(57)【要約】骨移植片ならびにそれを作成及び使用する方法、ならびにそのような骨移植片を含む製品及びキットが、本明細書に提供される。具体的には、骨治癒期にわたって骨再生を強化するために、Ｉ型コラーゲンならびに異なる溶解特性及び／またはサイズを有する１つ以上の異なる種類の鉱物組成物を含む骨移植片が提供される。
2017507711.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨移植片であって、
前記骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％のＩ型コラーゲンと、
それぞれが異なる溶解特性及び／またはサイズを有する、前記骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％の１つ以上の鉱物と、を含む、骨移植片。
【請求項２】
前記骨移植片の総重量に対して０．２〜２０重量％のヒアルロン酸と、
０．１〜２０重量％の量の酸または塩基と、
前記骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％の、前記骨移植片の総重量に対するＤＢＭと、からなる群から選択される、少なくとも１つのさらなる成分をさらに含む、請求項１に記載の骨移植片。
【請求項３】
前記Ｉ型コラーゲンが、ウシまたはブタ源に由来し、皮膚（真皮）または腱のいずれかから得られる、請求項１に記載の骨移植片。
【請求項４】
前記１つ以上の鉱物が、７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有するβ−リン酸三カルシウム、７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有する炭酸アパタイト、及び７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有する炭酸カルシウムからなる群から選択される、少なくとも１つの鉱物を含む、請求項１に記載の骨移植片。
【請求項５】
２０重量％〜９５重量％のＩ型コラーゲンを少なくとも１つの鉱物と混合して、混合物を形成することと、
前記混合物を３０分間〜５時間冷蔵することと、
前記混合物を６．５〜８．５のｐＨに中和することと、
前記混合物を１時間〜２４時間冷蔵することと、
前記混合物を−２０℃未満の温度で１時間〜最大２４時間急速冷凍することと、
前記混合物を２４〜７２時間凍結乾燥させることと、
前記混合物を物理的または化学的に架橋することと、
前記混合物を凍結乾燥させることと、を含む、請求項１に記載の骨移植片を作製する方法。
【請求項６】
前記中和が、前記混合物にＨＣｌまたはＮａＯＨを添加することによって達成される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記１つ以上の鉱物が、７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有するβ−リン酸三カルシウム、７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有する炭酸アパタイト、及び７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズを有する炭酸カルシウムからなる群から選択される、少なくとも１つの鉱物を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記骨移植片中の鉱物の総重量パーセントが、前記骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％である、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％のＩ型コラーゲンを、所望される稠度に達し、前記混合物の所望のｐＨが得られるまで、０．２〜２０重量％のヒアルロン酸と混合することと、
前記混合物を２０時間〜７２時間冷蔵することと、
さらに混合して均質なコラーゲン混合物を形成することと、
少なくとも１つの鉱物及び脱塩骨基質（ＤＢＭ）を秤量することと、
前記鉱物（複数可）を前記コラーゲン混合物と混合することと、
前記混合物を３０分間〜５時間冷蔵することと、
前記混合物を６．５〜８．５のｐＨに中和することと、
前記混合物を１時間〜２４時間冷蔵することと、
前記混合物を−２０℃以下の温度で１時間〜最大２４時間急速冷凍することと、
前記混合物を２４〜７２時間凍結乾燥させて、乾燥パッド混合物を形成することと、
前記混合物を物理的または化学的に架橋することと、
前記混合物を凍結乾燥させることと、を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記混合物を所望の寸法に打ち抜くか、または切り出すことをさらに含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記骨移植片中のＤＢＭの総重量が、２０〜９５％である、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の少なくとも１つの骨移植片を、前記骨移植片を必要とする哺乳動物に挿入することを含む、方法。
【請求項１３】
インプラントと請求項１に記載の骨移植片とを含む、製品。
【請求項１４】
請求項１に記載の少なくとも１つの骨移植片またはその構成要素と、
前記骨移植片の調製のための説明書、ならびに前記骨移植片の作製または使用を補助するための１つ以上のツール、デバイス、または他の構成要素からなる群から選択される、少なくとも１つの追加の構成要素と、を含む、キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、骨移植片ならびにそれを作製及び使用する方法に関する。本発明はまた、Ｉ型コラーゲンと、異なる溶解特性及び／または１つ以上のサイズを有する１つ以上の異なる種類の鉱物とを含む、骨移植片に関する。本骨移植片を有するキット及びインプラント、ならびに本骨移植片を作製及び使用する方法が、さらに含まれる。
【背景技術】
【０００２】
骨は、一般に、例えば骨折の後に、完全に再生する能力を有するが、再生するためには非常に小さな骨折空間または何らかの足場を必要とする。骨移植は、失われた骨を置き換えて、非常に複雑、適切に治癒できない、または著しい健康上の危険性を患者に呈する骨折を修復する、外科的処置である。
【０００３】
骨移植片は、自家移植のもの（患者自身の身体から摘出した骨、腸骨稜に由来することが多い）、同種移植のもの（通常は骨バンクから入手される死体骨）、または骨に類似の機械的特性を有する合成のもの（ヒドロキシアパタイトもしくは他の天然かつ生体適合性物質から作製されることが多い）であり得る。ほとんどの骨移植片は、天然の骨が数ヶ月の期間で治癒するにつれて再吸収され、置き換えられることが予測される。
【０００４】
骨移植片は、骨再生が可能な生存細胞を含む場合、骨原性である。脊椎及び長骨適用のための骨移植片代替物における現在の最適な標準物は、自家移植（すなわち、患者自身の組織を使用する）であり、同種移植がそれに続く。自家移植片は、多数の骨形成細胞を含有している場合、骨原性であると見なされる。しかしながら、自署は、可用性が限られている場合があり、それらは、供与部位の病的状態によって制限される。また、自家移植片は、複数回の外科手術を必要とする場合がある。同種移植は、供給源及び処理ステップに起因する大幅な変動性により性能が制限される。
【０００５】
骨原性であり、かつ／または骨治癒期全体にわたり骨再生を強化することができる、優れた骨移植片を製造する必要性がある。
【発明の概要】
【０００６】
非限定的な例示的実施形態によると、本発明は、コラーゲンと、溶解特性もしくは速度及び／またはサイズが異なる１つ以上の鉱物とを含む、骨治癒期全体にわたって骨再生を強化するための骨移植片を提供する。これらの鉱物は、例えば、リン酸カルシウム、炭酸アパタイト、及び／または炭酸カルシウムの形態であり得る。
【０００７】
他の例示的な実施形態は、本明細書に提供される骨移植片を調製するための方法を対象とする。さらなる例示的な実施形態は、外科手術により本発明の骨移植片のうちの１つ以上を哺乳動物に挿入することによって、骨移植片代替物を哺乳動物に適用することを含む、方法を対象とする。骨移植片は、例えば、例として切片、パテ、ゲル、及びスポンジの形態の移植片により適用されてもよく、あるいは骨移植片は、インプラントと共に、例えば、その中もしくは上に組み込まれた状態でも、利用可能であり得る。
【０００８】
なおもさらなる例示的な実施形態は、本明細書に提供される骨移植片のうちの１つ以上を中または上に含む、インプラントまたは他のデバイスを対象とする。他の例示的な実施形態は、本骨移植片のうちの１つ以上、及び／または本骨移植片を調製するために組み合わせ、混合、もしくは処理することができる構成要素もしくは要素、ならびに本骨移植片の作製または使用を補助することができる説明書、デバイス、インプラント、ツール、または他の構成要素を含む、キットを対象とする。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
非限定的な実施形態が、以下の添付の図面を参照して本明細書に記載される。
【図１】本発明の非限定的な実施例による、骨移植片を調製する例示的な方法のフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、骨移植片ならびにそのような骨移植片を作製及び使用するための方法、ならびにそれを含むキット及びインプラントまたは他のデバイスを対象とする。
【００１１】
例示的な実施形態は、骨折の治癒と併せて使用されるように記載されているが、これらの骨移植片は、他の目的で使用されてもよいこと、したがって、本発明がそのような用途に限定されないことを理解されたい。本明細書に提供される教示を鑑みると、当業者であれば、本発明の骨移植片が使用され得る他の用途を理解し、本発明の骨移植片及び方法を他の用途で使用することができるであろう。したがって、これらの代替的な使用は、本発明の一部であることが意図される。
【００１２】
本発明の例示的な実施形態の追加の態様、利点、及び／または他の特徴は、添付の図面をと共に、以下の詳細な説明を考慮すれば明らかであろう。本明細書に記載される実施形態は単に例示的かつ例証的であることが、当業者には明らかなはずである。その多数の変化形の実施形態が、本開示及びその同等物の範囲内に含まれることが企図される。
【００１３】
記載される例示的な実施形態では、明確さの目的で特定の用語が用いられる。しかしながら、これらの実施形態は、この特定の用語に限定されることを意図するものではない。別途示されない限り、技術用語は、従来の使用法に従って用いられる。
【００１４】
本明細書に使用されるとき、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」は、１つ以上を意味し得る。本明細書に使用されるとき、「もう１つの」は、少なくとも２つ目またはそれ以上ものを意味し得る。さらに、文脈により別途必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含む。
【００１５】
本明細書に使用されるとき、「哺乳動物」という用語は、本骨移植片が適用され得る任意の「対象」または「患者」としての動物（ヒトを含むがこれに限定されない）を含むことが意図される。対象または患者または哺乳動物は、現在診療を受けている場合もそうでない場合もあり、また以前に１回以上の治療を受けている場合もそうでない場合もある。当業者には明らかであるように、配合物は、非ヒトとヒトとでは異なる可能性がある。
【００１６】
本明細書に使用されるとき、「有効量」は、結果（構成物質または組成物が提供される目的としての）を達成するのに有効な組成物または配合物中の特定の構成物質の量または全体としての配合物の量を指す。したがって、骨移植片配合物の有効量は、本骨移植片が適用される対象、例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）において所望される骨移植片の効果を達成するのに好適な量である。
【００１７】
数的データが、範囲の形式で本明細書に提示される場合がある。そのような範囲形式は、単に便利さ及び簡潔さのための使用されるものであり、その範囲の限界として明示的に記載される数値だけでなく、その範囲に含まれる全ての個別の数値または部分範囲を、各数値及び部分範囲が明示的に記載されるかのように含むことを理解されたい。
【００１８】
非限定的な例示的な実施形態によると、コラーゲンと、「高速」及び「低速」の両方の溶解速度を有する１つ以上の鉱物（リン酸カルシウム、炭酸アパタイト、及び／または炭酸カルシウムを含むがこれらに限定されない）とを含む、骨移植片を調製することができる。「高速」または「より高速」の溶解速度は、初期の骨の治癒を助けることができ（例えば、骨移植片を患者に埋め込んだ後数週間から最大で２、３ヶ月）、一方でより低速な回路速度を有する鉱物は、例えば、埋め込み後最長２年間患者内に存在し得る。高速及び低速という用語は、相対的な用語であるが、互いに対して相対的であることを意味し、相対的な速度は、骨移植の文脈で本開示の文脈において当業者には明らかであろう。すなわち、当業者であれば、どの鉱物が、骨移植の文脈で所望される速度での溶解に適し得る高速または低速の溶解速度を有し得るかを判断することができるであろう。
【００１９】
したがって、本発明の目的は、（１）患者からの骨の摘出を必要とすることなく骨を再生させること、（２）同種移植と比べて骨原特性における変動性の低い骨再生材料を有すること、ならびに（３）任意選択の脱塩骨基質（ｄｅｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｄ  ｂｏｎｅ  ｍａｔｒｉｘ、ＤＢＭ）成分と共にまたはこれを伴わずに、またヒアルロン酸と共にまたはこれを伴わずに、鉱物（例えば、リン酸カルシウム、炭酸アパタイト、及び／または炭酸カルシウム）を含むことによって、先行技術の骨移植片の制限を回避する骨移植片を製造することである。１つを上回る鉱物を組み込むことにより、ある範囲の溶解速度を示すようになり、これにより、骨治癒の初期及び後期の両方において骨の治癒を強化する骨移植片が可能となる。
【００２０】
本骨移植片のこれらの実施形態は、したがって、自家移植片及び同種移植片の使用に対する代替手段となる。これらの実施形態は、現在利用可能なコラーゲン系の骨移植片に対しする代替手段ともなり、これは、それらには鉱物が組み込まれ、それにより初期及び後期の両方の段階で骨治癒を強化する１つ以上の溶解速度が得られるためである。
【００２１】
溶解速度及びサイズの異なる鉱物が、本骨移植片に用いられ得る。これらの実施形態における可能な鉱物の組み合わせは、骨治癒プロセス全体にわたって新しい骨の形成と相互作用する。例えば、２種以上の鉱物を選択した場合、１種目の鉱物は初期の骨治癒において活性となり、２種目の鉱物は骨治癒の後期において活性となる。代替的な実施形態によると、さらに異なる溶解速度及び／またはサイズを有する、３種以上の鉱物を組み込んでもよい。
【００２２】
異なるサイズ及び／または溶解速度の鉱物に関連する本骨移植片のさらなる利点は、「低速な」溶解速度を有する鉱物はまた、多孔質構造を有する場合があることである。この多孔質構造は、成長因子及び／または骨前駆細胞の取り込みを助けることになり、これは、文献によりリン酸カルシウム系材料における骨誘導の機構であることが示されている。
【００２３】
したがって、非限定的な例示的な実施形態によると、本発明は、Ｉ型コラーゲンと、それぞれが異なる溶解特性及び／または異なるサイズを有する少なくとも１つ、２つ、またはそれ以上の異なる種類の鉱物、例えば、リン酸カルシウム、炭酸アパタイト、及び／または炭酸カルシウムとを含む、骨治癒期全体にわたって骨再生を強化するための骨移植片を提供する。
【００２４】
非限定的な例示的な実施形態によると、２０重量％〜９５重量％（最終製品に対して）のＩ型コラーゲンと、それぞれが異なる溶解特性及び／またはサイズを有する２０重量％〜９５重量％（最終製品に対して）の鉱物とを含む、骨移植片が提供される。例示的な実施形態によると、鉱物には、リン酸カルシウム、炭酸アパタイト、及び／または炭酸カルシウムから選択される１つ以上の鉱物が含まれ得る。
【００２５】
例示的な実施形態によると、Ｉ型コラーゲンは、ウシまたはブタ源に由来し得、皮膚（真皮）または腱のいずれかから得ることができる。
【００２６】
これらの実施形態による骨移植片は、骨移植片の総重量に対して０．２〜２０重量％のヒアルロン酸、ｐＨを調節するのに必要な量の酸（塩酸等）または塩基（水酸化ナトリウム等）（この量は、例えば、骨移植片の総重量に対して０．１〜２０重量％であり得る）、及び２０重量％〜９５重量％のＤＢＭから選択される少なくとも１つのさらなる成分を含んでもよい。
【００２７】
さらに、２０重量％〜９５重量％のＩ型コラーゲンを、少なくとも２つの異なる溶解速度またはサイズを有する１つ以上の鉱物と混合することと、混合物を３０分間〜５時間冷蔵することと、混合物をｐＨが６．５〜８．５になるまで中和することと、混合物を１時間〜２４時間冷蔵することと、混合物を例えば−４０℃または少なくとも−２０℃よりも低い温度で１時間〜２４時間冷凍庫で急速冷凍することと、混合物を２４〜７２時間凍結乾燥させることと、混合物を物理的または化学的に架橋させることと、混合物を凍結乾燥させることとを含む、本骨移植片を作製する方法が、本明細書に提供される。本方法はさらに、混合物を所望の寸法に打ち抜くか、または切り出すことをさらに含み得る。
【００２８】
非限定的な例示的な実施形態によると、２０重量％〜９５重量％のＩ型コラーゲンを、所望の稠度が達成され、混合物の所望のｐＨが得られるまで、０．２〜２０重量％のヒアルロン酸と混合することと、この混合物を２０〜７２時間冷蔵することと、さらに混合して均質なコラーゲン混合物を形成することと、鉱物のうちの少なくとも１つ及び脱塩骨基質（任意選択の追加の成分）を秤量することと、この鉱物及び任意選択のＤＢＭをコラーゲン混合物と混合することと、この混合物を３０分間〜５時間冷蔵することと、混合物をｐＨが６．５〜８．５になるまで（例えば、ＨＣｌまたはＮａＯＨで）中和することと、混合物をトレイに注ぎ入れることと、混合物を１時間〜２４時間冷蔵することと、混合物を−２０℃以下の温度で１時間〜最大２４時間冷凍庫で急速冷凍することと、混合物を２４〜７２時間凍結乾燥させて混合物を形成することと、この混合物を物理的または化学的に架橋させることと、この混合物を凍結乾燥させることと、混合物を所望の寸法に打ち抜くか、または切り出すこととを含む、本骨移植片を作製する方法が本明細書に提供される。
【００２９】
これらの実施形態の鉱物としては、例えば、β−リン酸三カルシウム（７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズ）、炭酸アパタイト（７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズ）、及び炭酸カルシウム（７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズ）が挙げられる。したがって、例示的な実施形態には、Ｉ型コラーゲンと、１つ以上の異なる種類及び／または１つ以上のサイズの鉱物とが含まれる。
【００３０】
例示的な実施形態によると、骨移植片中の鉱物の総重量は、骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％である。
【００３１】
非限定的な例示的な実施形態によると、骨移植片中のＤＢＭの総重量は、骨移植片の総重量に対して２０重量％〜９５重量％であってもよい。
【００３２】
本発明による非限定的な例示的な方法は、例えば、図１のフローチャートに示されている。図１に示されるように、例示的な実施形態では、まず、コラーゲンを、ＨＣｌと混合する。上記に示したように、これらの成分は、所望の稠度が達成されるまで混合することができる。図１のフローチャートには具体的に示されていないが、次いで、混合物の所望されるｐＨが達成され得る。この混合物を、次いで、最大２０時間冷蔵して膨張させてもよい。
これらの実施形態によると、任意選択の成分であるＤＢＭを添加し、例えば１０００ｒｐｍの速度で約５分間剪断混合器で混合することにより、この混合物を混合／均質化する。次いで、鉱物成分を添加し、再び混合する。混合は、ここでも、例えば、５００ｒｐｍで２分間剪断混合器で混合することによって達成することができる。次いで、これらの実施形態における混合物を、−４０℃の温度で１２時間凍結させてもよく、また混合物は、例えば、４８時間凍結乾燥させてもよい。
【００３３】
使用方法
本骨移植片のいずれかを、骨移植片を必要とする哺乳動物に挿入することを含む方法もまた、本明細書に提供される。例として、本骨移植片は、本骨移植片のうちの１つ以上を、それを必要とする哺乳動物、例えば哺乳動物に挿入することによって、哺乳動物に挿入または適用され得る。骨移植片は、例えば、例として切片、パテ、ゲル、及び／またはスポンジの形態の移植片により挿入または適用されてもよく、あるいは骨移植片は、インプラントと共に、例えば、その中または上に（例えばコーティングとして）組み込まれた状態でも、利用可能であり得る。骨移植片は、骨移植片の必要性、骨移植片の種類、及び患者を考慮して医師により決定される、有効量で挿入され得る。
【００３４】
前述のように、対象／患者は哺乳動物（ならびに他の動物）であってもよく、哺乳動物はヒトであってもよい（が、必ずしもそうでなくてもよい）。
【００３５】
本発明の実施形態は、例えば、骨の欠損を補うために使用することができる、成形可能かつ形状付け可能なパテ組成物を含み得る。したがって、例示的な実施形態によると、本骨移植片は、切片、パテ、ゲル、またはスポンジを含むがこれらに限定されない、パテまたは他の半固形もしくは固形の形態であり得る。
【００３６】
インプラント
なおもさらなる例示的な実施形態は、本明細書に提供される骨移植片のうちの１つ以上を含むインプラントまたは他のデバイスもしくは製品を対象とし、本骨移植片はインプラントの中もしくは上に組み込まれるか、または製品もしくはインプラントと共に使用される。例えば、本骨移植片代替物は、インプラント内への、またはその中の移植片として使用することができる。非限定的な例として、骨移植片は、圧迫骨折の治療のための椎体間スペーサと共に使用することができる。
【００３７】
外科的インプラント及び組成物は、それらの意図される機能を無事に果たすためには、生体適合性でなければならない。生体適合性は、インプラントまたは組成物が、毒性、異物反応、または細胞の破壊といった二次的悪影響を伴うことなくその治療的機能を発揮できるような様式で機能する特徴として定義され得る。有害な反応の回避を補助するために、例示的な骨移植片は、哺乳動物に埋め込むための滅菌環境及び配合物で調製され得る。
【００３８】
キット
なおもさらなる実施形態は、本骨移植片のうちの１つ以上またはその１つ以上の構成要素もしくは成分を含む、キットを対象とする。
【００３９】
例示的なキットは、例えば、本骨移植片のうちの任意のものを、説明書及び／または例として骨移植片代替物の保管、調製、または使用に用いることができる少なくとも１つの追加の構成要素（デバイス、インプラント、ツール等）と共に含み得る。例として、キットの構成要素は、骨移植片をデバイスもしくはインプラントに添加するのを補助するため、または骨移植片を哺乳動物に挿入するのを補助するために使用され得る。さらなる非限定的な例では、本骨移植片のうちの１つ以上、ならびに骨移植片の調製のための説明書、骨移植片の使用のための説明書、骨移植片を哺乳動物に挿入するためのツール、乾燥形態の骨移植片を水和させるためのツールもしくはビヒクル、及び／または骨移植片と共に哺乳動物に挿入されるインプラントが含まれ得る。例えば、骨移植片は、再構成及び／または哺乳動物／患者への適用のために、シリンジで提供されてもよい。例示的な実施形態によると、製品は、侵襲が最小限となる様式で製品を送達するための付属品と共に、シリンジで提供されてもよい。キットに含まれる他の可能性のある成分としては、使い捨ての器具または処置文書が挙げられる。
【００４０】
なおもさらなる非限定的な例には、本骨移植片を調製するために組み合わせ、混合、または処理され得る、本骨移植片の１つ以上の成分が含まれてもよい。例として、本キットには、１型コラーゲン、１つ以上の鉱物、及び／または本骨移植片が形成するために組み合わせ、混合、もしくは処理され得る、本骨移植片のその他の必要な成分もしくは任意選択の成分が含まれてもよい。本骨移植片のうちの１つ以上の調製のための説明書、ならびに／または本骨移植片の作製もしくは使用を補助するための１つ以上のツール、デバイス、インプラント、及び／もしくは他の構成要素が、さらに提供され得る。
【００４１】
以下の実施例は、様々な非限定的実施形態及び技法をさらに例示するために提供される。しかしながら、これらの実施例は、例示的であることを意味するものであり、本特許請求の範囲を制限するものではないことを理解されたい。当業者には明らかなように、多数の変化形及び修正形が、本発明の趣旨及び範囲内に含まれることが意図される。
【実施例】
【００４２】
実施例１
非限定的な実施形態によると、Ｉ型コラーゲンならびに１つ以上の異なる溶解速度及び／または１つ以上のサイズを有する１つ以上の異なる種類の鉱物を含む骨移植片が調製される。本方法は、以下を含む：
（１）ウシ及びブタ源に由来するＩ型コラーゲンを、皮膚（真皮）または腱のいずれかから得る。
【００４３】
（２）２０％〜９５％（重量基準）の１型コラーゲンを、ヒアルロン酸（０．２〜２０重量％）と混合し、所望の稠度が達成されるまでビーカーで混合する。均質な混合物及び所望されるｐＨが得られるまで、酸（ＨＣｌ等）または塩基（ＮａＯＨ等）を混合物に添加してもよい。混合物のｐＨは、例えば、２．０〜６．０であり得る。（３）混合物に蓋をして、２０〜７２時間冷蔵庫に入れる。
【００４４】
（４）混合物を冷蔵（ステップ３）した後、剪断混合器を使用してさらに混合し、完全に混ぜ合わせて均質な混合物にする。
【００４５】
（５）鉱物（複数可）（リン酸カルシウム、炭酸アパタイト、及び／もしくは炭酸カルシウム）ならびに／または脱塩骨基質を秤量する
ａ）鉱物としては、組み合わせまたは単独で、例えば、以下のもののうち任意のものが挙げられる：
β−リン酸三カルシウム（７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズ）、
炭酸アパタイト（７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズ）、及び
炭酸カルシウム（７５ｎｍ〜５００μｍの範囲のサイズ）。
【００４６】
ｂ）骨移植片中の鉱物の総重量パーセントは、２０％〜９５％の範囲に及び得る。
【００４７】
ｃ）骨移植片中のＤＢＭの総重量パーセントは、２０％〜９５％の範囲に及び得る。
【００４８】
（６）鉱物（複数可）をコラーゲン混合物に添加するか、または逆も可能である。混合物は、ヒアルロン酸を含んでも含まなくてもよい。
【００４９】
（７）剪断混合器を用いて混合する。
【００５０】
（８）混合物を、３０分間〜５時間冷蔵庫に入れる。
【００５１】
（９）混合物を冷蔵庫から取り出す。
【００５２】
（１０）ｐＨが６．５〜８．５になるまでＨＣｌ等の酸またはＮａＯＨ等の塩基で混合物を中和する。
【００５３】
（１１）混合物をトレイに注ぎ入れる（トレイの鉱物は金属またはポリマー系であってもよい）。
【００５４】
（１２）混合物をトレイに入れた後、金属シートプレスを用いて広げてもよい。
【００５５】
（１３）混合物に蓋をして、１時間〜２４時間冷蔵庫に入れる。
【００５６】
（１４）混合物を−４０℃（または少なくとも−２０℃よりも低い温度）で１時間〜最大２４時間急速冷凍する。
【００５７】
（１５）混合物を２４〜７２時間凍結乾燥させて、「乾燥パッド」混合物を形成する。
【００５８】
（１６）乾燥パッド混合物を取り出し、架橋させる（化学的または物理的架橋方法を用いることができる）。
【００５９】
（１７）化学的架橋方法を用いた場合にはパッドをすすぐ。
【００６０】
（１８）凍結乾燥させる。
【００６１】
（１９）所望の寸法に打ち抜く／切り出す。
【００６２】
前述の説明において、本発明は、その特定の実施形態に関連して説明されている。しかしながら、様々な修正及び変更が本発明の広範な趣旨及び範囲から逸脱することなくそれらになされてもよいことは、明らかであろう。したがって、そのような変更及び修正が添付の特許請求の範囲により定められる本発明の範囲内に含まれることが、意図される。本明細書及び図面は、したがって、限定的な意味ではなく、例示的であると見なされるものである。
【図１】
2017507711.tif 000003
【国際調査報告】
2017507711.tif 000004
2017507711.tif 000005
2017507711.tif 000006