(57)【要約】  本発明は、皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径の低減のため、光防護剤として、および／または皮膚保護機能の改善のために人間の皮膚に塗布するための、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルを含む局所用組成物の化粧への使用に関する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径を低減するため、しわの出現を低減するため、光防護剤として特に皮膚の光損傷および光老化の徴候を低減するため、および／または皮膚保護機能の改善のために人間の皮膚に塗布するための、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルを含む局所用組成物の化粧への使用。
【請求項２】
前記皮膚の状態および外観の改善が皮膚の汗孔径の低減およびしわの出現の低減から選択される、請求項１に記載の化粧への使用。
【請求項３】
前記皮膚の状態および外観の改善がしわの出現の低減から選択される、請求項１に記載の化粧への使用。
【請求項４】
前記皮膚の状態および外観の改善が皮膚の光損傷および光老化の徴候の低減から選択される、請求項１に記載の化粧への使用。
【請求項５】
前記局所用組成物がレチノイドをさらに含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化粧への使用。
【請求項６】
前記レチノイドが、レチニルアセテート、フェニルブチレート、プロピオネート、オクタノエート、ラウレート、パルミテート、オレエート、リノレエート；レチニルアルキルカーボネート；レチノキシトリメチルシラン；（すべてトランスの）レチナールもしくはそのアセタール；またはメトキシＰＥＧ−１２レチナミドである、請求項５に記載の化粧への使用。
【請求項７】
１０−ヒドロキシステアリン酸の量が前記組成物全体の約０．０００１〜約５０重量％である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化粧への使用。
【請求項８】
１０−ヒドロキシステアリン酸の量が前記組成物全体の０．０１重量％〜１重量％である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化粧への使用。
【請求項９】
前記レチノイドまたはその誘導体の量が前記組成物全体の約０．００１〜約５０重量％である、請求項５〜８のいずれか一項に記載の化粧への使用。
【請求項１０】
前記１０−ヒドロキシステアリン酸と前記レチノイドまたはその誘導体との比率が重量で約１０００：１〜約１：１０００である、請求項５〜９のいずれか一項に記載の化粧への使用。
【請求項１１】
前記１０−ヒドロキシステアリン酸と前記レチノイドまたはその誘導体との比率が重量で約３０：１〜約１：３０である、請求項５〜９のいずれか一項に記載の化粧への使用。
【請求項１２】
皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径を低減するため、しわの出現を低減するため、光防護剤として皮膚の光損傷または光老化の徴候を低減するため、および皮膚保護機能の改善のための美容処置の方法であって、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルを含む化粧用組成物を人間の皮膚に塗布することを含む方法。
【請求項１３】
１０−ヒドロキシステアリン酸の量が前記組成物全体の０．０１重量％〜１重量％である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記化粧用組成物がレチノイドをさらに含む、請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記１０−ヒドロキシステアリン酸と前記レチノイドまたはその誘導体との比率が重量で約３０：１〜約１：３０である、請求項１４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
本発明は、皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤（ａｎｔｉ−ｗｒｉｎｋｌｅ）として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径の低減のため、光防護剤として特に皮膚の光損傷および光老化の徴候を低減するため、および／または皮膚保護機能の改善のために人間の皮膚に塗布するための、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルを含む局所用組成物の化粧への使用に関する。
【０００２】
［発明の背景］
人間の皮膚（特に顔の皮膚）は、過酷な条件（温度、湿度測定、紫外線などの外部条件）に絶えずさらされており、それらはすべて自然の皮膚老化過程を加速させることになる。近年、皮膚の外見および状態を改善するための方法が求められており、そのため、使用上安全であり異なった作用方式で相乗効果的に作用する、新しくかつより効果的な物質に対する要望が著しく増大してきた。一例として、欧州特許第１９３１３２９号明細書は、健康な皮膚の生理的恒常性が衰えることによって生じる任意の症状を治療または防止する点で化粧効果を有しうる広範囲のヒドロキシ脂肪酸を開示しており、それらのヒドロキシ脂肪酸は、発毛の促進および脱毛からの保護のためのものでもある。しかし、こうした化合物はいずれも商品化されていない。それは、人間の皮膚に塗布しても化粧効果が限られていること、そうした化合物の一部については商業生産を確立するのが難しいこと、および有効成分が可溶性のままである商品形態にするのが難しいことが理由である。
【０００３】
［発明の概要］
本発明が解決する課題は、使用の際に安全であり、複数の作用方式によってアンチエージング化粧成分として作用し、工業規模で容易に製造でき、かつ化粧用組成物中に可溶成分として容易に配合できる、ヒドロキシ脂肪酸を見出すことである。
【０００４】
驚くべきことに、本発明者らは、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルが上述の問題のすべてを解決し、かつ皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径の低減のため、光防護剤として特に皮膚の光損傷および光老化の徴候を低減するため、および皮膚保護機能の改善のために人間の皮膚に塗布するための局所用組成物として使用できることを見出した。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】３型コラーゲンの比誘導に関する対照と１０−ＨＳＡとの比較を示す。
【０００６】
［発明の詳細な説明］
したがって、１つの態様では、本発明は、皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径の低減のため、光防護剤として特に皮膚の光損傷および光老化の徴候を低減するため、および皮膚保護機能の改善のために人間の皮膚に塗布するための、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルを含む局所用組成物の化粧への使用に関する。
【０００７】
１０−ヒドロキシステアリン酸（ＣＡＳ：６３８−２６−６）は以下の式を有する。
【化１】
2017530975.tif 000002
両方の鏡像異性体が本発明に従って使用されうるが、好ましい鏡像異性型は（Ｒ）−１０−ヒドロキシステアリン酸である。
【０００８】
エステルは、好ましくはアルキルエステルであり、ここで「アルキル」という用語は直鎖および分岐のアルキル基を包含する。すなわち、その「Ｃ１〜４アルキル」は、Ｃ１〜４直鎖アルキル（メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル）およびＣ３〜４分岐アルキル（イソプロピル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル）を包含する。本発明によるもっとも好ましいアルキエステルはＣ１〜３直鎖アルキルである。
【０００９】
塩は、皮膚に対して毒性がなく、かつ／またはアレルギー性反応を引き起こさない任意の有機陽イオンおよび任意の金属陽イオンを意味する、化粧的に許容される任意の陽イオンによって形成されうる。そのような陽イオンの例としては、アンモニウム塩およびアルキルアンモニウム塩、アルカリ陽イオン（ナトリウムイオンおよびカリウムイオンなど）およびアルカリ土類金属の陽イオン（カルシウムイオンおよびマグネシウムイオンなど）がある。
【００１０】
さらに具体的には、本発明は、皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径の低減のため、光防護剤として特に皮膚の光損傷および光老化の徴候を低減するため、および皮膚保護機能の改善のための、１０−ヒドロキシステアリン酸、その塩またはエステルおよび任意選択的に１種のレチノイドを含む化粧用組成物の使用に関する。
【００１１】
本発明に従って使用するレチノイドは、例えば、レチノイン酸またはレチノールおよび異性体（例えば、それらの９−、１１−または１３−シス異性体）、ならびにそれらの誘導体であり、誘導体には、レチニルエステル（アセテート、フェニルブチレート、プロパノエート、ラウレート、パルミテート、オレエート、リノレートなど）；またはレチニルアルキルカーボネート；またはエーテル（レチノキシトリメチルシランなど）；または（すべてトランスの）レチナールもしくはそのアセタール；またはレチノイン酸もしくはそのアミド（メトキシＰＥＧ−１２レチナミド（「ＰＥＧ−１２」＝−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−）１２）など）が含まれる。
【００１２】
皮膚の状態および外観の改善は、しわまたは乾燥皮膚または敏感肌の治療または防止、表皮を厚くすること、皮膚細胞の老化の抑制、光損傷の防止または治療、酸化ストレス症状（ｏｘｉｄａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｐｈｅｎｏｍｅｎａ）の防止または治療、脂肪沈着の防止または治療、セラミドおよび脂質の合成における障害の防止および治療、過剰皮脂生成の防止、皮膚中のマトリクスメタロプロテアーゼまたは他のプロテアーゼの活性の低減、炎症性皮膚疾患の治療および防止を含む。
【００１３】
さらに別の態様では、本発明は、皮膚の状態および外観を改善するため、さらに詳細には、抗しわ剤として均一な皮膚の色合いを促進するため、皮膚の汗孔径の低減のため、光防護剤として特に皮膚の光損傷および光老化の徴候を低減するため、および皮膚保護機能を改善するための化粧方法に関する。
【００１４】
本発明のすべての実施形態において、皮膚状態は、好ましくは、皮膚の汗孔径の低減およびしわの出現の低減、またはしわの出現の低減、または皮膚の光損傷および光老化の徴候の低減から選択される。
【００１５】
本発明の好ましい実施形態は、しわを治療または防止する方法であって、上に示した有効量の１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルと、任意選択的にかつ好ましくはレチノイドとを、そのような効果を必要としている人に局所的に投与するステップを含む方法である。
【００１６】
本発明のさらなる目的は、色素異常症の防止または治療のため、および／または均一な皮膚の色合いを提供するための方法であって、そうした防止または治療を必要とする人に、上に定義した本発明による有効量の１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルを局所的に投与するステップを含み、組成物がレチノイドを含む、方法である。
【００１７】
本発明の他の目的は、色素沈着を促進する方法であって、そのような促進を必要とする人に、有効量の上に定義した本発明による１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルを局所的に投与するステップと日焼け促進剤（ｔａｎｎｉｎｇ  ａｃｔｉｖｅ）を局所的に投与するステップとを含み、その日焼け促進剤は、有効量の本発明による組成物を投与する前、その後、それと同時に投与することができ、その組成物中にいかなるレチノイドも基本的に存在しない、方法である。
【００１８】
「有効量」という用語は、生理学的効果をもたらすのに必要な量を表す。生理学的効果は、１回の塗布量または繰り返し塗布することによって得ることができる。投与量は、当然ながら、上に示した定義および好ましい条件を有する脂肪酸もしくは塩、エステルまたはアミドを任意選択的にレチノイドと組み合わせて含む特定の組成物の生理学的特性ならびにその投与方法および経路；投与対象者の年齢、健康状態および体重；症状の性質および程度；併用治療の種類；治療の頻度；および所望の効果などの周知の因子によって異なりうるものであり、当業者によって調節されうる。
【００１９】
上記のように、付加的または相乗的な化粧効果をもたらすレチノイドがさらに存在してもよい。２種類以上のレチノイドが存在してもよい。レチノイドが本発明の組成物中に含まれる場合、（上に示した定義および好ましい条件を有する）１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルとレチノイドとの比率は、重量で好適には約１０００：１〜１：１０００、より好ましくは約１００：１〜１：１００、特に約３０：１〜１：３０である。上に定義した脂肪酸もしくはその塩またはエステルは、人間の皮膚にすでに存在するレチノイドと一緒になって付加的または相乗的な効果も表す。
【００２０】
本発明で提供される組成物では、上に示した定義および好ましい条件を有する１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルの量は、好適には、組成物全体の約０．０００１〜約５０％、好ましくは約０．００１〜約２０重量％である。より好ましくは、上に定義した１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルは、組成物中に約０．０１重量％〜約１重量％の量で、もっとも好ましくは約０．５重量％の量で含まれる。レチノイドまたはそれらの誘導体が存在する場合、後者の量は、組成物の総量に対して好適には約０．０００１〜約５０重量％、好ましくは約０．００１〜約２０重量％、もっとも好ましくは約０．０１〜約１重量％の量、特に約０．１重量％の量である。本発明によれば、好ましいのは、上に示した定義および好ましい条件を有する１０−ヒドロキシステアリン酸もしくは塩またはエステルを組成物の総量に対して約０．５重量％の量で含み、レチノイドまたはその誘導体を約０．１重量％の量で含む組成物である。
【００２１】
本明細書で使用される「化粧用組成物」という用語は、例えば、人間の皮膚を手入れするための局所用組成物を表す。Ｒｏｅｍｐｐ  Ｌｅｘｉｋｏｎ  Ｃｈｅｍｉｅ，１０ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ  １９９７（Ｇｅｏｒｇ  Ｔｈｉｅｍｅ  Ｖｅｒｌａｇ  Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，ＮｅｗＹｏｒｋ）の「Ｋｏｓｍｅｔｉｋａ」という見出しも参照されたい。
【００２２】
局所用組成物の種類および局所用組成物の調製について、またさらなる好適な添加剤については、関係する文献、例えば、Ｎｏｖａｋ  Ｇ．Ａ．，Ｄｉｅ  ｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅｎ  Ｐｒａｅｐａｒａｔｅ−Ｂａｎｄ  ２，Ｄｉｅ  ｋｏｓｍｅｔｉｓｃｈｅｎ  Ｐｒａｅｐａｒａｔｅ−Ｒｅｚｅｐｔｕｒ，Ｒｏｈｓｔｏｆｆｅ，ｗｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅ  Ｇｒｕｎｄｌａｇｅｎ（Ｖｅｒｌａｇ  ｆｕｅｒ  Ｃｈｅｍ．Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ  Ｈ．Ｚｉｏｌｋｏｗｓｋｉ  ＫＧ，Ａｕｇｓｂｕｒｇ）を参照することができる。
【００２３】
皮膚に塗布する本発明による化粧用組成物の量は、組成物中の有効成分の濃度ならびに所望の化粧効果および薬剤効果によって異なる。例えば、塗布は、クリームが皮膚に塗布されるようなものでありうる。クリームは、通常、２ｍｇ（クリーム）／ｃｍ２（皮膚）の量で塗布する。しかし、皮膚に塗布する組成物の量は、決定的に重要ではなく、ある特定量の組成物の塗布では、所望の効果を得ることができない場合、例えば組成物をさらに塗布するか、または有効成分をより多く含む組成物を塗布することにより、さらに高い濃度の有効成分を使用できる。
【００２４】
本発明による化粧用組成物は、好ましくは少なくとも１日に１回（例えば、１日に２回または３回）施される。通常、所望の効果が現れるまでに少なくとも２週間かかる。しかし、所望の効果が十分に最大限に発揮されるまでに数週間または数ヶ月かかることがある。
【００２５】
本発明の組成物は、上記の定義および好ましい条件を有する１０−ヒドロキシステアリン酸もしくはその塩またはエステルを、化粧的に許容される賦形剤または希釈剤と一緒に含む。何も述べられていない場合、以下に述べる賦形剤、添加剤、希釈剤などは化粧用組成物に適したものである。何も述べられていない場合、本出願において、部およびパーセントは重量に基づいており、組成物の全重量に対するものである。
【００２６】
好ましくは、本発明の化粧用組成物は、溶剤または脂肪性物質の懸濁液または分散液の形態の局所用組成物、あるいはエマルションまたはマイクロエマルション（特に、Ｏ／ＷまたはＷ／Ｏ型、Ｏ／Ｗ／ＯまたはＷ／Ｏ／Ｗ型）、ＰＥＴ−エマルション、多重エマルション、ピカリングエマルション、ヒドロゲル、アルコールジェル、リポジェル、単相もしくは多相溶液または気泡分散液の形態の局所用組成物および他の通常の組成物であり、これらは、ペンで施すか、またはマスクもしくはスプレーとして施すこともできる。エマルションは、陰イオン、非イオン、陽イオンまたは両性の界面活性剤を含むこともできる。
【００２７】
本発明による好ましい組成物は、スキンケア配合物、ヘアケア配合物、装飾配合物、光保護配合物および機能性配合物である。
【００２８】
スキンケア配合物の例としては、特に、ボディーオイル、ボディーローション、ボディージェル、トリートメントクリーム、皮膚保護軟膏剤、シェービング配合物（フォームまたはジェルなど）、スキンパウダー（ベビーパウダーなど）、保湿ジェル、保湿スプレー、リバイタライジングボディースプレー、セルライトジェル、およびピーリング配合物がある。
【００２９】
ヘアケア配合物の例としては、例えば、シャンプー形式の毛髪洗浄配合物、ヘアコンディショナー、ヘアケア配合物（例えば、トリートメント配合物、プレトリートメント配合物、ヘアトニック、スタイリングクリーム、スタイルジェル、ポマード、ヘアリンス、トリートメントパック、強力ヘアトリートメント）、ストレートヘア配合物、液体整髪配合物、毛髪フォームおよびヘアスプレーおよびラッカー、パーマ剤、毛髪ゲル、毛髪固定剤および毛髪の着色剤またはブリーチ剤がある。
【００３０】
装飾配合物の例としては、特に、口紅、アイシャドー、マスカラ、ドライメーキャップおよびモイストメーキャップ、ほお紅、パウダー、ならびに日焼けローションがある。
【００３１】
機能性配合物の例には、ホルモン配合物、ビタミン配合物、植物抽出物配合物、老化防止配合物、および抗菌性（抗菌性または抗真菌性）配合物など、有効成分を含む化粧配合物または医薬配合物があるが、これらに限定されない。
【００３２】
本発明に従った化粧用組成物は、液体、ローション、濃化ローション、ジェル、クリーム、乳液、軟膏、ペースト、パウダー、メーキャップ、または固体チューブスティックの形態であってよく、また任意選択的にエアロゾルとしてパッケージ化されていれていてもよく、ムース（エアロゾルムースなど）、フォームまたはスプレーフォーム、スプレー、スティック、ジェル、プラスター、パウダー、クレンザー、ソープまたはエアロゾルまたはワイプ（ｗｉｐｅ）の形態で提供されうる。
【００３３】
本発明の組成物は、通常の化粧補助剤または医薬補助剤および添加剤も含むことができ、そうした補助剤および添加剤には、防腐剤／酸化防止剤、脂肪性物質／油、水、有機溶剤、シリコーン、増粘剤、柔軟剤、乳化剤、日焼け止め剤、消泡剤、保湿剤、芳香剤、界面活性剤、充填剤、金属イオン遮閉剤、陰イオン、陽イオン、非イオンもしくは両性のポリマーまたはそれらの混合物、噴射剤、酸性化剤または塩基性化剤、染料、着色剤、顔料またはナノ顔料（例えば、紫外線放射を物理的に遮断することによって光防護効果をもたらすのに適したもの）、あるいは化粧品または医薬品に通常配合される他の任意の成分がある。
【００３４】
一般には、さらなる量の酸化防止剤／防腐剤が好ましい。本発明に基づき、化粧品または医薬品に通常配合される公知のすべての酸化防止剤を使用できる。特に好ましいのは、アミノ酸（例えば、グリシン、ヒスチジン、チロシン、トリプトファン）およびその誘導体、イミダゾール（例えば、ウロカニン酸）および誘導体、ペプチド（Ｄ，Ｌ−カルノシン、Ｄ−カルノシン、Ｌ−カルノシンおよび誘導体（例えば、アンセリン）など）、カロチノイド、カロテン（例えば、α−カロテン、β−カロテン、リコピン）および誘導体、クロロゲン酸および誘導体、リポ酸および誘導体（例えば、ジヒドロリポ酸）、アウロチオグルコース、プロピルチオウラシルおよび他のチオール（例えば、チオレドキシン、グルタチオン、システイン、シスチン、シスタミンおよびそのグリコシル−、Ｎ−アセチル−、メチル−、エチル−、プロピル−、アミル−、ブチル−およびラウリル−、パルミトイル−；オレイル−、ｙ−リノレイル−、コレステリル−およびグリセリルエステル）およびその塩、ジラウリルチオジプロピオネート、ジステアリルチオジプロピオネート、チオジプロピオン酸およびその誘導体（エステル、エーテル、ペプチド、脂質、ヌクレオチド、ヌクレオシドおよび塩）ならびにスルホキシイミン化合物（ブチオニンスルホキシイミン、ホモシステインスルホキシイミン、ブチオニンスルホン、ペンタ−、ヘキサ−、ヘプタチオニンスルホキシイミンなど）（非常に少ない適合量（例えば、ｐｍｏｌ〜μｍｏｌ／ｋｑ））、さらに（金属）−キレート化剤（α−ヒドロキシ脂肪酸、パルミチン酸、フィチン酸、ラクトフェリンなど）、β−ヒドロキシ酸（クエン酸、乳酸、リンゴ酸など）、フミン酸、没食子酸、ニンニク抽出物、ビリルビン、ビリベルジン、ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびその誘導体、不飽和脂肪酸およびその誘導体（γ−リノール酸、リノール酸、オレイン酸など）、葉酸およびその誘導体、ユビキノンおよびユビキノールおよびそれらの誘導体、ビタミンＣおよび誘導体（パルミチン酸アスコルビルおよびテトラヘキシルデカン酸アスコルビル、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸リン酸ナトリウム、Ｎａ−アスコルビルアセテートなど）、トコフェロールおよび誘導体（ビタミン−Ｅ−アセテートなど）、天然または合成ビタミンＥの混合物、ビタミンＡおよび誘導体（ビタミン−Ａ−パルミテートおよび−アセテート）ならびにコニフェリルベンゾエート、ルチン酸および誘導体、α−グリコシルルチン、フェルラ酸、フルフリルイデングルシトール、カルノシン、ブチルヒドロキシトルエン、ブチルオキシアニソール、トリヒドロキシブチロフェノン、尿素およびその誘導体、マンノースおよび誘導体、亜鉛および誘導体（例えば、ＺｎＯ、ＺｎＳ０４）、セレンおよび誘導体（例えば、セレノメチオニン）、スチルベンおよび誘導体（スチルベノキシド、トランス−スチルベノキシドなど）および名前が挙げられている有効成分の好適な誘導体（塩、エステル、エーテル、糖、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ペプチドおよび脂質）からなる群から選択される酸化防止剤である。１種または複数種の防腐剤／酸化防止剤が、本発明の組成物の全重量に対して約０．０１重量％〜約１０���量％の量で存在してもよい。好ましくは、１種または複数種の防腐剤／酸化防止剤は、約０．１重量％〜約１重量％の量で存在する。
【００３５】
典型的には、局所用配合物は、界面活性成分（乳化剤、可溶化剤のようなもの）なども含む。乳化剤により、２種以上の不混和性成分が均一に混ざり合うことが可能になる。さらに、乳化剤は、組成物を安定化させる作用がある。Ｏ／Ｗ、Ｗ／Ｏ、Ｏ／Ｗ／ＯまたはＷ／Ｏ／Ｗエマルション／マイクロエマルションを形成するために本発明で使用してよい乳化剤としては、オレイン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、ジイソステアリン酸ポリグリセリル−３、オレイン酸／イソステアリン酸のポリグリセロールエステル、ポリグリセリル−６ヘキサリシノレート、オレイン酸ポリグリセリル−４、オレイン酸ポリグリセリル−４／ヤシ油脂肪酸ＰＥＧ−８プロピレングリコール、オレアミドＤＥＡ、ＴＥＡミリステート、ＴＥＡステアレート、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、カリウムラウレート、カリウムリシノレエート、ヤシ油脂肪酸ナトリウム、牛脂脂肪酸ナトリウム、ヒマシ油脂肪酸カリウム、オレイン酸ナトリウム、およびそれらの混合物がある。さらなる好適な乳化剤は、リン酸エステルおよびその塩であり、それには、リン酸セチル（Ａｍｐｈｉｓｏｌ（登録商標）Ａ）、ジエタノールアミンリン酸セチル（Ａｍｐｈｉｓｏｌ（登録商標））、セチルリン酸カリウム（Ａｍｐｈｉｓｏｌ（登録商標）Ｋ）、オレイン酸グリセリルリン酸ナトリウム、水素化野菜グリセリドホスフェート（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｅｄ  ｖｅｇｅｔａｂｌｅ  ｇｌｙｃｅｒｉｄｅ  ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）およびそれらの混合物などがある。さらに、１種または複数種の合成ポリマーを乳化剤として使用してよい。例えば、ＰＶＰエイコセンコポリマー、アクリレート／Ｃ１０〜３０アルキルアクリレートクロスポリマー、アクリレート／ステアレス−２０メタクリレートコポリマー、ＰＥＧ−２２／ドデシルグリコールコポリマー、ＰＥＧ−４５／ドデシルグリコールコポリマー、およびそれらの混合物である。好ましい乳化剤は、リン酸セチル（Ａｍｐｈｉｓｏｌ（登録商標）Ａ）、ジエタノールアミンリン酸セチル（Ａｍｐｈｉｓｏｌ（登録商標））、セチルリン酸カリウム（Ａｍｐｈｉｓｏｌ（登録商標）Ｋ）、ＰＶＰエイコセンコポリマー、アクリレート／Ｃ１０〜３０アルキルアクリレートクロスポリマー、ＰＥＧ−２０イソステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタン、およびそれらの混合物である。１種または複数種の乳化剤が、総量で本発明の組成物の全重量に対して約０．０１重量％〜約２０重量％で存在する。好ましくは、約０．１重量％〜約１０重量％の乳化剤を使用する。
【００３６】
局所用組成物の脂質相は、有利には以下のものから選択できる：鉱油および鉱蝋；カプリル酸（ｃａｐｒｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）またはカプリル酸（ｃａｐｒｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）およびヒマシ油のトリグリセリドなどの油；油またはワックスおよび他の天然油または合成油（好ましい実施形態では、脂肪酸とアルコール（例えば、イソプロパノール、プロピレングリコール、グリセリン）とのエステル、または脂肪アルコールとカルボン酸または脂肪酸とのエステル；安息香酸アルキル；および／またはシリコーン油（ジメチルポリシロキサン、ジエチルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン、シクロメチコンおよびそれらの混合物など）。
【００３７】
本発明におけるエマルション、マイクロエマルション、オレオゲル、水分散液または脂肪分散液の油相に含めることができる例示的な脂質物質は、有利には、飽和および／または不飽和の直鎖または分岐アルキルカルボン酸（３〜３０個の炭素原子を有する）と飽和および／または不飽和の直鎖および／または分岐アルコール（３〜３０個の炭素原子を有する）とのエステル、ならびに芳香族カルボン酸と飽和および／または不飽和の直鎖または分岐アルコール（３〜３０個の炭素原子のもの）とのエステルから選択される。そうしたエステルは、有利には、オクチルパルミテート、オクチルココエート、オクチルイソステアレート、オクチルドデシルミリステート、セテアリルイソノナネート、イソプロピルミリステート、パルミチン酸イソプロピル、イソプロピルステアレート、イソプロピルオレエート、ｎ−ブチルステアレート、ｎ−ヘキシルラウレート、ｎ−デシルオレエート、イソオクチルステアレート、イソノニルステアレート、イソノニルイソノナネート、２−エチルヘキシルパルミテート、２−エチルヘキシルラウレート、２−ヘキシルデシルステアレート、２−オクチルドデシルパルミテート、ステアリルヘプタノエート、オレイルオレエート、オレイルエルケート、エルシルオレエート、エルシルエルケート、トリデシルステアレート、トリデシルトリメリテート、ならびにそうしたエステルの合成、半合成または天然の混合物（例えば、ホホバ油）から選択できる。
【００３８】
本発明の局所用組成物での使用に適した他の脂肪成分としては、レシチンおよび脂肪酸トリグリセリド（すなわち、飽和および／または不飽和の直鎖または分岐カルボン酸（８〜２４個の炭素原子、好ましくは１２〜１８個の炭素原子を有する）のトリグリセロールエステル）などの極性油類があり、その脂肪酸トリグリセリドは、好ましくは、合成、半合成または天然の油（例えば、ココグリセリル、オリーブ油、ヒマワリ油、ダイズ油、ピーナッツ油、セイヨウアブラナ種子油、甘扁桃油、パーム油、ヤシ油、ヒマシ油、水添ヒマシ油、小麦油、ブドウ種油、マカダミアナッツ油など）；無極性油類（直鎖および／または分岐の炭化水素およびワックス（例えば、鉱油、ワセリン（ペトロラタム）など）；パラフィン、スクワランおよびスクアレン、ポリオレフィン、水添ポリイソブテンおよびイソヘキサデカン（好ましいポリオレフィンはポリデセンである）；ジアルキルエーテル（ジカプリルイルエーテルなど）；直鎖または環状のシリコーン油（好ましくはシクロメチコン（オクタメチルシクロテトラシロキサン；セチルジメチコン、ヘキサメチルシクロトリシロキサン、ポリジメチルシロキサン、ポリ（メチルフェニルシロキサン）など）およびそれらの混合物から選択される。
【００３９】
本発明の局所用組成物中に有利に含めることができるさらに他の脂肪成分としては、イソエイコサン；ネオペンチルグリコールジヘプタノエート；ジ（カプリル酸／カプリン酸）プロピレングリコール；カプリル／カプリン／ジグリセリルサクシネート；（カプリル酸／カプリン酸）ブチレングリコール；Ｃ１２〜１３アルキルラクテート；ジ−Ｃ１２〜１３アルキルタルトレート；トリイソステアリン；ヘキサ（カプリル酸／カプリン酸）ジペンタエリトリチル；プロピレングリコールモノイソステアレート；トリカプリリン；ジメチルイソソルビドがある。特に、Ｃ１２〜１５アルキルベンゾエートと２−エチルヘキシルイソステアレートとの混合物、Ｃ１２〜１５アルキルベンゾエートとイソトリデシルイソノナノエートとの混合物、およびＣ１２〜１５アルキルベンゾエートと２−エチルヘキシルイソステアレートとイソトリデシルイソノナノエートの混合物を使用するのが有利である。
【００４０】
本発明の組成物の油性相は、自然の野菜または動物のろう（蜜ろう、中国ワックス、マルハナバチの蜜ろうおよび他の昆虫のろうなど）、ならびにシアバターおよびカカオ脂を含むこともできる。
【００４１】
水分を維持するかまたは皮膚に潤いを取り戻させるために、保湿剤を本発明の局所用組成物中に含めることができる。保護被覆を生じさせることによって皮膚から水が蒸発するのを防ぐ保湿剤は、皮膚軟化薬と呼ばれる。
【００４２】
さらに、皮膚軟化薬は、皮膚表面に対して軟化作用または鎮静作用を及ぼし、一般に局所使用には安全と見なされている。好ましい皮膚軟化薬としては、鉱油、ラノリン、ペトロラタム、（カプリン酸／カプリル酸）トリグリセルアルデヒド、コレステロール、シリコーン（ジメチコン、シクロメチコンなど）、扁桃油、ホホバ油、アボガド油、ヒマシ油、ゴマ油、ヒマワリ油、ヤシ油およびブドウ種油、カカオ脂、オリーブ油アロエ抽出物、脂肪酸（オレイン酸およびステアリン酸など）、脂肪アルコール（セチルアルコールおよびヘキサデシルアルコール（ＥＮＪＡＹ）など）、アジピン酸ジイソプロピル、ヒドロキシベンゾエートエステル、Ｃ９〜１５アルコールの安息香酸エステル、イソノナン酸イソノニル、エーテル（ポリオキシプロピレンブチルエーテルおよびポリオキシプロピレンセチルエーテルなど）、およびＣ１２〜１５アルキルベンゾエート、およびそれらの混合物がある。もっとも好ましい皮膚軟化薬は、ヒドロキシベンゾエートエステル、アロエベラ、Ｃ１２〜１５アルキルベンゾエート、およびそれらの混合物である。皮膚軟化薬は、組成物の全重量に対して約１重量％〜約２０重量％の量で存在する。皮膚軟化薬の好ましい量は、約２重量％〜約１５重量％、もっとも好ましくは約４重量％〜約１０重量％である。
【００４３】
水に結合し、それによって水を皮膚表面に保持する保湿剤は、湿潤剤と呼ばれる。グリセリン、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、乳酸、ピロリドンカルボン酸、尿素、リン脂質、コラーゲン、エラスチン、セラミド類、レシチンソルビトール、ＰＥＧ−４、およびそれらの混合物などの好適な湿潤剤を本発明の局所用組成物中に含めることができる。さらなる好適な保湿剤には、水溶性多糖類および／または水膨潤性多糖類および／または水をゲル化させる多糖類（ヒアルロン酸、キトサンおよび／またはフコースを多く含む多糖（これは、例えば、ＳＯＬＡＢＩＡ  ＳのＦｕｃｏｇｅｌ（登録商標）１０００（ＣＡＳ  Ｎｏ．１７８４６３−２３−５）として入手可能）など）のファミリーに属する高分子保湿剤がある。１種または複数種の湿潤剤は、任意選択的に、本発明の組成物中に約０．５重量％〜約８重量％、好ましくは約１重量％〜約５重量％で存在する。
【００４４】
本発明の好ましい局所用組成物の水性相は、通常の化粧用または医薬用添加物を含むことができ、その添加物としては、アルコール（特に、低級アルコール、好ましくはエタノールおよび／またはイソプロパノール、低級ジオールまたはポリオール）およびそれらのエーテル、好ましくはプロピレングリコール、グリセリン、エチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテルまたはエチレングリコールモノブチルエーテル、プロピレングリコールモノメチルエーテルまたはプロピレングリコールモノエチルエーテルまたはプロピレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテルまたはジエチレングリコールモノエチルエーテルおよび類似物、ポリマー、泡安定剤；電解質および特に１種または複数種の増粘剤などがある。
【００４５】
生成物の粘度を好適なものにするのに役立つ、本発明の配合物に使用してよい増粘剤としては、カルボマー、二酸化ケイ素、ケイ酸マグネシウムおよび／またはケイ酸アルミニウム、蜜ろう、ステアリン酸、ステアリルアルコール多糖類およびそれらの誘導体（キサンタンガム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアクリルアミド、アクリレートクロスポリマー、好ましくはカルボマー（ｃａｒｂｏｐｏｌｅ（登録商標）のタイプ９８０、９８１、１３８２、２９８４、５９８４の単独またはそれらの混合物など））がある。
【００４６】
成分（例えば、乳化剤または泡の形成剤（ｂｕｉｌｄｅｒ）／安定剤など）を中和するために本発明の組成物中に含めてもよい好適な中和剤としては、水酸化アルカリ（水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムなど）；有機塩基（ジエタノールアミン（ＤＥＡ）、トリエタノールアミン（ＴＥＡ）、アミノメチルプロパノール、およびそれらの混合物など）；アミノ酸（アルギニンおよびリジンなど）および任意の上述のものの任意の組合せがあるが、これらに限定されない。中和剤は、本発明の組成物中に約０．０１重量％〜約８重量％、好ましくは１重量％〜約５重量％の量で存在してよい。
【００４７】
疎水性の乳化剤の挙動を変化させるために、本発明の組成物中に電解質を加えることが必要なことがある。したがって、本発明のエマルション／マイクロエマルションは、好ましくは、陰イオンを含む１種または複数種の塩（塩化物、硫酸塩、炭酸塩、ホウ酸塩およびアルミン酸塩などがあるが、これらに限定されない）の電解質を含みうる。他の好適な電解質は、ラクテート、アセテート、安息香酸塩、プロピオネート、タルトレートおよびシトレート（これらに限定されない）などの有機陰イオンに基づくものでありうる。陽イオンとしては、好ましくは、アンモニウム、アルキルアンモニウム、アルカリ金属またはアルカリ土類金属、マグネシウムイオン、鉄イオンまたは亜鉛イオンが選択される。特に好ましい塩は、塩化カリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛およびそれらの混合物である。電解質は、本発明の組成物中に約０．０１重量％〜約８重量％の量で存在してよい。
【００４８】
本発明の組成物を調製するための本発明によれば、有効成分はそれ自体を使用することができ、またはカプセル化形態（例えば、リポソーム形態）で使用することができる。リポソームは、好ましくはレシチンで形成される（ステロールまたは植物ステロールを加えても加えなくてもよい）。有効成分のカプセル化は、単独のものでも、または他の有効成分と一緒にしてもよい。上に記載した好ましい条件および定義を有する脂肪酸もしくはその塩、エステルまたはアミドのみ、あるいはレチノイドのみをカプセル化することができるが、両方の成分を一緒にまたは別々のカプセルにカプセル化することもできる。
【００４９】
他の実施形態としては、劣化からレチノイドを保護することを目的とした、または制御送達のための固体または半固体カプセル剤がある。カプセルは、レチノイドを単独で、または上に記載した好ましい条件および定義を有する脂肪酸もしくはその塩、エステルまたはアミドと一緒に含むことができる。好適なカプセル化技術は、例えば、国際公開第０１８０８２３号パンフレット、国際公開第９９０３４５０号パンフレット、国際公開第９３１７７８４号パンフレットまたはＦｒａｇｒａｎｃｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ（２００１），２９（２），８３−９０に記載されている。
【００５０】
本発明の組成物は、特に、にきび、しわ、すじ、萎縮症、炎症を防止または低減するための１種または複数種の付加的な薬剤的または化粧的に有効な成分、ならびに局所麻酔薬、人工のなめし剤および促進剤、抗微生物剤、抗真菌剤および日焼け止め添加剤（これらに限定されない）も含むことができる。
【００５１】
そのような成分の例として、ペプチド（例えば、Ｍａｔｒｉｘｙｌ（商標）［ペンタペプチド誘導体］）、オリゴペプチド、ワックスをベースにした合成ペプチド（例えば、パルミチン酸オクチルおよびトリベヘニンおよびイソステアリン酸ソルビタンおよびパルミトイル−オリゴペプチド）、グリセロール、尿素、グアニジン（例えば、アミノグアニジン）；ビタミンおよびその誘導体（ビタミンＣ（アスコルビン酸）、ビタミンＡ（例えば、レチノイド誘導体（パルミチン酸レチニルまたはプロピオン酸レチノールなど）、ビタミンＥ（例えば、酢酸トコフェロール）、ビタミンＢ３（例えば、ナイアシンアミド）およびビタミンＢ５（例えば、パンテノール）、ビタミンＢ６およびビタミンＢ１２、ビオチン、葉酸；抗にきび活性成分または薬剤（例えば、レゾルシノール、サリチル酸など）；酸化防止剤（例えば、植物ステロール、リポ酸）；フラボノイド（例えば、イソフラボン、フィトエストロゲン）；皮膚の無痛化剤および治癒剤（アロエベラ抽出物、アラントインなど）；美的目的に適した試剤（精油など）、芳香剤、皮膚感覚剤（ｓｋｉｎ  ｓｅｎｓａｔｅ）、乳白剤、芳香族化合物（例えば、ちょうじ油、メントール、樟脳、ユーカリ油、およびオイゲノール）、剥離活性剤、ヒドロキシ酸（ＡＨＡ酸など）、遊離基補足剤、ファルネソール、抗真菌活性剤（特にビサボロール）、アルキルジオール（１，２−ペンタンジオール、ヘキサンジオールまたは１，２−オクタンジオールなど）、フィトール、ポリオール（フィタントリオールなど）、セラミド類および疑似セラミド類、アミノ酸、タンパク質加水分解物、多価不飽和脂肪酸、植物抽出物（カイネチンのようなもの）、ＤＮＡまたはＲＮＡおよびそれらの断片化生成物、炭水化物、共役脂肪酸、カルニチン、カルノシン、ビオチノネン、フィトフルエン、フィトエン、およびそれらの対応する誘導体がある。
【００５２】
さらに、化粧用および医薬用の本発明の局所用組成物は、ＵＶスクリーニング剤（ＵＶフィルター）を含んでもよい。この付加的なＵＶスクリーニング剤は、有利には、ＩＲ、ＵＶ−Ａ、ＵＶ−Ｂ、ＵＶ−Ｃ、および／または広帯域のフィルターから選択される。ＵＶ−Ｂまたは広域スペクトルのスクリーニング剤（すなわち、約２９０ｎｍ〜３４０ｎｍに吸収極大がある物質）の例は、有機化合物または無機化合物であろう。ＵＶ−Ｂまたは広帯域の有機スクリーニング剤としては、例えば、アクリレート（２−エチルヘキシル２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレート（オクトクリレン、ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）３４０）、エチル２−シアノ−３，３−ジフェニルアクリレートなど）；樟脳誘導体（４−メチルベンジリデンカンファー（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）５０００）、３−ベンジリデンカンファー、カンファーメト硫酸ベンザルコニウム、ポリアクリルアミドメチルベンジリデンカンファー、スルホベンジリデンカンファー、スルホメチルベンジリデンカンファー、テレフタリデンジカンフルスルホン酸など）；シンナメート誘導体（エチルヘキシルメトキシシンナメート（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）ＭＣＸ）、エトキシエチルメトキシシンナメート、ジエタノールアミンメトキシシンナメート（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）Ｈｙｄｒｏ）、イソアミルメトキシシンナメートなど）ならびにシロキサンに結合したケイ皮酸誘導体；ｐ−アミノ安息香酸誘導体（ｐ−アミノ安息香酸、２−エチルヘキシルｐ−ジメチルアミノ安息香酸、Ｎ−オキシプロピレン化エチルｐ−アミノベンゾエート、グリセリルｐ−アミノベンゾエートなど）；ベンゾフェノン類（ベンゾフェノン−３、ベンゾフェノン−４，２，２’，４，４’−テトラヒドロキシ−ベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４，４’−ジメトキシベンゾフェノンなど）；ベンザルマロン酸のエステル（ジ（２−エチルヘキシル）４−メトキシベンザルマロネートなど）；２−（４−エトキシ−アニリノメチレン）プロパン二酸のエステル（欧州特許第０８９５７７６号明細書に記載されている２−（４−エトキシアニリノメチレン）プロパン二酸ジエチルエステルなど）；欧州特許第０３５８５８４Ｂ１号明細書、欧州特許第０５３８４３１Ｂ１号明細書および欧州特許出願公開第０７０９０８０Ａ１号明細書に記載されているベンズマロネート基を含む有機シロキサン化合物（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）ＳＬＸなど）；ドロメトリゾールトリシロキサン（Ｍｅｘｏｒｙｌ  ＸＬ）；イミダゾール誘導体（例えば、２−フェニルベンゾイミダゾールスルホン酸およびその塩（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）ＨＳ）など）がある。２−フェニルベンゾイミダゾールスルホン酸の塩には、例えば、アルカリ塩（ナトリウム塩またはカリウム塩など）、アンモニウム塩、モルホリン塩、第一、第二、および第三アミンの塩（モノエタノールアミン塩、ジエタノールアミン塩など）；サリチレート誘導体（サリチル酸イソプロピルベンジル、サリチル酸ベンジル、サリチル酸ブチル、サリチル酸エチルヘキシル（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）ＥＨＳ，Ｎｅｏ  Ｈｅｌｉｏｐａｎ  ＯＳ）、イソオクチルサリチレートまたはホモメンチルサリチレート（ホモサラート、ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）ＨＭＳ，Ｎｅｏ  Ｈｅｌｉｏｐａｎ  ＨＭＳ）など）；トリアジン誘導体（エチルヘキシルトリアゾン（Ｕｖｉｎｕｌ  Ｔ−１５０）、ジエチルヘキシルブタミドトリアゾン（Ｕｖａｓｏｒｂ  ＨＥＢ）など）がある。カプセル化ＵＶフィルター（カプセル化エチルヘキシルメトキシシンナメート（Ｅｕｓｏｌｅｘ  ＵＶ−ｐｅａｒｌｓ）またはＵＶフィルターが詰め込まれたマイクロカプセル（例えば、欧州特許第１４７１９９５号明細書に開示されているものなど）である。
【００５３】
広域スペクトルまたはＵＶ  Ａのスクリーニング剤（すなわち、約３２０ｎｍ〜４００ｎｍに吸収極大がある物質）の例は、有機化合物または無機化合物であろう。広域スペクトルまたはＵＶ  Ａの有機スクリーニング剤としては、例えば、ジベンゾイルメタン誘導体（４−ｔｅｒｔ．−ブチル−４’−メトキシジベンゾイル−メタン（ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）１７８９）、ジメトキシジベンゾイルメタン、イソプロピルジベンゾイルメタンなど）；ベンゾトリアゾール誘導体（２、２’−メチレン−ビス−（６−（２Ｈ−ベンゾトリアゾール−２−イル）−４−（１，１，３，３，−テトラメチルブチル）−フェノール（Ｔｉｎｏｓｏｒｂ  Ｍ）など）；ビスエチルヘキシルオキシフェノールメトキシフェニルトリアジン（Ｔｉｎｏｓｏｒｂ  Ｓ）など；フェニレン−１，４−ビス−ベンゾイミダゾールスルホン酸または塩（２，２−（１，４−フェニレン）ビス−（１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４，６−ジスルホン酸）（Ｎｅｏｈｅｌｉｏｐａｎ  ＡＰ）など）；アミノ置換ヒドロキシベンゾフェノン（２−（４−ジエチルアミノ−２−ヒドロキシ−ベンゾイル）−安息香酸ヘキシルエステル（Ｕｖｉｎｕｌ  Ａ  ｐｌｕｓ）（欧州特許第１０４６３９１号明細書に記載されている）など）；イオン性ＵＶ−Ａフィルター（国際公開第２００５０８０３４１Ａ１号パンフレットに記載されている）がある。ジベンゾイルメタン誘導体は光安定性が限られているため、こうしたＵＶ−Ａスクリーニング剤は光安定化させるのが望ましいであろう。したがって、「従来のＵＶ−Ａスクリーニング剤」という用語は、ジベンゾイルメタン誘導体（例えば、ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）１７８９（これは、例えば、欧州特許第０５１４４９１Ｂ１号明細書および欧州特許出願公開第０７８０１１９Ａ１号明細書に記載されている３，３−ジフェニルアクリレート誘導体によって安定化されている）など）；ベンジリデンカンファー誘導体（米国特許第５，６０５，６８０号明細書に記載されている）；ベンズマロネート基を含んでいる有機シロキサン（欧州特許第０３５８５８４Ｂ１号明細書、欧州特許第０５３８４３１Ｂ１号明細書および欧州特許出願公開第０７０９０８０Ａ１号明細書に記載されている）も表す。
【００５４】
本発明の組成物に添加できるＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂスクリーニング剤の優れた概説が、独国特許出願公開第１０３２７４３２号明細書にも記載されている。この文献に開示されているすべてのＵＶスクリーニング剤も、本発明の組成物の成分として有用であり、参照により本明細書に含まれる。さらに、本発明の組成物は、ＵＶ−ＡおよびＵＶ−Ｂフィルターを含んでもよい。ＵＶフィルターまたはスクリーニング剤のさらなる例が、例えば、国際公開第０４／０００２５６号パンフレット（特に１０〜１２ページを参照）（参照により本明細書に含まれる）に開示されている。
【００５５】
安全かつ有効な量のＵＶスクリーニング剤が使用され、その量は、組成物の全重量を基準にして、典型的には約１重量％〜約２０重量％、さらに典型的には約２重量％〜約１０重量％である。
【００５６】
化粧用または医薬用の本発明の局所用組成物に加えてよい他の好適なＵＶスクリーニング剤としては、微粒子化金属酸化物（例えば、ＰＡＲＳＯＬ（登録商標）ＴＸ）などの無機顔料がある。そのような化合物の例としては、例えば、平均一次粒径が約１５ｎｍ〜約１００ｎｍである二酸化チタン、平均一次粒径が約１５ｎｍ〜約１５０ｎｍである酸化亜鉛、平均一次粒径が約１５ｎｍ〜約１５０ｎｍである酸化ジルコニウム、平均一次粒径が約１５ｎｍ〜約５００ｎｍである酸化鉄、およびそれらの混合物がある。金属酸化物粒子は、金属酸化物（例えば、アルミニウムまたは酸化ジルコニウムなど）または有機被覆（例えば、ポリオール、メチコン、ステアリン酸アルミニウム、アルキルシランなど）で覆ってもよい。そのような被覆は当該技術分野において周知である。ここで使用する場合、無機遮光剤は、組成物の全重量に対して約０．１重量％〜約２０重量％、好ましくは約０．５重量％〜約１０重量％、より好ましくは約１重量％〜約５重量％の量で存在する。
【００５７】
１０−ヒドロキシステアリン酸、塩、またはエステルは知られているか、または知られている化合物類に属しており、それ自体は、既知の方法または類似の方法で調製できる。
【００５８】
皮膚のしわを低減する本発明の化粧用組成物の能力は、形状測定法で評価でき、形状測定法は、“Ｓｋｉｎ  ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｂｙ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ  ｆｒｉｎｇｅ  ｐｒｏｊｅｃｔｉｏｎ：ａ  ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ”（Ｌａｇａｒｄｅ  Ｊ  Ｍ；Ｒｏｕｖｒａｉｓ  Ｃ；Ｂｌａｃｋ  Ｄ；Ｄｉｒｉｄｏｌｌｏｕ  Ｓ；Ｇａｌｌ  Ｙ，Ｓｋｉｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｓｋｉｎ  （ＩＳＢＳ）［および］Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  Ｓｋｉｎ（ＩＳＤＩＳ）［および］Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｓｋｉｎ  Ｉｍａｇｉｎｇ（ＩＳＳＩ）（２００１  Ｍａｙ），７（２），１１２−２１の機関誌（ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｊｏｕｒｎａｌ）または“Ｄｉｒｅｃｔ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｄｉｒｅｃｔ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｓｋｉｎ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ”（Ｆｉｓｃｈｅｒ  Ｔ  Ｗ；Ｗｉｇｇｅｒ−Ａｌｂｅｒｔｉ  Ｗ；Ｅｌｓｎｅｒ  Ｐ．，Ｓｋｉｎ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ａｐｐｌｉｅｄ  ｓｋｉｎ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９９  Ｊａｎ−Ａｐｒ），１２（１−２），１−１１）に記載されている。
【００５９】
以下の実施例は、本発明を例示するものであり、本発明を限定するものと解釈すべきではない。
【００６０】
［実施例］
本発明を、以下の実験を用いてさらに説明する。
【００６１】
［実施例１］
以下に示す成分を含む老化防止配合物は、それ自体周知の方法で調製できる。
【００６２】
【表１】
2017530975.tif 000003
【００６３】
［実施例２］
以下に示す成分を含む老化防止配合物は、それ自体周知の方法で調製できる。
【００６４】
【表２】
2017530975.tif 000004
【００６５】
［実施例３］
以下に示す成分を含むフェイシャルトリートメント配合物は、それ自体周知の方法で調製できる。
【００６６】
【表３】
2017530975.tif 000005
【００６７】
［実施例４］
以下に示す成分を含むフェイシャルトリートメント配合物は、それ自体周知の方法で調製できる。
【００６８】
【表４】
2017530975.tif 000006
【００６９】
［実施例５］
以下に示す成分を含む脱毛セラムは、それ自体周知の方法で調製できる。
【００７０】
【表５】
2017530975.tif 000007
【００７１】
［実施例６］
以下に示す成分を含む脱毛セラムは、それ自体周知の方法で調製できる。
【００７２】
【表６】
2017530975.tif 000008
【００７３】
［実施例７］
以下に示す成分を含む皮膚強化ローションは、それ自体周知の方法で調製できる。
【００７４】
【表７】
2017530975.tif 000009
【００７５】
［実施例８］
以下に示す成分を含む皮膚強化ローションは、それ自体周知の方法で調製できる。
【００７６】
【表８】
2017530975.tif 000010
【００７７】
［実施例９］
以下に示す成分を含むしみ治療用配合物は、それ自体周知の方法で調製できる。
【００７８】
【表９】
2017530975.tif 000011
【００７９】
［実施例１０：Ｉ型コラーゲンの合成に対する１０−ヒドロキシステアリン酸の効果］
化合物をＤＭＳＯ中に１０ｍＭで溶かし、同量に分けて、−２０℃で保存した。
【００８０】
この作業の目的は、ヒト皮膚線維芽細胞における１型コラーゲンの合成に対する１０−ヒドロキシステアリン酸（１０−ＨＳＡ）の有効性を試験することであった。５０歳の女性提供者（Ｆｂ−Ｏ）の生検材料から得たヒト皮膚線維芽細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）と１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）とを含んだダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（高グルコース）で維持した。その細胞を、加湿された５％  ＣＯ２−空気雰囲気中で３７℃において培養した。
【００８１】
［物質および方法。］
［細胞毒性の測定］
細胞毒性は、製造業者の使用説明書に従ってＭＴＴ試験法で測定した。簡単にまとめると次のようになる：線維芽細胞（４０００細胞／ウェル、Ｎｕｎｃの９６ウェル細胞培養プレート中）を、ＤＭＥＭ  １０％ＦＣＳ  １％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐ／Ｓ）で２４時間にわたり事前培養し、それから０．２％ＦＣＳと１％Ｐ／Ｓとを含んだＤＭＥＭ（低グルコース）で２．５日間にわたり飢餓状態にした。次いで、飢餓培地を交換し、可溶化された化合物を加え、４８時間にわたり培養した。その後、１０μｌのＭＴＴ標識試薬を各ウェルに加え（最終濃度は０．５ｍｇ／ｍｌ）、マイクロタイタープレートを４時間にわたり培養した（３７℃、５％ＣＯ２）。１００μｌの可溶化溶液を各ウェルに加えた後、プレートを培養器（３７℃、５％ＣＯ２）内に一晩放置した。吸光度（ＯＤ）を吸光度プレートリーダーで５５０ｎｍにおいて測定した。
【００８２】
［ヒト正常線維芽細胞中での１型コラーゲンの合成の測定］
ヒト皮膚線維芽細胞を、ＤＭＥＭ  １０％ＦＣＳ  １％Ｐ／Ｓ中で２４時間にわたり事前培養してから、０．２％ＦＣＳと１％Ｐ／Ｓとを含んだＤＭＥＭ（低グルコース）中で２．５日間にわたり飢餓状態にした。次いで、飢餓培地を交換し、可溶化された化合物を加え、４８時間にわたり培養した。化合物培養後、４％ホルムアルデヒドを含んだＤＰＢＳで細胞を１５分間固定化し、ＤＰＢＳ  ０．１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００で９０秒間、透過処理した。マウスの抗ヒト１型コラーゲン抗体を用いて１型コラーゲンを検出した。最初の抗体は、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８結合ヤギ抗マウスＩｇＧで検出された。ＤＡＰＩで細胞核を対比染色した。Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｈｉｇｈ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて、染色した細胞を分析した。１０倍の対物レンズを用いて１つのウェル当たり４９枚の写真を得た。その後、画像は、「ＣｅｌｌＨｅａｌｔｈＰｒｏｆｉｌｉｎｇ」生物学的アプリーションｖ４を用いて分析した。細胞核の周りの規定領域内の１型コラーゲンを測定し、細胞数に対して蛍光強度値を正規化した。
【００８３】
［結果：］
［細胞毒性］
化合物で４８時間にわたり処理されたヒト正常線維芽細胞について、ＭＴＴ試験法を用いて生存可能性の評価を行った。化合物を用いない場合の対照値を、１００％生存可能とした。１０−ＨＳＡは、いかなる細胞毒性効果も示さなかった（細胞生存の減少は対照細胞と比べて８０％未満）。
【００８４】
［１型コラーゲンの合成］
事前培養期間後、化合物の量を増やして、初代ヒト線維芽細胞を４８時間にわたり培養した。その後、細胞を固定化し、１型コラーゲンタンパク質のレベルを免疫蛍光法で評価した。実験は２回繰り返した。飢餓状態後、化合物の量を増やして線維芽細胞を４８時間にわたり培養した。ＴＧＦ−β１は正の対照としての役割を果たす。示されている値は、対照細胞と比べた場合の１型コラーゲンの比誘導（ｆｏｌｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）である。１０−ＨＳＡは、用量に依存する１型コラーゲンの誘導を示したが、ステアリン酸（ＳＡ）は、１型コラーゲンの発現を誘導しなかった。５μＭの１０−ＨＳＡを使用した場合、１型コラーゲンの誘導は、比誘導が２．２になった。
【００８５】
［実施例１１：日焼け細胞および３型コラーゲンに対する１０−ＨＳＡの効果］
［物質および方法：］
皮膚試料：腹部形成外科手術から得た人の皮膚を使用した（提供者：１９７１年生まれの女性）。インフォームドコンセントを得た。皮膚フォトタイプを分光比色計で分析し、「ブラウン」に分類した（ＩＴＡ°角＝９，３°）（色素沈着スケール：非常に明るい＜明るい＜中間＜日焼け＜ブラウン＜暗い）（Ｄｅｌ  Ｂｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９．２００６）。
【００８６】
皮膚試料の作製：皮膚試料をカットしておよそ８×３ｍｍ（φ×厚さ）の小片にし、６日目まで培養した。１４の皮膚の試験片をそれぞれの処理に使用した。２つの皮膚試料を培養して、皮膚生存可能性試験を実施し、６つの皮膚試料について皮膚の色素沈着およびコラーゲン分析を行い、６つについてＳＢＣ試験を実施した。
【００８７】
組織培養：皮膚試料は、培地（ウイリアムスＥ粉末培地で変性）と接触させたステンレス鋼の多孔リングにおいて空気−液体界面で６日目まで培養した。培地は、３日間（すなわち、０〜３日目）おきに新しくした。
【００８８】
トリートメント：試験試料および対照の両方に局所的に施して毎日新しくした。塗布は次のようにして行った：皮膚生検材料を綿パッドで穏やかにきれいにし、試験試料ごとに４μｌのトリートメントをそれぞれの小片の上部に塗布し、７ｍｍ径の送達膜で覆った。
【００８９】
皮膚生存可能性：６日間にわたり培養した後、２つの皮膚生検材料の重量を量り、念のため、それらすべてがおおよそ同じ重さになるように皮膚部分を小さくする。その後、試料を洗浄し、メチルチアゾリルジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）で処理した。ＭＴＴは、ミトコンドリアデヒドロゲナーゼで水不溶性の濃青色ＭＴＴホルマザンに変換させる。その後、青色の結晶を可溶化し、色の強さ（皮膚の生命力と正比例する）を、５７０ｎｍの波長でプレートリーダーを用いて測定した。６日目が皮膚生存可能性試験の終了日であるため、２日目に停止された試料に対してこの分析は行われなかった。
【００９０】
日焼け細胞（ＳＢＣ）の定量化：ＳＢＣは、不可逆的かつ過酷にＤＮＡを損傷する生理学的量のＵＶＢを被った後、アポトーシスが起こるケラチノサイトである。この試験法では、組織化学的な染色後、ＵＶＢ光にさらされた結果として生じるＤＮＡ損傷を防止または緩和する面での試験化合物の効果を調査できる。この実験手順では、皮膚の断片をヘマトキシリン−エオシンで染色する。１２の皮膚断片を各トリートメントに属する皮膚試料から得る。
【００９１】
３型コラーゲン：皮膚の断片を、選択した抗体で免疫染色した。各スライドガラス内に存在する抗原の量は、Ｉｍａｇｅ  Ｊ（ＮＩＨ−ＵＳＡ）を用いて、真皮の選択領域内の赤色の強度および分布を推定することにより評価した。３型コラーゲン用の選択した抗体は、マウスのモノクローナル抗３型コラーゲン（Ｓｉｇｍａ  ｃａｔ♯ｃ７８０５）であった。
【００９２】
統計的分析：すべての定量的データを、それぞれのトリートメントの平均点数で要約した。標準偏差および標準誤差（ｓｅｍ）などの変動の尺度を元の点数に当てはめた。グループ間の相違は、並替検定による一元配置分散分析（Ｏｎｅ−ｗａｙ  ａｎｏｖａ）で評価し、その後、対の事後比較であるダネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）の並替検定および対の事後比較であるテューキー（Ｔｕｋｅｙ）のＨＳＤ並替検定を行った。
【００９３】
［結果：］
皮膚生存可能性：１０−ＨＳＡは、試験を行った３つの濃度（０．１、１、および１０ｍｇ／ｍｌ）のいずれにおいても皮膚生存可能性に影響を与えなかった。
【００９４】
日焼け細胞：予想されるように、ＵＶ照射により日焼け細胞（ＳＢＣ）が著しく増大した（＋２２５％）。選択した市販の日焼け防止クリーム（すなわち、Ｅｕｃｅｒｉｎ  ５０＋  Ｋｉｄｓ）は、ＳＢＣの形成を減らした（未処置でのＵＶの場合に対して−２５％）。１０−ＨＳＡの場合、ＵＶによって引き起こされるＳＢＣの増大に関して２７〜３０％保護することを示した。
【００９５】
３型コラーゲン：１０−ＨＳＡにより３型コラーゲンの合成が誘発された。０．１ｍｇ／ｍｌおよび１ｍｇ／ｍｌで試験すると、１０−ＨＳＡにより、３型コラーゲンの発現が著しく増大した（それぞれ＋４９％および＋５７％）。
【００９６】
［実施例１２：ＭＭＰ−１のモジュレーションに対する１０−ＨＳＡの影響］
皮膚試料：腹部形成外科手術から得た人間の皮膚を使用した（提供者：１９４８年生まれの男性）。インフォームドコンセントを得た。皮膚フォトタイプを分光比色計で分析し、「明るい」に分類した（ＩＴＡ°角＝５０°）（色素沈着スケール：非常に明るい＜明るい＜中間＜日焼け＜ブラウン＜暗い）（Ｄｅｌ  Ｂｉｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９．２００６）。
【００９７】
皮膚試料の作製：皮膚試料をカットして８×３ｍｍ（φ×厚さ）の小片にし、２日目まで培養した。それぞれのトリートメントについて２つの皮膚試料を培養して、ＭＭＰ−１分析を実施した。
【００９８】
組織培養：皮膚試料は、培地（ウイリアムスＥ粉末培地で変性）と接触させたステンレス鋼の多孔リングにおいて空気−液体界面で２日目まで培養した。培地は、３日間（すなわち、０〜３日目）おきに新しくした。
【００９９】
トリートメント：ＵＶＢ照射の１時間前に試験試料および対照の両方に局所的に施して新しくした。照射の直前に、トリートメントを穏やかに注意深く皮膚試料から取り除いた。塗布は次のようにして行った：皮膚生検材料を綿パッドで穏やかにきれいにし、試験試料ごとに４μｌのトリートメントをそれぞれの小片の上部に塗布し、７ｍｍ径の送達膜で覆った。
【０１００】
ＵＶ照射：ＵＶＢ  Ｔ８−Ｍランプ（３１２ｎｍ）を備えたＵＶＢ光源（Ｂｉｏ−Ｌｉｎｋ，Ｖｉｌｂｅｒ  Ｌｏｕｒｍａｔ，Ｅｂｅｒｈａｒｄｚｅｌｌ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で皮膚試料にＵＶＢ照射した（６０ｍＪ／ｃｍ２）。
【０１０１】
ＲＴ−ｇＰＣＲによるＭＭＰ−１の発現の定量：ＲＴ−ｑＰＣＲ分析では、ＲＮＡ全部を、製造業者の使用説明書に従って、線維組識用ＲＮＡｅａｓｙミニキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて全層皮膚から取り出した。定量を行った後、ランダムヘキサマーおよびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて、全ＲＮＡのうちの４００ｎｇをレトロ転写した。
【０１０２】
産生されたｃＤＮＡを用いて、ＭＭＰ−１発現の評価のために、特異的プライマーでリアルタイムＰＣＲ（ＳｙｂｒＧｒｅｅｎプロトコル）を行った。データ正規化のために参照遺伝子としてユビキチンおよびＹＷＨＡＺを使用した。
【０１０３】
データ収集および統計的分析：ＲｏｔｏｒＧｅｎｅ（Ｃｏｒｂｅｔ  ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）サーマルサイクラーでＲＴ−ｑＰＣＲを実施し、データ分析にはＲＥＳＴ  ２００９  Ｖ２．０．１３ソフトウェア（Ｑｉａｇｅｎ）を使用した。
【０１０４】
ＭＭＰ−１発現の分析の結果：予想されるように、ＵＶＢによる照射（１Ｊ／ｃｍ２）により、ＭＭＰ−１の発現が著しく劇的に増大した（未処置でのＵＶなしの場合に対して＋４３８％）。市販の選択ＵＶフィルターでは、ＵＶで促進される活性が著しく阻害された（未処置でのＵＶの場合に対して−４５％）。１０−ＨＳＡは、媒体（すなわちＤＭＳＯ）と比較して、かなり大幅にＭＭＰ−１の発現を抑えた。
【０１０５】
［実施例１３：ＵＶ誘導ストレスマーカーｐ５３の減少］
細胞培養は、上記の実施例１２のようにして実施した。
【０１０６】
ｐ５３の検出および定量：皮膚の断片をｐ５３の抗体（Ａｂｅａｍ，♯ａｂ７７５７）で染色した。ｐ５３陽性細胞の数をカウントし、得られた値を表皮で覆われた面積で割った。それぞれの皮膚試料の２つのスライドガラスを、画像収集および関連した分析で処理した（すなわち、それぞれの試験トリートメントごとに１２の画像）。
【０１０７】
統計的分析：すべての定量的データを、それぞれのトリートメントの平均点数で要約した。標準偏差および標準誤差（ＳＥＭ）などの変動の尺度を元の点数に当てはめた。グループ間の相違は、並替検定による一元配置分散分析で評価し、その後、対の事後比較であるダネットの並替検定および対の事後比較であるテューキーのＨＳＤ並替検定を行った。
【０１０８】
結果  ｐ５３：予想されるように、ＵＶＢによる照射（１Ｊ／ｃｍ２）により、ストレスマーカーｐ５３  ｐ５３が著しく劇的に増大した（未処置でのＵＶなしの場合に対して＋８４２９％）。選択した市販のＵＶフィルターでは、ＵＶで促進される誘導が著しく阻害された（未処置でのＵＶの場合に対して−６７％）。０．１ｍｇ／ｍｌで試験すると、１０−ＨＳＡは、ｐ５３  ＵＶ誘導刺激に対して保護作用をもたらした（ＤＭＳＯでのＵＶの場合に対して−４６％）。
【０１０９】
［実施例１４：ヒト皮膚線維芽細胞の３型コラーゲンに対する１０−ＨＳＡの効果］
［細胞培養：］
成人の皮膚（５０歳の提供者）から得たヒト皮膚線維芽細胞を、９６ウェルプレートに接種し（４０００細胞／ウェル）、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）と１％ペニシリン／ストレプトマイシンとを含んだダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で、５％ＣＯ２を用いて３７℃において２４時間にわたり培養した。０．２％ＦＣＳと１％  Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐとを含んでいるＤＭＥＭ  Ｌｏｗ  Ｇｌｕｃｏｓｅで培地を変化させた後、細胞をさらに２．５日間にわたり培養した。その後、飢餓培地を、試験化合物を含む新鮮培地で置き換えた。４８時間にわたり培養した後、細胞を、４％ホルムアルデヒドを含んでいるダルベッコのリン酸緩衝食塩水（ＤＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で１５分間にわたり固定化し、ＤＰＢＳ中に０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００を含んでいるもので９０秒間にわたり透過処理した。
【０１１０】
［ヒト正常線維芽細中での３型コラーゲンの合成の測定：］
ウサギの抗ヒトＩＩＩ型コラーゲン（ＢｉｏＴｒｅｎｄ，Ｃｏｌｏｇｎｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を用い、その後、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ  ４８８結合ＩｇＧ二次抗体（ヤギの抗ウサギＩｇＧ、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｌｕｃｅｒｎｅ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を用いて、３型コラーゲンを検出した。Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（Ｂｕｃｈｓ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）の４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を用いて、核を対比染色した。ＡｒｒａｙＳｃａｎ  ＶＴＩ  ＨＣＳ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ，ＵＳＡ）を用いて、染色細胞を分析した。１個のウェル当たり合計４９の写真を、１０倍の対物レンズで得、その後、“ＣｅｌｌＨｅａｌｔｈＰｒｏｆｉｌｉｎｇ”生物学的アプリケーションｖ４を用いて画像を分析した。細胞核の周りの規定領域内のコラーゲンを測定し、細胞数に対して蛍光強度値を正規化した。データは、最低限２つの独立した実験に基づいている。
【０１１１】
［結果：］
１０−ＨＳＡは、処理された線維芽細胞において、用量に応じて有意にＩＩＩ型コラーゲンの合成を誘発した（＊対照培地に対して、有意性ｐ＜０．０１）。培地処理細胞と比べて、１０−ＨＳＡの場合、５μＭの濃度で、ＩＩＩ型コラーゲンで２４４％の増大を観察した（図１）。
【図１】
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【国際調査報告】
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