(57)【要約】本発明は、新規な細胞結合剤−細胞毒性剤複合体であって、細胞結合剤（ＣＢＡ）が細胞毒性剤に対して、ＣＢＡ上の２−ヒドロキシエチルアミン部分の酸化から得られるアルデヒド基によって共有結合する、複合体に関する。本発明はまた、本発明の複合体の調製方法も提供する。本発明は更に、本発明の複合体を用いる、哺乳動物における、異常な細胞増殖の抑制または増殖的障害の治療に有用な組成物及び方法も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式
【化１】
2017529837.tif 000176
によって表される細胞結合剤−細胞毒性剤複合体またはその薬学的に許容される塩であって、式中、
ＣＢＡはＪＣＢ’基に共有結合した細胞結合剤であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡ上のアルデヒド基と、基Ｌに結合したアルデヒドと反応性の基とを反応させることによって形成される部分であり、但し、前記アルデヒド基は、以下の構造式
【化２】
2017529837.tif 000177
によって表される２−ヒドロキシエチルアミン部分の酸化に由来し、
前記２−ヒドロキシエチルアミン部分は、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり、
Ｌはスペーサーまたは結合であり、
ＪＤ’は、細胞毒性剤Ｄを基Ｌと結合させる連結部分であるか、またはＬが結合の場合には存在せず、
Ｄは、連結部分ＪＤ’を介してＬに、またはＬが結合の場合には、ＪＣＢ’を介してＣＢＡに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である、
前記複合体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２】
前記細胞結合剤が、抗体もしくはその抗原結合部分、またはＤＡＲＰｉｎ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、Ｆｙｎｏｍｅｒ、クーニッツドメインペプチド、モノボディ（もしくはアドネクチン）、トリボディ、またはナノフィチンなどの抗体模倣体である、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
前記細胞結合剤が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（またはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ(例えば、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ)、Ｔ細胞結合因子（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ｕｎｉｂｏｄｙもしくはｄｕｏｂｏｄｙ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｐｒｏｂｏｄｙ、細胞内発現抗体、または多重特異性抗体などの、抗体またはその抗原結合部分である、請求項１に記載の複合体。
【請求項４】
前記アルデヒド基が、前記抗体またはその抗原結合部分のＮ末端に位置する、請求項３に記載の複合体。
【請求項５】
前記Ｎ末端アルデヒド基がＮ末端セリンの酸化に由来する、請求項４に記載の複合体。
【請求項６】
前記Ｎ末端セリンが、前記抗体またはその抗原結合部分中に操作によって導入された、請求項５に記載の複合体。
【請求項７】
前記抗体またはその抗原結合部分が、請求項９０〜９３のいずれか１項に記載の組換え抗体のいずれか１つである、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記Ｎ末端セリンが、天然に前記抗体またはその抗原結合部分に存在する、請求項４に記載の複合体。
【請求項９】
前記抗体またはその抗原結合部分が配列番号３の軽鎖配列を含む、請求項３に記載の複合体。
【請求項１０】
前記抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体またはもしくはその抗原結合部分の、キメラ、ヒト化、またはヒト抗体その抗原結合部分である、請求項３に記載の複合体。
【請求項１１】
前記ヒト化抗体またはその抗原結合部分が、表面再構成された抗体もしくはＣＤＲグラフト化抗体またはそれらの抗原結合部分である、請求項１０に記載の複合体。
【請求項１２】
前記Ｎ末端アルデヒド基が、前記抗体もしくはその抗原結合部分の一方もしくは両方の重鎖上に、または前記抗体もしくはその抗原結合部分の一方もしくは両方の軽鎖上に位置するか、あるいはそれらの組み合わせである、請求項４〜１１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１３】
前記アルデヒドと反応性の基が、ヒドラジン、ヒドラジドまたはヒドロキシルアミンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１４】
前記アルデヒドと反応性の基が、
【化３】
2017529837.tif 000178
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ及びＸｂ’はそれぞれ独立に、−ＯＨ、−ＳＨまたは−ＮＨ２であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ＸｃはＮまたはＣＨである）
から選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１５】
前記アルデヒドと反応性の基が
【化４】
2017529837.tif 000179
である、請求項１４に記載の複合体。
【請求項１６】
ＪＣＢ’が以下の構造式
【化５】
2017529837.tif 000180
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ１及びＸｂ１’はそれぞれ独立に−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨ−であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ｓ１は前記細胞結合剤に共有結合した部位であり、ｓ２は基Ｌに共有結合した部位である）のいずれか１つによって表される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１７】
ＪＣＢ’が、
【化６】
2017529837.tif 000181
である、請求項１６に記載の複合体。
【請求項１８】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化７】
2017529837.tif 000182
（式中、
ｓ３は基ＪＣＢ’に共有結合した部位であり、
ｓ４は基Ｄに共有結合した部位であり、
Ｚａ１は存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９−、−ＮＲ９Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｚａ２は存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９−、または−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｒ９はＨまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｐ及びｐ’はそれぞれ独立に１〜１０の整数であり、
ＱはＨ、荷電した置換基またはイオン化可能な基であり、
それぞれのＲａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｑ１及びｒ１は、ｑ１及びｒ１が共に０であることはないとの条件で、それぞれ独立に０〜１０の整数である）
によって表される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１９】
Ｑが、ｉ）Ｈ、ｉｉ）−ＳＯ３Ｈ、−Ｚ’−ＳＯ３Ｈ、−ＯＰＯ３Ｈ２、−Ｚ’−ＯＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｚ’−ＰＯ３Ｈ２、−ＣＯ２Ｈ、−Ｚ’−ＣＯ２Ｈ、−ＮＲ１１Ｒ１２、もしくは−Ｚ’−ＮＲ１１Ｒ１２、またはそれらの薬学的に許容される塩、あるいはｉｉｉ）−Ｎ＋Ｒ１４Ｒ１５Ｒ１６Ｘ−または−Ｚ’−Ｎ＋Ｒ１４Ｒ１５Ｒ１６Ｘ−であり、Ｚ’は任意選択で置換されたアルキレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、または任意選択で置換されたフェニレンであり、Ｒ１４〜Ｒ１６はそれぞれ独立に任意選択で置換されたアルキルであり、Ｘ−は薬学的に許容されるアニオンである、請求項１８に記載の複合体。
【請求項２０】
Ｑが−ＳＯ３Ｈもしくは−ＣＯ２Ｈまたはそれらの薬学的に許容される塩である、請求項１９に記載の複合体。
【請求項２１】
Ｚａ１が存在せず、Ｚａ２が−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−または−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−である、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２２】
Ｒ９がＨである、請求項２１に記載の複合体。
【請求項２３】
Ｚａ１及びＺａ２が共に存在しない、請求項１８〜２０のいずれか１項に記載の複合体
。
【請求項２４】
Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３及びＲａ４が全て−Ｈであり、ｑ及びｒがそれぞれ独立に０〜４の整数である、請求項１８〜２３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２５】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化８】
2017529837.tif 000183
（式中、ＲはＨもしくは−ＳＯ３Ｈである）によって表される、請求項１８に記載の複合体またはその薬学的に許容される塩またはその薬学的に許容される塩。
【請求項２６】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化９】
2017529837.tif 000184
【化１０】
2017529837.tif 000185
（式中、
ｓ３はＪＣＢ’基に共有結合した部位であり、
ｓ４は基Ｄに共有結合した部位であり、
Ｚｂ１及びＺｂ２はそれぞれ独立に、存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、
−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−もしくは−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、または−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、但し、ｐ及びｐ’は独立に１〜１０００の整数であり、
Ｅ１及びＥ２の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−、他方は−ＮＲ９−であるか、またはＥ１及びＥ２の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−ＮＲ９−、他方は存在せず、
Ｒ９はＨまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
Ｐは［ＸＸ］１〜１０、但し、ＸＸは独立に選択されるアミノ酸の残基であるか、またはＰは−（ＮＲｍ−ＣＨ２ＣＨ２）ｓ−であり、
ｓは１〜５の整数であり、
ＲｍはＨ、または荷電した置換基もしくはイオン化可能な基で任意選択により置換されたアルキルであり、
それぞれのＲｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５及びＲｂ６はそれぞれ独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
それぞれのｍ１及びｎ１は独立に、０〜１０の整数である）
によって表される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項２７】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化１１】
2017529837.tif 000186
（式中、
Ｚｂ１及びＺｂ２は共に存在しないか、またはＺｂ１及びＺｂ２の一方は存在せず他方は−ＣＨ２−Ｏ−もしくは−Ｏ−ＣＨ２−であり、
ｎ１は１〜６の整数である）
によって表される、請求項２６に記載の複合体。
【請求項２８】
Ｒｂ１及びＲｂ２が共にＨである、請求項２７に記載の複合体。
【請求項２９】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化１２】
2017529837.tif 000187
（式中、
Ｚｂ１及びＺｂ２はそれぞれ独立に、存在しない、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、または−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−であり、
ｎ１及びｍ１はそれぞれ独立に１〜６の整数である）
によって表される、請求項２６に記載の複合体。
【請求項３０】
Ｚｂ１及びＺｂ２が共に存在しない、請求項２９に記載の複合体。
【請求項３１】
Ｚｂ１が−ＣＨ２−Ｏ−であり、Ｚｂ２が存在しない、請求項２９に記載の複合体。
【請求項３２】
Ｚｂ１が−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−であり、Ｚｂ２が−Ｏ−ＣＨ２−または存在しない、請求項２９に記載の複合体。
【請求項３３】
Ｒ９が−Ｈである、請求項２６、２９または３２に記載の複合体。
【請求項３４】
Ｐが［ＸＸ］２〜４である、請求項２６及び２９〜３３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項３５】
Ｐが［ＸＸ］２または［ＸＸ］３である、請求項３４に記載の複合体。
【請求項３６】
各ＸＸが、天然起源のアミノ酸、合成アミノ酸、アミノ酸類似体、または前記天然起源のアミノ酸に類似する形態で機能するアミノ酸模倣体から選択される、独立に選択されるアミノ酸の前記残基である、請求項２６及び２９〜３５に記載の複合体。
【請求項３７】
各ＸＸが、それぞれ独立してＬまたはＤ異性体としての、ヒスチジン、アラニン、イソロイシン、アルギニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セリン、チロシン、Ｎ−メチル−ヒスチジン、Ｎ−メチル−アラニン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−アルギニン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−アスパラギン、Ｎ−メチル−リシン、Ｎ−メチル−アスパラギン酸、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−システイン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−グルタミン酸、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−グルタミン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−グリシン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−プロリン、Ｎ−メチル−セリン、Ｎ−メチル−チロシン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ｓｅｌｉｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｏ−ホスホセリン、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、シトルリン、オルニチン、システインスルホン酸、システインスルフィン酸、３−アミノアラニン、３−
ジメチルアミノアラニン、２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）ブタン酸、２，４−ジアミノブタン酸、２−アミノ−６−（ジメチルアミノ）ヘキサン酸、２−アミノ−５−（ジメチルアミノ）ペンタン酸、及びβ−アラニンからなる群より選択される、独立に選択されるアミノ酸の前記残基である、請求項３６に記載の複合体。
【請求項３８】
各ＸＸが独立にグリシンまたはアラニンの前記残基である、請求項３７に記載の複合体。
【請求項３９】
Ｐがプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである、請求項２６及び２９〜３８に記載の複合体。
【請求項４０】
Ｐが腫瘍組織において発現されるプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである、請求項３９に記載の複合体。
【請求項４１】
Ｐがリソソームプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである、請求項３９に記載の複合体。
【請求項４２】
Ｐが、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、及びＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ。、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、ならびにＡｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａからなる群より選択される、請求項２６、２９〜３４ならびに３６〜４１に記載の複合体。
【請求項４３】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−ＧｌｙまたはＡｌａ−Ａｌａである、請求項２６及び２８〜４１に記載の複合体。
【請求項４４】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化１３】
2017529837.tif 000188
によって表される、請求項２６及び３４〜４３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４５】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化１４】
2017529837.tif 000189
（式中、
ｓ３は基ＪＣＢ’に共有結合した部位であり、
ｓ４は基Ｄに共有結合した部位であり、
Ｚｃ１は、
存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−もしくは−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−、但し、ｐ及びｐ’は独立に１〜１０００の整数であり、
ＪＤ’は、
【化１５】
2017529837.tif 000190
但し、ｓ１’は細胞毒性剤Ｄに共有結合した部位、ｓ２’は基Ａ’に共有結合した部位であり、
Ａ及びＡ’はそれぞれ独立に、任意選択で置換されたアルキレン、任意選択で置換されたアルケニレン、任意選択で置換されたアルキニレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、任意選択で置換されたシクロアルケニレンまたは任意選択で置換されたシクロアルキニレンであり、
Ｑは−Ｚ１−Ｐ−Ｚ２−であり、
Ｑ’は−Ｚ１’−Ｐ’−Ｚ２’−であり、
Ｚ１及びＺ２の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−、他方は−ＮＲｈ−であり、
Ｚ１’及びＺ２’の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−、他方は−ＮＲｈ’−であり、
Ｐ及びＰ’はそれぞれ独立に、存在しない、任意選択で置換されたアルキレン、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｊ−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｊ−、または［ＸＸ］１〜１０、但し、各ＸＸは独立に選択されるアミノ酸の残基であり、
Ｊは１〜５００の整数であり、
ｋは０または１であり、
Ｌは、−（ＣＲ５Ｒ６）ｖ−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｑ−Ｎ（Ｒｇ）−（ＣＲ９Ｒ１０）ｒ−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｑ−Ｃ（Ｒａ）（Ｒｇ）−（ＣＲ９Ｒ１０）ｒまたは−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｓ−Ｎ（Ｒｇ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−Ｎ（Ｒｇ’）−（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ−であり、
Ｒｇ及びＲｇ’それぞれ独立に−（ＣＲ１７Ｒ１８）ｐ−Ｚ−Ｖであり、
ｐは１〜５の整数であり、
ＶはＨ、荷電した置換基またはイオン化可能な基であり、
Ｚは存在しない、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｈ−アルキレン−または−ＮＲｈ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキレン−であり、
それぞれのＲｈ及びＲｈ’は、独立にＨまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
それぞれのＲ５〜Ｒ１８は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ及びｖはそれぞれ独立に０〜１０の整数である）
によって表される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項４６】
−Ｌ−ＪＤ’−が、以下の構造式
【化１６】
2017529837.tif 000191
（式中、
それぞれのＲ１９〜Ｒ２２は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｍ及びｎはそれぞれ独立に０〜１０である）
によって表される、請求項４５に記載の複合体。
【請求項４７】
Ｒ１９〜Ｒ２２がそれぞれＨであり、Ｒ５及びＲ６がそれぞれＨであり、Ｒ７〜Ｒ１０がそれぞれＨであり、Ｒ１１〜Ｒ１６がそれぞれＨである、請求項４６に記載の複合体。
【請求項４８】
それぞれのＰ及びＰ’が独立に［ＸＸ］１〜１０である、請求項４５〜４７に記載の複合体。
【請求項４９】
各ＸＸが、天然起源のアミノ酸、合成アミノ酸、アミノ酸類似体、または前記天然起源のアミノ酸に類似する形態で機能するアミノ酸模倣体から選択される、独立に選択される
アミノ酸の前記残基である、請求項４５〜４８に記載の複合体。
【請求項５０】
各ＸＸが、それぞれ独立してＬまたはＤ異性体としての、ヒスチジン、アラニン、イソロイシン、アルギニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セリン、チロシン、Ｎ−メチル−ヒスチジン、Ｎ−メチル−アラニン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−アルギニン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−アスパラギン、Ｎ−メチル−リシン、Ｎ−メチル−アスパラギン酸、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−システイン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−グルタミン酸、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−グルタミン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−グリシン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−プロリン、Ｎ−メチル−セリン、Ｎ−メチル−チロシン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ｓｅｌｉｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ、Ｏ−ホスホセリン、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、シトルリン、オルニチン、システインスルホン酸、システインスルフィン酸、３−アミノアラニン、３−ジメチルアミノアラニン、２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）ブタン酸、２，４−ジアミノブタン酸、２−アミノ−６−（ジメチルアミノ）ヘキサン酸、２−アミノ−５−（ジメチルアミノ）ペンタン酸、及びβ−アラニンからなる群より選択される、独立に選択されるアミノ酸の前記残基である、請求項４９に記載の複合体。
【請求項５１】
各ＸＸが独立に選択されるグリシンまたはアラニンの前記残基である、請求項５０に記載の複合体。
【請求項５２】
Ｐ及びＰ’がそれぞれ、プロテアーゼによって開裂可能なペプチドである、請求項４５〜５１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５３】
Ｐ及びＰ’がそれぞれ、腫瘍組織において発現されるプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである、請求項５２に記載の複合体。
【請求項５４】
Ｐ及びＰ’がそれぞれ、リソソームプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである、請求項５２に記載の複合体。
【請求項５５】
Ｐ及びＰ’がそれぞれ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、及びＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ。、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ、ならびにβ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙからなる群より選択される、請求項４５〜５４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５６】
Ｐ及びＰ’がそれぞれ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ、またはβ
−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙである、請求項４５〜５４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５７】
Ｄがメイタンシノイドである、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５８】
Ｄが、以下の構造式
【化１７】
2017529837.tif 000192
（式中、
それぞれのＲＭ、ＲＭ’、及びＲＭ”は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
それぞれのＲ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は独立に、Ｈ、任意選択で置換された任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアリール、または任意選択で置換されたヘテロアリールであり、
ｉは０〜１５の整数であり、
ｓ５は基ＪＤ’に共有結合した部位である）
によって表されるメイタンシノイドである、請求項１〜２５及び４５〜５６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項５９】
Ｄが、以下の構造式
【化１８】
2017529837.tif 000193
または
【化１９】
2017529837.tif 000194
によって表される、請求項５８に記載の複合体。
【請求項６０】
Ｄが、以下の構造式
【化２０】
2017529837.tif 000195
（式中、それぞれのＲＭ、ＲＭ’、及びＲＭ”は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、ｓ５は基ＪＤ’に共有結合した部位である）
によって表されるメイタンシノイドである、請求項１〜１７及び２６〜４４のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６１】
Ｄが、以下の構造式
【化２１】
2017529837.tif 000196
によって表される、請求項６０に記載の複合体。
【請求項６２】
Ｄがベンゾジアゼピン化合物である、請求項１〜５６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６３】
Ｄが、以下の構造式
【化２２】
2017529837.tif 000197
【化２３】
2017529837.tif 000198
【化２４】
2017529837.tif 000199
【化２５】
2017529837.tif 000200
【化２６】
2017529837.tif 000201
【化２７】
2017529837.tif 000202
【化２８】
2017529837.tif 000203
【化２９】
2017529837.tif 000204
【化３０】
2017529837.tif 000205
（式中、
ＮとＣとの間の二重線
【化３１】
2017529837.tif 000206
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは、−Ｈ、それに結合した反応性基を有する連結基、またはアミン保護基であり（好ましくは、Ｘは−Ｈ）、
Ｙは、−Ｈ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ、”−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍから選択され、但し、Ｍは−ＨまたはＮａ＋もしくはＫ＋などのカチオンであり、
Ｒは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルまたはＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃであり、但し、ｎは１〜２４の整数であり、Ｒｃは１〜４の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、
Ｒ’及びＲ’’は同一であるかまたは異なり、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＲＲｇ’、−ＣＯＲ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１８の炭素原子を有する、任意選択で置換されたアリール、Ｏ、Ｓ、Ｎ及びＰから選択される１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環、ＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ（但し、ｎは１〜２４の整数、好ましくは、ｎは２、４もしくは８であり、Ｒｇ’は−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃである）から選択され、
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１〜１０の炭素原子を有する、置換されたまたは無置換の直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、及びアミン保護基からなる群より選択され、
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、置換されたまたは無置換の直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され、
Ａ及びＡ’は−Ｏ−及び−Ｓ−から選択され、
Ｗ’は、存在しないか、または−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−もしくは−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され、
Ｒｘは、存在しないか、または１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキルから選択され、
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｋ、（但し、Ｒｋは、−Ｈ、任意選択で第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）もしくは第三級アミノ（例えば、−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を有する、１〜６の炭素原子を有する直鎖、分岐、環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５または６員の窒素含有ヘテロ環（但し、Ｒ１０１及びＲ１０２はそれぞれ独立に１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル）であり、
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−から選択され、
Ｘ’’及びＸ’’’は同一であるかまたは異なり、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＲ’−、−ＣＯ−、−ＢＨ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−から独立に選択され、
Ｙ’’及びＹ’’’は同一であるかまたは異なり、−Ｏ、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＲ’−または−Ｓ−から独立に選択され、
Ｚ’’及びＺ’’’は同一であるかまたは異なり、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＣＲ７’Ｒ８’−、−ＮＲ９’−、−Ｏ−、及び−Ｓ−から独立に選択され、
ｎは０、１、２及び３から選択され、
Ｒ７’及びＲ８’は同一であるかまたは異なり、それぞれ−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸
、２〜６のアミノ酸を有するペプチド単位、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキルから独立に選択され、
Ｒ９’は、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立に選択され、
ＲＡ、ＲＡ’、ＲＢ及びＲＢ’は同一であるかもしくは異なり、−Ｈ、ハライド、もしくは１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された分岐、直鎖もしくは環状のアルキルから独立に選択されるか、または、ＲＡ及びＲＡ’ならびに／もしくはＲＢ及びＲＢ’は、共にそれぞれ基＝Ｂ及び＝Ｂ’を含有する二重結合を形成し、
＝Ｂ及び＝Ｂ’は同一であるかまたは異なり、任意選択で置換された分岐もしくは直鎖のアルケニルもしくはカルボニル基から独立に選択され、
ＱＡはＱＡ１−Ａｒ−ＱＡ２であり、
ＱＡ’はＱＡ１’−Ａｒ’−ＱＡ２’であり、
ＱＡ１及びＱＡ１’はそれぞれ独立に、存在しない、１〜６の炭素原子の直鎖、分岐もしくは環状のアルキルまたは−ＣＨ＝ＣＨ単位であり、
Ａｒ及びＡｒ’はそれぞれ独立に、存在しないか、またはアリール基を表し、
ＱＡ２及びＱＡ２’はそれぞれ独立に、−Ｈ、それに結合した反応性基を有する連結基、１〜１０の炭素原子を有する、置換されたもしくは無置換の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−Ｒｃ’−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、または、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’によって表されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’によって表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、硫酸塩−ＯＳＯ３Ｍ、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’によって表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’もしくは−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から選択され、
Ｒｃ’は、存在しないかまたは、１〜５の炭素原子を有する、直鎖もしくは分岐のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択される）
によって表される、請求項１〜１７及び４５〜５６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６４】
Ｄが以下の構造式
【化３２】
2017529837.tif 000207
【化３３】
2017529837.tif 000208
【化３４】
2017529837.tif 000209
（式中、ＲＡ’’及びＲＢ’’は同一であるかもしくは異なり、−Ｈ及び−Ｍｅから選択される）によって表される、請求項６３に記載の複合体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６５】
ＮとＣとの間の二重線
【化３５】
2017529837.tif 000210
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈ、Ｙは−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容されるカチオン（例えば、Ｎａ＋）であり、
Ｘ’及びＹ’は共に−Ｈであり、
Ａ及びＡ’は共に−Ｏ−であり、
Ｒ６は−ＯＭｅであり、
Ｒｘは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルである、
請求項６３に記載の複合体。
【請求項６６】
Ｄが、以下の構造式
【化３６】
2017529837.tif 000211
【化３７】
2017529837.tif 000212
【化３８】
2017529837.tif 000213
【化３９】
2017529837.tif 000214
（式中、Ｙは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンである）によって表される、請求項６５に記載の複合体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６７】
Ｙが−ＳＯ３Ｍであり、ＭがＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である、請求項６３〜６６のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項６８】
−Ｌ−ＪＤ’−が結合であり、Ｄが以下の構造式
【化４０】
2017529837.tif 000215
【化４１】
2017529837.tif 000216
【化４２】
2017529837.tif 000217
【化４３】
2017529837.tif 000218
【化４４】
2017529837.tif 000219
【化４５】
2017529837.tif 000220
（式中、
Ｌ’、Ｌ’’、及びＬ’’’の１つは以下の式
【化４６】
2017529837.tif 000221
によって表され、他の２つは同一であるかまたは異なり、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立に選択され、
Ｚｄ１は、存在しない、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−または−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｐはアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
それぞれのＲａ及びＲｂは独立に、−Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたは荷電した置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は独立に１〜６の整数であり、
ＮとＣとの間の二重線
【化４７】
2017529837.tif 000222
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈ、または１〜４の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキルであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈまたはアミン保護部分であり、
Ｙは、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＮＲ’ＮＲ’Ｒ’’、任意選択で置換された５もしくは６員の窒素含有ヘテロ環（例えば、窒素原子によって結合した、ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリンなど）、−ＮＲ’（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ’Ｒ’’によって表されるグアニジナム（ｇｕａｎｉｄｉｎｕｍ）、アミノ酸、もしくは−ＮＲＣＯＰ’によって表されるペプチド、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、ハロゲン、シアノ、アジド、−ＯＳＯ３Ｈ、サルファイト（−ＳＯ３Ｈもしくは−ＳＯ２Ｈ）、メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５）、モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオホスフェート（ＨＳ２Ｏ３）、ジチオナイト（ＨＳ２Ｏ４）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ））、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ）、及びホルミアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−）またはそれらの混合物から選択される脱離基であり、但し、Ｒｉは１〜１０の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、かつ−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、及び−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１の置換基によって置換され、Ｒｉは、任意選択で本明細書において記載されるアルキルに対する置換基で更に置換されてもよく、Ｒｊは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、Ｒｋ’は１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり、
Ｐ’はアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するポリペプチドであり、
それぞれのＲは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環からなる群から独立に選択され、
Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒｃは、−Ｈまたは１〜４の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、
ｎは１〜２４の整数であり、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する、任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、任意選択で置換された６〜１８員アリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’はそれぞれ独立に、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３−Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、またはハロゲンであり、
Ａ及びＡ’は同一であるかまたは異なり、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５及び−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立に選択され、
Ｒ５及びＲ９はそれぞれ独立に、−Ｈまたは１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、残余の変数は、第２の実施形態または第１の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の複合体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項６９】
Ｌ’が式（Ａ）によって表され、Ｌ’’及びＬ’’’が共に−Ｈである、請求項６８に記載の複合体。
【請求項７０】
ＮとＣとの間の二重線
【化４８】
2017529837.tif 000223
が単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈ、Ｙは−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は全て−Ｈであり、
Ｒ６は−ＯＭｅであり、
Ｘ’及びＹ’は共に−Ｈであり、
Ａ及びＡ’は−Ｏ−であり、
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である、
請求項６８または６９に記載の複合体。
【請求項７１】
Ｒａ及びＲｂが共にＨである、請求項６８〜７０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７２】
Ｒ５及びＲ９がそれぞれ独立にＨまたはＭｅである、請求項６８〜７１のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７３】
Ｒ５及びＲ９が共にＨである、請求項７２に記載の複合体。
【請求項７４】
Ｐが２〜１０のアミノ酸残基を含有するペプチドである、請求項６８〜７３のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項７５】
Ｐが２〜５のアミノ酸単位を含有するペプチドである、請求項７４に記載の複合体。
【請求項７６】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、ならびにＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａから選択される、請求項７５に記載の複合体。
【請求項７７】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、及びＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａである、請求項７６に記載の複合体。
【請求項７８】
−Ｌ−ＪＤ’−Ｄが、以下の構造式
【化４９】
2017529837.tif 000224
【化５０】
2017529837.tif 000225
【化５１】
2017529837.tif 000226
または
【化５２】
2017529837.tif 000227
（式中、ＹはＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である）によって表される、請求項６８に記載の複合体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項７９】
以下の構造式
【化５３】
2017529837.tif 000228
【化５４】
2017529837.tif 000229
【化５５】
2017529837.tif 000230
【化５６】
2017529837.tif 000231
【化５７】
2017529837.tif 000232
【化５８】
2017529837.tif 000233
【化５９】
2017529837.tif 000234
【化６０】
2017529837.tif 000235
【化６１】
2017529837.tif 000236
【化６２】
2017529837.tif 000237
【化６３】
2017529837.tif 000238
【化６４】
2017529837.tif 000239
【化６５】
2017529837.tif 000240
【化６６】
2017529837.tif 000241
【化６７】
2017529837.tif 000242
【化６８】
2017529837.tif 000243
【化６９】
2017529837.tif 000244
（式中、ＤＭは以下の構造式
【化７０】
2017529837.tif 000245
によって表され、
ＹはＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である）によって表される、請求項１に記載の複合体またはその薬学的に許容される塩。
【請求項８０】
ｗが２または４である、請求項１〜７９のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項８１】
請求項１〜７９のいずれか１項に記載の抗体−細胞毒性剤複合体を含む組成物であって、前記複合体の少なくとも約７０％、８０％、９０％、９５％、またはそれ以上において、ｗが２または４である、前記組成物。
【請求項８２】
前記複合体の約１０％または５％以下においてｗが１である、請求項８１に記載の組成物。
【請求項８３】
配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチドを含む、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項８４】
前記異種シグナルペプチドが、前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列のＮ末端に融合した、請求項８３に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項８５】
前記異種シグナルペプチドが、前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列のＮ末端の２番目のアミノ酸残基に融合した、請求項８３に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項８６】
組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分であって、前記重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分のシグナルペプチドの最後の残基に隣接するＣ末端であるＳｅｒまたはＴｈｒ残基を含む、前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項８７】
前記ＳｅｒまたはＴｈｒ残基が、前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の最初の残基に隣接するＮ末端である、請求項８６に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項８８】
前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１または複数のＮ末端アミノ酸残基（複数可）が前記ＳｅｒまたはＴｈｒ残基によって置き換えられている、請求項８６に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項８９】
配列番号１０または１４の配列を有する、請求項８６に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分。
【請求項９０】
請求項８６〜８９のいずれか１項に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分に由来する、重鎖、軽鎖、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列を含む組換え抗体。
【請求項９１】
Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（もしくはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ(例えば、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ)、Ｔ細胞結合因子（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ｕｎｉｂｏｄｙもしくはｄｕｏｂｏｄｙ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｐｒｏｂｏｄｙ、細胞内発現抗体、または多重特異性抗体である、請求項９０に記載の組換え抗体。
【請求項９２】
ｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体またはナノボディ）である、請求項９１に記載の組換え抗体。
【請求項９３】
それぞれが請求項８６〜８９のいずれか１項に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分に由来する、重鎖、軽鎖、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１、２、３または４つを含む、請求項９０に記載の組換え抗体。
【請求項９４】
前記重鎖、軽鎖、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列上のＮ末端ＳｅｒまたはＴｈｒを有する抗体から酸化された修飾抗体であって、前記修飾抗体中において、前記Ｎ末端ＳｅｒまたはＴｈｒがアルデヒド基へと酸化されている、前記修飾抗体。
【請求項９５】
（１）配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチド、
（２）組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の最初の残基に隣接するＮ末端であるＳｅｒもしくはＴｈｒ残基、または
（３）前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１もしくは複数のＮ末端アミノ酸残基（複数可）を置き換えているＳｅｒまたはＴｈｒ残基
を含む組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分に由来する、請求項９４に記載の修飾抗体。
【請求項９６】
前記抗体が、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体またはその抗原結合部分である、請求項９４に記載の修飾抗体。
【請求項９７】
前記抗体が、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体またはその抗原結合部分の、キメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体またはその抗原結合部分である、請求項９４に記載の修飾抗体。
【請求項９８】
前記ヒト化抗体またはその抗原結合部分が、表面再構成された抗体もしくはＣＤＲグラフト化抗体またはそれらの抗原結合部分である、請求項９７に記載の修飾抗体。
【請求項９９】
請求項８６〜８９のいずれか１項に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１００】
哺乳動物の発現系における発現に関してコドン最適化された、請求項９９に記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０１】
発現系において請求項９９に記載のポリヌクレオチドを発現させることを含む、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の産生方法。
【請求項１０２】
前記発現系が哺乳動物の発現系である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
細胞結合剤−細胞毒性剤複合体の調製方法であって、
（ａ）細胞結合剤の２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、アルデヒド基を有する酸化細胞結合剤を形成するステップであって、前記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり、以下の構造式
【化７１】
2017529837.tif 000246
によって表される、前記ステップと、
（ｂ）前記酸化細胞結合剤を、
（ｉ）アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤と接触させて、前記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、または
（ｉｉ）アルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と接触させて、それに結合したリンカーを有する修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を形成し、続いて前記修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を細胞毒性剤と反応させて、前記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、または
（ｉｉｉ）細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒドと反応性の基及び前記細胞毒性剤と共有結合を形成することができる反応性基を有するリンカー化合物を添加して、前記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する
ステップと、を含む、前記方法。
【請求項１０４】
前記細胞結合剤が、抗体もしくはその抗原結合部分、または、ＤＡＲｐｉｎ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、Ｆｙｎｏｍｅｒ、クーニッツドメインペプチド、モノボディ（またはアドネクチン）、トリボディもしくはナノフィチンなどの抗体模倣体である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０５】
前記細胞結合剤が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（もしくはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ(例えば、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ)、Ｔ細胞結合因子（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ｕｎｉｂｏｄｙもしくはｄｕｏｂｏｄｙ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｐｒｏｂｏｄｙ、細胞内発現抗体、または多重特異性抗体などの、抗体または抗原結合部分である、請求項１０３に記載の方法。
【請求項１０６】
（ａ）抗体またはその抗原結合部分の２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によっ
て酸化させて、アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、
【化７２】
2017529837.tif 000247
前記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、Ｎ末端セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部である、前記ステップと、
（ｂ）前記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を、アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物またはアルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤と反応させて、前記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップであって、
【化７３】
2017529837.tif 000248
但し、
ＪＣＢはアルデヒドと反応性の基であり、
Ｌはスペーサーまたは結合であり、
ＪＤ’は、細胞毒性剤Ｄを基Ｌと結合させる連結部分であるか、またはＬが結合の場合は存在せず、
Ｄは連結部分ＪＤ’を介してＬに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である、
前記ステップと、を含む、請求項１０３の方法。
【請求項１０７】
（ａ）抗体またはその抗原結合部分のＮ末端２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、
【化７４】
2017529837.tif 000249
前記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、Ｎ末端セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部である、前記ステップと、
（ｂ）前記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を、アルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と反応させて、それに結合したリンカーを有する修飾抗体またはその修飾抗原結合部分を形成し、続いて前記修飾抗体またはその修飾抗原結合部分を細胞毒性剤と反応させて前記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップであって、
【化７５】
2017529837.tif 000250
但し、
ＪＣＢはアルデヒドと反応性の基であり、
Ｌはスペーサーまたは結合であり、
Ｄ’は細胞毒性剤であり、
ＪＤは細胞毒性剤Ｄ’と共有結合を形成することができる反応性基であり、
ＪＤ’は連結基ＪＤを細胞毒性剤Ｄ’と反応させることによって形成される連結部分であり、
Ｄは連結部分ＪＤ’を介してＬに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である、前記ステップと、を含む、請求項１０３の方法
【請求項１０８】
（ａ）抗体またはその抗原結合部分のＮ末端２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、
【化７６】
2017529837.tif 000251
前記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、Ｎ末端セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部である、前記ステップと、
（ｂ）前記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物を添加して、前記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップであって、
【化７７】
2017529837.tif 000252
但し、
ＪＣＢはアルデヒドと反応性の基であり、
Ｌはスペーサーまたは結合であり、
Ｄ’は細胞毒性剤であり、
ＪＤは細胞毒性剤Ｄ’と共有結合を形成することができる反応性基であり、
ＪＤ’は連結基ＪＤを細胞毒性剤Ｄ’と反応させることによって形成される連結部分であり、
Ｄは連結部分ＪＤ’を介してＬに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である、前記ステップと、を含む、請求項１０３の方法
【請求項１０９】
前記２−ヒドロキシエチルアミン部分がＮ末端セリンまたはスレオニンの一部である、請求項１０５〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１０】
前記Ｎ末端セリンが、前記抗体またはその抗原結合部分中に天然に存在する、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１１】
前記Ｎ末端セリンが、前記抗体またはその抗原結合部分中に操作によって導入された、請求項１０９に記載の方法。
【請求項１１２】
前記抗体またはその抗体結合部分が、請求項９０〜９３のいずれか１項に記載の組換え抗体のいずれか１つである、請求項１１１に記載の方法。
【請求項１１３】
前記抗体またはその抗原結合部分が、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを発現させることによって得られ、前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分が、
（１）配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチド、
（２）前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の最初の残基に隣接するＮ末端であるＳｅｒもしくはＴｈｒ残基、または
（３）前記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の
成熟処理された配列の１もしくは複数のＮ末端アミノ酸残基（複数可）を置き換えているＳｅｒもしくはＴｈｒ残基
を含む、請求項１０３〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１４】
前記抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３の軽鎖配列を含む、請求項１０３〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１５】
前記抗体またはその抗原結合部分が、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体もしくはその抗原結合部分の、キメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体またはその抗原結合部分である、請求項１０３〜１０８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１６】
前記ヒト化抗体またはその抗原結合部分が、表面再構成された抗体もしくはＣＤＲグラフト化抗体またはそれらの抗原結合部分である、請求項１１５に記載の方法。
【請求項１１７】
ステップ（ｂ）の反応がアニリン触媒の存在下で行われる、請求項１０３〜１１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１８】
前記アニリン触媒が４−アミノフェネチルアルコールである、請求項１１７に記載の方法。
【請求項１１９】
前記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分に対する前記アルデヒドと反応性の基のモル比が約４：１である、請求項１０３〜１１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２０】
ステップ（ａ）における前記酸化剤が過ヨウ素酸塩である、請求項１０３〜１１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２１】
ステップ（ｂ）がｐＨ５〜６、またはｐＨ５で行われる、請求項１０３〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２２】
前記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体が請求項１〜８０のいずれか１項に記載の複合体である、請求項１０３〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２３】
請求項１〜８０のいずれか１項に記載の複合体及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１２４】
哺乳動物における、異常な細胞増殖の抑制方法、または増殖的障害、自己免疫障害、破壊的骨障害、感染症、ウイルス性疾患、線維症、神経変性障害、膵炎もしくは腎臓疾患の治療方法であって、前記哺乳動物に対して、治療上有効な量の請求項１〜８０のいずれか１項に記載の複合体、及び任意選択で化学療法剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項１２５】
癌、関節リウマチ、多発性硬化症、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、移植拒絶反応、狼瘡、筋炎、感染症、及び免疫不全からなる群より選択される疾病の治療方法である、請求項１２４に記載の方法。
【請求項１２６】
癌の治療方法である、請求項１２５に記載の方法。
【請求項１２７】
前記癌が、白血病、リンパ腫、黒色腫、肺癌（例えばＮＳＣＬＣ）、前立腺癌、卵巣癌、子宮内膜癌、膵臓癌、乳癌、腹膜癌、頭頚部の扁平上皮癌、脊髄異形成症候群（ＭＤＳ）、及び子宮頸癌である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２８】
前記癌が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１２９】
前記癌が非小細胞肺癌である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１３０】
以下の構造式
【化７８】
2017529837.tif 000253
【化７９】
2017529837.tif 000254
【化８０】
2017529837.tif 000255
【化８１】
2017529837.tif 000256
【化８２】
2017529837.tif 000257
【化８３】
2017529837.tif 000258
（式中、
ＬＤ’、ＬＤ’’、及びＬＤ’’’の１つは以下の式
【化８４】
2017529837.tif 000259
によって表され、
他の２つは同一であるかまたは異なり、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立に選択され、
Ｚｄ１は、存在しない、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−または−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｐはアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
それぞれのＲａ及びＲｂは独立に、−Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたは荷電した置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は独立に１〜６の整数であり、
ＮとＣとの間の二重線
【化８５】
2017529837.tif 000260
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈ、または１〜４の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキルであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈまたはアミン保護部分であり、
Ｙは、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＮＲ’ＮＲ’Ｒ’’、任意選択で置換された５もしくは６員の窒素含有ヘテロ環（例えば、窒素原子によって結合した、ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリンなど）、−ＮＲ’（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ’Ｒ’’によって表されるグアニジナム（ｇｕａｎｉｄｉｎｕｍ）、アミノ酸、もしくは−ＮＲＣＯＰ’によって表されるペプチド、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、ハロゲン、シアノ、アジド、−ＯＳＯ３Ｈ、サルファイト（−ＳＯ３Ｈもしくは−ＳＯ２Ｈ）、メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５）、モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオホスフェート（ＨＳ２Ｏ３）、ジチオナイト（ＨＳ２Ｏ４）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ））、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ）、及びホルミアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−）またはそれらの混合物から選択される脱離基であり、但し、Ｒｉは１〜１０の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、かつ−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、及び−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１の置換基によって置換され、Ｒｉは、任意選択で本明細書において記載されるアルキルに対する置換基で更に置換されてもよく、Ｒｊは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、Ｒｋ’は１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり、
Ｐ’はアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するポリペプチドであり、
それぞれのＲは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１もしくは複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環からなる群から独立に選択され、
Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−Ｃ
ＯＲ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒｃは、−Ｈまたは１〜４の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、
ｎは１〜２４の整数であり、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する、任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、任意選択で置換された６〜１８員アリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’はそれぞれ独立に、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３−Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、またはハロゲンであり、
Ａ及びＡ’は同一であるかまたは異なり、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５及び−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立に選択され、
Ｒ５及びＲ９はそれぞれ独立に、−Ｈまたは１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、
ＪＣＢはアルデヒドと反応性の基である）によって表される細胞毒性化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１３１】
ＪＣＢが、ヒドラジン、ヒドラジドまたはヒドロキシルアミンである、請求項１３０に記載の化合物。
【請求項１３２】
ＪＣＢが、
【化８６】
2017529837.tif 000261
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ及びＸｂ’はそれぞれ独立に、−ＯＨ、−ＳＨまたは−ＮＨ２であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立に、Ｈまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ＸｃはＮまたはＣＨである）から選択される、請求項１３０に記載の化合物。
【請求項１３３】
ＪＣＢが、
【化８７】
2017529837.tif 000262
である、請求項１３２に記載の化合物。
【請求項１３４】
ＬＤ’、ＬＤ’’、及びＬＤ’’’の１つが式（Ａ）によって表され、その他がそれぞれ独立に、−Ｈ、１〜６の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキル、ハロゲン、−ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６）アルコキシ、または−ＮＯ２である、請求項１３０〜１３３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３５】
ＬＤ’、ＬＤ’’、及びＬＤ’’’の１つが式（Ａ）によって表され、その他が−Ｈである、請求項１３４に記載の化合物。
【請求項１３６】
ＬＤ’が式（Ａ）によって表され、その他が−Ｈである、請求項１３５に記載の化合物。
【請求項１３７】
ＮとＣとの間の二重線
【化８８】
2017529837.tif 000263
が単結合を表し、Ｘが−Ｈまたはアミン保護基であり、Ｙが、−Ｈ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ、”任意選択で置換された５または６員の窒素含有ヘテロ環、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２Ｈ及び−ＯＳＯ３Ｈから選択される、請求項１３０〜１３６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３８】
Ｙが、−Ｈ、−ＳＯ３Ｍ、−ＯＨ、−ＯＭｅ、−ＯＥｔまたは−ＮＨＯＨから選択され、但し、Ｍは−Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である、請求項１３７に記載の化合物。
【請求項１３９】
Ｙが、−Ｈ、−ＳＯ３Ｍまたは−ＯＨである、請求項１３８に記載の化合物。
【請求項１４０】
Ｘ’が、−Ｈ、−ＯＨ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、及びフェニルからなる群より選択される、請求項１３０〜１３９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４１】
Ｘ’が、−Ｈ、−ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、またはフェニルである、請求項１４０に記載の化合物。
【請求項１４２】
Ｘ’が、−Ｈ、−ＯＨまたは−Ｍｅである、請求項１４１に記載の化合物。
【請求項１４３】
Ｘ’が−Ｈである、請求項１４２に記載の化合物。
【請求項１４４】
Ｙ’が、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択される、請求項１３０〜１４３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４５】
Ｙ’が、−Ｈ、オキソ基、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたはハロ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである、請求項１４４に記載の化合物。
【請求項１４６】
Ｙ’が−Ｈまたはオキソである、請求項１４４に記載の化合物。
【請求項１４７】
Ｙ’が−Ｈである、請求項１４４に記載の化合物。
【請求項１４８】
Ａ及びＡ’が同一であるかまたは異なり、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ５−、及びオキソ−（Ｃ＝Ｏ）−から選択される、請求項１３０〜１４７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１４９】
Ａ及びＡ’が同一であるかまたは異なり、−Ｏ−及び−Ｓ−から選択される、請求項１
４８に記載の化合物。
【請求項１５０】
Ａ及びＡ’が−Ｏ−である、請求項１４９に記載の化合物。
【請求項１５１】
Ｒ６が−Ｍｅである、請求項１３０〜１５０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５２】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’が独立に、−Ｈ、ハロゲン、−ＮＯ２、−ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキル、ハロ（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルコキシである、請求項１３０〜１５１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５３】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’が全て−Ｈである、請求項１５２に記載の化合物。
【請求項１５４】
Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’及びＲ５がそれぞれ独立に、−Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルである、請求項１３０〜１５３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５５】
ＮとＣとの間の二重線
【化８９】
2017529837.tif 000264
が単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈ、Ｙは−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’が全て−Ｈであり、
Ｒ６が−Ｍｅであり、
Ｘ’及びＹ’が共に−Ｈであり、
Ａ及びＡ’が−Ｏ−であり、
Ｍが、Ｈ、Ｎａ＋またはＫ＋である、
請求項１３０〜１３６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５６】
Ｒａ及びＲｂが共にＨである、請求項１３０〜１５５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５７】
Ｒ５及びＲ９がそれぞれ独立にＨまたはＭｅである、請求項１３０〜１５６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１５８】
Ｒ５及びＲ９が共にＨである、請求項１５７に記載の化合物。
【請求項１５９】
Ｐが２〜１０のアミノ酸残基を含有するペプチドである、請求項１３０〜１５８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１６０】
Ｐが２〜５のアミノ酸残基を含有するペプチドである、請求項１５９に記載の化合物。
【請求項１６１】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ
−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、ならびにＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａから選択される、請求項１６０に記載の化合物。
【請求項１６２】
Ｐが、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、及びＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａである、請求項１６０に記載の化合物。
【請求項１６３】
以下の構造式
【化９０】
2017529837.tif 000265
【化９１】
2017529837.tif 000266
【化９２】
2017529837.tif 000267
【化９３】
2017529837.tif 000268
【化９４】
2017529837.tif 000269
【化９５】
2017529837.tif 000270
（式中、ＹはＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である）によって表される、請求項１３０に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
【請求項１６４】
前記癌が卵巣癌である、請求項１２６に記載の方法。
【請求項１６５】
前記細胞結合剤（ＣＢＡ）が、ＦＯＬＲ１、ＣＤ３７、ＥＧＦＲ、ＣＤ１９、ＣＤ３３、ＣＤ１２３またはＭｕｃ１抗原に対して特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分であり、前記抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の１または複数のＮ末端アミノ酸残基が、ＳｅｒまたはＴｈｒによって置き換えられている、請求項１〜６及び１３〜８０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１６６】
前記抗体が、ｈｕＭＯＶ１９、ｈｕＣＤ３７−３、ｈｕＣＤ３７−５０、ｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ、ｈｕＭＬ６６、ｈｕＢ４、ｈｕＭｙ９−６、及びｈｕＤＳ６からなる群より選択される抗体の、６のＣＤＲまたは重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）もしくは軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含む、請求項１〜６及び１３〜８０のいずれか１項に記載の複合体。
【請求項１６７】
ＦＯＬＲ１に対して特異的に結合する前記抗葉酸受容体抗体が、
ａ）配列番号４５の重鎖ＣＤＲ１、配列番号４６の重鎖ＣＤＲ２及び配列番号４７の重鎖ＣＤＲ３、ならびに
ｂ）配列番号４８の軽鎖ＣＤＲ１、配列番号４９の軽鎖ＣＤＲ２、及び配列番号５０の軽鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１６５に記載の複合体。
【請求項１６８】
ＦＯＬＲ１に対して特異的に結合する前記抗葉酸受容体抗体が、
ａ）配列番号５５に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、及び
ｂ）配列番号５６または５７に対して少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）
を含む、請求項１６５に記載の複合体。
【請求項１６９】
ＦＯＬＲ１に対して特異的に結合する前記抗葉酸受容体抗体がｈｕＭＯＶ１９である、請求項１６７または１６８に記載の複合体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の定めにより、２０１４年９月３日出願の米国仮出願第６２／０４５，２６４号、２０１４年１２月３日出願の米国仮出願第６２／０８６，９８６号、２０１５年４月１７日出願の米国仮出願第６２／１４９，３７９号、及び２０１５年６月２９日出願の米国仮出願第６２／１８６，２３５号の優先権を主張し、全ての図面、式、明細書、及び特許請求の範囲を含むこれらの出願のそれぞれの全体の内容が、参照により本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）及び細胞結合剤−薬物複合体が、様々な癌全体に効能を有する、強力な一群の抗腫瘍剤として出現している。細胞結合剤−薬物複合体（ＡＤＣなど）は、一般的に３種の異なる要素、すなわち、細胞結合剤（例えば抗体）、リンカー、及び細胞毒性部分から構成される。従来、上記細胞毒性薬物部分は上記抗体上のリシンに共有結合し、その結果、当該抗体分子上の異なる位置に結合した異なる数の薬物を有するＡＤＣの不均一な混合物である複合体を生じる。
【発明の概要】
【０００３】
驚くべきことに、抗体などの細胞結合剤のＮ−末端セリン残基の２−ヒドロキシエチルアミン部分を、当該抗体の過剰な酸化を伴うことなく、アルデヒド基へと選択的に酸化することができることが判っている。得られるアルデヒド基を有する抗体は、アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性薬物との、またはアルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物を介して細胞毒性薬物との、部位特異的な結合が可能である。驚くべきことに、得られる抗体−薬物複合体は、複合体化部位が当該抗体のＮ末端に位置するという事実にもかかわらず、未複合体化抗体と類似の抗原結合親和性を維持する。また、得られる複合体は、抗体当たり僅か２の結合した分子の薬物含有量を有するにもかかわらず、予想外に高い効能を示し、リシンで結合した複合体と比較してより良好な忍容性を有する。
【０００４】
特定の実施形態において、抗体などの上記細胞結合剤は、オキシム結合（−Ｃ＝Ｎ−Ｏ−）を介して細胞毒性剤と共有結合する。驚くべきことに、最近発表された知見（Ａｇａｒｗａｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １１０：４６−５１，２０１３）とは対照的に、上記オキシム結合はイン・ビボで非常に安定である。
【０００５】
本発明は、以下の構造式
【０００６】
【化１】
2017529837.tif 000002
【０００７】
（式中、
ＣＢＡはＪＣＢ’基に共有結合した細胞結合剤であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡ上のアルデヒド基と、基Ｌに結合したアルデヒドと反応性の基とを反応させることによって形成される部分であり、但し、上記アルデヒド基は、以下の構造式
【０００８】
【化２】
2017529837.tif 000003
【０００９】
によって表される２−ヒドロキシエチルアミン部分の酸化に由来し、
上記２−ヒドロキシエチルアミン部分は、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり、
Ｌはスペーサーまたは結合であり、
ＪＤ’は、細胞毒性剤Ｄを基Ｌと結合させる連結部分であるか、またはＬが結合の場合には存在せず、
Ｄは、連結部分ＪＤ’を介してＬに、またはＬが結合の場合には、ＪＣＢ’を介してＣＢＡに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である）によって表される細胞結合剤−細胞毒性剤複合体またはその薬学的に許容される塩を提供する。
【００１０】
本発明はまた、配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチドを含む、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分も提供する。
本発明は更に、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分であって、該重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分のシグナルペプチドの最後の残基に隣接するＣ末端であるＳｅｒまたはＴｈｒ残基を含む、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分も提供する。
【００１１】
上記重鎖、軽鎖、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列上のＮ末端ＳｅｒまたはＴｈｒを有する抗体から酸化された修飾抗体であって、該修飾抗体中において、上記Ｎ末端ＳｅｒまたはＴｈｒがアルデヒド基へと酸化されている、上記修飾抗体もまた提供される。
【００１２】
本発明はまた、本明細書に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチド、及び本明細書に記載の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の産生方法も包含する。
【００１３】
一実施形態において、本発明は、細胞結合剤−細胞毒性剤複合体の調製方法であって、
（ａ）細胞結合剤の２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化して、アルデヒド基を有する酸化細胞結合剤を形成するステップであって、上記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり、以下の構造式
【００１４】
【化３】
2017529837.tif 000004
【００１５】
によって表される、上記ステップと、
（ｂ）上記酸化細胞結合剤を、
（ｉ）アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物もしくはアルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤と接触させて、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、または
（ｉｉ）アルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と接触させて、結合したリンカーを有する修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を形成し、続いて上記修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を細胞毒性剤と反応させて、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、または
（ｉｉｉ）細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒドと反応性の基及び上記細胞毒性剤と共有結合を形成することができる反応性基を有するリンカー化合物を添加して、上記細
胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、
ステップと、を含む、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体の調製方法を対象とする。
【００１６】
一実施形態において、本発明は、以下の構造式
【００１７】
【化４】
2017529837.tif 000005
【００１８】
（式中、
ＬＤ’、ＬＤ’’、及びＬＤ’’’の１つは以下の式
【００１９】
【化５】
2017529837.tif 000006
【００２０】
によって表され、
他の２つは同一であるかまたは異なり、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立に選択され、
Ｚｄ１は、存在しない、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−または−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｐはアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
それぞれのＲａ及びＲｂは独立に、−Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたは荷電した置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は独立に１〜６の整数であり、
ＮとＣとの間の二重線
【００２１】
【化６】
2017529837.tif 000007
【００２２】
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈ、または１〜４の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキルであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈまたはアミン保護部分であり、
Ｙは、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＮＲ’ＮＲ’Ｒ’’、任意選択で置換された５もしくは６員の窒素含有ヘテロ環（例えば、窒素原子によって結合した、ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリンなど）、−ＮＲ’（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ’Ｒ’’によって表されるグアニジナム（ｇｕａｎｉｄｉｎｕｍ）、アミノ酸、もしくは−ＮＲＣＯＰ’によって表されるペプチド、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、ハロゲン、シアノ、アジド、−ＯＳＯ３Ｈ、サルファイト（−ＳＯ３Ｈもしくは−ＳＯ２Ｈ）、メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５）、モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオホスフェート（ＨＳ２Ｏ３）、ジチオナイト（ＨＳ２Ｏ４）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ））、ヒドロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ）、及びホルミアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−）またはそれらの混合物から選択される脱離基であり、但し、Ｒｉは１〜１０の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、かつ−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、及び−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１の置換基によって置換され、Ｒｉは、任意選択で本明細書において記載されるアルキルに対する置換基で更に置換されてもよく、Ｒｊは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、Ｒｋ’は１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり、
Ｐ’はアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するポリペプチドであり、
それぞれのＲは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する任意選択で置換されたアリー
ル、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、あるいはＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環からなる群から独立に選択され、
Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒｃは、−Ｈまたは１〜４の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、
ｎは１〜２４の整数であり、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する、任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意選択で置換された６〜１８員アリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’はそれぞれ独立に、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３−Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、またはハロゲンであり、
Ａ及びＡ’は同一であるかまたは異なり、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５及び−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立に選択され、
Ｒ５及びＲ９はそれぞれ独立に、−Ｈまたは１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、
ＪＣＢはアルデヒドと反応性の基である）によって表される細胞毒性化合物またはその薬学的に許容される塩を対象とする。
【００２３】
本発明には、式（Ｉ）の複合体もしくは式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）の細胞毒性化合物またはそれらの薬学的に許容される塩及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も包含される。
【００２４】
上記医薬組成物は、第２の治療（例えば、化学療法）薬を更に含んでもよい。
本発明はまた、哺乳動物（例えばヒト）における、異常な細胞増殖の抑制方法または増殖的障害、破壊的骨障害、自己免疫障害、移植片対宿主病、移植拒絶反応、免疫不全、炎症性疾患、感染症、ウイルス性疾患、線維症、神経変性障害、膵炎、もしくは腎臓疾患の
治療方法であって、上記哺乳動物に対して、治療上有効な量の複合体式（Ｉ）、もしくは式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）によって表される細胞毒性化合物またはそれらの薬学的に許容される塩を投与することを含む、上記方法も包含する。
【００２５】
関連する実施形態において、上記方法は、上記哺乳動物に対して、第２の治療（例えば、化学療法）薬を逐次的にまたは連続的に投与することを更に含む。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するヒト化モノクローナル抗体ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２を用いる、ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａ  ＡＤＣを合成するためのスキーム１を示す図である。
【図２】ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物ＡそのもののＱ−ＴｏＦ質量分析（ＭＳ）のデータの図である。当該反応生成物は、抗体当たり２の組み込まれた化合物Ａ分子を有する均一なＡＤＣであることが明らかである。
【図３】操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するヒト化モノクローナル抗体ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２を用いる、ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−アミノオキシ−アセチル−ＭａｙＮＭＡ  ＡＤＣを合成するためのスキーム２を示す図である。
【図４】ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−アミノオキシ−アセチル−ＭａｙＮＭＡそのもののＱ−ＴｏＦ質量分析（ＭＳ）のデータの図である。当該反応生成物は、抗体当たり２の組み込まれたＭａｙＮＭＡ分子を有する均一なＡＤＣであることが明らかである。
【図５】操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するヒト化モノクローナル抗体（例えばｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃１）を用いる、抗体（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃１など）−リンカー１−化合物Ａ  ＡＤＣを合成するためのスキーム３を示す図である。
【図６】ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃１−リンカー１−化合物ＡそのもののＱ−ＴｏＦ質量分析（ＭＳ）のデータを示す図である。
【図７Ａ】Ｎ末端Ｓｅｒ特異的な複合体化は、抗体の抗原に対する結合に顕著には影響を及ぼさないことを実証する図である。ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−ＭａｙＮＭＡ（すなわちＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ）及びｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−化合物Ａ（すなわちＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２）は共に、操作されたＮ末端Ｓｅｒ残基によって、それぞれメイタンシノイド及び細胞毒性化合物Ａ（すなわちスルホン化ＤＧＮ４６２（ｓＤＧＮ４６２））に結合した、ヒト化ＩｇＧモノクローナル抗体ｈｕＭＯＶ１９を含むＡＤＣである。Ｔ４７Ｄ（すなわち、表面上のＦＲα抗原）と上記ＡＤＣ（または対照抗体もしくはＦＡＣＳバッファ対照）との間の結合は、Ｔ４７Ｄ表面上のいずれかのＡＤＣ（または対照Ａｂ）に結合した、ＦＩＴＣと複合化されたヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃγ二次抗体のＦＡＣＳ検出によって測定された。
【図７Ｂ】ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａに関する、ＦＲα抗原を発現するＴ４７Ｄ細胞へのＦＡＣＳ結合データを示す図である。リシンを充填したｈｕＭＯＶ１９−ｓＳＰＤＢ−化合物Ａ及びＮ末端修飾ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａの両方が同等の細胞結合を有し、これはまた、未複合体化の天然のｈｕＭＯＶ１９及び操作されたｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２の細胞結合とも類似する（表中のＥＣ５０値を参照のこと）。
【図８Ａ】Ｎ末端Ｓｅｒ特異的な修飾すなわち複合体化は、抗体の抗原に対する結合に顕著には影響を及ぼさないことを示す図である。上記の図７Ａ及び７Ｂに示すように、野生型抗ＦＲα抗体ｈｕＭＯＶ１９、そのＮ末端Ｓｅｒ修飾バージョンのｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２（「ＳｅｒｉＭａｂ」）、及びそれらのそれぞれのメイタンシノイドとの複合体−Ａｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（ＳＭＣＣリンカーを介して、Ｌｙｓ残基によってＤＭ１と結合した野生型ｈｕＭＯＶ１９）及びＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ（操作されたＮ末端Ｓｅｒによってメイタンシノイドと結合したｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２）−は全て、ＦＡＣＳによって測定したところ、ＦＲαを有するＴ４７Ｄ細胞に対して本質的に同一の結合親和性を有する。
【図８Ｂ】Ｎ末端Ｓｅｒ特異的な修飾すなわち複合体化は、抗体の抗原に対する結合に顕著には影響を及ぼさないことを示す図である。上記の図７Ａ及び７Ｂに示すように、野生型抗ＦＲα抗体ｈｕＭＯＶ１９、そのＮ末端Ｓｅｒ修飾バージョンのｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２（「ＳｅｒｉＭａｂ」）及びその細胞毒性化合物Ａとの複合体（ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２）は全て、ＦＡＣＳによって測定したところ、ＦＲαを有するＴ４７Ｄ細胞に対して本質的に同一の結合親和性を有する。
【図９Ａ】ＫＢ子宮頸癌細胞株に対するＡＤＣ複合体ＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａの細胞毒性評価の結果を示す図である。該データは、本主題の部位特異的なＮ末端Ｓｅｒで結合したＳＥＲＩＭａｂ−化合物Ａ複合体が、リシンにおいて複合体化されたｓＳＰＤＢ−化合物Ａよりも、抗体濃度を基準として約３倍、化合物Ａ濃度を基準として約５倍大きな効能があることを示している。ＫＢ細胞上の抗原結合部位をブロックするための１μＭの未複合体化ｈｕＭＯＶ１９の存在下では、２種の試験した複合体に関する効能が概ね同一であることから、両方の複合体は共に、同一の抗原非依存性の活性を有する。
【図９Ｂ】ＫＢ子宮頸癌細胞株に対するＡＤＣ複合体ＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙの細胞毒性評価の結果を示す図である。該データは、ＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ複合体が、より高いＤＡＲ（抗体に対する細胞毒性化合物の比率）を有するリシン複合体Ａｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１と同様の効能を有することを示している。
【図１０】本発明の複合体の調製において用いることができる代表的な細胞毒性化合物を示す図である。
【図１１】本発明の複合体の調製において用いることができる代表的な細胞毒性化合物を示す図である。
【図１２Ａ】本発明の複合体を調製するための代表的なスキームを示す図である。
【図１２Ｂ】本発明の複合体を調製するための代表的なスキームを示す図である。
【図１２Ｃ】本発明の複合体を調製するための代表的なスキームを示す図である。
【図１２Ｄ】本発明の複合体を調製するための代表的なスキームを示す図である。
【図１３】ＮＣＩ−Ｈ２１１０を有するＳＣＩＤマウスにおける、ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａ複合体に関するイン・ビボでの効能を示す図である。
【図１４】図１４Ａは、ジスルフィドリンカーを有するＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２複合体の構造を示す図である。点線は観測する標的細胞異化産物に繋がる開裂部位の位置を示す。図１４Ｂは、イン・ビトロにおいて、ＫＢ子宮頸癌細胞中で生成したＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２複合体由来の異化産物のインキュベーション、精製、及び単離のためのスキームを示す図である。ＬＣ−ＭＳによって同定された４種の異化産物を、ｍ／ｚ比の計算値及び実測値と共に示す。
【図１５】図１５Ａは、非開裂性のリンカーを有するＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ複合体の構造を示す図である。点線は観測する標的細胞異化産物に繋がる開裂部位の位置を示す。図１５Ｂは、イン・ビトロにおいて、ＫＢ子宮頸癌細胞中で生成したＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ複合体由来の異化産物のインキュベーション、精製、及び単離のためのスキームを示す図である。ＬＣ−ＭＳによって同定された２種の異化産物を、ｍ／ｚ比の計算値及び実測値と共に示す。
【図１６】ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２複合体及び相当するＬｙｓで結合した複合体化したＡｂ−ｓＳＰＤＢ−ｓＤＧＮ４６２に対するバイスタンダーキリング（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ  ｋｉｌｌｉｎｇ）アッセイの結果を示す図である。
【図１７】操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するヒト化モノクローナル抗体を用いる、ｈｕＣＤ１２３−ｓＤ８複合体を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【図１８】リンカー１残基を有するｈｕＣＤ１２３−６−ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤ１複合体を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【図１９】リンカー１残基を有する、ｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ２Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ＤＧＮ４６２または４のＤＡＲを有する−ｓＤＧＮ４６２複合体（ｈｕＭｏｖ１９ＮＴＳ２Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２）を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【図２０】４のＤＡＲを有するｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ２Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２複合体（ｈｕＭｏｖ１９ＮＴＳ２Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２）のＱ−ＴｏＦ質量分析（ＭＳ）データを示す図である。
【図２１Ａ】４のＤＡＲを有するｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ２Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ＭａｙＮＭＡ複合体を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【図２１Ｂ】４のＤＡＲを有する、Ｓｅｒで結合したｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ−ＭａｙＮＭＡ複合体のＱ−ＴｏＦ質量分析（ＭＳ）データを示す図である。
【図２２Ａ】ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ−１（図２２Ａ）、及びＨＮＴ−３４（図２２Ｂ）、及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１（図２２Ｃ）において、ｈｕＣＤ１２３−６のＳｅｒｉＭａｂ（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８、塗りつぶした黒の円）が、同一の抗体のリシンで結合した複合体（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２、塗りつぶした下向きの黒の三角）と少なくとも同等の活性であることを示す図である。各図中の白抜きのデータポイントを結ぶ点線の曲線は、ブロックする濃度（５００ｎＭ）の未複合体化ｈｕＣＤ１２３−６抗体の存在下における、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８を表す白抜きの円、及びｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２を表す白抜きの下向きの三角）の活性を表す。Ｌｙｓで結合した抗体−Ｄ２複合体の構造に関しては実施例２８を参照されたい（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２の構造が示されているが、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２複合体は同様の構造を有する）。
【図２２Ｂ】ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ−１（図２２Ａ）、及びＨＮＴ−３４（図２２Ｂ）、及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１（図２２Ｃ）において、ｈｕＣＤ１２３−６のＳｅｒｉＭａｂ（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８、塗りつぶした黒の円）が、同一の抗体のリシンで結合した複合体（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２、塗りつぶした下向きの黒の三角）と少なくとも同等の活性であることを示す図である。各図中の白抜きのデータポイントを結ぶ点線の曲線は、ブロックする濃度（５００ｎＭ）の未複合体化ｈｕＣＤ１２３−６抗体の存在下における、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８を表す白抜きの円、及びｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２を表す白抜きの下向きの三角）の活性を表す。Ｌｙｓで結合した抗体−Ｄ２複合体の構造に関しては実施例２８を参照されたい（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２の構造が示されているが、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２複合体は同様の構造を有する）。
【図２２Ｃ】ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ−１（図２２Ａ）、及びＨＮＴ−３４（図２２Ｂ）、及びＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１（図２２Ｃ）において、ｈｕＣＤ１２３−６のＳｅｒｉＭａｂ（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８、塗りつぶした黒の円）が、同一の抗体のリシンで結合した複合体（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２、塗りつぶした下向きの黒の三角）と少なくとも同等の活性であることを示す図である。各図中の白抜きのデータポイントを結ぶ点線の曲線は、ブロックする濃度（５００ｎＭ）の未複合体化ｈｕＣＤ１２３−６抗体の存在下における、それぞれの複合体（すなわち、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８を表す白抜きの円、及びｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２を表す白抜きの下向きの三角）の活性を表す。Ｌｙｓで結合した抗体−Ｄ２複合体の構造に関しては実施例２８を参照されたい（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２の構造が示されているが、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２複合体は同様の構造を有する）。
【図２３】Ｎ末端Ｓｅｒ特異的な修飾すなわち複合体化は、抗体の抗原に対する結合に顕著には影響を及ぼさないことを示す図である。野生型抗ＦＲα  ｈｕＭＯＶ１９抗体、そのＮ末端Ｓｅｒ修飾バージョンのｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ２（「ｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ抗体」）、及びその細胞毒性化合物Ｄ８との複合体（ｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８）は全て、ＦＡＣＳによって測定したところ、ＦＲαを有するＴ４７Ｄ細胞に対して本質的に同一の結合親和性を有する。
【図２４】ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤ１複合体（図１８参照）は、ＥＯＬ−１細胞において、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ２（またはＳ３）−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８複合体と類似の効能を示すことを示す図である。Ｌｙｓで結合したｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３−ｓＳＰＤＢ−Ｄ１及びｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３−Ｄ２複合体に関する結果も示される。
【図２５】ｈｕＣＤ１２３抗体とＳｅｒで結合したＤＧＮ４６２化合物は、ＥＯＬ−１細胞に対して、より高いＤＡＲを有するリシンで結合したバージョンよりも３倍高い抗原特異的な効能を有することを示す図である。
【図２６Ａ】ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８）複合体はリシン複合体（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２）と同等の抗原特異的な効能及び標的結合を有することを示す図である。
【図２６Ｂ】ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８）複合体はリシン複合体（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２）と同等の抗原特異的な効能及び標的結合を有することを示す図である。
【図２６Ｃ】ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８）複合体はリシン複合体（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２）と同等の抗原特異的な効能及び標的結合を有することを示す図である。
【図２７】ｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８及び相当するＬｙｓで結合したｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２に関するバイスタンダーキリングアッセイの結果を示す図である。
【図２８】ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−アミノオキシ−アセチル−ＭａｙＮＭＡ複合体中のオキシム結合のイン・ビボでの安定性を示す図である。
【図２９】１００μｇ／ｋｇもしくは１５０μｇ／ｋｇのリシンで結合したｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２複合体または２００μｇ／ｋｇのｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８で処置した雌のＣＤ−１マウスの個々の体重の変化をパーセント表記で示す図である。
【図３０】本発明の複合体を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【図３１Ａ】本発明の複合体を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【図３１Ｂ】本発明の複合体を合成するための代表的なスキームを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
ここで、本発明の特定の実施形態について詳細に言及することとし、その例を付随する構造及び式中で説明する。本発明は、列挙する実施形態に関連して説明がなされることとなるが、これらの実施形態は、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないことが理解されよう。それとは逆に、本発明は、特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内に包含され得る全ての代替物、改変、及び等価物を網羅することを意図する。当業者は、本明細書に記載される方法及び物質に類似するまたは等価である多くの方法及び物質を認識することとなろうが、これらは本発明の実施において用いることができる。
【００２８】
本発明の種々の態様（例えば、化合物、複合体、組成物、製造及び使用方法）及び本明細書の異なる部分（実施例においてのみ記載される実施形態を含む）の下で記載される実施形態を含む、本明細書に記載の実施形態のいずれも、明確に放棄されないまたは不適切ではない限り、１または複数の本発明の他の実施形態と組み合わせることができることが理解される必要がある。実施形態の組み合わせは、多重従属の請求項によって権利請求される特定の組み合わせに限定されるものではない。
定義
本明細書では、「直鎖または分岐のアルキル」とは、１〜２０の炭素原子の、飽和の直鎖または分岐鎖の１価の炭化水素ラジカルを指し。アルキルの例としては、メチル、エチル、１−プロピル、２−プロピル、１−ブチル、２−メチル−１−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル、２−メチル−２−プロピル、１−ペンチル、２−ペンチ
ル３−ペンチル、２−メチル−２−ブチル、３−メチル−２−ブチル、３−メチル−１−ブチル、２−メチル−１−ブチル、１−ヘキシル）、２−ヘキシル、３−ヘキシル、２−メチル−２−ペンチル、３−メチル−２−ペンチル、４−メチル−２−ペンチル、３−メチル−３−ペンチル、２−メチル−３−ペンチル、２，３−ジメチル−２−ブチル、３，３−ジメチル−２−ブチル、１−ヘプチル、及び１−オクチル等が挙げられるが、これらに限定はされない。上記アルキルは１〜１０の炭素原子を有することが好ましい。上記アルキルは１〜４の炭素原子を有することがより好ましい。
【００２９】
「直鎖または分岐のアルケニル」とは、２〜２０の炭素原子の、直鎖または分岐鎖の１価の、少なくとも１の不飽和の部位、すなわち炭素−炭素二重結合を有する炭化水素ラジカルを指し、該アルケニルラジカルは、「シス」及び「トランス」の幾何学的配置、または代替として「Ｅ」もしくは「Ｚ」の幾何学的配置を有するラジカルを包含する。例としては、エチレニルすなわちビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、及びアリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）等が挙げられるが、これらに限定はされない。上記アルケニルは２〜１０の炭素原子を有することが好ましい。上記アルケニルは２〜４の炭素原子を有することがより好ましい。
【００３０】
「直鎖または分岐のアルキニル」とは、２〜２０の炭素原子の、直鎖または分岐鎖の１価の、少なくとも１の不飽和の部位、すなわち炭素−炭素三重結合を有する炭化水素ラジカルを指す。例としては、エチニル、プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、及びヘキシニル等が挙げられるが、これらに限定はされない。上記アルキニルは２〜１０の炭素原子を有することが好ましい。上記アルケニルは２〜４の炭素原子を有することがより好ましい。
【００３１】
用語「ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅ（炭素環）」、「ｃａｒｂｏｃｙｃｌｙｌ（カルボシクリル）」及び「ｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ  ｒｉｎｇ（炭素環）」とは、単環として３〜１２の炭素原子、または二環として７〜１２の炭素原子を有する、１価の非芳香族の、飽和または部分的に不飽和の環を指す。７〜１２の原子を有する二環炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、または［６，６］系として配置することができ、９または１０の環原子を有する二環炭素環は、ビシクロ［５，６］もしくは［６，６］系として、またはビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン及びビシクロ［３．２．２］ノナンなどの架橋系として配置することができる。単環炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、及びシクロドデシル等が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００３２】
用語「環状アルキル」及び「シクロアルキル」は同義で用いることができる。これらの用語は１価の飽和炭素環ラジカルを指す。上記環状アルキルは３〜７員単環ラジカルであることが好ましい。上記環状アルキルはシクロヘキシルであることがより好ましい。
【００３３】
用語「シクロアルケニル」とは、環構造中に少なくとも１の二重結合を有する炭素環ラジカルを指す。
用語「シクロアルキニル」とは、環構造中に少なくとも１の三重結合を有する炭素環ラジカルを指す。
【００３４】
「アリール」とは、基となる芳香環系の単一の炭素原子から１の水素原子を除去するこ
とによって誘導される、６〜１８の炭素原子の１価の芳香族炭化水素ラジカルを意味する。代表する形での構造中で、いくつかのアリール基が「Ａｒ」として表される。アリールは、飽和環、部分的に不飽和の環、または芳香族炭素環もしくはヘテロ環と縮合した芳香環を含む二環ラジカルを包含する。一般的なアリール基としては、ベンゼン（フェニル）、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、インデニル、インダニル、１，２−ジヒドロナフタレン、及び１，２，３，４−テトラヒドロナフチル等から誘導されるラジカルが挙げられるが、これらに限定はされない。アリールはフェニル基であることが好ましい。
【００３５】
本明細書では、用語「ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ（ヘテロ環）」、「ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｙｌ（ヘテロシクリル）」、及び「ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  ｒｉｎｇ（ヘテロ環）」は同義で用いられ、飽和または部分的に不飽和（すなわち、環中に１または複数の二重及び／または三重結合を有する）の、少なくとも１の環原子が、窒素、酸素、リン、及びイオウから選択されるヘテロ原子であり、残余の環原子がＣであり、１または複数の環原子が任意選択で、独立に後述する１または複数の置換基で置換された、３〜１８の環原子の炭素環ラジカルを指す。ヘテロ環は、３〜７の環員（２〜６の炭素原子及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜４のヘテロ原子）を有する単環、または７〜１０の環員（４〜９の炭素原子及びＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜６のヘテロ原子）を有する二環、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］、もしくは［６，６］系であってよい。ヘテロ環については、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．；“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，ニューヨーク，１９６８），特に１，３，４，６，７，及び９、“Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在），特に１３，１４，１６，１９，及び２８巻、ならびにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載される。「ヘテロシクリル」はまた、ヘテロ環ラジカルが、飽和環、部分的に不飽和の環、または芳香族炭素環もしくはヘテロ環と縮合したラジカルも包含する。ヘテロ環の例としては、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、ピペリジノ、モルホリノ、チオモルホリノ、チオキサニル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ホモピペリジニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、２−ピロリニル、３−ピロリニル、インドリニル、２Ｈ−ピラニル、４Ｈ−ピラニル、ジオキサニル、１，３−ジオキソラニル、ピラゾリニル、ジチアニル、ジチオラニル、ジヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、ジヒドロフラニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、イミダゾリジニル、３−アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３−アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、及びアザビシクロ［２．２．２］ヘキサニルが挙げられるが、これらに限定はされない。スピロ部分もまたこの定義の範囲内に包含される。環原子がオキソ（＝Ｏ）部分で置換されたヘテロ環基の例には、ピリミジノニル及び１，１−ジオキソ−チオモルホリニルがある。
【００３６】
用語「ヘテロアリール」とは、５または６員環の１価の芳香族ラジカルを指し、窒素、酸素及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、５〜１８の原子の縮合環系（少なくともその一方が芳香族である）を包含する。ヘテロアリール基の例には、（例えば、２−ヒドロキシピリジニルを含む）ピリジニル、イミダゾリル、イミダゾピリジニル、（例えば、４−ヒドロキシピリミジニルを含む）ピリミジニル、ピラゾリル、トリアゾリル、ピラジニル、テトラゾリル、フリル、チエニル、イソオキサゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソチアゾリル、ピロリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾフラニル、シンノリニル、インダゾリル、インドリジニル、フタラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、イソインドリル、プテリジニル、プリニル、オキサジアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、フラザニル、ベン
ゾフラザニル、ベンゾチオフェニル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、及びフロピリジニルがある。
【００３７】
上記ヘテロ環またはヘテロアリール基は、可能である場合には、炭素で接続（炭素で結合）されても、または窒素で接続（窒素で結合）されてもよい。限定ではなく例として、炭素で結合したヘテロ環またはヘテロアリールは、ピリジンの２、３、４、５、もしくは６位、ピリダジンの３、４、５、もしくは６位、ピリミジンの２、４、５、もしくは６位、ピラジンの２、３、５、もしくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールもしくはテトラヒドロピロールの２、３、４、もしくは５位、オキサゾール、イミダゾールもしくはチアゾールの２、４、もしくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール、もしくはイソチアゾールの３、４、もしくは５位、アジリジンの２もしくは３位、アゼチジンの２、３、もしくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、もしくは８位、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７、もしくは８位で結合される。
【００３８】
限定ではなく例として、窒素で結合したヘテロ環またはヘテロアリールは、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドールまたはイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾールまたはＯ−カルボリンの９位で結合される。
【００３９】
ヘテロアリールまたはヘテロシクルシル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｃｙｌ）中に存在するヘテロ原子は、ＮＯ、ＳＯ、及びＳＯ２などの酸化された形態を包含する。
用語「ハロ」または「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを指す。
【００４０】
上述のアルキル、アルケニル、アルキニル、環状アルキル、環状アルケニル、環状アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル及びヘテロアリールは、任意選択で１または複数（例えば、２、３、４、５、６またはそれ以上）の置換基で置換されていてもよい。
【００４１】
置換基が「置換された」と記載される場合には、当該置換基の炭素、酸素、イオウまたは窒素上の水素置換基が非水素置換基に置き換わっている。したがって、例えば、置換されたアルキル置換基は、当該アルキル置換基上の水素置換基が、少なくとも１の非水素置換基に置き換わっているアルキル置換基である。例を挙げて説明すると、モノフロオロアルキルは、１のフルオロ置換基によって置換されたアルキルであり、ジフロオロアルキルは、２のフルオロ置換基によって置換されたアルキルである。置換基に２以上の置換がある場合には、（別段の記載がない限りにおいて）各非水素置換基は同一であってもまたは異なっていてもよいことが認識される必要がある。
【００４２】
置換基が「任意選択で置換された」と記載される場合には、当該置換基は、（１）無置換であっても、または（２）置換されていてもよい。置換基の炭素が任意選択で列挙される置換基の１または複数によって置換されたと記載される場合には、当該炭素上の１または複数の水素が（任意の水素が存在する範囲で）、個別にかつ／または一緒に、独立に選択される任意選択の置換基で置換されていてもよい。置換基の窒素が任意選択で列挙される置換基の１または複数で置換されていると記載される場合には、当該窒素上の１または複数の水素が（任意の水素が存在する範囲で）、それぞれ、独立に選択される任意選択の置換基で置換されていてもよい。１つの代表的な置換基はＮＲ’Ｒ’’と表記され、但し、Ｒ’及びＲ’’は、これらが結合する窒素原子と共にヘテロ環を形成してもよい。Ｒ’及びＲ’’が結合する窒素原子と共にＲ’及びＲ’’から形成される上記ヘテロ環は、部
分的にまたは完全に飽和であってもよい。一実施形態において、上記ヘテロ環は３〜７の原子から構成される。別の実施形態において、上記ヘテロ環は、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル及びチアゾリルからなる群より選択される。
【００４３】
本明細書は、用語「置換基」、「ラジカル」、及び「基」を同義で用いる。
一群の置換基がまとめて、列挙される置換基の１または複数によって任意選択で置換されていると記載される場合には、当該の群は、（１）置換することができない置換基、（２）任意選択の置換基によって置換されていない置換可能な置換基、及び／または（３）１または複数の任意選択の置換基によって置換された置換可能な置換基を包含し得る。
【００４４】
置換基が任意選択で、特定の数までの数の非水素置換基によって置換されていると記載される場合には、当該の置換基は、（１）置換されていないか、または（２）当該の特定の数まで数の非水素置換基、もしくは当該置換基上の最大数までの数の置換可能な位置のどちらか小さい方によって置換されるかのいずれであってよい。したがって、例えば、置換基が、最大３までの数の非水素置換基によって任意選択で置換されたヘテロアリールとして記載される場合に、３未満の置換可能な位置を有する任意のヘテロアリールは、任意選択で、最大でも当該ヘテロアリールが有する置換可能な位置の数と同じ数の非水素置換基でしか置換されないこととなる。非限定的な例において、かかる置換基は、１〜１０の炭素原子を有する、直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシシクリル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｙｃｌｙｌ）、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ１００、−ＮＲ１０１Ｒ１０２、−ＮＯ２、−ＮＲ１０１ＣＯＲ１０２、−ＳＲ１００、−ＳＯＲ１０１によって表されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ１０１によって表されるスルホン、スルホン酸塩−ＳＯ３Ｍ、硫酸塩−ＯＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２ＮＲ１０１Ｒ１０２によって表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ１０１、−ＯＣＯＲ１０１、−ＯＣＯＮＲ１０１Ｒ１０２及びポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒ１０１から選択することができ、但し、ＭはＨまたはカチオン（Ｎａ＋もしくはＫ＋など）であり、Ｒ１０１、Ｒ１０２及びＲ１０３はそれぞれ独立に、Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒ１０４（但し、ｎは１〜２４の整数である）、６〜１０の炭素原子を有するアリール、３〜１０の炭素原子を有するヘテロ環及び５〜１０の炭素原子を有するヘテロアリールから選択され、Ｒ１０４はＨまたは１〜４の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキルであり、Ｒ１００、Ｒ１０１、Ｒ１０２、Ｒ１０３及びＲ１０４によって表される基中の上記アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクルシル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｃｙｌ）は、任意選択で、ハロゲン、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＮＯ２及び１〜４の炭素原子を有する無置換の直鎖または分岐のアルキルから独立に選択される１または複数（例えば、２、３、４、５、６もしくはそれ以上）の置換基で置換される。好ましくは、上述の任意選択で置換されたアルキル、アルケニル、アルキニル、環状アルキル、環状アルケニル、環状アルキニル、カルボシクリル、アリール、ヘテロシクリル及びヘテロアリールの置換基としては、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＲ１０２Ｒ１０３、−ＣＦ３、−ＯＲ１０１、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシシクル（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｙｃｌ）、−ＳＲ１０１、−ＳＯＲ１０１、−ＳＯ２Ｒ１０１及び−ＳＯ３Ｍが挙げられる。
【００４５】
用語「化合物」または「細胞毒性化合物」、「細胞毒性二量体」及び「細胞毒性二量体化合物」は同義で用いられる。これらの用語は、化合物であって、それらに関する構造もしくは式またはそれらの任意の誘導体が本発明に開示される上記化合物、あるいは参照により援用されるそれらの構造もしくは式または任意の誘導体を包含することを意図する。
上記用語はまた、本発明に開示される全ての式の化合物の、立体異性体、幾何異性体、互変異性体、溶媒和物、代謝産物、塩（例えば、薬学的に許容される塩）ならびにプロドラッグ、及びプロドラッグの塩も包含する。上記用語はまた、前述のもののいずれかの任意の溶媒和物、水和物、及び多形体も包含する。本出願に記載の発明の特定の態様において、「立体異性体」、「幾何異性体」、「互変異性体」、「溶媒和物」、「代謝産物」、「塩」「プロドラッグ」、「プロドラッグの塩」、「複合体」、「複合体の塩」、「溶媒和物」、「水和物」、または「多形体」を具体的に記述することは、用語「化合物」が、これらの他の形態を記述することなく用いられている本発明の他の態様において、これらの形態を意図的に除外することと解釈されるべきではない。
【００４６】
本明細書では、用語「免疫複合体」または「複合体」とは、細胞結合剤（すなわち、抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体もしくは抗ＦＲα抗体、またはそれらのフラグメント）に結合し、かつ一般式：Ａ−Ｌ−Ｃ（式中、Ｃ＝細胞毒、Ｌ＝リンカー、Ａ＝抗ＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα抗体もしくは抗ＦＲα抗体またはそれらのフラグメントなどの細胞結合剤（ＣＢＡ）である）によって定義される化合物またはその誘導体を指す。免疫複合体はまた、逆の順序Ｃ−Ｌ−Ａの一般式によって定義することもできる。
【００４７】
本明細書では、用語「細胞結合剤に結合可能な」とは、本明細書に記載の化合物またはそれらの誘導体が、これらの化合物またはそれらの誘導体を細胞結合剤に結合させるために好適な、少なくとも１の連結基またはその前駆体を含むことを指す。
【００４８】
所与の基の「前駆体」という用語は、任意の脱保護、化学修飾、またはカップリング反応によって、結果として当該の基になり得る任意の基を指す。
用語「細胞結合剤に結合した」とは、複合体分子が、好適な連結基またはその前駆体を介して細胞結合剤に結合した、本明細書に記載の細胞毒性剤化合物または細胞毒性剤−リンカー化合物（例えば、式（Ｄ１’）〜（Ｄ２９’）の化合物及び式（ＩＩ）の細胞毒性剤−リンカー化合物）、またはそれらの誘導体の少なくとも１種を含むことを指す。
【００４９】
用語「キラル」とは、鏡像のパートナー側と重ね合わせることができない特性を有する分子を指し、一方、用語「アキラル」とは、それらの鏡像のパートナー側に重ね合わせることができる分子を指す。
【００５０】
用語「立体異性体」とは、同一の化学的構成及び結合性を有する、単結合の周りを回転することによって相互変換することができない、空間におけるそれらの原子の異なる幾何学的配置を有する化合物を指す。
【００５１】
「ジアステレオマー」とは、２以上のキラリティーの中心を有する立体異性体であって、それらの分子が互いの鏡像ではない上記立体異性体を指す。ジアステレオマーは異なる物性、例えば、融点、沸点、分光特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、結晶化、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高分割能の分析操作下で分離し得る。
【００５２】
「鏡像異性体」とは、互いの重ね合わせることができない鏡像である化合物の２の立体異性体を指す。
本明細書において用いる立体化学の定義及び慣習は、概括的にはＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ
Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ（１９８４）  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ  Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，“Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，”  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９４に従う。本発明の化合物は、不斉すなわちキラル中心を含んでもよく、したがって異なる立体異性体の形態で存在してもよい。ジアステレオマー、鏡像異性体及びアトロプ異性体、ならびにラセミ混合物などのそれらの混合物を含むがこれらに限定されない、本発明の化合物の全ての立体異性体の形態は、本発明の一部を形成する。多くの有機化合物は光学活性の形態で存在する、すなわち、平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性な化合物の記載において、接頭辞Ｄ及びＬ、またはＲ及びＳを用いて、当該分子のそのキラル中心（複数可）の周りの絶対配置を表す。接頭辞ｄ及びＩまたは（＋）及び（−）を用いて、当該化合物による平面偏光の回転の符号を指定するが、（−）または１は、当該化合物が左旋性であることを意味する。接頭辞（＋）またはｄを付した化合物は右旋性である。所与の化学構造では、これらの立体異性体は、互いの鏡像であること以外は同一である。特定の立体異性体は鏡像異性体と呼ばれる場合もあり、かかる異性体の混合物は多くの場合鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物はラセミ混合物またはラセミ体と呼ばれ、化学反応または化学的処理において立体選択または立体特異性がない場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」とは、光学活性がない、２種の鏡像異性種の等モル量混合物を指す。
【００５３】
用語「互変異性体」または「互変異性形態」とは、低いエネルギー障壁を介して相互転換可能な、異なるエネルギーの構造異性体を指す。例えば、プロトン互変異性体（プロトトロピー互変異生体としても知られる）は、ケト−エノール及びイミン−エナミン異性化などのプロトンの転位を介した相互転換を含む。原子価互変異生体は、結合電子の一部の再構成による相互転換を含む。
【００５４】
本出願では、用語「プロドラッグ」とは、酵素的にもしくは加水分解的に活性化するまたはより活性な基となる形態へと転化することが可能である、本発明の化合物の前駆体または誘導体の形態を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４：３７５−３８２，６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）、及びＳｔｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ  ｅｔ  ａｌ．，（ｅｄｓ），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。本発明のプロドラッグとしては、より活性な細胞毒性の遊離の薬物へと転化することができる、エステル含有プロドラッグ、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、任意選択で置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ、任意選択で置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン及び他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるが、これらに限定はされない。本発明における使用のためのプロドラッグ形態へと誘導体化することができる細胞毒性薬物の例としては、本発明の化合物及び上記のような化学療法剤が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００５５】
用語「プロドラッグ」はまた、生物学的条件下（イン・ビトロまたはイン・ビボ）で加水分解するか、酸化するか、または他の形態で反応して、本発明の化合物を与えることができる化合物の誘導体を包含することも意味する。プロドラッグは生物学的条件下でのかかる反応に際してのみ活性になることができる、かまたはそれらの未反応の形態において活性を有することができる。本発明において企図されるプロドラッグの例としては、生加水分解性アミド、生加水分解性エステル、生加水分解性カルバミン酸エステル、生加水分
解性カーボネート、生加水分解性ウレイド、及び生加水分解性リン酸エステル類似体などの生加水分解性部分を含む、本明細書に開示される式のいずれかの１の化合物の類似体または誘導体が挙げられるが、これらに限定はされない。プロドラッグの他の例としては、−ＮＯ、−ＮＯ２、−ＯＮＯ、または−ＯＮＯ２部分を含む、本明細書に開示される式のいずれか１の化合物の誘導体が挙げられる。プロドラッグは、一般的に、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（１９９５）１７２−１７８，９４９−９８２（Ｍａｎｆｒｅｄ  Ｅ．Ｗｏｌｆｆ  ｅｄ．，５ｔｈ  ｅｄ．）によって記載されたものなどの周知の方法を用いて調製することができる。Ｇｏｏｄｍａｎ  ａｎｄ  Ｇｉｌｍａｎ’ｓ，Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，８ｔｈ  ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９２，“Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ
Ｄｒｕｇｓ”も参照されたい。
【００５６】
本発明のプロドラッグの１つの好ましい形態としては、化合物（任意のリンカー基を有するまたは有さない）及び本発明の複合体であって、上記化合物／複合体のイミン結合とイミンと反応性の反応剤との間に形成される付加物を含む、上記複合体が挙げられる。本発明のプロドラッグの別の好ましい形態としては、式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物などの化合物であって、式中、ＮとＣとの間の二重線
【００５７】
【化７】
2017529837.tif 000008
【００５８】
が単結合を表す場合に、ＸはＨまたはアミン保護基である、上記化合物が挙げられ、該化合物はプロドラッグになる。本発明のプロドラッグは、本明細書に記載のプロドラッグ（例えば、上記化合物／複合体のイミン結合とイミンと反応性の反応剤との間に形成される付加物を含む、かつ／またはＸが−Ｈの場合にＹ脱離基を含む）の一方または両方の形態を含んでいてもよい。
【００５９】
用語「イミンと反応性の反応剤」とは、イミン基と反応することができる反応剤を指す。イミンと反応性の反応剤の例としては、サルファイト（Ｈ２ＳＯ３、Ｈ２ＳＯ２またはカチオンと共に形成されたＨＳＯ３−、ＳＯ３２−もしくはＨＳＯ２−の塩）、メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５またはカチオンと共に形成されたＳ２Ｏ５２−の塩）、モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ３、ＰＯＳ３Ｈ３、ＰＳ４Ｈ３またはカチオンと共に形成されたＰＯ３Ｓ３−、ＰＯ２Ｓ２３−、ＰＯＳ３３−もしくはＰＳ４３−の塩）、チオホスフェートエステル（（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳＨ、ＲｉＳＯＨ、ＲｉＳＯ２Ｈ、ＲｉＳＯ３Ｈ）、種々のアミン（ヒドロキシルアミン（例えば、ＮＨ２ＯＨ）、ヒドラジン（例えば、ＮＨ２ＮＨ２）、ＮＨ２Ｏ−Ｒｉ、Ｒｉ’ＮＨ−Ｒｉ、ＮＨ２−Ｒｉ）、ＮＨ２−ＣＯ−ＮＨ２、ＮＨ２−Ｃ（＝Ｓ）−ＮＨ２，チオサルフェート（Ｈ２Ｓ２Ｏ３またはカチオンと共に形成されたＳ２Ｏ３２−の塩)、ジチオナイト（Ｈ２Ｓ２Ｏ４またはカチオンと共に形成されたＳ２Ｏ４２−の塩）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ）（ＳＨ）（ＯＨ）またはカチオンと共に形成されたその塩）、ヒドロキサム酸（ＲｋＣ（＝Ｏ）ＮＯＨまたはカチオンと共に形成されたその塩）、ヒドラジド（ＲｋＣＯＮＨＮＨ２）、ホルムアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２Ｈ、またはＨＯＣＨ２ＳＯ２−Ｎａ＋などのカチオンと共に形成されたＨＯＣＨ２ＳＯ２−の塩）、糖化ヌクレオチド（ＧＤＰ−マンノースなど）、フルダラビンまたはその混合物（但し、Ｒｉ及びＲｉ’はそれぞれ独立に、１〜１０の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、かつ−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、及び−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１の置換基によって置換され、Ｒｉ及びＲｉ’は、任意選択で本明細書において記載されるアルキルに対する置換基で更に置換されてもよく、Ｒｊは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、Ｒｋは、１〜１
０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリール（Ｒｋは１〜４の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであることが好ましく、Ｒｋはメチル、エチルまたはプロピルであることがより好ましい）が挙げられるが、これらに限定はされない。上記カチオンは、Ｎａ＋またはＫ＋などの１価のカチオンであることが好ましい。上記イミン反応剤は、サルファイト、ヒドロキシルアミン、尿素及びヒドラジンから選択されることが好ましい。上記イミン反応剤はＮａＨＳＯ３またはＫＨＳＯ３であることがより好ましい。
【００６０】
本明細書で別段示されない限り、用語「生加水分解性アミド」、「生加水分解性エステル」、「生加水分解性カルバミン酸エステル」、「生加水分解性カーボネート」、「生加水分解性ウレイド」及び「生加水分解性リン酸エステル類似体」とは、１）当該化合物の生物学的活性を破壊せず、かつ当該化合物に、取り込み、作用の継続時間、もしくは作用の発現などの、イン・ビボで有利な特性を与えるか、または２）それ自体は生物学的に不活性であるが、イン・ビボで生物学的に活性な化合物へと転化されるアミド、エステル、カルバミン酸エステル、カーボネート、ウレイドまたはリン酸エステル類似体を意味する。生加水分解性アミドの例としては、低級アルキルアミド、α−アミノ酸アミド、アルコキシアシルアミド、及びアルキルアミノアルキルカルボニルアミドが挙げられるがこれらに限定はされない。生加水分解性エステルの例としては、低級アルキルエステル、アルコキシアシルオキシエステル、アルキルアシルアミノアルキルエステル、及びコリンエステルが挙げられるがこれらに限定はされない。生加水分解性カルバミン酸エステルの例としては、低級アルキルアミン、置換エチレンジアミン、アミノ酸、ヒドロキシアルキルアミン、ヘテロ環状及びヘテロ芳香族アミンならびにポリエーテルアミンが挙げられるが、これらに限定はされない。特に好ましいプロドラッグ及びプロドラッグの塩は、本発明の化合物が哺乳動物に対して投与されたときに、かかる化合物の生物学的利用能を増加させるものである。
【００６１】
本明細書では、語句「薬学的に許容される塩」とは、本発明の化合物の薬学的に許容される有機または無機の塩を指す。代表的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫酸水素塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩「メシル酸塩」、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、パモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエ酸）塩）、アルカリ金属（例えば、ナトリウム及びカリウム）塩、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）塩、及びアンモニウム塩が挙げられるが、これらに限定はされない。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴ってもよい。上記対イオンは、基となる化合物上の電荷を安定化する任意の有機または無機部分であってよい。更に、薬学的に許容される塩は、その構造中に複数の荷電した原子を有していてもよい。複数の荷電した原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容される塩は、１もしくは複数の荷電した原子及び／または１もしくは複数の対イオンを有することができる。
【００６２】
本発明の化合物が塩基である場合、所望の薬学的に許容される塩は、本技術分野において利用可能かつ好適な任意の方法、例えば、当該の遊離塩基の、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、メタンスルホン酸、及びリン酸などの無機酸による、または酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、グルクロン酸もしくはガラクツロン酸などのピラノシディル酸（ｐｙｒａｎｏｓｉｄｙｌ  ａｃｉｄ）、クエン酸もしくは酒石酸などのアルファヒドロキシ酸、アスパ
ラギン酸もしくはグルタミン酸などのアミノ酸、安息香酸もしくは桂皮酸などの芳香族酸、ｐ−トルエンスルホン酸もしくはエタンスルホン酸などのスルホン酸などの有機酸による処理によって調製することができる。
【００６３】
本発明の化合物が酸である場合、所望の薬学的に許容される塩は、好適な任意の方法、例えば、当該の遊離酸の、アミン（第一級、第二級もしくは第三級）、アルカリ金属水酸化物もしくはアルカリ土類金属水酸化物などの無機または有機の塩基による処理によって調製することができる。好適な塩の説明のための例としては、グリシン及びアルギニンなどのアミノ酸、アンモニア、第一級、第二級及び第三級アミン、及びピペリジン、モルホリン及びピペラジンなどの環状アミンから誘導される有機塩、ならびにナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム及びリチウムから誘導される無機塩が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００６４】
本明細書では、用語「溶媒和物」とは、非共有結合の分子間力によって結合した、化学量論的もしくは非化学量論的な量の溶媒、例えば、水、イソプロパノール、アセトン、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸、及びエタノールアミンジクロロメタン、２−プロパノールなどを更に含む化合物を意味する。上記化合物の溶媒和物または水和物は、上記イミン部分の溶媒和または水和を生じさせるための、少なくとも１モル当量のヒドロキシル溶媒、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノールまたは水などを該化合物に添加することによって容易に調製される。
【００６５】
本出願において、用語「異常な細胞増殖」及び「増殖性障害」は同義で用いられる。本明細書では、「異常な細胞増殖」とは、別段示されない限り、正常な調節機構と無関係な細胞増殖（例えば、接触阻害の喪失）を指す。異常な細胞増殖としては、例えば、（１）変異したチロシンキナーゼの発現または受容体チロシンキナーゼの過剰発現によって増殖する腫瘍細胞（腫瘍）、（２）異常なチロシンキナーゼの活性化が生じる他の増殖性疾患の良性及び悪性細胞、（３）受容体チロシンキナーゼによって増殖する任意の腫瘍、（４）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化によって増殖する任意の腫瘍、ならびに（５）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化が生じる他の増殖性疾患の良性及び悪性細胞の異常な増殖が挙げられる。
【００６６】
用語「癌」及び「癌性の」とは、一般的には無調節の細胞増殖を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すかまたは説明する。「腫瘍」は、１種もしくは複数種の癌性細胞、及び／または良性もしくは前癌性細胞を含む。
【００６７】
「治療薬」は、抗体、ペプチド、タンパク質、酵素などの生物学的薬剤または化学療法剤の両方を包含する。
「化学療法剤」は、癌の治療に有用な化学的化合物である。
【００６８】
「代謝産物」は、特定の化合物、その誘導体、もしくはその複合体、またはそれらの塩の、体内の代謝を経て産生される産生物である。化合物、その誘導体、またはその複合体の代謝産物は、本技術分野において公知の慣用の技法を用いて同定することができ、それらの活性は、本明細書に記載のものなどの試験を用いて測定することができる。かかる産生物は、投与された化合物の、例えば、酸化、ヒドロキシル化、還元、加水分解、アミド化、脱アミド化、エステル化、脱エステル化、及び酵素的開裂などに由来し得る。したがって、本発明は、本発明の化合物、その誘導体、もしくはその複合体を、それらの代謝産生物を生じさせるのに十分な期間にわたって哺乳動物と接触させることを含む過程によって産生される化合物、その誘導体、またはその複合体を含む、本発明の化合物、その誘導体、またはその複合体の代謝産物を包含する。
【００６９】
語句「薬学的に許容される」とは、当該の物質または組成物が、製剤に含まれる他の成分に対して、かつ／またはそれを用いた治療を受ける哺乳動物に対して、化学的にかつ／または毒物学的に適合しなければならないことを示す。
【００７０】
用語「保護基」または「保護部分」とは、当該化合物、その誘導体、またはその複合体上の他の官能基を反応させている間、特定の官能基をブロックまたは保護するために一般的に用いられる置換基を指す。例えば、「アミン保護基」または「アミノ保護部分」は、アミノ基に結合して、当該化合物における当該アミノ官能基をブロックまたは保護する置換基である。かかる基は本技術分野で周知であり（例えば、Ｐ．Ｗｕｔｓ  ａｎｄ  Ｔ．Ｇｒｅｅｎｅ，２００７，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ７，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，ＮＪを参照のこと）、カルバミン酸メチル及びエチル、ＦＭＯＣ、置換カルバミン酸エチル、１，６−β脱離によって開裂する(「自壊性」とも呼ばれる)カルバミン酸エステルなどのカルバミン酸エステル、尿素、アミド、ペプチド、アルキル及びアリール誘導体によって例示される。好適なアミノ保護基としては、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。保護基及びそれらの使用の概括的な説明に関しては、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ  ＆  Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ
＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００７を参照されたい。
【００７１】
用語「脱離基」とは、置換反応（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）すなわち置換反応（ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ）の間に離脱する荷電したまたは荷電していない部分の基を指す。かかる脱離基は本技術分野で周知であり、該基としては、ハロゲン、エステル、アルコキシ、ヒドロキシル、トシレート、トリフレート、メシレート、ニトリル、アジド、カルバミン酸エステル、ジスルフィド、チオエステル、チオエーテル及びジアゾニウム化合物が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００７２】
用語「二官能性架橋剤」、「二官能性リンカー」「架橋剤」または「リンカー化合物」とは２の反応性基を有する修飾剤を指し、該２の反応性基の一方が細胞結合剤と反応することができ、もう一方が上記細胞毒性剤と反応して、これら２の部分を結合する。かかる二官能性架橋剤は本技術分野において周知である（例えば、Ｉｓａｌｍ  ａｎｄ  Ｄｅｎｔ  ｉｎ  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ，ｃｈａｐｔｅｒ  ５，ｐ２１８−３６３，Ｇｒｏｖｅｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ  Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９を参照のこと）。例えば、チオエーテル結合を介した結合を可能にする二官能性架橋剤としては、マレイミド基を導入するためのＮ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、またはヨードアセチル基を導入するためのＮ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）が挙げられる。細胞結合剤にマレイミド基またはハロアセチル基を導入する他の二官能性架橋剤は本技術分野において周知であり（米国特許出願２００８／００５０３１０、２００５０１６９９３３を参照のこと、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｃ．Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ１１７，Ｒｏｃｋｌａｎｄ，ＩＬ  ６１１０５，ＵＳＡより入手可能）、該架橋剤としては、ビス−マレイミドポリエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、ＢＭ（ＰＥＯ）２、ＢＭ（ＰＥＯ）３、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）スクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、５−マレイミド吉草酸ＮＨＳ、ＨＢＶＳ、ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ−ＳＭＣＣ）であるＮ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）−酪酸ヒドラジドまたはＨＣｌ塩（ＭＰＢＨ）、３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＢＡＰ）、ヨード酢酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＩＡ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、４−（ｐ−マレイミドフェニル）−酪酸Ｎ−スクシンイミジル（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル−６−（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、スクシンイミジル−（４−ビニルスルホニル）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）、ジチオビス−マレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビス−マレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビス−マレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビス−マレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、４−（Ｎ−マレイミド−メチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸スルホスクシンイミジル（スルホ−ＳＭＣＣ）、（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸スルホスクシンイミジル（スルホ−ＳＩＡＢ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＭＢＳ）、Ｎ−（γ−マレイミドブチルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、Ν−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＥＭＣＳ）、Ν−（κ−マレイミドウンデカノイルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＫＭＵＳ）、及び４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸スルホスクシンイミジル（スルホ−ＳＭＰＢ）が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００７３】
ヘテロ二官能性架橋剤は、２の異なる反応性基を有する二官能性架橋剤である。アミンと反応性のＮ−ヒドロキシスクシンイミド基（ＮＨＳ基）とカルボニルと反応性のヒドラジン基とを両方含有するヘテロ二官能性架橋剤を用いて、本明細書に記載の細胞毒性化合物を細胞結合剤(例えば抗体)と結合することもできる。かかる市販のヘテロ二官能性架橋剤の例としては、スクシンイミジル６−ヒドラジノニコチンアミドアセトンヒドラゾン（ＳＡＮＨ）、４−ヒドラジドテレフタル酸スクシンイミジル塩酸塩（ＳＨＴＨ）及びヒドラジニウムニコチン酸スクシンイミジル塩酸塩（ＳＨＮＨ）が挙げられる。酸に不安定な結合を有する複合体もまた、本発明のヒドラジン有するベンゾジアゼピン誘導体を用いて調製することができる。用いることができる二官能性架橋剤の例としては、スクシンイミジル−ｐ−ホルミルベンゾエート（ＳＦＢ）及びスクシンイミジル−ｐ−ホルミルフェノキシアセテート（ＳＦＰＡ）が挙げられる。
【００７４】
ジスルフィド結合を介した細胞結合剤の細胞毒性化合物との結合を可能にする二官能性架橋剤は本技術分野で公知であり、該架橋剤としては、ジチオピリジル基を導入するためのＮ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）２−スルホブタノエート（スルホ−ＳＰＤＢ）が挙げられる。ジスルフィド基を導入するために用いることができる他の二官能性架橋剤は本技術分野において公知であり、米国特許６，９１３，７４８、６，７１６，８２１、ならびに米国特許公開２００９０２７４７１３及び２０１００１２９３１４に開示され、これらの文献の全てが参照により本明細書に援用される。代替として、チオール基を導入する２−イミノチオラン、ホモシステインチオラクトンまたはＳ−アセチルコハク酸無水物などの架橋剤を用いることもできる。
【００７５】
本明細書で定義される「リンカー」、「リンカー部分」または「連結基」とは、細胞結合剤及び細胞毒性化合物などの２の基を１つに結合する部分を指す。一般的に、上記リンカーは、該リンカーが繋いでいる２の基を結合させる条件下では実質的に不活性である。二官能性架橋剤は、一方の反応性基を最初に上記細胞毒性化合物と反応させて、リンカー部分及び第２の反応性基を有する化合物を得ることができ、次いでこれを細胞結合剤と反応させることができるように、２の反応性基をリンカー部分のそれぞれの端部に１ずつ含
ませてもよい。代替として、二官能性架橋剤の一方の端部を最初に上記細胞結合剤と反応させて、リンカー部分及び第２の反応性基を有する細胞結合剤を得ることができ、次いでこれを細胞毒性化合物と反応させることができる。上記連結部分は、特定の部位における細胞毒性部分の放出を可能にする化学結合を含有していてもよい。好適な化学結合は当技術分野で周知であり、該化学結合としては、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸に不安定な結合、光に不安定な結合、ペプチダーゼに不安定な結合及びエステラーゼに不安定な結合が挙げられる（例えば、米国特許５，２０８，０２０、５，４７５，０９２、６，４４１，１６３、６，７１６，８２１、６，９１３，７４８、７，２７６，４９７、７，２７６，４９９、７，３６８，５６５、７，３８８，０２６及び７，４１４，０７３を参照のこと）。ジスルフィド結合、チオエーテル結合及びペプチダーゼに不安定な結合が好ましい。本発明において用いることができる他のリンカーとしては、米国公開第２００５０１６９９３３号に詳細に記載されるものなどの非開裂性のリンカー、またはＵＳ２００９／０２７４７１３、ＵＳ２０１０／０１２９３１４０、及びＷＯ２００９／１３４９７６に記載される荷電したリンカーまたは親水性のリンカーが挙げられ、これらの文献のそれぞれは、明示的に参照により本明細書に援用される。
【００７６】
用語「アミノ酸」とは、天然起源のアミノ酸または非天然起源のアミノ酸を指す。これらはＮＨ２−Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨによって表され、但し、Ｒａａ及びＲａａ’はそれぞれ独立に、Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであるか、あるいはＲａａ及びＮ末端窒素原子が共にヘテロ環を形成することができる（例えばプロリンにおいて）。用語「アミノ酸残基」とは、−ＮＨ−Ｃ（Ｒａａ’Ｒａａ）−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−などの、当該アミノ酸のアミン及び／またはカルボキシ末端から１の水素原子が除去された場合の相当する残基を指す。
【００７７】
用語「カチオン」とは、陽電荷を有するイオンを指す。上記カチオンは１価（例えばＮａ＋、Ｋ＋等）、２価（例えばＣａ２＋、Ｍｇ２＋等）または多価（例えばＡｌ３＋等）であってよい。上記カチオンは１価であることが好ましい。
【００７８】
用語「治療上有効な量」とは、対象において所望の生物学的応答を誘発する活性な化合物または複合体の量を意味する。かかる応答としては、治療される疾患もしくは障害の症状の緩和、上記疾患の症状もしくは上記疾患それ自体の再発の予防、抑制、もしくは遅延、当該治療を行わない場合と比較した対象の生存期間の増加、または上記疾患の症状もしくは上記疾患それ自体の増悪の予防、抑制、もしくは遅延が挙げられる。上記有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の技量の範囲内で行われる。化合物Ｉの毒性及び治療上の有効性は、細胞培養物及び実験動物における標準的な薬学的手法によって判定することができる。対象に投与される本発明の化合物もしくは複合体または他の治療薬の有効量は、多発性骨髄腫のステージ、分類及び状況ならびに、一般的な健康状態、年齢、性別、体重及び薬物耐性などの、当該対象の特徴に依存することとなる。投与される本発明の化合物もしくは複合体または他の治療薬の有効量はまた、投与経路及び剤形にも依存することとなる。投薬量及び間隔は、所望の治療効果を維持するために十分な当該活性化合物の血漿レベルを与えるために、個々に調節することができる。
【００７９】
用語「ヒト化抗体」とは、最小限の非ヒト（例えば、マウスの）配列を含有する特定の免疫グロブリン鎖、キメラ免疫グロブリン、またはそれらのフラグメントである非ヒト（例えば、マウスの）抗体の形態を指す。一般的にヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有する、非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲ由来の残基によって置換されているヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５，１
９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７，１９８８；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６，１９８８）。
【００８０】
いくつかの例において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、所望の特異性、親和性、及び能力を有する非ヒト種由来の抗体中の相当する残基に置換される。上記ヒト化抗体は、Ｆｖフレームワーク領域中及び／または置換された非ヒト残基内のいずれかの更なる残基の置換によって更に修飾して、抗体の特異性、親和性、及び／または能力を精緻化かつ最適化することができる。一般的に、上記ヒト化抗体は、上記非ヒト免疫グロブリンに相当するＣＤＲ領域の全てまたは実質的に全てを含有する実質的に少なくとも１、一般的には２もしくは３全ての可変領域を含むこととなる一方、全てのまたは実質的に全ての上記ＦＲ領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である。上記ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、一般的にはヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメインの少なくとも一部も含むことができる。ヒト化抗体を生成させるために用いられる方法の例が、米国特許５，２２５，５３９及び５，６３９，６４１、Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９１（３）：９６９−９７３，１９９４、ならびにＲｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．９（１０）：８９５−９０４，１９９６に記載される（全て参照により本明細書に援用される）。いくつかの実施形態において、「ヒト化抗体」は表面再構成された（ｒｅｓｕｒｆａｃｅｄ）抗体である。いくつかの実施形態において、「ヒト化抗体」はＣＤＲグラフト化抗体である。
細胞結合剤−細胞毒性剤複合体
本発明は、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、アミド結合したリンカー、酸に不安定なリンカー、及びエステラーゼに不安定なリンカーを含むがこれらに限定されない種々のリンカーを介して、１または複数種の本発明の細胞毒性剤に共有結合した本明細書に記載の細胞結合剤を含む、細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を提供する。
【００８１】
第１の実施形態において、本発明は、構造式（Ｉ）
【００８２】
【化８】
2017529837.tif 000009
【００８３】
（式中、
ＣＢＡはＪＣＢ’基に共有結合した細胞結合剤であり、
ＪＣＢ’は、ＣＢＡ上のアルデヒド基と、基Ｌに結合したアルデヒドと反応性の基とを反応させることによって形成される部分であり、但し、上記アルデヒド基は、以下の構造式
【００８４】
【化９】
2017529837.tif 000010
【００８５】
によって表される２−ヒドロキシエチルアミン部分の酸化に由来し、
上記２−ヒドロキシエチルアミン部分は、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり、
Ｌはスペーサーまたは結合であり、
ＪＤ’は細胞毒性剤Ｄを基Ｌと結合させる連結部分であり、
Ｄは、連結部分ＪＤ’を介してＬに、またはＬが結合の場合には、ＪＣＢ’を介してＣＢＡに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である）の細胞結合剤−細胞毒性剤複合体またはその薬学的に
許容される塩を提供する。
【００８６】
本発明においては、任意のアルデヒドと反応性の基を用いることができる。代表的なアルデヒドと反応性の基としては、Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ，１９９９，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨに記載されるものが挙げられるが、これらに限定はされない。
【００８７】
一実施形態において、上記アルデヒドと反応性の基は、ヒドラジン、ヒドラジドまたはヒドロキシルアミンである。
別の実施形態において、上記アルデヒドと反応性の基は、
【００８８】
【化１０】
2017529837.tif 000011
【００８９】
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ及びＸｂ’はそれぞれ独立に、−ＯＨ、−ＳＨまたは−ＮＨ２であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ＸｃはＮまたはＣＨである）から選択される。より詳細には、上記アルデヒドと反応性の基は、
【００９０】
【化１１】
2017529837.tif 000012
【００９１】
である。
第１の詳細な実施形態において、構造式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、ＪＣＢ’は以下の構造式
【００９２】
【化１２】
2017529837.tif 000013
【００９３】
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ１及びＸｂ１’はそれぞれ独立に−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨ−であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ｓ１は上記細胞結合剤に共有結合した部位であり、ｓ２は基Ｌに共有結合した部位である）
の１によって表される。より詳細には、ＪＣＢ’は、
【００９４】
【化１３】
2017529837.tif 000014
【００９５】
である。
第２の詳細な実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【００９６】
【化１４】
2017529837.tif 000015
【００９７】
（式中、
ｓ３は基ＪＣＢ’に共有結合した部位であり、
ｓ４は基Ｄに共有結合した部位であり、
Ｚａ１は存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９−、−ＮＲ９Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、または−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｚａ２は存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９−、または−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｒ９はＨまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｐ及びｐ’はそれぞれ独立に１〜１０の整数であり、
ＱはＨ、荷電した置換基またはイオン化可能な基であり、
それぞれのＲａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｑ１及びｒ１はそれぞれ独立に０〜１０の整数であるが、但しｑ１及びｒ１が共に０であることはないことを条件とし、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
【００９８】
一実施形態において、Ｑは、ｉ）Ｈ、ｉｉ）−ＳＯ３Ｈ、−Ｚ’−ＳＯ３Ｈ、−ＯＰＯ３Ｈ２、−Ｚ’−ＯＰＯ３Ｈ２、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｚ’−ＰＯ３Ｈ２、−ＣＯ２Ｈ、−Ｚ’−ＣＯ２Ｈ、−ＮＲ１１Ｒ１２、もしくは−Ｚ’−ＮＲ１１Ｒ１２、またはそれらの薬学的に許容される塩、あるいはｉｉｉ）−Ｎ＋Ｒ１４Ｒ１５Ｒ１６Ｘ−または−Ｚ’−Ｎ＋Ｒ１４Ｒ１５Ｒ１６Ｘ−であり、Ｚ’は任意選択で置換されたアルキレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、または任意選択で置換されたフェニレンであり、Ｒ１４〜Ｒ１６はそれぞれ独立に任意選択で置換されたアルキルであり、Ｘ−は薬学的に許容されるアニオンであり、残余の変数は、上記第２の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、Ｑは−ＳＯ３Ｈもしくは−ＣＯ２Ｈまたはそれらの薬学的に許容される塩である。
【００９９】
別の実施形態において、Ｚａ１は存在せず、Ｚａ２は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−または−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、残余の変数は、上記第２の詳細な実施形態のいずれかの実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、Ｒ９はＨである。
【０１００】
更に別の実施形態において、Ｚａ１及びＺａ２は共に存在せず、残余の変数は、上記第２の詳細な実施形態のいずれかの実施形態で説明されるとおりのものである。
別の実施形態において、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３及びＲａ４は全て−Ｈであり、ｑ及びｒはそれぞれ独立に０〜４の整数であり、残余の変数は、上記第２の詳細な実施形態のいずれかの実施形態で説明されるとおりのものである。
【０１０１】
更に別の実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【０１０２】
【化１５】
2017529837.tif 000016
【０１０３】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。
【０１０４】
第３の詳細な実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【０１０５】
【化１６】
2017529837.tif 000017
【０１０６】
（式中、
ｓ３はＪＣＢ’基に共有結合した部位であり、
ｓ４は基Ｄに共有結合した部位であり、
Ｚｂ１及びＺｂ２はそれぞれ独立に、存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−もしくは−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、または−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−（但し、ｐ及びｐ’は独立に１〜１０００の整数である）であり、
Ｅ１及びＥ２の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−であり、かつ他方は−ＮＲ９−であるか、またはＥ１及びＥ２の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−もしくは−ＮＲ９−であり、かつ他方は存在せず、
Ｒ９はＨまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
Ｐは［ＸＸ］１〜１０（但し、ＸＸは独立に選択されるアミノ酸の残基である）であるか、またはＰは−（ＮＲｍ−ＣＨ２ＣＨ２）ｓ−であり、
ｓは１〜５の整数であり、
ＲｍはＨ、または荷電した置換基もしくはイオン化可能な基で任意選択により置換されたアルキルであり、
それぞれのＲｂ１、Ｒｂ２、Ｒｂ３、Ｒｂ４、Ｒｂ５及びＲｂ６はそれぞれ独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
それぞれのｍ１及びｎ１は独立に、０〜１０の整数であり、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
【０１０７】
一実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【０１０８】
【化１７】
2017529837.tif 000018
【０１０９】
（式中、
Ｚｂ１及びＺｂ２は共に存在しないか、またはＺｂ１及びＺｂ２の一方は存在せず他方は−ＣＨ２−Ｏ−もしくは−Ｏ−ＣＨ２−であり、
ｎ１は１〜６の整数であり、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、Ｒｂ１及びＲｂ２は共にＨである。
【０１１０】
別の実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【０１１１】
【化１８】
2017529837.tif 000019
【０１１２】
（式中、
Ｚｂ１及びＺｂ２はそれぞれ独立に、存在しない、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−、または−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−であり、
ｎ１及びｍ１はそれぞれ独立に１〜６の整数であり、
残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
【０１１３】
より詳細な実施形態において、上記のいずれかの実施形態に記載される式（Ｌ２）に関して、Ｚｂ１及びＺｂ２は共に存在しない。更に別のより詳細な実施形態において、上記の式（Ｌ２）に関して、Ｚｂ１は−ＣＨ２−Ｏ−であり、Ｚｂ２は存在しない。代替として、上記の式（Ｌ２）に関して、Ｚｂ１は−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−であり、Ｚｂ２は−Ｏ−ＣＨ２−であるかまたは存在しない。更により詳細には、Ｒ９は−Ｈである。
【０１１４】
一実施形態において、上記のいずれかの実施形態に記載される式（Ｌ２）に関して、Ｐは［ＸＸ］２〜４である。更に別の詳細な実施形態において、上記のいずれかの実施形態に記載される式（Ｌ２）に関して、Ｐは［ＸＸ］２または［ＸＸ］３である。本明細書では、各ＸＸは独立に選択されるアミノ酸の残基である。
【０１１５】
別の実施形態において、上記のいずれかの実施形態に記載される式（Ｌ２）に関して、Ｐはプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである。より詳細には、Ｐは腫瘍組織において発現されるプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである。更に別のより詳細な実施形態において、Ｐはリソソームプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである。
【０１１６】
更に別の実施形態において、上記のいずれかの実施形態に記載される式（Ｌ２）に関して、Ｐは、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ
−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、及びＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ。、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、ならびにＡｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａからなる群より選択される。より詳細には、Ｐは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｇｌｙ−ＧｌｙまたはＡｌａ−Ａｌａである。
【０１１７】
別の実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【０１１８】
【化１９】
2017529837.tif 000020
【０１１９】
によって表され、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。
第４の詳細な実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式、
【０１２０】
【化２０】
2017529837.tif 000021
【０１２１】
（式中、
ｓ３は基ＪＣＢ’に共有結合した部位であり、
ｓ４は基Ｄに共有結合した部位であり、
Ｚｃ１は、存在しない、−ＳＯ２ＮＲ９−、−ＮＲ９ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−、−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−、−Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｐ−もしくは−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｐ’−であり、但し、ｐ及びｐ’は独立に１〜１０００の整数であり、
ＪＤ’は、
【０１２２】
【化２１】
2017529837.tif 000022
【０１２３】
であり、但し、ｓ１’は細胞毒性剤Ｄに共有結合した部位であり、ｓ２’は基Ａ’に共有結合した部位であり、
Ａ及びＡ’はそれぞれ独立に、任意選択で置換されたアルキレン、任意選択で置換されたアルケニレン、任意選択で置換されたアルキニレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、任意選択で置換されたシクロアルケニレンまたは任意選択で置換されたシクロアルキニレンであり、
Ｑは−Ｚ１−Ｐ−Ｚ２−であり、
Ｑ’は−Ｚ１’−Ｐ’−Ｚ２’−であり、
Ｚ１及びＺ２の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−であり、他方は−ＮＲｈ−であり、
Ｚ１’及びＺ２’の一方は−Ｃ（＝Ｏ）−であり、他方は−ＮＲｈ’−であり、
Ｐ及びＰ’はそれぞれ独立に、存在しない、任意選択で置換されたアルキレン、−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｊ−、−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｊ−、または［ＸＸ］１〜１０であり、但し、各ＸＸは独立に選択されるアミノ酸の残基であり、
Ｊは１〜５００の整数であり、
ｋは０または１であり、
Ｌは、−（ＣＲ５Ｒ６）ｖ−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｑ−Ｎ（Ｒｇ）−（ＣＲ９Ｒ１０）ｒ
−、−（ＣＲ７Ｒ８）ｑ−Ｃ（Ｒａ）（Ｒｇ）−（ＣＲ９Ｒ１０）ｒまたは−（ＣＲ１１Ｒ１２）ｓ−Ｎ（Ｒｇ）−（ＣＲ１３Ｒ１４）ｔ−Ｎ（Ｒｇ’）−（ＣＲ１５Ｒ１６）ｕ−であり、
Ｒｇ及びＲｇ’それぞれ独立に−（ＣＲ１７Ｒ１８）ｐ−Ｚ−Ｖであり、
ｐは１〜５の整数であり、
ＶはＨ、荷電した置換基またはイオン化可能な基であり、
Ｚは存在しない、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲｈ−アルキレン−または−ＮＲｈ−Ｃ（＝Ｏ）−アルキレン−であり、
それぞれのＲｈ及びＲｈ’は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
それぞれのＲ５〜Ｒ１８は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ及びｖはそれぞれ独立に０〜１０の整数であり、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
【０１２４】
一実施形態において、式（Ｉ）の複合体またはその薬学的に許容される塩に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は、以下の構造式
【０１２５】
【化２２】
2017529837.tif 000023
【０１２６】
（式中、
それぞれのＲ１９〜Ｒ２２は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
ｍ及びｎはそれぞれ独立に０〜１０であり、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、Ｒ１９〜Ｒ２２はそれぞれＨであり、Ｒ５及びＲ６はそれぞれＨであり、Ｒ７〜Ｒ１０はそれぞれＨであり、Ｒ１１〜Ｒ１６はそれぞれＨである。
【０１２７】
一実施形態において、式（Ｌ４）〜（Ｌ１１）に関して、それぞれのＰ及びＰ’は独立に［ＸＸ］１〜１０である。より詳細には、それぞれのＰ及びＰ’は独立に［ＸＸ］２〜５であり、残余の変数は上述のとおりである。
【０１２８】
別の実施形態において、式（Ｌ４）〜（Ｌ１１）に関して、Ｐ及びＰ’はそれぞれ、プロテアーゼによって開裂可能なペプチドである。更に別の実施形態において、Ｐ及びＰ’はそれぞれ、腫瘍組織において発現されるプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである。代替として、Ｐ及びＰ’はそれぞれ、リソソームプロテアーゼによって開裂可能なペプチドである。
【０１２９】
更に別の実施形態において、式（Ｌ４）〜（Ｌ１１）に関して、Ｐ及びＰ’はそれぞれ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、及びＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ。、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ、ならびにβ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙからなる群より選択される。より詳細には、Ｐ及びＰ’はそれぞれ、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、
Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ、またはβ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙである。
【０１３０】
特定の実施形態において、上記のいずれかの実施形態におけるそれぞれの［ＸＸ］は、天然起源のアミノ酸、合成アミノ酸、アミノ酸類似体、または上記天然起源のアミノ酸に類似する形態で機能するアミノ酸模倣体から選択される、独立に選択されるアミノ酸の残基である。
【０１３１】
特定の実施形態において、上記のいずれかの実施形態におけるそれぞれの［ＸＸ］は、それぞれ独立してＬまたはＤ異性体としての、ヒスチジン、アラニン、イソロイシン、アルギニン、ロイシン、アスパラギン、リシン、アスパラギン酸、メチオニン、システイン、フェニルアラニン、グルタミン酸、スレオニン、グルタミン、トリプトファン、グリシン、バリン、プロリン、セリン、チロシン、Ｎ−メチル−ヒスチジン、Ｎ−メチル−アラニン、Ｎ−メチル−イソロイシン、Ｎ−メチル−アルギニン、Ｎ−メチル−ロイシン、Ｎ−メチル−アスパラギン、Ｎ−メチル−リシン、Ｎ−メチル−アスパラギン酸、Ｎ−メチル−メチオニン、Ｎ−メチル−システイン、Ｎ−メチル−フェニルアラニン、Ｎ−メチル−グルタミン酸、Ｎ−メチル−スレオニン、Ｎ−メチル−グルタミン、Ｎ−メチル−トリプトファン、Ｎ−メチル−グリシン、Ｎ−メチル−バリン、Ｎ−メチル−プロリン、Ｎ−メチル−セリン、Ｎ−メチル−チロシン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、セリノシステイン（ｓｅｌｉｎｏｃｙｓｔｅｉｎｅ）、Ｏ−ホスホセリン、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、シトルリン、オルニチン、システインスルホン酸、システインスルフィン酸、３−アミノアラニン、３−ジメチルアミノアラニン、２−アミノ−４−（ジメチルアミノ）ブタン酸、２，４−ジアミノブタン酸、２−アミノ−６−（ジメチルアミノ）ヘキサン酸、２−アミノ−５−（ジメチルアミノ）ペンタン酸、及びβ−アラニンからなる群より選択される、独立に選択されるアミノ酸の残基である。より詳細には、各ＸＸは独立にグリシンまたはアラニンの残基である。
【０１３２】
第５の詳細な実施形態において、式（Ｉ）の複合体に関して、Ｄはメイタンシノイドであり、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１、第２、第３もしくは第４の実施形態あるいはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。
【０１３３】
より詳細な実施形態において、Ｄは以下の構造式
【０１３４】
【化２３】
2017529837.tif 000024
【０１３５】
（式中、
それぞれのＲＭ、ＲＭ’、及びＲＭ”は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、
それぞれのＲ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は独立に、Ｈ、任意選択で置換された任意選択で置換されたアルキル、任意選択で置換されたアルケニル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロシクリル、任意選択で置換されたアリール、または任意選択で置換されたヘテロアリールであり、
ｉは０〜１５の整数であり、
ｓ５は基ＪＤ’に共有結合した部位であり、
−Ｌ−ＪＤ’−は、上記第１の実施形態、または第２もしくは第４の詳細な実施形態、あるいはそれらに記載されるより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表されるメイタンシノイドである。
【０１３６】
より詳細には、Ｄは以下の構造式
【０１３７】
【化２４】
2017529837.tif 000025
【０１３８】
によって表される。
更に別の詳細な実施形態において、Ｄは以下の構造式
【０１３９】
【化２５】
2017529837.tif 000026
【０１４０】
（式中、それぞれのＲＭ、ＲＭ’、及びＲＭ”は独立に、Ｈまたは任意選択で置換されたアルキルであり、ｓ５は基ＪＤ’に共有結合した部位であり、−Ｌ−ＪＤ’−は、上記第１の実施形態または第３の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
によって表されるメイタンシノイドである。
【０１４１】
より詳細には、Ｄは以下の構造式
【０１４２】
【化２６】
2017529837.tif 000027
【０１４３】
によって表される。
第６の詳細な実施形態において、Ｄはベンゾジアゼピン化合物であり、残余の変数は、上記第１の実施形態または第１、第２、第３もしくは第４の実施形態あるいはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。代表的なベンゾジアゼピン化合物としては、米国特許第８，７６５，７４０号、同第８，４２６，４０２号、ＵＳ２０１４／００８８０８９、ＷＯ２０１１／１３０６１３、ＷＯ２０１１／１３０６１６、ＷＯ２０１０／０９１１５０、及びＷＯ２００９／０１６５１６に記載されるのもが挙げられるが、これらに限定はされない。これらの参照文献の全体の教示が参照により本明細書に援用される。
【０１４４】
より詳細な実施形態において、Ｄは以下の構造式
【０１４５】
【化２７】
2017529837.tif 000028
【０１４６】
【化２８】
2017529837.tif 000029
【０１４７】
（式中、
ＮとＣとの間の二重線
【０１４８】
【化２９】
2017529837.tif 000030
【０１４９】
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは、−Ｈ、それに結合した反応性基を有する連結基、またはアミン保護基であり（好ましくは、Ｘは−Ｈである）、
Ｙは、−Ｈ、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ、”−ＳＯ３Ｍ、−ＳＯ２Ｍまたは−ＯＳＯ３Ｍ（但し、Ｍは−ＨまたはＮａ＋もしくはＫ＋などのカチオンである）から選択され、
Ｒは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ（但し、ｎは１〜２４の整数、Ｒｃは１〜４の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルである）であり、
Ｒ’及びＲ’’は同一であるかまたは異なり、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＲＲｇ’、−ＣＯＲ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、６〜１８の炭素原子を有する、任意選択で置換されたアリール、Ｏ、Ｓ、Ｎ及びＰから選択される１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環、ＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃ（但し、ｎは１〜２４の整数、好ましくは、ｎは２、４もしくは８であり、Ｒｇ’は−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、またはＰＥＧ基−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｃである）から選択され、
Ｘ’は、−Ｈ、−ＯＨ、１〜１０の炭素原子を有する、置換されたまたは無置換の直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、フェニル、及びアミン保護
基からなる群より選択され、
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、置換されたまたは無置換の直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニルからなる群より選択され、
Ａ及びＡ’は−Ｏ−及び−Ｓ−から選択され、
Ｗ’は、存在しないか、または−Ｏ−、−Ｎ（Ｒｅ）−、−Ｎ（Ｒｅ）−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｎ（Ｃ（＝Ｏ）Ｒｅ）−、−Ｓ−もしくは−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２ＮＲｅ−から選択され、
Ｒｘは、存在しないか、または１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキルから選択され、
Ｒｅは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｒｋ（但し、Ｒｋは、−Ｈ、任意選択で第二級アミノ（例えば、−ＮＨＲ１０１）もしくは第三級アミノ（例えば、−ＮＲ１０１Ｒ１０２）基を有する、１〜６の炭素原子を有する直鎖、分岐、環状アルキル、またはピペリジンもしくはモルホリンなどの５または６員の窒素含有ヘテロ環であり、但し、Ｒ１０１及びＲ１０２はそれぞれ独立に１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルである）であり、
Ｇは−ＣＨ−または−Ｎ−であり、
Ｘ’’及びＸ’’’は同一であるかまたは異なり、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＲ’−、−ＣＯ−、−ＢＨ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−から独立に選択され、
Ｙ’’及びＹ’’’は同一であるかまたは異なり、−Ｏ、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＲ’−または−Ｓ−から独立に選択され、
Ｚ’’及びＺ’’’は同一であるかまたは異なり、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＣＲ７’Ｒ８’−、−ＮＲ９’−、−Ｏ−、及び−Ｓ−から独立に選択され、
ｎは０、１、２及び３から選択され、
Ｒ７’及びＲ８’は同一であるかまたは異なり、それぞれ−Ｈ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯＯＨ、−ＮＨＲ’、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、アミノ酸、２〜６のアミノ酸を有するペプチド単位、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキルから独立に選択され、
Ｒ９’は、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−から独立に選択され、
ＲＡ、ＲＡ’、ＲＢ及びＲＢ’は同一であるかまたは異なり、−Ｈ、ハライド、または１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された分岐、直鎖もしくは環状のアルキルからなる群から独立に選択されるか、あるいは、ＲＡ及びＲＡ’ならびに／またはＲＢ及びＲＢ’は、共にそれぞれ基＝Ｂ及び＝Ｂ’を含有する二重結合を形成し、
＝Ｂ及び＝Ｂ’は同一であるかまたは異なり、任意選択で置換された分岐もしくは直鎖のアルケニルまたはカルボニル基から独立に選択され、
ＱＡはＱＡ１−Ａｒ−ＱＡ２であり、
ＱＡ’はＱＡ１’−Ａｒ’−ＱＡ２’であり、
ＱＡ１及びＱＡ１’はそれぞれ独立に、存在しない、１〜６の炭素原子の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、または−ＣＨ＝ＣＨ単位であり、
Ａｒ及びＡｒ’はそれぞれ独立に、存在しないか、またはアリール基を表し、
ＱＡ２及びＱＡ２’はそれぞれ独立に、−Ｈ、それに結合した反応性基を有する連結基、１〜１０の炭素原子を有する、置換されたもしくは無置換の直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−Ｒｃ’−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、またはハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’によって表されるスルホキシド、−ＳＯ２Ｒ’によって表されるスルホン、スルホネート−ＳＯ３Ｍ、硫酸塩−ＯＳＯ３Ｍ、ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’によって表されるスルホンアミド、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’もしくは−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から
選択される置換基から選択され、
Ｒｃ’は、存在しないか、または１〜５の炭素原子を有する、直鎖もしくは分岐のアルキル、アルケニルもしくはアルキニルから選択される）によって表されるベンゾジアゼピン化合物である。
【０１５０】
更に別のより詳細な実施形態において、Ｄは以下の構造式
【０１５１】
【化３０】
2017529837.tif 000031
【０１５２】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、ＲＡ’’及びＲＢ’’は同一であるかまたは異なり、−Ｈ及び−Ｍｅから選択される。残余の変数は上述のとおりである。
【０１５３】
特定の実施形態において、式（Ｄ６）〜（Ｄ１７）に関して、ＮとＣとの間の二重線
【０１５４】
【化３１】
2017529837.tif 000032
【０１５５】
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈであり、Ｙは−ＯＨまたは−ＯＳＯ３Ｍであり、
Ｍは−Ｈまたは薬学的に許容されるカチオン（例えば、Ｎａ＋）であり、
Ｘ’及びＹ’は共に−Ｈであり、
Ａ及びＡ’は共に−Ｏ−であり、
Ｒ６は−ＯＭｅであり、
Ｒｘは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルである。
【０１５６】
より詳細な実施形態において、Ｄは以下の構造式
【０１５７】
【化３２】
2017529837.tif 000033
【０１５８】
【化３３】
2017529837.tif 000034
【０１５９】
【化３４】
2017529837.tif 000035
【０１６０】
【化３５】
2017529837.tif 000036
【０１６１】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、Ｙは−Ｈまたは−ＯＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンである。更により詳細には、Ｙはが−ＯＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
【０１６２】
第７の詳細な実施形態において、式（Ｉ）の複合体に関して、−Ｌ−ＪＤ’−は結合であり、Ｄは以下の構造式
【０１６３】
【化３６】
2017529837.tif 000037
【０１６４】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、
式中、
Ｌ’、Ｌ’’、及びＬ’’’の１つは以下の式
【０１６５】
【化３７】
2017529837.tif 000038
【０１６６】
によって表され、
他の２つは同一であるかまたは異なり、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立に選択され、
Ｚｄ１は、存在しない、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ９−または−ＮＲ９−Ｃ（＝Ｏ）−であり、
Ｐはアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、
それぞれのＲａ及びＲｂは独立に、−Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ３）アルキルまたは荷電した置換基もしくはイオン化可能な基Ｑであり、
ｒ及びｒ’は独立に１〜６の整数であり、
ＮとＣとの間の二重線
【０１６７】
【化３８】
2017529837.tif 000039
【０１６８】
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せず、Ｙは−Ｈ、または１〜４の炭素原子を有する直鎖もしくは分岐のアルキルであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈまたはアミン保護部分であり、
Ｙは、−ＯＲ、−ＯＣＯＲ’、−ＯＣＯＯＲ’、−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＮＲ’ＮＲ’Ｒ’’、任意選択で置換された５もしくは６員の窒素含有ヘテロ環（例えば、窒素原子によって結合した、ピペリジン、テトラヒドロピロール、ピラゾール、モルホリンなど）、−ＮＲ’（Ｃ＝ＮＨ）ＮＲ’Ｒ’’によって表されるグアニジナム（ｇｕａｎｉｄｉｎｕｍ）、アミノ酸、もしくは−ＮＲＣＯＰ’によって表されるペプチド、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、ハロゲン、シアノ、アジド、−ＯＳＯ３Ｈ、サルファイト（−ＳＯ３Ｈもしくは−ＳＯ２Ｈ）、メタ重亜硫酸（Ｈ２Ｓ２Ｏ５）、モノ、ジ、トリ及びテトラチオホスフェート（ＰＯ３ＳＨ３、ＰＯ２Ｓ２Ｈ２、ＰＯＳ３Ｈ２、ＰＳ４Ｈ２）、チオホスフェートエステル（ＲｉＯ）２ＰＳ（ＯＲｉ）、ＲｉＳ−、ＲｉＳＯ、ＲｉＳＯ２、ＲｉＳＯ３、チオホスフェート（ＨＳ２Ｏ３）、ジチオナイト（ＨＳ２Ｏ４）、ホスホロジチオエート（Ｐ（＝Ｓ）（ＯＲｋ’）（Ｓ）（ＯＨ））、ヒド
ロキサム酸（Ｒｋ’Ｃ（＝Ｏ）ＮＯＨ）、及びホルミアルデヒドスルホキシレート（ＨＯＣＨ２ＳＯ２−）またはそれらの混合物から選択される脱離基であり、但し、Ｒｉは１〜１０の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、かつ−Ｎ（Ｒｊ）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＳＯ３Ｈ、及び−ＰＯ３Ｈから選択される少なくとも１の置換基で置換され、Ｒｉは、任意選択で本明細書において記載されるアルキルに対する置換基で更に置換されてもよく、Ｒｊは１〜６の炭素原子を有する直鎖または分岐のアルキルであり、Ｒｋ’は１〜１０の炭素原子を有する直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールであり、
Ｐ’はアミノ酸残基または２〜２０のアミノ酸残基を含有するポリペプチドであり、
それぞれのＲは、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１もしくは複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、またはＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環からなる群から独立に選択され、
Ｒ’及びＲ’’はそれぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＮＨＲ、−ＮＲ２、−ＣＯＲ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒｃは、−Ｈまたは１〜４の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、
ｎは１〜２４の整数であり、
Ｘ’は、−Ｈ、アミン保護基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、６〜１８の炭素原子を有する、任意選択で置換されたアリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、ならびにＯ、Ｓ、Ｎ及びＰから独立に選択される１〜６のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｙ’は、−Ｈ、オキソ基、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、任意選択で置換された６〜１８員アリール、窒素、酸素、及びイオウから独立に選択される１または複数のヘテロ原子を含有する、任意選択で置換された５〜１８員ヘテロアリール環、１〜６のヘテロ原子を有する、任意選択で置換された３〜１８員ヘテロ環から選択され、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’はそれぞれ独立に、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐または環状のアルキル、アルケニルまたはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＣＯ、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３−Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’からなる群から選択され、
Ｒ６は、−Ｈ、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、またはハロゲンであり、
Ａ及びＡ’は同一であるかまたは異なり、−Ｏ−、オキソ（−Ｃ（＝Ｏ）−）、−ＣＲＲ’Ｏ−、−ＣＲＲ’−、−Ｓ−、−ＣＲＲ’Ｓ−、−ＮＲ５及び−ＣＲＲ’Ｎ（Ｒ５）−から独立に選択され、
Ｒ５及びＲ９はそれぞれ独立に、−Ｈまたは１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖もしくは分岐のアルキルであり、残余の変数は、上記第１の実施形態また
は第１の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。
【０１６９】
より詳細な実施形態において、式（Ｄ１８）〜（Ｄ２３）に関して、Ｌ’は式（Ａ）によって表され、Ｌ’’及びＬ’’’は共に−Ｈである。
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８）〜（Ｄ２３）に関して、
ＮとＣとの間の二重線
【０１７０】
【化３９】
2017529837.tif 000040
【０１７１】
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈ、Ｙは−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は全て−Ｈであり、
Ｒ６は−ＯＭｅであり、
Ｘ’及びＹ’は共に−Ｈであり、
Ａ及びＡ’は−Ｏ−であり、
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、残余の変数は、上記第７の詳細な実施形態または上記の任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。
【０１７２】
更に別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８）〜（Ｄ２３）に関して、Ｒａ及びＲｂは共にＨであり、残余の変数は、第７の詳細な実施形態または上記の任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。
【０１７３】
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８）〜（Ｄ２３）に関して、Ｒ５及びＲ９はそれぞれ独立にＨまたはＭｅであり、残余の変数は、第７の詳細な実施形態または上記の任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、Ｒ５及びＲ９は共にＨである。
【０１７４】
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８）〜（Ｄ２３）に関して、Ｐは２〜１０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残余の変数は、第７の詳細な実施形態または上記の任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、Ｐは２〜５のアミノ酸単位を含有するペプチドである。更により詳細には、Ｐは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、ならびにＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａから選択される。
【０１７５】
別の実施形態において、式（Ｉ）の複合体に関して、−Ｌ−ＪＤ’−Ｄは以下の構造式
【０１７６】
【化４０】
2017529837.tif 000041
【０１７７】
【化４１】
2017529837.tif 000042
【０１７８】
【化４２】
2017529837.tif 000043
【０１７９】
もしくは
【０１８０】
【化４３】
2017529837.tif 000044
【０１８１】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、ＹはＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
【０１８２】
第８の詳細な実施形態において、式（Ｉ）の複合体は以下の構造式
【０１８３】
【化４４】
2017529837.tif 000045
【０１８４】
【化４５】
2017529837.tif 000046
【０１８５】
【化４６】
2017529837.tif 000047
【０１８６】
【化４７】
2017529837.tif 000048
【０１８７】
【化４８】
2017529837.tif 000049
【０１８８】
【化４９】
2017529837.tif 000050
【０１８９】
【化５０】
2017529837.tif 000051
【０１９０】
【化５１】
2017529837.tif 000052
【０１９１】
【化５２】
2017529837.tif 000053
【０１９２】
【化５３】
2017529837.tif 000054
【０１９３】
【化５４】
2017529837.tif 000055
【０１９４】
【化５５】
2017529837.tif 000056
【０１９５】
【化５６】
2017529837.tif 000057
【０１９６】
【化５７】
2017529837.tif 000058
【０１９７】
【化５８】
2017529837.tif 000059
【０１９８】
【化５９】
2017529837.tif 000060
【０１９９】
【化６０】
2017529837.tif 000061
【０２００】
及び
【０２０１】
【化６１】
2017529837.tif 000062
【０２０２】
によって表される。
第１の実施形態または第１〜第８の詳細な実施形態またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態などの、上述の実施形態のいずれか１の複合体におけるＣＢＡは、後述の第２の実施形態中に記載されるものなどの、本明細書に記載の任意の細胞結合剤であってよい。
【０２０３】
特定の実施形態において、第１の実施形態または第１〜第８の詳細な実施形態またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態などの、上述の実施形態のいずれか１の複合体は、細胞結合剤（例えば抗体）分子当たり１〜４の結合した細胞毒性剤分子を含んでいてもよい。特定の実施形態において、上記複合体は、細胞結合剤分子当たり２または４の細胞毒性剤分子を含んでいてもよい。上記細胞結合剤（例えば抗体）分子当たりの結合した細胞毒性剤分子の数は、メイタンシノイド化合物については２８０ｎｍと２５２ｎｍとの吸光度の比を、ベンゾジアゼピン化合物については２８０ｎｍと３３０ｎｍとの吸光度の比を測定することによって、分光学的に求めることができる。代替として、上記細胞結合剤（例えば抗体）分子当たりの結合した細胞毒性剤分子の数は、質量分析法によって求めることができる。
【０２０４】
本発明は、第１の実施形態または第１〜第８の詳細な実施形態またはそれらに記載される任意ののより詳細な実施形態などの、上述の実施形態のいずれか１の複合体を含む組成物を更に提供する。特定の実施形態において、上記組成物中の少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、９９．５％、９９．９％またはそれ以上の上記複合体が、それぞれのＣＢＡに共有結合した２または４の細胞毒性剤を有する。特定の実施形態において、上述の組成物中では、約２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％または０．１％以下の上記複合体が、それぞれのＣＢＡに共有結合した１のみの細胞毒性剤を有する。
細胞結合剤
第２の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を調製するための細胞結合剤（ＣＢＡ）を提供する。かかるＣＢＡは、抗体、その抗原結合部分（抗体誘導体を包含し得る）、または抗体模倣体タンパク質などのタンパク質（例えば、天然に存在するタンパク質、または操作されたもしくは組換えタンパク質）であってもよい。かかるタンパク質性ＣＢＡのＮ末端は、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であってもよい２−ヒドロキシエチルアミン部分を含んでいてもよい。上記２−ヒドロキシエチルアミン部分は、本発明の方法を用いて酸化されてアルデヒド基になることができ、該アルデヒド基はその後、アルデヒドと反応性の基と反応して、本主題の複合体を形成することができる。
【０２０５】
関連する態様において、本発明はまた、操作された抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質であって、かかる抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質の非Ｓｅｒ、非Ｔｈｒの天然配列と対照をなす、Ｎ末端残基としてのＳｅｒまたはＴｈｒを有していてもよい、上記抗体、その抗原結合部分、または抗体模倣体タンパク質などの、特定の操作されたタンパク質性ＣＢＡも提供する。
【０２０６】
上記Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒは、Ｓｅｒ／Ｔｈｒコドンをシグナルペプチド配列の直後に挿入することによって付加することができる。かかるシグナルペプチド配列は、上記の抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質のための天然のシグナルペプチドであってもよく、あるいは、上記の抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質の成熟処理された配列のＮ末端に融合した異種シグナルペプチドであってもよい。
【０２０７】
ここで、「（例えば、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の）成熟処理された配列」とは、当該組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分のなどの特定の分泌タンパク質の処理された配列を指し、該分泌タンパク質はＮ−末端シグナルペプチド（天然起源のＮ−末端シグナルペプチド、または組換え技術を用いてＮ末端に融合させた異種Ｎ−末端シグナルペプチドのいずれか）を用いて合成される。当該シグナルペプチドの開裂を含む通常の成熟過程後には、生成する成熟処理された配列では、概して全てのシグナルペプチド配列が欠失する。
【０２０８】
配列番号１及び６は、天然のまたは異種のシグナルペプチドそれ自体として用いることができる。シグナルペプチドの開裂後の上記Ｎ末端残基がセリン/スレオニンである限りにおいて、上記抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質の、上記成熟処理された配列における上記Ｎ末端残基に対する更なる配列の変化が存在してもよい。
【０２０９】
詳細には、マウス抗ＦＯＬＲｌ抗体ＦＲ１−２．１の軽鎖シグナルペプチド（２０１３年４月１６日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１２０１９７を有するハイブリドーマによって産生）から得られる特定のシグナルペプチド配列を用いることによって、上記Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒを付加することができ、上記シグナルペプチドは配列番号１によって表される。驚くべきことに、このシグナルペプチド配列は、独自の処理を行うと、当該タンパク質の成熟処理された配列のＮ末端残基としてその最後のＳｅｒを残すことが見出された。
【０２１０】
上記Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒが上記ＣＢＡ中に天然に存在するか、または本明細書に記載のいずれかの組換え技術を用いて操作されているかにかかわらず、本発明の別の態様は、そのＮ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒがアルデヒド基へと酸化された修飾ＣＢＡ（例えば、修飾抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質）を更に提供する。特定の実施形態において、上記アルデヒドは、抗体またはその抗原結合部分の重鎖のＮ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒの酸化に由来する。該酸化は、本明細書に記載の本発明の方法のいずれかを用いて行うことができる。かかる修飾ＣＢＡは、アルデヒドと反応性の基（本明細書に記載のものなど）を有するリンカーと反応して、本発明の複合体を形成することができる。
【０２１１】
したがって、本発明はまた、本発明の修飾ＣＢＡ（例えば、抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質）を用いる、本明細書に記載の本発明の複合体の製造方法も提供する。本発明は更に、Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒを有する上記Ｃ
ＢＡの成熟処理された配列を生成させる、いずれかの操作されたＣＢＡ（例えば、抗体、その抗原結合部分（もしくは抗体誘導体）、または抗体模倣体タンパク質）をコードするポリヌクレオチドも提供する。
【０２１２】
特定の実施形態において、上記アルデヒド基は上記タンパク質性ＣＢＡ（例えば、抗体またはその抗原結合部分）の上記Ｎ末端に位置する。例えば、上記Ｎ末端アルデヒド基はＮ末端セリンまたはスレオニンの酸化に由来してもよい。
【０２１３】
一実施形態において、上記Ｎ末端セリンまたはスレオニンは、当該タンパク質性ＣＢＡ（例えば、抗体またはその抗原結合部分）中に天然に存在していてもよい。例えば、上記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３の軽鎖配列、または配列番号１のシグナルペプチドをコードする同様のマウス生殖系列配列に由来する軽鎖配列を含んでいてもよい。関連する実施形態において、上記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３の軽鎖配列、または配列番号１のシグナルペプチドをコードする同様のマウス生殖系列配列に由来する軽鎖配列を含む、マウス抗体またはその抗原結合部分のキメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体、またはそれらの抗原結合部分である。
【０２１４】
同様に、上記抗体またはその抗原結合部分は、マウスＩＧＫＶ６−３２＊０１配列（すなわち、ＳＩＶＭＴＱＴＰＫＦＬＬＶＳ
ＡＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＳＮＤＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＴＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＱＱＤＹＳＳＰ、配列番号２０）に由来する軽鎖配列を含んでいてもよい。関連する実施形態において、上記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号２０のマウスＩＧＫＶ６−３２＊０１配列に由来する軽鎖配列を含む、マウス抗体またはその抗原結合部分のキメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体、またはその抗原結合部分である。
【０２１５】
また、上記抗体またはその抗原結合部分は、後に掲載するヒトラムダＶ３ファミリーのＶ遺伝子配列（すなわち、配列番号２１〜２４）のいずれか１種に由来する軽鎖配列を含んでもよい。関連する実施形態において、上記抗体またはその抗原結合部分は、以下に列挙するヒトラムダＶ３ファミリーのＶ遺伝子配列のいずれか１種に由来する軽鎖配列を含む、マウス抗体またはその抗原結合部分のキメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体またはその抗原結合部分である。
【０２１６】
ヒトラムダＶ３ファミリーのＶ遺伝子配列
ＩＧＬＶ３−１＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＣＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＡ（配列番号２１）
ＩＧＬＶ３−１０＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＥＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＴＤＳＳＧＮＨＸ（配列番号２２）
ＩＧＬＶ３−１０＊０２
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＫＹＡＹＷＹＱＱＫＳＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＳＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＭＡＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＤＤＹＹＣＹＳＡＤＹＳＧＮ（配列番号２３）
ＩＧＬＶ３−１２＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＨＳＶＳＶＡＴＡＱＭＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＡＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＤＰＶＬＶＩＹＳＤＳＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＰＧＮＴＴＴＬＴＩＳＲＩＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰ（配列番号２４）
ＩＧＬＶ３−１２＊０２
ＳＹＥＬＴＱＰＨＳＶＳＶＡＴＡＱＭＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＡＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＤＰＶＬＶＩＹＳＤＳＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＰＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＩＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰ（配列番号２５）
ＩＧＬＶ３−１３＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＰＡＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＳＣＳＧＤＶＬＲＤＮＹＡＤＷＹＰＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＧＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＴＳＧＮＴＴＡＬＴＩＳＲＶＬＴＫＧＧＡＤＹＹＣＦＳＧＤ＊ＮＮＬ（配列番号２６）
ＩＧＬＶ３−１６＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＬＧＱＭＡＲＩＴＣＳＧＥＡＬＰＫＫＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＦＰＶＬＶＩＹＫＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＩＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＬＳＡＤＳＳＧＴＹＰ（配列番号２７）
ＩＧＬＶ３−１９＊０１
ＳＳＥＬＴＱＤＰＡＶＳＶＡＬＧＱＴＶＲＩＴＣＱＧＤＳＬＲＳＹＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＧＫＮＮＲＰＳＧＩＰＤＲＦＳＧＳＳＳＧＮＴＡＳＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＮＳＲＤＳＳＧＮＨＬ（配列番号２８）
ＩＧＬＶ３−２１＊０１
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰ（配列番号２９）
ＩＧＬＶ３−２１＊０２
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰ（配列番号３０）
ＩＧＬＶ３−２１＊０３
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＰ（配列番号３１）
ＩＧＬＶ３−２２＊０１
ＳＹＥＬＴＱＬＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＶＬＧＥＮＹＡＤＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＥＬＶＩＹＥＤＳＥＲＹＰＧＩＰＥＲＦＳＧＳＴＳＧＮＴＴＴＬＴＩＳＲＶＬＴＥＤＥＡＤＹＹＣＬＳＧＤＥＤＮＰ（配列番号３２）
ＩＧＬＶ３−２５＊０１
ＳＹＥＬＭＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＱＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＡＤＳＳＧＴＹＰ（配列番号３３）
ＩＧＬＶ３−２５＊０２
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＱＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＡＤＳＳＧＴＹＰ（配列番号３４）
ＩＧＬＶ３−２５＊０３
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＡＬＰＫＱＹＡＹＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣＱＳＡＤＳＳＧ（配列番号３５）
ＩＧＬＶ３−２７＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＳＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣＳＧＤＶＬＡＫＫＹＡＲＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＫＤＳＥＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＡＱＶＥＤＥＡＤＹＹＣＹＳＡＡＤＮＮＬ（配列番号３６）
ＩＧＬＶ３−３１＊０１
ＳＳＥＬＳＱＥＰＡＶＳＶＡＬＧ＊ＴＡＲＩＴＣＱＧＤＳＩＥＤＳＶＶＮＷＹＫＱＫＰＳ
ＱＡＰＧＬＶＩ＊ＬＮＳＶＱＳＳＧＩＰＫＫＦＳＧＳＳＳＧＮＭＡＴＬＴＩＴＧＩＱＶＥＤＫＡＤＹＹＣＱＳＷＤＳＳＲＴＨＳ（配列番号３７）
ＩＧＬＶ３−３１＊０２
ＳＳＥＬＳＱＥＰＡＶＳＶＳＬＧ＊ＴＡＲＩＴＣＱＧＤＳＩＥＤＳＶＶＮＷＹＫＱＫＰＳＱＡＰＧＬＶＩ＊ＬＮＳＶＱＳＳＧＩＰＫＫＦＳＧＳＳＳＧＮＭＡＴＬＴＩＴＧＩＱＶＥＤＫＡＤＹＹＣＱＳＷＤＳＳＲＴＨＳ（配列番号３８）
ＩＧＬＶ３−３２＊０１
ＳＳＧＰＴＱＶＰＡＶＳＶＡＬＧＱＭＡＲＩＴＣＱＧＤＳＭＥＧＳＹＥＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＤＳＳＤＲＰＳＲＩＰＥＲＦＳＧＳＫＳＧＮＴＴＴＬＴＩＴＧＡＱＡＥＤＥＡＤＹＹＹＱＬＩＤＮＨＡＴ（配列番号３９）
ＩＧＬＶ３−９＊０１
ＳＹＥＬＴＱＰＬＳＶＳＶＡＬＧＱＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＮＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＲＤＳＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＡＱＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＴＡ（配列番号４０）
ＩＧＬＶ３−９＊０２
ＳＹＥＬＴＱＰＬＳＶＳＶＡＬＧＱＡＡＲＩＴＣＧＧＮＮＬＧＹＫＳＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＲＤＮＮＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＡＱＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＴＡＨＰ（配列番号４１）
上記ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、表面再構成された抗体もしくはＣＤＲグラフト化抗体またはそれらの抗原結合部分であってもよい。
【０２１７】
別の実施形態において、上記Ｎ末端セリンまたはスレオニンは、上記タンパク質性ＣＢＡ（例えば、抗体またはその抗原結合部分）中に操作によって導入されてもよい。例えば、上記抗体またはその抗原結合部分は、本明細書に記載の本発明の組換え抗体のいずれか１種であってよい（以下を参照のこと）。
【０２１８】
特定の実施形態において、上記Ｎ末端アルデヒド基は、上記抗体もしくはその抗原結合部分の一方もしくは両方の重鎖上に、または上記抗体もしくはその抗原結合部分の一方もしくは両方の軽鎖上に位置するか、あるいはそれらの組み合わせである。
【０２１９】
特定の実施形態において、上記ＣＢＡは抗体またはその抗原結合部分である。特定の実施形態において、上記抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（またはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ(例えば、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ)、Ｔ細胞結合因子（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ｕｎｉｂｏｄｙもしくはｄｕｏｂｏｄｙ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｐｒｏｂｏｄｙ、細胞内発現抗体、または多重特異性抗体であってよい。特定の実施形態において、上記抗原結合部分は、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）またはナノボディであってよい。
【０２２０】
特定の実施形態において、上記ＣＢＡは、ＤＡＲＰｉｎ、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、Ｆｙｎｏｍｅｒ、クーニッツドメインペプチド、モノボディ（またはアドネクチン）、トリボディ（ｔｒｉｂｏｄｙ）、またはナノフィチンなどの抗体模倣体である。特定の詳細な実施形態において、上記ＣＢＡはＤＡＲＰｉｎである。他の詳細な実施形態において、上記ＣＢＡはＣｅｎｔｙｒｉｎである。更に別の詳細な実施形態において、上記ＣＢＡはモノボディまたはアドネクチンである。特定の実施形態において、上記ＣＢＡは、デュアル受容体リターゲティング（
ｄｕａｌ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｔａｒｇｅｔｉｎｇ）（ＤＡＲＴ）分子（Ｐ．Ａ．Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｂｌｏｏｄ，２０１１；１１７（１７）：４５４２−４５５１；Ｖｅｒｉ  ＭＣ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．，２０１０  Ｍａｒ
３０；６２（７）：１９３３−４３；Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２０１０  Ａｐｒ  ９；３９９（３）：４３６−４９）または細胞浸透性スーパーチャージドタンパク質（ｃｅｌｌ  ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ  ｓｕｐｅｒｃｈａｒｇｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ）（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．５０２，２９３−３１９（２０１２）である。
【０２２１】
別の態様において、本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチドを含む、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分を提供する。
【０２２２】
本発明のこの態様は、抗体ＦＲ１−２．１の軽鎖シグナルペプチドである配列番号１が、配列番号１における最後のＳｅｒの直前で自然に開裂することができ、したがって得られる処理されたポリペプチド（例えば、シグナルペプチドとして配列番号１で表される組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分）中にＮ末端セリンが残るとの驚くべき知見に一部基づく。したがって、配列番号１のシグナルペプチドは、組換えによって異種ポリペプチド（例えば、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分）に融合することができ、Ｎ末端Ｓｅｒを有するポリペプチドを生成させるための一般的な手法に用いることができる。
【０２２３】
特定の実施形態において、上記異種シグナルペプチドは、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列のＮ末端に融合される。
【０２２４】
特定の実施形態において、上記異種シグナルペプチドは、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列のＮ末端の２番目のアミノ酸残基に融合される。したがって、この実施形態においては、上記処理されたポリペプチドは、配列番号１由来のＮ末端Ｓｅｒに起因する１の追加のアミノ酸残基を有してはいない。他の関連する実施形態において、当該抗体またはその抗原結合部分の結合能が実質的に影響を受けない限りにおいて、上記異種シグナルペプチドは、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列のＮ末端部分の任意の残基（例えば、３番目、４番目、５番目等）に融合され、結果として１または複数のＮ末端残基が「欠失」する。代替的にまたは追加的に、当該Ｎ末端残基が配列番号１の最後の残基由来のＳｅｒなどのＳｅｒである限りにおいて、１または複数の更なる残基をＮ末端Ｓｅｒの後に付加することができる。
【０２２５】
関連する実施形態において、本発明は、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分であって、上記重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の（天然の）シグナルペプチドの最後の残基に隣接するＣ末端のＳｅｒまたはＴｈｒ残基を含む、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分を提供する。これは、ＳｅｒまたはＴｈｒのためのコドンを、天然のシグナルペプチドのためのコード配列の直後に挿入することによって得ることができる。例えば、Ｓｅｒ残基を、モノクローナル抗体ｈｕＭｏｖ１９軽鎖または重鎖の天然のシグナルペプチド配列の直後に挿入して、配列
【０２２６】
【化６２】
2017529837.tif 000063
【０２２７】
を創出することができる。上記天然のシグナルペプチド配列の天然の処理（開裂）の後に、得られるＮ末端残基がＳｅｒであることが期待される。
例えば、特定の実施形態において、上記ＳｅｒまたはＴｈｒ残基は、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の最初の残基に隣接するＮ末端であってよい。
【０２２８】
別の実施形態において、上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１または複数のＮ末端アミノ酸残基（複数可）は、上記ＳｅｒまたはＴｈｒ残基によって置き換えられている。代替的にまたは追加的に、シグナルペプチドの処理後に得られるポリペプチドの最初の残基がＳｅｒ／Ｓｅｒである限りにおいて、更なるアミノ酸残基を付加、除去、または置換することができる。
【０２２９】
代表的な組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分は、配列番号１０または１４を有していてもよい。他のものとしては配列番号４２を含むものが挙げられる。
【０２３０】
本発明の更に別の態様は、本明細書に記載されるいずれか１の本主題の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分に由来する、重鎖、軽鎖、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列を含む組換え抗体を提供する。
【０２３１】
例えば、上記組換え抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ’）３、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｄＡｂもしくはｓｄＡｂ（またはナノボディ）、ＣＤＲ、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）２、ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ、ｔａｓｃＦｖ（タンデムｓｃＦｖ）、ＡＶＩＢＯＤＹ(例えば、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ)、Ｔ細胞結合因子（ＢｉＴＥ）、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、Ｆｃａｂ、ｍＡｂ２、小モジュラー免疫薬（ＳＭＩＰ）、Ｇｅｎｍａｂ／ｕｎｉｂｏｄｙもしくはｄｕｏｂｏｄｙ、Ｖ−ＮＡＲドメイン、ＩｇＮＡＲ、ミニボディ、ＩｇＧΔＣＨ２、ＤＶＤ−Ｉｇ、ｐｒｏｂｏｄｙ、細胞内発現抗体、または多重特異性抗体であってもよいか、あるいはこれらを含んでもよい。特定の詳細な実施形態において、上記抗原結合部分は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）またはナノボディである。
【０２３２】
特定の実施形態において、上記組換え抗体は、それぞれが本明細書に記載される本主題の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分のいずれか１に由来する、重鎖、軽鎖、またはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１、２、３あるいは４を含んでいてもよい。
【０２３３】
特定の実施形態において、上記組換え抗体は、第１の重鎖ポリペプチド及び第２の重鎖ポリペプチドを含むヘテロ二量体抗体であって、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域と第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域とが界面で接触し、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域の界面が、第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域の界面のキャビティ中に位置することができる突起を含む、上記ヘテロ二量体抗体であってもよい。特定の実施形態において、二重特異性抗体における重鎖の特異的対合を促進するためのノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）技術が、例えば、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＲｏｃｈｅのＣｒｏｓｓＭａｂ技術に基づいて、例えば、ＣＨ１定常領域とカッパ定常領域との交換によって、更に改善されて、軽鎖の誤対合を更に低減または排除することができる。
【０２３４】
代替として、完全に二重特異性の抗体の開発において、共通の軽鎖、ドメイン抗体、及び単鎖形式を含む多様な他の生物製剤手法を完全に補完する、Ｚｙｍｅｗｏｒｋｓ  ＡＺＹＭＥＴＲＩＣ（商標）ヘテロ二量体ＩｇＧ１軽鎖プラットフォーム技術などのＬＣヘテ
ロ二量体を用いても、同様の結果を得ることができる。
【０２３５】
特定の実施形態において、第２の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域がテンプレート／元のポリペプチドから上記突起をコードするように変更されるか、または第１の重鎖ポリペプチドのＦｃ領域がテンプレート／元のポリペプチドから上記キャビティをコードするように変更されるか、またはその両方が行われる。
【０２３６】
特定の実施形態において、上記突起及びキャビティはそれぞれ天然起源のアミノ酸残基を含む。
特定の実施形態において、上記突起を含む第２の重鎖ポリペプチドの上記Ｆｃ領域は、テンプレート／元のポリペプチドの界面由来の元の残基を、元の残基よりも大きな側鎖容積を有する移入残基で置き換えることによって生成する。
【０２３７】
特定の実施形態において、上記突起を含む第２の重鎖ポリペプチドの上記Ｆｃ領域は、当該ポリペプチドの界面由来の元の残基をコードする核酸が、元の残基よりも大きな側鎖容積を有する移入残基をコードする核酸で置き換えられるステップを含む方法によって生成する。
【０２３８】
本発明の更に別の態様は、上記重鎖、軽鎖、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列上のＮ末端ＳｅｒまたはＴｈｒを有する抗体から酸化された修飾抗体であって、該修飾抗体中において、上記Ｎ末端ＳｅｒまたはＴｈｒがアルデヒド基へと酸化されている、上記修飾抗体を提供する。
【０２３９】
特定の実施形態において、上記抗体は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチド、（２）組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の最初の残基に隣接するＮ末端であるＳｅｒもしくはＴｈｒ残基、または（３）上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１もしくは複数のＮ末端アミノ酸残基（複数可）を置き換えているＳｅｒもしくはＴｈｒ残基を含む上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分に由来する。
【０２４０】
特定の実施形態において、上記抗体は、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体またはその抗原結合部分である。
特定の実施形態において、上記抗体は、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体またはその抗原結合部分の、キメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体またはその抗原結合部分である。上記ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、表面再構成された抗体もしくはＣＤＲグラフト化抗体またはそれらの抗原結合部分である。
【０２４１】
本発明の別の態様は、本明細書に記載される主題の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを提供する。
特定の実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、哺乳動物の発現系における発現に関してコドン最適化されている。
【０２４２】
本発明の別の態様は、哺乳動物の発現系などの発現系において、本明細書に記載される本主題のポリヌクレオチドを発現させることを含む、主題の組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分の産生方法を提供する。
【０２４３】
本明細書では、用語「細胞結合剤」または「ＣＢＡ」とは、好ましくは特異的な形態で、細胞（細胞表面リガンド上）に結合することができるか、または当該細胞に関連するもしくは近接するリガンドに結合することができる化合物を指す。特定の実施形態において、上記細胞または細胞上もしくはその近傍のリガンドへの結合は特異的である。上記ＣＢＡとしてはペプチド及び非ペプチドが挙げられる。タンパク質性の性質のＣＢＡに関して、天然のＮ末端残基がＳｅｒまたはＴｈｒではない場合には、本明細書に記載の任意の組換え方法を用いて、例えば、配列番号１の異種シグナルペプチドを用いることによって、または上記Ｎ末端残基に対してコードするためのＳｅｒ／Ｔｈｒコドンを挿入することによって、該Ｎ末端残基を操作することができる。
【０２４４】
細胞結合剤の選択は、自由選択によるものであり、標的とする特定の細胞集団によって部分的に決定されるものであるが、多くの場合（但し全てではない）、適切なものが利用可能である場合には、ヒト化モノクローナル抗体が好適に選択される。例えば、モノクローナル抗体ＭＹ９はＣＤ３３抗原に特異的に結合するマウスＩｇＧ１抗体であり（Ｊ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．，８：５２１（１９８４））、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の疾患におけるように、標的細胞がＣＤ３３を発現する場合には用いることができる。
【０２４５】
特定の実施形態において、上記細胞結合剤はタンパク質ではない。例えば、特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、細胞表面受容体などのビタミン受容体に結合するビタミンであってよい。この点に関して、ビタミンＡはレチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）に結合して複合体を形成し、次に該複合体はＳＴＲＡ６受容体に高い親和性で結合し、ビタミンＡの取り込みを増加させる。別の例において、葉酸／葉酸塩／ビタミンＢ９は細胞表面葉酸受容体（ＦＲ）、例えばＦＲαに高い親和性で結合する。葉酸またはＦＲαに結合する抗体を用いて、卵巣腫瘍及び、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を始めとするＦＲαを過剰発現する固形腫瘍を含む他の腫瘍上で発現される葉酸受容体を標的とすることができる。また、ビタミンＤは及びその類似体はビタミンＤ受容体に結合する。
【０２４６】
他の実施形態において、上記細胞結合剤は、タンパク質もしくはポリペプチド、または、抗体、非抗体タンパク質、もしくはポリペプチドを包含するタンパク質もしくはポリペプチドを含む化合物である。
【０２４７】
例えば、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦ、リガンド／成長因子を、急性骨髄性白血病由来の異常細胞に対する細胞結合剤として用いることができる。活性化されたＴ細胞に結合するＩＬ−２を、移植片拒絶の予防、移植片対宿主病の治療及び予防、ならびに急性Ｔ細胞白血病の治療に用いることができる。メラニン形成細胞に結合するＭＳＨを、黒色腫を対象とする抗体と同様に、黒色腫の治療に用いることができる。上皮成長因子を、肺癌及び頭頚部癌などの扁平上皮癌を標的とするために用いることができる。ソマトスタチンを神経芽細胞腫及び他の腫瘍型を標的とするために用いることができる。エストロゲン（またはエストロゲン類似体）を、乳癌を標的とするために用いることができる。アンドロゲン（またはアンドロゲン類似体）を、精巣を標的とするために用いることができる。
【０２４８】
したがって、特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、リンホカイン、ホルモン、成長因子、コロニー刺激因子、または栄養輸送分子であってよい。
特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、アンキリンリピートタンパク質、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ、またはアドネクチン／モノボディなどの抗体模倣体である。
【０２４９】
他の実施形態において、上記細胞結合剤は、抗体、単鎖抗体、標的細胞に特異的に結合する抗体フラグメント、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、標的細胞に特異
的に結合するモノクローナル抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）、キメラ抗体、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）、ドメイン抗体（例えばｓｄＡｂ）、または標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体フラグメントである。特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、ヒト化抗体、ヒト化単鎖抗体、またはヒト化抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）である。
【０２５０】
別の実施形態において、上記細胞結合剤は、参照により本明細書に援用される米国特許第７，５５７，１８９号、同第７，３４２，１１０号、同第８，１１９，７８７号、及び同第８，３３７，８５５号、ならびにＷＯ２００４／０４３３４４に記載される抗体またはそれらのフラグメントなどの、抗ＣＤ３３抗体またはそのフラグメントである。詳細な実施形態において、上記ヒト化抗体は、ｈｕＭｙ９−６または米国特許第７，３４２，１１０号及び同第７，５５７，１８９号に記載される別の関連する抗体である。別の実施形態において、上記抗ＣＤ３３抗体はｈｕＭｙ９−６抗体である。
【０２５１】
本明細書では、二重線の下線の配列は、当該重鎖または軽鎖配列の可変領域（すなわち、重鎖可変領域すなわちＨＣＶＲ、及び軽鎖可変領域すなわちＬＣＶＲ）を表し、一方太字の配列は、ＣＤＲ領域（すなわち、当該重鎖または軽鎖配列の、Ｎ末端からＣ末端に向けて、それぞれＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を表す。
【０２５２】
一実施形態において、上記抗ＣＤ３３抗体は、
【０２５３】
【化６３】
2017529837.tif 000064
【０２５４】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及び
【０２５５】
【化６４】
2017529837.tif 000065
【０２５６】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域を含む。
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３３抗体は、配列番号４３の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号４４の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗ＣＤ３３抗体は、好ましくは特異的にＣＤ３３に結合する。
【０２５７】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３３抗体は、配列番号４３に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号４４に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗ＣＤ３３抗体は、好ましくは特異的にＣＤ３３に結合する。
【０２５８】
別の実施形態において、上記ヒト化抗体は、本明細書に記載の抗葉酸受容体抗体である。別の詳細な実施形態において、上記抗体は、米国特許第８，５７７，９６６号に記載さ
れる抗葉酸受容体抗体である）。より詳細には、上記抗葉酸受容体抗体は、ヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。本明細書では、用語「ヒト葉酸受容体１」、「ＦＯＬＲ１」、または「葉酸受容体アルファ（ＦＲ−α）」とは、別段示されない限り、任意の天然のヒトＦＯＬＲ１を指す。したがって、これらの用語の全ては、本明細書に示されるタンパク質または核酸配列のいずれかを指すことができる。用語「ＦＯＬＲ１」は「全長の」、処理されていないＦＯＬＲ１及び当該細胞内での処理に由来する任意の形態のＦＯＬＲ１を包含する。上記ＦＯＬＲ１抗体は、（ａ）ＧＹＦＭＮ（配列番号４５）を含む重鎖ＣＤＲ１、ＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＸａａ１ＦＸａａ２Ｘａａ３（配列番号４６）を含む重鎖ＣＤＲ２、及びＹＤＧＳＲＡＭＤＹ（配列番号４７）を含む重鎖ＣＤＲ３、ならびに（ｂ）ＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨ（配列番号４８）を含む軽鎖ＣＤＲ１、ＲＡＳＮＬＥＡ（配列番号４９）を含む軽鎖ＣＤＲ２、及びＱＱＳＲＥＹＰＹＴ（配列番号５０）を含む軽鎖ＣＤＲ３を含み、但し、Ｘａａ１はＫ、Ｑ、Ｈ、及びＲから選択され、Ｘａａ２はＱ、Ｈ、Ｎ、及びＲから選択され、Ｘａａ３はＧ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ａ、及びＶから選択される。上記重鎖ＣＤＲ２配列はＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧ（配列番号５１）を含むことが好ましい。
【０２５９】
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体は、
【０２６０】
【化６５】
2017529837.tif 000066
【０２６１】
のアミノ酸配列を有する重鎖を含むヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体は、２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０７７２及びＰＴＡ−１０７７３またはＰＴＡ−１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによってコードされる、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２６２】
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体は、
【０２６３】
【化６６】
2017529837.tif 000067
【０２６４】
または
【０２６５】
【化６７】
2017529837.tif 000068
【０２６６】
のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号５３または配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むヒト葉酸受容体１に特異的に結合するヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。上記抗体は、配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号５４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含むことが好ましい（ｈｕＦＯＬＲ１）。
【０２６７】
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体は、２０１０年４月７日にＡＴＣＣに寄託され、ＡＴＣＣ寄託番号ＰＴＡ−１０７７２及びＰＴＡ−１０７７３または１０７７４を有するプラスミドＤＮＡによってコードされる、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２６８】
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体は、上記ヒト葉酸受容体１に特異的に結合し、かつ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＦＭＮＷＶＫＱＳＰＧＱＳＬＥＷＩＧＲＩＨＰＹＤＧＤＴＦＹＮＱＫＦＱＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＦＡＶＹＹＣＴＲＹＤＧＳＲＡＭＤＹＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号５５）に少なくとも約９０％、９５％、９９％、または１００％同一の重鎖可変領域、及び
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＮＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号５６）、もしくは
ＤＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＡＶＳＬＧＱＰＡＩＩＳＣＫＡＳＱＳＶＳＦＡＧＴＳＬＭＨＷＹＨＱＫＰＧＱＱＰＲＬＬＩＹＲＡＳＮＬＥＡＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＫＴＤＦＴＬＴＩＳＰＶＥＡＥＤＡＡＴＹＹＣＱＱＳＲＥＹＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲ（配列番号５７）に少なくとも約９０％、９５％、９９％、または１００％同一の軽鎖可変領域を含む、ヒト化抗体またはその抗原結合フラグメントである。
【０２６９】
別の実施形態において、上記抗葉酸受容体抗体はｈｕＭｏｖ１９またはＭ９３４６Ａである（例えば、米国特許第８，７０９，４３２号、米国特許第８，５５７，９６６号、及びＷＯ２０１１１０６５２８を参照されたい。これらの全てが参照により本明細書に援用される）。
【０２７０】
特定の実施形態において、上記ヒト化抗体は、米国特許第８，７６５，９１７号に記載される抗ＣＤ３７抗体（例えば、抗ＣＤ３７−３）である。別の実施形態において、上記細胞結合剤は、米国特許第８，７６５，９１７号及びＷＯ２０１１／１１２９７８に記載されるものなどの、抗ＣＤ３７抗体またはその抗原結合フラグメントであり、上記文献は参照により本明細書に援用される。一実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体はｈｕＣＤ３７−３抗体である。
【０２７１】
一実施形態において、上記ＣＤ３７抗体は、
【０２７２】
【化６８】
2017529837.tif 000069
【０２７３】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域及び
【０２７４】
【化６９】
2017529837.tif 000070
【０２７５】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、または
【０２７６】
【化７０】
2017529837.tif 000071
【０２７７】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域を含む。
別の実施形態において、上記ＣＤ３７抗体は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域及び配列番号５９に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域を含む。
【０２７８】
更に別の実施形態において、上記ＣＤ３７抗体は、配列番号５８に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域及び配列番号６０に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域を含む。
【０２７９】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体は、配列番号５９もしくは６０の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号５８の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗ＣＤ３７抗体は、好ましくは特異的にＣＤ３７に結合する。
【０２８０】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体は、配列番号５９もしくは６０に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、または１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号５８に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗ＣＤ３７抗体は、好ましくは特異的にＣＤ３７に結合する。
【０２８１】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体は、
【０２８２】
【化７１】
2017529837.tif 000072
【０２８３】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域及び
【０２８４】
【化７２】
2017529837.tif 000073
【０２８５】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域を含む。
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体は、配列番号６２の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号６１の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗ＣＤ３７抗体は、好ましくは特異的にＣＤ３７に結合する。
【０２８６】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体は、配列番号６２に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号６１に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗ＣＤ３７抗体は、好ましくは特異的にＣＤ３７に結合する。
【０２８７】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ３７抗体はｈｕＣＤ３７−５０抗体である。
特定の実施形態において、上記ヒト化抗体は、米国特許第８，７９０，６４９号に記載される抗ＥＧＦＲ抗体である。別の実施形態において、上記抗体は抗ＥＧＦＲ抗体である。一実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、例えば、ＷＯ２０１２０５８５９２に記載される抗体を始めとする、非アンタゴニスト抗体であり、上記文献は参照により本明細書に援用される。別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、非機能性抗体、例えば、ＭＬ６６またはＥＧＦＲ−８である。より詳細には、上記抗ＥＧＦＲ抗体はｈｕＭＬ６６である。全てのこれらの出願の教示は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
【０２８８】
更に別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６３のアミノ酸配列を有する重鎖、及び配列番号６４のアミノ酸配列を有する軽鎖を含む。
【０２８９】
【表１−１】
2017529837.tif 000074
【０２９０】
更に別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６３の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号６４の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくは特異的にＥＧＦＲに結合する。
【０２９１】
更に別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６３に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号６４に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくは特異的にＥＧＦＲに結合する。
【０２９２】
別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、８，７９０，６４９及びＷＯ２０１２／０５８５８８に記載される抗体であり、該文献は参照により本明細書に援用される。一実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体はｈｕＥＧＦＲ−７Ｒ抗体である。
【０２９３】
一実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、
【０２９４】
【化７３】
2017529837.tif 000075
【０２９５】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域及び
【０２９６】
【化７４】
2017529837.tif 000076
【０２９７】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域、または
【０２９８】
【化７５】
2017529837.tif 000077
【０２９９】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域を含む。
別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域及び配列番号６６に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域を含む。
【０３００】
別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６５に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域及び配列番号６７に示されるアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域を含む。
【０３０１】
更に別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６５の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号６６もしくは６７の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくは特異的にＥＧＦＲに結合する。
【０３０２】
更に別の実施形態において、上記抗ＥＧＦＲ抗体は、配列番号６５に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号６６もしくは６７に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗ＥＧＦＲ抗体は、好ましくは特異的にＥＧＦＲに結合する。
【０３０３】
別の実施形態において、上記細胞結合剤は、米国特許第８，４３５，５２８号及びＷＯ２００４／１０３２７２に記載されるものなどの抗ＣＤ１９抗体であり、該文献は参照により本明細書に援用される。一実施形態において、上記ＣＤ１９抗体は、
【０３０４】
【化７６】
2017529837.tif 000078
【０３０５】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域及び
【０３０６】
【化７７】
2017529837.tif 000079
【０３０７】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域を含む。
別の実施形態において、上記抗ＣＤ１９抗体はｈｕＢ４抗体である。
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ１９抗体は、配列番号６８の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号６９の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗ＣＤ１９抗体は、好ましくは特異的にＣＤ１９に結合する。
【０３０８】
更に別の実施形態において、上記抗ＣＤ１９抗体は、配列番号６８に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号６９に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗ＣＤ１９抗体は、好ましくは特異的にＣＤ１９に結合する。
【０３０９】
別の実施形態において、上記細胞結合剤は、米国特許第７，８３４，１５５号、ＷＯ２００５／００９３６９及びＷＯ２００７／０２４２２２に記載されるものなどの抗Ｍｕｃ１抗体であり、該文献は参照により本明細書に援用される。一実施形態において、上記Ｍｕｃ１抗体は、
【０３１０】
【化７８】
2017529837.tif 000080
【０３１１】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン重鎖領域、及び
【０３１２】
【化７９】
2017529837.tif 000081
【０３１３】
のアミノ酸配列を有する免疫グロブリン軽鎖領域を含む。
別の実施形態において、上記抗Ｍｕｃ１抗体はｈｕＤＳ６抗体である。
更に別の実施形態において、上記抗Ｍｕｃ１抗体は、配列番号７０の重鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３、及び／または配列番号７１の軽鎖ＣＤＲ１〜ＣＤＲ３を含み、該抗Ｍｕｃ１抗体は、好ましくは特異的にＭｕｃ１に結合する。
【０３１４】
更に別の実施形態において、上記抗Ｍｕｃ１抗体は、配列番号７０に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列、及び／または配列番号７１に少なくとも約９０％、９５％、９７％、９９％、もしくは１００％同一の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列を含み、該抗Ｍｕｃ１抗体は、好ましくは特異的にＭｕｃ１に結合する。
【０３１５】
特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、表面再構成された抗体、表面再構成された単鎖抗体、表面再構成された抗体フラグメント（もしくは「抗原結合部分」）、または二重特異性抗体である。
【０３１６】
特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、ミニボディ、ａｖｉｂｏｄｙ、ダイアボ
ディ、トリボディ、テトラボディ、ナノボディ、ｐｒｏｂｏｄｙ、ドメイン抗体、またはｕｎｉｂｏｄｙである。
【０３１７】
換言すると、代表的な細胞結合剤としては、抗体、単鎖抗体、標的細胞に特異的に結合する抗体フラグメント、モノクローナル抗体、単鎖モノクローナル抗体、標的細胞に特異的に結合するモノクローナル抗体フラグメント、キメラ抗体、標的細胞に特異的に結合するキメラ抗体フラグメント、二重特異性抗体、ドメイン抗体、標的細胞に特異的に結合するドメイン抗体フラグメント、インターフェロン、リンホカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、及びＩＬ−６）、ホルモン（例えば、インスリン、チロトロピン放出ホルモン、メラニン形成細胞刺激ホルモン、及びステロイドホルモン（例えば、アンドロゲン及びエストロゲン））、ビタミン（例えば、葉酸塩）、成長因子（例えば、ＥＧＦ、ＴＧＦ−アルファ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ）、コロニー刺激因子、栄養輸送分子（例えば、トランスフェリン。Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：９３２−９３７を参照されたい。該文献は参照により本明細書に援用される）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ（フィブロネクチンＩＩＩ型（ＦＮ３)リピートのコンセンサス配列に基づくタンパク質スキャフォールド。参照により本明細書に援用される米国特許公開２０１０／０２５５０５６、２０１０／０２１６７０８及び２０１１／０２７４６２３を参照のこと）、アンキリンリピートタンパク質（例えば、ＤＡＲＰｉｎとして知られる、設計されたアンキリンリピートタンパク質。参照により本明細書に援用される米国特許公開第２００４／０１３２０２８号、第２００９／００８２２７４号、第２０１１／０１１８１４６号、及び第２０１１／０２２４１００号、また参照により本明細書に援用されるＣ．Ｚａｈｎｄ ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０１０）７０：１５９５−１６０５、Ｚａｈｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００６）２８１（４６）：３５１６７−３５１７５、及びＢｉｎｚ，Ｈ．Ｋ．，Ａｍｓｔｕｔｚ，Ｐ．  ＆  Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００５）２３：１２５７−１２６８も参照のこと）、アンキリン様リピートタンパク質または合成ペプチド(例えば、参照により本明細書に援用される米国特許公開第２００７／０２３８６６７号、米国特許公開第７，１０１，６７５号、ＷＯ２００７／１４７２１３、及びＷＯ２００７／０６２４６６を参照のこと）、アドネクチン(フィブロネクチンドメインスキャフォールドタンパク質。参照により本明細書に援用される米国特許公開第２００７／００８２３６５号、第２００８／０１３９７９１号を参照のこと)、Ａｖｉｂｏｄｙ(ダイアボディ、トライアボディ、及びテトラボディを含む。米国公開第２００８／０１５２５８６号及び第２０１２／０１７１１１５号を参照のこと）、ならびに他の細胞結合分子または物質を挙げることができる。
【０３１８】
特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、細胞表面受容体などの、標的細胞上の部分に結合するリガンドであってもよい。例えば、上記リガンドは、成長因子受容体に結合する成長因子もしくはそのフラグメントであってもよく、またはサイトカイン受容体に結合するサイトカインもしくはそのフラグメントであってもよい。特定の実施形態において、上記成長因子受容体またはサイトカイン受容体は細胞表面受容体である。
【０３１９】
上記細胞結合剤が抗体もしくはその抗原結合部分（抗体誘導体を含む）、または特定の抗体模倣体である特定の実施形態において、上記ＣＢＡは、細胞表面受容体を始めとする細胞表面リガンドなどの、標的細胞上のリガンドに結合してもよい。
【０３２０】
具体的な代表的な抗原またはリガンドとしては、レニン、成長ホルモン（例えば、ヒト成長ホルモン及びウシ成長ホルモン）、成長ホルモン放出因子、副甲状腺ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、リポタンパク質、アルファ−１−アンチトリプシン、インスリンＡ鎖、インスリンＢ鎖、プロインスリン、卵胞刺激ホルモン、カルシトニン、黄体形成ホルモン、グルカゴン、凝固因子（例えば、因子ｖｍｃ、因子ＩＸ、組織因子、及びフォン・ウィ
ルブランズ因子）、反凝固因子（例えば、タンパク質Ｃ）、心房性ナトリウム利尿因子、肺界面活性剤、プラスミノゲン活性剤（例えば、ウロキナーゼ、ヒトの尿または組織型プラスミノゲン活性化因子）、ボンベシン、トロンビン、造血成長因子、腫瘍壊死因子アルファ及びベータ、エンケファリナーゼ、ランテス（ＲＡＮＴＥＳ）（すなわち、ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｎｏｒｍａｌｌｙ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ）、ヒトマクロファージ炎症性タンパク質−１−アルファ、血清アルブミン（ヒト血清アルブミン）、ミュラー管抑制因子、リラキシンＡ鎖、リラキシンＢ鎖、プロリラキシン、マウス性腺刺激ホルモン関連ペプチド、微生物タンパク質（ベータラクタマーゼ）、ＤＮアーゼ、ＩｇＥ、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原（例えば、ＣＴＬＡ−４）、インヒビン、アクチビン、血管内皮成長因子、ホルモン類または成長因子に対する受容体、タンパク質ＡまたはＤ、リウマチ因子、神経組織栄養因子（例えば、骨由来神経組織栄養因子、ニューロトロフィン−３、−４、−５または−６）、神経成長因子（例えば、ＮＧＦ−β）、血小板由来成長因子、線維芽細胞成長因子（例えば、ａＦＧＦ及びｂＦＧＦ）、線維芽細胞成長因子受容体２、上皮細胞成長因子、トランスフォーミング成長因子（例えば、ＴＧＦ−アルファ、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、及びＴＧＦ−β５）、インスリン様成長因子−Ｉ及び−ＩＩ、ｄｅｓ（１−３）−ＩＧＦ−Ｉ（脳ＩＧＦ−Ｉ）、インスリン様成長因子結合タンパク質、メラノトランスフェリン、ＥｐＣＡＭ、ＧＤ３、ＦＬＴ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＳＴＥＡＰ、ＣＥＡ、ＴＥＮＢ２、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体；葉酸受容体、ＦＯＬＲ１、メソセリン、ｃｒｉｐｔｏ、αｖβ６、インテグリン、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、トランスフェリン受容体、ＩＲＴＡ１、ＩＲＴＡ２、ＩＲＴＡ３、ＩＲＴＡ４、ＩＲＴＡ５、ＣＤタンパク質（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０．ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１２３、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、及びＣＤ１５２）、１種または複数種の腫瘍関連抗原または細胞表面受容体(米国公開第２００８０１７１０４０号または米国公開第２００８０３０５０４４号を参照されたい。これらの特許文献はそれらの全体が参照により本明細書に援用される）、エリスロポエチン、骨誘導因子、免疫毒素、骨形成タンパク質、インターフェロン（例えば、インターフェロン−α、β、及びγ）、コロニー刺激因子（例えば、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、及びＧ−ＣＳＦ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１〜ＩＬ−１０）、スーパーオキシドジスムターゼ、Ｔ細胞受容体、表面膜タンパク質、崩壊促進因子、ウイルス抗原ｓ(例えば、ＨＩＶエンベロープのタンパク質)、輸送タンパク質、ホーミング受容体、アドレシン、調節タンパク質、インテグリン（例えば、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ−４、及びＶＣＡＭ）、腫瘍関連抗原（例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４受容体）、エンドグリン、ｃ−Ｍｅｔ、ｃ−ｋｉｔ、１ＧＦ１Ｒ、ＰＳＧＲ、ＮＧＥＰ、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＴＭＥＦＦ２、ＬＧＲ５、Ｂ７Ｈ４、ならびに上記ポリペプチドのいずれかのフラグメントを挙げることができる。
【０３２１】
本明細書では、用語「抗体」は免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を包含する。特定の実施形態において、上記抗体は、４のポリペプチド、すなわち、ジスルフィド結合によって相互に結合した２の重鎖（ＨＣ）及び２の軽鎖（ＬＣ）を含む全長の抗体である。各重鎖は重鎖可変領域（ＨＣＶＲまたはＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）から構成される。上記重鎖定常領域は３のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（ＬＣＶＲまたはＶＬ）及び軽鎖定常領域から構成され、該軽鎖定常領域は１のドメイン、ＣＬから構成される。上記ＶＨ及びＶＬ領域は更に、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域へと細分化することができる。より保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）にかかる領域が散在する。各ＶＨ及びＶＬは３のＣＤＲ及び４のＦＲから構
成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向けて以下の順、すなわち、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４に配置される。
【０３２２】
特定の実施形態において、上記抗体はＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、またはＩｇＭである。特定の実施形態において、上記抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはＩｇＡ１もしくはＩｇＡ２である。
【０３２３】
特定の実施形態において、上記細胞結合剤は、抗原結合に対して重要な配列を、（参照により本明細書に援用される米国特許第７，３４２，１１０号及び第７，５５７，１８９号に記載されるｈｕＭｙ９−６またはその関連する抗体など）抗体と共有するモノクローナル抗体の「抗原結合部分」である。
【０３２４】
本明細書では、抗体の「抗原結合部分」（または場合により同義で「抗体フラグメント」と呼ばれる）とう用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１種または複数種のフラグメントを包含する。抗体の抗原結合機能は、全長の抗体の特定のフラグメントによって実現されることが明らかになっている。抗体の「抗原結合部分」という用語内に包含される結合フラグメントの例としては、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる１価のフラグメントであるＦａｂフラグメント（例えば、パパインによって消化された抗体は、３のフラグメント、すなわち、２の抗原結合Ｆａｂフラグメント、及び１の抗原に結合しないＦｃフラグメントを生じる）、（ｉｉ）ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって結合された２のＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント（例えば、ペプシンによって消化された抗体は、２のフラグメント、すなわち、２価の抗原結合Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、及び抗原に結合しないｐＦｃ’フラグメントを生じる）及びその関連するＦ（ａｂ’）の１価のユニット、（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント（すなわち、Ｆａｂ中に含まれる重鎖の部分）、（ｉｖ）抗体の単一のアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、及び関連するジスルフィドで結合されたＦｖ、（ｖ）ＶＨドメインからなる、ｄＡｂ（ドメイン抗体）またはｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）フラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６，１９８９）、ならびに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる（（これらに限定されない）。特定の実施形態において、上記抗原結合部分はｓｄＡｂ（単一ドメイン抗体）である。
【０３２５】
特定の実施形態において、抗原結合部分はまた、天然に存在する抗体には存在し得ない要素もしくは配列に加えて、抗原に特異的に結合する能力を保持した抗体の、１または複数のフラグメントを含む特定の操作されたまたは組換え誘導体（すなわち「派生的抗体」）も包含する。
【０３２６】
例えば、上記Ｆｖフラグメント、ＶＬ及びＶＨの上記２のドメインは別個の遺伝子によってコードされるが、標準的な組換え方法を用いて、該ドメインを、当該のＶＬ領域とＶＨ領域とが対をなして１価の分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる。例えば、Ｂｉｒｄ  ｅｔ  ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６，１９８８、及びＨｕｓｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３，１９８８を参照のこと）を形成している単一のタンパク質鎖とすることを可能にする合成リンカーによって、これらのドメインを連結することができる。
【０３２７】
本明細書に記載の全ての実施形態において、ｓｃＦｖの上記Ｎ末端は、ＶＨドメイン（すなわち、Ｎ−ＶＨ−ＶＬ−Ｃ）、またはＶＬドメイン（すなわち、Ｎ−ＶＬ−ＶＨ−Ｃ）であってよい。
【０３２８】
２価の（ｄｉｖａｌｅｎｔ）（または二価の（ｂｉｖａｌｅｎｔ））単鎖可変フラグメ
ント（ｄｉ−ｓｃＦｖ、ｂｉ−ｓｃＦｖ）を、２のｓｃＦｖを結合することによって操作することができる。これによって２のＶＨ領域及び２のＶＬ領域を有する単一のペプチド鎖が生成され、タンデムｓｃＦｖ（ｔａｓｃＦｖ）が得られる。３以上のｓｃＦｖを頭−尾様式で結合することによって、ｔｒｉ−ｓｃＦｖなどのより多くのタンデムリピートを同様に生成させることができる。
【０３２９】
特定の実施形態において、ｓｃＦｖを、当該２の可変領域が共に折り畳まれるには短過ぎる（約５のアミノ酸）リンカーペプチドによって結合させて、ｓｃＦｖを二量化させ、ダイアボディを形成させることができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８，１９９３、Ｐｏｌｊａｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ２：１１２１−１１２３，１９９４を参照のこと）。ダイアボディは二重特異性であってもまたは単一特異性であってもよい。ダイアボディの解離定数は、相当するｓｃＦｖよりも最大で４０分の１にもなること、すなわち、標的に対する親和性が更によりことが明らかになっている。
【０３３０】
更に短いリンカー（１または２のアミノ酸）を用いると、三量体、すなわちいわゆるトライアボディまたはトリボディが生成される。テトラボディも同様にして生成している。これらは、その標的に対してダイアボディよりも一層高い親和性を示す。ダイアボディ、トライアボディ、及びテトラボディは、場合によりまとめて「ＡＶＩＢＯＤＹ（商標）」細胞結合剤（または短縮して「ＡＶＩＢＯＤＹ」）と呼ばれる。すなわち、２、３、または４の標的結合領域（ＴＢＲ）を有するＡＶＩＢＯＤＹは、一般的に、ダイアボディ、トライアボディ、及びテトラボディとして知られる。詳細については、例えば、米国公開第２００８／０１５２５８６号及び同第２０１２／０１７１１１５号を参照されたい。これらの全体の教示は参照により本明細書に援用される。
【０３３１】
これらの形式の全てを、２以上の異なる抗体に対する特異性を有する可変フラグメントから構成することができ、その場合には、これらは二重または多重特異性抗体型である。例えば、特定の二重特異性タンデムｄｉ−ｓｃＦｖは、二重特異性Ｔ細胞エンゲイジャー（ｂｉ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｅｎｇａｇｅｒ）（ＢｉＴＥ）として知られる。
【０３３２】
特定の実施形態において、上記タンデムｓｃＦｖまたはダイアボディ／トライアボディ／テトラボディ中のそれぞれのｓｃＦｖは、同一または異なる結合特異性を有していてもよく、かつそれぞれが独立にＮ末端ＶＨまたはＮ末端ＶＬを有していてもよい。
【０３３３】
単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）はまた、ヒトＩｇＧ  Ｆｃ部分などのＦｃ部分と融合して、ＩｇＧ様の特性を得ることができるが、それにもかかわらず、これらは依然として単一の遺伝子によってコードされる。哺乳動物における、かかるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の一過性の産生はミリグラム量を容易に達成できることから、この派生的抗体形式は多くの研究用途に特に好適である。
【０３３４】
Ｆｃａｂは、抗体のＦｃ定常領域から操作された抗体フラグメントである。Ｆｃａｂは可溶なタンパク質として発現されることができ、またはＩｇＧなどの全長の抗体へと操作によって戻し、ｍＡｂ２を創出することができる。ｍＡｂ２は、通常のＦｃ領域の代わりにＦｃａｂを有する全長の抗体である。ｍＡｂ２二重特異性モノクローナル抗体は、これらの付加された結合部位によって、２の異なる標的に同時に結合することができる。
【０３３５】
特定の実施形態において、上記操作された抗体誘導体では、機能に対して必須ではないと見なされたドメインを除去することによって生成した抗原結合Ｉｇ由来の組換えタンパク質の大きさが縮小している（フルサイズｍＡｂの「小型化」）。最良の例の１つはＳＭ
ＩＰである。
【０３３６】
小モジュラー免疫薬、すなわちＳＭＩＰは、大部分が抗体（免疫グロブリン）の一部から構築された人工タンパク質であり、医薬としての使用が意図される。ＳＭＩＰは抗体と同様の生物学的半減期を有するが、抗体よりも小さく、それ故により良好な組織浸透性を有することができる。ＳＭＩＰは、１の結合領域、連結子としての１のヒンジ領域、及び１のエフェクタドメインを含む単鎖タンパク質である。上記結合領域は修飾単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を含み、当該タンパク質の残余は、Ｆｃ（エフェクタドメインとしてのＣＨ２、及びＣＨ３など）及びＩｇＧ１などの抗体のヒンジ領域から構築することができる。遺伝子的に修飾された細胞が、実際の抗体よりも約３０％小さい抗体様二量体としてのＳＭＩＰを産生する。
【０３３７】
かかる操作された小型化抗体の別の例は、「ｕｎｉｂｏｄｙ」であり、このｕｎｉｂｏｄｙにおいては、ヒンジ領域がＩｇＧ４分子から除去されている。ＩｇＧ４分子は不安定であり、軽鎖−重鎖ヘテロ二量体を相互に交換することができる。ヒンジ領域を除去することによって、重鎖−重鎖の対合が完全に防止され、高度に特異的な１価の軽鎖／重鎖ヘテロ二量体が残る一方で、イン・ビボでの安定性及び半減期を確保するＦｃ領域が保持される。
【０３３８】
単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ、Ａｂｌｙｎｘによるナノボディと呼ばれるものが含まれるが、これらに限定されない）は、単一の単量体の可変抗体ドメインからなる抗体フラグメントである。この単一ドメイン抗体は、全抗体と同様に、特定の抗原に選択的に結合することができるが、その分子量が１２〜１５ｋＤａにすぎないため、大幅に小さい。特定の実施形態において、上記単一ドメイン抗体は重鎖抗体（ｈｃＩｇＧ）から操作される。最初のかかるｓｄＡｂは、ＶＨＨフラグメントと呼ばれる、ラクダ科の動物に存在するｈｃＩｇＧに基づいて操作された。特定の実施形態において、上記記単一ドメイン抗体は、ＶＮＡＲフラグメントを用いて、ＩｇＮＡＲ（「免疫グロブリン新抗原受容体」、後述を参照のこと）から操作される。軟骨魚類（サメなど）がかかる重鎖ＩｇＮＡＲ抗体を有する。特定の実施形態において、上記ｓｄＡｂは、ヒトまたはマウス由来のものなどの、一般的な免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）由来の二量体の可変ドメインを単量体へと分割することによって操作される。特定の実施形態において、ナノボディは重鎖可変ドメインに由来する。特定の実施形態において、ナノボディは軽鎖可変ドメインに由来する。特定の実施形態において、上記ｓｄＡｂは、単一ドメイン重鎖配列（例えば、ヒト単一ドメインＨＣ）のライブラリを標的抗原に対する結合剤に関してスクリーニングすることによって得られる。
【０３３９】
上記単一可変新抗原受容体ドメイン抗体フラグメント（ＶＮＡＲ、またはＶＮＡＲドメイン）は、軟骨魚類（例えばサメ）の免疫グロブリン新抗原受容体抗体（ＩｇＮＡＲ）に由来する。かかる単一ドメインタンパク質は、公知の最小の免疫グロブリンに基づくタンパク質スキャフォールドの１つであり、有利な大きさ及び潜在的なエピトープ認識特性を示す。成熟したＩｇＮＡＲ抗体は、１の可変新抗原受容体（ＶＮＡＲ）ドメイン及び５の定常新抗原受容体（ＣＮＡＲ）ドメインのホモ二量体からなる。この分子は非常に安定であり、効率的な結合特性を有する。その固有の安定性は、（ｉ）マウス抗体中に存在する従来の抗体ＶＨ及びＶＬと比較して相当数の荷電したかつ親水性の、表面に露出した残基を示す、基礎をなすＩｇスキャフォールド、ならびに（ｉｉ）ループ間ジスルフィド架橋、及び複数のパターンのループ内水素結合を含む、相補性決定領域（ＣＤＲ）ループにおける安定化する構造上の特徴の両方に起因し得ると考えられる。
【０３４０】
ミニボディは、ＣＨ３γ１（ＩｇＧ１のＣＨ３ドメイン）またはＣＨ４ε（ＩｇＧ１のＣＨ４ドメイン）などのＣＨドメインに結合したｓｃＦｖを含む操作された抗体フラグメ
ントである。例えば、癌胎児抗原（ＣＥＡ）に対して特異的なｓｃＦｖをＣＨ３γ１に結合させてミニボディを創出するが、このミニボディは、イン・ビボでの迅速な排出と相まって、優れた腫瘍指向性を有することが以前から実証されている（Ｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５６：３０５５−３０６１，１９９６）。上記ｓｃＦｖはＮ末端ＶＨまたはＶＬを有していてもよい。上記結合は、非共有結合性の、ヒンジなしのミニボディをもたらす短いペプチド（例えば、ＶａｌＧｌｕなどの２のアミノ酸のリンカー）であってよい。代替として、上記結合は、共有結合性のヒンジ−ミニボディを生成する、ＩｇＧ１ヒンジ及びＧｌｙＳｅｒリンカーペプチドであってもよい。
【０３４１】
天然の抗体は単一特異性であるが、２の同一の抗原結合ドメインを発現するという点では２価である。対照的に、特定の実施形態において、特定の操作された抗体誘導体は、それぞれが異なる標的特異性を有する、２以上の異なる抗原結合ドメインを有する二重または多重特異性分子である。二重特異性抗体は、それぞれが異なる特異性を有する、抗体を産生する２種の細胞を融合することによって生成させることができる。これらの「クアドローマ」は、当該クアドローマ中で、上記２種の異なる軽鎖及び２種の異なる重鎖が多様な配置で自由に組換えられたことから、多様な分子種を産生した。それ以来、二重特異性のＦａｂ、ｓｃＦｖ及びフルサイズのｍＡｂが、種々の技術を用いて生成されている（上記を参照のこと）。
【０３４２】
二重可変ドメイン免疫グロブリン（ＤＶＤ−Ｉｇ）タンパク質は、同時に２の抗原／エピトープを標的とする二重特異性ＩｇＧの一種である（ＤｉＧｉａｍｍａｒｉｎｏ  ｅｔ
ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．８９９：１４５−５６，２０１２）。当該分子は従来のＩｇＧと同様の配置でＦｃ領域及び定常領域を含有する。しかし、このＤＶＤ−Ｉｇタンパク質は、当該分子のそれぞれのアームが２の可変ドメイン（ＶＤ）を含有するという点で独特である。アーム内の上記ＶＤはタンデムで結合し、異なる結合特異性を有することができる。
【０３４３】
ＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）は、二重特異性の修飾ＩｇＧ１抗体ヘテロ二量体である。ＩｇＧ１ヒンジ領域は一般的に、（ｉ）ＣＰＰＣ配列を含有し、イン・ビボでＦａｂアームを交換させる安定なヒンジ領域、及び（ｉｉ）Ｆ４０５Ｌ及びＫ４０９Ｒ残基を含有するように修飾され、当該ヒンジ領域に、Ｆａｂアームを交換させるＩｇＧ４様ＣＨ３ドメインを含む（例えば、ＷＯ２００８１１９３５３及びＷＯ２０１１１３１７４６を参照のこと）。
【０３４４】
三重特異性抗体誘導体分子もまた、例えば、２の異なるＦａｂ及び１のＦｃを有する二重特異性抗体を発現させることによって生成させることができる。１つの例は、ＢｉＵＩＩと呼ばれるマウスＩｇＧ２抗Ｅｐ−ＣＡＭ、ラットＩｇＧ２ｂ抗ＣＤ３クアドローマであり、これは、Ｅｐ−ＣＡＭを発現する腫瘍細胞、ＣＤ３を発現するＴ細胞、及びＦＣγＲＩを発現するマクロファージが共局在することを可能にし、したがって上記免疫細胞の同時刺激機能及び抗腫瘍機能を増強すると考えられる。
【０３４５】
Ｐｒｏｂｏｄｙは、健全な組織においては不活性のままであるが、疾患の微小環境においては特異的に活性化される（例えば、疾患の微小環境中で富化されまたは特異的なプロテアーゼによるプロテアーゼ開裂によって）、完全に組換えの、マスクされたモノクローナル抗体である。Ｄｅｓｎｏｙｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，５：２０７ｒａ１４４，２０１３を参照されたい。同様のマスキング技法を、本明細書に記載の抗体またはそれらの抗原結合部分のいずれかに対して用いることができる。
【０３４６】
細胞内発現抗体は、細胞内で作用して細胞内抗原に結合するように、細胞内の局在化に向けて修飾された抗体である。上記細胞内発現抗体は細胞質中にとどまってもよく、また
は核局在化シグナルを有していてもよく、またはＥＲ指向性のためのＫＤＥＬ配列を有していてもよい。上記細胞内発現抗体は、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）、超安定性を有する修飾免疫グロブリンＶＬドメイン、より還元性の細胞内環境に抵抗性であるか、またはマルトース結合タンパク質もしくは他の安定な細胞内タンパク質との融合タンパク質として発現される選択された抗体であってもよい。かかる最適化は、細胞内発現抗体の安定性及び構造を向上させており、また本明細書に記載のいずれかの抗体またはそれらの抗原結合部分に対する一般的な適応性を有する。
【０３４７】
本発明の抗原結合部分または派生的抗体は、それらが誘導される／操作される基となる抗体と比較して実質的に同様のまたは同一の、（１）軽鎖及び／もしくは重鎖ＣＤＲ３領域、（２）軽鎖及び／もしくは重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３領域、または（３）軽鎖及び／もしくは重鎖領域を有していてもよい。これらの領域内の配列は、ＣＤＲ領域内の置換を始めとする保存的なアミノ酸の置換を含んでいてもよい。特定の実施形態において、１、２、３、４、または５以下の保存的な置換が存在する。代替として、上記抗原結合部分または派生的抗体は、軽鎖領域及び／または重鎖領域であって、それらが誘導される／操作される基となる抗体に少なくとも約９０％、９５％、９９％または１００％同一の上記領域を有する。これらの抗原結合部分または派生的抗体は、当該抗体と比較して、実質的に同様の標的抗原に対する結合特異性及び／または親和性を有していてもよい。特定の実施形態において、上記抗原結合部分または派生的抗体のＫｄ及び／またはＫｏｆｆ値は、本明細書に記載の抗体の、１０倍以内もしくは１０分の１以内、５倍以内もしくは５分の１以内、３倍以内もしくは３分の１以内、または２倍以内もしくは２分の１以内である。
【０３４８】
特定の実施形態において、上記抗原結合部分または派生的抗体は、完全にヒトの抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体から誘導／操作されてもよく、本技術分野で認知された任意の方法に従って製造されてもよい。
【０３４９】
モノクローナル抗体技法は、特定のモノクローナル抗体の形態の極めて特異的な細胞結合剤の製造を可能にする。そのままの（ｉｎｔａｃｔ）標的細胞、標的細胞から単離された抗原、全ウイルス（ｗｈｏｌｅ  ｖｉｒｕｓ）、弱毒化した全ウイルス、及びウイルスコートタンパク質などのウイルスタンパク質などの対象とする抗原を用いて、マウス、ラット、ハムスターまたは任意の他の動物を免疫化することによって産生されるモノクローナル抗体の創生技法が本技術分野において特に周知である。増感させたヒト細胞もまた用いることができる。別のモノクローナル抗体の創生方法は、ｓｃＦｖ（単鎖可変領域）、特にはヒトｓｃＦｖのファージライブラリの使用である（例えば、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，米国特許第５，８８５，７９３号及び同第５，９６９，１０８号、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９２／０１０４７、Ｌｉｍｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ９９／０６５８７を参照のこと）。また、米国特許第５，６３９，６４１号に開示される表面再構成された抗体もまた、キメラ抗体及びヒト化抗体として用いられてもよい。
【０３５０】
細胞結合剤はまた、ファージディスプレイ法（例えば、Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（２０１１）１０８（１７），６９０９−６９１４を参照のこと）またはペプチドライブラリ技法（例えば、Ｄａｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｔｈｅｒ．（２００９）８（５）：１３１２−１３１８を参照のこと）に由来するペプチドであってもよい。
【０３５１】
特定の実施形態において、本発明のＣＢＡとしてはまた、ＤＡＲＰｉｎ、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アンチカリン、アビマー、Ｆｙｎｏｍｅｒ、クーニッツドメインペプチド、モノボディ、またはナノフィチンなどの抗体模倣体が挙げられる。
【０３５２】
本明細書では、用語「ＤＡＲＰｉｎ」及び「（設計された）アンキリンリピートタンパク質」は同義で用いられ、一般的には優先的な（場合により特異的な）標的結合を示す、特定の遺伝子操作された抗体模倣体タンパク質を指す。上記標的は、タンパク質、炭水化物、または他の化学成分であってよく、その結合親和性は非常に高くなり得る。上記ＤＡＲＰｉｎは、天然のアンキリンリピートを含有するタンパク質に由来してもよく、好ましくは少なくとも３の、通常は４または５の、これらのタンパク質のアンキリンリピートモチーフ（一般的には、各アンキリンリピートモチーフ中に約３３残基）からなる。特定の実施形態において、ＤＡＲＰｉｎは約４または５のリピートを含有し、それぞれ約１４または１８ｋＤａの分子量を有してもよい。リボソームディスプレイまたはシグナル識別粒子（ＳＲＰ）ファージディスプレイなどの種々の技術を用いて、ピコモル量の親和性及び特異性で、（例えば、受容体アゴニストもしくはアンタゴニスト、インバースアゴニスト、酵素阻害因子、または単なる標的タンパク質結合剤として作用する）所望の標的に結合するＤＡＲＰｉｎの選択に用いるために、１０１２を超える変異体の多様性を有する無作為化された潜在的な標的相互作用残基を伴うＤＡＲＰｉｎのライブラリを、ＤＮＡレベルで作成することができる。ＤＡＲＰｉｎの調製に関しては、例えば、米国特許公開第２００４／０１３２０２８号、同第２００９／００８２２７４号、同第２０１１／０１１８１４６号、及び同第２０１１／０２２４１００号、ＷＯ０２／２０５６５及びＷＯ０６／０８３２７５（これらの全体の教示が参照により本明細書に援用される）を参照されたい。またＣ．Ｚａｈｎｄ  ｅｔ  ａｌ．、（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，７０：１５９５−１６０５、Ｚａｈｎｄ  ｅｔ  ａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８１（４６）：３５１６７−３５１７５、及びＢｉｎｚ，Ｈ．Ｋ．，Ａｍｓｔｕｔｚ，Ｐ．＆Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．（２００５）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３：１２５７−１２６８(全て参照により本明細書に援用される)も参照されたい。また、関連するアンキリン様リピートタンパク質または合成ペプチドに関しては、米国特許公開第２００７／０２３８６６７号、米国特許第７，１０１，６７５号、ＷＯ２００７／１４７２１３、及びＷＯ２００７／０６２４６６（これらの全体の教示が参照により本明細書に援用される）も参照されたい。
【０３５３】
アフィボディ分子は、高い親和性で多数の標的タンパク質またはペプチドに結合するように操作された小タンパク質であり、したがって、モノクローナル抗体に類似する。アフィボディは５８のアミノ酸を有する３のアルファヘリックスからなり、約６ｋＤａのモル質量を有する。これらは高温（９０℃）または酸性もしくはアルカリ性条件（ｐＨ２．５またはｐＨ１１）に耐え、ナノモル量以下の範囲まで低下した親和性を有する結合剤が、ナイーブライブラリの選択から得られており、ピコモル量の親和性を有する結合剤が、親和性成熟の結果として得られている。特定の実施形態において、アフィボディは、標的と共有結合するために、弱い求電子剤と複合体化される。
【０３５４】
モノボディ（アドネクチンとしても知られる）は、抗原に結合することができる、遺伝子操作された抗体模倣体タンパク質である。特定の実施形態において、モノボディは９４のアミノ酸からなり、約１０ｋＤａの分子量を有する。これらはヒトフィブロネクチン、より詳細にはその１０番目の細胞外ＩＩＩ型ドメインの構造に基づいており、該ドメインは、抗体可変ドメインに類似する構造を有し、バレルを形成する７のベータシート及び３の相補性決定領域に相当する各側上の露出した３のループを有する。ループＢＣ（第２のベータシートと第３のベータシートとの間）及びＦＧ（第６のシートと第７のシートとの間）を修飾することによって、異なるタンパク質に対する特異性を有するモノボディを調整することができる。
【０３５５】
トリボディは、マウス及びヒトの軟骨基質タンパク質（ＣＭＰ）のＣ末端コイルドコイル領域に基づいて設計された自己組織化抗体模倣体であり、パラレル三量体複合体へと自己組織化する。トリボディは、特異的な標的結合部分をＣＭＰに由来する三量化ドメイン
と融合させることによって創生される非常に安定な三量体ターゲティングリガンドである。得られる融合タンパク質は、明確に定義された高い安定性を有するパラレルホモ三量体へと効率的に自己組織化することができる。該三量体ターゲティングリガンドの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）分析によって、相当する単量体と比較して、標的結合強度が有意に向上することが実証された。細胞の結合に関する試験により、かかるトリボディは、それらのそれぞれの受容体に対する優れた結合強度を有することが確認された。
【０３５６】
Ｃｅｎｔｙｒｉｎは、コンセンサスＦＮ３ドメイン配列のフレームワーク上に構築されたライブラリを用いて得ることができる別の抗体模倣体である（Ｄｉｅｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．，２０１４）。このライブラリは、ＦＮ３ドメインのＣ鎖、ＣＤループ、Ｆ鎖、及びＦＧループ内の多様な位置を用いており、特定の標的に対して高親和性Ｃｅｎｔｙｒｉｎ変異体を選択することができる。
【０３５７】
Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒの導入及びそれに続くアルデヒドと反応する基との反応のためのアルデヒド基への酸化のための全ての方法を、例えば、ｃｅｎｔｙｒｉｎ、Ｄａｒｐｉｎ、Ａｖｉｂｏｄｙ、アドネクチン、抗体フラグメント、ミニボディ、ダイアボディ、トリボディ、テトラボディ、ナノボディ、ｐｒｏｂｏｄｙ、ｄｕｏｂｏｄｙ、ｄｏｍａｉｎ  ｂｏｄｙまたはｕｎｉｂｏｄｙ等を含む、抗体である細胞結合剤及び抗体ではない細胞結合剤に適用することができる。
【０３５８】
後述の特定の例は種々のヒト化抗ＣＤ１２３抗体に言及しているが、ここでかかる抗体の命名法を簡単に説明する。１つの類別のｈｕＣＤ１２３−６抗体は、マウス抗ＣＤ１２３抗体であるｍｕＣＤ１２３−６の重鎖及び軽鎖由来の６ＣＤＲをグラフト化することによってヒト化される。これらの抗体においては、文字「Ｇ」がクローンの表示（例えば、ｈｕＣＤ１２３−６）の直後に続き、次いでその後にヒト軽鎖及び重鎖可変領域配列の起源を指定するバージョン番号が続く。したがって、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．６は、ヒト軽鎖可変領域Ｇｖ４及び重鎖可変領域Ｇｖ６上への、相当するｍｕＣＤＲ１２３−６抗体由来の６ＣＤＲ領域のグラフト化（「Ｇ」）に基づくヒト化ＣＤ１２３抗体を指す。同様に、−Ｇｖ４．７はヒト軽鎖可変領域Ｇｖ４及び重鎖可変領域Ｇｖ７を含む。
【０３５９】
別の類別のｈｕＣＤ１２３−６抗体が表面再構成（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）の方法によってヒト化される。表面再構成された重鎖配列ｈｕＣＤ１２３−６ｒｈｖ１．１及び表面再構成された軽鎖配列ｈｕＣＤ１２３−６ｒｌｖ１．０を有する表面再構成された抗体は、ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１である。
【０３６０】
本明細書では、ＮＴＳ＃２または略した「Ｓ２」とは、重鎖のＮ末端に操作されたＳｅｒを有する抗体を指す。したがって、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７抗体の上記Ｓ２変異体は、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ２と表示される。同様に、ＮＴＳ＃３または略した「Ｓ３」とは、軽鎖のＮ末端に操作されたＳｅｒを有する抗体を指す。ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７抗体の上記Ｓ３変異体は、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３と表示される。
【０３６１】
操作されたＮ末端Ｓｅｒ（Ｓ２またはＳ３のいずれか）を含む抗体が、酸化されたＮ末端Ｓｅｒを介して細胞毒性薬物／細胞毒性剤と複合体化される場合には、当該の複合体の名称は「ＳｅｒｉＭａｂ」という表示を含む。例えば、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８とは、軽鎖上の酸化されたＮ末端Ｓｅｒを介した、Ｄ８（Ｄ８またはｓＤ８の構造については図１７を参照のこと）とヒト化ＣＤ１２３抗体ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３との間の複合体を指す。
【０３６２】
「Ｄ８」及びそのスルホン化バージョン「ｓＤ８」ならびに関連する「Ｄ２」、「Ｄ１
」及びそのスルホン化バージョン「ｓＤ１」などの、実施例２３〜３０、ならびに図１７、１８、２２Ａ〜２４、２６Ａ〜２６Ｃ、及び２９で用いられる細胞毒性剤は、本主題の複合体における薬物分子「Ｄ」の一般式に従わない場合があるが、これらの細胞毒性剤の構造は関連する図及び本文に示される。
【０３６３】
特定のヒト化抗ＣＤ１２３抗体は、２０１５年６月２９日出願の、「ＡＮＴＩ−ＣＤ１２３  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＯＮＪＵＧＡＴＥＳ  ＡＮＤ  ＤＥＲＩＶＡＴＩＶＥＳ  ＴＨＥＲＥＯＦ」と題した発明の名称の米国仮出願第６２／１８６，１６１号で説明され、該出願の全教示には、全てのタンパク質（例えば、抗体及びＣＤＲ、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、それらの全長のＨＣ及びＬＣ配列）ならびに核酸配列及び関連する配列番号、特に１または複数の操作されたＮ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒ残基を有するＣＤ１２３−ＳｅｒＭａｂのものが含まれ、その全体が参照により本明細書に援用される。
細胞毒性剤
第３の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の細胞結合剤に共有結合して、本発明の複合体を形成することができる細胞毒性剤（Ｄ’によって表される）を提供する。
【０３６４】
一実施形態において、上記細胞毒性剤はメイタンシノイドである。より詳細には、細胞毒性剤Ｄ’は以下の構造式
【０３６５】
【化８０】
2017529837.tif 000082
【０３６６】
（式中、上記変数は上記第１の実施形態の第５の詳細な実施形態中の式（Ｄ１）に対して説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、細胞毒性剤Ｄ’はＤＭ１（Ｄ２’）またはＤＭ４（Ｄ３’）
【０３６７】
【化８１】
2017529837.tif 000083
【０３６８】
である。
別のより詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’は以下の構造式
【０３６９】
【化８２】
2017529837.tif 000084
【０３７０】
（式中、上記変数は上記第１の実施形態の第５の詳細な実施形態中の式（Ｄ４）に対して説明されるとおりのものである）によって表される。
更に別の詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’は以下の構造式
【０３７１】
【化８３】
2017529837.tif 000085
【０３７２】
によって表される。
別の詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’は、アルデヒドと反応性の基を含むメイタンシノイド化合物であり、該化合物は上記細胞結合剤と直接結合することができる。より詳細には、上記メイタンシノイド化合物は以下の構造式
【０３７３】
【化８４】
2017529837.tif 000086
【０３７４】
【化８５】
2017529837.tif 000087
【０３７５】
【化８６】
2017529837.tif 000088
【０３７６】
によって表される。
別の実施形態において、上記細胞毒性剤はベンゾジアゼピン化合物である。代表的なベンゾジアゼピン化合物としては、米国特許第８，７６５，７４０号、同第８，４２６，４０２号、ＵＳ２０１４／００８８０８９、ＷＯ２０１１／１３０６１３、ＷＯ２０１１／１３０６１６、ＷＯ２０１０／０９１１５０、及びＷＯ２００９／０１６５１６に記載されるものが挙げられるが、これらに限定はされない。
【０３７７】
より詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’は、以下の構造式
【０３７８】
【化８７】
2017529837.tif 000089
【０３７９】
【化８８】
2017529837.tif 000090
【０３８０】
によって表されるベンゾジアゼピン化合物またはその薬学的に許容される塩であり、式中、上記変数は、上記第１の実施形態の第６の詳細な実施形態中の式（Ｄ６）〜（Ｄ１７）に対して説明されるとおりのものである。
【０３８１】
より詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’は、以下の構造式
【０３８２】
【化８９】
2017529837.tif 000091
【０３８３】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、Ｙは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｍであり、ＭはＨ＋またはカチオンである。更により詳細には、Ｙは−ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
【０３８４】
別のより詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’はアルデヒドと反応性の基を含むベンゾジアゼピン化合物であり、該化合物は上記細胞結合剤に直接結合することができる。より詳細には、上記ベンゾジアゼピン化合物は、以下の構造式
【０３８５】
【化９０】
2017529837.tif 000092
【０３８６】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、
ＬＤ’、ＬＤ’’、及びＬＤ’’’の１つは以下の式
【０３８７】
【化９１】
2017529837.tif 000093
【０３８８】
によって表され、
他の２つは同一であるかまたは異なり、−Ｈ、１〜１０の炭素原子を有する、任意選択で置換された直鎖、分岐もしくは環状のアルキル、アルケニルもしくはアルキニル、ポリエチレングリコール単位−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−Ｒｃ、ハロゲン、グアニジニウム［−
ＮＨ（Ｃ＝ＮＨ）ＮＨ２］、−ＯＲ、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＯ２、−ＮＲ’ＣＯＲ’’、−ＳＲ、−ＳＯＲ’、−ＳＯ２Ｒ’、−ＳＯ３Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２ＮＲ’Ｒ’’、シアノ、アジド、−ＣＯＲ’、−ＯＣＯＲ’、及び−ＯＣＯＮＲ’Ｒ’’から独立に選択され、
ＪＣＢは、上記第１の実施形態で説明されるとおりのアルデヒドと反応性の基であり、残余の変数は、上記第１の実施形態の第７の詳細な実施形態及びそこに記載される任意のより詳細な実施形態中の構造式（Ｄ１８）〜（Ｄ２３）に対して説明されるとおりのものである。
【０３８９】
より詳細には、式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）に対して、ＪＣＢは、
【０３９０】
【化９２】
2017529837.tif 000094
【０３９１】
である。
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）に対して、Ｌ’は式（Ａ）によって表され、Ｌ’’及びＬ’’’は共に−Ｈであり、残余の変数は上記任意の実施形態で説明されるとおりのものである。
【０３９２】
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）に対して、
ＮとＣとの間の二重線
【０３９３】
【化９３】
2017529837.tif 000095
【０３９４】
は単結合または二重結合を表し、但し、それが二重結合である場合は、Ｘは存在せずＹは−Ｈであり、それが単結合である場合は、Ｘは−Ｈであり、Ｙは−ＯＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１’、Ｒ２’、Ｒ３’及びＲ４’は全て−Ｈであり、
Ｒ６は−Ｍｅであり、
Ｘ’及びＹ’ は共に−Ｈであり、
Ａ及びＡ’が−Ｏ−であり、
Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋であり、残余の変数は上記任意の実施形態で説明されるとおりのものである。
【０３９５】
更に別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）に対して、Ｒａ及びＲｂは共にＨであり、残余の変数は上記任意の実施形態で説明されるとおりのものである。
【０３９６】
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）に対して、Ｒ５及びＲ９はそれぞれ独立にＨまたはＭｅであり、残余の変数は上記任意の実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、Ｒ５及びＲ９は共にＨである。
【０３９７】
別のより詳細な実施形態において、式（Ｄ１８’）〜（Ｄ２３’）に対して、Ｐは２〜１０のアミノ酸残基を含有するペプチドであり、残余の変数は上記任意の実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、Ｐは２〜５のアミノ酸残基を含有するペプチドである。更により詳細には、Ｐは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ、Ａｌａ−Ｖａｌ、Ｖａｌ−Ａｌａ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｙｓ−Ｌｙｓ、Ａｌａ−Ｌｙｓ、Ｐｈｅ−Ｃｉｔ、Ｌｅｕ−Ｃｉｔ、Ｌｌｅ−Ｃｉｔ、Ｔｒｐ、Ｃｉｔ、Ｐｈｅ−Ａｌａ、Ｐｈｅ−Ｎ９−トシル−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｎ９−ニトロ−Ａｒｇ、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ、Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｖａｌ、Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１７）、β−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ（配列番号１８）及びＧｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ（配列番号１９）、Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ａｒｇ−Ｖａｌ、Ａｒｇ−Ａｒｇ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−
Ｖａｌ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ａｒｇ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ｌｙｓ、Ｄ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−Ａｒｇ、Ａｌａ−Ａｌａ、Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａ、Ｄ−Ａｌａ−Ａｌａ、ならびにＤ−Ａｌａ−Ｄ−Ａｌａから選択される。
【０３９８】
別のより詳細な実施形態において、細胞毒性剤Ｄ’は、以下の構造式
【０３９９】
【化９４】
2017529837.tif 000096
【０４００】
【化９５】
2017529837.tif 000097
【０４０１】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、ＹはＨまたは−ＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
細胞毒性剤−リンカー化合物
第４の実施形態において、本発明は、アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物を提供し、該化合物は本明細書に記載の細胞結合剤に共有結合することができる。
【０４０２】
特定の実施形態において、上記細胞毒性剤−リンカー化合物は以下の式
ＪＣＢ−Ｌ−ＪＤ’−Ｄ    （ＩＩ）、
（式中、ＪＣＢは、第１の実施形態で説明されるアルデヒドと反応性の基であり、残余の変数は、第１の実施形態もしくは第１の実施形態の第２〜第６の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
【０４０３】
より詳細には、ＪＣＢは、ヒドラジン、ヒドラジドまたはヒドロキシルアミンである。
別の実施形態において、ＪＣＢは、
【０４０４】
【化９６】
2017529837.tif 000098
【０４０５】
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ及びＸｂ’はそれぞれ独立に、−ＯＨ、−ＳＨまたは−ＮＨ２であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ＸｃはＮまたはＣＨである）から選択される。より詳細には、上記アルデヒドと反応性の基は、
【０４０６】
【化９７】
2017529837.tif 000099
【０４０７】
である。
一実施形態において、上記細胞毒性剤−リンカー化合物は、以下の構造式
【０４０８】
【化９８】
2017529837.tif 000100
【０４０９】
【化９９】
2017529837.tif 000101
【０４１０】
【化１００】
2017529837.tif 000102
【０４１１】
【化１０１】
2017529837.tif 000103
【０４１２】
【化１０２】
2017529837.tif 000104
【０４１３】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、ＹはＨまたは−ＯＳＯ３Ｍであり、Ｍは、Ｈ＋、Ｎａ＋またはＫ＋である。
修飾細胞結合剤
第５の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の細胞結合剤をアルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と反応させることによって形成される修飾細胞結合剤を提供する。
【０４１４】
特定の実施形態において、上記修飾細胞結合剤は以下の式
【０４１５】
【化１０３】
2017529837.tif 000105
【０４１６】
（式中、ＪＤは、細胞毒性剤Ｄ’と共有結合を形成することができる反応性基であり、残余の変数は、第１の実施形態またはそこに記載される任意の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである）によって表される。
【０４１７】
第１のの詳細な実施形態において、構造式（ＩＩＩ）の修飾細胞結合剤またはその薬学的に許容される塩に対して、ＪＣＢ’は、以下の構造式
【０４１８】
【化１０４】
2017529837.tif 000106
【０４１９】
（式中、ＸａはＣＨ２、ＯまたはＮＣＨ３であり、Ｕ’はＮＨ、Ｏ、ＳまたはＣＨ２であり、ＵはＨまたは電子供与性基であり、Ｘｂ１及びＸｂ１’はそれぞれ独立に−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＨ−であり、ＲＺ及びＲＺ’はそれぞれ独立にＨまたはアルキル（好ましくは−Ｍｅ）であり、ＲＺ”はＨまたはアルキルであり、ｓ１は上記細胞結合剤に共有結合した部位であり、ｓ２は基Ｌに共有結合した部位である）の１によって表される。より詳細には、ＪＣＢ’は、
【０４２０】
【化１０５】
2017529837.tif 000107
【０４２１】
である。
第２の詳細な実施形態において、式（ＩＩＩ）に対して、−Ｌ−ＪＤは、以下の式
【０４２２】
【化１０６】
2017529837.tif 000108
【０４２３】
（式中、ＪＤは−ＳＨ、−ＳＳＲｄまたは−ＳＣ（＝Ｏ）Ｒｇであり、但し、Ｒｄは、フェニル、ニトロフェニル、ジニトロフェニル、カルボキシニトロフェニル、ピリジルまたはニトロピリジルであり、Ｒｇはアルキルであり、ＪＣＢ’は上記第１の詳細な実施形態で説明されるとおりのものであり、残余の変数は、上記第１の実施形態の第２の詳細な実施形態、及びまたはそこに記載される任意のより詳細な実施形態中の式（Ｌ１）対して説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、ＪＤは−ＳＨまたは−ＳＳＲｄである。
【０４２４】
より詳細な実施形態において、−Ｌ−ＪＤは、以下の構造式
【０４２５】
【化１０７】
2017529837.tif 000109
【０４２６】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、ＪＣＢ’及びＪＤは、第２の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、ＪＤは−ＳＨまたは−ＳＳＲｄである。
【０４２７】
第３の詳細な実施形態において、式（ＩＩＩ）に対して、−Ｌ−ＪＤは、以下の式
【０４２８】
【化１０８】
2017529837.tif 000110
【０４２９】
（式中、ＪＤは−ＯＨもしくはハロゲンであるか、または−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＤが反応性のエステルであり、ＪＣＢ’は上記第１の（１ｓｔ）詳細な実施形態で説明されるとおりのものであり、残余の変数は、第１の実施形態の第３の詳細な実施形態またはそこに記載される任意のより詳細な実施形態中の式（Ｌ２）及び（Ｌ３）に対して説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＤはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。
【０４３０】
より詳細な実施形態において、−Ｌ−ＪＤは、以下の構造式
【０４３１】
【化１０９】
2017529837.tif 000111
【０４３２】
（式中、ＪＣＢ’及びＪＤは第３の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである。より詳細には、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＤはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである）によって表される。
【０４３３】
第４の詳細な実施形態において、式（ＩＩＩ）に対して、−Ｌ−ＪＤは、以下の式
【０４３４】
【化１１０】
2017529837.tif 000112
【０４３５】
（式中、ＪＤは、マレイミド、Ｘ’−ＣＲｂＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｘ’−ＣＲｂＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−、
【０４３６】
【化１１１】
2017529837.tif 000113
【０４３７】
であり、Ｘ’はハロゲンであり、ＪＣＢ’は第１の詳細な実施形態に説明のとおりのものであり、残余の変数は、第１の実施形態の第４の詳細な実施形態及びそこに記載される任意のより詳細な実施形態中の式（Ｌ４）に対して説明されるとおりである）によって表される。
【０４３８】
特定の実施形態において、第５の実施形態もしくは第５の実施形態の第１〜第４の詳細な実施形態、またはそれらに記載される任意のより詳細な実施形態などの、上記の実施形態のいずれか１に記載の式（ＩＩＩ）では、ＣＢＡは、第２の実施形態に記載される任意の細胞結合剤であってよい。
二官能性架橋剤（すなわちリンカー化合物）
第６の実施形態において、本発明は、アルデヒド基及び本明細書に記載の細胞毒性剤と共有結合を形成し得る反応性基を有する二官能性架橋剤（すなわち、リンカー化合物）を提供する。
【０４３９】
一実施形態において、上記リンカー化合物は、以下の式
ＪＣＢ−Ｌ−ＪＤ    （ＩＶ）、
（式中、上記変数は上記式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）に対して説明されるとおりのものである）によって表される。
【０４４０】
一実施形態において、上記リンカー化合物は、以下の式
【０４４１】
【化１１２】
2017529837.tif 000114
【０４４２】
またはその薬学的に許容される塩によって表され、式中、ＪＣＢは、第１の実施形態に記載されるアルデヒドと反応性の基であり、残余の変数は、構造式（Ｌ１’）に対して説明されるとおりのものである。より詳細には、ＪＤは−ＳＨまたは−ＳＳＲｄである。更により詳細には、ＪＣＢは、
【０４４３】
【化１１３】
2017529837.tif 000115
【０４４４】
である。
より詳細な実施形態において、上記二官能性架橋剤は、以下の構造式
【０４４５】
【化１１４】
2017529837.tif 000116
【０４４６】
またはそれらの薬学的に許容される塩によって表され、式中、ＪＣＢ及びＪＤは上述のとおりである。より詳細には、ＪＤは−ＳＨまたは−ＳＳＲｄである。更により詳細には、ＪＣＢは、
【０４４７】
【化１１５】
2017529837.tif 000117
【０４４８】
である。
別の実施形態において、上記リンカー化合物は、以下の構造式
【０４４９】
【化１１６】
2017529837.tif 000118
【０４５０】
（式中、ＪＣＢは、第１の実施形態に記載されるアルデヒドと反応性の基であり、残余の変数は、上記構造式（Ｌ２’）及び（Ｌ３’）に対して説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＤはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。更により詳細には、ＪＣＢは、
【０４５１】
【化１１７】
2017529837.tif 000119
【０４５２】
である。
より詳細な実施形態において、上記二官能性架橋剤は、以下の構造式
【０４５３】
【化１１８】
2017529837.tif 000120
【０４５４】
（式中、ＪＣＢ及びＪＤは上述のとおりのものである）によって表される。より詳細には、−Ｃ（＝Ｏ）−ＪＤはＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルである。更により詳細には、ＪＣＢは、
【０４５５】
【化１１９】
2017529837.tif 000121
【０４５６】
である。
別の実施形態において、上記二官能性架橋剤は、以下の構造式、
【０４５７】
【化１２０】
2017529837.tif 000122
【０４５８】
（式中、ＪＤは、マレイミド、Ｘ’−ＣＲｂＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−、Ｘ’−ＣＲｂＲｃ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲｅ−、
【０４５９】
【化１２１】
2017529837.tif 000123
【０４６０】
であり、Ｘ’はハロゲンであり、残余の変数は、構造式（Ｌ４’）に対して説明されるとおりのものである）によって表される。より詳細には、ＪＤはマレイミドである。更により詳細には、ＪＣＢは、
【０４６１】
【化１２２】
2017529837.tif 000124
【０４６２】
である。
細胞結合剤−薬物複合体の製造
第７の実施形態において、本発明は、本明細書に記載の細胞結合剤−細胞毒性剤複合体の調製方法を提供する。
【０４６３】
一実施形態において、本発明は、本明細書に記載の細胞結合剤−細胞毒性剤複合体の調製方法であって、
（ａ）細胞結合剤の２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、アルデヒド基を有する酸化細胞結合剤を形成するステップであり、上記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部であり、以下の構造式
【０４６４】
【化１２３】
2017529837.tif 000125
【０４６５】
によって表される、上記ステップと、
（ｂ）上記酸化細胞結合剤を、
（ｉ）アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物もしくはアルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤と接触させて、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、または
（ｉｉ）アルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と接触させて、結合したリンカーを有する修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を形成し、続いて上記修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を細胞毒性剤と反応させて、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、または
（ｉｉｉ）細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒドと反応性の基及び上記細胞毒性剤と共有結合を形成することができる反応性基を有するリンカー化合物を添加して、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体を形成する、
ステップと、を含む、上記細胞結合剤−細胞毒性剤複合体の調製方法を提供する。
【０４６６】
第１の詳細な実施形態において、上記細胞結合剤は抗体またはその抗原結合部分であり、上記方法は、
（ａ）抗体またはその抗原結合部分の２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、
【０４６７】
【化１２４】
2017529837.tif 000126
【０４６８】
上記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、Ｎ末端セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部である、上記ステップと、
（ｂ）上記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を、アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物またはアルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤と反応させて、上記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップであって、
【０４６９】
【化１２５】
2017529837.tif 000127
【０４７０】
但し、
Ａｂは本明細書に記載の抗体またはその抗原結合部分であり、
ＪＣＢは上記のアルデヒドと反応性の基であり、
Ｌは上記のスペーサーまたは結合であり、
ＪＤ’は、細胞毒性剤Ｄを基Ｌと結合させる連結部分であるか、またはＬが結合の場合は存在せず、
Ｄは連結部分ＪＤ’を介してＬに共有結合する細胞毒性剤であり、
ｗは１、２、３または４である、
上記ステップと、を含む。
【０４７１】
特定の実施形態において、上記第１の詳細な実施形態に記載される方法では、上記第４の実施形態に記載される任意の細胞毒性剤−リンカー化合物、または第３の実施形態に記載される任意の細胞毒性剤を用いることができる。
【０４７２】
特定の実施形態において、上記第１の詳細な実施形態に記載される方法では、ステップ（ｂ）において上記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分と反応させる前に、イミン官能基（−Ｃ＝Ｎ−）を有する上記細胞毒性剤−リンカー化合物または上記細胞毒性剤をイミンと反応性の反応剤と反応させて、修飾細胞毒性剤−リンカー化合物または修飾細胞毒性剤を形成する。一実施形態において、上記修飾細胞毒性剤−リンカー化合物または修飾細胞毒性剤をイン・シチュで生成して、精製することなく上記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分と反応させる。
【０４７３】
第２の詳細な実施形態において、上記細胞結合剤は抗体またはその抗原結合部分であり、上記方法は、
（ａ）抗体またはその抗原結合部分のＮ末端２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、
【０４７４】
【化１２６】
2017529837.tif 000128
【０４７５】
上記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、Ｎ末端セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部である、上記ステップと、
（ｂ）上記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を、アルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と反応させて、それに結合したリンカーを有する修飾抗体またはその修飾抗原結合部分を形成し、続いて上記修飾抗体またはその修飾抗原結合部分を細胞毒性剤と反応させて上記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップであって、
【０４７６】
【化１２７】
2017529837.tif 000129
【０４７７】
但し、Ｄ’は細胞毒性剤であり、ＪＤは細胞毒性剤Ｄ’と共有結合を形成することができる反応性基であり、残余の変数は、上記第１の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである、上記ステップと、を含む。
【０４７８】
特定の実施形態において、上記第２の詳細な実施形態に記載される方法では、上記第６の実施形態に記載される任意のリンカー化合物を用いることができる。
特定の実施形態において、第２の詳細な実施形態に記載される方法では、ステップ（ｂ）において、イミン官能性イミン官能基（−Ｃ＝Ｎ−）を有する細胞毒性剤を、結合したリンカーを有する上記修飾抗体またはその修飾抗原結合部分と反応させる前に、イミンと反応性の反応剤と反応させて修飾細胞毒性剤を形成する。一実施形態において、上記修飾細胞毒性剤をイン・シチュで生成させ、精製せずに、その後結合したリンカーを有する上記修飾抗体またはその修飾抗原結合部分と反応させる。
【０４７９】
第３の詳細な実施形態において、上記細胞結合剤は抗体またはその抗原結合部分であり、上記方法は、
（ａ）抗体またはその抗原結合部分のＮ末端２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、
【０４８０】
【化１２８】
2017529837.tif 000130
【０４８１】
上記２−ヒドロキシエチルアミン部分が、Ｎ末端セリン、スレオニン、ヒドロキシリシン、４−ヒドロキシオルニチンまたは２，４−ジアミノ−５−ヒドロキシ吉草酸残基の一部である、上記ステップと、
（ｂ）上記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物を添加して、上記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップであって、
【０４８２】
【化１２９】
2017529837.tif 000131
【０４８３】
但し、上記変数は上記第１及び第２の詳細な実施形態で説明されるとおりのものである、上記ステップと、を含む。
特定の実施形態において、上記第３の詳細な実施形態に記載される方法では、第６の実施形態に記載される任意のリンカー化合物及び第３の実施形態に記載される任意の細胞毒性剤を用いることができる。
【０４８４】
上記の方法のステップ（ａ）においては、任意の好適な酸化剤を用いることができる。
特定の実施形態において、上記酸化剤は過ヨウ素酸塩である。より詳細には、上記酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。
【０４８５】
上記細胞結合剤（例えば、抗体）に対して過剰のモル当量の上記酸化剤を用いてもよい。特定の実施形態において、約２〜１００、５〜８０、１０〜５０、１〜１０または５〜１０モル当量の上記酸化剤を用いてもよい。特定の実施形態において、約１０または約５０当量の上記酸化剤を用いてもよい。多量の上記酸化剤を用いる場合、過剰な酸化を回避するために短い反応時間が用いられる。例えば、５０当量の上記酸化剤を用いる場合、酸化反応は約５〜約６０分間実施される。代替として、１０当量の上記酸化剤を用いる場合、反応は約３０分間〜約２４時間実施される。一実施形態において、５〜１０モル当量の上記酸化剤が用いられ、酸化反応は約５〜約６０分間（例えば、約１０〜約３０分間、約２０〜３０分間）実施される。
【０４８６】
特定の実施形態において、上記酸化反応は、顕著な目的としない酸化を起こさない。例えば、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化されたＣＤ１２３／ＩＬ−３Ｒα結合剤を生成させるためのＮ末端セリンの酸化過程の間に、僅かな量（例えば、２０％未満、１０％未満、５％未満、３％未満、２％未満または１％未満）のメチオニン及び／またはグリカンしか酸化されない。
【０４８７】
特定の実施形態において、上述の方法におけるステップ（ｂ）の反応では触媒が存在する。本技術分野における任意の好適な触媒を用いることができる。一実施形態において、上記触媒はアニリンまたは置換アニリンである。代表的なアニリン触媒としては、アニリン、ｏ−フェニレンジアミン、ｍ−フェニレンジアミン、３，５−ジアミノ安息香酸、ｐ−フェニレンジアミン、２−メチル−ｐ−フェニレンジアミン、Ｎ−メチル−ｐ−フェニレンジアミン、ｏ−アミノフェノール、ｍ−アミノフェノール、ｐ−アミノフェノール、ｐ−メトキシアニリン、５−メトキシ−アントラニル酸、ｏ−アミノ安息香酸、及び４−アミノフェネチルアルコールが挙げられるが、これらに限定はされない。一実施形態において、上記触媒は４−アミノフェネチルアルコールである。特定の実施形態において、ステップ（ｂ）の反応はｐＨ約５．０〜約６．５で行われる。特定の実施形態において、ステップ（ｂ）の反応はｐＨ約５．０で行われる。
【０４８８】
特定の実施形態において、本明細書に記載の方法のステップ（ｂ）では、上記アルデヒドと反応性の基を有する化合物（例えば、本明細書に記載の細胞毒性剤−リンカー化合物、細胞毒性剤、またはリンカー化合物）は、上記酸化細胞結合剤（例えば、酸化抗体または酸化抗原結合部分）に対して過剰なモル量で用いられる。特定の実施形態において、酸化細胞結合剤に対する上記アルデヒドと反応性の基を有する化合物の比は、約１０：１〜約１．１：１、約５：１〜約２：１である。一実施形態において、上記比は約４：１である。
【０４８９】
特定の実施形態において、第３の実施形態または第１〜第３の詳細な実施形態における方法などの上記の方法では、上記抗体またはその抗原結合部分などの上記細胞結合剤は、本明細書に記載の任意の方法によって得ることができる。
【０４９０】
第４の詳細な実施形態において、本発明は、抗体−細胞毒性剤複合体の調製方法であって、
（ａ）抗体またはその抗原結合部分のＮ末端セリンまたはスレオニン残基の２−ヒドロキシエチルアミン部分を酸化剤によって酸化させて、Ｎ末端アルデヒド基を有する酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を形成するステップであって、上記２−ヒドロキシエチルアミン部分が以下の構造式
【０４９１】
【化１３０】
2017529837.tif 000132
【０４９２】
によって表される上記ステップと、
（ｂ）上記酸化抗体またはその酸化抗原結合部分を、（ｉ）アルデヒドと反応性の基を有する細胞毒性剤−リンカー化合物と接触させて、上記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するか、または（ｉｉ）アルデヒドと反応性の基を有するリンカー化合物と接触させて、結合したリンカーを有する修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を形成し、続いて上記修飾抗体もしくはその修飾抗原結合部分を細胞毒性剤と反応させて、上記抗体−細胞毒性剤複合体を形成する、または（ｉｉｉ）細胞毒性剤と接触させ、続いてアルデヒドと反応性の基及び上記細胞毒性剤と共有結合を形成することができる反応性基を有するリンカー化合物を添加して、上記抗体−細胞毒性剤複合体を形成するステップと、を含む、上記抗体−細胞毒性剤複合体の調製方法を提供する。
【０４９３】
特定の実施形態において、第７の実施形態もしくは第１〜第４の詳細な実施形態または任意のより詳細な実施形態における方法などの、上述の任意の方法では、上記抗体またはその抗原結合部分は、組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分をコードするポリヌクレオチドを発現させることによって得られ、該組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、またはそれらの抗原結合部分は、（１）配列番号１のアミノ酸配列を有する異種シグナルペプチド、（２）上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の最初の残基に隣接するＮ末端であるＳｅｒまたはＴｈｒ残基、あるいは（３）上記組換え抗体重鎖（ＨＣ）、軽鎖（ＬＣ）、もしくはそれらの抗原結合部分の成熟処理された配列の１または複数のＮ末端アミノ酸残基（複数可）を置き換えているＳｅｒまたはＴｈｒ残基を含む。
【０４９４】
特定の実施形態において、第７の実施形態もしくは第１〜第４の詳細な実施形態または任意のより詳細な実施形態における方法などの、上述の任意の方法では、上記抗体またはその抗原結合部分は配列番号３の軽鎖配列を含む。
【０４９５】
特定の実施形態において、第７の実施形態もしくは第１〜第４の詳細な実施形態または任意のより詳細な実施形態における方法などの、上述の任意の方法では、上記抗体またはその抗原結合部分は、配列番号３の軽鎖配列を含むマウス抗体もしくはその抗原結合部分の、キメラ、ヒト化、もしくはヒト抗体またはその抗原結合部分である。上記ヒト化抗体またはその抗原結合部分は、表面再構成された抗体もしくはＣＤＲグラフト化抗体またはそれらの抗原結合部分であってよい。
【０４９６】
特定の実施形態において、上述の任意の方法に従って調製された複合体は、次いで精製されてもよい。本技術分野で公知の任意の精製方法を用いて、本発明の複合体を精製することができる（例えば、２００８年にＡｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．により出版されたＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｇｒｅｇ第２版（Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ著）を参照のこと）。一実施形態において、本発明の複合体は、タンジェント流ろ過（ＴＦＦ）、非吸着クロマトグラフィー、吸着クロマトグラフィー、吸着ろ過、選択的沈殿、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、透析または任意のその他の好適な精製過程、及びそれらの組み合わせを用いて精製することができる。
【０４９７】
Ｐｅｌｌｉｃｏｎ型システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）、Ｓａｒｔｏｃｏｎ  Ｃａｓｓｅｔｔｅシステム（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ  ＡＧ，Ｅｄｇｅｗｏ
ｏｄ，ＮＹ）、及びＣｅｎｔｒａｓｅｔｔｅ型システム（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）を含む、任意の好適なＴＦＦシステムを精製に利用してもよい。
【０４９８】
任意の好適な吸着クロマトグラフィー樹脂を精製に用いてもよい。好ましい吸着クロマトグラフィー樹脂としては、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、疎水性電荷誘導クロマトグラフィー（ＨＣＩＣ）、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、混合モードイオン交換クロマトグラフィー、固定化金属アフィニティクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）、色素リガンドクロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、及びそれらの組み合わせが挙げられる。好適なヒドロキシアパタイト樹脂の例としては、セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ  Ｉ型及びＩＩ型、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）、ＨＡ  Ｕｌｔｒｏｇｅｌヒドロキシアパタイト（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）、及びセラミックフルオロアパタイト（ＣＦＴ  Ｉ型及びＩＩ型、Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適なＨＣＩＣ樹脂の例としては、ＭＥＰハイパーセル樹脂（Ｐａｌｌ  Ｃｏｒｐ．，Ｅａｓｔ  Ｈｉｌｌｓ，ＮＹ）が挙げられる。好適なＨＩＣ樹脂の例としては、ブチルセファロース、ヘキシルセファロース、フェニルセファロース、及びオクチルセファロース樹脂（全てＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ならびにＭａｃｒｏ−ｐｒｅｐ  Ｍｅｔｈｙｌ及びＭａｃｒｏ−Ｐｒｅｐ  ｔ−Ｂｕｔｙｌ樹脂（Ｂｉｏｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適なイオン交換樹脂の例としては、ＳＰ−セファロース、ＣＭ−セファロース、及びＱ−セファロース樹脂（全てＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、ならびにＵｎｏｓｐｈｅｒｅ  Ｓ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適な混合モードイオン交換剤の例としてはＢａｋｅｒｂｏｎｄ  ＡＢｘ樹脂（ＪＴ  Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ  ＮＪ）が挙げられる。好適なＩＭＡＣ樹脂の例としては、キレート化セファロース樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）及びＰｒｏｆｉｎｉｔｙ  ＩＭＡＣ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適な色素リガンド樹脂の例としては、ブルーセファロース樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）及びＡｆｆｉ−ｇｅｌ  Ｂｌｕｅ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）が挙げられる。好適なアフィニティ樹脂の例としては、タンパク質Ａセファロース樹脂（例えば、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）、Ｈｉｓタグ金属アフィニティ樹脂、抗ＦＬＡＧアフィニティ樹脂、及びレクチンアフィニティ樹脂、例えば、レンチルレクチンセファロース樹脂（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ））が挙げられ、ここで上記抗体は適当なレクチン結合部位を有する。好適な逆相樹脂の例としては、Ｃ４、Ｃ８、及びＣ１８樹脂（Ｇｒａｃｅ  Ｖｙｄａｃ，Ｈｅｓｐｅｒｉａ，ＣＡ）が挙げ���れる。
【０４９９】
任意の好適な非吸着クロマトグラフィー樹脂を精製に用いてもよい。例えば、本発明の複合体を精製するためにサイズ排除クロマトグラフィーを用いることができる。好適な非吸着クロマトグラフィー樹脂の例としては、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）Ｇ−１０、Ｇ−２５、Ｇ−５０、Ｇ−１００、ＳＥＰＨＡＣＲＹＬ（商標）樹脂（例えば、Ｓ−２００及びＳ−３００）、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）樹脂（例えば、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）７５及びＳＵＰＥＲＤＥＸ（商標）２００）、ＢＩＯ−ＧＥＬ（登録商標）樹脂（例えば、Ｐ−６、Ｐ−１０、Ｐ−３０、Ｐ−６０、及びＰ−１００）、ならびに当業者に公知の他のものが挙げられるが、これらに限定はされない。
【０５００】
一実施形態において、上記細胞結合剤がエピトープタグ付Ａｖｉｂｏｄｙである場合、上記複合体は、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィ
ー、タンジェント流ろ過、ゲル電気泳動、透析、及びアフィニティクロマトグラフィー、好ましくはアフィニティクロマトグラフィー、より好ましくはＨｉｓタグ金属アフィニティクロマトグラフィー及び抗ＦＬＡＧ  Ｍ２アフィニティクロマトグラフィーを用いて精製することができる（例えば、ＵＳ２００８／０１５２５８６及びＵＳ２０１２／０１７１１１５を参照のこと）。
【０５０１】
別の実施形態において、上記細胞結合剤がｃｅｎｔｙｒｉｎである場合、上記複合体は、タンパク質Ａ精製、硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、アニオンまたはカチオン交換クロマトグラフィー、リン酸セルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、タンジェント流ろ過、アフィニティクロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを用いて精製することができる。代替として、上記複合体は、ＨＰＬＣを用いて精製することができる。上記複合体は、好ましくはアフィニティクロマトグラフィー、より好ましくはＨｉｓタグ金属アフィニティクロマトグラフィーを用いて精製することができる。例えば、米国特許公開第ＵＳ２０１０／０２５５０５６号、同第ＵＳ２０１０／０２１６７０８号及び同第ＵＳ２０１１／０２７４６２３号を参照されたい。
【０５０２】
別の実施形態において、上記細胞結合剤がＤＡＲＰｉｎである場合、上記複合体は、アフィニティクロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、タンジェント流ろ過、好ましくはアフィニティクロマトグラフィー、より好ましくはＨｉｓタグアフィニティクロマトグラフィーによって精製することができる。例えば、米国特許公開第２００４０１３２０２８号、同第２００９／００８２２７４号、同第２０１１／０１１８１４６号、及び同第２０１１／０２２４１００号、ＷＯ０２／２０５６５及びＷＯ０６／０８３２７５を参照されたい。
細胞毒性のイン・ビトロ評価
本発明の細胞毒性化合物及び細胞結合剤−薬物複合体を、イン・ビトロで、種々の癌細胞株の増殖を抑制するそれらの能力について評価することができる。評価される細胞を上記化合物または複合体に１〜５日間暴露し、細胞の生存率を公知の方法による直接的なアッセイにおいて測定することができる。次いで、このアッセイの結果からＩＣ５０値を算出することができる。代替としてまたは追加として、米国国立癌研究所によって報告されたもの（Ｖｏｓｋｏｇｌｏｕ−Ｎｏｍｉｋｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：４２２２７−４２３９を参照されたい。該文献は参照により本明細書に援用される）などのイン・ビトロでの細胞株の感受性スクリーニングを、本発明の化合物または複合体による治療に対して感受性であり得る癌の種類を判定するための１つの指針として用いることができる。
組成物及び使用方法
本発明は、本明細書に記載の新規なベンゾジアゼピン化合物（例えば、インドリノベンゾジアゼピンもしくはオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、それらの誘導体、またはそれらの複合体、（ならびに／またはそれらの溶媒和物、水和物、及び／もしくは塩）及び担体（薬学的に許容される担体）を含む組成物（例えば、医薬組成物）を包含する。本発明はまた、本明細書に記載の新規なベンゾジアゼピン化合物、それらの誘導体、またはそれらの複合体、（ならびに／またはそれらの溶媒和物、水和物及び／もしくは塩）及び担体（薬学的に許容される担体）を含み、第２の治療薬を更に含む組成物（例えば、医薬組成物）も包含する。本組成物は、哺乳動物（例えば、ヒト）における異常な細胞増殖の抑制または増殖性障害の治療に有用である。本組成物はまた、哺乳動物（例えば、ヒト）における憂うつ、不安、ストレス、恐怖、パニック、不快、精神障害、疼痛、及び炎症性疾患の治療にも有用である。
本発明は、哺乳動物（例えば、ヒト）における異常な細胞増殖の抑制方法または増殖性障
害の治療方法であって、上記哺乳動物に対して、治療上有効な量の本明細書に記載の新規なベンゾジアゼピン化合物（例えば、インドリノベンゾジアゼピンもしくはオキサゾリジノベンゾジアゼピン）、それらの誘導体、またはそれらの複合体（ならびに／またはそれらの溶媒和物及び塩）、またはそれらの組成物を、単独でまたは第２の治療薬との併用で投与することを含む、上記方法を包含する。
【０５０３】
一実施形態において、上記増殖性障害は癌である。癌としては血液癌または固形腫瘍が挙げられる。より詳細には、上記癌は、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性単球性白血病、前骨髄球性白血病、好酸球性白血病、急性Ｂリンパ芽球性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）などの急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ））またはリンパ腫（例えば、非ホジキンリンパ腫）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、黒色腫、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、卵巣癌、子宮内膜癌、腹膜癌、膵臓癌、乳癌、前立腺癌、頭頚部の扁平上皮細胞癌、及び子宮頸癌である。
【０５０４】
本発明はまた、治療を必要とする対象に対して、有効量の上述のいずれかの複合体を投与することを含む治療方法も提供する。同様に、本発明は、標的細胞または標的細胞を含む組織を、本発明の細胞毒性化合物−細胞結合剤（例えば、細胞結合剤に結合したインドリノベンゾジアゼピンもしくはオキサゾリジノベンゾジアゼピン二量体）、それらの塩または溶媒和物のいずれかを含む、有効量の細胞毒性剤に接触させることを含む、選択された細胞集団における細胞死の誘導方法を提供する。上記標的細胞は、上記細胞結合剤が結合することができる細胞である。
【０５０５】
所望であれば、他の抗癌剤などの他の活性薬剤を上記複合体と共に投与してもよい。
好適な薬学的に許容される担体、希釈剤、及び賦形剤は周知であり、臨床的状況が許容する場合、当業者がこれらを決定することができる。好適な担体、希釈剤、及び／または賦形剤の例としては、（１）ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ約７．４、約１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬのヒト血清アルブミンを含有するものまたはしないもの）、（２）０．９％の生理食塩水（０．９％ｗ／ｖのＮａＣｌ）、及び（３）５％（ｗ／ｖ）のデキストロースが挙げられ、これらはまたトリプタミンなどの抗酸化剤及びＴｗｅｅｎ  ２０などの安定剤も含んでいてよい。
【０５０６】
上記選択された細胞集団における細胞死の誘導方法は、イン・ビトロ、イン・ビボ、またはエクス・ビボで実施することができる。
イン・ビトロでの使用の例としては、病的なもしくは悪性の細胞を殺傷するために同一の患者へ移植する前に自家骨髄を治療することと、コンピテントなＴ細胞を殺傷するかつ移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するために骨髄を移植する前に骨髄を治療することと、標的抗原を発現しない、所望の変異体以外の全ての細胞を殺傷するため、または望ましくない抗原を発現する変異体を殺傷するために細胞培養物を処理することと、が挙げられる。非臨床のイン・ビボでの使用の条件は、当業者によって容易に決定される。
【０５０７】
エクス・ビボでの使用の例は、癌の治療においてもしくは自己免疫疾患の治療において、自家移植の前に、骨髄から腫瘍細胞もしくはリンパ球細胞を除去すること、またはＧＶＨＤを予防するために、移植の前に、自家もしくは同種異系の骨髄または組織からＴ細胞及び他のリンパ球細胞を除去することである。治療は以下のようにして行うことができる。当該の患者または他の個体から骨髄を採取し、次いで、本発明の細胞毒性剤を約１０μＭ〜１ｐＭの範囲の濃度で添加した血清を含有する培地中で、約３７℃で約３０分間〜約４８時間インキュベートする。インキュベーションの濃度及び時間の厳密な条件、すなわ
ち用量は当業者が容易に決定することができる。インキュベーション後に、当該骨髄細胞を、血清を含有する培地で洗浄し、公知の方法に従って静脈内投与により当該患者に戻す。上記患者が、骨髄採取してから治療した細胞を再注入するまでの間に、破壊的化学療法または全身照射の治療などの他の治療を受ける状況にあっては、上記治療した骨髄細胞を、標準的な医療機器を用いて液体窒素中で凍結保存する。
【０５０８】
イン・ビボでの臨床使用では、本発明の細胞毒性剤は、溶液または凍結乾燥した粉末として供給されることとなり、これらでは無菌性内毒素レベルに関する試験が行われる。複合体の投与の好適なプロトコルの例は以下のとおりである。すなわち、複合体が毎週１回４週間にわたって、静脈内に大量投与される。大量投与は、５〜１０ｍLのヒト血清アルブミンが添加されていてもよい５０〜１０００ｍLの通常の生理食塩水中にて行われる。投与量は、静脈内投与による投与当たり１０μｇ〜２０００ｍｇ（１日当たり１００ｎｇ〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲）である。４週間の治療後、患者は週１回治療を継続して受けてもよい。投与経路、賦形剤、希釈剤、投与量、投与時間等に関する詳細な臨床プロトコルは、臨床的状況が許容する場合、当業者がこれらを決定することができる。
上記イン・ビボまたはエクス・ビボでの選択された細胞集団における細胞死の誘導方法に従って治療することができる疾病の例としては、例えば癌を始めとする任意の型の悪性病変、全身性エリテマトーデス、関節リウマチ、及び多発性硬化症などの自己免疫疾患、角膜移植拒絶、肝臓移植拒絶、肺移植拒絶、心臓移植拒絶、及び骨髄試食拒絶などの移植片拒絶、移植片対宿主病、ＣＭＶ感染症、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ等のウイルス性感染症、ならびにジアルジア鞭毛虫症、アメーバ症、住血吸虫症、及び当業者によって判定されるその他のものなどの寄生虫性感染症が挙げられる。
【０５０９】
癌治療薬及びそれらの投薬量、投与経路、及び推奨される使用は本技術分野で公知であり、医師用卓上参考書（ＰＤＲ）などの文献で説明されている。上記ＰＤＲは、種々の癌の治療に用いられている薬剤の投薬量を開示する。治療上有効な、これら上記化学療法剤の投与計画及び投薬量は、治療する特定の癌、当該疾患の程度、及び本分野において熟達した医師によく知られている他の因子に依存することとなり、当該医師が決定することができる。上記ＰＤＲの内容は、その全体が参照により明示的に本明細書に援用される。当業者は、１または複数の以下のパラメータを用いて上記ＰＤＲを検討し、本発明の教示に従って用いることができる化学療法剤及び複合体の投与計画及び投薬量を決定することができる。これらのパラメータとしては以下が挙げられる。すなわち、
・総合索引
・製造者によるもの
・製品（会社名または商標登録された薬物名によるもの）
・分類索引
・一般名／化学的索引（商標ではない一般名である薬物名）
・投薬治療のカラー画像
・ＦＤＡの表示と整合する製品情報
・化学的情報
・機能／作用
・適応症及び禁忌
・治験、副作用、警告
である。
類似体及び誘導体
細胞毒性剤の分野における当業者は、本明細書に記載の各細胞毒性剤を、結果として得られる化合物がなおも出発化合物の特異性及び／または活性を保持するような形態で修飾することができることを、容易に理解するであろう。当業者はまた、これらの化合物の多くが、本明細書に記載の細胞毒性剤に代えて用いることができることも理解しよう。した
がって、本発明の細胞毒性剤は、本明細書に記載の化合物の類似体及び誘導体を包含する。
【０５１０】
本明細書及び以下の実施例に引用される全ての参照文献は、それらの全体が参照により明示的に援用される。
【実施例】
【０５１１】
実施例１  Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒを有する組換え抗体の構築
Ｎ末端セリンを有するマウス抗葉酸受容体アルファ抗体ＦＲ１−２．１軽鎖（ＬＣ）の配列は以前に説明されている（全てが参照により援用される、２０１３年８月３０日出願の米国特許出願第６１／８７２，４０７号、２０１３年９月９日出願の第６１／８７５，４７５号、及び２０１４年２月１４日出願の第６１／９４０，１８４号、ならびにそれらの優先権を主張するＷＯ２０１５／０３１８１５）。このＮ末端Ｓｅｒは、上記ＦＲ１−２．１軽鎖が由来するＩＧＫＶ１−９９＊０１マウス生殖系列配列（寄託番号ＣＡＢ４６１２２、配列番号２）のシグナルペプチド中の通常の開裂部位を利用するシグナルペプチダーゼによって生じる。抗体の発現の間の開裂に際して完全に除去される一般的な抗体シグナルペプチドとは異なって、ＩＧＫＶ１−９９＊シグナルペプチドの最後のセリン（カバット位−１）は、上記ＦＲ１−２．１軽鎖のＮ末端に残存する。上記ＦＲ１−２．１抗体は、本明細書に記載のセリン酸化修飾法を評価するための有用なツールであることが判明し、また、上記ＦＲ１−２．１シグナルペプチド（表１、配列番号１）は、それらの軽鎖または重鎖のＮ末端にセリンを有する組換え抗体を生成させる想定される機構を提供する。上記Ｎ末端セリンを組み込むために天然の抗体シグナルペプチドを用いると、抗体工学の負の結果（非天然の構築物に由来するおそれのある発現の問題及び開裂部位の不均一性を含むがこれらに限定されない）がもたらされる可能性を回避することができる。
【０５１２】
上記ＦＲ１−２．１シグナルペプチドが、遺伝子導入された哺乳動物の細胞株において発現された組換え抗体のＮ末端のセリン残基を残存させることを実証するために、上記ＦＲ１−２．１軽鎖シグナルペプチドを利用して、新たな抗体発現構築物を合成した。標準的な抗体シグナルペプチド（配列番号６）に代えて、米国特許第８，５５７，９６６号で以前に説明されたヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖（ＬＣ）に対する可変領域アミノ酸配列（表１、配列番号３）を上記ＦＲ１−２．１シグナルペプチドと結合させて、ｈｕＮｏｖ１９  ＬＣ  ＮＴＳ１配列（配列番号１０）を生成した。次いでこの軽鎖配列をＢｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙに提供し、同社においてこれをコドン最適化し、合成し、ヒトカッパ定常領域配列を含有するｐＡｂＫＺｅｏ哺乳動物発現プラスミドのＥｃｏＲＩ及びＢｓｉＷＩ部位中にクローン化した。
【０５１３】
Ｎ末端にセリン／スレオニンを有する組換え抗体を生成させる代替の手法は、上記Ｎ末端残基（カボット位＋１）をセリンまたはスレオニンで置換することである。この方法論を実証するために、上記ヒト化Ｍｏｖ重鎖（ＨＣ）（配列番号８）のＮ末端残基（グルタミン）をセリンで置換し、ｈｕＭｏｖ１９  ＨＣ  ＮＴＳ２配列（配列番号１１）を生成した。次いで、Ｂｌｕｅ  Ｈｅｒｏｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙによってこの重鎖配列をコドン最適化し、合成し、ｐＡｂＫＺｅｏプラスミドのＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｐａｌ部位の、ヒトＩｇＧ１定常領域を有するフレーム中にクローン化した。
【０５１４】
最大４のＮ末端セリン（例えば、重鎖上に２及び軽鎖上に２）を有する更なる組換え抗体を生成させるために、上述のＮ末端セリンの付加及びＮ末端セリンによる置換のスキームの種々の組み合わせを用いる。上記ヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖（ＬＣ）のＮ末端アスパラギン酸がセリンで置換されるように、上述の構築物の逆を合成する（ｈｕＭｏｖ１９ＬＣ  ＮＴＳ３、配列番号１２）か、またはその反対に、上記ヒト化Ｍｏｖ１９重鎖を、Ｎ末端セリンを付加するようにＦＲ１−２．１シグナルペプチドを用いて合成する（ｈｕＭｏｖ
１９ＨＣ  ＮＴＳ４、配列番号１４）。また、これらの軽鎖及び重鎖構築物を共に混合して、両方のＮ末端にセリンを有し、抗体当たり合計で４のＮ末端セリンを有する組換え抗体（例えば、ｈｕＭｏｖ１９ＬＣ  ＮＴＳ３及びｈｕＭｏｖ１９ＨＣ  ＮＴＳ４）を生成させることができる。これらの構築物は２（単鎖のＮ末端セリン）または４（両鎖がＮ末端セリンを有する）の組み込み部位に限定されるが、「Ｋｎｏｂ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｈｏｌｅ」変異（参照により援用されるＷＯ２００５／０６３８１６Ａ２）などのヘテロ二量体抗体技術を用いる。１または３のＮ末端セリンを有する抗体の構築もまた想定される。
【０５１５】
最後に、複数のアミノ酸のＮ末端付加物またはＮ末端のトランケーションなどの、Ｎ末端セリンを有する組換え抗体を生成させるための別の手法に従うこともできるが、上述の方法には更に、結合特異性または構造の保全性などの重要な抗体の特性に対して影響を与える可能性が少ないという利点がある。
【０５１６】
セリンに加えて、本明細書に記載の方法によってこれらの抗体を複合化するために、単純にＮ末端残基（カバット位＋１）をスレオニンで置換することによって、Ｎ末端にスレオニン残基を有する組換え抗体を生成させることができる。例えば、上記ヒト化Ｍｏｖ１９軽鎖（ＬＣ）のＮ末端アスパラギン酸をスレオニンで置換する（ｈｕＭｏｖ１９  ＬＣ
ＮＴＴ１、配列番号１５）か、または上記ヒト化Ｍｏｖ１９重鎖（ＨＣ）のＮ末端グルタミンをスレオニンによって置換する（ｈｕＭｏｖ１９  ＨＣ  ＮＴＴ２、配列番号１６）。次いでこれらの構築物を、上述のそれぞれの哺乳動物の発現プラスミド中にクローン化する。
【０５１７】
【表１−２】
2017529837.tif 000133
【０５１８】
【表１−３】
2017529837.tif 000134
【０５１９】
【表１−４】
2017529837.tif 000135
【０５２０】
実施例１Ａ  Ｎ末端Ｓｅｒ／Ｔｈｒを有する組換え抗体の構築
上記実施例１に記載の方法と実質的に同一の方法を使用して、配列番号６を、その天然のｈｕＭｏｖ１９  ＬＣ及びＨＣのためのシグナルペプチドとして、または異種ＬＣもしくはＨＣのためのシグナルペプチドとして、当該シグナルペプチドの開裂を処理した後に、成熟処理された上記ＬＣまたはＨＣの配列中で、挿入されたＳｅｒ／Ｔｈｒが最初の（Ｎ末端）残基となるように、ＳｅｒまたはＴＨｒを配列番号６の直後に挿入する修飾を行って用いる。
実施例２  組換え抗体の発現
上記キメラ及びヒト化抗体構築物を、振とうしたフラスコ中で、改変したＰＥＩ操作（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ  Ｙ，Ｐｅｒｒｅｔ  Ｓ，＆  Ｋａｍｅｎ  Ａ  Ｈｉｇｈ−ｌｅｖｅｌ
ａｎｄ  ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ
ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ−ｇｒｏｗｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ２９３−ＥＢＮＡ１  ｃｅｌｌｓ．Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２００２  Ｊａｎ  １５；３０（２）：Ｅ９）を用いて、懸濁培養に適合するＨＥＫ−２９３Ｔ細胞中で一過性に産生させた。上記ＰＥＩ一過性遺伝子導入は、上記ＨＥＫ−２９３Ｔ細胞をＦｒｅｅｓｔｙｌｅ  ２９３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で増殖させた以外は説明したとおりに実施し（上記Ｄｕｒｏｃｈｅｒ）、培養物の容量は、ＰＥＩ−ＤＮＡ複合体の添加後は希釈しないままであった。付着したもの及び懸濁したものの両方の上記一過性遺伝子移入物を１週間インキュベートし、次いで濁りのない上清を、タンパク質Ａカラム、続いてＣＭカラムイオン交換クロマトグラフィーによって、以下に記載するようにして精製した。
実施例３  組換え抗体の精製
抗体を、例えば、タンパク質ＡまたはＧクロマトグラフィー（ＨｉＴｒａｐタンパク質
ＡまたはＧ  ＨＰ、１ｍＬ、Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）などの標準的な方法を用いて、濁りのない細胞培養物上清から精製した。簡単に説明すると、１／１０容量の１ＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌバッファ、ｐＨ８．０の添加によってクロマトグラフィー用に上清を調製した。このｐＨを調節した上清を０．２２μｍのフィルタ膜に通してろ過し、結合バッファ（ＰＢＳ、ｐＨ７．３）で平衡化したカラム上にロードした。このカラムを、２８０ｎｍにおける吸光がない安定したベースラインが得られるまで結合バッファで洗浄した。０．１５ＭのＮａＣｌを含有する、ｐＨ２．８の０．１Ｍ酢酸バッファにて、０．５ｍＬ／分の流速を用いて抗体を溶離させた。約０．２５ｍＬの画分を採取し，１／１０容量の１ＭのＴｒｉｓ／ＨＣｌ、ｐＨ８．０の添加によって中和した。ピーク画分（複数可）を１×ＰＢＳに対して２回、終夜にわたって透析を行い、０．２μｍのフィルタ膜に通してろ過することによって無菌化した。精製した抗体をＡ２８０における吸光度によって定量した。
【０５２１】
タンパク質Ａ精製した画分を、カルボキシメチル（ＣＭ）クロマトグラフィーによるイオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＸ）を用いて更に精製した。簡単に説明すると、タンパク質Ａ精製から得た試料を開始バッファ（１０ｍＭのリン酸カリウム、１０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．５）へとバッファ交換し、０．２２μｍのフィルタに通してろ過した。次いでこの調製した試料を、１２０ｃｍ／ｈｒの流速の開始バッファで平衡化したＣＭ  ｆａｓｔ  ｆｌｏｗ樹脂（ＧＥ  Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）上にロードした。カラムの大きさは、当該試料中の全ての抗体を結合するのに十分な容量を有するように選択した。次いでこのカラムを、２８０ｎｍにおける吸光がない安定したベースラインが得られるまで結合バッファで洗浄した。２０カラム容量（ＣＶ）での１０ｍＭ〜５００ｍＭの塩化ナトリウムの勾配を開始することによって抗体を溶離させた。ＵＶの読みが５０ｍＡｕを超える主要ピークの画分を採取した。純度（単量体及び可溶な高分子量凝集体のパーセンテージ）を、Ａｇｉｌｅｎｔ  ＨＰＬＣ  １１００システム（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｓａｎｔａ  Ｃｌａｒａ，ＣＡ）を用いた、ＳＷＸＬガードカラム、６．０×４０ｍｍを設けたＴＳＫゲルＧ３０００ＳＷＸＬ、７．８×３００ｍｍ（Ｔｏｓｏｈ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＰＡ）上でのサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって評価した。所望の純度（＞９５％）を有する画分をプールし、ＴＦＦシステムを用いてＰＢＳ（ｐＨ７．４）へとバッファ交換を行い、０．２μｍのフィルタ膜に通してろ過することによって無菌化した。精製した抗体をその純度についてＳＥＣによって試験し、２８０ｎｍにおける吸光度の測定により、１．４７の消衰係数を用いてＩｇＧ濃度を求めた。必要に応じて希釈を行った。代替として、セラミックヒドロキシアパタイト（ＣＨＴ）を用いて、選択性が向上したマウス及びヒト化抗体の両方に仕上げの精製を行ってもよい。４０μｍの粒径を有するＩＩ型ＣＨＴ樹脂（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を、ＩＥＸクロマトグラフィーと同様のプロトコルで、抗体の仕上げの精製に利用した。ＣＨＴ用の開始バッファは２０ｍＭのリン酸ナトリウム、ｐＨ７．０であり、２０ＣＶでの２０〜１６０ｍＭのリン酸ナトリウムの勾配によって抗体を溶離させた。
実施例４  Ｎ−末端における抗体の複合体化−２ステップ法
重鎖上のＮ末端セリンを操作したｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２抗体（図１に示すスキーム１中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液で処理した（５０当量、２５℃、３０分間）。次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡ  Ｇｒａｄｅ，ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０５２２】
得られた溶液を、１０％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒を含有する反応槽中で、４−アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ−ジメチルアセト
アミド］中１００ｍＭ）で処理して１０ｍＭの濃度とした。続いてリンカー１（スキーム１中の［３］、４または５当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０５２３】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、ｐＨ８．５のバッファへとバッファ交換した。次にこの溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０％ｖ／ｖ）で調節し、化合物Ａ（すなわちスルホン化ＤＧＮ４６２（ｓＤＧＮ４６２）またはスルホン化Ｄ１（すなわちｓＤ１））（スキーム１、［５］、遊離チオール、５当量）によって２５℃で６時間処理した。
【０５２４】
得られた複合体を、ＮＡＰろ過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、ｐＨ６．２の処方バッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、同一のバッファ中、２５℃で４時間透析を実施した。
【０５２５】
精製した複合体（スキーム１、［６］）は、抗体当たり２の結合した化合物Ａ分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による、図２）、＞９８％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜２％の遊離の薬物（アセトン沈殿させた逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び０．１４ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２０１４００Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
実施例５  Ｎ−末端における抗体の複合体化−ＤＭｘ直接結合
操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２抗体（図３、スキーム２中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）によって、２５℃で３０分間処理した。次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０５２６】
得られた溶液を、１０％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒を含有する反応槽中で、４−アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド］中１００ｍＭ）で処理して１０ｍＭの濃度とした。続いてアミノオキシ−アセチル−ＭａｙＭＮＡ（スキーム２、［３］、４または５モル当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０５２７】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロースバッファ、ｐＨ６．２へとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（(ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、同一のバッファ中、２５℃で４時間透析を実施した。
【０５２８】
精製した複合体（スキーム２、［４］）は、抗体当たり２の結合したＭａｙＮＭＡ分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による、図４）、＞９８％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜２％の遊離の薬物（ＨＩＳＥＰ逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び０．３１ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２抗体
に関するモル消衰係数ε２８０＝２０１４００Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
実施例６  Ｎ末端における抗体の複合化−ＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃１に対する２ステッププロトコル
リーダーペプチド配列を介して軽鎖上のＮ末端セリンを操作したｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃１抗体（図５、スキーム３中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）によって、２５℃で３０分間処理した。次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０５２９】
得られた溶液を、１０％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒を含有する反応槽中で、４−アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド］中１００ｍＭ）で処理して１０ｍＭの濃度とした。続いてリンカー１（スキーム３、［３］、４または５モル当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０５３０】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）、ｐＨ８．５のバッファへとバッファ交換した。次にこの溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０％ｖ／ｖ）で調節し、化合物Ａ（スキーム３、［５］、遊離チオール、５モル当量）によって、２５℃で６時間処理した。
【０５３１】
得られた複合体を、ＮＡＰろ過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウム、ｐＨ６．２の処方バッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０，０００ＭＷＣＯ）を利用して、同一のバッファ中、２５℃で４時間透析を実施した。
【０５３２】
精製した複合体（スキーム３、［６］）は、抗体当たり１．４分子の結合した化合物Ａの平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による、図６）、＞９８％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜２％の遊離の薬物（アセトン沈殿させた逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び０．１４ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃１抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２０１４００Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
実施例７  Ｎ末端Ｓｅｒ複合体のＴ４７Ｄ細胞上への結合は対照と同等
Ｎ末端Ｓｅｒ−薬物複合体（ＳＥＲＩＭａｂ  ＡＤＣ）の結合親和性を、Ｔ４７Ｄ細胞を用いて分析した。このＴ４７Ｄ細胞は、細胞当たり約１×１０５の結合した葉酸受容体アルファ（ＦＲ-α）抗原を有することが以前に明らかになっている。上記ヒト化モノクローナル抗体ｈｕＭＯＶ１９は特異的にＦＲαに結合する。
【０５３３】
上記結合親和性を評価するために、９６穴プレート（Ｆａｌｃｏｎ、丸底）中で、約１００μｌ／ウェルのＡＤＣまたは対照抗体（例えば、未複合体化天然ｈｕＭＯＶ１９、またはＭ９３４６Ａ）を、ＦＡＣＳバッファ（１％のＢＳＡ、１×ＰＢＳ）で約３×１０−８Ｍの開始濃度に希釈して、これを２通り行い、続いて４℃にて、ＦＡＣＳで逐次３倍希釈を行った。ヒト乳癌細胞株Ｔ４７Ｄ細胞を、加熱不活性化した１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆ
ｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、０．１ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び０．２ＩＵのウシインスリン／ｍＬ（Ｓｉｇｍａ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養し、ＰＢＳ中で１回洗浄した後、バーゼン液（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて取り出した。次いでＴ４７Ｄ細胞を培養培地（上記を参照のこと）中に再懸濁させてトリプシンを中和し、コールタールカウンター上で計数した。次に、細胞を冷ＦＡＣＳバッファ中で２回洗浄し、洗浄の間に１２００ｒｐｍで５分間遠心分離した。
【０５３４】
ＡＤＣ、抗体またはＦＡＣＳバッファのみを含有するウェルに、約１００μＬ／ｍＬの２×１０４細胞／ウェルを添加し、４℃で２時間インキュベートした。インキュベーション後に細胞を上記と同様に遠心分離し、２００μＬ／ウェルの冷ＦＡＣＳバッファ中で１回洗浄した。次いで細胞を、２００μＬ／ウェルのＦＩＴＣで複合体化したヤギ抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃγ二次抗体（含まれる対照は未染色細胞及び二次抗体のみで染色した細胞）によって４℃で４０分間染色し、遠心分離し、２００μＬ／ウェルの冷ＰＢＳ−Ｄ中で１回洗浄した。細胞を２００μＬ／ウェルの１％ホルムアルデヒド／ＰＢＳ−Ｄで固定化し、４℃で保存した。
【０５３５】
保存後に、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上でのフローサイトメトリーを用いて、複合体または抗体の細胞表面染色を検出した。ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて、ＡＤＣまたは抗体の対数濃度に対して幾何平均値をプロットし、非線形４パラメータロジスティック回帰分析によってＥＣ５０を算出した。図８を参照されたい。
【０５３６】
（１）抗体当たり平均して２分子の化合物Ａを有するｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａ（「ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２」としても知られる）、（２）ｈｕＭＯＶ１９当たり平均して２．４分子の化合物Ａを有する、スルホ−ＳＰＤＢリンカーを介してｈｕＭＯＶ−１９上のリシン残基のε−アミノ基と結合したｈｕＭＯＶ１９−ｓＳＰＤＢ−化合物Ａ、（３）未複合体化天然ｈｕＭＯＶ１９抗体（Ｍ９３４６Ａ）、及び（４）操作されたＮ末端Ｓｅｒを有する、未複合体化の操作されたｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２抗体を用いた同様の実験も実施した。図７Ａを参照されたい。
【０５３７】
図７Ａ及び７Ｂに示すように、上記ＳＥＲＩＭＡｂ  ＡＤＣ（複数可）は、未複合体化抗体（Ｍ９３４６Ａ）対照と同様に、標的抗原を発現するＴ４７Ｄ細胞の表面に結合した。例えば、図７ＢのＥＣ５０値を参照されたい。図８Ａ及び８Ｂに示す同様の実験においても実質的に同一の結果が得られた。これらの実験は、抗原への結合が、上記Ｎ末端Ｓｅｒ残基での複合体化過程による影響を受けないことを実証している。
【０５３８】
ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−Ｄ８複合体についても同様の結果が観測された。この複合体は、未複合体化対照（Ｍ９３４６Ａ抗体）及び未複合体化の操作されたｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２抗体（すなわちＳｅｒｉＭａｂ）と同様に、標的抗原を発現するＴ４７Ｄ細胞の表面に結合した。図２３を参照されたい。
実施例８  ＫＢ子宮頸癌細胞株のｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａの細胞毒性評価
この実験は、上記操作されたＮ末端Ｓｅｒへの部位特異的な抗体の複合体化は、抗体当たりの予見可能なかつ信頼性のある薬物の充填を与えるだけでなく、驚くべきことに、得られるＡＤＣ複合体に、Ｌｙｓ側鎖への抗体の結合を有する複合体と比較して、より高い効能を与えることを実証している。
【０５３９】
９６穴プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、平底）中で、１００μｌ／ウェルの各ＡＤＣを、加
熱不活性した１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び０．１ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で３．５×１０−９Ｍ〜３．５×１０−８Ｍの開始濃度に希釈し、これを３通り行い、大気温度にて、上記培地で逐次３倍希釈を行った。加熱不活性化した１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び０．１ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＥＭＥＭ（ＡＴＣＣ）中で培養したＫＢ細胞（頬の上皮性腫瘍）を、ＰＢＳ中で１回洗浄し、０．０５％のトリプシン−ＥＤＴＡ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて取り出した。試験した他の細胞は、加熱不活性化した１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及び０．１ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＰＲＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）中で培養した、ＮＣＩ−Ｈ２１１９（ＮＳＣＬＣ）及びＴ４７Ｄ（上皮性乳癌）であった。Ｔ４７Ｄの培地にも０．２ＩＵ／ｍｌのウシインスリンを補充した。全ての細胞を培養培地（上記を参照のこと）中に再懸濁させてトリプシンを中和し、コールタールカウンター上で計数した。ＡＤＣまたは培地のみを含有するウェルに１００μｌ／ｍｌの１０００〜２０００細胞／ウェルを添加し、１μＭのブロッキングｈｕＭＯＶ１９抗体の存在下または非存在下で、５％のＣＯ２、３７℃のインキュベータ中で５日間インキュベートした。全容量は２００μｌ／ウェルである。インキュベーション後に、２０μｌ／ウェルのＷＳＴ−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ）の添加によって細胞生存率を分析し、２時間現像した。プレートリーダー上で４５０ｎｍ及び６２０ｎｍでの吸光度を読み取った。４５０ｎｍでの吸光度から６２０ｎｍでの吸光度を減じた。培地のみを含有するウェルにおけるバックグラウンドを補正した吸光度から更に減じ、エクセルにおいて未処理の細胞の生存率（ＳＦ）を算出した。Ｇｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて、ＡＤＣ濃度（Ｍ）対ＳＦのＸＹグラフを作成した。
【０５４０】
図９Ａのデータは、化合物Ａが操作されたＮ末端Ｓｅｒに結合することができ、抗体分子当たり正確に化合物Ａの２の分子を有するＡＤＣを与えることができることを示す。対照的に、同じｈｕＭＯＶ１９抗体にＬｙｓ側鎖を介して結合した化合物Ａは、抗体当たり２．４分子の化合物Ａの平均値を有するＡＤＣを与え、このことは、異なる数の結合した化合物Ａを有するＡＤＣの集団が相対的に不均一であることを示唆している。
【０５４１】
図７Ａ及び７Ｂは上記にて、用いる結合にかかわらず（操作されたＮ末端Ｓｅｒを介して、または天然のＬｙｓ側鎖を介してのいずれであっても）、得られるＡＤＣは未複合体化の抗体と比較して、抗原に対する本質的に同様の結合親和性を有することを示していた。
【０５４２】
しかしながら、上記Ｌｙｓにおいて複合体化されたＡＤＣにおけるより高い薬物充填量（すなわち、２．４対２．０）にもかかわらず、Ｎ末端Ｓｅｒ結合を有するＡＤＣはリシンにおいて複合体化されたＡＤＣよりも、抗体濃度基準で約３倍効能が高く、かつ化合物Ａ濃度基準で約５倍効能が高い。図９Ａ中のＩＣ５０の測定値を参照されたい。
【０５４３】
更に、過剰な（１μＭ）未複合体化ｈｕＭＯＶ１９の添加が観測される殺傷作用を阻害する場合があり、このことは、観測される細胞毒性が特異的であり、かつｈｕＭＯＶ１９の、標的細胞上のその抗原に対する結合に依存するだけでなく、両方のＡＤＣが同一の、抗原に依存しない標的細胞に対する活性を有することも示唆している。
【０５４４】
ｈｕＭＯＶ１９に複合体化された異なる細胞毒及びＮ末端Ｓｅｒでの複合体化を伴うその操作されたバージョンに関しても同様の結果が得られた。図９Ｂのメイタンシノイド複合体を参照されたい。Ｎ末端Ｓｅｒ結合を有する上記ＡＤＣは、Ｌｙｓにおいて複合体化されたＡＤＣがより高い薬物充填量（３．５  ｖ．２）を有するにもかかわらず、当該の
Ｌｙｓにおいて複合体化されたＡＤＣと同様の効能を有する。
【０５４５】
ｈｕＭＯＶ１９に関して上述したものと同様の結果が、関連のない抗体に関しても観測された。
実施例９
【０５４６】
【化１３１】
2017529837.tif 000136
【０５４７】
ＤＭ４−ＳＰＤＢ−ヒドラジド及びＤＭ４−スルホ−ＳＰＤＢ−ヒドラジドは、上記のように、ＤＭ４−ＳＰＤＢまたはＤＭ４−スルホ−ＳＰＤＢをヒドラジンと反応させることによって調製されることとなる。
実施例１０
【０５４８】
【化１３２】
2017529837.tif 000137
【０５４９】
以前に説明されたスルホ−ＳＰＤＢ（米国特許第８，２３６，３１９号）をヒドラジンと反応させて、スルホ−ＳＰＤＢ−ヒドラジドリンカーを与えることができる。
０．２４ＭのヒドラジンのＤＭＡ溶液（０．０１５ｍｌ、０．２４２ｍｍｏｌ）に、０．０６Ｍの１−（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ）−１−オキソ−４−（ピリジン−２−イルジスルファニル）ブタン−２−スルホン酸（２５．９ｍｇ、０．
０６３５ｍｍｏｌ）のＤＭＡ溶液を、室温において高速で撹拌しながら滴下によって添加した。アルゴン下、５０℃で４０分間撹拌した後、３０分にわたる５〜２５％のアセトニトリル勾配を用いた、０．１％のギ酸を含有する脱イオン水で溶離させる逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８、２１．２×２５０ｍｍ）によって、粗反応混合物を精製した。所望の生成物を含有する画分を１つのまとめ、冷凍し、凍結乾燥して、３．１ｍｇ（収率１５％）の所望の生成物を白色固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋１）＋  実測値：３２４．０５，計算値：３２４．０１。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  ２．１３−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．８２−２．９１（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝７．８，６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝７．３，４．７Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８３（ｔ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝３．５，２．０Ｈｚ，１Ｈ）。
【０５５０】
得られた化合物は、アルデヒドまたはケトンを有する細胞結合剤と反応させることができ、次いで当該ヒドラジド結合を任意選択で還元することができる。得られるリンカーは、アルデヒドまたはケトンを有する細胞結合剤と反応させることができ、次いでＤＭ１またはＤＭ４などのチオールを有するメイタンシノイドと反応させて、複合体を与えることができる。
【０５５１】
代替として、上記リンカーが細胞結合剤と反応すると、得られる分子の反応性ジスルフィドを、ジチオスレイトールまたはＴＣＥＰなどの反応剤を用いて還元してチオールを得、これをＰｙＳ−ＤＭ１またはＰｙＳ−ＤＭ４などの反応性ジスルフィドを有するメイタンシノイドと反応させてもよい。
実施例１１
【０５５２】
【化１３３】
2017529837.tif 000138
【０５５３】
Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミンを１，３−ジブロモプロパンと、次いでチオ酢酸と反応させることとなる。当該チオール及びアミンを、ＮａＯＨ続いてＨＣｌで処理することによって脱保護し、次いで該チオール部分を２，２’−ジピリジルジスルフィドと反応させて、Ｗ１を得ることとなる。ＤＭ４をＷ１と反応させて、Ｗ２を得ることとなる。１，３−ジブロモプロパンを他の対称なジブロミドにより置き換えて、ＤＭ部分とジスルフィド部分との間の異なる長さのスペーサーを与えることができる。
【０５５４】
リンカーＷ１はまた、ケトンまたはアルデヒドを有する細胞結合剤を誘導体化して、反応性ジスルフィドを導入するために用いることもできる。上記オキシムはまた、任意選択で還元してもよい。いずれの方法もＤＭ１またはＤＭ４などのチオールを有するメイタン
シノイドの付加を可能にし、上記複合体化を完了する。
実施例１２
【０５５５】
【化１３４】
2017529837.tif 000139
【０５５６】
アルコキサミノアセチル−Ｃｙｓ（Ｓ−２−ＮＯ２−フェニル）−−ＯＨ（１ｍｇ、２．８８μｍｏｌ、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００６，４：１３１３−１４１９で以前に説明されたとおりにして調製）及びＤＭ４（６ｍｇ、７．７μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（２５０μＬ）及び脱イオン水（２５μＬ）に溶解し、１時間磁気撹拌した。この反応混合物を、０．１％のギ酸を含有する９５％の脱イオン水及び３０分にわたる５％〜９５％のアセトニトリル勾配によって２０ｍＬ／分で溶離させる、２１×１５０ｍｍのＣ１８カラムを用いてＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を採取し、冷凍し、凍結乾燥して、約０．２５ｍｇ（収率９％）の所望の生成物を白色固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  実測値９７２．５；計算値９７２．３；ＭＳ（Ｍ−１）  実測値９７０．４；計算値９７０．３。
実施例１３
【０５５７】
【化１３５】
2017529837.tif 000140
【０５５８】
スルホ−ＳＰＤＢ−ヒドラジン（１ｍｇ、３．１μｍｏｌ）及びＤＭ４（４ｍｇ、５．１μｍｏｌ）を、ＤＭＦ（３００μＬ）及び１／４に希釈した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００μＬ）に溶解し、１時間磁気撹拌した。この反応混合物を、０．１％のギ酸を含有する９５％の脱イオン水及び３０分にわたる５％〜９５％のアセトニトリル勾配によって２０ｍＬ／分で溶離させる、２１×１５０ｍｍのＣ１８カラムを用いてＨＰＬＣで精製した。所望の生成物を採取し、冷凍し、凍結乾燥して、約１ｍｇ（収率１９％）の所望の生成物を白色固体として得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋  実測値９９２．６；計算値９９２．３；ＭＳ（Ｍ−１）  実測値９９０．５；計算値９９０．３。
実施例１４
【０５５９】
【化１３６】
2017529837.tif 000141
【０５６０】
Ｂｏｃ保護Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨ（化合物２５）を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及びＥＤＣカップリング剤との反応、及びそれに続くヒドラジンとの反応によって活性化することができる。得られるヒドラジド（化合物２６）をＦＭｏｃ−Ｃｌとの反応によってＦＭｏｃで保護することができ、上記Ｂｏｃ保護基は希ＨＣｌとの反応によって除去することができる。得られる化合物２７は、ＤＩＰＥＡの存在下で１，４−ジオキサン−２，６−ジオンと反応して、化合物２８を与えることができる。ＥＤＣを用いてＤＭ’を化合物２８とカップリングさせることができ、上記ＦＭｏｃ保護基をモルホリンとの反応によって除去して所望の化合物２９を与えることができる。
【０５６１】
Ｂｏｃ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨ（化合物２５）をＢｏｃ保護アミノ酸またはペプチドで置き換えることによって上記スキームを一般化することができ、かつ上記無水グルタル酸も異なる環状無水物によりまたは一方を保護した二酸で置き換えて、ＤＭ’部分とペプチド部分との間に他のスペーサーを与えることもできる。
実施例１５
【０５６２】
【化１３７】
2017529837.tif 000142
【０５６３】
Ｂｏｃ保護Ｈ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨ（化合物８）を、９−フルオレンメタノールＤＩＣカップリング剤及びジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）との反応によって保護することができる。得られる化合物３０をトリフルオロ酢酸によってＢｏｃ脱保護して化合物３１を与えることができ、化合物３１は１，４−ジオキサン−２，６−ジオンと反応し、続いてＤＩＣ及びＤＭＡＰの存在下でトリメチルシリルエタノールと保護反応して化合物３２を与えることができる。次いで化合物３２をモルホリンと反応させて、９−フルオレンメタンエステルを脱保護して化合物３３を与えることができる。次いで、ＥＤＣカップリング剤及びＨＯＢＴを用い、ＤＭ’を化合物３３とカップリングして、化合物３４を与えることができる。テトラブチルアンモニウムフロリドによる処理ならびにそれに続くカルボン酸基を活性化するためのＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの反応、及びその後の、所望の化合物３５を与えるためのヒドラジンとの反応によって、化合物３４のトリメチルシリルエステルを除去することができる。
【０５６４】
Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＯＨを好ましいＢｏｃ保護アミノ酸またはペプチドで置き換えることによって、上記方法を一般化することができる。上記１，４−ジオキサン−２，６−ジオンも、異なる環状無水物によりまたは一方をトリメチルシリルエタン保護した二酸に置き換えて、ＤＭ’部分とペプチド部分との間に他のスペーサーを有する本発明の他の化合物を与えることもできる。
実施例１６
【０５６５】
【化１３８】
2017529837.tif 000143
【０５６６】
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）及びＥＤＣとの反応及びそれに続く１，２−ジアミノエタンとの反応によって、Ｂｏｃ保護Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−ＯＨ(化合物２５)を活性化して、化合物３６を得ることができる。化合物３６を、ＥＤＣカップリング剤の存在下でＦＭｏｃ−アミノオキシ酢酸で処理し、それに続いて希ＨＣｌによってＢｏｃ脱保護することができる。得られる化合物３７は１，４−ジオキサン−２，６−ジオンと反応して、化合物３８を与えることができる。ＥＤＣの存在下でのＤＭ’の化合物３８とのカップリング及びそれに続くモルホリンを用いたヒドロキシルアミンの脱保護によって、最終生成物である化合物３９が与えられることとなる。
【０５６７】
Ｂｏｃ保護アミノ酸またはＢｏｃ保護ペプチドを用いて同様の方法を使用し、異なるペプチド側鎖を有する本発明の化合物を生成させることができる。上記１，４−ジオキサン−２，６−ジオンを異なる環状無水物によってまたは一方が保護された二酸で置き換えて、ＤＭ’部分とペプチドとの間に他のスペーサーを与えることもできる。
実施例１７
【０５６８】
【化１３９】
2017529837.tif 000144
【０５６９】
化合物３６ｂの合成
【０５７０】
【化１４０】
2017529837.tif 000145
【０５７１】
磁気撹拌子が入ったフラスコ中で、Ｂｏｃ−Ｃｌｙ３−ＯＨ（２５ｂ、６ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍＬ）に溶解し、ここにＮ−ヒドロキシスクシンイミド（２．４ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（４ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物を１時間磁気撹拌し、次いで、磁気撹拌したエチレンジアミン（８ｇ、１３３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）溶液中に、激しく磁気撹拌しながら室温でゆっくりと注ぎ込んだ。ジエチルエーテル（２００ｍＬ）を添加して固体を沈殿させた。次いでこのフラスコをボルテックスし、１５分間超音波照射浴中に載置した。この物質を減圧ろ過し、次いで室温で減圧乾燥し、その後ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解し、２２０ｎｍでの検出を備え、１００ｍＬ／分の、０．２％のギ酸を含有する脱イオン水及び、最初の５分間は５％のアセトニトリル、次いで５〜３２分の間は５％〜９５％のアセトニトリルの直線的な勾配のアセトニトリル勾配で溶離させる、５０ｍｍ×２２０ｍｍの準備が整ったＣ１８カラム上で、略等量の注入容量を用いて３回の運転で精製した。純粋な所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して４．５ｇ（収率６５％）の所望の生成物３６ｂを得た。
化合物３６ｃの合成
【０５７２】
【化１４１】
2017529837.tif 000146
【０５７３】
Ｆｍｏｃアミノオキシ酢酸（１８７ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に溶解し、ここにＴＢＴＵ（２４３ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９５μＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を添加し、３分間磁気撹拌した。次いで、磁気撹拌しながら、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ３ＮＨ−（ＣＨ２）２−ＮＨ２（２００ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１ｍＬ）溶液を添加した。１時間後に、この反応物を、２５４ｎｍでの検出を備え、４０ｍＬ／分の、０．２％のギ酸を含有する脱イオン水及び、最初の５分間は１０％のア
セトニトリル、次いで５〜３２分の間は１０％〜９５％のアセトニトリルの直線的な勾配のアセトニトリル勾配で溶離させる、２７ｍｍ×２２０ｍｍの準備が整ったＣ１８カラム上で直接精製した。純粋な所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して６０ｍｇ（収率１７％）の所望の生成物３６ｃを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）  δ  １．３７（ｓ，９Ｈ），３．１５（ｄｔ，Ｊ＝１０．０，５．６Ｈｚ，４Ｈ），３．５８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），３．６７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１６（ｓ，２Ｈ），４．２６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｔｄ，Ｊ＝７．４，１．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．６８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），７．８９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，１Ｈ），８．０５（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ）。ＨＲＭＳ  計算値６４９．２５９２，実測値６４９．２５８８。
化合物３７ｂの合成
【０５７４】
【化１４２】
2017529837.tif 000147
【０５７５】
２５ｍＬの丸底フラスコにＢｏｃ−Ｇｌｙ３−ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＣＨ２−Ｏ−ＮＨ−ＦＭｏｃ（７６ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）を装入し、９５／５のトリフルオロ酢酸の水溶液（１０ｍＬ）に溶解した。この反応混合物を室温で１時間磁気撹拌した。減圧下で反応混合物の容量を減少させ、粗製残渣を塩化メチレンとトルエンの１：１混合物（１０ｍＬ）に再溶解し、減圧下で濃縮した。同時留去を３回繰り返し、得られた生成物（３７ｂ）を更に精製することなく用いた。ＭＳ（ｍ＋Ｈ＋）  実測値：５２７．４，計算値５２７．２；（ｍ−１）。
化合物３８ｂの合成
【０５７６】
【化１４３】
2017529837.tif 000148
【０５７７】
１０ｍＬの丸底フラスコにｔ−ブチル脱保護したＨ−Ｇｌｙ３−ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＣＨ２ＯＮＨ−ＦＭｏｃ（６４ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（３ｍＬ）を装入した。この溶液を撹拌しながら、無水ジグリコール酸（１５．５２ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．０４２ｍＬ、０．２４３ｍｍｏｌ）を逐次的に添加した。フラスコにはセプタムが取り付けてあり、室温で１時間磁気撹拌した。所望の生成物を、０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び２５分間にわたるアセトニトリルの５〜９５％の直線的な勾配で溶離させる、半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって単離した。生成物を含有する画分を１つにまとめ、減圧下で濃縮して、４０ｍｇ（０．０６２ｍｍｏｌ、収率５１．２％）の所望の生成物（３８ｂ）を白色の残渣として得た。ＭＳ（ｍ＋Ｈ＋）  実測値：６４３．４，計算値６４３．２；（ｍ−１）  実測値：６４１．２，計算値：６４１．２。
化合物３８ｃの合成
【０５７８】
【化１４４】
2017529837.tif 000149
【０５７９】
１０ｍＬの丸底フラスコに、Ｍａｙ−ＮＭＡ（５．０６ｍｇ、７．７８μｍｏｌ）の酢酸エチル（１．５００ｍＬ）溶液を装入した。次いで、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジミド塩酸塩（ＥＤＣ、３．７３ｍｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．３９μｌ、０．０１９ｍｍｏｌ）を添加し、その後ＨＯＣＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＯ−Ｇｌｙ３ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＯＣＨ２ＯＮＨ−ＦＭｏｃ（１０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）溶液を加えた。この反応混合物を室温で１時間撹拌した。減圧下でこの反応混合物の容量を半分に減らし、生成物を、０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び２５分間にわたるアセトニトリルの５〜９５％の直線的な勾配で溶離させる、半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって単離した。生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して、所望の生成物（３８ｃ）１．４ｍｇ（収率１３％）を白色固体として得た。ＭＳ（ｍ＋Ｎａ＋）  実測値：１２９６．７，計算値：１２９６．５。
化合物３９ｂの合成
【０５８０】
【化１４５】
2017529837.tif 000150
【０５８１】
Ｍａｙ−ＮＭＡ−ＣＯＣＨ２ＯＣＨ２ＣＯ−Ｇｌｙ３ＮＨ（ＣＨ２）２ＮＨＣＨ２ＯＮＨ−Ｆｍｏｃ（１．４ｍｇ、１．０９８μｍｏｌ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）に溶解し、撹拌子を備えた３ｍＬのガラス製バイアルに移した。この溶液を撹拌しながら、２０％ｖ／ｖのモルホリン（３００μＬ、３．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応を室温、撹拌下で、完結したと判定されるまで進行させた。この粗製の反応混合物を、半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって、３回の注入で精製した。生成物を含有する画分を１つにまとめ、シンチレーション用バイアルに移し、ドライアイス／アセトン浴中で冷凍し、凍結乾燥して、１．１ｍｇ（収率９５％）の所望の生成物（３９ｂ）を得た。ＭＳ（ｍ＋Ｎａ＋）  実測値：１０７４．７，計算値：１０７４．４；高分解能ＭＳ（ｍ＋Ｈ）＋
実測値：１０５２．４３３１，計算値：１０５２．４３３８；（ｍ＋Ｃｌ−）  実測値：１０８６．５，計算値：１０８６．４。
実施例１８
【０５８２】
【化１４６】
2017529837.tif 000151
【０５８３】
【化１４７】
2017529837.tif 000152
【０５８４】
Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ
１００ｍＬのフラスコに、Ｍａｙ−ＮＭＡ（２００ｍｇ、０．３０８ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（１９ｍＬ）溶液を装入した。この反応フラスコを減圧下で濃縮してＥｔＯＡＣを除去した。この物質をＤＭＳＯ（１０ｍＬ）に再溶解し、ＦＭｏｃ−Ｇｌｙ３−ＯＨ（１６５ｍｇ、０．４００ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（１２．２５ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（７７ｍｇ、０．４００ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５３．７μＬ、０．３０８ｍｍｏｌ）で処理した。反応を、アルゴン下、室温で進行させた。１時間後に、この反応混合物を、３５ｍＬ／分でのＣ１８高性能ｇｏｌｄ  ３０ｇカラムを使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｒｆ  ２００ｉを用いて精製した。０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び２０分間にわたる５〜９５％のアセトニトリル勾配で溶離。所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して、所望の生成物２９６ｍｇ（収率９３％）を得た。ＭＳ（Ｍ）＋  実測値：１０４３．４，計算値：１０４３．４。
【０５８５】
【化１４８】
2017529837.tif 000153
【０５８６】
Ｈ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ
ＦＭｏｃ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ（３７．７ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ）を２０％のモルホリンのＤＭＳＯ溶液（５ｍＬ）に溶解し、１時間磁気撹拌した。この反応混合物を、３５ｍＬ／分でのＣ１８高性能ｇｏｌｄ  ３０ｇカラムを使用したＣｏｍｂｉｆｌａｓｈ  Ｒｆ  ２００ｉを用いて精製した。２５分間にわたる２〜９５％のアセトニトリル勾配を伴う０．１％のギ酸を含有する脱イオン水で溶離。所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、所望の生成物２０ｍｇ（収率７５％）へと凍結乾燥した。ＬＲＭＳ（Ｍ）＋  実測値８２１．４０，計算値：８２１．３４。
【０５８７】
【化１４９】
2017529837.tif 000154
【０５８８】
Ｆｍｏｃ−アミノオキシ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ
Ｈ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ（１５ｍｇ、０．０１８ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２ｍＬ）に溶解し、ここにＦＭｏｃ−アミノオキシ酢酸（１１．４４ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３．１９μＬ、０．０１８ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（７．０ｍｇ、０．０３７ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後に、粗物質を、２１．２ｍＬ／分の流速での、ＸＢ−Ｃ１８  ２１．２×１５０ｍｍ、５μｍカラムを使用した半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって精製した。０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び、３分間は５％のアセトニトリル、次いで５〜２５分の間は５％〜９５％のアセトニトリルの直線的な勾配で溶離。所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して、２ｍｇ（収率８％）の所望の生成物を得た。ＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋  実測値１１３８．６，計算値：１１３８．４。
【０５８９】
【化１５０】
2017529837.tif 000155
【０５９０】
アミノオキシ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ
Ｆｍｏｃ−アミノオキシ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ（２ｍｇ、１８μｍｏｌ）を、室温で２時間磁気撹拌して、２０％のモルホリンのＤＭＳＯ溶液（１ｍＬ）で処理した。この反応混合物を、２１．２ｍＬ／分の流速での、ＸＢ−Ｃ１８  ２１．２×１５０ｍｍ、５μｍカラムを使用した半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって精製した。０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び、５分間は５％のアセトニトリル、次いで５〜２５分の間は５％〜９５％のアセトニトリルの直線的な勾配で溶離。所望の生成物を含有する画分を直接採取し、冷凍し、凍結乾燥して、アミノオキシ−Ｇｌｙ３−ＭａｙＮＭＡ（０．２ｍｇ、０．２２４μｍｏｌ）を得た。ＬＲＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋  実測値９１６．６０，計算値：９１６．３６。ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｎａ）＋  実測値９１６．３４６６，計算値：９１６．３４６６。
実施例１９
【０５９１】
【化１５１】
2017529837.tif 000156
【０５９２】
ＦＭｏｃ保護アミノオキシＭａｙＮＭＡ
１００ｍＬのフラスコに、ＭａｙＮＭＡ（１５０ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）を含む酢酸エチル（３５ｍＬ）を装入した。この反応フラスコを減圧下で濃縮してＥｔＯＡＣを除去した。この物質をＤＭＦ（５ｍＬ）に再溶解し、磁気撹拌しながら、ＦＭｏｃ−アミノオキシ酢酸（７２．３ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）、続いてＥＤＣ（４４．２ｍｇ、０．２３１ｍｍｏｌ）で処理した。反応を、アルゴン下、室温で４時間進行させ、次いで２１．２ｍＬ／分の流速での、ＸＢ−Ｃ１８  ２１．２×１５０ｍｍ、５μｍカラムを使用した半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって精製した。０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び、最初の５分間は５％、次いで５〜２５分の間は５％〜９５％のアセトニトリル勾配で溶離。所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して、２４．２ｍｇ（収率１１％）の所望の生成物を得た。ＬＲＭＳ（Ｍ）＋  実測値９４５．３５，計算値：９４５．３６。
【０５９３】
【化１５２】
2017529837.tif 000157
【０５９４】
アミノオキシ−ＭａｙＮＭＡ
ＦＭｏｃ保護アミノオキシＭａｙＮＭＡ（２４．２ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を２０％のモルホリンのＤＭＦ溶液（２ｍＬ）で処理した。１時間磁気撹拌した後に、この反応混合物を、２１．２ｍＬ／分の流速での、ＸＢ−Ｃ１８  ２１．２×１５０ｍｍ、５μｍカラムを使用した半分取Ｃ１８  ＨＰＬＣによって精製した。０．１％のギ酸を含有する脱イオン水及び、５分間は５％、次いで２５分間にわたって５％〜９５％の直線的な勾配のアセトニトリル勾配で溶離。所望の生成物を含有する画分を１つにまとめ、冷凍し、凍結乾燥して、１０ｍｇ（収率５４．０％）の所望の生成物を得た。ＭＳ（Ｍ）＋  実測値：７２３．３，計算値：７２３．３；高分解能ＭＳ  実測値：７２３．２９９５，計算値：７２３．３００３。
実施例２０  雌のＳＣＩＤマウスにおけるＮＣＩ−Ｈ２１１０  ＮＳＣＬＣ異種移植片に対する単回投与ＳｅｒｉＭａｂ部位特異的ｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａの抗腫瘍活性
６週齢の雌のＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手した。マウスに、０．１ｍｌの５０％マトリゲル／血清を含まない培地中に懸濁させた１×１０７のＮＣＩ−Ｈ２１１０腫瘍細胞を、右脇腹への皮下注射によって接種した。腫瘍容積が約１００ｍｍ３に達したとき（接種後第７日）に、マウスを、腫瘍容積に基づいて無作為に、各群６匹の４群に振り分けた。１日目（接種後８日目）に、マウスに対して、ビヒクル対照（０．２ｍｌ／マウス）またはｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａ（スキーム１、［６］）複合体の単回ＩＶ投与を、化合物
Ａの濃度に基づいて１０、２５または５０μｇ／ｋｇで行った。
【０５９５】
腫瘍の大きさを週２〜３回、ノギスを用いて三次元で測定した。腫瘍容積を、式Ｖ＝長さ×幅×高さ×１／２を用いてｍｍ３で表した。腫瘍容積が５０％以上減少した場合、マウスは部分退縮（ＰＲ）があったと見なし、触知可能な腫瘍を検知することができない場合、完全な腫瘍の退縮（ＣＲ）があったと見なした。腫瘍容積はＳｔｕｄｙＬｏｇソフトウェアによって判定した。
【０５９６】
次の式：Ｔ／Ｃ（％）＝治療群のメジアン腫瘍容積／対照群のメジアン腫瘍容積×１００を用いて、腫瘍の増殖阻害（Ｔ／Ｃ値）を判定した。
ビヒクル対照の腫瘍容積が所定の大きさ１０００ｍｍ３に達したところで、治療（Ｔ）群及びビヒクル対照（Ｃ）群で同時に腫瘍容積を測定した。腫瘍のないマウス（０ｍｍ３）を含む各治療群のメジアン腫瘍容積を毎日測定した。ＮＣＩ標準に従えば、Ｔ／Ｃ≦４２％が抗腫瘍活性の最低レベルである。Ｔ／Ｃ＜１０％が高抗腫瘍活性レベルと見なされる。
【０５９７】
図１３に示すように、上記複合体は２５μｇ／ｋｇ及び５０μｇ／ｋｇ用量において高活性である。
実施例２１  タンパク質Ａ樹脂を用いた親和性捕捉による異化産物富化
葉酸受容体α（ＦＲα）を発現するＫＢ細胞を５×Ｔ１５０組織培養プレート中で培養した。飽和量の、ＦＲαを標的とするｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ＃２−リンカー１−化合物Ａ（すなわちＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２）複合体をＫＢ細胞と共に、５％のＣＯ２で緩衝し加湿したインキュベータ中、３７℃で２４時間インキュベートした。２４時間後に、細胞から排出された異化産物を含有する培地を採取し、プールして次のアッセイを行った。
【０５９８】
４℃での終夜のインキュベーションによって、飽和量の抗インドリノベンゾジアゼピン化合物抗体をタンパク質Ａ樹脂のスラリーに結合させた。１ｍｌの予め結合させたタンパク質Ａ／抗ベンゾジアゼピン化合物抗体複合体を２５ｍｌの培地と共に、エンドツーエンド回転器で数時間インキュベートした。上記樹脂を１０００ｒｐｍで緩徐に遠心分離し、上清をデカントした。上記ＩＧＮの異化産物に結合したタンパク質Ａ／抗ＩＧＮ抗体樹脂をＰＢＳ（５×）で洗浄して培地成分を除去した。アセトン抽出によって上記異化産物を有機相中に放出させた。有機溶液が完全に留去されるまで、上記異化産物を終夜減圧乾燥した。上記異化産物を２０％のアセトニトリル水溶液で再構成し、ＬＣ−ＭＳによって分析した。
【０５９９】
葉酸受容体α（ＦＲα）を発現するＫＢ細胞を５×Ｔ１５０組織培養プレート中で培養した。飽和量の、ＦＲαを標的とするｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ＃２−アミノオキシ−アセチル−ＭａｙＮＭＡ（「ＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ」としても知られる）複合体をＫＢ細胞と共に、５％のＣＯ２で緩衝し加湿したインキュベータ中、３７℃で２４時間インキュベートした。２４時間後に、細胞から排出された異化産物を含有する培地を採取し、プールして次のアッセイを行った。
【０６００】
４℃での終夜のインキュベーションによって、飽和量の抗メイタンシン抗体をタンパク質Ａ樹脂のスラリーに結合させた。１ｍｌの予め結合させたタンパク質Ａ／抗メイタンシン抗体複合体を２０ｍｌの培地と共に、エンドツーエンド回転器で数時間インキュベートした。上記樹脂を１０００ｒｐｍで緩徐に遠心分離し、上清をデカントした。上記メイタンシノイドの異化産物に結合したタンパク質Ａ／抗メイタンシン抗体樹脂をＰＢＳ（５×
）で洗浄して培地成分を除去した。アセトン抽出によって上記異化産物を有機相中に放出させた。有機溶液が完全に留去されるまで、上記異化産物を終夜減圧乾燥した。上記異化産物を２０％のアセトニトリル水溶液で再構成し、ＬＣ−ＭＳによって分析した。
ＭＳ分析
Ｗａｔｅｒｓ  ＬＣＴ  ＥＳＩ−ＴＯＦを用いたインタクト質量分析によって、ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２複合体の薬物分布プロファイルを特徴付けた。Ｗａｔｅｒｓ  ＱＴＯＦを用いたＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって、上記複合体のトリプシンによるペプチドマッピングを実施した（試料を、還元、アルキル化し、続いてトリプシン消化した）。Ｑ−Ｅｘａｃｔｉｖｅ高分解能質量分析計（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いたＵＨＰＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって細胞の異化産物を同定した。抽出イオンクロマトグラム（ＸＩＣ）を用いて、標的細胞の異化産物を同定しかつ特徴付けた。特徴的なメイシン（５４７ｍ／ｚ）及びＤＧＮ（２８６ｍ／ｚ）の質量シグネチャーを含む全ての異化産物種を同定した。
【０６０１】
ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤＧＮ４６２複合体及びＳｅｒｉＭａｂ−Ｍａｙ複合体の両方が、２４時間の処理の後に当該標的細胞から排出される異化産物を生成した。末端カルボン酸を含有するＤＧＮ及びメイタンシノイド代謝物は、抗体重鎖上のＮ末端セリン残基または隣接するバリン残基のタンパク質分解と整合する。これらの異化産物はＳｅｒｉＭａｂ複合体化プラットフォームに特有のものであるが、これは、システインまたはリシンにおける複合体化に由来する代謝物は本質的に双生イオン性であることが予期されるためである。ｓＤＧＮ４６２複合体は、ジスルフィドの開裂（ｓＤＧＮ４６２）及びチオール基の自己犠牲（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｏｎ）（ＤＧＮ−アニリン）と整合する更なる異化産物を生成した。これらの代謝物はまた、リシンで結合したＤＧＮ４６２複合体からも生成される。
実施例２２  バイスタンダー活性
９６穴プレート（Ｆａｌｃｏｎ、丸底）中で、５０μｌ／ウェルの複合体をそれぞれ、加熱不活性化した１０％のＦＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、０．１ｍｇ／ｍｌのゲンタマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）及びβＭＥ（Ｌｉｆｅ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で、１ｅ〜１０Ｍ及び４ｅ〜１０Ｍの濃度に希釈して、これを６通り行った。組換えＦＯＬＲ１（ＦＲ１＃１４）を発現するまたは発現ベクターを発現しない（親）３００．１９細胞（マウス）を血球計数器上で計数した。ＡＤＣまたは培地のみを含有するウェルに５０μｌ／ｍｌの１０００のＦＲ１＃１４細胞／ウェルを添加し、ＡＤＣまたは培地のみを含有するウェルに５０μｌ／ｍの２０００の親細胞／ウェルを添加し、ＡＤＣまたは培地のみを含有するウェルにＦＲ１＃１４細胞及び親細胞の両方を一緒に添加した。全てのプレートを５％のＣＯ２、３７℃のインキュベータ中で４日間インキュベートした。全容量は１５０μｌ／ウェルであった。インキュベーション後に、７５μｌ／ウェルのＣｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）の添加によって細胞生存率を分析し、３０分間現像した。発光計上で発光を読み取り、培地のみを含有するウェルにおけるバックグラウンドを全ての値から減じた。各細胞の処理の平均値の棒グラフをＧｒａｐｈ  Ｐａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いてグラフ化した。
【０６０２】
図１６に示すように、リシンまたはＮ末端セリンのいずれかを介して複合体化されたジスルフィドで結合したｓＤＧＮ４６２  ＡＤＣは、近位の抗原陰性細胞の強力なバイスタンダー殺傷を示す。
【０６０３】
セリンで結合したＤ８複合体についても同様の結果が観測される。図２７を参照されたい。
実施例２３  化合物Ｄ８の合成
【０６０４】
【化１５３】
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【０６０５】
ステップ１：ヒドロキシカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．４９０ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２２．３８ｍＬ）に溶解した。２−（３−ブロオプロピル）イソインドリン−１，３−ジオン（３ｇ、１１．１９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（３．０９ｇ、２２．３８ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物を室温で終夜撹拌した。これを冷水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機分を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で脱水し、粗製残渣をシリカゲル・フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配、０％〜４５％）によって精製して、化合物８ａを粘着性固体として得た（２．４１ｇ、収率６７％）。ＬＣＭＳ＝４．９９分（８分法）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．８６−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．７３−７．７７（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｂｓ，１Ｈ），３．９２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．８２（ｔ，２Ｈ，６．９Ｈｚ），２．０５−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）。
【０６０６】
【化１５４】
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【０６０７】
ステップ２：化合物８ａ（２．４１ｇ、７．５２ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（１８．８１ｍＬ）に溶解し、氷浴中で０℃に冷却した。新たに混合したＤＣＭ（９．４０ｍｌ）及びＴＦＡ（９．４０ｍｌ）の溶液を添加し、氷浴を取り外した。この反応物を室温で１時間撹拌し、ＤＣＭで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、脱水し、ろ過し、濃縮して化合物８ｂを得た（１．３２ｇ、収率８０％）。この粗製物質を更に精製することなく用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．８５−７．８２（ｍ，２Ｈ），７．７２−７．６９（ｍ，２Ｈ），３．７８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．７２（ｔ，２Ｈ，６．０Ｈｚ），１．９９−１．９３（ｍ，２Ｈ）。
【０６０８】
【化１５５】
2017529837.tif 000160
【０６０９】
ステップ３：化合物８ｂ（１００ｍｇ、０．４５４ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（４．５ｍＬ）に溶解し、ＴＥＡ（１２７μｌ、０．９０８ｍｍｏｌ）及び２，５−ジオキソピロリジン−１−イル（２−（トリメチルシリル）エチル）カーボネート（１７７ｍｇ、０．６８１ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物を室温で終夜撹拌した。この反応物をＤＣＭで希釈し、飽和食塩水で洗浄し、脱水し、ろ過し、留去した。粗製残渣をシリカゲル・フラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン、勾配、０％〜４０％）によって精製して、化合物８ｃを得た（１４８ｍｇ、収率８９％）。ＬＣＭＳ＝５．９１分（８分法）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．８６−７．８３（ｍ，２Ｈ），７．７３−７．６９（ｍ，２Ｈ），７．３９（ｂｓ，１Ｈ），４．２６−４．２０（ｍ，２Ｈ），３．９４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．８３（ｔ，２Ｈ，６．９Ｈｚ），２
．０６−１．９８（ｍ，２Ｈ），１．０５−０．９８（ｍ，２Ｈ），０．０４（ｓ，９Ｈ）。
【０６１０】
【化１５６】
2017529837.tif 000161
【０６１１】
ステップ４：化合物８ｃ（１４８ｍｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）をエタノール（２．７ｍＬ）に溶解し、完全に可溶となるまで撹拌した。ヒドラジン（６３．７μｌ、２．０３０ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物を、１時間で白色沈殿が急激に生成されるまで室温で撹拌した。この反応物をセライトに通してろ過し、追加のエタノールで濯いだ。ろ液を留去し、シリカゲル・フラッシュクロマトグラフィー（Ａ＝ＭｅＯＨ、Ｂ＝ＥｔＯＡｃ勾配、１００％〜１０％）によって精製した。生成物画分を質量分析によって検知し、留去して化合物８ｄを粘着性固体として得た（６７．５ｍｇ、収率７１％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００  ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ４．２７−４．２１（ｍ，２Ｈ），３．９８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），２．９２−２．８７（ｍ，２Ｈ），１．８５−１．７７（ｍ，２Ｈ），１．０６−０．９９（ｍ，２Ｈ），０．０４（ｓ，９Ｈ）。
【０６１２】
【化１５７】
2017529837.tif 000162
【０６１３】
ステップ５：（Ｓ）−２−（（（ベンジルオキシ）カルボニル）アミノ）プロパン酸（５ｇ、２２．４０ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）−２−アミノプロパン酸ｔｅｒｔ−ブチル塩酸塩（４．４８ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（４４．８ｍＬ）に溶解させた。ＥＤＣ・ＨＣｌ（４．７２ｇ、２４．６４ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３．４３ｇ、２２．４０ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．７５ｍＬ、５６．０ｍｍｏｌ）を添加した。この反応物をアルゴン下、室温で終夜撹拌した。この反応物をジクロロメタンで希釈し、次いで飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及び飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で脱水し、濃縮した。この粗製油状物をシリカゲル・クロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）によって精製して、化合物２ａを得た（６．７ｇ、収率８５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．３８−７．３１（ｍ，５Ｈ），６．５３−６．４２（ｍ，１Ｈ），５．４２−５．３３（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．４８−４．４１（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．２０（ｍ，１Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．３８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
【０６１４】
【化１５８】
2017529837.tif 000163
【０６１５】
ステップ６：化合物２ａ（６．７ｇ、１９．１２ｍｍｏｌ）をメタノール（６０．７ｍＬ）及び水（３．０３ｍＬ）に溶解した。この溶液をアルゴンで５分間パージした。パラジウム炭素（湿潤、１０％）（１．０１７ｇ、０．９５６ｍｍｏｌ）をゆっくりと添加した。この反応物を水素雰囲気下で終夜撹拌した。この溶液をセライトに通してろ過し、メタノールで濯ぎ、濃縮した。これをメタノール及びアセトニトリルで共沸化し、得られた油状物を直接高真空に載置し、化合物２ｂ（４．０２ｇ、収率９７％）を得、これを次のステップで直接用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．７８−７．６３（ｍ，１Ｈ），４．４９−４．４２（ｍ，１Ｈ），３．５５−３．５０（ｍ，１
Ｈ），１．７３（ｓ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．３９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．３６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
【０６１６】
【化１５９】
2017529837.tif 000164
【０６１７】
ステップ７：化合物２ｂ（４．０２ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ）及びアジピン酸モノメチル（３．０３ｍＬ、２０．４５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（６２．０ｍＬ）に溶解した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（３．９２ｇ、２０．４５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．８５ｇ、１８．５９ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（６．４９ｍＬ、３７．２ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で終夜撹拌した。この反応物をジクロロメタン／メタノール（１５０ｍＬ、５：１）で希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、及び飽和食塩水で洗浄した。これを硫酸ナトリウム上で脱水し、ろ過し、ストリッピングした。この化合物をアセトニトリル（５×）で共沸化し、次いで高真空で３５℃にてポンプで吸引し、化合物２ｃを得た（６．６６ｇ、収率１００％）。この粗製の物質を精製することなく、次のステップで用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ６．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．４４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．５２−４．４４（ｍ，１Ｈ），４．４３−４．３６（ｍ，１Ｈ），３．６５（ｓ，３Ｈ），２．３５−２．２９（ｍ，２Ｈ），２．２５−２．１８（ｍ，２Ｈ），１．７１−１．６０（ｍ，４Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．３６（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）。
【０６１８】
【化１６０】
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【０６１９】
ステップ８：化合物２ｃ（５．９１ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）を、ＴＦＡ（２８．６ｍＬ、３７２ｍｍｏｌ）及び脱イオン水（１．５ｍＬ）中、室温で３時間撹拌した。この反応混合物をアセトニトリルと共に濃縮し、高真空上に載置して粗製の化合物２ｄを粘着性固体として得た（５．８８ｇ、収率１００％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）：  δ  ７．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．８１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），４．６９−４．６０（ｍ，１Ｈ），４．５９−４．５１（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），２．４０−２．３３（ｍ，２Ｈ），２．３１−２．２４（ｍ，２Ｈ），１．７２−１．６３（ｍ，４Ｈ），１．５１−１．４５（ｍ，３Ｈ），１．４２−１．３７（ｍ，３Ｈ）。
【０６２０】
【化１６１】
2017529837.tif 000166
【０６２１】
ステップ９：化合物２ｄ（５．６ｇ、１８．５２ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン（１１８ｍＬ）及び無水メタノール（５８．８ｍＬ）に溶解した。（５−アミノ−１，３−フェニレン）ジメタノール（２．７０ｇ、１７．６４ｍｍｏｌ）及びＥＥＤＱ（８．７２ｇ、３５．３ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物を室温で終夜撹拌した。溶媒をストリッピングし、酢酸エチルを添加した。得られたスラリーをろ過し、酢酸エチルで洗浄し、減圧／Ｎ２下で乾燥して、化合物２ｅを得た（２．７９ｇ、収率３６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  ９．８２（ｓ，１Ｈ），８．０５，（ｄ，１Ｈ，Ｊ
＝９．２Ｈｚ），８．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．４６（ｓ，２Ｈ），６．９５（３，１Ｈ），５．２１−５．１２（ｍ，２Ｈ），４．４７−４．４２（ｍ，４Ｈ），４．４０−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．３３−４．２４（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），２．３３−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．１６−２．０９（ｍ，２Ｈ），１．５４−１．４６（ｍ，４Ｈ），１．３０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２２（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ）。
【０６２２】
【化１６２】
2017529837.tif 000167
【０６２３】
ステップ１０：化合物２ｅ（０．５２ｇ、１．１８９ｍｍｏｌ）及び四臭化炭素（１．１８３ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１１．８９ｍＬ）に溶解した。トリフェニルホスフィン（０．９３５ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物をアルゴン下で４時間撹拌した。この反応混合物をＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１０：１）で希釈し、水及び飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で脱水し、ろ過し、濃縮した。この粗製の物質をシリカゲル・クロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物２ｆ（２６２ｍｇ、収率３９％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）：  δ  １０．０１（ｓ，１Ｈ），８．１１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），８．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．６７（ｓ，２Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），４．７０−４．６４（ｍ，４Ｈ），４．４０−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３１−４．２３（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｓ，３Ｈ），２．３４−２．２６（ｍ，２Ｈ），２．１８−２．１０（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．４５（ｍ，４Ｈ），１．３１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）。
【０６２４】
【化１６３】
2017529837.tif 000168
【０６２５】
ステップ１１：ジブロミド化合物２ｆ及びＩＧＮ単量体化合物Ｉ−１をＤＭＦに溶解した。炭酸カリウムを添加し、室温で終夜撹拌した。この反応混合物に水を添加して生成物を沈殿させた。このスラリーを室温で５分間撹拌し、次いでろ過し、減圧／Ｎ２下で１時間乾燥した。この粗製の物質をシリカゲル・クロマトグラフィー（ジクロロメタン／メタノール）によって精製して、化合物２ｇを得た（３３６ｍｇ、収率７４％）。ＬＣＭＳ＝５．９１分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９９０．６（Ｍ＋１）＋。
【０６２６】
【化１６４】
2017529837.tif 000169
【０６２７】
ステップ１２：ジイミン化合物２ｇを１，２−ジクロロエタンに溶解した。この反応混合物にＮａＢＨ（Ａｃ）３を添加し、室温で１時間撹拌した。この反応物をＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチした。層を分離し、飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。この粗製の物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）によって精製して、化合物２ｈ（８５．５ｍｇ、収率２５％）を得た。ＬＣＭＳ＝６．６４分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９９２．６（Ｍ＋１）＋。
【０６２８】
【化１６５】
2017529837.tif 000170
【０６２９】
ステップ１３：メチルエステル化合物２ｈを１，２−ジクロロエタンに溶解した。この反応混合物にトリメチルスタンナノール（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｔａｎｎａｎｏｌ）を添加し、８０℃で終夜加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。水層を１ＭのＨＣｌでｐＨ約４に酸性化した。この混合物をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１０：１、３×２０ｍＬ）で抽出した。１つにまとめた有機層を飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４上で脱水し、濃縮した。この粗製の物質をシリカ充填物に通して化合物２ｉを得た（４８．８ｍｇ、収率８０％）。ＬＣＭＳ＝５．８９分（１５分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：９７８．６（Ｍ＋１）＋。
【０６３０】
【化１６６】
2017529837.tif 000171
【０６３１】
ステップ１４：化合物２ｉ（３０ｍｇ、０．０３１ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ（６１３μｌ）中に懸濁させた。この溶液が透明になるまで無水ＤＭＦを滴下によって添加した。化合物８ｄ（２１．５７ｍｇ、０．０９２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（２９．４ｍｇ、０．１５３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＡＰ（０．７４９ｍｇ、６．１３μｍｏｌ）を添加し、この反応物を室温で１時間撹拌した。これをＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １０：１で希釈し、次いで水洗した。水層をＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １０：１で抽出し、１つにまとめた有機分を脱水し、濃縮して化合物８ｅ（４９ｍｇ）を得、これを更に精製することなく用いた。ＬＣＭＳ＝５．９４分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１９４．４（Ｍ＋１）＋。
【０６３２】
【化１６７】
2017529837.tif 000172
【０６３３】
ステップ１５：化合物８ｅ（４９ｍｇ、０．０４１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（８２０μｌ）に溶解し、この反応物を氷浴中で０℃に冷却した。ＴＢＡＦ（２０５μｌ、０．２０５ｍｍｏｌ）を添加し、この反応物を１５分間撹拌し、その後氷浴を取り外した。これを室温で反応が完結するまで撹拌した。この反応物を０℃まで冷却し、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ  １０：１で抽出した。有機分を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで脱水し、留去した。この粗製の物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）によって精製して、化合物Ｄ８を得た（１７．６ｍｇ、２ステップで収率５４％）。ＬＣＭＳ＝５．１分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０５０．４（Ｍ＋１）＋。
実施例２４  化合物Ｄ９の合成
【０６３４】
【化１６８】
2017529837.tif 000173
【０６３５】
ステップ１：化合物９ａ（１７ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（３２８μｌ）に溶解した。化合物８ｄ（５．７６ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（５．７１μｌ、０．０３３ｍｍｏｌ）を室温で添加し、この反応物を反応が完結するまで撹拌した。これを１０：１  ＤＣＭ：ＭｅＯＨで希釈し、飽和食塩水で洗浄した。有機分を脱水し、濃縮して化合物９ｂを得、これを直接用いた。
【０６３６】
ステップ２：実施例２３における化合物Ｄ８と同様にして、化合物Ｄ９を調製した。この粗製の物質をＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル／水）によって精製して化合物Ｄ９を得た（５ｍｇ、２ステップで収率３１％）。ＬＣＭＳ＝５．６８分（８分法）。ＭＳ（ｍ／ｚ）：１０１２．５（Ｍ＋１）＋。
実施例２５  ｈｕＣＤ１２３−６抗体のＳｅｒｉＭａｂ複合体の調製
ａ）Ｎ末端での抗体複合体化−２ステップ法
ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．６／７Ｓ３抗体（図５に示すスキーム３中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液で処理した（５０当量、２５℃、３０分）。次いでこの混合物をＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０６３７】
得られた溶液を４−アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド］中１００ｍＭ）で処理し、１０％ｖ／ｖの共溶媒とした。続いてヘテロ二官能性リンカー１（スキーム３中の［３］、５当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０６３８】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペリジンエタンスルホン酸)、ｐＨ８．５バッファへとバッファ交換した。次にこの溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０％ｖ／ｖ）で調節し、２５℃で６時間、スルホン化ＤＧＮ４６２（ｓＤＧＮ４６２）（スキーム３、［５］、遊離チオール、５当量）で処理した。
【０６３９】
得られた複合体を、ＮＡＰろ過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、ｐＨ６．２の、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムの処方バッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １０，０００  ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃で４時間、同一のバッファ中で透析を実施した。
精製した複合体（スキーム３、［６］）は、抗体当たり２の結合したＤＧＮ４６２分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による）、＞９８％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜２％の遊離の薬物（アセトン沈殿させた逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び０．１８ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．６／７Ｓ３抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２１３３２０Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
ｂ）Ｎ末端での抗体複合体化−ＩＧＮの直接の結合
重鎖上のＮ末端セリンについて操作した、操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するｈｕＣＤ
１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ２抗体（図１７、スキーム４中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を、２５℃で３０分間、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）で処理した。次いでこの混合物をＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０６４０】
得られた溶液をｐ−フェニレンジアミン（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド］中１００ｍＭ）で処理し、１０％ｖ／ｖの共溶媒とした。続いてイン・シチュでスルホン化したＤ８（すなわちｓ−Ｄ８）（スキーム４、［３］、５モル当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０６４１】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ｐＨ６．２の、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロースのバッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １０，０００  ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃で４時間、同一のバッファ中で透析を実施した。
【０６４２】
精製した複合体（スキーム４、［４］）は、抗体当たり２の結合したＤ８分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による）、＞９６％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜３％の遊離の薬物（ＨＩＳＥＰ逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び１．４ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ２抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２１３３２０Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
【０６４３】
上述のイン・シチュでスルホン化したＤ８（すなわちｓＤ８）は以下の手順に従って調製した。凍結乾燥した白色固体のＤ８の試薬を、ＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）に溶解して、１０〜２０ｍＭの原液濃度の溶液とした。新たに調製した亜硫酸水素ナトリウム溶液（５００ｍＭの水溶液、５モル当量）を添加し、得られた溶液を２５℃で４〜６時間反応させて、その後４℃で１５時間の保持工程を行った。新たに調製した亜硫酸水素ナトリウム溶液のアリコート（５００ｍＭの水溶液、２モル当量）を導入し、２５℃で４時間反応させて、その後更に使用するまでの間−８０℃で保存した。
ｃ）Ｎ末端での抗体複合体化−ＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３またはＳ２に関する２ステッププロトコル
軽鎖上のＮ末端セリンについて操作したｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３（またはＳ２  −  抗体（Ａｂ）の略図はＳ３に関するものであるが、スキームはＳ２にも適用される）抗体（図１８、スキーム５中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を、２５℃で３０分間、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）で処理した。次いでこの混合物をＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０６４４】
得られた溶液を４−アミノフェネチルアルコール（ＤＭＡ［Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド］中１００ｍＭ）で処理し、１０％ｖ／ｖの共溶媒とした。続いてヘテロ二官能性リンカー１（スキーム５、［３］、５モル当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０６４５】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ＨＥＰＥＳ（４−（２
−ヒドロキシエチル）−１−ピペリジンエタンスルホン酸)、ｐＨ８．５バッファへとバッファ交換した。次にこの溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０％ｖ／ｖ）で調節し、２５℃で６時間、スルホン化Ｄ１（すなわちｓＤ１）（スキーム５、［５］、遊離チオール、５モル当量）で処理した。
【０６４６】
得られた複合体を、ＮＡＰろ過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、ｐＨ６．２の、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムの処方バッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １０，０００  ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃で４時間、同一のバッファ中で透析を実施した。
【０６４７】
精製した複合体（スキーム５、［６］）は、抗体当たり２．０の結合したｓＤ１の分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による）、＞９６％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜３％の遊離の薬物（アセトン沈殿させた逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び０．４ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ３抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２１３３２０Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
実施例２６  ４のＤＡＲを有する複合体を調製するためのＮ末端での抗体複合体化
（ａ）２ステップ法
重鎖及び軽鎖上のＮ末端セリンについて操作したｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ２Ｓ３抗体（図１９に示すスキーム６中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液で処理した（５０当量、２５℃、３０分）。次いでこの混合物をＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０６４８】
得られた溶液を、１０％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒を含有する反応槽中で、４−アミノフェネチルアルコールで処理して１０ｍＭの濃度とした。続いてリンカー１（スキーム６中の［３］、１０当量）を導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０６４９】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペリジンエタンスルホン酸)、ｐＨ８．５バッファへとバッファ交換した。次にこの溶液をＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒（１０％ｖ／ｖ）で調節し、２５℃で６時間、化合物Ａ（すなわちスルホン化ＤＧＮ４６２（ｓＤＧＮ４６２））（スキーム６、［５］、遊離チオール、１０当量）で処理した。
【０６５０】
得られた複合体を、ＮＡＰろ過カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、ｐＨ６．２の、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロース、０．０１％のＴｗｅｅｎ−２０、５０μＭの亜硫酸水素ナトリウムの処方バッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １０，０００  ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃で４時間、同一のバッファ中で透析を実施した。
【０６５１】
精製した複合体（スキーム６、［６］）は、抗体当たり４の結合した化合物Ａ分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による、図２０）、＞９３％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜２％の遊離の薬物（アセトン沈殿させた逆相ＨＰＬＣ分析に
よる）、及び０．１ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ２Ｓ３抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２０１４００Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
（ｂ）ＤＭｘの直接結合
操作されたＮ末端Ｓｅｒを含有するｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ２Ｓ３抗体（図２１Ａ、スキーム７中の［１］、ＰＢＳ中３ｍｇ／ｍＬ、ｐＨ７．４）を、２５℃で３０分間、５ｍＭの過ヨウ素酸ナトリウム水溶液（５０モル当量）で処理した。次いでこの混合物をＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ
Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、酢酸ナトリウムバッファ、ｐＨ５．０へとバッファ交換した。
【０６５２】
得られた溶液を、該反応槽には１０％ｖ／ｖのＤＭＡ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド）共溶媒を含有する反応槽中で、４−アミノフェネチルアルコールで処理して１０ｍＭの濃度とした。次いで、アミノオキシ−アセチル−ＭａｙＮＭＡ（スキーム７、［３］、１０モル当量）を続いて導入し、反応槽を密封して３７℃で２４時間インキュベートした。
【０６５３】
次いでこの混合物を、ＮＡＰ脱塩カラム（Ｉｌｌｕｓｔｒａ  Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５  ＤＮＡグレード、ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に通して、ｐＨ６．２の、２５０ｍＭのグリシン、１０ｍＭのヒスチジン、１％のスクロースのバッファへとバッファ交換した。Ｓｌｉｄｅ−ａ−Ｌｙｚｅｒ透析カセット（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  １０，０００  ＭＷＣＯ）を利用して、２５℃で４時間、同一のバッファ中で透析を実施した。
【０６５４】
精製した複合体（スキーム７、［４］）は、抗体当たり４の結合したＭａｙＮＭＡ分子の均一な平均値（Ｑ−ＴｏＦ質量分析による、図２１Ｂ）、＞９５％の単量体（サイズ排除クロマトグラフィーによる）、＜２％の遊離の薬物（ＨＩＳＥＰ逆相ＨＰＬＣ分析による）、及び０．２ｍｇ／ｍＬの最終的なタンパク質濃度（ｈｕＭｏｖ１９−ＮＴＳ２Ｓ３抗体に関するモル消衰係数ε２８０＝２０１４００Ｍ−１ｃｍ−１を用いたＵＶ−可視光による）を有することが判明した。
実施例２７  ｈｕＣＤ１２３−６抗体の部位特異的複合体のイン・ビトロでの細胞毒性
種々のＩＧＮ化合物を有するｈｕＣＤ１２３−６の部位特異的複合体（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８）の、ＣＤ１２３をその細胞表面上に発現する細胞を殺傷する能力を、イン・ビトロ細胞毒性アッセイを用いて、一致する抗体及びペイロード（ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２）を含むリシンで結合した複合体の上記能力と比較した。細胞毒性アッセイは以下のとおりに実行して分析した。
【０６５５】
上記細胞株を、細胞の供給元（ＡＴＣＣまたはＤＳＭＺ）によって推奨された培地中で培養した。１００μＬの上記培地中の２，０００〜１０，０００の上記細胞を、平底の９６穴プレートの各ウェルに添加した。細胞表面上のＦｃ受容体をブロックするために、上記培地に１００ｎＭのｃｈＫＴＩ抗体（同一のイソ型の抗体）を補充した。３倍での段階希釈を用いて複合体を培養培地へと希釈し、ウェル当たり１００μＬを添加した。ＣＤ１２３に依存しない細胞毒性の寄与を測定するために、いくつかのウェルには、上記被験複合体の前にＣＤ１２３をブロックする抗体（１００ｎＭのｃｈＣＤ１２３−６抗体）を添加した。各アッセイプレートには、細胞及び上記培地を含有するが複合体を含有しない対照ウェル、ならびに培地のみを含有するウェルが含まれていた。アッセイは、各データポイントに対して３通り実施した。上記プレートを、加湿した６％ＣＯ２のインキュベータ中、３７℃で４〜７日間インキュベートした。次いで、ＷＳＴ−８に基づくＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｉｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を用いて、各ウェル中の生存する細胞の相対的な数を測定した。初めに培地のバックグラウンド吸収について補正を行い、次いで対照ウェル（未処理の細胞）における値の平均値で各値を除算することによって、各ウェルにおける見掛けの細胞の生存率を算出した。細胞の生存率を複合体濃度に対して片対数プロットでプロットした。
【０６５６】
ｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１Ｓ２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８複合体は標的（ＣＤ１２３）結合を維持し、多数の細胞株に対して、少なくともリシンで結合したｈｕＣＤ１２３−６Ｒｖ１．１−Ｄ２複合体と同程度に活性であった。ＡＭＬ細胞株ＳＨＩ−１及びＨＮＴ−３４、ならびにＣＭＬ細胞株ＭＯＬＭ−１を用いた細胞毒性アッセイのいくつかの例を、それぞれ図２２Ａ〜２２Ｃに示す。両方の複合体が、ＳＨＩ−１細胞、ＨＮＴ−３４細胞、及びＭＯＬＭ−１細胞に対してそれぞれ、約０．０１ｎＭ、０．００２ｎＭ、及び０．０３ｎＭのＩＣ５０値を有して、用量依存的な形態で上記細胞を殺傷した。上記ＣＤ１２３抗原が未複合体化ｈｕＣＤ１２３−６抗体によってブロックされた場合には、上記複合体は上記細胞に対して多くても１００分の１の低い毒性であったことから、上記の殺傷はＣＤ１２３依存性であった。
【０６５７】
別の実験において、ＥＯＬ−１細胞において、リンカー１残基を有するｈｕＣＤ１２３−６−Ｇｖ４．７Ｓ３−ＳｅｒｉＭａｂ−ｓＤ１複合体（図１８を参照のこと）は、ｈｕＣＤ１２３−６Ｇｖ４．７Ｓ２（またはＳ３）−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８複合体と同様の効能を示す(図２４)。
【０６５８】
別の実験において、ｈｕＣＤ１２３抗体とＳｅｒで結合したＤＧＮ４６２化合物は、ＥＯＬ−１細胞に対して、より高いＤＡＲを有するリシンで結合したバージョンよりも３倍高い抗原特異的な効能を有することが見出された（図２５を参照のこと）。上記リシンで結合した複合体は２．９のＤＡＲを有し、一方Ｓｅｒで結合した複合体は２．０のＤＡＲを有する。対照的に、抗原陰性のナマルバ細胞を用いた場合には、リシンで結合した複合体及びセリンで結合した複合体の両方が有意により低い活性を示し、このことはＥＯＬ−１細胞における抗原特異的な活性を示している。
実施例２８  ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８複合体のイン・ビトロでの効能
ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８複合体（ｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８）のイン・ビトロでの効能を、実施例８に記載のものと同様のアッセイプロトコルを用いて、ＫＢ細胞（図２６Ａ）、石川細胞（ヒト子宮内膜腺癌細胞）（図２６Ｂ）、及びＨＥＣ−１Ｂ細胞（ヒト子宮内膜腺癌細胞）（図２６Ｃ）に対して試験した。
【０６５９】
図２６Ａ〜２６Ｃに示すように、ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８複合体は、リシン複合体（ｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２）と同等の抗原特異的な効能及び標的結合を有する。
【０６６０】
【化１６９】
2017529837.tif 000174
【０６６１】
実施例２９  オキシム結合を有するＳｅｒｉＭａｂ複合体のイン・ビトロ安定性
親和性捕捉ＬＣ−ＭＳ
市販のｘマグ−ストレプトアビジン・マイクロパーティクル（Ｂｉｏｃｈａｉｎ、ＣＡ）を洗浄バッファ（５０ｍＭのＴｒｉｓ・ＨＣｌ、０．１５ＭのＮａＣｌ、ｐＨ８．０）で２回洗浄し、元の容量となるように同一のバッファに再懸濁させた。次いで、上記ストレプトアビジン微粒子（２００μＬ）にビオチン標識したＦｃ−ＦＲα（２．６のビオチン／ＦＲα、約１１４μｇ）を添加し、室温で２時間回転振とうした。上記ビーズを洗浄バッファで３回洗浄し、元の容量になるように、０．４％のＴｗｅｅｎ  ２０を含む洗浄バッファに再懸濁させた。
【０６６２】
１０ｍｇ／ｋｇのｈｕＭＯＶ１９−ＮＴＳ＃２−アミノオキシ−アセチル−ＭａｙＮＭＡ複合体を投与したＣＤ−１マウスから、２分後、１日後、及び３日後に血清を採取し、これらを、最終濃度２０％の洗浄バッファ及び０．２％のＴｗｅｅｎ−２０と共にストレプトアビジン−ビオチン−ＦＲα−Ｆｃ粒子（試料当たり２００μＬ）に添加した。室温で２時間緩徐に振とうした後、上記樹脂を１ｍＬの洗浄バッファで３回洗浄し、５０μＬの０．１Ｍのクエン酸／クエン酸ナトリウム、ｐＨ３．０、５０％エチレングリコールを用いて溶離させた。精製されたｈｕＭＯＶ１９が複合体化された種を含有する溶離液を直ちに９μＬの１ＭのＴｒｉｓ・ＨＣｌ、ｐＨ８．５で中和し、次いで以前に説明されたとおりに（Ｌａｚａｒ，Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．２００５）のとおりにＳＥＣまたはＳＥＣ−ＬＣ／ＭＳによって分析した。
【０６６３】
図２８に示すように、上記オキシム結合はマウスの循環において３日にわたって安定である。Ｄ２と表示されたピークは未変化の複合体に相当する。Ａ及びＢと表示されたピークはオキシムの加水分解及びメイシンの脱離由来の開裂生成物である。少量のメイタンシン脱離もまた約１７日の半減期で観測され、これはリシンで結合したＡｂ−ＳＭＣＣ−ＤＭ１複合体で観測されている。
実施例３０  イン・ビボでの忍容性試験
雌のＣＤ−１マウス（７週齢）をＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより入手した。入手後、該動物を、試験を開始する前に８日間観察した。動物では、到着後または処置の前に、疾患または病気の徴候が確認されなかった。
【０６６４】
マウスを体重別に無作為に３群に振り分けた。体重は２５．６〜２４．１グラムの範囲であり、平均値は２５グラムであった。個々の体重に基づいて、８匹のマウスにｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２を１００及び１５０μｇ／ｋｇ（Ｄ２薬剤の用量）投与し、２匹のマウスにｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８を２００μｇ／ｋｇ（Ｄ８薬剤の用量）投与した。全ての複合体の投与は、２７ゲージ、１／２インチ針を装着した１．０ｍｌのシリンジを用いて静脈内投与で実施した。図２９に示す時点で個々の体重を測定し、その％表記の変化を時間（日）に対してグラフ化する。各線は１匹のマウスの体重変化を表す。瀕死であるかまたは体重減少が＞２０％となった動物は、その用量に対して忍容性がないと定義されることから、屠殺した。
【０６６５】
図２９に示すように、上記リシンで結合したｈｕＭＯＶ１９−Ｄ２は約１００μｇ／ｋｇの最大耐用量（ＭＴＤ）を有する一方、上記セリンで結合した複合体ｈｕＭＯＶ１９−ＳｅｒｉＭａｂ−Ｄ８は、２００μｇ／ｋｇで十分な忍容性があり、２週間にわたって体重減少の徴候がほとんど確認されなかった。
実施例３１  化合物Ｄ１１の合成
【０６６６】
【化１７０】
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【０６６７】
ＮＨＳエステル１１ａ（１０．５ｍｇ、９．４７μｍｏｌ）をＤＭＦ（０．３１６ｍＬ）に溶解した。この溶液に室温でヒドラジン（１．２μＬ、３８μｍｏｌ）を添加し、２時間撹拌した。この粗製の反応混合物を直接ＲＰＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、ＣＨ３ＣＮ／Ｈ２Ｏ、勾配、４０％〜５５％）によって精製して、ヒドラジドＤ１１を白色固体として得た（６．５ｍｇ、収率６８％）。ＬＣＭＳ＝４．９２３分（８分法）。質量分析  実測値（ＥＳＩ＋）：９９２．７０（Ｍ＋Ｈ）。
実施例３２
ｈｕＭＯＶ１９ＮＴＳ２抗体のｓＤ１１またはｓＤ１との複合体は、実施例２５に記載の類似の手順を用いて調製することができる（図３０、３１Ａ及び３１Ｂを参照のこと）。
【０６６８】
本明細書に引用される全ての刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、及び寄託番号／データベース配列（ポリヌクレオチド配列及びポリペプチド配列の両方を含む）は、それぞれ個々の刊行物、特許、特許出願、インターネットサイト、または寄託番号／データベース配列が、具体的かつ個々に示されて、参照によりそのように援用されるのと同じ程度で、全ての目的に対してそれらの全体が参照により本明細書中に援用される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１２Ｃ】
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【図１２Ｄ】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１Ａ】
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【図２１Ｂ】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２２Ｃ】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２６Ｃ】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１Ａ】
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【図３１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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