(57)【要約】  本発明は、小滴の形態であり、抗癌剤を含有する２０％〜４０％（ｖ／ｖ）の水相と；ヨード化油および、組成物の総体積に対して、界面活性剤質量の、０．３％〜５％の割合で、式（Ｉ）を有する少なくとも１つの界面活性剤を含有する６０％〜８０％（ｖ／ｖ）の脂質相と、を含有する安定な油中水エマルション組成物に関し、この界面活性剤に対する式（Ｉ）は、次のものであり、式中、ｓは０または１の値を有し；ｍは２〜３０の整数であり；Ｒ1は、式（ＩＩ）の基であり、ここでｎは４〜１０の整数であり、ｏは１〜４の整数であり、ｐは３〜７の整数であり；ｑは２〜１０の整数であり、ｒは０または１の値を有し；Ｒ2は水素原子であるかまたはＲ1と同一であり；各Ｒ3は個別に、水素原子であるかまたはＲ1と同一である。本発明はまた、前記組成物から得られるエマルション、エマルションの調製方法および癌および癌の転移を処置するためのエマルションの使用にも関する。
2017505326.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
油中水エマルションの形態の組成物であって、
−抗癌剤を含む、小滴の形態の、２０％〜４０％（ｖ／ｖ）の水相と、
−ヨード化油および、前記組成物の総体積に対する界面活性剤の重量について、０．３％〜５％の割合の、少なくとも１つの式（Ｉ）の界面活性剤を含む、６０％〜８０％（ｖ／ｖ）の脂質相と、
を含み、前記界面活性剤の式（Ｉ）が次のとおり：
【化１】
2017505326.tif 000027
（式中、
−ｓは０または１であり、
−ｍは２〜３０の整数を表し、
−Ｒ1は式（ＩＩ）の基を表し、
【化２】
2017505326.tif 000028
ここでｎは４〜１０の整数を表し、ｏは１〜４の整数を表し、ｐは３〜７の整数を表し、ｑは２〜１０の整数を表し、ｒは０または１であり、
−Ｒ2は水素原子を表すか、またはＲ1と同一であり、
−各Ｒ3は独立に水素原子を表すか、またはＲ1と同一である）である、油中水エマルションの形態の組成物。
【請求項２】
各Ｒ3が水素原子を表す、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
安定であることを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記抗癌剤が、アントラサイクリン、白金錯体、ミトキサントロン、ネモルビシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、アクチノマイシンＤ、イリノテカン、５−フルオロウラシル、ソラフェニブ、スニチニブ、レゴラフェニブ、ブリバニブ、オランチニブ、リンシチニブ、エルロチニブ、カボザンチニブ、フォレチニブ、チバンチニブ、ホテムスチン、タウロムスチン（ＴＣＮＵ）、カルムスチン、シトシンＣ、シクロホスホンアミド、シトシンアラビノシド、パクリタキセル、ドセタキセル、メトトレキサート、エベロリムス、ＰＥＧ−アルギニンデイミナーゼ、テガフール／ギメラシル／オテラシル合剤、ムパルホスタット（ｍｕｐａｒｆｏｓｔａｔ）、ペレチノイン、ゲムシタビン、ベバシズマブおよびラムシルマブ、フロクスウリジン、ＧＭ−ＣＳＦ、モルグラモスチム、サルグラモスチム、ＯＫ−４３２、インターロイキン−２、インターロイキン−４およびＴＮＦアルファ、125Ｉ−標識抗ＣＥＡ（癌胎児性抗原）抗体、これらの化合物のうち１つが負荷されたミクロスフェア、放射性元素および前記放射性元素と大環状キレートとの錯体、鉄化合物および／またはガドリニウムキレートに基づく磁気粒子、放射性ミクロスフェア、デオキシリボ核酸およびリボ核酸配列から選択される核酸配列およびそれらの混合物から選択されることを特徴とする、請求項１〜３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記アントラサイクリンがドキソルビシン、エピルビシン、ネモルビシンおよびイダルビシンから選択されることを特徴とする、請求項１〜４に記載の組成物。
【請求項６】
前記水相が、非イオン性ヨード化造影剤およびそれらの混合物から選択される濃縮剤も含むことを特徴とする、請求項１〜５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記脂質相が、亜麻仁油、ダイズ油、パーム油、ココナツ油、キャスター油、トウモロコシ油、綿実油、落花生油、ゴマ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、アーモンド油、オリーブ油、ケシ油および式：
【化３】
2017505326.tif 000029
（式中、Ｒは３〜３５個の炭素原子を含む脂肪族鎖である）
の脂肪酸トリグリセリドの混合物を含むかまたはそれからなる油から選択される非ヨード化油も含み、ただし、前記脂肪酸の９５％超がＣ８および／またはＣ１０であることを特徴とする、請求項１〜６の何れか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記界面活性剤のＨＬＢが１〜８であることを特徴とする、請求項１〜７の何れか１項に記載の組成物。
【請求項９】
前記界面活性剤が、ポリグリセリルポリリシノール酸およびＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレートから選択されることを特徴とする、請求項１〜８の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ヨード化油が、ケシ油またはオリーブ油のヨード化脂肪酸のエチルエステルを含むことを特徴とする、請求項１〜９の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記水相小滴のサイズが１〜２００μｍであることを特徴とする、請求項１〜１０の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１２】
２０℃での粘度が１００〜２００ｍＰａ．ｓ．に含まれ、および／または３７℃での粘度が４０〜８０ｍＰａ．ｓ．に含まれることを特徴とする、請求項１〜１１の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
癌または癌の転移の処置での使用のための、請求項１〜１２の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１３の何れか１項に記載の組成物を調製するための方法であって、次の段階：
ａ）前記ヨード化油中で請求項１または２で定められる界面活性剤を混合し、
ｂ）抗癌剤を含む水溶液と段階ａ）で得られた溶液を混合すること
を含む、方法。
【請求項１５】
抗癌剤をベクター化するための併用製品としての、
−請求項１または２で定められる式（Ｉ）の界面活性剤と、
−ヨード化油と、
を含むキットの使用。
【請求項１６】
抗癌剤ベクターとしての請求項１、２、３、８〜１０および１２の何れか１項に記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヨード化油および界面活性剤を含む、抗癌剤をベクター化するための組成物であって、抗癌剤、ヨード化油および前記界面活性剤を含む油中水エマルションの形態の組成物を調製するのに使用できる組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
１世紀を超えて、リンパ系造影などの放射線検査において造影剤として、または肝臓病変の診断のために製品リピオドール（登録商標）などのヨード化油が使用されてきた。リピオドール（登録商標）は、主にケシ油のヨード化脂肪酸のエチルエステルからなる。
【０００３】
３０年を超えて、これらのヨード化油がインターベンショナル・ラジオロジー手順で使用されてきた。リピオドール（登録商標）は、肝臓腫瘍により選択的に取り込まれるというその傾向を特徴とする。したがって、これは、肝動脈化学塞栓術（ＴＡＣＥ）と呼ばれる技術において肝細胞癌の処置のための抗癌剤ベクターとして提案されている（Ｎａｋａｍｕｒａら：Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，１９８９；１７０：７８３−６およびＪ．Ｍ．Ｉｄｅｅ−Ｂ．Ｇｕｉｕ：Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ／Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２０１３；８８（３）：５３０−４９）。ヨード化油および特にリピオドール（登録商標）は、動脈循環の一時的な塞栓を誘導することも知られており、このようにして動脈循環の鈍化を引き起こす。殆どの抗癌剤が水溶性であることを考えると、互いにおいて可溶性でない２相を混合するのに適切である「エマルション」形態はヨード化油および抗癌剤を混合するために最も賢明であると思われる。これは、毒性が強すぎて動脈内または全身的に非乳化状態で投与される場合に十分に効果的ではない抗癌剤を腫瘍に輸送および送達するのに最適であると思われる。
【０００４】
「逆」エマルションと呼ばれる「油中水」エマルションは、Ｗ／Ｏ（油中水）で表されるエマルションである。これは、脂質相中での水相の小滴の分散系である。「水中油」エマルションは、Ｏ／Ｗ（水中油）で表される「直接」エマルションである。Ｗ／Ｏエマルションとは異なり、これは、水相中での脂質相の小滴の分散系である。「エマルションの方向性」という用語は、エマルションのＷ／ＯまたはＯ／Ｗ性を指すときに使用される。
【０００５】
水性連続相中に抗癌剤を含む水中油（Ｏ／Ｗ）エマルションは、血中に抗癌剤を急速に放出するという大きな欠点がある。したがって、治療剤のうち僅かと言えない部分が標的部位に到達せず、一方で全身性の毒性を誘導し得、一方でこの治療剤の有効性を低下させ得る。さらに、このタイプのＯ／Ｗエマルションは、肺塞栓またはさらに脳塞栓を引き起こすリスクがある。このリスクは、これらのエマルションの油の小滴サイズが１０μｍ未満である場合に上昇する。小滴サイズが大きくなるとこれらのエマルションの不安定性が高まるので、この第二の欠点を排除するのは困難である。
【０００６】
「逆エマルション」とも呼ばれ、ヨード化油および抗癌剤を含む油中水（Ｗ／Ｏ）エマルションは、Ｏ／Ｗエマルションよりも文献で言及されることは少ない。これらは、腫瘍においてよりゆっくりと治療剤を放出するものとして、および水中油エマルションよりも粘度が高いものとして記載される（Ｄｅ  Ｂａｅｒｅら、Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ  １９９５；１９４：１６５−１７０）。これらの理由から、腫瘍内で抗癌剤をベクター化するためにＷ／Ｏエマルションの形態を選択するということになる。しかし、これらのＷ／Ｏエマルションは、腫瘍上流の血液および血管分岐と接触した際に安定性を欠くので常に十分に有効とは限らない。実際には、抗癌剤の腫瘍標的化を向上させ、同時に治療効果および処置の耐性を改善するために、エマルションは、それが腫瘍に到達する瞬間まで安定であり続けなければならず、腫瘍病変でのその分布は完全かつ均一でなければならない。
【０００７】
したがって、エマルションを安定化するための様々な溶液が先行技術で提案されてきた。多くの著者が、Ｏ／Ｗエマルションを安定化するためにＨＬＢが高い（８より大きい）界面活性剤の使用を提案した。
【０００８】
ソルビタンのポリオキシエチレン化脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン化ソルビタンモノステアレートまたはポリソルベート６０（モンタノックス（Ｍｏｎｔａｎｏｘ）（登録商標）６０、ＨＬＢ＝１４．９）およびポリオキシエチレン化ソルビタンモノラウレートまたはポリソルベート２０（モンタノックス（Ｍｏｎｔａｎｏｘ）２０（登録商標）、ＨＬＢ＝１６．７）などの、ＨＬＢが高いかまたはさらに非常に高い界面活性剤の使用は、６カ月にわたり安定であるイダルビシンおよびリピオドール（登録商標）に基づく水中油エマルションを調製するために記載されている。
【０００９】
特開平６４７５５９号公報は、１０％〜３０％のリピオドール（登録商標）、抗癌剤および０．１％〜２％の親水性界面活性剤、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油（ＨＬＢ＝１４）としても知られるＨＣＯ−６０を含むＯ／Ｗエマルションを記載する。これは、推測的に、リシンオレイン酸に結合されているＰＥＧ−６０である。
【００１０】
欧州特許第０２９４５３４号明細書は、有機化合物、例えばアミノ酸（フェニルアラニン、アラニン、ロイシン、イソロイシン、グリシン、セリンまたはタウリン）、脂肪酸、例えばペラルゴン酸、オレイン酸（ＨＬＢ＝１７）またはリノール酸（ＨＬＢ＝１６）など、または脂溶性ビタミン、例えばビタミンＥなどを用いて乳化されたヨード化油から作製されるエマルション形態の造影剤を記載する。
【００１１】
欧州特許第０５８１８４２号明細書は、ヨード化され、リン脂質およびシクロペンタフェンアントレン誘導体、例えばステロールなどの混合物を用いて乳化されるケシ種子油由来である脂肪酸のエステルを含む水中油エマルションを記載する。
【００１２】
欧州特許第０２９４５３４号明細書および欧州特許第０５８１８４２号明細書は、他の文書を参照する。特に、独国特許第２６０２９０７号明細書が、５０％〜６０％のヨード化トリグリセリド、２％〜１０％のポリオキシエチレンソルビタンの脂肪酸エステル（ＨＬＢ＝１３〜１７）および２％〜４０％の水を含有する水中油エマルションを記載することが発見された。Ｇｒｉｍｅｓら（Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．１９７９  Ｊａｎ；６８（１）：５２−６）は、ヨード化油を含むエマルションを得るためのポリソルベート８０（ＨＬＢ＝１５）、ソルビタンモノオレエート（ＨＬＢ＝８．６）およびホスファチジルコリンの使用を記載する。Ｖｅｒｍｅｓｓらは、５３％（ｖ／ｖ）のリピオドール（登録商標）、１０％のアルコールおよび０．４５％のダイズレシチンを含有するエマルション（米国特許第４４０４１８２号明細書またはＪ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｓｓｉｓｔ．Ｔｏｍｏｇｒ．３：２５−３１，１９７９）を記載している。これらの水中油エマルションの粒径は２〜３μｍである。Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒら（Ｅｕｒｏｐ．Ｊ．Ｒａｄｉｏｌ．５，１６７−１７４，１９８５）は、ポリオキシエチレン−４−ソルビタンモノラウレート（ツイーン（登録商標）８０、Ｓｅｒｖａ：ＨＬＢ＝１５．３）、グリセロールポリエチレングリコールリシンオレエート（クレモフォア（登録商標）ＥＬ：ＨＬＢ＝１４．５）、ジアセチルホスフェートＤＰ（Ｓｉｇｍａ）、卵由来のレシチン（Ｆｌｕｋａ  ＧｍｂＨ）、ドキシポリゼラチン（ゲリンフンドール（Ｇｅｌｉｎｆｕｎｄｏｌ）（登録商標）５．５％  Ｂｉｏｔｅｓｔ  ＧｍｂＨ）およびデキストラン６０（マクロデックス（登録商標）４．５％、ＲＬ  Ｋｎｏｌｌ）などの乳化剤を用いて調製されたヨード化油を含有する様々なエマルションを記載する。英国特許第６７６７３８号明細書は、ヨード化油および合成非イオン性乳化剤、例えばポリヒドロキシアルコールの脂肪酸モノエステル（ソルビトールの、およびラウリン酸の、パルミチン酸の、ステアリン酸の、またはオレイン酸のモノエステル、グリセロールの、および脂肪酸のモノエステル、例えばグリセリルモノステアレートおよびグリセリルモノオレエートなど、グリコールのモノエステル、例えばパルミチン酸、ステアリン酸またはラウリン酸などの脂肪酸とのエチレングリコール、テトラエチレングリコールまたはドデカエチレングリコールなどのグリコールのモノエステル）を含有するエマルションを記載し、これらのエステルは、ポリオキシアルキレン誘導体を形成させるためにポリアルキレンオキシドと反応可能である。米国特許第３３５６５７５号明細書は、ヨード化油、グリセロールおよびレシチンを含有するエマルションを記載する。米国特許第４９１７８８０号明細書は、１０％ヨード化油および水相中に２．２５％グリセロールおよび０．１％フェニルアラニンとともに１．２％精製卵リン脂質を含むエマルションを記載する。
【００１３】
アミオダロン（化学式（２−ブチル−３−ベンゾフラニル）［４−［２−（ジエチルアミノ）エトキシ］−３，５−ジヨードフェニル］メタノンの抗不整脈薬）の使用によって、３７℃で最長４週間、リピオドール（登録商標）（４４％（ｖ／ｖ））およびドキソルビシンまたはピラルビシンの水中油エマルションを安定化することが可能になった。この特性は、この薬剤中に、賦形剤、高ＨＬＢの乳化剤であるポリソルベート８０が存在するがゆえである（Ｂｏｕｌｉｎら、Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ  ａｎｄ  Ｌｉｖｅｒ  Ｄｉｓｅａｓｅ  ４３（２０１１）９０５−９１１）。同じチームによるさらなる研究によって、アミオダロンが実質的にリピオドール（登録商標）およびイダルビシンに基づくエマルションの安定性を改善せず、抗癌剤における細胞毒性を向上させないと思われることを示すことが可能になった。したがって、イダルビシンおよびリピオドール（登録商標）のみの使用がさらに推奨される。
【００１４】
Ｎａｋａｍｕｒａら（Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ，１９８９；１７０：７８３−６）は、イオン性造影剤を含む１ｍＬの蒸留水、メグルミンジアトリゾ酸ナトリウム（ハイパック（登録商標）、ガストログラフィン（登録商標）またはウログラフィン（登録商標））および３ｍＬのリピオドール（登録商標）を混合することにより得られた様々なエマルションの外観を示す（図１）。エマルションＣは、この図において２４時間後に相分離が起こらなかったが、このエマルションは実際には安定ではなく、それを含有するチューブの下部はその上部よりも透明であることに容易に気付くことができることが示される。この文書はまた、２〜３／１の比率での、リピオドール（登録商標）およびドキソルビシンまたはマイトマイシンのエマルションの調製も記載する。得られたエマルションがＷ／Ｏエマルションであることが示される。このエマルションを使用する場合の抗癌剤の放出の最小量が強調される（図２）。しかし、このエマルションの注射後に可視化される血漿ピークは、依然として微々たるものとは言えない。このエマルションは、界面活性剤を使用しないので十分に安定ではないはずである。実際に、それらのエマルションの動脈内注射から２分後、ドキソルビシンの血漿濃度は、この抗癌剤単独注射後に測定した血漿濃度と比較して、８３％低い（（（３５００〜６００）／３５００）ｘ１００）ことが観察される。この低下は５分で８０％である。
【００１５】
Ｒａｏｕｌら（Ｃａｎｃｅｒ，１９９２，ｖｏｌ．７０，Ｎｏ．３，５８５−９０）は、１０ｍＬのリピオドール（登録商標）および２．５ｍＬのイオキサグラート（ヘキサブリックス（登録商標））を混合することにより調製される５０ｍｇのドキソルビシンを含むエマルションを記載する。得られるエマルションの、Ｗ／ＯまたはＯ／Ｗ方向性は特定されず、血漿ピークはドキソルビシン単独の動脈内注射により引き起こされるものよりも顕著に低くなる。しかし、この血漿ピークは、血液への抗癌剤の微々たるものとは言えない通過を示唆する。実際に、これらのエマルションの動脈内注射から２分後、ドキソルビシンの血漿濃度は、この抗癌剤単独注射後に測定した血漿濃度と比較して、５９％低いことが観察される（（（２２００〜９００）／２２００）ｘ１００）。注射から５分後に対応する計算は、この低下がわずか３３％（（（１０５０〜７００）／１０５０）ｘ１００）なので、さらに一層好ましくない。これらのエマルションの注射後に塞栓形成が行われる場合、これらの低下は、２および５分でそれぞれ８２％（（（２２００〜４００）／２２００）ｘ１００）および４３％（（（７００〜４００）／７００）ｘ１００）である。
【００１６】
これらの様々なエマルションは、それらが水中油形態である場合、高ＨＬＢの界面活性剤を用いて安定化されている場合でも、抗癌剤−ベクター化能が不十分となり、それらの使用は、依然として顕著な塞栓リスクを呈する。ベクター化能がこのように不十分であることは、水中油エマルションの場合、通常は水溶性である抗癌剤が水性の連続相中にあり、したがって血流中で非常に急速に希釈されるので、エマルションそのものにより説明される。さらに、これらのエマルションのうち一部は、欧州薬局方で列挙される乳化剤であり、副作用を引き起こす、ツイーン（登録商標）（高ＨＬＢ）またはスパン（登録商標）（ＨＬＢがより低いかまたはより高いかの何れか）などの合成乳化剤を含有する。ツイーン（登録商標）などのポリソルベートは、毒性がある可能性があるものとして記載される。スパン（登録商標）などのソルビタンエステルは非経口注射による使用には推奨されない（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，２００９）。
【００１７】
頻繁に、「油中水」エマルションとして刊行物中に記載のエマルションは、この性質のエマルションではない。これらが実際にＷ／Ｏ形態である場合、これらのエマルションの安定性は不十分であり、抗癌剤−ベクター化能が不十分である。したがって、注射後のこれらの有効性は、動脈内に注射される抗癌剤の量のかなりの部分が標的病変に到達しないので、不十分である（Ｒａｏｕｌら、１９９２）。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
出願者らは、２０℃で少なくとも２４時間にわたり安定であり、一般に、先行技術エマルションと比較してベクター化能が改善されている抗癌剤を含む油中水エマルションを調製することを可能にする組成物を開発した。
【００１９】
したがって、このエマルションには２つの大きな長所があり：これは、安定であることにより院内薬局で少なくとも２４時間前に調製可能となるので病院関連で容易に使用することができ、これの患者に対するリスクは非常に限定的であり、同時に治療効果が改善している。
【００２０】
このエマルションはまた、イメージング法により推定され得る、腫瘍に存在するヨード化油（例えばリピオドール（登録商標））の量を腫瘍に実際に存在する抗癌剤の量と相関させることを可能とする長所も有する。先行技術エマルションの大部分に対して、腫瘍に存在することが推定されるヨード化油の量は、この腫瘍に存在する抗癌剤の量を示すものでは全くない。したがって、本発明によるエマルションにより、抗癌剤が腫瘍の中心で効果的に投与されていることを検証することを求める場合、偽陽性を減少させることが可能になる。
【００２１】
したがって、本発明の対象は、
−抗癌剤を含む、小滴の形態の、２０％〜４０％（ｖ／ｖ）の水相、好ましくは２０％〜３５％（ｖ／ｖ）、より好ましくは２５％（ｖ／ｖ）の水相と、
−ヨード化油および本組成物の総体積に対して界面活性剤の重量について０．３％〜５％、好ましくは０．５％〜２％、より好ましくは１％の割合の式（Ｉ）の少なくとも１つの界面活性剤を含む、６０％〜８０％、好ましくは６５％〜８０％（ｖ／ｖ）、より好ましくは７５％（ｖ／ｖ）の脂質相と、
を含む油中水エマルション形態の組成物であり、この界面活性剤の式（Ｉ）は、次のとおり：
【００２２】
【化１】
2017505326.tif 000003
【００２３】
（式中、
−ｓは０または１であり、
−ｍは２〜３０の整数を表し、
−Ｒ1は式（ＩＩ）の基を表し、
【００２４】
【化２】
2017505326.tif 000004
【００２５】
ここで、ｎは４〜１０の整数を表し、ｏは１〜４の整数を表し、ｐは３〜７の整数を表し、ｑは２〜１０の整数を表し、ｒは０または１であり、
−Ｒ2は水素原子を表すか、またはＲ1と同一であり、および
−各Ｒ3は独立に水素原子を表すか、またはＲ1と同一である）である。
【００２６】
好ましくは、上記式（Ｉ）において、各Ｒ3は水素原子を表す。この界面活性剤の式（Ｉ）は次の式（Ｉ’）：
【００２７】
【化３】
2017505326.tif 000005
【００２８】
を有する。
【００２９】
界面活性剤の割合は、エマルション形態の組成物の総体積に対する界面活性剤の重量により表される。水相または脂質相の割合は、エマルション形態の組成物の総体積に対する相の体積により表される。
【００３０】
この組成物は抗癌剤をベクター化するためのものである。本発明はまた抗癌剤ベクターとしてのこの組成物の使用に関する。
【００３１】
この組成物は油中水エマルション（「逆エマルション」またはＷ／Ｏエマルションとしても知られる）の形態である。このようなエマルションは、脂質相および小滴の形態で分散される水相からなる。組成物のヨード化油は脂質相中にある。式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤は、水相と脂質相との間の境界にある。本願の目的のために、水相および脂質相の割合の計算に対して、界面活性剤は脂質相中にあるとみなす。
【図面の簡単な説明】
【００３２】
【図１】いくつかのエマルションの化学塞栓術（ＴＡＣＥ）手順による注射後の肝細胞癌を保有するラットにおけるドキソルビシンの血漿中動態。
【図２】いくつかのエマルションの化学塞栓術（ＴＡＣＥ）手順による注射後の肝細胞癌を保有するウサギにおけるドキソルビシンの血漿中動態。
【図３】腫瘍において測定されるリピオドール（登録商標）の量と投与されるエマルションによる前記の腫瘍において測定されるドキソルビシンの量との相関研究の結果。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
特に次の実施形態が有利である。
【００３４】
【表１】
2017505326.tif 000006
【００３５】
本発明によるエマルションは有利に安定である。「安定なエマルション」という用語は、従来温度（２０℃）および大気圧（１ｂａｒ）条件下およびその調製後２４時間以内で、エマルション形態の組成物全体に対して視覚的な相分離が５体積％未満であるエマルションを意味するものとする。好ましくは、「安定なエマルション」は、上述の条件下およびその調製後２４時間以内に視覚的な相分離を呈さないエマルションを意味するものとする。視覚的な相分離は、溶液が目視でもはや均一に見えないとき、すなわち少なくとも２相の出現が観察されるときに現れる。
【００３６】
より好ましくは、「安定なエマルション」という用語は、平均小滴サイズの変動が１０％未満、特に５％未満である、好ましくは平均小滴サイズが変動しないエマルションを意味するものとし、この平均サイズは、その調製から２４時間後に光学顕微鏡（例えばＬｅｉｃａ  ＤＭ２０００  ＬＥＤ顕微鏡）で測定する。
【００３７】
好ましくは、本発明によるエマルションの動脈内注射は、抗癌剤単独の動脈内注射に対して、この注射後０〜５分で、９０％超、好ましくは９４％超、より好ましくは９７％超、さらにより好ましくは９９％超の、抗癌剤の血漿濃度の低下を誘導する。有利に、これらの血漿濃度およびこの低下は、当業者にとって公知のプロトコールに従い、血漿中動態測定によって確認される。
【００３８】
この物質を含む特定の生成物の注射後の抗癌剤の血漿濃度ピークと抗癌剤単独の注射後に得られる血漿濃度ピークとの間の差の表現は、Ｈｏｎｇら（Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００６：１２（８））によって特に言及される。
【００３９】
エマルションが含む水相が２０％（ｖ／ｖ）未満である場合、抗癌剤はその中での溶解が困難である。エマルションが含む水相が４０％を超える場合、エマルション形態の組成物の粘度が高すぎる。これは、ヨード化油を含む脂質連続相中の水相の小滴の濃度が上昇するとき、組成物全体の粘度が上昇するからである。
【００４０】
水相は、治療的有効用量で抗癌剤を含む。「治療的有効用量」という用語は、癌を処置するかまたはその進行を遅延させることを可能にする用量を意味するものとする。好ましくは、抗癌剤がアントラサイクリンから選択される場合、治療的有効用量は、２０〜１５０ｍｇ、より好ましくは５０〜１００ｍｇの抗癌剤の量に相当する。
【００４１】
脂質相の密度は、好ましくは１．１０〜１．３０、より好ましくは１．２０〜１．３０、さらにより好ましくは１．２８である。好ましくは、水相および脂質相は同じ密度（言い換えると、これらは等密度）であるか、互いとの差が５％以下である。
【００４２】
水相の密度を上昇させるために、濃縮剤をそれに添加することができる（次いで抗癌剤を含むこの相の高密度化を行う）。逆に、ヨード化油を含む脂質相の密度を低下させるために、密度が１未満の第二の油を添加することができる（次いでヨード化油を含む脂質相の「脱高密度化（ｄｅｄｅｎｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」を行う）。
【００４３】
ある有利な実施形態において、このように、水相は、濃縮剤、好ましくは少なくとも１つの非イオン性ヨード化造影剤を含み得る。濃縮剤として使用し得る非イオン性ヨード化生成物は、好ましくは、イオビトリドール（ゼネティクス（登録商標））、イオパミドール（イオパミロン（登録商標）、イソブ（登録商標））、イオメプロール（イオメロン（登録商標））、イオベルソール（オプチレイ（登録商標）、オプチジェクト（登録商標））、イオヘキソール（オムニパーク（登録商標））、イオペントール（イマゴパーク（登録商標））、イオキシトール（オキシラン（登録商標））、イオプロミド（ウルトラビスト（登録商標））、メトリザミド（アミパーク（登録商標））、イオサルコール（メリトラスト（Ｍｅｌｉｔｒａｓｔ）（登録商標））、イオトロラン（イソビスト（登録商標））、イオジキサノール（ビジパーク（登録商標））、イオシメノールおよびイオシミド（ユニビスト（Ｕｎｉｖｉｓｔ）（登録商標））およびそれらの混合物から選択される。イオビトリドールは、好ましい非イオン性ヨード化生成物である。ゼネティクス（登録商標）２５０およびゼネティクス（登録商標）３００製品の密度は、それぞれ１．２８および１．３４である。これらの非イオン性ヨード化造影剤は、水相中の抗癌剤の良好な溶解性を可能にし、エマルションを不安定化しないという長所を有する。
【００４４】
イオキサグル酸（ヘキサブリックス（登録商標））またはメグルミナ（ｍｅｇｌｕｍｉｎａ）および／またはジアトリゾ酸ナトリウム（ハイパック（登録商標）、ガストログラフィン（登録商標）、ガストロビュー（Ｇａｓｔｒｏｖｉｅｗ）（登録商標）またはウログラフィン（登録商標））などのイオン性ヨウ素化造影剤の使用については、これらの造影剤が水相中の抗癌剤の溶解度を低下させ、またはさらにその溶解を妨害し、および／または組成物の浸透圧を上昇させる欠点を有するので、指示されない。
【００４５】
別の有利な実施形態において（水相が濃縮剤を含む上記の実施形態と組み合わせてもよいし、または組み合わせなくてもよい）、脂質相はまた、密度が１未満の少なくとも１つの非ヨード化油、好ましくは密度が０．９６未満の非ヨード化油、さらにより好ましくは亜麻仁油、ダイズ油、パーム油、ココナツ油、キャスター（ｃａｓｔｅｒ）油、トウモロコシ油、綿実油、落花生油、ゴマ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、アーモンド油、オリーブ油、ケシ油および式：
【００４６】
【化４】
2017505326.tif 000007
【００４７】
（式中、Ｒは３〜３５個の炭素原子を含む脂肪族鎖である）の脂肪酸トリグリセリドの混合物を含むかまたはこれからなる油から選択される非ヨード化油も含み得、ただし、この脂肪酸の９５％超が、例えばミグリオール（登録商標）、例えばミグリオール（登録商標）８１０油、ミグリオール（登録商標）８１２油（カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド）、ミグリオール（登録商標）８１８油（カプリル酸／カプリン酸／リノール酸トリグリセリド）、ミグリオール（登録商標）６１２油（グリセリルトリヘキサノエート）または他のプロピレングリコールジカプリレートジカプレートミグリオール（登録商標）誘導体の商品名で販売される、Ｃ８および／またはＣ１０であるものとする。（Ｒ＝Ｃ８＋Ｃ１０）＞９５％という表現は、混合物のトリグリセリドが、９５％超がＣ８および／またはＣ１０脂肪酸（カプリン酸またはカプリル酸）である脂肪酸のトリグリセリドであることを意味する。脂肪酸がＣ８脂肪酸である場合、Ｒは７個の炭素原子を含む鎖であり、脂肪酸がＣ１０脂肪酸である場合、Ｒは９個の炭素原子を含む鎖である。
【００４８】
列挙される様々な非ヨード化油の密度は、次の表で特定する。
【００４９】
【表２】
2017505326.tif 000008
【００５０】
この明確な実施形態において、上記で定められるようなヨード化油および１つ以上の非ヨード化油を含む脂質相の密度は、好ましくは０．９〜１．２、より好ましくは０．９５〜１．１０、さらにより好ましくは１．０５である。
【００５１】
水相小滴のサイズは、好ましくは１〜２００μｍに含まれ、より好ましくは５〜１００μｍに含まれ、さらにより好ましくは５〜５０μｍに含まれるか、または５〜１０μｍでもある。このサイズは、エマルションの安定性をまたさらに改善する。サイズは、光学顕微鏡（例えばＬｅｉｃａ  ＤＭ２０００  ＬＥＤ顕微鏡）を用いて測定することができる。
【００５２】
好ましくは、水相小滴は均一に分布する。均一性は光学顕微鏡を用いて確認され：小滴の凝集体が観察される場合、これらの小滴は均一に分布しない。
【００５３】
本発明によるエマルションの形態の組成物中の水相／脂質相体積比は、有利に１／２（すなわち０．５）〜１／４（すなわち０．２５）、好ましくは２／５（すなわち０．４）〜３／１０（すなわち０．３）、より好ましくは１／３（すなわちおよそ０．３３）である。１／２未満の比率であると、Ｗ／Ｏエマルションを確実に得ることが可能となる。実際に、脂質相と水相との間の１／１の比率はＯ／Ｗ方向性を自然に促進する。Ｗ／Ｏ方向性を強制するために、添加されるヨード化油の量を増加させなければならない。１／４の比率を上回ると、塞栓形成のリスクが顕著になる。これは、水相中で治療的有効量の抗癌剤を溶解させるために、この水相が十分な体積を有することが必要であるためである。ヨード化油を含み、水相よりも体積が４倍超大きい脂質相がある結果、一般に、使用されるヨード化油の用量が認定される限界よりも大きくなる。リピオドール（登録商標）などの生成物に関する法律上の表示において、画像化治療手順で注射される体積が１５ｍＬを超えてはならないことが示される。
【００５４】
本発明によるエマルションの形態の本組成物の水相および脂質相の体積％および水相／脂質相体積比によって、抗癌剤の腫瘍への運搬を改善することを可能にする逆（Ｗ／Ｏ）エマルションを体系的に得ることが可能となる。
【００５５】
有利に、本発明による組成物の粘度は、２０℃で１００〜２００ｍＰａ．ｓに含まれ、好ましくは１２０〜１７０ｍＰａ．ｓ、より好ましくは１５０〜１６５ｍＰａ．ｓに含まれ、および／または３７℃で粘度は４０〜８０ｍＰａ．ｓに含まれ、好ましくは５０〜７０ｍＰａ．ｓに含まれ、より好ましくは６０〜７０ｍＰａ．ｓに含まれる。粘度値は、直径が４０ｍｍの４°のコーンプレートセルを有するＭａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｋｉｎｅｘｕｓ  Ｐｒｏレオメーターを用いて得られる。測定は、０．１６〜１０Ｐａの範囲の強制ストレスで行われる。
【００５６】
ヨード化油
「脂肪酸」という用語は、少なくとも４個の炭素原子の炭素に基づく鎖を有する、飽和または不飽和、脂肪族カルボン酸を示すものとする。天然脂肪酸は、４〜２８個の炭素原子（一般に偶数）の炭素に基づく鎖を有する。「長鎖脂肪酸」という用語は１４〜２２個の炭素の長さに対して使用され、「非常に長鎖の脂肪酸」という用語は、２２個を超える炭素がある場合に使用される。逆に、「短鎖脂肪酸」という用語は、４〜１０個の炭素、特に６〜１０個の炭素原子、特に８または１０個の炭素原子の長さに対して使用される。当業者は関連する命名法および特に使用を知っている。
−Ｃｉ〜Ｃｐ脂肪酸の範囲を示すためのＣｉ〜Ｃｐ
−Ｃｉ＋Ｃｐ、Ｃｉ脂肪酸およびＣｐ脂肪酸の合計。
【００５７】
例えば：
−１４〜１８個の炭素原子を有する脂肪酸は「Ｃ１４〜Ｃ１８脂肪酸」として記され、
−Ｃ１６脂肪酸およびＣ１８脂肪酸の合計はＣ１６＋Ｃ１８として記され；
−飽和脂肪酸に対して、当業者は、次の命名法Ｃｉ：０（ここでｉは脂肪酸の炭素原子数である）を使用する。パルミチン酸は、例えば命名法（Ｃ１６：０）により示され；
−不飽和脂肪酸に対して、当業者は、次の命名法Ｃｉ：ｘ  ｎ−Ｎ（ここでＮは、酸性基の反対側の炭素から始まる不飽和脂肪酸中の二重結合の位置であり、ｉは脂肪酸の炭素原子数であり、ｘはこの脂肪酸の二重結合（不飽和）の数である）を使用する。オレイン酸は例えば命名法（Ｃ１８：１  ｎ−９）により示される。
【００５８】
有利に、本発明によるヨード化油は、ヨード化脂肪酸の誘導体、好ましくはヨード化脂肪酸のエチルエステル、より好ましくはケシ油、オリーブ油、菜種油、落花生油、ダイズ油またはクルミ油のヨード化脂肪酸のエチルエステル、さらにより好ましくはケシ油またはオリーブ油のヨード化脂肪酸のエチルエステルを含むかまたはこれからなる。より好ましくは、本発明によるヨード化油は、ケシ油（このケシはまた、ブルー・シーデッド（ｂｌｕｅ  ｓｅｅｄｅｄ）アヘンケシまたはパパベル・ソムニフェルム・バル・ニグルム（Ｐａｐａｖｅｒ  ｓｏｍｎｉｆｅｒｕｍ  ｖａｒ．ｎｉｇｒｕｍ）としても知られる）のヨード化脂肪酸のエチルエステルを含むかまたはこれからなる。ケシ種子油としても知られるケシ油は、好ましくは、８０％を超える不飽和脂肪酸（特にリノール酸（Ｃ１８：２  ｎ−６）およびオレイン酸（Ｃ１８：１  ｎ−９））を含有し、少なくとも７０％がリノール酸であり、少なくとも１０％がオレイン酸である。ヨード化油は、不飽和脂肪酸の各二重結合に対して１個のヨウ素原子の結合を可能にする条件下でのケシ油などの油の完全ヨード化（Ｗｏｌｆｆら、２００１，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８０，２０−３６）と続くトランスエステル化から得られる。
【００５９】
本発明によるヨード化油は、好ましくは２９％〜５３％（ｗ／ｗ）、より好ましくは３７％〜３９％（ｗ／ｗ）のヨウ素を含有する。
【００６０】
ヨード化油の例として、リピオドール（登録商標）、ブラッシオドール（Ｂｒａｓｓｉｏｄｏｌ）（登録商標）（菜種（ブラッシカ・コムペスティス（Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｃｏｍｐｅｓｔｉｓ））油由来）、ヨージオール（Ｙｏｄｉｏｌ）（登録商標）（落花生油由来）、オリオドール（Ｏｒｉｏｄｏｌ）（登録商標）（ケシ油由来であるが、脂肪酸トリグリセリドの形態）およびデュロリオパーク（Ｄｕｒｏｌｉｏｐａｑｕｅ）（登録商標）（オリーブ油由来）が挙げられ得る。
【００６１】
好ましくは、ヨード化油は、造影剤としておよびある種の画像化治療手順において使用されるヨード化油であるリピオドール（登録商標）である。この油は、ケシ種子油のヨード化および非ヨード化脂肪酸のエチルエステルの混合物である。これは主に（特に８４％超）ケシ種子油由来の長鎖ヨード化脂肪酸（特にＣ１８脂肪酸）のエチルエステルの混合物、好ましくはエチルモノヨードステアレートおよびエチルジヨードステアレートの混合物からなる。ヨード化油はまた、オリーブ油由来のステアリン酸（Ｃ１８：０）のモノヨード化エチルエステルに基づく油でもあり得る。デュロリオパーク（Ｄｕｒｏｌｉｏｐａｑｕｅ）（登録商標）と呼ばれるこのタイプの製品は数年前に販売された。
【００６２】
リピオドール（登録商標）の主な特徴は次のとおりである。
【００６３】
【表３】
2017505326.tif 000009
【００６４】
【表４】
2017505326.tif 000010
【００６５】
好ましくは、本発明による組成物中に存在するヨード化油の量は１５ｍＬを超えない。
【００６６】
好ましくは、脂質相は、基本的に、上記で定められるようなヨード化油および式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤からなる。本発明のある特定の実施形態において、脂質相は、基本的に、上記で定められるようなヨード化油、上記で定められるような非ヨード化油および式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤からなる。
【００６７】
抗癌剤
本発明による組成物によりベクター化されるかまたは本発明によるエマルションの形態の組成物中に含まれる抗癌剤は、好ましくは、アントラサイクリン、白金錯体、アントラサイクリン関連化合物、例えばミトキサントロンおよびネモルビシンなど、抗生物質、例えばマイトマイシンＣ（アメチシン（登録商標））、ブレオマイシンおよびアクチノマイシンＤなど、他の抗悪性腫瘍化合物、例えばイリノテカン、５−フルオロウラシル（アドルシル（登録商標））、ソラフェニブ（ネバクサール（登録商標））、スニチニブ（スーテント（登録商標））、レゴラフェニブ、ブリバニブ、オランチニブ、リンシチニブ、エルロチニブ、カボザンチニブ、フォレチニブ、チバンチニブ、ホテムスチン、タウロムスチン（ＴＣＮＵ）、カルムスチン、シトシンＣ、シクロホスホンアミド、シトシンアラビノシド（またはシタラビン）、パクリタキセル、ドセタキセル、メトトレキサート、エベロリムス（アフィニトール（登録商標））、ＰＥＧ−アルギニンデイミナーゼ、テガフール／ギメラシル／オテラシル合剤（テイスノ（登録商標））、ムパルホスタット（ｍｕｐａｒｆｏｓｔａｔ）、ペレチノイン、ゲムシタビン、ベバシズマブ（アバスチン（登録商標））、ラムシルマブ、フロクスウリジンなど、免疫刺激剤、例えばＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子）およびその組み換え形態：モルグラモスチムまたはサルグラモスチム（ロイキン（登録商標））、ＯＫ−４３２（ピシバニール（登録商標））、インターロイキン−２、インターロイキン−４および腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦアルファ）、125Ｉ標識抗ＣＥＡ（癌胎児性抗原）抗体、上述の化合物の１つが負荷されたミクロスフェア、放射性元素、キレートとの前記の放射性元素の錯体、鉄化合物（酸化鉄の超小型超常磁性磁気粒子またはＵＳＰＩＯ）および／またはガドリニウムキレートに基づく磁気粒子、放射性ミクロスフェア、核酸配列またはこれらの化合物の１つ以上の混合物（好ましくは１つ以上のアントラサイクリンの混合物または上述のようなアントラサイクリンおよび放射性元素の混合物またはアントラサイクリンおよび鉄化合物）および／またはガドリニウムキレートに基づく粒子の混合物から選択される。
【００６８】
好ましくは、本発明による組成物の水相は、水相中に０．５％〜２．５％（ｗ／ｖ）、より好ましくは１％〜２％（ｗ／ｖ）の抗癌剤を含む。
【００６９】
エマルション形態の組成物は１つ以上の抗癌剤を含み得る。好ましくは、少なくとも１つの抗癌剤は水溶性であり、すなわちこれは水相中で５０％超の溶解度である。したがって、エマルション形態の組成物が１つの抗癌剤のみを含む場合、この抗癌剤は、好ましくは水溶性であり、したがって分散された水相中にある。エマルション形態の組成物がいくつかの抗癌剤を含む場合、それらのうち一部は連続脂質相中にあり得る。
【００７０】
好ましい抗癌剤は、アントラサイクリン、マイトマイシンＣ、白金錯体、放射性元素および上記で列挙されるそれらの錯体から選択される。抗癌剤は、より好ましくはアントラサイクリンから、さらにより好ましくはドキソルビシン、エピルビシン、ネモルビシンおよびイダルビシンから選択される。
【００７１】
有利に、抗癌剤は、挿入剤、例えばドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ネモルビシン、ミトキサントロンおよびピラルビシンなど；アルキル化剤、例えばシスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ロバプラチン、シクロホスホンアミドおよびマイトマイシンＣ、ホテムスチンなど；１型トポイソメラーゼ阻害剤、例えばイリノテカンなど；２型トポイソメラーゼ阻害剤、例えばドキソルビシンおよびミトキサントロンなど；チロシンキナーゼ阻害剤、例えばエベロリムスなど；多種キナーゼ阻害剤、例えばソラフェニブなど、代謝拮抗剤、例えば５−フルオロウラシル、メトトレキサートおよびゲムシタビンなど、上記で列挙されるような放射性元素、これらの放射性元素と大環状キレートとの錯体、鉄化合物に基づく磁気粒子、放射性ミクロスフェア、核酸配列およびそれらの混合物から選択される。
【００７２】
好ましくは、上述のアントラサイクリンは、ドキソルビシン（またはアドリブラスチン（登録商標）の名称でＰｆｉｚｅｒにより販売されているアドリアマイシン）、エピルビシン（ファルモルビシン（登録商標））、イダルビシン（ザベドス（登録商標））、ダウノルビシン、ピラルビシン、ネモルビシンおよびこれらの化合物の１つ以上の混合物から選択される。
【００７３】
好ましくは、上述の白金錯体は、シスプラチン（プラチノール  ＡＱ（登録商標））、カルボプラチン、ミリプラチン、オキサリプラチン（エロキサチン（登録商標））、ロバプラチンおよびこれらの化合物の１つ以上の混合物から選択される。
【００７４】
好ましくは、上述の放射性元素は、レニウム１８６（186Ｒｅ）、レニウム１８８（188Ｒｅ）、イットリウム９０（90Ｙ）、ルテチウム１７７（177Ｌｕ）、ホルミウム１６６（166Ｈｏ）、ヨウ素１２５（125Ｉ）、ヨウ素１３１（131Ｉ）、リン３２（32Ｐ）、ストロンチウム８９（89Ｓｒ）、サマリウム１５３（153Ｓｍ）、銅６７（67Ｃｕ）、スズ１１７ｍ（117mＳｎ）、ビスマス２１３（213Ｂｉ）、ビスマス２１２（212Ｂｉ）、アスタチン２１１（211Ａｔ）、ラジウム２２３（223Ｒａ）、インジウム１１１（111Ｉｎ）、ガリウム６７（67Ｇａ）、ガリウム６８（68Ｇａ）、準安定テクネチウム９９（９９ｍＴｃ）およびこれらの化合物の１つ以上の混合物から選択される。任意選択により直鎖状または大環状キレートと錯体化した形態である放射性元素は、好ましくは188Ｒｅ、90Ｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏ、131Ｉ、111Ｉｎ、67Ｇａ、68Ｇａおよび９９ｍＴｃから、またはさらにより好ましくは188Ｒｅ、90Ｙ、177Ｌｕ、166Ｈｏおよび131Ｉから選択される。好ましくは、上述のこれらの放射性元素の錯体のキレートは、直鎖状キレートおよび大環状キレート、例えばＤＯＴＡ、ＰＣＴＡ、ＤＴＰＡ、ＮＯＴＡなど、およびその誘導体から、より好ましくは大環状キレート、例えばＤＯＴＡ、ＰＣＴＡ、ＮＯＴＡなど、およびその誘導体から選択される。イットリウム９０（90Ｙ）およびイットリウム９０の錯体および上記で定められるような大環状キレートの錯体は、それらの個々のカテゴリーにおける好ましい化合物である。
【００７５】
好ましくは、上述の核酸配列は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）配列から選択され、より好ましくは、遺伝子治療ベクター、例えばアデノウイルス（ＤＮＡウイルス）ベクター、レトロウイルス（ＲＮＡウイルス）ベクター、アデノ随伴ウイルスまたはＡＡＶ由来のベクターおよび他のウイルス由来のベクター（単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ポックスウイルス、インフルエンザウイルスなど）から選択されるウイルスベクターおよび非ウイルスベクター、例えばポリカチオンまたはナノ粒子（特にヒドロキシアパタイトまたは修飾ヒドロキシアパタイト（ポリ−Ｌ−リジン（ＰＬＬ）−修飾ヒドロキシアパタイトなど））によりベクター化されたＤＮＡまたはＲＮＡ配列および干渉ＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡに対するｓｉＲＮＡ）または２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）配列から選択される。
【００７６】
核酸配列は、好ましくはｐ５３タンパク質をコードする、Ｒｂタンパク質をコードする（特にＲｂ１遺伝子）またはインターロイキン１２（ＩＬ−１２）をコードする遺伝子をコードする遺伝子、またはそれらの個々の転写産物（すなわちＲＮＡの形態）の、ネイティブもしくは修飾配列またはネイティブもしくは修飾配列の一部から選択される。
【００７７】
これらの抗癌剤の市販の形態は通常、凍結乾燥形態または微粉化形態（すなわち粉末形態）である。抗癌剤のこれらの凍結乾燥物または粉末は、製薬分野で従来から使用される賦形剤：ラクトース（溶解および凍結乾燥剤）、メチルパラ−ヒドロキシベンゾエート（抗酸化剤）および／または塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含有し得る。
【００７８】
本発明の記載の目的のために、「鉄化合物に基づく粒子」という用語は、一般に鉄（ＩＩＩ）を含む、一般に酸化鉄または水酸化鉄の、鉄化合物を含むかまたはこれからなる粒子を意味するものとする。酸化鉄の超小型分子またはＵＳＰＩＯという用語が使用されることが多い。
【００７９】
一般的規則のように、磁気粒子は全体的にまたは部分的に、水酸化鉄；酸化鉄水和物；フェライト；混合酸化鉄、例えばコバルト、ニッケル、マンガン、ベリリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム、ストロンチウム、銅、亜鉛もしくは白金の混合酸化鉄など；またはそれらの混合物から構成される。
【００８０】
ある特に好ましい変形物によれば、磁気粒子は超常磁性である。
【００８１】
適切なコーティングで被覆する前の磁気粒子は、好ましくは５〜２００ｎｍの結晶径を有し、さらにより好ましくは１０〜６０ｎｍまたは１０〜２０ｎｍである。
【００８２】
ある有利な実施形態において、鉄化合物に基づく磁気粒子は、親水性化合物、好ましくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）型のもの、より好ましくはモル質量が１５００〜３０００に含まれるＰＥＧで被覆される。
【００８３】
別の有利な実施形態において、鉄化合物に基づく磁気粒子は、不飽和、好ましくは単不飽和の脂肪酸で、さらにより好ましくはオレイン酸（Ｃ１８：１  ｎ−９）で被覆される。このように脂溶性にされた磁気粒子を連続脂質相中で懸濁する。
【００８４】
本願の目的のために、「フェライト」という用語は、一般式［ｘ  Ｆｅ2Ｏ3，ｙ  ＭＯz］（式中、Ｍは、磁場の影響下で磁化され得る金属、例えばＦｅ、Ｃｏ、Ｒｕ、ＭｇまたはＭｎなどを示し、磁化可能な金属は任意選択により放射性である可能性がある）の酸化鉄を示す。
【００８５】
好ましくは、本発明の組成物の磁気粒子は、フェライト、特にマグヘマイト（γＦｅ2Ｏ3）またはマグネタイト（Ｆｅ3Ｏ4）または他の、コバルトの混合フェライト（Ｆｅ2ＣｏＯ4）またはマンガンの混合フェライト（Ｆｅ2ＭｎＯ4）を含む。この関連において、フェライトから完全にまたは部分的に構成される、好ましくは基本的に（すなわち９０％超、好ましくは９５％超、さらにより好ましくは９８重量％超）マグヘマイトまたはマグネタイトまたはそれらの混合物から構成される磁気粒子が特に最も好ましい。
【００８６】
好ましくは、上述の放射性ミクロスフェアは、イットリウム９０（ＳＩＲＴｅＸ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｌｔｄ社により販売されるＳＩＲ−スフィア（登録商標））で標識された陽イオン交換樹脂（例えばポリビニルアルコールを含むもの、またはスチレンおよびジビニルベンゼンを含むコポリマーを含むもの、例えばＢｉｏｒａｄ社からのＡｍｉｎｅｘ  ５０Ｗ−Ｘ４）からなるか、またはイットリウム９０が組み込まれているガラス（ＢＴＧ社により販売されるセラスフィア（登録商標））からなるか、またはポリ乳酸（ＰＬＬＡ）などのポリマーから、および上述の放射性元素のうち１つからなり、ホルミウム（１６６Ｈｏ）が好ましい放射性元素である。より好ましくは、これは、ガラスからなるミクロスフェアに組み込まれる89Ｙ2Ｏ3の形態のイットリウムであり、次に非放射性イットリウム89Ｙを放射性イットリウム90Ｙに変換することによってそれを放射性にするために、このミクロスフェアに中性子を照射する。さらにより好ましくは、陽イオン交換樹脂からなるかまたはガラスからなるミクロスフェアはそれぞれ、２０〜６０μｍおよび２０〜３０μｍの直径を有する。ＳＩＲ−スフィア型のミクロスフェアは、特に欧州特許第０７４０５８１Ｂ１号明細書の対象であった。
【００８７】
好ましくは、上述の化合物のうち１つが負荷されたミクロスフェアに、アントラサイクリン、例えばドキソルビシン、エピルビシンまたはイダルビシンなど、または１型トポイソメラーゼ阻害剤、例えばイリノテカンなど、または白金錯体、例えばシスプラチンなどを負荷する。これらのミクロスフェアは、好ましくはポリビニルアルコール（ＰＶＡ）から作製される。好ましくは、これらはＰＶＡのヒドロゲルからなり、より好ましくは、正に荷電した場合に上述の化合物が連結するスルホネートＳＯ3-基で修飾されたＰＶＡのポリマーからなるか（Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ社により販売される、ＤＣ  Ｂｅａｄｓ（登録商標）、ＤＣ−ビーズＭ１（登録商標）およびＬＣ−ビーズ（登録商標））またはこれらは、一緒に組み合わせられた際に、それらが正に荷電した場合に上述の化合物が単純なイオン結合により連結する、カルボキシレートＣＯＯ−基で修飾されたＰＶＡ／アクリルコポリマー（ポリ（アクリル酸ナトリウム−コ−ビニルアルコール）のコポリマー）を形成する、酢酸ビニルおよびメチルアクリレートなどのモノマーから作製される（Ｍｅｒｉｔ  Ｍｅｄｉｃａｌにより販売されるヘパスフィア（登録商標）またはクアドラスフィア（Ｑｕａｄｒａｓｐｈｅｒｅ）（登録商標））。これらのミクロスフェアはまた、ポリホスファゼンポリマーからなり、次いでドキソルビン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｎ）、エピルビシン、イダルビシンまたはイリノテカンを負荷し得る（Ｃｅｌｏｎｏｖａ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社により販売されるエンボゼン・タンデム（Ｅｍｂｏｚｅｎｅ  Ｔａｎｄｅｍ）（登録商標）ミクロスフェア）。これらはまた、グリセロールエーテル基で架橋され、置換される加水分解ジャガイモ粉から得られるポリマーからなり得、次いでドキソルビシン、アクチノマイシンＤ、タウロムスチン、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシンＣ、ホテムスチン、カルムスチン、イリノテカン、５−ＦＵ、フロクスウリジンまたはドセタキセルを、125Ｉ−標識される抗ＣＥＡ（癌胎児性抗原）抗体を、または９９ｍＴｃ−ＤＴＰＡ錯体（Ｐｈａｒｍａｃｅｐｔにより販売されるエンボセプト（Ｅｍｂｏｃｅｐｔ）（登録商標）Ｓミクロスフェア）を負荷する。
【００８８】
界面活性剤
「界面活性剤」という用語は、それに水／油型の境界に対する特定の親和性を付与し、それによってこれらの境界の自由エネルギーを低下させ、分散系を安定化させることができるようになる、両親媒性構造を有する組成物を指すことが想起される。
【００８９】
本発明による組成物は、上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）の少なくとも１つの界面活性剤を含む。したがって、これは、式（Ｉ）もしくは（Ｉ’）の界面活性剤または式（Ｉ）もしくは（Ｉ’）の界面活性剤の混合物を含み得る。
【００９０】
界面活性剤は、上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）を有し、好ましくは式中、ｓは０または１であり、ｍは２〜１０の整数を表し、Ｒ1は上記で定められるような式（ＩＩ）の基を表し、ここでｎは５〜７の整数を表し、ｏは１〜３の整数を表し、ｐは３〜５の整数を表し、ｑは２〜５の整数を表し、ｒは０または１である。さらにより好ましくは、上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）において、ｓは１であり、ｍは２〜５の整数を表し、ｎは７であり、ｏは１であり、ｐは５であり、ｑは２〜４の整数を表し、ｒはＲ1により表される式（ＩＩ）において１である。
【００９１】
ＨＬＢ（親水性−脂溶性バランスを意味する）は、当業者にとって周知の界面活性剤の特性の大きさである。好ましくは、本発明による界面活性剤は、低ＨＬＢの界面活性剤、すなわちＨＬＢ値が１〜８に含まれる、好ましくは１〜６に含まれる界面活性剤である。ＨＬＢによって、Ｗ．Ｃ．Ｇｒｉｆｆｉｎ（“Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｅ−ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｂｙ  “ＨＬＢ” ”，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ，１９４９，３１１−３２６）による論文で説明されるように、水中油または油中水エマルションのタイプを決定することが可能になる。この論文は、特にＨＬＢが４〜６の界面活性剤に対して、Ｗ／Ｏ型のエマルションが観察され、一方でＨＬＢが８〜１８である界面活性剤の場合、Ｏ／Ｗ型のエマルションが代わりに観察されることを示す。
【００９２】
有利に、式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤は、ヨード化油中で、特に上記で示される割合の範囲で可溶性である。
【００９３】
有利に、本発明による式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤は、ポリグリセリルポリリシノレエートおよびＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレートから選択される。
【００９４】
ポリグリセリルポリリシノレエートまたはＰＧＰＲ（パルスガード（Ｐａｌｓｇａａｒｄ）（登録商標）４１２５、パルスガード（Ｐａｌｓｇａａｒｄ）（登録商標）４１５０、パルスガード（Ｐａｌｓｇａａｒｄ）（登録商標）４１１０、パルスガード（Ｐａｌｓｇａａｒｄ）（登録商標）４１２０またはパルスガード（Ｐａｌｓｇａａｒｄ）（登録商標）４１７５）は、親水性基としてポリグリセロール（好ましくは少なくとも７５％のジ−およびトリグリセロールおよび最大で１０％のヘプタグリセロールからなる）を有し、疎水性基としてエステル交換されたリシノール脂肪酸を有する界面活性剤である。このＨＬＢは１．５である。
【００９５】
これは、上記で定められるような式Ｉの界面活性剤（式中、
−ｓは１であり、
−ｍは２〜５の整数を表し、
−Ｒ1は上記で定められるような式（ＩＩ）の基を表し、ここで、ｎは７であり、ｏは１であり、ｐは５であり、ｑは２〜４であり、ｒは１であり、
−Ｒ2は、Ｒ1および／または水素原子を表す）
に対応する。
【００９６】
好ましくは、式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤は、式（Ｉ）または（Ｉ’）（式中、
−ｓは１であり、
−ｍは２、３、４または５であり、
−Ｒ1は上記で定められるような式（ＩＩ）の基を表し、ここで、ｎは７であり、ｏは１であり、ｐは５であり、ｑは２、３または４であり、ｒは１であり、
−Ｒ2は、Ｒ1および／または水素原子を表す）
の界面活性剤の混合物である。
【００９７】
好ましくは、本発明による式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤は、式：
【００９８】
【化５】
2017505326.tif 000011
【００９９】
および
【０１００】
【化６】
2017505326.tif 000012
【０１０１】
の化合物から選択される界面活性剤の混合物である。
【０１０２】
５〜６のＨＬＢとしてのＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレート（Ｃｒｏｄａ社により販売されているシスロール（登録商標）ＤＰＨＳおよび前のアルラセル（登録商標）Ｐ１３５）。ＰＥＧという名称は、ＩＮＣＩにより定められる命名法の協定に従う。上記で指定される値３０は、エチレンオキシドモノマー単位の平均数に対応する。
【０１０３】
これは、上記で定められるような式１：（式中、
−ｓは０であり、
−ｍは３０であり、
−Ｒ1は上記で定められるような式（ＩＩ）の基を表し、ここで、ｎは９であり、ｏは１であり、ｐは５であり、ｑは７であり、ｒは０であり、
−Ｒ2はＲ1と同一である）の界面活性剤に対応する。
【０１０４】
本発明による組成物の使用
第二の主題によれば、本発明は、抗癌剤をベクター化するための、上記で定められるような組成物の使用に関する。本発明はまた、好ましくは一時的化学的塞栓による、癌またはその転移の処置におけるその使用のための、上記で定められるようなエマルション形態の組成物にも関する。ある有利な実施形態において、本発明は、好ましくは肝動脈化学塞栓術による、癌またはその転移を処置するための薬剤を調製するための、本発明による組成物の使用に関する。肝動脈化学塞栓術は、抗癌剤と組み合わせて血管を遮断するための、治療的有効量のこの物質を腫瘍に送達するための、物質の経動脈的な経皮導入として定義される。好ましくは、このようにして処置される癌は、肝臓癌（特に原発性肝臓癌、例えば肝細胞癌またはＨＣＣなど）、胆管癌、結直腸癌、神経内分泌腫瘍、乳癌、腎臓癌および悪性黒色腫から選択される原発性癌の肝臓転移から選択される。
【０１０５】
肝臓腫瘍の化学塞栓術は、好ましくは次の連続的段階を実行することにより行われる：
ａ）大腿動脈からの経皮的カテーテル挿入、
ｂ）二次または三次分岐部で血行停止が観察されるまで本発明によるエマルションを投与、
ｃ）任意選択により、エマルションが投与された後の腫瘍における塞栓剤の投与。
【０１０６】
好ましくは、このようにして投与される本発明によるエマルションは、２０ｍＬを超えないヨード化油、より好ましくは１５ｍＬを超えないヨード化油を含む。
【０１０７】
カテーテルと呼ばれるチューブを肝動脈に持ち込み、次いで癌病変を灌流するこの動脈の分岐部に持ち込むことからなるカテーテル挿入は、イメージング技術を用いて有利に行われる。それらのカテーテルをできる限り最適に留置することを可能にするために、インターベンショナル・ラジオロジストに対してガイダンスソフトウェアがさらに提供される。
【０１０８】
「塞栓剤」という用語は、血管において血流を永久にまたは一時的に緩徐にするかまたは停止させることを可能とする１つ以上の化合物を意味するものとする。「塞栓剤」の例としては、ゼラチンスポンジ、ゼラチンフォーム粒子（ゼルフォーム（登録商標）、スポンゼル（登録商標）、キュラスポン（登録商標））、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）または例えばトリスアクリルゼラチンに、ＰＶＡ（イバロン（登録商標）、コンツアー（Ｃｏｎｔｏｕｒ）（登録商標））などに基づく調整されたミクロスフェアが挙げられ得る。
【０１０９】
有利に、化学塞栓術の手順前に、内臓血管新生および腫瘍の動脈灌流を特定するために、アンギオスキャンまたはＭＲアンギオ（磁気共鳴血管造影またはＭＲＡ）および通常は造影剤（例えばアンギオスキャン用：水溶性ヨウ素化造影剤、例えばイオビトリドール（ゼネティクス（登録商標））またはイオヘキソール（オムニパーク（登録商標））など、およびＭＲアンギオ用：ガドリニウムキレート、例えばガドテル酸（ドタレム（登録商標））またはガドブトロール（ガドビスト（登録商標）））の注射を用いて行われる、血管造影または動脈造影を行う。
【０１１０】
この化学塞栓技術は、単独で、または下記で言及する１つ以上の他の技術と組み合わせて使用され得る。これは、これらの他の技術のうち１つと入れ替えることもできる。
【０１１１】
抗癌剤が放射性元素または放射性元素と上述の大環状キレートとの錯体から選択される場合、使用される技術は、選択的内用療法または放射線塞栓療法である。これは、腫瘍を灌流する肝動脈の分岐部に本発明による組成物を直接注射することにある。この技術には、腫瘍にかなりの量の照射を送達させるが、健常肝臓および患者の他の臓器はそれほど照射されないという長所がある。
【０１１２】
抗癌剤が鉄化合物に基づく磁気粒子（ＵＳＰＩＯ）から選択される場合、使用される技術は、磁気温熱アブレーション（ｍａｇｎｅｔｉｃ  ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ  ａｂｌａｔｉｏｎ）である。これは、腫瘍組織のレベルでの局所的な温度上昇を誘導することにあり、腫瘍細胞は健常細胞よりも温度上昇に感受性が高い。この温度上昇は、外部刺激および特にそれが処置することが所望される領域に対する交番磁界の適用を使用することにより生じる。到達温度によって２つのタイプの温熱療法に分類され：４６℃を上回る温度の場合、組織壊死を誘導することが可能であり、サーモアブレーション（ｔｈｅｒｍｏａｂｌａｔｉｏｎ）という用語が使用され；４２℃〜４６℃の温度は、多くの構造および酵素性タンパク質の機能を変化させ、細胞発生および分化を変化させ、アポトーシスを誘導する可能性があり、中度温熱療法という用語が使用される。細胞が死滅しない場合、これらは、電離放射線または化学療法に対してより感受性になる。
【０１１３】
抗癌剤が、上述のようなウイルスベクターまたは非ウイルスベクターによりベクター化されたデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）または干渉ＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡに対してｓｉＲＮＡ）または２本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）配列から選択される核酸配列である場合、使用される技術は遺伝子治療であり、これは時にゲノセラピー（ｇｅｎｏｔｈｅｒａｐｙ）とも呼ばれる。このアプローチの原理は、発現産物が腫瘍細胞の死滅を（直接または間接的に）誘導する外来遺伝子を導入することである。概略的に、３種類のアプローチを使用することができる：ａ）腫瘍細胞膜抗原を修飾することによる免疫防御の誘導（「免疫刺激」）；ｂ）腫瘍「抑制因子」遺伝子の腫瘍細胞ゲノムへの移入または最後にｃ）非活性抗癌剤プロドラッグを腫瘍細胞に対して毒性がある分子に変換することを可能にする「自殺」遺伝子の移入。
【０１１４】
全てのこれらの様々な技術は当業者にとって公知である。後者は、本発明による組成物を用いてこれらの技術を遂行するために調整しようとするパラメーターをどのように容易に選択するか分かるであろう。
【０１１５】
別段の断りがない限り、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、個人の快適性、健全性および生存を向上させることを目的とした何らかの行動を意味するものとし、したがってこの用語は、軽減、縮小、緩和および治癒の両方を包含する。
【０１１６】
本発明によるエマルション形態の組成物の調製
エマルション形態の組成物は好ましくは即時調製される。
【０１１７】
本発明はまた、次の段階：
ａ）ヨード化油中で上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤を混合し、
ｂ）抗癌剤を含む水溶液と段階ａ）で得られた溶液を混合することを
含む、上記で定められるようなエマルション形態の組成物を調製するための方法にも関する。
【０１１８】
段階ａ）で得られる溶液と混合される水溶液はまた、上記で定められるような濃縮剤も含み得る。
【０１１９】
段階ａ）で調製される脂質相はまた、上記で定められるような非ヨード化油も含み得る。
【０１２０】
段階ｂ）で行われる混合は、当業者にとって公知の何らかの手段によって行われ得る。好ましくは３方活栓を使用する。界面活性剤を含むヨード化油は、３方活栓に連結される第一のシリンジ中に入れる。抗癌剤を含む水溶液は、この三方活栓に９０°でまた連結される第二のシリンジに入れる。
【０１２１】
この２相の混合は、２本のシリンジのプランジャーを交互に押すことによって行う（好ましくは２０〜３５回）。好ましくは、１〜２秒ごとに、混合物全てを一方のシリンジに通し、次いで他方に通す。活栓の第三のチャンネルによって、エマルションの投与のために、腫瘍病変の範囲まで、蛍光透視鏡の調節下で、選択的に前進させられるカテーテルを連結できるようになる。
【０１２２】
好ましくは、本発明による組成物の調製は、１０〜４０℃、より好ましくは２０〜３０℃の温度で行われる。
【０１２３】
本発明による組成物に対するマーケティング形態
本発明はまた、癌を処置するためのその使用のための、同時に、個別に使用する、または経時的に広げるための併用生成物としての、
−上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤と、
−ヨード化油と、
−抗癌剤と、
を含むキットにも関する。
【０１２４】
界面活性剤、ヨード化油および抗癌剤（一般に水溶液中で溶解）は、３個の異なる容器中にある。一般に［界面活性剤／ヨード化油／水溶液中の抗癌剤］の混合の結果、本発明によるエマルションの形態の組成物が得られる。
【０１２５】
さらに、本発明は、癌を処置するためのそれらの使用のための、同時に、個別に使用するための、または経時的に広げるための併用生成物としての、
−上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤およびヨード化油を含む組成物と、
−抗癌剤と、
を含むキットに関する。
【０１２６】
本組成物および抗癌剤（好ましくは凍結乾燥形態で提供）は２個の異なる容器中にある。好ましくは、抗癌剤を水溶液中で即時的にまたはこの手順の前日に溶解させる。好ましくは、本組成物は、式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤、ヨード化油および任意選択により非ヨード化油の混合物からなる。一般に、水溶液中での本組成物および抗癌剤の混合の結果、本発明によるエマルションの形態の組成物が得られる。
【０１２７】
本発明はまた、抗癌剤をベクター化するための併用生成物としての、
−上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤と、
−ヨード化油と、
を含むキットの使用にも関する。界面活性剤およびヨード化油は２個の異なる容器中にある。
【０１２８】
本発明はまた、抗癌剤をベクター化するための生成物としての、
−ヨード化油中で溶解される上記で定められるような式（Ｉ）または（Ｉ’）の界面活性剤
を含む組成物の使用にも関する。界面活性剤を同じ容器中でヨード化油中で溶解させる。
【０１２９】
「容器」という用語は、生成物を含有し得る何らかの薬学的に許容可能な入れ物を示すものとする。例としては、アンプル、瓶またはプレフィルドシリンジが挙げられ得る。
【０１３０】
「薬学的に許容可能な入れ物」という用語は、生成物と相互作用しない何らかの入れ物、好ましくはヨード化油中に化合物を放出せず、ヨード化油を分解しない何らかの入れ物を示すものとする。
【０１３１】
本明細書中で以後出現する実施例は、本発明の非限定の例示により与えられる。
【実施例】
【０１３２】
実施例１
１．本発明によるエマルションの形態の組成物の調製：
１．１．リピオドール（登録商標）およびアントラサイクリンのエマルション
２．５ｍＬのゼネティクス（登録商標）２５０（ヨウ素２５０ｍｇ／ｍＬ）中で５０ｍｇのドキソルビシン（アドリブラスチナ（登録商標））を再構成した。良好に溶解させるために３０秒間手動で撹拌した後、得られた溶液を２０ｍＬルアーロックシリンジで取り出した。次いでこのシリンジを三法活栓に取り付けた。
【０１３３】
手動での撹拌により、ＰＧＰＲ（総計１％ｗ／ｖ、１００ｍｇ−Ｉｎｔｅｒｃｈｉｍ）を７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）中で溶解させた。
【０１３４】
得られた油を２０ｍＬルアーロックシリンジで取り出し、これも９０℃で三法活栓に取り付けた。水を油へより開始して、中程度の力で３４回通過、すなわち１７回前後に往復させた。
【０１３５】
これらのエマルションに対して、水相のおよび選択される脂質相の体積をそれぞれ２．５ｍＬ（すなわち２５％ｖ／ｖ）および７．５ｍＬ（すなわち７５％ｖ／ｖ）にした。水相／脂質相比率は１／３であった。
【０１３６】
他のエマルションは、
−抗癌剤としてのドキソルビシンをイダルビシン（ザベドス（登録商標））、マイトマイシンＣ（Ｋｙｏｗａ）またはエピルビシン（ファルモルビシン（登録商標））に交換することによって、および／または
−濃縮剤を全く導入しないことによって、または
−濃縮剤ゼネティクス（登録商標）２５０をゼネティクス（登録商標）３００（ヨウ素３００ｍｇ／ｍＬ）、イオパミロン（登録商標）３５０、イオパミロン（登録商標）３００、イオメロン（登録商標）３００、ウルトラビスト（登録商標）３００またはオムニパーク（登録商標）２４０に交換することによって、または
−界面活性剤ＰＧＰＲをシスロール（商標）ＤＰＨＳ（ＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレート）に交換することによって、または
−界面活性剤の割合を変化させることによって、調製した。
【０１３７】
シスロール（商標）ＤＰＨＳに対して、超音波（Ｖｉａｌツイーター、３ｘ４５ｓ）を用いることによって溶解を得た。
【０１３８】
エマルションの方向性の確認：
エマルションを調製したら、単純な視覚的検査によってその方向性を確認した。２本の瓶を用意し：１本には水相（必要に応じてゼネティクス（登録商標）２５０またはゼネティクス（登録商標）３００）を、他方にはヨード化油（リピオドール（登録商標））を入れた。
【０１３９】
新鮮調製エマルション滴を２本の瓶それぞれに添加した。リピオドール（登録商標）の瓶中で液滴が分散し、ゼネティクス（登録商標）の瓶中では分散せず；したがってエマルションは実際にＷ／Ｏ（油中水）エマルションであった。
【０１４０】
赤色のドキソルビシン小滴は、油の黄色の背景において明らかに可視的であった。光学顕微鏡を用いて水相小滴のサイズを評価した。
【０１４１】
調製した主要なエマルションを次の表に記載する。
【０１４２】
【表５】
2017505326.tif 000013
【０１４３】
式（Ｉ）の界面活性剤および様々な抗癌剤を使用して調製したこれらの様々なエマルションは全て、予想通りの安定性を明らかにした。
【０１４４】
１．２．リピオドール（登録商標）および放射性元素のエマルション
１．２．１．リピオドール（登録商標）および90ＹＣｌ3のエマルション
得られる溶液のｐＨを患者での使用と同等（６＜ｐＨ＜９）にするために、酸性溶液の形態のイットリウム９０の放射性溶液（亜塩素酸イットリウム（ｙｔｔｒｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｔｅ）、０．０５Ｍ  Ｈｌ）に緩衝液（トリス）を添加した。最終体積が１０ｍＬを超えないような体積の生理的食塩水中で、得られる溶液を希釈することができる。上記の技術に従い、１％（ｗ／ｖ）ＰＧＰＲを７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）中で溶解した。次いで、７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）および１％のＰＧＰＲからなる脂質相を水相に添加し、このようにして得られる懸濁液の吸引および再懸濁により撹拌することによって、エマルションを調製した。
【０１４５】
１．２．２．ＤＯＴＡと錯体化されるリピオドール（登録商標）および90ＹＣｌ3のエマルション
ｐＨ６〜７の緩衝液中のＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’−テトラ酢酸）の溶液に放射性溶液を添加し、媒質を８０℃で３０分間加熱した。最終体積が１０ｍＬを超えないような体積の生理的食塩水をこの溶液に添加した。上記の技術に従い、７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）中で１％（ｗ／ｖ）のＰＧＰＲを溶解させた。次いで７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）および１％ＰＧＰＲからなる脂質相を水相に添加し、このようにして得た懸濁液を激しく撹拌することによってエマルションを調製した。
【０１４６】
１．３．リピオドール（登録商標）および鉄に基づく磁気粒子のエマルション
１．３．１．リピオドール（登録商標）、鉄に基づく磁気粒子およびアントラサイクリンのエマルション
オレイン酸で被覆された鉄化合物に基づく磁気ナノ粒子（先行技術から知られる技術に従い合成）を６０℃にて２４時間、６０ｇのリピオドール（登録商標）中で完全に溶解した。肉眼で見える凝集体がないことを指摘することによって、前記の磁気ナノ粒子の全体的な溶解を視覚的に評価した。周囲温度に戻った後、溶液を保管するかまたはエマルションを生成させるために使用した。
【０１４７】
アドリブラスチナ（登録商標）の５０ｍｇ瓶を２．５ｍＬのゼネティクス（登録商標）２５０で再構成した。良好な溶解のために３０秒間、手動で撹拌を行った。得られた溶液を２０ｍＬルアーロックシリンジで取り出し、これを三方活栓に取り付けた。
【０１４８】
磁気粒子を含む７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）中でＰＧＰＲ（全部で１％ｗ／ｖ、１００ｍｇ）を分散させた。
【０１４９】
得られた油を２０ｍＬルアーロックシリンジで取り出し、これも三方活栓に取り付けた。水を油へより開始して、中程度の力で３０回通過、すなわち１５回前後に往復させた。
【０１５０】
１．３．２．リピオドール（登録商標）および鉄に基づく磁気粒子のエマルション
０．５Ｍ鉄濃度を得るために、ＰＥＧ２０００にカップリングされた式：
【０１５１】
【化７】
2017505326.tif 000014
【０１５２】
のｇｅｍ−ビスホスホネートの層で被覆した、鉄化合物に基づく磁気ナノ粒子（先行技術から知られる技術に従い合成：特に国際公開第２００４／０５８２７５号パンフレットを参照）を６０℃にて２４時間、１０ｇの生理的食塩水中で完全に溶解させた。肉眼で見える凝集体がないことを指摘することによって、前記の磁気ナノ粒子の全体的な溶解を視覚的に評価した。周囲温度に戻った後、溶液を保管するかまたはエマルションを生成させるために使用した。
【０１５３】
得られた２．５ｍＬの溶液を２０ｍＬルアーロックシリンジで取り出し、これを三方活栓に取り付けた。ＰＧＰＲ（総量１％ｗ／ｖ、１００ｍｇ）を７．５ｍＬのリピオドール（登録商標）中で分散させた。得られた油を２０ｍＬルアーロックシリンジで取り出し、これも９０°で三方活栓に取り付けた。水を油へより開始して、中程度の力で３０回通過、すなわち１５回前後に往復させた。
【０１５４】
２．本発明によらないエマルションとの比較
本発明によらないＰＧＰＲまたは低もしくは高ＨＬＢを有する界面活性剤、例えばスパン（登録商標）ファミリー（ソルビタンの脂肪酸エステル）の界面活性剤、クレモフォア（登録商標）ファミリー（グリセロールポリエチレングリコールリシンオレエート）の高ＨＬＢを有する界面活性剤、ツイーン（登録商標）ファミリー（ソルビタンのポリオキシエチレン脂肪酸エステル）またはプルロニック（登録商標）ファミリー（エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドに基づくブロックコポリマー、ＢＡＳＦにより販売）および低ＨＬＢを有するシスロール（登録商標）ＰＧ３２ＩＳ界面活性剤（ＨＬＢ＝６．７）の濃度の何れかを用いて、段落１．１で指定したものと同じプロトコールまたは僅かに異なるプロトコール（段落１．１のプロトコールと比較した相違は、下記表で示され：水相および脂質相の個々の体積は、それらの比率に基づいて計算される）によるエマルションを調製した。
【０１５５】
ＰＶＰ（ポリビニルピロリドン）、グリセロールまたは他のデキストランＴ４０（Ｓｉｇｍａ）など、非イオン性ヨード化造影剤以外の濃縮剤を試験したが、使用できる最大量によって、リピオドール（登録商標）などのヨード化油の密度に近付けることは可能にならない。イオキサグル酸（ヘキサブリックス（登録商標））によって、ドキソルビシンなどの抗癌剤を容易に溶解させることが可能にならず、組成物の浸透圧が大きく上昇する。
【０１５６】
調製した主要なエマルションを次の表に記載する。
【０１５７】
【表６】
2017505326.tif 000015
【０１５８】
【表７】
2017505326.tif 000016
【０１５９】
【表８】
2017505326.tif 000017
【０１６０】
【表９】
2017505326.tif 000018
【０１６１】
【表１０】
2017505326.tif 000019
【０１６２】
スパン（登録商標）８０（Ｃｒｏｄａ）はソルビタンモノオレエートである。ポリソルベート８０とも呼ばれるツイーン（登録商標）８０（Ｃｒｏｄａ）はＰＥＧ−２０ソルビタンモノオレエートである。クレモフォア（登録商標）ＥＬ（ＢＡＳＦ）は、化学名としてポリオキシル３５ヒマシ油を有する。シスロール（登録商標）ＰＧ３２ＩＳはポリグリセリル−３−ジイソステアレートである。したがって、これは、式（Ｉ）の界面活性剤のような分岐状ではない。
【０１６３】
スパン（登録商標）８０（ＨＬＢ＝４．３）以外のスパン（登録商標）を試験した：スパン（登録商標）２０（ＨＬＢ＝８．６）、スパン（登録商標）６５（ＨＬＢ＝２．１）、スパン（登録商標）８３（ＨＬＢ＝３．７）およびスパン（登録商標）８５（ＨＬＢ＝１．８）。これらの界面活性剤を用いて調製したエマルションは全て、それらが調製された後、すぐに相分離が起こった。プルロニック（登録商標）化合物（ＢＡＳＦ）を用いて行った試験も、これらの化合物を用いてエマルションを調製することが可能でなかったので、決定的ではなかった。
【０１６４】
したがって、得られた比較用エマルションは全て、安定性が不十分であったか、または本発明によらない方向性であったかの何れかであった。
【０１６５】
３．本発明によるエマルションのインビボ評価および本発明によらないエマルションとの比較
３．１．動物モデル：Ｎ１−Ｓ１細胞の投与により誘導された癌があるラット
３．１．１．材料および方法
前もって麻酔した雌スプラグー−ドーリーラット（供給元ＤｅｐｒｅまたはＪａｎｖｉｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ）において、Ｇａｒｉｎら（Ｌａｂ  Ａｎｉｍ．２００５  Ｊｕｌ；３９（３）：３１４−２０）に記載の腫瘍誘導方法を使用した。
【０１６６】
１００μＬのＩＭＤＭ培地（イスコフ改変ダルベッコ培地）中で懸濁した６ｘ１０6個のＮ１−Ｓ１ラット肝細胞癌瘍細胞（参照番号ＣＲＬ−１６０４（商標）のもとＡＴＣＣに預託、ノビコフ細胞とも呼ばれる）をおよそ５０秒間かけてゆっくりと注射することによって、雌ラットの左側葉の肝臓被膜下に投与した。
【０１６７】
情報として、Ｎ１−Ｓ１腫瘍細胞株は、雄スプラグードーリーラットでの４−ジメチルアミノアゾベンゼンの経口投与によって誘導された肝細胞腫から最初に得た。
【０１６８】
各４匹の動物で８群を形成した。
【０１６９】
被験生成物（１群あたり１つの生成物）：
【０１７０】
【表１１】
2017505326.tif 000020
【０１７１】
水相と脂質相との比率は１／３（２５μＬの水相および７５μＬのリピオドール（登録商標））であった。４種類の被験エマルション組成物は逆（Ｗ／Ｏ）エマルションであった。
【０１７２】
【表１２】
2017505326.tif 000021
【０１７３】
「対照」生成物
４匹のラットの群の１つにおいて、ドキソルビシン単独（０．９％ＮａＣｌ）または、必要に応じてエピルビシン単独を対照として注射した。
【０１７４】
生成物の投与：
これらの方法は当業者にとって周知であり、したがって、必要であることが明らかであるある一定のパラメーターをどのようにして調整すべきかを知っている。
【０１７５】
ＴＡＣＥ手順の前日（Ｄ−１）に、腫瘍成長を確認するために、ＭＲＩ（Ｂｒｕｋｅｒ、２．３５Ｔ）によって動物を撮像した。ＴＡＣＥ手順当日（Ｄ０）に、大きさ、次いで処置前に肝臓腫瘍の体積（画像処理ソフトウェアを使用）を測定するために再びラットの撮像を行った。
【０１７６】
腫瘍誘導法を行ってから７日後に、予め麻酔した動物に胃十二指腸動脈を介して生成物（体積：１００μＬ）を注射した。
【０１７７】
これらのエマルション中に含有される抗癌剤の注射後のそれらの血漿中動態の測定：
動脈内注射後、時間０、５、１０、２０、３０および４５分で、３００μＬの血液試料を頸動脈のカテーテル挿入後に採取した。次いで遠心後に１５０μＬの血漿を回収し、抗癌剤のアッセイを行うためにヘパリン処理した。抗癌剤の血漿中動態の試験をこのように行った。
【０１７８】
クロマトグラフに蛍光検出装置が備えられた高速液体クロマトグラフィー（またはＨＰＬＣ）によってヘパリン処理したラット血漿中で血漿ドキソルビシンアッセイを行った。４０％アセトニトリル入りの酸性液（酢酸アンモニウム、ｐＨ３．５）中での沈殿によって血漿試料を調製した。２００μＬのラット血漿（リチウムヘパリネート（ｌｉｔｈｉｕｍ  ｈｅｐａｒｉｎａｔｅ））を必要とした。Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ１８  ４．６ｘ１５０ｍｍ、３．５μｍカラム（Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ１８  ４．６ｘ１２．５ｍｍ、５μｍプレカラム付き）での逆相ＨＰＬＣおよび蛍光検出（励起波長４８０ｎｍ、放射波長５６０ｎｍ）によって１０μＬの抽出物を分析した。５ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ３．５／アセトニトリル勾配を用いて、３０分間にわたり分析を行った。較正曲線（ＤＯＸ較正範囲２μｇ／Ｌ〜１６００μｇ／Ｌ−ＤＯＸｏｌ較正範囲２μｇ／Ｌ〜４００μｇ／Ｌ）を介して試料をアッセイした。ＨＰＬＣピークの面積が定量の上限を超えた場合、範囲に含まれるドキソルビシンの面積を得るために、１０μＬではなく５μＬを注入した。時間Ｔ０、５分、１０分、２０分、３０分および４５分で盲検でアッセイを行った。
【０１７９】
腫瘍および健常肝臓の試料の組織学的評価：
１Ｌ／分のＯ2とともにイソフルランガス麻酔（５％）によって動物を安楽死させた。剖検を行い、ドキソルビシンおよびエピルビシンのアッセイを行うために、血液、血漿、腫瘍および健常肝臓試料を採取した。腫瘍の組織学的分析のために、採取した腫瘍および健常肝臓試料を凍結（未固定）した。
【０１８０】
検体試料が置かれたスライドの処理（切片、Ｈ＆Ｅのために固定など）後、腫瘍部分とその健常肝臓環境との間のより詳細な相違を得るために、Ｈ＆Ｅ（ヘマトキシリン−エオシン）染色を行った。ドキソルビシンの存在または非存在に特異的な蛍光の測定を行い、蛍光レベルを１（弱い蛍光）〜６（強い蛍光）のスケールで示した。この蛍光は検討中の組織に存在するドキソルビシンの量に比例する。これらの技術は全て当業者にとって周知である。
【０１８１】
３．１．２．得られた結果
３．１．２．１．抗癌剤の血漿中動態
図１のグラフ上の次の点が、時間の関数として平均濃度を表すということが可能であった：
ドキソルビシン濃度ピークは、８群の動物に対して５分である。最大ピーク（すなわち最大血漿濃度）はドキソルビシン単独（対照ドキソルビシン）の注射に対するものであり、平均は２４４７μｇ／Ｌである。これに続くのは、Ｅ２２生成物（エマルション方向性Ｏ／Ｗ−１／１比率、ゼネティクス（登録商標）２５０あり、界面活性剤なし）を投与された群であり、濃度ピークの平均は１２８７μｇ／Ｌであり、すなわち値は実際にはドキソルビシン単独注射に対して得られたものよりも２倍低く、次はＥ２３生成物（エマルション方向性Ｗ／Ｏ−１／３比率、界面活性剤も濃縮剤もなし）を投与された群、次に、Ｅ２１生成物（エマルション方向性Ｏ／Ｗ−１／１比率、界面活性剤も濃縮剤もなし）を投与された群である。試料採取時間１０分〜４５分の間で、ドキソルビシン単独ならびにＥ２１、Ｅ２２およびＥ２３生成物を投与された群は同じように低下し、Ｅ２１、Ｅ２２およびＥ２３生成物を投与された群に対してより低い値となった（４５分で、「対照ドキソルビシン単独」群＝１１２μｇ／Ｌ、「Ｅ２１」群＝１０６μｇ／Ｌ、「Ｅ２２」群＝６３μｇ／Ｌおよび「Ｅ２３」群＝１４３μｇ／Ｌ）。
【０１８２】
Ｅ１（エマルション方向性Ｗ／Ｏ−１／３、ゼネティクス（登録商標）２５０、界面活性剤としてのＰＧＰＲあり）、Ｅ２（エマルション方向性Ｗ／Ｏ、ＰＧＰＲあり、濃縮剤なし）、Ｅ４（エマルション方向性Ｗ／Ｏ、エピルビシン、ＰＧＰＲおよびゼネティクス（登録商標）２５０あり）およびＥ１１（エマルション方向性Ｗ／Ｏ、ドキソルビシン、シスロール（商標）ＤＰＨＳおよびゼネティクス（登録商標）２５０あり）生成物を投与された群の場合、ドキソルビシン単独またはＥ２１、Ｅ２２およびＥ２３生成物を投与された群の場合よりも、ドキソルビシン濃度がかなり低く、これは、全ての試料採取点において当てはまった。
【０１８３】
血漿中動態の分析から、本発明による組成物Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１１（図１）およびＥ４（図１で結果を示さない）の注射後、血漿ピークがないことが示される。
【０１８４】
【表１３】
2017505326.tif 000022
【０１８５】
したがって、本発明による安定なＷ／Ｏエマルションを投与された雌ラットに対して、ドキソルビシン単独のみを投与された動物と比較して血漿ドキソルビシンレベルが９４％を超えて低下することが観察される。
【０１８６】
本発明によらないＥ２１、Ｅ２２およびＥ２３エマルションを投与された雌ラットの場合、血漿ピークはその注射の５分後に観察される。
【０１８７】
【表１４】
2017505326.tif 000023
【０１８８】
したがって、本発明によらないエマルションを投与された雌ラットに対して、ドキソルビシン単独のみを投与された動物と比較して血漿ドキソルビシンレベルが最大で５９％低下することが観察される。
【０１８９】
式Ｉの界面活性剤（ＰＧＰＲまたはＰＥＧ−３０ジポリヒドロキシステアレート）を用いることによって改善されたＷ／Ｏエマルションの方向性およびその安定性によって、本発明による組成物の効果的な臨床使用を構想することが可能となる。
【０１９０】
３．１．２．２．腫瘍および健常肝臓試料の組織学的評価
スライドおよび特にＨ＆Ｅ染色の分析によって、Ｎ１Ｓ１細胞を移植された全ての動物において、健常組織に対して明確に境界が定められる、ＨＣＣタイプ（濃く密な線で連結される多角形細胞）の腫瘍の存在を明らかにすることが可能になる。
【０１９１】
Ｎｉｋｏｎ  Ｉｎｔｅｎｓｉｌｉｇｈｔ  Ｃ−ＨＧＦＩ  ｐｒｅｃｅｎｔｅｒｅｄファイバー照明系を備えたＮｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ８０ｉ  ＡＢＳ顕微鏡を用いて蛍光を測定した。Ｈａｍａｍａｔｓｕ  ＮＤＰ．ｖｉｅｗ  ２．５可視化ソフトウェアによって画像を見た。対照動物の切片上で組織の自己蛍光を決定した。この蛍光レベルを、エマルション組成物が投与された動物からの腫瘍および健常肝臓試料に対して観察される蛍光レベルから差し引く。
【０１９２】
決定された分類の順：Ｅ１（スコア６）、Ｅ２１（スコア１）、Ｅ２２（スコア３）およびＥ２３（スコア２）に（盲検で決定）、これらの切片上でのこの測定から、腫瘍のレベルでのドキソルビシンの量の相違が明らかになった。
【０１９３】
したがって、Ｅ１エマルションによって、本発明によらないエマルションがなすよりも大幅に腫瘍レベルで抗癌剤を維持することが可能となる。
【０１９４】
本発明によるエマルションの組成物から、これらの物質が腫瘍に残存し、血管区画に逸脱しなくなるので、それらの大きな抗癌剤ベクター化能力が明らかになる。
【０１９５】
３．２．動物モデル：ＶＸ２癌細胞の投与によって誘導された癌があるウサギ
３．２．１．材料および方法
前もって麻酔したＮｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄウサギ（ＮＺ；供給源Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｆｒａｎｃｅ）において、Ｈｏｎｇら（Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ２００６；１２（８）：２５６３−２５６７）により記載される腫瘍誘導方法を使用した。
【０１９６】
ウサギの左側葉の肝臓被膜下にＶＸ２腫瘍組織の断片を移植する（ＮＺウサギの肝臓１つあたり２５ｍｇの断片）。左肝葉に腫瘍があるこれらのウサギを以後「ＶＸ２ウサギ」と呼ぶ。
【０１９７】
各６匹の動物で３群を形成した。
【０１９８】
被験生成物（１群あたり１つの生成物）：
−Ｅ１（本発明によるエマルション）
−Ｅ２１（本発明によらないエマルション）
−「対照」生成物：６匹のウサギの群の１つにドキソルビシン単独（０．９％ＮａＣｌ）を対照として注射した。
【０１９９】
生成物の投与：
これらの方法は当業者にとって周知であり、したがって、必要であることが明らかであるある一定のパラメーターをどのようにして調整するべきかを知っている。
【０２００】
ＴＡＣＥ手順当日（Ｄ０）に、腫瘍成長を確認するために、および治療前（Ｄ０）の肝臓腫瘍の大きさ、次いで体積（画像処理ソフトウェアを使用）を測定するために、ＭＲＩ（Ｂｒｕｋｅｒ、２．３５Ｔ）によって動物を撮像した。
【０２０１】
腫瘍誘導法を行ってから１９日後に、ＴＡＣＥを行う。したがって、大腿動脈を介して蛍光透視法（Ｘ線イメージング）により先導され、肝臓腫瘍に流れ込む動脈まで送り込まれるカテーテルを用いて、生成物（体積：３００μＬ）を予め麻酔した動物に注射する（選択性が達成されるところのみの注射）。ＴＡＣＥは、専用の部屋で、および臨床実践（画像化治療）に近い条件下で行う。
【０２０２】
これらのエマルション中に含有される抗癌剤注射後のその血漿中動態の測定：
動脈内注射後、時間０、５、１５、３０または４５分で、３００μＬの血液試料を耳静脈のカテーテル挿入後に採取した。次いで遠心後に２００μＬの血漿を回収し、抗癌剤のアッセイを行うためにヘパリン処理した。抗癌剤の血漿中動態の試験をこのように行った。
【０２０３】
上記のものと同じ条件下でＶＸ２ウサギのヘパリン処理血漿中で血漿ドキソルビシンアッセイを行った。上記のものと同じ条件下でも分析を行った。
【０２０４】
組織学的評価および腫瘍および健常肝臓試料に送達されたドキソルビシンおよびリピオドール（登録商標）の量の評価：
ＴＡＣＥを行った後、第１日（Ｄ１）に、１Ｌ／分のＯ2とともにイソフルラン（５％）ガス麻酔によって動物を安楽死させた（Ｘ線イメージングによる先導下での生成物の動脈内注射）。剖検を行い、ドキソルビシンおよびリピオドール（登録商標）のアッセイを行うために、血液、血漿、腫瘍および健常肝臓試料を採取した。腫瘍の組織学的分析のために、採取した腫瘍および健常肝臓試料を凍結（未固定）した。組織の組織学的分析のために、腫瘍および健常肝臓試料を凍結（未固定）した。クライオスタット上で連続切片７μｍ厚を作製し、次いで−８０℃で保存した。
【０２０５】
組織のＨ＆ＥまたはＨＥトポグラフィー染色は、ヘマトキシリンでの核染色と１％エオシンでの細胞質染色からなる。白色光顕微鏡でＨＥ−染色した組織を直接分析する。
【０２０６】
リピオドール（登録商標）は、２．５％硝酸銀溶液中で組織を温置し、続いて蒸留水中で２回十分にすすぐことによって行われる鍍銀法により明らかにされる。次いで、組織をヘマトキシリンで対比染色し、白色光顕微鏡下で観察する。
【０２０７】
ドキソルビシンを明らかにするために、４％緩衝ホルモール溶液中で組織を後固定し、ＰＢＳ中ですすぎ、次いで蛍光を保ち（Ｐｒｏｌｏｎｇ褪色防止試薬）、核を対比染色する４’，６’−ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）を含有する封入液を用いて封入する。ＴＲＩＴＣ（テトラメチルローダミン）フィルターを使用することにより落射蛍光によって組織を観察する。
【０２０８】
スコアリング法を用いて各染色スライド上でリピオドール（登録商標）またはドキソルビシンおよびまた拡散の量を半定量的に評価する。
【０２０９】
スコアスケールは次のとおりである：
−量：０（なし）〜５（拡散あり）のスコア、
−拡散：スコア０（血管腔に限定（リピオドール（登録商標）に対して）または蛍光なし（ドキソルビシンに対して））〜３（およそ細胞１０列以上の血管からの距離で拡散）。
【０２１０】
最後に、次の類別に従い、ドキソルビシンおよびリピオドール（登録商標）の分布の相関を評価する：
−良好：連続切片上で同じ組織構造のレベルで化合物が検出される（リピオドール（登録商標）のみが存在する、数例の稀な構造は除く）。
−部分的または非常に部分的：数例の構造のみが共通してこの２つの化合物を有し、他の構造はリピオドール（登録商標）のみを含有した。
−なし：リピオドール（登録商標）を含有する構造においてドキソルビシンが全くない。
【０２１１】
クロマトグラフに蛍光検出装置が備えられた高速液体クロマトグラフィー（またはＨＰＬＣ）によって、腫瘍におけるドキソルビシンのアッセイを行った。ジェントルマックス（商標）組織分散装置（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ）において酢酸緩衝液ｐＨ３．５中で粉砕し、次いで粉砕した肝臓物質（対照）において希釈（１／４の係数による）し、続いて４０％アセトニトリル入りの酸性媒質（酢酸アンモニウム、ｐＨ３．５）中で沈殿させることによって、試料を調製した。上記で示す条件に従い、逆相ＨＰＬＣによって１０μＬの抽出物を分析した。５ｍＭ酢酸アンモニウム、ｐＨ３．５／アセトニトリル勾配により、３４分間にわたり分析を行った。ウサギ肝臓（１００ｎｇ／ｇ〜２００００ｎｇ／ｇ）において準備した較正曲線を介して試料をアッセイした。
【０２１２】
粉砕し、リピオドール（登録商標）（５００μｇＩ／ｇ〜２４０００μｇＩ／ｇ）を添加したウサギ肝臓の較正曲線に対して、ジェントルマックス（商標）組織分散装置（ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ）において水中で粉砕後、Ｘ線蛍光により総ヨウ素を測定することによって、腫瘍でのリピオドール（登録商標）のアッセイを行う。
【０２１３】
３．２．２．得られた結果
３．２．２．１．抗癌剤の血漿中動態
図２のグラフ上の次の点が、時間の関数として平均濃度を表すということに気付くことができた：
４群の動物に対して血漿ドキソルビシン濃度ピークは５分である。最大ピークは、ドキソルビシン単独（対照ドキソルビシン）の注射に対するものであり、平均（±ＳＤ）は５６３±２８２μｇ／Ｌである。これに続くのは、Ｅ２１生成物（エマルション方向性Ｏ／Ｗ−１／１比率、ゼネティクス（登録商標）２５０なし、界面活性剤なし）を投与された群であり、濃度ピークの平均（±ＳＤ）は２７５±７８μｇ／Ｌであり、次いでＥ１生成物（エマルション方向性Ｏ／Ｗ−１／３比率、１％界面活性剤あり、濃縮剤あり）を投与された群であり、平均（±ＳＤ）は１９±６μｇ／Ｌである。試料採取時間１０分〜４５分の間で、ドキソルビシン単独およびＥ２１生成物を投与された群は同じように低下し、Ｅ２１生成物を投与された群についてはより低い値であった。Ｅ１生成物を投与された群に関する結果から、注射から５分後でも、血漿中で見られる濃度が非常に低いので、低下しているが非常に平坦（寸法効果）に見える様子の曲線が示される。
【０２１４】
Ｅ１生成物を投与された群の場合、ドキソルビシン濃度は、Ｅ２１生成物を投与された群の場合よりもかなり低く、これは全ての試料採取点におけるものであり、ドキソルビシン単独と比較してさらにより顕著である。
【０２１５】
血漿中動態の分析から、本発明によるＥ１組成物の注射後、血漿ピークがないことが示される（図２）。
【０２１６】
【表１５】
2017505326.tif 000024
【０２１７】
したがって、本発明によるＷ／Ｏ安定エマルションを投与されたＶＸ２ウサギに対して、ドキソルビシン単独のみを投与された動物と比較して、９８％超の血漿ドキソルビシンレベルの低下が観察される。
【０２１８】
本発明によらないエマルションＥ２１を投与されたＶＸ２ウサギの場合、血漿ピークはその注射の５分後に観察される。
【０２１９】
したがって、本発明によらないエマルションを投与されたウサギに対して、ドキソルビシン単独のみを投与された動物と比較して、最大５１％の血漿ドキソルビシンレベルの低下が観察される（図２）。
【０２２０】
これらの結果から、別の動物モデルにおいて、式Ｉの界面活性剤（ＰＧＰＲ）を使用することによるＷ／Ｏエマルション方向性およびその安定性改善によって、本発明による組成物の効果的な臨床使用を構想することが可能になることが確認される。
【０２２１】
３．２．２．抗癌剤の送達
本発明による生成物Ｅ１の注射後に送達される量の決定から、本発明によらないエマルションＥ２１よりも顕著に高い、腫瘍レベルで存在するドキソルビシンの量が示される（表１）。
【０２２２】
【表１６】
2017505326.tif 000025
【０２２３】
本発明によるＷ／Ｏ安定エマルションを投与されたＶＸ２ウサギの場合、このように本発明によらないエマルションを投与されたウサギの場合よりも大量のドキソルビシンの送達が観察される。
【０２２４】
リピオドール（登録商標）の量も決定し、この量から、本発明によらないエマルションＥ２１と比較して、本発明によるエマルションＥ１を用いて、腫瘍においてより大量のリピオドール（登録商標）が見られたことが示される（表２）。
【０２２５】
【表１７】
2017505326.tif 000026
【０２２６】
ドキソルビシンおよびリピオドール（登録商標）濃度の決定によって、これらの２つの測定間に相関があったか否かを評価することが可能になった（図３）。図３において、したがって、本発明によるＷ／Ｏ安定エマルション（Ｅ１）を投与されたＶＸ２ウサギの場合、腫瘍におけるドキソルビシン濃度とリピオドール（登録商標）濃度との間で高い相関が認められる（ｒ2＝０．９５）。本発明によらないエマルションＥ２１を投与されたＶＸ２ウサギの場合、相関は認められない。
【０２２７】
Ｅ１エマルションを投与されたＶＸ２ウサギの場合、したがって、本発明によらないエマルションＥ２１を投与されたウサギと比較して、ドキソルビシンおよびリピオドール（登録商標）のより高い同時送達が観察された。
【０２２８】
３．２．３．腫瘍および健常肝臓試料の組織学的評価
スライドおよび特にＨ＆Ｅ染色の分析によって、健常組織に対して明らかに境界が定められる、ＶＸ２腫瘍断片が移植された全動物においてＨＣＣタイプ（濃く密な線において連結される多角形細胞）の腫瘍の存在を明らかにすることが可能になった。
【０２２９】
細胞規模において、その作用機序を示唆するように、ドキソルビシンは核または核残屑で観察される。ドキソルビシン分布を半定量的に評価し（盲検で読む）、スコアから、Ｅ１生成物投与後（スコア３．５±０．８４）およびＥ２１生成物投与後（スコア１．７５±０．９６）の、腫瘍におけるドキソルビシンの量の相違が明らかになる。Ｅ１生成物は、腫瘍により多くのドキソルビシンを送達する。リピオドール（登録商標）に関して、注射した量に対して正規化した後、腫瘍分布を半定量的に評価し、スコアは、これらのエマルション間の腫瘍におけるリピオドール（登録商標）の量の相違を全く示さない。
【０２３０】
したがって、Ｅ１エマルションによって、本発明によらないエマルションを用いる場合よりも、腫瘍に対してかなり多くの量の抗癌剤を送達することが可能になる。したがって、これらの物質が腫瘍に残存し、血管区画に逸脱しなくなるので、本発明によるエマルションの組成物は、大きな抗癌剤ベクター化能を有することが明らかに実証される。
【０２３１】
最後に、この２つの化合物の組織相関は、Ｅ１群において腫瘍のレベルで良好であるが、Ｅ２１群については非常に部分的であり、このことからアッセイにより得られた結果が確認される。
【０２３２】
健常肝臓における生成物の毒性について、Ｅ１およびＥ２１生成物を投与された動物および対照動物（注射しないＶＸ２ウサギ）において、壊死、炎症、血管分布または胆管線維症／増殖に対してスコアの相違はない。
【図１】
2017505326.tif 000030
【図２】
2017505326.tif 000031
【図３】
2017505326.tif 000032
【国際調査報告】
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2017505326.tif 000034
2017505326.tif 000035
2017505326.tif 000036
2017505326.tif 000037
2017505326.tif 000038