(57)【要約】  本開示は、とりわけ、ダイズ豆組織のグリセオリン含有量を増大させる組成物および方法、ならびに上昇したグリセオリン含有量を含むダイズ豆組織の大規模生産の方法を包含する。本開示は、過体重、肥満症、前糖尿病、糖尿病、ＩＢＤ、および胃腸ディスバイオシスの治療または予防（すなわち、発症の遅延）における、グリセオリンを含む食品製品の投与を更に包含する。
2017507148.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物組織１グラムあたり少なくとも０．０１ｍｇのグリセオリン含有量を有する単離植物組織を含む、組成物。
【請求項２】
１つもしくは複数のグリセオリンを含有する単離ダイズさや組織を含む、組成物。
【請求項３】
１つもしくは複数のグリセオリンの組み合わせ総濃度が、ダイズさや組織の１グラムあたり少なくとも０．０６ｍｇである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
１つもしくは複数のグリセオリンの組み合わせ総濃度が、ダイズさや組織の１グラムあたり少なくとも０．１ｍｇである、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
１つもしくは複数のグリセオリンの組み合わせ総濃度が、ダイズさや組織の１グラムあたり少なくとも５ｍｇである、請求項２に記載の組成物。
【請求項６】
ダイズさやが、可溶性食物繊維および不溶性食物繊維を含有する、請求項２から５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
経口送達用に調製される、請求項１から６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項８】
ダイズさや組織由来の食物繊維を含む、食品製品。
【請求項９】
１つもしくは複数のグリセオリンを更に含む、請求項８に記載の食品製品。
【請求項１０】
グリセオリンの組み合わせ総量が、少なくとも１０ｍｇである、請求項９に記載の食品製品。
【請求項１１】
１つもしくは複数のグリセオリンを含有する粉末を含む、組成物。
【請求項１２】
粉末が、ダイズさや組織から作製される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
粉末が、１つもしくは複数のグリセオリンを、粉末１グラムあたり少なくとも０．０１ｍｇのグリセオリンの組み合わせ総濃度で含有する、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１４】
粉末が、１つもしくは複数のグリセオリンを、粉末１グラムあたり少なくとも０．０６ｍｇのグリセオリンの組み合わせ総濃度で含有する、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１５】
粉末が、１つもしくは複数のグリセオリンを、粉末１グラムあたり少なくとも１．０ｍｇのグリセオリンの組み合わせ総濃度で含有する、請求項１１または１２に記載の組成物。
【請求項１６】
過体重または肥満症に罹患しているかまたは感受性である対象を治療する方法であって、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物または食品製品を対象に経口投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
糖尿病に感受性であるかまたは罹患している対象を治療する方法であって、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物または食品製品を対象に経口投与するステップを含む、方法。
【請求項１８】
炎症性腸疾患に感受性であるかまたは罹患している対象を治療する方法であって、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物または食品製品を対象に経口投与するステップを含む、方法。
【請求項１９】
対象の胃腸マイクロバイオームを改変する方法であって、
対象の胃腸マイクロバイオームが、脂肪およびタンパク質を処理する第１の細菌個体群と、炭水化物を発酵し、小鎖脂肪酸の増加を生じる第２の細菌個体群とを含み、
対象の胃腸管における第１の細胞個体群のおよび第２の細菌個体群の相対的存在度を変化させるために有効量の１つもしくは複数のグリセオリンを含む組成物を、対象に投与することを含む、方法。
【請求項２０】
第１の個体群がＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅを含み、第２の個体群がＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
対象の胃腸マイクロバイオームを改変する方法であって、
マイクロバイオータ分類群が、５％未満の存在度のＢｌａｕｔｉａのレベルを含有することが決定される対象に、
Ｂｌａｕｔｉａのレベルを少なくとも２０％の存在度に増加させるために有効量の１つもしくは複数のグリセオリンを含む組成物を投与するステップ
を含む、方法。
【請求項２２】
対象において胃腸のディスバイオシスを治療する方法であって、１つもしくは複数のグリセオリンを含む有効量の組成物を対象に経口投与するステップを含む、方法。
【請求項２３】
ダイズさや食物繊維および１つもしくは複数のグリセオリンを含む粉末を製造する方法であって、
ダイズさや組織を得るステップと、
ダイズさや組織を薄切りするステップと、
１つもしくは複数のグリセオリンを、ダイズさや組織に添加するステップと、
ダイズさや組織を乾燥するステップと、
ダイズさや組織を微粉砕して粉末にするステップ
とを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連技術の説明）
本出願は、２０１４年２月２０日出願の米国特許仮出願第６１／９４２，４１５号の優先権の利益を主張し、その全ての内容の開示は、全ての目的において全体が参照として本明細書に組み込まれる。
【背景技術】
【０００２】
近代技術の１つの恩恵は、ヒトの寿命および健康が改善したことであるが、近代社会はより多くの座業を助長している。産業化および農地から大都会への移動の前は、ヒトの体が作業を行った。
【０００３】
近代的な農業システムは、２つの関連する目標を念頭において開発されており、可能な限り高い収量を得ること、および可能な限り高い経済的利益を得ることである。食品加工の利益には、保存、効率的な市場活動および配給、ならびに食品の硬さの増加が含まれる。加えて、年間を通して多くの食品の利用可能性を増加し、傷みやすく腐りやすい食品の長距離にわたる輸送を可能にし、腐敗および病原性の微生物を非活性化することによって、多くの種類の食品を食べても安全にしている。近代の食品加工がもたらす残念な結果は、以前にもましてより多くのカロリーが１グラムあたりの食品に詰め込まれていることである。
【０００４】
近代化の結果として、近代社会の人々は、長生きし、１日により多くのカロリーを消費し、より座りがちになっている。近代化に伴って、代謝適合性を失う大きな危険性が存在する。身体中のそれぞれの細胞は重要な機能を有し、エネルギーを消費して、機能を実施する。エネルギーは食品の代謝により供給され、多くの場合、熱単位またはカロリーにより測定される。エネルギーバランスは、食事により供給される総エネルギーが全ての細胞が要求する総エネルギーと釣り合う点である。負のエネルギーバランスの期間において、または費やした総エネルギーが消費した総エネルギーよりも大きいときに備えるため、エネルギーは脂肪に変換され、脂肪細胞（fat cells or adipocytes）に貯蔵される。貯蔵は、正のエネルギーバランスの期間において、または消費および吸収された総カロリーがその期間に利用された総カロリーよりも大きいときに生じる。代謝的に適合した個体は、エネルギー需要を満たした十分なカロリーを消費し、過剰カロリーを脂肪として脂肪細胞に蓄積するものである。しかし、近代化の結果として、多くの場合に代謝適合性は失われている。消費カロリーが多量なので、脂肪細胞は過負荷になり、貯蔵用に合成された脂肪は、他の組織に貯め込まれる。
【０００５】
脂肪を脂肪細胞に貯蔵することは、完全に健康なことであるが、脂肪を肝臓、動脈、膵臓、筋肉、骨、脳などのような任意の他の臓器に貯蔵することは、不健康なことである。近代化は、脂肪供給レベルを測定する、および脂肪が集積する位置を特定する新たな方法の発見をもたらした。安価な方法は、身長および体重を測定して、肥満指数またはＢＭＩを計算することである。ＢＭＩが約２５であると、代謝的に適合していると思われる。ＢＭＩが２５を超えると適合性の損失が観察される。ＢＭＩが３０を超えると、肥満症と定義される。脂肪細胞以外の組織に貯蔵される脂肪は不健康であることの結果であり、糖尿病および心血管疾患などの多くの病理知見をモニターし、相関させる指数として、ＢＭＩを使用する、多数の研究が存在する。
【０００６】
糖尿病は、ほぼ２千５百８十万人、または米国の人口の８．３％に影響を及ぼし、次の十年間にわたって有意に上昇すると推測される。大部分の場合において、糖尿病は、特殊な機能のために必要なエネルギー（グルコース）を供給するためにインスリンを利用する組織に貯蔵された、過剰量の脂肪によってもたらされる。これらの組織は、脂肪を集積するとインスリンに対する感受性がますます少なくなり、グルコースは血中に留まる。これは２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）と呼ばれる。Ｔ２Ｄの世界的な発症率は、社会が近代化されるほど汎流行的な率となる。糖尿病は、米国において第７位の死亡原因である。これらの驚くべき死亡率データに加えて、糖尿病は、高い保健医療の費用をもたらす甚大な罹患率をもたらす。事実、人口、年齢および性別の差を調整した後、糖尿病を有する人々の平均医療支出は、糖尿病が不在である場合の支出より２．３倍高かった。注目すべきは、２００７年の推定は、糖尿病の合計（直的的および間接的な）推定費用が、その年単独で１千７百４十億万ドルであったと示唆していることである。
【０００７】
非糖尿病患者を、糖尿病の臨床例に向かって進行する可能性についてより良く教育するため、疾病対策センター（ＣＤＣ）および米国糖尿病協会（ＡＤＡ）は、「前糖尿病」という用語を作り出した。この方法により、医師たちは糖尿病を発生する高い危険性のある患者を確認することができる。これらの患者は、典型的には２５から３５のＢＭＩを有し、Ｔ２Ｄは、３０から４５のＢＭＩと密接に関連している。ＣＤＣは、前糖尿病を有する２０歳以上のアメリカ人が７千９百万人いると推定する。介入がないと、約１１％が僅か３年間で２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）に進行すると予測される。前糖尿病は、１００ｍｇ／ｄｌから１２５ｍｇ／ｄｌの空腹時血中グルコースレベル、または経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）の２時間後に１４０ｍｇ／ｄｌから１２５ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベル、および５．７％から６．４％のヘモグロビンＡ１ｃレベルとＡＤＡにより定義されている。前糖尿病の標的治療レジメンがＴ２Ｄへの進行の危険性を有意に低減しうることを支持するデータが、存在する。例えば、糖尿病予防プログラム（ＤＰＰ）は、食事、運動、および行動の修正に関して集中的な指導を受けた前糖尿病患者が、糖尿病発生の危険性を５８パーセント低減できたこと、ならびにメトホルミンを摂取した前糖尿病患者が糖尿病発生の危険性を３１パーセント低減したことを実証した［３］。更に、正常なグルコース調節への反転が一時的であっても生じる場合、糖尿病に進行する危険性が有意に低減した。したがって、安価で安全および効果的な、追加の前糖尿病介入の必要性が存在する。
【０００８】
あまり一般的ではない症例において、糖尿病は、天然の免疫系が、インスリンを産生および分泌する膵臓細胞−膵臓ベータ（β）細胞を攻撃する結果である。この種類の糖尿病は、１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）または１型若年性糖尿病と呼ばれる。これは、活性化Ｔリンパ球および単球の膵臓ランゲルハンス島への浸潤により特徴付けられ、炎症およびインスリン産生Ｂ細胞の進行性破壊をもたらす。アメリカ人、とりわけアメリカ人の小児の典型的な食事は、食用植物繊維および植物性ポリフェノールの両方が欠乏している。したがって、これらの基質を利用するＧＩマイクロバイオータには不利であり、したがって、そのバイオームの他の生息生物よりも存在度が低い。これらの必須食品構成要素を代えることによる食事介入は、ＧＩマイクロバイオームを調節することによりＩ型糖尿病の予防および（または）管理において有益であると証明することができる。
【０００９】
近代の食事によりもたらされる別の結果は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の有病率の増加である。ＩＢＤの発症率および有病率は、時間と共に、世界の異なる地域において増加しており、世界的な疾患としての出現が示されている。（Ｍｏｌｏｄｅｃｋｙ  ｅｔ  ａｌ．、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １４２：４６−５４、２０１２）。ＩＢＤは、胃腸（ＧＩ）管の慢性または再発性の免疫応答および炎症を伴う状態を記載する集合的用語である。２つの最も一般的な炎症性腸疾患は、潰瘍性結腸炎（ＵＣ）およびクローン病（ＣＤ）である。両方ともＧＩ免疫系の異常応答を特徴とする。通常、免疫細胞は身体を感染から保護する。しかし、ＩＢＤを有する人々では、この免疫系が腸内の食物、細菌および他の物質を病原体と間違え、炎症性の応答が腸の内層において着手され、慢性炎症を生じる。これが起こると、患者はＩＢＤの症状を経験する。ＩＢＤの報告された有病最高値は、ヨーロッパでは（ＵＣが１００，０００人あたり５０５、ＣＤが１００，０００人あたり３２２）であり、北アメリカでは（ＵＣが１００，０００人あたり２４９、ＣＤが１００，０００あたり３１９）であった。
【００１０】
２００７年の終わりには、米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）は、ヒトマイクロバイオームプロジェクト（Ｈｕｍａｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔ）（ＨＭＰ）に着手し、２００８年の初めには、欧州委員会と中国がヒト腸管のメタゲノムプロジェクト（Ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃｓ  ｐｒｏｊｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ）（ＭｅｔａＨＩＴ）を開始した。これらの大きな努力は、高度な配列決定および生物情報工学ツールを適用して、身体に生息する微生物を特徴付ける。推定１００兆個の微生物が大腸に常在しており、そこで、食物を代謝し、それを細胞が働くためのエネルギーに変換する、または予備のために保存しておく。これらの微生物個体群の活性がどのようにヒトの代謝に影響を与えるかを理解することは、代謝不適合性を予防し、肥満症、糖尿病、およびＩＢＤを治療するための介入を開発する手法を提供することができる。
【００１１】
例えば、中国人のＴ２Ｄ患者は、最近、中程度の胃腸（ＧＩ）細菌のディスバイオシス（dysbiosis）またはマイクロバイオータの異常な個体群によって特徴付けられている。分析は、Ｔ２Ｄ患者のＧＩマイクロバイオータが、短鎖脂肪酸（ＳＣＦＳ）を合成する能力の低下、硫化水素を産生する能力の増加、メタンを産生する能力の増加、および酸化ストレスに対する防御の減少を有することを明らかにしている。硫化水素の産生の増加は、ＩＢＤとも関連する。代謝不適合個体群は、低吸収性抗酸化剤を食事に補充することによって利益を得る。イソフラボンと呼ばれる１つクラスの抗酸化ポリフェノールは、ダイズ植物から産生され、ヒトにおいて健康を促進することが示されている。例えば、イソフラボンのゲニステイン、ダイゼイン、およびグリシテインは、伝統的なダイズに基づいた食品に特に高いレベルで存在する。ダイズ製品が豊富な食事の消費は、Ｔ２ＤおよびＩＢＤを防止することができる。他のイソフラボンは、植物の防御機構により誘発される。これらの化合物は、フィトアレキシンと呼ばれる。グリセオリンＩ、グリセオリンＩＩ、およびグリセオリンＩＩＩと呼ばれる３つの非常に類似したフィトアレキシンは、植物が土壌微生物、紫外（ＵＶ）光線、または重金属に曝露されたときにダイズから産生され、非常に強力な抗酸化剤である（１９）。前糖尿病またはＩＢＤの患者の食事へのグリセオリンの補充は、抗酸化剤をＧＩバイオームに送達する。理論に束縛されるものではないが、本明細書において、マイクロバイオータの系統群を選択するＧＩバイオームの酸化還元電位を変えることは、前糖尿病およびＩＢＤ患者に有益であると考えられる。
【発明の概要】
【００１２】
本発明は、とりわけ、グリセオリンを有する単離植物組織を含む組成物を提供する。
【００１３】
いくつかの実施形態において、１つもしくは複数のグリセオリンを含有する単離ダイズさや組織を含む組成物が提供される。いくつかの実施形態において、ダイズさや組織における１つもしくは複数のグリセオリンの組み合わせ総濃度は、１グラムあたり少なくとも０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇである。
【００１４】
いくつかの実施形態において、可溶性と不溶性の両方の食物繊維を含有する単離ダイズさやが提供される。
【００１５】
いくつかの実施形態において、経口送達用に調製された単離ダイズさやが提供される。
【００１６】
いくつかの実施形態において、本発明は、ダイズさや組織からの食物繊維を含む食品製品（food product）を提供する。いくつかの実施態様において、食品製品は１つもしくは複数のグリセオリンを含む。いくつかの実施形態において、食品製品は、少なくとも２．５、５．０、７．５、１０．０、２０．０、４０．０、または８０．０ｍｇの総量のグリセオリンを含む。
【００１７】
いくつかの実施態様において、本発明は１つもしくは複数のグリセオリンを含む粉末を提供する。いくつかの実施形態において、粉末は、ダイズさや組織から作製される。いくつかの実施形態において、粉末は、１つもしくは複数のグリセオリンを、粉末１グラムあたり少なくとも０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、または５．０ｍｇのグリセオリンの組み合わせ総濃度で含む。
【００１８】
本発明は、過体重または肥満症に罹患しているか、または感受性のある対象を治療する方法を更に提供する。
【００１９】
いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載されている組成物または食品製品を対象に経口投与することを含む。
【００２０】
本発明は、糖尿病または前糖尿病に罹患しているか、または感受性のある対象を治療する方法を更に提供する。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載されている組成物または食品製品を対象に経口投与することを含む。
【００２１】
本発明は、ＩＢＤに罹患しているか、または感受性のある対象を治療する方法を更に提供する。いくつかの実施形態において、方法は、本明細書に記載されている組成物または食品製品を対象に経口投与することを含む。
【００２２】
本発明は、対象の胃腸マイクロバイオームを改変する方法であって、対象の胃腸マイクロバイオームが、脂肪およびタンパク質を処理する第１の細菌個体群、および炭水化物を発酵し、小鎖脂肪酸の増加を生じる第２の細菌個体群を含む方法を更に提供する。いくつかの実施形態において、方法は、胃腸管における第１の細胞個体群のおよび第２の細菌個体群の相対的存在度をシフトするために有効量の１つもしくは複数のグリセオリンを含む組成物を、対象に投与することを含む。
【００２３】
いくつかの実施形態において、第１の個体群はＲｕｍｉｎｏｃｏｃｃａｃｅａｅを含み、第２の個体群はＢｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａを含む。
【００２４】
いくつかの実施形態において、対象のマイクロバイオータ分類群におけるＢｌａｕｔｉａのレベルを改変する方法を提供する。いくつかの実施形態において、対象は、２、３、４、または５％未満の存在度のＢｌａｕｔｉａのレベルを有し、Ｂｌａｕｔｉａのレベルを少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、または３０％の存在度に増加するために有効量の１つもしくは複数のグリセオリンで治療する必要性のあることが確認されている。いくつかの実施形態において、治療の必要性のあることが確認されている対象には、Ｂｌａｕｔｉａのレベルを増加するために１つもしくは複数のグリセオリンを含む組成物が投与される。いくつかの実施形態において、胃腸のディスバイオシスを治療する方法であって、１つもしくは複数のグリセオリンを含む有効量の組成物を対象に経口投与するステップを含む方法が提供される。
【００２５】
本発明は、ダイズさや食物繊維および１つもしくは複数のグリセオリンを含む粉末を製造する方法を更に提供する。いくつかの実施形態において、方法は、ダイズさや組織を得るステップ、ダイズさや組織を薄く切るステップ、ダイズさや組織を乾燥するステップ、およびダイズさや組織を粉末に摩砕するステップを含む。いくつかの実施形態において、方法は、１つもしくは複数のグリセオリンをダイズさや組織に加えることを含む。いくつかの実施形態において、方法は、ダイズさや組織を紫外線、重金属、または真菌感染に曝露することを含む。
【００２６】
本発明の他の特徴、目的、および利点は、以下の詳細な記載によって明白である。しかし、詳細な記載は、本発明の実施形態を示しているが、説明のためだけに提示されており、制限するためではないことを理解するべきである。本発明の範囲内の様々な変更および改変は、詳細な記載から当業者には明白となる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
以下の図は、説明目的のためだけに提示され、制限することは意図されない。
【００２８】
【図１】図１は、グリセオリン（３０および９０ｍｇ／ｋｇ、経口）投与後のＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットにおけるグリセオリンの血漿レベルを説明する例示的な結果を示す。値は、３匹の異なるラットの各時点および用量での平均±ＳＥＭを表す。
【００２９】
【図２】図２は、グルコース（２ｇ／ｋｇ、経口、０時点）投与後の前糖尿病ＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットにおける血中グルコースレベルを説明する例示的な結果を示す。経口グルコース負荷試験開始の１時間前に、グリセオリンを投与した（３０および９０ｍｇ／ｋｇ、経口）。各符号は、８匹のラットの血中グルコース値の平均±ＳＥＭを表す。６０分の時点で、グリセオリン治療動物の血中グルコースレベルは、ビヒクル治療ラットよりも有意に低く、グリセオリン群の曲線下面積は、ビヒクル治療ラットの積分よりも有意に小さかった。
【００３０】
【図３】図３は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞によるインスリン媒介グルコース取り込みを説明する例示的な結果を示す。細胞をインスリンに３７℃で３０分間曝露し、続いて［３Ｈ］−２デオキシ−グルコースと共に１０分間インキュベートした。グルコース取り込みにおける有効濃度の５０％の増加（ＥＣ５０）は、ＳｉｇｍａｔＰｌｏｔを使用する４パラメーターロジスティック方程式により計算すると、１．９２ｎＭであった。
【００３１】
これらのデータは、基礎ｃｐｍグルコース取り込みと比較したｃｐｍグルコース取り込み率を計算することにより正規化した、６回の実験の平均である。符号は、平均±ＳＥＭを表し、線は、４パラメーターロジスティック方程式を使用したデータへの最良適合を表す。
【００３２】
【図４】図４は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞による、インスリン、グリセオリン、およびグリセオリンと組み合わせたインスリンで刺激されたグルコース取り込みを説明する例示的な結果を示す。脂肪細胞を、インスリン（inulin）、グリセオリン、または両方に３時間曝露した。これらのデータは、基礎ｃｐｍグルコース取り込みと比較したｃｐｍグルコース取り込み率を計算することにより正規化した、３回の実験の平均である。符号は、平均±ＳＥＭを表す。異なる文字によるインスリン刺激グルコース取り込みにおける全ての平均は、有意（ｐ＜０．０５）に異なっている。
【００３３】
【図５】図５は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞によるグリセオリン媒介グルコース取り込みを説明する例示的な結果を示す。細胞をグリセオリンに３７℃で４５分間曝露し、続いて［３Ｈ］−２−デオキシ−グルコースと共に１０分間インキュベートした。ＥＣ５０は、２．４０±０．４３μＭであり、最大取り込みは、２．０４±０．２４倍であった（４パラメーターロジスティック方程式により計算した）。これらのデータは、基礎ｃｐｍグルコース取り込みと比較したｃｐｍグルコース取り込み率を計算することにより正規化した、３回の実験の平均である。符号は、平均±ＳＥＭを表し、線は、４パラメーターロジスティック方程式を使用したデータへの最良適合を表す。
【００３４】
【図６】図６は、グリセオリンが、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞においてグルコース輸送体遺伝子ＧＬＵＴ１およびＧＬＵＴ４の発現を刺激することを説明する例示的な結果を示す。両方の遺伝子のｍＲＮＡレベルをリアルタイムＰＣＲにより測定し、ＲＰＬ３２のｍＲＮＡレベルに対して示す。細胞をグリセオリンに３時間曝露し、ｍＲＮＡを細胞から単離し、ｃＤＮＡを合成し、遺伝子発現をリアルタイムＰＣＲにより定量化した。符号は、平均±ＳＥＭを表す。
【００３５】
【図７】図７は、グリセオリンブレンドの毎日投与（９０ｍｇ／ｋｇ、経口）が前糖尿病ラットの脂肪質量を１１日間減少することを説明する例示的な結果を示す。脂肪質量は、定量的ＮＭＲにより測定した。
【００３６】
【図８】図８は、グリセオリンブレンドの毎日投与（９０ｍｇ／ｋｇ、経口）が前糖尿病ラットの血漿ＧＬＰ−１を１１日間増加する傾向があることを説明する例示的な結果を示す。ＧＬＰ−１は、研究の終了時に胴体の血液をＥＬＩＳＡにより測定した。
【００３７】
【図９】図９は、グリセオリンブレンドの毎日投与（９０ｍｇ／ｋｇ、経口）が前糖尿病ラットの血漿インスリンを１１日間増加することを説明する例示的な結果を示す。血漿インスリンは、研究の終了時に胴体の血液をＥＬＩＳＡにより測定し、血漿グルコースは、グルコメーターにより測定した。
【００３８】
【図１０】図１０は、ＨＰＬＣクロマトグラムが、１ｍｍの断面に薄切りして、０から７２時間インキュベートした後に、ダイズさや繊維における化合物の存在を明らかにすることを説明する例示的な結果を示す。ピーク１３、１４、および１５は、約３２分間で溶出し、それぞれグリセオリンＩＩＩ、グリセオリンＩＩ、およびグリセオリンＩである。ダイズさやを分析条件下において実験室規模で処理した。
【００３９】
【図１１】図１１は、１ｍｍの断面に薄切りし、ＵＶ−Ｂ放射線に２分間曝露して、７２時間インキュベートした後の、活性化ダイズさや（Ｉｏｗａエダマメ品種（ＩＡ））繊維の実験室規模生産を説明する例示的な結果を示す。
【００４０】
【図１２】図１２は、摩砕された非活性化ダイズさや繊維（赤色）および活性化ダイズさや繊維（青色）のＨＰＬＣクロマトグラムである。３５から３６分のピークは、活性化プロセスによって同様に生成された未確認イソフラボンを表す。
【００４１】
【図１３】図１３は、活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＡＳＰＦ）または非活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＵＳＰＦ）を補充した肥満を引き起こす飼料（ＯｂＤ）を消費するマウスの表現型である。食餌摂取（Ａ）は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦのいずれかを給餌したマウスにおいて４週目まで増加した。体重増加（Ｂ）は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦ群において少ない傾向があった。体重増加は、脂肪（Ｃ）および除脂肪（Ｄ）質量の両方の増大の結果であった。符号は、平均±ＳＥＭである。＊は、ＯｂＤに対してｐ＝０．０１２であり、＊＊は、ＯｂＤに対してｐ＝０．０３７である。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。Ｎ＝各群あたり１０匹。
【００４２】
【図１４】図１４は、糞便におけるエネルギー損失。糞便排出量（Ａ）を毎週評価し、糞便カロリー密度（Ｂ）および糞便トリグリセリド（ＴＧ）含有量（Ｃ）を、ベースライン、および活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＡＳＰＦ）または非活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＵＳＰＦ）を補充した肥満を引き起こす飼料（ＯｂＤ）をマウスが消費した４週間後（最終）に評価した。符号および棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。ｎ＝各群あたり１０匹。
【００４３】
【図１５】図１５は、糞便総胆汁酸含有量は、ＯｂＤ補充飼料において減少した。糞便胆汁酸含有量を、ベースライン、および活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＡＳＰＦ）または非活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＵＳＰＦ）を補充した肥満を引き起こす飼料（ＯｂＤ）をマウスが消費した４週間後（最終）に測定した。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。ｎ＝各群あたり１０匹。
【００４４】
【図１６】図１６は、Ｆｌａｖｏｎｉｆａｃｔｏｒ（Ａ）、Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ（Ｂ）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ（Ｃ）、Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｏｒ（Ｄ）、およびＡｌｉｓｔｉｐｅｓ（Ｅ）属の消化管マイクロバイオータ種は、ベースラインから、活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＡＳＰＦ）を補充した、または非活性化ダイズさや繊維（ＯｂＤ−ＵＳＰＦ）を補充した肥満を引き起こす飼料（ＯｂＤ）を給餌した４週目（最終）まで、有意に増加している。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。存在度は、各群の１０匹全てのマウスの糞便試料の読み取り数の平均であった。
【００４５】
【図１７】図１７は、ベースラインから、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦを給餌した４週目（最終）までの発酵の増加である。証拠には、酢酸塩（Ｂ）、酪酸塩（Ｃ）およびプロピオン酸塩（Ｄ）の糞便短鎖脂肪酸含有量の増加に伴う糞便ｐＨ（Ａ）の減少が含まれる。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。ｎ＝３つの群にそれぞれ１０匹。
【００４６】
【図１８】図１８は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｄｉｅｓ（Ａ）、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ（Ｂ）、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（Ｃ）、およびＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ（Ｄ）属の消化管マイクロバイオータ種は、ベースラインから、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦを給餌した４週目（最終）までの存在度を有意に減少している。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。存在度は、各群の１０匹全てのマウスの糞便試料の読み取り数の平均であった。
【００４７】
【図１９】図１９は、糞便乳酸塩（Ａ）および糞便グルコース（Ｂ）含有量の、ベースラインから、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦを給餌した４週間後（最終）までのシフトである。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。ｎ＝各群あたり１０匹。
【００４８】
【図２０】図２０は、ＶｅｒｒｕｃｏｍｉｃｒｏｂｉａおよびＤｅｆｅｒｒｉｂａｃｔｅｒｅｓ族の消化管マイクロバイオータ属ＡｋｋｅｒｍａｎｉｓｉａおよびＭｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍは、それぞれ、ベースラインから、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦを給餌した４週間後（最終）まで有意にシフトする。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。存在度は、各群の１０匹全てのマウスの糞便試料の読み取り数の平均であった。
【００４９】
【図２１】図２１は、ＯｂＤ−ＵＳＰＦを４週間（最終）給餌したマウスの糞便における分泌免疫グロブリンＡ含有量の増加である。棒線は、平均±ＳＥＭである。同じ文字がつながっていないレベルは、統計的に異なっている（ｐ＜０．０５）。ｎ＝３つの群にそれぞれ１０匹。
【００５０】
【図２２】図２２は、ＯｂＤ、ＯｂＤ−ＡＳＰＦ、またはＯｂＤ−ＵＳＰＦを４週間給餌した後の血漿炎症促進レベルである。棒線は、平均±ＳＥＭである。＊Ｐ＝０．０１、＊＊Ｐ＝０．０３。ｎ＝３つの群にそれぞれ１０匹。
【００５１】
【図２３】図２３は、ＯｂＤ、ＯｂＤ−ＡＳＰＦ、およびＯｂＤ−ＵＳＰＦを３０日間消費した偶数のマウスの近接結腸のヘマトキシリンおよびエオシン染色である。治療について知らされていない組織学者は、比較する各マウスに類似した小窩画像を確認した。切片は、４００×に拡大されている。
【００５２】
【図２４】図２４は、精製マウス飼料の組成物を詳述する表である。通常使用される肥満を引き起こす練乳脂肪飼料（Ｄ１２２６６Ｂ）を、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔ，  Ｉｎｃ．の活性化または非活性化ダイズさや繊維で改変した。
【発明を実施するための形態】
【００５３】
定義
本発明がより容易に理解されるために、特定の用語を最初に下記に定義する。以下の用語および他の用語の追加の定義は、明細書全体にわたって記載されている。
【００５４】
およそ、または約：本明細書に使用されるとき、用語「およそ」または「約」は、目的の１つもしくは複数の値に適用されるときには、記述されている基準値に類似した値を指す。特定の実施形態において、用語「およそ」または「約」は、特に記述のない限り、または文脈から明白でない限り（そのような数字が可能な値の１００％を超える場合を除いて）、記述された基準値のいずれかの方向（超える、または未満）において、２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ以下の範囲内の値の範囲を指す。
【００５５】
寛解：本明細書に使用されるとき、用語「寛解」は、対象の状態の予防、低減、もしくは緩和、または状態の改善を意味する。寛解には、疾患状態の完全な回復または完全な予防が含まれるが、必須ではない。
【００５６】
匹敵する：本明細書に使用されるとき、用語「匹敵する」は、科学的に正当な比較を許容する試験系、一連の条件、効果、または結果に十分に類似した系、一連の条件、効果、または結果を指す。当業者は、どのような系、一連の条件、効果、または結果が、本明細書に記載されている任意の特定の試験系、一連の条件、効果、または結果に「匹敵する」ほど十分に類似しているかを認識し、理解する。
【００５７】
相関する：本明細書に使用されるとき、用語「相関する」は、「相関関係を示す」という通常の意味を指す。当業者は、２つの特徴である品目および値が、一緒に現れる、および／または変わる傾向を示すとき、互いに相関関係を示すことを認識する。いくつかの実施形態において、相関関係は、ｐ値が０．０５未満である場合に統計的に有意であり、いくつかの実施形態において、相関関係は、ｐ値が０．０１未満である場合に統計的に有意である。いくつかの実施形態において、相関関係は、回帰分析によって評価される。いくつかの実施形態において、相関関係は、相関係数である。
【００５８】
ディスバイオシスまたは胃腸ディスバイオシス：本明細書に使用されるとき、用語「ディスバイオシス」（細菌バランス失調（dysbacteriosis）とも呼ばれる）は、健康な身体の生息場所を占有している微生物個体群が、不健康または疾患状態において同じ生息場所に確認されるマイクロバイオータの個体群にシフトする状態を指す。ディスバイオシスは、消化管において最も顕著であり（腸ディスバイオシスとも呼ばれる）、糖尿病、肥満症、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、および胃潰瘍など疾病に関連する。
【００５９】
食品製品：本明細書に使用されるとき、用語「食品製品」は、特別に調製され、通常の食事だけでは満たすことのできない特定の栄養の必要性を有する疾患の食事管理のために意図される食品または食品成分を指す。
【００６０】
グリセオリン：本明細書に使用されるとき、用語「グリセオリン」は、植物が切断されたとき、土壌微生物に曝露されたとき、紫外（ＵＶ）光線に曝露されたとき、または重金属に曝露されたときにダイズにおいて産生される強力な抗酸化剤である、フィトアレキシンのグリセオリンＩ、グリセオリンＩＩ、およびグリセオリンＩＩＩ、ならびに類似した化合物を指す。フィトアレキシンは、植物の防御機構により誘発されるイソフラボンである。
【００６１】
改善する、増加する、または低減する：本明細書に使用されるとき、用語「改善する」、「増加する」、もしくは「低減する」、または文法的に同等のものは、本明細書に記載されている匹敵する条件下で取られた測定（例えば、本明細書に記載されている治療を開始する前の同じ個体におけるもの、または治療の不在下での対照個体（もしくは複数の対照個体）の測定）などの基準（例えば、ベースライン）測定に対する値を示す。いくつかの実施形態において、適切な対照は、本明細書に記載されている治療を開始する前の同じ個体における測定、または明細書に記載されている治療の不在下での対照個体（もしくは複数の対照個体）の測定などの、ベースライン測定である。「対照個体」は、過体重、肥満症、前糖尿病、糖尿病、または胃腸ディスバイオシスに罹患し、治療されている個体と（治療個体および対照個体の病期が匹敵することを確実にするため）ほぼ同じ年齢および／または性別の個体である。
【００６２】
マイクロバイオームまたは胃腸マイクロバイオーム：本明細書に使用されるとき、用語「マイクロバイオーム」は、微生物、これらの遺伝要素（ゲノム）、および特定の環境（生息場所または生態系）における環境相互作用を全体として指す。用語「胃腸マイクロバイオーム」は、胃腸管のマイクロバイオームを指す。
【００６３】
前糖尿病：本明細書に使用されるとき、用語「前糖尿病」は、個体が、正常よりも高いが糖尿病と診断されるほど高くない、空腹時血中グルコースまたはヘモグロビンＡ１ｃレベルを有する状態を指す。前糖尿病を有する人々は、２型糖尿病を発生する危険性が高い。
【００６４】
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）：本明細書に使用されるとき、用語「ＩＢＤ」は、個体が、胃腸（ＧＩ）管の慢性または再発性の免疫応答および炎症を有する状態を指す。２つの最も一般的な炎症性腸疾患は、潰瘍性結腸炎（ＵＣ）およびクローン病（ＣＤ）である。
【００６５】
提供する：本明細書に使用されるとき、用語「提供する」は、目的の実体が、操作の前または不在ということ以外は匹敵する条件下で観察されるよりも高いレベルおよび／または活性で存在するように、操作を実施することを指す。いくつかの実施形態において、提供することは、実体それ自体を（単独で、または組成物の一部として）投与することからなる、または投与することを含み、いくつかの実施形態において、提供することは、目的の実体のレベルおよび／または活性を増加させる作用物質を投与することからなる、または投与することを含む。
【００６６】
基準：「基準」の実体、系、量、一連の条件などは、試験の実体、系、量、一連の条件などがそれに対して本明細書に記載されているように比較されるものである。例えば、いくつかの実施形態において、「基準」個体は、過体重、肥満症、糖尿病、または胃腸ディスバイオシスに罹患していない、または感受性のない対照個体であり、いくつかの実施形態において、「基準」個体は、治療を受けている個体と同じ形態の疾患に罹患しており、かつ任意選択で、治療を受けている個体と（治療個体および対照個体の疾患の過程または前疾患状態が匹敵することを確実にするため）ほぼ同じ年齢である対照個体である。
【００６７】
対象：本明細書に使用されるとき、用語「対象」、「個体」、または「患者」は、本発明の実施形態を、例えば、実験、診断、予防、および／または治療目的で使用または投与することができる任意の生物体を指す。典型的な対象には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長類、およびヒトなどの哺乳動物、昆虫、蠕虫など）が含まれる。いくつかの実施形態において、治療される対象は、過体重、肥満症、糖尿病、または胃腸ディスバイオシスを有する、または発生する可能性を有する個体（乳幼児、小児、青年、または成人）である。いくつかの場合において、治療される対象は、一般に、過体重、肥満症、糖尿病、または胃腸ディスバイオシスを発生しやすい。
【００６８】
治療剤：本明細書に使用されるとき、語句「治療剤」は、対象に投与されたとき、治療効果を有する、ならびに／または望ましい薬理学的および／もしくは生物学的効果を誘発する任意の作用物質を指す。
【００６９】
治療レジメン：本明細書に使用されるとき、用語「治療レジメン」は、部分的に、または完全に、特定の疾患、障害、および／または状態の１つもしくは複数の症状または特徴を緩和する、寛解させる、軽減する、阻害する、予防する、その発症を遅延する、その重篤度を低減する、および／またはその発症率を低減するために使用される任意の方法を指す。これは、１つもしくは複数の用量を、任意選択で定期的に、または様々な時間間隔で間隔を開けて投与することを含むことができる。いくつかの実施形態において、治療レジメンは、その実施が、特定の効果、例えば、有害な状態または疾患の低減または排除を（例えば、細胞、組織、または生物体の関連する個体群にわたって）達成するように設計される、および／またはその達成と相関するものである。いくつかの実施形態において、治療には、１つもしくは複数の治療剤を、同じ、または異なる時間の長さで同時に、連続して、または異なる時点で投与することを含む。
【００７０】
治療有効量：本明細書に使用されるとき、用語「治療有効量」は、治療効果を治療される対象に任意の医学的処置に適用可能な妥当な利益／危険比で付与する治療剤（例えば、グリセオリンを含む食用繊維）の量を指す。そのような治療効果は、客観的（すなわち、一部の試験もしくはマーカーにより測定可能）、または主観的（すなわち、対象が効果の徴候もしくは感触を伝える）でありうる。いくつかの実施形態において、「治療有効量」は、疾患に関連する症状を寛解させる、疾患の発症を予防もしくは遅延する、および／または疾患の症状の重篤度もしくは頻度も減らすことなどによって、関連する疾患もしくは状態を治療する、寛解させる、もしくは予防する（例えば、その発症を遅延する）ため、および／または検出可能な治療もしくは予防効果を示すために有効な治療剤または組成物の量を指す。治療有効量は、複数の単位用量を含みうる投与レジメンで一般的に投与される。任意の特定の治療剤では、治療有効量（および／または有効な投与レジメン内の適切な単位用量）は、例えば、投与経路または他の治療剤との組み合わせに応じて変わりうる。代替的または追加的に、任意の特定の患者のための特定の治療有効量（および／または単位用量）は、治療される特定の形態の過体重、肥満症、糖尿病、ＩＢＤ、または胃腸ディスバイオシス；状態または前状態の重篤度；用いられる特定の治療剤の活性；用いられる特定の組成物；患者の年齢、体重、身体全体の健康、性別、および食事；用いられる特定の治療剤の投与時間、投与経路、および／または排出もしくは代謝速度；治療期間などの因子を含む様々な因子によって決まり、医療分野において良く知られている。
【００７１】
治療：本明細書に使用されるとき、用語「治療」（同様に、「治療する」または「治療すること」）は、部分的に、または完全に、特定の疾患、障害、および／または状態（例えば、過体重、肥満症、前糖尿病、糖尿病、胃腸ディスバイオシス）の１つもしくは複数の症状または特徴を緩和する、寛解する、軽減する、阻害する、その発症を遅延する、その重篤度を低減する、および／またはその発症率を低減するという望ましい効果を達成する治療レジメンによる治療剤（例えば、グリセオリンを含む食用繊維）の任意の投与を指し、いくつかの実施形態において、治療レジメンによる治療剤の投与は、望ましい効果の達成と相関する。そのような治療は、関連する疾患、障害、および／もしくは状態の徴候を示さない対象のもの、ならびに／または疾患、障害、および／もしくは状態の初期徴候のみを示す対象のものでありうる。代替的または追加的に、そのような治療は、関連する疾患、障害、および／または状態の１つもしくは複数の確立された徴候を示す対象のものでありうる。いくつかの実施形態において、治療は、関連する疾患、障害、および／または状態に罹患していると診断された対象のものでありうる。いくつかの実施形態において、治療は、関連する疾患、障害、および／または状態の発生の危険性の増加と統計的に相関する１つもしくは複数の感受性因子を有することが知られている対象のものでありうる。
【００７２】
（詳細な説明）
本開示は、食用繊維をダイズ植物組織から製造することができるという知見、およびグリセオリンにより増強された食用繊維を含有する食品製品が、過体重、肥満症、前糖尿病、糖尿病、ＩＢＤ、および胃腸ディスバイオシスの治療または予防に有用であるという知見を包含する。
【００７３】
ダイズ植物から製造される食用繊維
大部分のダイズ製品は、ダイズ豆（ダイズさやに含有されているダイズ種）から調製される。これらの製品は、ダイズ豆からのダイズ油およびダイズタンパク質から誘導される。一般的な製品は、醤油、ダイズ油、豆乳、および豆腐である。ダイズ豆さやの殻は、子房壁である。これは、胚珠（種または豆）を保護し、成長および成熟するための安全な環境を提供する。ダイズさやは裂開しており、このことは、ダイズさやが、両側に沿って伸びている開裂しうる継ぎ目を有することを意味する。ダイズさやの内部は、室として知られている。エダマメ以外に、さやから生産される食用製品は、現在存在しない。更に、大部分の消費者は、殻付きエダマメ（さや付き豆）を出されても、さやを食べない。殻むきエダマメまたはダイズ豆を出すことがより一般的であり、これらは生のまま、または調理した後に食べられる。エダマメは、豆の成長および成熟の中間段階で摘み取られるときに、風味のある大きな豆を提供するように操作または選択されるダイズの品種である。しかし、本明細書に記載されている食用繊維を製造するため、豆が生殖成長期の中間段階で採取される任意の品種のダイズを使用することができる。
【００７４】
ダイズ植物組織のグリセオリン含有量の増強
ダイズさやは、環境ストレス要因に曝露されない限り、グリセオリンを合成しない。ＵＶ光線への曝露は、ポリフェニルアラニンアンモニアリアーゼおよびカルコンシンターゼの発現を増加することによって、グリセオリンの有効な誘発物を提供する。ＵＶ光活性化は、それ自体、市販製品の大規模で低価格な開発をもたらす。追加的または代替的に、グリセオリンは、薄切りによって誘発されうる。
【００７５】
ダイズさやは、典型的には生殖成長期Ｒ６で採取される。この段階は、さやの両側に接触してさや空洞を充填する緑色の種を含有し、エダマメが採取される段階である。さやが生体活性イソフラボンを含有し、かつ可溶性と不溶性の繊維のブレンドを含有するので、これは食用繊維の良好な供給源である。更に、ダイズさやは、種のようにグリセオリンを産生することができる。
【００７６】
さや付き豆全体を、小さな断面に加工する、またはフードプロセッサーにより薄切りにすることができる。他の場合では、さやを開けて豆を採取してもよく、さやをフードプロセッサーにより小切片に薄切りすることができる。
【００７７】
さや、切断さや、または薄切りさやを、湿潤濾紙に置き、加湿雰囲気（湿度８５％）で暗所で４８から９６時間インキュベートして、グリセオリンを合成させ、切片に集積させることができる。グリセオリンは、ＵＶ−Ｂ光線を生じる紫外（ＵＶ）光線系を使用する照射により刺激することもできる。植物組織を配置して、ランプに面している一面を３０から１２０秒間曝露することができ、組織を反転させて、反対面を更に３０から１２０秒間曝露する。光活性化ダイズさや組織を、加湿室（湿度８３％）で暗所に室温で２４から７２時間置いて、グリセオリンを集積させることができる。
【００７８】
ダイズイソフラボンをメタノールで抽出し、ＨＰＬＣにより分析して、光活性化の程度を測定することができる。ダイジン、ゲニスチン、マロニルダイジン、マロニルゲニスチン、ダイゼイン、ゲニステイン、クメストロール、グリセオリンＩＩＩ、グリセオリンＩＩ、およびグリセオリンＩを測定することができる。
【００７９】
活性化繊維の望ましいイソフラボン含有量が最適条件下で達成されない場合、ブレンドのアリコートをエタノールにより抽出して、イソフラボンを貯蔵液に濃縮することができ、これにより、繊維を加えると、粉末繊維に望ましい標的含有量のイソフラボンを含有させることができる。
【００８０】
粉末の生産
食用または食物繊維は、非デンプン多糖、難消化性デンプン、およびリグニンを含む、ヒト消化酵素による加水分解に抵抗性のある植物構成成分の残留物と定義される。食用繊維は、典型的には、オートムギ、オオムギ、チコリの根、およびサトウダイコンから単離される。この開示の前に、食物繊維がダイズさやから開発されたことはなかった。植物材料を、薄切りストレスの後に凍結乾燥機を２４から１２０時間使用して乾燥する。次に乾燥材料を、スクリーン篩分けを用いるミルを使用し、０．５ｍｍ未満の粒子を収集することによって、微細粉末に粉砕することができる。摩砕材料は、可溶性と不溶性の両方の繊維を含有する。
【００８１】
経口投与
本明細書に記載されている組成物は、繊維が消化管に入るように、経口摂取されることが好ましい。このことは、繊維が、下部ＧＩ管に常在するマイクロバイオータと相互作用することを可能にする。加えて、可溶性繊維は、不溶性繊維とイソフラボンの結腸における滞留時間の増加に寄与する。細菌の一部は、繊維において盛んに成長し、血中に吸収され、腸の栄養素としての機能を果たし、かつ他の細菌の基質としての機能を果たすことができる小鎖脂肪酸などの健康な副産物を産生する。新規繊維は、腸内環境の酸化還元電位も変更し、これは、健康なマイクロバイオータの望ましい種を選択すること、およびＧＩマイクロバイオームを不健康な状態から健康を促進するものにシフトすることを助ける。
【００８２】
グリセオリンを含む食事、食品、食品成分、および他の組成物の選択は、全て、これらが摂取され、消化系により代謝されず、腸により吸収されない場合に、ＧＩマイクロバイオームと相互作用し、それを改変する潜在性を有する。
【００８３】
本明細書に記載されている組成物の治療有効量は、主に、本明細書に記載されている食品製品に含有される食用繊維および／またはグリセオリンの総量に基づいて決定される。一般に、治療有効量は、対象に意味のある利益を達成する（例えば、過体重、肥満症、糖尿病、または胃腸ディスバイオシスを治療する、調節する、治癒する、予防する、および／または寛解させる）のに十分なものである。
【００８４】
いくつかの実施形態において、治療有効量は、約０．００５ｍｇ／ｋｇ体重から１５ｍｇ／ｋｇ体重、例えば、約０．００５ｍｇ／ｋｇ体重から約１２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５ｍｇ／ｋｇ体重から約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５ｍｇ／ｋｇ体重から約５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．００５ｍｇ／ｋｇ体重から約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から約５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重から約１ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約１０ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約２ｍｇ／ｋｇ体重、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重から約１ｍｇ／ｋｇ体重、約１ｍｇ／ｋｇ体重から約１５ｍｇ／ｋｇ体重、約５ｍｇ／ｋｇ体重から１５ｍｇ／ｋｇ体重、または約５ｍｇ／ｋｇ体重から１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。
【００８５】
いくつかの実施形態において、治療有効用量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．０００５ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．００１ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．００５ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．０１ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．０５ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約０．５ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約１ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約５ｍｇ／ｋｇ体重を超える、約１０ｍｇ／ｋｇ体重を超える、または約１５ｍｇ／ｋｇ体重を超える。
【００８６】
いくつかの実施形態において、治療有効用量は、単位体積あたりの量として表すことができる。任意の特定の対象において、特定の投与レジメンは、個体の必要性に応じて経時的に調整できること、および本明細書に記載される投与範囲は、単に例示的なものであり、主張される発明の範囲または実施を制限することを意図しないことが、更に理解されるべきである。
【００８７】
治療用途
本発明は、グリセオリンを含む食品製品の経口投与が、とりわけ、過体重、肥満症、前糖尿病、糖尿病、ＩＢＤ、および胃腸ディスバイオシスの治療または予防（すなわち、発症の遅延）に有用であるという驚くべき知見を包含する。
【００８８】
過体重または肥満症の治療
特定の実施形態において、過体重または肥満症の治療は、部分的または完全な、症状の緩和、寛解、軽減、阻害、その発症の遅延、その重篤度および／または発症率の低減を指す。
【００８９】
肥満は、環境的（社会的および文化的）、遺伝的、生理的、代謝的、行動的、ならびに身体的な構成成分を伴う、複雑な多因性の慢性疾患である。これは、米国における予防可能な死亡原因の第２位である。肥満症は、高血圧症、２型糖尿病、発作、胆嚢疾患、不妊症、骨関節炎、睡眠時無呼吸、ならびに乳房、前立腺、および結腸の癌を発生する危険性が増加する。肥満症の人々は、雇用および他の差別の犠牲者になることもあり、多くの連邦および州政府の法律および政策にも関わらず、その状態のために罰を受ける。
【００９０】
そのまま維持すると、体重の５パーセントの少ない体重減少であっても、上記の疾患を発生する危険性を改善することができる。特に、高血圧症、血中グルコースの制御、および睡眠時無呼吸は、脂肪損失によって改善される。
【００９１】
肥満症治療の１つの目標は、過剰脂肪貯蔵を低減することである。より詳細には、余分な脂肪の脂肪貯蔵を低減することである。これは、Ｘ線技術、磁気共鳴技術、および体積置換技術を使用する機器により測定することができる。最も簡素には、単に体重、皮脂厚、および胴囲を測定することによって推定することができる。時々、改善指数は、血中脂質の減少、インスリン感受性の増加、循環肝臓酵素の減少、レプチンの減少、アジポネクチンの増加、および炎症マーカーの減少などのバイオマーカーの変化によって観察される。
【００９２】
糖尿病および関連する障害の治療
特定の実施形態において、糖尿病または前糖尿病の治療は、部分的または完全な、症状の緩和、寛解、軽減、阻害、その発症の遅延、その重篤度および／または発症率の低減を指す。
【００９３】
グルコースは、食品からもたらされ、また、グリコーゲンとして貯蔵されている肝臓および骨格筋により産生される。インスリンは、膵臓により作製され、かつグルコースレベルが上昇すると血中に放出されるホルモンである。インスリンは、グルコースを血液中から、エネルギーとして使用される組織細胞に輸送する。インスリン放出レベルが低すぎると、または細胞がインスリンに対して抵抗性であると、グルコースは、特定の細胞に進入することができず、血液中に留まる。血中グルコースレベルは上昇し、このことは、前糖尿病または糖尿病を診断するために使用される。前糖尿病は、１００ｍｇ／ｄｌから１２５ｍｇ／ｄｌの空腹時血中グルコースレベル、または経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）の２時間後に１４０ｍｇ／ｄｌから１２５ｍｇ／ｄｌの血中グルコースレベル、および５．７％から６．４％のヘモグロビンＡ１ｃレベルと米国糖尿病協会により定義されている。
【００９４】
１型糖尿病は、以前は若年性糖尿病またはインスリン依存性糖尿病と呼ばれ、通常、小児、１０代の若者、または若年成人に最初に診断される。この形態の糖尿病では、膵臓は、身体の免疫系が攻撃され、インスリン産生細胞が破壊されているので、もはやインスリンを作製しない。１型糖尿病の治療には、インスリン注射が含まれる。
【００９５】
２型糖尿病は、以前は成人発症型糖尿病またはインスリン非依存性糖尿病と呼ばれ、最も一般的な形態の糖尿病である。人々は、２型糖尿病を任意の年齢において、たとえ小児期であっても発生しうる。この形態の糖尿病は、通常は、脂肪、筋肉、および肝臓細胞がインスリンに適切に応答しない状態であるインスリン抵抗性を伴って始まる。最初に、膵臓は、より多くのインスリンを産生することによって追加の需要に追いつこうとする。しかし、やがて、食事に応答して十分なインスリンを分泌する能力を失う。過体重であり、活動的ではないと、２型糖尿病を発生する機会が増加する。
【００９６】
一部の女性は、妊娠後期に妊娠糖尿病を発生する。この形態の糖尿病は、通常は乳児が誕生すると無くなるが、これを有した女性は、後年に２型糖尿病を発生する可能性が高い。
【００９７】
糖尿病の症状には、口渇の増加、頻尿、頻繁な感染、霧視、疲労感、緩徐な創傷治癒、手および（または）足の刺痛および（または）痺れ、再発性の皮膚、歯肉、または膀胱の感染、体重減少、嘔気、ならびに嘔吐が含まれる。治療しないと、患者には、多くの追加的な病気のより大きな危険性がある。
【００９８】
糖尿病を有する人々は、網膜症などの眼の合併症の危険性が増加する。糖尿病患者は、神経損傷の危険性も増加する。潰瘍は、最も多くの場合、母趾球または母趾底部に生じる。糖尿病を有する成人３人のうちの２人もが、高血圧症を有する。難聴は、糖尿病を有する人々にとって、その疾患を有さない人々より２倍も一般的である。研究は、糖尿病を有する人々のうちで歯肉疾患の有病率が増加していることを示す。胃不全麻痺は、１型と２型の両方の糖尿病の人々が罹患する障害であり、胃が内容物を空にするのに時間が掛かりすぎること（遅延胃排出）である。糖尿病は、腎臓を損傷し、不全にしうる。糖尿病を有する３人のうち２人は、発作または心疾患で死亡する。
【００９９】
糖尿病の改善は、典型的には、絶食中、食後、グルコース飲料の摂取後、および就寝前の血中グルコースレベル分析することによって測定される。低い空腹時グルコースレベル、および食後または経口グルコース投入後のベースライングルコース値へのより素早い完全な戻りが、改善を示す指標として機能を果たす。
【０１００】
炎症性腸疾患の治療
特定の実施形態において、ＩＢＤの治療は、部分的または完全な、症状の緩和、寛解、軽減、阻害、その発症の遅延、その重篤度および／または発症率の低減を指す。ＩＢＤは、環境的（社会的および文化的）、遺伝的、生理的、代謝的、行動的、ならびに身体的な構成成分を伴う、複雑な多因性の慢性疾患である。ＩＢＤは、慢性または再発性でありうる。胃腸（ＧＩ）管の炎症を引き起こすものは、免疫応答である。２つの最も一般的な炎症性腸疾患は、潰瘍性結腸炎（ＵＣ）およびクローン病（ＣＤ）である。１５０万を超えるアメリカ人が、クローン病または潰瘍性結腸炎を有する。
【０１０１】
ＩＢＤは、有痛性および衰弱性の可能性があり、時々、生命を脅かす合併症をもたらす。
【０１０２】
症状は、通常、突発的ではなく、経時的に進展する。ＵＣは、通常、大腸（結腸）および直腸の最内層のみに罹患する。クローン病は、消化管の内層に沿ったどこにでも炎症を引き起こし、多くの場合、罹患組織の深部まで拡散する。このことは、腹部疼痛、重度の下痢、さらには栄養不足も引き起こしうる。クローン病により引き起こされる炎症は、異なる人々の消化管の異なる区域が関与しうる。
【０１０３】
ＩＢＤ療法の目標は、症状を排除すること、再燃を予防する（長期緩解を維持する）こと、および生活の質を回復することである。大部分の人々にとって、投薬が症状を制御し、治癒を促進する。これらには、抗生物質、抗炎症性ステロイド、およびＩＬ−１０などのサイトカインに対する抗体などの生物製剤が含まれる。外科手術は、通常、投薬が症状の改善に失敗した場合、または結腸において前癌性変化が、もしくは重篤な合併症が生じた場合においてのみ、必要となる。
【０１０４】
胃腸ディスバイオシスの治療
特定の実施形態において、胃腸ディスバイオシスの治療は、部分的または完全な、症状の緩和、寛解、軽減、阻害、その発症の遅延、その重篤度および／または発症率の低減を指す。
【０１０５】
ＧＩマイクロバイオームは、健康な個体および疾患に罹患している個体において特徴的でありうる。健康な個体において、ＧＩマイクロバイオームは正常と定義される。糖尿病、肥満症、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、および過敏性腸障害（ＩＢＤ）などの特定の疾患を有する個体において特徴付けられるＧＩマイクロバイオームは、ディスバイオシスの状態にあると呼ばれる。現在、病理状態の症状および結果が、疾患を定義する。ディスバイオシスが病理にどの程度寄与しているか、またはディスバイオシスが病理の結果にどの程度寄与しているか、不明である。いずれにしても、その病理または結果は、ディスバイオシスを正常なＧＩマイクロバイオームに戻すことによって治療することができる。
【０１０６】
ＧＩディスバイオシスは、典型的には、病理状態の個体の便試料におけるマイクロバイオータ群集と特徴付けられる。いくつかの場合において、ディスバイオシスは、便中のＳＣＦＡレベルの低減、糞便ｐＨの増加、硫化水素およびメタンガスの産生の増加、抗酸化能の低減、日和見マイクロバイオームの存在、病原性真菌および酵母菌の存在、腸内炎症の増加、腸粘膜厚の減少、結腸潰瘍、および漏出性消化管をもたらす。改善は、便中のＳＣＦＡレベルの増加、糞便ｐＨの減少、硫化水素およびメタンガスの産生の減少、抗酸化能の増加、日和見マイクロバイオームの不在、病原性真菌および酵母菌の不在、腸内炎症の減少、正常な腸粘膜厚、結腸の健康な解剖学的形態、および少ない循環免疫グロブリンＡ抗体によって観察することができる
【実施例】
【０１０７】
本発明を以下の実施例によって更に説明する。実施例は説明目的のためだけに提供される。これらは、本発明の範囲または内容をいかようにも制限するものとして解釈されるべきではない。
【０１０８】
実施例１．グリセオリンの生物学的利用能（bioavailabilty）
雄ＺＤＳＤ／ＰｃｏラットをＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓ（ＰｒｅＣｃｌｉｎＯｏｍｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）において現地で繁殖させ、吊り下げ型ワイヤケージに個別に収容し、制御室温（２０から２１℃）の標準的な実験室条件下で１２：１２時間の明暗サイクルにより維持した。プロトコールおよび全ての手順は、ＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。３か月齢で体重がおよそ５００ｇのラットを、まだ糖尿病を発生していないので実験用に選択した。糖尿病の同期化は、高カロリー食餌を給餌することによって、達成できる。しかし、前糖尿病モデルがこの研究に必要であったので、ＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットは、粉砕照射Ｐｕｒｉｎａ  ５００８固形飼料（Ｒａｌｓｔｏｎ  Ｐｕｒｉｎａ、Ｂｅｌｍｏｎｔ、ＣＡ）を受けて、研究の全体にわたって前糖尿病状態を維持した。固形飼料を、正確な食餌摂取測定のために、こぼれ防止ジャーの中に入れ、ラットは、飲料水を自由に入手した。
【０１０９】
グリセオリンを経口胃管栄養法（３ｍＬ）により給餌状態のラットに投与した。研究設計には、以下の群が含まれた（ｎ＝１群あたり３匹）：ビヒクル（ポロキサマー４０７、水中７．５％）、ポロキサマーに溶解したグリセオリンの３０ｍｇ／ｋｇおよび９０ｍｇ／ｋｇの投与。グリセオリンの血中レベルを、経口胃管栄養法の０．５、１、２、および４時間後に測定した。動物を、断頭により安楽死させ、胴体の血液を、アプロチニンを補充したＥＤＴＡ被覆管に集めた。血漿を分離し、ＨＰＬＣ−ＥＭＩ−ＭＳ／ＭＳによる分析（図１）まで、−８０℃で保存した。これらのデータは、グリセオリンが、経口投与後にある程度循環に吸収されて、細胞をイソフラボンに曝露させることを実証している。血漿レベルは、低かったが、４時間持続した。データは、吸収されないグリセオリンが、ＧＩ管中に留まることも示唆している。
【０１１０】
実施例２．経口グルコース負荷試験
雄ＺＤＳＤ／ＰｃｏラットをＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓ（ＰｒｅＣｃｌｉｎＯｏｍｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）において現地で繁殖させ、吊り下げ型ワイヤケージに個別に収容し、制御室温（２０から２１℃）の標準的な実験室条件下で１２：１２時間の明暗サイクルにより維持した。プロトコールおよび全ての手順は、ＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓの動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）が承認したプロトコールおよび全ての手順により承認された。３か月齢で体重がおよそ５００ｇのラットを、まだ糖尿病を発生していないので実験用に選択した。糖尿病の同期化は、高カロリー食餌を給餌することによって、達成できる。しかし、前糖尿病モデルがこの研究に必要であったので、ＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットは、粉砕照射Ｐｕｒｉｎａ  ５００８固形飼料（Ｒａｌｓｔｏｎ  Ｐｕｒｉｎａ，Ｂｅｌｍｏｎｔ，ＣＡ）を受けて、研究の全体にわたって前糖尿病状態を維持した。固形飼料を、正確な食餌摂取測定のために、こぼれ防止ジャーの中に入れ、ラットは、飲料水を自由に入手した。
【０１１１】
８匹のラットを、実施例１に記載されている光周期暗サイクルの開始時に、グリセオリン（３０ｍｇ／ｋｇもしくは９０ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクルのいずれかを受けるように無作為に割り当てた。経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を、治療の１日目に下記に記載されているように実施した。
【０１１２】
光周期暗サイクルで５時間絶食させた後、グリセオリンを、上記に記載されたように経口胃管栄養法により投与した。この実験では各群に８匹のラットがいた。６時間目に、ラットにグルコース（２ｇ／ｋｇ、１０ｍｌ／ｋｇ、経口）を投与した。尾静脈血を、グルコース投与の１５分、３０分、６０分、９０分、および１２０分後に、グルコース測定のために試料採取した。全血グルコースレベルを、Ａｌｐｈａ  Ｔｒａｋ血中グルコースモニター（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）の使用により測定した。
【０１１３】
ＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットは、空腹時血中グルコース値の１２７．６±１．５ｍｇ／ｄｌ（ｎ＝２４）により明白なように、前糖尿病状態であった。血中グルコースは、経口グルコース胃管栄養法の３０分後に最大レベルまで増加し、ビヒクル群では６０分まで上昇したままであったが、両方のグリセオリン群ではその時点において有意に（ｐ＜０．０５）少なくなっていた（図２）。経口投与の１２０分間の循環グルコースの処理は、ビヒクル群より両方のグリセオリン群において有意に（ｐ＜０．０５）大きかった（ＯＧＴＴのＡＵＣは、ビヒクル群（ｎ＝８）、３０ｍｇ／ｋｇグリセオリン群（ｎ＝８）、および９０ｍｇ／ｋｇグリセオリン群（ｎ＝８）において、２６８９０±８７６、２４３１０±４９６、および２３４０１±７５４ｍｇ／分／ｄｌであった）。２つのグリセオリン群の間に有意な差はなかった。
【０１１４】
データは、３つのグリセオリンの混合物による前治療が、経口グルコース投与に対する前糖尿病ＺＤＳＤラットの血中グルコース応答を改善したことを実証している。
【０１１５】
実施例３．脂肪細胞の活性
前糖尿病モデルにおける経口グルコース投与を改善するグリセオリンの１つの機構が、脂肪よるグルコース取り込みの増加であるかを決定するため、グリセオリンの薬理学を３Ｔ３−Ｌ１細胞において研究した。ネズミ前脂肪細胞（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．）を、ダルベッコー修飾イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｈａｍ  Ｆ−１０培地（１：１、ｖ／ｖ）、ＨＥＰＥＳ  １５ｍＭ（ｐＨ７．４）、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）、およびアムホテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍｌ）を含有するＰＭ−１−Ｌ１培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．）を加湿雰囲気下（５％ＣＯ２／９５％空気）で使用して、培養した。３から４日後、集密細胞を、ＤＭＥＭ／Ｈａｍ  Ｆ−１０培地（１：１、ｖ／ｖ）、ＨＥＰＥＳ  １５ｍＭ（ｐＨ７．４）、３％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、ビオチン（３３μＭ）、パントテン酸塩（１７μＭ）、ヒトインスリン（１００ｎＭ）、デキサメタゾン（１μＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、アムホテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍｌ）、イソブチルメチルキサンチン（０．２０μＭ）、およびＰＰＡＲγアゴニスト（１０μＭ）を含有する分化培地（ＤＭ−２−Ｌ１、Ｚｅｎ−Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．）に配置し、加湿雰囲気下で更に３日間インキュベートした。次に培地を、ＤＭＥＭ／Ｈａｍ  Ｆ−１０培地（１：１、ｖ／ｖ）、ＨＥＰＥＳ  １５ｍＭ（ｐＨ７．４）、３％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清、ビオチン（３３μＭ）、パントテン酸塩（１７μＭ）、ヒトインスリン（１００ｎＭ）、デキサメタゾン（１μＭ）、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、およびアムホテリシンＢ（０．２５μｇ／ｍｌ）を含有するＡＭ−１−Ｌ１培地（Ｚｅｎ−Ｂｉｏ  Ｉｎｃ．）に変えた。ＡＭ−１−Ｌ１培地（すなわち、ＺｅｎＢｉｏ（著作権）により市販されているものなどの、脂肪細胞維持培地）を、追加の１０日間のインキュベーションの際に２から３日毎に変えた。
【０１１６】
脂肪細胞を新たな滅菌ＫＲＨ緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ｐＨ＝７．４、１ｍＭのＣａＣｌ２、１．２ｍＭのＭｇＳＯ４、１ｍＭのＫＨ２ＰＯ４、１．４ｍＭのＫＣｌ、２０ｍＭ、１３０ｍＭのＮａＣｌ）ですすぎ、ＫＲＨ緩衝液において２４時間プレインキュベートした。緩衝液を取り除き、脂肪細胞を、グリセオリンを（０．５μＭから５μＭなどの指定された濃度で）含有するＫＲＨ緩衝液において、特定された時間にわたってインキュベートした。Ｄ−グルコース（１００ｍＭ）で０．０１μＣｉ／μＬに希釈した［３Ｈ］−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（Ｖｉｔｒａｘ、Ｐｌａｃｅｎｔｉａ、ＣＡ）の１０μＬを、各ウエルに加え、３７℃の水浴で１０分間インキュベートした。上澄みを取り除き、プレートを氷冷ＫＲＨで３回素早くすすいだ。細胞単層を除去しないように注意しながら、最終すすぎ液を吸引し、次に、５００μＬの氷冷ＲＩＰＡ緩衝液（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）を加えて、細胞を溶解した。各ウエルの細胞内容物を、１ｍｌのピペットにより数回粉砕して、結合した細胞および細胞構成成分をプレートの底部から除去した。アリコートの４５０μＬを、５ｍＬのＥｃｏｌｕｍｅシンチレーション液（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ、Ｓａｎｔａ  Ａｎａ、ＣＡ）を含有するバイアルに移した。バイアルを混合し、トリチウムを検出するため、出荷時初期設定範囲を使用したＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  １１００シンチレーション計数器により１０分間計数した。
【０１１７】
これらの脂肪細胞は、インスリン刺激に十分に応答する（図３）。グルコースは、用量依存的（０．３ｎＭから３００ｎＭのインスリン）に、脂肪細胞に輸送された。最大刺激は、基礎グルコース取り込みの測定の約３倍であったことが観察され、応答の半分を生じるインスリンの濃度（ＥＣ５０）は、１．９±１．５ｎＭ（ｎ＝６）と計算された。
【０１１８】
インスリンに対する脂肪細胞の応答がグリセオリンにより増強されたかを決定するため、３Ｔ３−Ｌ１分化細胞を、ＤＭＳＯ（ビヒクル対照）、０．３ｎＭのインスリン、５μＭのグリセオリン、またはグリセオリンとインスリンの両方のミックスと共にインキュベートした。グリセオリンを伴ったインスリンにより刺激されたグルコース取り込みは、より大きい傾向があったが、増加は、有意に異なっていなかった（図４）。驚くべきことに、グリセオリンブレンドは、グルコース取り込みの刺激にはインスリンと同じほど効果的であったが、効力は低かった。
【０１１９】
グリセオリンの用量グルコース取り込み応答を研究するため、用量範囲研究を実施した（図５）。グルコース取り込みを、０．５μＭから１０μＭの用量範囲のグリセオリンに４５分間曝露することにより刺激して、ＥＣ５０は、２．４０±０．４３μＭであり、最大取り込みは、基礎グルコース取り込みを２．０４±０．２４倍超えた刺激であった（ｎ＝３）。
【０１２０】
グルコース取り込みのグリセオリン刺激の基礎をなす機構を決定するため、脂肪細胞に発現する主要なグルコース輸送体タンパク質遺伝子であるＧＬＵＴ１およびＧＬＵＴ４をコードする遺伝子の発現を、検査した。
【０１２１】
脂肪細胞を、上記に記載されたように６ウエルプレートに増殖させ、分化を開始した後、１０から１１日目に使用した。脂肪細胞を滅菌ＫＲＨ緩衝液ですすぎ、次にＫＲＨ緩衝液中で２４時間プレインキュベートした。緩衝液を取り除き、脂肪細胞を、ビヒクルとしてＤＭＳＯにより、またはグリセオリンにより（１μＭもしくは１０μＭなどの指定された濃度で）３時間処理した。全ＲＮＡを、Ｔｒｉｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して単離し、ＲＮｅａｓｙカラム（Ｑｉａｇｅｎ）により製造会社のプロトコールに従って精製した。ＲＮＡの質および濃度は、２６０ｎｍおよび２８０ｎｍでの吸光度によって決定した。全ＲＮＡを、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して逆転写した。順方向プライマー、逆方向プライマー、ＧＬＵＴ１、ＧＬＵＴ４のＴａｑＭａｎプローブ、およびハウスキーピング遺伝子リボソームタンパク質Ｌ３２（ＲＰＬ３２）（ＮＭ＿１７２０８６）の配列は、Ｃａｏ，Ｈ．ｅｔ  ａｌ．、Ｏｂｅｓｉｔｙ  １６：１２０８−１２１８（２００８）に記載されている。反応は、ＣＦＸ９６  Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ  ＰＣＲ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）の９６ウエルプレートにおいて実施した。熱サイクル条件は下記であった。５０℃で２分間および９５℃で１０分間、続いて９５℃でそれぞれ１５秒間および６０℃で６０秒間の５０サイクル。ΔΔＣＴ方法の相対的定量化を使用して、発現の倍変化を決定した。これは、最初に、標的ＲＮＡの得られた閾値サイクル（ＣＴ）値を、同じ試料における内部対照Ｒｐｌ３２のＣＴ値に正規化することのよって実施した。これらのデータをＤＭＳＯ対照と比較した。
【０１２２】
ＧＬＵＴ１およびＧＬＵＴ４の両方の発現は、１μＭから１０μＭの範囲のグリセオリンに曝露された細胞において有意に増加した（図６）。
【０１２３】
これらの知見は、脂肪細胞へのグリセオリン媒介グルコース取り込みの機構が、ＧＬＵＴ１およびＧＬＵＴ４の両方の遺伝子の発現を増加することによるものであることを確立している。ＧＬＵＴ１は、脂肪細胞および大部分の他の細胞による基礎グルコース取り込みに関与していると考えられる。ＧＬＵ４は、脂肪細胞および他のインスリン標的組織によっても発現される。インスリン刺激グルコース取り込みに関与すると考えられる。両方のＧＬＵＴは、３Ｔ３−Ｌ１細胞により、これらが成熟した脂肪細胞に分化した後に発現される。したがって、グリセオリンは、インスリンと協調して、またはホルモンから独立して作用し、脂肪細胞によるグルコース取り込みを刺激することができる。
【０１２４】
実施例４．前糖尿病ラットへのグリセオリンの慢性投与
前糖尿病ＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットへの３つのグリセオリン（グリセオリンＩ、グリセオリンＩＩ、およびグリセオリンＩＩＩ）のブレンドは、経口グルコース投与に対する血中グルコース応答を改善する（実施例２を参照すること）。薬物動態データは、３０ｍｇ／ｋｇまたは９０ｍｇ／ｋｇのいずれかの投与後の３時間の間の血漿レベルが低かったので、グリセオリンが経口投与後には部分的にしか生物学的利用能がないことも実証した（実施例１を参照すること）。研究は、ＺＤＳＤ／Ｐｃｏラットの使用により実施して、グリセオリンの経口投与がＧＩマイクロバイオームおよび身体組成を変更するかを決定した。
【０１２５】
ラットを経口用量のグリセオリンブレンド（９０ｍｇ／ｋｇ）により１１日間治療し、糞便中のマイクロバイオータ分類群を、治療前および治療の１１日目に分析した。Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｓｙｎｃｈｒｏｎ  ＣＸ４ランダムアクセスマルチアナライザー（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｂｒｅａ、ＣＡ）を使用して、終末時出血の血漿中のグルコース（カタログ番号ＯＳＲ６１２１）、コレステロール（カタログ番号ＯＳＲ６１１６）、およびトリグリセリド（カタログ番号ＯＳＲ６０１８）を測定した。活性ＧＬＰ−１およびインスリンを、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ多重機器およびＫ１１１５９ｃ−１キット（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用して測定した。レプチンを、ＡＬＰＣＯ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙラット／マウスレプチンキット（２２−ＬＥＰＭＳ−Ｅ０１）を使用してＥＬＩＳＡにより測定した。
【０１２６】
３つの属の存在度の差を、ベースラインと、グリセオリン治療の１１日目に得た糞便におけるマイクロバイオータの痕跡とを比較して観察した（表１）。特にＢｌａｕｔｉａ種の劇的な繁栄が観察された。糞便マイクロバイオータを治療前と治療の１１日目とを比較したとき、ビヒクル治療ラットにおける分類群に、多様性または存在度にシフトが観察されなかった。
【０１２７】
【表１】
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【０１２８】
マイクロバイオータの糞便プロファイルのこの変化は、主に脂肪質量の減少の結果による体重の減少（ビヒクル群では、５２９．２５±８．１５ｇから５２９．００±１０．３２ｇ、グリセオリンブレンドでは、５２９．８８±５．８４から５２３．８８±６．４４ｇ）と有意に（ｐ＜０．０５）相関した（図７）。
【０１２９】
糞便マイクロバイオータプロファイルのシフトも、血漿レプチンの減少、ならびに血漿ＧＬＰ−１（図８）および血漿インスリン（図９）の増加と有意に（ｐ＜０．０５）相関した。
【０１３０】
グリセオリンブレンドは、僅か１１日間の治療の後に、Ｂｌａｕｔｉａ種の劇的な繁栄を刺激した。この属の種は、ポリフェノール分子を処理することができ、かつ酢酸塩を合成できることを示す遺伝子も有する、水素消費生物体である（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．、２００８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｅｖｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．、５８：１８９６−９０２）。結腸に到達する繊維などの食物構成成分は、発酵して主にＳＣＦＡになるが、水素および二酸化炭素もこの過程において生成される。ヒト結腸の嫌気的発酵の際に生成される水素の微生物処理は、この生態系が最適に機能するために重要である（概説は、Ｎａｋａｍｕｒａ  ｅｔ  ａｌ．２０１０；Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｆｏｏｄ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．１：３６３−９５を参照すること）。他の２つの主要な水素消費微生物の群が、結腸において見出されており、メタン産生菌および硫酸還元細菌である。両方とも、主に水素利用が生じる際に発生すると思われ、互いに、ならびにＢｌａｕｔｉａ種と競合する。
【０１３１】
ヒト消化管群集関係の最も簡単なモデルにおいて、無菌マウスへの、Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ  ｐｉｇｅｒ（水素を硫黄と反応させて、硫化水素を産生することができる）を伴うＢ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎのコロニー形成ではなく、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎ（炭水化物を発酵して、ＳＣＦＡおよび水素にすることができる）およびＭｅｔｈａｎｏｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒ  ｓｍｉｔｈｉｉ（水素および炭素を利用して、メタンを産生することができる）の移植は、血清酢酸塩レベルの増加、肝臓トリグリセリドの増加、および脂肪過多の増加をもたらす（Ｓａｍｕｅｌ  ａｎｄ  Ｇｏｒｄｏｎ  ２００６；Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ．ＵＳＡ；１０３：１００１１−１００１６）。Ｂｌａｕｔｉａ  ｈｙｄｒｏｇｅｎｏｔｒｏｐｈｉｃａ（発酵によって水素と炭素を反応させて、酢酸塩を産生することができる）を伴うＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎの移植は、Ｂ．ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎとＭ．ｍｉｔｈｉｉの同時移植よりも遙かに大きな循環酢酸塩レベルをもたらす（Ｂａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１０  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ；２８５：２２０８２−２２０９０）。残念なことに、得られる肝臓トリグリセリドおよび脂肪蓄積質量は、コロニー形成対研究において報告されなかった。しかし、これらのデータは、１種類の水素利用細菌が、宿主がカロリーを得ることの助けとなり、他が、炭水化物発酵細菌と一緒になったときに酢酸塩または硫化水素（多くの場合に結腸の病理と関連する）のいずれかを産生するのに最適であることを示唆している。理論に束縛されるものではないが、Ｂｌａｕｔｉａのグリセオリン刺激繁栄は、水素消費マイクロバイオータの他の２つの部類の消化管における水素の競合を作り出すと、本明細書において考えられる。したがって、満腹ホルモンのリガンドとして機能を果たす、ならびに不活性グレリンを生成するように機能を果たす、結腸中の大きな酢酸塩レベルは、脂肪過多の減少を誘発する。事実、水素のように、グリセオリンは強力な還元剤であり、メタン産生菌または硫酸還元細菌と異なり、Ｂｌａｕｔｉａはポリフェノールのような分子を処理することができる（Ｂａｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２０１０  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、；２８５：２２０８２−２２０９０）。
【０１３２】
実施例５．活性化ダイズさや繊維を利用して、２型糖尿病に観察されるＧＩディスバイオシスを修正する、グルコース調節を改善する、および身体組成を改善するヒト研究
対象および方法
必要な数の対象を、必要な資格を満たすように正確に選別し、適正な実験室評価を実施し、肯定的な主要および二次的転帰応答を記録し、有害事象を文書化し、患者を適切に追跡調査する。
【０１３３】
概観
これは、食事１の前の１時間以内、または食事２の前の１時間以内のいずれか、ならびに食事３の前の１時間以内において活性化ダイズさや繊維を４週間にわたって摂取する不断食事（ad libitum diet）下にある、空腹時血中グルコース障害を有する過体重対象が、
１．介入の開始時に分析した便と比較し、プラセボを消費した対象と比較したとき、小鎖脂肪酸の増加した、メタンおよび硫化水素ガスの減少した、酢酸塩の増加した、および抗酸化剤の増加した便を排泄すること、ならびに
２．初期ＯＧＴＴと比較し、プラセボを消費した対象と比較したとき、７５ｇのグルコース摂取の前、間中、および１２０分後の血中グルコースおよびインスリンレベルを測定すると、改善された経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を有すること、ならびに
３．介入の開始時の夜間絶食時（overnight fasting）血中グルコース値と比較し、プラセボを消費する対象と比較したとき、朝食を摂取する前の血中グルコースをモニターすることより測定すると、低い夜間絶食時血中グルコースレベルを有すること、ならびに
４．体重の減少、体脂肪または体脂肪％の減少、胴囲測定値の減少を測定して、身体組成の改善を経験すること、ならびに
５．プラセボを消費した対象と比較したとき、食事前の食欲の減少、食事の際の満腹感の増加を経験すること、ならびに
６．値を介入の３週間にわたってプラセボを消費した対象と比較したとき、標準食の後に活性グレリンレベルの低減を伴ってＧＬＰ−１とＰＹＹレベルの上昇を有することが見出されること
を例示するように設計されている。
【０１３４】
この研究において、対象は、１８０ｍｌの活性化ダイズさや繊維調製物、または活性化ダイズさや繊維と同じ総食物繊維レベルであるが、不活性セルロースを含有するプラセボを、食事１または食事２のいずれかの消費前の１時間以内、および食事３の消費前の１時間以内に、毎日、経口により消費した。プラセボ調製物は、活性化ダイズさや繊維の総食物繊維含有量と釣り合うように、食品着色料および風味料を有するセルロースを含有する。プラセボは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、活性化ダイズさや繊維を味の良い混合しやすい粉末に調製するのと同時に、調製される。
【０１３５】
対象は、任意の副作用の測定値および評価について毎週報告する。活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかの介入を開始する前、ならびに４週間治療期間の終了時に、便試料を収集するように求められる。また、任意の副作用およびその頻度を記録するように求められる（チェックリスト評価）。介入の３週目の標準食の際に、食欲（どれぐらい空腹であるか）および満腹感（どれぐらい満腹であるか）を記録するように求められる。こられを記録するため、適切な書類が提供される。
【０１３６】
対象の選別および選択
合計３０人の対象が選択され、１５人が活性化ダイズさや繊維に割り当てられ、１５人がプラセボに割り当てられる。
【０１３７】
対象の資格
１）ＢＭＩが２５から４５であり、年齢が１８から７０歳の健康な男性および女性が登録可能である。２）空腹時血中グルコースが１００から２００ｍｇ／ｄｌである。３）２か月間にわたって体重が安定している。
研究から除外される対象
ａ）グルコースに影響を与える投薬を摂取している人、
ｂ）インスリンに影響を与える投薬を摂取している人、
ｃ）体重に影響を与える投薬を摂取している人、
ｄ）細菌叢に影響を与える投薬を摂取している人、
ｅ）腸疾患を有する、または腸疾患の最近の病歴を有する人、
ｆ）胃または腸の外科手術を受けた人、
ｇ）甲状腺機能低下のある人、
ｈ）妊娠している人、
ｉ）心疾患を有する人。
【０１３８】
実験室評価
異なる試験が、潜在的な参加者を選別するため、研究の開始時に、および４週間治療期間の終了時に実施される。
１）選別：対象は、甲状腺機能低下症、妊娠、および心疾患を除外するために選別される。以下の試験が、このために十分でありうる。Ｔ４（チロキシン）、Ｔ３（トリヨードチロニン（triiodotyronine））、ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）、妊娠尿検査、血圧、およびＥＣＧ（心電図）。
２）研究の開始時：初期選別を合格した対象は、１週目の開始時に、以下について評価される。
ａ）空腹時血中グルコースおよびインスリンレベル、
ｂ）尿酸および肝臓機能試験を含む、ＳＭＡ２０（コンピューター２０による連続多チャンネル分析、２０個の異なる分析物による代謝パネル）、
ｃ）トリグリセリド、
ｄ）画分を含むコレステロール、
ｅ）グリコシル化ヘモグロビンＡ１（ＨｇｂＡ１）、
ｆ）毎回同じ体重計により計量した体重、
ｇ）ＤＸＡ（二重エネルギーＸ線吸収測定法）により決定された体脂肪％および総体脂肪、
ｈ）身長、
ｉ）胴囲測定値、
ｊ）７５ｇの経口グルコース投与に対する血中グルコース、インスリン、ＧＬＰ−１、ＰＹＹ、およびグレリンの応答、
ｋ）視覚的アナログ尺度を使用する食欲および満腹感の評価、
ｌ）便を収集し、凍結保存するが、研究の終了時まで分析しない。
３）研究の終了時の評価：
ａ）研究の開始時にステップ２において行った全ての実験および評価、
ｂ）初期試料と最終試料の両方の糞便マイクロバイオームのＤＮＡの分析、
ｃ）ｐＨ、ＳＣＦＡ、ラクトフェリン、白血球、粘液、分泌免疫グロブリンＡ、抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡ、病原性細菌、酵母菌、真菌、寄生虫、トリグリセリド、分岐鎖脂肪酸、長鎖脂肪酸、およびコレステロールが含まれる、糞便の分析。
【０１３９】
研究設計
参加するように選択された対象は、不断食事が容認され、食時の前後に食欲および満腹感を評価する評価シートが渡される。除外される食品には、アルコールが含まれる。果汁、牛乳、甘い紅茶（砂糖入り紅茶）、通常の清涼飲料、砂糖入りコーヒーなどの低カロリーの液体が、高カロリーの液体の代わりに強く勧められる。対象は、活性化ダイズさや繊維またはプラセボ治療のいずれかに無作為に割り当てられる。実験者と対象の両方とも、誰が活性化ダイズさや繊維またはプラセボを受けるかについて知らされていない。対象は、いずれかの治療を朝食または昼食のいずれかの前の１時間以内、および夕食の前の１時間以内に消費するように勧められる。
【０１４０】
持続期間
対象は、４週間分の活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかが開始時に与えられ、食時１または２のいずれかの前の１時間以内に１８０ｍｌの量を、ならびに食時３の前の１時間以内に、活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかを含有する別の１８０ｍｌの量を、全て消費するように指示される。不断食事は、４週間続けられるが、志願者は、間食のときのみに活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかを消費するように指示される。
【０１４１】
結果
この研究は、活性化ダイズさや繊維が、
１）介入の開始時に分析した便と比較し、プラセボを消費した対象と比較したとき、小鎖脂肪酸の増加した、メタンおよび硫化水素ガスの減少した、酢酸塩の増加した、および抗酸化剤の増加した便を排泄させること、
２）インスリン曲線下面積を減少すること（インスリン感受性の改善）によりＯＧＴＴへの血中グルコースおよびインスリン応答を改善すること、
３）空腹時血中グルコース値を減少すること、
４）体重減少、体脂肪の損失、および（または）体脂肪％の減少を生じること、
５）ＯＧＴＴの最終値を初期測定値と比較し、標準食のプラセボ群における知見と比較したとき、経口グルコース投与に対するＧＬＰ−１およびＰＹＹ応答を増加すること、ならびにＯＧＴＴおよび標準食の両方の１時間後に、空腹時グレリンレベルを減少すること、
６）便ｐＨを減少すること、
７）便ＳＣＦＡを増加すること、
８）便ラクトフェリンを増加すること、
９）便白血球を減少すること、
１０）便粘液を減少すること、
１１）便分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
１２）便抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
１３）便病原性細菌を減少すること、
１４）便酵母菌、真菌、および寄生虫を減少すること、
１５）便トリグリセリドを増加すること、
１６）便分岐鎖脂肪酸を減少すること、
１７）便長鎖脂肪酸に変化がないこと、
１８）便コレステロールを増加すること
を例示するように設計される。
対象が活性化ダイズさや繊維を４週間より長い期間にわたって、特に少なくとも８週間にわたって摂取すると、対象は、主に脂肪損失およびＨｇＡ１ｃレベルの減少による有意な体重減少を経験する。
【０１４２】
実施例６．活性化ダイズさや繊維を、ジペプチジルペプチダーゼ−４（ＤＰＰ−４）の阻害剤と組み合わせて利用して、２型糖尿病に観察されるＧＩディスバイオシスを修正する、およびＧＬＰ−１の持続上昇によりグルコース調節を改善するヒト研究
対象および方法
必要な数の対象を、必要な資格を満たすように正確に選別し、適正な実験室評価を実施し、肯定的な主要および二次的転帰応答を記録し、有害事象を文書化し、患者を適切に追跡調査する。
【０１４３】
概観
この研究は、食事１または食事２のいずれかの前の１時間以内、ならびに食事３の前の１時間以内にＤＰＰ−４阻害剤および活性化ダイズさや繊維を４週間にわたって摂取する不断食事下の、インスリン抵抗性を有する２型糖尿病（Ｔ２Ｄ）対象が、
１．治療の開始時と比較し、ＤＰＰ−４阻害剤のみを摂取する対象と比較したとき、治療の終了時に正常であると特徴付けられる便を排泄すること、ならびに
２．研究の開始時と比較したとき、およびＤＰＰ−４阻害剤のみを摂取する対象と比較したとき、の両方において、改善されたインスリン感受性を有すること。インスリン感受性は、経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）により測定される。これは、初期ＯＧＴＴと比較したとき、７５ｇのグルコースの摂取の前、間中、および１２０分後の血中グルコースおよびインスリンレベルを測定することによって実施され、ならびに
３．ＤＰＰ−４阻害剤のみを摂取する対象と比較したとき、改善された空腹時血中グルコース値を有すること、ならびに
４．ベースライン値と比較し、ＤＰＰ−４阻害剤のみを摂取する対象と比較したとき、体重の減少、体脂肪または体脂肪％の減少、胴囲測定値の減少を測定して、身体組成の改善を経験すること、ならびに
５．ベースライン値と比較し、ＤＰＰ−４阻害剤のみを摂取する対象と比較したとき、標準食の前の食欲の減少および標準食の際の満腹感の増加を経験すること、ならびに
６．値をベースライン値と比較し、ＤＰＰ−４阻害剤のみを摂取する対象と比較したとき、ＯＧＴＴと標準食の両方の１時間後に、グレリンレベルの低減を伴うＧＬＰ−１とＰＹＹレベルの上昇を有することが見出されること
を例示するように設計される。
【０１４４】
概要
この研究において、Ｔ２Ｄ患者は、食事１または２のいずれかの前の１時間以内、ならびに食事３の前の１時間以内に、１８０ｍｌの活性化ダイズさや繊維、またはセルロースを含有するプラセボ調製物のいずれかを毎日経口消費するように、無作為に割り当てられる。患者および実験者は、この割り当てについて知らされていない。また全ての患者は、糖尿病を管理する治療として、食事１の前に１日１回朝に１００ｍｇの推奨用量でシタグリプチン（Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標））を摂取するように指示される。
【０１４５】
対象は、任意の副作用の測定値および評価について毎週報告する。試験を開始する前、ならびに４週間治療期間の終了時に、便試料を収集するように求められる。また、任意の副作用およびその頻度を記録するように求められる（チェックリスト評価）。試験の開始時および終了時の両方でのＯＧＴＴの際に、ならびに治療の３週目の標準食の前および間中に、食欲（どれぐらい空腹であるか）および満腹感（どれぐらい満腹であるか）を記録するように求められる。こられを記録するため、適切な書類が提供される。
【０１４６】
対象の選別および選択
合計２４人の対象が選択される。１２人には、シタグリプチン＋プラセボ（活性化ダイズさや繊維と同じ総食物繊維含有量を含有し、活性化ダイズさや繊維の色および味を模倣する、セルロース溶液）、またはシタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維が無作為に割り当てられる。
対象の資格
１）ＢＭＩが２５から４５であり、年齢が１８から７０歳のＴ２Ｄの男性および女性が登録可能である。
２）空腹時血中グルコースが１２５ｍｇ／ｄｌを超える。
３）２か月間にわたって体重が安定している。 
研究から除外される対象
ａ）シタグリプチン以外の、グルコースに影響を与える投薬を摂取している人、
ｂ）シタグリプチン以外の、インスリンに影響を与える投薬を摂取している人、
ｃ）体重に影響を与える投薬を摂取している人、
ｄ）細菌叢に影響を与える投薬を摂取している人、
ｅ）腸疾患を有する、または腸疾患の最近の病歴を有する人、 
ｆ）胃または腸の外科手術を受けた人、
ｇ）甲状腺機能低下のある人、
ｈ）妊娠している人、
ｉ）心疾患を有する人。
【０１４７】
実験室評価
異なる試験が、潜在的な参加者を選別するため、研究の開始時に、および４週間治療期間の終了時に実施される。
４）選別：対象は、甲状腺機能低下症、妊娠、および心疾患を除外するために選別される。以下の試験が、このために十分でありうる。Ｔ４、Ｔ３、ＴＳＨ、妊娠尿検査、血圧、およびＥＣＧ。空腹時血中グルコース、空腹時インスリン、およびＨｇｂＡ１レベルも、糖尿病状態の評価として測定される。
５）研究の開始時：初期選別を合格した対象は、１週目の開始時に、以下について評価される。
ａ）空腹時血中グルコース、インスリン、およびＨｇｂＡ１レベル、
ｂ）尿酸および肝臓機能試験を含む、ＳＭＡ２０、
ｃ）血中トリグリセリド、
ｄ）画分を含む血漿コレステロール、
ｆ）毎回同じ体重計により計量した体重、
ｇ）ＤＸＡにより決定された体脂肪％および総体脂肪、
ｈ）身長、
ｉ）胴囲および臀部測定値、
ｊ）７５ｇの経口グルコース投与に対する血中グルコース、インスリン、ＧＬＰ−１、ＰＹＹ、およびグレリン応答、
ｋ）視覚的アナログ尺度を使用する標準食の前、間中、および後の食欲および満腹感の評価、
ｌ）便は、防腐剤に収集され、ベースラインおよび研究の終了時と、１週間以内に評価される。
６）研究の終了時の評価：
ｃ）研究の開始時にステップ２において行った全ての実験および評価、
ｄ）初期試料と最終試料の両方の糞便マイクロバイオームのＤＮＡの分析、
ｅ）便ｐＨ、
ｆ）便ＳＣＦＡ、
ｇ）便ラクトフェリン、
ｈ）便白血球、
ｉ）便粘液、
ｊ）便分泌免疫グロブリンＡ、
ｋ）便抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡ、
ｌ）便病原性細菌、
ｍ）便酵母菌、真菌、および寄生虫、 
ｎ）便トリグリセリド、
ｏ）便分岐鎖脂肪酸、 
ｐ）便長鎖脂肪酸、
ｑ）便コレステロール。
【０１４８】
参加するように選択された患者は、不断食事が容認され、食欲および満腹感を評価する評価シートが与えられる。除外される食品には、アルコールが含まれる。果汁、牛乳、甘い紅茶（砂糖入り紅茶）、通常の清涼飲料な、砂糖入りコーヒーなどの低カロリーの液体が、高カロリーの液体の代わりに強く勧められる。また２４人全ての患者は、糖尿病を管理する治療として、食事を伴っても、伴わなくても１日１回朝に１００ｍｇの推奨用量でシタグリプチン（Ｊａｎｕｖｉａ（登録商標））を摂取するように指示される。１２人の患者は、３回の毎日の食事のうちの２回の前に活性化ダイズさや繊維も消費するように無作為に選択され、残りの１２人の患者は、３回の毎日の食事のうちの２回の前にプラセボを消費するように指示される。患者および研究者には、間食補充がプラセボまたは活性化ダイズさや繊維のいずれであるかを知らされていない。
【０１４９】
持続期間
対象は、４週間分のシタグリプチン、および活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかが開始時に与えられ、食時１または２のいずれかの前の１時間以内に１８０ｍｌの量のいずれかの間食補充を、ならびに食時３の前の１時間以内に別の１８０ｍｌの量の間食補充を、全て消費するように指示される。全ての対象は、食物を伴って、または伴わないで朝に１錠のシタグリプチン（１００ｍｇ）を毎日摂取するように要求される。不断食事は、４週間にわたって続けられる。
【０１５０】
結果
この研究は、活性化ダイズさや繊維が、
１）活性化ダイズさや繊維に割り当てられた対象の研究の終了時の試料を、研究の開始時の試料と比較し、シタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維を摂取した対象を、シタグリプチン＋プラセボを摂取した患者と比較したとき、糞便試料中の細菌種を、Ｔ２Ｄの糞便で文書化されたものから非糖尿病対象に典型的なものにシフトすること、
２）シタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維を摂取した対象を、シタグリプチン＋プラセボを摂取した患者と比較したとき、インスリン曲線下面積を減少すること（インスリン感受性の改善）によりＯＧＴＴへの血中グルコースおよびインスリン応答を改善すること、
３）活性化ダイズさや繊維に割り当てられた患者を研究の開始時の試料と比較し、シタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維を摂取した対象を、シタグリプチン＋プラセボを摂取した患者と比較したとき、体重減少、体脂肪の損失、および（または）体脂肪％の減少を生じること、
４）シタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維を摂取した対象を、シタグリプチン＋プラセボを摂取した患者と比較したとき、空腹時血中グルコースレベルの減少を生じること、ならびに
５）活性化ダイズさや繊維に割り当てられた患者を研究の開始時の試料と比較し、シタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維を摂取した対象を、シタグリプチン＋プラセボを摂取した患者と比較したとき、経口グルコース投与へのＧＬＰ−１およびＰＹＹ応答を増加すること、およびＯＧＴＴの前の空腹時グレリンレベルを減少すること
を例示するように設計される。
６）研究の開始時の試料と比較したとき、活性化ダイズさや繊維に割り当てられた患者は、およびシタグリプチン＋プラセボを摂取した患者と比較したとき、シタグリプチン＋活性化ダイズさや繊維を摂取した対象は、便試料に以下の変化を実証することが予測される。
ａ）便ｐＨを減少すること、
ｂ）便ＳＣＦＡを増加すること、
ｃ）便ラクトフェリンを増加すること、
ｄ）便白血球を減少すること、
ｅ）便粘液を減少すること、
ｆ）便分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｇ）便抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｈ）便病原性細菌を減少すること、
ｉ）便酵母菌、真菌、および寄生虫を減少すること、
ｊ）便トリグリセリドを増加すること、
ｋ）便分岐鎖脂肪酸を減少すること、
ｌ）便長鎖脂肪酸に変化がないこと、
ｍ）便コレステロールを増加すること。
【０１５１】
対象が、活性化ダイズさや繊維を、他のＤＰＰ−ＩＶ阻害剤または他のシタグリプチン製剤と共に摂取する場合、対象は、ＨｇｂＡ１ｃレベルの低減を測定することによって、有意に改善されたグルコース調節も有すると予測される。
【０１５２】
実施例７．活性化ダイズさや繊維間食補充を利用して、過体重および肥満の小児に観察されるＧＩディスバイオシスを修正する、グルコース調節を改善する、および身体組成を改善する研究
対象および方法
必要な数の小児を、必要な資格を満たすように正確に選別し、親の同意を得て、適正な実験室評価を実施し、肯定的な主要および二次的転帰応答を記録し、有害事象を文書化し、小児および親を適切に追跡調査する。
【０１５３】
概観
この研究は、調製物Ａ（活性化ダイズさや繊維と同一の活性成分であるが、アイスクリーム、ゼリー型動物、クッキーなどの小児に優しい送達系に調製されている）を、食事１または食事２のいずれかの前の１時間以内、ならびに食事３の前の１時間以内に４週間にわたって摂取する不断食事下の、前糖尿病を有する、またはＴ２Ｄ（２型糖尿病）を発生する高い危険性のある過体重小児が、
１．介入の開始時と比較したとき、正常な多様性があると特徴付けられる便を排泄すること、ならびに
２．初期ＯＧＴＴと比較したとき、１．７５ｇのグルコース／ｋｇ体重から７５ｇのグルコースまでの摂取の前、間中、および１２０分後の血中グルコースおよびインスリンレベルを測定すると、改善された経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を有すること、ならびに
３．体重の減少、体脂肪または体脂肪％の減少、胴囲測定値の減少を測定して、身体組成の改善を経験すること、ならびに
４．空腹時血中グルコースレベルの減少を経験すること、ならびに
５．食事前の食欲の減少、および食事の際の満腹感の増加を経験すること、ならびに
６．値を試験の開始時と比較したとき、ＯＧＴＴの１時間後に、グレリンレベルの低減を伴うＧＬＰ−１とＰＹＹレベルの上昇を有することが見出されること
を例示するように設計される。
【０１５４】
概要
この研究において、小児は、６個の調製物Ｂのゼリー型動物（それぞれのゼリー型動物は約２０ｇの調製物Ｂを含有する）を、食事１または２のいずれかの前の１時間以内、ならびに食事３の前の１時間以内に、毎日、消費する。
【０１５５】
対象は、任意の副作用の測定値および評価について毎週報告する。調製物Ｂ介入を開始する前、ならびに４週間治療期間の終了時に、便試料を収集するように求められる。また、副作用およびその頻度を記録する親に、それらを報告するように求められる（チェックリスト評価）。親は、研究の開示時および終了時に３番目の標準食の前、間中、および後に食欲（どれぐらい空腹であるか）および満腹感（どれぐらい満腹であるか）を聞いて、記録するように指示される。研究者は、試験の開始時および終了時の両方、ならびに家庭におけるＯＧＴＴに同じ評価をスコア付けする。患者には、こられを記録するため、適切な書類が提供される。
対象の選別および選択
合計１０人の小児が選択される。
対象の資格
１）ＢＭＩが２５から３０であり、年齢が７から１２歳の健康な思春期前の男児および女児が登録可能である。
２）空腹時血中グルコースが１００から１２５ｍｇ／ｄｌである。
研究から除外される対象
ａ）グルコースに影響を与える投薬を摂取している小児、
ｂ）インスリンに影響を与える投薬を摂取している小児、
ｃ）体重に影響を与える投薬を摂取している小児、
ｄ）細菌叢に影響を与える投薬を摂取している小児、
ｅ）腸疾患を有する、または腸疾患の最近の病歴を有する小児、 
ｆ）胃または腸の外科手術を受けた小児、
ｇ）甲状腺機能低下のある小児。
【０１５６】
実験室評価
異なる試験が、潜在的な参加者を選別するため、研究の開始時に、および４週間治療期間の終了時に実施される。
【０１５７】
選別
小児は、甲状腺機能低下症および思春期を除外するために選別される。以下の試験が、このために十分でありうる。Ｔ４、Ｔ３、ＴＳＨ、健康診断、健康診断または思春期前後についての提示に疑問のある場合は、ゴナドトロピン放出ホルモン投与試験。
【０１５８】
研究の開始時
初期選別を合格した小児は、１週目の開始時に、以下について評価される。
ａ）空腹時血中グルコースおよびインスリンレベル、
ｂ）尿酸および肝臓機能試験を含む、ＳＭＡ２０、
ｃ）トリグリセリド、
ｄ）画分を含むコレステロール、
ｅ）グリコシル化ヘモグロビンＡ１（ＨｇｂＡ１）、
ｆ）毎回同じ体重計により計量した体重、
ｇ）ＤＸＡにより決定された体脂肪％および総体脂肪、
ｈ）身長、
ｉ）胴囲および臀部測定値、
ｊ）１．７５ｇ／ｋｇ（７５ｇまで）の経口グルコース投与に対する血中グルコース、インスリン、ＧＬＰ−１、ＰＹＹ、およびグレリン応答、
ｋ）視覚的アナログ尺度を使用する食欲および満腹感の評価、
ｌ）便は、防腐剤に収集され、１週間以内に評価される。
研究の終了時の評価
ａ）研究の開始時にステップ２において行った全ての実験および評価、
ｂ）初期試料と最終試料の両方の糞便マイクロバイオームのＤＮＡの分析。
【０１５９】
研究設計
参加するように選択された小児は、不断食事が容認され、親には、食欲および満腹感を評価する評価シートが与えられる。果汁、牛乳、通常の清涼飲料、砂糖入りコーヒーなどの低カロリーの液体が、高カロリーの液体の代わりに強く勧められる。小児は、唯一の間食として調製物Ｂを消費するように勧められる。キャンディー、アイスクリーム、ミルクシェーク、クッキー、ポテトチップスなどの他の間食は、やめるように勧められる。
【０１６０】
持続期間
小児は、４週間分の調製物Ｂが開始時に与えられ、食時１または２のいずれかの前の１時間以内に調製物Ｂを含有する６個のゼリー型動物を、ならびに食時３の前の１時間以内に別の６個のゼリー型動物を、全て消費するように指示される。不断食事は、４週間続けられるが、小児は、唯一の間食として調製物Ｂを消費するように指示される。
【０１６１】
結果
この研究は、調製物Ｂが、
１）研究の終了時の試料を研究の開始時の試料と比較したとき、糞便試料の細菌種を、肥満小児で文書化されたものから健康な除脂肪小児および青年に典型的なものへシフトすること、
２）インスリン曲線下面積を減少すること（インスリン感受性の改善）によりＯＧＴＴへの血中グルコースおよびインスリン応答を改善すること、
３）体重減少、体脂肪の損失、および（または）体脂肪％の減少を生じること、
４）最終値を初期測定値と比較すると、経口グルコース投与へのＧＬＰ−１およびＰＹＹ応答を増加すること、ならびにＯＧＴＴの前の空腹時グレリンレベルを減少すること、
５）以下の便特性を変更すること：
ａ）便ｐＨを減少すること、
ｂ）便ＳＣＦＡを増加すること、
ｃ）便ラクトフェリンを増加すること、
ｄ）便白血球を減少すること、
ｅ）便粘液を減少すること、
ｆ）便分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｇ）便抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｈ）便病原性細菌を減少すること、
ｉ）便酵母菌、真菌、および寄生虫を減少すること、
ｊ）便トリグリセリドを増加すること、
ｋ）便分岐鎖脂肪酸を減少すること、
ｌ）便長鎖脂肪酸に変化がないこと、
ｍ）便コレステロールを増加すること
を例示するように設計される。
【０１６２】
小児が間食補充として活性化ダイズさや繊維を４週間より長い期間にわたって、特に少なくとも８週間にわたって摂取すると、小児は、主に脂肪損失による有意な体重減少を経験する。
【０１６３】
実施例８．活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかを利用して、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の胃腸マイクロバイオータを、健康な個体に特徴的なものにシフトするヒト研究
対象および方法
必要な数の対象を、必要な資格を満たすように正確に選別し、適正な実験室評価を実施し、肯定的な主要および二次的転帰応答を記録し、有害事象を文書化し、患者を適切に追跡調査する。
【０１６４】
概観
この無作為化プラセボ対照臨床試験は、ＩＢＤを有する下痢気味のヒトにおいて活性化ダイズさや繊維の効力および耐容性を例示するように設計される。プラセボではなく活性化ダイズさや繊維を、食事１または食事２のいずれかを消費する前の１時間以内、ならびに食事３を消費する前の１時間以内に、４週間にわたって消費するように割り当てられた対象は、
１．治療開始の１週間以内の正常な多様性のＧＩマイクロバイオータを含有する堅い便を排泄する、
２．４週間の全てにおいて適切な軽減を報告する、
３．切迫感の減少を報告する、
４．便頻度の減少を報告する、および
５．腹部疼痛の軽減を報告する。
【０１６５】
概要
この研究において、対象は、食事１または２のいずれかの摂取前の１時間以内、ならびに食事３の消費前の１時間以内に、１８０ｍｌの活性化ダイズさや繊維またはプラセボ調製物のいずれかを毎日経口消費するように、無作為に選択される。対象および実験者は、治療割り当てについて知らされていない。プラセボ調製物は、活性化ダイズさや繊維の総食物繊維含有量と釣り合うように、食品着色料および風味料を有するセルロースを含有する。プラセボは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、活性化ダイズさや繊維を調製するのと同時に、調製される。両方の製剤は、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、コード付けされ、コードは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより維持され、同様に、全てのデータが研究の終了時に収集されるまで、薬剤師により研究診療所に機密として保持される。
【０１６６】
対象は、任意の副作用の測定値および評価について毎週報告する。活性化ダイズさや繊維またはプラセボの介入を開始する前、ならびに４週間治療期間の終了時に、便試料を収集するように求められる。選別、治療、および追跡調査の期間に、毎日および毎週の症状データは、双方向電話システムを使用して収集される。
【０１６７】
疼痛および腸機能データが選別段階で収集されて、患者が研究の参入時に適切な症状レベルを有していたことを確実にする。疼痛および不快感の重篤度は、５ポイントスケール（０．なし、１．穏やか、２．中程度、３．強度、４．重度）により毎日評価された。便の硬さデータは、毎日モニターされ、以下のようにスコア付けされる。１．非常に硬い、２．硬い、３．有形、４．軟らかい、５．水様。便がないときは、０の値が割り当てられる。患者は、また、ＩＢＳ症状の切迫感（０％、排便の必要性を感じない〜１００％、排便の重大な必要性を感じる）、便頻度（１日あたりの便の回数）、膨満感（０．腹部拡張の感覚なし、１．穏やか、２．中程度、３．重度）、および不完全な排便感（０．完全な排便感、１．不完全、２．便秘）を治療および追跡調査の段階で毎日記録する。
【０１６８】
対象の選別および選択
ＩＢＤおよび下痢型の腸パターンを有する年齢が１８歳以上の患者は、症状がＩＢＤのローマＩ基準を少なくとも６か月間にわたって満たす場合、この試験に登録される。患者は、無作為化の前に、疼痛および便の硬さの十分なレベルを確認するため２週間の選別評価を受ける。
【０１６９】
患者は、妊娠している、授乳している、もしくは承認された避妊方法を使用していない場合（出産可能な場合）、不安定な医学的または他の胃腸状態が存在する場合、２年前以内に主要な精神障害または物質乱用がある場合、治験薬を選別段階の３０日以内に使用した場合、または禁止されている併用投薬（胃腸管機能もしくは鎮痛を妨げる可能性がある）を、選別段階に参入する前の７日以内に使用した場合、除外される。疼痛および腸機能データが選別段階で収集されて、患者が研究の参入時に、上記に記載されている適切な症状レベルを有していたことを確実にする。
【０１７０】
症状および実験室評価
評価は、潜在的な参加者を選別するため、研究の開始時、毎日、および４週間治療期間の終了時に実施される。
１）研究の開始時および毎日
ａ）疼痛および不快感の重篤度は、５ポイントスケール（０．なし、１．穏やか、２．中程度、３．強度、４．重度）により評価される。
ｂ）便の硬さデータは以下のようにスコア付けされる。１．非常に硬い、２．硬い、３．有形、４．軟らかい、５．水様。便がないときは、０の値が割り当てられる。
ｃ）切迫感（０％、排便の必要性を感じない〜１００％、排便の重大な必要性を感じる）、
ｄ）便頻度（１日あたりの便の回数）、
ｅ）膨満感（０．腹部拡張の感覚なし、１．穏やか、２．中程度、３．重度）、
ｆ）不完全な排便感（０．完全な排便感、１．不完全、２．便秘）、
ｇ）体重。
２）研究の開始時
便を収集し、凍結保存するが、研究の終了時まで分析しない。
３）研究の終了時の評価
【０１７１】
初期試料と最終試料の両方の糞便マイクロバイオームのＤＮＡの分析、および完全な便分析。
【０１７２】
研究設計
参加するように選択された対象は、不断食事が容認される。除外される食品には、アルコールが含まれる。対象は、２つの食事の前の１時間以内に、活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかを毎日消費するように勧められ、３番目の食事の前の試験剤の摂取は、必須である。
【０１７３】
対象は、４週間分の活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかが開始時に与えられ、食時１または２のいずれかの前の１時間以内に、いずれかの調製物を含有する１８０ｍｌの量を、ならびに食時３の前の１時間以内に、いずれかの調製物を含有する別の１８０ｍｌの量を、全て消費するように指示される。
【０１７４】
対象は、ＩＢＤ症状の測定値および評価について毎週報告する。選別および治療期間に、毎日の症状データは、双方向電話システムを使用して収集される。
【０１７５】
結果
この研究は、プラセボではなく、活性化ダイズさや繊維が、
１）疼痛および不快感の重篤度を改善すること、
２）便の硬さを増加すること、
３）排便の切迫感を減少すること、
４）便の頻度を減少すること、
５）膨満感を減少すること、
６）完全な排便感を増加すること、
７）便プロファイルを、健康なＧＩマイクロバイオームに代表されるものにシフトすること、
ａ）便ｐＨを減少すること、
ｂ）便ＳＣＦＡを増加すること、
ｃ）便ラクトフェリンを増加すること、
ｄ）便白血球を減少すること、
ｅ）便粘液を減少すること、
ｆ）便分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｇ）便抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｈ）便病原性細菌を減少すること、
ｉ）便酵母菌、真菌、および寄生虫を減少すること、 
ｊ）便トリグリセリドを増加すること、
ｋ）便分岐鎖脂肪酸を減少すること、 
ｌ）便長鎖脂肪酸に変化がないこと、 
ｍ）便コレステロールを増加すること
を例示するように設計される。
【０１７６】
寄生虫感染、ウイルス感染、および食物に対する症候性応答などの突発性下痢症を治療するための活性化ダイズさや繊維の利用は、疼痛および不快感の重篤度を改善する、便の硬さを増加する、排便切迫感を減少する、便頻度を減少する、および膨満感を減少することも予測される。
【０１７７】
実施例９．活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかを利用して妊娠糖尿病を治療するヒト研究
対象および方法
必要な数の対象を、必要な資格を満たすように正確に選別し、適正な実験室評価を実施し、肯定的な主要および二次的転帰応答を記録し、有害事象を文書化し、患者を適切に追跡調査する。
【０１７８】
概観
この無作為化プラセボ対照臨床試験は、妊娠糖尿病において活性化ダイズさや繊維の効力および耐容性を例示するように設計される。プラセボではなく活性化ダイズさや繊維を、食事１または食事２のいずれかを消費する前の１時間以内、ならびに食事３を消費する前の１時間以内に、４週間にわたって消費するように割り当てられた対象は、
１．改善された血糖管理を有する。
２．治療の許容性を有する。
【０１７９】
概要
この研究において、対象は、食事１または２のいずれかの摂取前の１時間以内、ならびに食事３の消費前の１時間以内に、１８０ｍｌの活性化ダイズさや繊維またはプラセボ調製物のいずれかを毎日経口消費するように、無作為に選択される。対象および実験者は、治療割り当てについて知らされていない。プラセボ調製物は、活性化ダイズさや繊維の総食物繊維含有量と釣り合うように、食品着色料および風味料を有するセルロースを含有する。プラセボは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、活性化ダイズさや繊維を調製するのと同時に、調製される。両方の製剤は、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、コード付けされ、コードは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより維持され、同様に、全てのデータが研究の終了時に収集されるまで、薬剤師により研究診療所に機密として保持される。
【０１８０】
対象は、任意の副作用の測定値および評価について毎週報告する。活性化ダイズさや繊維またはプラセボの介入を開始する前、ならびに４週間治療期間の終了時に、便試料を収集するように求められる。選別、治療、および追跡調査期間に、毎日の血中グルコースデータは、指先穿刺を使用して患者により収集される。
【０１８１】
対象の選別および選択
妊娠糖尿病を２４から２８週間有し（米国糖尿病協会（ＡＤＡ）基準）、年齢が少なくとも１８歳である、食事療法および運動に失敗して介入治療が必要である、１型または２型糖尿病が知られていない、グルコース代謝を妨げる医薬で治療を受けていない、ダイズに対してアレルギーがなく、子癇前症を有さず、抗生物質を摂取しておらず、プロトンポンプ阻害剤を摂取していない、女性。
【０１８２】
症状および実験室評価
血糖管理は、治療の期間中、および送達の８〜１２週間後に評価される。治療が開始される前、治療の間中、および送達の８〜１２週間後の、便分析。
【０１８３】
研究設計
参加するように選択された女性は、妊娠の２４から２８週間の間に妊娠糖尿病が診断され、１０日間の食事療法および運動により回復する。対象は、食事療法の指導に加えて、２つの食事の前の１時間以内に、活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかを毎日消費するように勧められ、３番目の食事の前の試験剤の摂取は、必須である。
【０１８４】
女性は、８週間分の活性化ダイズさや繊維またはプラセボのいずれかが開始時に与えられ、食時１または２のいずれかの前の１時間以内に、いずれかの調製物を含有する１８０ｍｌの量を、ならびに食時３の前の１時間以内に、いずれかの調製物を含有する別の１８０ｍｌの量を、全て消費するように指示される。
【０１８５】
対象は、指先穿刺により、毎朝、空腹時血中グルコースを測定し、値を毎週の来診の際に報告する。治療群とプラセボ群との比較は、治療の２〜３週間、および送達の８〜１２週間後に行う。
【０１８６】
結果
この研究は、プラセボではなく、活性化ダイズさや繊維が、
１）終了期限までグルコース調節を改善すること、
２）重篤な有害事象を有さないこと、
３）帝王切開の率、早期分娩の率、新生児死亡率、分娩に関連する新生児および妊産婦外傷の数、入院日数を変更しないこと、
４）便プロファイルを、健康なＧＩマイクロバイオームに代表されるものにシフトすること、
ｎ）便ｐＨを減少すること、
ｏ）便ＳＣＦＡを増加すること、
ｐ）便ラクトフェリンを増加すること、
ｑ）便白血球を減少すること、
ｒ）便粘液を減少すること、
ｓ）便分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｔ）便抗グリアジン分泌免疫グロブリンＡを増加すること、
ｕ）便病原性細菌を減少すること、
ｖ）便酵母菌、真菌、および寄生虫を減少すること、
ｗ）便トリグリセリドを増加すること、
ｘ）便分岐鎖脂肪酸を減少すること、
ｙ）便長鎖脂肪酸に変化がないこと、
ｚ）便コレステロールを増加すること
を例示するように設計される。
【０１８７】
実施例１０．新たに発症した対象における１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）の進行に対する活性化ダイズさや繊維の効果
対象および方法
必要な数の対象を、必要な資格を満たすように正確に選別し、適正な実験室評価を実施し、肯定的な主要および二次的転帰応答を記録し、有害事象を文書化し、患者を適切に追跡調査する。
【０１８８】
概観
この無作為化プラセボ対照臨床試験は、新たに診断されたＴ１Ｄにおいて活性化ダイズさや繊維の効力および耐容性を例示するように設計される。プラセボではなく活性化ダイズさや繊維を、食事３を消費する前の１時間以内に、３か月間にわたって消費するように割り当てられた対象は、
１．改善された血糖管理を有する。
２．保存された残存インスリン分泌を有する。
３．ベータ細胞機能を維持する。
４．治療の許容性を有する。
【０１８９】
概要
この研究において、対象は、全ての食事の摂取前の１時間以内に、１８０ｍｌの活性化ダイズさや繊維またはプラセボ調製物のいずれかを経口消費するように、無作為に選択される。対象および実験者は、治療割り当てについて知らされていない。プラセボ調製物は、活性化ダイズさや繊維の総食物繊維含有量と釣り合うように、食品着色料および風味料を含有する。プラセボは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、活性化ダイズさや繊維を調製するのと同時に、調製される。両方の製剤は、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより、コード付けされ、コードは、Ｍｅｒｌｉｎ  Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔにより維持され、同様に、全てのデータが研究の終了時に収集されるまで、薬剤師により研究診療所に機密として保持される。
【０１９０】
対象は、任意の副作用の測定値および評価について毎月報告する。活性化ダイズさや繊維またはプラセボの介入を開始する前、ならびに毎週の来診の際に、便試料を収集するように求められる。選別、治療、および追跡調査の期間に、患者は、指先穿刺の使用により、血中グルコースデータを毎日収集する。
【０１９１】
研究は、２／３の参加者が、活性化ダイズさや繊維を受け、残りの１／３がプラセボを受ける、無作為化２アーム試験である。参加者は、毎月、３か月間にわたって来診するため臨床センターに戻る必要があり、インスリンを分泌し続けている参加者は、更に１年の更なる追跡調査を有する。
対象の選別および選択
参加基準：
−  年齢が８〜４５歳であること、
−  １型糖尿病の診断の３か月以内であること、
−  少なくとも１つの糖尿病関連自己抗体の存在があること、
−  選別の際に混合食負荷試験（ＭＭＴＴ）で測定して少なくとも０．２ｐｍｏｌ／ｍｌの刺激Ｃペプチドレベルを有していなければならないこと、
−  生殖能を有する女性の場合、試験に参加している間は、妊娠を回避し、妊娠検査を受ける意思のあること、
−  少なくとも１か月間、免疫化を受けていないこと、
−  集中的な糖尿病管理に応じる意思を持たなければならないこと、
−  研究参入時に少なくとも２５ｋｇの体重がなければならないこと。
除外基準：
−  免疫不全であること、または臨床的に有意な慢性リンパ球減少症を有すること、
−  活動性感染または陽性の精製タンパク誘導体（ＰＰＤ）試験結果を有すること、
−  現在妊娠中もしくは授乳中であるか、または妊娠する予定があること、
−  ステロイドの慢性的使用が必要であること、
−  現在または過去にＨＩＶ、Ｂ型肝炎、またはＣ型肝炎を有していること、
−  研究の実施を妨げる、または危険性を増大する、任意の複雑な医学的問題を有すること、
−  悪性腫瘍の病歴を有すること、
−  血糖管理に影響を与える非インスリン医薬品を現在使用していること、
−  別の１型糖尿病治療研究に現在参加していること。
【０１９２】
主要転帰測度：
３か月間の終了時に投与された４時間混合食付加試験（ＭＭＴＴ）の最初の２時間にわたる刺激Ｃペプチド曲線下面積は、プラセボと比較したとき、増加し、かつ選別時に観察されたものを維持することが予測される。
二次的転帰測度：
−  インスリン用量（単位／ｋｇ）および注射回数は、選別時を維持し、かつプラセボと比較したとき、減少することが予測される。
−  グリコシル化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）は、選別時を維持し、かつプラセボと比較したとき、減少することが予測される。
−  血中サイトカインレベルは、選別時を維持し、かつプラセボと比較したとき、減少することが予測される。
−  便ｐＨは、活性化ダイズさや繊維群において減少することが予測される。
−  便ＳＣＦＡは、活性化ダイズさや繊維群において増加することが予測される。
−  便免疫グロブリンＡは、活性化ダイズさや繊維群において増加することが予測される。
【０１９３】
実施例１１．活性化ダイズさやの生産
エダマメに使用される品種（ＩＡ２０３２）の３０本のダイズ植物を、温室に植え付けし、成長させた。２０個のさやを、生殖成長期６（Ｒ６）のとき、または緑色のさやが、さやを充填する種（豆）を含有したとき、３本の植物から収穫した。さやをプラスチック袋に入れ、実験室まで運んだ。５個のさやを、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水が充填されている５０ｍｌの遠心分離管に移した。管に栓を付け、管を数回反転して、さやを洗浄した。水を排出し、すすぎを繰り返した。５個のさやの他の３つのセットを同様の様式で洗浄した。
【０１９４】
２０個のさやを、全て、中央に２０ｍｌのシリンジを付けて改変したフードプロセッサーのフードプッシャー（food pusher）に、種を含有するさやを垂直に入れて、薄く切った。さやをシリンジに入れ、シリンジはさやを垂直に保持し、それを薄切り刃に切断面の約２ｍｍまで送達する。ディスク薄切り付属装置を使用するフードプロセッサー（ＫｉｔｃｈｅｎＡｉｄ（登録商標）Ｍｏｄｅｌ  ＫＦＰ７２０ＷＨ１）の電源を入れて、さやおよび種を薄い断面に薄切りする。薄切りさや組織を、６ｍｌのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ水に予浸したＳ＆Ｓ  Ｂｌｕｅ  Ｒｉｂｂｏｎ  ＃５８９濾紙を含有する４つの１５０ｍｍペトリ皿に移した。
【０１９５】
第１のペトリ皿の組織を、５０ｍｌの遠心分離管に直ぐに移し、−８０℃で冷凍庫に入れた。これらの試料は、０時間のインキュベーションを表す。薄切りさやを含有する他のペトリ皿を、プラットフォームの上の密閉乾燥機に入れ、プラットフォームの下の飽和塩化カリウムの皿から離して、湿度を８３％に固定した。乾燥機を暗所に置いた。
【０１９６】
２２．５℃での２４時間、４８時間、または７２時間のインキュベーションの後、組織を５０ｍｌの遠心分離管に移し、次に−８０℃で保存した。遠心分離蓋を取り外し、管をＣｈｅｍ  Ｗｉｐｅティッシュで覆い、それを輪ゴムで所定の位置に保持した。管を凍結乾燥機の中に終夜置いた。
【０１９７】
乾燥組織を、１．０ｍｍのスクリーンを有するＧｌｅｎ  Ｍｉｌｌｓミルを使用して摩砕した。乾燥組織をミルのホッパーに移し、粉末を収集した。ミルスクリーンを０．５ｍｍサイズのものに変え、前に摩砕した材料をホッパーに加え、摩砕して、微細粉末を生じた。
【０１９８】
この方法により活性化されたダイズ化合物を測定するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を実施した。０．２ｇの粉末を計量して、１ｍｌの微量遠心管に入れた。１ｍｌのメタノールを加え、管を、バイアルが浮くように水のレベルを調整した水浴中で超音波処理した。１時間の超音波処理の後、微量遠心管を高速で５分間遠心分離した。上澄みを１ｍｌの遠心分離機フィルターに移し、５分間遠心分離して、微細粒子を除去した。この濾液をＨＰＬＣ分析のためにオートサンプラーバイアルに移した（ＨＰＬＣ分析は、Ｗａｔｅｒｓ  ＵＶ−可視光線２９９６フォトダイオードアレイ検出器と組み合わせたＷａｔｅｒｓ  ２６９５（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）により実施した）。
【０１９９】
ダイズ化合物を、Ｌｕｎａ  ＩＩ  Ｃ１８逆相カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）の使用により分離した。同じ充填物を含有するガードカラムを使用して、分析カラムを保護した。溶媒Ａは、水中０．１％の酢酸であり、溶媒Ｂは、１００％のアセトニトリルであった。
【０２００】
２０μｌ体積の試料を注入し、ＨＰＬＣを、流速１．０ｍｌ／分により、１５％のＢを８分間、次に５８％のＢを５０分間、次に９０％のＢを１０分間使用し、続いて９０％のＢで１０分間保持するようにプログラムした。スペクトルを、フォトダイオードアレイ検出器により２２０から４００ｎｍで収集した。
【０２０１】
データ
図１０は、インキュベーションなし（０時間のインキュベーション）で観察されたダイズ化合物の種、および７２時間までのインキュベーションによるＵＶ吸収の新たなピークを実証するＨＰＬＣプロファイルである。インキュベーションは、植物組織における酵素系が物理的な損傷（薄切り）に応答して新たな分子を処理するために必要である。特に７２時間で確認されたピークは、グリセオリンＩＩＩ（ピーク１３）、グリセオリンＩＩ（ピーク１４）、およびグリセオリンＩ（ピーク１５）を表す。クメストロール（ピーク９）およびグリシノール（ピーク４）も確認されている。不明のピークが確認されている。これらのデータから、そのような処理は、ダイズさや組織を活性化して生体活性分子を産生する有用な手段であることが、明らかである。
【０２０２】
図１１は、薄切り、およびＵＶ放射線への曝露により産生される３つのグリセオリン種の定量化を示す。１つの棒線は、３つのグリセオリン種の合計を表し、インキュベーションが９６時間実施されると、１．５ｍｇ／ｇ粉末の高さである。最も存在度のある種は、グリセオリンＩＩＩおよびグリセオリＩであり、一緒になって、生成されるグリセオリンの約８０％を表す。
【０２０３】
実施例１２．活性化ダイズさやの大規模生産
油に使用される品種（Ｐｉｏｎｅｅｒ  ９５Ｙ６１）の８００本のダイズ植物を、ＬＳＵ  ＡｇＣｅｎｔｅｒ  Ｄｅａｎ  Ｌｅｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ａｌｅｘａｎｄｒｉａ、ＬＡに植え付けし、成長させた。３２０，０００個のさやを、生殖成長期６（Ｒ６）のとき、または緑色のさやが、さやを充填する種（豆）を含有したときに収穫した。さやをプラスチック袋に入れ、封止し、氷上に置き、実験室に輸送した。袋を４℃で終夜置いた。翌朝、ダイズさやの各袋を蒸留水で３回洗浄した。
【０２０４】
種を含有する全てのさやを、中央に２０ｍｌのシリンジを付けて改変したフードプロセッサーのフードプッシャーに、種を含有するさやを垂直に入れて、薄く切った。さやをシリンジに入れ、シリンジはさやを垂直に保持し、それを薄切り刃に切断面の約２ｍｍまで送達する。ディスク薄切り付属装置を使用するフードプロセッサー（ＫｉｔｃｈｅｎＡｉｄ（登録商標）Ｍｏｄｅｌ  ＫＦＰ７２０ＷＨ１）の電源を入れて、さやおよび種を薄い断面に薄切りする。薄切りしたさや組織を、蒸留水で予浸したペーパータオルを含有するカフェテリアトレイ（cafeteria tray）（９インチ×１２インチ）に移した。
【０２０５】
約３０，０００個のさやの組織を、ガロンサイズのプラスチック袋に直ぐに移し、封止し、−８０℃で冷凍庫に入れた。これらの試料は、非活性化ダイズさやを表す。トレイに置いた他の薄切りさやを、それぞれのトレイの間のスペーサーとしてペトリ皿を使用して、Ｒｕｂｂｅｒｍａｉｄ  Ｒｏｕｇｈｎｅｃｋ容器（高さ１０インチ×幅１１インチ×深さ１１インチ）に入れた。２つの１５０×１５ｍｍペトリ皿に、飽和塩化カリウムを充填し、下段のカフェテリアトレイの下に置き、容器を封止した後、湿度を８３％に固定した。１０個の容器を暗所に７２時間置いた。
【０２０６】
２２．５℃でのインキュベーションの後、各容器の組織をガロンサイズのプラスチック袋に移し、次に−８０℃で保存した。活性化（２２．５℃で７２時間インキュベートした）および非活性化組織のそれぞれの袋を、凍結乾燥機の中に４日間置いて、水を除去した。
【０２０７】
乾燥組織を、０．５ｍｍのスクリーンを有するＲｅｔｓｃｈ  Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｍｉｌｌ  ＳＭ  １００を使用して摩砕した。乾燥組織をミルのホッパーに移し、粉末を収集した。ボックス１および２、ならびにボックス５および７の摩砕材料をプールした（下記の表２を参照すること）。
【０２０８】
この方法により活性化されたダイズ化合物を測定するため、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を実施した。それぞれプールした摩砕ダイズさや繊維の０．２ｇの粉末を計量して、１ｍｌの微量遠心管に入れた。１ｍｌのメタノールを加え、管を、バイアルが浮くように水のレベルを調整した水浴中で超音波処理した。１時間の超音波処理の後、微量遠心管を高速で５分間遠心分離した。上澄みを１ｍｌの遠心分離機フィルターに移し、５分間遠心分離して、微細粒子を除去した。この濾液をＨＰＬＣ分析のためにオートサンプラーバイアルに移した（ＨＰＬＣ分析は、Ｗａｔｅｒｓ  ＵＶ−可視光線２９９６フォトダイオードアレイ検出器と組み合わせたＷａｔｅｒｓ  ２６９５（Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）により実施した）。
【０２０９】
ダイズ化合物を、Ｌｕｎａ  ＩＩ  Ｃ１８逆相カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）の使用により分離した。同じ充填物を含有するガードカラムを使用して、分析カラムを保護した。溶媒Ａは、水中０．１％の酢酸であり、溶媒Ｂは、１００％のアセトニトリルであった。
【０２１０】
２０μｌ体積の試料を注入し、ＨＰＬＣを、流速１．０ｍｌ／分により、１５％のＢを８分間、次に５８％のＢを５０分間、次に９０％のＢを１０分間使用し、続いて９０％のＢで１０分間保持するようにプログラムした。スペクトルを、フォトダイオードアレイ検出器により２２０から４００ｎｍで収集した。
【０２１１】
データ
各ボックスまたはプールしたボックスの摩砕ダイズさや繊維におけるグリセオリン含有量を、下記の表２に示す。グリセオリンの最大産生は、ボックス５および７でインキュベートされた材料からのものであった。ボックス８または１０では、産生されたグリセオリンはなかった。直ちに凍結され、インキュベートされなかった薄切りダイズさやは、グリセオリン生合成の対照としての機能を果たし、グリセオリンを全く産生しなかった（非活性化ダイズさや繊維）。
【０２１２】
【表２】
2017507148.tif 000004
【０２１３】
図１２は、非活性化ダイズさや繊維（赤色曲線）に観察されるダイズ化合物の種、および７２時間のインキュベーションによるＵＶ吸収の新たなピーク（活性化ダイズさや繊維（青色曲線））を実証するＨＰＬＣプロファイルである。インキュベーションは、植物組織における酵素系が物理的な損傷（薄切り）に応答して新たな分子を処理するために必要である。特に、活性化ダイズさや繊維のみに確認されたピークは、グリセオリンＩＩＩ、グリセオリンＩＩ、およびグリセオリンＩであった。いくつかの他のピークが活性化ダイズさや繊維において確認された。これらは、薄切りなどの組織損傷によってのみ産生される他のイソフラボンであると考えられる。これらのデータから、そのような処理は、ダイズさや組織を活性化して新規生体活性分子を産生する有用な手段であることが、明らかである。
【０２１４】
活性化ダイズさや繊維の多量養素含有量は、非活性化ダイズさや繊維のものと類似している。両方ともダイズタンパク質およびダイズ油（脂肪）を含有する。有意な量の新規総食物繊維も存在する（表３）。
【０２１５】
【表３】
2017507148.tif 000005
【０２１６】
実施例１３．ダイズさやは、マウスにおいて食餌脂肪を低減する
方法
８００本のダイズ植物（品種Ｐｉｏｎｅｅｒ  ９５Ｙ６１）を、ＬＳＵ  ＡｇＣｅｎｔｅｒ  Ｄｅａｎ  Ｌｅｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ａｎｄ  Ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、Ａｌｅｘａｎｄｒｉａ、ＬＡに植え付けし、成長させた。１２０，０００個のさやを、生殖成長期６（Ｒ６）のとき、または緑色のさやが、さやを充填する種（豆）を含有したときに収穫した。さやをプラスチック袋に収集し、封止し、氷上に置き、実験室に輸送し、４℃で終夜置いた。翌朝、ダイズさやの各袋を滅菌蒸留水で３回洗浄した。
【０２１７】
種を含有するさやは、さやを、ディスク薄切り刃の約２ｍｍにさやを垂直に保持する２０ｍｌのシリンジを中央に有するように改変されたフードプロセッサー（ＫｉｔｃｈｅｎＡｉｄ（登録商標）Ｍｏｄｅｌ  ＫＦＰ７２０ＷＨ１）のフードプッシャーに入れることによって、薄切りにした。さや組織の薄い断面を、８０ｍｌの蒸留水で予浸したペーパータオルを含有するカフェテリアトレイ（９インチ×１２インチ）に、単層として移した。
【０２１８】
約５０，０００個のさやの組織を、ガロンサイズのプラスチック袋に直ぐに移し、封止し、冷凍庫（−８０℃）に入れた。この調製は、非活性化ダイズさや切片を提供した。残りのさや断面を類似したトレイに置き、次に、それぞれのトレイの間のスペーサーとしてペトリ皿を使用して、Ｒｕｂｂｅｒｍａｉｄ  Ｒｏｕｇｈｎｅｃｋ容器（高さ１０インチ×幅１１インチ×深さ１１インチ）に入れた。２つの１５０×１５ｍｍペトリ皿に、飽和塩化カリウムを充填し、下段のカフェテリアトレイの下に置き、容器を封止した後、湿度を８３％に固定し、暗所に７２時間置いた。２２．５℃でのインキュベーションの後、組織をガロンサイズのプラスチック袋に移し、封止し、−８０℃で保存した。これらの試料は、活性化ダイズさや切片を提供した。非活性化および活性化ダイズさや切片を凍結乾燥機により４日間乾燥し、次に、０．５ｍｍのスクリーンを有するＲｅｔｓｃｈ  Ｃｕｔｔｉｎｇ  Ｍｉｌｌ  ＳＭ  １００を使用して摩砕して、非活性化ダイズさや繊維（ＵＳＰＦ）および活性化ダイズさや繊維（ＡＳＰＦ）を生じた。
【０２１９】
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を実施して、ＡＳＰＦおよびＵＳＦＰ中のダイズイソフラボンを測定した。それぞれプールしたものから０．２ｇの粉末を計量して、１ｍｌの微量遠心管に入れた。メタノール（１ｍｌ）を加え、管を水浴中で１時間超音波処理し、高速で５分間遠心分離した。上澄みを濾過し、ＨＰＬＣ分析のためにオートサンプラーバイアル（Ｗａｔｅｒｓ  ＵＶ−可視光線２９９６フォトダイオードアレイ検出器と組み合わせたＷａｔｅｒｓ  ２６９５、Ｗａｔｅｒｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ、Ｍｉｌｆｏｒｄ、ＭＡ）に移した。
【０２２０】
ダイズ化合物を、Ｌｕｎａ  ＩＩ  Ｃ１８逆相カラム（４．６×２５０ｍｍ、５μｍ、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ）の使用により分離した。溶媒Ａは、水中０．１％の酢酸であり、溶媒Ｂは、１００％のアセトニトリルであった。２０μｌ体積の試料を注入し、ＨＰＬＣを、流速１．０ｍｌ／分により、１５％のＢを８分間、次に５８％のＢを５０分間、次に９０％のＢを１０分間使用し、続いて９０％のＢで１０分間保持するようにプログラムした。スペクトルを、フォトダイオードアレイ検出器により２２０から４００ｎｍで収集し、グリセオリン基準により２８５ｎｍで較正曲線を使用して定量化した。
【０２２１】
ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦの糖を、Ｓｍｉｒｉｃｋｙ  ｅｔ  ａｌ（５）に記載されているようにＨＰＬＣにより定量化した。ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦについての他の全ての分析アッセイは、食品製品の栄養表示のための栄養表示教育法（Nutrition Labeling and Education Act）（ＮＬＥＡ）を使用して、Ｍｅｄａｌｌｉｏｎ  Ｌａｂｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ；ｗｗｗ．ｍｅｄａｌｌｉｏｎｌａｂｓ．ｃｏｍ）により実施した。
【０２２２】
雄Ｃ５７Ｂｌ／６ＮＴａｃマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔａｃｏｎｉｃ．ｃｏｍ／）から注文した。この広く使用されている近交系は、糖および脂肪が豊富な食餌が給餌されると、肥満になる。マウスをＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓ（ＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）に輸送し、そこで、木くず敷料を有する靴箱ケージに個別に収容し、制御室温（２０から２１℃）の標準的な実験室条件下で１２：１２の明：暗サイクル（２１時間の照明）に維持した。室内水（house water）は、研究の全体にわたって適宜に入手可能であった。ＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓの動物実験委員会は、プロトコールおよび全ての手順を承認した。ＰｒｅＣｌｉｎＯｍｉｃｓの訓練を受けたスタッフが、実験を実施し、処置に関しては知らされていなかった。
【０２２３】
重量が１９．８９±０．２２ｇ（平均±ＳＥＭ）のマウスを、実験用に選択し、肥満を引き起こす飼料（Ｄ１２２６６Ｂ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ、Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ、ＮＪ）を到着時に給餌した。２週間の順化の後、１０匹のマウスを、Ｄ１２２６６Ｂ（ＯｂＤ、肥満を引き起こす飼料）の消費を続けるように、無作為に割り当てた。１０匹のマウスを、１５％のＡＳＰＦを含有するように改変したＯｂＤ（ＯｂＤ−ＡＳＰＦ、図２４）を消費するように割り当て、１０匹のマウスを、１５％のＵＳＰＦを含有するように改変したＯｂＤ（ＯｂＤ−ＵＳＰＦ、表１）を消費するように割り当てた。３つの飼料は等カロリーであり、ＡＳＰＦとＵＳＰＦの両方の繊維含有量は、代わりにセルロースを含有するＯｂＤと釣り合っていた。ダイズさや繊維の脂肪およびタンパク質含有量は、部分的に、ＯｂＤのトウモロコシ油およびカゼインに代わっていた。
【０２２４】
ケージを、順化期間の９日目に清浄して、ベースライン試料としての機能を果たす、２週間の順化期間の１０〜１３日（含む）目の糞便ペレットの毎日の収集を可能にした。ペレットを計量し、アッセイまで−７０℃で保存した。順化期間の終了時、身体組成を、拘束または麻酔なしでＥｃｈｏＭＲＩ−９００全身分析機（Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）のＮＭＲ−ＭＲＩに基づいた技術を使用して、高い精度および正確度で測定した。次にマウスを、総体脂肪質量が均衡した３つの飼料群に、無作為に選別した。飼料を３０日間にわたって給餌した。
【０２２５】
体重および食餌摂取を毎週記録した。残った餌を、１週間に１回の間隔で新たな固形飼料に代えた。清浄な敷料を２２日目にケージに加えて、処置の２４日目〜２７日目（含む）に糞便の収集の可能にした。糞便ペレットを計量し、アッセイまで−７０℃で保存した。最終の身体組成を３０日目に測定し、次にマウスを断頭により安楽死させた。胴体の血液を収集して、ＥＤＴＡを含有する微量遠心管に入れた。収集した後、血液試料を血漿について処理し、更なる分析まで−２０℃で保存した。結腸を収集し、１０％ホルマリン溶液に入れ、組織調製および組織学的評価のためにＢｏｕｌｄｅｒ  ＢｉｏＰａｔｈ（Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）に輸送した。
【０２２６】
血漿インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、現在ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１（ＣＸＣＬ１）と呼ばれるケラチノサイト化学誘引物質増殖調節腫瘍遺伝子（ＫＣ／ＧＲＯ）、および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）を、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）のＶ−Ｐｌｅｘ炎症促進パネル１（マウス）アッセイキットを使用して測定した。
【０２２７】
結腸を２片に切断し、近位と遠位を確認した。標準的な手順に従って、それぞれをパラフィンに包埋し、切片に切り、ヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。切片の手順および分析は、Ｂｏｌｄｅｒ  ＢｉｏＰａｔｈ，Ｉｎｃ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｏｌｄｅｒｂｉｏｐａｔｈ．ｃｏｍ／）により実施し、彼らは処置群について知らされていなかった。近位および遠位の切片の組織学に差は無かったので、近位切片のデータのみが提示される。第２の切片を切断し、メイヤーのムシカルミンにより染色して、粘液をより良好に可視化した。
【０２２８】
粘膜下浮腫を、非接線域において非粘膜筋板から外側筋肉層の内部境界までの距離を測定することによって、定量化した。マクロファージ、リンパ球、および多形核（ＰＭＮ）細胞の浸潤の程度には、０＝正常から、７６〜１００％の粘膜が罹患している、５＝重篤の重篤度スコアを割り当てた。小窩上皮および残りの腺上皮の損失には、０＝なしから、７６〜１００％の粘膜が罹患している、５＝重篤で罹患した粘膜の近似率に基づいてスコアを付けた。表面上皮および残りの腺上皮の損失を、０＝なしから、７６〜１００％の粘膜が影響を受ける、５＝重篤により、影響を受けた粘膜の近似率に基づいてスコア付けした。粘膜厚を、全体の粘膜厚を最適に表す切片の非接線域において測定して、０＝２００μｍ（正常）から５  ≧６５０μｍ（重篤）であった。確定された粘膜リンパ凝集塊の数を記録した。杯細胞数の推定は、ムシカルミン染色を使用して行い、０＝正常から、杯細胞の７６〜１００％が損失する、５＝重篤をスコア付けした。
【０２２９】
４日間のそれぞれにおける毎日の糞便収集をプールし、それぞれのマウスにおいて混合して、それぞれのマウスのベースライン試料および最終試料をもたらした。４個の糞便ペレット（約１０ｍｇ／ペレット）を１００μｌの便希釈剤（等張食塩水中の、１０ｍｌ／ＬのＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、６ｍｌ／ＬのＢｒｉｊ（登録商標）３０、および０．１ｍｍ／ＬのＨＣｌ）で均質化し、ボルテックスして（vortexing）十分に混合した。室温で３０分間放置した後、試料を１０５０×ｇにより１５分間遠心分離した。上澄みを自動分析機のカップに移し、キットを有するＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＡＵ４８０化学分析機を使用してアッセイして、ＴＧ、乳酸塩、グルコース、およびコレステロールの血漿レベルを測定した。アッセイは、標準を添加することにより糞便において確証した。
【０２３０】
糞便ｐＨは、乾燥（凍結乾燥）糞便試料（４個のペレット）を、１００：１（ｍｇ／ｍｌ）の重量：体積比を使用して水と混合した後に実施した。マイクロプローブを有するＯｒｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ＥＡ−９４０  ｐＨ計（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ  ＭＡ）を、混合物に挿入した。
【０２３１】
糞便ＳＣＦＡは、乾燥糞便を１：１０（重量：体積）比でＨ２Ｏに加えることによって定量化した。十分にボルテックスした後、２ｍＬの２５％ｍ−リン酸を、それぞれ１ｍｇの糞便に加えた。溶液を、懸濁液が観察されるまでボルテックスし、室温で２０，０００ｇにより１０分間遠心分離した。上澄みを収集し、アッセイまで、微量遠心管中に−２０℃で凍結した。解凍試料を１０，０００ｇで１０分間遠心分離した。酢酸塩、プロピオン酸塩、および酪酸塩の濃度は、Ａｇｉｌｅｎｔ  ５９７５Ｃ質量選択検出器（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）および遊離脂肪酸相を有する融解石英毛管カラム（ＤＢ−ＦＦＡＰ  １２５−３２３７、Ｊ＆Ｗ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）に連結したＡｇｉｌｅｎｔ  ７８９０Ａ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ、ＣＡ）ガスクロマトグラフから構成されるＧＣ−ＭＳ系を使用して、上澄みにおいて決定した。ヘリウムを担体ガスとして流速１４．４ｍｌ／分で供給した。初期オーブン温度は、９０℃であり、０．５分間維持され、１５℃／分で１５０℃に上昇され、５℃／分で１７０℃に上昇され、最後に２０℃／分で２０５℃に増加された。注入温度は２５０℃であった。注入は、注入体積の１ｍｌにより分割モード（１０：１）で行った。検出器は、４０〜２５０ｍ／ｚの範囲で走査する、電子衝突イオン化モード（電子エネルギー７０ｅＶ）により稼働した。イオン供給源、四重極、およびインターフェースの温度は、２３０℃、１５０℃、および２８０℃であった。
【０２３２】
内部基準の２−エチル酪酸を、最終濃度の１ｍＭで上澄みに添加し、上澄みを分析のためにＧＣ−ＭＳに注入した。較正曲線は、基準ＳＣＦＡ混合物（カタログ番号４６９７５−Ｕ、Ｓｕｐｅｌｃｏ、Ｂｅｌｌｅｆｏｎｔｅ、ＰＡ）を使用して、それぞれのＳＣＦＡから得た。面積計算および定量化における抽出イオンクロマトグラムの使用は、重複ピークを誤解する可能性を低減した。相対的に豊富な、最高ｍ／ｚ値を有する特徴的な標的イオンを、それぞれの化合物において選択し、酢酸塩  ｍ／ｚ６０、プロピオン酸  ｍ／ｚ７４、および酪酸塩  ｍ／ｚ７３であった。定量化は、２−エチル酪酸（ｍ／ｚ８８の標的イオン）に対する酢酸塩、プロピオン酸塩、および酪酸塩のピーク域を測定することによって達成した。
【０２３３】
１．０ｍｌの７５％エタノールを５０ｍｇの乾燥糞便に加え、これを最初にガラスロッドにより微粉砕した。混合物を５０℃で２時間インキュベートした。次にインキュベートした物を１０５０×ｇで１０分間遠心分離し、１００μｌの上澄みを５００μｌのリン酸緩衝食塩溶液（ＰＢＳ）に加え、ボルテックスした。試料を、製造会社の使用説明書に従ってＣｒｙｓｔａｌ  Ｃｈｅｍマウス総胆汁酸キット（Ｄｏｗｎｅｒｓ  Ｇｒｏｖｅ、ＩＬ）を使用してアッセイした。１：５の７５％エタノール：ＰＢＳをブランクとして使用した。
【０２３４】
約３０ｍｇの乾燥マウス糞便ペレットを計量し、５ｍｌの、ＰＢＳ中の０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０を、それぞれ１００ｍｇの糞便に加えた。ペレットを３０分間再水和し、微量遠心管を手作業により激しく振とうし、次にボルテックスして、材料を懸濁させた。１０分間沈降させた後、懸濁液を微量遠心管により１０５０×ｇで１０分間遠心分離した。少なくとも３００μｌの上澄みをアッセイのために１ｍｌの微量遠心管に移した。ｓＩｇＡを、製造会社の使用説明書に従ってＣｌｏｕｄ−Ｃｌｏｎｅ  Ｃｏｒｐ．（ＳＥＡ６４１Ｍｕ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ）の酵素結合免疫吸着物アッセイキットを使用して、測定した。
【０２３５】
糞便の総エネルギー含有量は、等温壁型熱量計（Ｐａｒｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ  ６２００型、Ｐａｒｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｍｏｌｉｎｅ、ＩＬ）および基準として鉱油を使用して、測定した。鉱油添加（０．２ｍｌ、約０．１６ｇ）をピペットに取り、計量して、可能な限り試料の表面を覆うように、試料カップに入れた。約５個の乾燥マウス糞便ペレット（約０．０４０ｇ）を加え、試料および油の重量を記録した。点火ワイヤーを準備し、試料を含有する油に挿入し、爆弾キャニスター（bomb canister）の中に入れた。密閉キャニスターに酸素を充填した後、５００ｍｌの水を含有するバケツに沈めた。点火ワイヤーをキャニスター爆弾ヘッドの端子に接続し、機器をプログラムして、点火させた。試料のカロリー含有量を、添加油のカロリー値と相関させた後、糞便のカロリー／ｇで計算した。
【０２３６】
１６Ｓのライブラリーを構築し、分類分析は、治療群について知らされていないＣｏｆａｃｔｏｒ  Ｇｅｎｏｍｉｃｓ（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｆａｃｔｏｒｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｃｏｍ／）によって実施した。簡潔には、ゲノムＤＮＡ（１０ｎｇ）を、１６Ｓリボソーム遺伝子のＶ４可変部領域に隣接するプライマーにより増幅した。増幅した後、ＤＮＡをＡＭＰｕｒｅ  ＸＰビースで精製した。ライブラリーの質を評価し、多重試料ライブラリーを、等モル比でプールした個別の試料のｑＰＣＲ定量化によって作製した。試料を希釈して、１０ｎＭの貯蔵液にし、配列決定についてのＩｌｌｕｍｉｎａの推奨に従って調製した。
【０２３７】
クラスター生成および配列決定は、Ｉｌｌｕｍｉｎａのクラスター生成マニュアルおよび配列決定マニュアル（Ｃｌｕｓｔｅｒ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｕｓｅｒ  ＧｕｉｄｅおよびＧｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｚｅｒ  Ｏｐｅｒａｔｉｏｎｓ  Ｇｕｉｄｅ）に従って実施した。ベースコールは、Ｃａｓａｖａ  １．８．２（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を使用して生成し、得られた多重配列読み取り値は、質が低いためにフィルターを掛けた。
【０２３８】
Ｍｏｔｈｕｒ（ｗｗｗ．ｍｏｔｈｕｒ．ｏｒｇ）ソフトウェアを使用して、未加工配列決定読み取り値からコンティグを構築し、キメラ排除を介するＭｉＳｅｑ  ＳＯＰ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｏｔｈｕｒ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／ＭｉＳｅｑ＿ＳＯＰ）に従って、サイズおよびキメラをフィルターした。
【０２３９】
分類割り当ては、レベル０．５の多試料モードによるＲＤＰ分類子（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｉｔｈｕｂ．ｃｏｍ／ｒｄｐｓｔａｆｆ／ｃｌａｓｓｉｆｉｅｒ）により、得られた含有物において実施した。
【０２４０】
結果を、平均±１の標準偏差（ＳＥＭ）として表す。データは、未変換データに線形モデルおよび一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を使用して分析した（ＪＭＰ  １１．２．０、ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｉｎｃ．、Ｃａｒｒｙ、ＮＣ）。多重対スチューデントｔ検定比較を、ベースライン値（ＰｒｅＲｘ）を最終値（Ｐｏｓｔ  Ｒｘ）と比べるときに使用した。対照値（ＯｂＤ）との比較は、変数の末端データのみが利用可能な場合に、Ｄｕｎｎｅｔｔ法を使用して行った。各対の比較は、多数比較用に調整したスチューデントｔ検定を使用した。全ての試験の有意性を、ｐ＜０．０５に設定した。
【０２４１】
データ
ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦは、約５０％の炭水化物を含有したが、総食物繊維含有量が、その大部分に寄与している（表４）。約３０％がタンパク質であり、１５％が脂肪である。活性化プロセスは、グリセオリン生合成を刺激するように設計されたが（表４、図１）、このプロセスは、遊離スクロースを排除し（ＡＳＰＦ  ０ｍｇ／ｇ、ＵＳＰＦ  ２０．２ｍｇ／ｇ）、遊離グルコース含有量（ＡＳＰＦ  ６．２ｍｇ／ｇ、ＵＳＰＦ  １４．１ｍｇ／ｇ）および遊離フルクトース含有量（ＡＳＰＦ  ２．５ｍｇ／ｇ、ＵＳＰＦ  ７．３ｍｇ／ｇ）の両方を大きく減少した（表５）ことも観察された。
【０２４２】
【表４】
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【０２４３】
【表５】
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【０２４４】
ＡＳＰＦまたはＵＳＰＦのいずれかによるＯｂＤの補充は、食欲を損ねなかった。毎日の摂取は、全ての飼料を消費する最初の３週間で増加した（図１３Ａ）。食餌摂取は、ＯｂＤ飼料に割り当てられたマウスでは最終週にそのレベルを維持したと思われたが、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦのいずれかを消費するマウスでは一定の率を持続した。４週間にわたる累積食餌摂取は、群を比較したとき有意な差はなかった。等カロリー飼料の一定の消費にもかかわらず、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦ飼料のいずれかに割り当てられたマウスは、ＯｂＤを給餌されたマウスより、ゆっくりとした速度で体重を増加する傾向があった（図１３Ｂ）。ＯｂＤを消費するマウスは、５．９±０．７ｇを増加し、これは脂肪質量の統計的に有意な増加（３．２±０．８ｇ、図１３Ｃ）を含んだ。ＯｂＤ−ＡＳＰＦを摂取したマウスは、最小の体質量（４．４±０．５ｇ）を増加し、僅か１．８±０．７ｇの脂肪および２．７±０．５ｇの除脂肪質量を含んだ（図１３Ｄ）。ＯｂＤ−ＵＳＰＦを摂食したマウスは、５．３±０．４ｇを増加し、これは主に除脂肪質量（４．５±１．０ｇの除脂肪質量および２．７±０．５ｇの脂肪質量）であった。
【０２４５】
エネルギー利得の低減のいくつかは、糞便の損失が原因である。糞便排出量は、繊維補充飼料が供給されたマウスにおいて二倍であった（図１４Ａ）。ＯｂＤ−ＡＳＰＦを消費したマウスから収集された糞便質量は、最終の２週間において、ＯｂＤ−ＵＳＰＦを摂取したマウスよりも有意に多かった。加えて、糞便ペレットのエネルギー含有量は、最終週における両方の飼料からの糞便においてより大きかった（ｐ＜０．０５）（図１４Ｂ）。糞便におけるエネルギーの一部は、トリグリセリドからのものであり（図１４Ｃ）、補充飼料によりほぼ５０倍増加した。糞便ペレットは、全ての群において固形であり、検出可能な油漏出はなかった。ＴＧ吸収の低減は、糞便において検出されるように、管腔における胆汁酸レベルの低減の結果でありうる（図１５）。
【０２４６】
胆汁酸は、いくつかの腸内細菌により胆汁塩に転換され、他に対して毒性がある。肝臓による胆汁酸の産生および分泌は、食餌脂肪により刺激されるので、３つの飼料を消費したマウスの糞便のマイクロバイオータプロファイルが特徴付けられた。３つの飼料が給餌されたマウスの糞便のマイクロバイオータ組成における、門レベルのシフトが観察された。バクテロイデス（群集の７０％）とファーミキューテス（群集の２５％）の主な２つの門のシフトは、ＯｂＤがＡＳＰＦおよびＵＳＰＦにより補充されたときに、存在度をそれぞれ増加および減少する傾向があったが、これらの差は、統計的に有意ではなかった。しかし、ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦの両方が給餌されたマウスの糞便におけるベルコミクロビア種の存在度の有意な（ｐ＜０．０５）減少、ならびにＵＳＰＦ補充飼料が給餌されたマウスの糞便におけるデフェリバクター（Deferribacteres）種の存在度の減少（ｐ＜０．０５）があった。
【０２４７】
糞便中の胆汁酸が低減され、これらはいくつかの種に対して毒性があるので、どの属が種の存在度の増加を有しうるかを探索した。３つの属の種、Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ（図１６Ａ）、Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ（図１６Ｂ）、およびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ（図１６Ｃ）は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦの両方の消費により有意に増加した。Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｏｒ（図１６Ｄ）およびＡｌｉｓｔｉｐｅｓ（図１６Ｅ）の種は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦによってのみ刺激された。マイクロバイオームにおける胆汁酸のレベルの低下に加えて、これらの属のうちのいくつかの種は、炭水化物を発酵することができ、飼料にプレバイオティクスを投与することによって存在度が増加する。したがって、糞便バイオマーカーを使用して、発酵の証拠を探索した。酢酸塩（図１７Ｂ）、酪酸塩（図１７Ｃ）、およびプロピオン酸塩（図１７Ｄ）の糞便含有量の増加による、糞便ｐＨの減少（図１７Ａ）が観察された。発酵の見掛け増加は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦよりＯｂＤ−ＵＳＰＦのほうが大きかった。
【０２４８】
存在度が有意に減少した種は、６つの属に属している。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ（図１８Ａ）、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ（図１８Ｂ）、Ｈｙｄｒｏｇｅｎｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ（図１８Ｃ）、およびＬａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ（図１８Ｄ）属の種は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦの群において有意に減少した。Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ種は、バイオームにおいてグルコースを利用して、乳酸塩を作り出す。糞便乳酸園含有量が有意に減少した（図１９Ａ）、および糞便グルコース含有量が増加した（図１９Ｂ）という観察が、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ種の存在度の減少と一致している。
【０２４９】
存在度が有意に減少した他の２つの属の種は、粘液溶解種と考慮される。Ａｋｋｅｒｍａｎｉｓｉａ種は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦの両方によって存在度が有意に低減された（図２０Ａ）。Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ種は、ＯｂＤ−ＵＳＰＦのみを消費したマウスの糞便における存在度が有意に低減された（図２０Ｂ）。
【０２５０】
異なる粘液溶解種による粘液のコロニー形成は、結腸粘膜に関して重要でありうる。したがって、結腸の組織病理学を研究した。炎症および好中球のスコアの有意な増加は、ＯｂＤ−ＵＳＰＦを消費したマウスにおいてのみ観察され（表６、図１）、Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ種の存在度の減少が、粘膜保護をいくらか取り除くことを示唆している。
【０２５１】
【表６】
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【０２５２】
ＯｂＤ−ＵＳＰＦ飼料により媒介された結腸炎症に一致して、糞便ｓＩｇＡ含有量の増加があった（図２１）。これは、ＯｂＤ−ＡＳＰＦ給餌マウスの糞便には観察されず、グリセオリンが炎症に対して保護しうることを示唆している。ＡＳＰＦにより提供された結腸炎症の保護は、血漿炎症促進パネルデータに観察された変化と一致していた（図２２）。血漿抗炎症性ＩＬ−１０の増加（図２２Ｅ）、および白血球を動員するケモカインとして作用する循環ＣＸＣＬ１の減少（図２２Ｈ）が、ＯｂＤ−ＡＳＰＦを消費したマウスにおいて観察された。
【０２５３】
概観
【０２５４】
最近まで、ＧＩ微生物の群集は、ほぼ研究されないままであった（６，７）。食事、ＧＩマイクロバイオーム、およびヒト宿主が、異なる生理学的および病理学的状態においてどのように相互作用するかについての洞察は、これらの関係がどのように健康を支持するか、または疾患の引き金を引くかを明らかにしている。ＧＩマイクロバイオームは、ＧＩ微生物、その代謝セクレトーム、およびチャイム溶液（solution of chime）から構成され、これらは腸粘膜により仕切られている。食事は、ＧＩマイクロバイオームの特徴を決定する主な要素である。したがって、高カロリー食事では、ＧＩマイクロバイオームの協力が、栄養素獲得、エネルギー取り入れ、ＧＩ免疫性、代謝経路、およびＧＩホルモンを調節することによって、個体が肥満症および糖尿病などの代謝障害になる素因を与えうる。食事習慣は、変えることが困難であるので、食事介入としてグリセオリンを含有するダイズ豆さやからＧＩＭＭを開発した。脂肪および糖が豊富な食事へのＧＩＭＭの補充は、胆汁酸プールを低減することによって、食事脂肪の取り込みを減少することを実証している。このことは、炎症からの保護を伴って身体組成を改善した。
【０２５５】
ダイズ植物の果実は、非常に低いレベルの食物繊維を有する種またはダイズ豆を含有するさやである。さやは、新規の食物繊維に大きく寄与し、ＧＩＭＭに含めることができると、推測された。典型的にはエダマメが収穫される発育期に、ダイズ豆を含有するダイズさやを収穫した。材料の一部を活性化（ＡＳＰＦ）して、生物学的利用能が不十分である（３、４）、抗酸化剤および抗生物質活性を有する（２）ダイズ分子である、グリセオリンを産生させた。残りの物は、未処理（ＵＳＰＦ）であった。これは、グリセオリンが、さや全体の薄切りによってのみ大規模に産生されうることの最初の実証である。以前の方法は、ダイズ豆と真菌のインキュベーションを利用する（２）。驚くべきことに、活性化プロセスは、スクロースを排除し、グルコースおよびフルクトース含有量を両方とも大きく低減する。環境マイクロバイオータが活性化の際に存在し、これが遊離糖を発酵し、グリセオリン合成を刺激することもできたと考えられる。
【０２５６】
ＯｂＤ、ＯｂＤ−ＡＳＰＦ、およびＯｂＤ−ＵＳＰＦが均衡し、等カロリーになるように、ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦの両方の多量養素含有量を、齧歯類固形飼料を開発する前に分析した。セルロースをＯｂＤに加えて、ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦの不溶性繊維とした。ＯｂＤのトウモロコシ油およびカゼインを、試験飼料のダイズ油およびダイズタンパク質に部分的に代えた。ＯｂＤへのＡＳＰＦまたはＵＳＰＦにいずれかの添加は、食餌摂取を変更せず、食餌に対する有害作用がないことを示唆している。事実、特有の飼料により食餌摂取が増加する傾向があった。体重増加が増える付随的傾向よりは、むしろ、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦ給餌群における体重の低減傾向が観察された。前者では、ベースラインと統計的に異ならない最小体質量が増加した。しかし、身体組成は有意に変更された。ＯｂＤを消費したマウスは、３０日間にわたって体脂肪を有意に増加したが、ＯｂＤ−ＡＳＰＦを給餌したマウスは、それを阻止した。ＯｂＤ−ＵＳＰＦが給餌されたマウスは、有意に大きな脂肪質量を集積したが、統計的に有意な除脂肪質量の増加もあった。
【０２５７】
脂肪増加の欠如の少なくとも一部は、糞便におけるエネルギーの損失が原因でありうる。ＯｂＤ−ＡＳＰＦ給餌マウスの糞便排出量は、ＯｂＤが給餌されたマウスの約２倍であり、糞便のカロリー含有量は、ＯｂＤ給餌群の約１．４倍であった。糞便のエネルギー損失も、ＯｂＤマウスと比較したとき、ＯｂＤ−ＵＳＰＦが給餌されたマウスにおいて有意に大きかったが、糞便排出量は、処置の最終週ではＯｂＤ−ＡＳＰＦ群よりも少なかった。糞便トリグリセリド含有量は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦを消費したマウスにおいて大きく、吸収されなかった糞便カロリーの一部を占める。糞便におけるＴＧの損失は、膵臓リパーゼ阻害剤で処置されたマウスにおいて観察されるような油漏出または油様便と関連しなかった。糞便におけるＴＧの損失は、フラボノイドを飼料に含めた結果であったが（８）、ＧＩマイクロバイオームのシフトの結果でもありうる。無菌マウスは、食餌脂肪からエネルギーを採取することに効率が悪く、慣用的に成長させたマウスより４０％多くのＴＧを糞便に排出する（９）。
【０２５８】
食餌脂肪は、胆汁酸合成および十二指腸への分泌を刺激し、これは、肝臓およびＧＩにおけるファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）により負に調節されるプロセスである（１０、１１）。大部分の一次胆汁酸は、腸骨に再吸収され、循環して肝臓に戻る。腸肝循環を逃れたものは、結腸のＧＩマイクロバイオータにより二次胆汁酸に変換されうる。一次および二次胆汁酸は、両方ともＦＸＦアゴニストとして機能する。最近、マウスの一次および二次ムリコール胆汁酸の両方の産生は、ＧＩマイクロバイオータの存在により増加するＦＸＲアンタゴニストとして機能することが示されている（１２）。したがって、ＧＩマイクロバイオータは、ＦＸＲにおける胆汁酸アゴニストとアンタゴニストの均衡を変更することができる。この研究において、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦの糞便中の総胆汁含有量が、無菌マウス（１２）および抗生物質処置マウス（１２）においても観察されるように、有意に低減されたことが観察された。ＯｂＤに添加されたダイズタンパク質の構成成分は、胆汁塩排出ポンプを阻害することが可能である（１３）。ダイズイソフラボンは、不十分に吸収され、胆汁の中に分泌され（１４）、ＦＸＲにおいてアゴニスト活性を有する（４６）。したがって、１つもしくは複数のダイズイソフラボンは、不十分な生物学的利用能を有するＦＸＲアゴニストとして機能することができる。
【０２５９】
抱合胆汁酸は、細菌および腸粘膜に対して毒性がある。しかし、一部のマイクロバイオータは、胆汁塩ヒドロラーゼを産生する適合能力を有し、このことは、一次胆汁酸に対するいくらかの抵抗性を確立することによってマイクロバイオータに有益であり、また胆汁酸の毒性に対して宿主に有益である（１６）。糞便総胆汁酸の減少が観察されたので、糞便マイクロバイオータプロファイルのシフトがあるかを決定した。分類群の９５％が、２つの主要な門であるバクテロイデスとファーミキューテスであることが観察された。観察された相対的存在度は、同一のＯｂＤ飼料を消費した同じマウス株において報告されたものと類似していた（１７）。１１の属の存在度に統計的に有意なシフトが観察された（５つでは増加し、６つでは減少した）。
【０２６０】
存在度が増加した５つの属は、胆汁酸に感受性があり、したがって、マイクロバイオームへのこの否定的な影響を低減することは、これらの種に選択的優位性を提供しうる。Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ、Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ、およびＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓの種の存在度は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦ群両方の糞便において増加した。ＡｌｉｓｔｉｐｅｓおよびＯｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒの種の存在度は、ＡＳＰＦで処置されたマウスの糞便においてのみ増加した。Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ種は、ダイズにおけるフラバノールに類似した分子である抗酸化剤エピガロカテキンにより刺激される（１８）。Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ種は、胆汁塩ヒドロラーゼを発現すると思われず、これらの種の繁栄は、プレバイオティクスの添加により刺激されうる（１９）。この属の種の存在度は、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）において減少する（２０、２１）。Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種の存在度は、ＯｂＤ給餌マウスにおいてほぼ不在であったが、飼料へのＡＳＰＦおよびＵＳＰＦの添加により大きく増強された。Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種は、胆汁酸への曝露により減少され（２２）、過体重および肥満症の個体において減少され（２３）、肝硬変の患者において減少されている（２４）。ダイズイソフラボンは、イソフラボンを代謝できるＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種の繁栄を刺激することができる（２５）。Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ種は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦによってのみ有意に刺激され、グリセオリンの肯定的な影響を示唆している。この属における系統型の存在度は、ラードを給餌されたマウスにおいて減少するが、メトホルミンによる処置（２６）により、または胃バイパス手術（２７）後に刺激される。Ｏｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ種も、ＯｂＤ−ＡＳＰＦによってのみ刺激された。この属の種は、肝硬変の患者（２４）、またはＯｂＤを給餌したときに糖尿病になったマウス（２８）おいて存在度が減少する。まとめると、これらの属の種は、食餌脂肪に対して、おそらく胆汁酸に対しても、感受性があると思われる。脂肪食餌にＡＳＰＦおよびＵＳＰＦを補充すると、そのことを逆転する。ＡｌｉｓｔｉｐｅｓおよびＯｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ種は、グリセオリンにより刺激されると思われる。
【０２６１】
ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦにより減少した種は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ、Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ、Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ、およびＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａの属のものであった。Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、肥満症（２９）、Ｔ２Ｄ（３０、３１）、自閉症（３２）、および糖（３３）または難消化性デンプン（３４）の消費によって、糞便試料中に濃縮される。メトホルミンの投与は、Ｐａｒａｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ種の存在度を減少する（２６）。Ｒｕｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓ属の存在度は、慢性腸炎症（３５）、自閉症スペクトラム障害（３６）、およびＩＢＳ（３７）の状態において増加する。Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍの存在度は、ＯｂＤにより刺激される（１７、３８）。食餌脂肪の給餌は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓを増加し（１７、２６）、メトホルミン（２６）、プレバイオティクス（１９）、または垂直スリーブ状胃切除術（３９）によって逆転される。ＩＢＳの小児は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ種の存在度を増加する（２０）。Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ種は、バイオームにおいてグルコースを利用して、乳酸塩を作り出す。糞便乳酸塩が減少し、糞便グルコースが増加したという観察は、Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ種がＯｂＤ−ＡＳＰＦおよびＯｂＤ−ＵＳＰＦにより減少するという観察と一致する。
【０２６２】
Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ属の種は、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦのいずれかを給餌した後に減少したが、Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍの種は、ＯｂＤ−ＵＳＰＦによってのみ低減した。これらの２つの属の種は粘液溶解性であり、したがって、粘膜コロニー形成は、ヒトの健康に関して重要でありうる。したがって、結腸の組織学を研究した。ＯｂＤ−ＵＳＰＦを消費したマウスのみに、炎症および好中球数のスコアの増加が観察され、Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ種の存在度の減少が、保護をいくらか取り除くことを示唆している。Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ種の存在度は、高脂肪飼料が給餌されたマウスの糞便において（４０）、および感染により結腸炎が導入されたとき（４１）、減少する。この関係性は、Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ種の存在についてはあまり明確ではなく、ＯｂＤ−ＡＳＰＦまたはＯｂＤ−ＵＳＰＦのいずれかを給餌した後に劇的に減少した。ＯｂＤ−ＡＳＰＦを消費したマウスの結腸組織病理学は、正常であると思われた。種の濃度に劇的な減少があるにも関わらず、粘膜の厚さに変化は観察されなかった。Ｅｖｅｒａｒｄおよび同僚たちは、経口胃管栄養法によるＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ種の投与後に、粘膜厚の増加を実証し、Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａの存在度と粘膜の完全性との間の肯定的な相関関係を示唆している（４２）。Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａ種がＧＩマイクロバイオームにおいて存在が過小であるので、観察された存在度の減少は、経口胃管栄養法により生じるコロニー形成の増加より小さい変化を表しうる。Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａの存在度の増加は、ＩＢＳ（４３）、ヨーロッパ人ではなく（４４）中国人（３１）のＴ２Ｄ、および自閉症（４５）において報告されている。ヒトでは、完全菜食主義ではなく雑食性の食事が、アテローム発生促進性トリメチルアミン−Ｎ−オキシド（ＴＭＡＯ）を生じ、このことは、Ａｋｋｅｒｍａｎｓｉａの存在に部分的に関連しうる（４６）。高脂肪飼料を消費するマウスのＡｋｋｅｒｍａｎｓｉａ種の濃度は、グルコースおよび糖を含めることにより減少するが（３３）、発酵性オリゴ糖を補充することによって刺激される（１９）。
【０２６３】
炭水化物の発酵は、多くのマイクロバイオータの役割であり、プレバイオティクスの顕著な特徴である。発酵の証拠として糞便中の短鎖脂肪酸およびｐＨを測定した。酢酸塩、酪酸塩、およびプロピオン酸塩の含有量の増加を伴うｐＨの減少が観察され、ＡＳＰＦおよびＵＳＰＦ中の繊維が発酵したことが示された。この発酵における明白な候補は、存在度が増加した５つの属からのものである。これらは、Ｂａｒｎｅｓｉｅｌｌａ、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ、Ａｌｉｓｔｉｐｅｓ、Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ、およびＯｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒであった。特にＢａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｔｈｅｔａｉｏｔａｏｍｉｃｒｏｎは、酵母菌の壁に見出される複合糖質を発酵することができる種であり（４７）、おそらくダイズさや繊維を発酵させることができる。ＡｌｉｓｔｉｐｅｓおよびＯｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｅｒ種は、難消化性デンプンを発酵させると思われ（４７）、Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓは、オリゴフルクタン（oligofructan）により刺激される（１９）。Ｆｌａｖｏｎｉｆｒａｃｔｏｒ種による発酵の証拠はない。
【０２６４】
ＧＩ管の粘膜組織は、二次リンパ組織を全て合わせたものより多い免疫系細胞を内部に持つ。粘膜の免疫応答の１つの顕著な特徴は、分泌性ＩｇＡの産生であり、このことは腸内の微生物コロニー形成を必要とする。分泌性ＩｇＡは、上皮細胞への細菌、ウイルス、真菌、寄生虫、および食物粒子の結合を防止することによって、感染および炎症に対する粘膜障壁として作用することが、長い間知られてきた。ＯｂＤ−ＵＳＰＦを消費したマウスのみに、糞便ｓＩｇＡレベルの増加が観察された。これは、結腸炎症と関連し、ＡＳＰＦを消費したマウスにおいて観察されたようなＡｌｉｓｔｉｐｅｓまたはＯｓｃｉｌｌｉｂａｃｔｏｒの存在度の増加ではなく、Ｍｕｃｉｓｐｉｒｉｌｌｕｍ種の存在度の減少と関連した飼料であった。更に、炎症応答を阻害する抗炎症性ＩＬ−１０の血漿レベルは、統計的に増加し、白血球を動員するケモカインとして作用するＣＸＣＬ１は、ＡＳＰＦ補充ＯｂＤによってのみ減少した。２つの飼料の主な差は、ＡＳＰＦが、抗炎症性であることが知られているグリセオリンを含有すること（４８、４９）、および低い生物学的利用能を有することである。
【０２６５】
要約すると、マウスにおける食餌脂肪および糖の吸収を妨げるＧＩＭＭとして作用する、ダイズさやからの新規食品成分を開発した。改変されたＧＩマイクロバイオームの構成成分には、１１の属のマイクロバイオータの存在度をシフトすること、胆汁酸排出を減少すること、糞便エネルギーを増加すること、糞便乳酸塩の減少を伴って、糞便グルコースおよびＴＧを増加することが含まれた。ダイズさや組織が活性化されてグリセオリンを含有すると、ＧＩＭＭは抗炎症性になる。グリセオリンと、ＡＳＰＦの他のマクロおよびマイクロ栄養素との組み合わせは、脂肪および糖が豊富であるが、十分な食物繊維および抗酸化剤を欠いている食事を定期的に消費する個体にとって理想的なＧＩＭＭを提供できると考えられる。グリセオリンと、ダイズ調製物の他の要素との組み合わせは、集団としてのマイクロバイオームのシフトに重要であると考えられるが、データは、グリセオリンが、結腸炎症の治療および予防に有用でありうることも示唆している。食餌誘発機能障害性ＧＩバイオームの動物モデルによる更なる研究が、どの適応症がこのＧＩＭＭに最適であるかを予測するために必要である。可能性のある適応症は、非アルコール性脂肪性肝炎および肝硬変をもたらしうる非アルコール性脂肪肝疾患、肥満症、Ｔ２Ｄ、ＩＢＳ、ＩＢＤ、自閉症、慢性便秘である。
【０２６６】
均等物
本発明は詳細な説明と共に記載されてきたが、前述の記載は、本発明の範囲を例示することが意図され、制限することは意図されず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲の範囲により定義されることが理解されるべきである。他の態様、利点、および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
【０２６７】
参照としての組み込み
本明細書に引用されている全ての参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、および特許出願は、全ての目的において、それらの全体が参照として組み込まれる。しかし、本明細書に引用されている任意の参考文献、論文、刊行物、特許、特許公報、および特許出願の記述は、これらが、正当な従来技術を構成すること、または世界中の任意の国における一般的な共通の知識の一部を形成することの認識として、またはそのことを示唆する任意の形態であると受け取られない、または受け取るべきではない。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３−１】
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【図１３−２】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６−１】
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【図１６−２】
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【図１７−１】
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【図１７−２】
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【図１８−１】
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【図１８−２】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４−１】
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【図２４−２】
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【国際調査報告】
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