(57)【要約】  本発明は、少なくとも１種のフィコシアノビリンと少なくとも１種のポリフェノールの複合体である安定化されたフィコシアニンをベースとする、食品、飼料、化粧品及び医薬品及び製剤の製造に有用な青色着色用組成物並びにこの複合体の形成方法に関する。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶液中に少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物と少なくとも１種のポリフェノールを混合することによって得ることができる、少なくとも１種のフィコシアノビリン及び少なくとも１種のポリフェノールの複合体。
【請求項２】
水中で安定であり、複合体を解離しない、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
ｐＨ１〜８で安定である、請求項１に記載の複合体。
【請求項４】
５５０〜６７０ｎｍの範囲内の波長で純粋なフィコシアニンと比較して光の増大した吸収を示す、請求項１に記載の複合体。
【請求項５】
少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物がフィコシアニンを開裂することによって得ることができる、請求項１に記載の複合体。
【請求項６】
ポリフェノールが、少なくとも２個のフェノール環を含み、その各々が少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されている化合物の群から選択され、及び／又は、ポリフェノールが少なくとも１個のカルボン酸エステル基及び／又はカルボン酸基、場合によりＣ５又はＣ６の炭素鎖を有するシクロアルキル又はヘテロ−シクロアルキル、好ましくは１個のグルコース基を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項７】
フィコシアニンより高い等電点を有するタンパク質、及び／又はポリマーを含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項８】
水溶液中に少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物とポリフェノールを混合するステップを含む、複合体の形成方法。
【請求項９】
少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物が、化学的及び／又は酵素的分解によりフィコシアニンを開裂することによって得られる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
フィコシアニンが、ンパク質分解により開裂される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
フィコシアニンが、少なくとも１種の強酸及び場合により熱の作用により開裂される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
フィコシアニン−フラグメントの溶液を噴霧乾燥し、水に再溶解する、請求項８〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
フィコシアニンより高い等電点を有するタンパク質を添加するステップを含む、請求項８〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
食品、飼料、化粧品及び医薬製剤における、請求項１〜７のいずれかに記載の複合体の、又は請求項８〜１３のいずれかに記載の方法に従う、使用。
【請求項１５】
着色剤としての、請求項１〜７のいずれかに記載の複合体の、又は請求項８〜１３のいずれかに記載の方法に従う、使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、少なくとも１種のフィコシアノビリンと少なくとも１種のポリフェノールの複合体である安定化されたフィコシアニンをベースとする食品、飼料、化粧品及び医薬品及び製剤の製造に有用な青色着色用組成物、並びにこの複合体の生成のための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
フィコシアニンは、６２０ｎｍ付近の橙色及び赤色の光を吸収する特徴的な淡青色の色を有する色素タンパク質複合体である。フィコシアニンは、以前はラン藻類といわれたシアノバクテリア(Cyanobacteria)に見出される。色素フィコシアニンの発色団はフィコシアノビリンである。この発色団は、チオエーテル結合によってタンパク質に共有結合するテトラピロールである。チオエーテル結合に加えて、発色団は水素結合によりタンパク質と相互作用し、その結果発色団の有利な構造が得られる。これにより、強い青色の色が生じる。フィコシアノビリンはまた、アロフィコシアニン、フィコエリスリン、その他の色素タンパク質でも見ることができる。
【０００３】
フィコシアニンは一般にスピルリナ藻類から単離され、多くのダイエット及び治療的属性を示す。従って、スピルリナ及びスピルリナ抽出物は長い間食品又は栄養成分として使用されて来ている。かかる成分を製造する１つの方法はWO 03/080811 A1に開示されており、７０〜１００℃に加熱することによって色素タンパク質を変性させることにより、濃い青色に基づく不快な外観を除く。このように、フィコシアニンは、そのポリペプチドサブユニットの故に環境の温度及びｐＨ変化に対して非常に感受性が高い(Seo et al., Int.J. Mol. Sci. 2013, 14, 1778 - 1787)。タンパク質−発色団相互作用の変化により、色が失われる。
【０００４】
また、スピルリナ抽出物又はフィコシアニンを食品、殊に飲料に使用することも既に公知である（例えば、CN 103 054 117 A）。それでもまだ、ＦＤＡ又はEuropean Communityで要求される高い安全基準を満たす食品、飼料、化粧品又は医薬製剤用の非毒性で無害の青色着色剤が必要とされている。加えて、その青色は、例えば滅菌プロセスで使用されるような約６０〜１３０℃の高温でも酸性の低ｐＨでも長期間にわたり安定である必要がある。さらに、発色団は、やはり色を低減する酸化に対して安定化される必要がある。
【０００５】
色、例えば着色剤（着色用化合物）は、殊に室温の強い光条件下で安定でなければならない。加えて、殊に飲料中の着色剤組成物の沈殿は、濁り及び沈降を増大させることになるので避けなければならない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】WO 03/080811 A1
【特許文献２】CN 103 054 117 A
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Seo et al., Int.J. Mol. Sci. 2013, 14, 1778 - 1787
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
従って、正確な色のために特定のタンパク質構造に依拠する着色用化合物の安定化は極めて困難である。
【０００９】
さらに、その色が発色団と他の化合物との相互作用に基づく着色用化合物、殊に発色団と別の化合物との複合体は、食品、飼料、化粧品及び医薬品のような最終の調製物で色の喪失を招くことになる他の分子との反応又は相互作用に関して不活性である必要がある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
従って、水溶液中で少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物と少なくとも１種のポリフェノールを混合することによって得ることができ、すべての要件を満たす少なくとも１種のフィコシアノビリンと少なくとも１種のポリフェノールとの複合体が見出された。１つの実施形態において、少なくとも１種のフィコシアノビリンと少なくとも１種のポリフェノールとの複合体は、ポリフェノールを、水溶液中で少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物と混合することによって得られる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例で行った評価結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の１つの実施形態において、少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物は少なくとも１つのフィコシアノビリンと少なくとも１つのアミノ酸からなるフィコシアニン−フラグメントを含む。アミノ酸は水素結合及び／又はチオエーテル結合によって発色団と相互作用することができる。化合物は水素結合によってフィコシアノビリンと相互作用するさらなるアミノ酸を含んでいてもよい。
【００１３】
１つの代案において、この複合体は安定な複合体である。「安定」とは、複合体が高い熱力学及び／又は動的安定性のため低い、好ましくは極めて低い解離定数を有していて、化学平衡が複合体の側にシフトしていることを意味している。従って、複合体は水に可溶性であることができるが解離しない。
【００１４】
１つの実施形態において、複合体はｐＨ１〜８、好ましくは１．５〜７、ｐＨ２〜５、より好ましくは２．５〜４、ｐＨ３〜４、殊にｐＨ３．５で安定である。
【００１５】
「安定」とは、その複合体が、５５０〜６７０ｎｍ、好ましくは５６０〜６４０ｎｍ、より好ましくは５８０〜６２０ｎｍ、殊に６００〜６１０ｎｍの範囲内の波長の光の最大の吸収を有する青色、好ましくは混じりけのない青色又は青紫色を維持することを意味する。
【００１６】
１つの代案においては、上記範囲のいずれかの中に２つのピークがあることが可能である。
【００１７】
さらなる実施形態において、本発明の複合体は、５５０〜６７０ｎｍ、好ましくは５６０〜６４０ｎｍ、より好ましくは５８０〜６２０ｎｍ、殊に５９０〜６１０ｎｍの範囲内の波長の光の吸収増大を示す。上記範囲内の波長を有する光の吸収増大は、５％〜２００％であるか、又はフィコシアニンの吸光度より、好ましくは５％〜９５％、１０％〜９０％、２０％〜９０％、２５％〜９０％、より好ましくは２５％〜８０％多い。
【００１８】
フィコシアニン対ポリフェノールの比は１：１０〜１０：１、好ましくは１：２〜５：１、より好ましくは１：１〜２：１、殊に１：１である。
【００１９】
１つの実施形態において、少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物はフィコシアニンを開裂することによって得ることができるか又は得られる。
【００２０】
フィコシアニンのスピルリナ藻類からの単離は当業界で周知であり、例えばSeo et al. (Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 1778-1787)、Muthulakshni et al. (J. Alga Biomus Utln. 2012, 3, 7-11)、Hemlata et al. (J.Alga Biomus Utln. 2011, 2, (1), 30 - 51)又はGantar et al. (J. Biotechnol. 2012, 159 (1-2), 21-26)により開示されている方法に従って実行することができる。また、例えばＤＩＣから市販されているリナブルー(Linablue)Ｇ１といわれる粉末のような市販のフィコシアニンも使用することができる。
【００２１】
１つの実施形態において、本発明のポリフェノールは、各々の環が少なくとも２つのヒドロキシ基で、好ましくは３つのヒドロキシ基で置換されている少なくとも２つのフェノール環を含む化合物の群から選択され、及び／又は、ポリフェノールは少なくとも１つのカルボン酸エステル基及び／又はカルボン酸基を含む。
【００２２】
本発明によると、用語「カルボン酸基」はカルボキシレート基も含む。
【００２３】
１つの代案において、本発明のポリフェノールは没食子酸のエステル又はポリマーを含む。ポリフェノール化合物は、少なくとも２つのヒドロキシ基を有するフェノール環に加えて、カルボキシレート基を有する線状の飽和又は不飽和アルキル、好ましくはＣ２又はＣ３アルキルを含むことができる。ポリフェノールにおいて、このカルボキシレート基はエステル結合形成のために使用されるか、又は遊離のカルボン酸若しくはカルボキシレート基である。ポリフェノールはまたＣ５又はＣ６の炭素鎖を有するシクロアルキル又はヘテロ−シクロアルキルも含むことができる。好ましくは、グルコース又はその他の糖が使用される。１つの実施形態において、本発明のポリフェノールは、ロスマリン酸、タンニン酸、二没食子酸、縮合タンニン（フラバンの縮合生成物）、クゥエルシタンニン酸(quercitannic acid)、ガロタンニン酸、クゥエルセチン(quercitin)、エラジタンニン、カスタラギン、カスタリン、カスアリクチン(casuariticin)、グランジニン、プニカリギン(punicaligin)、プニカリン、ロブリン(roburin)Ａ、テリマグランジンＩＩ、テアフラビン(terflavin)Ｂ、ベスカラギン(vescaligin)、ペンズンクラギン(pendunculagin)、カスアリン(casuariin)、カストリン(castlin)、ベスカリン、好ましくはロスマリン酸、タンニン酸、二没食子酸、縮合タンニン、クゥエルシタンニン酸、ガロタンニン酸、エラジタンニンの群から選択され、より好ましくはタンニン酸(CAS 1401-55-4)である。
【００２４】
本発明のさらなる対象は、ポリフェノールを、フィコシアニンより高い等電点を有するタンパク質を含む水溶液中に少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物と混合することによって得ることができる、少なくとも１種のフィコシアノビリンと少なくとも１種のポリフェノールの複合体である。
【００２５】
より高い等電点を有するタンパク質は水溶液、好ましくはｐＨ１〜７、好ましくは１．５〜７、ｐＨ２〜５、より好ましくは２．５〜４、ｐＨ３〜４、殊にｐＨ３．５の酸性水溶液、より好ましくは飲料に高度に可溶性である。１つの代案において、より高い等電点を有するタンパク質は動物性タンパク質、植物性タンパク質、微生物由来のタンパク質から選択され、好ましくは乳清タンパク質単離物、ダイズタンパク質、ポリリシンからなる群から選択される。さらなる代案において、タンパク質は４〜９の等電点を有する。本発明の１つの代案においては、水溶性ポリマーがより高い等電点を有するタンパク質の代わりに使用される。
【００２６】
本発明のさらなる目的は、水溶液中に少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物とポリフェノールを混合するステップを含む複合体の生成方法である。１つの実施形態において、少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物は、化学的及び／又は酵素的開裂によりフィコシアニンを開裂することによって得られる。
【００２７】
１つの代案においてフィコシアニンはタンパク質分解によって開裂される。
【００２８】
タンパク質分解は、少なくとも１種の強酸及び場合により熱の作用によって実施することができる。
【００２９】
ｐＫａが−１以下の強酸は、例えばＨＣｌ、ギ酸、Ｈ２ＳＯ４、ＨＮＯ３又はこれらの混合物、好ましくはＨＣＬであることができる。場合により、強酸とフィコシアニンの混合物は２０〜１００℃の温度に加熱される。場合により、酸はイオン交換樹脂の形態であることができる。
【００３０】
１つの実施形態においてはフィコシアニン粉末を濃縮された強酸、好ましくはＨＣＬに加え、撹拌する。
【００３１】
フィコシアニンの開裂によりフィコシアニン−フラグメントが生じる。これらのフラグメントの幾つかはフィコシアノビリンを含む。
【００３２】
水で希釈することにより開裂反応を停止させる。また、このステップで、フィコシアニンフラグメントが沈殿する。
【００３３】
１つの代案においては沈殿をより良好にするためにポリフェノールを添加する。
【００３４】
溶液をろ過して強酸を除くと、フィコシアニン−フラグメントのフィルターケーキが得られる。次いで、フィルターケーキを純粋な水に再度溶解し、すべてのフィコシアニン−フラグメントが溶解するまで撹拌又は混合する。この溶液を噴霧乾燥すると、良好な水溶性を有する微細な粉末が得られる。
【００３５】
本発明の複合体は、水溶液中で少なくとも１種のフィコシアノビリンを含む組成物とポリフェノールを混合することによって形成される。
【００３６】
さらなる実施形態においては追加のタンパク質が本発明の複合体に加えられる。ここで、この追加のタンパク質はフィコシアニンより高い等電点を有する。
【００３７】
また、本発明の主題は、少なくとも１種のフィコシアノビリン及び少なくとも１種のポリフェノール及び追加のタンパク質（好ましくはより高い等電点を有する）、又はポリマーの複合体でもある。本発明のこの第２の複合体は、フィコシアニンの等電点に極めて近いｐＨ（好ましくはｐＨ３〜４）を有する溶液中で安定である。より高い等電点を有するタンパク質は動物性タンパク質、植物性タンパク質から選択され、好ましくは乳清タンパク質単離物、ダイズタンパク質、ポリリシンからなる群から選択される。
【００３８】
本発明の複合体並びに本発明の第２の複合体は着色剤として使用することができる。
【００３９】
本発明のさらなる対象は食品、飼料、化粧品又は医薬製剤における本発明の複合体並びに第２の複合体の使用である。本発明の対象はまた、上記方法のいずれかに従って生成されたあらゆる生成物である。
【００４０】
また、本発明のさらなる対象は、上記複合体の着色剤としての使用でもある。
【００４１】
本発明の追加の主題は、本発明の製品、すなわち本発明の複合体又は本発明の第２の複合体を、好ましくは着色剤として含む食品、飼料、化粧品及び医薬製剤である。
【００４２】
１つの実施形態において、食品は、飲料、清涼飲料のような飲料、フレーバーウォーター、フルーツジュース、これらの飲料のパンチ又は濃縮物、またアルコール性飲料及びインスタント飲料粉末、アイスクリーム、ケーキ、ドロップ、チーズ、ミルク飲料又はヨーグルトのような乳製品、豆乳など、砂糖菓子製品、ガム、デザート、キャンディー、プディング、ゼリー、インスタントプディング粉末、さらにまたスナック、クッキー、ソース、シリアル、サラダドレッシング、スープを含む群から選択される。
【００４３】
１つの実施形態において、化粧品用調製物はクリーム、練り歯磨き、メーキャップ、皮膚製品から選択される。
【００４４】
１つの実施形態において、医薬製剤は軟膏、丸薬、錠剤、カプセルから選択される。
【００４５】
本発明の根底にある目的が本発明の複合体、方法又はその他の主題により解決することができるということは驚くべきことであり、当業者は予期することができなかった。本発明の複合体が、滅菌中、殊に９０℃で１５分の間、さらに６ヶ月までの間商品棚に飲料を貯蔵する間に見られるような強い光の曝露の下で貯蔵中、水溶液中で安定であるということは特に驚くべきことであった。
【００４６】
本発明の複合体が、低いｐＨ、好ましくは１〜８、好ましくは１．５〜７、ｐＨ２〜５、より好ましくは２．５〜４、ｐＨ３〜４、殊にｐＨ３．５で安定であることはさらに驚くべきことであった。
【００４７】
さらに、本発明の複合体、殊に本発明の第２の複合体は水性組成物、殊に飲料中で沈殿も濁りの増大も示さない。
【００４８】
着色剤として、好ましくは食品中、殊に飲料中で、本発明の複合体、及び本発明の第２の複合体はそれぞれ１〜５０００ｐｐｍ、好ましくは１０〜７００ｐｐｍ、より好ましくは１０〜５００ｐｐｍ、殊に５０〜４００ｐｐｍの量で使用される。
【００４９】
本発明の飲料はさらに    を含むことができる。
【００５０】
１つの実施形態において飲料は澄んでいるか、又は濁っていてＮＴＵが１〜５００である。
【００５１】
１つの実施形態において、製品の色は、カロテノイド又は他のいずれかの黄色食用染料を添加することによって青色から緑色に変えることができる。従って、本発明の製品はカロテノイドを含み、場合によりＭＣＴ油（中鎖トリアシルグリセロール）、オリーブ油、トウモロコシ油、ヒマワリ油、ピーナッツ油、ダイズ油又はその他の植物油のようなトリアシルグリセロール油、好ましくはＭＣＴ油中で融解するか、及び／又は溶解するか、及び／又はトランスからシスへ異性化する。
【００５２】
１つの実施形態において、飲料製品は油溶性の酸化防止剤を含む。
【００５３】
さらなる実施形態において、製品はモノ−、ジ−及びオリゴ糖、グルコースシロップ、マルトース及びトレハロース、好ましくはグルコースシロップ、マルトース及びトレハロースを含む群から選択される炭水化物を含む。糖はグルコース、フルクトース、ガラクトース又はマンノースを含有する。
【００５４】
本発明の製品は、１つの代案において、以下のものからなる群から選択される少なくとも１種の水溶性酸化防止剤を含む。
【００５５】
ケイヒ酸のヒドロキシ誘導体のように、その化学的構造中にフェノール性ＯＨ−基を含むので酸化防止剤として活性である天然化合物、例えばヒドロキシケイヒ酸、ヒドロキシシンナメート、これらはＣ６〜Ｃ３骨格を有する１群のポリフェノールであり、例えばヒドロキシヒドロシンナメート。
【００５６】
コーヒー酸、フェルラ酸、チロソール、ヒドロキシチロソール、ケイヒ酸、クロロゲン酸、クマリン、クマリン酸、シナピン酸、ケイヒ酸、チコリ酸、及びＣ１〜Ｃ２０を有するこれらの化合物のいずれかのエステル。
【００５７】
少なくとも１種の上記化合物に富む植物の抽出物。
【００５８】
ロスマリン酸、ヒドロキシチロソール。
【００５９】
一般的なスパイスの抽出物。１つの実施形態において、一般的なスパイスはローズマリー、レモンバーム、オレガノ、タイム、ペパーミント、セージ又は上記化合物の少なくとも１種を含むか又は豊富に含む類似の植物を含む群から選択される。
【００６０】
酸化防止剤として使用される、５０００種以上が存在する１群の天然化合物であるフラボン類。これらはカテキン若しくはエピカテキン又は誘導体を含むか又は豊富に含むチャその他の植物のような植物から抽出されるいずれであることもでき、これらの化合物は炭水化物でグリコシル化するか又はＣ１〜Ｃ２０脂肪酸又は没食子酸でエステル化することができ、上記化合物の１種以上を含むか又は豊富に含むチャ、オリーブ、ナシ、リンゴのような植物の抽出物である。
【００６１】
アスコルビン酸ナトリウム、ポリフェノール、Teanova 80、グルタチオン、リポ酸、カテキン、プニカラギン(punicalagin)、キサントン、ベンゾトロポロン(benzotropolone)、好ましくはアスコルビン酸ナトリウム。
【実施例１】
【００６２】
開裂したフィコシアニン粉末の生成
１８ｇのフィコシアニン（リナブルーＧ１といわれるＤＩＣから市販されている粉末）を６０ｇの濃縮ＨＣｌ中に加えた。この溶液を２時間撹拌した。この結果タンパク質が部分的に分解する。２時間後ＨＣｌ／フィコシアニン溶液を５３３ｇの水中に注ぎ入れることにより反応を停止させた。水中への希釈の結果フィコシアニンが沈殿し、ろ過又は遠心分離により開裂したフィコシアニンを分離することが可能になる。その後、開裂したフィコシアニンをボールミルにより水に再分散させる。次に、開裂したフィコシアニン溶液を噴霧乾燥により乾燥すると水溶性の粉末が得られる。
【実施例２】
【００６３】
貯蔵安定性
サンプルを５００ｐｐｍの濃度で密封したガラスバイアル中に室温（２２℃）で貯蔵した。バイアルを、光源から３０ｃｍ離して直線１列に並べ、全てのサンプルを同量の光７０００ＬＵＸに露出した。その後、分光計（紫外可視分光法ＨＰ  ８４５２Ａ）で最大吸収の吸光度を測定することによって色の強さを測定した。この試験は、スーパーマーケットの棚の照明源の直下での飲料の貯蔵をシミュレートするために行われるが、加速して光に対する色の安定性を評価するために光の強度はスーパーマーケットの棚より実質的に高い。この試験での７日間の貯蔵は普通の店の照明の下でのおおよそ３ヶ月の貯蔵と解釈される。
【００６４】
色喪失は全て、次式を用いて、試験の始まり（０日）と研究の終わりにおける最終混合物の吸収に基づいて計算される。
（（Ａｂｓ始まり−Ａｂｓ終わり）／Ａｂｓ始まり）＊１００
式中、Ａｂｓは最大吸光度が測定された波長で選択された吸収を意味する。サンプルは５００ｐｐｍ水溶液で直接測定した。
【実施例３】
【００６５】
未開裂フィコシアニン（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）粉末をｐＨ２及び５００ｐｐｍ濃度で水に溶解した後、バイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを１００％喪失した。
【実施例４】
【００６６】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ２及び５００ｐｐｍ濃度で水に溶解した後、バイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを１００％喪失した（図１参照）。
【実施例５】
【００６７】
未開裂フィコシアニン粉末（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ３．５及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、バイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを１００％喪失し、その上実質的な凝集体が目に見えた。
【実施例６】
【００６８】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ３．５及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、バイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを１００％喪失し、凝集体は目に見えなかった。
【実施例７】
【００６９】
未開裂フィコシアニン粉末（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ２及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、１００ｐｐｍのタンニン酸を溶液に加えて、複合体を形成した。複合体の形成は溶液の吸収の小さい増大によって示された（吸収の６．４％増大及び吸収最大の６２８ｎｍから６３２ｎｍへのシフト）。最後にバイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを６４％喪失した。
【実施例８】
【００７０】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ２及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、１００ｐｐｍのタンニン酸を溶液に加えて、複合体を形成した。複合体の形成は溶液の吸収の増大によって示された（吸収の１８％増大及び吸収最大の５９８ｎｍから６０４ｎｍへのシフト）。その後最後にバイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを３５％喪失した。
【実施例９】
【００７１】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ２及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、５００ｐｐｍの没食子酸を溶液に加えたが、吸収の増大は測定されなかった。その後最後にバイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを１００％喪失した。
【実施例１０】
【００７２】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ２及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、５００ｐｐｍのロスマリン酸(rosmaric acid)を溶液に加えて、複合体を形成した。複合体の形成は溶液の吸収の小さい増大によって示された（吸収の１１％増大及び吸収最大の５９８ｎｍから６０８ｎｍへのシフト）。最後にバイアルを密封し、５日間加速貯蔵条件下に置いた。貯蔵期間の後吸収を測定した。このサンプルはその色の強さを３５％喪失した。
【実施例１１】
【００７３】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれる、ＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ３．５（３．５は飲料の普遍的なｐＨである）及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、１００ｐｐｍのタンニン酸を溶液に加えて、複合体を形成した。複合体の形成は溶液の吸収の実質的な増大によって示された（吸収の８４％増大及び吸収最大の５６４ｎｍから６０４ｎｍへのシフト）。５日間貯蔵後色の衰退(color breakdown)は測定できなかった（図１参照）。これは、目視検査で退色が検出できなかったことから確認された。
【実施例１２】
【００７４】
開裂したフィコシアニン（実施例１参照）（リナブルーＧ１といわれるＤＩＣから市販の粉末）をｐＨ３．５（３．５は飲料の普遍的なｐＨである）及び５００ｐｐｍの濃度で水に溶解した後、１００ｐｐｍのタンニン酸を溶液に加えて、複合体を形成した。複合体の形成は溶液の吸収の実質的な増大によって示された（吸収の８４％増大及び吸収最大の５６４ｎｍから６０４ｎｍへのシフト）（図１）。１４日間貯蔵後サンプルはその色を１８％喪失した。
【００７５】
１４日の加速貯蔵条件は、大雑把にいって、飲料がスーパーマーケットの棚で６か月の貯蔵の間その照明の下に曝される可能性がある光の量に相当すると解釈されることに留意されたい。さらに、色の強さは実験の始まりより１８％低く測定されるとはいえ、この色の強さの小量の低下は新たなサンプルと貯蔵されたサンプル（１４日間の加速貯蔵条件）との目視比較では認められないことに留意されたい。
【００７６】
ポリフェノール−発色団−複合体のため、本発明による複合体の色の強化は、ブランク又は没食子酸と比較して減り方が少なかったか、又は増大した。結果は、表１及び図１にまとめて示す。
【００７７】
【表１】
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【図１】
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【国際調査報告】
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