(57)【要約】  本発明は、改善された癌の診断および処置方法において使用するための新規の放射性医薬品コンジュゲートに関する。放射性医薬品コンジュゲートは、インビトロもしくはインビボでＥＰＲ剤と結合することができるリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物；またはインビトロもしくはインビボでＥＰＲ剤と結合することができるリンカーに結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物に結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤を順に含む。本発明の放射性医薬品コンジュゲートは、癌の診断および治療に使用される放射性医薬品の体内分布および薬理学的毒性を改善するのに役立つことができる能動的かつ受動的な標的化放射性核種送達系を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞を標的にする代謝産物、放射性核種を含有することができるキレート剤、およびＥＰＲ剤を含むバイオコンジュゲートであって、前記ＥＰＲ剤が切断可能なリンカーによって結合されたバイオコンジュゲート。
【請求項２】
腫瘍細胞を標的にする代謝産物、放射性核種を含有することができるキレート剤、およびインビトロまたはインビボでＥＰＲ剤と結合することができる切断可能なリンカーを含むプロコンジュゲート。
【請求項３】
ＥＰＲ剤に結合された切断不能または切断可能なリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物を順に含む、線状分子であるバイオコンジュゲート。
【請求項４】
インビトロまたはインビボでＥＰＲ剤と結合することができる切断不能または切断可能なリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物を順に含む、線状分子であるプロコンジュゲート。
【請求項５】
前記切断不能または切断可能なリンカーが４〜２０個の炭素原子の炭素鎖を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項６】
前記切断不能または切断可能なリンカーが８〜１５個の炭素原子の炭素鎖を含む、請求項５に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項７】
前記リンカーが腫瘍環境においてインビボで切断される切断可能なリンカーである、請求項１〜６のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項８】
前記切断可能なリンカーが、ヒドラゾン結合、ジスルフィド結合、または酵素的に切断可能なペプチド配列を含有する、請求項７に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項９】
前記ＥＰＲ剤が４０ｋＤａよりも大きいサイズの分子である、請求項１〜８のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１０】
前記ＥＰＲ剤が、血管透過性・滞留性亢進（ＥＰＲ）効果のためにインビボで腫瘍中に蓄積する高分子ナノ粒子、高分子ミセル、デンドリマー、リポソーム、ウイルスナノ粒子、炭素ナノ粒子およびタンパク質から選択される、請求項９に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１１】
前記ＥＰＲ剤が、生分解性である合成ポリマー、生体適合性であるが生分解性でない合成ポリマー、または天然ポリマーである、請求項１０に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１２】
前記生分解性合成ポリマーが、ポリグルタミン酸（ＰＧ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）またはポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）である、請求項１１に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１３】
前記生体適合性であるが生分解性でないポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド（ＨＭＰＡ）である、請求項１１に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１４】
前記天然ポリマーが、アルブミン、キトサンまたはヘパリンである、請求項１１に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１５】
前記腫瘍細胞を標的にする代謝産物が１０００Ｄａ未満のサイズの小分子である、請求項１〜１４のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１６】
前記腫瘍細胞を標的にする代謝産物が１００〜７００Ｄａのサイズである、請求項１５に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１７】
前記腫瘍細胞を標的にする代謝産物が、癌細胞表面において上方制御された受容体、抗原またはタンパク質によってインビボで認識されるモノクローナル抗体、タンパク質およびペプチド、ならびに分子から選択される、請求項１６に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１８】
前記モノクローナル抗体（ｍＡｂ）が、２Ｃ５、ゲムツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブおよびＰＳＭＡ  Ａｂ抗体である、請求項１７に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項１９】
前記タンパク質またはペプチドが、トランスフェリン、ＲＧＤペプチド、オクトレオチド、ボンベシン、またはＶＩＰである、請求項１７に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２０】
前記小分子が、葉酸塩、マンノース、グルコースまたはガラクトースである、請求項１７に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２１】
前記キレート剤が、放射性同位体と錯体を形成することができる環状または非環状二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２２】
前記キレート剤が、１，４，７−トリアザシクロノナン（ＴＡＣＮ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−三酢酸（ＮＯＴＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−コハク酸−Ｎ’，Ｎ’’−二酢酸（ＮＯＴＡＳＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−グルタミン酸−Ｎ’，Ｎ’’−二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−トリス（メチレンホスホニック（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ））（ＮＯＴＰ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（［１２］ａｎｅＮ４）（サイクレン）；１，４，７，１０−テトラアザシクロトリデカン（［１３］ａｎｅＮ４）；１，４，７，１１−テトラアザシクロテトラデカン（イソ−サイクラム）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）；２−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１−イル）アセタート（ＤＯ１Ａ）；２，２’−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，７−ジイル）二酢酸（ＤＯ２Ａ）；２，２’，２’’−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）三酢酸（ＤＯ３Ａ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ（メタンホスホン酸）（ＤＯＴＰ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，７−ジ（メタンホスホン酸）（ＤＯ２Ｐ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ（メタンホスホン酸）（ＤＯ３Ｐ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロ−デカン−１−グルタミン酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１−コハク酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＳＡ）；１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（［１４］ａｎｅＮ４）（サイクラム）；１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン（［１５］ａｎｅＮ４）；１，５，９，１３−テトラアザシクロヘキサデカン（［１６］ａｎｅＮ４）；１，４−エタノ−１，４，８，１１−テトラアザシクロ−テトラデカン（ｅｔ−サイクラム）；１，４，８，１１−１５−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）；２−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１−イル）酢酸（ＴＥ１Ａ）；２，２’−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，８−ジイル）二酢酸（ＴＥ２Ａ）；４，１１−ビス（カルボキシメチル）−１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］−ヘキサデカン（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）；３，６，１０，１３，１６，１９−ヘキサアザビシクロ［６．６．６］イコサン（Ｓａｒ）；フタロシアニンおよびその誘導体；ポルフィリンおよびその誘導体から選択される環状キレーターである、請求項２１に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２３】
前記キレート剤が、エチレン−ジアミン−四酢酸（ＥＤＴＡ）；およびジエチレン−トリアミン−五酢酸（ＤＴＰＡ）；Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸無水物（ＳＡＭＳＡ）；（２−メルカプトエチル）（２−（（２−メルカプトエチル）アミノ）エチル）−カルバミン酸（Ｎ２Ｓ２−ＤＡＤＴ）；１，１’−（エタン−１，２−ジイルビス（アザンジイル））ビス（２−メチルプロパン−２−チオール）（Ｎ２Ｓ２  ＢＡＴ−ＴＭ）、（２−（２−メルカプトアセトアミド）エチル）−システイン（Ｎ２Ｓ２−ＭＡＭＡ）；２，３−ビス（２−メルカプトアセトアミド）−プロパン酸（Ｎ２Ｓ２  ＤＡＤＳ）；エチレンジシステイン（ＥＣ）；２，２’，２’’−ニトリロトリエタンチオール（ＮＳ３）；２−エチルチオ−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イル）メチル−エタンアミン（Ｎ３Ｓ）；（（２−メルカプトアセチル）グリシルグリシル）カルバミン酸（ＭＡＧ３）および４−（２−（２−（２−メルカプトアセトアミド）アセトアミド）−アセトアミド）ブタン酸（ＭＡＧ２−ＧＡＢＡ）；（１，２−ビス｛［［６−（カルボキシ）ピリジン−２−イル］メチル］−アミノ｝−エタン）（Ｈ２ｄｅｄｐａ）；ニトリロトリス（メチレンホスフィン酸）（ＮＴＭＰ）；エチレンジアミンテトラメチレン−ホスホン酸（ＥＤＴＭＰ）、ジエチレントリアミンペンタ−メチレンホスホン酸（ＤＴＰＭＰ）；ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）；Ｎ’−｛５−［アセチル（ヒドロキシ）アミノ］−ペンチル｝−Ｎ−［５−（｛４−［（５−アミノペンチル）−（ヒドロキシ）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）ペンチル］−Ｎ−ヒドロキシスクシン−アミド（デフェロキサミン）から選択される非環状キレーターである、請求項２１に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２４】
前記放射性核種が、９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、５９Ｆｅ、６３Ｚｎ、５２Ｆｅ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１９５ｍＰｔ、１９１ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１１７ｍＳｎ、８９Ｚｒ、１７７Ｌｕ、１８Ｆ、１２３Ｉから選択される、イメージングのために使用され得る放射性核種である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２５】
前記放射性核種が、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、１１１Ｉｎ、１５３Ｇｄ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１９５ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１９７Ｐｔ、１１７ｍＳｎ、１０３Ｐｄ、１０３ｍＲｈ、１７７Ｌｕ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２７Ｔｈ、３２Ｐ、１６１Ｔｂおよび３３Ｐ、１２５Ｉ、２０３Ｐｂ、２０１Ｔｌ、１１９Ｓｂ、５８ｍＣｏ、１６１Ｈｏから選択される、治療目的で使用され得る放射性核種である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２６】
前記放射性核種が、オージェ電子放出放射性核種である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２７】
前記オージェ電子放出放射性核種が、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、２０１Ｔｌ、１０３Ｐｄ、１０３ｍＲｈ、１１９Ｓｂ、５８ｍＣｏ、１６１Ｈｏ、１６１Ｔｂ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９５ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１１７ｍＳｎから選択される、請求項２６に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２８】
前記キレート剤が放射性核種を含有する、請求項１〜２７のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項２９】
前記ＥＰＲ剤が前記リンカーへの取付けのために修飾されており、前記代謝産物が前記キレーターへの取付けのために修飾されており、そしてリンカーおよびキレート剤が修飾されている、請求項１〜２８のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項３０】
前記腫瘍細胞を標的にする代謝産物が、アルキル化またはアシル化によって前記キレート剤への接続のために官能基化されたグルコース含有リンカーであり、
前記キレート剤が、放射性同位体キレート化のためにＮ結合によって官能基化されたサイクラムであり、
前記リンカーがマレイミドにより官能基化され、そして
前記ＥＰＲ剤がアルブミンである、
請求項２９に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項３１】
前記放射性核種が１０３Ｐｄである、請求項３０に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項３２】
腫瘍細胞を標的にする代謝産物の官能基化ステップであって、前記代謝産物がハロゲン化アルキル鎖と反応されて、ハロゲン化物または酸クロリドに後で転換される末端官能基を有する炭素鎖に接続された代謝産物を形成するステップと、
切断不能なリンカーの官能基化ステップであって、置換に適した官能基を有する適切な長さのアルキル鎖が、キレート剤への取付けのために一方の端部にハロゲン化アルキルを有し、かつ保護アミンを他方の端部に有するリンカーへ転換されるステップ、または
切断可能なリンカーの官能基化ステップであって、末端官能基を有する２つの断片が切断可能な結合によって接続され、第１の断片が、キレート剤への取付けのために一方の端部にハロゲン化アルキルを含有し、かつ切断可能な結合を形成するための適切な基を他方の端部に含有し、そして第２の断片が、一方の端部に保護アミンを有し、かつ前記第１の断片と反応して切断可能な結合を形成するために適切な基を他方の端部に有するステップと、
キレート剤の官能基化ステップであって、前記キレート剤がまず前記リンカーによりモノアルキル化され、次に前記代謝産物により二度目のアルキル化が行われ、大員環の残りのアミンが金属錯体化に役立つ酢酸基と反応され、次に末端アミンがＥＰＲ剤に結合するための官能基に転換されるステップと
を含む、請求項２または４に記載のプロコンジュゲートの合成方法。
【請求項３３】
請求項１〜３１のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲートを水溶液中に含有する医薬品製剤。
【請求項３４】
水溶液中の所定量の請求項１〜２７のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲートを含む密封容器を含有するキット。
【請求項３５】
診断および治療的処置方法において無菌生理食塩水または血漿中で静脈内用量または腹腔内用量として使用するための、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲート。
【請求項３６】
それを必要としている個人の癌の診断または治療的処置方法であって、請求項１〜３１のいずれか一項に記載のバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲートが前記個人に投与される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、改善された癌の診断および処置方法において使用するための新規の放射性医薬品コンジュゲートに関する。
【背景技術】
【０００２】
癌は、腫瘍として知られている細胞塊の形成をもたらす制御されない異常細胞の成長が存在する腫瘍性（新生物）疾患であると定義される。ほとんどの場合、処置せずに放置すると、腫瘍の成長は最終的に生物体の死をもたらす。癌細胞は多くの場合悪性であり、リンパおよび血管系による変性細胞の播種を引き起こし、体の他の部分において腫瘍の成長が起こる。
【０００３】
癌が診断されると、一般的な処置形態は、手術、化学療法または放射線療法を含む。ほとんどの場合、３つの併用が適用される。
【０００４】
手術は、患者の体を切開することによって組織における物理的介入が実施される侵襲的手技である。手術の後、次に化学療法または放射線が行われる。
【０００５】
化学療法は、癌性細胞を死滅させるための患者への合成抗癌剤の投与である。一般的にＤＮＡ合成および複製の阻害または細胞有糸分裂の阻害（これらは次に、細胞アポトーシスの誘発に至る）を引き起こす様々な作用機構を有する多数の化学療法薬が存在する。これらの化学療法薬はいくつかの異なるタイプの癌の処置において比較的有効であるが、これらをより一貫してより長期間使用することによる大きな課題は、処置中に発生する多数の副作用である。副作用は、悪心、嘔吐、脱毛、食欲不振、口腔内潰瘍、血液細胞数の減少および多数の他のより深刻な作用に及ぶ。これらの作用は、投与された薬物が癌細胞に影響を与えるだけでなく、身体全体に広がって正常な健康細胞も損傷または死滅させた結果である。
【０００６】
従来の放射線療法は、腫瘍細胞を死滅させるために、Ｘ線、ガンマ線および荷電粒子などの高エネルギー放射線を使用することである。直接的に、または活性酸素種などの荷電粒子の発生によって放射線がＤＮＡを不可逆的に損傷すると、細胞は破壊される。腫瘍部位の照射は、外照射療法のための機械を用いて、あるいは内照射療法のために腫瘍内に配置された放射性物質シードを用いて行われる。放射線療法は、特に手術および化学療法との併用において実行可能な癌処置の源であるが、これもその課題がないわけではない。放射線が周囲の健康組織にも損傷を与えるという事実に加えて、別の課題は、固形腫瘍環境で見出される低酸素（低酸素性）条件において放射線があまり有効でないことである。低下した放射線感受性は次に、腫瘍の局所再発および患者の全生存率の低下をもたらし得る。
【０００７】
現在の癌の処置戦略は、患者の大部分を寛解させることに成功を収めている。しかしながら、癌と診断された人々が残念ながら生存しない割合は高く、処置を受けている全ての患者が様々な程度の非常に不快な有害副作用を有する。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、改善された癌の診断および処置方法において使用するための新規の放射性医薬品コンジュゲートを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明に従うバイオコンジュゲートは、腫瘍細胞を標的にする代謝産物、放射性核種を含有することができるキレート剤、およびＥＰＲ剤を含み、ＥＰＲ剤は、切断可能なリンカーによってバイオコンジュゲートに結合される。
【００１０】
また本発明は、腫瘍細胞を標的にする代謝産物、放射性核種を含有することができるキレート剤、およびインビトロまたはインビボでＥＰＲ剤と結合することができる切断可能なリンカーを含むプロコンジュゲートも包含する。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態では、バイオコンジュゲートは、ＥＰＲ剤に結合されたリンカー、好ましくは切断可能なリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物を順に含む線状分子である。
【００１２】
本発明の好ましい実施形態では、プロコンジュゲートは、インビトロまたはインビボでＥＰＲ剤と結合することができるリンカー、好ましくは切断可能なリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物を順に含む線状分子である。
【００１３】
「リンカー」は、キレート剤をＥＰＲ剤に接続する適切な長さ（４〜２０個、通常は８〜１５個の炭素原子）の炭素鎖を含む。リンカーは切断不能であってもよいが、好ましくは切断可能なリンカーである。切断可能なリンカーは、腫瘍環境において、例えば、酸性ｐＨ（７未満、通常は約４〜６のｐＨ）によって、グルタチオン（腫瘍環境中に高レベルで存在する）によって、あるいはマトリックスプロテアーゼなどの酵素の上方制御が存在するところで、インビボで切断される切断可能な結合を含有し、ＥＰＲ剤から代謝産物およびキレート剤を放出して、代謝産物およびキレート剤の細胞内部移行を可能にする。切断不能なリンカーの例は、アミド、チオ尿素、チオエーテルまたはトリアゾール結合を介して接続されるリンカーである。切断可能なリンカーの例は、ヒドラジン、またはジスルフィド結合、または酵素的に切断可能なペプチド配列を含有するリンカーである。
【００１４】
「ＥＰＲ剤」とは、血管透過性・滞留性亢進（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ  ａｎｄ  Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ）（ＥＰＲ）効果のために腫瘍中に蓄積する、高分子ナノ粒子、高分子ミセル、デンドリマー、リポソーム、ウイルスナノ粒子、炭素ナノ粒子およびタンパク質（例えば、アルブミンまたはヘパリンなど）などの４０ｋＤａよりも大きいサイズの分子を意味する。
【００１５】
ＥＰＲ剤は、ポリグルタミン酸（ＰＧ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）などの生分解性である合成ポリマー、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド（ＨＭＰＡ）などの生体適合性であるが生分解性でない合成ポリマー、またはアルブミン、キトサンおよびヘパリンなどの天然ポリマーであり得る。
【００１６】
「腫瘍細胞を標的にする代謝産物」とは、癌細胞表面において上方制御された受容体、抗原または他のタンパク質によってインビボで認識される、モノクローナル抗体、タンパク質およびペプチド、ならびに小分子（すなわち、１０００Ｄａよりも小さいサイズ、通常１００〜７００Ｄａの分子）などの分子を意味する。代謝産物は、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。
【００１７】
適切なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の例は、２Ｃ５、ゲムツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブおよびＰＳＭＡ  Ａｂ抗体である。
【００１８】
タンパク質およびペプチドの例は、トランスフェリン、ＲＧＤペプチド、オクトレオチド、ボンベシン、およびＶＩＰである。
【００１９】
小分子の例は、葉酸塩、マンノース、グルコースおよびガラクトースである。
【００２０】
「キレート剤」とは、放射性同位体と錯体を形成することができる、様々な数のへテロ原子（通常、Ｏ、ＮまたはＳ）からなる化合物である二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）を意味する。キレート剤は環状または非環状（ａｃｙｌｉｃ）、好ましくは環状であり得る。
【００２１】
環状キレーターの例は、１，４，７−トリアザシクロノナン（ＴＡＣＮ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−三酢酸（ＮＯＴＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−コハク酸−Ｎ’，Ｎ’’−二酢酸（ＮＯＴＡＳＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−グルタミン酸−Ｎ’，Ｎ’’−二酢酸（ＮＯＤＡＧＡ）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−トリス（メチレンホスホニック（ｍｅｔｈｙｌｅｎｅｐｈｏｓｐｈｏｎｉｃ））（ＮＯＴＰ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン（［１２］ａｎｅＮ４）（サイクレン）；１，４，７，１０−テトラアザシクロトリデカン（［１３］ａｎｅＮ４）；１，４，７，１１−テトラアザシクロテトラデカン（イソ−サイクラム）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ＤＯＴＡ）；２−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１−イル）アセタート（ＤＯ１Ａ）；２，２’−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，７−ジイル）二酢酸（ＤＯ２Ａ）；２，２’，２’’−（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリイル）三酢酸（ＤＯ３Ａ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラ（メタンホスホン酸）（ＤＯＴＰ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，７−ジ（メタンホスホン酸）（ＤＯ２Ｐ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７−トリ（メタンホスホン酸）（ＤＯ３Ｐ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロ−デカン−１−グルタミン酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＧＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１−コハク酸−４，７，１０−三酢酸（ＤＯＴＡＳＡ）；１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（［１４］ａｎｅＮ４）（サイクラム）；１，４，８，１２−テトラアザシクロペンタデカン（［１５］ａｎｅＮ４）；１，５，９，１３−テトラアザシクロヘキサデカン（［１６］ａｎｅＮ４）；１，４−エタノ−１，４，８，１１−テトラアザシクロ−テトラデカン（ｅｔ−サイクラム）；１，４，８，１１−１５−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸（ＴＥＴＡ）；２−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１−イル）酢酸（ＴＥ１Ａ）；２，２’−（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，８−ジイル）二酢酸（ＴＥ２Ａ）；４，１１−ビス（カルボキシメチル）−１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］−ヘキサデカン（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）；３，６，１０，１３，１６，１９−ヘキサアザビシクロ［６．６．６］イコサン（Ｓａｒ）；フタロシアニンおよびその誘導体；ポルフィリンおよびその誘導体である。
【００２２】
非環状キレーターの例は、エチレン−ジアミン−四酢酸（ＥＤＴＡ）；およびジエチレン−トリアミン−五酢酸（ＤＴＰＡ）；Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸無水物（ＳＡＭＳＡ）；（２−メルカプトエチル）（２−（（２−メルカプトエチル）アミノ）エチル）−カルバミン酸（Ｎ２Ｓ２−ＤＡＤＴ）；１，１’−（エタン−１，２−ジイルビス（アザンジイル））ビス（２−メチルプロパン−２−チオール）（Ｎ２Ｓ２  ＢＡＴ−ＴＭ）、（２−（２−メルカプトアセトアミド）エチル）−システイン（Ｎ２Ｓ２−ＭＡＭＡ）；２，３−ビス（２−メルカプトアセトアミド）−プロパン酸（Ｎ２Ｓ２  ＤＡＤＳ）；エチレンジシステイン（ＥＣ）；２，２’，２’’−ニトリロトリエタンチオール（ＮＳ３）；２−エチルチオ−Ｎ，Ｎ−ビス（ピリジン−２−イル）メチル−エタンアミン（Ｎ３Ｓ）；（（２−メルカプトアセチル）グリシルグリシル）カルバミン酸（ＭＡＧ３）および４−（２−（２−（２−メルカプトアセトアミド）アセトアミド）−アセトアミド）ブタン酸（ＭＡＧ２−ＧＡＢＡ）；（１，２−ビス｛［［６−（カルボキシ）ピリジン−２−イル］メチル］−アミノ｝−エタン）（Ｈ２ｄｅｄｐａ）；ニトリロトリス（メチレンホスホン酸）（ＮＴＭＰ）；エチレンジアミンテトラメチレン−ホスホン酸（ＥＤＴＭＰ）、ジエチレントリアミンペンタ−メチレンホスホン酸（ＤＴＰＭＰ）；ヒドラジノニコチン酸（ＨＹＮＩＣ）；Ｎ’−｛５−［アセチル（ヒドロキシ）アミノ］−ペンチル｝−Ｎ−［５−（｛４−［（５−アミノペンチル）−（ヒドロキシ）アミノ］−４−オキソブタノイル｝アミノ）ペンチル］−Ｎ−ヒドロキシスクシン−アミド（デフェロキサミン）である。
【００２３】
イメージング（診断）のために使用され得る放射性核種の例としては、９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、５９Ｆｅ、６３Ｚｎ、５２Ｆｅ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１９５ｍＰｔ、１９１ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１１７ｍＳｎ、８９Ｚｒ、１７７Ｌｕ、１８Ｆ、１２３Ｉが挙げられる。
【００２４】
治療目的で使用され得る放射性核種の例としては、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、１１１Ｉｎ、１５３Ｇｄ、２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１９５ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１９７Ｐｔ、１１７ｍＳｎ、１０３Ｐｄ、１０３ｍＲｈ、１７７Ｌｕ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２７Ｔｈ、３２Ｐ、１６１Ｔｂおよび３３Ｐ、１２５Ｉ、２０３Ｐｂ、２０１Ｔｌ、１１９Ｓｂ、５８ｍＣｏ、１６１Ｈｏが挙げられる。
【００２５】
好ましい放射性核種はオージェ電子放出放射性核種である。これらは、非常に短いナノメートル範囲を有する非常に低エネルギー（＜５００ｅＶ）の電子であるオージェ電子を放出する放射性核種であり、オージェ電子は、電子捕獲または内部電子転換プロセスによる電子殻の再配列の間に、崩壊電子の外殻から放出される。このような放射性核種には、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、２０１Ｔｌ、１０３Ｐｄ、１０３ｍＲｈ、１１９Ｓｂ、５８ｍＣｏ、１６１Ｈｏ、１６１Ｔｂ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９５ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１１７ｍＳｎが含まれる。
【００２６】
本発明は、キレート剤が放射性核種を含有する、上記で定義されるバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲートも包含する。
【００２７】
本発明のさらなる態様は、リンカーへの取付けのためのＥＰＲ剤の修飾およびキレート剤への取付けのための代謝産物の修飾と、リンカーおよびキレート剤の修飾とを含む。
【００２８】
本発明の実施形態に従う放射性医薬品バイオコンジュゲートは、３つの合成成分：
１）アルキル化またはアシル化によってキレート剤への接続のために官能基化された腫瘍細胞を標的にする代謝産物、好ましくはグルコース含有リンカーと、
２）放射性同位体キレート化のためにＮ結合によって官能基化されたキレート剤、好ましくはサイクラムと、
３）リンカー、好ましくはＥＰＲ剤への取付けのためにマレイミドにより官能基化されたリンカーと
を結合させてプロコンジュゲートを形成し、その後、
４）生体分子／ＥＰＲ剤、好ましくはアルブミン
に連結することによって生成される。
【００２９】
好ましい放射性核種は、１０３Ｐｄである。
【００３０】
プロコンジュゲートの合成方法のための条件は以下の通りである：
代謝産物の官能基化は、代謝産物内の反応基に適した保護戦略が実行されることを必要とする。代謝産物は次にハロゲン化アルキル鎖と反応されて、ハロゲン化物または酸クロリドに後で転換される適切な末端官能基を有する炭素鎖に接続された代謝産物を形成する。
切断不能なリンカーの官能基化は、置換に適した官能基を有する適切な長さのアルキル鎖が、キレート剤への取付けのために一方の端部にハロゲン化アルキルを有し、かつ保護アミンを他方の端部に有するリンカーに転換されることを必要とする。切断可能なリンカーの官能基化は、適切な末端官能基を有する２つの適切な断片が切断可能な結合（例えば、ジスルフィド結合）によって接続されることを必要とし、第１の断片は、キレート剤への取付けのために一方の端部にハロゲン化アルキルを含有し、かつチオトシラートを他方の端部に含有し、そして第２の断片は、キレート剤に対して遠位端部保護アミンを有し、かつ近位端部にチオール基を有する。
キレーターの官能基化は、キレーターがまずリンカーによりＳＮ２反応を介してモノアルキル化され、次に代謝産物によりＳＮ２またはＳＮＡｃ反応を介して二度目のアルキル化が行われることを必要とする。大員環の残りのアミンは、次に、金属錯体化に役立つ適切な酢酸基と反応される。全ての保護官能基の脱保護戦略が次に実行される。末端アミンは次に、ＥＰＲ剤に結合するためにマレイミドなどの官能基に転換される。
【００３１】
放射標識化は、プロコンジュゲートを水中に溶解させることによって実行される。プロコンジュゲートに放射性同位体の水溶液が添加されて、放射標識化がもたらされる。
【００３２】
上記のバイオコンジュゲートおよびプロコンジュゲートを含有する製剤は、既に放射標識化されているかまたはされていないこれらのバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲートを水溶液中に含むことができる。特定のプロコンジュゲートが水溶性でなければ、少量のエタノールまたはジメチルスルホキシドが、細胞に対して有毒でないようなレベルで使用され得る。放射性同位体への錯体化は、所定量のプロコンジュゲートまたはバイオコンジュゲートと、標識化のために必要であれば還元剤とを含み、これに水溶液中の放射性同位体が添加される密封容器を含むキット形態において行うことができる。またキットは、医薬品グレードの浸透圧のための塩、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤などの医薬品補助物質を含有していてもよい。キットの構成要素は、液体、凍結または乾燥形態であり得る。
【００３３】
診断および治療的処置方法は、無菌生理食塩水または血漿中で静脈内用量または腹腔内用量として放射標識化コンジュゲートの投与を必要とする。投与すべき単位用量は約０．０１〜３００ｍＣｉの放射活性を有し、この用量で注射される溶液は０．１〜１０ｍＬである。
【発明を実施するための形態】
【００３４】
本発明は、薬物の薬物動態および生物学的利用能を改善し、それにより薬物の副作用を低減することによって、制癌薬の効力を増大させるために、より効率的で正確な送達系による標的化癌治療のための新規の放射性医薬品コンジュゲートに関する。
【００３５】
受動的ターゲティングは、腫瘍血管系の独特の解剖学的および病態生理学的異常による、腫瘍内における特定の治療的巨大分子の選択的な蓄積である。これらの異常には、欠損血管構造を伴う過剰血管系（ｈｙｐｅｒｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ）および不十分なリンパ排液が含まれ、総合的に、これらはＥＰＲ効果として知られるようになった。
【００３６】
能動的ターゲティングは、癌細胞上の細胞表面分子および受容体の部位特異的ターゲティングであり、能動的ターゲティング剤の効率は、標的化されている受容体に依存し得る。理想的には、標的化される細胞受容体または表面抗原は癌細胞上に排他的および均一的に発現され、血流中に放出されないであろう。また、選択されるターゲティング剤は表面に結合したらすぐに、通常受容体媒介性エンドサイトーシスによって、細胞内に内部移行することが保証されることも必要である。
【００３７】
従って、腫瘍内に蓄積するために腫瘍微小環境およびＥＰＲ効果を利用するように設計された薬物の開発および使用は受動的ターゲティングとして知られており、一方、上方制御された細胞受容体の１つに対して高親和性を有し、従ってその腫瘍細胞内での蓄積を増大させるように開発された薬物は、能動的ターゲティングとして知られている。
【００３８】
放射性医薬品は核医学のカテゴリーに入る。診断用放射性医薬品は放射線の放出を生じ、これは、局在化部位を画像化するために外部から記録される。従って、処置のための放射性医薬品の使用は放射線量を内部で患部組織部位に送達し、放出により周囲の細胞が破壊されるので、これらは内部放射線療法の一形態として分類され得る。腫瘍造影剤は１０〜１０００ｎｍの範囲で使用されて薬理学的効果を全く有していてはならないが、治療薬は電離放射線によって起こる損傷に基づいた効果を有し、従って造影剤よりもわずかに高い濃度で使用されるが、それでも化学療法剤よりは遥かに少ない量である。
【００３９】
放射性医薬品は一般的に放射性核種および担体の２つの成分で構成されており、イメージングまたは治療のための放射性医薬品の機能および効率を決定するのはこれらの２つの態様である。放射性医薬品の目的は、健康組織に対する放射線損傷を全く伴わずに、腫瘍部位に放射性核種を定量的に送達することである。従って、放射性医薬品の設計は、使用される放射性同位体の物理的崩壊特性、腫瘍の特異的インビボターゲティング、および他の組織からの化合物のクリアランスについての注意深い検討を必要とする。受容体結合よる放射性医薬品の局在化は能動的ターゲティングとして記載されているが、腫瘍固有特性およびＥＰＲ効果による局在化は、これまで議論されたように、受動的ターゲティングとして記載されている。能動的かつ受動的な標的化放射性核種送達系は、癌の診断および治療に使用される放射性医薬品の体内分布および薬理学的毒性を改善するのに役立つことができる。
【００４０】
本発明の放射性医薬品コンジュゲートは、「受動的」ターゲティングおよび血管透過性・滞留性亢進（ＥＰＲ）、ならびに「能動的」（受容体媒介）ターゲティングを使用することにより、標的化された癌治療を達成するように構築される。
【００４１】
本発明に従う放射性医薬品バイオコンジュゲートは、腫瘍細胞を標的にする代謝産物、放射性核種を含有することができるキレート剤、およびＥＰＲ剤を含み、ＥＰＲ剤は、リンカーによってバイオコンジュゲートに結合されている。
【００４２】
また本発明は、腫瘍細胞を標的にする代謝産物、放射性核種を含有することができるキレート剤、およびインビトロまたはインビボでＥＰＲ剤と結合することができる切断可能なリンカーを含む放射性医薬品プロコンジュゲートも包含する。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態では、バイオコンジュゲートは、ＥＰＲ剤に結合されたリンカー、好ましくは切断可能なリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物を順に含む線状分子である。
【００４４】
本発明の好ましい実施形態では、プロコンジュゲートは、インビトロまたはインビボでＥＰＲ剤と結合することができるリンカーに結合した、放射性核種を含有することができるキレート剤に結合した、腫瘍細胞を標的にする代謝産物を順に含む線状分子である。
【００４５】
「ＥＰＲ剤」には、ポリマーナノ粒子、高分子ミセル、デンドリマー、リポソーム、ウイルスナノ粒子、炭素ナノ粒子およびいくつかのタンパク質などの分子が含まれる。
【００４６】
ポリマーは、合成または天然のいずれかであり得る生体適合性の反復単量体サブユニットから合成される生分解性巨大分子である。ポリマー−薬物コンジュゲートは、薬物をポリマー骨格に共有結合させるか、あるいはポリマーナノ粒子内に水相の薬物を封入することによって形成される。効率的なポリマー−薬物送達系を得るために、ポリマーは、非毒性であり、十分な薬物負荷能力を有し、体内の移動が安定しているが、所望の位置で薬物を放出することもできる必要がある。生分解性である合成ポリマーの例としては、ポリグルタミン酸（ＰＧ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）およびポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）が挙げられる。生体適合性であるが生分解性でない合成ポリマーの例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メチルアクリルアミド（ＨＭＰＡ）が挙げられる。使用することができる天然高分子タンパク質は、アルブミン、キトサンおよびヘパリンである。アルブミンは血清中に天然に存在する６６．５ｋＤａのタンパク質であり、薬物に共有結合されていると共に、薬物を封入するナノ粒子内に配合されている。
【００４７】
高分子ミセルは両親媒性ブロックコポリマーによって形成され、薬物を封入する疎水性コアと、ミセルを水溶性にする親水性シェルとをもたらす。
【００４８】
デンドリマーは、中心コアから放射状に広がる分枝状モノマーから形成されるポリマーであり、いくつかの異なる分子または薬物を同時に結合させることができる。
【００４９】
リポソームは、水性環境中でリン脂質の二重層への自己会合によって自然に形成される、およそ４００ｎｍの球形リン脂質二重層である。薬物は、薬物飽和水性環境中における、または有機溶媒交換メカニズムによるリポソームの構築方法を含む種々の方法でリポソーム内に装入される。
【００５０】
タンパク質ケージを形成するウイルスナノ粒子と、溶解度を改善し、薬物を結合するための表面修飾を有する炭素ナノ粒子とは、受動的ターゲティングおよび薬物送達のために使用されているその他のナノ粒子である。一例は、ササゲモザイク（ｃｏｗｐｅａ  ｍｏｓａｉｃ）ウィルス（ＣＰＭＶ）である。
【００５１】
ＥＰＲ効果は血管から腫瘍環境内への化合物の漏出に基づいているので、この現象に影響を与えることができ、従って薬物の腫瘍部位への取込みまたはターゲティングを増強するために様々な方法で使用することができる血管メディエータがいくつか存在する。これらの血管メディエータには、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ブラジキニン、一酸化窒素およびペルオキシナイトライト、プロスタグランジン、基質メタロプロテイナーゼおよびアンジオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害剤が含まれる。ＶＥＧＦは血管形成および腫瘍成長に関与する上方制御された血管新生因子であり、ＶＥＧＦのいくつかの阻害剤が開発されている。ブラジキニン（血管拡張ペプチド）、一酸化窒素、ペルオキシナイトライトおよびプロスタグランジンは全て血管透過性および血管外漏出において重要な役割を果たし、色素／アルブミン複合体の投与時にこれらのメディエータを添加すると、色素の腫瘍内への取込みの増大が起こることが分かった。基質メタロプロテイナーゼは腫瘍の浸潤、転移および血管新生に関連する酵素であり、ペルオキシナイトライトによるその活性化は細胞外マトリックスの崩壊によりＥＰＲ効果を促進し、ブラジキニンの産生をもたらす。ＡＣＥ（アンジオテンシン転換酵素）阻害剤はアンジオテンシン（ＡＴ）−ＩからＡＴ−ＩＩへの転換を防止し、これは次に、ブラジキニンの分解を阻害して血管透過性の増大をもたらす。
【００５２】
「腫瘍細胞を標的にする代謝産物」は、癌細胞表面において上方制御された受容体、抗原または他のタンパク質によって認識される、モノクローナル抗体、タンパク質およびペプチド、ならびに小分子（すなわち、１０００Ｄａよりも小さいサイズ、通常１００〜７００Ｄａの分子）などの分子である。代謝産物は、アゴニストまたはアンタゴニストであり得る。
【００５３】
抗体は高分子量を有するＹ形状の糖タンパク質であり、細胞上の異物標的に結合して、細胞死をもたらす経路を阻害する。適切なモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の例は、２Ｃ５、ゲムツズマブ、リツキシマブ、セツキシマブ、ベバシズマブ、ペルツズマブおよびＰＳＭＡ抗体Ａｂである。トラスツズマブは、一定の割合の乳癌患者において過剰発現されることが見出されたＨＥＲ−２／ｎｅｕ受容体に対するｍＡｂである。ＶＥＧＦおよび上皮成長因子（ＥＧＦ）はいずれも腫瘍成長および血管新生に関連し、その受容体（ＶＥＧＦＲおよびＥＧＦＲ）は、いくつかのｍＡｂ療法の焦点である。セツキシマブはＥＧＦＲに対して作用するが、ベバシズマブはＶＥＧＦＲに結合する。ｍＡｂの存在量にもかかわらず、実際には、インビボでの不十分な腫瘍蓄積（＜０．０１％）、交差反応性および遅い血液クリアランスのためにこれらの使用は限られている。ｍＡｂへの薬物の最初の直接的結合は、限られた数の薬物分子しか同時にｍＡｂに取り付けられないという可能性のために、限られた成功をもたらした。この課題は、次に、ｍＡｂをナノ粒子の表面に取り付け、薬物をナノ粒子内に装入することにより対処された。
【００５４】
タンパク質およびペプチドは、代替のターゲティング戦略を提供する。タンパク質およびペプチドの例は、トランスフェリン、ＲＧＤペプチド、オクトレオチド、ボンベシン、およびＶＩＰである。トランスフェリン（Ｔｆ）は、血液中の鉄に結合して、それをトランスフェリン−受容体への取付けにより細胞内に輸送する、天然に存在するタンパク質である。ペプチドは、そのより小さい分子サイズのために、改善された安定性および分解に対する耐性を有するアミノ酸の配列である。ペプチドの例は、過剰発現された血管新生促進受容体αｖβ３インテグリンに結合するアルギニン（Ｒ）、グリシン（Ｇ）、アスパラギン酸（Ｄ）（ＲＧＤ）配列である。使用されている他のペプチドには、天然に存在する神経ペプチドのソマトスタチン（ＳＳＴ）の合成類似体であり、ＳＳＴ受容体に対する高親和性を有するオクトレオチドが含まれる。ボンベシンは、いくつかの癌上のＧＲＰ受容体に結合するガストリン放出ホルモンペプチド（ＧＲＰ）のペプチド類似体であるが、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）は、乳癌上で過剰発現されたＶＩＰ受容体に結合する。
【００５５】
小分子（すなわち、１０００Ｄａよりも小さいサイズである分子）は、その手ごろな価格、改善された安定性および小さいサイズ（より容易な合成および結合を可能にする）のために、ターゲティングリガンドとしてより有利なであることが証明されている。能動的ターゲティングのために化学療法薬に取り付けられる最も一般的な小分子は葉酸塩である。葉酸塩は非常に高い親和性（ＫＤ約１ｎｍ）で表面葉酸受容体（ＦＲ）に結合し、受容体媒介性エンドサイトーシスによって容易に内部移行される。ターゲティングリガンドとしての葉酸の他の利点は、葉酸が安定的、非免疫原性、安価であり、かつ合成に使用される有機溶媒中に可溶性であることである。ターゲティングに使用される他の小分子は、レクチンと呼ばれる膜タンパク質によって認識される、マンノース、グルコースおよびガラクトースなどの炭水化物である。これの一例は、ドキソルビシン結合ポリマーに結合されたガラクトサミンの癌細胞に対するターゲティングであった。
【００５６】
キレーターとも呼ばれる「キレート剤」は、放射性同位体と錯体を形成することができる、様々な数のへテロ原子（通常、Ｏ、ＮまたはＳ）からなる化合物である二官能性キレート剤（ＢＦＣＡ）である。キレーターの選択は、キレーターの配位化学および供与体能力が放射性同位体特性と適合して、最も安定した不活性金属錯体を形成するように、放射性同位体の性質および酸化状態によって決定される。
【００５７】
ＢＦＣＡとして使用されるキレーターは、酸素、窒素および硫黄供与体リガンドを介して安定した錯体を形成する。またＢＦＣＡの安定性および薬物動態は、よりよく金属に配位させるために種々の官能基による基本アルキル骨格の修飾によって改善され得る。
【００５８】
ＢＦＣＡは、非環状キレーターおよび環状キレーターの２つの群に分類することができる。非環状（開鎖）キレーターは通常その環状対応物よりも速い金属−錯体化動態を有するが、通常、動態学的により不安定である。しかしながら、特定の放射性同位体を有する少数の非環状キレーターは、インビトロで高い熱力学的安定性および動態学的不活性を示す。
【００５９】
非環状キレーターの一例は、Ｎ−ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）およびその類似体である。Ｎ２Ｓ２キレーターは、９９ｍＴｃおよび１８６Ｒｅによるタンパク質、ペプチドおよびオリゴヌクレオチドの標識化において使用されている。これらのうちの最も単純なキレーターはＮ，Ｎ’−エタン−ビス（アミノエタンチオール）（ＤＡＤＴ）であり、これは、Ｎ，Ｎ’−エタン−ビス（１，１−ジメチルアミノエタンチオール）（ＢＡＴ−ＴＭ）、モノアミド−モノアミンジチオール（ＭＡＭＡ）およびＮ，Ｎ’−エタン−ビス（メルカプト−アセトアミド）（ＤＡＤＳ）などのさらなるＮ２Ｓ２キレーターの開発のための構成要素として使用される。Ｎ２Ｓ２キレーターの最新の開発は、エチレンジシステイン（ＥＣ）を使用して、９９ｍＴｃを効率的に安定してキレート化することである（９６）。トリアミドチオール（ＴＡＴ）などのＮ３Ｓ  ＢＦＣＡは、１８６Ｒｅおよび１８８Ｒｅと錯体を形成するために使用される。Ｎ３Ｓシリーズにおいて一般に使用されるＢＦＣＡは、メルカプトアセチル−グリシルグリシルグリシン（ＭＡＧ３）およびメルカプトアセチル−グリシルグリシル−γ−酪酸（ＭＡＧ２−ＧＡＢＡ）である。最も特異的にＧａ（ＩＩＩ）に結合するための別の非環状キレーターは、（１，２−ビス｛［［６−（カルボキシ）ピリジン−２−イル］メチル］−アミノ｝−エタン）（Ｈ２ｄｅｄｐａ）である。Ｈ２ｄｅｄｐａは、２８．１の安定度定数でＧａに結合するＮ４Ｏ２キレーターである。
【００６０】
骨癌は、大きな痛みを引き起し、根治治療が存在しない侵襲性タイプの腫瘍である。骨癌の唯一の「処置」は、腫瘍の結果として経験される痛みの緩和である。骨癌患者の緩和ケアは、１５３Ｓｍおよび１１７ｍＳｎにより放射標識化された非環状キレーターによって達成される。これらのキレーターの第１番目は窒素含有構造を含むが、これらはペンダントアームとしてカルボン酸の代わりにホスホン酸置換基を有する。このタイプのＦＤＡに承認された放射性医薬品は、１５３Ｓｍ−ＥＤＴＭＰ（エチレンジアミンテトラメチレンホスホン酸）（Ｑｕａｄｒａｍｅｔ）である。１５３Ｓｍ−ＥＤＴＭＰは非常に良好な薬物動態およびインビボクリアランスを示し、１９９７年に有痛性骨転移の処置に対して承認された。第２の可能性のある骨治療薬は、１１７ｍＳｎ−ＤＴＰＡである。１１７ｍＳｎは１２７および１２９ｋｅＶの２つの転換電子放出を有し、これは、より短い浸透範囲、従ってより少ない骨髄毒性を示す。
【００６１】
環状キレート剤は、もっと安定した、熱力学的および動態学的に不活性である金属錯体を形成する。得られる錯体の安定性と共に大員環内の同位体の立体化学および配位は、いくつかの因子に依存する：１）環のサイズ；２）Ｎ原子において起こる置換の数；３）Ｎ原子上の置換基の特性；４）放射性同位体の配位数；５）錯体化の間に使用される金属対リガンド比、および使用される対イオンの性質；ならびに６）遊離大環状キレーターのプロトン化状態に影響を与え得る錯体化反応のｐＨ。放射性イメージングおよび治療のためのＢＦＣＡの例はトリ−およびテトラアザベースのアミノ大員環であり、これは次に、二官能性のために、そして錯体の安定性を増大させるために、カルボキシルペンダントアームおよび他の部分により誘導体化される。これらの大環状ＢＦＣＡのうちの最も一般的なのは、ＮＯＴＡ（（１，４，７−トリアザシクロノナン−１，４，７−三酢酸）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）およびＴＥＴＡ（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−１，４，８，１１−四酢酸）、ならびにこれらの類似体である。
【００６２】
ＮＯＴＡの類似体は、ＮＯＴＡＳＡ（１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−コハク酸−Ｎ’，Ｎ’’−二酢酸）およびＮＯＤＡＧＡ（１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ−グルタミン酸−Ｎ’，Ｎ’’−二酢酸）、ならびにパラ−イソチオシアナトベンジル基などの別の結合部分によるＮＯＴＡの官能基化（ｐ−ＮＣＳ−ＮＯＴＡ）である。またＮＯＴＡは、ＮＯＴＰ（１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’−トリス（メチレンホスホン）酸などのいくつかのホスホネート類似体に変化されている。
【００６３】
大環状キレーターＤＯＴＡおよびＴＥＴＡはそれぞれ大員環サイクレンおよびサイクラムに基づく。これらのキレーターはいずれも、いくつかの異なる放射性同位体と安定した錯体を形成するために使用されており、金属配位を改善するために種々の方法で誘導体化されている。しかしながら、これらのキレーターに関する唯一の課題は、多くの場合、錯体化が非常にゆっくり生じることであり、十分な標識化化合の収率を達成するために高温を必要とする。
【００６４】
ＤＯＴＡの類似体は、ＰＡ−ＤＯＴＡ（Ｒ−［２−（４−アミノフェニル）−エチル］−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）、ＤＯＴＡＳＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロデカン−１−コハク酸−４，７，１０−三酢酸）およびＤＯＴＡＧＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロ−デカン−１−グルタミン酸−４，７，１０−三酢酸）であり、変更されたカルボキシレートペンダントアームを有する。ＤＯ３ＡおよびＤＯ２Ａは、カルボン酸基の１つまたは２つが除去されて他の官能性が窒素原子に取り付けられた類似体である。ＣＢ−ＤＯ２Ａは、２つの対向する窒素の間にエチレン架橋を含む。アルキル骨格に置換基が取り付けられたＤＯＴＡの誘導体には、ｐ−ＮＣＳ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ（２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロ−ドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸）、ならびに誘導体１Ｂ４Ｍ−ＤＯＴＡ（２−メチル−６−（ｐ−イソチオシアナト−ベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）およびＣＨＸ−ＤＯＴＡ（２−（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−５，６−シクロ−ヘキサノ−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸）（ｐ−ＮＣＳ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ環への余分な置換基を含む）が含まれる。
【００６５】
ＴＥＴＡはサイクラム大環状環であり、ＤＯＴＡと同様にそれぞれに酢酸基が取り付けられた４つの窒素原子を有するが、ＴＥＴＡは、ＤＯＴＡの１２員環とは対照的に１４員環である。ＴＥＴＡサイクラム環の余分な２つの炭素はわずかにより大きい空洞を作り出し、いくつかの金属配位の安定性のわずかな増大を提供することができる。放射性核種錯体が高安定性であり、窒素原子において置換が容易に起こるために、サイクラムは、二官能性キレーターの形成におけるほとんどの場合に使用される大員環の１つである。ＴＥＴＡの類似体は、ブロモアセトアミドベンジル−１，４，８，１１−テトラアザ−シクロテトラデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ＢＡＴ）、３−（４−イソチオシアナト−ベンジル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラ−デカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−四酢酸（ｐ−ＮＣＳ−Ｂｚ−ＴＥＴＡ）、４−［（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラ−デカン−１−イル）メチル］安息香酸（ＣＰＴＡ）、４，１１−ビス（カルボキシメチル）−１，４，８，１１−テトラアザビシクロ［６．６．２］−ヘキサデカン（ＣＢ−ＴＥ２Ａ）、３，６，１０，１３，１６，１９−ヘキサアザ−ビシクロ［６．６．６］イコサン（Ｓａｒ）、テトラ−（アミノメチルホスホナート）サイクラム（ＴＥＰＡ）である。
【００６６】
以下は、環状キレーターの構造である。
【化１】
2017530131.tif 000002
【化２】
2017530131.tif 000003
【００６７】
「リンカー」は、キレート剤をＥＰＲ剤に接続する適切な長さ（４〜２０、通常は８〜１５個の炭素原子）の炭素鎖である。バイオコンジュゲート内のリンカーは、放射性核種およびＢＦＣＡを、ＥＰＲ効果により細胞を標的にする放射性医薬品の部分から分離する。従って、リンカーは、キレート（ｃｈｅｌａｔｅ）が放射性同位体と錯体を形成する能力、またはターゲティング生体分子のその特異的受容体への親和性および結合を妨害してはならない。リンカーは、バイオコンジュゲートの親油性または親水性を増大させることにより、そして腫瘍内で切断され得る代謝可能な結合を含有することによって、放射性医薬品の薬物動態学的特性を改善するために使用することができる。これにより、致死量の放射線を送達するためにキレート剤および放射性核種の細胞内への内部移行が可能になる。バイオコンジュゲートの合成では、熱的に敏感な生体分子の分解を防止するために、可能であれば、迅速かつ穏やかな温度で、切断可能なリンカーを取り付けることも必要である。
【００６８】
切断可能なリンカーの特性は、細胞内または細胞のごく近くで分解されるように設計され得るようなものである。切断の後、恐らく扱いにくい生体分子から細胞毒性の放射性核種キレーターが放出されて、放射線源が細胞内に局在化できるようになり、細胞内で最も損傷を与えることができる。
【００６９】
切断不能なリンカーは、主に４つのタイプ：ペプチド、チオ尿素、チオエーテルおよびクリックケミストリートリアゾール結合を含む。生体分子の固有の官能性は通常アミンまたはチオール基を含み、これらは次に、リンカーおよびキレーター上の適切な部分にカップリングするために使用され得る。
【００７０】
ペプチドまたはアミド結合は、ほとんどの場合キレーターのペンダントアームとしてのカルボン酸と、第１級アミンとの間で形成される。効率的なカップリングは、カップリング試薬を用いてカルボン酸を活性化してより良い求電子試薬にすることによって促進される。これらのカップリング試薬は、通常、ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）、ＤＣＣ（ジシクロヘキシルカルボジイミド）、ＨＯＢｔ（ヒドロキシル−ベンゾトリアゾール）およびＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ０，Ｎ０−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロ−ホスファート）であるが、混合無水物活性化法を含むこともできる。ほとんどの場合に使用されるアミド結合形成技術の１つは、付加的なカップリング試薬を全く使用せずにアミンと反応され得るスクシンイミジルエステルを形成するための、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）によるカルボン酸の活性化である。ＮＨＳ活性化酸は脂肪族アミンに対して高選択性を有し、水性環境中ｐＨ８〜９で最適に反応する。ペプチド結合の形成は非常に有利なカップリング技術であるが、多くの場合、キレーターは複数のカルボン酸基を有し、生体分子は複数のアミンを有することができ、従って生体分子上に生じるカップリングの量を制限するために、保護／脱保護戦略またはモル比の制御が必要とされる。
【００７１】
別のタイプのリンカー結合戦略は、チオ尿素結合を形成するための、第１級アミンと、イソチオシアネート官能性との反応である。求核性付加反応には脱プロトン化アミンが必要とされるので、ｐＨ８．０〜９．５のわずかに塩基性の条件下で、イソチオシアネートを使用して、キレーターおよびターゲティング剤を連結する。イソチオシアネートはＮＨＳエステルよりも水性条件で安定しており、生体分子をＤＴＰＡおよびＤＯＴＡにカップリングさせるためにイソチオシアネート芳香族誘導体が使用されることが多い。
【００７２】
チオエーテル結合は、アクリレート、アクリルアミド、ビニルシルホン（ｖｉｎｙｌ  ｓｙｌｆｏｎｅ）およびマレイミドなどの求電子性マイケルアクセプターへの求核性チオール基のマイケル付加によって形成される。チオール基の高求核性は、このチオール−エンカップリングが、触媒または加熱を必要とすることなく穏やかな生理的条件下で起こることを可能にする。形成するチオエーテル結合は、強塩基、酸性または還元条件下でも非常に安定しているが、酸化剤と反応することができる。アクリレートおよびアクリルアミドはより反応性であり、重合を受けやすいので、マレイミドマイケルアクセプターが、ほとんどの場合に、放射性医薬品の形成において使用される。マレイミドは、ｐＨ７．０〜７．４においてチオールと最も良く反応する。マレイミド基の非反応性マレアミド酸への加水分解の可能性が増大するので、８よりも高いｐＨでの反応については注意が必要とされる。生体分子の標識化は、通常、構造内に豊富にあるリジン残基のアミノ基に向けられる。これにより標的化の機会が増大されるが、標的化率の制御も低下される。遊離チオール基は多数の生体分子で見出されないシステイン残基に由来し、従って多くの場合、ジスルフィド結合の還元によりこの官能性を導入することが必要とされる。結合のための限られた量のチオール基の使用は、反応する化合物のモル比のより優れた制御を可能にし、それにより、より特異的で均一の標的化が得られる。チオール基を含有する生体分子は、少数のタンパク質および抗体に含められる。この点で最も利用される有望なタンパク質は、システイン−３４位に遊離チオール基を有するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である。抗体中のチオール基はジスルフィド結合として存在しており、従ってまず還元する必要がある。
【００７３】
「クリック」反応は非協奏反応であり、１９６０年代にＲｏｌｆ  Ｈｕｉｓｇｅｎにより開発されたペリ環状１，３−双極子付加環化反応からそのインスピレーションを得ている。その非常に速い反応速度のためにそのように呼ばれ、位置選択的な形で１，４置換トリアゾールを形成するためのアルキンとアジドとの間の反応を含む。アルキンおよびアジドはいずれもキレーターまたは生体分子のいずれかに容易に導入されて、連結された錯体の選択的かつ急速な形成を良好な収率でもたらすことができる。この反応に関する課題は、キレーターと錯体化する可能性のある銅触媒を除去するための精製であり、従って、非銅触媒によるクリックケミストリー反応が開発されている。
【００７４】
切断可能なリンカーは化学療法薬において使用されることが多いが、放射性医薬品においても適用される。これらのリンカーは、腫瘍細胞内またはそのごく近くでの細胞毒性ペイロードの効率的な放出のために設計される。小さい疎水性薬物は受動拡散により細胞の形質膜を容易に通過することができるが、大きい巨大分子はサイトゾル空間内に透過することができない。従って、これらの大きいバイオコンジュゲートは細胞内に取り込まれて、膜障壁を通過することができるより小さい成分に分解されることが必要である。従って、キレーター錯体は嵩高のターゲティング剤から切断されて、放射性同位体の細胞内での局在化の増大を可能にする。リンカーの切断は、血液および血漿と、内部細胞区画との間の特性の違いに基づく。
【００７５】
いくつかのタイプのリンカーは化学的手段によって切断され、これらには、ｐＨの変化に敏感である酸不安定性ヒドラゾン結合、ならびにグルタチオン還元に敏感であるジスルフィド結合が含まれる。ヒドラゾン結合はｐＨ７．４〜７．６の血流および正常な間質組織内で安定しているが、コンジュゲートがエンドサイトーシスによって細胞内、エンドソーム（ｐＨ５．０〜６．５）およびリソソーム（ｐＨ４．５〜５．０）内に内部移行されると加水分解されるであろう。腫瘍細胞を包囲する腫瘍微小環境も６．５〜６．９のわずかに酸性ｐＨを有し、これはヒドラゾン結合を切断することが見出されている。研究により、細胞外切断は、キレーター−放射性同位体錯体が細胞内に取り込まれることをまだ可能にし得るが、特異性は低いことが示されている。
【００７６】
ジスルフィド結合は、タンパク質および抗体中に見出される２つのシステインチオール基の酸化により形成される容易に可逆的かつ安定した共有結合である。ジスルフィドは、高レベルの細胞内グルタチオン（チオール含有トリペプチド）によって切断される。リンカー戦略で使用されるジスルフィド結合は、生体分子内で、スルフヒドリル含有ＢＦＣＡまたは化学療法薬による遊離チオール基の酸化によって形成される。腫瘍細胞は、腫瘍への不十分な血流の結果として低酸素性（酸素が減少した）環境を誘導し、これは次に、グルタチオンおよび還元酵素の増大をもたらす。グルタチオンは高ミリモルの細胞内濃度レベルにおいて見出されるが、血液中ではわずかマイクロモル量である。それにより、化合物が内部移行されると、還元性細胞内空間はリンカーの急速な切断を起こす。
【００７７】
化学手段によって分解されるリンカーは、多くの場合、限られた血漿安定性を有する。血液内での安定性を改善するために、ペプチドに基づいた、酵素手段によって分解されるリンカーが確立された。これらのリンカーは、どのアミノ酸が鎖中で使用されるかに応じて異なる酵素に感受性である。細胞内および細胞外の両方におけるプロテアーゼの上方制御は多数の種類の癌において見出されており、腫瘍の進行、浸潤および転移における重要な役割を果たすことが分かっている。細胞内システインカテプシン酵素ＢおよびＳは、タンパク質分解に関連するリソソームプロテアーゼである。これらのプロテアーゼはリソソームに特異的であり、転移性腫瘍を除いて細胞外環境では通常決して見出されず、特定のペプチド配列を切断するために非常に特異的である。従って、バイオコンジュゲートは血清内で非常に安定しているが、リソソーム内で急速に切断されるので、カテプシン不安定性リンカーは放射性同位体および薬物送達戦略のために有利である。カテプシンＢおよびＳのいくつかの切断可能なペプチド配列が研究されている。カテプシンＢは、ジペプチドリンカーＰｈｅ−ＬｙｓおよびＰｈｅ−Ａｒｇ、ならびにより親水性のＶａｌ−Ｌｙｓ、Ｖａｌ−シトルリン（Ｃｉｔ）およびＰｈｅ−Ｃｉｔを切断するであろう。シトルリンはＡｒｇとアイソテリック（ｉｓｏｔｅｒｉｃ）および等電性であるが、塩基性ではない。カテプシンＢによる切断のために使用されているいくつかのテトラペプチドリンカーは、Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ、Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−ＧｌｙおよびＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕである。カテプシンＳは、配列Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏを切断する。いくつかの他のプロテアーゼも細胞およびその環境において見出されており、切断のためにこれらの酵素を標的にするペプチドリンカーが開発されている。サーモリシンはＡｌａ−Ｖａｌジペプチドを切断するために使用され、プロリンエンドペプチダーゼは、Ａｌａ−ＰｒｏまたはＧｌｙ−Ｐｒｏに連結された細胞毒性部分を放出する。これらのリンカーは、薬物（例えば、ドキソルビシンなど）および放射性同位体キレーター（例えば、１７７Ｌｕ−ＤＯＴＡおよび９０Ｙ−ＤＯＴＡなど）をポリマーＨＭＰＡおよびＰＥＧ、ならびに癌治療のためのモノクローナル抗体に接続している。
【００７８】
マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）は、細胞外マトリックスおよび基底膜の分解のために重要なエンドペプチダーゼである。腫瘍細胞内で、ＭＭＰの増大は腫瘍転移をもたらす腫瘍進行および細胞浸潤において重要な役割を果たす。ＭＭＰはペプチド配列を切断することができ、特定の癌タイプにおいてＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９の過剰発現により標的化されるオクタペプチドリンカーＧｌｙ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎが開発された。このペプチドを使用して、腫瘍細胞内での薬物の放出および蓄積のためにドキソルビシンをアルブミン巨大分子に連結させた。
【００７９】
放射性医薬品は多成分であり、従って治療用放射性医薬品の設計では、特性の全てが評価されなければならない。放射性核種は治療目的で有利な半減期および崩壊特性を有するべきであり、可能であれば、入手が容易で手ごろな価格でなければならない。キレーターは半減期に関して放射性同位体と一致し、選択された放射性核種と熱力学的に安定かつ動態学的に不活性の錯体を形成しなければならない。任意の金属結合血漿タンパク質による金属のトランスキレート化（ｔｒａｎｓｃｈｅｌａｔｉｏｎ）が起こらないように、放射性核種はキレーターに十分に固く結合されなければならない。理想的には、キレーターの放射標識化は、存在するあらゆる生体分子を保存するために、最低限の時間および最低限の温度において低濃度で起こらなければならない。放射性医薬品中に使用されるターゲティング剤はリンカーによってキレーターに取り付けられ、薬剤のその特異的受容体に対する親和性は、キレーターによって影響を受けてはならない。ターゲティング剤は、理想的には、放射性医薬品を腫瘍部位にだけ蓄積しなければならず、あらゆる他の遊離ラジオバイオコンジュゲート（ｒａｄｉｏｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）は、健康細胞への損傷を低減するために系から急速に排出されなければならない。
【００８０】
考慮すべき核種特性には、ガンマおよび微粒子放出および半減期が含まれる。微粒子放出は、α放出またはβ放出（約１００〜１０，０００ｋｅＶの範囲）およびオージェ電子放出（１〜１００ｋｅＶ）からなる。核種が腫瘍細胞に送達され得る場合、α放射体およびβ放射体は、周囲の健康組織も損傷する組織浸透がより大きく、オージェ電子は浸透範囲がわずか５００ｎｍまでであり、健康組織の損傷を最小限にすることができる。オージェ電子に関して複雑な点は、これらが最大効率を有するようにＤＮＡに極めて近接して送達される必要があることである。治療薬の理想的な半減期は１〜１４日であろう。現在の放射線療法の応用には、４７Ｓｃ、９０Ｙ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１８８Ｒｅによる大きな腫瘍の処置；１１７ｍＳｎおよび他の短い範囲のオージェ放出による微小転移の処置；４７Ｓｃ、１１７ｍＳｎ、６７Ｃｕおよび１３１Ｉによる白血病およびリンパ腫の処置；ならびに１１１Ｉｎによるいくつかの神経内分泌腫瘍の処置が含まれる。骨転移は前立腺癌患者の大部分で起こり、激痛に起因する罹患率の著しい増大をもたらし、処置は緩和的でしかない。この処置のために使用される核種は、８９Ｓｒ、１５３Ｓｍ、１１７ｍＳｎ、３２Ｐおよび１８６Ｒｅである。放射線療法に加えて、多数のこれらの放射性核種は腫瘍の放射性イメージングにも適用される。
【００８１】
イメージング（診断）のために使用され得る放射性核種の例としては、９９ｍＴｃ、１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、１１１Ｉｎ、５９Ｆｅ、６３Ｚｎ、５２Ｆｅ、４５Ｔｉ、６０Ｃｕ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、６２Ｃｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１９５ｍＰｔ、１９１ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１１７ｍＳｎ、８９Ｚｒ、１７７Ｌｕ、１８Ｆ、１２３Ｉが挙げられる。
【００８２】
治療目的で使用され得る放射性核種の例としては以下のものが挙げられる：
１８８Ｒｅ、１８６Ｒｅ、１５３Ｓｍ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、８９Ｓｒ、１１１Ｉｎ、１５３Ｇｄ、６７Ｃｕ、６４Ｃｕ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、１７７Ｌｕ、３２Ｐ、１６１Ｔｂおよび３３Ｐは、γ（ガンマ）放射線も放出し得る、好ましい（ベータ）β放射体であり、
２２５Ａｃ、２１２Ｂｉ、２１３Ｂｉ、２１１Ａｔ、２２３Ｒａ、２２４Ｒａ、２２７Ｔｈは、γ（ガンマ）放射線も放出し得る、好ましいα（アルファ）放射体であり、
５８ｍＣｏ、６１Ｃｕ、１０３Ｐｄ、１０３ｍＲｈ、１１１Ｉｎ、１１７ｍＳｎ、１１９Ｓｂ、１６１Ｈｏ、１９３ｍＰｔ、１９５ｍＰｔ、１９７Ｐｔ、２０１Ｔｌ、２０３Ｐｂ、１６１Ｔｂは、γ（ガンマ）放射線も放出し得る、好ましいオージェ／転換電子放射体である。
【００８３】
好ましい放射性核種はオージェ電子放出放射性核種である。これらは、非常に短いナノメートル範囲を有する非常に低エネルギー（＜５００ｅＶ）の電子であるオージェ電子を放出する放射性核種であり、オージェ電子は、電子捕獲または内部電子転換プロセスによる電子殻の再配列の間に、崩壊電子の外殻から放出される。このような放射性核種には、１１１Ｉｎ、２０３Ｐｂ、２０１Ｔｌ、１０３Ｐｄ、１０３ｍＲｈ、１１９Ｓｂ、５８ｍＣｏ、１６１Ｈｏ、１６１Ｔｂ、６１Ｃｕ、６７Ｃｕ、１９５ｍＰｔ、１９３ｍＰｔ、１１７ｍＳｎが含まれる。
【００８４】
本発明のさらなる態様は、リンカーへの取付けのためのＥＰＲ剤の修飾、ならびにキレーターおよび／またはリンカーへの取付けのための代謝産物の修飾と、リンカーおよびキレーターの修飾とを含む。
【００８５】
本発明の実施形態に従う放射性医薬品バイオコンジュゲートは、３つの合成成分：
１）アルキル化またはアシル化によってキレート剤への接続のために官能基化された腫瘍細胞を標的にする代謝産物、好ましくはグルコース含有リンカーと、
２）放射性同位体キレート化のためにＮ結合によって官能基化されたキレート剤、好ましくはサイクラムと、
３）切断可能なリンカー、好ましくはＥＰＲ剤への取付けのためにマレイミドにより官能基化されたリンカーと
を結合させてプロコンジュゲートを形成し、その後、
４）生体分子／ＥＰＲ剤、好ましくはアルブミン
に連結することによって生成される。
【００８６】
アルブミンは６６．５ｋＤａのサイズを有し、非常に可溶性であり、安定性であり、容易に入手可能であり、生分解性であると共に、毒性および免疫原性がない。
【００８７】
腫瘍細胞標的を標的にする代謝産物はグルコースである。腫瘍細胞は非常に高い代謝回転および成長を有し、従って、細胞表面で過剰発現されたグルコース輸送体により取り込まれる大量のグルコースを必要とする。
【００８８】
キレート剤は、いくつかの放射性核種へのキレート化を可能にし得るＴＥＴＡ誘導体であり、グルコース標的およびアルブミン担体を連結するように修飾することができる。
【００８９】
放射性核種は、その１７日半減期、ならびに１０３ｍＲｈを通って１０３Ｒｈまで崩壊する際の有利で短い範囲の２１ｋｅＶのｘ線およびオージェ電子の放出のために１０３Ｐｄである。しかしながら、他の核種は、化合物の局在化および体内分布を検査するために、インビボにおける巨大分子のイメージングに使用することができる。
【００９０】
ＥＰＲ剤の取付けはインビトロまたはインビボで起こり、放射性医薬品バイオコンジュゲートを生成することができる。バイオコンジュゲートは以下に示される：
【化３】
2017530131.tif 000004
【００９１】
プロコンジュゲート（アルブミンＥＰＲ剤を含まないグルコース−サイクラム−切断可能なリンカー）の合成は、必要とされる全ての成分を接続するために様々な異なる官能基の注意深い操作を必要とする：
グルコース代謝産物の官能基化は、ヒドロキシル基に適した保護戦略が実行されることを必要とする。グルコース代謝産物は次に、末端ブロミドまたはヒドロキシル基を有する適切な長さの鎖の末端ヒドロキシル基と反応されて、酸クロリドに酸化され得る末端ブロミド基またはヒドロキシル基を有する炭素鎖に接続されたグルコース代謝産物を形成する。
リンカーの官能基化は、置換に適した官能基を有する適切な長さのアルキル鎖が、２つの適切な断片：キレート剤への取付けのために一方の端部にハロゲン化アルキルを有する第１の断片と、他方の端部に保護アミンを有する第２の断片との接続によってリンカーに転換されることを必要とする。
サイクラムキレーターの官能基化は、サイクラムがまずリンカーによりＳＮ２反応を介してモノアルキル化され、次に代謝産物によりＳＮ２またはＳＮＡｃ反応を介して二度目のアルキル化が行われることを必要とする。大員環の残りのアミンは、次に、金属錯体化に役立つブロモ酢酸第３級ブチル基と反応される。全てのヒドロキシル、カルボン酸およびアミン保護官能基の脱保護戦略が次に実行される。末端アミンは次に、ＥＰＲ剤に結合するためにマレイミドに転換される。
【００９２】
放射標識化は、プロコンジュゲートを水中に溶解させることによって実行される。プロコンジュゲートに放射性同位体の水溶液が添加されて、放射標識化がもたらされる。
【００９３】
上記のバイオコンジュゲートおよびプロコンジュゲートを含有する製剤は、既に放射標識化されているかまたはされていないこれらのバイオコンジュゲートまたはプロコンジュゲートを水溶液中に含むことができる。特定のプロコンジュゲートが水溶性でなければ、少量のエタノールまたはジメチルスルホキシドが、細胞に対して有毒でないようなレベルで使用され得る。放射性同位体への錯体化は、所定量のプロコンジュゲートまたはバイオコンジュゲートと、標識化のために必要であれば還元剤とを含み、これに水溶液中の放射性同位体が添加される密封容器を含むキット形態において行うことができる。またキットは、医薬品グレードの浸透圧のための塩、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤などの医薬品補助物質を含有していてもよい。キットの構成要素は、液体、凍結または乾燥形態であり得る。
【００９４】
本発明のプロコンジュゲートおよびバイオコンジュゲートは、癌（原発性または続発性の良性または悪性腫瘍）の診断および処置（緩和ケアを含む）において使用され得る。腫瘍領域および細胞における選択的取込みは放射性核種の標的化送達を可能にし、骨髄などの他の感受性周囲組織への放射を最小限にし得る。本発明は骨肉腫などの急速に成長している固形腫瘍によりよく作用することができ、転移性癌については、主要目的は（続発性）骨転移であり得る。以下の一般的な癌もはるかに高い割合のグルコース輸送体ＧＬＵＴ１を有することが示されており、これらも例示された放射性医薬品コンジュゲートによって標的化され得る：
結腸直腸癌
腎細胞癌
乳癌
胃癌
頭頸部癌
肉腫
【００９５】
診断および治療的処置方法は、無菌生理食塩水または血漿中で静脈内用量または腹腔内用量として放射標識化コンジュゲートの投与を必要とする。投与すべき単位用量は約０．０１〜３００ｍＣｉの放射活性を有し、この用量で注射される溶液は０．１〜１０ｍＬである。
【００９６】
コンパニオン診断は、特定の患者が受け入れる治療薬の用量を個別化するために、治療の前に、その治療薬の診断的等価物（診断用放射性核種により放射標識化された分子）が使用される場合に使用される用語である。これにより、患者用量の個別化が可能になる。治療薬は、放射標識化されていない分子、および治療用放射性核種により放射標識化された分子であり得る。後者はテラノスティック（またはセラノスティック）剤とも呼ばれ、放射性核種のペアリングが、同じ薬剤／分子による診断および治療の両方を達成するために使用される。２つの別々の用量で投与されても（好ましい）、または単一投与であってもよい。記載される放射性核種のいくつかは、診断および治療用放射性核種またはその両方として、同じまたは別々の投与において使用され得る。
【実施例】
【００９７】
実施例１−ＥＰＲ剤への取付けおよび放射性医薬品バイオコンジュゲートの形成のための放射標識化代謝産物−キレーター−リンカープロコンジュゲート
【化４】
2017530131.tif 000005
Ａ）１０３Ｐｄによって放射標識化された種々のリンカー代替物を有する２つの提唱される合成グルコース−サイクラム−マレイミドプロコンジュゲート。Ｂ）放射性医薬品バイオコンジュゲートを形成するための、プロコンジュゲートのマレイミドに対するアルブミン中の遊離チオールのマイケル付加。
【００９８】
実施例２−代謝産物−グルコースリンカーの合成
１０−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）デカン−１−オール（１）
【化５】
2017530131.tif 000006
乾燥ＴＨＦ（６０ｍＬ）中の１，１０−デカンジオール（５．００ｇ、２８．７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２（ｇ）下で、イミダゾール（３．５０ｇ、５１．７ｍｍｏｌ）と、その後にＴＢＤＰＳＣｌ（８．７０ｇ、３１．５ｍｍｏｌ）とをゆっくり添加し、室温で２４時間撹拌しながら放置した。真空でＴＨＦを蒸発させた後、水（６０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）を添加することによって反応を停止させた。有機相を分離し、水（２ｘ５０ｍＬ）で抽出し、塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗生成物をカラムにかけて［ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（９：１）］、純粋なアルコールを油として得た（６．５９ｇ、５６％）。Ｒｆ＝０．４２（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ８：２）。
【００９９】
２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−グルコピラノシルベンゾアート（２）
【化６】
2017530131.tif 000007
０℃のピリジン（３０ｍＬ）中のα−Ｄ−グルコース（１．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に塩化ベンゾイル（４．６８ｇ、３３．３ｍｍｏｌ）を液滴で添加した。０℃で１０分後、溶液を室温で２時間攪拌した。冷水（５０ｍＬ）の添加により反応を停止させ、生成物をＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍｌ）で抽出した。合わせた有機層を１ＮのＨＣｌ（３ｘ５０ｍＬ）で洗浄した後、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、次に乾燥させ、ろ過し、濃縮した。熱ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ２：１による再結晶によって粗生成物を精製し、表題の化合物を白色固体として得た（３．４８ｇ、８９％）。
Ｒｆ＝０．２８（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ８：２）．
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：８．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｒ），８．０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｒ），７．９４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｒ），７．８８（４Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｒ），７．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｒ），７．５３−７．２８（１４Ｈ，ｍ，Ｈ−Ａｒ），６．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｈ−１），６．３２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−３），５．８５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−４），５．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．０Ｈｚ，Ｈ−２），４．６２（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６ａ／Ｈ−５），４．５９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１６６．１，１６５．９，１６５．３，１６５．１，１６４．４（Ｃ＝Ｏ），［１３３．９，１３３．５，１３３．４，１３３．３，１３３．１  １３０．０，１２９．９（ｘ２），１２９．８（ｘ２），１２９．６，１２９．０，１２８．９，１２８．８，１２８．６，１２８．４（ｘ３），１２８．３７  ＡｒＣ）］，９０．０（Ｃ−１），７６．６（Ｃ−３），７０．５（Ｃ−２），７０．５（Ｃ−５），６８．９（Ｃ−４），６２．５（Ｃ−６）
【０１００】
１−ヨード−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｄ−グルコピラノシド（３）
【化７】
2017530131.tif 000008
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のヘキサメチルジシラン（０．５３１ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中のα−Ｄ−グルコース−ペンタベンゾアート（２）（４．１０ｇ、５．８５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この溶液にＺｎＩ２（０．４６７ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を添加した後、Ｉ２（０．９２１ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）を添加し、１６時間攪拌した。ＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）ならびにＮａＨＣＯ３（１．６８ｇ）およびＮａ２Ｓ２Ｏ３（１．１２ｇ）の水溶液（１２０ｍＬ）の添加により反応を停止させ、次に、ピンクがかった色の乳状溶液が透明になるまで１０分間攪拌した。有機相を分離し、塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、合わせた水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空で濃縮して表題の化合物の粗製油が得られ、これを次の反応で直接使用した。
【０１０１】
１０−ブロモデシル−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド（４）
【化８】
2017530131.tif 000009
予め調製したヨウ化物３（１．８１ｇ、２．５７ｍｍｏｌ）をＮ２（ｇ）下でＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）中に溶解させ、４Åモレキュラーシーブ（４．００ｇ）およびＺｎＣｌ２（０．５２５ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）、ならびにＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中の１０−ブロモデカノール（０．９１４ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加した。反応を１７時間攪拌し、その後、溶液の色は薄ピンクに変化した。ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）を添加し、ＮａＨＣＯ３（ｓ）（１．８０ｇ）およびＮａ２Ｓ２Ｏ５（ｓ）（２．４０ｇ）の水溶液（８０ｍＬ）の添加により反応を停止させた。１０分間攪拌した後、色は黄〜オレンジ色から乳白色に変化した。溶液をセライトパッドによりろ過し、相を分離した。有機相を塩水で洗浄し、合わせた水相をＥｔＯＡｃ（２ｘ３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ、ろ過し、濃縮して粗製油（２．９９ｇ）が得られ、これをカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ８：２）により精製した。表題の生成物を透明の油として得た（１．２３ｇ、２段階にわたって５９％）。
Ｒｆ＝０．４８（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ８：２）．
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：８．０−７．８０（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５３−７．２４（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．７Ｈｚ，Ｈ−２’），４．８１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ’），４．４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’），４．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．８９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．３，９．６Ｈｚ，Ｈ−１ａ），３．５２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．７，９．６Ｈｚ，Ｈ−１ｂ），３．３７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１０），１．８０（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−９），１．５５−１．４５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２），１．４１−１．３０（２Ｈ，ｍ，Ａｌｋ−Ｈ），１．１９−１．０５（１０Ｈ，ｍ，Ａｌｋ−Ｈ）．
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：［１６６．２，１６５．８，１６５．２，１６５．１（Ｃ＝Ｏ）］，［１３３．４，１３３．２，１３３．１，１３３．０，１２９．８（ｘ２），１２９．７（ｘ２），１２９．６，１２９．５，１２８．９，１２８．８，１２８．４，１２８．３，１２８．３，１２８．２（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），７３．０（Ｃ−３’），７２．２（Ｃ−５’），７２．０（Ｃ−２’），７０．３（Ｃ−１），６９．９（Ｃ−４’），６３．３（Ｃ−６’），３３．９（Ｃ−１０），３２．８，２９．４，２９．３，２９．２，２９．１，２８．７，２８．１，２５．７（Ｃ−Ａｌｋ）．
【０１０２】
１０−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）デシル−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド（５）
【化９】
2017530131.tif 000010
ＣＨ２Ｃｌ２（１５ｍＬ）中のモレキュラーシーブ（７．００ｇ）、ＺｎＣｌ２（１．４３ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）およびアルコール１（２．１７ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）を、新しく調製したＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中のヨウ化物３（３．７１ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）に添加し、反応を８時間攪拌した。この溶液にＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）を添加し、モレキュラーシーブをセライトパッドによりろ過した後、ＮａＨＣＯ３（０．９６０ｇ）およびＮａ２Ｓ２Ｏ３（１．４４ｇ）の水溶液（１００ｍＬ）を添加し、１０分間攪拌した。有機層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）でもう一度抽出した。有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空で濃縮して粗製油生成物が得られ、これをプレパックカラム上にドライロードし、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ９：１、８：２、７：３）を用いて生成して、表題の化合物を油生成物として得た（３．５５ｇ、６８％）。
Ｒｆ＝０．５１（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ８：２）
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：８．０５−７．８３（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．６８（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５５−７．２６（１８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．９１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２’），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．６５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ’），４．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’），４．１７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．９２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．３，９．６Ｈｚ，Ｈ−１ａ），３．６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１０），３．５５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．７，９．６Ｈｚ，Ｈ−１ｂ），１．５９−１．５０（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２／９），１．２９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−８），１．２２−１．００（１０Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２），１．０４（９Ｈ，ｓ，Ｈ−２’’）．
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．０（Ｃ＝Ｏ）］，［１３５．６（ｘ４），１３４．２（ｘ２），１３３．４，１３３．２，１３３．１，１３３．０，１２９．８（ｘ２），１２９．７（ｘ６），１２９．５（ｘ２），１２８．９（ｘ２），１２８．４（ｘ２），１２８．３（ｘ４），１２８．３（ｘ２），１２８．３（ｘ２），１２７．５（ｘ４）（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），７３．０（Ｃ−３’），７２．２（Ｃ−２’），７２．０（Ｃ−５’），７０．３（Ｃ−１），７０．０（Ｃ−４’），６４．０（Ｃ−１０），６３．３（Ｃ−６’），３２．６，２９．５，２９．４，２９．４，２９．３，２９．２，２６．９（Ｃ−２’’），２５．８，２５．７，１９．２（Ｃ−１’’）．
【０１０３】
１０−ヒドロキシデシル−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノシド（６）
【化１０】
2017530131.tif 000011
酢酸（０．２４５ｇ、４．０９ｍｍｏｌ）およびＮ−テトラブチルアンモニウムフルオリド（６．８０ｍＬ、ＴＨＦ中１．０Ｍ、６．８０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のＴＢＤＰＳＯ−Ｃ１０−グルコピラノシド５（３．３８ｇ、３．４０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、３６時間攪拌した。溶媒を蒸発させて残渣が得られ、これにＨ２Ｏ（５０ｍＬ）を添加し、次にＥｔＯＡｃ（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ２：１）を用いて粗材料を精製して、表題のアルコールを透明の油として得た（２．３０ｇ、９０％）。
Ｒｆ＝０．１６（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ２：１），
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：８．０２−７．８１（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５６−７．２５（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．９０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２’），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．３，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ’），４．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’），４．１８−  ４．１２（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．９０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．３，９．６Ｈｚ，Ｈ−１ａ），３．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１０），３．５３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．７，９．６Ｈｚ，Ｈ−１ｂ），１．６３−１．４６（４Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２），１．３５−１．０５（１２Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２）．
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．１（Ｃ＝Ｏ）］，［１３３．４，１３３．２，１３３．１，１３３．０，１２９．８，１２９．７，１２９．６，１２９．４，１２８．９，１２８．４，１２８．３，１２８．２（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），７３．０（Ｃ−３’），７２．２（Ｃ−２’），７２．０（Ｃ−５’），７０．３（Ｃ−１），６９．９（Ｃ−４’），６３．３（Ｃ−６’），６３．１（Ｃ−１０），３２．８，２９．４，２９．４，２９．３，２９．３，２９．１，２５．７，２５．６．
【０１０４】
１０−（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノース−１−イル）−デカナール（７）
【化１１】
2017530131.tif 000012
デス・マーチン・ペルヨージナン（０．５９ｇ、１．４ｍｍｏｌ）を、無水ＣＨ２Ｃｌ２（６０ｍＬ）中のアルコール６（０．８７０ｇ、１．１６ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、１．５時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（６０ｍＬ）の添加により反応を停止させ、１５分間攪拌した。水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ６：４）を用いて粗材料を精製して、表題の化合物を透明の油として得た（０．６９３ｇ、７９％）。
Ｒｆ＝０．７５（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：１）．
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：９．７５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，Ｈ−１），８．０２−７．８２（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５６−７．２３（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．９０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．５，６．０Ｈｚ，Ｈ−２’），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１’），４．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４，９．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ’），４．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．２，９．０Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’），４．１４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．９１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．８，７．２Ｈｚ，Ｈ−１０ａ），３．５４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．８，７．２Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），２．３８（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１．２，５．４Ｈｚ，Ｈ−２），１．６０−１．４７（４Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２），１．２７−１．０５（１０Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２）．
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：２０２．７（Ｃ−１），［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．０（Ｃ＝Ｏ）］，［１３３．３，１３３．１，１３３．１，１３３．０，１２９．８（ｘ２），１２９．７（ｘ２），１２９．４，１２８．９，１２８．４（ｘ２），１２８．３（ｘ２），１２８．２（ｘ２）（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），７３．０（Ｃ−３’），７２．２（Ｃ−２’），７２．０（Ｃ−５’），７０．２（Ｃ−１０），６９．９（Ｃ−４’），６３．３（Ｃ−６’），４３．８（Ｃ−２），２９．３，２９．１，２９．１，２９．１，２９．０，２５．７，２２．０（Ｃ−Ａｌｋ）．
【０１０５】
１０−（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノース−１−イル）デカン酸（８）
【化１２】
2017530131.tif 000013
ＮａＣｌＯ２（０．１５７ｇ、１．７ｍｍｏｌ）およびＮａＨ２ＰＯ４（０．２０８ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）の水溶液（４．０ｍＬ）を、ｔ−ブタノール（４０ｍＬ）中のアルデヒド７（１．００ｇ、１．３０ｍｍｏｌ）および２−メチル−２−ブテン（０．６２６ｇ、８．９０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、この溶液を黄色が全て消失するまで２．５時間攪拌した。溶媒を蒸発させて粗製油が得られ、これをＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）中に再溶解させた。溶液を１ＭのＨＣｌ（１０ｍＬ）により酸性化し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：１）を用いて粗材料を精製して、表題の化合物を透明の油として得た（０．９０ｇ、８９％）。
Ｒｆ＝０．３９（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：１）
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：８．０３−７．８１（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５３−７．２６（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．９１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２’），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．４，１２．１Ｈｚ，Ｈ−６ａ’），４．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’），４．１９−４．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．９１（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．２，９．７Ｈｚ，Ｈ−１０ａ），３．５４（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．２，９．７Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），２．３２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，Ｈ−２），１．６２−１．４６（４Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２），１．２７−１．０２（１０Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２）．
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１７９．１（Ｃ＝Ｏ），［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．０（Ｃ＝Ｏ）］，［１３３．４，１３３．２，１３３．０，１２９．８，１２９．７，１２９．６，１２９．４，１２８．９，１２８．４，１２８．３，１２８．２（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），７３．０（Ｃ−３’），７２．２（Ｃ−２’），７２．０（Ｃ−５’），７０．３（Ｃ−１０），６９．９（Ｃ−４’），６３．３（Ｃ−６’），３３．９（Ｃ−２），２９．３，２９．１，２９．１，２９．０，２８．９，２５．７，２４．６（Ｃ−Ａｌｋ）
【０１０６】
１０−（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノース−１イル）デカノイルクロリド（９）
【化１３】
2017530131.tif 000014
無水ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）中のデカン酸８（０．９００ｇ、１．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２（ｇ）下で数滴のＤＭＦを添加した。フラスコを０℃に置き、塩化オキサリル（０．１１ｍＬ、１．２９ｍｍｏｌ）を溶液に液滴で添加した。反応を攪拌しながら１時間放置し、その後、溶媒を真空下で除去した。少量のトルエン（５ｍＬ）を添加し、再度真空で蒸発させ、次に残渣を真空ポンプ下で１０分間乾燥させて、任意の残存するオキサリル−Ｃｌを除去した。粗製油生成物は特徴付けをしなかったが、次のアシル化反応において直接使用した。
【０１０７】
実施例３−リンカー−切断不能なリンカーの合成
１０−ヒドロキシデシル−フタルイミド（１０）
【化１４】
2017530131.tif 000015
フタルイミドカリウム（３．５０ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中の１０−ブロモデカノール（４．４８ｇ、１８．９ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を１００℃で２０時間加熱し、その後ＤＭＦの大部分を蒸留除去した。残存する生成物をＣＨ２Ｃｌ２中に再溶解させ、次にＨ２Ｏ（２ｘ５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空で濃縮して粗固体が得られ、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ６：４）を用いてこれを精製した。表題の化合物を白色固体として得た（４．９２ｇ、９７％）。
Ｒｆ＝０．４５（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：１）．δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：７．８４−７．８１（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．７０−７．６８（２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），３．６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１），３．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１０），１．６６（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−２），１．５５（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−９），１．４２（１Ｈ，ｓ，−ＯＨ），１．３２−１．２５（１２Ｈ，ｍ，Ａｌｋ−ＣＨ２）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１６８．４（Ｃ＝Ｏ），１３３．８（Ａｒ−３’），１３２．２（ＡｒＣ−２’），１２３．１（ＡｒＣ−４’），６３．０（Ｃ−１０），３８．０（Ｃ−１），３２．８（Ｃ−９），［２９．４，２９．３，２９．３，２９．０，２８．５，２６．８，２５．６（Ａｌｋ−ＣＨ２）］
【０１０８】
１０−アミノデカン−１−オール（１１）
【化１５】
2017530131.tif 000016
ヒドラジン水和物（０．８１ｇ、０．７８ｍＬ、２５．３ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（１８０ｍＬ）中の１０−ヒドロキシデシル−フタルイミド（１０）（４．５０ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、一晩還流させた。出発材料が残存し、従って追加のヒドラジン（０．４ｍｌ）を添加し、溶液を再度一晩還流させた。溶媒を蒸発させ、粗固体生成物をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）中に再溶解させ、全ての固体が溶解するまで２ＭのＮａＯＨにより塩基性化した。有機層を分離し、水相をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ８０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空で濃縮した。得られた粗製の白色固体を再結晶して（ＣＨ２Ｃｌ２：ヘキサン）、表題の化合物を白色固体として得た（２．２２ｇ、８８％）。
Ｒｆ＝０．０７（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１  δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：３．６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１），２．６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−１０），１．５４（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−９），１．４１（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２），１．３５−１．２４（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−３−８）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：６３．０（Ｃ−１），４２．３（Ｃ−１０），３３．９（Ｃ−９），３２．９（Ｃ−２），［２９．５，２９．５，２９．４，２９．４，２６．９，２５．８（Ａｌｋ−ＣＨ２）］
【０１０９】
Ｏ−ベンジル−Ｎ−（１０−ヒドロキシデシル）カルバメート（１２）
【化１６】
2017530131.tif 000017
Ｎａ２ＣＯ３（２．９６ｇ、２７．９ｍｍｏｌ）およびクロロギ酸ベンジル（２．０７ｍＬ、２．４７ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２：Ｈ２Ｏ（１：１、１００ｍＬ）中の１０−アミノ−１−デカノール（１１）（１．９３ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、これを２０時間攪拌した。有機層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（３ｘ５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ４上で乾燥させ、ろ過し、真空で濃縮して粗固体が得られ、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ６：４、５：５）を用いてこれを精製して、表題の化合物を白色固体として得た（３．１３ｇ、９１％）。
Ｒｆ＝０．３５（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：１），
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：７．３６−７．２６（５Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．１０（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’），４．７０（１Ｈ，ｂ．ｓ，−ＮＨ），３．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１０），３．１８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１），１．５８−１．４７（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２／９），１．３０−１．２０（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−３−８）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１５６．４（Ｃ＝Ｏ），［１３６．７，１２８．５，１２８．０（ＡｒＣ）］，６６．６（Ｃ−２’），６３．０（Ｃ−１０），４１．１（Ｃ−１），３２．８（Ｃ−９），２９．９（Ｃ−２），［２９．４，２９．４，２９．３，２９．２，２６．７，２５．７（ＡｌｋＣＨ２）］
【０１１０】
Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（１０−ヒドロキシデシル）カルバメート（１３）
【化１７】
2017530131.tif 000018
ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）中に溶解された二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１．０５ｇ、４．８ｍｍｏｌ）を０℃で、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ（４：１、２０ｍＬ）中の１０−アミノ−１−デカノール（１１）（０．７０ｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、０〜５℃で２．５時間攪拌した。全ての溶媒を真空下で除去し、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ５：５；４：６；３：７）を用いて白色固体残渣を精製して、表題の化合物を白色固体として得た（０．８４ｇ、７６％）。
Ｒｆ＝０．６０（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ４：６），
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：４．５１（１Ｈ，ｂ．ｓ，−ＮＨ），３．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１０），３．０８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１），１．５５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２），１．４６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９），１．４３（９Ｈ，ｓ，Ｈ−３’），１．３５−１．２５（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−３−８）
【０１１１】
Ｏ−ベンジル−Ｎ−（１０−ブロモデシル）カルバメート（１４）
【化１８】
2017530131.tif 000019
トリフェニルホスフィン（３．４５ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（４．３８ｇ、１３．１５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１６０ｍＬ）中のカルバメート１２（２．７０ｇ、８．７７ｍｍｏｌ）の溶液にＮ２（ｇ）下で添加し、これを３時間攪拌した。シリカを溶液に添加し、次に粗材料をプレパックカラム上にドライロードし、自動フラッシュカラムクロマトグラフィ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ９：１、８．２）を用いて精製した。表題の化合物を白色固体として得た（２．９９ｇ、９２％）。
Ｒｆ＝０．６８（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  １：１）；
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：７．３５−７．２８（５Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．０９（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’），４．７５（１Ｈ，ｂ．ｓ，−ＮＨ），３．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１０），３．１８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１），１．８４（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−９），１．５０−１．３６（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２，Ｈ−８），１．３３−１．２０（１０Ｈ，ｍ，Ａｌｋ−ＣＨ２）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１５６．４（Ｃ＝Ｏ），［１３６．７，１２８．５，１２８．３，１２８．０（Ａｒ−Ｃ）］，６６．５（Ｃ−２’），４１．１（Ｃ−１），３３．９（Ｃ−１０），３２．８（Ｃ−９），２９．９（Ｃ−２），［２９．３，２９．３，２９．１，２８．７，２８．１，２６．７（ＡｌｋＣ）］
【０１１２】
Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−（１０−ブロモデシル）カルバメート（１５）
【化１９】
2017530131.tif 000020
トリフェニルホスフィン（０．６２３ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）および四臭化炭素（０．７８７ｇ、２．３７ｍｍｏｌ）を、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中のカルバメート１３（０．５００ｇ、１．８２ｍｍｏｌ）の溶液にＮ２（ｇ）下で添加し、これを２．５時間攪拌した。シリカを溶液に添加し、次に粗材料をカラム上にドライロードし、カラムクロマトグラフィ（ヘキサン：ＥｔＯＡｃ  ９：１、８．２）を用いて精製した。表題の化合物を白色固体として得た（０．５６ｇ、９１％）。
Ｒｆ＝０．６５（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ８：２）；
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：４．４９（１Ｈ，ｂ．ｓ，−ＮＨ），３．４０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−１０），３．０９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１），１．８５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９），１．４６−１．３８（１３Ｈ，ｍ，Ｈ−２／８／３’），１．３３−１．２５（１０Ｈ，ｍ，Ｈ−３−７）
【０１１３】
実施例４−リンカー−切断可能なリンカーための成分の合成
Ｓ−（１０−（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）デシル）エタンチオアート（１６）
【化２０】
2017530131.tif 000021
チオ酢酸（０．０７８ｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＮａＨ（鉱油中６０％）（０．０３４ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の懸濁液に添加し、１０分間攪拌した。次にこの溶液を、Ｎ２（ｇ）下、０℃において、無水ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中のカルバメート１５（０．２９０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液に液滴で添加し、室温で一晩攪拌した。全ての溶媒を真空下で蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中に再溶解させた後、飽和ＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）（２ｘ１５ｍＬ）で抽出した。次に、有機相をＮａＨＣＯ３（１５．０ｍＬ）および塩水（１５．０ｍＬ）で洗浄した。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ９．５：０．５）を用いて粗製油を精製して、表題の化合物を白色固体として得た（０．１７８ｍｇ、６２％）、Ｒｆ＝０．４０（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ９：１）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：４．４９（１Ｈ，ｂ．ｓ，−ＮＨ），３．０９（２Ｈ，ｑｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｈ−１），２．８５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１０），２．３１（３Ｈ，ｓ，Ｈ−２’’），１．５６（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−９），１．４６−１．４０（１１Ｈ，ｍ，Ｈ−２／３’），１．３５−１．２６（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−３−８）
【０１１４】
Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルＮ−（１０−メルカプトデシル）カルバメート（１７）
【化２１】
2017530131.tif 000022
ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中２５％）（０．０５ｍＬ）を、ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）中のチオアセテート１６（０．１６０ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、３０分間攪拌した。出発材料は残存せず、従って全ての溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ中に再溶解させた後、ＮＨ４Ｃｌ（ａｑ）で洗浄した。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ９：１）を用いて精製して、表題の化合物を白色固体として得た（０．１３５ｇ、９８％）Ｒｆ＝０．３７（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ９：１）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：４．４９（１Ｈ，ｂ．ｓ，−ＮＨ），３．０９（２Ｈ，ｑｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−１），２．５１（２Ｈ，ｑｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１０），１．５９（２Ｈ，ｑｎ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−９），１．４６−１．４０（１１Ｈ，ｍ，Ｈ−２／３’），１．３６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−８），１．３１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．２７（１０Ｈ，ｍ，Ｈ−３−７）
【０１１５】
３−ブロモプロピル−チオトシラート（１８）
【化２２】
2017530131.tif 000023
１，３−ジブロモプロパン（３．５６ｇ、１７．６４ｍｍｏｌ）を、ＭｅＣＮ（３０．０ｍＬ）中のチオトシル酸カリウム（１．００ｇ、４．４１ｍｍｏｌ）の溶液にＮ２（ｇ）下で添加し、２時間還流させた。次に、反応を熱から除去し、冷却させ、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（２５．０ｍＬ）中に再溶解させ、水（３ｘ２０ｍＬ）および塩水（１ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。次に有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮した後、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ９：１）を用いて粗材料の精製を行った。表題の化合物を透明の油として得た（１．０２ｇ、７５％）。Ｒｆ＝０．３５（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ８：２）。
【０１１６】
実施例５−プロコンジュゲート−グルコースリンカーおよび切断不能なリンカーのサイクラムへの取付けによる合成
１，４，８，１１−テトラアザトリシクロ［９．３．１．１］ヘキサデカン（１９）
【化２３】
2017530131.tif 000024
ホルムアルデヒド（Ｈ２Ｏ中３７％）（０．７５ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を、水（２０ｍＬ）中に溶解されたサイクラム（１．００ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、氷浴中で０〜５℃に冷却した。溶液をその温度で５分間攪拌し、その後室温まで温まるようにして、２．５時間攪拌した。反応を再度０〜５℃に冷却し、５分間攪拌して、形成される白色固体の沈殿を最大限にし、これを次にろ過し、氷水（３ｘ２０ｍＬ）で洗浄した。固体をＣＨ２Ｃｌ２（２５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解させ、溶液をＭｇＳＯ４上で乾燥させた。ＭｇＳＯ４をろ過し、溶媒を真空で除去して、表題の生成物を白色固体（１．０５ｇ、９４％）として得た。
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：５．４０（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３．０Ｈｚ，１３．５Ｈｚ，Ｈ−１’ａ），３．１４（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２／３／９／１０），２．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，Ｈ−１’ｂ），２．８５−２．８０（４Ｈ，ｍ，Ｈ−５／７／１２／１４），２．６２（４Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，１５．５Ｈｚ，Ｈ−５／７／１２／１４），２．３８（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２／３／９／１０），２．２８−２．１８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６／１３），１．２１−１．１６（２Ｈ，ｄｑｎ，Ｊ＝２Ｈｚ，Ｊ＝１６．５Ｈｚ，Ｈ−６／１３），
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：６８．９（Ｃ−１’），５３．６（Ｃ−２／３／９／１０），４９．３（Ｃ−５／７／１２／１４），２０．３（Ｃ−６／１３）
【０１１７】
１−［１０−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）デシル］−１，４，８，１１−テトラアザ−４，８−メタノ−シクロペンタデカンアンモニウムブロミド（２０）
【化２４】
2017530131.tif 000025
ブロミド１５（１．０６ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を、Ｎ２（ｇ）下で無水ＣＨ３ＣＮ（８０ｍＬ）中の架橋サイクラム１９（０．７７３ｇ、３．４５ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、箔で覆ったフラスコ内で７２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗製油をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）中に再溶解させ、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）で洗浄した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、濃縮した。得られた残渣をカラムクロマトグラフィ（数滴のＮＨ４ＯＨを含む、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）により精製して、油を得た（１．０２ｇ、６９％）、Ｒｆ＝０．５６（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：１２．７０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），９．１０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），７．３１−７．２４（５Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．０５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’），４．７７（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），４．０５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，Ｈ−１５ａ），３．６８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），３．３４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ，Ｈ−１５ｂ），３．２０−３．１０（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ，Ｈ−２５），３．０５−２．８３（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．７３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝５．０，１２．０Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），２．４３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１６ａ），２．３５−２．２５（３Ｈ，ｍ，Ｈ−１６ｂ，ＣＨ２Ｎ），２．２０（１Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．１１（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ，Ｈ−６ａ），１．８７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６ｂ），１．６５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１３ａ），１．５５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−１３ｂ），１．５０−１．３０（４Ｈ，ｍ，Ｈ−１７／２４），１．２８−１．２０（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ａｌｋ）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１５６．４（Ｃ−１’），［１３６．６，１２８．４，１２８．０，１２８．０（ＡｒＣ）］，７２．８（Ｃ−１５），６６．５（Ｃ−２’），５３．７（Ｃ−１６），［５２．９，４９．３，４８．５，４８．１，４８．０，４８．０，４６．０，４５．１（Ｃ−Ｎ）］，４１．０（Ｃ−２５），２９．９（Ｃ−１７），２９．５，２９．５，２９．４，２９．１，２７．７，２６．６，２６．３，２５．１（Ｃ−１３），２２．４（Ｃ−６）
【０１１８】
１−［１０−（２，３，４，６−Ｏ−テトラベンゾイル−β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）−１−オキソデシル］−１１−［１０−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）デシル］−１，４，８，１１−テトラアザ−４，８−メタノ−シクロペンタデカン（２１）
【化２５】
2017530131.tif 000026
ＤＭＡＰ（０．０４６ｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（０．１９０ｇ、１．８８ｍｍｏｌ）を、無水ＴＨＦ（３５ｍＬ）中に溶解されたサイクラム誘導体２０（０．４６０ｇ、０．９３ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。無水ＴＨＦ（７．８ｍＬ）中に溶解された酸クロリド９（０．７７５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）をこの溶液に添加し、１．５時間攪拌した。溶液をセライトによりろ過してトリエチルアンモニウム塩を除去した後、ＴＨＦを真空で除去した。粗製油をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に再溶解させ、Ｈ２Ｏ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機層を２ＭのＮａＯＨ（２０ｍＬ）で洗浄して分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。全ての有機相を合わせ、乾燥させ、ろ過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）を用いて粗製油を精製して、表題の化合物を油として得た（０．７６ｇ、６５％）。Ｒｆ＝０．４５（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）。ＨＰＬＣ分析により、１つのスポットに２つの分離できない化合物が含有され、これらは、示されるような表題の化合物と、ビスアミナル（ｂｉｓａｍｉｎａｌ）架橋を持たない同じ化合物とであることが示された。
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：８．０１−７．８１（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５２−７．２５（１７Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，３’），５．６５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２’），５．０８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’’），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．８０（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），４．６２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，１２Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），４．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），４．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．９０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．４，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ａ），３．８５−３．５５（３Ｈ，ｂｍ，−ＮＣＨ２），３．５３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ｂ），３．４１（２Ｈ，ｂｓ，−ＮＣＨ２），３．１７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−３５），２．７８−２．４５（１０Ｈ，ｂｍ，−ＮＣＨ２），２．３９−２．３０（５Ｈ，ｍ，Ｈ−２６／−ＮＣＨ２），２．２６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１７），１．７０−１．３８（１２Ｈ，ｍ，Ｈ−１８／２４／２７／３４／６／１３），１．３５−１．００（２２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ａｌｋ），
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１７２．９（Ｃ＝Ｏ），［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．０（Ｃ＝Ｏ）］，１５６．４（Ｃ＝Ｏ），１３６．７（ＡｒＣ），［１３３．４，１３３．２，１３３．２，１３３．１（ＡｒＣ）］，［１２９．８，１２９．８，１２９．７，１２９．５，１２８．９，１２８．９，１２８．５，１２８．５，１２８．４，１２８．４，１２８．３，１２８．３，１２８．１（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），７３．０（Ｃ−３’），７２．１（Ｃ−２’），７１．９（Ｃ−５’），７０．７（Ｃ−１５），７０．３（Ｃ−２５），６９．９（Ｃ−４’），６６．５（Ｃ−２’’），６３．３（Ｃ−６’），５６．０（Ｃ−２６），［５５．４，５５．０，５４．７，５４．４，５４．１，５３．９，５２．７，５２．４，５１．９，５１．１，５０．２，４６．５，４５．１，４３．７（ＮＣＨ２）］，４１．１（Ｃ−３５），３３．４／３３．１（Ｃ−１７），２９．９（Ｃ−３４），２９．５，２９．５，２９．４，２９．４，２９．３，２９．２，２７．８，２７．６，２７．５，２６．９，２６．８，２５．７，２５．５，２１．６
【０１１９】
１−［１０−（２，３，４，６−Ｏ−テトラベンゾイル−β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）−１−オキソデシル］−４，８−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−１１−［１０−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）デシル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（２２）
【化２６】
2017530131.tif 000027
無水ＣＨ３ＣＮ（１５ｍＬ）中のサイクラム２１（０．１００ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ２（ｇ）下で炭酸カリウム（０．０３３ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を添加した。ブロモ酢酸ｔ−ブチル（０．０４７ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ３ＣＮ（１ｍＬ）中に溶解してこの溶液に添加し、次にこれを１６時間攪拌した。溶媒をロータリーエバポレータで除去し、残渣をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）中に再溶解させ、ＣＨ２Ｃｌ２（４ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を乾燥させ、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させた。カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９．５：０．５）を用いて油性残渣を精製して、表題の化合物を油として得た（０．０８６ｇ、７３％）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：８．０２−７．８１（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５３−７．２５（１７Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２’），５．０９（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’’），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．７８（１Ｈ，ｂｓ，ＮＨ），４．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），４．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），４．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．９０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．４，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ａ），３．５３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ｂ），３．４５（４Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），３．２５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１’’’），３．２２（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１’’’），３．１７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−３５），２．８２−２．６２（８Ｈ，ｍ，Ｈ−２６／ＮＣＨ２），２．４６（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），２．３７（４Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），２．２５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１７），１．６７（１Ｈ，ｂｍ，ＣＨ２），１．５７（５Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．５０（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．４５（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’’’），１．４３（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’’’），１．３２−１．０２（２４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ａｌｋ）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１７２．９（Ｃ−１６），１７０．８（Ｃ−２’’’），［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．０（Ｃ＝Ｏ）］，１５６．４（Ｃ−１’’），１３６．７（ＡｒＣ），［１３３．３，１３３．１，１３３．１，１３３．０，１２９．８，１２９．７（ｘ４），１２９．４，１２８．９（ｘ２），１２８．５，１２８．４，１２８．３（ｘ３），１２８．２，１２８．０（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’），８０．６（ｘ２）（Ｃ−３’’’），７３．０（Ｃ−３’），７２．２（Ｃ−２’），７２．０（Ｃ−５’），７０．３（Ｃ−２５），７０．０（Ｃ−４’），６６．５（Ｃ−２’’），６３．３（Ｃ−６’），５７．２（Ｃ−１’’’），５５．９，（Ｃ−１’’’），［５５．０，５３．９，５２．３，５２．０，５１．３，５１．２（ｘ２），４７．０，４４．９（ＮＣＨ２）］，４１．１（Ｃ−３５），３３．１／３３．０（Ｃ−１７），［３０．０，２９．５，２９．４（ｘ３），２９．３，２９．２（ｘ２），２８．２（ｘ２），２８．０，２７．６，２６．７（ｘ２），２６．５，２５．８，２５．５（ｘ３）（ＣＨ２Ａｌｋ，Ｃ−６／１３，Ｃ−４’’’）］
【０１２０】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）−１−オキソデシル］−１１−［１０−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）デシル］−１，４，８，１１−テトラアザ−４，８−メタノ−シクロペンタデカン（２３）
【化２７】
2017530131.tif 000028
ナトリウム金属（０．１１９ｇ、５．１７ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＯＨ（５ｍＬ）と反応させ、次に無水ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）中のグルコース−サイクラム２１（０．６４０ｇ、０．５１２ｍｍｏｌ）の溶液にＮ２（ｇ）下で添加し、１時間攪拌した。ＭｅＯＨを真空で蒸発させ、生成物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）中に再溶解させた。抽出のために水（２０ｍＬ）を添加し、この際、エマルションが形成された。エマルションを放置して分離させ、有機層を除去した後、少量のＭｅＯＨ（５ｍＬ）を含むＤＣＭ（３ｘ４０ｍＬ）によって水相をさらに抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、濃縮した。粗製油をドライロードし、自動カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ、８：１．８：０．２）を用いて精製して、表題の生成物を油として得た（０．３７４ｇ、９２％）。
Ｒｆ＝０．５５（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ，８：１．８：０．２）
δＨ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：７．３４−７．２３（５Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．０６（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’’），４．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），３．９１−３．８４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６’ａ／２５ａ），３．８０−３．５５（２Ｈ，ｂｍ，−ＮＣＨ２  ３．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６’ｂ）を含む），３．６０−３．４０（２Ｈ，ｂｓ，−ＮＣＨ２  ３．５３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．９，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ｂ）を含む），３．３７−３．２３（５Ｈ，ｍ，Ｈ−３’／４’／５’／ＮＣＨ２），３．１７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−２’），３．１０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−３５），２．８０−２．５０（１０Ｈ，ｂｍ，−ＮＣＨ２），２．５０−２．４０（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２６／ＮＣＨ２），２．３７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−１７），１．７４（２Ｈ，ｍ），１．６１（４Ｈ，ｍ），１．４８（４Ｈ，ｍ），１．４０−１．２０（２４Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ａｌｋ）
δＣ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）：１７５．６（Ｃ＝Ｏ），１５８．８（Ｃ＝Ｏ），１３８．５（ＡｒＣ），［１２９．４，１２８．９，１２８．７（ＡｒＣ）］，１０４．４（Ｃ−１’），７８．１（Ｃ−３’），７７．９（Ｃ−２’），７５．１（Ｃ−５’），７１．７（Ｃ−２５），７１．１（Ｃ−１５），７０．９（Ｃ−４’），６７．２（Ｃ−２’），６２．８（Ｃ−６’），５６．９（Ｃ−２６），［５６．２，５５．４，５５．２，５５．２，５４．６，５４．５，５４．５，５３．８，５３．１，５２．５，５１．１，５１．１，４７．９，４６．０，４５．１，４２．３（ＮＣＨ２）］，４１．８（Ｃ−３５），３４．２／３４．０（Ｃ−１７），［３０．９，３０．８，３０．６，３０．６，３０．５，３０．５，３０．４，３０．４，２８．７，２８．６，２８．１，２８．０，２７．８，２７．０，２６．８，２６．７，２２．４（Ｃ−６／１３を含むＣ−ａｌｋ）］
【０１２１】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）−１−オキソデシル］−１１−［１０−アミノデシル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（２４）
【化２８】
2017530131.tif 000029
無水ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中のグルコースサイクラム２３（０．３７４ｇ、０．４５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（０．０３７ｇ、１０％ｗ／ｗ）を添加した。フラスコにＨ２（ｇ）を流し、水素充填バルーンを用いてＨ２（ｇ）環境下で一晩攪拌した。溶液をセライトパッドによりろ過し、これをＭｅＯＨで洗浄し、次にＭｅＯＨを真空下で除去した。次に、粗製油をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に再溶解させ、２ＭのＮａＯＨ（５ｍＬ）を添加して、生成物をその遊離塩基形態で得た。水およびＭｅＯＨを真空下で除去し、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を再度フラスコに添加した。白色固体が沈殿し、次にこれをセライトによりろ過した。溶媒を蒸発させ、粗生成物をドライロードし、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ、７：２．５：０．５）を用いて精製した。２つの主要な異性体が得られ、これらは完全には分離できなかった（上側異性体０．０４０ｇ、異性体混合物０．１５３ｇ、下側異性体０．０８４ｇ、全体の収率＝８９％）。ＮＭＲ分析により、上部異性体はまだビス−アミナール架橋を含有することが示されたが、下側異性体は表題の化合物であると分析された。
δＨ（ＣＤ３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：４．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−１’），３．８９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ａ），３．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），３．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．６，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），３．６２−３．４４（５Ｈ，ｍ，Ｈ−２／１４／２５ｂ），３．３７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｈ−３’），３．３２−３．２４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−４’／５’），３．１７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｈ−２’），２．９６（２Ｈ，ｍ，−ＮＣＨ２），２．８６−２．７６（８Ｈ，ｍ，Ｈ−３５／−ＮＣＨ２（ｘ３）），２．６６（２Ｈ，ｍ，−ＮＣＨ２），２．５５−２．３３（６Ｈ，ｍ，Ｈ−１７／２６／ＮＣＨ２），１．８５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６），１．８０−１．５５（８Ｈ，ｍ，Ｈ−１３／１８／２４／３４），１．４９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２７），１．４２−１．２８（２２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ａｌｋ）
δＣ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）：１７５．６（Ｃ−１６），１０４．４（Ｃ−１’），７８．２（Ｃ−３’），７７．９（Ｃ−２’），７５．２（Ｃ−５’），７１．８（Ｃ−２５），７０．９（Ｃ−４’），６２．９（Ｃ−６’），５６．０（Ｃ−２６），［５３．５，５３．４，５２．８，５２．６，５１．３（ｘ２），５０．５（ｘ２），４９．７（ｘ２），４８．６（ｘ２），４８．０（ｘ２），４６．４（ｘ２）（ＮＣＨ２および回転異性体）］，４１．４（Ｃ−３５），３４．２／３３．９（Ｃ−１７および回転異性体），［３０．８，３０．６（ｘ２），３０．４（ｘ２），３０．４，３０．３，２８．７，２８．５，２８．２，２７．８，２７．６，２７．４，２７．０，２６．７（Ｃ−６／１３を含むＣＨ２Ａｌｋおよび回転異性体）］
【０１２２】
１−［１０−（２，３，４，６−Ｏ−テトラベンゾイル−β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（２５）
【化２９】
2017530131.tif 000030
ブロミド４（０．１２６ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）をＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中に溶解し、Ｎ２（ｇ）下で、Ｋ２ＣＯ３（０．０６１ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ３ＣＮ（５ｍＬ）中の１，８−ビス（ｔ−ブトキシカルボニルメチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（０．０９５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、６０℃で７２時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗製油を１ＭのＨＣｌ（１０ｍＬ）中に再溶解させ、ＥｔＯＡｃ（２ｘ２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９．６：０．４；９．４：０．６；９．２：０．８；９：１）で精製し、油を得た（０．０５ｇ、２８％）。
Ｒｆ＝０．４５（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）．
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：８．００−７．８１（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５３−７．２５（１７Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．８８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’），５．６５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’），５．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２’），４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’），４．６１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ａ），４．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．０Ｈｚ，Ｈ−６’ｂ），４．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’），３．８９（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．４，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ａ），３．６３（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），３．５２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．８，９．６Ｈｚ，Ｈ−２５ｂ），３．４６（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），３．３２（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），３．２４−３．１７（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），３．１６−３．０８（４Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），３．０１（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），２．９２（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），２．８３（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），２．７４（２Ｈ，ｍ，ＮＣＨ２），２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−１６），２．０５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６），１．８５（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１３），１．５３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２），１．４７（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’’’），１．４３（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’’’），１．３２−１．０２（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ａｌｋ）
【０１２３】
１−［１０−（２，３，４，６−Ｏ−テトラベンゾイル−β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−８−［１０−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）デシル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（２６）
【化３０】
2017530131.tif 000031
Ｋ２ＣＯ３（０．０１８ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ３ＣＮ（２ｍＬ）中のサイクラム２５（０．０５０ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ブロミド１５（０．０２９ｇ、０．０８ｍｍｏｌ）をＮ２（ｇ）下で添加し、６０℃で２４時間攪拌した。反応は非常にゆっくり進行しており、従って追加のブロミド１５（０．０１９ｇ）およびＫ２ＣＯ３（０．０１２ｇ）を添加し、反応を６０℃で２４時間再度攪拌した。溶媒を蒸発させ、粗製油を１ＭのＨＣｌ（１０ｍＬ）中に再溶解させ、ＥｔＯＡｃ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、濃縮し、残渣をカラムクロマトグラフィ（数滴のＡｃＯＨを含む、ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９．５：０．５）により精製して、油を得た（０．０３ｇ、５０％）。Ｒｆ＝０．５９（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９．５：０．５）。
【０１２４】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−二酢酸−８−［１０−アミノデシル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（２７）
【化３１】
2017530131.tif 000032
無水ＭｅＯＨ（４ｍＬ）中のサイクラム２６（０．０３０ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の溶液にＴＦＡ（１．０ｍＬ）を添加して、２０％ＴＦＡの最終溶液を作った。反応を室温で２４時間攪拌した。溶媒およびＴＦＡを真空下で蒸発させて残渣が得られ、これを次の反応で直接使用した。残渣をＭｅＯＨ（２ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＭｅ（ＭｅＯＨ中２４％）（０．５ｍＬ）の添加の後、５分間攪拌した。Ｄｏｗｅｘ  Ｈ＋（０．５ｇ）の添加により反応を停止させ、５分間攪拌し、その後、Ｄｏｗｅｘをセライトパッドによりろ過した。ろ液を濃縮して固体残渣が得られ、これにＭｅＯＨ（１ｍＬ）を添加して、ＴＦＡ塩から生成物を抽出した。ＭｅＯＨを蒸発させて、ガラス状の固体を得た（０．０２１ｇ）。これにはまだいくらかのＴＦＡ塩が含有されていた。
ＬＲＭＳ：ｍ／ｚ  Ｃ４０Ｈ７９Ｎ５Ｏ１０に対する計算値＝７８９．５８；実測値（Ｍ＋Ｈ＋）＝７９０．６。
【０１２５】
実施例６−プロコンジュゲート−グルコースリンカーおよび切断可能なリンカーのサイクラムへの取付けによる合成
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロ−テトラデカン（２８）
【化３２】
2017530131.tif 000033
無水ＭｅＯＨ（２．０ｍＬ）中のサイクラム２５（０．０５ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の溶液にナトリウムメトキシド（０．２０ｍＬ、２５％溶液）を添加し、３０分間攪拌する。溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中に再溶解させ、０．２５ＭのＨＣｌ（２ｘ５ｍＬ）で洗浄する。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ８．５：１．５）によって精製して、表題の化合物を油として得た。
【０１２６】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−８−［３−（トシルチオ）プロピル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（２９）
【化３３】
2017530131.tif 000034
Ｋ２ＣＯ３（０．０１２ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ３ＣＮ（２ｍＬ）中のサイクラム２８（０．０２０ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の溶液にブロミド１８（０．０１９ｇ、０．０６ｍｍｏｌ）をＮ２（ｇ）下で添加し、６０℃で２４時間攪拌する。反応を停止させるが、次のステップに直接進行させる。
【０１２７】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−８−［３−（ペンタ−４−イン−１−イルジスルファニル）プロピル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３０）
【化３４】
2017530131.tif 000035
前の反応溶液に４−ペンチン−１−チオール（０．００４ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加し、次にこれをさらに２時間還流させる。溶媒を真空下で蒸発させ、粗残渣をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中に再溶解させ、飽和ＮＨ４Ｃｌ水（５ｍＬ）で洗浄する。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）により精製して、表題の化合物を油として得る。
【０１２８】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−ビス（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−８−［３−（（（（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）デシル）ジスルファニル）プロピル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３１）
【化３５】
2017530131.tif 000036
チオール１７（０．０１１ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を反応２９からの溶液に添加し、次にさらに２時間還流させる。溶媒を真空下で蒸発させ、粗残渣をＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中に再溶解させ、飽和ＮＨ４Ｃｌ水（５ｍＬ）で洗浄する。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）により精製して、表題の化合物を油として得る。
【０１２９】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−（二酢酸）−８−［３−（（アミノデシル）ジスルファニル）プロピル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３２）
【化３６】
2017530131.tif 000037
６ＭのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃの溶液（０．５０ｍＬ）を、ＥｔＯＡｃ（４．５ｍＬ）中に溶解されたサイクラム３１（０．０２０ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）に添加し、２時間攪拌する。生成物が白色ＨＣｌ塩として沈殿し、次にこれをろ過し、ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）で１回洗浄し、乾燥させる。
【０１３０】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−（二酢酸）−８−［３−（ペンタ−４−イン−１−イルジスルファニル）プロピル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３３）
【化３７】
2017530131.tif 000038
６ＭのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃの溶液（０．５０ｍＬ）を、ＥｔＯＡｃ（４．５ｍＬ）中に溶解されたサイクラム３０（０．０２０ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）に添加し、２時間攪拌する。全ての溶媒を真空下で蒸発させ、固体生成物をＥｔＯＨから再結晶させる。
【０１３１】
実施例７−放射標識化−１０３Ｐｄ配位の原理の証明のためのグルコース−サイクラム中間体の合成および放射標識化
１，４，８−トリス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３４）
【化３８】
2017530131.tif 000039
ＣＨ３ＣＮ（７０ｍＬ）中のサイクラム（０．１００ｇ、０．５０ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（０．０８８ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣＨ３ＣＮ（２５ｍＬ）中に溶解されたブロモ酢酸ｔ−ブチル（０．２０５ｇ、１．０５ｍｍｏｌ）を添加し、１５時間還流させた。形成した白色沈殿物をろ過し、溶媒を真空で除去した。次に、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ：ＮＨ４ＯＨ１０：１：０．１）により残渣を精製して、表題の化合物が淡黄色の油をして得られ、これは結晶化した。固体をトルエンにより再結晶させて、透明の結晶を得た（０．１２６ｇ、４６％）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）：９．０１（２Ｈ，ｂｓ，−ＮＨ），３．４２（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１’），３．３８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１’），３．２９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１２），３．１７（２Ｈ，ｍ，Ｈ−９），３．１１（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１’），３．０３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１０），２．７４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），２．７０（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，ＣＨ２Ｎ），２．５９（４Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），２．０３（２Ｈ，ｂｍ，Ｈ−１３），１．６６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６），１．４６（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’），１．４５（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’），１．４３（９Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１７１．１（Ｃ＝Ｏ），１７０．８（Ｃ＝Ｏ），１７０．５（Ｃ＝Ｏ），８２．３（Ｃ−３’），８１．６（Ｃ−３’），８１．２（Ｃ−３’），５５．８（Ｃ−１’），５５．７（Ｃ−１’），５５．３（Ｃ−１’），５３．８（ＣＨ２Ｎ），５２．０（Ｃ−１２），５１．２（Ｃ−９），５０．５（ＣＨ２Ｎ），４９．２（ＣＨ２Ｎ），４８．５（Ｃ−１０），４７．６（ＣＨ２Ｎ），４６．７（ＣＨ２Ｎ），２８．２（Ｃ−４’），２３．３（Ｃ−６），２２．５（Ｃ−１３）
【０１３２】
１−（１０−（テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−グルコピラノース−１−イル）デシル）−４，８，１１−トリス−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメチル）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３５）
【化３９】
2017530131.tif 000040
ブロミド４（０．５９０ｇ、０．７２ｍｍｏｌ）を無水ＭｅＣＮ（１０ｍＬ）中に溶解させ、ＭｅＣＮ（５０ｍＬ）中のサイクラム３４（０．３２７ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（０．１５２ｇ、１．８０ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応を８０℃で４８時間還流させ、その後Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）を添加し、反応を再度４８時間還流させた。溶媒を真空下で蒸発させ、粗材料をＤＣＭ（２０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）中に再溶解させた。水相をＤＣＭ（３ｘ２０ｍＬ）で抽出し、有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮して、粗製油が得られ、ＤＣＭ：ＭｅＯＨ（９．５：０．５）を移動相として用いて、これをカラムクロマトグラフィにより精製した。表題の生成物が透明の油として得られた（０．３７０ｇ、４８％）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：８．０２−７．８１（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．５５−７．２５（１２Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），５．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−３’’），５．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，Ｈ−４’’），５．５１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．８，９．７Ｈｚ，Ｈ−２’’），４．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’’），４．６３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．４，１２．１Ｈｚ，Ｈ−６ａ’’），４．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．２，１２．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ’’），４．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ−５’’），３．９０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．２，９．７Ｈｚ，Ｈ−２４ａ），３．５３（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．２，９．７Ｈｚ，Ｈ−２４ｂ），３．５３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ），３．３２−３．２２（８Ｈ，ｍ，ＣＨ２Ｎ，３  ｘ  Ｈ−１’），３．１２−３．０６（４Ｈ，ｍ，Ｈ−１５，ＣＨ２Ｎ），２．７２−２．６０（１０Ｈ，ｍ，５  ｘ  ＣＨ２Ｎ），１．９９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１３），１．７８（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１６），１．６１（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６），１．５２（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２３），１．４５（２７Ｈ，ｓ，Ｈ−４’），１．３０−１．０５（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ａｌｋ）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１７０．７（Ｃ−２’），１７０．５（Ｃ−２’），１７０．７（Ｃ−２’），［１６６．１，１６５．８，１６５．２，１６５．０（Ｃ＝Ｏ）］，［１３３．３，１３３．１，１３３．１，１３３．０，１２９．８（ｘ２），１２９．７（ｘ４），１２９．６（ｘ２），１２９．４（ｘ２），１２８．９（ｘ２），１２８．４（ｘ４），１２８．３（ｘ２），１２８．２（ｘ２）（ＡｒＣ）］，１０１．３（Ｃ−１’’），８１．４（Ｃ−３’），８１．４（Ｃ−３’），８１．０（Ｃ−３’），７３．０（Ｃ−３’’），７２．１（Ｃ−２’’），７２．０（Ｃ−５’’），７０．３（Ｃ−２４），６９．９（Ｃ−４’’），６３．３（Ｃ−６’’），５５．７（Ｃ−１’），５５．７（Ｃ−１’），５５．２（Ｃ−１’），５３．２（Ｃ−１５），［５２．１，５１．９，５１．８，５１．０，５０．７，５０．２，５０．０，４９．６（ＣＨ２Ｎ）］，［２９．３，２９．３，２９．２，２９．１，２９．０（ＣＨ２）］，２８．２（ｘ３）（Ｃ−４’），２６．９（Ｃ−２２），２５．７（Ｃ−１７），２５．４（Ｃ−６），２３．４（Ｃ−１６），２２．５（Ｃ−１３）
【０１３３】
１−（１０−（β−Ｄ−グルコピラノース−１−イル）デシル）−４，８，１１−トリス−（酢酸）−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラ−デカントリフルオロ酢酸塩（３６）
【化４０】
2017530131.tif 000041
無水ＭｅＯＨ（４．０ｍＬ）中のサイクラム３５（０．１１０ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）の溶液にナトリウムメトキシド（０．２０ｍＬ、２５％溶液）を添加し、１時間攪拌した。０．２５ＭのＨＣｌ（１０ｍＬ）により反応を停止させ、ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。水相を２ＭのＮａＯＨによりｐＨ１０〜１１に塩基性化し、再度ＤＣＭ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機相を乾燥させ、ろ過し、濃縮して、粗製油を得た。この油を次にＤＣＭ（２ｍＬ）中に溶解し、トリフルオロ酢酸（２．０ｍＬ）をこの溶液に添加し、これを次に一晩攪拌した。次に、全ての溶媒を蒸発させ、残存する油を水（５ｍＬ）中に再溶解させ、ＣＨＣｌ３（３ｘ３ｍＬ）で抽出した。水相を濃縮し、さらに高真空下で乾燥させて、表題の化合物のＴＦＡ−塩をガラス状の固体として得た（０．０３２ｇ、３６％）。
δＨ（Ｄ２Ｏ，４００ＭＨｚ）：４．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｈ−１’’），３．９３（２Ｈ，ｓ，Ｈ−１’），３．７９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’ａ／２４ａ），３．６１−３．５１（６Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’ｂ／２４ｂ／１’’（ｘ２）），３．４０−３．２５（１１Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’／４’’／５’’／ＮＣＨ２（ｘ４）），３．１６−３．０８（７Ｈ，Ｈ−２’’／１５／ＮＣＨ２（ｘ２）），２．９０（４Ｈ，ｂｍ，−ＮＣＨ２（ｘ２）），１．９３（４Ｈ，ｍ，Ｈ−６／１３），１．５９（２Ｈ，ｍ，Ｈ−１６），１．５０（２Ｈ，ｍ，Ｈ−２３），１．２５−１．１５（１２Ｈ，ｍ，ＣＨ２−ａｌｋ（ｘ６））
δＣ（Ｄ２Ｏ，１００ＭＨｚ）：１７３．８（Ｃ−２’），１７３．７（Ｃ−２’），１６９．６（Ｃ−２’），１０２．１（Ｃ−１’’），７５．８（Ｃ−３’’），７５．８（Ｃ−５’’），７３．１（Ｃ−２’’），７０．６（Ｃ−２４），６９．９（Ｃ−４’’），６０．８（Ｃ−６’’），５４．７（Ｃ−１’），５４．５（Ｃ−１’），５４．４（Ｃ−１’），５３．９（Ｃ−１５），［５２．９，５２．５，５１．６，５１．５，５０．６，５０．０，４９．６，４８．９（ＣＨ２Ｎ）］，［２８．７，２８．４，２８．３，２８．３，２８．０，２５．６，２４．９（ＣＨ２）］，２２．５（Ｃ−１６），［２１．６，２１．０（Ｃ−６／１３）］
【０１３４】
サイクラムＸを１０３Ｐｄにより標識化するための手順
【化４１】
2017530131.tif 000042
１０３Ｐｄ（ＮＨ３）４Ｃｌ２を水（１５０ｕＬ）（約ｐＨ５）中に溶解し、５ＭのＮａＯＨ（４ｕＬ）によりｐＨを１０〜１１に調整した。サイクラム３６（５０ｕＬ、０．４５０ｍｇ）を１０３Ｐｄ（ＮＨ３）４Ｃｌ２溶液に添加し、混合物を８０℃で３０分間加熱した。次に、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｘｔｅｎｄ  Ｃ−１８  ５ｕｍ、４．６ｘ２５０ｍｍカラムおよびＲａｙｔｅｓｔ  Ｇａｂｉ  Ｓｔａｒ  Ｇａｍｍａ検出器を装着したＨＰＬＣへの注入により反応溶液（２０ｕＬ）を分析し、Ａ：０．０１Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ９．５、Ｂ：メタノールの移動相系を用いて、流速０．８ｍＬ／分で勾配溶離（０分  Ａ：Ｂ＝９５：５；２分  Ａ：Ｂ＝８０：２０；４分  Ａ：Ｂ＝５０：５０；１０分  Ａ：Ｂ＝０：１００）において実行して分析した。遊離金属は１．３５分の保持時間で溶出し、標識化生成物は６．６分の保持時間を有した。
【０１３５】
実施例８：放射標識化−１０３Ｐｄ配位の原理の証明のためのサイクラムプロコンジュゲート２７の放射標識化
【化４２】
2017530131.tif 000043
イオン交換カラムにおける１０３Ｐｄ精製から得られた１０３Ｐｄ（ＮＨ３）４Ｃｌ２画分（３２ＭＢｑ）を、ｍｉｌｌｉＱ水（２００ｕＬ）（約ｐＨ４）中に溶解した。サイクラム２７（１００ｕＬ、１．０ｍｇ）をバイアル中の１０３Ｐｄ（ＮＨ３）４Ｃｌ２溶液（１００ｕＬ）に添加し、混合物を８５℃で３０分間加熱した。次に、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｘｔｅｎｄ  Ｃ−１８  ５ｕｍ、４．６ｘ２５０ｍｍカラムおよびＲａｙｔｅｓｔ  Ｇａｂｉ  Ｓｔａｒ  Ｇａｍｍａ検出器を装着したＨＰＬＣへの注入により反応溶液（２０ｕＬ）を分析し、Ａ：０．０１Ｍ酢酸アンモニウムｐＨ９．５、Ｂ：メタノールの移動相系を用いて、流速０．８ｍＬ／分で勾配溶離（０分  Ａ：Ｂ＝９５：５；２分  Ａ：Ｂ＝８０：２０；４分  Ａ：Ｂ＝５０：５０；１０分  Ａ：Ｂ＝０：１００）において実行して分析した。遊離金属は１．３５分の保持時間で溶出し、標識化生成物は７．９分の保持時間を有した。
【０１３６】
実施例９：アミンのマレイミド部分への転換
Ｎ−（メトキシカルボニル）マレイミド（３７）
【化４３】
2017530131.tif 000044
ＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）中のマレイミド（１．００ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）およびＮ−メチルモルホリン（１．２４ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃でクロロギ酸メチル（０．８７ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ）をゆっくり添加し、１時間攪拌した。セライトパッドによるろ過によって沈殿物を分離し、ろ液を真空で濃縮した。ヘキサン：ＣＨ２Ｃｌ２で粗製油を再結晶させることを試みたが、結晶化は生じなかった。粗生成物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中に再溶解させ、シリカ上に吸着させ、カラムクロマトグラフィ（Ｈｅｘ：ＥｔＯＡｃ  ６：４）を用いて精製して、白色固体を得た（１．０７ｇ、６７％）。
δＨ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）：６．８３（２Ｈ，ｓ，ＣＨ−３／４），３．９４（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３−２’）
δＣ（ＣＤＣｌ３，１００ＭＨｚ）：１６５．６（Ｃ−２／５），１４８．１（Ｃ−１’），１３２．３（Ｃ−３／４），５４．２（Ｃ−２’）
【０１３７】
Ｎ−１０−（β−Ｄ−グルコピラノース−１−イル）デシル−マレイミド（３８）
【化４４】
2017530131.tif 000045
ジオキサン（０．７５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（ａｑ）（１．５ｍＬ）中の（１０−アミノデシル）β−Ｄ−グルコピラノシド（０．０１５ｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｎ−（メトキシカルボニル）マレイミド（３７）（０．０１４ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応を１時間攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）により反応を停止させた。有機相を分離し、水相をＥｔＯＡｃ（３ｘ１０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させた。残渣をシリカ上に吸着させ、カラムクロマトグラフィ（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）により精製した。表題の化合物を透明の油として得た（０．０１１ｇ、６０％）。Ｒｆ＝０．１５（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ  ９：１）。
δＨ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）：６．７９（２Ｈ，ｓ，３’／４’），４．２４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−１’’），３．９３−３．８４（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’ａ／Ｈ−１０ａ），３．６９−３．６４（１Ｈ，ｍ，Ｈ−６’’ｂ），３．５７−３．５０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝６．６，９．６Ｈｚ，Ｈ−１０ｂ），３．４８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−１），３．３８−３．２２（３Ｈ，ｍ，Ｈ−３’’／４’’／５’’），３．１９−３．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ−２’’），１．６４−１．５４（４Ｈ，ｍ，Ｈ−２／９），１．４２−１．２８（１２Ｈ，ｍ，ＡｌｋＣＨ２）．δＣ（ＣＤ３ＯＤ，１００ＭＨｚ）：１７２．６（Ｃ−２’／５’），１３５．３（Ｃ−３’／４’），１０４．４（Ｃ−１’’），７８．２（Ｃ−３’’），７７．９（Ｃ−２’’），７５．１（Ｃ−５’’），７１．７（Ｃ−１０），７０．９（Ｃ−４’’），６２．８（Ｃ−６’’），３８．５（Ｃ−１），３０．８（Ｃ−２），３０．５（ｘ３），３０．１，２９．４，２７．７，２７．０（ＣＨ２Ａｌｋ）
【０１３８】
実施例１０：アルブミン担体への接続のためのマレイミド部分のプロコンジュゲートへの挿入
マレイミド部分を有する切断不能なリンカープロコンジュゲートの合成
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−（二酢酸）−８−［１０−マレイミドデシル］−１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（３９）
【化４５】
2017530131.tif 000046
ジオキサン（０．７５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（ａｑ）（１．５ｍＬ）中のサイクラム２７（０．０１５ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｎ−（メトキシカルボニル）マレイミド（３７）（０．００８ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を室温で添加する。反応を１時間攪拌し、その後、０．２５ＭのＨＣｌ（５ｍＬ）により反応を停止させる。水相をＥｔＯＨ：ＣＨＣｌ３（２：１）（５ｘ５ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させて、生成物を油として得る。
【０１３９】
マレイミド部分を有する切断可能なリンカープロコンジュゲートの合成
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−（二酢酸）−８−［３−（（マレイミドデシル）ジスルファニル）プロピル］−１、４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（４０）
【化４６】
2017530131.tif 000047
ジオキサン（０．７５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（ａｑ）（１．５ｍＬ）中のサイクラム３２（０．０１５ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、Ｎ−（メトキシカルボニル）マレイミド（３７）（０．００８ｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を室温で添加する。反応を１時間攪拌し、その後、０．２５ＭのＨＣｌ（５ｍＬ）により反応を停止させる。水相をＥｔＯＨ：ＣＨＣｌ３（２：１）（５ｘ５ｍＬ）で抽出する。有機層を合わせ、乾燥させ、ろ過し、溶媒を真空下で蒸発させて、生成物を油として得る。
【０１４０】
１−［１０−（β，Ｄ−グルコピラノース−１−イル）］−４，１１−（二酢酸）−８−［３−（（マレイミドプロピル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）プロピル））ジスルファニル）プロピル］−１、４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン（４１）
【化４７】
2017530131.tif 000048
ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中のジイソプロピエチルアミン（ｄｉｉｓｏｐｒｏｐｙｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ）（０．００１３ｇ、０．０１ｍｍｏｌ）、サイクラム３３（０．０１５ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）および触媒ヨウ化銅（０．２当量）の攪拌溶液に、３−アジドプロピル−１−マレイミド（０．００２ｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を室温で添加する。反応を２時間攪拌し、その後、０．２５ＭのＨＣｌ（１ｍＬ）により反応を停止させる。全ての溶媒を真空下で蒸発させ、残渣を０．２５ＭのＨＣｌ（２ｍｌ）中に再溶解させた後、ＥｔＯＨ：ＣＨＣｌ３（２：１）（５ｘ３ｍＬ）により生成物を抽出する。有機抽出物を合わせ、乾燥させ、ろ過し、濃縮して表題の化合物を得る。
【０１４１】
実施例１１：マレイミド官能基化化合物のアルブミンへの取付け
アルブミンとマレイミド−グリコシド３８との反応
ＢＳＡ（０．０１６ｇ、０．２４ｕｍｏｌ）および３８（０．００１ｇ、２．４ｕｍｏｌ）をそれぞれ１ｘＰＢＳ（１ｍＬ）中に溶解させることによって、ＢＳＡおよび３８の対照溶液を作った。Ａ：ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）およびＢ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）（３０分にわたって０〜６０％のＡ）による勾配溶離におけるＨＰＬＣによって、２０ｕＬのそれぞれの対照溶液を分析した。ＨＰＬＣ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ−１８（４．６ｘ１５０ｍｍ  ５ｕｍ）カラムを用いるＡｇｉｌｅｎｔ  １２２０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＬＣにおいて行った。次に、対照溶液を３７℃で２４時間加熱し、同じ方法を用いてＨＰＬＣにより再分析した。
ＢＳＡおよび３８の新しい溶液を上記のように調製し、３７℃で加熱することによりエッペンドルフバイアル内で一緒に反応させた。５分後、上記と同じ方法を用いて溶液のサンプルをＨＰＬＣにより分析した。
【０１４２】
アルブミンとマレイミド−プロコンジュゲート３９との反応
ＢＳＡ（０．００７ｇ、０．１１ｕｍｏｌ）および３９（０．００１ｇ、１．１ｕｍｏｌ）をそれぞれ１ｘＰＢＳ（１ｍＬ）中に溶解させることによって、ＢＳＡおよび３９の対照溶液を作った。Ａ：ＣＨ３ＣＮ（０．１％ＴＦＡ）およびＢ：Ｈ２Ｏ（０．１％ＴＦＡ）（３０分にわたって０〜６０％のＡ）による勾配溶離におけるＨＰＬＣによって、２０ｕＬのそれぞれの対照溶液を分析した。ＨＰＬＣ分析は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｐｌｕｓ  Ｃ−１８（４．６ｘ１５０ｍｍ  ５ｕｍ）カラムを用いるＡｇｉｌｅｎｔ  １２２０  Ｉｎｆｉｎｉｔｙ  ＬＣにおいて行った。次に、対照溶液を３７℃で２４時間加熱し、同じ方法を用いてＨＰＬＣにより再分析した。
ＢＳＡおよび３９の新しい溶液を上記のように調製し、３７℃で加熱することによりエッペンドルフバイアル内で一緒に反応させた。５分後、上記と同じ方法を用いて溶液のサンプルをＨＰＬＣにより分析した。
【配列表】
2017530131000001.app
【国際調査報告】
2017530131.tif 000049
2017530131.tif 000050
2017530131.tif 000051
2017530131.tif 000052
2017530131.tif 000053
2017530131.tif 000054
2017530131.tif 000055
2017530131.tif 000056
2017530131.tif 000057