(57)【要約】  本発明は、プロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）製品を得る又は健康な個体若しくは病気の個体における免疫応答を調節するための方法に関する。方法は、ＰＴＳＯ製品に組み込むためにＰＴＳＯに基づく化合物を選択することを含む。ＰＴＳＯに基づく化合物は、式がＲ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）であるＰＴＳＯを含む。次いで、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込む。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトの免疫機能を調節するためのプロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）製品を組み立てるための方法であって、ＰＴＳＯ製品に組み込むために、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル基（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）を表し、「ａ」は２である）を有するＰＴＳＯを含有するＰＴＳＯに基づく化合物のために、ＰＴＳＯの量を選択することと、前記選択した量のＰＴＳＯを含有する前記ＰＴＳＯに基づく化合物を生成した後に、前記ＰＴＳＯに基づく化合物を前記ＰＴＳＯ製品に組み込むこととを含み、ある用量の前記ＰＴＳＯ製品は少なくとも０．０１ｍｇ〜２０００ｍｇの間の量の前記ＰＴＳＯに基づく化合物を含む、方法。
【請求項２】
丸剤である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項３】
カプセル剤である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項４】
飲料である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項５】
食品サプリメントである、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項６】
栄養補助食品である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項７】
薬剤である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項８】
溶液である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項９】
ＰＴＳＯ溶液をプレフィルドシリンジに組み込むことを更に含み、前記プレフィルドシリンジが前記ＰＴＳＯ製品である、請求項８に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１０】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯ製品とを混合することを更に含む、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１１】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯに基づく化合物とを混合することを更に含む、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１２】
ヒトの免疫機能を調節するためのプロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）製品を組み立てるための方法であって、ＰＴＳＯ製品に組み込むために、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル基（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）を表し、「ａ」は２である）を有するＰＴＳＯを含有するＰＴＳＯに基づく化合物を選択することと、前記ＰＴＳＯに基づく化合物を選択した後に、前記ＰＴＳＯに基づく化合物を前記ＰＴＳＯ製品に組み込むこととを含む、方法。
【請求項１３】
食品サプリメントである、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１４】
栄養補助食品である、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１５】
薬剤である、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１６】
溶液である、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１７】
ＰＴＳＯ溶液をシリンジに組み込んでプレフィルドシリンジを作製することを更に含み、前記プレフィルドシリンジが前記ＰＴＳＯ製品である、請求項１６に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１８】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯ製品とを混合することを更に含む、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１９】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯに基づく化合物とを混合することを更に含む、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。 
【請求項２０】
ある用量の前記ＰＴＳＯ製品が、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の量の前記ＰＴＳＯに基づく化合物を含むことを更に含む、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学に関し、より具体的には、ヒトにおける免疫応答の調節に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫学は、身体の自然防御系に関連する全ての側面の研究を扱う生物医学科学である。免疫系の正常な機能は、ヒトの健康に極めて重量である。特定の物質を適用することによって、免疫応答の制御に干渉することができる。免疫調節は、所与の媒介物質によってもたらされる、免疫防御系を誘導する自己制御プロセスに対する作用を指す。アザチオプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、レバミゾール及びサリドマイドなどの多くの化合物が免疫調節剤として用いられており、免疫応答の最適化、全般的な健康状態の改善及び所与の疾患の罹患リスクの低減が可能である。
【０００３】
免疫調節剤は、免疫応答の阻害又は活性化によって、免疫抑制剤又は免疫促進剤のように作用し得る。免疫抑制剤は、炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療に役立つのに対して、免疫促進剤は、慢性の感染症、免疫不全疾患又は更に癌の人々の免疫機能を改善することができる。
【０００４】
免疫調節剤は、免疫グロブリン合成の増加を介して特異的免疫応答を調節することによって、又は可溶性メディエータの産生の制御を介して自然免疫応答を調節することによって、免疫系の２つのレベルで作用することができる。第１の場合、免疫調節剤は、免疫アジュバントで生じるように、特定の抗原に対する免疫反応をもたらす。これらは、免疫応答をより効果的に、より早く、強く、長く続くようにする化学的又は生物学的調製剤である。免疫アジュバントは、アクセサリー細胞及び他の補助刺激分子の活性化及び動員を介して免疫応答を誘発するプロセスにおいて、決定的な役割を果たす。自然免疫応答では、免疫調節剤は、サイトカイン合成の制御で生じるように、所与の抗原による事前の活性化を必要とすることなく、当該応答の刺激又は抑制を生じさせる。
【０００５】
サイトカインは、体内でホルモン調節因子として作用する、ペプチド、タンパク質又は糖タンパク質の多様な群である。これらは、侵入因子に対する防御機構を制御することによって、又は免疫応答性細胞の炎症反応若しくは活性化の開始などの免疫調節プロセスを起動させることによって、自然免疫応答にて必要不可欠な役割を果たす。自然免疫応答に関与する主なサイトカインのいくつかは、インターロイキン−１、インターロイキン−６、インターロイキン−８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）又はインターフェロンである。
【０００６】
今日、臨床診療又は機能性栄養品分野において、安全かつ効果的な免疫応答を引き起こすことができる、新しく、より強力で安全な免疫調節化合物の開発がますます必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、ヒトにおける免疫機能を調節するための製品を得るための新規かつ非自明の方法を提供する、治療用組成物に関する。ＰＴＳＯ化合物は、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒを有し、式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である。ＰＴＳＯに基づく化合物を選択したら、そのＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。
【０００８】
別の用途形態において、ＰＴＳＯの量は、ＰＴＳＯに基づく化合物を形成するために選択され得る。ＰＴＳＯに基づく化合物を選択したら、そのＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。
【０００９】
免疫応答を調節するために、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）を有するプロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）をヒトに投与することができる。
【００１０】
他の適用形態において、慢性感染症、免疫不全疾患、癌、多数の炎症性腸疾患、及び他の慢性自己免疫性又は炎症性の状態又は疾患を治療及び／又は予防するために、ＰＴＳＯ製品（したがって、ＰＴＳＯに基づく化合物）をヒトに投与することができる。
【００１１】
本発明の更なる他の態様については、以下の説明において部分的に記載され、当該説明において部分的に割愛されるか、あるいは本発明を実施する際に見出され得る。本発明の態様は、添付の特許請求の範囲に記載される要素及び特定の組み合わせを用いることによって実施され、達成される。上述の一般的な説明及び以下に述べる詳細な説明は、いずれも例示的かつ説明的なものにすぎず、特許請求される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
本明細書に組み込まれるとともにその一部でもある添付図面は、本発明の実施形態を例示し、その説明とともに本発明の原理を説明する役割を果たすものである。本明細書に例示される実施形態は、現時点での好ましい実施形態である。ただし、本発明は、図示する正確な配置又は手段に限定されないことを理解されたい。
【００１３】
【図１】ヒトの免疫応答を調節するための方法の絵図を示す。
【図２Ａ】ヒトの免疫機能を調節するための方法を例示するフローチャートを示す。
【図２Ｂ】本発明の別の適用における、ＰＴＳＯの免疫調節剤としての使用を例示するフローチャートを示す。
【図２Ｃ】本発明の別の適用における、ＰＴＳＯの免疫調節剤としての使用を例示するフローチャートを示す。
【図３】ＩＬ−１β産生調節に対する用量依存的なＰＴＳＯの効果を示す棒グラフを示す。
【図４】ＩＬ−６産生調節に対するＰＴＳＯの効果を示す。
【図５】ヒト結腸腺癌（ＣＡＣＯ−２）細胞におけるサイトカインＩＬ−８の産生に関するＰＴＳＯの免疫調節活性を示す。
【図６】ヒト白血病細胞株におけるインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）産生の調節を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、免疫調節化合物の適用のための方法について記載する。具体的には、本発明の一適用形態として、ＰＴＳＯ製品は、ＰＴＳＯ製品に組み込まれるＰＴＳＯに基づく化合物を得るように、ＰＴＳＯの量を選択することによって使用することができる。ＰＴＳＯに基づく化合物は、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）を有するＰＴＳＯを含み得る。次いで、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込んで、選択した量のＰＴＳＯを含有するＰＴＳＯに基づく化合物を生成することができる。ＰＴＳＯの選択される量は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含有する、ＰＴＳＯ製品の用量（各適用にて）に必要な量である。ＰＴＳＯ製品は、慢性感染症、免疫不全疾患、癌及び全身性炎症疾患及び炎症性腸疾患を予防及び治療するために、異なる病理学的プロセスの免疫応答を改善する免疫調節剤としてヒトに投与することができる。
【００１５】
更なる例示として、図１は、免疫応答を調節するプロセスを図で表している。図１に示す通り、ＰＴＳＯ１５０は、健康な個体又は病気の個体１０５に投与され得る。ＰＴＳＯ１５０（したがって、ＰＴＳＯ製品を介したＰＴＳＯに基づく化合物）の投与１１５は、注入１１５Ａ、経口投与用薬剤１１５Ｂへの組み込み、非経口的投与用薬剤１１５Ｃへの組み込みによって、製品及び／若しくは食品サプリメント１１５Ｄへの組み込みによって、又は栄養補助食品１１５Ｅへの組み込みによってなされ得る。ＰＴＳＯ１５０の継続的投与後、ヒトにおける免疫応答が改善されることになる。
【００１６】
図２Ａは、ヒトの免疫機能が調節されるプロセスを例示するフローチャートを示している。ブロック２２０から始まり、投与のためのＰＴＳＯに基づく化合物中のＰＴＳＯの所望の濃度が決定される。ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。本発明の異なる適用形態において、用量は、０．０１〜１．０００ｍｇを含み得る。更に別の異なる適用では、用量は、０．５〜５５０ｍｇを含み得る。
【００１７】
ブロック２３０に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物（したがって、ＰＴＳＯ自体）を食品及び／若しくは食品サプリメント、栄養補助食品並びに／又は薬剤などのＰＴＳＯ製品に組み込むことに関する決定がなされ得る。ＰＴＳＯに基づく化合物は、それ自体を投与することができること（ＰＴＳＯ単独、他の添加剤なし）は言及すべき点である。次いで、ブロック２４０に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物（したがって、ＰＴＳＯ製品）をどのように投与するかについての決定がなされ得る。例えば、ＰＴＳＯに基づく化合物は、注入又は経口投与することができる。この後、ブロック２５０に示すように、個体の免疫機能を調節して、慢性感染症、免疫不全疾患、癌、全身性炎症疾患又は炎症性腸疾患、及び慢性自己免疫性炎症の状態及び疾患を治療及び／又は予防するために、ＰＴＳＯに基づく化合物を投与することができる。
【００１８】
ＰＴＳＯは次式に相当する。
Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ
式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である。ＰＴＳＯはまた、ジプロピルプロピルチオスルホン酸、プロピルプロパンチオスルホン酸、又は１−プロピルスルホニルスルファニルプロパン（ＣＡＳ番号１１１３−１３−９）として知られることは言及すべき点である。
【００１９】
サイトカイン産生及び他のマーカの産生の両方の調節を含み得る免疫機能の調節に加えて、慢性感染症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）などの免疫不全疾患、癌、多数の炎症性腸疾患及び他の慢性自己免疫疾患を予防又は治療するために、本発明を使用できることも企図されることは言及すべき点である。炎症性疾患には、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、回腸炎、過敏性腸症候群、セリアック病及び慢性炎症性腸疾患を挙げることができるが、これらに限定されない。加えて、本発明では、ＰＴＳＯを免疫活性化剤として使用できることが企図される。具体的には、ＰＴＳＯを、抗原に対する免疫応答を強化する、及び／又は所望の免疫応答に対する当該応答を調節するために（例えば、既存の免疫を改善する、抗原曝露後の特異的な免疫グロブリン合成を増加させる、及び／又はワクチン接種と組み合わせて又は免疫アジュバントとして使用したときに特異的な免疫応答を増大させるために）使用することができる。
【００２０】
更に、ＰＴＳＯが、単独で又は他の免疫調節製品及び／若しくは薬理学的賦形剤と組み合わせて使用できることは言及すべき点である。ＰＳＴＯは、適用量に応じて、免疫活性効果又は免疫抑制効果をもたらすことができる。例えば、０．１ｍＭの用量では、当該化合物により、ＴＨＰ−１細胞におけるＩＬ−６産生が増加され得るのに対し、対照的に、１ｍＭを超える用量では、当該化合物により、当該インターロイキンの合成に明らかな抑制効果がもたらされる。しかしながら、用量依存比率は、特に、サイトカインの種類及び／又は研究対象の細胞モデルに依存し得る。
【００２１】
更に、ＰＴＳＯは、所与の病状の存在下での免疫応答を調節することができ、健康な個体における免疫応答を改善することができる。ＰＴＳＯは、健康な個体又は病気の個体に、経口的に投与するか、食品及び／若しくは食品サプリメント、栄養補助食品又は薬剤（他の免疫調節薬剤及び製品を含む）に直接組み込むことができる。経口投与のための本発明の適用は、カプセル剤、丸剤、錠剤、散剤、顆粒剤又はエマルション若しくは液状懸濁液（飲料、濃縮果汁又はシロップ）の形態での提供により採用され得る。更に、ＰＴＳＯは、単独で又は薬剤の一部としての注入によって個体に投与することができる。
【００２２】
本発明の別の更なる例示として、図２Ｂは、ヒトにおける免疫応答を調節するためのＰＴＳＯ製品の適用を例示するフローチャートを示す。ブロック２５５にて、ＰＴＳＯの量が選択され得る。ＰＴＳＯの選択される量は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間で、ある用量のＰＴＳＯ製品をもたらす、ＰＴＳＯに基づく化合物を生成するのに有効な用量に相当する。換言すれば、ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく製品を含み得る。
【００２３】
選択した量のＰＴＳＯは、ブロック２８５に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物を所望の濃度で生成するために、ＰＴＳＯに基づく化合物に組み込むことができる。ブロック２９５に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ＰＴＳＯ製品は、経口投与に適した製剤のいずれかに組み込んでよい。例えば、ＰＴＳＯ製品は、カプセル剤、丸剤、粉剤及び／又は顆粒剤の形態で提供することができる。ＰＴＳＯ製品は、液状（水性又は非水性）溶液、エマルション、飲料及び／又はシロップの形態で提供することができる。更に、ＰＴＳＯ製品は、プレフィルドシリンジとして提供することができる。ＰＴＳＯ溶液は、ＰＴＳＯ製品に用いることができる、選択した濃度を有するＰＴＳＯに基づく化合物を含み得、ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。ＰＴＳＯ製品がヒトに投与される予定である場合、当該製品は食品等級分子であることは言及すべき点である。
【００２４】
本発明の別の更なる例示として、図２Ｃは、ヒトにおける免疫応答を調節するためのＰＴＳＯ製品の適用を例示するフローチャートを示す。ブロック２９７に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物は、すでに作製されたＰＴＳＯに基づく化合物の群から選択することができる。ブロック２９９に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ＰＴＳＯ製品は、選択されたＰＴＳＯに基づく化合物に応じて、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。本明細書に示す通り、ＰＴＳＯ製品は、カプセル剤、丸剤、錠剤、粉剤及び／又は顆粒剤の形態で提供することができる。ＰＴＳＯ製品は、液状（水性又は非水性）溶液、エマルション、飲料及び／又はシロップの形態で提供することができる。更に、ＰＴＳＯ製品は、ＰＴＳＯ溶液が充填されたプレフィルドシリンジとして提供することができる。ＰＴＳＯ溶液は、所望の濃度を有するＰＴＳＯに基づく化合物から作製することができる。ＰＴＳＯ製品は、ヒトに投与され、ヒトによって消費されるので、その分子は食品用途に適するものである。
【００２５】
本発明にて記載されるように、ＰＴＳＯは、それ自体が活性合物であり得、（水性又は非水性）溶液に溶解することができ、かつ／又はＰＴＳＯに基づく化合物を形成するために他の成分と組み合わせることができることは言及すべき点である。次いで、このＰＴＳＯに基づく化合物は、ＰＴＳＯ製品（丸剤、トローチ剤、飲料など）を形成するために、他の免疫調節製品、薬理学的賦形剤などと混合され得る。免疫調節製品、賦形剤などもＰＴＳＯに基づく化合物の一部として添加することができることが許容される。更に、用量は、各回に摂取される薬剤又は治療薬の特定量であることが理解される。
【００２６】
本発明の更なる例示として、以下の実施例を記載する。本発明は、当業者に理解されるように、これらの実施例に排他的に制限されるものではないことは言及すべき点である。
【００２７】
実施例１：
ヒト単球性白血病細胞株（ＴＨＰ−１）におけるＰＴＳＯの免疫抑制活性に関する評価について、本実施例にて検討する。
【００２８】
リポ多糖体（ＬＰＳ）及びホルボール１２−ミリスタート１４−アセタートで活性化させたヒト細胞株（ＴＨＰ−１）中のサイトカイン産生（ＩＬ−１β及びＩＬ−６産生）に対するＰＴＳＯの効果を異なる濃度で評価した。サイトカインＩＬ−１β及びＩＬ−６が種々の炎症状態及び／又は免疫状態における免疫応答にて主要な役割を果たしていることは言及すべき点である。
【００２９】
ヒト細胞株ＴＨＰ−１は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｇｒａｎａｄａ（Ｇｒａｎａｄａ，Ｓｐａｉｎ）のＵｎｉｄａｄ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｉｖｏｓ  Ｃｅｌｕｌａｒｅｓ（細胞培養部）から入手した（ＥＣＡＣＣ参照番号：８８０８１２０１）。細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン及び０．０５ｍＭのメルカプトエタノールを添加した細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）中で、加湿環境下、３７℃、５％二酸化炭素（ＣＯ２）で培養した。細胞を２４ウェルプレートで５×１０５細胞／ｍＬの密度で培養し、異なる濃度の化合物（０．１〜２５μＭのＰＴＳＯ）とともに予め２４時間インキュベートし、１μｇ／ｍＬのＬＰＳ及び１μＭのホルボール１２−ミリスタート１４−アセタート（ＰＭＡ）で刺激した。２４時間後、上清を回収し、１．０００ｇで１０分間遠心分離にかけた。次いで、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ，ＵＫ）によってＩＬ−１β及びＩＬ−６レベルを評価するために、−８０℃で保存した。
【００３０】
実施例２：
ヒト結腸腺癌細胞（ＣＡＣＯ−２）におけるＰＴＳＯの免疫調節の効果を実施例２にて示す。
【００３１】
ＩＬ−１βで活性化させたヒト結腸直腸腺癌（ＣＡＣＯ−２）細胞株中のインターロイキン８（ＩＬ−８）の産生に対するＰＴＳＯの効果を異なる濃度で評価した。ＩＬ−８は、粘膜炎症性プロセスに関連する好中球湿潤に関与する。
【００３２】
細胞株は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｇｒａｎａｄａ（Ｇｒａｎａｄａ，Ｓｐａｉｎ）のＣｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒａ  Ｃｅｌｕｌａｒ（細胞培養センター）から入手した（ＥＣＡＣＣ参照番号：８６０１０２０２）。細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン及び０．０５ｍＭのメルカプトエタノールを添加した細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０（Ｓｉｇｍａ）中で、加湿環境下、３７℃、５％二酸化炭素（ＣＯ２）で培養した。細胞を２４ウェルプレートでコンフルエントまで培養し、異なる濃度の化合物（０．１〜２５μＭのＰＴＳＯ）とともに予め２４時間インキュベートし、１ｎｇ／ｎｌのＩＬ−１βで刺激した。２４時間後、上清を回収し、１．０００ｇで１０分間遠心分離にかけ、次いで、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってＩＬ−１βレベルを評価するために、−８０℃で保存した。異なる濃度のＰＴＳＯの細胞生存率に対する効果について、メチルチアゾールテトラゾリウム（ＭＴＴ）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価した。
【００３３】
実施例３：
ＰＴＳＯのヒト白血病細胞株に対する免疫調節効果を本実施例にて評価する。
【００３４】
使用した細胞株は、Ｃｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｉｖｏｓ  Ｃｅｌｕｌａｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｇｒａｎａｄａ（Ｇｒａｎａｄａ，Ｓｐａｉｎ）から入手した、ＪＵＲＫＡＴ  Ｅ６．１であった（ＥＣＡＣＣ参照番号：８８０４２８０３）。細胞株由来のＴ細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン及び０．０５ｍＭのメルカプトエタノールを添加した細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０中で、加湿環境下、３７℃、５％二酸化炭素（ＣＯ２）で培養した。細胞を２４ウェルプレートで５００，０００細胞／ｍＬの密度で培養し、異なる濃度の化合物（０．１〜２５μＭのＰＴＳＯ）とともに予め２及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を４０ｎＭのイオノマイシン及び０．５μＭのＰＭＡで刺激した。２４時間後、上清を回収し、１．０００ｇで１０分間遠心分離にかけ、次いで、ＥＬＩＳＡ法（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってＩＦＮ−γレベルを評価するために、−８０℃で保存した。
【００３５】
実施例の結果
図３に示す通り、これらの結果により、ＰＴＳＯが用量依存的にＩＬ−１βの産生を減らすことができることが示された。
【００３６】
図４は、ＰＴＳＯのＩＬ−６産生調節の性能を示す。
【００３７】
図５には、ヒト結腸腺癌細胞（ＣＡＣＯ−２）におけるインターロイキン８の産生のＰＴＳＯの免疫調節活性について示した。
【００３８】
最後に、図６は、ヒト白血病由来のＴ細胞におけるインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）産生の免疫機能の調節を示している。
【００３９】
生存率アッセイにより、２５μＭまでのＰＴＳＯの濃度では、ＴＨＰ−１、ＣＡＣＯ−２及びＪＵＲＫＡＴの細胞生存率に有意な影響を与えないことが明確に示された。したがって、サイトカイン産生について明示された効果は、細胞生存率に対する化合物の作用に起因すると考えることはできない。したがって、当該効果は、あらゆる細胞傷害性作用に関係しない化合物の免疫調節活性を示している。
【００４０】
本出願にて本発明を詳細に説明し、その実施形態を参照してきたが、以下に添付する特許請求の範囲に定義する本発明の範囲から逸脱することなく、変更及び変形が可能であることは明らかである。
【図１】
2017519717.tif 000003
【図２Ａ】
2017519717.tif 000004
【図２Ｂ】
2017519717.tif 000005
【図２Ｃ】
2017519717.tif 000006
【図３】
2017519717.tif 000007
【図４】
2017519717.tif 000008
【図５】
2017519717.tif 000009
【図６】
2017519717.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成27年9月23日(2015.9.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫学に関し、より具体的には、ヒトにおける免疫応答の調節に関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫学は、身体の自然防御系に関連する全ての側面の研究を扱う生物医学科学である。免疫系の正常な機能は、ヒトの健康に極めて重量である。特定の物質を適用することによって、免疫応答の制御に干渉することができる。免疫調節は、所与の媒介物質によってもたらされる、免疫防御系を誘導する自己制御プロセスに対する作用を指す。アザチオプリン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート、シクロスポリン、レバミゾール及びサリドマイドなどの多くの化合物が免疫調節剤として用いられており、免疫応答の最適化、全般的な健康状態の改善及び所与の疾患の罹患リスクの低減が可能である。
【０００３】
免疫調節剤は、免疫応答の阻害又は活性化によって、免疫抑制剤又は免疫促進剤のように作用し得る。免疫抑制剤は、炎症性疾患及び自己免疫疾患の治療に役立つのに対して、免疫促進剤は、慢性の感染症、免疫不全疾患又は更に癌の人々の免疫機能を改善することができる。
【０００４】
免疫調節剤は、免疫グロブリン合成の増加を介して特異的免疫応答を調節することによって、又は可溶性メディエータの産生の制御を介して自然免疫応答を調節することによって、免疫系の２つのレベルで作用することができる。第１の場合、免疫調節剤は、免疫アジュバントで生じるように、特定の抗原に対する免疫反応をもたらす。これらは、免疫応答をより効果的に、より早く、強く、長く続くようにする化学的又は生物学的調製剤である。免疫アジュバントは、アクセサリー細胞及び他の補助刺激分子の活性化及び動員を介して免疫応答を誘発するプロセスにおいて、決定的な役割を果たす。自然免疫応答では、免疫調節剤は、サイトカイン合成の制御で生じるように、所与の抗原による事前の活性化を必要とすることなく、当該応答の刺激又は抑制を生じさせる。
【０００５】
サイトカインは、体内でホルモン調節因子として作用する、ペプチド、タンパク質又は糖タンパク質の多様な群である。これらは、侵入因子に対する防御機構を制御することによって、又は免疫応答性細胞の炎症反応若しくは活性化の開始などの免疫調節プロセスを起動させることによって、自然免疫応答にて必要不可欠な役割を果たす。自然免疫応答に関与する主なサイトカインのいくつかは、インターロイキン−１、インターロイキン−６、インターロイキン−８、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ−α）又はインターフェロンである。
【０００６】
今日、臨床診療又は機能性栄養品分野において、安全かつ効果的な免疫応答を引き起こすことができる、新しく、より強力で安全な免疫調節化合物の開発がますます必要とされている。
【発明の概要】
【０００７】
本発明は、ヒトにおける免疫機能を調節するための製品を得るための新規かつ非自明の方法を提供する、治療用組成物に関する。ＰＴＳＯ化合物は、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒを有し、式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である。ＰＴＳＯに基づく化合物を選択したら、そのＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。
【０００８】
別の用途形態において、ＰＴＳＯの量は、ＰＴＳＯに基づく化合物を形成するために選択され得る。ＰＴＳＯに基づく化合物を選択したら、そのＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。
【０００９】
免疫応答を調節するために、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）を有するプロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）をヒトに投与することができる。
【００１０】
他の適用形態において、慢性感染症、免疫不全疾患、癌、多数の炎症性腸疾患、及び他の慢性自己免疫性又は炎症性の状態又は疾患を治療及び／又は予防するために、ＰＴＳＯ製品（したがって、ＰＴＳＯに基づく化合物）をヒトに投与することができる。
【００１１】
本発明の更なる他の態様については、以下の説明において部分的に記載され、当該説明において部分的に割愛されるか、あるいは本発明を実施する際に見出され得る。本発明の態様は、添付の特許請求の範囲に記載される要素及び特定の組み合わせを用いることによって実施され、達成される。上述の一般的な説明及び以下に述べる詳細な説明は、いずれも例示的かつ説明的なものにすぎず、特許請求される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
本明細書に組み込まれるとともにその一部でもある添付図面は、本発明の実施形態を例示し、その説明とともに本発明の原理を説明する役割を果たすものである。本明細書に例示される実施形態は、現時点での好ましい実施形態である。ただし、本発明は、図示する正確な配置又は手段に限定されないことを理解されたい。
【００１３】
【図１】ヒトの免疫応答を調節するための方法の絵図を示す。
【図２Ａ】ヒトの免疫機能を調節するための方法を例示するフローチャートを示す。
【図２Ｂ】本発明の別の適用における、ＰＴＳＯの免疫調節剤としての使用を例示するフローチャートを示す。
【図２Ｃ】本発明の別の適用における、ＰＴＳＯの免疫調節剤としての使用を例示するフローチャートを示す。
【図３】ＩＬ−１β産生調節に対する用量依存的なＰＴＳＯの効果を示す棒グラフを示す。
【図４】ＩＬ−６産生調節に対するＰＴＳＯの効果を示す。
【図５】ヒト結腸腺癌（ＣＡＣＯ−２）細胞におけるサイトカインＩＬ−８の産生に関するＰＴＳＯの免疫調節活性を示す。
【図６】ヒト白血病細胞株におけるインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）産生の調節を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明は、免疫調節化合物の適用のための方法について記載する。具体的には、本発明の一適用形態として、ＰＴＳＯ製品は、ＰＴＳＯ製品に組み込まれるＰＴＳＯに基づく化合物を得るように、ＰＴＳＯの量を選択することによって使用することができる。ＰＴＳＯに基づく化合物は、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）を有するＰＴＳＯを含み得る。次いで、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込んで、選択した量のＰＴＳＯを含有するＰＴＳＯに基づく化合物を生成することができる。ＰＴＳＯの選択される量は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含有する、ＰＴＳＯ製品の用量（各適用にて）に必要な量である。ＰＴＳＯ製品は、慢性感染症、免疫不全疾患、癌及び全身性炎症疾患及び炎症性腸疾患を予防及び治療するために、異なる病理学的プロセスの免疫応答を改善する免疫調節剤としてヒトに投与することができる。
【００１５】
更なる例示として、図１は、免疫応答を調節するプロセスを図で表している。図１に示す通り、ＰＴＳＯ１５０は、健康な個体又は病気の個体１０５に投与され得る。ＰＴＳＯ１５０（したがって、ＰＴＳＯ製品を介したＰＴＳＯに基づく化合物）の投与１１５は、注入１１５Ａ、経口投与用薬剤１１５Ｂへの組み込み、非経口的投与用薬剤１１５Ｃへの組み込みによって、製品及び／若しくは食品サプリメント１１５Ｄへの組み込みによって、又は栄養補助食品１１５Ｅへの組み込みによってなされ得る。ＰＴＳＯ１５０の継続的投与後、ヒトにおける免疫応答が改善されることになる。
【００１６】
図２Ａは、ヒトの免疫機能が調節されるプロセスを例示するフローチャートを示している。ブロック２２０から始まり、投与のためのＰＴＳＯに基づく化合物中のＰＴＳＯの所望の濃度が決定される。ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。本発明の異なる適用形態において、用量は、０．０１〜１．０００ｍｇを含み得る。更に別の異なる適用では、用量は、０．５〜５５０ｍｇを含み得る。
【００１７】
ブロック２３０に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物（したがって、ＰＴＳＯ自体）を食品及び／若しくは食品サプリメント、栄養補助食品並びに／又は薬剤などのＰＴＳＯ製品に組み込むことに関する決定がなされ得る。ＰＴＳＯに基づく化合物は、それ自体を投与することができること（ＰＴＳＯ単独、他の添加剤なし）は言及すべき点である。次いで、ブロック２４０に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物（したがって、ＰＴＳＯ製品）をどのように投与するかについての決定がなされ得る。例えば、ＰＴＳＯに基づく化合物は、注入又は経口投与することができる。この後、ブロック２５０に示すように、個体の免疫機能を調節して、慢性感染症、免疫不全疾患、癌、全身性炎症疾患又は炎症性腸疾患、及び慢性自己免疫性炎症の状態及び疾患を治療及び／又は予防するために、ＰＴＳＯに基づく化合物を投与することができる。
【００１８】
ＰＴＳＯは次式に相当する。
Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ
式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である。ＰＴＳＯはまた、ジプロピルプロピルチオスルホン酸、プロピルプロパンチオスルホン酸、又は１−プロピルスルホニルスルファニルプロパン（ＣＡＳ番号１１１３−１３−９）として知られることは言及すべき点である。
【００１９】
サイトカイン産生及び他のマーカの産生の両方の調節を含み得る免疫機能の調節に加えて、慢性感染症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）などの免疫不全疾患、癌、多数の炎症性腸疾患及び他の慢性自己免疫疾患を予防又は治療するために、本発明を使用できることも企図されることは言及すべき点である。炎症性疾患には、炎症性腸疾患（例えば、潰瘍性大腸炎及びクローン病）、回腸炎、過敏性腸症候群、セリアック病及び慢性炎症性腸疾患を挙げることができるが、これらに限定されない。加えて、本発明では、ＰＴＳＯを免疫活性化剤として使用できることが企図される。具体的には、ＰＴＳＯを、抗原に対する免疫応答を強化する、及び／又は所望の免疫応答に対する当該応答を調節するために（例えば、既存の免疫を改善する、抗原曝露後の特異的な免疫グロブリン合成を増加させる、及び／又はワクチン接種と組み合わせて又は免疫アジュバントとして使用したときに特異的な免疫応答を増大させるために）使用することができる。
【００２０】
更に、ＰＴＳＯが、単独で又は他の免疫調節製品及び／若しくは薬理学的賦形剤と組み合わせて使用できることは言及すべき点である。ＰＳＴＯは、適用量に応じて、免疫活性効果又は免疫抑制効果をもたらすことができる。例えば、０．１ｍＭの用量では、当該化合物により、ＴＨＰ−１細胞におけるＩＬ−６産生が増加され得るのに対し、対照的に、１ｍＭを超える用量では、当該化合物により、当該インターロイキンの合成に明らかな抑制効果がもたらされる。しかしながら、用量依存比率は、特に、サイトカインの種類及び／又は研究対象の細胞モデルに依存し得る。
【００２１】
更に、ＰＴＳＯは、所与の病状の存在下での免疫応答を調節することができ、健康な個体における免疫応答を改善することができる。ＰＴＳＯは、健康な個体又は病気の個体に、経口的に投与するか、食品及び／若しくは食品サプリメント、栄養補助食品又は薬剤（他の免疫調節薬剤及び製品を含む）に直接組み込むことができる。経口投与のための本発明の適用は、カプセル剤、丸剤、錠剤、散剤、顆粒剤又はエマルション若しくは液状懸濁液（飲料、濃縮果汁又はシロップ）の形態での提供により採用され得る。更に、ＰＴＳＯは、単独で又は薬剤の一部としての注入によって個体に投与することができる。
【００２２】
本発明の別の更なる例示として、図２Ｂは、ヒトにおける免疫応答を調節するためのＰＴＳＯ製品の適用を例示するフローチャートを示す。ブロック２５５にて、ＰＴＳＯの量が選択され得る。ＰＴＳＯの選択される量は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間で、ある用量のＰＴＳＯ製品をもたらす、ＰＴＳＯに基づく化合物を生成するのに有効な用量に相当する。換言すれば、ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく製品を含み得る。
【００２３】
選択した量のＰＴＳＯは、ブロック２８５に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物を所望の濃度で生成するために、ＰＴＳＯに基づく化合物に組み込むことができる。ブロック２９５に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ＰＴＳＯ製品は、経口投与に適した製剤のいずれかに組み込んでよい。例えば、ＰＴＳＯ製品は、カプセル剤、丸剤、粉剤及び／又は顆粒剤の形態で提供することができる。ＰＴＳＯ製品は、液状（水性又は非水性）溶液、エマルション、飲料及び／又はシロップの形態で提供することができる。更に、ＰＴＳＯ製品は、プレフィルドシリンジとして提供することができる。ＰＴＳＯ溶液は、ＰＴＳＯ製品に用いることができる、選択した濃度を有するＰＴＳＯに基づく化合物を含み得、ある用量のＰＴＳＯ製品は、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。ＰＴＳＯ製品がヒトに投与される予定である場合、当該製品は食品等級分子であることは言及すべき点である。
【００２４】
本発明の別の更なる例示として、図２Ｃは、ヒトにおける免疫応答を調節するためのＰＴＳＯ製品の適用を例示するフローチャートを示す。ブロック２９７に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物は、すでに作製されたＰＴＳＯに基づく化合物の群から選択することができる。ブロック２９９に示すように、ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むことができる。ＰＴＳＯ製品は、選択されたＰＴＳＯに基づく化合物に応じて、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の間の量のＰＴＳＯに基づく化合物を含み得る。本明細書に示す通り、ＰＴＳＯ製品は、カプセル剤、丸剤、錠剤、粉剤及び／又は顆粒剤の形態で提供することができる。ＰＴＳＯ製品は、液状（水性又は非水性）溶液、エマルション、飲料及び／又はシロップの形態で提供することができる。更に、ＰＴＳＯ製品は、ＰＴＳＯ溶液が充填されたプレフィルドシリンジとして提供することができる。ＰＴＳＯ溶液は、所望の濃度を有するＰＴＳＯに基づく化合物から作製することができる。ＰＴＳＯ製品は、ヒトに投与され、ヒトによって消費されるので、その分子は食品用途に適するものである。
【００２５】
本発明にて記載されるように、ＰＴＳＯは、それ自体が活性合物であり得、（水性又は非水性）溶液に溶解することができ、かつ／又はＰＴＳＯに基づく化合物を形成するために他の成分と組み合わせることができることは言及すべき点である。次いで、このＰＴＳＯに基づく化合物は、ＰＴＳＯ製品（丸剤、トローチ剤、飲料など）を形成するために、他の免疫調節製品、薬理学的賦形剤などと混合され得る。免疫調節製品、賦形剤などもＰＴＳＯに基づく化合物の一部として添加することができることが許容される。更に、用量は、各回に摂取される薬剤又は治療薬の特定量であることが理解される。
【００２６】
本発明の更なる例示として、以下の実施例を記載する。本発明は、当業者に理解されるように、これらの実施例に排他的に制限されるものではないことは言及すべき点である。
【００２７】
実施例１：
ヒト単球性白血病細胞株（ＴＨＰ−１）におけるＰＴＳＯの免疫抑制活性に関する評価について、本実施例にて検討する。
【００２８】
リポ多糖体（ＬＰＳ）及びホルボール１２−ミリスタート１４−アセタートで活性化させたヒト細胞株（ＴＨＰ−１）中のサイトカイン産生（ＩＬ−１β及びＩＬ−６産生）に対するＰＴＳＯの効果を異なる濃度で評価した。サイトカインＩＬ−１β及びＩＬ−６が種々の炎症状態及び／又は免疫状態における免疫応答にて主要な役割を果たしていることは言及すべき点である。
【００２９】
ヒト細胞株ＴＨＰ−１は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｇｒａｎａｄａ（Ｇｒａｎａｄａ，Ｓｐａｉｎ）のＵｎｉｄａｄ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｉｖｏｓ  Ｃｅｌｕｌａｒｅｓ（細胞培養部）から入手した（ＥＣＡＣＣ参照番号：８８０８１２０１）。細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン及び０．０５ｍＭのメルカプトエタノールを添加した細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０（Ｒｏｓｗｅｌｌ  Ｐａｒｋ  Ｍｅｍｏｒｉａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ  Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ）中で、加湿環境下、３７℃、５％二酸化炭素（ＣＯ２）で培養した。細胞を２４ウェルプレートで５×１０５細胞／ｍＬの密度で培養し、異なる濃度の化合物（０．１〜２５μＭのＰＴＳＯ）とともに予め２４時間インキュベートし、１μｇ／ｍＬのＬＰＳ及び１μＭのホルボール１２−ミリスタート１４−アセタート（ＰＭＡ）で刺激した。２４時間後、上清を回収し、１．０００ｇで１０分間遠心分離にかけた。次いで、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ，ＵＫ）によってＩＬ−１β及びＩＬ−６レベルを評価するために、−８０℃で保存した。
【００３０】
実施例２：
ヒト結腸腺癌細胞（ＣＡＣＯ−２）におけるＰＴＳＯの免疫調節の効果を実施例２にて示す。
【００３１】
ＩＬ−１βで活性化させたヒト結腸直腸腺癌（ＣＡＣＯ−２）細胞株中のインターロイキン８（ＩＬ−８）の産生に対するＰＴＳＯの効果を異なる濃度で評価した。ＩＬ−８は、粘膜炎症性プロセスに関連する好中球湿潤に関与する。
【００３２】
細胞株は、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｇｒａｎａｄａ（Ｇｒａｎａｄａ，Ｓｐａｉｎ）のＣｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｕｒａ  Ｃｅｌｕｌａｒ（細胞培養センター）から入手した（ＥＣＡＣＣ参照番号：８６０１０２０２）。細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン及び０．０５ｍＭのメルカプトエタノールを添加した細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０（Ｓｉｇｍａ）中で、加湿環境下、３７℃、５％二酸化炭素（ＣＯ２）で培養した。細胞を２４ウェルプレートでコンフルエントまで培養し、異なる濃度の化合物（０．１〜２５μＭのＰＴＳＯ）とともに予め２４時間インキュベートし、１ｎｇ／ｎｌのＩＬ−１βで刺激した。２４時間後、上清を回収し、１．０００ｇで１０分間遠心分離にかけ、次いで、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってＩＬ−１βレベルを評価するために、−８０℃で保存した。異なる濃度のＰＴＳＯの細胞生存率に対する効果について、メチルチアゾールテトラゾリウム（ＭＴＴ）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて評価した。
【００３３】
実施例３：
ＰＴＳＯのヒト白血病細胞株に対する免疫調節効果を本実施例にて評価する。
【００３４】
使用した細胞株は、Ｃｅｎｔｒｏ  ｄｅ  Ｃｕｌｔｉｖｏｓ  Ｃｅｌｕｌａｒｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄ  ｄｅ  Ｇｒａｎａｄａ（Ｇｒａｎａｄａ，Ｓｐａｉｎ）から入手した、ＪＵＲＫＡＴ  Ｅ６．１であった（ＥＣＡＣＣ参照番号：８８０４２８０３）。細胞株由来のＴ細胞を、１０％ウシ胎児血清（Ｓｉｇｍａ）、２ｍＭのグルタミン及び０．０５ｍＭのメルカプトエタノールを添加した細胞培養培地ＲＰＭＩ１６４０中で、加湿環境下、３７℃、５％二酸化炭素（ＣＯ２）で培養した。細胞を２４ウェルプレートで５００，０００細胞／ｍＬの密度で培養し、異なる濃度の化合物（０．１〜２５μＭのＰＴＳＯ）とともに予め２及び２４時間インキュベートした。次いで、細胞を４０ｎＭのイオノマイシン及び０．５μＭのＰＭＡで刺激した。２４時間後、上清を回収し、１．０００ｇで１０分間遠心分離にかけ、次いで、ＥＬＩＳＡ法（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によってＩＦＮ−γレベルを評価するために、−８０℃で保存した。
【００３５】
実施例の結果
図３に示す通り、これらの結果により、ＰＴＳＯが用量依存的にＩＬ−１βの産生を減らすことができることが示された。
【００３６】
図４は、ＰＴＳＯのＩＬ−６産生調節の性能を示す。
【００３７】
図５には、ヒト結腸腺癌細胞（ＣＡＣＯ−２）におけるインターロイキン８の産生のＰＴＳＯの免疫調節活性について示した。
【００３８】
最後に、図６は、ヒト白血病由来のＴ細胞におけるインターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）産生の免疫機能の調節を示している。
【００３９】
生存率アッセイにより、２５μＭまでのＰＴＳＯの濃度では、ＴＨＰ−１、ＣＡＣＯ−２及びＪＵＲＫＡＴの細胞生存率に有意な影響を与えないことが明確に示された。したがって、サイトカイン産生について明示された効果は、細胞生存率に対する化合物の作用に起因すると考えることはできない。したがって、当該効果は、あらゆる細胞傷害性作用に関係しない化合物の免疫調節活性を示している。
【００４０】
本出願にて本発明を詳細に説明し、その実施形態を参照してきたが、以下に添付する特許請求の範囲に定義する本発明の範囲から逸脱することなく、変更及び変形が可能であることは明らかである。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトにおける免疫応答を調節するために適用することができるプロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）製品を得るための方法であって、ＰＴＳＯに基づく化合物を形成し、消費可能なＰＴＳＯ製品に組み込むために、活性成分として、式ＲＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）を有するＰＴＳＯの量を選択することと、前記選択した量のＰＴＳＯを含有する前記ＰＴＳＯに基づく化合物を生成した後に、ＰＴＳＯ製品の有効用量で、少なくとも０．０１ｍｇ及び２，０００ｍｇ以下の前記ＰＴＳＯに基づく化合物をＰＴＳＯ製品に組み込むこととを含む、方法。
【請求項２】
丸剤である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項３】
カプセル剤である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項４】
飲料である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項５】
食品サプリメントである、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項６】
栄養補助食品である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項７】
薬剤である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項８】
溶液である、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項９】
ＰＴＳＯ溶液をプレフィルドシリンジに組み込むことを更に含み、前記プレフィルドシリンジが前記ＰＴＳＯ製品である、請求項８に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１０】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯ製品とを混合することを更に含む、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１１】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯに基づく化合物とを混合することを更に含む、請求項１に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１２】
請求項１に記載のヒトにおける免疫応答を調節するために適用することができるプロピルプロパンチオスルホン酸（ＰＴＳＯ）製品を得るための方法であって、ＰＴＳＯ製品に組み込むために、式Ｒ−ＳＯａ−Ｓ−Ｒ（式中、「Ｒ」は、ｎ−プロピル（−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＨ３）基を表し、「ａ」は２である）を有するＰＴＳＯに基づく化合物の量を選択することと、すでに作製されたＰＴＳＯに基づく化合物の群から前記ＰＴＳＯに基づく化合物を選択した後に、前記ＰＴＳＯに基づく化合物を前記ＰＴＳＯ製品に組み込むこととを含む、前記方法。
【請求項１３】
食品サプリメントである、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１４】
栄養補助食品である、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１５】
薬剤である、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１６】
溶液である、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１７】
ＰＴＳＯ溶液をシリンジに組み込んでプレフィルドシリンジを作製することを更に含み、前記プレフィルドシリンジが前記ＰＴＳＯ製品である、請求項１６に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１８】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯ製品とを混合することを更に含む、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【請求項１９】
１つ又は複数の免疫調節製品と前記ＰＴＳＯに基づく化合物とを混合することを更に含む、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。 
【請求項２０】
ある用量の前記ＰＴＳＯ製品が、少なくとも０．０１ｍｇから２，０００ｍｇ以下の量の前記ＰＴＳＯに基づく化合物を含むことを更に含む、請求項１２に記載のＰＴＳＯ製品。
【国際調査報告】
2017519717.tif 000011
2017519717.tif 000012
2017519717.tif 000013
2017519717.tif 000014
2017519717.tif 000015
2017519717.tif 000016
2017519717.tif 000017
2017519717.tif 000018