(57)【要約】  複数のキメラＶＳＶ−Ｇ（またはＶＳＶ−Ｇ変異体）タンパク質の設計および生成が、プラスミドＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＤＮＡおよびＲＮＡ、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド等の核酸のヒトおよび動物細胞への送達を高めるための移入ビヒクルとして使用される。これらのキメラＶＳＶ−Ｇタンパク質−核酸移入ビヒクルは、人間および動物におけるエクソンスキッピングおよび遺伝子置換に向けた遺伝子送達のための核酸を送達するための広範な用途を有する。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＳＶ−Ｇおよび核酸結合タンパク質を含むキメラタンパク質。
【請求項２】
前記核酸結合タンパク質は、ヒストンである、請求項１に記載のキメラタンパク質。
【請求項３】
前記ヒストンは、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４からなる群から選択される、請求項２に記載のキメラタンパク質。
【請求項４】
前記ヒストンは、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項２に記載のキメラタンパク質。
【請求項５】
前記ヒストンは、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項２に記載のキメラタンパク質。
【請求項６】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項４に記載のキメラタンパク質。
【請求項７】
配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、または配列番号２２、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項５に記載のキメラタンパク質。
【請求項８】
配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４に記載のキメラタンパク質。
【請求項９】
配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、または配列番号２２との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５に記載のキメラタンパク質。
【請求項１０】
前記核酸結合タンパク質は、ＳＳＢＰ−１である、請求項１に記載のキメラタンパク質。
【請求項１１】
ＳＳＢＰ−１は、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項１０に記載のキメラタンパク質。
【請求項１２】
ＳＳＢＰ−１は、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項１０に記載のキメラタンパク質。
【請求項１３】
配列番号９または配列番号１０、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項１１に記載のキメラタンパク質。
【請求項１４】
配列番号２３または配列番号２４、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項１２に記載のキメラタンパク質。
【請求項１５】
配列番号９または配列番号１０との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１１に記載のキメラタンパク質。
【請求項１６】
配列番号２３または配列番号２４との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１２に記載のキメラタンパク質。
【請求項１７】
前記核酸結合タンパク質は、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩである、請求項１に記載のキメラタンパク質。
【請求項１８】
ＲＮａｓｅ  ＩＩＩは、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項１７に記載のキメラタンパク質。
【請求項１９】
ＲＮａｓｅ  ＩＩＩは、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項１７に記載のキメラタンパク質。
【請求項２０】
配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項１８に記載のキメラタンパク質。
【請求項２１】
配列番号１４、配列番号２５、または配列番号２６、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項１９に記載のキメラタンパク質。
【請求項２２】
配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１８に記載のキメラタンパク質。
【請求項２３】
配列番号１４、配列番号２５、または配列番号２６との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１９に記載のキメラタンパク質。
【請求項２４】
対象における医学的状態を治療する方法であって、
ＶＳＶ−Ｇ、核酸結合タンパク質、および少なくとも１つの核酸を含むキメラタンパク質を含む治療化合物を提供するステップと；
前記対象に、薬学的に活性な量の前記治療化合物を投与するステップと
を含む上記方法。
【請求項２５】
前記核酸結合タンパク質は、ヒストン、ＳＳＢＰ−１、およびＲＮａｓｅ  ＩＩＩからなる群から選択される、請求項２３に記載の医学的状態を治療する方法。
【請求項２６】
請求項１に記載のキメラタンパク質を含む治療化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年４月２５日に出願された米国仮特許第６１／９８４，２９０号の利益を主張する、２０１５年４月２４日に出願された米国特許出願第１４／６９５，２６５号の利益を主張する、国際特許出願である。
【０００２】
医学的状態の治療のための人間および動物における核酸の標的化送達を可能にする、膜輸送ドメインおよび核酸結合ドメインを含むキメラまたは融合タンパク質が開示される。
【背景技術】
【０００３】
水疱性口内炎ウイルスＧ糖タンパク質（以降「ＶＳＶ−Ｇ」と呼ばれる）は、その広い指向性および安定性に起因して、偽型ウイルスベクターに広く使用される。これらのウイルスベクターは、人間および動物における遺伝子導入を促進する。ＶＳＶ−Ｇタンパク質はまた、いかなるウイルスベクターとも結合しない場合、無細胞条件において単独で裸のプラスミドＤＮＡと複合体を形成することができ、これはその後細胞にトランスフェクトされ得る。
【０００４】
水疱性口内炎ウイルスの融合性Ｇ糖タンパク質は、エンベロープタンパク質として作用することにより、ウイルス媒介遺伝子送達に有用なツールであることが判明している。その広い指向性に起因して、ＶＳＶ−Ｇは、より安定で高力価の偽型化マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）系レトロウイルスおよびレンチウイルス系ベクターを生成するための、効率的な代替エンベロープタンパク質として使用されており、それらは全て、遺伝子治療に効果的に使用されている。ＶＳＶのこの向汎性の理由は、長い間明確化されていなかった。最近、ＶＳＶは、広い分布を有する極めて遍在性の低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体を介して細胞に進入することが判明した。
【０００５】
しかしながら、ＶＳＶ−Ｇの使用に関連していくつかの制限が存在する。ＶＳＶ−Ｇは、産生細胞に対して傷害性であるが、テトラサイクリン調節されたプロモーターの使用が、この問題を克服するように役立っている。さらに、ＶＳＶ−Ｇ偽型化ウイルスの血清不活化が問題を引き起こし、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてある程度その機能が阻害される。後者の問題を克服するために、より熱安定性であると共に血清抵抗性であるＶＳＶ−Ｇ突然変異体が生成されている。Ｔ２３０Ｎ＋Ｔ３６８ＡまたはＫ６６Ｔ＋Ｓ１６２Ｔ＋Ｔ２３０Ｎ＋Ｔ３６８Ａ突然変異を保有するＶＳＶ−Ｇ突然変異体は、血清不活化に対するより高い抵抗性、およびより高い熱安定性を示した。
【０００６】
多くのウイルスベクターの融合性エンベロープタンパク質としての作用の他に、以前の研究では、精製された可溶性ＶＳＶ−Ｇ自体が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの無細胞系において、リポソームおよび脂質ベシクルの脂質二重層内に挿入され得ることが示された。さらに、ＶＳＶ−Ｇは、任意のトランスフェクション試薬の非存在下で裸のプラスミドＤＮＡと複合体を形成することができ、またそれにより裸のプラスミドＤＮＡの細胞内へのトランスフェクションを向上させることができることが示されている。ショ糖勾配沈降分析では、ＶＳＶ−ＧがプラスミドＤＮＡおよびＭＬＶ  ｇａｇ−ｐｏｌ粒子と結合し、高いＤＮＡトランスフェクト活性を伴って共沈降する三重複合体を形成することが実証された。このトランスフェクションは、ＶＳＶ−Ｇの抗体を添加することにより無効化することができた。
【０００７】
真核細胞において、遺伝性物質が、ＤＮＡおよびタンパク質からなるクロマチンとして知られる構造内に封入される。クロマチンの基本反復単位は、ヌクレオソームコアであり、これは、それぞれヒストンＨ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４の２つの分子により形成された八量体タンパク質コアの表面の周りの１．７の左巻き超螺旋回転内に巻かれたＤＮＡの１４７の塩基対からなる。ヒストンは、非常に貪欲に、および非特異的に核酸に結合する、極めて塩基性のタンパク質である。ヒストンは、その単離が比較的容易であることにより研究された最初のタンパク質類であり、４つ全てのヒストンタンパク質（Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４）が細菌内で発現され得る。これによって、明確に定義されたプロトコルを使用した無細胞系におけるヒストンタンパク質の精製および再構成が可能となった。天然ヒストンタンパク質は、広範な翻訳後修飾を受けるが、組換えヒストンは、翻訳後修飾を受けず、その高い発現レベルにより極めて純粋な形態で得ることができる。
【０００８】
一本鎖ＤＮＡ結合タンパク質（以降、「ＳＳＢＰ」と呼ばれる）は、遍在的に発現され、複製、組換え、損傷および修復を含む様々なＤＮＡ代謝プロセスに関与する。ＳＳＢＰ−１は、ミトコンドリア発生に関与するハウスキーピング遺伝子である。これはまた、ゲノム安定性の維持に関与する一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）結合複合体のサブユニットである。
【０００９】
リボヌクレアーゼＩＩＩ（以降、「ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ」と呼ばれる）は、細胞のほとんどにおいて発現され、ｐｒｅ−ｒＲＮＡの処理に関与する酵素である。これは、触媒ドメイン、および酵素のＣ末端に位置するＲＮＡ結合ドメインを有する。ヒトＲＮａｓｅ  ＩＩＩの阻害は、細胞死をもたらしたが、これは、この酵素の非常に重要な役割を示唆している。
【００１０】
遺伝子治療およびエクソンスキッピングは、過去２０年間にわたり、それぞれ人間における遺伝子導入または遺伝子操作の手段として役立ってきた。遺伝子治療およびエクソンスキッピングは、そもそも、原発性免疫不全等の利用可能な治療の選択肢がない有害な単一遺伝子疾患に対処することに重点を置いた治療戦略として開発された。これらのアプローチは、後に、神経変性疾患、がん、代謝障害、およびその他の治癒において、幅広い用途が見出された。
【００１１】
遺伝子治療は、ヒト細胞中に導入された場合にウイルスを産生することができるウイルスベクター中でクローニングされた対象となる遺伝子の送達が関与する。過去何年もの間遺伝子送達のためのレトロウイルスおよびレンチウイルス遺伝子移入系の継続的な改善にもかかわらず、これらの系の効率的および安全な臨床的応用の開発を妨げる厳しい制約が存在する。これらの制約には、対象となる細胞への感染を標的化することができないこと、不十分な導入、ヒトゲノム内に組み込まれ、突然変異を形成するウイルスベクターの傾向、高い免疫反応の誘発、静脈内または皮下投与が不可能であること、および遺伝子の局所的送達をもたらすに過ぎない筋肉内投与が含まれる。これらの制約に起因して、人間における使用のための遺伝子治療に基づく投薬はＦＤＡにより認可されていないが、過去２０年にわたり多くの臨床試験がなされ、また多くの臨床試験が継続中である。
【００１２】
エクソンスキッピングは、アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯ）が人間に送達され、遺伝子のスプライシングを調整して、機能性タンパク質を産生するか、またはそれらの産生を遮断するｍＲＮＡをもたらす治療戦略である。ＡＯは、特定のｍＲＮＡまたはｐｒｅ−ｍＲＮＡ配列に選択的に結合するように設計された短い核酸配列である。この戦略の基礎を成す非常に説得力のある原理にもかかわらず、ただ１つのＡＯしかＦＤＡにより認可されておらず（Ｖｉｔｒａｖｅｎｅ（商標）、免疫障害を有する患者におけるサイトメガロウイルス性網膜炎を阻害するための眼内注射；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、この薬物はもはや販売されていない。内皮および基底膜、細胞膜、ならびにファゴリソソームによる隔離等の生物学的障壁に起因して、細胞において薬理学的に有意な濃度を達成するのが困難であることを含む、ＡＯの使用に関連したある特定の制約が存在する。
【００１３】
遺伝子移入および送達に関するさらなる議論は、米国特許第７，５３１，６４７号（「Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ」（部位特異的遺伝子挿入のためのレンチウイルスベクター）；同第８，１５８，８２７号（「Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ」（トランスフェクション試薬））；および同第８，６５２，４６０号（「Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｕｓｅ」（遺伝子送達および使用の方法））ならびに米国特許出願第１４／６３５，０１２号（「Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎ−ＶＳＶ−Ｇ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｏ  Ｔｒｅａｔ  Ｄｙｓｔｒｏｐｈｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ」（ジストロフィン異常症を治療するためのキメラジストロフィン−ＶＳＶ−Ｇタンパク質）において見出すことができる。米国特許第７，５３１，６４７号、同第８，１５８，８２７号および同第８，６５２，４６０号、ならびに米国特許出願第１４／６３５，０１２号のそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００１４】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細を、付属の図面および以下の説明に記載する。本発明の他の特徴、目的、および利点は、説明および図面、ならびに特許請求の範囲から明らかとなる。
【発明の概要】
【００１５】
本明細書において、輸送ドメインおよび核酸結合ドメインを組み込んだキメラタンパク質、ならびにそれらのキメラタンパク質を治療核酸の標的化された送達に利用する方法が開示される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本開示は、ＶＳＶ−Ｇおよび核酸結合タンパク質を含むキメラタンパク質に関する。いくつかの実施形態において、核酸結合タンパク質は、ヒストンである。いくつかの実施形態において、ヒストンは、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、およびＨ４からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、ヒストンは、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される。いくつかの実施形態において、ヒストンは、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される。
【００１７】
いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、または配列番号２２、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、または配列番号２２との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【００１８】
いくつかの実施形態において、核酸結合タンパク質は、ＳＳＢＰ−１である。いくつかの実施形態において、ＳＳＢＰ−１は、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される。いくつかの実施形態において、ＳＳＢＰ−１は、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号９または配列番号１０、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号２３または配列番号２４、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号９または配列番号１０との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号２３または配列番号２４との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【００１９】
いくつかの実施形態において、核酸結合タンパク質は、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩである。いくつかの実施形態において、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩは、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される。いくつかの実施形態において、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩは、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１４、配列番号２５、または配列番号２６、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１１、配列番号１２、または配列番号１３との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１４、配列番号２５、または配列番号２６との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む。
【００２０】
いくつかの実施形態において、本開示は、対象における医学的状態を治療する方法であって、ＶＳＶ−Ｇ、核酸結合タンパク質、および少なくとも１つの核酸を含むキメラタンパク質を含む治療化合物を提供するステップと、前記対象に、薬学的に活性な量の前記治療化合物を投与するステップとを含む上記方法に関する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書において開示されるようなキメラタンパク質を含む治療化合物に関する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
発明としてみなされる主題は、本明細書の終わりに、特許請求の範囲において具体的に指摘され、明確に請求される。本発明の上記の、および他の目的、特徴、および利点は、添付の図面と併せてなされる以下の詳細な説明から明らかとなる。
【００２２】
【図１】ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析により精製されたキメラＶＳＶ−Ｇ  Ｈ２Ａタンパク質分画を示す図である。
【００２３】
【図２】図１に示されるようなＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析からの精製された分画におけるタンパク質のウェスタンブロット分析を示す図である。
【００２４】
【図３】ｅＧＦＰＮ１プラスミドでトランスフェクトされたＧＦＰ：ＨＥＫ  ２９３細胞の発現を示す図である。
【００２５】
【図４Ａ】精製されたＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａタンパク質を使用してＨＥＫ２９３細胞中でトランスフェクトされたＧＦＰ含有プラスミドｅＧＦＰＮ１を示す図である。
【００２６】
【図４Ｂ】精製されたＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａタンパク質を使用してＮＩＨ  ３Ｔ３細胞中でトランスフェクトされたＧＦＰ含有プラスミドｅＧＦＰＮ１を示す図である。
【００２７】
【図５】図１において単離されたもの等のキメラタンパク質を使用して医学的状態を治療する方法を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
いくつかの実施形態において、本開示は、ＶＳＶ−Ｇおよび少なくとも１つの核酸結合タンパク質を含むいくつかのキメラＶＳＶ−Ｇ（またはＶＳＶ−Ｇ変異体）タンパク質に関する。いくつかの実施形態において、これらのタンパク質は、プラスミドＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＤＮＡおよびＲＮＡ、ならびにアンチセンスオリゴヌクレオチド等の核酸のヒトおよび動物細胞への送達を高めるための移入ビヒクルとして使用される。
【００２９】
発現プラスミド中でクローニングされたＶＳＶ−Ｇは、細胞内にトランスフェクトされると、任意のウイルス成分の非存在下で沈降性ベシクルを形成する。本明細書に記載のキメラタンパク質は、無細胞系において核酸と効率的に複合体化し、ヒトおよび動物細胞におけるＡＯおよび対象となる遺伝子の送達のための効果的な手段として使用され得る。このアプローチは、遺伝子治療およびエクソンスキッピングに関連したいくつかのリスクおよび問題を軽減し、すなわち、ウイルス産生に関連した毒性のリスク、またはウイルスゲノム組み込みおよびその結果生じる可能な突然変異のリスクがない。ＶＳＶ−Ｇタンパク質は、ほぼ遍在的に発現されるＬＤＬ受容体を介して細胞内に進入するため、キメラＶＳＶ−Ｇ−核酸移入ビヒクルの導入効率は、エクソンスキッピングにより達成されるものよりも高い。本開示のいくつかの実施形態に一致するキメラＶＳＶ−Ｇ−核酸移入ビヒクルはまた、現在の遺伝子治療のメカニズムと置き換わることができる。この提案されるキメラＶＳＶ−Ｇ−核酸移入ビヒクルはウイルス産生に依存しないため、副作用がより少なく、皮下投与することができる。この系は、遺伝子置換に使用することができ、遺伝子突然変異により生じる多くの障害を治癒するための幅広い用途を有し得る。
【００３０】
いくつかの実施形態において、野生型ＶＳＶ−Ｇがキメラタンパク質において使用される。いくつかの実施形態において、ＶＳＶ−Ｇ変異体がキメラタンパク質において使用される。いくつかの実施形態において、ＶＳＶ−Ｇ変異体は、ＶＳＶ−Ｇの熱安定性および血清抵抗性突然変異体、例えば、Ｓ１６２Ｔ、Ｔ２３０Ｎ、Ｔ３６８Ａ、または組み合わされた突然変異体Ｔ２３０Ｎ＋Ｔ３６８ＡまたはＫ６６Ｔ＋Ｓ１６２Ｔ＋Ｔ２３０Ｎ＋Ｔ３６８Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異体ＶＳＶ−Ｇは、野生型ＶＳＶ−Ｇとの少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する。以下の実施形態において使用される場合、「ＶＳＶ−Ｇ」という用語は、野生型ＶＳＶ−ＧおよびＶＳＶ−Ｇ変異体の両方を指す。
【００３１】
いくつかの実施形態において、本開示のキメラタンパク質は、ＶＳＶ−Ｇ＋核酸結合タンパク質の組み合わされた配列との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、核酸結合タンパク質はＣ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化されている。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、ＶＳＶ−Ｇ＋核酸結合タンパク質の組み合わされた配列との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有し、核酸結合タンパク質はＮ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化されている。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号１、配列番号３、配列番号５、配列番号７、配列番号９、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１５、配列番号１７、配列番号１９、配列番号２１、配列番号２３、または配列番号２５の少なくとも１つとの少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態において、キメラタンパク質は、配列番号２、配列番号４、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１２、配列番号１４、配列番号１６、配列番号１８、配列番号２０、配列番号２２、配列番号２４、または配列番号２６の少なくとも１つとの少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、得られる変異体キメラタンパク質の薬理活性が維持される限り、任意の好適な突然変異、置換、付加、および欠失がキメラタンパク質になされてもよい。
【００３２】
いくつかの実施形態において、核酸結合タンパク質は、Ｈ２Ａヒストン、Ｈ２Ｂヒストン、Ｈ３ヒストン、Ｈ４ヒストン、ＳＳＢＰ−１、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ、およびそれらの組合せからなる群から選択される。
【００３３】
配列番号１は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ａヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００３４】
配列番号２は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ａヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００３５】
配列番号３は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ｂヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００３６】
配列番号４は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ｂヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００３７】
配列番号５は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ３ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００３８】
配列番号６は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ３ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００３９】
配列番号７は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ４ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００４０】
配列番号８は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ４ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００４１】
配列番号９は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＳＳＢＰ−１−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００４２】
配列番号１０は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＳＳＢＰ−１−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００４３】
配列番号１１は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＲＮａｓｅ  ＩＩＩ−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００４４】
配列番号１２は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｃ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＲＮａｓｅ  ＩＩＩ−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００４５】
配列番号１３は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有する部分ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００４６】
配列番号１４は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有する部分ＲＮａｓｅ  ＩＩＩ−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００４７】
配列番号１５は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ａヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００４８】
配列番号１６は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ａヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００４９】
配列番号１７は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ｂヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００５０】
配列番号１８は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ２Ｂヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００５１】
配列番号１９は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ３ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００５２】
配列番号２０は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ３ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００５３】
配列番号２１は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ４ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００５４】
配列番号２２は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＨ４ヒストン−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００５５】
配列番号２３は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＳＳＢＰ−１−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００５６】
配列番号２４は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＳＳＢＰ−１−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００５７】
配列番号２５は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＲＮａｓｅ  ＩＩＩ−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のヌクレオチド配列である。
【００５８】
配列番号２６は、本開示のいくつかの実施形態に一致する、Ｎ末端にＶＳＶ−Ｇを有するＲＮａｓｅ  ＩＩＩ−ＶＳＶ−Ｇキメラタンパク質のアミノ酸配列である。
【００５９】
いくつかの実施形態において、本開示は、上記で特定される実施形態において説明されるものと一致するキメラタンパク質を含む治療化合物に関する。いくつかの実施形態において、図５に示されるように、本開示は、対象における医学的状態を治療する方法に関する。いくつかの実施形態において、対象を治療する方法は、ＶＳＶ−Ｇ、核酸結合タンパク質、および少なくとも１つの核酸を含むキメラタンパク質を含む治療化合物を提供するステップ５００と、対象に、薬学的に活性な量の治療化合物を投与するステップ５１０とを含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つの核酸は、治療遺伝子である。
【実施例】
【００６０】
以下の実施例は、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化されたヒトヒストンＨ２Ａタンパク質から構築されたＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質を利用する。Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｓｋｏｋｉｅ、ＩＬからの適切な技術を使用して、ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラ遺伝子を合成した。ＥｃｏＲＩおよびＮｏｔＩ制限酵素部位で、哺乳動物発現ベクターｐＴＴ５においてＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａ遺伝子をクローニングした。確認のために、プラスミドを調製し、配列決定した。
【００６１】
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、トランスフェクションの１日前に約７０％コンフルエンスまで継代した（３×Ｔ７５フラスコ、約７．５×１０６細胞／フラスコ）。翌日、Ｔ７５フラスコ内の細胞を、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を使用してトランスフェクトした（Ｔ７５フラスコ当たり：３：１の比；２０ｕｇのＤＮＡ；および６０μＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（登録商標）２０００）。フラスコを３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。トランスフェクションから２４時間後、調整培地を除去し、新鮮培地で置き換えた（１４ｍＬ／フラスコ）。細胞をさらに一晩インキュベートした。調整培地を採取し、新鮮培地で置き換え（１４ｍＬ／フラスコ）、再び一晩インキュベートした。次いで、採取した培地を、０．４５μｍフィルタを使用して濾過し、−８０℃で保存した。翌日、再び調整培地を採取し、０．４５μｍフィルタを使用して濾過した。調整培地を、前日からの培地（約８４ｍＬ）と共にプールした。
【００６２】
調整培地を、Ｏｐｔｉｍａ（登録商標）Ｕｌｔｒａ  Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ（スイングバケットロータＳＷ３２Ｔｉを有する）（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｉｎｃ．、Ｂｒｅａ、ＣＡ）を使用して、２５，０００ｒｐｍで２時間、４℃で遠心分離した（３遠心管、約２８ｍＬ／管）。上清を除去し、ペレットを管当たり５ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁した。５ｍＬの２０％スクロース／ＰＢＳクッションおよび５ｍＬの再懸濁ペレットを、新たな遠心管に入れた。その上にＰＢＳを追加し、遠心管を満たした。試料を２５，０００ｒｐｍで６時間、４℃で遠心分離した。上清を除去し、各ペレットを１００μＬのＰＢＳ（全体積３００μＬ）に再懸濁した。さらに１００μＬのＰＢＳを各遠心管に追加し、任意の残留したＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａタンパク質を再懸濁した（全体積３００μＬ）。タンパク質濃度をＡ６６０アッセイにより測定した。
【００６３】
このようにして精製されたキメラＶＳＶ−Ｇ  Ｈ２Ａタンパク質分画を、ニトロセルロース膜に移す前にポリアクリルアミドゲル上で泳動させた。ＢｉｏＲａｄ  Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  Ｐｌｕｓ  Ｐｒｏｔｅｉｎ（商標）マーカーを含む４〜１５％ＢｉｏＲａｄ  ＴＧＸ（商標）ゲル（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）中で、３００Ｖで２１分間タンパク質を泳動させ、次いでＳＹＰＲＯ（登録商標）−Ｏｒａｎｇｅ染色（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，  Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）で染色したが、その結果は図１おいて確認され得る。図１に見られる各レーンの内容は、以下の通りである：レーン１：陰性対照−非トランスフェクト細胞のみ；レーン２：分子量マーカー；レーン３：Ｍ２０３３６−０１（２０μＬ負荷）；レーン４：Ｍ２０３３６−０１（２μＬ負荷）；レーン５：分子量マーカー；およびレーン６：Ｍ２０３３６−０２（２０μＬ負荷）。ＨＥＫ２９３非トランスフェクトレーンは、いかなるタンパク質に対しても染色されず、一方精製ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質の分画を含有する残りのレーンは、タンパク質に対して染色され、分画中の精製タンパク質の存在が確認された。
【００６４】
精製分画中のタンパク質の存在が確認された後、上述と同じ条件を使用してタンパク質を泳動させ、ニトロセルロース膜に移した。抗ＶＳＶ−Ｇ−一次抗体および抗ウサギＨＲＰ二次抗体でのプローブにより、キメラＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａタンパク質を検出した。Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ（登録商標）Ｔｕｒｂｏ（商標）を使用して、タンパク質をニトロセルロース膜に移した。ＳＮＡＰ  ｉｄ（登録商標）システム（Ｍｅｒｃｋ  ＫＧＡＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ、ＤＥ）およびＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ（登録商標）Ｗｅｓｔ  Ｐｉｃｏ化学発光基質（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，  Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を使用して信号を検出したが、その結果は、図２に示されるウェスタンブロットにおいて確認され得る。図２に見られる各レーンの内容は、以下の通りである：レーン１：分子量マーカー；レーン２：Ｍ２０３３６−０１（２０μＬ負荷）；レーン３：分子量マーカー；レーン４：Ｍ２０３３６−０１（２μＬ負荷）；レーン５：分子量マーカー；レーン６：Ｍ２０３３６−０２（２０μＬ負荷）；レーン７：分子量マーカー；レーン８：陰性対照−非トランスフェクト細胞のみ。２０μＬの負荷のタンパク質を含有するレーン２および６において、７５ｋＤのＶＳＶ−Ｇ  Ｈ２Ａキメラタンパク質のサイズに特異的なバンドが検出された。２μＬの負荷の精製タンパク質分画、および非トランスフェクトＨＥＫ２９３タンパク質分画を含むレーン４および８では、バンドは検出されなかった。したがって、精製分画中のＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質の存在が確認された。
【００６５】
精製ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質の、核酸移入ビヒクルとして作用する能力を評価するために、ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質を利用して、ＨＥＫ２９３細胞およびＮＩＨ  ３Ｔ３細胞を緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）発現プラスミドｅＧＦＰＮ１でトランスフェクトした。まず、ＶｉａＦｅｃｔ（商標）トランスフェクション試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を使用してｅＧＦＰＮ１プラスミドをＨＥＫ２９３細胞中でトランスフェクトし、ＧＦＰが適切に発現することを確認した。成功したＧＦＰの発現を図３に示す。
【００６６】
ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質が移入ビヒクルとして使用された場合にＧＦＰの同様の発現が観察され得るかを決定するために、２μｇのｅＧＦＰＮ１プラスミドを３μｇのＶＳＶ−Ｇ  Ｈ２Ａ精製キメラタンパク質と混合し、６ウェルプレートにおいて、カバースリップ上に播種されたＨＥＫ２９３およびＮＩＨ  ３Ｔ３細胞のそれぞれに追加した。分析の前に、細胞を４８時間インキュベートした。ＧＦＰが発現したかを検出するために、細胞内の既存の培地を吸引し、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中で洗浄し、４％パラホルムアルデヒド溶液中で固定した。細胞を再びＤＰＢＳで数回洗浄し、４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）で染色し、次いで適切な封入剤中に封入し、蛍光顕微鏡下で観察した。この手順の結果は、図４Ａおよび４Ｂにおいて確認され得るが、ＤＡＰＩ染色は核を示し、緑色蛍光はＧＦＰを示す。興味深いことに、ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａ精製キメラタンパク質がｅＧＦＰＮ１プラスミドをトランスフェクトするための移入ビヒクルとして使用されたＨＥＫ２９３およびＮＩＨ  ３Ｔ３細胞は、ＧＦＰを発現した。したがって、ＶＳＶ−Ｇ−Ｈ２Ａキメラタンパク質、ならびに本開示において開示される他のキメラタンパク質およびそれらの機能的均等物は、本開示により提案されるような核酸移入ビヒクルとして使用される候補であると結論付けられた。
【００６７】
本発明の１つ以上の実施形態が説明された。それにもかかわらず、本発明の精神および範囲から逸脱せずに、様々な修正がなされてもよいことが理解される。したがって、その他の実施形態も、以下の特許請求の範囲内である。
【図１】
2017517562.tif 000003
【図２】
2017517562.tif 000004
【図３】
2017517562.tif 000005
【図４Ａ】
2017517562.tif 000006
【図４Ｂ】
2017517562.tif 000007
【図５】
2017517562.tif 000008
【配列表】
2017517562000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成28年1月4日(2016.1.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＶＳＶ−Ｇおよび核酸結合タンパク質を含むキメラタンパク質であって、前記核酸結合タンパク質は、ヒストンであり、前記キメラタンパク質は、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、または配列番号８、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、前記キメラタンパク質。
【請求項２】
ＶＳＶ−Ｇおよび核酸結合タンパク質を含むキメラタンパク質であって、前記核酸結合タンパク質は、ヒストンであり、前記キメラタンパク質は、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、または配列番号２２、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、前記キメラタンパク質。
【請求項３】
ＶＳＶ−Ｇおよび核酸結合タンパク質を含むキメラタンパク質であって、前記核酸結合タンパク質は、ＳＳＢＰ−１である、前記キメラタンパク質。
【請求項４】
ＳＳＢＰ−１は、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項３に記載のキメラタンパク質。
【請求項５】
ＳＳＢＰ−１は、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項３に記載のキメラタンパク質。
【請求項６】
配列番号９または配列番号１０、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項４に記載のキメラタンパク質。
【請求項７】
配列番号２３または配列番号２４、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項５に記載のキメラタンパク質。
【請求項８】
配列番号９または配列番号１０との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項４に記載のキメラタンパク質。
【請求項９】
配列番号２３または配列番号２４との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項５に記載のキメラタンパク質。
【請求項１０】
前記核酸結合タンパク質は、ＲＮａｓｅ  ＩＩＩである、請求項３に記載のキメラタンパク質。
【請求項１１】
ＲＮａｓｅ  ＩＩＩは、Ｃ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項１０に記載のキメラタンパク質。
【請求項１２】
ＲＮａｓｅ  ＩＩＩは、Ｎ末端においてＶＳＶ−Ｇでタグ化される、請求項１０に記載のキメラタンパク質。
【請求項１３】
配列番号１１または配列番号１２、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項１１に記載のキメラタンパク質。
【請求項１４】
配列番号１３、配列番号１４、配列番号２５、または配列番号２６、およびそれらの薬理学的に許容される均等物を含む、請求項１２に記載のキメラタンパク質。
【請求項１５】
配列番号１１または配列番号１２との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１１に記載のキメラタンパク質。
【請求項１６】
配列番号１３、配列番号１４、配列番号２５、または配列番号２６との少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を含む、請求項１２に記載のキメラタンパク質。
【請求項１７】
対象における医学的状態を治療する方法であって、
ＶＳＶ−Ｇ、核酸結合タンパク質、および少なくとも１つの核酸を含むキメラタンパク質を含む治療化合物を提供するステップと；
前記対象に、薬学的に活性な量の前記治療化合物を投与するステップと
を含む方法。
【請求項１８】
前記核酸結合タンパク質は、ヒストン、ＳＳＢＰ−１、およびＲＮａｓｅ  ＩＩＩからなる群から選択される、請求項１６に記載の医学的状態を治療する方法。
【請求項１９】
請求項１に記載のキメラタンパク質を含む治療化合物。
【請求項２０】
ＶＳＶ−Ｇおよび核酸結合タンパク質を含むキメラタンパク質。
【国際調査報告】
2017517562.tif 000009
2017517562.tif 000010
2017517562.tif 000011
2017517562.tif 000012