(57)【要約】  分析的保証を伴う汗センサ装置（２００）は、第１の検体を検出するための少なくとも１つのセンサ（２２０）と、少なくとも第１の検体を含んでいる少なくとも１つの較正媒体（２７０）とを備える。少なくとも１つの較正媒体（２７０）の中の第１の検体が、少なくとも１つのセンサ（２２０）と接触するとき、較正媒体（２７０）が少なくとも１つのセンサ（２２０）の較正を提供する。汗センサ装置（２００）は、少なくとも１つの開口（２２０ａ）を有する担持体（２４０）と、少なくとも１つの較正媒体（２７０）を収容するための貯留部（２５４）とをさらに備え得る。少なくとも１つの開口（２２０ａ）は、貯留部（２５４）から少なくとも１つのセンサ（２００）への流体アクセスを提供する。
2017529216.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分析的保証を伴う汗センサ装置であって、
第１の検体を検出するための少なくとも１つのセンサと、
少なくとも前記第１の検体を含んでいる少なくとも１つの較正媒体と
を備え、
前記少なくとも１つの較正媒体の中の前記第１の検体が、前記少なくとも１つのセンサと接触するとき、前記較正媒体が前記少なくとも１つのセンサの較正を提供する、汗センサ装置。
【請求項２】
少なくとも１つの開口を有する担持体と、
前記少なくとも１つの較正媒体を収容するための貯留部と
をさらに備え、
前記少なくとも１つの開口が、前記貯留部から前記少なくとも１つのセンサへの流体アクセスを提供する、請求項１に記載の装置。
【請求項３】
破断されると前記較正媒体を前記開口と接触させることができる、前記貯留部内の破断可能膜をさらに備える、請求項２に記載の装置。
【請求項４】
汗汲み上げ要素と、
前記較正媒体と前記汗汲み上げ要素との間の流れ抑制要素と
をさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項５】
２つ以上の較正媒体をさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項６】
前記較正媒体が複数の溶質を含む、請求項１に記載の装置。
【請求項７】
前記較正媒体を前記少なくとも１つのセンサに輸送するための微小流体構成要素をさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項８】
前記微小流体構成要素への流体アクセスを提供する少なくとも１つのポートをさらに備える、請求項７に記載の装置。
【請求項９】
前記装置が皮膚に位置決めされるときに前記少なくとも１つのセンサと皮膚との間に来る材料をさらに備え、
前記装置が皮膚に位置決めされるとき、前記較正媒体が、少なくとも初期には、前記材料によって前記センサに押し付けられて閉じ込められる、請求項１に記載の装置。
【請求項１０】
前記材料が、少なくとも初期には前記第１の検体に対して不浸透性である、請求項９に記載の装置。
【請求項１１】
前記材料が水に対して浸透性であり、前記較正媒体が乾燥している、請求項９に記載の装置。
【請求項１２】
前記材料が、前記少なくとも１つのセンサの周りに固定された容積を定める、請求項９に記載の装置。
【請求項１３】
前記少なくとも１つのセンサが、前記第１の検体を検出するための第１のセンサと、前記第１の検体を検出するための第２のセンサとを含み、前記材料が、前記第１のセンサと皮膚との間にあり、前記第２のセンサと皮膚との間にない、請求項９に記載の装置。
【請求項１４】
汗が前記材料に浸透するとき、前記少なくとも１つの較正媒体の希釈の量を決定するために溶質を検出するための第３のセンサをさらに備え、
前記材料が前記第３のセンサを包囲する、請求項１３に記載の装置。
【請求項１５】
前記材料が膜である、請求項９に記載の装置。
【請求項１６】
前記材料が溶解性ポリマーである、請求項９に記載の装置。
【請求項１７】
前記材料が膨潤性ポリマーである、請求項９に記載の装置。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのセンサおよび前記少なくとも１つの較正媒体を包囲する、前記第１の検体に対して不浸透性の膜と、
前記第１のセンサへの流体アクセスを制御する少なくとも１つの流体ゲートと
をさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項１９】
前記膜が汗に対して不浸透性である、請求項１８に記載の装置。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの流体ゲートが水溶解性ポリマーを含む、請求項１８に記載の装置。
【請求項２１】
前記少なくとも１つの較正媒体が溶解性であり、前記装置の較正の間、前記少なくとも１つの較正媒体が、前記較正媒体中の前記第１の検体の固定された濃度をもたらす固定された容積を有する、請求項１に記載の装置。
【請求項２２】
前記少なくとも１つの較正媒体が第１の較正媒体と第２の較正媒体とを含み、前記第２の較正媒体が、前記第１の検体と異なる第２の検体を含む、請求項２１に記載の装置。
【請求項２３】
汗が前記較正媒体に到達するときに汗の中の検体の濃度を低減する少なくとも１つの結合媒体をさらに備える、請求項１に記載の装置。
【請求項２４】
前記較正媒体が、前記少なくとも１つのセンサの濃度較正を提供する、請求項１に記載の装置。
【請求項２５】
前記較正媒体が、前記少なくとも１つのセンサの遅延時間較正を提供する、請求項１に記載の装置。
【請求項２６】
汗の中の溶質を検出する方法であって、
装置内で前記溶質を検出するために、前記装置内の較正媒体を少なくとも１つのセンサに導くステップと、
前記少なくとも１つのセンサを較正するステップと、
前記装置を皮膚に位置決めするステップと、
汗を前記装置に導くステップと、
前記装置を用いて、前記汗の中の前記溶質を測定するステップと
を含む方法。
【請求項２７】
前記装置を皮膚に位置決めするステップが、前記少なくとも１つのセンサを較正するステップの前に起こる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
汗を前記装置に導くステップが、前記少なくとも１つのセンサを較正するステップの前に起き、前記方法が、
較正溶液を作り出すために、前記汗の少なくとも一部分を前記較正媒体に導くステップをさらに含み、
前記少なくとも１つのセンサを較正するステップが、前記較正溶液を使用することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
汗の中の溶質を検出するための装置を使用して、汗の中の前記溶質を検出する方法であって、前記装置が少なくとも１つのセンサを備え、前記方法が、
第１の下地材要素の開口を通じて前記少なくとも１つのセンサへの流体アクセスを提供するステップと、
前記開口を通じて、少なくとも１つの較正媒体を前記少なくとも１つのセンサに導くステップと、
前記少なくとも１つのセンサを較正するステップと、
前記装置を皮膚に置くステップと、
汗を前記装置に導くステップと、
前記装置を用いて、前記汗の中の前記溶質を測定するステップと
を含む方法。
【請求項３０】
流体アクセスを提供するステップが、第２の下地材要素を前記装置から取り外すことを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記装置を皮膚に置くステップの前に、前記第１の下地材要素を前記装置から取り外すステップをさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
較正媒体を前記装置に導くステップが、２つ以上の較正媒体を前記装置に導くことを含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記２つ以上の較正媒体のうちの１つが、前記２つ以上の較正媒体のうちの別のものと異なる、請求項３２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年９月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／０５３，３８８号と、２０１５年５月１日に出願された米国仮特許出願第６２／１５５，５２７号とに関連し、これにより、それらの開示は、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
汗感知技術は、いくつかの用途を挙げると、運動競技から、新生児学、薬理学的監視、個人のデジタル健康管理までに及ぶ用途について、計り知れない潜在的な可能性を有している。汗は、血液で運ばれるものと同じバイオマーカ、化学物質、または溶質の多くを含み、病気、健康状態、毒素、能力、および他の生理的属性を、あらゆる身体的兆候に先立ってさえ診断することを可能にする重要な情報を提供できる。さらに、皮膚における、皮膚の近くの、または皮膚の下の、汗自体、発汗の活動、および他のパラメータ、属性、溶質、または特徴が、生理的情報をさらに明らかにするために測定され得る。
【０００３】
汗がこのような重要な潜在的な可能性を感知のパラダイムとして有するならば、なぜ、嚢胞性線維症についての幼児の塩化物分析、または不法薬物監視パッチにおいて何十年にわたって利用されてきたこと以上のことが出現しなかったのであろうか？何十年の汗感知についての文献では、医学文献の大部分は、汗刺激、サンプルの収集、サンプルの研究室への輸送、そして、卓上機械および訓練を受けた専門家によるサンプルの分析、という洗練されておらず、時間がかかる不便な過程を利用している。この過程は、採血が高性能なバイオマーカ感知のほとんどの形態についての至適基準であるため、ほとんどの場合で採血を同様に実施することになり、非常に労働集約的で、複雑で、コストがかかる。したがって、汗感知は、バイオセンシングについて、特に、連続または繰り返しのバイオセンシングまたは監視について、その最も十分な機会および可能性に発展してこなかった。さらに、グルコースなどの「至高の目標」を感知するために汗を使用する試みによって、実行可能な市販製品を製作することはまだ成功しておらず、汗感知について世間で認識されている可能性および機会を低減している。
【０００４】
小型で携帯可能、着用可能なバイオセンサは、精密かつ正確であるように作るのが難しい。このようなセンサは、しばしば、専用の測定機械または大きな研究室で行われるのと等しい品質の分析測定を行う能力に概して課題がある。これは、特に小さいパッチまたは着用可能な装置に組み込まれるセンサについて当てはまるが、その理由は、小形化および低コスト化に対する要求と、また、そのような装置は、多くの研究室または機械の状況よりも制御しにくい環境に置かれるためである。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
前述の欠点の多くは、汗が発生するときに、手頃な価格で、効率的に、好都合に、知的に、または確実に汗感知技術を汗と密接させる手法で、化学物質、材料、センサ、電子工学、マイクロ流体工学、アルゴリズム、演算、ソフトウェア、システム、および他の特徴または設計の新規な最新の相互作用を作り出すことによって解決され得る。さらに、分析的保証ができる汗センサが必要とされている。このような新たな発明で、汗感知は、バイオセンシングの基盤として強力な新たなパラダイムとなり得る。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、分析的保証ができる着用可能汗センサ装置を提供する。一実施形態では、分析的保証を伴う汗センサ装置は、第１の検体を検出するための少なくとも１つのセンサと、少なくとも第１の検体を含んでいる少なくとも１つの較正媒体とを備える。少なくとも１つの較正媒体の中の第１の検体が、少なくとも１つのセンサと接触するとき、濃縮媒体が少なくとも１つのセンサの較正を提供する。
【０００７】
別の実施形態では、汗の中の溶質を検出する方法が、装置内で溶質を検出するために、装置内の較正媒体を少なくとも１つのセンサに導くステップと、少なくとも１つのセンサを較正するステップと、装置を皮膚に位置決めするステップと、汗を装置に導くステップと、装置を用いて、汗の中の溶質を測定するステップとを含む。
【０００８】
別の実施形態では、汗の中の溶質を検出するための装置を使用して、汗の中の溶質を検出する方法であって、装置が少なくとも１つのセンサを備え、方法が、第１の下地材要素の開口を通じて少なくとも１つのセンサへの流体アクセスを提供するステップと、開口を通じて、少なくとも１つの較正媒体を少なくとも１つのセンサに導くステップと、少なくとも１つのセンサを較正するステップと、装置を皮膚に置くステップと、汗を装置に導くステップと、装置を用いて、汗の中の溶質を測定するステップとを含む。
【０００９】
本発明の目的および利点は、以下の詳細な記載と図面とを考慮して、さらに理解されるものである。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】本発明の実施形態による装置の断面図である。
【図１Ｂ】較正の間の図１Ａの装置の断面図である。
【図１Ｃ】皮膚に位置決めされた図１Ａの装置の断面図である。
【図２Ａ】本発明の実施形態による装置および較正モジュールの断面図である。
【図２Ｂ】較正の間の図２Ａの装置および較正モジュールの断面図である。
【図２Ｃ】図２Ａの装置の一部分の断面図である。
【図３】本発明の実施形態による装置および較正モジュールの断面図である。
【図４】本発明の実施形態による装置の断面図である。
【図５】皮膚に位置決めされた本発明の実施形態による装置の断面図である。
【図６Ａ】皮膚に位置決めされた本発明の実施形態による装置の断面図である。
【図６Ｂ】較正の間の図６Ａの装置の断面図である。
【図６Ｃ】皮膚に位置決めされた本発明の実施形態による装置の断面図である。
【図７Ａ】皮膚に位置決めされた本発明の実施形態による装置の断面図である。
【図７Ｂ】較正の間の図７Ａの装置の断面図である。
【図７Ｃ】較正の後の図７Ａの装置の断面図である。
【図８】本発明の実施形態による装置の断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、２０１３年４月２日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１３／３５０９２、２０１４年１０月１７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１４／６１０８３、２０１４年１０月１７日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１４／６１０９８、２０１５年５月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１５／３２８３０、２０１５年５月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１５／３２８４３、２０１５年５月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１５／３２８６６、２０１５年５月２８日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１５／３２８９３、および、２０１５年７月１３日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ１５／４０１１３の国際出願を踏まえた明細書内容を有し、それら国際出願の開示は、これにより、それらの全体が本明細書に参照により組み込まれる。
【００１２】
本発明の実施形態は、汗、汗の発生速度、汗の経時的保証、汗の溶質、皮膚から汗へと移動する溶質、皮膚の表面の特性もしくは皮膚の表面上の品目、または、皮膚の下の特性もしくは品目を測定する任意の種類の汗センサ装置に少なくとも当てはまる。本発明の実施形態は、汗が体によって発生されるとき、汗刺激、汗の収集、および／もしくは汗感知の技術を汗と確実に密接させる、パッチ、バンド、ストラップ、衣服の一部分、着用可能品、または任意の適切な機構を含む、異なる形態を有する汗感知装置にさらに当てはまる。本発明の特定の実施形態は、皮膚の近くに装置を保持するために接着剤を利用するが、他の実施形態は、ストラップなどの皮膚に対して装置をしっかりと保持する他の機構によって保持される装置、または、ヘルメットに埋め込む装置を備える。
【００１３】
汗刺激または汗の活性化は、既知の方法によって達成され得る。例えば、汗刺激は、単純な熱の刺激によって、薬物を経口投与することで、メチルコリンまたはピロカルピンなどの薬物の皮内注射によって、および、イオントフォレーシスを用いたこのような薬物の皮膚導入によって、達成され得る。汗は、被験者に汗をかかせる活動または状態を、パッチを用いて被験者に成立または増進させるように依頼することで、制御または生じさせてもよい。これらの技術は、汗発生速度の能動的制御と言及され得る。
【００１４】
本発明の特定の実施形態は、センサを単純な個別の要素として示している。多くのセンサが、２つ以上の電極、基準電極、または、ここでの記載に表現されていない追加的な支援の技術もしくは特徴を必要とすることが理解される。センサは、好ましくは、本質的に電気的であるが、光学的、化学的、機械的、または他の知られているバイオセンシング機構であってもよい。センサは、向上されたデータおよび読み取りを提供するために、二重、三重、または四重以上であってもよい。センサは、センサが感知するものによって、例えば、汗センサ、インピーダンスセンサ、汗量センサ、汗発生速度センサ、および溶質発生速度センサと称され得る。
【００１５】
本発明の態様では、汗センサ装置は、後で記載されるように、分析的保証を提供できる。分析的保証とは、汗センサ装置によって提供される測定の精密性、正確性、または品質の保証を意味する（この意味に限定されることはない）。別の言い方をすれば、分析的保証は、行われた測定の精密性、正確性、または品質における向上された信頼にさらに言及し得る。
【００１６】
図１Ａ〜図１Ｃを参照すると、汗センサ装置は、使用前に較正されるように設計される。汗センサ装置１００は、担持体１５０と担持体１５２とによって支持された接着側を有する。担持体１５０、１５２は様々な材料であり得る。例として、担持体１５０、１５２は、包帯の下地材で使用されるものなど、蝋またはシリコンで処理された紙であり得る。担持体１５０は、開口１２０ａを除いて装置１００の接着側を覆って密封するように、装置１００の下側に接して十分に密封されている。開口１２０ａは、直接的なアクセスを介して、または、微小流量体連結を通じて、１つまたは複数のセンサ（図示せず）へのアクセスを許容する。担持体１５０、１５２は装置１００から取り外し可能である。図示した実施形態では、担持体１５２は、担持体１５０を取り外すことなく取り外し可能である。
【００１７】
図１Ｂを参照すると、装置１００の担持体１５２は、開口１２０ａを露出するために取り外され得る。較正の溶液または媒体が浸透されるスポンジ１６０が、溶液を装置１００のセンサと接触させるために装置１００に押し付けられる。重要なのは、担持体１５０は、装置１００の残りの部分を較正溶液の適用から遮断するが、較正の溶液または媒体が開口１２０ａを通じて少なくとも１つのセンサと接触するのを許容することである。較正溶液は、溶質の所定の濃度または汗の他の特性（例えば、ｐＨ）で提供される。スポンジ１６０は、溶液中での検体の測定に基づいてセンサを較正させることができる適切な時間の期間にわたって、装置１００に当てられて保持される。センサが較正されるのに必要とされる時間は、センサが安定する時間に依存して変わる可能性がある。センサが安定するために必要とされる時間は、例えば、数分間の短さから、ｎＭセンサまたはｐＭセンサの場合は３０分間の長さまでである可能性があり、または、湿り期間を必要とするイオン選択電極については数時間の長さまでであり得る。汗センサ装置１００が較正を完了すると、汗センサ装置１００は、汗測定に分析的保証を提供できるようになる。続いて担持体１５０が取り外され、装置１００は、図１Ｃに示しているように、使用される皮膚１２に付けられ得る。ここで開示されている較正技術は、パッチまたは着用可能な装置におけるセンサを較正できる容易性を大幅に向上している。従来のセンサ較正技術は、センサをビーカーまたはバイアルに入れた較正溶液に浸漬することを必要とする。本明細書で教示されるような、パッチまたは着用可能な装置におけるセンサについては、このような技術は大消費市場向けの使用にとって概して実用的ではなく（例えば、家庭などの実験室ではない状況）、または、汗センサ装置を損傷または劣化させる可能性がある。
【００１８】
様々な技術および組成が、本発明の方法に従ってセンサを較正するために使用され得る。例えば、溶液組成が皮膚の特性、皮膚における汚染、または、皮膚に置かれるセンサの分析的保証に影響を与える他の溶質もしくは特性に基づく較正溶液が使用され得る。収集されたヒトの汗のサンプルまたは人工的な汗のサンプル（例えば、Ｐｉｃｋｅｒｉｎｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手可能なものなど）が、センサを較正するために使用されてもよい。さらに、溶液は、溶質または関心のある特性を持つ、濃縮、希釈、またはアルコール入り溶液とされてもよい。溶質の選択された濃度は、例えば、センサについての検出の下限を確保するだけの小ささとできる、または、センサの正確性を確保する生理的レベル未満とできる。装置が２つ以上のセンサを備える場合、適用されるスポンジ１６０における溶質の濃度は、センサのすべて、センサのうちの１つ、またはセンサのうちの一部を較正するために設計され得る。代替の実施形態では、スポンジ１６０は、例えばスプレーボトル（図示せず）を用いることを含め、較正溶液を適用するための任意の他の技術によって取って代わられ得る。
【００１９】
一実施形態では、２つ以上の較正溶液が、センサを較正するために、汗の同様の濃度または異なる濃度または特性で適用され得る。図１Ｂに示した実施形態では、２つ以上のスポンジ１６０が、装置１００に順に適用されてもよい（図示せず）。複数のスポンジ１６０が順に適用されるとき、異なるスポンジ１６０は、濃度における変化とのセンサ応答または直線性を較正するために、例えば、濃度または特性が増加していく較正溶液を有してもよい。代替で、異なるスポンジ１６０は、センサの応答または適応の速度を決定するのに増加または低減する溶液濃度を有してもよい。センサ応答速度を決定することは、一部のセンサが、溶液中の検体濃度の変化と、センサに付着しようとする検体の傾向によって引き起こされる測定された検体濃度の変化との間で遅延を被るため、分析的保証を向上する。
【００２０】
較正溶液の適用（例えば、スポンジ１６０を用いる）は、時間経過に伴うセンサのドリフトなどの他の特性を決定することも可能にする。一実施形態では、スポンジ１６０は、センサドリフトがセンサについての分析的保証を向上するために決定され得るように、十分な時間にわたって適用され得る。高品質センサについては、ドリフトは、典型的には、ある期間の時間以上の後だけ観測可能である。
【００２１】
図２Ａおよび図２Ｂを参照すると、汗センサ装置２００は較正モジュール２４０に結合される。較正モジュール２４０は、貯留部２５４を定める筐体２５０を備えている。較正モジュール２４０は、図１Ａの担持体１５０と同様に、装置２００のための担持体として作用する。筐体２５０は、貯留部２５４から、装置２００内における少なくとも１つのセンサ２２０（図２Ｃに示している）への流体アクセスを提供する開口２２０ａを備えている。較正溶液２７０は、膜２６０によって筐体２５０の内部に密封されている。膜２６０の他方の側（つまり、開口２２０ａに隣接する貯留部２５４の側）には、ガス、不活性ガス、または流体２７８がある。（矢印２８０によって指示されるような）圧力を筐体２５０に加えることで、図２Ｂに示しているように、膜を破断させる。この点において、較正モジュール２４０は、矢印２８０の方向で加えられる圧力によって作動されており、較正溶液２７０は、開口２２０ａの近くで、装置２００の１つまたは複数のセンサと接触する。圧力は、例えば、使用者が筐体２５０を押し付けることで加えられ得る。一実施形態では、センサが湿らされることを確保するために、較正モジュール２４０は、開口２２０ａに隣接する膜２６０の側にスポンジ材料（図示せず）を備え得る。代替で、筐体２５０は、重力がセンサを過ぎる較正溶液２７０の移動における要因とならないように、および／または、較正溶液２７０が装置２００の１つまたは複数のセンサと接触することを確保するために揺動動作が加えられ得るように、設計されてもよい。
【００２２】
一実施形態では、装置２００は流れ抑制要素を備えてもよい。図２Ｃに示しているように、流れ抑制要素２９０が、装置２００と筐体２５０との間で開口２２０ａに隣接して位置決めされてもよい。ウィッキング材料２３０が、センサ２２０と流れ抑制要素２９０とを包囲する。流れ抑制要素２９０は、例えば、流れ制限要素（例えば、織物における低減された多孔性）、流れ狭窄要素（例えば、小さい小孔もしくは開口）、または、流れ停止要素であり得る。図示した実施形態では、抑制要素２９０は、小さい隙間などの流れ抑制構成要素を伴うポリマー膜である。この構成では、隙間は、皮膚からウィッキング材料２３０への汗の流れを抑制する。流れ抑制要素は、装置２００内のウィッキング材料２３０などの汗汲み上げ要素が較正溶液２７０で飽和されるのを防止できる。別の言い方をすれば、流れ抑制要素２９０は、較正溶液２７０が装置２００の汗汲み上げ能力を飽和するのを防止する。図２Ｃにおける抑制要素２９０は装置２００の一部であるとして示されているが、他の構成および技術が、装置２００への汗の流れを抑制するために使用されてもよい。一実施形態では、流れ抑制要素２９０は、図２Ａおよび図２Ｂに示した要素２５０の構成要素であってもよい。別の実施形態では、汲み上げ要素またはウィッキング要素は、除去されてもよく、または、較正の間はセンサに流体連結されず、構成が完了した後に追加もしくは連結されてもよい。
【００２３】
図２Ａおよび図２Ｂをさらに参照すると、一実施形態では、較正溶液２７０はゲルであってもよく、構成要素２７８は（前述したガス２７８ではなく）ゲルであってもよい。膜２６０が破断すると、較正ゲル２７０がゲル２７８と接触する。較正ゲル２７０における溶質は、開口２２０ａの近くで装置２００の１つまたは複数のセンサと接触するために、ゲル２７８を通じて、移流によって流れると言うよりも、拡散することになる。ゲル２７０、２７８の材料は、ゲル２７０中の溶質の拡散がゲル２７８を通じて起こり得る限り、同様または異なるゲル材料であり得る。この構成は、較正溶液がゲル２７８へと拡散するにつれて、変化する濃度レベルにわたってセンサの較正を可能にする。例えば、センサは、ゲル２７０についての開始濃度であるゼロ濃度レベルと、ゲル２７０が較正のために使用される少なくとも１つの溶質の濃縮を含むゲル２７０とゲル２８０との間の濃度のゆっくりとした拡散に基づく混合から生じる溶質の最大濃度との間で、較正され得る。構成要素２７０、２７８が液体である濃度勾配を伴う較正が達成され得るが、このような較正は、流体の混合が、より同質である構成要素２７０、２７８がゲルである溶質の拡散よりもしばしば無秩序であるため、より予測しにくくなる。
【００２４】
図２Ｂをさらに参照すると、一実施形態では、膜２６０の破断は、筐体２５０を装置２００から取り外すことで引き起こされ得る。これは、筐体２５０が取り外されるまで装置２００が皮膚に付着できないため、使用するのに都合がよい可能性がある。筐体２５０の取り外しの間、較正溶液２７０は装置２００のセンサと素早く（数秒間の短さで）接触でき、装置が皮膚に付けられ得る。センサの較正は、皮膚からの汗が較正溶液に取って代わるまで続く可能性があり、これは、それよりはるかに長いことはないとしても、少なくとも数分間を要し得る過程である。この手法は、接着パッチを皮膚に付けるために予測される最低限のこと（つまり、筐体２５０の取り外し）を越える過剰なステップなしで、使用者が使用前に装置を常に較正することを確保する。これは、より広くは、下地の要素もしくは材料、または筐体材料が装置の接着側から取り外されるときに起こる較正と言及され得る。
【００２５】
本発明の一態様では、較正モジュールは、２つ以上の較正溶液または較正媒体を備えてもよい。図３を参照すると、本発明の別の実施形態による装置および較正モジュールが示されている。装置３００および較正モジュール３４０は、図２Ａおよび図２Ｂに示したものと構造が同様であり、同様の符号は、以下において記載されているものを除いて、図２Ａおよび図２Ｂとの関連で図示および記載した同様の特徴に言及している。較正モジュール３４０は、貯留部３５４内に複数の溶液３７０、３７２、３７４を備えている。溶液３７０、３７２、３７４は、較正モジュール３４０内部のセンサを越えて開口３２０ａにわたって連続的に流れ得る（矢印３８０によって指示されているように）。溶液３７０、３７２、３７４は、開口３２０ａを越えて流れるとき、ガス３７８を置換する。較正モジュール３４０は、当業者によって知られているような流体の汲み上げ、出入り管理、または導入のための機構を備え得る。例えば、構成要素３７８は、センサに対して溶液３７０、３７２、３７４を吸い上げるスポンジ材料（図示せず）であり得る。さらに、装置３００は、溶液３７０、３７２、３７４とスポンジとの間に毛管現象を形成するために、エレクトロウェッティングゲート（図示せず）を備え得る。機械的なポンプおよび弁を用いたより複雑な構成も、本発明の他の実施形態において用いられ得ることは、理解されよう。溶液３７０、３７２、３７４は同一の濃度または異なる濃度を有し得る。一実施形態では、溶液３７０、３７２、３７４は、較正のために、最も低い濃度と、中間の濃度と、最も高い濃度とをそれぞれ含む。
【００２６】
本発明の他の態様では、較正モジュールは、２つ以上の溶質を含む１つまたは複数の較正溶液を備え得る。このような構成は、センサ較正を可能にする一方、汗の様々な溶質同士の間、または汗の特性同士の間の相互干渉の決定も可能にする。例えば、カリウム（Ｋ＋）とアンモニウム（ＮＨ４＋）とは、イオン選択電極センサにおいて互いと干渉することが知られている。一実施形態では、較正モジュール（例えば、モジュール３４０）は、高濃度のＫ＋と低濃度のＮＨ４＋とを含む第１の溶液を備え得る。較正モジュールにおける第２の溶液は、低濃度のＫ＋と高濃度のＮＨ４＋とを含み得る。さらに、溶液は、高い、中間の、または低い可能性のある等しい濃度のＫ＋およびＮＨ４＋を含み得る。この手法では、装置（例えば、装置３００）についてのＫ＋とＮＨ４＋との間の相互干渉が決定され得る。
【００２７】
図４を参照すると、装置４００は、外部導入ポート４９０と、流体をセンサへと移動する、または、センサを越えて移動させる微小流体構成要素４８０と、吸収スポンジ４６０を伴う任意選択の出口ポート４９２とを備えている。微小流体構成要素４８０は、例えば、５００ミクロンの幅である５０ミクロンのポリマー通路であり得る。１つまたは複数の較正溶液は、装置４００が皮膚１２にある間、ポート４９０において導入され得る。較正溶液は、様々な方法を用いてポート４９０において導入され得る。例えば、較正溶液は、滴の適用によって、カートリッジを用いて、前述したものなどの担持体を用いて、または、別の手法を用いて、ポート４９０において導入され得る。較正溶液に加えて、センサの有用性を回復する流体が、ポート４９０を通じて装置４００へと導入されてもよく、スポンジ４６０によってセンサにわたって微小流体構成要素４８０を通じて吸い上げられてもよい。様々な実施形態において、流体は、ｐＨレベルを変化させ得る、または、センサプローブに検体を解放させ得る。一実施形態では、このような回復流体が装置４００に導入され、続いて較正流体が導入されてもよい。流体（例えば、較正溶液）の導入は、流体の除去が後に続いてもよい。例えば、一実施形態では、スポンジ４６０は、回復流体の回収の後に除去されて廃棄されてもよい。スポンジ４６０は、ウィッキングスポンジ材料、織物、ヒドロゲル、または、流体を吸い上げもしくは回収できる他の材料であり得る。
【００２８】
図５を参照すると、装置５００は、微小流体構成要素５８０によって流体結合されている第１の貯留部５３０および第２の貯留部５３２を備えている。第１の貯留部５３０は較正溶液５７０を備え、第２の貯留部５３２は置換ガス５７８を備える。微小流体構成要素５８０は、センサ（図示せず）へのアクセスを提供するように設計される。本発明の態様を使用する装置５００の較正は、装置５００の動作が始まる前、皮膚１２からの汗が採取される前、または、当業者によって知られている時限微小流体動作のもう１つの方法を用いた装置５００の使用の間の時間に、起こり得る。例として、装置５００は、流体に長時間曝された後、膨張（閉じる）または溶解（開く）するゲートを備え得る。ゲート（図示せず）が、例えば、膨潤性ポリマー、または可溶性の塩もしくは糖によって、形成され得る。較正溶液５７０は、除去される前の所定の時間の期間にわたって、センサと接触したままであり得る。較正溶液５７０は、例えば、ウィッキングまたは汲み上げによって除去され得る。汲み上げは、内部加圧ガス供給源または発生ガス供給源（例えば、水の電気分解）の解放を用いて、ガス圧力（図示せず）を通じて遂行され得る。代替で、較正溶液５７０は、汗によって取って代わられるまで、センサと接触したままであり得る。
【００２９】
図６Ａおよび図６Ｂを参照すると、２つの同様のセンサ６２０、６２２を担持する基材６１０と、センサ６２０を覆う膜６１５とを備える装置６００が示されている。センサ６２０、６２２は、一方が較正されれば、一方についての較正が他方に用いられ得るのに十分に似ているという意味で似ている。一実施形態では、センサは、同じ発生方式（例えば、電流測定）のものであるが、異なる検体目標（例えば、グルコースおよび乳酸）を有する。他の実施形態では、センサは同じ検体を目標とし、１つのセンサについての較正は、典型的には、第２のセンサの較正を最良に予測するものである。装置６００は、膜６１５とセンサ６２０との間に、１つまたは複数の検体のための乾燥溶解性の較正媒体６７０をさらに備えている。較正媒体６７０は液体またはゲルであってもよい。図６Ｂは、矢印６９０ａによって指示しているように、皮膚１２によって発生される汗６９０の流れを示している。汗６９０における水分は、膜６１５を通って浸み込み、較正媒体６７０を溶解して較正溶液６７０ａを作り出す。膜６１５は、膜６１５を通る水分輸送を許容する一方、少なくともセンサ同士の間の較正の間、汗６９０から感知される検体の輸送を遅延または防止する。例として、膜６１５は、透析膜、ナフィオン膜、トラックエッチング膜、逆浸透膜、または密封基準電極から作られ得る。この構成では、センサ６２０、６２２は、検体のそれらの読み取りで比較され得る。溶液６７０ａにおける検体の濃度が分かっている場合、汗６９０における検体の濃度は、センサ６２０、６２２からの測定信号の比較を通じてより良好に決定され得る。例の実施形態では、膜６１５は、検体の濃度が予測可能であるように（つまり、較正媒体６７０が溶解するときの希釈の量が分かるように）、センサ６２０の周りに定められた容積を作り出す。例えば、センサ６２０の周りでの較正溶液６７０ａの体積を固定するために、細かい多孔質容積を有する多孔質ポリマーまたはポリマー織物が使用され得る。一実施形態では、較正溶液６７０ａは、汗に存在する検体の濃度より大きい検体の濃度を含み得る。例えば、較正溶液６７０ａは、較正媒体６７０を湿らせる汗に見出される濃度より大まかには１０倍以上の濃度で検体を含み得る。
【００３０】
図６Ｃを参照すると、一実施形態では、装置６００の要素６２０は、較正を必要とする２つ以上の異なるセンサ６２０ａおよび６２０ｂを表している。例えば、要素６２０における第１のセンサ６２０ａは、コルチゾールを検出するためのものとでき、しばしば、これらの種類のセンサは較正を必要とする。図６Ａに示したセンサ６２２は、この例では、同じくコルチゾールを検出するためのものであり、汗において見出されるコルチゾールを直接的に測定する。要素６２０における第２のセンサ６２０ｂは、Ｎａ＋を検出するためのものであり得る（イオン選択電極など、または、単純な溶液の電気伝導度を通じて）。乾燥溶解性の較正媒体６７０は、コルチゾール６７２ａおよびＮａ＋６７２ｂの既知の開始濃度を含む。水が膜６１５を通って移動するとき、水は較正媒体６７０を溶解または希釈して較正溶液６７０ａを作り出し、Ｎａ＋とコルチゾールとの両方の濃度が測定され得る。Ｎａ＋センサ６２０ｂは、較正溶液６７０ａを使用した較正を必要としないように構成され得る。例えば、センサ６２０ｂは、Ｎａ＋濃度を正確に定量化することができるように密封基準電極（図示せず）を有するイオン選択電極であり得る。水が移動してくるにつれてＮａ＋が希釈するとき、水の量も（Ｎａ＋を測定することで）間接的に測定され、そのため、コルチゾールの希釈の量は、水が膜６１５を通って移動し始めるときから、水が膜６１５とセンサ６２０ａ、６２０ｂとの間の空間を満たすまで、分かることになる。要約すると、Ｎａ＋の測定は、水が較正溶液６７０ａへと移動するにつれて起こった全体の希釈を決定するために使用され、そのため、較正溶液６７０ａにおけるコルチゾールの希釈の量も知られている。そのため、希釈の較正曲線は第１のセンサ６２０ａのために提供されてもよく、第１のセンサ６２０ａは、同じくセンサ６２２についての希釈の較正を提供する。
【００３１】
図６Ａ〜図６Ｃをさらに参照すると、本発明の一態様では、膜６１５は、汗が較正媒体に達する前に汗が１つまたは複数の検体で希釈されるように、汗の中の溶質と結合する結合媒体として作用し得る。このような結合媒体は、汗腺と少なくとも１つのセンサとの間の汗流路にある。結合媒体は、特定の結合（例えば、イオノフォアでドープされたビーズの層）、または、非特定の結合（例えば、セルロース）を提供し得る。結果として、較正媒体６７０は、較正センサに達する初期の汗は較正される検体で希釈されるため、本物の汗に見出される濃度より大きい検体の濃度を提供する必要はない。特定の結合材料は、ビーズ、または、当業者によって知られている特定の吸収を促進する他の材料を含む。
【００３２】
本発明の別の態様では、汗の中の検体の濃度が較正媒体に達する前に効果的に低減されるように、その検体を変性または変化させる条件が提供され得る。一実施形態では、検体がセンサ内でプローブに結合するのと同様の方法で検体に結合する溶液中の結合溶質が、センサと皮膚との間の場所に提供される。一実施形態では、結合溶質は、汗を皮膚からセンサへと持っていくウィッキング織物（図示せず）に存在し得る。検体が結合溶質と結合することになるため、センサプローブがこのような検体と結合するのが防止される。例えば、センサは、電気化学的なアプタマーまたは抗体のセンサであってよく、結合溶質は、溶液に懸濁されているアプタマーまたは抗体であり得る。当業者は、より純粋な流体が較正の目的のために提供されるように、汗の中の検体の濃度を低減するのに有用である他の技術を認識されよう。
【００３３】
図７Ａ〜図７Ｃを参照すると、装置７００は、第１の検体を感知するためのセンサ７２０と、第２の検体を感知するためのセンサ７２２とを備え、装置７００は、ポリマー基材７１０と、第１のセンサ７２０および第２のセンサ７２２をそれぞれ較正するための較正媒体７７０、７７２とをさらに備えている。較正媒体７７０、７７２は、様々な技術を用いて、センサ７２０、７２２に隣接して位置決めされ得る。例えば、較正媒体７７０、７７２は、汗によって湿らせられるまで、センサに隣接して置かれるか、接着剤もしくは溶解性媒体によって所定位置に保持されるか、または、他の技術によって所定位置に保持される乾燥粉末であり得る。較正媒体７７０、７７２は、概して、（１）汗を素早く吸い上げ、センサ７２０、７２２に対して汗の湿りを許容できる、（２）汗の中の検体の濃度を変化させるだけの素早さで、センサ７２０、７２２の近くで較正検体の濃縮を汗へと放出する、（３）実施されるセンサ７２０、７２２の較正にとって十分な長さで、汗の中の検体の較正濃度を維持する、および、（４）較正検体濃度が繰り返し可能であるように、初期に汗を取り込むときに概して固定された流体体積を促進する。一実施形態では、較正媒体７７０、７７２は、湿ったときに既知の体積まで素早く膨張するが、よりゆっくりと溶解し洗い流され、そのため、較正のための適切な時間を可能にする材料から作られ得る（後でさらに詳述する）。図７Ｂを参照すると、較正媒体７７０、７７２は、矢印７９０ａによって示されているように発生される汗７９０で湿らされ、較正溶液７７０ａ、７７２ａが形成される。時間と共に、較正溶液７７０ａ、７７２ａ内の較正検体は、図７Ｃに示しているように、新たな汗の中で感知が実施され得るように、汗７９０によってセンサ７２０、７２２から離れるように輸送される。
【００３４】
本発明の実施形態において有用である較正媒体は、様々な方法を用いて構築され得る。図７Ａ〜図７Ｃをさらに参照すると、較正媒体７７０、７７２は、汗と接触すると、または、その後のいつかにおいて、持続放出の技術を通じて、初期に含まれている検体を放出できる。様々な実施形態では、較正媒体は、水溶性ポリマーまたはヒドロゲルなど、溶解性ポリマーから形成され得る。例示のポリマーには、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、およびポリエチレンオキサイドがある。ＰＶＰは、湿潤環境において４０％水分まで膨張できる溶解性ポリマーとして使用できる、または、例えば紫外線曝露を用いて、交差結合される場合、ヒドロゲルとして使用できる。ＰＶＰ、ＰＶＡなど、水溶解性材料として、または、ヒドロゲルとして使用され得る。また、このようなポリマーは、このようなポリマーが溶解する速度に影響し得る分子量を幅広い範囲で有し得る。いくつかの例示の実施形態を検討する。一実施形態では、少なくとも１つの検体の既知の濃度を伴うＰＶＰの較正媒体が、センサに被覆される、または、センサに隣接して位置決めされる。湿らされると、または水和されると、ＰＶＰは較正溶液として作用する。このような較正媒体は、１つまたは複数の防腐剤を含むこともできる。ＰＶＰまたは他の適切な材料が水溶解性ポリマーとして使用される場合、その表面は、ＰＶＰが感知できるほどに溶解する前に、汗で素早く湿らされる。そして、ＰＶＰが完全に溶解する前に、汗はポリマーを水和し、センサ較正を可能にする。そのために、ポリマー自体は、それが完全に溶解する前の時間の期間（数秒間または数分間）にわたって、ポリマーの内部に閉じ込められた検体を較正する予測可能な体積と希釈とを提供できる。装置が、電気的に能動的なビーコンアプタマーセンサなど、タンパク質に基づくセンサを備える一実施形態では、ポリマーに閉じ込められた較正検体は、サイトカインなどのタンパク質であり得る。初期に、汗からの水およびイオンがポリマーを湿らせるためにポリマーに浸透するとき、較正のタンパク質溶液は、ポリマーの内部で少なくとも部分的に動けなくされたままとなり、汗の中の外部タンパク質は少なくとも一部排除される。較正媒体は、外部タンパク質が、タンパク質の大きさに基づいて、タンパク質の溶解性または脂溶性などの特性に基づいて、吸収されるのを防止するように適合され得る。較正媒体は、汗からの特定の溶質および水が、他の溶質を排除しつつ、センサを電気的に作動させるイオノフォアを含んでもよい。そのため、較正媒体の予測可能な希釈または濃縮が、ポリマーが溶解する前にセンサ較正を許容するだけの長さで（例えば、数秒間または数分間の程度で）提供され得る。一実施形態では、較正検体は、ポリマーの下のセンサによって吸収されてもよく、センサは、水および塩（つまり、汗）がセンサに達し、これによって、完全な感知回路に必要とされる適切な電気的接続を可能にするとき、較正されることになる。同様に、ヒドロゲルは、較正のための適切な時間期間が提供される限り、較正媒体として使用され得る。例えば、一実施形態では、ヒドロゲルの厚さは、汗の中の外部の検体がヒドロゲルに入り、センサから提供される信号を支配する前に、センサを較正するために、ヒドロゲルの内部の検体を較正するための適切な時間を提供する。較正媒体が代替の較正を有し得ることは、理解されるべきである。例えば、様々な実施形態において、較正媒体は、検体で被覆された織物から構築され得る、または、異なる特性を有するポリマーもしくはゲルの複数の層を含み得る。また、ｐＨを変更するなどの様々な技術が、新たな汗の測定との干渉を防止するために、センサからの較正検体を除去するために使用され得る。
【００３５】
図８を参照すると、装置８００は、例えば２つのセンサ８２０、８２２と、２つの理想的な較正媒体８７０とを含んでいる。センサ８２０、８２２と較正媒体８７０とは、基材８１０と密封材８１７とによって包み込まれている。密封材８１７は、流体ゲート８８０、８８２を備えている。流体ゲート８８０、８８２は、流体ゲート８８０、８８２の設計によって決定されるように（例えば、ゲートの溶解速度に基づいて）、汗をセンサ８２０、８２２へと到達させるだけである。一実施形態では、ゲート８８０、８８２が流体の通過を許容するとき、汗は、最初に膜８１０と密封材８１７との間の空間に入り、較正媒体８７０を溶解する。この手法では、センサ８２０、８２２は、先に詳述した較正方法と同様に構成され得る。時間の期間（例えば、３０分間）の後、較正媒体８７０は、新たな汗が入るにつれて微小流体ゲート８８０、８８２を通じて拡散する。媒体８７０が拡散するにつれて、センサ８２０、８２２の近くでの検体濃度は、新たな汗の中の検体濃度によって徐々に支配される。図８の装置８００は、センサが較正されるときに有用であり、必要とされるときのみ使用される。一実施形態では、センサ８２０、８２２は一回限り使用され、装置８００は複数回の読み取りを実施するように構成される。２つ以上の微小流体ゲートが使用される場合、ゲートは、同時または異なる時に開閉するように設計されてもよい。複数の流体ゲート構成が、サーモキャピラリ、エレクトロウェッティング、蝋障壁の融解、または他の既知の技術を含め、当業者によって知られているように可能である。一実施形態では、センサ８２０または８２２へと汗を連続して流し、較正媒体が拡散するための必要性を軽減し、それによって装置を較正するために必要とされる時間を短縮するために、ウィッキング要素が含まれてもよい（図示せず）。
【００３６】
図８をさらに参照すると、一実施形態では、ゲート８８０、８８２の一方または両方は溶解性ポリマー（例えば、ＰＶＰまたはＰＶＡ）とでき、密封材８１７は、水に対して浸透性であるが、少なくとも１つの較正される検体に対して極めて不浸透性である膜（例えば、透析膜）であり得る。そのため、汗が膜８１７を湿らせるにつれて、水は膜８１７を通って移動し、較正媒体８７０を溶解し、センサ８２０、８２２の少なくとも一方を較正するための較正溶液を作り出す。後に、ゲート８８０、８８２の少なくとも一方が溶解していくにつれて、膜８１７によって以前に排除された検体を含む汗が、溶解されたゲート８８０、８８２を通って入り、ここでは構成されているセンサ８２０またはセンサ８２２によって感知され始める。図８に示した正確な寸法は、非限定的であり、単なる例として提供されている。例えば、一実施形態では、ゲート８８０、８８２は膜８１７より大きい領域を有し得る。
【００３７】
明確性の目的のために、本発明の前述の実施形態における層および材料は、汗とセンサとの「間に」、一部の場合には、各々の層または材料の１つまたは複数の「間に」、位置決めされるとして図示および記載されている。しかしながら、「間に」などの用語は、そのように狭く解釈されるべきではない。「間に」という用語は、「関心のある流体の通路内に」の意味に解釈されてもよい。例えば、一実施形態では、３ｍｍの長さで面積が３００μｍｘ１００μｍである微小流体通路が皮膚からセンサへの汗の流れの通路内に（または、「間に」）位置決めされてもよく、本発明について図示および詳述された特徴のうちのどれか１つまたは複数を備え得る。そのため、「間に」または他の用語は、本発明の精神内にあると解釈されるべきであり、代替の実施形態は、具体的に図示または記載されていないが、図示した実施形態の同様の目的または機能を明らかに捉えている限り、本発明に含まれる。
【００３８】
これは、本発明を実施する好ましい方法と共に本発明を記載してきたが、本発明自体は、添付の特許請求の範囲だけによって定められるべきである。
【符号の説明】
【００３９】
１２  皮膚
１００  汗センサ装置
１２０ａ  開口
１５０  担持体
１５２  担持体
１６０  スポンジ
２００  汗センサ装置
２２０  センサ
２２０ａ  開口
２３０  ウィッキング材料
２４０  較正モジュール
２５０  筐体
２５４  貯留部
２６０  膜
２７０  較正溶液、較正ゲル
２７８  ガス、不活性ガス、流体、ゲル
２８０  圧力
２９０  流れ抑制要素
３００  装置
３２０ａ  開口
３４０  較正モジュール
３５４  貯留部
３７０、３７２、３７４  溶液
３７８  ガス
４００  装置
４６０  吸収スポンジ
４８０  微小流体構成要素
４９０  外部導入ポート
４９２  出口ポート
５００  装置
５３０  第１の貯留部
５３２  第２の貯留部
５７０  較正溶液
５７８  置換ガス
５８０  微小流体構成要素
６００  装置
６１０  基材
６１５  膜
６２０  センサ、要素
６２０ａ、６２０ｂ  センサ
６２２  センサ
６７０  較正媒体
６７０ａ  較正溶液
６９０  汗
６９０ａ  流れ
７００  装置
７２０  第１のセンサ
７２２  第２のセンサ
７７０、７７２  較正媒体
７７０ａ、７７２ａ  較正溶液
７９０  汗
８００  装置
８１０  基材
８１７  密封材、膜
８２０、８２２  センサ
８７０  較正媒体
８８０、８８２  流体ゲート
【図１Ａ】
2017529216.tif 000003
【図１Ｂ】
2017529216.tif 000004
【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
2017529216.tif 000006
【図２Ｂ】
2017529216.tif 000007
【図２Ｃ】
2017529216.tif 000008
【図３】
2017529216.tif 000009
【図４】
2017529216.tif 000010
【図５】
2017529216.tif 000011
【図６Ａ】
2017529216.tif 000012
【図６Ｂ】
2017529216.tif 000013
【図６Ｃ】
2017529216.tif 000014
【図７Ａ】
2017529216.tif 000015
【図７Ｂ】
2017529216.tif 000016
【図７Ｃ】
2017529216.tif 000017
【図８】
2017529216.tif 000018
【国際調査報告】
2017529216.tif 000019