(57)【要約】例えば、個体における癌治療及び／または薬剤耐性の防止のための、Ｇ９ａ拮抗剤の使用方法が、本明細書に提供される。例えば、個体に、Ｇ９ａ拮抗剤を単独でまたは癌治療剤と組み合わせて投与することを含む、個体における癌の治療方法が、提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、癌感受性の期間を増大させる、及び／または癌耐性の発生を遅らせる。いくつかの実施形態では、個体は癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を用いる治療のために選択される。いくつかの実施形態では、個体は、癌治療剤による治療の前にＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む治療を開始する。いくつかの実施形態では、個体は、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤を含む治療を同時に受ける。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、癌感受性の期間を増大させる、及び／または癌耐性の発生を遅らせる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体における癌の治療方法であって、前記個体に、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）癌治療剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項２】
前記Ｇ９ａ拮抗剤及び前記癌治療剤のそれぞれの量が、前記癌治療剤に対する癌感受性の期間を増大させる及び／または細胞耐性の発生を遅らせるのに有効である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
個体における癌治療剤を含む癌治療の有効性を増大させる方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項４】
個体における癌の治療方法であって、癌治療が、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤及び（ｂ）癌治療剤を投与することを含み、前記癌治療は、前記Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の前記癌治療剤を投与することを含む治療（例えば標準ケア治療）と比較して増大した有効性を有する、前記方法。
【請求項５】
個体における癌治療剤に対する耐性を有する癌の発生を遅らせる、及び／または防止する方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項６】
癌治療剤に対する耐性の発生の増大した可能性を有する癌を患う個体の治療方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の前記癌治療剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項７】
癌を患う個体における癌治療剤に対する感受性を増大させる方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項８】
癌を患う個体における癌治療剤の感受性の期間を延ばす方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項９】
癌を患う個体における癌治療に対する応答持続期間を延ばす方法であって、前記個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む、前記方法。
【請求項１０】
（ｂ）前記個体に、有効量の前記癌治療剤を投与することを更に含む、請求項３、５、７、８、または９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記Ｇ９ａ拮抗剤が、抗体阻害剤、結合低分子阻害剤、結合ポリペプチド阻害剤、及び／またはポリヌクレオチド拮抗剤である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ｇ９ａ拮抗剤がＧ９ａと結合し、Ｇ９ａメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記癌治療剤が化学療法剤である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌治療剤が化学療法剤であり、前記化学療法剤がタキサンを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記タキサンがパクリタキセルまたはドセタキセルである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記癌治療剤が化学療法剤であり、前記化学療法剤が白金製剤を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記癌治療剤が標的療法剤である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記癌治療剤が標的療法剤であり、前記標的療法剤がＥＧＦＲ拮抗剤を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＥＧＦＲ拮抗剤が、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミンまたはその薬学的に許容される塩（例えば、エルロチニブ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記癌治療剤が標的療法剤であり、前記標的療法剤がＲＡＦ阻害剤である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＲＡＦ阻害剤が、ＢＲＡＦ及び／またはＣＲＡＦ阻害剤である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＲＡＦ阻害剤が、ベムラフェニブである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記癌治療剤が標的療法剤であり、前記標的療法剤がＰＩ３Ｋ阻害剤である、請求項１７に記載の方法。
【請求項２４】
前記Ｇ９ａ拮抗剤が低分子Ｇ９ａ拮抗剤である、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記Ｇ９ａ拮抗剤及び前記癌治療剤が同時に投与される、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記Ｇ９ａ拮抗剤が、前記癌治療剤の前に、及び／または同時に投与される、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記癌が、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、黒色腫、結腸直腸癌、膵臓癌、及び／または乳癌である、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本特許出願は、２０１４年６月２３日に出願された米国特許出願第６２／０１５，９３２号の優先権の利益を主張し、この出願は、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本明細書に記載されるＧ９ａ拮抗剤を使用した、癌薬剤耐性の治療方法及び／または防止方法が、本明細書に提供される。
【背景技術】
【０００３】
癌薬剤に対する耐性の比較的早い獲得は依然として、功を奏する癌治療への主な障害となっている。かかる薬剤耐性に対する分子的基盤を明らかにする相当な努力により、薬剤排出、薬剤結合が不十分な、標的の突然変異体の獲得、代わりとなる生存経路の関与、及びエピジェネティックな変化を含む種々の機構が明らかとなっている。かかる機構は一般に、薬剤治療中に選択される腫瘍細胞集団内において希少で確率的な、耐性を付与する遺伝子変化があることを反映すると考えられている。Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １４１（１）：６９−８０（２０１０）を参照のこと。癌治療でますます観察される現象は、いわゆる「再治療応答」である。例えば、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）チロシンキナーゼ阻害剤（ＴＫＩ）での治療に良好に応答し、後で治療の失敗を経験した非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の患者の中には、「休薬期間」の後でのＥＧＦＲ  ＴＫＩ再治療に対して、二次応答を示した者もいる。Ｋｕｒａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１５：１７３−１７４（２００４）、Ｙａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．１５：１０７−１１１（２００５）を参照のこと。同様の再治療応答は他のいくつかの癌治療剤に対しては十分に確立されている。Ｃａｒａ  ａｎｄ  Ｔａｎｎｏｃｋ，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：２３−２７（２００１）を参照のこと。かかる研究結果は、癌薬剤に対する獲得耐性が、基本メカニズムが未だに確立されていないままの可逆的な「薬剤耐性」状態に関係があり得ることを示唆している。
特異的な耐性を付与する突然変異体の中には、獲得薬剤耐性を示す多くの癌患者で特定されたものもあるが、薬剤耐性に対する突然変異及び非突然変異的機構の相対的な関与、ならびに腫瘍細胞亜集団の役割は未だに、多くが不明瞭なままである。新規の治療方法が、癌細胞集団内での異質性及び薬剤治療に耐性を示す癌細胞の発生に上手く対処するために必要とされている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  １４１（１）：６９−８０（２０１０）
【非特許文献２】Ｋｕｒａｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１５：１７３−１７４（２００４）
【非特許文献３】Ｙａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｎｃｏｌ．Ｒｅｓ．１５：１０７−１１１（２００５）
【非特許文献４】Ｃａｒａ  ａｎｄ  Ｔａｎｎｏｃｋ，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１２：２３−２７（２００１）
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
例えば、個体における癌治療及び／または薬剤耐性の防止のための、Ｇ９ａ拮抗剤の使用方法が、本明細書に提供される。例えば、個体に、Ｇ９ａ拮抗剤を単独でまたは癌治療剤と組み合わせて投与することを含む、個体における癌の治療方法が、提供される。いくつかの実施形態では、個体は癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を用いる治療のために選択される。いくつかの実施形態では、個体は、癌治療剤による治療の前にＧ９ａ拮抗剤を投与することを含む治療を開始する。いくつかの実施形態では、個体は、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤を含む治療を同時に受ける。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、癌感受性の期間を増大させる、及び／または癌耐性の発生を遅らせる。
【０００６】
Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を用いた併用療法もまた、本明細書に提供される。
【０００７】
具体的には、個体に、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、ならびに（ｂ）癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を投与することを含む、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、癌治療剤に対する癌感受性の期間を増大させる、及び／または癌細胞の耐性の発生を遅らせるのに有効である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、癌治療剤を含む癌治療の有効性を増大させるのに有効である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の癌治療剤の投与を含む治療（例えば標準ケア治療）（例えば標準ケア治療）と比較して、有効性を増大させるのに有効である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の癌治療剤を投与することを含む治療（例えば標準ケア治療）と比較して、応答（例えば完全寛解）を増大させるのに有効である。
【０００８】
個体において癌治療剤を含む、癌治療の有効性を増大させる方法であって、該個体に（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を含む癌治療剤を投与することを含む方法もまた、本明細書に提供される。
【０００９】
癌治療は、個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含み、癌治療は、Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の癌治療剤を投与することを含む治療（例えば標準ケア治療）と比較して、増大した有効性を有する、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。
【００１０】
更に、個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、個体における癌治療剤に対する耐性を有する癌の発生を遅らせる、及び／またはそれを防止する方法が、本明細書に提供される。
【００１１】
個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌治療剤に対する耐性が発生する増大した可能性を有する癌を患う個体の治療方法が、本明細書に提供される。
【００１２】
更に、個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌を患う個体における癌治療剤に対する感受性を増大させる方法が、本明細書に提供される。
【００１３】
個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌を患う個体における癌治療剤の感受性の期間を延ばす方法もまた、本明細書に提供される。
【００１４】
個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌を患う個体における癌治療剤に対する応答の持続時間を延ばす方法が、本明細書に提供される。
【００１５】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌治療剤は標的療法剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、及び／またはＰＩ３Ｋ阻害剤のうちの１種以上である。
【００１６】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、標的療法剤はＥＧＦＲ拮抗剤である。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン及び／またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤はＮ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミンである。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、Ｎ−（４−（３−フルオロベンジルオキシ）−３−クロロフェニル）−６−（５−（（２−（メチルスルホニル）エチルアミノ）メチル）フラン−２−イル）キナゾリン−４−アミン、ジ４−メチルベンゼンスルホネート、またはその薬学的に許容される塩（例えばラパチニブ）である。
【００１７】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、標的療法剤はＲＡＦ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＲＡＦ阻害剤はＢＲＡＦ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＲＡＦ阻害剤はＣＲＡＦ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。いくつかの実施形態では、ＲＡＦ阻害剤は、３−（２−シアノプロパン−２−イル）−Ｎ−（４−メチル−３−（３−メチル−４−オキソ−３，４−ジヒドロキナゾリン−６−イルアミノ）フェニル）ベンズアミド、またはその薬学的に許容される塩（例えばＡＺ６２８（ＣＡＳ＃８７８７３９−０６−１））である。
【００１８】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、標的療法剤はＰＩ３Ｋ阻害剤である。
【００１９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌治療剤は化学療法剤である。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、化学療法剤はタキサンである。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。いくつかの実施形態では、タキサンはドセタキセルである。
【００２０】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、化学療法剤は白金製剤である。いくつかの実施形態では、白金製剤はカルボプラチンである。いくつかの実施形態では、白金製剤はシスプラチンである。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、化学療法剤はタキサン及び白金製剤である。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。いくつかの実施形態では、タキサンはドセタキセルである。いくつかの実施形態では、白金製剤はカルボプラチンである。いくつかの実施形態では、白金製剤はシスプラチンである。
【００２１】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、化学療法剤はビンカアルカロイドである。いくつかの実施形態では、ビンカアルカロイドはビノレルビンである。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、化学療法剤はヌクレオシド類似体である。いくつかの実施形態では、ヌクレオシド類似体はゲムシタビンである。
【００２２】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌治療剤は放射線治療剤である。
【００２３】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤はＧ９ａ低分子拮抗剤である。
【００２４】
ある種の実施形態の実施に際して有用であり得るＧ９ａ低分子拮抗剤の例としては、式Ｉの化合物、その異性体若しくは異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくはプロドラッグが挙げられる。ＵＮＣ０６３８としても知られ、本明細書では、Ｇ９ａｉ−２と称される式Ｉの化合物は、Ｇ９ａ及びＧＬＰに対して強力かつ選択的な細胞透過性化学プローブであり、濃度依存性様式でＨ３Ｋ９ｍｅ２レベルを低減させる。かかる化合物、ならびにかかる化合物の調製に有用な工程及び中間体は、Ｖｅｄａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，７，５６６−５７４（２０１１）及びＳｗｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，５，２０５−２０９（２０１４）に記載されている。
【化１】
2017519017.tif 000003
【００２５】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、Ｂｉｘ−０１２９４、ＵＮＣ０３２１、ＵＮＣ０６４６、及び／またはＵＮＣ０２２４である（Ｖｅｄａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，７，５６６−５７４（２０１１）を参照のこと）。Ｂｉｘ−０１２９４はまた、本明細書では、Ｇ９ａｉ−２と称される。
【００２６】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、２−（ヘキサヒドロ−４−メチル−１Ｈ−１，４−ジアゼピン−１−イル）−６，７−ジメトキシ−［１−（フェニルメチル）−４−ピペリジニル］−４−キナゾリンアミンまたはその塩を含む。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、２−（ヘキサヒドロ−４−メチル−１Ｈ−１，４−ジアゼピン−１−イル）−６，７−ジメトキシ−［１−（フェニルメチル）−４−ピペリジニル］−４−キナゾリンアミン三塩酸塩を含む。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、７−［３−（ジメチルアミノ）プロポキシ］−２−（ヘキサヒドロ−４−メチル−１Ｈ−１，４−ジアゼピン−１−イル）−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジニル）−４−キナゾリンアミンまたはその塩である。
【００２７】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、
【化２】
2017519017.tif 000004
またはその塩である。
【００２８】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、
【化３】
2017519017.tif 000005
を含み、式中、Ｒ１及びＲ２は、以下のもの（任意の組み合わせを含む）のうちの１つ以上である。
【化４】
2017519017.tif 000006
【００２９】
いくつかの実施形態では、Ｇ９Ａ阻害剤は、ワールドワイドウェブサイトのｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｐｉｉ／Ｓ０９６０８９４Ｘ１２０１５３９９（Ｆｕｊｉｓｈｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２３，７３３−７３６（２０１３））に記載されている阻害剤であり、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【００３０】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）と同時に投与される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の前に、及び／またはそれと同時に投与される。
【００３１】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌は、肺癌、乳癌、膵臓癌、結腸直腸癌、及び／または黒色腫である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌である。いくつかの実施形態では、肺癌はＮＳＣＬＣである。いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は黒色腫である。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１Ａ】図１Ａ〜Ｃは、以下のとおりである。（Ａ）翻訳後修飾をしたヒストン３（Ｈ３）尾部及びアミノ酸の位置の概略図。Ｇ９ａ／ＥＨＭＴ２は、Ｈ３のリジン９をメチル化することができるエメチトランスフェラーゼ（ｅｍｅｔｈｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）である。（Ｂ）Ｇ９ａは、親ＰＣ９細胞と比較してヒト非小細胞肺癌株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）において上方制御される。（Ｃ）３’−ＵＴＲ−ＧＦＰノックダウンでのＧ９ａのショートヘアピンの発現は、ＰＣ９の薬剤耐性細胞を排除することが示された。
【図１Ｂ】図１Ａ〜Ｃは、以下のとおりである。（Ａ）翻訳後修飾をしたヒストン３（Ｈ３）尾部及びアミノ酸の位置の概略図。Ｇ９ａ／ＥＨＭＴ２は、Ｈ３のリジン９をメチル化することができるエメチトランスフェラーゼ（ｅｍｅｔｈｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）である。（Ｂ）Ｇ９ａは、親ＰＣ９細胞と比較してヒト非小細胞肺癌株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）において上方制御される。（Ｃ）３’−ＵＴＲ−ＧＦＰノックダウンでのＧ９ａのショートヘアピンの発現は、ＰＣ９の薬剤耐性細胞を排除することが示された。
【図１Ｃ】図１Ａ〜Ｃは、以下のとおりである。（Ａ）翻訳後修飾をしたヒストン３（Ｈ３）尾部及びアミノ酸の位置の概略図。Ｇ９ａ／ＥＨＭＴ２は、Ｈ３のリジン９をメチル化することができるエメチトランスフェラーゼ（ｅｍｅｔｈｙｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）である。（Ｂ）Ｇ９ａは、親ＰＣ９細胞と比較してヒト非小細胞肺癌株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）において上方制御される。（Ｃ）３’−ＵＴＲ−ＧＦＰノックダウンでのＧ９ａのショートヘアピンの発現は、ＰＣ９の薬剤耐性細胞を排除することが示された。
【図２Ａ】図２Ａ〜Ｃは、以下のとおりである。（Ａ）親ＰＣ９細胞と比較したヒト非小細胞肺癌株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）におけるＨ３のメチル化の変化の概略図。（Ｂ）Ｈ３Ｋ４  ｍｅ２及びｍｅ３は、ウェスタンブロット法及びＭＳＤ  ＥＬＩＳＡの両方によって示されるように、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で低減する。（Ｃ）Ｈ３Ｋ９  ｍｅ３は、ウェスタンブロット法及びＭＳＤ  ＥＬＩＳＡの両方によって示されるように、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で増加する。Ｈ３Ｋ９のアセチル化は、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で減少する。
【図２Ｂ】図２Ａ〜Ｃは、以下のとおりである。（Ａ）親ＰＣ９細胞と比較したヒト非小細胞肺癌株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）におけるＨ３のメチル化の変化の概略図。（Ｂ）Ｈ３Ｋ４  ｍｅ２及びｍｅ３は、ウェスタンブロット法及びＭＳＤ  ＥＬＩＳＡの両方によって示されるように、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で低減する。（Ｃ）Ｈ３Ｋ９  ｍｅ３は、ウェスタンブロット法及びＭＳＤ  ＥＬＩＳＡの両方によって示されるように、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で増加する。Ｈ３Ｋ９のアセチル化は、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で減少する。
【図２Ｃ】図２Ａ〜Ｃは、以下のとおりである。（Ａ）親ＰＣ９細胞と比較したヒト非小細胞肺癌株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）におけるＨ３のメチル化の変化の概略図。（Ｂ）Ｈ３Ｋ４  ｍｅ２及びｍｅ３は、ウェスタンブロット法及びＭＳＤ  ＥＬＩＳＡの両方によって示されるように、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で低減する。（Ｃ）Ｈ３Ｋ９  ｍｅ３は、ウェスタンブロット法及びＭＳＤ  ＥＬＩＳＡの両方によって示されるように、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で増加する。Ｈ３Ｋ９のアセチル化は、ＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で減少する。
【図３Ａ】図３Ａ〜Ｂは、以下のとおりである。（Ａ）小分子Ｇ９ａ拮抗剤ＵＮＣ０６３８は、ウェスタンブロット法及び質量分析法によって観察されるように、Ｈ３Ｋ９のメチル化を阻害することができた。（Ｂ）小分子Ｇ９ａ拮抗剤は、Ｇ９ａＫ１８５ｍｅ３の自己メチル化を阻害する。
【図３Ｂ】図３Ａ〜Ｂは、以下のとおりである。（Ａ）小分子Ｇ９ａ拮抗剤ＵＮＣ０６３８は、ウェスタンブロット法及び質量分析法によって観察されるように、Ｈ３Ｋ９のメチル化を阻害することができた。（Ｂ）小分子Ｇ９ａ拮抗剤は、Ｇ９ａＫ１８５ｍｅ３の自己メチル化を阻害する。
【図４】Ｇ９Ａ−Ｋ１８５ｍｅ  ０／１／２／３ペプチドプルダウンの質量スペクトルデータを用いて、ＣＤＹＬ１及びＬＲＷＤ１は、Ｈ３Ｋ９またはＧ９ａＫ１８５メチル化ペプチドによってプルダウンされた。
【図５】ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、タルセバによる処理を介して生成したＰＣ９  ＤＴＰの生存率を低減した。
【図６Ａ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成したＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、親ＰＣ９細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図６Ｂ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成したＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、親ＰＣ９細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図７】（Ａ−Ｃ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、タルセバによる処理を介して生成したＰＣ９  ＤＴＰの生存率を低減した。
【図８Ａ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒト乳癌細胞株ＥＶＳＡ−Ｔにおいて用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＧＤＣ−０９８０による処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成されたＥＶＳＡ−Ｔ  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、ＥＶＳＡ−Ｔ親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図８Ｂ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒト乳癌細胞株ＥＶＳＡ−Ｔにおいて用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＧＤＣ−０９８０による処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成されたＥＶＳＡ−Ｔ  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、ＥＶＳＡ−Ｔ親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図９Ａ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒト乳腺癌細胞株ＳＫＢＲ３において用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を減少する。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ラパチニブによる処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成したＳＫＢＲ３  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、ＳＫＢＲ３親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図９Ｂ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒト乳腺癌細胞株ＳＫＢＲ３において用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を減少する。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ラパチニブによる処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成したＳＫＢＲ３  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、ＳＫＢＲ３親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図１０Ａ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒトメラノーマ癌細胞株Ｍ１４において用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＧＤＣ０９７３による処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成されたＭ１４  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、Ｍ１４親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図１０Ｂ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒトメラノーマ癌細胞株Ｍ１４において用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＧＤＣ０９７３による処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成されたＭ１４  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、Ｍ１４親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図１１Ａ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒト結腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５において用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＡＺ６２８による処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成したＣｏｌｏ２０５  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、Ｃｏｌｏ２０５親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【図１１Ｂ】（Ａ）ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ヒト結腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５において用量依存性様式でＨ３Ｋ９のメチル化（例えば、ｍｅ１、ｍｅ２、及びｍｅ３）を低減させる。（Ｂ）Ｇ９Ａ阻害剤は、ＡＺ６２８による処理時にＤＴＰの形成を抑制する。種々の用量のＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による前処理後に形成したＣｏｌｏ２０５  ＤＴＰの数の用量依存による低減を示すヒストグラム。示される濃度は、Ｃｏｌｏ２０５親細胞の生存率に影響を及ぼさない。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
Ｉ．定義
対象ポリペプチドの「拮抗剤」（互換的に「阻害剤」と称される）とは、対象ポリペプチドの活性化または機能に干渉する、例えば、対象ポリペプチドが仲立ちする生物活性を部分的に若しくは完全に遮断、阻害、または中和する作用物質である。例えば、ポリペプチドＸの拮抗剤とは、ポリペプチドＸが仲立ちする生物活性を部分的に若しくは完全に遮断、阻害、または中和する任意の分子を指し得る。阻害剤の例としては、抗体、リガンド抗体、低分子拮抗剤、アンチセンス及び阻害ＲＮＡ（例えばｓｈＲＮＡ）分子が挙げられる。好ましくは、阻害剤は対象ポリペプチドに結合する抗体または低分子である。特定の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに対して、約１，０００ｎＭ以下の結合親和性（解離定数）を有する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに対して約１００ｎＭ以下の結合親和性を有する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに対して約５０ｎＭ以下の結合親和性を有する。特定の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドに共有結合している。特定の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドのシグナル伝達を１，０００ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドのシグナル伝達を５００ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。別の実施形態では、阻害剤は対象ポリペプチドのシグナル伝達を５０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する。ある種の実施形態では、拮抗剤は少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上、対象ポリペプチドの発現レベルまたは生物活性を低減または阻害する。いくつかの実施形態では、対象ポリペプチドはＧ９ａである。「ポリペプチド」という用語は本明細書で使用する場合、特に指示がない限り、霊長類（例えばヒト）ならびに齧歯類（例えばマウス及びラット）等の哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然の対象ポリペプチドを指す。この用語は「完全長」の未処理ポリペプチドに加え、細胞中の処理で生じる任意の形態のポリペプチドを包含する。この用語はまた、ポリペプチドの自然発生変異体、例えばスプライス変異体またはアレリック変異体も包含する。
【００３４】
「ポリヌクレオチド」、または「核酸」は本明細書で互換的に用いられ、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド若しくは塩基、及び／若しくはそれらの類似体、またはＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼ、若しくは合成反応によりポリマー中に導入可能な任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びそれらの類似体等の修飾ヌクレオチドを含んでもよい。存在する場合、ヌクレオチド構造への修飾はポリマーの構築の前後において付与されてよい。ヌクレオチド配列には、非ヌクレオチド成分が間に入ってもよい。ポリヌクレオチドは合成後、標識結合等によって更に修飾されてよい。他のタイプの修飾には、例えば、「キャップ」、１つ以上の自然発生ヌクレオチドの類似体による置換、ヌクレオチド間修飾、例えば非荷電性連鎖を有するもの（例えばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート等）及び荷電性連鎖を有するもの（例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート等）、ペンダント部分、例えばタンパク質（例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ｐｌｙ−Ｌ−リジン等）を含むもの、インターカレーター（例えばアクリジン、ソラレン等）を有するもの、キレート剤（例えば金属、放射性金属、ホウ素、酸化的金属等）を含むもの、アルキル化剤を含むもの、修飾された連結を含むもの（例えばアルファアノマー核酸等）等と置換したもの、加えてポリヌクレオチド（複数を含む）の未修飾形態が含まれる。更に、糖類中に通常存在するヒドロキシル基のうちのいずれかを、例えばホスホネート基、ホスフェート基で置換してよく、標準的な保護基で保護してよく、若しくは更なるヌクレオチドへの更なる連鎖を調製するために活性化してよく、または固体若しくは半固体の支持体に結合してもよい。５’及び３’末端のＯＨは、リン酸化またはアミン基または１〜２０個の炭素原子の有機キャッピング基部位で置換することができる。他のヒドロキシルもまた、標準的な保護基に誘導体化してもよい。ポリヌクレオチドはまた、当該分野で一般的に知られているリボースまたはデオキシリボース糖類の類似形態も含むことができ、これらには例えば２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−または２’−アジド−リボース、炭素環式糖の類似体、α−アノマー糖、エピマー糖、例えばアラビノース、キシロース類またはリキソース類、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース類、非環式類似体、及びメチルリボシド等の脱塩基ヌクレオシド類似体が含まれる。１つ以上のホスホジエステル結合は代わりの連結基で置換されてよい。これらの代替の連結基には、限定されるものではないが、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、「（Ｏ）ＮＲ２」（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯまたはＣＨ２（「ホルムアセタール」）で置換されている実施形態が含まれ、式中、各ＲまたはＲ’は独立して、水素、または任意にエーテル（−Ｏ−）結合、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、若しく���アラルジルを含有する置換若しくは非置換のアルキル（炭素数１〜２０）である。ポリヌクレオチド内のすべての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含む、本明細書で言及するすべてのポリヌクレオチドに適用される。
【００３５】
「低分子」という用語は、約２０００ダルトン以下、好ましくは約５００ダルトン以下の分子量を有する任意の分子を指す。
【００３６】
「単離した」抗体は、その自然環境における成分から分離した抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば電気泳動（例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）、またはクロマトグラフィー（例えばイオン交換若しくは逆相ＨＰＬＣ）により求められるように、純度９５または９９％を超えて精製される。抗体純度の評価のための方法についての概説については、例えばＦｌａｔｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ  ８４８：７９−８７（２００７）を参照のこと。
【００３７】
「抗体」という用語は、本明細書において最も広範な意味で用いられ、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
【００３８】
「対象となる抗ポリペプチド抗体」及び対象ポリペプチド「に結合する抗体」という用語は、抗体が、対象ポリペプチドを標的にする診療及び／または治療剤として有用となるように、十分な親和性で対象ポリペプチドに結合可能な抗体を指す。一実施形態では、対象となる抗ポリペプチド抗体の、無関係の対象となる非ポリペプチドのタンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定されるように、抗体の対象ポリペプチドへの結合の約１０％未満である。ある種の実施形態では、対象ポリペプチドに結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある種の実施形態では、対象となる抗ポリペプチド抗体は、異なる種からの対象ポリペプチド内で保存された、対象ポリペプチドのエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、対象ポリペプチドはＧ９ａである。
【００３９】
「遮断抗体」または「アンタゴニスト抗体」は、それが結合する抗原の生物活性を阻害するまたは低減させる抗体である。好ましい遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物活性を実質的にまたは完全に阻害する。
【００４０】
「親和性」とは、分子（例えば抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）との間の、総計の非共有結合性相互作用の強度を指す。特に指示がない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」とは、結合対のメンバー（例えば抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野において既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するために具体的な例示説明及び例となる実施形態は、以下に記載されている。
【００４１】
「抗体断片」とは、無傷抗体が結合する抗原と結合する無傷抗体の一部分を含む無傷抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
【００４２】
参照抗体と「同一のエピトープに結合する抗体」とは、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する抗体、及び逆に、競合アッセイにおいて、この抗体のその抗原への結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。
【００４３】
「キメラ」抗体という用語は、重及び／または軽鎖の一部が特定の源または種に由来する一方で、重及び／または軽鎖の残部が異なる源または種に由来する抗体を指す。
【００４４】
「完全長抗体」、「無傷抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で同じ意味で用いられ、自然抗体の構造と実質的に同様の構造を有する、またはＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指す。
【００４５】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用する場合、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は、同一であり、かつ／または同一のエピトープと結合するが、例えば、自然発生の突然変異体を含有する、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に発生する、可能性のある変異型抗体は例外であり、かかる変異体は一般に少量で存在する。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を典型的に含む、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。故に、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されないものとする。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法、モノクローナル抗体を作製するためのかかる方法及び他の例となる方法を含むが、これらに限定されない、様々な技術によって作製され得る。
【００４６】
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞によって産生された、またはヒト抗体レパートリーを利用する非ヒト源に由来する、抗体のアミノ酸配列、または他のヒト抗体コード配列に対応する、アミノ酸配列を保有するものである。ヒト抗体のこの定義は、具体的には、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を除外する。
【００４７】
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある種の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、そのＨＶＲ（例えばＣＤＲ）のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト抗体のものに対応し、そのＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の、「ヒト化形態」とは、ヒト化を経た抗体を指す。
【００４８】
本明細書で使用する場合、「標的治療剤」という用語は、対象ポリペプチド（複数を含む）に結合し、特定の対象ポリペプチド（複数を含む）の活性及び／または活性化を阻害する治療剤を指す。かかる薬剤の例としては、対象ポリペプチドに結合する抗体及び低分子が挙げられる。
【００４９】
「化学療法剤」とは、癌治療に有用な化合物を指す。化学療法の例としては、以下が挙げられる：チオテパ及びシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチロメラミンを含むエチレンイミン及びメチラメラミン；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；β−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニマスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のニトロソウレア；エンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１（例えばＮｉｃｏｌａｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４））；経口α−４インテグリン阻害剤のＣＤＰ３２３；ジネミシンＡを含むジネミシン；エスペラミシン、加えてネオカルチノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム注射剤（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ  Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドクソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣ等のマイトマイシン、マイコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン等の抗生物質；メトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）等の代謝拮抗剤；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキセート等の葉酸類似体；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン等のプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジネン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン等のピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン等のアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン等の抗副腎剤；フロリン酸等の葉酸補充剤；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシン及びアンサマイトシン等のメイタンシノイド；ミトグアゾン；マイトキサントロン；モピダンモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標））、パクリタキセルのアルブミン組換えナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））；クロランブシル；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン（例えばＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン等の白金製剤；チューブリン重合を微小管形成から保護するビンカ（ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む）；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダ��レキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸等のレチノイド（ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標）を含む）；クロドロネート（例えばＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）若しくはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））等のビスホスホネート；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；ならびに製薬上許容できる上述のいずれかの塩、酸または誘導体；加えてＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの併用療法の略語）等の、上記の２つ以上の組み合わせ；ならびにＦＯＬＦＯＸ（５−ＦＵ及びロイコボリンを混ぜ合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））による治療レジメンの略語）。
【００５０】
「細胞毒性剤」という用語は、本明細書で使用する場合、細胞機能を阻害若しくは妨げる、及び／または細胞死若しくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。該用語は、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素）、化学療法剤または薬物（例えばメトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、若しくは他の挿入剤）、成長阻害剤、核酸分解酵素等の酵素及びその断片、抗生物質、ならびに微生物、菌類、植物、若しくは動物由来の低分子毒素または酵素活性毒素等の毒素を含むことを目的とし、これには、その断片及び／または変異体、ならびに以下に開示される種々の抗腫瘍剤または抗癌剤が含まれる。他の細胞毒性剤を以下に記載する。腫瘍崩壊剤は、腫瘍細胞の破壊の原因となる。
【００５１】
「免疫複合体」は、細胞毒性剤を含むが、これに限定されない、１つ以上の異種分子（複数を含む）に結合した抗体である。
【００５２】
「個体応答」または「応答」は、（１）減速及び完全停止を含む、疾患の進行（例えば癌の進行）をある程度阻害すること、（２）腫瘍サイズの減少、（３）隣接した末梢臓器及び／若しくは組織中への癌細胞の侵入阻害（すなわち低減、減速または完全停止）、（４）転移阻害（すなわち低減、減速または完全停止）、（５）疾患または障害（例えば癌）に関連する１つ以上の症状のある程度の回復、（６）無進行生存の長さの増加、ならびに／または（７）治療後のある時点での死亡率の低下を含む、個体への有効性を示す任意の終点を用いて評価することが可能であるが、これらに限定されない。
【００５３】
「実質的に同じ」という用語は、本明細書で使用する場合、２つの数値の類似性の程度が、当業者が、該値（例えばＫｄ値または発現）により測定した生物学的特性の背景の中で、２つの値の差に生物学的、及び／または統計的有意性がない、若しくはほとんどないと考えるように、十分に大きいことを表す。該２つの値の差は、例えば、参照／コンパレータ値の関数として、約５０％未満、約４０％未満、約３０％未満、約２０％未満、及び／または約１０％未満である。
【００５４】
「実質的に異なる」という語句は、本明細書で使用する場合、２つの数値の差の程度が、当業者が、該値（例えばＫｄ値）により測定した生物学的特性の背景の中で、２つの値の差が統計的に有意であると考えるように、十分に大きいことを意味する。該２つの値の差は、例えば、参照／コンパレータ分子に対する値の関数として、約１０％超、約２０％超、約３０％超、約４０％超、及び／または約５０％超である。
【００５５】
物質／分子、例えば医薬組成物の「有効量」とは、必要な用量及び期間で所望の治療または予防結果を達成するのに有効な量を指す。
【００５６】
物質／分子の「治療的有効量」は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、ならびに物質／分子が個体内で所望の応答を誘発する能力等の要因によって変化し得る。「治療的有効量」とはまた、物質／分子の任意の毒性または有害作用より、治療的に有益な効果が上回る量である。「予防的有効量」とは、必要な用量及び期間で、所望の予防効果を達成する有効量を指す。必ずしもではないが通常、予防的用量は疾患の初期段階時または前に対象において使用されるため、予防的有効量は治療的有効量よりも少ない。
【００５７】
「薬学的製剤」という用語は、その中に含まれる有効成分の生物活性を有効にするような形態であり、かつ製剤が投与される対象に対して許容されない毒性を有する追加の成分を含まない配合物を指す。
【００５８】
「薬学的に許容される担体」とは、有効成分以外の、対象に無毒の製剤処方中の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５９】
「薬学的に許容される塩」という語句は、本明細書で使用する場合、化合物の薬学的に許容される有機または無機の塩を指す。
【００６０】
本明細書で使用する場合、「治療」（及び例えば「治療する」または「治療すること」等の文法的な変形）とは、治療される個体の自然経過を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、または臨床病理の過程の間に行うことができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発症または再発の防止、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行度の低減、病状の回復または緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅らせる、または疾患の進行を遅くするために使用される。
【００６１】
「個体」または「対象」は哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えばヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、ならびに齧歯類（例えばマウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。ある種の実施形態では、個体または対象はヒトである。
【００６２】
「同時に」という用語は、本明細書において、２つ以上の治療剤の投与において、それらの個体への治療効果の時間が重複するように、時間の近接性が十分に高いことを指すために用いられる。したがって、同時投与には１つ以上の他の作用物質の投与を中止した後で、１つ以上の作用物質の投与を継続する投与レジメンが含まれる。いくつかの実施形態では、同時投与は、並行的、逐次的、及び／または同時的である。
【００６３】
「低減または阻害する」とは、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を意味する。低減または阻害するとは、治療される障害の症状、転移の存在若しくはサイズ、または原発腫瘍のサイズを指すことができる。
【００６４】
「添付文書」という用語は、適応症、使用法、用量、投与、併用療法、かかる治療製品の使用に関する禁忌及び／または警告に関する情報を含む、治療製品販売用パッケージに通常含まれる説明書を指すために使用される。
【００６５】
「製品」とは、少なくとも１つの試薬、例えば疾患若しくは障害（例えば癌）の治療用薬剤、または本明細書で記載される生体指標を特異的に検出するプローブを含む任意の製造物（例えばパッケージ若しくは容器）またはキットである。ある種の実施形態では、製造物またはキットは本明細書記載の方法を実施する一単位として促進、配布、または販売されてよい。
【００６６】
当業者により理解される通り、本明細書における「約」の値またはパラメータへの言及には、その値またはパラメータ自体に向けられる実施形態が含まれる（かつそれについて記載する）。例えば、「約Ｘ」を指す説明には、「Ｘ」の説明が含まれる。
【００６７】
本明細書に記載される発明の態様及び実施形態には、態様及び実施形態「からなる」及び／または「から本質的になる」が含まれることが理解される。本明細書で使用する場合、特に指示がない限り、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」には複数への言及が含まれる。
【００６８】
ＩＩ．方法及び使用
例えば、癌治療及び／または薬剤耐性の防止（例えば単剤及び／または併用療法）に対するＧ９ａ拮抗剤の使用方法が、本明細書に提供される。例えば、個体にＧ９ａ拮抗剤を単独でまたは他の癌治療剤と組み合わせて投与することを含む、個体における癌の治療方法。いくつかの実施形態では、個体は癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を用いる治療のために選択される。いくつかの実施形態では、個体は、癌治療剤による治療前に、Ｇ９ａ拮抗剤を投与することを含む治療を開始する。いくつかの実施形態では、個体は、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤を含む治療を同時に受ける。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、癌感受性の期間を増大させる、及び／または癌耐性の発生を遅らせる。
【００６９】
Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の利用方法もまた、本明細書に提供される。
【００７０】
具体的には、個体に、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、ならびに（ｂ）癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を投与することを含む、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、癌治療剤に対する癌感受性の期間を増大させる及び／または細胞耐性の発生を遅らせるのに有効である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、癌治療剤を含む癌治療の有効性を増大させるのに有効である。例えば、いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の癌治療剤を投与することを含む治療（例えば標準治療の治療）と比較して、有効性を増加させるのに有効である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤のそれぞれの量は、Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の癌治療剤を投与することを含む治療（例えば標準ケア治療）と比較して、応答（例えば完全寛解）を増大させるのに有効である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７１】
更に、個体に（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、個体への癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を含む癌治療の有効性を増大させる方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７２】
癌治療は、個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を投与することを含み、該癌治療は、Ｇ９ａ拮抗剤を含まない（不在下での）有効量の癌治療剤を投与することを含む治療（例えば標準ケア治療）と比較して、増大した有効性を有する、個体における癌の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７３】
更に、個体に（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、個体における癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）に対する耐性を有する癌の発生を遅らせる、及び／または防止する方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７４】
個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）に対する耐性の発生の可能性を増大した癌を患う個体の治療方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７５】
更に、個体に（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌を患う個体において癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）に対する感受性を増大させる方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７６】
更に、個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌を患う個体における癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の感受性の期間を延ばす方法が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７７】
個体に、（ａ）有効量のＧ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）有効量の癌治療剤を投与することを含む、癌を患う個体における癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）に対する応答の持続期間を延ばす方法もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７８】
向上した癌治療の提供に加え、本明細書に記載されるある種の組み合わせの投与により、異なる治療を受ける同一の患者が経験する生活の質と比較して、患者の生活の質が向上し得る。例えば、本明細書に記載されるように、個体にＧ９ａ拮抗剤及び癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の組み合わせを投与することにより、癌治療剤のみを治療として受けた場合に同一の患者が経験する生活の質と比較して、向上した生活の質が提供され得る。例えば、本明細書に記載される組み合わせによる併用療法により、必要な癌治療剤の投与量が減少し得、それにより、治療に関係する副作用（例えば悪心、嘔吐、脱毛、発疹、食欲減退、体重減少等）が減少する。組み合わせにより、腫瘍量、及び疼痛、臓器機能不全、体重減少等の関連する有害事象の低下もまた、引き起こされ得る。したがって、一態様は、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）により癌治療をした患者の生活の質を向上するための、治療上の使用のためのＧ９ａ拮抗剤を提供する。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、癌治療剤は、標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤である。いくつかの実施形態では、標的療法剤及び／または化学療法剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤、ＲＡＦ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、タキサン、及び白金製剤の１つ以上である。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。
【００７９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、自然または合成由来である。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、またはポリヌクレオチドである。
【００８０】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌治療剤は標的療法剤である。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌治療剤は化学療法剤である。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌治療剤は放射線治療剤である。
【００８１】
本明細書で使用する治療に対して耐性を有する癌としては、治療に対する応答性のない、及び／または著しい応答（例えば部分応答及び／若しくは完全応答）を生み出す能力が低下した癌が挙げられる。耐性は、治療法の過程において生じる獲得耐性であってよい。いくつかの実施形態では、獲得薬剤耐性は、一過性、及び／または可逆的薬剤耐性である。治療に対する一過性及び／または可逆的薬剤耐性としては、治療法の中断後に、治療に対する感受性を回復可能な薬剤耐性が挙げられる。いくつかの実施形態では、獲得耐性は持続耐性である。治療に対する持続耐性としては、薬剤耐性を付与する遺伝子変化が挙げられる。
【００８２】
本明細書で使用される治療剤に対して感受性を有する癌としては、応答性がある、ならびに／または著しい応答（例えば部分応答及び／または完全応答）を生み出すことが可能な癌が挙げられる。
【００８３】
治療剤に対する耐性の獲得及び／または感受性の維持を評価する測定方法は、当技術分野において既知であり、実施例に記載されている。薬剤耐性及び／または感受性は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤の存在下、及び／若しくは不存在下で、比較癌細胞または細胞集団を癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／若しくは放射線治療剤）に曝露すること、ならびに／または（ｂ）例えば、癌細胞の増殖、細胞生存能、アポトーシスのレベル及び／若しくは割合、ヒストン３  リジン９（Ｈ３Ｋ９）のメチル化状態（例えばモノメチル化、ジメチル化、及び／若しくはトリメチル化）、ならびに／若しくは反応のうちの１つ以上をアッセイすることにより測定されてもよい。
【００８４】
薬剤耐性及び／または感受性は、時間の経過と共に、及び／または種々の濃度の癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／若しくは放射線治療剤）、及び／または種々の量のＧ９ａ拮抗剤で測定されてもよい。薬剤耐性及び／または感受性を更に測定して、かつ／または親細胞、薬剤耐性のある生残細胞、及び／または薬剤耐性が拡大した細胞株の生残細胞を含む比較細胞株（例えばＰＣ９及び／またはＨ１２９９）と比較してもよい。いくつかの実施形態では、細胞生存能をＣｙＱｕａｎｔ  Ｄｉｒｅｃｔ細胞増殖アッセイによりアッセイしてもよい。薬剤耐性等の耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化を、実施例及びＳｈａｒｍａらにて記載されたようにして、薬剤耐性がある存続生物の成長をアッセイすることにより評価してもよい。持続耐性及び／または拡大した存続生物等の耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化は、実施例及びＳｈａｒｍａらにて記載されたようにして、薬剤耐性がある拡大した耐性生物の成長をアッセイすることにより評価されてもよい。いくつかの実施形態では、耐性は、ＩＣ５０、ＥＣ５０の変化、または薬剤耐性がある存続生物及び／若しくは薬剤耐性がある拡大した存続生物における腫瘍成長の減少で示されてもよい。いくつかの実施形態では、変化は、約５０％、約１００％、及び／または約２００％のいずれかより大きい。加えて、耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化を、例えば、応答、応答の持続時間、及び／または治療に対する、進行までの時間（例えば部分応答及び完全応答）を評価することにより、インビボで評価してもよい。耐性の獲得及び／または感受性の維持における変化は、応答の変化、応答の持続時間、及び／または個体の集団における治療に対する、進行までの時間、例えば部分応答及び完全応答に基づいてよい。
【００８５】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍癌である。いくつかの実施形態では、癌は、肺癌、乳癌、結腸直腸癌、大腸癌、黒色腫、及び／または膵臓癌である。いくつかの実施形態では、癌は肺癌（例えば非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））である。いくつかの実施形態では、癌は乳癌である。いくつかの実施形態では、癌は、高いレベルのＨ３Ｋ９のトリメチル化を有する。いくつかの実施形態では、癌は、高いレベルのＨ３Ｋ９のジメチル化を有する。いくつかの実施形態では、癌は、高いレベルのＨ３Ｋ９のモノメチル化を有する。いくつかの実施形態では、癌は、増加するレベルのＨ３Ｋ９のトリメチル化を発生させる危険性がある。いくつかの実施形態では、癌は、増加するレベルのＨ３Ｋ９のジメチル化を発生させる危険性がある。いくつかの実施形態では、癌は、増加するレベルのＨ３Ｋ９のモノメチル化を発生させる危険性がある。
【００８６】
本明細書に記載される併用療法のいずれかにおいて、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を含む治療方法を開始する際に、癌は、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を単独で含む治療方法に対して感受性を有してもよい（感受性の例としては、応答性があること、ならびに／または著しい応答（例えば部分応答及び／または完全応答）を生み出すことが可能であることが挙げられるが、これらに限定されない）。本明細書に記載される併用療法のいずれかにおいて、Ｇ９ａ拮抗剤及び癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を含む治療方法を開始する際に、癌は、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を単独で含む治療方法に対して耐性を有していなくてもよい（耐性の例としては、応答性がないこと、ならびに／または著しい応答を生み出す能力（例えば部分応答及び／若しくは完全応答）の低下、及び／若しくはそれが不可能なことが挙げられるが、これらに限定されない）。
【００８７】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、上記の実施形態のうちのいずれかに従う個体は、ヒトであってもよい。
【００８８】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、併用療法は同時に投与されてもよい。いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同一または別々の製剤に含まれる）、及び個別投与を包含してよく、この場合、Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の投与は、追加の治療剤及び／またはアジュバントの投与前に、同時に、逐次的に、並行的に、及び／またはそれに続いて実施してもよい。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の前に、及び／またはそれと同時に投与される。いくつかの実施形態では、併用療法は、更に、放射線治療及び／または追加の治療剤を含む。
【００８９】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）は、経口、非経口、肺内、及び経鼻投与、ならびに局所治療のために所望される場合、病巣内投与を含む任意の好適な手段により投与することができる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が挙げられる。投薬は、部分的には、投与が短期的なものか長期にわたるものかに応じて、例えば静脈内または皮下注射等の注射による、任意の好適な経路により行うことができる。種々の時点における単一または複数投与、ボーラス投与、及びパルス注入が挙げられるがこれらに限定されない種々の投与スケジュールが、本明細書において企図される。
【００９０】
いずれかの方法におけるいくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＧ９ａ拮抗剤（例えば抗体、結合ポリペプチド、及び／または結合低分子）ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）は、良好な医療実務に合わせた方法で配合、投薬、及び投与してもよい。本文脈で考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、作用物質の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医師に公知の他の要因が挙げられる。Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）は、必ずしもではないが、所望により、問題の疾患の予防または治療に現在使用されている１つ以上の作用物質と配合する。かかる他の作用物質の有効量は、製剤中に存在するＧ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の量、疾患または治療の種類、ならびに上述の他の要因によって異なる。これらは通常、本明細書に記載される同一用量及び投与経路、若しくは本明細書で記載される１〜９９％の用量、または実験的／臨床的に適切と決定される任意の用量及び任意の経路で使用される。
【００９１】
疾患の予防または治療に対し、本明細書に記載されるＧ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の適切な用量（単独で、または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用する場合）は、治療される疾患のタイプ、疾患の重症度及び経過、Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）が予防または治療目的で投与されるかどうか、薬歴、治療歴、患者の病歴ならびにＧ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）に対する応答、ならびに主治医の自由裁量に依存する。Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）は、一度にまたは一連の治療において患者に好適に投与される。数日間またはそれ以上にわたる反復投与において、状態に応じ、治療は通常、病徴の所望の抑制が生じるまで続けられる。かかる用量は、断続的に、例えば毎週または三週間ごとに（例えば、患者がＧ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の投与を約２〜約２０回、または例えば約６回受け取るように）投与してもよい。最初の多めの投与量、それに続くより少ない用量を一回以上投与してもよい。代表的な投与レジメンには投与が含まれる。しかし、他の投薬レジメンも有用であり得る。この治療の進行は、従来技術及びアッセイによって容易に監視される。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＥＧＦＲ拮抗剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＲＡＦ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）ＰＩ３Ｋ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、及び（ｂ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、（ａ）Ｇ９ａ拮抗剤、（ｂ）タキサン（例えばパクリタキセル）、及び（ｃ）白金製剤（例えばカルボプラチンまたはシスプラチン）を含む。
【００９２】
上記の製剤または治療法のうちのいずれかが、免疫複合体をＧ９ａ及び／または癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）として使用して実施してもよいことを理解されよう。
【００９３】
ＩＩＩ．治療用組成物
本明細書に記載される方法での使用のための、Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を含む組み合わせが、本明細書に提供される。ある種の実施形態では、組み合わせにより、単独で投与される癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の有効性が増大する。ある種の実施形態では、組み合わせは、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）に対する癌耐性の発生を遅らせる、及び／または防止する。ある種の実施形態では、組み合わせは、癌を患う個体における癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の感受性の期間を延ばす。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び／または癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）（例えばＥＧＦＲ拮抗剤、ＰＩ３Ｋ拮抗剤、及び／またはＲＡＦ阻害剤）は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、及び／またはポリヌクレオチドである。Ｇ９Ａは、ユークロマチンにおいて、ヒストンＨ３の「Ｌｙｓ−９」を特異的にモノ及びジメチル化（それぞれ、Ｈ３Ｋ９ｍｅ１及びＨ３Ｋ９ｍｅ２）するヒストンメチルトランスフェラーゼである。Ｈ３Ｋ９ｍｅは、メチル化ヒストンにＨＰ−１タンパク質を動員することによってエピジェネティックな転写抑制のための特異的なタグを表す。Ｇ９ａはまた、ラミン関連ドメインへの動員を媒介し、及び／またはＤＮＡのメチル化を開始する、ヘテロクロマチンにおける役割を果たし得る。
【００９４】
Ｇ９ａ拮抗剤のいずれかに関するいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、ＩＣ５０が約４μΜ、約２μΜ、約１μΜ、約５００ｎＭ、約２５０ｎＭ、約２００ｎＭ、約１５０ｎＭ、約１００ｎＭ、約７５ｎＭ、約５０ｎＭ、及び／または約３０ｎＭのうちのいずれかより良好な（例えば未満の）Ｇ９ａを有する。化合物に対するＧ９ａ  ＩＣ５０の測定方法は、当技術分野において既知である。
【００９５】
Ｇ９ａ拮抗剤のいずれかに関するいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、約５μΜ、約７．５μΜ、約１０μΜ、約１５μΜ、及び／または約２０μΜのうちのいずれかよりも大きいＩＣ５０を有する。
【００９６】
Ｇ９ａ拮抗剤のいずれかに関するいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は、約２５μΜ、約１５μΜ、約１０μΜ、約７．５μΜ、約５μΜ、約４μΜ、約３．５μΜ、約３μΜ、約２．５μΜ、約２μＭ、及び／または約１μＭのうちのいずれかより良好な（例えば未満の）Ｈ３Ｋ９ｍｅ（例えばｍｅ１、ｍｅ２、及び／またはｍｅ３）のＥＣ５０を有する。化合物に対するＨ３Ｋ９ｍｅ  ＥＣ５０の測定方法は、当技術分野において既知であり（ｗｏｒｌｄ−ｗｉｄｅ−ｗｅｂ  ｊｂｃ．ｏｒｇ／ｃｇｉ／ｄｏｉ／１０．１０７４／ｊｂｃ．Ｍ１１２．４１９８６１で入手可能なＳａｙｅｇｈ  ｅｔ  ａｌ．ＪＢＣ  Ｍａｎｕｓｃｒｉｐｔ  Ｍ１１２．４１９８６１（２０１３）、及びＫｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．ＦＥＢＳ  Ｊ．２７９：１９０５−１９１４（２０１２）を参照されたく、それらの全体が参照することにより本明細書に組み込まれる）、かつ本明細書に記載される。
【００９７】
ペプチド依存性の代謝回転率は、基質ペプチド存在下での代謝回転率から、ペプチド不在下での代謝回転率を減ずることにより計算される。阻害率及びＩＣ５０は、所定の阻害剤濃度におけるペプチド依存性の代謝回転率を用いて計算される。各阻害剤のＩＣ５０値の計算は、ＧｒａＦｉｔソフトウェア（Ｅｒｉｔｈａｃｕｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｌｔｄ．，Ｓｕｒｒｅｙ  ＵＫ）を使用して行われる。
【００９８】
本明細書に記載される方法において有用なＥＧＦＲ拮抗剤もまた、本明細書に提供される。ＥＧＦＲは、Ｕｌｌｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ（１９８４）３０９：４１８４２５に記載される、受容体型チロシンキナーゼポリペプチドの上皮成長因子受容体（あるいは、Ｈｅｒ−１及びｃ−ｅｒｂＢ遺伝子産物と呼ばれる）ならびにＥＧＦＲｖＩＩＩ等の変異体を意味する。ＥＧＦＲの変異体にはまた、欠失、置換及び挿入変異体、例えばＬｙｎｃｈら（ＮＥＪＭ  ２００４，３５０：２１２９）、Ｐａｅｚら（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２００４，３０４：１４９７）、Ｐａｏら（ＰＮＡＳ  ２００４，１０１：１３３０６）に記載されるものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲは野生型ＥＧＦＲであり、通常は自然発生のＥＧＦＲタンパク質のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、及び／またはポリヌクレオチドである。
【００９９】
例となるＥＧＦＲ拮抗剤（抗ＥＧＦＲ抗体）としては、ニモツズマブ（ＹＭ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）として知られるヒト化モノクローナル抗体等の抗体、完全ヒトＡＢＸ−ＥＧＦ（パニツムマブ、Ａｂｇｅｎｉｘ  Ｉｎｃ．）、ならびにＥ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３、及びＥ７．６．３として知られ、ＵＳ６，２３５，８８３に記載されている完全ヒト抗体、ＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ  Ｉｎｃ）が挙げられる。ペルツズマブ（２Ｃ４）は、ＨＥＲ２に直接結合するが、ＨＥＲ２−ＥＧＦＲの二量体化を妨げることにより、ＥＧＦＲのシグナル伝達を阻害するヒト化抗体である。ＥＧＦＲに結合する抗体の他の例としては、ＧＡ２０１（ＲＧ７１６０；Ｒｏｃｈｅ  Ｇｌｙｃａｒｔ  ＡＧ）、ＭＡｂ  ５７９（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ  ８５０６）、ＭＡｂ  ４５５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ  ２２５（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０８）、ＭＡｂ  ５２８（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５０９）（Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎらの米国特許第４，９４３，５３３号を参照）及びその変異体（キメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標）））ならびに再構成ヒト２２５（Ｈ２２５）（ＷＯ９６／４０２１０，Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．を参照；完全ヒトＥＧＦＲ標的抗体、ＩＭＣ−１１Ｆ８（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型変異型ＥＧＦＲと結合する抗体（米国特許第５，２１２，２９０号）；米国特許第５，８９１，９９６号に記載されているような、ＥＧＦＲと結合するヒト化及びキメラ抗体；ならびにＥＧＦＲと結合するヒト抗体、例えばＡＢＸ−ＥＧＦ（ＷＯ９８／５０４３３，Ａｂｇｅｎｉｘを参照）；ＥＭＤ  ５５９００（Ｓｔｒａｇｌｉｏｔｔｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３２Ａ：６３６−６４０（１９９６））；ＥＧＦＲ結合に対してＥＧＦ及びＴＧＦ−αの両方と競合するＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体、ＥＭＤ７２００（マツズマブ）；ならびにｍＡｂ  ８０６またはヒト化ｍＡｂ  ８０６（Ｊｏｈｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（２９）：３０３７５−３０３８４（２００４））が挙げられる。抗ＥＧＦＲ抗体は、細胞毒性剤と結合して、免疫複合体を産生する場合がある（例えば、ＥＰ６５９，４３９Ａ２，Ｍｅｒｃｋ  Ｐａｔｅｎｔ  ＧｍｂＨを参照）。いくつかの実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブである。いくつかの実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体はパニツムマブである。いくつかの実施形態では、抗ＥＧＦＲ抗体は、ザルツムマブ、ニモツズマブ、及び／またはマツズマブである。
【０１００】
本方法で有用な抗ＥＧＦＲ抗体としては、ＥＧＦＲに対して十分な親和性及び特異性を持って結合し、かつＥＧＦＲ活性を低減または阻害可能な任意の抗体が挙げられる。選択された抗体は通常、ＥＧＦＲに対して十分強力な結合親和性を有し、例えば、該抗体はヒトｃ−ｍｅｔと、１００ｎＭ〜１ｐＭのＫｄ値で結合してもよい。抗体親和性は例えば、表面プラズモン共鳴に基づくアッセイ（ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００５／０１２３５９号）に記載されているようなＢＩＡＣｏｒｅアッセイ等）；酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）；及び競合アッセイ（例えばＲＩＡ）により測定してもよい。好ましくは、本発明の抗ＥＧＦＲ抗体は、ＥＧＦＲ／ＥＧＦＲリガンド活性が関係する疾患または状態を標的にし、かつ妨げる治療剤として使用することが可能である。また、例えば治療剤としての有効性を評価するために、該抗体に他の生物活性アッセイを行ってもよい。かかるアッセイは、当技術分野において既知であり、標的抗原及び抗体の使用目的によって異なる。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ発現細胞に対する細胞防御機構に焦点を当てるために、ＥＧＦＲアームは、Ｔ細胞受容体分子（例えばＣＤ２若しくはＣＤ３）等の白血球へのトリガー分子、またはＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）等の、ＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃ受容体と結合するアームと組み合わせてもよい。更に、ＥＧＦＲを発現する細胞に対して細胞毒性剤を局在化するために、二重特異性抗体を使用してもよい。これらの抗体は、ＥＧＦＲ結合アーム、及び細胞毒性剤（例えばサポリン、抗インターフェロンα、ビンカアルカロイド、リシンＡ鎖、メトトレキサート、または放射性同位体ハプテン）と結合するアームを有する。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えばＦ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製することができる。
【０１０１】
例となるＥＧＦＲ拮抗剤はまた、ＵＳ５６１６５８２、ＵＳ５４５７１０５、ＵＳ５４７５００１、ＵＳ５６５４３０７、ＵＳ５６７９６８３、ＵＳ６０８４０９５、ＵＳ６２６５４１０、ＵＳ６４５５５３４、ＵＳ６５２１６２０、ＵＳ６５９６７２６、ＵＳ６７１３４８４、ＵＳ５７７０５９９、ＵＳ６１４０３３２、ＵＳ５８６６５７２、ＵＳ６３９９６０２、ＵＳ６３４４４５９、ＵＳ６６０２８６３、ＵＳ６３９１８７４、ＷＯ９８１４４５１、ＷＯ９８５００３８、ＷＯ９９０９０１６、ＷＯ９９２４０３７、ＷＯ９９３５１４６、ＷＯ０１３２６５１、ＵＳ６３４４４５５、ＵＳ５７６００４１、ＵＳ６００２００８、及び／またはＵＳ５７４７４９８に記載される化合物等の結合低分子も挙げられる。特定の結合低分子ＥＧＦＲ拮抗剤としては、ＯＳＩ−７７４（ＣＰ−３５８７７４、エルロチニブ、ＯＳＩ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ  １８３８０５（ＣＩ  １０３３、２−プロペンアミド、Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−７−［３（４−モルホリニル）プロポキシ］−６−キナゾリニル］−、ジヒドロクロリド、Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）；Ｉｒｅｓｓａ（登録商標）（ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ  １０５１８０（（６−アミノ−４−（３−メチルフェニル−アミノ）−キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ−１３８２（Ｎ８−（３−クロロ−４−フルオロ−フェニル）−Ｎ２−（１−メチル−ピペリジン−４−イル）−ピリミド［５，４−ｄ］ピリミジン−２，８−ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ−１６６（（Ｒ）−４−［４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール）；（Ｒ）−６−（４−ヒドロキシフェニル）−４−［（１−フェニルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン）；ＣＬ−３８７７８５（Ｎ−［４−［（３−ブロモフェニル）アミノ］−６−キナゾリニル］−２−ブチンアミド）；ＥＫＢ−５６９（Ｎ−［４−［（３−クロロ−４−フルオロフェニル）アミノ］−３−シアノ−７−エトキシ−６−キノリニル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド）；ラパチニブ（タイケルブ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＺＤ６４７４（ザクティマ、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＣＵＤＣ−１０１（Ｃｕｒｉｓ）；カネルチニブ（ＣＩ−１０３３）；ＡＥＥ７８８（６−［４−［（４−エチル−１−ピペラジニル）メチル］フェニル］−Ｎ−［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン、ＷＯ２００３０１３５４１、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、及びＰＫＩ１６６  ４−［４−［［（１Ｒ）−１−フェニルエチル］アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−６−イル］−フェノール、ＷＯ９７０２２６６  Ｎｏｖａｒｔｉｓ）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンアミン、及び／またはその薬学的に許容される塩（例えば、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリンア��ン塩酸塩）である。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、ゲフィチニブ、及び／またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、ラパチニブ、及び／またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、ゲフィチニブ及び／またはエルロチニブである。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ拮抗剤は、ＥＧＦＲに対する特異的阻害剤であってもよい。いくつかの実施形態では、該阻害剤は、ＥＧＦＲ拮抗剤がＥＧＦＲ及び１つ以上の他の標的ポリペプチドを阻害する二重阻害剤または汎阻害剤であってもよい。
【０１０３】
ホスホイノシチド３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、主要な生化学機能が、ホスホイノシチドの３−ヒドロキシル基をリン酸化することである脂質キナーゼのファミリーである。ＰＩ３Ｋ阻害剤の例は、当技術分野において既知であり、ワートマニン、ＬＹ２９４００２、ＳＦ１１２６（低分子プロドラッグであって、インテグリン結合成分に連結した、ＬＹ２９４００２の複合体）、ＮＶＰ−ＢＥＺ２３５（イミダゾキノリン誘導体）、ＮＶＰ−ＢＧＴ２２６、ＸＬ７６５、ＧＤＣ−０９８０、ＰＦ−０４６９１５０２、ＰＦ−０５２１２３８４、ＰＫＩ−５８７、ＮＶＰ−ＢＫＭ１２０、ＸＬ１４７、ＰＸ−８６６、ＧＤＣ−０９４１、ＧＳＫ６１５、及び／またはＣＡＬ−１０１が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＰＩ３Ｋ阻害剤は、ＷＯ２００９／１１４８７４、ＷＯ２００９／０８８９９０、ＵＳ７５１１０４１、ＵＳ７６６６９０１、ＵＳ７６６２９７７、ＷＯ２０１０／０４６６３９、ＵＳ２０１００１０５７１１、ＷＯ２０１０／０３７７６５、ＵＳ２０１０００８７４４０、ＷＯ２０１００３４４１４、ＵＳ２０１０００７５９６５、ＵＳ２０１０００７５９５１、ＵＳ２０１０００７５９４７、ＷＯ２０１０／０３８１６５、ＷＯ２０１０／０３６３８０、ＷＯ２０１０／０５９７８８、ＷＯ２０１０／０４９４８１、ＷＯ２００９／１３４８２５、ＷＯ２００９／１２３９７１、ＷＯ２００９／０９９１６３、及び／またはＷＯ２００９／０４２６０７に記載されている化合物であり、参照することによりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【０１０４】
本明細書に記載される方法において、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）として有用なＲＡＦ阻害剤もまた、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、ＲＡＦ阻害剤はＢＲＡＦ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＲＡＦ阻害剤はＣＲＡＦ阻害剤である。例となるＢＲＡＦ阻害剤は、当技術分野において既知であり、例えばソラフェニブ、ＰＬＸ４７２０、ＰＬＸ−３６０３、ダブラフェニブ（ＧＳＫ２１１８４３６）、ＧＤＣ−０８７９、ＲＡＦ２６５（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ２８１、ＡＺ６２８、ＡＲＱ７３６、ＢＡＹ７３−４５０６、ベムラフェニブ、ならびにＷＯ２００７／００２３２５、ＷＯ２００７／００２４３３、ＷＯ２００９１１１２７８、ＷＯ２００９１１１２７９、ＷＯ２００９１１１２７７、ＷＯ２００９１１１２８０及び米国特許第７，４９１，８２９号に記載されているものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、選択的ＢＲＡＦ阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００の選択的阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ  Ｖ６００は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｋ、及び／またはＶ６００Ｄである。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ  Ｖ６００はＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｒである。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。いくつかの実施形態では、ＢＲＡＦ阻害剤はベムラフェニブである。
【０１０５】
ベムラフェニブ（ＲＧ７２０４、ＰＬＸ−４０３２、ＣＡＳ登録番号１０２９８７２−５５−５）は、種々の癌細胞株、例えば黒色腫細胞株でプログラム細胞死を引き起こすことが示されている。ＢＲＡＦが共通のＶ６００Ｅ変異体を有する場合、ベムラフェニブはＢＲＡＦ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路におけるＢＲＡＦ／ＭＥＫステップを妨げる。ベムラフェニブは患者、例えば癌がＶ６００Ｅ  ＢＲＡＦ変異体を有する、ＦＤＡにより承認された黒色腫の患者内で作用する（すなわち、ＢＲＡＦタンパク質のアミノ酸位置番号６００において、正常なバリンがグルタミン酸で置換される）。黒色腫の約６０％は、Ｖ６００Ｅ  ＢＲＡＦ変異体を有する。Ｖ６００Ｅ変異体は、リンパ腫、大腸癌、黒色腫、甲状腺癌及び肺癌を含む他の種々の癌に存在する。ベムラフェニブは以下の構造を有する。
【化５】
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【０１０６】
ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）は、アメリカで承認された製剤であり、ＦＤＡが承認する試験により検出されたＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異体を有する切除不能な、または転移性黒色腫を患う患者の治療に用いられている。ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）は、ＢＲＡＦ  Ｖ６００Ｅ変異体を欠失した黒色腫（野生型ＢＲＡＦ黒色腫）の患者での使用は推奨されない。
【０１０７】
本明細書に記載される方法において癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）として有用な白金系薬剤もまた、本明細書に提供される。白金系薬剤の例としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、及び／またはトリプラチンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、白金系薬剤はシスプラチンである。いくつかの実施形態では、白金系薬剤はカルボプラチンである。
【０１０８】
本明細書に記載される方法において癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）として有用なタキサンもまた、本明細書に提供される。タキサンは、チューブリンに結合し、微小管集合及び安定を促進し、かつ／または微小管の解重合を防ぎ得るジテルペン類である。本明細書に含まれるタキサンとしては、タキソイド１０−デアセチルバッカチンＩＩＩ及び／またはその誘導体がある。タキサンの例としては、パクリタキセル（すなわち、タキソール、ＣＡＳ番号３３０６９−６２−４）、ドセタキセル（すなわち、タキソテール、ＣＡＳ番号１１４９７７−２８−５）、ラロタキセル、カバジタキセル、ミラタキセル、テセタキセル、及び／またはオルタタキセルが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。いくつかの実施形態では、タキサンはドセタキセルである。いくつかの実施形態では、タキサンは、クレモフォア（例えばＴａｘｏｌ（登録商標））及びポリソルベート８０（例えばＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））等のＴｗｅｅｎ中に配合される。いくつかの実施形態では、タキサンはリポソーム封入タキサンである。いくつかの実施形態では、タキサンは、プロドラッグ形態である、かつ／またはタキサンの結合形態（例えばパクリタキセル、パクリタキセルポリグルメックス、及び／またはリノレイルカーボネート−パクリタキセルに共有結合したＤＨＡ）である。いくつかの実施形態では、パクリタキセルは、実質的に界面活性剤を用いずに（例えばＴｏｃｏｓｏｌ  Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ等のクレモフォア及び／またはＴｗｅｅｎの不存在下で）配合される。いくつかの実施形態では、タキサンは、アルブミンでコーティングされたナノ粒子（例えばアブラキサン及び／またはＡＢＩ−００８）である。いくつかの実施形態では、タキサンはＴａｘｏｌ（登録商標）である。
【０１０９】
本明細書に記載される方法において癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）として有用なビンカアルカロイドが、本明細書に提供される。ビンカアルカロイドは、本来ニチニチソウ由来の抗有糸分裂剤及び微小管阻害剤のまとまりである。ビンカアルカロイドの例としては、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ビンカアルカロイドはビノレルビンである。
【０１１０】
本明細書に記載される方法において癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）として有用なヌクレオシド類似体が、本明細書に提供される。ヌクレオシド類似体としては、ゲムシタビン、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジネン、ドキシフルリジン、エノシタビン、及び／またはフロクスウリジンが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ヌクレオシド類似体はゲムシタビンである。
【０１１１】
Ａ．抗体
本明細書に記載される方法における使用のための、Ｇ９ａ等の対象ポリペプチドに結合する単離抗体が、本明細書に提供される。上記の実施形態のうちのいずれかにおいて、抗体はヒト化している。更に、上記の実施形態のうちのいずれかによる抗体はモノクローナル抗体であり、キメラ、ヒト化またはヒト抗体を含む。一実施形態では、抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態では、抗体は完全長抗体、例えば「完全ＩｇＧ１」抗体、または本明細書に定義する他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
【０１１２】
更なる態様では、上記の実施形態のいずれかによる抗体は、以下の項に記載する機能のいずれかを、単独でまたは組み合わせて、導入してもよい。
【０１１３】
１．抗体親和性
ある種の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、≦１μΜ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、または≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）を有する。一実施形態では、Ｋｄは、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、対象抗体のＦａｂ版、及びその抗原と共に実施する。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定系の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原によりＦａｂを平衡化し、次いで、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングされたプレート（例えばＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照）で捕捉することにより測定する。アッセイについての条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後室温（約２３℃）で２〜５時間、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで遮断した。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）中で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を、対象Ｆａｂの連続希釈液と混合する（例えばＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）にある、抗ＶＥＧＦ抗体であるＦａｂ−１２の評価と一致する）。次いで、対象Ｆａｂを一晩インキュベートするが、確実に平衡状態に到達するように、インキュベーションを更に長い期間（例えば約６５時間）継続してもよい。その後、室温でのインキュベーションのため、混合物を捕捉プレートに移す（約１時間）。次いで、溶液を次いで除去し、プレートをＰＢＳ中の０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥すると、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数する。最大結合が２０％以下となる各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイでの使用のために選択する。
【０１１４】
別の実施形態によれば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用してＫｄを測定する。例えば、約１０の応答単位（ＲＵ）にて固定化抗原ＣＭ５チップを用いて、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いるアッセイを２５℃にて実施する。一実施形態では、供給業者の取扱説明書に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ、Ｉｎｃ．）をＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）により活性化する。５μＬ／分の流量で注入する前に、１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）により、抗原を５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈して、約１０応答単位（ＲＵ）の共役タンパク質を得る。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して未反応基を遮断する。動力学測定のために、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）と共に、２５℃にて、約２５μＬ／分の流量で、２倍のＦａｂ連続希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）をＰＢＳ中に注入する。簡単な１：１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン３．２）を使用して、会合及び解離センサーグラムを同時に一致させることにより、会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）をｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率として算出する。例えばＣｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。上記表面プラズモン共鳴アッセイにより会合速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、会合速度は、ストップトフロー分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）または撹拌キュベットを備えた８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定されるように、抗原濃度が増加する存在下で、２５℃における、ＰＢＳ中の２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）（ｐＨ７．２）の蛍光発光強度における増減を測定する蛍光消光技術（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍバンドパス）を使用することによって測定され得る。
【０１１５】
２．抗体断片
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、ならびに以下に記載する他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照のこと。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）中のＰｌｕｃｋｔｈuｎを参照のこと；また、ＷＯ９３／１６１８５；ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
【０１１６】
ダイアボディとは、二価または二重特異的であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。また、トリアボディ及びテトラボディは、Ｈｕｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）にも記載されている。
【０１１７】
単一ドメイン抗体とは、抗体の重鎖可変領域の全部若しくは一部、または軽鎖可変領域の全部若しくは一部を含む抗体断片である。ある種の実施形態では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照）。
【０１１８】
抗体断片は、本明細書に記載されるように、無傷抗体のタンパク分解消化、及び組換え宿主細胞（例えば大腸菌またはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、各種技術により製造可能である。
【０１１９】
３．キメラ及びヒト化抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体はキメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一実施例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えばマウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサル等の非ヒト霊長類由来の可変領域）、及びヒト定常領域を含む。更なる実施例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体としては、その抗原結合断片が挙げられる。
【０１２０】
ある種の実施形態では、キメラ抗体はヒト化抗体である。一般的に、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性は低下させるためにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）はヒト抗体配列に由来する１つ以上の可変領域を含む。ヒト化抗体はまた、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むであろう。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、非ヒト抗体（例えばＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換され、例えば、抗体の特異性または親和性が回復または改善される。
【０１２１】
ヒト化抗体及びその作成方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）、Ｑｕｅｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、第７，５２７，７９１号、第６，９８２，３２１号、及び第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：２５−３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」を記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチを記載）に詳しく記載されている。
【０１２２】
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を用いて選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照）；ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ  ａｎｄ  Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照）；ならびにＦＲライブラリーをスクリーニングすることによって誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２３】
４．ヒト抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の種々の技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は、ｖａｎ  Ｄｉｊｋ  ａｎｄ  ｖａｎ  ｄｅ  Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に全般的に記載されている。
【０１２４】
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してヒト可変領域を有する無傷なヒト抗体または無傷抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することにより調製してもよい。かかる動物は、典型的に、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換えるか、または染色体外に存在する、若しくは動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座のすべてまたは一部を含む。かかるトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、概して、不活性化されてきた。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ  ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第ＵＳ２００７／００６１９００号）も参照のこと。かかる動物により生成される無傷抗体のヒト可変領域を、例えば異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に修飾してもよい。
【０１２５】
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）、Ｂｒｏｄｅｕｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）、及びＢｏｅｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体も、Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。更なる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ  Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載）に記載されるようなものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔ．＆Ｈｉｓｔｏｐａｔｈ．，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｆｉｎｄ  Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
【０１２６】
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。その後、かかる可変領域配列を、所望のヒト定常領域と組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術を以下に記載する。
【０１２７】
５．ライブラリー由来の抗体
抗体は、コンビナトリアルライブラリーを所望の活性（複数を含む）を有する抗体についてスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、かかるライブラリーを所望の結合特徴を所有する抗体についてスクリーニングするために、種々の方法が、当技術分野において既知である。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）において概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４、Ｃｌａｃｋｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｍａｒｋｓ  ａｎｄ  Ｂｒａｄｂｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、ならびにＬｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
【０１２８】
ある種のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいて無作為に再結合され、これを、その後、Ｗｉｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的に、抗体断片を、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして提示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とせずに、免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローニングして、いかなる免疫付与もなしに、単一供給源の抗体から広範囲の非自己抗原及び自己抗原まで提供することができる。最終的に、ナイーブライブラリーは、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ  ａｎｄ  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞から再構成されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングして、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、かつインビトロでの再構成を達成するランダム配列を含むＰＣＲプライマーを用いることによって合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載している特許文献としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
【０１２９】
本明細書において、ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、ヒト抗体またはヒト抗体断片と見なす。
【０１３０】
６．多重特異性抗体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施形態では、結合特異性のうちの１つは、Ｇ９ａ等の対象ポリペプチドであり、他の結合特異性は、任意の他の抗原に対するものである。ある種の実施形態では、二重特異性抗体は、Ｇ９ａ等の対象ポリペプチドの２つの異なるエピトープに結合してもよい。二重特異性抗体はまた、Ｇ９ａ等の対象ポリペプチドを発現する細胞に細胞毒性剤を局在化させるために使用してもよい。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製することができる。
【０１３１】
多重特異性抗体を作製するための技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ  ａｎｄ  Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７（１９８３）を参照）、ＷＯ９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５（１９９１）、ならびに「ノブ−イン−ホール」技術（例えば米国特許第５，７３１，１６８号を参照）が挙げられるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための組換え静電的ステアリング効果（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）；二重特異性抗体の産生のためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照）；ならびに一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照）；ならびに、例えば、Ｔｕｔｔ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているような三重特異性抗体の調製により作製してもよい。
【０１３２】
「オクトパス抗体」を含む３つ以上の機能的抗原結合部位を有する組換え抗体もまた、本明細書に含まれる（例えばＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照）。
【０１３３】
本明細書における抗体または断片は、Ｇ９ａならびに他の異なる抗原等の対象ポリペプチドに結合する抗原結合部位を含む「二重作用Ｆａｂ」または「ＤＡＦ」も含む（例えばＵＳ２００８／００６９８２０を参照）。
【０１３４】
７．抗体変異体
ａ）グリコシル化変異体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体は、抗体がグリコシル化される度合いを増大または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、アミノ酸配列を、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるように改変させることによって、簡便に達成され得る。
【０１３５】
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合される炭水化物が改変され得る。哺乳動物細胞により産生される自然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に対してＮ結合により一般的に結合する分枝状、二分岐のオリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ  ｅｔ  ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ  １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖は、種々の炭水化物、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合するフコースを含んでもよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾が、ある種の改善された特性を有する抗体変異体を作製するために、なされ得る。
【０１３６】
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であってもよい。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されるＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析により測定されるように、Ａｓｎ２９７に結合したすべての糖鎖構造（例えば複合体、ハイブリッド、及びハイマンノース構造体）の合計に対してＡｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって測定される。Ａｓｎ２９７とは、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥＵ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体中の軽度の配列変異により、２９７位のアミノ酸約±３つ分上流または下流に、すなわち、２９４位〜３００位の間に位置してもよい。かかるフコシル化変異体は改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第ＵＳ２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；ＵＳ２００４／００９３６２１（Ｋｙｏｗａ  Ｈａｋｋｏ  Ｋｏｇｙｏ  Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化」または「フコース欠失」抗体変異体に関連した公報の例としては、ＵＳ２００３／０１５７１０８、ＷＯ２０００／６１７３９、ＷＯ２００１／２９２４６、ＵＳ２００３／０１１５６１４、ＵＳ２００２／０１６４３２８、ＵＳ２００４／００９３６２１、ＵＳ２００４／０１３２１４０、ＵＳ２００４／０１１０７０４、ＵＳ２００４／０１１０２８２、ＵＳ２００４／０１０９８６５、ＷＯ２００３／０８５１１９、ＷＯ２００３／０８４５７０、ＷＯ２００５／０３５５８６、ＷＯ２００５／０３５７７８、ＷＯ２００５／０５３７４２、ＷＯ２００２／０３１１４０、Ｏｋａｚａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠失したＬｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ  ｅｔ  ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、米国特許出願第ＵＳ２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ、及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１、Ａｄａｍｓらの特に実施例１１）、及びα−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞等のノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）、Ｋａｎｄａ，Ｙ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）、及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照）が含まれる。
【０１３７】
抗体変異体は、更に、例えば抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分されている二分オリゴ糖と共に提供される。かかる抗体変異体は、フコシル化が低減され、及び／またはＡＤＣＣ機能が改善され得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）、米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）、及びＵＳ２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖内の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体もまた、提供される。かかる抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）、ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）、及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
【０１３８】
ｂ）Ｆｃ領域変異体
ある種の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾を、本明細書において提供する抗体のＦｃ領域に導入し、それにより、Ｆｃ領域変異体を生成してもよい。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置においてアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４  Ｆｃ領域）を含んでもよい。
【０１３９】
ある種の実施形態では、本発明は、エフェクター機能をいくつか有するがすべては有さない抗体変異体を企図し、これは、抗体を、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は不要かまたは有害である用途のために望ましい候補とする。インビトロ及び／またはインビボ細胞毒性アッセイを実施して、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低下／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠失している（そのためＡＤＣＣ活性も欠失している可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能は保持していることを確認することができる。ＮＫ細胞の仲立ちをする主な細胞であるＡＤＣＣは、Ｆｃ（ＲＩＩＩ）のみを発現するが、単球はＦｃ（ＲＩ）、Ｆｃ（ＲＩＩ）、及びＦｃ（ＲＩＩＩ）を発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁、表３に要約されている。対象分子のＡＤＣＣ活性を評価するインビトロアッセイの非限定例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：１４９９−１５０２（１９８５）、同第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、フローサイトメトリー用ＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ、及びＣｙｔｏＴｏｘ  ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、または更に、対象分子のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているような動物モデルにおいて、インビボで評価してもよい。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施して、抗体がＣ１ｑと結合できず、そのためＣＤＣ活性を欠失することを確認してもよい。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３（１９９６）、Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ  １０１：１０４５−１０５２（２００３）、及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ  Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ  １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照のこと）。当該技術分野において既知の方法を使用して、ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の決定も行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照）。
【０１４０】
低減したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体は、アミノ酸位２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２つ以上での置換を有するＦｃ変異体を含み、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
【０１４１】
ＦｃＲへの改善または低下した結合を有するある種の抗体変異体が記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと。）ある種の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えばＦｃ領域の位置２９８、３３３、及び／または３３４（残基のＥＵ番号付け）で置換を有するＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されるように、Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の改変（すなわち、改善または低下のいずれか）をもたらす改変が、Ｆｃ領域になされる。
【０１４２】
半減期が増大し、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善した抗体（Ｇｕｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））が、ＵＳ２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換を有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異体は、２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のＦｃ領域残基のうちの１つ以上での置換、例えばＦｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。Ｆｃ領域変異体のその他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ  ＆  Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８−４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及びＷＯ９４／２９３５１も参照のこと。
【０１４３】
ｃ）システイン操作抗体変異体
ある種の実施形態では、システイン操作抗体、例えば抗体の１つ以上の残基がシステイン残基により置換されている「ｔｈｉｏＭＡｂ」を作製するのが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換される残基が、抗体の接触可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基が抗体の接触可能な部位に配置され、抗体を他の部分、例えば薬物部分、またはリンカー−薬物部分に結合させ、本明細書で更に記載されるように免疫複合体を作製するために使用され得る。ある種の実施形態では、任意の１つ以上の以下の残基をシステインで置換してもよい：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されているように産生してもよい。
【０１４４】
Ｂ．免疫複合体
更に、Ｇ９ａまたはＥＧＦＲ等の対象ポリペプチドと結合する抗体を含み、化学療法剤若しくは薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、微生物、菌類、植物、若しくは動物由来の酵素活性毒素、またはこれらの断片）、あるいは本明細書に記載される方法で使用する放射性同位元素等の１つ以上の細胞毒性剤に結合した免疫複合体が、本明細書に提供される。
【０１４５】
一実施形態では、免疫複合体は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）であり、抗体が、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第ＥＰ０４２５２３５号を参照）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦ（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）等のオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号、同第５，７８０，５８８号、及び同第７，４９８，２９８号を参照）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２（１９９３）、及びＬｏｄｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８（１９９８）を参照）；ダウノマイシンまたはドキソルビシン等のアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３（２００６）、Ｊｅｆｆｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １６：３５８−３６２（２００６）、Ｔｏｒｇｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１（２００５）、Ｎａｇｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７：８２９−８３４（２０００）、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．＆  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：１５２９−１５３２（２００２）、Ｋｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３（２００２）、及び米国特許第６，６３０，５７９号を参照）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセル等のタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５を含む１つ以上の薬物に結合している。
【０１４６】
別の実施形態では、免疫複合体は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、エキソトキシンＡ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａからのもの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、αサルシン、シナアブラギリのタンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウのタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシ阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、ならびにトリコテセンが含まれるが、これらに限定されない、酵素活性毒素またはこれらの断片に結合する本明細書に記載される抗体を含む。
【０１４７】
別の実施形態では、免疫複合体は、放射性原子に結合して、放射性複合体を形成する本明細書に記載される抗体を含む。種々の放射性同位元素が、放射性複合体の産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位元素が含まれる。放射性複合体を検出用に用いる場合、例えば、Ｔｃ９９ｍ若しくはＩ１２３等のシンチグラフィ検査用放射性原子、または、ここでもヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄等の核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴映像法、ｍｒｉとしても知られている）用のスピン標識を含んでもよい。
【０１４８】
Ｎ−サクシニミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、サクシニミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジプイミデート塩酸塩等）、活性エステル（ジスクシンイミジルスベレート等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビスジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン等）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネート等）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン）等の、種々の二官能性タンパク質カップリング剤を用いて、抗体及び細胞毒性剤の複合体を作製してもよい。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているようにして調製することができる。炭素１４で標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの結合用の代表的なキレート剤である。ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。リンカーは、細胞中の細胞毒性薬の放出を促進する「開裂可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸に不安定なリンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５，２０８，０２０号）を使用してもよい。
【０１４９】
本明細書における免疫複合体またはＡＤＣは、限定されないが、（例えばＰｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）市販されているＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホＥＭＣＳ、スルホＧＭＢＳ、スルホＫＭＵＳ、スルホＭＢＳ、スルホＳＩＡＢ、スルホＳＭＣＣ、及びスルホＳＭＰＢ、及びＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むが、これらに限定されない、架橋試薬を用いて調製されたかかる複合体を明示的に企図する。
【０１５０】
Ｃ．結合ポリペプチド
結合ポリペプチドは、対象ポリペプチドを結合するポリペプチドであり、これには、本明細書に記載される方法で使用するために提供されるＧ９ａが含まれる。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドは、Ｇ９ａ拮抗剤拮抗剤である。結合ポリペプチドは、既知のポリペプチド合成法を用いて化学合成を行ってもよく、または組換え技術を用いて調製及び精製を行ってもよい。結合ポリペプチドは、通常、少なくとも約５個の長さのアミノ酸である、あるいは少なくとも約６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、若しくは１００個の長さのアミノ酸またはそれ以上であり、ここで、好ましくは、本明細書に記載されるように、標的、例えばＧ９ａまたはＥＧＦＲに特異的に結合可能なかかる結合ポリペプチド。いくつかの実施形態では、結合ポリペプチドはＧ９ａメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。
【０１５１】
結合ポリペプチドは、既知の技術を用いて過度な実験をすることなく同定され得る。これに関し、ポリペプチド標的に特異的に結合可能な結合ポリペプチドについてポリペプチドライブラリーをスクリーニングするための技術は、当該技術分野において周知であることに留意すべきである（例えば、米国特許第５，５５６，７６２号、同第５，７５０，３７３号、同第４，７０８，８７１号、同第４，８３３，０９２号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６８９号、同第５，６６３，１４３号；ＰＣＴ公開第ＷＯ８４／０３５０６及びＷＯ８４／０３５６４、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８１：３９９８−４００２（１９８４）、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８２：１７８−１８２（１９８５）、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ  ａｓ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ，１３０−１４９（１９８６）、Ｇｅｙｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．，１０２：２５９−２７４（１９８７）、Ｓｃｈｏｏｆｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４０：６１１−６１６（１９８８）、Ｃｗｉｒｌａ，Ｓ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：６３７８、Ｌｏｗｍａｎ，Ｈ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３０：１０８３２、Ｃｌａｃｋｓｏｎ，Ｔ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４、Ｍａｒｋｓ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１、Ｋａｎｇ，Ａ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：８３６３、ならびにＳｍｉｔｈ，Ｇ．Ｐ．（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２：６６８を参照のこと）。
【０１５２】
ペプチドライブラリーの生成及びこれらのライブラリーのスクリーニング方法は、米国特許第５，７２３，２８６号、同第５，４３２，０１８号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，４９８，５３０号、同第５，７７０，４３４号、同第５，７３４，０１８号、同第５，６９８，４２６号、同第５，７６３，１９２号、及び同第５，７２３，３２３号にも開示されている。
【０１５３】
Ｄ．結合低分子
上記の方法にて使用する、Ｇ９ａ等の対象ポリペプチドの結合低分子拮抗剤として使用するための結合低分子が、本明細書に提供される。いくつかの実施形態では、結合低分子拮抗剤はＧ９ａメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。
【０１５４】
結合低分子は、好ましくは本明細書に記載するＧ９ａ及び／またはＥＧＦＲに特異的に結合する、本明細書に定義する結合ポリペプチドまたは抗体以外の有機分子であることが好ましい。
【０１５５】
ある種の実施形態の実施に際して有用であり得るＧ９ａ低分子拮抗剤の例としては、式Ｉの化合物、その異性体若しくは異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、若しくはプロドラッグが挙げられる。ＵＮＣ０６３８としても知られ、本明細書では、Ｇ９ａｉ−２と称される式Ｉの化合物は、Ｇ９ａ及びＧＬＰに対して強力かつ選択的な細胞透過性化学プローブであり、濃度依存性様式でＨ３Ｋ９ｍｅ２レベルを低減させる。かかる化合物、ならびにかかる化合物の調製に有用な工程及び中間体は、Ｖｅｄａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，７，５６６−５７４（２０１１）及びＳｗｅｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，ＡＣＳ  Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，５，２０５−２０９（２０１４）に記載されている。
【化６】
2017519017.tif 000008
【０１５６】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、Ｂｉｘ−０１２９４、ＵＮＣ０３２１、ＵＮＣ０６４６、及び／またはＵＮＣ０２２４である（Ｖｅｄａｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，７，５６６−５７４（２０１１）を参照。Ｂｉｘ−０１２９４はまた、本明細書では、Ｇ９ａｉ−２と称される。
【０１５７】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、２−（ヘキサヒドロ−４−メチル−１Ｈ−１，４−ジアゼピン−１−イル）−６，７−ジメトキシ−［１−（フェニルメチル）−４−ピペリジニル］−４−キナゾリンアミンまたはその塩を含む。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、２−（ヘキサヒドロ−４−メチル−１Ｈ−１，４−ジアゼピン−１−イル）−６，７−ジメトキシ−［１−（フェニルメチル）−４−ピペリジニル］−４−キナゾリンアミン三塩酸塩を含む。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、７−［３−（ジメチルアミノ）プロポキシ］−２−（ヘキサヒドロ−４−メチル−１Ｈ−１，４−ジアゼピン−１−イル）−６−メトキシ−Ｎ−（１−メチル−４−ピペリジニル）−４−キナゾリンアミンまたはその塩である。
【０１５８】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、
【化７】
2017519017.tif 000009
またはその塩である。
【０１５９】
いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ阻害剤は、
【化８】
2017519017.tif 000010
を含み、式中、Ｒ１及びＲ２は、以下のもの（任意の組み合わせを含む）のうちの１つ以上である。
【化９】
2017519017.tif 000011
【０１６０】
いくつかの実施形態では、Ｇ９Ａ阻害剤は、ワールドワイドウェブサイトのｓｃｉｅｎｃｅｄｉｒｅｃｔ．ｃｏｍ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ａｒｔｉｃｌｅ／ｐｉｉ／Ｓ０９６０８９４Ｘ１２０１５３９９（Ｆｕｊｉｓｈｉｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ  ＆  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，２３，７３３−７３６（２０１３））に記載されている阻害剤であり、これは、参照することによりその全体が本明細書に組み込まれる。
【０１６１】
結合低分子は、周知の方法を用いて同定及び化学的に合成されてもよい（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３及びＷＯ００／３９５８５を参照）。結合低分子は、通常サイズが約２０００ダルトン未満、あるいはサイズが約１５００、約７５０、約５００、約２５０、または約２００ダルトン未満であり、ここで、好ましくは本明細書に記載されるポリペプチドに特異的に結合可能なかかる低分子は、既知の技術を使用して過度な実験をすることなく、同定してもよい。これに関し、対象ポリペプチドに結合可能な分子に対する有機低分子ライブラリーのスクリーニング技術は当該技術分野において周知であることに留意すべきである（例えばＰＣＴ公開第ＷＯ００／００８２３及びＷＯ００／３９５８５を参照）。結合有機低分子は、例えば、アルデヒド、ケトン、オキシム、ヒドラゾン、セミカルバゾン、カルバジド、第一級アミン、第二級アミン、第三級アミン、Ｎ−置換ヒドラジン、ヒドラジド、アルコール、エーテル、チオール、チオエーテル、ジスルフィド、カルボン酸、エステル、アミド、尿素、カルバメート、炭酸塩、ケタール、チオケタール、アセタール、チオアセタール、ハロゲン化アリール、スルホン酸アリール、ハロゲン化アルキル、スルホン酸アルキル、芳香族化合物、複素環式化合物、アニリン、アルケン、アルキン、ジオール、アミノアルコール、オキサゾリジン、オキサゾリン、チアゾリジン、チアゾリン、エナミン、スルホンアミド、エポキシド、アジリジン、イソシアネート、塩化スルホニル、ジアゾ化合物、酸塩化物等であり得る。
【０１６２】
Ｅ．拮抗剤ポリヌクレオチド
本明細書に記載される方法で使用するポリヌクレオチド拮抗剤もまた、本明細書に提供される。ポリヌクレオチドは、アンチセンス核酸及び／またはリボザイムであってもよい。アンチセンス核酸は、本明細書に記載されるＧ９ａ遺伝子（例えば、ＵＮＩＰＲＯＴ番号Ｑ９６ＫＱ７−１、Ｑ９６ＫＱ７−２、及び／またはＱ９６ＫＱ７−３のアミノ酸配列、これらは参照することによりそれらの全体が組み込まれる）等の、対象遺伝子のＲＮＡ転写産物の少なくとも一部に相補的な配列を含む。しかし、完全な相補性は、好ましいものの必要ではない。
【０１６３】
本明細書で言及される「ＲＮＡの少なくとも一部に相補的な」配列とは、ＲＮＡをハイブリダイズさせて安定した二本鎖を形成可能な十分な相補性を有する配列を指し、したがって、二本鎖のアンチセンス核酸の場合、二本鎖ＤＮＡの一本鎖を試験してもよい、または三本鎖形成をアッセイしてもよい。ハイブリダイゼーション能力は、アンチセンス核酸相補性の程度、及び長さの両方に依存する。通常、核酸のハイブリダイゼーションが大きくなればなるほど、より多くの塩基が含み得るＲＮＡとミスマッチするが、依然として安定した二本鎖（または場合により三本鎖）を形成する。当業者は、ハイブリダイズした複合体の融点を測定する標準的な手順を使用して、許容範囲のミスマッチの程度を確認することができる。
【０１６４】
メッセージの５’末端、例えばＡＵＧ開始コドンまでの及びそれを含む５’未翻訳配列に相補的であるポリヌクレオチドは、翻訳阻害で最も効率的に作用するはずである。しかし、ｍＲＮＡの３’未翻訳配列に相補的な配列も同様に、ｍＲＮＡの翻訳阻害に効果的であることが示されている。一般にはＷａｇｎｅｒ，Ｒ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：３３３−３３５を参照のこと。したがって、遺伝子の５’または３’未翻訳、未コード領域のいずれかに相補的なオリゴヌクレオチドは、内因性ｍＲＮＡの翻訳を阻害するアンチセンスアプローチに使用され得る。ｍＲＮＡの５’未翻訳領域に相補的なポリヌクレオチドは、ＡＵＧ開始コドンの補体を含まなければならない。ｍＲＮＡコード領域に相補的なアンチセンスポリヌクレオチドは、さほど効果のない翻訳阻害剤であるが、本発明に従って使用することができる。ｍＲＮＡの５’、または３’コード領域をハイブリダイズするように設計されたか否かに関わらず、アンチセンス核酸は少なくとも６個の長さのヌクレオチドを有さなければならず、好ましくは６〜５０個にわたる長さのヌクレオチドのオリゴヌクレオチドである。特定の態様では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のヌクレオチド、少なくとも１７個のヌクレオチド、少なくとも２５個のヌクレオチド、または少なくとも５０個のヌクレオチドである。
【０１６５】
Ｆ．抗体及び結合ポリペプチド変異体
ある種の実施形態では、本明細書で提供する抗体及び／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、結合親和性、ならびに／または抗体及び／または結合ポリペプチドの他の生物学的性質を改善するのが望ましい場合がある。抗体及び／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列変異体を、抗体及び／若しくは結合ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することで、またはペプチド合成により調製してもよい。かかる修飾には例えば、抗体及び／または結合ポリペプチドのアミノ酸配列内での残基の欠失、及び／または挿入、及び／または置換が挙げられる。最終構築物が所望の特性、例えば抗原結合を有することを条件として、欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを行い、最終構築物に到達することができる。
【０１６６】
ある種の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体及び／または結合ポリペプチド変異体を提供する。置換の突然変異を誘発させる対象部位としては、ＨＶＲ及びＦＲが挙げられる。表１において、見出し「好ましい置換」の下に保存的置換を示す。更に相当の変更を表１の見出し「代表的置換」の下に、かつアミノ酸側鎖クラスに関して以下に更に記載をする通りに示す。アミノ酸置換を抗体及び／または対象ポリペプチド、ならびに所望の活性、例えば抗原結合の維持／向上、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣ若しくはＣＤＣの向上についてスクリーニングをした生成物に導入してもよい。
【表１−１】
2017519017.tif 000012
【表１−２】
2017519017.tif 000013
【０１６７】
アミノ酸を一般的な側鎖の特性に従って分類してもよい：
（１）疎水性：ノルロイシン、メチオニン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン
（２）中性親水性：システイン、セリン、スレオニン、アスパラギン、グルタミン
（３）酸性：アスパラギン酸、グルタミン酸
（４）塩基性：ヒスチジン、リジン、アルギニン
（５）鎖配向に影響を与える残基：グリシン、プロリン
（６）芳香族：トリプトファン、チロシン、フェニルアラニン。
【０１６８】
非保存的置換には、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
【０１６９】
Ｇ．抗体及び結合ポリペプチド誘導体
ある種の実施形態では、本明細書において提供する抗体及び／または結合ポリペプチドを更に修飾して、当技術分野において既知であり容易に入手可能な、更なる非タンパク質性部分を含ませてもよい。抗体及び／または結合ポリペプチドの誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これに限定されない。水溶性ポリマーの非限定例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１、３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、その水中での安定性のため、製造において利点を有し得る。ポリマーは任意の分子量であってよく、かつ分枝または非分枝であってよい。抗体及び／または結合ポリペプチドに結合したポリマーの数は異なり得、１つを超えるポリマーが結合している場合、それらは、同一であるかまたは異なる分子であることができる。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、限定されるわけではないが、改善される抗体及び／または結合ポリペプチドの特定の性質または機能、抗体誘導体及び／または結合ポリペプチド誘導体が規定される状態下の治療に使用されるかどうか、等を含む事項に基づき決定することができる。
【０１７０】
別の実施形態では、放射線照射により選択的に加熱され得る、非タンパク質性部分への抗体及び／または結合ポリペプチドの複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は任意の波長であってよく、限定するものではないが、通常の細胞に害を与えないが、抗体及び／または結合ポリペプチド−非タンパク質様部分に近位の細胞が死滅させられる温度まで非タンパク質様部分を加熱する波長が含まれる。
【０１７１】
ＩＶ．所望の機能を有するＧ９ａ拮抗剤のスクリーニング及び／または同定方法
抗体、結合ポリペプチド、及び／または低分子を含む、本明細書に記載される方法において使用するＧ９ａ等の対象ポリペプチドの更なる拮抗剤が上に記載された。本明細書において提供する抗Ｇ９ａ抗体、結合ポリペプチド、及び／または結合低分子等の更なる拮抗剤は、当該技術分野において既知の種々のアッセイにより、その物理的／化学的性質及び／または生物活性を同定、スクリーニング、または特性決定してもよい。
【０１７２】
ある種の実施形態では、Ｇ９ａポリペプチドの原子座標を含むメモリを含むコンピュータシステムが、Ｇ９ａのリガンド結合部位を化合物を合理的に同定するモデルとして有用である。かかる化合物は、例えば、新規に設計するか、または既知の化合物の改質により設計するかのいずれかであってもよい。他の場合、結合化合物を、既知の化合物がＧ９ａの分子モデルと「ドッキングする」かどうかを判定する試験をすることにより同定してもよい。かかるドッキング法は一般に、当該技術分野において既知である。
【０１７３】
Ｇ９ａの結晶構造データをコンピュータモデリング技術と共に使用し、結晶構造データの分析により、種々のＧ９ａ結合化合物の結合モデルを開発することができる。部位モデルは、部位表面の三次元トポグラフィー、ならびにファン・デル・ワールス接触、静電相互作用、及び水素結合機会等の要因を特徴付ける。次に、コンピュータシミュレーション技術を使用して、モデル部位と相互作用するように設計されている、プロトン、ヒドロキシル基、アミン基、二価のカチオン、芳香族及び脂肪族官能基、アミド基、アルコール基等が挙げられるが、これらに限定されない、官能基の相互作用位置をマッピングする。これらの基を、候補化合物が部位に特異的に結合するであろうという予測を立てて、ファーマコフォアまたは候補化合物の中に設計してもよい。したがって、ファーマコフォアの設計には、ファーマコフォアに含まれる候補化合物の、水素結合、ファン・デル・ワールス、静電、及び共有結合の相互作用を含む利用可能な種類の化学的相互作用のいずれかまたはそのすべてにより、部位と相互作用する能力を考慮することを伴うが、一般に、ファーマコフォアは非共有結合機構により部位と相互作用する。
【０１７４】
ファーマコフォアまたは候補化合物の、Ｇ９ａポリペプチドへの結合能力は、実際の合成に加え、コンピュータモデリング技術の使用により分析することができる。十分な結合エネルギー（一実施例では、約１０−２Ｍまたはそれ以上の標的の解離定数に対応する結合エネルギー）により標的（例えばＧ９ａポリペプチド結合部位）と結合することがコンピュータモデリングにより示される化合物のみを合成して、それらのＧ９ａポリペプチドへの結合能力及びＧ９ａ阻害能力、また該当する場合、当業者に既知の、及び／または本明細書に記載される酵素アッセイを使用した酵素機能を試験してもよい。したがって、コンピュータによる評価ステップは、十分な親和性でＧ９ａポリペプチドと結合する可能性が低い化合物の不必要な合成を回避する。
【０１７５】
Ｇ９ａファーマコフォアまたは候補化合物を、化学成分または断片を、Ｇ９ａポリペプチドにおける個々の結合標的部位と会合する能力についてスクリーニングして選択する一連のステップを用いてコンピュータにより評価し、設計してもよい。当業者は、化学成分または断片の、Ｇ９ａポリペプチド、より詳細にはＧ９ａポリペプチドの標的部位と会合する能力をスクリーニングするいくつかの方法の１つを使用してもよい。該工程は例えば、Ｇ９ａポリペプチド座標に基づく、コンピュータスクリーン上の標的部位、または当該技術分野において既知のこれらの座標のサブセットの目視検査により開始してもよい。
【０１７６】
癌細胞死を誘発する拮抗剤を選択するために、例えばヨウ化プロピジウム（ＰＩ）、トリパンブルーまたは７ＡＡＤの取り込みにより示される膜の完全性の喪失を、基準物質と比較して評価してもよい。ＰＩ取り込みアッセイを、補体及び免疫エフェクター細胞の不存在下で実施してもよい。腫瘍細胞を培地のみ、または適切な併用療法剤を含有する培地でインキュベートする。細胞を３日間インキュベートする。各処理の後、細胞集塊除去のために、細胞を洗浄して、３５ｍｍのストレーナを取り付けた１２×７５チューブ（チューブ当たり１ｍＬ、処理群当たり３チューブ）中に分取する。次いで、チューブにＰＩ（１０μｇ／ｍＬ）を入れる。試料はＦＡＣＳＣＡＮ（登録商標）フローサイトメーター及びＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（登録商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して分析してもよい。ＰＩ取り込みにより測定されるように、培地のみ及び／または単剤療法と比較して、統計的に有意なレベルの細胞死を誘発するような拮抗剤を、細胞死誘発抗体、結合ポリペプチド、または結合低分子として選択してもよい。
【０１７７】
スクリーニング及び／または同定法のいずれかにおけるいくつかの実施形態では、Ｇ９ａの候補拮抗剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、またはポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は抗体である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤は結合低分子である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤はＧ９ａメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。
【０１７８】
Ｖ．薬学的製剤
本明細書に記載されるＧ９ａ拮抗剤及び／または癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の薬学的製剤は、所望の程度の純度を有するような抗体を、１つ以上の任意の薬学的に許容される担体と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び／または標的療法剤は、結合低分子、抗体、結合ポリペプチド、及び／またはポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、癌治療剤はＥＧＦＲ拮抗剤である。いくつかの実施形態では、癌治療剤はタキサンである。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。いくつかの実施形態では、タキサンはドセタキセルである。
【０１７９】
薬学的に許容される担体は、一般に、使用される用量及び濃度でレシピエントに対して無毒であり、これらには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸塩等の緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む単糖類、二糖類、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属錯体（例えば亜鉛−タンパク質複合体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬学的に許容される担体は、更に、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）等の介在性薬剤分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質を含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある種の例となるｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチン分解酵素等の、１つ以上の更なるグルコサミノグリカナーゼと結合する。
【０１８０】
例となる凍結乾燥製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが挙げられ、後者の製剤には、ヒスチジンアセテート緩衝液が含まれる。
【０１８１】
本明細書における製剤はまた、治療される特定の適応症で必要に応じて１つを超える有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含んでもよい。かかる有効成分は、意図する目的に対して有効な量の組み合わせで適切に存在する。
【０１８２】
有効成分は、例えば、液滴形成技術または界面重合によって配合されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中、コロイド薬物送達系（例えばリポソーム、アルブミン小球体、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中、あるいはマクロエマルション中に封入されてもよい。かかる技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０１８３】
持続放出配合物を配合してもよい。持続放出配合物の好適な例は、Ｇ９ａ拮抗剤ならびに／または癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／若しくは放射線治療剤）を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスを含み、そのマトリックスは、造形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
【０１８４】
インビボ投与で使用する製剤は通常滅菌されている。滅菌は例えば、滅菌濾過膜を通す濾過により容易に達成され得る。
【０１８５】
ＶＩ．製造物品
本発明の別の態様では、上記疾患の治療、予防及び／または診断に有用な材料を含む製造物品を提供する。該製造物品は、容器、及び容器上にあるまたは付属するラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、静注液バッグ等が挙げられる。容器はガラスまたはプラスチック等の種々の材料から形成してもよい。容器は組成物それ自体、または状態の治療、予防及び／若しくは診断に効果的な別の組成物と組み合わせた組成物を保持し、かつ、滅菌アクセス口を有してもよい（例えば、容器は静注液バッグまたは皮下注射針で貫通可能なストッパを有するバイアルであってよい）。組成物における少なくとも１つの活性剤は、本明細書で記載されるＧ９ａ拮抗剤である。ラベルまたは添付文書は、組成物が最適な状態の治療に使用されることを示す。更に、製造物品は（ａ）中に組成物を含有する第１の容器（ここで組成物はＧ９ａ拮抗剤を含む）、ならびに（ｂ）中に組成物を含有する第２の容器（ここで組成物は癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）を含む）を含んでもよい。
【０１８６】
いくつかの実施形態では、製造物品は容器、該容器上のラベル、及び該容器内に含まれる組成物を含み、ここで、組成物は、１つ以上の試薬（例えば、１つ以上の生体指標若しくはプローブに結合する一次抗体、及び／または本明細書に記載される１つ以上の生体指標に結合するプライマー）、試料内に１つ以上の生体指標が存在することを評価するために組成物を使用可能であることを示す、容器上のラベル、ならびに試料内に１つ以上の生体指標が存在することを評価するための試薬の使用説明書を含む。製造物品は更に、試料の調製及び試薬の利用のための取扱説明書及び材料のセットを含むことができる。いくつかの実施形態では、製造物品は更に一次及び二次抗体の両方といった試薬を含んでもよく、ここで二次抗体は標識、例えば酵素標識に結合している。いくつかの実施形態では、製造物品は、本明細書に記載される１つ以上の生体指標に対する、１つ以上のプローブ及び／またはプライマー。
【０１８７】
製造物品のいずれかに関するいくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤及び／または癌治療剤は、抗体、結合ポリペプチド、結合低分子、またはポリヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、癌治療剤はタキサンである。いくつかの実施形態では、タキサンはパクリタキセルである。いくつかの実施形態では、癌治療剤はＥＧＦＲ拮抗剤である。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤の拮抗剤は結合低分子である。いくつかの実施形態では、ＥＧＦＲ結合低分子拮抗剤はエルロチニブである。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤の拮抗剤は抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト、ヒト化、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は抗体断片であり、抗体断片はＧ９ａ及び／または阻害剤と結合する。いくつかの実施形態では、Ｇ９ａ拮抗剤はＧ９ａメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。
【０１８８】
本発明の本実施形態における製造物品は更に、組成物を特定の状態の治療に使用可能であることを示す添付文書を含んでもよい。いくつかの実施形態では、添付文書は、Ｇ９ａ拮抗剤を、癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／若しくは放射線治療剤）の前に、ならびに／またはそれと同時に投与するための取扱説明書を含む。あるいは、または更に、製造物品は更に、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸塩−緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液等の製薬上許容できる緩衝液を含む第２（または第３）の容器を含んでもよい。更に、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及び使用者の視点から所望の他の物質を含んでもよい。
【０１８９】
製造物品内のその他の任意成分としては、１つ以上の緩衝液（例えば遮断緩衝液、洗浄緩衝液、基質緩衝液等）、酵素標識により化学的に変化する基質等の他の試薬（例えば色素体）、エピトープ回収溶液、対照試料（陽性及び／または陰性対照）、対照スライド等（複数を含む）が挙げられる。
【０１９０】
上記の製造物品のうちのいずれかが、Ｇ９ａ拮抗剤ならびに癌治療剤（例えば標的療法剤、化学療法剤、及び／または放射線治療剤）の代わりに、またはそれに加えて、本明細書に記載される免疫複合体を含み得ることが理解される。
【実施例】
【０１９１】
以下は本発明の方法及び組成物の実施例である。上述の概略的な記載を考慮して、種々の他の実施例を実施してもよいことが理解される。結果もまた、図及び図の凡例に表示及び記載している。
【０１９２】
（実施例１）
材料及び方法
細胞培養
すべての細胞を、５％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）及びＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ培地（高グルコース）中に、５％  ＣＯ２、３７℃にて保持する。
【０１９３】
細胞生存アッセイ
２×１０５個の細胞を、６ウェルのクラスターディッシュの各ウェルに播種した。播種から２４時間後、培地を取り除き、薬剤を含む培地と交換した。未処理細胞がコンフルエンスに達するまで、新鮮な培地に２日ごとに交換した。次いで培地を除去し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した後、ＰＢＳ中で４％ホルムアルデヒドにより１５分間固定した。次いで細胞をＰＢＳで洗浄し、蛍光性核酸着色剤Ｓｙｔｏ６０（ＰＢＳ中１ｎＭ；分子プローブ）で１５分間染色した。染料を除去し、細胞単一膜をＰＢＳで洗浄し、Ｏｄｙｓｓｅｙ  Ｉｎｆｒａｒｅｄ  Ｉｍａｇｅｒ（Ｌｉ−Ｃｏｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）により７００ｎｍで蛍光定量化を実施した。いくつかの設定では、Ｓｙｔｏ６０ではなく、ＲＦＰ  ｎｕｃ赤色細胞を使用した。
【０１９４】
薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）の発生
薬物感受性のある細胞を、本明細書に記載した関係する薬物により、確定したＩＣ５０値の１００倍を超える濃度で３ラウンド処理した。各処理は７２時間続けた。関係する薬物処理の第３ラウンドの終了時にディッシュに付着したままの生存細胞をＤＴＰとし、分析のために収集した。
【０１９５】
特に、タルセバ、ＧＤＣ−０９８０、ＧＤＣ−０９７３、ＡＺ６２８、及びラパチニブＤＴＰについて、細胞を播種して６０〜７０％のコンフルエンシーになるまで成長させ、次いでタルセバ（０．１、０．２、０．５、及び／または１ｕＭ）、ＧＤＣ−０９８０（２ｕＭ）、ＧＤＣ−０９７３（１ｕＭ）、ＡＺ６２８（２ｕＭ）、及びラパチニブ（１ｕＭ）で処理した。化学療法の最終投与から１週間後にＤＴＰを回収し、分析した。
【０１９６】
ｓｉＲＮＡ及びｓｈＲＮＡノックダウン
ｓｉＲＮＡノックダウンのために、０．０６２５ｕＬのＤｈａｒｍａＦＥＣＴ  １トランスフェクション脂質（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、カタログ番号Ｔ−２００１）、及び最終濃度が１２．５ｎＭの単一ｓｉＲＮＡ（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  ｓｉＧＥＮＯＭＥ）を使用して、黒色９６ウェルの底が透明なプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号３６０３）中で、ウェルあたり１０００個の細胞で、細胞をリバーストランスフェクションした。その後細胞を４８〜７２時間トランスフェクトした後、トランスフェクション培地を、培地中の関係する１μＭの薬物療法、または培地のみのいずれかと交換した。７２時間のインキュベーションの後、薬物を含む／含まない培地を新鮮な培地と交換し、関係する薬物療法後に生存した、薬剤耐性のある存続生物（ＤＴＰ）の回復（回復フェーズ）を可能にした。３日間の回復フェーズの後、ＣｙＱｕａｎｔ  Ｄｉｒｅｃｔ細胞増殖アッセイ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を使用して、メーカーのプロトコールに従って最終的な細胞生存度を測定した。ＣｙＱｕａｎｔ蛍光シグナルを、ＧＥ  ＩＮ  Ｃｅｌｌ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  ２０００（対物レンズ４倍）を使用して検出し、ＧＥ  Ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ  Ｔｏｌｌｂｏｘ  １．９．１．を用いて開発した画像解析アルゴリズムを使用して、ウェルあたりの細胞数として定量化した。次いでデータをＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌで処理し、各細胞株を二度、完全に独立した条件にて実行した。
【０１９７】
結合低分子阻害剤実験
一般に、Ｇ９ａ阻害剤実験に関しては、化学療法の治療前に３〜５日間、０．１、０．２、０．５、及び／または１ｕＭの活性化合物、Ｇ９ａ阻害剤ＵＮＣ０６３８で細胞を処理し、研究期間中、薬物上に保持した。
【０１９８】
細胞収穫及びタンパク質分析
細胞溶解物をＬａｅｍｍｌｉ試料緩衝液中で調製され、前述の免疫ブロット法により分析した。Ｈ３の修飾に対する商業用抗体（Ａｂｃａｍ，Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ，ａｎｄ  Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、細胞溶解物を分析した。
【０１９９】
質量分析用試料調製
１０００万個の細胞を有する試料を溶解させ、Ａｃｔｉｖｅ  Ｍｏｔｉｆ  Ｈｉｓｔｏｎｅ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎキット（ワールドワイドウェブ  ａｃｔｉｖｅｍｏｔｉｆ．ｃｏｍ／ｃａｔａｌｏｇ／１７１．ｈｔｍｌ）を使用して細胞溶解物からヒストンを単離した。Ｑｕｂｉｔ蛍光プラットフォーム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、単離後のタンパク質定量化を行った。目標収率は、細胞５００万個当たり精製ヒストンが少なくとも２０μｇ、またはそれ以上であった。次に、試料を誘導体化して、ｄ０／ｄ１０無水プロピオン酸及びトリプシン消化を用いた２進比較を実施した。具体的には、各試料の５μｇのアリコートをｄ０無水プロピオン酸により誘導体化し、リジン及びモノメチル化リジン残基を遮断した。対照試料には１５μｇを使用した。試料をトリプシンで消化した。ｄ０無水プロピオン酸で、対照試料を（ペプチドＮ末端上にさらして）再度誘導体化した。ｄ１０無水プロピオン酸で、試験試料を（Ｎ末端上にさらして）再度誘導体化した。各試験試料は独立して、対照試料と１：１でプールした。次いで試料を多酵素消化した。試料当たり３つで１組の酵素を使用して、特性決定されるＰＴＭ部位周辺に大きなペプチド、及び全部位周辺において、付随する重複配列一致を作製した。
【０２００】
質量分析
ＬＴＱ  Ｏｒｂｉｔｒａｐ  Ｖｅｌｏｓタンデム質量分析計上で、データ依存モードのナノＬＣ／ＭＳ／ＭＳによりペプチド消化を分析した。ＣＩＤ、ＨＣＤ及びＥＴＤフラグメンテーション方式を用いて、データを得た。データの取得に際し、Ｍａｓｃｏｔ（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）を用いるデータベース検索を使用して、アセチル化、メチル化、ジメチル化、トリメチル化、リン酸化、及びユビキチン化を測定した。新規の配列決定を含む手動でのデータ分析を使用して、コンピュータによる推定アサインメントを確認し、Ｍａｓｃｏｔで一致しない修飾ペプチドに関する生データを調査した。正確な質量フルスキャンＬＣ／ＭＳデータを統合して、試料間での修飾ペプチドの相対的な存在量を求めた。トリプシン消化したプロピオニル化試料を、ｄ０／ｄ５対を比較することによって作動する各ＬＣ／ＭＳで定量化した（Ｇａｒｃｉａ  ｅｔ  ａｌ．，ＪＰＲ，８，５３６７−５３７４（２００９）の作業による）。代わりとなる酵素試料を、ＬＣ／ＭＳの操作間に標識なしで定量化した。
【０２０１】
結果
Ｇ９ａは、ヒストンＨ３のリジン９のモノ及びジメチル化を特異的に触媒するヒストンメチルトランスフェラーゼである。Ｇ９ａはまた、ＥＨＭＴ２、ＢＡＴ８、ＧＡＴ８、ＫＭＴ１Ｃ、及びＮＧ３６としても周知である。Ｈ３Ｋ９  ＫＭＴ  Ｇ９ａ（ＫＭＴ１Ｃ）は、インビトロ及びインビボでＨ３Ｋ２７をメチル化することが知られている。Ｇ９ａ及びＧ９ａ様タンパク質（ＧＬＰまたはＫＭＴ１Ｄ）は、主に、Ｇ９ａ−ＧＬＰ異種複合体として存在し、インビボで機能的Ｈ３Ｋ９メチルトランスフェラーゼであるように思われる。上昇したレベルのＧ９Ａ発現が、多くの型のヒト癌において観察されている。
【０２０２】
図１Ｂに示すように、Ｇ９ａは、親ＰＣ９細胞と比較してヒト非小細胞肺癌細胞株ＰＣ９の薬剤耐性がある存続生物（ＤＴＰ）中で上方制御される。薬剤耐性の確立のためにＧ９ａメチル化活性が必要であることを確認するために、３’−ＵＴＲ−ＧＦＰノックダウンでのＧ９ａショートヘアピンの発現が、ＰＣ９薬剤耐性細胞を除去することが示された。図１Ｃを参照のこと。図２Ｃに示すように、Ｇ９ａの発現レベルの変化に一致して、ウェスタンブロッティング及び質量スペクトルの両方により、Ｈ３Ｋ４ｍｅ３はＰＣ９親細胞と比較してＰＣ９  ＤＴＰ中で増加する。
【０２０３】
図３Ａに示す低分子Ｇ９ａ拮抗剤ＵＮＣ０６３８及び図示しないデータは、ウェスタンブロッティング法及び質量分析によって観察されるように、Ｈ３Ｋ９のメチル化を阻害することができた。更に、図３Ｂに示すように、低分子Ｇ９ａ拮抗剤ＵＮＣ０６３８は、Ｇ９ａＫ１８５ｍｅ３の自己メチル化を阻害する。図４に示すように、Ｇ９Ａ−Ｋ１８５ｍｅ  ０／１／２／３ペプチドプルダウンの質量スペクトルデータを用いて、ＣＤＹＬ１及びＬＲＷＤ１は、Ｈ３Ｋ９またはＧ９ａＫ１８５のメチル化ペプチドによってプルダウンされ、メチル化Ｋ９またはメチル化Ｇ９ａのいずれかが、機能がこの集団へのヘテロクロマチン形成において重要であり得るタンパク質を動員することができることを示唆した。
【０２０４】
低分子Ｇ９ａ拮抗剤ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、Ｈ３Ｋ９のメチル化を阻害することが可能であり、広範な範囲の癌細胞型にわたり、様々な薬剤を用いて生成されたＤＴＰにわたるＤＴＰ形成の低減が、図に示される。図５及び７に示すように、ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）による処理により、タルセバによる処理を介して生成された、非小細胞肺癌細胞株ＰＣ９、ＤＴＰの数が低減する。更に、ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）は、ウェスタンブロット法によって示されるＨ３Ｋ９のメチル化を低減させ、かつＰＣ９  ＤＴＰの数を低減させた（図６を参照）。ＵＮＣ０６３８（Ｇ９ａｉ−２）によるＨ３Ｋ９のメチル化及びＤＴＰ形成の低減が、図８（乳癌細胞株ＥＶＳＡ−Ｔ／ＧＤＣ−０９８０）、図９（乳癌細胞株ＳＫＢＲ３／ラパチニブ）、図１０（黒色腫癌細胞株Ｍ１４／ＧＤＣ−０９７３）、及び図１１（結腸直腸癌細胞株Ｃｏｌｏ２０５／ＡＺ６２８）に示すように、複数の細胞株及び治療レジメンにわたって見られる。
【０２０５】
前述の発明が実例として、かつ理解を明瞭にする目的のための実施例として、ある程度詳細に記載されてはいるが、これらの説明及び実施例は本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用したすべての特許及び科学文献の開示は、それら全体が参照することにより明示的に組み込まれる。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図７】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
2017519017.tif 000029
【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
2017519017.tif 000031
【図１０Ｂ】
2017519017.tif 000032
【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【国際調査報告】
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