(57)【要約】  本発明は、経口の摂取後、腸において特定の種類の生物学的に活性な化合物の安定性、溶解度及び透過性を改善する送達システムを提供する。送達システムは、固体脂質粒子の集塊と生物学的に活性な化合物とを含む、担体顆粒を含む。生物学的に活性な化合物は、上記送達システムと共に、治療的な血液及び組織内のレベルが病気の治療に必要とされる、炎症、酸化又はタンパク質凝集に関連する病気の治療に使用され得る。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
増強された経口バイオアベイラビリティーを有する送達システムであって、
経口服用のための固体脂質粒子の集塊を含む担体顆粒と、
１又は複数の生物学的に活性な化合物と、を含む送達システム。
【請求項２】
前記担体顆粒が、約１５０ミクロン〜約８４０ミクロンの粒子径を有する、請求項１に記載の送達システム。
【請求項３】
前記顆粒内の前記脂質球状粒子が約５ミクロン〜約２０ミクロンの粒子径を有する、先の請求項１〜２のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項４】
前記固体脂質粒子が１又は複数の長鎖脂質を含む、先の請求項１〜３のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項５】
前記固体脂質粒子が、ダイズレシチン、ホスファチジルコリン、ステアリン酸、及びアスコルビン酸パルミテートからなる群から選択される１又は複数の長鎖脂質を含む、先の請求項１〜４のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項６】
前記固体脂質粒子がデキストリン、シリコーン二酸化物又はそれらの両方を更に含む、先の請求項１〜５のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項７】
ステアリン酸：ホスファチジルコリンの比が約１：２５：１〜約３：５：１の範囲にある、先の請求項１〜６のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項８】
前記生物学的に活性な化合物が、脂溶性部分及びヒドロキシル基を含む、先の請求項１〜７のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項９】
前記生物学的に活性な化合物がクルクミンを含む、先の請求項１〜８のいずれか１に記載の送達システム。
【請求項１０】
前記生物学的に活性な化合物がルテインを含む、先の請求項１〜９のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１１】
前記担体顆粒が、前記有効成分、ホスファチジルコリン、及びアスコルビン酸パルミテートからなるコアと、ステアリン酸のコーティングと、を含む、先の請求項１〜１０のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１２】
前記有効成分が、前記担体顆粒の表面に埋め込まれるか、又はその表面に付着される、先の請求項１〜１１のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１３】
前記固体脂質粒子が前記顆粒内にちりばめられる、先の請求項１〜１２のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１４】
前記担体顆粒が破砕された固体脂質微粒子から形成される、先の請求項１〜１３のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１５】
前記担体顆粒が、前記担体顆粒に埋め込まれた、又は付着された固体脂質微粒子を含む、先の請求項１〜１４のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１６】
前記担体顆粒が、リンパ系への活性剤の送達を増加させる、先の請求項１〜１５のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１７】
前記担体顆粒が水中での前記有効成分の溶解度を増加させる、先の請求項１〜１６のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１８】
前記顆粒が腸における加水分解から前記有効成分を保護する、先の請求項１〜１７のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項１９】
前記送達システムがリンパ系によって吸収される、先の請求項１〜１８のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項２０】
前記顆粒が、肝臓での初回通過代謝を回避し、前記有効成分のバイオアベイラビリティーを増加させる、先の請求項１〜１９のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項２１】
前記送達システムが、前記有効成分の水中での溶解度を増加させる、先の請求項１〜２０のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項２２】
前記送達システムが、
約１５％〜４０％の少なくとも１つの活性化合物、
約７％〜２５％のダイズレシチン、
約７％〜３０％のマルトデキストリン、
約１％〜３％のアスコルビン酸パルミテート、及び
約０．３％〜２％のシリコーン二酸化物
を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項２３】
前記ダイズレシチンがホスファチジルコリンである、請求項２２に記載の送達システム。
【請求項２４】
前記送達システムが、
約１０％〜３０％の少なくとも１つの活性化合物、
約１０％〜２０％のホスファチジルコリン、
約２５％〜３５％のステアリン酸、
約２５％〜４０％のデキストリン、
約１％〜４％のアスコルビン酸パルミテート、及び
約０．１％〜３％の二酸化ケイ素
を含む、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の送達システム。
【請求項２５】
加齢性疾患を治療する方法であって、
先の請求項１〜２１のいずれか一項に記載の治療的有効量の送達システムを投与することを含み、
前記送達システムが、加齢性疾患を治療することが可能な有効成分を含む、加齢性疾患を治療する方法。
【請求項２６】
加齢性疾患の治療に対する、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の送達システムの使用。
【請求項２７】
増強された経口バイオアベイラビリティーを有する送達システムにおける使用に対する担体顆粒を作製する方法であって、
ａ）有効成分と、精製されたホスファチジルコリン（８０％〜９０％のホスファチジルコリン）及びアスコルビン酸パルミテートとを複合化する工程、
ｂ）工程（ａ）に由来する前記複合体をホモジナイズする工程、
ｃ）前記ホモジナイズした複合体を濾過する工程、
ｄ）前記ホモジナイズした複合体を噴霧乾燥する工程、
ｅ）乾燥したホモジナイズされた複合体を溶解したステアリン酸と高速で混合する工程、並びに
ｆ）工程（ｅ）に由来する材料を冷却し、担体顆粒の粉末まで製粉する工程、
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、それらの内容全体が参照により援用される、「加齢性疾患に対する脂溶性化合物改善されたバイオアベイラビリティーに対する安定な固体脂質粒子組成物」と題され、２０１４年１１月１１日付けで出願された米国仮特許出願第６２／０７８，２７１号の利益を主張する。
【０００２】
本発明は、概して、脂溶性化合物、特に加齢性疾患に有用な脂溶性化合物に対する送達システムに関する。
【背景技術】
【０００３】
アルツハイマー病及びパーキンソン病等の病因論は、酸化的損傷及び炎症性因子の積み重ねられた証拠を示す。残念ながら、強力な疫学及び論理的根拠にもかかわらず、これらの加齢性疾患に対する抗酸化剤及びＮＳＡＩＤのアプローチは診療所において一般的に成功していない。例えば、ビタミンＥはアルツハイマー病及び心疾患の予防に対する試験に失敗したのに対し、ＣＯＸ阻害剤はアルツハイマー治療に失敗し、従来の抗酸化剤（セレン、ビタミンＥ、β‐カロテン）、エストロゲン及びＣＯＸ‐２阻害剤を用いた予防努力から脱落した（ｄｒｏｐｐｅｄ  ｆｏｒ）。本発明者らの高齢人口の人口統計データより、１又は複数の加齢による慢性疾患の予防及び可能な治療に適した代替案が緊急な必要性に迫られている。
【０００４】
ウコン抽出物として、クルクミンはイエローカレーの黄色であり、例えば、イエローマスタードでは食品添加物として使用される。いまだに我々のわずかな成功した予防剤の一つである「特効薬」アスピリンのように、クルクミンの長期的な健康可能性には、実質的な歴史、及び比較的確立された科学的根拠がある。それは、伝統的なインド及び中国の医薬の経験的に高度に発展したシステムにおいて、主要な生物活性剤であると確認されている。
【０００５】
クルクミン（ジフェルロイルメタン（ｄｉｆｅｒｕｌｏｍｅｔｈａｎｅ））は、ＣＯＸ‐２、ｉＮＯＳ、ｉｌ‐Ｉ及びＴＮＦαを含むＮＦＫＢ及びＡＰ‐Ｉ調節炎症促進物質に作用する強力な天然の抗酸化剤及び抗炎症剤であるのみならず、複数の有用な活性を有し、しばしば老化に関連する疾患に対して、多くの前臨床の培養物及び動物モデルにおいて治療の可能性を示している。これらは、癌（大腸、前立腺、乳房、皮膚、白血病等）（Ａｇａｒｗａｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）、プリオン病（Ｃａｕｇｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）、アテローム性動脈硬化（Ｍｉｑｕｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２；Ｒａｍａｓｗａｍｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）、卒中、ＣＮＳアルコール毒性（Ｒａｊａｋｒｉｓｈｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）、外傷性脳損傷、ハンチントン病、マリー‐シャルコー歯、多発性硬化症、及びアルツハイマー病を含む。
【０００６】
脂溶性部分と、少なくとも１つのヒドロキシル基の両方を含むクルクミンの構造は、アミロイド結合化合物のそれに似ている。コンゴレッド（ＣＲ）のようなアミロイド色素は、適切に間隔を置かれた電荷により平面のヒドロキシル基を介して結合し、β‐アミロイドと他のβ‐シート依存性ペプチドとの凝集及び毒性を抑制することが知られている。コンゴレッド類縁体であるクリサミンＧは、より脳浸透性であり、ＣＲのアミロイド結合特性を保持する。クルクミンは、その極性フェノール基の間の１９オングストロームのＣＲ空間を共有し、容易に脳浸透性であり、アミロイドペプチドを結合して、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのそれらの凝集及び毒性を阻害する。クルクミンが、ＡＰＰ  Ｔｇマウスにおいて効果的にｉｎ  ｖｉｖｏでアミロイド蓄積を減少することが発見された。ＣＲの抗アミロイド結束は、ハンチントン、ａ‐シヌクレイン、プリオン及びタウを含む、他のβシート神経細胞内凝集塊に総括的で、潜在的に関連することから、クルクミンの抗アミロイド活性は神経細胞内の凝集塊に対する細胞外のアミロイドを越えて関連するかもしれない。実際、クルクミンは、公表されていない製剤の経口投薬によりｉｎ  ｖｉｖｏで作用しなかったものの、これまでｉｎ  ｖｉｔｒｏで試験された最も有効な抗プリオン化合物のうちの１つである（Ｃａｕｇｈｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。これは、クルクミンの経口のバイオアベイラビリティーの制限を引き上げる。
【０００７】
アミロイドタンパク質の凝集、及び他のＣＡＧリピート障害を伴う複数の疾患の治療としてのクルクミンの利点は、確立されており、また、卒中、頭部外傷、メタボリックシンドローム、並びに創傷治癒の促進と同様に、いくつかの形態の癌及び関節炎を含む他の多くの病状の治療におけるその効能も理解され始めている。しかしながら、これらの治療適用はいずれも不十分な腸管吸収のために制限されている。
【０００８】
高用量で固型飼料中に与えられた場合（典型的には、癌の試験における食餌中２０００ｐｐｍ〜５０００ｐｐｍ）、クルクミンはヒト疾患用の複数の動物モデルにおいて有効な医薬であるが、現在の定説は、クルクミンが非常に生物学的な利用可能性に乏しいため、ヒトでは結腸の外での治療に使用することができない。クルクミンは非常に疎水性であり、通常の栄養補助食品中の粉末抽出物として送達される場合、典型的に溶解されない。大半のクルクミン活性は、１００ナノモル〜２，０００ナノモル（０．１マイクロモル〜２マイクロモル）レベルをｉｎ  ｖｉｔｒｏで必要とするが、現在のサプリメントは無視できるほど低いナノモル血中濃度をもたらす（Ｓｈａｒｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００４を参照されたい）。レスターのＲ．Ｓｈａｒｍａのグループは、低いナノモル範囲を超える意義深い血液レベルを達成することを繰り返し試み、それを達成できなかった（Ｇａｒｃｅａ  Ｇ．，Ｊｏｎｅｓ  Ｊ．Ｄ．，Ｓｉｎｇｈ  Ｒ．，Ｄｅｕｎｉｓｏｎ  Ａ．Ｒ．，Ｆａｒｍｅｒ  Ｐ．Ｂ．，Ｓｈａｒｍａ  Ｒ．Ａ．，Ｓｔｅｗａｒｄ  Ｗ．Ｐ．，Ｇｅｓｃｈｅｒ  Ａ．Ｊ．，Ｂｅｒｒｙ  Ｄ，Ｐ．，“Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｕｒｃｕｍｉｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｉｃ  ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  ｐｏｒｔａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｏｒａｌ  ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，”Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ，２００４年３月８日；９０（５）；１０１１‐５．）。彼ら及びその他は、全身の組織（ＧＩ管の外側）への経口のクルクミンの有効濃度の送達が「恐らく実現可能ではない」と結論づける。ほとんどの文献はこの見解を支持し、大腸癌に注目するようにＮＣＩを導く。
【０００９】
３つの因子がクルクミン吸収を制限し、以下を検討する必要がある：１）クルクミンのフェノール性ヒドロキシル基の迅速なグルクロン酸抱合／硫酸化、及び高い「初回通過」クリアランス、２）クルクミンはｐＨ７以上の水溶液において不安定である、並びに３）クルクミンは非常に疎水性で、典型的には酸性のｐＨ、及び既存のサプリメント中、乾燥粉末として送達される場合、水溶性ではない（大半のクルクミンは吸収されず、単にＧＩ管を通り抜けて、排泄される）。
【００１０】
可溶化は、これを予防するのに決定的であるが、クルクミンは、完全に溶けるためにｐＨ８．５を要求する。この理由により、癌患者は、典型的には１日当たり８ｇｍ以内で多量に摂取している。下痢は、一般的な副作用である。Ｇａｒｃｅａ，Ｇ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）は、１日に３．６ｇｍのクルクミン（Ｓａｂｉｎｓａ社によって供給された標準粉体抽出物カプセルとして）を摂取する患者の達成された血液及び肝臓のレベルは無視できることを報告する。彼らは、「結果は、薬理活性を与えるのに十分な肝臓レベルを供給するのに必要なクルクミンの用量は、恐らくヒトにおいて実現可能ではないことを示唆する。」と結論づけた。
【００１１】
クルクミンは、酸性ｐＨで可溶性ではなく、中性又はアルカリのｐＨで水に可溶化され、希釈されると（例えば小腸の後のＧＩ管において）、β‐ジケトン架橋中のケト‐エノール変換により崩壊する。さらに、クルクミンは迅速なグルクロン酸抱合／硫酸化に感受性が強い。主要な米国の供給元であるＳａｂｉｎｓａは、グルクロン酸抱合を阻害するためにＢｉｏｐｅｒｉｎｅ（ピペリン）を付加することにより、より生物学的に利用可能な形態を作ろうと試みた。しかしながら、大半のグルクロン酸抱合が、ｐＨが酸性の上部のＧＩ管で起こり、クルクミンはｐＨ８．５以上まで完全には溶解されないため、かかるアプローチには欠点がある。更に悪いことに、グルクロン酸抱合を阻害すると深刻な健康のリスクを引き起こす場合がある。グルクロン酸抱合は、多くの毒素に対する保護であり、一般に用いられる薬物の代謝に関与する。大半の高齢の患者は、グルクロン酸抱合の阻害によって安全でない状態に変化し得るレベルで複数の投薬を受けている。
【００１２】
クルクミノイドは、脂溶性部分と少なくとも１つのヒドロキシル基の両方を有する、脂溶性化合物の一例に過ぎない。これらの化合物は、一般に、経口剤形の安定性と同様にバイオアベイラビリティーの課題を有する。経口バイオアベイラビリティーは、腸における活性化合物の安定性、溶解度及び透過性を要求するが、脂溶性化合物は一般に水溶性ではなく、ヒドロキシル基を有する脂溶性化合物は加水分解に対する不安定性を持つ場合がある。かかる溶解度及び不安定性の問題は、被験体に対するバイオアベイラビリティー、及び腸内及び商品陳列棚の両方における剤形の安定性に関する実質的な課題である。
【００１３】
水不溶性である食事由来の化合物及び薬物は、腸において固体形態で見出される。しかしながら、吸収するために、化合物は、１）腸の水性媒質、又は２）小腸中の胆汁酸の両親媒性の媒質のいずれかに溶解されなければならない。特定の割合の長鎖脂質を有する１又は複数のヒドロキシル基又はアシル基を含む脂溶性化合物は、より大きなレベルのコロイド分散を可能とする。
【００１４】
腸の水性又は脂質のコンパートメントのいずれかにおいて、化合物があるレベルの溶解度を達成することができると仮定すると、いずれも場合も、目的の化合物は、媒質中に個々の分子として分散され、身体から該化合物を排出するため、分解し、代謝することが意図される酸化性（水）及び加水分解性（ｐＨ、酵素の及び微生物の）条件に曝される。未変性で吸収されるように、化合物について不溶性及び不安定性の両方の問題に取り組まなければならず、これらのうちの１つのみを取り扱うことはその問題を解決しない。
【００１５】
化合物の安定性は、それが見出される媒質において化学的に、また静電気的に安定な状態（「溶解物の様に（Ｌｉｋｅ  ｄｉｓｓｏｌｖｅｓ  ｌｉｋｅ）」）を維持することを求める。腸では、非常に低いｐＨ、また非常に高いｐＨの両方の水が優位を占める。極が、それぞれ活性化合物（特に、化合物の安定性には不利な不安定なヒドロキシル基を含むもの）に対する電荷を誘導する。さらに、ヒドロキシルラジカルは、高度に反応性であり、容易に化学反応を経る。ほとんど無極性であるが、極性のヒドロキシル基を含む化合物は、ヒドロキシル基上の電荷の損失又は取得によるｐＨの変化において分解する傾向がある。
【００１６】
当該技術の多くの組成物は、わずかな量によってバイオアベイラビリティーを改善し、これは当該技術において繰り返される。ナノ粒子、ミセル、リポソームはいずれも開発されてはいるが、ほとんどが商業上の成功を収めていない。１つの理由は、腸におけるそれらの不安定性に起因する。小粒子は、酸及びアルカリのｐＨ、並びに腸の酵素に曝される表面積の量が多い。
【００１７】
したがって、経口摂取後に腸において特定の種類の生物学的に活性な化合物の安定性、溶解度及び透過性を改善し、（グルクロニド等の不活性な代謝産物とは対照的に）治療的な親（未変性）化合物レベルをもたらす、組成物又は送達デバイスを製剤化できれば、有利であろう。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】図１は、顆粒の表面に埋め込まれるか、又は付着された複数の球状の固体脂質微粒子を有する３０メッシュ顆粒の１０Ｋｖ及び１７０倍の倍率で撮影された走査型電子顕微鏡写真である。
【図２】図２は、プロスタグランジン産生の固体脂質微粒子（ＳＬＣＰ）用量依存的抑制を実証するグラフである。
【図３】図３は、遊離の、及びグルクロン酸化されたクルクミンの血漿中濃度を実証するグラフである（平均値±ｓ．ｄ．；ｎ＝５）。
【図４】図４は、クルクミンのリンパ液濃度を示すグラフである（平均値±ｓ．ｄ．；ｎ＝５）。
【図５】図５は、１０ｍｇ／日のルテインによる１０日間の補充の前と後の血漿ルテイン濃度を示すグラフである。ルテイン１＝ルテインエステル。ルテイン２＝固体脂質粒子複合体ルテイン。＊補充前の値との有意差、ｐ＜０．００１、対応ｔ検定。
【図６】図６は、１０ｍｇ／日のルテインによる１０日間の補充の前と後の血漿ルテイン濃度の変化を示すグラフである。ルテイン１＝ルテインエステル。ルテイン２＝固体脂質粒子複合体。＊補充前の値との有意差、ｐ＜０．００２、独立ｔ検定。
【図７】図７は、補充（１０日間に亘り１０ｍｇ／日のルテイン）後７日目の血漿ルテイン濃度を示すグラフである。ルテイン１＝ルテインエステル。ルテイン２＝固体脂質粒子複合体ルテイン。＊補充前の値との有意差、ｐ＜０．００１、独立ｔ検定
【図８】図８は、種々の脂溶性薬剤によるバコパの放出プロファイルを示す。最も良好な放出プロファイルは対照製剤であり、続いてホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、及びコレステロールであった。
【図９】図９は、放出速度のグラフを示す。種々の濃度のホスファチジルコリン製剤の溶解プロフィールによれば、１０％の濃度のホスファチジルコリンは最も放出速度が高く、一方、４０％の濃度のホスファチジルコリンは最も放出速度が低かった。
【図１０】図１０Ａ〜図１０Ｂは、対照（蒸留水）、標準（Ｆ１）及び試験製剤（Ｐ２）による血漿中のバコサイドＡ３の強度及び分子量、並びにそれらの代謝産物を示す。
【図１１】図１１は、経時的な血漿濃度の結果を示す。試験製剤（Ｐ２）はより良好なＡＵＣ値を示したのに対し、Ｃｍａｘは標準製剤（Ｆ１）でより高かった。両方の製剤のＴｍａｘは、ほぼ同じであった。
【図１２】図１２は、質量分析によるバコサイドＡ３及びそれらの代謝産物の投与された種々の製剤の比較を示す。バコサイドＡ３及びその代謝産物は、標準及び対照の製剤よりも試験製剤（Ｐ２）により、ラット脳において高濃度であったことが観察された。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本発明は、経口摂取後に腸において特定の種類の生物学的に活性な化合物の安定性、溶解度及び透過性を改善し、（グルクロニド等の不活性な代謝産物とは対照的に）治療的なレベルの親（未変性）化合物を生じる、送達システムを提供する。治療的な血液及び組織のレベルが病気の治療に必要とされる、炎症、酸化又はタンパク質凝集に関連する病気を治療するため、上記生物学的に活性な化合物を、上記送達システムと共に使用してもよい。
【００２０】
本発明の実施形態では、上記送達システムは、経口服用に対する固体脂質粒子の集塊を含み、前記粒子は特定割合の長鎖脂質を含む。上記脂質は、ヒドロキシル基を含む脂溶性化合物を安定化するのに理想的な正帯電基及び負帯電基の均衡を有する。
【００２１】
或る一つの実施形態では、増強された経口バイオアベイラビリティーを有する送達システムは、担体顆粒を含み、該担体顆粒は、経口服用に対する固体脂質粒子の集塊と、１又は複数の生物学的に活性な化合物とを含む。いくつかの実施形態では、上記担体顆粒は、約１５０ミクロン〜約８４０ミクロンの粒子径を有する。いくつかの実施形態では、上記顆粒内の脂質球状粒子は約５ミクロン〜約２０ミクロンの粒子径を有する。
【００２２】
いくつかの実施形態では、本発明は、加齢性疾患を治療する方法であって、本明細書に開示される送達システムの治療的有効量を投与することを含み、該送達システムが、加齢性疾患を治療すること可能な有効成分を含む、加齢性疾患を治療する方法を提供する。
【００２３】
更なる実施形態では、本発明は、増強された経口バイオアベイラビリティーを有する送達システムを作製する方法であって、ａ）有効成分と、精製されたホスファチジルコリン（８０％〜９０％のホスファチジルコリン）及びアスコルビン酸パルミテートとを複合化する工程、ｂ）工程１に由来する複合体をホモジナイズする工程、ｃ）ホモジナイズした複合体を濾過する工程、ｄ）ホモジナイズした複合体を噴霧乾燥する工程、ｅ）乾燥したホモジナイズした複合体を溶解したステアリン酸と高速で混合する工程、並びにｆ）工程４に由来する材料を冷却し、担体顆粒の粉末まで製粉する工程、を含む方法を提供する。
【００２４】
本発明は、経口服用に対する固体脂質粒子の集塊で構成され、前記粒子が特定割合の長鎖脂質を含む、送達システムを提供する。脂質は、ヒドロキシル基を含む脂溶性化合物の安定化に理想的な正帯電基及び負帯電基の均衡を有する。上記粒子に有用なかかる脂質は、以下で更に議論されるように、高純度ホスファチジルコリン（すなわち帯電したリン脂質）、ステアリン酸（すなわち静電気学に平衡を保っている脂肪酸）、及びアスコルビン酸パルミテート（両親媒性の抗酸化剤）を、特定割合又は比率の近似範囲で含む。
【００２５】
上記送達システムは、１又は複数の活性化合物の経口送達に使用される。本発明の１つの実施形態では、これらの活性化合物は、脂溶性部分及びヒドロキシル基の両方を持つ構造を有し、全体的に非水溶性の性質を持つ、限定されないが、カロチノイド、脂肪酸、ポリフェノール、脂溶性ビタミン、フラボノイド、イソフラボン、クルクミノイド、セラミド、プロアントシアニジン、テルペノイド、ステロール、フィトステロール、ステロールエステル、トコトリエノール、スクワレン及びレチノイド等である。
【００２６】
或る一つの実施形態では、上記活性化合物は、ルテイン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、又はベータカロテン等のカロチノイドである。他の実施形態では、上記活性化合物は、オメガ脂肪酸（例えばＤＨＡ、ＥＰＡ、ＣＬＡ）、ポリフェノール（例えばエラグ酸、クルクミン、プロアントシアニジン）、テルペノイド（例えばトリテルペン、ボスウェリア酸、フィトステロール）、脂溶性ビタミン（例えばビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ）、フラボノイド、スチルベン（レスベラトロル）イソフラボン、フィトステロール又はステロールエステルの１又は複数であってもよい。「生物学的に活性な化合物」又は「活性化合物」又は「有効成分」の用語は、本明細書において互換的に使用される。活性化合物は、（１又は複数の活性化合物を有してもよい）植物抽出物、クルクミノイド、ルテイン（ｌｕｔｉｅｎ）、ユビキノン（ＣｏＱ１０）、ボスウェリア酸、バコパグリコシド、ウィタノライド、チモキノン、トリテルペングリコシド等を含んでいてもよい。好適な活性化合物は、脂溶性部分とヒドロキシル基の両方を含む化合物である。この一覧は、網羅的であることは意図されず、当業者は本発明の送達化合物／システムにより使用され得る他のかかる脂溶性化合物を容易に理解するであろう。
【００２７】
或る一つの実施形態では、経口投与製剤は、有効成分、ホスファチジルコリン、ステアリン酸及びアスコルビン酸パルミテートを含む場合がある。また、デキストリン及び二酸化ケイ素を使用してもよい。更なる実施形態によれば、経口用量は、以下の相対部（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｐａｒｔ）で個々の構成要素を含んでいてもよい：
活性物質：１０％〜３０％、
ホスファチジルコリン：１０％〜２０％、
ステアリン酸：２５％〜３５％、
デキストリン：２５％〜４０％、
アスコルビン酸パルミテート：１％〜４％、
二酸化ケイ素：０．１％〜３％。
好適には、上記経口投与製剤は、１を超えるホスファチジルコリン（ＰＣ）に対するステアリン酸の割合を使用して調製される。特定の実施形態では、ステアリン酸：ＰＣの比は、約１．２５：１〜約３．５：１の範囲である。
【００２８】
別の実施形態では、上記送達システムは、
活性化合物‐１５％〜４０％、
ダイズレシチン‐７％〜２５％、
マルトデキストリン：７％〜３０％、
アスコルビン酸パルミテート：１％〜３％、
シリコーン二酸化物０．３％〜２％を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、ダイズレシチンはホスファチジルコリンである。
【００２９】
上記経口送達システムは、好適には、集塊、又は担体顆粒の表面に埋め込まれた、若しくはそれに付着した有効成分を含む複数の固体脂質微粒子の形態である。例えば、図１に示されるように、クルクミン、及び／又はルテイン、ホスファチジルコリン及びアスコルビン酸パルミテート、並びにステアリン酸のコーティングを含む、有効成分のコアを有する複数の球状の固体脂質微粒子は、微粒子に対する担体として作用する、顆粒の表面に埋め込まれるか、又はそれに付着される。特定の実施形態によれば、上記顆粒は、約２０メッシュ〜約９０のメッシュ（すなわち、約１５０ミクロン〜約８４０ミクロン）の範囲の粒子径を有する。球状の固体脂質粒子は、約５ミクロン〜約２０ミクロンの範囲の粒子径を有する。特定の他の実施形態によれば、上記顆粒は、顆粒マトリックス内に完全に包まれた固体脂質微粒子を更に含んでもよい。担体顆粒は、一般的には、製造工程の間に産生される破砕された固体脂質微粒子から形成される。
【００３０】
集塊、又は担体顆粒に埋め込まれるか、若しくは付着された複数の固体脂質微粒子を提供することにより、上記送達システムは、腸における加水分解から有効成分のヒドロキシル基を防御するように作用し、それにより有効成分の安定性を改善すると考えられるが、それに拘束されない。また、上記経口送達システムは、キロミクロンによって脂溶性の有効成分の直接的なリンパ吸収を促進することにより、肝臓（すなわち、グルクロン酸抱合）における初回通過代謝を回避し、有効成分のバイオアベイラビリティーを増加させると考えられる。
【００３１】
本発明の特性は、経口摂取後の腸における特定の種類の生物学的に活性な化合物の安定性、溶解度及び透過性を改善し、治療の（グルクロニド等の不活性の代謝産物とは対照的に）親（未変性）化合物レベルをもたらす経口送達システムである。生物学的に活性な化合物は、治療的な血液及び組織のレベルが病気の治療に必要とされる、炎症、酸化又はタンパク質凝集に関連する病気を治療するために使用され得る。
【００３２】
上記経口送達システムは、特定の種類の生物学的に活性な化合物と共に、例えば、限定されないが、加齢性疾患、神経変性疾患、アルツハイマー病、パーキンソン病、黄斑変性、痴呆、骨関節炎等の多くの加齢性疾患の治療に使用され得る。
【００３３】
本発明の経口投薬製剤は、増加した溶解度及び安定性を示した。
【００３４】
担体顆粒（ＳＬＣＰ）の表面に埋め込まれたか、又は付着されたクルクミンの固体脂質微粒子に関する溶解性データ：
【００３５】
【表１】
2017533970.tif 000003
【００３６】
或る一つの実施形態では、活性化合物を含む経口送達システムは、
（１）溶液中で有効成分と、精製されたＰＣ（８０％〜９０％のホスファチジルコリン‐高価であり、典型的には注射用薬物に対してのみ使用される）及びアスコルビン酸パルミテートとを複合化する工程、
（２）工程（１）に由来する複合体を、追加のアスコルビン酸パルミテート、デキストリン、及び任意に二酸化ケイ素と高速で（ａｔ  ｈｉｇｈ  ｓｐｅｅｄ）ホモジナイズする工程、
（３）上記ホモジナイズした複合体を濾過し、噴霧乾燥する工程
（４）噴霧乾燥して粉末化された複合体を加熱した（溶解した）ステアリン酸と高速で混合する工程、
並びに
（５）工程（４）に由来する材料を冷却した後、集塊した、及び／又は顆粒の表面に埋め込まれるか、若しくは付着された、複数の固体脂質微粒子を有する顆粒を含む粉末まで製粉する工程、
を使用して作製され得る。
【００３７】
有効成分（複数の場合がある）であるホスファチジルコリン及びアスコルビン酸パルミテートを溶解するのに適した任意の溶媒を工程（１）で使用してもよい。実施形態によれば、工程（１）で使用される溶媒は酢酸エチルを含んでもよい。
【００３８】
本明細書に開示される経口送達システムは、脂溶性部分と少なくとも１つのヒドロキシル基の両方を有する有効成分の経口的治療用途と関連するいくつかの問題に取り組む。
【００３９】
課題：溶解した化合物を用いる主な挑戦のうちの１つは、細胞膜を通るそれらの透過性である。これは、活性化合物に対する不適当な電荷に起因し得る。本発明は、かかる問題を解決する。
【００４０】
証明：いずれも長連鎖脂質である、ホスファチジルコリン、ステアリン酸、アスコルビン酸パルミテートの存在。
【００４１】
固体脂質微粒子（ＳＬＣＰ）は、図２に示されるように、培養細胞に浸透可能であり、リポポリサッカリド（ＬＰＳ）による刺激の後に用量依存的にプロスタグランジン産生を阻害する（２０１３年１０月取得データ、未公開）。
【実施例】
【００４２】
実施例１：クルクミン
【００４３】
課題：溶解度、安定性及び透過性を達成する化合物は、肝臓によって不活性な複合化された代謝産物へと急速に代謝される。クルクミンは、中性及び酸性のｐＨの水に溶解せず、小腸のアルカリ性条件では急速に加水分解するか、又は崩壊する。一旦消費されると、クルクミンはバイオアベイラビリティーに対する３つの主要な要件、すなわち、溶解度、浸透性、及び安定性を満たすことができない。この問題を扱うためのアプローチは、検出可能なレベルのクルクミンを見つける研究に帰着していない。油中でクルクミンを混合し、それを微粒子化若しくはナノ粒子化するか、又はピペリンを添加する製品は、いずれもクルクミンの血中レベルをもたらすことができなかった。
【００４４】
本発明は、細胞への即時の暴露を可能にし、キロミクロン上、及びリンパ系への活性化合物の増加した取り込みを可能とする。クルクミンが特定の方法でこれらと一体化される場合、それは小腸において溶解可能であり、アルカリ性から防御され、キロミクロン上に吸着される。
【００４５】
齧歯動物による、単回経口服用の後のこの製剤によるリンパ液へのクルクミンの優先的な取り込みを示すデータを以下に示す（２０１４年５月取得データ、未公開）。
【００４６】
以前に公開された計画に従い、合計１０匹のＳｐｒａｇｕｅ‐Ｄａｗｌｅｙラットは、上に記載されるように作製された、標準水性懸濁液（Ｓｉｇｍａ＃Ｃ７７２７によるクルクミン）又は固体脂質クルクミン微粒子（ＳＬＣＰ）のいずれかとして、７５ｍｇのクルクミン／ｋｇ体重の単回経口投与を受けた。治療に先立って、ラットに腸間膜の腸間膜のリンパ管（リンパ収集のため）及び頚動脈（血液収集のため）にカニューレを挿入するため、麻酔に続いて、外科的処置を行った。カニューレを外に出し（ｅｘｔｅｒｎａｌｉｚｅｄ）し、２４時間に亘ってラットを回復させた。その後、クルクミン懸濁液又はＳＬＣＰ剤形のいずれかを胃管栄養によって投与した。血液（０．２５ｍｌ）を、投与前、並びに投与から０．５時間後、１．０時間後、２．０時間後、３．０時間後及び５．０時間後にＥＤＴＡで被覆したバイアルに採取した。血液試料を、血漿を得るため遠心分離機にかけ、分析まで−３０℃未満で保存した。腸間膜リンパ（０．２５ｍｌ）を、投与前、並びに投与から１時間後及び５時間後にＥＤＴＡで被覆したバイアルに収集し、分析まで−３０℃未満で保存した。
【００４７】
クルクミン及びグルクロン酸化クルクミンの分析は、公開された方法に従ってＭＳと合わせたＵＶ検出を用いてＨＰＬＣによって行われた。分析方法は、血液／血漿及びリンパ液の流体中のクルクミン及びクルクミングルクロニドの安定性を含めて検証した。定量限界を２．５ｎｇ／ｍｌの体液に設定した。
【００４８】
結果及び考察：
【００４９】
図３及び表２に見られるように、標準クルクミン懸濁液と比較した場合、クルクミンの血漿濃度は、ＳＬＣＰ剤形の投与後に実質的により高い。さらに、グルクロン酸化クルクミンに対する遊離クルクミンの比は、標準クルクミン懸濁液と比較した場合、ＳＬＣＰ剤形の投与後、実質的により高い割合の遊離クルクミンが血流に達することを示す。標準クルクミン懸濁液と比較した場合、薬物動態学的試験の結果は、ＳＬＣＰ剤形の投与後のクルクミンの５倍高い相対的バイオアベイラビリティーを示唆する。
【００５０】
【表２】
2017533970.tif 000004
【００５１】
図４では、クルクミンのリンパ濃度を示す。標準クルクミン懸濁液と比較した場合、約１０倍高い濃度のクルクミンがＳＬＣＰの投与後に観察された。
【００５２】
標準クルクミン懸濁液と比較した場合、ＳＬＣＰによる治療後のリンパ液中に見られる高い量のクルクミンが、その増加したバイオアベイラビリティーの説明となる。
【００５３】
クルクミンが、経口投与後に血液中の高い量のクルクミン‐グルクロニドを生じる大規模な初回通過代謝を経ることはよく知られている。経口投与後のクルクミンのリンパ液による輸送は、肝臓及び初回通過代謝を回避する。リンパ系を通る増加したクルクミン輸送は、血流中へのより高い量のクルクミンの送達を促す。
【００５４】
実施例２：ルテイン
【００５５】
課題：ルテイン（ヒドロキシル基を有する脂溶性化合物）は水に不溶性であり、水への暴露に際して急速に可溶性であるルテインの部分が分解する。
【００５６】
解決策：本明細書に開示される技術は、このクラスの活性物質（ａｃｔｉｖｅｓ）を安定させる。
【００５７】
ヒトのルテインバイオアベイラビリティーのデータ（２０１４年８月取得、未公開）は、表３に示される従来のルテインに対する、上に開示される（ｄｉｓｃｌｏｓｅｓ）経口送達システム（ルテインＳＬＰ）における製剤化されたルテインのバイオアベイラビリティーの増加を実証する。
【００５８】
【表３】
2017533970.tif 000005
【００５９】
課題：ルテインのバイオアベイラビリティーに関する技術は、遊離の又はエステル化されたルテインがより良好に吸収されたかどうかに関して明らかではなく、いずれも等しく吸収されるように見える。
【００６０】
解決策：本発明は、技術を明確にし、上の表３に示されるように、血流において安定なレベルを達成するための有効分としてルテインエステル（自然界で発見される形態）を使用する。
【００６１】
課題：ルテインエステルは、典型的には、ルテインにおいて通常発見されるヒドロキシル基の部位を占有する２つの脂肪酸基によってジエステル化された形態として、例えばルテインジパルミテートとして自然界で見出される。しかしながら、市場に出ているほとんどの遊離ルテインは、コスト効率が良くない非常に高濃度を要求し、過酷な／有毒な溶媒で抽出される。
【００６２】
解決策：この技術は、脱エステル化のための化学反応又は有毒溶媒を用いることなく、天然型（エステル）の使用を可能とする。
【００６３】
開示される経口送達システムによって対処される少なくとも１つのヒドロキシル基を有する脂溶性化合物の経口剤形を製剤化する場合に遭遇する更なる課題又は問題として、バイオアベイラビリティー及び／又は安定性の問題に対処するための食物用途に適していない成分の使用、並びに腸において安定でない送達システムの使用が挙げられる。
【００６４】
課題：リンパ液による輸送を標的とするリポソーム等の固体脂質ナノ粒子（ＳＬＮ）は、しばしば腸において不安定である。ナノ粒子の経口バイオアベイラビリティーにおける改善は、その結果しばしば制限される。
【００６５】
解決策：微粒子の集塊である固体脂質粒子は、腸の変化するｐＨ及び水性環境において安定化され、リンパ液による輸送を可能とする。上記組成物は、２０メッシュ〜９０メッシュの粉末サイズ、及び５ミクロン〜２０ミクロンの範囲の集塊中の粒子径を有する、被覆された微粒子の集塊で構成される粉末である。粒子の集塊は、胃酸及び胆汁に暴露される面積をより少なくする。
【００６６】
課題：ほとんどの市販製品は、臨床的有効性試験に失敗したか、治療的血中濃度に達しないか、又は作用するため実用的なものより更に高い用量を要求するかのいずれかである。
【００６７】
解決策：クルクミン及びボスウェリア酸ＳＬＰの低用量に対する臨床データは、有効性を示し利用可能である（ａｖａｉｌａｂｌｅ  ｓｈｏｗｉｎｇ  ｅｆｆｉｃａｃｙ）。
【００６８】
本発明の経口送達システム及び治療用組成物は、限定されないが、製造業において標準的な賦形剤及び製剤技術を使用して、錠剤、カプセル剤、粉末、液体、チュウ（ｃｈｅｗｓ）、グミ（ｇｕｍｍｉｅｓ）等を含む、任意の好適な経口の機能性食品又は医薬の剤形に製剤化されてもよい。
【００６９】
実施例３：成人被験体における血漿ルテイン濃度
【００７０】
本実施例は、従来のルテインと比較した場合に、現在の技術の顆粒と対合した場合のルテインの増加したバイオアベイラビリティーを実証する。
方法
【００７１】
研究プロトコールは、オハイオ健康施設内治験審査委員会によって承認された。全ての被験体は、インフォームドコンセントの用紙に署名した。被験体は、１２名の男性及び女性（各性別６名）であり、標準ルテインに対して５７±３歳、新規のルテイン複合体に対して５９±６歳の平均±ＳＤの年齢５２歳〜６９歳であった。適格性アンケートに対する回答に基づくと、容認された被験体は、広範囲の酸化ストレスを引き起こすか、又は脂質栄養素の吸収に関する問題を引き起こす問題のない非喫煙者であった。また、アンケートに対する回答に基づくと、被験体は、タマゴ、ホウレンソウ又はケールを月に４回以上摂取せず、ルテインサプリメントを摂っていなかった。
【００７２】
被験体を、ルテインエステル又は固体脂質粒子（ＳＬＰＴＭ）複合体ルテインのいずれかに無作為に割り当てた。後者は、米国インディアナ州ノーブルズヴィルのＶｅｒｄｕｒｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって供給された。被験体は、１０日間、単一カプセルで１０ｍｇのルテインを摂った（同じｍｇのルテイン／日／治療であるが、異なる重量の合計粉末）。被験者は、群の割り当てに対して盲検化された。カプセルを、少なくとも２００カロリーの脂肪を含む自分で選択した食事と共に摂った。被験者は、補充を中止した後７日と同様に１０日間の補充期間の前後にヘパリン含有チューブに血液サンプルを提供した。血漿を３０００ｒｐｍで３０分間の遠心分離によって分離した。血漿ルテインはＨＰＬＣによって決定された。
【００７３】
各補充群の変化を、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｏｎ．ｈｕｍ．ｕｖａ．ｎｌ／Ｓｅｒｖｉｃｅ／Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ／Ｓｔｕｄｅｎｔ＿ｔ＿Ｔｅｓｔ．ｈｔｍｌを使用する対応ｔ検定により分析した。群比較を、
ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｏｎ．ｈｕｍ．ｕｖａ．ｎｌ／Ｓｅｒｖｉｃｅ／Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ／２Ｓａｍｐｌｅ＿Ｓｔｕｄｅｎｔ＿ｔ＿Ｔｅｓｔ．ｈｔｍｌを使用する独立ｔ検定により行った。
結果
【００７４】
１０日間の補充後、サプリメントは両方とも、血漿ルテイン値の非常に有意な増加をもたらした。（図５、各治療についてｐ＜０．００１、対応ｔ検定）。固体‐脂質粒子複合体ルテインは、従来のルテインよりはるかに高い平均血漿ルテイン値を与えた（ｐ＜０．００１、独立ｔ検定）。平均パーセント変更対補充前の値は、固体脂質粒子複合体ルテインに対して５６３％、従来のルテインエステルに対して８８％であった。データがルテイン濃度の変化として表された場合、はるかに高い平均変化が、固体‐脂質粒子複合体で見られた（図６、ｐ＜０．００１、独立ｔ検定）。従来と新規のルテインサプリメントの両方について、平均血漿ルテインレベルは、補充の７日後、ベースラインを上回ったままであった（図５、補充前の値対図７、ｐ＜０．００１、対応ｔ検定）。しかしながら、固体‐脂質粒子複合体ルテインは、はるかに高い平均血漿ルテイン値を与えた（図７、ｐ＜０．００１、対応ｔ検定）。したがって、３種類の評価によって、血漿ルテイン濃度は、従来のバージョンよりも、更により大きな程度、固体脂質粒子複合体ルテインに対して応答した。
【００７５】
要約すると、ルテインエステルと比較して、固体‐脂質粒子複合体ルテインの１０日間の補充は、はるかに大きな血漿レベルをもたらした。いかなる特定の理論にも拘束されないが、固体‐脂質粒子複合体ルテインによってもたらされたより高い血漿ルテイン濃度は、ＧＩ管からのより良好な吸収を反映すると考えられる。
【００７６】
実施例４：改善された薬物動態学の特性を有するバコパ・モニエリ（Ｂａｃｏｐａ  ｍｏｎｎｉｅｒｉ）製剤
バコパ・モニエリ（ＢＭ）はゴマノハグサ科に由来する。ＢＭは、衰弱させる疾患において脳の強壮及び回復として使用された。ＢＭはインド半島の湿潤な湿地帯で見出され、３０００年間に亘ってインドでアーユルベーダに使用され、アーユルベーダではメディヤラサヤナ（脳力増進滋養強壮：ｍｅｄｈｙａｒａｓａｙａｎａ）、すなわち記憶及び知性（ｍｅｄｈｙａ）を改善するために使用される薬物として分類される。また、バコパは、アルツハイマー病及び痴呆のような疾患に使用される。ＢＭは、多数のメンタルヘルス障害の治療に使用される場合がある。
【００７７】
商業的に入手可能なＢＭ製剤に関する問題は、疾患に対するその推奨される用量が高く、治療の期間が長いことであり、これは、脳へのバコサイドの透過性が乏しいことを示す可能性がある。高用量によるより長期の治療は、胃刺激症状を引き起こす。本開示は、ＢＭの有効性を改善し、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するＢＭの量を増加させて、治療期間を減少させる、本明細書の送達システムを使用する製剤を提供する。
【００７８】
材料及び方法
【００７９】
研究のＡ相は、ＢＭ抽出物（ＢＭＥ）製剤開発、並びに本発明者らの個人的な依頼及び連携によりインド国グジャラート州アーナンドのＭ／ｓ  Ｐｈａｒｍａｎｚａ  Ｈｅｒｂａｌ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．で行われた品質管理分析を含んだ。
【００８０】
本研究のＢ相は、新たに開発された製剤、すなわち制御（ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ）製剤及び標準製剤の前臨床薬物動態試験を含んだ。動態検査では、種々の時間間隔での血中バコサイドの概算に対し、３群（各々９匹）で２７匹のアルビノラットを使用した。実験の終わりに、動物を死亡させ、脳を摘除した。切除された脳をホモジナイズし、脳組織中のバコサイドのレベルを測定した。バコサイドのレベルを血液試料及び脳試料の両方で比較した。薬物動態研究は、インド国ウッタル・プラデーシュ州のムラーダーバード大学の施設内実験動物倫理委員会、ＩＦＴＭによって承認された。
【００８１】
フェーズＡ
【００８２】
標準製剤の開発
ＢＭの標準製剤（Ｆ１）：３月〜６月に収穫された、インド起源のＢＭの全草（Ｍａｔｈｕｒ  Ｓ，Ｇｕｐｔａ  ＭＭ，  Ｒａｍ  Ｍ，Ｓｈａｒｍａ  Ｓ，  Ｋｕｍａｒ  Ｓ．Ｈｅｒｂ  Ｙｉｅｌｄ  ａｎｄ  Ｂａｃｏｓｉｄｅ‐Ａ  Ｃｏｎｔｅｎｔ  ｏｆ  Ｆｉｅｌｄ‐Ｇｒｏｗｎ  Ｂａｃｏｐａ  ｍｏｎｎｉｅｒｉ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ．Ｊ  Ｈｅｒｂｓ  Ｓｐｉｃｅｓ  Ｍｅｄ  Ｐｌａｎｔｓ．２００２；９（１）：１１‐８）を収集し、水で完全に洗浄した。ＢＭ植物を確認した後、ＢＭ全草を粉砕し、そのメタノール溶解性抽出物を調製した。乾燥形態を得るため、メタノールを蒸発させた後、粉砕して、残留溶媒と関係する不純物についてガスクロマトグラフィーによって分析した。
【００８３】
分配係数
【００８４】
分配係数は化合物の親水性（ｈｙｄｒｏｐｈｙｌｉｃｉｔｙ）及び脂溶性（ｌｉｐｏｐｈｙｌｉｃｉｔｙ）を決定する重要なパラメーターであり、分配係数値の決定は、オンラインのフリーソフトウェアであるＭｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎによって行われた。また、Ｍｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎは、最も重要な薬物標的の生物活性スコア（Ｇタンパク質共役型受容体、リガンド、キナーゼ阻害剤、イオンチャネル調節剤、核受容体）の予測と同様に重要な分子特性（ｌｏｇＰ、極表面積、水素結合供与体及び受容体の数等）の計算のために無料のオンラインサービスを提供することによってインターネット上の化学のコミュニティを支援する（分子特性及び生物活性スコアの計算。２０１４．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎ．ｃｏｍ／ｃｇｉ‐ｂｉｎ／ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ。２０１４年１０月１５日にアクセス）。実験的に、１つはｎ‐オクタノール、もう一つは水である、２つの非混和液を使用して、フラスコ振盪法によって分配係数を決定した。
【００８５】
ＢＭＥの新たな製剤の開発
【００８６】
新たな製剤（Ｆ２）：Ａ部：２０グラムの抽出された粉体を２００ｍｌのメタノールと混合した後、２時間に亘って還流した。Ｂ部：４グラムのホスファチジルコリンリン脂質（Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅｐｈｏｓｐｏｌｉｐｉｄ）（９０％）を１００ｍｌの水と混合した。その後、Ａ部とＢ部を混合し、溶液をローターエバポレーターによってよって濃縮した後、５０ｍｌの逆浸透水を添加した。微量のメタノールの除去のためその溶液を濃縮した後、９０ｍｌの水の添加し、溶液を１４００ＲＰＭで４５分間ホモジナイズした（リポソームのミクロ乳化）。その後、上記溶液を、バコパ粉末を得るため、１７３℃にて、０．６ｋｇの圧力で実験室プラント０．５Ｄ‐０５で噴霧乾燥した。製剤Ｆ３及びＦ４を、４ｇｍのホスファチジルエタノールアミン及び４ｇｍのコレステロールを用いて、製剤Ｆ２に対してそれぞれ適用されるのと同じ手順を使用して調製した。全ての製剤（Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３及びＦ４）を、物理学的、化学的、微生物学的（ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｃａｌ）、及び不純物の分析に基づいて分析した。
【００８７】
製剤の選択
【００８８】
種々の製剤の放出プロファイルに基づいて、最も適した脂溶性物質を選択し、種々の濃度のその選択された物質を更なる研究のため調製した。
【００８９】
上記に基づいて、最も好適な材料は、ホスファチジルコリンであることがわかり、その後、先のＦ１〜Ｆ４の開発に適用されたものと同じ手順を適用することによって、Ｐ１（１０％）、Ｐ２（２０％）、Ｐ３（３０％）、及びＰ４（４０％）の異なる濃度の４つの新たな製剤を作製した。種々の濃度のホスファチジルコリン（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｃｈｏｌｉｎｅ）（Ｐ１‐Ｐ４）を有する製剤の放出プロファイルに基づいて、動物試験に対して最も好適な濃度を選択した。
フェーズＢ
【００９０】
用量の算出
【００９１】
ＢＭ製剤の用量を、明示される式から計算した（Ｓｈａｗ  ＳＲ，  Ｎｉｈａｌ  Ｍ，Ａｈｍａｄ  Ｎ．Ｄｏｓｅ  ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ａｎｉｍａｌ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．ＦＡＳＥＢ  Ｊ．２００８  Ｍａｒ；２２（３）：６５９‐６１）。
【００９２】
ＨＥＤ：ヒト有効用量ｍｇ／ｋｇ
【００９３】
Ｋｍ：１平方メートル当たりのキログラム
【００９４】
【数１】
2017533970.tif 000006
【００９５】
動物実験
【００９６】
動物実験を、いずれかの性別のアルビノラットに対して行った。３群のアルビノラットを作った（対照、標準及び試験）。各群を、各サブグループ３匹の動物を含む、３つのサブグループへと更に分けた。用量をラットの体重当たりの懸濁液形態で経口投与した。
【００９７】
ラット血液中のバコサイドの推定：特定の時間間隔（０分、１２分、２２．５分、４５分、９０分、１８０分、３６０分、７２０分及び１４４０分）で採血を行い、血清中のバコサイドの濃度を液体クロマトグラフィー‐質量分析（ＬＣＭＳ）によって分析した。
【００９８】
ラット脳の中のバコサイドの推定；製剤投与から２４時間後、動物を死亡させ、脳を摘出してホモジナイズした後、４０００ｒｐｍで１５分間に亘り遠心分離を行った。上清を収集し、ＬＣＭＳによって分析した。
【００９９】
液体クロマトグラフィー‐質量分析
【０１００】
液体クロマトグラフィー条件：
【０１０１】
測定器：Ｗａｔｅｒｓ‐Ｑ‐Ｔｏｆｍｉｃｒｏｍａｓｓ、カラム：Ｃ１８×ｔｅｒｒａ、粒子径：５μｍ  ２．１×１００ｍｍ、流速：０．１５ｍｌ／分、アセトニトリル（Ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉａｌ）：水中０．１％のＴＦＡ
【０１０２】
３５：６５，λ＝２０５ｎｍ
【０１０３】
質量分析条件：
【０１０４】
毛細管の電圧：３０００、サンプルコーン：２８ボルト〜３０ボルト、抽出コーン：１．０、ソールス温度：１００Ｃ、デソレーション温度：３０３
【０１０５】
統計学的分析
【０１０６】
結果は、ソフトウェア「ｐｒｉｍｅｒ  ｏｆ  ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（生物統計学の入門書）」製品バージョン４を適用して分析した。０．０５未満のＰ値を有意とし、反復測定分散分析を使用して平均を比較し、ポストホックＴｕｒｋｅｙ検定を使用して多重比較を行った。
【０１０７】
結果
【０１０８】
分配係数の決定
【０１０９】
分配係数及び他の因子の決定を、オンラインソフトウェア、ｍｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎ．ｃｏｍの補助により行った。ＢＭＥでは、バコサイドは、ＢＭの記憶増強特性を担う一群の化学化合物である。しかし、ＢＭＥにおける種々の化学成分であるＡ３、ＩＩ、Ｘ及びＣは、異なるｌｏｇｐ値（０．６６、０．５、１．１２及び１．４７）及び濃度（１８．４２パーセント、３６．７２パーセント、１３．２８パーセント及び１４．０２パーセント）をそれぞれ有する。ＢＭＥの分配係数は０．８３６３とわかり、Ａ３、ＩＩ、Ｘ及びＣのエイムス試験の値は、それぞれ８９、８９、８１及び８５であった。
【０１１０】
分配係数の決定に対するフラスコ振盪法；容易で信頼できるこの方法を化合物のｌｏｇＰ値を決定するために使用し、ここで本発明者らは１つがｎ‐オクタノール及び他方が水である２つの非混和液を使用する。Ｎ‐オクタノールは身体バリアと一致する好適なバリアと見なされることから、本発明者らは体細胞において脂溶性及び親水性のバリアを規定するためにｎ‐オクタノール及び水を使用した。
【０１１１】
紫外分光法によるアッセイ
【０１１２】
【数２】
2017533970.tif 000007
【０１１３】
分配係数の値は、ＢＭＥの親水性を示した。
【０１１４】
不純物（残留溶剤）
【０１１５】
ガスクロマトグラフィーの使用により、イソプロパノール、酢酸エチル、エタノール、アセトン、クロロホルム、シクロヘキサン、トルエン（Ｔｏｌｕｎｅ）、メタノール、ｎ‐ヘキサン、ベンゼン及び１，２‐ジクロロエタンのような全ての残留溶剤は、許可されたＵＳＰ制限通りであった。
【０１１６】
ＢＭ製剤の分析
【０１１７】
製剤化前試験；全ての製剤に対する確認試験は、ＴＬＣ方法によって陽性であった。使用した植物部分は全草であり、外観は微粉であり、色はウグイス色から茶色であり、全ての製剤について臭味は特徴的な感覚刺激性であった。メッシュ３０番を通る全ての調製物の粒子径はＵＳＰに指定される制限の通りであり、全ての製剤の嵩密度及びタップ密度はＵＳＰに指定される制限を下回った。
【０１１８】
化学分析；全ての製剤中のバコサイドのアッセイを、ＵＶ及びＨＰＬＣによって測定した。バコサイドの濃度は、種々の製剤において異なっており、ＵＶによる４５．２３％及びＨＰＬＣによる１５．１７％を有する対照製剤において最も高く、その他はそれよりも低かった。濃度変化は、他の形態もまた製剤中の添加された賦形剤を有したという事実に起因する。乾燥減量、薬草抽出液の割合、含水率、ｐＨ、酸不溶性灰分、賦形剤及び溶媒のような他のパラメーターは、ＵＳＰで指定された制限を下回った。
【０１１９】
微生物学；全ての製剤の微生物学的試験は、全てのパラメーター（生菌数（ｔｏｔａｌ  ｐｌａｔｅ  ｃｏｕｎｔ）、酵母及びカビ、大腸菌型、エシェリキア・コリ、サルモネラ、Ｓ．アウレウス、腸内菌科）がＵＳＰで指定された制限を下回ったことを示した。したがって、微生物学的試験は、使用した全ての製剤が使用に対して微生物学的に安全であったことを示す。
【０１２０】
不純物（重金属）：文献は、鉛、水銀、カドミウム及びヒ素の総重金属のような重金属の不純物が漢方薬中に存在することを示す［１２］。しかしながら、本発明者らのＢＭＥの製剤の分析はいずれも、データがＵＳＰで指定された制限を下回ったことを示した。
【０１２１】
ラット脳の中のバコサイドの概算
【０１２２】
対照群（蒸留水）；図１０（ａ）及び図１０（ｂ）では、分子量及び強度７８６．５（２８０）、６５０．７（２８０）及び５１６（７８０）のピークが対照群で見られた。異なる分子量による他の多くのピークも、非常に低い強度１００ｅで明らかにされた。
【０１２３】
標準群（Ｆ１）；標準群の分析により、分子量（ＭＷ）９２９．２及び強度５０を有するバコサイドＡ３が見出され、また１個の電子の除去によって、３１１の強度を有する分子量９２８．２が見出された。９２３．２（６７）、９２２．２（３６５）、９２０．２（４９）、９１７．２（８７）、９１６．２（６３３）、７９２．４（７０５）、６５６（１０５２）、６２８．７（７６３）、５２１．９（５０４）、及び５２０．９（２５５２）のように種々の強度を有する他の代謝産物も見られた。
【０１２４】
試験試料（Ｐ２）：試験群の分析は、バコサイドＡ３が強度６２７の分子量９２９．２を有していたことを示し、２個の電子の除去により種々の代謝産物、９２９．０（６２７）、９２８（４７３１）、７９３（１８４３）、７９２．２（９５９３）、６５７．７（２２１４）、６５６．５（１１６４９）、５７８．７（７７９）、５３６．８（１１１３）、５２１．８（９１６５）、５２０．７（１９７４３）が見出された。
【０１２５】
ラット脳におけるバコサイドの推定
【０１２６】
対照群；ラットの対照群の脳試料の分析では、ピークが９２２．５（１４）、９２２．４（４５）、９２２．３（３０）、９１７．４（１３）、９１６．４（５１）、９１６．３（１０）、９００．５（１５）、９００．４（２４）及び９００．３（１０）にあったことがわかった。
【０１２７】
標準試料（Ｆ１）；標準製剤によるラットの脳試料の分析では、バコサイド及びそれらの代謝産物の濃度は、９２８．４（２２）、９２２．４（９８）、９２２．３（４１）、９１６．４（５６）、９１６．３（１２９）、９１６．２（１３）、９１０．３（１０）、９００．４（１９）、９００．３（１３）、８９４．４（８）、８８４．４（９）、８７７．４（６）、８７１．４（５）、５１５（９６１）であったことがわかった。
【０１２８】
試験試料；試験製剤によるラット脳試料の分析では、バコサイド及びそれらの代謝産物の濃度は、９２８．４（４４）、９２３．３（１１）、９１９．１（２１）、９１８．１（６６）、９１６．４（１７）、９１０．４（２３）、９１０．３９（１２）、８９５．５（１５）、８９４．４（２４）、８８６．４（７）、８８２．４（８）、８７８．４（１５）、８７７．４（２６）、８７７．３（７１）、８７５．３（１１）、８５２．３（２３）、６４４．８（５８８）、５３７（７５４）、５０８（２０８１）であったことがわかった。
【０１２９】
考察
【０１３０】
ＢＭＥの標準処方の開発後、残留溶媒と関係する不純物について分析を行い、本発明者らは、不純物が検出されないか、又はＵＳＰの制限を下回ったことを見出した。これは、この製剤が経口投与にとって安全であり、レシピエントに有害な不純物がなかったことを示す。
【０１３１】
オンライン・ソフトｍｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎ（分子特性及び生物活性スコアの計算。２０１４．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎ．ｃｏｍ／ｃｇｉ‐ｂｉｎ／ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．２０１４年１０月１５日にアクセス）によるバコパグリコシドＣ、ＩＩ、Ｘ、Ａ３のエイムス試験の結果は、化合物が変異原可能性を有していないことを示し、したがって、レシピエントにとって有害ではない（哺乳動物の環境突然変異誘発性に対するエイムス試験．２０１４．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｕｎ．ｃａ／ｂｉｏｌｏｇｙ／ｓｃａｒｒ／４２４１＿Ａｍｅｓ＿Ｔｅｓｔ．ｈｔｍｌ。２０１４年１１月２１日にアクセス）。
【０１３２】
分配係数の決定
【０１３３】
分配係数を、ソフトウェアｍｏｌｉｎｓｐｉｒａｔｉｏｎ．ｃｏｍ、及びフラスコ振盪法によって推定した（Ｌｉｎ  Ｂ，Ｐｅａｓｅ  ＪＨ．Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ  ｓｈａｋｅ  ｆｌａｓｋ  ａｎｄ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｔａｎｄｅｍ  ｍａｓｓ  ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｃｏｍｂ  Ｃｈｅｍ  Ｈｉｇｈ  Ｔ  Ｓｃｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ．２０１３  Ｄｅｃ；１６（１０）：８１７‐２５）。ｌｏｇＰ値は、それぞれ０．８３６及び０．８３４であることがわかった。これらは、ＢＭＥの性質が親水性であり、ＢＢＢ（血液脳関門）を通過するためのより良好な効能を得るように、分配係数／脂溶性のほぼ２０％の上昇を必要とすることを示す。（ＫＤ  Ｔｒｉｐａｔｈｉ．Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｓ  ｏｆ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｊａｙｐｅｅ  Ｂｒｏｔｈｅｒｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  Ｐｖｔ．Ｌｔｄ．２０．２０１０）。
【０１３４】
上のパラメーターの評価の後、ＢＢＢを通過するより優れた能力のためにより脂溶性の部分が必要であり、１に近いｌｏｇＰ値がより良好な薬物動態学の特性を提供すると結論づけられた。したがって、本発明者らは、異なる脂溶性薬剤を含む４つの新たな製剤、すなわち、対照形態、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン及びコレステロールを製剤化した。
【０１３５】
ＢＭ製剤の分析
【０１３６】
製剤の分析では、予備処方試験、化学分析、微生物学、及び重金属に関連する不純物と関係するパラメーターが、ＵＳＰの基準を満たすことがわかった。製剤中のバコパのアッセイにおける唯一の相違は添加剤の存在に起因した。
【０１３７】
種々の脂溶性薬剤に基づく製剤の放出プロファイルの比較研究；最良の放出プロファイルは、それぞれ、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、及びコレステロールにより減少した対照製剤であった（図８）。これは対照製剤で見られた最大の放出プロファイルを示し、２番目がホスファチジルコリン、３番目がホスファチジルエタノールアミン、そして最後がコレステロールであった。これは、製剤の脂溶性が増加するにつれて、放出プロファイルが減少したことを示す。これによれば、脂溶性薬剤を含まない対照製剤は、最良の放出プロファイルを有した。
【０１３８】
先の報告（Ｇｏｓｗａｍｉ  Ｓ，Ｓａｏｊｉ  Ａ，Ｋｕｍａｒ  Ｎ，Ｔｈａｗａｎｉ  Ｖ，Ｔｉｗａｒｉ  Ｍ，Ｔｈａｗａｎｉ  Ｍ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｂａｃｏｐａ  ｍｏｎｎｉｅｒｉ  ｏｎ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．ＩＪＣＲＩＭＰＨ．２０１１；３（４）：２８５‐９３）より対照製剤は、ＢＢＢを通過するためのより良好な透過性を有しておらず、したがって、脳においてその効果を増すためのより長い持続に対して、より高い用量を必要とする。これは用量を増加させ、持続は消化管刺激症状、ひいては低い患者のコンプライアンスをもたらす。脂溶性薬剤を含むＢＭＥの新たな製剤は、ＢＭがＢＢＢを通過する能力を増加させた。
【０１３９】
上記結果に基づけば、製剤ホスファチジルコリン（Ｆ２）は、その有利な親水性及び脂溶性のプロファイルに基づき、更なる研究に選択され、この製剤は、ＢＢＢを通過するより良好な透過性も有した。また、Ｆ２は適切な排出速度を有した。
【０１４０】
放出プロファイルが統計的に分析される場合；ホスファチジルエタノールアミン対コレステロールの間で比較される場合、全ての値が統計的に有意であることがわかった。それは、様々な製剤中の放出パターンに有意差が存在することを示した（図８）。
【０１４１】
本発明者らのＢＭＥ製剤に対するホスファチジルコリンの好適な濃度；好適な脂溶性薬剤の選択の後、発明者らは、ＢＭＥの新たな製剤の調製用ホスファチジルコリンの最も好適な濃度を決定した。ホスファチジルコリンの異なる濃度を有する新たな４つの製剤、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４を調製した。
【０１４２】
これらの製剤の分析に基づき、発明者らは、物理学的、化学的、微生物学的、及び不純物に関連する全てのパラメーターは、ＵＳＰにより指定された制限を下回る、又はそれに一致する若しくは不在であったことを見出した。これは、全ての製剤が経口用途に許容可能であったことを示す。
【０１４３】
種々の濃度ホスファチジルコリンによるＢＭの放出プロファイルの分析では、最大放出が１０％のホスファチジルコリンで見られたのに対し、最低放出が４０％のホスファチジルコリンで見られ（図９）、最も良好な溶解プロファイルが製剤Ｐ１のものであることを示した。分配係数の値によれば、製剤は、ｌｏｇＰ値のほぼ２０％の上昇を必要とした。したがって、製剤Ｐ２（２０％のホスファチジルコリンに基づく）を更なる動物実験に使用した。種々の濃度のホスファチジルコリンの放出プロファイルの統計分析では、Ｐ値は、全ての結果が統計学的に有意であったことを示した。
【０１４４】
標準及び試験製剤の比較
【０１４５】
本発明者らは、物理的、微生物学的、及び不純物に関係するパラメーターの全てが、国民医薬品集ＵＳＰにおいて指定される範囲にほぼ同じであるか、又はそれに一致するか若しくは不在であったことを見出した。化学分析における唯一の相違は、それぞれ、ＢＭ試料中の賦形剤の量の増加に起因する、ＵＶによって４５．２３％及び３５．４５％、ＨＰＬＣによって１５．１７％及び１０．２５％のバコサイドの濃度であった。製剤Ｐ２では、水溶性抽出物は減少し、アルコール可溶性抽出物は増加した。製剤Ｐ２のｐＨはわずかに高く、他のパラメーターはインド国の薬局方及びＵＳＰに指定される制限とほぼ同じであったか、又はそれを下回った。
【０１４６】
Ｆ１及びＰ２の比較分析の後、ホスファチジルコリンに２０％基づくＢＭＥの製剤は、ＢＭＥの標準製剤よりも（ｔｈｅｎ）低いバコサイド濃度、及びわずかに高いｐＨを有することが結論づけられ、これはホスファチジルコリンの添加に起因する可能性がある。
動物実験
【０１４７】
ＬＣ‐ＭＳによる血液及び脳の試料の比較
【０１４８】
文献より、記憶増強特性を担う主な化合物は、バコサイドＡ３及びＩＩである。両方の分子構造及び分子量は、同じ（分子量、すなわち９２９．１０）であるが、違いは、バコサイドＡ３（左旋性）及びバコサイドＩＩ（右旋性）の化合物の旋光度のみである。
【０１４９】
血液中の対照、標準及び試験群の質量分光光学的な比較。
図１０（ａ）及び図１０（ｂ）によれば、対照群は、種々の分子量により多くのピークを示した。標準製剤及び試験製剤の比較では、本発明者らは、バコサイドＡ３及びそれらの代謝産物の量が、標準群よりも（ｔｈｅｎ）試験群でより多く見られることを見出した。それは、ラット血漿中の試験製剤によって、バコサイドの量がより多いことを直接示した。
【０１５０】
血漿濃度ｖ／ｓ時間プロファイル
【０１５１】
図１１より、血漿濃度対時間がラットモデルにおいてプロットされた。標準製剤は、６時間の用量投与後に最高濃度（Ｃｍａｘ）を示し、排出速度も高かった。試験製剤もまた６時間でＣｍａｘを示したが、濃度は標準製剤よりも少なく、排出速度も標準より遅かった。また、試験製剤の曲線下面積（ＡＵＣ）は標準製剤より大きく、被験薬がより良好な薬物動態学のプロファイルを有していることを示した。
【０１５２】
脳試料に対する対照群、標準群、及び試験群の質量分光光学的比較
【０１５３】
ラットの血漿及び脳の試料の分析は、標準処方と比較して、試験製剤中の高濃度のバコサイド及びそれらの代謝産物を実証し、本発明の送達システムを使用する新たな試験製剤によってバコサイド及びそれらの代謝産物の脳へのより良好な浸透を示した。
【０１５４】
脳の質量分光学のグラフは、高強度の分子量９２９．１０のバコサイドＡ３及びそれらの代謝産物を示し、これは、新たな製剤により脳において、バコサイド及びそれらの代謝産物の濃度がより高くなったことを示し、バコサイド及びそれらの代謝産物のラット脳へのより高い透過性を示した。
【０１５５】
新たな製剤は、ＢＢＢを通過するためにより透過性であり、その作用持続時間はより長かった。
【０１５６】
バコパ・モニエリの新たな脂溶性製剤は、増加した脂質溶解性により脳へのより良好な浸透を有し、以前に市販される製剤よりも（ｔｈｅｎ）良好な薬物動態学的プロファイルを有する。バコサイド及びそれらの代謝産物の脳における高い浸透により、治療の用量、頻度、及び持続は減少し、副作用もまた減少するであろう。したがって、患者のコンプライアンス、並びにアルツハイマー病及び痴呆に苦しむ患者の生活の質が、本発明者らの新たなバコパ製剤により改善するであろう。
【０１５７】
実施例５：
膝の骨関節炎の対症療法に関する固体脂質ボスウェリア・セラータ（Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ  ｓｅｒｒａｔａ）粒子（ＳＬＢＳＰ）対標準化ボスウェリア・セラータゴム樹脂抽出物（ＢＳＥ）の無作為化二重盲検ダブルダミー・プラセボ比較試験
【０１５８】
民族薬理学的（Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ）関連：膝の骨関節炎（ＯＡ膝）は、制限された運動性及び乏しい生活の質としばしば関連する、慢性で進行性の骨格変性傷害である。ＮＳＡＩＤは、疼痛の対症療法のためＯＡではしばしば使用される。ボスウェリア酸（ＢＡ）は、抗炎症性の特性を有し、ＯＡ膝の治療に伝統的に使用される。しかしながら、薬物動態研究は、１１‐ケト‐β‐ボスウェリア酸（ＫＢＡ）及びアセチル‐１１‐ケト‐β‐ボスウェリア酸（ＡＫＢＡ）を含むＢＡの低いバイオアベイラビリティーを示した。リン脂質複合化は、ＢＡのバイオアベイラビリティーを増強し、それは固体脂質ボスウェリア・セラータ粒子（ＳＬＢＳＰ）の開発をもたらした。
【０１５９】
方法：ＯＡ膝の症状を示す患者における、前向き無作為化二重盲検ダブルダミー・プラセボ対照単施設実施臨床試験であった。被験体を、コンピュータにより作成された乱数配列を使用して、ＳＬＢＳＰカプセル又はＢＳＥ錠を受けるために無作為化した。選択バイアス除去するために封をした封筒を利用して、割付け隠蔽を達成した。ＳＬＢＣＰカプセル及びＢＳＥタブレットに似た釣り合う用量のプラセボ（Ｍａｔｃｈｉｎｇ  ｐｌａｃｅｂｏ）が処方され、患者はそれぞれ活性薬物及びプラセボを受けた（すなわち、ＳＬＢＳＰカプセル＋ＢＳＥプラセボ又はＢＳＥタブレット＋ＳＬＢＳＰプラセボ）。ＢＳＥのタブレットはそれぞれ、４０％のボスウェリア酸（ＢＡ）を含む３３３ｍｇの標準化されたＢＳＥガムを含んだのに対し、ＳＬＢＳＰカプセルはそれぞれ、１００ｍｇの４０％のボスウェリア酸に等しい量の３３３ｍｇの処方を含んだ。治療を２ヶ月に亘り継続した。患者は、必要に応じて、レスキュー鎮痛剤（アセロフェナク１００ｍｇ）の服用を認められた。疼痛及び機能における改善は、西オンタリオ・マクマスター大学変形性関節症指数（ＷＯＭＡＣ：Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｏｎｔａｒｉｏ  ａｎｄ  ＭｃＭａｓｔｅｒ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ  ＯＡ  ｉｎｄｅｘ）、視覚的アナログ尺度（ＶＡＳ）、並びに１ヶ月目及び２ヶ月目におけるレスキュー鎮痛剤の必要を利用して判定した。ＩＩ型コラーゲン（ＣＴＸ‐ＩＩ）の架橋テロペプチドを、治療のベースライン及び終了時に尿で測定した。ＩＬ‐２、ＩＬ‐６、ＩＬ‐４、ＴＮＦ‐α、ＩＦＮ‐γを含む炎症性サイトカインの血清レベルを、ベースライン及び治療終了時に測定した。結果を、分散分析を使用して、２群間で比較した。
【０１６０】
結果：２０名の患者を各群に登録した。いずれの治療もベースラインと比較して、疼痛及び機能のスコアにおける著しい改善をもたらした。ＷＯＭＡＣスコアは、ＳＬＢＳＰ群では１ヶ月目及び２ヶ月目でそれぞれ１８．２％及び１５．４％改善した（ｐ＜０．０５）のに対し、ＢＳＥに対応する数値はそれぞれ１８．８％及び２３．１％であった（ｐ＜０．０５）。同様の変化、すなわち、ＢＳＢＳＰに関して同じ期間中のそれぞれ１９％及び２６％の改善（ｐ＜０．０５）、ＢＳＥ群におけるそれぞれ１８．２％及び２０．４％の改善（ｐ＜０．０５）がＶＡＳスコアにおいて観察された。２群間のＶＡＳ及びＷＯＭＡＣのスコアの差は、統計学的に有意ではなかった。しかしながら、ベースライン（ｐ＜０．０１）と比較して、ＳＬＢＳＰ群では最も顕著な効果がレスキュー鎮痛剤の必要において観察され、１ヶ月目に６７％に著しく減少し、２ヶ月目には７６％に減少したのに対して、ＢＳＥ群ではそれぞれ６５％及び３４％であった。ＳＬＢＳＰは、２ヶ月目の終わりにＢＳＥと比較して、レスキュー鎮痛剤に対する著しく低い依存をもたらした（ｐ＜０．０５）。また、ＳＬＢＳＰはベースラインと比較して、ＩＬ‐２及びＩＬ‐４レベルの顕著な低下を生じたのに対し、数倍の増加がＢＳＥ群のこれらの炎症誘発性のサイトカインのレベルにおいて見られた（ｐ＜０．０５）。有意差は、２つの群の間の他のサイトカイン又は尿ＣＴＸ‐ＩＩレベルにおいて観察されなかった。有害効果は、いずれの治療にも観察されなかった。治療へのコンプライアンスは、両方の群の全ての患者において８０％超であった。
【０１６１】
結論：
ＳＬＢＳＰ及びＢＳＥはいずれも、ＯＡ膝の患者の疼痛及び機能スコアにおける著しい改善をもたらしたが、ＳＬＢＳＰは炎症性サイトカインの調節に加えてレスキュー鎮痛剤の必要性の減少においてＢＳＥより優れていた。
【０１６２】
実施例６：
血漿補酵素Ｑ及びビタミンＣ濃度に対する効果について２種類の補酵素Ｑサプリメントの比較
【０１６３】
計画
【０１６４】
Ａ．試験集団  被験体は、５０歳〜７５歳の禁煙の健康な人々であろう。この年齢集団は、人々が年齢を重ねるにつれて臓器のＣｏＱ含有量が低下する可能性があるため、高いＣｏＱ貯蔵を有しないはずである（ｗａｓ  ｓｈｏｕｌｄ  ｎｏｔ  ｈａｖｅ）。被験体は、１００ｍｇ／日（マルチビタミン剤中の通常の量）を上回るビタミンＣ含有サプリメントを摂取していないであろう。研究参加に先立って、被験体が１００ｍｇのビタミンＣを含むマルチビタミンサプリメントを使用していれば、参加を始める前に少なくとも４日間その製品を中止する。
【０１６５】
Ｂ．手法  ２週の間、被験体は、脂肪を含む食事と共に以下の（ｆｌｏｗｉｎｇ）うち１つを毎日摂取する：
【０１６６】
対照：プラセボカプセル（ゼラチン）
【０１６７】
ＣｏＱ（１００ｍｇ／日、標準）
【０１６８】
ＣｏＱ（１００ｍｇ／日、本技術の新たな顆粒を使用）
【０１６９】
各治療群は、両方の性別（１つの群当たり同じ配分）から１５名の被験体を選択する（ｄｒａｗｎ）。１４日の治療介入中に、被験体は、特定の高ビタミンの食品を食べないように依頼される（柑橘果実及びそれらの果汁、キウイ、イチゴ、一人前当たり５０ｍｇ以上の添加されたビタミンＣ、緑色及び関連するピーマン、チリメンキャベツ及びブロッコリ）。
【０１７０】
Ｃ．分析  主なプロジェクトの測定、すなわち血漿補酵素Ｑ及びアスコルビン酸は、請け負った研究所のＨＰＬＣによって分析される。また、血漿マロンジアルデヒドは、それらの施設でＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ製のキットを使用して分析される。
【０１７１】
上記の明細書において、本発明はその特定の実施形態に関して記載され、多くの詳細が実例の目的で述べられているが、本発明が追加の実施形態に影響され得ること、及び本明細書に記載される特定の詳細が、本発明の基本原理から逸脱することなく、相当に変化可能であることは、当業者に明らかであろう。
【０１７２】
本明細書に引用される全ての参照は、参照によってそれらの全体が援用される。本発明は、その趣旨又は本質的な属性から逸脱することなく、他の特定の形態に具体化される場合があり、したがって、上記の明細書よりも本発明の範囲を示す添付の特許請求の範囲に対して参照がなされるべきである。
【図１】
2017533970.tif 000008
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【国際調査報告】
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