(57)【要約】  化学療法を受けているか又は予定されている患者で、手足症候群（手掌足底発赤知覚不全）及び前記に随伴する症候を治療する方法が開示される。前記方法は、影響を受ける皮膚領域又は手及び足に医薬組成物を局所的に投与する工程を含み、前記医薬組成物は、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩、又は前記の組み合わせの有効量及び医薬的に許容できる担体を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学療法を受けている患者において手足症候群（手掌足底発赤知覚不全）及び前記症候群に随伴する症候を治療する方法であって、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせの有効量、及び、医薬的に許容できる担体、を含む医薬組成物を、皮膚の影響を受ける領域に、化学療法の施療中に局所的に投与する工程を含む、前記方法。
【請求項２】
アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストが、アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストが、ブリモニジン、テトラヒドロザリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、エピネフリン、ノルエピネフリン、オキシメタゾリン、フェニルエフリン、又はメトキシアミンである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせが、ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
皮膚の影響を受ける領域が手、足、顔、性器又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
皮膚の影響を受ける領域が、手のひら、足の裏、手指、足指、足の甲、手の甲又はそれらの組み合わせである、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
皮膚の影響を受ける領域が手のひらである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
手足症候群の症候が水疱、皮膚硬結、腫脹、潰瘍、びらん又はそれらの組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
医薬的に許容できる担体がゲル、クリーム、軟膏、ローション、又はエマルジョンである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩が、組成物の約0.5質量％から約5質量％の量で存在する、請求項４に記載の方法。
【請求項１１】
ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩が、組成物の約0.5質量％から約2質量％の量で存在する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
担体がゲルであり、ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩がゲルの約0.33質量％の量で存在する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
化学療法を受ける予定の患者において手足症候群（手掌足底発赤知覚不全）の症候を軽減する方法であって、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせの有効量及び医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物を、化学療法を受ける前に患者の手及び足に局所的に適用する工程を含む、前記方法。
【請求項１４】
アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストが、アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストが、ブリモニジン、テトラヒドロザリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、エピネフリン、ノルエピネフリン、オキシメタゾリン、フェニルエフリン、又はメトキシアミンである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせが、ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
医薬的に許容できる担体がゲル、クリーム、軟膏、ローション、又はエマルジョンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩が、組成物の約0.5質量％から約5質量％の量で存在する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩が、組成物の約0.5質量％から約2質量％の量で存在する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
担体がゲルであり、ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩がゲルの約0.33質量％の量で存在する、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
医薬組成物が化学療法施療の3から4時間前に適用される、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出現の相互引用）本出願は、米国仮特許出願62/016,324（2014年6月24日出願）（その内容は参照により本明細書に含まれる）の優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
癌治療は、多様な治療法（外科手術、放射線照射、ホルモン療法、化学療法及び免疫療法を含む）の開発とともに先の世紀において大いに改善された。化学療法は、今もなお癌のもっとも一般的な治療の1つである。新規な化学療法剤及び併用化学療法剤の投薬プログラムの開発と試験は、性能の向上と副作用の軽減のために絶え間なく進行している。
しかしながら、化学療法剤の大半が患者の生活の質に影響を与える副作用を有する。そのような副作用の1つが、手足症候群（すなわち手掌足底発赤知覚不全、肢端紅斑、バーグドーフ症候群、化学療法誘発肢端紅斑、手掌足底知覚不全、手掌足底紅斑、手掌足底紅皮症、中毒性紅斑）であり、手足症候群は化学療法のタイプにしたがって化学療法患者の2%に生じる。
手足症候群は、手及び足並びに頻度は低いが顔、性器領域及び圧迫又は摩擦により影響を受ける領域（例えば皮膚のしわ及び窮屈な衣類下の皮膚）の皮膚細胞又は毛細血管（小血管）の増殖に化学療法剤が影響を及ぼすときに生じる。化学療法剤がいったん血管外に出ると、当該薬剤は周辺組織を損傷しうる。手足症候群の発症機序は不明である。1つの理論は、化学療法剤は汗腺管（eccrine sweat duct）で蓄積されることによって局所損傷を引き起こすというものである。他の研究者は、化学療法の結果としてシクロオキシゲナーゼ2の皮膚の過剰発現が炎症を生じると考えている。
手足症候群は、通常は化学療法開始から数日以内に初めて出現するが、症候が出現するために数カ月及び数多くの化学療法サイクルを要することもある。手のひらは常に含まれ、さらに常にというわけではないが足の裏、手指、足指、足の甲及び手の甲が含まれる。一般的ではない部位には顔、性器領域、及び摩擦圧によって影響を受ける部位（例えば皮膚のしわ及び窮屈な衣類下の皮膚）が含まれる。
軽度から中等度の手足症候群には、手のひら及び/又は足の裏の症候（水疱、潰瘍、びらん、腫脹、ひりひりする感覚、火傷のような感覚、圧痛、及び皮膚の突っ張りを含む）が含まれる。手足症候群のより重篤な症候には、水疱、潰瘍、びらん、皮膚のひびわれ、剥離（flaking）又は剥脱（peeling）による重篤な痛み及び歩行困難又は腕の使用困難が含まれる。時に症候は、当該症候が鎮まるまで化学療法投薬プログラムを変更又は停止しなければならないほど重篤である。
化学療法投薬プログラムの変更又は停止を必要とするほど患者の症候が重篤でないように、手足症候群を治療及び予防する新規な治療法が希求される。
【発明の概要】
【０００３】
ある実施態様では、本発明は、化学療法を受けている患者における手足症候群（手掌足底発赤知覚不全）及び前記症候群に随伴する症候を治療する方法に関し、本方法は、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせの有効量及び医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物を、影響を受ける皮膚領域に、当該化学療法の施療中に局所的に投与する工程を含む。
好ましくは、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストは、アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストである。アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストは、好ましくはブリモニジン、テトラヒドロザリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、エピネフリン、ノルエピネフリン、オキシメタゾリン、フェニルエフリン、又はメトキシアミンである。もっとも好ましくは、アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストはブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩である。
影響を受ける皮膚領域には手、足、顔、性器又はそれらの組み合わせが含まれる。特に影響を受ける手及び足の領域には手のひら、足の裏、手指、足指、足の甲、手の甲又はそれらの組み合わせが含まれる。手のひらはほぼいつも影響を受ける。
医薬的に許容できる担体は、好ましくはゲル、クリーム、軟膏、ローション、又はエマルジョンである。
ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩は、好ましくは当該組成物の約0.5質量％から約5質量％の量で存在する。より好ましくは、ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩は、当該組成物の約0.5質量％から約2質量％の量で存在する。
本発明の好ましい特徴では、担体はゲルであり、ブリモニジン又は医薬的に許容できるその塩はゲルの約0.33質量％の量で存在する。
別の実施態様では、本発明は、化学療法を受ける予定の患者において手足症候群（手掌足底発赤知覚不全）の症候を軽減する方法に関し、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせの有効量及び医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物を、化学療法を受ける前に患者の手及び足に局所的に適用する工程を含む。
好ましい実施態様では、医薬組成物は化学療法施療の3から4時間前に適用される。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】ネズミUBV誘発表皮過形成モデルにおけるブリモニジン酒石酸塩の局所投与後の効果、特に1回のUVB照射に対するマウス皮膚の応答と表皮の厚さにおけるブリモニジン酒石酸塩治療の影響の評価の結果を示す。
【図２】ネズミUBV誘発表皮過形成モデルにおけるブリモニジン酒石酸塩の局所投与後の効果、特に1回のUVB照射に対するマウス皮膚の応答とケラチノサイト増殖におけるブリモニジン酒石酸塩治療の影響の評価の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００５】
本発明は、手足症候群（すなわち手掌足底発赤知覚不全）及び前記症候群に随伴する症候を治療する方法に関し、前記方法は、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト、医薬的に許容できるその塩又はそれらの組み合わせ及び医薬的に許容できる担体を含む医薬組成物を、影響を受ける皮膚領域部位に、化学療法の前、施療中及び/又は施療後で局所的に投与する工程を含む。
手足症候群の症候には、身体の様々な部分の水疱、潰瘍、びらん、腫脹、ひりひりする感覚、火傷のような感覚、圧痛、皮膚の突っ張り、皮膚のひび割れ、皮膚の剥離、又は皮膚の剥脱が含まれる。当該症候は、ほぼ普遍的に手及び足（例えば手のひら、手指、手の甲、足指、足の甲及び足の裏を含む）に生じる。頻度は低いが、症候は、顔、性器領域及び圧迫又は摩擦により影響を受ける部位（例えば皮膚のしわ及び窮屈な衣類下の皮膚）にも生じうる。
アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストは当業界で周知である。好ましい実施態様では、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストは、アルファ-1又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストでありうる。本発明に含まれるアルファアドレナリン作動性受容体アゴニストは、アルファ-1又はアルファ-2アドレナリン作動性受容体のどちらかに対して選択性を示しても示さなくてもよい。例えば、あるものはアルファ-1及びアルファ-2両アドレナリン作動性受容体アゴニストとみなすことができる。より好ましくは、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストは、選択的アルファ-1又は選択的アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストでありうる。
選択的アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニストの例には、オキシメタゾリン、フェニルエフリン、及びメトキシアミンが含まれる。選択的アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストの例には、ブリモニジン、テトラヒドロザリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、エピネフリン、及びノルエピネフリンが含まれる。
【０００６】
いくつかの選択的アルファ-1及び選択的アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニストの化学構造を以下に示す。
【０００７】
2017519034.tif 000003
ブリモニジン及び医薬的に許容できるその塩が本発明の好ましい実施態様である。好ましくは、組成物の活性成分はブリモニジン酒石酸塩である。
【０００８】
アルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト、アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニスト、又は医薬的に許容できるその塩は、単独で、又は1つ若しくは2つ以上のアルファ-1アドレナリン作動性受容体アゴニスト、アルファ-2アドレナリン作動性受容体アゴニスト、又は医薬的に許容できるその塩と併用して投与されうる。例えば、医薬組成物中の活性成分はブリモニジン酒石酸塩及びオキシメタゾリン塩酸塩を含むことができる。
各アルファアドレナリン作動性受容体アゴニストの医薬的に許容できる塩は当業界で周知である。医薬的に許容できる塩は、哺乳動物での局所的な使用について安全かつ有効であり、さらに所望の生物学的活性を保有する、本発明の化合物の塩を意味する。医薬的に許容できる塩には、本発明の化合物に存在する酸性基又は塩基性基の塩が含まれる。医薬的に許容できる酸付加塩には、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩（すなわち1,1'-メチレン-ビス-(2-ヒドロキシ-3-ナフトエ酸)塩）が含まれるが、ただしこれらに限定されない。本発明のある種の化合物は、多様なアミノ酸とともに医薬的に許容できる塩を形成できる。適切な塩基性塩にはアルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛、及びジエタノールアミン塩が含まれるが、ただしこれらに限定されない。医薬的に許容できる塩は以下で考察されている：Berge et al., J Pharm Sci., 66:1-19, 1977（前記文献は参照によりその全体が本明細書に含まれる）。
【０００９】
医薬組成物は、本発明の化合物の局所的デリバリーのために医薬的に許容できる任意の処方物を含む。局所用処方物の選択はいくつかの要件に左右され、それらの要件には、本発明の個々の化合物及び存在する他の賦形剤の物理化学的特徴、処方物中でのそれらの安定性、利用可能な製造装置、及び経費の制限が含まれる。
医薬的に許容できる組成物は、患者の皮膚の影響を受ける部位に当業界で周知の任意の通常的態様で局所的に適用される。例えば、本組成物は、手のひら及び足の裏に適用できるローションでありうる。
本組成物は、手足症候群の症候が存在するかぎり、化学療法の前、最中及び/又は後で適用できる。
皮膚に適用されるアルファアドレナリン作動性受容体アゴニストの量は、手足症候群の治療に有効な任意の量である。一般的には、影響を受ける皮膚領域に適用される、本発明の局所用処方物中のアルファアドレナリン作動性受容体アゴニストの最低量は、皮膚表面積1cm2につき約0.0001g、好ましくは約0.001gである。影響を受ける皮膚領域に適用される、本発明の局所用処方物中のアルファアドレナリン作動性受容体アゴニストの最大量は、皮膚表面積1cm2につき約0.05gから約0.008gである。典型的には、治療期間中に1日につき1から4回の適用が推奨される。
投薬量及び投与頻度は、本発明の化合物の活性、個々の局所用処方物の特徴、及び処置される者の全身の健康状態に応じて熟練医療専門者によって決定されるであろう。
例えば、本医薬組成物は化学療法の前に施療中に及び/又は後で適用されうる。化学療法の施療前及び施療後の適切な時期は熟練医療専門者が決定できる。例えば、医師は、化学療法施療の3から4時間前、化学療法施療中、及び化学療法施療の5日後の組成物の適用を指示することができる。
【００１０】
一般的には、各アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト又は医薬的に許容できるその塩は、処方物の総質量の約0.05パーセント、約0.1パーセント又は約0.15パーセントの最低量で本発明の処方物に存在する。好ましくは、アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト又は医薬的に許容できるその塩は、処方物の総質量の約5パーセント、約2パーセント、約1パーセント又は約0.5パーセントの最大量で本発明の処方物に存在する。
本発明は、最小量の各々を最大量の各々と組み合わせて実現可能なあらゆる範囲を生じる実施態様を意図していることは理解されよう。例えば、各アルファアドレナリン作動性受容体アゴニスト又は医薬的に許容できるその塩は、組成物の総質量を基準にして約0.05パーセントから約1パーセントの量で、又は同様に、組成物の総質量を基準にして約0.1パーセントから約1パーセントの量で本発明の組成物に存在しうる。
ある実施態様では、本発明の化合物は、影響を受ける皮膚領域に、医薬的に許容できる局所用担体中でデリバーされる。本明細書で用いられるように、医薬的に許容できる局所用担体は、医薬又は薬物の局所的デリバリー又は皮膚デリバリーのために皮膚表面に適用しうる医薬的に許容可能な任意の処方物である。医薬的に許容できる局所用担体と本発明の化合物との結合物は本発明の医薬組成物と称される。本発明の医薬組成物は、当業界で周知の方法、例えば以下の標準的な参考文献によって提供される方法にしたがって本発明の化合物を局所用担体と混合することによって調製される：Remington:The Science and Practice of Pharmacy, 1577-1591, 1672-1673, 866-855（Alfonso R. Gennaro ed. 19th ed., 1995）；T.K. Ghosh et al., Transdermal and Topical Drug Delivery Systems, 1997（両文献とも参照によりその全体が本明細書に含まれる）。米国特許7,439,241号のアルファアドレナリン作動性受容体アゴニストを含む医薬組成物の考察は、参照により本明細書に含まれる。
本発明の化合物の局所的なデリバリーに有用である局所用担体は、医薬を局所的に投与するために当業界で公知の任意の担体、例えば医薬的に許容できる溶媒、例えば多価アルコール又は水；エマルジョン（水中油型乳剤又は油中水型乳剤）、例えばクリーム又はローション；ミクロエマルジョン；ゲル；軟膏；リポソーム；パウダー；水溶液又は水性懸濁物でありうるが、ただしこれらに限定されない。好ましい担体はゲル、クリーム、軟膏、ローション及びエマルジョンである。
【実施例１】
【００１１】
ゲル組成物
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【実施例２】
【００１２】
クリーム組成物
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【実施例３】
【００１３】
ローション組成物
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【実施例４】
【００１４】
0.25質量％のブリモニジン酒石酸塩を含むローションを、化学療法を受けている患者の手のひら及び足の裏に投与する。患者は、化学療法施療中ずっと1日2回当該ローションを適用塗布する。
【実施例５】
【００１５】
ブリモニジンを下記に記載のネズミモデルで試験し、表皮過形成及びケラチノサイト増殖を低下させることが示された。
材料と方法
UBV照射
UVB太陽灯を搭載したバイオスペクトラ（Biospectra）システムを用いて、SKH1マウスの背中の皮膚を120 mJ/cm2 UVBに暴露した（最大放射ピーク312nm）。照射はイソフルランガスによる麻酔下で実施した。背中の10 cm2領域にマイクロピペットを用いてビヒクル（PEG400/EtOH/PHY (30/20/50) p/p）又は0.2%若しくは2%のブリモニジンを局所経路（100μL）で投与した。動物が舐めるのを防ぐために、前記領域は背中の上方部に位置する。
以下の2つの治療スケジュールにしたがって3回の適用を実施した：
−処置前：UBV照射の1時間前に第一の適用、続いて23時間離して更に2回の適用。
−処置後：UBV照射直後に第一の適用、続いて23時間離して更に2回の適用。
化合物参照（76/24のETOH/H2O中で4%のEGFR阻害剤）もまた処置前において投与した。
3回目の局所的処置の1時間後かつ安楽死の1時間前に、マウスに100mg/kgの5-エチニル-2'-デオキシウリジンのi.p.注射を実施した。マウスを安楽死させた後（頸部脱臼による）、背中の皮膚を取り出し、直ちにフォルマリン（formol）で固定した。フォルマリン固定皮膚サンプルをパラフィンに包埋し、続いて免疫組織学的試験に付した（表皮の厚さの測定及びEdU検出）。表皮の厚さについては、動物につき2切片（7μm）をH&Eで染色した。皮膚組織及び表皮の厚さは、画像分析（mScope 3.9, Aurora mScope）を用いスライド像のスキャンにより解析した（NanoZoomer C9600-12, Hamamatsu Photonics K.K）。EdU検出のためには、各動物で2又は3切片（7μm）をEdU染色に付した。簡単に記せば、パラフィン切片を再水和し、続いてクリックイット（Click-iT(商標)）反応カクテル（Alexa Fluor(商標)594アジ化物（Life Technologies）を含むClick-iT(商標)EdU画像化キット）とともに30分間インキュベートした。核もまたDAPI（5mg/mL）で染色した。DAPIは蛍光用ヴェクタシールドハードセット（Vectashield Hard Set）マウンティング媒体（ref: H-1400 Vector Laboratories）で希釈した。Alexa Fluor(商標)594で染色されるケラチノサイトの数をデジタル画像で計測し（NanoZoomer C9600-12, 浜松ホトニクス株式会社）、社内製作器具を用いて各切片の表皮の長さを決定した。
【００１６】
データの分析
データは、UV照射については対応のないｔ検定及び処置効果の分析についてはダネットの多重比較検定による一元配置分散分析を用いて解析した（Prism 6; GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA）。0.05未満のP値を有意とみなした。
結果
ブリモニジンは表皮の過形成及びケラチノサイト増殖を低下させる
ネズミUVB誘発表皮過形成モデルにおける、ブリモニジン酒石酸塩の局所的投与後の効果を評価した。
H&E染色皮膚切片の組織学的分析は、マウス皮膚のUVB照射（120mJ/cm2）は、照射後48時間ではっきりと目に見える表皮肥厚症を生じることを示した（表皮の厚さはビヒクル処置マウスと比較して+127%増加した）。この表皮肥厚症は、参照処置（4%のEGFR阻害剤）による局所的な処置前適用によって完全に（-96%）阻害され、2%のブリモニジン酒石酸塩の適用によって部分的に（-23%）阻害された（UV照射1時間前に1回適用及び23時間離してさらに2回適用）。しかし、より低い用量（0.2％）では効果は観察されなかった。
ブリモニジンのUVBフィルター効果を排除しさらに薬理学的活性を補助するために、同じ実験を処置後適用でも実施した。この事例でも同様な結果が得られ、0.2%のブリモニジン酒石酸塩で表皮の厚さのわずかな低下、さらに2%で表皮の厚さの最大かつ有意な低下があった（それぞれ-16%及び-32%）。
表皮過形成におけるブリモニジン酒石酸塩の影響をより明瞭に特徴付けるために、増殖マーカーを分析した：EdU（チミジンアナローグ）をDNA複製中に細胞DNAに取り込ませ、取り込まれたEdUを蛍光Alexa Fluor(商標)594アジ化物による“クリック”反応を通して検出した（Zeng, Bain Res. 2010）。1回のUVB照射は、Alexa Fluor(商標)594で染色される増殖ケラチノサイトの増加（4倍を超える）をもたらすことが確認された。図2に示すように、参照化合物のEGFR阻害剤は増殖ケラチノサイトの数を64%減少させた。2%のブリモニジン酒石酸塩は処置前及び処置後でEdU陽性細胞の数を首尾よく減少させた（それぞれ-59%及び-64%）。前記の効果はまたより低い用量（0.2%）でも処置後で観察された（25%の低下）。
【００１７】
図1．マウス皮膚への1回UVB照射に対する応答及び表皮の厚さにおけるブリモニジン酒石酸塩処置の影響
ビヒクル又は2%ブリモニジンを局所的経路で背中に投与した。上段は背側皮膚切片のH&E染色である：ビヒクルにより処置された非照射皮膚（A）；ビヒクル（C）又は2%のブリモニジン酒石酸塩（D）により処置前において手当された照射皮膚；ビヒクル（E）又は2%のブリモニジン酒石酸塩（F）により処置後において手当された照射皮膚。皮膚肥厚症は4%のEGFR阻害剤による局所的な処置前手当によって阻害された：EtOH/H2Oにより処置された非照射皮膚（B）；EtOH/H2O（G）又は4%のEGFR阻害剤（H）により処置前において手当された照射皮膚。下段は表皮の厚さにおける0.2%及び2%のブリモニジン処置前並びに処置後における効果の定量分析である。ブリモニジン酒石酸塩による処置後投与によって引き起こされる表皮厚さの低下は、2%の用量について統計的に有意であった（**ｐ＜0.01）。EGFR阻害剤を参照処置として用いた。平均±SD。
【００１８】
図2．マウス皮膚への1回UVB照射に対する応答及びケラチノサイト増殖におけるブリモニジン酒石酸塩処置の影響
ビヒクル又は2%ブリモニジンを局所的経路で背中に投与した。上段はそれぞれ増殖ケラチノサイト及び核のためのEdU（桃色）及びDAPI（青色）染色である：ビヒクルにより処置前において手当された非照射皮膚（A）；ビヒクル（C）又は2%のブリモニジン酒石酸塩（D）により処置前において手当された照射皮膚；ビヒクル（E）又は2%のブリモニジン酒石酸塩（F）により処置後において手当された照射皮膚。皮膚肥厚症は4%のEGFR阻害剤による局所的な処置前適用によって阻害された：EtOH/H2Oにより処置された非照射皮膚（B）；EtOH/H2O（G）又は4%のEGFR阻害剤（H）により処置前において手当された照射皮膚。下段は表皮の増殖における0.2%及び2%のブリモニジン処置前並びに処置後適用の効果の定量分析である。EdU取り込みは、表皮の長さに対する表皮基底層中のEdU陽性細胞数として計算した。ブリモニジン酒石酸塩による処置によって引き起こされる表皮増殖の低下は、両用量（0.2%及び2%）について統計的に有意であった（*ｐ＜0.05及び****p＜0.0001）が、ただし処置前における0.2%用量は除外される。EGFR阻害剤を参照処置として用いた。平均±SD。
【図１】
2017519034.tif 000007
【図２】
2017519034.tif 000008
【国際調査報告】
2017519034.tif 000009
2017519034.tif 000010