(57)【要約】  本発明は、重度の眼疾患を処置、予防または低減する方法を提供する。本発明の方法は、抗Ａｎｇ−２抗体のようなアンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）阻害剤を含む治療用組成物を血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）と併用してそれを必要とする対象に投与することを含む。
2017536414.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管性眼疾患または障害を処置する方法であって、アンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をそれを必要とする対象に硝子体内投与することを含む前記方法。
【請求項２】
医薬組成物は血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
医薬組成物は約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬのＡｎｇ−２阻害剤を含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４】
医薬組成物は１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬまたは１２０ｍｇ／ｍＬのＡｎｇ−２阻害剤を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
医薬組成物は約４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＥアンタゴニストを含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
Ａｎｇ−２阻害剤を０．５ｍｇ〜１０ｍｇの用量でそれを必要とする対象に投与する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ＶＥＧＥアンタゴニストを５０μｇ〜５ｍｇの用量でそれを必要とする対象に投与する、請求項２〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
眼疾患または障害は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
眼疾患または障害は加齢黄斑変性である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
眼疾患または障害は糖尿病性黄斑浮腫である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
網膜血管新生を抑制する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
【請求項１２】
Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して硝子体内投与する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
Ａｎｇ−２阻害剤を約１〜１０μｇの用量で投与する、請求項１１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
ＶＥＧＦアンタゴニストを約１〜１０μｇの用量で投与する、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して皮下に投与する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり５〜３０ｍｇの用量で投与する、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＶＥＧＦアンタゴニストを、対象の体重１ｋｇ当たり５〜３０ｍｇの用量で投与する、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
併用処置は、Ａｎｇ−２阻害剤またはＶＥＧＦアンタゴニスト単独のいずれかの投与と比較して血管面積を少なくとも６５％減少させる、請求項１１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
網膜血管新生は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される眼疾患または障害に関連する、請求項１１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
網膜血管新生を抑制する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
【請求項２１】
Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して硝子体内投与する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
Ａｎｇ−２阻害剤を０．１〜１０．０ｍｇの用量で投与し、ＶＥＧＦアンタゴニストを０．１ｍｇ〜５ｍｇの用量で投与する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり１５ｍｇの用量で２週間ごとに１回静脈内投与する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
ＶＥＧＦアンタゴニストを０．１ｍｇ〜５ｍｇの用量で硝子体内投与する、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
網膜血管新生は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、中心網膜静脈閉塞症および網膜静脈分枝閉塞症からなる群から選択される眼疾患または障害に関連する、請求項２０〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
血管漏出を抑制する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
【請求項２７】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して少なくとも３週間阻害される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して３週間超阻害される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して少なくとも８週間阻害される、請求項２６または２８に記載の方法。
【請求項３０】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して少なくとも１０週間阻害される、請求項２６〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり５〜５０ｍｇの用量で０．０５〜２ｍｇのＶＥＧＦアンタゴニストと併用して投与する、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり約１５ｍｇの用量で１２５μｇのＶＥＧＦアンタゴニストと併用して投与する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
Ａｎｇ−２阻害剤を静脈内投与または皮下投与する、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
ＶＥＧＦアンタゴニストを硝子体内投与する、請求項２６〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して硝子体内投与する、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
Ａｎｇ−２阻害剤を約５００μｇの用量で約１２５μｇのＶＥＧＦアンタゴニストと併用して投与する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
血管漏出は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される眼疾患または障害に関連する、請求項２６〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
血管漏出は網膜血管新生に関連する、請求項２６〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
眼疾患を有する対象における血管漏出を抑制する方法であって、単一用量のＶＥＧＦアンタゴニストとそれに続く１つまたはそれ以上の用量のＡｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物をそれを必要とする該対象に投与することを含む前記方法。
【請求項４０】
ＶＥＧＦアンタゴニストを１００〜５００μｇの用量で投与する、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
ＶＥＧＦアンタゴニストを硝子体内投与する、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】
Ａｎｇ−２阻害剤を静脈内投与または皮下投与する、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
１回またはそれ以上の用量のＡｎｇ−２阻害剤を２週間ごとに１回投与する、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４４】
１回またはそれ以上の用量のＡｎｇ−２阻害剤はそれぞれ対象の体重１ｋｇ当たり１５ｍｇを含む、請求項３９〜４３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して少なくとも４週間阻害される、請求項３９〜４４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して４週間超阻害される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して少なくとも８週間阻害される、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独で投与した対象と比較して少なくとも１０週間阻害される、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
血管漏出は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される眼疾患または障害に関連する、請求項３９〜４８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】
血管漏出は網膜血管新生に関連する、請求項３９〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
眼疾患を有する対象に投与される硝子体内注射の回数を低減する方法であって、ＶＥＧＦアンタゴニストと併用して、治療有効量のＡｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物の第１の初回用量とそれに続く１つまたはそれ以上の第２の用量をそれを必要とする該対象に連続して投与することを含み、該ＶＥＧＦアンタゴニストの硝子体内投与が、該ＶＥＧＦアンタゴニスト単独の投与を受けた対象と比較して９週間ごとに１回に減少する前記方法。
【請求項５２】
１つまたはそれ以上の第２の用量は医薬組成物の２〜１０の用量を含む、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
医薬組成物の少なくとも２回の第２の用量を対象に投与し、各第２の用量を直近の用量の１〜４週間後に投与する、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
医薬組成物の初回用量および１つまたはそれ以上の第２の用量はそれぞれ約０．５〜１０ｍｇのＡｎｇ−２阻害剤を含む、請求項５１〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
Ａｎｇ−２阻害剤を静脈内または皮下投与する、請求項５１〜５４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５６】
ＶＥＧＦアンタゴニストを約１〜５ｍｇの用量で投与する、請求項５１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
眼疾患は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生および脈絡膜血管新生からなる群から選択される、請求項５１〜５６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
脈絡膜血管新生を阻害する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
【請求項５９】
Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり約１０〜５０ｍの用量で皮下投与する、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり２５ｍｇの用量で投与する、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
脈絡膜血管新生は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される眼疾患または障害に関連する、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６２】
Ａｎｇ−２阻害剤は抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片である、請求項１〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号７のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
ＶＥＧＦアンタゴニストはＶＥＧＦ受容体ベースのキメラ分子（ＶＥＧＦトラップ）を含む、請求項２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
ＶＥＧＦトラップはＶＥＧＦＲ１の１つまたはそれ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、ＶＥＧＦＲ２の１つまたはそれ以上のＩｇ様ドメインおよび多量体化ドメインを含む、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＶＥＧＦトラップはＶＥＧＦＲ１のＩｇ様ドメイン２、ＶＥＧＦＲ２のＩｇ様ドメイン３および多量体化ドメインを含む、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
ＶＥＧＦトラップはアフリベルセプトである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
ＶＥＧＦアンタゴニストは、配列番号１１のアミノ酸２７〜４５７からなる２つのポリペプチドの二量体からなる、請求項２〜５７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
安定液体製剤であって、
（ｉ）血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト；
（ｉｉ）ヒトアンジオポエチン（ｈＡｎｇ−２）に特異的に結合する抗体；
（ｉｉｉ）６．２±０．３のｐＨの緩衝剤；
（ｉｖ）非イオン性界面活性剤；
（ｖ）等張化剤；および
（ｖｉ）安定剤
を含み、ＶＥＧＦアンタゴニストが配列番号１１のアミノ酸２７〜４５７からなる前記安定液体製剤。
【請求項７２】
抗体は、ＨＣＤＲ１が配列番号３を有し、ＨＣＤＲ２が配列番号４を有し、ＨＣＤＲ３が配列番号５を有する、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびにＬＣＤＲ１が配列番号６を有し、ＬＣＤＲ２が配列番号７を有し、ＬＣＤＲ３が配列番号８を有する、３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む、請求項７１に記載の製剤。
【請求項７３】
抗体は、配列番号１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および配列番号２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項７１または７２のいずれか１項に記載の製剤。
【請求項７４】
ＶＥＧＦアンタゴニスト濃度は約４０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬである、請求項７３に記載の製剤。
【請求項７５】
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗体を含む、請求項７４に記載の製剤。
【請求項７６】
１０ｍｇ／ｍＬ、２０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬおよび１２０ｍｇ／ｍＬからなる群から選択される濃度の抗体を含む、請求項７５に記載の製剤。
【請求項７７】
約５〜１００ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニスト；
約１０〜１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２抗体；
約５〜５０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ約６．２；
約０．０１〜０．１％（重量／容量）ポリソルベート；
約１０〜５０ｍＭ塩化ナトリウム；および
約１〜２０％（ｗ／ｖ）スクロース
を含む、請求項７１に記載の製剤。
【請求項７８】
１０ｍｇ／ｍｌ、２０ｍｇ／ｍｌ、６０ｍｇ／ｍｌおよび１２０ｍｇ／ｍｌからなる群から選択される濃度の抗体を含む、請求項７７に記載の製剤。
【請求項７９】
緩衝剤はリン酸ナトリウムである、請求項７６に記載の製剤。
【請求項８０】
リン酸ナトリウム濃度は１０ｍＭ±１．５ｍＭである、請求項７９に記載の製剤。
【請求項８１】
非イオン性界面活性剤はポリソルベート２０である、請求項７６に記載の製剤。
【請求項８２】
ポリソルベート２０の濃度は約０．０３％（重量／容量）±０．００４５％である、請求項８１に記載の製剤。
【請求項８３】
等張剤は塩化ナトリウムである、請求項７６に記載の製剤。
【請求項８４】
塩化ナトリウムの濃度は約４０ｍＭ±６．０ｍＭである、請求項８３に記載の製剤。
【請求項８５】
安定剤はスクロースである、請求項７６に記載の製剤。
【請求項８６】
スクロースの濃度は約５％±０．７５％（重量／容量）である、請求項８５に記載の製剤。
【請求項８７】
ＶＥＧＦアンタゴニスト濃度は４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬであり、抗体濃度は１０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬ、緩衝剤は１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２±０．３であり、非イオン性界面活性剤は０．０３％重量／容量±０．００４５％ポリソルベート２０であり、等張化剤は４０ｍＭ塩化ナトリウムであり、安定剤は５％重量／容量±１．５％スクロースである、請求項７１に記載の製剤。
【請求項８８】
ＶＥＧＦアンタゴニスト濃度は４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬであり、抗体濃度は２０ｍｇ／ｍＬ±３．０ｍｇ／ｍＬであり、緩衝剤は１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２±０．３であり、非イオン性界面活性剤は０．０３％重量／容量±０．００４５％ポリソルベート２０であり、等張化剤は４０ｍＭ塩化ナトリウムであり、安定剤は５％重量／容量±１．５％スクロースである、請求項７１に記載の製剤。
【請求項８９】
ＶＥＧＦアンタゴニスト濃度は４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬであり、抗体濃度は６０ｍｇ／ｍＬ±９．０ｍｇ／ｍＬであり、緩衝剤は１０ｍＭ±１．５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２±０．３であり、非イオン性界面活性剤は０．０３％重量／容量±０．００５％ポリソルベート２０であり、等張化剤は４０ｍＭ塩化ナトリウムであり、安定剤は５％重量／容量±１．５％スクロースである、請求項７１に記載の製剤。
【請求項９０】
ＶＥＧＦアンタゴニスト濃度は４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬであり、抗体濃度は１２０ｍｇ／ｍＬ±１８．０．０ｍｇ／ｍＬであり、緩衝剤は１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ６．２±０．３であり、非イオン性界面活性剤は０．０３％重量／容量±０．００４５％ポリソルベート２０であり、等張化剤は４０ｍＭ塩化ナトリウムであり、安定剤は５％重量／容量±１．５％スクロースである、請求項７１に記載の製剤。
【請求項９１】
血管性眼疾患または障害を処置または改善する方法であって、請求項７１〜９０のいずれか１項に記載の製剤をそれを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
【請求項９２】
眼疾患または障害は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
血管性眼疾患を処置する方法であって、治療活性量の抗Ａｎｇ−２阻害剤およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の用量をそれを必要とする対象に連続して投与することを含む前記方法。
【請求項９４】
医薬組成物は約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤を含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９５】
医薬組成物は約４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項９３〜９４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９６】
医薬組成物は約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項９３に記載の方法。
【請求項９７】
医薬組成物は１０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項９３〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９８】
医薬組成物は２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項９３〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９９】
医薬組成物は６０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項９３〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１００】
医薬組成物は１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項９３〜９６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０１】
医薬組成物の初回用量を対象に投与し、その後、該医薬組成物の１つまたはそれ以上の第２の用量を該対象に投与することを含み、各第２の用量を直近の用量の１〜４週間後に投与する、請求項９３〜１００のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０２】
少なくとも２つの第２の用量を対象に投与し、各第２の用量を直近の用量の４週間後に投与する、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
医薬組成物の１つまたはそれ以上の第３の用量を対象に投与することをさらに含み、各第３の用量を直近の用量の５〜１２週間後に投与する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
各第３の用量を直近の用量の８週間後に投与する、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
医薬組成物の各用量は約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約２ｍｇのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項１０１〜１０４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０６】
医薬組成物の各用量は１０ｍｇ／ｋｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｋｇのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０７】
医薬組成物の各用量は約２０ｍｇ／ｋｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｋｇのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０８】
医薬組成物の各用量は約６０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１０９】
医薬組成物の各用量は約１２０ｍｇ／ｋｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および４０ｍｇ／ｋｇのＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項１０５に記載の方法。
【請求項１１０】
医薬組成物の各用量を対象に硝子体内投与する、請求項９３〜１０９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１１】
眼疾患は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される、請求項９３〜１１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１２】
眼疾患は加齢黄斑変性である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
眼疾患は糖尿病性黄斑浮腫である、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１４】
Ａｎｇ−２阻害剤は抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片である、請求項９３〜１１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１５】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）のＣＤＲを含む、請求項１１４に記載の方法。
【請求項１１６】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）、配列番号４のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２、配列番号５のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３、配列番号６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）、配列番号７のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２、および配列番号８のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含む、請求項１１４または１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよび配列番号２のアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１１６に記載の方法。
【請求項１１８】
ＶＥＧＦアンタゴニストはＶＥＧＦ受容体ベースのキメラ分子（ＶＥＧＦトラップ）を含む、請求項９３〜１１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１９】
ＶＥＧＦトラップはＶＥＧＦＲ１の１つまたはそれ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、ＶＥＧＦＲ２の１つまたはそれ以上のＩｇ様ドメインおよび多量体化ドメインを含む、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
ＶＥＧＦトラップはＶＥＧＦＲ１のＩｇ様ドメイン２、ＶＥＧＦＲ２のＩｇ様ドメイン３および多量体化ドメインを含む、請求項１１９に記載の方法。
【請求項１２１】
ＶＥＧＦトラップはアフリベルセプトである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
ＶＥＧＦアンタゴニストは、配列番号１１のアミノ酸２７〜４５７からなる２つのポリペプチドの二量体からなる、請求項９３〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管性眼疾患の少なくとも１つの症状または徴候を処置または改善する方法であって、アンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）阻害剤および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストを含む医薬製剤をそれを必要とする対象に投与することを含む方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
血管性眼疾患は、今日の老年人口における失明の主要な原因である。これらの疾患は、網膜内に成長する異常な「漏出」血管を特徴とする。この患者集団への最大の寄与因子のうちの２つは、糖尿病性網膜症および滲出性加齢黄斑変性である。
【０００３】
糖尿病性網膜症（ＤＲ）は、米国における視力障害の主要な原因である（非特許文献１；非特許文献２）。糖尿病性網膜症は、基底膜の肥厚（非特許文献３）から始まり、最終的に血管閉塞および血管新生（非特許文献４）につながる微小血管代償不全に起因する。糖尿病を有する４０歳以上の患者の約２８がＤＲを有し、４．４％が視力を脅かすＤＲを有することが推定されている（非特許文献５）。糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、ＤＲの一症状であり、若年および中年成人における失明の最も高頻度の原因である（非特許文献６；非特許文献７）。
【０００４】
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、先進国世界における５０歳以上における重度視力障害の主要な原因である。近年、新生血管を伴うＡＭＤを有する患者に著しい視力回復の希望を与える、血管新生阻害剤の導入によるＡＭＤの処置の大きな進歩がなされた（非特許文献８）。
【０００５】
抗血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）療法（例えば、アフリベルセプト）は、新生血管を伴うＡＭＤおよびＤＭＥに対する標準治療処置である。これらの患者集団におけるアフリベルセプトの有効性および安全性は、十分に明らかにされている（非特許文献９）。しかし、ＡＭＤでは、患者の約９５％が視力を維持するが、患者の約３０％のみが１年目に最良矯正視力（ＢＣＶＡ）の１５以上の文字の改善を達成した。ＤＭＥでも、アフリベルセプトの場合およびラニビズマブの場合にみられるようにＤＭＥに起因する失明を有する患者の５０％未満が１および２年にわたり１５以上の文字の改善を達成するので、処置の帰結の改良の可能性がある。また、ラニビズマブを用いた試験において、ラニビズマブ月１回の処置を３年間受けた患者の最大７．２％に増殖性網膜症の臨床的証拠が発生し、患者の最大３．２％が、視覚障害をもたらす可能性がある処置モダリティである、汎網膜光凝固術を必要とした（非特許文献１０）。
【０００６】
ラニビズマブおよびアフリベルセプトなどの抗ＶＥＧＦ療法薬の硝子体内（ＩＶＴ）送達は、網脈絡膜疾患に対する有効性および安全性を示した。しかし、血管透過性、血管新生および他の血管機能不全に寄与する多くの付加的な因子が存在する。血管透過性に寄与する最も研究された因子の１つは、アンジオポエチン２（Ａｒｇ−２）である。Ａｒｇ−２は、正常血管の発生中に、また成人における生理的または病的血管新生の過程においても、血管内皮細胞により発現される（非特許文献１１；非特許文献１２）。その受容体Ｔｉｅ−２へのＡｒｇ−２の結合によって、正常血管の発生中および病的血管新生を特徴とする状態における血管新生が促進される。マウスにおけるＡｒｇ−２の遺伝子欠失によって、正常網膜血管の発生および病的血管新生の両方が著しく抑制される（非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。アンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）を標的とすることにより、これらの因子のいずれかの単独または組合せの抑制を支援することができ、抗ＶＥＧＦ療法単独の成功が改善される可能性がある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｋｌｅｉｎら  １９８４年、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ９１巻：１４６４〜１４７４頁
【非特許文献２】Ｍｏｓｓら  １９９８、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １０５巻：９９８〜１００３頁
【非特許文献３】Ｒｕｇｇｉｅｒｏら  １９９７年、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔａｂ．  ２３巻：３０〜４２頁
【非特許文献４】Ｐｏｒｔａら  ２００２年、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ．  ４５巻：１６１７〜１６３４頁
【非特許文献５】Ｚｈａｎｇら  ２０１０年、ＪＡＭＡ．  ３０４巻：６４９〜６５６頁
【非特許文献６】Ｋｌｅｉｎら  １９８４年、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  ９１巻：１４６４〜１４７４頁
【非特許文献７】Ｍｏｓｓら  １９９８年、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １０５巻：９９８〜１００３頁
【非特許文献８】Ｋｅａｎｅら  ２０１２年、Ｓｕｒｖ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  ５７巻：３８９〜４１４頁
【非特許文献９】Ｄｉｘｏｎら  ２００９年；Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １８巻：１５７３〜８０頁
【非特許文献１０】Ｂｒｏｗｎら  ２０１３年、Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  １０巻：２０１３〜２２頁
【非特許文献１１】Ｍａｉｓｏｎｐｉｅｒｒｅら  １９９７年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７７巻：５５〜６０頁
【非特許文献１２】Ｈｏｌａｓｈら  １９９９年、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８４巻：１９９４〜８９頁
【非特許文献１３】Ｈａｃｋｅｔｔら  ２０００年、Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １８４巻：２７５〜８３頁
【非特許文献１４】Ｈａｃｋｅｔｔら  ２００２年、Ｊ．  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  １９２巻：１８２〜７頁
【非特許文献１５】Ｇａｌｅら  ２００２年、Ｄｅｖ．  Ｃｅｌｌ  ３巻：４１１〜４２３頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の一態様によれば、対象における血管性眼疾患または障害の少なくとも１つの症状または徴候を処置、予防または改善する方法を提供する。本発明のこの態様による方法は、アンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニストと併用投与する。
【０００９】
本発明の別の態様によれば、対象における網膜血管新生を抑制する方法を提供する。方法は、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、併用投与は、Ａｎｇ−２阻害剤またはＶＥＧＦアンタゴニスト単独の投与と比較して網膜血管面積の少なくとも６５％の減少をもたらす。いくつかの実施形態では、網膜血管新生は、血管性眼疾患または障害に関連する。
【００１０】
別の態様では、本発明は、血管新生に関連する眼疾患または障害を有する対象における網膜血管新生を阻害する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１１】
本発明の別の態様によれば、眼疾患または障害を有する対象における血管漏出を阻害する方法を提供する。方法は、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む。
【００１２】
関連する態様では、本発明は、血管新生に関連する眼疾患または障害を有する対象における血管漏出を抑制する方法であって、ＶＥＧＦアンタゴニストの単一用量とそれに続きＡｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の用量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１３】
いくつかの実施形態では、血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独を投与した対象と比較して少なくとも３週間、３週間超、４週間超、８週間超または１０週間超阻害される。
【００１４】
別の態様では、本発明は、脈絡膜血管新生を阻害する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。
【００１５】
本発明の別の態様によれば、血管性眼疾患または障害を有する対象における頻回の硝子体内注射の依存性および処置負担を低減する方法を提供する。方法は、ＶＥＧＦアンタゴニストと併用して、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物の初回用量とそれに続く１つまたはそれ以上の第２の用量をそれを必要とする対象に連続して投与することを含み、医薬組成物の投与が、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独の投与を受けた対象と比較して９週間ごとに１回に減少する。
【００１６】
ある特定の実施形態では、血管性眼疾患を治療する方法であって、治療活性量の抗Ａｎｇ−２阻害剤および治療活性量のＶＥＧＦアンタゴニストを含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の用量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、方法は、医薬組成物の初回用量とそれに続く１つまたはそれ以上の第２の用量を投与することを含む。ある特定の実施形態では、各第２の用量は、直近の用量の１〜４週間後に投与する。ある特定の実施形態では、対象に１つまたはそれ以上の第３の用量を投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、各第３の用量は、直近の用量の５〜１２週間後に投与する。一実施形態では、各第２の用量は、直近の用量の４週間後に投与する。ある特定の実施形態では、各第３の用量は、直近の用量の８週間または１２週間後に投与する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＥアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＥアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、対象に硝子体内投与する。ある特定の実施形態では、医薬組成物の各用量は、約０．５ｍｇ〜約６ｍｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約２ｍｇのＶＥＧＥアンタゴニストを含む。一実施形態では、医薬組成物の各用量は、約３ｍｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約２ｍｇのＶＥＧＥアンタゴニストを含む。一実施形態では、医薬組成物の各用量は、約６ｍｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約２ｍｇのＶＥＧＥアンタゴニストを含む。
【００１７】
ある特定の実施形態では、眼疾患または障害は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される。
【００１８】
ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＥアンタゴニストとの共製剤として投与する。ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を単独でまたはＶＥＧＥアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に硝子体内投与する。代替実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を静脈内または皮下投与する。ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＥアンタゴニストと併用して静脈内または皮下投与し、ＶＥＧＥアンタゴニストは、硝子体内投与する。ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤およびＶＥＧＥアンタゴニストを局所または眼内（例えば、硝子体内）同時投与する。
【００１９】
ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を０．０５ｍｇ〜１０ｍｇの用量でそれを必要とする対象に投与する。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＥアンタゴニストを０．０１ｍｇ〜５ｍｇの用量でそれを必要とする対象に投与する。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を、対象の体重１ｋｇ当たり約１〜５０ｍｇの用量で投与する。
【００２０】
ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の第２の用量をそれを必要とする対象に投与する。いくつかの実施形態では、１つまたはそれ以上の用量は、医薬組成物の少なくとも２つの第２の用量を含む。ある特定の実施形態では、各第２の用量を直近の用量の１〜４週間後に投与する。
【００２１】
本発明の方法との関連で用いることができる例示的なＡｎｇ−２阻害剤は、例えば、Ａｎｇ−２の低分子化学阻害剤またはＡｎｇ−２を標的とする生物剤を含む。ある特定の実施形態によれば、Ａｎｇ−２阻害剤は、Ａｎｇ−２リガンドに結合し、Ｔｉｅ２シグナル伝達を遮断する抗体または抗原結合タンパク質である。ある特定の実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体または抗原結合タンパク質は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖ＣＤＲを含む。
【００２２】
本発明の組成物および方法にＡｎｇ−２阻害剤と併用して用いることができるＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ラニビズマブ）、低分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、スネチニブ）およびＶＥＧＦ阻害融合タンパク質（「ＶＥＧＦトラップ」）を含む。本発明の処置の方法に抗Ａｎｇ−２抗体と併用して用いることができるＶＥＧＦアンタゴニストの例は、ＶＥＧＦ阻害融合タンパク質であるアフリベルセプトである（ＵＳ７，０８７，４１１参照）。
【００２３】
別の態様では、本発明は、治療有効量のＡｎｇ−２阻害剤および薬学的に許容される担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ＶＥＧＦアンタゴニストをさらに含む。
【００２４】
ある特定の実施形態では、本発明は、ヒトを含む、対象における眼疾患または障害の少なくとも一症状または徴候を治療または予防または改善するための医薬の製造における本発明の抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片の使用を提供する。
【００２５】
ある特定の実施形態では、本発明は、ヒトを含む、対象における眼疾患または障害を治療するための医薬の製造におけるＶＥＧＦアンタゴニストとの併用での本発明の抗Ａｎｇ−２阻害剤の使用を提供する。
【００２６】
本発明の別の態様によれば、（ｉ）ＶＥＧＦアンタゴニスト；（ｉｉ）Ａｎｇ−２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片；（ｉｉｉ）緩衝剤；（ｉｖ）非イオン性界面活性剤；（ｖ）等張化剤；および（ｖｉ）安定剤を含む安定な液体医薬製剤を提供する。一実施形態では、（ｉ）ＶＥＧＦアンタゴニスト；（ｉｉ）Ａｎｇ−２に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片；（ｉｉｉ）緩衝剤；（ｉｖ）非イオン性界面活性剤；（ｖ）等張化剤；および（ｖｉ）安定剤を含む安定眼科用製剤を提供する。
【００２７】
一実施形態では、５ｍｇ／ｍＬ±０．７５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬ±１５ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＥＧＦアンタゴニストを提供し、１０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬ±１８．０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗Ａｎｇ−２抗体を提供する。いくつかの実施形態では、１０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬ〜約８０ｍｇ／ｍＬ±１２ｍｇ／ｍＬまたは２０ｍｇ／ｍＬ±３．０ｍｇ／ｍＬ〜６０ｍｇ／ｍＬ±９．０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＥＧＦアンタゴニストを提供する。一実施形態では、４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬまたは約４０ｍｇ／ｍＬの濃度のＶＥＧＦアンタゴニストを提供する。一実施形態では、１０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬまたは約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体を提供する。別の実施形態では、２０ｍｇ／ｍＬ±３．０ｍｇ／ｍＬまたは約２０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体を提供する。別の実施形態では、６０ｍｇ／ｍＬ±９．０ｍｇ／ｍＬまたは約６０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体を提供する。別の実施形態では、１２０ｍｇ／ｍＬ±１８．０ｍｇ／ｍＬまたは約１２０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗体を提供する。
【００２８】
ある特定の実施形態では、液体製剤のｐＨは、約ｐＨ５．５〜約ｐＨ６．５である。いくつかの実施形態では、液体製剤のｐＨは、ｐＨ６．２±０．３、ｐＨ６．２±０．２５、ｐＨ６．２±０．２、ｐＨ６．２±０．１５、ｐＨ６．２±０．１、ｐＨ６．２±０．０５、ｐＨ６．２±０．０１またはｐＨ６．２である。一実施形態では、液体製剤のｐＨは、ｐＨ６．２±０．３またはｐＨ６．２である。
【００２９】
一実施形態では、緩衝剤は、リン酸ナトリウムである。いくつかの実施形態では、リン酸ナトリウムは、５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜５０ｍＭ±７．５ｍＭ、５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜４０ｍＭ±６．０ｍＭまたは５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜２５ｍＭ±３．７５ｍＭの濃度である。一実施形態では、リン酸ナトリウムは、１０ｍＭ±１．５ｍＭまたは１０ｍＭの濃度である。
【００３０】
いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリオキシエチレン部分を含む非イオン性ポリマーである。いくつかの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポロキサマー１８８およびポリエチレングリコール３３５０のいずれか１つまたはそれ以上である。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０である。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート８０である。
【００３１】
ある特定の実施形態では、非イオン性界面活性剤は、０．００５％±０．０００７５％〜１％±０．１５％「重量容量」または「重量／容量」であり、例えば、０．１ｇ／ｍｌ＝１０％であり、０．０１ｇ／ｍｌ＝１％である。一実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０であり、それは、約０．０１％±０．００４５％〜約０．０５％±０．００４５％重量／容量の濃度である。一実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート２０であり、それは、０．０３％±０．００４５％重量／容量または約０．０３％重量／容量である。
【００３２】
いくつかの実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムである。一実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウムである。いくつかの実施形態では、等張化剤は、１０ｍＭ±１．５ｍＭ〜７５ｍＭ±１１．２５ｍＭ、２０ｍＭ±３．０ｍＭ〜６０ｍＭ±９．０ｍＭまたは３０ｍＭ±４．５ｍＭ〜５０ｍＭ±７．５ｍＭの濃度の塩化ナトリウムである。一実施形態では、塩化ナトリウムは、４０ｍＭ±６．０ｍＭまたは約４０ｍＭの濃度である。
【００３３】
一実施形態では、安定剤は、糖である。一実施形態では、糖は、スクロース、マンニトールおよびトレハロースからなる群から選択される。一実施形態では、安定剤は、スクロースである。
【００３４】
いくつかの実施形態では、安定剤は、１％±０．１５％重量／容量〜２０％±３％重量／容量の濃度である。いくつかの実施形態では、安定剤は、１％±０．１５％重量／容量〜１５％±２．２５％重量／容量または１％±０．１５％重量／容量〜１０％±１．５％重量／容量の濃度のスクロースである。一実施形態では、安定剤は、５％±０．１５％重量／容量または約５％重量／容量の濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、７．５％±１．１２５％重量／容量または約７．５％重量／容量の濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、１０％±１．５％重量／容量または約１０％重量／容量の濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、１２．５％±１．８７５％重量／容量または約１２．５％重量／容量の濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、１５％±２．２５％重量／容量または約１５％重量／容量の濃度のスクロースである。別の実施形態では、安定剤は、２０％±３％重量／容量または約２０％重量／容量の濃度のスクロースである。
【００３５】
一態様では、約５．５〜約６．５のｐＨで、（ｉ）５±０．７５ｍｇ／ｍＬ〜１００±１５．０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニスト；（ｉｉ）ヒトＡｎｇ−２に特異的に結合する５±０．７５ｍｇ／ｍｌ〜１５０±２２．５ｍｇ／ｍｌのヒト抗体；（ｉｉｉ）５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜５０ｍＭ±０．７５ｍＭリン酸ナトリウム；（ｉｖ）０．０１％±０．００１５％〜０．１％±０．０１５％（重量／容量）ポリソルベート２０；（ｖ）１０ｍＭ±１．５ｍＭ〜１００ｍＭ±１５ｍＭ塩化ナトリウム；および（ｖｉ）１％±０．１５％〜２０％±３％（重量／容量）スクロースを含む、安定液体医薬製剤を提供する。
【００３６】
一実施形態では、医薬製剤は、６．２±０．３のｐＨで、（ｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬのアフリベルセプト；（ｉｉ）１０±１．５ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２抗体；（ｉｉｉ）１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム；（ｉｖ）０．０３％±０．００４５％（重量／容量）ポリソルベート２０；（ｖ）４０ｍＭ±６．０ｍＭ塩化ナトリウム；および（ｖｉ）５％±０．７５％（重量／容量）スクロースを含む。
【００３７】
一実施形態では、医薬製剤は、６．２±０．３のｐＨで、（ｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬのアフリベルセプト；（ｉｉ）２０±３．０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２抗体；（ｉｉｉ）１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム；（ｉｖ）０．０３％±０．００４５％（重量／容量）ポリソルベート２０；（ｖ）４０ｍＭ±６．０ｍＭ塩化ナトリウム；および（ｖｉ）５％±０．７５％（重量／容量）スクロースを含む。
【００３８】
一実施形態では、医薬製剤は、６．２±０．３のｐＨで、（ｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬのアフリベルセプト；（ｉｉ）６０±９．０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２抗体；（ｉｉｉ）１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム；（ｉｖ）０．０３％±０．００４５％（重量／容量）ポリソルベート２０；（ｖ）４０ｍＭ±６．０ｍＭ塩化ナトリウム；および（ｖｉ）５％±０．７５％（重量／容量）スクロースを含む。
【００３９】
一実施形態では、医薬製剤は、６．２±０．３のｐＨで、（ｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬのアフリベルセプト；（ｉｉ）１２０±１８．０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２抗体；（ｉｉｉ）１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム；（ｉｖ）０．０３％±０．００４５％（重量／容量）ポリソルベート２０；（ｖ）４０ｍＭ±６．０ｍＭ塩化ナトリウム；および（ｖｉ）５％±０．７５％（重量／容量）スクロースを含む。
【００４０】
一態様では、本発明の液体医薬製剤は、容器入りで提供する。一実施形態では、容器は、ポリカーボネートバイアルである。別の実施形態では、容器は、ガラスバイアルである。一実施形態では、ガラスバイアルは、フッ化炭素被覆ブチルゴム栓付きの１型ホウケイ酸ガラスバイアルである。別の実施形態では、容器は、微量注入器である。別の実施形態では、容器は、注射器である。特定の実施形態では、注射器は、フッ化炭素被覆プランジャーを含む。一実施形態では、注射器は、３０Ｇ針、フッ化炭素被覆ブチルゴム栓およびラテックス不含有非細胞毒性ゴム先端キャップを装着した約５０００億分率未満のタングステンを含む２ｍＬ長ガラス注射器である。一実施形態では、注射器は、３０Ｇ薄壁針、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４４３２／５０  ＧＲＡＹ  Ｂ２−４０栓およびＦＭ２７ゴム先端キャップを装着したＮＵＯＶＡ  ＯＭＰＩ  ２ｍＬ長ガラス注射器である。ある特定の実施形態では、注射器は、２７Ｇ針を取り付けた１ｍＬ、２ｍＬまたは３ｍＬプラスチック注射器である。一実施形態では、容器は、ポリ塩化ビニルＩＶバッグである。別の実施形態では、容器は、ポリオレフィンＩＶバッグである。
【００４１】
一態様では、本発明は、先行する態様のいずれかの医薬製剤を含むプレフィルド型注射器を含む。
【００４２】
一態様では、先行する態様のいずれか１つの医薬組成物、容器および使用説明書を含むキットを提供する。一実施形態では、容器は、プレフィルド型注射器である。一実施形態では、容器は、ＦＬＵＲＯＴＥＣ被覆４４３２／５０ゴム栓を取り付けたホウケイ酸バイアルである。
【００４３】
本発明の他の実施形態は、以下の詳細な説明の閲覧により明らかになる。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本明細書における実施例２で述べる、抗Ａｎｇ−２抗体、ＶＥＧＦアンタゴニストまたは抗Ａｎｇ−２抗体とＶＥＧＦアンタゴニストとの併用により処置したＤＬ−アルファ−アミノアジピン酸（ＤＬ−アルファ−ＡＡＡ）誘発性網膜血管新生を有するウサギにおける漏出面積の変化百分率を示す図である。
【図２】本明細書における実施例３で述べる、以下の治療計画によりＶＥＧＦアンタゴニスト（ＶＧＴ）（または対照）を硝子体内（ＩＶＴ）処置し、抗Ａｎｇ−２抗体（または対照）を静脈内処置したＤＬ−アルファ−ＡＡＡ誘発性網膜血管新生を有するウサギにおける漏出面積の変化百分率を示す図である：（ａ）対照ＩＶＴおよび対照ＩＶ；（ｂ）ＶＧＴ  ＩＶＴおよび対照ＩＶ；（ｃ）対照ＩＶＴおよび抗Ａｎｇ−２抗体ＩＶ；ならびに（ｄ）ＶＧＴ  ＩＶＴおよび抗Ａｎｇ−２抗体ＩＶ。
【図３−１】本明細書における実施例５で述べる、ベースライン、対照（ｈＦｃ）および抗Ａｎｇ−２抗体（ｍＡｂ１）処置群の総網膜下病変サイズ（Ａ）、新生血管体積（Ｂ）および（Ｃ）血管密度の定量化を示す図である。ｈＦｃ処置対照と比較して、ｍＡｂ１処置群は、総病変体積の統計的に有意な減少（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定、ｐ＝０．００３４）および新生血管体積の減少の傾向（２６．９％）（Ｓｔｕｄｅｎｔ  ｔ検定、ｐ＝０．１６５８）を示した。エラーバーは、標準偏差を示す。
【図３−２】図３−１の続き。
【発明を実施するための形態】
【００４５】
本発明を説明する前に、本発明が、述べる特定の方法および実験条件に限定されず、したがって、そのような方法および条件が変化する可能性があることを理解すべきである。本明細書で用いる用語は、特定の実施形態のみを記述する目的のためであり、本発明の範囲が添付の特許請求の範囲によってのみ制限されることから、限定的なものではない。
【００４６】
別途定義しない限り、本明細書で用いるすべての技術および科学用語は、本発明が属する技術分野における通常の技術を有する者によって一般的に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書で用いられる「約」という用語は、列挙する個々の数値に関して用いる場合、値が列挙する値から１％以下変化し得ることを意味する。例えば、本明細書で用いられる「約１００」という表現は、９９および１０１ならびに間のすべての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４等）を含む。
【００４７】
本明細書で述べるものと類似または同等の方法および物質を本発明の実施に用いることができるが、好ましい方法および物質をこれから述べる。本明細書で言及するすべての刊行物は、それらの全体として述べるように参照によって本明細書に組み入れる。
【００４８】
血管性眼疾患または障害を処置または改善する方法
本発明は、対象における血管性眼疾患または障害の少なくとも１つの症状または徴候を処置、予防または改善する方法を含む。本発明のこの態様による方法は、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤を皮下または静脈内投与する。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して投与する。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して硝子体内投与する。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストとの単一配合製剤として投与する。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をＶＥＧＦアンタゴニストと併用投与し、Ａｎｇ−２阻害剤は、静脈内投与し、ＶＥＧＦアンタゴニストは、硝子体内投与する。ＶＥＧＦアンタゴニストは、Ａｎｇ−２阻害剤の前、後または同時に投与することができる。
【００４９】
本明細書で用いられる「処置する」、「処置すること」という用語または同様の用語は、血管性眼疾患の症状を軽減すること、症状の原因を一時的もしくは永久的に除去すること、または症状の出現を予防もしくは遅くすることを意味する。ある特定の実施形態では、本方法は、網膜血管新生、血管新生、血管漏出、中心窩の５００μｍの範囲内の網膜肥厚、隣接網膜の肥厚を伴う中心窩の５００μｍの範囲内の硬く、黄色の滲出物、および中心窩の１乳頭径以内にある、少なくとも１乳頭の範囲の網膜肥厚、霧視、飛蚊症、コントラストの喪失、複視ならびに最終的な視力喪失を含むが、これらに限定されない少なくとも１つの症状または徴候を処置または改善するのに有用である。ＡＭＤまたはＤＭＥなどの血管性眼疾患を処置する方法に関連して、用語は、治療の開始から、患者が糖尿病性網膜症の初期処置試験（Ｅａｒｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｔ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｔｕｄｙ）（ＥＤＴＲＳ）視力表上で１つまたはそれ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０またはそれ以上）の文字を得ることを意味する。ある特定の実施形態では、用語は、治療の開始から、１５文字を超えるまたは等しい視力喪失が患者において予防されることを意味する。
【００５０】
本明細書で用いられる「予防」、「予防すること」という用語または同様の用語は、血管性眼疾患の症状、徴候または合併症の発生を予防することを意味する。ＡＭＤまたはＤＭＥなどの血管性眼疾患を処置する方法に関連して、用語は、処置の開始から、中等度または重度の視力喪失が患者において予防されることを意味する。
【００５１】
本明細書で用いられる「血管性眼疾患または障害」は、眼内の血管を侵す眼疾患または障害である。疾患は、異常な血管新生（新たな血管の形成）または血管の閉塞もしくは遮断に起因して引き起こされる可能性がある。本明細書で用いられるこの用語は、血管新生に関連する眼疾患または障害を含む。用語は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞、網膜静脈分枝閉塞、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される眼疾患または障害を含むが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、「血管新生性眼疾患または障害」という用語は、「血管新生に関連する眼疾患または障害」という用語と同義で用いることができる。
【００５２】
ある特定の実施形態では、本発明は、対象における血管新生に関連する眼疾患または障害の少なくとも１つの症状または徴候を処置、予防または改善する方法を含み、疾患または障害は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心静脈閉塞、網膜静脈分枝閉塞、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される。
【００５３】
本明細書で用いられる「糖尿病性黄斑浮腫」（ＤＭＥ）は、糖尿病（１または２型）を有する人を侵す重篤な眼疾患を意味する。黄斑浮腫は、網膜内の血管が黄斑内に漏出し、液体およびタンパク質沈着物が眼の黄斑（網膜の黄色の中心部）の上または下に集まり、黄斑が厚くなり、腫脹すること（浮腫）の原因となる。黄斑が眼球の背部の網膜の中心部の近くにあるので、腫脹は、人の中心視を歪める可能性がある。ＤＭＥの主要な症状は、霧視、飛蚊症、コントラストの喪失、複視および最終的な視力喪失を含むが、これらに限定されない。ＤＭＥの病状は、通常網膜における水の移動を妨げる、血液網膜関門の破綻、それにより液体を網膜に蓄積させること、および網膜の肥厚の存在を特徴とする。ＤＭＥは、現在のところ、標準化検査表上で人が読むことができる最小の文字を決定する、視力検査、疾患の徴候について検査するための瞳孔拡張検査、光コヒーレンス断層撮影法（ＯＣＴ）またはフルオレセイン血管造影法（ＦＡ）などの画像検査および眼内圧力を測定する手段である、眼圧測定法からなる眼検査中に診断される。処置法を決定するために以下の試験も実施する：光コヒーレンス断層撮影法（ＯＣＴ）、フルオレセイン血管造影法およびカラー立体眼底写真撮影法。ＤＭＥは、おおむね限局性とびまん性という２つの主なカテゴリーに特徴付けることができる。限局性ＤＭＥは、十分な黄斑血流を伴う黄斑における独立した明瞭な漏出のはっきり限定された部位によって特徴付けられる。びまん性ＤＭＥは、眼の内部の血液網膜関門の崩壊に起因した、黄斑の周囲の毛細血管床全体の漏出に起因する。限局性およびびまん性に加えて、ＤＭＥは、臨床的検査所見に基づいて臨床的に有意な黄斑浮腫（ＣＳＭＥ）、非ＣＳＭＥおよび窩に影響を与える、中心の病変を伴うＣＳＭＥにも分類される。本発明は、上述のカテゴリーのＤＭＥを処置する方法を含む。
【００５４】
本明細書で用いられる加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、黄斑として公知の、網膜の小さな中心部分が損なわれた場合の重篤な眼の状態を意味する。滲出型のＡＭＤは、黄斑の下部の脈絡膜からの異常な血管の成長によって特徴付けられる。これは、脈絡膜血管新生と呼ばれる。これらの血管は、血液および体液を網膜内に漏出し、直線を波形に見えさせる視覚の歪みならびに盲点および中心視力の喪失を引き起こす。これらの異常な血管は、最終的に傷痕を残し、これが中心視力の永続的な喪失をもたらす。ＡＭＤの症状は、視心における暗く不鮮明な部分ならびに色覚の低下または変化を含む。ＡＭＤは、通常の眼検査で検出し得る。最も一般的な初期の徴候の１つは、ドルーセン−網膜下の小さい黄色の沈着物−または色素塊沈着の存在である。
【００５５】
本明細書で用いられる「それを必要とする対象」という語句は、眼疾患もしくは障害関連血管新生の１つもしくはそれ以上の症状もしくは徴候を示し、かつ／またはそれと診断されたヒトまたは非ヒト哺乳動物を意味する。「それを必要とする対象」という用語は、例えば、網膜血管新生、血管新生、血管漏出、窩中心の５００μｍ以内の網膜肥厚、隣接網膜肥厚を伴う窩中心の５００μｍ以内の硬い黄色の滲出物、および中心窩の１乳頭径以内にある、少なくとも１乳頭の範囲の網膜肥厚、霧視、飛蚊症、コントラストの喪失、複視ならびに最終的な視力喪失などの血管新生眼疾患の１つまたはそれ以上の徴候を、処置の前に、示す（または示した）対象も含み得る。
【００５６】
本発明に関連して、「それを必要とする対象」は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞症、網膜静脈分枝閉塞症、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される血管性眼疾患または障害を有するヒトまたは非ヒト哺乳動物も含む。
【００５７】
本発明に関連して、「それを必要とする対象」は、ＤＭＥもしくはＡＭＤにより罹り易い集団のサブセットを含み得るまたはＤＭＥ関連もしくはＡＭＤ関連バイオマーカーのレベルの上昇を示し得る。例えば、「それを必要とする対象」は、１０年間を超える期間糖尿病に罹患し、頻繁な高血糖値または高い空腹時血糖値を有する対象を含み得る。ある特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という用語は、Ａｇ−２阻害剤および／またはＶＥＧＦアンタゴニストの投与の前もしくは投与の時点に、糖尿病を有するもしくは糖尿病と診断されている対象を含む。ある特定の実施形態では、「それを必要とする対象」という用語は、Ａｇ−２阻害剤および／またはＶＥＧＦアンタゴニストの投与の前もしくは投与の時点に、５０歳を超えている対象を含む。いくつかの実施形態では、「それを必要とする対象」という用語は、喫煙者である対象、または高血圧もしくは高コレステロールを有する対象を含む。
【００５８】
本発明は、血管性眼疾患を処置する、予防するまたはその重症度を低減する方法であって、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用してそれを必要とする対象に投与することを含む方法を含み、医薬組成物は、例えば、特定の治療のための投与計画の一部として、対象に複数回で投与する。例えば、治療のための投与計画は、複数用量の医薬組成物を、１日１回、２日ごとに１回、３日ごとに１回、４日ごとに１回、５日ごとに１回、６日ごとに１回、１週間に１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、１ヵ月に１回、２ヵ月ごとに１回、３ヵ月ごとに１回、４ヵ月ごとに１回の頻度またはより低い頻度で対象に投与することを含み得る。ある特定の実施形態では、治療のための投与計画は、複数用量の医薬組成物を１日１回または１日２回またはそれ以上の頻度で対象に投与することを含み得る。
【００５９】
本発明の方法は、ある特定の実施形態によれば、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、本発明のＡｎｇ−２阻害剤は、黄斑内への漏洩を停止させるためのレーザー処置を含む療法と併用して投与することができる。本明細書で用いられる「と併用して」という語句は、Ａｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストの投与と同時に、その直前にまたは直後に対象に投与することを意味する。
【００６０】
本発明はまた、対象における血管漏出を阻害するまたは低減するまたは抑制する方法を含む。ある特定の実施形態では、本発明のこの態様による方法は、対象の眼における血管漏出を低減または阻害するためにＡｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の用量を対象に投与することを含む。特定の別の実施形態では、方法は、対象の眼における血管漏出を低減または阻害するためにＡｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の用量をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して対象に投与することを含む。ある特定の実施形態では、血管漏出は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独の投与を受けた対象におけるより３週間を超える、４週間を超える、８週間を超える、または１０週間を超える期間阻害される。
【００６１】
本発明の方法は、ある特定の実施形態によれば、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して対象に投与することを含む。本明細書で用いられる「と併用して」という語句は、Ａｎｇ−２阻害剤を含む医薬組成物をＶＥＧＦアンタゴニストの投与と同時に、その直前にまたは直後に対象に投与することを意味する。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストをＡｎｇ−２阻害剤との共製剤として投与する。関連実施形態では、本発明は、ＶＥＧＦアンタゴニスト単独の投与と比較してより大きい治療効果または相乗効果をもたらすために、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む方法を含む。対象は、硝子体内投与ＶＥＧＦアンタゴニストの治療計画を受け得る。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤をこの治療計画に加え、ＶＥＧＦアンタゴニストの１回またはそれ以上の回数の硝子体内注射を減少させることができるまたは継続的な硝子体内注射の間の期間を延長させることができる。
【００６２】
ある特定の実施形態では、本発明は、血管性眼疾患を処置する方法であって、治療有効量の抗Ａｎｇ−２阻害剤および治療有効量のＶＥＧＦアンタゴニストを含む医薬組成物の１つまたはそれ以上の用量をそれを必要とする対象に投与することを含む方法を提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物を対象に硝子体内投与する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約１２０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約４０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む。ある特定の実施形態では、方法は、医薬組成物の初回用量と、それに続く１つまたはそれ以上の第２の用量を投与することを含み、各第２の用量は、直近の用量の１〜４週間後に投与する。ある特定の実施形態では、医薬組成物の１つまたはそれ以上の第３の用量を投与し、各第３の用量は、直近の用量の５〜１２週間後に投与する。ある特定の実施形態では、医薬組成物の各用量は、約０．５〜約６ｍｇの抗Ａｎｇ−２阻害剤および約２ｍｇのＶＥＧＦアンタゴニストを含む。
【００６３】
ある特定の実施形態では、本発明は、血管性眼疾患を有する対象における硝子体内注射の回数を減少させる方法であって、抗Ａｎｇ−２阻害剤およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む医薬組成物を投与することを含み、硝子体内注射が抗Ａｎｇ−２阻害剤またはＶＥＧＦアンタゴニスト単独の投与を受けた対象と比較して８週間に１回に減少する方法を提供する。
【００６４】
本発明の方法は、血管性眼障害と診断されたまたはそれに罹患するリスクがある患者における血管性眼障害を処置するまたは予防するのに有用である。一般的に、本発明の方法は、処置計画の開始（「０週目」に投与する初回用量を用いる）の３６週間以内に、例えば、６週目の終了までに、１２週目の終了までに、１８週目の終了までに、２４週目の終了までに、等に有効性を示す。ＡＭＤおよびＤＭＥなどの血管性眼障害を処置する方法に関連して、「有効性」は、処置を開始してから、患者が糖尿病性網膜症の初期処置試験（Ｅａｒｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｔ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｔｕｄｙ）（ＥＤＴＲＳ）視力表上で１０またはより少ない文字の損失を示すことを意味する。ある特定の実施形態では、「有効性」は、処置の開始時からのＥＤＴＲＳ表上の１つまたはそれ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１またはそれ以上）の文字の獲得を意味する。
【００６５】
アンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）阻害剤
本明細書で用いられる「Ａｎｇ−２」または「ＡＮＧ２」という用語は、Ｔｉｅ２活性化の自己分泌アンタゴニストとして一般的に公知である、ヒトアンジオポエチン２を意味する。Ａｎｇ−２は、血管内皮がサイトカインの作用を受けることを「用意をする」ことが当技術分野で一般的に公知である。Ａｎｇ−２は、腫瘍血管系において高度に発現し、他のサイトカイン（すなわち、血管内皮増殖因子）と共に相乗的に作用して、血管新生および腫瘍の進行を促進すると一般的に考えられている。
【００６６】
本明細書で用いられる「Ａｎｇ−２阻害剤」（本明細書で「Ａｎｇ−２アンタゴニスト」、「Ａｎｇ−２遮断薬」等とも呼ぶ）は、Ａｎｇ−２に結合しまたはそれと相互作用し、Ａｎｇ−２の正常な生物学的シグナル伝達機能／活性を阻害または減弱させる任意の薬剤である。
【００６７】
Ａｎｇ−２阻害剤のカテゴリーの非限定的な例は、低分子Ａｎｇ−２阻害剤、抗Ａｎｇ−２アプタマー、ペプチドベースのＡｎｇ−２阻害剤（例えば、「ペプチボディ」分子）、「レセプター−ボディ」（例えば、Ａｎｇ−２成分の受容体結合を含む改変分子）およびヒトＡｎｇ−２に特異的に結合する抗体または抗体の抗原結合断片を含む。ある特定の実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤は、例えば、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１００２７２８６に開示されている抗体またはその抗原結合断片である。ある特定の実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
【００６８】
本発明の方法は、Ａｎｇ−２阻害剤を含む治療のための組成物をそれを必要とする対象に投与することを含む。
【００６９】
抗Ａｎｇ−２抗体およびその抗原結合断片
本発明の特定の例示的実施形態によれば、抗Ａｎｇ−２阻害剤は、抗Ａｎｇ−２抗体およびその抗原結合断片である。本明細書で用いられる「抗体」という用語は、ジスルフィド結合により相互に連結された２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。一般的な抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書でＨＣＶＲまたはＶＨと短縮する）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３つのドメインを含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書でＬＣＶＲまたはＶＬと短縮する）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存的である領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端までＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配列した、３つのＣＤＲおよびＦＲｓから構成されている。本発明の異なる実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体のＦＲｓ（またはその抗原結合部分）は、ヒト生殖系列配列と同一である、または天然でもしくは人工的に修飾される可能性がある。
【００７０】
本明細書で用いられる「抗体」という用語は、全長抗体分子の抗原結合断片も含む。本明細書で用いられる抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、抗原に特異的に結合して複合体を形成する天然に存在する、酵素的に得られる、合成の、または遺伝子組換えポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、タンパク質分解などの適切な標準技術または抗体可変および場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学技術を用いて全長抗体分子から得ることができる。そのようなＤＮＡは、公知であり、かつ／または例えば、商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能である、または合成することができる。ＤＮＡは、配列決定し、例えば、１つもしくはそれ以上の可変および／または定常ドメインを適切な立体配置に配列するために、あるいはコドンを導入し、システイン残基を生成し、アミノ酸を修飾し、付加し、または欠失を引き起こす等のために、化学的にまたは分子生物学技術を用いることにより操作することができる。
【００７１】
抗原結合断片の非限定的な例は、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束性ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを含む。ドメイン特異抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディ等）、小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰｓ）およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の改変分子も、本明細書で用いている、「抗原結合断片」という語句の範囲内に含まれる。
【００７２】
抗体の抗原結合断片は、一般的に少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであり得、一般的に１つまたはそれ以上のフレームワーク配列に隣接するまたはそのフレーム内にある少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＬドメインと結合したＶＨドメインを有する抗原結合断片において、ＶＨおよびＶＬは、任意の適切な配置で互いに対して位置し得る。例えば、可変領域は、二量体であり、ＶＨ−ＶＨ、ＶＨ−ＶＬまたはＶＬ−ＶＬ二量体であり得る。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体ＶＨまたはＶＬドメインを含み得る。
【００７３】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインと共有結合により連結された少なくとも１つの可変ドメインを含み得る。本発明の抗体の抗原結合断片内に見いだすことができる可変および定常ドメインの非限定的な例示的立体配置は、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬを含む。上に示した例示的立体配置のいずれかを含む、可変および定常ドメインのいずれかの立体配置において、可変および定常ドメインは、互いに直接連結しているか、あるいは全もしくは部分ヒンジまたはリンカー領域により連結されている可能性がある。ヒンジ領域は、単一ポリペプチド分子における隣接可変および／または定常ドメイン間の柔軟性または半柔軟性結合をもたらす少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれ以上）のアミノ酸からなっていてよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いにおよび／または１つもしくはそれ以上の単量体ＶＨもしくはＶＬドメインと非共有結合により会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）により）上に示した可変および定常ドメイン立体配置のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含み得る。
【００７４】
本明細書で用いられる「抗体」という用語は、多重特異性（例えば、二重特異性）抗体も含む。多重特異性抗体または抗体の抗原結合断片は、一般的に少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインは、別個の抗原にまたは同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。多重特異性抗体フォーマットは、当技術分野で利用可能な通常の技術を用いて本発明の抗体または抗体の抗原結合断片に関連する使用のために構成することができる。例えば、本発明は、免疫グロブリンの１つのアームがＩＬ−４Ｒαまたはその断片に特異的であり、免疫グロブリンの他のアームが第２の治療標的に特異的であるまたは治療のための部分にコンジュゲートしている、二重特異性抗体の使用を含む方法を含む。本発明に関連して使用することができる例示的二重特異性フォーマットは、制限なしに、例えば、ｓｃＦｖベースのまたはダイアボディ二重特異性フォーマット、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、クアドローマ（Ｑｕａｄｒｏｍａ）、ノブズイントゥーホールズ（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブズイントゥーホールズを含む共通軽鎖）、クロスマブ（ＣｒｏｓｓＭａｂ）、クロスファブ（ＣｒｏｓｓＦａｂ）、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧおよびＭａｂ２二重特異性フォーマットを含む（前述のフォーマットのレビューについては、例えば、Ｋｌｅｉｎら、２０１２年、ｍＡｂｓ、４巻６号、１〜１１頁およびそれにおいて引用された参考文献を参照）。二重特異性抗体は、ペプチド／核酸コンジュゲーションを用いて構築することもでき、例えば、ここで、直交性化学反応性を有する非天然アミノ酸を用いて、部位特異性抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成し、これが次に定義された組成、原子価および幾何構造を有する多量体複合体に自己集合する（例えば、Ｋａｚａｎｅら、Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．［Ｅｐｕｂ：２０１２年１２月４日］を参照）。
【００７５】
本発明の方法に用いる抗体は、ヒト抗体であり得る。本明細書で用いられる「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含むことを意図されている。本発明のヒト抗体は、それにもかかわらず、例えば、ＣＤＲ、とりわけＣＤＲ３におけるヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（ｉｎ  ｖｉｔｒｏでランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によりまたはｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異により導入された突然変異）を含み得る。しかし、本明細書で用いられる「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの、別の哺乳類種の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列上にグラフトされた抗体を含むことを意図されていない。
【００７６】
本発明の方法に用いる抗体は、組換えヒト抗体であり得る。本明細書で用いられる「組換えヒト抗体」という用語は、宿主細胞にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体（下文でさらに述べる）、組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（下文でさらに述べる）、ヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２年）、Ｎｕｃｌ．  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２０巻、６２８７〜６２９５頁参照）などの組換え手段により調製され、発現され、創製されまたは単離されるすべてのヒト抗体または他のＤＮＡ配列へのヒト免疫グロブリン遺伝子のスプライシングを含む他の手段により調製され、発現され、創製されまたは単離される抗体を含むことを意図されている。そのような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する。ある特定の実施形態では、しかし、そのような組換えヒト抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列についてトランスジェニックである動物を用いる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏでの体細胞突然変異誘発）を受け、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、関連するが、ｉｎ  ｖｉｖｏでのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然で存在し得ない。
【００７７】
ある特定の実施形態によれば、本発明の医薬製剤および方法に用いる抗体は、Ａｎｇ−２に特異的に結合する。「特異的に結合する」という用語または同様の用語は、抗体またはその抗原結合断片が生理的条件下で比較的に安定である抗原と複合体を形成することを意味する。抗体が抗原に特異的に結合するかどうかを判定する方法は、本技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。例えば、Ａｎｇ−２に「特異的に結合する」抗体は、本発明に関連して用いているように、表面プラズモン共鳴アッセイで測定するとき、約５００ｎＭ未満、約３００ｎＭ未満、約２００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約９０ｎＭ未満、約８０ｎＭ未満、約７０ｎＭ未満、約６０ｎＭ未満、約５０ｎＭ未満、約４０ｎＭ未満、約３０ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約４ｎＭ未満、約３ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満または約０．５ｎＭ未満のＫＤでＡｎｇ−２またはその一部に結合する抗体を含む。しかし、ヒトＡｎｇ−２に特異的に結合する単離抗体は、他の（非ヒト）種に由来するＡｎｇ−２分子などの、他の抗原との交差反応性を有し得る。
【００７８】
本発明の特定の例示的実施形態によれば、Ａｎｇ−２阻害剤は、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および／または米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１００２７２８６に示されている抗Ａｎｇ−２抗体のアミノ酸配列のいずれかを含む相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片である。
【００７９】
特定の例示的実施形態では、本発明の方法に関連して用いることができる抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む。ある特定の実施形態によれば、抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片は、３つのＨＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）ならびに３つのＬＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含み、ＨＣＤＲ１は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２は、配列番号４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３は、配列番号５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１は、配列番号６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２は、配列番号７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ３は、配列番号８のアミノ酸配列を含む。さらに他の実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１を含むＨＣＶＲおよび配列番号２を含むＬＣＶＲを含む。ある特定の実施形態では、本発明の方法は、抗Ａｎｇ−２抗体の使用を含み、抗体は、配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体は、配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。配列番号９のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む例示的抗体は、ネスバクマブとして公知の完全にヒト抗Ａｎｇ−２抗体である。特定の例示的実施形態によれば、本発明の方法は、ネスバクマブまたはその生物学的同等物の使用を含む。本明細書で用いられる「生物学的同等物」という用語は、同様の実験条件下で同じモル用量で単回投与または複数回投与で投与した場合にその吸収の速度および／または程度がネスバクマブとの有意な差を示さない薬学的同等物または薬学的代替物である抗Ａｎｇ−２抗体またはそのＡｎｇ−２結合タンパク質もしくは断片を意味する。本発明に関連して、用語は、それらの安全性、純度および／または効力についてネスバクマブとの臨床的に意味のある差を有さないＡｎｇ−２に結合する抗原結合タンパク質を意味する。
【００８０】
本明細書における実施例で用いた非限定的な例示的抗体は、ＵＳ２０１１／００２７２８６号におけると同様に、「Ｈ１Ｈ６８５Ｐ」と呼ぶ。この抗体は、配列番号１／２を有するＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列、および配列番号３−４−５／配列番号６−７−８により表されるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３ドメインを含む。
【００８１】
ヒトＡｎｇ−２に対する他の抗体は、参照によって本明細書に組み入れる、特許出願公開ＵＳ２０１０／０１６６７６８、ＵＳ２０１１／００６５９０２およびＷＯ２０１０／０７７８５４に記載されている。
【００８２】
本発明の医薬製剤中に含まれる抗体またはその抗原結合断片の量は、製剤の所望の個別の特性ならびに製剤が使用されることが意図される特定の状況および目的によって異なり得る。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、５±０．７５ｍｇ／ｍＬ〜１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗体；７．５±１．１２５ｍｇ／ｍＬ〜１４０±２１ｍｇ／ｍＬの抗体を含み得る液体製剤である。例えば、本発明の製剤は、ヒトＡｎｇ−２に特異的に結合する、約１０ｍｇ／ｍＬ；約２０ｍｇ／ｍＬ；約３０ｍｇ／ｍＬ；約５０ｍｇ／ｍＬ；約６０ｍｇ／ｍＬ；約８０ｍｇ／ｍＬ；約１００ｍｇ／ｍＬ；約１２０ｍｇ／ｍＬ；または約１５０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片を含み得る。
【００８３】
ＶＥＧＦアンタゴニスト
本明細書で用いられる「ＶＥＧＦアンタゴニスト」は、ＶＥＧＦに結合しもしくはそれと相互作用し、ＶＥＧＦのその受容体（ＶＥＧＦＲ１およびＶＥＧＦＲ２）への結合を阻害し、かつ／またはＶＥＧＦの生物学的シグナル伝達および活性を阻害する作用物質である。ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦと天然ＶＥＧＦ受容体、例えば、ＶＥＧＦに結合する分子またはＶＥＧＦ受容体との相互作用を妨げ、ＶＥＧＦとＶＥＧＦ受容体の間の相互作用を防止または別途妨げる分子を含む。特定の例示的ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ラニビズマブ［ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）］）、抗ＶＥＧＦ受容体抗体（例えば、抗ＶＥＧＦＲ１抗体、抗ＶＥＧＦＲ２抗体等）、ＶＥＧＦの低分子阻害剤（例えば、スニチニブ）およびＶＥＧＦ受容体ベースのキメラ分子またはＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質（本明細書で「ＶＥＧＦ−トラップ」とも呼ぶ）を含む。
【００８４】
ＶＥＧＦ受容体ベースのキメラ分子は、ＶＥＧＦＲ１（Ｆｌｔ１とも呼ぶ）および／またはＶＥＧＦＲ２（Ｆｌｋ１もしくはＫＤＲとも呼ぶ）のようなＶＥＧＦ受容体の２つまたはそれ以上の免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメインを含み、多量体化ドメイン（例えば、２つまたはそれ以上のキメラポリペプチドの多量体化［例えば、二量体化］を促進するＦｃドメイン）も含み得るキメラポリペプチドを含む。例示的なＶＥＧＦ受容体ベースのキメラ分子は、ＶＥＧＦＲ１Ｒ２−ＦｃΔＣ１（ａ）と呼ばれる分子（アフリベルセプトとしても公知；製品名ＥＹＬＥＡ（登録商標）のもとに市販された）である。ある特定の実施形態では、アフリベルセプトは、配列番号１１のアミノ酸配列によりコードされる。
【００８５】
本発明の医薬製剤中に含まれるＶＥＧＦアンタゴニストの量は、製剤の所望の個別の特性ならびに製剤が使用されることが意図される特定の状況および目的によって異なり得る。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、５±０．７５ｍｇ／ｍＬ〜１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニスト；１０±１．５ｍｇ／ｍＬ〜１００±１５．０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニスト；２０±３ｍｇ／ｍＬ〜８０±１２ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニスト；３０±４．５ｍｇ／ｍＬ〜７０±１０．５ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストまたは４０±６．０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含み得る液体製剤である。例えば、本発明の製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ；約３０ｍｇ／ｍＬ；約４０ｍｇ／ｍＬ；約５０ｍｇ／ｍＬ；または約６０ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含み得る。
【００８６】
併用療法
本発明の方法は、ある特定の実施形態によれば、ＶＥＧＦアンタゴニストを抗Ａｎｇ−２抗体と併用して対象に投与することを含む。本明細書で用いられる「と併用して」という語句は、ＶＥＧＦアンタゴニストを抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の前、後、またはそれと同時に投与することを意味する。「と併用して」という用語は、抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストの連続または同時投与も含む。例えば、抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の「前に」投与する場合、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の投与の７２時間以上、約７２時間、約６０時間、約４８時間、約３６時間、約２４時間、約１２時間、約１０時間、約８時間、約６時間、約４時間、約２時間、約１時間、約３０分、約１５分または約１０分前に投与し得る。抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の「後に」投与する場合、抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の投与の約１０分、約１５分、約３０分、約１時間、約２時間、約４時間、約６時間、約８時間、約１０時間、約１２時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約６０時間、約７２時間または７２時間以上後に投与し得る。抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物との「同時」投与は、ＶＥＧＦアンタゴニストを、抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の投与の５分未満以内に（前、後、または同時に）別個の剤形で対象に投与すること、またはＶＥＧＦアンタゴニストおよび抗Ａｎｇ−２抗体の両方を含む単一配合製剤として対象に投与することを意味する。
【００８７】
併用療法は、本発明の抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ、例えば、ＵＳ７，０８７，４１１参照（本明細書で「ＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質」とも呼ぶ））、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ラニビズマブ）、ＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブまたはパゾパニブ）等を含み得る。
【００８８】
本発明の方法は、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、加齢黄斑変性、網膜血管新生、中心網膜静脈閉塞、網膜静脈分枝閉塞、ポリープ状脈絡膜血管症および脈絡膜血管新生からなる群から選択される眼疾患または障害の少なくとも１つの症状または徴候を処置または改善するための相加または相乗活性を得るために抗Ａｎｇ−２抗体をＶＥＧＦアンタゴニストと併用して投与することを含む。
【００８９】
医薬組成物および製剤
本発明は、医薬組成物に含まれている、Ａｎｇ−２阻害剤を対象に投与することを含む方法を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ＶＥＧＦアンタゴニストをさらに含む。代替実施形態では、Ａｎｇ−２阻害剤およびＶＥＧＦアンタゴニストは、それ自体の別個の医薬投与製剤であり得る。本発明の医薬組成物は、適切な担体、賦形剤および適切な輸送、送達、耐性などを可能にする他の物質を用いて製剤化することができる。すべての薬剤師に公知の処方集であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｘｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに多数の適切な製剤を見いだすことができる。これらの製剤は、例えば、散剤、パスタ剤、軟膏剤、ゼリー剤、ワックス剤、油剤、脂質剤、小胞を含む脂質（陽イオン性または陰イオン性）（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収パスタ剤、水中油型および油中水型乳剤、乳剤カーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル剤およびカーボワックスを含む半固体混合物を含む。Ｐｏｗｅｌｌら、「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８年）Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ、５２巻、２３８〜３１１頁も参照のこと。
【００９０】
本明細書で用いられる「医薬製剤」という語句は、少なくとも１つの有効成分（例えば、ヒトまたは非ヒト動物において生物学的作用を発揮することができる低分子、巨大分子、化合物等）と、有効成分または１つもしくはそれ以上の追加の不活性成分と配合した場合、ヒトまたは非ヒト動物への処置のための投与に適する、少なくとも１つの不活性成分との配合を意味する。本明細書で用いられる「製剤」という用語は、特に別途示さない限り、「医薬製剤」を意味する。本発明は、少なくとも１つの治療用ポリペプチドを含む医薬製剤を提供する。本発明のある特定の実施形態によれば、治療用ポリペプチドは、ヒトアンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）タンパク質に特異的に結合する、抗体またはその抗原結合断片である。特定の別の実施形態によれば、本発明は、複数の治療用ポリペプチドを含む医薬製剤を提供する。より具体的には、本発明は、（ｉ）ヒトＡｎｇ−２に特異的に結合する、ヒト抗体；（ｉｉ）ＶＥＧＦアンタゴニスト；（ｉｉｉ）リン酸ナトリウム緩衝液；（ｉｖ）非イオン性界面活性剤である有機共溶媒；（ｖ）塩化ナトリウムなどの等張化剤；および（ｖｉ）炭水化物である熱安定剤を含む医薬製剤を含む。本発明に含まれる特定の成分および製剤は、下文で詳細に述べる。
【００９１】
本発明の医薬製剤に含まれる抗体およびその抗原結合断片の量は、製剤の所望の個別の特性ならびに製剤が使用されることが意図される特定の状況および目的によって異なり得る。ある特定の実施形態では、医薬製剤は、５±０．７５ｍｇ／ｍＬ〜１５０±２２．５ｍｇ／ｍＬの抗体；７．５±１．１２５ｍｇ／ｍＬ〜１４０±２１ｍｇ／ｍＬの抗体；１０±１．５ｍｇ／ｍＬ〜１３０±１９．５ｍｇ／ｍＬの抗体；１０±１．５ｍｇ／ｍＬの抗体；２０±３ｍｇ／ｍＬの抗体；６０±９ｍｇ／ｍＬの抗体；または１２０±１８ｍｇ／ｍＬの抗体を含み得る液体製剤である。例えば、本発明の製剤は、ヒトＡｎｇ−２に特異的に結合する、約１０ｍｇ／ｍＬ；約２０ｍｇ／ｍＬ；約４０ｍｇ／ｍＬ；約６０ｍｇ／ｍＬ；約８０ｍｇ／ｍＬ；約１００ｍｇ／ｍＬ；約１２０ｍｇ／ｍＬ；または約１４０ｍｇ／ｍＬの抗体またはその抗原結合断片を含み得る。
【００９２】
ある特定の実施形態では、医薬製剤は、５±０．７５ｍｇ／ｍＬ〜１００±１５ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含み得る液体製剤である。例えば、本発明の製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ；約１０ｍｇ／ｍＬ；約１５ｍｇ／ｍＬ；約２０ｍｇ／ｍＬ；約２５ｍｇ／ｍＬ；約３０ｍｇ／ｍＬ；約３５ｍｇ／ｍＬ；約４０ｍｇ／ｍＬ；約５０ｍｇ／ｍＬ；約６０ｍｇ／ｍＬ；約７０ｍｇ／ｍＬ；約８０ｍｇ／ｍＬ；約９０ｍｇ／ｍＬ；または約１００ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含み得る。
【００９３】
ある特定の実施形態では、医薬製剤は、約５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの抗Ａｎｇ−２抗体および約５〜１００ｍｇ／ｍＬのＶＥＧＦアンタゴニストを含む安定な液体共製剤である。
【００９４】
本発明の医薬製剤は、１つまたはそれ以上の賦形剤を含む。本明細書で用いられる「賦形剤」という用語は、所望の粘稠度、粘度または安定化効果をもたらすために製剤に添加される非治療用物質を意味する。
【００９５】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬製剤は、例えば、ボルテックスするなどの、手荒い取り扱いまたは撹拌の条件下でヒトＡｎｇ−２抗体を安定にする種類および量の少なくとも１つの有機共溶媒を含む。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、手荒い取り扱い中に抗体の総量の４％を超える凝集抗体（モル基準で）の形成の防止である。いくつかの実施形態では、手荒い取り扱いは、抗体および有機共溶媒を含む溶液を約６０分間または約１２０分間ボルテックスすることである。
【００９６】
ある特定の実施形態では、有機共溶媒は、アルキルポリ（エチレンオキシド）などの非イオン性界面活性剤である。本発明の製剤に含めることができる特定の非イオン性界面活性剤は、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート２８、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート６５、ポリソルベート８０、ポリソルベート８１およびポリソルベート８５などのポリソルベート；ポロキサマー１８１、ポロキサマー１８８、ポロキサマー４０７などのポロキサマー；またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。ポリソルベート２０は、ＴＷＥＥＮ２０、ソルビタンラウリン酸モノエステルおよびポリオキシエチレンソルビタンラウリン酸モノエステルとしても公知である。ポロキサマー１８８は、ＰＬＵＲＯＮＩＣ  Ｆ６８としても公知である。
【００９７】
本発明の医薬製剤に含まれる非イオン性界面活性剤の量は、製剤の所望の個別の特性ならびに製剤が使用されることが意図される特定の状況および目的によって異なり得る。ある特定の実施形態では、製剤は、０．０１％±０．００１５％〜１％±０．１５％の界面活性剤を含み得る。例えば、本発明の製剤は、約０．００８５％；約０．０１％；約０．０２％；約０．０３％；約０．０４％；約０．０５％；約０．０６％；約０．０７％；約０．０８％；約０．０９％；約０．１％；約０．１１％；約０．１２％；約０．１３％；約０．１４％；約０．１５％；約０．１６％；約０．１７％；約０．１８％；約０．１９％；約０．２０％；約０．２１％；約０．２２％；約０．２３％；約０．２４％；約０．２５％；約０．３％；約０．４％；約０．５％；約０．６％；約０．７％；約０．８％；約０．９％；約１％；約１．１％；約１．１５％；または約１．２％のポリソルベート２０、ポリソルベート８０またはポロキサマー１８８を含み得る。
【００９８】
本発明の医薬製剤は、熱ストレスの条件下でヒトＡｎｇ−２抗体を安定にする種類および量の１つまたはそれ以上の安定剤も含み得る。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および熱安定剤を含む溶液を約４５℃で最長約２８日間保持した場合、約８３％を超える抗体を天然立体配置に維持することである。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および熱安定剤を含む溶液を約４５℃に最長約２８日間保持した場合、約４％未満の抗体が凝集することである。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および熱安定剤を含む溶液を約３７℃に最長約２８日間保持した場合、約９６％を超える抗体を天然立体配置に維持することである。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および熱安定剤を含む溶液を約３７℃に最長約２８日間保持した場合、約２％未満の抗体が凝集することである。本明細書で用いられる「天然」は、一般的に抗体の完全な単量体である、サイズ排除による抗体の主形態を意味する。
【００９９】
ある特定の実施形態では、熱安定剤は、スクロース、ソルビトール、グリセロール、トレハロースおよびマンニトールまたはそれらのいずれかの組合せから選択される糖または糖アルコールであり、製剤に含まれるその量は、製剤が使用される個別の状況および用途によって異なり得る。ある特定の実施形態では、製剤は、約１％〜約２０％の糖または糖アルコール；約２％〜約１８％の糖または糖アルコール；約３％〜約１５％の糖または糖アルコール；約４％〜約１０％の糖または糖アルコール；あるいは約５％の糖または糖アルコールを含み得る。例えば、本発明の医薬製剤は、４％±０．６％；５％±０．７５％；６％±０．９％；７％±１．０５％；８％±１．２％；９％±１．３５％；１０％±１．５％；１１％±１．６５％；１２％±１．８％；１３％±１．９５％；または１４％±２．１％の糖または糖アルコール（例えば、スクロース、トレハロースまたはマンニトール）を含み得る。
【０１００】
ある特定の実施形態では、本発明の医薬製剤は、塩化ナトリウムまたは塩化カリウムなどの等張化剤を含む。いくつかの実施形態では、等張化剤は、塩化ナトリウムである。いくつかの実施形態では、塩化ナトリウムは、５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜１００ｍＭ±１５．０ｍＭ；１０ｍＭ±１．５ｍＭ〜５０ｍＭ±７．５ｍＭ；４０ｍＭ±６．０ｍＭ；または約４０ｍＭの濃度で存在する。
【０１０１】
本発明の医薬製剤は、安定なｐＨを維持する役割を果たし、ヒトＡｎｇ−２抗体を安定にする助けとなる、緩衝剤または緩衝系も含み得る。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および緩衝剤を含む溶液を約４５℃に最長約２８日間保持した場合、５％±０．５％未満または約４．３％以下の抗体が凝集することである。いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および緩衝剤を含む溶液を約４５℃に最長約２８日間保持した場合、サイズ排除クロマトグラフィーにより測定されるように少なくとも９２％±０．５％の抗体がその天然立体配置にあることである。「天然」または「天然立体配置」とは、凝集または分解していない抗体分画である。これは、サイズ排除クロマトグラフアッセイなどの、抗体実体の相対的サイズを測定するアッセイによって一般的に測定される。凝集していないおよび分解されていない抗体は、天然抗体と一致する分画で溶出し、一般的に主溶出画分である。凝集抗体は、天然抗体より大きいサイズを示す分画で溶出する。分解抗体は、天然抗体より小さいサイズを示す分画で溶出する。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、「安定にする」とは、抗体および緩衝剤を含む溶液を約４５℃に最長約２８日間保持した場合、陽イオン交換クロマトグラフィーにより測定されるように少なくとも５２％±０．５％の抗体がその主電荷形態にあることである。「主電荷」または「主電荷形態」とは、一般的に一方の側のより「塩基性」ピークおよび他方の側のより「酸性」ピークによって隣接された、イオン交換樹脂から主ピークとして溶出する抗体の分画を指す。
【０１０３】
本発明の医薬製剤は、約５．５〜約６．５のｐＨを有し得る。例えば、本発明の製剤は、約５．５；約５．６；約５．７；約５．８；約５．９；約６．０；約６．１；約６．２；約６．３；約６．４；または約６．５のｐＨを有し得る。いくつかの実施形態では、ｐＨは、６．２±０．３；６．２±０．２；６．２±０．１；約６．２；または６．２である。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、緩衝剤または緩衝系は、ｐＨ５．５〜７．４の範囲と完全にまたは一部分重複する緩衝範囲を有する少なくとも１つの緩衝剤を含む。一実施形態では、緩衝剤は、約６．２±０．５のｐＫａを有する。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、リン酸ナトリウム緩衝剤を含む。ある特定の実施形態では、リン酸ナトリウムは、５ｍＭ±０．７５ｍＭ〜１５ｍＭ±２．２５ｍＭ；６ｍＭ±０．９ｍＭ〜１４ｍＭ±２．１ｍＭ；７ｍＭ±１．０５ｍＭ〜１３ｍＭ±１．９５ｍＭ；８ｍＭ±１．２ｍＭ〜１２ｍＭ±１．８ｍＭ；９ｍＭ±１．３５ｍＭ〜１１ｍＭ±１．６５ｍＭ；１０ｍＭ±１．５ｍＭ；または約１０ｍＭの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、緩衝系は、１０ｍＭ±１．５ｍＭ、６．２±０．３または６．１±０．３のｐＨのリン酸ナトリウムを含む。
【０１０５】
本発明に関連して用いることができるＶＥＧＦアンタゴニストを含む例示的製剤は、例えば、米国特許第７，５３１，１７３号および第７，６０８，２６１号に開示されている。本発明に関連して用いることができる抗Ａｎｇ−２抗体を含む例示的医薬組成物は、例えば、米国特許出願公開第２０１３０１８６７９７号に開示されている。
【０１０６】
医薬製剤の安定性
本発明の医薬製剤は、一般的に高いレベルの安定性を示す。医薬製剤に関して本明細書で用いられる「安定」という用語は、医薬製剤中の抗体が、規定の条件下での貯蔵の後に許容できる程度の化学構造または生物学的機能を保持していることを意味する。それに含まれた抗体が規定の期間にわたる貯蔵の後に１００％のその化学構造または生物学的機能を保持していないとしても、製剤は、安定であり得る。特定の状況下では、規定の期間にわたる貯蔵の後の約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％または約９９％の抗体の構造または機能の維持は、「安定」と見なすことができる。
【０１０７】
安定性は、とりわけ、規定の温度で、規定の期間にわたる貯蔵の後に製剤中に残存する天然抗体の百分率を決定することにより測定することができる。天然抗体の百分率は、とりわけ、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除高または超高速液体クロマトグラフィー［ＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣ］）により決定することができ、したがって、天然であることとは、凝集していないおよび分解されていないことを意味する。「許容できる程度の安定性」は、当語句が本明細書で用いられているように、所定の温度で規定の期間にわたる貯蔵の後に少なくとも９０％の天然型の抗体を製剤中に検出することができることを意味する。ある特定の実施形態では、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の天然型の抗体を、規定の温度で、規定の期間にわたる貯蔵の後に製剤中に検出することができる。その後に安定性を測定する規定の期間は、少なくとも１４日、少なくとも２８日、少なくとも１ヵ月、少なくとも２ヵ月、少なくとも３ヵ月、少なくとも４ヵ月、少なくとも５ヵ月、少なくとも６ヵ月、少なくとも７ヵ月、少なくとも８ヵ月、少なくとも９ヵ月、少なくとも１０ヵ月、少なくとも１１ヵ月、少なくとも１２ヵ月、少なくとも１８ヵ月、少なくとも２４ヵ月、またはそれ以上であり得る。安定性を評価する場合に医薬製剤を貯蔵することができる規定の温度は、約−８０℃〜約４５℃の温度であり、例えば、約−８０℃、約−３０℃、約−２０℃、約０℃、約４〜８℃、約５℃、約２５℃、約３５℃、約３７℃、または約４５℃における貯蔵であり得る。例えば、５℃で９ヵ月間の貯蔵の後に約９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％または９９．５％の天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣにより検出される場合、医薬製剤は、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、２５℃で６ヵ月間の貯蔵の後に約９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％または９９．５％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣにより検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、３７℃で２８日間の貯蔵の後に約９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％または９９．５％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣにより検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、４５℃で２８日間の貯蔵の後に約９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣにより検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、−２０℃で６ヵ月間の貯蔵の後に約９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％または９９．５％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣにより検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、−３０℃で６ヵ月間の貯蔵の後に約９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％または９９．５％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣにより検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、−８０℃で６ヵ月間の貯蔵の後に約９６％、９６．５％、９７％、９７．５％、９８％、９８．５％、９９％または９９．５％を超える天然抗体がＳＥ−ＨＰＬＣまたはＳＥ−ＵＰＬＣにより検出される場合、安定であると考えることができる。
【０１０８】
安定性は、とりわけ、規定の温度で、規定の期間にわたる貯蔵の後に製剤中で凝集体として形成する抗体の百分率を決定することにより測定することができ、ここで、安定性は、形成される凝集体の百分率に反比例する。凝集した抗体の百分率は、とりわけ、サイズ排除クロマトグラフィー（例えば、サイズ排除高液体クロマトグラフィー［ＳＥ−ＨＰＬＣ］）により決定することができる。「許容できる程度の安定性」は、当語句が本明細書で用いられているように、所定の温度で規定の期間にわたる貯蔵の後に最大で６％の抗体が凝集した形態で製剤中に検出されることを意味する。ある特定の実施形態では、許容できる程度の安定性は、所定の温度で規定の期間にわたる貯蔵の後に最大で約６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体を凝集した形態で製剤中に検出することができることを意味する。その後に安定性を測定する規定の期間は、少なくとも２週間、少なくとも２８日、少なくとも１ヵ月、少なくとも２ヵ月、少なくとも３ヵ月、少なくとも４ヵ月、少なくとも５ヵ月、少なくとも６ヵ月、少なくとも７ヵ月、少なくとも８ヵ月、少なくとも９ヵ月、少なくとも１０ヵ月、少なくとも１１ヵ月、少なくとも１２ヵ月、少なくとも１８ヵ月、少なくとも２４ヵ月、またはそれ以上であり得る。安定性を評価する場合に医薬製剤を貯蔵することができる温度は、約−８０℃〜約４５℃の温度であり、例えば、約−８０℃、約−３０℃、約−２０℃、約０℃、約４〜８℃、約５℃、約２５℃、約３５℃、約３７℃、または約４５℃における貯蔵であり得る。例えば、５℃で９ヵ月間の貯蔵の後に約２％未満、１．７５％、１．５％、１．２５％、１％、０．７５％、０．５％、０．２５％または０．１％の抗体が凝集した形態で検出される場合、医薬製剤は、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、２５℃で６ヵ月間の貯蔵の後に約２％、１．７５％、１．５％、１．２５％、１％、０．７５％、０．５％、０．２５％または０．１％未満の抗体が凝集した形態で検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、４５℃で２８日間の貯蔵の後に約４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％または０．１％未満の抗体が凝集した形態で検出される場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、−２０℃、−３０℃または−８０℃で３ヵ月間の貯蔵の後に約２％未満、１．９％、１．８％、１．７％、１．６％、１．５％、１％、０．５％または０．１％の抗体が凝集した形態で検出される場合、安定であると考えることができる。
【０１０９】
安定性は、とりわけ、イオン交換中に抗体の主分画（「主荷電型」）より酸性分画に移行する抗体（「酸性型」）の百分率を決定することにより測定することができ、ここで、安定性は、酸性型の抗体の割合に反比例する。理論に拘束されることを望むものではないが、抗体の脱アミド化により、抗体が脱アミド化されない抗体と比べてより負に荷電し、ひいてはより酸性になる（例えば、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  Ｎ．、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅａｍｉｄａｔｉｏｎ、ＰＮＡＳ、２００２年４月１６日、９９巻（８号）、５２８３〜５２８８頁参照）。「酸性化」抗体の「酸性化」の百分率は、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陽イオン交換高速液体クロマトグラフィー［ＣＥＸ−ＨＰＬＣ］）により決定することができる。「許容できる程度の安定性」は、当語句が本明細書で用いられているように、規定の温度で規定の期間にわたる貯蔵の後に最大で５２％の抗体がより酸性型で製剤中に検出されることを意味する。ある特定の実施形態では、許容できる程度の安定性は、所定の温度で規定の期間にわたる貯蔵の後に最大で約５２％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体を酸性型で製剤中に検出することができることを意味する。その後に安定性を測定する規定の期間は、少なくとも２週間、少なくとも２８日、少なくとも１ヵ月、少なくとも２ヵ月、少なくとも３ヵ月、少なくとも４ヵ月、少なくとも５ヵ月、少なくとも６ヵ月、少なくとも７ヵ月、少なくとも８ヵ月、少なくとも９ヵ月、少なくとも１０ヵ月、少なくとも１１ヵ月、少なくとも１２ヵ月、少なくとも１８ヵ月、少なくとも２４ヵ月、またはそれ以上であり得る。安定性を評価する場合に医薬製剤を貯蔵することができる温度は、約−８０℃〜約４５℃の温度であり、例えば、約−８０℃、約−３０℃、約−２０℃、約０℃、約４〜８℃、約５℃、約２５℃、または約４５℃における貯蔵であり得る。例えば、−８０℃、−３０℃または−２０℃で３ヵ月間貯蔵した後に約２９％未満、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体がより酸性型である場合、医薬製剤は、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、５℃で９ヵ月間貯蔵した後に約２８％未満、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体がより酸性型である場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、２５℃で２８日間貯蔵した後に約３０％未満、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体がより酸性��である場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、３７℃で２８日間貯蔵した後に約３７％未満、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体がより酸性型である場合、安定であると考えることができる。医薬製剤はまた、４５℃で２８日間貯蔵した後に約５２％未満、５１％、５０％、４９％、４８％、４７％、４６％、４５％、４４％、４３％、４２％、４１％、４０％、３９％、３８％、３７％、３６％、３５％、３４％、３３％、３２％、３１％、３０％、２９％、２８％、２７％、２６％、２５％、２４％、２３％、２２％、２１％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％の抗体がより酸性型である場合、安定であると考えることができる。
【０１１０】
その標的に対する抗体の結合親和力を測定することも安定性を評価するために用いることができる。例えば、規定の期間（例えば、１４日〜６ヵ月）にわたり例えば、−８０℃、−３０℃、−２０℃、５℃、２５℃、３７℃、約４５℃等で貯蔵した後に製剤に含まれた抗Ａｎｇ−２抗体が、前記貯蔵の前の抗体の結合親和力の少なくとも８４％、９０％、９５％またはそれ以上である親和力でＡｎｇ−２に結合する場合、本発明の製剤は、安定と見なすことができる。結合親和力は、例えば、ＥＬＩＳＡまたはプラズモン共鳴などの、方法により測定することができる。生物学的活性は、Ａｎｇ−２を発現する細胞を抗Ａｎｇ−２抗体を含む製剤と接触させることなどによる、Ａｎｇ−２活性アッセイにより測定することができる。そのような細胞に対する抗体の結合は、ＦＡＣＳ解析などにより、直接的に測定することができる。あるいは、Ａｎｇ−２系の下流活性を抗体の存在下で測定し、抗体の非存在下でのＡｎｇ−２系の活性と比較することができる。いくつかの実施形態では、Ａｎｇ−２は、細胞に対して内因性でありうる。別の実施形態では、Ａｎｇ−２は、細胞中で異所的に発現し得る（すなわち、異種発現）。
【０１１１】
製剤中の抗体の安定性を評価するさらなる方法は、下文に示す実施例で示す。
【０１１２】
容器および投与方法
様々な送達システム、例えば、リポソーム内への封入、マイクロ粒子、マイクロカプセル、変異型ウイルスを発現することができる組換え細胞、受容体媒介エンドサイトーシスが公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために用いることができる（例えば、Ｗｕら、１９８７年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、２６２巻、４４２９〜４４３２頁参照）。投与の方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路を含むが、これらに限定されない。組成物は、通常の経路により、例えば、注入またはボーラス注射により、上皮または粘膜皮膚層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸粘膜等）を経る吸収により投与することができ、また他の生物学的に活性な物質と一緒に投与することができる。
【０１１３】
眼障害の処置のために、本発明の医薬製剤は、例えば、点眼剤、結膜下注射、結膜下インプラント、硝子体内注射、硝子体内インプラント、テノン嚢下注射またはテノン嚢下インプラントにより投与することができる。
【０１１４】
本発明の医薬製剤は、標準的な針および注射器を用いて皮下または静脈内送達することができる。さらに、皮下送達に関して、ペン送達装置は、本発明の医薬組成物の送達に容易に適用される。そのようなペン送達装置は、再使用可能または使い捨てであり得る。再使用可能なペン送達装置は、一般的に医薬組成物を含む交換可能カートリッジを利用する。カートリッジ内のすべての医薬組成物が投与され、カートリッジが空になったならば、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含む新たなカートリッジと交換することができる。次いでペン送達装置を再使用することができる。使い捨てペン送達装置には、交換可能カートリッジが存在しない。それどころか、使い捨てペン送達装置は、装置内の貯槽に保持された医薬組成物があらかじめ充填された状態になる。医薬組成物が排出されて貯槽が空になったならば、装置全体を廃棄する。
【０１１５】
ある特定の状況では、医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。一実施形態では、ポンプを用いることができる。別の実施形態では、ポリマー材料を用いることができる。Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、１９７４年、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、Ｆｌｏｒｉｄａを参照のこと。別の実施形態では、制御放出システムを組成物の標的に近接して配置することができ、したがって全身投与量の一部が必要であるにすぎない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４年、ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、前出、２巻、１１５〜１３８頁参照）。他の制御放出システムは、Ｌａｎｇｅｒによるレビュー、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４９巻、１５２７〜１５３３頁に述べられている。
【０１１６】
注射用製剤は、静脈内、皮下、皮内および筋肉内注射、点滴静注等のための剤形を含み得る。これらの注射用製剤は、公知の方法により調製することができる。例えば、注射用製剤は、例えば、上述の抗体またはその塩を注射剤に通常用いられる滅菌水性媒体又は油性媒体に溶解する、懸濁するまたは乳状にすることにより調製することができる。注射剤用の水性媒体として、例えば、生理食塩水、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）］等などの適切な可溶化剤と併用することができる、グルコースおよび他の助剤等を含む等張溶液がある。油性媒体として、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等などの可溶化剤と併用することができる、例えば、ゴマ油、ダイズ油等が用いられる。そのように調製される注射剤は、好ましくは適切なアンプルに充填する。
【０１１７】
有利には、上述の経口または非経口用の医薬組成物は、有効成分の用量に適合させるのに適する単位用量の剤形に調製する。そのような単位用量の剤形は、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤等を含む。
【０１１８】
本発明の医薬製剤は、医薬または他の治療用組成物の貯蔵または投与に適する容器内に含めることができる。例えば、医薬製剤は、バイアル、アンプル、注射器、カートリッジ、ビンまたはＩＶバッグなどの規定の容量を有する密封され、滅菌済みのプラスチックまたはガラス容器内に含めることができる。例えば、透明および不透明（例えば、琥珀色）ガラスまたはプラスチックバイアルを含む、本発明の製剤を含めるための様々な種類のバイアルを用いることができる。同様に、本発明の医薬製剤を含めるまたは投与するためのあらゆる種類の注射器を用いることができる。
【０１１９】
本発明の医薬製剤は、「通常のタングステン」注射器または「低タングステン」注射器内に含めることができる。当業者により理解されるように、ガラス注射器を製造する方法は、一般的にガラスに穴を開け、それにより、注射器から液体を抜き出し、排出させることができる穴を作る機能を果たす熱タングステンの使用を含む。この方法は、注射器の内面への微量のタングステンの沈着をもたらす。その後の洗浄および他の処理工程を用いて、注射器におけるタングステンの量を減少させることができる。本明細書で用いられる「通常のタングステン」という用語は、注射器が１０億分の５００（５００ｐｐｂ）に等しいまたはそれを超えるタングステンを含むことを意味する。「低タングステン」という用語は、注射器が５００ｐｐｂ未満のタングステンを含むことを意味する。例えば、本発明による、低タングステン注射器は、約４９０未満、４８０、４７０、４６０、４５０、４４０、４３０、４２０、４１０、３９０、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０、１０ｐｐｂまたはそれ未満のタングステンを含み得る。
【０１２０】
注射器に用いられるゴムプランジャーおよびバイアルの開口部を閉じるために用いられるゴム栓は、注射器もしくはバイアルの医薬内容物の汚染を防ぐまたはそれらの安定性を維持するために被覆することができる。したがって、ある特定の実施形態による、本発明の医薬製剤は、被覆プランジャーを含む注射器内、または被覆ゴム栓で密封されるバイアル内に含めることができる。例えば、プランジャーまたは栓は、フッ化炭素フィルムで被覆することができる。本発明の医薬製剤を含むバイアルおよび注射器とともに用いるのに適する被覆栓またはプランジャーの例は、それらの内容全体が参照によって本明細書に組み入れる、例えば、米国特許第４，９９７，４２３号、第５，９０８，６８６号、第６，２８６，６９９号、第６，６４５，６３５号および第７，２２６，５５４号に言及されている。本発明に関連して用いることができる特定の例示的被覆ゴム栓およびプランジャーは、Ｗｅｓｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｌｉｏｎｖｉｌｌｅ、ＰＡ）から入手できる、商品名「ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）」のもとに市販されている。ＦｌｕｒｏＴｅｃ（登録商標）は、医薬品がゴム表面に付着することを最小限にするまたは防止するために用いられるフッ化炭素コーティングの例である。
【０１２１】
本発明のある特定の実施形態によれば、医薬製剤は、フッ化炭素被覆プランジャーを含む低タングステン注射器内に含めることができる。
【０１２２】
医薬製剤は、注射（例えば、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内等）もしくは経皮、粘膜、鼻腔内、肺投与などの非経口経路または経口投与により患者に投与することができる。本発明の医薬製剤を皮下に送達するために多くの再使用可能ペンまたは自動注入送達装置を用いることができる。例は、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ  Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｔｒｏｎｉｃ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ  ＭＩＸ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ  ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ、ＮＪ），ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ  ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｓｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を含むが、これらに限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に用途を有する使い捨てペンまたは自動注入送達装置の例は、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｓｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）ならびにＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）、ｔｈｅ  ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注入器（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ｔｈｅ  ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ｔｈｅ  ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔ  Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）を含むが、これらに限定されない。
【０１２３】
本発明の医薬製剤を送達するための微量注入器の使用も本明細書で企図される。本明細書で用いられる「微量注入器」という用語は、大量（例えば、最大約２．５ｍＬまたはそれ以上）の治療用製剤を長時間（例えば、約１０、１５、２０、２５、３０またはそれ以上の分時）にわたり徐々に投与するために設計された皮下送達用具を意味する。例えば、ＵＳ６，６２９，９４９；ＵＳ６，６５９，９８３；およびＭｅｅｈａｎら、Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、４６巻、１０７〜１１６頁（１９９６年）を参照のこと。微量注入器は、高濃度（例えば、約１００、１２５、１５０、１７５、２００またはそれ以上のｍｇ／ｍＬ）または粘稠溶液に含まれる大用量の治療用タンパク質の送達にとりわけ有用である。
【０１２４】
一実施形態では、製剤が生理学的に許容される溶液を含むＩＶバッグ中で希釈されるように、医薬製剤をＩＶ点滴により投与する。一実施形態では、単一用量の医薬品が１００ｍＬ、２５０ｍＬ（または静注点滴送達に適する他の同様な量）の生理的緩衝液（例えば、０．９％食塩水）中に希釈されるように、医薬組成物は、静脈内注入バッグ入りの配合滅菌製剤である。いくつかの実施形態では、注入バッグは、ポリ塩化ビニル製である（例えば、ＶＩＡＦＬＥＸ、Ｂａｘｔｅｒ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）。いくつかの実施形態では、注入バッグは、ポリオレフィン製である（ＥＸＣＥＬ  ＩＶ  Ｂａｇｓ、Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｎｃ．、Ｂｅｔｈｌｅｈｅｍ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）。
【０１２５】
ある特定の実施形態では、１０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌの抗Ａｎｇ−２抗体を含む液体製剤をプレフィルド型注射器に含め、おおよそ最大１００μＬの容量で硝子体内投与する。ある特定の実施形態では、１０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌの抗Ａｎｇ−２抗体および１０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトを含む液体製剤をプレフィルド型注射器に含め、おおよそ最大１００μＬの容量で硝子体内投与する。ある特定の実施形態では、１０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌの抗Ａｎｇ−２抗体および１０ｍｇ／ｍｌ〜１００ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトを含む液体製剤をプレフィルド型注射器に入れ、おおよそ最大５００μＬの容量で硝子体内投与する。ある特定の実施形態では、６０ｍｇ／ｍｌ〜１２０ｍｇ／ｍｌの抗Ａｎｇ−２抗体および４０ｍｇ／ｍｌのアフリベルセプトを含む液体製剤をプレフィルド型注射器に入れ、おおよそ最大５００μＬの容量で硝子体内投与する。一実施形態では、注射器は、３０ゲージ薄壁針、フッ化炭素被覆ゴムプランジャーおよびゴム製針シールドを取り付けた２ｍＬ長ガラス注射器である。一実施形態では、注射器は、３０ゲージ薄壁針、フッ化炭素被覆ゴムプランジャーおよびゴム製針シールドを取り付けた１ｍＬ長ガラス注射器である。
【０１２６】
投与計画
本発明は、治療反応が達成される限り、約週４回、週２回、週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、５週間ごとに１回、６週間ごとに１回、８週間ごとに１回、１２週間ごとに１回またはより低い頻度などの投与頻度で抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物を対象に投与することを含む方法を含む。ある特定の実施形態によれば、方法は、治療反応が達成される限り、約週４回、週２回、週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、４週間ごとに１回、５週間ごとに１回、６週間ごとに１回、８週間ごとに１回、９週間ごとに１回、１２週間ごとに１回またはより低い頻度などの投与頻度でＶＥＧＦアンタゴニストとの併用での抗Ａｎｇ−２抗体を含む医薬組成物の投与を含む。
【０１２７】
本発明のある特定の実施形態によれば、複数回の抗Ａｎｇ−２抗体を規定の時間的経過で対象に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、複数回の抗Ａｎｇ−２抗体を対象に連続して投与することを含む。本明細書で用いられる「連続して投与すること」は、毎回の抗Ａｎｇ−２抗体を異なる時点に、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）で隔てられた異なる日に対象に投与することを意味する。本発明は、１回の初回投与の抗Ａｎｇ−２抗体と、それに続く１回またはそれ以上の回数の２次投与の抗Ａｎｇ−２抗体と、場合により、それに続く１回またはそれ以上の回数の３次投与の抗Ａｎｇ−２抗体とを患者に連続して投与することを含む方法を含む。
【０１２８】
本発明のある特定の実施形態によれば、複数回の抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤を規定の時間的経過で対象に投与することができる。本発明のこの態様による方法は、複数回の抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤を対象に連続して投与することを含む。本明細書で用いられる「連続して投与すること」は、ＶＥＧＦアンタゴニストと併用する毎回の抗Ａｎｇ−２抗体を異なる時点に、例えば、所定の間隔（例えば、時間、日、週または月）で隔てられた異なる日に対象に投与することを意味する。本発明は、１回の初回投与の抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤と、それに続く１回またはそれ以上回数の２次投与の共製剤化抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストと、場合により、それに続く１回またはそれ以上回数の３次投与の共製剤化抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストとを患者に連続して投与することを含む方法を含む。
【０１２９】
「初回用量」、「第２の用量」および「第３の用量」という用語は、投与の時間的順序を意味する。したがって、「初回用量」は、治療計画の開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」とも呼ぶ）、「第２の用量」は、初回用量の後に投与される用量であり、「第３の用量」は、第２の用量の後に投与される用量である。初回、第２および第３の用量はすべて、同じ量の抗Ａｎｇ−２抗体（または抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤）を含み得るが、一般的に投与の頻度に関して互いに異なり得る。ある特定の実施形態では、しかし、初回、第２および／または第３の用量に含まれる量は、処置の経過中に互いに異なる（例えば、適宜上方または下方調節）。ある特定の実施形態では、１つまたはそれ以上（例えば、１、２、３、４または５つ）の用量を「負荷用量」として治療計画の開始時に投与し、より低い頻度で投与するその後の用量（例えば、「維持用量」）を後続させる。例えば、抗Ａｎｇ−２抗体（または抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤）は、約６ｍｇの負荷用量で眼疾患または障害を有する患者に投与した後、約０．５ｍｇ〜約１０ｍｇの１つまたはそれ以上の維持用量を投与することができる。
【０１３０】
本発明の１つの例示的実施形態では、各第２および／または第３の用量は、直近の用量の１〜１４（例えば、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、５．５、６、６．５、７、７．５、８、８．５、９、９．５、１０、１０．５、１１、１１．５、１２、１２．５、１３、１３．５、１４、１４．５、またはそれ以上）週後に投与する。本明細書で用いられる「直近の用量」という語句は、一連の複数回の投与において、介在投与のない一連の投与におけるまさに次の用量の投与の前に患者に投与される抗Ａｎｇ−２抗体（または抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤）の投与を意味する。
【０１３１】
本発明のこの態様による方法は、抗Ａｎｇ−２抗体（または抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤）のあらゆる数の第２および／または第３の用量を患者に投与することを含み得る。例えば、ある特定の実施形態では、１つのみの第２の用量を患者に投与する。別の実施形態では、２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上）の第２の用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態では、１つのみの第３の用量を患者に投与する。別の実施形態では、２つまたはそれ以上（例えば、２、３、４、５、６、７、８またはそれ以上の回数）の３次投与を患者に施す。
【０１３２】
複数の第２の用量を含む実施形態では、各第２の用量は、他の第２の用量と同じ頻度で投与することができる。例えば、各第２の用量は、直近の投与の１〜２週後に患者に投与することができる。同様に、複数の第３の用量を含む実施形態では、各第３の投与は、他の３次投与と同じ頻度で施行することができる。例えば、各３次投与は、直近の投与の２〜４週後に患者に投与することができる。あるいは、各２次および／または３次投与を患者に施行する頻度は、治療計画の過程において変化し得る。投与の頻度はまた、臨床検査の後に個々の患者の必要に応じて医師が処置の過程において調節することができる。
【０１３３】
本発明は、ＤＭＥまたはＡＭＤを処置するための、ＶＥＧＦアンタゴニストと併用する抗Ａｎｇ−２抗体の連続投与を含む方法を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抗Ａｎｇ−２抗体の１つまたはそれ以上の用量とそれに続くＶＥＧＦアンタゴニストの１つまたはそれ以上を投与することを含む。ある特定の実施形態では、本方法は、ＶＥＧＦアンタゴニストを単回投与し、それに続いて抗Ａｎｇ−２抗体を１回またはそれ以上の回数投与することを含む。いくつかの実施形態では、約０．０５ｍｇ〜約２ｍｇのＶＥＧＦアンタゴニストを１回またはそれ以上の回数投与し、それに続いて約０．０５ｍｇ〜約１０ｍｇの抗Ａｎｇ−２抗体を１回またはそれ以上の回数投与することができる。一実施形態では、対象の体重１ｋｇ当たり約１ｍｇ〜約１５ｍｇの抗Ａｎｇ−２抗体の１回またはそれ以上の回数の投与を、ＶＥＧＦアンタゴニストの１つまたはそれ以上の用量を投与した後に投与して、ＤＭＥまたはＡＭＤに随伴する１つまたはそれ以上の状態を処置、軽減、低減または改善することができる（例えば、血管新生の抑制）。いくつかの実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体を、１つまたはそれ以上のパラメーター（例えば、網膜肥厚、視力）の改善をもたらす１つまたはそれ以上の用量で投与した後、再発を防ぐためにまたは相加活性を得るためにＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）を投与する。本発明の代替実施形態は、抗Ａｎｇ−２抗体と、抗Ａｎｇ−２抗体と比べて類似または異なる頻度で別個の服用量で投与するＶＥＧＦアンタゴニストとの併用投与に関する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストを、抗Ａｎｇ−２抗体の前、後またはそれと同時に投与する。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストを抗Ａｎｇ−２抗体と共に単一製剤として投与する。
【０１３４】
服用量
本発明の方法により対象に投与するＡｎｇ−２阻害剤（例えば、抗Ａｎｇ−２抗体）の量は、一般的に治療有効量である。本明細書で用いられる「治療有効量」という語句は、（ａ）網膜血管漏出の減少；（ｂ）網膜または脈絡膜血管新生面積の減少；（ｃ）中心網膜厚の変化；（ｄ）眼内の血管漏出の抑制の持続時間の増加；および（ｅ）血管新生に関連する眼疾患または障害を有する対象における硝子体内注射の回数の減少のうちの１つまたはそれ以上をもたらすＡｎｇ−２阻害剤の量を意味する。
【０１３５】
抗Ａｎｇ−２抗体の場合、治療有効量は、約０．０５ｍｇ〜約１００ｍｇ、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇまたは約１００ｍｇの抗Ａｎｇ−２抗体である。ある特定の実施形態では、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、３．０ｍｇまたは６．０ｍｇの抗Ａｎｇ−２抗体を投与する。
【０１３６】
個々の服用量に含まれる抗Ａｎｇ−２抗体の量は、１キログラムの患者の体重当たりの抗体のミリグラム（すなわち、ｍｇ／ｋｇ）により表すことができる。例えば、抗Ａｎｇ−２抗体は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０００１〜約１００ｍｇの用量で患者に投与することができる。
【０１３７】
ある特定の実施形態では、０．５ｍｇ、１．０ｍｇ、３．０ｍｇまたは６．０ｍｇの抗Ａｎｇ−２抗体を０．０５ｍｇ〜約１０ｍｇのＶＥＧＦアンタゴニストと併用して投与することができる。
【実施例】
【０１３８】
以下の実施例は、本発明の方法および組成物をどのようにして製造し、使用するかの完全な開示および記述を当業者に提供するために示すものであり、発明者がその発明と見なすものの範囲を限定するものではない。用いられる数（例えば、量、温度等）に関する精度を保証するための努力がなされたが、実験誤差および偏差は、明細を明らかにすべきである。特に示さない限り、部は、重量部であり、分子量は、平均分子量であり、温度は、セ氏温度であり、圧力は、大気圧またはほぼ大気圧である。
【実施例１】
【０１３９】
マウスにおける発達段階の網膜血管新生に対するアフリベルセプト（ＶＥＧＦトラップ）および抗Ａｎｇ−２抗体を用いるＶＥＧＦおよびＡｎｇ２の複合阻害の効果
はじめに：  ＶＥＧＦは、正常および病的血管新生における血管新生の重要なモジュレーターである。しかし、他の増殖因子も血管新生に関与し、抗ＶＥＧＦ療法に対する血管の抵抗性を媒介することができる。アンジオポエチン２（Ａｎｇ２）は、様々な状況における血管の成長および退縮に状況依存的に関与することが示された。本試験では、本発明者らは、正常網膜血管発達（ｒｅｔｉｎａｌ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）（ＲＶＤ）モデルにおける血管成長および退縮に対するアフリベルセプト単独および抗Ａｎｇ−２抗体によるＡｎｇ阻害と組み合わせてアフリベルセプトを用いたＶＥＧＦ阻害の効果を試験した。
【０１４０】
ヒト抗Ａｎｇ−２抗体は、米国特許出願公開番号ＵＳ２０１１００２７２８６に記載されているように作製した。本発明および以下の実施例に用いる例示的抗Ａｎｇ−２抗体は、配列番号１／２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを有するＨ１Ｈ６８５と呼ぶヒト抗Ａｎｇ−２抗体（本明細書で「ｍＡｂ１」とも呼ぶ）である。
【０１４１】
最初の実験では、抗Ａｎｇ−２抗体を単独でまたはアフリベルセプトと併用して硝子体内投与した。
【０１４２】
方法：  正常Ｃ５７ＢＩ／６マウス子動物に出生後４日目（Ｐ４）からＰ６までアフリベルセプトおよび抗Ａｎｇ−２抗体を個別にまたは併用して処置した。子動物にＰ４に５μｇの対照タンパク質（ｈＦｃ）、５μｇのｍＡｂ１（抗Ａｎｇ−２抗体）または１．２５μｇのアフリベルセプトを単剤またはアフリベルセプトおよびｍＡｂ１の両方の混合物としてＩＶＴ注射した。子動物をＰ６に人道的に安楽死させ、眼を摘出し、４％パラホルムアルデヒドで固定した。網膜を切断し、ＦＩＴＣ標識ＧＳレクチンＩ（血管内皮細胞用）で染色した。
【０１４３】
結果：  ＲＶＤに対するＡｎｇ２および／またはＶＥＧＦ阻害の効果を評価するためのｍＡｂ１による処置の出発点としてＰ４を選択した。ｍＡｂ１またはアフリベルセプトの投与により、ｈＦｃ投与対照と比較して表在網膜血管系の増生が減少した。具体的には、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトは、ｈＦｃ対照と比べて網膜の平均血管新生面積をそれぞれ１７％および３６％減少させたのに対して、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの両方による併用処置は、血管面積を７２％減少させ、これは、処置期間にわたる網膜血管の発生の完全な停止に相当していた（Ｐ４における網膜血管面積と比較して）。ｍＡｂ１およびアフリベルセプトはまた、平均血管長をｈＦｃ対照と比較してそれぞれ２３％および２２％減少させた。ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの両方による併用処置は、総血管長の劇的な７７％の減少をもたらす、有意な相乗作用を有していた。総血管長は、併用処置標本においてＰ４網膜と比較して２５％小さかった。
【０１４４】
第２の実験では、用いたｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ、皮下［ＳＣ］）およびアフリベルセプト（２５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）の用量は、各薬物を単剤として用いる場合に網膜血管新生の最大の抑制を得るために必要な最小用量を超えていた。Ｐ３におけるｍＡｂ１またはアフリベルセプトの投与は、Ｐ６において測定した網膜の平均血管新生面積をｈＦｃ対照と比べてそれぞれ３６％および４２％有意に低下させた。さらに、網膜の平均血管新生面積は、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの両方を投与した動物において、いずれかの薬剤を単独で処置した動物と比較して、有意に小さく、６８％低く、これは、治療期間にわたる網膜血管の発生のほぼ完全な停止に相当していた。
【０１４５】
結論：  Ａｎｇ２およびＶＥＧＦ−Ａの両方の阻害が治療期間中の網膜血管の発生のほぼ完全な停止およびＰ４における初期の治療状態と比較して部分的血管退縮をもたらしたように、Ａｎｇ２およびＶＥＧＦ−Ａの複合薬理学的阻害には、Ａｎｇ２またはＶＥＧＦ−Ａ阻害剤単独の投与よりも発育上の網膜血管新生に対して大きな効果があった。
【実施例２】
【０１４６】
ウサギ眼におけるＤＬ−アルファ−アミノアジピン酸（ＤＬ−アルファ−ＡＡＡ）誘発性網膜血管新生（ＲＮＶ）に対する共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプトのＩＶＴ注射の効果
グリア毒素であるＤＬ−アルファ−ＡＡＡは、網膜ミュラ細胞および星状細胞を標的とし、血管新生および少なくとも１２ヵ月持続する慢性血管漏出をもたらす（Ｋａｔｏら、１９９３年；Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ、５７巻、４７３頁）。この試験の目的は、ＤＬ−アルファ−ＡＡＡにより誘発されたＲＮＶに対する共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプトのＩＶＴ注射の効果を評価することであった。
【０１４７】
方法：  雄ニュージーランドホワイト種ウサギ（体重＞２ｋｇ）を、ＲＮＶを誘発するためにＤＬ−アルファ−ＡＡＡの単回硝子体内注射により処置した。漏出は、フルオレセイン血管造影（ＦＡ）を用いて非侵襲的にモニターし、定量化した。病的血管系および比較的に不変の漏出領域を注射後１３週間にわたって確立させた。疾患の確立の後に、対象を下に示すように処置のための３つの群に分けた。
群Ｉ：１２５μｇ／５０μｌのアフリベルセプトＩＶＴ
群ＩＩ：５００μｇ／５０μｌのｍＡｂ１  ＩＶＴ
群ＩＩＩ：共製剤化１２５μｇアフリベルセプトおよび５００μｇ  ｍＡｂ１／５０μｌ、ＩＶＴ
【０１４８】
ベースライン検査は、処置群を均衡させるために最初の処置の前に実施した。フォローアップ検査は、ＩＶＴ処置後１、２、３、４、５、６、７および８週目に実施した。漏出領域は、フルオレセイン血管造影（ＦＡ）解析後にＡｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐを用いて定量化した。蛍光剤を静脈内投与して、血管漏出をモニターし、光波を用いた眼コヒーレンス断層撮影を用いて、網膜構造をモニターした。
【０１４９】
結果：  図１に示すように、漏出は、アフリベルセプト処置対象において３週目に戻ってしまうことが示されたが、ｍＡｂ１およびアフリベルセプト配合物を処置した対象では漏出面積は、８週目まで変化しなかった。アフリベルセプトおよびｍＡｂ１の併用投与は、アフリベルセプト単独の単回ＩＶＴ注射と比較して抗漏出効果の持続時間を最大３倍有意に向上させ得る。
【実施例３】
【０１５０】
ウサギ眼におけるＤＬ−ＡＡＡ誘発性網膜新生血管漏出に対するｍＡｂ１単独の全身投与またはＶＥＧＦトラップ眼ＩＶＴとの併用処置
この試験の目的は、ＤＬ−アルファ−ＡＡＡにより誘発されたＲＮＶに対する抗Ａｎｇ２抗体およびアフリベルセプトの併用処置の効果を評価することであり、アフリベルセプトの硝子体内投与の後にｍＡｂ１の全身投与を行った。この試験の論理的根拠は、アフリベルセプトの最初のＩＶＴ注射および抗Ａｎｇ２抗体の２週間に１回（ｑ２ｗ）の全身注射によるフォローアップによってより長期間にわたって漏出の抑制を試み、維持することであった。
【０１５１】
実施例２で開示したように、網膜血管新生は、ＤＬ−アルファ−ＡＡＡの単回硝子体内注射によって雄ニュージーランドホワイト種ウサギにおいて誘発された。安定な網膜血管新生および血管漏出が誘発の１０週間後に確立された。疾患の確立の１０週間後に、対象をバランスのとれた漏出の重症度を有する４つの群に分け、下に示すように処置を施行した。
群１：対照４２μｇ／５０μｌ、ＩＶＴおよび対照５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ２ｗ
群２：対照４２μｇ／５０μｌ、ＩＶＴおよびｍＡｂ１（抗Ａｎｇ２ａｂ）１５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ２ｗ
群３：アフリベルセプト１２５μｇ／５０μｌ、ＩＶＴおよび対照５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ２ｗ
群４：アフリベルセプト１２５μｇ／５０μｌ、ＩＶＴおよびｍＡｂ１（抗Ａｎｇ２）１５ｍｇ／ｋｇ、ＩＶ、ｑ２ｗ
【０１５２】
フルオレセイン血管造影（ＦＡ）；第１の処置の前のベースラインフルオレセイン血管造影（ＦＡ）および光コヒーレンス断層撮影（ＯＣＴ）；ＩＶ投与後１、２、３、４、６、８、１０、１２および１４週目におけるフォローアップＦＡおよびＯＣＴによる漏出面積の解析
【０１５３】
図２に示すように、２週目においてアフリベルセプト処置眼に漏出は存在しなかった。アフリベルセプト処置単独について漏出が４週目に戻ってしまうことが示された。しかし、アフリベルセプトおよびｍＡｂ１の併用により処置した対象に１０週目まで漏出が存在しなかった。併用処置対象における漏出の最初の戻りは、１２週目に示された。
【実施例４】
【０１５４】
ウサギ眼におけるＤＬ−アルファ−ＡＡＡ誘発性ＲＮＶおよび血管漏出に対するアフリベルセプトのＩＮＴ注射
この試験は、ウサギ眼におけるＤＬ−アルファ−ＡＡＡ誘発性網膜血管新生（ＲＮＶ）および血管漏洩に対するＩＶＴアフリベルセプト単剤療法の効果に関する用量設定試験である。実施例２で開示したように、ＤＬ−アルファ−ＡＡＡを用いて、ウサギ眼におけるＲＮＶを誘発した。ＲＮＶおよび血管漏出の確立の後、対象を５０μｇ、１２５μｇ、２５０μｇおよび５００μｇの４つの用量のアフリベルセプトにより処置した。網膜血管漏出は、ＩＶＴ後１、２、３、４、５、６、８、１０および１２週目のフォローアップ時点にＦＡによりモニターし、定量化した（本明細書の他所で開示したように）。
【０１５５】
無処置の場合、ＦＡは、網膜ＮＶおよび血管漏出が１０〜２２週目に不変のままであった。表１に処置後の漏出の再発の平均時間を示す。ここで、「最初の漏出の再発」＝多少の漏出の時間であり、完全な再発でない。
【０１５６】
【表１】
2017536414.tif 000003
【０１５７】
５００μｇのアフリベルセプトは、１週間以内にＮＶ漏出を遮断し、漏出は、処置後１２週目まで再び始まらなかった。したがって、アフリベルセプト処置は、血管漏出の抑制および血管新生の部分的退縮をもたらす。血管漏出は、再発するが、抑制の期間は、用量依存的である。
【実施例５】
【０１５８】
抗Ａｎｇ−２抗体の全身投与はマトリゲル誘発性脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）を阻害する
はじめに：  Ａｎｇ２は、チロシンキナーゼ受容体Ｔｉｅ−２のリガンドであり、発達段階の血管の血管内皮ならびに多様な生理学的および病態生化学的条件で能動成長またはリモデリングを受ける血管に広範に発現する。ｍＡｂ１は、Ａｎｇ−２に対するヒトモノクローナル、中和抗体である。本試験では脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）のラットモデルを用いて、ＣＮＶに対するＡｎｇ−２のｍＡｂ１媒介薬理学的阻害の抑制効果を評価した。
【０１５９】
方法：  ＣＮＶは、０日目にマトリゲルの網膜下注射によってＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラットにおいて誘発した。動物の１群（動物：Ｎ＝４〜６；眼：Ｎ＝８〜１２）を用いてベースライン確立し、ＣＮＶの誘発の１０日後に動物を色素［１，１’−ジオクタデシル−３，３，３’，３’−テトラメチルインドカルボシアニンパークロレート（Ｄｉｌ）］で潅流して、血管を染色した。他の動物を２つの群に分け（各群において、動物：Ｎ＝５〜６；眼：Ｎ＝１０〜１２）、１０、１３および１６日目に、それぞれ２５ｍｇ／ｋｇのｍＡｂ１またはｍＡｂ１に対して等モル量の６．５ｍｇ／ｋｇのｈＦｃの皮下注射によりマスク溶液で処置した後、２０日目にＤｉｌで潅流して、血管を染色した。以下の式を用いて網膜下病変およびＣＮＶ血管体積を病変全体を通しての５０μｍ切片から定量化した。
【０１６０】
【数１】
2017536414.tif 000004
式中、Ｖ：総病変体積
Ｔ：切片厚
Ａ：各切片上の病変または血管の面積
【０１６１】
病変体積、血管体積および血管密度の３群間比較のために２つの同じ実験の結果を併合した。対照と対比したｍＡｂ１を処置した群間の病変体積、血管体積および血管密度の差を比較するために両側Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定を用いた。ラット血清中の機能し得るｍＡｂ１の濃度および抗ｍＡｂ１抗体のレベルは、直接酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて測定した。
【０１６２】
結果：  ＳＤラットへのｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ）の全身投与により、ｈＦｃ投与対照と比較して総病変体積および血管体積の抑制がもたらされた（図３）。対照処置群では、１０日目におけるベースラインと比べて、網膜下病変体積、新生血管体積および新生血管密度が２０日目までにそれぞれ２８．２％、６２．５％および２８．６％増加した。ｍＡｂ１処置群は、血管密度は、ｈＦｃ処置群と比較して変化していなかったが、総病変体積の２６．５％の減少および血管体積の２６．９％の減少を示した（図３）。ｈＦｃ処置群と比較して、ｍＡｂ１処置群は、総病変体積の統計的に有意な減少（Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、ｐ＝０．００３４）、および新生血管体積の減少の傾向（２６．９％）を示したが、この傾向は、統計的有意性を達成せず（Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ検定、ｐ＝０．１６５８）、これは、群内変動に起因していた。ラット血清試料中の機能し得るｍＡｂ１および抗ｍＡｂ１抗体の生物分析的分析で、ｍＡｂ１処置動物における機能し得るｍＡｂ１の測定可能濃度が示され、終了日（２０日目）に５０４±１０７μｇ／ｍＬのレベルであった（表２）。個々の抗ｍＡｂ１応答は、陰性であった。
【０１６３】
【表２】
2017536414.tif 000005
【０１６４】
結論：  ｍＡｂ１、すなわちＡｎｇ２に対する中和ヒトモノクローナル抗体の効果をＳＤラットにおけるマトリゲル誘発性ＣＮＶについて評価した。結果は、ｍＡｂ１の全身（皮下）処置がラットにおけるマトリゲル誘発性ＣＮＶを有意に阻害し得ることを示すものである。したがって、この実施例は、血管性眼疾患を処置するための全身単剤療法としてのＡｎｇ−２阻害剤（ｍＡｂ１など）の使用に対する付加的な裏付けを与えるものである。
【実施例６】
【０１６５】
抗Ａｎｇ−２抗体を含む製剤
製剤開発活動は、タンパク質の安定性を向上させる賦形剤を特定するための抗Ａｎｇ−２抗体の液体製剤中の緩衝剤、有機共溶媒および熱安定剤のスクリーニングを含んでいた。最大のタンパク質の安定性を得るための最適ｐＨを決定するために緩衝条件も検討した。これらの試験から得られた結果を用いて、臨床での使用に適する安定な液体製剤を開発した。抗Ａｎｇ−２抗体は、配列番号１／２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを有するヒト抗Ａｎｇ−２抗体であり、米国特許出願公開ＵＳ２０１１００２７２８６においてＨ１Ｈ６８５と称されている（本明細書で「ｍＡｂ１」とも呼ぶ）。
【０１６６】
抗Ａｎｇ−２抗体は、以下の４種の濃度で製剤化した。
（ｉ）１０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬ
（ｉｉ）２０ｍｇ／ｍＬ±３．０ｍｇ／ｍＬ
（ｉｉｉ）６０ｍｇ／ｍＬ±９．０ｍｇ／ｍＬ
（ｉｖ）１２０ｍｇ／ｍＬ±１８．０ｍｇ／ｍＬ
【０１６７】
様々な実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体を水中１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．２±０．３）、０．０３％０．００４５％ポリソルベート２０、４０ｍＭ±６．０ｍＭ塩化ナトリウムおよび５％±０．７５％スクロースで製剤化する。
【０１６８】
製剤化原体および医薬品の安定性は、以下のアッセイを用いて評価した。
【０１６９】
外観検査による色および外観；ｐＨ；４０５ｎｍにおける光学濃度の増加により測定される濁度；マクロフローイメージング（ＭＦＩ）によるサブビジブル微粒子解析；ＲＰ−ＨＰＬＣによるタンパク質濃度；サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＰＬＣ）による精製；還元および非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥ；陽イオン交換ＵＰＬＣによる荷電変異体分析；バイオアッセイによる効力。さらなる詳細は、実施例８で述べる。
【０１７０】
１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１および１２０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１  ＦＤＳの研究ロットの貯蔵、加速（貯蔵条件を上回る温度）およびストレス（撹拌ならびに凍結および解凍）安定性を測定するために安定性試験を開始した。これらの条件は、臨床ＤＰを製造するために用いるＦＤＳのタンパク質濃度の限界を定めるために選択した。加速およびストレス条件下のＦＤＳの研究ロットの評価は、ＦＤＳがＤＰの製造中に遭遇し得るストレスを超えるように設計され、ｍＡｂ１  ＦＤＳの分解経路を解明するための様々なテストにＦＤＳをかけることによって実施した。ＦＤＳは、５ｍＬポリカーボネートバイアルに満たした。
【０１７１】
原体の研究安定性は、以下の表３および４に示すように試験した。
【０１７２】
【表３】
2017536414.tif 000006
【０１７３】
【表４】
2017536414.tif 000007
【０１７４】
安定性試験の結果を以下の表５〜１４に要約する。
【０１７５】
【表５】
2017536414.tif 000008
【０１７６】
【表６】
2017536414.tif 000009
【０１７７】
【表７】
2017536414.tif 000010
【０１７８】
【表８】
2017536414.tif 000011
【０１７９】
【表９】
2017536414.tif 000012
【０１８０】
【表１０】
2017536414.tif 000013
【０１８１】
【表１１】
2017536414.tif 000014
【０１８２】
【表１２】
2017536414.tif 000015
【０１８３】
【表１３】
2017536414.tif 000016
【０１８４】
【表１４】
2017536414.tif 000017
【０１８５】
ｍＡｂ１医薬品の研究安定性試験を表１５および１６に示すように実施した。
【０１８６】
【表１５】
2017536414.tif 000018
【０１８７】
【表１６】
2017536414.tif 000019
【０１８８】
医薬品の安定性試験の結果を以下の表１７〜２２に要約する。
【０１８９】
【表１７】
2017536414.tif 000020
【０１９０】
【表１８】
2017536414.tif 000021
【０１９１】
【表１９】
2017536414.tif 000022
【０１９２】
【表２０】
2017536414.tif 000023
【０１９３】
【表２１】
2017536414.tif 000024
【０１９４】
【表２２】
2017536414.tif 000025
【０１９５】
安定性試験の結果は、以下のことを示すものであった。
【０１９６】
製剤化原体（ＦＤＳ）１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１は、≦−２０℃で少なくとも１２ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【０１９７】
ＦＤＳ  １２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１は、≦−２０℃で少なくとも１２ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【０１９８】
ＦＤＳ  １０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１は、５℃で５６日間のインキュベーションの後に物理的かつ化学的に安定であり、５℃で５６日間または２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）でおよび４０℃／７５％ＲＨで２８日間インキュベートした場合、効力を維持していた。
【０１９９】
ＦＤＳ  １２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１は、５℃で５６日間のインキュベーションの後に物理的かつ化学的に安定であり、５℃で５６日間または２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）でおよび４０℃／７５％ＲＨで２８日間インキュベートした場合、効力を維持していた。
【０２００】
１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１  ＦＤＳは、１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、物理的かつ化学的に安定であった。モニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１  ＦＤＳを１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、ｍＡｂ１は、効力を維持していた。
【０２０１】
１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１  ＦＤＳは、１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、物理的かつ化学的に安定であった。モニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１  ＦＤＳを１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、ｍＡｂ１は、効力を維持していた。
【０２０２】
医薬品（ＤＰ）１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１は、２〜８℃で少なくとも９ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【０２０３】
ＤＰ１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１は、２〜８℃で少なくとも９ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【実施例７】
【０２０４】
抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを含む共製剤
共製剤開発活動は、タンパク質の安定性を向上させる賦形剤を特定するためのＶＥＧＦアンタゴニストおよび抗Ａｎｇ−２抗体の液体製剤中の緩衝剤、有機共溶媒および熱安定剤のスクリーニングを含んでいた。最大のタンパク質の安定性を得るための最適ｐＨを決定するために緩衝条件も検討した。これらの試験から得られた結果を用いて、臨床での使用に適する安定な液体共製剤を開発した。ＶＥＧＦアンタゴニストは、配列番号１１のアミノ酸２７〜４５７からなる２つのポリペプチドの二量体からなる（本明細書でアフリベルセプトとも呼ぶ）。抗Ａｎｇ−２抗体は、配列番号１／２のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを有するヒト抗Ａｎｇ−２抗体であり、米国特許出願公開ＵＳ２０１１００２７２８６においてＨ１Ｈ６８５と称されている（本明細書で「ｍＡｂ１」とも呼ぶ）。ＶＥＧＦアンタゴニストを以下の４種の濃度の抗Ａｎｇ−２抗体と共製剤化した。
（ｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプトと１０ｍｇ／ｍＬ±１．５ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１
（ｉｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプトと２０ｍｇ／ｍＬ±３．０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１
（ｉｉｉ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプトと６０ｍｇ／ｍＬ±９．０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１、および
（ｉｖ）４０ｍｇ／ｍＬ±６．０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプトと１２０ｍｇ／ｍＬ±１８．０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１
【０２０５】
様々な実施形態では、抗Ａｎｇ−２抗体およびＶＥＧＦアンタゴニストを水中１０±１．５ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ６．２±０．３）、０．０３％０．００４５％ポリソルベート２０、４０ｍＭ±６．０ｍＭ塩化ナトリウムおよび５％±０．７５％スクロースで製剤化する。
【０２０６】
製剤化原体および医薬品の安定性は、本明細書の実施例８で述べるアッセイを用いて評価した。電荷変異体分析は、製剤化原体および医薬品について画像化キャピラリー等電点電気泳動を用いて行った。
【０２０７】
１０ｍｇ／Ｌ：４０ｍｇ／ｍＬおよび１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ（ｍＡｂ１：アフリベルセプト）ＦＤＳの研究ロットの貯蔵、加速（貯蔵条件を上回る温度）およびストレス（撹拌ならびに凍結および解凍）安定性を測定するために安定性試験を開始した。これらの条件は、臨床ＤＰを製造するために用いるＦＤＳのタンパク質濃度の限界を定めるために選択した。加速およびストレス条件下のＦＤＳの研究ロットの評価は、ＦＤＳがＤＰの製造中に遭遇し得るストレスを超えるように設計され、ｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳの分解経路を解明するための様々なテストにＦＤＳをかけることによって実施した。ＦＤＳは、５ｍＬポリカーボネートバイアルに満たした。
【０２０８】
共製剤化原体の研究安定性は、以下の表２３および２４に示すように試験した。
【０２０９】
【表２３】
2017536414.tif 000026
【０２１０】
【表２４】
2017536414.tif 000027
【０２１１】
共製剤化原体の安定性試験の結果を以下の表２５〜３４に要約する。
【０２１２】
【表２５】
2017536414.tif 000028
【０２１３】
【表２６】
2017536414.tif 000029
【０２１４】
【表２７】
2017536414.tif 000030
【０２１５】
【表２８】
2017536414.tif 000031
【０２１６】
【表２９】
2017536414.tif 000032
【０２１７】
【表３０】
2017536414.tif 000033
【０２１８】
【表３１】
2017536414.tif 000034
【０２１９】
【表３２】
2017536414.tif 000035
【０２２０】
【表３３】
2017536414.tif 000036
【０２２１】
【表３４】
2017536414.tif 000037
【０２２２】
共製剤化医薬品の安定性を以下の表３５および３６に示すように試験した。
【０２２３】
【表３５】
2017536414.tif 000038
【０２２４】
【表３６】
2017536414.tif 000039
【０２２５】
共製剤化医薬品の安定性の結果を以下の表３７〜４２に要約する。
【０２２６】
【表３７】
2017536414.tif 000040
【０２２７】
【表３８】
2017536414.tif 000041
【０２２８】
【表３９】
2017536414.tif 000042
【０２２９】
【表４０】
2017536414.tif 000043
【０２３０】
【表４１】
2017536414.tif 000044
【０２３１】
【表４２】
2017536414.tif 000045
【０２３２】
安定性試験の結果は、以下のことを示すものであった。
【０２３３】
製剤化原体（ＦＤＳ）１０：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトは、≦−２０℃で少なくとも１２ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【０２３４】
ＦＤＳ１２０：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトは、≦−２０℃で少なくとも１２ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【０２３５】
１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳは、５℃で５６日間のインキュベーションまたは２５℃／６０％相対湿度（ＲＨ）で２８日間のインキュベーションの後に物理的かつ化学的に安定であった。モニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。ｍＡｂ１およびアフリベルセプトは両方とも、１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ＦＤＳを５℃で５６日間または２５℃／６０％ＲＨで２８日間インキュベートした場合、効力を維持していた。
【０２３６】
１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳは、５℃で５６日間のインキュベーションの後に物理的かつ化学的に安定であった。モニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ＦＤＳは、２５℃／６０％ＲＨで２８日間のインキュベーションの後に物理的に安定していた。他のモニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。ｍＡｂ１およびアフリベルセプトは両方とも、１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ＦＤＳを５℃で５６日間または２５℃／６０％ＲＨで２８日間インキュベートした場合、効力を維持していた。
【０２３７】
１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳは、１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、物理的かつ化学的に安定であった。モニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ＦＤＳを１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトは、効力を維持していた。
【０２３８】
１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳは、６０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、物理的かつ化学的に安定であった。モニターした属性のいずれについても物理的または化学的安定性の感知できる変化は、検出されなかった。ＦＤＳを１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合に高分子量種（ＳＥ−ＵＰＬＣ）の０．９％の増加が認められたが、他のモニターした属性のいずれについても感知できる変化は、検出されなかった。１２０分のボルテックス撹拌は、極度のストレスであり、撹拌は、製造工程中に１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳについて最小限にするものとする。１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ  ＦＤＳを１２０分間撹拌（室温でボルテックス）した場合または８凍結／解凍サイクル（−３０℃で凍結し、室温で解凍する）にかけた場合、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトは、効力を維持していた。
【０２３９】
製剤（ＤＰ）１０：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトは、２〜８℃で少なくとも９ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【０２４０】
ＤＰ  １２０：４０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１：アフリベルセプトは、２〜８℃で少なくとも９ヵ月間貯蔵する場合、安定である。
【実施例８】
【０２４１】
製剤の安定性を評価するために用いた方法
ｍＡｂ１およびｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳならびにＤＰの研究安定性は、以下のアッセイを用いて評価した：外観検査による色および外観；ｐＨ；４０５ｎｍにおける光学濃度（ＯＤ）の増加により測定される濁度；マクロフローイメージング（ＭＦＩ）によるサブビジブル微粒子解析；逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）によるタンパク質濃度。
【０２４２】
純度は、以下のアッセイにより評価した：サイズ排除超高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ−ＵＰＬＣ）；還元および非還元ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）。
【０２４３】
荷電変異体分析は、以下のアッセイにより評価した：ｍＡｂ１  ＦＤＳおよびＤＰについて陽イオン交換ＵＰＬＣ；ｍＡｂ１およびｍＡｂ１：アフリベルセプトＦＤＳならびにＤＰについて画像化キャピラリー等電点電気泳動（ｉＣＩＥＦ）。
【０２４４】
効力は、ｍＡｂ１製剤中のｍＡｂ１について；ならびにｍＡｂ１：アフリベルセプト製剤中のｍＡｂ１およびアフリベルセプトの両方についてバイオアッセイにより評価した。各試料の相対効力は、バイオアッセイにより測定し、（ＩＣ５０参照試料／ＩＣ５０試料）＊１００％と定義する。貯蔵安定性試料の測定される効力は、参照基準の測定される効力の５０〜１５０％以内でなければならない。
【０２４５】
製剤の物理的安定性は、色、外観、ｐＨ、濁度およびタンパク質濃度を対象とする。溶液中の可視微粒子の存在は、外観検査により検出することができる。溶液が透明からわずかに乳光を発し、可視微粒子が本質的に存在せず、無色から浅黄色である場合、溶液は、外観検査に合格である。４０５ｎｍにおけるＯＤの増加により測定される、濁度も溶液中の微粒子を検出するために用いることができる。４０５ｎｍにおけるＯＤの増加は、微粒子の存在、乳光の増加または被験物質の変色を示し得る。ＭＦＩは、サイズが≧２μｍであるサブビジブル微粒子を測定するために用いられる。タンパク質濃度は、ＲＰ−ＨＰＬＣアッセイにより測定し、出発物質に対するタンパク質回収百分率として報告する。ＲＰ−ＨＰＬＣアッセイでは、逆相カラムからの溶離後に単一ｍＡｂ１ピークが単一アフリベルセプトピークから分離される。ｍＡｂ１濃度は、ｍＡｂ１ピーク面積をｍＡｂ１標準を用いて作製した検量線と比較することによって決定する。回収百分率は、それぞれ出発ｍＡｂ１またはアフリベルセプト濃度に対する測定ｍＡｂ１またはアフリベルセプト濃度に基づいて計算する。
【０２４６】
化学的安定性は、タンパク質の共有結合性変形態様（例えば、共有結合性凝集体、開裂生成物または電荷変異体）および非共有結合性変形態様（例えば、非共有結合性凝集体）の形成に適用される。高および低分子量分解生成物は、ＳＥ−ＵＰＬＣおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ法を用いて天然分子量生成物から分けることができる。ＳＥ−ＵＰＬＣ法における分解ｍＡｂ１の百分率は、すべての非天然ピークの面積とすべてのｍＡｂ１ピークの総面積との比から計算する。非還元および還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによるｍＡｂ１の純度は、主バンド強度とすべてのバンドの総強度との比から計算する。ｍＡｂ１の電荷変異体は、ｉＣＩＥＦおよびＣＥＸ−ＵＰＬＣを用いて分離する。これらの方法では、主ピークのｐｌより低いｐｌにフォーカスされるピークを「酸性」ピークと分類するのに対して、主ピークのｐｌより高いｐｌにフォーカスされるピークを「塩基性」ピークと分類する。
【０２４７】
ｍＡｂ１およびアフリベルセプト天然種は、互いから十分に分離することができないため、ｍＡｂ１：アフリベルセプト製剤は、ＳＥ−ＵＰＬＣにより総分子量純度（天然ｍＡｂ１＋天然アフリベルセプト）を用いて特徴付ける（すなわち、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの分子量純度は、個別に測定されない）。同様に、ｍＡｂ１  ＨＭＷ種は、アフリベルセプトＨＭＷ種から分離することができず、ｍＡｂ１  ＬＭＷ種は、アフリベルセプトＬＭＷ種から分離することができないため、ｍＡｂ１：アフリベルセプト製剤は、総ＨＭＷ種（ｍＡｂ１  ＨＭＷ＋アフリベルセプトＨＭＷ）および総ＬＭＷ種（ｍＡｂ１  ＬＭＷ＋アフリベルセプトＬＭＷ）を用いて特徴付けるものとする。
【０２４８】
ＳＥ−ＵＰＬＣ法を用いて測定されるｍＡｂ１：アフリベルセプト中の総ＨＭＷ種または総ＬＭＷ種の百分率は、それぞれ総ＨＭＷ種または総ＬＭＷ種の面積とすべてのｍＡｂ１：アフリベルセプトピークの総面積との比から計算する。非還元および還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥによる純度は、（アフリベルセプト主バンド＋ｍＡｂ１主バンド）強度とすべてのバンドの総強度との比から計算する。アフリベルセプトは、高レベルのシアル酸を含む高度グリコシル化タンパク質である。アフリベルセプト上の複雑な電荷分布の結果として、ＣＥＸ−ＵＰＬＣ法は、すべての電荷変異体を分けるするのに十分な分解能を有しておらず、したがって、ｍＡｂ１：アフリベルセプト試料の電荷変異体プロファイルの変化をアッセイするのに用いなかった。ｍＡｂ１：アフリベルセプト内の共製剤化されるｍＡｂ１およびアフリベルセプトの電荷変異体は、ｉＣＩＥＦのみを用いて分離した。
【０２４９】
ｍＡｂ１については、主ピークのｐｌより低いｐｌにフォーカスされるピークを「酸性」ピークと分類するのに対して、主ピークのｐｌより高いｐｌにフォーカスされるピークを「塩基性」ピークと分類する。アフリベルセプトについては、ピーク３〜８は、主要ピークであり、「主」と分類する。ピーク３のｐｌより低いｐｌにフォーカスされるピークを「酸性」ピークと分類するのに対して、ピーク８のｐｌより高いｐｌにフォーカスされるピークを「塩基性」ピークと分類する。
【実施例９】
【０２５０】
ｍＡｂ１、ｍＡｂ１：アフリベルセプトおよびアフリベルセプト製剤の貯蔵安定性の比較
１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１、１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１および４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプトの研究製剤の貯蔵安定性を評価する試験のＳＥ−ＵＰＬＣ結果をｍＡｂ１：アフリベルセプト（１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）および（１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）共製剤の結果と比較した。この評価は、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトを共製剤化することが、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの個別製剤化溶液（単一製剤）と比較した場合に形成された高分子量種の相対量の差をもたらしたかどうかを判定するために行った。共製剤と同等の条件下でインキュベートした、単一製剤のＳＥ−ＵＰＬＣ結果を用いて、同じ濃度の各タンパク質を含む共製剤のＨＭＷ種％の理論的増加を計算した。ＨＭＷの理論的増加を、実際の共製剤化医薬品を５℃でインキュベートした場合に認められたＨＭＷの増加と比較した。これらの試験に用いたＤＳロットは、臨床使用のために製造されたＤＳを代表するものである。
【０２５１】
１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１単独、４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプト単独およびｍＡｂ１：アフリベルセプト（１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）共製剤を含む５℃で貯蔵した製剤についてのＳＥ−ＵＰＬＣ結果の要約は、次の通りである：５℃で９ヵ月の貯蔵の後、１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１製剤中のＨＭＷ含量は、増加しなかった。同じ評価期間にわたって、４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプト製剤中のＨＭＷ％は、０．４％増加した。１０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１および４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプト製剤についての結果に基づいて、ｍＡｂ１：アフリベルセプト（１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）共製剤において９ヵ月の評価期間にわたって０．４％のＨＭＷ種の増加が起こることが予測された。総ＨＭＷ種の０．４％の増加が９ヵ月の評価期間中にｍＡｂ１：アフリベルセプト（１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）ＤＰについて認められた。ＨＭＷ％の計算された増加と観測された増加との一致は、５℃で９ヵ月間にわたるｍＡｂ１：アフリベルセプト（１０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）ＤＰとしてのｍＡｂ１およびアフリベルセプトの貯蔵が、個別に製剤化された医薬品について認められた増加と比べて、ＨＭＷ型の生成の増加をもたらすものではなかったことを示唆するものである。
【０２５２】
１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１単独、４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプト単独およびｍＡｂ１：アフリベルセプト（１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）共製剤を含む５℃で貯蔵した製剤についてのＳＥ−ＵＰＬＣ結果の要約は、次の通りである：５℃で９ヵ月の貯蔵の後、１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１製剤および４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプト製剤中のＨＭＷ含量は、それぞれ０．５％および０．４％増加した。１２０ｍｇ／ｍＬ  ｍＡｂ１および４０ｍｇ／ｍＬアフリベルセプト製剤についての結果に基づいて、ｍＡｂ１：アフリベルセプト（１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）共製剤において９ヵ月のインキュベーション期間にわたって０．９％のＨＭＷ種の増加が起こることが予測された。この理論的結果は、５℃での９ヵ月の貯蔵中にｍＡｂ１：アフリベルセプト（１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）ＤＰについて認められた総ＨＭＷ種の１．０％の増加と同等であった。ＨＭＷ％の計算上の増加と実際の増加とがほぼ一致したことは、５℃で９ヵ月間にわたるｍＡｂ１：アフリベルセプト（１２０ｍｇ／ｍＬ：４０ｍｇ／ｍＬ）ＤＰとしてのｍＡｂ１およびアフリベルセプトの貯蔵が、個別に製剤化された医薬品について認められた増加と比べて、ＨＭＷ型の生成の増加をもたらすものではなかったことを示唆するものである。
【実施例１０】
【０２５３】
新生血管を伴うＡＭＤまたはＤＭＥを有する患者におけるアフリベルセプトと併用して硝子体内（ＩＶＴ）投与するｍＡｂ１の臨床試験
この試験は、新生血管を伴うＡＭＤまたはＤＭＥを有する患者における単独またはアフリベルセプトと併用するｍＡｂ１のＩＶＴ投与の安全性、忍容性および有効性を評価するためにデザインされた第Ｉ相オープンラベル用量漸増臨床試験である。
【０２５４】
本試験の主要な目的は、新生血管を伴うＡＭＤを有する患者における、ならびに別個にＤＭＥを有する患者における、ＩＶＴ  ｍＡｂ１およびアフリベルセプト、ならびにＩＶＴ  ｍＡｂ１の安全性ならびに忍容性を検討することである。
【０２５５】
本試験の副次的目的は、（ｉ）ｍＡｂ１およびアフリベルセプトのＩＶＴ注射後のｍＡｂ１およびアフリベルセプトの全身薬物動態（ＰＫ）を特徴付けること；ならびに（ｉｉ）ＩＶＴ注射後の抗ｍＡｂ１および抗アフリベルセプト抗体の存在を特徴付けることである。
【０２５６】
主要エンドポイントは、ＩＶＴ  ｍＡｂｔ単独またはＩＶＴ共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプトにより処置した患者における２４週目までの眼および全身性の処置下で発現した有害事象（ＴＥＡＥｓ）の発生頻度および重症度である。
【０２５７】
副次的エンドポイントは、薬物動態；および（ｉｉ）共製剤のＩＶＴ注射後の抗薬物抗体（ＡＤＡ）の発生である。
【０２５８】
探索的エンドポイントは、（１）ＢＣＶＡのベースラインからの変化；（２）１２週目および２４週目における中心網膜厚のベースラインからの変化（ＯＣＴ）により測定）；ならびに（３）１２週目から２０週目までのＰＲＮアフリベルセプト注射の回数である。
【０２５９】
ＡＭＤ患者のみについて：（ｉ）１２週目および２４週目におけるＣＮＶ面積のベースラインからの変化（ＦＡにより測定）；（ｉｉ）１２週目および２４週目における総病変面積のベースラインからの変化（ＦＡにより測定）；（ｉｉｉ）１２週目および２４週目における漏出の面積のベースラインからの変化（ＦＡにより測定）
【０２６０】
ＤＭＥ患者のみについて：１２週目および２４週目におけるＤＲＳＳ（ＦＰにより測定）のベースラインからの変化
【０２６１】
試験デザインの論理的根拠
抗ＶＥＧＦ療法（例えば、アフリベルセプト）は、新生血管を伴うＡＭＤおよびＤＭＥの標準治療処置である。新生血管性眼疾患におけるＶＥＧＦおよびアンンジオポエチン２（Ａｎｇ−２）経路の両方を標的とすることは、抗ＶＥＧＦ療法のみによる処置と比べてさらなる有効性をもたらす可能性があり、より長い処置間隔をもたらす作用のより長い持続時間をもたらす可能性もある。ウサギにおけるＤＬ−ＡＡＡにより誘発された網膜血管新生および慢性血管漏出の前臨床モデルにおいて、静脈内（ＩＶ）ｍＡｂ１（１５ｍｇ／ｋｇ）とＩＶＴアフリベルセプト（１２５μｇ／５０μｌ）による処置は、アフリベルセプト単独による３週目までのみと比較して、８週目までの血管漏出の抑制をもたらした（実施例２における詳細参照）。
【０２６２】
他の試験において、網膜血管の発生に対するｍＡｂ１の効果を、アフリベルセプトの効果と、またはｍＡｂ１およびアフリベルセプトの両方による処置の効果と比較した。この実験に用いたｍＡｂ１（２５ｍｇ／ｋｇ、皮下［ＳＣ］）およびアフリベルセプト（２５ｍｇ／ｋｇ、ＳＣ）の用量は、各薬物が単剤として用いられた場合に網膜血管新生の最大抑制を得るのに必要な最小用量を超えていた。Ｐ３におけるアフリベルセプトまたはｍＡｂ１の投与は、ｈＦｃ対照と比べて、Ｐ６に測定した網膜の平均血管新生面積をそれぞれ３６％および４２％減少させた。さらに、網膜の平均血管新生面積は、いずれかの薬剤を単独で投与した動物と比較して、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの両方を投与した動物において有意に小さく、６８％低下し、これは、処置期間にわたる網膜血管の発生のほぼ完全な停止に相当していた（実施例３における詳細参照）。
【０２６３】
用量の選択の論理的根拠
開始用量は、試験眼におけるＩＶＴ注射により投与する０．５ｍｇ  ｍＡｂ１：２ｍｇアフリベルセプトの共製剤から構成されている。アフリベルセプトの２ｍｇ用量は、滲出性ＡＭＤおよび中心網膜静脈閉塞の処置用に現在承認済みおよび市販されているものと同等である。
【０２６４】
共製剤の０．５ｍｇ：２ｍｇ用量は、ＧＬＰ毒性試験中にカニクイザルに両側にＩＶＴ投与された最低用量の半分である。２ｍｇアフリベルセプトとの併用での最大６ｍｇ  ｍＡｂ１、ならびに６ｍｇ  ｍＡｂ１単独の用量は、サルにおいて忍容性が良好であった。
【０２６５】
生物学的観点からのこの開始用量論理的根拠は、ウサギ眼における血管新生のＤＬ−ＡＡＡモデルに基づいている。当モデルにおいて、ＩＶＴアフリベルセプト（０．１２５ｍｇ）およびｍＡｂ１（０．５ｍｇ）の共製剤は、アフリベルセプト単剤療法と比較して抗漏出効果の持続時間を３週間から８週間に有意に延長させた。０．５ｍｇ〜０．６ｍｇの範囲のヒト眼（ウサギ眼より約４倍大きい）用量への外挿は、生物学的活性を示すと予想される。したがって、０．５ｍｇの初回用量は、薬理学的観点から妥当である（実施例２参照）。
【０２６６】
提案される初回用量の安全性は、２ｍｇアフリベルセプトと併用して１、３および６ｍｇのｍＡｂ１の用量を両側に用い、ｍＡｂ１単独の６ｍｇ用量を含めたサルにおける１３週間ＩＶＴ毒性試験により裏付けられている。ヒト硝子体腔の体積がサル硝子体腔の体積の約４倍であることを考慮すると、初回開始用量は、サル試験における最低用量より事実上８倍低く、最高計画用量より約４８倍低い。したがって、サルＩＶＴ試験に用いた最低用量は、提案される臨床開始用量に十分な安全余裕を与える。
【０２６７】
試験デザイン
本試験は、スクリーニング期間（−２１日目〜−１日目）、ベースライン来院（１日目）、処置期間（１日目〜５７日目）、フォローアップ（８５日目〜１４１日目）および試験終了来院［１６９日目（２４週目）］からなっている。１日目／ベースラインにおいて、適格患者は、治験薬の初回投与を受ける前に安全性評価を受ける。
【０２６８】
１日目、２９日目および５７日目に、患者は、共製剤（ｍＡｂ１およびアフリベルセプト）またはｍＡｂ１単独の注射を合計３回受ける。最初のコホートは、０．５ｍｇ：２ｍｇの共製剤の投与を受ける。共製剤およびｍＡｂ１単独の計画投与の概要を表４３に示す。最大耐量（ＭＴＤ）が決定された場合、単独投与するｍＡｂ１の用量は、ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの共製剤内の投与されるｍＡｂ１の最高用量に対応するものとする。
【０２６９】
【表４３】
2017536414.tif 000046
【０２７０】
治験薬の最終用量は、８週目に投与する。硝子体内アフリベルセプト注射（２ｍｇ）は、試験眼について１２週目に開始して２０週目まですべての患者に使用できる。１２週目にアフリベルセプトの投与を受ける患者は、アフリベルセプト処置を受け続けるものとし、月１回の注射までの可能性がある。
【０２７１】
患者は、試験来院時に眼および全身安全性（眼科学的検査、臨床検査評価等）ならびに有効性（光コヒーレンス断層撮影［ＯＣＴ］、フルオレセイン血管造影［ＦＡ］／眼底写真撮影［ＦＰ］、眼底自家蛍光［ＦＡＦ］およびＢＣＶＡ）について評価し、２４週目（試験の終了）まで追跡する。
【０２７２】
試験眼／僚眼の選択：  １例の患者当たり１眼のみを試験に登録する。登録眼は、試験眼と呼ぶ。他眼は、僚眼であると見なす。
両眼における適格性基準を満たす患者については、より悪いＢＣＶＡスコアを有する眼を試験眼として選択する。患者が両眼における同様のＢＣＶＡスコアを有する場合、最も透明な透光体を有する眼を試験眼として選択する。両眼の中間透光体の透明度が同様である場合、患者の非優位眼（識別可能な場合）を試験眼として選択する。いずれの眼も優位でない場合、右眼を試験眼として指定する。
【０２７３】
試験コホート
約２０〜４０例の患者をこの用量漸増試験に登録する。４つの逐次漸増用量コホートを共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプト（０．５ｍｇ：２ｍｇ、１ｍｇ：２ｍｇ、３ｍｇ：２ｍｇおよび６ｍｇ：２ｍｇ）について計画し、１つのコホートをｍＡｂ１単独（６ｍｇ）について計画した。各用量コホートは、最初に２例のＤＭＥおよび２例のＡＭＤの４例の患者からなっている。１例の用量制限毒性（ＤＬＴ）が発生した場合、コホートは、２例のさらなるＤＭＥ患者および／または２例のさらなるＡＭＤ患者を含むように拡大することができる。コホート４に到達した場合、コホート４および５を並行して実施することができる。
【０２７４】
用量漸増および試験中止規則
共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの次のより高用量レベルに漸増する決定は、進行中のコホート中に評価され、審査されたＡＭＤおよびＤＭＥ患者の両方からの安全性および忍容性情報に基づく。漸増する決定は、コホート（ＡＭＤおよびＤＭＥの両方）における最後の患者を治験薬の患者の最初の投与を受けた後少なくとも１週間観察した後に行うことができる。ｍＡｂ１単独コホートは、ＭＴＤで、またはＭＴＤが特定されない場合、最高用量（６ｍｇ）で登録する。ＭＴＤが特定されない場合、このコホートにおける登録は、６ｍｇ：２ｍｇ  ｍＡｂ１：アフリベルセプト共製剤と並行させる。
【０２７５】
ＤＴＬが認められる場合、コホートの拡大を考慮することができる。コホートの拡大は、２例のさらなるＡＭＤ患者および／または２例のさらなるＤＭＥ患者を含み得る。ＤＬＴ事象の後の４例を超える各コホートにおける患者の数を増加させる論理的根拠は、ＩＶＴ注射により散発的に発生することが公知である特定のＡＥｓ（例えば、過敏性反応または中等度から重度の眼内炎症）と治験薬曝露に関連する真のＤＬＴ事象とを区別する能力を向上させることである。コホートの拡大は、自動的でないものとする。それどころか、コホートの拡大または共製剤の次のより高用量レベルへの用量漸増を行うかどうかを決定するために所見を考察して、可能なＤＬＴの臨床的有意性を判定する。
【０２７６】
すべての患者は、次の用量コホートにおける登録を開設する前に共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプトの投与を受けた後少なくとも７日間観察する（現在の用量が安全であることを確認する前に次の用量コホートのスクリーニングを開始することができるが）。コホートに登録された最初の４例の患者のすべてが８日目（来院７）の安全性評価を完了し、データが審査されたならば、次の用量コホートへの漸増を行うものとする。用量漸増および中止規則については表４４を参照されたい。
【０２７７】
【表４４】
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【０２７８】
２例またはそれ以上のＤＬＴｓが認められた場合、安全性審査が行われるまで、投与を一時停止する。安全性審査の結果は、試験を計画通りに継続する、現在の用量コホートを拡大する、または現在の用量で投与することを中止する決定である。この後者の場合、観測される毒性は、用量制限であると見なし、投与した最高用量を下回る用量をＭＴＤと見なす。１例のグレード４ＡＥまたはグレード４重篤有害事象（ＳＡＥ）がいずれかのコホート（最初の投与コホートまたは拡大コホート）に認められた場合、投与を一時停止し、さらなる投与の考慮の前に総合的な安全性審査を行うものとする。
【０２７９】
用量制限毒性
ＤＬＴは、次のように定義される：眼毒性評価尺度（Ｏｃｕｌａｒ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｇｒａｄｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ）により判定されるグレード２もしくは３、または食品医薬品局（ＦＤＡ）産業界向け２００７年指針、予防ワクチン臨床試験に登録された健常成人および未成年者志願者の毒性評価尺度（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００７  Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ、Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ｇｒａｄｉｎｇ  Ｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ａｄｕｌｔ  ａｎｄ  Ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ  Ｅｎｒｏｌｌｅｄ  ｉｎ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ）におけるグレード３もしくは４
【０２８０】
最大耐量
ＭＴＤは、２例またはそれ以上のＤＬＴｓの発生のために投与が中止される用量レベルの直下の用量レベルと定義される。ＤＬＴの発生のために試験が中止されない場合、ＭＴＤが決定されなかったと見なされる。
【０２８１】
試験集団
標的集団は、新生血管性ＡＭＤを有する５０歳もしくはそれより高齢の男性および女性、または中心障害（ｃｅｎｔｒａｌ  ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ）を伴う臨床的に有意なＤＭＥ有する１８歳もしくはそれより高齢の男性および女性である。
【０２８２】
選択基準：  患者は、試験への参加に適格であるためには以下の基準を満たさなければならない：（１）ＡＭＤを有する患者については：ａ．治験責任医師により判断される、試験眼におけるＦＡまたはＯＣＴにより証明される中心窩を侵す傍中心窩病変を含む、ＡＭＤに二次的な活動性中心窩下脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）；ならびにｂ．≧５０歳およびそれより高齢の男性または女性。ＤＭＥ有する患者については：ｃ．中心障害（スペクトルドメインＯＣＴ上の中心サブフィールドにおける≧３００μｍ）を伴う臨床的に有意なＤＭＥ有する；ならびにｄ．≧１８歳およびそれより高齢の男性または女性。（２）診療所来院および試験関連手順を遵守する意思があり、能力がある；ならびに（３）署名済みインフォームドコンセントを提出する。
【０２８３】
除外基準：  以下の基準のいずれかを満たす患者は、試験から除外される：（１）（ａ）新生血管性ＡＭＤ有する患者については：いずれかの眼におけるＡＭＤ以外のあらゆる原因によるＣＮＶの証拠；いずれかの眼におけるＤＲまたはＤＭＥの証拠；（ｂ）ＤＭＥ有する患者については：いずれかの眼におけるあらゆる原因による新生血管性ＡＭＤまたはＣＮＶ；（２）いずれかの眼における事前のアフリベルセプト；（３）１日目の８週間以内の試験眼におけるＩＶＴベバシズマブ、ラニビズマブもしくはペガプタニブナトリウムまたは本試験における薬物の投与を除外するようなこれらの事前の処置のいずれかによるＡＥ；（４）アンジオポエチン阻害剤による事前の処置；（５）事前の全身（ＩＶ）抗ＶＥＧＦ投与；（６）試験眼における網膜硝子体手術の既往歴；（７）スクリーニング来院の３ヵ月以内の試験眼における汎網膜光凝固術または黄斑光凝固術；（８）スクリーニングの４ヵ月以内の試験眼における眼内または眼周囲コルチコステロイドの事前の使用；（９）スクリーニング／ベースラインにおける試験眼における眼内圧（ＩＯＰ）≧２５ｍｍＨｇ；（１０）スクリーニング／ベースラインにおけるいずれかの眼における感染性眼瞼炎、角膜炎、強膜炎または結膜炎の証拠；（１１）スクリーニング来院の３ヵ月以内のいずれかの眼における眼内炎症／感染：（１２）試験眼におけるスクリーニング来院時に可視の現在の虹彩血管新生、硝子体出血または牽引性網膜剥離；（１３）例えば、スクリーニング／ベースラインにおける透光体不透明、フルオレセイン色素に対するアレルギーまたは静脈アクセスの欠如のため、ＣＮＶを記録するための写真、ＦＡまたはＯＣＴを得ることが不可能；（１４）治験責任医師の見解での、コントロール不良の糖尿病；（１５）患者が座位にある場合のコントロール不良の血圧（収縮期＞１６０ｍｍＨｇまたは拡張期＞９５ｍｍＨｇと定義）；（１６）１日目の１８０日以内の脳血管発作または心筋梗塞の病歴；（１７）腎不全、透析または腎臓移植の既往歴；（１８）ドキシサイクリンまたは類似化合物（すなわち、テトラサイクリン）に対する既知の過敏症；（１９）試験製剤の化合物のいずれかに対する既知の過敏症；（２０）妊娠または授乳中女性；ならびに（２１）試験中に十分な避妊を実施する意思のない性的に活動性の男性または妊娠の可能性がある女性（十分な避妊処置は、スクリーニング前の２もしくはそれ以上の月経周期での経口避妊薬もしくは他の処方薬学的避妊薬の安定使用；子宮内装置；両側卵管結紮；精管切除術；コンドームプラス避妊スポンジ、発泡剤もしくはゼリー、またはダイアフラムプラス避妊スポンジ、発泡剤もしくはゼーを含む）。
【０２８４】
試験処置
治験中および参照処置
共製剤化ｍＡｂ１およびアフリベルセプトは、ｍＡｂ１（Ａｎｇ２抗体）およびアフリベルセプトから構成されている医薬品である。これは、以下の濃度（用量漸増で漸進的により高用量に用いられる漸進的により高濃度有する）の、ＩＶＴ投与用の滅菌済み１回使用２ｍＬガラスバイアル入りの水溶液として本試験のために供給される：１０：４０ｍｇ／ｍＬ；２０：４０ｍｇ／ｍＬ；６０：４０ｍｇ／ｍＬ；および１２０：４０ｍｇ／ｍＬ（ｍＡｂ１：アフリベルセプト）。
【０２８５】
ｍＡｂ１単独医薬品も１２０ｍｇ／ｍＬの濃度の、ＩＶＴ投与用の滅菌済み１回使用２ｍＬガラスバイアル入りの水溶液として本試験のために供給される。
【０２８６】
共製剤およびｍＡｂ１は、ＩＶＴ注射により送達し、注射容量は、５０μｌ（０．０５ｃｃ）とする。０．０５０ｍｌの最小抜取り可能容量が存在する。各バイアルは、０．３ｍＬのｍＡｂ１の抜取り可能容量を含む。
【０２８７】
患者に３用量（ｄｏｓｅｓ）の治験薬を投与する。治験薬は、治験責任医師または他の有資格試験担当者により１日目、２９日目および５７日目に投与される。患者は、以下の共製剤またはｍＡｂ１治療計画の１つを受けるために登録する。
コホート１：０．５ｍｇ：２ｍｇ（ｍＡｂ１：アフリベルセプト）
コホート２：１ｍｇ：２ｍｇ（ｍＡｂ１：アフリベルセプト）
コホート３：３ｍｇ：２ｍｇ（ｍＡｂ１：アフリベルセプト）
コホート４：６ｍｇ：２ｍｇ（ｍＡｂ１：アフリベルセプト）
コホート５：６ｍｇ（ｍＡｂ１単独）
【０２８８】
バックグラウンド処置
試験眼処置：  硝子体内アフリベルセプト注射剤は、４０ｍｇ／ｍＬの濃度の５０μＬを含む注射器を用意するのに十分な容量を有する滅菌済み密封バイアル入りで供給される。１２週目に開始し（そして２０週目まで継続する）、下記の再処置基準のいずれかが満たされる場合、患者は、試験眼におけるアフリベルセプト処置（２ｍｇ）を月１回受けるのに適格である：（１）最低の以前の測定値と比較してＯＣＴにおける中心網膜厚の５０μｍ超の増加がある。（２）ＯＣＴにおける新規もしくは持続性の嚢胞性網膜変化もしくは網膜下液、またはＯＣＴにおける中心サブフィールドにおける持続性びまん性浮腫が存在する。（３）ＯＣＴにおける中心サブフィールドにおける網膜厚の増加と併せて最良の以前の測定値からの５またはそれ以上の文字の損失。（４）現在とつい最近の来院との間のＢＣＶＡの５文字以上の改善。
【０２８９】
遼眼処置：  ４週目に、スクリーニング時に遼眼にＡＭＤもしくはＤＭＥを有する患者、または試験中にＡＭＤもしくはＤＭＥと診断される患者にアフリベルセプト（２ｍｇ）を使用可能にする。遼眼は、試験中に安全性について評価するが、試験眼と見なさない。患者の遼眼は、治験責任医師の裁量で、試験眼の処置と同じ日に処置を受け得る。すべての遼眼の処置は、遼眼に対する処置として電子的症例報告書（ＣＲＦ）に記録しなければならない。
【０２９０】
遼眼の処置を受ける患者は、試験からの撤退を要求されないものとする。遼眼の試験評価およびすべてのＡＥｓは、収集する。
【０２９１】
禁止薬物
試験眼：  患者は、ＩＶＴ共製剤またはｍＡｂ１、および必要な場合、このプロトコールに規定されている、アフリベルセプトによる患者の割り当てられた試験処置以外の試験眼におけるＡＭＤもしくはＤＭＥに対する標準もしくは治験薬の投与を受けてはならない。これは、試験眼における新生血管性ＡＭＤまたはＤＥＭを処置する目的で、局所投与（例えば、ＩＶＴ、局所、強膜近傍または眼窩周囲経路）される薬物、ならびに全身投与される薬物を含む。
【０２９２】
僚眼：  ４週目に開始して、僚眼が黄斑の中心に関係するもしくは脅かすＤＭＥまたは新生血管性ＡＭＤを有する場合、アフリベルセプト（２ｍｇ）を投与することができる。僚眼における他の状態は、承認済み療法により処置することができるが、それらは、局所投与しなければならない。
【０２９３】
非眼全身：  試験または僚眼の新生血管性ＡＭＤおよびＤＭＥに対する非眼（全身）標準もしくは治験処置は、許容されない。全身血管新生阻害剤は、試験中許容されない。
【０２９４】
試験処置
安全性および忍容性は、処置下で発現する有害事象（ＴＥＡＥｓ）、理学的検査、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧｓ）ならびに臨床評価（血液学的検査、血液化学検査および尿検査）のモニタリング／評価により評価する。眼安全性は、眼科検査（細隙灯、倒像検眼鏡検査、眼内圧［ＩＯＰ］、スペクトルドメインＯＣＴ、ＢＣＶＡ、ＦＡＦならびにＦＰおよびＦＡからの情報）により評価する。ｍＡｂ１を評価するために血清試料およびアフリベルセプトの血漿ＰＫ試料を採取する。ＡＤＡ反応を評価するための血清試料を採取する。
【０２９５】
最良矯正視力（ＢＣＶＡ）：  試験眼および遼眼の視覚機能は、スクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院時に４ｍで４Ｍ  ＥＴＤＲＳプロトコール（Ｔｈｅ  Ｅａｒｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ  １９８５）を用いて評価する。
【０２９６】
フルオロセイン血管造影／眼底写真撮影（ＦＡ／ＦＰ）：  試験眼および遼眼の網膜血管系の解剖学的状態は、スクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院の時点に眼底鏡検査、ＦＡおよびＦＰにより評価する。最小限、以下の変数に関する情報を収集する：
ＡＭＤのみについて：総病変面積、ＣＮＶ面積、古典的ＣＮＶ面積およびフルオロセイン漏洩の面積
ＤＭＥのみについて：糖尿病性網膜症重症度スコア（ＤＲＳＳ）
【０２９７】
認定写真撮影者は、上記の時点に両眼におけるＦＡおよびＦＰを実施する。眼底および血管造影画像を独立判定センターに送る。試験眼は、トランジット眼であるものとする。すべてのＦＡおよびＦＰは、原資料の一部として施設に保管する。
【０２９８】
スペクトドメイン光コヒーレンス断層撮影：  網膜および病変の特性は、スクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院の時点にスペクトドメインＯＣＴを用いて評価する。
【０２９９】
画像は、ＯＣＴ技師によって試験眼および遼眼についてスペクトドメインＯＣＴを用いて試験施設において保存され、伝送される。光コヒーレンス断層撮影画像は、独立判定センターに送られ、そこで試験眼の画像が判定される。すべてのＯＣＴｓは、原資料の一部として試験施設に電子的に保管する。光コヒーレンス断層撮影技師は、画像取得の一貫性および質を保証するために判定センターにより認定され、共製剤の患者の用量レベルに対してマスクされる。
【０３００】
眼底自家蛍光：  網膜の解剖学的特性は、自家蛍光を用いることによっても評価する。認定写真撮影者は、スクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院の時点にＦＡＦを実施する。画像は、独立判定センターに送られる。すべての画像は、原資料の一部として施設に保管する。
【０３０１】
眼内圧：  試験眼の眼内圧は、Ｇｏｌｄｍａｎｎ圧平眼圧計またはＴｏｎｏ−ｐｅｎ（商標）を用いて各試験来院時に測定する。ＩＯＰ測定の同じ方法を試験中に各患者に用いなければならない。アフリベルセプト処置が行われている来院時には、ＩＯＰは、処置前（両側）および処置後約３０分に（試験眼のみ）測定しなければならない。
【０３０２】
細隙灯検査：  前眼部および前部硝子体をスクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院の時点に細隙灯を用いて検査する。両眼を検査する。眼底の検査も倒像検眼鏡を用いて行う。
【０３０３】
前房フレアおよび細胞を等級付けする。前房中の細胞反応の強度は、４５°〜６０°の角度で全強度の１×３ｍｍ高出力ビームで認められる炎症細胞の数により等級付けする。さらに、硝子体炎症反応を等級付けする。
【０３０４】
倒像検眼鏡検査：  倒像検眼鏡検査は、スクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院の時点に実施する。それは、投与前に両側に、治験薬を投与する日に治験薬の投与直後に試験眼において実施する。適切なレンズおよび光学系、すなわち、辺縁部については頭部装着型もしくは携帯型検眼鏡および中心眼底については細隙灯を用いる。瞳孔を散大させ、眼底の検査を両眼について行う。
【０３０５】
安全性非眼：  体温、座位血圧、脈拍および呼吸数を含む、バイタルサインを収集し、完全かつ十分な理学検査、標準１２誘導ＥＣＧならびに血液学、化学、尿検査に関する標準臨床検査、および妊娠検査をスクリーニング、ベースラインならびに処置後１、４、６、８、１２、１６、２０および２４週目の各試験来院の時点の投与前に行う。
【０３０６】
安全性
安全性および忍容性は、処置下で発現する有害事象（ＴＥＡＥｓ）、理学的検査、バイタルサイン、心電図（ＥＣＧｓ）ならびに臨床評価（血液学的検査、血液化学検査および尿検査）のモニタリング／評価により評価する。
【０３０７】
有害事象（ＡＥ）は、治験薬との因果関係を有し得るまたは有し得ない、治験薬を投与した患者における厄介な医療上の出来事である。したがって、ＡＥは、治験薬に関連すると見なされるか否かを問わず、治験薬の使用に時間的に関連する好ましくなく、意図しない徴候（異常な臨床検査所見を含む）、症状または疾患である。
【０３０８】
重篤な有害事象（ＳＡＥ）は、あらゆる用量で、死亡をもたらす、生命を脅かす、入院を必要とするまたは既存の入院を長期化させる、持続性または重大な作業不能／不能をもたらす、先天的異常／出生時欠損である、かつ／または重要な医療事象である、厄介な医療上の出来事である。重篤な視覚を脅かす眼のＡＥｓは、以下を含む：（１）ＡＥが３０文字超のＢＣＶＡの低下をもたらす（ＢＣＶＡの最近の評価と比較して）。（２）ＡＥが光感知またはより悪いレベルへのＶＡの低下をもたらす。（３）ＡＥが永久失明を防止するための外科的介入（例えば、感染防止剤のＩＶＴ注射を伴う硝子体穿刺または生検、レーザーまたはガスによる冷凍凝固）を必要とする。（４）ＡＥが重度の眼内炎症に関連する（すなわち、４＋前房細胞／フレアまたは４＋硝子体炎）。（５）治験責任医師の見解では、ＡＥが永久失明を防止するための内科的介入を必要とし得る。
【０３０９】
結果
安全性結果の予備的解析により、共製剤がＡＭＤおよびＤＭＥ患者において忍容性が良好であり、好ましい安全性プロファイルを有することが示された。
【０３１０】
表４５および４６にそれぞれＡＭＤおよびＤＭＥを有する患者のベースライン人口統計学的特性を示す。
【０３１１】
【表４５】
2017536414.tif 000048
【０３１２】
【表４６】
2017536414.tif 000049
【０３１３】
ＡＭＤおよびＤＭＥ患者のベースライン特性をそれぞれ表４７および４８に要約する。
【０３１４】
【表４７】
2017536414.tif 000050
【０３１５】
【表４８】
2017536414.tif 000051
【０３１６】
現在まで（１２週目）の結果は、すべての用量レベルで視覚（２０文字までの視力の向上）および網膜の形態（中心サブフィールド厚の減少）の改善を示している。効果の持続時間は、より高用量（３ｍｇ：２ｍｇおよび６ｍｇ：２ｍｇで）で延長した。
【０３１７】
処置後２４週目に、視力の獲得がＡＭＤまたはＤＭＥを有する患者において維持または改善すると期待される。
【０３１８】
本発明は、本明細書で述べた特定の実施形態によって範囲が限定されないものとする。実際に、本明細書で述べたものに加えて、本発明の様々な変形形態が、前述の説明および添付図面から当業者に明らかになる。そのような変形形態は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入るものとする。
【図１】
2017536414.tif 000052
【図２】
2017536414.tif 000053
【図３−１】
2017536414.tif 000054
【図３−２】
2017536414.tif 000055
【配列表】
2017536414000001.app
【国際調査報告】
2017536414.tif 000056
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