(57)【要約】本発明は、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎およびアスピリン増悪呼吸器疾患等、シグレック−８関連疾患の予防および処置のための方法および組成物を提供する。特に、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたは前記抗体もしくはアゴニストを含む組成物の投与による、シグレック−８関連疾患の予防および処置のための方法を提供する。本発明は、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎およびアスピリン増悪呼吸器疾患等、シグレック−８関連疾患の予防および処置のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む製造品またはキットも提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項２】
前記慢性副鼻腔炎が、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記慢性副鼻腔炎が、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記慢性副鼻腔炎が、アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
慢性副鼻腔炎を有する前記個体における１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記１種または複数の症状が、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
慢性副鼻腔炎を有する前記個体における喘息の１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記１種または複数の症状が、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記個体における鼻ポリープのサイズが、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記個体が、ヒトである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗体が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１３】
前記アスピリン増悪呼吸器疾患が、非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記アスピリン増悪呼吸器疾患が、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
アスピリン増悪呼吸器疾患を有する前記個体における１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記１種または複数の症状が、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
アスピリン増悪呼吸器疾患を有する前記個体における喘息の１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項１２〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記１種または複数の症状が、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記個体における鼻ポリープのサイズが、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
前記個体が、ヒトである、請求項１２〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記抗体が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する、請求項１２〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項２３】
副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する前記個体における１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
１種または複数の症状が、永続的喀痰中好酸球増加症、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較してより高い血中好酸球、および永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）からなる群より選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記個体が、ヒトである、請求項２２〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記抗体が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する、請求項２２〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項２８】
前記シグレック−８関連疾患が、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎または慢性閉塞性肺疾患である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
シグレック−８関連疾患を有する前記個体における１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項２７または２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記個体における鼻ポリープのサイズが、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
損なわれた前記ＮＫ細胞機能が、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である、請求項２７〜３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記個体が、ヒトである、請求項２７〜３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
前記抗体が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する、請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体における好酸球を枯渇させるための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項３５】
前記個体が、シグレック−８関連疾患を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記シグレック−８関連疾患が、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎または慢性閉塞性肺疾患である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
シグレック−８関連疾患を有する前記個体における１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項３５または３６に記載の方法。
【請求項３８】
前記個体における鼻ポリープのサイズが、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
損なわれた前記ＮＫ細胞機能が、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である、請求項３４〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
前記個体が、ヒトである、請求項３４〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
前記抗体が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する、請求項３４〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
個体における慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項４３】
慢性閉塞性肺疾患を有する前記個体における１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
慢性閉塞性肺疾患を有する前記個体における前記１種または複数の症状が、息切れ；喘鳴；胸部絞扼感、慢性の咳；痰産生；チアノーゼ、頻繁な呼吸器感染症；疲労；および体重減少からなる群より選択される、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記個体が、ヒトである、請求項４２〜４４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４６】
前記抗体が、前記抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する、請求項４２〜４５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４７】
前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４８】
前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体である、請求項１〜４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗体が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される抗体断片である、請求項１〜４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５１】
前記抗体が、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５２】
前記抗体が、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５３】
前記ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記ヒトＩｇＧ４が、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、前記アミノ酸残基が、Ｋａｂａｔで規定されたＥＵインデックスに従って番号付けられる、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記抗体が、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗体が、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗体が、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、前記重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、および／または前記軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記抗体が、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５９】
前記抗体が、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６０】
前記抗体が、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６１】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６２】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６３】
前記抗体が、以下：
（ａ）以下：
（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変領域、ならびに／または
（ｂ）以下：
（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６４】
前記抗体が、以下：
（ａ）（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域、ならびに／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６５】
前記抗体が、以下：
（ａ）配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｂ）配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、
（ｃ）配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項６７】
前記慢性副鼻腔炎が、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６８】
前記慢性副鼻腔炎が、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である、請求項６６に記載の組成物。
【請求項６９】
前記慢性副鼻腔炎が、アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項６６に記載の組成物。
【請求項７０】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項６６〜６９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７１】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項７０に記載の組成物。
【請求項７２】
個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項７３】
前記アスピリン増悪呼吸器疾患が、非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７４】
前記アスピリン増悪呼吸器疾患が、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項７２に記載の組成物。
【請求項７５】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項７２〜７４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７６】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項７８】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項７７に記載の組成物。
【請求項７９】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項８１】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項８０に記載の組成物。
【請求項８２】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８３】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体における好酸球の枯渇における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項８４】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項８３に記載の組成物。
【請求項８５】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項８４に記載の組成物。
【請求項８６】
個体における慢性閉塞性肺疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む組成物。
【請求項８７】
前記抗体が、Ｆｃ領域と、前記Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する、請求項８６に記載の組成物。
【請求項８８】
前記Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない、請求項８７に記載の組成物。
【請求項８９】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための、それを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む、製造品。
【請求項９０】
前記慢性副鼻腔炎が、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である、請求項８９に記載の製造品。
【請求項９１】
前記慢性副鼻腔炎が、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である、請求項８９に記載の製造品。
【請求項９２】
前記慢性副鼻腔炎が、アスピリン増悪呼吸器疾患である、請求項８９に記載の製造品。
【請求項９３】
前記添付文書が、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べた、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を有する前記個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す、請求項８９〜９２のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項９４】
前記１種または複数の症状が、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される、請求項９３に記載の製造品。
【請求項９５】
慢性副鼻腔炎を有する前記個体における喘息の１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項９３に記載の製造品。
【請求項９６】
前記１種または複数の症状が、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される、請求項９５に記載の製造品。
【請求項９７】
前記個体が、ヒトである、請求項８９〜９６のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項９８】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、アスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む、製造品。
【請求項９９】
前記添付文書が、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べた、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する前記個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す、請求項９８に記載の製造品。
【請求項１００】
前記１種または複数の症状が、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される、請求項９９に記載の製造品。
【請求項１０１】
アスピリン増悪呼吸器疾患を有する前記個体における喘息の１種または複数の症状が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される、請求項９９に記載の製造品。
【請求項１０２】
前記１種または複数の症状が、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される、請求項１０１に記載の製造品。
【請求項１０３】
前記個体が、ヒトである、請求項９８〜１０２のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項１０４】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための、それを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む、製造品。
【請求項１０５】
前記添付文書が、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べた、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する前記個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す、請求項１０４に記載の製造品。
【請求項１０６】
前記１種または複数の症状が、永続的喀痰中好酸球増加症、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較してより高い血中好酸球、および永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）からなる群より選択される、請求項１０５に記載の製造品。
【請求項１０７】
前記個体が、ヒトである、請求項１０４〜１０６のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項１０８】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬およびシグレック−８関連疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品であって、それを必要とする前記個体が、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する、製造品。
【請求項１０９】
前記添付文書が、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べた、シグレック−８関連疾患を有する前記個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す、請求項１０８に記載の製造品。
【請求項１１０】
前記個体が、ヒトである、請求項１０８〜１０９のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項１１１】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、好酸球を枯渇させるための、それを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品であって、それを必要とする前記個体が、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する、製造品。
【請求項１１２】
前記個体が、ヒトである、請求項１１１に記載の製造品。
【請求項１１３】
ヒトシグレック−８に結合する抗体を含む医薬と、慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における前記医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む、製造品。
【請求項１１４】
前記添付文書が、前記処置が、ヒトシグレック−８に結合する前記抗体の投与後に、ベースラインと比べた、慢性閉塞性肺疾患を有する前記個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す、請求項１１３に記載の製造品。
【請求項１１５】
慢性閉塞性肺疾患を有する前記個体における前記１種または複数の症状が、息切れ；喘鳴；胸部絞扼感、慢性の咳；痰産生；チアノーゼ、頻繁な呼吸器感染症；疲労；および体重減少からなる群より選択される、請求項１１４に記載の製造品。
【請求項１１６】
前記個体が、ヒトである、請求項１１３〜１１５のいずれか一項に記載の製造品。
【請求項１１７】
個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１１８】
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、請求項１１８に記載の方法。
【請求項１２０】
個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１２１】
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである、請求項１２０に記載の方法。
【請求項１２２】
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、請求項１２１に記載の方法。
【請求項１２３】
個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１２４】
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである、請求項１２３に記載の方法。
【請求項１２５】
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１２７】
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、請求項１２７に記載の方法。
【請求項１２９】
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体における好酸球を枯渇させるための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１３０】
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである、請求項１２９に記載の方法。
【請求項１３１】
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、請求項１３０に記載の方法。
【請求項１３２】
個体における慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための方法であって、前記個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１３３】
前記アゴニストが、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである、請求項１３２に記載の方法。
【請求項１３４】
前記アゴニストが、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である、請求項１３３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、その全体が参考として本明細書に援用される、２０１４年２月２８日に出願された米国仮特許出願第６１／９４６，４０７号に対する優先権を主張する。
【０００２】
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルにおける次の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７０１７１２０００２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録された日付：２０１５年２月２５日、サイズ：９０．１ＫＢ）。
【０００３】
本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたは前記抗体もしくはアゴニストを含む組成物の投与により、シグレック−８関連疾患を予防または処置するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
発明の背景
シグレック（シアル酸結合免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球に存在し、細胞表面の複合糖質に付着したシアル酸に対するその特異性によって特徴付けられる、１回膜貫通細胞表面タンパク質である。シグレックファミリーは、哺乳動物において見出される少なくとも１５種のメンバーを含有する（Ｐｉｌｌａｉら、Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３０巻：３５７〜３９２頁、２０１２年）。これらのメンバーは、シアロアドヘシン（ｓｉａｌｏａｄｈｅｓｉｏｎ）（シグレック−１）、ＣＤ２２（シグレック−２）、ＣＤ３３（シグレック−３）、ミエリン関連糖タンパク質（シグレック−４）、シグレック−５、ＯＢＢＰ１（シグレック−６）、ＡＩＲＭ１（シグレック−７）、ＳＡＦ−２（シグレック−８）およびＣＤ３２９（シグレック−９）を含む。ヒトにおいて発現されるが、マウスにおいては発現されないメンバーであるシグレック−８は、新規ヒト好酸球タンパク質を同定する試みの一環として最初に発見された。好酸球による発現に加えて、これは、肥満細胞および好塩基球によっても発現される。シグレック−８は、硫酸化グリカン、すなわち、６’−スルホ−シアリルルイスＸまたは６’−スルホ−シアリル−Ｎ−アセチル−Ｓ−ラクトサミンを認識し、肥満細胞機能を阻害することが示された細胞内免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含有する。
【０００５】
肥満細胞と共に、好酸球は、特異的組織部位における感染の制御等、有益な機能的役割を果たす炎症性応答を促進することができる。炎症性応答において、好酸球のアポトーシスは、ＩＬ−５およびＧＭ−ＣＳＦ等、生存促進性サイトカインの活性により阻害され得る。しかし、アポトーシスによって迅速に除去されない活性化された好酸球の増加は、既に炎症した部位における好酸球顆粒タンパク質の放出を引き起こす可能性があり、これは、組織を損傷し、炎症をさらに増悪させる可能性がある。肥満細胞および好酸球の生物学的活性により生じる疾患の例として、Ｓａｍｔｅｒの三徴候またはアスピリン感受性喘息としても公知の、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）およびアスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）が挙げられる。ＣＲＳｗＮＰは、クオリティ・オブ・ライフに有意に影響する重篤な疾患であり、多くの場合、吸入コルチコステロイドにより不十分に管理される。鼻ポリープにおける肥満細胞浸潤は、アトピー性および非アトピー性個体の両方において顕著であることが示されてきた（Ｒｕｈｎｏら、Ａｌｌｅｒｇｙ、４５巻：３７０〜３７４頁、１９９０年）。ＣＲＳｗＮＰにおける鼻ポリープは、多数の好酸球も含有し、ポリープ好酸球浸潤を伴う末梢好酸球増加症（Ｈｕら、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ、１２２巻（３号）：４９８〜５０３頁、２０１２年）と疾患重症度（Ｂｒｙｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｓｃｉ．、２８巻（１号）：５５〜８頁、２００３年）の間には相関がある。ほとんど致死的な喘息に強く関連し（Ｓｚｃｚｅｋｌｉｋら、Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  Ａｓｐｉｒｉｎ  ａｎｄ  Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ．  Ｉｎ：  Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ’ｓ  Ａｌｌｅｒｇｙ、第７版、Ｍｏｓｂｙ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ、１２２７〜１２４３頁、２００９年）、アスピリンおよび他の非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）の回避後であっても遅延性の経過を有するため（Ｋｏｗａｌｓｋｉ  Ｍ．  Ｌ．、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｏｒｌｄａｌｌｅｒｇｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ／ａｌｌｅｒｇｉｃ＿ｄｉｓｅａｓｅｓ＿ｃｅｎｔｅｒ／ａｓｐｉｒｉｎ／、本来２００６年５月に投稿）、ＡＥＲＤも重篤な疾患である。アスピリン感受性喘息に加えて、ＡＥＲＤ患者は、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎を有する。よって、この疾患は、アスピリンに対し過敏性であると推定されるＣＲＳ患者の３０〜４０％を有する、ＣＲＳｗＮＰのサブセットであるとも考慮される（Ｓｚｃｚｅｋｌｉｋら、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ、６２巻：５２６〜５２９頁、２０１０年）。ＡＥＲＤは、好酸球性喘息に関連し、多数の好酸球および肥満細胞の両方を含有する鼻ポリープの成長ならびに呼吸粘膜全体への好酸球および肥満細胞の激しい浸潤によって特徴付けられ（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ｒｅｖ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：１６９頁、２００３年）、多くの場合、浸潤性気道リモデリング（ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ａｉｒｗａｙ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）をもたらす（Ｓｔｅｉｎｋｅら���Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ．、２０１２年：１〜９頁、２０１２年）。ＡＥＲＤ患者の最大５０％が、喘息を制御するために全身性コルチコステロイドを必要とする。しかし、この疾患は、吸入または経口ステロイドにより不十分に管理され、患者は典型的に、再発する鼻ポリープを除去するための反復的外科手術を必要とする（Ｊｅｎｋｉｎｓら、ＢＭＪ．、３２８巻：４３４頁、２００４年）。したがって、現在利用できる治療的処置による不十分な疾患管理のために、好酸球および肥満細胞の活性等、これらの疾患の病因に関与する免疫細胞の活性を制御することができる代替治療法の必要があると思われる。
特許出願、特許公報および科学文献を含む本明細書に引用されるあらゆる参考文献は、個々の参考文献それぞれが具体的かつ個別に参照によりその全体が本明細書に組み入れられると示されているかのように、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｒｕｈｎｏら、Ａｌｌｅｒｇｙ（１９９０年）４５巻：３７０〜３７４頁
【非特許文献２】Ｈｕら、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ（２０１２年）１２２巻（３号）：４９８〜５０３頁
【非特許文献３】Ｂｒｙｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｓｃｉ．（２００３年）２８巻（１号）：５５〜８頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
シグレック−８関連疾患の予防または処置のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはこれを含む組成物を使用する方法が本明細書に提供される。シグレック−８関連疾患として、慢性副鼻腔炎、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎または鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎）、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴うアトピー性慢性副鼻腔炎または鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎）、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患または非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および副鼻腔疾患（ｓｉｎｕｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）を伴う成体発症型非アトピー性喘息が挙げられるがこれらに限定されない。
【０００８】
一態様において、個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、アスピリン増悪呼吸器疾患である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、慢性副鼻腔炎を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり（ｎａｓａｌ  ｂｌｏｃｋａｇｅ）、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁（ｎａｓａｌ  ｄｉｓｃｈａｒｇｅ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｅｒｉｏｒ  ｏｒ  ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｎａｓａｌ  ｄｒｉｐ）；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧（ｅａｒ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ）；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、慢性副鼻腔炎を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、一秒量（ｆｏｒｃｅｄ  ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ  ｖｏｌｕｍｅ  ｉｎ  １  ｓｅｃｏｎｄ）（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。別のさらなる実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における鼻ポリープにおける好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における血液における好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在することができる。
【０００９】
別の態様において、個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。一実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択することができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。さらに別のさらなる実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における鼻ポリープにおける好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における血液における好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１０】
さらに別の態様において、個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一実施形態において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、永続的喀痰中好酸球増加症（ｐｅｒｍａｎｅｎｔ  ｓｐｕｔｕｍ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較してより高い血中好酸球、および永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１１】
さらに別の態様において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、慢性閉塞性肺疾患である。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一部の実施形態において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１２】
さらに別の態様において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体における好酸球を枯渇させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体は、シグレック−８関連疾患を有する。さらなる実施形態において、シグレック−８関連疾患は、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎または慢性閉塞性肺疾患である。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一部の実施形態において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１３】
さらに別の態様において、個体における慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗体の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一実施形態において、慢性閉塞性肺疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、息切れ；喘鳴；胸部絞扼感（ｃｈｅｓｔ  ｔｉｇｈｔｎｅｓｓ）、慢性の咳；痰産生；チアノーゼ、頻繁な呼吸器感染症；疲労；および体重減少からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有することができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在することができる。
【００１４】
他の態様において、個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態において、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１５】
さらに他の態様において、個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態において、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１６】
一部の態様において、個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態において、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１７】
一部の態様において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態において、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１８】
一部の態様において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体における好酸球を枯渇させるための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態において、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。
【００１９】
一部の態様において、個体における慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合するアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質からなる群より選択される６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストである。一部の実施形態において、アゴニストは、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体である。一部の実施形態において、個体は、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する。
【００２０】
本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、モノクローナル抗体となることができる。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはキメラ抗体となることができる。本方法およびそれにおける使用のための組成物の実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖおよび（Ｆａｂ’）２断片からなる群より選択される抗体断片となることができる。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域は、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、アミノ酸残基は、Ｋａｂａｔで規定されたＥＵインデックスに従って番号付けされる。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖；および／または配列番号７６もしくは７７のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。一部の実施形態において、抗体は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号２３〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１��配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域、および／または（ｂ）（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域；および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５５のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ａ）（１）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（３）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（５）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；および（７）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４を含む重鎖可変領域；および／または（ｂ）（１）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１；（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（３）配列番号５１のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２；（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（５）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３；（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３；および（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨ��Ｒ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖可変領域；および／または（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗体は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域；および／または配列番号１１１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、休止した好酸球のアポトーシスを誘導する。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、シグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を有する個体から単離された組織試料（例えば、鼻ポリープ試料）における好酸球を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、シグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を有する個体から単離された生体液試料（例えば、血液試料）における好酸球を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、シグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を有する個体における組織（例えば、鼻ポリープ）における好酸球を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、シグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を有する個体における生体液（例えば、血液）における好酸球を枯渇させる。
【００２１】
一態様において、個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、アスピリン増悪呼吸器疾患である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、慢性副鼻腔炎を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、慢性副鼻腔炎を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。別のさらなる実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における鼻ポリープにおける好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における血液における好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含むことができ、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。さらなる実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。
【００２２】
別の態様において、個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が本明細書に提供される。一実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。一実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択することができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下され得る。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。さらに別のさらなる実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における鼻ポリープにおける好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、個体における血液における好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含むことができ、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。さらなる実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。
【００２３】
別の態様において、個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が本明細書に提供される。一実施形態において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、永続的喀痰中好酸球増加症、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較してより高い血中好酸球、および永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含むことができ、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。さらなる実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。
【００２４】
別の態様において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が本明細書に提供される。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、慢性閉塞性肺疾患である。一実施形態において、シグレック−８関連疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一実施形態において、個体における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一部の実施形態において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能は、シグレック−８関連疾患がなく等価なＣＤ１６遺伝子型を有する個体から得られる試料と比較して、シグレック−８関連疾患を有しＮＫ細胞機能が損なわれた個体から得られる試料において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％低下される（例えば、ＮＫ細胞機能は、損なわれる）。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含むことができ、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。さらなる実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。
【００２５】
別の態様において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体における好酸球の枯渇における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が本明細書に提供される。本明細書における実施形態の一部において、個体は、シグレック−８関連疾患を有する。一部の実施形態において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能は、シグレック−８関連疾患がなく、等価なＣＤ１６遺伝子型を有する個体から得られる試料と比較して、シグレック−８関連疾患を有し、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体から得られる試料において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％低下される（例えば、ＮＫ細胞機能は、損なわれる）。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含むことができ、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。さらなる実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。
【００２６】
別の態様において、慢性閉塞性肺疾患の処置または予防における使用のための、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む組成物が本明細書に提供される。一実施形態において、慢性閉塞性肺疾患を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、息切れ；喘鳴；胸部絞扼感、慢性の咳；痰産生；チアノーゼ、頻繁な呼吸器感染症；疲労；および体重減少からなる群より選択される。一部の実施形態において、個体は、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する。一部の実施形態において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能は、慢性閉塞性肺疾患がなく、等価なＣＤ１６遺伝子型を有する個体から得られる試料と比較して、慢性閉塞性肺疾患を有し、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体から得られる試料において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％低下される（例えば、ＮＫ細胞機能は、損なわれる）。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含むことができ、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の５０％未満が、フコース残基を含有する。さらなる実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない。
【００２７】
一部の態様において、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品も本明細書に提供される。一実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である。別の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である。さらに別の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、アスピリン増悪呼吸器疾患である。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べた、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を有する個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示すことができる。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される。さらに別のさらなる実施形態において、慢性副鼻腔炎を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。
【００２８】
一部の態様において、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、アスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品が本明細書に提供される。一実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べた、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される。さらに別のさらなる実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べて低下される。一実施形態において、１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。
【００２９】
他の態様において、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品が本明細書に提供される。一実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べた、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、永続的喀痰中好酸球増加症、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較してより高い血中好酸球、および永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）からなる群より選択される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。
【００３０】
他の態様において、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬およびシグレック−８関連疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品であって、それを必要とする個体が、本明細書に記載されている通り、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する製造品が本明細書に提供される。一実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べた、シグレック−８関連疾患を有する個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。
【００３１】
他の態様において、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、好酸球を枯渇させるための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品であって、それを必要とする個体が、本明細書に記載されている通り、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する製造品が本明細書に提供される。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。
【００３２】
他の態様において、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む製造品が本明細書に提供される。一実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に、ベースラインと比べた、慢性閉塞性肺疾患を有する個体における１種または複数の症状の低下において有効であることをさらに示す。さらなる実施形態において、１種または複数の症状は、息切れ；喘鳴；胸部絞扼感、慢性の咳；痰産生；チアノーゼ、頻繁な呼吸器感染症；疲労；および体重減少からなる群より選択される。一部の実施形態において、個体は、本明細書に記載されている通り、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、個体は、ヒトとなることができる。
【００３３】
本明細書に記載されている様々な実施形態の特性のうち１種、一部または全てを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形作ることができることを理解されたい。本発明の上述および他の態様は、当業者には明らかになるであろう。本発明の上述および他の実施形態を次の詳細な説明によりさらに記載する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１は、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）を有する患者の鼻ポリープ由来の好酸球におけるシグレック−８発現のレベルを示すヒストグラムである。細胞を蛍光抗シグレック−８抗体（黒ヒストグラム）またはアイソタイプ対照（白ヒストグラム）と共にインキュベートした。好酸球は、ＣＤ４５＋ＣＣＲ３＋ＩｇＥＲ−細胞として定義した。
【００３５】
【図２】図２は、抗シグレック−８  ＩｇＧ４ヒト化抗体が、鼻ポリープ由来の好酸球を直接的に死滅させたことを示す一連のグラフである。ＣＲＳｗＮＰ患者由来の鼻ポリープから細胞ホモジネートを調製した。５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−５の存在下で（右パネル）またはＩＬ−５なしで（左パネル）、細胞をＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体（灰色に塗りつぶした丸；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体（黒く塗りつぶした三角；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１）またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（白丸；アイソタイプ）と共に１６時間インキュベートした。残余のＳＳＣｈｉＣＣＲ３＋好酸球をフローサイトメトリーにより定量化した。患者試料毎の抗体なし対照に対し正規化した残存好酸球の％としてデータを示す。２回の生物学的複製を標準偏差と共に示す。
【００３６】
【図３−１】図３は、健康なドナー由来の血液試料中の好酸球における抗シグレック−８抗体の活性を示す一連のグラフである。５名の健康なドナーからヒト末梢血白血球（ＰＢＬ）調製物を単離し、５０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−５の存在下で（下パネル）またはＩＬ−５なしで（上パネル）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体（灰色塗りの丸；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体（黒塗の三角；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１）またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（白丸；アイソタイプ）抗体と共に１６時間インキュベートした。残余のＳＳＣｈｉＣＣＲ３＋好酸球をフローサイトメトリーにより定量化した。患者試料毎の抗体なし対照に対し正規化した残存好酸球の％としてデータを示す。３回の生物学的複製の平均を標準偏差と共に示す。４パラメータロジスティック非線形回帰モデルを使用したソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）において曲線適合を行った。ｘ軸の１０Ｘは、１０のｘ乗（例えば、１０−７、１０−６、１０−５等）を示す。
【図３−２】図３は、健康なドナー由来の血液試料中の好酸球における抗シグレック−８抗体の活性を示す一連のグラフである。５名の健康なドナーからヒト末梢血白血球（ＰＢＬ）調製物を単離し、５０ｎｇ／ｍＬ  ＩＬ−５の存在下で（下パネル）またはＩＬ−５なしで（上パネル）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体（灰色塗りの丸；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体（黒塗の三角；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１）またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体（白丸；アイソタイプ）抗体と共に１６時間インキュベートした。残余のＳＳＣｈｉＣＣＲ３＋好酸球をフローサイトメトリーにより定量化した。患者試料毎の抗体なし対照に対し正規化した残存好酸球の％としてデータを示す。３回の生物学的複製の平均を標準偏差と共に示す。４パラメータロジスティック非線形回帰モデルを使用したソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）において曲線適合を行った。ｘ軸の１０Ｘは、１０のｘ乗（例えば、１０−７、１０−６、１０−５等）を示す。
【００３７】
【図４−１】図４は、ＣＲＳｗＮＰ患者由来の血液試料中の好酸球における抗シグレック−８抗体の活性を示す一連のグラフである。ＣＲＳｗＮＰ患者からヒト末梢血白血球（ＰＢＬ）を単離した。５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−５の存在下で（下パネル）またはサイトカインなしで（上パネル）、細胞をＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体（灰色に塗りつぶした丸；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体（黒く塗りつぶした三角；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１）、ＩｇＧ４アイソタイプ対照（白丸；アイソタイプｈｌｇＧ４）またはＩｇＧ１アイソタイプ対照（白三角；アイソタイプｈｌｇＧ１）抗体と共に１６時間インキュベートした。残余のＳＳＣｈｉＣＣＲ３＋好酸球をフローサイトメトリーにより定量化した。患者試料毎の抗体なし対照に対し正規化した残存好酸球の％としてデータを示す。３回の生物学的複製の平均を標準偏差と共に示す。４パラメータロジスティック非線形回帰モデルを使用したソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）において曲線適合を行った。ｘ軸の１０Ｘは、１０のｘ乗（例えば、１０−７、１０−６、１０−５等）を示す。
【図４−２】図４は、ＣＲＳｗＮＰ患者由来の血液試料中の好酸球における抗シグレック−８抗体の活性を示す一連のグラフである。ＣＲＳｗＮＰ患者からヒト末梢血白血球（ＰＢＬ）を単離した。５０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−５の存在下で（下パネル）またはサイトカインなしで（上パネル）、細胞をＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体（灰色に塗りつぶした丸；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４）、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体（黒く塗りつぶした三角；ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１）、ＩｇＧ４アイソタイプ対照（白丸；アイソタイプｈｌｇＧ４）またはＩｇＧ１アイソタイプ対照（白三角；アイソタイプｈｌｇＧ１）抗体と共に１６時間インキュベートした。残余のＳＳＣｈｉＣＣＲ３＋好酸球をフローサイトメトリーにより定量化した。患者試料毎の抗体なし対照に対し正規化した残存好酸球の％としてデータを示す。３回の生物学的複製の平均を標準偏差と共に示す。４パラメータロジスティック非線形回帰モデルを使用したソフトウェアＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）において曲線適合を行った。ｘ軸の１０Ｘは、１０のｘ乗（例えば、１０−７、１０−６、１０−５等）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００３８】
Ｉ．定義
本発明に関して詳細に記載する前に、本発明が、当然ながら変動し得る特定の組成物または生命システムに限定されないことを理解されたい。本明細書で使用されている用語法が、特定の実施形態を記載することのみを目的としており、限定を目的としないことも理解されたい。本明細書および添付の特許請求の範囲において使用されている通り、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、内容がそれ以外を明らかに指示しない限り、複数の指示対象を含む。よって、例えば、「分子（ａ  ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」と言及される場合、２個またはそれを超える斯かる分子の組合せその他を任意選択で含む。
【００３９】
用語「約」は、本明細書において、本技術分野における当業者であれば容易に分かるそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書において「約」の値またはパラメータが言及される場合、該値またはパラメータそれ自体に指示される実施形態を含む（および記載する）。
【００４０】
本明細書に記載されている本発明の態様および実施形態が、態様および実施形態を「含む」、「からなる」および「から本質的になる」ことを含むことが理解される。
【００４１】
用語「抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ）および単鎖分子ならびに抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ）を含む。用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書において「抗体」と互換的に使用される。
【００４２】
基本的４鎖抗体単位は、２つの同一軽（Ｌ）鎖および２つの同一重（Ｈ）鎖で構成されたヘテロ四量体糖タンパク質である。ＩｇＭ抗体は、Ｊ鎖と呼ばれる追加的なポリペプチドと共に５個の基本的ヘテロ四量体単位からなり、１０個の抗原結合部位を含有するが、ＩｇＡ抗体は、Ｊ鎖と組み合わせた、重合して多価集合体を形成することができる２〜５個の基本的４鎖単位を含む。ＩｇＧの場合、４鎖単位は一般に、約１５０，０００ダルトンである。各Ｌ鎖は、１個の共有結合性ジスルフィド結合によってＨ鎖に連結される一方、２つのＨ鎖は、Ｈ鎖アイソタイプに応じて１個または複数のジスルフィド結合によって互いに連結される。各ＨおよびＬ鎖は、規則的に間隔をあけた鎖内ジスルフィド架橋も有する。各Ｈ鎖は、Ｎ末端において、可変ドメイン（ＶＨ）に続いて、αおよびγ鎖のそれぞれに対し３個の定常ドメイン（ＣＨ）、μおよびεアイソタイプに対し４個のＣＨドメインを有する。各Ｌ鎖は、Ｎ末端において可変ドメイン（ＶＬ）、続いてその他端に定常ドメインを有する。ＶＬは、ＶＨと整列され、ＣＬは、重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と整列される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖および重鎖可変ドメイン間の界面を形成すると考えられる。ＶＨおよびＶＬの対形成は共に、単一の抗原結合部位を形成する。異なるクラスの抗体の構造および特性に関して、例えば、Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第８版、Ｄａｎｉｅｌ  Ｐ．  Ｓｔｉｅｓ、Ａｂｂａ  Ｉ．  ＴｅｒｒおよびＴｒｉｓｔｒａｍ  Ｇ．  Ｐａｒｓｏｌｗ（編）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、Ｎｏｒｗａｌｋ、ＣＴ、１９９４年、７１頁、第６章を参照されたい。
【００４３】
いずれかの脊椎動物種由来のＬ鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパおよびラムダと呼ばれる明らかに異なる２型の一方に割り当てることができる。その重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラスまたはアイソタイプに割り当てることができる。それぞれα、δ、ε、γおよびμと命名された重鎖を有する５クラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在する。γおよびαクラスは、ＣＨ配列における相対的に軽微な差および機能に基づいてサブクラスへとさらに分割され、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと名付けられた複数の多型バリアントで存在することができ（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｅｆｒａｎｃ  ２００９年、ｍＡｂｓ、１巻、４号、１〜７頁において概説）、そのうちいずれかが、本発明における使用に適する。ヒト集団における共通アロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚによって命名されている。
【００４４】
「単離された」抗体は、その産生環境（例えば、天然または組換えによる）の構成成分から同定、分離および／または回収された抗体である。一部の実施形態において、単離されたポリペプチドは、その産生環境由来のあらゆる他の構成成分との関連を含まない。組換えトランスフェクト細胞に起因するもの等、その産生環境の夾雑構成成分は、抗体の研究、診断または治療的使用に典型的に干渉する材料であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性溶質を含むことができる。一部の実施形態において、ポリペプチドは、（１）例えば、ローリー方法によって決定される抗体の９５重量％超まで、一部の実施形態において、９９重量％超まで；（１）スピニングカップシークエネーターの使用により、Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルーもしくは銀染色を使用した非還元もしくは還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで精製される。単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも１種の構成成分が存在しないため、組換え細胞内のｉｎ  ｓｉｔｕの抗体を含む。しかし通常、単離されたポリペプチドまたは抗体は、少なくとも１回の精製ステップにより調製される。
【００４５】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書において、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体を指す、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量で存在し得る可能な天然起源の変異および／または翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除いて同一である。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において切断される。一部の実施形態において、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リシンを除去する。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５個のアミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において切断される。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に向けられている。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、複数の抗原部位に向けられている（二重特異性抗体または多特異性抗体等）。修飾語句「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られるという抗体の性状を示し、いずれか特定の方法による抗体の産生を要求するものと解釈するべきではない。例えば、本発明に従って使用するべきモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ方法、組換えＤＮＡ方法、ファージディスプレイ技術、およびヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全体を有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術を含む種々の技法によって作製することができる。
【００４６】
用語「裸の抗体」は、細胞傷害性部分または放射性標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。
【００４７】
用語「全長抗体」、「インタクト抗体」または「全抗体」は、抗体断片とは対照的に、その実質的にインタクトな形態の抗体を指すように互換的に使用される。特に、全抗体は、Ｆｃ領域を含む重および軽鎖を有する抗体を含む。定常ドメインは、ネイティブ配列定常ドメイン（例えば、ヒトネイティブ配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントとなり得る。場合によっては、インタクト抗体は、１種または複数のエフェクター機能を有することができる。
【００４８】
「抗体断片」は、インタクト抗体の一部、インタクト抗体の抗原結合および／または可変領域を含む。抗体断片の例として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８巻（１０号）：１０５７〜１０６２頁［１９９５年］を参照）；抗体断片から形成された単鎖抗体分子および多特異性抗体が挙げられる。
【００４９】
抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２個の同一抗原結合性断片と、容易に結晶化する能力を反映する命名であるところの、残余の「Ｆｃ」断片を産生する。Ｆａｂ断片は、一方の重鎖のＨ鎖可変領域ドメイン（ＶＨ）および第１の定常ドメイン（ＣＨ１）と共にＬ鎖全体からなる。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価である、すなわち、単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、単一の大型のＦ（ａｂ’）２断片を生じ、これは、異なる抗原結合活性を有し、依然として抗原を架橋することができる２個のジスルフィド結合したＦａｂ断片に大まかに相当する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１個または複数のシステインを含む数個の追加的な残基をＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に有するという点において、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における命名である。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は本来、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片のペアとして産生された。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
【００５０】
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一体に保持された両方のＨ鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、ある特定の種類の細胞上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）によって認識される領域でもあるＦｃ領域における配列によって決定される。
【００５１】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含有する最小抗体断片である。この断片は、緊密な非共有結合性会合した１個の重および１個の軽鎖可変領域ドメインの二量体からなる。これら２個のドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付与する６個の高頻度可変性ループ（それぞれＨおよびＬ鎖由来の３個のループ）を発する。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３個のＨＶＲのみを含むＦｖの半分）であっても、結合部位全体よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識および結合する能力を有する。
【００５２】
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」としても省略される「単鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖へと接続されたＶＨおよびＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。一部の実施形態において、ｓＦｖポリペプチドは、ＶＨおよびＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、これは、ｓＦｖが、抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする。ｓＦｖの概説に関しては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６９〜３１５頁（１９９４年）を参照されたい。
【００５３】
本発明の抗体の「機能断片」は、インタクト抗体の抗原結合もしくは可変領域を一般に含むインタクト抗体の部分、または修飾されたＦｃＲ結合能を保持もしくは有する抗体のＦｖ領域を含む。抗体断片の例として、抗体断片から形成された線状抗体、単鎖抗体分子および多特異性抗体が挙げられる。
【００５４】
本明細書におけるモノクローナル抗体は、重および／または軽鎖の部分が、特定の種に由来するまたは特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同であるが、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するまたは別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）と共に、所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、斯かる抗体の断片を特に含む（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８１巻：６８５１〜６８５５頁（１９８４年））。本明細書における目的のキメラ抗体は、ＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体を含み、この抗体の抗原結合領域は、例えば、目的の抗原でマカクザルを免疫化することによって産生された抗体に由来する。本明細書において、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして使用される。
【００５５】
「ヒト化」型の非ヒト（例えば、マウス）抗体は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含有するキメラ抗体である。一実施形態において、ヒト化抗体は、レシピエントのＨＶＲ由来の残基が、所望の特異性、親和性および／または能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）のＨＶＲ由来の残基に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。一部の事例において、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、相当する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に存在しない残基を含むことができる。これらの修飾を為して、結合親和性等、抗体性能をさらに精緻化することができる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１、典型的には２個の可変ドメインのうち実質的に全てを含み、それによると、高頻度可変性ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン配列のものに相当し、ＦＲ領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリン配列のものであるが、ＦＲ領域は、結合親和性、異性化、免疫原性等、抗体性能を改善する１個または複数の個々のＦＲ残基置換を含むことができるであろう。一部の実施形態において、ＦＲにおけるこれらのアミノ酸置換の数は、Ｈ鎖において６個以下であり、Ｌ鎖においては、３個以下である。ヒト化抗体は、典型的にはヒト免疫グロブリンの、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも部分も任意選択で含むであろう。さらなる詳細に関して、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁（１９８６年）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２９頁（１９８８年）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．２巻：５９３〜５９６頁（１９９２年）を参照されたい。例えば、ＶａｓｗａｎｉおよびＨａｍｉｌｔｏｎ、Ａｎｎ．  Ａｌｌｅｒｇｙ，  Ａｓｔｈｍａ  ＆  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１巻：１０５〜１１５頁（１９９８年）；Ｈａｒｒｉｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  ２３巻：１０３５〜１０３８頁（１９９５年）；ＨｕｒｌｅおよびＧｒｏｓｓ、Ｃｕｒｒ．  Ｏｐ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．５巻：４２８〜４３３頁（１９９４年）；ならびに米国特許第６，９８２，３２１号および同第７，０８７，４０９号も参照されたい。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、単一の抗原部位に向けられている。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、複数の抗原部位に向けられている。代替的ヒト化方法は、米国特許第７，９８１，８４３号および米国特許出願公開第２００６／０１３４０９８号に記載されている。
【００５６】
抗体の「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の重または軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖および軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」および「ＶＬ」と称することができる。これらのドメインは一般に、抗体の最も可変的な部分であり（同じクラスの他の抗体と比べて）、抗原結合部位を含有する。
【００５７】
用語「高頻度可変領域」、「ＨＶＲ」または「ＨＶ」は、本明細書において使用される場合、配列が高頻度可変性であるおよび／または構造的に定義されたループを形成する抗体可変ドメインの領域を指す。一般に、抗体は、６個のＨＶＲを含む；ＶＨにおける３個（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）およびＶＬにおける３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）。ネイティブ抗体において、Ｈ３およびＬ３は、６個のＨＶＲのうち最大の多様性を表示し、Ｈ３は特に、抗体への優れた特異性の付与において特有の役割を果たすと考えられる。例えば、Ｘｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １３巻：３７〜４５頁（２０００年）；ＪｏｈｎｓｏｎおよびＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２４８巻：１〜２５頁（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３年））を参照されたい。実際に、重鎖のみからなる天然起源のラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）抗体は、軽鎖の非存在下で機能的かつ安定的である。例えば、Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６３巻：４４６〜４４８頁（１９９３年）およびＳｈｅｒｉｆｆら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．３巻：７３３〜７３６頁（１９９６年）を参照されたい。
【００５８】
多数のＨＶＲの図解が使用されており、本明細書に包含される。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）であるＨＶＲは、配列可変性に基づき、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１年））。Ｃｈｏｔｈｉａ  ＨＶＲは、その代わりに、構造ループの位置を指す（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１〜９１７頁（１９８７年））。「Ｃｏｎｔａｃｔ」ＨＶＲは、利用できる複雑な結晶構造の解析に基づく。これらのＨＶＲのそれぞれに由来する残基を下に記す。
【表１】
2017507945.tif 000003
【００５９】
他に断りがなければ、可変ドメイン残基（ＨＶＲ残基およびフレームワーク領域残基）は、Ｋａｂａｔら（上掲）に従ってナンバリングする。
【００６０】
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されているＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
【００６１】
表現「Ｋａｂａｔにおける通りの可変ドメイン残基ナンバリング」または「Ｋａｂａｔにおける通りのアミノ酸位置ナンバリング」およびこれらの変種は、Ｋａｂａｔら（上掲）における抗体の編集の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリング方式を指す。このナンバリング方式を使用して、実際の線状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそれへの挿入に相当する、より少ないまたは追加的なアミノ酸を含有することができる。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）を、また、重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂおよび８２ｃ等）を含むことができる。残基のＫａｂａｔナンバリングは、「標準」Ｋａｂａｔナンバリングされた配列との抗体配列の相同性領域におけるアライメントにより、所定の抗体に対して決定することができる。
【００６２】
本明細書における目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬまたはＶＨフレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含むことができる、あるいは先在するアミノ酸配列変化を含有することができる。一部の実施形態において、先在するアミノ酸変化の数は、１０個もしくはそれに満たない、９個もしくはそれに満たない、８個もしくはそれに満たない、７個もしくはそれに満たない、６個もしくはそれに満たない、５個もしくはそれに満たない、４個もしくはそれに満たない、３個もしくはそれに満たないまたは２個もしくはそれに満たない。
【００６３】
参照ポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」は、配列を整列し、必要であればギャップを導入して、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮することなく、最大パーセント配列同一性を達成した後に、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアライメントは、当業者の技能範囲内の様々な仕方で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたる最大アライメントの達成に必要とされるいずれかのアルゴリズムを含む、配列の整列に適切なパラメータを決定することができる。例えば、所定のアミノ酸配列Ｂとの、これに関するまたはこれに対する所定のアミノ酸配列Ａの％アミノ酸配列同一性（あるいは、所定のアミノ酸配列Ｂと、これに関しまたはこれに対し、ある特定の％アミノ酸配列同一性を有するまたは含む所定のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、次の通りに計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
（式中、Ｘは、ＡおよびＢの該プログラムのアライメントにおける配列により同一マッチとしてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の総数である）。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ｂに対するＡの％アミノ酸配列同一性が、Ａに対するＢの％アミノ酸配列同一性に等しくならないことが認められよう。
【００６４】
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドにおけるエピトープ「に結合する」、「に特異的に結合する」または「に特異的な」抗体は、他のいかなるポリペプチドまたはポリペプチドエピトープにも実質的に結合することなく、この特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドにおけるエピトープに結合する抗体である。一部の実施形態において、無関係の非シグレック−８ポリペプチドへの本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）の結合は、本技術分野で公知の方法（例えば、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ））によって測定されるシグレック−８への抗体結合の約１０％未満である。一部の実施形態において、シグレック−８に結合する抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．７ｎＭ、≦０．６ｎＭ、≦０．５ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍまたはそれに満たない、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【００６５】
用語「抗シグレック−８抗体」または「ヒトシグレック−８に結合する抗体」は、無関係の非シグレック−８ポリペプチドの他のいずれかのポリペプチドまたはエピトープに実質的に結合することなく、ヒトシグレック−８のポリペプチドまたはエピトープに結合する抗体を指す。
【００６６】
用語「シグレック−８」は、本明細書において、ヒトシグレック−８タンパク質を指す。この用語は、スプライスバリアントまたはアレルバリアントを含むシグレック−８の天然起源のバリアントも含む。例示的なヒトシグレック−８のアミノ酸配列を配列番号７２に示す。別の例示的なヒトシグレック−８のアミノ酸配列を配列番号７３に示す。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８タンパク質は、免疫グロブリンＦｃ領域に融合されたヒトシグレック−８細胞外ドメインを含む。免疫グロブリンＦｃ領域に融合された例示的なヒトシグレック−８細胞外ドメインのアミノ酸配列を配列番号７４に示す。配列番号７４における下線を引いたアミノ酸配列は、シグレック−８  Ｆｃ融合タンパク質アミノ酸配列のＦｃ領域を示す。
【化１】
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【００６７】
「アポトーシスを誘導する」または「アポトーシス性」である抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡの断片化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞断片化および／または膜小胞の形成（アポトーシス小体と呼ばれる）等、標準アポトーシスアッセイによって決定されるプログラム細胞死を誘導する抗体である。例えば、本発明の抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）のアポトーシス活性は、アネキシンＶで細胞を染色することにより示すことができる。
【００６８】
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（ネイティブ配列Ｆｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指し、抗体アイソタイプにより変動する。抗体エフェクター機能の例として：Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方調節；およびＢ細胞活性化が挙げられる。
【００６９】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に結合した分泌されたＩｇが、これらの細胞傷害性エフェクター細胞を、抗原を有する標的細胞に特異的に結合させ、その後、細胞毒で標的細胞を死滅させることができる細胞傷害の形態を指す。抗体は、細胞傷害性細胞を「武装（ａｒｍ）」させ、この機構による標的細胞の死滅に必要とされる。ＡＤＣＣを媒介するための主な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．９巻：４５７〜９２頁（１９９１年）の４６４頁の表３に要約されている。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、ＡＤＣＣを増強する。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されているもの等、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを行うことができる。斯かるアッセイに有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。その代わりにまたはその上、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９５巻：６５２〜６５６頁（１９９８年）に開示されているもの等、動物モデルにおいて評価することができる。ＡＤＣＣ活性および他の抗体特性を変更する他のＦｃバリアントは、Ｇｈｅｔｉｅら、Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５巻：６３７〜４０頁、１９９７年；Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：５６３〜５６４頁、１９８８年；Ｌｕｎｄら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４７巻：２６５７〜２６６２頁、１９９１年；Ｌｕｎｄら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９巻：５３〜５９頁、１９９２年；Ａｌｅｇｒｅら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５７巻：１５３７〜１５４３頁、１９９４年；Ｈｕｔｃｈｉｎｓら、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２巻：１１９８０〜１１９８４頁、１９９５年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ．４４巻：１１１〜１１７頁、１９９５年；Ｌｕｎｄら、ＦＡＳＥＢ  Ｊ  ９巻：１１５〜１１９頁、１９９５年；Ｊｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ５４巻：１０１〜１０４頁、１９９６年；Ｌｕｎｄら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５７巻：４９６３〜４９６９頁、１９９６年；Ａｒｍｏｕｒら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２９巻：２６１３〜２６２４頁、１９９９年；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４巻：４１７８〜４１８４頁、２００；Ｒｅｄｄｙら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４巻：１９２５〜１９３３頁、２０００年；Ｘｕら、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２００巻：１６〜２６頁、２０００年；Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６巻：２５７１〜２５７５頁、２００１年；Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６巻：６５９１〜６６０４頁、２００１年；Ｊｅ��ｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｌｅｔｔ  ８２巻：５７〜６５頁．２００２年；Ｐｒｅｓｔａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  Ｔｒａｎｓ  ３０巻：４８７〜４９０頁、２００２年；Ｌａｚａｒら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  １０３巻：４００５〜４０１０頁、２００６年；米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８５，５７３号；同第５，６７７，４２５号；同第６，１６５，７４５号；同第６，２７７，３７５号；同第５，８６９，０４６号；同第６，１２１，０２２号；同第５，６２４，８２１号；同第５，６４８，２６０号；同第６，１９４，５５１号；同第６，７３７，０５６号；同第６，８２１，５０５号；同第６，２７７，３７５号；同第７，３３５，７４２号；および同第７，３１７，０９１号に開示されているものを含む。
【００７０】
本明細書における用語「Ｆｃ領域」は、ネイティブ配列Ｆｃ領域およびバリアントＦｃ領域を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用されている。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０の位置のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端に伸びるものと定義される。本発明の抗体における使用に適したネイティブ配列Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４を含む。単一のアミノ酸置換（ＫａｂａｔナンバリングによるＳ２２８Ｐ；ＩｇＧ４Ｐｒｏと命名）を導入して、組換えＩｇＧ４抗体において観察される異質性を消失させることができる。Ａｎｇａｌ，  Ｓ．ら（１９９３年）Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３０巻、１０５〜１０８頁を参照されたい。
【００７１】
「非フコシル化」または「フコース欠損」抗体は、Ｆｃ領域を含むグリコシル化抗体バリアントを指し、このＦｃ領域に付着した糖質構造は、低下したフコースを有するまたはフコースを欠如する。一部の実施形態において、フコースが低下したまたはフコースを欠如する抗体は、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。一部の実施形態において、非フコシル化またはフコース欠損抗体は、細胞株において産生される同じ抗体におけるフコースの量と比べて低下したフコースを有する。本明細書において企図される非フコシル化またはフコース欠損抗体組成物は、組成物における抗体のＦｃ領域に付着したＮ結合型グリカンの約５０％未満が、フコースを含む組成物である。
【００７２】
用語「フコシル化」または「フコシル化された」は、抗体のペプチド骨格に付着したオリゴ糖内のフコース残基の存在を指す。特に、フコシル化抗体は、例えば、ヒトＩｇＧ１  ＦｃドメインのＡｓｎ２９７位における（Ｆｃ領域残基のＥＵナンバリング）、抗体Ｆｃ領域に付着したＮ結合型オリゴ糖の一方または両方における最内側Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）残基にα（１，６）結合型フコースを含む。Ａｓｎ２９７は、免疫グロブリンにおける軽微な配列変種により、２９７位の上流または下流の約＋３アミノ酸に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもできる。
【００７３】
「フコシル化の程度」は、本技術分野で公知の方法によって、例えば、マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析（ＭＡＬＤＩ  ＴＯＦ  ＭＳ）によって評価されるＮ−グリコシダーゼＦ処理抗体組成物において同定された、全オリゴ糖と比べたフコシル化オリゴ糖のパーセンテージである。「完全にフコシル化された抗体」の組成物において、基本的に全オリゴ糖が、フコース残基を含む、すなわち、フコシル化されている。一部の実施形態において、完全にフコシル化された抗体の組成物は、少なくとも約９０％のフコシル化の程度を有する。したがって、斯かる組成物における個々の抗体は、典型的に、Ｆｃ領域における２個のＮ結合型オリゴ糖のそれぞれにフコース残基を含む。逆に、「完全非フコシル化」抗体の組成物において、基本的にいかなるオリゴ糖もフコシル化されておらず、斯かる組成物における個々の抗体は、Ｆｃ領域における２個のＮ結合型オリゴ糖のいずれにもフコース残基を含有しない。一部の実施形態において、完全非フコシル化抗体の組成物は、約１０％未満のフコシル化の程度を有する。「部分的にフコシル化された抗体」の組成物において、オリゴ糖の一部のみが、フコースを含む。組成物が、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖にフコース残基を欠如する基本的にあらゆる個々の抗体も、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の両方にフコース残基を含有する基本的にあらゆる個々の抗体も含まないのであれば、斯かる組成物における個々の抗体は、Ｆｃ領域におけるＮ結合型オリゴ糖の一方または両方にフコース残基を含むことができるまたはどちらにも含まない。一実施形態において、部分的にフコシル化された抗体の組成物は、約１０％〜約８０％（例えば、約５０％〜約８０％、約６０％〜約８０％または約７０％〜約８０％）のフコシル化の程度を有する。
【００７４】
本明細書における「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位およびその結合パートナー（例えば、抗原）の間の非共有結合性相互作用の強度を指す。一部の実施形態において、シグレック−８（本明細書に記載されているシグレック−８−Ｆｃ融合タンパク質等、二量体の場合がある）に対する抗体の結合親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載されている方法を含む、本技術分野で公知の一般的方法により測定することができる。
【００７５】
本明細書における「結合アビディティー」は、分子（例えば、抗体）の複数の結合部位およびその結合パートナー（例えば、抗原）の結合強度を指す。
【００７６】
本明細書における抗体をコードする「単離された」核酸分子は、同定され、これが産生された環境においてこれが通常関連する少なくとも１種の夾雑核酸分子から分離された核酸分子である。一部の実施形態において、単離された核酸は、産生環境と関連するあらゆる構成成分との関連を含まない。本明細書におけるポリペプチドおよび抗体をコードする単離された核酸分子は、これが天然に見出される形態または設定以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、本明細書において細胞中に天然に存在するポリペプチドおよび抗体をコードする核酸から区別される。
【００７７】
用語「医薬製剤」は、活性成分の生物学的活性が有効となることを可能にするような形態の、この製剤が投与される個体にとって容認し難い毒性がある追加的な構成成分を含有しない調製物を指す。斯かる製剤は無菌である。
【００７８】
本明細書における「担体」は、用いられている投薬量および濃度でこれに曝露される細胞または哺乳動物にとって無毒性の、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含む。多くの場合、生理的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理的に許容される担体の例として、リン酸塩、クエン酸塩および他の有機酸等のバッファー；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシン等のアミノ酸；グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む単糖、二糖および他の糖質；ＥＤＴＡ等のキレート剤；マンニトールまたはソルビトール等の糖アルコール；ナトリウム等の塩形成対イオン；および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【００７９】
本明細書において、用語「処置」は、臨床病理学の経過において処置されている個体または細胞の天然の経過を変更するように設計された臨床介入を指す。処置の望ましい効果は、疾患進行速度の減少、疾患状態の回復または緩和、および寛解または改善された予後を含む。例えば、障害（例えば、シグレック−８関連疾患）に関連する１種または複数の症状が、軽減または排除される場合、個体はうまく「処置」される。例えば、処置が、疾患に罹った個体のクオリティ・オブ・ライフの増加、疾患処置に必要とされる他の薬物療法の用量の減少、疾患再発の頻度の低下、疾患の重症度の低減、疾患の発症もしくは進行の遅延および／または個体の生存の延長をもたらす場合、個体はうまく「処置」される。
【００８０】
本明細書において、「と併せて」は、ある処置様式に加えた、別の処置様式の投与を指す。このようなものとして、「と併せて」は、個体へのある処置様式の投与の前、最中または後における、他の処置様式の投与を指す。
【００８１】
本明細書において、用語「予防」は、個体における疾患の発生または再発に関する予防法の提供を含む。個体は、障害の素因がある、障害になりやすいまたは障害発症リスクがある可能性があるが、未だ障害と診断されていない。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、障害（例えば、シグレック−８関連疾患）の発症を遅延させるために使用される。
【００８２】
本明細書において、障害（例えば、シグレック−８関連疾患）発症「リスクがある」個体は、検出可能な疾患または疾患症状を有していても有していなくてもよく、本明細書に記載されている処置方法に先立ち検出可能な疾患または疾患症状を呈していてもいなくてもよい。「リスクがある」は、個体が、本技術分野で公知の疾患（例えば、シグレック−８関連疾患）の発症と相関する測定可能なパラメータである１種または複数のリスク因子を有することを意味する。これらのリスク因子のうち１種または複数を有する個体は、これらのリスク因子の１種または複数がない個体よりも高い障害発症確率を有する。
【００８３】
「有効量」は、治療的または予防的結果を含む、所望のまたは表示の効果の達成に必要な投薬量および期間で、少なくとも有効な量を指す。有効量は、１回または複数の投与でもたらすことができる。「治療有効量」は、特定の障害の測定可能な改善をもたらすために要求される少なくとも最小濃度である。本明細書における治療有効量は、患者の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する抗体の能力等の因子に応じて変動し得る。治療有効量は、治療的に有益な効果が、抗体のいかなる毒性または有害効果も上回る量となることもできる。「予防有効量」は、所望の予防的結果の達成に必要な投薬量および期間で有効な量を指す。典型的には、ただし必然的にではなく、予防的用量は、疾患のより早期ステージにおいてまたはそれに先立ち個体において使用されるため、予防有効量は、治療有効量未満となり得る。
【００８４】
「慢性」投与は、延長された期間で初期治療効果（活性）を維持するために、急性様式とは対照的に継続的な様式での医薬（複数可）の投与を指す。「間欠的」投与は、中断することなく連続的に為されないが、周期性の性質の処置である。
【００８５】
本明細書において、「個体」または「被験体」は、哺乳動物である。処置目的のための「哺乳動物」は、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、スナネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコ等、ヒト、飼育動物および家畜、ならびに動物園、スポーツまたは愛玩動物を含む。一部の実施形態において、個体または被験体は、ヒトである。
【００８６】
ＩＩ．組成物および方法
Ａ．本発明の方法
個体におけるシグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。個体におけるシグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されているアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストまたはアゴニスト抗体）またはその組成物の有効量を投与するステップを含む方法も本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体（例えば、ヒト）は、シグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）と診断されている、またはシグレック−８関連疾患を発症するリスクがある。本明細書において、用語「シグレック−８関連疾患」は、シグレック−８発現細胞の増殖の増加（例えば、数の増加）または活性化に関連する疾患、障害または状態を指すことができる。シグレック−８発現細胞として、好酸球、好塩基球および肥満細胞が挙げられるがこれらに限定されない。本発明の製剤により処置することができるシグレック−８関連疾患の非限定例として、慢性副鼻腔炎、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎または鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎）、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴うアトピー性慢性副鼻腔炎または鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎）、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患または非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息が挙げられる。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は好酸球媒介性障害である。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、肥満細胞媒介性障害である。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、損なわれたＮＫ細胞機能に関連する疾患である（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患を有する個体は、損なわれたＮＫ細胞機能を有する。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患を有する個体は、損なわれたＮＫ細胞エフェクター機能（例えば、損なわれたＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性）を有する。
【００８７】
鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）（ＣＲＳｗＮＰ）は、アトピー性および非アトピー性個体の両方の鼻ポリープにおける肥満細胞浸潤および好酸球浸潤によって特徴付けられる（Ｒｕｈｎｏら、Ａｌｌｅｒｇｙ、４５巻：３７０〜３７４頁、１９９０年）。肥満細胞は、ＣＲＳｗＮＰにおける副鼻腔粘膜全体を通して見出すこともできる（Ｔａｋａｂａｙａｓｈｉら、２０１１年；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ｒｅｖ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：１６９頁、２００３年）。その上、末梢好酸球増加症は、ポリープ好酸球浸潤（Ｈｕら、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ、１２２巻（３号）：４９８〜５０３頁、２０１２年）および疾患重症度（Ｂｒｙｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ  Ａｌｌｉｅｄ  Ｓｃｉ．、２８巻（１号）：５５〜８頁、２００３年）に相関する。ＣＲＳｗＮＰ患者の約３０％は、慢性炎症調節に関与する局所的ＩｇＥレベル増加に関連する喘息を有する。Ｇｅｖｅａｒｔら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３１巻（１号）：１１０〜１１６頁、２０１２年を参照されたい。本明細書において、「慢性副鼻腔炎」または「ＣＲＳ」を有する個体は、鼻ポリープを含有してもしなくてもよい。ＣＲＳを有する成人（例えば、個体）は、次の症状のうち１種または複数を１２週間またはそれを超えて示すであろう：１）そのうち１種がａ）鼻の詰まり、閉塞もしくはうっ血またはｂ）前もしくは後鼻漏を伴う鼻汁のいずれかとなるべきである２種またはそれを超える症状によって特徴付けられる鼻部および副鼻腔の炎症；２）顔面痛または圧迫；または３）嗅覚低下または喪失。ＣＲＳを有する小児（例えば、個体）は、次の症状のうち１種または複数を１２週間またはそれを超えて示すであろう：１）そのうち１種がａ）鼻の詰まり、閉塞もしくはうっ血またはｂ）前もしくは後鼻漏を伴う鼻汁のいずれかとなるべきである２種またはそれを超える症状によって特徴付けられる鼻部および副鼻腔の炎症；２）顔面痛または圧迫、または３）咳。ＣＲＳの追加的な症状として、耳痛または耳圧、眩暈、口臭、歯痛、鼻の刺激、咽頭の刺激、喉頭の刺激、気管の刺激、発声障害、咳、傾眠、倦怠感、睡眠障害およびアスピリン感受性が挙げられるがこれらに限定されない。「鼻ポリポーシスを伴わないＣＲＳ」または「ＣＲＳｓＮＰ」を有する個体は、中鼻道に目に見えるポリープを持たない。「鼻ポリポーシスを伴うＣＲＳ」または「ＣＲＳｗＮＰ」を有する個体は、中鼻道に内視鏡により可視化される両側性ポリープを有する。副鼻腔外科手術を受けた個体は、外科手術６カ月を超えた後に、内視鏡検査においてポリープの存在が、敷石状粘膜とは対照的に両側性有茎性病変として見いだされた場合、ＣＲＳｗＮＰを有すると診断され得る。ＣＲＳを有する個体における内視鏡（Ｅｎｄｏｃｏｐｉｃ）所見は、ポリープ、粘液膿性漏出、浮腫／粘膜閉塞のうち１種または複数を含む。ＣＲＳを有する個体は、コンピュータ断層撮影によって評価された場合、中鼻道自然口ルート（ｏｓｔｅｏｍｅａｔａｌ  ｃｏｍｐｌｅｘ）および／または副鼻腔内に粘膜変化を有することもできる。数種類の因子が、ＣＲＳｓＮＰまたはＣＲＳｗＮＰに関連するこ���ができ、その例として、線毛機能障害（カルタゲナー（Ｋａｒａｔａｇｅｎｅｒ）症候群、原発性線毛運動不全または嚢胞性線維症を有する個体等）、アレルギー、喘息、アスピリン感受性、免疫無防備状態（ＨＩＶに感染した個体等）、ＣＲＳｓＮＰもしくはＣＲＳｗＮＰを有する遺伝的家族歴、妊娠、病原性細菌（メチシリン耐性Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）等）のバイオフィルム、喫煙、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉ感染、呑酸または骨炎が挙げられるがこれらに限定されない。Ｌｕｎｄら、Ｒｈｉｎｏｌｏｇｙ、追補２３巻：１〜２９９頁、２０１２年を参照されたい。一部の実施形態において、ＣＲＳｗＮＰを有する個体は、損なわれたＮＫ細胞機能を有する。一部の実施形態において、ＣＲＳｗＮＰを有する個体は、損なわれたＮＫ細胞エフェクター機能（例えば、損なわれたＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性）を有する。
【００８８】
ＣＲＳｓＮＰまたはＣＲＳｗＮＰを有する個体における処置に対する応答は、本技術分野で周知の方法によって評価することができる。Ｌｕｎｄら、Ｒｈｉｎｏｌｏｇｙ、追補２３巻：１〜２９９頁、２０１２年を参照されたい。例えば、ＣＲＳｓＮＰまたはＣＲＳｗＮＰを有する個体における症状の低下または改善は、Ｓｅｎｓｏｎｉｃｓ  Ｉｎｃ．の嗅覚識別検査のペンシルバニア大学嗅覚識別検査（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ  Ｓｍｅｌｌ  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ）（ＵＰＳＩＴ）等、検証された嗅覚鈍麻スコアリング方法論を使用した、嗅覚の改善となることができる。他の例示的なアッセイにおいて、Ｓｉｎｏ−Ｎａｓａｌ  Ｏｕｔｃｏｍｅ  Ｔｅｓｔ  ２０（ＳＮＯＴ−２０）および２２（ＳＮＯＴ−２２）は、副鼻腔状態（例えば、ＣＲＳ）における症状重症度および健康関連のＱｏＬの検証された患者報告による尺度である。簡潔に説明すると、ＳＮＯＴ−２２は、鼻をかむ必要；くしゃみ；鼻水鼻閉塞（ｒｕｎｎｙ  ｎｏｓｅ  ｎａｓａｌ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎ）；嗅覚または味覚の喪失；咳；後鼻漏（ｐｏｓｔ−ｎａｓａｌ  ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）；濃鼻汁（ｔｈｉｃｋ  ｎａｓａｌ  ｄｉｓｃｈａｒｇｅ）；耳閉感（ｅａｒ  ｆｕｌｌｎｅｓｓ）；眩暈；耳痛；顔面痛または圧迫；入眠障害（ｄｉｆｆｉｃｕｌｔｙ  ｆａｌｌｉｎｇ  ａｓｌｅｅｐ）；夜間に目を覚ます；良質な夜間睡眠がとれない；疲れて目を覚ます；疲労；生産性低下；集中低下；フラストレーション、不穏、易怒性；悲しみ；および困惑等、ＣＲＳ関連症状に関する２２個の質問を含有する。症状重症度は、ゼロから５にグレード分けされ、ゼロは、全く問題なしを示し、５は、最悪な可能な症状を示す。項目毎に、スコアが加えられて、ゼロから１１０に及ぶスケールの合計スコアが得られ、高スコアは、より大きい副鼻腔炎関連健康負担を示す。個体は、いずれの５項目が自身に最も重要であるかを同定するようにも求められる。アンケートの最後に、個体は、該２２症状に含まれていないいかなる症状があるか記述することができ、ここ２週間にわたり経験した症状を示すように個体に求める。Ｌａｎｇｅら、Ｄａｎ  Ｍｅｄ  Ｂｕｌ．、５８巻（２号）：１〜６頁、２０１１年を参照されたい。鼻漏および鼻うっ血の評価を含む追加的な成績尺度は、前検鼻法、鼻内視鏡検査、鼻細胞診、生検および細菌学、副鼻腔透視法、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）ならびに磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）と共に、鼻粘液線毛クリアランス（ｎａｓｏｍｕｃｏｃｉｌｉａｒｙ  ｃｌｅａｒａｎｃｅ）、線毛拍動頻度（ｃｉｌｉａｒｙ  ｂｅａｔ  ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）、一酸化窒素産生、ピーク鼻吸気流測定（ｐｅａｋ  ｎａｓａｌ  ｉｎｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｆｌｏｗ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ）（ＰＮＩＦ）、鼻腔通気度検査、音響鼻腔計測法（ａｃｏｕｓｔｉｃ  ｒｈｉｎｏｍｅｔｒｙ）、鼻腔体積測定法（ｒｈｉｎｏｓｔｅｒｅｏｍｅｔｒｙ）、嗅覚閾値検査およびアスピリン負荷等の追加的な評価または診断検査等、公知の方法論を使用することにより、本技術分野で公知である。例えば、ベースラインおよび本明細書に記載されている抗体またはアゴニストによる処置後に行われる鼻部および副���腔のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）ｘ線走査は、Ｌｕｎｄ−Ｍａｃｋａｙスコアリングシステムを使用することにより評価される。Ｌｕｎｄら、Ｒｈｉｎｏｌｏｇｙ、追補２３巻：１〜２９９頁、２０１２年；およびｖａｎ  Ｓｐｒｏｎｓｅｎら、Ａｌｌｅｒｇｙ、６３巻：８２０〜８３３頁、２００８年を参照されたい。
【００８９】
可逆性閉塞性気道疾患としても公知の喘息は、呼吸刺激物質および気管支収縮剤化学物質に対する気管気管支樹の応答性亢進によって特徴付けられ、自発的にまたは処置により可逆性である喘鳴、呼吸困難、胸部絞扼感および咳の発作を生じる。これは、気道全体に関与する慢性疾患であるが、時折の軽度一過性エピソードから重度慢性の生命に関わる気管支閉塞へと重症度が変動する。喘息発作の身体的兆候は、頻呼吸、聞き取れる喘鳴および呼吸副筋の使用を含む。末梢血および鼻分泌物における好酸球のレベル上昇と同様に、速い脈拍および血圧上昇も典型的に存在する。喘息およびアトピーは共存し得るが、喘息患者の約半数のみが、同様にアトピー性であり、さらにより少ないパーセンテージのアトピー患者が喘息も有する。しかし、喘息は、特に小児期において、非アトピー性個体よりも頻繁にアトピー性個体の間で起こるという点において、アトピーおよび喘息は、完全に無関係とは限らない。喘息はさらに、２種のサブグループ、外因性喘息および内因性喘息へと歴史的に分類されている。加えて、喘息は、気道の慢性炎症、異なる患者間の頻度で環境的トリガーに応答して変動する急性増悪に関与する。重症例において、気道の慢性リモデリングが起こり得る。
【００９０】
アレルギー性、アトピー性または免疫性喘息としても公知の外因性喘息は、通常、乳児期または小児期である年少期に喘息を一般に発症する患者の説明である。湿疹またはアレルギー性鼻炎を含むアトピーの他の症状発現が多くの場合共存する。喘息性発作は、花粉の季節において、動物の存在下で、またはハウスダスト、羽毛枕もしくは他のアレルゲンへの曝露下で起こり得る。皮膚検査は、原因となるアレルゲンに対する陽性膨疹・紅斑反応を示す。興味深いことに、血清総ＩｇＥ濃度は頻繁に上昇するが、正常の場合もある。非アレルギー性または特発性（ｉｄｏｐａｔｈｉｃ）喘息としても公知の内因性喘息は、典型的には、顕性呼吸感染後に成人期において最初に起こる。症状は、花粉の季節または他のアレルゲンへの曝露とは無関係な慢性または再発性気管支閉塞を含む。皮膚検査は、通常のアトピー性アレルゲンに対し陰性であり、血清ＩｇＥ濃度は正常である。追加的な症状は、痰血液および好酸球増加症を含む。本特許出願の目的のために、「好酸球媒介性障害」、「肥満細胞媒介性障害」、「シグレック−８関連疾患」、「付随する喘息を伴うＣＲＳｓＮＰ」または「付随する喘息を伴うＣＲＳｗＮＰ」は、アレルギー性および非アレルギー性喘息の両方を含む。喘息の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度の低下；および局所的または全身性ステロイドの必要の低下等、標準喘息スコアリングシステムを使用して評価することができる。
【００９１】
鼻ポリープは、鼻閉塞、鼻漏、後鼻漏および嗅覚喪失等の症状を引き起こし得る鼻腔、副鼻腔またはその両方における良性浮腫性腫瘤である。Ｇｅｖｅａｒｔら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３１巻（１号）：１１０〜１１６頁、２０１２年を参照されたい。鼻ポリポーシスは、鼻腔へと成長して飛び出す炎症組織によって特徴付けられる、上気道の慢性炎症性疾患であり、正確な病因は不明であるが、成人の１〜５％の間の有病率を有することが公知である（Ｓｅｔｔｉｐａｎｅ  Ｇ  Ａ：Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｎａｓａｌ  ｐｏｌｙｐｓ．、Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｐｒｏｃ、１９９６年、１７巻：２３１〜２３６頁）。鼻ポリポーシスは、典型的には、２０歳またはそれより年上の男性において呈し、鼻閉塞、嗅覚鈍麻および再発性感染を引き起こし、通年性アレルギー性鼻炎よりも有意に大きい影響をクオリティ・オブ・ライフに与える（Ｌｉら、Ｊ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ａｌｌｅｒｇｏｌ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９巻（４号）：２７６〜２８２頁、２００９年）。鼻ポリポーシスの全患者の最大３分の１が、喘息であると報告されるが、喘息患者の７％のみが、鼻ポリポーシスを有する。鼻ポリポーシスに関係付けられる優勢な細胞型は、鼻ポリープに浸潤することが示されてきた好酸球および肥満細胞を含む。（Ｒｕｈｎｏら、Ａｌｌｅｒｇｙ、４５巻：３７０〜３７４頁、１９９０年）および（Ｈｕら、Ｌａｒｙｎｇｏｓｃｏｐｅ、１２２巻（３号）：４９８〜５０３頁、２０１２年）を参照されたい。本明細書における一部の実施形態において、鼻ポリープのサイズの低下が評価される。鼻ポリープのサイズを評価する標準方法は、本技術分野で公知である。Ｇｅｖａｅｒｔら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３１巻（１号）：１１０〜１１６頁、２０１３年を参照されたい。例示的なアッセイにおいて、総鼻内視鏡ポリープスコア（ＴＰＳ）は、各来診の際の鼻内視鏡検査を用いて評価され、ポリープのサイズに基づきグレード分けされ、外鼻孔毎に０から４のスコアをもたらす。このスコアリングシステムを次に示す：スコア０は、ポリープなしを示す；１は、中鼻甲介（ｍｉｄｄｌｅ  ｔｕｒｂｉｎａｔｅ）の下縁の下に達しない中鼻道（ｍｉｄｄｌｅ  ｍｅａｔｕｓ）における小ポリープを表す；２は、中鼻甲介の下辺縁の下に達するポリープを表す；３は、下鼻甲介の下辺縁に達する大ポリープまたは中鼻甲介の内側にあるポリープを表す；４は、下鼻腔の完全閉塞の原因となる大ポリープを表す。ＴＰＳは、左および右外鼻孔スコアの和である（０から８のスケール）。ポリープを除去し、副鼻腔および鼻孔をきれいにするための外科的介入の必要の低下を評価することもできる。本明細書に記載されている方法の一部において、鼻ポリープにおける好酸球が枯渇される。
【００９２】
アスピリン増悪呼吸器疾患（ＡＥＲＤ）またはＳａｍｔｅｒの三徴候は、ほとんど致死的な喘息に強く関連する（Ｓｚｃｚｅｋｌｉｋら、Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｔｏ  Ａｓｐｉｒｉｎ  ａｎｄ  Ｎｏｎｓｔｅｒｏｉｄａｌ  Ａｎｔｉ−Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇｓ．  Ｉｎ：  Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ’ｓ  Ａｌｌｅｒｇｙ、第７版、Ｍｏｓｂｙ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ、１２２７〜１２４３頁、２００９年）。喘息に加えて、ＡＥＲＤ患者は、鼻ポリープを伴うＣＲＳを有し、アスピリンの経口摂取は、喘息および鼻炎発作の両方をもたらす。Ｂｅｒｇｅｓ−Ｇｉｍｅｎｅら、Ａｎｎ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ａｓｔｈｍａ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、８９巻：４７４〜４７８頁、２００２年を参照されたい。重篤かつ制御できないＣＲＳは、これらの患者における喘息の経過を悪化させる（Ｋｏｗａｌｓｋｉ  Ｍ．  Ｌ．、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｏｒｌｄａｌｌｅｒｇｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ／ａｌｌｅｒｇｉｃ＿ｄｉｓｅａｓｅｓ＿ｃｅｎｔｅｒ／ａｓｐｉｒｉｎ／、本来２００６年５月に投稿）。この疾患は、好酸球性喘息に関連し、多数の好酸球および肥満細胞の両方（総細胞の５０％を超える）を含有する鼻ポリープの成長によって特徴付けられるため、高度に好酸球性である。ＡＥＲＤは、呼吸粘膜全体への好酸球および肥満細胞の激しい浸潤によって特徴付けられ（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ｃｌｉｎ  Ｒｅｖ．  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４巻：１６９頁、２００３年）、これは、浸潤性気道リモデリングをもたらし得る（Ｓｔｅｉｎｋｅら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ．、２０１２年：１〜９頁、２０１２年）。ＡＥＲＤ患者におけるポリープは、アスピリン耐性ＣＲＳｗＮＰ患者と同様の組織学を示すが、さらにより顕著な肥満細胞および好酸球関与を示す。ＡＥＲＤにおける好酸球および肥満細胞浸潤は、激しいまたは「壊滅的」であると記載されている（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１８巻：７７３〜７８６頁、２００６年）。ＡＥＲＤは、喘息とは異なる自然経過による別個の疾患である考慮される。例えば、これは典型的には、小児喘息から発生しないが、典型的には３０代から４０代に鼻ポリポーシスを伴う重篤な持続性疾患としてｄｅ  ｎｏｖｏで生じる。ＡＥＲＤに見られるＩＬ−４およびシステイニルロイコトリエン（ＣｙｓＬＴ）のレベル上昇は、この疾患における肥満細胞および好酸球の両方の激しい浸潤に関係付けられており（Ｓｔｅｉｎｋｅら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ．、２０１２年：１〜９頁、２０１２年）、肥満細胞および好酸球の両方のアポトーシスの低下は、ポリープにおける両方の細胞型の高レベルに寄与する因子となることができる（Ｋｏｗａｌｓｋｉ  Ｍ．  Ｌ．、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｗｏｒｌｄａｌｌｅｒｇｙ．ｏｒｇ／ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ／ａｌｌｅｒｇｉｃ＿ｄｉｓｅａｓｅｓ＿ｃｅｎｔｅｒ／ａｓｐｉｒｉｎ／、本来２００６年５月に投稿）。本明細書における一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎を有する個体は、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する。
【００９３】
一部の個体は、喘息を処置するのが困難であり、抗炎症性処置にもかかわらず好酸球性気道炎症が持続する。この種類の喘息は、より重篤な喘息、高頻度増悪および肺機能喪失に関連し得る。喘息処置の困難の１種は、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息である。副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体は、永続的喀痰中好酸球増加症、遅発型の喘息を有し、アトピー性である場合が少なく、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して、より高い血中好酸球、より高いコンピュータ断層撮影副鼻腔スコアおよびより低いＦＥＶ１を有する。一部の個体は、上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）を有することもできる。永続的喀痰中好酸球増加症は、ベースラインおよびベースラインの５年間後における痰好酸球≧２％として定義される。ｖａｎ  Ｖｅｅｎら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２４巻（３号）：６１５６１７頁、２００９年を参照されたい。
【００９４】
ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）は、炎症性肺疾患の予防において重要な役割を果たすことが示されてきた細胞傷害性リンパ球である。ＮＫ細胞機能は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）として公知の気道の慢性炎症性障害において損なわれることが見いだされている。ＣＯＰＤは、完全に可逆的とは限らない進行性気流制限によって特徴付けられる疾患である。ＣＯＰＤの病理学的特徴は、慢性気管支炎、肺気腫および呼吸器細気管支炎を含む。中枢気道における炎症性応答は、慢性気管支炎として公知であり、定期的に痰を喀出する個体において臨床診断することができる。炎症性応答は、肺気腫として公知の状態である、肺胞等、肺における組織の破壊を引き起こし得る。ＣＯＰＤを診断する方法は、肺活量測定検査等、肺機能検査を含む。Ｐｒｉｅｔｏら、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１６３巻（７号）：１５７８〜８３頁、２００１年およびＦａｉｒｃｌｏｕｇｈら、Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ  （Ｌｏｎｄ）．、１１４巻（８号）：５３３〜４１頁、２００８年を参照されたい。さらに、ＮＫ細胞は、慢性副鼻腔炎（ＣＲＳ）を有する個体における病理学的特徴と考慮される好酸球性炎症を調節することができる。近年、損なわれたＮＫ細胞機能は、ＣＲＳを有する個体において見出され、これらの個体は、付随する喘息および末梢血好酸球増加症等、不良な予後因子に関連した。この種類のＣＲＳは、医学的および外科的治療法に対し不応性である。Ｋｉｍら、ＰＬｏＳ  ＯＮＥ．、８巻（１０号）：ｅ７７１７７頁、２０１３年を参照されたい。個体は、ＡＤＣＣ活性を媒介するＮＫ細胞におけるＦｃ受容体であるＣＤ１６における多型のため、変動するＮＫ細胞機能を有することができる。ＣＤ１６コード遺伝子ＦＣＧＲ３Ａは、ヌクレオチド５２６に一塩基多型（ＳＮＰ）を有し［チミジン（Ｔ）→グアニン（Ｇ）］、１５８位のアミノ酸におけるフェニルアラニン（Ｆ）からバリン（Ｖ）へのアミノ酸交換をもたらす。ヒトＩｇＧ１が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆアロタイプよりも効率的にＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖアロタイプを発現するＮＫ細胞に結合することが実証された。個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型（すなわち、ＣＤ１６の両方のアレルにおける１５８Ｖ）、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型（すなわち、ＣＤ１６の両方のアレルにおける１５８Ｆ）またはＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型（すなわち、ＣＤ１６の一方のアレルにおける１５８ＶおよびＣＤ１６の一方のアレルにおける１５８Ｆ）を有することができる。Ｋｏｅｎｅら、Ｂｌｏｏｄ．、９０巻（３号）：１１０９〜１４頁、１９９７年を参照されたい。
【００９５】
一部の実施形態において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体におけるシグレック−８関連疾患を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎である。本明細書における一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。本明細書における実施形態の一部において、シグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰおよび付随する喘息）を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。本明細書における実施形態の一部において、シグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰおよび付随する喘息）を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。本明細書における実施形態の一部において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能は、シグレック−８関連疾患がなく、等価なＣＤ１６遺伝子型を有する個体から得られる試料と比較して、シグレック−８関連疾患を有し、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体から得られる試料において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％低下される（例えば、ＮＫ細胞機能は、損なわれる）。
【００９６】
一部の実施形態において、個体における慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における実施形態の一部において、ＣＯＰＤを有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。本明細書における実施形態の一部において、ＣＯＰＤを有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。一部の実施形態において、ＣＯＰＤを有する個体における１種または複数の症状は、息切れ；喘鳴；胸部絞扼感、慢性の咳；痰産生；チアノーゼ、頻繁な呼吸器感染症；疲労；および体重減少からなる群より選択される。一部の実施形態において、個体は、損なわれたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能は、慢性閉塞性肺疾患がなく、等価なＣＤ１６遺伝子型を有する個体から得られる試料と比較して、慢性閉塞性肺疾患を有し、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体から得られる試料において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％低下される（例えば、ＮＫ細胞機能は、損なわれる）。
【００９７】
一部の実施形態において、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞機能が損なわれた個体における好酸球を枯渇させるための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における実施形態の一部において、個体は、シグレック−８関連疾患を有する。一部の実施形態において、シグレック−８関連疾患は、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎または慢性閉塞性肺疾患である。本明細書における実施形態の一部において、損なわれたＮＫ細胞機能は、損なわれたＮＫ細胞脱顆粒、損なわれたＮＫ細胞サイトカイン産生および損なわれたＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のうち１種または複数である。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｖ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｆ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体は、ＣＤ１６  １５８Ｖ／Ｆ遺伝子型を有する。一部の実施形態において、ＮＫ細胞機能は、シグレック−８関連疾患がなく、等価なＣＤ１６遺伝子型を有する個体から得られる試料と比較して、シグレック−８関連疾患を有し、ＮＫ細胞機能が損なわれた個体から得られる試料において少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％低下される（例えば、ＮＫ細胞機能は、損なわれる）。
【００９８】
本技術分野で公知であり本明細書に記載されている方法論およびアッセイは、本明細書に記載されているいずれかのシグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｓＮＰ、ＣＲＳｗＮＰ、ＡＥＲＤおよび副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息）または本明細書に記載されているシグレック−８関連疾患の症状の評価に使用することができる。
【００９９】
本明細書に提供される方法の一部の実施形態において、本方法は、シグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）であると個体（例えば、患者）を診断するステップ、処置のためにシグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を有する個体（例えば、患者）を選択するステップ、および／または個体（例えば、患者）が、シグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を有するか決定するステップをさらに含む。一部の実施形態において、本方法は、個体におけるシグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を処置または予防する前に、シグレック−８関連疾患であると個体を診断するステップ、処置のためにシグレック−８関連疾患を有する個体を選択するステップ、および／または個体が、シグレック−８関連疾患を有するか決定するステップをさらに含み、方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む。一部の実施形態において、本方法は、個体におけるシグレック−８関連疾患（例えば、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎）を処置または予防した後に、シグレック−８関連疾患であると個体を診断するステップ、処置のためにシグレック−８関連疾患を有する個体を選択するステップ、および／または個体が、シグレック−８関連疾患を有するか決定するステップをさらに含み、方法は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を投与するステップを含む。
【０１００】
一部の実施形態において、個体における鼻ポリポーシスを伴わない慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体における鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体における鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体における鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体における付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、個体における鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における実施形態の一部において、個体は、アスピリンに対し感受性である。本明細書における実施形態の一部において、慢性副鼻腔炎は、アスピリン増悪呼吸器疾患である。
【０１０１】
本明細書における実施形態の一部において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。本明細書における実施形態の一部において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳；傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における１種または複数の症状は、鼻をかむ必要；くしゃみ；鼻水鼻閉塞；嗅覚または味覚の喪失；咳；後鼻漏；濃鼻汁；耳閉感；眩暈；耳痛；顔面痛または圧迫；入眠障害；夜間に目を覚ます；良質な夜間睡眠がとれない；疲れて目を覚ます；疲労；生産性低下；集中低下；フラストレーション、不穏、易怒性；悲しみ；および困惑からなる群より選択される。本明細書における実施形態の一部において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される。本明細書における実施形態の一部において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、ＣＲＳｗＮＰを有する個体）における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、ＣＲＳｗＮＰを有する個体）における総鼻内視鏡ポリープスコアは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、ＣＲＳｗＮＰを有する個体）における鼻ポリープにおける好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、ＣＲＳｗＮＰを有する個体）における生体液（例えば、血液）における好酸球の量は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における一部の実施形態において、個体は、ヒトである。本明細書における実施形態の一部において、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。本明細書における実施形態の一部において、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。
【０１０２】
一部の実施形態において、個体におけるアスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。本明細書における実施形態の一部において、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。本明細書における実施形態の一部において、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）を有する個体における１種または複数の症状は、鼻部および副鼻腔の炎症；鼻の詰まり、閉塞またはうっ血；鼻ポリープ；前または後鼻漏を伴う鼻汁；顔面痛または圧迫；嗅覚低下または喪失；咳；耳痛；耳圧；眩暈；口臭；歯痛；鼻の刺激；咽頭の刺激；喉頭の刺激；気管の刺激；発声障害；咳、傾眠；倦怠感；睡眠障害；ならびにアスピリン感受性からなる群より選択される。本明細書における一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）に関連する症状は、鼻ポリポーシスである。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体）における鼻ポリープのサイズは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体）における総鼻内視鏡ポリープスコアは、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における実施形態の一部において、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される。一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。本明細書における一部の実施形態において、個体は、ヒトである。本明細書における一部の実施形態において、個体（例えば、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体）におけるアスピリンに対する感受性は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下される。本明細書における実施形態の一部において、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。本明細書における実施形態の一部において、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。
【０１０３】
一部の実施形態において、個体における副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための方法であって、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）またはアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の有効量を個体に投与するステップを含む方法が本明細書に提供される。本明細書における実施形態の一部において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。本明細書における実施形態の一部において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト）の投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される（例えば、参照値）。一部の実施形態において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状は、永続的喀痰中好酸球増加症、永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較してより高い血中好酸球、および永続的喀痰中好酸球増加症がない個体と比較して上昇したレベルの呼気中一酸化窒素（ＦｅＮＯ）からなる群より選択される。本明細書における一部の実施形態において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息に関連する症状は、永続的喀痰中好酸球増加症である。本明細書における実施形態の一部において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べて低下または改善される。一部の実施形態において、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における喘息の１種または複数の症状は、一秒量（ＦＥＶ１）；喘息増悪の頻度；および局所的または全身性ステロイドの必要からなる群より選択される。本明細書における一部の実施形態において、個体は、ヒトである。本明細書における実施形態の一部において、抗体は、抗体および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。本明細書における実施形態の一部において、アゴニストは、アゴニストおよび薬学的に許容される担体を含む医薬組成物中に存在する。
【０１０４】
本明細書において互換的に使用される用語「ベースライン」または「ベースライン値」は、治療法（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与前の、または治療法の投与の開始時における症状の測定値または特徴付けを指すことができる。本明細書において考慮されるシグレック−８関連疾患の症状の低下または改善を決定するために、ベースライン値は、参照値と比較することができる。本明細書において互換的に使用される用語「参照」または「参照値」は、治療法（例えば、抗シグレック−８抗体）の投与後の症状の測定値または特徴付けを指すことができる。参照値は、投薬レジメンもしくは処置サイクルの間にまたは投薬レジメンもしくは処置サイクルの完了時に、１回または複数回測定することができる。「参照値」は、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均値；中央値；平均的な値；またはベースライン値と比較される値となることができる。同様に、「ベースライン値」は、絶対値；相対値；上限および／または下限を有する値；値の範囲；平均値；中央値；平均的な値；または参照値と比較される値となることができる。参照値および／またはベースライン値は、１個体から、または異なる２個体から、または個体の群（例えば、２、３、４、５またはそれを超える個体の群）から得ることができる。例えば、シグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体は、個体におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与の前または開始時に測定される嗅覚の感覚またはレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に（例えば、参照値）、改善された嗅覚の感覚またはレベルを有することができる。別の例において、シグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体は、異なる個体におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与の前または開始時に測定される嗅覚の感覚またはレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に（例えば、参照値）、改善された嗅覚の感覚またはレベルを有することができる。さらに別の例において、シグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体は、個体の群におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与の前または開始時に測定される嗅覚の感覚またはレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に（例えば、参照値）、改善された嗅覚の感覚またはレベルを有することができる。別の例において、シグレック−８関連疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）を有する個体の群は、個体の群におけるヒトシグレック−８に結合する抗体の投与の前または開始時に測定される嗅覚の感覚またはレベル（例えば、ベースライン値）と比較して、ヒトシグレック−８に結合する抗体の投与後に（例えば、参照値）、改善された嗅覚の感覚またはレベルを有することができる。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、ベースライン値は、ヒトシグレック−８に結合する抗体で処置されていない、１個体から、異なる２個体から、または個体の群（例えば、２、３、４、５またはそれを超える個体の群）から得ることができる。
【０１０５】
本明細書において考慮される処置方法は、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物による、好酸球媒介性障害および／または肥満細胞媒介性障害の処置である。好酸球媒介性障害は、好酸球遊走、走化性、発生または顆粒化に関連する障害または疾患を含む。同様に、肥満細胞媒介性障害は、肥満細胞遊走、走化性、作製または顆粒化に関連する障害または疾患を含む。本発明の製剤で処置可能な好酸球媒介性障害および／または肥満細胞媒介性障害は、喘息、アレルギー性鼻炎、鼻ポリポーシス、アトピー性皮膚炎、慢性蕁麻疹、肥満細胞症、好酸球性白血病、好酸球増加症候群、慢性副鼻腔炎、鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎または鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎）、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎（例えば、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴うアトピー性慢性副鼻腔炎または鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎）、アスピリン増悪呼吸器疾患（例えば、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患または非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）ならびに副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を含む。本発明の製剤により処置できる好酸球媒介性障害および／または肥満細胞媒介性障害は、損なわれたＮＫ細胞機能（例えば、損なわれたＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性等、損なわれたＮＫ細胞エフェクター機能）に関連する疾患（例えば、ＣＲＳｗＮＰ）も含む。
【０１０６】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の枯渇または低下のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較して、被験体から得られる試料における好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇または低下させる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較して、被験体から得られる試料における好酸球（例えば、シグレック−８を発現する好酸球）の少なくとも約２０％を枯渇または低下させる。一部の実施形態において、好酸球の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における好酸球集団数を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における好酸球集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、好酸球の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における好酸球集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における好酸球集団数または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均好酸球集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料、鼻ポリポーシス試料等）である。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、組織試料（例えば、鼻ポリープ試料）における好酸球を枯渇させる。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞洗浄試料および鼻洗浄試料）である。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、生体液試料（例えば、血液試料）における好酸球を枯渇させる。本明細書における方法の一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。好酸球は、ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−３３、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−αおよびレプチン等が挙げられるがこれらに限定されない、サイトカインまたはホルモンにより活性化または感作することができる。本明細書における方法の一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、休止した好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、好酸球に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、炎症性メディエーターの好酸球産生を予防または低下させる。例示的な炎症性メディエーターとして、活性酸素種、顆粒タンパク��（例えば、好酸球カチオン性タンパク質、主要塩基性タンパク質、好酸球由来神経毒、好酸球ペルオキシダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、ＰＡＦ、ＰＧＥ１、ＰＧＥ２等）、酵素（例えば、エラスターゼ）、増殖因子（例えば、ＶＥＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−α、ＴＧＦ−β等）、ケモカイン（例えば、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ４、エオタキシン等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＴＮＦ−α等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０７】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、肥満細胞の枯渇または低下のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における肥満細胞集団数または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料、鼻ポリポーシス試料等）である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞洗浄試料および鼻洗浄試料）である。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量は、肥満細胞に対する抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または低下は、肥満細胞から産生される予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターの低下または予防である。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシン（ｃａｔｈｅｓｐｉｎ）Ｇ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０８】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、シグレック−８を発現する肥満細胞を枯渇させるために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与され、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によりシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較した場合に、被験体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％を枯渇させる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、処置前のベースラインレベルと比較した場合に、被験体から得られる試料におけるシグレック−８を発現する肥満細胞の少なくとも約２０％を枯渇させる。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または死滅は、抗体による処置後の被験体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体による処置前の被験体由来の試料における肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または死滅は、抗体による処置後の被験体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞集団数を、抗体処置なしの別の被験体由来の試料における肥満細胞集団数または抗体処置なしの被験体由来の試料における平均肥満細胞集団数と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料、鼻ポリポーシス試料等）である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞洗浄試料および鼻洗浄試料）である。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を改善するように操作された。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を改善するＦｃ領域における少なくとも１個のアミノ酸置換を含む。一部の実施形態において、抗体の重鎖の少なくとも１または２つは、フコシル化されていない。一部の実施形態において、肥満細胞の枯渇または死滅は、肥満細胞から産生される予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターの低下または予防である。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシンＧ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１０９】
一部の実施形態において、本明細書に記載されている個体は、肥満細胞媒介性活性の阻害のために、ヒトシグレック−８に結合する抗体もしくはアゴニストまたはその組成物の有効量を投与される。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞媒介性活性を、抗体またはアゴニストによる処置前の個体由来の試料における肥満細胞媒介性活性と比較することにより測定される。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、抗体またはアゴニストによる処置後の個体由来の試料（例えば、組織試料または生体液試料）における肥満細胞媒介性活性を、抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの別の個体由来の試料における肥満細胞媒介性活性または抗体処置もしくはアゴニスト処置なしの個体由来の試料における平均肥満細胞媒介性活性と比較することにより測定される。一部の実施形態において、試料は、組織試料（例えば、皮膚試料、肺試料、骨髄試料、鼻ポリポーシス試料等）である。一部の実施形態において、試料は、生体液試料（例えば、血液試料、気管支肺胞洗浄試料および鼻洗浄試料）である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、肥満細胞脱顆粒の阻害である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、気道平滑筋収縮の阻害である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、肥満細胞におけるカルシウムフラックスの阻害である。一部の実施形態において、肥満細胞媒介性活性の阻害は、肥満細胞からの予め形成または新たに形成された炎症性メディエーターの放出の阻害である。例示的な炎症性メディエーターとして、ヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミン、酵素（例えば、トリプターゼ、キマーゼ、カテプシンＧ、カルボキシペプチダーゼ等）、脂質メディエーター（例えば、プロスタグランジンＤ２、プロスタグランジンＥ２、ロイコトリエンＢ４、ロイコトリエンＣ４、血小板活性化因子、１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２等）、ケモカイン（例えば、ＣＣＬ２、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ１１（すなわち、エオタキシン）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２、ＣＸＣＬ３、ＣＸＣＬ１０等）およびサイトカイン（例えば、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−３３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ等）が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１１０】
疾患の予防または処置のために、活性薬剤の適切な投薬量は、上に定義されている処置しようとする疾患の種類、疾患の重症度および経過、予防または治療目的のいずれのために薬剤が投与されるか、以前の治療法、個体の臨床歴および薬剤に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。薬剤は、一度にまたは一連の処置にわたって個体に適宜投与される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストの投与間の間隔は、約１カ月間またはそれより長い。一部の実施形態において、投与間の間隔は、約２カ月間、約３カ月間、約４カ月間、約５カ月間、約６カ月間またはそれより長い。本明細書において、投与間の間隔は、抗体またはアゴニストの１投与と、抗体またはアゴニストの次の投与との間の期間を指す。本明細書において、約１カ月間の間隔は、４週間を含む。したがって、一部の実施形態において、投与間の間隔は、約４週間、約５週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、約１１週間、約１２週間、約１６週間、約２０週間、約２４週間またはそれより長い。一部の実施形態において、処置は、抗体またはアゴニストの複数投与を含み、投与間の間隔は、変動し得る。例えば、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態において、第１の投与と第２の投与との間の間隔は、約１ヶ月間であり、第２の投与と第３の投与との間の間隔は、約２ヶ月間であり、その後の投与間の間隔は、約３ヶ月間である。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、平坦な用量で投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．１ｍｇ〜約１８００ｍｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストは、用量当たり０．１ｍｇ、０．５ｍｇ、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、３０ｍｇ、４０ｍｇ、５０ｍｇ、６０ｍｇ、７０ｍｇ、８０ｍｇ、９０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、５００ｍｇ、５５０ｍｇ、６００ｍｇ、６５０ｍｇ、７００ｍｇ、７５０ｍｇ、８００ｍｇ、８５０ｍｇ、９００ｍｇ、９５０ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、１２００ｍｇ、１３００ｍｇ、１４００ｍｇ、１５００ｍｇ、１６００ｍｇ、１７００ｍｇおよび１８００ｍｇのほぼいずれかの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約１５０ｍｇ〜約４５０ｍｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストは、用量当たり１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇおよび４５０ｍｇのほぼいずれかの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、用量当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で個体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１．０ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの投薬量で被験体に投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、約０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、４．５ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、５．５ｍｇ／ｋｇ、６．０ｍｇ／ｋｇ、６．５ｍｇ／ｋｇ、７．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、８．０ｍｇ／ｋｇ、８．５ｍｇ／ｋｇ、９．０ｍｇ／ｋｇ、９．５ｍｇ／ｋｇまたは１０．０ｍｇ／ｋｇのいずれかの投薬量で被験体に投与される。上述の投薬頻度のいずれかを使用することができる。上述のいずれかの投薬頻度は、本明細書に記載されている方法または組成物の使用において使用することができる。本明細書に記載されている抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストによる処置の有効性は、１週間毎〜３カ月間毎に及ぶ間隔で、本明細書に記載されている方法論またはアッセイのいずれかを使用して評価することができる。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、処置の有効性（例えば、１種または複数の症状の低下または改善）は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、約１カ月間毎に、約２カ月間毎に、約３カ月間毎に、約４カ月間毎に、約５カ月間毎に、約６カ月間毎にまたはそれより長い間隔で評価される。本明細書に記載されている方法の一部の実施形態において、処置の有効性（例えば、１種または複数の症状の低下または改善）は、約１週間毎に、約２週間毎に、約３週間毎に、約４週間毎に、約５週間毎に、約６週間毎に、約７週間毎に、約８週間毎に、約９週間毎に、約１０週間毎に、約１１週間毎に、約１２週間毎に、約１６週間毎に、約２０週間毎に、約２４週間毎にまたはそれより長い間隔で評価される。
【０１１１】
シグレック−８のアゴニスト
一態様において、本発明は、本明細書における方法のいずれかにおける使用のためのアゴニストを提供する。一部の実施形態において、アゴニストは、好酸球において発現されるシグレック−８に結合し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏにおける好酸球のアポトーシスを誘導する薬剤である。一部の実施形態において、アゴニストは、アゴニスト抗体である。一部の実施形態において、アゴニスト抗体（例えば、本明細書に提供される抗体２Ｅ２）は、好酸球によって発現されるシグレック−８に架橋し、好酸球における１種または複数のカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびカスパーゼ−９）の活性化および／またはミトコンドリア膜電位の喪失を誘導する。Ｎｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年を参照されたい。シグレック−８は、グリカン６’−スルホ−シアリルルイスＸ（本明細書において、６’−スルホ−ｓＬｅＸとも称される）に結合し、このグリカンへの会合は、シグレック−８発現細胞（例えば、好酸球）のアポトーシスを誘導する。Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．、３３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年を参照されたい。本明細書における一部の実施形態において、シグレック−８のアゴニストは、分子（例えば、ポリマー、オリゴ糖、ポリペプチド、糖タンパク質等）に付着または連結された６’−スルホ−ｓＬｅＸを有する分子である。本明細書における一部の実施形態において、アゴニストは、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニスト分子（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有オリゴ糖、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有ポリペプチドおよび６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖タンパク質）である。
【０１１２】
アゴニストは、種々の供給源、例えば、細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物の混合物から同定することができる。斯かるアゴニストは、グリカン６’−スルホ−ｓＬｅＸを含有し、シグレック−８に結合する天然または修飾された基質、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチド、ポリペプチドまたは抗体となることができる、あるいはこれらの構造または機能的模倣物となることができる。グリカン６’−スルホ−ｓＬｅＸを含有する斯かる天然または修飾された基質、リガンド、受容体、オリゴヌクレオチドまたは抗体の構造または機能的模倣物は、本明細書において、「６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖模倣物（ｇｌｙｃｏｍｉｍｅｔｉｃ）」と称される。Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １巻（２号）：第５章、１９９１年を参照されたい。例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有糖模倣物は、シグレック−８の天然リガンドの活性を構造または機能的に模倣する６’−スルホ−ｓＬｅＸで装飾された合成ポリマーに基づくリガンドとなることができる。例えば、本明細書で考慮される糖模倣物に関する、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．、３３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年を参照されたい。潜在的アゴニストの他の例として、抗体、あるいは一部の事例において、シグレック−８の天然リガンドに密接に関係したオリゴヌクレオチドもしくはポリペプチドまたはシグレック−８に結合する小分子が挙げられる。シグレック−８に結合する特定の多糖リガンド（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド）のコンフォメーションおよび望ましい特色を模倣し、好ましくは、目的の元の多糖リガンド（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有リガンド）の少なくとも一部の望ましくない特色（低い結合親和性、短いｉｎ  ｖｉｖｏ半減期その他等）を回避する合成化合物は、本明細書において、「模倣物」と称される。例えば、本明細書で考慮される模倣物に関する、米国特許第８，１７８，５１２号を参照されたい。
【０１１３】
一部の態様において、本明細書に記載されているヒトシグレック−８に結合するアゴニスト（例えば、６’−スルホ−ｓＬｅＸ含有アゴニストまたは抗体）は、好酸球のアポトーシスを誘導する。好酸球のアポトーシスは、本技術分野で周知の方法によって評価することができる。Ｈｕｄｓｏｎら、Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．、３３０巻（２号）：６０８〜１２頁、２００９年およびＮｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年を参照されたい。例えば、ヒト好酸球は、末梢血から単離され、精製され、ＩＬ−５において２４または７２時間培養され、続いてヒトシグレック−８に結合するアゴニストと共にさらに２４時間インキュベーションされる。次に、アネキシン−Ｖおよびヨウ化プロピジウムで標識した後に、フローサイトメトリー解析により細胞生存を評価する。アゴニスト活性は、好酸球におけるカスパーゼ（例えば、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびカスパーゼ−９）の活性化および／または好酸球におけるミトコンドリア膜電位の喪失を検出することにより使用して評価することもできる。これらのアッセイは、Ｎｕｔｋｕら、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．、３３６巻：９１８〜９２４頁、２００５年に記載されている。
【０１１４】
抗体
一態様において、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する単離された抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合するアゴニスト抗体）を提供する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、次の特徴のうち１種または複数を有する：（１）ヒトシグレック−８に結合する；（２）ヒトシグレック−８の細胞外ドメインに結合する；（３）マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高い親和性でヒトシグレック−８に結合する；（４）マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも高いアビディティーでヒトシグレック−８に結合する；（５）熱シフトアッセイにおいて約７０℃〜７２℃またはそれより高いＴｍを有する；（６）低下した程度のフコシル化を有するかまたはフコシル化されていない；（７）好酸球上に発現されたヒトシグレック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する；（８）肥満細胞上に発現されたヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞を枯渇させる；（９）肥満細胞上に発現されたヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞のＦｃεＲＩ依存性活性（例えば、ヒスタミン放出、ＰＧＤ２放出、Ｃａ２＋フラックスおよび／またはβ−ヘキソサミニダーゼ放出等）を阻害する；（１０）ＡＤＣＣ活性を改善するように操作された；（１１）鼻ポリープ中の好酸球において発現されるヒトシグレック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する；および（１２）血液中の好酸球において発現されるヒトシグレック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。
【０１１５】
一態様において、本発明は、ヒトシグレック−８に結合する抗体を提供する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８は、配列番号７２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、好酸球上に発現されるヒトシグレック−８に結合し、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞を枯渇させる。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体は、肥満細胞上に発現されるヒトシグレック−８に結合し、肥満細胞媒介性活性を阻害する。
【０１１６】
一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、モノクローナル抗体である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、抗体断片（抗原結合性断片を含む）、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖまたは（Ｆａｂ’）２断片である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、キメラ、ヒト化またはヒト抗体である。一態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体のいずれかは、精製されている。
【０１１７】
一態様において、シグレック−８に結合するマウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と競合する抗シグレック−８抗体が提供される。マウス２Ｅ２抗体およびマウス２Ｃ４抗体と同じエピトープに結合する抗シグレック−８抗体も提供される。シグレック−８に対するマウス抗体、２Ｅ２および２Ｃ４抗体は、米国特許第８，２０７，３０５号；米国特許第８，１９７，８１１号、米国特許第７，８７１，６１２号および米国特許第７，５５７，１９１号に記載されている。
【０１１８】
一態様において、シグレック−８への結合に関して本明細書に記載されているいずれかの抗シグレック−８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１）と競合する抗シグレック−８抗体が提供される。本明細書に記載されているいずれかの抗シグレック−８抗体（例えば、ＨＥＫＡ、ＨＥＫＦ、１Ｃ３、１Ｈ１０、４Ｆ１１）と同じエピトープに結合する抗シグレック−８抗体も提供される。
【０１１９】
本発明の一態様において、抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドが提供される。ある特定の実施形態において、抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。ある特定の実施形態において、斯かるベクターを含む宿主細胞が提供される。本発明の別の態様において、抗シグレック−８抗体または抗シグレック−８抗体をコードするポリヌクレオチドを含む組成物が提供される。ある特定の実施形態において、本発明の組成物は、本明細書に列挙されているもの等、好酸球媒介性障害、肥満細胞媒介性障害および／またはシグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）の処置のための医薬製剤である。
【０１２０】
一態様において、マウス抗体２Ｃ４のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体２Ｅ２のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲである。
【０１２１】
一態様において、マウス抗体１Ｃ３のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体４Ｆ１１のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、マウス抗体１Ｈ１０のＨＶＲ配列のうち１、２、３、４、５または６個を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ  ＣＤＲまたはＣｈｏｔｈｉａ  ＣＤＲである。
【０１２２】
一態様において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する単離された抗シグレック−８抗体が本明細書に提供される。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒトシグレック−８のドメイン１におけるエピトープに結合する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒトシグレック−８のドメイン３におけるエピトープに結合する。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体またはヒト抗体である。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、マウス抗体である。一部の実施形態において、ヒトシグレック−８および非ヒト霊長類シグレック−８に結合する抗体は、ヒトＩｇＧ１抗体である。
【０１２３】
一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１２４】
一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１２５】
一態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１２６】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含み、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１２７】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１２８】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１２９】
別の態様において、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗シグレック−８抗体であって、重鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２および（ｉｉｉ）配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、かつ／または軽鎖可変領域が、（ｉ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２および（ｉｉｉ）配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１３０】
本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、この抗体が、ヒトシグレック−８に結合する能力を保持するのであれば、いかなる適したフレームワーク可変ドメイン配列を含むこともできる。本明細書において、重鎖フレームワーク領域は、「ＨＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と命名され、軽鎖フレームワーク領域は、「ＬＣ−ＦＲ１〜ＦＲ４」と命名される。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号２６、３４、３８および４５の重鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＨＣ−ＦＲ１、ＨＣ−ＦＲ２、ＨＣ−ＦＲ３およびＨＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号４８、５１、５５および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号４８、５１、５８および６０の軽鎖可変ドメインフレームワーク配列（それぞれＬＣ−ＦＲ１、ＬＣ−ＦＲ２、ＬＣ−ＦＲ３およびＬＣ−ＦＲ４）を含む。
【０１３１】
一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）および配列番号４５または４６（ＨＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６３のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む重鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＨＣ−ＦＲ１〜ＨＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号２６〜２９（ＨＣ−ＦＲ１）、配列番号３１〜３６（ＨＣ−ＦＲ２）、配列番号３８〜４３（ＨＣ−ＦＲ３）および配列番号４５または４６（ＨＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｈ１は、配列番号６１のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ２は、配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｈ３は、配列番号６７〜７０から選択されるアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）および配列番号６０（ＬＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号６６のアミノ酸配列を含む。一実施形態において、抗シグレック−８抗体は、フレームワーク配列および高頻度可変領域を含む軽鎖可変ドメインを含み、フレームワーク配列は、ＬＣ−ＦＲ１〜ＬＣ−ＦＲ４配列、それぞれ配列番号４８または４９（ＬＣ−ＦＲ１）、配列番号５１〜５３（ＬＣ−ＦＲ２）、配列番号５５〜５８（ＬＣ−ＦＲ３）および配列番号６０（ＬＣ−ＦＲ４）を含み、ＨＶＲ−Ｌ１は、配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ２は、配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＨＶＲ−Ｌ３は、配列番号７１のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号２〜１０から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６〜２２から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号１１〜１４から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２３または２４から選択されるアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。これらの抗体の一実施形態において、重鎖可変ドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変ドメインは、配列番号２１のアミノ酸配列を含む。
【０１３２】
一部の実施形態において、重鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化２】
2017507945.tif 000005
【０１３３】
一部の実施形態において、重鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化３】
2017507945.tif 000006
【０１３４】
一部の実施形態において、重鎖ＦＲ配列は、次のものを含む：
【化４】
2017507945.tif 000007
【０１３５】
一部の実施形態において、軽鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化５】
2017507945.tif 000008
【０１３６】
一部の実施形態において、軽鎖ＨＶＲ配列は、次のものを含む：
【化６】
2017507945.tif 000009
【０１３７】
一部の実施形態において、軽鎖ＦＲ配列は、次のものを含む：
【化７】
2017507945.tif 000010
【０１３８】
一部の実施形態において、ヒトシグレック−８に結合する抗シグレック−８抗体（例えば、ヒト化抗シグレック−８抗体）であって、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗体であり、
（ａ）
（１）配列番号２６〜２９から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
（３）配列番号３１〜３６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
（５）配列番号３８〜４３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３および
（７）配列番号４５〜４６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣ−ＦＲ４
を含む重鎖可変ドメイン
および／または
（ｂ）
（１）配列番号４８〜４９から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ１、
（２）配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
（３）配列番号５１〜５３から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ２、
（４）配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
（５）配列番号５５〜５８から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ３、
（６）配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３および
（７）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＬＣ−ＦＲ４
を含む軽鎖可変ドメイン
を含む抗体が本明細書において提供される。
【０１３９】
一態様において、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号２〜１０から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６〜２２から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１１〜１４から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号２３もしくは２４から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１６もしくは２１から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。
【０１４０】
一態様において、配列番号１０６〜１０８から選択される重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９〜１１１から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０６の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１０９の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０７の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１０の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一態様において、配列番号１０８の重鎖可変ドメインを含む、かつ／または配列番号１１１の軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。
【０１４１】
一部の実施形態において、配列番号２〜１４から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、配列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入または欠失を含有するが、このアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトシグレック−８に結合する能力を保持する。一部の実施形態において、置換、挿入または欠失（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１０６〜１０８から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１４２】
一部の実施形態において、配列番号１６〜２４から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％配列同一性を有するアミノ酸配列は、参照配列と比べて置換、挿入または欠失を含有するが、このアミノ酸配列を含む抗体は、ヒトシグレック−８に結合する能力を保持する。一部の実施形態において、置換、挿入または欠失（例えば、１、２、３、４または５アミノ酸）は、ＨＶＲの外側の領域（すなわち、ＦＲ）において生じる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１６または２１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号１０９〜１１１から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを含む。
【０１４３】
一態様において、本発明は、（ａ）表２に示すＶＨ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＨ  ＨＶＲおよび／または（ｂ）表２に示すＶＬ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＬ  ＨＶＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。
【０１４４】
一態様において、本発明は、（ａ）表５に示すＶＨ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＨ  ＨＶＲおよび／または（ｂ）表５に示すＶＬ  ＨＶＲから選択される１、２もしくは３個のＶＬ  ＨＶＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。
【０１４５】
一態様において、本発明は、（ａ）表３に示すＶＨ  ＦＲから選択される１、２、３もしくは４個のＶＨ  ＦＲおよび／または（ｂ）表３に示すＶＬ  ＦＲから選択される１、２、３もしくは４個のＶＬ  ＦＲを含む抗シグレック−８抗体を提供する。
【０１４６】
一部の実施形態において、表４に示す抗体、例えば、ＨＡＫＡ抗体、ＨＡＫＢ抗体、ＨＡＫＣ抗体等の重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインを含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。
【表２】
2017507945.tif 000011
【表３−１】
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【表３−２】
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【表３−３】
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【表４−１】
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【表４−２】
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【表４−３】
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【表４−４】
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【表４−５】
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【表５−１】
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【０１４７】
それぞれα、δ、ε、γおよびμと命名された重鎖を有する５クラスの免疫グロブリン：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭが存在する。γおよびαクラスは、サブクラスにさらに分けられ、例えば、ヒトは、次のサブクラスを発現する：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２。ＩｇＧ１抗体は、アロタイプと命名される複数の多型バリアントで存在することができ（ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｅｆｒａｎｃ  ２００９年、ｍＡｂｓ  １巻、４号１〜７頁において概説）、そのうちいずれかが、本明細書における実施形態の一部における使用に適する。ヒト集団における共通アロタイプバリアントは、文字ａ、ｆ、ｎ、ｚまたはこれらの組合せによって命名されるバリアントである。本明細書における実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む重鎖Ｆｃ領域を含むことができる。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ領域は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔにおける通りのＥＵインデックスに従ってナンバリングされる。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ１は、配列番号７８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態において、ヒトＩｇＧ４は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む。
【０１４８】
一部の実施形態において、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６もしくは７７から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗シグレック−８抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖、および／または配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖を含むことができる。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、肥満細胞を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、活性化された好酸球を枯渇させ、肥満細胞活性化を阻害する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、活性化された好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、休止した好酸球のアポトーシスを誘導する。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、組織（例えば、鼻ポリープ）における好酸球を枯渇させる。本明細書における一部の実施形態において、抗体は、生体液（例えば、血液）における好酸球を枯渇させる。
【０１４９】
１．抗体親和性
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４と比較した場合に、ほぼ同じもしくはより高い親和性および／またはより高いアビディティーでヒトシグレック−８に結合する。ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗シグレック−８抗体は、≦１μＭ、≦１５０ｎＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭまたは≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍまたはそれに満たない、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、マウス抗体２Ｅ２および／またはマウス抗体２Ｃ４よりも約１．５倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍または約１０倍高い親和性で、ヒトシグレック−８に結合する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
【０１５０】
一実施形態において、抗シグレック−８抗体の結合親和性は、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、固定化された抗原ＣＭ５チップにより約１０の応答単位（ＲＵ）で２５℃にてＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−２０００またはＢＩＡｃｏｒｅ（商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用することにより測定することができる。簡潔に説明すると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｉｎｃ．）は、供給元の説明書に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により活性化される。捕捉抗体（例えば、抗ヒト−Ｆｃ）は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８で希釈され、その後、流速３０μｌ／分で注射し、抗シグレック−８抗体でさらに固定化する。動態測定のため、二量体シグレック−８の２倍系列希釈を、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ（ＰＢＳＴ）において２５℃、流速およそ２５μｌ／分で注射する。会合および解離センサーグラムを同時に適合することにより、単純１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）評価ソフトウェアバージョン３．２）を使用して、会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ，  Ｙ．ら（１９９９年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．２９３巻：８６５〜８８１頁を参照されたい。
【０１５１】
別の実施形態において、バイオレイヤーインターフェロメトリーを使用して、シグレック−８に対する抗シグレック−８抗体の親和性を決定することができる。例示的なアッセイにおいて、シグレック−８−Ｆｃタグ付けタンパク質は、抗ヒト捕捉センサー上に固定化され、増加濃度のマウス、キメラまたはヒト化抗シグレック−８  Ｆａｂ断片と共にインキュベートされて、例えば、Ｏｃｔｅｔ  Ｒｅｄ  ３８４  Ｓｙｓｔｅｍ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）等の機器を使用して親和性測定値を得る。
【０１５２】
抗シグレック−８抗体の結合親和性は、例えば、関連技術分野において周知の標準技法を使用して、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１０７巻：２２０頁（１９８０年）に記載されているＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって決定することもできる。Ｓｃａｔｃｈａｒｄ，  Ｇ．、Ａｎｎ．  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．５１巻：６６０頁（１９４７年）も参照されたい。
【０１５３】
１．抗体アビディティー
一実施形態において、抗シグレック−８抗体の結合アビディティーは、表面プラズモン共鳴アッセイにより決定することができる。例えば、ＫｄまたはＫｄ値は、ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｔ１００を使用することにより測定することができる。捕捉抗体（例えば、ヤギ−抗ヒト−Ｆｃおよびヤギ−抗マウス−Ｆｃ）は、ＣＭ５チップ上に固定化される。フローセルは、抗ヒトまたは抗マウス抗体により固定化することができる。ある温度および流速、例えば、２５℃、流速３０μｌ／分でアッセイを行う。二量体シグレック−８は、アッセイバッファーにおいて様々な濃度で、例えば、１５ｎＭ〜１．８８ｐＭに及ぶ濃度で希釈する。抗体を捕捉し、高速注射、続いて解離を行う。バッファー、例えば、５０ｍＭグリシンｐＨ１．５でフローセルを再生する。空の参照セルおよび複数のアッセイバッファー注射により結果をブランク作成し、１：１グローバルフィットパラメータにより解析する。
【０１５４】
２．競合アッセイ
競合アッセイを使用して、２種の抗体が、同一もしくは立体的に重複するエピトープを認識することにより、同じエピトープに結合するか、または一方の抗体が、抗原への別の抗体の結合を競合的に阻害するか決定することができる。このようなアッセイは、本技術分野で公知である。典型的には、抗原または抗原発現細胞が、マルチウェルプレートに固定化され、標識抗体の結合を遮断する非標識抗体の能力が測定される。斯かる競合アッセイに一般的な標識は、放射性標識または酵素標識である。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、本明細書に記載されている２Ｅ２抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、配列番号１のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、本明細書に記載されている２Ｃ４抗体と競合する。一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、細胞（例えば、好酸球）の細胞表面に存在するエピトープへの結合に関して、配列番号２のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン（米国特許第８，２０７，３０５号に見出されるものと同様に）および配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域（米国特許第８，２０７，３０５号に見出されるものと同様に）を含む抗体と競合する。
【０１５５】
３．熱的安定性
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８は、熱シフトアッセイにおいて少なくとも約７０℃、少なくとも約７１℃または少なくとも約７２℃の融解温度（Ｔｍ）を有する。例示的な熱シフトアッセイにおいて、ヒト化抗シグレック−８抗体を含む試料を、ｑＰＣＲサーマルサイクラーにおいて１サイクル毎に１℃増加させつつ７１サイクルにわたり蛍光色素（Ｓｙｐｒｏ  Ｏｒａｎｇｅ）と共にインキュベートして、Ｔｍを決定する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、マウス２Ｅ２抗体および／またはマウス２Ｃ４抗体と比較した場合に、同様のまたはより高いＴｍを有する。本明細書における一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および／または配列番号１６もしくは２１から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、キメラ２Ｃ４抗体と比較した場合に同じまたはより高いＴｍを有する。一部の実施形態において、抗シグレック−８抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号８５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と比較した場合に同じまたはより高いＴｍを有する。
【０１５６】
４．生物学的活性アッセイ
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、好酸球のアポトーシスを誘導する。一部の他の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、肥満細胞を枯渇させる。細胞のアポトーシスを評価するためのアッセイは、本技術分野において周知であり、例えば、アネキシンＶによる染色およびＴＵＮＮＥＬアッセイが挙げられる。例示的な細胞アポトーシスアッセイにおいて、血液試料由来の新鮮バフィーコートを培地に再懸濁し、９６ウェルＵ字底プレートで平板培養する。抗シグレック−８抗体の一連の系列５倍希釈を各ウェルに添加し、このプレートを３７℃、５％ＣＯ２で４時間より長くインキュベートする。ＰＢＳに希釈したパラホルムアルデヒドで細胞を固定し、顕微鏡を使用した検出のための好酸球に特異的なコンジュゲートされた抗体で染色する。バフィーコートが抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされないときと比較した場合に、バフィーコートが抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされたときの総末梢血白血球における好酸球集団を評価する。別の例示的なアッセイにおいて、血液試料から精製された好酸球（例えば、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ好酸球単離キット）を培地に再懸濁し、ＩＬ−５の存在または非存在下で一晩培養する。培養した好酸球をその後、遠心分離によって収集し、培地に再懸濁し、９６ウェルＵ字底プレートで平板培養する。抗シグレック−８抗体の一連の系列５倍希釈を各ウェルに添加し、このプレートを３７℃、５％ＣＯ２で４時間より長くインキュベートする。本技術分野において周知の標準技法を使用して細胞を固定し、アネキシン−Ｖで染色し、顕微鏡を使用して好酸球の数を検出する。精製された細胞が抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされないときと比較した場合に、精製された細胞が抗シグレック−８抗体の存在下でインキュベートされたときの試料における好酸球集団を評価する。
【０１５７】
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性を誘導する。一部の他の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、ＡＤＣＣ活性によりシグレック−８を発現する肥満細胞を死滅させる。一部の実施形態において、組成物は、非フコシル化（すなわち、アフコシル化（ａｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ））抗シグレック−８抗体を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載されている非フコシル化抗シグレック−８抗体を含む組成物は、部分的にフコシル化された抗シグレック−８抗体を含む組成物と比較した場合に、ＡＤＣＣ活性を増強する。ＡＤＣＣ活性を評価するためのアッセイは、本技術分野において周知であり、本明細書に記載されている。例示的なアッセイにおいて、ＡＤＣＣ活性を測定するために、エフェクター細胞および標的細胞が使用される。エフェクター細胞の例として、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、大型顆粒リンパ球（ＬＧＬ）、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞ならびにＮＫおよびＬＧＬを含むＰＢＭＣ、または好中球、好酸球およびマクロファージ等、細胞表面にＦｃ受容体を有する白血球が挙げられる。標的細胞は、評価しようとする抗体が認識できる抗原を細胞表面に発現するいずれかの細胞である。斯かる標的細胞の例は、細胞表面にシグレック−８を発現する好酸球である。斯かる標的細胞の別の例は、細胞表面にシグレック−８を発現する肥満細胞である。標的細胞は、細胞溶解の検出を可能にする試薬で標識される。標識のための試薬の例として、クロム酸ナトリウム（Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４）等、放射性物質が挙げられる。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１４巻、１８１頁（１９６８年）；Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１７２巻、２２７頁（１９９４年）；およびＪ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ、１８４巻、２９頁（１９９５年）を参照されたい。
【０１５８】
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、肥満細胞媒介性活性を阻害する。肥満細胞トリプターゼは、総肥満細胞数および活性化のバイオマーカーとして使用されてきた。例えば、血液または尿中の総および活性トリプターゼならびにヒスタミン、Ｎ−メチルヒスタミンおよび１１−ベータ−プロスタグランジンＦ２を測定して、肥満細胞の低下を評価することができる。例えば、例示的な肥満細胞活性アッセイに関して、米国特許出願公開第２０１１０２９３６３１号を参照されたい。肥満細胞における抗シグレック−８抗体のＡＤＣＣおよびアポトーシス活性を評価するための例示的なアッセイにおいて、ヒト肥満細胞は、公開されたプロトコールに従ってヒト組織から単離される（Ｇｕｈｌら、Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２０１１年、７５巻：３８２〜３８４頁；Ｋｕｌｋａら、Ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、２００１年、（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｉｎｃ．））、または例えば、Ｙｏｋｏｉら、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００８年、１２１巻：４９９〜５０５頁に記載されている通りにヒト造血幹細胞から分化される。精製された肥満細胞は、無菌９６ウェルＵ字底プレートにおける完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁され、０．０００１ｎｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌの間に及ぶ濃度における抗シグレック−８抗体の存在または非存在下で３０分間インキュベートされる。精製されたナチュラルキラー（ＮＫ）細胞または新鮮ＰＢＬありまたはなしで、試料をさらに４〜１６時間インキュベートして、ＡＤＣＣを誘導する。肥満細胞を検出するための蛍光コンジュゲート抗体（ＣＤ１１７およびＦｃεＲ１）ならびに生きているおよび死んでいるまたは瀕死の細胞を識別するためのアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤを使用したフローサイトメトリーにより、アポトーシスまたはＡＤＣＣによる細胞死滅を解析する。製造元の説明書に従ってアネキシン−Ｖおよび７ＡＡＤ染色を行う。
【０１５９】
抗体調製
本明細書に記載されている抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）は、抗体を作製するための本技術分野において利用できる技法を使用して調製されるが、そのうち例示的な方法について次のセクションでより詳細に記載する。
【０１６０】
１．抗体断片
本発明は、抗体断片を包含する。抗体断片は、酵素消化等の伝統的な手段または組換え技法によって作製することができる。ある特定の状況下で、全抗体ではなく抗体断片を使用する利点がある。ある特定の抗体断片の概説に関しては、Ｈｕｄｓｏｎら（２００３年）Ｎａｔ．  Ｍｅｄ．９巻：１２９〜１３４頁を参照されたい。
【０１６１】
抗体断片の産生のための様々な技法が開発された。伝統的には、このような断片は、インタクト抗体のタンパク質分解的消化により得られた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４巻：１０７〜１１７頁（１９９２年）；およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照）。しかし、このような断片は現在、組換え宿主細胞によって直接的に産生することができる。Ｆａｂ、ＦｖおよびＳｃＦｖ抗体断片は全て、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、それから分泌させることができ、よって、大量のこのような断片の手軽な産生を可能にする。抗体断片は、上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨ断片をＥ．ｃｏｌｉから直接的に回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０巻：１６３〜１６７頁（１９９２年））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、ｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片が、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。抗体断片の産生のための他の技法は、当業者には明らかとなろう。ある特定の実施形態において、抗体は、単鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ＦｖおよびｓｃＦｖは、定常領域を欠くインタクトな組み合わせ部位を有する唯一の種である；よって、これらは、ｉｎ  ｖｉｖｏ使用における非特異的結合低下に適する可能性がある。ｓｃＦｖ融合タンパク質を構築して、ｓｃＦｖのアミノまたはカルボキシ末端のいずれかにおけるエフェクタータンパク質の融合体を生じることができる。Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編（上掲）を参照されたい。例えば抗体断片は、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されている「線状抗体」となることもできる。斯かる線状抗体は、単一特異性または二重特異性となり得る。
【０１６２】
２．ヒト化抗体
本発明は、ヒト化抗体を包含する。非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が、本技術分野で公知である。例えば、ヒト化抗体は、非ヒト供給源から導入された１個または複数のアミノ酸残基を有することができる。このような非ヒトアミノ酸残基は多くの場合、「移入」残基と称され、これは典型的には、「移入」可変ドメインから得られる。ヒト化は基本的に、高頻度可変領域配列をヒト抗体の相当する配列の代わりに置換することにより、Ｗｉｎｔｅｒの方法に従って行うことができる（Ｊｏｎｅｓら（１９８６年）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１巻：５２２〜５２５頁；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８年）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２巻：３２３〜３２７頁；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８年）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９巻：１５３４〜１５３６頁）。したがって、斯かる「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４，８１６，５６７号）、インタクトなヒト可変ドメインに実質的に満たないものが、非ヒト種由来の相当する配列によって置換されている。実際には、ヒト化抗体は典型的には、いくつかの高頻度可変領域残基およびおそらくいくつかのＦＲ残基が、齧歯類抗体における類似性部位由来の残基によって置換されたヒト抗体である。
【０１６３】
ヒト化抗体の作製において使用するべき軽および重両方のヒト可変ドメインの選択は、抗原性の低下に重要となり得る。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」方法によると、齧歯類（例えば、マウス）抗体の可変ドメインの配列が、公知ヒト可変ドメイン配列のライブラリー全体に対しスクリーニングされる。続いて、齧歯類の配列に最も近縁のヒト配列が、ヒト化抗体のヒトフレームワークとして受け入れられる（Ｓｉｍｓら（１９９３年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１巻：２２９６頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７年）Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１頁）。別の方法は、軽または重鎖の特定のサブグループのあらゆるヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワークを使用する。いくつかの異なるヒト化抗体に同じフレームワークを使用することができる（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２年）Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、８９巻：４２８５頁；Ｐｒｅｓｔａら（１９９３年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１巻：２６２３頁）。
【０１６４】
抗体が、抗原に対する高い親和性および他の好ましい生物学的特性を保持しつつヒト化されることがさらに一般に望ましい。この目標を達成するため、一方法に従って、ヒト化抗体は、親およびヒト化配列の三次元モデルを使用して、親配列および様々な概念的ヒト化産物の解析のプロセスにより調製される。三次元免疫グロブリンモデルは、一般的に利用でき、当業者には馴染み深い。選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元コンフォメーションを図解および表示するコンピュータプログラムを利用できる。このような表示の点検は、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能性の高い役割の解析、すなわち、その抗原に結合する候補免疫グロブリンの能力に影響を与える残基の解析を可能にする。このようにして、標的抗原（複数可）に対する親和性増加等、所望の抗体特徴が達成できるように、レシピエントおよび移入配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせることができる。一般に、高頻度可変領域残基は、直接的におよび最も実質的に、抗原結合への影響に関与する。
【０１６５】
３．ヒト抗体
本発明のヒト抗シグレック−８抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列（複数可）と公知ヒト定常ドメイン配列（複数可）を組み合わせることにより構築することができる。あるいは、本発明のヒトモノクローナル抗シグレック−８抗体は、ハイブリドーマ方法によって作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒトミエローマおよびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株は、例えば、Ｋｏｚｂｏｒ、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３巻：３００１頁（１９８４年）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１〜６３頁（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８７年）；およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７巻：８６頁（１９９１年）によって記載されている。
【０１６６】
免疫化により、内在性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）を産生することが可能である。例えば、キメラおよび生殖系列変異体マウスにおける抗体重鎖連結領域（ＪＨ）遺伝子のホモ接合型欠失が、内在性抗体産生の完全阻害をもたらすことが記載されている。斯かる生殖系列変異体マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移行は、抗原負荷によるヒト抗体の産生をもたらすであろう。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ、９０巻：２５５１頁（１９９３年）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３６２巻：２５５頁（１９９３年）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、７巻：３３頁（１９９３年）を参照されたい。
【０１６７】
遺伝子シャッフリングを使用して、非ヒト（例えば、齧歯類）抗体からヒト抗体を得ることもでき、このヒト抗体は、出発非ヒト抗体と同様の親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法に従い、本明細書に記載されているファージディスプレイ技法によって得られる非ヒト抗体断片の重または軽鎖可変領域のいずれかを、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換え、非ヒト鎖／ヒト鎖ｓｃＦｖまたはＦａｂキメラの集団を作り出す。抗原による選択は、非ヒト鎖／ヒト鎖キメラｓｃＦｖまたはＦａｂの単離をもたらし、ヒト鎖は、一次ファージディスプレイクローンにおける相当する非ヒト鎖の除去により破壊された抗原結合部位を修復する、すなわち、エピトープは、ヒト鎖パートナーの選択を支配する。残存非ヒト鎖を置き換えるために、このプロセスを反復すると、ヒト抗体が得られる（ＰＣＴ  ＷＯ９３／０６２１３、１９９３年４月１日公開を参照）。ＣＤＲグラフトによる非ヒト抗体の伝統的なヒト化とは異なり、この技法は、非ヒト起源のＦＲ残基もＣＤＲ残基も持たない完全なヒト抗体を提供する。
【０１６８】
４．二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２種の異なる抗原に対し結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。ある特定の実施形態において、結合特異性のうち一方は、シグレック−８に対するものであり、他方は、他のいずれかの抗原に向けられている。ある特定の実施形態において、二重特異性抗体は、シグレック−８の２種の異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体を使用して、シグレック−８を発現する細胞に細胞傷害性薬剤を局在化させることもできる。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【０１６９】
二重特異性抗体を作製するための方法は、本技術分野で公知である。ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ、３０５巻：５３７頁（１９８３年）、ＷＯ９３／０８８２９、１９９３年５月１３日公開およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１０巻：３６５５頁（１９９１年）を参照されたい。二重特異性抗体作製のさらなる詳細に関しては、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１２１巻：２１０頁（１９８６年）を参照されたい。二重特異性抗体は、架橋されたまたは「ヘテロコンジュゲート」抗体を含む。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体の一方は、アビジンにカップリングすることができ、他方はビオチンにカップリングすることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製することができる。適した架橋剤は、本技術分野において周知であり、多数の架橋技法と共に米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０１７０】
５．シングルドメイン抗体
一部の実施形態において、本発明の抗体は、シングルドメイン抗体である。シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体もしくは部分または軽鎖可変ドメインの全体もしくは部分を含む単一のポリペプチド（ｐｏｌｙｅｐｔｉｄｅ）鎖である。ある特定の実施形態において、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６（Ｂ１）号を参照）。一実施形態において、シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体または部分からなる。
【０１７１】
６．抗体バリアント
一部の実施形態において、本明細書に記載されている抗体のアミノ酸配列修飾（複数可）が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましくなり得る。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な変化を導入することにより、あるいはペプチド合成により調製することができる。斯かる修飾は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失および／またはそれへの挿入および／またはその置換を含む。欠失、挿入および置換のいずれかの組合せを為して、最終構築物に到達することができるが、この最終構築物が、所望の特徴を保有することを条件とする。アミノ酸変更は、配列が作製されるときに対象抗体アミノ酸配列に導入することができる。
【０１７２】
変異誘発に好まれる位置である、抗体のある特定の残基または領域の同定に有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１〜１０８５頁によって記載されている「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。それによると、残基または標的残基の群が同定され（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ等、荷電残基）、中性または負電荷アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられて、抗原とアミノ酸との相互作用に影響を与える。置換に対する機能的感受性を実証するアミノ酸位置は続いて、置換部位にまたはそれに代えてさらに別のまたは他のバリアントを導入することにより精緻化される。よって、アミノ酸配列変種を導入するための部位は既定であるが、変異の性質それ自体は既定である必要はない。例えば、所定の部位における変異の性能を解析するために、ａｌａスキャニングまたはランダム変異誘発が、標的コドンまたは領域において行われ、発現された免疫グロブリンが、所望の活性に関してスクリーニングされる。
【０１７３】
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００またはそれを超える残基を含有するポリペプチドの長さに及ぶアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントは、抗体の血清半減期を増加させる酵素またはポリペプチドへの抗体のＮまたはＣ末端の融合を含む。
【０１７４】
一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＣ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＣ末端において切断される。一部の実施形態において、Ｃ末端切断は、重鎖からＣ末端リシンを除去する。一部の実施形態において、モノクローナル抗体は、重鎖および／または軽鎖にＮ末端切断を有する。例えば、１、２、３、４または５アミノ酸残基が、重鎖および／または軽鎖のＮ末端において切断される。一部の実施形態において、モノクローナル抗体のトランケート型は、組換え技法によって作製することができる。
【０１７５】
ある特定の実施形態において、本発明の抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変更される。ポリペプチドのグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合型またはＯ結合型のいずれかである。Ｎ結合型は、アスパラギン残基の側鎖への糖質部分の付着を指す。トリペプチド配列、アスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（式中、Ｘは、プロリンを除くいずれかのアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への糖質部分の酵素による付着の認識配列である。よって、ポリペプチドにおけるこれらのトリペプチド配列のいずれかの存在は、潜在的グリコシル化部位を生じる。Ｏ結合型グリコシル化は、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリシンを使用してもよいが、最も一般的にはセリンまたはスレオニンであるヒドロキシアミノ酸への糖、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ａｃｅｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）、ガラクトースまたはキシロースのうち１種の付着を指す。
【０１７６】
抗体に対するグリコシル化部位の付加または欠失は、上述のトリペプチド配列（Ｎ結合型グリコシル化部位のための）のうち１種または複数が作出または除去されるように、アミノ酸配列を変更することにより簡便に達成される。変更は、本来の抗体の配列に対する１個または複数のセリンまたはスレオニン残基の付加、欠失または置換によって為すこともできる（Ｏ結合型グリコシル化部位のため）。
【０１７７】
抗体が、Ｆｃ領域を含む場合、それに付着した糖質を変更することができる。例えば、抗体のＦｃ領域に付着したフコースを欠如する、成熟糖質構造を有する抗体が、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ．）に記載されている。ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，  Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃ領域に付着した糖質において二分（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、ＷＯ２００３／０１１８７８、Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔらおよび米国特許第６，６０２，６８４号、Ｕｍａｎａらにおいて参照される。抗体のＦｃ領域に付着したオリゴ糖において少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗体は、ＷＯ１９９７／３００８７、Ｐａｔｅｌらに報告されている。そのＦｃ領域に付着した変更された糖質を有する抗体に関して、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）およびＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，  Ｓ．）も参照されたい。修飾されたグリコシル化を有する抗原結合分子に関して、ＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）も参照されたい。
【０１７８】
ある特定の実施形態において、グリコシル化バリアントは、Ｆｃ領域に付着した糖質構造が、フコースを欠如するＦｃ領域を含む。斯かるバリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有する。任意選択で、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣをさらに改善する１個または複数のアミノ酸置換をそこにさらに含み、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３および／または３３４位（残基のＥｕナンバリング）における置換が挙げられる。「脱フコシル化（ｄｅｆｕｃｏｓｙｌａｔｅｄ）」または「フコース欠損」抗体に関する刊行物の例として：ＵＳ２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；ＵＳ２００３／０１１５６１４；ＵＳ２００２／０１６４３２８；ＵＳ２００４／００９３６２１；ＵＳ２００４／０１３２１４０；ＵＳ２００４／０１１０７０４；ＵＳ２００４／０１１０２８２；ＵＳ２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．３３６巻：１２３９〜１２４９頁（２００４年）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例として、タンパク質フコシル化を欠損するＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ａ１）号、Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ；およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）、Ａｄａｍｓら、特に、実施例１１）と、アルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年））等のノックアウト細胞株と、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴ−ＩＩＩ）およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩ（ＭａｎＩＩ）を過剰発現する細胞が挙げられる。
【０１７９】
野生型ＣＨＯ細胞において産生された同じ抗体におけるフコースの量と比べて低下したフコースを有する抗体が、本明細書において企図される。例えば、抗体は、ネイティブＣＨＯ細胞（例えば、ネイティブＦＵＴ８遺伝子を含有するＣＨＯ細胞等、ネイティブグリコシル化パターンを産生するＣＨＯ細胞）によって産生された場合よりも少量のフコースを有する。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗シグレック−８抗体は、そのＮ結合型グリカンの約５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、５％または１％未満がフコースを含む抗体である。ある特定の実施形態において、本明細書において提供される抗シグレック−８抗体は、そのＮ結合型グリカンのいずれもフコースを含まない抗体である、すなわち、抗体は、完全にフコースを含有しない、またはフコースを持たない、またはフコシル化されていない、またはアフコシル化されている。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって測定される、Ａｓｎ２９７に付着したあらゆる糖構造の和と比べて（例えば、複合的、ハイブリッドおよび高マンノース構造）、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することにより決定することができる。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域における約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ領域残基のＥｕナンバリング）；しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体における軽微な配列変種により、２９７位の約±３アミノ酸上流または下流に、すなわち、２９４〜３００位の間に位置することもできる。一部の実施形態において、抗体の重鎖の少なくとも１または２つは、フコシル化されていない。
【０１８０】
一実施形態において、抗体は、その血清半減期を改善するように変更される。抗体の血清半減期を増加させるために、例えば、米国特許第５，７３９，２７７号に記載されている通り、サルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に、抗体断片）に取り込ませることができる。本明細書において、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のｉｎ  ｖｉｖｏ血清半減期の増加の原因となる、ＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す（ＵＳ２００３／０１９０３１１、米国特許第６，８２１，５０５号；米国特許第６，１６５，７４５号；米国特許第５，６２４，８２１号；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第６，１６５，７４５号；米国特許第５，８３４，５９７号）。
【０１８１】
別の種類のバリアントは、アミノ酸置換バリアントである。このようなバリアントは、異なる残基によって置き換えられた少なくとも１個のアミノ酸残基を抗体分子に有する。置換変異誘発のための目的の部位は、高頻度可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図される。保存的置換は、表１の見出し「好まれる置換」に示す。斯かる置換が、生物学的活性に望ましい変化をもたらす場合、表１において「例示的な置換」と命名される、またはアミノ酸クラスを参照しつつさらに後述する、より実質的な変化を導入し、その産物をスクリーニングすることができる。
【表５−２】
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【０１８２】
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、（ａ）例えば、シートもしくはヘリックスコンフォメーションとしての、置換の区域におけるポリペプチド骨格の構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、またはｃ）側鎖の嵩の維持におけるその効果が有意に異なる置換を選択することにより達成される。アミノ酸は、その側鎖の特性の類似性に従ってグループ化することができる（Ａ．  Ｌ．  Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、第２版、７３〜７５頁、Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７５年））：
（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）無電荷極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
【０１８３】
あるいは、天然起源の残基は、共通側鎖特性に基づき群に分けることができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向性に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１８４】
非保存的置換は、これらのクラスのうちあるクラスから別のクラスへのメンバーの交換を必要とするであろう。斯かる置換された残基は、保存的置換部位または残存（非保存）部位へと導入することもできる。
【０１８５】
１種類の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化またはヒト抗体）のうち１個または複数の高頻度可変領域残基の置換に関与する。一般に、さらなる開発のために選択されるその結果得られたバリアント（複数可）は、これを作製する元になった親抗体と比べて修飾された（例えば、改善された）生物学的特性を有するであろう。斯かる置換バリアントを作製するための簡便な仕方は、ファージディスプレイを使用した親和性成熟化に関与する。簡潔に説明すると、いくつかの高頻度可変領域部位（例えば、６〜７部位）を変異させて、各部位にあらゆる可能なアミノ酸置換を作製する。このように作製された抗体は、各粒子内にパッケージされたファージコートタンパク質（例えば、Ｍ１３の遺伝子ＩＩＩ産物）の少なくとも一部への融合体として繊維状ファージ粒子からディスプレイされる。次に、ファージディスプレイされたバリアントは、その生物学的活性（例えば、結合親和性）に関してスクリーニングされる。修飾のための候補高頻度可変領域部位を同定するために、スキャニング変異誘発（例えば、アラニンスキャニング）を行って、抗原結合に有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。その代わりにまたはその上、抗原−抗体複合体の結晶構造を解析して、抗体および抗原の間の接触点を同定することが有益となり得る。斯かる接触残基および隣接する残基は、本明細書に詳述されている技法を含む、本技術分野で公知の技法に従った置換の候補である。斯かるバリアントが作製されたら、バリアントのパネルを、本明細書に記載されている技法を含む本技術分野で公知の技法を使用したスクリーニングに付し、１種または複数の関連アッセイにおいて優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択することができる。
【０１８６】
抗体のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、本技術分野で公知の種々の方法によって調製される。このような方法として、天然供給源からの単離（天然起源のアミノ酸配列バリアントの場合）、または先に調製されたバリアントもしくは非バリアントバージョンの抗体のオリゴヌクレオチド媒介性（または部位特異的）変異誘発、ＰＣＲ変異誘発およびカセット変異誘発による調製が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１８７】
本発明の抗体のＦｃ領域に１個または複数のアミノ酸修飾を導入し、これにより、Ｆｃ領域バリアントを作製することが望ましくなり得る。Ｆｃ領域バリアントは、ヒンジシステインの位置を含む１個または複数のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含むことができる。一部の実施形態において、Ｆｃ領域バリアントは、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、ヒトＩｇＧ４  Ｆｃ領域は、アミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを含み、このアミノ酸残基は、Ｋａｂａｔにおける通りのＥＵインデックスに従ってナンバリングされる。
【０１８８】
本明細書および本技術分野が教示するところに従って、一部の実施形態において、本発明の抗体が、野生型カウンターパート抗体と比較して１個または複数の変更を、例えば、Ｆｃ領域に含むことができることが企図される。それにもかかわらず、このような抗体は、その野生型カウンターパートと比較した場合に、治療的有用性に必要とされる実質的に同じ特徴を保持するであろう。例えば、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている通り、例えば、変更された（すなわち、改善または縮小された）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらすであろう、ある特定の変更をＦｃ領域に為すことができることが考えられる。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関して、ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２巻：７３８〜４０頁（１９８８年）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；およびＷＯ９４／２９３５１も参照されたい。ＷＯ００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）およびＷＯ２００４／０５６３１２（Ｌｏｗｍａｎ）は、ＦｃＲに対し改善または縮小された結合を有する抗体バリアントについて記載する。これらの特許公報の内容は、特に参照により本明細書に組み入れられる。Ｓｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．９巻（２号）：６５９１〜６６０４頁（２００１年）も参照されたい。増加された半減期および胎児への母系ＩｇＧの移行の原因となる、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への改善された結合を有する抗体（Ｇｕｙｅｒら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７巻：５８７頁（１９７６年）およびＫｉｍら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４巻：２４９頁（１９９４年））は、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。このような抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する、１個または複数の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。変更されたＦｃ領域アミノ酸配列および増加または減少されたＣ１ｑ結合能を有するポリペプチドバリアントは、米国特許第６，１９４，５５１Ｂ１号、ＷＯ９９／５１６４２に記載されている。これらの特許公報の内容は、特に参照により本明細書に組み入れられる。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４巻：４１７８〜４１８４頁（２０００年）も参照されたい。
【０１８９】
７．ベクター、宿主細胞および組換え方法
本発明の抗体の組換え産生のため、これをコードする核酸を単離し、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。抗体をコードするＤＮＡは、従来手順を使用して（例えば、抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離および配列決定される。多くのベクターを利用できる。ベクターの選択は、一部には、使用するべき宿主細胞に依存する。一般に、宿主細胞は、原核生物または真核生物（一般には哺乳動物）起源のいずれかである。ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥ定常領域を含むいかなるアイソタイプの定常領域をこの目的のために使用してもよく、いかなるヒトまたは動物種から斯かる定常領域を得てもよいことが認められよう。
【０１９０】
原核生物宿主細胞を使用した抗体の作製：
ａ）ベクター構築
本発明の抗体のポリペプチド構成成分をコードするポリヌクレオチド配列は、標準組換え技法を使用して得ることができる。所望のポリヌクレオチド配列は、ハイブリドーマ細胞等、抗体産生細胞から単離および配列決定することができる。あるいは、ポリヌクレオチドは、ヌクレオチド合成機またはＰＣＲ技法を使用して合成することができる。得られた後に、ポリペプチドをコードする配列は、原核生物宿主において異種ポリヌクレオチドを複製および発現することができる組換えベクターに挿入する。利用できる本技術分野で公知の多くのベクターを本発明の目的のために使用することができる。適切なベクターの選択は、主に、ベクターに挿入されるべき核酸のサイズおよびベクターで形質転換されるべき特定の宿主細胞に依存するであろう。各ベクターは、その機能（異種ポリヌクレオチドの増幅もしくは発現またはその両方）およびこれが存在する特定の宿主細胞との適合性に応じて様々な構成成分を含有する。ベクター構成成分として、複製起点、選択マーカー遺伝子、プロモーター、リボソーム結合部位（ＲＢＳ）、シグナル配列、異種核酸挿入物および転写終結配列が一般に挙げられるがこれらに限定されない。
【０１９１】
一般に、宿主細胞と適合性の種に由来するレプリコンおよび対照配列を含有するプラスミドベクターは、このような宿主に関連して使用される。ベクターは通常、複製部位と共に、形質転換細胞における表現型選択をもたらすことができるマーキング配列を保有する。例えば、Ｅ．ｃｏｌｉは典型的に、Ｅ．ｃｏｌｉ種に由来するプラスミドであるｐＢＲ３２２を使用して形質転換される。ｐＢＲ３２２は、アンピシリン（Ａｍｐ）およびテトラサイクリン（Ｔｅｔ）抵抗性をコードする遺伝子を含有し、これにより、形質転換細胞を同定するための容易な手段を提供する。ｐＢＲ３２２、その派生体または他の微生物プラスミドまたはバクテリオファージは、内在性タンパク質の発現のために微生物によって使用され得るプロモーターを含有することもできるまたは含有するように修飾することもできる。特定の抗体の発現のために使用されるｐＢＲ３２２派生体の例は、Ｃａｒｔｅｒら、米国特許第５，６４８，２３７号に詳細に記載されている。
【０１９２】
加えて、宿主微生物と適合性であるレプリコンおよび対照配列を含有するファージベクターは、このような宿主に関連した形質転換ベクターとして使用することができる。例えば、λＧＥＭ．ＴＭ．−１１等、バクテリオファージは、Ｅ．ｃｏｌｉ  ＬＥ３９２等、感受性宿主細胞の形質転換に使用することができる組換えベクターの作製において利用することができる。
【０１９３】
本発明の発現ベクターは、ポリペプチド構成成分のそれぞれをコードする２個またはそれを超えるプロモーター−シストロンペアを含むことができる。プロモーターは、その発現をモジュレートするシストロンの上流（５’）に位置する非翻訳調節配列である。原核生物プロモーターは、典型的には、２種のクラス、誘導性および構成的に分類される。誘導性プロモーターは、培養条件の変化、例えば、栄養素の存在もしくは非存在または温度変化に応答して、その制御下でシストロンの転写のレベル増加を開始するプロモーターである。
【０１９４】
種々の潜在的宿主細胞によって認識される多数のプロモーターが周知である。制限酵素消化により供給源ＤＮＡからプロモーターを除去し、本発明のベクターへと単離されたプロモーター配列を挿入することにより、選択されたプロモーターは、軽または重鎖をコードするシストロンＤＮＡに作動可能に連結することができる。ネイティブプロモーター配列および多くの異種プロモーターの両方を使用して、標的遺伝子の増幅および／または発現を方向付けることができる。一部の実施形態において、一般に、ネイティブ標的ポリペプチドプロモーターと比較した場合に、より優れた転写および発現された標的遺伝子のより高い収量を可能にするため、異種プロモーターが利用される。
【０１９５】
原核生物宿主による使用に適したプロモーターは、ＰｈｏＡプロモーター、β−ガラクタマーゼ（ｇａｌａｃｔａｍａｓｅ）およびラクトースプロモーター系、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系ならびにｔａｃまたはｔｒｃプロモーター等のハイブリッドプロモーターを含む。しかし、細菌において機能的な他のプロモーター（他の公知細菌またはファージプロモーター等）も同様に適する。これらのヌクレオチド配列は発表されているため、当業者であれば、任意の必要とされる制限部位を供給するためのリンカーまたはアダプターを使用して、操作可能にこれらを標的の軽および重鎖をコードするシストロンにライゲーションすることができる（Ｓｉｅｂｅｎｌｉｓｔら（１９８０年）Ｃｅｌｌ  ２０巻：２６９頁）。
【０１９６】
本発明の一態様において、組換えベクター内の各シストロンは、膜を横切っての発現されたポリペプチドのトランスロケーションを方向付ける分泌シグナル配列構成成分を含む。一般に、シグナル配列は、ベクターの構成成分となり得る、あるいはベクターに挿入される標的ポリペプチドＤＮＡの一部となり得る。本発明の目的のために選択されるシグナル配列は、宿主細胞によって認識およびプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）配列となるべきである。異種ポリペプチドにとってネイティブなシグナル配列を認識およびプロセシングしない原核生物宿主細胞のため、シグナル配列は、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐまたは熱安定性エンテロトキシンＩＩ（ＳＴＩＩ）リーダー、ＬａｍＢ、ＰｈｏＥ、ＰｅｌＢ、ＯｍｐＡおよびＭＢＰからなる群から例えば選択される原核生物シグナル配列によって置換される。本発明の一実施形態において、発現系の両方のシストロンで使用されるシグナル配列は、ＳＴＩＩシグナル配列またはそのバリアントである。
【０１９７】
別の態様において、本発明に係る免疫グロブリンの産生は、宿主細胞の細胞質において起こることができ、したがって、各シストロン内に分泌シグナル配列の存在を必要としない。これに関して、免疫グロブリン軽および重鎖は、細胞質内で発現され、フォールドされ、アセンブルされて、機能的免疫グロブリンを形成する。ある特定の宿主系統（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ  ｔｒｘＢ−系統）は、ジスルフィド結合形成に好ましい細胞質条件を提供し、これにより、発現されたタンパク質サブユニットの適切なフォールディングおよびアセンブリを可能にする。ＰｒｏｂａおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｇｅｎｅ、１５９巻：２０３頁（１９９５年）。
【０１９８】
本発明の抗体は、分泌され適切にアセンブルされた本発明の抗体の収量を最大化するために、発現されたポリペプチド構成成分の定量的な比をモジュレートすることができる発現系を使用することにより産生することもできる。斯かるモジュレーションは、少なくとも一部には、ポリペプチド構成成分の翻訳強度を同時にモジュレートすることにより達成される。
【０１９９】
翻訳強度をモジュレートするための一技法は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、米国特許第５，８４０，５２３号に開示されている。これは、シストロン内の翻訳開始領域（ＴＩＲ）のバリアントを利用する。所定のＴＩＲのため、一連のアミノ酸または核酸配列バリアントをある範囲の翻訳強度で作り出し、これにより、特異的な鎖の所望の発現レベルにこの因子を調整するための簡便な手段を提供することができる。ＴＩＲバリアントは、アミノ酸配列を変更し得るコドン変化をもたらす従来の変異誘発技法によって作製することができる。ある特定の実施形態において、ヌクレオチド配列の変化は、サイレントである。ＴＩＲにおける変更は、例えば、シグナル配列における変更と共に、シャインダルガーノ配列の数またはスペーシングの変更を含むことができる。変異体シグナル配列を作製するための一方法は、シグナル配列のアミノ酸配列を変化させない（すなわち、変化がサイレントである）、コード配列の開始における「コドンバンク」の作製である。これは、各コドンの第３のヌクレオチド位置を変化させることにより達成することができる；その上、ロイシン、セリンおよびアルギニン等、一部のアミノ酸は、バンクの作製において複雑さを加えることができる複数の第１および第２の位置を有する。この変異誘発方法は、Ｙａｎｓｕｒａら（１９９２年）ＭＥＴＨＯＤＳ：  Ａ  Ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．４巻：１５１〜１５８頁に詳細に記載されている。
【０２００】
一実施形態において、ベクターのセットが、その中のシストロン毎にある範囲のＴＩＲ強度で作製される。この限定されたセットは、各鎖の発現レベルの比較と共に、様々なＴＩＲ強度組合せ下における所望の抗体産物の収量をもたらす。ＴＩＲ強度は、Ｓｉｍｍｏｎｓら、米国特許第５，８４０，５２３号に詳細に記載されている通り、レポーター遺伝子の発現レベルを定量化することにより決定することができる。翻訳強度比較に基づき、所望の個々のＴＩＲが選択されて、本発明の発現ベクター構築物において組み合わされる。
【０２０１】
本発明の抗体の発現に適した原核生物宿主細胞は、グラム陰性またはグラム陽性生物等、古細菌および真正細菌を含む。有用な細菌の例として、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｂａｃｉｌｌｉ（例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種（例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ  ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｒｈｉｚｏｂｉａ、ＶｉｔｒｅｏｓｃｉｌｌａまたはＰａｒａｃｏｃｃｕｓが挙げられる。一実施形態において、グラム陰性細胞が使用される。一実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞が、本発明のための宿主として使用される。Ｅ．ｃｏｌｉ系統の例として、系統Ｗ３１１０（Ｂａｃｈｍａｎｎ、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２巻（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  Ｄ．Ｃ．：Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１９８７年）、１１９０〜１２１９頁；ＡＴＣＣ寄託番号２７，３２５）および遺伝子型Ｗ３１１０  ΔｆｈｕＡ（ΔｔｏｎＡ）ｐｔｒ３  ｌａｃ  Ｉｑ  ｌａｃＬ８  ΔｏｍｐＴΔ（ｎｍｐｃ−ｆｅｐＥ）ｄｅｇＰ４１  ｋａｎＲを有する系統３３Ｄ３を含むその派生体（米国特許第５，６３９，６３５号）が挙げられる。Ｅ．ｃｏｌｉ  ２９４（ＡＴＣＣ３１，４４６）、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉλ  １７７６（ＡＴＣＣ３１，５３７）およびＥ．ｃｏｌｉ  ＲＶ３０８（ＡＴＣＣ３１，６０８）等、他の系統およびその派生体も適している。これらの例は、限定的ではなく説明的である。定義された遺伝子型を有する上述の細菌のうちいずれかの派生体を構築するための方法は、本技術分野で公知であり、例えば、Ｂａｓｓら、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ、８巻：３０９〜３１４頁（１９９０年）に記載されている。細菌の細胞におけるレプリコンの複製能（ｒｅｐｌｉｃａｂｉｌｉｔｙ）を考慮に入れて適切な細菌を選択することが一般に必要である。ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＡＣＹＣ１７７またはｐＫＮ４１０等、周知のプラスミドが、レプリコンの供給に使用される場合、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、ＳｅｒｒａｔｉａまたはＳａｌｍｏｎｅｌｌａ種は、宿主として適切に使用することができる。典型的には、宿主細胞は、最小量のタンパク質分解酵素を分泌するべきであり、望ましくは、追加的なプロテアーゼ阻害剤を細胞培養において取り込むことができる。
【０２０２】
ｂ）抗体産生
宿主細胞は、上述の発現ベクターで形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するための、必要に応じて修飾された従来の栄養培地において培養される。
【０２０３】
形質転換は、ＤＮＡが、染色体外エレメントとしてまたは染色体組み込み体により複製可能となるような、原核生物宿主へのＤＮＡの導入を意味する。使用する宿主細胞に応じて、形質転換は、斯かる細胞に適切な標準技法を使用して行われる。塩化カルシウムを用いたカルシウム処理は、実質的な細胞壁障壁を含有する細菌細胞のために一般に使用される。形質転換のための別の方法は、ポリエチレングリコール／ＤＭＳＯを用いる。使用されるさらに別の技法は、エレクトロポレーションである。
【０２０４】
本発明のポリペプチドの産生に使用される原核細胞は、本技術分野で公知の、選択された宿主細胞の培養に適した培地において育成される。適した培地の例として、ルリアブロス（ＬＢ）に必要な栄養素補充物質を加えたものが挙げられる。一部の実施形態において、培地は、発現ベクターの構築に基づき選ばれる選択用薬剤も含有して、この発現ベクターを含有する原核細胞の成長を選択的に可能にする。例えば、アンピシリン抵抗性遺伝子を発現する細胞の成長のために、培地にアンピシリンが添加される。
【０２０５】
炭素、窒素および無機リン酸塩源に加えて任意の必要な補充物質が、単独でまたは複合的窒素源等の別の補充物質もしくは培地との混合物として導入されて、適切な濃度で含まれていてもよい。任意選択で、培養培地は、グルタチオン、システイン、シスタミン、チオグリコレート、ジチオエリトリトールおよびジチオスレイトールからなる群より選択される１種または複数の還元剤を含有することができる。
【０２０６】
原核生物宿主細胞は、適した温度で培養される。ある特定の実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉの成長のため、成長温度は、約２０℃から約３９℃、約２５℃から約３７℃の範囲であるか、または約３０℃である。培地のｐＨは、主に宿主生物に応じて、約５〜約９に及ぶいずれかのｐＨとなり得る。ある特定の実施形態において、Ｅ．ｃｏｌｉのため、ｐＨは、約６．８〜約７．４または約７．０である。
【０２０７】
誘導性プロモーターが、本発明の発現ベクターにおいて使用される場合、タンパク質発現は、プロモーターの活性化に適した条件下で誘導される。本発明の一態様において、ＰｈｏＡプロモーターが、ポリペプチドの転写を制御するために使用される。したがって、形質転換された宿主細胞は、誘導のためのリン酸塩制限培地において培養される。ある特定の実施形態において、リン酸塩制限培地は、Ｃ．Ｒ．Ａ．Ｐ．培地である（例えば、Ｓｉｍｍｏｎｓら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ（２００２年）２６３巻：１３３〜１４７頁を参照）。本技術分野で公知の通り、用いられているベクター構築物に従って、種々の他の誘導因子を使用することができる。
【０２０８】
一実施形態において、本発明の発現されたポリペプチドは、宿主細胞の周辺質に分泌され、そこから回収される。タンパク質回収は、典型的には、一般に、浸透圧ショック、超音波処理または溶解等の手段による微生物の崩壊に関与する。細胞が崩壊されたら、細胞デブリまたは細胞全体は、遠心分離または濾過によって除去することができる。タンパク質は、例えば、親和性樹脂クロマトグラフィーによってさらに精製することができる。あるいは、タンパク質は、培養培地へと輸送され、そこに単離されてもよい。細胞をこの培養物から除去し、産生されたタンパク質のさらなる精製のために培養上清を濾過および濃縮することができる。発現されたポリペプチドは、ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）およびウエスタンブロットアッセイ等、一般的に公知の方法を使用してさらに単離および同定することができる。
【０２０９】
本発明の一態様において、抗体産生は、発酵プロセスにより大量に行われる。様々な大規模フェドバッチ（ｆｅｄ−ｂａｔｃｈ）発酵手順が、組換えタンパク質の産生のために利用できる。大規模発酵は、少なくとも１０００リットルの容量、ある特定の実施形態において、約１，０００〜１００，０００リットルの容量を有する。このような発酵槽は、酸素および栄養素、特にグルコースを分布させるための撹拌機羽根車を使用する。小規模発酵は一般に、およそ１００リットル以下の容積測定的容量の発酵槽における発酵を指し、約１リットル〜約１００リットルに及び得る。
【０２１０】
発酵プロセスにおいて、タンパク質発現の誘導は、典型的には、細胞が適した条件下で所望の密度、例えば、約１８０〜２２０のＯＤ５５０まで成長した後に開始され、このステージにおいて、細胞は定常期初期にある。本技術分野で公知かつ上述の通り、用いられているベクター構築物に従って、種々の誘導因子を使用することができる。誘導に先立ちより短い期間、細胞を育成することができる。細胞は通常、約１２〜５０時間誘導されるが、より長いまたはより短い誘導時間を使用してもよい。
【０２１１】
本発明のポリペプチドの産生収量および質を改善するために、様々な発酵条件を修飾することができる。例えば、分泌された抗体ポリペプチドの適切なアセンブリおよびフォールディングを改善するために、Ｄｓｂタンパク質（ＤｓｂＡ、ＤｓｂＢ、ＤｓｂＣ、ＤｓｂＤおよび／またはＤｓｂＧ）またはＦｋｐＡ（シャペロン活性を有するペプチジルプロリルｃｉｓ，ｔｒａｎｓ−イソメラーゼ）等、シャペロンタンパク質を過剰発現する追加的なベクターを使用して、宿主原核細胞を同時形質転換することができる。シャペロンタンパク質は、細菌宿主細胞において産生された異種タンパク質の適切なフォールディングおよび溶解度を容易にすることが実証された。Ｃｈｅｎら（１９９９年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７４巻：１９６０１〜１９６０５頁；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第６，０８３，７１５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第６，０２７，８８８号；ＢｏｔｈｍａｎｎおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７５巻：１７１００〜１７１０５頁；ＲａｍｍおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（２０００年）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２７５巻：１７１０６〜１７１１３頁；Ａｒｉｅら（２００１年）Ｍｏｌ．  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９巻：１９９〜２１０頁。
【０２１２】
発現された異種タンパク質（特に、タンパク質分解に感受性のタンパク質）のタンパク質分解を最小化するために、タンパク質分解酵素を欠損したある特定の宿主系統を本発明のために使用することができる。例えば、宿主細胞系統を修飾して、プロテアーゼＩＩＩ、ＯｍｐＴ、ＤｅｇＰ、Ｔｓｐ、プロテアーゼＩ、プロテアーゼＭｉ、プロテアーゼＶ、プロテアーゼＶＩおよびこれらの組合せ等、公知の細菌プロテアーゼをコードする遺伝子に遺伝的変異（複数可）を生じることができる。いくつかのＥ．ｃｏｌｉプロテアーゼ欠損系統を利用することができ、例えば、Ｊｏｌｙら（１９９８年）（上掲）；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第５，２６４，３６５号；Ｇｅｏｒｇｉｏｕら、米国特許第５，５０８，１９２号；Ｈａｒａら、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ、２巻：６３〜７２頁（１９９６年）に記載されている。
【０２１３】
一実施形態において、タンパク質分解酵素を欠損し、１種または複数のシャペロンタンパク質を過剰発現するプラスミドにより形質転換されたＥ．ｃｏｌｉ系統が、本発明の発現系における宿主細胞として使用される。
【０２１４】
ｃ）抗体精製
一実施形態において、本明細書における産生された抗体タンパク質は、さらに精製されて、さらなるアッセイおよび使用のために実質的に均一な調製物を得る。本技術分野で公知の標準タンパク質精製方法を用いることができる。次の手順は、適した精製手順に例示的である：免疫親和性またはイオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、ＤＥＡＥ等、シリカまたはカチオン交換樹脂におけるクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、硫酸アンモニウム沈殿および例えば、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−７５を使用したゲル濾過。
【０２１５】
一態様において、固相に固定化されたプロテインＡが、本発明の抗体産物の免疫親和性精製のために使用される。プロテインＡは、抗体のＦｃ領域に高親和性で結合する、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅａｓ由来の４１ｋＤの細胞壁タンパク質である。Ｌｉｎｄｍａｒｋら（１９８３年）Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈ．６２巻：１〜１３頁。プロテインＡが固定化される固相は、ガラスもしくはシリカ表面を含むカラム、またはポア制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｐｏｒｅ）ガラスカラムまたはケイ酸カラムであり得る。一部の適用において、カラムは、グリセロール等の試薬でコーティングされて、夾雑物の非特異的接着性を予防する可能性がある。
【０２１６】
精製の第１のステップとして、上述の細胞培養物に由来する調製物をプロテインＡ固定化固相にアプライして、プロテインＡへの目的の抗体の特異的結合を可能にすることができる。続いて、固相を洗浄して、固相に非特異的に結合した夾雑物を除去する。最後に、溶出により固相から目的の抗体を回収する。
【０２１７】
真核生物宿主細胞を使用した抗体の作製：
真核生物宿主細胞における使用のためのベクターは一般に、次の非限定的構成成分のうち１種または複数を含む：シグナル配列、複製起点、１種または複数のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーターおよび転写終結配列。
【０２１８】
ａ）シグナル配列構成成分
真核生物宿主細胞における使用のためのベクターは、目的の成熟タンパク質またはポリペプチドのＮ末端に特異的な切断部位を有する、シグナル配列または他のポリペプチドを含有することもできる。選択された異種シグナル配列は、宿主細胞により認識およびプロセシングされる（すなわち、シグナルペプチダーゼによって切断される）配列となり得る。哺乳動物細胞発現において、哺乳動物シグナル配列およびウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用できる。斯かる前駆体領域のためのＤＮＡは、抗体をコードするＤＮＡに読み取り枠でライゲーションされる。
【０２１９】
ｂ）複製起点
一般に、複製起点構成成分は、哺乳動物発現ベクターには必要とされない。例えば、ＳＶ４０起点は、典型的には、初期プロモーターを含有するという理由でのみ使用することができる。
【０２２０】
ｃ）選択遺伝子構成成分
発現およびクローニングベクターは、選択可能マーカーとも命名される選択遺伝子を含有することができる。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキセートもしくはテトラサイクリンに対する抵抗性を付与する、（ｂ）関連する場合、栄養要求性欠乏を補完する、または（ｃ）複合培地から得ることができない重大な栄養素を供給するタンパク質をコードする。
【０２２１】
選択スキームの一例は、宿主細胞の成長を停止させるための薬物を利用する。異種遺伝子による形質転換が成功した細胞は、薬物抵抗性を付与するタンパク質を産生し、これにより、この選択レジメンを生き残る。斯かる優性選択の例は、薬物、ネオマイシン、ミコフェノール酸およびハイグロマイシンを使用する。
【０２２２】
哺乳動物細胞に適した選択可能マーカーの別の例は、ＤＨＦＲ、チミジンキナーゼ、メタロチオネイン−Ｉおよび−ＩＩ、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチンデカルボキシラーゼ等、抗体核酸を取り込む能力のある細胞の同定を可能にするマーカーである。
【０２２３】
例えば、一部の実施形態において、ＤＨＦＲ選択遺伝子で形質転換された細胞は先ず、ＤＨＦＲの競合的アンタゴニストであるメトトレキセート（Ｍｔｘ）を含有する培養培地において全形質転換体を培養することにより同定される。一部の実施形態において、野生型ＤＨＦＲが用いられる場合に適切な宿主細胞は、ＤＨＦＲ活性を欠損したチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株である（例えば、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−９０９６）。
【０２２４】
あるいは、抗体、野生型ＤＨＦＲタンパク質およびアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）等の別の選択可能マーカーをコードするＤＮＡ配列で形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内在性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド系抗生物質、例えば、カナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８等、この選択可能マーカーのための選択用薬剤を含有する培地における細胞成長により選択することができる。米国特許第４，９６５，１９９号を参照されたい。宿主細胞は、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）を欠損した細胞株を含む、ＮＳ０、ＣＨＯＫ１、ＣＨＯＫ１ＳＶまたは派生体を含むことができる。哺乳動物細胞のための選択可能マーカーとしてのＧＳの使用のための方法は、米国特許第５，１２２，４６４号および米国特許第５，８９１，６９３号に記載されている。
【０２２５】
ｄ）プロモーター構成成分
発現およびクローニングベクターは通常、宿主生物によって認識され、目的のポリペプチド（例えば、抗体）をコードする核酸に作動可能に連結されたプロモーターを含有する。プロモーター配列は、真核生物で公知である。例えば、実際ではあらゆる真核生物遺伝子は、転写が開始される部位からおよそ２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。多くの遺伝子の転写開始から７０〜８０塩基上流に見出された別の配列は、ＣＮＣＡＡＴ領域であり、Ｎは、いかなるヌクレオチドでもよい。大部分の真核生物遺伝子の３’端には、コード配列の３’端へのポリＡテイルの付加のためのシグナルとなり得るＡＡＴＡＡＡ配列がある。ある特定の実施形態において、これらの配列のいずれかまたは全てを、真核生物発現ベクターに適切に挿入することができる。
【０２２６】
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（アデノウイルス２等）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルスおよびサルウイルス４０（ＳＶ４０）等、ウイルスのゲノムから、あるいは異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーターまたは免疫グロブリンプロモーターから、熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御される、ただし、斯かるプロモーターは、宿主細胞系と適合性であること。
【０２２７】
ＳＶ４０ウイルスの初期および後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点も含有するＳＶ４０制限断片として簡便に得られる。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ  Ｅ制限断片として簡便に得られる。ベクターとしてウシパピローマウイルスを使用して哺乳動物宿主においてＤＮＡを発現するための系は、米国特許第４，４１９，４４６号に開示されている。この系の修飾は、米国特許第４，６０１，９７８号に記載されている。単純ヘルペスウイルス由来のチミジンキナーゼプロモーターの制御下でのマウス細胞におけるヒトβ−インターフェロンｃＤＮＡの発現について記載するＲｅｙｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７巻：５９８〜６０１頁（１９８２年）も参照されたい。あるいは、ラウス肉腫ウイルス末端反復配列をプロモーターとして使用することができる。
【０２２８】
ｅ）エンハンサーエレメント構成成分
高等真核生物による本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、ベクターにエンハンサー配列を挿入することにより増加される。多くのエンハンサー配列が、哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテインおよびインスリン）から現在公知である。しかし典型的には、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用されるであろう。例として、複製起点の後方（ｌａｔｅ  ｓｉｄｅ）（ｂｐ１００〜２７０）のＳＶ４０エンハンサー、ヒトサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、マウスサイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサー、複製起点の後方のポリオーマエンハンサーおよびアデノウイルスエンハンサーが挙げられる。真核生物プロモーターの活性化のためのエンハンサーエレメントについて記載するＹａｎｉｖ、Ｎａｔｕｒｅ  ２９７巻：１７〜１８頁（１９８２年）も参照されたい。エンハンサーは、抗体ポリペプチドコード配列に対し５’位または３’位においてベクターにスプライスすることができるが、一般に、プロモーターから５’の部位に位置する。
【０２２９】
ｆ）転写終結構成成分
真核生物宿主細胞において使用される発現ベクターは、転写の終結およびｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有することもできる。斯かる配列は、真核生物またはウイルスＤＮＡまたはｃＤＮＡの５’および場合により３’非翻訳領域から一般的に利用できる。このような領域は、抗体をコードするｍＲＮＡの非翻訳部分におけるポリアデニル化断片として転写されるヌクレオチドセグメントを含有する。有用な転写終結構成成分の１種は、ウシ成長ホルモンポリアデニル化領域である。ＷＯ９４／１１０２６およびそこに開示されている発現ベクターを参照されたい。
【０２３０】
ｇ）宿主細胞の選択および形質転換
本明細書におけるベクターにおけるＤＮＡのクローニングまたは発現に適した宿主細胞は、脊椎動物宿主細胞を含む、本明細書に記載されている高等真核生物細胞を含む。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の繁殖は、ルーチン手順となった。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系列（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）；ヒト胚性腎臓系列（懸濁培養における育成のためにサブクローニングされた２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．  Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．３６巻：５９頁（１９７７年））；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  １０）；チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ７７巻：４２１６頁（１９８０年））；マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．  Ｒｅｐｒｏｄ．２３巻：２４３〜２５１頁（１９８０年））；サル腎臓細胞（ＣＶ１  ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７０）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１５８７）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ２）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）；バッファローラット（ｂｕｆｆａｌｏ  ｒａｔ）肝臓細胞（ＢＲＬ  ３Ａ、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １４４２）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）；ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ  Ｎ．Ｙ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．３８３巻：４４〜６８頁（１９８２年））；ＭＲＣ５細胞；ＦＳ４細胞；ＣＨＯＫ１細胞、ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞または派生体およびヒトヘパトーマ系列（Ｈｅｐ  Ｇ２）である。
【０２３１】
宿主細胞は、抗体産生のために上述の発現またはクローニングベクターにより形質転換され、プロモーターを誘導するため、形質転換体を選択するため、または所望の配列をコードする遺伝子を増幅するために、必要に応じて修飾された従来の栄養培地において培養される。
【０２３２】
ｈ）宿主細胞の培養
本発明の抗体の産生に使用される宿主細胞は、種々の培地において培養することができる。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）およびダルベッコ変法イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）等、市販の培地は、宿主細胞の培養に適する。加えて、Ｈａｍら、Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚ．５８巻：４４頁（１９７９年）、Ｂａｒｎｅｓら、Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２巻：２５５頁（１９８０年）、米国特許第４，７６７，７０４号；同第４，６５７，８６６号；同第４，９２７，７６２号；同第４，５６０，６５５号；もしくは同第５，１２２，４６９号；ＷＯ９０／０３４３０；ＷＯ８７／００１９５；または米国再発行特許（Ｕ．Ｓ．  Ｐａｔ．  Ｒｅ．）３０，９８５に記載されている培地のいずれかを宿主細胞のための培養培地として使用することができる。これらの培地のいずれも、ホルモンおよび／または他の増殖因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮増殖因子等）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウムおよびリン酸塩等）、バッファー（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジン等）、抗生物質（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物等）、微量元素（マイクロモル濃度範囲内の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義）ならびにグルコースまたは等価なエネルギー源を必要に応じて補充することができる。他のいずれかの補充物質が、当業者に公知の適切な濃度で含まれていてもよい。温度、ｐＨその他等、培養条件は、発現のために選択された宿主細胞により以前に使用された条件であり、当業者には明らかとなろう。
【０２３３】
ｉ）抗体の精製
組換え技法を使用する場合、抗体は、細胞内に産生することができる、あるいは培地に直接的に分泌することができる。抗体が、細胞内に産生される場合、第１のステップとして、宿主細胞または溶解された断片のあらゆる粒子状デブリは、例えば、遠心分離または限外濾過により除去することができる。抗体が、培地に分泌される場合、斯かる発現系から得た上清は、市販のタンパク質濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを使用して先ず濃縮することができる。ＰＭＳＦ等、プロテアーゼ阻害剤が、タンパク質分解を阻害するために前述ステップのいずれかに含まれていてよく、抗生物質が、偶発的な夾雑物の成長を予防するために含まれていてよい。
【０２３４】
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析および親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーが、簡便な技法である。親和性リガンドとしてのプロテインＡの適合性は、抗体に存在するいずれかの免疫グロブリンＦｃドメインの種およびアイソタイプに依存する。プロテインＡを使用して、ヒトγ１、γ２またはγ４重鎖に基づく抗体を精製することができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６２巻：１〜１３頁（１９８３年））。プロテインＧは、全マウスアイソタイプおよびヒトγ３に推奨される（Ｇｕｓｓら、ＥＭＢＯ  Ｊ．５巻：１５６７  １５７５頁（１９８６年））。親和性リガンドが付着するマトリックスは、アガロースであってよいが、他のマトリックスも利用できる。ポア制御ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等、機械的に安定的なマトリックスは、アガロースにより達成され得るものよりも速い流速およびより短い処理時間を可能にする。抗体が、ＣＨ３ドメインを含む場合、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、Ｎ．Ｊ．）が、精製に有用である。イオン交換カラムにおける分画、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、シリカにおけるクロマトグラフィー、ヘパリンにおけるクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）におけるＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）クロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび硫酸アンモニウム沈殿等、タンパク質精製のための他の技法も、回収しようとする抗体に応じて利用できる。
【０２３５】
任意の予備的精製ステップ（複数可）の後に、目的の抗体および夾雑物を含む混合物は、例えば、低塩濃度（例えば、約０〜０．２５Ｍ塩）で行われる約２．５〜４．５の間のｐＨの溶出バッファーを使用した低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーにより、さらなる精製に付すことができる。
【０２３６】
一般に、研究、検査および臨床用途における使用のための抗体を調製するための様々な方法論は、本技術分野において十分に確立されており、上述の方法論と一貫しており、および／または当業者によって特定の目的の抗体に適切であると考慮される。
【０２３７】
非フコシル化抗体の産生
フコシル化の程度が低下した抗体を調製するための方法が本明細書に提供されている。例えば、本明細書において企図される方法として、タンパク質フコシル化が欠損した細胞株の使用（例えば、Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞、アルファ−１，６−フコシル基転移酵素遺伝子ノックアウトＣＨＯ細胞、β１，４−Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩを過剰発現する細胞およびゴルジμ−マンノシダーゼＩＩをさらに過剰発現する細胞等）および抗体の産生に使用される細胞培養培地におけるフコースアナログ（複数可）の添加が挙げられるがこれらに限定されない。Ｒｉｐｋａら、Ａｒｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９巻：５３３〜５４５頁（１９８６年）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８（Ａ１）号、Ｐｒｅｓｔａ，  Ｌ；ＷＯ２００４／０５６３１２（Ａ１）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｅｎｇ．８７巻：６１４頁（２００４年）；および米国特許第８，５７４，９０７号を参照されたい。抗体のフコース含量を低下させるための追加的な技法は、米国特許出願公開第２０１２／０２１４９７５号に記載されているＧｌｙｍａｘｘ技術を含む。抗体のフコース含量を低下させるための追加的な技法は、抗体の産生に使用される細胞培養培地における１種または複数のグリコシダーゼ阻害剤の添加も含む。グリコシダーゼ阻害剤は、α−グルコシダーゼＩ、α−グルコシダーゼＩＩおよびα−マンノシダーゼＩを含む。一部の実施形態において、グリコシダーゼ阻害剤は、α−マンノシダーゼＩの阻害剤である（例えば、キフネンシン）。
【０２３８】
本明細書において、「コアのフコシル化」は、Ｎ結合型グリカンの還元末端におけるＮ−アセチルグルコサミン（「ＧｌｃＮＡｃ」）へのフコースの付加（「フコシル化」）を指す。斯かる方法によって産生された抗体およびその組成物も提供される。
【０２３９】
一部の実施形態において、Ｆｃ領域（またはドメイン）に結合した複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖のフコシル化が低下される。本明細書において、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、典型的に、アスパラギン２９７（Ｋａｂａｔの番号に従う）に結合されるが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖は、他のアスパラギン残基に連結されてもよい。「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端にマンノースのみが取り込まれた高マンノース型の糖鎖を除外するが、１）コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の１個または複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、シアル酸、二分Ｎ−アセチルグルコサミンその他を任意選択で有する複合型；または２）コア構造の非還元末端側が、高マンノースＮ−グリコシド結合型糖鎖および複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖の両方の分枝を有するハイブリッド型を含む。
【０２４０】
一部の実施形態において、「複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖」は、コア構造の非還元末端側が、ガラクトース−Ｎ−アセチルグルコサミン（「ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃ」とも称される）の０、１個または複数の分枝を有し、Ｇａｌ−ＧｌｃＮＡｃの非還元末端側が、シアル酸、二分Ｎ−アセチルグルコサミンその他等の構造を任意選択でさらに有する複合型を含む。
【０２４１】
本方法によると、典型的には、ごく微量のフコースが、複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖（複数可）に取り込まれる。例えば、様々な実施形態において、組成物中、抗体の約６０％未満、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、約１５％未満、約１０％未満、約５％未満または約１％未満が、フコースによりコアがフコシル化されている。一部の実施形態において、組成物中、抗体の実質的に全てが、フコースによりコアがフコシル化されていない（すなわち、約０．５％未満が、フコシル化されている）。一部の実施形態において、組成物中、抗体の約４０％超、約５０％超、約６０％超、約７０％超、約８０％超、約９０％超、約９１％超、約９２％超、約９３％超、約９４％超、約９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超または約９９％超が、フコシル化されていない。
【０２４２】
一部の実施形態において、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない（すなわち、約０．５％未満が、フコース残基を含有する）抗体が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体重鎖の少なくとも１または２つがフコシル化されていない抗体が本明細書において提供される。
【０２４３】
上述の通り、種々の哺乳動物宿主−発現ベクター系を利用して、抗体を発現させることができる。一部の実施形態において、培養培地は、フコースを補充されない。一部の実施形態において、有効量のフコースアナログが、培養培地に添加される。この文脈において、「有効量」は、抗体の複合Ｎ−グリコシド結合型糖鎖へのフコース取り込みを、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％減少させるのに十分なアナログの量を指す。一部の実施形態において、本方法によって産生された抗体は、フコースアナログの非存在下で培養された宿主細胞から産生された抗体と比較した場合に、少なくとも約１０％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％または少なくとも約５０％のコアがフコシル化されていないタンパク質（例えば、コアのフコシル化が欠如している）を含む。
【０２４４】
フコースが糖鎖の還元端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されていない糖鎖、対、フコースが糖鎖の還元端におけるＮ−アセチルグルコサミンに結合されている糖鎖の含量（例えば、比）は、例えば、実施例に記載されている通りに決定することができる。他の方法は、ヒドラジン分解または酵素消化（例えば、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３巻：Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  Ｓｔｕｄｙｉｎｇ  Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｕｇａｒ  Ｃｈａｉｎ（Ｊａｐａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  Ｐｒｅｓｓ）、Ｒｅｉｋｏ  Ｔａｋａｈａｓｈｉ編集（１９８９年）を参照）、放出された糖鎖の蛍光標識または放射性同位元素標識と、続くクロマトグラフィーによる標識された糖鎖の分離を含む。また、放出された糖鎖の組成は、ＨＰＡＥＣ−ＰＡＤ方法によって鎖を解析することにより決定することができる（例えば、Ｊ．  Ｌｉｑ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．６巻：１５５７頁（１９８３年）を参照）（全般的には、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号を参照）。
【０２４５】
Ｂ．本発明の組成物
一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、シグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストのいずれかを含む組成物（例えば、医薬組成物）も本明細書に提供される。一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の約５０％未満が、フコース残基を含有する組成物が本明細書において提供される。一部の実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の約４５％、約４０％、約３５％、約３０％、約２５％、約２０％または約１５％未満が、フコース残基を含有する。一部の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体を含む組成物であって、抗体が、Ｆｃ領域と、Ｆｃ領域に連結されたＮ−グリコシド結合型炭水化物鎖とを含み、Ｎ−グリコシド結合型炭水化物鎖の実質的に全てが、フコース残基を含有しない組成物が本明細書において提供される。
【０２４６】
任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と、所望の程度の純度を有する活性成分とを混合することにより、貯蔵のための治療用製剤が調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｋｌｉｎｓ，  Ｐｕｂ．、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、Ｐａ．２０００年）。許容される担体、賦形剤または安定剤は、用いられている投薬量および濃度ではレシピエントに対し無毒性であり、バッファー、アスコルビン酸、メチオニン、ビタミンＥ、二亜硫酸ナトリウム含む抗酸化剤；保存料、等張化剤（ｉｓｏｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒ）、安定剤、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ＥＤＴＡ等のキレート剤および／または非イオン性界面活性剤を含む。
【０２４７】
特に、安定性がｐＨ依存性である場合、バッファーを使用して、治療上の有効性を最適化する範囲にｐＨを制御することができる。バッファーは、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭに及ぶ濃度で存在することができる。本発明による使用に適した緩衝剤は、有機および無機酸ならびにこれらの塩の両方を含む。例えば、クエン酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酢酸塩である。その上、バッファーは、ヒスチジンおよびＴｒｉｓ等のトリメチルアミン塩で構成され得る。
【０２４８】
保存料を添加して微生物の成長を予防することができ、これは典型的には、約０．２％〜１．０％（ｗ／ｖ）の範囲内で存在する。本発明による使用に適した保存料は、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；ハロゲン化ベンザルコニウム（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、塩化ベンゼトニウム；チメロサール、フェノール、ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール、３−ペンタノールおよびｍ−クレゾールを含む。
【０２４９】
「安定剤」として公知の場合もある等張化剤は、組成物における液体の張度を調整または維持するために存在することができる。タンパク質および抗体等、大型の荷電生体分子と共に使用される場合、これは、アミノ酸側鎖の荷電基と相互作用し、これにより、分子間および分子内相互作用の可能性を減らすことができるため、多くの場合「安定剤」と命名される。等張化剤は、他の成分の相対量を考慮に入れつつ、約０．１％〜約２５重量％の間または約１〜約５重量％の間のいずれかの量で存在することができる。一部の実施形態において、等張化剤は、グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトールおよびマンニトール等、多価糖アルコール、三価またはより高次の糖アルコールを含む。
【０２５０】
追加的な賦形剤は、次のうち１種または複数として機能し得る薬剤を含む：（１）増量剤、（２）溶解促進剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）、（３）安定剤および（４）変性または容器壁への接着を予防する薬剤。斯かる賦形剤は、次のものを含む：多価糖アルコール（上に列挙）；アラニン、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、リシン、オルニチン、ロイシン、２−フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン等、アミノ酸；スクロース、ラクトース、ラクチトール、トレハロース、スタキオース、マンノース、ソルボース、キシロース、リボース、リビトール、ミオイニシトース（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｓｅ）、ミオイノシトール（ｍｙｏｉｎｉｓｉｔｏｌ）、ガラクトース、ガラクチトール、グリセロール、シクリトール（例えば、イノシトール）、ポリエチレングリコール等、有機糖または糖アルコール；尿素、グルタチオン、チオクト酸、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリセロール、α−モノチオグリセロールおよびチオ硫酸ナトリウム等、含硫還元剤；ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、ゼラチンまたは他の免疫グロブリン等、低分子量タンパク質；ポリビニルピロリドン等、親水性ポリマー；単糖（例えば、キシロース、マンノース、フルクトース、グルコース）；二糖（例えば、ラクトース、マルトース、スクロース）；ラフィノース等、三糖；ならびにデキストリンまたはデキストラン等、多糖。
【０２５１】
非イオン性界面活性剤または洗剤（「湿潤剤」としても公知）は、治療剤の可溶化を助けると共に、撹拌誘導性凝集から治療タンパク質を保護するために存在することができ、これは、活性治療タンパク質または抗体の変性を引き起こすことなく、製剤をせん断表面応力に曝露させることもできる。非イオン性界面活性剤は、約０．０５ｍｇ／ｍｌ〜約１．０ｍｇ／ｍｌまたは約０．０７ｍｇ／ｍｌ〜約０．２ｍｇ／ｍｌの範囲内で存在する。一部の実施形態において、非イオン性界面活性剤は、約０．００１％〜約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％〜約０．１％ｗ／ｖまたは約０．０１％〜約０．０２５％ｗ／ｖの範囲内で存在する。
【０２５２】
適した非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート（２０、４０、６０、６５、８０等）、ポロクサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（１８４、１８８等）、ＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）ポリオール、ＴＲＩＴＯＮ（登録商標）、ポリオキシエチレンソルビタンモノエーテル（ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０、ＴＷＥＥＮ（登録商標）−８０等）、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水素付加ヒマシ油１０、５０および６０、グリセロールモノステアレート、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース（ｃｅｌｌｕｏｓｅ）ならびにカルボキシメチルセルロースを含む。使用することができるアニオン性洗剤は、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウムを含む。カチオン性洗剤は、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウムを含む。
【０２５３】
製剤は、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用するためには、無菌でなければならない。製剤は、滅菌濾過膜を通した濾過により滅菌することができる。本明細書における治療用組成物は一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈内溶液バッグまたは皮下注射針により穿刺可能な共栓を有するバイアルに入れられる。
【０２５４】
投与の経路は、適した方式での長期間に及ぶ単一または複数のボーラスまたは注入、例えば、皮下、静脈内、腹腔内、筋肉内、動脈内、病巣内もしくは関節内経路による注射または注入、局所的投与、吸入または徐放もしくは延長放出手段による等、公知かつ受け入れられた方法に従う。
【０２５５】
本明細書における製剤は、処置されている特定の適応症の必要に応じて、１種より多くの活性化合物、好ましくは、互いに有害な影響を与えない相補的な活性を有する化合物を含有することもできる。その代わりにまたはそれに加えて、組成物は、細胞傷害性薬剤、サイトカインまたは成長阻害薬剤を含むことができる。斯かる分子は、意図される目的に有効な量で、組み合わせて適切に存在する。
【０２５６】
ＩＩＩ．製造品またはキット
別の態様において、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）または本明細書に記載されているアゴニストを含む製造品またはキットが提供される。製造品またはキットは、本発明の方法における抗体またはアゴニストの使用のための説明書をさらに含むことができる。よって、ある特定の実施形態において、製造品またはキットは、個体における好酸球媒介性障害、肥満細胞媒介性障害および／またはシグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）を処置または予防するための方法であって、個体に、ヒトシグレック−８に結合する抗シグレック−８抗体またはアゴニストの有効量を投与するステップを含む方法における、ヒトシグレック−８に結合する抗シグレック−８抗体またはアゴニストの使用のための説明書を含む。ある特定の実施形態において、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、慢性副鼻腔炎を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴うアトピー性慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴う非アトピー性慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスおよび付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、鼻ポリポーシスを伴わない慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、付随する喘息を伴う慢性副鼻腔炎である。一部の実施形態において、慢性副鼻腔炎は、アスピリン増悪呼吸器疾患である。一部の実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べた、慢性副鼻腔炎（例えば、ＡＥＲＤ）を有する個体における１種または複数の症状（本明細書に記載されている１種または複数の症状等）の低下において有効であることをさらに示す。ある特定の実施形態において、個体は、ヒトである。ある特定の実施形態において、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、アスピリン増悪呼吸器疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む。一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。一部の実施形態において、アスピリン増悪呼吸器疾患は、非アトピー性アスピリン増悪呼吸器疾患である。一部の実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べた、アスピリン増悪呼吸器疾患を有する個体における１種または複数の症状（本明細書に記載されている１種または複数の症状等）の低下において有効であることをさらに示す。ある特定の実施形態において、個体は、ヒトである。ある特定の実施形態において、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む。一部の実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べた、副鼻腔疾患を伴う成体発症型非アトピー性喘息を有する個体における１種または複数の症状（本明細書に記載されている１種または複数の症状等）の低下において有効であることをさらに示す。ある特定の実施形態において、個体は、ヒトである。ある特定の実施形態において、製造品は、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストを含む医薬と、慢性閉塞性肺疾患を処置または予防するための、それを必要とする個体における医薬の投与のための説明書を含む添付文書とを含む。一部の実施形態において、添付文書は、処置が、ヒトシグレック−８に結合する抗体またはアゴニストの投与後に、ベースラインと比べた、慢性閉塞性肺疾患を有する個体における１種または複数の症状（本明細書に記載されている１種または複数の症状等）の低下において有効であることをさらに示す。ある特定の実施形態において、個体は、ヒトである。
【０２５７】
製造品またはキットは、容器をさらに含むことができる。適した容器は、例えば、ボトル、バイアル（例えば、デュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（シングルまたはデュアルチャンバーシリンジ等）および試験管を含む。容器は、ガラスまたはプラスチック等、種々の材料でできていてよい。容器は、製剤を保持する。
【０２５８】
製造品またはキットは、容器上にあるかまたは容器に付随する、製剤の再構成および／または使用に関する指示を示すことができるラベルまたは添付文書をさらに含むことができる。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体における好酸球媒介性障害、肥満細胞媒介性障害および／またはシグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）を処置または予防するための、皮下、静脈内または他の様式の投与に有用であるまたは意図されることをさらに示すことができる。製剤を保持する容器は、使い捨てバイアルであっても多重使用バイアルであってもよく、これは、再構成された製剤の反復投与を可能にする。製造品またはキットは、適した希釈液を含む第２の容器をさらに含むことができる。製造品またはキットは、他のバッファー、希釈液、フィルター、針、シリンジおよび添付文書と使用説明書を含む、商業的、治療的および使用者の見地から望ましい他の材料をさらに含むことができる。
【０２５９】
具体的な実施形態において、本発明は、単一用量投与単位のためのキットを提供する。斯かるキットは、シングルまたはマルチチャンバーの両方の予め充填されたシリンジを含む、治療抗体の水性製剤の容器を含む。例示的な予め充填されたシリンジは、Ｖｅｔｔｅｒ  ＧｍｂＨ、ドイツ、ラーフェンスブルクから入手できる。
【０２６０】
本発明は、個体における好酸球媒介性障害、肥満細胞媒介性障害および／またはシグレック−８関連疾患（例えば、ＡＥＲＤ）を処置または予防するための１種または複数の医薬（例えば、第２の医薬）と組み合わせた、ヒトシグレック−８に結合する本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体（例えば、ヒトシグレック−８に結合する抗体）またはアゴニストも提供する。一部の実施形態において、本明細書における製造品またはキットは、第２の医薬を含む容器を任意選択でさらに含み、抗シグレック−８抗体またはアゴニストは、第１の医薬であり、製造品またはキットは、ラベルまたは添付文書に、第２の医薬の有効量により個体を処置するための説明書をさらに含む。
【０２６１】
別の実施形態において、自動注射装置における投与のための、本明細書に記載されている製剤を含む製造品またはキットが本明細書において提供される。自動注射器は、起動すると、患者または管理者の追加的な必要な動作なしでその内容物を送達する注射装置として説明することができる。送達速度が一定でなければならず、送達時間が僅かな間よりも長い場合、これは、治療用製剤のセルフメディケーションに特に適する。
【０２６２】
本明細書に記載されている態様および実施形態は、単なる説明目的のものであり、これを踏まえた様々な修正または変更が、当業者に示唆され、これが本願の精神および範囲内ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれるべきであることが理解される。
【０２６３】
本発明は、次の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかし、実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈するべきではない。本明細書に記載されている実施例および実施形態が、単なる説明目的であり、これを踏まえた様々な修正または変更が、当業者に示唆され、本願および添付の特許請求の範囲の精神および範囲内に含まれるべきであることが理解される。
【実施例】
【０２６４】
シグレック（シアル酸結合、免疫グロブリン様レクチン）は、主に白血球上に見いだされる１回膜貫通型細胞表面タンパク質である。シグレックファミリーのメンバーであるシグレック−８は、ヒト好酸球、好塩基球および肥満細胞によって発現される。シグレック−８は、硫酸化グリカン、すなわち、６’−スルホ−シアリルルイスＸまたは６’−スルホ−シアリル−Ｎ−アセチル−Ｓ−ラクトサミンを認識し、肥満細胞機能を阻害することが示された細胞内免疫受容抑制性チロシンモチーフ（ＩＴＩＭ）ドメインを含有する。
（実施例１）
ＣＲＳｗＮＰ患者由来の鼻ポリープおよび血液試料に見いだされる好酸球における抗シグレック−８抗体の活性
【０２６５】
鼻ポリポーシスを伴う慢性副鼻腔炎（ＣＲＳｗＮＰ）と診断された患者から単離された鼻ポリープおよび血液試料に見いだされる好酸球に対するヒト化抗体抗シグレック−８抗体の活性を調査した。
【０２６６】
材料と方法
ＣＲＳｗＮＰ患者から単離された鼻ポリープ組織を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）においておよそ３ミリメートル片となるように刻み、懸濁物を５０ｍＬコニカルチューブに移した。上清の除去後に、３７℃で１時間攪拌しながら、ペニシリン、ストレプトマイシン、１０μｇ／ｍＬコラゲナーゼＩＶ、０．５ｍｇ／ｍＬヒアルロニダーゼＩ−Ｓ型、５ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１ｍｇ／ｍＬ  ＤＮＡｓｅを補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して組織を解離させた。４０μｍフィルターを通して細胞懸濁物を濾過し、塩化アンモニウム溶解バッファー（水中の０．８％ＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭ  ＫＨＣＯ３および０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ溶液）を使用して、５分間室温のインキュベーションにより赤血球（ＲＢＣ）を除去した。ＰＢＳで２回細胞を洗浄し、その後、フローサイトメトリーおよび細胞枯渇アッセイにおいて使用した。
【０２６７】
フローサイトメトリーアッセイのため、鼻ポリープ細胞懸濁物における細胞を、抗シグレック−８抗体（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ抗体クローン８３７５３５）、抗ＩｇＥ受容体抗体（抗ＩｇＥＲ）、抗ＣＣＲ３抗体および抗ＣＤ４５抗体を使用して、細胞表面マーカーに関して染色した。細胞を固定し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（商標）機器（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用したフローサイトメトリーにより解析した。ＣＤ４５＋ＣＣＲ３＋ＩｇＥＲ−細胞集団に基づき好酸球を同定した。肥満細胞は、ＣＤ４５＋ＣＣＲ３−ＩｇＥＲ＋細胞集団により定義した。
【０２６８】
細胞枯渇アッセイのため、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地に懸濁した１．０×１０６個の鼻ポリープ細胞を、１０μｇ／ｍＬ  ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体またはヒトＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体と共に１６時間インキュベートした。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、マウス抗シグレック−８モノクローナル抗体（クローン１Ｈ１０）、抗ＩｇＥＲ抗体、抗ＣＣＲ３抗体および抗ＣＤ４５抗体を使用して、上述の通りフローサイトメトリーアッセイのために染色した。ＣＤ４５＋ＣＣＲ３＋ＩｇＥＲ−細胞集団に基づき好酸球をゲート選別した（ｇａｔｅ）。
【０２６９】
健康なドナーおよびＣＲＳｗＮＰ患者由来の血液を採取し、収集後２４時間未満に末梢血白血球（ＰＢＬ）を単離した（表６）。完全ＲＰＭＩ培地［（１０％ウシ胎仔血清を補充したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ａ１０４９１−０１））］に細胞を懸濁した。５０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−５（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２０５−ＩＬ−０２５）を補充したか、またはサイトカイン添加無しの完全ＲＰＭＩ培地に、１ｍＬ当たり１０７細胞となるよう細胞を調整し、ウェル当たり１００μＬで無菌９６ウェルＵ字底プレートで平板培養した。０．１ｐｇ／ｍＬ〜１０μｇ／ｍＬ（すなわち、１ｐｇ／ｍＬ、１０ｐｇ／ｍＬ、０．１ｎｇ／ｍＬ、１ｎｇ／ｍＬ、１０ｎｇ／ｍＬ、０．１μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬおよび１０μｇ／ｍＬ）に及ぶ濃度で抗シグレック−８抗体を添加して、用量応答および５０％最大好酸球枯渇（ＥＣ５０）をもたらす濃度を決定した。プレートを２００ｇで１分間遠心分離し、加湿３７℃インキュベーター内で５％ＣＯ２にて１６時間インキュベートした。フローサイトメトリーにより細胞集団を評価して、好酸球の枯渇を評価した。ＣＣＲ３陽性顆粒（高い側方散乱）細胞の除去により好酸球枯渇を検出した。
【表６】
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【０２７０】
結果
高レベルの肥満細胞（総単離細胞の８％）が、鼻ポリープホモジネートにおいて検出された。ＣＲＳｗＮＰ患者は、血液（６試料中６試料；図示せず）および鼻ポリープ（２試料中２試料；図１に一例を示す）における好酸球において高レベルのシグレック−８を発現する。
【０２７１】
様々なサイトカイン（ＩＬ−５、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−３３を含む）により活性化された好酸球におけるアポトーシスを誘導する抗シグレック−８抗体について記載されている。ＩＬ−５処理好酸球におけるアポトーシスの強力な誘導とは対照的に、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体を含む抗シグレック−８抗体は、添加されたサイトカインの非存在では、正常ドナー由来の末梢血白血球調製物において僅かな好酸球枯渇活性のみを示した（図３）。対照的に、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体は、ＩＬ−５ありまたはなしで、鼻ポリープ細胞ホモジネート由来の好酸球を死滅させた（図２）。ＩＬ−５による好酸球の活性化が死滅を改善する非罹患血液試料とは異なり、罹患組織において、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体は、ＩＬ−５とのインキュベーションを必要としなかった。理論に制約されることなく、この結果は、組織好酸球が、抗シグレック−８抗体のアポトーシス促進性効果に対し既に感作されたことを示し得る。
【０２７２】
強力なＡＤＣＣ効果により、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体は、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体と比較して、健康なドナー血液試料において好酸球のより有意な死滅を示した（図３）。鼻ポリープ細胞ホモジネートにおいて、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体およびＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体の活性は同様であり、ＡＤＣＣが、ポリープ由来好酸球におけるＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体の細胞死滅活性に必要とされなかったことを示す。健康なドナー血液試料において、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体は、ＩＬ−５活性化された好酸球を優先的に死滅させた（図３）。ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体の僅かな細胞死滅活性のみが、ＩＬ−５なしでインキュベートした正常血液試料において観察された。ＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体は、あらゆる（休止したおよび活性化された）好酸球における強力なＡＤＣＣ効果を誘導した。全ての正常血液試料において頑強なＮＫ細胞活性が実証された（図３）。
【０２７３】
正常血液とは異なり、ＮＫ細胞に基づくＡＤＣＣ活性は、ＣＲＳｗＮＰ患者において損なわれた（図４）。６種のＣＲＳｗＮＰ患者血液試料のうち５種において、血中好酸球の枯渇に対するＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体およびＨＥＫＡ  ＩｇＧ１非フコシル化ヒト化抗体の活性は同様であり、これらの患者由来試料においてＡＤＣＣによる死滅活性の追加的な増強がなかったことを示す。ＡＤＣＣ活性が損なわれた全５種の試料において、ＣＤ１６＋ＮＫ細胞の数は、正常範囲内（４．２〜９．９％）であり、ＣＲＳｗＮＰ患者におけるＮＫ細胞の活性が損なわれた可能性があることを示す。
【０２７４】
これらの結果は、ＨＥＫＡ  ＩｇＧ４ヒト化抗体が、ＣＲＳｗＮＰを患う患者由来の組織好酸球および循環好酸球に対する強力かつ選択的な細胞枯渇活性を示したことを示す。この抗体は、ＡＤＣＣ媒介性死滅に必要とされる正常ＮＫ細胞機能が損なわれた患者由来の好酸球に対する活性を有した。
【０２７５】
ＣＲＳｗＮＰおよび付随する喘息を有する個体は、処置が困難である。鼻ポリープの除去が、このような個体における喘息管理を改善することが示された。Ｅｈｎｈａｇｅら、Ａｌｌｅｒｇｙ．、６４巻：７６２〜７６９頁、２００９年を参照されたい。喘息症状を改善するために、鼻ポリープのサイズを低下させるための好酸球枯渇抗体による処置は、このような個体において有益となるであろう。ＩＬ−５は、喘息等、好酸球によって媒介される疾患に関係付けられてきた。ベンラリズマブ（Ｂｅｎｒａｌｉｚｕｍａｂ）は、ＩＬ−５受容体に結合するモノクローナル抗体であり、ＮＫ細胞媒介性ＡＤＣＣ活性を介した好酸球枯渇活性を実証し、喘息の処置に使用される。Ｇｈａｚｉら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ．、１２巻（１号）：１１３〜１１８頁、２０１２年を参照されたい。しかし、好酸球を枯渇させるためのＡＤＣＣ活性を媒介するためにＮＫ細胞に依存するベンラリズマブ等の抗体は、損なわれたＮＫ細胞機能に関連する疾患のための最良の処置経過ではない場合もある。
【０２７６】
本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、ＮＫ細胞を必要とすることなく好酸球を枯渇させることが示されてきたため、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体は、好酸球を枯渇させるために機能的ＮＫ細胞を必要とする抗体と比較してより有効となることができる。特に、本明細書に記載されている抗シグレック−８抗体による処置は、ＣＲＳｗＮＰを有する個体における喘息症状の処置に特に有利である。なぜなら、斯かる個体は典型的に、損なわれたＮＫ細胞機能を有し、その活性のためにＮＫ細胞機能を必要とする抗体に応答することができないからである。
【化８】
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【化９】
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【化１０】
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【化１１】
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【化１２】
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【化１３】
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【化１４】
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【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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