(57)【要約】  エストロゲン受容体モジュレーターを投与することにより、ＥＳＲ１遺伝子における突然変異により特徴を明らかにされるＥＲ関連疾患状態を治療する方法及び組成物が本明細書中に記載される。また、エストロゲン受容体モジュレーターを投与することにより、ＥＳＲ１遺伝子における突然変異により特徴を明らかにされるホルモン耐性エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性乳がんを治療する方法が本明細書中に記載される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のための式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物であって、
患者が、ＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有し、
式（Ａ）の化合物が、下記構造：
2017509631.tif 000101
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000102
から成る群から選択される５員複素環であり、
Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒｃは、Ｈ又はＦであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
ｎは、０、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有し、
式（Ｂ）の化合物が、下記構造：
2017509631.tif 000103
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000104
から成る群から選択される５員複素環であり、
環Ｃは、
2017509631.tif 000105
であり、
環Ｄは、フェニル又はチエニルであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有し、
式（Ｃ）の化合物が、下記構造：
2017509631.tif 000106
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000107
から成る群から選択される５員複素環であり、
Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有し、
式（Ｄ）の化合物が、下記構造：
2017509631.tif 000108
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲ６、−ＮＨＲ６、−ＮＲ６Ｒ７、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ４はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルキル、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルコキシ、及びＣ１−Ｃ４アルコキシから選択され、
Ｒ５はそれぞれ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、又は−ＯＣＨ３であり、
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ７、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換のＣ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、置換又は無置換のＣ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２であり。
ｔは、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する、
ＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２】
エストロゲン受容体モジュレーターが、下記構造：
2017509631.tif 000109
を有する式（Ａ−１）の化合物である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３】
エストロゲン受容体モジュレーターが、下記構造：
2017509631.tif 000110
を有する式（Ｃ−１）の化合物である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４】
エストロゲン受容体モジュレーターが、下記構造：
2017509631.tif 000111
を有する式（Ｄ−１）、（Ｄ−２）、（Ｄ−３）、及び（Ｄ−４）から選択される化合物である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項５】
エストロゲン受容体モジュレーターが、化合物１−１、１−２、１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−８、１−９、１−１０、１−１１、及び１−１２の中から選択される、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項６】
エストロゲン受容体モジュレーターが、１−３である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項７】
エストロゲン受容体モジュレーターが、化合物２−１、２−２、２−３、２−４、及び２−５の中から選択される、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項８】
エストロゲン受容体モジュレーターが、化合物３−１、３−２、３−３、及び３−４の中から選択される、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項９】
エストロゲン受容体モジュレーターが、化合物４−１、４−２、４−３、４−４、４−５、４−６、４−７、４−８、４−９、４−１０、４−１１、４−１２、４−１３、４−１４、４−１５、４−１６、４−１７、４−１８、４−１９、４−２０、４−２１、４−２２、４−２３、４−２４、４−２５、４−２６、４−２７、４−２８、４−２９、４−３０、４−３１、４−３２、４−３３、４−３４、４−３５、４−３６、４−３７、４−３８、４−３９、４−４０、４−４１、４−４２、４−４３、４−４４及び４−４５の中から選択される、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１０】
エストロゲン受容体モジュレーターが、４−２３である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１１】
ＥＲ関連疾患又は状態ががんである、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１２】
がんが、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、子宮内膜がん、神経膠腫、肺がん、メラノーマ、卵巣がん、膵臓がん、及び前立腺がんから選択される、請求項１１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１３】
がんが乳がんである、請求項１２に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１４】
乳がんが、転移性、ホルモン耐性、エストロゲン受容体陽性、エストロゲン受容体陰性、プロゲステロン受容体陰性、ＨＥＲ２陽性、又はＨＥＲ２陰性乳がんである、請求項１３に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１５】
乳がんが、アロマターゼ阻害剤による治療に対して耐性である、請求項１２に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１６】
アロマターゼ阻害剤が、アナストロゾール、レトロゾール、又はエキセメスタンである、請求項１５に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１７】
乳がんが、基底又は管腔サブタイプである、請求項１３に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１８】
患者が、閉経前又は閉経後の女性患者である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項１９】
患者が、１つ又は複数の抗がん剤療法に失敗している、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２０】
ＥＳＲ１遺伝子における突然変異が、体細胞突然変異である、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２１】
患者が、野生型ＥＲ及び突然変異ＥＲを発現する、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２２】
患者が、２つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドのホモダイマーを発現する、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２３】
患者が、２つの野生型ＥＲ−αポリペプチドのホモダイマーを発現する、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２４】
患者が、１つの野生型ＥＲ−αポリペプチドと１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドとのヘテロダイマー又は１つの野生型ＥＲ−βポリペプチドと１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドとのヘテロダイマーを発現する、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２５】
患者が腫瘍を有し、腫瘍の複数の細胞が突然変異ＥＲを発現する、請求項２４に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２６】
患者が、化学療法剤、生物学的療法、がんワクチン、血管新生阻害剤、ホルモン療法、放射線療法、手術、又はそれらの任意の組合せを施されている、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２７】
生物学的療法が、ペプチド、サイトカイン、抗体、治療用ウイルス、治療用細菌、遺伝子療法、ｓｉＲＮＡ、養子Ｔ細胞移入、又はそれらの任意の組合せである、請求項２６に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２８】
患者が、アロマターゼ阻害剤、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲンディグレーダー（ＳＥＲＤ）、ＰＩ３キナーゼ／ｍＴＯＲ経路阻害剤、ＣＤＫ  ４／６阻害剤、ＨＥＲ−２阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、化学療法、又はそれらの任意の組合せを施されている、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項２９】
患者が、フルベストラント、タモキシフェン、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ゴセレリン、ロイプロリド、ラロキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、バゼドキシフェン、又はそれらの任意の組合せを施されている、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３０】
患者が、アントラサイクリン、タキサン、白金剤、エポチロン、又はヌクレオシドアナログを施されている、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３１】
患者が、シスプラチン、カルボプラチン、カペシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エリブリン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イクサベピロン、ミトキサントロン、メトトレキサート、パクリタキセル、パミドロネート、ビノレルビン、又はそれらの任意の組合せを施されている、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３２】
患者が、ペルツズマブ、トラスツズマブ、ラパチニブ、エベロリムス、ベバシズマブ、テムシロリムス、又はそれらの任意の組合せを施されている、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３３】
ＥＳＲ１突然変異が、ＥＲポリペプチドにおける１つ又は複数のアミノ酸の置換、挿入又は欠失をもたらす、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３４】
ＥＳＲ１突然変異が、エストロゲン受容体のＮ末端ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、ヒンジ領域又はリガンド結合ドメインにおけるアミノ酸置換をもたらす、請求項３３に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３５】
ＥＳＲ１突然変異が、エストロゲン受容体のリガンド結合ドメインにおけるアミノ酸置換をもたらす、請求項３３に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３６】
アミノ酸置換が、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８又は５５５位に存在する、請求項３５に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３７】
アミノ酸置換が、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択される、請求項３６に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３８】
アミノ酸置換が、Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、及びＤ５３８Ｇの中から選択される、請求項３７に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項３９】
患者が、
ａ）患者由来の核酸を含む試料においてＥＳＲ１遺伝子における突然変異を検出する工程、及び
ｂ）患者がＥＳＲ１突然変異を有する場合、エストロゲン受容体モジュレーター化合物による治療に関して、患者を選定する工程
により、エストロゲン受容体モジュレーター化合物による治療に関して選定される、請求項１に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４０】
核酸がＲＮＡ又はＤＮＡである、請求項３９に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４１】
ＤＮＡがゲノムＤＮＡである、請求項４０に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４２】
方法が、核酸試料からｍＲＮＡを単離することを更に含む、請求項３９に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４３】
方法が、核酸試料から前記突然変異を含む核酸分子を増幅することを更に含む、請求項３９に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４４】
増幅が、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はデジタルＰＣＲによるものである、請求項４３に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４５】
ＰＣＲ増幅が、前記突然変異を含む領域に隣接するオリゴヌクレオチドプライマー対を使用することを含む、請求項４４に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４６】
配列特異的な核酸プローブを前記核酸と接触させることを含み、配列特異的な核酸プローブが、前記突然変異を有する前記核酸に結合して、野生型核酸には結合しない、請求項３９に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４７】
試料が、１つ又は複数の腫瘍細胞由来の核酸を含む、請求項３７に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４８】
腫瘍細胞が、腫瘍生検試料、血液試料、血清試料、リンパ液試料、又は骨髄穿刺液から採取される、請求項４７に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項４９】
腫瘍細胞が、循環性腫瘍細胞である、請求項４８に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項５０】
試料が、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）を含む、請求項４９に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物。
【請求項５１】
ＥＳＲ１における突然変異の検出用の１つ又は複数の試薬と、請求項１に記載の式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物とを含むキット。
【請求項５２】
請求項１から５０の何れか一項に記載のＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物と、１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項５３】
ＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のための、医薬の調製のための請求項１から５０の何れか一項に記載のエストロゲン受容体モジュレーター化合物の使用。
【請求項５４】
ＥＲ関連疾患又は状態の治療のための、請求項１から５０の何れか一項に記載のエストロゲン受容体モジュレーター化合物の使用。
【請求項５５】
患者においてＥＲ関連疾患又は状態を治療するための方法であって、請求項１から３４の何れか一項に記載のエストロゲン受容体モジュレーター化合物を患者へ投与することを含む方法。
【請求項５６】
上述の本発明。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
配列表
本出願は、配列表を含有し、それは、ＥＦＳ−ＷｅｂによりＡＳＣＩＩフォーマットでコンピューターに読み込み可能なテキストファイルとして提出しており、出典明示によりその全体が本明細書に援用されている。作成日２０１４年３月１３日のテキストファイルには、４５２０２−７３９−１０１ｓｅｑｌｉｓｔ．ｔｘｔと名前を付け、サイズは８ＫＢである。
【０００２】
エストロゲン受容体モジュレーターを投与することにより、女性における１つ又は複数の腫瘍細胞中のＥＲ遺伝子における突然変異により特徴を明らかにされるホルモン耐性エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性乳がんを治療する方法が本明細書中に記載されている。
【背景技術】
【０００３】
乳がんは、最も一般的ながんの形態であり、世界的に女性におけるがん死亡の主な原因である。全ての乳がんのおよそ８０％が、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現し、腫瘍増殖及び進行に関してエストロゲン受容体に依存している。エストロゲン受容体（「ＥＲ」）は、内因性のエストロゲンとの相互作用を通じて、様々な生物学的影響の誘導を媒介するリガンド活性化される転写制御タンパク質である。内因性のエストロゲンとして、１７β−エストラジオール及びエストロンが挙げられる。ＥＲは、２つのアイソフォームであるＥＲ−α及びＥＲ−βを有することが見出されている。エストロゲン及びエストロゲン受容体は、乳がん、卵巣がん、結腸がん、肺がん、前立腺がん、子宮内膜がん、子宮がん、並びに他の疾患又は状態などの多数の疾患又は状態に関与している。
【０００４】
ほとんどの乳がん患者は、エストロゲン合成をブロックする（例えば、アロマターゼ阻害剤；ＡＩＳ）か、又は競合的ＥＲ結合を介してエストラジオールの影響を拮抗する（例えば、タモキシフェン）薬剤で治療される。（Puhalla S等 Mol Oncol 2012; 6(2):222-236）。様々な病期においてこれらの薬剤の治療的有用性が十分に記録されてはいるが、多くのＥＲ＋乳がんは再発して、患者は最終的には死亡する。近年、次世代型全ゲノム及び標的シーケンシングにより、主にアロマターゼ阻害剤による内分泌療法において進行した進行性乳がんを患う患者由来の腫瘍の最大２０％においてＥＳＲ１（エストロゲン受容体アルファ遺伝子）突然変異が同定されている（Li S等.Cell Rep(2013)； 4(6):1116-1130、Merenbakh-Lamin K等.Cancer Res(2013); 73(23):6856-6864、Robinson DR等. Nat Genet(2013);45(12):1446-1451；Toy W等. Nat Genet(2013); 45(12):1439-1445；Jeselsohn R等.Clin Cancer Res(2014); 20:1757-1767）。これらのリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）突然変異は、それらをリガンド非依存的にして、低エストラジオールの状況で活性にさせるアポ受容体の高い基礎活性を付与する。ＥＳＲ１突然変異腫瘍を担持する患者のサブセットを含むＡＩ又はタモキシフェン治療後の進行性疾患の状況において、頑強な活性を伴うＥＲシグナル伝達を標的とする療法が非常に必要とされている。
【０００５】
ＡＲＮ−８１０（ＧＤＣ−０８１０、Ｓｅｒａｇｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）は、エストロゲンの影響を拮抗させて、プロテアソームを介してＥＲ分解を誘導する強力な小分子であり、非ステロイド系選択的ＥＲモジュレーターである。ＡＲＮ−８１０は、進行性転移性ＥＲ−α陽性（ＥＲ＋）乳がんを治療するための経口送達療法として臨床治験中である。
【０００６】
非ステロイド系選択的エストロゲン受容体ディグリーダー（ＳＥＲＤ）が記載されている（国際公開第２０１１／１５６５１８号；米国特許第８７０３８１０号；国際公開第２０１２／０３７４１１号；国際公開第２０１２／０３７４１０号；米国特許第８２９９１１２号；米国特許第８４５５５３４号；国際公開第２０１３／０９０８２９号；国際公開第２０１３／１４２２６６号；国際公開第２０１４／１５１８９９号；国際公開第２０１３／０９０８３６号；国際公開第２０１４／０２５１３８号；国際公開第２０１４／２０５１３６号）。
【発明の概要】
【０００７】
ある特定の実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有すると特徴を明らかにされる患者において、ホルモン耐性エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性乳がんを治療する方法であって、エストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）を投与することを含む方法が本明細書中に記載されている。幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、選択的エストロゲン受容体ディグレーダー（ＳＥＲＤ）である。幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）である。幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の構造を有する化合物である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）の構造を有する化合物は、式（Ａ−１）の構造を有する化合物である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）の構造を有する化合物は、式（Ａ−１）の構造を有する化合物である。幾つかの実施形態では、式（Ｃ）の構造を有する化合物は、式（Ｃ−１）の構造を有する化合物である。幾つかの実施形態では、式（Ｄ）の構造を有する化合物は、式（Ｄ−１）、（Ｄ−２）、（Ｄ−３）、（Ｄ−４）、（Ｄ−５）又は（Ｄ−６）の構造を有する化合物である。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子における突然変異は、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、突然変異は、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＳＲ１遺伝子において２つ又はそれ以上の突然変異を有する。
【０００８】
幾つかの実施形態では、ＥＲ関連疾患又は状態を治療する方法であって、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）化合物を、ＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有する患者へ投与することを含む方法が、本明細書中に記載されている。
【０００９】
式（Ａ）の化合物は、下記構造：
2017509631.tif 000002
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000003
から成る群から選択される５員複素環であり、
Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒｃは、Ｈ又はＦであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
ｎは、０、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する。
【００１０】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、下記構造：
2017509631.tif 000004
を有する式（Ａ−１）の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である。
【００１１】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、化合物１−１、１−２、１−３、１−４、１−５、１−６、１−７、１−８、１−９、１−１０、１−１１、及び１−１２の中から選択される。
【００１２】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは１−３である。
【００１３】
式（Ｂ）の化合物は、下記構造：
2017509631.tif 000005
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000006
から成る群から選択される５員複素環であり、
環Ｃは、
2017509631.tif 000007
であり、
環Ｄは、フェニル又はチエニルであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する。
【００１４】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、化合物２−１、２−２、２−３、２−４、及び２−５の中から選択される。
【００１５】
式（Ｃ）の化合物は、下記構造：
2017509631.tif 000008
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000009
から成る群から選択される５員複素環であり、
Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する。
【００１６】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、下記構造：
2017509631.tif 000010
を有する式（Ｃ−１）の化合物、又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する。
【００１７】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、化合物３−１、３−２、３−３、３−４である。
【００１８】
式（Ｄ）の化合物は、下記構造：
2017509631.tif 000011
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−Ｃ４アルキル又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲ６、−ＮＨＲ６、−ＮＲ６Ｒ７、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ４はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルキル、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルコキシ、及びＣ１−Ｃ４アルコキシから選択され、
Ｒ５はそれぞれ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、又は−ＯＣＨ３であり、
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ７、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換のＣ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、置換又は無置換のＣ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２であり、ｔは、１又は２である）、
又はその薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する。
【００１９】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、下記構造：
2017509631.tif 000012
を有する式（Ｄ−１）の化合物である。
【００２０】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、下記構造：
2017509631.tif 000013
を有する式（Ｄ−２）の化合物である。
【００２１】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、下記構造：
2017509631.tif 000014
を有する式（Ｄ−３）の化合物である。
【００２２】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、下記構造：
2017509631.tif 000015
を有する式（Ｄ−４）の化合物である。
【００２３】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、化合物４−１、４−２、４−３、４−４、４−５、４−６、４−７、４−８、４−９、４−１０、４−１１、４−１２、４−１３、４−１４、４−１５、４−１６、４−１７、４−１８、４−１９、４−２０、４−２１、４−２２、４−２３、４−２４、４−２５、４−２６、４−２７、４−２８、４−２９、４−３０、４−３１、４−３２、４−３３、４−３４、４−３５、４−３６、４−３７、４−３８、４−３９、４−４０、４−４１、４−４２、４−４３、４−４４、及び４−４５の中から選択される。
【００２４】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、４−２３である。
【００２５】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、１−３又は４−２３である。
【００２６】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸又は（Ｓ）−２−（４−（２−（３−（フルオロメチル）アゼチジン−１−イル）エトキシ）フェニル）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２Ｈ−クロメン−６−オールである。
【００２７】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸である。
【００２８】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、（Ｓ）−２−（４−（２−（３−（フルオロメチル）アゼチジン−１−イル）エトキシ）フェニル）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２Ｈ−クロメン−６−オールである。
【００２９】
幾つかの実施形態では、ＥＲ関連疾患又は状態は、がんである。幾つかの実施形態では、がんは乳がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、転移性乳がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、ホルモン耐性乳がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、エストロゲン受容体陽性乳がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、ＨＥＲ２陽性乳がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、ＨＥＲ２陰性乳がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、アロマターゼ阻害剤による治療に対して耐性である。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子における突然変異は、体細胞突然変異である。幾つかの実施形態では、患者は、野生型ＥＲ及び突然変異ＥＲを発現する。幾つかの実施形態では、患者は、２つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドのホモダイマーを発現する。幾つかの実施形態では、患者は、１つの野生型ＥＲ−αポリペプチド及び１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドのヘテロダイマー又は１つの野生型ＥＲ−βポリペプチド及び１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドのヘテロダイマーを発現する。幾つかの実施形態では、患者は、腫瘍を有する。幾つかの実施形態では、腫瘍の複数の細胞は、突然変異ＥＲを発現する。幾つかの実施形態では、患者は、閉経前又は閉経後である。幾つかの実施形態では、患者は、１つ又は複数の抗がん剤療法に失敗している。幾つかの実施形態では、患者は、化学療法剤、生物学的療法、がんワクチン、血管新生阻害剤、ホルモン療法、放射線療法、手術、又はそれらの任意の組合せを施されている。幾つかの実施形態では、生物学的療法は、ペプチド、サイトカイン、抗体、治療用ウイルス、治療用細菌、遺伝子療法、ｓｉＲＮＡ、養子Ｔ細胞移入、又はそれらの任意の組合せである。幾つかの実施形態では、患者は、アロマターゼ阻害剤、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、選択的エストロゲンディグレーダー（ＳＥＲＤ）、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ｍＴＯＲ経路阻害剤、ＣＤＫ  ４／６阻害剤、ＨＥＲ−２阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、化学療法、又はそれらの任意の組合せを施されている。幾つかの実施形態では、患者は、フルベストラント、タモキシフェン、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ＧＤＣ００３２、ゴセレリン、ロイプロリド、ラロキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、バゼドキシフェン、又はそれらの任意の組合せを施されている。幾つかの実施形態では、患者は、アントラサイクリン、タキサン、白金剤、エポチロン、又はヌクレオシドアナログを施されている。幾つかの実施形態では、患者は、シスプラチン、カルボプラチン、カペシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エリブリン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イクサベピロン、ミトキサントロン、メトトレキサート、パクリタキセル、パミドロネート、ビノレルビン、又はそれらの任意の組合せを施されている。幾つかの実施形態では、患者は、ペルツズマブ、トラスツズマブ、ラパチニブ、エベロリムス、ベバシズマブ、テムシロリムス、又はそれらの任意の組合せを施されている。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、ＥＲポリペプチドにおける１つ又は複数のアミノ酸の置換、挿入又は欠失をもたらす。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、エストロゲン受容体のＮ末端ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、ヒンジ領域又はリガンド結合ドメインにおけるアミノ酸置換をもたらす。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、エストロゲン受容体のリガンド結合ドメインにおけるアミノ酸置換をもたらす。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８又は５５５位に存在する。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択される。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、及びＤ５３８Ｇの中から選択される。幾つかの実施形態では、方法は、ＥＲ関連疾患又は状態の治療用の１つ又は複数の治療剤の投与を更に含む。幾つかの実施形態では、方法は、更なる抗がん剤の投与を更に含む。幾つかの実施形態では、方法は、アロマターゼ阻害剤の投与を更に含む。
【００３０】
ある特定の実施形態では、ＥＲ関連疾患又は状態を有する患者を、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、又は（Ｄ）の化合物による治療に関して選定する方法であって、１）患者由来の核酸を含む試料においてＥＳＲ１遺伝子における突然変異を検出すること、及び２）患者がＥＳＲ１突然変異を有する場合、上記化合物による治療に関して、患者を選定することを含む方法が、本明細書中に記載されている。
【００３１】
幾つかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡ又はＤＮＡである。幾つかの実施形態では、ＤＮＡは、ゲノムＤＮＡである。幾つかの実施形態では、方法は、核酸試料からｍＲＮＡを単離することを更に含む。幾つかの実施形態では、方法は、核酸試料から突然変異を含む核酸分子を増幅することを更に含む。幾つかの実施形態では、増幅は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又はデジタルＰＣＲによるものである。幾つかの実施形態では、ＰＣＲ増幅は、突然変異を含む領域に隣接するオリゴヌクレオチドプライマー対を使用することを含む。幾つかの実施形態では、方法は、配列特異的な核酸プローブを核酸と接触させることを含み、ここで、配列特異的な核酸プローブは、突然変異を有する核酸に結合して、野生型核酸には結合しない。幾つかの実施形態では、試料は、１つ又は複数の腫瘍細胞由来の核酸を含む。幾つかの実施形態では、腫瘍細胞は、腫瘍生検試料、血液試料、血清試料、リンパ液試料、又は骨髄穿刺液から採取される。幾つかの実施形態では、腫瘍細胞は、循環性腫瘍細胞である。幾つかの実施形態では、試料は、循環腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）を含む。
【００３２】
ある特定の実施形態では、ＥＳＲ１における突然変異の検出用の１つ又は複数の試薬、及び式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物を含むキットが、本明細書中に記載されている。幾つかの実施形態では、キットは、ＥＳＲ１における突然変異の検出用の１つ又は複数のプライマー又はプローブを含む。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、ＥＲポリペプチドにおける１つ又は複数のアミノ酸の置換、挿入又は欠失をもたらす。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、エストロゲン受容体のＮ末端ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、ヒンジ領域又はリガンド結合ドメインにおけるアミノ酸置換をもたらす。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、エストロゲン受容体のリガンド結合ドメインにおけるアミノ酸置換をもたらす。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８又は５５５位に存在する。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択される。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、及びＤ５３８Ｇの中から選択される。
【００３３】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、患者へ経口投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、毎日投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、連続した毎日の投薬スケジュールで投与される。
【００３４】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、１日当たり約５ｍｇ〜１日当たり約１０００ｍｇで投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターの治療的有効量は、１日当たり約１０ｍｇ〜１日当たり約１００ｍｇである。
【００３５】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、１日１回又は１日複数回投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）、（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、１日１回、１日２回、１日３回、又は１日４回投与される。
【００３６】
本明細書中に記載する上記方法、使用及び組成物の他の目的、特徴並びに利点は、下記の詳細な説明から明らかとなる。しかしながら、詳細な説明及び具体的な実施例は、特定の実施形態を示しているが、本開示の精神及び範囲内の各種変更及び修正が、この詳細な説明から当業者に明らかとなるため、単なる例として付与されることが理解されるべきである。
【００３７】
発明の詳細な説明
乳がんは、最も一般的ながんの形態であり、世界的に女性におけるがん死亡の主な原因である。全ての乳がんのおよそ８０％が、エストロゲン受容体（ＥＲ）を発現し、腫瘍増殖及び進行に関してエストロゲン受容体に依存している。例えば卵巣及び子宮内膜がんなどの他のがんもまた、増殖及び生存に関してＥＲ−αシグナル伝達に依存していると考えられる。
【００３８】
エストロゲン受容体アルファ（ＥＲ−α）及びエストロゲン受容体β（ＥＲ−β）は、ステロイドホルモン受容体であり、それらは、大きな核内受容体スーパーファミリーのメンバーである。核内受容体は、ＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）及びリガンド結合ドメイン（ＬＢＤ）を最小限に含む共通のモジュール構造を共有する。ステロイドホルモン受容体は、リガンドに調節される転写因子として機能を果たす可溶性細胞内タンパク質である。脊椎動物は、５つの密接に関連したステロイドホルモン受容体（エストロゲン受容体、アンドロゲン受容体、プロゲステロン受容体、グルココルチコイド受容体、ミネラルコルチコイド受容体）を含有し、それらは、広範囲の生殖活性、代謝活性及び発達活性を調節する。ＥＲの活性は、１７β−エストラジオール及びエストロンを含む内因性エストロゲンの結合による制御される。
【００３９】
ＥＲ−α遺伝子は、６ｑ２５．１上に位置し、５９５ＡＡのタンパク質をコードする。ＥＲ−β遺伝子は、染色体１４ｑ２３．３上に存在し、５３０ＡＡのタンパク質を産生する。しかしながら、選択的スプライシング及び翻訳開始部位に起因して、これらの遺伝子はそれぞれ、多重アイソフォームを生じることができる。ＤＮＡ結合ドメイン（いわゆるＣドメイン）及びリガンド結合ドメイン（Ｅドメイン）の他に、これらの受容体は、Ｎ末端（Ａ／Ｂ）ドメイン、Ｃ及びＥドメインを連結するヒンジ（Ｄ）ドメイン、及びＣ末端伸長（Ｆドメイン）を含有する（Gronemeyer及びLaudet; Protein Profile 2:1173-1308,1995）。ＥＲ−α及びＥＲ−βのＣ及びＥドメインは非常に保存されている（それぞれ、９５％及び５５％アミノ酸同一性）一方で、Ａ／Ｂ、Ｄ及びＦドメインの保存は乏しい（３０％未満のアミノ酸同一性）。受容体はともに、女性生殖器官路の調節及び発達に関与するが、中枢神経系、心血管系及び骨代謝においても様々な役割を果たす。
【００４０】
ステロイドホルモン受容体のリガンド結合ポケットは、リガンド結合ドメイン内に深く埋もれている。結合時に、リガンドは、このドメインの疎水性コアの一部になる。その結果として、ほとんどのステロイドホルモン受容体は、ホルモンの非存在下では不安定であり、ホルモン結合適格性を維持するために、Ｈｓｐ９０などのシャペロンからの援助を必要とする。Ｈｓｐ９０との相互作用が、これらの受容体の核移行をも制御する。リガンド結合は、受容体を安定化して、シャペロンを放出して、各種受容体ドメインとの間の相互作用を変更させて、これらの受容体を核へと移行させて、ＤＮＡを結合して、クロマチン再モデル化複合体及び転写機構との相互作用に携わることが可能なタンパク質相互作用表面を再モデル化する順次のコンホメーション変化を開始させる。ＥＲは、Ｈｓｐ９０と相互作用することができるが、この相互作用は、ホルモン結合に必要とされず、細胞状況に応じて、アポ−ＥＲは、細胞質及び核の両方であり得る。生物物理学的研究により、リガンド結合よりもＤＮＡ結合が、受容体の安定性に寄与することが示された（Greenfield等, Biochemistry 40:6646-6652，2001）。
【００４１】
ＥＲは、エストロゲン応答要素（ＥＲＥ）と呼ばれる特定のＤＮＡ配列モチーフへの結合により直接的に（古典的経路）、又はタンパク質間相互作用を介して間接的に（非古典的経路）、ＤＮＡと相互作用することができる（Welboren等, Endocrine-Related Cancer 16:1073-1089, 2009）。非古典的経路では、ＥＲは、ＳＰ−１、ＡＰ−１及びＮＦ−κＢを含む他の転写因子に係留することが示されている。これらの相互作用は、ＥＲの、細胞増殖及び分化を調節する能力において重要な役割を果たすようである。
【００４２】
ＥＲ  ＤＮＡ相互作用のタイプはともに、各々のＥＲ−ＥＲＥ複合体によりリクルートされる転写共調節因子に依存して、遺伝子活性化又は抑制をもたらし得る（Klinge, Steroid 65:227-251, 2000）。共調節因子のリクルートは、ＡＦ２及びＡＦ１の２つのタンパク質相互作用表面により主に媒介される。ＡＦ２は、ＥＲ  Ｅ−ドメインに位置し、そのコンホメーションは、リガンドにより直接調節される（Brzozowski等. Nature 389:753-758, 1997）。完全アゴニストは、活性化補助因子のリクルートを促進するようであるのに対して、弱いアゴニスト及びアンタゴニストは、補助抑制因子の結合を促進させる。ＡＦ１によるタンパク質の調節は、あまり解明されていないが、セリンリン酸化により制御することができる（Ward及びWeigel,Biofactors 35:528-536, 2009）。関与するリン酸化部位の１つ（Ｓ１１８）は、乳がんの治療において重要な役割を果たすタモキシフェンなどのアンタゴニストの存在下でＥＲの転写活性を制御するようである。完全アゴニストは、ある特定のコンホメーションではＥＲを停止させるようである一方で、弱いアゴニストは、種々のコンホメーション間で平衡にＥＲを維持する傾向にあり、共調節因子レパートリーにおける細胞依存的な差が、細胞依存的様式でＥＲの活性を調節するのを可能にする（Tamraz等, Mol. Endocrinol. 17:2593-2602, 2003）。ＥＲとＤＮＡとの相互作用は動的であり、プロテアソームによるＥＲの分解を含むが、それに限定されないプロセスにより調節される（Reid等, Mol Cell 11: 695-707, 2003）。リガンドによるＥＲの分解は、エストロゲン感受性であり、及び／又は利用可能な抗ホルモン治療に耐性である疾患又は状態に対して魅力的な治療戦略を提供する。
【００４３】
ＥＲシグナル伝達は、乳房、排卵及び子宮内膜の肥厚を含む女性生殖器官の発達及び維持にとって重大である。ＥＲシグナル伝達はまた、骨量、脂質代謝、がん等においても役割を果たす。
【００４４】
エストロゲン活性及び／又は合成の調節は、ＥＲ陽性（ＥＲ＋）乳がんを患う女性における治療的手法の主力である。ＥＲ−αアンタゴニストタモキシフェンは、閉経前及び閉経後の両方の女性における早期及び進行性ＥＲ−α陽性乳がんを治療するのに使用されている。ステロイドベースのＥＲアンタゴニストであるフルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（商標）、Ａｓｔｒａ  Ｚｅｎｅｃａ）は、タモキシフェンによる療法にもかかわらず進行している女性における乳がんを治療するのに使用される。ステロイド系及び非ステロイド系のアロマターゼ阻害剤もまた、ヒトにおけるがんの治療に使用される。幾つかの実施形態では、ステロイド系及び非ステロイド系のアロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール及びエキセメスタン）は、閉経後の女性においてアンドロステンジオン及びテストステロンからのエストロゲンの産生をブロックし、それによりがんにおけるＥＲ依存的増殖をブロックする。これらの抗ホルモン剤の他に、進行性ＥＲ陽性乳がんは、場合によっては、例えば、アントラサイクリン、プラチン、タキサンなどの様々な他の化学療法剤で治療される。場合によっては、ＥＲＢ−Ｂ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ受容体の遺伝子増幅を担持するＥＲ陽性乳がんは、モノクローナル抗体トラスツマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．）又は小分子ｐａｎ−ＥＲＢ−Ｂ阻害剤ラパチニブで治療される。この一連の抗ホルモン療法、化学療法及び小分子及び抗体ベースの標的療法にもかかわらず、ＥＲ−α陽性乳がんを患う多くの女性は、進行性転移性疾患を発症し、新たな療法を必要とする。重要なことに、既存の抗ホルモン並びに他の療法で進行するＥＲ陽性腫瘍の大部分は、増殖及び生存に関して依然としてＥＲ−αに依存していると考えられる。したがって、転移性疾患及び獲得耐性の状況で活性を有する新たなＥＲ−αのターゲティング剤が必要とされる。
【００４５】
アロマターゼ阻害剤又はタモキシフェンが不応性になっているにもかかわらず、耐性腫瘍細胞の増殖及び生存は、依然としてＥＲシグナル伝達に依存しており、したがって、ＥＲ＋乳がんを患う患者は、先のホルモン療法に対する進行後に、二次／三次のホルモン治療に依然として応答することができる。幾つかの実施形態では、内分泌耐性状態では、ＥＲは、リガンド非依存的様式でシグナル伝達し得る。幾つかの実施形態では、ＥＲアンタゴニズム＋分解などの二重作用機序を有する薬剤は、リガンド依存的及び非依存的ＥＲシグナル伝達の両方を標的にし、したがって、後期ＥＲ＋乳がんにおいて治療転帰を改善させる能力を有する。
【００４６】
ホルモン耐性乳がん患者からの腫瘍試料のゲノム解析は、ＥＲ＋乳がんにおいてホルモン耐性に寄与するエストロゲン受容体アルファ遺伝子ＥＳＲ１における突然変異を明らかにした。ある特定の状況では、このような突然変異は、エストロゲン受容体のリガンド非依存的活性化をもたらす。本明細書中に記載するように、特定のＥＲモジュレーター化合物は、ＥＲ突然変異設定ではＥＲシグナル伝達を阻害するのに有効である。したがって、このようなＥＲモジュレーター化合物は、突然変異ＥＲを有するＥＲ＋乳がん患者を治療するのに有用である。
【００４７】
ある特定の場合では、ＥＲ突然変異は、ＥＳＲ１遺伝子における体細胞突然変異である。幾つかの実施形態では、体細胞突然変異は、がん治療の過程でがん細胞（例えば、乳がん細胞）に見られる。幾つかの実施形態では、患者は、野生型ＥＳＲ１遺伝子及び突然変異ＥＳＲ１遺伝子の両方を有する（即ち、ヘテロ接合性）。幾つかの実施形態では、がん細胞は体細胞突然変異を受けて、突然変異ＥＳＲ１遺伝子を産生する。幾つかの実施形態では、突然変異がん細胞は、複製して、複数の突然変異がん細胞を産生する（例えば、体細胞突然変異に起因した突然変異ＥＳＲ１遺伝子を有するがん細胞の増えた集団）。幾つかの実施形態では、患者は、野生型ＥＲ−α及び突然変異ＥＲ−αを発現する（即ち、不均一発現）。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αは、２つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを含む（即ち、ホモダイマー）。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αは、野生型ＥＲ−α−ポリペプチド及び突然変異ＥＲ−αを含む（即ち、ヘテロダイマー）。幾つかの実施形態では、体細胞突然変異は、がん治療に対してがん細胞の耐性を付与する。幾つかの実施形態では、複数のがん細胞における体細胞突然変異は、がん治療に対して患者の耐性を付与する。幾つかの実施形態では、突然変異は、がん（例えば、乳がん）の治療に関するホルモンベースの療法に耐性を付与する。幾つかの実施形態では、がんは、ＥＲ＋乳がんである。
【００４８】
幾つかの実施形態では、ＥＲ突然変異は、遺伝されるＥＳＲ１遺伝子における生殖細胞系突然変異である。幾つかの実施形態では、突然変異は、乳がんを発症するリスクを増加させる。幾つかの実施形態では、生殖細胞系突然変異は、がん治療に対してがん細胞の耐性を付与する。幾つかの実施では、複数のがん細胞（例えば、乳がん細胞）における生殖細胞系列突然変異は、がん治療に対して患者の抵抗を付与する。幾つかの実施形態では、生殖細胞系突然変異は、がん（例えば、乳がん）の治療に関するホルモンベースの療法に耐性を付与する。幾つかの実施形態では、がんは、ＥＲ＋乳がんである。
【００４９】
一態様では、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有する患者の治療用のエストロゲン受容体モジュレーターである化合物が、本明細書中に記載されている。幾つかの実施形態では、患者は、１つ又は複数のがん細胞、又は複数のがん細胞において、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、選択的エストロゲン受容体ディグレーダー（ＳＥＲＤ）であり、それらは、分解に関してＥＲ−αを標的とする。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、組織特異的なＥＲ特性を有する選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）である。
【００５０】
幾つかの実施形態では、細胞ベースのアッセイにおいて、本発明に記載する化合物は、定常状態のＥＲ−αレベルにおける低減（例えば、ＥＲ分解）をもたらし、エストロゲン感受性疾患若しくは状態及び／又は抗ホルモン療法に対して耐性を発症した疾患若しくは状態に有用である。幾つかの実施形態では、本明細書中に開示するＥＲモジュレーター化合物は、核内でエストロゲン受容体のレベルを最低限に抑える。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲン受容体への結合に関して、エストロゲンと競合する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲン受容体への結合に関して、エストロゲンと競合する非ステロイド系ＥＲαアンタゴニストである。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲンに対する野生型ＥＲ−αの応答を完全に拮抗する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲンに対する突然変異ＥＲ−αの応答を完全に拮抗する。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αは、野生型ＥＲ−αと比較して、基礎活性の増加を示す。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αは、リガンド非依存的活性（例えば、構成的な活性）を示す。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αは、エストラジオールの非存在下で、構成的な活性を示す。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーターは、突然変異ＥＲ−αのリガンド非依存的活性（例えば、構成的な活性）を阻害する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーターは、突然変異ＥＲ−αにおいてコンホメーション変化を誘導する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーターは、突然変異ＥＲ−αの活性を阻害する突然変異ＥＲ−αにおいてコンホメーション変化を誘導する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーターは、乳がん細胞において野生型ＥＲ−αのプロテアソーム分解を誘導する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーターは、乳がん細胞において突然変異ＥＲ−αのプロテアソーム分解を誘導する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーターは、プロテアソーム分解に非依存的な乳がん細胞において突然変異ＥＲ−αを阻害する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲンに対するＥＲ−αの応答を完全に拮抗して、乳がん細胞において野生型ＥＲ−αのプロテアソーム分解を誘導する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲンに対する突然変異ＥＲ−αの応答を完全に拮抗して、乳がん細胞において突然変異ＥＲ−αのプロテアソーム分解を誘導する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、エストロゲンに対する突然変異ＥＲ−αの応答を完全に拮抗して、乳がん細胞において突然変異ＥＲ−αのプロテアソーム分解を誘導しない。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、突然変異ＥＲ−αを発現する乳がん細胞の増殖を阻害する。幾つかの実施形態では、ＥＲモジュレーター化合物は、良好な経口バイオアベイラビリティを示す。
【００５１】
本明細書中に開示するＥＲモジュレーター化合物は、単独で、又はＩＧＦ１Ｒ、ＥＧＦＲ、Ｅｒｂ−Ｂ２、Ｅｒｂ−Ｂ３、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路、ＨＳＰ９０、ＰＡＲＰ、サイクリン依存性キナーゼ（即ち、ＣＤＫ  ４／６）、ＶＥＦＧ受容体又はヒストンデアセチラーゼを阻害するものを含むがそれらに限定されない、乳がんにおいて他の重大な経路を調節する他の薬剤と組み合わせて、ＥＳＲ１遺伝子における１つ又は複数の突然変異により特徴を明らかにされるホルモン耐性ＥＲ陽性乳がんの治療に有用である。幾つかの実施形態では、本明細書中に開示するＥＲモジュレーター化合物は、単独で、又はアロマターゼ阻害剤、アントラサイクリン、プラチン、ナイトロジェンマスタード、アルキル化剤、タキサン、ヌクレオシドアナログ、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ｍＴＯＲ経路阻害剤、ＣＤＫ  ４／６阻害剤、ＨＥＲ−２阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＶＦＧＦＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤及び化学療法を含むがそれらに限定されない、乳がんを治療するのに使用される他の薬剤と組み合わせて、ＥＳＲ１遺伝子における１つ又は複数の突然変異により特徴を明らかにされるホルモン耐性ＥＲ陽性乳がんの治療に有用である。乳がんを治療するのに使用される実例的な薬剤として、フルベストラント、タモキシフェン、アナストロゾール、レトロゾール、エキセメスタン、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−００６８、ゴセレリン、ロイプロリド、ラロキシフェン、トレミフェン、酢酸メゲストロール、バゼドキシフェン、シスプラチン、カルボプラチン、カペシタビン、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エリブリン、フィルグラスチム、フルオロウラシル、ゲムシタビン、イクサベピロン、ＬＥＥ０１１、ＬＹ２８３５２１９、ミトキサントロン、メトトレキサート、パクリタキセル、パミドロネート、ビノレルビン、ペグフィルグラスチム、ペルツズマブ、トラスツズマブ、ラパチニブ、エベロリムス、ベバシズマブ、テムシロリムス、及びそれらの組合せ、並びに本明細書中に記載する他のものが挙げられるが、それらに限定されない。乳がんの治療用の更なる非限定的な例示的薬剤は、本明細書中の他の箇所で提供される。
【００５２】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に記載するようなＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のための、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物に関連する。
【００５３】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に記載するようなＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のための、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物、及び１つ又は複数の薬学的に許容される賦形剤を含む薬学的組成物に関する。
【００５４】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に記載するようなＥＲ関連疾患又は状態の治療における使用のための医薬の調製のための、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物の使用に関する。
【００５５】
一実施形態では、本発明は、本明細書中に記載するようなＥＲ関連疾患又は状態の治療における、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物の使用に関する。
【００５６】
一実施形態では、本発明は、患者においてＥＲ関連疾患又は状態を治療するための方法であって、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物を投与することを含む方法に関する。
【図面の簡単な説明】
【００５７】
【図１−２】Ｅ２（エチニルエストラジオール）の非存在下で、ＷＴ及び突然変異ＥＲαを誘導的に発現するＭＣＦ７におけるＥＲα分解アッセイを示す。細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのＤｏｘ（ドキソルビシン）を含有するエストロゲン欠乏培地中で２４時間、増加用量のフレベストラント（図１）で処理した。突然変異ＥＲα分解は、表１からのエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）１−３（図１）及びＥＲＭ４−２３（図２）を用いた場合に観察されたが、タモキシフェンでは観察されなかった（図２）。機能的出力は、ＰＲ及びサイクリンＤ１レベルにより明白である。
【図３】ビヒクル、高用量２００ｍｇ／ｋｇでのフルベストラント（臨床的曝露を約２０−３０倍上回るＡＵＣ）、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日での表１からのエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）１−３及び１００ｍｇ／ｋｇ／日での表４からのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＭＣＦ−７  ＥＦ１：Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１突然変異（Ｙ５３７Ｓ）マウスを保有する７匹の免疫不全マウスのコホートにおける、２８日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。
【図４】ビヒクル（＋）、ビヒクル（−）、６０ｍｇ／ｋｇ／日でのタモキシフェン、２００ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ  ３ｘ／ｗｋ）でのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＥＳＲ１  Ｌ５３６Ｐ突然変異体、ＥＲ＋、ＰＲ＋、ＨＥＲ２＋を担持するＨＣＩ−００５乳房腫瘍（ＮＯＤ．ＳＣＩＤ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する５匹の免疫不全マウスのコホートにおける、４０日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ビヒクル（＋）は、エチニルエストラジオール（０．１ｍｇ／ｋｇ）を有する溶媒／バッファーである。ビヒクル（−）は、エチニルエストラジオールを有さない溶媒／バッファーである。
【図５】ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、６０ｍｇ／ｋｇ／日でのタモキシフェン、２００ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ  ３ｘ／ｗｋ）でのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＥＳＲ１  Ｌ５３６Ｐ突然変異体、ＥＲ＋、ＰＲ＋、ＨＥＲ２＋を担持するＨＣＩ−００５乳房腫瘍（ＮＯＤ．ＳＣＩＤ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する７匹の免疫不全マウスのコホートにおける、Ｆｏｌｄ  Ｏｖｅｒ  Ｓｔａｒｔを用いた５６日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ビヒクル（＋Ｅ２）は、エチニルエストラジオール（０．１ｍｇ／ｋｇ）を有する溶媒／バッファーである。ビヒクル（−Ｅ２）は、エチニルエストラジオールを有さない溶媒／バッファーである。
【図６】ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、６０ｍｇ／ｋｇ／日でのクエン酸タモキシフェン、５０ｍｇ／ｋｇでのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＷＨＩＭ  ２０  Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１−突然変異体（Ｙ５３７Ｓ）、ＰＩＫ３ＣＡ突然変異体（Ｅ５４２Ｋ）乳房腫瘍（ＮＯＤ．ＳＣＩＤ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する７−８匹の免疫不全マウスのコホートにおける、３５日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。
【図７】ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、２００ｍｇ／ｋｇで皮下に１週当たり３回のフルベストラント、１０ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、並びに１０及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＷＨＩＭ  ２０  Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１−突然変異体（Ｙ５３７Ｓ）、ＰＩＫ３ＣＡ突然変異体（Ｅ５４２Ｋ）乳房腫瘍（ＮＳＧ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する７匹の免疫不全マウスのコホートにおける、２８日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。
【図８−９】ビヒクル、２００ｍｇ／ｋｇでのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇでのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇでのＥＲＭ４−２３で、１００マイクロリットル（μｌ）のＰＯ（経口）投与により１日１回４日間投薬したＷＨＩＭ  ２０  Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１−突然変異体（Ｙ５３７Ｓ）、ＰＩＫ３ＣＡ突然変異体（Ｅ５４２Ｋ）乳房腫瘍患者由来の（ＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片モデルを保有する免疫不全マウスにおける、ＥＲα（アルファ）対アクチンタンパク質レベルの比（図８）の棒プロットを示す。
【図１０】ベースライン時、処理前（左）及び投薬の２３時間後に収集した画像とともに６００ｍｇ／日でのＥＲＭ１−３（ＡＲＮ−８１０）で、連続した経口の毎日投薬の１ヶ月後（右）の乳がん患者の［１８Ｆ］ＦＥＳ−ＰＥＴ画像法を示す。患者は、ＥＳＲ１  Ｄ５３８Ｇ突然変異を有する軟組織病変を担持することが確認された。
【発明を実施するための形態】
【００５８】
定義
他の箇所で規定しない限り、本明細書中で使用する技術用語及び科学用語は全て、特許請求される主題が属する技術分野における当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中の開示全体にわたって参照される特許、特許出願、出願公開及び刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウェブサイト及び他の出版物は全て、別記しない限り、それらの全体が出典明示により本明細書に援用される。本明細書中の用語に関して、複数の定義が存在する場合には、このセクションにおけるものを優先させる。ＵＲＬ又は他のこのような識別子又はアドレスに関して言及する場合、このような識別子は変化することができ、インターネット上での特定の情報は見え隠れすることができるが、等価の情報は公知であり、インターネット及び／又は適切なデータベースを検索することなどにより、容易にアクセスすることができるということが理解されよう。それに対する言及は、このような情報の利用可能性及び公的普及を証拠立てる。概して、細胞培養、細胞感染、抗体産生及び分子生物学の方法に関する手順は、当該技術分野で一般的に使用される方法である。このような標準的な技法は、例えばＳａｍｂｒｏｏｋ等．（２０００）及びＡｕｓｕｂｅｌ等．（１９９４）など、のような参照マニュアルに例えば見出すことができる。
【００５９】
本明細書中で使用する場合、単数形は、明らかに他の場合を指示しない限りは、複数形を含む。本出願では、単数形の使用は、具体的に別記しない限り、複数形を含む。本明細書中で使用する場合、「又は」の使用は、別記しない限り、「及び／又は」を意味する。更に、「を含んでいる」並びに他の形態（例えば、「を含む」、「を含む（単数形）」及び「を含んでいた」）の使用は、非限定的である。
【００６０】
本明細書中で使用する場合、範囲及び量は、「約」特定の値又は範囲として表現され得る。約もまた、正確な量を含む。したがって、「約５μｇ」は、「約５μｇ」及び同様に「５μｇ」も意味する。概して、「約」という用語は、実験誤差内であると予測される量を含む。
【００６１】
本明細書中で使用する場合、「エストロゲン受容体ポリペプチド」又は「ＥＲポリペプチド」は、組換え的に産生されるタンパク質、合成的に産生されるタンパク質、天然エストロゲン受容体タンパク質、及び細胞又は組織から抽出されるエストロゲン受容体タンパク質を含むがそれらに限定されない任意のエストロゲン受容体タンパク質又はポリペプチドを指す。ＥＲポリペプチドは、ヒト及び非ヒト起源の動物を含むがそれらに限定されない種々の種由来の関連ポリペプチドを含む。非ヒト起源のＥＲポリペプチドとして、非ヒト霊長類（例えば、チンパンジー及び類人猿）、ネズミ（例えば、マウス及びラット）、犬（イヌ）、猫（ネコ）、兎（ウサギ）、鳥（トリ）、牛（ウシ）、羊（ヒツジ）、豚（ブタ）、馬（ウマ）、魚（サカナ）、蛙（カエル）及び他の哺乳動物又は非哺乳動物ＥＲポリペプチドが挙げられるが、それらに限定されない。例示的なＥＲポリペプチドとして、例えば配列番号２が挙げられる。ＥＲポリペプチドは、野生型ＥＲ、対立遺伝子変異体アイソフォーム、腫瘍に見出されるものを含む体細胞突然変異、核酸からの合成分子、ヒト組織及び細胞から単離したタンパク質、及びそれらの修飾形態を含む。本明細書中に提供されるＥＲポリペプチドは、一次アミノ酸配列の修飾により、１つ又は複数のアミノ酸の欠失、付加又は置換により更に修飾することができる。本明細書中で使用する場合、ＥＲタンパク質は、ＥＲ−α及びＥＲ−βポリペプチドのダイマー形態（例えば、ＥＲ−α（αα）又はＥＲ−β（ββ）ホモダイマー、又はＥＲαβ（αβ）ヘテロダイマー）を含む、ＥＲポリペプチドのモノマー及びダイマー形態を含む。
【００６２】
本明細書中で使用する場合、「突然変異エストロゲン受容体」又は「突然変異ＥＲ」は、野生型ＥＲと比較した場合に、一次アミノ酸配列の修飾により、１つ又は複数のアミノ酸の欠失、付加又は置換により修飾される任意のエストロゲン受容体タンパク質又はポリペプチドを指す。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲは、突然変異ＥＲポリペプチド及び野生型ポリペプチドのヘテロダイマーを含む。幾つかの実施形態では、突然変異エストロゲン受容体（ＥＲ）は、２つの突然変異ＥＲポリペプチドのホモダイマーを含む。
【００６３】
「を調節する」という用語は本明細書で使用する場合、ほんの一例として、標的の活性を高めるように、標的の活性を阻害するように、標的の活性を制限するように、又は標的の活性を広げるようにを含めて標的の活性を変更させるように、直接的又は間接的に標的と相互作用することを意味する。
【００６４】
「モジュレーター」という用語は本明細書中で使用する場合、直接的又は間接的に標的と相互作用する分子を指す。相互作用とは、アゴニスト、部分的アゴニスト、逆アゴニスト、アンタゴニスト、ディグレーダー、又はそれらの組合せの相互作用が挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、モジュレーターは、アンタゴニストである。本明細書中で使用する場合、エストロゲン受容体（ＥＲ）モジュレーターは、エストロゲン受容体（例えば、ＥＲ−α）と相互作用する分子である。幾つかの実施形態では、モジュレーターは、ディグレーダーである。
【００６５】
「選択的エストロゲン受容体モジュレーター」又は「ＳＥＲＭ」は本明細書中で使用する場合、種々の組織におけるエストロゲン受容体の活性を差次的に調節する分子を指す。例えば、幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、幾つかの組織ではＥＲアンタゴニスト活性を示し、他の組織ではＥＲアゴニスト活性を示す。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、幾つかの組織ではＥＲアンタゴニスト活性を示し、他の組織では最小のＥＲアゴニスト活性を示すか、又はＥＲアゴニスト活性を示さない。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、乳房組織、卵巣組織、子宮内膜組織、及び／又は子宮頸部組織ではＥＲアンタゴニスト活性を示すが、子宮組織では最小のＥＲアゴニスト活性を示すか、又はＥＲアゴニスト活性を示さない。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、ＥＲ分解特性を示す。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、幾つかの組織ではＥＲ分解特性を示し、他の組織ではＥＲ分解特性を示さない。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、ＥＲ分解及びＥＲアンタゴニスト特性を示す。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、幾つかの組織ではＥＲ分解及びＥＲアンタゴニスト特性を示し、他の組織ではＥＲ分解を示すが、ＥＲアゴニスト活性を示さない。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、幾つかの組織ではＥＲ分解及びＥＲアンタゴニスト特性を示し、他の組織ではＥＲ分解及びＥＲアンタゴニスト特性を示すが、ＥＲ分解特性を示さない。幾つかの実施形態では、ＳＥＲＭは、乳房組織、卵巣組織、子宮内膜組織、及び／又は子宮頸部組織ではＥＲ分解及びＥＲアンタゴニスト特性を示すが、子宮組織では、最小のＥＲ分解及び／又はＥＲアンタゴニスト特性を有するか、又はＥＲ分解及び／又はＥＲアンタゴニスト特性を示さない。
【００６６】
「アンタゴニスト」という用語は本明細書中で使用する場合、核内ホルモン受容体に結合して、次いで核内ホルモン受容体のアゴニストにより誘導される転写活性を減少させる小分子剤を指す。
【００６７】
「アゴニスト」という用語は本明細書中で使用する場合、核内ホルモン受容体に結合して、次いで既知のアゴニストの非存在下で、核内ホルモン受容体転写活性を増加させる小分子剤を指す。
【００６８】
「逆アゴニスト」という用語は本明細書中で使用する場合、核内ホルモン受容体に結合して、次いで既知のアゴニストの非存在下で存在する核内ホルモン受容体転写活性の基礎レベルを減少させる小分子剤を指す。
【００６９】
「ディグレーダー」という用語は本明細書中で使用する場合、核内ホルモン受容体に結合して、次いで前記受容体の定常状態のタンパク質レベルを低下させる小分子剤を指す。幾つかの実施形態では、本明細書中に記載するようなディグレーダーは、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％、定常状態のエストロゲン受容体レベルを低下させる。
【００７０】
「選択的エストロゲン受容体ディグレーダー」又は「ＳＥＲＤ」という用語は本明細書中で使用する場合、他の受容体に対してエストロゲン受容体に優先的に結合して、次いで定常状態のエストロゲン受容体レベルを低下させる小分子剤を指す。
【００７１】
「ＥＲ依存的」という用語は本明細書中で使用する場合、エストロゲン受容体の非存在下では起こらないか、又は同程度まで起こらない疾患又は状態を指す。
【００７２】
「ＥＲ媒介性」という用語は本明細書中で使用する場合、エストロゲン受容体の非存在下では起こらないが、エストロゲン受容体の存在下では起こり得る疾患又は状態を指す。
【００７３】
「ＥＲ感受性」という用語は本明細書中で使用する場合、エストロゲンの非存在下では起こらないか、又は同程度まで起こらない疾患又は状態を指す。
【００７４】
「がん」という用語は本明細書中で使用する場合、コントロールされない様式で増殖して、場合によっては転移する（伝播する）傾向にある細胞の異常増殖を指す。がんの型としては、転移を伴って、又は伴わずに、疾患の任意のステージでの固形腫瘍（膀胱、腸、脳、乳房、子宮内膜、心臓、腎臓、肺、子宮、リンパ組織（リンパ腫）、卵巣、膵臓又は他の内分泌性臓器（甲状腺）、前立腺、皮膚（メラノーマ又は基底細胞がん）の固形腫瘍などの）又は血液腫瘍（白血病及びリンパ腫などの）が挙げられるが、これらに限定されない。幾つかの実施形態では、がんは、カルシノーマ（例えば、腺がん）又は肉腫である。
【００７５】
がんの更なる非限定的な例として、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、副腎皮質がん、肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、非定型奇形腫様腫瘍／横紋筋肉腫様腫瘍、基底細胞がん、胆管がん、膀胱がん、骨がん（骨肉腫及び悪性線維性組織球腫）、脳幹神経膠腫、脳腫瘍、脳脊髄腫瘍、乳がん、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、子宮頸がん、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、結腸がん、結腸直腸がん、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、胚芽腫、子宮内膜がん、上衣芽細胞腫、上衣腫、食道がん、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、眼がん、網膜芽細胞腫、胆嚢がん、胃の（胃）がん、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、消化管間質細胞腫瘍、胚細胞腫瘍、神経膠腫、ヘアリー細胞白血病、頭頸部がん、肝細胞（肝臓）がん、ホジキンリンパ腫、下咽頭がん、眼内黒色腫、島細胞腫（内分泌性膵臓）、カポジ肉腫、腎臓がん、ランゲルハンス細胞組織球増加症、喉頭がん、白血病、急性リンパ芽球性白血病、急性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、ヘアリー細胞白血病、肝臓がん、肺がん、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、バーキットリンパ腫、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、リンパ腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、髄芽腫、髄様上皮腫、メラノーマ、中皮腫、口のがん、慢性骨髄性白血病、骨髄性白血病、多発性骨髄腫、上咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺がん、口腔がん、口腔咽頭がん、骨肉腫、骨の悪性線維性組織球腫、卵巣がん、上皮性卵巣がん、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍、膵臓がん、乳頭腫症、副甲状腺がん、陰茎がん、咽頭がん、中程度の分化の松果体実質腫瘍、松果体芽細胞腫及びテント上原始神経外胚葉腫瘍、下垂体部腫瘍、形質細胞腫瘍／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、中枢神経系原発リンパ腫、前立腺がん、直腸がん、腎細胞（腎臓）がん、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、ユーイング肉腫ファミリー腫瘍、肉腫、カポジ、セザリー症候群、皮膚がん、小細胞肺がん、小腸がん、軟組織肉腫、扁平上皮がん、胃（胃の）がん、テント上原始神経外胚葉腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣がん、咽喉がん、胸腺腫及び胸腺がん、甲状腺がん、尿道がん、子宮がん、子宮肉腫、膣がん、外陰がん、ワルデンストレームマクログロブリン血症、ウィルムス腫瘍が挙げられる。
【００７６】
「乳がん」という用語は本明細書中で使用する場合、組織学的に又は細胞学的に確認される乳房のがんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、カルシノーマである。幾つかの実施形態では、乳がんは、腺がんである。幾つかの実施形態では、乳がんは、肉腫である。
【００７７】
「局所進行性の乳がん」という用語は、がんが胸で始まった場所から、近くの組織又はリンパ節へと伝播しているが、身体の他の部分へは伝播していないがんを指す。
【００７８】
「転移性乳がん」という用語は、乳房から、骨、肝臓、肺又は脳などの身体の他の部分へ伝播しているがんを指す。転移性乳がんはまた、ステージＩＶの乳がんについて言及される。
【００７９】
「共投与」等の用語は本明細書中で使用する場合、単一患者への選択される治療剤の投与を包含することを意味し、同じ投与経路若しくは異なる投与経路により、又は同じ時間若しくは異なる時間に薬剤が投与される治療レジメンを含むことを意図する。
【００８０】
「有効量」又は「治療的有効量」という用語は本明細書中で使用する場合、治療される疾患又は状態の症候の１つ又は複数をある程度軽減する、投与される薬剤又は化合物の十分量を指す。結果には、疾患の徴候、症候若しくは原因の低減及び／又は緩和、又は生物学的系の任意の他の所望の変更が含まれる。例えば、治療的使用のための「有効量」は、病徴の臨床的に有意な減少を提供するのに必要とされる、本明細書中に開示するような化合物を含む組成物の量である。任意の個体の場合における適切な「有効」量は、用量増加研究などの技法を使用して任意選択的に決定される。
【００８１】
「治療する」、「治療している」又は「治療」という用語は本明細書中で使用する場合、予防的に、及び／又は治療的に、疾患又は状態の少なくとも１つの症候を緩和すること、寛解すること又は改善すること、更なる症候を防止すること、疾患又は状態を阻害すること、例えば疾患又は状態の発症を停止させること、疾患又は状態を軽減すること、疾患又は状態の後退を引き起こすこと、状態の進行を遅延させること、疾患又は状態により引き起こされる状態を軽減すること、あるいは疾患又は状態の徴候を止めることを含む。幾つかの実施形態では、治療は、無増悪生存を広げることを含む。幾つかの実施形態では、治療は、他の治療選択と比較した場合に、疾患進行の相対リスクを低減することを含む。幾つかの実施形態では、他の治療選択として、ホルモン治療（例えば、抗エストロゲン療法、例えば、タモキシフェン及び／又はフルベストラント又はアロマターゼ療法）が挙げられるが、それに限定されない。
【００８２】
「無増悪生存」という用語は、患者が疾患を患って生存するが、それは悪化していない、がんなどの疾患の治療中及び後の時間である。臨床治験では、無増悪生存を測定することは、治療がいかに良好に効いているかを確認するための１つの方法である。
【００８３】
「転移のない生存」又は「ＭＦＳ」という用語は、規定の期間のがんの広がり又は死亡を伴わずに生存した研究における対象のパーセントを指す。ＭＦＳは通常、研究における治療の開始からの時間として報告される。ＭＦＳは、個体又は研究集団として報告される。幾つかの実施形態では、転移のない生存の増加は、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１３ヶ月、約１４ヶ月、約１５ヶ月、約１６ヶ月、約１７ヶ月、約１８ヶ月、約１９ヶ月、約２０ヶ月、又は２０ヶ月以上である。
【００８４】
「薬学的組合せ」という用語は本明細書中で使用する場合、１つよりも多い有効成分を混合すること又は組み合わせることによって生じ、有効成分の固定及び非固定組合せの両方を含む生成物を意味する。「固定組合せ」という用語は、有効成分、例えば式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物及び共薬剤がともに、単一体又は投与量の形態で同時に患者へ投与されることを意味する。「非固定組合せ」という用語は、有効成分、例えば式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物及び共薬剤が、特定の介入期限を伴わずに、同時に、ともに、又は順次、別個の存在として患者へ投与されることを意味し、このような投与は、患者の身体において２つの化合物の有効レベルを提供する。後者はまた、カクテル療法、例えば３つ又はそれ以上の有効成分の投与に適用する。
【００８５】
本明細書中に開示する化合物の「代謝産物」は、化合物が代謝される際に形成されるその化合物の誘導体である。「活性な代謝産物」という用語は、化合物が代謝される際に形成される化合物の生物学的に活性な誘導体を指す。「代謝される」という用語は本明細書中で使用する場合、特定の物質が生物により変化するプロセス（加水分解反応及び酵素により触媒される反応を含むが、それらに限定されない）の合計を指す。したがって、酵素は、化合物に対して特定の構造変化を生じ得る。例えば、シトクロムＰ４５０は、様々な酸化及び還元反応を触媒する一方で、ウリジン二リン酸グルクロン酸転移酵素は、活性化されたグルクロン酸分子の、芳香族アルコール、脂肪族アルコール、カルボン酸、アミン及び遊離スルフヒドリル基への移行を触媒する。本明細書中に開示する化合物の代謝産物は、化合物の、宿主への投与、及び宿主からの組織試料の分析により、又はインビトロでの肝細胞との化合物のインキュベーション、及び得られた化合物の分析により任意選択的に同定される。
【００８６】
「薬学的に許容される」という用語は本明細書中で使用する場合、本明細書中に記載するＥＲ阻害剤化合物の生物活性又は特性を抑止せず、また比較的無毒性である材料（例えば、担体又は希釈剤）を指す（即ち、材料は、望ましくない生物学的効果を引き起こさずに、又はそれが含まれる組成物の構成成分の何れかと有害な様式で相互作用せずに、個体へ投与される）。
【００８７】
本明細書中で使用する場合、「コントロール」は、試験パラメーターで処理しないことを除いて、試験試料と実質的に同一である試料を指し、あるいはそれが血漿試料である場合には、それは対象の状態で罹患されていない健常志願者に由来し得る。コントロールはまた、内部標準であり得る。
【００８８】
本明細書中で使用する場合、「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、交換可能に使用される。その用語は何れも、医療専門家（例えば、医者、看護師、医師の助手、用務係、ホスピス職員）の監督を必要とすると解釈されるべきではない。本明細書中で使用する場合、対象は、哺乳動物（例えば、ヒト又は非ヒト動物、例えば、チンパンジー、類人猿、サル、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、ラット、マウス、モルモット等）及び非哺乳動物を含む任意の動物であり得る。本明細書中に提供する方法及び組成物の一実施形態では、哺乳動物はヒトである。
【００８９】
「連続的な毎日の投薬スケジュール」という用語は、任意の休薬期間を伴わない、エストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の毎日の投与を指す。幾つかの実施形態では、連続した毎日の投薬スケジュールは、エストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の、毎日ほぼ同じ時間での投与を含む。
【００９０】
「アルキル」基は、脂肪族炭化水素基を指す。アルキル部分は、分岐鎖又は直鎖であり得る。「アルキル」基は、１〜６個の炭素原子を有し得る（それが本明細書中で出現するときはいつも、「１〜６」などの数的範囲は、所定の範囲内の各整数を指す；例えば、「１〜６個の炭素原子」は、１個の炭素原子、２個の炭素原子、３個の炭素原子等、６個を含むそれ以下の炭素原子で構成され得ることを意味するが、この定義はまた、数的範囲が指定されない「アルキル」という用語の存在も網羅する）。一態様では、アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、及びｔ−ブチルから成る群から選択される。典型的なアルキル基として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、三級ブチル、ペンチル、ネオペンチル、ヘキシル等が挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、アルキルの１個又は複数の水素原子は、１個又は複数の重水素原子で置き換えられる。
【００９１】
「アルコキシ」基は、（アルキル）Ｏ−基を指し、ここで、アルキルは、本明細書中で規定される通りである。
【００９２】
「芳香族」という用語は、４ｎ＋２π電子を含有する非局在化π電子系を有する平面環を指し、ここでｎは整数である。芳香族は、置換されていてもよい。「芳香族」という用語は、炭素環式アリール（「アリール」、例えば、フェニル）及び複素環式アリール（又は「ヘテロアリール」又は「芳香族複素環」）基（例えば、ピリジン）の両方を含む。その用語は、単環式又は融合環多環式（即ち、炭素原子の隣接する対を共有する環）基を含む。
【００９３】
「炭素環式」又は「炭素環」という用語は、環の骨格を形成する原子が全て炭素原子である環又は環構造（ring system）を指す。したがって、その用語は、環骨格が、炭素とは異なる少なくとも１個の原子を含有する複素環と、炭素環式を区別する。
【００９４】
本明細書中で使用する場合、「アリール」という用語は、環を形成する原子がそれぞれ、炭素原子である芳香族環を指す。一態様では、アリールは、フェニル又はナフタレニルである。一態様では、アリールはフェニルである。一態様では、アリールは、Ｃ６−Ｃ１０アリールである。幾つかの実施形態では、アリールの１個又は複数の水素原子は、１個又は複数の重水素で置き換えられる
【００９５】
「シクロアルキル」という用語は、環状脂肪族炭化水素基を指す。シクロアルキル基は、３〜１０個の環原子を有する基を含む。幾つかの実施形態では、シクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルの中から選択される。一態様では、シクロアルキルは、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキルである。
【００９６】
「ハロ」、あるいは「ハロゲン」又は「ハライド」という用語は、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）又はヨード（Ｉ）を意味する。幾つかの実施形態では、ハロゲンは、Ｆ又はＣｌである。幾つかの実施形態では、ハロゲンはＦである。
【００９７】
「フルオロアルキル」という用語は、１個又は複数の水素原子がフッ素原子により置き換えられたアルキルを指す。一態様では、フルオロアルキルは、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキルである。幾つかの実施形態では、フルオロアルキルは、モノフルオロアルキルであり、ここでアルキルの水素原子１個が、フッ素原子により置き換えられる。幾つかの実施形態では、フルオロアルキルは、ジフルオロアルキルであり、ここでアルキルの水素原子２個が、フッ素原子により置き換えられる。幾つかの実施形態では、フルオロアルキルは、トリフルオロアルキルであり、ここでアルキルの水素原子３個が、フッ素原子により置き換えられる。幾つかの実施形態では、フルオロアルキルは、モノフルオロアルキル、ジフルオロアルキル、又はトリフルオロアルキルである。幾つかの実施形態では、モノフルオロアルキルは、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨＦＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨＣＨ３ＣＦ３、−ＣＨ（ＣＦ３）２又は−ＣＦ（ＣＨ３）２である。
【００９８】
「複素環」又は「複素環式」という用語は、環（複数可）中に１〜４個のヘテロ原子を含有する芳香族複素環（ヘテロアリールとしても公知）及びヘテロシクロアルキル環（複素脂環式基としても公知）を指し、ここで環（複数可）中のヘテロ原子はそれぞれ、Ｏ、Ｓ及びＮから選択され、各複素環基は、その環構造中に３〜１０個の原子を有し、但し、何れの環も、２つの隣接するＯ又はＳ原子を含有しない。非芳香族複素環式基（ヘテロシクロアルキルとしても公知）は、それらの環構造中に３個の原子のみを有する基を含むが、芳香族複素環式基は、それらの環構造中に少なくとも５個の原子を有さなくてはならない。複素環式基は、ベンゾ融合環構造を含む。３員複素環式基の例は、アジリジニルである。４員複素環式基の例は、アゼチジニルである。５員複素環式基の例は、チアゾリルである。６員複素環式基の例は、ピリジルであり、１０員複素環式基の例は、キノリニルである。非芳香族複素環式基の例は、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、オキサゾリジノニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チオキサニル、ピペラジニル、アジリジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、１，２，３，６−テトラヒドロピリジニル、ピロリン−２−イル、ピロリン−３−イル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、３Ｈ−インドリル及びキノリジニルである。芳香族複素環式基の例は、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニリル、ピラゾリル、チアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベンゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル及びフロピリジニルである。上述の基は、可能であるところではＣ結合（又はＣ連結）又はＮ結合されてもよい。例えば、ピロールに由来する基は、ピロール−１−イル（Ｎ結合）、又はピロール−３−イル（Ｃ結合）であってもよい。更に、イミダゾールに由来する基は、イミダゾール−１−イル若しくはイミダゾール−３−イル（ともにＮ結合）、又はイミダゾール−２−イル、イミダゾール−４−イル若しくはイミダゾール−５−イル（全てＣ結合）であってもよい。複素環式基は、ベンゾ融合環構造を含む。
【００９９】
「ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素及び硫黄から選択される１個又は複数の環ヘテロ原子を含むアリール基を指す。単環式ヘテロアリールとして、ピリジニル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、ピリダジニル、トリアジニル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、及びフラザニルが挙げられる。幾つかの実施形態では、ヘテロアリールは、環中に０−３個のＮ原子を含有する。幾つかの実施形態では、ヘテロアリールは、環中に１−３個のＮ原子を含有する。幾つかの実施形態では、ヘテロアリールは、環中に０−３個のＮ原子、０−１個のＯ原子、及び０−１個のＳ原子を含有する。幾つかの実施形態では、単環式ヘテロアリールは、５員又は６員ヘテロアリールである。
【０１００】
「ヘテロシクロアルキル」又は「複素脂環式」基は、シクロアルキルの炭素原子の少なくとも１個が、窒素（無置換又は置換、例えば、−ＮＨ−、−ＮＲｅ−）、酸素（−Ｏ−）、又は硫黄（例えば、−Ｓ−、−Ｓ（＝Ｏ）−又は−Ｓ（＝Ｏ）２−）で置き換えられたシクロアルキル基を指す。それらの基は、アリール又はヘテロアリールと融合させてもよい。幾つかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、オキサゾリジノニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジニル、モルホリニリル、チオモルホリニル、ピペラジニル、及びインドリニルから選択される。複素脂環式という用語はまた、単糖類、二糖類及びオリゴ糖を含むが、それらに限定されない炭水化物の環形態全てを含む。一態様では、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ２−Ｃ１０ヘテロシクロアルキルである。別の態様では、ヘテロシクロアルキルは、Ｃ４−Ｃ１０ヘテロシクロアルキルである。幾つかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環中に０−２個のＮ原子を含有する。幾つかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、環中に０−２個のＮ原子、０−２個のＯ原子及び０−１個のＳ原子を含有する。
【０１０１】
「置換されてもよい」又は「置換された」という用語は、参照される基が、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、複素脂環式、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルスルホン、アリールスルホン、シアノ、ハロ、ニトロ、ハロアルキル、フルオロアルキル、フルオロアルコキシ、及び一及び二置換アミノ基を含むアミノ、並びにそれらの保護誘導体から個別に及び独立して選択される１個又は複数の更なる基（複数可）で置換され得ることを意味する。幾つかの実施形態では、任意の置換基は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＮＨ（アルキル）、−Ｎ（アルキル）２、−ＯＨ、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２アルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（アルキル）、−Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（アルキル）２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ２、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＨ（アルキル）、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｎ（アルキル）２、アルキル、シクロアルキル、フルオロアルキル、ヘテロアルキル、アルコキシ、フルオロアルコキシ、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、アルキルチオ、アリールチオ、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルスルホン、及びアリールスルホンから選択される。幾つかの実施形態では、任意の置換基は、独立して、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＨ２、−ＯＨ、−ＮＨ（ＣＨ３）、−Ｎ（ＣＨ３）２、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＣＨ３、及び−ＯＣＦ３から選択される。幾つかの実施形態では、置換される基は、先述の基の１又は２個で置換される。幾つかの実施形態では、脂肪族炭素原子（非環式若しくは環式の飽和又は不飽和炭素原子、芳香族炭素原子は除く）上の任意の置換基は、オキソ（＝Ｏ）を含む。
【０１０２】
診断及び治療のための例示的エストロゲン受容体突然変異体
幾つかの実施形態では、本明細書中に提供する診断方法は、ＥＳＲ１遺伝子における１つ又は複数の突然変異を検出することを含む。幾つかの実施形態では、本明細書中に提供する方法は、ＥＳＲ１遺伝子における１つ又は複数の突然変異を有する患者を治療することを含む。診断及び治療のための例示的ＥＳＲ１突然変異として、ヌクレオチド挿入、欠失又は置換が挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、突然変異は、コードされるＥＲポリペプチドにおけるアミノ酸の置換をもたらすヌクレオチド置換である（即ち、ミスセンス突然変異）。幾つかの実施形態では、突然変異は、コードされるＥＲポリペプチドにおけるアミノ酸の挿入及び／又は１つ又は複数のアミノ酸の置換をもたらすヌクレオチド挿入である。幾つかの実施形態では、突然変異は、コードされるＥＲポリペプチドにおけるアミノ酸の欠失及び／又は１つ又は複数のアミノ酸の置換をもたらすヌクレオチド欠失である。幾つかの実施形態では、突然変異は、ハイブリッドＥＲポリペプチドをもたらすゲノム転位であり、ここでＥＲポリペプチドの１つ又は複数のドメインは、別のタンパク質又はその一部に融合される。幾つかの実施形態では、突然変異は、切断型ＥＲポリペプチドをもたらすヌクレオチド挿入、欠失又は置換である（即ち、ナンセンス突然変異）。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、コードされる突然変異ＥＲ−αポリペプチドの活性の増加をもたらす。幾つかの実施形態では、突然変異は、コードされる突然変異ＥＲ−αポリペプチドのリガンド非依存的活性化を付与する。幾つかの実施形態では、突然変異は、構成的に活性な突然変異ＥＲ−αポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αは、エストラジオールの非存在下で、構成的な活性を示す。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、ＥＳＲ１遺伝子産物の発現を増加させる（即ち、野生型ＥＲ−αポリペプチドの発現を増加させる）。
【０１０３】
幾つかの実施形態では、突然変異は、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、突然変異は、配列番号２のアミノ酸３８０、４６３、５３４、５３５、５３６、５３７及び５３８位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、突然変異は、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＳＲ１遺伝子における２つ又はそれ以上の突然変異を有する。
【０１０４】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の６位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｈ６Ｙ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＨ６をコードするコドンにおけるＣ１６Ｔ置換である（例えば、ＣＡＣからＴＡＣへ）。
【０１０５】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子は、配列番号２の１１８位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ１１８Ｐ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＳ１１８をコードするコドンにおけるＴ３５２Ｃ置換である（例えば、ＴＣＧからＣＣＧへ）。
【０１０６】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の２６９位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ２６９Ｃ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＲ２６９をコードするコドンにおけるＣ８０５Ｔ置換である（例えば、ＣＧＣからＴＧＣへ）。
【０１０７】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の３１１位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｔ３１１Ｍ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＣ９３２Ｔ置換である。
【０１０８】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の３４１位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ３４１Ｌ突然変異である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＣ１０２２Ｔ置換である。
【０１０９】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２のアミノ酸Ｇ３４４とＬ３４５との間にアミノ酸挿入を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸挿入は、Ｃアミノ酸である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド１０３２と１０３３との間のヌクレオチドＧＣＴの挿入である。
【０１１０】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の３５０位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ａ３５０Ｅ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＣ１０４９Ａ置換である。
【０１１１】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の３８０位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｅ３８０Ｑ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＥ３８０をコードするコドンにおけるＧ１１３８Ｃ置換である（例えば、ＧＡＡからＣＡＡへ）。
【０１１２】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の３９２位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｖ３９２Ｉ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＶ３９２をコードするコドンにおけるＧ１７７４Ａ置換である（例えば、ＧＴＣからＡＴＣへ）。
【０１１３】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の３９４位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ３９４Ｈ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＧ１１８１Ａ置換である。
【０１１４】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の４１３位で終わる切断型タンパク質を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸切断は、停止コドンを導入するヌクレオチド配列における突然変異に起因して、Ｑ４１４＊突然変異である。幾つかの実施形態では、突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＣ１２４０Ｔ置換である。
【０１１５】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の４３３位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ４３３Ｐ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＴ１２９７Ｃ置換である。
【０１１６】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の４６３位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｓ４６３Ｐ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＳ４６３をコードするコドンにおけるＴ１３８７Ｃ置換である（例えば、ＴＣＣからＣＣＣへ）。
【０１１７】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の５０３位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ５０３Ｗ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＣ１５０７Ｔ置換である。
【０１１８】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の５３４位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｖ５３４Ｅ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＶ５３４をコードするコドンにおけるＴ１６０１Ａ置換である（例えば、ＧＴＧからＧＡＧへ）。
【０１１９】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の５３５位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｐ５３５Ｈ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＰ５３５をコードするコドンにおけるＣ１６０４Ａ置換である（例えば、ＣＣＣからＣＡＣへ）
【０１２０】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の５３６位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ５３６Ｒ置換である。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ５３６Ｐ置換である。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｌ５３６Ｑ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＬ５３６をコードするコドンにおけるＴ１６０７Ａ置換及びＣ１６０８Ａ置換である（例えば、ＣＴＣからＣＡＡへ）。
【０１２１】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の５３７位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ５３７Ｎ置換である。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ５３７Ｃ置換である。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｙ５３７Ｓ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＴ１６０９Ａ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＡ１６１０Ｇ置換である。
【０１２２】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号２の５３８位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｄ５３８Ｇ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＡ１６１３Ｇ置換である。
【０１２３】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子は、配列番号２の５５５位でアミノ酸置換を引き起こすＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異を含む。幾つかの実施形態では、アミノ酸置換は、Ｒ５５５Ｃ置換である。幾つかの実施形態では、ミスセンス突然変異は、配列番号１のヌクレオチド配列に従うＲ５５５をコードするコドンにおけるＣ１６６３Ｔ置換である（例えば、ＣＧＴからＴＧＴ）。
【０１２４】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、ＥＳＲ１遺伝子のリガンド結合ドメインにおける欠失である。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、３つ又はそれ以上のヌクレオチドのインフレーム欠失である。幾つかの実施形態では、突然変異は、１つ又は複数のＥＳＲ１エクソンにおける３つ又はそれ以上のヌクレオチドのインフレーム欠失である。幾つかの実施形態では、突然変異は、ＥＳＲ１遺伝子のエクソン８、９、１０、１１又は１２における３つ又はそれ以上のヌクレオチドのインフレーム欠失である。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、配列番号１に従うヌクレオチド１０４６−１０５１（ＴＧＧＣＡＧ）の６つのヌクレオチド欠失であり、それは、配列番号２のＥＲポリペプチドのアミノ酸３４９−３５１（ＬＡＤ）の欠失、及びアミノ酸３４９位でのＨの挿入をもたらす。
【０１２５】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子におけるミスセンス突然変異は、配列番号２の６位でのヒスチジンからチロシンへの置換（Ｈ６Ｙ）、１１８位でのセリンからプロリンへの置換（Ｓ１１８Ｐ）、２６９位でのアルギニンからシステインへの置換（Ｒ２６９Ｃ）、３１１位でのスレオニンからメチオニンへの置換（Ｔ３１１Ｍ）、３４１位でのセリンからロイシンへの置換（Ｓ３４１Ｌ）、３５０位でのアラニンからグルタメート置換（Ａ３５０Ｅ）、３８０位でのグルタミン酸からグルタミンへの置換（Ｅ３８０Ｑ）、３９２位でのバリンからイソロイシンへの置換（Ｖ３９２Ｉ）、３９４位でのアルギニンからヒスチジンへの置換（Ｒ３９４Ｈ）、４１４位でのグルタミン置換、例えば停止コドンへの挿入（Ｑ４１４＊）、４３３位でのセリンからプロリンへの置換（Ｓ４３３Ｐ）、４６３位でのセリンからプロリンへの置換（Ｓ４６３Ｐ）、５０３位でのアルギニンからトリプトファンへの置換（Ｒ５０３Ｗ）、５３４位でのバリンからグルタミン酸への置換（Ｖ５３４Ｅ）、５３５位でのプロリンからヒスチジンへの置換（Ｐ５３５Ｈ）、５３６位でのロイシンからアルギニンへの置換（Ｌ５３６Ｒ）、５３６位でのロイシンからプロリンへの置換（Ｌ５３６Ｐ）、５３６位でのロイシンからグルタミンへの置換（Ｌ５３６Ｑ）、５３７位でのチロシンからアスパラギンへの置換（Ｙ５３７Ｎ）、５３７位でのチロシンからシステインへの置換（Ｙ５３７Ｃ）、５３７位でのチロシンからセリンへの置換（Ｙ５３７Ｓ）、５３８位でのアスパラテートからグリシンへの置換（Ｄ５３８Ｇ）、及び５５５位でのアルギニンからシステインへの置換（Ｒ５５５Ｃ）のうちの１つ又は複数から選択されるアミノ酸置換をもたらす。
【０１２６】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、ＥＲ−ＹＡＰ１融合タンパク質を生じる、ＥＳＲ１遺伝子と、ｙｅｓ活性化タンパク質１（ＹＡＰ１）遺伝子との間のゲノム転位である。
【０１２７】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子は、２つ又はそれ以上の突然変異を含む。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子は、ヒンジドメイン及び／又はリガンド結合ドメインにおいて２つ又はそれ以上の突然変異を含む。
【０１２８】
エストロゲン受容体モジュレーター化合物
ＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有する対象の治療のためのエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）化合物を本明細書中に提供する。幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーター化合物は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、Ｎ−オキシド、代謝産物及びプロドラッグを含む式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物である。
【０１２９】
一態様では、本明細書中に記載する方法及び組成物における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ａ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000016
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000017
から成る群から選択される５員複素環であり、
Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒｃは、Ｈ又はＦであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｘは、ＣＨ又はＮであり、
ｎは、０、１又は２である）。
【０１３０】
幾つかの実施形態では、Ｒａは、−ＣＯ２Ｈである。幾つかの実施形態では、Ｒａは、
2017509631.tif 000018
から成る群から選択される５員複素環である。
【０１３１】
幾つかの実施形態では、ＲｃはＨである。幾つかの実施形態では、ＲｃはＦである。
【０１３２】
幾つかの実施形態では、Ｒｂは、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、シクロプロピル又はシクロブチルである。幾つかの実施形態では、Ｒｂは、−ＣＨ２ＣＨ３である。幾つかの実施形態では、Ｒｂは、シクロブチルである。
【０１３３】
幾つかの実施形態では、ＸはＣＨである。幾つかの実施形態では、ＸはＮである。
【０１３４】
幾つかの実施形態では、ｎは、１又は２である。幾つかの実施形態では、ｎは１である。幾つかの実施形態では、ｎは２である。幾つかの実施形態では、ｎは０である。
【０１３５】
幾つかの実施形態では、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３及び、−ＣＦ３から選択される。幾つかの実施形態では、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３及び、−ＣＦ３から選択される。
【０１３６】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、式（Ａ）（式中、Ｒａは−ＣＯ２Ｈであり、ＲｂはＣ１−Ｃ６アルキルであり、ＲｃはＨであり、Ｒｄはそれぞれ独立して、ハロゲンから選択され、ＸはＣＨであり、ｎは２である）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である。
【０１３７】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、式（Ａ）（式中、Ｒａは−ＣＯ２Ｈであり、Ｒｂはエチルであり、ＲｃはＨであり、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｆ及びＣｌから選択され、ＸはＣＨであり、ｎは２である）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である。
【０１３８】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ａ−１）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000019
【０１３９】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、表１に記載する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000020
2017509631.tif 000021
【０１４０】
別の態様では、本明細書中に記載する方法及び組成物における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｂ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000022
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000023
から成る群から選択される５員複素環であり、
環Ｃは、
2017509631.tif 000024
であり、
環Ｄは、フェニル又はチエニルであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２である）。
【０１４１】
幾つかの実施形態では、環Ｃは、
2017509631.tif 000025
である。
【０１４２】
幾つかの実施形態では、環Ｃは、
2017509631.tif 000026
である。
【０１４３】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000027
は、
2017509631.tif 000028
である。
【０１４４】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000029
は、
2017509631.tif 000030
である。
【０１４５】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000031
は、
2017509631.tif 000032
である。
【０１４６】
幾つかの実施形態では、Ｒａは、−ＣＯ２Ｈである。
【０１４７】
幾つかの実施形態では、ｎは、１又は２である。
【０１４８】
幾つかの実施形態では、ｎは１である。
【０１４９】
幾つかの実施形態では、ｎは２である。幾つかの実施形態では、ｎは０である。
【０１５０】
幾つかの実施形態では、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３及び、−ＣＦ３から選択される。
【０１５１】
幾つかの実施形態では、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３及び、−ＣＦ３から選択される。
【０１５２】
幾つかの実施形態では、式（Ｂ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、表２に記載する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000033
【０１５３】
更に別の態様では、本明細書中に記載する方法及び組成物における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｃ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000034
（式中、
Ｒａは、−ＣＯ２Ｈ又は下記
2017509631.tif 000035
から成る群から選択される５員複素環であり、
Ｒｂは、Ｃ１−Ｃ６アルキル又はＣ３−Ｃ６シクロアルキルであり、
Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲｅ、−ＮＨＲｅ、−ＮＲｅＲｆ、−ＳＲｅ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、及びＣ１−Ｃ６フルオロアルキルから選択され、
Ｒｅはそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲｆ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲｆ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒｆはそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２である）。
【０１５４】
幾つかの実施形態では、Ｒａは、−ＣＯ２Ｈである。
【０１５５】
幾つかの実施形態では、Ｒｂは、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、シクロプロピル又はシクロブチルである。
【０１５６】
幾つかの実施形態では、Ｒｂは、−ＣＨ２ＣＨ３である。
【０１５７】
幾つかの実施形態では、Ｒｂは、シクロブチルである。
【０１５８】
幾つかの実施形態では、ｎは、１又は２である。幾つかの実施形態では、ｎは１である。幾つかの実施形態では、ｎは２である。幾つかの実施形態では、ｎは０である。
【０１５９】
幾つかの実施形態では、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−Ｓ（＝Ｏ）２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３及び、−ＣＦ３から選択される。
【０１６０】
幾つかの実施形態では、Ｒｄはそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＣＮ、−ＯＨ、−ＯＣＨ３、−ＯＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ３、−ＣＨ２Ｈ３及び、−ＣＦ３から選択される。
【０１６１】
幾つかの実施形態では、式（Ｃ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｃ−１）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000036
【０１６２】
幾つかの実施形態では、式（Ｃ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、表３に記載する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000037
【０１６３】
別の態様では、本明細書中に記載する方法及び組成物における使用のためのエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000038
（式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ２は、Ｈ、Ｆ、Ｃ１−Ｃ４アルキル又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ３は、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＲ６、−ＮＨＲ６、−ＮＲ６Ｒ７、−ＳＲ６、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ７、Ｃ１−Ｃ４アルキル、又はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、
Ｒ４はそれぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、−ＣＮ、−ＯＨ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルキル、Ｃ１−Ｃ４フルオロアルコキシ、及びＣ１−Ｃ４アルコキシから選択され、
Ｒ５はそれぞれ、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、又は−ＯＣＨ３であり、
Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ７、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、Ｃ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換のＣ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、置換又は無置換のＣ３−Ｃ６シクロアルキル、置換又は無置換の単環式Ｃ２−Ｃ６ヘテロシクロアルキル、置換又は無置換のフェニル、及び置換又は無置換の単環式ヘテロアリールから選択され、
ｎは、０、１又は２であり、
ｔは、１又は２である）。
【０１６４】
幾つかの実施形態では、Ｒ１は、Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、又は−ＣＦ３である。
【０１６５】
幾つかの実施形態では、Ｒ２はそれぞれ独立して、Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、−ＣＦ３、−ＣＨＦＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２Ｆ、−ＣＨ２ＣＨＦ２、−ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＦ３、−ＣＨＣＨ３ＣＦ３、−ＣＨ（ＣＦ３）２、又は−ＣＦ（ＣＨ３）２である。幾つかの実施形態では、Ｒ２はそれぞれ独立して、Ｆ、−ＣＨ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、又は−ＣＦ３である。幾つかの実施形態では、Ｒ２はそれぞれ独立して、−ＣＨ３、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＨＦ２、又は−ＣＦ３である。幾つかの実施形態では、Ｒ２はそれぞれ独立して、−ＣＨ２Ｆである。幾つかの実施形態では、Ｒ２はそれぞれ独立して、−ＣＨ３である。
【０１６６】
幾つかの実施形態では、ｔは１である。幾つかの実施形態では、ｔは２である。
【０１６７】
幾つかの実施形態では、Ｒ３は、−ＯＲ６である。幾つかの実施形態では、Ｒ３は、−ＯＨである。
【０１６８】
幾つかの実施形態では、Ｒ４はそれぞれ独立して、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、−ＯＨ、−ＣＨ３、−ＣＦ３、又は−ＯＣＨ３から選択される。
【０１６９】
幾つかの実施形態では、Ｒ５はそれぞれ独立して、Ｈ及びＦから選択される。
【０１７０】
幾つかの実施形態では、Ｒ６はそれぞれ独立して、Ｈ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨＲ７、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、及び置換又は無置換のフェニルから選択される。幾つかの実施形態では、Ｒ６はＨである。
【０１７１】
幾つかの実施形態では、Ｒ７はそれぞれ独立して、Ｃ１−Ｃ６アルキル、Ｃ１−Ｃ６フルオロアルキル、及び、置換又は無置換のフェニルから選択される。
【０１７２】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000039
は、
2017509631.tif 000040
である。
【０１７３】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000041
は、
2017509631.tif 000042
である。
【０１７４】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000043
は、
2017509631.tif 000044
である。
【０１７５】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000045
は、
2017509631.tif 000046
である。
【０１７６】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000047
は、
2017509631.tif 000048
である。
【０１７７】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000049
は、
2017509631.tif 000050
である。
【０１７８】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000051
は、
2017509631.tif 000052
である。
【０１７９】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000053
は、
2017509631.tif 000054
である。
【０１８０】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000055
は、
2017509631.tif 000056
である。
【０１８１】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000057
は、
2017509631.tif 000058
である。
【０１８２】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000059
は、
2017509631.tif 000060
である。
【０１８３】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ−１）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000061
【０１８４】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ−２）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000062
【０１８５】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ−３）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000063
【０１８６】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ−４）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000064
【０１８７】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ−５）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000065
【０１８８】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、式（Ｄ−６）の下記構造、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物を有する：
2017509631.tif 000066
【０１８９】
幾つかの実施形態では、
2017509631.tif 000067
は、
2017509631.tif 000068
である。
【０１９０】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）又は式（Ｄ−３）（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＣ１−Ｃ４フルオロアルキルであり、Ｒ３はＨであり、Ｒ４は−ＯＨであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨであり、ｎは１であり、ｔは１である）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である。
【０１９１】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、式（Ｄ）、式（Ｄ−１）又は式（Ｄ−３）（式中、Ｒ１はＨであり、Ｒ２は−ＣＨ２Ｆであり、Ｒ３はＨであり、Ｒ４は−ＯＨであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６はＨであり、ｎは１であり、ｔは１である）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である。
【０１９２】
幾つかの実施形態では、式（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、表４に記載する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくは溶媒和物である：
2017509631.tif 000069
2017509631.tif 000070
2017509631.tif 000071
2017509631.tif 000072
2017509631.tif 000073
2017509631.tif 000074
2017509631.tif 000075
【０１９３】
エストロゲン受容体モジュレーター化合物の更なる形態
幾つかの実施形態では、記載するエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、薬学的に許容される塩として使用される。薬学的に許容される塩のタイプとしては、（１）化合物の遊離塩基形態を、薬学的に許容される無機酸と反応させて、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、メタリン酸塩等などの塩を形成することにより、又は有機酸と反応させて、例えば酢酸塩、プロピオン酸塩、ヘキサン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、グリコール酸塩、ピルビン酸塩、乳酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、トリフルオロ酢酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、３−（４−ヒドロキシベンゾイル）安息香酸塩、桂皮酸塩、マンデル酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、１，２−エタンジスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、４−メチルビシクロ−［２．２．２］オクタ−２−エン−１−カルボン酸塩、グルコヘプトン酸塩、４，４’−メチレンビス−（３−ヒドロキシ−２−エン−１−カルボン酸）塩、３−フェニルプロピオン酸塩、トリメチル酢酸塩、三級ブチル酢酸塩、ラウリル硫酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、ムコン酸塩、酪酸塩、フェニル酢酸塩、フェニル酪酸塩、バルプロ酸塩等の塩を形成することにより形成される酸付加塩、（２）親化合物中に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えばアルカリ金属イオン（例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、又はカリウム塩）、アルカリ土類イオン（例えば、マグネシウム塩、又はカルシウム塩）、又はアルミニウムイオン（例えば、アルミニウム塩）により置き換えられる場合に形成される塩が挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの場合で、本明細書中に記載する化合物は、有機塩基と配位して、エタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、トロメタミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、又はトリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン塩などの（しかし、それらに限定されない）塩を形成してもよい。他の場合では、本明細書中に記載する化合物は、アルギニン塩、リシン塩などの（しかし、それらに限定されない）アミノ酸を有する塩を形成してもよい。酸性プロトンを含む化合物と塩を形成するのに使用する許容される無機塩基として、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム等が挙げられるが、それらに限定されない。
【０１９４】
薬学的に許容される塩に対する言及は、溶媒付加形態を含むことが理解されるべきである。溶媒和物は、化学量論量又は非化学量論量の何れかの溶媒を含有し、水、エタノール等などの薬学的に許容される溶媒との結晶化のプロセス中に形成され得る。水和物は、溶媒が水である場合に形成され、あるいはアルコラートは、溶媒がアルコールである場合に形成される。本明細書中に記載する化合物の溶媒和物は、本明細書中に記載するプロセス中に利便性よく調製又は形成され得る。更に、本明細書中に提供する化合物は、非溶媒和並びに溶媒和形態で存在し得る。
【０１９５】
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載するエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、１つ又は複数の立体中心を含んでもよい。立体中心が存在する場合、このような立体中心は、Ｒ立体配置又はＳ立体配置において描かれ得ることが理解されよう。立体中心の特定の立体配置が描かれない限りは、本明細書中に記載する化合物は、全てのこのような考え得る立体化学的立体配置（即ち、ラセミ形態、Ｒ立体配置、Ｓ立体配置）を含むと意図される。
【０１９６】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、突然変異ＥＲの活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型ＥＲの活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、１つの野生型ＥＲ−αポリペプチド及び１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを有する突然変異ＥＲ−α（即ち、ヘテロダイマー）の活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、２つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを有する突然変異ＥＲ−α（即ち、ホモダイマー）の活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型及び突然変異ＥＲ−αの両方を発現する細胞において（即ち、不均一発現）突然変異ＥＲ−αの活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型及び突然変異ＥＲの両方を発現する細胞において野生型ＥＲ−αの活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、突然変異ＥＲ−αのみを発現する細胞において（即ち、均一発現）突然変異ＥＲ−αの活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲの活性を減少させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲの活性を減少させる。
【０１９７】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、突然変異ＥＲを拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型ＥＲを拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、１つの野生型ＥＲ−αポリペプチド及び１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを有する突然変異ＥＲ−α（即ち、ヘテロダイマー）を拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、２つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを有する突然変異ＥＲ−α（即ち、ホモダイマー）を拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型及び突然変異ＥＲ−αの両方を発現する細胞において（即ち、不均一発現）突然変異ＥＲ−αを拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型及び突然変異ＥＲの両方を発現する細胞において野生型ＥＲ−αを拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、突然変異ＥＲ−αのみを発現する細胞において（即ち、均一発現）突然変異ＥＲ−αを拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲを拮抗する。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲを拮抗する。
【０１９８】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、突然変異ＥＲの細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型ＥＲの細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、１つの野生型ＥＲ−αポリペプチド及び１つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを有する突然変異ＥＲ−α（即ち、ヘテロダイマー）の細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、２つの突然変異ＥＲ−αポリペプチドを有する突然変異ＥＲ−α（即ち、ホモダイマー）の細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型及び突然変異ＥＲ−αの両方を発現する細胞において（即ち、不均一発現）突然変異ＥＲ−αの細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、野生型及び突然変異ＥＲの両方を発現する細胞において野生型ＥＲ−αの細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、突然変異ＥＲ−αのみを発現する細胞において（即ち、均一発現）突然変異ＥＲ−αの細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲの細胞濃度を低減させる。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲの細胞濃度を低減させる。
【０１９９】
式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、それらの薬学的に許容される塩若しくはＮ−オキシドは、エストロゲン及び／又はエストロゲン受容体の作用が、疾患若しくは状態の病因学又は病理学に関与するか、あるいは疾患若しくは状態の少なくとも１つの症候に寄与し、且つエストロゲン及び／又はエストロゲン受容体のこのような作用が望ましくない疾患若しくは状態の治療又は防止のための薬剤として有用である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、エストロゲン受容体アンタゴニストである。幾つかの実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、選択的エストロゲン受容体ディグレーダー化合物（ＳＥＲＤ）である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、エストロゲン受容体アンタゴニスト並びにエストロゲン受容体ディグレーダーである。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、最小のエストロゲン受容体アゴニスト活性を示すか、又はエストロゲン受容体アゴニスト活性を示さない。幾つかの実施形態では、がんを治療する状況において、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、完全な、又はより持続性の腫瘍縮小、治療に対する耐性の発症のより低い発生率又は割合、及び／又は腫瘍侵襲性の低減により特徴を明らかにされる治療活性の改善を示す。幾つかの実施形態では、本明細書中に開示する化合物は、ごくわずかな、又は最小のエストロゲン受容体アゴニスト活性を伴う完全エストロゲン受容体アンタゴニスト活性を示すエストロゲン受容体ディグレーダーである。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、組織特異的なＥＲ特性を有する選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）である。
【０２００】
診断及び治療方法
ある特定の実施形態では、患者を、エストロゲン受容体モジュレーターによる療法に関して選定する方法が、本明細書中で開示される。幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーターは、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物である。幾つかの実施形態では、上記方法は、患者がＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有するかどうかを決定することを含む。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＲ媒介性疾患又は状態を有する。幾つかの実施形態では、患者は、がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＲ＋乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、ホルモン耐性乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、ホルモン耐性ＥＲ＋乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、ホルモン療法後に疾患の進行を示す。幾つかの実施形態では、患者は、抗エストロゲン療法後に疾患の進行を示す。幾つかの実施形態では、乳がんは、切除又は根治的放射線療法に適していない。幾つかの実施形態では、乳がんは、エストロゲン受容体陽性乳がんに対する少なくとも６ヶ月のホルモン療法後に進行してきた。幾つかの実施形態では、乳がんは、フルベストラントによる療法の存在下で、これまで進行した。幾つかの実施形態では、乳がんは、アロマターゼ阻害剤による療法の存在下で、これまで進行した。幾つかの実施形態では、乳がんは、アナストロゾール、レトロゾール又はエキセメスタンによる療法の存在下で、これまで進行した。
【０２０１】
幾つかの実施形態では、ホルモン耐性エストロゲン受容体（ＥＲ）陽性乳がんを有する患者を、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターによる療法に関して選定する方法は、ａ）患者がＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有するかどうかを決定すること、及びｂ）患者が突然変異を有する場合に、患者を療法に関して選定することを含む。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーターは、選択的エストロゲン受容体ディグレーダー（ＳＥＲＤ）である。幾つかの実施形態では、突然変異は、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、突然変異は、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＳＲ１遺伝子において２つ又はそれ以上の突然変異を有する。幾つかの実施形態では、突然変異は、ＥＲ−ＹＡＰ１融合ポリペプチドをもたらす転位である。
【０２０２】
幾つかの実施形態では、患者は、ホルモン療法後に疾患の進行を示す。幾つかの実施形態では、患者は、抗エストロゲン療法後に疾患の進行を示す。幾つかの実施形態では、乳がんは、切除又は根治的放射線療法に適していない。幾つかの実施形態では、乳がんは、エストロゲン受容体陽性乳がんに対する少なくとも６ヶ月のホルモン療法後に進行してきた。幾つかの実施形態では、乳がんは、フルベストラントによる療法の存在下で、これまで進行した。幾つかの実施形態では、乳がんは、アロマターゼ阻害剤による療法の存在下で、これまで進行した。幾つかの実施形態では、乳がんは、アナストロゾール、レトロゾール又はエキセメスタンによる療法の存在下で、これまで進行した。
【０２０３】
幾つかの実施形態では、患者がＥＳＲ１遺伝子において突然変異を有するかどうか決定する方法は、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料を試験することを含む。幾つかの実施形態では、試料は、腫瘍生検試料又は液体試料（例えば、血液又はリンパ液試料）である。幾つかの実施形態では、試料は、１つ又は複数の循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）腫瘍細胞を含む。したがって、幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１の突然変異状態は、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料において評価される。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子の突然変異状態は、１つ又は複数のＣＴＣを含有する試料において評価される。幾つかの実施形態では、１つ又は複数の循環性腫瘍細胞を含有する試料は、患者から単離される。幾つかの実施形態では、患者は、乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＲ陽性乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、転移性乳がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、１つ又は複数の抗がん剤でこれまで治療されている。幾つかの実施形態では、患者は、１つ又は複数のホルモン療法でこれまで治療されている。幾つかの実施形態では、ＣＴＣは、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異の存在又は非存在に関してアッセイされる。幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１突然変異は、コードされるＥＲポリペプチドのリガンド非依存的活性を付与する。幾つかの実施形態では、配列番号２のアミノ酸６、１１８、２６９、３１１、３４１、３５０、３８０、３９２、３９４、４３３、４６３、５０３、５３４、５３５、５３６、５３７、５３８及び５５５位の中から選択される位置でアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらすＥＳＲ１突然変異が決定される。幾つかの実施形態では、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらすＥＳＲ１突然変異が決定される。幾つかの実施形態では、ＥＲ−ＹＡＰ１融合ポリペプチドをもたらす転位である突然変異が決定される。
【０２０４】
幾つかの実施形態では、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料は、１つ又は複数の更なる遺伝子突然変異の存在又は非存在に関してアッセイされる。幾つかの実施形態では、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＨ１、ＳＴＫ１１、ＴＰ５３、ＰＩＫ３ＣＡ、ＰＴＥＮ、ＥＧＦＲ（ＥＲＢＢ１）、ＨＥＲ２（ＥＲＢＢ２）、ＡＲ、ＡＴＭ、ＢＡＲＤ１、ＢＲＩＰ１、ＣＨＥＫ２、ＤＩＲＡＳ３、ＥＲＢＢ２、ＮＢＮ、ＰＡＬＢ２、ＲＡＤ５０、及びＲＡＤ５１の中から選択される遺伝子における突然変異の中から選択される１つ又は複数の更なる遺伝子突然変異の存在又は非存在に関してアッセイされる。
【０２０５】
幾つかの実施形態では、ＥＲをコードする核酸は、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料から単離される。幾つかの実施形態では、ＥＲをコードする核酸は、循環性腫瘍細胞から単離される。
【０２０６】
幾つかの実施形態では、試料中のＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有する腫瘍細胞の割合が決定される。幾つかの実施形態では、治療学的予後は、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有する腫瘍細胞の割合に基づいて決定される。
【０２０７】
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有するＣＴＣの割合が決定される。幾つかの実施形態では、治療学的予後は、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有するＣＴＣの割合に基づいて決定される。
【０２０８】
幾つかの実施形態では、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料は、患者からの単離後にインビトロで培養される。幾つかの実施形態では、１つ又は複数の腫瘍細胞を含有する試料は、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異の存在又は非存在に関してアッセイする前に、インビトロで培養される。
【０２０９】
幾つかの実施形態では、１つ又は複数の循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）を含有する試料は、患者からの単離後に、インビトロで培養される。幾つかの実施形態では、循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）は、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異の存在又は非存在に関してアッセイする前に、インビトロで培養される。
【０２１０】
幾つかの実施形態では、患者のＥＳＲ１突然変異状態は、経時的にモニタリングされる。幾つかの実施形態では、患者のＥＳＲ１突然変異状態は、がん治療にわたってモニタリングされる。幾つかの実施形態では、患者のＥＳＲ１突然変異状態は、がん治療にわたって１回又は複数回評価される。幾つかの実施形態では、患者のＥＳＲ１突然変異状態は、毎週、２週毎に、３週毎に、４週毎に、毎月、２ヶ月毎に、３ヶ月毎に、４ヶ月毎に、５ヶ月毎に、６ヶ月毎に、７ヶ月毎に、８ヶ月毎に、９ヶ月毎に、１０ヶ月毎に、１１ヶ月毎に、毎年、２年毎に、３年毎に、４年毎に、５年毎に、又はそれよりも長い期間評価される。
【０２１１】
本明細書中に提供する化合物の活性は、レポーターアッセイ、結合アッセイ及び細胞生存率アッセイなどのインビトロアッセイ、又は異種移植片腫瘍動物モデルを含むインビボアッセイを含むがそれらに限定されない当該技術分野で周知の標準的な方法を使用してアッセイすることができる。
【０２１２】
幾つかの実施形態では、腫瘍細胞は、生物体からの任意の組織又は液体に由来する。試料として、全血、解離された骨髄、骨髄穿刺液、胸膜液、腹膜液、中心性脊髄液、腹腔液、膵液、脳脊髄液、脳液、腹水、心膜液、尿、唾液、気管支洗浄、汗、涙、耳の流動液（ear flow）、痰、水瘤液（hydrocele fluid）、精液、膣の流動液（vaginal flow）、乳汁、羊水、及び気道、腸管又は尿生殖路の分泌物が挙げられるが、それらに限定されない。特定の実施形態では、試料は、腫瘍生検試料である。特定の実施形態では、試料は、リンパ系若しくは循環器系の一部、又はリンパ系若しくは循環器系に関連した液体又は組織に由来する。幾つかの実施形態では、試料は、静脈、動脈、末梢、組織、臍帯血試料である血液試料である。特定の実施形態では、試料は、血清試料である。幾つかの実施形態では、試料は、１つ又は複数の循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）を含有する。幾つかの実施形態では、試料は、１つ又は複数の播種性腫瘍細胞（ＤＴＣ、例えば骨髄穿刺液試料における）を含有する。
【０２１３】
組織及び液体試料中に含有される細胞からの核酸及びタンパク質の単離方法は、当該技術分野で周知である。特定の実施形態では、対象から得られる核酸試料は、対象由来の腫瘍生検中に含有される細胞から単離される。特定の実施形態では、対象から得られる核酸試料は、骨髄穿刺液中の細胞から単離される。特定の実施形態では、対象から得られる核酸試料は、血液試料中に含有される細胞から単離される。特定の実施形態では、対象から得られる核酸試料は、リンパ液試料中に含有される細胞から単離される。幾つかの実施形態では、細胞は、循環性腫瘍細胞（ＣＴＣ）である。
【０２１４】
幾つかの実施形態では、試料は、周知且つ常套的な臨床的方法を使用して試料を得る任意の適切な手段により、対象から得られる。対象から液体試料を得る手順は周知である。例えば、全血及びリンパ液を引き抜いて、加工処理する手順は周知であり、提供する方法における使用のための試料を得るのに使用され得る。通常、血液試料の収集に関して、血液の凝固を防止するために、抗凝固剤（例えば、ＥＤＴＡ、又はクエン酸塩、及びヘパリン又はＣＰＤ（クエン酸塩、リン酸塩、デキストロース）又は匹敵する物質）が試料に添加される。幾つかの例では、血液試料の凝固を防止するために、血液試料は、ある量のＥＤＴＡを含有する収集チューブ中に収集される。
【０２１５】
幾つかの実施形態では、試料は、組織生検であり、例えば、針生検、ＣＴガイド針生検、吸引生検、内視鏡生検、気管支鏡生検、気管支洗浄、切開生検、切除生検、パンチ生検、薄片生検、皮膚生検、骨髄生検、及びループ式電気焼灼切除法（ＬＥＥＰ）により得られる。通常、１００ｍｇよりも多い非壊死性の滅菌生検又は標本が得られるが、それは、より少なくてもよく（１００ｍｇ未満、５０ｍｇ又はそれ未満、１０ｍｇ又はそれ未満、又は５ｍｇ又はそれ未満などの）、あるいはより多くてもよい（１００ｍｇを超える、２００ｍｇ又はそれ以上、又は５００ｍｇ又はそれ以上、１ｇｍ又はそれ以上、２ｇｍ又はそれ以上、３ｇｍ又はそれ以上、４ｇｍ又はそれ以上、又は５ｇｍ又はそれ以上などの）。アッセイのために抽出されるべき試料サイズは、実施されるアッセイの数、組織試料の健康、がんのタイプ、及び患者の状態を含むが、それらに限定されない多数の要因に依存する。幾つかの実施形態では、組織は、滅菌チューブ又は培養プレートなどの滅菌容器中に配置されて、適切な培地中に任意選択的に浸漬される。通常、細胞は、当該技術分野で周知であるように機械的手段及び／又は酵素処理により細胞懸濁液へと解離される。通常、細胞を収集して、続いてアッセイのための核酸の単離に関する標準的な手法に付す。
【０２１６】
幾つかの実施形態では、試料は、例えば１日、２日、３日、４日、５日、６日、１週、２週、週、４週、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、１年などの一定間隔で、毎日、毎週、半月毎、年４回、隔年、又は毎年、対象から得られる。幾つかの実施形態では、試料の収集は、既定時間で、又は１つ又は複数の抗がん剤による治療に対して一定間隔で実施される。幾つかの実施形態では、試料の収集は、既定時間で、又はホルモン療法による治療に対して一定間隔で実施される。例えば、試料は、既定時間で、又は治療前、治療中若しくは治療後、又は連続した治療の間の一定間隔で収集される。特定の例では、試料は、抗がん療法の投与前に対象から得られ、続いて、治療が実施された後に一定間隔で再び得られる。特定の例では、試料は、ホルモン療法の投与前に対象から得られ、続いて、治療が実施された後に一定間隔で再び得られる。
【０２１７】
液体試料の容量は、提供する方法におけるＥＲ突然変異体の検出に適している任意の容量であり得る。幾つかの例では、液体試料に関する容量は、使用する特定のアッセイ方法に依存している。例えば、特定のアッセイ方法は、使用するデバイス又は方法の容量、及びアッセイ方法の処理量のレベルなどの（しかし、それらに限定されない）要因に応じて、より大きな又はより小さな液体試料容量を必要とし得る。幾つかの例では、液体試料は、アッセイ方法の適用前に適切な培地中に希釈される。幾つかの例では、液体試料は、対象から得られ、試料の一部又はアリコートがアッセイ方法で使用される。一部又はアリコートは、アッセイ方法の適用前に適切な培地中に希釈され得る。
【０２１８】
幾つかの実施形態では、試料は、哺乳動物である対象から得られる。例示的哺乳動物対象として、ヒト、類人猿及びサルなどの霊長類、マウス、ラット、ウサギ及びフェレットなどのげっ歯類、ヤギ、ウシ、シカ及びヒツジなどの反芻動物、ウマ、ブタ、イヌ、ネコ及び他の動物が挙げられるが、それらに限定されない。幾つかの実施形態では、試料は、患者から得られる。幾つかの例では、患者は、ヒト患者である。
【０２１９】
幾つかの実施形態では、対象から得られる核酸試料は、ゲノム核酸試料である。幾つかの実施形態では、対象から得られる核酸試料は、ＲＮＡ試料である。幾つかの実施形態では、ｍＲＮＡは、ＲＮＡ試料中の総ＲＮＡから単離される。幾つかの実施形態では、ＲＮＡ試料は、ｃＤＮＡへ逆転写される。幾つかの実施形態では、ゲノム核酸試料は、核酸増幅方法により増幅される。幾つかの実施形態では、核酸増幅方法は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）である。幾つかの実施形態では、ゲノム核酸試料は、ＥＲ遺伝子に特異的なヌクレオチドプライマーのセットを使用して増幅される。幾つかの実施形態では、ヌクレオチドプライマーのセットは、ＥＲポリペプチドの突然変異アミノ酸位置をコードする核酸配列に隣接する。幾つかの実施形態では、増幅産物は、ＥＲポリペプチドの突然変異アミノ酸位置をコードする核酸である。幾つかの実施形態では、配列特異的なプライマーは、蛍光性標識、生物発光標識、化学発光標識、放射性標識、酵素標識、検出可能な基質、又は第２の検出可能な分子に結合するペプチド若しくは分子などの検出可能な分子にコンジュゲートされている。
【０２２０】
幾つかの実施形態では、試料は、循環性腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）、ＲＮＡ（ｃｔＲＮＡ）又はマイクロＲＮＡを含有する血漿又は血清試料である（例えば、Chan等 (2007) Br J Cancer 96(5):681-5を参照）。幾つかの実施形態では、核酸は、検出前に試料から単離される。
【０２２１】
検出方法
幾つかの実施形態では、アッセイすることは、核酸試料を配列決定することを含む。幾つかの実施形態では、核酸試料中のＥＲをコードする核酸は、配列特異的なプライマーを使用してポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの方法によりまず増幅され、続いて、増幅されたＰＣＲ断片が配列決定される。本明細書中に提供する方法における使用のための例示的シーケンシング方法は、当該技術分野で周知であり、ジデオキシ又はチェーンターミネーション方法、マクサム−ギルバートシーケンシング、超並列的遺伝子ビーズクローンシーケンシング（massively parallel signature sequencing）（又はＭＰＳＳ）、ポロニー（polony）シーケンシング、ピロシーケンシング、イルミナ色素シーケンシング、ＳＯＬｉＤ（又はライゲーションによるシーケンシング）シーケンシング、イオン半導体シーケンシング、ＤＮＡナノボールシーケンシング、ヘリスコープシーケンシング、及び単一分子リアルタイム（ＳＭＲＴ）シーケンシングが挙げられるが、それらに限定されない。
【０２２２】
幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αをコードするＤＮＡは、ＢＥＡＭｉｎｇ（ビーズ、増幅、エマルジョン、磁気）ＰＣＲシーケンシング方法により評価される（例えば、Li等 (2006) Nat Methods 3(2):95-7、Li等 (2006) Nat Methods 3(7):551-9、及びDiehl 等 (2008) Nat Med. 14(9): 985-990を参照）。ＢＥＡＭｉｎｇは、個々のＤＮＡ分子が油中水型エマルジョンで磁気ビーズへ結合されて、続いて、区画化されたＰＣＲ増幅に付される技法である。次に、ビーズへ結合されたＤＮＡの突然変異状態が、突然変異又は野生型ＥＲに関する蛍光性対立遺伝子特異的なプローブへのハイブリダイゼーションにより決定される。続いて、フローサイトメトリーを使用して、血漿又は血清中に存在する突然変異ＤＮＡのレベルを定量化する（例えば、Higgins等 (2012) Clin Cancer Res 18: 3462-3469を参照）。
【０２２３】
幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αをコードするＤＮＡは、核酸試料のクローン増幅により評価される。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αをコードするＤＮＡは、デジタルポリメラーゼ連鎖反応により評価される。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αをコードするＤＮＡは、ドロップレットデジタルポリメラーゼ連鎖反応により評価される。
【０２２４】
幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αをコードするＤＮＡの存在を検出するために試料をアッセイすることは、突然変異ＥＲ−αをコードするが、野生型ＥＲをコードしない核酸に特異的である配列特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いた突然変異の検出を含む。幾つかの実施形態では、アッセイすることは、（ａ）試料を、突然変異ＥＲ−α核酸配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブと接触させること（それにより、突然変異核酸配列が試料中に存在する場合には、プローブ−ＤＮＡ複合体が形成される）、及び（ｂ）プローブ−ＤＮＡ複合体を検出することを含む。幾つかの実施形態では、配列特異的なプローブは、蛍光性標識、生物発光標識、化学発光標識、放射性標識、酵素標識、検出可能な基質、又は第２の検出可能な分子に結合するペプチド若しくは分子などの検出可能な分子にコンジュゲートされている。
【０２２５】
幾つかの実施形態では、単一ヌクレオチド変化は、突然変異配列において制限部位を創出するＰＣＲベースの切断された増幅多型配列（ＣＡＰＳ）マーカー（Michaels等 (1998) Plant J. 14(3):381-5）又はフルオロフォアなどの（しかし、それに限定されない）検出可能な部分に結合された配列特異的なヘアピンプローブ（Mhlanga及びMalmberg (2001) Methods 25:463-471）を使用したＰＣＲにより検出可能である。幾つかの実施形態では、配列特異的なプローブは、蛍光性標識、生物発光標識、化学発光標識、放射性標識、酵素標識、検出可能な基質、又は第２の検出可能な分子に結合するペプチド若しくは分子などの検出可能な分子にコンジュゲートされている。
【０２２６】
幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αをコードするＤＮＡの存在を検出するために試料をアッセイすることは、オリゴヌクレオチドアレイを使用して実施される（例えば、Hastia等 (1999) J Med Genet. 36(10):730-6を参照）。幾つかの実施形態では、対象由来の核酸を含有する試料は、チップへ直接ハイブリダイズされる。幾つかの実施形態では、対象由来の核酸を含有する試料は、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）などの（しかし、それに限定されない）増幅方法を使用して増幅され、増幅された核酸は、チップへハイブリダイズされる。幾つかの実施形態では、オリゴヌクレオチドアレイは、マイクロチップ上に含有される。幾つかの実施形態では、単一ヌクレオチド変化は、マイクロチップを使用して検出可能である。
【０２２７】
幾つかの実施形態では、試料をアッセイすることは、突然変異ＥＲ−αポリペプチドに特異的な抗体を用いた突然変異の検出を含む。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−αポリペプチドを検出する方法は、対象から試料を得ること（ここで試料は、ＥＲポリペプチドを含む）と、試料を、突然変異ＥＲ−αポリペプチドに結合するのに特異的であり、且つ野生型ＥＲ−αポリペプチドを結合しないか、又は野生型ＥＲ−αポリペプチドに対して減少された親和性で結合する抗体と接触させることにより、突然変異ＥＲ−αポリペプチドの存在に関して試験すること（ここで、突然変異ＥＲ−αポリペプチドの存在が、抗体−突然変異ＥＲ−αポリペプチド複合体を創出する）とを含む。幾つかの実施形態では、上記方法は、抗体−突然変異ＥＲ−αポリペプチド複合体を検出することを更に含む。幾つかの実施形態では、上記方法は、検出試薬を用いて、抗体−突然変異ＥＲ−αポリペプチド複合体を検出することを更に含む。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−α特異的な抗体は、蛍光性標識、生物発光標識、化学発光標識、放射性標識、酵素標識、検出可能な基質、又は第２の検出可能なタンパク質に結合するペプチド若しくは分子（例えば、二次抗体）などの検出可能な分子にコンジュケートされている。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−α特異的な抗体の結合は、検出可能な分子に関してアッセイすることにより検出される。幾つかの実施形態では、突然変異ＥＲ−α特異的な抗体の結合は、二次（例えば、抗ＩｇＧ）抗体を使用することにより検出される。幾つかの実施形態では、試料は、腫瘍生検試料、骨髄穿刺液、血液試料、血清試料、又はリンパ液試料である。
【０２２８】
エストロゲン受容体モジュレーターインビトロ活性
表１−表４におけるエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）化合物を含むがそれらに限定されないエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）化合物の組合せの細胞毒性又は細胞増殖抑制活性は、細胞培地中で増殖性哺乳動物腫瘍細胞株を樹立すること、試験化合物を添加すること、約６時間から約５日の期間、細胞を培養すること、及び細胞生存率を測定することにより測定される（実施例７）。細胞ベースのインビトロアッセイを使用して、生存率、即ち増殖（ＩＣ５０）、細胞毒性（ＥＣ５０）、及びアポトーシスの誘導（カスパーゼ活性化）を測定した。
【０２２９】
ＥＲＭ化合物のインビトロ力価は、実施例７の細胞増殖アッセイ；Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．（マディソン、ＷＩ）から市販されているＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイにより測定される。この均一アッセイ方法は、甲虫目（Coleoptera）ルシフェラーゼの組換え発現に基づいており（米国特許第５５８３０２４号、米国特許第５６７４７１３号、米国特許第５７００６７０号）、代謝的に活性な細胞の指標である、存在するＡＴＰの定量化に基づいて培養における生細胞の数を決定する（Crouch等 (1993) J. Immunol. Meth. 160:81-88、米国特許第６６０２６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、９６又は３８４ウェルフォーマットで行われ、それを自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適するようにした（Cree等 (1995) AntiCancer Drugs 6:398-404）。均一アッセイ手順は、単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を、血清補充培地中で培養した細胞へ直接添加することを含む。細胞洗浄、培地の除去及び多重ピペット操作工程は必要とされない。その系は、試薬を添加して、混合した後の１０分で、３８４ウェルフォーマットにおいてわずか１５個の細胞／ウェルを検出する。
【０２３０】
ＥＲＭ化合物の組合せの抗増殖性効果は、腫瘍細胞株に対してＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイ（実施例７）により測定した。ＥＣ５０値は、試験化合物及び組合せに関して確立される。インビトロ細胞力価活性の範囲は、約１００ｎＭ〜約１０μＭであり得る。
【０２３１】
エストロゲン受容体モジュレーターインビボ腫瘍異種移植片活性
ＥＲＭ化合物及び各種化学療法剤の有効性を、げっ歯類においてがん細胞の同種移植片又は異種移植片を移植すること、並びに薬物及びコントロール（ビヒクル）製剤で、腫瘍保有動物を処理することにより、インビボで測定した。結果は、細胞株、腫瘍細胞におけるある特定の突然変異の存在又は非存在、ＥＲＭ化合物及び化学療法剤の投与の順序、投薬レジメン、及び他の要因に依存している。対象マウスを、薬物（複数可）又はコントロール（ビヒクル）で処理して、数週又はそれ以上にわたってモニタリングして、腫瘍倍加、細胞死滅の対数（log cell kill）、及び腫瘍阻害までの時間を測定した（実施例８）。図１−図１３は、実施例８のプロトコールに従って、ＥＲＭ化合物及び各種化学療法剤で処理した腫瘍保有マウスの処理後の経時的な腫瘍体積変化のプロットを示す。
【０２３２】
図１及び図２は、Ｅ２の非存在下で、ＷＴ及び突然変異ＥＲαを誘導的に発現するＭＣＦ７におけるＥＲα分解アッセイを示す。細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのＤｏｘを含有するエストロゲン欠乏培地中で２４時間、増加用量のフルベストラント（図１）で処理した。突然変異ＥＲα分解は、表１からのエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）１−３（図１）及びＥＲＭ４−２３（図２）を用いた場合に観察されたが、タモキシフェンでは観察されなかった（図２）。機能的出力は、ＰＲ及びサイクリンＤ１レベルにより明白である。
【０２３３】
図３は、ビヒクル、高用量２００ｍｇ／ｋｇでのフルベストラント（臨床的曝露を約２０−３０倍上回るＡＵＣ）、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日での表１からのエストロゲン受容体モジュレーター（ＥＲＭ）１−３及び１００ｍｇ／ｋｇ／日での表４からのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＭＣＦ−７  ＥＦ１：Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１突然変異（Ｙ５３７Ｓ）マウスを保有する７匹の免疫不全マウスのコホートにおける、２８日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。操作されたＭＣＦ７突然変異細胞は、内因性の野生型（ＷＴ）ＭＣＦ７細胞を４−５倍上回ってタンパク質を発現する。フルベストラントは、臨床的曝露を３０倍上回った場合でさえ、及びＥ２の非存在下では、頑強なインビボ有効性を示さない。
【０２３４】
図４は、ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、６０ｍｇ／ｋｇ／日でのタモキシフェン、２００ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ  ３ｘ／ｗｋ）でのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＥＳＲ１  Ｌ５３６Ｐ突然変異体、ＥＲ＋、ＰＲ＋、ＨＥＲ２＋を担持するＨＣＩ−００５乳房腫瘍（ＮＯＤ．ＳＣＩＤ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する５匹の免疫不全マウスのコホートにおける、４０日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。ＥＲＭ４−２３は、このＥＳＲ１  Ｌ５３６Ｐ突然変異モデルにおいてＥＲＭ１−３よりも高い有効性を有する。
【０２３５】
図５は、ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、６０ｍｇ／ｋｇ／日でのタモキシフェン、２００ｍｇ／ｋｇ（ＱＤ  ３ｘ／ｗｋ）でのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＥＳＲ１  Ｌ５３６Ｐ突然変異体、ＥＲ＋、ＰＲ＋、ＨＥＲ２＋を担持するＨＣＩ−００５乳房腫瘍（ＮＯＤ．ＳＣＩＤ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する７匹の免疫不全マウスのコホートにおける、Ｆｏｌｄ  Ｏｖｅｒ  Ｓｔａｒｔを用いた５６日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。
【０２３６】
図６は、ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、６０ｍｇ／ｋｇ／日でのクエン酸タモキシフェン、５０ｍｇ／ｋｇでのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＷＨＩＭ  ２０  Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１−突然変異体（Ｙ５３７Ｓ）、ＰＩＫ３ＣＡ突然変異体（Ｅ５４２Ｋ）乳房腫瘍（ＮＯＤ．ＳＣＩＤ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する７−８匹の免疫不全マウスのコホートにおける、３５日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。
【０２３７】
図７は、ビヒクル（＋Ｅ２）、ビヒクル（−Ｅ２）、２００ｍｇ／ｋｇで皮下に１週当たり３回のフルベストラント、１０ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ１−３、並びに１０及び１００ｍｇ／ｋｇ／日でのＥＲＭ４−２３で、１日１回ＰＯ（経口）投与により投薬したＷＨＩＭ  ２０  Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１−突然変異体（Ｙ５３７Ｓ）、ＰＩＫ３ＣＡ突然変異体（Ｅ５４２Ｋ）乳房腫瘍（ＮＳＧ  ＯＶＸにおけるＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植片を保有する７匹の免疫不全マウスのコホートにおける、２８日にわたる近似腫瘍体積変化を示す。
【０２３８】
図８及び図９は、ビヒクル、２００ｍｇ／ｋｇでのフルベストラント、１００ｍｇ／ｋｇでのＥＲＭ１−３、及び１００ｍｇ／ｋｇでのＥＲＭ４−２３で、１００マイクロリットル（μｌ）のＰＯ（経口）投与により１日１回４日間投薬したＷＨＩＭ  ２０  Ｙ５３７Ｓ  ＥＳＲ１−突然変異体（Ｙ５３７Ｓ）、ＰＩＫ３ＣＡ突然変異体（Ｅ５４２Ｋ）乳房腫瘍の患者由来の（ＢＣ  ＰＤＸモデル）異種移植モデルを保有する免疫不全マウスにおける、ＥＲα（アルファ）対アクチンタンパク質レベルの比（図８）ＰＲ−Ａ対アクチンタンパク質レベルの比（図９）の棒プロットを示す。
【０２３９】
図１０は、ベースライン時、処理前（左）及び投薬の２３時間後に収集した画像とともに６００ｍｇ／日でのＥＲＭ１−３（ＡＲＮ−８１０）で、連続した経口の毎日投薬の１ヶ月後（右）の乳がん患者の［１８Ｆ］ＦＥＳ−ＰＥＴ画像法を示す。患者は、ＥＳＲ１  Ｄ５３８Ｇ突然変異を有する軟組織病変を担持することが確認された。
【０２４０】
ＥＲＭ１−３及びＥＲＭ４−２３は、ＥＲ突然変異乳がん異種移植モデルにおいて、腫瘍縮小から腫瘍増殖遅延の広範囲の抗腫瘍活性を示した。更に、ＥＲＭ１−３及びＥＲＭ４−２３は、患者由来の原発性又は転移性腫瘍が免疫不全マウスにおいて移植されたモデル（患者由来の異種移植モデルとも呼ばれる）で効果的であった。ＥＲＭ１−３及びＥＲＭ４−２３の薬力学的活性は、ＥＲタンパク質レベルの減少、及びプロゲステロン受容体レベル：ＥＲ標的遺伝子の低減に基づいて、患者由来の異種移植モデルで観察された。更に、１つのモデルでは、ＥＲＭ１−３及びＥＲＭ４−２３は、ケア薬物の標準（フルベストラント又はタモキシフェン）により効果的であり、他のモデルでは、有効性の改善の傾向が観察された。
【０２４１】
ＥＲ関連疾患又は状態の治療
幾つかの実施形態では、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有する患者の治療方法が提供される。幾つかの実施形態では、治療は、ＥＳＲ１遺伝子において１つ又は複数の突然変異を有する患者への、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物の投与を含む。幾つかの実施形態では、突然変異は、Ｈ６Ｙ、Ｓ１１８Ｐ、Ｒ２６９Ｃ、Ｔ３１１Ｍ、Ｓ３４１Ｌ、Ａ３５０Ｅ、Ｅ３８０Ｑ、Ｖ３９２Ｉ、Ｒ３９４Ｈ、Ｓ４３３Ｐ、Ｓ４６３Ｐ、Ｒ５０３Ｗ、Ｖ５３４Ｅ、Ｐ５３５Ｈ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｑ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｓ、Ｄ５３８Ｇ、及びＲ５５５Ｃの中から選択されるアミノ酸置換を有するＥＲポリペプチドをもたらす。幾つかの実施形態では、患者は、ＥＳＲ１遺伝子において２つ又はそれ以上の突然変異を有する。幾つかの実施形態では、突然変異は、ＥＲ−ＹＡＰ１融合ポリペプチドをもたらす転位である。幾つかの実施形態では、患者は、がんを有する。幾つかの実施形態では、患者は、固形腫瘍を有する。幾つかの実施形態では、がんは、乳がん、卵巣がん、子宮内膜がん、子宮がん、子宮頸がん、前立腺がん、肝臓がん、肺がん又は膀胱がんである。幾つかの実施形態では、がんは、乳がんである。幾つかの実施形態では、がんは、エストロゲン陽性乳がんである。幾つかの実施形態では、がんは、ＨＥＲ２陽性乳がんである。幾つかの実施形態では、がんは、ＨＥＲ２陰性乳がんである。幾つかの実施形態では、がんは、転移性がんである。幾つかの実施形態では、がんは、転移性乳がんである。
【０２４２】
幾つかの実施形態では、がんは、ホルモン依存性がんである。幾つかの実施形態では、がんは、エストロゲン受容体依存性がんである。幾つかの実施形態では、がんは、エストロゲン受容体陽性がんである。幾つかの実施形態では、がんは、エストロゲン感受性がんである。幾つかの実施形態では、がんは、抗ホルモン治療に対して耐性である。幾つかの実施形態では、がんは、抗ホルモン治療に対して耐性であるエストロゲン感受性がん又はエストロゲン受容体依存性がんである。幾つかの実施形態では、抗ホルモン治療は、タモキシフェン、フルベストラント、ステロイド系アロマターゼ阻害剤、及び非ステロイド系アロマターゼ阻害剤耐性から選択される少なくとも１つの薬剤による治療を含む。幾つかの実施形態では、抗ホルモン治療は、アナストロゾール、レトロゾール又はエキセメスタンによる治療を含む。
【０２４３】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、抗エストロゲン療法後に疾患の進行を伴う女性である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、アロマターゼ阻害剤による療法後に疾患の進行を伴う女性である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、アナストロゾール、レトロゾール又はエキセメスタンによる療法後に疾患の進行を伴う女性である。
【０２４４】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、閉経後の女性である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、抗エストロゲン療法後に疾患の進行を伴う閉経後の女性である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、アロマターゼ阻害剤による療法後に疾患の進行を伴う閉経後の女性である。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、アナストロゾール、レトロゾール又はエキセメスタンによる療法後に疾患の進行を伴う閉経後の女性である。
【０２４５】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、化学療法未処置である。
【０２４６】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物で治療される患者は、少なくとも１つの抗がん剤でがんに関して治療されている。一実施形態では、がんは、ホルモン不応性がんである。
【０２４７】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異を有する患者におけるＥＲ関連疾患又は状態の治療において使用される。例示的ＥＲ関連疾患又は状態として、がん（例えば、骨がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、子宮内膜がん、前立腺がん、卵巣及び子宮がん）、子宮内膜症、子宮類線維腫、平滑筋腫（例えば、子宮平滑筋腫）、中枢神経系（ＣＮＳ）欠陥（例えば、アルコール依存症、片頭痛）、心血管系欠陥（例えば、大動脈瘤、心筋梗塞へのかかりやすさ、大動脈弁硬化症、心血管疾患、冠動脈疾患、高血圧症）、血液系欠陥（例えば、深部静脈血栓症）、免疫及び炎症疾患（例えば、グレーブス病、関節炎、多発性硬化症、硬変）、易感染性（例えば、Ｂ型肝炎、慢性肝疾患）、代謝性欠陥（例えば、骨密度、胆汁鬱滞、尿道下裂、肥満、変形性関節症、骨減少症、骨粗鬆症）、神経学的欠陥（例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、片頭痛、目まい）、精神性欠陥（例えば、神経性食欲不振症、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、認知症、大うつ病性障害、精神病）及び生殖性欠陥（例えば、初潮の年齢、子宮内膜症、不妊症）に関連したＥＲ−α機能障害が挙げられるが、それらに限定されない。
【０２４８】
同様に、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異を有する患者においてＥＲ活性化を低減させる方法であって、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の構造を有する少なくとも１つの化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、若しくはＮ−オキシドを哺乳動物へ投与することを含む方法が、本明細書中に提供される。幾つかの実施形態では、上記方法は、哺乳動物において、乳房細胞、卵巣細胞、結腸細胞、前立腺細胞、子宮内膜細胞、又は子宮細胞におけるＥＲ活性化を低減させることを含む。幾つかの実施形態では、哺乳動物においてＥＲ活性化を低減させる方法は、哺乳動物において、エストロゲン受容体へのエストロゲンの結合を低減させることを含む。幾つかの実施形態では、哺乳動物においてＥＲ活性化を低減させる方法は、哺乳動物においてＥＲ濃度を低減させることを含む。
【０２４９】
投与経路
本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物の投与の適切な経路として、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、筋肉内）、鼻腔内、頬側、局所、直腸、エアロゾル、眼部、肺、経粘膜、経皮、膣内、耳、鼻腔、及び局所投与が挙げられるが、それらに限定されない。更に、単なる例として、非経口送達としては、筋肉内、皮下、静脈内、髄内注射、並びに髄腔内、直接的脳室内、腹腔内、リンパ管内、及び鼻腔内注射が挙げられる。ある特定の実施形態では、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、全身性様式で投与される。ある特定の他の実施形態では、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、全身性様式ではなく、局所性様式で投与される。幾つかの実施形態、ある特定の実施形態では、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、経口投与される。
【０２５０】
薬学的組成物／製剤
幾つかの実施形態では、本明細書中に記載するようなエストロゲン受容体モジュレーター化合物は、薬学的組成物へと配合される。薬学的組成物は、薬学的に使用される調製物への活性化合物の加工処理を容易にする１つ又は複数の薬学的に許容される不活性成分を使用して、従来の様式で配合される。適当な製剤は、選ばれる投与経路に依存している。本明細書中に記載する薬学的組成物の概要は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，第１９版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５）；Ｈｏｏｖｅｒ，Ｊｏｈｎ  Ｅ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  １９７５；Ｌｉｂｅｒｍａｎ，Ｈ．Ａ．及びＬａｃｈｍａｎ，Ｌ．編，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｃｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９８０；及びＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ１９９９）に見出され、それらはこのような開示に関して、出典明示により本明細書中に援用される。
【０２５１】
薬学的組成物は、本明細書中で使用する場合、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物と、担体、賦形剤、結合剤、充填剤、沈殿防止剤、香味剤、甘味剤、崩壊剤、分散剤、界面活性剤、潤滑剤、着色剤、希釈剤、可溶化剤、保湿剤（moistening agents）、可塑剤、安定剤、浸透促進剤、湿潤剤、消泡剤、抗酸化剤、防腐剤、あるいはそれらの１つ又は複数の組合せなどの他の化学的成分（即ち、薬学的に許容される不活性成分）との混合物を指す。薬学的組成物は、哺乳動物への化合物の投与を容易にする。
【０２５２】
薬学的組成物は、遊離酸若しくは遊離塩基の形態で活性成分として、又は薬学的に許容される塩の形態で、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の少なくとも１つの化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩を含む。更に、本明細書中に記載する方法及び薬学的組成物は、同じタイプの活性を有するこれらの化合物のＮ−オキシド（適切である場合）、結晶性形態、非晶質相、並びに活性代謝産物の使用を含む。幾つかの実施形態では、本明細書中に記載する化合物は、非溶媒和形態で、又は水、エタノール等などの薬学的に許容される溶媒との溶媒和形態で存在する。
【０２５３】
本明細書中に記載する薬学的製剤として、水性液体分散体、自己乳化分散体、固溶体、リポソーム分散体、エアロゾル、固体投与形態、粉末、即時放出型製剤、制御放出型製剤、迅速溶解型製剤、錠剤、カプセル、丸剤、遅延放出型製剤、持続放出型製剤、腸溶性製剤、パルス放出製剤、多成分製剤、及び混合即時及び制御放出型製剤が挙げられるが、それらに限定されない。
【０２５４】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、全身的に投与される。
【０２５５】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、経口投与される。経口投与用の製剤は全て、このような投与に適した投与形で存在する。幾つかの実施形態では、本明細書中に開示する固体投与形態は、錠剤、丸剤、粉末、カプセル、固体分散体、固溶体、生体内分解性投与形態、制御放出型製剤、パルス放出投与形態、多成分投与形態、ビーズ、ペレット、顆粒の形態で存在する。他の実施形態では、薬学的製剤は、粉末の形態で存在する。更に他の実施形態では、薬学的製剤は、錠剤の形態で存在する。更に他の実施形態では、薬学的製剤は、懸濁液錠剤、迅速溶解型錠剤、一かみで崩壊する（bite-disintegration）錠剤、迅速崩壊錠剤、発泡性錠剤、又はカプレットの形態で存在する。他の実施形態では、薬学的製剤は、カプセルの形態で存在する。
【０２５６】
幾つかの実施形態では、薬学的固体経口投与形態は、活性化合物の制御放出を提供するように配合される。制御放出プロフィールとしては、例えば、徐放、持続性放出、パルス放出、及び遅延放出プロフィールが挙げられる。
【０２５７】
一態様では、経口投与用の液体製剤投与形態は、薬学的に許容される水性経口分散体、エマルジョン、溶液、エリキシル剤、ゲル及びシロップを含むがこれらに限定されない群から選択される水性懸濁液の形態で存在する。例えば、Ｓｉｎｇｈ等，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，第２版，ｐ７５４−７５７（２００２）を参照されたい。
【０２５８】
頬側又は舌下投与に関して、組成物は任意選択的に、従来の様式で配合される錠剤、ロゼンジ、又はゲルの形態を取る。
【０２５９】
一態様では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、筋肉内、皮下、又は静脈内注射に適した薬学的組成物へと配合される。非経口注射は、ボーラス注射及び／又は連続的注入を含む。
【０２６０】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、静脈内投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、皮下投与される。
【０２６１】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、局所投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、溶液、懸濁液、ローション、ゲル、ペースト、シャンプー、スクラブ、ラブ、スメア、薬用スティック、薬用絆創膏、バルム、クリーム又は軟膏などの様々な局所投与可能な組成物へと配合される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、哺乳動物の皮膚へと局所的に投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、経皮投与形態として調製される。
【０２６２】
別の態様は、エストロゲン受容体の活性が、疾患又は状態の病理学及び／又は症候に寄与する疾患、障害又は状態（例えば、ＥＳＲ１遺伝子における突然変異により特徴を明らかにされるホルモン耐性がん）を治療するための医薬の製造における式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用である。一態様では、疾患又は状態は、本明細書中で明記した疾患又は状態の何れかである。
【０２６３】
エストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の治療的有効量は、疾患の重篤性、対象の年齢及び相対的な健康、並びに他の要因に応じて多様であり得る。
【０２６４】
投薬及び治療レジメン
一実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩は、エストロゲン受容体活性の低減によって利益を享受する哺乳動物における疾患又は状態（例えば、ＥＳＲ１遺伝子における突然変異により特徴を明らかにされるホルモン耐性乳がん）を含む、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異を有する患者の治療のための医薬の調製において使用される。このような治療を必要とする哺乳動物において、本明細書中に記載する疾患又は状態の何れかを治療する方法は、前記患者への治療的有効量での式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の少なくとも１つの化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、Ｎ−オキシド、活性代謝産物、プロドラッグ、又は薬学的に許容される溶媒和物を含む医薬組成物の投与を含む。
【０２６５】
治療的有効量は、疾患又は状態の重篤性及び経過、治療歴、患者の健康状態、体重及び薬物に対する応答、並びに治療中の医師の判断に応じる。治療的有効量は、用量増加臨床治験を含むが、それに限定されない方法により任意選択的に決定される。
【０２６６】
本明細書中に記載する治療の方法の何れかにおいて、有効量の式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物は、（ａ）哺乳動物へ全身的に投与され、及び／又は（ｂ）哺乳動物へ経口投与され、及び／又は（ｃ）哺乳動物へ静脈内投与され、及び／又は（ｄ）哺乳動物へ注射により投与され、及び／又は（ｅ）哺乳動物へ局所投与され、及び／又は（ｆ）哺乳動物へ非全身的に又は局所的に投与される。
【０２６７】
幾つかの状況では、治療方法は、（ｉ）化合物が一度投与されるか、（ｉｉ）化合物が、１日の期間にわたって複数回、（ｉｉｉ）継続的に、又は（ｉｖ）連続的に哺乳動物へ投与される更なる実施形態を含む、有効量の化合物の単一投与を含む。
【０２６８】
上述の態様の何れかは、（ｉ）化合物が、単回用量と同様に連続的に又は間欠的に投与されるか、（ｉｉ）複数回投与の間の時間が、６時間毎であるか、（ｉｉｉ）化合物が、８時間毎に哺乳動物へ投与されるか、（ｉｖ）化合物が、１２時間毎に哺乳動物へ投与されるか、（ｖ）化合物が、２４時間毎に哺乳動物へ投与される更なる実施形態を含む、有効量の化合物の複数回投与を含む更なる実施形態である。更なる、又は代替的な実施形態では、上記方法は、休薬期間を含み、ここで化合物の投与は、一時的に中止されるか、又は投与される化合物の用量が、一時的に低減され、休薬期間の最後に、化合物の投薬が再開される。一実施形態では、休薬期間の長さは、２日から１年まで様々である。
【０２６９】
患者の状態が改善しないある特定の実施形態では、医師の裁量で、化合物は、慢性的に、即ち長期間投与される。
【０２７０】
患者の状態が改善しないある特定の実施形態では、投与される薬物の用量は、ある特定の時間、一時的に低減されるか、又は一時的に中止される（即ち、「休薬期間」）。
【０２７１】
幾つかの実施形態では、成人の治療に用いられる用量は通常、１日当たり式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物０．０１ｍｇ−５０００ｍｇの範囲である。一態様では、成人の治療に用いられる用量は、１日当たり式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物約１ｍｇ〜約２０００ｍｇである。一実施形態では、所望の用量は、単回用量で、又は同時に投与される分割用量で、又は適切な間隔で、例えば１日当たり２回、３回、４回又はそれ以上の副用量として簡便に提供される。一実施形態では、本明細書中に記載する式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩に適した１日の投与量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１〜約５０ｍｇである。
【０２７２】
幾つかの実施形態では、エストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、閉経後の女性へ経口投与される。
【０２７３】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、患者へ毎日投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、患者へ１日おきに投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、患者へ毎日、１日おきに、３日毎に、４日毎に、５日毎に、６日毎に、１週に１度、２週毎に１度、３週毎に１度、又は１ヶ月に１度投与される。
【０２７４】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、連続的な毎日の投薬スケジュールで、患者へ経口投与される。
【０２７５】
幾つかの実施形態では、１日当たり約５ｍｇ〜１日当たり約１０００ｍｇの式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩が、患者へ投与される。幾つかの実施形態では、１日当たり約１０ｍｇ〜１日当たり約１００ｍｇの式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩が、患者へ投与される。
【０２７６】
幾つかの実施形態では、１日当たり約１０ｍｇ、１日当たり約１５ｍｇ、１日当たり約２０ｍｇ、１日当たり約２５ｍｇ、１日当たり約３０ｍｇ、１日当たり約３５ｍｇ、１日当たり約３５ｍｇ、１日当たり約４０ｍｇ、１日当たり約４５ｍｇ、１日当たり約５０ｍｇ、１日当たり約５５ｍｇ、１日当たり約６０ｍｇ、１日当たり約６５ｍｇ、１日当たり約７０ｍｇ、１日当たり約７５ｍｇ、１日当たり約８０ｍｇ、１日当たり約８５ｍｇ、１日当たり約９０ｍｇ、１日当たり約１００ｍｇ、１日当たり約１５０ｍｇ、１日当たり約２００ｍｇ、１日当たり約２５０ｍｇ、１日当たり約３００ｍｇ、１日当たり約３５０ｍｇ、１日当たり約４００ｍｇ、１日当たり約４５０ｍｇ、１日当たり約５００ｍｇ、１日当たり約５５０ｍｇ、１日当たり約６００ｍｇ、１日当たり約６５０ｍｇ、１日当たり約７００ｍｇ、１日当たり約７５０ｍｇ、１日当たり約８００ｍｇ、１日当たり約８５０ｍｇ、１日当たり約９００ｍｇ、１日当たり約９５０ｍｇ、１日当たり約１０００ｍｇの式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩が、患者へ投与される。
【０２７７】
幾つかの実施形態では、１日当たり約６００ｍｇの式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩が、患者へ投与される。
【０２７８】
幾つかの実施形態では、１日当たり約１０００ｍｇの式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩が、患者へ投与される。
【０２７９】
一実施形態では、所望の１日の用量は、単回用量で、又は同時に（又は短期間にわたって）投与される分割用量で、又は適切な間隔で、例えば１日当たり２回、３回、４回又はそれ以上の副用量として簡便に提供される。幾つかの実施形態では、所望の１日の用量は、１日１回、同時に（又は短期間にわたって）投与される分割用量で、簡便に提供される。幾つかの実施形態では、所望の１日の用量は、１日２回、１日３回又は１日３回以上等しい比率で投与される分割用量で、簡便に提供される。
【０２８０】
幾つかの実施形態では、患者へ投与される式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の所望の１日の量が、１日１回投与される。
【０２８１】
幾つかの実施形態では、患者へ投与される式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の１日の量が、一様な分割用量で、１日２回投与される。
【０２８２】
幾つかの実施形態では、患者へ投与される式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の１日の量が、一様な分割用量で、１日３回投与される。
【０２８３】
幾つかの実施形態では、患者へ投与される式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の１日の量が、一様な分割用量で、１日３回以上投与される。
【０２８４】
患者における乳がんの状態の改善が観察されないある特定の実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の１日の用量が、増加される。幾つかの実施形態では、１日１回の投薬スケジュールは、１日２回の投薬スケジュールへ変更される。幾つかの実施形態では、１日３回の投薬スケジュールを用いて、投与されるエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の量を増加させる。
【０２８５】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、絶食状態の患者へ投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩は、摂食状態の患者へ投与される。
【０２８６】
幾つかの実施形態では、患者へ付与される式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター、又はその薬学的に許容される塩の量は、乳がんの状態及び重篤性、並びに女性のアイデンティティー（例えば、体重）などの（しかし、それらに限定されない）要因に応じて多様である。
【０２８７】
１８Ｆ−フルオロエストラジオール（ＦＥＳ）は、良好な耐容性用量の新たな治療法での十分な標的会合に関する非侵襲的モニタリングにより臨床的薬物開発を助長し得るエストロゲン受容体に関する特異的且つ選択的放射性トレーサーである。１８Ｆ−ＦＥＳを用いたポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）を使用して、進行性又は転移性ＥＲ＋乳がんを伴う女性における多施設第Ｉ相用量設定、安全性及び薬物動態的臨床治験においてＥＲＭ１−３を用いたエストロゲン受容体標的会合を確証した。図１０は、ベースライン時、処理前（左）及び投薬の２３時間後に収集した画像とともに６００ｍｇ／日の薬学的製剤ＥＲＭ１−３（ＡＲＮ−８１０）で、連続した経口の毎日投薬の１ヶ月後（右）の乳がん患者の［１８Ｆ］ＦＥＳ−ＰＥＴ（フルオロエストラジオール−ポジトロン放出断層撮影）画像法を示す。患者は、ＥＳＲ１  Ｄ５３８Ｇ突然変異を有する軟組織病変を担持することが確認された。患者の状態は、部分応答である。ＦＥＳ−ＰＥＴ／ＣＴは、ＥＲＭ１−３の臨床治験における標的会合を首尾よく実証する。臨床治験における他の患者は、ＥＲＭ１−３薬学的製剤による治療に対して類似の応答を示した。
【０２８８】
併用療法
幾つかの実施形態では、１つ又は複数のＥＳＲ１突然変異を有する患者の治療のための薬学的組成物は、コルチコステロイド、制吐剤、鎮痛剤、抗がん剤、抗炎症薬、キナーゼ阻害剤、受容体阻害剤、抗体、ＨＳＰ９０阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、免疫系のモジュレーター、ＰＤ−１阻害剤、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、及びアロマターゼ阻害剤から選択される１つ又は複数の更なる治療活性剤を更に含む。
【０２８９】
ある特定の場合では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の少なくとも１つの化合物、又はその薬学的に許容される塩を、１つ又は複数の他の治療剤と組み合わせて投与することは適切である。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、１つ又は複数の抗がん剤を更に含む。
【０２９０】
１つの特定実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、第２に治療剤と共投与され、ここで式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、及び第２の治療剤は、治療される疾患、障害又は状態の種々の態様を調節して、それにより何れかの治療剤単独の投与よりも高い総合的利益を提供する。
【０２９１】
どの場合でも、治療される疾患、障害又は状態にかかわらず、患者が受ける総合的利益は、２つの治療剤の相加的効果であるか、あるいは患者は、相加的利益を受けてもよい。
【０２９２】
併用療法では、多重治療剤（それらのうちの１つは、本明細書中に記載する化合物のうちの１つである）は、任意の順序で、又は更には同時に投与される。投与が同時である場合、多重治療剤は、単なる例として、単一の統合形態で、又は多重形態で（例えば、単一丸剤として、又は２つの別個の丸剤として）提供される。
【０２９３】
幾つかの実施形態では、がんを含む増殖性疾患などのエストロゲン受容体依存性若しくはエストロゲン受容体媒介性の状態又は疾患の治療方法は、少なくとも１つの更なる治療剤と組み合わせた、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の哺乳動物への投与を含む。
【０２９４】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ホルモンブロッキング療法、化学療法、放射線療法、手術、がんワクチン、生物学的療法、又はそれらの組合せと組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ペプチド、サイトカイン、治療用ウイルス、治療用細菌、遺伝子療法、ｓｉＲＮＡ、養子Ｔ細胞移入、抗体、モノクローナル抗体、又はそれらの組合せと組み合わせて投与される。
【０２９５】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、アロマターゼ阻害剤、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ｍＴＯＲ経路阻害剤、ＣＤＫ  ４／６阻害剤、ＨＥＲ−２阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＤ−１阻害剤、ポリＡＤＰ−リボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）阻害剤、ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤、ＨＳＰ９０阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、化学療法、又はそれらの任意の組合せと組み合わせて投与される。
【０２９６】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、アロマターゼ阻害剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、アロマターゼ阻害剤は、アナストロゾール、レトロゾール又はエキセメスタンである。
【０２９７】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ＣＤＫ  ４／６阻害剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ＣＤＫ  ４／６阻害剤は、ＬＥＥ０１１又はＬＹ２８３５１９である。
【０２９８】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ｍＴＯＲ経路阻害剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ｍＴＯＲ経路阻害剤は、エベロリムス、テムシロリムス、ＢＥＺ２３５、ＢＹＬ７１９、ＧＤＣ００３２、ＢＫＭ１２０、ＢＧＴ２２６、ＧＤＣ００６８、ＧＤＣ−０９８０、ＧＤＣ０９４１、ＩＮＫ１２８（ＭＬＮ０１２８）、ＩＮＫ１１１７、ＭＫ−２２０６、ＯＳＩ−０２７、ＣＣ−２２３、ＡＺＤ８０５５、ＳＡＲ２４５４０８、ＳＡＲ２４５４０９、ＰＦ０４６９１５０２、ＷＹＥ１２５１３２、ＧＳＫ２１２６４５８、ＧＳＫ−２６３６７７１、ＢＡＹ８０６９４６、ＰＦ−０５２１２３８４、ＳＦ１１２６、ＰＸ８６６、ＡＭＧ３１９、ＺＳＴＫ４７４、Ｃａｌ１０１、ＰＷＴ３３５９７、ＣＵ−９０６、又はＣＵＤＣ−９０７である。
【０２９９】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤（ＨＤＡＣ）と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は、エンチノスタット又はモセチノスタットである。
【０３００】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ＨＥＲ−２阻害剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ＨＥＲ−２阻害剤は、トラスツズマブ、ペルツズマブ又はＴＤＭ−１である。
【０３０１】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ＥＧＦＲ阻害剤は、ラパチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、セツキシマブ、カネルチニブ、パニツムマブ、ニモツズマブ、ＯＳＩ−６３２、バンデタニブ、アファチニブ、ＭＰ−４１２、ＡＥＥ−７８８、ネラチニブ、ＸＬ−６４７、ダコミチニブ、ＡＺＤ−８９３１、ＣＵＤＣ−１０１、ＡＰ−２６１１３又はＣＯ−１６８６である。
【０３０２】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、抗血管新生剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、抗血管新生剤は、ＶＥＧＦＲ阻害剤である。幾つかの実施形態では、抗血管新生剤は、多重キナーゼを阻害する（例えば、多種キナーゼ標的薬剤である）。幾つかの実施形態では、抗血管新生剤は、ベバシズマブ、ＡＢＲ−２１５０５０（タスキニモド）、ＣＨＩＲ−２５８（ドビチニブ）、ＥＸＥＬ−７６４７、ＯＳＩ−９３０、ＢＩＢＦ−１１２０、ＢＡＹ−７３−４５０６、ＢＭＳ−５８２６６４（ブリバニブ）、ＲＯ−４９２９０９７、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＡＺＤ−２１７１（セジラニブ）、ソラフェニブ、アフリベルセプト、エンザスタウリン、ＡＧ−０１３７３６（アキシチニブ）、ＧＳＫ−７８６０３４（パゾパニブ）、ＡＰ−２３５７３、又はスニチニブである。
【０３０３】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、抗ＰＤ−１剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、抗ＰＤ−１剤は、ＭＫ−３４７５、ニボルマブ、ＭＰＤＬ３２８０Ａ、又はＭＥＤＩ４７３６である。
【０３０４】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ＡＫＴ阻害剤と組み合わせて投与される。幾つかの実施形態では、ＡＫＴ阻害剤は、ＧＤＣ００６８、ＭＫ−２２０６、ＡＴ７８６７、ＧＳＫ２１１０１８３、ＧＳＫ２１４１７９５、又はＧＳＫ６９０６９３である。
【０３０５】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、ドキソルビシン、シクロホスファミド、カペシタビン、ビノレルビン、パクリタキセル、ドセタキセル、又はシスプラチンと組み合わせて投与される。
【０３０６】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩と組み合わせた使用のための更なる治療剤として、下記：アビラテロン、アバレリックス、アドリアマイシン、アクチノマイシン、アシビシン、アクラルビシン、アコダゾール塩酸塩、アクロニン、アドゼレシン、アルデスロイキン、アレムツズマブ、アロプリノール、アリトレチノイン、アルトレタミン、アンボマイシン（ambomycin）、酢酸アメタントロン、アミノグルテチミド、アミノレプチン酸、アミホスチン、アムサクリン、アナストロゾール、アントラマイシン、アプレピタント、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、アスペルリン、アザシチジン、アゼテパ、アゾトマイシン、バチマスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ベンゾデパ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ビカルタミド、ビサントレン塩酸塩、ビスナフィドジメシラート、ビゼレシン、ブレオマイシン、ブレオマイシン硫酸塩、ボルテゾミブ、ブレキナルナトリウム、ブロピリミン、ブスルファン、カクチノマイシン、カルステロン、カラセミド、カルベチマー、カルボプラチン、カルムスチン、カルビシン塩酸塩、カルゼレシン、カペシタビン、セデフィンゴール、セツキシマブ、クロラムブシル、シロレマイシン、シスプラチン、クラドリビン、クロファラビン、メシル酸クリスナトール、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、ダクチノマイシン、ダルベポエチンアルファ、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デキソルマプラチン、デクスラゾキサン塩酸塩、デザグアニン（dezaguanine）、メシル酸デザグアニン、ジアジクオン、ドセタキセル、ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩、ドロロキシフェン、ドロロキシフェンクエン酸塩、プロピオン酸ドロモスタノロン、デュアゾマイシン、エダトレキサート、エフロルニチン塩酸塩、エルサミトルシン、エルトロンボパグオラミン、エンロプラチン、エンプロマート、エピプロピジン、エピルビシン塩酸塩、エポエチンアルファ、エルブロゾール、エルロチニブ塩酸塩、エソルビシン塩酸塩、エストラムスチン、リン酸エストラムスチンナトリウム、エタニダゾール、エトポシド、エトポシドリン酸塩、エトプリン、エベロリムス、エキセメスタン、ＧＤＣ００３２、ファドロゾール塩酸塩、ファザラビン、フェンレチニド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルダラビンリン酸塩、フルオロウラシル、フルオロシタビン（fluorocitabine）、ホスキドン（fosquidone）、ホストリエシンナトリウム、フルベストラント、ゲフィチニブ、ゲムシタビン、ゲムシタビン塩酸塩、ゲムシタビン−シスプラチン、ゲムツズマブオゾガミシン、酢酸ゴセレリン、酢酸ヒストレリン、ヒドロキシウレア、イダルビシン塩酸塩、イホスファミド、イルモホシン（iimofosine）、イブリツモマブチウキセタン、イダルビシン、イホスファミド、メシル酸イマチニブ、イミキモド、インターロイキンＩＩ（組換えインターロイキンＩＩ、即ちｒＩＬ２を含む）、インターフェロンアルファ−２ａ、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロンアルファ−ｎ１、インターフェロンアルファ−ｎ３、インターフェロンベータ−１ａ、インターフェロンガンマ−１ｂ、イプロプラチン、イリノテカン塩酸塩、イクサベピロン、酢酸ランレオチド、ラパチニブ、レナリドミド、レトロゾール、酢酸ロイプロリド、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、レバミゾール、リポソームシタラビン、リアロゾール塩酸塩、ロメトレキソールナトリウム、ロムスチン、ロソキサントロン塩酸塩、マソプロコル、メイタンシン、メクロレタミン塩酸塩、酢酸メゲストロール、酢酸メレンゲストロール、メルファラン、メノガリル、メルカプトプリン、メトトレキサート、メトトレキサートナトリウム、メトキサレン、メトプリン、メツレデパ、ミチンドミド（mitindomide）、ミトカルシン、ミトクロミン、ミトギリン（mitogillin）、ミトマルシン、マイトマイシンＣ、ミトスペル、ミトタン、ミトキサントロン塩酸塩、ミコフェノール酸、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ネララビン、ニロチニブ、ノコダゾール（nocodazoie）、ノフェツモマブ、ノガラマイシン、オファツムマブ、オプレルベキン、オルマプラチン、オキサリプラチン、オキシスラン、パクリタキセル、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パミドロネート、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセドジナトリウム、ペントスタチン、パニツムマブ、パゾパニブ塩酸塩、ペメトレキセド二ナトリウム、プレリキサフォル、プララトレキサート、ペグアスパルガーゼ、ペリオマイシン（peliomycin）、ペンタムスチン（pentamustine）、ペプロマイシン硫酸塩、ペルホスファミド、ピポブロマン、ピポスルファン、ピロキサントロン塩酸塩、プリカマイシン、プロメスタン、ポルフィマーナトリウム、ポルフィロマイシン、プレドニムスチン、プロカルバジン塩酸塩、ピューロマイシン、ピューロマイシン塩酸塩、ピラゾフリン、キナクリン、ラロキシフェン塩酸塩、ラスブリカーゼ、組換えＨＰＶ二価ワクチン、組換えＨＰＶ四価ワクチン、リボプリン（riboprine）、ログレチミド（rogletimide）、リツキシマブ、ロミデプシン、ロミプロスチム、サフィンゴール、サフィンゴール塩酸塩、サルグラモスチム、セムスチン、シムトラゼン、シプロイセルＴ、ソラフェニブ、スパルホサートナトリウム、スパルソマイシン、スピロゲルマニウム塩酸塩、スピロムスチン、スピロプラチン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、スロフェヌル、スニチニブリンゴ酸塩、タリソマイシン（talisomycin）、タモキシフェン、タモキシフェンクエン酸塩、テコガランナトリウム、テガフール、テロキサントロン塩酸塩、テモゾロミド、テモポルフィン、テムシロリムス、テニポシド、テロキシロン、テストラクトン、サリドマイト、チアミプリン、チオグアニン、チオテパ、チアゾフリン、チラパザミン、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トシツモマブ及びＩ１３１ヨウ素トシツモマブ、トラスツマブ、酢酸トレストロン（trestolone）、トレチノイン、トリシリビンリン酸塩、トリメトレキサート、グルクロン酸トリメトレキサート、トリプトレリン、ツブロゾール塩酸塩、ウラシルマスタード、ウレデパ、バルルビシン、バプレオチド、ベルテポルフィン、ビンブラスチン、ビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩、ビンデシン、ビンデシン硫酸塩、ビネピジン硫酸塩、ビングリシナート硫酸塩、ビンレウロシン硫酸塩、酒石酸ビノレルビン、ビ��ロシジン（vinrosidine）硫酸塩、ビンゾリジン硫酸塩、ボリノスタット、ボロゾール、ゼニプラチン、ジノスタチン、ゾレドロン酸、及びゾルビシン塩酸塩のうちの１つ又は複数が挙げられる。
【０３０７】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、抗がん剤（複数可）及び／又は放射線療法の使用に起因する悪心又は嘔吐を治療するために制吐剤と組み合わせて使用される。
【０３０８】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、貧血又は好中球減少症の治療に有用な薬剤と組み合わせて使用される。
【０３０９】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、コルチコステロイドとともに投与される。
【０３１０】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、鎮痛剤とともに共投与される。
【０３１１】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、放射線療法（又はラジオセラピー）と組み合わせて使用される。放射線療法は、電離放射線によるがん及び他の疾患の治療である。放射線療法は、皮膚、舌、咽頭、脳、乳房、前立腺、結腸、子宮及び／又は頸部のがんなどの限局性固形腫瘍を治療するのに任意選択的に使用される。それはまた、白血病及びリンパ腫（それぞれ、造血細胞及びリンパ系のがん）を治療するのに任意選択的に使用される。
【０３１２】
がん細胞へ照射を送達するための技法は、腫瘍又は体腔において直接放射性インプラント（radioactive implants）を配置させることである。これが、いわゆる内部放射線療法である（近接照射療法、組織内照射、及び腔内照射は、内部放射線療法の種類である）。内部放射線療法を使用して、放射線用量を狭い領域に濃縮させて、患者は、数日間入院する。内部放射線治療は、舌、子宮、前立腺、結腸、及び頸部のがんに高頻度で使用される。「放射線療法」又は「電離放射線」という用語は、α、β、γ照射、及び紫外線を含むが、それらに限定されない照射の全ての形態を含む。
【０３１３】
幾つかの実施形態では、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩は、乳がんに関する少なくとも１つの更なる治療の選択肢と組み合わせて、乳がんの治療に使用される。幾つかの実施形態では、更なる治療の選択肢は、乳がん手術を含む。幾つかの実施形態では、乳がん手術は、腫瘍摘出手術、乳房切除術、センチネルリンパ節生検、又は腋窩リンパ節郭清を含む。幾つかの実施形態では、更なる治療の選択肢は、放射線療法を含む。幾つかの実施形態では、照射は、外照射又は近接照射療法を含む。幾つかの実施形態では、更なる治療の選択肢は、ホルモン療法（即ち、ホルモンブロッキング療法）を含む。幾つかの実施形態では、ホルモン療法は、選択的エストロゲン受容体モジュレーター（例えば、タモキシフェン）、アロマターゼ阻害剤、又はフルベストラントの使用を含む。幾つかの実施形態では、更なる治療の選択肢は、卵巣を除去するための手術、又は卵巣がエストロゲンを作ることを妨げるための投薬を含む。幾つかの実施形態では、更なる治療の選択肢は、トラスツズマブ、ラパチニブ、又はベバシズマブの使用を含む。幾つかの実施形態では、更なる治療の選択肢は、乳がん再発を防止するための骨構築薬（bone-building drug）（例えば、ゾレドロン酸（Ｒｅｃｌａｓｔ、Ｚｏｍｅｔａ））の使用を含む。
【０３１４】
キット／製造品
本明細書中に記載する診断及び治療用途における使用に関して、キット及び製造品についても本明細書中に記載する。このようなキットは、担体、パッケージ、又はバイアル、チューブ等などの１つ又は複数の容器を受け取れるように区画化された容器を含むことができ、容器（複数可）はそれぞれ、本明細書中に記載する方法で使用される別個の要素のうちの１つを含む。適切な容器として、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、及び試験管が挙げられる。容器は、例えばガラス又はプラスチックを含む任意の許容される材料から形成される。
【０３１５】
幾つかの実施形態では、本明細書中に提供するキットは、対象において突然変異ＥＲ−αポリペプチドをコードする核酸を検出する際に、又は対象において突然変異ＥＲ−αポリペプチドを検出するのに使用するためのものである（即ち、診断キット）。幾つかの実施形態では、キットは、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物による治療に関して患者を選択するのに、ホルモン療法に対して耐性であると、若しくはホルモン療法に対して耐性になる可能性が高いと対象を同定するのに、ホルモン療法に対する耐性の発症をモニタリングするのに、又はそれらの組合せのために用いられる。本明細書中に提供するキットは、突然変異ＥＲ−αポリペプチドをコードする核酸の検出用の、突然変異ＥＲ−αポリペプチドの検出用の、対象由来の細胞におけるＥＲ活性の検出用の、又はそれらの組合せのための１つ又は複数の試薬を含有する。例示的試薬として、バッファー、ＰＣＲ試薬、抗体、酵素染色用の基質、色素原（chromagens）、又はスライド、容器、マイクロタイタープレートなどの他の材料、及び任意選択的に、上記方法を実施するための説明書が挙げられるが、それらに限定されない。当業者は、各種材料を接触させるのに使用することができる多くの他の考え得る容器及びプレート及び試薬を認識する。キットはまた、例えば本明細書中に提供する突然変異ＥＲ−αポリペプチド若しくは本明細書中に提供する突然変異ＥＲ−αポリペプチドをコードする核酸などの、例えば核酸又はタンパク質などのコントロール試料を含有することができる。幾つかの実施形態では、キットは、内因性のＥＲ遺伝子発現の検出用のオリゴヌクレオチドプライマーの１つ又は複数のセットを含有する。
【０３１６】
幾つかの実施形態では、容器（複数可）は、任意選択的に組成物中に、又は本明細書中に開示するような別の薬剤と組み合わせて、式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）の１つ又は複数のエストロゲン受容体モジュレーター化合物を含み得る。容器（複数可）は、滅菌アクセスポートを任意選択的に有する（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針により穿刺可能な栓を有するバイアルであり得る）。このようなキットは任意選択的に、本明細書中に記載する方法におけるその使用に関する識別説明又はラベル又は説明書とともに化合物を含む。
【０３１７】
キットは通常、それぞれが、本明細書中に記載する化合物の使用に関して商業的及び使用者の観点から望ましい各種材料（任意選択的に濃縮形態での試薬、及び／又はデバイスなどの）のうちの１つ又は複数を有する１つ又は複数の更なる容器を含む。このような材料の非限定的な例として、バッファー、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、担体、パッケージ、容器、バイアル、及び／又は内容物を記載しているチューブラベル及び／又は使用説明書、及び使用説明書を伴う添付文書が挙げられるが、それらに限定されない。一連の説明書も通常含まれる。
【０３１８】
ラベルは、容器上に存在し得るか、又は容器に関連付けられ得る。ラベルは、字、数字又はラベルを形成する他の文字が、容器自体へ貼り付けられるか、形作られるか、又はエッチングされる場合には、容器上に存在し得る。ラベルは、それが、例えば添付文書として、容器も保持するレセプタクル又は担体内に存在する場合には、容器に関連付けられ得る。ラベルは、内容物が特定の治療用途に使用されるべきであることを示すのに使用され得る。ラベルはまた、本明細書中に記載する方法におけるなどの、内容物の使用に関する指示書を示し得る。
【０３１９】
包装材料、包装材料内の式（Ａ）、（Ｂ）、（Ｃ）又は（Ｄ）のエストロゲン受容体モジュレーター化合物、及び化合物若しくは組成物、あるいはその薬学的に許容される塩、互変異性体、薬学的に許容されるＮ−オキシド、薬学的に許容される活性代謝産物、薬学的に許容されるプロドラッグ、又は薬学的に許容される溶媒和物が、活性化されたエストロゲン受容体の影響を低減、減少又は排除するのに、あるいはエストロゲン受容体活性の低減又は排除によって利益を享受する疾患又は状態の１つ又は複数の症候の治療、防止又は改善に使用されることを示すラベルを含む製造品が提供される。
【実施例】
【０３２０】
これらの実施例は、単なる説明の目的で提供されるものであり、本明細書中に提供する特許請求の範囲を限定するものではない。
【０３２１】
実施例１：  ＭＣＦ−７  ３ｘＥＲＥルシフェラーゼ転写レポーターアッセイ
この実施例では、選択される突然変異エストロゲン受容体の構成的な転写活性及び刺激された野生型エストロゲン受容体活性の阻害に関する最大相対ＩＣ５０を、ＭＣＦ７乳がん細胞において３ｘＥＲＥ−ルシフェラーゼレポーターを使用して、ＥＲモジュレーターエストラジオール、４−ＯＨタモキシフェン、フルベストラント、及び化合物のパネルに関して評価した。このアッセイで利用される条件下では、野生型及び全ての突然変異エストロゲン受容体は、測定可能な構成的な、配列依存性の、及びエストラジオール依存性のＥＲリガンドにより調節され得る基礎活性を示す。したがって、提示するデータは全て、エストラジオールの非存在下での野生型エストロゲン受容体に対するものである。
【０３２２】
ＭＣＦ７細胞を、１０％ＦＣＳで補充したＲＰＭＩ  １６４０中に維持した。転写アッセイは、２５０，０００個の細胞／ｍＬの密度の細胞１００μＬを、１０％チャコール処理済血清（charcoal stripped serum）で補充したＲＰＭＩ  １６４０中の９６ウェル細胞培養プレートへ播種することにより実施して、一晩結合させた。リポフェクチン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、細胞を一過性にトランスフェクトした。三重トランスフェクションは、３Ｘ  ＥＲＥ−ＴＫ−Ｌｕｃ（レポーターベクター）１５０ｎｇ、ＣＭＶｐＲＬ（標準化ベクター）３０ｎｇ、及びｐＣＤＮＡ  ＥＲα（又はＥＲα突然変異体）３００ｎｇを使用して実施した。トランスフェクトした細胞を一晩インキュベートした後、リガンドで処理した。化合物を段階的に希釈して、化合物＋チャコール処理済血清で補充したＲＰＭＩ  １６４０  ５０μＬを細胞に添加した。２４時間のインキュベーション後に、培地を除去して、細胞を溶解バッファー（２５ｍＭ  トリスリン酸塩、２ｍＭ  ＣＤＴＡ、１０％グリセロール、０．５％トリトンＸ−１００、２ｍＭ  ＤＴＴ）４０μＬ中に溶解させた。ルシフェラーゼバッファー（２０ｍＭトリシン、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．０７ｍＭ（ＭｇＣＯ３）４Ｍｇ（ＯＨ）２・５Ｈ２Ｏ、２．６７ｍＭ  ＭｇＳＯ４、３３．３ｍＭ  ＤＴＴ、２７０μＭ  補酵素Ａ、４７０μＭ  ルシフェリン、５３０μＭ  ＡＴＰ）の添加直後に、ホタルルシフェラーゼ活性を測定した。セレンテラジン（colelenterazine）バッファー（１．１Ｍ  ＮａＣｌ、２．２ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、０．２２Ｍ  ＫｘＰＯ４（ｐＨ５．１）、０．４４ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、１．３ｍＭ  ＮａＮ３、１．４３μＭ  セレンテラジン、最終ｐＨを５．０に調整）４０μＬの添加後に、ウミシイタケ（Renilla）ルシフェラーゼを測定した。各化合物の最大相対アゴニスト活性を、ＲＬＵ試料／ＲＬＵ  ｗｔＥＲ−α  ＤＭＳＯ×１００＝相対活性の通りにグラフを描いた各突然変異受容体に対する最大応答を表す用量応答曲線上の点（用量応答曲線の底部）から導き出した。各化合物に関する相対ＩＣ５０は、下記：ＩＣ５０ＥＲ−α突然変異体／ＩＣ５０  ｗｔ  ＥＲ−αの通りに決定した。
【０３２３】
本明細書中に開示する代表的な化合物に関する例証的な転写データを表５に提示する。
2017509631.tif 000076
【０３２４】
実施例２：  局所進行性又は転移性ＥＲ＋乳がん及び局所的に確認されるＥＳＲ１突然変異を伴う閉経後の女性におけるＥＲＭ化合物１−３の臨床治験
これは、確認されたＥＳＲ１突然変異を有する局所進行性又は転移性ＥＲ＋（ＨＥＲ２−）乳がんを患う閉経後の女性において、ＥＲＭ化合物１−３である（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩の有効性及び安全性を評価するオープンラベルの臨床治験である。
【０３２５】
目的：局所進行性又は転移性ＥＲ＋（ＨＥＲ２−）乳がん及び局所的に確認されるＥＳＲ１突然変異を伴う閉経後の女性において、ＥＲＭ化合物１−３である（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩の薬物動態（ＰＫ）、安全性及び忍容性を評価して、抗腫瘍活性の予備的証拠を評価すること。更なる目的は、［１８Ｆ］−フルオロエストラジオール（ＦＥＳ）陽電子放出型断層撮影（ＰＥＴ）［ＦＥＳ  ＰＥＴ］による薬力学的（ＰＤ）応答のバイオマーカーの予備評価を実施すること、ＥＲ標的遺伝子発現の予備評価を実施すること、単回又は多重回の治療後に、（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩に対する耐性のメカニズムの予備評価（例えば、Ｃｍａｘ、Ｔｍａｘ、ＡＵＣ、Ｔ１／２）を実施することを含む。
【０３２６】
治験設計：この研究では、女性に、推奨される第２相の用量の（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩を付与するか、あるいは出発用量の１日当たり約４００ｍｇの（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩、続くその後およそ２００ｍｇの増分による用量増加を用いて、増量の（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩を割り当てる。患者は、アロマターゼ阻害剤による事前治療後に測定可能な疾患の進行、及び確認されるＥＳＲ１突然変異（複数可）を有するべきである。
【０３２７】
患者は全て、疾患の進行、容認できない毒性又は患者のコンセントの撤回まで治療される。
【０３２８】
患者の選定
組み入れ基準：
１．根治的切除又は放射線療法に適していない局所性再発疾患、又は転移性疾患（ともに、ＥＲ＋乳がんに対する少なくとも６ヶ月のホルモン療法後に進行している）の兆候を伴う乳房の腺がんの組織学的又は細胞学的に証明される診断
２．ＥＲ陽性腫瘍（検査所実験に従う免疫組織化学［ＩＨＣ］により１％以上の細胞で染色）
３．特定の場所の検査所実験に従うＨＥＲ２陰性乳がん（細胞膜タンパク質発現に関して０又は＋１のＩＨＣ結果、あるいは内部標準プローブを用いない系に関して、１．８未満のＨＥＲ２／ＣＥＰ１７比又は核１個につき平均４個よりも少ないＨＥＲ２遺伝子のコピーを示すＦＩＳＨ結果）
４．下記の通りに更に規定されるＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１に従う評価可能な疾患：
・測定可能な疾患、又は評価可能な骨疾患、即ち、測定可能な病変の非存在下で溶解性又は混合性（溶解性＋硬化性）である骨の病変。注記：放射線の完了後に、進行がその部位で実証されている場合のみ、これまでに照射された病変は、測定可能であるとみなされる。測定不可能で評価不可能な病変（胸膜滲出などの）を伴う患者は、治験の用量増大部分にはふさわしくない
５．検査所実験に従うＥＳＲ１突然変異。アロマターゼ阻害剤による治療後の疾患の進行
６．タモキシフェンの使用から、少なくとも２ヶ月が経過していなくてはならない
７．任意の他の抗がんホルモン療法の使用から、少なくとも２週間が経過していなくてはならない
８．任意の化学療法の使用から、少なくとも３週間が経過していなくてはならない
９．女性、１８歳又はそれ以上
１０．下記に規定される閉経後の状態：
・事前両側性外科的卵巣摘出術
・年齢５６歳以上：最終月経から１年以上経つ自然無月経
・最終月経から１年以上経つ無月経並びに閉経後の範囲において血清エストラジオールレベル（＜２０ｐｇ／ｍＬ）及びＦＳＨレベル（＞４０ｍＩＵ／ｍＬ）を伴う年齢５６歳未満
・適所に置かれた一方又は両方の卵巣を伴う子宮摘出術を受けたか、又は１年以上のタモキシフェン中断とともにタモキシフェン誘導性の無月経を伴い、並びに閉経後の範囲において血清エストラジオールレベル（＜２０ｐｇ／ｍＬ）及びＦＳＨレベル（＞４０ｍＩＵ／ｍＬ）を伴う年齢５６歳未満
１１．２以下（コホートＡに関して）又は１以下（コホートＢ１及びＢ２に関して）の米国東海岸がん臨床試験グループ（ＥＣＯＧ）一般状態
１２．ベースライン又は１以上のグレードへの事前療法又は外科手技の全ての急性毒性の影響の消散（脱毛症、又は患者に関して安全性リスクであるとはみなされない他の毒性を除く）
１３．下記判断基準により規定されるような適正な臓器機能：
・絶対数好中球（ＡＮＣ）  １５００／μＬ以上
・血小板  １００，０００／μＬ以上
・血清アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）及び血清アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）  正常（ＵＬＮ）の３ｘ上限以下、又は肝機能異常が原発性の悪性腫瘍に起因する場合にはＡＳＴ及びＡＬＴ５ｘＵＬＮ以下
・総血清ビリルビン  腫瘍に続発する肝臓障害にかかわらず１．５ｘＵＬＮ以下。ギルバート症候群に起因して血清間接ビリルビンの増加（３ｘＵＬＮ以下）を伴う患者の組み入れは認められている
・血清クレアチニン  １．５×ＵＬＮ以下
・ＱＴｃ  ４６０ｍｓｅｃ以下
１４．対象（又は合法的に許容される代表）が、登録前に治験の関連態様全てについて知らされていることを示す署名と日付が付されたインフォームドコンセント文書
１５．予定された訪問、治療プラン、検査所試験、及び他の治験手順を順守する意思及び能力
【０３２９】
除外基準：
１．未治療又は症候性ＣＮＳ転移。注記：登録前の１２週以内にＸ線写真上安定である治療済及び無症候性ＣＮＳ転移を伴う患者は許可されるが、但し、コルチコステロイドの長期使用は、登録前の４週以内に中断されている
２．子宮内膜障害
３．進行性／転移性状況において１つ以上の事前化学療法
４．進行性疾患に関する任意の全身性抗がん療法、又は別の臨床試験に関する任意の全身性実験的治療を用いた現在の治療
５．登録前の２年以内に任意の二次性悪性腫瘍の診断、但し、適正に治療された基底細胞又は扁平細胞皮膚がん、又は上皮内がんは除く
６．登録前１２ヶ月以内に以下の何れか：心筋梗塞、重症／不安定狭心症、グレード２以上の進行中の不整脈、任意のグレードの心房細動、冠動脈又は末梢動脈バイパス移植術、症候性うっ血性心不全、又は一過性脳虚血発作を含む脳血管発作
７．活動性炎症性腸疾患又は慢性下痢、短腸性症候群、又は胃切除を含む上部消化管手術
８．公知のヒト免疫不全ウイルス感染
９．登録前の４週間以内の大手術又は放射線療法
１０．研究参加又は治験薬投与に関連付けられる危険性を増大し得るか、又は研究結果の解釈を妨げる可能性があり、また治験者の判断で、この研究への参入にとって対象を不適切なものにさせる他の重篤な急性若しくは慢性の内科的又は精神的状態又は検査所異常。
【０３３０】
腫瘍評価：疾患評価を実施する。画像研究は、胸部、腹部及び骨盤のＣＴスキャン＋骨スキャンを含む。客観的な腫瘍応答又は疾患の進行のＸ線写真での確認は、ＲＥＣＩＳＴ  ｖ１．１に基づく（Eisenhauer, 2009）。骨スキャンで検出される新たな骨の病変に関しては、進行を確認するのに、第２の画像診断法（例えば、ＣＴ又はＭＲＩ）が必要とされる。
【０３３１】
同じ評価方法、及び同じ技法が、スクリーニング時及び経過観察中に使用されるべきである。静脈内（ＩＶ）コントラストは、医学的に禁忌でない場合には必要とされる。ＩＶコントラストに対して禁忌を持つ患者は、ＣＴの代わりに実施される腹部及び骨盤のＭＲＩ試験、及び胸部の非コントラストＣＴを受けてもよい。陽電子放出型断層撮影（ＰＥＴ）スキャンによる、又は超音波による腫瘍評価は、ＣＴの代用にはなり得ない。
【０３３２】
相関性研究
１８ＦＥＳ−ＰＥＴ標的会合による薬力学：［１８Ｆ］−フルオロエストラジオール（ＦＥＳ）陽電子放出型断層撮影（ＰＥＴ）による画像処理を実施して、腫瘍中のＥＲ発現を定量化して、（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩を用いた療法に対する薬力学的応答を評価する。ＦＥＳ取込みは、一般に患者間で多様であり得る一方で、ＦＥＳ取込みは、所定の時点で病変にわたって極めて一貫しており、平均取込みは、個々の患者に関してＥＲ発現の合理的な概略を提供する。性ホルモン結合グロブリン（ＳＨＢＧ）などの標準取込み値（ＳＵＶ）に影響を及ぼし得る要因は、標準的なプロトコールに従って調節される（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ、２０１１）。更に、タモキシフェン（少なくとも２ヶ月）又はフルベストラント（少なくとも６ヶ月）でこれまで治療した患者に関するウオッシュアウト期間は、各薬物の長期半減期及びＦＥＳ取込みを妨げるそれらの能力に起因して必要とされ得る。ＦＥＳ−ＰＥＴ研究は、吸収補正及び病巣限局化のためにハイブリッドＰＥＴ／ＣＴ画像処理として実施される。
【０３３３】
コア生検：治療前及び後の腫瘍生検（軟組織又は内臓の病変）を収集して、評価する：
−腫瘍組織学；腫瘍対間質、対線維化組織
−免疫組織化学又は免疫蛍光によるＥＲα及びＰＲタンパク質レベル
−増殖性指標（Ｋｉ６７）
−ＥＲ標的遺伝子調節  モニタリングされ得るＥＲ標的遺伝子の例として、ＡＧＲ２、ＡＲＥＧ、Ｃ３、ＣＣＮＤ１、ＣＸＣＬ１２、ＥＲＢＢ２、ＧＲＥＢ１、ＩＬ６、ＩＲＳ１、ＰＤＺＫ１、ＰＧＲ、ＳＥＭＡ３Ｂ、ＴＦＦ１、ＴＦＦ２、ＴＦＦ３、ＴＯＰ２Ａ、ＷＩＳＰ２が挙げられるが、それらに限定されない。
【０３３４】
循環性腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）：用量増加及び用量増大中の患者全てにおいて、更なる血液試料が、スクリーニング時、治療時、及び循環性腫瘍ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）の分析のための研究中断時に収集される。
【０３３５】
最近の前臨床及び臨床データにより、ＥＲ−α、及び触媒サブユニットアルファであるホスファチジルイノシトール−４，５−ビスリン酸３−キナーゼ（ＰＩＫ３ＣＡ）における突然変異が、内分泌耐性乳がんに関連付けられることを示唆する。（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸、又はその薬学的に許容される塩の臨床活性と、耐性メカニズムとの間の考え得る因果関係に対する洞察を得るために、これらの遺伝子の両方の突然変異状態を、高感度エマルジョンＰＣＲベースのＢＥＡＭｉｎｇ（ビーズ、エマルジョン、増幅、及び磁気）法（Dressman、2003）又は次世代シーケンシング法などの高度なＤＮＡ分析技法を使用して血漿から単離されるｃｔＤＮＡでモニタリングする。
【０３３６】
実施例３：  臨床的に関連するＥＳＲ１突然変異に対するＥＲＭ化合物１−３（ＡＲＮ−８１０）の活性
この研究の目的は、アロマターゼ阻害剤などの抗ホルモン療法に対して耐性を付与すると提唱される臨床的に関連するエストロゲン受容体突然変異に対する表１からのＥＲＭ１−３、即ち（Ｅ）−３−（４−（（Ｅ）−２−（２−クロロ−４−フルオロフェニル）−１−（１Ｈ−インダゾール−５−イル）ブタ−１−エン−１−イル）フェニル）アクリル酸の有効性を評価することであった。ＥＲＭ１−３の力価及び有効性は、ＥＲ依存的転写レポーターアッセイ、及びＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞の生存率アッセイにおいてインビトロで測定した。ＥＲＭ１−３活性は、臨床的に関連するＥＲ−αターゲティング乳がん治療薬４−ヒドロキシタモキシフェン（タモキシフェンの活性代謝産物）及びフルベストラントと比較した。細胞ベースの転写レポーターアッセイにおいて、ＥＲＭ１−３は、試験した全てのＥＲ−α突然変異（Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇ）の活性を、ナノモルの力価で阻害して、有効性は匹敵したか、又は野生型レポーターを用いて観察されるよりも大きかった。ＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞では、ＥＲＭ１−３は、突然変異及びアッセイフォーマットに応じて、生細胞の数を４４％−７８％減少させた（５日の増殖アッセイにおけるＤＭＳＯコントロールと比較した場合）。レポーター及び増殖アッセイの両方において、ＥＲＭ１−３は、野生型ＥＲ−αと比較した場合にＥＳＲ１突然変異のパネルにわたって０．８〜２１０倍減少した力価を示した。しかしながら、転写レポーターアッセイに対比して、生存率アッセイでは、ＥＲＭ１−３は概して、野生型ＥＲ−αを安定に発現する細胞と比較して、有効性の低減を示した。
【０３３７】
化合物及び製剤：
ＥＲＭ１−３は、国際公開第２０１２／０３７４１０号の実施例３６及び国際公開第２０１２／０３７４１１号の実施例５０に記載するように調製した。原体試料は、９５％を超える純度を有し（純度評価：核磁気共鳴／液体クロマトグラフィー−質量分析）、オフホワイト色の粉末であった。分子のナトリウム又はＮ−メチル−Ｄ−グルカミン塩形態を利用した。ＡＲＮ−８１０は、−２０℃で保管したＤＭＳＯ中に溶解した１０ｍＭストック溶液として供給した。
【０３３８】
フルベストラント（中性形態）は、Ｗａｔｅｒｓｔｏｎｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入し（ＷＳ１００３２）、１０ｍＭの最終濃度で無水ＤＭＳＯ中に再懸濁させて、アリコートへ分取して、−８０℃で保管した。
【０３３９】
４−ヒドロキシタモキシフェンは、Ｓｉｇｍａ  ＡＬｄｒｉｃｈから購入し、１０ｍＭの最終濃度で無水ＤＭＳＯ中に再懸濁させた後、アリコートへ分取して、−８０℃で保管した。
【０３４０】
ＭＣＦ−７細胞は、ＡＴＣＣ（ＡＴＣＣ（登録商標）ＨＴＢ−２２（商標））から得ることができる。細胞を増やして、培養液中で１回の継代後に液体窒素中で保管した。凍結細胞のバイアルを解凍して、２ヶ月毎に培養液に入れ、続いて１週に二度分けた。解凍した細胞は、２週間培養液中に存在させて、任意のアッセイにおける使用に先立って、凍結からの回収を可能にした。この報告で詳述されるアッセイで使用される細胞は、初期の解凍から５〜２２継代を受ける。
【０３４１】
細胞培養増殖培地
Ｃｏｒｎｉｎｇ（商標）ｃｅｌｌｇｒｏ（商標）ＲＰＭＩ  １６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログＮｏ．１５−０４０）
フェノールレッドを伴わないＣｏｒｎｉｎｇ（商標）ｃｅｌｌｇｒｏ（商標）ＲＰＭＩ  １６４０（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログＮｏ．１７−１０５）
Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ウシ胎児血清（Ｕ．Ｓ．）−特徴を明らかにされている（ＦＢＳ）（Ｔｈｅｒｍｏ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログＮｏ．ＳＨ３００７１０３）
Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（商標）ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）ウシ胎児血清（Ｕ．Ｓ．）−チャコール／デキストラン処理済（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログＮｏ．ＳＨ３００６８０３）
【０３４２】
他の試薬
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログＮｏ．Ｇ７５７２）
アッセイプレート、３８４ウェル、蓋付、平底、下フランジ、組織培養液処理済、滅菌、白色ポリスチレン（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログＮｏ．３５７０）
ジメチルスルホキシド無水物（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログＮｏ．２７６８５５−１００ｍＬ）
Ｍａｔｒｉｘ  １２チャンネル電動ピペット、０．５−１２．５μＬ、２−１２５μＬ、及びＭａｔｒｉｘ  ８チャンネル電動ピペット、１５−１２５０μＬ
９６ウェルＴＣ処理滅菌ポリスチレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．，カタログＮｏ．３９０３、３９０４又は３９１７）
リポフェクチン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログＮｏ．１８２９２０３７）
Ｄ−ルシフェリン、カリウム塩（Ｇｏｌｄ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、カタログＮｏ．ＬＵＣＫ−５００）
Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０３（商標）マルチラベルリーダー
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ａｎａｌｙｓｔ（商標）ＧＴマルチモードリーダー
Ｒｅｉｃｈｅｒｔ  Ｂｒｉｇｈｔ−Ｌｉｎｅ（登録商標）Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  Ｎｅｕｂａｕｅｒ血球計（Ｈａｕｓｓｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログＮｏ．１４９０）
統計分析：曲線の当てはめ及びＩＣ５０及びＥｍａｘ値は、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍバージョン６．０１及びＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｏｆｆｉｃｅ  Ｅｘｃｅｌ（２０１０）を使用して、ｌｏｇ（阻害剤）対応答可変スロープ（４つのパラメーター）曲線の当てはめを使用してＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアを用いて作成した。
【０３４３】
実施例４：  ＥＲ−α転写レポーターアッセイ
ＭＣＦ７細胞を、１０％ＦＣＳで補充したＲＰＭＩ  １６４０中に維持した。転写アッセイは、２５０，０００個の細胞／ｍＬの密度の細胞１００μＬを、１０％チャコール処理済血清で補充したＲＰＭＩ  １６４０中の９６ウェル細胞培養プレートへ播種することにより実施して、一晩結合させた。リポフェクチン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、製造業者のプロトコールに従って、細胞を一過性にトランスフェクトした。三重トランスフェクションは、３Ｘ  ＥＲＥ−ＴＫ−Ｌｕｃ（レポーターベクター）１８０ｎｇ、ｐＲＬ−ＣＭＶ（標準化ベクター）３０ｎｇ、及びｐＣＤＮＡ  ＥＲ−α（又はＥＲ−α突然変異）２７０ｎｇを使用して実施した。トランスフェクトした細胞を一晩インキュベートした後、リガンドで処理した。ＥＲアゴニストアッセイ用に、化合物を段階的に希釈して、化合物＋チャコール処理済血清で補充したＲＰＭＩ  １６４０  ５０μＬを細胞に添加した。
【０３４４】
ＥＲアンタゴニストアッセイ用に、化合物を段階的に希釈して、化合物＋チャコール処理済血清で補充したＲＰＭＩ  １６４０中の３ｎＭ  １７β−エストラジオール５０μＬを細胞に添加した。２４時間のインキュベーション後に、培地を除去して、細胞を溶解バッファー（２５ｍＭ  トリスリン酸塩、２ｍＭ  ＣＤＴＡ、１０％グリセロール、０．５％トリトンＸ−１００、２ｍＭ  ＤＴＴ）４０μＬ中に溶解させた。
【０３４５】
ルシフェラーゼバッファー（２０ｍＭトリシン、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１．０７ｍＭ（ＭｇＣＯ３）４Ｍｇ（ＯＨ）２・５Ｈ２Ｏ、２．６７ｍＭ  ＭｇＳＯ４、３３．３ｍＭ  ＤＴＴ、２７０μＭ  補酵素Ａ、４７０μＭ  ルシフェリン、５３０μＭ  ＡＴＰ）４０μＬの添加直後に、ホタルルシフェラーゼ活性を測定した。セレンテラジンバッファー（１．１Ｍ  ＮａＣｌ、２．２ｍＭ  Ｎａ２ＥＤＴＡ、０．２２Ｍ  ＫｘＰＯ４（ｐＨ５．１）、０．４４ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ、１．３ｍＭ  ＮａＮ３、１．４３μＭ  セレンテラジン、最終ｐＨを５．０に調整）４０μＬの添加後に、ウミシイタケルシフェラーゼを測定した。各化合物の最大相対アゴニスト活性を、ＲＬＵ試料／ＲＬＵ  ｗｔＥＲ−αＤＭＳＯ＝相対活性の通りにグラフを描いた各突然変異受容体に対する用量応答曲線の底部から導き出した。
【０３４６】
ＭＣＦ−７突然変異ＥＲ−α安定な細胞株生成：野生型又はＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞は、アミノ末端ヘマグルチニンタグを含有するＥＳＲ１野生型及び突然変異ｃＤＮＡを、ｐＣＤＨ−ＥＦ１−ＭＣＳ−（ＰＧＫ−Ｐｕｒｏ）（ＦＥ１  ＨＡ−  ＥＲ−αと称される）及びｐＣＤＨ−ＵｂＣ−ＭＣＳ−ＥＦ１−Ｈｙｇｒｏ（ＵｂＣ  ＨＡ−ＥＲ−αと称される）（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｃｓｃｉｅｎｃｅｓ）へサブクローニングすることにより生成した。続いて、得られたプラスミドは、製造業者のプロトコールに従って、空ベクター陰性コントロールの他に、ｐＰＡＣＫＨ１パッケージングプラスミドミックス（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）ともにＨＥＫ２９３Ｔ細胞へコトランスフェクトした。トランスフェクションの４日後に、レンチウイルス粒子は、細胞培地から精製されて、層を成して、−８０℃で保管した。ＭＣＦ−７細胞は、精製したウイルス粒子で形質導入して、１０％ＦＢＳ＋１μＧ／ｍＬ  ピューロマイシン又は２００μＧ／ｍＬ  ハイグロマイシンを含有するＲＰＭＩ中での増殖により、安定な細胞株が、それぞれｐＣＤＨ−ＥＦ１−ＭＣＳ−（ＰＧＫ−Ｐｕｒｏ）及びｐＣＤＨ−ＵｂＣ−ＭＣＳ−ＥＦ１−Ｈｙｇｒｏに関して選択された。選択後、野生型及び突然変異ＥＲ−αの発現は、６Ｅ２マウスモノクローナルＨＡ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇａｌｉｎｇ）を使用してウェスタンブロットにより確認した。
【０３４７】
ＭＣＦ−７安定な細胞株生存率：ＮＥＡＡ及びピルビン酸ナトリウムとともに１０％ＣＳＳを含有するＰｈｅｎｏｌ  Ｆｒｅｅ  ＲＰＭＩ中で、１ｍＬ当たり４０，０００個の細胞の濃度へ調節されたＭＣＦ−７細胞を血球計数器で数え上げた。細胞懸濁液１６マイクロリットルを、Ｍａｔｒｉｘ  １６チャンネル電動ピペットを使用して、３８４ウェルの組織培養液処理した白色透明な底のポリスチレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の各ウェルへ添加した。細胞を一晩インキュベートして、細胞を接着させた。翌日、ＮＥＡＡ及びピルビン酸ナトリウムとともに１０％ＣＳＳを含有するＰｈｅｎｏｌ  Ｆｒｅｅ  ＲＰＭＩ  １６マイクロリットルを、１つのプレートのウェルへ添加して、続いてＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ＷＩ）発光細胞生存率試薬１６μＬを、Ｍａｔｒｉｘ  １６チャンネル電動ピペットを使用して添加した。室温で２０分のインキュベーション後、６．５ｍｍで設定した発光測定高さ及び１秒の最大積分時間を用いて、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０３マルチラベルリーダーで発光を測定した。ウェルの相対発光ユニット（ＲＬＵ）の「平均値」は、時間＝ゼロでのベースライン値であるとみなされる。更に、ポジティブコントロールとしてＤＭＳＯのみを含むＤＭＳＯ（Ｓｉｇｍａ−ＡＬｄｒｉｃｈ）中での１０ポイントの１：５段階希釈を、Ｍａｔｒｉｘ  １２チャンネル電動ピペットを使用して実施した。次に、各希釈物４μＬを、ＮＥＡＡ及びピルビン酸ナトリウムとともに１０％ＣＳＳを含有するＲＰＭＩ  １９６μＬに添加した。化合物を含有する培地１６μＬは、１０μＭ〜５ｐＭの範囲の最終濃度で細胞に添加した。培地中での化合物希釈、続く細胞への添加は、Ｍａｔｒｉｘ  １２チャンネル電動ピペットを使用して実行した。５日の化合物曝露後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ、マディソン、ＷＩ）発光細胞生存率試薬１６μＬを、Ｍａｔｒｉｘ  １６チャンネル電動ピペットを使用して、細胞に添加した。細胞を有さない培地３２μＬに添加されたＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏを使用して、バックグラウンド値を得た。０ｍｍで設定した発光測定高さ及び０．１秒の最大積分時間を用いて、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｅｎｖｉｓｉｏｎ  ２１０３マルチラベルリーダーで発光を測定した。各ウェルの相対発光ユニット（ＲＬＵ）を測定して、各試料の相対増殖（倍）は、（ＲＬＵ試料−ＲＬＵバックグラウンド）／（Ｔ＝０でのＲＬＵ）＝相対増殖のように決定した。
【０３４８】
実施例５  化合物１−３（ＡＲＮ−８１０）及びＥＲ転写レポーターアッセイ
臨床的に関連するＥＳＲ１突然変異（Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇ）の転写活性に対する化合物１−３（ＡＲＮ−８１０）、４−ヒドロキシタモキシフェン及びフルベストラントの影響を、野生型ＥＲ−α又はＥＲ−α突然変異体を一過性に発現するＭＣＦ−７乳がん細胞において評価した。ＭＣＦ−７細胞を、ＥＲ応答性転写レポーター＋野生型又は突然変異ＥＲ−α発現プラスミドで一過性にトランスフェクトして、ＡＲＮ−８１０、０．１ｐＭ〜１０μＭの範囲の４−ヒドロキシタモキシフェン若しくはフルベストラント、又は０．１ｐＭ〜１μＭの範囲の１７β−エストラジオールで処理した。化合物の考え得るアゴニスト活性を評価するために、細胞をエストラジオールの非存在下で処理した。アンタゴニストアッセイは、１ｎＭエストラジオールの存在下で行った。表６に見られるように、エストラジオールの非存在下では、分析される臨床的突然変異は全て、ＡＲＮ−８１０、４−ヒドロキシタモキシフェン及びフルベストラントにより野生型に匹敵するレベルに阻害される検出可能なリガンド依存的活性を示す。アンタゴニストは全て、試験した突然変異に対してナノモルの力価を保持する（表７）。しかしながら、幾つかの例外（Ｅ３８０Ｑ及びＬ５３６Ｐに対する４−ヒドロキシタモキシフェン活性）では、アゴニストモードにおいて、アンタゴニストは全て、野生型ＥＲ−αと比較して、突然変異受容体に対する力価の緩やかな低減（１．１〜６１倍）を示し、最大６１倍がＹ５３７Ｓ突然変異に対するＡＲＮ−８１０に関して観察された。有効性に対する類似の影響が、ＥＳＲ１突然変異（Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇ）のサブセットをアンタゴニストモード転写アッセイで分析した場合に観察された。しかしながら、エストラジオールの存在下では、ＡＲＮ−８１０で観察される力価のシフトは、あまり顕著ではなかった。具体的には、臨床的に関連する突然変異に関して、ＡＲＮ−８１０のＩＣ５０は、０．８〜１．７倍変化して、最大有効性は、野生型受容体で観察されるものに匹敵した（表８及び表９）。
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【０３４９】
生存率アッセイ：ＡＲＮ−８１０の、患者において同定される構成的に活性なＥＲ−α突然変異のリガンド非依存的増殖活性を拮抗する能力を評価するために、野生型、Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｃ及びＤ５３８Ｇアミノ末端ヘマグルチニンタグ付けＥＲ−α（ＨＡ−ＥＲ−α）を安定に発現するＭＣＦ−７細胞株を生成した。ＥＲ−α過剰発現は、リガンド非依存的増殖を誘導することができ、また飽和状態であり得るため、リガンド媒介性分解経路非依存的な安定な細胞株は、ＥＲ−α発現を駆動するためのＵｂＣ及びＥＦ１プロモーターを利用して各受容体に関して創出された（Li S等 Cell Rep(2013);4（6）:1116-1130、Wardell SE等 Biochem Pharmacol(2011);82（2）:122-130）。ＥＦ１プロモーターが高レベルを発現する一方で、Ｕｂｃプロモーターは、低〜中のＲＮＡレベルを発現すると製造業者（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により報告されている（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。定量的ウェスタンブロット分析により決定されるように、ＵｂＣベースの細胞株は、内因性のＥＲ−αの１０％未満のレベルでＨＡ−ＥＲ−αタンパク質を発現する。他方で、ＥＦ１プロモーターベースの株は、内因性のタンパク質よりも２〜６倍高いレベルでＨＡ−ＥＲ−α及び突然変異体を発現する。
【０３５０】
転写レポーターアッセイにおけるそれらの活性と一致して、ＵｂＣ又はＥＦ１プロモーターの何れかによりＭＣＦ−７細胞における臨床的に同定されたＥＲ−α突然変異体の発現は、細胞の、１７β−エストラジオールの非存在下で増殖する能力を付与した（表１０及び表１４）。しかしながら、ＥＦ１プロモーターを使用して達成される高レベルの野生型ＥＲ−α発現（内因性のタンパク質レベルのおよそ２−３倍）もまた、リガンド非依存的増殖を促進するのに十分であった。
【０３５１】
ＵｂＣプロモーターベースの細胞株では、化合物１−３（ＡＲＮ−８１０）、４−ヒドロキシタモキシフェン及びフルベストラントは、アゴニスト及びアンタゴニストモードの両方で、野生型、Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｃ及びＤ５３８Ｇ  ＨＡ−ＥＲ−αを安定に発現する細胞株の増殖を拮抗した（表１０及び表１２）。フルベストラント及びＡＲＮ−８１０は、類似した有効性（それぞれ、アゴニスト及びアンタゴニストモードに関して、４７％〜６７％、及び７１％〜７８％の範囲の阻害）を示す一方で、４−ヒドロキシタモキシフェンは、試験した全ての突然変異に対して有効性の低減を示した。アゴニスト及びアンタゴニストモードでは、３つ全てのアンタゴニストが、ＵｂＣ  ＨＡ−ＥＲ−α突然変異細胞株に対して高いピコモル〜低いナノモルのＩＣ５０を示した（表１１及び表１３）。アゴニストモードでは、ＵｂＣ野生型ＨＡ−ＥＲ−α細胞株は、正確なＩＣ５０を導き出すのに十分に増殖しなかったが、アンタゴニストモードでは、全てのアンタゴニストが、野生型ＥＲ−αと比較して力価の緩やかな低減を示す（１．３〜５．４倍、表１３）
【０３５２】
ＥＦ１由来の株では、アゴニストモードでは、全てのアンタゴニストが、野生型と比較して突然変異受容体に対して力価の低減を示した（それぞれ、４−ヒドロキシタモキシフェン、フルベストラント及びＡＲＮ−８１０に関して、８〜１４０倍、２〜４７倍、及び２〜２１０倍）。更に、ＡＲＮ−８１０は、フルベストラント及び４−ヒドロキシタモキシフェンの両方と比較して、Ｙ５３７突然変異体に対して有効性の低減を示した（表１５及び表１６）。アンタゴニスト有効性及び力価の類似した観察が、増殖アッセイをアンタゴニストモードで実施した場合に観察された（表１６及び表１７）。しかしながら、１７β−エストラジオールの存在下では、野生型と突然変異ＨＡ−ＥＲ−α保有細胞株との間におけるアンタゴニスト力価の差は、ＥＦ−１アゴニストアッセイで観察されるよりもあまり顕著でなかった（最大１５倍）。
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【０３５３】
結論：化合物１−３（ＡＲＮ−８１０）は、細胞ベースの転写レポーター及び細胞生存率アッセイにおいて、臨床的に関連するＥＳＲ１突然変異Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇの活性を阻害する。ＡＲＮ−８１０は、ＥＲ依存的転写レポーターアッセイにおいて、全てのＥＳＲ１突然変異の転写活性を、野生型受容体で観察されるものに匹敵するレベルへ阻害した。ＵＢＣプロモーターを介して低レベルでＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞において、ＡＲＮ−８１０は、ＤＭＳＯコントロールと比較して、生細胞の数を４７％−７８％低減させた。ＡＲＮ−８１０は、このアッセイでナノモルの力価を示すが、ＡＲＮ−８１０は、野生型と比較して、突然変異ＥＲ−αに対して力価の１．３〜２．７倍低減を示した。逆に言うと、ＥＲ−α突然変異体がＥＦ１プロモーターを介して過剰発現される場合、ＡＲＮ−８１０は、野生型受容体と比較して、力価の０．６〜２１０倍低減を示し、４−ヒドロキシタモキシフェン及びフルベストラントの力価と比較して、最大有効性（Ｅｍａｘ）応答を低減させた。
【０３５４】
実施例６：  臨床的に関連するＥＳＲ１突然変異に対するＥＲＭ化合物４−２３の活性
この研究の目的は、アロマターゼ阻害剤などの抗ホルモン療法に対して耐性を付与すると提唱されている臨床的に関連するエストロゲン受容体突然変異に対するＥＲＭ４−２３、即ち（Ｓ）−２−（４−（２−（３−（フルオロメチル）アゼチジン−１−イル）エトキシ）フェニル）−３−（３−ヒドロキシフェニル）−４−メチル−２Ｈ−クロメン−６−オール（表４）の有効性を評価することであった。ＥＲＭ４−２３の力価及び有効性を、ＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞のＥＲ依存的転写レポーターアッセイ及び生存率アッセイにおいてインビトロで測定した。ＥＲＭ４−２３活性は、臨床的に関連するＥＲ−αターゲティング乳がん治療薬４−ヒドロキシタモキシフェン（タモキシフェンの活性代謝産物）及びフルベストラントと比較した。細胞ベースの転写レポーターアッセイにおいて、ＥＲＭ４−２３は、試験した全てのＥＲ−α突然変異（Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇ）の活性を、ナノモルの力価で阻害して、有効性は、野生型受容体で観察されるものに匹敵した。同様に、ＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞において、ＥＲＭ４−２３は、突然変異及びアッセイフォーマットに応じて、生細胞の数を４９％−９０％低減させた（ＤＭＳＯコントロールと比較して）。しかしながら、両方のアッセイにおいて、ＥＲＭ４−２３は、野生型ＥＲ−αと比較して、ＥＳＲ１突然変異のパネルにわたって力価の０．７〜２３倍低減を示した。
【０３５５】
実施例３と同様に、この研究の目的は、臨床的に関連するＥＲ−α突然変異に対するＥＲＭ４−２３の活性を決定することであった。野生型又は突然変異ＥＲ−α（アルファ）を安定に発現するＭＣＦ−７細胞のＥＲ−α転写レポーター及び細胞生存率において、ＥＲＭ４−２３活性をモニタリングした。
【０３５６】
ＥＲＭ４−２３は、国際公開第２０１４／０２５１３８号に記載されるように調製した。分子の塩酸塩形態を利用した。原体試料は、９５％を超える純度を有し（純度評価：核磁気共鳴／液体クロマトグラフィー−質量分析）、オフホワイト色の粉末であった。ＥＲＭ４−２３は、１０ｍＭストック溶液としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させて、−２０℃で保管した。他の化合物及び製剤は、実施例３に記載するように用いた。
【０３５７】
臨床的に関連するＥＳＲ１突然変異（Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇ）の転写活性に対するＥＲＭ化合物４−２３、４−ヒドロキシタモキシフェン、及びフルベストラントの影響を、実施例５と同様に野生型ＥＲ−α又はＥＲ−α突然変異体を一過性に発現するＭＣＦ−７乳がん細胞において評価した。ＭＣＦ−７細胞を、ＥＲ応答性転写レポーター＋野生型又は突然変異ＥＲ−α発現プラスミドで一過性にトランスフェクトして、ＥＲＭ４−２３、０．１ｐＭ〜１０μＭの範囲の４−ヒドロキシタモキシフェン若しくはフルベストラント、又は０．１ｐＭ〜１μＭの範囲の１７β−エストラジオールで処理した。化合物の考え得るアゴニスト活性を評価するために、細胞をエストラジオールの非存在下で処理した。アンタゴニストアッセイは、１ｎＭエストラジオールの存在下で行った。表１８に見られるように、エストラジオールの非存在下では、分析される臨床的突然変異は全て、ＥＲＭ４−２３、４−ヒドロキシタモキシフェン若しくはフルベストラントにより野生型に匹敵するレベルに阻害される検出可能なリガンド非依存的活性を示す。アンタゴニストは全て、試験した突然変異に対してナノモルの力価を保持する（表１９）。しかしながら、幾つかの例外（Ｅ３８０Ｑ及びＬ５３６Ｐに対する４−ヒドロキシタモキシフェン活性）では、アゴニストモードにおいて、アンタゴニストは全て、野生型ＥＲ−αと比較して、突然変異受容体に対する力価の緩やかな低減（１．１〜５．９倍）を示し、最大５．９倍がＹ５３７Ｓ突然変異に対するＥＲＭ４−２３に関して観察された。有効性及び力価に対する類似の影響が、ＥＳＲ１突然変異（Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇ）のサブセットをアンタゴニストモード転写アッセイで分析した場合に観察された。具体的には、臨床的に関連する突然変異に対して、ＥＲＭ４−２３のＩＣ５０は、２．２〜１０．２倍増加したが、最大有効性は、野生型受容体で観察されるものに匹敵した（表２０及び表２１）。
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【０３５８】
生存率アッセイ：ＥＲＭ４−２３の、患者において同定される構成的に活性なＥＲ−α突然変異のリガンド依非存的増殖活性を拮抗する能力を評価するために、野生型、Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｃ及びＤ３８Ｇアミノ末端ヘマグルチニンタグ付けＥＲ−α（ＨＡ−ＥＲ−α）を安定に発現するＭＣＦ−７細胞株を生成した。ＥＲ−α過剰発現は、リガンド非依存的増殖を誘導することができ、また飽和状態であり得るため、リガンド媒介性分解経路非依存的な安定な細胞株は、ＥＲ−α発現を駆動するためのＵｂＣ及びＥＦ１プロモーターを利用して各受容体に関して創出された。ＥＦ１プロモーターが高レベルを発現する一方で、ＵｂＣプロモーターは、低〜中のＲＮＡレベルを発現すると製造業者（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により報告されている（Ｓｙｓｔｅｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。定量的ウェスタンブロット分析により決定されるように、ＵｂＣベースの細胞株は、内因性のＥＲ−αの１０％未満のレベルでＨＡ−ＥＲ−αタンパク質を発現する。他方で、ＥＦ１プロモーターベースの株は、内因性のタンパク質よりも２〜６倍高いレベルでＨＡ−ＥＲ−α及び突然変異体を発現する。
【０３５９】
転写レポーターアッセイにおけるそれらの活性と一致して、ＵｂＣ又はＥＦ１プロモーターの何れかによりＭＣＦ−７細胞における臨床的に同定されたＥＲ−α突然変異体の発現は、細胞の、１７β−エストラジオールの非存在下で増殖する能力を付与した（表２２及び表２６  ５）。しかしながら、ＥＦ１プロモーターを使用して達成される高レベルの野生型ＥＲ−α発現（内因性のタンパク質レベルのおよそ２−３倍）もまた、リガンド非依存的増殖を促進するのに十分であった。アゴニストモードでは、ＥＲＭ４−２３、４−ヒドロキシタモキシフェン及びフルベストラントは、何れかのプロモーターを通じて野生型、Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｐ、Ｌ５３６Ｒ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ、Ｙ５３７Ｃ及びＤ５３８Ｇ  ＨＡ−ＥＲ−αを安定に発現するＭＣＦ−７細胞株の増殖を拮抗した（表２２及び表２６）。フルベストラント及びＥＲＭ４−２３は、類似した有効性（それぞれ、ＵｂＣ及びＥＦ１に由来する株に関して、４７％〜６６％、及び４２％〜９６％の範囲の阻害）を示す一方で、４−ヒドロキシタモキシフェンは、試験した全ての突然変異に対して有効性の低減を示した。アゴニストモードでは、３つ全てのアンタゴニストが、ＵｂＣ  ＨＡ−ＥＲ−α突然変異細胞株及びＥＦ１に由来する株の低いナノモルの力価に対して高いピコモル〜低いナノモルのＩＣ５０を示した（表２３及び表２７）。ＵｂＣ野生型ＨＡ−ＥＲ−α細胞株は、正確なＩＣ５０を導き出すのにＥ２の非存在下では十分に増殖しなかったが、ＥＦ１に由来する株では、全てのアンタゴニストが、野生型ＥＲ−αと比較して突然変異受容体に対する力価の低減を示す（それぞれ、４−ヒドロキシタモキシフェン、フルベストラント及びＥＲＭ４−２３に関して、８〜１４０倍、２〜４７倍、及び０．７〜２４倍）。アンタゴニスト有効性及び力価の類似した観察が、増殖アッセイをアンタゴニストモードで実施した場合に観察された（表２４、表２５、表２８、表２９）。しかしながら、１７β−エストラジオールの存在下では、野生型と突然変異ＨＡ−ＥＲ−α保有細胞株との間におけるアンタゴニスト力価の差は、ＥＦ−１アゴニストアッセイで観察されるよりもあまり顕著でなかった（最大１３倍）。
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【０３６０】
結論：ＥＲＭ４−２３は、細胞ベースの転写レポーター及び細胞生存率アッセイにおいて、臨床的に関連するＥＳＲ１突然変異Ｅ３８０Ｑ、Ｌ５３６Ｒ、Ｌ５３６Ｐ、Ｙ５３７Ｃ、Ｙ５３７Ｎ、Ｙ５３７Ｓ及びＤ５３８Ｇの活性を阻害する。ＥＲＭ４−２３は、ＥＲ依存的転写レポーターアッセイにおいて、全てのＥＳＲ１突然変異の転写活性を、野生型受容体で観察されるものに匹敵するレベルへ阻害した。ＥＲ−α突然変異体を安定に発現するＭＣＦ−７細胞において、ＥＲＭ４−２３は、ＤＭＳＯコントロールと比較して、生細胞の数を４９％−９０％低減させた。ＥＲＭ４−２３は、これらのアッセイで低いナノモルの力価を示すが、ＥＲＭ４−２３は、野生型と比較して、突然変異ＥＲ−αに対して力価の０．７〜２４倍低減を示した。ＥＲＭ４−２３は、４−ヒドロキシタモキシフェン及びフルベストラントと類似したＩＣ５０力価、及びフルベストラントの最大有効性（Ｅｍａｘ）応答と類似した最大有効性（Ｅｍａｘ）応答を示す。
【０３６１】
実施例７  インビトロ細胞増殖アッセイ
エストロゲン受容体モジュレーター化合物及び化学療法化合物の有効性は、下記プロトコールを用いる細胞増殖アッセイにより測定する（Mendoza等 (2002) Cancer Res.62:5485-5488）。
【０３６２】
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは、代謝的に活性な細胞の存在を示唆する、存在するＡＴＰの定量化に基づいて培養における生細胞の数を決定するための均一方法である。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、マルチウェルプレートフォーマットを用いた使用のために設計され、それを自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）、細胞増殖及び細胞毒性試験にとって理想的なものにしている。均一アッセイ手順は、単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を、血清補充培地中で培養した細胞へ直接添加することを含む。細胞洗浄、培地の除去及び多重ピペット操作工程は必要とされない。試薬及びプロトコールを含むＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイは、市販されている（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、マディソン、ＷＩ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８）。
【０３６３】
アッセイは、化合物の、細胞に侵入して、細胞増殖を阻害する能力を評価する。アッセイ原理は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬の添加が、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応による発光シグナルの生成をもたらす均一アッセイで、存在するＡＴＰを定量化することによる、存在する生細胞の数の決定に基づく。発光シグナルは存在するＡＴＰの量に比例する。
【０３６４】
手順  １日目−細胞プレート（３８４ウェル、黒色、透明底、マイクロクリア、Ｆａｌｃｏｎからの蓋付ＴＣプレート、＃３５３９６２）に播種、細胞を収集、３日アッセイ用に３８４ウェル細胞プレートへウェル１個につき５４μｌ当たり１０００個の細胞で細胞を播種。細胞培地：ＲＰＭＩ又はＤＭＥＭ高グルコース、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、Ｐ／Ｓ。３７℃、５％ＣＯ２でＯ／Ｎ（一晩）インキュベートする。
【０３６５】
２日目−細胞に薬物を添加、化合物希釈、ＤＭＳＯプレート（９ポイント用に段階希釈１：２）。９６ウェルプレートの第２のカラムにおいて１０ｍＭの化合物２０μｌを添加。ＮｕｎｃからのＰｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｍｅｄｉａ  Ｐｌａｔｅｓ９６ウェルコニカル底ポリプロピレンプレート（ｃａｔ．＃２４９９４６）を使用して、総計９ポイント用にプレートにわたって段階希釈１：２（１０μｌ＋１００％ＤＭＳＯ  ２０μｌ）を実施（１：５０希釈）。全てのウェルへ培地１４７μｌを添加。ＤＭＳＯプレートにおける各ウェルからのＤＭＳＯ＋化合物３μを、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）（Ｃａｌｉｐｅｒ、ａ  Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  Ｃｏ．）を使用した培地プレート上の各相当するウェルへ移動。２つの薬物組合せ研究のために、ＤＭＳＯプレートの各ウェルからのＤＭＳＯ＋化合物の一方の薬物１．５μｌを、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅを使用した培地プレート上の各相当するウェルへ移動。続いて、別の薬物１．５μｌを培地プレートへ移動。
【０３６６】
細胞への薬物添加、細胞プレート（１：１０希釈）：培地＋化合物６μｌを直接細胞へ添加（すでに細胞上に培地５４μｌ）。多くの場合、開放されていないインキュベーター中で３７℃、５％ＣＯ２で３日インキュベート。
【０３６７】
５日目−プレートを展開、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏバッファーを室温で解凍：細胞プレートを３７℃から取り出して、約３０分間、室温で平衡化。Ｃｅｌｌ  Ｔｏｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）バッファーを、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）基質へ添加（瓶から瓶へ）。Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  ｃａｔ．＃Ｇ７５７２）３０μｌを、細胞の各ウェルへ添加。プレート振盪機上に約３０分間配置。Ａｎａｌｙｓｔ  ＨＴプレートリーダー上で発光を読み取る（ウェル１個につき０．５秒）。
【０３６８】
細胞生存率及び組合せアッセイ：細胞を、３８４ウェルプレート中に１０００−２０００個の細胞／ウェルで１６時間播種した。２日目に、９つの段階１：２化合物希釈を、９６ウェルプレートにおいてＤＭＳＯ中で作製した。化合物は、Ｒａｐｉｄｐｌａｔｅ（登録商標）ロボット（Ｚｙｍａｒｋ  Ｃｏｒｐ．、ホプキントン、ＭＡ）を使用して増殖培地へ更に希釈した。次に、希釈した化合物を３８４ウェル細胞プレートにおいて４重ウェルで添加して、３７℃及び５％ＣＯ２でインキュベートした。４日後、製造業者の指示書に従って、Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、発光により生細胞の相対数を測定して、Ｗａｌｌａｃマルチラベルリーダー（登録商標）（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、フォスターシティ）で読み取った。ＥＣ５０値は、Ｐｒｉｓｍ（登録商標）４．０ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ、サンディエゴ）を使用して算出した。組合せアッセイにおける薬物は、４Ｘ  ＥＣ５０濃度で開始して投薬した。薬物のＥＣ５０が２．５μＭを上回った場合、使用される最も高い濃度は１０μＭだった。エストロゲン受容体モジュレーター化合物及び化学療法剤は、アッセイ全てにおいて同時に、又は４時間空けて（一方、その後他方）添加した。
【０３６９】
更なる例示的インビトロ細胞増殖アッセイは、下記工程を含む：
１．培地中に約１０４個の細胞を含有する細胞培養液１００μｌのアリコート（細胞株及び腫瘍タイプに関しては表３を参照）を、３８４ウェルの不透明壁付きプレートの各ウェル中に堆積させる。
２．培地を含有し、且つ細胞を有さないコントロールウェルを調製した。
３．化合物を実験ウェルに添加して、３−５日間インキュベートした。
４．プレートをおよそ３０分間、室温へと平衡化させた。
５．各ウェル中に存在する細胞培地の容積に等しい容積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬を添加した。
６．オービタル振盪機上で２分間、内容物を混合して、細胞溶解を誘導した。
７．室温で１０分間、プレートをインキュベートして、発光シグナルを安定化させた。
８．発光を記録して、ＲＬＵ＝相対発光ユニットとしてグラフで報告した。
９．組合せ指数を得るために、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの組合せ方法、並びにＣａｌｃｕＳｙｎ（登録商標）ソフトウェア（Ｂｉｏｓｏｆｔ、ケンブリッジ、ＵＫ）を用いたＤｏｓｅ−Ｅｆｆｅｃｔ分析を使用して分析。
【０３７０】
あるいは、細胞を、９６ウェルプレートにおいて最適密度で播種して、試験化合物の存在下で４日間インキュベートした。続いて、Ａｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（商標）をアッセイ培地に添加して、細胞を６時間インキュベートした後、５４４ｎｍ励起、５９０ｎｍ発光で読み取った。ＥＣ５０値は、Ｓ字形用量応答曲線の当てはめを使用して算出した。
【０３７１】
あるいは、増殖／生存率は、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｉｎｃ．、マディソン、ＷＩ）を使用して、薬物処理の４８時間後に分析した。ＤＭＳＯ処理を、全ての生存率アッセイにおいてコントロールとして使用した。ＩＣ５０値は、ＸＬフィットソフトウェア（ＩＤＢＳ、アラメダ、ＣＡ）を使用して算出した。
【０３７２】
細胞株は、ＡＴＣＣ（アメリカンタイプカルチャーコレクション、マナッサス、ＶＡ）又はＤＳＭＺ（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ、ブラウンシュワイク、ＤＥ）の何れかから得た。細胞は、１０％ウシ胎児血清、１００ユニット／ｍｌ  ペニシリン、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、及び１００ｍｇ／ｍｌ  ストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、グランドアイランド、ＮＹ）で補充したＲＰＭＩ  １６４０培地中で、３７℃で５％ＣＯ２下で培養した。
【０３７３】
実施例８  インビボマウス腫瘍異種移植片有効性
マウス：雌重症複合免疫不全マウス（Ｆｏｘ  Ｃｈａｓｅ  ＳＣＩＤ（登録商標）、C.B-17/IcrHsd、Harlan）又はヌードマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｆａｒｍｓ、Ｈａｒｌａｎ）は、８〜９週齢であり、研究の０日目に１５．１〜２１．４グラムの範囲の体重を有していた。動物に適宜水を供給し（逆浸透法、１ｐｐｍＣｌ）、並びに粗タンパク質１８．０％、粗脂肪５．０％、及び粗線維５．０％で構成されるＮＩＨ  ３１  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ａｎｄ  Ｉｒｒａｄｉａｔｅｄ  Ｌａｂ  Ｄｉｅｔ（登録商標）を供給した。マウスを、１２時間の光サイクルで、２１−２２℃（７０−７２°Ｆ）及び４０−６０％湿度で、静圧式ミクロアイソレーター（static microisolators）における照射ＡＬＰＨＡ−Ｄｒｉ（登録商標）ｂｅｄ−ｏ’ｃｏｂｓ（登録商標）Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｂｅｄｄｉｎｇに収容した。ＰＲＣは、拘束、飼育、手術手順、餌及び液体調節、並びに獣医学的管理に関する実験動物の管理及び使用に関するガイドラインの推奨を特に順守する。ＰＲＣでの動物の管理及び使用プログラムは、実験動物の管理及び使用に関して受け入れられている規格の順守を確保する国際実験動物ケア評価認証協会（ＡＡＡＬＡＣ）により認可されている。
【０３７４】
腫瘍移植：異種移植片は、がん細胞とともに開始された。細胞は、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  グルタミン、１００ユニット／ｍＬ  ペニシリン、１００μｇ／ｍＬ  ストレプトマイシン硫酸塩及び２５μｇ／ｍＬ  ゲンタマイシンで補充したＲＰＭＩ  １６４０培地中で培養した。細胞を、対数増殖中に収集して、細胞株の倍加時間に応じて５ｘ１０６個又は１０ｘ１０６個の細胞／ｍＬの濃度でリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に再懸濁した。腫瘍細胞を右側腹部に皮下移植して、平均サイズが１００〜１５０ｍｍ３の標的範囲に近づくように、腫瘍増殖をモニタリングした。腫瘍移植の２１日後、研究の０日目として、７５−１７２ｍｍ３の範囲の個々の腫瘍体積及び１２０−１２１ｍｍ３の群平均腫瘍体積を有する１０匹のマウスでそれぞれ構成される４つの群にマウスを配置した（付録Ａを参照）。体積は、式：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（ｗ２×ｌ）／２（式中、ｗ＝幅であり、ｌ＝腫瘍のｍｍでの長さである）を使用して算出した。腫瘍重量は、１ｍｇを腫瘍体積１ｍｍ３に等しいと仮定して推定され得る。
【０３７５】
治療剤：エストロゲン受容体モジュレーター化合物及び化学療法剤は通常、乾燥粉末で調製されて、室温で保管されて、光から保護される。薬物用量は、脱イオン水（「ビヒクル」）中の０．５％メチルセルロース：０．２％Ｔｗｅｅｎ  ８０中に毎週調製して、４℃で保管した。化合物の用量は、滅菌生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）でストックのアリコートを希釈することにより、毎日の投薬に関して調製した。全ての用量が、体重２０グラム当たり０．２ｍＬ（１０ｍＬ／ｋｇ）の容量で、定められたｍｇ／ｋｇ投与量を送達するように配合した。
【０３７６】
治療：用量は全て、個々の動物の体重へと増減させ、図の各々で示した経路により供給した。
【０３７７】
エンドポイント：Ｕｌｔｒａ  Ｃａｌ  ＩＶキャリパー（モデル５４  １０  １１１；Ｆｒｅｄ  Ｖ．Ｆｏｗｌｅｒ  Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用して、腫瘍体積（ｍｍ３）＝（長さ×幅２）×０．５の通りに、腫瘍体積を２つの寸法（長さ及び幅）で測定し、Ｅｘｃｅｌ  ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．２（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して分析した。線形混合効果（ＬＭＥ）モデリング手法を使用して、経時的に同じ動物からの腫瘍体積の反復測定を分析した（Pinheiro J等  nlme: linear and nonlinear mixed effects models. R package version 3.1 92. 2009、Tan N等 Clin. Cancer Res. 2011;17(6):1394−1404）。この手法は、反復測定及び研究終了前の動物の任意の非治療関連死に起因した中程度のドロップアウトの両方に対処する。３次回帰スプラインを使用して、各用量モデルでｌｏｇ２腫瘍体積の経時変化に、非線形プロフィールを適合させた。次に、これらの非線形プロフィールを、混合モデル内の用量に関連させた。ビヒクルコントロールのパーセントとしての腫瘍増殖阻害（％  ＴＧＩ）は、下記式：％  ＴＧＩ＝１００×（１−ＡＵＣｄｏｓｅ／ＡＵＣｖｅｈ）を使用して、ビヒクルに関連した１日当たりの各々の用量群に関する近似曲線下面積（ＡＵＣ）のパーセントとして算出された。この式を使用して、１００％のＴＧＩ値は、腫瘍均衡状態を示し、１％を超えるが、１００％未満のＴＧＩ値は、腫瘍増殖遅延を示し、１００％を超えるＴＧＩ値は、腫瘍縮小を示す。動物に関する部分応答（ＰＲ）は、５０％を超えるが、開始腫瘍用量の１００％未満である腫瘍縮小と定義された。完全寛解（ＣＲ）は、研究中の何れかの日に、１００％腫瘍縮小（即ち、測定不可能な腫瘍）と定義された。
【０３７８】
毒性：研究の最初の５日間は毎日、それ以降は週に二度、動物を秤量した。動物の体重は、Ａｄｖｅｎｔｕｒｅｒ  Ｐｒｏ（登録商標）ＡＶ８１２スケール（Ｏｈａｕｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して測定した。体重パーセントの変化は、下記：体重変化（％）＝［（重量ｄａｙ  ｎｅｗ−重量ｄａｙ  ０）／重量ｄａｙ  ０］×１００の通りに算出した。マウスは、任意の有害作用、治療関連副作用の明白な兆候に関しては頻繁に観察され、毒性の臨床的兆候は、観察された場合に記録した。許容される毒性は、１０匹の治療動物間の研究中の２０％未満の群平均体重（ＢＷ）損失及び多くても１回の治療関連（ＴＲ）死として定義される。より大きな毒性をもたらす任意の投薬レジメンは、最大耐量（ＭＴＤ）を上回るとみなされる。死亡は、臨床的兆候及び／又は部検から明らかなように、治療副作用に起因する場合にはＴＲと分類され、あるいは投薬期間中に、又は最終用量の１０日以内に未知の原因に起因する場合もＴＲと分類され得る。死亡が、治療副作用に関連する証拠が存在しない場合には、死亡は、ＮＴＲとして分類される。
【０３７９】
上述の発明は、理解を明確にするために、例示及び例として幾らか詳細に記載してきたが、例示及び例は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。本明細書中に引用する全ての特許及び科学文献の開示は、その全体が出典明示により本明細書に明らかに援用される。本明細書中に記載する例及び実施形態は、単に説明目的であり、当業者に提案される各種修正又は変更は、本出願の精神及び範囲、並びに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきである。
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８−９】
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【図１−２】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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