(57)【要約】  ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを同定し、使用する方法が提供される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
がんを治療する方法であって、がんを有する対象に少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効量を投与することを含む方法。
【請求項２】
対象における活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法であって、対象に少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを投与することを含む方法。
【請求項３】
対象に化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤及び抗腫瘍組成物から選択される治療剤の有効量を投与することをさらに含む、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
抗腫瘍組成物が免疫刺激剤を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
免疫刺激剤が以下のカテゴリー：
ａ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞で見出される免疫刺激分子などの、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニスト；
ｂ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞で見出される免疫刺激分子などの、共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニスト；
ｃ）ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ガレクチン１、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＬＴ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＫＩＲ、アデノシンＡ２Ａ受容体、ＰＩ３Ｋデルタ又はＩＤＯのアンタゴニスト；
ｄ）Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ２８Ｈ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＦＮα、ＳＴＩＮＧのアゴニスト、又はＴＬＲ２／４アゴニストなどのＴｏｌｌ様受容体アゴニスト；
ｅ）Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）及びＢ７−Ｈ６などの膜結合タンパク質のＢ７ファミリーのメンバーに結合する薬剤；
ｆ）ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｅＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＬ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ又はＮＧＦβなどの、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバー又はＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーに結合する共刺激若しくは共阻害分子に結合する薬剤；
ｇ）ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦなどの、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインに拮抗するか又はそれを阻害する薬剤；
ｈ）ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＦＮαなどの、Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニスト；並びに
ｉ）ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２又はＣＣＲ４などのケモカインのアンタゴニスト
の１つ又は複数に含まれる薬剤から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法であって、Ｔ細胞を少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと接触させることを含む方法。
【請求項７】
Ｔ細胞がインビトロである、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストが、活性化Ｔ細胞の増殖の抑制を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％低減する、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
活性化Ｔ細胞がＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
活性化Ｔ細胞がＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストがＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子がモノマーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子がダイマーである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストがＳＬＡＭＦ１抗体である、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記抗体が二重特異性抗体又は単鎖抗体である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
前記抗体が抗体断片である、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストが小分子又は小ペプチドである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを同定する方法であって、
ｃ）活性化Ｔ細胞を候補分子及びＳＬＡＭＦ１分子と接触させることであって、ＳＬＡＭＦ１分子はＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子を含む、接触させること；並びに
ｄ）活性化Ｔ細胞の増殖を検出すること
を含み、候補分子の非存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制と比較したときの、候補分子の存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制の低減は、その候補分子がＳＬＡＭＦ１アンタゴニストであることを指し示す方法。
【請求項２１】
候補分子の存在下において、活性化Ｔ細胞の増殖の抑制が、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％低減される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
候補分子がＳＬＡＭＦ１に結合する、請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
候補分子がＳＬＡＭＦ１に結合する抗体である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
候補分子が小分子である、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
候補分子が小ペプチドである、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
活性化Ｔ細胞が活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項２０から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
活性化Ｔ細胞がＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ＳＬＡＭＦ１抗体がＳＬＡＭＦ１アンタゴニストであるかどうかを判定する方法であって、
ｃ）活性化Ｔ細胞をＳＬＡＭＦ１抗体及びＳＬＡＭＦ１分子と接触させることであって、ＳＬＡＭＦ１分子は、ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子を含む、接触させること；並びに
ｄ）活性化Ｔ細胞の増殖を検出すること
を含み、ＳＬＡＭＦ１抗体の非存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制と比較したときの、ＳＬＡＭＦ１抗体の存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制の低減は、そのＳＬＡＭＦ１抗体がＳＬＡＭＦ１アンタゴニストであることを指し示す方法。
【請求項２９】
ＳＬＡＭＦ１抗体の存在下において、活性化Ｔ細胞の増殖の抑制が、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％低減される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
活性化Ｔ細胞が活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】
活性化Ｔ細胞がＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
対象におけるがんを治療するためのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの使用。
【請求項３３】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストがＳＬＡＭＦ１抗体である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体から選択される、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
抗体が抗体断片である、請求項３３又は３４に記載の使用。
【請求項３６】
抗体断片が、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２から選択される、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
抗体が二重特異性抗体又は単鎖抗体である、請求項３３に記載の使用。
【請求項３８】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストがＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子である、請求項３２に記載の使用。
【請求項３９】
ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子がモノマーである、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子がダイマーである、請求項３８に記載の使用。
【請求項４１】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストが小分子又は小ペプチドである、請求項３２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は２０１４年１０月２３日に出願の米国特許仮出願第６２／０６７６３８号及び２０１５年５月１日に出願の米国特許仮出願第６２／１５５８１０号の優先権の利益を主張し、これらのそれぞれはあらゆる目的で出典明示によりその全体が本明細書に援用される。
【０００２】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを同定し、使用する方法が提供される。そのような方法には、がんを治療する方法が限定されずに含まれる。ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストには、ＳＬＡＭＦ１に結合する抗体が限定されずに含まれる。
【背景技術】
【０００３】
がんでの遺伝子変化は、抗腫瘍免疫を媒介することができる、抗原の多様なセットを提供する。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を通しての抗原認識はＴ細胞応答を開始し、それは活性化シグナルと阻害シグナルの間の平衡によって調節される。阻害シグナル、又は「免疫チェックポイント」は、正常組織で自己免疫を阻止する重要な役割を演ずる。免疫チェックポイントタンパク質の上方制御は、がんが抗腫瘍免疫を回避することを可能にする。２つの免疫チェックポイントタンパク質、すなわち細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ４）及びプログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ１）が、臨床がん免疫療法の中心であり続けている。抗ＣＴＬＡ４抗体が転移性メラノーマの治療のために承認され、現在他のがんについて臨床治験中である。抗ＰＤ−１抗体、及びＰＤ−１のためのリガンドを対象とする抗ＰＤ−Ｌ１抗体も、現在臨床開発中である。
【０００４】
Ｔ細胞活性化及び抑制に関与するさらなるタンパク質の同定は、Ｔ細胞応答のさらなる理解を助け、治療的に有効で安全な治療法の選択、患者選択及びコンパニオン診断薬のためのバイオマーカー、併用療法の標的並びにがん免疫療法剤の開発のための新しい標的を含む、薬物開発に多くの利点を提供すると予想される。
【発明の概要】
【０００５】
一部の実施態様では、がんの治療方法が提供される。一部の実施態様では、がんの治療方法は、がんを有する対象に少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効量を投与することを含む。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法が提供される。一部の実施態様では、方法は、対象に少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを投与することを含む。
【０００６】
一部の実施態様では、がんを治療し、及び／又は活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法は、対象に化学療法剤、抗血管新生剤、増殖阻害剤及び抗腫瘍組成物から選択される治療剤の有効量を投与することをさらに含む。一部の実施態様では、抗腫瘍組成物は、免疫刺激剤を含む。一部の実施態様では、免疫刺激剤は、以下のカテゴリー：
ａ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞で見出される免疫刺激分子などの、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニスト；
ｂ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞で見出される免疫刺激分子などの、共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニスト；
ｃ）ＣＴＬＡ４、ＬＡＧ−３、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ガレクチン１、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＬＴ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＫＩＲ、アデノシンＡ２Ａ受容体、ＰＩ３Ｋデルタ又はＩＤＯのアンタゴニスト；
ｄ）Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ２８Ｈ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＦＮα、ＳＴＩＮＧのアゴニスト、又はＴＬＲ２／４アゴニストなどのＴｏｌｌ様受容体アゴニスト；
ｅ）Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）及びＢ７−Ｈ６などの膜結合タンパク質のＢ７ファミリーのメンバーに結合する薬剤；
ｆ）ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｅＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＬ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ又はＮＧＦβなどの、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバー又はＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーに結合する共刺激若しくは共阻害分子に結合する薬剤；
ｇ）ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦなどの、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインに拮抗するか又はそれを阻害する薬剤；
ｈ）ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＦＮαなどの、Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニスト；並びに
ｉ）ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２又はＣＣＲ４などのケモカインのアンタゴニスト
の１つ又は複数に含まれる薬剤から選択される。
【０００７】
一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法であって、Ｔ細胞を少なくとも１つのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと接触させることを含む方法が提供される。一部のそのような実施態様では、Ｔ細胞はインビトロである。
【０００８】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、活性化Ｔ細胞の増殖の抑制を少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％低減する。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、ＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、ＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である。
【０００９】
本明細書に記載される実施態様のいずれでも、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、ＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子であってもよい。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はモノマーである。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はダイマーである。
【００１０】
本明細書に記載される実施態様のいずれでも、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、ＳＬＡＭＦ１抗体であってもよい。一部の実施態様では、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体から選択される。一部の実施態様では、抗体は二重特異性抗体又は単鎖抗体である。一部の実施態様では、抗体は抗体断片である。一部の実施態様では、抗体断片は、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２から選択される。
【００１１】
本明細書に記載される実施態様のいずれでも、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、小分子又は小ペプチドであってもよい。
【００１２】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを同定する方法が提供される。一部の実施態様では、この方法は：
ａ）活性化Ｔ細胞を候補分子及びＳＬＡＭＦ１分子と接触させることであって、ＳＬＡＭＦ１分子は、ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子を含む、接触させること；並びに
ｂ）活性化Ｔ細胞の増殖を検出すること
を含み、候補分子の非存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制と比較したときの、候補分子の存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制の低減は、その候補分子がＳＬＡＭＦ１アンタゴニストであることを指し示す。一部の実施態様では、候補分子の存在下において、活性化Ｔ細胞の増殖の抑制は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％低減される。一部の実施態様では、候補分子はＳＬＡＭＦ１に結合する。一部の実施態様では、候補分子は、ＳＬＡＭＦ１に結合する抗体である。一部の実施態様では、候補分子は、小分子である。一部の実施態様では、候補分子は、小ペプチドである。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、ＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である。
【００１３】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体がＳＬＡＭＦ１アンタゴニストであるかどうかを判定する方法が提供される。一部の実施態様では、この方法は：
ａ）活性化Ｔ細胞をＳＬＡＭＦ１抗体及びＳＬＡＭＦ１分子と接触させることであって、ＳＬＡＭＦ１分子は、ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子を含む、接触させること；並びに
ｂ）活性化Ｔ細胞の増殖を検出すること
を含み、ＳＬＡＭＦ１抗体の非存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制と比較したときの、ＳＬＡＭＦ１抗体の存在下における活性化Ｔ細胞の増殖の抑制の低減は、そのＳＬＡＭＦ１抗体がＳＬＡＭＦ１アンタゴニストであることを指し示す。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体の存在下において、活性化Ｔ細胞の増殖の抑制は、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％又は少なくとも８０％低減される。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、ＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞である。
【００１４】
一部の実施態様では、対象でがんを治療するためのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの使用が提供される。一部のそのような実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、ＳＬＡＭＦ１抗体である。一部の実施態様では、抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体から選択される。一部の実施態様では、抗体は抗体断片である。一部の実施態様では、抗体断片は、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２から選択される。一部の実施態様では、抗体は二重特異性抗体又は単鎖抗体である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、ＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はモノマーである。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はダイマーである。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、小分子又は小ペプチドである。
【００１５】
本明細書に記載されるいずれの実施態様又はそのいずれの組合せも、本明細書に記載される本発明のあらゆる方法に適用される。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１−１】ＰＤ−Ｌ１が、活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の増殖を抑制することを示す図である。ＣＤ３＋Ｔ細胞は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで６日間活性化させ、ＩＬ−２中で追加の４日間静止させた。静止後、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬで開始；１：３の希釈）でコーティングしたプレートの上でＴ細胞を３７℃で３日間再刺激した。細胞を収集する１２−１６時間前に細胞をＥｄｕでパルス処理し、ＦＡＣＳによって測定したときのＥｄｕを取り込んだ細胞の数によって増殖の変化を数量化した。各パネルは、異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を使用した結果を示す。
【図１−２】ＰＤ−Ｌ１が、活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の増殖を抑制することを示す図である。ＣＤ３＋Ｔ細胞は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで６日間活性化させ、ＩＬ−２中で追加の４日間静止させた。静止後、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬで開始；１：３の希釈）でコーティングしたプレートの上でＴ細胞を３７℃で３日間再刺激した。細胞を収集する１２−１６時間前に細胞をＥｄｕでパルス処理し、ＦＡＣＳによって測定したときのＥｄｕを取り込んだ細胞の数によって増殖の変化を数量化した。各パネルは、異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を使用した結果を示す。
【図１−３】ＰＤ−Ｌ１が、活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の増殖を抑制することを示す図である。ＣＤ３＋Ｔ細胞は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで６日間活性化させ、ＩＬ−２中で追加の４日間静止させた。静止後、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬで開始；１：３の希釈）でコーティングしたプレートの上でＴ細胞を３７℃で３日間再刺激した。細胞を収集する１２−１６時間前に細胞をＥｄｕでパルス処理し、ＦＡＣＳによって測定したときのＥｄｕを取り込んだ細胞の数によって増殖の変化を数量化した。各パネルは、異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を使用した結果を示す。
【図２−１】ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃが、活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の増殖を抑制することを示す図である。ＣＤ３＋Ｔ細胞は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで６日間活性化させ、ＩＬ−２中で追加の４日間静止させた。静止後、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬで開始；１：３の希釈）でコーティングしたプレートの上でＴ細胞を３７℃で３日間再刺激した。細胞を収集する１２−１６時間前に細胞をＥｄｕでパルス処理し、ＦＡＣＳによって測定したときのＥｄｕを取り込んだ細胞の数によって増殖の変化を数量化した。各パネルは、異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を使用した結果を示す。
【図２−２】ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃが、活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の増殖を抑制することを示す図である。ＣＤ３＋Ｔ細胞は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで６日間活性化させ、ＩＬ−２中で追加の４日間静止させた。静止後、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬで開始；１：３の希釈）でコーティングしたプレートの上でＴ細胞を３７℃で３日間再刺激した。細胞を収集する１２−１６時間前に細胞をＥｄｕでパルス処理し、ＦＡＣＳによって測定したときのＥｄｕを取り込んだ細胞の数によって増殖の変化を数量化した。各パネルは、異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を使用した結果を示す。
【図２−３】ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃが、活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の増殖を抑制することを示す図である。ＣＤ３＋Ｔ細胞は抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８ビーズで６日間活性化させ、ＩＬ−２中で追加の４日間静止させた。静止後、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬで開始；１：３の希釈）でコーティングしたプレートの上でＴ細胞を３７℃で３日間再刺激した。細胞を収集する１２−１６時間前に細胞をＥｄｕでパルス処理し、ＦＡＣＳによって測定したときのＥｄｕを取り込んだ細胞の数によって増殖の変化を数量化した。各パネルは、異なるドナーからのＣＤ３＋Ｔ細胞を使用した結果を示す。
【図３】ヒト組織におけるＳＬＡＭＦ１  ｍＲＮＡの発現を示す図である。
【図４】ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤは、インビボでＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍の成長を変えることを示す図である。Ａ．Ｃ５７ＢＬ／６マウスを、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤの構成的、全身性発現を発現するように誘導した。ＥＣＤを発現するか又はコントロールとして食塩水で処理したマウスをＥ．Ｇ７−ＯＶＡマウスＴ細胞リンパ腫細胞で接種し、腫瘍体積を測定した。ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを発現するマウスで成長させた腫瘍は、１５日目及び１８日目に食塩水処理マウスのそれらより有意に大きかった（＊ｐ＜０．０５）。Ｂ．１８日目に調査した個々のＥ．Ｇ７−ＯＶＡ腫瘍体積を示す。統計的有意性は、両側性の対応のないｔ検定を通して判定した。
【図５Ａ−Ｂ】抗ＳＬＡＭＦ１ブロッキング抗体は、Ａ２０  ＡＰＣアッセイでＴ細胞阻害を軽減することを示す図である。Ａ．Ａ２０人工ＡＰＣアッセイの概略図を示す。Ｂ．Ａ２０細胞へのＳＬＡＭＦ１の導入は、ＯＣＡペプチドによって刺激されるＴ細胞増殖を低減する。
【図５Ｃ】抗ＳＬＡＭＦ１ブロッキング抗体は、Ａ２０  ＡＰＣアッセイでＴ細胞阻害を軽減することを示す図である。Ｃ．ＳＬＡＭＦ１によるＴ細胞増殖の阻害は、抗ＳＬＡＭＦ１抗体をブロックすることによって覆される。
【図６】抗ＳＬＡＭＦ１ブロッキング抗体は、Ｔ２細胞と共にインキュベートしたヒトＣＤ８＋細胞からのインターフェロンガンマ（ＩＮＦγ）の放出を刺激することを示す図である。Ａ．ポリクローナル抗ＳＬＡＭＦ１抗体は、インターフェロンガンマの用量依存的放出を刺激する。Ｂ．モノクローナル抗ＳＬＡＭＦ１抗体も、インターフェロンの放出を刺激する。Ｃ．ポリクローナル抗ＳＬＡＭＦ１抗体とのＣＤ８細胞でなくＴ２細胞のプレインキュベーションは、ＩＦＮγ放出を誘導する。Ｄ．抗ＳＬＡＭＦ１ブロッキング抗体によるＩＮＦγ放出の刺激は、抗ＣＤ３２抗体によってブロックされない。
【図７】ＳＬＡＭＦ１は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞の上で発現されることを示す図である。Ａ．ＳＬＡＭＦ１は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞のサブセットの上で発現される。Ｂ．ＳＬＡＭＦ１は、Ｔ調節細胞の上で発現される。Ｃ．ＰＤ−１及びＳＬＡＭＦ１の両方は、大多数のＣＤ４  Ｔ細胞の上で発現される。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明者は、ＳＬＡＭＦ１を活性化Ｔ細胞のサプレッサーとして同定した。ＳＬＡＭＦ１は、活性化ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の上で発現され、それは、２つの細胞外免疫グロブリンドメインを有する９つのタンパク質のファミリーに属し、その大半は細胞内免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を有する。いかなる特定の理論によっても束縛されることを意図しないが、ＳＬＡＭＦ１はＴ細胞と相互作用することができ、不活性の状態（例えば、アネルギー性又は免疫寛容状態）を誘導する阻害シグナルをＴ細胞にもたらすことができる。したがって、例えば阻害抗体又は可溶型ＳＬＡＭＦ１によるＳＬＡＭＦ１活性の阻害は、がん細胞の免疫媒介性の死滅を増強することができる。標的化分子には、ＳＬＡＭＦ１に結合してＳＬＡＭＦ１活性をブロックする抗体、並びにＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質、例えば、モノマーＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質が含まれる。そのような標的化分子は、がん治療のための治療剤として提供される。
【００１８】
特許出願及び公開を含む本明細書で引用される全ての参考文献は、出典明示により本明細書で完全に援用される。
【００１９】
本明細書で用いられるセクション見出しは体系づけだけが目的であり、記載される対象発明を限定するものと解釈するべきでない。
【００２０】
定義
特記されない限り、本発明に関連して使用される科学的及び専門用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈から特に必要とされない限り、単数形用語は複数形を含み、複数形用語は単数形を含むものとする。
【００２１】
組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養及び形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）、酵素反応に関連して使用される例示的な技術、並びに精製技術は、当該技術分野で公知である。多くのそのような技術及び手法は、例えば、中でも、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（3版、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.（2001年））に記載される。さらに、化学合成、化学分析、薬学的調製物、製剤及び送達並びに患者の治療のための例示的な技術も、当該技術分野で公知である。
【００２２】
本出願では、「又は」の使用は、特に明記しない限り「及び／又は」を意味する。複数の従属クレームとの関連で、「又は」の使用は、１を超える前出の独立又は従属クレームを択一的にだけ指す。別途指示がない限り、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」は「限定されずに含む」と同じ意味を有し、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」は「限定されずに含む」と同じ意味を有し、用語「含んでいる」は「限定されずに含んでいる」と同じ意味を有する。同様に、用語「例えば」は、用語「例えば、限定されずに」と同じ意味を有する。さらに、「要素」又は「成分」などの用語は、特記されない限り、１つの単位を含む要素及び成分並びに１を超えるサブユニットを含む要素及び成分を包含する。
【００２３】
以下の用語は、本開示に従って利用される場合、別途指示がない限り以下の意味を有すると理解されるものとする。
【００２４】
用語「核酸分子」及び「ポリヌクレオチド」は互換的に使用することができ、ヌクレオチドのポリマーを指す。そのようなヌクレオチドのポリマーは、天然及び／又は非天然のヌクレオチドを含有することができ、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びＰＮＡが限定されずに含まれる。「核酸配列」は、核酸分子又はポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの線状の配列を指す。
【００２５】
用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すものとして互換的に使用され、最小長に限定されない。そのようなアミノ酸残基のポリマーは、天然又は非天然のアミノ酸残基を含有することができ、アミノ酸残基のペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、トリマー及び多量体を限定されずに含むことができる。完全長タンパク質及びその断片は、この定義に包含される。この用語は、ポリペプチドの発現後の修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本発明の目的のために、「ポリペプチド」は、そのタンパク質が所望の活性を維持する限り、天然の配列への改変、例えば欠失、付加及び置換（一般的に本来保存的な）を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的突然変異誘発を通してのように故意であってもよく、又は、そのタンパク質を生成する宿主の突然変異若しくはＰＣＲ増幅によるエラーを通してなどのように偶然であってもよい。「小ペプチド」は、５０以下のアミノ酸を有するペプチドを指す。一部の実施態様では、小ペプチドは、４０以下、又は３５以下、又は３０以下、又は２５以下のアミノ酸を有する。一部の実施態様では、小ペプチドは、１０から５０アミノ酸又は１５から３０アミノ酸を有する。
【００２６】
「天然配列」のポリペプチドは、天然に見出されるポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するポリペプチドを含む。したがって、天然配列のポリペプチドは、任意の哺乳動物からの天然に存在するポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。そのような天然配列のポリペプチドは自然から単離することができるか、又は組換え若しくは合成手段によって生成することができる。用語「天然配列」のポリペプチドは、ポリペプチドの天然に存在するトランケーション又は分泌された形態（例えば、細胞外ドメイン配列）、ポリペプチドの天然に存在する変異形態（例えば、選択的にスプライシングされた形態）及び天然に存在する対立遺伝子変異体を具体的に包含する。
【００２７】
ポリペプチド「変異体」は、配列を整列させ、最大の配列同一性パーセントを達成するために必要に応じてギャップを導入した後に、また、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と考えずに、天然配列のポリペプチドと少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する生物学的に活性なポリペプチドを意味する。そのような変異体には、例えば、ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端で１つ又は複数のアミノ酸残基が付加されるか又は欠失しているポリペプチドが含まれる。一部の実施態様では、変異体は、少なくとも約８０％のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施態様では、変異体は、少なくとも約９０％のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施態様では、変異体は、天然配列のポリペプチドと少なくとも約９５％のアミノ酸配列同一性を有する。一部の実施態様では、変異体は、天然配列のポリペプチドと少なくとも約９７％のアミノ酸配列同一性を有する。
【００２８】
本明細書で用いるように、ペプチド、ポリペプチド又は抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列を整列させ、最大の配列同一性パーセントを達成するために必要に応じてギャップを導入した後に、また、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と考えずに、特定のペプチド又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率と規定される。アミノ酸配列パーセント同一性を判定するためのアラインメントは、当該分野の技術の範囲内である様々な方法で、例えば公開されているコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適当なパラメータを判断することができる。
【００２９】
用語「シグナル伝達リンパ球活性化分子」及び「ＳＬＡＭＦ１」は互換的に使用され、別途指示がない限り、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物の供与源からの任意の天然のＳＬＡＭＦ１を含む。本用語は、完全長のプロセシングされていないＳＬＡＭＦ１、並びに、活性（例えば、活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞の抑制）を保持する、細胞でのプロセシングからもたらされるＳＬＡＭＦ１の任意の形態又は任意のその断片を含む。本用語は、ＳＬＡＭＦ１の天然に存在する変異体、例えばスプライスバリアント又は対立遺伝子変異体も包含する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１は、配列番号１のアミノ酸配列（前駆体、シグナルペプチドを有する）又は配列番号２のアミノ酸配列（成熟、シグナルペプチドなし）を有するヒトＳＬＡＭＦ１である。
【００３０】
用語「ＳＬＡＭＦ１」は、完全長ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１断片及びＳＬＡＭＦ１変異体も含む。本明細書で用いるように、用語「完全長ＳＬＡＭＦ１」は、完全長のプロセシングされていないＳＬＡＭＦ１、並びに、活性（例えば、活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞の抑制）を保持する、細胞でのプロセシングからもたらされるＳＬＡＭＦ１の任意の形態又は任意のその断片を指す。一部の実施態様では、完全長ヒトＳＬＡＭＦ１は、配列番号１（前駆体、シグナルペプチドを有する）又は配列番号２（成熟、シグナルペプチドなし）のアミノ酸配列を有する。本明細書で用いるように、用語「ＳＬＡＭＦ１断片」は、完全長ＳＬＡＭＦ１のＮ末端及び／又はＣ末端から１つ又は複数の残基が欠失した、活性を保持するＳＬＡＭＦ１を指す。本明細書で用いるように、用語「ＳＬＡＭＦ１変異体」は、アミノ酸の付加、欠失及び置換を含有し、活性のままであるＳＬＡＭＦ１を指す。そのような変異体は、親ＳＬＡＭＦ１と少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一であってもよい。２つのポリペプチドの％同一性は、類似性を判定するためのデフォルト設定でＢｅｓｔｆｉｔプログラムを使用して２つのポリペプチドのアミノ酸配列を比較することによって判定される、類似性スコアによって測定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２−４８９（１９８１）の局所相同性アルゴリズムを使用して、２つの配列間の類似性の最良のセグメントを見出す。
【００３１】
用語「アンタゴニスト」は最も広い意味で使用され、ＳＬＡＭＦ１などのポリペプチドの生物活性を部分的又は完全に阻害又は中和するか、ポリペプチドをコードする核酸の転写又は翻訳を部分的又は完全に阻害する任意の分子を含む。例示的なアンタゴニスト分子には、アンタゴニスト抗体、ＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質及び融合分子、小ペプチド、オリゴペプチド、有機分子（小分子を含む）、アプタマー及びアンチセンス核酸が限定されずに含まれる。一部の実施態様では、アンタゴニスト剤は、ブロッキング剤（例えば、ブロッキング抗体）と呼ぶことができる。
【００３２】
用語「ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト」は、ＳＬＡＭＦ１と相互作用して、ＳＬＡＭＦ１媒介シグナル伝達又は活性（そのような活性には、活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞の抑制が限定されずに含まれる）を阻害する分子を指す。例示的なＳＬＡＭＦ１アンタゴニストには、ＳＬＡＭＦ１に結合する抗体、可溶型ＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）タンパク質及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子が含まれる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はモノマーである。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はダイマーである。
【００３３】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、それが活性化Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制を少なくとも５０％低減するとき、「ＳＬＡＭＦ１活性を阻害する」と考えられる。一部の実施態様では、実施例３に記載のアッセイを使用すると、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、活性化Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制を少なくとも５０％低減する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、活性化Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制を少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％低減する。
【００３４】
用語「阻害」又は「阻害する」は、任意の表現型特性の減少若しくは停止、又はその特性の発生率、程度若しくは可能性の低下若しくは停止を指す。一部の実施態様では、「低減する」又は「阻害する」は、２０％以上の低下を引き起こす能力を意味する。別の実施態様では、「低減する」又は「阻害する」は、５０％以上の低下を引き起こす能力を意味する。さらに別の実施態様では、「低減する」又は「阻害する」は、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれを超える全体的低下を引き起こす能力を意味する。
【００３５】
本明細書で用いるように、用語「ＳＬＡＭＦ１抗体」又は「ＳＬＡＭＦ１に結合する抗体」は、ＳＬＡＭＦ１に結合する抗体を指す。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ＳＬＡＭＦ１媒介シグナル伝達又は活性を阻害する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、抗体がＳＬＡＭＦ１の標的化において診断用及び／又は治療剤として有益であるのに十分な親和性でＳＬＡＭＦ１に結合することが可能である抗体を指す。一部の実施態様では、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定したとき、無関係な非ＳＬＡＭＦ１タンパク質へのＳＬＡＭＦ１抗体の結合の程度は、ＳＬＡＭＦ１への抗体の結合の約１０％未満である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、異なる種からのＳＬＡＭＦ１の間で保存されるＳＬＡＭＦ１のエピトープに結合する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ヒトＳＬＡＭＦ１に結合するヒトの又はヒト化ＳＬＡＭＦ１抗体と同じエピトープに結合する。
【００３６】
本明細書において用語「抗体」は最も広い意味で使用され、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、単鎖抗体（例えば、ラクダ科の抗体）、フィブロネクチンＩＩＩ型足場抗体（例えば、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標）；例えば、Lipovsek、2011、Prot. Eng. Des. Sel. 24: 3-9を参照）及び抗体断片を限定されずに含む、様々な抗体構造を包含する。本明細書で用いる用語「抗体」は、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３並びに軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を含む分子をさらに指し、ここで、分子は抗原に結合することが可能である。用語抗体には、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及び（Ｆａｂ’）２などの抗原に結合することが可能である断片が限定されずに含まれる。用語抗体には、キメラ抗体、ヒト化抗体、並びにマウス、ヒト、カニクイザルなどの様々な種の抗体も限定されずに含まれる。
【００３７】
一部の実施態様では、抗体は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗体は、重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの重鎖、並びに軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む少なくとも１つの軽鎖を含む。一部の実施態様では、抗体は、各重鎖が重鎖可変領域及び重鎖定常領域の少なくとも一部を含む２つの重鎖、並びに、各軽鎖が軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域の少なくとも一部を含む２つの軽鎖を含む。本明細書で用いるように、例えば、全ての６つのＣＤＲ（３つの重鎖ＣＤＲ及び３つの軽鎖ＣＤＲ）を含む単一のポリペプチド鎖を含む単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又は任意の他の抗体は、重鎖及び軽鎖を有すると考えられる。一部のそのような実施態様では、重鎖は３つの重鎖ＣＤＲを含む抗体領域であり、軽鎖は３つの軽鎖ＣＤＲを含む抗体領域である。
【００３８】
本明細書で用いるように用語「重鎖可変領域」は、重鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３及びＣＤＲ３を含む領域を指す。一部の実施態様では、重鎖可変領域は、ＣＤＲ１のＮ末端側にあるＦＲ１の少なくとも一部及び／又はＣＤＲ３のＣ末端側にあるＦＲ４の少なくとも一部も含む。
【００３９】
本明細書で用いるように用語「重鎖定常領域」は、少なくとも３つの重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む領域を指す。非限定的な例示的重鎖定常領域には、γ、δ及びαが含まれる。非限定的な例示的重鎖定常領域には、ε及びμも含まれる。各重鎖定常領域は、抗体アイソタイプに対応する。例えば、γ定常領域を含む抗体はＩｇＧ抗体であり、δ定常領域を含む抗体はＩｇＤ抗体であり、α定常領域を含む抗体はＩｇＡ抗体である。さらに、μ定常領域を含む抗体はＩｇＭ抗体であり、ε定常領域を含む抗体はＩｇＥ抗体である。ある特定のアイソタイプは、サブクラスにさらに細分化することができる。例えば、ＩｇＧ抗体には、ＩｇＧ１（γ１定常領域を含む）、ＩｇＧ２（γ２定常領域を含む）、ＩｇＧ３（γ３定常領域を含む）及びＩｇＧ４（γ４定常領域を含む）抗体が限定されずに含まれ；ＩｇＡ抗体には、ＩｇＡ１（α１定常領域を含む）及びＩｇＡ２（α２定常領域を含む）抗体が限定されずに含まれ；ＩｇＭ抗体には、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２が限定されずに含まれる。
【００４０】
本明細書で用いるように、用語「重鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、重鎖可変領域を少なくとも含むポリペプチドを指す。一部の実施態様では、重鎖は重鎖定常領域の一部を少なくとも含む。本明細書で用いるように、用語「完全長重鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、重鎖可変領域及び重鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００４１】
本明細書で用いるように、用語「軽鎖可変領域」は、軽鎖ＣＤＲ１、フレームワーク（ＦＲ）２、ＣＤＲ２、ＦＲ３及びＣＤＲ３を含む領域を指す。一部の実施態様では、軽鎖可変領域は、ＦＲ１及び／又はＦＲ４も含む。
【００４２】
本明細書で用いるように、用語「軽鎖定常領域」は、軽鎖定常ドメインＣＬを含む領域を指す。非限定的な例示的軽鎖定常領域には、λ及びκが含まれる。
【００４３】
本明細書で用いるように、用語「軽鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、軽鎖可変領域を少なくとも含むポリペプチドを指す。一部の実施態様では、軽鎖は軽鎖定常領域の一部を少なくとも含む。本明細書で用いるように、用語「完全長軽鎖」は、リーダー配列の有無にかかわらず、軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域を含むポリペプチドを指す。
【００４４】
参照抗体としての「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいてその抗原への参照抗体の結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、反対に、参照抗体は競合アッセイにおいてその抗原へのその抗体の結合を５０％以上ブロックする。同じエピトープに関して競合する抗体との関連で使用されるとき、用語「競合する」は、抗体の間の競合が、試験抗体が参照抗体の共通抗原（例えば、ＳＬＡＭＦ１）への特異的結合を阻止又は阻害するアッセイによって判定されることを意味する。多数のタイプの競合結合アッセイを使用することができる、例えば：固体相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固体相直接又は間接酵素免疫検定法（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えば、Stahli等、1983、Methods in Enzymology 9: 242-253を参照）；固体相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Kirkland等、1986、J. Immunol. 137:3614-3619を参照）、固体相直接標識アッセイ、固体相直接標識サンドイッチアッセイ（例えば、Harlow及びLane、1988、Antibodies, A Laboratory Manual、Cold Spring Harbor Pressを参照）；１−１２５標識を使用する固体相直接標識ＲＩＡ（例えば、Morel等、1988、Molec. Immunol. 25:7-15を参照）；固体相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えば、Cheung等、1990、Virology 176:546-552を参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer等、1990、Scand. J. Immunol. 32:77-82）。一般的に、そのようなアッセイは、これらの非標識試験抗原結合性タンパク質及び標識参照抗体のいずれかを有する固体表面又は細胞に結合する精製抗原の使用を含む。競合阻害は、試験抗体の存在下で固体表面又は細胞に結合する標識の量を判定することによって測定される。通常、試験抗体は過剰に存在する。競合アッセイによって同定される抗体（競合抗体）には、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体、及び参照抗体に結合するエピトープに、立体的障害が起こるのに十分に近い隣接エピトープに結合する抗体が含まれる。一部の実施態様では、競合抗体が過剰に存在するとき、それは共通抗原への参照抗体の特異的結合を少なくとも４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％又は７５％阻害する。一部の場合には、結合は少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％又は９７％以上阻害される。
【００４５】
用語「抗原」は、選択的結合剤、例えば抗体又は免疫学的に機能的なその断片が結合することが可能であり、さらに、その抗原に結合することが可能な抗体を生成するために哺乳動物で使用することが可能である分子又は分子の一部を指す。抗原は、抗体と相互作用することが可能である１つ又は複数のエピトープを有することができる。
【００４６】
用語「エピトープ」は、選択的結合剤、例えば抗体又はその断片が結合する分子の一部である。本用語は、抗体に特異的に結合することが可能である任意の決定因子を含む。エピトープは近接していても近接していなくてもよい（例えば、ポリペプチドにおいて、ポリペプチド配列中でお互いに近接していないが、分子の文脈で抗原結合性タンパク質が結合するアミノ酸残基）。一部の実施態様では、抗体を生成するために使用されるエピトープと類似した三次元構造を含むが、抗体を生成するために使用されるそのエピトープで見出されるアミノ酸残基を含まないか又はいくつかだけを含むという点で、エピトープは模倣体であってもよい。エピトープ決定因子は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル又はスルホニル基などの分子の化学的活性表面基を含むことができ、特異的三次元構造特性及び／又は特異的電荷特性を有することができる。
【００４７】
本明細書で用いるように、「キメラ抗体」は、第１の種（マウス、ラット、カニクイザルなど）からの少なくとも１つの可変領域及び第２の種（ヒト、カニクイザル、ニワトリなど）からの少なくとも１つの定常領域を含む抗体を指す。一部の実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１つのマウス可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施態様では、キメラ抗体は、少なくとも１つのカニクイザル可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部の実施態様では、キメラ抗体の可変領域の全ては第１の種からであり、キメラ抗体の定常領域の全ては第２の種からである。
【００４８】
本明細書で用いるように、「ヒト化抗体」は、非ヒト可変領域（マウス、ラット、カニクイザル、ニワトリなど）のフレームワーク領域の少なくとも１つのアミノ酸がヒト可変領域からの対応するアミノ酸で置き換えられた抗体を指す。一部の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つのヒト定常領域又はその断片を含む。一部の実施態様では、ヒト化抗体は、Ｆａｂ、ｓｃＦｖ、（Ｆａｂ’）２などである。
【００４９】
本明細書で用いるように、「ＣＤＲグラフト化抗体」は、第１の（非ヒト）種の１つ又は複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）が第２の（ヒト）種のフレームワーク領域（ＦＲ）の上にグラフトされたヒト化抗体を指す。
【００５０】
本明細書で用いるように、「ヒト抗体」は、ヒトで生成される抗体、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）などのヒト免疫グロブリン遺伝子を含むヒト以外の動物で生成される抗体、及び抗体レパートリーがヒト免疫グロブリン配列に基づく、ファージディスプレイなどのインビトロ方法を使用して選択される抗体を指す。
【００５１】
用語「ＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン」（「ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ」）には、完全長ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ断片及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ変異体が含まれ、細胞内及び膜貫通ドメインを欠くＳＬＡＭＦ１ポリペプチドを指す。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤは、Ｔ細胞の上でＳＬＡＭＦ１の結合パートナーに結合することが可能である。本明細書で用いるように、用語「完全長ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ」は、細胞外ドメインの最後のアミノ酸に伸長するＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを指し、細胞外ドメインに天然のスプライスバリアントを含む。完全長ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤは、シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよい。一部の実施態様では、完全長ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤは、配列番号３（シグナルペプチドを有する）又は配列番号４（シグナルペプチドなし）のアミノ酸配列を有する。本明細書で用いるように、用語「ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ断片」は、完全長ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１つ又は複数の残基が欠失したＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを指す。ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ断片は、シグナルペプチドを含んでも含まなくてもよい。本明細書で用いるように、用語「ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ変異体」は、アミノ酸の付加、欠失及び置換を含有するＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを指す。そのような変異体は、親ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤと少なくとも８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一であってもよい。２つのポリペプチドの％同一性は、類似性を判定するためのデフォルト設定でＢｅｓｔｆｉｔプログラムを使用して２つのポリペプチドのアミノ酸配列を比較することによって判定される、類似性スコアによって測定することができる。Ｂｅｓｔｆｉｔは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ  ２：４８２−４８９（１９８１）の局所相同性アルゴリズムを使用して、２つの配列間の類似性の最良のセグメントを見出す。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤはモノマーである。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤはダイマーである。
【００５２】
いかなる特定の理論によっても縛られることを意図することなく、可溶型ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子はＳＬＡＭＦ１活性のアンタゴニストであると予想されるが、基質に結合したＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子（例えば、固体表面に結合したＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子）はＳＬＡＭＦ１模倣物として作用すると考えられている（例えば、実施例３を参照）。一部の場合、可溶型ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子と基質に結合したＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子の間の相違は、Ｔ細胞の表面の阻害性受容体を架橋する基質に結合したＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子の能力にあるかもしれない。
【００５３】
用語「ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子」は、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び１つ又は複数の「融合パートナー」を含む分子を指す。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子は、Ｔ細胞の上でＳＬＡＭＦ１の結合パートナーに結合することが可能である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び融合パートナーは共有結合している（「融合している」）。融合パートナーもポリペプチド（「融合パートナーポリペプチド」）である場合、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは、連続するアミノ酸配列の一部であってもよく、融合パートナーポリペプチドはＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤのＮ末端又はＣ末端のどちらかに連結してもよい。そのような場合、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドは、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び融合パートナーポリペプチドの両方をコードするコード配列からの単一のポリペプチド（「ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質」）として翻訳されてもよい。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び融合パートナーは、他の手段、例えばペプチド結合以外の化学結合を通して共有結合される。ポリペプチドを他の分子（例えば、融合パートナー）に共有結合する多くの公知の方法を使用することができる。他の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及び融合パートナーは、少なくとも１つのアミノ酸又は化学部分を含む「リンカー」を通して融合することができる。非限定的な例示的ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子は、配列番号５の配列を有する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子は、モノマーである。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子は、ダイマーである。一部の実施態様では、融合パートナーは、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤのＮ末端に連結される。
【００５４】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１ポリペプチド及び融合パートナーは、非共有結合的に連結している。一部のそのような実施態様では、それらは、例えば結合対を使用して連結することができる。例示的な結合対には、ビオチン及びアビジン又はストレプトアビジン、抗体及びその抗原などが限定されずに含まれる。
【００５５】
例示的な融合パートナーには、免疫グロブリンＦｃドメイン、アルブミン及びポリエチレングリコールが限定されずに含まれる。非限定的な例示的Ｆｃドメインのアミノ酸配列を、配列番号６−８に示す。
【００５６】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤアミノ酸配列は、非ヒト哺乳動物のそれに由来する。そのような実施態様では、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤアミノ酸配列は、げっ歯類（マウス、ラット、ハムスターを含む）、ウサギ、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物の実験動物、哺乳動物の家畜、哺乳動物の競技用動物及び哺乳動物のペットを限定されずに含む哺乳動物に由来してもよい。非ヒトＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを組み込むＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子は、「非ヒトＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子」と命名する。ヒトＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子と類似して、非ヒト融合分子は、融合パートナー、任意選択のリンカー及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを含むことができる。そのような非ヒト融合分子は、シグナルペプチドを含むこともできる。「非ヒトＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ断片」は、完全長ＥＣＤのＮ末端及び／又はＣ末端から１つ又は複数の残基が欠失した非ヒトＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを指す。「非ヒトＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ変異体」は、アミノ酸の付加、欠失及び置換を含有するＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤを指す。
【００５７】
本明細書に記載される実施態様のいずれかで、完全長ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１断片、ＳＬＡＭＦ１変異体、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質を限定されずに含むＳＬＡＭＦ１は、タグをさらに含むことができる。非限定的な例示的タグには、当該技術分野で公知である、ＦＩＴＣ、Ｈｉｓ６、ビオチン並びに他の標識及びタグが含まれる。
【００５８】
用語「シグナルペプチド」は、哺乳動物細胞からのポリペプチドの分泌を促進するポリペプチドのＮ末端に位置するアミノ酸残基の配列を指す。シグナルペプチドは哺乳動物細胞からのポリペプチドの搬出の後に切断され、成熟タンパク質を形成することができる。シグナルペプチドは天然であっても又は合成的であってもよく、それらはそれらが結合するタンパク質に対して異種であっても同種であってもよい。例示的なシグナルペプチドには、ＳＬＡＭＦ１からのシグナルペプチド、及び異種タンパク質からのシグナルペプチドが含まれる。「シグナル配列」は、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を指す。
【００５９】
用語「ベクター」は、宿主細胞で増殖させることができるクローニングされたポリヌクレオチド（１つ又は複数）を含有するように工学的に操作することができるポリヌクレオチドを記載するために使用される。ベクターは、以下の要素の１つ又は複数を含むことができる：複製開始点、目的のポリペプチドの発現を調節する１つ又は複数の調節配列（例えば、プロモーター及び／又はエンハンサー）、及び／又は１つ又は複数の選択マーカー遺伝子（例えば、抗生物質耐性遺伝子及び比色アッセイで使用することができる遺伝子、例えばβ−ガラクトシダーゼ）。用語「発現ベクター」は、宿主細胞で目的のポリペプチドを発現させるために使用されるベクターを指す。
【００６０】
「宿主細胞」は、ベクター又は単離されたポリヌクレオチドのレシピエントであるか、あった細胞を指す。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であってもよい。例示的な真核細胞には、哺乳動物の細胞、例えば霊長類又は非霊長類動物の細胞；真菌細胞、例えば酵母；植物細胞；及び昆虫細胞が含まれる。非限定的な例示的哺乳動物細胞には、ＮＳＯ細胞、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）並びに２９３及びＣＨＯ細胞、及びそれらの誘導体、例えばそれぞれ２９３−６Ｅ及びＤＧ４４細胞が限定されずに含まれる。
【００６１】
本明細書で用いられる用語「単離された」は、それが天然に一般的に一緒に見出される成分の少なくともいくつかから分離されたか、それが一般的に一緒に生成される成分の少なくともいくつかから分離された分子を指す。例えば、ポリペプチドは、それが生成された細胞の成分の少なくともいくつかからそれが分離されるとき、「単離された」と呼ばれる。ポリペプチドが発現後に細胞によって分泌される場合、それを生成した細胞からポリペプチドを含有する上清を物理的に分離することが、ポリペプチドを「単離すること」と考えられている。同様に、ポリヌクレオチドは、それが、それが天然に一般的に見出されるより大きなポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡポリヌクレオチドの場合、ゲノムＤＮＡ又はミトコンドリアＤＮＡ）の一部でないとき、又は、例えばＲＮＡポリヌクレオチドの場合、それが生成された細胞の成分の少なくともいくつかから分離されるとき、「単離された」と呼ばれる。したがって、宿主細胞の中のベクターに含有されるＤＮＡポリヌクレオチドは、そのポリヌクレオチドが天然でそのベクターに見出されない限り「単離された」と呼ぶことができる。
【００６２】
用語「対象」及び「患者」は、本明細書でヒトを指すために互換的に使用される。一部の実施態様では、げっ歯類、サル、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、哺乳動物の実験動物、哺乳動物の家畜、哺乳動物の競技用動物及び哺乳動物のペットを限定されずに含む他の哺乳動物を治療する方法も提供される。一部の場合には、「対象」又は「患者」は、疾患又は障害のために治療を必要とする対象又は患者を指す。
【００６３】
本明細書で用いるように、用語「試料」又は「患者試料」は、例えば、物理的、生化学的、化学的及び／又は生理学的特性に基づいて特徴付ける及び／又は同定すべき、細胞性及び／又は他の分子的実体を含有する目的の対象から得られるか又は由来する材料を指す。例えば、語句「疾患試料」及びその変形は、特徴付ける細胞性及び／又は分子的実体を含有することが予想されるか公知である目的の対象から得られる任意の試料を指す。「組織又は細胞試料」は、対象又は患者の組織から得られた類似の細胞の集合を意味する。組織又は細胞試料の供与源は、新鮮な、凍結された及び／若しくは保存された器官若しくは組織の試料又は生検又は吸引物からのような固体組織；血液又は任意の血液成分；体液、例えば喀痰、脳脊髄液、羊水、腹水又は間質液；対象の妊娠又は発達中の任意の時期からの細胞であってもよい。組織試料は、一次の又は培養された細胞又は細胞株であってもよい。任意選択で、組織又は細胞の試料は、疾患組織／器官から得られる。組織試料は、防腐剤、抗凝固薬、バッファー、固定剤、栄養素、抗生物質などの天然において組織と本来混合していない化合物を含有することができる。
【００６４】
本明細書で用いるように、「参照試料」、「参照細胞」又は「参照組織」は、同定するために本発明の方法又は組成物が使用される疾患又は状態に侵されていないことが知られているか考えられている供与源から得た試料、細胞又は組織を指す。一実施態様では、参照試料、参照細胞又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は状態が同定される同じ対象又は患者の体の健康な部分から得られる。一実施態様では、参照試料、参照細胞又は参照組織は、本発明の組成物又は方法を使用して疾患又は状態が同定される対象又は患者でない少なくとも一個体の体の健康な部分から得られる。一部の実施態様では、参照試料、参照細胞又は参照組織は、疾患又は状態を起こす前又は疾患又は状態のより早い段階に患者から前もって得られた。
【００６５】
その状態のそのような特徴がその状態を有する患者の少なくともサブセットで又はその状態の１つ又は複数の動物モデルで示されたとき、状態は「［特徴］を有すると前もって特徴付けられた」。一部の実施態様では、状態のそのような特徴は、本発明の１つ又は複数のＳＬＡＭＦ１アンタゴニストで治療すべき患者で判定される必要はない。その特徴を有すると前もって特徴付けられた状態を患者が有すると考えられるために、本方法及び／又は組成物を使用して治療すべき特定の患者での特徴の存在が判定されている必要はない。
【００６６】
「障害」又は「疾患」は、本発明の１つ又は複数のＳＬＡＭＦ１アンタゴニストによる治療から利益を受けると予想される任意の状態である。これには、哺乳動物が問題の障害を起こしやすくする病的状態を含む、慢性及び急性の障害又は疾患が含まれる。ここで治療すべき障害の非限定例には、がんが含まれる。
【００６７】
本明細書で用語「がん」は、増殖及び成長の異常に高いレベルを示す一群の細胞を指すために使用される。がんは、良性（良性腫瘍とも呼ばれる）、前がん状態又は悪性であってもよい。がん細胞は、固体がん細胞又は白血病がん細胞であってもよい。本明細書で用語「がん成長」は、がんのサイズ又は程度の対応する増加につながる、がんを含む細胞（１つ又は複数）による増殖又は成長を指すために使用される。
【００６８】
がんの例には、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病が限定されずに含まれる。そのようながんのより多くの特定の非限定例には、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓癌、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝癌、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、腎臓がん、肝がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、脳がん、子宮体がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ及び各種の頭けい部がんが含まれる。
【００６９】
「化学療法剤」は、がんの治療で有益な化合物である。化学療法剤の例には、チオテパ及びＣｙｔｏｘａｎ（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン及びピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；ベンゾドパ、カルボコン、メツレドパ及びウレドパなどのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド及びトリメチルオロメラミンを含むエチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトセシン（合成アナログトポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロルエタミン、酸化メクロルエタミン塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムヌスチンなどのニトロソ尿素；エンジイン抗生物質などの抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩ１（例えば、Agnew、Chem Intl. Ed. Engl.、33: 183-186（1994）を参照）；ジネミシンＡを含むジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラマイシン；並びにネオカルジノスタチン発色団及び関係する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラシノミシン、アクチノマイシン、オースラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えばマイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；メトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）などの代謝拮抗物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウ��ジンなどのピリミジンアナログ；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎薬；フロリン酸などの葉酸リプレニッシャー；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート；デフォファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシン及びアンサマイトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、Ｔａｘｏｌ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標）パクリタキセルのクレモホルフリーアルブミン工学操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）及びＴａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；Ｇｅｍｚａｒ（登録商標）ゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標）ビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ、ＣＰＴ−１１）（５−ＦＵ及びロイコボリンとイリノテカンの治療レジメンを含む）；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン；コンブレタスタチン；ロイコボリン（ＬＶ）；オキサリプラチン治療レジメン（ＦＯＬＦＯＸ）を含むオキサリプラチン；細胞増殖を低減するＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、ＥＧＦＲ（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標）））及びＶＥＧＦ−Ａの阻害剤、並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が限定されずに含まれる。
【００７０】
さらなる非限定的な例示的化学療法剤には、がんへのホルモン作用を調節又は阻害する作用をする抗ホルモン剤、例えば、抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン及びＦａｒｅｓｔｏｎ（登録商標）トレミフェン；副腎でエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、Ｍｅｇａｓｅ（登録商標）酢酸メゲストロール、Ａｒｏｍａｓｉｎ（登録商標）エクセメスタン、フォルメスタニー、ファドロゾール、Ｒｉｖｉｓｏｒ（登録商標）ボロゾール、Ｆｅｍａｒａ（登録商標）レトロゾール及びＡｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標）アナストロゾール；並びに抗アンドロゲン剤、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリン；並びにトロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常な細胞増殖に関与しているシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ−アルファ、Ｒａｌｆ及びＨ−Ｒａｓ；リボザイム、例えばＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（登録商標）リボザイム）及びＨＥＲ２発現阻害剤；ワクチン、例えば遺伝子療法ワクチン、例えば、Ａｌｌｏｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン、Ｌｅｕｖｅｃｔｉｎ（登録商標）ワクチン及びＶａｘｉｄ（登録商標）ワクチン；Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）ｒＩＬ−２；Ｌｕｒｔｏｔｅｃａｎ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；Ａｂａｒｅｌｉｘ（登録商標）ｒｍＲＨ；並びに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸又は誘導体が含まれる。
【００７１】
「抗血管新生剤」又は「血管新生阻害剤」は、血管新生、脈管形成又は望ましくない血管透過性を直接的又は間接的に阻害する、小分子量物質、ポリヌクレオチド（例えば、阻害性ＲＮＡ（ＲＮＡｉ又はｓｉＲＮＡ）を含む）、ポリペプチド、単離されたタンパク質、組換えタンパク質、抗体又はそのコンジュゲート若しくは融合タンパク質を指す。抗血管新生剤には、血管新生因子又はその受容体の血管新生活性に結合してブロックする薬剤が含まれることを理解すべきである。例えば、抗血管新生剤は、血管新生剤に対する抗体又は他のアンタゴニスト、例えば、ＶＥＧＦ−Ａへの抗体（例えば、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））又はＶＥＧＦ−Ａ受容体（例えば、ＫＤＲ受容体又はＦｌｔ−１受容体）への抗体、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（メシル酸イマチニブ）などの抗ＰＤＧＦＲ阻害剤、ＶＥＧＦ受容体シグナル伝達をブロックする小分子（例えば、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２８４、ＳＵ６６６８、Ｓｕｔｅｎｔ（登録商標）／ＳＵ１１２４８（リンゴ酸スニチニブ）、ＡＭＧ７０６、又は、例えば国際特許出願公開ＷＯ２００４／１１３３０４に記載されるもの）である。抗血管新生剤には、天然の血管新生阻害剤、例えば、アンギオスタチン、エンドスタチンなども含まれる。例えば、Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ及びＤ’Ａｍｏｒｅ  （１９９１）  Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｐｈｙｓｉｏｌ．  ５３：２１７−３９；Ｓｔｒｅｉｔ及びＤｅｔｍａｒ  （２００３）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２：３１７２−３１７９を参照（例えば、表３は悪性メラノーマでの抗血管新生療法を掲載する）；Ｆｅｒｒａｒａ  ＆  Ａｌｉｔａｌｏ  （１９９９）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ５（１２）：１３５９−１３６４；Ｔｏｎｉｎｉ等（２００３）  Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  ２２：６５４９−６５５６（例えば、表２は公知の抗血管新生因子を掲載する）；及びＳａｔｏ  （２００３）  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．  ８：２００−２０６（例えば、表１は臨床治験で使用される抗血管新生剤を掲載する）を参照。
【００７２】
本明細書で用いるように、「成長阻害剤」は、細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の成長をインビトロ又はインビボで阻害する化合物又は組成物を指す。したがって、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞（ＶＥＧＦを発現する細胞など）の百分率を有意に低減するものであってもよい。成長阻害剤の例には、細胞周期の進行（Ｓ期以外の場所で）をブロックする薬剤、例えばＧ１期停止及びＭ期停止を誘導する薬剤が限定されずに含まれる。古典的なＭ期ブロッカーには、ビンカ（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン及びトポイソメラーゼＩＩ阻害剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド及びブレオマイシンが含まれる。Ｇ１を停止する薬剤、例えばＤＮＡアルキル化剤、例えばタモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロルエタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル及びａｒａ−Ｃは、Ｓ期停止にも波及する。さらなる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ及びＩｓｒａｅｌ編、Ｔｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（W.B. Saunders、Philadelphia、1995）のＣｈａｐｔｅｒ  １、Ｍｕｒａｋａｍｉ等による表題「Ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，  ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，  ａｎｄ  ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｄｒｕｇｓ」、例えばｐ．１３に見出すことができる。タキサン（パクリタキセル及びドセタキセル）は、両方ともイチイに由来する抗がん薬である。欧州イチイに由来するドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成アナログである。パクリタキセル及びドセタキセルはチューブリンダイマーからの微小管の組立てを促進し、脱重合を阻止することによって微小管を安定させ、それは細胞での有糸分裂の阻害をもたらす。
【００７３】
用語「抗腫瘍組成物」は、少なくとも１つの活性治療剤を含む、がん治療で有益な組成物を指す。治療剤の例には、例えば、化学療法剤、成長阻害剤、細胞傷害剤、放射線療法で使用される薬剤、抗血管新生剤、がん免疫療法剤、アポトーシス剤、抗チューブリン剤、並びにがんを治療する他の薬剤、例えば抗ＨＥＲ−２抗体、抗ＣＤ２０抗体、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）アンタゴニスト（例えば、チロシンキナーゼ阻害剤）、ＨＥＲ１／ＥＧＦＲ阻害剤（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、血小板由来増殖因子阻害剤（例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標）（メシル酸イマチニブ））、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブ）、インターフェロン、ＣＴＬＡ４阻害剤（例えば、抗ＣＴＬＡ抗体イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標）））、ＰＤ−１阻害剤（例えば、抗ＰＤ１抗体、ＢＭＳ−９３６５５８）、ＰＤＬ１阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ１抗体、ＭＰＤＬ３２８０Ａ）、ＰＤＬ２阻害剤（例えば、抗ＰＤＬ２抗体）、ＴＩＭ３阻害剤（例えば、抗ＴＩＭ３抗体）、サイトカイン、以下の標的ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＰＤＧＦＲ−ベータ、ＢｌｙＳ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ３又はＶＥＧＦ受容体（１つ又は複数）の１つ又は複数に結合するアンタゴニスト（例えば、中和抗体）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２並びに他の生体活性及び有機の化学薬剤などが限定されずに含まれる。その組合せも、本発明に含まれる。一部の実施態様では、抗腫瘍組成物は少なくとも１つの免疫療法剤を含み、それは少なくとも１つの免疫刺激剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニストを含む。免疫刺激剤が関与する追加の実施態様を、下で議論する。
【００７４】
本明細書で用いるように、「治療」は、ヒトを含む哺乳動物で疾患（本明細書において「障害」又は「状態」とも呼ばれる）のための治療薬の任意の投与又は適用を包含し、疾患若しくは疾患の進行を阻害すること、疾患若しくはその進行を阻害若しくは減速すること、その発達を停止させること、疾患を部分的若しくは完全に軽減すること、疾患の１つ又は複数の症候を部分的若しくは完全に軽減すること、又は失われたか、欠落しているか、欠陥のある機能を回復若しくは修復すること；又は非効率的な過程を刺激することを含む。
【００７５】
用語「有効量」又は「治療的有効量」は、対象で疾患又は障害を治療するのに有効な薬物の量を指す。一部の実施態様では、有効量は、必要な投薬量及び期間で、所望の治療的又は予防的結果を達成するのに有効な量を指す。本発明のＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの「治療的有効量」は、個体の病状、年齢、性別及び体重、並びに個体で所望の応答を導き出すアンタゴニストの能力などの因子によって異なってもよい。治療的有効量は、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストのいかなる毒性又は有害作用よりも治療的に有益な作用が上回る量を包含する。
【００７６】
「予防的有効量」は、必要な投薬量及び期間で、所望の予防結果を達成するのに有効な量を指す。一般的に、しかし必ずしもそうとは限らないが、予防的用量は疾患の前か又はより初期の段階で対象に用いられるので、予防的有効量は治療的有効量より少ないと予想される。
【００７７】
「薬学的に許容される担体」は、対象への投与のための「薬学的組成物」を一緒に構成する治療剤と併用するための、当該技術分野で慣用される無毒の固体、半固体又は液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材、処方助剤又は担体を指す。薬学的に許容される担体は、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに無毒であり、製剤の他の成分に適合する。薬学的に許容される担体は、用いられる製剤に適当である。例えば、治療剤が経口投与される場合は、担体はゲルカプセルであってもよい。治療剤が皮下投与される場合は、担体は理想的には皮膚に刺激性でなく、注射部位反応を引き起こさない。
【００７８】
「製造品」は、少なくとも１つの試薬、例えば、疾患若しくは障害の治療のための医薬、又は本明細書に記載されるバイオマーカーを特異的に検出するためのプローブを含む任意の製品（例えば、パッケージ又は容器）又はキットである。一部の実施態様では、製品又はキットは、本明細書に記載される方法を実施するための単位として促進、分配又は販売される。
【００７９】
治療組成物及び方法
疾患の治療方法
ヒト及び他の哺乳動物を治療する方法で使用するための、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストが提供される。ヒト及び他の哺乳動物にＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを投与することを含む、疾患を治療する方法が提供される。
【００８０】
がんを治療する方法
一部の実施態様では、がんを治療又は予防する方法であって、そのような治療を必要とする対象にＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効量を投与することを含む方法が提供される。
【００８１】
本発明者は、ＳＬＡＭＦ１を活性化Ｔ細胞のサプレッサーとして同定した。ＳＬＡＭＦ１は、活性化ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の上で発現され、それは、２つの細胞外免疫グロブリンドメインを有する９つのタンパク質のファミリーに属し、その大半は細胞内免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を有する。いかなる特定の理論によっても束縛されることを意図しないが、ＳＬＡＭＦ１はＴ細胞と相互作用することができ、不活性の状態（例えば、アネルギー性又は免疫寛容状態）を誘導する阻害シグナルをＴ細胞にもたらすことができる。したがって、例えば阻害抗体又は可溶型ＳＬＡＭＦ１によるＳＬＡＭＦ１活性の阻害は、がん細胞の免疫媒介性の死滅を増強することができる。標的化分子には、ＳＬＡＭＦ１に結合してＳＬＡＭＦ１活性をブロックする抗体、並びにＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質、例えば、モノマー及びダイマーＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質が含まれる。
【００８２】
一部の実施態様では、がんの治療方法であって、がんを有する対象にＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを投与することを含む方法が提供される。一部の実施態様では、がんを治療するためのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの使用が提供される。癌、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫及び白血病を含む、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストで治療することができる非限定的な例示的がんが本明細書で提供される。そのようながんのより多くの特定の非限定例には、扁平上皮がん、小細胞肺がん、下垂体がん、食道がん、星状細胞腫、軟組織肉腫、非小細胞肺がん、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、腹膜のがん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、膠芽細胞腫、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、肝癌、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、腎性がん、肝がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、脳がん、子宮体がん、精巣がん、胆管癌、胆嚢癌、胃がん、メラノーマ及び各種の頭けい部がんが含まれる。一部の実施態様では、肺がんは、非小細胞肺がん又は肺扁平上皮癌である。一部の実施態様では、白血病は急性骨髄性白血病又は慢性リンパ球性白血病である。一部の実施態様では、乳がんは、乳房浸潤癌である。一部の実施態様では、卵巣がんは卵巣の漿液性嚢胞腺癌である。一部の実施態様では、腎臓がんは腎臓の腎性明細胞癌である。一部の実施態様では、結腸がんは、結腸腺癌である。一部の実施態様では、膀胱がんは膀胱尿路上皮癌である。
【００８３】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、ＳＬＡＭＦ１抗体である。
【００８４】
活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法
一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法であって、活性化Ｔ細胞を含む組織をＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと接触させることを含む方法が提供される。一部のそのような実施態様では、活性化Ｔ細胞の抑制を阻害する方法であって、活性化Ｔ細胞がＳＬＡＭＦ１によって抑制される方法が提供される。
【００８５】
本発明者は、ＳＬＡＭＦ１を活性化Ｔ細胞のサプレッサーとして同定した。ＳＬＡＭＦ１は、活性化ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞の上で発現され、それは、２つの細胞外免疫グロブリンドメインを有する９つのタンパク質のファミリーに属し、その大半は細胞内免疫受容体チロシンベースのスイッチモチーフ（ＩＴＳＭ）を有する。いかなる特定の理論によっても束縛されることを意図しないが、ＳＬＡＭＦ１はＴ細胞と相互作用することができ、不活性の状態（例えば、アネルギー性又は免疫寛容状態）を誘導する阻害シグナルをＴ細胞にもたらすことができる。したがって、例えば阻害抗体又は可溶型ＳＬＡＭＦ１によるＳＬＡＭＦ１活性の阻害は、ＳＬＡＭＦ１による活性化Ｔ細胞の抑制を阻害することができる。標的化分子には、ＳＬＡＭＦ１に結合してＳＬＡＭＦ１活性をブロックする抗体、並びにＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質、例えば、モノマー及びダイマーのＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ及びＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合タンパク質が含まれる。
【００８６】
一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞を含む組織を、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと接触させる。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞自体を、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと接触させる。一部の実施態様では、活性化Ｔ細胞は、活性化Ｔ細胞がＳＬＡＭＦ１によって抑制される対象の中にある。
【００８７】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、ＳＬＡＭＦ１抗体である。
【００８８】
投与経路及び担体
様々な実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、皮下又は静脈内に投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、経口、動脈内、非経口、鼻腔内、筋肉内、心臓内、心室内、気管内、口内、直腸、腹腔内、吸入、皮内、局所、経皮及びクモ膜下、その他、例えば移植を限定されずに含む様々な経路によってインビボで投与することができる。対象組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒、軟膏、溶液、坐薬、浣腸、注射、吸入剤及びエアゾールを限定されずに含む、固体、半固体、液体又は気体の形態の調製物に製剤化することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、遺伝子療法を使用して送達される。非限定例として、例えば、文献に記載されるように（例えば、Tang等、Nature 356:152-154 (1992)を参照）、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストをコードする核酸分子は、金微粒子にコーティングして、微粒子銃デバイス又は「遺伝子銃」によって皮内に送達することができる。
【００８９】
様々な実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを含む組成物は、多種多様な薬学的に許容される担体との製剤で提供される（例えば、Gennaro、Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus、20版（2003）；Ansel等、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、7版、Lippencott Williams and Wilkins（2004）；Kibbe等、Handbook of Pharmaceutical Excipients、3版、Pharmaceutical Press（2000）を参照）。ビヒクル、アジュバント及び希釈剤を含む様々な薬学的に許容される担体が利用できる。さらに、様々な薬学的に許容される補助物質、例えばｐＨ調整及び緩衝剤、張性調整剤、安定剤、湿潤剤なども、利用できる。非限定的な例示的担体には、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール及びその組合せが含まれる。
【００９０】
様々な実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを含む組成物は、水性又は非水性の溶媒、例えば植物油若しくは他の油、合成脂肪酸グリセリド、高級脂肪族系酸のエステル又はプロピレングリコールにそれらを溶解、懸濁又は乳化することによって、また所望により、可溶化剤、等張剤、懸濁剤、乳化剤、安定剤及び保存剤などの慣用される添加剤と一緒に、皮下投与を含む注射のために製剤化することができる。様々な実施態様では、組成物は、例えば加圧された許容される噴射剤、例えばジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素などを使用して、吸入のために製剤化することができる。様々な実施態様では、組成物は、例えば生分解性又は非生分解性ポリマーによる持続的放出マイクロカプセルに製剤化することもできる。非限定的な例示的生分解性製剤には、ポリ乳酸−グリコール酸ポリマーが含まれる。非限定的な例示的な非生物分解性製剤には、ポリグリセリン脂肪酸エステルが含まれる。そのような製剤を作製するある特定の方法は、例えばＥＰ１１２５５８４Ａ１に記載される。
【００９１】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの１又は複数の用量を各々含有する１つ又は複数の容器を含む医薬投薬量パックも、提供される。一部の実施態様では、１つ又は複数の追加の薬剤の有り無しでＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを含む組成物の所定量を含有する単位投薬量が提供される。一部の実施態様では、そのような単位投薬量は、注射のための使い捨ての予充填シリンジで供給される。様々な実施態様では、単位投薬量に含有される組成物は、食塩水、スクロースなど；バッファー、例えばリン酸などを含むことができ；及び／又は、安定した及び有効なｐＨ範囲内で製剤化されてもよい。あるいは、一部の実施態様では、組成物は、適当な液体、例えば滅菌水の添加により再構成することができる凍結乾燥粉末として提供されてもよい。一部の実施態様では、組成物は、タンパク質凝集を阻害する１つ又は複数の物質、例えば、限定されずにスクロース及びアルギニンを含む。一部の実施態様では、本発明の組成物は、ヘパリン及び／又はプロテオグリカンを含む。
【００９２】
薬学的組成物は、具体的な適応症の治療又は予防のために有効な量で投与される。治療的有効量は、治療対象の体重、彼若しくは彼女の身体的若しくは健康の状態、治療する状態の程度又は治療対象の年齢に一般的に依存する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約５０μｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の量で投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約１００μｇ／ｋｇ体重から約５０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の量で投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約１００μｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の量で投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約０．５ｍｇ／ｋｇ体重から約２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の量で投与することができる。
【００９３】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約１０ｍｇから約１，０００ｍｇの範囲内の量で投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１は、１用量につき約２０ｍｇから約５００ｍｇの範囲内の量で投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約２０ｍｇから約３００ｍｇの範囲内の量で投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１用量につき約２０ｍｇから約２００ｍｇの範囲内の量で投与することができる。
【００９４】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト組成物は、必要に応じて対象に投与することができる。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効用量は、１回又は複数回対象に投与される。様々な実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効用量は、月１回、月１回未満、例えば、２カ月ごと、３カ月ごと又は６カ月ごとに対象に投与される。他の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効用量は、月１回を超えて、例えば２週ごと、毎週、週に２回、週に３回、毎日又は１日に複数回投与される。ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効用量は、少なくとも１回対象に投与される。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの有効用量は、少なくとも１カ月、少なくとも６カ月又は少なくとも１年の期間を含み、複数回投与されてもよい。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、状態の１つ又は複数の症候を緩和するために必要に応じて対象に投与される。
【００９５】
併用療法
その任意の機能的断片を含む本発明によるＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、他の生物学的に活性な物質又は疾患の治療のための他の治療手法と組み合わせて、それを必要とする対象に投与することができる。例えば、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、単独で、又は他の様式の治療と一緒に投与することができる。それらは、放射線療法などの他の様式の治療の前、実質的に同時又は後に提供することができる。
【００９６】
がんの治療のために、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１つ又は複数の抗がん剤、例えば化学療法剤、成長阻害剤、抗血管新生剤又は抗腫瘍性組成物と併用して投与することができる。本発明の１つ又は複数のＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと併用することができる化学療法剤、成長阻害剤、抗血管新生剤及び抗腫瘍性組成物の非限定例は、本明細書において「定義」の下で提供される。
【００９７】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、１つ又は複数の免疫刺激剤と併用して投与される。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニストを含み、一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞などの免疫細胞で見出される、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞などの免疫細胞で見出される、共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＮＫ細胞などの先天性免疫に関与する細胞で見出される、共刺激分子を含む免疫刺激分子のアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＮＫ細胞などの先天性免疫に関与する細胞で見出される、共阻害分子を含む免疫阻害分子のアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、組合せは、治療対象で抗原特異的Ｔ細胞応答を増強し、及び／又は対象で先天性免疫応答を増強する。一部の実施態様では、組合せは、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト又は免疫刺激剤の単独投与と比較して、異種移植モデルなどの動物がんモデルで改善された抗腫瘍応答をもたらす。一部の実施態様では、組合せは、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト又は免疫刺激剤の単独投与と比較して、異種移植モデルなどの動物がんモデルで相乗的応答をもたらす。
【００９８】
一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化の阻害剤のアンタゴニストを含み、一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化の刺激物質のアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＬＡＧ−３、ガレクチン１、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＬＴ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＫＩＲ、アデノシンＡ２Ａ受容体、ＰＩ３Ｋデルタ又はＩＤＯのアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ２８Ｈ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＦＮα、ＳＴＩＮＧのアゴニスト、又はＴＬＲ２／４アゴニストなどのＴｏｌｌ様受容体アゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）及びＢ７−Ｈ６などの膜結合タンパク質のＢ７ファミリーのメンバーに結合する薬剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｅＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＬ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ又はＮＧＦβなどの、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバー又はＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーに結合する共刺激若しくは共阻害分子に結合する薬剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦなどの、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインに拮抗するか又はそれを阻害する薬剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２又はＣＣＲ４などのケモカインのアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＦＮαなどの、Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、抗体を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、メソテリン標的化ワクチン又は弱毒化リステリアがんワクチン、例えばＣＲＳ−２０７などのワクチンを含むことができる。上記のアンタゴニスト、アゴニスト及び結合性薬剤の任意の１つ又は複数は、本明細書に記載される抗ＳＬＡＭＦ１抗体の任意の１つ又は複数と組み合わせることができる。
【００９９】
一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、上に掲載される少なくとも１つの他の免疫刺激剤と任意選択的に組み合わせたＣＤ４０アゴニストを含む。一部の実施態様では、ＣＤ４０アゴニストは、抗体である。一部の実施態様では、ＣＤ４０アゴニストは、抗ＣＤ４０抗体である。一部の実施態様では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＰ−８７０，８９３；ダセツズマブ；ＳＥＡ−ＣＤ４０；ＡＤＣ−１０１３；ＲＯ７００９７８９；及びカイＬｏｂ７／４から選択される抗体のＣＤＲを含む。一部の実施態様では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＰ−８７０，８９３；ダセツズマブ；ＳＥＡ−ＣＤ４０；ＡＤＣ−１０１３；ＲＯ７００９７８９；及びカイＬｏｂ７／４から選択される抗体の重鎖及び軽鎖可変領域を含む。一部の実施態様では、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＰ−８７０，８９３；ダセツズマブ；ＳＥＡ−ＣＤ４０；ＡＤＣ−１０１３；ＲＯ７００９７８９；及びカイＬｏｂ７／４から選択される抗体である。一部の実施態様では、ＣＤ４０アゴニストは、組換えＣＤ４０Ｌである。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、上記のそれらのいずれかからのＣＤ４０アゴニスト及び少なくとも１つの追加の免疫刺激剤を含む。例えば、上の上記の免疫刺激剤の任意の１つ又は複数は、本明細書に記載されるＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの任意の１つ又は複数、並びにＣＤ４０アゴニスト、例えばＣＤ４０アゴニスト抗体又は組換えＣＤ４０Ｌ、例えば上記の抗ＣＤ４０抗体のいずれか１つと組み合わせることができる。
【０１００】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト及び少なくとも１つの免疫刺激剤は、同時並行的又は逐次的に投与される。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト及び少なくとも１つの免疫刺激剤は、同時並行的に投与される。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤の１又は複数の用量は、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを投与する前に投与される。一部の実施態様では、対象は、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの投与の前に、少なくとも１つの免疫刺激剤による療法の完全なクールを受けた。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストは、少なくとも１つの免疫刺激剤による療法の第２のクールの間に投与される。一部の実施態様では、対象は、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの投与の前に、少なくとも１つの免疫刺激剤の少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３又は少なくとも４用量を受けた。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤の少なくとも１用量は、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストと同時並行的に投与される。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの１又は複数用量は、少なくとも１つの免疫刺激剤を投与する前に投与される。一部の実施態様では、対象は、少なくとも１つの免疫刺激剤の投与の前に、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの少なくとも２、少なくとも３又は少なくとも４用量を受けた。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの少なくとも１用量は、少なくとも１つの免疫刺激剤と同時並行的に投与される。
【０１０１】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニスト及び少なくとも１つの免疫刺激剤を含む組成物が提供される。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化の阻害剤のアンタゴニストを含み、一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｔ細胞の活性化の刺激物質のアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−１、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＬＡＧ−３、ガレクチン１、ガレクチン９、ＣＥＡＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＣＤ２５、ＣＤ６９、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、２Ｂ４、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＰＤ１Ｈ、ＬＡＩＲ１、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、ＩＬＴ４、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦ、ＫＩＲ、アデノシンＡ２Ａ受容体、ＰＩ３Ｋデルタ又はＩＤＯのアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、ＣＤ２８、４−１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４−１ＢＢＬ、ＩＣＯＳ、ＩＣＯＳ−Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＤＲ３、ＣＤ２８Ｈ、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１、ＩＦＮα、ＳＴＩＮＧのアゴニスト、又はＴＬＲ２／４アゴニストなどのＴｏｌｌ様受容体アゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）及びＢ７−Ｈ６などの膜結合タンパク質のＢ７ファミリーのメンバーに結合する薬剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＯＸ４０、ＯＸ４０Ｌ、ＧＩＴＲ、ＧＩＴＲＬ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＣＤ１３７（４−１ＢＢ）、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ１、ＥＤＡ２、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＴβＲ、ＬＩＧＨＴ、ＤｅＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＬ／ＴＬ１Ａ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＴＮＦＲ１、ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ又はＮＧＦβなどの、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバー又はＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーに結合する共刺激若しくは共阻害分子に結合する薬剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦβ、ＶＥＧＦなどの、Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインに拮抗するか又はそれを阻害する薬剤を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＦＮαなどの、Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２又はＣＣＲ４などのケモカインのアンタゴニストを含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は抗体を含む。一部の実施態様では、少なくとも１つの免疫刺激剤は、メソテリン標的化ワクチン又は弱毒化リステリアがんワクチン、例えばＣＲＳ−２０７などのワクチンを含むことができる。
【０１０２】
一部の実施態様では、組成物は、本明細書に記載されるＳＬＡＭＦ１アンタゴニストの任意の１つ又は複数と組み合わされた、上記のアンタゴニスト、アゴニスト及び結合性薬剤の任意の１つ又は複数を含む。組成物は、別個の容器又はコンパートメントに各治療剤を含むことができるか、あるいは、一緒に混合された治療剤の２つ以上を含むことができる。
【０１０３】
ＳＬＡＭＦ１抗体
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１活性を阻害する抗体が提供される。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１活性は、活性化Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制である。一部のそのような実施態様では、抗体はＳＬＡＭＦ１抗体である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ＳＬＡＭＦ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に結合する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ＳＬＡＭＦ１媒介シグナル伝達を阻害する。
【０１０４】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ＳＬＡＭＦ１に対して≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
【０１０５】
一部の実施態様では、抗体は、複数の種のＳＬＡＭＦ１に結合する。例えば、一部の実施態様では、抗体はヒトＳＬＡＭＦ１に結合し、マウス、ラット、イヌ、モルモット及びサルから選択される少なくとも１つの哺乳動物のＳＬＡＭＦ１にも結合する。
【０１０６】
一部の実施態様では、多重特異性抗体が提供される。一部の実施態様では、二重特異性抗体が提供される。非限定的な例示的二重特異性抗体には、第１の抗原に結合する重鎖／軽鎖組合せを含む第１の腕及び第２の抗原に結合する重鎖／軽鎖組合せを含む第２の腕を含む抗体が含まれる。さらなる非限定的な例示的多重特異性抗体は、二重可変ドメイン抗体である。一部の実施態様では、二重特異性抗体は、ＳＬＡＭＦ１活性を阻害する第１の腕及びＴ細胞を刺激する第２の腕を含む。一部の実施態様では、第２の腕は、ＰＤ−１又はＰＤ−Ｌ１に結合する。一部の実施態様では、第１の腕は、ＳＬＡＭＦ１に結合する。
【０１０７】
一部の実施態様では、ラクダの抗体などの、ＳＬＡＭＦ１活性を阻害する単鎖抗体が提供される。
【０１０８】
一部の実施態様では、Ａｄｎｅｃｔｉｎｓ（商標）などの、ＳＬＡＭＦ１活性を阻害するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン抗体が提供される。
【０１０９】
ヒト化抗体
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ヒト化抗体である。ヒト化抗体は、抗体治療薬への免疫応答及び治療薬の有効性の減少をもたらすことができる非ヒト抗体へのヒト免疫応答（ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答など）を低減又は排除するので、治療分子として有益である。
【０１１０】
抗体は、任意の方法によってヒト化することができる。ヒト化の非限定的例示的方法には、例えば、米国特許第５５３０１０１号；第５５８５０８９号；第５６９３７６１号；第５６９３７６２号；第６１８０３７０号；Ｊｏｎｅｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：  ５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：  ３２３−２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：  １５３４−３６（１９８８）；及び米国特許出願公開第２００９／０１３６５００号に記載される方法が含まれる。
【０１１１】
上記したように、ヒト化抗体は、非ヒト可変領域のフレームワーク領域中の少なくとも１つのアミノ酸がヒトフレームワーク領域の対応する位置からのアミノ酸で置き換えられた抗体である。一部の実施態様では、非ヒト可変領域のフレームワーク領域中の少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１５又は少なくとも２０アミノ酸が、１つ又は複数のヒトフレームワーク領域の１つ又は複数の対応する位置からのアミノ酸で置き換えられる。
【０１１２】
一部の実施態様では、置換のために使用される対応するヒトアミノ酸のいくつかは、異なるヒト免疫グロブリン遺伝子のフレームワーク領域からのものである。すなわち、一部のそのような実施態様では、非ヒトアミノ酸の１つ又は複数は、第１のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられるか、第１のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよく、非ヒトアミノ酸の１つ又は複数は、第２のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられるか、第２のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよく、非ヒトアミノ酸の１つ又は複数は、第３のヒト抗体のヒトフレームワーク領域からの対応するアミノ酸で置き換えられるか、第３のヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされてもよい、などである。さらに、一部の実施態様では、単一のフレームワーク領域、例えばＦＲ２で置換のために使用される対応するヒトアミノ酸の全てが、同じヒトフレームワークからのものである必要があるとは限らない。しかし、一部の実施態様では、置換のために使用される対応するヒトアミノ酸の全ては、同じヒト抗体からのものであるか、同じヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされる。
【０１１３】
一部の実施態様では、１つ又は複数のフレームワーク領域全体を対応するヒトフレームワーク領域で置き換えることによって、抗体はヒト化される。一部の実施態様では、置き換えられる非ヒトフレームワーク領域と最高レベルの相同性を有するヒトフレームワーク領域が選択される。一部の実施態様では、そのようなヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト化抗体である。
【０１１４】
一部の実施態様では、ＣＤＲグラフト化に続いて、１つ又は複数のフレームワークアミノ酸がマウスフレームワーク領域の対応するアミノ酸に戻される。一部の実施態様では、そのような「復帰突然変異」は、ＣＤＲの１つ又は複数の構造に寄与するようである、及び／又は抗原接触に関与することができる、及び／又は抗体の全体の構造的完全性に関与するようである、１つ又は複数のマウスフレームワークアミノ酸を保持するためになされる。一部の実施態様では、ＣＤＲグラフト化の後、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、２以下、１又はゼロの復帰突然変異が抗体のフレームワーク領域に対してなされる。
【０１１５】
一部の実施態様では、ヒト化抗体は、ヒト重鎖定常領域及び／又はヒト軽鎖定常領域も含む。
【０１１６】
キメラ抗体
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、キメラ抗体である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、少なくとも１つの非ヒト可変領域及び少なくとも１つのヒト定常領域を含む。一部のそのような実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体の可変領域の全ては非ヒト可変領域であり、ＳＬＡＭＦ１抗体の定常領域の全てはヒト定常領域である。一部の実施態様では、キメラ抗体の１つ又は複数の可変領域は、マウス可変領域である。キメラ抗体のヒト定常領域は、あるならばそれが置き換える非ヒト定常領域と同じアイソタイプのものである必要はない。キメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ等、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８１：  ６８５１−５５（１９８４）で議論される。
【０１１７】
ヒト抗体
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、任意の適する方法によって作製することができる。非限定的な例示的方法には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含むトランスジェニックマウスでヒト抗体を作製することが含まれる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ等、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９０：  ２５５１−５５（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：  ２５５−８（１９９３）；Ｌｏｎｂｅｒｇ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：  ８５６−９（１９９４）；並びに米国特許第５５４５８０７号；第６７１３６１０号；第６６７３９８６号；第６１６２９６３号；第５５４５８０７号；第６３００１２９号；第６２５５４５８号；第５８７７３９７号；第５８７４２９９号；及び第５５４５８０６号を参照。
【０１１８】
非限定的な例示的方法には、ファージディスプレイライブラリーを使用してヒト抗体を作製することも含まれる。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２７：  ３８１−８（１９９２）；Ｍａｒｋｓ等、Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２２２：  ５８１−９７（１９９１）；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ９９／１０４９４を参照。
【０１１９】
ヒト抗体定常領域
一部の実施態様では、本明細書に記載されるヒト化、キメラ又はヒト抗体は、１つ又は複数のヒト定常領域を含む。一部の実施態様では、ヒト重鎖定常領域は、ＩｇＡ、ＩｇＧ及びＩｇＤから選択されるアイソタイプのものである。一部の実施態様では、ヒト軽鎖定常領域は、κ及びλから選択されるアイソタイプのものである。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ定常領域、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４を含む。一部の実施態様では、抗体又はＦｃ融合パートナーは、例えばＩｇＧ１定常領域にＣ２３７Ｓ突然変異を含む。例えば、配列番号６を参照。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施態様では、ＩｇＧ２定常領域は、米国特許第６９００２９２号に記載されるように、Ｐ３３１Ｓ突然変異を含む。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を含む。一部のそのような実施態様では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域にＳ２４１Ｐ突然変異を含む。例えば、Ａｎｇａｌ等、Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３０（１）：  １０５−１０８（１９９３）を参照。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域及びヒトκ軽鎖を含む。
【０１２０】
重鎖定常領域の選択は、抗体がインビボでエフェクター機能を有するか否かを決定することができる。そのようなエフェクター機能には、一部の実施態様では、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）が含まれ、抗体が結合する細胞の死をもたらすことができる。一般的に、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ３重鎖を含む抗体は、エフェクター機能を有する。
【０１２１】
一部の実施態様では、エフェクター機能は望ましくない。例えば、一部の実施態様では、エフェクター機能は炎症性状態及び／又は自己免疫性障害の治療では望ましくないかもしれない。一部のそのような実施態様では、ヒトＩｇＧ４又はＩｇＧ２重鎖定常領域が選択されるか、工学的に操作される。一部の実施態様では、ＩｇＧ４定常領域は、Ｓ２４１Ｐ突然変異を含む。
【０１２２】
抗体の例示的性質
ＳＬＡＭＦ１抗体の例示的性質
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体はＳＬＡＭＦ１に結合して、ＳＬＡＭＦ１媒介シグナル伝達を阻害する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、活性化Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制を阻害する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制を阻害する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞のＳＬＡＭＦ１媒介抑制を阻害する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、５０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満又は１ｎＭ未満の結合親和性（ＫＤ）でＳＬＡＭＦ１に結合する。一部の実施態様では、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定したとき、無関係な非ＳＬＡＭＦ１タンパク質へのＳＬＡＭＦ１抗体の結合の程度は、ＳＬＡＭＦ１への抗体の結合の約１０％未満である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、異なる種からのＳＬＡＭＦ１の間で保存されるＳＬＡＭＦ１のエピトープに結合する。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体は、ヒトＳＬＡＭＦ１に結合するヒトの又はヒト化ＳＬＡＭＦ１抗体と同じエピトープに結合する。
【０１２３】
抗体コンジュゲート
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１は標識にコンジュゲートされる。本明細書で用いるように、標識は、抗体の検出を促進する、及び／又は抗体が結合する分子の検出を促進する部分である。非限定的な例示的標識には、放射性同位体、蛍光性の基、酵素の基、化学発光性の基、ビオチン、エピトープタグ、金属結合性タグなどが限定されずに含まれる。当業者は、目的の適用に従って適する標識を選択することができる。
【０１２４】
一部の実施態様では、標識は、インビトロで化学的方法を使用して抗体にコンジュゲートされる。コンジュゲーションの非限定的な例示的化学的方法は当該技術分野で公知であり、例えば、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｅｓ（旧Ｐｉｅｒｃｅ；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｐｒｏｚｙｍｅ（Ｈａｙｗａｒｄ、ＣＡ）、ＳＡＣＲＩ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（Ｃａｌｇａｒｙ、Ｃａｎａｄａ）、ＡｂＤ  Ｓｅｒｏｔｅｃ（Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ）などから市販されているサービス、方法及び／又は試薬を含む。一部の実施態様では、標識がポリペプチドである場合は、標識は、抗体鎖に融合している標識を含むポリペプチドを生成するために少なくとも１つの抗体鎖を有する同じ発現ベクターから発現させることができる。
【０１２５】
シグナルペプチド
一部の分泌タンパク質が発現し、大量に分泌するためには、異種タンパク質からのシグナルペプチドが望ましいことがある。分泌の過程でＥＲにおいてシグナルペプチドが除去されるので生じる成熟したポリペプチドが不変のままであることができるという点で、異種シグナルペプチドを用いることが有利かもしれない。一部のタンパク質を発現させ、分泌するために、異種シグナルペプチドの付加を必要とすることがある。
【０１２６】
非限定的な例示的シグナルペプチド配列は、例えば、Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｓｉｎｇａｐｏｒｅによって維持される、オンラインのＳｉｇｎａｌ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｄａｔａｂａｓｅに記載される。Ｃｈｏｏ等、ＢＭＣ  Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ、６：  ２４９（２００５）；及びＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／０８１４３０を参照。
【０１２７】
共翻訳及び翻訳後修飾
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１などのポリペプチドは、翻訳の間か後に、例えばグリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク分解性開裂又は抗体分子若しくは他の細胞性リガンドへの連結によって差別的に修飾される。多数の化学修飾のいずれも、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアーゼによる特異的化学的開裂；ＮａＢＨ４；アセチル化；ホルミル化；酸化；還元；及び／又はツニカマイシンの存在下での代謝合成を限定されずに含む公知の技術によって実行することができる。
【０１２８】
本発明によって包含される追加の翻訳後修飾には、例えば、Ｎ結合型又はＯ結合型の炭水化物鎖；Ｎ末端又はＣ末端のプロセシング；アミノ酸骨格への化学部分の結合；Ｎ結合型又はＯ結合型の炭水化物鎖の化学修飾；及び、原核宿主細胞の発現の結果としてのＮ末端メチオニン残基の付加又は欠失が含まれる。
【０１２９】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストをコードする核酸分子
ＳＬＡＭＦ１などの、本明細書に記載される抗体の１つ又は複数の鎖をコードするポリヌクレオチドを含む核酸分子が、提供される。一部の実施態様では、核酸分子は、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施態様では、核酸分子は、本明細書に記載される抗体の重鎖をコードするポリヌクレオチド及び軽鎖をコードするポリヌクレオチドの両方を含む。一部の実施態様では、第１の核酸分子は重鎖をコードする第１のポリヌクレオチドを含み、第２の核酸分子は軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチドを含む。
【０１３０】
一部のそのような実施態様では、重鎖及び軽鎖は１つの核酸分子から、又は２つの別個の核酸分子から２つの別個のポリペプチドとして発現される。一部の実施態様では、例えば抗体がｓｃＦｖである場合、単一のポリヌクレオチドは一緒に連結される重鎖及び軽鎖を含む単一のポリペプチドをコードする。
【０１３１】
一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体の重鎖又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、翻訳されるとき重鎖又は軽鎖のＮ末端に位置するリーダー配列をコードするヌクレオチド配列を含む。上記のように、リーダー配列は天然の重鎖若しくは軽鎖リーダー配列であってもよいか、又は別の異種リーダー配列であってもよい。
【０１３２】
核酸分子は、当該技術分野で慣用される組換えＤＮＡ技術を使用して構築することができる。一部の実施態様では、核酸分子は、選択された宿主細胞での発現に適する発現ベクターである。
【０１３３】
ポリペプチドの発現及び生成
ベクター
本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含むベクターが提供される。そのようなベクターには、ＤＮＡベクター、ファージベクター、ウイルスベクター、レトロウイルスベクターなどが限定されずに含まれる。一部の実施態様では、ベクターは、重鎖をコードする第１のポリヌクレオチド配列及び軽鎖をコードする第２のポリヌクレオチド配列を含む。一部の実施態様では、重鎖及び軽鎖は２つの別個のポリペプチドとしてベクターから発現される。一部の実施態様では、重鎖及び軽鎖は、例えば抗体がｓｃＦｖであるとき、単一のポリペプチドの一部として発現される。
【０１３４】
一部の実施態様では、第１のベクターは、重鎖をコードするポリヌクレオチドを含み、第２のベクターは軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む。一部の実施態様では、第１のベクター及び第２のベクターは、類似の量（例えば、類似のモル量又は類似の質量）で宿主細胞にトランスフェクトされる。一部の実施態様では、５：１から１：５の間のモル比又は質量比の第１のベクター及び第２のベクターが、宿主細胞にトランスフェクトされる。一部の実施態様では、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターの１：１から１：５の間の質量比が使用される。一部の実施態様では、重鎖をコードするベクター及び軽鎖をコードするベクターの１：２の質量比が使用される。
【０１３５】
一部の実施態様では、ＣＨＯ若しくはＣＨＯ由来の細胞、又はＮＳＯ細胞でのポリペプチドの発現のために最適化されたベクターが選択される。例示的なそのようなベクターは、例えば、Ｒｕｎｎｉｎｇ  Ｄｅｅｒ等、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ｐｒｏｇ．  ２０：８８０−８８９（２００４）に記載される。
【０１３６】
一部の実施態様では、ヒトを含む動物でのＳＬＡＭＦ１アンタゴニストのインビボ発現のために、ベクターが選択される。一部のそのような実施態様では、ポリペプチド（１つ又は複数）の発現は、組織特異的に機能するプロモーター（１つ又は複数）の制御下にある。例えば、肝臓特異的プロモーターが、例えば、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／０７６２８８に記載される。
【０１３７】
宿主細胞
様々な実施態様では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、細菌細胞などの原核細胞；又は真菌細胞（酵母など）、植物細胞、昆虫細胞及び哺乳動物細胞などの真核細胞で発現させることができる。そのような発現は、例えば当該技術分野で公知の手法によって実行することができる。ポリペプチドを発現させるために使用することができる例示的な真核細胞には、ＣＯＳ７細胞を含むＣＯＳ細胞；２９３−６Ｅ細胞を含む２９３細胞；ＣＨＯ−Ｓ及びＤＧ４４細胞を含むＣＨＯ細胞；ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞（Ｃｒｕｃｅｌｌ）；並びにＮＳＯ細胞が限定されずに含まれる。一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体の重鎖及び／又は軽鎖は、酵母で発現させることができる。例えば、米国特許出願公開番号ＵＳ２００６／０２７００４５  Ａ１を参照。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１抗体の重鎖及び／又は軽鎖に所望の翻訳後修飾を加えるその能力に基づいて、特定の真核宿主細胞が選択される。例えば、一部の実施態様では、ＣＨＯ細胞は、２９３細胞で生成される同じポリペプチドより高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを生成する。
【０１３８】
所望の宿主細胞への１つ又は複数の核酸の導入は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、カチオン性脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、形質導入、感染などを限定されずに含む、任意の方法によって達成することができる。非限定的な例示的方法は、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、３版、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（２００１）に記載される。任意の適する方法によって、所望の宿主細胞で核酸を一時的に、又は安定してトランスフェクトすることができる。
【０１３９】
一部の実施態様では、任意の適する方法によって、ポリペプチドをコードする１つ又は複数の核酸分子で工学操作又はトランスフェクトした動物で、１つ又は複数のポリペプチドをインビボで生成することができる。
【０１４０】
ポリペプチドの精製
本明細書に記載される抗体は、任意の適する方法によって精製することができる。そのような方法には、親和性マトリックス又は疎水性相互作用クロマトグラフィーの使用が限定されずに含まれる。適する親和性リガンドには、抗体が結合する抗原及び／又はエピトープ並びに抗体定常領域に結合するリガンドが含まれる。定常領域に結合して抗体を精製するために、例えば、プロテインＡ、プロテインＧ、プロテインＡ／Ｇ又は抗体親和性カラムを使用することができる。
【０１４１】
一部の実施態様では、一部のポリペプチドを精製するために、疎水性相互作用クロマトグラフィー、例えばブチル又はフェニルカラムも使用される。ポリペプチドを精製する多くの方法が、当該技術分野で公知である。
【０１４２】
ポリペプチドの無細胞生成
一部の実施態様では、本明細書に記載される抗体は、無細胞系で生成される。非限定的な例示的無細胞系は、例えば、Ｓｉｔａｒａｍａｎ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．  ４９８：  ２２９−４４（２００９）；Ｓｐｉｒｉｎ、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２２：  ５３８−４５（２００４）；Ｅｎｄｏ等、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  Ａｄｖ．  ２１：  ６９５−７１３（２００３）に記載される。
【０１４３】
ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを同定する方法
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを同定する方法が提供される。一部の実施態様では、方法は、ＳＬＡＭＦ１、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子（「ＳＬＡＭＦ１分子」と総称される）と候補分子を接触させることを含む。一部の実施態様では、本方法は、候補分子／ＳＬＡＭＦ１分子混合物とＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞を接触させて、Ｔ細胞活性化に対する影響を判定することをさらに含む。一部の実施態様では、本方法は、候補分子とＩＬ−２活性化ＣＤ３＋Ｔ細胞を接触させ、次に混合物をＳＬＡＭＦ１分子と接触させて、Ｔ細胞活性化に対する影響を判定することを含む。一部の実施態様では、アッセイは、実質的に本明細書の実施例３に記載される通りであるが、候補分子の存在下で実行される。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１分子単独の存在下におけるＴ細胞活性化の抑制と比較して、候補分子の存在下におけるＴ細胞活性化の抑制が低減されるならば、候補分子はＳＬＡＭＦ１アンタゴニストである。一部の実施態様では、候補分子は、Ｔ細胞活性化の抑制を少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％低減する。一部の実施態様では、候補分子は、抗ＳＬＡＭＦ１抗体である。当業者は、成分がお互いと接触する順序は、アッセイ設計によって変えることができることを認めるであろう。
【０１４４】
一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１分子は、完全長ＳＬＡＭＦ１、例えば、細胞の表面で発現されるＳＬＡＭＦ１である。一部の実施態様では、ＳＬＡＭＦ１分子は、可溶型ＳＬＡＭＦ１、例えば、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ又はＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ融合分子である。
【０１４５】
候補分子の例示的なクラスには、抗体、ペプチド、小分子及びアプタマーが限定されずに含まれる。一部の実施態様では、候補分子は、ＳＬＡＭＦ１に結合することが公知である抗体（すなわち、ＳＬＡＭＦ１抗体）である。
【０１４６】
製造品
一部の実施態様では、バイオマーカー（例えば、ＳＬＡＭＦ１）の検出又は上記の障害の治療、予防及び／若しくは診断のために有益な物質を含有する製造品又はキットが提供される。製造品は、容器、及び容器の上に又はそれに関連して表示又は添付文書を含む。適する容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが含まれる。容器はガラス又はプラスチックなどの様々な材料で形成することができる。一部の実施態様では、容器は、単独であるか、状態を治療、予防及び／又は診断するために有効な別の組成物と組み合わされた組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有することができる（例えば、容器は、皮下注射針で穿刺可能なストッパを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。表示又は添付文書は、組成物が選択された状態を治療するために使用されることを示す。一部の実施態様では、製造品は、（ａ）本発明のＳＬＡＭＦ１アンタゴニストを含む組成物をその中に含有する第１の容器；及び（ｂ）さらなる治療剤を含む組成物をその中に含有する第２の容器を含むことができる。製造品は、特定の状態を治療するために組成物を使用することができることを表示する添付文書をさらに含むことができる。あるいは、又はさらに、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば静菌性注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器をさらに含むことができる。それは、他のバッファー、希釈剤、フィルター、針及びシリンジを含む、商業的及びユーザーの見地から望ましい他の材料をさらに含むことができる。
【０１４７】
一部の実施態様では、本発明の分子は、単独で、又は他の治療化合物と組み合わせてキットとして包装することができる。一実施態様では、治療化合物は、抗がん剤である。別の実施態様では、治療化合物は、免疫抑制剤である。キットは、粉末形態を再構成するためのバイアル、注射用シリンジ、カスタマイズされたＩＶ送達系、吸入器などの、患者への単位用量の投与を助ける任意選択の構成要素を含むことができる。さらに、単位用量キットは、組成物の調製及び投与のための説明書を含むことができる。キットは、１名の患者のための単用単位用量として、特定患者のための複数回の使用（一定用量の、又は治療の進行に従って個々の化合物の力価が変化する場合）として製造することができる。又は、キットは複数の患者への投与に適する複数用量を含有することができる（「ばら包装」）。キットの構成要素は、カートン、ブリスター包装、ボトル、チューブなどで組み立てることができる。
【実施例】
【０１４８】
下で議論される実施例は、本発明の単なる例示が目的であり、本発明を限定するものと決して考えるべきでない。実施例は、下の実験が実施された全て又は唯一の実験であることを表すものではない。用いる数（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するように努めたが、多少の実験誤差及び逸脱が考慮されるべきである。特に明記しない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度で示され、圧は大気圧又はその近辺である。
【０１４９】
実施例１
材料及び方法
細胞／血液。全てのバフィーコートは、Ｓｔａｎｆｏｒｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｃｅｎｔｅｒから得られた。
【０１５０】
ＣＤ３＋Ｔ細胞の濃縮。フィコール勾配を使用して、バフィーコートからＰＢＭＣを濃縮した。製造業者の説明書に基づいてＳｔｅｍＣｅｌｌ  ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓからのＥａｓｙＳｅｐ（商標）ヒトＴ細胞濃縮キットを使用して、全体のＣＤ３＋Ｔ細胞を負濃縮した。
【０１５１】
ＣＤ３＋Ｔ細胞活性化及びＩＬ−２静止。１：１の細胞対ビーズ比及び２×１０５細胞数／ｍＬの濃度で、３７℃で６日間の間、濃縮したＣＤ３＋Ｔ細胞を抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８  Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で活性化した。Ｄｙｎａｌ磁石（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して細胞からビーズを除去し、１×１０６細胞数／ｍＬの細胞濃度で３７℃でさらなる４日間の間、１０Ｕ／ｍＬのＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）の存在下で培養した。ＩＬ−２を除去するために細胞を完全に洗浄し、増殖アッセイで使用した。
【０１５２】
増殖アッセイ。９６ウェル組織培養処理プレートを、１×ＰＢＳ中の１．３５μｇ／ｍＬの抗ヒトＣＤ３（クローンＯＫＴ３、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）及び２０μｇ／ｍＬの抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で、４℃で一晩コーティングした。遊離タンパク質を除去するためにプレートを１×ＰＢＳで完全に洗浄し、Ｆｃタンパク質の滴定用量（１００μｇ／ｍＬから開始；１×ＰＢＳに１：３の希釈）で、３７℃で４時間再コーティングした。ヒトＩｇＧ１及びヒトＰＤ−Ｌ１−ｈＩｇＧ１のネガティブとポジティブコントロールをＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから購入し、ヒトＳＬＡＭＦ１−ｈＩｇＧ１はＦｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓで生産された。Ｆｃタンパク質の再コーティングの後、遊離タンパク質を除去するためにプレートを１×ＰＢＳで完全に洗浄し、活性化／ＩＬ−２静止ＣＤ３＋Ｔ細胞を１×１０６細胞数／ｍＬの濃度でプレートに加えた。細胞は、プレートの上で３７℃で７２時間インキュベートされる。収集の１２−１６時間前に、細胞に５μＭのＥｄｕ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）をパルス投与し、３７℃でインキュベートする。製造業者の説明書に従ってＣｌｉｃｋ−ｉＴ  Ｐｌｕｓ  Ｅｄｕフローサイトメトリーアッセイキット（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して、ＬＳＲＩＩ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の上で増殖細胞パーセントをフローサイトメトリーによって測定する。データは、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。
【０１５３】
実施例２
ＰＤ−Ｌ１は活性化／ＩＬ−２静止ＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖を抑制する
この固定化されているＦｃタンパク質アッセイフォーマットがＴ細胞の増殖を抑制することが可能なタンパク質を同定することができるかどうかについて探究するために、前に活性化され、ＩＬ−２で静止されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ並びにＲ＆Ｄ  ＳｙｓｔｅｍｓからのｈＩｇＧ１及びＰＤ−Ｌ１又はＦｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにて生産されたＰＤ−Ｌ１のいずれかでコーティングされたプレートに加えた。これらのＦｃタンパク質の存在下での活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の７２時間の再刺激は、ＰＤ−Ｌ１の存在下でだけ増殖が抑制されることを実証した（図１）。用量依存的抑制がいずれのＰＤ−Ｌ１タンパク質の存在下でも観察されたのに対して、ｈＩｇＧ１の存在下で用量依存的抑制は観察されなかった。試験したｈＩｇＧ１の最も高い濃度（すなわち１００μｇ／ｍＬ）で多少の抑制があり、≧１００μｇ／ｍＬの濃度が多少の非特異的抑制を生じ得ることを示唆する。このデータは、このアッセイ系がＴ細胞の増殖を抑制することが可能なＦｃタンパク質を同定することが可能なことを実証する。
【０１５４】
実施例３
ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃは活性化／ＩＬ−２静止ＣＤ３＋Ｔ細胞の増殖を抑制する
この精製Ｔ細胞アッセイフォーマットでＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ−ＦｃがＴ細胞の増殖を抑制するかどうかについて探究するために、前に活性化され、ＩＬ−２で静止されたＣＤ３＋Ｔ細胞を、抗ＣＤ３、抗ヒトＩｇＧ及びＦｉｖｅ  Ｐｒｉｍｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓにて生産されたＳＬＬＡＭＦ１−Ｆｃでコーティングされたプレートに再び加えた。ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃの存在下での活性化／ＩＬ−２静止Ｔ細胞の７２時間の再刺激は、ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃが増殖を用量依存的に抑制することを実証した（図２）。ＳＬＡＭＦ１−Ｆｃは試験した３ドナーで完全に近い阻害を、及び試験した３ドナーで部分的阻害を実証した。これらのデータは、ＳＬＡＭＦ１−ＦｃがＴ細胞の増殖を抑制することを示唆する。
【０１５５】
実施例４
ヒト組織におけるＳＬＡＭＦ１の発現
ＳＬＡＭＦ１は、本来ＲＴ−ＰＣＲによってリンパ細胞で排他的に発現されると同定された。Ｃｏｃｋｓ等、１９９５、Ｎａｔｕｒｅ  ３７６：  ２６０−２６３を参照。ＲＴ−ＰＣＲはヒト組織ＲＮＡ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）及びヒト免疫細胞ＲＮＡ（ＡｌｌＣｅｌｌｓ、ＬＬＣ）の群で実行され、それらは製造業者のプロトコール（Ｑｉａｇｅｎ）に従ってｃＤＮＡに逆転写された。ＳＬＡＭＦ１のための遺伝子特異的プライマー又はＧＵＳＢ（Ｑｉａｇｅｎ）及びＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ試薬（Ｑｉａｇｅｎ）を使用した定量的ＰＣＲのために、ｃＤＮＡを希釈し、並行ウェルに分配した。９５℃で１５秒、５５℃で３０秒及び７２℃で３０秒の合計４０サイクルの間、製造業者の推奨プロトコールに従ってｑＰＣＲを実行した。各組織の中の発現は、ΔΔＣｔ方法を使用してＧＵＳＢの相対発現に正規化した。ＳＬＡＭＦ１のｍＲＮＡは、胸腺で、並びにＣＤ４＋Ｔ細胞（ナイーブ及び記憶細胞の両方、記憶Ｔ細胞でより高い発現）、ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞、Ｔ調節細胞、Ｂ細胞及び単球由来の樹状細胞で発現されることが見出された。図３を参照。このＲＴ−ＰＣＲデータは、公開されたタンパク質発現データと一致する。例えば、Ａｖｅｒｓａ等、１９９７、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５８：４０３６−４０４４；Ｐｕｎｎｏｎｅｎ等、１９９７、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８５：  ９９３−１００４；Ｂｌｅｈａｒｓｋｉ等、２００１、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７：  ３１７４−３１８１を参照。これらのデータは、ＳＬＡＭＦ１の発現が活性化Ｔ細胞、Ｂ細胞及び樹状細胞で濃縮されることを示す−ＰＤ−１及びＴＩＭ３を含む他の免疫チェックポイントに一致するパターン。
【０１５６】
実施例５
ＳＬＡＭＦ１はインビボで腫瘍増殖を増加させる
１１週齢雌Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）から購入し、試験開始前の９日間順応させた。ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ  Ｆｃをコードする核酸の尾静脈トランスフェクションを用いて、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ  Ｆｃの構成的、全身性発現を誘導するために、マウスを処置した。遺伝子発現の誘導を模倣するために、コントロール動物を食塩水で処置した。次に、マウスの右側腹部に、マウスのＴ細胞リンパ腫細胞株Ｅ．Ｇ７−ＯＶＡを１×１０６細胞数／１００μｌ／マウスで皮下に植え込んだ。Ｅ．Ｇ７−ＯＶＡ細胞株は、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ；カタログ番号ＣＲＬ−２１１３）から購入した。接種の前に、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１．５ｇ／Ｌ重炭酸ナトリウム、４．５ｇ／Ｌグルコース、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１．０ｍＭピルビン酸ナトリウム、０．０５ｍＭ  ２−メルカプトエタノール、０．４ｍｇ／ｍｌ  Ｇ４１８及び抗生−抗真菌性溶液を追加したＲＰＭＩ  １６４０の培養液で細胞を３継代培養した。５％ＣＯ２の加湿雰囲気中の３７℃で、細胞を増殖させた。８０−８５％の集密度に到達した後、細胞を収集し、１ミリリットルにつき１×１０７細胞数で、５０％マトリゲルを含有する冷たいＣａ２＋及びＭｇ２＋フリーのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁させた。
【０１５７】
細胞移植の後に週２回、腫瘍増殖についてマウスをモニタリングした。５日目から、各腫瘍の長さ及び幅をノギスで測定し、体積は、以下の式で計算した：腫瘍体積（ｍｍ３）＝（幅（ｍｍ）×長さ（ｍｍ））２／２。腫瘍体積が動物重量の１０％又は概ね２０００ｍｍ３を超えるまで、１週間に少なくとも２回、腫瘍を測定し続けた。試験からのそれらの排除の時に全ての動物から血漿を収集し、ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ  Ｆｃの発現をＥＬＩＳＡによって確認した。
【０１５８】
その実験の結果は、図４に示す。動物をＥ．Ｇ７−ＯＶＡ細胞で接種した日と比較した平均腫瘍体積をグラフで示すことによって、腫瘍サイズの変化を示す。ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ  Ｆｃ又はコントロールとして食塩水による処置の結果としての腫瘍体積の比較は、Ｐ＜０．０５の場合、統計的に有意であると判定された。Ｐ値は、腫瘍を測定した各日の計算された腫瘍体積の対応のない両側性ｔ検定分析を使用して計算した。ＳＬＡＭＦ１  ＥＣＤ  Ｆｃを発現したマウスにおける、食塩水コントロールと比較して増加した腫瘍体積は、１５日目（ｐ＝０．０３０５）及び１８日目（ｐ＝０．０２７７）に統計学的に有意であった。図４Ａ及び４Ｂを参照。
【０１５９】
実施例６
抗ＳＬＡＭＦ１抗体は、人工ＡＰＣアッセイでＴ細胞阻害を軽減する
完全長マウスＳＬＡＭＦ１をコードするＤＮＡを含有するレンチウイルス（Ｇｅｎｅｃｏｐｏｅｉａ  ＥＸ−Ｍｍ０６５７１−Ｌｖ１０５）、又は空のベクターコントロールに、マウスＡ２０細胞（ＡＴＣＣ  ＴＩＢ−２０８）を感染させた。Ａ２０細胞でのマウスＳＬＡＭＦ１の安定した発現が、フローサイトメトリーによって確認された（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄクローンＴＣ１５−１２Ｆ１２．２）。
【０１６０】
アッセイ当日、マウスＣＤ４＋Ｔ細胞ＭＡＣＳ分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  １３０−１０４−４５４）を使用して、Ｄ０１１マウス（Ｊａｃｋｓｏｎ保存株番号００３３０３）のリンパ節からマウスＣＤ４＋Ｔ細胞を分離した。Ｔ細胞をＣＦＳＥ色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｃ３４５５４）で標識し、次に洗浄して計数した。マウスＳＬＡＭＦ１を発現するＡ２０細胞又はベクターコントロール細胞を、３７℃で１時間、１００μｇ／ｍＬのマイトマイシンＣ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）で処置し、次に洗浄して計数した。
【０１６１】
アッセイセットアップのために、１００，０００個のＣＦＳＥ標識ＣＤ４＋Ｔ細胞を、１０％の熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１×非必須アミノ酸及び０．０５ｍＭ  ２−メルカプトエタノールを追加したＲＰＭＩ  １６４０培養液中で、２０，０００個のマイトマイシンＣ処置Ａ２０細胞及び５ｎｇ／ｍＬのＯＶＡ３２３−３３９ペプチド（Ａｎａｓｐｅｃ  ２７０２４）と混合した。一部のウェルでは、ラット抗マウスＳＬＡＭＦ１抗体を様々な濃度で加えた：クローンＴＣ１５−１２Ｆ１２．２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、クローン９Ｄ１（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ）又は関連するアイソタイプコントロール（図５Ａ）。アッセイは９６ウェル丸底プレートで設定し、３７℃及び５％ＣＯ２で３日間インキュベートし、次にフローサイトメトリーによってＣＦＳＥ蛍光を読み取った。Ｔ細胞増殖は、ＦｌｏｗＪｏによって、ＯＶＡペプチドなしのコントロールウェルと比較して低減されたＣＦＳＥ蛍光を有していたＴ細胞のパーセントとして分析した（％分裂細胞）。
【０１６２】
実験の結果は、図５Ｂ−Ｃに示す。Ａ２０細胞へのマウスＳＬＡＭＦ１の導入は、ベクターコントロールＡ２０細胞と比較して５ｎｇ／ｍＬのＯＶＡペプチドによって刺激されるＴ細胞増殖の量を低減する（図５Ｂ）。阻害は、ブロックする抗ＳＬＡＭＦ１モノクローナル抗体によって覆され（Van Driel等、2012 Gastroenterology 143: 1544-1554）が、アイソタイプコントロール抗体は影響を及ぼさない（図５Ｃ）。さらに、ベクターコントロールＡ２０細胞と混合されたＴ細胞に加えられるときは、抗ＳＬＡＭＦ１抗体は影響を及ぼさない。結果は、抗ＳＬＡＭＦ１ブロッキング抗体がＳＬＡＭＦ１によるＴ細胞活性化の共阻害を覆すことを実証する。
【０１６３】
実施例７
人工ＡＰＣアッセイでのヒトＳＬＡＭＦ１によるＴ細胞阻害は、ブロッキング抗体によって軽減することができる
Ｇｅｒｄｅｍａｎｎ等、２０１２  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２０：  １６２２−３２から適合させたプロトコールを使用して、Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ＬｔｄからのＨＬＡ−Ａ＊０２陽性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からＣＭＶ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞を増殖させた。簡潔には、１０μｇ／ｍＬのＣＭＶｐｐ６５４９５−５０３（Ａｎａｓｐｅｃ２８３２８）を３７℃で２時間、ＰＢＭＣに加え、その後、２ｎｇ／ｍＬの組換えＩＬ−２（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）及び１０ｎｇ／ｍＬの組換えＩＬ−７（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加えたＣＴＬ培養液（１０％熱不活性化ヒトＡＢ血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、２ｍＭのＬ−グルタミン、１×ペニシリン／ストレプトマイシン及び０．０５ｍＭの２−メルカプトエタノールを加えたＲＰＭＩ  １６４０培養液）に平板培養した。１１日後に、１０μｇ／ｍＬのＣＭＶペプチドを加えた、自家マイトマイシンＣ処置ＰＨＡ芽球で細胞を再刺激した（実施例６のように）。細胞をさらに１０日間増殖させ、次に、ＣＤ８＋Ｔ細胞をＭｉｌｔｅｎｙｉヒトＣＤ８＋Ｔ細胞分離キット（１３０−０９６−４９５）で分離し、低温保存した。
【０１６４】
ヒトＴ２細胞（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−１９９２）は、フローサイトメトリー（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＃３０６３０８）によってヒトＳＬＡＭＦ１を生来発現することが見出された。アッセイの前日に、ＣＭＶ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞のバイアルを解凍し、ＣＴＬ培養液に平板培養した。アッセイ当日に、Ｔ２細胞に、回転させながら３７℃で１時間、ＣＴＬ培養液中の１μｇ／ｍＬのＣＭＶペプチドを加えた。細胞を次にＣＴＬ培養液で３回洗浄し、計数した。９６ウェル丸底プレート中のＣＴＬ培養液中で、１００，０００個のＣＭＶ負荷Ｔ２細胞を１００，０００個のＣＭＶ反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞と混合した。複数の抗ヒトＳＬＡＭＦ１抗体を、反応に追加した：ヒツジポリクローナル（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＡＦ１６４）、マウスクローンＡ１２（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＃３０６３１０）、マウスクローンＩＰＯ−３（Ｔｈｅｒｍｏ  ＃ＭＡ１７６２６）、マウスクローン５４２３０１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ＃ＭＡＢ１６４２）又は各々のための適当なアイソタイプコントロール。プレートを３７℃及び５％ＣＯ２で４８時間インキュベートし、次に上清を収集して、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）レベルをヒトＩＦＮγ  ＨＴＲＦアッセイ（Ｃｉｓｂｉｏ  ＃６２ＩＦＮＰＥＢ）によって測定した。
【０１６５】
これらの実験の結果を、図６に示す。抗ＳＬＡＭＦ１ポリクローナル（図６Ａ）及びモノクローナル抗体（図６Ｂ）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞によるＩＦＮγ生成の用量依存的増加を刺激する。どの細胞型を通して抗体が効いたかについて判定するために、ポリクローナル抗体をＣＭＶ負荷Ｔ２細胞又はＣＤ８＋Ｔ細胞のいずれかとプレインキュベートし、その後アッセイをセットアップする前に洗い流した。Ｔ２細胞との抗体のプレインキュベーションはアッセイ全体で抗体組入れの活性を再生するが、ＣＤ８＋Ｔ細胞との抗体のプレインキュベーションは最小限の影響しか及ぼさないことが判明した（図６Ｃ）。抗ＳＬＡＭＦ１抗体がＴ２細胞によるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を増強する理由の１つの可能な説明は、抗体のＦｃ群がＦｃ受容体を通してＣＤ８＋及びＴ２細胞を架橋結合し、この誘導された近接性を通して活性化を増加させるということである。これを排除するために、Ｔ２及びＣＤ８＋Ｔ細胞をフローサイトメトリーによってＦｃ受容体の存在に関して染色した。Ｔ２細胞が１つのＦｃ受容体ＣＤ３２ｂを発現することが判明した。アッセイに及ぼすＣＤ３２ｂ媒介架橋の影響を排除するために、抗ＳＬＡＭＦ１クローン５４２３０１の滴定を、無添加と比較した抗ＳＬＡＭＦ１抗体の各用量での５μｇ／ｍＬブロッキング抗ＣＤ３２抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＃１６−０３２９−８５）又はアイソタイプコントロールの添加で設定した。ＣＤ３２ブロッキング抗体もアイソタイプコントロール抗体の添加も、ＩＦＮγ放出の抗ＳＬＡＭＦ１刺激にいかなる影響も及ぼさないことが判明した（図６Ｄ）。
【０１６６】
合わせると、これらのデータは、抗ＳＬＡＭＦ１抗体がＳＬＡＭＦ１に結合して、ＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＭＶペプチド刺激活性化のその阻害を軽減することを指し示す。この活性は、主にＣＤ８＋細胞ではなくＴ２細胞の上でのＳＬＡＭＦ１のブロッキングのためであるようである。この活性は、Ｆｃ受容体によって媒介される架橋のためでもない。これらの結果は、本明細書のマウスアッセイで観察されるＳＬＡＭＦ１のＴ細胞の共阻害活性と一致している。
【０１６７】
実施例８
ＳＬＡＭＦ１は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞の上で発現される
ＢＡＬＢ／ｃマウスをＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入し、順化の後、マウス当たり１×１０６細胞数／２００μｌで右側腹部の皮下にマウス結腸癌細胞株ＣＴ２６（ＡＴＣＣ  ＣＲＬ−２６３８）を接種した。接種の前に、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を加えたＲＰＭＩ  １６４０培養液で、細胞を３継代以下培養した。５％ＣＯ２の加湿雰囲気中の３７℃で、細胞を増殖させた。８０−８５％の集密度に到達した後、細胞を収集し、１ミリリットルにつき５×１０６細胞数で、５０％マトリゲルを含有する冷ＲＰＭＩ  １６４０に再懸濁させた。
【０１６８】
移植の概ね１−３週後に、腫瘍組織を収集して計量した。腫瘍をかみそりの刃で細かく切り刻み、３７℃で３０分の間振盪させながら、ＲＰＭＩ  １６４０培養液中で２００Ｕ／ｍＬのコラゲナーゼＩ型（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏ、カタログ番号ＬＳ００４１９６）の５ｍＬで消化した。細胞懸濁液を４０μｍのフィルターに通し、洗浄し、計数した。各腫瘍からの１０６個の細胞を室温で１５分の間、１０μｇのＤＮａｓｅＩ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ番号０７９００）で処置した。表３の抗体カクテルの５０μＬを細胞に加え、４℃で３０分の間インキュベートした。染色後、細胞を冷ＰＢＳで２回洗浄し、次に、１：１０００の水生Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ色素（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌ３４９５７）の１００μＬを加え、４℃で１５−２０分の間インキュベートした。その後、０．５％ＢＳＡ及び２ｍＭのＥＤＴＡを加えた冷ＰＢＳで細胞をさらに３回洗浄し、次にフローサイトメトリーによって分析した。
表3:マウス腫瘍リンパ球抗体染色パネル
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【０１６９】
調節Ｔ細胞（Ｔｒｅｇｓ）を特異的に染色するために、腫瘍細胞懸濁液を上記のように、しかし表３の抗体のサブセットで染色した：ＥｐｈＡ２−ＡＰＣ、ＣＤ４５−ＦＩＴＣ、ＣＤ３ｅ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、ＣＤ４−ＢＶ７１１、ＣＤ２５−ＢＶ６０５、ＳＬＡＭＦ１−ＢＶ４２１及びＦｃブロック。細胞を次に洗浄し、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ  ＦＯＸＰ３  Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍバッファー（カタログ番号４２１４０３）で固定し、次に抗マウスＦｏｘＰ３−ＰＥクローンＦＪＫ−１６ｓ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  １２−５７７３−８２）又は適当なアイソタイプコントロールにより室温で３０分間染色した。その後、０．５％ＢＳＡ及び２ｍＭのＥＤＴＡを加えた冷ＰＢＳで細胞をさらに３回洗浄し、次にフローサイトメトリーによって分析した。
【０１７０】
単一の生細胞のための最初のゲーティングによるＦｌｏｗＪｏで、フローサイトメトリーデータの分析を実行した。ＣＴ２６腫瘍細胞及び腫瘍浸潤性白血球をそれぞれ同定するために、ＥｐｈＡ２及びＣＤ４５抗体を使用した。腫瘍浸潤性白血球の間で骨髄細胞を分離するためにＣＤ１１ｂを使用し、残りの抗体は様々なリンパ細胞型を区別するために使用した。ＳＬＡＭＦ１は、大多数の腫瘍浸潤性ＣＤ４＋Ｔ細胞、並びにＣＤ８＋Ｔ細胞及びＮＫＴ細胞のサブセットで発現されることが見出された（図７Ａ）。負の染色コントロールとして図７に含まれるＮＫ細胞で、ＳＬＡＭＦ１発現は観察されなかった。Ｔｒｅｇ細胞のほぼ全ては、ＳＬＡＭＦ１を発現することが見出された（図７Ｂ）。さらに、腫瘍中の大多数のＣＤ４Ｔ細胞は、ＳＬＡＭＦ１及びＰＤ−１を共発現することが見出され、これらの２つのマーカーがほとんど重複する発現プロファイルを実際有することを確認した（図７Ｃ、ＮＫ細胞は負の染色コントロールとして含まれる）。合わせて、これらのデータは、ＳＬＡＭＦ１が活性化Ｔ細胞及びＴｒｅｇｓを含む、ＣＴ２６腫瘍の大多数のＣＤ４＋Ｔ細胞で発現されることを指し示す。
【０１７１】
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ）で増殖させたＭＣ３８マウス結腸癌腫瘍を染色したとき、類似の結果が得られた。
配列表
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【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ−Ｂ】
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【図５Ｃ】
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【図６】
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【図７】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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