(57)【要約】  本発明は、医薬としてのその使用のための少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる抗転移性組成物に関し、前記少なくとも一つのフラバノール型化合物は、少なくとも一つの塩基性アミノ酸及び／又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成により形成される錯体の形態で存在する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の転移の予防的及び／又は治癒的な治療における使用のための、少なくとも一つのフラバノール型化合物を含む組成物であって、前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在することにおいて特徴づけられる、前記組成物。
【請求項２】
前記錯体が、前記フラバノール型化合物と前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の前記少なくとも一つの誘導体との間の、１：２と１：４の間のモル当量比を有することで特徴づけられる、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記フラバノール型化合物が、（＋）−カテキン、（−）−カテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−没食子酸エピカテキン、（−）−没食子酸エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキン、（＋）−没食子酸ガロカテキン、（−）−没食子酸ガロカテキン、及びこれらの混合物からなる群から選択されることにおいて特徴づけられる、請求項１又は２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
前記フラバノール型化合物が、カテキン又はカテキン誘導体であることにおいて特徴づけられる、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸が、リシンであることで特徴づけられる、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
少なくとも一つの酸を更に含み得ることで特徴づけられる、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
前記酸が、アスコルビン酸、酢酸、クエン酸、塩酸、及びこれらの混合物からなる群から選択されることで特徴づけられる、請求項６に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
２５℃における０．０１モルの溶液において、３以上の、好ましくは４〜１１の、好都合には４．５〜７．５のｐＨを有することで特徴づけられる、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
固体の形態、好ましくは水溶性固体の形態、例えば粉末又は錠剤、或いは他にペッサリー又は座薬であることで特徴づけられる、請求項１ないし８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
経口的に投与されることで特徴づけられる、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
一つ以上の生体適合性の賦形剤を更に含むことで特徴づけられる、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
治療が、抗癌治療との組合せであることにおいて特徴づけられる、請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
癌が、肝臓、前立腺、乳房、子宮、精巣、膀胱、腎臓、肺、気管支、骨、口腔、食道、胃、膵臓、結腸直腸又は他に脳の癌であることで特徴づけられる、請求項１ないし１２のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
癌が、肝細胞癌であることで特徴づけられる、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
癌が、白血病、骨髄腫、リンパ腫又は黒色腫であることで特徴づけられる、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬として使用するための少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
カテキンは、その抗酸化性及び化学保護性の特徴のために知られる植物化学分子である。これらは、多くの植物基剤の食品中に、そして茶葉中に高濃度で存在する。果実及び緑茶の抗発癌性効果を証明する疫学的な研究が、その抗腫瘍化活性の調査を促進している。然しながら、その普通の一般的な構造、その生化学的特徴におけるかなりの差及びこれらの化合物の生体利用性及び安定性のその結果は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで観察される結果が必ずしも代表的ではなかったことを意味している。
【０００３】
少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる組成物の抗転移性活性は、Ｍｅｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９９９，１４１：１５９−１６５）による研究中で示唆されている。この文献は、黒色腫細胞の浸潤が、静脈注射により癌細胞を受けたマウス中で、これらが、フラバノール型化合物のカテキンで治療された場合、阻害されることを示している。この研究は、更に特に、黒色腫細胞の浸潤の阻害が、メタロプロテナーゼの作用に対するカテキンの阻害活性によることを提案し、これは、これらの酵素による接続網の分解を遮断することを可能にするものであり、そして従ってこれは、腫瘍細胞が健康な器官に侵入し、そしてそこに転移を形成することを防止するものである。
【０００４】
同様に、少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなるもう一つの組成物の抗腫瘍化効果は、Ｗｅｙａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００１，６１：１１８−１２５）による研究中に記載されている。この研究は、（＋）−カテキンが、上皮細胞の細胞外マトリックスへの接着を改変するものであり、そして腫瘍細胞の細胞骨格に変化を誘発するするものであり、その結果、癌細胞の遊走を調節するものであるという仮説を提案している。
【０００５】
然しながら、更に最近の研究は、カテキンの抗増殖性効果が、緑茶中の最も豊富なフラバノールであるエピガロカテキン−３−没食子酸（ＥＧＣＧ）のそれと比較して無視可能であることを証明している（Ｄｕ  ｅｔ  ａｌ．２０１２，Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ  ４：１６７９−１６９１）。治療剤としてのこれらのフラバノイドの潜在性を開発することを可能にするためのこれらの化合物の作用のモードに関する多くの疑問が、更に残っている。
【０００６】
転移の原因ある細胞と言われる転移性前駆体細胞が、これらに不適である環境におけるその生存及びその増殖を確実にするために、エネルギー基質の非常に有意な供給を必要とすることは公知であるが、転移過程中の腫瘍細胞の内転移を制御する代謝経路は、なお非常に不十分にしか知られていない。然しながら、Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．（Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２０１４，８：５４−６６）による研究において、代謝性前駆体細胞によるスーパーオキシドラジカルの増加した産生が、その遊走を促進するように見受けられることが証明されている。更に具体的には、転移性前駆体細胞のミトコンドリアレベルにおいて、スーパーオキシドラジカル及び反応性酸素種（ＲＯＳ）の過剰な産生、並びにこれらを破壊することが可能な抗酸化物系間の不均衡が、これらの癌細胞が出発腫瘍から離れた組織に内転移し、これらが転移をそこに発生するためにコロニー化することの可能性を説明することができることが証明されている。
【０００７】
このミトコンドリアの転移性前駆体細胞によるスーパーオキシドラジカル及び他の反応性酸素種（ＲＯＳ）の過剰産生、並びにその遊走を阻害する目的で制御するために、ミトコンドリアのスーパーオキシドの産生の阻害剤としてこれらの細胞のミトコンドリアを選択的に標的とする抗酸化剤を使用することが想定されている。例えば、阻害剤、例えばキノン分子のトリフェニルホスホニウム塩（ｍｉｔｏＱ）又はピペリジン由来分子（ｍｉｔｏＴＥＭＰＯ）の使用が現時点で行われ、トリフェニルホスホニウム基は、これらの産物がミトコンドリアに浸透することを可能にする。然しながら、これらのキノン分子のトリフェニルホスホニウム塩又はピペリジン由来分子の毒性は、殆ど未知である。
【０００８】
更に、ミトコンドリアに対して非標的性の作用を持つ一般的な抗酸化物質、例えばＮ−アセチルシステイン、ビタミンＣ及びトロロクスは、腫瘍の成長（Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ａｎｄ  Ｓｏｎｖｅａｕｘ  Ｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｏｎｃｏｌ．２０１５；２：ＤＯＩ：１０．４１６１／２３７２３５４８．２０１４．９６８０４３）及び転移性内転移（Ｐｉｓｋｏｕｎｏｖａ  ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２０１５  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１５７２６；Ｌｅ  Ｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１５；７：３０８ｒｅ８）を促進することができる。
【０００９】
不幸にも、現時点で既知であり、そして抗酸化物質を含んでなる抗転移性組成物は、転移性前駆体細胞の遊走を比較的僅かにのみ最小化することを可能にする。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ｍｅｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １９９９，１４１：１５９−１６５；
【非特許文献２】Ｗｅｙａｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００１，６１：１１８−１２５；
【非特許文献３】Ｄｕ ｅｔ ａｌ．２０１２，Ｎｕｔｒｉｅｎｔｓ  ４：１６７９−１６９１；
【非特許文献４】Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  ２０１４，８：５４−６６；
【非特許文献５】Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ａｎｄ  Ｓｏｎｖｅａｕｘ  Ｐ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｏｎｃｏｌ．２０１５；２：ＤＯＩ：１０．４１６１／２３７２３５４８．２０１４．９６８０４３；
【非特許文献６】Ｐｉｓｋｏｕｎｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ２０１５  ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎａｔｕｒｅ１５７２６；
【非特許文献７】Ｌｅ  Ｇａｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１５；７：３０８ｒｅ８。
【発明の概要】
【００１１】
発明の概要
本発明は、少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる組成物に関し、この組成物は、前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在することで特徴づけられる。従って、本発明によれば、これは、フラバノール型化合物及び少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体間の配位結合の生成によって形成された分子錯体である。
【００１２】
第一の側面によれば、本発明は、前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在することで特徴づけられる、癌の転移の予防的及び／又は治癒的治療において使用するための、少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる組成物に関する。
【００１３】
一つの態様において、組成物は、前記フラバノール型化合物が、（＋）−カテキン、（−）−カテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、（＋）−没食子酸エピカテキン、（−）−没食子酸エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキン、（＋）−没食子酸ガロカテキン、（−）−没食子酸ガロカテキン、及びこれらの混合物からなる群から選択されることにおいて特徴づけられる。一つの好ましい態様において、組成物は、前記フラバノール型化合物がカテキン又はカテキン誘導体であることにおいて特徴づけられる。
【００１４】
一つの態様において、組成物は、前記錯体が、前記フラバノール型化合物及び前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体間の１：０．２５ないし１：５間、好ましくは１：１ないし１：４間、好ましくは１：１ないし１：３間、好ましくは１：１ないし１：２．５間、更に好ましくは１：１ないし１：２間のモル当量比を有することにおいて特徴づけられる。一つの好ましい態様において、組成物は、前記錯体が、前記フラバノール型化合物及び前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体間の１：２ないし１：４間、例えば１：２のモル当量比を有することにおいて特徴づけられる。
【００１５】
一つの態様において、組成物は、前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸が、リシン、アルギニン、オルニチン、シトルリン、ヒスチジン、ピロリシン、トリプトファン、プロリン、及びこれらの混合物からなる群から選択されることにおいて特徴づけられる。一つの好ましい態様において、前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸は、リシンである。
【００１６】
一つの態様によれば、組成物は、これが更に少なくとも一つの酸を含んでなることにおいて特徴づけられる。一つの好ましい態様において、前記少なくとも一つの酸は、アスコルビン酸、酢酸、クエン酸、塩酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される。
【００１７】
一つの態様において、組成物は、錯体の形態で存在する前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、０．０１μＭないし５０００μＭ間、好ましくは０．０２μＭないし２５００μＭ間、優先的には０．１μＭないし１０００μＭ間、好ましくは０．５μＭないし５００μＭ間のモル濃度で存在することにおいて特徴づけられる。
【００１８】
一つの態様において、組成物は、これが、更に一つ又はそれより多い生体適合性の賦形剤を含んでなることにおいて特徴づけられる。
一つの態様において、組成物は、これが、液体の形態又は固体の形態、好ましくは水溶性固体の形態、例えば粉末又は錠剤或いは他にペッサリー又は座薬であることにおいて特徴づけられる。
【００１９】
一つの態様において、組成物は、これが、経口、直腸、膣、注射、又は皮膚の使用のために処方されることにおいて特徴づけられる。
一つの態様において、組成物は、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在する少なくとも一つのフラバノール型化合物の含有率が、前記組成物の全重量に対して１５％ないし９５重量％間、好ましくは６０％ないし９０％間、好都合には前記組成物の全重量に対して６５％ないし８５重量％間であることにおいて特徴づけられる。
【００２０】
一つの態様において、組成物は、２５℃における０．０１モルの溶液において、これが、３より大きいか又はそれに等しい、好ましくは４ないし１１間、好都合には４．５ないし９間のｐＨを有することにおいて特徴づけられる。一つの好ましい態様において、これは、７．２ないし７．４間のｐＨを有する。
【００２１】
一つの態様において、癌は、肝臓、前立腺、乳房、子宮、精巣、膀胱、腎臓、肺、気管支、骨、口腔、食道、胃、膵臓、結腸直腸又は他に脳癌である。一つの態様において、癌は、肝細胞癌である。一つの態様において、癌は、白血病、骨髄腫、リンパ腫又は黒色腫である。
【００２２】
もう一つの側面によれば、本発明は、前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在することにおいて特徴づけられる、医薬として使用するための、少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる抗転移性組成物に関する。一つの態様において、組成物は、錯体の形態で存在する前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、０．０１μＭないし５０００μＭ間、好ましくは０．０２μＭないし２５００μＭ間、好ましくは０．１μＭないし１０００μＭ間、好ましくは０．５μＭないし５００μＭ間のモル濃度で存在することにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、前記フラバノール型化合物が、（＋）−カテキン、（−）−カテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、（＋）−没食子酸エピカテキン、（−）−没食子酸エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキン、（＋）−没食子酸ガロカテキン、（−）−没食子酸ガロカテキン、及びこれらの混合物からなる群から選択されることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸が、リシン、アルギニン、オルニチン、シトルリン、ヒスチジン、ピロリシン、プロリン及びトリプトファン、並びにこれらの混合物からなる群から選択されることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、前記錯体が、前記フラバノール型化合物及び前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体間の１：０．２５ないし１：５間、好ましくは１：１ないし１：４間、優先的には１：１ないし１：３間、好ましくは１：１ないし１：２．５間、更に優先的には１：１ないし１：２間のモル当量比を有することにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、これが、更に一つ又はそれより多い生体適合性の賦形剤を含んでなることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、これが、更に少なくとも一つの酸を含んでなることができることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、前記酸がアスコルビン酸、酢酸、クエン酸、塩酸、及びこれらの混合物からなる群から選択されることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、これが、液体の形態又は固体の形態、好ましくは水溶性固体の形態、例えば粉末又は錠剤或いは他にペッサリー又は座薬であることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、本発明は、経口、直腸、膣、注射又は皮膚の使用のための先に記載したとおりの組成物を含んでなる。一つの態様において、組成物は、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在する少なくとも一つのフラバノール型化合物の含有率が、前記組成物の全重量に対して１５％ないし９５重量％間、好ましくは６０％ないし９０％間、好都合には前記組成物の全重量に対して６５％ないし８５重量％間であることにおいて特徴づけられる。一つの態様において、組成物は、２５℃��おける０．０１モルの溶液において、これが、３より大きいか又はそれに等しい、好ましくは４ないし１１間、好都合には４．５ないし９間のｐＨを有することにおいて特徴づけられる。一つの態様において、本発明は、肝臓、前立腺、乳房、子宮、精巣、膀胱、腎臓、肺、気管支、骨、口腔、食道、胃、膵臓、結腸直腸又は他に脳癌の予防的及び／又は治癒的治療のための、先に記載したとおりの組成物に関する。一つの態様において、本発明は、癌、好ましくは肝細胞癌の予防的及び／又は治癒的治療のための先に記載したとおりの組成物に関する。一つの態様において、本発明は、白血病の予防的及び／又は治癒的治療のための先に記載したとおりの組成物に関する。一つの態様において、本発明は、骨髄腫の予防的及び／又は治癒的治療のための先に記載したとおりの組成物に関する。一つの態様において、本発明は、リンパ腫の予防的及び／又は治癒的治療のための先に記載したとおりの組成物に関する。一つの態様において、本発明は、黒色腫の予防的及び／又は治癒的治療のための先に記載したとおりの組成物に関する。本発明は、更に、抗転移性医薬の産生のための先に記載したとおりの組成物の使用に関する。
【００２３】
独立の及び従属性の請求項は、本発明の特定の、そして好ましい特徴を定義する。従属性の請求項の特徴は、独立の請求項の特徴と又は他の従属性の請求項の特徴と、適宜組み合わせることができる。付属する請求項は、更に本発明の記載を介して明示のために含まれる。
【００２４】
発明の詳細な説明
本発明を非常に詳細に記載する前に、本発明が、記載される特定の方法、組成、使用、成分、産物又は組合せに制約されず、これらの組成、使用、方法、成分、産物又は組合せは、恐らく勿論変化することは理解されるべきである。本明細書中で使用される言語は、本発明の適用の分野が、制約として添付の特許請求の範囲のみを有するものであることを考慮すれば、制限的と考えることはできないことも更に理解されることである。
【００２５】
本明細書中で使用する場合、単数の形態“一つ”、“一つの”及び“その”は、状況が明確に反対を示す場合を除き、単数及び複数への言及を含む。
用語“含んでなり”、“含んでなる”及び“からなる”は、本明細書中で使用する場合、“含み”、“含む”、“含有し”又は“含有する”の同義語であり、そして包括的であるか又は開かれ、そして記述されていない更なるメンバー、要素又は方法の工程を排除しない。用語“含んでなり”、“含んでなる”及び“からなる”が、本明細書中で使用する場合、用語“構成される”、“にある”及び“からなる”を、そして更に用語“本質的に、からなる”、“本質的に、にある”及び“本質的に、からなる”を含んでなることは忘れてはならない。
【００２６】
その両端の点による数値の範囲の記述は、全ての数字及びそれぞれの範囲に統合された小数を、そして更に引用された両端の点を含む。
用語“約”又は“概略”は、本明細書中で使用する場合、測定可能な数値、例えばパラメーター、量、時間、及び他の類似のものに適用される場合、これらの変化が本発明を実行するために適当である限り、規定された数値に対して±２０％又はそれより小さい、好ましくは±１０％又はそれより小さい、更に好ましくは±５％又はそれより小さい、そしてなお更に好ましくは±１％又はそれより小さい変化の程度があることを意味する。記載“約”又は“概略”が指す数値が、更に、それ自体が具体的であり、そして好ましくは記載されることは理解される。
【００２７】
用語“一つ又はそれより多い”又は“少なくとも一つ”、例えばメンバーの群の一つ又はそれより多い、或いは少なくとも一つのメンバーは、例による証明によってそのように明確であるが、用語は、特に、前記メンバーのいずれか一つに対する、又は前記メンバーの少なくともいずれか二つ、例えば前記メンバーの≧３、≧４、≧５、≧６又は≧７、等に、そして全ての前記メンバーに対するまでの言及を含む。
【００２８】
本発明の記載において引用される全ての参考文献は、本明細書中に参考文献としてその全てが援用される。特に、本明細書中に明確に記述される参考文献の全ての教示は、参考文献として援用される。
【００２９】
これらが他に定義されない限り、技術的及び科学的用語を含む本発明の記載において使用される全ての用語は、本発明が一部であるいずれもの当業者によって普通に理解される意味を有する。更なる情報として、用語の定義が、本発明の教示のより良好な理解のために含まれる。
【００３０】
以下の段落において、本発明の各種の側面が非常に詳細に定義される。従って、定義されたそれぞれの側面は、明確に他に示されない限り、いずれか一つの又は他の側面と組合せることができる。特に、好ましい又は好都合であると示されたいずれもの特徴は、好ましい又は好都合であると示された一つ又は他の特徴と組合せることができる。
【００３１】
“一つの態様”に対するこの記載におけるいずれもの言及は、その態様に関して記載される特定の機能、構造又は特徴は、本発明の少なくとも一つの態様に含まれることを意味する。従って、この記載中の各種の場所における語句“一つの態様において”の出現は、全てが必ずしも同じ態様を指さないが、しかしそうであることもあり得る。更に、特定の機能、構造又は特徴は、一つ又はそれより多い態様中のこの記載を読む当業者にとって、明白に見受けられるものである、いずれもの適当な様式で組合せることができる。更に、本明細書中に記載される幾つかの態様が幾つかを、しかし、他の態様に含まれない他の特徴を含んでなるが、各種の態様の特徴の組合せは、本発明の適用の分野であり、そして当業者によって理解されるものであるように、各種の態様を形成する。例えば、付属する特許請求の範囲において、特許請求される態様のいずれか一つは、いずれもの組合せで使用することができる。
【００３２】
以下の本発明の詳細な記載において、本発明の不可欠な部分である付属する図面に対する言及が行われ、そして本発明を行うことができる具体的な態様の単なる例示の方法として提示される。他の態様を使用することができ、そして構造的又は理論的改変を、本発明の適用の分野から逸脱することなく導入することができることは理解される。従って、以下の詳細な記載は、制約的と考えるべきではなく、そして本発明の適用の分野は、付属する特許請求の範囲によって定義される。
【００３３】
本明細書中で使用する場合、本発明の目的のための表現“少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる組成物”は、一つ又はそれより多いフラバノール型化合物を含んでなる組成物を指す。これは、少なくとも一つのフラバノール化合物を主として含んでなる又は排他的にそれからなる組成物を含んでなるが、しかしそれに制約されない。
【００３４】
本発明の目的のために、用語“抗転移性組成物”は、転移の形成を予防するか又は少なくとも最小化する組成物を意味することを意図し、即ち、これは、初期に影響された部位から離れた、そして血液又はリンパ液の循環によって到達する組織又は器官における、腫瘍細胞（転移性前駆体細胞）の内転移（遊走）及び／又は浸潤及び／又は成長及び／又は増殖を予防又は少なくとも最小化する。同様に、本明細書中で使用する場合、表現“抗転移性治療のための方法”は、本発明の目的のために、転移の形成を予防又は少なくとも最小化する治療を意味することを意図し、即ちこれは、初期に影響された部位から離れた、そして血液又はリンパ液の循環によって到達する器官における、腫瘍細胞（転移性前駆体細胞）の内転移（遊走）及び／又は浸潤及び／又は成長及び／又は増殖を予防又は少なくとも最小化する。
【００３５】
用語“患者”は、本発明による治療を必要とするいずれもの動物を意味することを意図する。これは、両方の動物、更に特に哺乳動物、及びヒトを含んでなる。
用語“代謝性前駆体細胞”は、本発明の目的のために、転移に責任のある細胞を意味することを意図する。
【００３６】
用語“塩基性アミノ酸の誘導体”は、本発明の目的のために、塩基性アミノ酸のいずれもの化学的誘導体、例えばアミノ基の−ＣＨ３又は−Ｃ２Ｈ５或いは他の基の付加を意味することを意図する。
【００３７】
フラバノール、３−フラバノール、フラバン−３−オール又は他のカテキンは、フラボノイドのサブファミリーであり、これは、三つの炭素によって結合された二つの芳香族環：Ｃ６−Ｃ３−Ｃ６によって形成された全てが一つの、そして同じ基本的構造を共有する植物の二次代謝産物である。
【００３８】
用語“カテキン誘導体”は、本発明の目的のために、その一つ又はそれより多いそのＯＨ機能が、例えばアルキル化又はアシル化によって誘導体化されたカテキン、例えばテトラメトキシカテキン、ペンタアセトキシカテキン、及び環状誘導体を意味することを意図する。
【００３９】
フラバノールは、本発明による組成物中に、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成された錯体の形態で存在する。配位結合の生成によって形成される錯体に対する言及が行われ、弱い塩基及び酸、例えば（＋）−カテキンは、溶液中で、その濃度の９９％より多くが非イオン性の形態であるという事実によって特徴づけられるために、これは、溶液中の非常に少ないイオンを、そして従って塩の形成が起こらないことを意味する。
【００４０】
本発明の状況において、全く驚くべきことに、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成された錯体の形態のフラバノール型化合物が、抗転移性組成物として使用することができる、即ち一次腫瘍の出発における転移性前駆体細胞の遊走を阻害するための医薬として使用することができる組成物を提供することを可能にすることが観察されている。
【００４１】
この組成物が、非毒性であり、健康な細胞のミトコンドリアの呼吸を遮断せず、そして転移性前駆体細胞によって産生されるスーパーオキシド及び反応性酸素種の産生を調節する薬剤として作用することが更に示され、これは、特にヒトのための医薬として使用するための明確な利益を構成している。
【００４２】
第一に、驚くべきことに、本発明による錯体の形態のフラバノール型化合物が、スーパーオキシド及び反応性酸素種の転移性前駆体細胞による過剰の産生を、然しながら健康な細胞において天然に必要な、特に細胞間の正しい伝達を確実にし、そして前記細胞の正しい機能のためにその存在を阻害又は完全に排除することなく制御する（即ち調節する）ことを可能にすることが観察されている。
【００４３】
第二に、本発明による錯体の形態のフラバノール型化合物が、一次腫瘍から健康な器官に遊走する転移性前駆体細胞の数の有意な減少を誘発することが可能であることが初めて示されている。
【００４４】
用語“遊走”又は“内転移”は、本発明の目的のために、転移性前駆体細胞の本来の部位（一次腫瘍）から身体の他の部分への移動（リンパ系及び／又は血液系を使用して）を意味することを意図する。
【００４５】
全き驚くべきことに、そして初めて、本発明による錯体の形態のフラバノール型化合物が、一次腫瘍から健康な器官に遊走する転移性前駆体細胞数を、少なくとも５％ないし１０％、好ましくは少なくとも２０％ない４０％、優先的には少なくとも５０％ないし７５％減少することを可能にする阻害剤であると確認されたことは、本発明の状況内であり、この本発明による錯体の形態のこのフラバノール型化合物は、これらの癌細胞によって産生されるスーパーオキシド及び反応性酸素種（ＲＯＳ）の産生を調節する。
【００４６】
理論によっていずれかの方法で制約されることを望むものではないが、効果の一部が、転移性前駆体細胞のミトコンドリアによるスーパーオキシド及び反応性酸素種（ＲＯＳ）の産生に対する効果に起因することができることは推定される。従来の技術が、転移性前駆体細胞によるスーパーオキシド及び反応性酸素種の産生に対する、錯体の形態のフラバノール型化合物による調節の作用のこのモードに関しては、完全に無言であることは注目すべきである。作用のこのモードは、フラバノール型化合物が低濃度でさえ特に強力である抗酸化性化合物であることが知られていたにもかかわらず、これらは、更に非常に低い膜透過能力を有するとして認識されていたために、全てが更に驚きである。従って、このようなフラバノール型化合物が、本発明によって提供されるような錯体の形態においてさえ、転移性前駆体細胞のミトコンドリア膜を通して透過し、そこでスーパーオキシド及び反応性酸素種（ＲＯＳ）の過剰の産生を調節するために、そして従って遊走する転移性前駆体細胞の数を減少することに対して有意な影響を有することが可能であるものであることは確実に予想されておらず、これは、本発明の状況においてのみ証明されている。
【００４７】
全ての場合、そして特に転移の場合、転移性前駆体細胞によるフリーラジカルの過剰な産生の捕捉剤及び調節剤にとって、正しい部位に、正しい時間に、そして正しい濃度で到着し、そして十分に迅速に作用し、一方同時に、細胞内機構に対して非毒性であることが好ましい。本発明の状況において、全ての予測に対して、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成された錯体の形態のフラバノール型化合物は、全てのこれらの判定基準に完全に合致することが決定されている。
【００４８】
更に具体的に、本発明の状況において、本発明による錯体の形態のフラバノール型化合物が、一次腫瘍のレベルにおいて、転移性前駆体細胞によって産生されるミトコンドリアのスーパーオキシドラジカル及びＲＯＳの存在を適当に調節することによって、従って前記細胞の遊走を有意に最小化することによって、直接、そして迅速に作用することを可能にすることが証明されている。本発明による錯体の形態のフラバノール型化合物が、ミトコンドリア膜を通して透過する可能であると仮定すると、これは、この化合物が、転写性前駆体細胞のミトコンドリアによって産生されるミトコンドリアのスーパーオキシドラジカル及びＲＯＳの適当な比率を捕捉することを可能にするものである。本発明人等によって行われた観察によれば、ミトコンドリアのスーパーオキシドラジカル及びＲＯＳを捕捉及び調節は、健康な細胞中のミトコンドリアのスーパーオキシドラジカル及びＲＯＳの存在の天然の生理学的平衡を遵守するために適当に起こる。
【００４９】
これらの転移性前駆体細胞の内転移（遊走）の問題が、循環する腫瘍細胞を標的とすることにより供給源において攻撃し、そしてその後の健康な器官及び組織へのその遊走及び形成並びに転移を阻害するために、これは特に好都合であり、これは観察されるいずれもの毒性を伴わず、そして健康な細胞に影響を伴わない。従って、本発明による錯体の形態で存在するフラバノール型化合物の作用が、血液又はリンパ系中の転移性前駆体細胞を標的とするよって少なくとも部分的に起こる限り、前記細胞が実際に健康な器官又は組織に到達する危険性は、有意に最小化される。
【００５０】
いずれもの理論から独立して、本発明による組成物が、認識された転移のモデルにおいて、公表された抗転移性効果を有することが確証されている。一つの態様において、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成された錯体の形態で存在する（＋）−カテキンの錯体を含んでなる組成物が、特に高い抗転移性効果を有することが確証されている。一つの特別に想定された態様において、（＋）−カテキンは、塩基性アミノ酸、例えばリシン又はプロリン、或いはリシン又はプロリンの誘導体との錯体の形態で存在する。実際に、塩基性アミノ酸は、コラーゲンの組成中で本質的な役割を演じ、そしてコラーゲン架橋の形成のために必須である。
【００５１】
一つの態様において、組成物は、カテキンの少なくとも一つの塩基性アミノ酸との錯体を含んでなり、ここにおいて、フラバノールは、（＋）−カテキン、（−）−カテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキン、（＋）−没食子酸ガロカテキン、（−）−没食子酸ガロカテキン、及びこれらの混合物からなる群から選択される。本発明による、即ち本発明による錯体の形態の少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる、組成物の抗転移性効果は、従来の技術において最も強力であると考えられていたフラバノールである没食子酸エピガロカテキンと比較して、非常に高いことが確証されている。一つの態様において、フラバノールは、（＋）−カテキンである。
【００５２】
一つの態様において、組成物は、更に他の活性化合物、例えば一つ又はそれより多い他のフラバノール又は他の治療的化合物を含んでなる。
最後に、本発明以前に、本発明による錯体の形態のフラバノール型化合物が、抗転移性薬剤として作用することができることを示唆したものはなかった。先に記載したように、しかしこの理論により制約されることを望むものではないが、この錯体が、転移性前駆体細胞からのこの種類のラジカル及びＲＯＳに対する調節物質として少なくとも部分的に、前記細胞の遊走が阻害されるような方法で作用することは、非常に可能性がある。
【００５３】
これらの観察は、フラバノール型化合物が、低い生体利用率を有するとして認識されているために、そして従って、この化合物による生物体中だけでなく、更に消化管によるその同化作用に続く作用が明確に保証されていないために、全てが更に驚くべきことである。事実、これは、本発明によって想定されるような錯体の形態で存在してさえ、フラバノール型化合物が特に低い生体利用率を有することが認識されているため、転移性前駆体細胞からのスーパーオキシドラジカル及びＲＯＳに対するフラバノール型化合物による調節の影響を予測することは不可能である。
【００５４】
これに関して、本発明の状況において、フラバノール型化合物及び少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体間で形成される錯体が、全ての予測に対して、組成物の溶解度も更にこのような錯体の形成により増加されるにもかかわらず、本発明による組成物の生体利用率を改良することを可能にすることが驚くべきことに更に観察されている。実際に、水性媒体中の溶解度が増加される限り、脂質組織を通る錯体の能力が低いものであることが予測される；然しながら、本発明の状況において、全ての予測に対して、更に全く驚くべきことに、溶解度が増加される事実にも関わらず、生体利用率がやはり増加されることが決定されている。
【００５５】
従って、本発明は、塩基性アミノ酸及び／又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との錯体の形態で存在する少なくとも一つのフラバノール型化合物を含んでなる組成物及びその使用に関する。好ましくは、錯体の形態で存在する前記少なくとも一つのフラバノール型化合物は、０．０１μＭないし５０００μＭ間、好ましくは０．０２μＭないし２５００μＭ間、優先的には０．１μＭないし１０００μＭ間、好ましくは０．５μＭないし５００μＭ間のモル濃度で存在する。錯体の形態で存在するフラバノール型化合物のこのようなモル濃度は、転移性前駆体細胞によって過剰に産生されるミトコンドリアのスーパーオキシドラジカル及びＲＯＳの存在を調節（制御）する薬剤として後者に対して作用するために適当であるとして決定されている。好ましくは、これらのモル濃度は、当該フラバノール型化合物に分子量によれば０．０００２ｍｇ／ｍｌないし４００ｍｇ／ｍｌ間の錯体の形態で存在するフラバノール型化合物の濃度に対応する。
【００５６】
好都合には、前記フラバノール型化合物は、（＋）−カテキン、（−）−カテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、（＋）−没食子酸エピカテキン、（−）−没食子酸エピカテキン、（＋）−没食子酸エピガロカテキン、（−）−没食子酸エピガロカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキン、（＋）−没食子酸ガロカテキン、（−）−没食子酸ガロカテキン、及びこれらの混合物からなる群から選択される。好ましくはフラバノールは、（＋）−カテキン、（−）−カテキン、（＋）−エピカテキン、（−）−エピカテキン、（＋）−エピガロカテキン、（−）−エピガロカテキン、（＋）−没食子酸エピカテキン、（−）−没食子酸エピカテキン、（＋）−ガロカテキン、（−）−ガロカテキン、（＋）−没食子酸ガロカテキン、（−）−没食子酸ガロカテキン、及びこれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、フラバノール型化合物は、（＋）−カテキンである。
【００５７】
好都合には、前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸は、リシン、アルギニン、オルニチン、シトルリン、ヒスチジン、ピロリシン、トリプトファン、プロリン、及びこれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは、前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸は、リシン、アルギニン及びプロリンからなる群から選択される。更に特に、一つの態様において、塩基性アミノ酸はリシンである。
【００５８】
好ましくは、前記錯体は、前記フラバノール型化合物及び前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の前記少なくとも一つの誘導体間の１：０．２５ないし１：５間、好ましくは１：１ないし１：４間、優先的には１：１ないし１：３間、好ましくは１：１ないし１：２．５間、更に優先的には１：１ないし１：２間のモル当量比を有する。前記フラバノール型化合物及び前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸間のこのようなモル当量比は、本発明の状況において、転移性前駆体細胞の遊走を阻害するために適当である錯体を提供することが可能であるとして決定されている。
【００５９】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１より大きいか、又はそれに等しく、特に１：１より大きい。
好都合には、前記モル当量比は、１：３より小さいか、又はそれに等しい。
【００６０】
好都合には、前記モル当量比は、１：２に等しいか、又は１：２ないし１：４間、更に優先的には１：２ないし１：３間である。
特に、前記モル当量比は、１：３より小さいか、更に好ましくは１：２．５より小さいか、又はそれに等しい。
【００６１】
優先的には、前記モル当量比は、１：２より小さい。
別に、モル当量比は、１：１．５ないし１：２．５間、好ましくは１：１．５ないし１：２間である。
【００６２】
好都合には、前記モル当量比は、１：１より大きいか、又はそれに等しく、そして１：２．５０より小さいか又はそれに等しい。
非常に好都合には、前記モル当量比は、１：１より大きいか、又はそれに等しく、そして１：１．５より小さいか又はそれに等しい。
【００６３】
好ましくは、前記モル当量比は、１：１．５より大きいか、又はそれに等しく、そして１：２より小さいか又はそれに等しい。
好ましくは、前記モル当量比は、１：１．５より大きいか、そしてそれに等しく、そして１：２．５より小さいか又はそれに等しい。
【００６４】
優先的には、本発明による前記組成物は、更に、一つ又はそれより多い生体適合性の賦形剤を含んでなる。例えば、前記組成物は、一つ又はそれより多い潤滑剤、保存剤、安定剤、甘味剤、接着剤、アジュバント、染料、崩壊剤、増量剤及び浸透性活性化剤を含んでなることができる。賦形剤は、当業者によって公知である。
【００６５】
好都合には、本発明による前記組成物は、酸を含んでなることができる。この酸の存在は、組成物のｐＨを低い値に、錯体の天然の酸性度より大幅に低く調節すること（処方されるように、又は投与前に形成されるように）を可能にする。一つの態様において、組成物のｐＨは、約４．０ないし６．０であり、これによって、錯体の安定化を可能にする。一つの態様において、組成物のｐＨは、約７．２ないし７．４の生理学的ｐＨ値まで高い。一つの態様において、組成物のｐＨは調節され、従って組成物のその方鉛鉱の形態に、例えば約７．２ないし７．４の生理学的ｐＨにおける溶液中で安定化することを可能にする。組成物のｐＨは、更に、医薬物としての組成物の使用にも依存することができ、更に特に、これは、想定される投与の経路に依存することができる。一つの態様において、本発明による化合物の注射用の形態の調製は、これは所望により使用前に即座に調製することができるが、例えば想定される。
【００６６】
この状況におけるｐＨの値を減少するために想定される酸は、無機酸であることができ、これは、塩酸、硫酸又はリン酸からなる群から選択することができ、或いは有機酸、例えば脂肪族、脂環式、芳香族又は複素環酸であることができ、これらは、カルボン酸又はスルホン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、グルコン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、グルロン酸、マレイン酸、フマル酸、ピルビン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、マンデリン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、パントテン酸、ベータ−ヒドロキシプロピオン酸、ベータ−ヒドロキシ酪酸、マロン酸及びガラクツロン酸である。
【００６７】
好ましくは、前記酸は、アスコルビン酸、酢酸、クエン酸、塩酸、及びこれらの混合物からなる群から選択される。好ましくは前記酸は、塩酸である。
一つの態様において、組成物は、化合物の溶解度及び安定性を改良するために、一つ又はそれより多い医薬的に受容可能な酸又は塩基付加塩或いはこれらの溶媒和物を含んでなることができる。α−又はγ−シクロデキストリン又はこれらの誘導体、特にヒドロキシアルキルで置換されたシクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピルシクロデキストリン又は他にスルホブチルシクロデキストリンを使用することは好都合であることができる。一つの態様において、組成物は、更に、溶媒、例えばアルコールを含んでなることができ、これは、化合物の溶解度及び／又は安定性を改良することができる。
【００６８】
好都合には、本発明による組成物は、液体の形態又は固体の形態である。一つの態様において、組成物は、水溶性固体の形態、例えば粉末又は錠剤、或いはペッサリー又は座薬である。
【００６９】
一つの態様において、組成物は、同時使用又は投与直前の混合のための、構成物（フラバノール、アミノ酸、及び所望による酸及び賦形剤）の混合された製剤として想定される。更に特に、この種類の処方は、経口投与のために想定される。例えば、組成物は、錠剤の形態で処方することができる。これらの態様において、前記錯体は、事後投与を形成する。
【００７０】
好都合には、本発明による前記組成物は、経口的、直腸的、膣的に、注射又は皮膚によって使用される。
好ましくは、本発明による組成物は、少なくとも一つの塩基性アミノ酸又は塩基性アミノ酸の少なくとも一つの誘導体との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在する少なくとも一つのフラバノール型化合物の含有率が、前記組成物の全重量に対して１５％ないし９５重量％間、好ましくは６０％ないし９０％間、好都合には前記組成物の全重量に対して６５％ないし８５％であることにおいて特徴づけられる。
【００７１】
好都合には、本発明による組成物は、２５℃における０．０１モルの溶液において、これが、３より大きいか又はそれに等しい、好ましくは４ないし１１間、好都合には４．５ないし９間のｐＨを有することにおいて特徴づけられる。
【００７２】
もう一つの側面によれば、本発明は、癌性疾病の予防的及び／又は治癒的治療のための本発明による組成物の使用に関する。
好ましくは、本発明による化合物は、肝臓、前立腺、乳房、子宮、精巣、膀胱、腎臓、肺、気管支、骨、口腔、食道、胃、膵臓、結腸直腸又は他に脳癌の予防的及び／又は治癒的治療のために使用される。
【００７３】
好ましくは、本発明による化合物は、癌、好ましくは肝細胞癌の予防的及び／又は治癒的治療のために使用される。
好ましくは、本発明による化合物は、白血病の予防的及び／又は治癒的治療のために使用される。
【００７４】
好ましくは、本発明による化合物は、骨髄癌の予防的及び／又は治癒的治療のために使用される。
好ましくは、本発明による化合物は、リンパ腫の予防的及び／又は治癒的治療のために使用される。
【００７５】
好ましくは、本発明による化合物は、黒色腫の予防的及び／又は治癒的治療のために使用される。
本発明は、更に、癌の転移の予防又は治療のための、本発明による組成物の使用に関する。従って本発明は、特に、抗転移性医薬の産生に関する。
【００７６】
一つの態様において、本発明は、癌の転移に罹った又は罹る危険性の患者の治療を想定する。更に特に、一つの態様において、これらは、腫瘍を持つと診断された患者である。
一つの態様において、腫瘍は、乳房、肝臓、前立腺、子宮、精巣、膀胱、腎臓、肺、気管支、骨、口腔、食道、胃、膵臓、結腸直腸又は他に脳癌腫瘍である。
【００７７】
一つの態様において、本発明は、循環腫瘍細胞（ＣＴＳ）、即ち血液及びリンパ液中に存在する腫瘍細胞の治療を想定する。優先的には、ＣＴＳの中で、組成物は、転移性前駆体細胞、即ち遊走を起こしている細胞を標的とする。
【００７８】
一つの態様において、本発明は、転移の高い危険性を伴う腫瘍を持つと診断された患者の治療を想定する。
一つの態様において、腫瘍は低酸素性腫瘍である。低酸素性の特質は、低酸素状態マーカー、例えばＣＡＩＸ又はＨＩＦ−１アルファの検出によって、或いは低酸素状態指示薬、例えばＥＦ５、又は低酸素状態トレーサー、例えば［１８Ｆ］−フルオロミソニダゾールを使用することによって組織学的に証明することができる。
【００７９】
一つの態様において、腫瘍は、転移マーカーを発現している腫瘍である。幾つかの転移マーカー、例えばＮｅｄ９、Ｐｙｋ２、ＣＰＥ−デルタ、及びメタロプロテアーゼ２及び／又は９が、そして更にＣＡＩＸ又はＨＩＦ−１アルファが従来の技術において記載されている。
【００８０】
一つの態様において、本発明は、一つ又はそれより多い転移を持つと診断された患者の治療を想定する。
一つの態様において、本発明により想定される治療は、一つ又はそれより多い抗癌剤治療との組合せである。これらの治療は、例えば、制約されるものではないが、外科手術、放射線療法、化学療法、標的治療、ホルモン療法及び免疫療法を含んでなる。組成物は、即ち、もう一つ抗癌治療の前に、その最中に及び／又はその後に投与することができる。
【００８１】
一つの態様において、本発明により想定される治療は、抗増殖作用を持つ化合物との組合せである。
一つの態様において、本発明により想定される治療は、抗酸化作用を持つ、及び／又はＲＯＳ産生に影響を有する癌に対する医薬又は確立された治療法との組合せである。
【００８２】
一つの態様において、想定される治療は、本発明による組成物の、経口的、直腸的、膣的な、注射又は皮膚的による投与を含んでなる。一つの好ましい態様において、投与は、経口的である。
【００８３】
本発明の組成物は、手術前に、手術時に又は手術後に投与することができる。投与量は、一般的に、患者のサイズ、重量及び／又は身体表面積に基づき、投与計画に従って決定される。一つの態様において、組成物は、一日一回、一日二回、一日三回又は一日四回投与することができる。一つの態様において、５０ｍｇないし２ｇ／日／患者の投与量の投与を想定することができる。更に特に、約２５０ｍｇないし７５０ｍｇ／日、例えば５００ｍｇ／日の投与量を想定することができる。投与及び投与計画の均一性を容易にするために、単位投与量計画形態が想定される医薬組成物を処方することが特に好都合である。本発明の文書の単位投与量計画形態は、単位投与量として役立つ物理的に別個の単位を指し、それぞれの単位は、所定の量の活性成分を含有する。
【００８４】
本発明の他の特徴、詳細及び利点は、本明細書中で以下に、非制約的様式で与えられる実施例、及び付属する図面（グラフ）に対する言及から出現するものである。
【図面の簡単な説明】
【００８５】
【図１−１】図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは、各種の濃度の（＋）−カテキン（＋Ｃ）における処理に対する、生存するＳｉＨａ−Ｆ３腫瘍細胞（Ｆ３）のパーセント（図１Ａ）、遊走した細胞のパーセント（図１Ｂ）及びＤＣＦＤＡ蛍光／タンパク質含有率の比（図１Ｃ）をそれぞれ再現するグラフである。
【図１−２】図１−１の説明と同じ。
【図２−１】図２Ａ、２Ｂ及び２Ｃは、各種の濃度の１：１のモル当量比による（＋）−カテキン／リシン錯体（＋Ｃ）における処理に対する、生存するＳｉＨａ−Ｆ３腫瘍細胞（Ｆ３）のパーセント（図２Ａ）、遊走した細胞のパーセント（図２Ｂ）及びＤＣＦＤＡ蛍光／タンパク質含有率の比（図２Ｃ）をそれぞれ再現するグラフである。
【図２−２】図２−１の説明と同じ。
【図３】図３Ａ及び３Ｂは、各種の濃度の１：２のモル当量比による（＋）−カテキン／リシン錯体（＋Ｃ）の処理に対する、生存するＳｉＨａ−Ｆ３腫瘍細胞（Ｆ３）のパーセント（図３Ａ）及び遊走した細胞のパーセント（図３Ｂ）をそれぞれ再現するグラフである。
【図４】図４Ａ、４Ｂ、４Ｃ及び４Ｄは、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：１又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：２（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）で処理された腫瘍細胞の生存（クリスタルバイオレット［ＣＶ］技術により測定し、そして非処理のＳｉＨａ−Ｆ３超転移性細胞の％として表示）を再現するグラフである。
【図５】図５Ａ、５Ｂ、５Ｃ及び５Ｄは、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：１又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：２（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）で処理された腫瘍細胞の生存（ＭＴＴ技術により測定し、そして非処理のＳｉＨａ−Ｆ３の％として表示）を再現するグラフである。
【図６】図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ及び６Ｄは、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：１又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：２（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）によるＳｉＨａ−Ｆ３腫瘍細胞の処理に対するＤＣＦＤＡ蛍光／タンパク質含有比を再現するグラフである。
【図７】図７Ａ、７Ｂ、７Ｃ及び７Ｄは、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：１又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ  １：２（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）により処理された腫瘍細胞の細胞の遊走（非処理のＳｉＨａ−Ｆ３の％として）を再現するグラフである。
【図８】図８Ａ及び８Ｂは、実験モデル中の肺の転移の形成に対する全てがそれ自体のロテノン（ロテノン２０ｎＭ）による処理と比較した、ロテノン（ロテノン２０ｎＭ＋１：２のＣ／Ｌ１０μＭ）で処理された黒色腫腫瘍細胞に対する、１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌの効果を証明する写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）である。動物の一群は、ＤＭＳＯ単独で処理され、そして負の対照として貢献した。
【図９】図９Ａ及び９Ｂは、実験動物の肺の転移の形成中の黒色腫腫瘍細胞に対する１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン２０ｎＭ＋１：２のＣ／Ｌ１０μＭ）及び１：２の没食子酸エピガロカテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン２０ｎＭ＋１：２のＥＧＣＧ／Ｌ１０μＭ）の影響を示す写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）である。動物の一群はロテノン単独（ロテノン２０ｎＭ）で処理され、そして正の対照として貢献した。動物の一群は、ＤＭＳＯ単独で処理され、そして負の対照として貢献した。
【図１０】図１０Ａ及び１０Ｂは、実験モデルにおける肺の転移の形成に対する１：２のカテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン１０ｎＭ＋１：２のＣ／Ｌ１０μＭ）又は没食子酸エピガロカテキン（ロテノン１０ｎＭ＋ＥＧＣＧ１０μＭ）の影響を示す写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）である。
【発明を実施するための形態】
【００８６】
実施例
処理された細胞の細胞遊走及び生存の試験が、ヒトの子宮頚部腺癌細胞系、ＳｉＨａから得られた超浸潤性腫瘍細胞のモデルで行われた。超浸潤性ＳｉＨａ−Ｆ３（グラフ上ではＦ３）の選択は、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）で被覆されたＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）型の透過性支持体中のｉｎ  ｖｉｔｒｏの３回の連続した浸潤後に行われた（Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１４，８：７５４−７６６）。特別に侵襲性の転移性前駆体細胞のこのような選択は、最も活性な抗転移性産物を更によく確認することを可能にする。
【００８７】
腫瘍細胞の実際の遊走は、ウェル当たり５００００細胞のＢｏｙｄｅｎチャンバーで測定し、そして０．１５％の胎児ウシ血清（ＦＢＳ）を走化性因子として使用した。Ｂｏｙｄｅｎチャンバーの二つの区画を分離する多孔性膜の細孔直径は８μｍに固定した。１６時間の遊走後、細胞を最初にメタノールで３分間固定し、そして次いでクリスタルバイオレットで染色した。使用した培養培地は、ＤＭＥＭ  ４．５ｇ／ｌのグルコース、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標）１％のペニシリン／ストレプトマイシンの溶液及び１０％の胎児ウシ血清であった。
【００８８】
細胞の生存を、試験された産物のいずれもの毒性効果を排除するために、クリスタルバイオレットで染色した細胞の定量化に基づくか、又はＭＴＴテトラゾリウム塩の還元に対するミトコンドリアのコハク酸デヒドロゲナーゼ（ＳＤＨ）活性を測定する（ＤＭＳＯ中で得られたホルマザンの懸濁液及び５７０ｎｍにおける吸光度の測定）ことによるかのいずれかで推定した。
【００８９】
更に、観察された反応性酸素種（ＲＯＳ）のレベルに対する試験された産物の影響の評価を、ＳｉＨａ−Ｆ３代謝性前駆体細胞の試験された産物による６０分間の予備処理後にＤＣＦＤＡ技術によって行った。
【００９０】
図中で、Ｆ３は：対照（非処理細胞）を示し；Ｆ３＋ＣｘＭは：（＋）−カテキンでｘのモル濃度で処理された細胞を示し；Ｆ３Ｃ／Ｌ１：１ｘＭは：１：１のモル当量比による（＋）−カテキン／リシン錯体で、ｘのモル濃度で処理された細胞を示し；Ｆ３Ｃ／Ｌ１：２ｘＭは：１：２のモル当量比による（＋）−カテキン／リシン錯体で、ｘのモル濃度で処理された細胞を示す。
【００９１】
得られた結果を考察するために、他の値もグラフ上に再現されているが、１μＭのモル濃度を考慮した。この濃度は、これが、活性化合物の濃度を最小化するために系統的に探求されたために、医薬の産生に関して最も適切である。他のモル濃度がこのような医薬の産生のために適していることは多くの場合やはりそのままのことであり、フラバノール型化合物が低い毒性を有するために、ますますそうであり、そしてこれらの濃度は従って本発明の一体化された部分である。
【００９２】
実施例１：  （＋）−カテキン（＋Ｃ）の各種の濃度における処理
図１Ａで注目することができるように、１μＭのモル濃度の（＋）−カテキン（Ｃ）は、腫瘍細胞の生存に影響せず、これによってこの濃度において、（＋）−カテキンは毒性ではないことを示す。然しながら、図１Ｂは、１μＭのモル濃度の（＋）−カテキンが、Ｂｏｙｄｅｎセルの一つの区画から他方へ腫瘍細胞が遊走する数を有意に減少することを可能にしないことに注目することを可能にする。同じ意味で、図１Ｃは、１μＭのこの同じ濃度で（＋）−カテキンが、観察される活性酸素種（ＲＯＳ）のレベルに、影響を持たないことを示す。
【００９３】
実施例２：  １：１のモル当量比による（＋）−カテキン／リシン錯体の各種濃度における処理
図２Ａにおいて注目することができるように、１μＭのモル濃度の１：１のモル当量比（１：１のＣ／Ｌ）による（＋）−カテキン／リシン錯体が、腫瘍細胞の生存に影響せず、これによって、この濃度において１：１のＣ／Ｌ錯体が毒性ではないことを示す。更に、図２Ｂは、１μＭのモル濃度の１：１のＣ／Ｌ錯体が、Ｂｏｙｄｅｎセルの一つの区画から他方へ腫瘍細胞が遊走する数を３０％まで有意に減少することを可能にすることに注目することを可能にする。
【００９４】
遊走する腫瘍細胞のパーセントのこの減少が、細胞によって産生される反応性酸素種（ＲＯＳ）のレベルの約、そして少なくとも１０％の減少に関連し、これが１：１のＣ／Ｌ錯体の影響下であることが決定された。
【００９５】
実施例３：  １：２のモル当量比による（＋）−カテキン／リシン錯体の各種濃度における処理
図３Ａにおいて注目することができるように、１μＭのモル濃度の１：２のモル当量比（１：２のＣ／Ｌ）による（＋）−カテキン／リシン錯体が、腫瘍細胞の生存に影響せず、これによって、この濃度において１：２のＣ／Ｌ錯体が毒性ではないことを示す。更に、図３Ｂは、１μＭのモル濃度の１：２のＣ／Ｌ錯体が、Ｂｏｙｄｅｎセルの一つの区画から他方へ腫瘍細胞が遊走する数を４０％まで有意に減少することを可能にすることに注目することを可能にする。
【００９６】
本発明が、如何なる方法ででも先に記載された態様に制約されず、そして多くの改変を付属する特許請求の範囲の文脈から逸脱することなくそれに導入することができることは明確に理解される。
【００９７】
実施例４：  腫瘍細胞に対する没食子酸エピガロカテキンと比較した（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ誘導体の細胞毒性
没食子酸エピガロカテキンは、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓから到着し、（＋）−カテキンは、Ｂｌｏｃ  Ｇａｍｂｉｒから医薬的に純粋に調製され、そしてその錯体は、これを、リシン塩酸塩と共にモル比率で混合することによって得た。
【００９８】
最初にＳｉＨａ−Ｆ３細胞を、Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐｏｒｔｓ：Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１４，８：７５４−７６６中で最近公開された文献に記載されたとおりに発生した。細胞を培養液中で維持し、そして１０％の胎児ウシ血清で補充されたＤＭＥＭ、４．５ｇ／ｌのグルコース、ｇｌｕｔａＭＡＸ（Ｇｉｂｃｏ）、中で操作した。
【００９９】
細胞生存率の測定：２００００個のＳｉＨａ−Ｆ３細胞を播種し、そして示された化合物で一晩（１６時間）処理した。次いで細胞を３分間メタノールで固定し、０．２３％のクリスタルバイオレットで染色し、そして５９５ｎｍにおける吸光度を測定（Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４分光光度計，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）するためにＤＭＳＯ中に再懸濁した；或いは別の方法として、１０ｍＭのＨＥＰＥＳを含有するＨＢＳＳ中のＭＴＴの飽和溶液中の３７℃で３時間インキュベートし、そして６３０ｎｍにおける吸光度を測定（Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４分光光度計，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）するためにＤＭＳＯ中に再懸濁した。
【０１００】
ＳｉＨａ−Ｆ３細胞を、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、１：１の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（１：２）（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）で一晩（１６時間）処理し、その後、細胞の生存率をクリスタルバイオレットで染色することによって（図４）、又はＭＴＴで（図５）測定した。
【０１０１】
図４及び５において証明されるように、カテキン誘導体は、没食子酸エピガロカテキンより毒性が少ない。
実施例５：  化合物の抗酸化剤活性
没食子酸エピガロカテキン、（＋）−カテキン及びリシン塩酸塩と組合されたその錯体及びＤ、Ｌ−リシン、そして更にＳｉＨａ−Ｆ３細胞を、先に記載したように得た。
【０１０２】
全細胞のＲＯＳの測定：２００００個のＳｉＨａ−Ｆ３細胞を播種してから、示された化合物で１時間処理した。次いで細胞を、１０ｎＭのＨＥＰＥＳを含有するＨＢＳＳ中のＨ２−ＤＣＦＤＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）の１μＭ溶液中の３７℃で３０分間インキュベートしてから、５３５ｎｍにおける吸光度を測定（Ｖｉｃｔｏｒ  Ｘ４分光光度計，Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）した。
【０１０３】
ＳｉＨａ−Ｆ３細胞を、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、１：１の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（１：２）（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）で２時間処理し、その後、細胞のＲＯＳの産生をＤＣＦＤＡによる蛍光によって測定した。
【０１０４】
図６中で注目することができるように、全てのカテキン誘導体及び没食子酸エピガロカテキンは、腫瘍細胞に対する類似の抗酸化活性を有する。
実施例６：  （＋）−カテキン／リシンＨＣｌ錯体は、腫瘍細胞の遊走を阻害する
没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン及びリシン塩酸塩及びＤ、Ｌ−リシンと組合せたその錯体、そして更にＳｉＨａ−Ｆ３細胞は、先に記載したように得た。
【０１０５】
細胞遊走の測定：４８ウェルの再使用可能なＢｏｙｄｅｎチャンバー（Ｎｅｕｒｏｐｒｏｂｅ）を、製造業者の説明書によって使用した。簡単には、走化性因子として役立つ０．１５％の胎児ウシ血清を含有する培地が下部の区画に、直径８μｍの細孔で孔をあけられたポリカーボネートの膜が二つの区画を分離し、そして示された化合物の存在中の懸濁液中の５００００個のＳｉＨａ−Ｆ３細胞が上部区画に導入された。細胞の遊走を、一晩の時間（１６時間）後に定量化した。遊走した細胞を、メタノール中で３分間固定し、０．２３％のクリスタルバイオレットで３０分間染色し、そして倒立（ｉｎｖｅｒｔｅｄ  ｐｈａｓｅ）顕微鏡（Ａｘｉｏｖｅｒｔ  ａｎｄ  Ｍｒｃ  ｃａｍｅｒａ，Ｚｅｉｓｓ）を使用して×２．５の倍率で撮られた写真上で数えた。
【０１０６】
ＳｉＨａ−Ｆ３細胞を、Ｂｏｙｄｅｎチャンバー中で行われた遊走中に、没食子酸エピガロカテキン（ＥＧＣＧ）、（＋）−カテキン、１：１の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ又は（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（１：２）（１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭ、１００μＭ、５００μＭ又は１ｍＭの濃度）で処理し、その後、０．１５％の血清に向かって遊走した細胞の数を数えた。結果を対照の％として表示した。
【０１０７】
図７中で注目することができるように、没食子酸エピガロカテキン及び（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ錯体は、癌細胞の遊走を阻害したが、しかし（＋）−カテキンは阻害しなかった。（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ錯体化合物のみが、計数に影響するものである細胞毒性とは非依存的に腫瘍細胞の遊走を阻害した。
【０１０８】
実施例７：  １：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌは、転移の形成を阻害した
Ｂ１６Ｆ１０腫瘍細胞は、ＡＴＣＣコレクションから到着した。オスの６又は７週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスをＪａｎｖｉｅｒ研究所から取得し、そしてプロトコルをＵＣＬ倫理委員会に申請し、そして一方動物愛護に関するベルギーの法律に忠実であった。
実験的転移のモデル：Ｂ１６Ｆ１０細胞をＤＭＳＯ（０．５％、ロテノン担体、負の対照）又はロテノン（Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１４，８：７５４−７６６中に記載されているように呼吸鎖錯体Ｉ阻害剤及びミトコンドリアのスーパーオキシド誘発物質、正の対照）で、単独で又は示された化合物との組合せで６時間予備処理した。次いで細胞を剥離し、計数し、そしてカルシウム又はマグネシウムを含まないＨＢＳＳ中に１０×１０６細胞／ｍｌの比率で再懸濁した。次いで１０６個の細胞（即ち、１００μｌの懸濁液）を、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの尾側静脈に注射した。細胞の注射後１４日目に、マウスを犠牲にし、肺を分離し、そして転移（メラニンに対して陽性のスポット）を手術用顕微鏡下で数えた。
【０１０９】
図８は、同質遺伝子的マウスの尾側の静脈への１０６個のＢ１６Ｆ１０マウスの黒色腫細胞の注射後の１４日目の肺の転移の形成を定量化した代表的な写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）を示す。細胞を、０．５％のＤＭＳＯ（ＤＭＳＯ、負の対照）又は呼吸鎖錯体Ｉ阻害剤及びミトコンドリアのスーパーオキシド誘発物質の単独の２０ｎＭのロテノン（ロテノン２０ｎＭ、正の対照）で、或いは１０μＭの１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン２０ｎＭ＋１：２のＣ／Ｌ１０μＭ）との組合せで予備処理した。ｎ＝７−９であり、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ試験を伴う一元配置ＡＮＯＶＡで、＊＊はｐ＜０．０１である。
【０１１０】
１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌが、静脈注射実験モデルにおける転移の形成を阻害することは注目される。
図９は、同質遺伝子的マウスの尾側の静脈への１０６個のＢ１６Ｆ１０マウスの黒色腫細胞の注射後１４日目の肺の転移の形成を定量化した代表的な写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）を示す。細胞を、０．５％のＤＭＳＯ（ＤＭＳＯ、負の対照）又は呼吸鎖錯体Ｉ阻害剤及びミトコンドリアのスーパーオキシド誘発物質の２０ｎＭの単独のロテノン（ロテノン２０ｎＭ、正の対照）で、或いは１０μＭの１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン２０ｎＭ＋１：２のＣ／Ｌ１０μＭ）又は１：２の没食子酸エピガロカテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン２０ｎＭ＋１：２のＥＧＣＧ／Ｌ１０μＭ）との組合せで予備処理した。ｎ＝７−８であり、Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ試験を伴う一元配置ＡＮＯＶＡでｎｓはｐ＞０．０５、＊＊はｐ＜０．０１である。
【０１１１】
１：２の没食子酸エピガロカテキン／リシンＨＣｌとは対照的に、１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌが、静脈注射実験モデルにおける転移の形成を阻害することが観察された。
【０１１２】
実施例８：  １：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌは、実験モデルにおける肺転移の形成を減少したが、没食子酸エピガロカテキンは減少しなかった
図１０は、同質遺伝子的マウスの尾側の静脈への１０６個のＢ１６Ｆ１０マウスの黒色腫細胞の注射後１４日目の肺の転移の形成を定量化した代表的な写真（Ａ）及びグラフ（Ｂ）を示す。細胞を、没食子酸エピガロカテキン（ロテノン１０ｎＭ＋ＥＧＣＧ１０μＭ）又は１０μＭの１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌ（ロテノン１０ｎＭ＋１：２のＣ／Ｌ１０μＭ）と組合せた１０ｎＭの呼吸鎖錯体Ｉ阻害剤及びミトコンドリアのスーパーオキシド誘発物質のロテノンで予備処理した。ｎ＝５−９であり、スチューデント試験でｎｓはｐ＞０．０５、＊はｐ＜０．０１である。
【０１１３】
１：２の（＋）−カテキン／リシンＨＣｌが、静脈注射実験モデルにおける転移の形成を、没食子酸エピガロカテキンより更に有効に阻害することが観察された。
統計：
全ての実験及び実施例１ないし８において、一元配置ＡＮＯＶＡを適用してから、適当な複数の比較試験（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験に対してＤｕｎｎｅｔｔ、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験に対してＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ）を、そしてスチューデント試験を、図１０に示した二つの条件の比較のために適用した。ｐ値＜０．０５を統計的に有意と考えた（＊）；＊＊はｐ＜０．０１を；＊＊＊ｐは＜０．００５を示す。ｎｓ（有意ではない）は、ｐ値が＞０．０５であることを示す。Ｉｎ  ｖｉｔｒｏグラフのカラムは、それぞれの群の平均であり、ｉｎ  ｖｉｖｏグラフの点は、それぞれ一匹のマウスを指し、そして水平の棒は、それぞれの群の平均を示す。Ｎは、実験が独立に再現された実験の回数を示し、そしてｎは、複写物の全数である。
【０１１４】
実施例９：  自然転移のモデルにおける抗転移性効果
転移過程を全体として研究するために、一次腫瘍からの自然転移のモデルを使用した（Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１４；８：７５４−７６６）。例えば、モデル中で、所望により発光性又は蛍光性のレポーターを保持する１００００００個の中程度に転移性のマウス黒色腫細胞（Ｂ１６Ｆ１０）又は強力に転移性のマウス黒色腫細胞（Ｂ１６Ｍ４ｂ、Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１４，８：７５４−７６６中に記載）を、同質遺伝子的なＣ５７ＢＬ／６マウスの側腹部に皮下又は皮内的に注射した。カテキン型の化合物の抗転移性及び／又は抗腫瘍性活性を、この化合物を、動物に、例えば腹腔内的に又は静脈的に（注射）或いは経口的に（強制飼養、食品又は飲料水中に組込む）投与することによって、そしてこれを、定義された投与計画スキーム（投与頻度及び投与量）により、その担体と比較することによって評価した。
【０１１５】
一次腫瘍の成長を、ノギスによる腫瘍直径の繰返し測定（例えば２−３日毎）によって及び／又は腫瘍細胞によるレポーターの発現がこれを可能にする場合、ｉｎ  ｖｉｖｏの発光又は蛍光画像化によって注意深くモニターした。平均腫瘍直径が優先的に１０ｍｍに達した時点で（上述の腫瘍系において典型的には１０ないし１４日目間）、一次腫瘍を、マウスの生存を保つこと及び転移の発育を刺激することの二重目的で切除した（Ｐｏｒｐｏｒａｔｏ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  Ｒｅｐ  ２０１４，８：７５４−７６６；  Ｇａｂｒｉ  ＭＲ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００６；１２：７０９２−７０９８）。必要なサイズの一次腫瘍を発育するための最初のマウス及び最後のマウスの外科手術間の時間は、できるだけ短くする（典型的には、上述の腫瘍系に対して５日）。一次腫瘍の可能な再成長の切除は、この再成長が直径で約１０ｍｍに達した時点で必要に応じてしばしば行われる。転移性内転移を評価するために、次の現象：１°）最初の動物が倫理的限度を超えて苦しむ状態を示す、２°）最初の動物が事前の徴候を示さず死亡し、そして多くの及び／又は大きい転移性病変を示す、３°）細胞が適当なレポーターを発現する場合、ｉｎ  ｖｉｖｏの発光又は蛍光のモニタリングが相当な転移性内転移を示す、４°）Ｂ１６Ｍ４ｂマウスに対して典型的には注射後３０ないし４０日、又はＢ１６Ｆ１０マウスに対して典型的には６０ないし９０日の期間、の一つが起こった場合に各種の群のマウスが犠牲にされた。これらの黒色腫モデルにおいて、転移は、本質的に肺及びリンパ節（鼠蹊部、腋窩、縦隔）において、そして少ない頻度で肝臓に、腹膜に、そして恐らく脳に起こる。肺の転移の数の定量化のために、生理食塩水の器官内注射による肺の吹送が行われた。肺の転移（黒メラニン顔料に対する点陽性）は、転倒顕微鏡１を使用して数えた。別の方法として、ｅｘ  ｖｉｖｏの除去された器官の発光又は蛍光画像化及び／又は組織学的分析が行われた。一次腫瘍のサイズのかなりの変化の場合、その切除までの一次腫瘍の成長の曲線下面積によって、結果をそれぞれの動物に対して標準化した。
【０１１６】
本発明によるカテキン型誘導体が、抗転移効果を有することが観察された。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成29年7月12日(2017.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌の転移の予防的及び／又は治癒的な治療における使用のための、少なくとも一つのフラバノール型化合物を含む組成物であって、前記少なくとも一つのフラバノール型化合物が、少なくとも一つの塩基性アミノ酸との配位結合の生成によって形成される錯体の形態で存在する（＋）−カテキンであることにおいて特徴づけられる、前記組成物。
【請求項２】
前記錯体が、前記（＋）−カテキンと前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸との間の、１：２と１：４の間のモル当量比を有することで特徴づけられる、請求項１に記載の使用のための組成物。
【請求項３】
前記少なくとも一つの塩基性アミノ酸が、リシンであることで特徴づけられる、請求項請求項１又は２に記載の使用のための組成物。
【請求項４】
少なくとも一つの酸を更に含み得ることで特徴づけられる、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項５】
前記酸が、アスコルビン酸、酢酸、クエン酸、塩酸、及びこれらの混合物からなる群から選択されることで特徴づけられる、請求項４に記載の使用のための組成物。
【請求項６】
２５℃における０．０１モルの溶液において、３以上の、好ましくは４〜１１の、好都合には４．５〜７．５のｐＨを有することで特徴づけられる、請求項１ないし５のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項７】
固体の形態、好ましくは水溶性固体の形態、例えば粉末又は錠剤、或いは他にペッサリー又は座薬であることで特徴づけられる、請求項１ないし６のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項８】
経口的に投与されることで特徴づけられる、請求項１ないし７のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項９】
一つ以上の生体適合性の賦形剤を更に含むことで特徴づけられる、請求項１ないし８のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１０】
治療が、抗癌治療との組合せであることにおいて特徴づけられる、請求項１ないし９のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１１】
癌が、肝臓、前立腺、乳房、子宮、精巣、膀胱、腎臓、肺、気管支、骨、口腔、食道、胃、膵臓、結腸直腸又は他に脳の癌であることで特徴づけられる、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１２】
癌が、肝細胞癌であることで特徴づけられる、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１３】
癌が、白血病、骨髄腫、リンパ腫又は黒色腫であることで特徴づけられる、請求項１ないし１０のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１４】
前記組成物が２５０ｍｇ〜７５０ｍｇ／日の用量で投与されることにおいて特徴づけられる、請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【請求項１５】
前記組成物が循環腫瘍細胞を治療することで特徴づけられる、請求項１ないし１４のいずれか１項に記載の使用のための組成物。
【国際調査報告】
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