(57)【要約】  本願は、新規のアミノ置換縮合ピリミジン、その調製のための工程、疾患の治療および／または予防法のための単独または組み合わせのその使用、ならびに疾患の治療および／または予防法のための医薬品、特に心血管障害の治療および／または予防法のための医薬品を製造するためのその使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（I）
【化１】
2017529338.tif 000076
（式中、
Aは、窒素または炭素を表し、
R1は、フェニル、ピリジル、3，3，3−トリフルオロプロパ−1−イル、4，4，4−トリフルオロブタ−1−イルまたは3，3，4，4，4−ペンタフルオロブタ−1−イルを表し、
ここで、フェニルは、フッ素、塩素、（C1−C4）−アルキル、シクロプロピルおよび（C1−C4）−アルコキシからなる群から互いに無関係に選択される1個〜3個の置換基で置換され、
および
ここで、ピリジルは、フッ素、（C1−C4）−アルキル、シクロプロピルおよび（C1−C4）−アルコキシからなる群から互いに無関係に選択される1個または2個の置換基で置換され、
R2は、水素または（C1−C4）−アルキルを表し、
R3は、（C1−C6）−アルキルを表し、
ここで、（C1−C6）−アルキルは、アミノにより置換され、およびフッ素により5回まで置換され、
R4は、（C1−C4）−アルキルを表し、
ここで、（C1−C4）−アルキルは、フッ素により5回まで置換されてもよく、
R5は、（C1−C4）−アルキルを表し、
ここで、（C1−C4）−アルキルは、フッ素により5回まで置換されてもよく、
または
R4およびR5は、これらが結合している前記炭素原子と共に3員〜6員炭素環を形成し、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素、塩素、フッ素または（C1−C4）−アルキルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、前記N−オキシドの塩、および前記N−オキシドと塩の溶媒和物。
【請求項２】
Aは、窒素または炭素を表し、
R1は、フェニルまたはピリジルを表し、
ここで、フェニルは、フッ素およびメチルからなる群から互いに無関係に選択される1個〜3個の置換基で置換され、
および
ここで、ピリジルは、フッ素およびメチルからなる群から互いに無関係に選択される1個または2個の置換基で置換され、
R2は、水素またはメチルを表し、
R3は、
【化２】
2017529338.tif 000077
（式中、
＃＃は、前記窒素原子との結合点を表す。）を表し、
R4は、メチルまたはエチルを表し、
ここで、メチルおよびエチルは、フッ素により3回まで置換されてもよく、
R5は、メチルまたはエチルを表し、
ここで、メチルおよびエチルは、フッ素により3回まで置換されてもよく、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素、塩素、メチルまたはエチルを表す請求項1に記載の式（I）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、前記N−オキシドの塩、および前記N−オキシドと塩の溶媒和物。
【請求項３】
Aは、窒素を表し、
R1は、フェニルまたはピリジルを表し、
ここで、フェニルは、1個〜3個のフッ素置換基で置換され、
および
ここで、ピリジルは、フッ素で置換され、
R2は、水素を表し、
R3は、
【化３】
2017529338.tif 000078
（式中、
＃＃は、前記窒素原子との結合点を表す。）を表し、
R4は、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
R5は、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素、メチルまたはエチルを表す請求項1または2に記載の式（I）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、前記N−オキシドの塩、および前記N−オキシドと塩の溶媒和物。
【請求項４】
Aは、窒素を表し、
R1は、式
【化４】
2017529338.tif 000079
（式中、
＃は、メチレン基との結合点を表し、
および
R9は、水素またはフッ素を表し、
R10は、フッ素を表し、
R11は、水素またはフッ素を表し、
または
3−フルオロピリジン−2−イルを表す。）のフェニル基を表し、
R2は、水素を表し、
R3は、
【化５】
2017529338.tif 000080
（式中、
＃＃は、前記窒素原子との結合点を表す。）を表し、
R4は、メチルを表し、
R5は、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素またはメチルを表す請求項1、2または3に記載の式（I）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、前記N−オキシドの塩、および前記N−オキシドと塩の溶媒和物。
【請求項５】
式（II）
【化６】
2017529338.tif 000081
（式中、R1、R6、R7およびR8は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物が、
任意選択で、適した塩基の存在下、不活性溶媒中で式（III）
【化７】
2017529338.tif 000082
（式中、R4およびR5は、それぞれ、上述の意味を有し、および
T1は、（C1−C4）−アルキルを表す。）
の化合物と反応して、式（IV）
【化８】
2017529338.tif 000083
（式中、R1、R4、R5、R6、R7およびR8は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物を与え、
次いで、この化合物が、亜硝酸イソペンチルおよびヨウ素等価物を用いて、式（V）
【化９】
2017529338.tif 000084
（式中、R1、R4、R5、R6、R7およびR8は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物に変換され、
および、この化合物が、不活性溶媒中で、式（VI）
【化１０】
2017529338.tif 000085
（式中、
R2およびR3は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物を用いて引き続き変換され、
および、式（I）の前記生じる化合物が、任意選択で、前記適切な（i）溶媒および／または（ii）塩基もしくは酸を用いて、その溶媒和物、塩および／または前記塩の溶媒和物に変換され、
および、式（I）の前記生じる化合物が、任意選択で、前記適切な（i）溶媒および／または（ii）塩基もしくは酸を用いて、その溶媒和物、塩および／または前記塩の溶媒和物に変換されることを特徴とする請求項1から4のいずれか一項に記載の式（I）の化合物を調製するための工程。
【請求項６】
疾患の治療および／または予防法のための請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性の障害、動脈硬化症、認知症障害および勃起不全の治療および／または予防法のための医薬品の調製のための請求項1から4のいずれか一項に記載の式（I）の化合物の使用。
【請求項８】
1つまたは複数の不活性で非毒性の薬剤的に適した賦形剤と組み合わせた請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬品。
【請求項９】
有機硝酸塩、NOドナー、cGMP−PDE阻害剤、抗血栓剤、血圧降下剤および脂質代謝調節剤からなる群から選択される別の活性化合物と組み合わせた請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物を含む医薬品。
【請求項１０】
心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性の障害、動脈硬化症、認知症障害および勃起不全の治療および／または予防法のための請求項8または9に記載の医薬品。
【請求項１１】
有効量の少なくとも1つの請求項1から4のいずれか一項に記載の式（I）の化合物、または請求項8から10のいずれか一項に記載の医薬品を使用する、ヒトおよび動物における心不全、狭心症、高血圧、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、動脈硬化症、認知症障害および勃起不全の治療および／または予防法のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、新規のアミノ置換縮合ピリミジン、その調製のための工程、疾患の治療および／または予防法のための単独または組み合わせのその使用、ならびに、疾患の治療および／または予防法のための医薬品、特に心血管障害の治療および／または予防法のための医薬品を製造するためのその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
哺乳類細胞において最も重要な細胞伝達系の1つは、環状グアノシン一リン酸（cGMP）である。内皮から放出され、ホルモンのシグナルおよび機械的シグナルを伝達する一酸化窒素（NO）と共に、NO／cGMP系をなす。グアニル酸シクラーゼは、グアノシン三リン酸（GTP）からのcGMPの生合成を触媒する。これまでに知られているこのファミリーの代表的なものは、構造的特徴またはリガンドのタイプのいずれかにより、ナトリウム利尿ペプチドにより刺激される粒子状グアニル酸シクラーゼと、NOにより刺激される可溶性グアニル酸シクラーゼの2つのグループに分類することができる。可溶性グアニル酸シクラーゼは、2つのサブユニットからなり、調節中枢の一部であるヘテロダイマーあたり1個のヘムを含んでいる可能性が高い。このことは、活性化機構において中心的な重要性を持つ。NOは、ヘムの鉄原子に結合することができるため、酵素の活性を著しく高める。対照的に、無ヘム製剤はNOによって刺激されない。一酸化炭素（CO）もヘム中心の鉄原子に結合することができるが、COによる刺激は、明らかにNOによる刺激よりもずっと少ない。
【０００３】
cGMPの産生、ならびにホスホジエステラーゼ、イオンチャネルおよびプロテインキナーゼに起因する制御により、グアニル酸シクラーゼは、さまざまな生理的過程において重要な役割を果たし、特に、平滑筋細胞の弛緩および増殖、血小板凝集および血小板粘着、神経細胞の信号伝達、ならびに上述の過程の乱れに基づく疾患においても重要な役割を果たす。病態生理的な条件下では、NO／cGMP系が抑制される可能性があり、これは、例えば、高血圧症、血小板活性化、細胞増殖の増大、内皮機能障害、動脈硬化症、狭心症、心不全、心筋梗塞、血栓症、脳卒中および性機能低下につながり得る。
【０００４】
効率が高く、副作用が少ないことが予想されるため、生物におけるcGMPシグナル伝達経路に影響を与えることを目標とする、このような疾患のためのNO非依存的な可能性のある治療は有望なアプローチである。
【０００５】
これまで、可溶性グアニル酸シクラーゼの治療的刺激のほとんどに、その効果がNOに基づいている有機硝酸塩などの化合物が用いられてきた。NOは、生物変換によって産生され、ヘム中心の鉄原子を攻撃することにより可溶性グアニル酸シクラーゼを活性化する。副作用に加えて、耐性発現がこの治療法の重大で不利な点のうちの1つである。
【０００６】
数年前、可溶性グアニル酸シクラーゼを直接、すなわち、NOを事前に放出することなく刺激する物質がいくつか記述されており、例えば、3−（5’−ヒドロキシメチル−2’−フリル）−1−ベンジルインダゾールがある［YC−1；Wuら、Blood 84（1994），4226；Mulschら、Brit．J．Pharmacol．120（1997），681］。もっと最近の可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激物には、BAY 41−2272、BAY 41−8543およびリオシグアト（BAY 63−2521）が含まれる（例えば、Stasch J．−P．ら、Nat．Rev．Drug Disc．2006；5：755−768；Stasch J．−P．ら、ChemMedChem 2009；4：853−865。Stasch J．−P．ら、Circulation 2011；123：2263−2273を参照）。興味深いことに、これらのsGC刺激物の一部、例えば、YC−1またはBAY 41−2272も、直接的なグアニル酸シクラーゼ刺激に加えてPDE−5阻害作用を示す。cGMP経路を最大化するために、cGMPの合成を刺激すると同時に、PDE−5を介した分解を阻害することが薬理学的に望ましい。この二重の原理が薬理学的な点で特に有利である（例えば、Oudoutら、Eur．Urol．2011；60，1020−1026；Albersenら、J Sex Med．2013；10，1268−1277参照）。
【０００７】
本発明の化合物が、3μM以下の最小有効濃度（MEC）のとき、B−2の試験によって組換えグアニル酸シクラーゼレポーター細胞株に対する効果を示し、IC50＜100nMのとき、B−3の試験によってヒトホスホジエステラーゼ−5（PDE5）の阻害を示すとき、二重の原理が本発明の文脈において満たされる。
【０００８】
ホスホジエステラーゼ−5（PDE5）は、cGMPのリン酸エステル結合を切断して、5’−グアノシン一リン酸（5´−GMP）を生成する酵素のうちの1つの名称である。ヒトでは、ホスホジエステラーゼ−5が、陰茎海綿体の平滑筋系および肺動脈で主に生じる。（例えば、シルデナフィル、バルデナフィルまたはタダラフィルを用いて）PDE5を阻害することによってcGMP分解を妨害すると、弛緩シグナル伝達経路のシグナル増加、具体的には陰茎海綿体の血液供給増加および肺血管の低圧がもたらされる。これらは勃起不全および肺動脈高血圧の治療に使用される。PDE5だけでなく、別のcGMP切断ホスホジエステラーゼが存在する（Staschら、Circulation 2011；123，2263−2273）。
【０００９】
可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激物として、国際公開第00／06568号パンフレットおよび国際公開第00／06569号パンフレットには縮合ピラゾール誘導体が開示されており、国際公開第03／095451号パンフレットにはカルバメート置換3−ピリミジニルピラゾロピリジンが開示されている。フェニルアミド置換基を持つ3−ピリミジニルピラゾロピリジンがE．M．Beckerら、BMC Pharmacology 1（13），2001に記載されている。国際公開第2004／009590号パンフレットには、CNS障害の治療のための置換4−アミノピリミジンを持つピラゾロピリジンが記載されている。国際公開第2010／065275号パンフレットおよび国際公開第2011／149921号パンフレットには、置換ピロロ−およびジヒドロピリドピリミジンがsGC活性化剤として開示されている。sGC刺激物として、国際公開第2012／004259号パンフレットには縮合アミノピリミジンが記載されており、国際公開第2012／004258号パンフレット、国際公開第2012／143510号パンフレットおよび国際公開第2012／152629号パンフレットには、縮合ピリミジンおよびトリアジンが記載されている。国際公開第2012／28647号パンフレットには、心血管障害の治療のための各種アザヘテロ環を持つピラゾロピリジンが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１０】
【特許文献１】国際公開第00／06568号パンフレット
【特許文献２】国際公開第00／06569号パンフレット
【特許文献３】国際公開第03／095451号パンフレット
【特許文献４】国際公開第2004／009590号パンフレット
【特許文献５】国際公開第2010／065275号パンフレット
【特許文献６】国際公開第2011／149921号パンフレット
【特許文献７】国際公開第2012／004259号パンフレット
【特許文献８】国際公開第2012／004258号パンフレット
【特許文献９】国際公開第2012／143510号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第2012／152629号パンフレット
【特許文献１１】国際公開第2012／28647号パンフレット
【非特許文献】
【００１１】
【非特許文献１】Wuら著、Blood 84（1994），4226
【非特許文献２】Mulschら著、Brit．J．Pharmacol．120（1997），681
【非特許文献３】Stasch J．−P．ら著、Nat．Rev．Drug Disc．2006；5：755−768
【非特許文献４】Stasch J．−P．ら著、ChemMedChem 2009；4：853−865
【非特許文献５】Stasch J．−P．ら著、Circulation 2011；123：2263−2273
【非特許文献６】Oudoutら著、Eur．Urol．2011；60，1020−1026
【非特許文献７】Albersenら著、J Sex Med．2013；10，1268−1277
【非特許文献８】Staschら著、Circulation 2011；123，2263−2273
【非特許文献９】E．M．Beckerら著、BMC Pharmacology 1（13），2001
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明の目的は、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激物として作用し、可溶性グアニル酸シクラーゼおよびホスホジエステラーゼ−5阻害剤の刺激物としても作用し（二重の原理）、例えば、それらのインビボでの特性、例えば、それらの薬物動態学的および薬力学的特性、それらの溶解度ならびに／あるいはそれらの代謝プロファイルならびに／あるいはそれらの用量−活性の関係に関して、先行技術により既知の化合物と比べて同一のまたは改善された治療プロファイルを有する新規物質を提供することであった。
【００１３】
本発明による化合物は、改善された溶解度と同時に、高い細胞透過性によって特に区別される。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、一般式（I）
【化１】
2017529338.tif 000002
（式中、
Aは、窒素または炭素を表し、
R1は、フェニル、ピリジル、3，3，3−トリフルオロプロパ−1−イル、4，4，4−トリフルオロブタ−1−イルまたは3，3，4，4，4−ペンタフルオロブタ−1−イルを表し、
ここで、フェニルは、フッ素、塩素、（C1−C4）−アルキル、シクロプロピルおよび（C1−C4）−アルコキシからなる群から互いに無関係に選択される1個〜3個の置換基で置換され、
および
ここで、ピリジルは、フッ素、（C1−C4）−アルキル、シクロプロピルおよび（C1−C4）−アルコキシからなる群から互いに無関係に選択される1個または2個の置換基で置換され、
R2は、水素または（C1−C4）−アルキルを表し、
R3は、（C1−C6）−アルキルを表し、
ここで、（C1−C6）−アルキルは、アミノにより置換され、およびフッ素により5回まで置換され、
R4は、（C1−C4）−アルキルを表し、
ここで、（C1−C4）−アルキルは、フッ素により5回まで置換されてもよく、
R5は、（C1−C4）−アルキルを表し、
ここで、（C1−C4）−アルキルは、フッ素により5回まで置換されてもよく、
または
R4およびR5は、これらが結合している炭素原子と共に3員〜6員炭素環を形成し、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素、塩素、フッ素または（C1−C4）−アルキルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物に関する。
【００１５】
本発明による化合物は、式（I）の化合物とその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、以下で指定される式の式（I）により包含される化合物とその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、ならびに式（I）により包含され、以下で指定される化合物が既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でない場合には、式（I）により包含され、作業例として以下で指定される化合物とその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１６】
本発明の文脈において好ましい塩は、本発明の化合物の生理学的に許容される塩である。同様に包含されるのは、それ自体は医薬品用途に適してはいないが、例えば、本発明の化合物の単離または精製に使用できる塩である。
【００１７】
本発明の化合物の生理学的に許容される塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１８】
また、本発明の化合物の生理学的に許容される塩には、例として、かつ好ましくは、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩）およびアンモニアまたは1個〜16個の炭素原子を有する有機アミン（例として、かつ好ましくは、エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、ジメチルアミノエタノール、プロカイン、ジベンジルアミン、N−メチルモルホリン、アルギニン、リシン、エチレンジアミンおよびN−メチルピペリジン）由来のアンモニウム塩の従来の塩基の塩も含まれる。
【００１９】
本発明の文脈における溶媒和物は、固体または液体状態で溶媒分子を伴う配位による錯体を形成する本発明の化合物の形態のものとして記載される。水和物は、配位が水を伴う溶媒和物の特定の形態である。本発明の文脈において好ましい溶媒和物は水和物である。
【００２０】
本発明の化合物は、その構造に応じて、さまざまな立体異性体、すなわち配置異性体の形態で、そうでなければ、適切な場合は、配座異性体（アトロプ異性体の場合を含むエナンチオマーおよび／またはジアステレオマー）として存在してもよい。したがって、本発明は、エナンチオマーおよびジアステレオマーならびにこれらの混合物それぞれを包含する。立体異性的に均質な組成物は、既知の方法でエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーのこのような混合物から単離することができる；この目的のために好ましくは、クロマトグラフィー工程、特にアキラルまたはキラル相のHPLCクロマトグラフィーが用いられる。
【００２１】
本発明の化合物が互変異性体で発生する可能性がある場合、本発明は、すべての互変異性体を包含する。
【００２２】
本発明は、本発明の化合物のすべての適した同位体の変種も包含する。本発明の化合物の同位体の変種は、本明細書において、本発明の化合物内の少なくとも1つの原子が、同じ原子番号ではあるが、原子質量は通常または主として天然に存在する原子質量とは異なる別の原子と交換された化合物を意味すると理解される。本発明の化合物に取り込むことができる同位体の例は、2H（重水素）、3H（三重水素）、13C、14C、15N、17O、18O、32P、33P、33S、34S、35S、36S、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129Iおよび131Iなど、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素の同位体である。本発明の化合物の特定の同位体の変種、特に1つまたは複数の放射性同位体が取り込まれた変種は、例えば、体内における作用機序または活性化合物の分布を調査するのに有益である可能性があるが、その理由は、比較的容易に調製および検出することができるためであり、特に3Hまたは14C同位体で標識した化合物は、この目的に適している。さらに、同位体、例えば重水素の取り込みは、化合物のより大きな代謝安定性の結果、特定の治療上の利益、例えば、体内における半減期の延長、または必要とされる有効な用量の低減につながることがあり、したがって、本発明の化合物のこのような変更は、場合により、本発明の好ましい実施形態となることもできる。本発明の化合物の同位体の変種は、当業者に既知の工程、例えば、以下で説明する手順、および作業例において説明する方法により、それぞれの試薬および／または出発原料の対応する同位体の変更を利用することによって調製することができる。
【００２３】
さらに、本発明は、本発明の化合物のプロドラッグも包含する。この文脈において、用語「プロドラッグ」は、それ自体が生物学的に活性または不活性であってもよいが、体内でのその滞留時間内に（例えば、代謝的または加水分解的に）反応して本発明の化合物を与える化合物を指す。
【００２４】
本発明の文脈において、別段の指定がない限り、置換基は以下の通り定義される：
本発明の文脈におけるアルキルは、特定の数の指定の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルキル基である。例として、かつ好ましくは、以下を挙げることができる：メチル、エチル、n−プロピル、イソプロピル、n−ブチル、イソブチル、1−メチルプロピル、tert−ブチル、n−ペンチル、イソペンチル、1−エチルプロピル、1−メチルブチル、2−メチルブチル、3−メチルブチル、n−ヘキシル、1−メチルペンチル、2−メチルペンチル、3−メチルペンチル、4−メチルペンチル、3，3−ジメチルブチル、1−エチルブチル、2−エチルブチル、1，4−ジメチルペンチル、4，4−ジメチルペンチルおよび1，4，4−トリメチルペンチル。
【００２５】
本発明の文脈におけるアルコキシは、1個から4個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルコキシ基である。例として、かつ好ましくは、以下に言及してもよい：メトキシ、エトキシ、n−プロポキシ、イソプロポキシ、n−ブトキシおよびtert−ブトキシ。
【００２６】
本発明の文脈におけるシクロアルキルまたは炭素環は、それぞれの場合において指定の数の環炭素原子を有する単環式の飽和アルキル基である。例として、かつ好ましくは、以下を挙げることができる：シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチル。
【００２７】
本発明の文脈におけるハロゲンには、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素が含まれる。塩素またはフッ素が好ましい。
【００２８】
R1およびR3が表し得る基の式において、記号＃または＃＃で印をつけた線の端点は、炭素原子またはCH2基を表すのではなく、R1またはR3が結合しているそれぞれの原子との結合の一部である。
【００２９】
本発明の化合物内の基が置換されるとき、基は、別段の指定がない限り、一置換または多置換されてもよい。本発明の文脈において、1回を超えて発生するすべての基は、互いに無関係に定義される。1個または2個の同一のまたは異なる置換基による置換が好ましい。1個の置換基による置換が特に非常に好ましい。
【００３０】
本発明の文脈において、用語「治療」または「を治療する」には、疾患、状態、障害、傷害または健康問題、あるいは、このような状態および／またはこのような状態の症状の発生、経過または進行の阻害、遅延、検査、軽減、減弱、制限、減少、抑制、忌避または治癒が含まれる。本明細書において、用語「治療法」は、用語「治療」と同義であると理解される。
【００３１】
用語「予防（prevention）」、「予防法（prophylaxis）」および「防止（preclusion）」は、本発明の文脈において同義で用いられ、疾患、状態、障害、損傷または健康問題を罹患したり、経験したり、患ったり、または有したりするリスク、あるいは、このような状態および／またはこのような状態の症状の発生または進行のリスクの回避または低減を指す。
【００３２】
疾患、状態、障害、損傷または健康問題の治療または予防は、部分的または完全でもよい。
【００３３】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
Aは、窒素または炭素を表し、
R1は、フェニルまたはピリジルを表し、
ここで、フェニルは、フッ素およびメチルからなる群から互いに無関係に選択される1個〜3個の置換基で置換され、
および
ここで、ピリジルは、フッ素およびメチルからなる群から互いに無関係に選択される1個または2個の置換基で置換され、
R2は、水素またはメチルを表し、
R3は、
【化２】
2017529338.tif 000003
（式中、
＃＃は、窒素原子との結合点を表す。）を表し、
R4は、メチルまたはエチルを表し、
ここで、メチルおよびエチルは、フッ素により3回まで置換されてもよく、
R5は、メチルまたはエチルを表し、
ここで、メチルおよびエチルは、フッ素により3回まで置換されてもよく、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素、塩素、メチルまたはエチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物が好ましい。
【００３４】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
Aは、窒素を表し、
R1は、フェニルまたはピリジルを表し、
ここで、フェニルは、1個〜3個のフッ素置換基で置換され、
および
ここで、ピリジルは、フッ素で置換され、
R2は、水素を表し、
R3は、
【化３】
2017529338.tif 000004
（式中、
＃＃は、窒素原子との結合点を表す。）を表し、
R4は、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
R5は、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素、メチルまたはエチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物が好ましい。
【００３５】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
Aは、窒素を表し、
R1は、式
【化４】
2017529338.tif 000005
（式中、
＃は、メチレン基との結合点を表し、
および
R9は、水素またはフッ素を表し、
R10は、フッ素を表し、
R11は、水素またはフッ素を表し、
または
3−フルオロピリジン−2−イルを表す。）のフェニル基を表し、
R2は、水素を表し、
R3は、
【化５】
2017529338.tif 000006
（式中、
＃＃は、窒素原子との結合点を表す。）を表し、
R4は、メチルを表し、
R5は、メチルまたはトリフルオロメチルを表し、
R6は、水素を表し、
R7は、水素またはフッ素を表し、
R8は、水素またはメチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物が特に好ましい。
【００３６】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
Aは、窒素または炭素を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００３７】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
Aは、炭素を表す。）、の化合物
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００３８】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
Aは、窒素を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も特に好ましい。
【００３９】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R1は、式
【化６】
2017529338.tif 000007
（式中、
＃は、メチレン基との結合点を表し、
および
R9は、水素またはフッ素を表し、
R10は、フッ素を表し、
R11は、水素またはフッ素を表し、
または
3−フルオロピリジン−2−イルを表す。）のフェニル基を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４０】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R1は、式
【化７】
2017529338.tif 000008
（式中、
＃は、メチレン基との結合点を表し、
および
R9は、水素またはフッ素を表し、
R10は、フッ素を表し、
R11は、水素またはフッ素を表す。）のフェニル基を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４１】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R1は、3−フルオロピリジン−2−イルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。本発明の文脈において、式（I）（式中、
R3は、
【化８】
2017529338.tif 000009
（式中、
＃＃は、窒素原子との結合点を表す。）を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４２】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R4は、メチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４３】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R5は、メチルまたはトリフルオロメチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４４】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R5は、メチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４５】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R5は、トリフルオロメチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４６】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R7は、水素またはフッ素を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４７】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R7は、水素を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４８】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R7は、フッ素を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００４９】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R8は、水素またはメチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００５０】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R8は、水素を表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００５１】
本発明の文脈において、式（I）（式中、
R8は、メチルを表す。）の化合物、
ならびに、そのN−オキシド、塩、溶媒和物、N−オキシドの塩、およびN−オキシドと塩の溶媒和物も好ましい。
【００５２】
基のそれぞれの組み合わせまたは好ましい組み合わせにおいて指定されている個々の基の定義はまた、指定されている基のそれぞれの組み合わせとは無関係に、他の組み合わせの基の定義によって所望の通り置き換えられる。
【００５３】
2つ以上の前述の好ましい範囲の組み合わせが特に非常に好ましい。
【００５４】
好ましい、特に好ましい、および特に非常に好ましいと記載された基の定義は、式（I）の化合物、およびそれに対応してすべての中間体に適用される。
【００５５】
さらに本発明は、式（II）
【化９】
2017529338.tif 000010
（式中、R1、R6、R7およびR8は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物が、
任意選択で、適した塩基の存在下、不活性溶媒中で式（III）
【化１０】
2017529338.tif 000011
（式中、R4およびR5は、それぞれ、上述の意味を有し、および
T1は、（C1−C4）−アルキルを表す。）
の化合物と反応して、式（IV）
【化１１】
2017529338.tif 000012
（式中、R1、R4、R5、R6、R7およびR8は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物を与え、
次いで、この化合物が、亜硝酸イソペンチルおよびヨウ素等価物を用いて、式（V）
【化１２】
2017529338.tif 000013
（式中、R1、R4、R5、R6、R7およびR8は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物に変換され、
および、この化合物が、不活性溶媒中で、式（VI）
【化１３】
2017529338.tif 000014
（式中、
R2およびR3は、それぞれ、上述の意味を有する。）の化合物を用いて引き続き変換され、
および、式（I）の生じる化合物が、任意選択で、適切な（i）溶媒および／または（ii）塩基もしくは酸を用いて、その溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換されることを特徴とする本発明による式（I）の化合物を調製するための工程を提供する。
【００５６】
工程ステップ（II）＋（III）→（IV）のための不活性溶媒は、例えば、メタノール、エタノール、n−プロパノール、イソプロパノール、n−ブタノールまたはtert−ブタノールなどのアルコール、ジエチルエーテル、ジオキサン、ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルまたはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル、ベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサンまたは鉱油留分などの炭化水素、あるいは、ジメチルホルムアミド（DMF）、ジメチルスルホキシド（DMSO）、N，N’−ジメチルプロピレン尿素（DMPU）、N−メチルピロリドン（NMP）、ピリジン、アセトニトリル、スルホランなどのその他の溶媒、そうでなければ水である。また、挙げた溶媒の混合物を使用することもできる。tert−ブタノール、メタノールまたはエタノールが好ましい。
【００５７】
工程ステップ（II）＋（III）→（IV）に適した塩基は、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムなどのアルカリ金属水酸化物、炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸セシウムなどのアルカリ金属炭酸塩、重炭酸ナトリウムまたは重炭酸カリウムなどのアルカリ金属重炭酸塩、ナトリウムメトキシドまたはカリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドまたはカリウムエトキシドまたはカリウムtert−ブトキシドなどのアルカリ金属アルコキシド、あるいは、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、1，8−ジアザビシクロ［5．4．0］ウンデカ−7−エン（DBU）または1，5−ジアザビシクロ［4．3．0］ノナ−5−エン（DBN）などの有機アミンである。カリウムtert−ブトキシドまたはナトリウムメトキシドが好ましい。
【００５８】
反応（II）＋（III）→（IV）は、概して、＋20℃〜＋150℃の温度範囲内、好ましくは＋75℃〜＋100℃で、任意選択でマイクロ波中で行う。変換は、大気圧、高圧または減圧（例えば、0．5〜5bar）で行うことができる。通常、反応は大気圧で行う。
【００５９】
変換（IV）→（V）において適したハロゲン源は、例えば、ジヨードメタン、ヨウ化セシウム、ヨウ素およびヨウ化銅（I）の混合物、または臭化銅（II）である。
【００６０】
工程ステップ（IV）→（V）は、ハロゲン源がジヨードメタンの場合、1molの式（IV）の化合物に基づいて、5〜30molの亜硝酸イソペンチルおよび5〜30molのヨウ素等価物のモル比を用いて行う。
【００６１】
工程ステップ（IV）→（V）は、溶媒あり、またはなしで行う。適した溶媒は、反応条件下で不活性なすべての有機溶媒である。好ましい溶媒はジオキサンである。
【００６２】
反応（IV）→（V）は、概して、＋20℃〜＋100℃の温度範囲、好ましくは＋50℃〜＋100℃の範囲内で、任意選択でマイクロ波中で行う。変換は、大気圧、高圧または減圧で行うことができる。
【００６３】
工程ステップ（V）＋（VI）→（I）のための不活性溶媒は、例えば、ジエチルエーテル、ジオキサン、ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン、グリコールジメチルエーテルまたはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル、ベンゼン、キシレン、トルエン、ヘキサン、シクロヘキサンまたは鉱油留分などの炭化水素、あるいは、ジメチルホルムアミド（DMF）、ジメチルスルホキシド（DMSO）、N，N’−ジメチルプロピレン尿素（DMPU）、N−メチルピロリドン（NMP）、ピリジン、アセトニトリルまたはスルホランなどの他の溶媒である。また、挙げた溶媒の混合物を使用することもできる。NMPまたはDMSOが好ましい。
【００６４】
反応（V）＋（VI）→（I）は、概して、＋20℃〜＋200℃、好ましくは＋100℃〜＋200℃の温度範囲内で、好ましくはマイクロ波中で行う。変換は、大気圧、高圧または減圧（例えば、0．5〜5bar）で行うことができる。
【００６５】
記載される調製工程は、以下の合成スキーム（スキーム1およびスキーム2）により、例として説明することができる：
スキーム1
【化１４】
2017529338.tif 000015
［a）：t−BuOH、任意選択でt−BuOK、還流；b）：ジヨードメタン、亜硝酸イソペンチル、ジオキサン、85℃］。
【００６６】
スキーム2
【化１５】
2017529338.tif 000016
［a）：NMP、130℃；マイクロ波］。
【００６７】
式（III）の化合物は、市販されているか、文献により既知か、または文献により既知の工程と同様に調製することができて、
あるいは、
式（III）において、R5がトリフルオロメチルを表し、R4がメチルを表す場合、式（VII）
【化１６】
2017529338.tif 000017
の化合物を不活性溶媒中でメチルマグネシウムハライドと反応させることによって調製することができる。
【００６８】
式（VII）の化合物は文献により既知である（例えば、Journal of Fluorine Chemistry，1991，vol．51，＃3，pp．323−334を参照）。
【００６９】
式（II）の化合物は文献により既知であり（例えば、国際公開第03／095451号パンフレット、実施例6A；国際公開第2013／104703号パンフレット、実施例52A；国際公開第2013／030288号パンフレット、実施例54Aを参照。）、または、以下の合成スキーム（スキーム3）にあるように調製することができる。
【００７０】
スキーム3
【化１７】
2017529338.tif 000018
［a）：ヒドラジン水和物、1，2−エタンジオール；b）：亜硝酸イソペンチル、NaI、THF；c）：Cs2CO3、DMF；d）：CuCN、DMSO、e）：1．NaOMe、MeOH、2．NH4Cl、酢酸］。
【００７１】
式（VIII）の化合物は文献により既知であり［国際公開第2007／041052号パンフレット］、または、文献により既知の工程と同様に調製することができる［国際公開第2013／004785号パンフレットおよび国際公開第2011／149921号パンフレット］。
【００７２】
また、詳細な手順および別の参考文献も、実験の部、出発化合物および中間体の調製の部に記載されている。
【００７３】
本発明による別の化合物を、任意選択で、上述の工程により得られる式（I）の化合物で出発して、個々の置換基の官能基、特にR3の下に列記したものを変換することにより調製することもできる。これらの変換は、当業者に既知の通例の方法によって行い、例えば、求核置換および求電子置換、酸化、還元、水素化、遷移金属触媒カップリング反応、脱離、アルキル化、アミノ化、エステル化、エステル加水分解、エーテル化、エーテル開裂、カルボキサミドの生成などの反応、一時的な保護基の導入および除去が含まれる。
【００７４】
本発明の化合物は、可溶性グアニル酸シクラーゼの強力な刺激物として作用し、有用な薬理特性を有し、例えば、そのインビボでの特性、ならびに／あるいはその薬物動態学的な特性および／または代謝プロファイルに関して改善された治療プロファイルを有する。したがって、これらの化合物は、ヒトおよび動物における疾患の治療および／または予防法に適している。
【００７５】
本発明の化合物は、血管を弛緩させ、血小板凝集を抑制し、また、血圧を低下させ、冠血流を増加させる。これらの効果は、可溶性グアニル酸シクラーゼの直接刺激および細胞内のcGMPの増加によって媒介される。さらに、本発明の化合物は、cGMPレベルを高める物質、例えば、EDRF（内皮由来弛緩因子）、NOドナー、プロトポルフィリンIX、アラキドン酸またはフェニルヒドラジン誘導体の作用を増強する。
【００７６】
本発明の化合物は、心血管、肺、血栓塞栓性および線維性の障害の治療および／または予防法に適している。
【００７７】
したがって、本発明の化合物は、心血管障害、例えば、高血圧（高血圧症）、抵抗性高血圧症、急性および慢性心不全、冠動脈性心疾患、安定および不安定狭心症、末梢および心臓血管障害、不整脈、心房性および心室性不整脈など、および、伝導障害、例えば、I度〜III度の房室ブロック（ABブロックI〜III）、上室性頻脈性不整脈、心房細動、心房粗動、心室細動、心室粗動、心室性頻脈性不整脈、トルサード・ド・ポアンツ頻拍、心房性および心室性期外収縮、AV接合部期外収縮、洞不全症候群、失神、AV結節性リエントリー性頻拍、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、急性冠症候群（ACS）、自己免疫性心障害（心外膜炎、心内膜炎、弁膜炎（valvolitis）、大動脈炎、心筋症）、
心原性ショック、敗血症性ショックおよびアナフィラキシーショックなどのショック、動脈瘤、ボクサー心筋症（心室期外収縮（PVC））などの治療および／または予防法のための医薬品、心筋虚血、心筋梗塞、脳卒中、心肥大、一過性脳虚血発作、妊娠高血圧腎症、炎症性心血管障害、冠状動脈および末梢血管の攣縮などの血栓塞栓性障害および虚血、例えば、肺水腫、脳浮腫、腎性浮腫などの浮腫形成、または、心不全、末梢循環障害、再灌流障害、動脈および静脈血栓、ミクロアルブミン尿、心筋不全、内皮機能障害によって引き起こされる浮腫の治療および／または予防法のための医薬品、例えば、血栓溶解療法、経皮的血管形成術（PTA）、経皮的冠動脈形成術（PTCA）、心臓移植およびパイパス手術の後の再狭窄、および、微小および大血管障害（血管炎）、フィブリノゲンおよび低密度リポタンパク質（LDL）のレベル上昇およびプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター1（PAI−1）の濃度上昇も予防するための医薬品、ならびに勃起不全および女性性機能不全の治療および／または予防法のためでもある医薬品において使用することができる。
【００７８】
本発明の文脈において、用語「心不全」は、心不全の急性型および慢性型の両方を包含し、また、急性非代償性心不全、右心不全、左心不全、両室不全、虚血性心筋症、拡張型心筋症、肥大型心筋症、特発性心筋症、先天性心疾患、心臓弁の異常を伴う心不全、僧帽弁狭窄症、僧帽弁閉鎖不全症、大動脈弁狭窄症、大動脈弁閉鎖不全症、三尖弁狭窄症、三尖弁閉鎖不全症、肺動脈弁狭窄症、肺動脈弁閉鎖不全症、連合弁膜症、心筋の炎症（心筋炎）、慢性心筋炎、急性心筋炎、ウイルス性心筋炎、糖尿病性心不全、アルコール性心筋症、貯留性心障害、拡張期心不全および収縮期心不全、ならびに現存する慢性心不全の悪化（心不全悪化）の急性期など、疾患のより具体的なタイプまたは関連するタイプも包含する。
【００７９】
さらに、本発明の化合物は、動脈硬化症、脂質代謝障害、低リポ蛋白血症、異脂肪血症、高トリグリセリド血症、高脂血症、高コレステロール血症、無ベータリポ蛋白血症（abetelipoproteinemia）、シトステロール血症、黄色腫症、タンジール病、脂肪症、肥満症および複合型高脂血症ならびにメタボリックシンドロームの治療および／または予防法のためにも使用することができる。
【００８０】
さらに、本発明の化合物は、一次性および二次性レイノー現象、微小循環障害、跛行、末梢性および自律神経性ニューロパチー、糖尿病性細小血管症、糖尿病性網膜症、四肢の糖尿病性潰瘍、壊疽、クレスト症候群、紅斑性疾患、爪真菌症、リウマチ障害の治療および／または予防法、ならびに創傷治癒促進のために使用することができる。
【００８１】
さらに、本発明の化合物は、泌尿器系障害、例えば、良性前立腺症候群（BPS）、良性前立腺肥大症（BPH）、良性前立腺腫大（BPE）、膀胱下尿道閉塞（BOO）、下部尿路症候群（猫泌尿器症候群（FUS）を含むLUTS）、神経性過活動膀胱（OAB）および（IC）を含む泌尿生殖系の障害、尿失禁（UI）、例えば、混合性尿失禁、切迫性尿失禁、腹圧性尿失禁または溢流性尿失禁（MUI、UUI、SUI、OUI）、骨盤痛、男性および女性の泌尿生殖系の臓器の良性および悪性障害の治療に適している。
【００８２】
本発明の化合物は、腎障害、特に急性および慢性腎機能不全、ならびに急性および慢性腎不全の治療および／または予防法にも適している。本発明の文脈において、用語「腎機能不全」は、例えば、クレアチニンおよび／または水排泄の異常低下、尿素、窒素、カリウムおよび／またはクレアチニンの血中濃度の異常上昇、腎酵素、例えば、グルタミルシンテターゼの活性変化、尿浸透圧または尿量の変化、ミクロアルブミン尿の増加、マクロアルブミン尿、糸球体および細動脈の損傷、尿細管拡張、高リン血症および／または透析の必要により診断的に特徴づけることができる、腎機能不全の急性および慢性徴候の両方、ならびに腎の低灌流、透析時低血圧、閉塞性尿路疾患、糸球体症、糸球体腎炎、急性糸球体腎炎、糸球体硬化症、尿細管間質障害などの基礎または関連腎障害、原発性および先天性腎疾患、腎炎などの腎症障害、腎移植拒絶反応および免疫複合体誘導性腎障害などの免疫腎疾患、有毒物質により誘発される腎症、
造影剤により誘発される腎症、糖尿病性および非糖尿病性腎症、腎盂腎炎、腎嚢胞、腎硬化症、高血圧性腎硬化症およびネフローゼ症候群を包含する。また、本発明は、腎機能不全の続発症、例えば、肺水腫、心不全、尿毒症、貧血、電解質障害（例えば、高カリウム血症、低ナトリウム血症）ならびに骨および炭水化物代謝における障害の治療および／または予防法のための本発明の化合物の使用も包含する。
【００８３】
さらに、本発明の化合物は、喘息性の障害、肺動脈性肺高血圧症（PAH）、ならびに左心疾患、HIV、鎌状赤血球貧血、血栓塞栓症（CTEPH）、サルコイドーシス、COPDまたは肺線維症関連の肺高血圧症、慢性閉塞性肺疾患（COPD）、急性呼吸窮迫症候群（ARDS）、急性肺傷害（ALI）、α1−アンチトリプシン欠損症（AATD）、肺線維症、肺気腫症（例えば、タバコの煙によって誘発される肺気腫症）および嚢胞性線維症（CF）を含む肺高血圧症（PH）の他の形態の治療および／または予防法にも適している。
【００８４】
また、本発明に記載の化合物は、NO／cGMP系の障害により特徴づけられる中枢神経系の障害を抑制するための活性化合物でもある。これらは、特に、軽度認知障害、加齢性学習障害および記憶障害、加齢性記憶喪失、血管性認知症、頭蓋脳外傷、脳卒中、脳卒中後に発生する認知症（脳卒中後認知症）、外傷後頭蓋脳外傷、一般的な集中力低下、学習障害および記憶障害を伴う小児の集中力低下、アルツハイマー病、レビー小体病、ピック症候群を含む前頭葉の変性を伴う認知症、パーキンソン病、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症を伴う認知症、筋萎縮性側索硬化症（amyolateral sclerosis）（ALS）、ハンチントン病、脱髄、多発性硬化症、視床変性症、クロイツフェルト・ヤコブ認知症、HIV認知症、認知症を伴う統合失調症、またはコルサコフ精神病などの状況／疾患／症候群に特に関連して発生するような認知機能障害後の知覚、集中、学習または記憶の改善に適している。これらは、また、不安、緊張およびうつ、CNS関連性機能低下、および睡眠障害などの中枢神経系の障害の治療および／または予防法、ならびに食物、刺激物質および依存性物質の摂取の病理学的障害の抑制にも適している。
【００８５】
さらに、本発明の化合物は、脳血流の制御にも適しており、片頭痛の抑制に有効な薬剤である。これらは、また、脳卒中、脳虚血および頭蓋脳外傷などの脳梗塞（脳出血）の続発症の予防法および抑制にも適している。本発明の化合物は、同じく、疼痛状態および耳鳴の抑制のためにも使用することができる。
【００８６】
さらに、本発明の化合物は抗炎症作用を有し、したがって、敗血症（SIRS）、多臓器不全（MODS、MOF）、腎臓の炎症性障害、慢性小腸炎症（IBD、クローン病、UC）、膵炎、腹膜炎、リウマチ障害、炎症性皮膚障害および炎症性眼障害の治療および／または予防法のための抗炎症剤として使用することができる。
【００８７】
さらに、本発明の化合物は、自己免疫疾患の治療および／または予防法のためにも使用することができる。
【００８８】
本発明の化合物は、内臓、例えば、肺、心臓、腎臓、骨髄など、特に肝臓の線維性障害の治療および／または予防法ならびに皮膚線維症および眼の線維性障害の治療および／または予防法にも適している。本発明の文脈において、用語「線維性障害（fibrotic disorder）」は、特に以下の用語を含む：肝線維症、肝硬変症、肺線維症、心内膜心筋線維症、腎症、糸球体腎炎、間質性腎線維症、糖尿病の結果生じる線維性障害（fibrotic damage）、骨髄線維症および類似の線維性障害、強皮症、モルフェア、ケロイド、肥厚性瘢痕（外科手術後を含む。）、母斑、糖尿病性網膜症、増殖性硝子体網膜症および結合組織の障害（例えば、サルコイドーシス）。
【００８９】
本発明の化合物は、術後瘢痕、例えば、緑内障手術の結果の術後瘢痕の抑制にも適している。
【００９０】
また、本発明の化合物は、老化および角質化する皮膚に美容的に使用することもできる。
【００９１】
さらに、本発明の化合物は、肝炎、新生物、骨粗鬆症、緑内障および胃不全麻痺の治療および／または予防法に適している。
【００９２】
さらに本発明は、障害、特に前述の障害の治療および／または予防法のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００９３】
さらに本発明は、心不全、狭心症、高血圧症、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害、動脈硬化症、認知症障害および勃起不全の治療および／または予防法のための本発明の化合物の使用を提供する。
【００９４】
さらに本発明は、心不全、狭心症、高血圧症、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害および動脈硬化症の治療および／または予防法のための方法における使用のための本発明の化合物を提供する。
【００９５】
さらに本発明は、障害、特に前述の障害の治療および／または予防法のための医薬品を製造するための本発明の化合物の使用を提供する。
【００９６】
さらに本発明は、心不全、狭心症、高血圧症、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害、動脈硬化症、認知症障害および勃起不全の治療および／または予防法のための医薬品を調製するための本発明の化合物の使用を提供する。
【００９７】
さらに、本発明は、有効量の少なくとも1つの本発明の化合物を用いた、障害、特に前述の障害の治療および／または予防法のための方法を提供する。
【００９８】
さらに本発明は、有効量の少なくとも1つの本発明の化合物を用いた、心不全、狭心症、高血圧症、肺高血圧症、虚血、血管障害、腎機能不全、血栓塞栓性障害、線維性障害および動脈硬化症の治療および／または予防法のための方法を提供する。
【００９９】
本発明の化合物は、単独で、または必要ならば他の活性化合物と組み合わせて使用することができる。さらに本発明は、少なくとも1つの本発明の化合物および1つまたは複数の別の活性化合物、特に、上述の障害の治療および／または予防法のためのものを含む医薬品を提供する。組み合わせに適した活性化合物の好ましい例には、以下が含まれる：
・有機硝酸塩およびNOドナー、例えば、ニトロプルシドナトリウム、ニトログリセリン、一硝酸イソソルビド、硝酸イソソルビド、モルシドミンまたはSIN−1および吸入NO；
・環状グアノシン一リン酸（cGMP）の分解を阻害する化合物、例えば、ホスホジエステラーゼ（PDE）1、2および／または5の阻害剤、特にシルデナフィル、バルデナフィルおよびタダラフィルなどのPDE 5阻害剤；
・抗血栓剤、例として、かつ好ましくは、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤または線維素溶解促進性物質の群からのもの；
・降圧活性化合物、例として、かつ好ましくは、カルシウム拮抗剤、アンジオテンシンAII拮抗剤、ACE阻害剤、エンドセリン拮抗剤、レニン阻害剤、α受容体遮断剤、β受容体遮断剤、鉱質コルチコイド受容体遮断剤および利尿剤の群からのもの；および／または
・脂質代謝を変える活性物質、例として、かつ好ましくは、甲状腺受容体アゴニスト、例として、かつ好ましくは、HMG−CoA還元酵素阻害剤またはスクアレン合成阻害剤などのコレステロール合成阻害剤、ACAT阻害剤、CETP阻害剤、MTP阻害剤、PPAR−α、PPAR−γおよび／またはPPAR−δアゴニスト、コレステロール吸収阻害剤、リパーゼ阻害剤、高分子胆汁酸吸着剤、胆汁酸再吸収阻害剤およびリポタンパク質（a）アンタゴニストの群からのもの。
【０１００】
抗血栓剤は、好ましくは、血小板凝集阻害剤、抗凝固剤または線維素溶解促進性物質の群からの化合物を意味すると理解される。
【０１０１】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、血小板凝集阻害剤、例として、かつ好ましくは、アスピリン、クロピドグレル、チクロピジンまたはジピリダモールと組み合わせて投与される。
【０１０２】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、トロンビン阻害剤、例として、かつ好ましくは、キシメラガトラン、ダビガトラン、メラガトラン、ビバリルジンまたはクレキサンと組み合わせて投与される。
【０１０３】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、GPIIb／IIIaアンタゴニスト、例として、かつ好ましくは、チロフィバンまたはアブシキシマブと組み合わせて投与される。
【０１０４】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、第Xa因子阻害剤、例として、かつ好ましくは、リバーロキサバン（BAY 59−7939）、エドキサバン（DU−176b）、アピキサバン、オタミキサバン、フィデキサバン、ラザキサバン、フォンダパリナックス、イドラパリナックス、PMD−3112、YM−150、KFA−1982、EMD−503982、MCM−17、MLN−1021、DX 9065a、DPC 906、JTV 803、SSR−126512またはSSR−128428と組み合わせて投与される。
【０１０５】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ヘパリンまたは低分子量（LMW）ヘパリン誘導体と組み合わせて投与される。
【０１０６】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ビタミンK拮抗剤、例として、かつ好ましくは、クマリンと組み合わせて投与される。
【０１０７】
血圧降下剤は、好ましくは、カルシウム拮抗剤、アンジオテンシンAII拮抗剤、ACE阻害剤、エンドセリン拮抗剤、レニン阻害剤、α受容体遮断剤、β受容体遮断剤、鉱質コルチコイド受容体遮断剤および利尿剤の群からの化合物を意味すると理解される。
【０１０８】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、カルシウム拮抗剤、例として、かつ好ましくは、ニフェジピン、アムロジピン、ベラパミルまたはジルチアゼムと組み合わせて投与される。
【０１０９】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、α1受容体遮断剤、例として、かつ好ましくは、プラゾシンと組み合わせて投与される。
【０１１０】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、β受容体遮断剤、例として、かつ好ましくは、プロプラノロール、アテノロール、チモロール、ピンドロール、アルプレノロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ブプラノロール、メチプラノロール、ナドロール、メピンドロール、カラザロール（carazalol）、ソタロール、メトプロロール、ベタキソロール、セリプロロール、ビソプロロール、カルテオロール、エスモロール、ラベタロール、カルベジロール、アダプロロール、ランジオロール、ネビボロール、エパノロールまたはブシンドロールと組み合わせて投与される。
【０１１１】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、アンジオテンシンAII拮抗剤（好ましい例は、ロサルタン、カンデサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエンブサルタンである。）と組み合わせて投与される。
【０１１２】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ACE阻害剤、例として、かつ好ましくは、エナラプリル、カプトプリル、リシノプリル、ラミプリル、デラプリル、ホシノプリル、キノプリル（quinopril）、ペリンドプリルまたはトランドプリル（trandopril）と組み合わせて投与される。
【０１１３】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、エンドセリン拮抗剤、例として、かつ好ましくは、ボセンタン、ダルセンタン、アンブリセンタンまたはシタクスセンタンと組み合わせて投与される。
【０１１４】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、レニン阻害剤、例として、かつ好ましくは、アリスキレン、SPP−600またはSPP−800と組み合わせて投与される。
【０１１５】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、鉱質コルチコイド受容体遮断剤、例として、かつ好ましくは、スピロノラクトンまたはエプレレノンと組み合わせて投与される。
【０１１６】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ループ利尿剤、例えば、フロセミド、トラセミド、ブメタニドおよびピレタニドと、カリウム保持性利尿剤、例えば、アミロリドおよびトリアムテレンと、アルドステロン拮抗剤、例えば、スピロノラクトン、カンレノ酸カリウムおよびエプレレノンと、ならびにサイアザイド利尿剤、例えば、ヒドロクロロチアジド、クロルタリドン、キシパミドおよびインダパミドと組み合わせて投与される。
【０１１７】
脂質代謝調節剤（lipid metabolism modifier）は、好ましくは、CETP阻害剤、甲状腺受容体アゴニスト、HMG−CoA還元酵素阻害剤またはスクアレン合成阻害剤などのコレステロール合成阻害剤、ACAT阻害剤、MTP阻害剤、PPAR−α、PPAR−γおよび／またはPPAR−δアゴニスト、コレステロール吸収阻害剤、高分子胆汁酸吸着剤、胆汁酸再吸収阻害剤、リパーゼ阻害剤ならびにリポタンパク質（a）アンタゴニストの群からの化合物を意味すると理解される。
【０１１８】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、CETP阻害剤、例として、かつ好ましくは、ダルセトラピブ、BAY 60−5521、アナセトラピブまたはCETPワクチン（CETi−1）と組み合わせて投与される。
【０１１９】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、甲状腺受容体アゴニスト、例として、かつ好ましくは、D−チロキシン、3，5，3’−トリヨードチロニン（T3）、CGS 23425またはアキシチロム（axitirome）（CGS 26214）と組み合わせて投与される。
【０１２０】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、スタチンのクラスからのHMG−CoA還元酵素阻害剤、例として、かつ好ましくは、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、ロスバスタチンまたはピタバスタチンと組み合わせて投与される。
【０１２１】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、スクアレン合成阻害剤、例として、かつ好ましくは、BMS−188494またはTAK−475と組み合わせて投与される。
【０１２２】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、ACAT阻害剤、例として、かつ好ましくは、アバシミベ、メリナミド、パクチミベ、エフルシミベまたはSMP−797と組み合わせて投与される。
【０１２３】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、MTP阻害剤、例として、かつ好ましくは、インプリタピド、BMS−201038、R−103757またはJTT−130と組み合わせて投与される。
【０１２４】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、PPAR−γアゴニスト、例として、かつ好ましくは、ピオグリタゾンまたはロシグリタゾンと組み合わせて投与される。
【０１２５】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、PPAR−δアゴニスト、例として、かつ好ましくは、GW 501516またはBAY 68−5042と組み合わせて投与される。
【０１２６】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、コレステロール吸収阻害剤、例として、かつ好ましくは、エゼチミブ、チクエシドまたはパマクエシドと組み合わせて投与される。
【０１２７】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物はリパーゼ阻害剤、例として、かつ好ましくは、オルリスタットと組み合わせて投与される。
【０１２８】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、高分子胆汁酸吸着剤、例として、かつ好ましくは、コレスチラミン、コレスチポール、コレソルバム（colesolvam）、コレスタゲル（CholestaGel）またはコレスチミドと組み合わせて投与される。
【０１２９】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、胆汁酸再吸収阻害剤、例として、かつ好ましくは、ASBT（＝IBAT）阻害剤、例えば、AZD−7806、S−8921、AK−105、BARI−1741、SC−435またはSC−635と組み合わせて投与される。
【０１３０】
本発明の好ましい実施形態において、本発明の化合物は、リポタンパク質（a）アンタゴニスト、例として、かつ好ましくは、ゲムカベンカルシウム（CI−1027）またはニコチン酸と組み合わせて投与される。
【０１３１】
さらに本発明は、少なくとも1つの本発明の化合物を、通常、1つまたは複数の不活性で非毒性の薬剤的に適した助剤と共に含む医薬品を提供し、上述の目的のためのその使用を提供する。
【０１３２】
本発明の化合物は、全身的および／または局所的に作用することができる。この目的のために、これらの化合物は適した方法で、例えば、経口、非経口、肺、経鼻、舌下、舌、頬側、直腸、皮膚（dermal）、経皮（transdermal）、結膜または耳の経路により、あるいは植込またはステントとして投与することができる。
【０１３３】
本発明の化合物は、これらの投与経路に適した投与形態で投与することができる。
【０１３４】
経口投与に適した投与形態は、先行技術により作用し、本発明の化合物を迅速に、かつ／または変更された方法で放出し、本発明による化合物を結晶および／または非晶質および／または溶解形態で含むもの、例えば、錠剤（非コーティングあるいは例えば、本発明による化合物の放出を制御する、胃液抵抗性または遅延溶解または不溶性コーティングによるコーティング錠）、口腔で急速に崩壊する錠剤またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥物、カプセル剤（例えば、硬質または軟質ゼラチンカプセル）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤である。
【０１３５】
非経口投与は、再吸収ステップ（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内の経路による。）を避けて、または再吸収（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮的または腹腔内の経路による。）を含めて実現することができる。非経口投与に適した投与形態には、溶液、懸濁液、乳剤、凍結乾燥物または無菌粉末の形態で注入および輸注するための製剤が含まれる。
【０１３６】
他の投与経路については、適した例は、吸入可能な薬物形態（粉末吸入器、ネブライザーを含む。）、点鼻液、溶液またはスプレー、舌、舌下または頬側投与用の錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル、坐剤、耳または眼の製剤、膣用カプセル、水性懸濁液（ローション、振盪合剤）、親油性懸濁液、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、乳剤、ペースト、泡、散布粉末、植込またはステントである。
【０１３７】
経口または非経口投与、特に経口投与が好ましい。
【０１３８】
本発明の化合物は、述べた投与形態に変換することができる。この変換は、それ自体既知の方法で、不活性で非毒性の薬剤的に適した賦形剤と混合することによって行うことができる。これらの賦形剤には、キャリヤー（例えば、微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば、液体のポリエチレングリコール）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレアート）、結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン）、合成および天然の高分子（例えば、アルブミン）、安定剤（例えば、アスコルビン酸などの酸化防止剤）、着色剤（例えば、酸化鉄などの無機顔料）ならびに矯味薬および／または矯臭薬が含まれる。
【０１３９】
一般に、非経口投与の場合、有効な結果を達成するためには、約0．001〜1mg／kg体重、好ましくは約0．01〜0．5mg／kg体重の量を投与するのが有利であることが明らかになっている。経口投与の場合、用量は約0．001〜2mg／kg体重、好ましくは約0．001〜1mg／kg体重である。
【０１４０】
それでも、場合によっては、記載した量から逸脱する必要があることがあり、具体的には体重、投与経路、活性成分に対する個々の応答、製剤の特性および投与を行う時間または間隔に応じる。したがって、場合によっては、前述の最小量より少なくても十分に処置できる可能性がある一方で、他の場合においては、述べた上限を超えなければならない。さらに多い量を投与する場合は、それを1日数回に分けて投与するとよいこともある。
【０１４１】
以下の作業例により本発明を説明する。
【０１４２】
特に記載のない限り、以下の試験および実施例におけるパーセントは重量パーセントであり、部は重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈率および濃度のデータはそれぞれの場合において体積に基づく。
【発明を実施するための形態】
【０１４３】
A．実施例
【表１Ａ】
2017529338.tif 000019
【表１Ｂ】
2017529338.tif 000020
【０１４４】
HPLC法、GCMS法およびLC−MS法：
方法1（LC−MS）：
測定器：Waters ACQUITY SQD UPLC System；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1．8μ、50×1mm；移動相A：1Lの水＋0．25mlの99％強度ギ酸、移動相B：1Lのアセトニトリル＋0．25mlの99％強度ギ酸；勾配：0．0min 90％ A→1．2min 5％ A→2．0min 5％ A；オーブン：50℃；流量：0．40ml／min；UV検出：208〜400nm。
【０１４５】
方法2（LC−MS）：
測定器：Waters ACQUITY SQD UPLC System；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1．8μ、50×1mm；移動相A：1Lの水＋0．25mlの99％強度ギ酸、移動相B：1Lのアセトニトリル＋0．25mlの99％強度ギ酸；勾配：0．0min 95％ A→6．0min 5％ A→7．5min 5％ A；オーブン：50℃；流量：0．35ml／min；UV検出：210〜400nm。
【０１４６】
方法3（LC−MS）：
測定器：Micromass Quattro PremierおよびWaters UPLC Acquity；カラム：Thermo Hypersil GOLD 1．9μ 50×1mm；移動相A：1Lの水＋0．5mlの50％強度ギ酸、移動相B：1Lのアセトニトリル＋0．5mlの50％強度ギ酸；勾配：0．0min 97％ A→0．5min 97％ A→3．2min 5％ A→4．0min 5％ A オーブン：50℃；流量：0．3ml／min；UV検出：210nm。
【０１４７】
方法4（LC−MS）：
MS測定器：Waters（Micromass）Quattro Micro；HPLC装置：Agilent 1100シリーズ；カラム：YMC−Triart C18 3μ 50×3mm；移動相A：1Lの水＋0．01molの炭酸アンモニウム、移動相B：1Lのアセトニトリル；勾配：0．0min 100％ A→2．75min 5％ A→4．5min 5％ A；オーブン：40℃；流量：1．25ml／min；UV検出：210nm。
【０１４８】
方法5（LC−MS）：
MS測定器：Waters（Micromass）QM；HPLC装置：Agilent 1100シリーズ；カラム：Agilent ZORBAX Extend−C18 3．0×50mm 3．5ミクロン；移動相A：1Lの水＋0．01molの炭酸アンモニウム、移動相B：1Lのアセトニトリル；勾配：0．0min 98％ A→0．2min 98％ A→3．0min 5％ A→4．5min 5％ A；オーブン：40℃；流量：1．75ml／min；UV検出：210nm。
【０１４９】
方法6（GC−MS）：
測定器：Micromass GCT、GC6890；カラム：Restek RTX−35、15m×200μm×0．33μm；一定ヘリウム流量：0．88ml／min；オーブン：70℃；入口：250℃；勾配：70℃、30℃／min→310℃（3分間保持）。
【０１５０】
方法7（LC−MS）：
測定器：Agilent MS Quad 6150；HPLC：Agilent 1290；カラム：Waters Acquity UPLC HSS T3 1．8μ 50×2．1mm；移動相A：1Lの水＋0．25mlの99％強度ギ酸、移動相B：1Lのアセトニトリル＋0．25mlの99％強度ギ酸；勾配：0．0min 90％ A→0．3min 90％ A→1．7min 5％ A→3．0min 5％ A オーブン：50℃；流量：1．20ml／min；UV検出：205〜305nm。
【０１５１】
方法8（GC−MS）：
測定器：Thermo Scientific DSQII、Thermo Scientific Trace GC Ultra；カラム：Restek RTX−35MS、15m×200μm×0．33μm；ヘリウムで一定流量：1．20ml／min；オーブン：60℃；入口：220℃；勾配：60℃、30℃／min→300℃（3．33分間保持）。
【０１５２】
方法9（LC−MS）：
MS測定器：Waters SQD；HPLC装置：Waters UPLC；カラム：Zorbax SB−Aq（Agilent）、50mm×2．1mm、1．8μm；移動相A：水＋0．025％ギ酸、移動相B：アセトニトリル（ULC）＋0，025％ギ酸；勾配：0．0min 98％A−0．9min 25％A−1．0min 5％A−1．4min 5％A−1．41min 98％A−1．5min 98％A；オーブン：40℃；流量：0，600ml／min；UV検出：DAD；210nm。
【０１５３】
方法10（分取HPLC）：
MS測定器：Waters、HPLC装置：Waters；カラム：Waters X−Bridge C18、19mm×50mm、5μm、移動相A：水＋0．05％アンモニア、移動相B：アセトニトリル（ULC）および勾配；流量：40ml／min；UV検出：DAD；210〜400nm）。
または：
MS測定器：Waters、HPLC装置：Waters（カラムPhenomenex Luna 5μ C18（2）100A、AXIA Tech。50×21．2mm、移動相A：水＋0．05％ギ酸、移動相B：アセトニトリル（ULC）および勾配；流量：40ml／min；UV検出：DAD；210〜400nm）。
【０１５４】
方法11（LC−MS）：
MS測定器：ThermoFisherScientific LTQ−Orbitrap−XL；HPLC装置タイプ：Agilent 1200SL；カラム：Agilent、POROSHELL 120、3×150mm、SB−C18 2．7μm；移動相A：1Lの水＋0．1％トリフルオロ酢酸；移動相B：1Lのアセトニトリル＋0．1％トリフルオロ酢酸；勾配：0．0min 2％ B→1．5min 2％ B→15．5min 95％ B→18．0min 95％ B；オーブン：40℃；流量：0．75ml／min；UV検出：210nm。
【０１５５】
詳細：
溶離液が添加剤、例えば、トリフルオロ酢酸、ギ酸またはアンモニアを含む上記の方法による分取HPLCによって本発明の化合物を精製する場合、本発明の化合物が十分に塩基性または酸性の官能基を含む場合は、本発明の化合物は塩の形で、例えば、トリフルオロアセタート、ホルマートまたはアンモニウム塩として得ることができる。このような塩は、当業者に既知のさまざまな方法により、対応する遊離塩基または酸に変換することができる。
【０１５６】
さらに、アミジンは、遊離化合物として、あるいは（酢酸が関与する場合、調製に応じて）酢酸塩または酢酸溶媒和物として部分的に存在することができる。
【０１５７】
以下で説明する本発明の合成中間体および作業例の場合、対応する塩基または酸の塩の形態で指定されるあらゆる化合物は概して、それぞれの調製および／または精製工程によって得られたままの未知の厳密な化学量論的組成の塩である。したがって、さらに詳細な指定がない限り、「塩酸」、「トリフルオロアセタート」、「ナトリウム塩」または「x HCl」、「x CF3COOH」、「x Na＋」などの名称および構造式への追加は、このような塩の場合、化学量論的な意味で理解されるべきでなく、その中に存在する塩生成成分に関して、単に記述的な性質を有すると理解されるべきである。
【０１５８】
このことは、それに対応して、合成中間体または作業例またはそれらの塩が、記載されている調製工程および／または精製工程によって、未知の化学量論的組成（これらが定義されたタイプのものである場合。）の溶媒和物、例えば水和物の形態で得られた場合に適用される。
【０１５９】
さらに、本発明による二級アミドは、特にNMR調査において、回転異性体／異性体混合物として存在してもよい。純度の値は概して、LC／MSクロマトグラムの対応するピーク積分に基づくが、加えて、1H NMRスペクトルを利用して求められたものもある。純度が示されていない場合、純度は概してLC／MSクロマトグラムの自動ピーク積分にしたがって100％であるか、または純度は明確に求められていない。
【０１６０】
理論値の％で記載された収率は概して、純度＜100％と示されている場合、純度に合わせて補正されている。溶媒を含むバッチまたは汚染されたバッチにおいて、形式的な収率が「＞100％」になることがある；これらの場合、収率は溶媒または純度に合わせて補正されていない。
【０１６１】
すべての1H NMRスペクトルデータにおいて、化学シフトδはppmで記載されている。
【０１６２】
以下の段落で報告される1H NMRスペクトルにおけるプロトンシグナルの多重度は、それぞれの場合において観察されるシグナルの形態を表しており、さらに高次のどのようなシグナル現象も考慮していない。通常、記載した化学シフトは、問題になっているシグナルの中央を指す。ブロードな多重項の場合、区間が示される。溶媒または水によって不明瞭なシグナルは暫定的に帰属されたか、または記載されていない。（例えば、分子部分の高速回転が原因であるか、またはプロトン交換による）著しくブロードなシグナルも同じく暫定的に帰属されたか（しばしばブロードな多重項またはブロードな一重項と呼ばれる。）、または記載されていない。
【０１６３】
融点および融点範囲は、記載されている場合、補正されていない。
【０１６４】
調製が以下に明確に記載されていないすべての反応物または試薬は一般に利用できる供給源から商業的に購入された。同じく調製が以下で説明されていない、商業的に入手できなかった、または一般に利用できない供給源から入手したすべての他の反応物または試薬については、それらの調製が記述されている発表文献への参照を示す。
出発化合物および中間体：
【０１６５】
実施例1A
5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−アミン
【化１８】
2017529338.tif 000021
58g（340．03mmol）の2−クロロ−5−フルオロ−6−メチルニコチノニトリル（国際公開第2007／041052号パンフレット、実施例U−2、80ページに記載の調製物。）を初めに1，2−エタンジオール（580ml）に入れ、次いで、ヒドラジン水和物（24．81ml）および56．09ml（340．03mmol）のN，N−ジイソプロピルエチルアミンを加えた。混合物を80℃で16時間、次いで、120℃で6時間撹拌した。室温まで冷却した後、水（2．5L）および酢酸エチル（2．5L）を加え、生じる固体を吸引により濾過して取り出した。得られた固体を減圧下で乾燥した。これにより、28．4g（理論値の47％）の目標化合物を得た。
LC−MS（方法4）：Rt＝1．77min
MS（ESIpos）：m／z＝167［M＋H］＋
【０１６６】
実施例2A
5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化１９】
2017529338.tif 000022
実施例1Aの28g（168．5mmol）の5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−アミンを初めに1．32LのTHFに入れ、混合物を0℃まで冷却した。次いで、41．45ml（337．03mmol）の三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体をゆっくりと加えた。反応混合物を−10℃まで冷却した。次いで、166mlのTHF中の25．66g（219．07mmol）の亜硝酸イソペンチルの溶液をゆっくりと加え、引き続き混合物をさらに30分間撹拌した。次いで、反応溶液をその体積の1／3まで濃縮した。次いで、988mlのアセトンを加え、溶液を0℃まで冷却した。412mlのアセトン中の32．84g（219．07mmol）のヨウ化ナトリウムの溶液をこの溶液に滴加し、次いで、混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物を5Lの氷水に注ぎ、それぞれの場合において750mlの酢酸エチルで3回抽出した。合わせた有機相を750mlの飽和塩化ナトリウム水溶液で洗い、乾燥して減圧下で濃縮した。シリカゲル（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル、勾配9：1〜1：1）を用いて未精製の生成物を精製した。これにより、14．90g（理論値の32％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．84min
MS（ESIpos）：m／z＝278［M＋H］＋
【０１６７】
実施例3A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン
【化２０】
2017529338.tif 000023
実施例2Aの2．60g（9．37mmol）の5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジンを初めに35mlのDMFに入れた。次いで、10mlのDMF中の3．67g（11．26mmol）の炭酸セシウムおよび1．94g（9．37mmol）の1−（ブロモメチル）−2，3−ジフルオロベンゼンの溶液を加え、引き続き混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を200mlの水に加え、酢酸エチルで2回抽出した。回収した有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮した。残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、移動相：石油エーテル／酢酸エチル＝10／1）により精製し、生成物分画を濃縮した。分取HPLCによりさらに精製を行った（カラム：Sunfire C18、5μm、250×20mm；移動相：12％水＋85％メタノール＋3％ 1％強度TFA水溶液；流量：25ml／min；温度：40℃；波長：210nm）。これにより、2．67g（理論値の71％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝1．29min
MS（ESIpos）：m／z＝404［M＋H］＋
【０１６８】
実施例3Aと同様に、表1Aに示す例示的な化合物は、記載の反応条件下、DMF中で実施例2Aの5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジンを、1−（ブロモメチル）−2−フルオロベンゼン、2−（ブロモメチル）−1，3，4−トリフルオロベンゼンまたは2−（クロロメチル）−3−フルオロピリジン塩酸塩（1．1〜1．5当量）および炭酸セシウム（1．2〜2当量）と反応させることによって調製した（反応時間：2〜72時間；温度：室温〜60℃）。
【０１６９】
反応混合物の例示的なワークアップ：
方法A：反応混合物を水に加え、次いで、室温で約1時間撹拌した。生成した固体を濾過して取り出し、水で洗い、高真空下で乾燥した。
方法B：あるいは、反応混合物を水に加え、酢酸エチルで抽出した。回収した有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮した。残留物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーにより精製した（移動相：石油エーテル／酢酸エチルまたはジクロロメタン／メタノール）。
方法C：あるいは、反応混合物をアセトニトリルで希釈し、分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAまたは0．05％ギ酸を添加）。
【０１７０】
【表２】
2017529338.tif 000024
【０１７１】
実施例7A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリル
【化２１】
2017529338.tif 000025
実施例3Aの2．47g（6．13mmol）の1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−3−ヨード−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジンおよび0．576g（6．43mmol）のシアン化銅（I）の混合物を初めにフラスコ内の加熱して乾燥しておいた12．1mlの無水DMSOに入れ、混合物を150℃で3時間撹拌した。酢酸エチルを冷却した反応混合物に加え、混合物を半飽和塩化アンモニウム水溶液および濃アンモニア水溶液（3／1）の混合物で3回洗った。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。未精製の生成物をフラッシュクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル勾配：15／1〜10／1；次いで、ジクロロメタン／メタノール：10／1）。これにより、780mgの目標化合物（理論値の42％）を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝1．19min
MS（ESIpos）：m／z＝303［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．65（d，3H），5．87（s，2H），7．10−7．25（m，2H），7．39−7．48（m，1H），8．41（d，1H）．
【０１７２】
表2Aに示す例示的な化合物は、実施例7Aと同様に、記載の反応条件下、DMSO中で適切なヨージドを、シアン化銅（I）（1．1〜1．5当量）と反応させることによって調製した（反応時間：1〜5時間；温度：150℃）。
【０１７３】
反応混合物の例示的なワークアップ：
方法A：冷却後、酢酸エチルを反応混合物に加え、混合物を半飽和塩化アンモニウム水溶液および濃アンモニア水溶液（3／1）の混合物で3回洗った。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、溶媒を減圧下で除去した。未精製の生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル勾配：またはジクロロメタン／メタノール勾配）。
【０１７４】
方法B：あるいは、反応混合物をアセトニトリルで希釈し、分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAまたは0．05％ギ酸を添加）。
【０１７５】
【表３】
2017529338.tif 000026
【０１７６】
実施例11A
1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボイミドアミド
【化２２】
2017529338.tif 000027
実施例7Aの960mg（3．18mmol）の1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボニトリルを初めに9．47mlのメタノールに入れた。メタノール中の0．69ml（3．18mmol）のナトリウムメトキシドを加え、引き続き混合物を室温で1時間撹拌した。次いで、別の10mlのメタノールを加え、引き続き反応混合物を60℃で1時間撹拌した。204mg（3．81mmol）の塩化アンモニウムおよび0．71ml（12．39mmol）の酢酸を加え、反応混合物を還流下、7時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を38mlの1 N水酸化ナトリウム水溶液と共に室温で1時間撹拌した。次いで、沈殿物を濾過して取り出し、水で洗った。これにより、1．0gの目標化合物（理論値の90％、純度90％）を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．68min
MS（ESIpos）：m／z＝320［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝2．60（d，3H），5．77（s，2H），6．62（br．s，3H），6．91−6．98（m，1H），7．11−7．20（m，1H），7．34−7．44（m，1H），8．29（d，1H）．
【０１７７】
表3Aに示す例示的な化合物は、実施例11Aと同様に、記載の反応条件下、メタノール中で適切なニトリルを、ナトリウムメトキシド（1．0〜1．2当量）と、続いて塩化アンモニウム（1．2〜1．5当量）および酢酸（3．5〜5当量）と反応させることによって調製した（塩化アンモニウムおよび酢酸の添加後の反応時間：5〜24時間；温度：還流）。
【０１７８】
反応混合物の例示的なワークアップ：
溶媒を蒸発させ、残留物を1 N水酸化ナトリウム水溶液と共に室温で0．5〜2時間撹拌した。次いで、沈殿物を濾過して取り出し、水で洗い、続いて乾燥した。
得られる目標化合物は、適切な場合は部分的に、酢酸塩または酢酸溶媒和物として存在してもよい。
【０１７９】
【表４】
2017529338.tif 000028
【０１８０】
実施例15A
5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボイミドアミドアセタート
【化２３】
2017529338.tif 000029
化合物の調製は、国際公開第2013／004785号パンフレット、実施例14A、p．69−70に記載されている。
【０１８１】
実施例16A
6−クロロ−1−（2−フルオロベンジル）−1H−インダゾール−3−カルボイミドアミドアセタート
【化２４】
2017529338.tif 000030
化合物の調製は、国際公開第2013／104598号パンフレット、実施例54A、p．97−98に記載されている。
【０１８２】
実施例17A
4−アミノ−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化２５】
2017529338.tif 000031
実施例11Aの2．34g（6．67mmol；純度90％）の1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボイミドアミドを初めに50．5mlのtert−ブタノールに入れた。次いで、1．33g（8．00mmol）のメチル3，3−ジシアノピバラートを加え、引き続き混合物を還流下、6時間撹拌した。別の8mlのtert−ブタノールを加え、次いで、混合物を還流下、一晩加熱した。室温まで冷却した後、水を加え、反応混合物を室温で30分間撹拌した。生成した沈殿物を濾過して取り出し、水で洗った。固体を高真空下で乾燥した。これにより、3．25g（理論値の99％；純度：92％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝1．03min
MS（ESIpos）：m／z＝454［M＋H］＋
【０１８３】
表4Aに示す例示的な化合物は、実施例17Aと同様に、記載の反応条件下、tert−ブタノール中で適切なカルボイミドアミド（アミジン）を、メチル3，3−ジシアノピバラート（1．1〜1．5当量）と反応させることによって調製した［0．2〜1．4当量のカリウムtert−ブトキシドを、酢酸塩または酢酸溶媒和物として存在するアミジンに加えた。］（反応時間：4〜24時間）。
【０１８４】
反応混合物の例示的なワークアップ：
水を反応混合物に加え、混合物を室温で30分間撹拌した。生成した沈殿物を濾過して取り出し、水で洗った。
【０１８５】
【表５Ａ】
2017529338.tif 000032
【表５Ｂ】
2017529338.tif 000033
【表５Ｃ】
2017529338.tif 000034
【０１８６】
実施例23A
メチル3，3−ジシアノ−2−（トリフルオロメチル）アクリレート
【化２６】
2017529338.tif 000035
この化合物の合成は、Journal of Fluorine Chemistry 1991，vol．51，3，p．323−334に記載されている。
【０１８７】
実施例24A
メチル2−（ジシアノメチル）−3，3，3−トリフルオロ−2−メチルプロパノアート
【化２７】
2017529338.tif 000036
3．00g（14．70mmol）の実施例23Aをテトラヒドロフラン（30ml）に溶解し、溶液を0℃まで冷却した。次いで、7．35ml（22．05mmol）のメチルマグネシウムクロリド（THF中で3M）を、温度が5℃を超えないように滴加した。添加し終えた後、混合物をさらに10分間撹拌した。次いで、1 N塩酸水溶液を混合物に加え、続いて混合物を酢酸エチルで抽出した。相を分離し、水性相を酢酸エチルでさらに2回抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過して濃縮した。次いで、未精製の生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン、次いで、シクロヘキサン：酢酸エチル9：1（v：v））。濃縮して、3．24g（理論値の63％）の表題化合物を得た。
1H−NMR（400MHz，CDCl3）：δ［ppm］＝1．81（s，3H），3．95（s，3H），4．48（s，1H）．
【０１８８】
実施例25A
rac−4−アミノ−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化２８】
2017529338.tif 000037
実施例15Aの23．0g（66．02mmol）の5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−カルボイミドアミドアセタートを初めにtert−ブタノール（400ml）に入れ、13．43g（119．68mmol）のカリウムtert−ブトキシドを加えた。続いて、tert−ブタノール（100ml）中の実施例24Aの21．08g（95．75mmol）のメチル2−（ジシアノメチル）−3，3，3−トリフルオロ−2−メチルプロパノアートを加え、混合物を還流下、一晩加熱した。室温まで冷却した後、水を加え、反応混合物を室温でさらに30分間撹拌した。生成した沈殿物を濾過して取り出し、水および少量のジエチルエーテルで洗った。固体を高真空下で乾燥した。これにより、16．1gの表題化合物（理論値の51％）を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．95min；
MS（ESIpos）：m／z＝477［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．72（s，3H），5．96（s，2H），7．10（br．s，2H），7．42−7．48（m，1H），7．75−7．80（m，1H），8．27（d，1H），8．68（dd，1H），8．86（dd，1H），11．60（br．s，1H）．
【０１８９】
表5Aに示す例示的な化合物は、実施例25Aと同様に、記載の反応条件下、tert−ブタノール中で適切なカルボイミドアミド（アミジン）を、メチル2−（ジシアノメチル）−3，3，3−トリフルオロ−2−メチルプロパノアート（1．1〜1．5当量）と反応させることによって調製した［0．2〜1．4当量のカリウムtert−ブトキシドを、酢酸塩または酢酸溶媒和物として存在するアミジンに加えた。］（反応時間：0．5〜24時間）。
あるいは、反応はマイクロ波中で行うことができる［0．5〜10時間、100℃］
【０１９０】
反応混合物の例示的なワークアップ：
水を加え、反応混合物を室温で30分間撹拌した。生成した沈殿物を濾過して取り出し、水で洗った。
【０１９１】
【表６Ａ】
2017529338.tif 000038
【表６Ｂ】
2017529338.tif 000039
【０１９２】
実施例30A
2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化２９】
2017529338.tif 000040
実施例17Aの3．25g（6．61mmol；純度92％）の4−アミノ−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンを初めに64mlのジオキサンに入れ、4．42ml（33．04mmol）の亜硝酸イソペンチルおよび2．66ml（33．04mmol）のジヨードメタンを加え、次いで、混合物を85℃で3時間加熱した。冷却後、混合物を減圧下で濃縮し、残留物をシリカゲルでクロマトグラフにかけた（移動相：ジクロロメタン／メタノール勾配）。減圧下で溶媒を除去し、2．32g（理論値の51％、純度82％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝1．34min
MS（ESIpos）：m／z＝565［M＋H］＋
【０１９３】
表6Aに示す例示的な化合物は、実施例30Aと同様に、記載の反応条件下、ジオキサン中で適切なアニリンを、ジヨードメタン（3〜18当量）および亜硝酸イソペンチル（3〜10当量）と反応させることによって調製した（温度：85℃；反応時間：2〜10時間）。
【０１９４】
反応混合物の例示的なワークアップ：
反応混合物を濃縮し［適切な場合、水と有機溶媒の間で分配させ、次いで濃縮した。］、残留物をシリカゲルでクロマトグラフにかけた（移動相：ジクロロメタン／メタノールまたはシクロヘキサン／酢酸エチル勾配］。任意選択で、分取HPLCによりさらに精製を行った［カラム：Sunfire C18、5μM、100×30mm；移動相：水／アセトニトリル＋0．2％強度ギ酸］。
【０１９５】
【表７Ａ】
2017529338.tif 000041
【表７Ｂ】
2017529338.tif 000042
【表７Ｃ】
2017529338.tif 000043
【０１９６】
実施例36A
rac−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−4−ヨード−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化３０】
2017529338.tif 000044
798μl（5．93mmol）の亜硝酸イソペンチルおよび286μl（3．56mmol）のジヨードメタンを、15mlのジオキサン中の実施例25Aの565mg（1．19mmol）のrac−4−アミノ−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を85℃まで4時間加熱した。冷却後、混合物を減圧下で濃縮し、残留物をジクロロメタンに取り、珪藻土を加え、次いで、混合物を減圧下で濃縮した。次いで、珪藻土に吸着させた未精製の化合物をカラムクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、移動相：シクロヘキサン／酢酸エチル勾配）。濃縮して、297mg（理論値の42％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝1．19min；
MS（ESIpos）：m／z＝588［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．81（s，3H），6．04（s，2H），7．43−7．47（m，1H），7．77−7．82（m，1H），8．26（d，1H），8．47（dd，1H），8．76（dd，1H），12．41（br．s，1H）．
【０１９７】
表7Aに示す例示的な化合物は、実施例36Aと同様に、記載の反応条件下、ジオキサン中で適切なアニリンを、ジヨードメタン（4〜18当量）および亜硝酸イソペンチル（4〜12当量）と反応させることによって調製した（温度：85℃；反応時間：2〜10時間）。
【０１９８】
反応混合物の例示的なワークアップ：
反応混合物を濃縮し、残留物をシリカゲルでクロマトグラフにかけた（移動相：ジクロロメタン／メタノール勾配）。任意選択で、分取HPLCによりさらに精製を行った［カラム：Kinetex C18、5μM、100×300mm；移動相：水／アセトニトリル35：65］。
【０１９９】
【表８Ａ】
2017529338.tif 000045
【表８Ｂ】
2017529338.tif 000046
【０２００】
実施例41A
2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパノニトリル
【化３１】
2017529338.tif 000047
8．75g（178．6mmol）のシアン化ナトリウムを初めにメタノール中の132mlの2Nアンモニア溶液に入れた。15．0g（159．5mmol）の1，3−ジフルオロアセトンおよび9．55g（178．6mmol）の塩化アンモニウムを室温で加えた。懸濁液を70℃の油浴温度で2時間撹拌した。300mlのジエチルエーテルを冷却した反応混合物に加え、混合物を10分間撹拌し、固体を濾過して取り出した。濾液を減圧下で濃縮した（50℃、70mbar）。これにより、19．2g（理論値の100％）の目標化合物を得た。生成物は、さらに精製することなく、さらに反応させた。
GC−MS（方法8）：Rt＝1．78min
MS（ESpos）：m／z＝121（M＋H）＋
【０２０１】
実施例42A
ベンジル（2−シアノ−1，3−ジフルオロプロパン−2−イル）カルバメート
【化３２】
2017529338.tif 000048
実施例41Aの5．0g（41．6mmol）の2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパノニトリルを初めに14．5ml（83．3mmol）のN，N−ジイソプロピルエチルアミンに入れた。10．65g（62．5mmol）のベンジルクロロホルマートを室温でゆっくりと滴加し、混合物を室温で3日間撹拌した。反応混合物を25mlのジクロロメタンで希釈し、0℃で、225mlのジクロロメタン中の12．9g（124．9mmol）のN−（2−アミノエチル）エタン−1，2−ジアミンの溶液に滴加し、混合物を10分間撹拌した。次いで、200mlの飽和塩化アンモニウム溶液を室温で滴加した。相を分離し、水性相をジクロロメタンで3回抽出した。合わせた有機相を濃縮した。次いで、未精製の生成物をシリカゲル中でクロマトグラフにかけた（移動相：シクロヘキサン：酢酸エチル勾配）。これにより、4．40g（理論値の42％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．92min
MS（ESpos）：m／z＝255（M＋H）＋
【０２０２】
実施例43A
ベンジル［1−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−2−イル］カルバメート
【化３３】
2017529338.tif 000049
室温で、実施例42Aの5．00g（16．32mmol）のベンジル［1−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−2−イル］カルバメートを初めに80mlの無水エタノールに入れた。3．09g（81．62mmol）の水素化ホウ素ナトリウムを室温で加え、混合物を室温で2時間撹拌した。氷で冷却しながら、250mlの飽和塩化アンモニウム溶液を非常にゆっくりと滴加した。次いで、pHが4になるまで1 N塩酸水溶液を加えた（約100ml）。次いで、反応混合物を飽和塩化ナトリウム水溶液で飽和させ、酢酸エチルで6回抽出した。合わせた有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で1回洗い、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、濃縮した。出発化合物を−18℃で保管した。これにより、4．16g（理論値の83％；純度84％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法5）：Rt＝1．99min
MS（ESpos）：m／z＝259（M＋H）＋
【０２０３】
実施例44A
3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミン
【化３４】
2017529338.tif 000050
実施例43Aの4．16g（13．53mmol）のベンジル［1−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−2−イル］カルバメートを初めに12mlの1−メチル−2−ピロリドンに入れ、216mg（0．20mmol）の活性炭上の10％パラジウムをアルゴン下で加えた。反応混合物を室温、標準圧力で一晩水素化した。反応混合物をCeliteで濾過し、次いで、フィルターを2．5mlの1−メチル−2−ピロリドンで洗った。合わせた溶液を次の反応に直接用いた。
1．07mol／l（133mg／ml）の濃度の目標化合物が得られた。
【０２０４】
作業例：
実施例1
4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化３５】
2017529338.tif 000051
1−メチル−2−ピロリドン（NMP）中の実施例44Aの144mg（1．16mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例30Aの200mg（0．29mmol；純度82％）の2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を0．5mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で3．5時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、22mg（理論値の12％；純度92％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．82min
MS（ESIpos）：m／z＝561［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．36（s，6H），1．84（br．s，2H），2．62（d，3H），3．73（d，2H），4．18−4．48（m，4H），5．82（s，2H），6．49（br．s，1H），6．99−7．06（m，1H），7．11−7．20（m，1H），7．34−7．43（m，1H），8．55（d，1H），11．08（br．s，1H）．
【０２０５】
実施例2
4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化３６】
2017529338.tif 000052
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの273mg（2．20mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、300mg（0．55mmol）の2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を2．7mlの1−メチル−2−ピロリドンで希釈した。混合物を130℃で7時間撹拌した。反応溶液を分取HPLCにより直接精製した（RP18カラム、移動相：メタノール／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。分取HPLCによりさらに精製を行った［Kinetex C18、5μm、100×21．2mm；移動相：水／アセトニトリル／水中の1％ギ酸＝60／35／5、アイソクラチック］。これにより、40mg（理論値の12％；純度86％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法7）：Rt＝1．06min
MS（ESIpos）：m／z＝543［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．38（s，6H），2．62（d，3H），3．76（d，2H），4．21−4．31（m，1H），4．36（d，2H），4．47（d，1H），5．78（s，2H），6．56（t，1H），7．11−7．27（m，3H），7．32−7．40（m，1H），8．53（d，1H），11．07（s，1H）．
【０２０６】
実施例3
4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化３７】
2017529338.tif 000053
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの256mg（2．06mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例32Aの300mg（0．51mmol）の2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を2．5mlの1−メチル−2−ピロリドンで希釈した。混合物を130℃で4時間撹拌した。反応溶液を分取HPLCにより直接精製した（RP18カラム、移動相：メタノール／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、20mg（理論値の6％；純度86％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法5）：Rt＝2．55min
MS（ESIpos）：m／z＝579［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．37（s，6H），1．85（br．s．，2H），2．63（d，3H），3．73（d，2H），4．19（d，1H），4．31（d，2H），4．43（d，1H），5．80（s，2H），6．55（t，1H），7．18（ddt，1H），7．54（ddt，1H），8．52（d，1H），11．05（s，1H）．
【０２０７】
実施例4
4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化３８】
2017529338.tif 000054
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの169mg（1．36mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例33Aの200mg（0．34mmol）の2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を0．4mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で5時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、19mg（理論値の10％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．72min
MS（ESIpos）：m／z＝544［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．37（s，6H），1．83（br．s，2H），2．60（d，3H），3．75（d，2H），4．17−4．47（m，4H），5．91（s，2H），6．51（t，1H），7．40−7．47（m，1H），7．72−7．80（m，1H），8．28（d，1H），8．53（d，1H），11．02（br．s，1H）．
【０２０８】
実施例5
4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化３９】
2017529338.tif 000055
1−メチル−2−ピロリドン（NMP）中の実施例44Aの348mg（2．80mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例34Aの450mg（0．70mmol；純度83％）の2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を1．2mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で4時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、43mg（理論値の12％；純度97％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．66min
MS（ESIpos）：m／z＝530［M＋H］＋
1H−NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．39（s，6H），1．85（br．s，2H），3．76（d，2H），4．20−4．46（m，4H），5．96（s，2H），6．53（t，1H），7．40−7．46（m，1H），7．73−7．80（m，1H），8．25−9．29（m，1H），8．63−8．69（m，2H），11．05（br．s，1H）．
【０２０９】
実施例6
rac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化４０】
2017529338.tif 000056
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの141mg（1．14mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例39Aの200mg（0．29mmol；純度88％）のrac−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を0．4mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で4．5時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、57mg（理論値の31％；純度95％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．91min
MS（ESIpos）：m／z＝615［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．66（s，3H），1．87（br．s，2H），2．61（d，3H），3．59−3．68（m，1H），3．73−3．84（m，1H），4．21（d，1H），4．28−4．36（m，2H），4．40−4．47（m，1H），5．83（s，2H），6．24（br．s，1H），6．97−7．05（m，1H），7．09−7．22（m，1H），7．32−7．44（m，1H），8．51（d，1H），11．69（br．s，1H）．
【０２１０】
実施例7
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーA）
【化４１】
2017529338.tif 000057
50mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例6）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralcel（登録商標）OX−H、5μm、250×20mm、移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール＋0．2％ジエチルアミン、流量15ml／min；40℃、検出：220nm］。生成物分画をドライアイス上に集め、蒸発により濃縮し、次いで、凍結乾燥した。
エナンチオマーA：14mg（99％純度、99％ee）
Rt＝5．36min［Daicel Chiralcel（登録商標）OX−H、5μm、250×4．6mm；移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；40℃；検出：220nm］。
【０２１１】
実施例8
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーB）
【化４２】
2017529338.tif 000058
50mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［1−（2，3−ジフルオロベンジル）−5−フルオロ−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例6）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralcel（登録商標）OX−H、5μm、250×20mm、移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール＋0．2％ジエチルアミン、流量15ml／min；40℃、検出：220nm］。生成物分画をドライアイス上に集め、蒸発により濃縮し、次いで、凍結乾燥した。
エナンチオマーB：16mg（99％純度、99％ee）
Rt＝8．31min［Daicel Chiralcel（登録商標）OX−H、5μm、250×4．6mm；移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；40℃；検出：220nm］。
【０２１２】
実施例9
rac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化４３】
2017529338.tif 000059
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの165mg（1．33mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例37Aの200mg（0．33mmol）のrac−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を1．5mlの1−メチル−2−ピロリドンで希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で5時間撹拌した。反応溶液を分取HPLCにより直接精製した（RP18カラム、移動相：メタノール／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画をメタノールから分離し、ジクロロメタン／メタノール（10／1）の混合物で繰り返し抽出した。合わせた有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および塩化ナトリウムで洗い、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。残留物を再び分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：メタノール／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を濃縮した。これにより、37mg（理論値の16％；純度85％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法7）：Rt＝1．11min
MS（ESIpos）：m／z＝597［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．75（s，3H），1．95（br．s，2H），2．63（d，3H），3．66（dd，1H），3．86（dd，1H），4．22（d，1H），4．30−4．36（m，2H），4．44（dd，1H），5．80（s，2H），6．52（t，1H），7．09−7．27（m，3H），7．32−7．41（m，1H），8．50（d，1H），11．72（br．s，1H）．
【０２１３】
実施例10
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーA）
【化４４】
2017529338.tif 000060
36mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例9）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×20mm、移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール、流量15ml／min；35℃、検出：220nm］。
エナンチオマーA：7mg（＞99％純度、＞99％ee）
Rt＝4．15min［Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：70％イソヘキサン、30％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；30℃；検出：270nm］。
【０２１４】
実施例11
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーB）
【化４５】
2017529338.tif 000061
36mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−1−（2−フルオロベンジル）−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例9）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×20mm、移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール、流量15ml／min；35℃、検出：220nm］。
エナンチオマーB：11mg（95％純度、＞99％ee）
Rt＝5．60min［Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：70％イソヘキサン、30％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；30℃；検出：270nm］。
【０２１５】
実施例12
rac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化４６】
2017529338.tif 000062
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの156mg（1．26mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例38Aの200mg（0．31mmol）のrac−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−4−ヨード−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を1．5mlの1−メチル−2−ピロリドンで希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で5時間撹拌した。反応溶液を分取HPLCにより直接精製した（RP18カラム、移動相：メタノール／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を濃縮し、ジクロロメタン／メタノール（10／1）の混合物で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および塩化ナトリウムで洗い、硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、84mg（理論値の35％；純度82％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．86min
MS（ESIpos）：m／z＝633［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．74（s，3H），1．86（br．s，2H），2．64（d，3H），3．63（dd，1H），3．83（dd，1H），4．20（d，1H），4．27−4．35（m，2H），4．42（dd，1H），5．82（s，2H），6．53（t，1H），7．19（ddt，1H），7．54（ddt，1H），8．48（d，1H），11．71（br．s，1H）．
【０２１６】
実施例13
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーA）
【化４７】
2017529338.tif 000063
84mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例12）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×20mm、移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール、流量15ml／min；35℃、検出：220nm］。
エナンチオマーA：18mg（＞99％純度、＞99％ee）
Rt＝4．27min［Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：70％イソヘキサン、30％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；30℃；検出：270nm］。
【０２１７】
実施例14
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーB）
【化４８】
2017529338.tif 000064
84mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［5−フルオロ−6−メチル−1−（2，3，6−トリフルオロベンジル）−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル］−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例12）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×20mm、移動相：80％イソヘキサン、20％エタノール、流量15ml／min；35℃、検出：220nm］。
エナンチオマーB：19mg（＞99％純度、約98％ee）
Rt＝4．99min［Daicel Chiralcel（登録商標）OZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：70％イソヘキサン、30％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；30℃；検出：270nm］。
【０２１８】
実施例15
rac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化４９】
2017529338.tif 000065
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの132mg（1．06mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例40Aの200mg（0．27mmol；純度80％）のrac−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−4−ヨード−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を0．4mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で4．5時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。残留物を厚層クロマトグラフィーにより再精製した（移動相：ジクロロメタン／メタノール中の2Nアンモニア＝10／1）。これにより、37mg（理論値の23％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．81min
MS（ESIpos）：m／z＝598［M＋H］＋
1H−NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．73（s，3H），1．88（br．s，2H），2．61（d，3H），3．63−3．70（m，1H），3．82−3．88（m，1H），4．22（d，1H），4．30−4．36（m，2H），4．40−4．46（m，1H），5．94（s，2H），6．49（t，1H），7．40−7．46（m，1H），7．73−7．79（m，1H），8．28（d，1H），8．50（d，1H），11．68（br．s，1H）．
【０２１９】
実施例16
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーA）
【化５０】
2017529338.tif 000066
32mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例15）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×30mm、移動相：70％イソヘキサン、30％エタノール＋0．2％ジエチルアミン、流量30ml／min；40℃、検出：220nm］。生成物分画をドライアイス上に集め、蒸発により濃縮し、次いで、凍結乾燥した。
エナンチオマーA：14mg（99％純度、99％ee）
Rt＝3．97min［Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：30％イソヘキサン、70％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；40℃；検出：220nm］。
【０２２０】
実施例17
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーB）
【化５１】
2017529338.tif 000067
32mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−6−メチル−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例15）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×30mm、移動相：70％イソヘキサン、30％エタノール＋0．2％ジエチルアミン、流量30ml／min；40℃、検出：220nm］。生成物分画をドライアイス上に集め、蒸発により濃縮し、次いで、凍結乾燥した。
エナンチオマーB：15mg（95％純度、98％ee）
Rt＝6．33min［Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：30％イソヘキサン、70％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；40℃；検出：220nm］。
【０２２１】
実施例18
rac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン
【化５２】
2017529338.tif 000068
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの148mg（1．20mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例36Aの200mg（0．34mmol）のrac−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−4−ヨード−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を0．4mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で4．5時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。生成物分画を蒸発により濃縮した。得られた残留物をジクロロメタンおよび少量のメタノールに取り、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で2回洗った。合わせた水性相をジクロロメタンで2回抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥して濾過し、蒸発により濃縮した。これにより、49mg（理論値の25％；純度約92％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．77min
MS（ESIpos）：m／z＝584［M＋H］＋
1H−NMR（500MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．74（s，3H），1．89（br．s，2H），3．64−3．71（m，1H），3．81−3．88（m，1H），4．22（d，1H），4．30−4．36（m，2H），4．40−4．46（m，1H），5．98（s，2H），6．52（t，1H），7．40−7．46（m，1H），7．73−7．79（m，1H），8．26（d，1H），8．59−8．63（m，1H），8．68−8．71（m，1H），11．70（br．s，1H）．
【０２２２】
実施例19
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーA）
【化５３】
2017529338.tif 000069
36mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例18）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×30mm、移動相：40％イソヘキサン、60％エタノール＋0．2％ジエチルアミン、流量30ml／min；40℃、検出：220nm］。生成物分画をドライアイス上に集め、蒸発により濃縮し、次いで、凍結乾燥した。
エナンチオマーA：13mg（99％純度、99％ee）
Rt＝4．05min［Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：30％イソヘキサン、70％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；40℃；検出：220nm］。
【０２２３】
実施例20
ent−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（エナンチオマーB）
【化５４】
2017529338.tif 000070
36mgのrac−4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−｛5−フルオロ−1−［（3−フルオロピリジン−2−イル）メチル］−1H−ピラゾロ［3，4−b］ピリジン−3−イル｝−5−メチル−5−（トリフルオロメチル）−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オン（実施例18）をキラル相上でエナンチオマーに分離した［カラム：Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×30mm、移動相：40％イソヘキサン、60％エタノール＋0．2％ジエチルアミン、流量30ml／min；40℃、検出：220nm］。生成物分画をドライアイス上に集め、蒸発により濃縮し、次いで、凍結乾燥した。
エナンチオマーB：17mg（約92％純度、97％ee）
Rt＝5．56min［Daicel Chiralpak（登録商標）AZ−H、5μm、250×4．6mm；移動相：30％イソヘキサン、70％エタノール＋0．2％ジエチルアミン；流量1．0ml／min；40℃；検出：220nm］。
【０２２４】
実施例21
4−｛［2−アミノ−3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロピル］アミノ｝−2−［6−クロロ−1−（2−フルオロベンジル）−1H−インダゾール−3−イル］−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オントリフルオロアセタート
【化５５】
2017529338.tif 000071
1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの70mg（0．57mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの溶液［想定濃度：1．07mol／l］を、実施例35Aの80mg（0．14mmol）の2−［6−クロロ−1−（2−フルオロベンジル）−1H−インダゾール−3−イル］−4−ヨード−5，5−ジメチル−5，7−ジヒドロ−6H−ピロロ［2，3−d］ピリミジン−6−オンに加え、混合物を0．2mlの1−メチル−2−ピロリドン（NMP）で希釈した。混合物をマイクロ波中、130℃で4時間撹拌した。次いで、1−メチル−2−ピロリドン中の実施例44Aの35mg（0．28mmol）の3−フルオロ−2−（フルオロメチル）プロパン−1，2−ジアミンの別の溶液［想定濃度：1．07mol／l］を加え、混合物をマイクロ波中、130℃で2時間撹拌した。水／アセトニトリル／TFAを加え、反応溶液を分取HPLCにより精製した（RP18カラム、移動相：アセトニトリル／水勾配、0．1％TFAを添加）。これにより、3mg（理論値の3％；純度約93％）の表題化合物を得た。
LC−MS（方法1）：Rt＝0．84min
MS（ESIpos）：m／z＝544．4［M＋H］＋
1H−NMR（400MHz，DMSO−d6）：δ［ppm］＝1．38（s，6H），3．75−3．81（m，2H），4．58−4．69（m，2H），4．71−4．82（m，2H），5．83（s，2H），6．90（t，1H），7．06−7．11（m，1H），7．12−7．18（m，1H），7．21−7．28（m，1H），7．32−7．42（m，2H），7．94（s，1H），8．50（d，1H），8．98（br．s，3H），11．22（s，1H）．
【０２２５】
【表９】
2017529338.tif 000072
【０２２６】
本発明の化合物の薬理活性は、以下のアッセイにおいて実証することができる：
B−1．インビトロの血管弛緩作用
摘出血管に対する本発明の化合物の弛緩作用の測定は、JP Staschら、Br J Pharmacol．2002；135，333−343に記載の通り行った。首への打撃によりウサギを気絶させ、失血させる。大動脈を取り出し、付着している組織を除き、幅1．5mmの環に分け、これらの環を、以下の組成（それぞれ、mM）：塩化ナトリウム：119；塩化カリウム：4．8；塩化カルシウム二水和物：1；硫酸マグネシウム七水和物：1．4；リン酸二水素カリウム：1．2；重炭酸ナトリウム：25；グルコース：10を有するカルボゲンをスパージした37℃のKrebs−Henseleit溶液が入った5mlの器官浴中に張力下、個別に置く。収縮力を、Statham UC2セルを用いて測定し、A／D変換器（DAS−1802 HC、Keithley Instruments（ミュンヘン））を用いて増幅およびデジタル化し、チャートレコーダーで並行して記録する。
【０２２７】
収縮を生じさせるために、フェニレフリンの濃度を上げて累積的に浴に添加する。数回の対照サイクルの後、調査する物質の投与量を、その後の試験毎に毎回増やして添加し、収縮の大きさを、直前の試験において達する収縮の大きさと比較する。これを用いて、対照値の量を50％低減させるのに必要な濃度（IC50値）を計算する。標準的な投与量は5μlであり、浴溶液中のDMSO含有量は、0．1％に相当する。
【０２２８】
B−2．組換えグアニル酸シクラーゼレポーター細胞株に対する作用
本発明の化合物の細胞活性を、F．Wunderら、Anal．Biochem．339，104−112（2005）に記載の通り、組換えグアニル酸シクラーゼレポーター細胞株を用いて測定する。
【０２２９】
本発明の化合物の代表値（MEC＝最小有効濃度）を下表に（表1；場合によっては個々の測定値の平均として）示す：
【０２３０】
【表１０】
2017529338.tif 000073
【０２３１】
B−3．ヒトホスホジエステラーゼ 5（PDE 5）の阻害
PDE 5調製物は、ヒト血小板から、破壊（Microfluidizer（登録商標）、800bar、3回）、続いて遠心分離（75 000g、60min、4℃）、およびMono Q 10／10カラム（塩化ナトリウム直線勾配、塩化ナトリウムの0．2〜0．3M緩衝溶液（20mM HEPES pH 7．2、2mM塩化マグネシウム）で溶離。）による上清のイオン交換クロマトグラフィーにより得られる。PDE 5活性を有する分画を合わせ（PDE 5調製物）、−80℃で保管する。
【０２３２】
ヒトPDE 5に対するこれらのインビトロ作用を測定するため、試験物質を100％ DMSOに溶解し、連続的に希釈する。通常、200μM〜0．091μMの希釈系列（1：3）を調製する（試験で得られる最終濃度：4μM〜0．0018μM）。それぞれの場合において、2μlの希釈物質溶液をマイクロタイタープレートのウェルに入れる（Isoplate−96／200W；Perkin Elmer）。続いて、50μlの上記のPDE 5調製物の希釈液を加える。PDE 5調製物の希釈液は、後のインキュベーション中に、70％未満の基質が変換されるように選ばれる（典型的な希釈：1：100；希釈緩衝液：50mMトリス／塩酸pH 7．5、8．3mM塩化マグネシウム、1．7mM EDTA、0．2％ BSA）。基質、［8−3H］環状グアノシン−3’，5’−一リン酸（1μCi／μl；Perkin Elmer）を、アッセイ緩衝液（50mMトリス／塩酸pH 7．5、8．3mM塩化マグネシウム、1．7mM EDTA）で1：2000に希釈して、0．0005μCi／μlの濃度にする。50μl（0．025μCi）の希釈した基質を添加することにより、最後に酵素反応を開始する。試験混合物を室温で60分間インキュベートし、水中の18mg／mlイットリウムシンチレーションプロキシミティビーズ（scintillation proximity bead）（SPAアッセイ用ホスホジエステラーゼビーズ、RPNQ 0150、Perkin Elmer）の懸濁液25μlを加えることで反応を停止する。マイクロタイタープレートをフィルムでシールし、室温で60分間静置する。続いて、Microbetaシンチレーションカウンター（Perkin Elmer）内でウェルあたり30秒間、プレートを分析する。IC50値は、PDE 5阻害パーセントに対する物質濃度をグラフにプロットしたものを用いて求める。
【０２３３】
本発明の化合物の代表的なIC50値を下表に（表2；場合によっては個々の測定値の平均として）示す：
【０２３４】
【表１１】
2017529338.tif 000074
【０２３５】
B−4．意識下の自然発症高血圧ラットのラジオテレメトリー血圧測定
DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI（米国）製の市販されているテレメトリーシステムを、以下で説明する意識下ラットの血圧測定に使用する。
【０２３６】
システムは、3つの主要な構成要素からなる：
−埋め込み型送信機（Physiotel（登録商標）テレメトリー送信機）
−受信機（Physiotel（登録商標）受信機）。これは、多重化装置（DSI Data Exchange Matrix）を介してデータ取得コンピュータに結合される。
−テレメトリーシステムは、通常の生息環境における意識下の動物の血圧、心拍数および身体の動きを連続的に記録することができる。
【０２３７】
動物材料
試験は、体重＞200gの雌成体の自然発症高血圧ラット（SHR Okamoto）で行う。Okamoto Kyoto School of MedicineによるSHR／NCrl（1963）は、重度の高血圧の雄のWistar Kyotoラットと、わずかに高血圧の雌の交雑種で、F13にて米国立衛生研究所に引き渡された。
【０２３８】
送信機を埋め込んだ後、実験動物を3型Makrolonケージに個別に収容する。実験動物は、標準的な餌および水に自由に近づくことができる。
【０２３９】
実験室内の昼／夜リズムは、6：00 amと7：00 pmに室内照明により変化させる。
【０２４０】
送信機の埋め込み
使用するTA11 PA−C40テレメトリー送信機を、最初の実験での使用の少なくとも14日前に、無菌条件下で実験動物に外科的に埋め込む。このように装置を取り付けた動物は、創部が治癒し、埋め込み装置が定着した後に、繰り返し使用することができる。
【０２４１】
埋め込みのために、絶食した動物をペントバルビタール（Nembutal、Sanofi：50mg／kg、腹腔内）を用いて麻酔し、それらの腹部の広い領域を剪毛および消毒する。腹腔を白線に沿って開いた後、液体を満たした本システムの測定カテーテルを下行大動脈内に、分枝の上で頭蓋方向に挿入し、組織接着剤（VetBonD（商標）、3M）で固定する。送信機ハウジングを腹腔内で腹壁筋に固定し、創部を層毎に閉じる。
【０２４２】
手術後、感染の予防のために抗生物質（Tardomyocel COMP、Bayer、1ml／kg、皮下）を投与する。
【０２４３】
物質および溶液
特に記載しない限り、調査する物質は、それぞれの場合において、動物群に胃管栄養法により経口投与する（n＝6）。5ml／kg体重の投与量にしたがって、試験物質を適した溶媒混合物に溶解させるか、または0．5％チロースに懸濁させる。
【０２４４】
溶媒処理した動物群を対照として用いる。
【０２４５】
実験手順
示したテレメトリー測定ユニットを24匹の動物用に構成する。各実験は実験番号（V年月日）で記録する。
【０２４６】
装置を取り付けたシステム内の生きているラットそれぞれに、別々の受信アンテナ（1010 Receiver、DSI）が割り当てられる。
【０２４７】
埋め込んだ送信機は、組み込まれた磁気スイッチにより外部から作動させることができる。これらの磁気スイッチは、実験の前段階で送信に切り替えられる。発せられたシグナルは、データ取得システム（Dataquest（商標）A．R．T．for WINDOWS（登録商標）、DSI）によりオンラインで検出し、それに応じて処理することができる。データは、それぞれの場合において、この目的のために作成され、実験番号を持つファイルに保存される。
【０２４８】
標準的な手順において、以下をそれぞれの場合について10秒間測定する：
−収縮期血圧（SBP）
−拡張期血圧（DBP）
−平均動脈圧（MAP）
−心拍数（HR）
−活性度（ACT）。
【０２４９】
測定値の取得は、コンピュータ制御下、5分間隔で繰り返される。絶対値で得られるソースデータは、現在の測定気圧（周囲圧力参照モニター；APR−1）を用いて図内で補正され、個別のデータとして保存される。さらに技術的な詳細については、製造会社（DSI）による広範な文書に記載されている。
【０２５０】
特に記載のない限り、試験物質は、実験日の9：00 amに投与する。投与後、上述のパラメータを24時間にわたって測定する。
【０２５１】
評価
実験終了後、取得した個々のデータを、解析ソフトウェア（DATAQUEST（商標）A．R．T．（商標）ANALYSIS）を用いてソートする。この場合、ブランク値を投与の2時間前と想定し、したがって、選択したデータセットは、実験日の7：00 amから次の日の9：00 amまでの期間を包含する。
【０２５２】
データは、平均値（15分平均）の測定により、事前定義が可能な時間にわたって平滑化され、テキストファイルとして記憶媒体に転送される。このようにしてプレソートおよび圧縮された測定値は、Excelテンプレートに転送され、表にまとめられる。各実験日について、得られたデータは、実験番号を持つ専用のファイルに保存される。結果および試験プロトコルは、番号によりソートされる紙の形でファイルに保管される。
【０２５３】
参考文献
Klaus Witte，Kai Hu，Johanna Swiatek，Claudia Mussig，Georg Ertl and Bjorn Lemmer：Experimental heart failure in rats：effects on cardiovascular circadian rhythms and on myocardial β−adrenergic signaling．Cardiovasc Res 47（2）：203−405，2000；Kozo Okamoto：Spontaneous hypertension in rats．Int Rev Exp Pathol 7：227−270，1969；Maarten van den Buuse：Circadian Rhythms of Blood Pressure，Heart Rate，and Locomotor Activity in Spontaneously Hypertensive Rats as Measured With Radio−Telemetry．Physiology＆Behavior 55（4）：783−787，1994
【０２５４】
B−5．長期実験におけるラットに対する臓器保護効果の測定
本発明の化合物の臓器保護効果は、ラットにおける治療上関連のある「低一酸化窒素（NO）／高レニン」高血圧モデルにおいて示される。試験は最近発表された論文（Sharkovska Yら、J Hypertension 2010； 28：1666−1675）と同様に行った。この試験は、NOシンターゼ阻害剤L−NAMEが、本発明による化合物または媒体と同時に飲料水経由で数週間にわたって投与されたレニン−トランスジェニックラット（TGR（mRen2）27）を処理するものである。血行動態および腎パラメータを処理期間中に決定する。長期調査の最後に、臓器保護（腎臓、肺、心臓、大動脈）が、組織病理学的実験、バイオマーカー、発現解析および心血管の血漿パラメータによって示される。
【０２５５】
B−6．低酸素条件下での意識下のイヌの肺動脈圧（PAP）測定
例えば、DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI（米国）製のテレメトリーシステムを、以下で説明する意識下イヌの血圧測定に使用する。システムは、埋め込み型血圧送信機、受信機およびデータ取得コンピュータからなる。テレメトリーシステムによって、意識下の動物の血圧および心拍数を連続的に監視することが可能になる。使用するテレメトリー送信機は、最初の実験での使用前に、無菌条件下で実験動物に外科的に埋め込む。このように装置を取り付けた動物は、創部が治癒し、埋め込み装置が定着した後に、繰り返し使用することができる。成体雌ビーグルを用いて試験を行う。技術的な詳細は、製造会社（DSI）の文書に記載されている。
【０２５６】
物質および溶液
試験する物質をそれぞれ、イヌの群（n＝3〜6）にゼラチンカプセルにより経口で、または適した溶媒混合物で静脈内に投与する。媒体処理した動物群を対照として用いる。
【０２５７】
実験手順
低酸素条件下での測定のために、動物を低酸素雰囲気（酸素濃度約10％）のチャンバーに移す。これは、市販の低酸素発生装置（Hoehenbalance（ケルン、ドイツ）製）を用いて設定する。標準的な実験では、例えば、物質投与の1時間後および5時間後に、イヌを30分間低酸素チャンバーに移す。低酸素チャンバーに入れる約10分前および入れた約10分後、ならびに低酸素チャンバー内にいる間、テレメトリーにより血圧および心拍数を測定する。
【０２５８】
評価
健康なイヌでは、低酸素下でPAPが急上昇する。物質投与により、この上昇を抑えることができる。PAPの上昇、ならびに心拍数および全身血圧の差を定量するために、平均を求めて平滑化した低酸素期間前および期間中のデータを比較する。測定パラメータの経過をPrismソフトウェア（GraphPad（米国））を用いて図示する。
【０２５９】
B−7．静脈内および経口投与後の薬物動態学的パラメータの測定
本発明の化合物の薬物動態学的パラメータを、雄CD−1マウス、雄ウィスターラット、雌ビーグルおよび雌カニクイザルにおいて測定する。マウスおよびラットの場合の静脈内投与は、種特異的な血漿／DMSO配合物により行い、イヌおよびサルの場合は、水／PEG400／エタノール配合物により行う。すべての種において、溶解させた物質の経口投与は、水／PEG400／エタノール配合物をベースとして、胃管栄養法により実施する。ラットからの血液の取り出しは、物質投与前に、シリコンカテーテルを右外頸静脈に挿入することにより簡略化する。この作業は、実験の少なくとも1日前に、イソフルラン麻酔を用い、鎮痛剤（アトロピン／リマダイル（3／1）0．1ml、皮下）を投与して行う。血液は、物質投与後、少なくとも24時間から最長72時間の終わりの時点を含む時間枠内で（一般に、10回を超える時点で）採取する。血液を、ヘパリン処理したチューブ内に取り出す。次いで、血漿を遠心分離により得る。必要ならば、さらに処理を行うまで−20℃で保管する。
【０２６０】
内部標準（化学的に関連のない物質であってもよい。）を、本発明の化合物のサンプル、較正サンプルおよび基準を満たすサンプル（qualifier）に添加し、続いて、過剰なアセトニトリルを用いてタンパク質を沈殿させる。LC条件に対応する緩衝液を添加した後、ボルテックスし、続いて、1000gで遠心分離する。上清を、C18逆相カラムおよび可変の移動相混合物を用いたLC−MS／MSにより分析する。物質を、特定の選択したイオンのモニタリング実験または高分解能LC−MS実験から抽出したイオンクロマトグラムのピーク高さまたは面積により定量する。
【０２６１】
求めた血漿濃度／時間プロットを用い、有効な薬物動態計算プログラムを使用して、AUC、Cmax、F（生物学的利用率）、t1／2（終末半減期）、MRT（平均滞留時間）およびCL（クリアランス）などの薬物動態学的パラメータを計算する。
【０２６２】
物質の定量は血漿中で実施するため、それに対応して薬物動態学的パラメータを調整できるようにするために、物質の血液／血漿の分配を求める必要がある。この目的のために、規定の量の物質を、当該種のヘパリン処理した全血中で、ロッキングローラーミキサー内で20分間インキュベートする。血漿を1000gで遠心分離して得る。血漿中および血液中の濃度を測定（LC−MS（／MS）による；上記参照）後、Cblood／Cplasma値を商の形で求める。
【０２６３】
B−8．代謝に関する調査
本発明の化合物の代謝プロファイルを測定し、実質的に非常に完全な肝細胞相Iおよび相IIの代謝についての情報および代謝に関与する酵素についての情報を得て比較するために、組換えヒトチトクロムP450（CYP）酵素、肝ミクロソーム、またはさまざまな動物種（例えば、ラット、イヌ）由来、さらにはヒト起源の新鮮な初代肝細胞を用いてインキュベートする。
【０２６４】
本発明の化合物を、約0．1〜10μMの濃度でインキュベートした。この目的のために、アセトニトリル中の0．01〜1mMの濃度を有する本発明の化合物の原液を調製し、次いで、1：100の希釈でインキュベーション混合物中にピペットで入れた。肝ミクロソームおよび組換え酵素を、50mMリン酸カリウム緩衝液（pH7．4）中、1mM NADP＋、10mMグルコース−6−リン酸、および1単位のグルコース−6−リン酸デヒドロゲナーゼからなるNADPH産生系ありとなしで、37℃でインキュベートした。初代肝細胞は、Williams E培地中に懸濁させて、同じく37℃でインキュベートした。0〜4時間のインキュベーション後、インキュベーション混合物をアセトニトリル（最終濃度約30％）を用いて停止し、タンパク質を約15000 x gで遠心分離した。このように停止したサンプルを直接分析するか、または分析を行うまで−20℃で保管した。
【０２６５】
分析は、紫外線および質量分析検出を備えた高性能液体クロマトグラフィー（HPLC−UV−MS／MS）により行う。この目的のために、インキュベーションサンプルの上清について、適したC18逆相カラム、ならびにアセトニトリルおよび10mMギ酸アンモニウム水溶液または0．05％ギ酸の可変の移動相混合物を用いてクロマトグラフにかける。質量分析データと組み合わせたUVクロマトグラムは、代謝物の同定、構造の解明および定量的評価、ならびにインキュベーション混合物中における本発明の化合物の定量的代謝還元に役立つ。
【０２６６】
B−9．Caco−2透過性試験
試験物質の透過性を、Caco−2細胞株、胃腸管の障壁における透過性を予測するための確立されたインビトロモデルを利用して測定した［Artursson，P．and Karlsson，J．（1991）Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial（Caco−2）cells．Biochem．Biophys．175（3），880−885］。Caco−2細胞（ACC No．169，DSMZ，Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen（ブラウンシュワイク、ドイツ））をインサートを備えた24ウェルのプレートに播き、15〜16日間培養した。透過性を調査するために、試験物質をDMSOに溶解し、輸送緩衝液（ハンクス緩衝塩液、Gibco／Invitrogen、19．9mMグルコースおよび9．8mM HEPESを含む。）で最終的な試験濃度まで希釈した。試験物質の頂端側から基底外側への透過性（PappA−B）を測定するために、試験物質を含む溶液をCaco−2細胞単層の頂端側に、輸送緩衝液を基底外側に適用した。試験物質の基底外側から頂端側への透過性（PappB−A）を測定するために、試験物質を含む溶液をCaco−2細胞単層の基底外側に、輸送緩衝液を頂端側に適用した。物質収支を確認するために、実験開始時にそれぞれのドナー区画からサンプルを採取した。37℃で2時間インキュベーションした後、サンプルを2つの区画から採取した。サンプルをLC−MS／MSにより分析し、見かけの透過係数（Papp）を算出した。各細胞単層について、ルシファーイエローの透過性を測定し、細胞層の完全性を確認した。各試験において、品質管理として、アテノロール（低透過性のマーカー）およびスルファサラジン（能動的排出のマーカー）の透過性も測定した。
【０２６７】
B−10．緩衝液（pH 6．5）における物質の溶解度の測定
40μlのDMSOを2mgの試験物質に加える［50g／L］。この溶液10μlを取り出し、990μlのPBS緩衝液（pH 6．5）に入れる（c＝500μg／ml）。この溶液／懸濁液を室温で24時間振盪する。超遠心分離を114000gで30分行った後、上清を取り出し、ACN／水8：2で希釈し、LC−MSMSにより分析する。
【０２６８】
較正のため、同じく10μlをDMSO原液から取り出し、823μlのDMSOに入れる（c＝600μg／ml）。5点検量線を用いて定量化を行う。
【０２６９】
LC−MSMS定量化のための測定器：
AB Sciex TRIPLE QUAD 4500；Agilent 1260および一次ポンプ（G1312B Infinity）、脱気装置（G4225a Infinity）、カラムサーモスタット（G1316C Infinity）；CTC Analytics PAL注入システムTHC−xt
【０２７０】
HPLC法：
移動相：
A：水1Lあたり0．5mlのギ酸（50％強度）
B：アセトニトリル1Lあたり0．5mlのギ酸（50％強度）
勾配：
時間［min］  ％A  ％B
0            90    10
0．5          5    95
0．84        5    95
0．85        90    10
1．50        90    10
流量：2．5ml
注入量：5μl
カラム：Waters OASIS HLB、2．1×20mm、25μ
カラム温度：30℃
スプリッター（MSの上流）1：20
【０２７１】
MS法：
最適化のためのフローインジェクション分析（FIA）
定量化のための多重反応モニタリング（MRM）
移動相：
A：水1Lあたり0．5mlのギ酸（50％強度）
B：アセトニトリル1Lあたり0．5mlのギ酸（50％強度）
流量：0．25ml
注入量：5μl
カラム：ステンレス鋼キャピラリー
キャピラリー温度：22℃
【０２７２】
本発明による化合物の代表的な溶解度を表3に一覧にした。
【０２７３】
【表１２】
2017529338.tif 000075
【０２７４】
B−11．さまざまなpH値を有する緩衝液における物質の溶解度の測定
物質および緩衝液毎に、それぞれの場合において、正確に0．5〜0．6mg秤量する（8つの部分を秤量）。DMSO較正溶液用に、もう1つ秤量した0．5〜0．6mgの部分が必要である（部分9を秤量）。それぞれの場合において、c＝500μg／mlの濃度が得られるように緩衝液をサンプルに加える。このサンプル溶液を室温で1400rpmで24時間振盪する。
【０２７５】
較正用に秤量した部分を入れたエッペンドルフ容器をDMSOで満たして、c＝600μg／mlの濃度にする。この原液から、2つの較正溶液を調製する。初めに1000μlのDMSOを2mlエッペンドルフ容器に入れ、ピペットで34．4μlの原液を入れる（c＝20μg／ml）。この溶液（c＝20μg／ml）のうち、71．4μlを、別の2mlエッペンドルフ容器中の500μlのDMSOに加える（c＝2．5μg／ml）。両方の較正溶液をHPLCバイアルに移す。
【０２７６】
サンプル溶液を振盪後、それぞれの場合において、200μlの上清を遠心分離管に移し、114000gで30分間遠心分離する。次いで、150μlの上清を取り出し、DMSOで1：5および1：100に希釈し、HPLCバイアルに移す。2つの較正溶液および希釈サンプル溶液をHPLCにより分析する。それぞれのピーク面積を用いて定量化を行う。
【０２７７】
溶媒および緩衝液
蒸留水
過塩素酸（Fluka；77227）
アセトニトリル（tap quality）
DMSO（Merck；8．02912．2500）
緩衝液
pH 1  HCl緩衝液      （Fluka）
pH 2  クエン酸緩衝液  （Fluka）
pH 4  クエン酸緩衝液  （Fluka）
pH 5  クエン酸緩衝液  （Fluka）
pH 6  PBS緩衝液      （Fluka）
pH 7  PBS緩衝液      （Fluka）
pH 8  ホウ酸緩衝液    （Fluka）
pH 10  ホウ酸緩衝液    （Fluka）
【０２７８】
測定器
UV検出、可変波長（例えば、ダイオードアレイ）を備えるAgilent 1100または同等の測定器
超音波浴
Janke＆Kunkel Vibromix
Eppendorf Thermomixer
【０２７９】
HPLC法：
移動相A：水1Lあたり5mlのHClO4
移動相B：アセトニトリル
勾配：
時間［min］  A［％］  B［％］
0．0          98      2
0．5          98      2
4．5          10      90
6．5          10      90
6．7          98      2
7．5          98      2
カラム：Kromasil 100 C18、60×2．1mm、3．5μm
カラムオーブン：30℃
流量：0．75ml／min
検出器：210nm
注入量：60μl
【０２８０】
C．医薬組成物の作業例
本発明の化合物を以下の通り医薬製剤に変換することができる：
錠剤：
組成：
100mgの本発明の化合物、50mgのラクトース（一水和物）、50mgのコーンスターチ（天然）、10mgのポリビニルピロリドン（PVP25）（BASF（ルートウィヒスハーフェン、ドイツ））および2mgのステアリン酸マグネシウム。
【０２８１】
錠剤の重量212mg。直径8mm、曲率半径12mm。
【０２８２】
製造：
本発明の化合物、ラクトースおよびデンプンの混合物を、水中の5％PVP溶液（w／w）を用いて造粒する。次いで、顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウムと5分間混合する。この混合物を従来の錠剤プレス機で圧縮する（錠剤の形式については上記を参照）。プレスに用いられる指針値は、15kNのプレス圧である。
【０２８３】
経口投与用の懸濁剤：
組成：
1000mgの本発明の化合物、1000mgのエタノール（96％）、400mgのRhodigel（登録商標）（FMC（米国ペンシルベニア）製キサンタンガム）および99gの水。
【０２８４】
10mlの経口懸濁剤は、100mgの本発明の化合物の単一用量に相当する。
【０２８５】
製造：
Rhodigelをエタノール中に懸濁させる；本発明の化合物を懸濁液に加える。撹拌しながら水を加える。Rhodigelの膨潤が完了するまで、混合物を約6時間撹拌する。
【０２８６】
経口投与用の溶液：
組成：
500mgの本発明の化合物、2．5gのポリソルベートおよび97gのポリエチレングリコール400。20gの経口溶液は、100mgの本発明の化合物の単一用量に相当する。
【０２８７】
製造：
本発明の化合物を、撹拌しながらポリエチレングリコールとポリソルベートの混合物中に懸濁させる。本発明の化合物が完全に溶解するまで撹拌操作を継続する。
【０２８８】
静注液：
本発明の化合物を、生理的に許容される溶媒（例えば、等張食塩水、5％グルコース溶液および／または30％PEG400溶液）に飽和溶解度未満の濃度で溶解させる。溶液を滅菌濾過し、無菌かつパイロジェンフリーの注射容器に分注する。
【国際調査報告】
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