(57)【要約】本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する障害などの皮膚炎症障害に関連する作用を治療するための、ジヒドロクエルセチン、ならびに任意にα‐トコフェロールおよび／またはビサボロールを含む組成物の使用に関する。また本発明は、本発明に使用するための組成物を製造する工程に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための、ジヒドロクエルセチンを含む組成物。
【請求項２】
前記皮膚炎症障害が、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ジヒドロクエルセチンの濃度が、前記組成物の総重量の１〜１０重量％、好ましくは３〜９重量％、好ましくは５〜７重量％の範囲にある、請求項１または２のいずれかに記載の組成物。
【請求項４】
ビサボロールをさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記ビサボロールの濃度が、前記組成物の総重量の０．１〜１重量％、好ましくは０．３〜０．７重量％の範囲にある、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
α−トコフェロールをさらに含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記α−トコフェロールの濃度が、前記組成物の総重量の０．５〜２重量％、好ましくは１〜１．５重量％の範囲にある、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物が、美容上許容可能なビヒクル、好ましくは動物性脂肪、植物性脂肪、高級アルコール、グリコール、またはそれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの化合物を含むビヒクルを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、界面活性剤、色素、安定剤、皮膚軟化薬、保水剤、またはそれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記組成物が、クリーム、ゲル、軟膏、液剤、エマルジョン、マスク、ミルク、ローション、セラム、ペースト、フォーム、または懸濁剤、好ましくはクリームである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、局所投与用に設計されている、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物を製造する工程であって、前記工程が、ＤＨＱ、α‐トコフェロール、およびビサボロールを、美容上許容可能なビヒクルと混合するステップを含む、工程。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する障害などの皮膚炎症障害に関連する作用を治療するための、ジヒドロクエルセチン、ならびに任意にα―トコフェロールおよび／またはビサボロールを含む組成物の使用に関する。また、本発明は、本発明の組成物を製造する工程にも関する。
【背景技術】
【０００２】
乾癬
乾癬は、銀色の肥厚した鱗屑で覆われた炎症性の赤い皮膚の斑状の肥厚を特徴とする一般的な皮膚の疾患である。乾癬は、乾癬の強度、持続期間、位置、形状、および鱗屑のパターンが異なる、様々な形態で起こる。肘および膝は、乾癬を罹患する最も一般的な領域である。多くの場合、身体の両側の同一の場所で乾癬が発症する。斑は、コインより小さなものから手より大きな大きさといった範囲であり得る。乾癬の最も一般的な形態は、尋常性乾癬（最も一般的な形態は銀白色の死細胞の集積（鱗屑）で覆われた、盛り上がり、炎症性の赤色の病変を特徴とし、体躯、肘、膝、頭皮、および指または足指爪で主に見出される）；膿疱性乾癬（小さな膿疱（稗粒腫様病変）を特徴とし、身体全体で見出されるか、または手掌、足底、および身体の他の領域に限定されるまれな形態）；滴状乾癬（小児で最も高頻度に発症し、皮膚の広い範囲にわたり急速に発症する多くの小さな、赤い滴様の鱗状の斑を特徴とする）、ならびに倒置乾癬（腋窩、乳房の下、皮膚のひだ、鼠蹊部周辺、臀部の間の間隙、および生殖器周辺で発症し、乾癬の他の形態で見られる肥厚性の鱗屑が存在しない）である。
【０００３】
乾癬は、軽度、中度、または重度に分類することができる。軽度の乾癬は、身体の５〜１０％未満にわたり鱗屑があるとされ、中度の乾癬は、身体の１０〜２０％にわたり鱗屑があるとされ、重度の乾癬は、身体の２０％超にわたり鱗屑があるとされる。すべての乾癬患者の５パーセントでは、関節炎を発症する。この状態は、乾癬性関節炎と呼ばれる。関節炎は関節の炎症であり、通常、疼痛、腫脹、および関節構造の変化を伴う。
【０００４】
乾癬は、様々な免疫の異常に関連する、慢性かつ再発性の皮膚の炎症性疾患である。また、乾癬患者の約３０％が、乾癬性関節炎を示す関節の合併症を有している。遺伝子および環境は、これら疾患の病変形成に鍵となる役割を果たしており、注目すべきことに、ゲノム全体の連鎖スキャンから、乾癬およびアトピー性皮膚炎の感受性遺伝子座が一部重複していることが明らかとなった。
【０００５】
リンパ球、樹状ＡＰＣ（抗原提示細胞）、ＮＫＴ（ナチュラルキラーＴ）細胞、好中球、マスト細胞、ケラチノサイト、および線維芽細胞を含む多くの種類の細胞は、乾癬の病変形成に関与すると推定されている。慢性乾癬は、特に、好中球による著しい皮膚の浸潤および微小膿瘍の形成を特徴とする。ＩＬ−８は、乾癬の好中球において発現されることが見いだされており、微小膿瘍および膿疱の形成にＩＬ−８が関わっていることが示唆されている。さらに、いくつかの研究により、乾癬性プラークの好中球およびケラチノサイトの両方において発現されたＩＬ−８レベルの増加が、病変部位へのマスト細胞の遊走に寄与する役割を果たしており、マスト細胞の数が乾癬性炎症の部位で著しく増加することが、示唆される。多因子性免疫エフェクター細胞の役割を考慮することにより、マスト細胞は、乾癬の炎症工程の永続化に本質的な役割を果たしていると考えられる。同様に、ＩＬ−１７およびＩＬ−２３も、乾癬の病変形成に主要な役割を果たしていることが知られている。特に、マスト細胞よび好中球は、ヒトの皮膚においてＩＬ‐１７を含む主な細胞種であることが例証されている。さらに、ＩＬ−２３およびＩＬ−１βは、マスト細胞の細胞外トラップ形成およびヒトのマスト細胞の脱顆粒を誘導することがわかっており、乾癬の発病においてＩＬ‐１７の放出が中心的な役割を果たすことが示唆されている。
【０００６】
既存の乾癬の治療は、一般的には、主要な３つのカテゴリ：局所治療、全身治療、および紫外（ＵＶ）光治療に分類することができる。
【０００７】
局所治療には、鱗屑を低減する、クリーム、軟膏、ワセリン、パラフィン、および硬化植物油などの皮膚軟化薬；鱗屑を軟化し、鱗屑の除去を促進し、他の局所薬剤の吸収を増大させるサリチル酸；抗炎症性であり、ケラチノサイトの過増殖を減少させるコールタール調製物；局所用の抗増殖および抗炎症剤であるアントラリン；局所にまたは注射で使用され得る副腎皮質ステロイド；正常なケラチノサイトの増殖および分化を誘導するビタミンＤ３類似体；カルシニューリン阻害剤；ならびに局所用のレチノイドであるタザテロンが挙げられる。
【０００８】
全身治療には、メトトレキサート；尋常性乾癬、膿疱性乾癬、および掌蹠乾癬過多症（ｈｙｐｅｒ  ｋｅｒａｔｏｔｉｃｐａｌｍｏｐｌａｎｔａｒ  ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）の重度および不応性の症例に適応されるレチノイド（たとえばアシトレチン、イソトレチノイン）の全身投与；シクロスポリン（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅｉｓ）などの免疫抑制剤；ならびに、ＴＮＦ−α阻害剤（エタネルセプト、アダリムマブ、インフリキシマブ）、Ｔ細胞修飾物質のアレファセプト、ならびにＩＬ−１２およびＩＬ−２３を標的とするヒトモノクローナル抗体であるウステキヌマブなどの免疫調節剤を用いた治療が挙げられる。
【０００９】
最後に、ＵＶ光治療は、典型的に、広範囲の乾癬を有する患者で使用されている。対応する作用機構は未だ知られていないが、ＵＶＢ光は、ＤＮＡの合成を低減し、軽度の全身性免疫抑制を誘導することができる。さらに、治療（ＰＵＶＡ）は、光増感剤であるメトキシソラレンの投与を、長波長のＵＶＡ光（３３０〜３６０ｎｍ）の曝露と併用し、これにより、抗増殖作用をもたらし、また、ケラチノサイトの分化を正常化するためにも役立つ。レチノイドの投与と、ＵＶ光への曝露、単一のＮＢＵＶＢ光（３１１〜３１２ｎｍ）への曝露または単一のエキサイマーレーザー（３０８ｎｍ）への曝露の併用もまた、乾癬を治療する公知の方法である。
【００１０】
アトピー性皮膚炎
アトピー性皮膚炎は、「アトピー性湿疹」、「神経皮膚炎」、または「ベニエ痒疹（ｐｒｕｒｉｇｏ  Ｂｅｓｎｉｅｒ）」の名称でも現在知られており、炎症性、再発性およびそう痒性の皮膚障害であり、未だ原因がわかっていない。アトピー性皮膚炎は、身体のどの場所でも発症し得るが、好ましくは、手および足、足首、手首、顔、首、および胸部上部に局在する。症状は様々で、通常は、赤く、炎症があり、かゆみを伴う発疹を含み得るが、盛り上がって、疼痛を伴う隆起を発症する場合がある。一般的に、アトピー性皮膚炎は、季節性鼻アレルギー、喘息、およびアレルギー性結膜炎のような他のアトピー性疾患と共に起こり、多くの場合、乾癬と混同される。アトピー性皮膚炎患者の皮膚は、刺激物質、食品、および環境のアレルゲンに、異常かつ容易に反応する。
【００１１】
アトピー性皮膚炎に関する治癒例は知られていないが、乾癬に関して推奨される治療は、患者にとって短期間の代替的治療を提供し得る。
【００１２】
蕁麻疹
蕁麻疹は、一般的には「蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ）」とも呼ばれ、盛り上がって、かゆみを伴う薄赤色の隆起を特徴とする。蕁麻疹の原因は、アレルギーからくるものであり得るが、また、非アレルギー性が原因のこともあり、多くの場合不明である。慢性蕁麻疹の症例の多くは、自己免疫応答により引き起こされる突発的原因を有する。根本となる分子機構は、潜在的に、皮膚マスト細胞からのヒスタミンまたはサイトカインの放出にあり、これにより、真皮の毛細管の漏出などの表層部血管からの流体の漏出が起こる。間質液が周辺細胞に吸収されるまで、形成された浮腫が持続する。これまで、治癒的治療法は知られていない。ジフェンヒドラミンなどの抗ヒスタミン剤、またはドキセピンなどの三環系抗うつ剤（ａｎｔｉｏｘｙｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ）を、治療に使用してもよいが、同様に副作用をも伴う。プレドニゾンなどの副腎皮質ステロイドは、重度の発症を治療するために使用されており、ヒドロコルチゾン、フルオシノニド、またはデソニドなどの局所クリームもまた、かゆみを軽減するために処方され得る。
【００１３】
国際特許公開公報第０３／０５１２８７号は、電離放射線の少なくとも１つの有害作用を局所適用によって低減、治療、または予防する組成物であって、少なくとも１つの非フラボノイド抗酸化剤と少なくとも１つのフラボノイドとの混合物を含み、少なくとも１つの成分が緑茶から得られる、組成物を開示する。国際特許出願第０３／０５１８７号の例示される組成物は、フラボノイドとしてのクエルセチンと、非フラボノイド抗酸化剤としてのビタミンＡ、ビタミンＥ酢酸塩、パルミチン酸アスコルビル、およびリポ酸の混合物とを含む。患者が、この組成物の投与の効果を自己評価しており、放射線療法後の放射性皮膚炎の重症度がより低いことを記載した。
【００１４】
米国特許公開公報第２００５／２４９７６１号は、皮膚の疾患および／または皮膚の炎症性反応の予防および／または治療のための局所組成物に関し、この局所組成物は皮膚の美容上のケアにも使用することができる。この組成物は、アリールオキシムおよびビサボロールを含み、さらにアジュバントおよび／または賦形剤を含んでもよい。アリールオキシムは、皮膚の炎症の治療に有益であることが知られているが、処方が困難である。米国特許出願公開公報第２００５／２４９７６１号では、ビサボロールの使用が、抗炎症作用を強化しつつ組成物を安定化することができることが示された。しかしながら、この組成物の効能の評価は提供されていない。
【００１５】
Ｋｉｒｃｈｎｅｒら（Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，  ２０１３，  ２０１３：７１０２３９）は、（＋）‐カテキン水和物を含むフラボノイドが、活性酸素種（ＲＯＳ）の生成およびＮＥＴ（好中球細胞外トラップ；ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｔｒａｐ）の形成を阻害することを記載している。特に、この論文は、乾癬などの自己免疫疾患におけるＮＥＴおよびＮＥＴ成分の役割を開示している。しかしながら、Ｋｉｒｃｈｎｅｒらは、皮膚炎症障害に関連する作用を治療するための、ジヒドロクエルセチンを含む組成物の使用を開示していない。
【００１６】
Ｂｉｔｏら（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，  ２００２，  ５２０（１−３）：１４５−１５２）は、ヒトのケラチノサイトにおけるタキシフォリンによるＩＮＦγ‐誘導型のＩＣＡＭ−１のタンパク質およびｍＲＮＡの発現の阻害を開示する。よってＢｉｔｏらは、皮膚の病態におけるタキシフォリンの治療上の可能性を示唆している。しかしながら、Ｂｉｔｏらは、いかなる皮膚の病態も開示していない。特にＢｉｔｏらは、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患に言及していない。
【００１７】
欧州特許出願公開公報第１２１８１０５８．４号は、治療に関連する皮膚の不快感に患者が対処するのを助けるためのコンパニオン美容処置を開示する。この出願は、特に、治療により誘発された皮膚の刺激、炎症、または皮膚の紅斑に起因する、好ましくは、抗癌性の放射線療法および／または化学療法に起因する不快感を治療するための、ジヒドロクエルセチン、α‐トコフェロール、およびビサボロールを含む美容上組成物を記載している。しかしながら、欧州特許出願公開公報第１２１８１０５８．４号は、皮膚炎症性障害、より具体的には、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの、不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する作用を治療するための、ジヒドロクエルセチンを含む組成物の使用を開示していない。
【００１８】
乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹を治療するためのいくつかの治療が提案されているにもかかわらず、これらの治療のいずれも、実際には、中〜長期にわたってこれら疾患に関連する作用を軽減することができ、なおかつ有害な副次作用のない治療を提供しない。
【００１９】
よって、皮膚炎症性障害、より具体的には、皮膚の炎症、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹を含む不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する作用を治療するための解決策を提供する必要がある。本発明はこのニーズを満たすことを目標とし、かつ患者への局所投与に適した組成物の使用に関する。
【００２０】
好ましくは、本発明の組成物は、安全であり、光毒性および／または光感受性（ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｂｉｌｉｚｉｎｇ）である成分を含まず、毒性を示さない。また、本発明の組成物は、皮膚の炎症に関連し、かつ、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する作用の治療に有効である。
【００２１】
本発明の組成物は、高い安定性および保存性を有するといった利点を提示する。さらに、本発明の組成物は、皮膚に塗布する際に好ましい感覚をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
よって、本発明は、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための、ジヒドロクエルセチンを含む組成物に関する。
【００２３】
一実施形態では、本発明で使用するための組成物はビサボロールをさらに含む
【００２４】
一実施形態では、本組成物は、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する作用を治療する方法に使用するためのものである。
【００２５】
本発明の特定の実施形態では、本組成物は、α‐トコフェロールをさらに含む。
【００２６】
特定の実施形態では、本発明で使用するための組成物は、ジヒドロクエルセチンの濃度が、本組成物の総重量の１〜１０重量％、好ましくは３〜９重量％、好ましくは５〜７重量％の範囲にある組成物である。特定の実施形態では、本発明の組成物は、ビサボロールの濃度が、本組成物の総重量の０．１〜１重量％、好ましくは０．３〜０．７重量％の範囲にある組成物である。特定の実施形態では、本発明の組成物は、α‐トコフェロールの濃度が、本組成物の総重量の０．５〜２重量％、好ましくは１〜１．５重量％の範囲にある組成物である。
【００２７】
特定の実施形態では、本発明に使用するための組成物は、濃度が本組成物の総重量の１〜１０重量％、好ましくは３〜９重量％、好ましくは５〜７重量％の範囲にあるジヒドロクエルセチンと、濃度が本組成物の総重量の０．１〜１重量％、好ましくは０．３〜０．７重量％の範囲にあるビサボロールと、濃度が本組成物の総重量の０．５〜２重量％、好ましくは１〜１．５重量％の範囲にあるα−トコフェロールとを含む、またはからなる。
【００２８】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物は、好ましくは、動物性脂肪、植物性脂肪、高級アルコール、グリコール、またはそれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの化合物を含む美容上許容可能なビヒクルをさらに含む。
【００２９】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物は、界面活性剤、色素、安定剤、皮膚軟化薬、保水剤、またはそれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含む。
【００３０】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物は、クリーム、ゲル、軟膏、液剤、エマルジョン、マスク、ミルク、ローション、セラム、ペースト、フォーム、または懸濁剤であり、好ましくはクリームである。
【００３１】
特定の実施形態では、本発明に使用するための組成物は、局所投与用に設計されている。
【００３２】
さらに本発明は、本発明に使用するための組成物を製造する工程であって、上記工程が、ＤＨＱ、α−トコフェロール、およびビサボロールを、美容上許容可能なビヒクルと混合するステップを含む、工程に関する。特定の実施形態では、本発明で使用するための組成物を製造する工程は、油にＤＨＱを混合する第１のステップと、さらにビサボロールを添加するステップとを含む。特定の実施形態では、本発明で使用するための組成物を製造する工程は、油にＤＨＱを混合する第１のステップと、さらにビサボロールおよびα−トコフェロールを添加するステップとを含む。
【図面の簡単な説明】
【００３３】
【図１】ＰＭＡまたはｆＭＬＰによる好中球の活性化に起因するチロクロムｃの還元（スーパーオキシドアニオンの産生）に及ぼすＤＨＱの阻害効果を示すグラフである。チトクロムｃの還元をｄＤＯ／分で表す。ＤＨＱの濃度は、μＭで記録する。図１のグラフに対応する数値データを表１で詳細に表す。
【図２】１００ｎｇ／ｍｌのＰＭＡによる好中球の活性化に起因するＲＯＳの産生に及ぼすＤＨＱの阻害効果を示すグラフである。図２のグラフに対応する数値データを表ＩＩに詳細に表す。
【図３】１０−６ＭのｆＭＬＰによる好中球の活性化に起因するＲＯＳの産生に及ぼすＤＨＱの阻害効果を示すグラフである。図３のグラフに対応する数値データを、表ＩＩＩに詳細に表す。
【図４】β‐ヘキソサミニダーゼの放出により推定されるマスト細胞の脱顆粒に及ぼすＤＨＱの効果を示すグラフである。放出されたβ‐ヘキソサミニダーゼ（ｂｅｔａ−ｈｅｘａｍｉｎｉｄａｓｅ）の減少をパーセントで表し、ここで１００％は、ＤＨＱの非存在下でのβ‐ヘキソサミニダーゼの放出に対応する。ＤＨＱの濃度は、μＭで記録する。
【図５】還元ＭＴＴレベルの減少により推定されるＤＨＱの増加濃度の存在下における線維芽細胞の増殖阻害を示すグラフである。還元されたＭＴＴレベルの減少は、還元されたホルマザンの測定により評価される。細胞の生存率は、還元されたＭＴＴの度合いにより評価される。ＤＨＱの濃度は、μＭで記録する。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
定義
本発明では、以下の用語は以下の意味を有する
【００３５】
数字の前にある「約」は、上記数字の±１０％の値を意味する。
【００３６】
「美容上許容可能な」は、不適当な有害な副作用（毒性、刺激、アレルギー性応答など）を伴うことなく皮膚との接触での使用に適した成分を指す。
【００３７】
「ビヒクル」は、関心対象の成分を混合する、または関心対象成分を溶解する物質を指す。一実施形態では、ビヒクルは、美容上許容可能な基剤であり得る。
【００３８】
「美容上許容可能な基剤」は、親油性成分を含む、美容上許容可能なビヒクルを指す。
【００３９】
「治療する」は、治療上の処置および予防上（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）の手段の両方を指し、ここでの目的は、標的となる病態または障害を予防または遅延させる（和らげる）ことである。処置が必要な対象は、すでに障害を有する対象、ならびに障害を有する傾向がある対象、または障害を予防すべき対象を含む。一実施形態では、「治療する」は、臓器、組織、または細胞機能の欠損または非存在に関連する皮膚炎症障害の少なくとも１つの有害作用または症状を低減または軽減することを指す。本発明の方法により治療量の抗体を投与した後に患者が、以下：病原性細胞の数の減少、病原性である総細胞のパーセントの減少；および／または特定の疾患もしくは病態に関連する症状の１つまたは複数のある程度までの緩和；罹患率および死亡率の減少、ならびにクオリティ・オブ・ライフの改善、のうち１つまたは複数の観察可能かつ／または測定可能な低減または非存在を示す場合、対象または哺乳類の感染症の「治療」が成功している。疾患における治療の成功および改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られている通常の手段により容易に測定可能である。一実施形態では、用語「治療する」は、「緩和する」を意味する。
【００４０】
「コンパニオン美容組成物」は、治療に関連する皮膚の不快感に患者が対処するのを助けるように意図された美容組成物を指す。
【００４１】
「対象」は、哺乳類、好ましくはヒトである。一実施形態では、対象は、「患者」、すなわち、温血動物であり得て、より好ましくは、医療を受けるために待機しているヒト、または医療を受けているヒト、または医学的技法の対象であるヒト、または皮膚炎症性障害の発症に関してモニタリングされているヒトであり得る。一実施形態では、対象は成年（たとえば１８歳超の対象）である。別の実施形態では、対象は小児（たとえば１８歳未満の対象）である。一実施形態では、対象は男性である。別の実施形態では、対象は女性である。
【００４２】
詳細な説明
本発明は、皮膚炎症障害に関連する作用、好ましくは不適切な免疫応答を特徴とする疾患、より好ましくは乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹に関連する作用を治療する方法に使用するためのジヒドロクエルセチン（ＤＨＱ）を含む組成物に関する。
【００４３】
ジヒドロクエルセチン（本明細書中「ＤＨＱ」とも呼ばれる）は、一般名が３，３’，４’，５，７−ペンタヒドロキシフラボンデハイドラートであり、２−（３，４−ジヒドロキシフェニル）−３，５，７−トリヒドロキシ−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン  デハイドラートであり、タキシフォリンとしても知られている。ＤＨＱは、フラボノイドファミリーの天然の化合物である。フラボノイドは、その抗酸化、抗炎症、抗アレルギー、または抗虚血特性により、治療に有望であることが報告されている。さらにフラボノイドは、局所投与の後、深部皮膚層へと浸透し得る。これらのうち、クエルセチンは、最も報告の多いものの１つであるが、遺伝毒性であり、変異原であり、かつ化学的安定性が低いことが知られている。
【００４４】
ＤＨＱは、重要な生物学的かつ薬理学的な特性が保存された高い化学的安定性、およびその安全性を特徴とする、クエルセチンに代わる有効な代替品である。ＤＨＱは、強力な抗酸化剤であり、安全かつ、天然の保存剤として同定されている。よって、ロシアおよび米国では、１５〜２０年にわたり、栄養補助食品として販売されている。
【００４５】
本発明の特定の実施形態では、本発明に使用するための組成物中のＤＨＱの濃度は、１〜１０重量％（すなわち、組成物の総重量による重量単位）、好ましくは３〜９重量％、より好ましくは５〜７重量％、より好ましくは約６重量％の範囲にある。
【００４６】
特定の実施形態では、本発明で使用するための組成物は、ビサボロールをさらに含む。
【００４７】
ビサボロール（６−メチル−２−（４−メチル−３−シクロヘキセン−１−イル）−５−ヘプテン−２−オール、または１−メチル−４−（１，５−ジメチル−１−ヒドロキシヘキシ−４（５）−ニル）シクロヘキセン−１）は、ハーブティおよびカモミールを含む、様々な植物で見出されているセスキテルペンである。ビサボロールの公知の最も重要な作用は、抗炎症、創傷治癒、抗菌、抗真菌、および消炎特性である。よって、ビサボロールは、美容製品およびパーソナルケア製品に広く使用されている。ビサボロールは、特に、経皮浸透を高めるために使用することができ、言い換えると、修飾された皮膚障壁を通して拡散率を上げるために使用することができる（Ｋａｄｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｐｈａｎｎ．，  １９９１，  ７０：８７−９４）。本発明では、ビサボロールは、真皮領域へのＤＨＱおよび／またはα―トコフェロールの拡散を促進することが考えられるため、ＤＨＱおよび／またはα―トコフェロールのビヒクルとして使用される。一実施形態では、ＤＨＱは、カラマツ材の一種、好ましくはシベリアカラマツ（ｓｉｂｅｒｉａｎ  ｌａｒｃｈ）から抽出される。一実施形態では、ＤＨＱ含有散剤は、少なくとも９６重量％のＤＨＱを含み、かつ、分析および微生物学の報告に基づく技術的な必要要件および公衆衛生の規則に対応する。
【００４８】
一実施形態では、本組成物中のビザボロールの濃度は、総組成物重量の０．１〜１重量％、好ましくは０．３〜０．７重量％の範囲にあり、より好ましくは０．５％である。
【００４９】
さらに、特定の実施形態では、本発明は、皮膚炎症障害に関連する作用、特には、不適切な免疫応答、好ましくは乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹を特徴とする様々な疾患に関連する作用を治療する方法に使用するための、ＤＨＱ、ビサボロールを含み、さらには、α‐トコフェロールを含む組成物に関する。
【００５０】
α‐トコフェロールは、一般名が「ビタミンＥ」であり、多くの生物学的機能を有し、このうち抗酸化剤の機能は最も重要な機能と考えられている。さらに、α‐トコフェロールは脂溶性である。α‐トコフェロールは、グルタチオンペルオキシダーゼ経路に関連する抗酸化剤として機能し、脂質の過酸化連鎖反応の間に産生された脂質ラジカルと反応することにより、細胞膜を酸化から保護する。この工程は、反応性のフリーラジカル中間体を除去し、酸化連鎖反応を継続させないようにする。結果として得られるα‐トコフェロキシルラジカルを、アスコルビン酸塩、レチノール、またはユビキノール、ならびにＤＨＱなどの他の抗酸化剤による還元を通して還元形態に戻るように変換してもよい。理論により拘束されるものではないが、本発明の組成物において、α‐トコフェロールは、その活性なフェノール型でＤＨＱの再利用に都合がよいと、本出願人らは理解している。
【００５１】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物中のα‐トコフェロールの濃度は、本組成物の総重量の０．５〜２重量％、好ましくは１〜１．５重量％の範囲にあり、より好ましくは約１．２重量％である。
【００５２】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物は、本組成物の総重量の１〜１０重量％のジヒドロクエルセチンと、０．５〜２重量％のα‐トコフェロールと、０．１〜１重量％のビサボロールと、美容上許容可能なビヒクルとを含む。
【００５３】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物は、本組成物の総重量の３〜９重量％のジヒドロクエルセチンと、１〜１．５重量％のα‐トコフェロールと、０．３〜０．７重量％のビサボロールと、美容上許容可能なビヒクルとを含む。
【００５４】
一実施形態では、本発明に使用するための組成物は、本組成物の総重量の６重量％のジヒドロクエルセチンと、１．２重量％のα‐トコフェロールと、０．５重量％のビサボロールと、美容上許容可能なビヒクルとを含む。
【００５５】
本発明者らは、ＤＨＱ、ビサボロール、およびα‐トコフェロールの特定の組み合わせが、予想外に、皮膚炎症障害に関連する作用、より具体的には、不適切な免疫応答を特徴とする様々な疾患、好ましくは乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹に関連する作用を軽減することを発見した。
【００５６】
「皮膚炎症障害に関連する作用」、「不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する作用」、または「乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹に関連する作用」は、銀色の肥厚した鱗屑で覆われた炎症性の赤い皮膚の斑状の肥厚；銀白色の死細胞の集積（鱗屑）で覆われた、盛り上がった炎症性の赤色の病変；皮膚の広い領域にわたり急速に発症する小さな赤い滴状の鱗状の斑；盛り上がって痛みを伴う隆起へと発達する赤い炎症性のかゆみを伴う発疹；および盛り上がってかゆみを伴う薄赤色の隆起を特徴とする皮膚の損傷を意味する。
【００５７】
一実施形態によると、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、美容上許容可能なビヒクルをさらに含む。
【００５８】
一実施形態では、ビヒクルは美容上許容可能な基剤である。
【００５９】
一実施形態によると、美容上許容可能な基剤は、動物性脂肪、植物性脂肪、高級アルコール、グリコール、鉱油、またはそれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの化合物を含む。
【００６０】
一実施形態では、動物性脂肪は、たとえばステアリン酸である。一実施形態では、植物性脂肪は、たとえばホホバオイル（ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓオイルとも呼ばれる）、甘扁桃油、アボカド油、またはそれらの混合物である。一実施形態では、高級アルコールは、たとえばセテアリルアルコールである。一実施形態では、グリコールはたとえばプロピレングリコールである。一実施形態では、鉱油は、たとえばパラフィン油である。
【００６１】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、界面活性剤、色素、安定剤、皮膚軟化薬、保水剤、またはそれらの混合物を含む群から選択される少なくとも１つの成分をさらに含む。
【００６２】
一実施形態では、界面活性剤は、たとえばＰＥＧ−１００ステアリン酸塩、ＰＥＧ−２０ステアリン酸塩、またはそれらの混合物である。一実施形態では、安定剤は、たとえばカルボマーである。一実施形態では、色素はたとえば酸化亜鉛である。一実施形態では、皮膚軟化薬は、たとえばカプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、ジカプリルエーテル、グリセリルステアラート、グリセリルモノステアラート、またはそれらの混合物である。一実施形態では、保水剤は、たとえばグリセリン、ソルビトール、またはそれらの混合物である。
【００６３】
一実施形態によると、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、たとえばシトネロール、ゲラニオール、リモネン、またはそれらの混合物などの芳香剤をさらに含む。
【００６４】
一実施形態によると、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、水をさらに含む。特定の実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、水中油型のエマルジョンである。
【００６５】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、美容上の基剤として一般的に使用されており、当業者に知られている成分をさらに含む。
【００６６】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、ステロイド、ビタミンＤ３類似体、角質溶解薬、局所レチノイド、人工的もしくは遺伝的に操作した物質、既知のアレルギー剤、人工的な着色剤または芳香剤などのいかなるタールまたは硫黄誘導体も含まない。
【００６７】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、局所投与用に設計されている。
【００６８】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、クリーム、ゲル、軟膏、液剤、エマルジョン、マスク、ミルク、ローション、セラム、ペースト、フォーム、または懸濁剤の形態である。好ましい実施形態では、本発明で使用するための組成物は、クリームである。
【００６９】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、美容上組成物である。一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、医薬組成物である。
【００７０】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、治療上組成物である。
【００７１】
別の実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、非治療上の組成物である。
【００７２】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、治療により誘導される皮膚の不快感を予防かつ／または軽減するためのコンパニオン美容組成物として使用されない。別の実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法で使用するための組成物は、治療に関連する皮膚の不快感に患者が対処するのを助けるためのコンパニオン美容組成物として使用されない。
【００７３】
一実施形態では、本発明は、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法で使用するための組成物であって、上記方法が、本発明の組成物の投与からなる、組成物に関する。よって特定の実施形態では、上記方法は、別の治療の投与を含まない。
【００７４】
別の実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、皮膚炎症障害に関する別の治療と併用して投与される。一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法で使用するための組成物は、別の公知の乾癬の治療と併用して投与される。公知の乾癬の治療の例として、限定するものではないが、皮膚軟化薬、サリチル酸、アントラリン、ビタミンＤ３類似体、カルシニューリン阻害剤、タザロテンなどの局所治療；メトトレキサート、免疫抑制剤、アレファセプト、ウステキヌマブを用いた治療などの全身治療；紫外線（ＵＶ）治療が挙げられる。
【００７５】
別の実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、別の公知のアトピー性皮膚炎の治療と併用して投与される。既知のアトピー性皮膚炎の治療の例として、限定するものではないが、短期間の代替物として乾癬で推奨される治療が挙げられる。
【００７６】
別の実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法で使用するための組成物は、別の公知の蕁麻疹の治療と併用して投与される。公知の蕁麻疹の治療の例として、限定するものではないが、抗ヒスタミン剤、三環系抗うつ剤、副腎皮質ステロイドが挙げられる。
【００７７】
一実施形態では、本発明の使用のための組成物は、局所的に投与される治療と併用して投与される。別の実施形態では、本発明の使用のための組成物は、経口投与される治療と併用して投与される。
【００７８】
一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法に使用するための組成物は、標準的な保存条件において、１年間にわたり安定である。
【００７９】
一実施形態では、本発明に係る組成物の使用は、外用である。一実施形態では、本発明に係る組成物の使用は、組成物を炎症性の皮膚に塗布することを必要とする。
【００８０】
一実施形態では、組成物の薄層を用いて、皮膚の罹患領域を覆うために十分である量の組成物を塗布する。
【００８１】
一実施形態では、本組成物は、皮膚に残留物がほとんどまたは全く残らなくなるまですりこむべきである。一実施形態では、本組成物は、規則的なマッサージで皮膚に塗布する。一実施形態では、本組成物は、１日に１回、２回、３回、またはそれ以上の回数で塗布され得る。
【００８２】
一実施形態では、本発明の方法で使用される組成物は、コンテナ、好ましくはガラスのコンテナに保存される。一実施形態では、ガラスのコンテナは、乾熱滅菌機を使用して滅菌されている。一実施形態では、コンテナはプラスチックのコンテナである。一実施形態では、プラスチックのコンテナは、低圧「Ｈａｒｄ  Ｑｕａｒｔｚ  Ｇｌａｓｓ」ＵＶランプを使用したＵＶ照射を使用して、滅菌されている。
【００８３】
一実施形態では、本発明の組成物の塗布は、皮膚炎症障害に関連する作用、より具体的には、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹に関連する作用の治療を可能にする。
【００８４】
また、本発明は、皮膚炎症障害に関連する作用、好ましくは、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患に関連する作用を治療する方法に関する。
【００８５】
本発明の一実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法は、本明細書において上述の組成物の投与を含む。好ましい実施形態では、皮膚炎症障害に関連する作用を治療する方法は、その必要がある患者の皮膚に本発明に係る組成物を塗布するステップを含む。
【００８６】
一実施形態では、患者は皮膚炎症障害を罹患している。好ましい実施形態では、患者は、乾癬、アトピー性皮膚炎、および／または蕁麻疹などの不適切な免疫応答を特徴とする疾患を罹患している。別の実施形態では、患者は、皮膚炎症障害を罹患するリスクがある。
【００８７】
一実施形態では、患者は、皮膚炎症障害に関する別の治療でこれまで治療されていなかった。別の実施形態では、患者は、皮膚炎症障害に関する１つまたは複数の治療を以前に受けていた。
【００８８】
また、本発明は、本発明に使用される組成物を製造する工程に関する。一実施形態では、本発明の工程は、ＤＨＱ、α‐トコフェロール、およびビサボロールを、美容上許容可能なビヒクルと混合するステップを含む。
【００８９】
一実施形態では、本発明の工程は、ＤＨＱ、α‐トコフェロール、およびビサボロールを、美容上許容可能なビヒクルと混合する前に、ホホバオイル（ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｅｎｓｉｓオイルとも呼ばれる）、甘扁桃油、またはアボカド油にＤＨＱを溶解する予備的なステップを含む。
【００９０】
一実施形態では、美容上許容可能なビヒクルは、当技術分野で公知のいずれかの従来の方法により製造されている。
【００９１】
実施例
本発明を、以下の実施例によりさらに説明する。実施例は、本発明の範囲を限定することを意図していない。
【００９２】
実施例１：多形核好中球の活性化に及ぼすＤＨＱの作用
材料および方法
好中球（５×１０５）を、３７℃で、１０μＭのルミノールを含むハンクス平衡塩類溶液０．５ｍｌに懸濁する。次に細胞を、１０-6ＭのｆＭＬＦ（Ｎ−ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニン）で刺激する。化学発光を、ルミノメーター（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ−Ｂｉｏｌｕｍａｔ  ＬＢ９３７）を用いて記録する。
【００９３】
ＰＭＡ（１２−０−テトラデカノイル−ホルボール−１３−アセテート、Ｃｏｎｓｏｌｉｄａｔｅｄ  Ｍｉｄｌａｎｄ  Ｃｏｒｐ．，（ニューヨーク州ブルースター））を、ジメチルスルホキシドに１ｍｇ／ｍｌで溶解する。この原液は、２５℃の暗所に保存した場合数か月間完全な生物学的活性を維持する。特段他の記載がない限り、ＢＳ−Ｈ中１０６／ｍｌの多形核好中球（ＰＭＮ）を、プラスチックの遠心管（Ｆａｌｃｏｎ  Ｎｏ．  ２０７０，  Ｆａｌｃｏｎ  Ｌａｂｗａｒｅ，  Ｄｉｖ．  ｏｆ  Ｂｅｃｔｏｎ，  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＆  Ｃｏ．，（カリフォルニア州オックスナード））に入れ、３７℃にする。ＰＭＡの原液を添加して、最終濃度１００ｎｇ／ｍｌのＰＭＡを提供する。「休止期」（対照）の細胞に、１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）のジメチルスルホキシドを曝露する。化学発光（ルミノールを使用）方法を使用して、活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を測定する（Ｄａｎｇ  ｅｔ  ａｌ，  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ２００６，  １１６（７）：２０３３−４３；  Ｂｏｕｓｓｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ，  Ｂｌｏｏｄ．  ２０１０，  １１６（２６）：５７９５−８０２）。スーパーオキシドの産生を、スーパーオキシドジムスターゼ（ＳＯＤ）−阻害可能なフェリチトクロムｃ還元アッセイにより測定する。
【００９４】
結果
好中球を、オプソニン化した細菌、ザイモサン（ｚｙｍｏｚａｎ）、ｆＭＬＰ（ホルミル−メチオニル−ロイシル−フェニルアラニン）、またはＰＭＡ（ホルボールミリスタートアセタート）により活性化すると、好中球は酸化的バーストを起こし、スーパーオキシドアニオンおよびその後の過酸化水素を産生する。酸化的バーストは、主に、スーパーオキシドアニオンの産生の原因となる酵素であるＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化により媒介される。チトクロムｃの還元の測定によるスーパーオキシドアニオンの定量は（以下の表１および図１参照）は、ＤＨＱの添加が、チトクロムｃの還元を強力に阻害することを示す。この効果は、直接的なアニオンのスーパーオキシドの除去、またはＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性化の阻害のいずれかに起因する。
【表１】
2017505806.tif 000002
【００９５】
好中球の酸化的バーストに及ぼすＤＨＱの効果をさらに試験するために、ＲＯＳの産生を、スーパーオキシドアニオンおよび過酸化水素の両方を検出するために化学発光（ｃｈｅｍｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ）によっても測定した。
【００９６】
好中球を、３７℃で、１０μＭのルミノールを含むハンクスバッファー中異なる濃度のＤＨＱ（０．１、１、１０、および１００μＭ）の存在下でＰＭＡ（１００ｎｇ／ｍｌ）により誘発し、化学発光を、化学発光計（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ）により測定する。総ＲＯＳ産生に対応する２２．２１分の間の化学発光の計数の合計（積分）を決定する。対応する結果を、表ＩＩおよび図２に提示する。
【表２】
2017505806.tif 000003
【００９７】
同様に、好中球を、１０μＭのルミノールを含むハンクスバッファー中の異なる濃度のＤＨＱ（０、１、１０、および１００μＭ）の存在下でｆＭＬＰ（１０−６Ｍ）により誘発し、化学発光を化学発光計により測定した。総ＲＯＳ産生に対応する２２．２１分の間の化学発光計数の合計（積分）を決定した。対応する結果を、表ＩＩＩおよび図３に提示する。
【表３】
2017505806.tif 000004
【００９８】
化学発光アッセイは、スーパーオキシドアニオンのプロトン化形態および過酸化水素を含むすべての酸化ＲＯＳを検出した。
【００９９】
図２および３の結果は、ＤＨＱが、ＰＭＡまたはｆＭＬＰのいずれかにより活性化した好中球によるＲＯＳ産生を強力に阻害することを示す。ＤＨＱにより提供された阻害効果は、アッセイ培地に１μＭを添加することにより、両方の実験においてＲＯＳ産生のおよそ８０％の阻害をもたらすため、非常に有効である。
【０１００】
よって、これらの結果は、周知の抗酸化特性に加えて、ＤＨＱが、ｆＭＬＰまたはＰＭＡのいずれかにより誘発される多形核好中球におけるＮＡＤＰＨオキシダーゼの活性を阻害することを示唆する。この特性は、ＤＨＱがＰＭＡおよびｆＭＬＰにより誘発された多形核好中球の酸素消費をさらに強力に阻害するとの事実により確認されている（データ不図示）。
【０１０１】
実施例２：マスト細胞の活性化に関するＤＨＱの効果
材料および方法
純粋なヒトのマスト細胞（ＨＭＣ）集団を、幹細胞因子（ＳＣＦ）の継続的な存在下でのヒトの正常な造血前駆細胞（ＣＤ３４＋細胞）の長期間の培養により得る。これらのＣＤ３４＋細胞の供給源は、主に骨髄、臍帯血、または末梢血である。通常、骨髄および臍帯血由来の単核細胞は、０．５〜１％のＣＤ３４＋細胞を含み、対して末梢血は、０．１％未満のＣＤ３４＋細胞を含む。
【０１０２】
造血前駆細胞は、磁性標識したＣＤ３４＋細胞の陽性選択を使用して約８５〜９８％の純度まで迅速かつ効率的に濃縮することができる。次に、造血前駆細胞を、ＭＡＣＳ  ＣＤ３４マイクロビーズを使用して磁性的に標識する。磁性標識した細胞を、磁場をかけた陽性選択カラム上で濃縮する。または末梢血（ＰＢＭＣ）、臍帯血、または骨髄由来の単核細胞を、Ｆｉｃｏｌｌ  Ｐａｑｕｅ（登録商標）上で密度勾配遠心により得てもよい。マスト細胞を生成するための分画方法は、当該分野で説明されている（たとえばＡｒｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，  ２００８，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｂｉｏｌｏｇｙ  ４１５：  ２４１−２５４参照）。
【０１０３】
結果
マスト細胞の脱顆粒を、ＩｇＥ、次に抗ＩｇＥ抗体によるマスト細胞の逐次的な処置により誘導した。次に脱顆粒を、ＩｇＥ刺激から１時間後に、βヘキソサミニダーゼの放出を評価することにより測定した。（図４参照）。
【０１０４】
行った実験から、ＤＨＱが、マスト細胞の脱顆粒に関して強力な阻害性活性を有することが示される（１００μＭで８０％の阻害、および１０μＭで最大５０％の阻害）。
【０１０５】
この結果は、ＤＨＱが、キナーゼ阻害剤およびクロモグリケート（参照分子）より優れた、高い阻害性活性を呈することを示す。
【０１０６】
実施例３：ＮＩＨ−３Ｔ３線維芽細胞の増殖に及ぼすＤＨＱの効果
材料および方法
ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞株を、ＡＴＣＣ（ＣＲＬ１６５８）から購入した、細胞株を、１０％の熱不活性化新生仔牛血清、１００ＵＩ／ｍｌのペニシリン、および１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（すべてＧｉｂｃｏ  ＢＲＬ製）を補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、３７℃、加湿した５％のＣＯ２雰囲気で増殖させた。ＤＨＱをＤＭＳＯに溶解する。様々なＤＨＱ濃度の非存在下または存在下で、細胞を４８時間培養する。ＮＩＨ−３Ｔ３線維芽細胞は、アクチンストレスファイバーの量および高い収縮性により評価した炎症性表現型を模倣する不死化細胞である。
【０１０７】
ＮＩＨ−３Ｔ３細胞の増殖に関するＤＨＱの効果を、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウム臭化物（ＭＴＴ）アッセイを使用して決定する。簡潔に述べると、細胞を、増加濃度のＤＨＱと共に、ウェルあたり細胞４，０００の個で９６ウェルプレートに播種する。薬剤との７２時間のインキュベーションの後、培地を除去し、完全培地＋ＭＴＴ（１０％ｖ／ｖ）と交換する。３時間のインキュベーションの後、ホルマザン結晶を、１０％のＳＤＳ（ｗ／ｖ，  Ｂｉｏ−Ｒａｄ）、５０％のジメチルホルムアミド（Ｓｉｇｍａ）（ｐＨ  ４．７）を含むバッファーに溶解する。還元したホルマザンの吸光度を、５８０ｎｍで測定する。結果を図５に提示する。還元したＭＴＴの１００％はＤＨＱの非存在下で行った測定値に起因する。
【０１０８】
結果
図５に示されるように、増加濃度のＤＨＱの存在下で培養したＮＩＨ−３Ｔ３細胞の細胞生存率は減少する（細胞生存率は、還元されたＭＴＴの度合いにより評価される）。ＮＩＨ−３Ｔ３線維芽細胞が、筋線維芽細胞の表現型を模倣する不死化細胞であることを考慮すると、線維芽細胞の増殖が、増加濃度のＤＨＱの存在下で阻害されることを、これら結果から推測することができる。
【０１０９】
実施例４：乾癬を治療するための皮膚クリーム組成物
１、２、５、または１０重量％のＤＨＱ、０．５または１重量％のα‐トコフェロール、および０．１または０．２重量％のビサボロール、ホホバオイル、ならびに水、パラフィン油、ステアリルアルコール、グリセリルモノステアラート、ジメチコンＥ９００（シリコーン）、ＰＥＧ２０ステアラート、ＰＥＧ１００ステアラート、ホホバ（ｓｉｍｍｏｎｄｓｉａ  ｃｈｉｎｎｅｎｓｉｓ）オイル、セチルアルコール、イミダゾリン尿素、ブチルフェニルメチルプロパナール（ｐｒｏｐｒｉｏｎａｌ）、シンナミルアルコール、シトロネロール、ゲラニオールおよびリモネンを含む美容上許容可能なビヒクルを含む局所組成物を、調製する。
【表４】
2017505806.tif 000005
【０１１０】
上記組成物は、ホホバオイル、甘扁桃油、またはアボカド油とＤＨＱをまず混合することにより得られる。典型的に、組成物が、５％のＤＨＱを含む場合、１２．５％のホホバオイル、甘扁桃油、またはアボカド油を使用する（局所組成物の重量に対する重量％）。組成物が、２％のＤＨＱを含む場合、５％のホホバオイル、甘扁桃油、またはアボカド油を使用する（局所組成物の重量に対する重量％）。組成物が、１％のＤＨＱを含む場合、２．５％のホホバオイル、甘扁桃油、またはアボカド油を使用する（局所組成物の重量に対する重量％）。
【０１１１】
次に、美容上のビヒクル、α‐トコフェロール、およびビサボロールの成分をＤＨＱおよび油の混合物と、混合により混合する。
【０１１２】
実施例５：乾癬を罹患している患者の皮膚に及ぼす実施例４の組成物の効果
実施例４の組成物を、５名の患者を登録した臨床試験で、対照のない非盲検の試験で試験した。
【０１１３】
方法
実施例４の組成物で患者を治療した。試験のプロトコルは、炎症性の皮膚領域に１日に１回クリームを塗布することからなる。第１の目的は、皮膚の炎症の度合いの客観的な測定値および患者の自己評価により評価した治療効率を評価することであった。参加する患者はすべて、乾癬と診断された男性であった。
【０１１４】
結果
試験の記録は明らかに、少なくとも皮膚の炎症の減少、および場合によっては、炎症領域の完全な消失を示すものである。観察される効果は、治療を中断した後も有意に数日間持続する。
【図１】
2017505806.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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2017505806.tif 000012
2017505806.tif 000013
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