(57)【要約】  本発明は、光線性角化症（ＡＫ）又は基底細胞ガン（ＢＣＣ）のパルス光力学的療法（又はパルスＰＤＴ）処置に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
動物において光力学的療法（ＰＤＴ）によって皮膚症状を処置するのに使用するための光増感剤であって、短期間にわたって前記動物の皮膚に適用すべきものであり、該症状が、光線性角化症及び基底細胞ガンからなる群より選択される、光増感剤。
【請求項２】
ＰＤＴに関連する副作用を予防又は軽減するための、請求項１に記載の使用のための光増感剤。
【請求項３】
５〜１２０分間に含まれる期間、好ましくは１５〜６０分間に含まれる期間にわたって、動物の皮膚に適用される、請求項１又は２に記載の使用のための光増感剤。
【請求項４】
光力学的療法が、人工光源又は自然光源、特にＬＥＤ又は太陽光によって達成される光活性化を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用のための光増感剤。
【請求項５】
前記ＰＤＴが、
ａ）５分間〜１２０分間の期間にわたって、前記光増感剤を含む組成物を前記動物に投与すること；及び
ｂ）１分間〜１５分間の期間にわたって人工光によって、又は０．５時間〜３時間の期間にわたって自然光によって前記光増感剤を光活性化すること
を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用のための光増感剤。
【請求項６】
前記ＰＤＴが、
ａ）１５分間〜６０分間の期間にわたって、前記光増感剤を含む組成物を前記動物に投与すること；及び
ｂ）５分間〜１０分間の期間にわたって人工光によって、又は０．５時間〜２時間の期間にわたって自然光によって前記光増感剤を光活性化すること
を含む、請求項５に記載の使用のための光増感剤。
【請求項７】
前記ＰＤＴが、
ａ）３０分間の期間にわたって、前記光増感剤を含む組成物を前記動物に投与すること；及び
ｂ）光増感剤を除去すること；及び
ｃ）２．５時間後に、９分間の期間にわたって人工光によって、又は少なくとも２時間の期間にわたって、自然光によって前記光増感剤を光活性化すること
を含む、請求項６に記載の使用のための光増感剤。
【請求項８】
５−ＡＬＡ、５−ＡＬＡ誘導体、５−ＭＡＬ、５−ＭＡＬ誘導体、及び一般式Ｉ：
Ｒ２２Ｎ−ＣＨ２ＣＯＣＨ２−ＣＨ２ＣＯ−ＯＲ１（Ｉ）
（式中：
Ｒ１は、置換されている又は置換されていない直鎖状、分岐状又は環状アルキル基（例えば、置換されている又は置換されていない直鎖状アルキル基）を表し；各Ｒ２は独立して、水素原子又は場合により置換されているアルキル基、例えばＲ１基を表す）によって包含される化合物；及びそれらの薬学的に許容し得る塩からなる群より選択される、請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用のための光増感剤。
【請求項９】
５−ＡＬＡ又は５−メチルＡＬＡエステルである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用のための光増感剤。
【請求項１０】
前記光増感剤を含む組成物の前記動物への投与を、閉塞ありで又は閉塞なしで、より好ましくは閉塞ありで行う、請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用のための光増感剤。
【請求項１１】
グルココルチコステロイドと組み合わせて使用するための、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用のための光増感剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、光線性角化症（ＡＫ）及び基底細胞ガン（ＢＣＣ）からなる群より選択される皮膚病のパルス光力学的療法（又はパルスＰＤＴ）処置に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
光線性角化症（ＡＫ）は過角化性前ガン上皮病変であり、太陽光への皮膚の頻繁かつ慢性的な曝露によって引き起こされることが公知である。この症状は、典型的には、直径約２mm〜７mmの小さくて粗い皮膚パッチを示す。パッチは、通常、赤色調の色であり、粗い質感及び白色又は黄色の過角化症を伴う。光線性角化症は不快又は苦痛であり得、処置しなければ、悪性腫瘍（扁平上皮ガン）に発達し得る。
【０００３】
特に、患者が複数の病変又はいわゆる領域ガン化を示す場合には、光線性角化症は、局所処置、例えば光力学的療法（光増感剤としてＡＬＡ、５−ＭＡＬ及びＨＡＬ））、イミキモド、ジクロフェナク又は５−フルオロウラシルによって処置されることが最も一般的である。あるいは、特に、患者が少数の病変を示す場合には、この症状は、液体窒素を用いた凍結手術又はキューレットによって処置され得る。浸潤性ＳＣＣの疑いがある場合には、手術が推奨される。
【０００４】
基底細胞ガンは、最も一般的な形態の皮膚ガンであり、米国における全ての皮膚ガンの９０％超を占める。これらのガンは、他の身体部分に広がる（転移する）ことはほとんどないが、成長して周囲組織に浸潤することによって、損傷を引き起こし得る。
【０００５】
通常、基底細胞ガンは、当初は、小さくて円蓋状の結節として存在し、多くの場合には、真珠のように光沢があって半透明であり、表在性の血管を伴う。いくつかの基底細胞ガンはメラニン色素を含むので、光沢があるというよりも暗く見える。
【０００６】
光力学的療法（ＰＤＴ）は、皮膚又は他の上皮器官若しくは粘膜の様々な異常又は障害、特にガン又は前ガン病変及び特定の非悪性病変（例えば、皮膚病、例えば乾癬、光線性角化症（ＡＫ）及び座瘡）の処置技術である。ＰＤＴでは、光増感（光化学療法）剤を身体の患部に適用し、続いて、光活性化光に曝露して光増感剤を活性化し、それらを細胞毒性型に変換することにより、罹患細胞を殺傷する（壊死、アポトーシス）。
【０００７】
ソラレン、ポルフィリン（例えば、Photofrin（登録商標））、クロリン及びフタロシアニンを含む様々な光増感剤が公知である。しかしながら、中でも、当技術分野で公知の最も臨床的に有用な光増感剤は、５−アミノレブリン酸及びその誘導体、例えば５−ＡＬＡエステルなどのエステルである。
【０００８】
ＰＤＴの作用機序は、細胞内ポルフィリン（ＰｐＩＸを含む）（これは光活性蛍光化合物であり、酸素の存在下で光活性化されると、一重項酸素が形成されて、細胞区画、特にミトコンドリアへの損傷が引き起こされる）に依拠する。蓄積されたポルフィリンの光活性化は、光に曝露されたターゲット細胞に対する光化学反応及びそれによる光毒症をもたらす。
【０００９】
ＰＤＴは、広範囲の疾患の処置において臨床的に有用であるが、このような処置の主な欠点は、特に処置部位における付随する副作用である。これらとしては、多くの場合、炎症、例えば紅斑、腫脹、浮腫、熱傷、かゆみ、剥脱、高色素沈着、並びに処置後の長期刺激及び過敏症が挙げられる。処置部位が顔、頭皮又は首である場合、このような副作用は特に望ましくない。ＰＤＴが病変（例えば、座瘡、基底細胞ガン、光線性角化症、光損傷及びボーエン病（ＢＤ））の処置のためのものである場合に、これは頻繁に生じる。
【００１０】
座瘡の処置のためのＰＤＴにおける５−ＡＬＡエステルの使用が開示されている国際公開公報第２００６／０５１２６９号では、このような副作用の発生が認められている。国際公開公報第２００６／０５１２６９号には、１６重量％のメチルＡＬＡエステルを含むクリームを３時間にわたって被験体の顔に適用し、続いて、被験体の顔を非コヒーレント赤色光（線量３７Jkm-2）に曝露する研究が記載されている。次いで、２週間後に、処置が繰り返された。結果は、メチルＡＬＡエステルによるＰＤＴが座瘡の処置に有効であることを裏付けていたが、被験体は、この処置が痛みを引き起こし、重度の炎症を誘導したことも示していた。
【００１１】
国際公開公報第０２／１３７８８号には、座瘡の処置のためのＰＤＴにおけるＡＬＡ酸の使用に関する類似研究が開示されている。この場合では、２０％ＡＬＡ酸が３時間にわたって被験体の背中に適用され、次いで、被験体は１５０J/cm2の広帯域光に曝露された。この場合も同様に、結果は、ＡＬＡによるＰＤＴが座瘡の処置に有効であることを裏付けていたが、被験体は、多くの望ましくない副作用も報告していた。例えば、国際公開公報第０２／１３７８８号では、ＰＤＴ処置後に、紅斑、高色素沈着及び剥脱が多く見られたことが報告されており、いくつかの場合では、その後の処置を延期さえしなければならなかったと記述されている。処置中及び処置後の痛み、熱傷及びかゆみの報告も多かった。国際公開公報第０２／１３７８８号には、「高用量高エネルギー」レジームとして上記処置レジームが開示されており、座瘡の永久的改善をもたらすと述べられている。国際公開公報第０２／１３７８８号には、「低用量低エネルギー」レジームがさらに開示されており、座瘡の緩和をもたらすように設計されると述べられている。この処置では、０．１〜１０重量％のＡＬＡ酸を適用し、ＡＬＡ酸が皮膚に浸透するのを待った後、１〜２０Ｊ／cm2の光線量を照射する。国際公開公報第０２／１３７８８号では、座瘡を緩和するための不定期の複数の処置において、このレジームを使用し、その減少を維持するために必要に応じて繰り返すことが示唆されている。このようなレジームの使用は無痛であり得ると認識されているが、国際公開公報第０２／１３７８８号では、この処置レジームの治療効果は、それに記載及び例証されている高用量高エネルギーレジームよりも低いことが暗示されている。
【００１２】
したがって、望ましくない副作用（例えば、炎症）がないが、高い治療効果を有する代替的なＰＤＴ法の必要性が依然として存在する。
【００１３】
炎症及び／又は紅斑は、ＰＤＴ処置に関連する主要な問題の１つである。一般に、炎症は、ＰＤＴによるＡＫ／ＢＣＣ／ＢＤの治癒における必要要素／必須条件であるが、ＢＣＣ及びＢＤについては、これらの病変は小さく、衣服によって隠れることが多いので、それほど大きな問題ではないと考えられている。反対に、ＡＫは主に顔にあり、ダウンタイムを減少させる必要が重要である。炎症とＰＤＴの有効性との間のこれまでに発表されていない関係を図１に示す。
【００１４】
したがって、光線性角化症及び基底細胞ガンを処置するための方法であって、炎症性が少なく、依然として有効な方法の必要性が存在する。本発明は、その必要性に対処する。
【発明の概要】
【００１５】
上記のように、従来技術では、ＰＤＴによるＡＫ及びＢＣＣの治癒において、炎症が重度の有害事象があることが教示されている。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、ＰＤＴにおいて古典的に行われる短期間にわたる光増感剤の適用が、光増感剤を長期間にわたって使用する場合と同様に効果的なＰＤＴの実施を可能にし、従来技術のＰＤＴプロトコールで通常観察される副作用（特に、炎症）が大きく減少することを見出した。
【００１６】
したがって、本発明は、ＰＤＴ処置であって、光増感剤（特に、５−ＭＡＬ）をそれを必要とする被験体に短期間にわたって投与すること、及び次いで、皮膚表面から光増感剤を除去することを含むＰＤＴ処置に関する。あるいは、このＰＤＴプロトコールは、本明細書における指定のパルスＰＤＴである。
【００１７】
代表的な光増感剤としては、好ましくは、５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）及び５−ＡＬＡの誘導体（例えば、エステル）、より好ましくは５−ＡＬＡメチルエステル（又は５−ＭＡＬ）又はそれらの薬学的に許容し得る塩が挙げられる。本使用及び方法では、光活性化は、自然光又は人工光によって達成される。特定の実施態様では、ＰＤＴは、
（ａ）場合により、適切な前処理、例えばキューレット又はマイクロパーフォレーションによって、処置すべき皮膚領域を整えること、
（ｂ）前記光増感剤を含む組成物を前記動物に短期間にわたって投与すること；及び
（ｃ）前記光増感剤を光活性化すること
を含む。
【００１８】
特定の実施態様では、本発明は、光増感剤（特に、５−ＭＡＬ）をそれを必要とする被験体に短期間にわたって投与すること、及び次いで、皮膚表面から光増感剤を除去することを含むパルスＰＤＴ処置に関する。次いで、本出願全体を通じて記載されるように、光活性化を行う。本発明のパルスＰＤＴ処置は、高い細胞内ＰＰＩＸ及び低い細胞外ＰＰＩＸを保証する。したがって、処置中及び処置終了後における過剰量のＰＰＩＸ形成が回避される。特に、本発明者らは、本発明のパルスＰＤＴ処置では炎症が少なく、有効性が不変であることを示す。
【００１９】
一実施態様によれば、光増感剤を皮膚に乗せる間のパルス時間は、５〜１２０分間に含まれる。好ましい実施態様によれば、光増感剤を皮膚に乗せる間のパルス時間は、１５〜６０分間、特に２０〜４０分間に含まれる。さらなる特定の実施態様では、光増感剤を約３０分間（例えば、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４又は３５分間、より具体的には３０分間）投与する。このような短期の光増感処置では、疼痛レベルは変化せず、ＰＰＩＸ濃度は、例えば５−ＭＡＬへの従来の３時間曝露の場合よりも明らかに低いが、処置は同様に効果的である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
発明の詳細な説明
本発明にしたがって処置される皮膚症状
用語「動物」は、本明細書では、任意のヒト又は非ヒトを意味する。本発明による処置のための好ましい動物は、ヒトである。
【００２１】
本発明によれば、「皮膚症状」は、ＰＤＴによって処置され得る疾患であって、ＡＫ及び基底細胞ガン（ＢＣＣ）を含む群より選択される疾患を表す。
【００２２】
光線性角化症（ＡＫ）は、太陽光などの放射エネルギーへの慢性曝露によって引き起こされ、これに関連する前ガン性（前悪性）皮膚病変である。光線性角化症病変は、小さい赤色の粗い過角化性病変であり、太陽に曝露された皮膚領域に生じる。光線性角化症病変は、扁平上皮細胞ガン（ＳＣＣ）と称される皮膚ガンで観察される同じ細胞変化の多くを有する。研究では、突然変異型ｐ５３遺伝子は、体内の太陽損傷細胞に見られ、ＡＫ及び扁平上皮ガンを有する人々の約９０％超に存在することが示されている。ほとんどの光線性角化症病変は、実際にはガンにならないが、一部の病変は悪性になり得る。
【００２３】
光線性角化症は、皮膚の最外層である表皮の約９０％、を構成する細胞であるケラチノサイトと称される皮膚細胞で生じる。慢性的な太陽曝露は、時間の経過と共に、これらの細胞において突然変異を生じさせ、サイズ、形状、組織化様式、並びに挙動及び増殖様式の変化を細胞に引き起こす。加えて、異常細胞の増殖は、真皮（皮膚の下の層）にまですら拡大し得、浸潤性ＳＣＣと称される。
【００２４】
光線性角化症（ＡＫ）は、太陽紫外線（ＵＶＲ）への慢性曝露に関連する一般的な皮膚病変である。Frost CA and Green AC, Br J Dermatol 1994; 131 :455-64。ＡＫ及び扁平上皮細胞ガン（ＳＣＣ）は、組織学的特徴及び分子的特徴を共有する；したがって、一部の専門家は、ＡＫを初期ＳＣＣであると考えている。Cockerell CJ, J Am Acad Dermatol 2000; 42(1 Pt2): 11 -17。いくつかのＡＫは自然に退縮するので、個々のＡＫが浸潤性ＳＣＣに進行するリスクは低いが、ＡＫは、多病巣性及び再発性である傾向がある。複数のＡＫを示す患者は、ＳＣＣを発症する高いリスクを有し得るので、ＡＫの処置が推奨される。Glogau RG, J Am Acad Dermatol 2000; 42 (lPt2):23-24; Criscione VD et al., Cancer 2009: 1 15:2523-30; Drake LA et al., J Am Acad Dermatol 1995; 32:95-98。
【００２５】
光線性角化症病変は、一般に、直径約２〜約７ミリメートルのサイズがある。ＡＫ病変は、肌色調から赤色調の色範囲であり得、多くの場合に過角化性である。時折、ＡＫ病変に関連する過角化症は、動物の角の形になる。これが生じると、ＡＫは、「皮角」として公知である。光線性角化症を発症するリスクが高い人々は色白であり、長年にわたって屋外で（例えば、仕事又は遊びで）かなりの時間を費やす傾向がある。ＡＫ病変は、通常、数年間にわたって太陽に絶え間なく曝露された身体領域で生じる。加えて、慢性的な太陽曝露により、皮膚は、しわくちゃになり、シミだらけになり、変色することが多い。光線性角化症の一般的な場所としては、顔、耳、唇、はげた頭皮、後頸部、上胸部、手の甲及び前腕が挙げられる。ＡＫ病変が唇で発達する場合、この症状は、光線性口唇炎として公知である。光線性口唇炎は、ひび割れ及び乾燥している下唇における広範性の落屑を特徴とし得る。いくつかの場合では、唇は、肥厚した唇における白色の（過角化性）シミを有する。
【００２６】
光線性角化症は発症に数年を要するので、一般に、光線性角化症は、４０歳以降に一般的である。しかしながら、より若い成人であっても、強烈な太陽光に年中曝露されている地域（例えば、フロリダ及び南カリフォルニア）に住んでいる場合には、光線性角化症を発症し得る。
【００２７】
ＡＫ処置は、病変指向性対部位指向性、並びに看護者実施及び患者実施処置に分けられ得る。米国では、凍結手術は、最も一般的な看護者実施処置であり、病変指向性治療である。
【００２８】
基底細胞ガン（ＢＣＣ）（皮膚ガン）は、最も一般的なガンである［１］。それは、ほとんど転移又は消滅しない。しかしながら、それは、周囲組織に浸潤することによって、大きな破壊及び変形を引き起こし得るので、それは依然として悪性であると考えられる。
【００２９】
基底細胞ガンは、原根毛としても公知の濾胞−皮脂−アポクリン胚に分化する。太陽への過剰曝露は、チミン二量体（ＤＮＡ損傷の一形態）の形成につながる。ＤＮＡ修復は、ほとんどの紫外線による損傷を除去するが、全ての架橋が切断されるわけではない。したがって、突然変異につながる累積ＤＮＡ損傷がある。突然変異誘発とは別に、太陽光への過剰曝露は局所免疫系を低下させ、おそらくは、新たな腫瘍細胞に対する免疫監視を減少させる。
【００３０】
基底細胞ガンはまた、基底細胞母斑症候群又はゴーリン症候群の結果として発症し、顎、手掌又は足底（足の裏）小窩の角化嚢胞歯原性腫瘍、（脳の中心線における）大脳鎌の石灰化、及び肋骨の異常も特徴とする。症候群の原因は、ヘッジホッグシグナル伝達経路を阻害する、染色体９ｑ２２．３にあるＰＴＣＨ１腫瘍抑制遺伝子の突然変異である。ＳＭＯ遺伝子（これもヘッジホッグ経路にある）の突然変異もまた、基底細胞ガンを引き起こす。
【００３１】
Freedberg, et al. (2003). Fitzpatrick’s Dermatology in General Medicine. (6th ed.)及びJames, William D.; Berger, Timothy G.; et al. (2006). Andrews’ Diseases of the Skin: clinical Dermatology. Saunders Elsevierにしたがって、基底細胞ガンは、以下の種類に分けられ得る。
【００３２】
結節性基底細胞ガン（「古典的な基底細胞ガン」としても公知である）は、基底細胞ガンのサブタイプである皮膚症状であり、頭頸部の太陽曝露部位で生じることが最も多い。
【００３３】
嚢胞性基底細胞ガンは、円蓋状で青灰色の嚢胞性結節を特徴とする皮膚症状である。
【００３４】
瘢痕性基底細胞ガン（「モルフェア型基底細胞ガン」及び「モルフェア性基底細胞ガン」としても公知である）は、基底細胞ガンのサブタイプである皮膚症状であり、区別可能な臨床的及び組織学的外観を有する侵襲性の変異体である。
【００３５】
浸潤性基底細胞ガンは、深い浸潤を特徴とする侵襲型の基底細胞ガンである皮膚症状である。
【００３６】
小結節性基底細胞ガンは、小結節成長パターンを特徴とする皮膚症状である。
【００３７】
表在性基底細胞ガン（「表在性多中心性基底細胞ガン」としても公知である）は、胴体に生じることが最も多く、紅斑パッチとして現れる基底細胞ガンのサブタイプである皮膚症状である。
【００３８】
色素性基底細胞ガンは、メラニン化の増加を示す基底細胞ガンのサブタイプである皮膚症状である。
【００３９】
蚕食性潰瘍（「ヤコビ潰瘍」としても公知である）は、中心壊死を伴う結節性基底細胞ガンの大きな皮膚病変であり、基底細胞ガンの一種である。
【００４０】
ピンカスの線維上皮腫は、背下部に生じることが最も多い基底細胞ガンのサブタイプである皮膚症状である。
【００４１】
ポリープ状基底細胞ガンは、頭頸部における外向性結節（ポリープ様構造）を特徴とする皮膚症状である。
【００４２】
細孔様基底細胞ガンは、拡大した細孔又は星状の小窩に似ている基底細胞ガンを特徴とする皮膚症状である。
【００４３】
異常基底細胞ガンは、明確な発ガン因子の非存在下における基底細胞ガンの形成を特徴とする皮膚症状であり、目立たない部位、例えば陰嚢、外陰部、会陰、乳首及び腋窩で生じる。
【００４４】
炎症は、病原体及び外部ストレス刺激に対する細胞又は組織の防御反応である。炎症の間、損傷部位における細胞又は組織は、ＮＦ−κＢを介して特定の遺伝子の発現を刺激し、続いて、ケモカインの発現が増加し、それにより、多核白血球、単球、マクロファージ及びマスト細胞が損傷部位に蓄積する（すなわち、炎症）。リクルートされたマクロファージは、病原体の表面上で発現しているリポ多糖（ＬＰＳ）によって活性化される。活性化マクロファージは、炎症促進性遺伝子（シクロオキシゲナーゼ−２遺伝子、ＣＯＸ−２及び誘導型一酸化窒素合成酵素遺伝子ｉＮＯＳを誘導）の発現を誘導して、炎症反応を強化する。加えて、活性化マクロファージは、ＲＯＳ及びフリーラジカルを放出して病原体を殺傷する。しかしながら、長期の炎症反応は、ＲＯＳ及びフリーラジカルの過剰蓄積による酸化ストレス及び損傷につながり、それにより、慢性炎症をもたらし、最終的には慢性病又はガンの可能性を高める。
【００４５】
光増感剤
ＰＤＴにおける５−ＡＬＡ（５−アミノ−４−オキソ−ペンタン酸、あるいは５−アミノレブリン酸として公知である）及び５−ＡＬＡの誘導体の使用は、科学文献及び特許文献において周知である（例えば、J. C. Kennedy et al., J. Clin. Laser Med. Surg. (1996) 14: 289-304、米国特許第５，０７９，２６２号、米国特許第５，２１１，９３８号、米国特許第５，２３４，９４０号、米国特許第５，４２２，０９３号、米国特許第６，０３４，２６７号、国際公開公報第９１／０１７２７号、国際公開公報第９６／２８４１２号、国際公開公報第２００５／０９２８３８号及び国際公開公報第２００６／０５１２６９号を参照のこと）。５−ＡＬＡ及び５−ＡＬＡの全てのこのような誘導体並びにそれらの薬学的に許容し得る塩は、本明細書に記載される使用及び方法に適切である。
【００４６】
本発明による有用な５−ＡＬＡ誘導体は、in vivoにおいて、プロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）又は他の任意の光増感剤（例えば、ＰｐＩＸ誘導体）を形成することができる５−ＡＬＡの任意の誘導体であり得る。典型的には、このような誘導体は、ＰｐＩＸ又はＰｐＩＸ誘導体（例えば、ＰｐＩＸエステル）の前駆体であって、したがって、in vivo投与後に、処置すべき部位においてＰｐＩＸの蓄積を誘導することができる前駆体である。ＰｐＩＸ又はＰｐＩＸ誘導体の適切な前駆体は、ＰｐＩＸの生合成において中間体としてin vivoで５−ＡＬＡを形成することができるか、又は中間体として５−ＡＬＡを形成せずにポルフィリンに（例えば、酵素作用によって）変換され得る５−ＡＬＡプロドラッグを含む。５−アミノレブリン酸のエステル及びそのＮ置換誘導体は、本発明で使用するのに好ましい光増感剤である。５−アミノ基が置換されていない化合物（すなわち、ＡＬＡエステル）が特に好ましい。このような化合物は一般に公知であり、文献（例えば、PhotoCure ASAの国際公開公報第９６／２８４１２号、国際公開公報第０２／１０１２０号及び国際公開公報第２００５／０９２８３８号を参照のこと）に記載されている。置換されている又は置換されていないアルカノールを有する５−アミノレブリン酸のエステル（すなわち、アルキルエステル）は、本発明で使用するのに特に好ましい光増感剤である。特に、５−ＭＩＬ及び５−ＭＡＬ誘導体が特に好ましい。有用な誘導体の例としては、一般式Ｉ：
【化１】
2017505292.tif 000002
（式中：
Ｒ１は、置換されている又は置換されていない直鎖状、分岐状又は環状アルキル基（例えば、置換されている又は置換されていない直鎖状アルキル基）を表し、各Ｒ２は独立して、水素原子、又は場合により置換されているアルキル基（例えば、Ｒ１基）を表す）の誘導体及びその薬学的に許容し得る塩が挙げられる。
【００４７】
本明細書で使用される用語「アルキル」は、特に指定がない限り、任意の長鎖状又は短鎖状、環状、直鎖状又は分岐状脂肪族飽和又は不飽和炭化水素基を含む。不飽和アルキル基は、一価不飽和又は多価不飽和であり得、アルケニル基及びアルキニル基の両方を含む。特に指定がない限り、このような基は、最大４０個の原子を含み得る。しかしながら、最大３０個、好ましくは最大１０個、特に好ましくは最大８個、特別に好ましくは最大６個、例えば最大４個の炭素原子、例えば１個、２個、３個又は４個の炭素原子を含むアルキル基が好ましい。
【００４８】
置換されているアルキルＲ１及びＲ２基は、一置換又は多置換され得る。
【００４９】
適切な置換基は、ヒドロキシ、アルコキシ、アシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、アミノ、アリール、ニトロ、オキソ、フルオロ、−ＳＲ３、−ＮＲ３２及び−ＰＲ３２基から選択され得、各アルキル基は、１つ以上の−Ｏ−、−ＮＲ３−、−Ｓ−又は−ＰＲ３−基が場合により割り込んでいてもよく、Ｒ３は、水素原子又はＣ１−６アルキル基である。
【００５０】
好ましい置換されているアルキルＲ１基としては、１個以上のオキソ基を有するもの、好ましくは、１個、２個又は３個（好ましくは、２個又は３個）のオキソ基で置換されている直鎖状Ｃ４−１２アルキル（例えば、Ｃ８−１０アルキル）基が挙げられる。このような基の例としては、３，６−ジオキサ−１−オクチル及び３，６，９−トリオキサ−１−デシル基が挙げられる。
【００５１】
本発明で使用するのに特に好ましいのは、少なくとも１個のＲ２が水素原子を表す式Ｉの化合物である。特別に好ましい化合物では、各Ｒ２は、水素原子を表す。
【００５２】
Ｒ１が、置換されていないアルキル基（好ましくは、Ｃ１−８アルキル、例えばＣ１−６アルキル）又は上記で定義した置換基（例えば、フェニルなどのアリール基又はメトキシなどのアルコキシ基）で置換されているアルキル基（例えば、Ｃ１−２アルキル、特にＣ１アルキル）を表す式Ｉの化合物も好ましい。
【００５３】
本発明で使用され得る置換されていないアルキル基としては、分岐状及び直鎖状炭化水素基の両方が挙げられる。Ｒ１が、１個以上のＣ１−６（例えば、Ｃ１−２アルキル）基で分岐しているＣ４−８、好ましくはＣ５−８直鎖状アルキル基である式Ｉの化合物が好ましい。適切な置換されていない分岐状アルキル基の代表的な例としては、２−メチルペンチル、４−メチルペンチル、１−エチルブチル及び３，３−ジメチル−１−ブチルが挙げられる。４−メチルペンチルが特に好ましい。
【００５４】
Ｒ１がＣ１−１０直鎖状アルキル基である式Ｉの化合物も好ましい。適切な置換されていないアルキル基の代表的な例としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル及びオクチル（例えば、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル及びｎ−オクチル）が挙げられる。ヘキシル、特にｎ−ヘキシルが特に好ましい基である。メチルも特に好ましい。
【００５５】
また本発明で使用するのに好ましいのは、Ｒ１が、アリール基で場合により置換されているＣ１−２アルキル基（好ましくは、Ｃ１アルキル基）を表す式Ｉの化合物である。
【００５６】
本発明で使用するのになおさらに好ましいのは、Ｒ１が、アリール基（例えば、フェニル）で置換されているアルキル基（例えば、Ｃ１−２アルキル、特にＣ１アルキル）を表す式Ｉの化合物である。式Ｉの化合物中に存在し得る好ましい置換されているアルキルＲ１基としては、場合により置換されているアリール基で置換（好ましくは、末端が置換）されているＣ１−６アルキル、好ましくはＣ１−４アルキル、特に好ましくはＣ１又はＣ２アルキル（例えば、Ｃ１アルキル）が挙げられる。
【００５７】
「アリール基」は、芳香族の基を意味する。好ましいアリール基は、最大２０個の炭素原子、より好ましくは最大１２個の炭素原子、例えば１０個又は６個の炭素原子を含む。
【００５８】
本発明の化合物中に存在し得るアリール基は、複素芳香環（例えば、５〜７員複素芳香環）であり得るが、好ましくは、非複素芳香環である。「非複素芳香環」は、炭素原子のみに由来する電子を含む芳香族系を有するアリール基を意味する。好ましいアリール基としては、フェニル及びナフチル、特にフェニルが挙げられる。本発明で使用するのに好ましい化合物では、１個又は２個（好ましくは、１個）のアリール基が存在し得る。
【００５９】
本発明の化合物中に存在し得るアリール基は、１個以上（例えば、１個〜５個）、より好ましくは１個又は２個の基（例えば、１個の基）で場合により置換されていてもよい。好ましくは、アリール基は、メタ又はパラ位、最も好ましくはパラ位で置換されている。適切な置換基としては、ハロアルキル（例えば、トリフルオロメチル）、アルコキシ（すなわち、Ｒが好ましくはＣ１−６アルキル基である−ＯＲ基）、ハロ（例えば、ヨード、ブロモ、より具体的にはクロロ及びフルオロ）、ニトロ及びＣ１−６アルキル（好ましくは、Ｃ１−４アルキル）が挙げられ得る。好ましいＣ１−６アルキル基としては、メチル、イソプロピル及びｔ−ブチル、特にメチルが挙げられる。特に好ましい置換基としては、クロロ及びニトロが挙げられる。さらにより好ましくは、アリール基は置換されていない。
【００６０】
さらに好ましい態様では、本発明は、式Ｉ（式中、Ｒ１は、アリール置換Ｃ１−４アルキル基（好ましくは、Ｃ１−２、例えばＣ１）を表し、好ましくは、前記アリール基は、最大２０個の炭素原子（例えば、最大１２個の炭素原子、特に６個の炭素原子）を含み、それ自体が場合により置換されており、各Ｒ２は、前記のとおりである）の化合物である光増感剤の使用を提供する。
【００６１】
本発明で使用するのに好ましい化合物としては、メチルＡＬＡエステル、エチルＡＬＡエステル、プロピルＡＬＡエステル、ブチルＡＬＡエステル、ペンチルＡＬＡエステル、ヘキシルＡＬＡエステル、オクチルＡＬＡエステル、２−メトキシエチルＡＬＡエステル、２−メチルペンチルＡＬＡエステル、４−メチルペンチルＡＬＡエステル、１−エチルブチルＡＬＡエステル、３，３−ジメチル−１−ブチルＡＬＡエステル、ベンジルＡＬＡエステル、４−イソプロピルベンジルＡＬＡエステル、４−メチルベンジルＡＬＡエステル、２−メチルベンジルＡＬＡエステル、３−メチルベンジルＡＬＡエステル、４−［ｔ−ブチル］ベンジルＡＬＡエステル、４−［トリフルオロメチル］ベンジルＡＬＡエステル、４−メトキシベンジルＡＬＡエステル、３，４−［ジクロロ］ベンジルＡＬＡエステル、４−クロロベンジルＡＬＡエステル、４−フルオロベンジルＡＬＡエステル、２−フルオロベンジルＡＬＡエステル、３−フルオロベンジルＡＬＡエステル、２，３，４，５，６−ペンタフルオロベンジルＡＬＡエステル、３−ニトロベンジルＡＬＡエステル、４−ニトロベンジルＡＬＡエステル、２−フェニルエチルＡＬＡエステル、４−フェニルブチルＡＬＡエステル、３−ピリジニル−メチルＡＬＡエステル、４−ジフェニル−メチルＡＬＡエステル及びベンジル−５−［（１−アセチルオキシエトキシ）−カルボニル］アミノレブリナートが挙げられる。
【００６２】
本発明で使用するのになおさらに好ましい化合物としては、メチルＡＬＡエステル、エチルＡＬＡエステル、２−メトキシエチルＡＬＡエステル、ベンジルＡＬＡエステル、４−イソプロピルベンジルＡＬＡエステル、４−メチルベンジルＡＬＡエステル、２−メチルベンジルＡＬＡエステル、３−メチルベンジルＡＬＡエステル、４［ｔ−ブチル］ベンジルＡＬＡエステル、４−［トリフルオロメチル］ベンジルＡＬＡエステル、４−メトキシベンジルＡＬＡエステル、３，４［ジクロロ］ベンジルＡＬＡエステル、４−クロロベンジルＡＬＡエステル、４−フルオロベンジルＡＬＡエステル、２−フルオロベンジルＡＬＡエステル、３−フルオロベンジルＡＬＡエステル、４−ニトロベンジルＡＬＡエステル、２−フェニルエチルＡＬＡエステル、４−フェニルブチルＡＬＡエステル、３−ピリジニル−メチルＡＬＡエステル、４−ジフェニル−メチルＡＬＡエステル及びベンジル−５−［（１−アセチルオキシエトキシ）−カルボニル］アミノレブリナートが挙げられる。
【００６３】
本発明で使用するのに特に好ましい化合物としては、メチルＡＬＡエステル、ヘキシルＡＬＡエステル及びベンジルＡＬＡエステル、特にメチルＡＬＡエステルが挙げられる。
【００６４】
本発明で使用するための化合物は、当技術分野で利用可能な（例えば、PhotoCure ASAの国際公開公報第０２／１０１２０号に記載されている）任意の従来の手順によって調製され得る。例えば、５−ＡＬＡのエステルは、酸の存在下で、５−ＡＬＡを適切なアルコールと反応させることによって調製され得る。あるいは、本発明で使用するための化合物は、（例えば、Photocure ASA, Norwayから）商業的に入手可能なものであり得る。
【００６５】
光活性化
本発明によれば、光活性化は、人工光源又は自然光源のいずれかによって達成される。好ましい実施態様では、光増感剤の光活性化は、ＬＥＤ又は太陽光によって達成される。
【００６６】
光源−人工
エレクトロルミネッセンス（ＥＬ）は、電流の通過又は強力な電場に応じて、材料が光を放出する光学的及び電気的な現象である。これは、熱から生じる黒体発光（白熱）、化学反応（化学ルミネセンス）、音（音ルミネセンス）、又は他の機械的作用（機械ルミネセンス）とは区別される。
【００６７】
エレクトロルミネッセンス源の中でも、ＬＥＤ（発光ダイオード）ランプは周知であり、本発明における人工光源として好ましい。ＬＥＤランプ（ＬＥＤ電球）は、光源として発光ダイオード（ＬＥＤ）を使用するソリッドステートランプである。関連のＬＥＤは、従来の半導体発光ダイオード、有機ＬＥＤ（ＯＬＥＤ）又は高分子発光ダイオード（ＰＬＥＤ）デバイスであり得る。
【００６８】
本明細書以下の実施例で使用したＬＥＤランプは、波長（nm単位）、ＬＥＤの電力（mW/cm2単位）、ＬＥＤのエネルギー（J/cm2単位）のようないくつかの特性によって定義される。このような特定の特徴を以下に示す。
【００６９】
光源−自然
本発明のこの態様は、自然太陽光、又は人工太陽光（すなわち、ＵＶからＩＲまでの全範囲）を提供する任意の光源のいずれかによる光活性化を含む。光源としての自然太陽光の使用は、処置する動物が、処置が通常行われる臨床環境から自由に離れてもよいという利点を有する。
【００７０】
光源−強度
本発明の使用及び方法では、光活性化は、当技術分野で公知の光源を使用して達成され得る。例えば、ランプ又はレーザーによって異なる身体部位を照射するための方法は、当技術分野で周知である（例えば、Van den Bergh, Chemistry in Britain, May 1986 p. 430-439を参照のこと）。照射に使用される光の波長は、より有効な増感効果を達成するように選択され得る。最も有効な光は、３００〜８００nmの範囲、典型的には４００〜７００nmの範囲内の波長の光である。照射は、一般に、３０〜２００ジュール/cm2、例えば１００ジュール/cm2の線量レベルで適用されるであろう。１〜１００mW/cm2のフルエンス率を有する光源を使用し得る。
【００７１】
本発明の特に好ましい使用及び方法では、ＰＤＴの副作用は、５０mW/cm2未満のフルエンス率を有する光源で光活性化することによってさらに予防又は軽減される。
【００７２】
さらにより好ましくは、照射は、１０〜１００J/cm2、より好ましくは２０〜６０J/cm2、例えば約３７ジュール/cm2の線量で適用される。組織への光の浸透は、使用される波長に依存し、青色光の場合よりも赤色光の場合により深い。
【００７３】
好ましくは、人工光による照射は、光量及びフルエンス率に応じて、１〜３０分間、好ましくは１〜１５分間、より好ましくは５〜１０分間、好ましくは５分間にわたって実施される。単一照射を使用し得るか、又はあるいは光量を数回分割して（例えば、照射間に１〜１０分間）送達する光分割投与を使用し得る。
【００７４】
自然光による光活性化は、好ましくは、３０分間〜３時間の期間にわたって行われる。
【００７５】
本発明による皮膚の処置
本発明の方法及び使用は、皮膚の前処置を含み得る。例えば、前処置は、光増感剤の適用前に、キューレット、（例えば、サンドペーパーによる）ダーマブレーション、又はマイクロパーフォレーションを含み得る。特定の実施態様では、前処置は、適合デバイス、例えばマイクロニードルデバイス、例えばダーマローラーを使用した皮膚のパーフォレーションを含む。
【００７６】
本発明の方法及び使用はまた、閉塞ありで又は閉塞なしで、より好ましくは閉塞ありで行われ得る。
【００７７】
光増感剤は、パルス療法として上記期間、例えば約３０分間の期間にわたって適用される。本明細書では、本発明者らは、このようなパルス療法が、長期の曝露を伴う治療と同様に効果的であるが、産生されるＰＰＩＸが少ないので、ＰＰＩＸに関連する副作用を防ぐという利点を有することを示す。
【００７８】
光活性化は、光増感剤の適用後に、好ましくは、皮膚から光増感剤を除去した後に実施される。
【００７９】
特定の実施態様では、処置は、
（ａ）場合により、適切な前処置、例えばキューレット、又はマイクロパーフォレーション、特に適合デバイスマイクロニードリングデバイス、例えばダーマローラーによるパーフォレーションによって、処置すべき皮膚領域を準備すること；
（ｂ）前記光増感剤を含む組成物を前記動物に短期間にわたって投与すること；
（ｃ）場合により、光増感剤を除去すること；及び（an）
（ｃ）前記光増感剤を光活性化すること
を含む。
【００８０】
本発明の一実施態様では、動物に対するパルス光力学的療法（ＰＤＴ）は、
ａ）前記光増感剤を含む組成物を前記動物に５分間〜１２０分間の期間にわたって投与すること；
ｂ）場合により、光増感剤を除去すること；及び
ｃ）人工光によって１〜１５分間、又は自然光によって０．５時間〜３時間の期間にわたって、前記光増感剤を光活性化すること
を含む。
【００８１】
本発明のより好ましい実施態様では、動物に対する光力学的療法（ＰＤＴ）における光増感剤の使用は、
ａ）前記光増感剤を含む組成物を前記動物に１５分間〜６０分間の期間にわたって投与すること；
ｂ）場合により、光増感剤を除去すること；及び
ｃ）人工光によって５〜１０分間、又は自然光によって０．５時間〜２時間の期間にわたって、前記光増感剤を光活性化すること
を含む。
【００８２】
本発明のより好ましい実施態様では、動物に対する光力学的療法（ＰＤＴ）に使用するための光増感剤は、
ａ）前記光増感剤を含む組成物を前記動物に３０分間の期間にわたって投与すること；及び
ｂ）場合により、光増感剤を除去すること；及び
ｃ）２．５時間後に、人工光によって９分間の期間、又は自然光によって少なくとも２時間の期間にわたって、前記光増感剤を光活性化すること
を含む。
【００８３】
上記特定の又は好ましい実施態様のいずれかは、光増感剤を皮膚に適用する工程の前に、上記のように皮膚を前処理する工程を含み得る。
【００８４】
さらに、特定の実施態様では、本発明のＰＤＴはまた、グルココルチコステロイドを被験体の皮膚に適用することを含む。この実施態様によれば、グルココルチコステロイドは、ＰＤＴに関連する副作用をさらに予防又は軽減するために投与される。グルココルチコステロイドは、光増感剤の投与と同時に、光増感剤の投与前に、光増感剤の投与前後、又は光増感剤の投与前及び投与後の両方に適用され得る。特定の実施態様では、グルココルチコステロイドは、プロピオン酸クロベタゾール、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プロピオン酸ハロベタゾール、二酢酸ジフロラゾン、吉草酸ジフルコルトロン、１７−ブチル酸ヒドロコルチゾン、フロ酸モメタゾン、アセポン酸メチルプレドニゾロン及びハロメタゾンからなる群より選択される。さらなる特定の実施態様では、グルココルチコステロイドは、プロピオン酸クロベタゾール又はベタメタゾンである。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１】図１は、顔における炎症とＡＫ反応率（３カ月間）との対比を示すグラフである。
【図２】図２は、ＰＤＴの翌日における赤みの平均増加を示すグラフである。
【図３】図３は、異なる処置プロトコールによるＰＤＴの翌日の目視による赤みを報告するグラフである。
【図４】図４は、異なる処置後の疼痛スケールを示すグラフである。
【図５】図５は、異なる処置後の治癒率を示すグラフである。
【図６】図６は、異なるプロトコールによる処置の翌日の紅斑の割合の増加を示すグラフである。
【図７】図７は、異なるプロトコールによる処置後の紅斑のスケールを示すグラフである。
【図８】図８は、標準的な処置及び異なる「パルス」処置における平均光退色を示すグラフである。
【図９】図９は、炎症（紅斑）／ＰｐＩＸ形成の関係を示すグラフである。
【実施例】
【００８６】
実施例１−ＰＤＴにおける炎症を最小限にするためのＰＤＴ手順の変更
前記理論によれば、ＰＰＩＸ及び細胞酵素を細胞外区画から遠ざけて炎症を防ぐことが好ましいであろう。したがって、このプロジェクトの目的は、ミトコンドリア内のＰＰＩＸ形成を維持し、過剰量のＰＰＩＸの形成を防ぐことである。同時に、ほとんどの異常細胞が影響を受けるような長時間にわたって、ＰＰＩＸが形成されるはずである。
【００８７】
したがって、ＰＤＴの目的は、好ましくはアポトーシスによって、異常細胞を殺傷することである。理想的な状況は、ＰＰＩＸを細胞内に維持し、ミトコンドリアのみを破壊して、細胞機能に必要なＡＴＰ形成を阻害することであろう。それは、アポトーシスによる細胞死をもたらすはずである。
【００８８】
これを達成するための１つの可能な方法は、最初に、短時間にわたる５−ＭＡＬパルス処置を行って細胞内の５−ＭＡＬを高濃度にし、次いで、皮膚表面から５−ＭＡＬを除去することによって、５−ＭＡＬへのさらなるアクセスを減らすことである。
【００８９】
皮膚を５−ＭＡＬに曝露することのみによって、これを行うことができ、その後、皮膚表面から全ての５−ＭＡＬが除去される、正しい「パルス時間」を見出し得る場合、それは、高い細胞ＰＰＩＸ及び低い細胞外ＰＰＩＸを保証し得る。したがって、処置中及び処置終了後における過剰量のＰＰＩＸ形成が回避される。
【００９０】
この結果は、炎症が少なく、有効性が不変であることを示しており、したがって、ミトコンドリアの破壊は、ＰＤＴにおける最も重要な因子であると思われる。
【００９１】
好ましいＭｅｔｖｉｘ「パルス時間」を推定するために、健常志願者２４人において、別の調査を実施した（方法Ｂ）。パルス時間は、２０分間、４０分間、６０分間及び従来の１８０分間であり、この後、皮膚から過剰量のＭｅｔｖｉｘを除去した。３時間後のＰＰＩＸ形成は図８に見られ、炎症との関係は図９に見られる。ＰＰＩＸ濃度は、「パルス曝露」の２０〜４０分間に上昇することがわかるので、本発明者らは、この方法変更によって、有効性及び炎症に関する以下の（方法Ａの）調査において、最小「パルス曝露」時間として３０分間を選択した。結果は、図４、５、６及び７のカラム３に示されている。手順の変更は、治癒率に影響を与えずに、炎症（紅斑）を明らかに軽減する（図５）。疼痛レベルは変化しない。ＰＰＩＸ濃度は、Ｍｅｔｖｉｘへの従来の３時間曝露よりも明らかに低い（表１及び図８）。
【００９２】
方法
健常志願者
スカンジナビア人系統の健常志願者の男性２４人を研究に含めた（平均年齢３０歳、２０〜５１歳の範囲）。志願者の両方の前腕の内側において、処置部位を選択した。既製の柔軟なテンプレートを使用して、各処置部位を２×５cmサイズの４つの小さな処置部位（各部位間は少なくとも３cm）に分割した。皮膚病変を模倣するために、処置前に、閉鎖包帯によって、全ての部位を１０回テープストリッピングした（Tegaderm（商標）Roll, 3M, Glostrup, Denmark）。
【００９３】
左前腕において、ビヒクル軟膏Ｍを処置部位に適用した。
【００９４】
右前腕において、過剰量の５−ＭＡＬ  １６％（Metvix（登録商標）Photocure, Oslo, Norway）を４つの処置部位全てに適用した。遮光性閉鎖包帯によって、全ての部位を覆った。２０分後、第１の部位から包帯を除去し、過剰のクリームを軽く拭き取った。薄いガーゼ片及び遮光性包帯によって、この部位を再び覆った。さらに２０分後及び４０分後、同じ手順を第２及び第３の部位に行った。適用の１８０分後、５つの部位全てから５−ＭＡＬ及びビヒクルを除去し、最後の部位から過剰のクリームを軽く拭き取った。赤色光を全ての部位に照射した。９分間かけて３７J/cm2の全光線量を使用して、赤色ＬＥＤ光６３０nmピーク（Aktilite（商標）128; Photocure ASA, Oslo Norway）によって、照射を実施した。照射中及び照射後に、痛みを記録した。処置後の日々における痛みを記録するための特別な日記を志願者に配布した。処置後１日目、２日目、３日目及び８日目に、４回の経過観察来院を実施した。
【００９５】
ＰｐＩＸ蛍光
蛍光カメラ（Medeikonos AB, Gothenburg, Sweden）を使用して、５−ＭＡＬ誘導性ＰｐＩＸ蛍光を非侵襲的に示した。プログラムMatLab（登録商標）（MatLab（登録商標）, MathWorks, Natic, US）によって、写真からＰｐＩＸ蛍光の量を計算した。テープストリッピング及びクリーム適用（ベースライン）前に、並びに照射前後に、蛍光の量を測定した。
【００９６】
よって、光退色は、照射前後の写真から計算したＰｐＩＸ蛍光（ＡＵ）の差である。
【００９７】
紅斑及び色素沈着
炎症の指標として、紅斑を測定した。専門の評価者が紅斑を評価し、客観的に測定した。皮膚反射率計（Optimize Scientific 558, Chromo-Light, Espergaerde, Denmark）を使用して、紅斑及び色素沈着の客観的測定を実施した。処置前、照射直前、照射直後、及び４回の経過観察来院時に、紅斑％及び色素沈着％を測定した。
【００９８】
疼痛スコア
志願者は、照射中には１分ごとに痛みをスコア化し、処置日の照射後には毎日１時間ごとに痛みを記録し、その後３日間は１日２回記録し、その後５日間は１日１回記録した。これらの日の異なる時点でＰＤＴを実施したので、評価の回数は、初日と３〜１１回異なっていた。０〜１０の数値スケール（０は痛みなしであり、１０は考えられる最悪の痛みである）を使用して、痛みを評価した。患者が異なる処置部位を容易に識別することができるようにするために、番号付けした前記部位の図を日記に加えた。
【００９９】
無作為化
無作為化非盲検試験として研究を設計した。統計アドバイザーが無作為化を行った。処置期間のシークエンスは事前に定義されていたので、無作為化は、４つの処置部位のうちのどれが第１の部位であるかを決定したにすぎなかった。
【０１００】
統計
文献のデータに基づいて、サンプルサイズを計算した。本発明者らは、最小臨床関連差を８．８％（以前に見出された１７．６％の５０％）に設定し、検出力０．８０及び有意水準０．０５を選択し、志願者２２人が含まれるものとする。
【０１０１】
全ての結果をペアしたので、処置部位間の疼痛スコア、紅斑％及び色素沈着％の差を確認するために、本発明者らは、ウィルコクソンの符号付き検定を使用した。全ての計算について、０．０５未満のｐ値を統計的有意とみなした。Windows用のPASW Statistics 19.0 (SPSS Inc, Chicago, Illinois, USA)を用いて、全ての分析を実施した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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2017505292.tif 000013
2017505292.tif 000014
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