(57)【要約】  本出願は過敏性腸症候群の治療に用いるための、１つ以上のヒトミルク単糖またはヒトミルクオリゴ糖を含む合成組成物に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量のヒトミルク単糖（ＨＭＳ）またはヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）またはその両方を含むことを特徴とする、下記の用途に用いるための合成組成物：
−過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状の軽減、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、腹痛、腹部不快感および／または腹部膨満の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの患者で、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの元患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を以前有していた元患者における、ＩＢＳの再発の予防、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、および／または腸内菌強制バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状を軽減するためのＩＢＳ患者の結腸中のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティスの増加、および／または
−抗生物質による治療を受けているまたは受けたことのある患者における、ＩＢＳまたはＩＢＳ症状の予防。
【請求項２】
組成物が栄養組成物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＨＭＳがシアル酸およびフコースから選択され、ＨＭＯが２’−ＦＬ、３−ＦＬ、ＤＦＬ、３’−ＳＬ、６’−ＳＬ、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、ＬＮＦＰ−ＩおよびＤＳＬＮＴから選択される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
組成物が１つ以上のＨＭＯ骨格、１つ以上のシアリルＨＭＯ、および１つ以上のフコシルＨＭＯを含み、適宜フコースおよび／またはシアル酸、好ましくはその両方を含んでいてもよい、請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
【請求項５】
組成物が２’−ＦＬおよびＬＮｎＴを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
１つ以上のＨＭＳ、または１つ以上のＨＭＯ、またはその両方の有効量を、合成組成物の形態で患者に経口投与することを特徴とする、下記の用途に用いられる方法：
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状の軽減、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状の１つ以上の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの元患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有していた元患者におけるＩＢＳの再発の予防、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、および／または腸内菌強制バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状を軽減するための、ＩＢＳの患者の結腸中のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティスの増加、および／または
−抗生物質による治療を受けているまたは受けたことのある患者における、ＩＢＳまたはＩＢＳ症状の予防。
【請求項７】
合成組成物が栄養組成物である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ＨＭＳがシアル酸およびフコースから選択され、ＨＭＯが２’−ＦＬ、３−ＦＬ、ＤＦＬ、３’−ＳＬ、６’−ＳＬ、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、ＬＮＦＰ−ＩおよびＤＳＬＮＴから選択される、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
合成組成物が１つ以上のＨＭＯ骨格、１つ以上のシアリルＨＭＯ、および１つ以上のフコシルＨＭＯを含み、適宜フコースおよび／またはシアル酸、好ましくはその両方を含んでいてもよい、請求項６〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
合成組成物が２’−ＦＬおよびＬＮｎＴを含む、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
内臓感受性および通便異常の改善のための、請求項６〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
１つ以上のＨＭＳ、１つ以上のＨＭＯ、またはその両方を含む合成組成物の、下記の用途における使用：
−ＩＢＳの患者、特に細菌の異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状の減少
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、腹痛、腹部不快感または腹部膨満の慢性症状の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化の慢性症状の治療、
−ＩＢＳの元患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷を有していた元患者におけるＩＢＳの再発の予防、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、および／または腸内菌強制バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状を抑制するための、ＩＢＳの患者の結腸中のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティスの増加、および／または
−抗生物質による治療を受けているまたは受けたことのある患者における、ＩＢＳまたはＩＢＳ症状の予防。
【請求項１３】
合成組成物が栄養組成物である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
ＨＭＳがシアル酸およびフコースから選択され、ＨＭＯが２’−ＦＬ、３−ＦＬ、ＤＦＬ、３’−ＳＬ、６’−ＳＬ、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、ＬＮＦＰ−ＩおよびＤＳＬＮＴから選択される、請求項１２または１３に記載の使用。
【請求項１５】
合成組成物が１つ以上のＨＭＯ骨格、１つ以上のシアリルＨＭＯ、および１つ以上のフコシルＨＭＯを含み、適宜フコースおよび／またはシアル酸、好ましくはその両方を含んでいてもよい、請求項１２〜１４のいずれかに記載の使用。
【請求項１６】
合成組成物が２’−ＦＬおよびＬＮｎＴを含む、請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は一般に過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療のための組成物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
過敏性腸症候群はヒト、特に成人の患者における臨床的異質性疾患であり、腹痛、腹部不快感、腹部膨満、疲労、並びに軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化などの慢性症状を伴う。患者に対する通常の臨床的検査においては、一般的に異常はみられないが、患者の腸はバルーン吹送検査などの特定の刺激に対して感受性がより強くなりうる。世界的なＩＢＳの有病率は約１０〜２０％（Longstreth et al．Gastroenterology 130，1480 (2006)）であるが、特定の国ではさらに高くなりうる。ＩＢＳの原因は解明されていないが、脳腸軸の乱れ、急性消化器感染症、小腸の細菌異常繁殖、抗生物質の使用および腸内菌共生バランス失調が重大な危険因子であると考えられている（Kim et al．Diges．Dis．Sci．57，3213 (2012)）。他の危険因子は若年、長期にわたる発熱、不安、およびうつ病である。一般的に慢性的な軽度の炎症がIBS患者に生じるが、臨床的な症状がほとんどないまたは全くない場合も存在する。
【０００３】
ＩＢＳの診断は困難である。ＩＢＳの診断に用いることができる、バイオマーカーに基づく検査は存在しない。診断には一般的に、ＩＢＳに類似した症状を引き起こす状況を排除すること、また次いで患者の症状を分類することが含まれる。ＩＢＳの診断がなされる前に、全ての患者について、寄生虫感染、乳酸不耐症およびセリアック病を排除することが望ましい。診断後、通常、患者はＲｏｍｅＩＩＩ基準に従い、便の硬さに基づく４つの症状のサブタイプに分類される：下痢型（ＩＢＳ−Ｄ）、便秘型（ＩＢＳ−Ｃ）、下痢および便秘の両方が交互に発現する混合型（ＩＢＳ−Ｍ）、並びにいずれにも分類されないＩＢＳ（ＩＢＳ−Ｕ）。
【０００４】
ＩＢＳの治療法はなく、現在の治療法は症状の緩和を試みることを重点的に行っている。治療は、食事調節、薬物療法、および心理学的介入などの様々な形態をとる。患者教育および医者と患者の良好な関係もまた重要である。しかしながら、ほとんどの治療は不十分であり、ほとんどの患者は慢性疼痛、疲労、および他の症状を経験し続ける。ＩＢＳは平均余命に直接的に影響しないが、高い有病率およびクオリティ・オブ・ライフへの著しい影響によって、高い社会的費用を伴う状態になる。ＩＢＳに関連する一般的な絶望感は、患者および彼らを治療する医療関係者の両方にとっての不満の根源である。
【０００５】
現在の研究において、消化器の微生物叢、脳腸軸および肥満細胞がＩＢＳの病態生理学に関係していることが示唆されてきた。ヒトの消化器の微生物叢には少なくとも１，０００種の細菌が含まれ、それぞれの個体の腸には約１６０の異なる種から成る約１０１４の個別の細菌細胞が生息している（Qin et al．Nature 464，59 (2010)）。個体の遺伝的体質および獲得免疫、並びに環境因子が、消化器の微生物叢に影響すると考えられている。さらに、微生物叢は個体の消化器システム内の免疫および生理機能を形作る。また、健康な個体は、腸に生息する微生物叢との共生関係を維持しているが、一方でＩＢＳの患者は、この微生物叢−免疫相互作用に不均衡が生じていると考えられている。
【０００６】
ＩＢＳ患者の消化器の微生物叢は、健康対照者のそれとは異なっていることが研究によって明らかになっている。消化器の微生物叢が感染後過敏性腸症候群（ＰＩ−ＩＢＳ）を引き起こすという証拠も存在する。フラジェリンは細菌の鞭毛の主要な構成要素であるが、これが個体の先天性および適応免疫の両方を活性化することが明らかになっている。例えば、細菌のフラジェリンに対する抗体は（Ａ４−Ｆ３ａ２およびＦｌａ−Ｘ）、ＩＢＳの患者において、健康対照者と比較してしばしば多く検出される（それぞれｐ＝０．００４およびｐ＝０．００９；Schoepfer et al．Neurogastroentero．Motil．20，1110 (2008)）。また、感染後の小腸細菌異常増殖（ＳＩＢＯ）を有する個体は、感染している細菌のフラジェリンタンパク質に対する抗体を持ちうる（Spiller et al．Gastroenterology 136，1979 (2009)）。これらの細菌はしばしば、カンピロバクター・ジェジュニ、大腸菌、サルモネラ腸炎菌、およびフレキシネル赤痢菌である。
【０００７】
抗生物質、プロバイオティクスおよびプレバイオティスなどの消化器の微生物叢を標的にした治療は、少なくとも一時的にはＩＢＳの症状を軽減するように思われる。例えば、抗生物質のリファキシミンは、ＩＢＳ患者に対して悪影響のある細菌産物の生産を減少させるように思われる。
【０００８】
ＩＢＳに関連する腹痛および不快感は、脳腸軸およびストレスホルモンに対する応答に関係している。一般にＩＢＳ患者は、脳腸軸または中枢のストレス応答機構によって仲介される、腸の運動異常および内臓過敏を経験する。脳腸軸の１つの経路は中枢の遠心性伝導路であり、交感神経系および視床下部・下垂体・副腎系（ＨＰＡ）軸によって形成される。ＩＢＳなどのストレス感受性障害において、副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ）、コルチゾール、およびカテコールアミンなどのＨＰＡ軸のストレスホルモンが放出される。いくつかの研究において、粘膜免疫がさらに活性化することでＩＢＳ患者のＨＰＡ軸応答が生じ、またこれによって血漿のサイトカイン量が上昇することで、ＨＰＡ軸が活性化されることが明らかになっている。
【０００９】
腸のマイクロバイオームおよび脳腸軸に加えて、肥満細胞もまたＩＢＳの病因に重要な役割を示しうる。腸の遠位領域における肥満細胞の膨潤および活性化は、症状の発症およびＩＢＳの重症度に関係している。これらの細胞はまた、ＩＢＳ患者において、粘膜刺激に対する内臓の求心性神経の応答の上昇に関係している。肥満細胞の過形成は一般に、上記の感染後過敏性腸症候群および非感染後過敏性腸症候群の両方において記述された細菌によって起こる感染の後に観測される。
【００１０】
ＩＢＳ治療における近年の進歩にＦＯＤＭＡＰ食事療法がある。この食事療法において、患者はＦＯＤＭＡＰ炭水化物の摂取を制限する必要がある。発酵性のオリゴ糖、二糖類、単糖類およびポリオールは、近位小腸でほとんど吸収されず、浸透圧的に活性であり、腸内細菌によって発酵し水素を生産する。何人かの患者において、この食事療法を順守した結果、症状が改善した（Staudacher et al．J．Hum．Nutr．Diet．24，487 (2011)）。しかしながら、ＦＯＤＭＡＰ炭水化物のうちのいくつかは有益な食物繊維であり、栄養価の高い果物、植物および豆類に含まれる食物である。しかしながら、全般的にＩＢＳ患者の症状をさらに改善する、一般的に安全で有効な方法が必要とされている。
【発明の概要】
【００１１】
ある局面において、本発明は有効量の１つ以上のヒトミルク単糖（「ＨＭＳ」）または１つ以上のヒトミルクオリゴ糖（「ＨＭＯ」）またはその両方を含むことを特徴とする、下記の用途に用いるための合成組成物を提示する：
−過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷を有する患者におけるＩＢＳ症状の軽減、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、腹痛、腹部不快感および／または腹部膨満の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの元患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を以前有していた元患者におけるＩＢＳの再発の予防、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状を軽減するための、ＩＢＳ患者の結腸中のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティスの増加、および／または
−抗生物質による治療を受けているまたは受けたことのある患者におけるＩＢＳまたはＩＢＳ症状の予防。
当該合成組成物は好ましくは栄養組成物である。
ある実施態様において、患者のＩＢＳ症状は細菌異常繁殖および／または腸内菌共生バランス失調である。
【００１２】
別の局面において、本発明は下記の用途に用いるための方法を提示し、その方法は有効量の１つ以上のＨＭＳもしくは１つ以上のＨＭＯ、またはその両方を好ましくは合成組成物の形態として患者に経口投与することを特徴とする：
−ＩＢＳの患者、特に１つ以上の細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、ＩＢＳ症状の軽減、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、１つ以上のＩＢＳ症状の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷を有する患者における、軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの元患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうちの１つ以上を有していた元患者におけるＩＢＳ症状の再発の予防、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、および／または腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうちの１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状を軽減するための、ＩＢＳ患者の結腸中のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティスの増加、および／または
−抗生物質による治療を受けているまたは受けたことのある患者におけるＩＢＳまたはＩＢＳ症状の予防。
ある実施態様において、患者のＩＢＳ症状は細菌異常繁殖および／または腸内菌共生バランス失調である。
【００１３】
好ましくは、内臓感受性および便通異常が改善される。例えば、便秘型ＩＢＳ患者において、内臓感受性および完全な自発的排便が改善した。さらに下痢型ＩＢＳ患者において、内臓感受性および便の硬さが改善した。患者は最初の治療期間においては高用量、好ましくは１日あたり５ｇから１０ｇの１つ以上の中性のＨＭＯを投与され、次いでメンテナンス期間においては低用量、好ましくは１日あたり１ｇから５ｇを投与されうる。最初の治療期間は１から８週間でありうる。メンテナンス期間は少なくとも１ヶ月である。
【００１４】
さらなる局面において、本発明はＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷の１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状の治療／軽減のための、１つ以上のＨＭＳもしくは１つ以上のＨＭＯ、またはその両方を好ましくは合成組成物の形態で使用することを提示する。この点について、本発明は下記の用途のために、１つ以上のＨＭＳもしくは１つ以上のＨＭＯまたはその両方を使用することを提示する：
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者における、ＩＢＳ症状の軽減、
−ＩＢＳ患者における、腹痛、腹部不快感または腹部膨満の慢性症状のうち１つ以上の治療
−ＩＢＳの患者における、軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化の慢性症状のうち１つ以上の治療、
−ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、および／または腸内菌共生バランス失調および粘膜関門の損傷のうち１つ以上を有する患者におけるＩＢＳ症状を軽減するための、ＩＢＳ患者の結腸中のビフィズス菌、好ましくはビフィドバクテリウム・アドレセンティスの増加、
−ＩＢＳの元患者におけるＩＢＳの再発の予防、および／または
−抗生物質による治療を受けているまたは受けたことのある患者におけるＩＢＳまたはＩＢＳ症状の予防。
いくつかの実施態様において、患者のＩＢＳ症状は細菌異常繁殖および／または腸内菌共生バランス失調である。
【００１５】
好ましくは、本発明の全ての局面において、ＨＭＳはシアル酸およびフコースから選択され、ＨＭＯは２’−ＦＬ、３−ＦＬ、ＤＦＬ、３’−ＳＬ、６’−ＳＬ、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、ＬＮＦＰ−ＩおよびＤＳＬＮＴから選択される。さらに好ましくは、ＨＭＯは１つ以上のＨＭＯ骨格および１つ以上のフコシルＨＭＯの組み合わせ、例えば２’−ＦＬおよびＬＮｎＴである。２’−ＦＬおよびＬＮｎＴは質量比で約４：１から１：１、さらに好ましくは約３：１から１：１で存在しうる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
（発明の詳細な説明）
本発明によれば、驚くべきことに、ヒトミルク単糖（ＨＭＳ）、有利にはシアル酸および／またはフコース、およびヒトミルクオリゴ糖（ＨＭＯ）、有利には２’−ＦＬ、３−ＦＬ、ＬＮＴ、ＬＮｎＴ、３’−ＳＬ、６’−ＳＬ、ＤＦＬ、ＤＳＬＮＴおよび／またはＬＮＦＰ−Ｉによって、ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調または粘膜関門の損傷に苦しんでいる患者における過敏性腸症候群の慢性症状を軽減できることが発見された。さらにＨＭＳ／ＨＭＯによって、ＩＢＳの患者、特に細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調または粘膜関門の損傷に苦しんでいる患者における、ＩＢＳの再発のリスクを軽減することが発見された。当該ＨＭＳ／ＨＭＯは下記の働きを示しうると考えられている：（１）有益な細菌の増殖を促進し、細菌異常繁殖および腸内菌共生バランス失調を軽減させるプレバイオティクスとしての働き；（２）病原体に結合し、それによって病原体が消化管の上皮性細胞へ結合するのを軽減／抑制するデコイとしての働き；（３）慢性の粘膜炎症を軽減する働き；および／または（４）粘膜関門の損傷の修復。また、ＨＭＳ／ＨＭＯは腸の伝播性筋放電群に神経系的に依存して腸の運動性障害に対処し働きうるため、患者の中枢神経系に有益な効果を持つ可能性がある。
【００１７】
用語「経口投与」は、好ましくは、患者に対して組成物を経口投与するための通常のいずれかの形態であって、患者の消化管（胃など）に組成物の沈着させるものを意味する。そのため経口投与は、患者による組成物の嚥下、経鼻胃栄養チューブを介した腸内投与などを含む。
用語「有効量」は、好ましくは、患者に望ましい治療結果を与えるのに充分な分量のヒトミルク単糖またはヒトミルクオリゴ糖を提供する組成物の分量を意味する。有効量は、望ましい治療結果を得るために、１回以上の用量として患者に投与されうる。
用語「ヒトミルク単糖」または「ＨＭＳ」は、好ましくはヒトの母乳に存在する単糖を意味する。例として、シアル酸およびＬ−フコースが挙げられる。ヒトの母乳において、シアル酸はＮ−アセチルノイラミン酸である。
【００１８】
用語「ヒトミルクオリゴ糖」または「ＨＭＯ」は、好ましくは、ヒトの母乳の中に酸性型または中性型で存在しうる複合炭水化物を意味する。約２００を超える異なる構造のＨＭＯが、ヒトの母乳に存在することが知られている（Urashima et al．：Milk Oligosaccharides，Nova Biomedical Books，New York，2011）。ＨＭＯはフコシルおよびシアリルオリゴ糖の骨格になりうる。ＨＭＯ骨格はＧｌｕ、ＧａｌおよびＧｌｃＮＡｃから成り、Ｆｕｃおよびシアル酸を欠いている。ＨＭＯ骨格の例としては、ラクト−Ｎ−テトラオース（ＬＮＴ）、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース（ＬＮｎＴ）、ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（ＬＮｎＨ）およびラクト−Ｎ−ヘキサオース（ＬＮＨ）が挙げられる。フコシルＨＭＯは、２’−フコシルラクトース（２’−ＦＬ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩ（ＬＮＦＰ−Ｉ）、ジフコヘキサオースＩ（ＮＤＦＨ−Ｉ）、３−フコシルラクトース（３−ＦＬ）、ジフコシルラクトース（ＤＦＬ）、ラクト−Ｎ−フコペンタオースＩＩＩ（ＬＮＦＰ−ＩＩＩ）、フコシル−パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（Ｆ−ｐＬＮｎＨ）ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩ（ＬＮＤＦＨ−Ｉ）、フコシル−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩＩ（ＦＬＮＨ−ＩＩ）ラクト−Ｎ−フコペンタオースＶ（ＬＮＦＰ−Ｖ）、ラクト−Ｎ−ジフコヘキサオースＩＩ（ＬＮＤＦＨ−ＩＩ）、フコシル−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩ（ＦＬＮＨ−Ｉ）、フコシル−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩＩＩ（ＦＬＮＨ−ＩＩＩ）およびフコシル−パラ−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオース（Ｆ−ｐＬＮｎＨ）などの、フコシルラクトースまたはフコシル化ＨＭＯ骨格である。シアリルＨＭＯは、３’，６−ジシアリルラクト−Ｎ−テトラオース（ＤＳＬＮＴ）、６’−シアリルラクトース（６’−ＳＬ）、３’−シアリルラクトース（３’−ＳＬ）、６’−シアリルラクト−Ｎ−ネオテトラオース（ＬＳＴｃ）、３’−シアリルラクト−Ｎ−テトラオース（ＬＳＴａ）および６−シアリルラクト−Ｎ−テトラオース（ＬＳＴｂ）などの、シアリルラクトースまたはシアリルＨＭＯ骨格である。シアリルおよびフコシル基の両方を含むＨＭＯは上記２つのグループのいずれかに属するとみなしてもよい。シアリルおよびフコシルＨＭＯの例としては、ジシアリル−フコシル−ラクト−Ｎ−ヘキサオース（ＤＳＦＬＮＨ−ＩＩ）、フコシル−シアリル−ラクト−Ｎ−ネオヘキサオースＩ（ＦＳＬＮｎＨ−Ｉ）、フコシル−シアリル−ラクト−Ｎ−ヘキサオースＩ（ＦＳＬＮＨ−Ｉ）および３−フコシル−３’−シアリルラクトース（ＦＳＬ）が挙げられる。
【００１９】
用語「微生物叢」、「細菌叢」および「マイクロバイオーム」は好ましくは、一般に肉体組織または部位に生息する生存微生物群を意味する。消化器の微生物叢のうち最も優占的なメンバーには、ファーミキューテス、バクテロイデス、放線菌、プロテオバクテリア、シネルギステス、ウェルコミクロビウム、フソバクテリウム、およびユリアーキオータ門の微生物；属のレベルでは、バクテロイデス、フィーカリバクテリウム、ビフィドバクテリウム、ロゼブリア、アリスティペス、コリンゼラ、ブラウチア、コプロコッカス、ルミノコッカス、ユーバクテリウムおよびドレア属の微生物；および種のレベルでは、バクテロイデス・ユニフォルミス（Bacterioides uniformis）、アリスティペス・プトレディニス（Alistipes putredinis）、パラバクテロイデス・メルダ（Parabacteroides merdae）、ルミコッカス・ブロミイ（Ruminococcus bromii）、ドレア・ロンギカテナ（Dorea longicatena）、バクテロイデス・カッカ（Bacteroides caccae）、バクテロイデス・テタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron）、ユーバクテリウム・ハリイ（Eubacterium halli）、ルミノコッカス・トロクエス（Ruminococcus torques）、フィーカリバクテリウム・プラウスニッツィイ（Faecalibacterium prausnitzii）、ルミノコッカス・ラクタリス（Runminococcus lactaris）、コリンゼラ・アエロファシエンス（Collinsella aerofaciens）、ドレア・フォルミシゲネランス（Dorea formicigenerans）、バクテロイデス・ブルガータス（Bacteroides vulgatus）およびロゼブリア・インテスチナリス（Roseburia intestinalis）種の微生物が含まれる。いくつかの例において、消化器の微生物叢は、消化管上皮を覆う粘液層に位置するまたは接触する粘膜関連微生物叢および、消化管の細胞内腔に存在する管腔関連微生物層を含む。
【００２０】
用語「過敏性腸症候群」および「ＩＢＳ」は好ましくは、腹痛、腹部不快感、腹部膨満、疲労、並びに軟便または頻繁な便通、下痢および便秘などの便通パターンの変化などの、一般に明確な構造的異常が存在しない慢性症状の１つ以上を特徴とする、ヒト、特に成人の腸の機能障害群を意味する。ＩＢＳには下記の症状に従って、少なくとも３つの型が存在する：（１）下痢型（ＩＢＳ−Ｄ）；（２）便秘型（ＩＢＳ−Ｃ）；および（３）排便パターンの変化を伴うＩＢＳ（ＩＢＳ−ＡまたはＩＢＳ−Ｍ）。感染後過敏性腸症候群 （ＩＢＳ−ＰＩ）など、様々なＩＢＳの臨床的なサブタイプもまた存在する。
【００２１】
当該ＨＭＯは、これらに限定はされないがヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、またはヤギの種などの哺乳類から分泌されるミルクから、周知のプロセスによって単離または濃縮されうる。また、当該ＨＭＯは微生物発酵、酵素法、化学合成またはそれらの技術の組み合わせを用いた周知のプロセスによって生産されうる。例として、WO2011/100980およびWO2013/044928に記載されているようにＬＮｎＴは化学合成によって製造され、WO2012/155916およびWO2013/044928に記載されているようにＬＮＴは合成され、WO2013/091660に記載されているようにＬＮＴおよびＬＮｎＴの混合物が製造され、WO2010/115934およびWO2010/115935に記載されているように２’−ＦＬが製造され、WO2013/139344に記載されているように３−ＦＬが製造され、WO2010/100979に記載されているように６’−ＳＬおよびその塩が製造され、WO2012/113404に記載されているようにシアリル化オリゴ糖が製造され、WO2012/113405に記載されているようにヒトミルクオリゴ糖の混合物が製造されうる。酵素的製造法の例として、WO2012/007588に記載されているようにシアリル化オリゴ糖が製造され、WO2012/127410に記載されているようにフコシル化オリゴ糖が製造され、WO2012/156897およびWO2012/156898に記載されているようにヒトミルクオリゴ糖の有利に多様化された混合物が製造されうる。生化学的な方法に関しては、WO01/04341およびWO2007/101862において、フコースまたはシアル酸によって適宜置換されていてもよいヒトミルクオリゴ糖のコア骨格を、遺伝子改変大腸菌を用いて製造する方法が記載されている。
【００２２】
１つ以上のヒトミルク単糖または１つ以上のヒトミルクオリゴ糖、またはその両方を含む本発明の合成組成物は、いずれかの適切な形態を取りうる。例えば、当該組成物はタンパク質、脂質または他の炭水化物などの他の主要栄養素を含む栄養組成物の形態でありうる。当該合成組成物はまた、医薬組成物でありうる。ある実施態様において、当該合成組成物は１つ以上のＨＭＯ骨格および１つ以上のフコシルＨＭＯ骨格および適宜フコースを含む。別の実施態様において、当該合成組成物は１つ以上のＨＭＯ骨格および１つ以上のシアリルＨＭＯおよび適宜シアル酸を含む。さらに別の実施態様において、当該合成組成物は１つ以上のフコシルＨＭＯ並びに１つ以上のシアリルＨＭＯ、並びに適宜フコースおよび／またはシアル酸、好ましくはその両方を含む。好ましい実施態様において、当該合成組成物は１つ以上のＨＭＯ骨格、１つ以上のシアリルＨＭＯ並びに１つ以上のフコシルＨＭＯ、並びに適宜フコースおよび／またはシアル酸、好ましくはその両方を含む。
【００２３】
栄養組成物
本発明の栄養組成物はタンパク質、脂質および／または可消化炭水化物源を含み、粉末または液体の形態で存在しうる。当該組成物は唯一の栄養源または栄養補助剤として設計されうる。ＩＢＳ患者にとって、栄養補助剤、特に食事または間食と置き換えられる形態を取りうる補助剤が好ましい。好ましくは、当該栄養組成物は低ラクトース、できればラクトースフリーである。好ましくは、当該栄養素組成物はまたＦＯＤＭＡＰ炭水化物を全くまたは少量しか含まない。
【００２４】
適切なタンパク質源としては、ミルクプロテイン、大豆プロテイン、ライスプロテイン、ピープロテインおよびオートプロテイン、またはそれらの混合物が挙げられる。ミルクプロテインは、ミルクプロテインの濃縮物、ホエイプロテインもしくはカゼイン、または２つの混合物の形態で存在しうる。大豆、ライス、ピーおよびオートプロテインは単離されたタンパク質の形態で存在しうる。タンパク質は全長タンパク質または、部分的に加水分解されたもしくは広範囲にわたって加水分解された加水分解タンパク質でありうる。タンパク質は当該栄養組成物のエネルギーの約５％から約５０％、好ましくは約１０％から３０％でありうる。タンパク質源は好ましくは、ラクトースなどの非発酵性の炭水化物源ではない。そのため、ミルクプロテインがタンパク質源として用いられる場合、ミルクタンパク質は好ましくは低ラクトースまたはラクトースフリーである。
【００２５】
適切な可消化炭水化物としてはマルトデキストリン、加水分解または加工デンプンまたはコーンスターチ、グルコースポリマー、コーンシロップ、コーンシロップ固形物、タピオカ、スクロース、およびグルコース、またはそれらの混合物が挙げられる。一般に可消化炭水化物は当該栄養組成物のエネルギーの約３５％から約７５％、好ましくは約４５％から７０％でありうる。好ましくは、可消化炭水化物はラクトースを含まない。
【００２６】
適切な脂質としては菜種油、ヒマワリ種子油、パーム油、大豆油、乳脂、トウモロコシ油および大豆レシチンが挙げられる。長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣ−ＰＵＦＡ）、特にドコサヘキサエン酸（ＤＨＣ）などのオメガ−３脂肪酸は抗炎症性の性質を有するため、脂質源に含まれうる。適切なＬＣ−ＰＵＦＡ源は植物油、海洋プランクトン油、真菌油、および魚油である。また、脂質源は中鎖脂肪酸トリグリセリド（ＭＣＴ）を含みうる。分別されたヤシ油は適切な中鎖脂肪酸トリグリセリド源である。脂質源は好ましくは当該栄養組成物のエネルギーの約５％から約２５％であり、例えば約１０％から２０％である。高脂肪の食事はIBS症状を引き起こすため、好ましくは脂質含有量は抑えられている。
【００２７】
当該栄養組成物はまた、好ましくはビタミンおよびミネラルを含む。当該栄養組成物が唯一の栄養源として意図されている場合、好ましくは全てのビタミンおよびミネラル特性が含まれる。ビタミンの例には、ビタミンＡ、Ｂ群（Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６およびＢ１２など）、Ｃ、Ｄ、ＥおよびＫ、ナイアシン並びに、パントテン酸および葉酸およびビオチンなどのビタミン酸が含まれる。ミネラルの例には、カルシウム、鉄、亜鉛、マグネシウム、ヨウ素、銅、リン、マンガン、カリウム、クロム、モリブデン、セレニウム、ニッケル、スズ、ケイ素、バナジウムおよびホウ素が含まれる。
【００２８】
当該栄養組成物はまた、ルテイン、リコピン、ゼアキサンチン、およびベータ−カロテンなどのカロテノイドを含みうる。含まれるカロテノイドの総量は約０．００１μｇ／ｍｌから約１０μｇ／ｍｌの範囲で変動しうる。ルテインは約０．００１μｇ／ｍｌから約１０μｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０４４μｇ／ｍｌから約５ｇ／ｍｌの分量のルテインが含まれうる。リコピンは約０．００１μｇ／ｍｌから約１０μｇ／ｍｌ、好ましくは約０．０１８５ｍｇ／ｍｌから約５ｇ／ｍｌの分量のリコピンが含まれうる。ベータ−カロテンは約０．００１μｇ／ｍｌから約１０ｍｇ／ｍｌ、例えば約０．０３４μｇ／ｍｌから約５μｇ／ｍｌのベータ−カロテンを含みうる。
【００２９】
当該栄養組成物はまた、防腐剤、乳化剤、増粘剤、緩衝剤、繊維およびプロバイオティクス、特にIBS患者の症状の軽減を助けるプロバイオティクス（例えば、VSL#3、B.infantis 35624、B.animals subsp.lactis BB-12、B.lactis Bi-07、L.rhamnosus GG、L.rhamnosus Lc705、L.plantarum DSM9843、L.plantarum CECT7484、L.plantarum CECT7485、L.acidophilus NCFM、L.fermentum CECT5716、B.breve Bb99、Propionibacterium freundenreichii ssp. Shermanii JS、P.acidilactici CECET7483、Streptococcus faecium）、トコフェロール、カロテノイド、アスコルビン酸／ビタミンＣ、パルミチン酸アスコルビル、ポリフェノール、グルタチオン、およびスーパーオキシドディスムターゼ（メロン）などの抗酸化／抗炎症性化合物、他の生理活性因子（例えば、成長ホルモン、サイトカイン、ＴＦＧ−β）、着色剤、香味剤および安定剤、滑沢剤などの従来の他の様々な成分を含みうる。
当該栄養組成物は可溶性粉末、液体濃縮物、または即時使用可能な製剤の形態で存在しうる。様々な香味剤、繊維および他の添加剤もまた存在しうる。
【００３０】
当該栄養組成物は、栄養組成物を固体または液体の形態で製造するための一般的に用いられるいずれかの生産技術によって製造されうる。例えば、当該組成物は様々な供給液から製造されうる。タンパク質の脂質供給液は脂質源を加熱および混合し、次いで乳化剤（例えば、レシチン）、脂溶性ビタミン、および少なくとも一部のタンパク質源を加熱および攪拌しながら加えることで製造されうる。炭水化物供給液もまた、ミネラル、微量および超微量ミネラル、増粘剤または懸濁化剤を水に加熱および攪拌しながら加えることで製造される。炭水化物（例えば、ＨＭＯおよび可消化炭水化物源）を加える前に、得られた溶液を１０分間連続して加熱および攪拌する。次いで得られた供給液を加熱および攪拌しながら混合し、ｐＨを６．６〜７．０に合わせ、その後当該組成物を高温短時間処理することで組成物を熱処理、乳化および均質化し、次いで冷却した。水溶性ビタミンおよびアスコルビン酸を加え、必要であればｐＨを望ましい範囲に調節し、香味剤を加え、望ましい全固体値になるまで水を加える。
【００３１】
液体生成物においては、得られた溶液は次いで無菌包装され、無菌包装栄養組成物が形成されうる。この形態において、当該栄養組成物は即時使用可能または濃縮液の形態でありうる。あるいは、当該組成物は噴霧乾燥および加工および包装によって処理された再構成可能な粉末でありうる。当該栄養組成物が即時使用可能な液体栄養剤である場合、液体中のＨＭＳ／ＨＭＯの総濃度は、液体の重量で約０．０００１％から約２．０％であり、例えば約０．００１％から約１．５％および約０．０１％から約１．０％；または約０．００２％から約３．０％であり、例えば約０．００５％から約２％および約０．０５％から約１．０％である。当該栄養組成物が濃縮液体栄養剤である場合、液体中のＨＭＳ／ＨＭＯの総濃度は、液体の重量で約０．０００２％から約４．０％であり、例えば約０．００２％から約３．０％および約０．０２％から約２．０％；または約０．００４％から約６．０％であり、例えば約０．０１％から約４．０％および約０．１％から約２．０％である。
【００３２】
単位剤形
本発明の合成組成物はまた、カプセル、錠剤または小袋の単位剤形でありうる。例えば、当該組成物はヒトミルク単糖および／またはオリゴ糖、並びに、希釈剤、添加物、抗酸化剤、滑沢剤、着色剤、結合剤、崩壊剤などの製剤化および投与を補助する１つ以上の追加成分を含む錠剤の形態でありうる。
適切な希釈剤、添加物、滑沢剤、着色剤、結合剤、および崩壊剤としては、ポリエチレン、ポリビニルクロライド、エチルセルロース、アクリルポリマーおよびそれらのコポリマー、ヒドロキシエチル−セルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース（ＨＰＭＣ）、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリヒドロキシエチルメタクリレート（ＰＨＥＭＡ）、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、またはポリアクリルアミド（ＰＡ）、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、ポリカルボフィル、ポリアクリル酸、トラガカント、メチルセルロース、ペクチン、天然ガム、キサンタンガム、グアーガム、カラヤゴム、ハイプロメロース、ステアリン酸マグネシウム、微結晶セルロース、およびコロイド状二酸化ケイ素が挙げられる。適切な抗酸化剤はビタミンＡ、カロテノイド、ビタミンＣ、ビタミンＥ、セレニウム、フラボノイド、ポリフェノール、リコピン、ルテイン、リグナン、コエンザイムＱ１０（「ＣｏＱＩＯ」）およびグルタチオンである。
単位剤形、特に小袋の形態のものは、主要栄養素などの様々な栄養を含みうる。
【００３３】
投与量
細菌異常繁殖、腸内菌共生バランス失調および／または粘膜関門の損傷を有する患者におけるＩＢＳ症状を軽減するために、患者に投与されるのに必要なＨＭＳおよび／またはＨＭＯの分量は、疾患のリスクおよび重症度、患者の年齢、組成物の形態、および患者に投与される他の薬物治療などの因子に従って変化する。しかしながら、必要な分量は医師によって即座に決定されることができ、一般に１日あたり約２０ｍｇから約２０ｇの範囲であり、いくつかの実施態様において、好ましくは１日あたり約５０ｍｇから約１０ｇであり、さらに好ましくは１日あたり約１００ｍｇから約７．５ｇであり、それよりさらに好ましくは１日あたり約５００ｍｇから約５ｇであり、特に１日あたり１ｇから約２．５ｇである。別の実施態様においては、好ましくは１日あたり約５０ｍｇから約２０ｇであり、さらに好ましくは１日あたり約１００ｍｇから約１５ｇであり、それよりさらに好ましくは１日あたり約５００ｍｇから約１０ｇであり、特に１日あたり約１ｇから約７．５ｇである。最初の治療段階の間、高用量とすることができ、例えば１日あたり１００ｍｇから２０ｇまたは１００ｍｇから３０ｇ、好ましくは１日あたり５００ｍｇから１５ｇ、さらに好ましくは１日あたり１ｇから１０ｇであり、いくつかの実施態様においては１日あたり２．５ｇから７．５ｇである。続く予防段階の間、用量を減少することでき、例えば、いくつかの実施態様においては１日あたり２０ｍｇから１０ｇ、好ましくは１日あたり１００ｍｇから７．５ｇ、さらに好ましくは１日あたり５００ｍｇから２．５ｇ、それよりさらに好ましくは１日あたり７５０ｍｇから１．５ｇ、または別の実施態様においては、１日あたり２０ｍｇから２０ｇ、好ましくは１日あたり１００ｍｇから１０ｇ、さらに好ましくは１日あたり５００ｍｇから７．５ｇ、それよりもさらに好ましくは１日あたり７５０ｍｇから５ｇである。
【実施例】
【００３４】
本発明をさらに例証するために実施例を記述する：
実施例１―臨床試験
合計６０人の男性および女性のＩＢＳ患者が、試験に参加するために採用される。１〜２週間のスクリーニング訪問および導入期間（run−in−period）の後、患者が選択される。患者はそれぞれ２０人の患者ごとの３つのグループに無作為に分けられ、８週間にわたり２つのグループは治療薬を、１つのグループはプラセボを使用する。当該治療薬は５または１０グラムのいずれかの２’−ＦＬ、ＬＮｎＴ、ＬＮＴ、３−ＦＬ、６’−ＳＬおよび３’−ＳＬの組み合わせを含み、当該対照薬は２グラムのグルコースを含む。両薬剤は単一用量包装に含まれる粉末の形態である。
【００３５】
患者は、少なくとも１８歳であり、ＩＢＳのＲｏｍｅＩＩＩ基準を満たし、細菌異常繁殖／腸内菌共生バランス失調であると診断されている場合に、参加する資格がある。採用された全ての患者は、試験の手順を理解し従うことが可能であり、それらに前向きである。患者が除外されるのは、患者がスクリーニング訪問の１ヶ月前に臨床試験に参加した；患者がスクリーニング検査において、試験への参加に臨床的に関係のある異常な結果を示した；患者が悪性腫瘍、糖尿病、深刻な冠疾患、腎疾患、神経性疾患などの深刻な疾患、もしくは深刻な神経疾患などの深刻な疾患、または当該試験の結果を混乱させうるいずれかの状態を患っている；当該試験前の３ヶ月に、高用量のプロバイオティクス補助剤を受けていた（ヨーグルトは許容される）；当該試験前の３ヶ月に、抗生物質薬剤を摂取していた；当該試験前の２週間に、症状の評価を妨げうる、いずれかの薬物治療を定期的に受けていた；および妊娠または授乳中である場合である。
スクリーニング訪問において、病歴および併用している薬物治療を登録し、安全性分析のための血液サンプルを収集する。便サンプルキットを配布する。患者は次の訪問までサンプルを冷凍庫で保管するよう指導を受ける。
【００３６】
２回目の訪問において、適格基準が確認され、適格な患者を試験において無作為に３つの群に分ける。便サンプルを回収し、新たな試料のための備品を配布する。患者は毎日のデータを記録することのできる相互作用的なインターネットに慣れ親しんでおり、治療薬またはコントロール薬のいずれかを与えられる。患者は試験の間、通常の食事を変化させないよう注意される。血液サンプルをバイオマーカー解析のために回収する。
血液サンプルからの血清をクライオチューブに移し、−８０℃で保存する。下記のバイオマーカーが測定される：アルドステロン、アンギオテンシンＩＩ、ＡｐｏＡ１、ＡｐｏＢ、血液尿素窒素、鉄分、ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）、コルチゾール、ＥＣＰ（好中球カチオン性タンパク質）、エストラジオール、ＦＦＡ（脂肪族カルボン酸塩）、グルカゴン、ＨｂＡ１ｃ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、インスリン、リゾチーム、プロゲステロン、テストステロン、ＴＮＦ−α、トランスフェリン、ビタミンＡ、ビタミンＢ１、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ６、ビタミンＤ、ビタミンＫ１、Α−１−アンチトリプシン。
便サンプルを解析まで−８０℃で保存する。便サンプルを１６Ｓ ＲＮＡシーケンス解析にかける。
【００３７】
当該試験は８週間にわたり、毎日プラセボまたは治療薬を摂取する患者と共に進行する。患者は薬を朝食とともに朝に摂取するように指導を受ける。相互作用的インターネット対応システムを通じてコンプライアンスをモニターする。当該患者はまた、以下を記録するためのシステムを利用する：
−ブリストル便形状スケール（ＢＳＦ）の情報、
−腹痛、腹部不快感、腹部けいれん、腹部膨満および鼓腸などの症状の情報、
−さらなる消化器疾患症状尺度（ＧＳＲＳ）の情報。
このアンケート調査は５つの尺度（腹痛、消化不良、逆流、下痢、便秘）に関する１５項目を含み、７段階のリッカート尺度を用いる。
当該試験の終わりに、それぞれの患者は医療チームの終了訪問を受ける。前回と同様に便サンプルおよび血液サンプルを回収し、解析する。
治療患者は、プラセボグループと比較して、苦痛の軽減および便通の改善を報告する。血液バイオマーカー解析において、治療患者が炎症性マーカーのレベルが低下したことが示される。便解析において、治療患者が細菌異常繁殖／腸内菌共生バランス失調のレベルが低下したことが示される。
【００３８】
実施例２―臨床試験
合計３００人の男性および女性のＩＢＳ患者が、試験に参加するために採用される。１〜２週間のスクリーニング訪問および導入期間（run−in−period）の後、患者が選択される。患者はそれぞれ１５０人の患者ごとの２つのグループに無作為に分けられ、８週間にわたり１つのグループは治療薬を、１つのグループはプラセボを使用する。当該治療薬は５グラムの２’−ＦＬおよびＬＮｎＴを含み、当該対照薬は２グラムのグルコースを含む。両薬剤は単一用量包装に含まれる粉末の形態である。
【００３９】
患者が参加する資格があるのは：患者が１８から６０歳の間である；ＩＢＳのＲｏｍｅＩＩＩ基準を満たす；一日で最も酷い、０−１０段階評価で３以上の腹痛強度スコアの週平均を報告する；スクリーニング評価の間、少なくとも週に２日の頻度の痛み／不快感を報告する；ＩＢＳ−Ｃサブグループの患者において、週に３回未満の完全な自発的排便（ＣＳＢＭ）を報告する；およびＩＢＳ−Ｄサブグループの患者において、少なくとも週に２日、ブリストル便スケール（ＢＳＳ）のタイプ６またはタイプ７に一致する少なくとも１回の便である場合である。採用された全ての患者は試験の手順を理解し従うことが可能であり、それらに前向きである。患者が除外されるのは：患者がスクリーニング訪問の１ヶ月前に臨床試験に参加した；患者がスクリーニング検査において、試験への参加に臨床的に関係のある異常な結果を示した；患者が悪性腫瘍、糖尿病、深刻な冠疾患、腎疾患、神経性疾患、もしくは深刻な神経疾患などの深刻な疾患、または当該試験の結果を混乱させうるいずれかの状態を患っている；当該試験前の３ヶ月に、高用量のプロバイオティクス補助剤を受けていた（ヨーグルトは許容される）；当該試験前の３ヶ月に、抗生物質薬剤を摂取していた；当該試験前の２週間に、症状の評価を妨げうる、いずれかの薬物治療を定期的に受けていた；妊娠または授乳中である場合である。
【００４０】
最初の訪問（スクリーニング）において、それぞれの患者は当該試験に関する文書および口頭の情報を伝えられ、当該患者はインフォームドコンセント用紙にサインすることが求められる。
患者は全ての病歴の審査に従って評価され、臨床的症状に基づき以下の３つのグループのうちの１つに特徴づけられる：下痢支配型（ＩＢＳ−Ｄ）、便秘支配型（ＩＢＳ−Ｃ）または交互型／混合型（ＩＢＳ−Ａ／Ｍ）。これにより事後解析において、患者をサブグループに振り分けることが可能になる。
適格性解析のための血液サンプルを回収する。患者に電子媒体システムを把握させるため、電子媒体によるアンケートを通した会話（ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＳＳＳ、ＱｏＬおよびＢＳＦＳ）を実施し、便サンプル採取のための装置を患者に配布する。患者は次の訪問までサンプルを冷凍庫で保管するよう指導をうける。
【００４１】
第二の訪問において（介入の開始）、適格基準が確認され、適格な患者を試験において無作為に２つの群に分ける。症状（ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＳＳＳ、ＢＳＦＳおよびＱｏＬ尺度）を評価する。試験補足物（trial supplementation）が、電子コンプライアンス日記（electronic compliance diary）の使用の説明書と共に配布される。便サンプルを回収し、新たなサンプルの回収のための装置を配布する。患者は研究の間、通常の食生活を変化させないように指導される。
バイオマーカー解析およびバイオバンクのために、血液サンプルを回収する。血液サンプルからの血清をクライオチューブに移し、−８０℃で保管する。以下のバイオカーカーが観測される：ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−８、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＭＩＰ−１β、ｈｓ−ＣＲＰ、タンパク質結合リポ多糖、トリプターゼ、抗フラジェリン、ゾヌリン、ヒスタミン、プロスタグランジン２およびコルチゾール。便サンプルを解析まで−８０℃で保管する。１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子シーケンスを用いて、便サンプルの微生物学解析を行う。
【００４２】
当該試験は８週間にわたり、毎日プラセボまたは治療薬を摂取する患者と共に進行する。患者は薬を朝食とともに朝に摂取するように指導を受ける。相互作用的インターネット対応システムを通じてコンプライアンスをモニターする。患者はまた、以下を記録するためのシステムを利用する：
−ブリストル便形状スケール（ＢＳＦＳ）の情報、
−腹痛、腹部不快感、腹部けいれん、腹部膨満および鼓腸などの症状の情報、
−クオリティ・オブ・ライフ（ＱｏＬ）の情報、
−IBS重症度評価システム（ＩＢＳ−ＳＳＳ）の情報、
さらなる消化器疾患症状尺度（ＧＳＲＳ）の情報。このアンケート調査は５つの尺度（腹痛、消化不良、逆流、下痢、便秘）に関する１５の項目を含み、７段階のリッカート尺度を用いる。
【００４３】
開始から４週間後、中間のチェックを行う。健康診断を行い、症状（ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＳＳＳ、ＢＳＦＳおよびＱｏＬ尺度などによって測定される）を再評価する。前回と同様に便サンプルおよび血液サンプルを回収、解析し、新たな便サンプルの回収のための装置を配布する。
介入（８週間）の終わりに、それぞれの患者は医療チームの終了訪問を受ける。健康診断を行い、症状（ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＳＳＳ、ＢＳＦＳおよびＱｏＬ尺度などによって測定される）を再評価する。コンプライアンスを確認するため、試験補足物（trial supplementation product）を回収する。
前回と同様に便サンプルおよび血液サンプルを回収し、解析する。
【００４４】
この訪問において、患者は非盲検追跡試験を継続することを望むかどうかを質問される。継続する患者の５０％は当該活性組成物の半分の用量を服用し、残りは当該組成物を服用しない。継続に同意した患者には便サンプル回収のための装置を配布し、活性組成物を継続する患者には試験補足物（trial supplementation）を配布する。
当該試験の終わりに患者は最終訪問を受け、このとき非盲検追跡研究の患者から便サンプルを回収し、症状（ＧＳＲＳ、ＩＢＳ−ＳＳＳ、ＢＳＦＳおよびＱｏＬ尺度によって測定する）を再評価する。さらに、彼らは有害事象について質問される。
非盲検追跡研究に参加していない患者において、この訪問は有害事象がある場合にのみ関係がある。この訪問は電話で完了しうる。治療患者は、プラセボグループに対して、痛み／内臓感受性の軽減および便通の改善を報告する。血液バイオマーカー解析によって、治療患者において炎症性マーカーの量の減少、粘膜関門の向上を意味する腸透過性の減少、および肥満細胞の脱顆粒の兆候の軽減が示される。便解析によって、治療患者において細菌異常繁殖／腸内菌共生バランス失調の程度の軽減、およびビフィズス菌、特にビフィドバクテリウム・アドレセンティスの量のさらなる増加が示される。
【００４５】
実施例３−栄養組成物
即時使用可能な栄養組成物は、水、マルトデキストリン、コーンシロップ、糖、ミルクプロテインの濃縮物、植物油（キャノーラ、高オレインヒマワリおよびコーン）、大豆プロテイン単離物、アカシアガム、香味剤、ＨＭＯ、クエン酸カリウム、リン酸マグネシウム、セルロースゲルおよびガム、炭酸カルシウム、アスコルビン酸ナトリウム、大豆レシチン、重酒石酸コリン、リン酸カルシウム、アルファ−トコフェロール酢酸エステル、アスコルビン酸、カラギーナンガム、リン酸鉄（ＩＩＩ）、香味剤、甘味剤（ステビア）、パルミチン酸ビタミンＡ、ナイアシンアミド、ビタミンＤ３、パントテン酸カルシウム、硫酸マンガン、硫酸銅、塩酸ピリドキシン、塩酸チアミン、ベータカロテン、リボフラビン、塩化クロム、葉酸、ビオチン、ヨウ化カリウム、フィトナジオン、亜セレン酸ナトリウム、モリブデン酸ナトリウム、ビタミンＢ１２から製造される。
当該組成物は、豊富なタンパク質源、低脂肪、ビタミン、ミネラル、および抗酸化剤を含む栄養補助剤であり、ＦＯＤＭＡＰ基準を満たす。さらに、当該組成物は有益な腸内細菌の生育を促進し、慢性炎症を調節することができるＨＭＯを含む。
【００４６】
実施例４−カプセル組成物
充填機を用いて、０００ゼラチンカプセル内に約１ｇのＨＭＳ／ＨＭＯを充填してカプセルが製造される。次いで、当該カプセルを閉じる。当該ＨＭＳ／ＨＭＯは自由流動性の粉末の形態である。
【００４７】
実施例５−粘膜関門機能
２’−ＦＬおよびＬＮｎＴを、胚細胞のヒトＬＳ１７４Ｔ細胞培養モデルにおいてＭＵＣ２、ＴＦＦ３、ΕΙΜβ、ＣＨＳＴ５およびＧＡＬ３ＳＴ２の発現を誘導する能力に関して検査する。当該ヒトＬＳ１７４Ｔ細胞株はアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ）から得る。ＬＳ１７４Ｔ細胞を、説明書に従い５％ＣＯ２で３７℃の最小必須培地（ＭＥＭ）で保持する。２’−ＦＬおよびＬＮｎＴを、所要の濃度になるように細胞培養グレードの水に溶解する。ＬＳ１７４Ｔ細胞は０または５ｍｇＨＭＯ／ｍＬを含むＨＭＯ溶液によって処理する。
ＬＳ１７４細胞を回収し、トリゾール試薬に懸濁し、製造者の説明書に従いＲＮＡ解析キット（Qiagen）を用いて全ＲＮＡを単離し、当該単離ＲＮＡをナノドロップ解析（Thermo Fisher Scientific）を用いて定量する。単離ＲＮＡは、大容量ｃＲＮＡ逆転写キット（Applied Biosystems）を用いて逆転写されｃＤＮＡを生成し、次いでこれを定量ＲＴ−ＰＣＲによる遺伝子発現の評価に用いる。
【００４８】
定量ＲＴ−ＰＣＲのために、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから特定のＴａｑＭＡＮ遺伝子発現アッセイを得、これはＭＵＣ２、ＴＦＦ３、ＣＨＳＴ５およびＧＡＬ３ＳＴ２の発現アッセイを含む。ＴａｑＭＡＮ ＰＣＲマスターミックス（Applied Biosystems）を用いて、定量リアルタイムＰＣＲを行う。反応は、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７９００ＨＴ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍを用いて、３８４−ウェルプレートにおいて、２回行われる。結果をＳＤＳ ２．３ ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて解析し、ｄｅｌｔａ ｄｅｌｔａ Ｃｔ ｍｅｔｈｏｄを用いて計算する。すべてのサンプルはＧｕｓ−βの発現量で標準化し、無処理のコントロールに対して誘導の倍率を計算する。遺伝子発現は、ＨＭＯ−フリーのコントロール細胞に対して倍増する。当該実験を３回くり返す。
結果において、２’−ＦＬおよびＬＮｎＴによる処置によってＭＵＣ２およびＴＦＦ３遺伝子の発現が、コントロール培養に対して増加することが示される。杯細胞遺伝子の発現の増加が全体的ではなく特異的であり、これはＣＨＳＴ５およびＧＡＬ３ＳＴ２がそれぞれ最小の誘導率または誘導されなかったことによって示される。ＭＵＣ２およびＴＦＦ３は粘膜関門の主要な要素であり、粘膜関門機能を向上させる。
【国際調査報告】
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