(57)【要約】  本発明は、損傷したヒトまたは動物組織を修復するように最適に化学的に製剤化された、生体適合性繊維および生体適合性成分と組み合わされた生細胞を含む、新規の化学組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイブリッド組成物であって：
（ａ）１つまたは複数の生体適合性繊維；
（ｂ）１つまたは複数の治療的細胞；および
（ｃ）（ｉ）前記の１つまたは複数の治療的細胞を前記の１つまたは複数の繊維に付着させる、および／または、前記の１つまたは複数の治療的細胞および前記の１つまたは複数の繊維を埋め込む、または、（ｉｉ）前記組成物を組織に付着させることが可能な、１つまたは複数の生体適合性成分、
を含む、
ハイブリッド組成物。
【請求項２】
請求項１に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数の繊維は、１つまたは複数のセルロース繊維、１つまたは複数のコラーゲン繊維、１つまたは複数のコラーゲン−グリコサミノグリカン繊維、１つまたは複数のゼラチン繊維、１つまたは複数の絹フィブロイン繊維、１つまたは複数のフィブリン繊維、１つまたは複数のキトサン繊維、１つまたは複数のスターチ繊維、１つまたは複数のアルギン酸繊維、１つまたは複数のヒアルロン酸繊維、１つまたは複数のポロキサマー繊維、またはそれらの組み合わせである、
ハイブリッド組成物。
【請求項３】
請求項２に記載のハイブリッド組成物であって、
前記グリコサミノグリカンは、コンドロイチンである、
ハイブリッド組成物。
【請求項４】
請求項１から３のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数の生体適合性成分は、前記の１つまたは複数の治療的細胞を、前記の１つまたは複数の繊維に付着させる生体適合性接着剤を含む、
ハイブリッド組成物。
【請求項５】
請求項４に記載のハイブリッド組成物であって、
前記生体適合性接着剤は、前記の１つまたは複数の治療的細胞を、前記の１つまたは複数の繊維の表面上および／または前記の１つまたは複数の繊維の中に付着させる、
ハイブリッド組成物。
【請求項６】
請求項４または５に記載のハイブリッド組成物であって、
前記生体適合性接着剤は、フィブリンゲル、インテグリンまたはカドヘリンである、
ハイブリッド組成物。
【請求項７】
請求項４から６のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物であって、
前記生体適合性接着剤は、血小板溶解物を含む、
ハイブリッド組成物。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数の生体適合性成分は、前記の１つまたは複数の治療的細胞および前記の１つまたは複数の繊維を埋め込む生体適合性ゲルを含む、
ハイブリッド組成物。
【請求項９】
請求項８に記載のハイブリッド組成物であって、
前記生体適合性ゲルは、セルロースゲル、コラーゲンゲル、ゼラチンゲル、フィブリンゲル、キトサンゲル、スターチゲル、アルギン酸ゲル、ヒアルロン酸ゲル、アガロースゲル、ポロキサマーゲル、またはそれらの組み合わせである、
ハイブリッド組成物。
【請求項１０】
請求項８または９に記載のハイブリッド組成物であって、
前記生体適合性ゲルは、血小板溶解物を含む、
ハイブリッド組成物。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数の治療的細胞は、１つまたは複数の中胚葉性系統の前駆細胞（ＰＭＬ）、１つまたは複数の免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞、１つまたは複数の間葉系幹細胞、１つまたは複数の樹状細胞、１つまたは複数の血小板、１つまたは複数の線維芽細胞、１つまたは複数の筋線維芽細胞、またはそれらの組み合わせを含む、
ハイブリッド組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数のＰＭＬは、（ａ）検出可能なレベルのＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２７１を発現し、および、（ｂ）検出可能なレベルのＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない、
ハイブリッド組成物。
【請求項１３】
請求項１２に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数のＰＭＬは、検出可能なレベルのＣＤ６２Ｐ（Ｐ−セレクチン）および／またはＣＤ６２Ｅ（Ｅ−セレクチン）を発現する、
ハイブリッド組成物。
【請求項１４】
請求項１２に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数のＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（１型Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する、
ハイブリッド組成物。
【請求項１５】
請求項１２または１４に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数のＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６を発現する、
ハイブリッド組成物。
【請求項１６】
請求項１２、１４または１５のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数のＩＭＰ細胞は：
（ａ）検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６；および／または
（ｂ）検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ７２、ＣＤ１３３、ＣＤ１９２、ＣＤ２０７、ＣＤ１４４、ＣＤ４１ｂ、ＦＭＣ７、ＣＤ７５、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ２８２、ＣＤ１００、ＣＤ９４、ＣＤ３９、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ１５、ＰＡＣ−１、ＣＬＩＰ、ＣＤ４８、ＣＤ２７８、ＣＤ５、ＣＤ１０３、ＣＤ２０９、ＣＤ３、ＣＤ１９７、ＨＬＡ−ＤＭ、ＣＤ２０、ＣＤ７４、ＣＤ８７、ＣＤ１２９、ＣＤｗ３２９、ＣＤ５７、ＣＤ１６３、ＴＰＢＧ、ＣＤ２０６、ＣＤ２４３（ＢＤ）、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１３８、ＣＤ７、ＣＤ５０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１５８ｅ２、ＣＤ６４、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５、ＣＬＡ、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ３４、ＣＤ１０１、ＣＤ２、ＣＤ４１ａ、ＣＤ６９、ＣＤ１３６、ＣＤ６２Ｐ、ＴＣＲαβ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１ａ、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１５４、ＣＤ７０、ＣＤｗ２１８ａ、ＣＤ１３７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ１５０、ＣＤ６６、ＣＤ２１２、ＣＤ１７７、ＣＤ１４２、ＣＤ１６７、ＣＤ３５２、ＣＤ４２ａ、ＣＤ３３６、ＣＤ２４４、ＣＤ２３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２２９、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤＨ６、ＣＤ２８、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ３３５、ＣＤ１３１、ＣＤ３２、ＣＤ１５７、ＣＤ１６５、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ３３２、ＣＤ１８０、ＣＤ６５およびＣＤ２４
を発現する、
ハイブリッド組成物。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物であって、
前記の１つまたは複数の治療的細胞は、自己由来または同種異系である、
ハイブリッド組成物。
【請求項１８】
リポソーム組成物であって、
１つまたは複数のリポソーム内に包含された、請求項１から１７のいずれか一項に記載の１つまたは複数のハイブリッド組成物を含む、
リポソーム組成物。
【請求項１９】
マイクロバブル組成物であって、１つまたは複数のマイクロバブル内に包含された、請求項１から１７のいずれか一項に記載の１つまたは複数のハイブリッド組成物を含む、
マイクロバブル組成物。
【請求項２０】
請求項１から１７のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物を生産する方法であって、
（ａ）１つまたは複数の生体適合性繊維、１つまたは複数の治療的細胞、および、１つまたは複数の生体適合性成分を、提供するステップ、および、
（ｂ）前記の１つまたは複数の治療的細胞を、前記の１つまたは複数の繊維に、１つまたは複数の生体適合性成分を用いて付着させるステップ、および／または、前記の１つまたは複数の治療的細胞および前記の１つまたは複数の繊維を、１つまたは複数の生体適合性成分内に埋め込むステップ、
または、
前記の１つまたは複数の繊維、前記の１つまたは複数の細胞、および、前記の１つまたは複数の成分を組み合わせて、それにより、請求項１から１７のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物を生産するステップ、
を含む、
方法。
【請求項２１】
患者における損傷組織を修復する方法であって、
前記の損傷組織を、請求項１から１７のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物、請求項１８に記載のリポソーム組成物、または、請求項１９に記載のマイクロバブル組成物と、接触させるステップを含み、
ここで、前記組成物は、治療的に効果的な数の細胞を含み、それにより、前記患者における前記損傷組織を治療する、
方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、
前記ハイブリッド組成物または前記リポソーム組成物を前記損傷組織内に移植または注入するステップ、または、前記ハイブリッド組成物または前記リポソーム組成物を前記損傷組織に付着または固定するステップ、を含む、
方法。
【請求項２３】
請求項２１または２２に記載の方法であって、
前記の１つまたは複数の繊維は、前記組織における損傷の深さとほぼ同じ長さである、
方法。
【請求項２４】
請求項２１から２３のいずれか一項に記載の方法であって、
前記組織は、前記中胚葉から得られる、
方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、
前記組織は、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である、
方法。
【請求項２６】
請求項２１から２５のいずれか一項に記載の方法であって、
前記組織は、外傷または疾患により損傷されたものである、
方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、
前記方法は、前記患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療するためのものである、
方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の方法であって、
前記の心臓の外傷または疾患は、心筋梗塞、左室肥大、右室肥大、塞栓、心不全、先天性心臓欠陥、心臓弁膜症、不整脈および心筋炎から選択される、
方法。
【請求項２９】
請求項２５に記載の方法であって、
前記の骨の外傷または疾患は、骨折、Ｓａｌｔｅｒ−Ｈａｒｒｉｓ骨折、若木骨折、骨棘、頭蓋骨癒合症、コフィン‐ローリー症候群、進行性骨化線維異形成症、線維性骨異形成症、Ｆｏｎｇ病（または爪膝蓋骨症候群）、低ホスファターゼ症、クリッペル・ファイル症候群、代謝性骨疾患、爪膝蓋骨症候群、変形性関節症、変形性骨炎（または骨パジェット病）、嚢胞性線維性骨炎（または線維性骨炎またはフォンレックリングハウゼン骨病）、恥骨骨炎、硬化性骨炎（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ｏｓｔｅｉｔｉｓ）（または硬化性骨炎（ｏｓｔｅｉｔｉｓ  ｃｏｎｄｅｎｓａｎｓ））、硬化性腸骨炎、離断性骨軟骨炎、骨形成不全症、骨軟化症、骨髄炎、骨減少症、大理石骨病、骨粗鬆症、骨壊死、骨萎縮性骨化過剰症、原発性副甲状腺機能亢進症、腎性骨ジストロフィー、骨癌、転移性癌と関連する骨病変、Ｇｏｒｈａｍ  Ｓｔｏｕｔ病、原発性副甲状腺機能亢進症、歯周病、および関節置換の無菌弛緩から選択される。
方法。
【請求項３０】
請求項２１から２９のいずれか一項に記載の方法であって、
治療的細胞の集団は、前記患者または同種異系ドナーから得られる、
方法。
【請求項３１】
請求項１から１７のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物、請求項１８に記載のリポソーム組成物、または、請求項１９に記載のマイクロバブル組成物であって、
患者における損傷組織を修復する方法で使用するための、
ハイブリッド組成物、リポソーム組成物、または、マイクロバブル組成物。
【請求項３２】
請求項１から１７のいずれか一項に記載のハイブリッド組成物、請求項１８に記載のリポソーム組成物、または、請求項１９に記載のマイクロバブル組成物であって、
患者における心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療する方法で使用するための、
ハイブリッド組成物、リポソーム組成物、または、マイクロバブル組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、損傷したヒトまたは動物組織を修復するように最適に化学的に製剤化された、生体適合性繊維および生体適合性成分と組み合わされた生細胞を含む、新規の化学組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
様々な異なる細胞のタイプが、損傷組織を修復するのに用いられている。患者に投与された時点で、細胞は典型的に、パラクリンシグナリングを通して、および、損傷組織において隣接細胞の生存、修復および再生を促進することにより、それらの治療的効果を与える。
【０００３】
治療的細胞による損傷細胞の修復は、以下の理由により非効率であることが多い。（１）細胞は、損傷組織の表面にのみアクセスして修復することができるが、損傷組織のより深い部分には届くことができず、（２）細胞は、制限された期間、修復のために最適な位置に留まり、そして、（３）細胞が置かれる局所的な微小環境は、修復および再生を促進するのに最適ではない。これらの制限は、しばしば、損傷組織の準最適または部分的な修復をもたらす。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者らは、驚くべきことに、生細胞、生体適合性繊維および生体適合性成分の独特のハイブリッド組成物が、損傷組織を修復するのにより効果的であることを見いだした。例えば、生体適合性繊維および成分は、細胞に、最適な位置へのアクセスを与えることが可能であり、損傷組織の最適な修復をもたらす。細胞は、例えば、損傷組織のより深い部分に到達し得る。また、生体適合性繊維および成分は、細胞を、最適な位置に保持することも可能であり、損傷組織の最適な修復をもたらす。また、組成物は、最適な修復および再生のための、それ自身の最適な微小環境も作り出す。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、したがって、以下を含むハイブリッド組成物を提供する：
（ａ）１つまたは複数の生体適合性繊維；
（ｂ）１つまたは複数の治療的細胞；および
（ｃ）（ｉ）前記の１つまたは複数の治療的細胞を前記の１つまたは複数の繊維に付着させる、および／または、前記の１つまたは複数の治療的細胞および前記の１つまたは複数の繊維を埋め込む、または、（ｉｉ）前記組成物を組織に付着させることが可能な、１つまたは複数の生体適合性成分。
【０００６】
また、本発明は、以下も提供する：
−１つまたは複数のリポソーム内に包含された、１つまたは複数の本発明のハイブリッド組成物を含む、リポソーム組成物；
−１つまたは複数のマイクロバブル内に包含された、１つまたは複数の本発明のハイブリッド組成物を含む、マイクロバブル組成物；
−（ａ）１つまたは複数の生体適合性繊維、１つまたは複数の治療的細胞、および、１つまたは複数の生体適合性成分を、提供するステップ、および、（ｂ）前記の１つまたは複数の治療的細胞を、前記の１つまたは複数の繊維に、１つまたは複数の生体適合性成分を用いて付着させるステップ、および／または、前記の１つまたは複数の治療的細胞および前記の１つまたは複数の繊維を、１つまたは複数の生体適合性成分内に埋め込むステップ、または、前記の１つまたは複数の繊維、前記の１つまたは複数の細胞および前記の１つまたは複数の成分を組み合わせて、それにより、本発明のハイブリッド組成物を生産するステップ、を含む、本発明のハイブリッド組成物を生産する方法；
−損傷組織を、本発明のハイブリッド組成物、本発明のリポソーム組成物、または、本発明のマイクロバブル組成物と接触させるステップ（ここで、組成物は、治療的に効果的な数の細胞を含む）、および、それにより、患者における損傷組織を治療するステップ、を含む、患者における損傷組織を修復する方法；または、
−患者における損傷組織を修復する方法での使用のための、本発明のハイブリッド組成物、本発明のリポソーム組成物、または、本発明のマイクロバブル組成物。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】生体適合性成分を用いて治療的細胞が１つまたは複数の繊維に付着した、本発明のハイブリッド組成物の一般的構造を示す。
【図２】治療的細胞が生体適合性成分に埋め込まれた、本発明のハイブリッド組成物の一般的構造を示す。
【図３】図１に示されたタイプのハイブリッド組成物の好ましい構造を示す。それぞれの場合において、治療的細胞はヒト間葉系幹細胞（ＭＳＣ）であり、１つまたは複数の繊維は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む。生体適合性成分は、フィブリン、インテグリンまたはアドへリンを含む。
【図４】図２に示されたタイプのハイブリッド組成物の好ましい構造を示す。それぞれの場合において、治療的細胞はヒト間葉系幹細胞（ＭＳＣ）であり、１つまたは複数の繊維は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む。生体適合性成分は、フィブリン、インテグリンまたはカドヘリンを含む。
【図５】図１に示されたタイプのハイブリッド組成物の好ましい構造を示す。それぞれの場合において、治療的細胞は間葉前駆細胞（ＭＰＣ）であり、１つまたは複数の繊維は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む。生体適合性成分は、フィブリン、インテグリンまたはカドヘリンを含む。
【図６】図２に示されたタイプのハイブリッド組成物の好ましい構造を示す。それぞれの場合において、治療的細胞は間葉前駆細胞（ＭＰＣ）であり、１つまたは複数の繊維は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）を含む。生体適合性成分は、フィブリン、インテグリンまたはカドヘリンを含む。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
開示された産物および方法の異なる適用は、当該分野における特定のニーズに合わせられ得ることが理解されるよう。また、本明細書において用いられる専門用語は、本発明の特定の実施態様を説明する目的のためだけであり、限定されることを意図しないことも理解されよう。
【０００９】
さらに、本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明らかに別段の指示をしない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」との言及は「細胞（複数）（ｃｅｌｌｓ）」を含み、「組織（ａ  ｔｉｓｓｕｅ）」との言及は２以上のそのような組織を含み、「患者（ａ  ｐａｔｉｅｎｔ）」との言及は２以上のそのような患者を含むなどである。
【００１０】
上記であろうと下記であろうと本明細書中に挙げられる全ての刊行物、特許および特許出願は、それらの全体で参照により本明細書に援用される。
【００１１】
本発明の組成物
本発明は、ハイブリッド組成物を提供する。組成物は、生細胞と、生きていない繊維および成分とを含むので、ハイブリッドである。
【００１２】
組成物は、損傷組織を修復するのに適している。組成物は、損傷組織内に移植または注入され得る。組成物は、損傷組織に付着または固定され得る。このことは、本発明の治療的実施態様に関してより詳細に以下に述べる。
【００１３】
生体適合性繊維
本発明の組成物は、１つまたは複数の生体適合性繊維を含む。繊維は、損傷組織と接触した場合に、いかなる有害反応または副作用も引き起こさないならば、生体適合性である。
【００１４】
任意の数の生体適合性繊維が、組成物内に存在してよい。組成物は、ただ１つの繊維を含んでよい。組成物は典型的に、１よりも多い繊維、例えば少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも５００の繊維、少なくとも１０００の繊維、またはさらにそれよりも多くの繊維を含む。
【００１５】
適切な生体適合性繊維は、当該分野で知られている。１つまたは複数の生体適合性繊維は、天然または合成であってよい。好ましい生体適合性繊維は、限定されないが、セルロース繊維、コラーゲン繊維、コラーゲン−グリコサミノグリカン繊維、ゼラチン繊維、絹フィブロイン繊維、１つまたは複数のフィブリン繊維、キトサン繊維、スターチ繊維、アルギン酸繊維、ヒアルロン酸繊維、ポロキサマー（ｐｏｌｏａｘｍｅｒ）繊維、またはそれらの組み合わせを含む。グリコサミノグリカンは、好ましくはコンドロイチンである。セルロースは、好ましくは、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはメチルセルロースである。ポロキサマーは、好ましくはプルロニック酸であり、場合によりプルロニックＦ−１２７である。
【００１６】
１よりも多い繊維が組成物内に存在する場合は、繊維の集団は同種であってよい。換言すれば、集団内の全ての繊維は、同じタイプの繊維、例えばセルロース繊維であってよい。あるいは、繊維の集団は、異種であってよい。換言すれば、繊維の集団は、異なるタイプの繊維、例えばセルロース繊維およびコラーゲン繊維を含んでよい。
【００１７】
１つまたは複数の繊維は、任意の長さであってよい。１つまたは複数の繊維は、好ましくは、組成物を用いて治療される組織における損傷の深さとほぼ同じ長さである。１つまたは複数の繊維の長さは、好ましくは、組成物が、規定の深さまで損傷組織に浸透することができるように設計される。１つまたは複数の繊維は、任意の長さであってよい。１つまたは複数の繊維の長さの下限は、典型的に、１つまたは複数の治療的細胞の直径により決定される。適切な長さは、限定されないが、少なくとも１μｍの長さ、少なくとも１０μｍの長さ、少なくとも１００μｍの長さ、少なくとも５００μｍの長さ、少なくとも１ｍｍの長さ、少なくとも１０ｍｍ（１ｃｍ）の長さ、少なくとも１００ｍｍ（１０ｃｍ）の長さ、少なくとも５００ｍｍ（５０ｃｍ）の長さまたは少なくとも１０００ｍｍ（１００ｃｍまたは１ｍ）の長さを含む。１つまたは複数の繊維は、さらにより長くてよい。例えば、１つまたは複数の繊維は、例えばヒト腸管に沿った損傷を修復するために用いられる場合は５ｍまたは１０ｍまでの長さであってよく、または、ウマのようなより大きな動物で用いられる場合はさらにより長い。１つまたは複数の繊維の長さは、典型的に、それらの使用目的、および／または、例えば外科医による、ロボットによる、または磁性のような一部の他の手段を介した、取り扱われ得るそれらの能力により、決定される。
【００１８】
１つまたは複数の繊維は、帯電されてよい。１つまたは複数の繊維は、好ましくは正に帯電している。１つまたは複数の繊維は、好ましくは負に帯電している。
【００１９】
１つまたは複数の繊維は、磁性でよい。１つまたは複数の繊維は、１つまたは複数の磁性原子または磁性基を含むように修飾されてよい。このことは、組成物の磁性標的化を可能にする。磁性原子または磁性基は、常磁性または超常磁性であってよい。適切な原子または基は、限定されないが、金原子、鉄原子、コバルト原子、ニッケル原子、および、任意のこれらの原子を含む金属キレート基、例えばニトリロ三酢酸を含む。金属キレート基は、例えば、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ−Ｏ−Ｃ−、−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｉ、−Ｓ（＝Ｏ）２−および−Ｓ−から選択される基を含んでよい。
【００２０】
生体適合性成分
また、組成物は、１つまたは複数の生体適合性成分も含む。１つまたは複数の生体適合性成分は、（ｉ）１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させる、および／または、１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込む、および／または、（ｉｉ）組成物を組織に付着させることが可能である。１つまたは複数の生体適合性成分は、（ａ）１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させ得る、（ｂ）１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込み得る、（ｃ）組成物を組織に付着させることが可能であり得る、（ｄ）１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させ、かつ、１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込み得る、（ｅ）１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させ、かつ、組成物を組織に付着させることが可能であり得る、（ｆ）１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込み、かつ、組成物を組織に付着させることが可能であり得る、または、（ｇ）１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させ、１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込み、かつ、組成物を組織に付着させることが可能であり得る。
【００２１】
成分は、損傷組織と接触した場合に、いかなる有害反応または副作用も引き起こさないのならば、生体適合性である。
【００２２】
任意の数の生体適合性成分が、組成物に存在してよい。組成物は典型的に、１つの成分のみ、または２つの成分を含む。組成物は、２よりも多い成分、例えば、少なくとも３、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０の成分、またはさらにそれよりも多くの成分を含んでよい。
【００２３】
１つまたは複数の生体適合性成分は、好ましくは、１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させる生体適合性接着剤を含む。生体適合性接着剤は、１つまたは複数の治療的細胞を、（ａ）１つまたは複数の繊維の表面上に、（ｂ）１つまたは複数の繊維の中に、または（ｃ）１つまたは複数の繊維の表面上およびその中の両方に、付着させ得る。
【００２４】
生体適合性接着剤は、天然または合成であってよい。適切な生体適合性接着剤は、当該分野で知られている。適切な接着剤は、限定されないが、フィブリン、フィブリンゲル、インテグリン、インテグリンゲル、カドヘリンおよびカドヘリンゲルを含む。
【００２５】
１つまたは複数の生体適合性成分は、好ましくは、１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込む生体適合性ゲルを含む。適切な生体適合性ゲルは、当該分野で知られている。生体適合性ゲルは、天然または合成であってよい。好ましい生体適合性ゲルは、限定されないが、セルロースゲル、コラーゲンゲル、ゼラチンゲル、フィブリンゲル、キトサンゲル、スターチゲル、アルギン酸ゲル、ヒアルロン酸ゲル、アガロースゲル、ポロキサマーゲル、またはそれらの組み合わせを含む。
【００２６】
セルロースゲルは、上記に述べた任意のセルロース類から形成され得る。セルロースポリマー濃度は、好ましくは約１．５％（ｗ／ｗ）〜約４．０％（ｗ／ｗ）、例えば約２．０％（ｗ／ｗ）〜約３．０％（ｗ／ｗ）である。セルロースポリマーは、好ましくは、約４５０，０００〜約４，０００，０００、例えば約５００，０００〜約３，５００，０００、約５００，０００〜約３，０００，０００、または約７５０，０００〜約２，５００，０００、または約１０００，０００〜約２，０００，０００の分子量を有する。
【００２７】
ポロキサマーゲルは、好ましくは、プルロニック酸ゲルであり、場合によりプルロニックＦ−１２７ゲルである。
【００２８】
接着剤および／またはゲルは、好ましくは、室温で１０００〜５００，０００ｍＰａ・ｓ（ｃｐｓ）、例えば室温で約１５００〜約４５０，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約２０００〜約４００，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約２５００〜約３５０，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約５０００〜約３００，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約１０，０００〜約２５０，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約５０，０００〜約２００，０００ｍＰａ・ｓ、または室温で約５０，０００〜約１５０，０００ｍＰａ・ｓの範囲の粘度を有する。
【００２９】
粘度は、接着剤および／またはゲルが、剪断応力または引張応力のいずれかによって変形される耐性の尺度である。粘度は、当該分野で知られている任意の方法を用いて測定することができる。適切な方法は、限定されないが、粘度計またはレオメータの使用を含む。
【００３０】
室温は、典型的に、約１８℃〜約２５℃、例えば、約１９℃〜約２４℃、または、約２０℃〜約２３℃、または、約２１℃〜約２２℃である。室温は、好ましくは、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃および２５℃のいずれかである。粘度は、最も好ましくは２５℃で測定される。
【００３１】
１つまたは複数の生体適合性成分は、好ましくは、１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させる生体適合性接着剤、および、１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込む生体適合性ゲルを含む。例えば、組成物は、１つまたは複数の治療的細胞を１つまたは複数の繊維に付着させるフィブリンゲル、および、１つまたは複数の治療的細胞および１つまたは複数の繊維を埋め込むセルロースゲルを含んでよい。
【００３２】
任意の上述した実施態様では、生体適合性接着剤および／または生体適合性ゲルは、好ましくは血小板溶解物を含む。例えば、接着剤および／またはゲルは、血小板溶解物ゲルであってよい。血小板溶解物とは、血小板に含まれる天然の成長因子の組み合わせを指し、これらの血小板の溶解により放出されている。溶解は、化学的手段（すなわちＣａＣｌ２）、浸透圧的手段（蒸留Ｈ２Ｏの使用）、または凍結融解手順により、達成することができる。血小板溶解物は、米国特許第５，１９８，３５７号に記載のように全血から採取することができる。血小板溶解物は、好ましくは、ＰＣＴ／ＧＢ１２／０５２９１１（ＷＯ２０１３／０７６５０７として公開）に記載のように調製される。例えばそれは、血小板の集団を少なくとも１回の凍結融解サイクルに供することにより調製され得て、ここで、各サイクルの凍結部分は、−７８℃以下の温度で行なわれる。
【００３３】
接着剤および／またはゲルは、好ましくは、（ａ）血小板溶解物、（ｂ）少なくとも１つの薬学的に許容できるポリマー、および、（ｃ）リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、メチオニン、プロリン、セリン、アスパラギン、システイン、ポリアミノ酸、プロタミン、アミノグアニジン、亜鉛イオンおよびマグネシウムイオンからなる群より選択される少なくとも１つの薬学的に許容できる正電荷の化学種を含み、ここで、組成物は、室温で１０００〜５００，０００ｍＰａ・ｓ（ｃｐｓ）の範囲の粘度を有する水性ゲルである。薬学的に許容できるポリマーは、好ましくは、セルロースまたはポロキサマーである。上記に述べた任意のセルロースおよびポロキサマーであってよい。
【００３４】
血小板溶解物は、好ましくはヒト血小板溶解物である。血小板溶解物は、以下により詳細に述べられる。
【００３５】
治療的細胞
また、組成物は、１つまたは複数の治療的細胞も含む。治療的細胞は、治療的効果を有することのできる細胞である。治療的細胞は典型的に、生細胞である。治療的細胞は典型的に、損傷組織を修復することが可能な細胞である。１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは自己由来である。換言すれば、１つまたは複数の細胞は、好ましくは、損傷組織を修復するために細胞が投与される患者から採取される。あるいは、１つまたは複数の細胞は、好ましくは同種異系である。換言すれば、細胞は、好ましくは、損傷組織を修復するために細胞が投与される患者と免疫学的に適合する患者から採取される。１つまたは複数の細胞は、半−同種異系であってよい。半−同種異系の集団は、典型的に、細胞が投与される患者と免疫学的に適合する２以上の患者から生産される。換言すれば、１つまたは複数の細胞の全ては、好ましくは、それらが投与される患者と遺伝学的に同一であり、または、細胞は、それらが投与される患者と免疫学的に適合するように十分に遺伝学的に同一である。
【００３６】
任意の数の細胞が、組成物中に存在してよい。組成物は、１つの細胞のみ含んでよい。例えば、組成物は、１つの細胞および１つの繊維を含んでよい。
【００３７】
組成物は典型的に、１よりも多い細胞、例えば少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも５００、少なくとも１０００、少なくとも２０００、少なくとも５０００、少なくとも１００００、少なくとも５００００、少なくとも１０００００、少なくとも５×１０５、少なくとも１×１０６、少なくとも２×１０６、少なくとも５×１０６、少なくとも１×１０７、少なくとも２×１０７、少なくとも５×１０７、少なくとも１×１０８または少なくとも２×１０８の細胞を含む。ある場合には、組成物は、少なくとも１．０×１０７、少なくとも１．０×１０８、少なくとも１．０×１０９、少なくとも１．０×１０１０、少なくとも１．０×１０１１または少なくとも１．０×１０１２の細胞、またはさらにより多くの細胞を含んでよい。
【００３８】
１よりも多い細胞が組成物中に存在する場合は、細胞の集団は同種であってよい。換言すれば、集団内の全ての細胞は、同じタイプの細胞、例えば間葉系幹細胞（ＭＳＣ）であってよい。あるいは、細胞の集団は、異種であってよい。換言すれば、細胞の集団は、異なるタイプの細胞、例えばＭＳＣおよび中胚葉性系統（ＰＭＬ）の前駆細胞を含んでよい。
【００３９】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の中胚葉性系統の前駆細胞（ＰＭＬ）である。ＰＭＬは、ＰＣＴ／ＧＢ２０１２／０５１６００（ＷＯ２０１３／００５０５３として公開）に開示される。そこに開示される任意の細胞を用いてよい。ＰＭＬは、検出可能なレベルのＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２７１を発現するが、検出可能なレベルのＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない。
【００４０】
ＰＭＬを有利に用いて患者における損傷組織を修復し得る。ＰＭＬは、組織において抗炎症性効果を効率的に発揮することが可能である。ＰＭＬの抗炎症性効果は、損傷組織における隣接細胞の生存、修復および再生を促進する。また、細胞は、血管形成性、走化性および抗アポトーシス性の因子の分泌のような、パラクリン作用を発揮することも可能である。
【００４１】
以下により詳細に述べるように、ＰＭＬは、ヒト個体などの個体から得られる単核細胞（ＭＣ）（末梢ＭＣなど）から生産される。ＰＭＬはＭＣから生産されるので、それらは（例えば末梢血から）容易に生産され得て、処置される患者にとって自己由来であり得て、それにより、患者による免疫学的拒絶のリスクを回避する。
【００４２】
ＭＣの様々なサンプル（すなわち血液の様々なサンプル）を得ることができるので、原理的には、単一の個体から無制限の数のＰＭＬを生産することが可能である。非常に多くの数のＰＭＬを単一の個体から生産することが確実に可能である。したがって、本発明のＰＭＬは多くの数で作ることができる。
【００４３】
ＰＭＬは、臨床関連の条件下で、例えば、微量のエンドトキシンおよび他の環境汚染物質、ならびにウシ胎仔血清などの動物産物の不存在下で生産される。このことは、ＰＭＬを、患者への投与に特に適切にする。
【００４４】
ＰＭＬはＭＣから生産されるので、それらは実質的に同質であり、自己由来であり得る。また、それらは、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）で頻繁に生じるドナー間の変動を回避する。ＰＭＬの非常に多くの集団は、化学療法または放射線療法のような任意の他の治療が始まる前に、患者から得られた単一のサンプルから生産することができる。したがって、ＰＭＬは、これらの治療の任意の有害な効果を回避することができる。
【００４５】
ＰＭＬは、迅速に作製することができる。ＰＭＬは、３０日未満、例えば約２２日で、ＭＣから生産することができる。
【００４６】
ＭＣからのＰＭＬの生産は、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）に由来する間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の使用と関連する道徳的および倫理的影響を回避する。
【００４７】
ＰＭＬは典型的に、ヒトＭＣから生産される。したがって、ＰＭＬは典型的にヒトである。あるいは、ＰＭＬ細胞は、他の動物または哺乳類由来、例えば、ウマ、ウシ、ヒツジまたはブタのような商業的に飼育される動物由来、マウスまたはラットのような実験動物由来、または、ネコ、イヌ、ウサギまたはモルモットのようなペット由来のＭＣから生産され得る。
【００４８】
ＰＭＬは、系統限定マーカー、構造的および機能的特徴の発現を含む、当該分野で知られている標準的な方法を用いて、中胚葉性系統の前駆細胞として同定することができる。ＰＭＬは、中胚葉性系統の前駆細胞の特徴であることが知られる細胞表面マーカーを検出可能なレベルで発現する。特に、以下により詳細に述べるマーカーに加えて、ＰＭＬは、α−平滑筋アクチン、Ｉ型コラーゲンα−鎖、ＧＡＴＡ６、Ｍｏｈａｗｋ、およびビメンチンを発現し得る（Ｓａｇｉ  Ｂ  ｅｔ  ａｌ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ  Ｄｅｖ．２０１２  Ｍａｒ  ２０；２１（５）：８１４−２８）。
【００４９】
ＰＭＬは、分化アッセイをインビトロでうまく完了することが可能であり、それらが中胚葉性系統であることが確認される。そのようなアッセイは、限定されないが、脂肪生成の分化アッセイ、骨分化アッセイ、および神経分化アッセイを含む（Ｚａｉｍ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１２  Ａｕｇ；９１（８）：１１７５−８６）。
【００５０】
ＰＭＬは幹細胞ではない。具体的には、それらは間葉系幹細胞（ＭＳＣ）ではない。それらは最終分化している。それらは、インビトロで適切な条件下で、例えば軟骨または骨細胞へ分化させることができるが、インビボでは分化しない。ＰＭＬは、損傷組織においてパラクリンシグナリングを発揮することにより、それらの効果を有する。具体的には、ＰＭＬは、好ましくは、損傷組織において抗炎症性（ａｎｔｉ−ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）効果を誘導することが可能である。このことは以下により詳細に述べられる。
【００５１】
ＰＭＬは典型的に、紡錘形の形態により特徴付けられる。ＰＭＬは典型的に、線維芽細胞様であり、すなわちそれらは、長細い多少の細胞突起を有する小さな細胞体を有する。細胞は典型的に、約１０〜約２０μｍの直径である。
【００５２】
ＰＭＬは、それらのマーカー発現パターンを介して他の細胞から区別される。ＰＭＬは、検出可能なレベルのＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２７１を発現する。ＰＭＬは、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２７１のうちの１つまたは複数、例えばすべてを過剰発現し得る。ＰＭＬは、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５およびＣＤ２７１のうちの１つまたは複数を、それらが他のＰＭＬおよび／またはＭＳＣよりも多く発現する場合に過剰発現する。ＰＭＬは、検出可能なレベルのＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない。ＰＭＬは、好ましくは、ＣＤ６２Ｅ（Ｅ−セレクチン）および／またはＣＤ６２Ｐ（Ｐ−セレクチン）を発現する。
【００５３】
当該分野で知られている標準的な方法を用いて、上記（および以下）に述べる様々なマーカーの、検出可能な発現、低い発現、またはその欠如を判定し得る。適切な方法は、限定されないが、免疫細胞化学、免疫測定法、フローサイトメトリー、例えば蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）、およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、例えば逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）を含む。適切な免疫測定法は、限定されないが、ウェスタンブロッティング、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素結合免疫吸着スポット分析（ＥＬＩＳＰＯＴ分析）、競合的酵素免疫分析法、放射性アレルゲン吸着（ＲＡＳＴ）試験、ラジオイムノアッセイ、ラジオバインディングアッセイおよび免疫蛍光を含む。ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡおよびＲＴ−ＰＣＲは、全て定量的なので、存在するならば様々なマーカーの発現のレベルを測定するために用いることができる。ＦＡＣＳの使用が好ましい。本明細書において述べられる様々なマーカーの全てに関する抗体および蛍光標識抗体は市販される。
【００５４】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、本出願と同時に出願されるＵＫ出願に開示される１つまたは複数の免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞である（ＣＴＬ  Ｒｅｆ．ＩＭＰ１）。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（１型Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。
【００５５】
ＩＭＰ細胞を有利に用いて、患者における損傷組織を修復し得る。ＩＭＰ細胞は、組織において抗炎症性効果を発揮することが可能である。ＩＭＰ細胞の抗炎症性効果は、損傷組織における隣接細胞の生存、修復および再生を促進する。また、細胞は、血管形成性、走化性および抗アポトーシス性の因子の分泌のような、パラクリン作用を発揮することも可能である。
【００５６】
ＩＭＰ細胞は典型的に、ヒトＭＣから生産される。したがって、本発明のＩＭＰ細胞は、典型的にヒトである。あるいは、ＩＭＰ細胞は、他の動物または哺乳類由来、例えば、ウマ、ウシ、ヒツジまたはブタのような商業的に飼育される動物由来、マウスまたはラットのような実験動物由来、または、ネコ、イヌ、ウサギまたはモルモットのようなペット由来のＭＣから生産され得る。
【００５７】
また、ＩＭＰ細胞は、ヒト個体などの個体から得られる単核細胞（ＭＣ）（末梢ＭＣなど）から生産される。それ故に、それらは、上記に述べたＰＭＬと同じ利点を有する。ＩＭＰ細胞は、分化アッセイをインビトロでうまく完了することが可能であり、それらが中胚葉性系統であることが確認される。そのようなアッセイは、限定されないが、脂肪生成の分化アッセイ、骨分化アッセイ、および神経分化アッセイを含む（Ｚａｉｍ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１２  Ａｕｇ；９１（８）：１１７５−８６）。
【００５８】
ＩＭＰ細胞は幹細胞ではない。具体的には、それらはＭＳＣではない。それらは最終分化されている。それらは、インビトロで適切な条件下で、例えば軟骨または骨細胞へ分化させることができるが、典型的に、インビボでは分化しない。本発明のＩＭＰ細胞は、損傷組織においてパラクリンシグナリングを発揮することにより、それらの効果を有する。具体的には、ＩＭＰ細胞は、好ましくは、損傷組織において抗炎症性（ａｎｔｉ−ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）効果を誘導することが可能である。このことは以下により詳細に述べられる。
【００５９】
ＩＭＰ細胞は典型的に、紡錘形の形態により特徴付けられる。ＩＭＰ細胞は典型的に、線維芽細胞様であり、すなわちそれらは、長細い多少の細胞突起を有する小さな細胞体を有する。細胞は典型的に、約１０〜約２０μｍの直径である。
【００６０】
本発明のＩＭＰ細胞は、それらのマーカー発現パターンを介して、ＭＳＣを含む公知の細胞から区別される。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（１型Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量のこれらのマーカーを発現する。これは、同一の条件下で同一の技術を用いて、本発明のＩＭＰでのマーカーの発現レベル／量を、ＭＳＣでの発現レベル／量と比較することにより判定することができる。適切なＭＳＣは市販されている。比較に用いるＭＳＣは、好ましくはヒトＭＳＣである。ヒトＭＳＣは、Ｍｅｓｏｂｌａｓｔ（登録商標）Ｌｔｄ、Ｏｓｉｒｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（登録商標）Ｉｎｃ．またはＬｏｎｚａ（登録商標）から市販される。ヒトＭＳＣは、好ましくはＬｏｎｚａ（登録商標）から得られる。そのような細胞を実施例で比較に用いた。ＭＳＣは、上記に述べた動物または哺乳類のいずれかから得てよい。
【００６１】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の、１つまたは複数のＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（１型Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して、増加した量の１０個のマーカー全てを発現する。
【００６２】
上記に開示した任意の方法を用いて、これらのマーカーの検出可能な発現または増加した発現を判定してよい。本明細書に開示される任意のマーカーの発現または増加した発現は、好ましくは、ハイスループットＦＡＣＳ（ＨＴ−ＦＡＣＳ）を用いてなされる。
【００６３】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＩＣ  Ａ／Ｂに関して少なくとも３３０、例えば少なくとも３５０または少なくとも４００の抗体平均蛍光強度（ＭＦＩ）、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）に関して少なくとも２１０、例えば少なくとも２５０または少なくとも３００のＭＦＩ、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）に関して少なくとも２２１、例えば少なくとも２５０または少なくとも３００のＭＦＩ、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）に関して少なくとも１８６、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）に関して少なくとも１８１、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＤ９９に関して少なくとも１８４、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＤ１８１（１型Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体；ＣＸＣＲ１）に関して少なくとも３００、例えば少なくとも３５０または少なくとも４００のＭＦＩ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）に関して少なくとも１７３、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＸＣＲ２に関して少なくとも２３６、例えば少なくとも２５０または少なくとも３００のＭＦＩ、および、ＣＤ１２６に関して少なくとも１６０、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩを示す。平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、平方メートルあたりのワットで測定される、強度、時間平均エネルギー束の測定単位である。それはＳＩ単位である。各マーカーに関するＭＦＩは、典型的に、ＨＴ−ＦＡＣＳを用いて測定される。各マーカーに関するＭＦＩは、好ましくは、本出願と同時に出願されるＵＫ出願の実施例に記載のようにＨＴ−ＦＡＣＳを用いて測定される（ＣＴＬ  Ｒｅｆ．ＩＭＰ１）。
【００６４】
上記に特定した１０個のマーカーに加えて、ＩＭＰ細胞は典型的に、本出願と同時に出願されるＵＫ出願の実施例の表１に示される他のマーカーの１つまたは複数を検出可能なレベルで発現する（ＣＴＬ  Ｒｅｆ．ＩＭＰ１）。ＩＭＰ細胞は、これらのマーカーの任意の数および組み合わせを検出可能なレベルで発現し得る。
【００６５】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ３４０、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ６３、ＣＤ５８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６を発現する。ＩＭＰ細胞は、より好ましくは、検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６を発現する。ＩＭＰ細胞は、これらのマーカーの任意の数および組み合わせを検出可能なレベルで発現し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、これらのマーカーの全てを検出可能なレベルで発現する。
【００６６】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９およびＣＤ１４０ｂを発現する。ＩＭＰ細胞は、より好ましくは、検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６を発現する。ＩＭＰ細胞は、これらのマーカーの任意の数および組み合わせを検出可能なレベルで発現し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、これらのマーカーの全てを検出可能なレベルで発現する。
【００６７】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの１つまたは複数のＣＤ７２、ＣＤ１３３、ＣＤ１９２、ＣＤ２０７、ＣＤ１４４、ＣＤ４１ｂ、ＦＭＣ７、ＣＤ７５、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ２８２、ＣＤ１００、ＣＤ９４、ＣＤ３９、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ１５、ＰＡＣ−１、ＣＬＩＰ、ＣＤ４８、ＣＤ２７８、ＣＤ５、ＣＤ１０３、ＣＤ２０９、ＣＤ３、ＣＤ１９７、ＨＬＡ−ＤＭ、ＣＤ２０、ＣＤ７４、ＣＤ８７、ＣＤ１２９、ＣＤｗ３２９、ＣＤ５７、ＣＤ１６３、ＴＰＢＧ、ＣＤ２０６、ＣＤ２４３（ＢＤ）、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１３８、ＣＤ７、ＣＤ５０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１５８ｅ２、ＣＤ６４、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５、ＣＬＡ、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ３４、ＣＤ１０１、ＣＤ２、ＣＤ４１ａ、ＣＤ６９、ＣＤ１３６、ＣＤ６２Ｐ、ＴＣＲαβ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１ａ、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１５４、ＣＤ７０、ＣＤｗ２１８ａ、ＣＤ１３７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ１５０、ＣＤ６６、ＣＤ２１２、ＣＤ１７７、ＣＤ１４２、ＣＤ１６７、ＣＤ３５２、ＣＤ４２ａ、ＣＤ３３６、ＣＤ２４４、ＣＤ２３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２２９、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤＨ６、ＣＤ２８、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ３３５、ＣＤ１３１、ＣＤ３２、ＣＤ１５７、ＣＤ１６５、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ３３２、ＣＤ１８０、ＣＤ６５およびＣＤ２４を発現する。ＩＭＰ細胞は、これらのマーカーの任意の数および組み合わせを検出可能なレベルで発現し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、これらのマーカーの全てを検出可能なレベルで発現する。
【００６８】
１つまたは複数のＩＭＰ細胞は、本出願と同時に出願されるＵＫ出願に開示される集団のいずれかの部分であってよい（ＣＴＬ  Ｒｅｆ．ＩＭＰ１）。
【００６９】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織に付着することが可能である。付着および接着アッセイは、当該分野で知られている（Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００９；５２２：２０３−１０）。
【００７０】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織において、増殖することが可能である。細胞増殖アッセイは、当該分野でよく知られている。そのようなアッセイは、例えばＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標）から市販されている。
【００７１】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織において、血管新生を促進することが可能である。血管新生アッセイは、当該分野で知られている（Ａｕｅｒｂａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．２００３  Ｊａｎ；４９（１）：３２−４０）。
【００７２】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者の損傷組織において、抗炎症性効果を有することが可能である。また、本発明のＩＭＰ細胞が抗炎症性効果を有する能力は、当該分野で知られている標準的なアッセイを用いて測定してもよい。適切な方法は、限定されないが、サイトカインの分泌に関する酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、増強された混合白血球反応、および、共刺激分子および成熟マーカーの上方制御（フローサイトメトリーにより測定される）を含む。用いられ得る特定の方法は、実施例に開示される。測定されるサイトカインは、典型的に、インターロイキン、例えばインターロイキン−８（ＩＬ−８）、セレクチン、接着分子、例えば細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、および化学誘引物質タンパク質、例えば単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）である。これらのサイトカインに関するアッセイは市販されている。抗炎症性因子は、好ましくは、実施例に記載のＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）アッセイを用いて検出および測定される。そのようなアッセイは、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標）から市販される。
【００７３】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの１つまたは複数のインターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−８、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０；インターフェロンγ−誘導性タンパク質１０；ＩＰ−１０）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２；単球走化性タンパク質−１；ＭＣＰ−１）およびケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５；ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ；ＲＡＮＴＥＳ）を分泌する。ＩＭＰ細胞は、これらの因子の任意の数および組み合わせを分泌し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、これらのマーカーの全てを分泌する。
【００７４】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の１つまたは複数のＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１およびＲＡＮＴＥＳを分泌する。ＩＭＰ細胞は、これらの因子の任意の数および組み合わせを増加した量で分泌し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、これらのマーカーの全てを増加した量で分泌する。
【００７５】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、間葉系幹細胞ＭＳＣと比較して減少した量のインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）および／またはＩＬ−１２を分泌する。ＩＬ−１０およびＩＬ−１２は、炎症促進性のサイトカインである。
【００７６】
ＩＭＰ細胞は、上記に述べたものに加えて、様々な異なる他のマーカーを発現する。これらの一部は、ＩＭＰ細胞が、損傷組織において抗炎症性効果を有するそれらの能力を補助する。本発明のＩＭＰ細胞はいずれも、検出可能なレベルの１つまたは複数の（ｉ）インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、（ｉｉ）ＩＧＦ−１受容体；（ｉｉｉ）１型Ｃ−Ｃケモカイン受容体（ＣＣＲ１）、（ｉｖ）ストロマ細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）、（ｖ）低酸素誘導因子−１α（ＨＩＦ−１α）、（ｖｉ）Ａｋｔ１および（ｖｉｉ）肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）および／または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）を、さらに発現し得る。
【００７７】
ＩＧＦ‐１受容体は、ＩＧＦ−１勾配に向かう遊走能力を促進する。ＩＧＦ−１が遊走を増大させるメカニズムの１つは、細胞の表面上のＣＸＣＲ４の上方制御によるものであり、ＳＤＦ−１シグナリングに対してそれらをより感受性にさせる。このことは上述されている。
【００７８】
ＣＣＲ１は、ＣＣＬ７（以前はＭＣＰ３として知られる）の受容体であり、ＭＳＣのホーミングおよび生着能力を高め（したがって、本発明のＩＭＰ細胞に関して同一の効果を有することが期待される）、および、パラクリンシグナリングを介して、外傷心筋における毛管密度を増大させることができる。
【００７９】
ＨＩＦ−１αは、酸素送達を増大させかつ適応性の生存促進性の応答を促進するパスウェイを活性化する。多くのＨＩＦ−１αの標的遺伝子の中には、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、エンドセリンおよびＶＥＧＦ（その受容体Ｆｌｋ−１を有する）がある。ＨＩＦ−１αを発現する、または増加した量のＨＩＦ−１αを発現するＩＭＰ細胞は、より治療的なサブタイプを促進し得る様々な血管原性成長因子などのパラクリン刺激の発現が上方制御される。以下により詳細に記載するように、本発明のＩＭＰ細胞は、低酸素（２０％未満の酸素）、例えば、約２％または約０％の酸素の条件下でそれらを培養することにより、より治療的なサブタイプへ前もって調整することができる。
【００８０】
Ａｋｔ１は、グルコース代謝、細胞増殖、アポトーシス、転写および細胞遊走などの複数の細胞のプロセスにおいて重要な役割を果たす、細胞内セリン／トレオニンタンパク質キナーゼである。Ａｋｔ１の過剰発現は、ラットＭＳＣがアポトーシスを受けるのを防ぐことが示されていて、本発明のＩＭＰ細胞において同一の効果を有するであろう。アポトーシスからの保護は、ＩＭＰ細胞の治療効果を高める。
【００８１】
ＭＳＣによるＨＧＦの過剰発現は、血管新生およびカルシニューリンが仲介するパスウェイを介したアポトーシスの阻害により、虚血後の心不全を防ぐことが示されている。ＨＧＦおよびＧ−ＣＳＦは、この点について相乗効果を示す。また、ＨＧＦおよびその受容体ｃ−ｍｅｔが高発現であるＭＳＣは、損傷組織への遊走能力も高い（ホルモンのパラクリンおよびオートクリンシグナリングを介して達成される）。ＨＧＦおよび／またはＧ−ＣＳＦを発現している本発明のＩＭＰ細胞についても同様である。
【００８２】
ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、上記に定義した（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数を発現し得る。本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数を発現する。細胞マーカーに関する定量分析は上述される。これらのマーカーの検出可能な発現およびそれらの発現レベルは、上述のように測定し得る。
【００８３】
任意のＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの１または複数の（ｉ）血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、（ｉｉ）形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）、（ｉｉｉ）インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、（ｉｖ）線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、（ｖ）腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、（ｖｉ）インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）および（ｖｉｉ）インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）を発現し得る。ＶＥＧＦを過剰発現している細胞由来の馴化培地は、ハムスターモデルにおいて心不全を緩和することが示されている。それ故に、ＶＥＧＦを発現する、または増加した量のＶＥＧＦを発現する本発明のＩＭＰ細胞は、損傷した心臓の組織の同一効果を有する。
【００８４】
ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの１または複数の（ｉ）〜（ｖｉｉ）を発現し得る。ＩＭＰ細胞は、ＭＳＣと比較して増加した量の１または複数の（ｉ）〜（ｖｉｉ）を発現し得る。細胞マーカーに関する定量分析は上述される。これらのマーカーの検出可能な発現およびそれらの発現レベルは、上述のように測定し得る。
【００８５】
上記に示した（ｉ）〜（ｖｉｉ）の定義の両方のセットにおいて、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数の任意の組み合わせが発現され得て、または、増加した量で発現され得る。例えば、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の各定義に関して、ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、または、増加した量の、（ｉ）；（ｉｉ）；（ｉｉｉ）；（ｉｖ）；（ｖ）；（ｖｉ）；（ｖｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）および（ｖ）；（ｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｖ）および（ｖｉ）；（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ、）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）およびｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）およびｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）を、発現し得る。（ｉ）〜（ｖｉｉ）の各定義の組み合わせは、このリストから独立に選択される。
【００８６】
上述した任意のマーカーに加えて、ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルのＬＩＦおよび／または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体も発現する。本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、間葉系幹細胞と比較して増加した量のＬＩＦおよび／または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体を発現する。ＰＤＧＦ受容体は、好ましくは、ＰＤＧＦ−Ａ受容体および／またはＰＳＤＧＦ−Ｂ受容体である。これらの受容体の発現が高いＭＳＣは、血小板が活性化されている領域、例えば創傷および血栓性血管へ、効率的に遊走することができる。当該受容体を発現または増加した量の当該受容体を発現しているＩＭＰ細胞についても同様である。
【００８７】
ＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、好ましくは自己由来である。換言すれば、細胞は、好ましくは、細胞が投与される患者から採取される。あるいは、ＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、好ましくは同種異系である。換言すれば、細胞は、好ましくは、細胞が投与される患者と免疫学的に適合する患者から採取される。
【００８８】
ＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、抗体に基づく技術を含む様々な技術を用いて単離され得る。細胞は、ＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞上に存在するこれらの表面マーカー（上記参照）に対するモノクローナル抗体の結合に基づくネガティブおよびポジティブ選択技術を用いて単離され得る。それ故に、ＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）および磁気ビーズ分離を含む、任意の抗体に基づく技術を用いて分離され得る。
【００８９】
以下により詳細に述べるように、ＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、エクスビボで処置され得る。したがって、細胞は、治療薬または診断薬がロードまたはトランスフェクトされ得て、その結果、本発明の方法において治療的に用いられる。
【００９０】
１つまたは複数のＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、任意の公知の方法を用いて生産してよい。１つまたは複数のＰＭＬは、好ましくは、国際出願ＰＣＴ／ＧＢ２０１２／０５１６００（ＷＯ２０１３／００５０５３として公開）に記載の方法を用いて生産される。１つまたは複数のＩＭＰ細胞は、好ましくは、本出願と同時に出願されるＵＫ出願に開示の方法を用いて生産される（ＣＴＬ  Ｒｅｆ．ＩＭＰ１）。
【００９１】
これは典型的に、単核細胞（ＭＣ）を、ＭＣがＰＭＬまたはＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導する条件下で培養するステップ、およびそれから、上述のマーカーを発現するＰＭＬまたはＩＭＰ細胞を採取および培養するステップを含む。
【００９２】
単核細胞（ＭＣ）およびそれらを単離する方法は、当該分野で知られている。ＭＣは、骨髄から単離される初期の（ｐｒｉｍａｒｙ）ＭＣであってよい。ＭＣは、好ましくは末梢血ＭＣ（ＰＢＭＣ）、例えば、リンパ球、単球および／またはマクロファージである。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）などの親水性多糖類を用いて、血液から単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、実施例に開示されるように、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）（市販の密度培地）を用いて血液から単離され得る。
【００９３】
培養する前に、ＭＣを、間葉系幹細胞エンリッチメントカクテルに曝してよい。カクテルは、好ましくは、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ６６ｂ（不要な細胞上に存在する）を認識する抗体および赤血球の成分を含む。そのようなカクテルは、不要な細胞を赤血球と架橋させてイムノロゼット（ｉｍｍｕｎｏｒｏｓｅｔｔｅ）を形成し、それは必要なＭＣから除去され得る。好ましいカクテルはＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）である。
【００９４】
ＭＣが間葉系細胞（主に中胚葉に由来する組織）へ分化するのを誘導する適切な条件は、当該分野で知られている。例えば、適切な条件は、Ｃａｐｅｌｌｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｌｙｓａｔｅ  ａｌｌｏｗｓ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｒａｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｓｍａｌｌ  ｓａｍｐｌｅｓ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ａｓｐｉｒａｔｅｓ  ｏｒ  ｍａｒｒｏｗ  ｆｉｌｔｅｒ  ｗａｓｈｏｕｔｓ．Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２００７．４０：ｐ．７８５−７９１）に開示される。これらの条件を用いて、本発明のとおりにＭＣがＰＭＬ分化するのを誘導してもよい。
【００９５】
当該方法は、好ましくは、ＭＣを血漿溶解物とともに培養して、ＭＣがＰＭＬまたはＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導するステップを含む。血小板溶解物とは、血小板に含まれる天然の成長因子の組み合わせ（これらの血小板の溶解により放出されたもの）をいう。溶解は、化学的手段（すなわちＣａＣｌ２）、浸透圧的手段（蒸留Ｈ２Ｏの使用）を介して、または、凍結／融解の手順を介して、達成することができる。血小板溶解物は、米国特許第５，１９８，３５７号に記載のとおりに、全血から得ることができる。血小板溶解物は、好ましくは、ＰＣＴ／ＧＢ１２／０５２９１１（ＷＯ２０１３／０７６５０７として公開）に記載のとおりに調製される。血漿溶解物は、好ましくはヒト血漿溶解物である。
【００９６】
例えば、ＭＣは、血小板溶解物を含む培地中で、ＭＣがＰＭＬまたはＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導するのに十分な時間、培養され得る。十分な時間は典型的に、約１５〜約２５日、好ましくは約２２日である。培地は、好ましくは、約２０体積％またはそれ未満の血小板溶解物、例えば約１５体積％またはそれ未満、または約１０体積％またはそれ未満を含む。培地は、好ましくは、約５体積％〜約２０体積％の血小板溶解物、例えば約１０体積％〜約１５体積％を含む。培地は、好ましくは、約１０体積％の血小板溶解物を含む。
【００９７】
あるいは、ＭＣは、間葉性エンリッチメントカクテルに曝され、それから、ＭＣがＰＭＬまたはＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導するのに十分な時間、血小板溶解物を含む培地中で培養され得る。十分な時間は、典型的に、約１５〜約２５日、好ましくは約２２日である。
【００９８】
培地は、好ましくは最小必須培地（ＭＥＭ）である。ＭＥＭは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈを含む様々な供給源から市販される。培地は、好ましくは、ヘパリン、Ｌ−グルタミンおよびペニシリン／ストレプトアビジン（Ｐ／Ｓ）の１または複数をさらに含む。Ｌ−グルタミンは、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販される）と置き換えてよい。
【００９９】
ＭＣは、典型的に、ＰＭＬまたはＩＭＰ細胞が付着するのを可能にする条件下で培養される。適切な条件は、上記により詳細に述べられている。
【０１００】
ＭＣは、好ましくは、低酸素条件下で培養される。ＭＣは、好ましくは、約２０％未満の酸素（Ｏ２）、例えば約１９％未満、約１８％未満、約１７％未満、約１６％未満、約１５％未満、約１４％未満、約１３％未満、約１２％未満、約１１％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満の酸素（Ｏ２）において培養される。ＭＣは、好ましくは、約０％〜約１９％のＯ２、例えば約１％〜約１５％のＯ２、約２％〜約１０％のＯ２、または約５％〜約８％のＯ２において培養される。ＭＣは、最も好ましくは、約０％のＯ２において培養される。上記で見積もられた酸素の％（またはＯ２の％）に関する数字は、例えば細胞インキュベーターにより、培養中に細胞に供給されるガス中の酸素の体積％に関連する。一部の酸素は、インキュベーター内に漏れ得て、または、ドアーが開いているときに入り得ることが可能である。
【０１０１】
ＭＣは、最も好ましくは、血小板溶解物の存在下および低酸素条件下で培養される。この組み合わせは、損傷組織内の自然な条件を模倣するので、より健康的かつより治療的に強力な細胞をもたらす。従来の細胞培養は、２０％または２１％酸素（およそ大気の含有量）で行われるが、ヒト体内に、この酸素レベルを有する場所はない。肺内の上皮細胞は、この酸素レベルを「見る」が、酸素が溶解して肺を去る時点で、１７％付近に減少する。それから、組織の大部分でさらにいっそう約１〜２％まで減少するが、関節内の軟骨のような無血管組織では０．１％という低さになる。
【０１０２】
また、１つまたは複数のＰＭＬまたはＩＭＰ細胞を生産するステップは、上述の必須マーカー発現パターンを有するＰＭＬまたはＩＭＰ細胞を採取および培養するステップも含む。必須マーカー発現パターンを有するＰＭＬまたはＩＭＰ細胞は、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）および磁気ビーズ分離を含む任意の抗体に基づく技術を用いて採取してよい。ＦＡＣＳが好ましい。
【０１０３】
上述から明らかなように、１つまたは複数のＰＭＬまたはＩＭＰ細胞の生産は、臨床関連の条件、すなわち、微量のエンドトキシンおよび他の環境汚染物質、例えば、リポ多糖、リポペプチドおよびペプチドグリカンなどの不存在下で行なわれる。このことは、ＰＭＬまたはＩＭＰ細胞を、患者への投与に特に適切にさせる。
【０１０４】
ＭＣは、好ましくは、患者または同種異系ドナーから得られる。
【０１０５】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。適切なＭＳＣは、当該分野で知られている。上記に開示の任意のＭＳＣを用いてよい。
【０１０６】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の間葉前駆細胞（ＭＰＣ）である。１つまたは複数の治療的細胞は、より好ましくは、１つまたは複数のヒト間葉前駆細胞（ＭＰＣ）である。
【０１０７】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の樹状細胞である。
【０１０８】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の血小板である。
【０１０９】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の線維芽細胞である。
【０１１０】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、１つまたは複数の筋線維芽細胞である。
【０１１１】
１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくはヒトである。１つまたは複数の治療的細胞は、ＰＭＬおよびＩＭＰ細胞の由来に関して上述した任意の動物または哺乳類から採取してよい。
【０１１２】
１つまたは複数の治療的細胞は、典型的に、組成物中の他の成分と組み合わせられる前に、インビトロで培養される。細胞を培養する技術は、当業者によく知られている。細胞は、血清を含まない培地中、３７℃、５％ＣＯ２の標準的な条件下で培養され得る。細胞は、好ましくは、以下により詳細に述べる低酸素条件下で培養される。細胞は、標準的な６ウェルプレートのような平板のウェルを含む任意の適切なフラスコまたは容器内で培養してよい。そのようなプレートは、Ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＶＷＲ  ｓｕｐｐｌｉｅｒｓ、Ｎｕｎｃ、ＳｔａｒｓｔｅｄｔまたはＦａｌｃｏｎから市販される。ウェルは典型的に、約１ｍｌ〜約４ｍｌの容量を有する。
【０１１３】
フラスコ、容器またはウェル（その中に集団が含まれ、または培養される）は、細胞のハンドリングを促進するように改変され得る。例えば、フラスコ、容器またはウェルは、細胞の培養を促進するように、例えば、増殖マトリックスを含むなどにより改変され得る。フラスコ、容器またはウェルは、細胞の付着を可能にするように、または表面上への細胞の固定化を可能にするように、改変され得る。１つまたは複数の表面は、細胞外マトリックスタンパク質、例えば、ラミニンまたはコラーゲン、または、細胞に結合してそれらを表面（単数または複数）上に固定化または補足する任意の他の捕捉分子によりコーティングされ得る。
【０１１４】
細胞は、本明細書に記載の任意の技術を用いて、エクスビボで改変され得る。例えば、集団は、治療薬または診断薬がトランスフェクトまたはロードされ得る。それから集団は、以下により詳細に述べる治療方法において用いられ得る。
【０１１５】
好ましい組成物
好ましい本発明のハイブリッド組成物を、以下の表に要約する。
【０１１６】
【表１】
2017517557.tif 000002
【０１１７】
リポソーム組成物
また、本発明は、１つまたは複数のリポソーム内に包含された、１つまたは複数の本発明のハイブリッド組成物を含む、リポソーム組成物も提供する。適切なリポソームは、当該分野で知られている。適切なリポソームは、例えば、Ａｋｂａｒｚａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｎｏｓｃａｌｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１３，８：１０２  ａｎｄ  Ｍｅｇｈａｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，１（１）：１−１０に開示される。リポソームの形成で用いるための適切な脂質は、マイクロバブルに関して以下に述べられる。
【０１１８】
マイクロバブル組成物
また、本発明は、１つまたは複数のマイクロバブル内に包含された、１つまたは複数の本発明のハイブリッド組成物を含む、マイクロバブル組成物も提供する。マイクロバブル、それらの形成および生体医学的使用は、当技術分野で知られている（例えばＳｉｒｓｉ  ａｎｄ  Ｂｏｒｄｅｎ，Ｂｕｂｂｌｅ  Ｓｃｉ  Ｅｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｎｏｖ  ２００９；１（１−２）：３−１７）。
【０１１９】
マイクロバブルは、直径が１ミリメートルより小さく、直径が１マイクロメートルよりも大きいバブルである。本発明のマイクロバブルは、好ましくは、直径が８μｍ以下、例えば直径が７μｍ以下、直径が６μｍ以下、直径が５μｍ以下、直径が４μｍ以下、直径が３μｍ以下、または直径が２μｍ以下である。
【０１２０】
マイクロバブルは、任意の物質から形成され得る。マイクロバブルの一般的な組成は、シェルにより安定化されたガスコアである。ガスコアは、空気または重いガス、例えばパーフルオロカーボン、窒素またはパーフルオロプロパン（ｐｅｒｆｌｏｕｒｏｐｒｏｐａｎｅ）を含み得る。重いガスは、水溶性が低いので、マイクロバブルから漏出してマイクロバブルの溶解をもたらす可能性が低い。重いガスコアを有するマイクロバブルは、典型的に、循環において、より長持ちする。
【０１２１】
シェルは、任意の材料から形成され得る。シェル材料は、好ましくは、タンパク質、界面活性剤、脂質、ポリマーまたはそれらの混合物を含む。
【０１２２】
適切なタンパク質は、限定されないが、アルブミン、リゾチームおよびアビジンを含む。シェル内のタンパク質は、例えばシステイン−システイン結合により、化学的に架橋され得る。他の架橋は当該分野で知られている。
【０１２３】
適切な界面活性剤は、限定されないが、ソルビタンモノパルミテート（ＳＰＡＮ−４０など）、ポリソルベート洗浄剤（ＴＷＥＥＮ−４０など）、ＳＰＡＮ−４０およびＴＷＥＥＮ−４０の混合物、およびスクロースステアリン酸（モノ−およびジ−エステル）を含む。
【０１２４】
適切なポリマーは、限定されないが、アルギネートポリマー、エチリデンの二重エステルポリマー、共重合体ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、共重合体ポリパーフルオロオクチルオキシカルボニル（ｐｏｌｙｐｅｒｆｌｕｏｒｏｏｃｔｙｌｏｘｙｃａｒｏｎｙｌ）−ポリ（乳酸）（ＰＬＡ−ＰＦＯ）および他のブロック共重合体を含む。ブロック共重合体は、２以上のモノマーのサブユニットが共に重合されて単一のポリマー鎖を作る、ポリマー材料である。ブロック共重合体は、典型的に、それぞれのモノマーサブユニットにより与えられる特性を有する。しかしながら、ブロック共重合体は、個々のサブユニットから形成されるポリマーが保有しない独特の特性を有し得る。ブロック共重合体は、水性培地中で、モノマーサブユニットの１つが疎水性（すなわち脂溶性）であり、一方で、他方のサブユニット（単数または複数）が親水性であるように改変することができる。この場合、ブロック共重合体は、両親媒性の特性を有し得て、生物学的な膜を模倣する構造を形成し得る。ブロック共重合体は、ジブロック（２つのモノマーサブユニットからなる）であり得るが、２個よりも多いモノマーサブユニットからも作られ、両親媒性物質（ａｍｐｈｉｐｉｌｅ）として振る舞う、より複雑な配置を形成し得る。共重合体は、トリブロック、テトラブロックまたはペンタブロック共重合体であり得る。また、ブロック共重合体は、脂質サブ材料として分類されないサブユニットから作られてもよく；例えば、疎水性ポリマーは、シロキサンまたは他の非炭化水素系モノマーから作られ得る。また、ブロック共重合体の親水性のサブ部分は、低いタンパク質結合特性を有してもよく、このことは、生の生物学的サンプルに曝された場合に抵抗性が高い膜の形成を可能にする。この頭部基ユニットは、非古典的な脂質頭部基からも生じ得る。
【０１２５】
マイクロバブルを形成する任意の脂質材料が用いられ得る。脂質組成は、マイクロバブルが、表面電荷、充填密度または機械的特性などの必要な特性を有するように選択される。脂質組成は、１または複数の異なる脂質を含むことができる。例えば、脂質組成は、１００までの脂質を含むことができる。脂質組成は、好ましくは１〜１０の脂質を含む。脂質組成は、天然起源の脂質および／または人工の脂質を含んでよい。
【０１２６】
脂質は典型的に、頭部基、界面部分、および、同一または異なってよい２つの疎水性尾部基を含む。適切な頭部基は、限定されないが、中性頭部基、例えばジアシルグリセリド（ＤＧ）およびセラミド（ＣＭ）；双性イオン性頭部基、例えばホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）およびスフィンゴミエリン（ＳＭ）；負に帯電した頭部基、例えばホスファチジルグリセロール（ＰＧ）；ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、リン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＰＡ）およびカルジオリピン（ＣＡ）；および正に帯電した頭部基、例えばトリメチルアンモニウム−プロパン（ＴＡＰ）を含む。適切な界面部分は、限定されないが、天然起源の界面部分、例えばグリセロール系またはセラミド系の部分を含む。適切な疎水性尾部基は、限定されないが、飽和炭化水素鎖、例えばラウリン酸（ｎ−ドデカン酸）、ミリスチン酸（ｎ−テトラデカン酸）、パルミチン酸（ｎ−ヘキサデカン酸）、ステアリン酸（ｎ−オクタデカン）およびアラキジン（ｎ−エイコサン）；不飽和炭化水素鎖、例えばオレイン酸（シス−９−オクタデカン）；および分岐炭化水素鎖、例えばフィタノイルを含む。鎖の長さ、および、不飽和炭化水素鎖中の二重結合の位置および数は、変更することができる。鎖の長さ、および、分岐炭化水素鎖中の分岐の位置および数（例えばメチル基）は、変更することができる。疎水性尾部基は、エーテルまたはエステルとして界面部分に結合することができる。
【０１２７】
また、脂質は、化学的に修飾することもできる。脂質の頭部基または尾部基は、化学的に修飾することができる。頭部基が化学的に修飾されている適切な脂質は、限定されないが、ＰＥＧ修飾脂質、例えば１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；官能性ＰＥＧ脂質、例えば１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３ホスホエタノールアミン−Ｎ−［ビオチニル（ポリエチレングリコール）２０００］；および、結合のために修飾された脂質、例えば１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（ビオチニル）を含む。尾部基が化学的に修飾されている適切な脂質は、限定されないが、重合性脂質、例えば１，２−ビス（１０，１２−トリコサジイノイル（ｔｒｉｃｏｓａｄｉｙｎｏｙｌ））−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；フッ素化脂質、例えば１−パルミトイル−２−（１６−フルオロパルミトイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；重水素化脂質、例えば１，２−ジパルミトイル−Ｄ６２−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；および、エーテル結合脂質、例えば１，２−ジ−Ｏ−フィタニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む。上述のように、脂質は、化学的に修飾され、または官能化され、リガンド、受容体または抗体の結合を促進し得る。
【０１２８】
脂質組成は、マイクロバブルの特性に影響する１または複数の添加剤を含み得る。適切な添加剤は、限定されないが、脂肪酸、例えばパルミチン酸、ミリスチン酸およびオレイン酸；脂肪族アルコール、例えばパルミチンアルコール、ミリスチンアルコールおよびオレインアルコール；ステロール類、例えばコレステロール、エルゴステロール、ラノステロール、シトステロールおよびスチグマステロール；リゾリン脂質、例えば１−アシル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；およびセラミド類を含む。
【０１２９】
マイクロバブルシェルは、好ましくはリン脂質から形成される。適切なリン脂質は当該分野で知られている。
【０１３０】
Ｄｅｆｉｎｉｔｙ（Ｌａｎｔｈｅｕｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ）およびＳｏｎｏｖｕｅ（登録商標）（Ｂｒａｃｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）などの、様々な市販の脂質シェルマイクロバブル製剤が存在する。
【０１３１】
また、マイクロバブルは、予め形成されたマイクロバブル上に高分子電解質多層（ＰＥＭ）シェルを形成することを含むポリマー−界面活性剤ハイブリッドからも形成され得る。予め形成されたマイクロバブルは、帯電した界面活性剤またはタンパク質層で覆われ、それは、ＰＥＭ沈着のための基質として働く。多層集合の技術を用いて、逆に帯電したポリイオンをマイクロバブルシェルに連続して吸着させる。例えば、ＰＥＭは、ポリ（アリルアミンハイドロクロライド）（ＰＡＨ）およびポリ（スチレンスルホナート）（ＰＳＳ）をポリイオンペアに用いて、マイクロバブル上に沈着することができる。カチオン性頭部基トリメチルアンモニウムプロパン（ＴＡＰ）を下層シェルとして、および、ＤＮＡとポリ（Ｌ−リジン）（ＰＬＬ）をポリイオンペアとして含む、リン脂質を有するＰＥＭマイクロバブルも開発されている。
【０１３２】
マイクロバブルは典型的に、ガスとマイクロバブルシェル材料との間の界面を与えることにより形成される。上述した任意の材料を用いてよい。リン脂質などの一部の材料は、自然発生的にマイクロバブルを形成する。リン脂質は、マイクロバブルに自己集合する。他の材料は、界面のソニケーション、すなわち界面に対する音波または音エネルギーの適用を必要とする。超音波が典型的に用いられる。適切な方法は、ソニケーションに関する分野で知られている。
【０１３３】
マイクロバブルは、マイクロバブルの形成後、またはマイクロバブルの形成中に、ハイブリッド組成物がロードされ得る。
【０１３４】
薬物、方法および治療的用途
本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物は、ヒトまたは動物の体の治療方法で用いられ得る。したがって、本発明は、治療によるヒトまたは動物の体の治療方法での使用のための、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物を提供する。具体的には、本発明は、患者における損傷組織を修復するための、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物の使用に関する。また、本発明は、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療するための、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物の使用にも関する。
【０１３５】
本発明は、患者における損傷組織を修復する方法を提供し、損傷組織を、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物と接触させるステップ（ここで、組成物は、治療的に効果的な数の細胞を含む）、および、それにより、患者における損傷組織を治療するステップ、を含む。また、本発明は、患者における損傷組織の修復での使用のための、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物を提供する。また、本発明は、患者における損傷組織を修復するための薬物の製造での、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物の用途を提供する。
【０１３６】
組織は、好ましくは、中胚葉から得られる。組織は、より好ましくは、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である。
【０１３７】
組織に対する損傷は、外傷または疾患に起因し得る。外傷または疾患は、好ましくは、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患である。したがって、本発明は、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療する方法を提供し、患者に、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物を投与するステップ（ここで、組成物は、治療的に効果的な数の細胞を含む）、およびそれにより、患者における外傷または疾患を治療するステップ、を含む。また、本発明は、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺外傷または疾患の治療での使用のための、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物も提供する。また、本発明は、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺外傷または疾患を治療するための薬物の製造での、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物の用途も提供する。
【０１３８】
心臓の外傷または疾患は、好ましくは、心筋梗塞（ＭＩ）、左室肥大、右室肥大、塞栓、心不全、先天性心臓欠陥、心臓弁膜症、不整脈および心筋炎から選択される。
【０１３９】
ＭＩは、心筋により放出されるＶＥＧＦおよびＥＰＯのレベルを増大させる。さらに、ＭＩは、炎症性反応と関連し、および、梗塞組織は、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、インターロイキン（ＩＬ‐６）およびＫＣ／Ｇｒｏ−αも放出する。ＣＣＬ７（以前はＭＣＰ３として知られる）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２は、心筋梗塞（ＭＩ）後に心臓内で著しく上方制御され、梗塞心筋へのＭＳＣのホーミングおよび生着の制御に関与し得る。
【０１４０】
心筋梗塞マウスモデルでは、ＩＬ−８は、まず、ＭＩ後の最初の２日に遺伝子発現を高度に上方制御することが示された。驚くべきことに、ＩＬ−８発現の増加は、主に、梗塞領域および境界域で生じ、残りの心筋ではよりいっそう低い程度であった。ＣＸＣＲ２を活性化することにより、ＭＩＦは、ケモカイン様の機能を示し、炎症性細胞動員およびアテローム発生の主なレギュレーターとして作用する。
【０１４１】
骨の疾患または外傷は、好ましくは、骨折、Ｓａｌｔｅｒ−Ｈａｒｒｉｓ骨折、若木骨折、骨棘、頭蓋骨癒合症、コフィン−ローリー症候群、進行性骨化線維異形成症、線維性骨異形成症、Ｆｏｎｇ病（または爪膝蓋骨症候群）、低ホスファターゼ症、クリッペル・ファイル症候群、代謝性骨疾患、爪膝蓋骨症候群、変形性関節症、変形性骨炎（または骨パジェット病）、嚢胞性線維性骨炎（または線維性骨炎またはフォンレックリングハウゼン骨病）、恥骨骨炎、硬化性骨炎（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ｏｓｔｅｉｔｉｓ）（または硬化性骨炎（ｏｓｔｅｉｔｉｓ  ｃｏｎｄｅｎｓａｎｓ））、硬化性腸骨炎、離断性骨軟骨炎、骨形成不全症、骨軟化症、骨髄炎、骨減少症、大理石骨病、骨粗鬆症、骨壊死、骨萎縮性骨化過剰症、原発性副甲状腺機能亢進症、腎性骨ジストロフィー、骨癌、転移性癌と関連する骨病変、Ｇｏｒｈａｍ  Ｓｔｏｕｔ病、原発性副甲状腺機能亢進症、歯周病、および関節置換の無菌弛緩から選択される。骨癌は、ユーイング肉腫、多発性骨髄腫、骨肉腫（骨の巨大な腫瘍）、骨軟骨腫または破骨細胞腫であり得る。骨病変をもたらす転移性癌は、乳癌、前立腺癌、腎臓癌、肺癌および／または成人Ｔ細胞白血病であり得る。
【０１４２】
全ての例において、１つまたは複数の治療的細胞は、好ましくは、患者または同種異系ドナーから採取される。患者からの細胞を採取することは、患者の免疫系により細胞自身が拒絶されないことを確実にするであろう。ドナーおよびレシピエントの間の任意の違いは、細胞のクリアランスを最終的に引き起こすが、それらが損傷組織の少なくとも一部を修復する前ではない。
【０１４３】
本発明は、患者に対して治療的に効果的な数の治療的細胞を、患者へ投与することに関する。治療的に効果的な数は、損傷、疾患または外傷の症状の１つまたは複数を改善する数である。治療的に効果的な数は、好ましくは、損傷組織を修復する、または疾患または外傷を治療する数である。適切な数は、以下により詳細に述べられる。
【０１４４】
本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物は、任意の適切な患者へ投与され得る。患者は一般に、ヒト患者である。患者は、ＰＭＬおよびＩＭＰ細胞の由来に関して上述した任意の動物または哺乳類であってよい。
【０１４５】
患者は、幼児、子どもまたは成人であってよい。患者は、損傷組織を有すること、または損傷組織を有する疑いがあることが、知られていてよい。患者は、関連のある疾患または外傷を起こしやすく、またはそのリスクがあってよい。例えば、患者は、遺伝学的に心不全に罹りやすくてよい。
【０１４６】
本発明は、損傷組織を修復する、または疼痛緩和を提供する、他の手段および物質と組み合わせて用いてよい。ある場合には、本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物は、損傷組織を修復する、または疼痛緩和を提供することを目的とする他の物質と、同時に、連続して、または別々に投与され得る。本発明のハイブリッド組成物または本発明のリポソームまたはマイクロバブル組成物は、損傷組織のための既存の治療と組み合わせて用いてよく、例えば、そのような治療と単純にミックスしてよい。したがって、本発明を用いて、損傷組織の既存の治療の有効性を増大させ得る。
【０１４７】
本発明は、好ましくは、治療薬および／または診断薬がロードまたはトランスフェクトされた、治療的細胞の使用に関する。治療薬は、損傷組織の修復を助け得る。蛍光分子などの診断薬は、患者における組成物の位置を特定するのを助け得る。細胞は、当該分野で知られている任意の方法を用いてロードまたはトランスフェクトされ得る。細胞のロードは、インビトロまたはエクスビボで行なわれ得る。それぞれの場合において、細胞は、培養物中で薬剤と単純に接触され得る。あるいは、細胞は、リポソームのような送達ビヒクルを用いて、薬剤がロードされ得る。そのようなビヒクルは当該分野で知られている。
【０１４８】
ＰＭＬまたはＩＭＰ細胞などの細胞のトランスフェクションは、インビトロまたはエクスビボで行なわれ得る。あるいは、安定したトランスフェクションは、ＭＣ段階で行なわれ得て、導入遺伝子を発現するＰＭＬが、それらから分化するのを可能にする。細胞は典型的に、薬剤をコードする核酸でトランスフェクトされる。例えば、ウイルス粒子または薬剤をコードする他のベクターが用いられ得る。これを行なう方法は、当該分野で知られている。
【０１４９】
核酸は、細胞内で薬剤の発現を生じさせる。核酸分子は、好ましくは、薬剤をコードする配列に動作可能に連結されかつＰＭＬ内で活性であり、または細胞内で誘導され得る、プロモーターを含む。
【０１５０】
特に好ましい実施態様では、薬剤をコードする核酸は、ウイルス粒子を介して送達され得る。ウイルス粒子は標的化分子を含み、効率的なトランスフェクションを確実にし得る。標的化分子は典型的に、その分子がウイルスを細胞に対して標的化することができるように、ウイルスの表面上に全体的または部分的に与えられる。
【０１５１】
任意の適切なウイルスを、そのような実施態様で用いてよい。ウイルスは、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスであってよい。特に好ましい実施態様では、ウイルスは、レンチウイルスであってよい。レンチウイルスは、遺伝子を送達する使用に適切な改変ＨＩＶウイルスであってよい。レンチウイルスは、ＳＩＶ、ＦＩＶ、またはウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＱＩＡ）に基づくベクターであってよい。ウイルスは、モロニーミューリン白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）であってよい。本発明で用いられるウイルスは、好ましくは複製欠損型である。
【０１５２】
ウイルス粒子を使用する必要はない。従来のプラスミドＤＮＡまたはＲＮＡトランスフェクションなど、細胞をトランスフェクトすることが可能な任意のベクターを用いてよい。
【０１５３】
核酸構築物の取り込みは、トランスフェクション剤の使用を含むもののようないくつかの公知のトランスフェクション技術により増強され得る。これらの試薬の例は、カチオン剤、例えば、リン酸カルシウムおよびＤＥＡＥ−デキストランおよびリポフェクタント（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｎｔ）、例えば、リポフェクタミン、フュージーン（ｆｕｇｅｎｅ）およびトランスフェクタム（ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ）を含む。
【０１５４】
細胞は、適切な条件下でロードまたはトランスフェクトされ得る。細胞および薬剤またはベクターは、例えば、５分〜１０日間、好ましくは１時間〜５日間、より好ましくは５時間〜２日間、さらにより好ましくは１２時間〜１日、接触させてよい。
【０１５５】
一部の実施態様では、ＭＣは、患者から回収され、上述のようにＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞に変換され、インビトロでロードまたはトランスフェクトされ、およびそれから、同一患者に戻してよい。そのような例では、本発明で用いられるＰＭＬおよび／またはＩＭＰ細胞は、自己由来の細胞であり、患者と完全に一致する。好ましい例では、本発明で用いられる細胞は、患者から回収され、エクスビボで使用され、その後に同一患者へ戻される。
【０１５６】
医薬組成物および投与
本発明の組成物は、任意の適切な方法を用いて製剤化され得る。標準的な薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を用いた細胞の製剤化は、調剤分野における常法を用いて行なわれ得る。製剤の厳密な性質は、投与される細胞および所望の投与経路を含むいくつかの因子に依存する。適切な製剤タイプは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡに完全に記載されている。
【０１５７】
組成物は、任意の経路により投与され得る。適切な経路は、限定されないが、静脈内、筋肉内、腹腔内または他の適切な投与経路を含む。組成物は、好ましくは、損傷組織に直接投与される。
【０１５８】
組成物は、生理的に許容できる担体または希釈剤を用いて調製され得る。組成物は、薬学的に許容でき有効成分と適合する賦形剤と混合され得る。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセロールなど、およびそれらの組み合わせである。
【０１５９】
加えて、必要に応じて、本発明の医薬組成物は、少量の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および／または有効性を高めるアジュバントを含んでよい。組成物は、好ましくはヒト血清アルブミンを含む。
【０１６０】
適切な担体または希釈剤の１つは、Ｐｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ（登録商標）である。これは、静脈内投与のための、滅菌の、非発熱性の等張液である。各１００ｍＬは、５２６ｍｇの塩化ナトリウム、ＵＳＰ（ＮａＣｌ）；５０２ｍｇのグルコン酸ナトリウム（Ｃ６Ｈ１１ＮａＯ７）；３６８ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物、ＵＳＰ（Ｃ２Ｈ３ＮａＯ２・３Ｈ２Ｏ）；３７ｍｇの塩化カリウム、ＵＳＰ（ＫＣｌ）；および３０ｍｇの塩化マグネシウム、ＵＳＰ（ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を含む。それは抗菌剤を含まない。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて調整される。ｐＨは７．４（６．５〜８．０）である。
【０１６１】
組成物は、投与製剤と適合する方法で、治療的に効果的であるような量で投与される。投与される治療的細胞の量は、治療される対象、対象の免疫系の能力、および所望の修復度合に依存する。投与が必要とされる細胞の正確な量は、熟練者の判断に依存し得て、および、各対象に特有であり得る。
【０１６２】
任意の適切な数の細胞が、対象に投与され得る。例えば、患者のｋｇあたり、少なくとも、または約、０．２×１０６、０．２５×１０６、０．５×１０６、１．５×１０６、４．０×１０６または５．０×１０６の細胞が投与され得る。例えば、少なくとも、または約、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９の細胞が投与され得る。目安として、投与される細胞の数は、１０５〜１０９、好ましくは１０６〜１０８であり得る。典型的に、２×１０８までのＩＭＰ細胞が、各患者に投与される。上述の任意の特定の数が投与され得る。
【０１６３】
以下の実施例は、本発明を説明する。
【実施例】
【０１６４】
ハイブリッド組成物を、図３〜６に示されるスキームに従って製造した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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