(57)【要約】ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を用いて、癌等の病的状態の治療のための併用療法が本明細書に提供される。【選択図】図４Ｂ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における癌の治療方法であって、前記個体に、（ａ）ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量が、前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性の期間を増大させる及び／または癌耐性の発生を遅らせるのに有効である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量が、前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性を増大させる及び／または感受性を回復させるのに有効である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
癌細胞の治療方法であって、前記癌細胞が、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤による治療に対して耐性があり、前記個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項５】
個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対して耐性がある癌の治療方法であって、前記個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項６】
Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる及び／または感受性を回復させる方法であって、前記個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項７】
個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させる方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項８】
個体においてＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を有する癌の発生を遅らせる及び／または防止する方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項９】
Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を発生する可能性が増大している癌を患う個体の治療方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項１０】
癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項１１】
癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤の感受性の期間を延ばす方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項１２】
癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤への応答の持続時間を延ばす方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、前記方法。
【請求項１３】
前記癌が、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、乳癌、または黒色腫である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が、上皮間葉移行を経ている、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤が、抗体阻害剤、低分子阻害剤、結合ポリペプチド阻害剤、及び／またはポリヌクレオチド拮抗剤である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤がＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤が、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤が結合ポリペプチド阻害剤であり、前記結合ポリペプチド阻害剤が、Ｆｃに結合するＦＧＦＲの細胞外ドメインの領域を含む、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤が低分子であり、前記低分子が、Ｎ−［２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ］−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素またはその薬学的に許容される塩である、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤が抗ＦＧＦＲ１抗体である、請求項１５〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤が、Ｎ−（３−｛［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］カルボニル｝−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミドまたはその薬学的に許容される塩である、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び前記Ｂ−ｒａｆ拮抗剤が相乗効果を提供する、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２０１４年６月１３日に出願された米国仮特許出願第６２／０１１，８５４号の利益を主張し、この開示は、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を用いて、癌等の病的状態の治療のための併用療法が本明細書に提供される。
【背景技術】
【０００３】
癌は、依然としてヒトの健康への最も致命的な脅威のうちの１つである。米国では、癌は、毎年ほぼ１３０万人の新たな患者を侵し、心疾患に続く２番目に多い死因であり、それは、４件の死亡に対して約１の割合を占める。例えば、乳癌は、２番目に多い癌の形態であり、米国女性の間で２番目に多い致死癌である。癌は、５年以内に１番多い死因として心臓血管疾患を超え得ることも予想される。固形腫瘍は、それらの死の大部分に関与している。ある種の癌の薬剤療法において大幅な進歩があるが、すべての癌における全般的な５年の生存率は、過去２０年において約１０％のみ改善された。癌、または悪性腫瘍は、抑制されていない様式で転移し、急速に成長し、適時検出及び治療を非常に困難にする。
【０００４】
癌薬剤に対する耐性の比較的早い獲得は依然として、功を奏する癌治療への主な障害となっている。かかる薬剤耐性に対する分子的基盤を明らかにする相当な努力により、薬剤排出、薬剤結合が不十分な、標的の突然変異体の獲得、代わりとなる生存経路の関与、及びエピジェネティックな変化を含む種々の機構が明らかとなっている）。例えば、ＲＡＦ阻害剤は、悪性黒色腫に含まれるＢ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ突然変異体を標的とするために使用されるが、それらの臨床的成功は、獲得耐性によって減衰される。したがって、新規の治療方法が、癌細胞集団内での異質性及び薬剤治療に耐性を示す癌細胞の発生に上手く対処するために必要とされている。
【発明の概要】
【０００５】
ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を用いて、併用療法が、本明細書に提供される。特定の実施形態では、併用療法は、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を使用する。
【０００６】
特に、個体に、（ａ）ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性の期間を増大させる及び／または癌耐性の発生を遅らせるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させるのに有効である。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、増大した有効性に有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、応答（例えば完全寛解）を増大させるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性を増大させる及び／または感受性を回復させるのに有効である。
【０００７】
癌細胞は、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤による治療に対して耐性があり、個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、癌細胞の治療方法もまた、本明細書に提供される。更に、個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を有する癌の治療方法が、本明細書に提供される。
【０００８】
個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる及び／または感受性を回復させる方法が、本明細書に提供される。
【０００９】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させる方法もまた、本明細書に提供される。
【００１０】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含み、癌治療が、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、有効性を増大させる、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。
【００１１】
更に、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体においてＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌耐性の発生を遅らせる及び／または防止する方法が、本明細書に提供される。
【００１２】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を発生する可能性が増大している癌を患う個体の治療方法が、本明細書に提供される。
【００１３】
更に、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる方法が、本明細書に提供される。
【００１４】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性の期間を延ばす方法もまた、本明細書に提供される。
【００１５】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する応答の持続時間を延ばす方法が、本明細書に提供される。
【００１６】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、抗体阻害剤、低分子阻害剤、結合ポリペプチド阻害剤、及び／またはポリヌクレオチド拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、結合ポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチド阻害剤は、Ｆｃドメインに結合するＦＧＦＲの細胞外ドメインの領域（例えば、免疫グロブリン（ｉｍｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）ヒンジ及びＦｃドメインに結合するＦＧＦＲの細胞外ドメインの領域）を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態ではＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、抗体である。
【００１７】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１に結合する、及び／またはそれを阻害するだけである。
【００１８】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、低分子は、Ｎ−［２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ］−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、低分子は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、及び／またはＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ抗体である。
【００１９】
いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬＸ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ベムラフェニブ、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。更なる実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブである。更なる実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ＧＳＫ２１１８４３６である。Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。
【００２０】
いくつかの実施形態では、患者の癌は、Ｂ−ｒａｆのバイオマーカーを発現することが示されている。Ｂ−ｒａｆのバイオマーカーは、突然変異体Ｂ−ｒａｆであってもよい。突然変異体Ｂ−ｒａｆは、構成的に活性化されたＢ−ｒａｆである。いくつかの実施形態では、突然変異体Ｂ−ｒａｆは、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００である。Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅであってもよい。突然変異体Ｂ−ｒａｆの非限定的な例となる一覧は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｋ（ＧＴＧ＞ＡＡＧ）、Ｖ６００Ｒ（ＧＴＧ＞ＡＧＧ）、Ｖ６００Ｅ（ＧＴＧ＞ＧＡＡ）、及び／またはＶ６００Ｄ（ＧＴＧ＞ＧＡＴ）である。いくつかの実施形態では、突然変異体Ｂ−ｒａｆポリペプチドが検出される。いくつかの実施形態では、突然変異体Ｂ−ｒａｆ核酸が検出される。「Ｖ６００Ｅ」とは、Ｂ−ｒａｆのアミノ酸位置６００においてバリンに対してグルタミンの置換をもたらすヌクレオチド位置１７９９においてＢ−ＲＡＦ（Ｔ＞Ａ）の突然変異体を指す。「Ｖ６００Ｅ」はまた、前の番号付けシステムの下で「Ｖ５９９Ｅ」（１７９６Ｔ＞Ａ）としても知られている（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：３３６２−３３６８，２００３）。
【００２１】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）ＦＧＦＲ１拮抗剤、及び（ｂ）Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性の期間を増大させる及び／または癌耐性の発生を遅らせるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させるのに有効である。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、増大した有効性に有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、応答（例えば完全寛解）を増大させるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性を増大させる及び／または感受性を回復させるのに有効である。
【００２２】
特定の実施形態では、癌細胞は、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤による治療に対して耐性があり、個体に、有効量のＦＧＦＲ１拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、癌細胞の治療方法もまた、本明細書に提供される。更に、個体に、有効量のＦＧＦＲ１拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を有する癌の治療方法が、本明細書に提供される。
【００２３】
特定の実施形態では、個体に、有効量のＦＧＦＲ１拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる、及び／または感受性を回復させる方法が、本明細書に提供される。
【００２４】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲ１拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させる方法が、本明細書に提供される
【００２５】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含み、癌治療が、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、有効性を増大させる、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。
【００２６】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌耐性の発生を遅らせる及び／または防止する方法が、本明細書に提供される。
【００２７】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を発生する可能性が増大している癌を患う個体の治療方法が、本明細書に提供される。
【００２８】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる方法が、本明細書に提供される。
【００２９】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性の期間を延長させる方法もまた、本明細書に提供される。
【００３０】
特定の実施形態では、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する応答の持続時間を延ばす方法が、本明細書に提供される。
【００３１】
いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬＸ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ベムラフェニブ、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。更なる実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブである。更なる実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ＧＳＫ２１１８４３６である。Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。
【００３２】
いずれかの方法における特定の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｓａｎｋｙｏ）である。
【００３３】
いずれかの方法における特定の実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗体阻害剤、低分子阻害剤、結合ポリペプチド阻害剤、及び／またはポリヌクレオチド拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、結合ポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチド阻害剤は、Ｆｃドメインに結合するＦＧＦＲ１の細胞外ドメインの領域（例えば、免疫グロブリン（ｉｍｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）ヒンジ及びＦｃドメインに結合するＦＧＦＲ１の細胞外ドメインの領域）を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗体である。
【００３４】
特定の実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、低分子は、Ｎ−［２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ］−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、低分子は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、及び／またはＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７）である。
【００３５】
特定の実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１抗体である。
【００３６】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１に結合する、及び／またはそれを阻害するだけである。
【００３７】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１と特異的に結合し、いかなる他のＦＧＦＲポリペプチドとも結合しない抗ＦＧＦＲ１抗体である。
【００３８】
Ｂ−ｒａｆ拮抗剤及びＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤が、同時に投与されてもよい。Ｂ−ｒａｆ拮抗剤及びＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤が、逐次的に投与されてもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤の前に投与される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤の前に投与される。
【００３９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、肺癌はＮＳＣＬＣである。いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。いくつかの実施形態では、癌はＨＥＲ２＋乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、上皮間葉移行を経ている。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１Ａ】図１Ａ〜Ｄ。腫瘍細胞及び／または腫瘍微環境によって分泌される因子は、細胞表面受容体の活性化を通して薬剤耐性の一因となる。Ａ、１０個の黒色腫細胞株にわたる４４７個の分泌因子のスクリーニングは、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＮＲＧ１、及びＥＧＦがＢ−ｒａｆ及びＭＥＫ拮抗剤に対して耐性に貢献することを示した。Ｂ、黒色腫細胞株に示されるように、ＦＧＦ２、ＨＧＦ、及びＮＲＧ１は、最も広範にかつ強力にＢ−ｒａｆ−及びＭＥＫ拮抗剤に対する耐性から腫瘍細胞を救助した（Ｒ＝５０〜１００％の救助、ＰＲ＝２５〜５０％の救助）。Ｃ、Ｍｅｔ、ＦＧＦＲ、及びＥＲＢＢ受容体を標的とする低分子阻害剤は、リガンドに媒介される耐性が、同族受容体に特異的であることを示す。Ｄ、ＰＬＸ４０３２に対する耐性を促進する分泌された成長因子は、ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋ経路を再活性化させる。ＦＧＦ２によるＭＡＰＫ、ＨＧＦによるＭＡＰＫ及びＡＫＴ、ならびにＮＲＧ１及びＳＣＦによるＡＫＴの活性化が、ＰＬＸ４０３２の存在下、６２４  ＭＥＬ細胞に示される。治療は、５μＭのＰＬＸ４０３２で２４時間、及び５０ｎｇ．ｍＬのＦＧＦ２、ＨＧＦ、ＮＲＧＢ１、またはＳＣＦで１０分間であった。
【図１Ｂ】図１Ａ〜Ｄ。腫瘍細胞及び／または腫瘍微環境によって分泌される因子は、細胞表面受容体の活性化を通して薬剤耐性の一因となる。Ａ、１０個の黒色腫細胞株にわたる４４７個の分泌因子のスクリーニングは、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＮＲＧ１、及びＥＧＦがＢ−ｒａｆ及びＭＥＫ拮抗剤に対して耐性に貢献することを示した。Ｂ、黒色腫細胞株に示されるように、ＦＧＦ２、ＨＧＦ、及びＮＲＧ１は、最も広範にかつ強力にＢ−ｒａｆ−及びＭＥＫ拮抗剤に対する耐性から腫瘍細胞を救助した（Ｒ＝５０〜１００％の救助、ＰＲ＝２５〜５０％の救助）。Ｃ、Ｍｅｔ、ＦＧＦＲ、及びＥＲＢＢ受容体を標的とする低分子阻害剤は、リガンドに媒介される耐性が、同族受容体に特異的であることを示す。Ｄ、ＰＬＸ４０３２に対する耐性を促進する分泌された成長因子は、ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋ経路を再活性化させる。ＦＧＦ２によるＭＡＰＫ、ＨＧＦによるＭＡＰＫ及びＡＫＴ、ならびにＮＲＧ１及びＳＣＦによるＡＫＴの活性化が、ＰＬＸ４０３２の存在下、６２４  ＭＥＬ細胞に示される。治療は、５μＭのＰＬＸ４０３２で２４時間、及び５０ｎｇ．ｍＬのＦＧＦ２、ＨＧＦ、ＮＲＧＢ１、またはＳＣＦで１０分間であった。
【図１Ｃ】図１Ａ〜Ｄ。腫瘍細胞及び／または腫瘍微環境によって分泌される因子は、細胞表面受容体の活性化を通して薬剤耐性の一因となる。Ａ、１０個の黒色腫細胞株にわたる４４７個の分泌因子のスクリーニングは、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＮＲＧ１、及びＥＧＦがＢ−ｒａｆ及びＭＥＫ拮抗剤に対して耐性に貢献することを示した。Ｂ、黒色腫細胞株に示されるように、ＦＧＦ２、ＨＧＦ、及びＮＲＧ１は、最も広範にかつ強力にＢ−ｒａｆ−及びＭＥＫ拮抗剤に対する耐性から腫瘍細胞を救助した（Ｒ＝５０〜１００％の救助、ＰＲ＝２５〜５０％の救助）。Ｃ、Ｍｅｔ、ＦＧＦＲ、及びＥＲＢＢ受容体を標的とする低分子阻害剤は、リガンドに媒介される耐性が、同族受容体に特異的であることを示す。Ｄ、ＰＬＸ４０３２に対する耐性を促進する分泌された成長因子は、ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋ経路を再活性化させる。ＦＧＦ２によるＭＡＰＫ、ＨＧＦによるＭＡＰＫ及びＡＫＴ、ならびにＮＲＧ１及びＳＣＦによるＡＫＴの活性化が、ＰＬＸ４０３２の存在下、６２４  ＭＥＬ細胞に示される。治療は、５μＭのＰＬＸ４０３２で２４時間、及び５０ｎｇ．ｍＬのＦＧＦ２、ＨＧＦ、ＮＲＧＢ１、またはＳＣＦで１０分間であった。
【図１Ｄ】図１Ａ〜Ｄ。腫瘍細胞及び／または腫瘍微環境によって分泌される因子は、細胞表面受容体の活性化を通して薬剤耐性の一因となる。Ａ、１０個の黒色腫細胞株にわたる４４７個の分泌因子のスクリーニングは、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＮＲＧ１、及びＥＧＦがＢ−ｒａｆ及びＭＥＫ拮抗剤に対して耐性に貢献することを示した。Ｂ、黒色腫細胞株に示されるように、ＦＧＦ２、ＨＧＦ、及びＮＲＧ１は、最も広範にかつ強力にＢ−ｒａｆ−及びＭＥＫ拮抗剤に対する耐性から腫瘍細胞を救助した（Ｒ＝５０〜１００％の救助、ＰＲ＝２５〜５０％の救助）。Ｃ、Ｍｅｔ、ＦＧＦＲ、及びＥＲＢＢ受容体を標的とする低分子阻害剤は、リガンドに媒介される耐性が、同族受容体に特異的であることを示す。Ｄ、ＰＬＸ４０３２に対する耐性を促進する分泌された成長因子は、ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋ経路を再活性化させる。ＦＧＦ２によるＭＡＰＫ、ＨＧＦによるＭＡＰＫ及びＡＫＴ、ならびにＮＲＧ１及びＳＣＦによるＡＫＴの活性化が、ＰＬＸ４０３２の存在下、６２４  ＭＥＬ細胞に示される。治療は、５μＭのＰＬＸ４０３２で２４時間、及び５０ｎｇ．ｍＬのＦＧＦ２、ＨＧＦ、ＮＲＧＢ１、またはＳＣＦで１０分間であった。
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｅ。細胞株（「ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ」）は、ベムラフィエニブ（ｖｅｍｕｒａｆｉｅｎｉｂ）に対して耐性があるように操作された。Ａ、ＦＧＦＲ１発現に対してプローブされた１１個の細胞株の免疫ブロットの画像。Ｂ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＤＭＳＯプロットに示されるように、５μＭのベムラフェニブ（すなわち、「ＰＬＸ」）によって影響を受けないが、細胞株は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（すなわち、ＢＧＪ３９８、ＰＤ１７３０７４、及びＡＰ２４５３４）と組み合わされた５μＭのベムラフェニブによって影響を受ける。したがって、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＦＧＦＲを阻害することによってベムラフェニブに対して再感作されたことが見出された。Ｃ、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株と比較して、親ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞株におけるｐｇ／ｍＬのＦＧＦＲ２のプロットは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株がＦＧＦ２の増大した分泌によって特徴付けられることを示す。Ｄ及びＥ、ＲＮＡｉのノックダウン及び５μＭのＰＬＸ４０３２のスクリーニングは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株のベムラフェニブ耐性がＦＧＦＲ１依存性であり、ＦＧＦＲ１／ＦＧＦ２によって促されることを示唆している。
【図２Ｂ】図２Ａ〜Ｅ。細胞株（「ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ」）は、ベムラフィエニブ（ｖｅｍｕｒａｆｉｅｎｉｂ）に対して耐性があるように操作された。Ａ、ＦＧＦＲ１発現に対してプローブされた１１個の細胞株の免疫ブロットの画像。Ｂ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＤＭＳＯプロットに示されるように、５μＭのベムラフェニブ（すなわち、「ＰＬＸ」）によって影響を受けないが、細胞株は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（すなわち、ＢＧＪ３９８、ＰＤ１７３０７４、及びＡＰ２４５３４）と組み合わされた５μＭのベムラフェニブによって影響を受ける。したがって、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＦＧＦＲを阻害することによってベムラフェニブに対して再感作されたことが見出された。Ｃ、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株と比較して、親ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞株におけるｐｇ／ｍＬのＦＧＦＲ２のプロットは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株がＦＧＦ２の増大した分泌によって特徴付けられることを示す。Ｄ及びＥ、ＲＮＡｉのノックダウン及び５μＭのＰＬＸ４０３２のスクリーニングは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株のベムラフェニブ耐性がＦＧＦＲ１依存性であり、ＦＧＦＲ１／ＦＧＦ２によって促されることを示唆している。
【図２Ｃ】図２Ａ〜Ｅ。細胞株（「ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ」）は、ベムラフィエニブ（ｖｅｍｕｒａｆｉｅｎｉｂ）に対して耐性があるように操作された。Ａ、ＦＧＦＲ１発現に対してプローブされた１１個の細胞株の免疫ブロットの画像。Ｂ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＤＭＳＯプロットに示されるように、５μＭのベムラフェニブ（すなわち、「ＰＬＸ」）によって影響を受けないが、細胞株は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（すなわち、ＢＧＪ３９８、ＰＤ１７３０７４、及びＡＰ２４５３４）と組み合わされた５μＭのベムラフェニブによって影響を受ける。したがって、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＦＧＦＲを阻害することによってベムラフェニブに対して再感作されたことが見出された。Ｃ、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株と比較して、親ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞株におけるｐｇ／ｍＬのＦＧＦＲ２のプロットは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株がＦＧＦ２の増大した分泌によって特徴付けられることを示す。Ｄ及びＥ、ＲＮＡｉのノックダウン及び５μＭのＰＬＸ４０３２のスクリーニングは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株のベムラフェニブ耐性がＦＧＦＲ１依存性であり、ＦＧＦＲ１／ＦＧＦ２によって促されることを示唆している。
【図２Ｄ】図２Ａ〜Ｅ。細胞株（「ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ」）は、ベムラフィエニブ（ｖｅｍｕｒａｆｉｅｎｉｂ）に対して耐性があるように操作された。Ａ、ＦＧＦＲ１発現に対してプローブされた１１個の細胞株の免疫ブロットの画像。Ｂ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＤＭＳＯプロットに示されるように、５μＭのベムラフェニブ（すなわち、「ＰＬＸ」）によって影響を受けないが、細胞株は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（すなわち、ＢＧＪ３９８、ＰＤ１７３０７４、及びＡＰ２４５３４）と組み合わされた５μＭのベムラフェニブによって影響を受ける。したがって、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＦＧＦＲを阻害することによってベムラフェニブに対して再感作されたことが見出された。Ｃ、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株と比較して、親ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞株におけるｐｇ／ｍＬのＦＧＦＲ２のプロットは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株がＦＧＦ２の増大した分泌によって特徴付けられることを示す。Ｄ及びＥ、ＲＮＡｉのノックダウン及び５μＭのＰＬＸ４０３２のスクリーニングは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株のベムラフェニブ耐性がＦＧＦＲ１依存性であり、ＦＧＦＲ１／ＦＧＦ２によって促されることを示唆している。
【図２Ｅ】図２Ａ〜Ｅ。細胞株（「ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ」）は、ベムラフィエニブ（ｖｅｍｕｒａｆｉｅｎｉｂ）に対して耐性があるように操作された。Ａ、ＦＧＦＲ１発現に対してプローブされた１１個の細胞株の免疫ブロットの画像。Ｂ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＤＭＳＯプロットに示されるように、５μＭのベムラフェニブ（すなわち、「ＰＬＸ」）によって影響を受けないが、細胞株は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（すなわち、ＢＧＪ３９８、ＰＤ１７３０７４、及びＡＰ２４５３４）と組み合わされた５μＭのベムラフェニブによって影響を受ける。したがって、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＦＧＦＲを阻害することによってベムラフェニブに対して再感作されたことが見出された。Ｃ、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株と比較して、親ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞株におけるｐｇ／ｍＬのＦＧＦＲ２のプロットは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株がＦＧＦ２の増大した分泌によって特徴付けられることを示す。Ｄ及びＥ、ＲＮＡｉのノックダウン及び５μＭのＰＬＸ４０３２のスクリーニングは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株のベムラフェニブ耐性がＦＧＦＲ１依存性であり、ＦＧＦＲ１／ＦＧＦ２によって促されることを示唆している。
【図３Ａ】図３Ａ〜Ｂ。ＦＧＦＲ阻害は、Ｖｅｍ耐性細胞の増生を防ぐ。Ａ、インビトロ研究は、３つの癌細胞株におけるベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２）及びＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（ＢＧＪ３９８）の相乗効果を示した。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞は、ベムラフェニブ及びＢＧＪ３９８単独による治療に対して最小応答を示すが、ベムラフェニブ及びＢＧＪ３９８の併用治療に対して高い応答を示す。ＳＫ−ＭＥＬ−３及びＳＫ−ＭＥＬ−２４細胞株は、ＢＧＪ９８０と組み合わせられる場合に、ＰＬＸ４０３２に対して増大した応答を示す。Ｂ、選択タンパク質の発現パターンは、ベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２）、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（ＮＶ−ＢＧＪ３９８）、及び／またはＦＧＦ２の存在下で、ウェスタンブロット上に示される。
【図３Ｂ】図３Ａ〜Ｂ。ＦＧＦＲ阻害は、Ｖｅｍ耐性細胞の増生を防ぐ。Ａ、インビトロ研究は、３つの癌細胞株におけるベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２）及びＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（ＢＧＪ３９８）の相乗効果を示した。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞は、ベムラフェニブ及びＢＧＪ３９８単独による治療に対して最小応答を示すが、ベムラフェニブ及びＢＧＪ３９８の併用治療に対して高い応答を示す。ＳＫ−ＭＥＬ−３及びＳＫ−ＭＥＬ−２４細胞株は、ＢＧＪ９８０と組み合わせられる場合に、ＰＬＸ４０３２に対して増大した応答を示す。Ｂ、選択タンパク質の発現パターンは、ベムラフェニブ（ＰＬＸ４０３２）、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（ＮＶ−ＢＧＪ３９８）、及び／またはＦＧＦ２の存在下で、ウェスタンブロット上に示される。
【図４Ａ】図４Ａ〜Ｃ。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、インビボでＦＧＦＲ媒介性ベムラフェニブ耐性を有する。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞（親細胞株）は、ベムラフェニブに対して感受性がある。Ｂ、ベムラフェニブのＮＶＰ−ＢＧＪ３９８との組み合わせは、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ腫瘍において強力な有効性を示す。Ｃ、ＮＶＰ−ＢＧＪ３９８による治療終了後のＬＯＸ−ＩＭＶＩ（元々、ベムラフェニブに感受性がある）腫瘍の再出現は、ＦＧＦＲ及びＢ−ｒａｆを同時に標的化すること（すなわち、ＢＧＪ３９８及びベムラフェニブによる同時治療）によって防止することができる。
【図４Ｂ】図４Ａ〜Ｃ。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、インビボでＦＧＦＲ媒介性ベムラフェニブ耐性を有する。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞（親細胞株）は、ベムラフェニブに対して感受性がある。Ｂ、ベムラフェニブのＮＶＰ−ＢＧＪ３９８との組み合わせは、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ腫瘍において強力な有効性を示す。Ｃ、ＮＶＰ−ＢＧＪ３９８による治療終了後のＬＯＸ−ＩＭＶＩ（元々、ベムラフェニブに感受性がある）腫瘍の再出現は、ＦＧＦＲ及びＢ−ｒａｆを同時に標的化すること（すなわち、ＢＧＪ３９８及びベムラフェニブによる同時治療）によって防止することができる。
【図４Ｃ】図４Ａ〜Ｃ。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、インビボでＦＧＦＲ媒介性ベムラフェニブ耐性を有する。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞（親細胞株）は、ベムラフェニブに対して感受性がある。Ｂ、ベムラフェニブのＮＶＰ−ＢＧＪ３９８との組み合わせは、ベムラフェニブ耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ腫瘍において強力な有効性を示す。Ｃ、ＮＶＰ−ＢＧＪ３９８による治療終了後のＬＯＸ−ＩＭＶＩ（元々、ベムラフェニブに感受性がある）腫瘍の再出現は、ＦＧＦＲ及びＢ−ｒａｆを同時に標的化すること（すなわち、ＢＧＪ３９８及びベムラフェニブによる同時治療）によって防止することができる。
【図５Ａ】図５Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ１は、黒色腫におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、６２４  ＭＥＬ細胞株におけるＦＧＦＲサブタイプのｓｉＲＮＡノックダウン。Ｂ、７つの細胞株におけるｓｉＲＮＡを標的とするＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１／４、及びＦＧＦＲ２／３の欠失を示すチャート。Ｃ、ＦＧＦＲ１発現は、Ｖ６００Ｅ  Ｂ−ｒａｆ突然変異体を有する黒色腫（ｎ＝４９）において増大している。Ｄ、ＦＧＦＲ１は、未知のＢ−ｒａｆ突然変異体のＴＣＧＡ黒色腫試料（ｎ＝２４７）において増大している。
【図５Ｂ】図５Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ１は、黒色腫におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、６２４  ＭＥＬ細胞株におけるＦＧＦＲサブタイプのｓｉＲＮＡノックダウン。Ｂ、７つの細胞株におけるｓｉＲＮＡを標的とするＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１／４、及びＦＧＦＲ２／３の欠失を示すチャート。Ｃ、ＦＧＦＲ１発現は、Ｖ６００Ｅ  Ｂ−ｒａｆ突然変異体を有する黒色腫（ｎ＝４９）において増大している。Ｄ、ＦＧＦＲ１は、未知のＢ−ｒａｆ突然変異体のＴＣＧＡ黒色腫試料（ｎ＝２４７）において増大している。
【図５Ｃ】図５Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ１は、黒色腫におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、６２４  ＭＥＬ細胞株におけるＦＧＦＲサブタイプのｓｉＲＮＡノックダウン。Ｂ、７つの細胞株におけるｓｉＲＮＡを標的とするＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１／４、及びＦＧＦＲ２／３の欠失を示すチャート。Ｃ、ＦＧＦＲ１発現は、Ｖ６００Ｅ  Ｂ−ｒａｆ突然変異体を有する黒色腫（ｎ＝４９）において増大している。Ｄ、ＦＧＦＲ１は、未知のＢ−ｒａｆ突然変異体のＴＣＧＡ黒色腫試料（ｎ＝２４７）において増大している。
【図５Ｄ】図５Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ１は、黒色腫におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、６２４  ＭＥＬ細胞株におけるＦＧＦＲサブタイプのｓｉＲＮＡノックダウン。Ｂ、７つの細胞株におけるｓｉＲＮＡを標的とするＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１／４、及びＦＧＦＲ２／３の欠失を示すチャート。Ｃ、ＦＧＦＲ１発現は、Ｖ６００Ｅ  Ｂ−ｒａｆ突然変異体を有する黒色腫（ｎ＝４９）において増大している。Ｄ、ＦＧＦＲ１は、未知のＢ−ｒａｆ突然変異体のＴＣＧＡ黒色腫試料（ｎ＝２４７）において増大している。
【図６Ａ】図６Ａ〜Ｂ。ＦＧＦＲ１  ｍＲＮＡレベルは、黒色腫におけるＦＧＦ２の救助と相関する。
【図６Ｂ】図６Ａ〜Ｂ。ＦＧＦＲ１  ｍＲＮＡレベルは、黒色腫におけるＦＧＦ２の救助と相関する。
【図７Ａ】図７Ａ〜Ｄ。Ｂ−ｒａｆのＭＥＫ／ＥＲＫ下流の再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における耐性の中心となる機序である。Ａ、ＭＡＰＫシグナル伝達は、免疫ブロットによって示されるように、ＦＧＦ２媒介耐性のために必要である。ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化は、免疫ブロットに示されるように、ＲＴＫ媒介耐性の共通機能であり、ＦＧＦ２媒介救助は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）の存在下で、ＭＥＫ及びＥＲＫを活性化する。Ｂ、ＲＡＦ１（Ｃ−ｒａｆ）の活性化を示す免疫ブロットは、更なるＲＡＦファミリーメンバーがＭＡＰＫの再活性化を媒介し得ることを示唆している。Ｃ、合成的な致死化学スクリーニングは、１２個の獲得耐性の黒色腫細胞株においてＰＬＸ４０３２に対する耐性を媒介するシグナル伝達経路を特定するために使用された。表は、ＭＥＫ及びＥＲＫの阻害剤と同時治療される場合に、ＰＬＸ４０３２に対する感受性の変化を示し、これは、Ｂ−ｒａｆの経路下流の再活性化を示す。Ｄ、特定の細胞株における図７Ｃに示される合成的な致死化学スクリーニングの例。
【図７Ｂ】図７Ａ〜Ｄ。Ｂ−ｒａｆのＭＥＫ／ＥＲＫ下流の再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における耐性の中心となる機序である。Ａ、ＭＡＰＫシグナル伝達は、免疫ブロットによって示されるように、ＦＧＦ２媒介耐性のために必要である。ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化は、免疫ブロットに示されるように、ＲＴＫ媒介耐性の共通機能であり、ＦＧＦ２媒介救助は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）の存在下で、ＭＥＫ及びＥＲＫを活性化する。Ｂ、ＲＡＦ１（Ｃ−ｒａｆ）の活性化を示す免疫ブロットは、更なるＲＡＦファミリーメンバーがＭＡＰＫの再活性化を媒介し得ることを示唆している。Ｃ、合成的な致死化学スクリーニングは、１２個の獲得耐性の黒色腫細胞株においてＰＬＸ４０３２に対する耐性を媒介するシグナル伝達経路を特定するために使用された。表は、ＭＥＫ及びＥＲＫの阻害剤と同時治療される場合に、ＰＬＸ４０３２に対する感受性の変化を示し、これは、Ｂ−ｒａｆの経路下流の再活性化を示す。Ｄ、特定の細胞株における図７Ｃに示される合成的な致死化学スクリーニングの例。
【図７Ｃ】図７Ａ〜Ｄ。Ｂ−ｒａｆのＭＥＫ／ＥＲＫ下流の再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における耐性の中心となる機序である。Ａ、ＭＡＰＫシグナル伝達は、免疫ブロットによって示されるように、ＦＧＦ２媒介耐性のために必要である。ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化は、免疫ブロットに示されるように、ＲＴＫ媒介耐性の共通機能であり、ＦＧＦ２媒介救助は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）の存在下で、ＭＥＫ及びＥＲＫを活性化する。Ｂ、ＲＡＦ１（Ｃ−ｒａｆ）の活性化を示す免疫ブロットは、更なるＲＡＦファミリーメンバーがＭＡＰＫの再活性化を媒介し得ることを示唆している。Ｃ、合成的な致死化学スクリーニングは、１２個の獲得耐性の黒色腫細胞株においてＰＬＸ４０３２に対する耐性を媒介するシグナル伝達経路を特定するために使用された。表は、ＭＥＫ及びＥＲＫの阻害剤と同時治療される場合に、ＰＬＸ４０３２に対する感受性の変化を示し、これは、Ｂ−ｒａｆの経路下流の再活性化を示す。Ｄ、特定の細胞株における図７Ｃに示される合成的な致死化学スクリーニングの例。
【図７Ｄ−１】図７Ａ〜Ｄ。Ｂ−ｒａｆのＭＥＫ／ＥＲＫ下流の再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における耐性の中心となる機序である。Ａ、ＭＡＰＫシグナル伝達は、免疫ブロットによって示されるように、ＦＧＦ２媒介耐性のために必要である。ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化は、免疫ブロットに示されるように、ＲＴＫ媒介耐性の共通機能であり、ＦＧＦ２媒介救助は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）の存在下で、ＭＥＫ及びＥＲＫを活性化する。Ｂ、ＲＡＦ１（Ｃ−ｒａｆ）の活性化を示す免疫ブロットは、更なるＲＡＦファミリーメンバーがＭＡＰＫの再活性化を媒介し得ることを示唆している。Ｃ、合成的な致死化学スクリーニングは、１２個の獲得耐性の黒色腫細胞株においてＰＬＸ４０３２に対する耐性を媒介するシグナル伝達経路を特定するために使用された。表は、ＭＥＫ及びＥＲＫの阻害剤と同時治療される場合に、ＰＬＸ４０３２に対する感受性の変化を示し、これは、Ｂ−ｒａｆの経路下流の再活性化を示す。Ｄ、特定の細胞株における図７Ｃに示される合成的な致死化学スクリーニングの例。
【図７Ｄ−２】図７Ａ〜Ｄ。Ｂ−ｒａｆのＭＥＫ／ＥＲＫ下流の再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における耐性の中心となる機序である。Ａ、ＭＡＰＫシグナル伝達は、免疫ブロットによって示されるように、ＦＧＦ２媒介耐性のために必要である。ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化は、免疫ブロットに示されるように、ＲＴＫ媒介耐性の共通機能であり、ＦＧＦ２媒介救助は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）の存在下で、ＭＥＫ及びＥＲＫを活性化する。Ｂ、ＲＡＦ１（Ｃ−ｒａｆ）の活性化を示す免疫ブロットは、更なるＲＡＦファミリーメンバーがＭＡＰＫの再活性化を媒介し得ることを示唆している。Ｃ、合成的な致死化学スクリーニングは、１２個の獲得耐性の黒色腫細胞株においてＰＬＸ４０３２に対する耐性を媒介するシグナル伝達経路を特定するために使用された。表は、ＭＥＫ及びＥＲＫの阻害剤と同時治療される場合に、ＰＬＸ４０３２に対する感受性の変化を示し、これは、Ｂ−ｒａｆの経路下流の再活性化を示す。Ｄ、特定の細胞株における図７Ｃに示される合成的な致死化学スクリーニングの例。
【図７Ｄ−３】図７Ａ〜Ｄ。Ｂ−ｒａｆのＭＥＫ／ＥＲＫ下流の再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における耐性の中心となる機序である。Ａ、ＭＡＰＫシグナル伝達は、免疫ブロットによって示されるように、ＦＧＦ２媒介耐性のために必要である。ＭＡＰＫシグナル伝達の再活性化は、免疫ブロットに示されるように、ＲＴＫ媒介耐性の共通機能であり、ＦＧＦ２媒介救助は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）の存在下で、ＭＥＫ及びＥＲＫを活性化する。Ｂ、ＲＡＦ１（Ｃ−ｒａｆ）の活性化を示す免疫ブロットは、更なるＲＡＦファミリーメンバーがＭＡＰＫの再活性化を媒介し得ることを示唆している。Ｃ、合成的な致死化学スクリーニングは、１２個の獲得耐性の黒色腫細胞株においてＰＬＸ４０３２に対する耐性を媒介するシグナル伝達経路を特定するために使用された。表は、ＭＥＫ及びＥＲＫの阻害剤と同時治療される場合に、ＰＬＸ４０３２に対する感受性の変化を示し、これは、Ｂ−ｒａｆの経路下流の再活性化を示す。Ｄ、特定の細胞株における図７Ｃに示される合成的な致死化学スクリーニングの例。
【図８Ａ】図８Ａ〜Ｃ。ＰＩ３Ｋの再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における代替機序を示す。Ａ、合成的な致死化学スクリーニングは、ＰＬＸ４０３２に対するＰＩ３Ｋ依存性の耐性を特定した。Ｂ及びＣ、ＰＬＸ４０３２に対し耐性にされた６２４の黒色腫細胞（「６３４  ｍｅｌ  ＶｅｍＲ」）は、ＭＥＴの活性化（リン酸化反応）を示し、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）で治療した場合にｐＡＫＴの増加を示した。ＭＥＴ阻害剤による同時治療は、ＰＬＸ４０３２の存在下で、６２４  ｍｌ  ＶｅｍＲ細胞を成長停止するために必要とされた。ＰＩ３Ｋシグナル伝達への同様の依存が、Ｇ３６１細胞において観察された（データは図示せず）。
【図８Ｂ】図８Ａ〜Ｃ。ＰＩ３Ｋの再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における代替機序を示す。Ａ、合成的な致死化学スクリーニングは、ＰＬＸ４０３２に対するＰＩ３Ｋ依存性の耐性を特定した。Ｂ及びＣ、ＰＬＸ４０３２に対し耐性にされた６２４の黒色腫細胞（「６３４  ｍｅｌ  ＶｅｍＲ」）は、ＭＥＴの活性化（リン酸化反応）を示し、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）で治療した場合にｐＡＫＴの増加を示した。ＭＥＴ阻害剤による同時治療は、ＰＬＸ４０３２の存在下で、６２４  ｍｌ  ＶｅｍＲ細胞を成長停止するために必要とされた。ＰＩ３Ｋシグナル伝達への同様の依存が、Ｇ３６１細胞において観察された（データは図示せず）。
【図８Ｃ】図８Ａ〜Ｃ。ＰＩ３Ｋの再活性化は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における代替機序を示す。Ａ、合成的な致死化学スクリーニングは、ＰＬＸ４０３２に対するＰＩ３Ｋ依存性の耐性を特定した。Ｂ及びＣ、ＰＬＸ４０３２に対し耐性にされた６２４の黒色腫細胞（「６３４  ｍｅｌ  ＶｅｍＲ」）は、ＭＥＴの活性化（リン酸化反応）を示し、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）で治療した場合にｐＡＫＴの増加を示した。ＭＥＴ阻害剤による同時治療は、ＰＬＸ４０３２の存在下で、６２４  ｍｌ  ＶｅｍＲ細胞を成長停止するために必要とされた。ＰＩ３Ｋシグナル伝達への同様の依存が、Ｇ３６１細胞において観察された（データは図示せず）。
【図９Ａ】図９Ａ〜Ｃ。ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋに依存しない生存促進機序は、Ｂ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫における薬剤耐性を促進する。Ａ及びＢ、低分子スクリーニングは、ＣＯＬＯ８００及びＵＡＣＣ−６２細胞におけるＳＲＣファミリーの活性化を特定した。ＳＲＣ依存耐性を示した細胞株はまた、ＰＩ３Ｋシグナル伝達の阻害によって再感作させた。Ｃ、抗アポトーシス経路のメンバーであるＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２が特定された。グラフに示されるように、ＰＬＸ４０３２に対して獲得耐性を有するＧ−３６１細胞は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性があったが、ＰＬＸ４０３２及びＭＥＫｉ（ＧＤＣ−０９７３）に対して耐性があるＧ−３６１細胞株の変異体は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して感受性がある。
【図９Ｂ】図９Ａ〜Ｃ。ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋに依存しない生存促進機序は、Ｂ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫における薬剤耐性を促進する。Ａ及びＢ、低分子スクリーニングは、ＣＯＬＯ８００及びＵＡＣＣ−６２細胞におけるＳＲＣファミリーの活性化を特定した。ＳＲＣ依存耐性を示した細胞株はまた、ＰＩ３Ｋシグナル伝達の阻害によって再感作させた。Ｃ、抗アポトーシス経路のメンバーであるＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２が特定された。グラフに示されるように、ＰＬＸ４０３２に対して獲得耐性を有するＧ−３６１細胞は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性があったが、ＰＬＸ４０３２及びＭＥＫｉ（ＧＤＣ−０９７３）に対して耐性があるＧ−３６１細胞株の変異体は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して感受性がある。
【図９Ｃ−１】図９Ａ〜Ｃ。ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋに依存しない生存促進機序は、Ｂ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫における薬剤耐性を促進する。Ａ及びＢ、低分子スクリーニングは、ＣＯＬＯ８００及びＵＡＣＣ−６２細胞におけるＳＲＣファミリーの活性化を特定した。ＳＲＣ依存耐性を示した細胞株はまた、ＰＩ３Ｋシグナル伝達の阻害によって再感作させた。Ｃ、抗アポトーシス経路のメンバーであるＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２が特定された。グラフに示されるように、ＰＬＸ４０３２に対して獲得耐性を有するＧ−３６１細胞は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性があったが、ＰＬＸ４０３２及びＭＥＫｉ（ＧＤＣ−０９７３）に対して耐性があるＧ−３６１細胞株の変異体は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して感受性がある。
【図９Ｃ−２】図９Ａ〜Ｃ。ＭＡＰＫ及びＰＩ３Ｋに依存しない生存促進機序は、Ｂ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫における薬剤耐性を促進する。Ａ及びＢ、低分子スクリーニングは、ＣＯＬＯ８００及びＵＡＣＣ−６２細胞におけるＳＲＣファミリーの活性化を特定した。ＳＲＣ依存耐性を示した細胞株はまた、ＰＩ３Ｋシグナル伝達の阻害によって再感作させた。Ｃ、抗アポトーシス経路のメンバーであるＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２が特定された。グラフに示されるように、ＰＬＸ４０３２に対して獲得耐性を有するＧ−３６１細胞は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して耐性があったが、ＰＬＸ４０３２及びＭＥＫｉ（ＧＤＣ−０９７３）に対して耐性があるＧ−３６１細胞株の変異体は、ＢＣＬ−ＸＬ及びＢＣＬ−２阻害剤に対して感受性がある。
【図１０Ａ】図１０Ａ〜Ｃ。ＬＯＸ−ＩＭＶＩは、ＦＧＦＲ媒介性機序によってＰＬＸ４０３２に対し耐性となった。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ（ベムラフェニブ耐性細胞株）は、ＦＧＦＲ活性に依存していることが示された。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤に対し耐性にされたＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ細胞は、ＥＧＦＲ活性に依存するようになった。Ｂ及びＣ、ＦＧＦＲ及びＥＧＦＲ阻害剤に対し耐性にされたＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ細胞は、分泌ＨＧＦの同時増加を伴ってＭＥＴ及びＭＥＫ阻害剤による再感作を示した。
【図１０Ｂ】図１０Ａ〜Ｃ。ＬＯＸ−ＩＭＶＩは、ＦＧＦＲ媒介性機序によってＰＬＸ４０３２に対し耐性となった。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ（ベムラフェニブ耐性細胞株）は、ＦＧＦＲ活性に依存していることが示された。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤に対し耐性にされたＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ細胞は、ＥＧＦＲ活性に依存するようになった。Ｂ及びＣ、ＦＧＦＲ及びＥＧＦＲ阻害剤に対し耐性にされたＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ細胞は、分泌ＨＧＦの同時増加を伴ってＭＥＴ及びＭＥＫ阻害剤による再感作を示した。
【図１０Ｃ】図１０Ａ〜Ｃ。ＬＯＸ−ＩＭＶＩは、ＦＧＦＲ媒介性機序によってＰＬＸ４０３２に対し耐性となった。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ（ベムラフェニブ耐性細胞株）は、ＦＧＦＲ活性に依存していることが示された。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤に対し耐性にされたＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ細胞は、ＥＧＦＲ活性に依存するようになった。Ｂ及びＣ、ＦＧＦＲ及びＥＧＦＲ阻害剤に対し耐性にされたＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ｖｅｍＲ細胞は、分泌ＨＧＦの同時増加を伴ってＭＥＴ及びＭＥＫ阻害剤による再感作を示した。
【図１１】分泌因子は、薬剤療法に対する耐性を促進することができる。図１１中のグラフは、未処理細胞（対照）、薬剤で処理した細胞（薬剤）、ならびに薬剤及び分泌因子で処理した細胞の比較を示す。示されるように、ベムラフェニブ等の薬剤は、細胞数を減少する（すなわち、死滅させる）ことができるが、薬剤に対する耐性は、細胞分泌因子（例えば、ＦＧＦ）を添加する場合に獲得される。
【図１２】ＨＥＲ２＋乳癌細胞における癌治療に対する耐性を促進する分泌因子のスクリーニングが行われ、細胞が６つの治療剤（ラパチニブ、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−０９４１、ＧＤＣ−０３４９、Ｔ−ＤＭ１、またはＴ−ＤＭ１＋ペルツズマブ）のうちの１つで処理された。それぞれの分泌因子に相関性があった増強した死滅または救助が測定された。
【図１３】Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞における癌治療に対する耐性を促進する分泌因子のスクリーニングが行われ、細胞が３つの治療剤（ＰＬＸ４０３２（すなわち、ベムラフェニブ）、ＧＤＣ−０９７３、またはＧＤＣ−０６２３）のうちの１つで処理された。それぞれの分泌因子に相関性があった増強した死滅または救助が測定された。
【図１４】９個の異なる細胞株におけるｐ−Ａｋｔ、Ａｋｔ、ｐＥＲＫ、ＥＲＫ、及びβアクチン（対照）を検出する免疫ブロットが、分泌因子媒介性薬剤耐性の下流機序を検出するために行われた。
【図１５Ａ】図１５Ａ〜Ｃ。１０個の黒色腫細胞株及び１０個の乳癌株のスクリーニングが、薬剤耐性におけるＦＧＦシグナル伝達の役割を決定するために行われた。Ａ及びＢ、ロバストなｚスコアが、黒色腫及び乳癌細胞株において観察された。Ｃ、ＦＧＦ受容体、それらのサブファミリー、及びそれらのリガンドの概要。
【図１５Ｂ】図１５Ａ〜Ｃ。１０個の黒色腫細胞株及び１０個の乳癌株のスクリーニングが、薬剤耐性におけるＦＧＦシグナル伝達の役割を決定するために行われた。Ａ及びＢ、ロバストなｚスコアが、黒色腫及び乳癌細胞株において観察された。Ｃ、ＦＧＦ受容体、それらのサブファミリー、及びそれらのリガンドの概要。
【図１５Ｃ】図１５Ａ〜Ｃ。１０個の黒色腫細胞株及び１０個の乳癌株のスクリーニングが、薬剤耐性におけるＦＧＦシグナル伝達の役割を決定するために行われた。Ａ及びＢ、ロバストなｚスコアが、黒色腫及び乳癌細胞株において観察された。Ｃ、ＦＧＦ受容体、それらのサブファミリー、及びそれらのリガンドの概要。
【図１６Ａ】図１６Ａ〜Ｂ。ＦＧＦ２は、耐性を促進するために主要なシグナル伝達経路を再活性化し、下流シグナル伝達の持続的な活性化を刺激する。Ａ、ＦＧＦ２に１０分間曝露した細胞の免疫ブロットを、曝露なしの細胞と比較した。Ｂ、ＦＧＦ２に２４時間曝露した細胞の免疫ブロットを、ＦＧＦ２曝露なしの細胞と比較した。
【図１６Ｂ】図１６Ａ〜Ｂ。ＦＧＦ２は、耐性を促進するために主要なシグナル伝達経路を再活性化し、下流シグナル伝達の持続的な活性化を刺激する。Ａ、ＦＧＦ２に１０分間曝露した細胞の免疫ブロットを、曝露なしの細胞と比較した。Ｂ、ＦＧＦ２に２４時間曝露した細胞の免疫ブロットを、ＦＧＦ２曝露なしの細胞と比較した。
【図１７Ａ】図１７Ａ〜Ｃ。黒色腫細胞株におけるＦＧＦの分泌因子媒介性シグナル伝達の動力学。Ａ、細胞株は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）で４時間及びＦＧＦで１０分間処理された。Ｂ、６２４  ＭＥＬ細胞株は、ＰＬＸ４０３２で２４時間及びＦＧＦで２４時間処理された。Ｃ、９２８  ＭＥＬ細胞株は、ＰＬＸ４０３２で２４時間及びＦＧＦで２４時間処理された。
【図１７Ｂ】図１７Ａ〜Ｃ。黒色腫細胞株におけるＦＧＦの分泌因子媒介性シグナル伝達の動力学。Ａ、細胞株は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）で４時間及びＦＧＦで１０分間処理された。Ｂ、６２４  ＭＥＬ細胞株は、ＰＬＸ４０３２で２４時間及びＦＧＦで２４時間処理された。Ｃ、９２８  ＭＥＬ細胞株は、ＰＬＸ４０３２で２４時間及びＦＧＦで２４時間処理された。
【図１７Ｃ】図１７Ａ〜Ｃ。黒色腫細胞株におけるＦＧＦの分泌因子媒介性シグナル伝達の動力学。Ａ、細胞株は、ＰＬＸ４０３２（ベムラフェニブ）で４時間及びＦＧＦで１０分間処理された。Ｂ、６２４  ＭＥＬ細胞株は、ＰＬＸ４０３２で２４時間及びＦＧＦで２４時間処理された。Ｃ、９２８  ＭＥＬ細胞株は、ＰＬＸ４０３２で２４時間及びＦＧＦで２４時間処理された。
【図１８Ａ】図１８Ａ〜Ｂ。ＦＧＦＲ標的化は、ＦＧＦ２の救助を有効に遮断する。Ａ、下流経路の有効な遮断は、ＦＧＦ２の救助を克服しない場合がある。Ｂ、ラパチニブ、ＭＥＫｉ、ＳＭＩ、及びＦＧＦ−２で処理したＡＵ５６５細胞の免疫ブロット（同様の結果が、ＨＣＣ１９５４及びＵＡＣＣ−８９３細胞株においても観察された）。
【図１８Ｂ】図１８Ａ〜Ｂ。ＦＧＦＲ標的化は、ＦＧＦ２の救助を有効に遮断する。Ａ、下流経路の有効な遮断は、ＦＧＦ２の救助を克服しない場合がある。Ｂ、ラパチニブ、ＭＥＫｉ、ＳＭＩ、及びＦＧＦ−２で処理したＡＵ５６５細胞の免疫ブロット（同様の結果が、ＨＣＣ１９５４及びＵＡＣＣ−８９３細胞株においても観察された）。
【図１９Ａ】図１９Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ４は、ＨＥＲ２＋乳癌におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の救助の割合（％）。Ｂ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の免疫ブロット。Ｃ、ＴＣＧＡ乳癌試料（ｎ＝９１３）は、乳癌における高いＦＧＦＲ１レベルを示す。Ｄ、ＨＥＲ２＋乳癌細胞は、高いＦＧＦＲ４に対して富化される。
【図１９Ｂ】図１９Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ４は、ＨＥＲ２＋乳癌におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の救助の割合（％）。Ｂ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の免疫ブロット。Ｃ、ＴＣＧＡ乳癌試料（ｎ＝９１３）は、乳癌における高いＦＧＦＲ１レベルを示す。Ｄ、ＨＥＲ２＋乳癌細胞は、高いＦＧＦＲ４に対して富化される。
【図１９Ｃ】図１９Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ４は、ＨＥＲ２＋乳癌におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の救助の割合（％）。Ｂ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の免疫ブロット。Ｃ、ＴＣＧＡ乳癌試料（ｎ＝９１３）は、乳癌における高いＦＧＦＲ１レベルを示す。Ｄ、ＨＥＲ２＋乳癌細胞は、高いＦＧＦＲ４に対して富化される。
【図１９Ｄ】図１９Ａ〜Ｄ。ＦＧＦＲ４は、ＨＥＲ２＋乳癌におけるＦＧＦ２の救助を媒介する。Ａ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の救助の割合（％）。Ｂ、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理した細胞の免疫ブロット。Ｃ、ＴＣＧＡ乳癌試料（ｎ＝９１３）は、乳癌における高いＦＧＦＲ１レベルを示す。Ｄ、ＨＥＲ２＋乳癌細胞は、高いＦＧＦＲ４に対して富化される。
【図２０Ａ】図２０Ａ〜Ｃ。自然耐性のＨＥＲ２＋乳癌モデル。Ａ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＨＣＣ１５６９細胞を感作する。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞を感作する。Ｃ、腫瘍体積は、ラパチニブ及びＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）の併用治療により減少する。
【図２０Ｂ】図２０Ａ〜Ｃ。自然耐性のＨＥＲ２＋乳癌モデル。Ａ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＨＣＣ１５６９細胞を感作する。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞を感作する。Ｃ、腫瘍体積は、ラパチニブ及びＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）の併用治療により減少する。
【図２０Ｃ−１】図２０Ａ〜Ｃ。自然耐性のＨＥＲ２＋乳癌モデル。Ａ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＨＣＣ１５６９細胞を感作する。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞を感作する。Ｃ、腫瘍体積は、ラパチニブ及びＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）の併用治療により減少する。
【図２０Ｃ−２】図２０Ａ〜Ｃ。自然耐性のＨＥＲ２＋乳癌モデル。Ａ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＨＣＣ１５６９細胞を感作する。Ｂ、ＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）は、ラパチニブに対するＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞を感作する。Ｃ、腫瘍体積は、ラパチニブ及びＦＧＦＲ阻害剤（ＢＧＪ３９８）の併用治療により減少する。
【図２１Ａ−１】図２１Ａ〜Ｂ。獲得耐性の更なる機序は、ＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する感受性（Ａ）及びＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する非感受性（Ｂ）を含む。
【図２１Ａ−２】図２１Ａ〜Ｂ。獲得耐性の更なる機序は、ＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する感受性（Ａ）及びＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する非感受性（Ｂ）を含む。
【図２１Ｂ−１】図２１Ａ〜Ｂ。獲得耐性の更なる機序は、ＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する感受性（Ａ）及びＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する非感受性（Ｂ）を含む。
【図２１Ｂ−２】図２１Ａ〜Ｂ。獲得耐性の更なる機序は、ＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する感受性（Ａ）及びＥＲＫ／ＭＥＫ阻害剤に対する非感受性（Ｂ）を含む。
【図２２Ａ】図２２Ａ〜Ｂ。分泌因子媒介の耐性機序は、獲得薬剤耐性モデルにおいて明らかである。Ａ、単一の薬剤耐性株の表。Ｂ、二重薬剤耐性株の表。
【図２２Ｂ】図２２Ａ〜Ｂ。分泌因子媒介の耐性機序は、獲得薬剤耐性モデルにおいて明らかである。Ａ、単一の薬剤耐性株の表。Ｂ、二重薬剤耐性株の表。
【図２３Ａ】図２３Ａ〜Ｃ。ベムラフェニブ耐性及び感受性細胞株は、患者における耐性に対する経路を決定し、予想するために使用することができる。スクリーニングでは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞は、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＥＧＦ、及びＨＧＦによって救助された。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞は、ＦＧＦＲ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。Ｂ、二重耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ／ＦＧＦＲｉ（すなわち、ベムラフェニブ及びＦＧＦＲ阻害剤に対して耐性がある）細胞は、ＥＧＦＲ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。Ｃ、三重耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ／ＦＧＦＲｉ／エルロチニブ細胞は、ＭＥＴ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。
【図２３Ｂ】図２３Ａ〜Ｃ。ベムラフェニブ耐性及び感受性細胞株は、患者における耐性に対する経路を決定し、予想するために使用することができる。スクリーニングでは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞は、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＥＧＦ、及びＨＧＦによって救助された。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞は、ＦＧＦＲ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。Ｂ、二重耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ／ＦＧＦＲｉ（すなわち、ベムラフェニブ及びＦＧＦＲ阻害剤に対して耐性がある）細胞は、ＥＧＦＲ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。Ｃ、三重耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ／ＦＧＦＲｉ／エルロチニブ細胞は、ＭＥＴ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。
【図２３Ｃ】図２３Ａ〜Ｃ。ベムラフェニブ耐性及び感受性細胞株は、患者における耐性に対する経路を決定し、予想するために使用することができる。スクリーニングでは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞は、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＥＧＦ、及びＨＧＦによって救助された。Ａ、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞は、ＦＧＦＲ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。Ｂ、二重耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ／ＦＧＦＲｉ（すなわち、ベムラフェニブ及びＦＧＦＲ阻害剤に対して耐性がある）細胞は、ＥＧＦＲ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。Ｃ、三重耐性のＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ／ＦＧＦＲｉ／エルロチニブ細胞は、ＭＥＴ阻害によってＰＬＸ４０３２に対して再感作された。
【発明を実施するための形態】
【００４１】
Ｉ．  定義
対象ポリペプチドの「拮抗剤」（互換的に「阻害剤」と称される）とは、対象ポリペプチドの活性化または機能に干渉する、例えば、対象ポリペプチドが仲立ちする生物活性を部分的に若しくは完全に遮断、阻害、または中和する作用物質である。例えば、ポリペプチドＸの拮抗剤とは、ポリペプチドＸが仲立ちする生物活性を部分的に若しくは完全に遮断、阻害、または中和する任意の分子を指し得る。阻害剤の例としては、抗体、リガンド抗体、低分子拮抗剤、アンチセンス及び阻害ＲＮＡ（例えばｓｈＲＮＡ）分子が挙げられる。好ましくは、阻害剤は対象ポリペプチドに結合する抗体または低分子である。特定の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに対して、約１，０００ｎＭ以下の結合親和性（解離定数）を有する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに対して約１００ｎＭ以下の結合親和性を有する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに対して約５０ｎＭ以下の結合親和性を有する。特定の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに共有結合している。特定の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドのシグナル伝達を１，０００ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドのシグナル伝達を５００ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドのシグナル伝達を５０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。ある種の実施形態では、拮抗剤は少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上、対象ポリペプチドの発現レベルまたは生物活性を低減または阻害する。いくつかの実施形態では、対象ポリペプチドはＦＧＦＲ受容体（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）である。いくつかの実施形態では、対象ポリペプチドはＥＧＦＲである。
【００４２】
「ポリペプチド」という用語は本明細書で使用する場合、特に指示がない限り、霊長類（例えばヒト）ならびに齧歯類（例えばマウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然の対象ポリペプチドを指す。この用語は「完全長」の未処理ポリペプチドに加え、細胞中の処理で生じる任意の形態のポリペプチドを包含する。この用語はまた、ポリペプチドの自然発生変異体、例えばスプライス変異体またはアレリック変異体も包含する。
【００４３】
「ポリヌクレオチド」、または「核酸」は本明細書で互換的に用いられ、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド若しくは塩基、及び／若しくはそれらの類似体、またはＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ、若しくは合成反応によりポリマー中に導入可能な任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体等の修飾ヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾はポリマーの構築の前後において付与されてよい。ヌクレオチド配列には、非ヌクレオチド成分が間に入ってもよい。ポリヌクレオチドは合成後、標識結合等によって更に修飾されてよい。他のタイプの修飾には、例えば、「キャップ」、１つ以上の自然発生ヌクレオチドの類似体による置換、ヌクレオチド間修飾、例えば非荷電性連鎖を有するもの（例えばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート等）及び荷電性連鎖を有するもの（例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）、ペンダント部分、例えばタンパク質（例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジン等）を含むもの、インターカレーター（例えばアクリジン、ソラレン等）を有するもの、キレート剤（例えば金属、放射性金属、ホウ素、酸化的金属等）を含むもの、アルキル化剤を含むもの、修飾された連結を含むもの（例えばアルファアノマー核酸等）等と置換したもの、加えてポリヌクレオチド（複数を含む）の未修飾形態が含まれる。更に、糖類中に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかを、例えばホスホネート基、ホスフェート基で置換してよく、標準的な保護基で保護してよく、若しくは更なるヌクレオチドへの更なる連鎖を調製するために活性化してよく、または固体若しくは半固体の支持体に結合してもよい。５’及び３’末端のＯＨは、リン酸化またはアミン基または１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部位で置換することができる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化してもよい。ポリヌクレオチドはまた、当該分野で一般的に知られているリボースまたはデオキシリボース糖類の類似形態も含むことができ、これらには例えば２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環式糖の類似体、α−アノマー糖、エピマー糖、例えばアラビノース、キシロース類またはリキソース類、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース類、非環式類似体、及びメチルリボシド等の脱塩基ヌクレオシド類似体が含まれる。１つ以上のホスホジエステル結合は代わりの連結基で置換されてよい。これらの代替の連結基には、限定されるものではないが、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ２」（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）で置換されている実施形態が含まれ、式中、各ＲまたはＲ’は独立して、水素、または任意にエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、若しく���アラルジルを含有する置換若しくは非置換のアルキル（炭素数１〜２０）である。ポリヌクレオチド内のすべての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及するすべてのポリヌクレオチドに適用される。
【００４４】
「低分子」という用語は、約２０００ダルトン以下、好ましくは約５００ダルトン以下の分子量を有する任意の分子を指す。
【００４５】
「単離した」抗体は、その自然環境における成分から分離した抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフィー（例えばイオン交換若しくは逆相ＨＰＬＣ）により求められるように、純度９５または９９％を超えて精製される。抗体純度の評価のための方法についての概説については、例えばＦｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照のこと。
【００４６】
「抗体」という用語は、本明細書において最も広範な意味で用いられ、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００４７】
「対象となる抗ポリペプチド抗体」及び対象ポリペプチド「に結合する抗体」という用語は、抗体が、対象ポリペプチドを標的にする診療及び／または治療剤として有用となるように、十分な親和性で対象ポリペプチドに結合可能な抗体を指す。一実施形態では、対象となる抗ポリペプチド抗体の、無関係の対象となる非ポリペプチドのタンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、抗体の対象ポリペプチドへの結合の約１０％未満である。ある種の実施形態では、対象ポリペプチドに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある種の実施形態では、対象となる抗ポリペプチド抗体は、異なる種からの対象ポリペプチド内で保存された、対象ポリペプチドのエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象ポリペプチドはＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）及び／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）である。いくつかの実施形態では、対象ポリペプチドはＥＧＦＲである。
【００４８】
「遮断抗体」または「アンタゴニスト抗体」は、それが結合する抗原の生物活性を阻害するまたは低減させる抗体である。好ましい遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【００４９】
「親和性」とは、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の、総計の非共有結合性相互作用の強度を指す。特に指示がない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」」とは、結合対のメンバー（例えば抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野において既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するために具体的な例示説明及び例となる実施形態は、以下に記載されている。
【００５０】
「抗体断片」とは、無傷抗体が結合する抗原と結合する無傷抗体の一部分を含む無傷抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
参照抗体と「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体、及び逆に、競合アッセイにおいて、この抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。
【００５２】
「キメラ」抗体という用語は、重及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来する一方で、重及び／または軽鎖の残部が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００５３】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で同じ意味で用いられ、自然抗体の構造と実質的に同様の構造を有する、またはＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【００５４】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、同一であり、かつ／または同一のエピトープと結合するが、例えば、自然発生の突然変異体を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある変異型抗体は例外であり、かかる変異体は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。故に、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例となる方法を含むが、これらに限定されない、様々な技術によって作製されて得る。
【００５５】
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。
【００５６】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある種の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、そのＨＶＲ（例えばＣＤＲ）のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト抗体のものに対応し、そのＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化形態」とは、ヒト化を経た抗体を指す。
【００５７】
「免疫複合体」は、細胞毒性剤を含むが、これに限定されない、１つ以上の異種分子（複数を含む）に結合した抗体である。
【００５８】
「ＰＬＸ４０３２」及び「ベムラフェニブ」は、本明細書では互換的に用いられ、Ｎ−（３−｛［５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル］カルボニル｝−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミドを指す。
【００５９】
「Ｂ−ｒａｆの活性化」とは、Ｂ−ｒａｆキナーゼの活性化またはリン酸化を指す。概して、Ｂ−ｒａｆの活性化は、シグナル変換をもたらす。
【００６０】
「Ｂ−ｒａｆ」という用語は、本明細書で使用する場合、特に指示がない限り、任意の天然のまたは変異型（天然または合成の）Ｂ−ｒａｆポリペプチドを指す。「野生型Ｂ−ｒａｆ」という用語は、通常は自然発生のＢ−ｒａｆタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。
【００６１】
「Ｂ−ｒａｆ変異体」という用語は、本明細書で使用する場合、天然Ｂ−ｒａｆ配列において１つ以上のアミノ酸突然変異体を含むＢ−ｒａｆポリペプチドを指す。任意に、１つ以上のアミノ酸突然変異体は、アミノ酸置換（複数を含む）を含む。
【００６２】
「Ｂ−ｒａｆ拮抗剤」（互換的に「Ｂ−ｒａｆ阻害剤」と称される）とは、Ｂ−ｒａｆの活性化または機能に干渉する作用物質である。特定の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、Ｂ−ｒａｆに対して、約１，０００ｎＭ以下の結合親和性（解離定数）を有する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、Ｂ−ｒａｆに対して、約１００ｎＭ以下の結合親和性を有する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、Ｂ−ｒａｆに対して、約５０ｎＭ以下の結合親和性を有する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、Ｂ−ｒａｆに対して、約１０ｎＭ以下の結合親和性を有する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、Ｂ−ｒａｆに対して、約１ｎＭ以下の結合親和性を有する。特定の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、１，０００ｎＭ以下のＩＣ５０を有するＢ−ｒａｆシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、５００ｎＭ以下のＩＣ５０を有するＢ−ｒａｆシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、５０ｎＭ以下のＩＣ５０を有するＢ−ｒａｆシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、１０ｎＭ以下のＩＣ５０を有するＢ−ｒａｆシグナル伝達を阻害する。別の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ阻害剤は、１ｎＭ以下のＩＣ５０を有するＢ−ｒａｆシグナル伝達を阻害する。
【００６３】
「Ｖ６００Ｅ」とは、Ｂ−Ｒａｆのアミノ酸位置６００においてバリンに対してグルタミンの置換をもたらすＢ−ＲＡＦ遺伝子における突然変異体を指す。「Ｖ６００Ｅ」はまた、前の番号付けシステムの下で「Ｖ５９９Ｅ」としても知られている（Ｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．９：３３６２−３３６８，２００３）。
【００６４】
「構成的」または「構成的に」という用語は、本明細書で使用する場合、受容体キナーゼ活性に適用される例に関しては、リガンドまたは他の活性化する分子の存在下で依存しない受容体の連続的なシグナル伝達活性を指す。受容体の性質に応じて、活性のすべてが構成的であってもよく、または受容体の活性が他の分子（例えばリガンド）の結合によって更に活性化されてもよい。受容体の活性化をもたらす細胞事象は、当業者には周知である。例えば、活性化は、オリゴマー形成、例えば、より高次な受容体複合体への二量化、三量化等を含んでもよい。複合体は、一種類のタンパク質、すなわち、同型複合体を含んでもよい。あるいは、複合体は、少なくとも２つの異なるタンパク質種、すなわち、異型複合体を含んでもよい。複合体形成は、例えば、細胞表面上での受容体の正常なまたは突然変異形態の過剰発現によって生じてもよい。複合体形成はまた、受容体における特異的突然変異（複数を含む）によって生じてもよい。
【００６５】
「個体応答」または「応答」は、（１）減速及び完全停止を含む、疾患の進行（例えば癌の進行）をある程度阻害すること、（２）腫瘍サイズの減少、（３）隣接した末梢臓器及び／若しくは組織中への癌細胞の侵入阻害（すなわち低減、減速または完全停止）、（４）転移阻害（すなわち低減、減速または完全停止）、（５）疾患または障害（例えば癌）に関連する１つ以上の症状のある程度の回復、（６）無進行生存の長さの増加、ならびに／または（９）治療後のある時点での死亡率の低下を含む、個体への有効性を示す任意の終点を用いて評価することが可能であるが、これらに限定されない。
【００６６】
「実質的に同じ」という用語は、本明細書で使用する場合、２つの数値の類似性の程度が、当業者が、該値（例えばＫｄ値または発現）により測定した生物学的特性の背景の中で、２つの値の差に生物学的、及び／または統計的有意性がない、若しくはほとんどないと考えるように、十分に大きいことを表す。該２つの値の差は、例えば、参照／コンパレータ値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、及び／または約１０％未満である。
【００６７】
「実質的に異なる」という語句は、本明細書で使用する場合、２つの数値の差の程度が、当業者が、該値（例えばＫｄ値）により測定した生物学的特性の背景の中で、２つの値の差が統計的に有意であると考えるように、十分に大きいことを意味する。該２つの値の差は、例えば、参照／コンパレータ分子に対する値の関数として、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、及び／または約５０％超である。
【００６８】
物質／分子、例えば医薬組成物の「有効量」とは、必要な用量及び期間で所望の治療または予防結果を達成するのに有効な量を指す。
【００６９】
物質／分子の「治療的有効量」は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに物質／分子が個体内で所望の応答を誘発する能力等の要因によって変化し得る。「治療的有効量」とはまた、物質／分子の任意の毒性または有害作用より、治療的に有益な効果が上回る量である。「予防的有効量」とは、必要な用量及び期間で、所望の予防効果を達成する有効量を指す。必ずしもではないが通常、予防的用量は疾患の初期段階時または前に対象において使用されるため、予防的有効量は治療的有効量よりも少ない。
【００７０】
「薬学的製剤」という用語は、その中に含まれる有効成分の生物活性を有効にするような形態であり、かつ製剤が投与される対象に対して許容されない毒性を有する追加の成分を含まない配合物を指す。
【００７１】
「薬学的に許容される担体」とは、有効成分以外の、対象に無毒の製剤処方中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７２】
「薬学的に許容される塩」という語句は、本明細書で使用する場合、化合物の薬学的に許容される有機または無機の塩を指す。
【００７３】
本明細書で使用する場合、「治療」（及び例えば「治療する」または「治療すること」等の文法的な変形）とは、治療される個体の自然経過を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程の間に行うことができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発症または再発の防止、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行度の低減、病状の回復または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅らせる、または疾患の進行を遅くするために使用される。
【００７４】
「白金剤」は、白金を含む化学療法剤、例えば、カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチンである。
【００７５】
「細胞毒性剤」または「化学療法剤」という用語は、作用機序に関わらず、癌の治療に有用な生物学的（例えば、巨大分子）または化学的（例えば、低分子）化合物である。該用語は、本明細書で使用する場合、細胞機能を阻害若しくは妨げる、及び／または細胞死若しくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。該用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤または薬剤（例えばメトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、若しくは他の挿入剤）、成長阻害剤、核酸分解酵素等の酵素及びその断片、抗生物質、ならびに微生物、菌類、植物、若しくは動物由来の低分子毒素または酵素活性毒素等の毒素を含むことを目的とし、これには、その断片及び／または変異体、ならびに以下に開示される種々の抗腫瘍剤または抗癌剤が含まれる。他の細胞毒性剤を以下に記載する。腫瘍崩壊剤は、腫瘍細胞の破壊の原因となる。
【００７６】
「個体」または「対象」は哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えばヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに齧歯類（例えばマウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。ある種の実施形態では、個体または対象はヒトである。
【００７７】
「癌」及び「癌性」という用語は、典型的には、無秩序な細胞成長により特徴付けられる、哺乳動物における生理学的条件を指すか、または、記載する。この定義には、良性及び悪性癌が含まれる。「早期癌」または「早期腫瘍」とは、侵襲性でも転移性でもない癌を意味するか、または病期０、Ｉ、若しくはＩＩ期の癌として分類される。癌の例としては、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫（髄芽細胞腫及び網膜芽細胞腫を含む）、肉腫（脂肪肉腫及び滑膜細胞肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍（カルチノイド腫瘍、ガストリノーマ、及び島細胞癌を含む）、中皮腫、神経鞘腫（聴神経腫を含む）、髄膜腫、腺癌、黒色腫、及び白血病、またはリンパ性悪性疾患が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより特定の例としては、黒色腫、結腸直腸癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、腹膜の癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝臓癌、乳癌（転移性乳癌を含む）、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆管の腫瘍、ならびに頭頸部癌が挙げられる。いくつかの実施形態では、癌は、黒色腫、結腸直腸癌、甲状腺癌、例えば甲状腺乳頭癌、または卵巣癌である。
【００７８】
「同時に」という用語は、本明細書において、２つ以上の治療剤の投与において、それらの個体への治療効果の時間が重複するように、時間の近接性が十分に高いことを指すために用いられる。したがって、同時投与には１つ以上の他の作用物質の投与を中止した後で、１つ以上の作用物質の投与を継続する投与レジメンが含まれる。いくつかの実施形態では、同時投与は、並行的、逐次的、及び／または同時的である。
【００７９】
「低減または阻害する」とは、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。低減または阻害するとは、治療される障害の症状、転移の存在若しくはサイズ、または原発腫瘍のサイズを指すことができる。
【００８０】
「添付文書」という用語は、適応症、使用法、用量、投与、併用療法、かかる治療製品の使用に関する禁忌及び／または警告に関する情報を含む、治療製品販売用パッケージに通常含まれる説明書を指すために使用される。
【００８１】
「製品」とは、少なくとも１つの試薬、例えば疾患若しくは障害（例えば癌）の治療用薬剤、または本明細書で記載される生体指標を特異的に検出するプローブを含む任意の製造物（例えばパッケージ若しくは容器）またはキットである。ある種の実施形態では、製造物またはキットは本明細書記載の方法を実施する一単位として促進、配布、または販売されてよい。
【００８２】
当業者により理解される通り、本明細書における「約」の値またはパラメータへの言及には、その値またはパラメータ自体に向けられる実施形態が含まれる（かつそれについて記載する）。例えば、「約Ｘ」を指す説明には、「Ｘ」の説明が含まれる。
【００８３】
本明細書に記載される発明の態様及び実施形態には、態様及び実施形態「からなる」及び／または「から本質的になる」が含まれることが理解される。本明細書で使用する場合、特に指示がない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には複数への言及が含まれる。
【００８４】
ＩＩ．  方法及び使用
ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を使用する方法が、本明細書に提供される。
【００８５】
特に、個体に、（ａ）ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性の期間を増大させる及び／または癌耐性の発生を遅らせるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させるのに有効である。例えば、いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、増大した有効性に有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、応答（例えば完全寛解）を増大させるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤のそれぞれの量は、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する癌感受性を増大させる及び／または感受性を回復させるのに有効である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００８６】
癌細胞は、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤による治療に対して耐性があり、個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、癌細胞の治療方法が、本明細書に提供される。個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を有する癌の治療方法もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００８７】
個体に、有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を投与することを含む、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる、及び／または感受性を回復させる方法もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００８８】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む癌治療の有効性を増大させる方法が、本明細書に更に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００８９】
癌治療が、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含み、この癌治療が、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤を含まない（不在下での）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を含む標準治療と比較して、有効性を増大させる、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。更に、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、個体においてＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を有する癌の発生を遅らせる及び／または防止する方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００９０】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤に対する耐性を発生する可能性が増大している癌を患う個体の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００９１】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する感受性を増大させる方法が、更に本明細書に提供される。更に、個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤への感受性の期間を延ばす方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００９２】
個体に、（ａ）有効量のＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤、及び（ｂ）有効量のＢ−ｒａｆ拮抗剤を同時投与することを含む、癌を患う個体におけるＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する応答の持続時間を延ばす方法もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、ベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）、ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬ−３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６のうちの１つ以上である。ある種の実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅに対して選択的であってもよい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤はベムラフェニブ（すなわち、ＰＬＸ４０３２）である。
【００９３】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、抗体阻害剤、低分子阻害剤、結合ポリペプチド阻害剤、及び／またはポリヌクレオチド拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、結合ポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチド阻害剤は、Ｆｃ（例えば、ＦＰ−１０３９（Ｆｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ））に結合するＦＧＦＲの細胞外ドメインの領域を含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態ではＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、抗体である。
【００９４】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１ｂ、ＦＧＦＲ１ｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、低分子は、Ｎ−［２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ］−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、低分子は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、及び／またはＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ抗体である。
【００９５】
本明細書で使用する治療に対して耐性を有する癌としては、治療に対する応答性のない、及び／または著しい応答（例えば部分応答及び／若しくは完全応答）を生み出す能力が低下した癌が挙げられる。耐性は、治療法の過程において生じる獲得耐性であってよい。いくつかの実施形態では、獲得薬剤耐性は、一過性、及び／または可逆的薬剤耐性である。治療に対する一過性及び／または可逆的薬剤耐性としては、治療法の中断後に、治療に対する感受性を回復可能な薬剤耐性が挙げられる。いくつかの実施形態では、獲得耐性は持続耐性である。治療に対する持続耐性としては、薬剤耐性を付与する遺伝子変化が挙げられる。
【００９６】
本明細書で使用される治療剤に対して感受性を有する癌としては、応答性がある、ならびに／または著しい応答（例えば部分応答及び／または完全応答）を生み出すことが可能な癌が挙げられる。
【００９７】
治療剤に対する耐性の獲得及び／または感受性の維持を評価する測定方法は、当技術分野において既知であり、実施例に記載されている。薬剤耐性等の耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化を、実施例及びＳｈａｒｍａらにて記載されたようにして、薬剤耐性がある存続生物の成長をアッセイすることにより評価してもよい。持続耐性及び／または拡大した存続生物等の耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化は、実施例及びＳｈａｒｍａらにて記載されたようにして、薬剤耐性がある拡大した存続生物の成長をアッセイすることにより評価されてもよい。いくつかの実施形態では、耐性は、ＩＣ５０、ＥＣ５０の変化、または薬剤耐性がある存続生物及び／若しくは薬剤耐性がある拡大した存続生物における腫瘍成長の減少で示されてもよい。いくつかの実施形態では、変化は、約５０％、約１００％、及び／または約２００％のいずれかより大きい。加えて、耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化を、例えば、応答、応答の持続時間、及び／または治療に対する、進行までの時間（例えば部分応答及び完全応答）を評価することにより、インビボで評価してもよい。耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化は、応答の変化、応答の持続時間、及び／または個体の集団における治療に対する、進行までの時間、例えば部分応答及び完全応答に基づいてよい。
【００９８】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍癌である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌（例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））である。いくつかの実施形態では、癌は乳癌（例えば、ＨＥＲ２陽性乳癌）である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は上皮組織の癌である。いくつかの実施形態では、癌は腺癌である。ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む治療方法を開始する場合に、本明細書に記載される併用療法のいずれかにおいて、癌が、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を単独で含む治療方法に対して感受性があってもよい（感受性の例としては、応答性があること、ならびに／または著しい応答（例えば部分応答及び／または完全応答）を生み出すことが可能であることが挙げられるが、これらに限定されない）。ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む治療方法を開始する場合に、本明細書に記載される併用療法のいずれかにおいて、癌が、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤を単独で含む治療方法に対して耐性がなくてもよい（耐性の例としては、応答性がないこと、ならびに／または著しい応答（例えば部分応答及び／または完全応答）を生み出す能力を低下させること及び／若しくは生み出すことが不可能であることが挙げられるが、これらに限定されない）。いくつかの実施形態では、癌は、上皮間葉移行（ＥＭＴ）を経ている。いくつかの実施形態では、ＥＭＴは、上皮関連タンパク質／ＲＮＡ（例えば、Ｅ−カドヘリン）及び／または間葉関連タンパク質／ＲＮＡ（例えば、ビメンチン）の発現をアッセイすることによって検出される。いくつかの実施形態では、癌は、野生型Ｂ−ｒａｆを有する（すなわち、癌は、Ｂ−ｒａｆにおける突然変異体を有さない）。いくつかの実施形態では、癌は、Ｂ−ｒａｆにおける突然変異体を有する。いくつかの実施形態では、突然変異体Ｂ−ｒａｆは、構成的に活性化されたＢ−ｒａｆである。いくつかの実施形態では、突然変異体Ｂ−ｒａｆは、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００である。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅである。いくつかの実施形態では、突然変異体Ｂ−ｒａｆは、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｋ（ＧＴＧ＞ＡＡＧ）、Ｖ６００Ｒ（ＧＴＧ＞ＡＧＧ）、Ｖ６００Ｅ（ＧＴＧ＞ＧＡＡ）、及び／またはＶ６００Ｄ（ＧＴＧ＞ＧＡＴ）のうちの１つ以上である。
【００９９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれかに従う個体は、ヒトであってもよい。
【０１００】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、上記の併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同一または別々の製剤に含まれる）、及び個別投与を包含し、この場合、本発明の拮抗剤の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与前に、同時に（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、逐次的に、同時に（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）、及び／またはそれに続いて実施することができる。いくつかの実施形態では、併用療法は、更に、放射線治療及び／または追加の治療剤を含む。
【０１０１】
ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤は、経口、非経口、肺内、及び経鼻投与、ならびに局所治療のために所望される場合、病巣内投与を含む任意の好適な手段により投与することができる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。投薬は、その投与が短期間かまたは長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の好適な経路、例えば静脈内または皮下注射等の注射により行うことができる。種々の時点における単一または複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入が挙げられるがこれらに限定されない、種々の投与スケジュールが、本明細書において企図される。
【０１０２】
本明細書に記載されるＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（例えば抗体、結合ポリペプチド、及び／または低分子）ならびにＢ−ｒａｆ拮抗剤は、良好な医療実務に合わせた方法で配合、投薬、及び投与してもよい。本文脈で考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医師に公知の他の要因が挙げられる。ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤は、必ずしもではないが、任意に、問題の障害の予防または治療に現在使用されている１つ以上の作用物質と共に配合される。かかる他の作用物質の有効量は、製剤中に存在するＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤ならびにＢ−ｒａｆ拮抗剤の量、障害または治療の種類、ならびに上述の他の要因によって異なる。これらは通常、本明細書に記載される同一用量及び投与経路、若しくは本明細書で記載される１〜９９％の用量、または実験的／臨床的に適切と決定される任意の用量及び任意の経路で使用される。
【０１０３】
疾患の予防または治療に対し、本明細書に記載されるＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤ならびにＢ−ｒａｆ拮抗剤の適切な用量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用する場合）は、治療される疾患のタイプ、疾患の重症度及び経過、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤ならびにＢ−ｒａｆ拮抗剤が予防または治療目的で投与されるかどうか、薬歴、治療歴、患者の病歴ならびにＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤ならびにＢ−ｒａｆ拮抗剤に対する応答、ならびに主治医の自由裁量に依存する。ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤は、一度にまたは一連の治療において患者に好適に投与される。数日間またはそれ以上にわたる反復投与において、状態に応じ、治療は通常、病徴の所望の抑制が生じるまで続けられる。かかる用量は、断続的に、例えば毎週または三週間ごとに（例えば、患者がＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤の投与を約２〜約２０回、または例えば約６回受けるように）投与してもよい。最初の多めの投与量、それに続くより少ない用量を一回以上投与してもよい。代表的な投与レジメンには投与が含まれる。しかし、他の投薬レジメンも有用であり得る。この治療の進行は、従来技術及びアッセイによって容易に監視される。
【０１０４】
上記の製剤または治療方法のうちのいずれかがＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤として免疫複合体を使用して実施してもよいことが理解されよう。
【０１０５】
ＩＩＩ．  治療用組成物
ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む組み合わせが本明細書に提供される。ある種の実施形態では、この組み合わせは、単独で投与される標的療法剤の有効性を増大させる。ある種の実施形態では、この組み合わせは、標的療法剤に対する癌耐性の発生を遅らせる、及び／または防止する。ある種の実施形態では、この組み合わせは、癌を患う個体における標的療法剤の感受性の期間を延ばす。
【０１０６】
本明細書に記載される併用療法に有用なＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、及び／またはポリヌクレオチドである。
【０１０７】
様々なＦＧＦＲ及びＦＧＦのアミノ酸配列が当該技術分野において既知あり、公的に入手可能である。例えば、ＦＧＦＲ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１１３６２−１、Ｐ１１３６２−２、Ｐ１１３６２−３、Ｐ１１３６２−４、Ｐ１１３６２−５、Ｐ１１３６２−６、Ｐ１１３６２−７、Ｐ１１３６２−８、Ｐ１１３６２−９、Ｐ１１３６２−１０、Ｐ１１３６２−１１、Ｐ１１３６２−１２、Ｐ１１３６２−１３、Ｐ１１３６２−１４、Ｐ１１３６２−１５、Ｐ１１３６２−１６、Ｐ１１３６２−１７、Ｐ１１３６２−１８、Ｐ１１３６２−１９、Ｐ１１３６２−２０、及び／若しくはＰ１１３６２−２１）、ＦＧＦＲ２（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２１８０２−１（すなわちＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ）、Ｐ２１８０２−２、Ｐ２１８０２−３（すなわちＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ）、Ｐ２１８０２−４、Ｐ２１８０２−５、Ｐ２１８０２−６、Ｐ２１８０２−７、Ｐ２１８０２−８、Ｐ２１８０２−９、Ｐ２１８０２−１０、Ｐ２１８０２−１１、Ｐ２１８０２−１２、Ｐ２１８０２−１３、Ｐ２１８０２−１４、Ｐ２１８０２−１５、Ｐ２１８０２−１６、Ｐ２１８０２−１７、Ｐ２１８０２−１８、Ｐ２１８０２−１９、Ｐ２１８０２−２０、Ｐ２１８０２−２１、Ｐ２１８０２−２２、及び／若しくはＰ２１８０２−２３）、ＦＧＦＲ３（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２２６０７−１（すなわちＦＧＦＲ３−ＩＩＩｃ）、Ｐ２２６０７−２（すなわちＦＧＦＲ３−ＩＩＩｂ）、Ｐ２２６０７−３、及び／若しくはＰ２２６０７−４）、ＦＧＦＲ４（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２２４５５−１及び／若しくはＰ２２４５５−２）、ＦＧＦ１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０５２３０−１及び／若しくはＰ０５２３０−２）、ＦＧＦ２（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０９０３８−１、Ｐ０９０３８−２、Ｐ０９０３８−３、及び／若しくはＰ０９０３８−４）、ＦＧＦ３（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１１４８７）、ＦＧＦ４（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ０８６２０）、ＦＧＦ５（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ１２０３４−１及び／若しくはＰ１２０３４−２）、ＦＧＦ６（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  １０７６７）、ＦＧＦ７（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ２１７８１）、ＦＧＦ８（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ５５０７５−１、Ｐ５５０７５−２、Ｐ５５０７５−３、及び／若しくはＰ５５０７５−４）、ＦＧＦ９（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ３１３７１）、ＦＧＦ１０（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｏ１５５２０）、ＦＧＦ１１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９２９１４）、ＦＧＦ１２（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｐ６１３２８−１、及び／若しくはＰ６１３２８−２）、ＦＧＦ１３（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９２９１３−１、Ｑ９２��１３−２、Ｑ９２９１３−３、Ｑ９２９１３−４、及び／若しくはＱ９２９１３−５）、ＦＧＦ１４（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９２９１５−１、及び／若しくはＱ９２９１５−２）、ＦＧＦ１６（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｏ４３３２０）、ＦＧＦ１７（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｏ６０２５８−１及び／若しくはＯ６０２５８−２）、ＦＧＦ１８（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｏ７６０９３）、ＦＧＦ１９（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｏ９５７５０）、ＦＧＦ２０（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９ＮＰ９５）、ＦＧＦ２１（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９ＮＳＡ１）、ＦＧＦ２２（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９ＨＣＴ０）、ならびに／またはＦＧＦ２３（例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ  Ｑ９ＧＺＶ９）を参照のこと。
【０１０８】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、抗体阻害剤、低分子阻害剤、結合ポリペプチド阻害剤、及び／またはポリヌクレオチド拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、結合ポリペプチド阻害剤である。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチド阻害剤は、Ｆｃに結合するＦＧＦＲの細胞外ドメインの領域を含む。いくつかの実施形態ではＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、抗体である。
【０１０９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂ、ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ５、ＦＧＦ６、及びＦＧＦ１０のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ１（例えば、ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂ及び／またはＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃ）に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ２に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ５に結合する、及び／またはそれを阻害する。
【０１１０】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドは、ＦＧＦＲ１ポリペプチド及び融合パートナーの細胞外ドメインを含むＦＧＦＲ１融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１はＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１はＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂである。いくつかの実施形態では、細胞外ドメインは、ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃのアミノ酸２２〜３６０または２２〜５９２からのものを含む。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１融合タンパク質は、ＵＳ７６７８８９０に記載されているタンパク質であり、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１１１】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦ２抗体である。いくつかの実施形態ではでは、融合パートナーはＦｃポリペプチドである。いくつかの実施形態では、この抗体は、例えば、ＵＳ２００９０３０４７０７（参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＦＧＦ２抗体、例えば、ハイブリドーマＰＴＡ−８８６４により産生された抗体及び／またはそのヒト化抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ１−ＩＩＩｃ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ１抗体である。
【０１１２】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、Ｎ−［２−［［４−（ジエチルアミノ）ブチル］アミノ］−６−（３，５−ジメトキシフェニル）ピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−７−イル］−Ｎ’−（１，１−ジメチルエチル）−尿素またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、すなわち３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−尿素及び／またはその薬学的に許容される塩；ＣＡＳ＃  ８７２５１１−３４−７）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤は、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；すなわちＮ−（５−（３，５−ジメトキシフェネチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−（（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド及び／またはその薬学的に許容される塩）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ１シグナル伝達拮抗剤はＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７）である。
【０１１３】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ３、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ７、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、及びＦＧＦ２２のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ２（例えば、ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ及び／またはＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ）に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ２に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ９に結合する、及び／またはそれを阻害する。
【０１１４】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドは、ＦＧＦＲ２ポリペプチド及び融合パートナーの細胞外ドメインを含むＦＧＦＲ２融合タンパク質である。例としては、ＷＯ２００８／０６５５４３及びＷＯ２００７／０１４１２３（参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ２抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ２−ＩＩＩｃ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ２  抗体である。ＦＧＦＲ２抗体の例は、当該技術分野において既知であり、これには、ＵＳ８，１０１，７２３、ＵＳ８，１０１，７２１、ＷＯ２００１／７９２６６、ＷＯ２００７／１４４８９３、及びＷＯ２０１０／０５４２６５（参照することによりそれらの全体が組み込まれる）に記載される抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１５】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、すなわち３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−尿素及び／またはその薬学的に許容される塩；ＣＡＳ＃  ８７２５１１−３４−７）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤は、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；すなわちＮ−（５−（３，５−ジメトキシフェネチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−（（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド及び／またはその薬学的に許容される塩）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ２シグナル伝達拮抗剤はＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７））である。
【０１１６】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ３−ＩＩＩｂ、ＦＧＦＲ３−ＩＩＩｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、及びＦＧＦ２３のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ３（例えば、ＦＧＦＲ３−ＩＩＩｂ及び／またはＦＧＦＲ３−ＩＩＩｃ）に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ２に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ９に結合する、及び／またはそれを阻害する。
【０１１７】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドは、ＦＧＦＲ３ポリペプチド及び融合パートナーの細胞外ドメインを含むＦＧＦＲ３融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ３抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ３−ＩＩＩｂ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ３−ＩＩＩｃ抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ３抗体である。ＦＧＦＲ３抗体の例は、当該技術分野において既知であり、これには、ＵＳ８，１０１，７２１、ＷＯ２０１０／１１１３６７、ＷＯ２００１／７９２６６、ＷＯ２００２／１０２８５４、ＷＯ２００２／１０９７２、ＷＯ２００７／１４４８９３、ＷＯ２０１０／００２８６２、及び／またはＷＯ２０１０／０４８０２６（参照することによりそれらの全体が組み込まれる）に記載される抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１８】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、すなわち３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−尿素及び／またはその薬学的に許容される塩；ＣＡＳ＃  ８７２５１１−３４−７）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤は、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；すなわちＮ−（５−（３，５−ジメトキシフェネチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−（（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド及び／またはその薬学的に許容される塩）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３シグナル伝達拮抗剤はＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７）である。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ３拮抗剤は、ブリバニブ、ドビチニブ（ＴＫＩ−２５８）、及び／またはＨＭ−８０８７１Ａである。
【０１１９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤はＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ４−ＩＩＩｂ、ＦＧＦＲ４−ＩＩＩｃ、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ８、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１６、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、及びＦＧＦ１９のうちの１つ以上に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ４（例えば、ＦＧＦＲ４−ＩＩＩｂ及び／またはＦＧＦＲ４−ＩＩＩｃ）に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ２に結合する、及び／またはそれを阻害する。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦ９に結合する、及び／またはそれを阻害する。
【０１２０】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は結合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドは、ＦＧＦＲ４ポリペプチド及び融合パートナーの細胞外ドメインを含むＦＧＦＲ４融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、抗ＦＧＦＲ４抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、１つを超えるＦＧＦＲポリペプチドと結合することが可能な抗ＦＧＦＲ４抗体である。ＦＧＦＲ４抗体の例は、当該技術分野において既知であり、これには、ＷＯ２００８／０５２７９６及びＷＯ２００５／０３７２３５（参照することによりそれらの全体が組み込まれる）に記載される抗体が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２１】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４シグナル伝達の弱い拮抗剤は、ＢＧＪ３９８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ、すなわち３−（２，６−ジクロロ−３，５−ジメトキシ−フェニル）−１−｛６−［４−（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−フェニルアミノ］−ピリミジン−４−イル｝−１−メチル−尿素及び／またはその薬学的に許容される塩；ＣＡＳ＃８７２５１１−３４−７）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４の弱い拮抗剤は、ＡＺＤ４５４７（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ；すなわちＮ−（５−（３，５−ジメトキシフェネチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−４−（（３Ｓ，５Ｒ）−３，５−ジメチルピペラジン−１−イル）ベンズアミド及び／またはその薬学的に許容される塩）である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ４の弱い拮抗剤は、ＦＦ２８４（Ｃｈｕｇａｉ／Ｄｅｂｉｏｐｈａｒｍ（Ｄｅｂｉｏ  １３４７）である。
【０１２２】
例となるＦＧＦＲ拮抗剤は、当該技術分野において既知であり、これには、ＵＳ５２８８８５５、ＵＳ６３４４５４６、ＷＯ９４／２１８１３、ＵＳ２００７０２７４９８１、ＷＯ２００５／０６６２１１、ＷＯ２０１１／０６８８９３、ＵＳ５２２９５０１、ＵＳ６６５６７２８、ＵＳ７６７８８９０、ＷＯ９５／０２１２５８、ＵＳ６９２１７６３、ＵＳ６７１３４７４、ＵＳ６６１０６８８、ＵＳ６２９７２３８、ＵＳ２０１３００５３３７６、ＵＳ２０１３００３９８５５、ＵＳ２０１３００４４９２、ＵＳ２０１２０３１６１３７、ＵＳ２０１２０２５１５３８、ＵＳ２０１２０１９５８５１、ＵＳ２０１１０１２９５２４、ＵＳ２０１１００５３９３２、ＵＳ２００５０２２７９２１、ＥＰ１７６１５０５、ＷＯ２０１２／１２５１２４、ＷＯ２０１２／１２３５８５、ＷＯ２０１１／０９９５７６、ＷＯ２０１１／０３５９２２、ＷＯ２００９１４８９２８、ＷＯ２００８／１４９５２１、ＷＯ２００５／０７９３９０、ＷＯ２００３／０８００６４、ＷＯ２００８／０７５０６８（具体的には、実施例８０）、ＷＯ２００５／０８０３３０（参照することによりそれらの全体が組み込まれる）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１２３】
いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ／ＦＧＦに特異的な阻害剤、例えば、ＦＧＦＲ１の特異的な阻害剤であってもよい。いくつかの実施形態では、阻害剤は、二重阻害剤または汎阻害剤であってもよく、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤は、ＦＧＦＲ／ＦＧＦ、１つ以上の他の標的ポリペプチド、及び／または１つ以上のＦＧＦＲ／ＦＧＦを阻害する。
【０１２４】
本明細書に記載される方法において有用なＢ−ｒａｆ拮抗剤もまた、本明細書に提供される。
【０１２５】
例となるＢ−ｒａｆ拮抗剤には、当該技術分野において既知であるもの、例えば、ベムラフェニブ（Ｚｅｌｏｂｒａｆ（登録商標）及びＰＬＸ４０３２としても知られている）ソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬＸ３６０３、ＧＳＫ２１１８４３６、ＧＤＣ−０８７９、Ｎ−（３−（５−（４−クロロフェニル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−カルボニル）−２，４−ジフルオロフェニル）プロパン−１−スルホンアミド、ならびにＷＯ２００７／００２３２５、ＷＯ２００７／００２４３３、ＷＯ２００９１１１２７８、ＷＯ２００９１１１２７９、ＷＯ２００９１１１２７７、ＷＯ２００９１１１２８０、及び米国特許第７，４９１，８２９号に記載されているものが挙げられる。他のＢ−ｒａｆ拮抗剤には、ＧＳＫ  ２１１８４３６、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６が含まれる。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、選択的なＢ−ｒａｆ拮抗剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、選択的なＢ−ｒａｆ  Ｖ６００拮抗剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、選択的なＢ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ拮抗剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｋ、及び／またはＶ６００Ｄである。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００は、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｒである。
【０１２６】
Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、低分子阻害剤であってもよい。低分子阻害剤は、好ましくは、Ｂ−ｒａｆに特異的に結合する、本明細書に定義するポリペプチドまたは抗体以外の有機分子であることが好ましい。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、キナーゼ阻害剤である。いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、抗体、ペプチド、ペプチド模倣剤、アプタマー、またはポリヌブレオチド（ｐｏｌｙｎｕｂｌｅｏｔｉｄｅ）である。
【０１２７】
本方法で有用な抗Ｂ−ｒａｆ抗体としては、Ｂ−ｒａｆに対して十分な親和性及び特異性で結合し、かつＢ−ｒａｆ活性を低減または阻害することができる任意の抗体が挙げられる。選択された抗体は通常、Ｂ−ｒａｆに対して十分強力な結合親和性を有し、例えば、該抗体はヒトＢ−ｒａｆと、１００ｎＭ〜１ｐＭのＫｄ値で結合してもよい。抗体親和性は例えば、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（ＰＣＴ出願公開第  ＷＯ２００５／０１２３５９号）に記載されているようなＢＩＡＣｏｒｅアッセイ等）；酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）；及び競合アッセイ（例えばＲＩＡ）により測定してもよい。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆに特異的な阻害剤であってもよい。いくつかの実施形態では、該阻害剤は、二重阻害剤または汎阻害剤であってもよく、Ｂ−ｒａｆ拮抗剤は、Ｂ−ｒａｆ及び１つ以上の他の標的ポリペプチドを阻害する。
【０１２９】
Ａ．抗体
ＦＧＦＲ（例えば、本明細書に記載される方法における使用のための、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆ等の対象ポリペプチドに結合する単離抗体が、本明細書に提供される。上記の実施形態のうちのいずれかにおいて、抗体はヒト化している。更に、上記の実施形態のうちのいずれかによる抗体はモノクローナル抗体であり、キメラ、ヒト化またはヒト抗体を含む。一実施形態では、抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は完全長抗体、例えば「完全ＩｇＧ１」抗体、または本明細書に定義する他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０１３０】
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗体は、以下の項に記載する機能のいずれかを、単独でまたは組み合わせて、導入してもよい。
【０１３１】
１．抗体親和性
ある種の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、≦１μΜ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）を有する。一実施形態では、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、対象抗体のＦａｂ版、及びその抗原と共に実施する。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原によりＦａｂを平衡化し、次いで、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレート（例えばＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照）で捕捉することにより測定する。アッセイについての条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ  ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後室温（約２３℃）で２〜５時間、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで遮断した。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を、対象Ｆａｂの連続希釈液と混合する（例えばＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）にある、抗ＶＥＧＦ抗体であるＦａｂ−１２の評価と一致する）。次いで、対象Ｆａｂを一晩インキュベートするが、確実に平衡状態に到達するように、インキュベーションを更に長い期間（例えば約６５時間）継続してもよい。その後、室温でのインキュベーションのため、混合物を捕捉プレートに移す（約１時間）。次いで、溶液を次いで除去し、プレートをＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥すると、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数する。最大結合が２０％以下となる各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイでの使用のために選択する。
【０１３２】
別の実施形態によれば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。例えば、約１０の応答単位（ＲＵ）にて固定化抗原ＣＭ５チップを用いて、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いるアッセイを２５℃にて実施する。一実施形態では、供給業者の取扱説明書に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ、Ｉｎｃ．）をＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により活性化する。５μＬ／分の流量で注入する前に、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）により、抗原を５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈して、約１０応答単位（ＲＵ）の共役タンパク質を得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して未反応基を遮断する。動力学測定のために、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）と共に、２５℃にて、約２５μＬ／分の流量で、２倍のＦａｂ連続希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）をＰＢＳ中に注入する。簡単な１：１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を使用して、会合及び解離センサーグラムを同時に一致させることにより、会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率として算出する。例えばＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。上記表面プラズモン共鳴アッセイにより会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、会合速度は、ストップトフロー分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）または撹拌キュベットを備えた８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定されるように、抗原濃度が増加する存在下で、２５℃における、ＰＢＳ中の２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度における増減を測定する蛍光消光技術（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）を使用することによって測定され得る。
【０１３３】
２．  抗体断片
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載する他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）にも記載されている。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）中のＰｌｕｃｋｔｈuｎを参照のこと；また、ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
【０１３４】
ダイアボディとは、二価または二重特異的であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。また、トリアボディ及びテトラボディは、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）にも記載されている。
【０１３５】
単一ドメイン抗体とは、抗体の重鎖可変領域の全部若しくは一部、または軽鎖可変領域の全部若しくは一部を含む抗体断片である。ある種の実施形態では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照）。
【０１３６】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、無傷抗体のタンパク分解消化、及び組換え宿主細胞（例えば大腸菌またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、各種技術により製造可能である。
【０１３７】
３．  キメラ及びヒト化抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体はキメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一実施例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えばマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）、及びヒト定常領域を含む。更なる実施例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体としては、その抗原結合断片が挙げられる。
【０１３８】
ある種の実施形態では、キメラ抗体はヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性は低下させるためにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）はヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変領域を含む。ヒト化抗体はまた、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むであろう。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、非ヒト抗体（例えばＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換され、例えば、抗体の特異性または親和性が回復または改善される。
【０１３９】
ヒト化抗体及びその作成方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載）に詳しく記載されている。
【０１４０】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照）；ならびにＦＲライブラリーをスクリーニングすることによって誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１４１】
４．  ヒト抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の種々の技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に全般的に記載されている。
【０１４２】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してヒト可変領域を有する無傷なヒト抗体または無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製してもよい。かかる動物は、典型的に、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在する、若しくは動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含む。かかるトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、概して、不活性化されてきた。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第ＵＳ  ２００７／００６１９００号）も参照のこと。かかる動物により生成される無傷抗体のヒト可変領域を、例えば異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に修飾してもよい。
【０１４３】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。更なる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載）に記載されるようなものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔ．＆Ｈｉｓｔｏｐａｔｈ．，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１４４】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。その後、かかる可変領域配列を、所望のヒト定常領域と組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術を以下に記載する。
【０１４５】
５．ライブラリー由来の抗体
抗体は、コンビナトリアルライブラリーを所望の活性（複数を含む）を有する抗体についてスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、かかるライブラリーを所望の結合特徴を所有する抗体についてスクリーニングするために、種々の方法が、当技術分野において既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）において概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、ならびにＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
【０１４６】
ある種のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいて無作為に再結合され、これを、その後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的に、抗体断片を、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とせずに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローニングして、いかなる免疫付与もなしに、単一供給源の抗体から広範囲の非自己抗原及び自己抗原まで提供することができる。最終的に、ナイーブライブラリーは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞から再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングして、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロでの再構成を達成するランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用いることによって合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許文献としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０１４７】
本明細書において、ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、ヒト抗体またはヒト抗体断片と見なす。
【０１４８】
６．多重特異性抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施形態では、結合特異性のうちの１つは、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆ等の対象ポリペプチドであり、もう一方は、任意の他の抗原のためのものである。ある種の実施形態では、二重特異性抗体は、ＦＧＦＲ／ＦＧＦ及び／またはＢ−ｒａｆ等の対象ポリペプチドの２つの異なるエピトープに結合してもよい。二重特異性抗体はまた、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆ等の対象ポリペプチドを発現する細胞に細胞毒性剤を局在化させるために使用してもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０１４９】
多重特異性抗体を作製するための技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３）を参照）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）、ならびに「ノブ−イン−ホール」技術（例えば米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための組換え静電的ステアリング効果（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）；二重特異性抗体の産生のためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照）；ならびに一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照）；ならびに、例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているような三重特異性抗体の調製により作製してもよい。
【０１５０】
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する組換え抗体もまた、本明細書に含まれる（例えばＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照）。
【０１５１】
本明細書における抗体または断片は、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、及び／またはＢ−ｒａｆならびに他の異なる抗原等の対象ポリペプチドに結合する抗原結合部位を含む「二重作用Ｆａｂ」または「ＤＡＦ」も含む（例えばＵＳ２００８／００６９８２０を参照）。
【０１５２】
７．抗体変異体
ａ）グリコシル化変異体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、抗体がグリコシル化される度合いを増大または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、アミノ酸配列を、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるように改変させることによって、簡便に達成され得る。
【０１５３】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合される炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞により産生される自然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に対してＮ結合により一般的に結合する分枝状、二分岐のオリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合するフコースを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が、ある種の改善された特性を有する抗体変異体を作製するために、なされ得る。
【０１５４】
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により測定されるように、Ａｓｎ２９７に結合したすべての糖鎖構造（例えば複合体、ハイブリッド、及びハイマンノース構造体）の合計に対してＡｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって測定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体中の軽度の配列変異により、アミノ酸の２９７位の約±３上流または下流に、すなわち、２９４位〜３００位の間に位置してもよい。かかるフコシル化変異体は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第  ＵＳ  ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠失」抗体変異体に関連した公報の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠失したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１，Ａｄａｍｓらの特に実施例１１）、及びα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が含まれる。
【０１５５】
抗体変異体は、更に、例えば抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分オリゴ糖と共に提供される。かかる抗体変異体は、フコシル化が低減され、及び／またはＡＤＣＣ機能が改善され得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体もまた、提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１５６】
ｂ）Ｆｃ領域変異体
ある種の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾を、本明細書において提供する抗体のＦｃ領域に導入し、それにより、Ｆｃ領域変異体を生成してもよい。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んでもよい。
【０１５７】
ある種の実施形態では、本発明は、エフェクター機能をいくつか有するがすべては有さない抗体変異体を企図し、これは、抗体を、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は不要かまたは有害である用途のために望ましい候補とする。インビトロ及び／またはインビボ細胞毒性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠失している（そのためＡＤＣＣ活性も欠失している可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能は保持していることを確認することができる。ＡＤＣＣの仲立ちをする主な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、単球はＦｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁、表３に要約されている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリー用ＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、または更に、対象分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価してもよい。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑと結合できず、そのためＣＤＣ活性を欠失することを確認してもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。当該技術分野において既知の方法を使用して、ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定も行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照）。
【０１５８】
低減したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体は、アミノ酸位２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ変異体を含み、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１５９】
ＦｃＲへの改善または低下した結合を有するある種の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと。）ある種の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の位置２９８、３３３、及び／または３３４（残基のＥＵ番号付け）で置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の改変（すなわち、改善または低下のいずれか）をもたらす改変が、Ｆｃ領域になされる。
【０１６０】
半減期が増大し、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善した抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体は、２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のＦｃ領域残基のうちの１つ以上での置換、例えばＦｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。Ｆｃ領域変異体のその他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
【０１６１】
ｃ）システイン操作抗体変異体
ある種の実施形態では、例えば、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基により置換されているＴＨＩＯＭＡＢ（商標）技術を用いることによって、システイン操作抗体を作製するのが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換される残基が、抗体の接触可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接触可能な部位に配置され、抗体を他の部分、例えば薬物部分、またはリンカー−薬物部分に結合させ、本明細書で更に記載されるように免疫複合体を作製するために使用され得る。ある種の実施形態では、任意の１つ以上の以下の残基をシステインで置換してもよい：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。更なる抗体は、米国特許第７，５２１，５４１号及び米国特許公開第２０１１０３０１３３４号（参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるように、システイン置換を用いて設計され得る。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように産生してもよい。
【０１６２】
Ｂ．  免疫複合体
更に、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、またはＢ−ｒａｆ等の対象ポリペプチドと結合する抗体を含み、化学療法剤若しくは薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、微生物、菌類、植物、若しくは動物由来の酵素活性毒素、またはこれらの断片）、あるいは本明細書に記載される方法で使用する放射性同位元素等の１つ以上の細胞毒性剤に結合した免疫複合体が、本明細書に提供される。
【０１６３】
一実施形態では、免疫複合体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）であり、抗体が、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ０４２５２３５Ｂ１号を参照）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、及びＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照）；ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含む１つ以上の薬物に結合している。
【０１６４】
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａからのもの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、シナアブラギリのタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウのタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、ならびにトリコテセンが含まれるが、これらに限定されない、酵素活性毒素またはこれらの断片に結合する本明細書に記載される抗体を含む。
【０１６５】
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に結合して、放射性複合体を形成する本明細書に記載される抗体を含む。種々の放射性同位元素が、放射性複合体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素が含まれる。放射性複合体を検出用に用いる場合、例えば、Ｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３等のシンチグラフィ検査用放射性原子、または、ここでもヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄等の核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴映像法、ｍｒｉとしても知られている）用のスピン標識を含んでもよい。
【０１６６】
Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジプイミデート塩酸塩等）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビスジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネート等）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）等の、種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて、抗体及び細胞毒性剤の複合体を作製してもよい。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるようにして調製することができる。炭素１４で標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの結合用の代表的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。リンカーは、細胞中の細胞毒性薬の放出を促進する「開裂可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してもよい。
【０１６７】
本明細書における免疫複合体またはＡＤＣは、限定されないが、（例えばＰｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）市販されているＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホＥＭＣＳ、スルホＧＭＢＳ、スルホＫＭＵＳ、スルホＭＢＳ、スルホＳＩＡＢ、スルホＳＭＣＣ、及びスルホＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むが、これらに限定されない、架橋試薬を用いて調製されたかかる複合体を明示的に企図する。
【０１６８】
Ｃ．  結合ポリペプチド
結合ポリペプチドは、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／またはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆに好ましくは特異的に結合するポリペプチドであり、また、本明細書に記載される方法で使用するために提供される。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドは、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／またはＦＧＦＲ４）及び／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）拮抗剤、ならびに／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤である。結合ポリペプチドは、既知のポリペプチド合成法を用いて化学合成を行ってもよく、または組換え技術を用いて調製及び精製を行ってもよい。結合ポリペプチドは、通常、少なくとも約５個の長さのアミノ酸である、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、若しくは１００個の長さのアミノ酸またはそれ以上であり、ここで、好ましくは、本明細書に記載されるように、標的、例えば、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、またはＢ−ｒａｆに特異的に結合可能なかかる結合ポリペプチド。結合ポリペプチドは、既知の技術を用いて過度な実験をすることなく同定され得る。これに関し、ポリペプチド標的に特異的に結合可能な結合ポリペプチドについてポリペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該技術分野において周知であることに留意すべきである（例えば、米国特許第５，５５６，７６２号、同第５，７５０，３７３号、同第４，７０８，８７１号、同第４，８３３，０９２号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６８９号、同第５，６６３，１４３号；ＰＣＴ  公開第  ＷＯ８４／０３５０６及びＷＯ８４／０３５６４、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：３９９８−４００２（１９８４）、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２：１７８−１８２（１９８５）、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，１３０−１４９（１９８６）、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１０２：２５９−２７４（１９８７）、Ｓｃｈｏｏｆｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４０：６１１−６１６（１９８８）、Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３７８、Ｌｏｗ��ａｎ，Ｈ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：１０８３２、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４、Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１、Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：８３６３、ならびにＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８を参照のこと）。
【０１６９】
ペプチドライブラリーの生成及びこれらのライブラリーのスクリーニング方法は、米国特許第５，７２３，２８６号、同第５，４３２，０１８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，４９８，５３０号、同第５，７７０，４３４号、同第５，７３４，０１８号、同第５，６９８，４２６号、同第５，７６３，１９２号、及び同第５，７２３，３２３号にも開示されている。
【０１７０】
Ｄ．結合低分子
本明細書に記載される方法で使用するために、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆの低分子拮抗剤として使用するための結合低分子が、本明細書に提供される。
【０１７１】
結合低分子は、本明細書に記載するＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆに特異的に結合する、本明細書に定義する結合ポリペプチドまたは抗体以外の有機分子であることが好ましい。結合有機低分子は、周知の方法を用いて同定及び化学的に合成されてもよい（例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３及びＷＯ００／３９５８５を参照）。結合有機低分子は、通常サイズが約２０００ダルトン未満、あるいはサイズが約１５００、約７５０、約５００、約２５０、または約２００ダルトン未満であり、ここで、好ましくは本明細書に記載されるポリペプチドに特異的に結合可能なかかる有機低分子は、既知の技術を使用して過度な実験をすることなく、同定してもよい。これに関し、対象ポリペプチドに結合可能な分子に対する有機低分子ライブラリーのスクリーニング技術は当該技術分野において周知であることに留意すべきである（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３及びＷＯ００／３９５８５を参照）。結合有機低分子は、例えば、アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、Ｎ−置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバメート、炭酸塩、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、ハロゲン化アリール、スルホン酸アリール、ハロゲン化アルキル、スルホン酸アルキル、芳香族化合物、複素環式化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアネート、塩化スルホニル、ジアゾ化合物、酸塩化物等であり得る。
【０１７２】
Ｅ．拮抗剤ポリヌクレオチド
本明細書に記載される方法で使用するポリヌクレオチド拮抗剤もまた、本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、アンチセンス核酸及び／またはリボザイムであってもよい。アンチセンス核酸は、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆ遺伝子等の、対象遺伝子のＲＮＡ転写産物の少なくとも一部に相補的な配列を含む。しかし、完全な相補性は、好ましいが、必要ではない。
【０１７３】
本明細書で言及される「ＲＮＡの少なくとも一部に相補的な」配列とは、ＲＮＡをハイブリダイズさせて安定した二本鎖を形成可能な十分な相補性を有する配列を指し、したがって、二本鎖のアンチセンス核酸の場合、二本鎖ＤＮＡの一本鎖を試験してもよい、または三本鎖形成をアッセイしてもよい。ハイブリダイゼーション能力は、アンチセンス核酸相補性の程度、及び長さの両方に依存する。通常、核酸のハイブリダイゼーションが大きくなればなるほど、より多くの塩基が含み得るＲＮＡとミスマッチするが、依然として安定した二本鎖（または場合により三本鎖）を形成する。当業者は、ハイブリダイズした複合体の融点を測定する標準的な手順を使用して、許容範囲のミスマッチの程度を確認することができる。
【０１７４】
メッセージの５’末端、例えばＡＵＧ開始コドンまでの及びそれを含む５’未翻訳配列に相補的であるポリヌクレオチドは、翻訳阻害で最も効率的に作用するはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’未翻訳配列に相補的な配列も同様に、ｍＲＮＡの翻訳阻害に効果的であることが示されている。一般にはＷａｇｎｅｒ，Ｒ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３３３−３３５を参照のこと。したがって、遺伝子の５’または３’未翻訳、未コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用され得る。ｍＲＮＡの５’未翻訳領域に相補的なポリヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの補体を含まなければならない。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスポリヌクレオチドは、さほど効果のない翻訳阻害剤であるが、本発明に従って使用することができる。ｍＲＮＡの５’、または３’コード領域をハイブリダイズするように設計されたか否かに関わらず、アンチセンス核酸は少なくとも６個の長さのヌクレオチドを有さなければならず、好ましくは６〜５０個にわたる長さのヌクレオチドのオリゴヌクレオチドである。特定の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも２５個のヌクレオチド、または少なくとも５０個のヌクレオチドである。
【０１７５】
Ｆ．抗体及び結合ポリペプチド変異体
ある種の実施形態では、本明細書で提供する抗体及び／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、結合親和性、ならびに／または抗体及び／または結合ポリペプチドの他の生物学的性質を改善するのが望ましい場合がある。抗体及び／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列変異体を、抗体及び／若しくは結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することで、またはペプチド合成により調製してもよい。かかる修飾には例えば、抗体及び／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列内での残基の欠失、及び／または挿入、及び／または置換が挙げられる。最終構築物が所望の特性、例えば抗原結合を有することを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行い、最終構築物に到達することができる。
【０１７６】
ある種の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体及び／または結合ポリペプチド変異体を提供する。置換の突然変異を誘発させる対象部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。表１において、見出し「好ましい置換」の下に保存的置換を示す。更に相当の変更を表１の見出し「代表的置換」の下に、かつアミノ酸側鎖クラスに関して以下に更に記載をする通りに示す。アミノ酸置換を抗体及び／または対象ポリペプチド、ならびに所望の活性、例えば抗原結合の維持／向上、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの向上についてスクリーニングをした生成物に導入してもよい。
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【０１７７】
アミノ酸を一般的な側鎖の特性に従って分類してもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、メチオニン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン
（２）中性親水性：システイン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン
（３）酸性：アスパラギン酸、グルタミン酸
（４）塩基性：ヒスチジン、リジン、アルギニン
（５）鎖配向に影響を与える残基：グリシン、プロリン
（６）芳香族：トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン。
【０１７８】
非保存的置換には、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０１７９】
Ｇ．抗体及び結合ポリペプチド誘導体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体及び／または結合ポリペプチドを更に修飾して、当技術分野において既知であり容易に入手可能な、更なる非タンパク質性部分を含ませてもよい。抗体及び／または結合ポリペプチドの誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１、３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性のため、製造において利点を有し得る。ポリマーは任意の分子量であってよく、かつ分枝または非分枝であってよい。抗体及び／または結合ポリペプチドに結合したポリマーの数は異なり、１つを超えるポリマーが結合している場合、それらは、同一であるかまたは異なる分子であることができる。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、限定されるわけではないが、改善される抗体及び／または結合ポリペプチドの特定の性質または機能、抗体誘導体及び／または結合ポリペプチド誘導体が規定される状態下の治療に使用されるかどうか、等を含む事項に基づき決定することができる。
【０１８０】
別の実施形態では、放射線照射により選択的に加熱され得る、非タンパク質性部分への抗体及び／または結合ポリペプチドの複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は任意の波長であってよく、限定するものではないが、通常の細胞に害を与えないが、抗体及び／または結合ポリペプチド−非タンパク質様部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで非タンパク質様部分を加熱する波長が含まれる。
【０１８１】
ＩＶ．所望の機能を有するＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤のスクリーニング及び／または同定方法
抗体、結合ポリペプチド、及び／または低分子を含む、本明細書に記載される方法において使用するＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ならびに／またはＢ−ｒａｆ等の対象ポリペプチドの更なる拮抗剤が上に記載された。本明細書において提供する抗体、結合ポリペプチド、及び／または結合低分子等の更なる拮抗剤は、当該技術分野において既知の種々のアッセイにより、その物理的／化学的性質及び／または生物活性を同定、スクリーニング、または特性決定してもよい。
【０１８２】
ある種の実施形態では、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ポリペプチドの原子座標を含むメモリを含むコンピュータシステムが、ＦＧＦＲシグナル伝達のリガンド結合部位を有する化合物を合理的に同定するモデルとして有用である。かかる化合物は、例えば、新規に設計するか、または既知の化合物の改質により設計するかのいずれかであってもよい。他の場合、結合化合物は、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）の分子モデルと「ドッキングする」かどうかを判定するために既知の化合物を試験することにより同定してもよい。かかるドッキング法は一般に、当該技術分野において既知である。
【０１８３】
ＦＧＦＲシグナル伝達の結晶構造データをコンピュータモデリング技術と共に使用し、結晶構造データの分析により、種々のＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）結合化合物の結合モデルを開発することができる。部位モデルは、部位表面の三次元トポグラフィー、ならびにファン・デル・ワールス接触、静電相互作用、及び水素結合機会等の要因を特徴付ける。次に、コンピュータシミュレーション技術を使用して、モデル部位と相互作用するように設計されている、プロトン、ヒドロキシル基、アミン基、二価のカチオン、芳香族及び脂肪族官能基、アミド基、アルコール基等が挙げられるが、これらに限定されない、官能基の相互作用位置をマッピングする。これらの基を、候補化合物が部位に特異的に結合するであろうという予測を立てて、ファーマコフォアまたは候補化合物の中に設計してもよい。したがって、ファーマコフォアの設計には、ファーマコフォアに含まれる候補化合物の、水素結合、ファン・デル・ワールス、静電、及び共有結合の相互作用を含む利用可能な種類の化学的相互作用のいずれかまたはそのすべてにより、部位と相互作用する能力を考慮することを伴うが、一般に、ファーマコフォアは非共有結合機構により部位と相互作用する。
【０１８４】
ファーマコフォアまたは候補化合物の、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチドへの結合能力は、実際の合成に加え、コンピュータモデリング技術の使用により分析することができる。十分な結合エネルギー（一実施例では、約１０−２Ｍまたはそれ以上の標的の解離定数に対応する結合エネルギー）により標的（例えば、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチド結合部位）と結合することがコンピュータモデリングにより示される化合物のみを合成して、それらのＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）、ポリペプチドへの結合能力及びＦＧＦＲシグナル伝達阻害能力、また該当する場合、当業者に既知の、及び／または本明細書に記載される酵素アッセイを使用した酵素機能を試験してもよい。したがって、コンピュータによる評価ステップは、十分な親和性を有するＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチドと結合する可能性が低い化合物の不必要な合成を回避する。
【０１８５】
ＦＧＦＲシグナル伝達ファーマコフォアまたは候補化合物を、化学成分または断片を、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチドにおける個々の結合標的部位と会合する能力についてスクリーニングして選択する一連のステップを用いてコンピュータにより評価し、設計してもよい。当業者は、化学成分または断片の、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチド、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチド、より詳細にはＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチドの標的部位と会合する能力をスクリーニングするいくつかの方法の１つを使用してもよい。該工程は、例えば、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）ポリペプチド座標に基づく、コンピュータスクリーン上の標的部位、または当該技術分野において既知のこれらの座標のサブセットの目視検査により開始してもよい。
【０１８６】
癌細胞死を誘発する拮抗剤を選択するために、例えばヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルーまたは７ＡＡＤの取り込みにより示される膜の完全性の喪失を、基準物質と比較して評価してもよい。ＰＩ取り込みアッセイを、補体及び免疫エフェクター細胞の不存在下で実施してもよい。腫瘍細胞を培地のみ、または適切な併用療法剤を含有する培地でインキュベートする。細胞を３日間インキュベートする。各処理の後、細胞集塊除去のために、細胞を洗浄して、３５ｍｍのストレーナを取り付けた１２×７５チューブ（チューブ当たり１ｍＬ、処理群当たり３チューブ）中に分取する。次いで、チューブにＰＩ（１０μｇ／ｍＬ）を入れる。試料はＦＡＣＳＣＡＮ（登録商標）フローサイトメーター及びＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（登録商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して分析してもよい。ＰＩ取り込みにより測定されるように、培地のみ及び／または単剤療法と比較して、統計的に有意なレベルの細胞死を誘発するような拮抗剤を、細胞死誘発抗体、結合ポリペプチド、または結合低分子として選択してもよい。
【０１８７】
スクリーニング及び／または同定法のいずれかにおけるいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）の候補拮抗剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、またはポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）の拮抗剤は、抗体である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲ（例えば、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及び／若しくはＦＧＦＲ４）、ならびに／またはＦＧＦ（例えば、ＦＧＦ１−２３）の拮抗剤は、低分子である。
【０１８８】
Ｖ．薬学的製剤
本明細書に記載されるＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するような抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤は、結合低分子、抗体、結合ポリペプチド、及び／またはポリヌクレオチドである。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、これらには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば亜鉛−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬学的に許容される担体は、更に、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）等の介在性薬剤分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある種の例となるｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチン分解酵素等の、１つ以上の更なるグルコサミノグリカナーゼと結合する。
【０１８９】
例となる凍結乾燥製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが挙げられ、後者の製剤には、ヒスチジンアセテート緩衝液が含まれる。
【０１９０】
本明細書における製剤はまた、治療される特定の適応症で必要に応じて１つを超える有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含んでもよい。かかる有効成分は、意図する目的に対して有効な量の組み合わせで適切に存在する。
【０１９１】
有効成分は、例えば、液滴形成技術または界面重合によって配合されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、あるいはマクロエマルション中に封入されてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０１９２】
持続放出配合物を配合してもよい。持続放出配合物の好適な例は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは、造形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【０１９３】
インビボ投与で使用する製剤は通常滅菌されている。滅菌は例えば、滅菌濾過膜を通す濾過により容易に達成され得る。
【０１９４】
ＶＩ．製造物品
本発明の別の態様では、上記疾患の治療、予防及び／または診断に有用な材料を含む製造物品を提供する。該製造物品は、容器、及び容器上にあるまたは付属するラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静注液バッグ等が挙げられる。容器はガラスまたはプラスチック等の種々の材料から形成してもよい。容器は組成物それ自体、または状態の治療、予防及び／若しくは診断に効果的な別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、かつ、滅菌アクセス口を有してもよい（例えば、容器は静注液バッグまたは皮下注射針で貫通可能なストッパを有するバイアルであってよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載されるＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤である。ラベルまたは添付文書は、組成物が最適な状態の治療に使用されることを示す。更に、製造物品は（ａ）中に組成物を含有する第１の容器（ここで組成物はＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤を含む）、ならびに（ｂ）中に組成物を含有する第２の容器（ここで組成物は更なる細胞毒性剤またはそうでなければ治療剤を含む）を含んでもよい。
【０１９５】
いくつかの実施形態では、製造物品は容器、該容器上のラベル、及び該容器内に含まれる組成物を含み、ここで、組成物は、１つ以上の試薬（例えば、１つ以上の生体指標若しくはプローブに結合する一次抗体、及び／または本明細書に記載される１つ以上の生体指標に結合するプライマー）試料内に１つ以上の生体指標が存在することを評価するために組成物を使用可能であることを示す、容器上のラベル、ならびに試料内に１つ以上の生体指標が存在することを評価するための試薬の使用説明書を含む。製造物品は更に、試料の調製及び試薬の利用のための取扱説明書及び材料のセットを含むことができる。いくつかの実施形態では、製造物品は更に一次及び二次抗体の両方といった試薬を含んでもよく、ここで二次抗体は標識、例えば酵素標識に結合している。いくつかの実施形態では、製造物品は、本明細書に記載される１つ以上の生体指標に対する、１つ以上のプローブ及び／またはプライマー。
【０１９６】
製造物品のいずれかに関するいくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、またはポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤は、低分子である。いくつかの実施形態では、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及び／またはＢ−ｒａｆ拮抗剤は、抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は抗体断片であり、抗体断片は  ＦＧＦＲシグナル伝達及び／または阻害剤と結合する。
【０１９７】
本発明の本実施形態における製造物品は更に、組成物を特定の状態の治療に使用可能であることを示す添付文書を含んでもよい。あるいは、または更に、製造物品は更に、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩−緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液等の製薬上許容できる緩衝液を含む第２（または第３）の容器を含んでもよい。更に、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の視点から所望の他の物質を含んでもよい。
【０１９８】
製造物品内のその他の任意成分としては、１つ以上の緩衝液（例えば遮断緩衝液、洗浄緩衝液、基質緩衝液等）、酵素標識により化学的に変化する基質等の他の試薬（例えば色素体）、エピトープ回収溶液、対照試料（陽性及び／または陰性対照）、対照スライド（複数を含む）等が挙げられる。
【０１９９】
上記の製造物品のうちのいずれかが、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤及びＢ−ｒａｆ拮抗剤の代わりに、またはそれに加えて、本明細書に記載される免疫複合体を含み得ることが理解される。
【実施例】
【０２００】
以下は本発明の方法及び組成物の実施例である。上述の概略的な記載を考慮して、種々の他の実施例を実施してもよいことが理解される。
【０２０１】
（実施例１）
Ｂ−ｒａｆ阻害剤に対する獲得耐性の２つのモデルは、Ｂ−ｒａｆ阻害剤の耐性と関連する分泌因子を決定するために試験された。具体的には、ＨＥＲ２＋乳癌及びＢ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞株が試験された。ＨＥＲ＋陽性乳癌における治療レジメン（ｒｅｇｉｍｅ）は、手術、ハーセプチン、ラパチニブ、ペルツズマブ、Ｔ−ＤＭ１、アントラサイクリン、タキサン、及びカペシタビン（転移性乳癌に対する一次治療としてトラスツズマブ、ペルツズマブ、及びドセタキセル）からなる。ＨＥＲ２＋乳癌は、乳癌の約１５〜３５％（１年当たり約４０，０００件の症例）を占める。ＨＥＲ受容体の併用標的は、耐性機序を補正することによって生存率を改善させることができるが、高い初期応答率にも関わらず、患者の大部分は、最終的には、進行性疾患を発症する。Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫に対する治療レジメンは、手術、イピリムバブ（ＣＴＬＡ４）、ベムラフェニブ、トラメチニブ、ダブラフェニブ、及びダルカルバジンである。黒色腫の約５０％が、Ｂ−ｒａｆ  Ｖ６００Ｅ突然変異体によって特徴付けられ、毎年約１０８，０００件の新しい症例がある。患者の大部分は、ベムラフェニブに応答するが、患者の１０％は、治療の早期に腫瘍進行を経験し、患者の大部分が最大応答に続く遺残腫瘍を有し、１年以内に再発を伴う。
【０２０２】
本明細書に記載されるように、ベムラフェニブ等の治療剤に対する耐性を促進する分泌因子についてのスクリーニングが、Ｂ−ｒａｆ阻害剤に対する獲得耐性の一因となる原因を判定するために行われた（図１１）。
【０２０３】
どの分泌因子が薬剤耐性を促進するかを判定するために、分泌因子のスクリーニングが、ＨＥＲ２＋乳癌細胞及びＢ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞において実行された（図１２及び１３）。分泌因子のスクリーニングの結果は、どの分泌因子が、増大した細胞死（すなわち、因子により増大した死滅）と関連し、どの分泌因子が救助（すなわち、獲得薬剤耐性）と関連するかを示す。
【０２０４】
分泌因子は、ラパチニブ、ＧＤＣ−００３２、ＧＤＣ−０９４１、ＧＤＣ−０３４９、Ｔ−ＤＭ１、またはＴ−ＤＭ１＋ペルツズマブの存在下で、ＨＥＲ２＋乳癌細胞において測定された。このスクリーニングに基づいて、ＢＴＣ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＨＲＧ１、ＮＲＧ１（ＥＧＦ）、ＯＳＭ、ＰＲＧＮ、及びＴＧＦＡ（ＥＧＦ）は、ＨＥＲ２＋乳癌細胞において薬剤耐性をもたらすことが可能な分泌因子として特定された。同様に、分泌因子はまた、薬剤の不在下、またはＰＬＸ４０３２、ＧＤＣ−０９７３、若しくはＧＤＣ−０６２３の存在下で、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞においても測定された。このスクリーニングに基づいて、ＦＧＦ、ＨＧＦ、ＨＲＧ１、ＮＲＧ１（ＥＧＦ）、ＯＳＭ、ＴＧＦＡ（ＥＧＦ）、及びＴＮＦＡは、Ｂ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫細胞において薬剤耐性をもたらすことが可能な分泌因子として特定された。
【０２０５】
分泌因子のスクリーニングの結果として、救助を促進する個々の因子数が、特定された。ＨＥＲ２＋乳癌細胞株については、ＦＧＦＲ、ＥＧＦＲ、及びＨＥＲ３／４のリガンドは、耐性のドライバーとして関係していると見なされた。より小さいサブセットのＨＥＲ２＋乳癌細胞株では、ＭＥＴ及びｃｃ−ケモカインのリガンドもまた、耐性のドライバーとして関係していると見なされた。Ｂ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫細胞株については、ＦＧＦＲ、ＭＥＴ、及びＨＥＲ３／４のリガンドは、耐性に関与した。より小さいサブセットのＢ−ＲＡＦ突然変異体黒色腫細胞株では、ｃＫＩＴ及びＥＧＦＲのリガンドもまた、耐性のドライバーとして関係していると見なされた。
【０２０６】
スクリーニングに基づいて、耐性を促進する同じサブセットの分泌因子が、試験されたすべての化合物（すなわち、薬剤）に対して特定された。したがって、分泌因子は、癌型に依存していた。薬剤標的、化学、及び濃度が、分泌因子が誘発する耐性の強度に影響を及ぼす（すなわち、薬剤スクリーニング濃度の選択が重要であった）こともまた結論づけられた。基礎受容体タンパク質の発現状態が必ずしも分泌因子の救助（すなわち、獲得耐性）を予測するとは限らないことが判定された。例えば、ＥＧＦＲ及びＭＥＴは、分泌因子の救助を予測するが、ＨＥＲ３及びＦＧＦＲは予測しない。更に、ＥＧＦＲ、ＭＥＴ、及びＦＧＦＲの間で見かけの受容体のクロストークを媒介する救助がなく、標的下流（ｍＴＯＲ）シグナル伝達ノードは、救助の大部分を克服した。
【０２０７】
実施例２
分泌因子を媒介する耐性の下流機序が調査された。具体的には、分泌因子によって再活性化される一般経路は、それらの阻害が獲得薬剤耐性を克服することができるかどうかを判定するために調査された。
【０２０８】
５つの分泌因子のうちの１つで処理された９つの細胞株の免疫ブロットスクリーニングに基づいて、下流シグナルのうちすべての分泌因子を媒介する耐性を予測するものは１つもないと判定された（図１４）。更に、リガンドは、異なる機序によって異なる細胞株を救助し得る。
【０２０９】
実施例３
ＦＧＦシグナル伝達及び耐性は、１０個のＨＥＲ２＋乳癌細胞株及び１０個のＢ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞株について研究された（図１５）。１０個のＨＥＲ２＋乳癌細胞株のうちの７個がＦＧＦ２によって救助された（図１５Ａ）。１０個のＢ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞株のうちの８個がＦＧＦ２によって救助された（図１５Ｂ）。その後の分析は、Ｖ６００Ｅ突然変異体を有する黒色腫株のうちの５０〜７０％がＦＧＦ２（ｎ＝３０）によって救助されたことを決定した。
【０２１０】
更に、ＦＧＦ２が耐性を促進するために主要なシグナル伝達経路を再活性化したことを決定した（図１６）。このことは、ＨＥＲ２＋乳癌細胞がラパチニブ（２μＭ）の存在または不在下で、ＦＧＦ２（５０ｎｇ．ｍＬ）に１０分間曝露された細胞アッセイにおいて示された（図１６Ａ）。同様に、ＨＥＲ２＋乳癌細胞がラパチニブ（２μＭ）の存在または不在下で、ＦＧＦ２（５０ｎｇ／ｍＬ）に２４時間曝露されたアッセイが行われた（図１６Ｂ）。これらの実験に基づいて、ＦＧＦ２が下流シグナル伝達の持続的な活性化を刺激することが決定された。
【０２１１】
実施例４
分泌因子を媒介するシグナル伝達の動力学及びフィードバック機序もまた、研究された。ＦＧＦＲ標的がＦＧＦ２の救助を有効に遮断することが示された。
【０２１２】
３個の細胞株（６２４  ＭＥＬ、９２８  ＭＥＬ、及びＬＯＸ  ＩＭＶＩ）が（５μＭ）ＰＬＸ４０３２（すなわち、ベムラフェニブ）に４時間曝露され、次いで、分泌（５０ｎｇ／ｍＬ）ＦＧＦ（サブタイプ１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１６、１７、１８、１９、２０、２１、及び２２）に１０分間曝露された。免疫ブロットが調製され、ｐ−ＭＥＫ及びｐ−ＥＲＫについてプローブされた。多くのＦＧＦがＭＡＰＫ経路を活性化するが、耐性を促進しないことが決定された（図１７Ａ）。６２４  ＭＥＬ及び９８２  ＭＥＬ細胞株もまた、（５μＭ）ＰＬＸ４０３２に２４時間曝露され、（５０ｎｇ／ｍＬ）ＦＧＦ（サブタイプ１  、２、４、６、８、９、１７、及び１８）に２４時間曝露され、次いで、免疫ブロットのために処理された。免疫ブロットが、ｐ−ＭＥＫ及びｐ−ＥＲＫについてプローブされた。シグナル寿命が役割を果たし得るが、更なる因子が獲得薬剤耐性に関与していることが決定された（図１７Ｂ）。
【０２１３】
ＦＧＦ救助の下流媒介物質と関連するフィードバック機序もまた研究された（図１８）。ＢＴ−４７４乳癌細胞は、ｐ３８、ＰＩ３Ｋ、ＭＥＫ、及びＦＧＦＲのうちの１つ以上の阻害剤の存在または不在下で、２μＭのラパチニブまたは２μＭのラパチニブ＋５０ｎｇ／ｍＬのＦＧＦ２で処理された（図１８Ａ）。細胞はまた、２μＭのラパチニブ、ＭＥＫ阻害剤、及び／またはｐ３８、ＰＩ３Ｋ、ｐ３８及びＰＩ３Ｋ、若しくはＦＧＦＲの低分子阻害剤で事前処理され、続いて、５０ｎｇ／ｍＬのＦＧＦ２で１０分間刺激された。事前処理され、刺激された細胞が処理され、ｐ−ＨＥＲ２、ｐＭＥＫ、ＭＥＫ、ｐ−ＥＲＫ、ＥＲＫ、ｐ９０ＲＳＫ（ｐＳ３８０）、ｐ９０  ＲＳＫ、ｐ−ｐ３８  ＭＡＰＫ（Ｔ１８０／Ｙ１８２）、ｐ３８  ＭＡＰＫ、ｐ−Ａｋｔ（Ｓ４７３）、Ａｋｔ、及びβアクチンについてプローブされた免疫ブロットが行われた（図１８Ｂ）。同様の事前処理／刺激実験はまた、ＨＣＣ−１９５４及びＵＡＣＣ−８９３乳癌細胞株を用いても行われた。
【０２１４】
下流経路の有効な遮断が、しばしば、ＦＧＦ２の救助を克服しないが、複数のフィードバック及び代償機序が明白であることが決定された。更に、ＦＧＦＲ標的化のみが、ＦＧＦ２の救助を有効に遮断したことが決定された。
【０２１５】
実施例５
実験が行われ、ＦＧＦＲ１が黒色腫においてＦＧＦ２の救助を媒介することが示された。
【０２１６】
６２４  ＭＥＬ細胞は、ＤＭＳＯ（対照）、５μＭのＰＬＸ４０３２、または５μＭのＰＬＸ４０３２／ＦＧＦｂで処理され、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ４（すなわち、ＦＧＦＲ１／４）、ＦＧＦＲ２及びＦＧＦＲ３（すなわちＦＧＦＲ２／３）、若しくはＦＲＳ２を標的とするｓｉＲＮＡに曝露された（図５Ａ）。同様に、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ４、ならびにＦＧＦＲ２及びＦＧＦＲ３を標的とするｓｉＲＮＡのスクリーニングが、７つの細胞株（６２４  ＭＥＬ、９２８  ＭＥＬ、Ａ−３７５、ＣＯＬＯ  ８４９、Ｇ３６１、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ、及びＵＡＣＣ６２）において行われた（図５Ｂ）。ＦＧＦＲ１及びＦＧＦＲ１／４を標的とするｓｉＲＮＡのみが、細胞成長／増殖において完全な遮断を引き出した。
【０２１７】
ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ３、及びＦＧＦＲ４の発現レベルは、野生型及び突然変異体（Ｖ６００Ｅ）細胞株黒色腫試料（ｎ＝４９）において測定された（図５Ｃ）。ＦＧＦＲ１が野生型及びＶ６００Ｅ突然変異体黒色腫細胞試料において最高の発現を有したことが示された。未知のＢ−ｒａｆ状態のＴＣＧＡ黒色腫試料（ｎ＝２４７）の分析もまた、分析された（図５Ｄ）。この分析は、ＦＧＦＲ１がＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、及びＦＧＦＲ４よりも高く発現したことを示した（＊＊ｐ＜０．０００１）。
【０２１８】
実施例６
ＦＧＦＲ４は、ＨＥＲ２＋乳癌細胞株におけるＦＧＦ２の救助を媒介することが示された。
【０２１９】
ＨＥＲ２＋乳癌細胞株（ＡＵ５６５、ＢＴ−４７４、ＨＣＣ１９５４、ＳＫ−ＢＲ−３、及びＵＡＣＣ−８９３）が、ラパチニブ及びＦＧＦ２で処理された。その後、細胞は、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、若しくはＦＧＦＲ４を標的とするｓｉＲＮＡに曝露されたか、またはＦＧＦＲ汎阻害剤ＢＧＪ３９８に曝露された（図１９Ａ）。ＦＧＦＲ４を標的とするｓｉＲＮＡ及び汎阻害剤が、ラパチニブ及びＦＧＦ２に対する獲得耐性からの救助の最大の割合（％）を有したことが示された。免疫ブロットはまた、ＦＧＦ２の存在及び不在下で、ラパチニブで処理した細胞においてＩＰ／ｐＴｙｒ／ＩＢ：ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ４、ｐＥＲＫ、ＥＲＫ、及びアクチン（対照）を検出するために行われた（図１９Ｂ）。
【０２２０】
ＴＣＧＡ乳癌試料もまた、分析された（図１９Ｃ及び１９Ｄ）。ＦＧＦＲ１レベルは、乳癌試料（ｎ＝９１３）において高かったことが示された（図１９Ｃ）。ＨＥＲ２＋乳癌についてゲート化される場合に、ＨＥＲ２＋乳癌ＦＧＦＲ４が高いＦＧＦＲ４（ＨＥＲ２  ｌｏｇ２  ＲＰＫＭカットオフ＝８．０）に対して富化されることが示された（図１９Ｄ）。
【０２２１】
実施例７
ＨＥＲ２＋乳癌細胞株における自然耐性及びＢ−ｒａｆ突然変異体黒色腫細胞株における獲得耐性のモデルが研究された。
【０２２２】
自然耐性があるＨＥＲ２＋乳癌細胞株は、ＨＣＣ１５６９及びＭＤＡ−ＭＢ−４５３であった。ＨＣ１５６９は、ＦＧＦＲ２を発現し（ウェスタンブロットによって検出され）、ＦＧＦ２を分泌した（ＥＬＩＳＡによって検出された）。ＨＣＣ１５６９株からのＦＧＦＲ  ＥＣＤキメラは、ラパチニブに対して感作された。更に、ＦＧＦＲ阻害剤（複数を含む）で処理されたＨＣ１５６９細胞は、該細胞をラパチニブに対して感作させた。ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞株は、高度にリン酸化されたＦＧＦＲ４発現を有し（ウェスタンブロットによって検出された）、ＦＧＦ２を分泌しなかった（ＥＬＩＳＡを介してＦＧＦ２の検出がない）。ＦＧＦＲ阻害剤（複数を含む）で処理されたＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞は、該細胞をラパチニブに対して感作させた。
【０２２３】
ＨＣＣ１５６９及びＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞は、５μＭのラパチニブの存在または不在下で、１００ｎＭのアファチニブ、１００ｎＭのクリゾチニブ、または１００ｎＭのＢＧＪ３９８で処理された（図２０Ａ及び２０Ｂ）。示されるように、ラパチニブ及びＢＧＪ３９８の併用は、薬剤耐性から細胞株を救助し、腫瘍体積を減少させる（図２０Ａ〜Ｃ）。
【０２２４】
Ｌｏｘ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、Ｂ−ｒａｆ突然変異体黒色腫における獲得耐性のモデルとして使用された。１１個の細胞株は、ＦＧＦＲ１発現についてウェスタンブロットを用いて試験された。試験された細胞株のうち、ＦＧＦＲ１発現は、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ（ベムラフェニブ感受性）及びＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ（ベムラフェニブ耐性）株において検出された（図２Ａ）。ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株は、ＦＧＦＲシグナル伝達拮抗剤（１μＭのＢＧＪ３９８、１μＭのＰＤ１７３０７４、及び１μＭのＡＰ２４５３４）の添加とともに、救助された（すなわち、ベムラフェニブに対して再感作された）ことが更に示された（図２Ｂ）。ＦＧＦ２発現（ｐｇ／ｍＬ）はまた、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ（「親」）及びＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ（「ＶｅｍＲ」）細胞株においても測定され、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲが、ベムラフェニブ感受性親株と比較して、ＦＧＦ２の発現が増大したことが示された（図２Ｃ）。更に、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲ４、ＦＧＦＲ１／４、ＦＧＦＲ２／３、及びＦＲＳ２を標的とするｓｉＲＮＡのスクリーニングは、ベムラフェニブと組み合わせたＦＧＦＲ１のノックダウンがベムラフェニブ処理に対してＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株を再感作させることを示した（図２Ｄ）。
【０２２５】
ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞株のベムラフェニブ耐性及び回復もまた、インビボで研究された。腫瘍体積（ｍｍ３）は、ベムラフェニブ、ＢＧＪ３９８、またはベムラフェニブ及びＢＧＪ３９８の存在下で、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ（親、ベムラフェニブ感受性）腫瘍及びＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ（ベムラフェニブ耐性）腫瘍において測定された（図３Ａ及び３Ｂ）。図に示されるように、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ細胞において、ベムラフェニブ（２５ｍｇ／ｋｇ、１日２回）またはベムラフェニブ（２５ｍｇ／ｋｇ、１日２回）、及びＢＧＪ３９８（１５ｍｇ／ｋｇ、１日１回）で処理される場合に、腫瘍体積が減少した。対照的に、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ  ＶｅｍＲ細胞は、ベムラフェニブに曝露された場合に、腫瘍体積の減少を示さなかったが、ベムラフェニブ及びＢＧＪ３９８の併用処理に曝露された場合に、腫瘍体積の減少を示した。
【０２２６】
前述の発明が実例として、かつ理解を明瞭にする目的のための実施例として、ある程度詳細に記載されてはいるが、これらの説明及び実施例は本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用したすべての特許及び科学文献の開示は、それら全体が参照することにより明示的に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2017517558.tif 000011
【図２Ｅ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
2017517558.tif 000014
【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図５Ｄ】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ−１】
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【図７Ｄ−２】
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【図７Ｄ−３】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図９Ｃ−１】
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【図９Ｃ−２】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１０Ｃ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１５Ｃ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１７Ａ】
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【図１７Ｂ】
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【図１７Ｃ】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９Ａ】
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【図１９Ｂ】
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【図１９Ｃ】
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【図１９Ｄ】
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【図２０Ａ】
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【図２０Ｂ】
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【図２０Ｃ−１】
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【図２０Ｃ−２】
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【図２１Ａ−１】
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【図２１Ａ−２】
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【図２１Ｂ−１】
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【図２１Ｂ−２】
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【図２２Ａ】
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【図２２Ｂ】
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【図２３Ａ】
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【図２３Ｂ】
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【図２３Ｃ】
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【国際調査報告】
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2017517558.tif 000072