(57)【要約】  本出願は、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストである安定した及び持続性のGLP-1誘導体、その組成物、医療でのGLP-1誘導体の使用、並びに患者へのGLP-1誘導体の投与を含む処置(例えば、糖尿病、肥満並びに関連する疾患及び状態の処置)の方法に関する。好ましいGLP-1誘導体は、式I:Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xl6-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37[I](式中、-X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、-X16はVal、Leu、lie又はTyrであり、-X18はLys又はArgであり、-X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibであり、-X23はGin、Arg又はLysであり、-X26はLys又はArgであり、-X27はGlu又はLysであり、-X33はVal、Leu又はIleであり、-X34はLys又はArgであり、-X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、-X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず、-X37はGlyであるか、又は存在しない)のアミノ酸配列からなるポリペプチド又はその薬学的に許容される塩及び/若しくはエステルを含み、前記GLP-1誘導体は、親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基であって、前記負電荷部分のうち1つが親油性部分から遠位である、置換基を更に含み、前記ポリペプチドはC末端アミドを任意選択で含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i)式I:
Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]、
(式中、
X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、
X16はVal、Leu、(Ile)又はTyrであり、
X18はLys又はArgであり、
X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、(Ser)又は(Aib)であり、
X23はGln、Arg又はLysであり、
X26は(Lys)又はArgであり、
X27はGlu又はLysであり、
X33は(Val)、Leu又はIleであり、
X34はLys又はArgであり、
X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、
X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず、
X37はGlyであるか、又は存在しない)
のアミノ酸配列からなるポリペプチドと、
(ii)親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基であり、前記負電荷部分のうち1つが親油性部分から遠位である、置換基と
を含み、
前記ポリペプチドがC末端アミドを任意選択で含む、GLP-1誘導体又はその薬学的に許容される塩及び/若しくはエステル。
【請求項２】
前記置換基が、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置で前記ポリペプチド中のアミノ酸残基により前記ポリペプチドに共有結合的に付着している、請求項1に記載のGLP-1誘導体。
【請求項３】
前記ポリペプチドが、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して3〜15個のアミノ酸残基改変を含む、請求項1に記載のGLP-1誘導体。
【請求項４】
前記改変が、置換、付加及び欠失からなる群から選択される、請求項3に記載のGLP-1誘導体。
【請求項５】
X8がAla、Aib又はAcbであり、
X22がAla又はGluであり、
X35がGly又はThrであり、
X36がGlyであるか、又は存在しない、請求項1から4のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項６】
X8がAla、Aib若しくはAcbであり、
X22がAla若しくはGluであり、
X35がGly若しくはThrであり、又は
X36がGlyであるか、若しくは存在しない、請求項1から4のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項７】
X35、X36及びX37が存在しない、請求項1から4のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項８】
X36及びX37が存在しない、請求項1から4のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項９】
前記置換基が、少なくとも3個の負電荷部分を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１０】
前記親油性部分が少なくとも12個の炭素原子のアルキル基を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１１】
前記アルキル基が12〜20個の炭素原子を有する、請求項10に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１２】
前記アルキル基が14〜18個の炭素原子を有する、請求項11に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１３】
前記アルキル基が16個の炭素原子を有する、請求項12に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１４】
前記置換基がアミノ酸の側鎖に共有結合的に付着している、請求項1から13のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１５】
前記置換基がリシンの側鎖の窒素原子に共有結合的に付着している、請求項14に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１６】
前記置換基が、式II:
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]
[(式中、
Z1は、式IIa:
【化１】
2017536343.tif 000167
(式IIa中、nは6〜20であり、記号*は、隣接する基の窒素への付着点を表す)
を含み、
Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10は個々に、存在しないか、又はGlu、γGlu、Gly、Ser、Ala、Thr及びAdoからなる群から選択されるアミノ酸であり、
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10は合わせて少なくとも2個の負電荷部分を含む]
を含む、請求項1から15のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１７】
γGlu-γGlu-Ado-Ado-;
γGlu-γGlu-Ado-Ado-γGlu-;
γGlu-γGlu-Ado-γGlu-γGlu-;
γGlu-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-;
γGlu-γGlu-Ser-Gly-;
γGlu-γGlu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-;
γGlu-γGlu-γGlu-Ado-Ado-;
γGlu-γGlu-γGlu-γGlu-;
γGlu-Ado-Ado-;
γGlu-Ado-Ado-γGlu-γGlu-;及び
Gly-Ser-Glu-Gly-Ser-γGlu-γGlu-
からなる群から選択される構造を含むリンカーを更に含む請求項16に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１８】
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２】
2017536343.tif 000168
(化学式1);
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３】
2017536343.tif 000169
(化学式2);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化４】
2017536343.tif 000170
(化学式3);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化５】
2017536343.tif 000171
(化学式4);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化６】
2017536343.tif 000172
(化学式5);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化７】
2017536343.tif 000173
(化学式6);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化８】
2017536343.tif 000174
(化学式7);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化９】
2017536343.tif 000175
(化学式8);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化１０】
2017536343.tif 000176
(化学式9);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化１１】
2017536343.tif 000177
(化学式10);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【化１２】
2017536343.tif 000178
(化学式11);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化１３】
2017536343.tif 000179
(化学式12);
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【化１４】
2017536343.tif 000180
(化学式13);
Nε36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【化１５】
2017536343.tif 000181
(化学式14);
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化１６】
2017536343.tif 000182
(化学式15);
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化１７】
2017536343.tif 000183
(化学式16);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【化１８】
2017536343.tif 000184
(化学式17);
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【化１９】
2017536343.tif 000185
(化学式18);
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【化２０】
2017536343.tif 000186
(化学式19);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２１】
2017536343.tif 000187
(化学式20);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２２】
2017536343.tif 000188
(化学式21);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２３】
2017536343.tif 000189
(化学式22);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２４】
2017536343.tif 000190
(化学式23);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２５】
2017536343.tif 000191
(化学式24);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【化２６】
2017536343.tif 000192
(化学式25);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２７】
2017536343.tif 000193
(化学式26);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[(2S)-2-[[2-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【化２８】
2017536343.tif 000194
(化学式27);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化２９】
2017536343.tif 000195
(化学式28);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【化３０】
2017536343.tif 000196
(化学式29);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３１】
2017536343.tif 000197
(化学式30);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【化３２】
2017536343.tif 000198
(化学式31);
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３３】
2017536343.tif 000199
(化学式32);
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３４】
2017536343.tif 000200
(化学式33);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３５】
2017536343.tif 000201
(化学式34);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【化３６】
2017536343.tif 000202
(化学式35);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【化３７】
2017536343.tif 000203
(化学式36);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３８】
2017536343.tif 000204
(化学式37);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(13-カルボキシトリデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化３９】
2017536343.tif 000205
(化学式38);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化４０】
2017536343.tif 000206
(化学式39);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化４１】
2017536343.tif 000207
(化学式40);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化４２】
2017536343.tif 000208
(化学式41);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【化４３】
2017536343.tif 000209
(化学式42);
又はこれらの薬学的に許容される塩、アミド及び/若しくはエステルからなる群から選択される、請求項1に記載のGLP-1誘導体。
【請求項１９】
請求項1から18のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体と、1種又は複数の薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【請求項２０】
請求項1から18のいずれか一項に記載のGLP-1誘導体を、それを必要とする対象に投与する工程を含む、疾患を処置する方法であって、疾患が、肥満、高血糖、2型糖尿病、耐糖能障害及び1型糖尿病からなる群から選択される、方法。
【請求項２１】
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;及び
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
からなる群から選択されるGLP-1類似体又はその薬学的に許容される塩、アミド若しくはエステル。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニスト(co-agonist)である新規のGLP-1誘導体、その組成物、及びこのGLP-1誘導体の医療での使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
多数の胃腸ペプチドホルモンが、食物摂取量及びエネルギー恒常性の調節に関与している(例えばCCK、GLP-1、PYY、グレリン)。近年、腸のL細胞におけるプログルカゴン遺伝子からの生成物であるオキシントモジュリン(Oxm)も、齧歯類及びヒトの両方において食欲抑制特性を有することが分かった。肥満のヒトでの4週間の臨床試験により、Oxmの皮下投与の反復によって食物摂取量が減少して有意な体重減少が起こることが実証された。特定のOxm受容体が依然として見出されることから、生理学的効果の多くがGLP-1受容体活性化及びグルカゴン受容体活性化を介して媒介されることが示唆されている。実際、Oxmは、同種のリガンドと比べて親和性及び効力が低いにもかかわらず、GLP-1受容体及びグルカゴン受容体の両方に結合して活性化させる。いくつかの近年の論文は、デュアルアゴニストを構築してDIOマウスモデル及びノックアウトマウスモデルにおける体重減少効果を比較することにより、同時にGLP-1/グルカゴン受容体を標的に定める能力を実証した。バランスの取れたGLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストによる処置によって、GLP-1受容体アゴニストの場合に相当するグルコース制御で、純粋なGLP-1受容体アゴニストの場合を超える体重及び脂肪量の確実な減少が生じた。インスリン、レプチン及びアディポネクチン等の血漿代謝パラメーターの改善は、純粋なGLP-1受容体アゴニストによる処置と比べてGLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストによる処置時に顕著であった。加えて、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニスト処置により、DIOマウスにおいて脂肪酸酸化が増加して脂肪肝が減少した。GLP-1受容体ノックアウトマウス又はグルカゴン受容体ノックアウトマウスでは、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストは、野生型動物と比較して、減少してはいるものの、依然として体重に対する有意な効果が実証されており、そのため、GLP-1受容体及びグルカゴン受容体の同時活性化により体重がより減少するという仮説が支持されている。
【０００３】
グルカゴン受容体活性化の1つの生理学的効果は、肝臓のグリコーゲン分解及び糖新生を刺激することにより血糖値を上昇させることである。グルカゴン受容体活性化は、齧歯類及びヒトの両方においてエネルギー消費量を増加させる及び食物摂取量を減少させることが更に分かっている。
【０００４】
近年の研究では、16例のヒトボランティアに、グルカゴン、GLP-1、グルカゴン及びGLP-1の組合せ又は生理食塩水を注入した。食事中のエネルギー摂取量は組合せの群で有意に減少した(13%)が、いずれかのホルモン単独の投与では影響を受けなかった。
【０００５】
別の研究では、健康なヒトボランティアへのGLP-1、グルカゴン又はこれらの組合せの注入後にエネルギー消費量(EE)を測定した。この研究から、グルカゴンとグルカゴン及びGLP-1の組合せとはEEを同程度まで増加させるがGLP-1は効果がないことが分かった。グルカゴンの注入は血漿グルコースレベルの上昇を伴ったが、グルカゴンに加えてGLP-1を同時に注入することにより、この偏位が急速に減少した。2種の受容体に対するマウス受容体効力が異なるGLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストペプチドのファミリーを使用して、肥満のマウスにおけるグルカゴン受容体媒介型の高血糖の予防におけるGLP-1受容体活性の重要性が更に実証された。この研究は、バランスの取れたGLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストペプチドがグルカゴン受容体の活性化に関連する高血糖のリスクを軽減しつつ体重減少用の最適な治療プロファイルを示すことを示した。
【０００６】
まとめると、これらの研究は、肥満の処置の潜在的標的としての二重のGLP-1及びグルカゴンのアゴニズムの概念を支持する。
【０００７】
GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストの大部分は、出発点としてグルカゴン又はオキシントモジュリンを使用して得られており、GLP-1活性は様々なアミノ酸変異により改善されている。グルカゴンは物理的安定性及び化学的安定性が低く、このことはグルカゴンベースの多くのコアゴニストでも観察される。
【０００８】
従って、安定性が改善されている(例えば化学的安定性及び物理的安定性が改善されている)GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストが必要とされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】WO2009/083549
【特許文献２】WO98/08871
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】www.chem.qmul.ac.uk/iupac/AminoAcid/AA1n2.html#AA1
【非特許文献２】Johan Gabrielsson及びDaniel Weiner: Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis. Concepts & Applications、第3版、Swedish Pharmaceutical Press、Stockholm(2000)
【非特許文献３】Rowland, M及びTozer TN: Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications、第3版、1995 Williams Wilkins
【非特許文献４】Schmittschmitt及びScholtz、Protein Science、12、10、2374〜2378頁、2003
【非特許文献５】Stability of Protein Pharmaceuticals、Ahern. T.J. & Manning M.C.、Plenum Press、New York 1992
【非特許文献６】Formulation Consideration for Proteins Susceptible to Asparagine Deamidation and Aspartate Isomerization、Wakankar及びBorchardt、Journal of Pharmaceutical Sciences、2006、第95巻、第11号、2321頁
【非特許文献７】Remington's Pharmaceutical Sciences、1985
【非特許文献８】Remington: The Science and Practice of Pharmacy、第19版、1995
【非特許文献９】Naiki他(1989) Anal. Biochem. 177、244〜249頁
【非特許文献１０】LeVine(1999) Methods. Enzymol. 309、274〜284頁
【非特許文献１１】Nielsen他(2001) Biochemistry 40、6036〜6046頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストである新規の安定した及び持続性のGLP-1誘導体、その組成物、医療でのGLP-1誘導体の使用、並びに患者へのGLP-1誘導体の投与を含む処置(例えば糖尿病、肥満並びに関連する疾患及び状態の処置)の方法に関する。
【００１２】
一部の実施形態では、本発明は、式I:
Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]、
(式中、
X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、
X16はVal、Leu、Ile又はTyrであり、
X18はLys又はArgであり、
X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibであり、
X23はGln、Arg又はLysであり、
X26はLys又はArgであり、
X27はGlu又はLysであり、
X33はVal、Leu又はIleであり、
X34はLys又はArgであり、
X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、
X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず、
X37はGlyであるか、又は存在しない)
のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含むGLP-1誘導体又はその薬学的に許容される塩及び/若しくはエステルであって、
前記GLP-1誘導体は、親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基を更に含み、前記負電荷部分のうち1つは親油性部分から遠位であり、
前記ポリペプチドはC末端アミドを任意選択で含む、GLP-1誘導体に関する。
【００１３】
一部の実施形態では、本発明は、上記の請求項のいずれか一つで定義したGLP-1誘導体と、1種又は複数の薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１４】
一部の実施形態では、本発明は、医療で使用するための(例えば肥満、高血糖、2型糖尿病、耐糖能障害及び/又は1型糖尿病の処置又は予防で使用するための)上記の請求項のいずれか一つで定義したGLP-1誘導体に関する。
【００１５】
一部の実施形態では、本発明は、本明細書で定義したGLP-1類似体の形態での中間生成物又はその薬学的に許容される塩、アミド若しくはエステルに関する。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】アミロイド原線維形成中のThT蛍光発光の理論的なS字状の時間経過を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明は、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストである、アミノ酸置換基と負電荷部分を有する置換基とを含む新規なGLP-1誘導体を提供する。用語「GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニスト」は、本明細書で使用する場合、GLP-1受容体及びグルカゴン受容体の両方を活性化するアゴニストを意味する。具体的には、本発明のGLP-1誘導体は、少なくとも2個の負電荷を有する置換基を更に含むGLP-1誘導体のアミノ酸配列の7位のデスアミノヒスチジン及び9位のヒスチジンへのアミノ酸置換基を含む。一部の実施形態では、GLP-1誘導体中のアミノ酸位置への言及は、本明細書で使用する場合、N末端ヒスチジンが7位と定義されるヒトGLP-1(7-37)に対するものである。
【００１８】
一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体はグルカゴン受容体と比べてGLP-1誘導体を良好に活性化する、即ち、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1に対するEC50との比が1超である。一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体は、グルカゴン受容体と比べてGLP-1受容体に良好に結合する、即ち、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が1超である。本明細書で開示する受容体アッセイを使用して、そのような比を評価することができる。
【００１９】
本発明者らは、本発明のGLP-1誘導体が、適切な水溶性、受容体効力及び受容体結合を保持しつつ物理的安定性及び化学的安定性を改善することができることを発見した。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は物理的安定性が改善されている(例えば、GLP-1誘導体は、物理的安定性を評価するために使用するアッセイにおいて原線維形成を示さず、又は原線維形成の遅延を示し、そのようなアッセイの例を本明細書で開示する)。更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、中性pH又はやや塩基性pH等の医薬組成物に適したpH範囲で適切な水溶性を有する。更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は化学的安定性が改善されており、例えば医薬組成物等の液体組成物中でのGLP-1誘導体の化学的分解が減少する。更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は薬物動態特性が改善されている、即ち、GLP-1誘導体は、例えばヒトグルカゴン及び/又はヒトGLP-1と比較してin vivoでの半減期が延びている。更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、皮下投与後に体重の有意な減少を誘導する。本明細書に記載したアッセイ(I)及びアッセイ(II)を使用して、グルカゴン受容体及びGLP-1受容体に対する本発明のGLP-1誘導体の活性及び親和性それぞれを測定することができる。様々なpH値での本発明のGLP-1誘導体の溶解性を本明細書に記載したように測定することができる(例えば機能特性の章を参照されたい)。本発明のGLP-1誘導体の物理的安定性を、本明細書のアッセイ(III)に記載した方法で測定することができる。本発明のGLP-1誘導体の化学的安定性を、本明細書のアッセイ(V)に記載したように測定することができる。このGLP-1誘導体の半減期を、マウス(例えば、本明細書のアッセイ(IV)に記載した方法で使用する)、ラット又はミニブタ等の種における薬物動態研究で測定することができる。本発明のGLP-1誘導体により引き起こされる体重減少を、本発明のGLP-1誘導体のDIOマウスへの投与及びビヒクルのみの投与との体重への効果の比較により測定することができる。
【００２０】
一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体は、
式I:
Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]、
(式中、
X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、
X16はVal、Leu、Ile又はTyrであり、
X18はLys又はArgであり、
X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibであり、
X23はGln、Arg又はLysであり、
X26はLys又はArgであり、
X27はGlu又はLysであり、
X33はVal、Leu又はIleであり、
X34はLys又はArgであり、
X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、
X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず、
X37はGlyであるか、又は存在しない)
のアミノ酸配列からなるポリペプチド又はその薬学的に許容される塩、アミド及び/若しくはエステルを含み、
前記ポリペプチドは、親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基を含み、前記負電荷部分のうち1つが親油性部分から遠位である。
【００２１】
一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体は、式I:
Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]、
(式中、
X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、
X16はVal、Leu、Ile又はTyrであり、
X18はLys又はArgであり、
X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibであり、
X23はGln、Arg又はLysであり、
X26はLys又はArgであり、
X27はGlu又はLysであり、
X33はVal、Leu又はIleであり、
X34はLys又はArgであり、
X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、
X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず、
X37はGlyであるか、又は存在しない)
のアミノ酸配列からなるポリペプチド又はその薬学的に許容される塩、アミド及び/若しくはエステルを含み、前記アミノ酸配列は、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択される1つ又は複数の位置でリシン残基を含み、前記ポリペプチドは、親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基を含み、前記負電荷部分のうち1つは親油性部分から遠位であり、前記置換基は、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置のうち1つのリシン残基のイプシロン位に付着している。
【００２２】
GLP-1ペプチド及び類似体
用語「GLP-1ペプチド」は、本明細書で使用する場合、配列が配列番号1又はこの配列番号1の類似体として配列表に含まれるヒトGLP-1を意味する。配列番号1の配列からなるペプチドはまた、本明細書において単に「GLP-1」とも称され得る。一部の実施形態では、本明細書で使用する場合、用語「ヒトGLP-1」及び「GLP-1」は、HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (配列番号1)を意味する。配列表では、配列番号1の最初のアミノ酸残基(ヒスチジン)に番号1が割り当てられている。しかしながら、下記においては、当分野において確立された慣例に従って、このヒスチジン残基を番号7と称して、それに応じて後続のアミノ酸残基に番号を付しており、番号37のグリシンで終わる。従って、一般的には、本明細書におけるアミノ酸残基の番号又はGLP-1(7-37)配列の位置番号へのあらゆる言及は、7位のHisで始まり37位のGlyで終わる配列に対するものである。
【００２３】
本発明の誘導体のGLP-1類似体を、i)変更されているアミノ酸残基に対応する天然GLP-1(7-37)中のアミノ酸残基の番号(即ち、天然GLP-1中の対応する位置)及びii)実際の変更への言及により説明することができる。
【００２４】
換言すると、GLP-1類似体は、天然GLP-1(7-37)(配列番号1)と比較した場合に多数のアミノ酸残基が変更されているGLP-1(7-37)ペプチドである。これらの変更は独立して、1個又は複数のアミノ酸の置換、付加及び/又は欠失を表すことができる。
【００２５】
用語「GLP-1類似体」は、本明細書で使用する場合、GLP-1(配列番号1)の多様体であるペプチド又は化合物を意味する。本明細書における式Iのアミノ酸配列はGLP-1類似体の一例である。本明細書では用語「GLP-1類似体」及び「類似体」を互換的に使用することができる。用語「ポリペプチド」は、例えば「GLP-1誘導体のポリペプチド」のようにGLP-1誘導体に関連して本明細書で使用する場合、本明細書で定義した式Iのアミノ酸配列からなるペプチドを意味することができる。
【００２６】
本発明の誘導体のGLP-1類似体を、i)改変されているアミノ酸残基に対応するヒトGLP-1(配列番号1)中のアミノ酸残基の数字{即ち、GLP-1(配列番号1)中の対応する位置}及びii)実際の改変への言及により説明することができる。下記は、適切なGLP-1類似体命名の非限定的な例である。
【００２７】
GLP-1類似体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較した場合に多数のアミノ酸残基が改変されているGLP-1ペプチドである。これらの改変は、1個又は複数個のアミノ酸の置換、付加及び/又は欠失であり得る。例えば、「[Imp7,His9]-GLP-1」又は「[Imp7,His9]-GLP-1(7-37)ペプチド」は、7位のアミノ酸がImpで置換されており、9位のアミノ酸がHisで置換されているGLP-1(配列番号1)を示す。同様に、「[Imp7,His9,des36-37]-GLP-1(7-35)ペプチド」又は「[Imp7,His9,des36-37]-GLP-1」は、7位のアミノ酸がImpで置換されており、9位のアミノ酸がHisで置換されており、36位及び37位のアミノ酸が欠失しているGLP-1(配列番号1)を示す。
【００２８】
ある特定の変化を「含む」類似体は、配列番号1と比較した場合に更なる変化を含むことができる。特定の実施形態では、類似体は、特定の変化「からなる」、又は特定の変化を「有する」。
【００２９】
上記の例から明らかであるように、アミノ酸残基を、その完全な名称、その1文字コード及び/又はその3文字コードにより識別することができる。これら3種の方法は完全に等価である。一部の実施形態では、GLP-1類似体及びGLP-1誘導体は、IUPAC-IUB命名法に従って標準的な1文字コード又は3文字コードを使用して描かれている。
【００３０】
語句「位置」又は「対応する位置」を、ヒトGLP-1(配列番号1)への言及によりGLP-1アミノ酸配列中での変化部位を特徴付けるために使用することができる。この位置及び変化の数は、例えば単純な手書き及び視認により容易に推定される。
【００３１】
用語「ペプチド」は、例えば本発明の誘導体のGLP-1類似体に関連して使用する場合、アミド(又はペプチド)結合により相互接続されている一連のアミノ酸を含む化合物を意味する。本発明のGLP-1誘導体は、ペプチド結合により接続された少なくとも5個の構成アミノ酸を含む。特定の実施形態では、ペプチドは、a)i)28個、ii)29個、iii)30個若しくはiv)31個のアミノ酸を含む、又はb)i)28個、ii)29個、iii)30個若しくはiv)31個のアミノ酸からなる。更に特定の実施形態では、ペプチドは、ペプチド結合により相互接続されたアミノ酸からなる。
【００３２】
アミノ酸はアミノ基とカルボン酸基とを含む分子である。用語「アミノ酸」は、本明細書で使用する場合、(20種の標準的なアミノ酸の中の)コード化アミノ酸と非コード化アミノ酸とを含む。コード化アミノ酸は、遺伝暗号によりコードされているアミノ酸である(IUPACの表1、3AA-1章、www.chem.qmul.ac.uk/iupac/AminoAcid/AA1n2.html#AA1)。非コード化アミノ酸は、天然(例えばヒト)のペプチド中に及び/若しくはタンパク質中に見出されない、又は標準的な細胞機構により産生されない(例えば翻訳後改変に晒されている場合がある)。非コード化アミノ酸の非限定的な例は、Aib(アルファ-アミノイソ酪酸)、des-アミノ-ヒスチジン{3-(イミダゾール-4-イル)プロピオン酸、代替名称イミダゾプロピオン酸(imidazopropionic acid)、Impと略される}及びコード化アミノ酸のD-異性体である。本明細書において、Impは、アミノ基を含まないがアミノ酸と定義される。
【００３３】
本明細書において、光学異性体が述べられていないペプチド(例えばGLP-1類似体又はGLP-1誘導体)の全てのアミノ酸は、(別途指定されない限り)L-異性体を意味すると理解しなければならない。
【００３４】
GLP-1誘導体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、ポリペプチド中に合計で最大15個のアミノ酸改変(例えば、1個若しくは複数個の付加、1個若しくは複数個の欠失、及び/又は1個若しくは複数個の置換)を含むことができる。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、3〜15個のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で14個(例えば最大で13個又は最大で12個)のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で11個(例えば最大で10個又は最大で9個)のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で8個(例えば最大で7個又は最大で6個)のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を含むポリペプチドを含む。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で5個(例えば最大で4個又は最大で3個)のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を含むポリペプチドを含む。
【００３５】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体のポリペプチドは、式I:
Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]、
(式中、
X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、
X16はVal、Leu、Ile又はTyrであり、
X18はLys又はArgであり、
X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibであり、
X23はGln、Arg又はLysであり、
X26はLys又はArgであり、
X27はGlu又はLysであり、
X33はVal、Leu又はIleであり、
X34はLys又はArgであり、
X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、
X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず、或いはX36は天然Arg残基である場合もあり、
X37はGlyであるか、又は存在しない)
のアミノ酸配列からなる。
【００３６】
一部の実施形態では、ポリペプチドはカルボン酸基等のC末端酸性基を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドはC末端アミドを含む。
【００３７】
一部の実施形態では、X8はAla、Aib、Acbであり、X22はAla若しくはGluであり、X35はGly若しくはThrであり、及び/又はX36はGlyであるか、若しくは存在しない。
【００３８】
一部の実施形態では、X8はAla、Aib、Acb又はGlyである。一部の実施形態では、X8はAla、Aib又はAcbである。
【００３９】
一部の実施形態では、X16はVal、Leu、Ile又はTyrである。
【００４０】
一部の実施形態では、X18はLys又はArgである。
【００４１】
一部の実施形態では、X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibである。一部の実施形態では、X22はGly、Ala又はGluである。一部の実施形態では、X22はLys、Arg、Ser又はAibである。一部の実施形態では、X22はAla又はGluである。
【００４２】
一部の実施形態では、X23はGln、Arg又はLysである。
【００４３】
一部の実施形態では、X26はLys又はArgである。
【００４４】
一部の実施形態では、X27はGlu又はLysである。
【００４５】
一部の実施形態では、X33はVal、Leu又はIleである。
【００４６】
一部の実施形態では、X34はLys又はArgである。
【００４７】
一部の実施形態では、X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在しない。一部の実施形態では、X35はGly又はThrである。
【００４８】
一部の実施形態では、X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在しない。一部の実施形態では、X36はAla、Gly又はLysである。一部の実施形態では、X36はGlyであるか、又は存在しない。
【００４９】
一部の実施形態では、X35が存在しない場合、X36及びX37も存在しない。一部の実施形態では、X35が存在しない場合、X36及びX37も存在せず、前記GLP-1誘導体は、C末端カルボン酸基を含む。
【００５０】
一部の実施形態では、X36が存在しない場合、X37も存在しない。一部の実施形態では、X36が存在しない場合、X37も存在せず、前記GLP-1誘導体はC末端カルボン酸アミドを含む。
【００５１】
本文脈で使用する略語は下記の意味を有する。
【００５２】
【表１Ａ】
2017536343.tif 000002
【００５３】
【表１Ｂ】
2017536343.tif 000003
【００５４】
D-Ser、D-His等のDで始まり3文字コードが続くアミノ酸略語は、対応するアミノ酸のD-鏡像異性体、例えばD-セリン、D-ヒスチジン等を意味する。
【００５５】
GLP-1誘導体
本発明は、GLP-1類似体の誘導体であるGLP-1誘導体に関する。用語「誘導体」は、GLP-1類似体に関連して本明細書で使用する場合、1個又は複数個の置換基がGLP-1類似体に共有結合的に付着している化学的に改変されたGLP-1類似体を意味する。用語「置換基」は、本明細書で使用する場合、水素原子を置き換える化学部分又は化学基を意味する。誘導体は、アミド、炭水化物、アルキル基、アシル基、エステル等から選択される1種又は複数の改変を含むことができる。
【００５６】
一部の実施形態では、置換基は、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置のうち1つで前記ポリペプチド中のアミノ酸残基により共有結合的に付着している。一部の実施形態では、置換基は、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置のうち1つで前記ポリペプチド中のリシン残基のイプシロン位に付着している。
【００５７】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基を含み、前記負電荷部分のうち1つは親油性部分から遠位であり、前記置換基は、式Iのアミノ酸配列からなるポリペプチド中の22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置のうち1つのリシン残基のイプシロン位に付着している。
【００５８】
用語「親油性部分」は、本明細書で使用する場合、6個超で30個未満の炭素原子を有する脂肪族部分又は環式炭化水素部分を意味しており、前記炭化水素部分は追加の置換基を含むことができる。
【００５９】
用語「負電荷部分」は、本明細書で使用する場合、負電荷を有し得る化学部分を意味しており、この化学部分として、アミノ酸部分(例えば、Glu、γGlu、Asp若しくはベータ-Asp、カルボン酸、スルホン酸、又はテトラゾール部分)が挙げられるがこれらに限定されない。負電荷部分の数は、生理学的pH(pH7.4)で決定することができる。負電荷部分はカルボン酸基であることができる。
【００６０】
一部の実施形態では、置換基は、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択される式Iのアミノ酸配列からなるポリペプチドの位置でアミノ酸残基に付着している。一部の実施形態では、置換基は、式Iのアミノ酸配列からなるポリペプチド中の34位又は35位でアミノ酸残基に付着している。
【００６１】
一部の実施形態では、置換基は、式Iのアミノ酸配列からなるポリペプチド中の22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択される位置でリシン残基のイプシロン窒素に付着している。一部の実施形態では、置換基は、式Iのアミノ酸配列からなるポリペプチド中の34位及び35位の位置でリシン残基のイプシロン窒素に付着している。
【００６２】
一部の実施形態では、置換基は少なくとも2個の負電荷部分を含む。一部の実施形態では、置換基は3個、4個又は5個の負電荷部分を含む。一部の実施形態では、置換基は3個又は4個の負耐電部分を含む。一部の実施形態では、置換基は2〜10個の負電荷部分を含む。
【００６３】
一部の実施形態では、置換基はアルブミンに非共有結合的に結合している。
【００６４】
一部の実施形態では、置換基は生理学的pH、例えばpH7.0〜8.2、pH7.0〜7.7又はpH7.2〜7.5、又は例えばpH7.4で負電荷を有する。
【００６５】
一部の実施形態では、置換基は、式II:
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]
(式中、
Z1は、式IIa:
【００６６】
【化１】
2017536343.tif 000004
【００６７】
(式IIa中、nは6〜20であり、記号*は、隣接する基の窒素への付着点を表す)
を含み、
Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10は個々に、存在しないか、又はGlu、γGlu、Gly、Ser、Ala、Thr及びAdoからなる群から選択されるアミノ酸であり、
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10は合わせて少なくとも2個の負電荷部分を含む)
を含む。
【００６８】
一部の実施形態では、置換基は、GLP-1誘導体のポリペプチド中のリシン残基のイプシロン位等のアミノ酸残基の側鎖で付着している。
【００６９】
一部の実施形態では、Z1は、式IIa:
【００７０】
【化２】
2017536343.tif 000005
【００７１】
(式中、nは12から18の範囲の整数である)からなる。一部の実施形態では、式IIa中のnは12、14、16又は18である。一部の実施形態では、式IIa中のnは16である(即ち、Z1は17-カルボキシヘプダデカノイルである)。
【００７２】
一部の実施形態では、式II:Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はリンカーであり、ここでZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のそれぞれは個々に、下記のアミノ酸残基:Glu、γGlu、Gly、Ser、Ala、Thr及び/若しくはAdoのうちいずれか1つであるか、又は残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち1つ若しくは複数は存在せず、ただし残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも2つは存在し、Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-は合わせて少なくとも2個の負電荷部分を含む。一部の実施形態では、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10は個々に、下記のアミノ酸残基:Glu、γGlu、Gly、Ser及び/若しくはAdoのうちいずれか1つで表される、又はZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち1つ若しくは複数は存在せず、ただしZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも2つは存在する。一部の実施形態では、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10は個々に、下記のアミノ酸残基:γGlu及び/若しくはAdoのうちいずれか1つで表される、又はZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち1つ若しくは複数は存在せず、ただしZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも2つは存在する。一部の実施形態では、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも3つが存在する。一部の実施形態では、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも4つが存在する。一部の実施形態では、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも5つが存在する。一部の実施形態では、Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10のうち少なくとも6つが存在する。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-は、γGlu-γGlu-Ado-Ado-、γGlu-γGlu-Ado-Ado-γGlu-、γGlu-γGlu-Ado-γGlu-γGlu-、γGlu-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-、γGlu-γGlu-Ser-Gly-、γGlu-γGlu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-、γGlu-γGlu-γGlu--Ado-Ado-、γGlu-γGlu-γGlu-γGlu-、γGlu-Ado-Ado-、γGlu-Ado-Ado-γGlu-γGlu-、及びGly-Ser-Glu-Gly-Ser-γGlu-γGlu-からなる群から選択される。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-Ado-Ado-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-Ado-Ado-γGlu-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-Ado-γGlu-γGlu-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-Ser-Gly-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-γGlu-Ado-Ado-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-γGlu-γGlu-γGlu-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-Ado-Ado-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はγGlu-Ado-Ado-γGlu-γGlu-である。一部の実施形態では、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-はGly-Ser-Glu-Gly-Ser-γGlu-γGlu-である。
【００７３】
一部の実施形態では、親油性部分(例えばZ1)は、12〜20個の炭素原子若しくは14〜18個の炭素原子又は例えば16個の炭素原子等の少なくとも12個の炭素原子のアルキル基を含む。
【００７４】
一部の実施形態では、置換基は、リシンの側鎖の窒素原子等のアミノ酸の側鎖に共有結合的に付着している。
【００７５】
一部の実施形態では、置換基は、
【００７６】
【化３】
2017536343.tif 000006
2017536343.tif 000007
2017536343.tif 000008
【００７７】
からなる群から選択される。置換基を、前記置換基の構造式中において波線で印を付けたカルボニル基により、GLP-1誘導体のポリペプチド(即ち式Iからなるアミノ酸配列)に共有結合的に付着させることができる。
【００７８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００７９】
【化４】
2017536343.tif 000009
【００８０】
(化学式1)
である。
【００８１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００８２】
【化５】
2017536343.tif 000010
【００８３】
(化学式2)
である。
【００８４】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００８５】
【化６】
2017536343.tif 000011
【００８６】
(化学式3)
である。
【００８７】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００８８】
【化７】
2017536343.tif 000012
【００８９】
(化学式4)
である。
【００９０】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００９１】
【化８】
2017536343.tif 000013
【００９２】
(化学式5)
である。
【００９３】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００９４】
【化９】
2017536343.tif 000014
【００９５】
(化学式6)
である。
【００９６】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【００９７】
【化１０】
2017536343.tif 000015
【００９８】
(化学式7)
である。
【００９９】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１００】
【化１１】
2017536343.tif 000016
【０１０１】
(化学式8)
である。
【０１０２】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１０３】
【化１２】
2017536343.tif 000017
【０１０４】
(化学式9)
である。
【０１０５】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１０６】
【化１３】
2017536343.tif 000018
【０１０７】
(化学式10)
である。
【０１０８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０１０９】
【化１４】
2017536343.tif 000019
【０１１０】
(化学式11)
である。
【０１１１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１１２】
【化１５】
2017536343.tif 000020
【０１１３】
(化学式12)
である。
【０１１４】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０１１５】
【化１６】
2017536343.tif 000021
【０１１６】
(化学式13)
である。
【０１１７】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０１１８】
【化１７】
2017536343.tif 000022
【０１１９】
(化学式14)
である。
【０１２０】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１２１】
【化１８】
2017536343.tif 000023
【０１２２】
(化学式15)
である。
【０１２３】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１２４】
【化１９】
2017536343.tif 000024
【０１２５】
(化学式16)
である。
【０１２６】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０１２７】
【化２０】
2017536343.tif 000025
【０１２８】
(化学式17)
である。
【０１２９】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０１３０】
【化２１】
2017536343.tif 000026
【０１３１】
(化学式18)
である。
【０１３２】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０１３３】
【化２２】
2017536343.tif 000027
【０１３４】
(化学式19)
である。
【０１３５】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１３６】
【化２３】
2017536343.tif 000028
【０１３７】
(化学式20)
である。
【０１３８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１３９】
【化２４】
2017536343.tif 000029
【０１４０】
(化学式21)
である。
【０１４１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１４２】
【化２５】
2017536343.tif 000030
【０１４３】
(化学式22)
である。
【０１４４】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１４５】
【化２６】
2017536343.tif 000031
【０１４６】
(化学式23)
である。
【０１４７】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１４８】
【化２７】
2017536343.tif 000032
【０１４９】
(化学式24)
である。
【０１５０】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０１５１】
【化２８】
2017536343.tif 000033
【０１５２】
(化学式25)
である。
【０１５３】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１５４】
【化２９】
2017536343.tif 000034
【０１５５】
(化学式26)
である。
【０１５６】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[(2S)-2-[[2-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０１５７】
【化３０】
2017536343.tif 000035
【０１５８】
(化学式27)
である。
【０１５９】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１６０】
【化３１】
2017536343.tif 000036
【０１６１】
(化学式28)
である。
【０１６２】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０１６３】
【化３２】
2017536343.tif 000037
【０１６４】
(化学式29)
である。
【０１６５】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１６６】
【化３３】
2017536343.tif 000038
【０１６７】
(化学式30)
である。
【０１６８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０１６９】
【化３４】
2017536343.tif 000039
【０１７０】
(化学式31)
である。
【０１７１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１７２】
【化３５】
2017536343.tif 000040
【０１７３】
(化学式32)
である。
【０１７４】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１７５】
【化３６】
2017536343.tif 000041
【０１７６】
(化学式33)
である。
【０１７７】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１７８】
【化３７】
2017536343.tif 000042
【０１７９】
(化学式34)
である。
【０１８０】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０１８１】
【化３８】
2017536343.tif 000043
【０１８２】
(化学式35)
である。
【０１８３】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０１８４】
【化３９】
2017536343.tif 000044
【０１８５】
(化学式36)
である。
【０１８６】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１８７】
【化４０】
2017536343.tif 000045
【０１８８】
(化学式37)
である。
【０１８９】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(13-カルボキシトリデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１９０】
【化４１】
2017536343.tif 000046
【０１９１】
(化学式38)
である。
【０１９２】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１９３】
【化４２】
2017536343.tif 000047
【０１９４】
(化学式39)
である。
【０１９５】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１９６】
【化４３】
2017536343.tif 000048
【０１９７】
(化学式40)
である。
【０１９８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０１９９】
【化４４】
2017536343.tif 000049
【０２００】
(化学式41)
である。
【０２０１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０２０２】
【化４５】
2017536343.tif 000050
【０２０３】
(化学式42)
である。
【０２０４】
GLP-1類似体の誘導体の調製
本発明の誘導体を、下記で説明する方法により調製することができる。
【０２０５】
SPPSの一般的方法
使用するFmoc保護アミノ酸誘導体は、例えばAnaspec社、Bachem社、Iris Biotech社、又はNovabioChem社から供給される標準推奨:Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(BOC)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH又はFmoc-Lys(Alloc)-OHであることができる。Impを組み込むために3-(N-1-トリチル-イミダゾール-4-イル)-プロピオン酸を使用する。
【０２０６】
SPPSを、Protein Technologies社(Tucson、AZ 85714 U.S.A.)のPrelude Solid Phase Peptide Synthesizerで、Fmocベースの化学を使用して実施することができる。C末端カルボン酸の調製に適した樹脂は、アミノ酸がプレ充填されたWang樹脂{例えばFmoc-Thr(tBu)-Wang樹脂(低充填、0.35mmol/g)}である。置換基がC末端リシンに付着している場合では、適切な樹脂はプレ充填Fmoc-Lys(Mtt)-Wangである。C末端ペプチドアミドの調製に適した樹脂は、H-Rink Amide-ChemMatrix樹脂(例えば0.52nmol/gを充填)又はRink Amide AMポリスチレン樹脂(Novabiochem社、例えば0.62mmol/gを充填)等である。Fmoc-脱保護はNMP中の20%ピペリジンで達成される。ペプチドカップリングを、予め活性化して又は予め活性化させることなくDIC/HOAt/コリジン又はコリジンを含む若しくは含まないDIC/Oxyma Pureのいずれかを使用して、或いは例えばカップリング中のHisのエピマー化の抑制用にDEPBt(3-(ジエトキシホスホリルオキシ)-1,2,3-ベンゾトリアジン-4(3H)-オン)/DIPEAを使用して、実施する。この樹脂にアミノ酸/HOAt溶液又はアミノ酸/Oxyma Pure溶液(3〜10倍のモル過剰でNMP中に0.3M/0.3M)を添加し、続いて同じモル当量のDIC(NMP中に3M)を添加し、続いてコリジン(NMP中に3M)を添加する。例えば、下記の量の0.3Mアミノ酸/HOAt溶液を、下記のスケール反応用のカップリング毎に使用することができる:スケール/mL、0.05mmol/1.5mL、0.10mmol/3.0mL、0.25mmol/7.5mL。
【０２０７】
Fmoc-Lys(Mtt)-OHを使用する場合、樹脂をHFIP/DCM(75:25)(2回×2分)で洗浄し、DCMで洗浄し、この樹脂をHFIP/DCM(75:25)(2回×20分)に懸濁させてMtt基を除去することができ、その後、洗浄後に置換基をリシン部分のイプシロン位に導入することできる。
【０２０８】
Fmoc-Lys(Alloc)-OHを使用する場合、1種又は複数の捕捉剤の組合せの存在下で、例えばモルホリン(6.0当量)及び/又はジメチルボラン錯体(18.0当量)の存在下で、Pd(PPh3)4(0.02当量)で樹脂を処理することにより(30分)、Alloc基を除去することができる。次いで、樹脂をMeOH、NMP又はDMF、及びIPA(イソプロピルアルコール)それぞれで洗浄した後、置換基をリシン部分のイプシロン位に導入することができる。
【０２０９】
Imp(デスアミノHis(Trt)-OH)の合成
Imp(デスアミノHis)を、トリチル保護を有するImpの遊離酸(デスアミノHis(Trt)-OH)を得る3工程の手順でウロカニン酸から合成することができる(下記のスキームを参照されたい)。
【０２１０】
【化４６】
2017536343.tif 000051
【０２１１】
この3工程の手順を使用して合成した例示的なImpを説明する。
【０２１２】
工程1:炭素上のパラジウム(10%、150g、1.41mol)を、MeOH(5.50L)、水(5.50L)及び35%HCl(752mL、8.59mol)中のウロカニン酸(1、1.01kg、7.33mol)の溶液に添加し、生じた混合物を4日にわたり常圧でホモジナイズした。反応の変換を1H NMRでモニタリングした。完了後に触媒をろ別し、ろ液を蒸発乾固させた。残留物をMeOH(7.00L)に再溶解させ、MeOH(500mL)中のHClの2.2M溶液を添加して45℃にて16時間にわたり撹拌した。溶媒を蒸発乾固で除去した。MeOH(10.0L)及びMeOH(1.00L)中のHCl(47.0g)を添加し、45℃にて一晩撹拌した。混合物を蒸発乾固させ、純粋な3-(1H-イミダゾール-4-イル)-プロピオン酸メチルエステルヒドロクロリド(2)をオフホワイトの固体で得た。収量:1.37kg(98%)。
【０２１３】
【数１】
2017536343.tif 000052
【０２１４】
工程2:トリチルクロリド(Trt-OH)(2.04Kg、7.33mol)を、乾燥DCM(25.2L)中の上記生成物(2、1.37kg、7.20mol)の溶液に添加し、Et3N(2.62L、18.7mol)を添加した。混合物を一晩23℃で撹拌した。生じた溶液を水(15.0L)で洗浄し、DCM(2.50L)で水相を再度抽出した。組み合わせた有機相をクエン酸の10%水溶液(10.0L)で洗浄し、DCM(2.50L)で水相を再度抽出した。組み合わせた有機相を水(10.0L)で洗浄し、DCM(2.50L)で水相を再度抽出した。組み合わせた有機相を無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、蒸発乾固して3-(1-トリチル-1H-イミダゾール-4-イル)-プロピオン酸メチルエステル(3)を白色固体で得た。
【０２１５】
工程3:水(5.00L)中のNaOH(570g、14.3mol)の溶液を、THF(20.0L)中の上記エステル(3)の溶液に添加し、生じた混合物を一晩23℃で撹拌した。クエン酸の水溶液(10%、15.0L)を残留物に添加し、混合物をDCM(3回×5.00L)で抽出した。組み合わせた有機抽出物を水(2回×5.00L)で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上で乾燥させ、蒸発させて結晶性物質を得た。残留物をDCM(2.50L)中に懸濁させ、シクロヘキサン(10.0L)を添加した。固体をろ過し、シクロヘキサン(7.00L)で洗浄した。生成物は0.34%の副生成物を含んでいたことから、この固体をMeOH(20.0L)中に懸濁させてろ過した。固体を空気で乾燥させ、還流DCM(10.0L)に再溶解させ、蒸発により溶媒を除去した。固体をホモジナイズして、標題の生成物(4)を白色粉末で得た。収量:2679.2g(97%)。
【０２１６】
【数２】
2017536343.tif 000053
【０２１７】
内毒素レベル:<0.06EU/mL(10%水性DMSO中の1mgの化合物の溶液を使用するLimulus Amebocyte Lysate PYROGENT Plus試験により推定した)。
【０２１８】
置換基の付着
上に記載した標準的なアミノ酸、Fmoc-8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸及びFmoc-Glu-OtBu等の適切に保護された構成単位を使用して、上に記載したPreludeペプチド合成機により段階的手順で置換基を導入することができる。オクタデカン二酸モノ-tert-ブチル-エステルが挙げられるがこれに限定されない構成単位を使用して、脂肪酸部分の導入を達成することができる。各カップリング工程後、無水酢酸及びコリジンを過剰(>10当量)に使用して、未反応のペプチド中間体をキャップすることができる。
【０２１９】
各カップリング工程後、無水酢酸及びコリジンを過剰(>10当量)に使用して、未反応のペプチド中間体をキャップすることができる。
【０２２０】
リシンのイプシロン-窒素上での置換基の導入を、Mtt(Fmoc-Lys(Mtt)-OH)、Alloc(Fmoc-Lys(Alloc)-OH)又はivDde基(Fmoc-Lys(ivDde)-OH)で保護したリシンを使用して達成する。置換基へのγGlu部分の組み込みを、アミノ酸Fmoc-Glu-OtBuとのカップリングにより達成することができる。
【０２２１】
長期にわたるカップリング時間(1回×6時間)を使用し、続いて無水酢酸で或いは酢酸/DIC/HOAt/コリジンでキャップすることにより、置換基への各部分の導入を達成することができる。
【０２２２】
樹脂からの切断
合成後、樹脂をDCMで洗浄し、TFA/TIPS/水(95/2.5/2.5)又はTFA/EDT(1,2-エタンジチオール)/水(90/5/5)による2〜3時間の処理により樹脂からペプチドを切断し、続いてEt2O(ジエチルエーテル)又はIPE(ジイソプロピルエーテル)で沈降させる。次いで、沈殿物を、使用した溶媒で洗浄する。
【０２２３】
精製及び定量化
粗ペプチドを水/MeCN(4:1)等の水及びMeCN又は水/AcOH(1:1)の適切な混合物に60℃で1時間溶解させ、C8-又はC18-シリカゲルを含むカラムによる逆相分取HPLC(Waters社のDeltaprep 4000又はGilson社)で精製する。0.1%TFAを含む水中でのMeCNの上昇勾配で溶出を実施する。関連する画分を分析HPLC又は分析UPLCでチェックする。純粋な標的ペプチドを含む画分を混合し、減圧下で濃縮する。追加の精製工程を、別の勾配(例えば0.05M NH4HCO3を含む)を使用して導入することができる。得られる溶液を分析し(HPLC、LCMS)、化学発光窒素特異的(chemiluminescent nitrogen specific)HPLC検出器(Antek社の8060 HPLC-CLND)を使用して、又は280nmでのUV吸収を測定することにより、生成物(即ち本誘導体)を定量化する。この生成物をガラスバイアルに分注する。これらのバイアルに、Millipore社のガラス繊維プレフィルタでキャップする。凍結乾燥により、ペプチドトリフルオロ酢酸塩を白色固体として得る。
【０２２４】
一部の実施形態では、ペプチドトリフルオロ酢酸塩を、例えばMeCN中のNaOAcによるカラムイオン交換によりナトリウム塩へと変換することができる。或いは、ペプチドトリフルオロ酢酸塩を、例えば0.05M NH4HCO3を含有する勾配を有するカラムクロマトグラフィー、続いて凍結乾燥及び水中での懸濁により、アンモニウム塩へと変換することができる。一部の実施形態では、次いで、ペプチドを、懸濁液を透明にする1M NaOH(塩基性/酸性残基と一致する当量)の付加によりナトリウム塩へと変換する。最後に、凍結乾燥によりペプチドナトリウム塩を単離することができる。
【０２２５】
中間生成物
一部の実施形態では、本発明は、
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;及び
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
からなる群から選択されるGLP-1類似体の形態の中間生成物又はこれらの薬学的に許容される塩に関する。
【０２２６】
一部の実施形態では、本発明は、
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;及び
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
からなる群から選択されるGLP-1類似体の形態の中間生成物又はこれらの薬学的に許容される塩に関する。
【０２２７】
本発明のGLP-1誘導体は、(i)中間GLP-1類似体の調製、続いて(ii)置換基の付着を含む段階的合成方法により調製することができる。この方法の工程(i)を、保護アミノ酸を使用して実験の章に記載されているような標準的な固相合成を使用して達成することができ、樹脂からの切断後、GLP-1類似体を本明細書の実験の章に記載されているような分取HPLCを使用して精製にかけて中間生成物を得ることができる。或いは、この方法の工程(i)、中間生成物の調製を、WO2009/083549に記載されている半組み換え合成を使用して実行することができる。この方法の工程(ii)、即ち最終生成物を生じる中間生成物への置換基の付着、及び置換基自体の調製を、WO2009/083549に記載されている方法を使用して達成することができる。
【０２２８】
薬学的に許容される塩、アミド又はエステル
本発明の誘導体又は中間生成物は、薬学的に許容される塩、アミド又はエステルの形態であることができる。塩は、例えば塩基と酸との間の化学反応{例えば2NH3+H2SO4→(NH4)2SO4}により形成される。塩は、塩基性塩、酸性塩であることができる、又は塩はいずれでなくもよい(即ち塩は中性塩であることができる)。水中では、塩基性塩は水酸化物イオンを生成し、酸性塩はヒドロニウムイオンを生成する。
【０２２９】
本発明の誘導体又は中間生成物の塩は、アニオン基又はカチオン基それぞれの間で、添加されるカチオン又はアニオンにより形成され得る。これらの基は、本発明の誘導体又は中間生成物のペプチド部分中に及び/又は置換基中に位置することができる。
【０２３０】
本発明の誘導体又は中間生成物のアニオン基の非限定的な例として、置換基中の及び存在する場合にはペプチド部分中の遊離カルボン酸基が挙げられる。ペプチド部分は、Asp及びGlu等の内部酸性アミノ酸残基で遊離カルボン酸基を含むことが多い。
【０２３１】
ペプチド部分中のカチオン基の非限定的な例として、N末端の遊離アミノ基、並びに存在する場合には内部塩基性アミノ酸残基(例えばHis、Arg及びLys)の任意の遊離アミノ基が挙げられる。
【０２３２】
本発明の誘導体又は中間生成物のエステルは、例えば遊離カルボン酸基とアルコール又はフェノールとの反応により形成され得、この反応により、アルコキシ基又はアリールオキシ基によって少なくとも1個の水酸基が置き換えられる。エステル形成には、ペプチドのC末端の遊離カルボン酸基及び/又は置換基中の任意の遊離カルボン酸基が関与することができる。
【０２３３】
本発明の類似体及び誘導体のアミドは、例えば遊離カルボン酸基とアミン若しくは置換アミンとの反応により形成され得る、又は遊離アミノ基若しくは置換アミノ基とカルボン酸との反応により形成され得る。
【０２３４】
アミド形成には、ペプチドのC末端の遊離カルボン酸基、置換基中の任意の遊離カルボン酸基、ペプチドのN末端の遊離カルボン酸基、並びに/又はペプチド中の及び/若しくは置換基中のペプチドの任意の遊離アミノ基若しくは置換アミノ基が関与することができる。
【０２３５】
本文脈では、用語「薬学的に許容される塩」は、患者に対して有害ではない塩を示すように意図されている。そのような塩として、薬学的に許容される酸付加塩、薬学的に許容される金属塩、アンモニウム、及びアルキル化アンモニウム塩が挙げられる。酸付加塩として、無機酸の塩及び有機酸の塩が挙げられる。
【０２３６】
一部の実施形態では、ペプチドは薬学的に許容される塩の形態である。一部の実施形態では、ペプチドは薬学的に許容されるアミドの形態であり、好ましくは、ペプチドC末端でアミド基を有する薬学的に許容されるアミドの形態である。一部の実施形態では、ペプチドは薬学的に許容されるエステルの形態である。
【０２３７】
機能特性
本発明のGLP-1誘導体は、GLP-1受容体及びグルカゴン受容体の両方に結合して活性化することができる。換言すると、本発明のGLP-1誘導体は、グルカゴン受容体のアゴニスト及びGLP-1受容体のアゴニストの両方であり、本明細書において「GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニスト」とも称される。一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体は、GLP-1及びグルカゴンの両方の受容体に対する効力が反映されているような、GLP-1及びグルカゴンの受容体アゴニストである。
【０２３８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体よりもGLP-1受容体に対して低いEC50値を有する。
【０２３９】
更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は化学的に安定であり、物理的に安定であり、及び可溶性であり、例えば、GLP-1誘導体の化学的安定性、物理的安定性及び可溶性により、液体医薬組成物中でのGLP-1誘導体の十分な貯蔵安定性が可能になる。
【０２４０】
更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、例えばヒトGLP-1(配列番号1)又はヒトグルカゴンと比較してグルカゴン受容体に対する良好な受容体結合及び効力を有する。
【０２４１】
更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、例えばヒトGLP-1(配列番号1)又はヒトグルカゴンと比較してGLP-1受容体に対する良好な受容体結合及び効力を有する。
【０２４２】
更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は薬物動態特性が改善されている。
【０２４３】
更に、又は或いは、一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、例えばヒトGLP-1(配列番号1)又はヒトグルカゴンと比較して持続性の誘導体である。
【０２４４】
受容体結合及び効力
本発明の誘導体はGLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストであり、即ちGLP-1受容体アゴニスト及びグルカゴン受容体アゴニストの両方である。
【０２４５】
受容体アゴニストを、受容体に結合して天然リガンドの典型的な応答を誘発するペプチド(例えばGLP-1誘導体)と定義することができる。そのため、例えば「GLP-1受容体アゴニスト」を、ヒトGLP-1受容体に結合することができ、このヒトGLP-1受容体を完全に又は部分的に活性化させることができる化合物と定義することができる。同様に、用語「グルカゴン受容体アゴニスト」は、本明細書で使用する場合、グルカゴン受容体に結合することができ、このグルカゴン受容体を完全に又は部分的に活性化させることができる化合物と定義され得る。天然リガンドの典型的な応答は、アデニル酸シクラーゼの活性化及び細胞内cAMPのレベルの増加等の細胞内シグナル伝達経路の完全な又は部分的な活性化であることができ、当分野で既知であるような生理学的効果を媒介する。例えば、用語「GLP-1受容体活性」は、GLP-1受容体に結合して、インスリン分泌作用又は当分野で既知であるようなその他の生理学的効果を生じるシグナル伝達経路を開始させる能力を意味する。
【０２４６】
本発明の誘導体又は類似体を、本明細書に記載したアッセイ(I)(a)若しくはアッセイ(II)(a)を使用してGLP-1受容体活性に関して試験することができる、又は本明細書に記載したアッセイ(I)(b)若しくはアッセイ(II)(b)を使用してグルカゴン受容体活性に関して試験することができる。一部の実施形態では、用語「受容体活性」は、本明細書で使用する場合、受容体アゴニストの効果を意味する。
【０２４７】
一部の実施形態では、用語「グルカゴン受容体」は、本明細書で使用する場合、ヒトグルカゴン受容体を意味する。一部の実施形態では、用語「GLP-1受容体」は、本明細書で使用する場合、ヒトGLP-1受容体を意味する。
【０２４８】
生理学的活性-in vitroでの親和性及び効力
一部の実施形態では、用語「親和性」又は「受容体結合」は、本明細書で使用する場合、in vitroでの受容体結合親和性を意味しており、即ち、GLP-1受容体結合親和性アッセイ及びグルカゴン受容体結合親和性アッセイでの性能を意味しており、更には特に、ヒトGLP-1受容体及びヒトグルカゴン受容体に結合する能力を意味する。ヒトGLP-1受容体の結合親和性を結合アッセイで測定することができ、例えばヒトGLP-1受容体を安定的に発現するBHK細胞系の膜で測定することができる。放射性標識されたGLP-1は受容体に結合し、化合物(例えば、GLP-1誘導体)によって競合的に置き換えられ得る。残存する結合した放射性リガンドを、細胞膜に結合するシンチレーション近接アッセイ(SPA)ビーズを添加することにより測定し、放射能がビーズに近接する場合には、測定する光が生成され、この光はin vitroでの化合物の結合親和性の尺度である。結合親和性を測定するためのアッセイの1つの非限定的な例を本明細書のアッセイ(II)に記載する。ヒトグルカゴン受容体の結合親和性を結合親和性アッセイで測定することができ、例えば、ヒトグルカゴン受容体を安定的に発現するBHK細胞系の膜で測定することができる。放射性標識されたグルカゴンは受容体に結合し、化合物(例えば、GLP-1誘導体)によって競合的に置き換えられ得る。残存する結合した放射性リガンドを、細胞膜に結合するシンチレーション近接アッセイ(SPA)ビーズを添加することにより測定し、放射能がビーズに近接する場合には、測定する光が生成され、この光はin vitroでの化合物の結合親和性の尺度である。
【０２４９】
用語50%阻害濃度(IC50)は一般に、用量応答曲線を参照して、基線と最大との中間に対応する放射性リガンド結合の特異的結合の50%を置き換える競合化合物の濃度を意味する。IC50は化合物の結合親和性の尺度として使用され、この化合物の最大結合の50%が観測される濃度である。
【０２５０】
本発明のGLP-1誘導体のin vitroでの結合を上に記載したように測定することができ、問題となるペプチドのIC50を測定することができる。IC50値が低いほど、結合親和性は良好である。
【０２５１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、100nM以下、より好ましくは10nM未満、更により好ましくは5nM未満、最も好ましくは1nM未満のIC50に対応する、GLP-1受容体に対するin vitroでの結合親和性{本明細書のアッセイ(II)(a)に記載した方法を使用して測定する}を有する。
【０２５２】
GLP-1誘導体は、100nM以下、又は50nM未満、又は10nM未満のIC50に対応する、グルカゴン受容体に対するin vitroでの結合親和性{本明細書のアッセイ(II)(b)に記載した方法を使用して測定する}を有することができる。
【０２５３】
一部の実施形態では、効力及び/又は活性はin vitroでの効力を意味しており、即ち、機能性GLP-1受容体アッセイ及び機能性グルカゴン受容体アッセイでの性能を意味しており、更には特に、ヒトGLP-1受容体及びヒトグルカゴン受容体を活性化させる能力を意味する。ヒトGLP-1受容体の応答をレポーター遺伝子アッセイで測定することができ、例えば、ヒトGLP-1受容体を安定的に発現し、プロモーターに連結されたcAMP応答要素(CRE)に関するDNA及びホタルルシフェラーゼ(CREルシフェラーゼ)に関する遺伝子を含むBHK細胞系で測定することができる。GLP-1受容体の活性化の結果としてcAMPが産生されると、次いでルシフェラーゼが発現される。ルシフェラーゼの発現を、酵素によりオキシルリフェリンに変換されて生物発光を生じるルシフェリンを添加することにより測定することができ、この生物発光を測定し、この生物発光はin vitroでの受容体効力の尺度である。受容体効力の測定用のアッセイの1つの非限定的な例を本明細書のアッセイ(I)に記載する。ヒトグルカゴン受容体の応答をレポーター遺伝子アッセイで測定することができ、例えば、ヒトグルカゴン受容体を安定的に発現し、プロモーターに連結されたcAMP応答要素(CRE)に関するDNA及びホタルルシフェラーゼ(CREルシフェラーゼ)に関する遺伝子を含むBHK細胞系で測定することができる。グルカゴン受容体の活性化の結果としてcAMPが産生されると、次いでルシフェラーゼが発現される。ルシフェラーゼの発現を、酵素によりオキシルリフェリンに変換されて生物発光を生じるルシフェリンを添加することにより測定することができ、この生物発光を測定し、この生物発光はin vitroでの受容体効力の尺度である。
【０２５４】
用語50%効果濃度(EC50)は一般に、用量応答曲線を参照して、基線と最大との応答中間を誘発する濃度を意味する。EC50は化合物(例えば、GLP-1誘導体)の効力の尺度として使用され、この化合物の最大効果の50%が観測される濃度である。
【０２５５】
本発明のGLP-1誘導体のin vitroでの受容体効力を上に記載したように測定することができ、問題のペプチドのEC50を測定することができる。EC50値が低いほど、効力は良好である。
【０２５６】
GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニスト
GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストを、GLP-1受容体及びグルカゴン受容体の両方を活性化することができるペプチドと定義することができる。本発明の誘導体は、GLP-1受容体に対して1nM未満のEC50を有し、グルカゴン受容体に対して10nM未満のEC50を有する。一部の実施形態では、本発明の誘導体は、GLP-1受容体に対して100pM未満のEC50を有し、グルカゴン受容体に対して100pM未満のEC50を有する、又はGLP-1受容体に対して50pM未満のEC50を有し、グルカゴン受容体に対して100pM未満のEC50を有する、又はGLP-1受容体に対して10pM未満のEC50を有し、グルカゴン受容体に対して50pM未満のEC50を有する。EC50を、本明細書のアッセイ(I)に記載したように測定することができる。
【０２５７】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体よりもGLP-1受容体に対して低いEC50値を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、このGLP-1誘導体のグルカゴン受容体に対するEC50とGLP-1受容体に対するEC50との比が100から250の範囲であり、例えば50から100の範囲であり、20から50の範囲であり、10から20の範囲であり、又は1から10の範囲である。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、このGLP-1誘導体のグルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が50から100の範囲である。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、このGLP-1誘導体のグルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が20から50の範囲である。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、このGLP-1誘導体のグルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が10から20の範囲である。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、このGLP-1誘導体のグルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が1から10の範囲である。一部の実施形態では、GLP-1受容体に対するEC50を、本明細書に記載したアッセイ(I)(a)に従って測定する。一部の実施形態では、グルカゴン受容体に対するEC50を、本明細書に記載したアッセイ(I)(b)に従って測定する。
【０２５８】
GLP-1誘導体は、10nM未満又は1nM未満又は100pM未満又は10pM未満の、グルカゴン受容体に対する効力(EC50)を有することができる。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対する10nM未満のEC50を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対する1nM未満のEC50を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対する100pM未満のEC50を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対する10pM未満のEC50を有する。
【０２５９】
本発明のGLP-1誘導体は、1nM未満又は100pM未満又は50pM未満又は10pM未満の、GLP-1受容体に対するEC50を有することができる。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、GLP-1受容体に対する100pM未満のEC50を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、GLP-1受容体に対する50pM未満のEC50を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、GLP-1受容体に対する10pM未満のEC50を有する。
【０２６０】
本発明のGLP-1誘導体のGLP-1受容体に対する効力(即ちEC50)を、本明細書に記載したアッセイ(I)(a)に従って測定することができる。本発明のGLP-1誘導体のグルカゴン受容体に対する効力(即ちEC50)を、本明細書に記載したアッセイ(I)(b)に従って測定することができる。
【０２６１】
本発明の誘導体は、GLP-1受容体に対して35nM未満のIC50を有し、グルカゴン受容体に対して150nM未満のIC50を有する。IC50を、本明細書のアッセイ(II)に記載したように決定することができる。
【０２６２】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対するのと比べてGLP-1受容体に対して低いIC50値を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が1〜5の範囲であり、例えば5〜10の範囲であり、10〜15の範囲であり、15〜25の範囲であり、又は例えば25〜100であり、又は100超である。
【０２６３】
生物学的活性-in vivoでの薬理学
一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体はin vivoで効力があり、これは、任意の適切な動物モデル及び臨床試験において当分野で既知であるように測定することができる。
【０２６４】
飼料誘発性肥満(DIO)マウスは適切な動物モデルの一例であり、体重、食物摂取及び耐糖性に対する効果を、このモデルでの亜慢性投与中に評価することができる。体重及び血糖への効果を、in vivoでそのようなマウスにおいて測定することができる。動物を個々に飼育し、1日当たりに消費される食物を秤量することにより、食物摂取を評価することができる。このモデルを使用して、経口耐糖試験又は腹腔内耐糖試験(OGTT又はIPGTT)を実施することにより、耐糖に対する効果も評価することができる。これらの試験を、半絶食動物に経口又は腹腔内でグルコース負荷を投与し、その後、最大3時間にわたり血糖を測定することにより実施する。
【０２６５】
薬物動態プロファイル
本発明のGLP-1誘導体は、例えばヒトGLP-1又はヒトグルカゴンと比較して、終末相半減期の増加等の改善された薬物動態特性を有することができる。好ましくは、本発明のGLP-1誘導体は、1日に1回の投与又はそれ未満に適した薬物動態特性を有する。
【０２６６】
本発明のGLP-1誘導体の薬物動態特性を、薬物動態(PK)研究においてin-vivoで適切に決定することができる。そのような研究を行なって、身体中において医薬化合物がどのようにして吸収され、分布し、そして除去されるか、及びこれらのプロセスが時間の経過と共に身体中において化合物の濃度にどのようにして影響を及ぼすかを評価する。
【０２６７】
医薬開発の発見及び前臨床相では、マウス、ラット、サル、イヌ又はブタ等の動物モデルを使用して、このキャラクタリゼーションを実施することができる。これらのモデルのいずれかを使用して、本発明のGLP-1誘導体の薬物動態特性を試験することができる。
【０２６８】
そのような研究では、典型的には、単回用量の薬物を、関連する医薬組成物で静脈内(i.v.)、皮下(s.c.)又は経口(p.o.)のいずれかにて動物に投与する。投与後の所定の時点で血液サンプルを採取し、サンプルを、関連する定量アッセイにより薬物の濃度に関して分析する。この測定に基づいて、研究化合物に関する時間-血漿中濃度プロファイルをプロットし、いわゆるデータの非コンパートメント薬物動態分析(non-compartmental pharmacokinetic analysis)を実施する。
【０２６９】
ほとんどの化合物の場合、最初の吸収及び分布後に薬物が一定のわずかな割合で身体から除去されることを反映して、血漿中濃度プロファイルの終末部分は、片対数プロット中に描いた場合に直線状になるだろう。この割合(ラムダZ又はλz)は、プロットの終末部分のマイナス傾斜に等しい。この割合から、t1/2=ln(2)/λzとして終末相半減期を計算することもできる{例えばJohan Gabrielsson及びDaniel Weiner: Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis. Concepts & Applications、第3版、Swedish Pharmaceutical Press、Stockholm(2000)を参照されたい}。
【０２７０】
i.v.投与後にクリアランスを決定することができ、このクリアランスを、血漿中濃度対時間プロファイルでの曲線下面積(AUC)で除算した用量(D)と定義する(Rowland, M及びTozer TN: Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications、第3版、1995 Williams Wilkins)。
【０２７１】
終末相半減期及び/又はクリアランスの推定は投与レジメンの評価に関連しており、薬物開発において及び新規薬物化合物の評価において重要なパラメーターである。
【０２７２】
薬物動態プロファイル-ラットにおけるin vivoでの半減期
GLP-1誘導体の薬物動態特性を、i.v.投与後の及びs.c.投与後のラットにおけるin vivoでの終末相半減期(T1/2)として決定することができる。一部の実施形態では、GLP-1誘導体の終末相半減期は少なくとも1時間であり、好ましくは少なくとも3時間であり、好ましくは少なくとも4時間であり、更により好ましくは少なくとも5時間であり、又は最も好ましくは少なくとも6時間である。
【０２７３】
薬物動態プロファイル-マウスにおけるin vivoでの半減期
本発明のGLP-1誘導体は、ヒトGLP-1又はヒトグルカゴンと比較して改善された薬物動態特性を有することができる。好ましくは、本発明のGLP-1誘導体は、1日に1回の投与又はそれ未満に適した薬物動態特性を有する。
【０２７４】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体の薬物動態特性を、i.v.投与後の及びs.c.投与後のマウスにおけるin vivoでの終末相半減期(T1/2)として決定することができる。一部の実施形態では、GLP-1誘導体の終末相半減期は少なくとも1時間であり、好ましくは少なくとも3時間であり、好ましくは少なくとも4時間であり、更により好ましくは少なくとも5時間であり、又は最も好ましくは少なくとも6時間である。s.c.投与後のマウスにおけるGLP-1誘導体の終末相半減期を測定するのに適したアッセイを本明細書のアッセイ(IV)に記載する。
【０２７５】
薬物動態プロファイル-ミニブタにおけるin vivoでの半減期
本発明のGLP-1誘導体はhGLP-1と比較して改善され、好ましくは1日に1回又は1週に1回の投与に適する薬物動態特性を有することができる。一部の実施形態では、GLP-1誘導体の薬物動態特性を、例えば下に記載するように、i.v.投与後のミニブタにおけるin vivoでの終末相半減期(T1/2)として決定することができる。
【０２７６】
一部の実施形態では、ミニブタにおけるGLP-1誘導体の終末相半減期は少なくとも5時間であり、好ましくは少なくとも10時間であり、更により好ましくは少なくとも15時間であり、又は最も好ましくは少なくとも20時間である。
【０２７７】
この研究の目的は、ミニブタへのi.v.投与後のGLP-1誘導体のin vivoでの薬物動態特性を決定することである。このことを、その他のパラメーターの中で、問題の誘導体の終末相半減期及びクリアランスを決定する薬物動態(PK)研究で行なう。終末相半減期の増加及びクリアランスの低減は、研究化合物が身体から緩やかに除去されることを意味する。GLP-1誘導体の場合、これは薬理学的効果の持続期間の延長を伴う。
【０２７８】
約7〜14カ月齢で約16〜35kgの体重の雌のGottingenミニブタをEllegaard Gottingen Minipigs社{デンマーク、ダルモーセ(Dalmose)}から得て、この研究で使用する。このミニブタを個々に(持続性カテーテルを有するブタ)又は群で飼育し、SDSミニブタ飼料(Special Diets Services社、Essex、UK)を限定的に1日に1回又は2回で給餌する。
【０２７９】
いくつかの研究では、2本の持続性中心静脈カテーテルを、少なくとも2週の順応の後に、各動物の尾又は頭蓋の大静脈に埋め込む。この動物を手術から1週にわたり回復させ、次いで、連続するGLP-1誘導体投与の間に適切な洗い出し期間を有する反復薬物動態研究に使用する。その他の研究では、この動物を1週にわたり順応させ、その後、この動物を、連続するGLP-1誘導体投与の間に適切な洗い出し期間を有する反復薬物動態研究に使用する。各投与のときに、このブタの1つの耳静脈中にベンフロン(venflon)を装着し、このベンフロンを介して誘導体を投与した。血液サンプリングを、頸静脈又は頭蓋の大静脈中の静脈穿刺により実施する。
【０２８０】
この動物を、投与前約18時間及び投与後0から4時間にわたり絶食させない、又は絶食させるが、期間全体にわたり水を自由に利用させる。
【０２８１】
通常、GLP-1誘導体を、50mMリン酸ナトリウム、145mM塩化ナトリウム、0.05%tween80、pH7.4に通常は20〜60nmol/mlの濃度まで溶解させる。化合物の静脈内注射(通常は2〜3nmol/kg、例えば0.1ml/kgに対応する体積)を1本のカテーテル又はベンフロンを介して投与し、投与後13日まで所定の時点で(好ましくは、その他のカテーテルを介して又は静脈穿刺により)血液をサンプリングする。血液サンプル(例えば0.8ml)を、EDTA緩衝液(8mM)(時には、血液1ml当たりアプロチニン500KIUを添加した)が入った管に採取し、次いで、10分にわたり4℃及び1942Gで遠心分離する。血漿をドライアイス上のMicronic管中にピペットで移し、ELISA又はLC-MSのような適切な定量アッセイを使用して各GLP-1誘導体の血漿中濃度に関して分析するまで-20℃で保持する。
【０２８２】
この測定に基づいて、研究化合物に関する時間-血漿中濃度プロファイルをプロットし、WinNonlin v.5.0若しくはPhoenix v.6.2(Pharsight Inc.社、Mountain View、CA、USA)又はPK分析用のその他の関連するソフトウェアで、いわゆるデータの非コンパートメント薬物動態分析を実施する。ほとんどの化合物の場合、最初の分布後に薬物が一定のわずかな割合で身体から除去されることを反映して、血漿中濃度プロファイルの終末部分は、片対数プロット中に描いた場合に直線状になるだろう。この割合(ラムダZ又はλz)は、プロットの終末部分のマイナス傾斜に等しい。この割合から、t1/2=ln(2)/λzとして終末相半減期を計算することもできる{例えばJohan Gabrielsson及びDaniel Weiner: Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis. Concepts & Applications、第3版、Swedish Pharmaceutical Press、Stockholm(2000)を参照されたい}。クリアランスを、血漿中濃度対時間プロファイルでの曲線下面積(AUC)で除算した用量(D)と定義する(Rowland, M及びTozer TN: Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications、第3版、1995 Williams Wilkins)。
【０２８３】
本発明に係る化合物を上記で説明したようにミニブタ中で試験した場合、有意に長いin vivoでの半減期を観測した。
【０２８４】
物理的安定性
ペプチドは物理的状態の様々な変化を受ける場合がある。ペプチドは、ある種の一連の条件では溶解性の欠如に起因して沈殿する場合があり、例えばpHの変化に起因してアミノ酸側鎖上で反発する電荷の中和に起因して沈殿する場合がある。別の物理的変化はアミロイド原線維の形成であり、これは、ベータ-シートに富む高分子原線維構造への構造変化を伴う。凝集に起因するあまり組織的ではない構造的繰り返しにより、その他の高分子構造が形成され得る。後者の2つの場合、ペプチド物質は最終的に沈殿物として観測され得る。実際には、これらの物理的変化は、ある程度相互に関係があり得、例えば溶解性対pH及び原線維形成は関連している[Schmittschmitt及びScholtz、Protein Science、12、10、2374〜2378頁、2003]。更に、目視検査のみでこれらの現象を区別することは非常に困難であり、従って、これらの変化の結果は、一般用語「沈殿物」で記載されることが多い。
【０２８５】
物理的状態のその他の変化として、溶液からのペプチドの含有量の低下として観測される表面への吸着、及び液体溶液からゲルへの変化が挙げられる。それにもかかわらず、沈殿物の観測は、その性質又はゲルの形成に関係なく、この沈殿物の貯蔵及び使用期間中に注射可能な薬剤の場合に問題である。
【０２８６】
誘導体又は組成物の用語「物理的安定性」は、本明細書で使用する場合、ペプチド及び/若しくはタンパク質(即ち、本明細書におけるGLP-1誘導体)の熱-機械的ストレスへの曝露並びに/又は疎水性の表面及び界面等の不安定な表面及び界面との相互作用の結果として、このペプチド及び/又はタンパク質の生物学的に不活性な及び/又は不溶性の凝集体を形成するペプチド及び/又はタンパク質の傾向を意味する。適切な容器(例えばカートリッジ又はバイアル)に充填された水性のペプチド組成物及び/又はタンパク質組成物を、様々な期間にわたり様々な温度で機械的/物理的ストレス(例えば撹拌)に曝露した後、目視検査及び/又は濁度測定により、このペプチド組成物及び/又はタンパク質組成物の物理的安定性を評価する。この組成物の目視検査を、暗い背景により鋭く収束させた光中で実施する。この組成物の濁度を、例えば0から3のスケールで濁度の程度をランク付ける目視スコアにより特徴付ける(濁度を示さない組成物は目視スコア0に対応し、日光下で目視できる濁度を示す組成物は目視スコア3に対応する)。組成物が日光下で目視できる濁度を示す場合、この組成物を、タンパク質凝集に関して物理的に不安定と分類することができる。或いは、当業者に公知の単純な濁度測定により、この組成物の濁度を評価することができる。水性のペプチド組成物及び/又はタンパク質組成物の物理的安定性を、ペプチド及び/又はタンパク質の立体配座状態の分光剤(spectroscopic agent)又はプローブを使用することにより評価することもできる。このプローブは好ましくは、ペプチド及び/又はタンパク質の非天然配座異性体に優先的に結合する小分子である。ペプチド構造及び/又はタンパク質構造の小分子分光プローブの一例はチオフラビンTである。チオフラビンTは、アミロイド原線維を検出するために広く使用されている蛍光色素である。原線維、場合によっては更にその他のペプチド配置及び/又はタンパク質配置の存在下では、チオフラビンTは、原線維ペプチド形態及び/又は原線維タンパク質形態に結合した場合に約450nmで新たな励起極大を生じて約482nmで増強発光を生じる。未結合のチオフラビンTは、これらの波長では本質的に非蛍光である。
【０２８７】
その他の小分子を、天然から非天然状態へのペプチド構造及び/又はタンパク質構造の変化のプローブとして使用することができる。例えば、ペプチド及び/又はタンパク質の露出した疎水性パッチに優先的に結合する「疎水性パッチ」プローブ。この疎水性パッチは一般に、天然状態ではペプチド及び/又はタンパク質の三次構造内に埋もれているが、ペプチド及び/又はタンパク質がほどけ始めると又は変性し始めると露出するようになる。これら小分子、分光プローブの例は、例えばアントラセン、アクリジン、フェナントロリン等の芳香族の疎水性色素である。
【０２８８】
本誘導体の物理的安定性を、本明細書に記載したアッセイ(III)(即ちThT原線維形成アッセイ)での回収率及び/又はラグタイムにより測定することができる。一部の実施形態では、物理的に安定な誘導体は、本明細書に記載したアッセイ(III)において70%超の回収率及び/又は7時間超のラグタイムを有する。
【０２８９】
一部の実施形態では、本誘導体は、本明細書に記載したアッセイ(III)等のThT原線維形成アッセイにおいて70%超の回収率を有する。一部の実施形態では、本誘導体は、本明細書に記載したアッセイ(III)等のThT原線維形成アッセイにおいて95%超又は98%超等の90%超の回収率を有する。一部の実施形態では、本誘導体は、本明細書に記載したアッセイ(III)等のThT原線維形成アッセイにおいて約100%の回収率を有する。
【０２９０】
一部の実施形態では、本誘導体は、本明細書に記載したアッセイ(III)等のThT原線維形成アッセイにおいて20時間超又は45時間超等の7時間超のラグタイムを有する。
【０２９１】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいて70%超の回収率を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいて90%超の回収率を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいて約100%の回収率を有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいて7時間超のラグタイムを有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいて20時間超のラグタイムを有する。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいて45時間以上のラグタイムを有する。一部の実施形態では、ThT原線維形成アッセイは、本明細書に記載したアッセイ(III)である。
【０２９２】
化学的安定性
用語「化学的安定性」及び「化学的に安定な」は、本明細書において誘導体又は組成物に関連して使用する場合、潜在的な低い生物学的効力及び/又は潜在的な増大した免疫原性特性を有する化学的分解産物の形成をもたらすペプチド構造での化学的共有結合変化を意味する。天然ペプチドの種類及び性質並びこのペプチドが曝露される環境に応じて、様々な化学的分解産物が形成され得る。化学的分解の排除はおそらく完全に回避され得ず、化学的分解産物の量の増加は、長期にわたる貯蔵の間に見られることが多い。ほとんどのペプチドは、グルタミニル残基中の又はアスパラギニル残基中の側鎖アミド基が加水分解されて遊離カルボン酸を形成するプロセスである脱アミドを受けやすい。その他の分解経路は、2個以上のペプチド分子が、共有結合した二量体、オリゴマー及びポリマー分解産物の形成をもたらすアミド基転移及び/又はジスルフィド相互作用を介して互いに共有結合する高分子量変換産物の形成を伴う(Stability of Protein Pharmaceuticals、Ahern. T.J. & Manning M.C.、Plenum Press、New York 1992)。(例えばメチオニン残基の)酸化を、化学的分解の別の変種として述べることができる。アスパラギン又はアスパラギン酸を含むペプチドは、対応するイソアスパラギン酸異性体を生じ、D-異性体及びL-異性体の両方が形成され得る中間体アスパルチミド(aspartimide)の形成により異性化を受けやすい可能性がある。アスパルチミド中間体は、D-アスパラギン酸異性体の形成ももたらし得る。(Formulation Consideration for Proteins Susceptible to Asparagine Deamidation and Aspartate Isomerization、Wakankar及びBorchardt、Journal of Pharmaceutical Sciences、2006、第95巻、第11号、2321頁)。最後に、ペプチドは、ペプチド断片又は単一アミノ酸がペプチド結合の加水分解により切断される加水切断も受ける場合がある。
【０２９３】
様々な環境条件(分解産物の形成は例えば昇温により促進され得ることが多い)への曝露後に様々な時点で化学的分解産物の量を測定することにより、組成物の化学的安定性を評価することができる。様々なクロマトグラフィー技術(例えばSE-HPLC及び/又はRP-UPLC)を使用する、分子のサイズ及び/又は電荷に応じた分解産物の分離により、個々の分解産物の量を測定することが多い。
【０２９４】
そのため、上で概説したように、「安定した組成物」は、物理的安定性が増大している、化学的安定性が増大している、又は物理的安定性と化学的安定性とが増大している組成物を意味する。一般に、組成物は、有効期限が到達するまで(推奨される使用条件及び貯蔵条件に従って)使用中に及び貯蔵中に安定でなければならない。
【０２９５】
本明細書に記載したアッセイ(V)での化学的分解の測定により、本誘導体の化学的安定性を測定することができる。一部の実施形態では、本誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて14%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて13%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて12%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて10%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて9%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて7%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて5%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて3%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて2%未満が分解している。一部の実施形態では、GLP-1誘導体は、化学的安定性アッセイにおいて1%未満が分解している。一部の実施形態では、化学的に安定な誘導体は、4%未満、3%未満又は2%未満等の5%未満が化学的に分解しており、前記化学的分解を、本明細書に記載したアッセイ(V)により測定することができる。
【０２９６】
溶解性
本発明のGLP-1誘導体は可溶性であることができ、例えば、少なくとも0.1mmol/l、例えば少なくとも0.2mmol/l、少なくとも0.5mmol/l又は少なくとも2mmol/lの溶解度を有する。本発明のGLP-1誘導体は可溶性であることができ、例えば10mMのリン酸塩水溶液中において、例えば少なくとも4mmol/l、例えば少なくとも8mmol/l、少なくとも10mmol/l又は少なくとも15mmol/lの溶解度を有する。
【０２９７】
本発明のGLP-1誘導体は、pH7.0〜8.2、例えばpH7.0〜7.7若しくはpH7.2〜7.5のpH範囲で可溶性であることができる、又は例えば10mMのリン酸塩水溶液中においてpH7.4で可溶性であることができる。具体的には、本発明のGLP-1誘導体はpH7.0〜8.2のpH範囲で可溶性であることができ、例えば10mMのリン酸塩水溶液中において少なくとも0.1mmol/lの溶解度を有する。
【０２９８】
一部の実施形態では、GLP-1誘導体の溶解度は室温(例えば20〜25℃)の溶解度である。一部の実施形態では、GLP-1誘導体の溶解度は低温(例えば4〜10℃、4〜8℃又は4〜5℃)での溶解度である。
【０２９９】
本文脈では、別途言及しない限り、用語「可溶な、可溶性の」、「溶解性、溶解度」、「水溶液に可溶な」、「水溶性(aqueous solubility)」、「水溶性の(water soluble)」、「水溶性の(water-soluble)」、「水溶性(water solubility)」及び「水溶性(water-solubility)」は、水又は塩水溶液又は水性緩衝液(例えば、10mMリン酸溶液又はその他の化合物を含む水溶液)に対する、例えば室温での、化合物の溶解性を意味する。下記のアッセイを使用して溶解性を評価することができる。
【０３００】
pH依存性の溶解性アッセイ
ペプチド及びタンパク質の溶解性は溶液のpHに依存する。多くの場合、タンパク質又はペプチドは、その実効電荷がゼロである等電点(pI)で又はこの等電点(pI)付近で沈殿する。低pH(即ち、pIよりも低いpH)では、タンパク質及びペプチドは典型的には正電荷を有し、pIよりも高いpHではタンパク質及びペプチドは負電荷を有する。
【０３０１】
治療用ペプチドにとって、所与のpH(安定した薬物製品の製剤化及びこの薬物製品の例えば皮下注射による患者への投与の両方に適している)において治療用ペプチドが十分な濃度で可溶であることが有利である。
【０３０２】
溶解度対pHの曲線を以下に記載するように測定する:製剤又はペプチドの水溶液を調製し、HCl及びNaOHを添加することによりアリコートを所望の範囲のpH値に調整する。この試料を2〜4日にわたり室温で放置して平衡化させる。次いで、試料を遠心分離する。各試料の少量のアリコートを、溶液中のタンパク質の濃度を測定するための逆HPLC分析のために抜き取る。遠心分離後に各試料のpHを測定し、各タンパク質の濃度を、測定したpHに対して描く。
【０３０３】
DPP-IV安定性
一部の実施形態では、GLP-1誘導体はDPPIV保護化合物である。一部の実施形態では、GLP-1誘導体はDPPIV安定化化合物である。
【０３０４】
DPP-IV安定性を、下記のアッセイを使用して測定することができる:10μMのペプチドを、0.005%Tween20を添加したHEPES緩衝液中で37℃にて2回、DPP-IV(2μg/ml)と共にインキュベートする。この実験では、ヒトGLP-1を陽性コントロールとして使用する。3分、15分、30分、60分、120分及び240分で試料のアリコートを採取し、3倍体積のエタノールを添加して反応を停止させる。試料を親ペプチドに関してLC-MSにより分析する。データを一次速度式に従ってプロットし、安定性を半減期として報告する。
【０３０５】
組合せ
一部の実施形態では、本発明は、GLP-1化合物等の1種若しくは複数の追加の治療上有効な化合物又はインスリン化合物と組み合わされた本発明のGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体はGLP-1化合物と組み合わされている。一部の実施形態では、本発明のGLP-1誘導体はインスリン化合物と組み合わされている。
【０３０６】
本明細書で使用する場合、「GLP-1化合物」は、GLP-1受容体を活性化させることができるが例えばグルカゴン受容体を活性化させることができない化合物である。
【０３０７】
本明細書で使用する場合、「インスリン化合物」は、インスリン受容体を活性化させることができる化合物である。
【０３０８】
一部の実施形態では、この組合せのGLP-1化合物は、
N-ε26-((S)-4-カルボキシ-4-ヘキサデカノイルアミノ-ブチリル)[Arg34]GLP-1-(7-37):
【０３０９】
【化４７】
2017536343.tif 000054
【０３１０】
(化合物G1);
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-({trans-4-[(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37):
【０３１１】
【化４８】
2017536343.tif 000055
【０３１２】
(化合物G2);
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37):
【０３１３】
【化４９】
2017536343.tif 000056
【０３１４】
(化合物G3);
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37):
【０３１５】
【化５０】
2017536343.tif 000057
【０３１６】
(化合物G4);
及びこれらの薬学的に許容される塩、アミド、アルキル又はエステル
からなる群から選択される。
【０３１７】
一部の実施形態では、この組合せのインスリン化合物は、N-イプシロン-B29-[(S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブチリル]desB30ヒトインスリン(化合物G5):
【０３１８】
【化５１】
2017536343.tif 000058
【０３１９】
である。
【０３２０】
医薬組成物
一部の実施形態では、本発明は、本発明の誘導体と、1種又は複数の薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物に関する。一部の実施形態では、本組成物は、SC投与、IM投与又はIV投与等の非経口投与に適している。用語「医薬組成物」は、本明細書で使用する場合、有効な化合物又はこの塩を、緩衝液、防腐剤、並びに任意選択で浸透張力調節剤及び/又は安定剤等の医薬用添加剤と一緒に含む製品を意味する。そのため、医薬組成物は医薬製剤として当分野で既知でもある。用語「医薬組成物」、「組成物」及び「製剤」は本明細書において互換的に使用される。
【０３２１】
本発明の誘導体を含む医薬組成物を、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences、1985又はRemington: The Science and Practice of Pharmacy、第19版、1995に記載されているような従来技術により調製することができる。
【０３２２】
一部の実施形態では、本発明は、本発明の誘導体を含む医薬組成物に関し、前記GLP-1誘導体は、約0.05mg/mLから約5mg/mL及び約0.1mg/mLから約2mg/mL等の約0.01mg/mLから約25mg/mLの濃度で存在し、前記組成物は2.0から10.0のpHを有する。本医薬組成物は本発明の誘導体を含むことができ、前記GLP-1誘導体は約0.01mg/mLから約50mg/mLの濃度で存在し、前記組成物は2.0から10.0のpHを有する。
【０３２３】
一部の実施形態では、本医薬組成物は本発明の誘導体の水溶液と緩衝液とを含み、前記GLP-1誘導体は、0.01mg/mL以上の濃度で存在し、前記組成物は約2.0から約10.0のpHを有する。一部の実施形態では、本医薬組成物は本発明の誘導体の水溶液と緩衝液とを含み、前記GLP-1誘導体は0.01mg/mL以上の濃度で存在し、前記組成物は約6.5から約8.5のpHを有する。
【０３２４】
一部の実施形態では、本発明の組成物は約2.0から約10.0のpHを有する。一部の実施形態では、本組成物は約6.5から約8.5のpHを有する。一部の実施形態では、本組成物は約7.2から約8.2等の約7.0から約8.5のpHを有する。
【０３２５】
本組成物は、緩衝系、防腐剤、等張剤、キレート化剤、安定剤及び界面活性剤を更に含むことができる。一部の実施形態では、本医薬組成物は水性組成物であり、即ち水を含む組成物である。そのような組成物は、典型的には溶液又は懸濁液である。本発明の一部の実施形態では、本医薬組成物は水溶液である。用語「水性組成物」は、少なくとも50%w/wの水を含む組成物と定義される。同様に、用語「水溶液」は、少なくとも50%w/wの水を含む溶液と定義される。一部の実施形態では、本組成物は非水性有機溶媒を含む。
【０３２６】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、使用前に例えば医師又は患者により溶媒及び/又は希釈剤が添加される凍結乾燥組成物である。
【０３２７】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、事前に溶解させることなく使用可能な乾燥(例えば凍結乾燥又は噴霧乾燥)組成物である。
【０３２８】
一部の実施形態では、本発明は、本発明の誘導体と、GLP-1、インスリン又はこれらの類似体及び/若しくは誘導体等の1種又は複数のその他の有効成分とを含む組成物に関する。一部の実施形態では、本発明は、本発明の誘導体と、GLP-1又はこの類似体及び/若しくは誘導体とを含む組成物に関する。一部の実施形態では、本発明は、本発明の誘導体と、インスリン又はこの類似体及び/若しくは誘導体とを含む組成物に関する。本発明の誘導体と、1種又は複数のその他の有効成分との組合せを含む組成物を「共製剤」と称することもできる。一部の実施形態では、そのような共製剤は、物理的に安定な及び/又は化学的に安定な組成物である。
【０３２９】
本発明の誘導体が中性pHで可溶性であるという事実により、インスリンとの共製剤が可能であり、より安定な血糖値及び低血糖発作の回数の低減並びに糖尿病関連合併症のリスクの低減が可能である。
【０３３０】
用語「添加剤」は、本明細書で使用する場合、医薬組成物に通常添加される化合物(例えば緩衝剤、等張化剤、防腐剤)を意味する。
【０３３１】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、1種又は複数の追加の治療上有効な化合物又は物質を更に含む。一部の実施形態では、追加の治療上有効な化合物はGLP-1化合物又はインスリン化合物である。一部の実施形態では、追加の治療上有効な化合物はGLP-1化合物である。一部の実施形態では、追加の治療上有効な化合物はインスリン化合物である。一部の実施形態では、GLP-1化合物は、
【０３３２】
N-ε26-((S)-4-カルボキシ-4-ヘキサデカノイルアミノ-ブチリル)[Arg34]GLP-1-(7-37)
(化合物G1):
【０３３３】
【化５２】
2017536343.tif 000059
【０３３４】
;N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-({trans-4-[(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37)
(化合物G2):
【０３３５】
【化５３】
2017536343.tif 000060
【０３３６】
;N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
(化合物G3):
【０３３７】
【化５４】
2017536343.tif 000061
【０３３８】
;及び
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37)
(化合物G4):
【０３３９】
【化５５】
2017536343.tif 000062
【０３４０】
及びこれらの薬学的に許容される塩、アミド、アルキル又はエステル
からなる群から選択される。
【０３４１】
一部の実施形態では、インスリン化合物は、N-イプシロン-B29-[(S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブチリル]desB30ヒトインスリン(化合物G5):
【０３４２】
【化５６】
2017536343.tif 000063
【０３４３】
である。
【０３４４】
一部の実施形態では、本医薬組成物は、上記の実施形態のいずれか一つで定義したGLP-1誘導体を約0.01mgから約1000mg(例えば約0.1mgから約500mg、約0.5mgから約5mg、例えば約0.5mgから約200mg)含む単位剤形である。
【０３４５】
一部の実施形態では、本医薬組成物は非経口投与に適している。
【０３４６】
薬剤投与
本発明の誘導体を患者に非経口投与することができる。本誘導体の投与経路は、筋肉内(IM)、皮下(SC)又は静脈内(IV)であることができる。患者に投与される本発明の誘導体を含む組成物の投与量が医師により選択されることが推奨される。
【０３４７】
シリンジを用い、任意選択でペン様シリンジを用いる皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射又は静脈内注射により、非経口投与を実施することができる。一部の実施形態では、本発明の誘導体を含む組成物を、グルカゴン投与用の既製のペン型デバイスで使用することができる。或いは、注入ポンプを用いて非経口投与を実施することができる。一部の実施形態では、本発明の誘導体を含む組成物をグルカゴン投与用のポンプで使用することができる。非経口投与は経鼻投与であることができる。更なる選択肢として、本発明の誘導体を含むグルカゴン製剤を、例えば無針注射による若しくはパッチ{任意選択でイオン導入パッチ(iontophoretic patch)}からの経皮投与又は経粘膜(例えば口腔内)投与に適合させることもできる。
【０３４８】
本発明に係る方法で用いる場合の本発明の誘導体又は組成物の典型的な投与量は、1日当たり約0.0001から約1mg/体重kgの範囲であり、好ましくは約0.001から約1mg/体重kgの範囲であり、より好ましくは約0.005から約0.02mg/体重kgの範囲である。上に記載したように、本発明の誘導体を、1種又は複数の追加の治療上有効な化合物又は物質と組み合わせて投与することができ、又は適用することができ、適切な追加の化合物又は物質を、例えば抗糖尿病薬、抗高脂血症薬、抗肥満薬、降圧薬、及び糖尿病に起因する又は糖尿病に関連する合併症の処置薬から選択することができる。
【０３４９】
適切な抗糖尿病薬として、インスリン、インスリンの誘導体又は類似体、GLP-1(グルカゴン様ペプチド-1)の誘導体又は類似体[例えば、WO98/08871(Novo Nordisk A/S社)に記載されているもの、又はその他のGLP-1類似体、例えばエキセナチド(Byetta、Eli Lilly/Amylin社;AVE0010、Sanofi-Aventis社)、タスポグルチド(Roche社)、アルビグルチド(Syncria、GlaxoSmithKline社)]、デュラグルチド(Trulicity、Eli Lilly社)、アミリン、アミリン類似体(例えばSymlin/Pramlintide)及び経口活性血糖降下薬が挙げられる。
【０３５０】
肥満又は過体重の処置又は予防に関連した目的のために、即ち、過剰な体脂肪蓄積の低減又は予防に関連した目的のために、1種又は複数の上で開示した追加の治療上有効な化合物又は物質と任意選択で組み合わせて本発明のGLP-1誘導体を投与する場合、体重減少の達成又は体重増加の予防を目的とした外科的介入と組み合わせて、例えば肥満の外科的介入と組み合わせて、そのような投与を用いることが妥当な場合がある。頻繁に使用される肥満外科手術の例として下記が挙げられるがこれらに限定されない:胃の一部をステープラーで留めて、新たな胃として機能するより小さいプレ胃嚢(pre-stomach pouch)を作成する垂直帯胃形成術{「胃ステープリング(stomach stapling)」としても知られている};患者によりサイズを調整可能なエラストマー(例えばシリコーン)バンドを使用して、新たな胃として機能する小さいプレ胃嚢を作成する、例えば調整可能な胃緊縛システム{例えばSwedish Adjustable Gastric Band(SAGB)、LAP-BAND(商標)又はMIDband(商標)}を使用する胃緊縛術;及び小さい胃嚢を、ステープラーデバイスを使用して作成し、遠位小腸に接続し、小腸の上部をY字形に再付着させる胃バイパス手術、例えば「Roux-en-Y」バイパス。
【０３５１】
問題の肥満の外科的介入の実行前の期間にわたり及び/又はその後の期間にわたり、(任意選択で、上で開示した1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わせて)本発明のGLP-1誘導体の投与を行なうことができる。多くの場合、肥満の外科的介入を行なった後に、本発明の化合物の投与を開始することが好ましい場合がある。
【０３５２】
本発明のGLP-1誘導体、及び本明細書で定義した抗肥満薬又は抗糖尿病薬を、同時に又は順次に投与することができる。これらの因子を、両方の化合物を含む単回投与形態で、又は第1の単位剤形としての本発明のGLP-1誘導体の製剤及び第2の単位剤形としての抗肥満薬若しくは抗糖尿病薬の製剤を含むキットオブパーツ(kit-of-parts)の形態で、供給することができる。本明細書全体を通して第1又は第2又は第3等の単位用量を述べる際には常に、このことは投与の好ましい順序を示さず、単に便宜上の目的のために示される。
【０３５３】
本発明のGLP-1誘導体の製剤及び抗肥満薬又は抗糖尿病薬の製剤の「同時」投与は、単一剤形での化合物の投与、又は15分以下、好ましくは10分以下、より好ましくは5分以下、より好ましくは2分以下の時間分離での第1の薬剤の投与、続いて第2の薬剤の投与を意味する。いずれの因子も最初に投与することができる。
【０３５４】
「順次」投与は、15分超の時間分離での第1の薬剤の投与、続いて第2の薬剤の投与を意味する。2種の単位剤形のいずれも最初に投与することができる。好ましくは、両方の製品を、同じ静脈内アクセスを介して注射する。
【０３５５】
既に示したように、上で開示した治療法又は治療適応の全てにおいて、本発明のGLP-1誘導体を単独で投与することができる。しかしながら、1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わせて、順次に又は同時に投与することもできる。
【０３５６】
本発明の化合物(例えばGLP-1誘導体)の典型的な投与量は、本発明に係る方法で用いる場合、1回から3回の用量等の1回又は複数回の用量で投与される1日当たり約0.0001から約100mg/体重kgの範囲であり、好ましくは約0.001から約10mg/体重kgの範囲であり、より好ましくは1日当たり約0.001から約5mg/体重kgの範囲であり、例えば1日当たり約0.001から約10mg/体重kgの範囲である、又は1日当たり約0.001から約5mg/体重kgの範囲である。正確な投与量は、投与の頻度及び様式、処置する対象の性別、年齢、体重及び全身状態、処置する状態の性質及び重症度、処置する任意の合併症、並びに当業者に明らかなその他の因子に左右されるだろう。
【０３５７】
本発明の化合物は、例えば1日に1回よりも長い間隔での投与に十分に適すると考えられる化合物を含み、そのため、本発明の適切に製剤化された化合物は、本明細書で開示した経路のいずれか一つ等の適切な投与経路による例えば1週に2回又は1週に1回の投与に適することができる。
【０３５８】
上に記載したように、本発明の化合物を1種又は複数の追加の治療上有効な化合物又は物質と組み合わせて投与する又は適用することができ、適切な追加の化合物又は物質を、例えば抗糖尿病薬、抗高脂血症薬、抗肥満薬、降圧薬、及び糖尿病に起因する又は糖尿病に関連する合併症の処置薬から選択することができる。
【０３５９】
薬学的適応
一部の実施形態では、本発明は、任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、医療で使用するための本明細書に記載したGLP-1誘導体に関する。
【０３６０】
本明細書で使用する場合、化合物(例えばGLP-1誘導体)の用語「治療上有効な量」は、所与の疾患及び/又はこの合併症の臨床症状の治癒、緩和又は部分的な抑止に十分な量を意味する。これを達成するのに十分な量が「治療上有効な量」と定義される。各目的に有効な量は、疾患又は傷害の重症度並びに対象の体重及び全身状態に左右されるだろう。適切な投与量の決定を、値のマトリックスを構築し、このマトリックス中の様々なポイントを試験することにより、日常的な実験を使用して達成することができ、これらは全て、熟練した医師又は獣医の通常の技術のレベル内であることが理解されるだろう。
【０３６１】
用語「処置」、「処置する」及びこれらのその他の変化形は、本明細書で使用する場合、疾患又は傷害等の状態と闘うこと目的とした患者の管理及びケアを意味する。この用語は、症状若しくはこの合併症を緩和するための、症状、傷害若しくは状態の進行を遅延させるための、疾患、傷害若しくは状態を治癒するため若しくは除去するための、及び/又は状態を予防するための(ここで、予防は、疾患、状態若しくは傷害と闘うことを目的とした患者の管理及びケアと理解すべきであり、症状若しくは合併症の発症を予防するための問題の有効な化合物の投与を含む)、問題の有効な化合物の投与等の、患者が罹患している所与の状態のための処置の全範囲を含むように意図されている。処置する患者は好ましくは哺乳動物であり、特にヒトであるが、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ又はブタ等のその他の動物の処置も本発明の範囲内である。
【０３６２】
用語「糖尿病(diabetes)」又は「糖尿病(diabetes mellitus)」には、1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠性糖尿病(妊娠中)、及び高血糖を引き起こすその他の状態が含まれる。この用語は、膵臓が十分な量のインスリンを産生しない又は身体の細胞がインスリンに適切に応答することができず細胞のグルコース吸収が妨げられる代謝異常に関して使用される。結果として、血液中にグルコースが蓄積される。
【０３６３】
1型糖尿病{インスリン依存性糖尿病(IDDM)及び若年発症型糖尿病とも呼ばれる}はベータ細胞破壊に起因し、通常は絶対的インスリン欠乏を引き起こす。
【０３６４】
2型糖尿病{インスリン非依存性糖尿病(NIDDM)及び成人発症型糖尿病とも呼ばれる}は顕著なインスリン耐性に関連しており、そのため相対的インスリン欠乏及び/又はインスリン耐性を有する主なインスリン分泌欠損に関連する。
【０３６５】
用語「正常血糖(euglycaemia)」は、本明細書で使用する場合、血中グルコースの正常な濃度を意味する。正常血糖(normoglycaemia)とも呼ばれる。
【０３６６】
用語「肥満」は過剰な脂肪組織を意味する。エネルギー摂取がエネルギー消費を上回る場合、この過剰カロリーは脂肪組織に貯蔵され、この正味の正のバランスが長期にわたると肥満が生じる{即ち、体重バランスに対する2種の成分が存在し、いずれかの側(摂取又は消費)の異常が肥満を引き起こす可能性がある}。これに関して、肥満は大抵、健康リスクをもたらすある程度の過剰な脂肪組織と見なされる。正常な個体と肥満の個体との間の区別は近似的にすぎないが、肥満によりもたらされる健康リスクはおそらく脂肪組織の増大との連続である。しかしながら、本発明に関連して、25を超える肥満度指数{BMI=身長(メートル)の二乗で除算した体重(キログラム)}を有する個体が肥満と見なすことができる。
【０３６７】
一部の実施形態では、本発明は、肥満の処置又は過体重の予防で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、食物摂取の低減で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、エネルギー消費の増大で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、体重の減少で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、食欲の制御で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、満腹感の誘導で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、体重減少の成功後の体重の再増加の予防で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、過体重又は肥満に関連する疾患又は状態の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、過食症の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、過食の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。
【０３６８】
一部の実施形態では、本発明は、粥状動脈硬化の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、高血圧の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、脂質異常症の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、冠動脈心疾患の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、脂肪肝の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。
【０３６９】
一部の実施形態では、本発明は、2型糖尿病の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、耐糖能障害の処置で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、2型糖尿病での疾患進行の遅延又は予防で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、耐糖能障害(IGT)から2型糖尿病への進行の遅延で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。一部の実施形態では、本発明は、2型糖尿病からインスリン要求性糖尿病への進行の遅延で使用するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体に関する。
【０３７０】
一部の実施形態では、本発明は、任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、本明細書で定義したGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、肥満を処置する、過体重を予防する、食物摂取を低減させる、エネルギー消費を増大させる、体重を減少させる、食欲を制御する、満腹感を誘導する、体重減少の成功後の体重の再増加を予防する、過体重若しくは肥満に関連する疾患若しくは状態を処置する、過食症を処置する又は過食を処置する方法に関する。
【０３７１】
一部の実施形態では、本発明は、任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、本明細書で定義したGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、粥状動脈硬化、高血圧、脂質異常症、冠動脈心疾患又は脂肪肝を処置する方法に関する。
【０３７２】
一部の実施形態では、本発明は、任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、本明細書で定義したGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、2型糖尿病を処置する方法、耐糖能障害を処置する方法、耐糖能障害(IGT)から2型糖尿病への進行を遅延させる方法、2型糖尿病からインスリン要求性糖尿病への進行を遅延させる方法に関する。
【０３７３】
一部の実施形態では、本発明は、薬剤を調製するための、本明細書で定義したGLP-1誘導体の使用に関する。一部の実施形態では、本発明は、肥満、高血糖、2型糖尿病、耐糖能障害及び1型糖尿病の処置用の又は予防用の薬剤を調製するための、上記の実施形態のいずれか一つで定義したGLP-1誘導体の使用に関する。
【０３７４】
本発明の実施形態
本発明を、下記の非限定的な実施形態により更に説明することができる。
【０３７５】
1.式I:
Imp-X8-His-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X16-Ser-X18-Tyr-Leu-Glu-X22-X23-Ala-Ala-X26-X27-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-X33-X34-X35-X36-X37 [I]、
(式中、
X8はAla、Aib、Acb又はGlyであり、
X16はVal、Leu、Ile又はTyrであり(或いは、X16はVal、Leu又はTyrであり)、
X18はLys又はArgであり、
X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibであり(或いは、X22はGly、Ala、Glu、Lys、Arg又はSerであり)、
X23はGln、Arg又はLysであり、
X26はLys又はArgであり(或いは、X26はArgであり)、
X27はGlu又はLysであり、
X33はVal、Leu又はIleであり(或いは、X33はLeu又はIleであり)、
X34はLys又はArgであり、
X35はGly、Thr、Lysであるか、又は存在せず、
X36はAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在せず(或いは、X36はArgであり)、
X37はGlyであるか、又は存在しない)
のアミノ酸配列からなるポリペプチドを含むGLP-1誘導体又はその薬学的に許容される塩及び/若しくはエステルであって、
前記GLP-1誘導体は、親油性部分と少なくとも2個の負電荷部分とを含む置換基を更に含み、前記負電荷部分のうち1つは親油性部分から遠位であり、
前記ポリペプチドはC末端アミドを任意選択で含む、GLP-1誘導体。
【０３７６】
2.前記置換基が、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置のうち1つで前記ポリペプチド中のアミノ酸残基を介して共有結合的に付着している、実施形態1に記載のGLP-1誘導体。
【０３７７】
3.前記置換基が、22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択されるアミノ酸位置のうち1つで前記ポリペプチド中のリシン残基のイプシロン位に付着している、実施形態1に記載のGLP-1誘導体。
【０３７８】
4.前記ポリペプチドがカルボン酸基等のC末端酸性基を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３７９】
5.前記ポリペプチドがC末端アミドを含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８０】
6.前記ポリペプチドが、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して3〜15個のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８１】
7.前記ポリペプチドが、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で13個又は最大で12個等の最大で14個のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８２】
8.前記ポリペプチドが、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で10個又は最大で9個等の最大で11個のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８３】
9.前記ポリペプチドが、ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、最大で7個又は最大で6個等の最大で8個のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８４】
10.ヒトGLP-1(配列番号1)と比較して、前記ポリペプチド中に最大で5個のアミノ酸残基改変、例えば置換、付加又は欠失を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８５】
11.X8がAla、Aib、若しくはAcbであり、
X22がAla若しくはGluであり、
X35がGly若しくはThrであり、及び/又は
X36がGlyであるか若しくは存在しない、
上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８６】
12.X8がAla、Aib、Acb又はGlyである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８７】
13.X8がAla、Aib又はAcbである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８８】
14.X16がVal、Leu、Ile又はTyrである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３８９】
15.X18がLys又はArgである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９０】
16.X22がGly、Ala、Glu、Lys、Arg、Ser又はAibである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９１】
17.X22がGly、Ala又はGluである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９２】
18.X22がLys、Arg、Ser又はAibである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９３】
19.X22がAla又はGluである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９４】
20.X23がGln、Arg又はLysである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９５】
21.X26がLys又はArgである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９６】
22.X27がGlu又はLysである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９７】
23.X33がVal、Leu又はIleである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９８】
24.X34がLys又はArgである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０３９９】
25.X35がGly、Thr、Lysであるか、又は存在しない、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４００】
26.X35がGly又はThrである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０１】
27.X36がAla、Gly、Lys、Serであるか、又は存在しない、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０２】
28.X36がAla、Gly又はLysである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０３】
29.X36がGlyであるか、又は存在しない、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０４】
30.X35が存在しない場合、X36及びX37も存在しない、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０５】
31.X36が存在しない場合、X37も存在しない、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０６】
32.X35が存在しない場合、X36及びX37も存在せず、前記GLP-1誘導体がC末端カルボン酸基を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０７】
33.X36が存在しない場合、X37も存在しない、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０８】
34.X36が存在しない場合、X37も存在せず、前記GLP-1誘導体がC末端カルボン酸アミドを含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４０９】
35.前記置換基が少なくとも3個の負電荷部分を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４１０】
36.前記親油性部分が、12〜20個の炭素原子若しくは14〜18個の炭素原子又は16個の炭素原子等の少なくとも12個の炭素原子のアルキル基を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４１１】
37.前記置換基が、リシンの側鎖の窒素原子等のアミノ酸の側鎖に共有結合的に付着している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４１２】
38.前記置換基が、前記ポリペプチド中の22位、23位、27位、34位、35位及び36位からなる群から選択される位置でアミノ酸残基に付着している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４１３】
39.前記置換基が、前記ポリペプチド中の34位及び35位からなる群から選択されるアミノ酸位置でリシン残基のイプシロン位に付着している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４１４】
40.前記置換基が、式II:
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]
(式中、
Z1は、式IIa:
【０４１５】
【化５７】
2017536343.tif 000064
【０４１６】
(式IIa中、nは6〜20であり、記号*は、隣接する基の窒素への付着点を表す)
を含み、
Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10は個々に、存在しないか、又はGlu、γGlu、Gly、Ser、Ala、Thr、及びAdoからなる群から選択されるアミノ酸であり、
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10は合わせて少なくとも2個の負電荷部分を含む)
を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４１７】
41.前記置換基が、式II:
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]
(式中、
Z1は、式IIa:
【０４１８】
【化５８】
2017536343.tif 000065
【０４１９】
(式IIa中、nは6〜20であり、記号*は、隣接する基の窒素への付着点を表す)
を含み、
Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10は個々に、存在しないか、又はGlu、γGlu、Gly、Ser、Ala、Thr、及びAdoからなる群から選択されるアミノ酸であり、
前記置換基は、前記ポリペプチドのリシン残基のイプシロン位で付着しており、
Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10は合わせて少なくとも2個の負電荷部分を含む)
を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２０】
42.前記置換基が3個、4個又は5個の負電荷部分を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２１】
43.前記置換基が3個又は4個の負電荷部分を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２２】
44.前記置換基が3個の負電荷部分を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２３】
45.前記置換基がアルブミンに非共有結合的に結合している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２４】
46.前記置換基が生理学的pHで負電荷を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２５】
47.Z1が、式IIa:
【０４２６】
【化５９】
2017536343.tif 000066
【０４２７】
(式中、nは12から18の範囲の整数である)
からなる、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２８】
48.式IIa中のnが12、14、16又は18である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４２９】
49.式IIa中のnが16である(即ち、Z1が17-カルボキシヘプタデカノイルである)、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３０】
50.式II Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-がリンカーであり、ここでZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のそれぞれは個々に、下記のアミノ酸残基:Glu、γGlu、Gly、Ser、Ala、Thr及び/若しくはAdoのうちいずれか1つである、又は残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち1つ若しくは複数は存在せず、ただし残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち少なくとも2つは存在し、Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-は合わせて少なくとも3個の負電荷部分を含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３１】
51.Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10が個々に、下記のアミノ酸残基:Glu、γGlu、Gly、Ser及び/若しくはAdoのうちいずれか1つである、又は残基Z2からZ10のうち1つ若しくは複数は存在せず、ただし残基Z2からZ10のうち少なくとも2つは存在する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３２】
52.Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9及びZ10が個々に、下記のアミノ酸残基:γGlu及び/若しくはAdoのうちいずれか1つである、又は残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち1つ若しくは複数は存在せず、ただしZ2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち少なくとも2つは存在する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３３】
53.残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち少なくとも3つが存在する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３４】
54.残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち少なくとも4つが存在する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３５】
55.残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち少なくとも5つが存在する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３６】
56.残基Z2、Z3、Z4、Z5、Z6、Z7、Z8、Z9又はZ10のうち少なくとも6つが存在する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３７】
57.式II中、Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-が、
γGlu-γGlu-Ado-Ado-;
γGlu-γGlu-Ado-Ado-γGlu-;
γGlu-γGlu-Ado-γGlu-γGlu-;
γGlu-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-Ado-γGlu-;
γGlu-γGlu-Ser-Gly-;
γGlu-γGlu-Ser-Gly-Glu-Ser-Gly-;
γGlu-γGlu-γGlu-Ado-Ado-;
γGlu-γGlu-γGlu-γGlu-;
γGlu-Ado-Ado-;
γGlu-Ado-Ado-γGlu-γGlu-;
Gly-Ser-Glu-Gly-Ser-γGlu-γGlu-
からなる群から選択される構造を含むリンカーである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４３８】
58.前記置換基が、
【０４３９】
【化６０】
2017536343.tif 000067
2017536343.tif 000068
2017536343.tif 000069
【０４４０】
からなる群から選択され、前記置換基が、前記置換基の構造式中において波線で印を付けたカルボニル基により、前記ポリペプチドに共有結合的に付着され得る、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０４４１】
59.前記GLP-1誘導体が、
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４４２】
【化６１】
2017536343.tif 000070
【０４４３】
(化学式1);
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４４４】
【化６２】
2017536343.tif 000071
【０４４５】
(化学式2);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４４６】
【化６３】
2017536343.tif 000072
【０４４７】
(化学式3);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４４８】
【化６４】
2017536343.tif 000073
【０４４９】
(化学式4);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４５０】
【化６５】
2017536343.tif 000074
【０４５１】
(化学式5);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４５２】
【化６６】
2017536343.tif 000075
【０４５３】
(化学式6);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４５４】
【化６７】
2017536343.tif 000076
【０４５５】
(化学式7);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４５６】
【化６８】
2017536343.tif 000077
【０４５７】
(化学式8);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４５８】
【化６９】
2017536343.tif 000078
【０４５９】
(化学式9);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４６０】
【化７０】
2017536343.tif 000079
【０４６１】
(化学式10);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０４６２】
【化７１】
2017536343.tif 000080
【０４６３】
(化学式11);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４６４】
【化７２】
2017536343.tif 000081
【０４６５】
(化学式12);
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０４６６】
【化７３】
2017536343.tif 000082
【０４６７】
(化学式13);
Nε36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０４６８】
【化７４】
2017536343.tif 000083
【０４６９】
(化学式14);
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４７０】
【化７５】
2017536343.tif 000084
【０４７１】
(化学式15);
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４７２】
【化７６】
2017536343.tif 000085
【０４７３】
(化学式16);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０４７４】
【化７７】
2017536343.tif 000086
【０４７５】
(化学式17);
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０４７６】
【化７８】
2017536343.tif 000087
【０４７７】
(化学式18);
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０４７８】
【化７９】
2017536343.tif 000088
【０４７９】
(化学式19);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４８０】
【化８０】
2017536343.tif 000089
【０４８１】
(化学式20);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４８２】
【化８１】
2017536343.tif 000090
【０４８３】
(化学式21);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４８４】
【化８２】
2017536343.tif 000091
【０４８５】
(化学式22);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４８６】
【化８３】
2017536343.tif 000092
【０４８７】
(化学式23);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４８８】
【化８４】
2017536343.tif 000093
【０４８９】
(化学式24);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０４９０】
【化８５】
2017536343.tif 000094
【０４９１】
(化学式25);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４９２】
【化８６】
2017536343.tif 000095
【０４９３】
(化学式26);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[(2S)-2-[[2-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０４９４】
【化８７】
2017536343.tif 000096
【０４９５】
(化学式27);
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０４９６】
【化８８】
2017536343.tif 000097
【０４９７】
(化学式28);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０４９８】
【化８９】
2017536343.tif 000098
【０４９９】
(化学式29);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５００】
【化９０】
2017536343.tif 000099
【０５０１】
(化学式30);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０５０２】
【化９１】
2017536343.tif 000100
【０５０３】
(化学式31);
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５０４】
【化９２】
2017536343.tif 000101
【０５０５】
(化学式32);
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５０６】
【化９３】
2017536343.tif 000102
【０５０７】
(化学式33);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５０８】
【化９４】
2017536343.tif 000103
【０５０９】
(化学式34);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０５１０】
【化９５】
2017536343.tif 000104
【０５１１】
(化学式35);
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０５１２】
【化９６】
2017536343.tif 000105
【０５１３】
(化学式36);
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５１４】
【化９７】
2017536343.tif 000106
【０５１５】
(化学式37);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(13-カルボキシトリデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５１６】
【化９８】
2017536343.tif 000107
【０５１７】
(化学式38);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５１８】
【化９９】
2017536343.tif 000108
【０５１９】
(化学式39);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５２０】
【化１００】
2017536343.tif 000109
【０５２１】
(化学式40);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５２２】
【化１０１】
2017536343.tif 000110
【０５２３】
(化学式41);
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０５２４】
【化１０２】
2017536343.tif 000111
【０５２５】
（化学式42）
からなる群から選択される、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５２６】
60.前記GLP-1誘導体の薬学的に許容される塩、アミド及び/又はエステルの形態である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５２７】
61.前記ポリペプチドがC末端アミドを含む、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５２８】
62.前記GLP-1誘導体の薬学的に許容される塩の形態である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５２９】
63.前記GLP-1誘導体のエステルの形態である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３０】
64.グルカゴン受容体のアゴニスト及びGLP-1受容体のアゴニストである、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３１】
65.グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が、50から100の範囲、20から50の範囲、10から20の範囲又は1から10の範囲等の100から250の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３２】
66.グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が、50から100の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３３】
67.グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が、20から50の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３４】
68.グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が、10から20の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３５】
69.グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が、1から10の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３６】
70.グルカゴン受容体に対するEC50値とGLP-1受容体に対するEC50との比が、1から10の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３７】
71.グルカゴン受容体に対して10nM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３８】
72.グルカゴン受容体に対して1nM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５３９】
73.グルカゴン受容体に対して100pM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４０】
74.グルカゴン受容体に対して10pM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４１】
75.GLP-1受容体に対して100pM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４２】
76.GLP-1受容体に対して50pM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４３】
77.GLP-1受容体に対して10pM未満のEC50を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４４】
78.グルカゴン受容体よりもGLP-1受容体に対して低いEC50値を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４５】
79.前記GLP-1受容体に対するEC50を、本明細書に記載したアッセイ(I)(a)に従って測定する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４６】
80.前記グルカゴン受容体に対するEC50を、本明細書に記載したアッセイ(I)(b)に従って測定する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４７】
81.グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が1〜5の範囲であり、例えば5〜10の範囲であり、10〜15の範囲であり、15〜25の範囲であり、又は例えば25〜100であり、又は例えば100超である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４８】
82.グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が5〜10の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５４９】
83.グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が10〜15の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５０】
84.グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が15〜25の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５１】
85.グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が25〜100の範囲である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５２】
86.グルカゴン受容体に対するIC50値とGLP-1受容体に対するIC50との比が100超である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５３】
87.前記GLP-1受容体に対するIC50が、本明細書で説明するアッセイ(II)(a)に従って測定される、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５４】
88.前記グルカゴン受容体に対するIC50が、本明細書で説明するアッセイ(II)(b)に従って測定される、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５５】
89.ThT原線維形成アッセイにおいて70%超の回収率を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５６】
90.ThT原線維形成アッセイにおいて90%超の回収率を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５７】
91.ThT原線維形成アッセイにおいて約100%の回収率を有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５８】
92.ThT原線維形成アッセイにおいて7時間超のラグタイムを有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５５９】
93.ThT原線維形成アッセイにおいて20時間超のラグタイムを有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６０】
94.ThT原線維形成アッセイにおいて45時間以上のラグタイムを有する、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６１】
95.前記ThT原線維形成アッセイが本明細書に記載したアッセイ(III)である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６２】
96.化学的安定性アッセイにおいて14%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６３】
97.化学的安定性アッセイにおいて13%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６４】
98.化学的安定性アッセイにおいて12%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６５】
99.化学的安定性アッセイにおいて10%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６６】
100.化学的安定性アッセイにおいて9%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６７】
101.化学的安定性アッセイにおいて7%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６８】
102.化学的安定性アッセイにおいて5%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５６９】
103.化学的安定性アッセイにおいて3%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７０】
104.化学的安定性アッセイにおいて2%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７１】
105.化学的安定性アッセイにおいて1%未満が分解している、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７２】
106.前記化学的安定性アッセイが本明細書に記載したアッセイ(V)である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７３】
107.DPPIV保護化合物である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７４】
108.DPPIV安定化化合物である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７５】
109.前記GLP-1誘導体の薬学的に許容される塩及び/又はエステルの形態である、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５７６】
110.上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体と、1種又は複数の薬学的に許容される添加剤とを含む医薬組成物。
【０５７７】
111.1種又は複数の追加の治療上有効な化合物又は物質を更に含む上記の実施形態に記載の医薬組成物。
【０５７８】
112.前記追加の治療上有効な化合物がGLP-1化合物又はインスリン化合物である、上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５７９】
113.前記追加の治療上有効な化合物がGLP-1化合物である、上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５８０】
114.前記追加の治療上有効な化合物がインスリン化合物である、上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５８１】
115.GLP-1化合物が、
N-ε26-((S)-4-カルボキシ-4-ヘキサデカノイルアミノ-ブチリル)[Arg34]GLP-1-(7-37):
【０５８２】
【化１０３】
2017536343.tif 000112
【０５８３】
(化合物G1);
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-({trans-4-[(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)メチル]シクロヘキサンカルボニル}アミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][デスアミノHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37):
【０５８４】
【化１０４】
2017536343.tif 000113
【０５８５】
(化合物G2);
N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブチリルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチルアミノ]エトキシ}エトキシ)アセチル][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37):
【０５８６】
【化１０５】
2017536343.tif 000114
【０５８７】
(化合物G3);
N-ε37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシ-ペンタデカノイルアミノ)-ブチリルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチルアミノ]-エトキシ}-エトキシ)-アセチル][Aib8,22,35,Lys37]GLP-1-(7-37):
【０５８８】
【化１０６】
2017536343.tif 000115
【０５８９】
(化合物G4);
及びこれらの薬学的に許容される塩、アミド、アルキル又はエステル
からなる群から選択される、上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５９０】
116.インスリン化合物がN-イプシロン-B29-[(S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブチリル]desB30ヒトインスリン(化合物G5):
【０５９１】
【化１０７】
2017536343.tif 000116
【０５９２】
である、上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５９３】
117.上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体を約0.01mgから約1000mg、例えば約0.1mgから約500mg、約0.5mgから約5mg、例えば約0.5mgから約200mg含む単位剤形である上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５９４】
118.非経口投与に適している上記の実施形態のいずれか一つに記載の医薬組成物。
【０５９５】
119.医療で使用するための上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５９６】
120.2型糖尿病及び/又は肥満の予防及び/又は処置で使用するための上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５９７】
121.肥満、高血糖、2型糖尿病、耐糖能障害及び/又は1型糖尿病の処置又は予防で使用するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５９８】
122.肥満の処置又は予防で使用するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０５９９】
123.高血糖、2型糖尿病、耐糖能障害及び/又は1型糖尿病の処置又は予防で使用するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０６００】
124.肥満の処置若しくは予防又は過体重の予防で使用するための、食物摂取の低減で使用するための、エネルギー消費の増大で使用するための、食欲の制御で使用するための、満腹感の誘導で使用するための、体重減少の成功後の体重の再増加の予防で使用するための、過体重若しくは肥満に関連する疾患若しくは状態の処置で使用するための、過食症の処置で使用するための、及び/又は過食の処置で使用するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０６０１】
125.2型糖尿病の処置若しくは予防で使用するための、耐糖能障害の処置で使用するための、2型糖尿病での疾患進行の遅延若しくは予防で使用するための、耐糖能障害(IGT)から2型糖尿病への進行の遅延で使用するための、及び/又は2型糖尿病からインスリン要求性糖尿病への進行の遅延で使用するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０６０２】
126.粥状動脈硬化、高血圧、脂質異常症、冠動脈心疾患及び/又は脂肪肝の処置又は予防で使用するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体。
【０６０３】
127.前記GLP-1誘導体を1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わせて投与する、上記の実施形態のいずれか一つに記載の使用のためのGLP-1誘導体。
【０６０４】
128.上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の治療上有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、2型糖尿病及び/又は肥満の予防及び/又は処置の方法。
【０６０５】
129.任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、肥満を処置する又は過体重を予防する方法。
【０６０６】
130.任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、肥満を処置する若しくは過体重を予防する、食物摂取を低減させる、エネルギー消費を増大させる、体重を減少させる、食欲を制御する、満腹感を誘導する、体重減少の成功後の体重の再増加を予防する、過体重若しくは肥満に関連する疾患若しくは状態を処置する、過食症を処置する、及び/又は過食を処置する方法。
【０６０７】
131.任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、2型糖尿病、耐糖能障害を処置する若しくは予防する、2型糖尿病での疾患進行を遅延させる若しくは予防する、耐糖能障害(IGT)から2型糖尿病への進行を遅延させる、及び/又は2型糖尿病からインスリン要求性糖尿病への進行を遅延させる方法。
【０６０８】
132.任意選択で1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わされた、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の有効な量を、それを必要とする患者に投与する工程を含む、粥状動脈硬化を処置する若しくは予防する、高血圧を処置する、脂質異常症を処置する、冠動脈心疾患を処置する、及び/又は脂肪肝を処置する方法。
【０６０９】
133.前記GLP-1誘導体を1種又は複数の追加の治療上有効な化合物と組み合わせて投与する、上記の実施形態のいずれか一つに記載の処置の方法。
【０６１０】
134.薬剤を調製するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の使用。
【０６１１】
135.肥満、高血糖、2型糖尿病、耐糖能障害及び1型糖尿病の処置用の又は予防用の薬剤を調製するための、上記の実施形態のいずれか一つに記載のGLP-1誘導体の使用。
【０６１２】
136.
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド;
[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;及び
[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド;
からなる群から選択されるGLP-1類似体又はその薬学的に許容される塩。
【実施例】
【０６１３】
下記の実施例を参照して本発明を更に説明するが、下記の実施例は、特許請求の範囲のように本発明の範囲を限定するようには決して意図されていない。
【０６１４】
略語のリスト
BOC:tert-ブチルオキシカルボニル
DCM:ジクロロメタン
DIC:ジイソプロピルカルボジイミド
Fmoc:9-フルオレニルメチルオキシカルボニル
HFIP:1,1,1,3,3,3-ヘキサフルオロ-2-イソプロパノール
HOAt:1-ヒドロキシ-7-アザベンゾトリアゾール
HPLC:高速液体クロマトグラフィー
LCMS:液体クロマトグラフィー質量分析
MeCN:アセトニトリル
Mtt:4-メチルトリチル
NMP:N-メチルピロリドン
Oxyma Pure:シアノ-ヒドロキシイミノ-酢酸エチルエステル
Pbf:2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル
RP:逆相
RP-HPLC:逆相高速液体クロマトグラフィー
RT:室温
Rt:保持時間
SPPS:固相ペプチド合成
TFA:トリフルオロ酢酸
TIPS:トリイソプロピルシラン
Trt:トリチル
UPLC:超高速液体クロマトグラフィー
10EE:10の乗数(例えば、「10EE(X)」は数字10の(X)乗又は単に数字10(X)を意味しており、即ち5×10EE3は5×103である)
【０６１５】
一般的方法
この章は、樹脂結合ペプチドを合成する方法(SPPS法、アミノ酸を脱保護する方法、樹脂からペプチドを切断する方法及びこのペプチドを精製する方法を含む)、並びに得られたペプチドを検出する及びキャラクタライズする方法(LCMS法及びUPLC法)に関する。
【０６１６】
下記で説明する一般的手順に原則として従って、本明細書における実施例1〜42の化合物を調製し、精製し、分析した。
【０６１７】
SPPSの一般的方法
使用したFmoc保護アミノ酸誘導体は、例えばAnaspec社、Bachem社、Iris Biotech社又はNovabioChem社から供給される標準推奨:Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Trp(BOC)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH及びFmoc-Lys(Mtt)-OH又はFmoc-Lys(Alloc)-OHであった。3-(N-1-トリチル-イミダゾール-4-イル)-プロピオン酸を使用してN末端Impを組み込んだ。
【０６１８】
リシンのイプシロン窒素上での置換基の導入を、Mtt(Fmoc-Lys(Mtt)-OH)又はAlloc(Fmoc-Lys(Alloc)-OH)で保護したリシンを使用して達成した。Fmoc-8-アミノ-3,6-ジオキサオクタン酸、Fmoc-Glu-OtBu等の適切に保護された構成単位及び上に記載した標準的な保護アミノ酸を使用して置換基を導入した。脂肪酸部分の導入を、18-tert-ブトキシ-18-オキソ-オクタデカン酸等のモノtert-ブチル化二酸を使用して達成した。
【０６１９】
SPPSを、100又は250μmolスケールにてProtein Technologies社(Tucson、AZ 85714 U.S.A.)のPrelude Solid Phase Peptide Synthesizerで実施した。Rink Amide AMポリスチレン樹脂(Novabiochem社、例えば0.62mmol/gを充填)又はプレ充填されたWang樹脂(例えばNovabiochem社)を固体支持体として使用した。Fmoc脱保護を、NMP中の20%ピペリジンを使用して実施した。カップリングを、樹脂と比べて過剰な、NMP中のアミノ酸/Oxyma Pure(登録商標)/DIC/コリジンの混合物(100μmolスケール:10:9;9;9、250μmolスケール:7:6:6:6)を使用して実施した。或いは、DEPBt(3-(ジエトキシホスホリルオキシ)-1,2,3-ベンゾトリアジン-4(3H)-オン)/DIPEAを使用して、カップリング中の例えばHisのエピマー化を抑制することができる。脱保護工程及びカップリング工程の間にNMP及びDCMの上部洗浄(それぞれ5〜7ml、0.5分、2回×2)を実施した。カップリング時間は概して60分であった。Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Aib-OH又はBoc-His(Trt)-OHが挙げられるがこれらに限定されないいくつかのアミノ酸と置換基を含む構成単位とを「二重カップリング」し、このことは、最初のカップリング(例えば60分)の後に、樹脂を排出し、更なる試薬(アミノ酸、(HOAt又はOxyma Pure(登録商標))、DIC及びコリジン)を添加し、混合物を再び反応させた(例えば60分)ことを意味する。
【０６２０】
Fmoc-Lys(Mtt)-OHを使用する場合、樹脂をHFIP/DCM(75:25)(2回×2分)で洗浄し、DCMで洗浄し、樹脂をHFIP/DCM(75:25)(2回×20分)中に懸濁させ、その後、ピペリジン/NMP(20:80)、DCM(1回)、NMP(1回)、DCM(1回)、NMP(1回)で順に洗浄することにより、Mtt基を除去した。
【０６２１】
Fmoc-Lys(Alloc)-OHを使用する場合、1種又は複数の捕捉剤の組合せ存在下で、例えばモルホリン(6.0当量)及び/又はジメチルボラン錯体(18.0当量)の存在下で、Pd(PPh3)4(0.02当量)で樹脂を処理することにより(30分)、Alloc基を除去することができる。次いで、樹脂をMeOH、NMP又はDMF、及びIPA(イソプロピルアルコール)それぞれで洗浄した後、置換基をリシン部分のイプシロン位に導入することができる。
【０６２２】
樹脂からの切断
合成後、樹脂をDCMで洗浄し、ペプチドをTFA/TIPS/水(95/2.5/2.5)又はTFA/EDT(1,2-エタンジチオール)/水(90/5/5)で2〜3時間処理して樹脂から切断し、続いてEt2O(ジエチルエーテル)又はIPE(ジイソプロピルエーテル)で沈殿させた。沈殿物を、使用した溶媒で洗浄した。
【０６２３】
精製及び定量化
粗ペプチドを水/MeCN(4:1)等の水及びMeCN又は水/AcOH(1:1)の適切な混合物に60℃で1時間溶解させ、C8-又はC18-シリカゲルを含むカラムによる逆相分取HPLC(Waters社のDeltaprep 4000又はGilson社)で精製した。0.1%TFAを含む水中でのMeCNの上昇勾配で溶出を実施した。関連する画分を分析HPLC又は分析UPLCでチェックする。純粋な標的ペプチドを含む画分をプールし、減圧下で濃縮した。追加の精製工程を、例えば0.05M NH4HCO3を含有する別の勾配を使用して導入することができる。得られた溶液を分析し(HPLC、LCMS)、化学発光窒素特異的HPLC検出器(Antek社の8060 HPLC-CLND)を使用して、又は280nmでのUV吸収を測定することにより、生成物を定量化する。この生成物をガラスバイアルに分注する。これらのバイアルに、Millipore社のガラス繊維プレフィルタでキャップした。凍結乾燥により、ペプチドトリフルオロ酢酸塩を白色固体として得る。
【０６２４】
ペプチドトリフルオロ酢酸塩を、例えばMeCN中のNaOAcによるカラムイオン交換によりナトリウム塩へと変換することができる。或いは、ペプチドトリフルオロ酢酸塩を、例えば0.05M NH4HCO3を含有する勾配を有するカラムクロマトグラフィー、続いて凍結乾燥及び水中での懸濁により、アンモニウム塩へと変換することができる。ペプチドを、懸濁液を透明にする1M NaOH(塩基性/酸性残基と一致する当量)の付加によりナトリウム塩へと変換した。最後に、凍結乾燥によりペプチドナトリウム塩を単離することができる。
【０６２５】
検出及びキャラクタリゼーションの方法
LCMS法
【０６２６】
【表２】
2017536343.tif 000117
【０６２７】
【表３】
2017536343.tif 000118
【０６２８】
UPLC法
【０６２９】
【表４】
2017536343.tif 000119
【０６３０】
(実施例1)
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６３１】
【化１０８】
2017536343.tif 000120
【０６３２】
(化学式1)
UPLC02:Rt=8.7分
LCMS01:計算値m/1=4423;実測値m/3=1475;実測値m/4=1107;実測値m/5=886
【０６３３】
(実施例2)
Nε35-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６３４】
【化１０９】
2017536343.tif 000121
【０６３５】
(化学式2)
UPLC02:Rt=8.3
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4359;実測値m/1=4359;実測値m/3=1453;実測値m/4=1091;実測値m/5=873
【０６３６】
(実施例3)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６３７】
【化１１０】
2017536343.tif 000122
【０６３８】
(化学式3)
UPLC02:Rt=8.8分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4320;実測値m/1=4320;実測値m/3=1441;実測値m/4=1081;実測値m/5=865
【０６３９】
(実施例4)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６４０】
【化１１１】
2017536343.tif 000123
【０６４１】
(化学式4)
UPLC02:Rt=9.1分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4046;実測値m/3=1350;実測値m/4=1012;実測値m/5=810;実測値m/z=4047;
【０６４２】
(実施例5)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６４３】
【化１１２】
2017536343.tif 000124
【０６４４】
(化学式5)
UPLC02:Rt=9.0分
LCMS01:RT=2.3分;計算値m/1=4193;実測値m/3=1398;実測値m/4=1049;実測値m/5=839;実測値m/z=4193;
【０６４５】
(実施例6)
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６４６】
【化１１３】
2017536343.tif 000125
【０６４７】
(化学式6)
UPLC02:Rt=9.0分
LCMS01:RT=2.3分;計算値m/1=4161;実測値m/3=1388;実測値m/4=1041;実測値m/5=833;実測値m/z=4162
【０６４８】
(実施例7)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６４９】
【化１１４】
2017536343.tif 000126
【０６５０】
(化学式7)
UPLC02:Rt=8.9分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4348;実測値m/1=4348;実測値m/3=1449;実測値m/4=1087;実測値m/5=870
【０６５１】
(実施例8)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６５２】
【化１１５】
2017536343.tif 000127
【０６５３】
(化学式8)
UPLC02:Rt=9.0分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4276;実測値m/1=4276;実測値m/3=1426;実測値m/4=1070;実測値m/5=856
【０６５４】
(実施例9)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６５５】
【化１１６】
2017536343.tif 000128
【０６５６】
(化学式9)
UPLC02:Rt=8.9分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4332;実測値m/1=4332;実測値m/3=1445;実測値m/4=1084;実測値m/5=867
【０６５７】
(実施例10)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６５８】
【化１１７】
2017536343.tif 000129
【０６５９】
(化学式10)
UPLC02:Rt=8.6分
LCMS13:Rt=2.3分;計算値m/1=4264;実測値m/3=1422;実測値m/4=1067
【０６６０】
(実施例11)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０６６１】
【化１１８】
2017536343.tif 000130
【０６６２】
(化学式11)
UPLC02:Rt=8.7分
LCMS13:Rt=2.3分;計算値m/1=4335;実測値m/3=1445;実測値m/4=1084
【０６６３】
(実施例12)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６６４】
【化１１９】
2017536343.tif 000131
【０６６５】
(化学式12)
UPLC02:Rt=9.3分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4064;実測値m/1=4064;実測値m/3=1356;実測値m/4=1017
【０６６６】
(実施例13)
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０６６７】
【化１２０】
2017536343.tif 000132
【０６６８】
(化学式13)
UPLC02:Rt=8.4分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4392;実測値m/1=4392;実測値m/3=1465;実測値m/4=1099
【０６６９】
(実施例14)
Nε36-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０６７０】
【化１２１】
2017536343.tif 000133
【０６７１】
(化学式14)
UPLC02:Rt=8.2分
LCMS01:Rt=2.1分;計算値m/1=4526;実測値m/1=4526;実測値m/3=1510;実測値m/4=1133
【０６７２】
(実施例15)
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６７３】
【化１２２】
2017536343.tif 000134
【０６７４】
(化学式15)
UPLC02:Rt=8.8分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=3992;実測値m/1=3992;実測値m/3=1332;実測値m/4=999
【０６７５】
(実施例16)
Nε23-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Tyr16,Lys18,Lys23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６７６】
【化１２３】
2017536343.tif 000135
【０６７７】
(化学式16)
UPLC02:Rt=8.6分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4056;実測値m/1=4055;実測値m/3=1353;実測値m/4=1015
【０６７８】
(実施例17)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０６７９】
【化１２４】
2017536343.tif 000136
【０６８０】
(化学式17)
UPLC02:Rt=9.5分
LCMS01:Rt=2.9分;計算値m/1=4192;実測値m/1=4192;実測値m/3=1398;実測値m/4=1049
【０６８１】
(実施例18)
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０６８２】
【化１２５】
2017536343.tif 000137
【０６８３】
(化学式18)
UPLC02:Rt=8.7分
LCMS01:Rt=2.1分;計算値m/1=4263;実測値m/3=1422;実測値m/4=1067;実測値m/5=853
【０６８４】
(実施例19)
Nε27-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Lys27,Leu33,Arg34]-GLP-1-(7-34)-ペプチド
【０６８５】
【化１２６】
2017536343.tif 000138
【０６８６】
(化学式19)
UPLC02:Rt=8.7分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4277;実測値m/3=1426;実測値m/4=1070;実測値m/5=856
【０６８７】
(実施例20)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６８８】
【化１２７】
2017536343.tif 000139
【０６８９】
(化学式20)
UPLC02:Rt=8.6分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4287.88;実測値m/1=4290;実測値m/3=1430;実測値m/4=1073;実測値m/5=858
【０６９０】
(実施例21)
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６９１】
【化１２８】
2017536343.tif 000140
【０６９２】
(化学式21)
UPLC02:Rt=8.5分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4829;実測値m/3=1610;実測値m/4=1208;実測値m/5=966
【０６９３】
(実施例22)
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６９４】
【化１２９】
2017536343.tif 000141
【０６９５】
(化学式22)
UPLC02:Rt=8.5分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4884;実測値m/4=1222;実測値m/5=978;実測値m/z=4885
【０６９６】
(実施例23)
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０６９７】
【化１３０】
2017536343.tif 000142
【０６９８】
(化学式23)
LCMS01:Rt=2.1分;計算値m/1=4855;実測値m/4=1215;実測値m/5=972;実測値m/z=4856
【０６９９】
(実施例24)
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg22,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７００】
【化１３１】
2017536343.tif 000143
【０７０１】
(化学式24)
UPLC02:Rt=8.0分
LCMS01:Rt=2.1分;計算値m/1=4884;実測値m/3=1629;実測値m/4=1222;実測値m/5=978
【０７０２】
(実施例25)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０７０３】
【化１３２】
2017536343.tif 000144
【０７０４】
(化学式25)
UPLC02:Rt=9.0分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4321;実測値m/3=1441;実測値m/4=1081;実測値m/5=865
【０７０５】
(実施例26)
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Lys18,Arg23,Arg26,Leu33,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７０６】
【化１３３】
2017536343.tif 000145
【０７０７】
(化学式26)
UPLC02:Rt=8.1分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4784;実測値m/3=1596;実測値m/4=1197;実測値m/5=958;実測値m/z=4785
【０７０８】
(実施例27)
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[(2S)-2-[[2-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]アセチル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０７０９】
【化１３４】
2017536343.tif 000146
【０７１０】
(化学式27)
UPLC02:Rt=9.06分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4321;実測値m/3=1441;実測値m/4=1081,実測値m/5=865
【０７１１】
(実施例28)
Nε35-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Tyr16,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Arg34,Lys35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７１２】
【化１３５】
2017536343.tif 000147
【０７１３】
(化学式28)
UPLC02:Rt=8.3分
LCMS01:Rt=2.3分;計算値m/1=4840;実測値m/4=1211;実測値m/5=969
【０７１４】
(実施例29)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチド
【０７１５】
【化１３６】
2017536343.tif 000148
【０７１６】
(化学式29)
UPLC02:Rt=9.05分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4323;実測値m/3=1442;実測値m/4=1082;実測値m/5=866
【０７１７】
(実施例30)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７１８】
【化１３７】
2017536343.tif 000149
【０７１９】
(化学式30)
UPLC02:Rt=9.3分
LCMS01:Rt=3.0分;計算値m/1=4348;実測値m/1=4348;実測値m/3=1450;実測値m/4=1088
【０７２０】
(実施例31)
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg23,Arg26,Leu33,Gly36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０７２１】
【化１３８】
2017536343.tif 000150
【０７２２】
(化学式31)
UPLC02:Rt=8.4分
LCMS13:Rt=2.3分;計算値m/1=4363;実測値m/3=1455;実測値m/4=1091
【０７２３】
(実施例32)
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg23,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７２４】
【化１３９】
2017536343.tif 000151
【０７２５】
(化学式32)
UPLC02:Rt=8.6分
LCMS13:Rt=2.1分;計算値m/1=4361;実測値m/4=1091;実測値m/5=873
【０７２６】
(実施例33)
Nε22-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Acb8,His9,Lys18,Lys22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７２７】
【化１４０】
2017536343.tif 000152
【０７２８】
(化学式33)
UPLC02:Rt=8.3分
LCMS13:Rt=2.2分;計算値m/1=4333;実測値m/3=1445;実測値m/4=1084;実測値m/5=867
【０７２９】
(実施例34)
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Ala22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７３０】
【化１４１】
2017536343.tif 000153
【０７３１】
(化学式34)
UPLC02:Rt=8.9分
LCMS13:Rt:=2.4分;計算値m/1=4248;実測値m/3=1417
【０７３２】
(実施例35)
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ala36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０７３３】
【化１４２】
2017536343.tif 000154
【０７３４】
(化学式35)
UPLC02:Rt=9.8分
LCMS13:Rt=2.3分;計算値m/1=4375;実測値m/3=1459;実測値m/4=1095
【０７３５】
(実施例36)
Nε34-[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]ブタノイル]-[Imp7,Aib8,His9,Arg18,Arg23,Arg26,Leu33,Ser36]-GLP-1-(7-37)-ペプチド
【０７３６】
【化１４３】
2017536343.tif 000155
【０７３７】
(化学式36)
UPLC02:Rt=9.7分
LCMS13:Rt=2.3分;計算値m/1=4391;実測値m/3=1465;実測値m/4=1099
【０７３８】
(実施例37)
Nε34-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-カルボキシ-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]アミノ]ブタノイル]アミノ]-3-ヒドロキシプロパノイル]アミノ]アセチル]-[Imp7,Gly8,His9,Arg18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７３９】
【化１４４】
2017536343.tif 000156
【０７４０】
(化学式37)
UPLC02:Rt=9.0分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4320;実測値m/3=1441;実測値m/4=1081;実測値m/5=865
【０７４１】
(実施例38)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(13-カルボキシトリデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７４２】
【化１４５】
2017536343.tif 000157
【０７４３】
(化学式38)
UPLC02:Rt=8.7分
LCMS01:Rt=2.1分;計算値m/1=4137;実測値m/3=1380;実測値m/4=1035;実測値m/5=828
【０７４４】
(実施例39)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(15-カルボキシペンタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７４５】
【化１４６】
2017536343.tif 000158
【０７４６】
(化学式39)
UPLC02:Rt=9.8分
LCMS01:Rt=2.2分;計算値m/1=4165;実測値m/3=1389;実測値m/4=1042;実測値m/5 834
【０７４７】
(実施例40)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(19-カルボキシノナデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７４８】
【化１４７】
2017536343.tif 000159
【０７４９】
(化学式40)
UPLC02:Rt=9.0分
LCMS01:Rt=2.4分;計算値m/1=4221;実測値m/3=1408;実測値m/4=1056;実測値m/5=845
【０７５０】
(実施例41)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Leu16,Lys18,Glu22,Arg26,Leu33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７５１】
【化１４８】
2017536343.tif 000160
【０７５２】
(化学式41)
UPLC02:Rt=10.1分
LCMS01:Rt=2.5分;計算値m/1=4207;実測値m/3=1403;実測値m/4=1053;実測値m/5=842
【０７５３】
(実施例42)
Nε34-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-カルボキシ-4-[[(4S)-4-カルボキシ-4-(17-カルボキシヘプタデカノイルアミノ)ブタノイル]アミノ]ブタノイル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]アミノ]エトキシ]エトキシ]アセチル]-[Imp7,Aib8,His9,Lys18,Glu22,Arg26,Ile33,Thr35]-GLP-1-(7-35)-ペプチドアミド
【０７５４】
【化１４９】
2017536343.tif 000161
【０７５５】
(化学式42)
UPLC02:Rt=9.9分
LCMS01:Rt=2.5分;計算値m/1=4193;実測値m/3=1398;実測値m/4=1049;実測値m/5=839
【０７５６】
アッセイ(I):GLP-1受容体効力及びグルカゴン受容体効力
この実験の目的は、in vitroでの本発明のGLP-1誘導体の活性又は効力を試験することであった。in vitroでの効力は、全細胞アッセイにおけるヒトGLP-1受容体(GLP-1R)又はグルカゴン受容体(グルカゴンR)それぞれの活性化の尺度である。
【０７５７】
原理
レポーター遺伝子アッセイにおいてヒトGLP-1受容体活性化又はヒトグルカゴン受容体活性化それぞれの細胞性応答を測定することにより、in vitroでの効力を測定した。このアッセイを、ヒトGLP-1受容体又はヒトグルカゴン受容体のいずれかを安定的に発現し、プロモーターに連結されたcAMP応答要素(CRE)に関するDNA及びホタルルシフェラーゼ(CREルシフェラーゼ)に関する遺伝子を含むBHK細胞系で実施した。ヒトGLP-1受容体又はヒトグルカゴン受容体がそれぞれ活性化されるとcAMPが産生され、次に、ルシフェラーゼタンパク質が発現された。アッセイインキュベーションが完了するとルシフェラーゼ基質(ルシフェリン)を添加し、酵素によりルシフェリンがオキシルシフェリンへと変換され、生物発光が生じた。この発光を、アッセイに関する読み取りとして測定した。
【０７５８】
(a)GLP-1受容体の活性化
細胞培養及び調製
このアッセイで使用する細胞(クローンFCW467-12A/KZ10-1)は、親細胞系としてBHKTS13を有するBHK細胞であった。この細胞は、ヒトGLP-1受容体を発現するクローン(FCW467-12A)に由来しており、この細胞を、現在のクローンを得るためにCREルシフェラーゼを更にトランスフェクトすることにより確立した。
【０７５９】
この細胞を、10%FBS、1×GlutaMAX、1mg/ml G418、240nM MTX(メトトレキサート)及び1%pen/strep(ペニシリン/ストレプトマイシン)を含むDMEM培地中で5%CO2にて培養した。この細胞を等分し、液体窒素中で保存した。各アッセイ前にアリコートを取り、PBSで3回洗浄した後に、アッセイ培地中に所望の濃度で懸濁させた。96ウェルプレートの場合、5×10EE3個の細胞/ウェルの最終濃度が得られるように懸濁を行なった。
【０７６０】
材料
このアッセイでは下記の化学物質を使用した:Pluronic F-68(10%)(Gibco社、2404)、オボアルブミン(Sigma社、A5503)、DMEM w/oフェノールレッド(Gibco社、11880-028)、1M Hepes(Gibco社、15630)、Glutamax 100x(Gibco社、35050)及びsteadylite plus(PerkinElmer社、6016757)。アッセイ培地は、DMEM w/oフェノールレッド、10mM Hepes、1×GlutaMAX、2%オボアルブミン及び0.2% Pluronic F-68からなった。
【０７６１】
手順
細胞ストックを37℃の水浴中で解凍した。細胞をPBSで3回洗浄した。細胞を計数し、アッセイ培地で5×10EE3個の細胞/50μl(1×10EE5個の細胞/ml)に調整した。細胞の50μlアリコートをアッセイプレート中の各ウェルに移した。試験化合物及び参照化合物のストックを、アッセイ培地で0.2μMの濃度まで希釈した。化合物を10倍希釈して下記の濃度を得た:2×10EE-6M、2×10EE-7M、2×10EE-8M、2×10EE-9M、2×10EE-10M、2×10EE-11M、2×10EE-12M及び2×10EE-13M。各化合物につきブランクアッセイ培地コントロールも含めた。
【０７６２】
化合物又はブランクの50μlアリコートを、希釈プレートからアッセイプレートに移した。化合物を下記の最終濃度で試験した:1×10EE-6M、1×10EE-7M、1×10EE-8M、1×10EE-9M、1×10EE-10M、1×10EE-11M及び1×10EE-12M及び1×10EE-13M。
【０７６３】
アッセイプレートを、37℃で5%CO2インキュベーター中において3時間にわたりインキュベートした。アッセイプレートをインキュベーターから取り出し、15分にわたり室温で放置した。アッセイプレートの各ウェルにsteadylite plus試薬の100μlアリコートを添加した(試薬は感光性である)。各アッセイプレートをアルミニウムホイルで覆って光から保護し、室温で30分にわたり振盪した。各アッセイプレートをPerkin Elmer社のTopCount NXT機器で読み取った。
【０７６４】
算出
TopCount機器からのデータをGraphPad Prismソフトウェアに移した。このソフトウェアにより、非線形回帰{log(アゴニスト)対応答-変数勾配(4パラメーター)}を実施した。このソフトウェアによりEC50値を算出し、pMで報告した。
【０７６５】
(b)グルカゴン受容体の活性化
細胞培養及び調製
このアッセイで使用する細胞(クローンpLJ6'-4-25)は、CREルシフェラーゼ遺伝子を発現する親細胞系としてBHK570を有するBHK細胞(クローンBHK/KZ10-20-48)であり、ヒトグルカゴン受容体(pHZ-1ベクター中のクローンpLJ6')で更にトランスフェクトすることにより確立した。
【０７６６】
この細胞を、10%FBS、1×GlutaMAX、1mg/ml G418、240nM MTX(メトトレキサート)及び1%pen/strep(ペニシリン/ストレプトマイシン)を含むDMEM培地中で5%CO2にて培養した。この細胞を等分し、液体窒素中で保存した。各アッセイ前にアリコートを取り、PBSで3回洗浄した後に、アッセイ培地中に所望の濃度で懸濁させた。96ウェルプレートの場合、5×10EE3個の細胞/ウェルの最終濃度が得られるように懸濁を行なった。
【０７６７】
材料
このアッセイでは下記の化学物質を使用した:Pluronic F-68(10%)(Gibco社、2404)、オボアルブミン(Sigma社、A5503)、DMEM w/oフェノールレッド(Gibco社、11880-028)、1M Hepes(Gibco社、15630)、Glutamax 100x(Gibco社、35050)及びsteadylite plus(PerkinElmer社、6016757)。アッセイ培地は、DMEM w/oフェノールレッド、10mM Hepes、1×GlutaMAX、2%オボアルブミン及び0.2% Pluronic F-68からなった。
【０７６８】
手順
細胞ストックを37℃の水浴中で解凍した。細胞をPBSで3回洗浄した。細胞を計数し、アッセイ培地で5×10EE3個の細胞/50μl(1×10EE5個の細胞/ml)に調整した。細胞の50μlアリコートをアッセイプレート中の各ウェルに移した。
【０７６９】
試験化合物及び参照化合物のストックを、アッセイ培地で0.2μMの濃度まで希釈した。化合物を10倍希釈して下記の濃度を得た:2×10EE-6M、2×10EE-7M、2×10EE-8M、2×10EE-9M、2×10EE-10M、2×10EE-11M、2×10EE-12M及び2×10EE-13M。各化合物につきブランクアッセイ培地コントロールも含めた。
【０７７０】
化合物又はブランクの50μlアリコートを、希釈プレートからアッセイプレートに移した。化合物を下記の最終濃度で試験した:1×10EE-6M、1×10EE-7M、1×10EE-8M、1×10EE-9M、1×10EE-10M、1×10EE-11M及び1×10EE-12M及び1×10EE-13M。
【０７７１】
アッセイプレートを、37℃で5%CO2インキュベーター中において3時間にわたりインキュベートした。アッセイプレートをインキュベーターから取り出し、15分にわたり室温で放置した。アッセイプレートの各ウェルにsteadylite plus試薬の100μlアリコートを添加した(試薬は感光性である)。各アッセイプレートをアルミニウムホイルで覆って光から保護し、室温で30分にわたり振盪した。各アッセイプレートをPerkin Elmer社のTopCount NXT機器で読み取った。
【０７７２】
算出
TopCount機器からのデータをGraphPad Prismソフトウェアに移した。このソフトウェアにより、非線形回帰{log(アゴニスト)対応答-変数勾配(4パラメーター)}を実施した。このソフトウェアによりEC50値を算出し、pMで報告した。
【０７７３】
アッセイ(II):GLP-1及びグルカゴン受容体結合
このアッセイの目的は、本発明のGLP-1誘導体のin vitroでの受容体結合活性を試験することである。
【０７７４】
(a)GLP-1受容体結合
GLP-1受容体(GLP-1R)結合は、ヒトGLP-1受容体に対する誘導体の親和性の尺度である。
【０７７５】
原理
各誘導体のGLP-1受容体結合を、コムギ胚芽凝集素(WGA)シンチレーション近接アッセイ(SPA)ビーズと会合した細胞膜中で発現したGLP-1受容体に結合した[125I]-GLP-1を置換する競合的結合により測定した。各誘導体を、ヒトGLP-1受容体を含む単離膜に一連の濃度で添加し、標識された放射性リガンドの置換をモニタリングした。受容体結合を、標識されたリガンドの半分が受容体から置換された濃度、即ちIC50値として報告した。
【０７７６】
材料
このアッセイでは下記の化学物質を使用した:MEM w/oフェノールレッド(Gibco社、11880-028)、Pen/strep(Invitrogen社、15140-122)、G418(Invitrogen社、10131-027)、1M Hepes(Gibco社、15630)、EDTA(Invitrogen社、15575-038)、PBS(Invitrogen社、14190-094)、ウシ胎仔血清(Invitrogen社、16140-071)、EGTA、MgCl2(Merck社、1.05832.1000)、Tween 20(Amresco社、0850C335)、SPA粒子{コムギ胚芽凝集素(WGA)SPAビーズ、Perkin Elmer社のRPNQ0001}、[125I]-GLP-1]-(7-36)NH2(内製)、OptiPlateTM-96 (Perkin Elmer社)。
【０７７７】
緩衝液1は20mM Na-HEPES及び10mM EDTAからなり、pHを7.4に調整した。緩衝液2は20mM Na-HEPES及び0.1mM EDTAからなり、pHを7.4に調整した。アッセイ緩衝液は、5mM EGTAが補充された50mM HEPES、5mM MgCl2、0.005%Tween 20からなり、pHを7.4に調整した。0.02%アルブミンストックは、アッセイ緩衝液に0.02%(重量/質量)にて溶解したHSAからなった。
【０７７８】
細胞培養及び膜調製
このアッセイで使用する細胞(クローンFCW467-12A)は、親細胞系としてBHKTS13を有するBHK細胞であった。この細胞はヒトGLP-1受容体を発現する。
【０７７９】
この細胞を、DMEM、10%ウシ胎仔血清、1%Pen/Strep(ペニシリン/ストレプトマイシン)及び1.0mg/mlの選択マーカーG418中において5%CO2で増殖させた。膜調製物を作成するために、この細胞を約80%のコンフルエンスまで増殖させた。この細胞をリン酸緩衝生理食塩水で2回洗浄して採取した。この細胞を、短時間の遠心分離を使用してペレット化し、細胞ペレットを氷上で維持した。この細胞ペレットを、適切な量の緩衝液1(例えば10ml)中において20〜30秒にわたりULTRA-THURRAX分散機器によりホモジナイズした。ホモジネートを15分にわたり遠心分離した。このペレットを10ml緩衝液2に再懸濁させ(ホモジナイズし)、遠心分離した。この工程をもう1度繰り返した。得られたペレットを緩衝液2に再懸濁させ、タンパク質濃度を測定した。膜を等分し、-80℃で貯蔵した。
【０７８０】
手順
1.受容体結合アッセイの場合、50μlのアッセイ緩衝液をアッセイプレートの各ウェルに添加した。
2.試験化合物を連続的に希釈して下記の濃度を得た:8×10EE-7M、8×10EE-8M、8×10EE-9M、8×10EE-10M、8×10EE-11M、8×10EE-12M及び8×10EE-13M。25μlをアッセイプレート中の適切なウェルに添加した。
3.細胞膜アリコートを解凍し、その作業濃度まで希釈した。50μlをアッセイプレート中の各ウェルに添加した。
4.WGA SPAビーズを20mg/mlでアッセイ緩衝液に懸濁させた。懸濁液を、アッセイ緩衝液で10mg/mlに希釈した直後にアッセイプレートに添加した。50μlをアッセイプレート中の各ウェルに添加した。
5.[125I]-GLP-1]-(7-36)NH2の480pM溶液25μlをアッセイプレートの各ウェルに添加することにより、インキュベーションを開始させた。総カウント/ウェルを測定するために25μlアリコートを確保した。
6.アッセイプレートを30℃で2時間にわたりインキュベートした。
7.アッセイプレートを10分にわたり遠心分離した。
8.アッセイプレートをPerkin Elmer社のTopCount NXT機器中で読み取った。
【０７８１】
算出
TopCount機器からのデータをGraphPad Prismソフトウェアに移した。このソフトウェアにより反復に関する値を平均化し、非線形回帰を実施した。このソフトウェアによりIC50値を算出し、nMで報告した。
【０７８２】
(b)グルカゴン受容体結合
グルカゴン受容体(グルカゴンR)結合活性は、ヒトグルカゴン受容体に対する誘導体の親和性の尺度である。
【０７８３】
原理
各誘導体のグルカゴン受容体結合を、コムギ胚芽凝集素(WGA)シンチレーション近接アッセイ(SPA)ビーズと会合した細胞膜中で発現したグルカゴン受容体に結合した[125I]-グルカゴンを置換する競合的結合により測定した。各誘導体を、ヒトグルカゴン受容体を含む単離膜に一連の濃度で添加し、標識されたリガンドの置換をモニタリングした。受容体結合を、標識されたリガンドの半分が受容体から置換された濃度、即ちIC50値として報告した。
【０７８４】
材料
このアッセイでは下記の化学物質を使用した:DMEM w Glutamax(Gibco社、61965-026)、Pen/strep(Invitrogen社、15140-122)、G418(Invitrogen社、10131-027)、Versene(Gibco社、15040)、1M Hepes(Gibco社、15630)、PBS(Invitrogen社、14190-094)、ウシ胎仔血清(Invitrogen社、16140-071)、MgCl2(Merck社、1.05832.1000)、EDTA(Invitrogen社、15575-038)、CaCl2(Sigma社、C5080)、Tween 20(Amresco社、0850C335)、オボアルブミン(Sigma社、A5503)、SPA粒子{コムギ胚芽凝集素(WGA)SPAビーズ、Perkin Elmer社のRPNQ0001)、[125I]-グルカゴン(内製)、OptiPlateTM-96(Packard 6005290)。
【０７８５】
HME緩衝液は25mM HEPES、2mM MgCl2及び1mM EDTAからなり、pHを7.4に調整した。アッセイ緩衝液は、5mM MgCl2が補充された50mM HEPES、1mM CaCl2、0.02%Tween 20及び0.1%オボアルブミンからなり、pHを7.4に調整した。
【０７８６】
細胞培養及び膜調製
このアッセイで使用する細胞(クローンBHK hGCGR A3*25)は、ヒトグルカゴン受容体をコードするcDNAを含む発現プラスミドを安定的にトランスフェクトしたBHK細胞であった。
【０７８７】
この細胞を、DMEM、10%ウシ胎仔血清、1%Pen/Strep(ペニシリン/ストレプトマイシン)及び1.0mg/mlの選択マーカーG418中において5%CO2で増殖させた。膜調製物を作成するために、この細胞を約80%のコンフルエンスまで増殖させた。この細胞をリン酸緩衝生理食塩水で2回洗浄して採取した。この細胞を、短時間の遠心分離を使用してペレット化し、細胞ペレットを氷上で維持した。約5ml HME緩衝液を添加して細胞を溶解させ、ピペット操作により混合し、液体窒素中で急速に凍結させた。素早く解凍し、10mlまでHME緩衝液を添加した。細胞ペレットを、20〜30秒にわたりULTRA-THURRAX分散機器でホモジナイズした。ホモジネートを10分にわたり20.000×G、4℃で遠心分離した。このペレットを1〜2ml HME緩衝液に再懸濁させた(ホモジナイズした)。タンパク質濃度を測定した。膜を等分し、液体窒素中で急速に凍結させて-80℃で貯蔵した。
【０７８８】
手順
1.受容体結合アッセイの場合、50μlのアッセイ緩衝液をアッセイプレートの各ウェルに添加した。
2.試験化合物を連続的に希釈して下記の濃度を得た:8×10EE-7M、8×10EE-8M、8×10EE-9M、8×10EE-10M、8×10EE-11M、8×10EE-12M及び8×10EE-13M。25μlをアッセイプレート中の適切なウェルに添加した。
3.細胞膜アリコートを解凍し、その作業濃度まで希釈した。50μlをアッセイプレート中の各ウェルに添加した。
4.WGA SPAビーズを20mg/mlでアッセイ緩衝液に懸濁させた。懸濁液を、アッセイ緩衝液で10mg/mlに希釈した直後にアッセイプレートに添加した。50μlをアッセイプレート中の各ウェルに添加した。
5.[125I]-グルカゴンの480pM溶液25μlをアッセイプレートの各ウェルに添加することにより、インキュベーションを開始させた。総カウント/ウェルを測定するために25μlアリコートを確保した。
6.アッセイプレートを25℃で2時間にわたりインキュベートした。
7.アッセイプレートを10分にわたり1500rpmにて遠心分離した。
8.アッセイプレートをPerkin Elmer社のTopCount NXT機器中で読み取った。
【０７８９】
算出
TopCount機器からのデータをGraphPad Prismソフトウェアに移した。このソフトウェアにより反復に関する値を平均化し、非線形回帰を実施した。ソフトウェアによりIC50値を算出し、nMで報告した。
【０７９０】
アッセイ(III):ペプチド組成物の物理的安定性を評価するためのThT原線維形成アッセイ
このアッセイの目的は、水溶液中での本発明のGLP-1誘導体の物理的安定性を評価することである。
【０７９１】
ペプチドの低い物理的安定性により、試料中において秩序だった糸様高分子構造として観測されるアミロイド原線維が形成される場合があり、この形成により最終的にはゲルが形成される場合がある。このことは従来、試料の目視検査により測定されている。しかしながら、この種の測定は非常に主観的であり、観測者によって左右される。従って、小分子インジケータープローブの適用が更により有利である。チオフラビンT(ThT)はそのようなプローブであり、原線維に結合する場合に明瞭な蛍光サインを有する[Naiki他(1989) Anal. Biochem. 177、244〜249頁、LeVine(1999) Methods. Enzymol. 309、274〜284頁]。
【０７９２】
原線維形成に関する時間経過を、下記の式を有するS字形曲線により説明することができる[Nielsen他(2001) Biochemistry 40、6036〜6046頁]。
【０７９３】
【数３】
2017536343.tif 000162
【０７９４】
式中、図1に示すように、Fは時間tでのThT蛍光である。定数t0は、最大蛍光の50%に達するのに必要な時間である。原線維形成を説明する2種の重要パラメーターは、t0-2τにより算出されるラグタイム及び見掛けの速度定数kaap 1/τである。
【０７９５】
ペプチドの部分的に折り畳まれた中間体の形成は、原線維形成のための一般的な開始機構として示唆されている。この中間体の一部が核形成してテンプレートを形成し、このテンプレートの上に中間体が更に集合して原線維形成が進行し得る。ラグタイムは、核の臨界質量が構築される間隔に相当し、見掛けの速度定数は、原線維自体が形成される速度である。
【０７９６】
各アッセイ前に試料を新たに調製した。各試料組成物は説明文に記載されている。適切な量の高濃度のNaOH及びHClを使用して、試料のpHを所望の値に調整した。チオフラビンTを、H2O中のストック溶液からの試料に1μMの最終濃度まで添加した。
【０７９７】
200μlの試料アリコート(10mM HEPES緩衝液中の250μMのGLP-1誘導体、pH7.5)を96ウェルマイクロタイタープレート{Packard OptiPlate(商標)-96、白色ポリスチレン}に入れた。通常、各試料の4個又は8個のレプリカ(1つの試験条件に対応する)をウェルの1列に入れた。このプレートをScotch Pad(Qiagen社)で密封した。
【０７９８】
所与の温度でのインキュベーション、振盪、及びThT蛍光発光の測定を、Fluoroskan Ascent FL蛍光プレートリーダー(Thermo Labsystems社)中で行なった。温度を37℃に調整した。プレートを、振幅が1mmである960rpmに調整したオービタルシェイキングによりインキュベートした。444nmフィルタを通した励起及び485nmフィルタを通した発光の測定を使用して蛍光測定を行なった。
【０７９９】
各実行を、プレートを10分にわたりアッセイ温度でインキュベートすることにより開始した。プレートを所望の期間にわたり20分毎に測定した。各測定の間にプレートを振盪し、記載したように加熱した。
【０８００】
ThTアッセイの完了後、各試料の4個又は8個のレプリカをプールし、18℃で30分にわたり20000rpmにて遠心分離した。上清を0.22μmフィルタに通してろ過し、アリコートをHPLCバイアルに移した。
【０８０１】
参照として適切な標準を使用する逆相HPLCにより、最初の試料中におけるペプチドの濃度、及びろ過後の上清中におけるペプチドの濃度を測定した。最初の試料濃度が占めるろ過後の試料の濃度であるパーセント割合を回収率として報告した。
【０８０２】
測定点を、更なる処理のためにMicrosoft Excelフォーマットで保存し、GraphPad Prismを使用して曲線の描画及びフィッティングを実施した。原線維が存在しないThTからのバックグラウンド発光は無視できる程であった。データポイントは典型的には4個又は8個の試料の平均であり、標準偏差エラーバーで示される。同じ実験(即ち、同じプレート上の試料)で得られたデータのみを、実験間での原線維形成の相対的測定を確保する同じグラフに示す。
【０８０３】
データセットを式(1)にフィットさせることができた。しかしながら、原線維形成前のラグタイムを、ThT蛍光がバックグラウンドレベルを有意に超えて増加する時点を同定する曲線の目視検査により評価することができた。
【０８０４】
アッセイ(IV):マウスにおける薬物動態プロファイル
このアッセイの目的は、マウスにおける本発明のGLP-1誘導体の薬物動態プロファイルを評価することであった。
【０８０５】
GLP-1誘導体の薬物動態プロファイルを、正常な雄のc57/BL6マウス(おおよその体重:30グラム)、各時点(例えばt=0.25時間、0.5時間、1時間、3時間、6時間、10時間、24時間、30時間及び48時間)で表される例えば3匹のマウスを有するn=12で試験することができた。試験化合物を、10nmol/kgの単回皮下投与として投与することができた。
【０８０６】
ELISA/LOCIアッセイ又はLCMSを使用して、GLP-1誘導体の血漿中レベルを測定することができた。PCベースのソフトウェアPhoenix(Pharsight社、Certara社のWinNonLinバージョン6.3)を使用して、半減期(T1/2)、最大濃度(Cmax)及び最大濃度の時間(Tmax)等の化合物の薬物動態を算出することができた。
【０８０７】
アッセイ(V):化学的安定性の評価
このアッセイの目的は、水溶液中での本発明のGLP-1誘導体の化学的安定性を評価することであった。
【０８０８】
GLP-1誘導体の化学的安定性を、RP-UPLC分離及びUV検出で調べることができた。凍結乾燥試料を8mMリン酸緩衝液pH8.6に溶解させ、続いて333μMの最終濃度までHClを使用してpH7.3に調整した。試料を5℃で及び37℃で14日にわたりインキュベートし、続いてRP-UPLC分析を行なった。純度を、各クロマトグラムにおける総積算ピークの全面積に対する主なピークの面積パーセントとして定義した。37℃での14日後の純度低下(本明細書において化学的分解とも称される)を5℃でインキュベートした試料と37℃でインキュベートした試料との間の純度の差異として測定し、5℃での14日にわたるインキュベーション後の試料の純度で除算する。
【０８０９】
RP-UPLC分析を、A:MQ水中の0.05%TFA、及びB:アセトニトリル中0.05%TFAからなる移動相系を使用し、50℃及び0.4mL/分の流速で操作されるWaters社のBEH130 2.1mm×150mm、1.7μmカラムを使用して実施した。UV検出を215nmで実施した。ほとんどの試料で使用した典型的な勾配プロファイルを下記に示す。
【０８１０】
【表５】
2017536343.tif 000163
【０８１１】
大部分の誘導体と比較して大幅に異なる保持時間で溶出する一部の個々の誘導体に関して、勾配プロファイルへのある程度の調整により、試料全体でのより良好な純度評価の比較が可能になった。
【０８１２】
実施例44及びTable 2(表7)は、アッセイ(V)を使用して得られた情報を示す。
【０８１３】
(実施例43:  GLP-1誘導体の受容体効力、受容体結合及び物理的安定性)
本明細書のアッセイ(I)、アッセイ(II)及びアッセイ(III)に記載した方法に従って、本発明の選択されたGLP-1誘導体に関して、GLP-1受容体効力(EC50)及び親和性(IC50)並びにグルカゴン受容体効力(EC50)及び親和性(IC50)、並びに物理的安定性を測定した。アッセイ(III)をpH7.5で実行した。結果をTable 1(表6)に示す。
【０８１４】
【表６Ａ】
2017536343.tif 000164
【０８１５】
【表６Ｂ】
2017536343.tif 000165
【０８１６】
Table 1(表6)の結果は、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストであるGLP-1誘導体を示す。加えて、これらの結果から、ほとんどのGLP-1誘導体は、ThT原線維形成アッセイにおいてラグタイム及び/又は回収率で評価した予想外に高い物理的安定性を示すことが分かる。
【０８１７】
(実施例44:GLP-1誘導体の化学的安定性)
本発明の選択したGLP-1誘導体の化学的安定性を、本明細書のアッセイ(V)に記載した方法に従って測定した。アッセイ(V)をpH7.3で実行した。結果をTable 2(表7)に示す。
【０８１８】
【表７】
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【０８１９】
Table 2(表7)から、GLP-1/グルカゴン受容体コアゴニストが予想外にも良好乃至優れた化学的安定性を有することが分かる。
【０８２０】
本発明のある特定の特徴を本明細書で示している及び説明しているが、ここで当業者は多くの改変、置換、変更及び等価なものに想到すると予想される。従って、添付した特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨に含まれるような全てのそのような改変及び変更を包含するように意図されていることを理解しなければならない。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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