(57)【要約】本発明は、薬学的に有効な量の薬物化合物の組合せを提供することによって、結核を処置する方法を対象とする。本発明はまた、上記組み合わせを含む医薬組成物を対象とし、この組み合わせは、薬学的に有効な量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンの組合せであり得る。上記結核は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされ、多剤耐性ＴＢ、広範囲薬物耐性ＴＢであり得る。
2017533220.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬学的に有効な量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンの組合せを含む、医薬組成物。
【請求項２】
前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
それを必要としている対象の結核を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンを含む薬物の組合せを投与するステップを含む、方法。
【請求項５】
前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドを含む、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記組合せの（ａ）〜（ｄ）の１つまたは複数が、逐次的に投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項８】
（ａ）〜（ｄ）の１つまたは複数が、同時に投与される、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
前記対象が、哺乳動物である、請求項４に記載の方法。
【請求項１０】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記薬物の組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンからなる、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンからなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドからなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記結核が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる、請求項４に記載の方法。
【請求項１５】
前記結核が、多剤耐性ＴＢである、請求項４に記載の方法。
【請求項１６】
前記結核が、広範囲薬物耐性ＴＢである、請求項４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本出願は、２０１４年１１月３日に出願された米国仮出願番号第６２／０７４，５０８号、および２０１５年９月１１日に出願された米国仮出願番号第６２／２１７，３０６号の利益を主張しており、これら仮出願の各々は、それらの全体が参考として本明細書中に援用される。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
薬物の組合せの使用には、単一薬物治療を上回る重要な利点がある。単剤療法では、しばしば疾患が再燃し、その後、薬物耐性の発生に起因して、標準処置が有効でなくなる。現在、多剤治療は、複数の疾患の標準処置になっているが、それらの開発には、困難に満ちた経験的試験が伴う。このような治療の設計は、影響を受ける細胞経路間の交差が非常に把握困難である通り、薬物間の相互作用が十分に理解されていないため、かなり難易度が高い。さらに、いくつかの薬物を、あり得る異なる濃度または用量で組み合わせると、試験パラメーター空間が大きくなり、それによって最適な組合せの検索は大きな困難となる。したがって、多剤療法を開発するための異なる手法を使用する必要がある。
【０００３】
こうした背景の下、本開示に記載の実施形態を開発する必要が生じた。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（開示される主題の要旨）
ある特定の態様では、本発明は、薬学的に有効な量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンの組合せを含む医薬組成物を対象とする。一部の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンの組合せを含むか、またはそれらから本質的になるか、またはそれらからその上さらになる。他の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドの組合せを含むか、またはそれらから本質的になるか、またはそれらからその上さらになる。一態様では、化合物は、薬学的に許容される担体などの担体に添加される。
【０００５】
本開示の他の態様は、それを必要としている対象の結核を処置する方法であって、その患者に、治療有効量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンを含む薬物の組合せを投与するステップを含むか、またはそのステップから本質的になるか、またはそのステップからその上さらになる方法を含む。一部の実施形態では、組合せは、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンを含むか、またはそれらから本質的になるか、またはそれらからその上さらになる。この方法の他の実施形態では、組合せは、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドを含むか、またはそれらから本質的になるか、またはそれらからその上さらになる。一部の実施形態では、組合せの（ａ）〜（ｄ）の１つまたは複数は、逐次的に投与される。他の実施形態は、（ａ）〜（ｄ）の１つまたは複数が同時に投与されることを含む。一部の実施形態では、対象は、哺乳動物、例えばヒトである。一部の実施形態では、薬物の組合せは、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンからなる。他の実施形態では、組合せは、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンからなる。他の実施形態では、組合せは、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドからなる。一部の実施形態では、結核は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる。一部の実施形態では、結核は、多剤耐性ＴＢである。一部の実施形態では、結核は、広範囲薬物耐性ＴＢである。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】図１は、阻害アッセイにおけるモキシフロキサシンの用量応答を示す。
【０００７】
【図２Ａ】図２Ａは、標準レジメンの用量応答を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、第二選択のＴＢ薬物の用量応答を示す。
【図２Ｃ−１】図２Ｃは、実験的ＴＢ薬物の用量応答を示す。
【図２Ｃ−２】図２Ｃは、実験的ＴＢ薬物の用量応答を示す。
【０００８】
【図３】図３は、５種のＴＢ薬物の組合せ対標準レジメンを試験するｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害アッセイにおける、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの阻害を示す。
【０００９】
【図４Ａ−１】図４Ａは、３種の薬物による実験的レジメンを示す。
【図４Ａ−２】図４Ａは、３種の薬物による実験的レジメンを示す。
【図４Ｂ−１】図４Ｂは、４種の薬物による実験的レジメンを示す。
【図４Ｂ−２】図４Ｂは、４種の薬物による実験的レジメンを示す。
【００１０】
【図５Ａ】図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、それぞれ１×薬物濃度、４×薬物濃度、および１６×薬物濃度を示す。
【図５Ｂ】図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、それぞれ１×薬物濃度、４×薬物濃度、および１６×薬物濃度を示す。
【図５Ｃ】図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、それぞれ１×薬物濃度、４×薬物濃度、および１６×薬物濃度を示す。
【００１１】
【図６−１】図６は、ＥＭＢとＳＱ１０９の類似性を示す。
【図６−２】図６は、ＥＭＢとＳＱ１０９の類似性を示す。
【００１２】
【図７】図７は、４週間の処置後の、マウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵを示す。
【００１３】
【図８】図８は、週５回、４週間、シャム処置したか、標準レジメンで処置したか、または高（Ｈ）、中（Ｍ）もしくは低（Ｌ）用量の薬物によるＦＳＣレジメンＩで処置したマウスの肺当たりの結核のＣＦＵを示す。
【００１４】
【図９】図９は、感染および高（Ｈ）、中（Ｍ）または低（Ｌ）用量の薬物による処置の経過に亘る間の、Ａ〜Ｌ群のマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵを示す。マウスを、エアロゾルによってＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎに感染させ（０日目）、チャレンジの１４日後に開始して４週間処置し（１４日目〜３９日目）、最終処置の３日後に安楽死させて（４２日目）、肺内の細菌負荷を決定した。Ｃ〜Ｌ群のマウスを、ＦＳＣレジメンＩであるＣＬＺ、ＥＭＢ、ＰＲＯ、およびＰＺＡの薬物の組合せにより、示されている通り、個々の薬物を高（Ｈ）、中（Ｍ）または低（Ｌ）用量で用いて処置した。
【００１５】
【図１０】図１０は、週５回、４週間、シャム処置したか、標準レジメンで処置したか、または高（Ｈ）、中（Ｍ）もしくは低（Ｌ）用量の薬物によるＦＳＣレジメンＩＩで処置したマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵを示す。
【００１６】
【図１１】図１１は、実験開始時（０日目）、チャレンジの１４日後（１４日目）、および処置開始から２８日後（４２日目）のデータを示す。感染および処置の経過に亘って、Ａ〜Ｌ群のマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。マウスを、エアロゾルによってＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎに感染させ（０日目）、チャレンジの１４日後に開始して４週間処置し（１４日目〜３９日目）、最終処置の３日後に安楽死させて（４２日目）、肺内の細菌負荷を決定した。Ｃ〜Ｌ群のマウスを、ＦＳＣレジメンＩＩであるＣＬＺ、ＥＭＢ、ＴＭＣ、およびＰＺＡからなる薬物の組合せにより、個々の薬物を高（Ｈ）、中（Ｍ）または低（Ｌ）用量で用いて処置した。
【００１７】
【図１２】図１２は、ある実施形態の各組合せ薬物レジメンにおける薬物および薬物用量を示す。
【００１８】
【図１３】図１３は、実施例３のマウスのｉｎ  ｖｉｖｏデータのスキームを示す。
【００１９】
【図１４】図１４は、８週間の処置にわたるＦＳＣレジメンＩおよびＩＩＡ／Ｂの有効性を示す。感染および処置の経過に亘って、Ａ〜Ｆ群のマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。マウスを、エアロゾルによってＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎに感染させ（０日目）、チャレンジの１４日後に開始して最長８週間処置し（１４日目〜６７日目）、最終処置の３日後に安楽死させて（７０日目）、肺内の細菌負荷を決定した。マウスを、示されている通り、ＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢで処置した。ＬＯＤ：検出限界。
【００２０】
【図１５】図１５は、２、３、４、６または８週間の処置後のＦＳＣレジメンＩおよびＩＩＡ／Ｂの有効性を示す。示されている通り、シャム処置した（シャム）か、標準レジメン（ＳＲ）で処置したか、強化標準レジメン（ＥＳＲ）で処置したか、またはＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡもしくはＩＩＢで処置したマウスの肺の、処置後の様々な時間におけるＣＦＵ。すべての処置期間について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【００２１】
【図１６】図１６は、ＦＳＣレジメンＩＩＡで３週間処置してから３日後（有効性）および３カ月後（再発）の肺負荷を示す。
【００２２】
【図１７】図１７は、ＦＳＣレジメンＩＩＡで４週間処置してから３日後（有効性）および３カ月後（再発）の肺負荷を示す。
【００２３】
【図１８】図１８は、ＦＳＣレジメンＩＩＡで６週間処置してから３日後（有効性）および３カ月後（再発）の肺負荷を示す。
【００２４】
【図１９】図１９は、マウスのｉｎ  ｖｉｖｏ実験４のスキームを示す。
【００２５】
【図２０】図２０は、６週間の処置に亘るＦＳＣレジメンＩＩＣの有効性を示す。
【００２６】
【図２１】図２１は、３、４または６週間の処置後のＦＳＣレジメンＩＩＣの有効性を示す。示されている通り、５日／週（月〜金）、シャム処置した（シャム）か、標準レジメン（ＳＲ）で処置したか、強化標準レジメン（ＥＳＲ）で処置したか、またはＦＳＣレジメンＩＩＣで処置したマウスの肺の、処置後の様々な時間におけるＣＦＵ。追加の一群を、ＦＳＣレジメンＩＩＣで毎日３週間処置した。すべての処置期間について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【００２７】
【図２２】図２２は、８週間の処置後のＦＳＣレジメンＩの有効性を示す。感染および処置期間の経過に亘る肺のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ負荷。ここではマウスを、週５日（月〜金）、シャム処置し（シャム）、または標準レジメン、強化標準レジメンもしくはＦＳＣレジメンＩで処置した。すべての処置期間について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【００２８】
【図２３】図２３は、標準レジメン、強化標準レジメン、およびＦＳＣレジメンＩで８週間処置した後のマウスの肺のＣＦＵを示す。５日／週（月〜金）で８週間、シャム処置した（シャム）、標準レジメン（ＳＲ）で処置したか、強化標準レジメンで処置したか（ＥＳＲ）、またはＦＳＣレジメンＩで処置したマウスの肺のＣＦＵ。すべての群について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【００２９】
【図２４】図２４は、ＦＳＣレジメンＩＩのヒートマップを示す。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
（詳細な説明）
現在、結核（ＴＢ）の処置は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの感染性株の薬物感受性および患者層（例えば、子ども、成人、妊娠中、ＨＩＶ陽性等）に応じて変わる。ＴＢ処置の２つの主な分類は、「第一選択」および「第二選択」である。薬物感受性のＴＢの第一選択の処置は、イソニアジド（ＩＮＨ）、リファンピン（ＲＩＦ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびエタンブトール（ＥＭＢ）の４種の薬物レジメンである。薬物耐性ＴＢを処置するために使用される第二選択の処置は、アミノグリコシド（アミカシン（ＡＭＫ）、カナマイシン（ＫＭ）等）、ポリペプチド（例えば、カプレオマイシン、バイオマイシン等）、チオアミド（例えば、エチオナミド（ethioamide）、プロチオナミド（prothioamide）（ＰＲＯ）等）、フルオロキノロン（例えば、シプロフロキサシン（ＣＩＰ）、レボフロキサシン、モキシフロキサシン（ＭＸＦ）等）、およびサイクロセリンの、３〜５種の他の薬物を組み合わせて利用する。ＴＢ処置期間中に患者が摂取する丸剤の数を低減する一助にするために使用される、組合せ薬物または固定用量の組合せ（ＦＤＣ）も存在する。ＴＢ処置に使用されるＦＤＣの例として、Ｒｉｆａｔｅｒ［イソニアジド（ＩＮＨ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびリファンピシン（ＲＩＦ）］、およびＲｉｆａｍａｔｅ［イソニアジド（ＩＮＨ）およびリファンピン（ＲＩＦ）］が挙げられる。
【００３１】
抗ＴＢ薬物に耐性があるＴＢ株は、ますます発見されつつある。２０１２年には、およそ４５０，０００人のヒトが、多剤耐性ＴＢを発症しており、その半数が、インド、中国およびロシアにおいて報告された。多剤耐性ＴＢ（ＭＤＲ−ＴＢ）は、イソニアジドおよびリファンピシンの少なくとも両方に対して耐性がある分類のＴＢ株である。ＭＤＲ−ＴＢは、低質な薬の使用、不適正な処置レジメンの投与、および全処置過程を患者が確実に完了できないなどの不適切な処置から生じる。ＭＤＲ−ＴＢは、２種の最も強力な第一選択の抗ＴＢ薬物に対する細菌耐性に起因するので、ＭＤＲ−ＴＢ患者は、株が感受性を示す第一選択の薬物に加えて、いくつかの第二選択の薬物で処置される。しかし第二選択の処置選択肢には、それら自体に、大規模な化学治療、高コスト、重篤な薬物有害反応、および利用できない可能性といった制限および欠点が合わさっている。さらに、第二選択の薬物を用いる処置によって、ＭＤＲ−ＴＢを引き起こす不適切な処置に類似の、より重篤な薬物耐性が生じるおそれがある。広範囲薬物耐性ＴＢ（ＸＤＲ−ＴＢ）は、最も有効な第二選択の抗ＴＢ薬物を含む、いくつかの他のクラスの抗ＴＢ薬物に対してさらに耐性があるＭＤＲ−ＴＢとして特定されている。報告されたＭＤＲ−ＴＢ症例の約９．６％が、ＸＤＲ−ＴＢであると推定される。
【００３２】
本開示の実施形態は、それぞれの用量の薬物の組合せ、結核を処置するためのその使用、および組合せにおける最適な薬物用量を決定するための方法を対象とする。一部の実施形態では、この方法は、３つの段階を含む。まず、最適な薬物用量の組合せを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究に基づいて、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを阻害し死滅させる様々な薬物用量の組合せの有効性に関して、フィードバックシステム制御（ＦＳＣ）最適化スキームを使用して決定する。次に、最適な組合せ、すなわちイソニアジド（ＩＮＨ）、リファンピン（ＲＩＦ）、エタンブトール（ＥＭＢ）およびピラジナミド（ＰＺＡ）の標準レジメンよりも有効または強力な組合せを、ＦＳＣスキームを使用し、肺ＴＢのマウスモデルで試験して、マウスの最適な薬物用量をｉｎ  ｖｉｖｏで決定する。最後に、対応するヒトの用量を、薬物用量外挿技術、ならびに経口投与後の薬物に関するマウスおよびヒトの薬物動態データを使用して、マウス用量から外挿することができる。
【００３３】
ｉ．薬物の組合せ
本開示は、公知の薬物の様々な組合せを含む。その組合せは、例えば従来の処置と比較して様々な形態の結核に対して、改善された効力を示す。一部の実施形態では、複数の最適な薬物用量の組合せは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究およびＦＳＣ分析に基づいて決定される。薬物の組合せのある特定の実施形態は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＴＢ処置試験に基づいて評価されており、標準レジメンと同様にまたはそれよりも良好に実施されることが示されている（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究を含む作用実施例セクションを参照されたい）。
【００３４】
一部の実施形態では、薬物の組合せは、以下の１つから選択される。
（１）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、４−アミノサリチル（aminosalicyclic）酸（ＰＡＳ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（２）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、およびリファンピシン（ＲＩＦ）。
（３）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、およびピラジナミド（ＰＺＡ）。
（４）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、およびプロチオナミド（ＰＲＯ）。
（５）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびピラジナミド（ＰＺＡ）。
（６）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびリファンピシン（ＲＩＦ）。
（７）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、およびプロチオナミド（ＰＲＯ）。
（８）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、およびピラジナミド（ＰＺＡ）。
（９）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１０）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびリファンピシン（ＲＩＦ）。
（１１）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、リファンピシン（ＲＩＦ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１２）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１３）クロファジミン（ＣＬＺ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、リファンピシン（ＲＩＦ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１４）クロファジミン（ＣＬＺ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１５）クロファジミン（ＣＬＺ）、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１６）エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（１７）エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、ピラジナミド（ＰＺＡ）、およびリファンピン（ＲＩＦ）。
（１８）エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびピラジナミド（ＰＺＡ）。
（１９）エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（２０）エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、リファンピシン（ＲＩＦ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（２１）エタンブトール（ＥＭＢ）、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（２２）エタンブトール（ＥＭＢ）、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびリファンピシン（ＲＩＦ）。
（２３）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（２４）クロファジミン（ＣＬＺ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびベダキリン（ＴＭＣ２０７）。
（２５）クロファジミン（ＣＬＺ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびピラジナミド（ＰＺＡ）
（２６）クロファジミン（ＣＬＺ）、エタンブトール（ＥＭＢ）、プロチオナミド（ＰＲＯ）、およびピラジナミド（ＰＺＡ）。
（２７）ＣＬＺ、ＰＲＯ、ＰＺＡ。
（２８）ＣＬＺ、ＥＭＢ、ＰＺＡ。
（２９）ＣＬＺ、ＰＲＯ、ＥＭＢ。
【００３５】
一部の実施形態では、薬物の組合せは、以下の表１の組合せの１つから選択される。
【表１】
2017533220.tif 000003
【００３６】
さらに一部の実施形態では、エタンブトール（ＥＭＢ）およびＳＱ１０９は、それらの挙動および相互作用に類似性があることが示される（ＥＭＢおよびＳＱ１０９のセクションを参照されたい）。したがって、ＥＭＢおよびＳＱ１０９は、本開示のある特定の実施形態では交換され得る。以下の、薬物の組合せの個々の実施形態の一覧は、先の一覧から導出されたものであり、ここでエタンブトールまたはＳＱ１０９のいずれかを、その対応物によって置き換えた。
【表１１】
2017533220.tif 000004
【００３７】
最も強力な組合せの２つの場合、肺結核のマウスモデルにおける最適な薬物用量が決定され、驚くべきことに、その組合せは、標準レジメンよりも優れていることが実証される。この用量からヒト用量への転換には、マウスおよびヒトにおける薬物の薬物動態の外挿が伴う。
【００３８】
薬物の組合せのいくつかの個々の実施形態は、標準レジメンよりも優れていることが示された（ｉｎ  ｖｉｖｏ研究のセクションを参照されたい）。
【表１２】
2017533220.tif 000005
【００３９】
一部の実施形態では、薬物の組合せの１つまたは複数は、以下の１つまたは複数を含む、いくつかの利益の少なくとも１つを提供する。第一に、薬物の組合せは、ＴＢ処置に使用される他の薬物の組合せよりも高い有効性を有することができる処置の組合せである。第二に、薬物の組合せは、薬物耐性ＴＢの処置の代替の組合せを提供し、薬物耐性ＴＢのより速やかな処置も可能にする。薬物の組合せの多くは、ＩＮＨおよびＲＩＦを含まないので、ＭＤＲ−ＴＢの多くの症例の処置に適している代替レジメンを開発することができる。驚くべきことに、薬物の組合せの多くが、２種の最も強力な第一選択の抗ＴＢ薬物であるＩＮＨおよびＲＩＦを含まなくても、そうした組合せは、標準レジメンよりも優れていることが示されている。さらに一部の実施形態では、これらのレジメンは、フルオロキノロンまたはアミノグリコシドを含まず、または除外することができるので、ＸＤＲ−ＴＢの多くの症例の処置にとっても有用となり得る。第三に、現在の薬物処置レジメンは、一般に６〜８カ月の処置が必要である。薬物耐性株の処置は、さらにより長く、典型的に２４カ月かかる。処置がそのように長引くので、患者の服薬遵守は、しばしば低下する。患者の服薬遵守が低下すると、薬物耐性の発生の可能性が増大する。本開示で提案されている薬物用量の組合せは、薬物感受性ＴＢおよび薬物耐性ＴＢの両方の、より速やかでより有効な処置を可能にし、患者の服薬遵守をより高める。さらに、最適な薬物の組合せを使用すると、現在処置に３〜９カ月かかる潜伏ＴＢを速やかに処置することができる。
【００４０】
ｉｉ．処置方法
本開示のいくつかの実施形態は、それを必要としている対象の結核を処置する方法であって、その患者に、治療有効量の本明細書に記載の薬物の組合せを投与するステップを含む方法を含む。例えば、一部の実施形態では、組合せは、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンを含むか、またはそれらから本質的になるか、またはそれらからその上さらになる。一部の実施形態では、組合せは、表１の１〜４８群から選択される組合せの１つを含むか、またはそれから本質的になるか、またはそれからその上さらになる。一部の実施形態では、組合せは、表１の１〜４８群から選択される組合せの１つからなる。一部の実施形態では、それを必要としている対象の結核を処置する方法は、患者にＳＱ１０９を投与するステップを含まない。他の実施形態では、それを必要としている対象の結核を処置する方法は、患者にＳＱ１０９を投与するステップを含む。
【００４１】
本開示の方法に使用される薬物の組合せは、逐次的または同時に投与される。一部の実施形態では、選択された組合せの化合物の１つまたは２つまたは３つは、逐次的に送達される。一部の実施形態では、選択された組合せの化合物の１つまたは２つまたは３つは、同時に送達される。
【００４２】
本発明の方法の投与スケジュールは、望ましい治療効果をもたらす方式であり得る。例えば、一部の実施形態では、組合せは、１日１回、１日２回または１日３回投与される。一部の実施形態では、投与は、２週もしくは４週もしくは６週もしくは８週間、または１カ月、２カ月、３カ月、４カ月もしくは５カ月、またはそれらの間の任意の期間、継続される。一部の実施形態では、処置レジメンは、薬物耐性株のために、６カ月未満、または９、１２、１５、１８、２１もしくは２４カ月未満の処置を要する。
【００４３】
一部の実施形態では、それを必要としている対象は、哺乳動物である。哺乳動物は、例えば家畜動物、例えばヒツジ、ブタ、ウシおよびウマ、愛玩動物、例えばイヌおよびネコ、実験動物、例えばラット、マウスおよびウサギを含む任意の哺乳動物であり得る。一実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
【００４４】
一部の実施形態では、処置される結核は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる。他の実施形態では、処置される結核は、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ複合体における他の種によって引き起こされる。一部の実施形態では、結核は、薬物感受性ＴＢまたは多剤耐性ＴＢ（ＭＤＲ−ＴＢ）または広範囲薬物耐性ＴＢ（ＸＤＲ−ＴＢ）である。
【００４５】
ＭＤＲ−ＴＢは、イソニアジドおよびリファンピシンの少なくとも両方に対して耐性がある分類のＴＢ株である。ＭＤＲ−ＴＢは、低質な薬の使用、不適正な処置レジメンの投与、および全処置過程を患者が確実に完了できないなどの不適切な処置から生じる。
【００４６】
ＸＤＲ−ＴＢは、最も有効な第二選択の抗ＴＢ薬物を含む、いくつかの他のクラスの抗ＴＢ薬物に対してさらに耐性があるＭＤＲ−ＴＢとして特定されている。一部の実施形態では、ＸＤＲ−ＴＢは、アミノグリコシド（アミカシン（ＡＭＫ）、カナマイシン（ＫＭ）等）、ポリペプチド（例えば、カプレオマイシン、バイオマイシン等）、チオアミド（例えば、エチオナミド、プロチオナミド（ＰＲＯ）等）、フルオロキノロン（例えば、シプロフロキサシン（ＣＩＰ）、レボフロキサシン、モキシフロキサシン（ＭＸＦ）等）、およびサイクロセリンからなる群から選択される１種または複数の第二選択の薬物に対して耐性がある。報告されたＭＤＲ−ＴＢ症例の約９．６％が、ＸＤＲ−ＴＢであると推定される。
【００４７】
ｉｉｉ．医薬製剤
本開示の実施形態は、薬学的に許容される担体または賦形剤と共に、薬物の組合せのキットとして、またはＦＤＣとして実施され得る。例えば、最適な３種の薬物または４種の薬物の組合せにおける薬物は、ＴＢを処置するための単一の固体投与製剤に組み合わせることができ、ここで組合せにおける薬物の用量は、互いに適正な比である。
【００４８】
経口投与のために、液体または固体投与製剤を使用することができる。経口投与製剤のいくつかの例として、錠剤、ゼラチンカプセル剤、丸剤、トローチ剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウェハ剤、チューインガム等が挙げられる。化合物は、当業者に理解される通り、適切な医薬担体（ビヒクル）または賦形剤と混合することができる。担体および賦形剤の例として、デンプン、乳、糖、ある特定のタイプの粘土、ゼラチン、乳酸、ステアリン酸、またはステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カルシウムを含むそれらの塩、タルク、植物性脂肪または油、ガムおよびグリコールが挙げられる。
【００４９】
本発明の技術の方法において有用な化合物の製剤は、全身、脳室内、髄腔内、局所、静脈内、鼻腔内、皮下、筋肉内、または経皮投与のために、化合物を送達するために用いられ得ることが当技術分野で公知のものなどの、従来の希釈剤、担体、または賦形剤等を利用することができる。例えば、製剤は、安定剤、界面活性剤（例えば非イオン性、イオン性、アニオン性、または双性イオン性界面活性剤）、ならびに任意選択で塩および／または緩衝剤の１種または複数を含むことができる。化合物は、溶液、懸濁液の形態で、または再構成された凍結乾燥形態で送達され得る。
【００５０】
一部の実施形態では、安定剤は、例えばアミノ酸、例えばグリシンなど、またはオリゴ糖、例えばスクロース、トレハロース、ラクトースもしくはデキストランなどであり得る。あるいは安定剤は、糖アルコール、例えばマンニトールなど、またはそれらの組合せであり得る。他の安定剤には、蜜蝋、ブチル化ヒドロキシトルエン、クエン酸、エチルバニリン、ゼラチン、グリセリン、酸化鉄、レシチン、ｐ−メトキシアセトフェノン、パラベン、植物油、およびプロピレングリコールが含まれ得る。一部の実施形態では、安定剤または安定剤の組合せは、化合物の重量に対して約０．１重量％〜約１０重量％を構成する。
【００５１】
一部の実施形態では、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベートである。適切な界面活性剤のいくつかの例として、ポリソルベート（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリエチレングリコールまたはポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、例えば約０．００１％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）のＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−６８が挙げられる。
【００５２】
塩または緩衝剤は、それぞれ、例えば塩化ナトリウムまたはリン酸ナトリウム／カリウムなどの任意の塩または緩衝剤であり得る。ある特定の実施形態では、緩衝剤は、医薬組成物のｐＨを、約５．５〜約７．５の範囲に維持する。また、塩および／または緩衝剤は、浸透圧を、ヒトまたは動物に投与するのに適したレベルに維持するのに有用である。一部の実施形態では、塩または緩衝剤は、約１５０ｍＭ〜約３００ｍＭのほぼ等張の濃度で存在する。
【００５３】
本発明の技術の方法において有用な化合物の製剤は、１種または複数の従来の添加剤をさらに含むことができる。このような添加剤のいくつかの例として、可溶化剤、例えばグリセロールもしくはヒドロキシプロピル−シクロデキストリンなど、抗酸化剤、例えば塩化ベンザルコニウム（「ｑｕａｔｓ」として公知の第四級アンモニウム化合物の混合物）、ベンジルアルコール、クロレトンもしくはクロロブタノールなど、麻酔剤、例えばモルヒネ誘導体など、または前述のものなどの等張剤等が挙げられる。医薬組成物は、酸化または他の損傷に対するさらなる予防措置として、不透過性ストッパーで封止されたバイアルに窒素ガスを入れて保存することができる。
【００５４】
一部の実施形態では、本発明の技術の方法において有用な化合物の製剤は、単一のビヒクルに含有される（例えば、単一の経口投与形態）。例えば、医薬組成物は、薬学的に有効な量の、本発明の技術の方法において有用な化合物の組合せ（例えば、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンまたは本明細書に開示の任意の組合せ）を、単一の経口投与製剤（例えば、単一の錠剤、ゼラチンカプセル剤、丸剤、トローチ剤、エリキシル剤、懸濁剤等）に含む。
【００５５】
ｉｖ．フィードバックシステム制御（ＦＳＣ）最適化スキーム
患者を処置するために薬物を適用するなどの刺激（stimulations）は、複合系を所望の状況に方向付けるために適用され得る。これらの刺激（stimulations）を適用するタイプおよび振幅（例えば用量）は、系を所望の状況にする効率に影響を及ぼし得る入力パラメーターの一部である。しかし、Ｎ個のタイプの異なる薬物を、薬物ごとにＭ種の用量で用いると、ＭＮの起こり得る薬物用量の組合せが生じることになる。あらゆる可能な組合せに対して複数の試験を行うことによって、最適な組合せまたはさらにはほぼ最適な組合せを識別することは、実際に法外な費用がかかる。例えば、薬物および用量の数が増大すると、有効な薬物用量の組合せを見出すためのｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ試験において可能なすべての薬物用量の組合せを実施することは、実際的でない。
【００５６】
本開示の実施形態は、複数の入力パラメーターを伴う多次元（または多変量）系をそれらの所望の状況に導くために最適化された入力パラメーターの組合せを、速やかに検索することを可能にする技術を適用する。この技術は、多次元パラメーター空間のそれぞれの次元に沿って入力パラメーターによって影響を受ける状況を有する多次元複合系から構成される。一部の実施形態では、この技術は、パラメーター同士のおよび複合系との複雑な相互作用を伴い得る入力パラメーターの大きいプール（例えば、薬物プール）に対して、効率的に作動することができる。検索技術は、その複合系の所望の状況をもたらす、入力パラメーターの少なくとも１つのサブセットまたはすべての最適な組合せまたは部分的組合せを識別するために使用することができる。組合せの薬物の場合では、例えば、多数の薬物を評価して、薬物の最適な組合せ、比および用量を速やかに識別することができる。パラメーター空間のサンプリング技術（例えば、実験設計法）は、最小数もしくは低減された試験の選択指針となって、評価される複合系の際立った特徴を曝露し、複合系の状況に影響を及ぼすより大きい有意性または影響の入力パラメーターの組合せまたは部分的組合せを明らかにすることができる。
【００５７】
本開示の実施形態は、複数の入力パラメーターに対する複合系の応答が、低次方程式、例えば二次（second  order）（または二次（quadratic））方程式によって表すことができるが、一次（または線形）方程式ならびに三次（third  order）（または三次（cubic））方程式も、可能な低次方程式として企図されるという驚くべき知見に基づく。他の実施形態では、より高次の方程式も企図される。組合せの薬物の場合では、例えば薬物の有効性Ｅは、以下の通り薬物用量の関数として表すことができる。
【数１】
2017533220.tif 000006
式中、Ｃｉは、Ｎ種の全薬物のプールのｉ番目の薬物の用量であり、Ｅ０は、ベースライン有効性を表す定数であり、ａｉは、単一薬物の有効性係数を表す定数であり、ａｉｊは、薬物と薬物の相互作用係数を表す定数であり、合計はＮである。三次または他のより高次の用語が排除される場合、薬物の有効性Ｅは、薬物用量Ｃｉの関数として二次モデルによって表すことができる。前述の通り、三次もしくはそれより高次のモデルを含む他のモデル、または線形回帰モデルの使用も企図される。また、組合せの薬物の具体例が使用されるが、先の方程式は、より一般的には、複数の入力パラメーターの関数としての多種多様な他の複合系を表すために使用され得ることに留意されたい。
【００５８】
Ｎ＝１の場合（１種の薬物のプール）、
【数２】
2017533220.tif 000007
であり、合計３つの定数Ｅ０、ａ１、およびａ１１を伴う。
Ｎ＝２の場合（２種の薬物のプール）、
【数３】
2017533220.tif 000008
であり、合計６つの定数Ｅ０、ａ１、ａ２、ａ１２、ａ１１、およびａ２２を伴う。
【００５９】
より一般的には、合計Ｎ種の薬物では、定数の総数ｍは、１＋２Ｎ＋（Ｎ（Ｎ−１））／２である。１種の薬物投与量が、研究において一定に保持される場合、定数の数ｍは、Ｎ＞１で１＋２（Ｎ−１）＋（（Ｎ−１）（Ｎ−２））／２までさらに低減され得る。以下の表２は、評価される薬物のプールにおける薬物総数の関数としての薬物の有効性の二次モデルにおける定数の総数を示す。
【表２】
2017533220.tif 000009
【００６０】
この驚くべき知見を活用することによって、相対的に少数のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施して、有効性用量応答表面をモデル化することができ、この入力／出力モデルを使用して、最適な薬物−用量の組合せを識別することができる。一部の実施形態では、試験を、単一研究で並列に実施し、それによって、現在の薬物スクリーニングと比較して、速度を大幅に高め、労力と費用を大幅に縮小することができる。
【００６１】
薬物の有効性Ｅの二次モデルの場合、例えば薬物用量Ｃｉの異なる組合せは、以下の通りそれぞれのｉｎ  ｖｉｖｏ試験に合わせて選択することができる。
【数４】
2017533220.tif 000010
式中、Ｅｋは、合計ｎ回の試験からのｋ番目の試験において観測または測定された有効性であり、Ｃｉｋは、ｋ番目の試験において適用されたｉ番目の薬物の用量である。ｎ回の試験から、ｍ個の定数Ｅ０、ａｉ、およびａｉｊを導出することができる（ｎ≧ｍ、すなわち試験の回数は、二次モデルにおける定数の数と同じか、またはそれを超える）。一部の実施形態では、最小数の試験を実施することができる（ｎ＝ｍ）。１種の薬物投与量が、研究において一定に保持される場合、試験の数ｎは、Ｎ＞１で１＋２（Ｎ−１）＋（（Ｎ−１）（Ｎ−２））／２までさらに低減され得る。
【００６２】
一部の実施形態では、実験設計法は、それぞれのｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ試験の薬物用量の選択指針とするために使用することができる。実験設計法と関連して、可能な用量を、いくつかの別個のレベルまで絞り込むことができる。
【００６３】
試験を設計し実施したら、次に試験の実験結果（例えば有効性Ｅｋに関する）を、回帰分析などの任意の適切な多次元フィッティングを使用することによって、モデルにフィットさせる。実験結果とモデルの間のフィッティング性能に基づいて、追加の試験を実施して、モデルの精度を改善することができる。所望の精度のモデルが達成されたら、系の入力パラメーターの最適な組合せを、応答表面における最大または極大の位置決めによるものなどの任意の適切な極値の位置決め技術を使用することによって識別することができる。
【００６４】
薬物の有効性Ｅの二次モデルの場合、例えば、定数Ｅ０、ａｉ、およびａｉｊが多次元フィッティングによって導出されたら、最適な用量を識別することができる。
【数５】
2017533220.tif 000011
式中、
【数６】
2017533220.tif 000012
は、合計Ｎ種の薬物のプールのｉ番目の薬物の最適な用量である。
【００６５】
相対的に大きい薬物プールが評価される場合（例えば、Ｎ≧１０、１００、またはさらには１，０００もしくはそれを超える）、薬物の最適な部分的組合せを識別して、その後のｉｎ  ｖｉｖｏ試験または臨床治験を容易にすることができる。例えば、合計６種の薬物のプールの場合、薬物プールからの３種の薬物のすべての最適な部分的組合せは、プールの３種の薬物の用量を０に設定して、六次元系を三次元系に有効に低減し、３つの残りの次元に関して最大を位置決めすることによって識別することができる。この６種の薬物プールの例では、３種の薬物の合計２０種の異なる最適な部分的組合せを識別することができる。また、６種の薬物プールの場合には、薬物プールからの４種の薬物のあらゆる最適な部分的組合せは、プールの２種の薬物投与量を０に設定して、六次元系を四次元系に有効に低減し、４つの残りの次元に関して最大を位置決めすることによって識別することもできる。この６種の薬物プールの例では、４種の薬物の合計１５種の異なる最適な部分的組合せを識別することができる。したがって、６種の薬物プールについてわずか２８種のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を実施することによって、３種および４種の薬物の３５（＝２０＋１５）の最適な部分的組合せを、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験または臨床治験の候補として識別することができる。他の実施形態では、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を実施して、あらゆる最適な部分的組合せを識別することができ、次に、最も適しているサブセットを、動物試験のために選択することができる。動物試験を臨床治験に移して、類似の手順を実施することができる。
【００６６】
所望の精度のモデルが、いくつかの実施形態で達成されたら、各入力パラメーターの有意性および他の入力パラメーターとのその相乗効果を識別することができる。複合系の状況にほとんどまたは全く影響を及ぼさない、有意でない入力パラメーターは、入力パラメーターの初期プールから取り下げ、または除外し、それによって、初期多次元系を、より低い次元を有する精製系に有効に変換することができる。薬物の有効性Ｅの二次モデルの場合、例えば有意でない薬物は、定数ａｉおよびａｉｊの低い値を有するものと識別することができ、その後の評価のために初期の薬物プールから取り下げることができる。
【００６７】
ｖ．定義
本明細書で使用される、単数を示す用語「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」および「その（ｔｈｅ）」は、文脈によって別段明示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって例えば、１つの物体への言及には、文脈によって別段明示されない限り、複数の物体が含まれ得る。
【００６８】
本明細書で使用される、用語「実質的に」および「約」は、わずかな変動を記載し、説明するために使用される。この用語は、ある事象または環境と併用される場合、その事象または環境が正確に生じる場合と、その事象または環境がほぼ近似で生じる場合とに言及することができる。この用語は、数値と併用される場合、その数値の±１０％もしくはそれ未満、例えば±５％もしくはそれ未満、±４％もしくはそれ未満、±３％もしくはそれ未満、±２％もしくはそれ未満、±１％もしくはそれ未満、±０．５％もしくはそれ未満、±０．１％もしくはそれ未満、または±０．０５％もしくはそれ未満の変動範囲を指す場合がある。
【００６９】
さらに、量、比、および他の数値は、本明細書では範囲形式で提示されることがある。このような範囲型式は、便宜のためおよび簡略化のために使用されると理解されたく、ある範囲の限界として明確に特定されている数値を含むが、各数値および部分範囲があたかも明確に特定されているかのように、その範囲に包含されるあらゆる個々の数値または部分範囲を柔軟に含むと理解されるべきである。例えば、約１〜約２００の範囲の比は、約１および約２００の明確に列挙された限界値を含むが、約２、約３および約４などの個々の比、ならびに約１０〜約５０、約２０〜約１００などの部分範囲等も含むと理解されたい。
【００７０】
一部の実施形態では、クロファジミン（ＣＬＺ）は、Ｎ，５−ビス（４−クロロフェニル）−３−（プロパン−２−イルイミノ）−３，５−ジヒドロフェナジン−２−アミンに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化１】
2017533220.tif 000013
【００７１】
一部の実施形態では、エタンブトール（ＥＭＢ）は、（２Ｓ，２’Ｓ）−２，２’−（エタン−１，２−ジイルジイミノ）ジブタン−１−オールに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化２】
2017533220.tif 000014
【００７２】
一部の実施形態では、４−アミノサリチル酸（ＰＡＳ）は、４−アミノ−２−ヒドロキシ−安息香酸に相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化３】
2017533220.tif 000015
【００７３】
一部の実施形態では、ベダキリン（ＴＭＣ２０７）は、（１Ｒ，２Ｓ）−１−（６−ブロモ−２−メトキシ−３−キノリル）−４−ジメチルアミノ−２−（１−ナフチル）−１−フェニル−ブタン−２−オールに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化４】
2017533220.tif 000016
【００７４】
一部の実施形態では、リファンピン（ＲＩＦ）は、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化５】
2017533220.tif 000017
【００７５】
一部の実施形態では、ピラジナミド（ＰＺＡ）は、ピラジン−２−カルボキサミドに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化６】
2017533220.tif 000018
【００７６】
一部の実施形態では、プロチオナミド（ＰＲＯ）は、２−プロピルピリジン−４−カルボチオアミドに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化７】
2017533220.tif 000019
【００７７】
一部の実施形態では、ＳＱ１０９は、Ｎ−アダマンタン−２−イル−Ｎ’−（（Ｅ）−３，７−ジメチル−オクタ−２，６−ジエニル）−エタン−１，２−ジアミンに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化８】
2017533220.tif 000020
【００７８】
一部の実施形態では、プレトマニド（ＰＡ８２４）は、（６Ｓ）−２−ニトロ−６−｛［４−（トリフルオロメトキシ）ベンジル］オキシ｝−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−イミダゾ［２，１−ｂ］［１，３］オキサジンに相当し、以下の構造または薬学的に許容されるその塩によって表される。
【化９】
2017533220.tif 000021
【００７９】
当業者は、本発明の化合物が、互変異性、立体配座異性、幾何異性および／または光学異性の現象を呈する場合があることを理解されよう。本明細書および特許請求の範囲に含まれる式の図は、可能な互変異性体、立体構造異性体、光学異性体または幾何異性体の形態の１つだけを表し得るので、本発明は、本明細書に記載の実用性の１つまたは複数を有する化合物の任意の互変異性体、立体構造異性体、光学異性体および／または幾何異性体の形態、ならびにこれらの様々な異なる形態の混合物を包含することを理解されたい。
【００８０】
「互変異性体」は、互いに平衡である化合物の異性体形態を指す。異性体形態の濃度は、化合物が見出される環境に応じて変わり、例えば化合物が固体であるか、または有機溶液もしくは水溶液であるかどうかに応じて異なり得る。例えば、水溶液中では、ピラゾールは、互いに互変異性体と呼ばれる以下の異性体形態を呈することができる。
【化１０】
2017533220.tif 000022
【００８１】
当業者に容易に理解される通り、多種多様な官能基および他の構造が、互変異性を呈する場合があり、本明細書に記載の化合物のあらゆる互変異性体は、本発明の範囲に含まれる。
【００８２】
「光学異性体」としても公知である化合物の立体異性体には、特定の立体化学が明確に示されない限り、構造のあらゆるキラル、ジアステレオマーおよびラセミ形態が含まれる。したがって、本発明で使用される化合物は、図から明らかである通り、任意のまたはすべての非対称原子において濃縮または分割された光学異性体を含む。ラセミ混合物およびジアステレオマー混合物の両方、ならびに個々の光学異性体は、それらの鏡像異性パートナーまたはジアステレオマーパートナーを実質的に含まないように単離または合成することができ、これらは、すべて本発明の範囲に含まれる。
【００８３】
「薬学的に許容される」は、生物学的にもその他の方式でも望ましくないことはない材料、すなわち患者に投与される医薬組成物に、任意の望ましくない生物学的作用を引き起こさず、または材料が含有されている組成物の他の構成成分のいずれとも有害な方式で相互作用せずに組み込むことができる材料を意味する。用語「薬学的に許容される」が、医薬担体または賦形剤に言及するために使用される場合、その担体または賦形剤は、中毒学的な製造試験に必要な標準を満たしているか、またはアメリカ食品医薬品局によって準備されているInactive  Ingredient  Guideに含まれることを暗示している。
【００８４】
「患者」は、処置が望まれる任意の動物を意味する。患者は、哺乳動物であってよく、典型的に、本明細書で使用される場合、患者は、ヒト個体である。
【００８５】
本明細書で使用される用語「薬学的に許容される塩」は、水溶性または油溶性または分散性であり、過度の毒性、刺激（irritation）およびアレルギー応答なしに疾患を処置するのに適しており、妥当な損益比に見合っており、それらの所期の使用にとって有効な、本発明の化合物の塩または双性イオン性形態を表す。塩は、化合物の最終的な単離および精製中に、または遊離塩基形態の適切な化合物を適切な酸と反応させることによって別個に、調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、Ｌ−アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩（ベシル酸塩）、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、ジグルコン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、ゲンチジン酸、グルタル酸塩、グリセロリン酸塩、グリコール酸、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、馬尿酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩（イセチオン酸塩）、乳酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、ＤＬ−マンデル酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩（phenylproprionate）、ホスホン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ピログルタミン酸塩、コハク酸塩、スルホン酸塩、酒石酸塩、Ｌ−酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、パラ−トルエンスルホン酸塩（ｐ−トシレート）、およびウンデカン酸塩が含まれる。また、本発明の化合物の塩基性基は、塩化、臭化およびヨウ化メチル、エチル、プロピルおよびブチル；硫酸ジメチル、ジエチル、ジブチルおよびジアミル；塩化、臭化およびヨウ化デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステリル；ならびに臭化ベンジルおよびフェネチルで四級化することができる。薬学的に許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例として、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸およびリン酸、ならびに有機酸、例えばシュウ酸、マレイン酸、コハク酸およびクエン酸が挙げられる。また塩は、化合物にアルカリ金属またはアルカリ土類イオンを配位することによって形成することができる。したがって、本発明は、本発明の化合物のナトリウム、カリウム、マグネシウム、およびカルシウム塩等を企図する。
【００８６】
用語「溶媒和物」は、その最も広範な意味で使用される。例えば溶媒和物という用語は、本発明の化合物が、１つまたは複数の結合した水分子を含有する場合に形成される水和物を含む。
【００８７】
ある特定の範囲は、本明細書では、数値に用語「約」が前置された状態で表される。用語「約」は、本明細書では、それが前置される正確な数、ならびにその用語が前置される数に近いかまたは近似する数を文字により裏付けるために使用される。ある数が、具体的に列挙された数に近いかまたは近似するかどうかの決定において、近いかまたは近似する列挙されていない数が、提示される文脈において具体的に列挙された数の実質的な均等物を提供する数であり得る。
【００８８】
別段定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する分野の技術者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似のまたは等価な任意の方法および材料も、本発明の実施または試験において使用され得るが、ここでは代表的な例示的方法および材料を記載する。
【００８９】
値のある範囲が提示される場合、文脈によって別段明示されない限り、その範囲の上限と下限の間にある、下限単位の１０分の１までの各介在値、および記載の範囲内の任意の他の記載値または介在値は、本発明に包含されると理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限は、独立に、そのより小さい範囲に含まれていてもよく、やはり本発明に包含され、記載の範囲において具体的に排除された任意の限界値の影響を受ける。記載の範囲が、限界値の一方または両方を含む場合、含まれているそれらの限界値のいずれかまたは両方を含まない範囲も、本発明に含まれる。
【００９０】
本開示を、その具体的な実施形態を参照して記載してきたが、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の真の精神および範囲から逸脱せずに、様々な変更を行うことができ、均等物で置換できることを、当業者は理解されたい。さらに、特定の状況、材料、物質の組成、方法、１つまたは複数の動作を採用するために、多くの改変を本開示の目的、精神および範囲に加えることができる。このようなすべての改変は、本明細書に添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。特に、ある特定の方法が、特定の順序で実施される特定の動作に言及して記載され得るが、これらの動作は、等価な方法を形成するために、本開示の教示から逸脱することなく組み合わせ、分割し、または順序変更できることを理解されよう。したがって、本明細書に具体的に示されない限り、動作の順序およびグループ分けは、本開示を制限しない。
【００９１】
本明細書に引用されているあらゆる刊行物および特許文書は、あたかも各個々の刊行物または特許文書が、参照によって組み込まれることが具体的に個々に示されているかのように、参照によって本明細書に組み込まれ、引用されている刊行物と関連する方法および／または材料を開示し説明するために参照によって本明細書に組み込まれる。任意の刊行物の引用は、出願日前のその開示に関するものであり、本発明が、従来の発明に関してこのような刊行物に先行する資格がないことの承認であると解釈されるべきではない。さらに、提示されている刊行物の日付は、実際の刊行物の日付とは異なる場合があり、独立に確認される必要があり得る。
【実施例】
【００９２】
ｖｉ．作用実施例
本発明の技術は、以下の実施例によってさらに例示されるが、これらの実施例は、いかなる場合でも限定的なものとみなされるべきではない。
【００９３】
阻害アッセイ：蛍光を定量化することによってＴＢ薬物の組合せの有効性を試験するｉｎ  ｖｉｔｒｏマクロファージアッセイ
Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ菌の調製
これらの実験では、ヒトマクロファージに感染するＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎ誘導性ＧＦＰｕｖ株（Ｍｔｂ−ｉＧＦＰ）を利用した。この株は、誘導物質であるＩＰＴＧと共にインキュベートすると、蛍光を発するように誘導される。感染接種菌液を調製するために、この株のグリセロール原液を、ハイグロマイシン（約５０μｇ／ｍｌ）およびカナマイシン（約１５μｇ／ｍｌ）を含有する７Ｈ１１寒天プレートで培養し、培養物を約３７℃、約５％ＣＯ２−９５％空気で１０日間インキュベートした。寒天プレートの菌叢を掻爬し、約２０ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したＲＰＭＩ−１６４０に入れた。細菌凝集体を、水浴超音波処理器中、約１５秒の８つの期間、細菌懸濁液を超音波処理することによって、超音波処理の間に約５秒間、氷浴で懸濁液を冷却しながら分散させた。残留凝集体を、約２００ｇで約４℃において約１０分間遠心分離することによって除去した。凝集した細菌ペレットを破棄し、上清懸濁液を、同じ条件下で再び遠心分離し、このプロセスを合計５回反復した。最終懸濁液の光学密度を、分光光度計で約５４０ｎｍにおいて測定した。最終懸濁液中の細菌数を、ＯＤ５４００．１＝２×１０７個の細菌／ｍｌの式に従って決定した。細菌（ＯＤ５４００．２）を、約１０％ヒト血清ＡＢ型を含むＲＰＭＩ中、約３７℃で約１０分間オプソニン化し、２０倍希釈し、マクロファージを感染させるために使用した。
【００９４】
ヒトマクロファージの調製
ヒト単球細胞株であるＴＨＰ−１を、約２ｍＭグルタミン、約１０％熱不活化ウシ胎児血清、およびペニシリン−ストレプトマイシン（それぞれ約１００Ｕ／ｍｌおよび約１００μｇ／ｍｌ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０で成長させた。ＴＨＰ−１細胞を、感染実験で使用する前に、約２００ｇで室温において約１０分間遠心分離することによって沈降させ、約２ｍＭグルタミン、約１０％熱不活化ウシ胎児血清および１３−酢酸１２−ミリスチン酸ホルボール（約１００ｎＭ）を補充したＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁させ、Ｍａｔｒｉｃａｌ  ９６ウェルガラス底プレートに、約１×１０５個の細胞／２００μｌ／ウェルの密度で、約３７℃、約５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気で３日間播種しておいた。
【００９５】
ＴＢ薬物の組合せの試験
１３−酢酸１２−ミリスチン酸ホルボールによって分化したＴＨＰ−１細胞の単層を、約１０：１の比のＭｔｂ−ｉＧＦＰに約９０分間感染させ、ＲＰＭＩで洗浄し、約１ｍＭのＩＰＴＧおよび実験的ＴＢ薬物の組合せを含む培地中でインキュベートした。各９６ウェルプレートには、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染していないウェル（感染なしの対照）、誘導物質であるＩＰＴＧを添加していないウェル（ＩＰＴＧなしの対照）、およびＴＢ薬物が添加されていないウェル（薬物なしの対照）が含まれていた。すべての条件を、無作為化ウェル位置で三重に実施した。培養物を４日間インキュベートした後、ダルベッコリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中約４％パラホルムアルデヒドで１時間固定した。細胞核を、約０．１％のＴｗｅｅｎ  ２０を含有するＰＢＳ中、約１μｇ／ｍｌのＨｏｅｃｈｓｔ  ３３３４２で、約１０分間染色した。単層を、ＰＢＳで２回洗浄し、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）ハイスループット落射蛍光顕微鏡で、１０倍対物レンズを使用して画像化した。３つのＧＦＰおよびＨｏｅｃｈｓｔ落射蛍光画像を、各ウェルの非オーバーラップ領域から、それぞれＦＩＴＣおよびＤＡＰＩフィルタキューブを使用して得た。自動化画像分析を、ＭｅｔａＸｐｒｅｓｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）ソフトウェアのＧｒａｎｕｌａｒｉｔｙ  ａｎｄ  Ｃｏｕｎｔ  Ｎｕｃｌｅｉモジュールを使用して行って、画像化したエリアごとに、それぞれ積分ＧＦＰ蛍光強度とマクロファージ核の数を定量した。
【００９６】
モキシフロキサシンの用量応答アッセイの一例を、図１に示す。
【００９７】
標準レジメン薬物、第二選択の薬物、および実験的ＴＢ薬物を含むすべての１４種の薬物に関する用量応答曲線を、図２Ａ〜２Ｃに示す。
【００９８】
最終的な阻害アッセイの結果を、図３に示す。図３において、５種のＴＢ薬物対標準レジメンの組合せを試験するｉｎ  ｖｉｔｒｏ阻害アッセイにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの阻害。最終的な阻害アッセイ。ＴＢ薬物の５０種のレジメンおよび標準レジメンを、蛍光測定によってアッセイされる通り、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの成長阻害に関するアッセイで試験した。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの蛍光阻害パーセンテージを、組合せごとに示す。多くの組合せが、標準レジメンよりも高い阻害を示す。
【００９９】
（ＩＩ）死滅アッセイ：コロニー形成単位（ＣＦＵ）を定量化することによってＴＢ薬物の組合せの有効性を試験するｉｎ  ｖｉｔｒｏマクロファージアッセイ
細菌
これらの研究では、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎ株を使用して、マクロファージを感染させた。グリセロール原液から得たＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを、７Ｈ１１寒天プレート上に広げ、約３７℃、約５％ＣＯ２−９５％空気で１０日間インキュベートした。細菌を、ヒトマクロファージの感染に使用するために、先のセクションに記載されている通り調製した。
【０１００】
マクロファージ
前述の通り調製した。
【０１０１】
ＴＢ薬物の組合せの試験
１３−酢酸１２−ミリスチン酸ホルボールによって分化したＴＨＰ−１細胞の単層を、約１０：１の比のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに約９０分間感染させ、ＲＰＭＩで洗浄し、薬物なし（薬物なしの対照）、標準レジメン（ＩＮＨ、ＲＩＦ、ＥＭＢ、およびＰＺＡ）、または実験的ＴＢ薬物レジメンを含む培地中で、約３７℃、約５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気においてインキュベートした。標準レジメンおよび実験的ＴＢ薬物を、１×、４×、および１６×の投与量で投与し、蛍光アッセイでは、１×薬物濃度を２０％阻害用量とした。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを、薬物なしの対照ウェルのＣＦＵを数えるために、約９０分において、１日目において、および３日目において収集して、細菌成長量を確立し、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓを、すべての薬物処理ウェルから１日目および３日目に収集して、薬物の有効性をアセスメントした。ウェル中の生存Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの数を数えるために、感染マクロファージを、約０．１％ＳＤＳで約１０秒間溶解し、溶菌液を連続希釈し、希釈物を７Ｈ１１−０．４％チャコール寒天上に蒔いた。そのプレートを、約３７℃、約５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気で４週間インキュベートした後、各プレート上のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ数を計数した。
【０１０２】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイの結果を、以下の図４および５に示す。
【０１０３】
図４Ａは、３種の薬物による実験的レジメンを示している。図４Ｂは、４種の薬物による実験的レジメンを示している。
【０１０４】
図１１には、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイにおけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの死滅が示されている。様々な実験薬物レジメンＡおよびＭ〜Ｗ（示されている通り、ＲＡ、ＲＭ〜ＲＷ）を、示されている通り、１×、４×、および１６×濃度で標準レジメン（ＳＲ）に対してプロットする。また、実験薬物レジメンＬおよびＸ（示されている通り、ＲＬ、ＲＸ）を、１×、４×、および１６×濃度で標準レジメン（ＳＲ）に対してプロットするが、レジメンＬでは、ＣＬＺおよびＰＲＯの用量を半分にし（「Ｌ」は、１×、４×または１６×であろうと通常用量の半分であることを示し、Ｈは、通常用量である）、レジメンＸでは、ＥＭＢの用量を半分にした（やはり、「Ｌ」は、１×、４×または１６×であろうと通常用量の半分であることを示す）。３種の薬物を含有する実験的レジメンは、図１１Ａに示されており、４種の薬物を含有する実験的レジメンは、図１１Ｂに示されている。標準レジメンは、常に４種の薬物であった。特に１６×濃度では、実験薬物レジメンの多くが、標準レジメンよりも優れている。
【０１０５】
図５Ａ、５Ｂおよび５Ｃは、それぞれ１×薬物濃度、４×薬物濃度、および１６×薬物濃度を示す。図５Ａ〜５Ｃでは、様々な実験薬物レジメンＡおよびＭ〜Ｗを、示されている通り、１×、４×、および１６×濃度で標準レジメン（Ｖ）に対してプロットする。また、実験薬物レジメンＬおよびＸを、１×、４×、および１６×濃度で標準レジメン（Ｖ）に対してプロットするが、レジメンＬでは、ＣＬＺおよびＰＲＯの用量を半分にし（１×、４×または１６×であろうと通常用量の半分である）、レジメンＸでは、ＥＭＢの用量を半分にした（１×、４×または１６×であろうと通常用量の半分である）。マクロファージにおけるｉｎ  ｖｉｔｒｏ死滅アッセイから得られた３日分のＣＦＵデータを提示する。データは、レジメンごとのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ／ウェルのｌｏｇのＣＦＵである。レジメンを構成する薬物を、グラフの右に列挙し、バーの下の「＋」標示によっても示す。特に１６×濃度では、実験薬物レジメンの多くが、標準レジメンよりも優れている。
【０１０６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏマクロファージ内Ｍｔｂ−ｉＧＦＰモデルにおける薬物の組合せの有効性
分化ＴＨＰ−１細胞（ヒト単球性細胞株から得られた）の単層を、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ−ｉＧＦＰ（Ｍｔｂ−ｉＧＦＰ）で約３時間感染させた後、イソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）および実験的ＴＢ薬物の組合せを含む培地中でインキュベートした。試験した薬物の組合せを、直交性配列中心複合設計（ＯＡＣＤ）によって、ＦＳＣスキームに従って決定した。単層を、ＩｍａｇｅＸｐｒｅｓｓ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）ハイスループット落射蛍光顕微鏡で画像化し、その阻害を、以下の方程式によって算出した。
【数７】
2017533220.tif 000023
【０１０７】
得られた結果を使用して、ＦＳＣスキームに従って二次モデルにフィットさせた。このモデルを使用して、以下の最適な薬物用量の組合せを、ＴＢについて識別する。
【表３−１】
2017533220.tif 000024
【表３−２】
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【表３−３】
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【０１０８】
肺ＴＢのマウスモデルにおけるＦＳＣレジメンＩ（組合せ番号４７）の有効性（マウスｉｎ  ｖｉｖｏ実験１）
病原体を含まない８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス６５匹を、Ｔａｃｏｎｉｃから購入した。マウスを、５匹１群で収容し、食餌および水を自由に摂取させた。７日の隔離期間後、マウスを、約１．８７５×１０６のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｅｒｄｍａｎ株の懸濁液約２０ｍｌから作成したエアロゾルで感染させた。その１日後に、マウス２匹を安楽死させて、それらの肺内の初期細菌数を決定した。マウス２匹は、２．２２±０．０９ｌｏｇ（平均±標準誤差（ＳＥ））コロニー形成単位（ＣＦＵ）のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ／肺（全肺）を有していた。２週間後、マウス３匹を安楽死させて、その時点の肺内細菌数を決定すると、マウス３匹は、６．２４±０．０５ｌｏｇのＣＦＵ（平均±ＳＥ）／全肺を有していた。次に、マウスを以下の通り１２の処置群に分けた。
Ａ群：ビヒクルだけで処置したシャム（マウス５匹）
Ｂ群：ＲＩＦ／ＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡ（標準レジメン）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｃ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／低／低／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｄ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／低／高／低）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｅ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／高／低／低）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｆ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／高／高／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｇ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／高／高／低）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｈ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／高／低／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｉ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／低／高／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｊ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／高／中／中）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｋ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／中／高／中）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｌ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（高／中／中／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
【０１０９】
マウスを、先に示されている通り、高、中および低用量の薬物で、経口強制飼育によって週５回（月〜金）で４週間処置した。高、中および低用量に相当する薬物量は、以下の通りである。
【表４】
2017533220.tif 000027
【０１１０】
標準レジメンを受けた群に、以下の用量の薬物を投与した。
【表５】
2017533220.tif 000028
【０１１１】
マウスを、以下の通り各設定（sitting）で２回強制飼育した。Ｂ群には、まずＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡを投与し、その４５分後またはそれ以降にＲＩＦを投与した。Ｃ〜Ｌ群には、まずＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡを投与し、その４５分後またはそれ以降にＣＬＺを投与した。Ａ群には、まずビヒクルＩ（アガロース溶液）を投与し、その４５分後またはそれ以降にビヒクルＩＩ（水）を投与した。
【０１１２】
最終処置投与の３日後に、すべてのマウスを安楽死させ、それらの肺、肝臓および脾臓を無菌状態で取り出し、病理について肺を点検した。臓器を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）でホモジナイズし、ホモジネートを連続希釈し、アンピシリン（約１２．５μｇ／ｍｌ）、アンホテリシンＢ（約５μｇ／ｍｌ）、およびポリミキシンＢ（約２０単位／ｍｌ）を含有する７Ｈ１１−０．４％チャコール寒天上に蒔いた。プレートを、約３７℃において約５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気で４週間インキュベートした後、各プレート上のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ数を計数した。
【０１１３】
点検すると、Ａ群のマウス（シャム処置）は、多数の肺結節によって証拠付けられた通り、最も病理を有していた。Ｂ群のマウス（標準レジメン）は、Ａ群のマウスよりもいくらか病理が少なかった。Ｃ〜Ｌ群のマウスは、著しく少ない結節によって証拠付けられた通り、Ｂ群よりも病理が少なかった。
【０１１４】
肺内のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの臓器負荷に関して、マウスは、それらの肺内に以下のＣＦＵ計数を有していた。
【表６】
2017533220.tif 000029
【０１１５】
肝臓および脾臓におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの臓器負荷に関して、シャム処置したマウスだけが、かなりの数を有していた。シャム処置マウスは、肝臓に４．０７±０．１９（平均±ＳＥ）ｌｏｇのＣＦＵを有しており、脾臓に５．０３±０．１１（平均±ＳＥ）ｌｏｇを有していた。すべての処置群は、脾臓に約１．７ｌｏｇ未満のＣＦＵを有しており、肝臓に約２．２ｌｏｇ未満のＣＦＵを有していた。
【０１１６】
安楽死時の肺データを、図７にグラフで提示する。図８は、実験開始（０日目）、チャレンジの１４日後（１４日目）および処置開始の２８日後（４２日目）のデータを示す。図８において、感染および高（Ｈ）、中（Ｍ）または低（Ｌ）用量の薬物による処置の間の、Ａ〜Ｌ群のマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。マウスを、エアロゾルによってＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎに感染させ（０日目）、チャレンジの１４日後に開始して４週間処置し（１４日目〜３９日目）、最終処置の３日後に安楽死させて（４２日目）、肺内の細菌負荷を決定した。Ｃ〜Ｌ群のマウスを、ＦＳＣレジメンＩであるＣＬＺ、ＥＭＢ、ＰＲＯ、およびＰＺＡの薬物の組合せにより、示されている通り、個々の薬物を高（Ｈ）、中（Ｍ）または低（Ｌ）用量で用いて処置した。
【０１１７】
概要および結論。すべての１０のＦＳＣレジメンＩ処置群のマウスは、標準レジメンで処置したマウスよりも、肺内のＣＦＵが少なかった。最良のＦＳＣレジメンＩ群のマウスは、標準レジメンで処置したマウスよりも、肺内のＣＦＵが約１．８ｌｏｇ少なかった。ＦＳＣレジメンＩ処置群のマウスは、シャム群のマウスおよび標準レジメンで処置した群のマウスよりも肺病理が少なかった。したがってＦＳＣレジメンＩは、標準レジメンよりも著しく優れていた。
【０１１８】
肺ＴＢのマウスモデルにおけるＦＳＣレジメンＩＩ（組合せ番号４８）の有効性（マウスｉｎ  ｖｉｖｏ実験２）
病原体を含まない８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス６５匹を、Ｔａｃｏｎｉｃから購入した。マウスを、５匹１群で収容し、食餌および水を自由に摂取させた。７日の隔離期間後、マウスを、約１．８７５×１０６のＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｅｒｄｍａｎ株の懸濁液約２０ｍｌから作成したエアロゾルで感染させた。その１日後に、マウス２匹を安楽死させて、それらの肺内の初期細菌数を決定した。マウス２匹は、２．３６±０．１１ｌｏｇ（平均±ＳＥ）のＣＦＵのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ／肺（全肺）を有していた。２週間後、マウス３匹を安楽死させて、その時点の肺内細菌数を決定すると、マウス３匹は、６．０９±０．０４ｌｏｇのＣＦＵ（平均±ＳＥ）／全肺を有していた。次に、マウスを以下の通り１２の処置群に分けた。
Ａ群：ビヒクルだけで処置したシャム（マウス５匹）
Ｂ群：ＲＩＦ／ＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡ（標準レジメン）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｃ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／低／低／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｄ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／低／高／低）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｅ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／高／低／低）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｆ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／高／高／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｇ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／高／高／低）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｈ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／高／低／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｉ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／低／高／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｊ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／高／中／中）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｋ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／中／高／中）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
Ｌ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（高／中／中／高）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス５匹）
【０１１９】
マウスを、先に示されている通り、高、中および低用量の薬物で、経口強制飼育によって週５回（月〜金）で４週間処置した。高、中および低用量に相当する薬物量は、以下の通りである。
【表７】
2017533220.tif 000030
【０１２０】
標準レジメンを受けた群に、表５に示した用量と同じ用量の薬物を投与した。
【０１２１】
マウスを、以下の通り各設定で２回強制飼育した。Ｂ群には、まずＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡを投与し、その４５分後またはそれ以降にＲＩＦを投与した。Ｃ〜Ｌ群には、まずＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡを投与し、その４５分後またはそれ以降にＣＬＺを投与した。Ａ群には、前述の通り投与した。
【０１２２】
最終処置投与の３日後に、すべてのマウスを安楽死させ、それらの肺、肝臓および脾臓を無菌状態で取り出し、病理について肺を点検した。臓器を、ＰＢＳでホモジナイズし、ホモジネートを連続希釈し、アンピシリン（約１２．５μｇ／ｍｌ）、アンホテリシンＢ（約５μｇ／ｍｌ）、およびポリミキシンＢ（約２０単位／ｍｌ）を含有する７Ｈ１１−０．４％チャコール寒天上に蒔いた。プレートを、約３７℃において約５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気で４週間インキュベートした後、各プレート上のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ数を計数した。
【０１２３】
点検すると、Ａ群のマウス（シャム処置）は、多数の肺結節によって証拠付けられた通り、最も病理を有していた。Ｂ群のマウス（標準レジメン）は、Ａ群のマウスよりもいくらか病理が少なかった。Ｃ〜Ｌ群のマウスは、著しく少ない結節によって証拠付けられた通り、Ｂ群よりも病理が少なかった。
【０１２４】
肺内のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの臓器負荷に関して、マウスは、それらの肺内に以下のＣＦＵ計数を有していた。
【表８】
2017533220.tif 000031
【０１２５】
肝臓および脾臓におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの臓器負荷に関して、シャム処置したマウスだけが、かなりの数を有していた。シャム処置マウスは、肝臓に４．２６±０．３０（平均±ＳＥ）ｌｏｇのＣＦＵを有しており、脾臓に４．８５±０．１３（平均±ＳＥ）ｌｏｇを有していた。すべての処置群は、脾臓に約１．０４ｌｏｇ未満のＣＦＵを有しており、肝臓に約０．８９ｌｏｇ未満のＣＦＵを有していた。シャム処置した、標準レジメンで処置した、または高（Ｈ）、中（Ｍ）もしくは低（Ｌ）用量の薬物によるＦＳＣレジメンＩＩで、週５回、４週間処置したマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。
【０１２６】
安楽死時の肺データを、図８にグラフで提示する。図８において、シャム処置したか、標準レジメンで処置したか、または高（Ｈ）、中（Ｍ）もしくは低（Ｌ）用量の薬物によるＦＳＣレジメンＩＩで、週５回、４週間処置したマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。図９は、実験開始（０日目）、チャレンジの１４日後（１４日目）および処置開始の２８日後（４２日目）のデータを示す。図９において、感染および処置の間の、Ａ〜Ｌ群のマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。マウスを、エアロゾルによってＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎに感染させ（０日目）、チャレンジの１４日後に開始して４週間処置し（１４日目〜３９日目）、最終処置の３日後に安楽死させて（４２日目）、肺内の細菌負荷を決定した。Ｃ〜Ｌ群のマウスを、ＦＳＣレジメンＩＩであるＣＬＺ、ＥＭＢ、ＴＭＣ、およびＰＺＡからなる薬物の組合せにより、個々の薬物を高（Ｈ）、中（Ｍ）または低（Ｌ）用量で用いて処置した。
【０１２７】
概要および結論。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染させ、すべての１０のＦＳＣレジメンＩＩで処置した処置群のマウスは、標準レジメンで処置したマウスよりも、肺内のＣＦＵが少なかった。最良のＦＳＣレジメンＩＩ群のマウスは、標準レジメンで処置したマウスよりも、肺内のＣＦＵが約３．２ｌｏｇ少なかった。ＦＳＣレジメンＩＩ処置群のマウスは、シャム群のマウスおよび標準レジメンで処置した群のマウスよりも肺病理が少なかった。したがってＦＳＣレジメンＩＩは、標準レジメンよりも著しく優れていた。
【０１２８】
肺ＴＢのマウスモデルにおけるＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡ、およびＩＩＢの有効性および再発（マウスｉｎ  ｖｉｖｏ実験３）
病原体を含まない８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス１３７匹を、Ｈａｒｌａｎから購入した。マウスを、食餌および水を自由に摂取できる状態で収容した。７日の隔離期間後、マウスを、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｅｒｄｍａｎ株に感染させた。その１日後に、マウス２匹を安楽死させて、それらの肺内の初期細菌数を決定した。マウス２匹は、２．０７±０．０８ｌｏｇ（平均±ＳＥ）のＣＦＵのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ／肺（全肺）を有していた。２週間後、マウス３匹を安楽死させて、その時点の肺内細菌数を決定すると、マウス３匹は、６．０４±０．０８ｌｏｇのＣＦＵ（平均±ＳＥ）／全肺を有していた。次に、マウスを以下の通り１０の処置群に分けた。
有効性の研究
Ａ群：ビヒクルだけで強制飼育により５×／週で２、３、４、６または８週間処置したシャム（マウス２５匹）
Ｂ群：ＲＩＦ／ＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡ（標準レジメン）を強制飼育により５×／週で２、３、４、６または８週間（マウス２５匹）
Ｃ群：ＲＩＦ／ＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡ（強化標準レジメン）を強制飼育により５×／週で３、４または８週間（マウス１５匹）
Ｄ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩ）を強制飼育により５×／週で４、６または８週間（マウス１５匹）
Ｅ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＡ）を強制飼育により５×／週で２、３、４、６週間（マウス２０匹）
Ｆ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＢ）を強制飼育により５×／週で２または３週間（マウス１０匹）
再発の研究
Ｈ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＡ）を強制飼育により５×／週で３週間（マウス８匹）
Ｉ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＡ）を強制飼育により５×／週で４週間（マウス７匹）
Ｊ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＡ）を強制飼育により５×／週で６週間（マウス５匹）
【０１２９】
マウスを、先に示されている通り、標準レジメン、強化標準レジメン、ＦＳＣレジメンＩ、ＦＳＣレジメンＩＩＡ、またはＦＳＣレジメンＩＩＢで、経口強制飼育によって週５回（月〜金）で２〜８週間処置した。各処置レジメンにおける薬物量は、以下の通りである。
【表９】
2017533220.tif 000032
【０１３０】
各組合せの薬物レジメンにおける薬物および薬物用量を、図１２に示す。
【０１３１】
研究の有効性部分のために、最終処置投与の３日後に、Ａ〜Ｆ群のマウスを安楽死させ、それらの肺を無菌状態で取り出し、病理について点検し、ＰＢＳでホモジナイズし、連続希釈し、アンピシリン（約１２．５μｇ／ｍｌ）、アンホテリシンＢ（約５μｇ／ｍｌ）、およびポリミキシンＢ（約２０単位／ｍｌ）を含有する７Ｈ１１−０．４％チャコール寒天上に蒔いた。プレートを、約３７℃において約５％ＣＯ２−９５％空気雰囲気で４週間インキュベートした後、各プレート上のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ数を計数した。
【０１３２】
研究の再発部分のために、様々な時間にわたってすべてＦＳＣレジメンＩＩＡで処置したＨ〜Ｊ群のマウスを、最終処置の３カ月後に安楽死させ、それらの肺および脾臓をホモジナイズし、肺および脾臓当たりのＣＦＵを、臓器全体を蒔くことによって決定した。
【０１３３】
図１３は、この実施例のマウスｉｎ  ｖｉｖｏ試験のスキームを示す。点検すると、Ａ群のマウス（シャム処置）は、多数の肺結節によって証拠付けられた通り、最も病理を有していた。Ｂ群のマウス（標準レジメン）は、Ａ群のマウスよりもいくらか病理が少なかった。Ｃ群のマウス（強化標準レジメン）は、著しく少ない結節によって証拠付けられた通り、Ｂ群よりも病理が少なかった。Ｄ〜Ｆ群のマウス（ＦＳＣレジメン）は、肺病変が最も少なかった。
【０１３４】
肺内のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの臓器負荷に関して、ＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡ、およびＩＩＢで処置したマウスは、標準レジメンまたは強化標準レジメン（高ＰＺＡ）で処置したマウスよりも、肺内のＣＦＵが少なかった。
【０１３５】
ＦＳＣレジメンＩＩは、ＦＳＣレジメンＩよりも有効性が高かった。ＦＳＣレジメンＩＩＢは、ＦＳＣレジメンＩＩＡよりも速やかにＣＦＵを低減した。
【０１３６】
図１４は、８週間の処置にわたるＦＳＣレジメンＩおよびＩＩＡ／Ｂの有効性を示す図である。図１４において、感染および処置の経過に亘る、Ａ〜Ｆ群のマウスの肺当たりのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓのＣＦＵ。マウスを、エアロゾルによってＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｅｒｄｍａｎに感染させ（０日目）、チャレンジの１４日後に開始して最長８週間処置し（１４日目〜６７日目）、最終処置の３日後に安楽死させて（７０日目）、肺内の細菌負荷を決定した。マウスを、示されている通り、ＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡ、またはＩＩＢで処置した。ＬＯＤ：検出限界。
【０１３７】
図１５は、２、３、４、６または８週間の処置後のＦＳＣレジメンＩおよびＩＩＡ／Ｂの有効性を示す図である。図１５において、示されている通り、シャム処置した（シャム）、標準レジメン（ＳＲ）で処置した、強化標準レジメン（ＥＳＲ）で処置した、またはＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡもしくはＩＩＢで処置したマウスの肺の、処置後の様々な時間におけるＣＦＵ。すべての処置期間について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【０１３８】
ＦＳＣレジメンＩＩＡで４週間処置したマウスは、再発せずに治癒した（以下参照）。この時点で、標準レジメンで処置したマウスは、それらの肺内に約３．８５ｌｏｇのＣＦＵを有していた。
【０１３９】
図１６〜１８は、ＦＳＣレジメンＩＩＡによる３、４または６週間の処置が完了してから３日後の個々のマウスの肺のＣＦＵ、および処置が完了してから３カ月後の個々のマウスの肺のＣＦＵを示す。
【０１４０】
図１６は、ＦＳＣレジメンＩＩＡで３週間処置してから３日後（有効性）および３カ月後（再発）の肺負荷を示す。図１７は、ＦＳＣレジメンＩＩＡで４週間処置してから３日後（有効性）および３カ月後（再発）の肺負荷を示す。図１８は、ＦＳＣレジメンＩＩＡで６週間処置してから３日後（有効性）および３カ月後（再発）の肺負荷を示す。
【０１４１】
概要および結論。Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓに感染させ、ＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡ、およびＩＩＢで処置したマウスは、標準レジメンまたは強化標準レジメン（高ＰＺＡ）で処置したマウスよりも、肺内のＣＦＵが少なかった。ＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡおよびＩＩＢ処置群のマウスは、シャム群、標準レジメンで処置した群、および強化標準レジメンで処置した群よりも肺病理が少なかった。
【０１４２】
ＦＳＣレジメンＩＩＡで４週間処置したマウスは、再発せずに治癒した。この時点で、標準レジメンで処置したマウスは、それらの肺内に約３．８５ｌｏｇのＣＦＵを有していた。ＦＳＣレジメンＩＩＢで処置したマウスは、ＦＳＣレジメンＩＩＡで処置したマウスよりも速やかに、肺のＣＦＵを低減した。したがって、ＦＳＣレジメンＩ、ＩＩＡおよびＩＩＢは、標準レジメンよりも著しく優れていた。
【０１４３】
肺ＴＢのマウスモデルにおけるＦＳＣレジメンＩおよびＩＩＣの有効性および再発（マウスｉｎ  ｖｉｖｏ実験４）
病原体を含まない８週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス２２８匹を、Ｈａｒｌａｎから購入した。マウスを、食餌および水を自由に摂取できる状態で収容した。７日の隔離期間後、マウスを、記載の通り、エアロゾルによってＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｅｒｄｍａｎ株に感染させた。その１日後に、マウス２匹を安楽死させて、それらの肺内の初期細菌数を決定した。マウス２匹は、２．３０±０．０３ｌｏｇ（平均±ＳＥ）のＣＦＵのＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ／肺（全肺）を有していた。２週間後、マウス３匹を安楽死させて、その時点の肺内細菌数を決定すると、マウス３匹は、５．６８±０．２１ｌｏｇのＣＦＵ（平均±ＳＥ）／全肺を有していた。次に、マウスを以下の通り６つの処置群に分けた。
有効性および再発の研究
Ａ群：ビヒクルだけで強制飼育により５×／週で３、４、６、８、１２、１６、２０または２４週間処置したシャム（マウス４０匹）
Ｂ群：ＲＩＦ／ＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡ（標準レジメン）を強制飼育により５×／週で３、４、６または８週間、次にＲＩＦ／ＩＮＨ単独で１２、１６、２０または２４週間まで（マウス５５匹）
Ｃ群：ＲＩＦ／ＥＭＢ／ＩＮＨ／ＰＺＡ（強化標準レジメン）を強制飼育により５×／週で３、４、６または８週間、次にＲＩＦ／ＩＮＨ単独で１２、１６、２０または２４週間まで（マウス５５匹）
Ｄ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＰＲＯ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩ）を強制飼育により５×／週で８または１２週間（マウス２０匹）
Ｅ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＣ）を強制飼育により５×／週で３、４または６週間（マウス３０匹）
Ｆ群：ＣＬＺ／ＥＭＢ／ＴＭＣ／ＰＺＡ（ＦＳＣレジメンＩＩＣ）を強制飼育により毎日、２または３週間（マウス２０匹）
【０１４４】
ＦＳＣレジメンＩＩＣの薬物用量を、マウスｉｎ  ｖｉｖｏ実験２および３の分析に基づいて最適化した（図２４）。ＴＭＣ２０７およびＰＺＡの最適な用量を、それぞれ約３０ｍｇ／ｋｇおよび約４５０ｍｇ／ｋｇに調整した。ＣＬＺおよびＥＭＢの用量を、それぞれ約２５ｍｇ／ｋｇおよび約１００ｍｇ／ｋｇで一定に保った。
【０１４５】
マウスを、先に示されている通り、標準レジメン、強化標準レジメンもしくはＦＳＣレジメンＩＩＣにより週５回（月〜金）で２〜８週間、またはＦＳＣレジメンＩＩＣにより毎日２〜３週間、経口強制飼育によって処置した。各処置レジメンにおける薬物量は、以下の通りである。
【表１０】
2017533220.tif 000033
【０１４６】
図２４は、ＦＳＣレジメンＩＩのヒートマップを示す。図１７は、実験のマウスｉｎ  ｖｉｖｏデータのスキームを示す。図１８は、６週間の処置にわたるＦＳＣレジメンＩＩＣの有効性を示す。図１９において、感染および処置期間の間の肺におけるＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓの負荷。ここではマウスを、シャム処置し（シャム）、または標準レジメン、強化標準レジメンもしくはＦＳＣレジメンＩＩＣで週５日（月〜金）処置し、またはＦＳＣレジメンＩＩＣで毎日処置した。
【０１４７】
図２１は、３、４または６週間の処置後のＦＳＣレジメンＩＩＣの有効性を示す。図２１において、示されている通り、５日／週（月〜金）、シャム処置した（シャム）か、標準レジメン（ＳＲ）で処置したか、強化標準レジメン（ＥＳＲ）で処置したか、またはＦＳＣレジメンＩＩＣで処置したマウスの肺の、処置後の様々な時間におけるＣＦＵ。追加の一群を、ＦＳＣレジメンＩＩＣで毎日３週間処置した。すべての処置期間について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【０１４８】
図１９は、８週間の処置後のＦＳＣレジメンＩの有効性を示す。図１９において、感染および処置期間経過に亘る肺のＭ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ負荷。ここではマウスを、週５日（月〜金）、シャム処置し（シャム）、または標準レジメン、強化標準レジメンもしくはＦＳＣレジメンＩで処置した。すべての処置期間の間、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【０１４９】
以下の図２３は、標準レジメン、強化標準レジメン、およびＦＳＣレジメンＩで８週間処置した後のマウスの肺のＣＦＵを示す。図２１において、５日／週（月〜金）で８週間、シャム処置した（シャム）か、標準レジメン（ＳＲ）で処置したか、強化標準レジメンで処置した（ＥＳＲ）か、またはＦＳＣレジメンＩで処置したマウスの肺のＣＦＵ。すべての群について、マウスを、最終処置の３日後に安楽死させた。
【０１５０】
ＦＳＣレジメンＩによる８週間の処置が完了したら、マウスは、Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ感染が完全に無菌化されていた。
【０１５１】
概要および結論：ＦＳＣレジメンＩＩＣ。ＦＳＣレジメンＩＩＣで処置したマウスは、標準レジメンまたは強化標準レジメン（高ＰＺＡ）で処置したマウスよりも、肺内におけるＣＦＵが少なかった。ＦＳＣレジメンＩＩＣ処置群のマウスは、シャム群、標準レジメンで処置した群、および強化標準レジメンで処置した群のマウスよりも肺病理が少なかった。ＦＳＣレジメンＩＩＣで３週間処置したマウスは、平均で約１ＣＦＵ／肺（Ｌｏｇ０）であり、これは、既に記載した実験でＦＳＣレジメンＩＩＡにより再発せずに治癒した量［平均約３．５ＣＦＵ／肺（０．４ｌｏｇ）］よりも低かった。したがって、ＦＳＣレジメンＩＩＣは、３週間でマウスを治癒させる可能性が高い（処置の休止後に再発なし）。この時点（３週目）で、標準レジメンで処置したマウスは、それらの肺内に約４．２ｌｏｇのＣＦＵを有していた。ＦＳＣレジメンＩＩＣを毎日投与すると、ＦＳＣレジメンＩＩＣを５日／週投与したよりも（Ｌｏｇ０）、３週目でＣＦＵがさらに低減した（Ｌｏｇ−０．７）。したがって、ＦＳＣレジメンＩＩＣは、標準レジメンおよび強化標準レジメンよりも著しく優れている。
【０１５２】
概要および結論：ＦＳＣレジメンＩ。ＦＳＣレジメンＩで８週間処置したマウスは、それらの肺全体のＣＦＵは本質的に０であったが（絶対的０）、標準レジメンまたは強化標準レジメン（高ＰＺＡ）で処置したマウスは、それらの肺内にまだＣＦＵを有していた。したがって、ＦＳＣレジメンＩは、８週間でマウスを治癒させる（処置の休止後に再発なし）。ＦＳＣレジメンＩ処置群のマウスは、シャム群、標準レジメンで処置した群、および強化標準レジメンで処置した群のマウスよりも肺病理が少なかった。したがって、ＦＳＣレジメンＩは、標準レジメンおよび強化標準レジメンよりも著しく優れている。
【０１５３】
ｖｉｉ．実施形態
以下の実施形態は、本開示の範囲に含まれる。
【０１５４】
実施形態１。  薬学的に有効な量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンの組合せを含む、医薬組成物。
【０１５５】
実施形態２。  前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンである、実施形態１に記載の医薬組成物。
【０１５６】
実施形態３。  前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドである、実施形態１に記載の医薬組成物。
【０１５７】
実施形態４。  それを必要としている対象の結核を処置する方法であって、前記患者に、治療有効量の、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンを含む薬物の組合せを投与するステップを含む、方法。
【０１５８】
実施形態５。  前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンを含む、実施形態４に記載の方法。
【０１５９】
実施形態６。  前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドを含む、実施形態４または５に記載の方法。
【０１６０】
実施形態７。  前記組合せの（ａ）〜（ｄ）の１つまたは複数が、逐次的に投与される、実施形態４〜６の１項に記載の方法。
【０１６１】
実施形態８。  （ａ）〜（ｄ）の１つまたは複数が、同時に投与される、実施形態４〜７の１項に記載の方法。
【０１６２】
実施形態９。  前記対象が、哺乳動物である、実施形態４〜８の１項に記載の方法。
【０１６３】
実施形態１０。  前記哺乳動物が、ヒトである、実施形態９に記載の方法。
【０１６４】
実施形態１１。  前記薬物の組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドまたはベダキリンからなる、実施形態４〜１０の１項に記載の方法。
【０１６５】
実施形態１２。  前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）ベダキリンからなる、実施形態４〜１１の１項に記載の方法。
【０１６６】
実施形態１３。  前記組合せが、（ａ）クロファジミン、（ｂ）エタンブトール、（ｃ）ピラジナミド、および（ｄ）プロチオナミドからなる、実施形態４〜１１の１項に記載の方法。
【０１６７】
実施形態１４。  前記結核が、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓによって引き起こされる、実施形態４〜１３の１項に記載の方法。
【０１６８】
実施形態１５。  前記結核が、多剤耐性ＴＢである、実施形態４〜１４の１項に記載の方法。
【０１６９】
実施形態１６。  前記結核が、広範囲薬物耐性ＴＢである、実施形態４〜１４の１項に記載の方法。
【図１】
2017533220.tif 000034
【図２Ａ】
2017533220.tif 000035
【図２Ｂ】
2017533220.tif 000036
【図２Ｃ−１】
2017533220.tif 000037
【図２Ｃ−２】
2017533220.tif 000038
【図３】
2017533220.tif 000039
【図４Ａ−１】
2017533220.tif 000040
【図４Ａ−２】
2017533220.tif 000041
【図４Ｂ−１】
2017533220.tif 000042
【図４Ｂ−２】
2017533220.tif 000043
【図５Ａ】
2017533220.tif 000044
【図５Ｂ】
2017533220.tif 000045
【図５Ｃ】
2017533220.tif 000046
【図６−１】
2017533220.tif 000047
【図６−２】
2017533220.tif 000048
【図７】
2017533220.tif 000049
【図８】
2017533220.tif 000050
【図９】
2017533220.tif 000051
【図１０】
2017533220.tif 000052
【図１１】
2017533220.tif 000053
【図１２】
2017533220.tif 000054
【図１３】
2017533220.tif 000055
【図１４】
2017533220.tif 000056
【図１５】
2017533220.tif 000057
【図１６】
2017533220.tif 000058
【図１７】
2017533220.tif 000059
【図１８】
2017533220.tif 000060
【図１９】
2017533220.tif 000061
【図２０】
2017533220.tif 000062
【図２１】
2017533220.tif 000063
【図２２】
2017533220.tif 000064
【図２３】
2017533220.tif 000065
【図２４】
2017533220.tif 000066
【国際調査報告】
2017533220.tif 000067