩）、マイトマイシンＣ、Ｍｉｔｏｚｙｔｒｅｘ（登録商標）（マイトマイシンＣ）、Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標）（マイトマイシンＣ）、パクリタキセルアルブミン安定化小粒子製剤、スニチニブリンゴ酸塩、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）（スニチニブリンゴ酸塩）、およびＴａｒｃｅｖａ（登録商標）（エルロチニブ塩酸塩）が挙げられる。
【０１０９】
キット（例えば、医薬品包装（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｐａｃｋ））も本開示によって包含される。提供されるキットは、提供される医薬組成物または化合物および容器（例えば、バイアル、アンプル、瓶、注射器、および／またはディスペンサーパッケージ、または他の好適な容器）を含み得る。ある実施形態において、提供されるキットは、任意選択的に、提供される医薬組成物または化合物の希釈または懸濁のための医薬品用賦形剤を含む第２の容器をさらに含み得る。ある実施形態において、容器および第２の容器中に提供される、提供される医薬組成物または化合物は、組み合わされて、１つの単位剤形が形成される。ある実施形態において、提供されるキットは、使用説明書をさらに含む。
【０１１０】
本明細書に記載される化合物および組成物は、一般に、ＰＲＭＴ５の阻害に有用である。ある実施形態において、被験体のＰＲＭＴ５媒介性疾患を治療する方法であって、有効量の本明細書に記載される化合物（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物）、またはその薬学的に許容できる塩）を、治療を必要とする被験体に投与する工程を含む方法が提供される。特定の実施形態において、有効量は、治療的に有効な量である。特定の実施形態において、有効量は、予防的に有効な量である。特定の実施形態において、被験体は、ＰＲＭＴ５媒介性疾患（例えば、癌、例えばリンパ腫、乳癌、または膵臓癌）に罹患している。特定の実施形態において、被験体は、ＰＲＭＴ５媒介性疾患（例えば、癌、例えばリンパ腫、乳癌、または膵臓癌）に罹患しやすい。
【０１１１】
本明細書において使用される際、「ＰＲＭＴ５媒介性疾患」という用語は、ＰＲＭＴ５が関与することが知られている任意の疾患、障害、または他の病態を意味する。したがって、ある実施形態において、本開示は、ＰＲＭＴ５が関与することが知られている１つまたは複数の疾患を治療し、またはその重症度を軽減することに関する。
【０１１２】
ある実施形態において、それを必要とする被験体のＰＲＭＴ５活性を阻害する方法であって、有効量の本明細書に記載される化合物（例えば、式（１〜５）または（Ａ〜Ｆ）の化合物）、またはその薬学的に許容できる塩、またはその医薬組成物を被験体に投与する工程を含む方法が提供される。
【０１１３】
ある実施形態において、提供される化合物は、癌などの増殖性疾患を治療するのに有用である。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗癌化合物は、リンパ腫を治療するのに有用である。ある実施形態において、リンパ腫はマントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）である。ある実施形態において、リンパ腫は急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ）である。ある実施形態において、本明細書に記載される抗癌化合物は、膵臓癌を治療するのに有用である。ある実施形態において、本明細書に記載される抗癌化合物は、多発性骨髄腫（ＭＭ）を治療するのに有用である。ある実施形態において、本明細書に記載される抗癌化合物は、乳癌を治療するのに有用である。ある実施形態において、乳癌はエストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）である。ある実施形態において、乳癌はプロゲステロン受容体陰性（ＰＲ−）である。ある実施形態において、乳癌はＨＥＲ２陰性である。ある実施形態において、乳癌は、エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性およびＨＥＲ２陰性である（本明細書において「トリプルネガティブ乳癌」とも呼ばれる）。
【０１１４】
ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、乳癌を治療するのに有用である。ある実施形態において、乳癌はエストロゲン受容体陰性（ＥＲ−）である。ある実施形態において、乳癌はプロゲステロン受容体陰性（ＰＲ−）である。ある実施形態において、乳癌はＨＥＲ２陰性である。ある実施形態において、乳癌は、エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性およびＨＥＲ２陰性である（本明細書において「トリプルネガティブ乳癌」とも呼ばれる）。ある実施形態において、乳癌は、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ）、浸潤性乳管癌（ＩＤＣ）、炎症性乳癌、乳頭パジェット病、葉状腫瘍、血管肉腫、腺様嚢胞癌、低悪性腺扁平上皮癌、髄様癌、粘液癌、乳頭癌、管状腺癌、化生癌、微小乳頭癌、混合癌、またはトリプルネガティブ、ＨＥＲ陽性、エストロゲン受容体陽性、プロゲステロン受容体陽性、ＨＥＲおよびエストロゲン受容体陽性、ＨＥＲおよびプロゲステロン受容体陽性、エストロゲンおよびプロゲステロン受容体陽性、ならびにＨＥＲおよびエストロゲンおよびプロゲステロン受容体陽性を含むがこれらに限定されない別の乳癌であり得る。
【０１１５】
したがって、ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含む。ある実施形態において、癌はリンパ腫である。ある実施形態において、リンパ腫はマントル細胞リンパ腫である。ある実施形態において、癌は乳癌である。ある実施形態において、乳癌はトリプルネガティブ乳癌である。ある実施形態において、癌は膵臓癌である。
【０１１６】
ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、任意のＰＲＭＴ５媒介性またはＰＲＭＴ５応答性増殖細胞疾患、例えばＰＲＭＴ５応答性の癌を治療するのに有用である。
【０１１７】
ある実施形態において、ｐ５３が欠損した癌（例えば、ｐ５３ヌル癌）は、ｐ５３陽性の癌よりＰＲＭＴ５阻害に対する感受性が低い。したがって、ＰＲＭＴ５応答性の癌はｐ５３陽性癌であり得る。「ｐ５３陽性」という用語は、ｐ５３発現および／または活性のない癌を指す。ある実施形態において、本明細書に記載される１つまたは複数の化合物は、ｐ５３陽性癌を治療するのに有用である。ある実施形態において、より多い量の本明細書に記載される１つまたは複数の化合物が、ｐ５３陽性癌よりｐ５３陰性癌（例えば、ｐ５３ヌル癌）を治療するのに必要とされ得る。
【０１１８】
ある実施形態において、本開示は、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性の癌に罹患している被験体を特定するための方法を提供する。ある実施形態において、本方法は、被験体から試料を取得する工程と；ｐ５３の存在または非存在を検出する工程と；ｐ５３が試料中に存在する場合、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性の癌に罹患している被験体を特定する工程とを含む。したがって、ある実施形態において、ｐ５３陽性癌に罹患している被験体が、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療のための被験体として特定される。ある実施形態において、本方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程をさらに含む。
【０１１９】
ある実施形態において、本開示の態様は、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性でない癌（または低い感受性を有する癌）に罹患している被験体を特定するための方法に関する。ある実施形態において、本方法は、被験体から試料を取得する工程と；ｐ５３の存在または非存在を検出する工程と；ｐ５３が試料に存在しない場合（例えば、癌がｐ５３ヌル癌である場合）ＰＲＭＴ５阻害剤による治療に感受性でない癌（例えば、ｐ５３陽性癌より感受性が低い癌）に罹患している被験体を特定する工程とを含む。ある実施形態において、ｐ５３陰性癌（例えば、ｐ５３ヌル癌）が、ＰＲＭＴ５阻害剤で治療されるが、より多い量のＰＲＭＴ５阻害剤が、ｐ５３陽性癌よりｐ５３陰性癌を治療するのに必要とされ得る。しかしながら、ある実施形態において、ｐ５３陰性癌（例えば、ｐ５３ヌル癌）に罹患している被験体が、ＰＲＭＴ５阻害剤でない治療剤で治療される。
【０１２０】
「試料」とは、被験体に由来する任意の生体試料を意味し、限定はされないが、細胞、組織試料、体液（限定はされないが、粘液、血液、血漿、血清、尿、唾液、および精液を含む）、癌細胞、および癌組織を含む。試料中のｐ５３の存在または非存在の検出は、ｐ５３核酸またはタンパク質を検出するための任意の好適な方法、例えば、核酸シークエンシング（例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡシークエンシング）、定量ＰＣＲ、ウエスタンブロット法など、またはそれらの任意の組合せによって行われ得る。
【０１２１】
ある実施形態において、本明細書に記載される化合物の１つまたは複数が、聴神経腫、腺癌、副腎癌、肛門癌、血管肉腫（例えば、リンパ管肉腫、リンパ管内皮腫、血管内皮腫）、虫垂癌、良性単クローン性免疫グロブリン血症、胆道癌（例えば、胆管癌）、膀胱癌、脳腫瘍（例えば、髄膜腫；神経膠腫、例えば、星細胞腫、乏突起膠腫；髄芽腫）、気管支癌、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌（例えば、子宮頚部腺癌）、絨毛腫、脊索腫、頭蓋咽頭腫、結腸直腸癌（例えば、結腸癌、直腸癌、結腸直腸腺癌）、上皮癌、上衣腫、内皮肉腫（例えば、カポジ肉腫、多発性特発性出血性肉腫）、子宮内膜癌（例えば、子宮癌、子宮肉腫）、食道癌（例えば、食道の腺癌、バレット腺癌）、ユーイング肉腫、眼癌（例えば、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫）、家族性過好酸球増加症、胆嚢癌、胃癌（例えば、胃腺癌）、消化管間質性腫瘍（ＧＩＳＴ）、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮細胞癌、口腔癌（例えば、口腔扁平上皮細胞癌（ＯＳＣＣ）、喉の癌（例えば、喉頭癌、咽頭癌、上咽頭癌、口咽頭癌））、造血器癌（例えば、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）（例えば、Ｂ細胞ＡＬＬ、Ｔ細胞ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）（例えば、Ｂ細胞ＡＭＬ、Ｔ細胞ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）（例えば、Ｂ細胞ＣＭＬ、Ｔ細胞ＣＭＬ）、および慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（例えば、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞ＣＬＬ）などの白血病；濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫（ＣＬＬ／ＳＬＬ）、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫（例えば、粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾性辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫）、縦隔原発Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（例えば、「ワルデンストレームマクログロブリン血症」）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、免疫芽球性大細胞型リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫および原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫；および前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫／白血病、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）（例えば、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）（例えば、菌状息肉腫、セザリー症候群）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、節外性ナチュラルキラーＴ細胞リンパ腫、腸症型Ｔ細胞リンパ腫、皮下脂肪織炎様Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫）などのＴ細胞ＮＨＬ；上述される１つまたは複数の白血病／リンパ腫の混合；および多発性骨髄腫（ＭＭ））、重鎖病（例えば、α鎖病、γ鎖病、μ鎖病）、血管芽腫、炎症性筋線維芽細胞性腫瘍、免疫細胞性アミロイドーシス、腎臓癌（例えば、腎芽腫（別名、ウィルムス腫瘍）、腎細胞癌）、肝臓癌（例えば、肝細胞癌（ＨＣＣ）、悪性肝細胞癌）、肺癌（例えば、気管支原性癌、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺腺癌）、平滑筋肉腫（ＬＭＳ）、肥満細胞症（例えば、全身性肥満細胞症）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、中皮腫、骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）（例えば、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、特発性骨髄化生（ＡＭＭ）（別名、骨髄線維症（ＭＦ））、慢性特発性骨髄線維症、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、特発性好酸球増加症候群（ＨＥＳ））、神経芽細胞腫、神経繊維腫（例えば、神経線維腫症（ＮＦ）Ｉ型またはＩＩ型、シュワン細胞腫）、神経内分泌癌（例えば、胃腸膵管系神経内分泌腫瘍（ＧＥＰ−ＮＥＴ）、カルチノイド腫瘍）、骨肉腫、卵巣癌（例えば、嚢胞腺癌、卵巣胎児性癌、卵巣腺癌）、乳頭腺癌、陰茎癌（例えば、乳房外ページェット病）、松果体腫、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＴ）、前立腺癌（例えば、前立腺腺癌）、直腸癌、横紋筋肉腫、唾液腺癌、皮膚癌（例えば、扁平上皮細胞癌（ＳＣＣ）、角化棘細胞腫（ＫＡ）、黒色腫、基底細胞癌（ＢＣＣ））、小腸癌（例えば、虫垂癌）、軟組織肉腫（例えば、悪性線維性組織球腫（ＭＦＨ）、脂肪肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、軟骨肉腫、線維肉腫、粘液肉腫）、脂腺癌、汗腺癌、滑膜腫、精巣癌（例えば、精上皮腫、精巣胎児性癌）、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌、甲状腺乳頭癌（ＰＴＣ）、甲状腺髄様癌）、尿道癌、膣癌、および外陰癌（例えば、外陰ページェット病）を含むがこれらに限定されない他のタイプの癌を治療するのに有用であり得ることを理解されたい。
【０１２２】
ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、ＰＲＭＴ５阻害剤による治療が、約２５％超、約５０％超、約７５％超、約９０％超（例えば、２５％〜５０％、５０％〜７５％、７５％〜９０％、または９０％〜１００％）だけ癌の腫瘍増殖を阻害する。ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、癌のメチルマークが、約５０％超、約７５％超、約８０％超（例えば、５０％〜７５％、５０％〜８０％、８０％〜９０％、８０％〜１００％、または９０％〜１００％）だけ減少される。メチルマークは、タンパク質メチル化、例えばヒストンメチル化（例えば、ヒストンタンパク質の１つまたは複数のリジンおよび／またはアルギニンのメチル化）、またはＤＮＡメチル化（例えば、エピジェネティックなＤＮＡメチル化、例えばメチル化ＣｐＧ部位）を指す。ある実施形態において、細胞のメチルマークレベルは、ヒストンが細胞中でメチル化される程度の尺度である（例えば、１つまたは複数の特定のリジンおよび／またはアルギニン位置において）。
【０１２３】
ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、被験体の体重減少が、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約８％未満、または約５％未満（例えば、２０％〜１０％、１０％〜５％、約８％、約６％、約５％、約４％、または５％〜０％）である。したがって、ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、被験体の体重減少が約８％以下である。ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、被験体の体重減少が約６％以下である。ある実施形態において、被験体の癌を治療する方法は、ＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物を被験体に投与する工程を含み、ここで、被験体の体重減少が約４％以下である。
【０１２４】
ある態様において、本開示は、ＭＤＭ４（ＭＤＭＸとしても知られている）過剰発現が、被験体におけるＰＲＭＴ５阻害剤の活性を弱め得るという意外な発見に関する。例えば、ＭＤＭ４過剰発現は、癌細胞（例えば、リンパ腫細胞）中のＰＲＭＴ５阻害剤によって誘発される増殖／死の表現型を部分的に救うことができる。したがって、ある実施形態において、癌を治療する方法は、被験体へのＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物の投与と同時に（例えば、その前に、またはそれと同時に、および／またはその後に）ＭＤＭ４活性またはＭＤＭ４発現を阻害する工程を含む。ＭＤＭ４活性は、（例えば、ＭＤＭ４阻害剤の投与によって）直接または間接的に（例えば、ＭＤＭ４発現のサイレンシング）阻害され得る。ＭＤＭ４阻害剤の例としては、ＳＪ−１７２５５０およびＮＳＣ−２０７８９５が挙げられる。ある実施形態において、ＭＤＭ４発現のサイレンシングは、転写後遺伝子サイレンシング（例えば、ＲＮＡ干渉）によって、またはＭＤＭ４遺伝子プロモータ（例えば、ＰＰＡＲ−α、ＭＺＦ−１、ＮＲＦ−２、ｃ−Ｅｔｓ−１、ＴＰＢ、Ｅｌｋ−１、ＨＥＮ１）におけるＭＤＭ４転写因子結合部位との干渉によって行われる。
【０１２５】
何らかの理論に制約されることを望むものではないが、ＭＤＭ４活性またはＭＤＭ４発現を阻害することにより、腫瘍抑制タンパク質、ｐ５３が活性化されるものと考えられる。ある態様において、ｐ５３はまた、ＭＤＭ２活性またはＭＤＭ２発現を阻害することによって活性化され得る。したがって、ある実施形態において、癌を治療する方法は、被験体へのＰＲＭＴ５阻害剤を含む組成物の投与と同時に（例えば、その前に、またはそれと同時に、および／またはその後に）ＭＤＭ２活性またはＭＤＭ２発現を阻害する工程を含む。ＭＤＭ２活性は、（例えば、ＭＤＭ２阻害剤の投与によって）直接または間接的に（例えば、ＭＤＭ２発現のサイレンシング）阻害され得る。ＭＤＭ２阻害剤の例としては、Ｎｕｔｌｉｎ−３ａ、ＮＳＣ−６６８１１、ＮＳＣ−６５２２８７、およびＳＰ−１４１が挙げられる。ある実施形態において、ＭＤＭ２発現のサイレンシングが、転写後遺伝子サイレンシング（例えば、ＲＮＡ干渉）によって、またはＭＤＭ２遺伝子プロモータ（例えば、ＡＰ−１）におけるＭＤＭ２転写因子結合部位との干渉によって行われる。
【実施例】
【０１２６】
本明細書に記載される本発明が、より十分に理解され得るために、以下の実施例が記載される。これらの実施例は、あくまでも例示のためのものであり、決して本明細書を限定するものと解釈されるべきではないことを理解されたい。
【０１２７】
実施例１：材料および方法
Ｚ−１３８メチル化アッセイ
Ｚ−１３８懸濁細胞を、ＡＴＣＣ（米国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ＲＰＭＩ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、ペニシリン−ストレプトマイシン、熱失活したウシ胎児血清、およびＤ−ＰＢＳを、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ）から購入した。Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液、８００ＣＷヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体、およびＬｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外線スキャナを、Ｌｉｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｌｉｎｃｏｌｎ，ＮＥ，ＵＳＡ）から購入した。対称性ジメチルアルギニン抗体を、ＥＭＤ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。１６％のパラホルムアルデヒドを、Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｈａｔｆｉｅｌｄ，ＰＡ，ＵＳＡ）から購入した。
【０１２８】
Ｚ−１３８懸濁細胞を、増殖培地（１０％  ｖ／ｖの熱失活したウシ胎児血清および１００単位／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ  １６４０）において維持し、５％のＣＯ２下で、３７℃で培養した。
【０１２９】
対称性ジメチルアルギニンおよびＤＮＡ含量の検出のための細胞処理、Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｗｅｓｔｅｒｎ（ＩＣＷ）
Ｚ−１３８細胞を、１ウェル当たり５０μＬで、３８４ウェル細胞培養プレートに、５０，０００個の細胞／ｍＬの濃度のアッセイ培地中で播種した。３８４ウェルソースプレートからの化合物（１００ｎＬ）を、３８４ウェル細胞プレートに直接加えた。プレートを、３７℃、５％のＣＯ２で９６時間インキュベートした。４日間のインキュベーションの後、インキュベートされたプレートからの４０μＬの細胞を、ポリ−ｄ−リジンで被覆された３８４ウェル培養プレート（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  ３５６６９７）に加えた。プレートを、室温で３０分間インキュベートし、次に、３７℃、５％のＣＯ２で５時間インキュベートした。インキュベーションの後、１ウェル当たり４０μＬの、ＰＢＳ中８％のパラホルムアルデヒド（１６％のパラホルムアルデヒドをＰＢＳ中８％まで希釈した）を、各プレートに加え、３０分間インキュベートした。プレートを、Ｂｉｏｔｅｋ  ４０５プレート洗浄装置に移し、１ウェル当たり１００μＬの洗浄緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（ｖ／ｖ）を含む１×ＰＢＳ）で５回洗浄した。次に、１ウェル当たり３０μＬのＯｄｙｓｓｅｙブロッキング緩衝液を、各プレートに加え、室温で１時間インキュベートした。ブロッキング緩衝液を除去し、１ウェル当たり２０μＬの一次抗体（０．１％のＴｗｅｅｎ２０（ｖ／ｖ）を含むＯｄｙｓｓｅｙ緩衝液中で１：１００に希釈された対称性ジメチルアルギニン）を加え、プレートを、４℃で一晩（１６時間）インキュベートした。プレートを、１ウェル当たり１００μＬの洗浄緩衝液で５回洗浄した。次に、１ウェル当たり２０μＬの二次抗体（１：２００の８００ＣＷヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体、０．１％のＴｗｅｅｎ２０（ｖ／ｖ）を含むＯｄｙｓｓｅｙ緩衝液中の１：１０００のＤＲＡＱ５（Ｂｉｏｓｔａｔｕｓ  ｌｉｍｉｔｅｄ））を加え、室温で１時間インキュベートした。プレートを、１ウェル当たり１００μＬの洗浄緩衝液で５回、次に、１ウェル当たり１００μＬの水で１回洗浄した。プレートを、室温で乾燥させ、次に、７００ｎｍおよび８００ｎｍの波長で積分強度を測定するＬｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙ機械においてイメージングした。７００および８００チャネルの両方を走査した。
【０１３０】
計算：
まず、各ウェルの比率を、下式によって求めた。
【数１】
2017530940.tif 000021
【０１３１】
各プレートは、ＤＭＳＯのみの処理（最小阻害）の１４の対照ウェルならびに３μＭの対照化合物で処理された最大阻害の１４の対照ウェル（バックグラウンドウェル）を含んでいた。各対照タイプの比率値の平均を計算し、それを用いて、プレート中の各試験ウェルについての阻害パーセントを求めた。対照化合物を、３μＭから開始して全部で９つの試験濃度に対してＤＭＳＯ中で３倍に連続希釈した。阻害パーセントを求め、ＩＣ５０曲線を、化合物の濃度につき３組のウェルを用いて作成した。
【数２】
2017530940.tif 000022
【０１３２】
Ｚ−１３８増殖アッセイ
Ｚ−１３８懸濁細胞を、ＡＴＣＣ（米国培養細胞系統保存機関（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から購入した。ＲＰＭＩ／Ｇｌｕｔａｍａｘ培地、ペニシリン−ストレプトマイシン、熱失活したウシ胎児血清を、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ，ＵＳＡ）から購入した。Ｖ底ポリプロピレン３８４ウェルプレートを、Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−Ｏｎｅ（Ｍｏｎｒｏｅ，ＮＣ，ＵＳＡ）から購入した。細胞培養３８４ウェル乳白色プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ（Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。Ｃｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）を、Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＵＳＡ）から購入した。ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５プレートリーダーを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  ＬＬＣ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，ＣＡ，ＵＳＡ）から購入した。
【０１３３】
Ｚ−１３８懸濁細胞を、増殖培地（１０％  ｖ／ｖの熱失活したウシ胎児血清が補充されたＲＰＭＩ  １６４０中で維持し、５％のＣＯ２下で、３７℃で培養した。アッセイ条件下で、細胞を、５％のＣＯ２下で、３７℃で、アッセイ培地（１０％  ｖ／ｖの熱失活したウシ胎児血清および１００単位／ｍＬのペニシリン−ストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ  １６４０）中でインキュベートした。
【０１３４】
Ｚ−１３８細胞株の増殖に対する化合物の効果の評価のために、指数関数的に増殖している細胞を、最終容量５０μｌのアッセイ培地中で、１０，０００個の細胞／ｍｌの密度で、３８４ウェル乳白色プレート中で平板培養した。化合物ソースプレートを、１０ｍＭから開始して、ＤＭＳＯ中での３組の９点の３倍の連続希釈を行うことによって調製した（アッセイ中の化合物の最終的な最高濃度は２０μＭであり、ＤＭＳＯは０．２％であった）。化合物ストックプレートからの１００ｎＬのアリコートを、細胞プレート中のそれぞれのウェルに加えた。１００％阻害対照は、２００ｎＭの最終濃度のスタウロスポリンで処理した細胞からなり、０％阻害対照は、ＤＭＳＯ処理細胞からなっていた。化合物の添加の後、アッセイプレートを、３７℃、５％のＣＯ２、相対湿度＞９０％で５日間インキュベートした。細胞プレートに３５μｌのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（登録商標）試薬を加えながら、細胞培養物中に存在するＡＴＰの定量化によって細胞生存を測定した。ルミネセンスを、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  Ｍ５マイクロプレートリーダーにおいて読み取った。細胞生存を５０％阻害する化合物の濃度を、正規化された用量反応曲線の４パラメータフィットを用いて求めた。
【０１３５】
実施例２：ＭＣＬ細胞株のパネルにおけるｓＤＭＡメチル化の阻害に対する式Ｂの効力
式Ｂで処理されたＭＣＬ細胞株（Ｚ−１３８、Ｍａｖｅｒ−１、Ｍｉｎｏ、Ｇｒａｎｔａ−５１９、およびＪｅｋｏ−１）を、４日目に採取し、全細胞溶解液を、Ｐａｎ−ジ−メチル対称性アルギニン抗体、対称性ジメチルアルギニン（ｓＤＭＡ）を用いて、ウエスタンブロットによって評価した。１０ｋＤａバンドの測定を用いて、メチル化ＩＣ５０値を計算した。ＲＮＡｉデータ（ＥＬＮ  ｅｎｔｒｙ  １４２〜３９）は、この１０ｋＤａバンドが、ジ−メチル対称性ＳｍＤ３であることを示唆するが、この１０ｋＤａバンドについてのタンパク質ＩＤ研究は行われておらず、結果として、それは、その分子量によってウエスタンブロットにおいて標識されるであろう。Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞株について示される代表的なウエスタンブロット（図１）を用いて試験される全ての細胞株において、１０ｋＤａバンドの濃度依存性の減少が４日目に観察された。ウエスタンブロットからの１０ｋＤａバンドのレベルを、濃度測定によって定量化し、全ＳｍＤ３に対する１０ｋＤａバンドの比率（ＳｍＤ３ｍｅ２ｓであると仮定される）を計算して、ＩＣ５０を求めた（表２、全ての試料についてｎ＝１）。メチル化ＩＣ５０値を、表３に示されるように、ＭＣＬ細胞株中の式Ａについても取得した。
【０１３６】
【表１】
2017530940.tif 000023
【０１３７】
【表２】
2017530940.tif 000024
【０１３８】
【表３】
2017530940.tif 000025
【０１３９】
実施例３：式Ｂで処理されたＺ−１３８およびＭａｖｅｒ−１細胞についてのＩＣＷ結果
ＳＹＭ１１抗体を用いて細胞メチル化のＩＣ５０を測定するために、Ｚ−１３８細胞を用いたＩＣＷアッセイにおいて式Ｂを試験した。０．６４ｎＭのＩＣ５０が、化合物による処理の４日後に得られた（図２、ｎ＝１）。
【０１４０】
ＳＹＭ１１抗体を用いて細胞メチル化のＩＣ５０を測定するために、Ｍａｖｅｒ−１細胞を用いたＩＣＷアッセイにおいて式Ｂを試験した。１．９ｎＭのＩＣ５０が、化合物による処理の４日後に得られた（図３、ｎ＝１）。
【０１４１】
実施例４：アポトーシス応答に関与する所定数の遺伝子に対する式Ｂの転写効果
式Ｂと同じ細胞能力を有するツール化合物（ｔｏｏｌ  ｃｏｍｐｏｕｎｄ）を用いたＭＣＬ細胞株中の前のＲＮＡ  Ｓｅｑ試験により、アポトーシス応答に関与するいくつかの遺伝子における発現の変化が特定された（公表されていない結果）。これらの遺伝子は、アポトーシス応答のよく特徴付けられたドライバである、Ｂｃｌ−２ファミリーメンバーＰＵＭＡおよびＢＡＸを含んでいた。アポトーシス応答に関与する他の遺伝子も特定され、ＰＨＬＤＡ３、ＴＰ５３Ｉ３、ｐ２１、ＡＰＯＢＥＣ３Ｈ、ＴＲＩＭ２２、およびＦＡＳを含む。化合物で処理されたＺ−１３８細胞が、ＤＭＳＯにわたって４倍〜２５倍の範囲の試験される全ての遺伝子（ＴＰ５３Ｉ３を除いて）の用量依存的な増加を示した。Ｍａｖｅｒ−１細胞はまた、ＤＭＳＯにわたって発現の２倍〜２０倍の増加の範囲の試験されるいくつかの遺伝子の遺伝子発現変化を示した。Ｇｒａｎｔａ−５１９は、遺伝子ＰＨＬＤＡ３における１０倍までの増加を示したが、ｐ２１、ＴＲＩＭ２２、およびＦＡＳの遺伝子発現のわずかな増加が観察されたに過ぎなかった。化合物で処理されたＪｅｋｏ−１およびＭｉｎｏ細胞は、試験される遺伝子のいずれにおいても有意な影響を示さなかった（表４および図６）。
【０１４２】
【表４】
2017530940.tif 000026
【０１４３】
実施例５：Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１アポトーシスに対する式Ｂの影響
細胞死滅の機構を、ＭＣＬ細胞株、Ｚ−１３８およびＭａｖｅｒ−１において評価した。細胞を、様々な時点で２ｎＭ、２０ｎＭ、および２００ｎＭの式Ｂで処理した。アポトーシスを、アネキシン−Ｖ陽性細胞のパーセンテージを測定することによって評価し、アッセイをトリプリケートで行った。アネキシン−Ｖ陽性細胞の１２％および４０％の増加が、Ｚ−１３８細胞中で４日後および６日後（図７）に２００ｎＭの式Ａの処理で観察された。よりわずかな増加が、Ｍａｖｅｒ−１細胞において観察された。８％の細胞が、式Ａによる処理の４日後にアネキシン−Ｖに対して陽性に染色された。アネキシン陰性細胞の対応する減少が、両方の細胞株においてそれらの時点で観察された。
【０１４４】
実施例６：２１日のマントル細胞リンパ腫異種移植片試験のＰＫ／ＰＤ／腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）分析
この実施例で示されるデータを、マントル細胞リンパ腫腫瘍の２１日の試料の分析後に測定した。Ｃｍｉｎ  ＰＫ試料を、２１日目の最後の投与の前に取った。腫瘍を切除し、秤量し、メチルマークのために処理した。メチルマーク減少を、腫瘍試料において測定し、ビヒクル対照（ＰＯＣ）に対するパーセントとして示す。ＳＹＭ１１およびｓＤＭＡ  Ｅｌｉｓａの両方を用いてメチルマークを測定し、示されるデータは、１０匹の動物の平均である。ＰＯＣに対するパーセントとして表される２１日目における腫瘍体積減少を用いて、腫瘍増殖阻害を測定した。インビボ阻害曲線も生成し、ＩＣ５０値を測定した。各群からの血漿中濃度は、５匹の動物の平均である。Ｚ−１３８細胞中の式Ｂの有効性が、図８に示される。試験された全ての用量は、５０％以上のＴＧＩをもたらし、５０％を超えるＴＧＩを有する腫瘍は、８０％を超えるメチルマーク減少を示した。全ての群中の平均体重減少（ＢＷＬ）は６％未満であった。Ｍａｖｅｒ−１細胞中の式Ｂの有効性が、図９に示される。試験された全ての用量は、５０％を超えるＴＧＩを示す。５０％を超えるＴＧＩを有する全ての腫瘍が、８０％を超えるメチルマーク減少を示した。全ての群中の平均ＢＷＬは、４％未満であった。Ｚ−１３８細胞中の式Ａの有効性が、図１０に示される。全ての群中の平均ＢＷＬは、１００ｍｇ／ｋｇの投与群において４匹の動物が１５％のＢＷＬを超えたことを除いて、８％未満であった。５０％を超えるＴＧＩを有する、式Ａで処理された動物に由来する腫瘍は、８０％を超えるメチルマーク減少を示した。Ｍａｖｅｒ−１細胞中の式Ａの有効性が、図１１に示される。試験される全ての群は、有意なメチルマーク減少（＞８０％）および５０％を超えるＴＧＩを示した。
【０１４５】
この試験で示されるデータ（図１２）はまた、代用組織におけるインビボメチルマーク阻害の最初のエビデンスを表す。図１２は、式Ｂを用いたＺ−１３８有効性試験からの骨髄試料のｓＤＭＡウエスタンブロット結果を示す。骨髄試料を試験の最後の２１日目に採取し、溶解液を、腫瘍に使用されたのと同じ方法を用いて調製した。メチルマークが試験される全ての投与群において完全に除去された腫瘍と比較して、ｓＤＭＡメチル化のレベルにおけるより一層の用量依存的反応が、骨髄において観察された。
【０１４６】
実施例７：乳癌データ
この実施例において、正味の細胞死アッセイを用いて、乳癌細胞株に対するＰＲＭＴ５阻害剤の有効性を実証した。ＰＭＲＴ５阻害剤式Ａ、式Ｂおよび式Ｃを用いて、３つの異なる乳癌細胞株（ＳＫＢＲ−３、ＺＲ−７５−１およびＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を処理した。ＳＫＢＲ−３は、ＨＥＲ２陽性乳癌細胞株である。ＺＲ−７５−１は、エストロゲン受容体／プロゲステロン受容体（ＥＲ／ＰＲ）陽性乳癌細胞株である。ＭＤＡ−ＭＢ−４６８は、トリプルネガティブ（ＥＲ−／ＰＧ−／ＨＥＲ２−）乳癌細胞株である。マントル細胞リンパ腫細胞株（Ｚ−１３８）を、陽性対照として使用した。アッセイの結果が、図１３に示される。
【０１４７】
腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）も、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８異種移植片モデルにおいて化合物の２つ、式Ａおよび式Ｂについてのいくつかの投与計画について測定した。ＴＧＩアッセイの結果が、図１４に示される。
【０１４８】
式Ａおよび式Ｂの薬力学メチルマーク抑制応答も、ＭＤＡ−ＭＢ−４６８細胞異種移植片モデルにおいて測定した。応答が、図１５に示される。
【０１４９】
実施例８：膵臓癌データ
この実施例において、膵臓癌を治療する際のＰＲＭＴ５阻害剤の有効性が実証される。図１６は、式ＣおよびＤで処理された２つの膵臓癌細胞株（Ｍｉａｐａｃａ−２およびＰａｎｃ−１）のウエスタンブロット分析の結果を示す。
【０１５０】
図１７は、式Ｃおよび式Ｄで処理されたＭｉａｐａｃａ−２細胞において行われたヒストンＨ４（Ｈ４Ｒ３ｍｅ２ｓ）試験のアルギニン−３における対称性ジメチル化の結果を示す。
【０１５１】
膵臓癌細胞形態に対する式Ｄによる処理の影響も試験した。各化合物による処理は、図１８に示されるように、Ｍｉａｐａｃａ−２およびＰａｎｃ−１細胞株の両方における癌細胞増殖の阻害をもたらす。
【０１５２】
また、２Ｄ−増殖アッセイを、式Ｄで処理された膵臓細胞株において行った。式ＤによるＭｉａｐａｃａ−２およびＰａｎｃ−１細胞の両方の処理が、図１９に示されるように、細胞増殖の減少をもたらす。ＭｉａＰａｃａ−２細胞中の計算された発育阻止濃度（ｇＩＣ５０）は、４日目に３４９ｎＭであり、６日目に２６９ｎＭであり、１３日目に９２９ｎＭであった。Ｐａｎｃ−１細胞中の計算された発育阻止濃度（ｇＩＣ５０）は、４日目に１９９０ｎＭであり、６日目に１２４３ｎＭであり、１３日目に３９０４ｎＭであった。
【０１５３】
実施例９：ヘム癌データ
ヘム癌細胞を、ＰＲＭＴ５阻害剤で処理し、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ増殖／死アッセイを行った。図２０に示されるように、式ＣのＰＲＭＴ阻害剤による処理が、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、急性骨髄性リンパ腫（ＡＭＬ）細胞株および多発性骨髄腫（ＭＭ）、およびリンパ腫細胞株を含むいくつかのヘム癌細胞株において増殖を阻害する。
【０１５４】
実施例１０：ｐ５３陽性癌データ
非ヒストン基質（Ｅ２Ｆ１およびｐ５３など）のＰＲＭＴ５メチル化も、癌細胞増殖および死に寄与する。ウエスタンブロットおよびＰＣＲ実験の結果は、ＰＲＭＴ５阻害が、遺伝子発現およびスプライシング変化につながり、最終的に癌細胞中のｐ５３の誘導を引き起こすことを示す。式ＣのＰＲＭＴ５阻害剤を用いて、図２１および図２２中のデータを生成した。図２１に示されるように、Ｚ１３８マントル細胞リンパ腫細胞中のＰＲＭＴ５阻害は、ＭＤＭ４スプライシングを軽減し、ｐ５３発現を増加させる。また、ｐ５３が欠損した細胞（例えば、ＳＷ４８結腸癌細胞）（すなわち、ＳＷ４８−／−）は、例えばＥＣ５０、ｇＩＣ５０、またはｇＩＣ９０（図２２）に基づいて、それらの野生型対応物（すなわち、ＳＷ４８）と比較して、ＰＲＭＴ５阻害に対する感受性が低かった。
【０１５５】
実施例１１：ＰＲＭＴ５阻害剤式Ｃで処理されたマントル細胞リンパ腫株、Ｚ−１３８の細胞周期分析（ヨウ化プロピジウム染色、３日目）（左側のパネル）およびウェスタン分析（１μＭのＰＲＭＴ５阻害剤）（右側のパネル）
図２３に示されるように、ＰＲＭＴ５阻害は、マントル細胞リンパ腫株、Ｚ１３８におけるＧ１期停止（１０ｎＭにおける棒グラフ）および細胞死（２００ｎＭにおける棒グラフ）をもたらす。ウェスタン分析は、ＰＲＭＴ５（ｓＤＭＡ、対称性ジメチルアルギニン）の時間依存性の阻害およびＰＲＭＴ５阻害剤処理に応答した細胞死経路（切断されたカスパーゼ−３および切断されたＰＡＲＰ）の誘導を実証している。
【０１５６】
細胞周期分析
３ｍＬのＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清（形質導入された細胞株のために０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンが補充された）の体積中で、６ウェル組織培養皿に細胞を播種した。細胞を、３日間にわたって、ＤＭＳＯ、１０ｎＭの式Ｃ、または２００ｎＭの式Ｃで処理した。５分間にわたって２，０００ＲＰＭで遠心分離し、ＰＢＳで洗浄し、クエン酸緩衝液で洗浄し、次に、過剰のクエン酸緩衝液を吸引して、ペレットの上に約５０μＬを残すことによって、細胞を採取した。ペレットを、処理の準備ができるまで−８０℃で凍結させた。
【０１５７】
Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＣｙｃｌｅＴＥＳＴ  ＰＬＵＳキット（カタログ番号３４０２４２）を用いて、ペレットをＦＡＣＳのためにヨウ化プロピジウムで染色した。キットの溶液Ａ、Ｂ、およびＣを解凍し、次に、氷上で保持した。細胞ペレットを３７℃で迅速に解凍し、ピペットで吸ったり出したりして、５０μＬのクエン酸緩衝液中で再懸濁させた。
【０１５８】
細胞ペレット体積の約４分の１を、新しいエッペンドルフチューブに移した。２５０μＬの溶液Ａを各試料に加え、次に、７〜１０回反転させた。試料を、室温で１０分間にわたって１５０ＲＰＭで振とう機に入れた。振とうしない場合、試料を氷上に置いた。２５０μＬの溶液Ｂおよび２５０μＬの溶液Ｃを、同じように各試料に加えた。ヨウ化プロピジウムを溶液Ｃに加えた後、光への暴露を最小限に抑えるために、試料を箔で覆った。試料をＦＡＣＳチューブ（ポリスチレン、Ｆａｌｃｏｎ  ３５２０５８）に移し、染色された試験片の分析を、染色の３時間以内に完了した。
【０１５９】
試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機械においてＦＡＣＳによって処理した。各細胞周期段階における細胞のパーセンテージを、ＦｌｏｗＪｏ  Ｖ１０ソフトウェアを用いて、ゲートされた単一細胞集団についての細胞周期関数を用いて測定した。
【０１６０】
ウェスタン分析
ＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清培地中で、約６ウェル組織培養皿に、Ｚ１３８細胞を播種した。細胞を、１、２、３、４、または５日間にわたって１μＭの化合物で処理した。５分間にわたって５００×ｇで遠心分離し、ＰＢＳで１回洗浄し、処理の準備ができるまで−８０℃で凍結させることによって、細胞ペレットを収集した。
【０１６１】
プロテアーゼ阻害剤（細胞ペレットの体積の約５倍、またはおよそ２５０μＬ）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ  Ｒ０２７８）を各細胞ペレットに加え、ピペット操作により再懸濁させることによって、タンパク質溶解液を調製した。試料を１０×１秒のパルスで、超音波で分解し、次に、６分間にわたって最高速度（１３，３００ＲＰＭ）で遠心分離した。上清（２００μＬ）を、新しいエッペンドルフチューブに移し、ペレットを廃棄した。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙキットを用いてタンパク質濃度を測定した。
【０１６２】
２０μｇの溶解液を、適切な体積のＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＮｕＰａｇｅ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｒｅｄｕｃｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔ、ＬＤＳ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ、およびＲＩＰＡ緩衝液と組み合わせることによって、タンパク質ゲル試料を調製した。ゲル試料を、加熱ブロック中１００℃で５〜１０分間加熱した。１５ウェルのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ４〜１２％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＮｕＰＡＧＥ−ＳＤＳゲルを１ウェル当たり１９μＬの体積で充填し、約１時間にわたってまたはバンドの最大分離が達成されるまで１５０ＶでＭＥＳ  ＳＤＳ緩衝液中で流した。
【０１６３】
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｉＢｌｏｔシステムを用いて、ゲルをニトロセルロース膜上に移した。ブロットを、室温に固定しながら、３０分間にわたってＬｉＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙ緩衝液（カタログ番号９２７−４００００）でブロックした。一次抗体を、Ｌｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（０．１％のＴＷＥＥＮ−２０を加えた）で希釈し、４℃に固定しながら、一晩適用した。次に、ブロットをＰＢＳＴ中で３×１５分間洗浄し、室温に固定しながら１時間にわたって蛍光二次抗体（０．１％のＴｗｅｅｎ−２０／Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング試薬で１：１０，０００に希釈された）で処理し、ＰＢＳＴ中で３×１５分間にわたって再度洗浄し、次に、ＬｉＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙスキャナを用いて撮像した。
【０１６４】
実施例１２：ＰＲＭＴ５阻害が、ＭＤＭ４スプライシングを軽減し、ｐ５３発現を増加させる。
形質導入されたＺ１３８細胞株の生成
１ウェル当たり３ｍＬのＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清の体積で、６ウェル組織培養皿中に、１×１０６個のＺ１３８細胞を播種した。レンチウイルス（ｐＬＥＸベクター中のＭＤＭ４またはＥＧＦＰ）を、既に記載されているように調製するか、またはＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した（ｐ５３  ｓｈＲＮＡまたはスクランブルｓｈＲＮＡレンチウイルスについてのカタログ番号ｓｃ−２９４３５−Ｖおよびｓｃ−１０８０８０）。レンチウイルス粒子を、ＭＯＴ＝２０で播種された細胞に加え、８μｇ／ｍＬのポリブレンを補充した。６ウェルプレートをパラフィルム（Ｐａｒａｆｉｌｍ）で封止し、レンチウイルス治療のために３７℃で９０分間にわたって１０００×ｇで回転させた。次に、各ウェルの内容物を、別個の１５ｍＬの円錐管中に収集し、５分間にわたって１０００×ｇで回転させた。上清（レンチウイルスおよびポリブレンを含有する）を廃棄し、細胞ペレットを、３ｍＬのＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清中で再懸濁させた。細胞を、新しい６ウェル組織培養皿で再播種し、４８時間にわたって３７℃および５％のＣＯ２でインキュベートした。
【０１６５】
形質導入効率を、蛍光顕微鏡法を用いてＥＧＦＰ−形質導入された細胞について評価した。ＥＧＦＰ発現が観察された場合、形質導入は成功しており、ピューロマイシンを０．５μｇ／ｍＬの濃度で加えて、形質導入された細胞を選択した。実験用に播種するのに十分な細胞が存在するまで（ピューロマイシンによる連続培養で）形質導入された集団を拡大した。
【０１６６】
ＭＤＭ４スプライシング分析（ＰＣＲ）
１０ｍＬのＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清培地の体積で、１皿当たり約３×１０６個の細胞の密度で、Ｚ１３８細胞を、１０ｃｍの組織培養皿に播種した。細胞を、１、２、または３日間にわたって０．５％のＤＭＳＯで、２００ｎＭまたは１μＭの化合物で処理した。ＰＢＳで１回洗浄し、３７℃で５分間トリプシン処理し、５分間にわたって１０００×ｇで遠心分離し、次に、処理の準備ができるまで−８０℃で貯蔵することによって、細胞ペレットを採取した。
【０１６７】
ＲＮＡを細胞ペレットから抽出した。まず、ペレットを氷上で解凍し、次に、５００μＬのＴｒｉｚｏｌ試薬中で迅速に再懸濁させた。次に、試料を室温で２〜３分間インキュベートし、３０秒間ボルテックスして、溶解液を完全に均質化した。５０μＬの水および５０μＬのクロロホルムを、各Ｔｒｉｚｏｌ−細胞混合物に加え、次に、各試料を３０秒間ボルテックスして、完全に混合した。試料を、ＭａＸｔｒａｃｔ  Ｈｉｇｈ  Ｄｅｎｓｉｔｙチューブに充填し、５分間にわたって１４，０００ＲＰＭで回転させた。各チューブからの透明な上清（水相）を、新しい２ｍＬのチューブに移し、２倍の体積の新しく調製された７０％のエタノールを各試料に加えた。試料をＲＮｅａｓｙ  ｓｐｉｎカラム（Ｑｉａｇｅｎ  ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉキットの一部）に充填した。カラムを１５秒間にわたって９０００×ｇで遠心分離し、フロースルー（ｆｌｏｗ−ｔｈｒｏｕｇｈ）を廃棄した。３５０μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＲＷ１を各カラムに加え、試料を１５秒間にわたって約９０００×ｇで遠心分離し、フロースルーを廃棄した。各試料について１０μＬのＤＮａｓｅ  Ｉを７０μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＲＤＤと混合することによって、ＤＮａｓｅ  Ｉ混合物（Ｑｉａｇｅｎ）を調製し、次に、８０μＬのＤＮａｓｅ  Ｉ混合物を各試料に加え、室温で１５分間インキュベートした。３５０μＬのＢｕｆｆｅｒ  ＲＷ１を各カラムに加え、試料を１５秒間にわたって約９０００×ｇで遠心分離し、フロースルーを廃棄した。次に、カラムを５００μＬの調製されたＢｕｆｆｅｒ  ＲＰＥで２回洗浄し、試料を、１５秒間にわたって９０００×ｇで遠心分離し、フロースルーを廃棄した。ＲＮｅａｓｙカラムを、新しい２ｍＬの収集管に入れ、１分間にわたって１４０００ＲＰＭで回転させて、カラムを乾燥させた。次に、ＲＮｅａｓｙカラムを１．５ｍＬの収集管に移し、３０μＬのＲＮａｓｅフリー水を各カラムに加えた。カラムを室温で１分間インキュベートし、次に、１分間にわたって１４０００ＲＰＭで回転させた。次に、６０μＬの総体積になるようにさらなる３０μＬのＲＮａｓｅフリー水を加えながら、この溶出工程を繰り返した。ＲＮＡ濃度をＮａｎｏｄｒｏｐにおいて分析した。
【０１６８】
次に、ＲＮＡを逆転写して、ｃＤＮＡを生成した。９６ウェルＰＣＲプレートにおいて、１μｇのＲＮＡを、滅菌したヌクレアーゼフリー水で、２５μＬの最終体積になるまで希釈した。Ｈｉｇｈ  Ｃａｐａｃｉｔｙ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ（ＡＢＩ  ＃４２７４９６６）を用いてマスターミックスを調製した。２５μＬのマスターミックスを、５０μＬの最終的な反応物体積になるようにＲＮＡを含む各ウェルに加えた。反応物を、以下のようにプログラムされたサーマルサイクラー中でインキュベートした：２５℃で１０分間、３７℃で２時間、および８５℃で５分間。ｃＤＮＡを、９６ウェルポリプロピレンプレート中で、２５μＬの逆転写反応生成物を、２００μＬのヌクレアーゼフリー水と組み合わせることによって希釈した。
【０１６９】
短い長さおよび完全長ＨＤＭＸスプライス変異を、希釈されたｃＤＮＡからＰＣＲ増幅した。まず、Ｔｈｅｒｍｏ  ＤｒｅａｍＴａｑ  Ｇｒｅｅｎ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（２Ｘ）（カタログ番号Ｋ１０８２）、ＨＤＭＸ  フォワードプライマー（１μＭの最終濃度、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＳＳ２９４１６８−０１、ＴＧＴＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＴＴＴＴＧＧＧ（配列番号１））、およびＨＤＭＸリバースプライマー（１μＭの最終濃度、Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＳＳ２９４１６９−０１、ＧＣＡＧＴＧＴＧＧＧＧＡＴＡＴＣＧＴ（配列番号２））を組み合わせることによって、ＰＣＲマスターミックスを調製した。９６ウェルＰＣＲプレートにおいて、１０μＬの希釈されたｃＤＮＡおよび４０μＬのＰＣＲマスターミックスを組み合わせて、５０μＬの反応物を生成した。ＰＣＲ反応をサーマルサイクラー中で行った：９５℃で５分間の１サイクル；９５℃で４０秒間、５８℃で３０秒間、および７２℃で４０秒間の２６サイクル；次に、７２℃で４分間の１サイクル。
【０１７０】
２％のアガロース臭化エチジウムゲル上で１レーン当たり１５μＬを流し、ＢｉｏＲａｄ  ＶｅｒｓａＤｏｃシステムで撮像することによって、ＰＣＲ産物を視覚化した。
【０１７１】
ｐ５３およびｐ２１発現分析（ウェスタン）
１０ｍＬのＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清培地の体積中で、１０ｃｍの組織培養皿に、Ｚ１３８細胞を、約３×１０６個の細胞／皿で播種した。細胞を、１、２、３、４、または５日間にわたって１μＭの式Ｃで処理した。５分間にわたって５００×ｇで遠心分離し、ＰＢＳで１回洗浄し、処理の準備ができるまで−８０℃で凍結させることによって、細胞ペレットを収集した。
【０１７２】
プロテアーゼ阻害剤（細胞ペレットの体積の約５倍、またはおよそ２５０μＬ）を含有するＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ  Ｒ０２７８）を各細胞ペレットに加え、ピペット操作により再懸濁させることによって、タンパク質溶解液を調製した。試料を、１０×１秒のパルスで、超音波で分解し、次に、６分間にわたって最高速度（１３，３００ＲＰＭ）で遠心分離した。２００μＬの上清を新しいエッペンドルフチューブに移し、ペレットを廃棄した。Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙキットを用いてタンパク質濃度を測定した。
【０１７３】
２０μｇの溶解液を、適切な体積のＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  ＮｕＰａｇｅ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｒｅｄｕｃｔｉｎｇ  Ａｇｅｎｔ、ＬＤＳ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｂｕｆｆｅｒ、およびＲＩＰＡ緩衝液と組み合わせることによって、タンパク質ゲル試料を調製した。ゲル試料を、加熱ブロック中１００℃で５〜１０分間加熱した。１５ウェルのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ４〜１２％のＢｉｓ−Ｔｒｉｓ  ＮｕＰＡＧＥ−ＳＤＳゲルを１ウェル当たり１９μＬの体積で充填し、約１時間にわたってまたはバンドの最大分離が達成されるまで１５０ＶでＭＥＳ  ＳＤＳ緩衝液中で流した。
【０１７４】
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｉＢｌｏｔシステムを用いて、ゲルをニトロセルロース膜上に移した。ブロットを、室温に固定しながら、３０分間にわたってＬｉＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙ緩衝液（カタログ番号９２７−４００００）でブロックした。一次抗体（１：２００で、ｐ５３、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ｓｃ−１２６；１：１，０００で、ｐ２１、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃２９４６；１：５，０００で、チューブリン、Ｓｉｇｍａ  Ｔ９０２６）を、Ｌｉｃｏｒ  Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキングバッファー（０．１％のＴＷＥＥＮ−２０を加えた）で希釈し、４℃に固定しながら、一晩適用した。次に、ブロットをＰＢＳＴ中で３×１５分間洗浄し、室温に固定しながら１時間にわたって蛍光二次抗体（０．１％のＴｗｅｅｎ−２０／Ｏｄｙｓｓｅｙブロッキング試薬で１：１０，０００に希釈された）で処理し、ＰＢＳＴ中で３×１５分間にわたって再度洗浄し、次に、ＬｉＣＯＲ  Ｏｄｙｓｓｅｙスキャナを用いて撮像した。
【０１７５】
図２４中の実験結果は、ＰＲＭＴ５阻害が、ＭＤＭ４スプライシングを軽減し、Ｚ１３８細胞中のｐ５３発現を増加させることを示す。
【０１７６】
実施例１３：完全長（ＦＬ）ＭＤＭ４を過剰発現するＺ−１３８細胞は、ＰＲＭＴ５阻害に対する感受性が低い
形質導入されたＺ１３８細胞株の生成
形質導入されたＺ１３８細胞株を、上述されるように調製した。
【０１７７】
細胞周期分析
３ｍＬのＩＭＤＭ＋１０％のウマ血清（形質導入された細胞株のために０．５μｇ／ｍＬのピューロマイシンが補充された）の体積中で、６ウェル組織培養皿に、細胞を、２５０，０００個の細胞／ウェルで播種した。細胞を、２、３、または４日間にわたって、ＤＭＳＯ、５０ｎＭの式Ｃ、または５００ｎＭの式Ｃで処理した。５分間にわたって２，０００ＲＰＭで遠心分離し、ＰＢＳで洗浄し、クエン酸緩衝液で洗浄し、次に、過剰のクエン酸緩衝液を吸引して、ペレットの上に約５０μＬを残すことによって、細胞を採取した。ペレットを、処理の準備ができるまで−８０℃で凍結させた。
【０１７８】
Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＣｙｃｌｅＴＥＳＴ  ＰＬＵＳキット（カタログ番号３４０２４２）を用いて、ペレットをＦＡＣＳのためにヨウ化プロピジウムで染色した。キットの溶液Ａ、Ｂ、およびＣを解凍し、次に、氷上で保持した。細胞ペレットを３７℃で迅速に解凍し、ピペットで吸ったり出したりして、５０μＬのクエン酸緩衝液中で再懸濁させた。
【０１７９】
細胞ペレット体積の約４分の１を、新しいエッペンドルフチューブに移した。２５０μＬの溶液Ａを各試料に加え、次に、７〜１０回反転させた。試料を、室温で１０分間にわたって１５０ＲＰＭで振とう機に入れた。振とうしない場合、試料を氷上に置いた。２５０μＬの溶液Ｂおよび２５０μＬの溶液Ｃを、同じように各試料に加えた。ヨウ化プロピジウムを溶液Ｃに加えた後、光への暴露を最小限に抑えるために、試料を箔で覆った。試料をＦＡＣＳチューブ（ポリスチレン、Ｆａｌｃｏｎ  ３５２０５８）に移し、染色された試験片の分析を、染色の３時間以内に完了した。
【０１８０】
試料を、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ機械においてＦＡＣＳによって処理した。各細胞周期段階における細胞のパーセンテージを、ＦｌｏｗＪｏ  Ｖ１０ソフトウェアを用いて、ゲートされた単一細胞集団についての細胞周期関数を用いて測定した。
【０１８１】
図２５中の実験結果は、完全長（ＦＬ）ＭＤＭ４を過剰発現するＺ−１３８細胞が、ＰＲＭＴ５阻害に対する感受性が低いことを示す。
【０１８２】
他の実施形態
上記は、本発明の特定の非限定的な実施形態の説明であった。当業者は、本明細書に対する様々な変形形態および変更形態が、以下の特許請求の範囲に規定されるような本発明の趣旨または範囲から逸脱せずに行われ得ることを理解するであろう。
【図１】
2017530940.tif 000036
【図２】
2017530940.tif 000037
【図３】
2017530940.tif 000038
【図４】
2017530940.tif 000039
【図５】
2017530940.tif 000040
【図６】
2017530940.tif 000041
【図７】
2017530940.tif 000042
【図８】
2017530940.tif 000043
【図９】
2017530940.tif 000044
【図１０】
2017530940.tif 000045
【図１１】
2017530940.tif 000046
【図１２】
2017530940.tif 000047
【図１３】
2017530940.tif 000048
【図１４】
2017530940.tif 000049
【図１５】
2017530940.tif 000050
【図１６】
2017530940.tif 000051
【図１７】
2017530940.tif 000052
【図１８】
2017530940.tif 000053
【図１９】
2017530940.tif 000054
【図２０】
2017530940.tif 000055
【図２１】
2017530940.tif 000056
【図２２】
2017530940.tif 000057
【図２３】
2017530940.tif 000058
【図２４】
2017530940.tif 000059
【図２５】
2017530940.tif 000060
【図２６】
2017530940.tif 000061
【図２７】
2017530940.tif 000062
【図２８】
2017530940.tif 000063
【図２９】
2017530940.tif 000064
【図３０】
2017530940.tif 000065
【図３１】
2017530940.tif 000066
【図３２】
2017530940.tif 000067
【図３３】
2017530940.tif 000068
【国際調査報告】
2017530940.tif 000069
2017530940.tif 000070
2017530940.tif 000071