(57)【要約】本発明は、新規のプラジエノライドピリジン化合物、このような化合物を含有する医薬組成物、及び治療剤としてその化合物を使用する方法を提供する。これらの化合物は、がん、特にそこにあるスプライソソーム及び突然変異を標的とする薬剤が有用であることが知られているがんの治療に有用であることがある。【選択図】  図１
2017505282.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１：
【化１】
2017505282.tif 000018
の化合物、
式２：
【化２】
2017505282.tif 000019
の化合物、
式３：
【化３】
2017505282.tif 000020
の化合物、及び
式４：
【化４】
2017505282.tif 000021
の化合物
からなる群から選択される化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項２】
式１：
【化５】
2017505282.tif 000022
の化合物である、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項３】
式２：
【化６】
2017505282.tif 000023
の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項４】
式３：
【化７】
2017505282.tif 000024
の化合物である、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項５】
式４：
【化８】
2017505282.tif 000025
の化合物である、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項６】
前記化合物が、立体異性的に純粋である、請求項１に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が、静脈内、経口、皮下、又は筋肉内投与のために製剤化されている、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が、経口投与のために製剤化されている、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、前記対象に、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物若しくはその医薬上許容しうる塩、又は請求項７〜９のいずれか一項に記載の組成物の有効量を投与するステップを含み、前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんである、方法。
【請求項１１】
前記がんが、結腸がんである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記がんが、膵臓がんである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記がんが、白血病である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
前記対象が、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性であるがんを有する、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
治療的処置の方法における請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用であって、前記治療的処置が、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんの治療のためのものである、使用。
【請求項１７】
前記使用が、結腸がんの治療のためのものである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記使用が、膵臓がんの治療のためのものである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
前記使用が、白血病の治療のためのものである、請求項１６に記載の使用。
【請求項２０】
前記骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２１】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
薬物の調製における請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用。
【請求項２３】
前記薬物が、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんの治療のためのものである、請求項２２の使用。
【請求項２４】
前記薬物が、結腸がんの治療のためのものである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記薬物が、膵臓がんの治療のためのものである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】
前記薬物が、白血病の治療のためのものである、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
前記骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
式２：
【化９】
2017505282.tif 000026
の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、経口投与のために製剤化されている、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
それを必要とする対象におけるがんを治療する方法であって、前記対象に、請求項２９又は請求項３０の組成物の有効量を投与するステップを含み、前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんである、方法。
【請求項３２】
前記がんが、結腸がんである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記がんが、膵臓がんである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記がんが、白血病である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記対象が、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性であるがんを有する、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３６】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
治療的処置の方法における請求項２９又は請求項３０の医薬組成物の使用であって、前記治療的処置が、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんの治療のためのものである、使用。
【請求項３８】
前記治療的処置が、結腸がんの治療のためのものである、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記治療的処置が、膵臓がんの治療のためのものである、請求項３７に記載の使用。
【請求項４０】
前記治療的処置が、白血病の治療のためのものである、請求項３７に記載の使用。
【請求項４１】
前記骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項３７〜４０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４２】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
薬物の調製における、請求項２９又は請求項３０の医薬組成物の使用。
【請求項４４】
前記薬物が、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんの治療のためのものである、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
前記薬物が、結腸がんの治療のためのものである、請求項４４に記載の使用。
【請求項４６】
前記薬物が、膵臓がんの治療のためのものである、請求項４４に記載の使用。
【請求項４７】
前記薬物が、白血病の治療のためのものである、請求項４４に記載の使用。
【請求項４８】
前記骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん又は肺がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項４４〜４７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項４９】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項４８に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【背景】
【０００１】
本発明は、新規の有機化合物及びそのような化合物を含有する医薬組成物を提供する。これらの化合物は、がん、特にスプライソソーム及び突然変異を標的にする薬剤が有用であることが知られているがんの治療に有用でありうる。
【０００２】
真核生物では、新たに合成されたメッセンジャーＲＮＡは、典型的には、切除されて、成熟したｍＲＮＡを供する複数のイントロンを有する。スプライソソームは、この課題を達成するマルチサブユニット複合体である。スプライソソームは、多様なタンパク質と組み合わせた５つの核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ；Ｕ１−６）からなる。スプライソソーム遺伝子における突然変異は、様々の種類のがんで見ることができた。
【０００３】
例えば、スプライソソームのスプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）における突然変異は、多くのがんで存在し、抗がん剤のための標的を含む。このようながんとしては、それに限定されないが、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、白血病、例えば慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）及び急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、並びに固形腫瘍、例えば乳がん及びブドウ膜黒色腫が挙げられる。
【０００４】
細菌ストレプトマイセス・プラテンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ）から単離され、プラジエノライドと名付けられ、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）プロモーターの阻害剤についてスクリーニングするときに知見された化合物（Ｓａｋａｉ，Ｔａｋａｓｈｉ；Ｓａｍｅｓｈｉｍａ，Ｔｏｍｏｈｉｒｏ；Ｍａｔｓｕｆｕｊｉ，Ｍｏｔｏｋｏ；Ｋａｗａｍｕｒａ，Ｎａｏｔｏ；Ｄｏｂａｓｈｉ，Ｋａｚｕｙｕｋｉ；Ｍｉｚｕｉ，Ｙｏｓｈｉｈａｒｕ．Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓ，Ｎｅｗ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ  Ｍｅｒ−１１１０７．  Ｉ．  Ｔａｘｏｎｏｍｙ，  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．２００４、Ｖｏｌ．５７、Ｎｏ．３．）は、ヒトＶＥＧＦプロモーターにより制御されるレポーター遺伝子の発現を阻害し、その阻害は、抗がん剤についての作用の有用な機構として知られている。
【０００５】
これらの化合物は、インビトロでＵ２５１ヒト神経膠腫細胞の増殖も阻害する。これらの化合物の最も強力なプラジエノライドＢは、ＶＥＧＦで促進される遺伝子発現を１．８ｎＭのＩＣ５０で阻害し、神経膠腫細胞増殖を３．５ｎＭのＩＣ５０で阻害する。プラジエノライドＢの構造は知られており（Ｓａｋａｉ，Ｔａｋａｓｈｉ；Ｓａｍｅｓｈｉｍａ，Ｔｏｍｏｈｉｒｏ；Ｍａｔｓｕｆｕｊｉ，Ｍｏｔｏｋｏ；Ｋａｗａｍｕｒａ，Ｎａｏｔｏ；Ｄｏｂａｓｈｉ，Ｋａｚｕｙｕｋｉ；Ｍｉｚｕｉ，Ｙｏｓｈｉｈａｒｕ．Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅｓ，Ｎｅｗ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ  ｆｒｏｍ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｐｌａｔｅｎｓｉｓ  Ｍｅｒ−１１１０７．  ＩＩ．  Ｐｈｙｓｉｃｏ−ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．Ｖｏｌ．５７、Ｎｏ．３．（２００４））、プラジエノライドＢは、ＳＦ３ｂスプライソソームを標的にして、スプライシングを阻害し、遺伝子発現のパターンを改変することが知られている（Ｋｏｔａｋｅら、「Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３ｂ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００７年、３巻、５７０〜５７５頁）。
【０００６】
特定のプラジエノライドＢ化合物、並びに他のプラジエノライド化合物は、以下の特許出願を開示するのと同様に知られている：国際公開第２００２／０６０８９０号；国際公開第２００４／０１１４５９号；国際公開第２００４／０１１６６１号；国際公開第２００４／０５０８９０号；国際公開第２００５／０５２１５２号；国際公開第２００６／００９２７６号；及び国際公開第２００８／１２６９１８号。例えば、Ｅ７１０７としても知られているプラジエノライド化合物（８Ｅ，１２Ｅ，１４Ｅ）−７−（（４−シクロヘプチルピペラジン−１−イル）カルボニル）オキシ−３，６，１６，２１−テトラヒドロキシ−６，１０，１２，１６，２０−ペンタメチル−１８，１９−エポキシトリコサ−８，１２，１４−トリエン−１１−オリドは、天然物プラジエノライドＤの半合成誘導体であり、そのフェーズＩ研究の結果が報告されている。
【０００７】
しかし、がん、特にスプライソソーム及びその突然変異を標的にする薬剤が有用であることが知られているがんの治療に有用な追加の薬剤が必要とされている。
【発明の概要】
【０００８】
本発明の目的は、式１の化合物（「化合物１」）、式２の化合物（「化合物２」）、式３の化合物（「化合物３」）、及び式４の化合物（「化合物４」）：
【化１】
2017505282.tif 000003
並びにその医薬上許容しうる塩を提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は、化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、又はその医薬上許容しうる塩を含む医薬組成物を提供することである。このような医薬組成物を、１つ又は複数の医薬上許容しうる担体と共に製剤化することができる。このような組成物は、静脈内、経口、皮下又は筋肉内投与を含めた種々の従来の経路の投与を介した用途のために製剤化される。
【００１０】
本発明は、対象に、治療上有益な応答を生じるのに有効な量の化合物１、化合物２、化合物３、化合物４又はその医薬上許容しうる塩を投与するステップを含む、がんを有する対象を治療する方法にも関することができる。がんは、骨髄異形成症候群、白血病、例えば慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病若しくは急性骨髄性白血病、又は固形腫瘍、例えば結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん、肺がん、又はその任意にサブセットであることがある。がんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質、例えば表１に列挙されるものにおける１つ又は複数の突然変異について陽性であることを試験することができる。
【００１１】
本発明は、治療的処置、例えばがんのための治療の方法での化合物１、化合物２、化合物３、化合物４又はその医薬上許容しうる塩の使用にも関することができる。がんは、骨髄異形成症候群、白血病、例えば慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、若しくは急性骨髄性白血病、又は固形腫瘍、例えば結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん、肺がん、又はその任意にサブセットであることがある。がんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質、例えば表１に列挙されるものにおける１つ又は複数の突然変異について陽性であることを試験することができる。
【００１２】
本発明は、薬物の調製における化合物１、化合物２、化合物３、化合物４、又はその医薬上許容しうる塩の使用にも関することができる。特に、薬物は、がんの治療のためであることがある。がんは、骨髄異形成症候群、白血病、例えば慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、若しくは急性骨髄性白血病、又は固形腫瘍、例えば結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん、肺がん、又はその任意のサブセットであることができる。がんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質、例えば表１に列挙されるものにおける１つ又は複数の突然変異について陽性であるかを試験することができる。
【００１３】
本発明は、さらに、スプライソソーム、例えば、ＳＦ３Ｂスプライソソームのサブユニット１を標的にする化合物１、化合物２、化合物３、化合物４又はその医薬上許容しうる塩の使用に関しうる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】５ｍｇ／ｋｇ静脈内（ＩＶ）又は１０ｍｇ／ｋｇ経口投与（ＰＯ）の用量で化合物２が投与されているＣＤ−１マウスにおける薬物動態学的（ＰＫ）研究の結果を示すグラフである。
【図２】操作されたＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ突然変異を有するＮａｌｍ−６（ヒトのプレＢ−細胞株）マウスの異種移植モデルでの化合物２の効力を示すグラフである。１４日間、毎日１回（ＱＤ）、マウスに２．５、５又は１０ｍｇ／ｋｇの化合物２を投与し、腫瘍体積を、４０日期間にわたり測定した。
【図３】操作されたＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ突然変異を有するＮａｌｍ−６（ヒトのプレＢ−細胞株）異種移植モデルにおける化合物２の薬物動態学的及び薬力学的分析を示すグラフである。マウスに、１０ｍｇ／ｋｇＰＯ用量の化合物２を投与し、腫瘍濃度（μｇ／ｇ）及び溶媒と比較したプレ−ＥＩＦ４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１転写物のプレ−ｍＲＮＡ）及びＳＬＣ２５Ａ１９（ＳＬＣ２５Ａ１９転写物の成熟したｍＲＮＡ）の発現における倍率変化を決定した。
【図４】野生型ＳＦ３Ｂ１膵臓がん細胞株ＢＸＰＣ３、ＨＰＡＦＩＩ、ＰＡＮＣ０４０３、ＰＡＮＣ１００５、ＣＦＰＡＣ１及びＭＩＡＰＡＣＡ２と比較したＰＡＮＣ０５０４がん細胞株（ＳＦ３Ｂ１ＭＵＴ）（突然変異体ＰＡＮＣ０５．０４）における化合物２を用いた細胞生存能力アッセイの結果を示すグラフである。
【図５】ナノストリング（Ｎａｎｏｓｔｒｉｎｇ）の分析に基づいたＥ７１０７及び化合物２（ｃｍｐｄ２）についての選択的スプライシングの調節を示す図である。「＋」及び「−」は、それぞれ、様々なスプライス接合部の発現の可変レベルを示すシェードキー（shade key）における正又は負の値を示す。
【図６】５ｍｇ／ｋｇ静脈内（ＩＶ）又は１２ｍｇ／ｋｇ経口投与（ＰＯ）の用量で化合物１を投与したＣＤ−１マウスにおけるＰＫ研究の結果を示すグラフである。
【図７】操作されたＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ突然変異を有するＮａｌｍ−６マウス異種移植モデルにおける化合物１の効力を示すグラフである。１４日間、毎日１回（ＱＤ）、マウスに、７．５又は１０ｍｇ／ｋｇの化合物１を投与し、３０日期間にわたり腫瘍体積を測定した。
【図８】操作されたＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ突然変異を有するＮａｌｍ−６異種移植モデルにおける化合物１の薬物動態学的及び薬力学的分析を示すグラフである。マウスに、単一ＰＯ用量の化合物１を投与し、腫瘍濃度（μｇ／ｇ）及び溶媒と比較したプレ−ＥＩＦ４Ａ１（ＥＩＦ４Ａ１転写物のプレ−ｍＲＮＡ）及びＳＬＣ２５Ａ１９（ＳＬＣ２５Ａ１９転写物の成熟しているｍＲＮＡ）の発現における倍率変化を決定した。
【図９】５．９６４ｍｇ／ｋｇ静脈内（ＩＶ）又は１３．３０７ｍｇ／ｋｇ経口投与（ＰＯ）の用量で化合物３を投与したＣＤ−１マウスにおけるＰＫ研究の結果を示すグラフである。
【図１０】５ｍｇ／ｋｇ静脈内（ＩＶ）又は１０ｍｇ／ｋｇ経口投与（ＰＯ）の用量で化合物４を投与したＣＤ−１マウスにおけるＰＫ研究の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
Ａ．定義
本明細書で使用される場合、以下の定義は、特に指示されていない限り適用される。
【００１６】
「異性体」は、同じ数及び種類の原子を有し、したがって、同じ分子量を有するが、その原子の配列又は配置に関して異なる化合物を指す。「立体異性体」は、同じ原子結合性を有するが、空間でのそれらの原子の異なる配列を有する化合物を指す。「ジアステレオ異性体」又は「ジアステレオマー」は、鏡像異性体でない立体異性体を指す。「鏡像異性体」は、互いに重ねることができない鏡像である立体異性体を指す。「幾何学的異性体」は、二重結合又は環又は中心原子に関して異なる位置の基を有するシス−トランス異性体を指す。
【００１７】
本明細書で教示されている鏡像異性体としては、特定の不斉中心又は（複数の）不斉中心で、単独の鏡像異性体、例えば、９０％、９２％、９５％、９８％、若しくは９９％より大きいか又は等しい、又は１００％に等しい単一の鏡像異性体を実質的に含む「鏡像異性的に純粋な」異性体を挙げることができる。「不斉中心」又は「キラル中心」は、４つの異なる置換基を含む四面体炭素原子を指す。
【００１８】
本明細書で使用される場合、「立体異性的に（stereomerically）純粋な」は、ある化合物の１つの立体異性体を含み、その化合物の他の立体異性体を実質的に含まない化合物又はその組成物を意味する。例えば、１つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、その化合物の逆の鏡像異性体を実質的に含まない。２つのキラル中心を有する化合物の立体異性的に純粋な組成物は、その化合物のジアステレオマーを実質的に含まず、その化合物の逆の鏡像異性体を実質的に含まない。典型的な立体異性的に純粋な化合物は、その化合物の約８０重量％超の一方の立体異性体及び、その化合物の約２０重量％未満の他方の立体異性体、さらに好ましくはその化合物の約９０重量％超の一方の立体異性体及びその化合物の約１０重量％未満の他方の立体異性体、さらにいっそう好ましくはその化合物の約９５重量％超の一方の立体異性体及びその化合物の約５重量％未満の他方の立体異性体、最も好ましくはその化合物の約９７重量％超の一方の立体異性体及びその化合物の約３重量％未満の他方の立体異性体を含む。例えば、米国特許第７，１８９，７１５号を参照されたい。
【００１９】
異性体を記述する用語として、「Ｒ」及び「Ｓ」は、非対称に置換されている炭素原子での立体化学の配置の記述子である。「Ｒ」又は「Ｓ」としての非対称に置換されている炭素原子の名称は、当業者に周知であるので、カーン・インゴルド・プレローグ順位則の使用によって行われており、有機化学の命名法についての国際純正・応用化学連合（ＩＵＰＡＣ）規則、セクションＥ、立体化学に記述されている。
【００２０】
がんの「治療」、がんを「治療する（ｔｒｅａｔ）」又はがんを「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、本明細書に記述されるとおり、がんを逆戻りさせること（例えば、細胞の分化障壁を克服すること）、緩和すること（例えば、１つ又は複数の症状、例えば貧血からの疲労、血球数低下などを緩和すること）、及び／又はがんの進行を遅延させること（例えば、ＡＭＬへの形質転換などの症状の進行を遅延させること）を指す。
【００２１】
本明細書で使用される場合、「対象」は、動物対象、好ましくは哺乳類対象、特にヒトを意味する。
【００２２】
本明細書で使用される場合、「医薬上許容しうる担体」は、それと共に製剤化されている化合物の薬理的活性を破壊しない毒性のない担体、アジュバント又は賦形剤を指す。本発明の組成物で使用することができる医薬上許容しうる担体、アジュバント又は賦形剤としては、それに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レクチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝剤物質、例えばホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的グリセリド混合物、水、塩又は電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース基材の物質、ポリエチレングリコール、シクロデキストリン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。
【００２３】
「医薬上許容しうる塩」は、親化合物の望ましい生物学的活性を維持し、望ましくない毒物学的効果を与えない塩である。このような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば塩酸、塩化臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸などで形成されている酸付加塩；及び有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸などで形成されている塩；及び（ｂ）陰イオン元素、例えば塩素、臭素及びヨウ素から形成されている塩である。例えば、Ｈａｙｎｅｓら、「Ｃｏｍｍｅｎｔａｒｙ：Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ａｎｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｄａｔａｂａｓｅ」、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  ｖｏｌ．９４、ｎｏ．１０（２００５）、及びＢｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、ｖｏｌ．６６、ｎｏ．１（１９７７年）を参照されたい。これらは参照により本明細書に組み込まれる。
【００２４】
Ｂ．化合物
特に規定がない限り、本明細書に描かれている化合物としては、本明細書に描かれている化合物の混合物、及びその構造の鏡像異性体、ジアステレオマー、及び幾何学的（又は立体構造）形態のいずれか、例えば各不斉中心についてのＲ及びＳ立体配置、（Ｚ）及び（Ｅ）二重結合異性体、並びに（Ｚ）及び（Ｅ）立体構造異性体を挙げることができる。特に規定がない限り、互変異性形態と同時に存在する本明細書で描かれている化合物は、本発明の範囲内にある。さらに、特に規定がない限り、本明細書で描かれている構造は、１つ又は複数の同位体的に富化されている原子の存在下でのみ異なる化合物を含むことも意図されている。例えば、水素を重水素又はトリチウムに置換すること、又は炭素を１３Ｃ−又は１４Ｃ−富化炭素に置換すること以外は本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内にある。このような化合物は、例えば、生物学的アッセイで分析ツール又はプローブとして有用であることができる。
【００２５】
いくつかの実施形態により本明細書で提供されるのは、式１の化合物（「化合物１」）、式２の化合物（「化合物２」）、式３の化合物（「化合物３」）、及び式４の化合物（「化合物４」）：
【化２】
2017505282.tif 000004
並びにその医薬上許容しうる塩である。
【００２６】
Ｃ．医薬製剤
本発明の化合物は、医薬上許容しうる担体と組み合わせて、その医薬製剤を提供することができる。担体及び製剤の特定の選択は、組成物が意図される投与の特定の経路による。
【００２７】
本発明の医薬組成物は、非経口、経口、吸入噴霧、局所、直腸、鼻、頬側、膣内又は移植されているリザーバー投与などのために適切に製剤化されうる。本明細書で使用される場合、用語「非経口」としては、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑膜内、胸骨内、クモ膜下腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内注射又は注入技術が挙げられる。特定の実施形態では、化合物は、静脈内に、経口で、皮下で、又は筋肉内投与を介して投与される。本発明の組成物の滅菌の注射用形態は、水性又は油性懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、適切な分散又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して、当業界で知られている技術により製剤化してもよい。滅菌の注射用製剤は、非毒性の非経口で許容しうる希釈剤又は溶媒中の滅菌の注射用溶液若しくは懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール中の溶液でもありうる。中でも、使用することができる許容しうる溶媒は、水、リンゲル液及び等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌されている不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒体として従来使用されている。
【００２８】
この目的のために、合成のモノ又はジグリセリドを含めた任意のブランドの不揮発性油を使用してもよい。脂肪酸、例えばオレイン酸及びそのグリセリド誘導体は、天然の医薬上許容しうる油、例えば、オリーブ油又はひまし油、特にそれらのポリオキシエチレン化バージョンであるとき、注射用のものの調製に有用である。これらの油溶液又は懸濁液は、長鎖アルコール希釈剤又は分散剤、例えばカルボキシメチルセルロース、又はエマルジョン及び懸濁液を含めた医薬上許容しうる剤形の製剤で一般に使用されている類似の分散剤をも含むことができる。他の一般に使用されている界面活性剤、例えば、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）、スパン（Ｓｐａｎ）及び医薬上許容しうる固体、液体又は他の剤形の製造で一般に使用される他の乳化剤又は生物学的利用能増強剤は、製剤の目的のためにも使用されていてもよい。
【００２９】
経口投与については、化合物は、それに限定されないが、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液又は溶液を含めた許容しうる経口剤形で提供されていてもよい。経口用途の錠剤の場合には、一般に使用されている担体としては、ラクトース及びコーンスターチが挙げられる。滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムも添加されていてよい。カプセル剤形態での経口投与のために、有用な希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが挙げられる。水性懸濁液が経口用途で必要とされる場合、活性成分は、乳化及び／又は懸濁剤と組み合わせられている。所望の場合、ある一定の甘味、風味又は着色剤も添加されていてよい。
【００３０】
Ｄ．対象及び使用の方法
本発明の化合物は、ＳＦ３Ｂ１を標的にする薬剤に応答性のあるものを含めた様々の種類のがんを治療するために使用されうる。上述のとおり、プラジエノライドＢの抗腫瘍活性が、そのＳＦ３ｂ複合体の標的に結合されること、遺伝子発現のパターンのスプライシング及び改変を阻害することとして報告されている。（Ｋｏｔａｋｅら、「Ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３ｂ  ａｓ  ａ  ｔａｒｇｅｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｎａｔｕｒａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ」、Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２００７、３巻、５７０〜５７５頁）。スプライソソーム遺伝子、例えばスプライシング因子３Ｂサブユニット１（ＳＦ３Ｂ１）タンパク質における突然変異は、いくつかのがん、例えば血液悪性腫瘍及び固形腫瘍と関係づけられることが知られている。Ｓｃｏｔｔら、「Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ａｆｆｅｃｔ  ｐｒｅ−ｍＲＮＡ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、ＪＮＣＩ  １０５、２０、１５４０〜１５４９頁。
【００３１】
血液悪性腫瘍としては、血液のがん（白血病）又はリンパ節のがん（リンパ腫）を挙げることができる。白血病としては、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、急性単球性白血病（ＡＭｏＬ）などを挙げることができる。リンパ腫としては、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を挙げることができる。他の血液悪性腫瘍としては、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）を挙げることができる。
【００３２】
固形腫瘍としては、腺がんなどの細胞がん、例えば乳がん、膵臓がん、前立腺がん、結腸又は結腸直腸がん、肺がん、胃がん、子宮頚がん、子宮内膜がん、卵巣がん、胆管細胞がん、神経膠腫、黒色腫などを挙げることができる。
【００３３】
本発明の化合物は、ＳＦ３Ｂ１以外のスプライソソーム遺伝子又はタンパク質を標的にする薬剤に応答性があり得るがんを治療するためにも使用されうる。以下の実施例は、スプライソソームを標的にする薬剤に応答性があり得る種々のがんのいくつかの例であり、いかなる手段でも本発明の範囲を限定することは意図されていない。したがって、本発明の化合物は、多様なそのようながん又は状態を治療するために対象に、例えば患者又は以下に罹患されている対象に投与することができる：
【００３４】
ａ）骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）：例えば、「ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ：  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｄａｍｍ  Ｆ．ら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２０１１、１〜４頁；「Ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｐａｔｈｗａｙ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ」、Ｙｏｓｈｉｄａ  Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１１年、４７８巻、６４〜６９頁；「Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ／ｍｙｅｌｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ  ｎｅｏｐｌａｓｍｓ」、Ｍａｌｃｏｖａｔｉ  Ｌ．ら、Ｂｌｏｏｄ、２０１１年、１１８、２４，  ６２３９〜６２４６頁；「Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ  ｐａｔｈｗａｙ  ｉｎ  ｌｅｕｋｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｍａｋｉｓｈｉｍａら、Ｂｌｏｏｄ、２０１２年、１１９巻、３２０３〜３２１０頁；「Ｓｏｍａｔｉｃ  ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ｗｉｔｈ  ｒｉｎｇ  ｓｉｄｅｒｏｂｌａｓｔｓ」、Ｐａｐｐａｅｍａｎｎｕｉｌ，Ｅ．ら、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊ．  Ｍｅｄ．２０１１年、ＤＯＩ  １０．１０５６／ＮＥＪＭｏａ１１０３２８３を参照されたい。
【００３５】
ｂ）慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）：例えば、「Ｄｅｆｅｃｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍａｌ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ：  ａ  ｎｅｗ  ｐａｔｈｗａｙ  ｏｆ  ｌｅｕｋａｅｍｏｇｅｎｅｓｉｓ」、Ｍａｃｉｅｊｅｗｓｋｉ，  Ｊ．Ｐ．、Ｐａｄｇｅｔｔ，Ｒ．Ａ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２０１２、１〜９頁；「Ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＳＦ３Ｂ１  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ−ｒｅｆｒａｃｔｏｒｉｎｅｓｓ」、Ｒｏｓｓｉら、Ｂｌｏｏｄ、２０１１年、１１８巻、６９０４〜６９０８頁；「Ｅｘｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３Ｂ１  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｑｕｅｓａｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２０１１年、４４巻、４７〜５２頁を参照されたい。
【００３６】
ｃ）慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）：例えば、Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１；「Ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍａｌ  ｇｅｎｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ｆｒｅｑｕｅｎｔ  ｅｖｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｉｖｅｒｓｅ  ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｂｕｔ  ｌａｒｇｅｌｙ  ａｂｓｅｎｔ  ｉｎ  ｊｕｖｅｎｉｌｅ  ｍｙｅｌｏｍｏｎｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｋａｒ  Ｓ．Ａ．ら、Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉａ、２０１２、ＤＯＩ：１０．３３２４／ｈａｅｍａｔｏｌ．２０１２．０６４０４８；ＤｅＢｏｅｖｅｒら、「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ３’  ｓｐｌｉｃｅ  ｓｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＳＦ３Ｂ１−ｍｕｔａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ」、ＰＬＯＳ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１３、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００４１０５を参照されたい。
【００３７】
ｄ）急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）：例えば、Ｍａｌｃｏｖａｔｉら、Ｂｌｏｏｄ  ２０１１；Ｙｏｓｈｉｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１１を参照されたい。
【００３８】
ｅ）乳がん：例えば、「Ｗｈｏｌｅ  ｇｅｎｏｍｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎｆｏｒｍｓ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ａｒｏｍａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ」、Ｅｌｌｉｓら、Ｎａｔｕｒｅ、２０１２年、４８６巻、３５３〜３６０頁；ＤｅＢｏｅｖｅｒら、「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ３’  ｓｐｌｉｃｅ  ｓｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＳＦ３Ｂ１−ｍｕｔａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ」、ＰＬＯＳ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１３、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００４１０５；Ｍａｇｕｉｒｅら、「ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ」、Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２０１５、２３５巻、５７１〜５８０頁を参照されたい。
【００３９】
ｆ）ブドウ膜黒色腫：例えば、「ＳＦ３Ｂ１  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｎ  ｕｖｅａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ」、Ｆｕｒｎｅｙら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｉｓｃ．  ２０１３、１０巻、１１２２〜１１２９頁；ＤｅＢｏｅｖｅｒら、「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ｃｒｙｐｔｉｃ  ３’  ｓｐｌｉｃｅ  ｓｉｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ＳＦ３Ｂ１−ｍｕｔａｔｅｄ  ｃａｎｃｅｒｓ」、ＰＬＯＳ  Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、２０１３、ＤＯＩ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｃｂｉ．１００４１０５を参照されたい。
【００４０】
ｇ）子宮内膜がん：例えば、Ｔｅｆｆｅｒｉら、「Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ」。Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ．２００９；３６１巻：１８７２〜８５頁を参照されたい。
【００４１】
ｈ）胃がん：例えば、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．  ２０１３  Ｊｕｌ；１３３（１）：２６０〜５頁、「Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ｇｅｎｅｓ  ＳＦ３Ｂ１，Ｕ２ＡＦ１  ａｎｄ  ＳＲＳＦ２  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｃｏｍｍｏｎ  ｔｕｍｏｒｓ」。  Ｊｅらを参照されたい。
【００４２】
ｉ）卵巣がん：例えば、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ．２０１３  Ｊｕｌ；１３３（１）：２６０〜５頁、「Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｍａｃｈｉｎｅｒｙ  ｇｅｎｅｓ  ＳＦ３Ｂ１，  Ｕ２ＡＦ１  ａｎｄ  ＳＲＳＦ２  ｉｎ  ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｉａ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ｃｏｍｍｏｎ  ｔｕｍｏｒｓ」。Ｊｅらを参照されたい。
【００４３】
ｊ）胆管がん、例えば胆管細胞がん及び膵臓がん：例えば、Ｂｉａｎｋｉｎら、「Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｇｅｎｏｍｅｓ  ｒｅｖｅａｌ  ａｂｅｒｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ａｘｏｎ  ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ｇｅｎｅｓ」、Ｎａｔｕｒｅ  ２０１２、４９１巻、３９９〜４０５頁を参照されたい。
【００４４】
ｋ）肺がん：例えば、「Ｅｘｏｍｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ  ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ  ＳＦ３Ｂ１  ｇｅｎｅ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ」、Ｑｕｅｓａｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４４巻、４７〜５２頁（２０１２年）；Ｓｃｏｔｔら、「Ａｃｑｕｉｒｅｄ  ｍｕｔａｔｉｏｎｓ  ｔｈａｔ  ａｆｆｅｃｔ  ｐｒｅ−ｍＲＮＡ  ｓｐｌｉｃｉｎｇ  ｉｎ  ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ  ａｎｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ」、ＪＮＣＩ  １０５、２０、１５４０〜１５４９頁を参照されたい。
【００４５】
さらに、がんにおける体細胞突然変異のカタログ（ＣＯＳＭＩＣ）（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｔｒｕｓｔ  Ｓａｎｇｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ）では、ＳＦ３Ｂ１突然変異が、様々な種類のがん試料で見出されていることが報告されている。
【００４６】
本発明の化合物は、処置上有効な又は治療上有効な量で対象に投与されることができる。担体材料と組み合わせて、単一剤形での組成物を生成することができる本発明の化合物の量は、治療される対象及び投与の特定の経路により変化する。組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量の活性薬剤を、これらの組成物を受ける対象に投与することができるように製剤化されるのが好ましい。特定の実施形態で、本発明の組成物は、０．０１ｍｇ〜５０ｍｇの投与量をもたらす。他の実施形態では、０．１ｍｇ〜２５ｍｇ又は５ｍｇ〜４０ｍｇの投与量がもたらされる。
【００４７】
任意の特定の患者についての特定の投与量及び治療レジームが、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、全般的健康、性別、食事、投与の時間、排出の速度、薬物併用、治療する医師の判断、及び治療される特定の疾患の重症度を含めた、多様な因子に依ることも理解されるべきである。組成物中の本発明の活性薬剤の量は、組成物中の特定の化合物／塩にも依存する。
【００４８】
いくつかの実施形態では、上記がんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について試験され、及び／又は陽性であり、突然変異（複数可）の存在（「陽性」）は、対象のがんが、このタンパク質及び／又はスプライソソームを標的にする化合物の投与を含む治療の方法に応答性があることを示すことができる。このようなスプライソソーム遺伝子の例としては、それに限定されないが、表１に表されるものが挙げられる。
【００４９】
【表１】
2017505282.tif 000005
【００５０】
いくつかの実施形態では、対象のがんは、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質におけるこのような突然変異の不在下でさえ、このタンパク質及び／又はスプライソソームを標的とする化合物の投与を含む治療の方法に応答性がありうる。
【００５１】
突然変異についてのスクリーニング又は試験は、核酸増殖、電気泳動、マイクロアレイ、ブロッティング（blot）、官能性アッセイ、免疫アッセイなどを介した、任意の既知手段、例えば遺伝子型決定、表現型決定（phenotyping）などによって実施されうる。スクリーニングの方法としては、例えば、がん性細胞／組織を含む上記対象から生物学的試料を採取することを挙げることができる。
【００５２】
本明細書に記述されている本発明を、より十分に理解することができるために、以下の実施例が規定される。これらの実施例は、例示の目的のためのみであって、本発明を、なんらかの手段で限定すると解釈されるべきでないと理解すべきである。
【実施例】
【００５３】
化合物１、２、３及び４の調製
全般：
Ｂｉｏｔａｇｅ  ＥｍｒｙｓのＬｉｂｅｒａｔｏｒ又はＩｎｉｔｉａｔｏｒのマイクロ波を使用して、マイクロ波加熱を行った。Ｉｓｃｏ  Ｒｆ２００ｄを使用して、カラムクロマトグラフィーを実行した。Ｂｕｃｈｉのロータリーエバポレーター又はＧｅｎｅｖａｃ遠心分離エバポレーターのいずれかを使用して、溶媒除去を実行した。酸性移動相条件下でＷａｔｅｒｓの自動精製装置及び１９×１００ｍｍ  ＸＴｅｒｒａ５ミクロンＭＳ  Ｃ１８カラムを使用して、分取ＬＣ／ＭＳを行った。Ｖａｒｉａｎ４００ＭＨｚ分光測定装置を使用して、ＮＭＲスペクトルを記録した。
【００５４】
用語「不活性化」が、反応器（例えば、反応容器、フラスコ、ガラス製反応器など）を記述するために使用される場合、反応器内の空気は、基本的に湿気なし、又は乾燥している不活性ガス（例えば、窒素、アルゴンなど）に置換されていることが意図される。
【００５５】
本発明の化合物を調製する全般的方法及び実験は、以下に規定されている。
【００５６】
以下の略語を、本明細書で使用する。
ＭｅＯＨ：メタノール
ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド
ＫＨＭＤＳ：カリウムビス（トリメチルシリル）アミド
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー−質量分光測定装置
ＴＢＳＣｌ：ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー
【００５７】
材料：以下の化合物は、市販で入手可能である、及び／又は有機合成の当業者に周知であるいくつかの方法で調製することができる。より詳細には、開示されている化合物は、本明細書に記述されている反応及び技術を使用して調製することができる。下に記述されている合成方法の説明で、溶媒、反応雰囲気、反応温度、実験の期間及び後処理の選択を含めて提案されている全ての反応条件は、特に指示されない限り、その反応についての条件基準として選択されうると理解すべきである。分子の種々の部分に存在する官能性が、提案されている試薬及び反応に適合性があるであろうことが、有機合成の当業者に理解される。それらの反応条件に適合性がない置換基は、当業者には明らかであり、したがって、代替方法が示されている。例えば、出発材料は、市販で入手可能であるか、又は既知材料から標準方法により十分に調製されるかのいずれかである。
【００５８】
ＬＣＭＳ情報
移動相：Ａ（Ｈ２Ｏ中の０．１％ギ酸）及びＢ（アセトニトリル中の０．１％ギ酸）。
勾配：１．８分でＢ  ５％→９５％。
カラム：ＡｃｑｕｉｔｙＢＥＨ  Ｃ１８カラム（１．７ｕｍ、２．１×５０ｍｍ）。
【００５９】
共に「Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｄ，  ｄｅｓｃｒｉｂｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｋｎｏｗｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｒｔ  ｆｏｒ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｄ」と題される、米国特許第７，８８４，１２８号及び第７，８１６，４０１号は、プラジエノライドＢ及びＤの合成について当業界で知られている方法を記述している。プラジエノライドＢ及びＤの合成は、当業界で知られている方法を使用しても行うことができ、Ｋａｎａｄａら、「Ｔｏｔａｌ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ  Ｐｌａｄｉｅｎｏｌｉｄｅ  Ｂ  ａｎｄ  Ｄ」、Ａｎｇｅｗ．  Ｃｈｅｍ．  Ｉｎｔ．  Ｅｄ．４６：４３５０〜４３５５頁（２００７年）に記述されている。Ｋａｎａｄａら、及び「Ｎｏｖｅｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ  Ａｃｔｉｖｅ  Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ」と題されるＰＣＴ国際出願公報の国際公開第２００３／０９９８１３号は、プラジエノライドＤ（国際公開第’８１３号の１１１０７Ｄ）からＥ７１０７（国際公開第’８１３号の化合物４５）の合成について当業界で知られている方法を記述している。対応する米国特許は、Ｋｏｔａｋｅらの第７，５５０，５０３号である。
【００６０】
化合物の実験的合成
化合物１の合成
【化３】
2017505282.tif 000006
【００６１】
ステップ１：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−７−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン−２−イル）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソオキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−シクロヘプチルピペラジン−１−カルボキシレートの合成。０℃で、ＤＭＦ（１００ｍＬ、０．０５Ｍ）中の窒素下で、Ｅ７１０７（Ａ、３．７ｇ、５．１ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、イミダゾール（２．５ｇ、３６．１ｍｍｏｌ、７．０当量）で処理し、ＴＢＳＣｌ（３．９ｇ、２５．７ｍｍｏｌ、５．０当量）を添加した。反応物を、室温に加温し、２０時間、又は反応が、ＬＣＭＳ  又はＴＬＣにより完了したと決定されるまで、撹拌した。反応物を、酢酸エチルで希釈し、有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物を得た（Ｂ、４．７ｇ、５．０ｍｍｏｌ、９６％）。
【００６２】
ステップ２：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（（６Ｒ，Ｅ）−７−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン−２−イル）オキシラン−２−イル）−４，５，６−トリヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２−エン−２−イル）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソオキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−シクロヘプチルピペラジン−１−カルボキシレートの合成。窒素下、０℃でＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（１０：１、１３３ｍＬ：１３ｍＬ、０．０３Ｍ）中のオレフィンＢ（４．７ｇ、５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、四酸化オスミウム（１２．４ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ、０．２当量、２．５％溶液）、続いてＮ−メチルモルホリンＮ−オキシド（１．１６ｇ、９．９ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、室温に加温し、１３時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、亜硫酸ナトリウムで停止し、酢酸エチルで希釈し、有機層を水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン／メタノール）により精製して、所望の生成物（Ｃ、４．８ｇ、４．９ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【００６３】
ステップ３：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｅ）−４−オキソブタ−２−エン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−シクロヘプチルピペラジン−１−カルボキシレートの合成。窒素下室温で、ベンゼン（１００ｍＬ、０．０５Ｍ）中のジオールＣ（４．４ｇ、４．５ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、四酢酸鉛（４．０ｇ、９．０ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、３０分間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了したと決定されるまで、撹拌した。反応物を、亜硫酸ナトリウムで停止し、ジクロロメタンで希釈した。有機層を、水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。所望の生成物（Ｄ、１．５ｇ、２．３ｍｍｏｌ、５２％）が、最終粗製物であった。
【００６４】
ステップ４：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−シクロヘプチルピペラジン−１−カルボキシレートの合成。
【００６５】
注：（Ｓ）−２−（１−（（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スルホニル）プロパン−２−イル）ピリジンの合成は、下で記述され、スキームＶで描かれている。
【００６６】
窒素下−７８℃で、乾燥ＴＨＦ（３０．０ｍＬ、０．０５Ｍ）中の（Ｓ）−２−（１−（（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スルホニル）プロパン−２−イル）ピリジン（１．６７ｇ、５．０８ｍｍｏｌ、２．５当量）に、滴下でＫＨＭＤＳ（８．５３ｍｌ、４．２６５ｍｍｏｌ、２．１当量）を添加し、反応物を１０分間撹拌した。その後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のアルデヒドＤ（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｅ）−４−オキソブタ−２−エン−２−イル）オキサシクロ−ドデカ−４−エン−６−イル４−シクロヘプチルピペラジン−１−カルボキシレート（１．３１８ｇ、２．０３１ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下で添加した。反応物を、１時間、−７８℃で撹拌し、その後一夜、室温に加温させた。反応物を、水で停止し、酢酸エチルで希釈した。有機層を、水及びブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｅ、１．２０ｇ、２．０３ｍｍｏｌ、７９％）を得た。
【００６７】
ステップ５：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−シクロヘプチルピペラジン−１−カルボキシレート（化合物１）の合成。窒素下、室温で、ＭｅＯＨ（１０．０ｍＬ、０．２４Ｍ）中のシリルエーテルＥ（１．８０ｇ、２．３９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、ｐＴｓＯＨ（１．１４ｇ、５．９８ｍｍｏｌ、２．５当量）で処理した。反応物を、２時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。その後、反応物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、分取ＴＬＣ（溶出剤としてジクロロメタン／メタノール）により精製して、所望の生成物（化合物１、１．１９ｇ、１．８３ｍｍｏｌ、７６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：０．８８（ｄ，Ｊ＝６．６５Ｈｚ，６Ｈ）１．２３（ｓ，３Ｈ）１．３４〜１．７８（ｍ，１２Ｈ）１．４４（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，３Ｈ）１．７３（ｓ，３Ｈ）２．２８〜２．３９（ｍ，１Ｈ）２．４５〜２．６６（ｍ，８Ｈ）３．４８（ｂｒ．ｓ．，５Ｈ）３．７２（ｍ，２Ｈ）５．０１（ｄ，Ｊ＝９．５４Ｈｚ，１Ｈ）５．１４（ｄ，Ｊ＝１０．６７Ｈｚ，１Ｈ）５．５５〜５．７２（ｍ，２Ｈ）６．００（ｄｄ，Ｊ＝１５．００，７．４７Ｈｚ，１Ｈ）６．１１（ｄ，Ｊ＝１１．２９Ｈｚ，１Ｈ）６．２８〜６．３５（ｍ，１Ｈ）７．１２（ｄｄｄ，Ｊ＝７．４７，４．８９，１．０７Ｈｚ，１Ｈ）７．１６（ｄ，Ｊ＝７．７８Ｈｚ，１Ｈ）７．６１（ｔ，Ｊ＝７．６５Ｈｚ，１Ｈ）８．５５（ｄ，Ｊ＝４．９１Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）＝６３８．４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００６８】
化合物２の合成
【化４】
2017505282.tif 000007
【００６９】
ステップ１：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−７−（（２Ｒ，３Ｒ）−３−（（２Ｓ，３Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン−２−イル）オキシラン−２−イル）−６−ヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソオキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。０℃でＤＭＦ（８０ｍＬ、０．１Ｍ）中の窒素下のプラジエノライドＤ（Ｆ、５．３ｇ、９．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、イミダゾール（４．６ｇ、６７．８ｍｍｏｌ、７．０当量）及びＴＢＳＣｌ（７．３ｇ、４８．４ｍｍｏｌ、５．０当量）で処理した。反応物を、室温に加温させ、２０時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、酢酸エチルで抽出し、有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｇ、７．５ｇ、９．６ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【００７０】
ステップ２：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−２−（（６Ｒ，Ｅ）−７−（（２Ｒ，３Ｓ）−３−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）ペンタン−２−イル）オキシラン−２−イル）−４，５，６−トリヒドロキシ−６−メチルヘプタ−２−エン−２−イル）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソオキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。窒素下、０℃で、脱気されているＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（２１０ｍＬ：２１ｍＬ、０．０１Ｍ）中のオレフィンＧ（７．６ｇ、９．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、四酸化オスミウム（２４．４ｍＬ、１．９ｍｍｏｌ、０．２当量、ｔｅｒｔ−ブタノール中の２．５％溶液）を、続いてＮ−メチルモルホリンＮ−オキシド（２．３ｇ、１９．５ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、室温に加温し、１３時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、亜硫酸ナトリウムで停止し、酢酸エチルで希釈し、有機層を、水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてジクロロメタン／メタノール）により精製して、所望の生成物（Ｈ，６．８ｇ、８．３ｍｍｏｌ、８６％）を得た。
【００７１】
ステップ３：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｅ）−４−オキソブタ−２−エン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。窒素下室温で、ベンゼン（３５０ｍＬ、０．０３Ｍ）中のジオールＨ（７．９ｇ、９．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、四酢酸鉛（８．６ｇ、１９．４ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、３０分間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｉ、２．５ｇ、５．２６ｍｍｏｌ、５４％）を得た。
【００７２】
ステップ４：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｅ）−４−オキソブタ−２−エン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イルアセテートの合成。ＴＨＦ（９．５ｍＬ、０．５Ｍ）中のアルデヒドＩ（１．４ｇ、２．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、室温で、エトキシエテン（１１．１ｍＬ、４０．０当量）及びピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（０．０７ｇ、０．３ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。反応物を、２４時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで停止し、酢酸エチルで希釈した。酢酸エチルを、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｊ、１．２ｇ、２．２ｍｍｏｌ、７５％）を得た。
【００７３】
ステップ５：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル）アセテートの合成。窒素下−７８℃で、ＴＨＦ（２０ｍＬ、０．０６Ｍ）中の（Ｓ）−２−（１−（（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スルホニル）プロパン−２−イル）ピリジン（６９５．０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ、１．５当量）の溶液に、滴下でＫＨＭＤＳ（４．２ｍＬ、２．１ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加し、反応物を、２０分間撹拌した。その後、ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中のアルデヒドＪ（７８０．０ｍｇ、１．４ｍｍｏｌ、１．０当量）を滴下で添加した。反応物を、−７８℃で、９０分間撹拌し、その後１時間、−２０℃に加温させた。反応物を、塩化アンモニウムで停止し、酢酸エチルで希釈し、室温に加温した。有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望のジュリア生成物（Ｋ、４９０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、５３％）を得た。
【００７４】
ステップ６：（４Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，１１Ｓ，Ｅ）−４−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−８−ヒドロキシ−７，１１−ジメチル−１２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−９−エン−２−オンの合成。室温で、メタノール（１５ｍＬ、０．０５Ｍ）中のアセテートＫ（４９０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、炭酸カリウム（１５５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。２４時間、又は反応がＬＣＭＳ又はＴＬＣにより完了していると決定されるまで、反応を実行した。反応物を、水で停止し、酢酸エチルで希釈し、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた発泡性固体（Ｌ、４５９ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１００％）を、追加の精製なしに次のステップに進めた。
【００７５】
ステップ７：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレートの合成。室温で、ジクロロメタン（０．５ｍＬ、０．１Ｍ）中のアルコールＬ（４５９ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（２７．３ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、０．３当量）及びトリエチルアミン（１．０ｍＬ、７．４ｍｍｏｌ、１０．０当量）、続いて４−ニトロフェニルクロロホルメート（４５１ｍｇ、０２．２ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。反応物を、室温で３時間撹拌した。次に、Ｎ−メチル−ピペラジン（２９９ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、４．０当量）を室温で添加した。１時間撹拌した後、反応物を、水で停止し、ジクロロメタンで希釈した。有機層を、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、有機層を濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤（ｅｌｕａｎｔ）としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｍ、５５３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、１００％）を得た。
【００７６】
ステップ８：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−メチルピペラジン−１−カルボキシレート（化合物２）の合成。室温で、メタノール（２０ｍＬ、０．０４Ｍ）中のシリルエーテル（Ｍ、５５３ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ｐ−メトキシトルエンスルホン酸（４２５ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。反応物を、３時間、又は、ＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで停止し、酢酸エチルで希釈した。有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（化合物２、１８４ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、４４％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：０．８２〜１．００（ｍ，３Ｈ）１．２２〜１．４８（ｍ，８Ｈ）１．５０〜１．６３（ｍ，１Ｈ）１．６６〜１．８３（ｍ，４Ｈ）１．９７（ｓ，１Ｈ）２．０７（ｓ，１Ｈ）２．３３（ｓ，３Ｈ）２．４０（ｂｒ．ｓ．，３Ｈ）２．４５〜２．６８（ｍ，３Ｈ）３．４４〜３．６１（ｍ，５Ｈ）３．７４（ｄｄ，Ｊ＝１４．２，７．２Ｈｚ，２Ｈ）５．０４（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ）５．１７（ｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，１Ｈ）５．５７〜５．７６（ｍ，２Ｈ）６．０２（ｄｄ，Ｊ＝１５．１，７．５Ｈｚ，１Ｈ）６．１３（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）６．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１，１０．７，１．０Ｈｚ，１Ｈ）７．１４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ）７．１８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）７．６３（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）＝５５６．４［Ｍ＋Ｈ］。
【００７７】
化合物３の合成
ステップ１〜６は、化合物２の合成で上に行われているとおりであり、アルコールＬを得た。
【化５】
2017505282.tif 000008
【００７８】
ステップ７：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−（アゼパン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレートの合成。室温で、ジクロロメタン（３．０ｍＬ、０．１５Ｍ）中のアルコールＬ（３００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（７１．４ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ、１．２当量）及びトリエチルアミン（０．２７ｍＬ、１．９５ｍｍｏｌ、４．０当量）、続いて４−ニトロフェニルクロロホルメート（１９６ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、室温で３時間撹拌した。次に、室温で、１−（ピペリジン−４−イル）アゼパン（２６５ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ、３．０当量）を添加した。１時間撹拌した後、反応物を、水で停止し、ジクロロメタンで希釈した。有機層を、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、有機層を濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｎ、４００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１００％）を得た。
【００７９】
ステップ８：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル４−（アゼパン−１−イル）ピペリジン−１−カルボキシレート（化合物３）の合成。室温で、メタノール（４．０ｍＬ、０．１Ｍ）中のシリルエーテル（Ｎ、４００ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ｐ−メトキシトルエンスルホン酸（２３１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。反応物を、３時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで停止し、酢酸エチルで希釈した。有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（化合物３、２２６ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ、７３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：０．８８（ｄ，Ｊ＝６．５３Ｈｚ，３Ｈ）１．２０〜１．２８（ｍ，４Ｈ）１．３５（ｓ，３Ｈ）１．４５（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，４Ｈ）１．５９（ｂｒ．ｓ．，１０Ｈ）１．７４（ｄ，Ｊ＝０．７５Ｈｚ，３Ｈ）１．７５〜１．８３（ｍ，２Ｈ）１．９９（ｓ，１Ｈ）２．４６〜２．６２（ｍ，３Ｈ）２．６２〜２．７１（ｍ，４Ｈ）２．７９（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）３．５１（ｄ，Ｊ＝９．７９Ｈｚ，１Ｈ）３．６３〜３．８２（ｍ，２Ｈ）４．０３〜４．２６（ｍ，２Ｈ）５．０１（ｄ，Ｊ＝９．５４Ｈｚ，１Ｈ）５．１６（ｄ，Ｊ＝１０．７９Ｈｚ，１Ｈ）５．５４〜５．６４（ｍ，１Ｈ）５．６５〜５．７５（ｍ，１Ｈ）６．０１（ｄｄ，Ｊ＝１５．０６，７．５３Ｈｚ，１Ｈ）６．１２（ｄ，Ｊ＝１１．０４Ｈｚ，１Ｈ）６．２５〜６．３９（ｍ，１Ｈ）７．１２（ｄｄｄ，Ｊ＝７．４７，４．８３，１．２５Ｈｚ，１Ｈ）７．１７（ｄｔ，Ｊ＝８．０３，１．００Ｈｚ，１Ｈ）７．６２（ｔｄ，Ｊ＝７．６５，１．７６Ｈｚ，１Ｈ）８．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝４．９６，１．８２，１．００Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）＝６３８．６［Ｍ＋Ｈ］。
【００８０】
化合物４の合成
ステップ１〜６は、化合物２の合成で上に行われているとおりであり、アルコールＬを得る。
【化６】
2017505282.tif 000009
【００８１】
ステップ７：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−１０−（（ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル）オキシ）−７−（１−エトキシエトキシ）−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル［１，４’−ビピペリジン］−１’−カルボキシレートの合成。室温で、ジクロロメタン（０．３ｍＬ，０．１Ｍ）中のアルコールＬ（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４．８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ、１．２当量）及びトリエチルアミン（０．０２ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ、４．０当量）、続いて４−ニトロフェニルクロロホルメート（１３．１ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加した。反応物を、３時間、室温で撹拌した。次に、１，４’−ビピペリジン（１６．４ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ、３．０当量）を室温で添加した。１時間撹拌した後、反応物を、水で停止し、ジクロロメタンで希釈した。有機層を、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液で洗浄し、有機層を濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（Ｎ、１８ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ、６８．４％）を得た。
【００８２】
ステップ８：（２Ｓ，３Ｓ，６Ｓ，７Ｒ，１０Ｒ，Ｅ）−７，１０−ジヒドロキシ−３，７−ジメチル−１２−オキソ−２−（（Ｒ，２Ｅ，４Ｅ）−６−（ピリジン−２−イル）ヘプタ−２，４−ジエン−２−イル）オキサシクロドデカ−４−エン−６−イル［１，４’−ビピペリジン］−１’−カルボキシレート（化合物４）の合成。室温で、メタノール（０．５ｍＬ、０．０４Ｍ）中のシリルエーテル（Ｎ、１８ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ｐ−メトキシトルエンスルホン酸（１０．６ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ、２．５当量）を添加した。反応物を、３時間、又は反応がＬＣＭＳ又はＴＬＣにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで停止し、酢酸エチルで希釈した。有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた油状物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（化合物４、４．０ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ、２９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：０．９０（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）１．１７〜１．４２（ｍ，５Ｈ）１．４６（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）１．５１〜１．６５（ｍ，６Ｈ）１．６５〜１．７８（ｍ，５Ｈ）１．８５（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ）２．４４（ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２Ｈ）２．４９〜２．６６（ｍ，６Ｈ）２．８０（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）３．４２〜３．６２（ｍ，１Ｈ）３．６３〜３．８２（ｍ，２Ｈ）４．１８（ｂｒ．ｓ．，２Ｈ）５．０２（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，１Ｈ）５．１７（ｄ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ，１Ｈ）５．５７〜５．７５（ｍ，２Ｈ）６．０２（ｄｄ，Ｊ＝１５．２，７．４Ｈｚ，１Ｈ）６．１４（ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，１Ｈ）６．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１，１０．８，１．０Ｈｚ，１Ｈ）７．１４（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ）７．１８（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）７．２９（ｓ，２Ｈ）７．６３（ｔｄ，Ｊ＝７．７，１．９Ｈｚ，１Ｈ）８．５７（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ）。ＭＳ（ＥＳ＋）＝６２４．６［Ｍ＋Ｈ］。
【００８３】
（Ｓ）−２−（１−（（１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−イル）スルホニル）プロパン−２−イル）ピリジンの合成
【化７】
2017505282.tif 000010
【００８４】
ステップ１：０℃で、メタノール（５００ｍＬ、０．５Ｍ）中の２−（ピリジン−２−イル）酢酸ヒドロクロリド塩ＭＭＭＭＭＭ（５０．０ｇ、２８８．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、滴下で、塩化チオニル（３１．５ｍＬ、４３２．０ｍｍｏｌ、１．５当量）を添加した。反応物を、０℃で、６０分間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸ナトリウムで注意深く停止し、水性層を、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られた生成物（ＮＮＮＮＮＮ、４１．５ｇ、２７５．０ｍｍｏｌ、９５％）を、さらなる精製なしに次のステップに使用した。
【００８５】
ステップ２：０℃で、ＴＨＦ（１５００ｍＬ、０．２Ｍ）中のエステルＮＮＮＮＮＮ（４１．５ｇ、２７５．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ナトリウム  ２−メチルプロパン−２−オレート（２８．６ｇ、２８８．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、ヨードメタン（３４．３ｍＬ、５４９．１ｍｍｏｌ、２．０当量）の添加の前に、反応混合物を３０分間、０℃で撹拌した。反応物を、室温で、１時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、塩化アンモニウムで停止し、過剰な溶媒を真空で除去した。その後、粗材料を、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、混合物を、真空で濃縮した。得られたメチルエステル（ＯＯＯＯＯＯ、４１．３ｇ、２５０ｍｍｏｌ、９１％）を、精製なしに進行させた。
【００８６】
ステップ３：０℃で、ＴＨＦ（１５００ｍＬ、０．１Ｍ）中のメチルエステルＯＯＯＯＯＯ（４３．０ｇ、２６０．３ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、滴下で、水素化アルミニウムリチウム（３１２ｍＬ、３１２．４ｍｍｏｌ、１．２当量、ＴＨＦ中の溶液）を添加した。反応物を、３０分間、徐々に０℃に加温させ、その後１時間、又はＬＣＭＳ又はＴＬＣにより反応が完了していると決定されるまで室温に加温させた。反応物を、水、水酸化ナトリウム及び水で注意深く停止した。３０分間混合物を撹拌した後、白色沈殿物をろ取し、溶媒を真空で除去した。その後、反応物を、ジエチルエーテルで抽出し、合わせた有機留分を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過し、真空で濃縮した。得られたアルコール（ＰＰＰＰＰＰ、３０．０ｇ、２１９．０ｍｍｏｌ、８４％）を、精製なしに進行させた。
【００８７】
ステップ４：０℃で、ジクロロメタン（７００ｍＬ、０．３Ｍ）中のアルコールＰＰＰＰＰＰ（３０．０ｇ、２１９．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、トリエチルアミン（６１．５ｍＬ、４３７．４ｍｍｏｌ、２．０当量）及びＤＭＡＰ（２．７ｇ、２１．９ｍｍｏｌ、０．１当量）を添加した。酢酸無水物（２４．８ｍＬ、２６２．４ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加し、反応混合物を、３０分間、又は反応が、ＬＣＭＳ  又はＴＬＣにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、塩化アンモニウムで停止し、有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、ろ過した。その後、得られた溶液を蒸発させ、粗アセテート（ＱＱＱＱＱＱ、３７．０ｇ、２０６．０ｍｍｏｌ、９４％）を、さらなる精製なしに以下のステップで使用した。
【００８８】
ステップ５：アセテートＱＱＱＱＱＱ（３９．４ｇ、２１９．８ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液を、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）に溶解し、その後、１１８ｇのシリカゲルを添加した。過剰なエーテルを真空で除去し、その後、粗固体を、ｐＨ７水性緩衝液（１９７０ｍＬ、０．１Ｍ）（水酸化ナトリウム／モノ塩基性リン酸ナトリウム／水）で希釈した。ブタの膵臓リパーゼＩＩ型（３．３ｇ、（１５ｍｇ／ｍｍｏｌ））を添加し、４時間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで、反応物を、３７℃で撹拌した。（４時間後、変換は、ＥＬＳＤにより４０％に達し、鏡像異性体過剰は、キラルＳＦＣにより決定され、１３：１  Ｓ：Ｒの鏡像異性体比を示した）。（ＳＦＣ条件：ＳＦＣ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ（Ｗａｔｅｒｓ／Ｔｈａｒ）、ソフトウエア：Ｃｈｒｏｍｓｃｏｐｅ  ｖ１．２、方法：１０分かけてアイソクラチック１５％共溶媒、９５：５ヘプタン：ＩＰＡ  ＋０．１％ＤＥＡ、カラム：Ｌｕｘ−Ａｍｙｌｏｓｅ−２、４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、全流量：４ｍｌ／分（ＣＯ２ポンプから３．８０ｍｌ、改質剤ポンプから０．２０ｍｌ）、オーブン温度を３５℃に設定し、システム圧力を１００ｂａｒに設定し、滞留時間：所望及び主要な（Ｓ）−鏡像異性体６．９分、微量の（Ｒ）−鏡像異性体、８．４分）。シリカゲルをろ取し、水性層を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。生成物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン：酢酸エチル）により精製して、所望のアルコール（ＲＲＲＲＲＲ、１２．５ｇ、９１ｍｍｏｌ、４１％）を得た。
【００８９】
ステップ６：室温で、ジクロロメタン（５７０ｍＬ、０．１６Ｍ）中のアルコールＲＲＲＲＲＲ（１２．５ｇ、９１．０ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、トリエチルアミン（１３．９ｍＬ、１００．１ｍｍｏｌ、１．１当量）を添加した。反応物を、０℃に冷却し、その後、メタンスルホニルクロリド（７．４４ｍＬ、９５．５ｍｍｏｌ、１．０５当量）を添加した。反応物を、０℃で、３０分間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、炭酸水素ナトリウムで停止し、その層を分離した。その後、水性層を、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空で濃縮した。得られたスルホネートＳＳＳＳＳＳ（１９．２ｇ、８９ｍｍｏｌ、９８％）を、さらなる精製なしに進行させた。
【００９０】
ステップ７：室温で、ＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．１Ｍ）中のスルホネートＳＳＳＳＳＳ（１９．２ｇ、８９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、炭酸セシウム（４０．７ｇ、１２５．０ｍｍｏｌ、１．４当量）及び１−フェニル−１Ｈ−テトラゾール−５−チオール（１９．１ｇ、１０７．１ｍｍｏｌ、１．２当量）を添加した。反応混合物を、５０℃で、４８時間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで撹拌した。混合物を室温に冷却後、ブラインを添加し、水性層を、３回、ジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した。ろ過後、溶媒を真空で除去し、残渣を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）を使用して精製して、所望の生成物（ＴＴＴＴＴＴ、２８．９ｇ、８８ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
【００９１】
ステップ８：−１０℃で、ＥｔＯＨ（７００ｍＬ、０．１Ｍ）中のスルフィドＴＴＴＴＴＴ（３１．５ｇ、１０５．９ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、モリブデン酸アンモニウム４水和物（６．５ｇ、５．３ｍｍｏｌ、０．０５当量）及び過酸化水素（１０８ｍＬ、１０６０ｍｍｏｌ、５．０当量、３３％水溶液）を添加した。反応物を、−１０℃で、４時間、又はＴＬＣ又はＬＣＭＳにより完了していると決定されるまで撹拌した。反応物を、水及びメタ重亜硫酸ナトリウム溶液で停止した。粗生成物を、ろ過により収集し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン／酢酸エチル）により精製して、所望の生成物（ＵＵＵＵＵＵ、２３．２ｇ、７０．４ｍｍｏｌ、６６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム−ｄ）δ：１．５０（ｄ，Ｊ＝７．０３Ｈｚ，３Ｈ）１．６６（ｂｒ．ｓ．，１Ｈ）３．７５（ｍ，１Ｈ）３．９４（ｄｄ，Ｊ＝１４．８１，５．０２Ｈｚ，１Ｈ）４．５５（ｄｄ，Ｊ＝１４．６８，７．９１Ｈｚ，１Ｈ）７．１４〜７．２２（ｍ，２Ｈ）７．２９（ｓ，１Ｈ）７．５７〜７．７０（ｍ，６Ｈ）８．４４〜８．４９（ｍ，１Ｈ）。
【００９２】
その後、無色油状を、トルエン／ヘプタン（１／１）（１００ｍｇの化合物当たり１ｍＬのトルエン及び１ｍＬのヘプタンを使用して再結晶させた。混合物を穏やかに加熱して、２つの溶媒を混合した。１２時間、混合物を室温に冷却する。（再結晶化が観察されない場合、溶液に１つの結晶を添加する。結晶は、種晶添加方法を介して結晶を得る助けになる。）結晶は、時間をかけてゆっくりと形成した。その結晶は、ろ過を介して単離するか、又はピペットを介して液層を除去することができたであろう。その後、結晶をヘプタンで洗浄し、次いで、トルエンで急速に洗浄した。再結晶の前後で、スルホンのｅｒを分析した。（ＳＦＣ諸条件：ＳＦＣ条件：ＳＦＣ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒ（Ｗａｔｅｒｓ／Ｔｈａｒ）、ソフトウエア：Ｃｈｒｏｍｓｃｏｐｅ  ｖ１．２、方法：１０分かけてアイソクラチック１０％共溶媒ＭｅＯＨ、カラム：ＣｈｉｒａｌＰａｋ  ＩＣ、４．６×２５０ｍｍ、５ｕｍ、全流量：４ｍｌ／分（ＣＯ２ポンプから３．８０ｍｌ、改質剤ポンプから０．２０ｍｌ）、オーブン温度を、３５℃に設定し、システム圧力を、１００ｂａｒに設定した、滞留時間：所望及び主要な（Ｓ）−鏡像異性体３．５分、微量の（Ｒ）−鏡像異性体３．８分）。
【００９３】
ｐＨ安定性測定
化合物を、９６ウエルプレートに供給し、三重で試験した。ＤＭＳＯ中の化合物の１０ｍＭ保存溶液４マイクロリットルを、３つのウエル各々に分配した。プレートを、分析の日まで−２０℃で又は未満で保存した。メタノール（ＨＰＬＣグレード）及び０．１Ｎ  ＨＣｌ（ＥＭＤカタログＨＸ０６０３Ａ−６）を、希釈のために使用した。アセトニトリル（ＨＰＬＣグレード）、水（ミリ−Ｑ（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）でろ過された）、トリフルオロ酢酸（分光用グレード）及び０．２Ｍリン酸緩衝液（Ｗａｋｏ、カタログ番号１６３−１４４７１）を使用して、２つの分析方法のための移動相を調製した。
【００９４】
ＵＶ検出器（Ｗａｔｅｒｓ  ＴＵＶ）及びシングル四重極ＭＳ検出器（Ｗａｔｅｒｓ  ＳＱＤ）を備えているＷａｔｅｒｓのＡｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣを使用して、安定性データを得た。目的の化合物（複数可）を含有する９６ウエルプレートを、冷凍装置から取り出し、１時間、室温に加温させた。ＵＰＬＣを予備刺激し、平衡化し、標準物質を注入することによりシステム性能を確認した。１時間後、３つのウエルの各々を、２６６μＬの０．１Ｎ  ＨＣｌで希釈して、ｐＨ＝１を得た。プレートを被覆し、４５分間、６００ｒｐｍで振盪装置（Ｅｐｐｉｎｄｏｒｆ  Ｔｈｅｒｍｏｍｉｘｅｒ  Ｒ）に入れた。プレートを振盪装置から取り出し、各ウエルの内容物を、真空でろ過プレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号ＭＳＳＬＢＰＣ５０）を通してろ過し、ＵＰＬＣに注入した。およそ２４時間後、ウエルの内容物を、ＵＰＬＣに再注入した。
【００９５】
【表２】
2017505282.tif 000011
【００９６】
メタノール中の分析物のピーク面積−％を、２４時間の時点の注入で、０．１Ｎ  ＨＣｌ緩衝液中の同じ滞留時間での分析物のピーク面積−％と比較することにより、種々の緩衝液での安定性を測定した。表２で報告されている安定性アッセイは、化合物１〜４が、２４時間の期間にわたり、ｐＨ１で、化合物Ｅ７１０７より優れた安定性を有することを示す。
【００９７】
【表３】
2017505282.tif 000012
【００９８】
生物学的アッセイ
細胞生存能力アッセイプロトコール
細胞（ＡＴＣＣから得られているＷｉＤｒ及びＰａｎｃ０５．０４）を、９６ウエルプレートに、細胞２０００個／１００μＬ／ウエルで播種し、一夜インキュベートした。消耗された培地を除去し、９つの異なる濃度の化合物を含有する新鮮な培地（１００μＬ／ウエル）を添加し、化合物保存溶液から得られるＤＭＳＯ濃度を０．１％に調節した。各化合物処置を、各濃度で二重に又は三重に行った。
【００９９】
播種した細胞を有する別のプレートを、時間ゼロ（Ｔｚ）プレートとし、そのプレートに、細胞生存能力の代理としてのＡＴＰ測定のために、培地（１００μＬ／ウエル）中の０．１％ＤＭＳＯ、続いてセルタイター−グロ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ）（登録商標）試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）（５０μＬ／ウエル）を添加した。このプレートの複数のウエルの測定から得られる平均値をＴｚとして使用する。
【０１００】
化合物で処置したプレートを、７２時間、３７℃でインキュベートした。その後、セルタイター−グロ（登録商標）試薬（５０μＬ／ウエル）を添加し、ＡＴＰを測定した。二重又は三重で化合物処置したウエルの測定から得られる平均値をＴｉとして使用し、化合物なしに０．１％ＤＭＳＯを有する培地で播種されているプレートを対照成長（Ｃ）として使用する。
【０１０１】
成長阻害率／生存率を、以下のとおりに計算した：
Ｔｉ＞／＝Ｔｚの濃度について、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００
Ｔｉ＜Ｔｚの濃度について、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／Ｔｚ］×１００。
*時間ゼロ（Ｔｚ）、対照成長（Ｃ）、及び化合物の存在下での試験成長（Ｔｉ）
成長阻害率／生存率を、化合物濃度に対してプロットし、Ｅｍａｘを決定した。
【０１０２】
５０％の成長阻害（ＧＩ５０）は、［（Ｔｉ−Ｔｚ）／（Ｃ−Ｔｚ）］×１００＝５０から計算され、この値は、化合物処置中の対照成長（Ｃ）でのＡＴＰ総増加における５０％減少を生じる薬物濃度である。
【０１０３】
インビトロスプライシング（生化学的）アッセイプロトコール
介在配列の欠失を有するアデノウイルス２型構築物（Ａｄ２）のビオチンで標識されているプレｍＲＮＡ（Ｂｅｒｇ，Ｍ．Ｇ．ら、２０１２  Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．、３２（７）：１２７１〜８３頁）を、インビトロ転写により調製した。Ｅｘｏｎ１  （４１ヌクレオチド）、イントロン（２３１ヌクレオチド）、及びＥｘｏｎ２（７２ヌクレオチド）を含有するＡｄ２構築物を、遺伝子合成により産生させ、ジーンウィズ（Ｇｅｎｅｗｉｚ）（登録商標）（Ｓｏｕｔｈ  Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）によるｐＧＥＭ（登録商標）−３Ｚベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）のＥｃｏＲＩ及びＸｂａＩ部位にクローン化した。その後、プラスミドを、ＸｂａＩ消化により直線化し、精製した。製造業者の指示により、それぞれ、ＭＥＧＡスクリプト（ｓｃｒｉｐｔ）（登録商標）Ｔ７転写キット（インビトロゲン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（商標）、ライフ  テクノロジーズ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）（商標）、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）及びＭＥＧＡクリア（ｃｌｅａｒ）（商標）転写クリーンアップキット（インビトロゲン（商標）、ライフ  テクノロジーズ（商標）、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を使用して、転写プレ−ｍＲＮＡのインビトロ転写及び精製を行った。ビオチン−１６−ＵＴＰ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）対冷ＵＴＰの比は、スプライシングされているＡｄ２ｍＲＮＡ当たりおよそ２つのビオチン分子を組み込むのに１：１３であった。
【０１０４】
９５μｇＨｅＬａ核抽出物（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）、４７ｎＭ  Ａｄ２プレ−ｍＲＮＡ、２５Ｕ  ＲＮａｓｉｎＲＮａｓｅ阻害剤（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）、１ＸＳＰ緩衝液（０．５ｍＭ  ＡＴＰ、２０ｍＭリン酸クレアチン、１．６ｍＭ  ＭｇＣｌ２）、及びＤＭＳＯ中の化合物（１％最終濃度のＤＭＳＯで）を含有する２５μＬ反応混合物中、３０℃で、インビトロスプライシングアッセイを行った。９０分のインキュベーションの後、１８μＬの５Ｍ  ＮａＣｌを添加することにより反応を停止させ、その混合物を、１０μＬのＭ−２８０ストレプトアビジンで被覆されている磁性ビーズ（インビトロゲン（商標）、ライフ  テクノロジーズ（商標）、Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）と、３０分間、室温でインキュベートして、Ａｄ２プレ−及びスプライシングされているｍＲＮＡを捕捉した。ビーズを、１０ｍＭトリス（ｐＨ＝７．５）、１ｍＭ  ＥＤＴＡ及び２Ｍ  ＮａＣｌを含有する１００ｕＬ緩衝液で２回洗浄し、その後、９５％ホルムアミドを含有するＲＮＡゲル負荷緩衝液中、７０℃で、１０分間、インキュベートして、ＲＮＡを溶出した。Ａｄ２  ＲＮＡを、６％ＴＢＥ−ＵＲＥＡゲルにより溶解し、ナイロン膜に移行させ、ＵＶ架橋し、ＩＲＤｙｅ（登録商標）で標識されているストレプトアビジン（ＬＩ−ＣＯＲ、Ｌｉｎｃｏｌｎ、Ｎｅｂｒａｓｋａ）で探索した。ＬＩ−ＣＯＲ  Ｉｍａｇｅ  Ｓｔｕｄｉｏソフトウエアを使用してバンド蛍光強度を測定することによりスプライシングされているＲＮＡの量を定量した。
【０１０５】
結果
データを下の表３で報告する。Ｅｍａｘは、試験した用量範囲での化合物に対する最大達成可能な応答を指し、負の値は、細胞致死性を示す。大きな負のＥｍａｘ値は、特定の化合物について細胞致死性が大きいことを示す。例えば、突然変異体ＳＦ３Ｂ１細胞株であるＰａｎｃ０５．０４細胞では、大きな負のＥｍａｘ値は、化合物１が、化合物２より大きな細胞致死性を有したことを示す。
【０１０６】
ＷｉＤｒ−Ｒ細胞は、化学的に誘発されたＲ１０７４Ｈ突然変異を有する結腸がん細胞であり、成長阻害の点でプラジエノライドＢに耐性であることが示されている（Ｙｏｋｏｉ，Ａ．ら、２０１１  ＦＥＢＳ  Ｊｏｕｒｎａｌ、２７８巻：４８７０〜４８８０頁）。「耐性」ＷｉＤｒ−Ｒ細胞株を用いたこの生存能力アッセイにおける化合物のカウンタースクリーニング（counter-screening）は、これらの化合物が、オフターゲット効果（複数可）を有するかどうかを示すことができる。耐性ＷｉＤｒ−Ｒ細胞株で成長阻害（ＧＩ５０）活性を欠くが、親のＷｉＤｒ細胞株における活性を維持する化合物は、オンメカニズムスプライシング調節が、親のＷｉＤｒ細胞株で観察される成長阻害に応答性があることを示唆する。
【０１０７】
上述のインビトロスプライシング（ＩＶＳ）アッセイは、例示のプレ−ｍＲＮＡのｍＲＮＡへのスプライシングの阻害を監視する生化学的アッセイである。この生化学的アッセイは、研究者らが、どの化合物濃度で、この特定の転写物のスプライシングが、非細胞状況で阻害され、機械論的スプライシング阻害活性を示すために使用されるかを評価することを可能にする。
【０１０８】
【表４】
2017505282.tif 000013
【０１０９】
化合物の追加試験
マウスでの薬物動態学的（ＰＫ）研究
化合物２を、ＣＤ−１マウスに５ｍｇ／ｋｇＩＶ（静脈内）又は１０ｍｇ／ｋｇＰＯ（経口投与）で投与した。投与後、血液試料を、５匹のマウスから、尾静脈からの連続放血を介して予め決定されている時点で採取した。血液を、投与後０．０８３（０．１６７ＰＯのみ）、０．５、１、２、４、６、８及び２４時間に採取した。血液採取後３０分以内に、血液試料を５０００ＲＰＭで５分間遠心分離して、血漿を採取した。抽出後、試料をＬＣＭＳを使用して分析した。ＰＫパラメーターはＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３における非コンパートメント分析を使用して計算した。
【０１１０】
このデータは、化合物２が、マウスモデルで経口生物学的利用能及び好ましい薬物動態学的特性を表すことを示した（図１、表４）。
【０１１１】
【表５】
2017505282.tif 000014
【０１１２】
マウスの異種移植モデル
化合物２の効力をマウスの異種移植モデルで試験した。Ｎａｌｍ−６ＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ同質遺伝子細胞（ヒトのプレＢ−細胞株、１０×１０６細胞）をメスのＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下移植した。マウスを化合物２（１０％エタノール、５％ＴＷＥＥＮ−８０、８５％生理食塩水）又は溶媒対照で処置した。マウスに、図２で示されている量で、１４日間、毎日経口で投与（ＱＤ×１４ＰＯ）し、マウスが以下の終点のいずれかに達するまで観察した：１）週３回測定した過剰な腫瘍体積（楕円の式：（長さ×幅２）／２を使用することにより計算される腫瘍体積）；又は２）なんらかの健康上の問題、例えば麻痺又は過剰な体重減少の発生。全ての動物研究は、Ｈ３  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って実行した。
【０１１３】
結果は、異種移植マウスモデルにおいて、化合物２は、経口経路を介して投与された場合、効果的であり、腫瘍成長を減少させることを示した（図２）。
【０１１４】
マウスの異種移植モデルにおけるＰＫ／ＰＤ試験
Ｎａｌｍ−６マウスの異種移植モデルで、化合物２の薬物動態学（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）も分析した。Ｎａｌｍ−６  ＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ同質遺伝子細胞（ヒトのプレＢ−細胞株、１０×１０６細胞）を、メスのＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下移植した。マウスに、単一の経口用量の１０ｍｇ／ｋｇの化合物２（１０％エタノール、５％ＴＷＥＥＮ−８０、８５％生理食塩水）を投与し、分析のために、投与の後の所定時間に腫瘍を採取した。
【０１１５】
リボピュア（ＲｉｂｏＰｕｒｅ）（商標）ＲＮＡ精製キット（アンビオン（Ａｍｂｉｏｎ）（登録商標））を使用してＲＮＡを単離し、ｑＰＣＲ分析のために使用した。スーパースクリプト（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ）（登録商標）ＶＩＬＯ（商標）ｃＤＮＡ合成キット（インビトロゲン（商標））の指示に従いＲＮＡをレトロ転写し、０．０４μｌのｃＤＮＡを、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）のために使用した。プレ−ｍＲＮＡ  ＥＩＦ４Ａ１及び成熟したｍＲＮＡ  ＳＬＣ２４Ａ１９についてのｑＰＣＲ及びＰＫ評価を、先に報告されているとおりに行った。（Ｅｓｋｅｎｓ，Ｆ．Ａ．ら、Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｃｌａｓｓ  ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｅ７１０７  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １９、６２９６〜６３０４頁、ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−１３−０４８５（２０１３））。全ての動物研究は、Ｈ３  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って実行した。
【０１１６】
図３に示されている結果は、化合物２が、経口経路の投与を介して忍容用量でＰＤ応答を表すことを示した。
【０１１７】
細胞生存能力アッセイ
化合物２の存在下でのＰａｎｃ０５．０４がん細胞（ＳＦ３Ｂ１ＭＵＴ）（ＳＦ３Ｂ１におけるＱ６９９Ｈ及びＫ７００Ｅ突然変異）の生存能力を評価するために、３８４ウエルプレート中にウエル当たり７５０個の細胞を播種し、７２時間、３７℃で、図４に示した濃度の化合物２で処置した。生存性又はアポトーシス細胞の相対数は、セルタイター−グロ（登録商標）発光性細胞生存性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して発光により測定した。
【０１１８】
結果は、突然変異体ＳＦ３Ｂ１膵臓がん細胞株における野生型ＳＦ３Ｂ１膵臓がん細胞株とは異なる細胞致死性を示した（図４）。
【０１１９】
Ｅ７１０７及び化合物２についての選択的スプライシングの比較
ｎカウンター（ｎＣｏｕｎｔｅｒ）（登録商標）分析システム（ＮａｎｏＳｔｒｉｎｇ  Ｔｅｃｈｏｌｏｇｉｅｓ，  Ｉｎｃ．、Ｓｅａｔｔｌｅ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ）を使用して、Ｅ７１０７及び化合物２についての選択的スプライシングの調節を決定した。Ｎａｌｍ−６同質遺伝子細胞を、１０×ＧＩ５０で、６時間、化合物２又はＥ７１０７（Ｅｉｓａｉ，  Ｉｎｃ．から得られる）で処置した。リボピュア（商標）ＲＮＡ精製キット（アンビオン（登録商標））を使用して、ＲＮＡを単離し、分析に使用した。スーパースクリプト（登録商標）ビロ（ＶＩＬＯ）（商標）ｃＤＮＡ合成キット（インビトロゲン（商標））の指示によりＲＮＡをレトロ転写し、０．０４μｌのｃＤＮＡを、ｑＰＣＲ用に使用した。
【０１２０】
図５に示されている結果は、化合物２についてのスプライシング調節プロフィールが、Ｅ７１０７のプロフィールと異なることを示した。
【０１２１】
化合物１のマウスの薬物動態学的（ＰＫ）研究
化合物１を、ＣＤ−１マウスに５ｍｇ／ｋｇＩＶ又は１２ｍｇ／ｋｇＰＯで投与した。投与後、５匹のマウスから尾静脈からの連続放血を介して予め決定されている時点で血液試料を採取した。血液は、投与後０．０８３（０．１６７ＰＯのみ）、０．５、１、２、４、６、８及び２４時間に採取した。血液採取３０分以内に、血液試料を５０００ＲＰＭで５分間遠心分離して、血漿を採取した。抽出後、試料を、ＬＣＭＳを使用して分析した。ＰＫパラメーターを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３における非コンパートメント分析を使用して計算した。
【０１２２】
このデータは、化合物１が、マウスモデルで経口生物学的利用能及び好ましい薬物動態学的特性を表すことを示した（図６、表５）。
【０１２３】
【表６】
2017505282.tif 000015
【０１２４】
マウスの異種移植モデルにおける化合物１の効力
化合物１の効力をマウスの異種移植モデルで試験した。Ｎａｌｍ−６ＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ同質遺伝子細胞（ヒトのプレＢ−細胞株、１０×１０６細胞）をメスのＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下で移植した。マウスを、化合物１（１０％エタノール、５％ＴＷＥＥＮ−８０、８５％生理食塩水）又は溶媒対照で処置した。マウスに、７．５ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇの化合物１又は溶媒を、１４日間、毎日経口で投与（ＱＤ×１４ＰＯ）し、マウスが以下の終点のいずれかに達するまで観察した：１）週３回測定されている過剰な腫瘍体積（楕円の式：（長さ×幅２）／２を使用して計算される腫瘍体積）；又は２）なんらかの健康上の問題、例えば麻痺又は過剰な体重減少の発生。全ての動物研究は、Ｈ３  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って実行した。
【０１２５】
結果は、異種移植マウスモデルにおいて、化合物１は、経口経路を介して投与された場合、効果的であり、腫瘍成長を減少させることを示した（図７）。
【０１２６】
マウスの異種移植モデルにおける化合物１のＰＫ／ＰＤ試験
Ｎａｌｍ−６マウスの異種移植モデルで、化合物１の薬物動態学的（ＰＫ）／薬力学的（ＰＤ）も分析した。Ｎａｌｍ−６  ＳＦ３Ｂ１Ｋ７００Ｅ同質遺伝子細胞（ヒトのプレＢ−細胞株、１０×１０６細胞）を、メスのＣＢ１７−ＳＣＩＤマウスの側腹部に皮下で移植した。マウスに、単一の経口用量の化合物１（１０％エタノール、５％ＴＷＥＥＮ−８０、８５％生理食塩水）を投与し、分析のために、投与の後の所定時間に腫瘍を採取した。
【０１２７】
リボピュア（商標）ＲＮＡ精製キット（アンビオン（登録商標））を使用してＲＮＡを単離し、ｑＰＣＲ分析のために使用した。スーパースクリプト（登録商標）ビロ（商標）ｃＤＮＡ合成キット（インビトロゲン（商標））の指示に従いＲＮＡをレトロ転写し、０．０４μｌのｃＤＮＡを、定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）のために使用した。プレ−ｍＲＮＡ  ＥＩＦ４Ａ１及び成熟したｍＲＮＡ  ＳＬＣ２４Ａ１９についてのｑＰＣＲ及びＰＫ評価を、先に報告されているとおりに行った（Ｅｓｋｅｎｓ，Ｆ．Ａ．ら、Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｃｌａｓｓ  ｓｐｌｉｃｅｏｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  Ｅ７１０７  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ．Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １９巻、６２９６〜６３０４頁、ｄｏｉ：１０．１１５８／１０７８−０４３２．ＣＣＲ−１３−０４８５（２０１３））。全ての動物研究は、Ｈ３  Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌｓに従って実行した。
【０１２８】
図８に示されている結果は、化合物１が、経口経路の投与を介して忍容用量でＰＤ応答を表すことを示した。
【０１２９】
化合物３のマウスの薬物動態学的（ＰＫ）研究
ＣＤ−１マウスに化合物３を５．９６４ｍｇ／ｋｇＩＶ又は１３．３０７ｍｇ／ｋｇＰＯで投与した。投与後、５匹のマウスから、尾静脈からの連続放血を介して予め決定されている時点で血液試料を採取した。血液を、投与後０．０８３（０．１６７ＰＯのみ）、０．５、１、２、４、６、８及び２４時間で採取した。血液採取後３０分以内に、血液試料を５０００ＲＰＭで５分間遠心分離して、血漿を採取した。抽出後、試料を、ＬＣＭＳを使用して分析した。ＰＫパラメーターを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３における非コンパートメント分析を使用して計算した。
【０１３０】
このデータは、化合物３が、マウスモデルで経口生物学的利用能及び好ましい薬物動態学的特性を表すことを示した（図９、表６）。
【０１３１】
【表７】
2017505282.tif 000016
【０１３２】
化合物４のマウスの薬物動態学的（ＰＫ）研究
化合物４を、ＣＤ−１マウスに５ｍｇ／ｋｇＩＶ又は１０ｍｇ／ｋｇＰＯで投与した。投与後、５匹のマウスから、尾静脈からの連続放血を介して予め決定されている時点で血液試料を採取した。血液を、投与後０．０８３（０．１６７ＰＯのみ）、０．５、１、２、４、６、８及び２４時間で採取した。血液採取後３０分以内に、血液試料を５０００ＲＰＭで５分間遠心分離して、血漿を採取した。抽出後、試料を、ＬＣＭＳを使用して分析した。ＰＫパラメーターを、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ  ｖ６．３における非コンパートメント分析を使用して計算した。
【０１３３】
このデータは、化合物４が、マウスモデルで経口生物学的利用能及び好ましい薬物動態学的特性を表すことを示した（図１０、表７）。
【０１３４】
【表８】
2017505282.tif 000017
【０１３５】
上に表される結果は、化合物１、２、３及び４は各々経口生物学的利用能及び好ましい薬物動態学的特性を持つことを示す。この結果は、不十分な経口生物学的利用能のため静脈内注入によって患者に投与されてきたＥ７１０７より、改善している（Ｈｏｎｇら、（２０１４）、Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ３２巻、４３６〜４４４頁）。
【図１】
2017505282.tif 000027
【図２】
2017505282.tif 000028
【図３】
2017505282.tif 000029
【図４】
2017505282.tif 000030
【図５】
2017505282.tif 000031
【図６】
2017505282.tif 000032
【図７】
2017505282.tif 000033
【図８】
2017505282.tif 000034
【図９】
2017505282.tif 000035
【図１０】
2017505282.tif 000036
【手続補正書】
【提出日】平成28年6月22日(2016.6.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１：
【化１】
2017505282.tif 000037
の化合物、
式２：
【化２】
2017505282.tif 000038
の化合物、
式３：
【化３】
2017505282.tif 000039
の化合物、
式４：
【化４】
2017505282.tif 000040
の化合物、及びその医薬上許容しうる塩
からなる群から選択される化合物。
【請求項２】
式１：
【化５】
2017505282.tif 000041
の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項３】
式２：
【化６】
2017505282.tif 000042
の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項４】
式３：
【化７】
2017505282.tif 000043
の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項５】
式４：
【化８】
2017505282.tif 000044
の化合物又はその医薬上許容しうる塩。
【請求項６】
前記化合物が、立体異性的に純粋である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項８】
前記組成物が、静脈内、経口、皮下、又は筋肉内投与のために製剤化されている、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が、経口投与のために製剤化されている、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん及び肺がんから選択されるがんの治療における使用のための、請求項７〜９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記がんが、結腸がんである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記がんが、膵臓がんである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記がんが、骨髄異形成症候群である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記がんが、慢性骨髄単球性白血病である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項１０〜１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１、セリン／アルギニン富化スプライシング因子２、プレ−ｍＲＮＡ−プロセシング-スプライシング因子８、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２、スプライシング因子１、スプライシング因子３ａサブユニット１、ＰＲＰ４０プレ−ｍＲＮＡプロセシング因子４０相同体Ｂ、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１、クルックドネック  プレ−ｍＲＮＡスプライシング因子１、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９、ペプチジル−プロリル  シス−トランスイソメラーゼ−様２、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２、核内低分子リボヌクレオプロテインＳｍＤ３、プロバブル  ＡＴＰ−依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５、プレ−ｍＲＮＡ−スプライシング因子  ＡＴＰ−依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５及びポリアデニレート−結合タンパク質１から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
がんを治療するための医薬の製造における請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用であって、前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん及び肺がんから選択される、使用。
【請求項２１】
前記がんが、結腸がんである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記がんが、膵臓がんである、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２４】
前記がんが、骨髄異形成症候群である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記がんが、慢性骨髄単球性白血病である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】
前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２８】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
式２：
【化９】
2017505282.tif 000045
の化合物又はその医薬上許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項３０】
前記組成物が、静脈内、経口、皮下、又は筋肉内投与のために製剤化されている、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記組成物が、経口投与のために製剤化されている、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん及び肺がんから選択されるがんの治療における使用のための、請求項２９〜３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記がんが、結腸がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記がんが、膵臓がんである、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
前記がんが、骨髄異形成症候群である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記がんが、慢性骨髄単球性白血病である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項３２〜３８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１、セリン／アルギニン富化スプライシング因子２、プレ−ｍＲＮＡ−プロセシング-スプライシング因子８、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２、スプライシング因子１、スプライシング因子３ａサブユニット１、ＰＲＰ４０プレ−ｍＲＮＡプロセシング因子４０相同体Ｂ、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１、クルックドネック  プレ−ｍＲＮＡスプライシング因子１、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９、ペプチジル−プロリル  シス−トランスイソメラーゼ−様２、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２、核内低分子リボヌクレオプロテインＳｍＤ３、プロバブルＡＴＰ−依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５、プレ−ｍＲＮＡ−スプライシング因子  ＡＴＰ−依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５及びポリアデニレート−結合タンパク質１から選択される、請求項３９に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項４０に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
がんを治療するための医薬の製造における請求項２に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩の使用であって、前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、急性骨髄性白血病、結腸がん、膵臓がん、子宮内膜がん、卵巣がん、乳がん、ブドウ膜黒色腫、胃がん、胆管細胞がん及び肺がんから選択される、使用。
【請求項４３】
前記がんが、結腸がんである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記がんが、膵臓がんである、請求項４２に記載の使用。
【請求項４５】
前記がんが、骨髄異形成症候群、慢性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄単球性白血病及び急性骨髄性白血病から選択される、請求項４２に記載の使用。
【請求項４６】
前記がんが、骨髄異形成症候群である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４７】
前記がんが、慢性骨髄単球性白血病である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４８】
前記がんが、急性骨髄性白血病である、請求項４５に記載の使用。
【請求項４９】
前記がんが、スプライソソーム遺伝子又はタンパク質における１つ又は複数の突然変異について陽性である、請求項４２〜４８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５０】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子１、セリン／アルギニン富化スプライシング因子２、プレ−ｍＲＮＡ−プロセシング-スプライシング因子８、Ｕ２核内低分子ＲＮＡ補助因子２、スプライシング因子１、スプライシング因子３ａサブユニット１、ＰＲＰ４０プレ−ｍＲＮＡプロセシング因子４０相同体Ｂ、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質１０、ポリ（ｒＣ）結合タンパク質１、クルックドネック  プレ−ｍＲＮＡスプライシング因子１、ＤＥＡＨ（Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｈｉｓ）ボックスヘリカーゼ９、ペプチジル−プロリル  シス−トランスイソメラーゼ−様２、ＲＮＡ結合モチーフタンパク質２２、核内低分子リボヌクレオプロテインＳｍＤ３、プロバブルＡＴＰ−依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＤＸ５、プレ−ｍＲＮＡ−スプライシング因子  ＡＴＰ−依存性ＲＮＡヘリカーゼＤＨＸ１５及びポリアデニレート−結合タンパク質１から選択される、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
前記スプライソソーム遺伝子又はタンパク質が、スプライシング因子３Ｂサブユニット１である、請求項５０に記載の使用。
【国際調査報告】
2017505282.tif 000046
2017505282.tif 000047