(57)【要約】  本発明は1種のクロロゲン酸結晶形を提供した。当該結晶形は直方晶系であり、空間群がP212121であり、単位格子のパラメータがa=7.7291(2) Å；b＝10.9808(2) Å；c=36.5334(7) Å；α＝β＝γ＝90.00°、Z＝8であり、単位格子の体積が3100.65(11) Å3である。本発明は当該結晶形の調製方法も提供した。本発明の結晶形は、安定性が良好であり、冷暗所に４８ケ月以内保存したときに著しい変化はなく、各指標においても原薬の関連基準を満たしている。本発明が提供した結晶形の調製方法により、純度の異なる原料から同様なクロロゲン酸結晶形を調製できるだけではなく、原料中の残留溶媒を著しく低下させ、製品の安全性を向上させることもできる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶形が直方晶系であり、空間群がP212121であり、単位格子のパラメータがa=7.7291(2) Å；b＝10.9808(2) Å；c=36.5334(7) Å；α＝β＝γ=90°、Z＝8であり、単位格子の体積が3100.65(11) Å3であることを特徴とする、１種のクロロゲン酸結晶形。
【請求項２】
前記結晶形の粉末Ｘ線回折図は図１又は図２で示されるものであることを特徴とする、請求項１に記載の結晶形。
【請求項３】
以下の方法の中のいずれかの方法を含むことを特徴とする、請求項１又は２に記載の結晶形の調製方法。
方法１：純度98%以上のクロロゲン酸をとり、水を加えて溶解した後、濾過し、次いで濾液を凍結乾燥し、クロロゲン酸結晶形を得る方法；
方法２：純度90%以上のクロロゲン酸をとり、水を加えて溶解した後、一次濾過を行い、濾液を温度0℃以下の環境下で5〜-20℃に冷凍し、次いで二次濾過を行い、残渣を凍結乾燥し、クロロゲン酸結晶形を得る方法。
【請求項４】
方法１又は方法２において、水を加えて溶解する温度が5〜70℃であることを特徴とする、請求項３に記載の調製方法。
【請求項５】
方法１において、クロロゲン酸の濃度が10 mg/ml〜2 g/ml範囲内になるように水を加えて溶解し；方法２において、クロロゲン酸の濃度が20 mg/ml〜2 g/ml範囲内になるように水を加えて溶解することを特徴とする、請求項３又は４に記載の調製方法。
【請求項６】
方法１又は方法２において、濾過に用いるフィルターのポアサイズが0.22〜200 μmであることを特徴とする、請求項５に記載の調製方法。
【請求項７】
方法１において、濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルター或はカートリッジフィルターであり、方法２において、一次濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルター或はカートリッジフィルターであり；二次濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルターであることを特徴とする、請求項３又は６に記載の調製方法。
【請求項８】
方法１において、濾過温度が5〜70℃であり、方法２において、一次濾過の温度が5〜70℃であり；二次濾過の温度が0〜25℃であることを特徴とする、請求項３又は７に記載の調製方法。
【請求項９】
方法１において、凍結乾燥の条件としては、予備凍結の温度が-20〜-50℃であり、予備凍結の時間が1〜8 時間であり、乾燥温度が-20〜-50℃から30℃に昇温し、昇温時間が8〜48 時間であり、30℃における再乾燥の時間が1〜12 hであり、冷凍中の真空度が5〜40 Paである；
方法２において、凍結乾燥の条件としては、予備凍結の温度が-10〜-30℃であり、予備凍結の時間が1〜5 時間であり、乾燥温度が-10〜-30℃から30℃に昇温し、昇温時間が8〜48 時間であり、再乾燥が1〜12 時間であり、真空度が5〜40 Paであることを特徴とする、請求項３に記載の調製方法。
【請求項１０】
純度90%以上98%未満のクロロゲン酸粗製品をとり、水を加えて溶解した後、一次濾過を行い、濾液を温度0℃以下の環境下で5〜-20℃に冷凍し、次いで二次濾過を行い、残渣を凍結乾燥し、純度98%以上のクロロゲン酸純製品を得る工程を含むことを特徴とする、１種のクロロゲン酸の精製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、クロロゲン酸の新しい結晶形に関する。
【背景技術】
【０００２】
クロロゲン酸(chlorogenic acid)、別名3-O-カフェオイルキナ酸(3-Ｏ-caffeoylquinnic acid)は植物に多く存在するポリフェノール類化合物の１種であり、その中スイカズラ属、トチュウ科及びコーヒー等の植物における含量が比較的高い。クロロゲン酸は強い抗アレルギー反応、体内における血糖の調節、酸素遊離基の除去、抗がん及び抗HIV等の作用を有する。その治療効果が著しく、毒性や副作用が弱いことから幅広い研究は行われている。
【０００３】
同じ種類の化合物は通常２種又は多種の異なる結晶状態を有しうる。結晶形が異なければ、通常そのバイオアベイラビリティ、溶出度、溶解速度、安定性、融点、色、濾過性、密度及び流動性等にも相違が現れる。そのため、より良い溶解性及び安定性を有する薬物結晶形の研究開発が非常に重要な意義をもっている。
【０００４】
呉玲玲らは中国薬品生物製品検定所により購入したクロロゲン酸対照品を原料とし、結晶体の構造に関する研究を行った。その結果、ロット番号110753のクロロゲン酸対照品が斜方晶系に属し、Pna21空間群で、単位格子のパラメータがa=36.132 Å；b＝ll.709 Å；c＝8.152 Å；α＝β＝γ＝90°、単位格子内の分子数(Z)＝4、単位格子の体積が3448.86 Å3であることを発見した（呉玲玲ら、Ｘ線回折によるクロロゲン酸結晶体の構造解析、中国実験処方学雑誌、2010年16巻17期）。しかし、この文献には当該結晶形の有益な効果及び調製方法等に関する更なる説明はない。
【発明の概要】
【０００５】
本発明の目的は、１種のクロロゲン酸結晶形を提供することである。本発明のもう一つの目的は、当該結晶形の調製方法を提供することである。
本発明は1種のクロロゲン酸結晶形を提供した。当該結晶形は直方晶系であり、空間群がP212121であり、単位格子のパラメータがa=7.7291(2) Å；b＝10.9808(2) Å；c=36.5334(7) Å；α＝β＝γ＝90°、Z＝8であり、単位格子の体積が3100.65(11) Å3である。
更に、上記結晶形の粉末Ｘ線回折図は図１又は図２で示されている。
【０００６】
現在、上記結晶形に関連する調製方法はまだ見当たらないことから、本発明は上記結晶形の調製方法も提供した。本発明の調整方法は以下のいずれかの方法を含む。
方法１：純度98%以上のクロロゲン酸をとり、水を加えて溶解した後、に濾過し、次いで濾液を凍結乾燥し、クロロゲン酸結晶形を得る。
方法２：純度90%以上のクロロゲン酸をとり、水を加えて溶解した後に一次濾過を行い、濾液を温度0℃以下の環境下で5〜-20℃に冷凍し、次いで二次濾過を行い、残渣を凍結乾燥し、クロロゲン酸結晶形を得る。
方法２のクロロゲン酸原料の純度が90%以上である。方法２は方法１の純度98%以上のクロロゲン酸原料を含む。即ち、純度98%以上のクロロゲン酸を用いて方法２に従って本発明のクロロゲン酸結晶形を得ることができる。本発明で用いられるクロロゲン酸原料を得るには、その純度が本発明の請求の範囲内であることさえ保証できれば、市販品を購入してもよいが、公知技術に準じ、精製を行ってもよい。 
【０００７】
「濾液を温度0℃以下の環境下で5〜-20℃に冷凍する。」との操作は、冷蔵庫の冷凍機能を利用して行ってもよいが、他の方法、例えば、氷-水浴や液体窒素等を使用して行ってもよい。
更に、方法１又は２において、水を加えて溶解する温度が5〜70℃である。
更に、方法１では、クロロゲン酸の濃度が10 mg/ml〜2 g/ml範囲内になるよう水を加えて溶解する。方法２では、クロロゲン酸の濃度が20 mg/ml〜2 g/ml範囲内になるように水を加えて溶解する。
更に、方法１又は２では、濾過に用いるフィルターのポアサイズが0.22〜200 μmである。
本発明に用いるフィルターは、液体を濾過するための器具を指す。それは１種の多孔性物品又は物質（例えば、布、紙、膜等）であり、液体から浮遊物や溶解不純物或は色素等を分離するための媒体として用いられる。このフィルターの様式については、よく見られるメンブレンフィルター或はカートリッジフィルターでもよいが、前記２種類以外の様式も排除しない。
更に、方法１では、濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルター或はカートリッジフィルターである。方法２では、一次濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルター或はカートリッジフィルターであり；二次濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルターである。
更に、方法１では、濾過温度は5〜70℃であり、方法２では、一次濾過の温度は5〜70℃であり、二次濾過の温度は0〜25℃である。
更に、方法１では、冷凍乾燥の条件は、予備凍結の温度：-20〜-50℃、予備凍結の時間：l〜8 時間、乾燥温度：-20〜-50℃から30℃に昇温、昇温時間：8〜48 時間、30℃における再乾燥の時間：l〜12 時間、凍結乾燥中の真空度：5〜40 Paである。
方法２では、冷凍乾燥の条件は、予備凍結の温度：-10〜-30℃、予備凍結の時間：l〜5 時間、乾燥温度：-10〜-30℃から30℃に昇温、昇温時間：8〜48 時間、30℃における再乾燥の時間：l〜12 時間、凍結乾燥中の真空度：5〜40 Paである。
【０００８】
周知のように、同じ化学薬物は再結晶の溶媒が同じである条件の場合でも、再結晶の温度パラメータの変化によって生成した固体物質の結晶形が異なる。同じ化学薬物は再結晶の溶媒が異なる条件の場合、結晶体に含まれる結晶溶剤の種類や量のパラメータが変化し、結晶体に含まれる結晶水の量と位置のパラメータが変化し、結晶体に含まれる薬物分子の立体キラルのパラメータが変化し、また、結晶体に含まれる薬物分子自身の立体配置のパラメータが変化するため、いずれも異なる結晶形に導く可能性がある（『結晶形薬物』、呂揚、人民衛生出版社、2009年第１版、第24〜25頁）。ここから分かるように、たとえ同じ原料でも、異なる結晶方法やパラメータ条件等での調製によって得られる結晶形の構造は予期できない。
本発明に関して言えば、方法１と方法２で使用する原料の純度が異なる可能性はあり、更に、濾過方法や凍結乾燥等の条件にも相違がある。従って、関連データの比較がない場合、この２つの方法によって調製された結晶形の構造が同じかどうかについては予知できない。本発明では、粉末Ｘ線回折のデータを通じて２つの方法により得られた結晶形について比較を行った結果、意外にもこの２つの方法により得られた結晶形の構造が同様であり、同じ結晶形に属していることを発見した。
【０００９】
また、方法２を用いて結晶形を調製した際に意外にも、一次濾過の濾液を5〜-20℃に冷凍した後に、二次濾過によりクロロゲン酸製品の純度が有効に上げられ、純度90%以上98%未満のクロロゲン酸粗製品から98%以上の純度を有する純製品を精製することができたことを発見した。そのため、本発明はクロロゲン酸の精製方法も提供した。本発明の精製方法これは以下の操作を含む。
純度90%以上98%未満のクロロゲン酸粗製品をとり、水を加えて溶解した後、一次濾過を行い、濾液を温度0℃以下の環境下で5〜-20℃に冷凍し、次いで二次濾過を行い、残渣を凍結乾燥し、純度98%以上のクロロゲン酸純製品を得る。
更に、水を加えて溶解する温度が5〜70℃である。
更に、クロロゲン酸の濃度が20 mg/ml〜2 g/ml範囲内になるように水を加えて溶解する。
更に、濾過に用いるフィルターのポアサイズが0.22〜200 μmである。
更に、一次濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルターまたはカートリッジフィルターであり；二次濾過に用いるフィルターがメンブレンフィルターである。
更に、一次濾過の温度が5〜70℃であり、二次濾過の温度が0〜25℃である。
更に、冷凍乾燥の条件としては、予備凍結の温度：-10〜-30℃、予備凍結の時間：l〜5 時間、乾燥温度：-10〜-30℃から30℃に昇温、昇温時間：8〜48 時間、30℃における再乾燥の時間：l〜12 時間、凍結乾燥中の真空度：5〜40 Paである。
【００１０】
本発明のメリット：
（１）本発明が提供したクロロゲン酸結晶形は、製品の安定性が良好であり、冷暗所で48ケ月保存しても著しい変化がなく、各指標とも原薬の関連基準を満たしている。
（２）本発明が提供した結晶形の調製方法によって純度の異なる原料から同様なクロロゲン酸結晶形を得ることができるだけでなく、原料中の残留溶媒も著しく低下し、製品の安全性も向上した。
（３）方法２を用いて結晶形を調製した際に意外にも、一次濾過の濾液を5〜-20℃に冷凍した後に、二次濾過によりクロロゲン酸製品の純度が有効に向上し、純度90%以上98%未満のクロロゲン酸粗製品から98%以上の純度を有する純製品まで精製できたことを発見した。なお、二次濾過の際、残渣と濾液を分離することにより大量の水分が有効に除去された。これによって、その後の凍結乾燥の際、乾燥時間は方法１と比べより短縮され、乾燥コストもより安くなった。同時に、方法２に用いる原料の純度は更に低くてもよいので、その適用性は更に広くなった。従って、本発明では、方法２をクロロゲン酸結晶形の好ましい調製方法としてもよい。
（４）本発明が提供したクロロゲン酸の精製方法を用い、凍結や濾過等の操作によってクロロゲン酸の純度を98%以上まで著しく向上することができる。本発明は高純度のクロロゲン酸を調製するための新しい選択肢を提供した。
【００１１】
以下、本発明について具体的な実施形態を通じて更に詳しく述べるが、これは本発明を制限するものではない。本発明の本質を逸脱しない限り、当業者による本発明に基づいた種々の改変や置換はすべて本発明の特許請求範囲内に属すべきものである。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】は実施例１で調製されたクロロゲン酸結晶形の粉末Ｘ線回折図を示す。
【図２】は実施例２で調製されたクロロゲン酸結晶形の粉末Ｘ線回折図を示す。
【発明を実施するための具体的な形態】
【００１３】
実施例１  本発明のクロロゲン酸結晶形の調製方法
調製経路：溶液調合―濾過―凍結乾燥
（１）溶液調合：純度98%以上のクロロゲン酸をとり、純水又は注射用水を加え、クロロ
ゲン酸濃度10 mg/ml〜2 g/mlの溶液を調製する。溶解温度は5〜70℃である。
（２）濾過：ポアサイズ0.22〜200 μmのメンブレンフィルター或はカートリッジフィルターを用いて調製したクロロゲン酸水溶液を濾過する。濾過温度は5〜70℃である。濾液を集める。
（３）凍結乾燥：濾液をとり凍結乾燥機の中に放置し、凍結乾燥する。予備凍結の温度は
-20〜-50℃、予備凍結の時間は1〜8 時間、真空度は5〜40 Pa、乾燥温度は-20〜-50℃から30℃に昇温し、昇温時間は8〜48 時間、30℃における再乾燥の時間は1〜12 hである。凍結乾燥後に本発明のクロロゲン酸結晶形を得る。
実施例１で調製した結晶形を検測し、その関連データは以下に示す。
１．単一結晶のＸ線回折
2017517476.tif 000002
２．粉末Ｘ線回折
機器の型番：Philips MRD Ｘ線回折計（英国）
検測基準  ：国際回折データセンター(ICDD)が発行した粉末回折基準
測定条件  ：ターゲット材質Cu／黒鉛；管電圧40 KV；管電流30 mA；範囲0.00〜60.00 (Deg)；スキャン速度2 Deg/min
検測の結果は図１に示す。
【００１４】
実施例２  本発明の結晶形の調製方法
調製経路：溶解―濾過―冷凍―濾過―残渣収集―凍結乾燥
（１）溶解：純度90%以上のクロロゲン酸をとり、純水又は注射用水を加え、クロロゲン
酸濃度20 mg/ml〜2 g/mlの溶液を調製する。溶解温度が5〜70℃である。
（３）濾過：ポアサイズ0.22〜200 μmのメンブレンフィルター或はカートリッジフィル
ターを用いて、調製したクロロゲン酸水溶液を濾過する。濾過温度が5〜70℃である。濾液
を集める。
（４）冷凍：濾液を温度0℃以下の環境下で5〜-20℃に冷凍する。
（５）濾過：冷凍した濾液をポアサイズ0.22〜200 μmのメンブレンフィルターで濾過し、濾過温度が0〜25℃である。残渣を集める。
（６）凍結乾燥：残渣をとり、凍結乾燥機の中に放置し凍結乾燥する。予備凍結の温度が
-10〜-30℃、予備凍結の時間は1〜5 時間、乾燥温度は-10〜-30℃から30℃に昇温、真空度は5〜40 Pa、昇温時間は8〜48 時間、30℃における再乾燥の時間は1〜12 時間である。凍結乾燥後に本発明のクロロゲン酸結晶形を得る。
実施例２で調製した結晶形を検測し、その関連データは以下に示す。
粉末Ｘ線回折
機器の型番：Philips MRD Ｘ線回折計（英国）
検測基準  ：国際回折データセンター(ICDD)が発行した粉末回折基準
測定条件  ：ターゲット材質Cu／黒鉛；管電圧40 KV；管電流30 mA；範囲0.00〜60.00 (Deg)；スキャン速度2 Deg/min
検測の結果は図２に示す。
【００１５】
図１と図２を比べると、それらの粉末回折図における回折ピークが所在する2θ角度はほぼ同様であることが分かった。よって、実施例１及び実施例２で得られた結晶形が同じであることが証明された。
同時にHPLCを用いて検測した結果、実施例２で得られた結晶形におけるクロロゲン酸の純度が98%以上であることが分かった。この純度結果に基づいて発明者らは繰り返して分析した結果、試料の純度が90%以上さえであれば、２回の濾過を経て、残渣を乾燥した後の製品の中にクロロゲン酸の純度が全て98%以上に達せることが分かった。即ち、実施例２での冷凍や再濾過の操作により不純物は有効に除去され、クロロゲン酸の純度は向上される。
また、実施例２の調製方法においては、冷凍や再濾過の操作を経て得られた残渣は凍結乾燥で得られた結晶形の中間体である。二次濾過の際、残渣と濾液を分離することにより大量な水分が除去され、その後の凍結乾燥の際、その乾燥時間が実施例１と比べより短縮され、乾燥コストも更に安くなった。
【００１６】
以下、試験例を通じて本発明の効果を具体的に説明する。
【００１７】
試験例１  本発明のクロロゲン酸結晶形の安定性に関する検討
１．長期安定性試験
実施例１で調製されたクロロゲン酸結晶形をとり、市販品と同様に包装し、温度18±2℃及び相対湿度60±10%の条件下で保存し、それぞれ３、６、９、１２、１８、２４、３６及び４８ケ月末にサンプリングし検測する。また、１２、２４、３６及び４８ケ月末に顕微鏡法により結晶形を検査した。結果は下の表に示す。
2017517476.tif 000003
2017517476.tif 000004
2017517476.tif 000005
2017517476.tif 000006
また、３、６、９、１２、１８、２４、３６及び４８ケ月後に行うサンプリングの際、アルミ／プラスチック複合膜の内表面及び外表面の性状を観察した。その結果、いずれも著しい変化はなかった。１２、２４、３６及び４８ケ月末に顕微鏡法により結晶形を検査した。その結果、各時点ではいすれも単一なフレーク状の結晶体であった。
上記データから分かるように、本発明のクロロゲン酸結晶形について、比旋光度はほとんど変化せず、乾燥減量は著しく変化せず、類縁物質の含量は緩やかに若干増加したが、その増加幅は大きくなく、また、クロロゲン酸の含量は緩やかに若干低下したが、依然として98%以上であった。上記結果は、本発明で調製したクロロゲン酸結晶形の安定性が良好であることを示した。
【００１８】
試験例２  本発明のクロロゲン酸結晶形の残留溶媒に関する検討
適量のアセトニトリルをとり、精密に秤量し、N,N-ジメチルホルムアミドを加え、1 mlあたりに5 mgを含有する溶液を調製し、これを内標溶液とした。適量の酢酸エチルをとり、精密に秤量し、N,N-ジメチルホルムアミドを加え、1 mlあたりに5 mgの酢酸エチルを含有する溶液を調製した。これを1 ml精密にとり、10 mlのフラスコの中に入れた後、内標溶液を1 ml精密に加え、N,N-ジメチルホルムアミドを加えて希釈し、メスアップした。これを均一になるよう振り混ぜ、対照溶液とした。実施例１及び実施例２で調製されたクロロゲン酸結晶形及び各実施例の調製前の試料をそれぞれ約0.5 gとり、精密に秤量した後、10 mlのフラスコの中に入れた。それに内標溶液1 mlを精密に加え、N,N-ジメチルホルムアミドを加えて溶解させ、希釈し、メスアップした。これを均一になるよう振り混ぜ、試料溶液とした。ガスクロマトグラフィー法（「中国薬局方」2010年版第２部付録V E）に従い、30 mのキャピラリーカラムを用い、50%ポリフェニルメチルシロキサンを固定相とし、コーティング厚さは1 μmで、カラム温度は80℃であった。対照溶液及び試料溶液をそれぞれ1 μl精密にとり、ガスクロマトグラフに注入し、クロマトグラムを記録した。内標法でピーク高さ比を計算した。結果を下記の表に示す。
2017517476.tif 000007
表４の試験データから分かるように、本発明のクロロゲン酸結晶形の調製方法を用いて試料中の残留溶媒を有効に除去できる。また、調製後の試料における残留溶媒は中国薬局方の基準を満たしている。
【図１】
2017517476.tif 000008
【図２】
2017517476.tif 000009
【国際調査報告】
2017517476.tif 000010
2017517476.tif 000011
2017517476.tif 000012
2017517476.tif 000013