(57)【要約】【課題】  非水性溶媒に溶解したアルプロスタジルを有効成分として含有する、輸液製造用の濃縮物としての液体医薬組成物を提供する。【解決手段】  少なくとも一つの酸又は酸として働くプロトン供与体を、有効成分の安定化剤として含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
非水性溶媒に溶解したアルプロスタジルを有効成分として含有する、輸液製造用の濃縮物としての液体医薬組成物であって、前記非水性溶媒がプロピレングリコール、1,3-ブタンジオール、酢酸エチル、96％エタノール 欧州薬局方（95.1〜96.9％（V/V)）、無水エタノール 欧州薬局方（最低99.5％（V/V））若しくは無水エタノール、又はそれらの混合物であり、
前記有効成分の安定化剤として、少なくとも一つの酸又は酸として働くプロトン供与体を含有し、前記酸のpKs1値が4.85未満(<4.85)であることを特徴とする液体医薬組成物。
【請求項２】
前記酸が、有機酸、特にカルボン酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記酸が、ヒドロキシカルボン酸である、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
前記酸が、リンゴ酸、酢酸、酒石酸、乳酸、クエン酸及びアセチルシステインからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
前記酸が、多価ヒドロキシカルボン酸、好ましくはクエン酸、リンゴ酸又は酒石酸である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記酸が、アセチルシステインである、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記酸が、リンゴ酸、特にDL-リンゴ酸である、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
【請求項８】
前記酸が、無機酸、特に塩酸またはリン酸である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記酸のpKs1値が、2〜4.8の範囲に入る、請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記酸のpKs1値が0以上であって4.85未満、酸濃度がc min=1.45×e(1.02×pKs1)μM(=μmol/l)以上であってc max=11.75×e(1.35×pKs1)μM(=μmol/l)以下である、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１１】
前記酸のpKs1値が0未満であって、酸濃度がc min=1.0μM(=μmol/l)以上であってc max=15μM(=μmol/l)以下、好ましくはc min=1.3μM(=μmol/l)以上であってc max=13.2μM(=μmol/l)以下である、請求項１〜９のいずれかに記載の組成物。
【請求項１２】
前記酸の濃度が、0.05〜500μg/ml、好ましくは0.1〜100μg/ml、特に好ましくは5〜50μg/mlである、請求項１〜１１のいずれかに記載の組成物。
【請求項１３】
前記酸のpKs1値が2以上であって4.8以下、酸濃度が0.5〜500μg/ml、特に1〜250μg/mlである、請求項１〜１２のいずれかに記載の組成物。
【請求項１４】
前記酸が酢酸であって、酢酸濃度が20〜500μg/ml、特に50〜250μg/mlである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
前記酸がアセチルシステインであり、アセチルシステイン濃度が5〜350μg/ml、特に10〜100μg/mlである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１６】
前記酸がリンゴ酸、特にDL-リンゴ酸であり、リンゴ酸濃度が5〜200μg/ml、特に10〜100μg/mlである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。  
【請求項１７】
前記酸が酒石酸であり、酒石酸濃度が2〜150μg/ml、特に5〜50μg/mlである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１８】
前記酸がリン酸であり、リン酸濃度が0.5〜15μg/ml、特に1〜10μg/mlである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１９】
前記酸が塩酸であり、塩酸濃度が0.1〜0.8μg/ml、特に0.3〜0.7μg/mlである、請求項１〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項２０】
アルプロスタジルの濃度が、1〜1000μg/ml、好ましくは5〜750μg/ml、特に20〜500μg/mlである、請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物。
【請求項２１】
ガラスアンプル、ガラスバイアル、カートリッジまたはシリンジに充填される、請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物。
【請求項２２】
ガラスアンプル、ガラスバイアル、カートリッジ、またはプレフィルドシリンジに充填された請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物を含むキット・オブ・パーツ。
【請求項２３】
前記医薬組成物が、特に適切なキャリア液による希釈ステップによって非経口投与のためにすぐに使用できる輸液製造用の濃縮物、または非経口投与のために希釈可能な輸液製造用の濃縮物である、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物を、等張液、好ましくは生理食塩水で、1:10〜1:500の希釈倍率、好ましくは1:20〜1:250の倍率で希釈して得られることを特徴とする、すぐに使用可能な非経口投与用組成物。
【請求項２５】
請求項１〜２３のいずれかに記載の液体医薬組成物の調製方法であって、有効成分であるアルプロスタジルを請求項１に記載の非水性溶媒に溶解させ、少なくとも一つの酸又は酸として働くプロトン供与体を該有効成分の安定化剤として添加することを特徴とする、調製方法。
【請求項２６】
請求項１〜１９に記載の少なくとも一つの酸若しくは酸として働くプロトン供与体の、有効成分に対する、又は非水性溶媒に溶解したアルプロスタジルを有効成分として含有する前記液体医薬組成物に対する、安定化剤としての使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
アルプロスタジル（PGE1）は、一種のプロスタグランジン類似体であって、欧州薬局方に記載された薬物である。アルプロスタジルは、体内のプロスタグランジンE1と同一の物質である。その主な生理学的効果は、血管拡張及び血小板凝集の抑制である。勃起不全の治療、末梢動脈閉塞性疾患の治療及び新生児における特定の心臓欠損症の短期治療が、効果プロファイルにおける最も重要な指標として挙げられる。利用可能な医薬剤形は、主に、勃起不全治療のための非経口製剤や局所投与製剤である。
【背景技術】
【０００２】
アルプロスタジルは、化学的に非常に不安定な薬物である。欧州薬局方のコメントによると、脱水によって主にプロスタグランジンA1（PGA1）へと分解される。欧州薬局方のモノグラフによると、分解生成物は、不純物Aと称される。これは、さらに異性化反応によってプロスタグランジンB1となり、欧州薬局方のモノグラフで不純物Bと称される。
分子構造が異なる１１種の不純物が欧州薬局方に記載されている。欧州薬局方のコメントによると、分解の初期反応、すなわち脱水によるPGA1への分解は、特に酸性または塩基性条件下で起こりやすく、エタノール溶液中の二価および三価の陽イオンは、安定性をさらに悪化させる。
【０００３】
有効成分の不安定性は、すぐに使用可能な非経口製剤の貯蔵安定性を商業的規模で十分に提供することを不可能とする。したがって、アルプロスタジルは、非経口使用のための濃縮物の形でのみ利用可能であり、使用前に適切な滅菌溶液（例えば生理食塩水）に溶解・希釈させて、すぐに使用可能な輸液として再構成される。濃縮物としては、主に凍結乾燥物または非水性溶液が使用される。
【０００４】
凍結乾燥物は、安定化賦形剤と有効成分とを一緒に凍結乾燥させることにより調製される固体、粉末状の濃縮物である。その製造工程は、複雑で高価である。凍結乾燥物は、バイアルまたはユーザーフレンドリーな二室型シリンジもしくは二室型カートリッジでパッケージ化され、室温で保管することができる。α-シクロデキストリン（アルファデクス）は、主に安定化賦形剤として使用される。このような製品の商品名としては、Caverject（登録商標）(ファイザー、ファルマシア）、Prostavasin（登録商標）（UCBファーマ）またはViridal（登録商標）（UCBファーマ）が挙げられる。 特許文献１には、安定化剤としてデキストラン及びヒドロキシプロピル-β-シクロデキストリンの混合物を用いた、アルプロスタジル凍結乾燥物が開示されている。
【０００５】
非水性溶液としては、有効成分の無水エタノール溶液が使用される。このエタノール濃縮物は、常に２から８℃の低温で保管する必要がある。コールドチェーンの維持とその証明は、製造者や製品ユーザーにかなりの労力とコストを要する。それにもかかわらず、製剤の貯蔵寿命は、通常、わずか18ヶ月である。そのような製品の商品名としては、Pridax（登録商標）（Gebro、Pharmore）、Alprestil（登録商標）（Gebro）、Miniprog（登録商標）（ファイザー、ファルマシア）、及びアルプロスタジル「PINT」（登録商標）（ピントファーマ）が挙げられる。
さらに、油性及びリポソーム性製剤並びに濃縮物が文献に開示されている。後者は日本で、Liple（登録商標）（田辺三菱製薬）やPalux（登録商標）（大正製薬）の商品名で販売されている。
【０００６】
半固形製剤の安定性は、有利な条件下であっても数ヶ月に限定され、当該製剤の勃起不全治療剤としての実用化を制限する。局所製剤としてのリポゲルの例は、天然油、脂肪酸、脂肪アルコール、またはミリスチン酸イソプロピル等の合成脂質が挙げられ、それらは、ポロキサマー等の増粘剤で増粘されてもよい。そのようなリポゲルは、特許文献２及び特許文献３にも記載されている。
他の投与形態の例として尿道用座薬が、アボット社から商品名Muse（登録商標）で販売されている。
【０００７】
本発明に最も近い先行技術として、有効成分の無水エタノール溶液（例えば、輸液製造用のPridax（登録商標）20μg/ml濃縮物）が挙げられる。エタノール溶液の主な利点は、凍結乾燥物と比較して、輸液をより簡単に製造できることである。凍結乾燥物は、第１のステップで、バイアル中で適切な溶媒で再構成される必要がある。この溶液は、第２のステップで輸液に添加される。対照的に、アンプルは、１つの工程で、輸液に直接添加してもよい。取り扱いの単純化によって、操作エラーのリスクと細菌汚染のリスクを低減できる。
エタノール溶液の別の利点は、有効成分と溶媒のみからなる製剤組成のシンプルさにある。従って、凍結乾燥物と比較して、より簡単で安価な製造を可能にする。
別の利点として、製剤の基本的な組成によって、製剤の分析を顕著に簡素化できることが挙げられる。有効成分が低用量であることから、品質管理の観点から、10ng/mlの濃度範囲で汚染を定量化しなければならない。このような低濃度の場合、労力をかけずに製剤を直接分析でき、さらに賦形剤を分離する必要がないことは、大きな利点である。
【０００８】
エタノール溶液の欠点として、低い化学的安定性がある。具体的な欠点は以下の通りである。
・最終製品中の高いレベルの分解生成物を考慮する必要がある（例えば、6％PGA1）。
・最終製品の保管期間が限定されている（例えば、18ヶ月）
・最終製品を冷却して保管する必要がある。２から８℃のコールドチェーンを維持しなければならない。
・製造プロセスの過程で不可避な室温時間を、数時間に制限する必要がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】中国特許公開公報第１０２６８８２０３号
【特許文献２】韓国特許公開公報第２００１００１１６２５号
【特許文献３】特許公報第０３８３９２５号
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、容易にかつ安価に製造することができ、分析が容易であって、同時に安定性が改善されたアルプロスタジル溶液、特に扱い易いエタノール溶液、が求められている。
本発明の目的は、そのような製剤（例えば、Pridax（登録商標）から）を開発することである。前記したエタノール溶液の効果に加えて、分解生成物の濃度が低く、安定性が改善され、貯蔵寿命が長く、生産、輸送、貯蔵中の冷却条件があまり厳しくない製剤を開発することである。
上記目的は、アルプロスタジル溶液に酸性成分を少量含有させることで達成できる。
【００１１】
本発明は、液体医薬組成物、特に有効成分としてアルプロスタジルを含有する輸液の生産のための濃縮物の形態を有する液体医薬組成物であって、少なくとも一つの酸又は酸として働くプロトン供与体を、安定化剤として非水性溶媒に溶解させたものである。
【００１２】
驚くべきことに、本発明の溶液（輸液製造用の20μg/ml Pridax（登録商標）濃縮物）は、従来技術と比べてより長い貯蔵寿命を有し、主要な分解生成物であるPGA1の生成が顕著に遅くなることがわかった。この顕著な安定化効果によって、本発明に係る製剤は、本発明のすべての目的を達成することに適している。分解生成物PGA1の上限値を減少させることができる（例えば6％から4％に）。製品の耐久性が向上する（例えば、18ヶ月から36ヶ月に）。室温での調製に際して、溶液の寿命が伸びるので（例えば、4時間から8時間に）、バッチサイズを大きくすることができる。調製物の分析方法は、酸性成分の添加によって複雑にならない。
【００１３】
文献（Vieillard et al, Pharmaceut Anal Acta 2013, 4:4, 4.00-1488 alprostadil comment for Ph. Eur. 4.00）によると、アルプロスタジル薬物は、塩基、酸及び酸化剤に対して非常に敏感であることが知られている  特に、塩基及び酸は、主な分解産物であるPGA1の脱水による生成を促進させる。アルプロスタジルが20μg/ml〜500μg/mlの低濃度で含有されるので、濃縮液中に前記不純物が少量でも含まれると、安定性の低下につながる。そのため、プロセス制御やパッケージング及び溶媒の純度を用いた従来技術では持続的な不純物の回避を達成することは不可能であり、また、そのような従来技術は製造高ストを増大させるので、製品を通常の市場価格で提供することが困難である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
驚くべきことに、文献記載の見解に反して、非常に少量の有機または無機酸は、安定性の低下に必ずしもつながらず、反対に、安定性の大きな向上につながることがわかった。本発明における有機酸または無機酸の「非常に小量」とは、500μg/ ml以下の酸濃度を意味する。
【００１５】
先行技術文献では、アルプロスタジルエタノール溶液中の有効成分濃度はμg/ml単位で記載されている。同様に、本発明において酸濃度はμg/ml単位で表される。μg/g単位への変換は、溶媒の密度（無水アルコールは約0.789ｇ/ml）で除算することで行うことができる。安定性データの指数回帰によって理論的に推測される安定化に必要とされる酸の量は、μmol/mlに相当するμM単位で表される。各酸の分子量を用いて、μg/ml単位に変換することができる。
【００１６】
好ましい製剤では、0.05〜500μg/ml、好ましくは0.1〜100μg/ml、特に好ましくは5〜50μg/mlの低い酸濃度が用いられる。本発明の好ましい実施態様においても、アルプロスタジルを20μg/ml含有するエタノール溶液は、20μg/mlの酸を添加することで安定化される。
アルプロスタジルが1〜1000μg/ml、好ましくは5〜750μg/ml、特に好ましくは20〜500μg/mlの濃度で存在する場合、有利な効果を得ることができる。
【００１７】
人為的に添加される酸の分析定量には、通常の分析方法、例えば、HPLC、GC、滴定分光法等が用いられる。添加される酸をpH値の測定によって検出することは、本発明のアルコール性製剤、すなわち非水性製剤においては不可能である。しかし、簡略化試験では、酸の添加は、0.9％NaCl溶液で最終製品を1：25の比率で希釈した後、溶液のpH値を測定して検出できる。0.9％NaCl溶液を用いて、基準値より0.2単位以上pHが低下した場合、製剤中に酸が添加されたことを示す。
【００１８】
本発明において用語「酸性成分」と「酸」は、ブレンステッド・ローリーの定義によるものであり、プロトンを供与できる化合物又はプロトン供与体を意味する。アルプロスタジルに対するプロトン供与体として機能するためには、アルプロスタジルのpKs値である4.85より低いpKs値を有する酸でなければならない。酸は、無機酸であっても有機酸であってもよい。酸は、一塩基性であっても多塩基性であってもよい。本発明において好ましい酸は、毒性プロフィール上、非経口薬物において使用することができる有機酸および無機酸であって、本発明の濃度で使用される溶媒中に完全に溶解し、特に中低温で無水アルコールに溶解するものである。このような酸としては、塩酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、酒石酸またはアセチルシステインが挙げられる。
【００１９】
本発明においては、多塩基性の有機カルボン酸、特に有機ヒドロキシ酸が、その広範な安定化範囲から特に好ましい。クエン酸、リンゴ酸又は酒石酸が好ましい。 DL-リンゴ酸の使用が特に好ましい。
なお、塩酸やリン酸等の無機酸を使用することもできる。
【００２０】
安定性試験によって、本願明細書で規定する条件をみたす全ての酸が、安定性を向上させることが示された。安定化は、試験貯蔵期間中、アルプロスタジルの含有量がよりゆっくり減少し、不純物（特に不純物A）の含有量がよりゆっくり上昇する事によって確認することができる。安定性の改善が最大化される濃度、及び安定性向上の度合いは、使用する酸の種類、特にpKs1値に大きく依存し、すべての場合において、最適濃度範囲で安定化効果が示される。
【００２１】
酸性緩衝システムを追加した際の安定性には、改善が見られなかった。例えば、酢酸を50μg/ml添加した場合、純粋なアルプロスタジルのエタノール溶液と比較して安定性が向上するが、一方、50μg/ml酢酸及び50μg/ml酢酸ナトリウム、又は25μg/ml酢酸及び25μg/ml酢酸ナトリウムからなる緩衝液混合物を添加すると、安定性は低下する。
また、純粋な酸は、最適安定化効果濃度範囲が深く又は低く、強い酸であるほど、範囲が狭くなる。以下の表１は、20μg/mlのアルプロスタジルを含有する無水エタノール溶液における上記関係を示す。
表１：20μg/mlのアルプロスタジルを含有する無水エタノール溶液に適した酸濃度範囲
【００２２】
【表１】
2017507172.tif 000002
【００２３】
表１は、アルプロスタジルの安定化に寄与することが実験的に確認された、有効かつ使用可能な酸の好ましい濃度範囲を示す。
比較実験から、pKs1値が<4.85（4.85未満）の場合、特にpKs1値が2〜4.8の範囲内である場合、有利な安定化効果を達成することができることがわかる。
pKs1値が0以上であって4.85未満、濃度がc min=1.45×e(1.02×pKs1)μM(=μmol/l)以上であってc max=11.75×e(1.35×pKs1)μM(=μmol/l)以下の酸が有効である。酸のpKs1値が0未満の場合は、c min=1.0μM(=μmol/l)以上であってc max=15μM(=μmol/l)以下の濃度が有効である。
【００２４】
さらに、2以上、4.8以下のpKs1値を有する無機又は有機酸を、0.5〜500μg/mlの濃度、特に好ましくは1〜250μg/mlの濃度で含有すると、アルプロスタジルの安定化に有効であることが確認された。
欧州薬局方の定義及び要件に応じて、プロピレングリコール、1,3-ブタンジオール、酢酸エチル、96％エタノール 欧州薬局方（95.1〜96.9％（V/V）92.6〜95.2重量％に相当)、無水エタノール 欧州薬局方（最低99.5％（V/V）最低99.2重量％に相当）又は100％エタノールと同義語と解される無水エタノール、等が非水性溶媒として好ましく用いられる。
【００２５】
これらの溶媒はすべて、毒性プロフィール上、非経口製剤に適用可能であり、アルプロスタジルは、十分な濃度で溶解される。これら溶媒の混合物が有利に用いられる。また、ポリエチレングリコールやポリソルベートなどの可溶化剤を添加してもよい。
また、好ましい組成物は、有効成分として、非水性溶媒中に溶解されアルプロスタジルのみを含有し、有効成分の安定化剤として少なくとも一つの酸または酸として働くプロトン供与体を含み、任意に賦形剤または添加剤等の他の成分を含んでもよい。
本発明に係る溶液の充填は、適切な一次包装によって行われる。一次包装とは、薬物と直接接触する包装材料である。一方で、それら包装は、関連する薬局方の要件を満たす必要があり、できるだけ、安定性に有害な塩基性不純物の含有量を最小限とするように選択しなければならない。
【００２６】
敏感な非経口一次包装材に使用できる適切な材料としては、当業者に通常知られているものが用いられる。考えられる例としては、加水分解クラスIまたは加水分解クラスIIのガラス容器が挙げられるが、これらに限定されるものではない。同様に、例えば、COP、COC、PP、PE、HDPE、テフロン、PA などのプラスチックも使用できる。
好ましい一次容器は、加水分解クラスIのチューブ状ガラスアンプルまたはガラスバイアルであって、ブロモブチルゴムまたはクロロブチルゴムの栓（好ましくはコートされた）を有する。他の一次容器としては、カートリッジやプレフィルドシリンジ等が考えられるが、それらに限定されるものではない。
【００２７】
本発明のアルプロスタジル組成物は、ガラスアンプル、ガラスバイアル、カートリッジ、またはプレフィルドシリンジの、キット・オブ・パーツコンビネーションで存在する。
本発明において酸は、好ましくは、最終製品の製造工程中に溶媒に添加される。他の実施態様では、溶媒もしくは他のアジュバントの製造工程中、または有効成分であるアルプロスタジルの製造工程中に酸を加えることもできる。
【００２８】
本発明の医薬組成物は、好ましくは、非経口投与用輸液を調製するための濃縮物であって、特に、非経口投与のためにすぐに使用できる、希釈工程により調製される濃縮物である。非経口投与用輸液を調製するための希釈は、等張液、好ましくは生理食塩水で行ない、希釈倍率は、1:10〜1:500が好ましく、1:20〜1:250がより好ましい。
なお、本発明の組成物は、直接投与のための注射用濃縮液として使用することもできる。
【００２９】
本明細書記載の適用濃度に関する全てのデータ、例えば酸、アルプロスタジルに関するデータは、このような濃縮液に関するものであり、すぐに使用できる希釈輸液に関するものではない。
本発明のさらなる実施態様は、有効成分であるアルプロスタジルを上記非水性溶媒に溶解させた濃縮物を製造する際、酸又は酸として働くプロトン供与体を有効成分の安定化剤として添加する、液体医薬組成物の調製方法を提供する。  
本発明はさらに、有効成分であるアルプロスタジルが非水性溶媒に溶解した液体医薬組成物の安定化剤としての、上記酸又は酸として働くプロトン供与体の使用を提供する。
本発明の組成物は、血管拡張の治療が不可能又は治療に失敗した、第３度及び第４度の慢性動脈閉塞症を主な適応症とする。
【実施例】
【００３０】
本発明を以下の実施例を参照して説明するが、本発明はこれらの実施態様に限定されるものではない。
【００３１】
実施例１：
（実験アプローチ/エタノール/20μg/mlのアルプロスタジル/40μg/mlの酢酸/バイアル）
スターラー付きの2.5リットルガラス製容器に、無水エタノールと無水酢酸とを添加した。有効成分のアルプロスタジルを攪拌しながら添加し、完全に溶解させた。その溶液を2ミリリットルのI型琥珀色ガラスバイアルに充填し、クロロブチルゴム栓で密封した。
【００３２】
【表２】
2017507172.tif 000003
【００３３】
実施例２：
（実験アプローチ/エタノール/20μg/mlのアルプロスタジル/20μg/mlのリンゴ酸/バイアル）
スターラー付きの2.5リットルガラス製容器に、無水エタノールとDL-リンゴ酸とを添加した。有効成分のアルプロスタジルを攪拌しながら添加し、完全に溶解させた。その溶液を2ミリリットルのI型琥珀色ガラスバイアルに充填し、クロロブチルゴム栓で密封した。
【００３４】
【表３】
2017507172.tif 000004
【００３５】
実施例３：
（実験アプローチ/エタノール/20μg/mlのアルプロスタジル/20μg/mlのリンゴ酸/シリンジ）
スターラー付きの2.5リットルガラス製容器に、無水エタノールとDL-リンゴ酸とを添加した。有効成分のアルプロスタジルを攪拌しながら添加し、完全に溶解させた。その溶液をプレフィルドシリンジに充填した。
【００３６】
【表４】
2017507172.tif 000005
【００３７】
実施例４：
（製造アプローチ/エタノール/20μg/mlのアルプロスタジル/20μg/mlのDL-リンゴ酸/アンプル）
実施例4の製剤は、本発明の特に好ましい実施態様を表す。
スターラー付きの20リットルガラス製容器に、冷却された無水エタノールとDL-リンゴ酸とを添加した。有効成分のアルプロスタジルを攪拌しながら添加し、完全に溶解させた。その溶液を0.2ミクロンの細孔サイズを有する滅菌フィルターを通して濾過し、無菌環境下で2ミリリットルのI型琥珀色ガラスアンプルに充填した。充填されたアンプルの粒子状物質や密度を視覚的にチェックした後、ラベルし、二次包装した。
【００３８】
【表５】
2017507172.tif 000006
【００３９】
下記の表６及び表７に、さらなる実施態様を示す。溶媒に加える添加剤の量がμg単位で記載されている。表に記載されているすべての実施例は、任意のバッチサイズで製造され、すべての種類の適切な充填材に充填することがでる。
表６：アルプロスタジル濃度20μg/ml製剤の製造例
【００４０】
【表６】
2017507172.tif 000007
【００４１】
表７：アルプロスタジル濃度10〜1000μg/ml製剤の製造例
【００４２】
【表７】
2017507172.tif 000008
【００４３】
酸の添加による安定化効果：
酸の添加による安定化効果の確認は、4℃の貯蔵温度と、25℃/65％RHのストレス条件下での安定性試験で行なった。2ミリリットルの加水分解クラスIチューブ状ガラスバイアルを包装容器として用いた。ガラスの品質は、アンプル用のガラスの品質と同一である。以下、短い貯蔵期間後の安定性の差異について確認するために、25℃での試験の結果のみを記載する。市販品Pridax（登録商標）20（輸液製造用の20μg/ml Pridax（登録商標）濃縮物）の長期に渡る安定性試験から、4℃での製剤の分解は、25℃と同様に起こるが、分解反応の進行速度が約10倍遅いことがわかっている。
【００４４】
第1の実験では、最も近い従来技術とみなされる、輸液製造用の20μg/ml Pridax（登録商標）濃縮物からなる製剤を比較例(サンプル名  X03 130002-3)として用いた。本発明に係る試験製剤としては、20μg/mlの酢酸を含有する点以外は比較例と同様の組成を有する製剤（サンプル名  X03 130002-9）を用いた。
PGE1の含有量は、単位濃度（μg/ml）で測定された。以下のすべての試験結果表において含有量は、より良い比較のために、PGE1の初期値の％で記載される。 分解生成物PGA1の濃度を測定し、PGE1の含有量に基づく質量パーセント（％ m/m）で表した。
【００４５】
以下の表８は、両方の製剤についてPGE1（有効成分）とPGA1（分解生成物）の、製造直後（T=0）、及び25℃/65％RHで12週間保管した後（T=12週間）の含有量を示す。 PGE1の製造直後の絶対値は、酸を含まない製剤ついては18.3μg/ml、酸を含有する製剤については18.4μg/mlであった。
表８：25℃で12週間保管した場合の、コントロール（比較例）と酢酸20μg/ml含有との比較
【００４６】
【表８】
2017507172.tif 000009
【００４７】
従来技術のアルプロスタジル溶液に、20μg/mlの酢酸を添加したところ、25℃での12週間保管における顕著な安定性効果が確認された。PGE1（アルプロスタジル有効成分）の含有量低下が有意に減少し、PGA1（アルプロスタジル分解生成物）の含有量増加が有意に減少した。
【００４８】
酸の添加量又は濃度の影響確認：
さらなる実験で、安定化効果に対する酢酸の量の影響を調べるために、市販品である輸液製造用のPridax（登録商標）20μg/ml濃縮物からなる製剤（サンプル名  X03 130007）を用いて、同様の組成に加えて、酢酸を5μg/ml、20μg/ml、50μg/ml含有量となるように添加した各製剤（サンプル名 X03 130007-1、X03 130007-2、X03 130007-3）との比較を行なった。
【００４９】
以下の表９及び表１０（グラフ）は、これら４種類の製剤について、PGE1（有効成分）とPGA1（分解生成物）の、製造直後（T=0）、及び25℃/65％RHで6週間保管した後（T=6週間）の含有量を示す。
PGE1の製造直後の絶対値は、20.2〜20.2μg/mlであった。
表９：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと各酢酸濃度との比較
【００５０】
【表９】
2017507172.tif 000010
【００５１】
表１０（グラフ）：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと各酢酸濃度との比較
【００５２】
【表１０】
2017507172.tif 000011
【００５３】
アルプロスタジル溶液への20μg/ml酢酸添加による安定化効果は、サンプルX03 130007-2の実験で再現できた。酢酸の量を50μg/mlまで増加させると、安定性はさらに向上した。しかし、5μg/mlの濃度では、有意な安定化効果はみられなかった。
【００５４】
酸の種類による効果：
さらなる実験で、各種酸の20μg/ml添加による安定化効果を比較した。市販品である輸液製造用のPridax（登録商標）20μg/ml濃縮物からなる製剤（サンプル名  X03 130007）を用いて、同様の組成に加えて、酢酸を含有する試験サンプル（サンプル名  X03 130007-2）、リンゴ酸を含有する試験サンプル（サンプル名  X03 130007-5）、酒石酸を含有する試験サンプル（サンプル名  X03 130007-8）、クエン酸を含有する試験サンプル（サンプル名  X03 130007-11）、アセチルシステインを含有する試験サンプル（サンプル名  X03 130007-14）、リン酸を含有する試験サンプル（サンプル名  X03 140006-6）、及び塩酸を含有する試験サンプル（サンプル名  X03 140006-3）との比較を行なった。
【００５５】
以下の表１１は、これら８種類の製剤について、PGE1（有効成分）とPGA1（分解生成物）の、製造直後（T=0）、及び25℃/65％RHで6週間保管した後（T=6週間）の含有量を示す。
PGE1の製造直後の絶対値は、20.2〜20.3μg/mlであった。
表１１：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと各種酸との比較
【００５６】
【表１１】
2017507172.tif 000012
【００５７】
下記の表１２（グラフ）は、酸を添加していない製剤及び安定化効果が認められた５種の製剤について、25℃/65％RHで6週間保管した後の、PGE1（有効成分）とPGA1（分解生成物）の含有量を示す。安定化効果が観察されなかった塩酸含有製剤及びリン酸含有製剤はグラフに表示されていない。20μg/mlの塩酸添加は、アルプロスタジル及びその分解生成物PGA1両方の減少をもたらす。20μg/mlのリン酸添加は、酸を含まない製剤と比較して安定性の低下をもたらす。両方の場合において、安定化のための最適濃度は20μg/mlを超えていた。酢酸の場合、最適濃度はわずかに高い、約50μg/mlからである。
表１２（グラフ）：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと各種酸20μg/mlとの比較
【００５８】
【表１２】
2017507172.tif 000013
【００５９】
この実験は、酸添加による安定化効果が、使用する酸の種類に大きく依存することを示す。最初に用いた酢酸は、多価の有機酸やアセチルシステインより低い安定化効果を有していた。安定化効果の機能的メカニズムは、水性系のpH最適化と同様の、酸濃度による非特異的最適化だけでなく、驚くべきことに、酸特異的な安定化メカニズムも確認できる。
【００６０】
強酸、リン酸及び塩酸の安定化効果の確認：
リン酸及び塩酸は、20μg/mlの濃度で安定化効果を示さなかったので、さらに実験を行ない、これらの酸による安定化効果が、より低濃度で検出できるか確認した。
リン酸を用いて、5μg/mlの濃度で試験を行なった。以下の表１３は、5μg/mlの濃度で良好な安定化効果が得られることを示す。
表１３：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと、5μg/mlリン酸及び20μg/mlリン酸との比較
【００６１】
【表１３】
2017507172.tif 000014
【００６２】
また、塩酸について、0.05μg/ml〜2μg/mlの濃度範囲で試験を行なった。0.1μg/ml〜0.8μg/mlの塩酸濃度範囲で安定化効果が確認され、最適安定化は約0.5μg/mlでみられた。但し、2μg/mlの添加では、酸を添加していない場合より安定性が著しく劣っていた。
【００６３】
リンゴ酸の量又は濃度の影響確認：
各種の酸を比較することによって、リンゴ酸が特に好ましいことが証明された。リンゴ酸は、その毒性プロフィール上、非経口製剤に使用するのに非常に適している。さらなる実験で、リンゴ酸の量又は濃度が安定化効果に及ぼす影響を調べた。
上述した酢酸を用いた試験と同様に、市販品である輸液製造用のPridax（登録商標）20μg/ml濃縮物からなる製剤（サンプル名  X03 130007）を用いて、同様の組成に加えて、DL-リンゴ酸を5μg/ml、20μg/ml、50μg/ml含有量となるように添加した各製剤（サンプル名 X03 130007-4、X03 130007-5、X03 130007-6）との比較を行なった。
【００６４】
以下の表１４は、これら４種類の製剤について、PGE1（有効成分）とPGA1（分解生成物）の、製造直後（T=0）、及び25℃/65％RHで6週間保管した後（T=6週間）の含有量を示す。
PGE1の製造直後の絶対値は、20.0〜20.1μg/mlであった。
表１４：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと各リンゴ酸濃度との比較
【００６５】
【表１４】
2017507172.tif 000015
【００６６】
表１５（グラフ）：25℃で6週間保管した場合の、コントロールと各リンゴ酸濃度との比較
【表１５】
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【００６７】
リンゴ酸の場合、酢酸とは異なり、5μg/mlの非常に少量の添加であっても、アルプロスタジルを安定化させた。20μg/mlで安定化効果の向上がみられた。一方、酢酸とは異なり、50μg/mlに増加させても安定性のさらなる向上はみられなかった。
【００６８】
要求される酸の性質及び量に関する試験結果の要約：
pKs1の値が、アルプロスタジルのpKs1値である4.85よりも低い酸が、アルコール溶液のアルプロスタジル安定化に適している。酸度以外のものは、安定性にさらなる影響を与えない。
【００６９】
好ましい酸の場合、pKs1値と必要量又は濃度との間に、pKs1値が下がると必要量が減少する関係がある。
指数回帰によって、安定化する酸のpKs1値から近似的に、安定化に必要な酸濃度を得ることができる。
C max in μM  c= 11.75e(1.35×pKs1)
C min in μM  c= 1.45e(1.02×pKs1)
【００７０】
これらの式から、安定化のために必要な酸濃度をμM単位（=μmol/l）で得ることができる。0から4.85までのpKs1値を有する好適な有機酸及び無機酸に適用できる。
pKs1<0の酸については、0であると推定され、下記の一定の値となる。
C max= 13.2μM 
C min= 1.3μM
上記の表１は、各種酸による安定化に適した濃度をμg/mlで例示したものである。
【国際調査報告】
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