(57)【要約】本発明は、ペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体及びそれを含むしわ改善及び老化防止用組成物に関する。本発明に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、水に対する溶解度や安定性が改善され、優れたビタミンＤの供給源としてしわ改善及び老化防止用化粧料組成物、薬剤学的組成物、健康機能食品などに効果的に使用できる。
2017505778.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化Ｉ】
2017505778.tif 000023
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｇは、−ＸＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ−、−ＸＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ−、−ＸＣＯＮＨＣＹＣＯ−、−ＸＣＯＣＹＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ２ＣＯ−又は−ＸＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨＣＹＣＯ−を示し、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ又はＳを示し、
Ｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基、（ＣＨ２）ｍ’ＣＨ２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＲ、（ＣＨ２）ｍ’ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＲ又は（ＣＨ２）ｍ’ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ−ＤＨＣを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数を示す。
【請求項２】
下記の化学式１Ａで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化１Ａ】
2017505778.tif 000024
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数を示す。
【請求項３】
下記の化学式１Ｂで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化１Ｂ】
2017505778.tif 000025
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数を示す。
【請求項４】
下記の化学式２Ａで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ａ】
2017505778.tif 000026
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
Ｙ１は、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基を示す。
【請求項５】
下記の化学式２Ｂで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ｂ】
2017505778.tif 000027
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数を示し、
Ｙ１は、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基を示す。
【請求項６】
下記の化学式２Ｃで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ｃ】
2017505778.tif 000028
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数を示し、
Ｙ１は、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基を示す。
【請求項７】
下記の化学式２Ｄで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ｄ】
2017505778.tif 000029
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数を示す。
【請求項８】
下記の化学式２Ｅで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ｅ】
2017505778.tif 000030
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数を示す。
【請求項９】
下記の化学式２Ｆで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ｆ】
2017505778.tif 000031
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数を示す。
【請求項１０】
下記の化学式２Ｇで表される化合物である請求項１に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【化２Ｇ】
2017505778.tif 000032
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数を示す。
【請求項１１】
ｎは、３〜２００の整数である請求項１〜１０の何れか一項に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【請求項１２】
ｍ及びｍ’は１である請求項１、請求項７〜１０の何れか一項に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【請求項１３】
ｍは１である請求項２、３、５、及び６の何れか一項に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体。
【請求項１４】
請求項１〜１０の何れか一項に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用化粧料組成物。
【請求項１５】
請求項１〜１０の何れか一項に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用薬剤学的組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１０の何れか一項に記載のペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体に係り、より詳しくは、安定性や溶解度が増加し、体内で加水分解してビタミンＤを供給するペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体及びそれを含むしわ改善及び老化防止用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ビタミンＤの主要形態としては、ビタミンＤ２（エルゴカルシフェロール）とビタミンＤ３（コレカルシフェロール、化合物Ｂ）があり、これら２種の物質は、肝臓や腎臓で代謝を受けることで活性型（カルシトリオール、化合物Ｃ）に転換されるようになる。７−デヒドロコレステロール（７−ｄｅｈｙｄｒｏｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ：７−ＤＨＣ、化合物Ａ）は、ビタミンＤ３のプロビタミン（ｐｒｏｖｉｔａｍｉｎ）形態であって、太陽光によってビタミンＤ３に転換される。
【０００３】
【化０】
2017505778.tif 000003
【０００４】
ビタミンＤ３は、一般にカルシウムの吸収を刺激して骨の密度を強化させる働きをすることで骨粗鬆症患者の治療剤として用いられており、また、年寄りや日照量が不足な北緯度地域の居住者らに対する補充剤として用いられている。
【０００５】
ビタミンＤの前駆物質として知られた７−デヒドロコレステロールは、強力な皮膚老化抑制機能や抗酸化効能及び紫外線防御効果を持っており、機能性化粧品の素材として活用されている［参照：韓国公開特許第２００１−０００２２８１号］。また、米国公開特許第２０１３−００１７２３４号では、骨の生成と関連のあるＣｏｌ-１、ＡＬＰ、ＯＳＸ、ＯＣ、ＢＭＰ−２、ＩＬ−５などの複数の因子を発現させ、関節治療医薬品としての可能性を示したことがあり、さらに、韓国登録特許第１０−０５６８６００号では、臨床実験を通じて毛髪の保護効果にも優れることが報告されている。
【０００６】
したがって、表皮層に持続的に７−デヒドロコレステロールを補充することで、紫外線の吸収遮断や老化防止は勿論のこと、コレカルシフェロールの産生を増加させ、骨粗鬆症の予防や異常角質による乾癬及びアトピー性皮膚炎のような皮膚疾患を予防することができるという機能が期待される。
【０００７】
しかし、７−デヒドロコレステロールは、皮膚以外では非常に不安定なものであって光によって複数の物質に転換され、該変換体は副作用はないものの、ビタミンＤ３への転換が非常に難しくなる。また、皮膚以外の場所では、７−デヒドロコレステロールがピロカルシフェロールやルミステロール、イソピロカルシフェロールに転換され、活性が劣るという問題点がある。
【０００８】
このような問題点を解決するために、米国特許第５,３４２,８３３号では、新規な物性を持つ新規コレカルシフェロール、すなわち活性型ビタミンＤ誘導体を皮膚疾患や乾癬治療に用いた例を示しており、また、米国特許第５,７４７,４７８号では、酸化マグネシウムとクエン酸ナトリウムを用いて活性化したコレカルシフェロールを安定化させた例を示している。
【０００９】
しかし、７−デヒドロコレステロールに対する安定化研究は非常に不十分な点が多く、その理由は、７−デヒドロコレステロールが紫外線や温度によって別の物質に転移し易く、且つ空気中の酸素と反応して変性を示すという構造的な短所を持っているからである。
【００１０】
また、上述したように、既存の特許では剤形的に７−デヒドロコレステロールの安定化に関する内容だけが報告されているか、または活性型であるコレカルシフェロールに関する研究だけを報告されており、７−デヒドロコレステロールを合成的に安定化させた例は未だ報告されたことがない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】韓国公開特許第２００１-０００２２８１号
【特許文献２】米国公開特許第２０１３-００１７２３４号
【特許文献３】韓国登録特許第１０-０５６８６００号
【特許文献４】米国特許第５,３４２,８３３号
【特許文献５】米国特許第５,７４７,４７８号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明者らは、前記した７−デヒドロコレステロールの問題点である化学的な不安定性、紫外線、温度及び空気との接触による不安定性や水に対する難溶性の問題を改善するために、鋭意研究・検討を重ねた結果、７−デヒドロコレステロールをポリエチレングリコールにコンジュゲート化して、有機溶媒または水溶液に対する溶解度を増加させると共に、皮膚内細胞への伝達効果を増加させ、且つ物性の改善による効能の増大を誘導することで、溶解度が改善し且つ長期間の保管にも安定性を保持することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
したがって、本発明の目的は、溶解度や安定性が向上したペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を提供することである。
【００１４】
本発明の他の目的は、前記ペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明の一実施の形態は、下記の化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体に関する。
【００１６】
【化Ｉ】
2017505778.tif 000004
【００１７】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｇは、−ＸＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ−、−ＸＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ−、−ＸＣＯＮＨＣＹＣＯ−、−ＸＣＯＣＹＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ２ＣＯ−又は−ＸＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨＣＹＣＯ−を示し、
Ｘは、Ｏ、ＮＨ又はＳを示し、
Ｙは、水素、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基、（ＣＨ２）ｍ’ＣＨ２ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＲ、（ＣＨ２）ｍ’ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＲ又は（ＣＨ２）ｍ’ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ２（ＣＨ２）ｍＣＯ−ＤＨＣを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは、３〜２００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数、好ましくは１を示す。
【００１８】
本明細書で用いられるＣ１−Ｃ６のアルキル基とは、炭素数１〜６個で構成された直鎖状又は分岐状炭化水素を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどが含まれるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。
【００１９】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式１Ａで表される化合物であってよい。
【００２０】
【化１Ａ】
2017505778.tif 000005
【００２１】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数、好ましくは１を示す。
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式１Ｂで表される化合物であってよい。
【００２２】
【化１Ｂ】
2017505778.tif 000006
【００２３】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数、好ましくは１を示す。
【００２４】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ａで表される化合物であってよい。
【００２５】
【化２Ａ】
2017505778.tif 000007
【００２６】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
Ｙ１は、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基を示す。
【００２７】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ｂで表される化合物であってよい。
【００２８】
【化２Ｂ】
2017505778.tif 000008
【００２９】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数、好ましくは１を示し、
Ｙ１は、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基を示す。
【００３０】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ｃで表される化合物であってよい。
【００３１】
【化２Ｃ】
2017505778.tif 000009
【００３２】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍは、１〜３の整数、好ましくは１を示し、
Ｙ１は、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基を示す。
【００３３】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ｄで表される化合物であってよい。
【００３４】
【化２Ｄ】
2017505778.tif 000010
【００３５】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数、好ましくは１を示す。
【００３６】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ｅで表される化合物であってよい。
【００３７】
【化２Ｅ】
2017505778.tif 000011
【００３８】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数、好ましくは１を示す。
【００３９】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ｆで表される化合物であってよい。
【００４０】
【化２Ｆ】
2017505778.tif 000012
【００４１】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数、好ましくは１を示す。
【００４２】
本発明の一実施の形態に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の化学式２Ｇで表される化合物であってよい。
【００４３】
【化２Ｇ】
2017505778.tif 000013
【００４４】
前記式中、
Ｒは、水素又はＣ１−Ｃ６のアルキル基を示し、
Ｘは、Ｏ又はＮＨを示し、
ｎは、１〜７００の整数、好ましくは３〜２００の整数を示し、
ｍ及びｍ’は、それぞれ独立して１〜３の整数、好ましくは１を示す。
【００４５】
本発明に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、下記の反応式１〜５に表した方法によって製造されていてよい。下記の反応式に表した方法は本発明において代表的に用いられた方法を例示したものに過ぎず、単位操作の順序、反応試薬、反応条件などは、場合によって種々に適宜変更することができる。
【反応式１】
【００４６】
2017505778.tif 000014
【００４７】
前記反応式中、
Ｒ、Ｘ、ｎ、及びｍは、化学式Ｉにおけるそれぞれの定義と同一である。
【００４８】
前記反応式１によれば、前記化学式４で表される化合物と化学式５で表される化合物をそれぞれ化学式７ａで表される化合物又は化学式６で表される化合物と縮合反応させて前記化学式１Ａで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。また、前記化学式４で表される化合物を化学式７ｂで表される化合物と縮合反応させて前記化学式１Ｂで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【００４９】
前記化学式５で表される化合物と化学式７ａで表される化合物は、それぞれ化学式４で表される化合物又は化学式６で表される化合物に酸無水物を反応させて製造し、化学式７ｂで表される化合物は、ＸがＯである化学式６で表される化合物を出発物質として公知の方法で製造するか、商業的に購買することができる［参考文献：Ｊ.Ｍ. Ｈａｒｒｉｓ ｅｔ.ａｌ、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００２、５４、４５９-４７６］。
【００５０】
また、化学式６で表される化合物は、商業的に購買するか、または公知の方法で製造することができる［参考文献：Ｓａｎｄｌｅｒ ａｎｄ Ｋａｒｏ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｖｏｌ．３、ｐａｇｅｓ １３８-１６１］。
【反応式２】
【００５１】
2017505778.tif 000015
【００５２】
前記反応式中、
Ｒ、Ｘ、ｎ、及びｍは、化学式Ｉにおける定義とそれぞれ同一であり、
Ｚｂ及びＺｃは保護基を示し、
Ｙ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基又はアミノ酸残基を示す。
【００５３】
前記反応式２によれば、前記化学式６で表される化合物を活性化して得られた前記化学式８で表される化合物と前記化学式９で表される化合物とを反応させて前記化学式１０で表されるポリエチレングリコール誘導体を製造することができる。また、前記化学式１０で表される化合物を前記化学式４で表される化合物と縮合反応させて前記化学式２Ａで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【００５４】
また、前記化学式６で表される化合物を化学式１２で表される化合物と縮合反応させて前記化学式１３で表される化合物を得ることができる。次いで、前記化学式１３で表される化合物の脱保護反応によって前記化学式１４で表される化合物を収得し、前記化学式１４で表される化合物を前記化学式５で表される化合物と縮合反応させて前記化学式２Ｂで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を得ることができる。
【００５５】
また、場合によっては、化学式１１で表される化合物のような保護基で置換されている化合物を選択して用い、Ｙ１がアミノ酸残基である場合、必要に応じて保護基で置換するか遊離基として用いることができる。
【反応式３】
【００５６】
2017505778.tif 000016
【００５７】
前記反応式中、
Ｒ、ｎ、及びｍは、化学式Ｉにおけるそれぞれの定義と同一であり、
Ｌは、ハロゲン、コハク酸イミド又はイミダゾールを示し、
Ｙ１は、水素、Ｃ１−Ｃ６のアルキル基又はアミノ酸残基を示す。
【００５８】
前記反応式３によれば、前記化学式７ｂで表される化合物を活性化して得られた前記化学式１５ｂで表される化合物と前記化学式９で表される化合物とを反応させて前記化学式１６で表されるポリエチレングリコール誘導体を製造することができる。また、前記化学式１６で表される化合物を前記化学式４で表される化合物と縮合反応させて前記化学式２Ｃで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【反応式４】
【００５９】
2017505778.tif 000017
【００６０】
前記反応式中、
Ｒ、Ｘ、ｎ、ｍ、及びｍ’は、化学式Ｉにおけるそれぞれの定義と同一であり、
Ｌは、ハロゲン、コハク酸イミド又はイミダゾールを示し、
Ｚａ及びＺｂは、保護基を示す。
【００６１】
前記反応式４によれば、前記化学式６で表される化合物を、保護基で置換されているか又は遊離基の化学式１７で表される化合物と反応させて前記化学式１８で表される化合物を製造し、前記化学式１８で表される化合物を脱保護反応させて得られた化学式１９で表される化合物と化学式７ｂで表される化合物とを反応させて側鎖状のポリエチレングリコール誘導体である化学式２０で表される化合物を製造することができる。前記化学式２０で表される化合物を脱保護反応させて得られた化学式２１で表される化合物と化学式５で表される化合物とを縮合反応させて前記化学式２Ｄで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【反応式５】
【００６２】
2017505778.tif 000018
【００６３】
前記反応式中、
Ｒ、Ｘ、ｎ、ｍ、及びｍ’は、化学式Ｉにおけるそれぞれの定義と同一であり、
Ｚａは、保護基を示す。
【００６４】
前記反応式５によれば、前記化学式８で表される化合物を、保護基で置換されているか又は遊離基の化学式２２で表される化合物と反応させて前記化学式２３で表される化合物を製造し、前記化学式２３で表される化合物の脱保護反応によって得られた化学式２４で表される化合物と前記化学式１５ｂで表される化合物とを反応させて前記化学式２５ｂで表される化合物を製造し、前記化学式２５ｂで表される化合物と前記化学式４で表される化合物とを縮合反応させて前記化学式２Ｅで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【００６５】
また、前記化学式２４で表される化合物と前記化学式７ａで表される化合物を活性化して得られた前記化学式１５ａで表される化合物とを反応させて前記化学式２５ａで表される化合物を製造し、前記化学式２５ａで表される化合物と前記化学式４で表される化合物とを縮合反応させて前記化学式２Ｆで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【反応式６】
【００６６】
2017505778.tif 000019
【００６７】
前記反応式中、
Ｒ、Ｘ、ｎ、ｍ、及びｍ’は、化学式Ｉにおけるそれぞれの定義と同一であり、
Ｚａは、保護基を示す。
【００６８】
前記反応式６によれば、前記化学式８で表される化合物を、保護基で置換されているか又は遊離基の化学式２２で表される化合物と反応させて前記化学式２３で表される化合物を製造し、前記化学式２３で表される化合物を前記化学式４で表される化合物と縮合反応させて得られた前記化学式２６で表される化合物を脱保護反応させて前記化学式２７の化合物を製造し、前記化学式２７で表される化合物と化学式５で表される化合物とを縮合反応させて前記化学式２Ｇで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を製造することができる。
【００６９】
前記反応式における縮合反応は、溶媒中で縮合剤及び有機アミン触媒の存在下において行なうのが好ましい。
【００７０】
前記縮合剤としては、Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチル−（ベンゾトリアゾール−１−イル)ウロニウムテトラフルオロボラート（ＴＢＴＵ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド（ＥＤＣ）、Ｎ,Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、Ｎ,Ｎ‘−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などを用いることができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。
【００７１】
また、有機アミン触媒としては、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）などを用いることができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。
【００７２】
前記溶媒としては、無水有機溶媒、例えばジクロロメタン、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、及びジエチルエーテルから選択された１種以上を用いることができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。また、水、緩衝溶液、またはアセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ）、ジメチルホルムアミド（Ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）などの水に混じられる有機溶媒と水を併用することもできる。
【００７３】
前記反応は、冷却乃至加温された状態で進められていてもよい。
【００７４】
一方、前記保護基としては、Ｂｏｃ、Ｆｍｏｃ、ＣＢｚ、ｔＢｕＣＯ、Ｔｒｔ、Ｍｅ、Ｅｔなどを用いることができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。
【００７５】
また、前記脱保護反応は、有機溶媒中で酸又は塩基の存在下において行なうことができる。前記有機溶媒としては、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、メタノール（Ｍｅｔｈａｎｏｌ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）などを用いることができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。また、前記酸又は塩基としては、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸、硫酸、酢酸、ピペリジン、水酸化ナトリウムなどを用いることができるが、必ずしもこれらに限定されるものではない。
【００７６】
前記反応式３及び５における活性化離脱基の置換反応は、無水有機溶媒下において必要に応じて有機アミン触媒を用い、塩化チオニル（Ｔｈｉｏｎｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）、塩化オキサリル（Ｏｘａｌｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅ）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（Ｎ−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）、カルボニルイミダゾール（Ｃａｒｂｏｎｙｌｄｉｉｍｉｄａｚｏｌｅ）などと反応させて行なうことができる。
【００７７】
本発明に係る前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、７−デヒドロコレステロール（ＤＨＣ）に比べて、水溶液に対する溶解度が増加し、且つ光や熱に対する安定性が著しく改善した。
【００７８】
したがって、本発明に係る前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、体内で加水分解してビタミンＤ前駆体である７−デヒドロコレステロールを供給することができるビタミンＤ前駆体の供給源として、しわ改善及び老化防止用化粧料組成物、薬剤学的組成物及び健康機能食品に効果的に用いることができる。
【００７９】
本発明の一実施の形態は、前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用化粧料組成物に関する。
【００８０】
本発明に係る化粧料組成物は、前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を有効成分として、約０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜１重量％の範囲で含む。有効成分の含量はその使用目的に応じて適宜決めればよい。
【００８１】
本発明に係る化粧料組成物は、有効成分としての前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体以外に、化粧料組成物に通常に用いられる成分、例えば抗酸化剤、安定化剤、溶解化剤、ビタミン、顔料、及び香料のような通常の補助剤、並びに担体を含む。
【００８２】
本発明に係る化粧料組成物は、当業界において通常に用いられる如何なる剤形への製造も可能であり、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、ゲル、クリーム、パウダー、スプレーなどに剤形化することができる。
【００８３】
本発明の剤形がペースト、クリーム、またはゲルである場合は、担体成分として動物性油、植物性油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、シリカ、タルク、酸化亜鉛などが用いられていてよい。
【００８４】
本発明の剤形がパウダーまたはスプレーである場合は、担体成分としてラクトース、タルク、シリカ、アルミニウムヒドロキシド、カルシウムシリケート、ポリアミドパウダーなどが用いられていてよく、特にスプレーである場合は、更に、クロロフルオロヒドロカーボン、プロパン／ブタンまたはジメチルエーテルのような推進体を含むことができる。
【００８５】
本発明の剤形が溶液または乳濁液である場合は、担体成分として溶媒、溶解化剤または乳濁化剤、例えば水、エタノール、イソプロパノール、エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１,３−ブチルグリコールオイル、グリセロール脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステルなどが用いられていてよい。
【００８６】
本発明の剤形が懸濁液である場合は、担体成分として水、エタノール、またはプロピレングリコールのような液状の希釈剤、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、またはポリオキシエチレンソルビタンエステルのような懸濁剤、微小結晶性セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、トラガカントなどが用いられていてよい。
【００８７】
本発明に係る化粧料組成物は、スキン、ローション、クリーム、エッセンス、パック、ファウンデーション、メイクアップ化粧品、サンクリーム、ツーウェイケーキ、ペースパウダー、コンパクト、メーキャップベース、スキンカバー、アイシャドウ、リップスティック、リップグロス、リップフィックス、アイブローペンシルなどの化粧品に適用されていてよい。
【００８８】
本発明の一実施の形態は、前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用薬剤学的組成物に関する。
【００８９】
本発明に係る薬剤学的組成物は、経口的に（例えば、服用または吸入）または非経口的に（例えば、注射、経皮吸収、直腸投与）投与されてよく、注射は、例えば、静脈注射、皮下注射、筋肉内注射、または腹腔内注射であってよい。本発明に係る薬剤学的組成物は、投与経路によって、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤（ｆｉｎｅ ｓｕｂｔｉｌａｅ）、粉剤、舌下錠、座薬、軟膏、注射剤、乳濁液剤、懸濁液剤、シロップ剤、噴霧剤などに剤形化していてよい。前記各種の形態の本発明に係る薬剤学的組成物は、各剤形に通常に用いられる薬剤学的に許容できる担体（ｃａｒｒｉｅｒ）を用い、公知技術によって製造されていてよい。薬剤学的に許容できる担体の例は、賦形剤、結合剤、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、潤滑剤、防腐剤、抗酸化剤、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃ ａｇｅｎｔ）、緩衝剤、被膜剤、甘味剤、溶解剤、基剤（ｂａｓｅ）、分散剤、湿潤剤、懸濁化剤、安定剤、着色剤などを含む。
【００９０】
本発明に係る薬剤学的組成物は、薬剤の形態によって異なるが、前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を約０．１〜１０重量％、好ましくは０．１〜１重量％の範囲で含む。
【００９１】
本発明に係る薬剤学的組成物の具体的な投与量は、治療対象の人を含む哺乳動物の種類、体重、性別、疾患の程度、医者の判断などによって異なっていてよい。好ましくは、経口投与の場合は、体重６０ｋｇの治療対象を基準に一日に５μｇ〜６０μｇの範囲で投与される。前記総一日投与量は、疾患の程度、医者の判断などによって一度にまたは複数回に分けて投与されていてよい。
【００９２】
本発明の一実施の形態は、前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体を含むしわ改善及び老化防止用健康機能食品に関する。
【００９３】
本発明に係る健康機能食品の種類には特に制限がなく、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液剤、エマルジョン、シロップ剤などの経口型製剤の形態であるか、またはキャンデー、お菓子、ガム、アイスクリーム、麺類、パン、飲料などの一般的な食品に添加されていてよい。
【００９４】
本発明に係る健康機能食品は、形態によって通常の方法にて充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、甘味剤、芳香剤、保存剤、界面活性剤、潤滑剤、賦形剤などの食品学的に許容できる担体を適宜用いて製造されていてよい。
前記健康機能食品の製造に際し、前記化学式Ｉで表されるペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体の含量は、健康機能食品の形態によって異なるが、約０．０００１〜１０重量％、好ましくは０．１〜１重量％の範囲の濃度である。
【発明の効果】
【００９５】
本発明に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、水に対する溶解度や安定性が改善し、毒性低減効果を奏する。
【００９６】
この結果、本発明に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、優れたビタミンＤの供給源として、しわ改善及び老化防止用化粧料組成物、薬剤学的組成物、健康機能食品などに効果的に用いることができる。
【００９７】
さらには、本発明に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体は、生体内で多くの酵素によって活性ビタミンＤに転換され、抗酸化、しわ改善、美白などの生理活性を持続的に奏することができる。
【図面の簡単な説明】
【００９８】
【図１】実施例１の化合物（ＭＰ３５０ＤＨＣ）と７−デヒドロコレステロール（ＤＨＣ）との４０℃恒温条件での熱安定性を比べたグラフである。
【図２】実施例１の化合物（ＭＰ３５０ＤＨＣ）と７−デヒドロコレステロール（ＤＨＣ）との７０℃恒温条件での熱安定性を比べたグラフである。
【図３】実施例１の化合物（ＭＰ３５０ＤＨＣ）と７−デヒドロコレステロール（ＤＨＣ）との光安定性を比べたグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００９９】
以下、実施例に基づいて本発明をより具体的に説明することにする。なお、これらの実施例は単に本発明を説明するためのものに過ぎず、本発明の範囲がこれらの実施例に限定されるものではないことは当業者にとって自明である。
【０１００】
実施例１：ｍＰＥＧ３５０−Ｓ−ＤＨＣエステル（Ｒはメチル基を示し、ＸはＯを示し、ｎは７．２５（平均）であり、ｍは１である化学式１Ａで表される化合物）の製造
実施例１-１：７−デヒドロコレステロールコハク酸（ｍが１である化学式５で表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール（ＤＨＣ）６．４５ｇ（１６．８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１２０ｍｌに溶解し、トリエチルアミン３．３９ｇ（３３．５ｍｍｏｌ）と４−ジメチルアミノピリジン０．８２ｇ（６．７ｍｍｏｌ）を添加した溶液に、無水コハク酸（ｍが１である化学式３で表される化合物）３．３５ｇ（３３．５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で１２時間撹拌した。この反応溶液を３．５％塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、及び飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理し、ろ過し、減圧濃縮した後、エチルアセテートとヘキサン１：２の溶媒でシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて精製して、標題化合物７．２ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.41(dd, 1H), 4.75(m, 1H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.39(t, 1H), 2.18-1.85(m, 6H), 1.82-1.50(m, 6H), 1.48-0.93(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.89(d, 3H) 0.64(s, 3H)。
【０１０１】
実施例１-２：ｍＰＥＧ３５０−Ｓ−ＤＨＣエステル（Ｒはメチル基を示し、ＸはＯを示し、ｎは７．２５（平均）であり、ｍは１である化学式１Ａで表される化合物）の製造
前記実施例１−１で収得した７−デヒドロコレステロールコハク酸（ｍが１である化学式５で表される化合物）１．１ｇ（２．３０ｍｍｏｌ）とｍＰＥＧ３５０−ＯＨ（Ｒがメチル基を示し、ｎが７．２５（平均）であり、ＸがＯを示す化学式６で表される化合物）０．８ｇ（２．３０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン０．４２ｇ（３．４４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド０．８８ｇ（４．５９ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物１．７７ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.40(dd, 1H), 4.74(m, 1H), 4.27(t, 2H), 3.72(t, 2H), 3.67(PEG backbone), 3.57(t, 2H), 3.40(s, 3H), 2.67(dt, 2H), 2.62(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.38(t, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.88(d, 3H) 0.64(s, 3H)。
【０１０２】
実施例２：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｓ−ＤＨＣエステル（Ｒはメチル基を示し、ＸはＯを示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍは１である化学式１Ａで表される化合物）の製造
前記実施例１−１で収得した７−デヒドロコレステロールコハク酸８２．８ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）、ｍＰＥＧ２Ｋ−ＯＨ（Ｒがメチル基を示し、ｎが４４．３（平均）であり、ＸがＯを示す化学式６で表される化合物）４５２ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン５ｍｌ、４−ジメチルアミノピリジン６５．７ｍｇ（０．５４ｍｍｏｌ）、及びＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド１２３．８ｍｇ（０．６５ｍｍｏｌ）を用い、前記実施例１−２と同一の製造方法にて標題化合物４６２ｍｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.57(m, 1H), 5.40(m, 1H), 4.72(m, 1H), 4.25(t, 2H), 3.83-3.45(PEG backbone), 3.38(s, 3H), 2.70-2.56(m, 5H), 2.48(dt, 1H), 2.38(dt, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.95(s, 6H), 0.88(d, 3H), 0.84(d, 3H) 0.62(s, 3H)。
【０１０３】
実施例３：ｍＴｒＥＧ−Ｓ−ＤＨＣエステル（Ｒはメチル基を示し、ＸはＯを示し、ｎは３であり、ｍは１である化学式１Ａで表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール０．５４ｇ（１．４０ｍｍｏｌ）とメトキシトリエチレングリコールコハク酸（Ｒがメチル基を示し、ｎが３であり、Ｘが酸素を示し、ｍは１である化学式７ａで表される化合物；ｍＴｒＥＧ−ｓｕｃｃｉｎｉｃ ａｃｉｄ）０．３７ｇ（１．４０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン８ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン０．２６ｇ（２．１１ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド０．６７ｇ（３．５１ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物０．６９ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.58(dd, 1H), 5.40(dd, 1H), 4.74(m, 1H), 4.28(t, 2H), 3.72(t, 2H), 3.68(m, 6H), 3.59(t, 2H), 3.40(s, 3H), 2.65(m, 4H), 2.52(dd, 1H), 2.39(t, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.88(d, 3H) 0.64(s, 3H)。
【０１０４】
実施例４：ｍＰＥＧ３５０−Ｓ−ＤＨＣアミド（Ｒはメチル基を示し、ＸはＮＨを示し、ｎは７．２５（平均）であり、ｍは１である化学式１Ａで表される化合物）の製造
前記実施例１−１で収得した７−デヒドロコレステロールコハク酸３４６．２ｍｇ（０．７１４ｍｍｏｌ）とｍＰＥＧ３５０−ＮＨ２（Ｒがメチル基を示し、ｎが７．２５（平均）であり、ＸがＮＨを示す化学式６で表される化合物；平均分子量３５０）２５０ｍｇ（０．７１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン８７．３ｍｇ（０．７１４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド４１０．８ｇ（２．１４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して標題化合物５０８ｍｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.35(s, 1H), 5.57(dd, 1H), 5.39(dd, 1H), 4.72(m, 1H), 3.66(PEG back-bone), 3.47(t, 2H), 3.39(s, 3H), 2.65(dt, 2H), 2.48(d, 1H), 2.37(t, 1H), 2.08-1.89(m, 6H), 1.74-1.50(m, 6H), 1.42-0.96(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.88(d, 3H), 0.87(s, 3H), 0.63(s, 3H)。
【０１０５】
実施例５：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍは１である化学式１Ｂで表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール０．３２ｇ（０．８４ｍｍｏｌ）とｍＰＥＧ２Ｋ−プロピオン酸（Ｒがメチル基を示し、ｎが４４．３（平均）であり、ｍが１である化学式７ｂで表される化合物；平均分子量２,０００）１．６８ｇ（０．８４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１００ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン０．１５４ｇ（１．２６ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド０．３２２ｇ（１．６８ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物１．５７ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.58(m, 1H), 5.40(m, 1H), 4.74(m, 1H), 3.84-3.47(PEG backbone), 3.39(s, 3H), 2.67(dt, 2H), 2.60(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.38(t, 1H), 2.12-1.89(m, 6H), 1.75-1.53(m, 6H), 1.43-0.95(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.87(d, 3H) 0.63(s, 3H)。
【０１０６】
実施例６：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｏ−Ａ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ＸはＯを示し、ｎは４４．３（平均）であり、Ｙ１はメチル基を示す化学式２Ａで表される化合物）の製造
実施例６−１：ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＰＣ（Ｒがメチル基を示し、ＸがＯを示し、ｎは４４．３（平均）である化学式８で表される化合物）の製造
乾燥したｍＰＥＧ２Ｋ−ＯＨ（Ｒがメチル基を示し、ｎが４４．３（平均）であり、ＸがＯを示す化学式６で表される化合物）３０ｇ（１４．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１２０ｍｌに溶解した溶液に、４−ニトロフェニルクロロフォーメート１２ｇ（５９．７ｍｍｏｌ）、ピリジン５．９ｍｌ（７４．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で２０時間撹拌した。反応溶液を１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ１５０ｍｌで順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物３３．５ｇを得た。
【０１０７】
実施例６−２：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ａｌａ−ＯＨ（Ｒがメチル基を示し、ＸがＯを示し、ｎは４４．３（平均）であり、Ｙ１はメチル基を示す化学式１０で表される化合物）の製造
前記実施例６−１で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＰＣ  １６ｇ（７．２ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１００ｍｌ、蒸留水６０ｍｌに溶解した溶液に、Ｈ−Ａｌａ−ＯＨ（Ｙ１がメチル基を示す化学式９で表される化合物）１．９ｇ（２１．７ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン１．５ｍｌ（２１．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で８時間撹拌した。反応溶液をジクロロメタン３００ｍｌで抽出し、１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ３００ｍｌで順次洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理し、ろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物１８．８ｇ（３６．４ｍｍｏｌ）を得た。
【０１０８】
実施例６−３：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｏ−Ａ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ＸはＯを示し、ｎは４４．３（平均）であり、Ｙ１はメチル基を示す化学式２Ａで表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール０．２ｇ（０．４８ｍｍｏｌ）と前記実施例６−２で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−Ａｌａ−ＯＨ  ０．１０ｇ（０．２３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１００ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン０．１４ｇ（１．１４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド０．２ｇ（１．１４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物１．０６ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.44(dd, 1H), 5.41(bs, 1H), 4.36(q, 1H), 4.22(t, 2H), 3.83(t, 2H), 3.77-3.52(PEG back-bone), 3.48(t, 2H), 3.39(s, 3H), 2.80(dt, 2H), 2.55(d, 2H), 2.41(d, 2H), 2.19-1.77(m, 6H), 1.74-1.52(m, 6H), 1.43-1.08(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.88(d, 3H), 0.63(s, 3H)。
【０１０９】
実施例７：ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ａ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、Ｙ１はメチル基を示し、ｍは１である化学式２Ｂで表される化合物）の製造
実施例７−１：ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ａｌａ−Ｆｍｏｃ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、Ｙ１はメチル基を示し、ＺｂがＦｍｏｃを示す化学式１３で表される化合物）の製造
ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ２（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３であり、ＸがＮＨを示す化学式６で表される化合物）２８０ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ  ９４．６ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン９０．５ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し１０分間撹拌して得た溶液に、Ｆｍｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ（ＺｂがＦｍｏｃを示し、Ｙ１がメチル基を示す化学式１２で表される化合物）２１８．０ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）とＰｙＢＯＰ  ３６４．５ｍｇ（０．７０ｍｍｏｌ）を溶解し１０分間撹拌して得た溶液を入れ、室温で５時間撹拌した。反応溶液を１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ１５０ｍｌで順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物３０１．１ｍｇを得た。
【０１１０】
実施例７-２：ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ａｌａ−Ｈ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４.３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、Ｙ１はメチル基を示す化学式１４で表される化合物）の製造
前記実施例７−１で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ａｌａ−Ｆｍｏｃ  ３００ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）をピペリジンが２５％含まれているＤＭＦ溶液６ｍｌに溶解し、室温で３時間撹拌した。反応溶液をジエチルエーテル１００ｍｌに入れ沈殿して、白色固体の標題化合物０．２６ｍｇを得た。
【０１１１】
実施例７−３：ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ａ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、Ｙ１はメチル基を示し、ｍは１である化学式２Ｂで表される化合物）の製造
前記実施例１−１で収得した７−デヒドロコレステロールコハク酸１２０ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）とｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ａｌａ−Ｈ  ２５０ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン１７．７ｍｇ（０．１４ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド６９．５ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物２８３ｍｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.44(m, 3H), 4.33(q, 1H), 4.23(m, 1H), 3.66(PEG backbone), 3.48(t, 2H), 3.39(s, 3H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.52(d, 1H), 2.48(d, 3H), 2.39(t, 1H), 2.18-1.85(m, 6H), 1.82-1.50(m, 6H), 1.48-0.93(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.89(d, 3H) 0.64(s, 3H)。
【０１１２】
実施例８：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ａｌａ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍは１であり、Ｙ１はメチル基を示す化学式２Ｃで表される化合物）の製造
実施例８−１：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−ＮＨＳ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍは１であり、Ｌがコハク酸イミドを示す化学式１５ｂで表される化合物）の製造
ｍＰＥＧ−ＰＡ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍが１である化学式７ｂで表される化合物）１ｇ（０．４７６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン７ｍｌに溶解した溶液に、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド０．２７ｇ（２．３８ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド０．４５ｇ（２．３８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン０．１８ｇ（１．１９８ｍｍｏｌ）を加え、室温で５時間撹拌した。反応溶液をジクロロメタン１００ｍｌで抽出し、１Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ１００ｍｌで順次洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理し、ろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物０．９４ｇを得た。
【０１１３】
実施例８−２：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ａｌａ−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍは１であり、Ｙ１はメチル基を示す化学式１６で表される化合物）の製造
前記実施例８−１で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−ＮＨＳ  ４５０ｍｇ（０．２１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解した溶液を、Ｈ−Ａｌａ−ＯＨ  ９２．４ｍｇ（１．０４ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン１１５．５ｍｇ（１．１４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２．５ｍｌとジメチルホルムアミド２．５ｍｌに溶解した溶液にゆっくり滴下し、室温で３時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物４７８ｍｇを得た。
【０１１４】
実施例８−３：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ａｌａ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ｍは１であり、Ｙ１はメチル基を示す化学式２Ｃで表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール９０．４ｍｇ（０．２４ｍｍｏｌ）と前記実施例８−２で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ａｌａ−ＯＨ  ４２０ｍｇ（０．１９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン３５．９ｍｇ（０．２９ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド９３．９ｍｇ（０．４９ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次に洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物４５７ｍｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.59(dd, 1H), 5.44(m, 3H), 4.26(q, 1H), 4.23(m, 1H), 3.66(PEG backbone), 3.39(s, 3H), 2.60(t, 2H), 2.52(d, 1H), 2.39(t, 1H), 2.18-1.85(m, 6H), 1.82-1.50(m, 6H), 1.50(d, 3H), 1.48-0.93(m, 11H), 0.97(s, 6H), 0.90(d, 3H), 0.89(d, 3H) 0.64(s, 3H)。
【０１１５】
実施例９：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｄで表される化合物）の製造
実施例９−１：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−Ｆｍｏｃ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、ｍ’は１であり、ＺａはｔＢｏｃ保護基を示し、ＺｂはＦｍｏｃ保護基を示す化学式１８で表される化合物）の製造
ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ２  ４００ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ  １３５．２ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン１２９．３ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ（ｍ’は１であり、ＺａはｔＢｏｃ保護基を示し、ＺｂはＦｍｏｃ保護基を示す化学式１７で表される化合物）２６４．４ｍｇ（０．６０ｍｍｏｌ）とＰｙＢＯＰ  ５２０．６ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ  ４０ｍｌを用い、前記実施例７−１と同一の製造方法にて白色固形の標題化合物４７３ｍｇを得た。
【０１１６】
実施例９−２：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ｄａｂ−Ｆｍｏｃ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、ｍ’は１であり、ＺｂはＦｍｏｃ保護基を示す化学式１９で表される化合物）の製造
前記実施例９−１で収得したα−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−Ｆｍｏｃ  ４５０ｍｇ（０．４７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解した溶液にトリフルオロ酢酸５ｍｌを加え、室温で３時間撹拌した。反応溶液にジクロロメタン５０ｍｌを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ５０ｍｌで洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理し、ろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物４２８ｍｇを得た。
【０１１７】
実施例９−３：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−Ｆｍｏｃ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１であり、ＺｂがＦｍｏｃ保護基を示す化学式２０で表される化合物）の製造
前記実施例９−２で収得したα−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−Ｄａｂ−Ｆｍｏｃ  ４２０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン８ｍｌに溶解し、ｍＰＥＧ２Ｋ−ＰＡ  ３７４．９ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）、４−ジメチルアミノピリジン３３．２ｍｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド６９．４ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物７５０ｍｇを得た。
【０１１８】
実施例９−４：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−Ｈ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２１で表される化合物）の製造
前記実施例９−３で収得したα−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−Ｆｍｏｃ  ７００ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）をピペリジンが２５％含まれているＤＭＦ溶液１４ｍｌに溶解し、室温で３時間撹拌した。反応溶液をジエチルエーテル１００ｍｌに入れ沈殿して、白色固体の標題化合物６５１ｍｇを得た。
【０１１９】
実施例９−５：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＮＨを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｄで表される化合物）の製造
前記実施例１−１で収得した７−デヒドロコレステロールコハク酸６４．２ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）と前記実施例９−４で収得したα−ｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＨ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−Ｈ  ５５０ｍｇ（０．１３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン２４．３ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド５０．８ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）を用い、実施例７−３と同一の製造方法にて標題化合物５８７ｍｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 5.74(m, 2H), 5.59(d, 1H), 5.44(m, 2H), 4.35(m, 1H), 4.23(m, 3H), 3.84-3.66(PEG back-bone), 3.57(m, 6H), 3.48(t, 2H), 3.39(s, 6H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.62(t, 2H), 2.53-2.39(m, 4H), 2.20-1.52(m, 16H), 1.41-1.06(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.88(d, 3H), 0.63(s, 3H)。
【０１２０】
実施例１０：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｅで表される化合物）の製造
実施例１０−１：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍ’は１であり、ＺａがｔＢｏｃを示す化学式２３で表される化合物）の製造
前記実施例６−１で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−ＮＰＣ  ２ｇ（０．９１ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１５ｍｌ、蒸留水１０ｍｌに溶解した溶液にＨ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ（ｍ’は１であり、ＺａはｔＢｏｃを示す化学式２２で表される化合物）０．５９ｇ（２．７２ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン０．４６ｍｌ（２．７２ｍｍｏｌ）を用い、前記実施例６−２と同一の製造方法にて標題化合物１．６７ｇを得た。
【０１２１】
実施例１０−２：ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｄａｂ−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍ’は１である化学式２４で表される化合物）の製造
前記実施例１０−１で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ  １ｇ（０．４７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解した溶液にトリフルオロ酢酸１０ｍｌ（０．１３ｍｍｏｌ）を加え、前記実施例９−２と同一の製造方法にて標題化合物０．７６ｇを得た。
【０１２２】
実施例１０−３：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２５ｂで表される化合物）の製造
前記実施例１０−２で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−Ｄａｂ−ＯＨ  ０．３４ｇ（０．１６ｍｍｏｌ）と実施例８−１で収得したｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−ＮＨＳ  ０．３５ｇ（０．１６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解した溶液にトリエチルアミン８７μｌを加え、室温で１２時間撹拌した。反応溶液にジクロロメタン１００ｍｌを加え、１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ１００ｍｌで順次洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理し、ろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物０．５４ｇを得た。
【０１２３】
実施例１０−４：α−ｍＰＥＧ２Ｋ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは４４．３（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｅで表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール３８．０ｍｇ（０．０９８ｍｍｏｌ）と前記実施例１０−３で収得したα−ｍＰＥＧ２Ｋ−γ−ｍＰＥＧ２Ｋ−Ｐ−Ｄａｂ−ＯＨ  ０．１０ｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５０ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン６．０ｍｇ（０．２４７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド９５ｍｇ（０．４９４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物０．４８ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.85(bs, 1H), 5.74(m, 1H), 5.59(d, 1H), 5.32(d, 1H), 4.35(m, 1H), 4.23(m, 3H), 3.84-3.66(PEG back-bone), 3.49(t, 2H), 3.39(s, 6H), 2.53-2.39(m, 4H), 2.20-1.52(m, 8H), 1.41-1.06(m, 11H), 0.96(s, 6H), 0.89(d, 3H), 0.88(d, 3H), 0.63(s, 3H)。
【０１２４】
実施例１１：α−ｍＰＥＧ５Ｋ−γ−ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｓ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｆで表される化合物）の製造
実施例１１−１：ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｓ−ＮＨＳ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍは１であり、ＬはＮＨＳを示す化学式１５ａで表される化合物）の製造
ｍＰＥＧ５Ｋ−ＳＡ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍは１である化学式７ａで表される化合物）１．０ｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を用い、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド０．１６ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン７３ｍｇ（０．６ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド０．２７ｇ（１．４ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン７ｍｌを入れ、前記実施例８−１と同一の製造方法にて白色固形の標題化合物０．９３ｇを得た。
【０１２５】
実施例１１−２：ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍ’は１であり、ＺａはｔＢｏｃを示す化学式２３で表される化合物）の製造
ｍＰＥＧ５Ｋ−ＮＰＣ  ２ｇ（０．３８４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル１０ｍｌ、蒸留水１０ｍｌに溶解した溶液にＨ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ  ０．１７ｇ（０．７６８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン０．２ｍｌ（１．１５ｍｍｏｌ）を加え、前記実施例１０−１と同一の製造方法にて標題化合物１．７ｇを得た。
【０１２６】
実施例１１−３：ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｄａｂ−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍ’は１である化学式２４で表される化合物）の製造
前記実施例１１−２で収得したｍＰＥＧ５Ｋ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ  １．３ｇ（０．２５４ｍｍｏｌ）、トリフルオロ酢酸１３ｍｌ、ジクロロメタン１３ｍｌを用い、実施例９−２と同一の製造方法にて標題化合物１．２ｇを得た。
【０１２７】
実施例１１−４：α−ｍＰＥＧ５Ｋ−γ−ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｓ−Ｄａｂ−ＯＨ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２５ａで表される化合物）の製造
前記実施例１１−３で収得したｍＰＥＧ５Ｋ−Ｄａｂ−ＯＨ  ０．７９ｇ（０．１５ｍｍｏｌ）と前記実施例１１−１で収得したｍＰＥＧ５Ｋ−Ｓ−ＮＨＳ  ０．８ｇ（０．１５ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１５ｍｌに溶解した溶液にトリエチルアミン０．１ｍｌを加え、室温で１２時間撹拌した。反応溶液にジクロロメタン５０ｍｌを加え、１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ５０ｍｌで順次洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理し、ろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をジエチルエーテルで沈殿して、白色固形の標題化合物１．３５ｇを得た。
【０１２８】
実施例１１−５:α−ｍＰＥＧ５Ｋ−γ−ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｓ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは１１３．０（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｆで表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール３８．０ｍｇ（０．０９８ｍｍｏｌ）と前記実施例１１−４で収得したα−ｍＰＥＧ５Ｋ−γ−ｍＰＥＧ５Ｋ−Ｓ−Ｄａｂ−ＯＨ  ０．５ｇ（０．０４９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン６．０ｍｇ（０．２４７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド９５ｍｇ（０．４９４ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、室温で１２時間撹拌した。反応溶液を１．０Ｎ塩酸水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液で順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮し、真空乾燥して、標題化合物０．４９ｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.79(bs, 1H), 5.69(m, 1H), 5.53(d, 1H), 5.30(d, 1H), 4.29(m, 1H), 4.17(m, 3H), 3.91-3.50(PEG backbone), 3.45(t, 4H), 3.34(t, 4H), 3.34(s, 6H), 2.55-2.48(m, 8H), 2.1-1.62(m, 14H), 1.42-1.14(m, 11H), 0.95(s, 6H), 0.84(d, 3H), 0.82(d, 3H), 0.59(s, 3H)。
【０１２９】
実施例１２：α−ｍＰＥＧ３５０−γ−ＤＨＣ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは７．２５（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｇで表される化合物）の製造
実施例１２−１：ｍＰＥＧ３５０−ＮＰＣ（Ｒがメチル基を示し、ＸがＯを示し、ｎは７．２５（平均）である化学式８で表される化合物）の製造
乾燥したｍＰＥＧ３５０−ＯＨ（Ｒがメチル基を示し、ｎが７．２５（平均）であり、ＸがＯを示す化学式６で表される化合物）１５ｇ（４２．８６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２００ｍｌに溶解した溶液に４−ニトロフェニルクロロフォーメート１２．９ｇ（６４．２９ｍｍｏｌ）、ピリジン５．０ｍｌ（６４．２９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応溶液を１Ｎ塩酸水溶液、飽和塩化ナトリウム水溶液のそれぞれ１５０ｍｌで順次洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで処理した後にろ過し、減圧濃縮した。生成された混合物をメタノールとジクロロメタンでシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて、無色オイル形態の標題化合物１８．８ｇを得た。
【０１３０】
実施例１２−２：α−ｍＰＥＧ３５０−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ（Ｒがメチル基を示し、ＸがＯを示し、ｎは７．２５（平均）であり、ｍ’は１であり、ＺａはｔＢｏｃ保護基を示す化学式２３で表される化合物）の製造
前記実施例１２−１で収得したｍＰＥＧ３５０−ＮＰＣ  １．０ｇ（１．９４ｍｍｏｌ）をアセトニトリル２０ｍｌ、蒸留水２０ｍｌに溶解した溶液にＨ−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ  ０．６４ｇ（２．９１ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン０．５０ｇ（３．８８ｍｍｏｌ）を用い、前記実施例６−２と同一の製造方法にて得た混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて、標題化合物０．９８ｇを得た。
【０１３１】
実施例１２−３：α−ｍＰＥＧ３５０−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＤＨＣ（Ｒがメチル基を示し、ＸがＯを示し、ｎは７．２５（平均）であり、ｍ’は１であり、ＺａがｔＢｏｃ保護基を示す化学式２６で表される化合物）の製造
化学式４で表される７−デヒドロコレステロール５８２．６ｍｇ（０．０９８ｍｍｏｌ）と前記実施例１２−２で収得したα−ｍＰＥＧ３５０−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＯＨ  ９００ｍｇ（１．５１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１０ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン２０８．２ｍｇ（１．７０ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド４３５．５ｍｇ（２．２７ｍｍｏｌ）を用い、前記実施例６−３と同一の製造方法にて得た混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて、標題化合物１．２３ｇを得た。
【０１３２】
実施例１２−４：α−ｍＰＥＧ３５０−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒがメチル基を示し、ＸがＯを示し、ｎは７．２５（平均）であり、ｍ’は１である化学式２７で表される化合物）の製造
前記実施例１２−３で収得したα−ｍＰＥＧ３５０−Ｄａｂ（ｔＢｏｃ）−ＤＨＣ  ２５０ｍｇ（０．２６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２．５ｍｌに溶解した溶液にトリフルオロ酢酸２．５ｍｌを加え、実施例９−２と同一の製造方法にて得た混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにかけて、標題化合物１９４ｍｇを得た。
【０１３３】
実施例１２−５：α−ｍＰＥＧ３５０−γ−ＤＨＣ−Ｄａｂ−ＤＨＣ（Ｒはメチル基を示し、ｎは７.２５（平均）であり、ＸはＯを示し、ｍとｍ’はそれぞれ１である化学式２Ｇで表される化合物）の製造
前記実施例１−１で収得した７−デヒドロコレステロールコハク酸５６．３ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）と前記実施例１２−４で収得したα−ｍＰＥＧ３５０−Ｄａｂ−ＤＨＣ  １００ｍｇ（０．１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン５ｍｌに溶解し、４−ジメチルアミノピリジン２１．３ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド４４．５ｍｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を用い、実施例７−３と同一の製造方法にて標題化合物１４１ｍｇを得た。
1H NMR 400 MHz(CDCl3) δ 6.85(bs, 1H), 5.74(m, 1H), 5.59(d, 2H), 5.44(m, 2H), 4.35(t, 2H), 4.33(m, 2H), 4.22(m, 1H), 3.84-3.66(PEG back-bone), 3.39(s, 3H), 2.72(dt, 2H), 2.64(dt, 2H), 2.53-2.39(m, 6H), 2.23-1.51(m, 14H), 1.41-1.06(m, 22H), 0.97(s, 12H), 0.88(d, 6H), 0.87(d, 6H), 0.63(s, 6H)。
【０１３４】
前記実施例１〜１２で収得した本発明に係るペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体の化学構造式を下記の表１に表した。
【０１３５】
【表１】
2017505778.tif 000020
【０１３６】
実験例１：溶解度試験
蒸留水１００ｍｌに、実施例１及び実施例５の化合物と比較物質としての７−デヒドロコレステロールをそれぞれ１００ｍｇずつ入れ、常温で１時間程度撹拌した。溶解しないまで繰り返し続け、溶解しない物質はろ過して、前記化合物の飽和水溶液をそれぞれ調製した。
【０１３７】
次いで、測量した空き容器（Ａ）に飽和水溶液を入れ、測量（Ｂ）した後、減圧濃縮し、真空乾燥して測量（Ｃ）を行い、下記の数式１にて溶解度を算出した。その結果を下記の表２に表した。 
【０１３８】
【数１】
2017505778.tif 000021
【０１３９】
【表２】
2017505778.tif 000022
【０１４０】
前記表２に見られるように、実施例１及び５で収得したペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体が７−デヒドロコレステロールよりも水に対する溶解度が著しく優れていることを確認した。
【０１４１】
実験例２：熱安定性試験
前記実施例１の化合物をジメチルスルホキシドに１０ｍＭの濃度で溶解して溶液を調製した。比較物質としての７−デヒドロコレステロールをジメチルスルホキシドとメタノール（９：１）に１０ｍＭの濃度で溶解して溶液を調製した。調製した溶液をそれぞれ１．５ｍｌずつ分画して入れて光を遮断し、それぞれ４０℃、７０℃の恒温に放置し、一定時間後に回収した後、試験溶液をメタノールで希釈して検液濃度を１ｍＭにして、ＨＰＬＣで分析を行った。その結果を図１及び図２に示した。
ＨＰＬＣの分析条件は次のとおりである。
分析機器名：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ  １２６０
カラム：Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ／５μｍ）
展開溶媒：アセトニトリル：メタノール＝６：４
カラム温度：３０℃
分解率（％）＝［Ｃｔｘ／Ｃｔ０］×１００（％）
Ｃｔ０＝０時間の実施例１のピーク面積
Ｃｔｘ＝Ｘ時間の実施例１のピーク面積
図１及び図２に示されるように、実施例１で収得したペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体が７−デヒドロコレステロールよりも熱に対する安定性に優れていることを確認した。
【０１４２】
実験例３：光安定性試験
前記実施例１の化合物をジメチルスルホキシドに１０ｍＭの濃度で溶解して溶液を調製した。比較物質としての７−デヒドロコレステロールをジメチルスルホキシドとメタノール（９：１）に１０ｍＭの濃度で溶解して溶液を調製した。調製した溶液をプレートウェルに１５０μｌ分画し、ＵＶ（中波長、３１５ｎｍ、ｗｉｄｔｈ：１２ｃｍ）で照射した。一定時間後に回収し、メタノールで希釈して試験溶液を１ｍＭの濃度にして、ＨＰＬＣで分析を行った。その結果を図３に示した。
ＨＰＬＣの分析条件は次のとおりである。
分析機器名：Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ  １２６０
カラム：Ｃ１８（１５０×４．６ｍｍ／５μｍ）
展開溶媒：アセトニトリル：メタノール＝６：４
カラム温度：３０℃
分解率（％）＝［Ｃｔｘ／Ｃｔ０］×１００（％）
Ｃｔ０＝０時間の実施例１のピーク面積
Ｃｔｘ＝Ｘ時間の実施例１のピーク面積
図３に示されるように、実施例１で収得したペグ化７−デヒドロコレステロール誘導体が７−デヒドロコレステロールよりも光に対する安定性に優れていることを確認した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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