(57)【要約】窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法が提供され、上記方法は、ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程を包含する。窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための装置もまた提供され、上記装置は、ニンヒドリン含有組成物を受容するための入り口およびニンヒドリン試薬を排出するための出口を有する導管；ならびに上記導管内の上記ニンヒドリン含有組成物を、ＵＶ光で照射するための光源を含む。１種もしくはこれより多くの窒素含有化合物を分析するための方法は、ニンヒドリン含有組成物を活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射して、ニンヒドリン試薬を生成する工程；および上記ニンヒドリン試薬と上記窒素含有化合物とを反応ゾーンにおいて接触させる工程を包含する。
2017517744.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法であって、該方法は、
ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程
を包含する方法。
【請求項２】
前記ニンヒドリン含有組成物に存在するニンヒドリン濃度は、０．１％〜５％  ｗ／ｖである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ニンヒドリン含有組成物は、水性緩衝液を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記水性緩衝液は、弱酸とその共役塩基／塩のうちの１つとを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記水性緩衝液は、３〜７の間の値でｐＨを維持する、請求項３または４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記ニンヒドリン含有組成物は、１種もしくはこれより多くの有機溶媒をさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記有機溶媒は、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、プロピレングリコール、スルホラン、カルビトール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、メチルセロソルブ、メタノール、エタノールおよびプロパノールから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記有機溶媒の濃度は、５％ｖ／ｖ〜７５％ｖ／ｖである、請求項６または７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ニンヒドリン含有組成物は、ヒドリンダンチンも還元剤も含まない、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記形成されるヒドリンダンチンの濃度は、０．０１〜０．３％  ｗ／ｖである、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記形成されるヒドリンダンチンの濃度は、０．０１〜０．１５％  ｗ／ｖである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
１もしくはこれより多くのＵＶ光源は、前記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で放射するために使用される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記ＵＶ光源は、発光ダイオード（ＬＥＤ）を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＵＶ光源は、１９０ｎｍ〜４３０ｎｍの範囲にある波長を有するＵＶ光を放つように構成される、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ＵＶ光源は、３５０ｎｍ〜３７０ｎｍの範囲にある波長を有するＵＶ光を放つように構成される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＵＶ光源は、３６５ｎｍの波長を有するＵＶ光を放つように構成される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＵＶ光源によって放たれた光の強度は、１０ｍＷ〜１０，０００ｍＷの範囲にある、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記ニンヒドリン含有組成物は、ＵＶ光で、２〜１０分間照射される、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記ニンヒドリン含有組成物は、１００℃未満の温度において、ＵＶ光で照射される、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記ニンヒドリン含有組成物は、２０℃〜２５℃の温度においてＵＶ光で照射される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
窒素含有化合物を分析するための方法において、請求項１〜２０のいずれかに記載のプロセスによって得られ得るニンヒドリン試薬の使用。
【請求項２２】
窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための装置であって、該装置は、
ニンヒドリン含有組成物を受容するための入り口およびニンヒドリン試薬を排出するための出口を有する導管；ならびに
該導管内のニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するための光源
を含む装置。
【請求項２３】
前記導管は、ハウジング内に含まれ、該ハウジングは、前記導管の入り口を受容するための第１の開口部および該導管の出口を受容するための第２の開口部を含む、請求項２２に記載の装置。
【請求項２４】
前記ハウジングの１つもしくはこれより多くの内部表面は、反射材料を含む、請求項２３に記載の装置。
【請求項２５】
前記光源は、前記導管と前記ハウジングとの間に設置される、請求項２３または２４のいずれかに記載の装置。
【請求項２６】
前記光源は、前記ハウジングの内部表面上に設置されているかまたは該内部表面に隣接して設置されている、請求項２５に記載の装置。
【請求項２７】
前記導管は、細長い、請求項２２〜２６のいずれかに記載の装置。
【請求項２８】
前記導管は、ＵＶスペクトルにある電磁放射線に対して透過性の材料から形成される、請求項２２〜２７のいずれかに記載の装置。
【請求項２９】
前記導管は、ガラス、プラスチックおよび／もしくは石英から形成される、請求項２８に記載の装置。
【請求項３０】
前記導管を保持する支持体をさらに含む、請求項２２〜２９のいずれかに記載の装置。
【請求項３１】
前記支持体は、ＵＶスペクトルにある電磁放射線に対して透過性の材料から形成される、請求項３０に記載の装置。
【請求項３２】
前記光源は、ＬＥＤである、請求項２２〜３１のいずれかに記載の装置。
【請求項３３】
前記光源の温度を制御するために使用される１もしくはこれより多くのヒートシンクをさらに含む、請求項２２〜３２のいずれかに記載の装置。
【請求項３４】
前記１もしくはこれより多くのヒートシンクは、前記ハウジングに対して外側にある表面上に提供される、請求項３３に記載の装置。
【請求項３５】
１種もしくはこれより多くの窒素含有化合物を分析するための方法であって、該方法は、
活性化ゾーンにおいてＵＶ光でニンヒドリン含有組成物を照射して、ニンヒドリン試薬を生成する工程；および
該ニンヒドリン試薬と該窒素含有化合物とを反応ゾーンにおいて接触させる工程
を包含する方法。
【請求項３６】
前記ニンヒドリン含有組成物は、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法によって、前記活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記活性化ゾーン内の温度は、１００℃未満である、請求項３５または３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
前記反応ゾーン内の温度は、１００℃〜１６０℃の範囲にある、請求項３５または３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記反応ゾーン内の温度は、１２０℃〜１３５℃の範囲にある、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記反応ゾーンにおける前記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間は、１０〜１８０秒間の範囲にある、請求項３５〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記反応ゾーンにおける前記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間は、３０〜６０秒間の範囲にある、請求項４０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、窒素含有化合物を分析するためのニンヒドリン試薬を調製するための新規方法に関する。本発明はさらに、窒素含有化合物を分析するためのニンヒドリン試薬を調製するための新規装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
アミノ酸は、タンパク質が形成される構成要素であり、タンパク質は、次に多くの生物学的プロセスにおいて重要な役割を果たす。いくつかの場合、個体における特定のアミノ酸の存在もしくは非存在は、彼らの健康状態に重大な影響を及ぼし得る。例えば、遺伝性代謝障害であるフェニルケトン尿症（ｐｈｅｎｙｌｋｅｔｏｎｕｒｅａ）に罹患している個体は、フェニルアラニンを代謝できず、その蓄積が、彼らの脳の発達に重度に影響を及ぼす。よって、遊離アミノ酸を検出するか、またはタンパク質のアミノ酸組成を決定するための方法は、疾患の適切な診断および管理にとって極めて重要である。同様に、このような方法は、市販の薬物、食べ物および食品の分析、ならびにタンパク質および酵素の研究および開発にとって重要である。より一般的には、窒素含有化合物の検出および同定は、広い範囲の学問分野（農学、生化学、臨床、環境、食べ物、法医学、組織化学、微生物学、医学、栄養学、植物学、およびタンパク質科学が挙げられる）にわたる適用を見出す。
【０００３】
１９５０年代に、最初の自動化アミノ酸分析法が、Ｍｏｏｒｅ、ＳｔｅｉｎおよびＳｐａｃｋｍａｎによって開発された（Ｓｐａｃｋｍａｎ  ＤＨ，  Ｓｔｅｉｎ  ＷＨ，  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  Ｓ．  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ  ａｐｐａｒａｔｕｓ  ｆｏｒ  ｕｓｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  ｏｆ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ．  Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ，  １９５８，  ３０：１１９０−１２０６）。この多段階プロセスは、上記アミノ酸を、イオン交換液体クロマトグラフィーによって分離する工程を包含する。次いで、ニンヒドリン試薬は、試薬レザバからポンプ輸送され、上記イオン交換カラムからの溶離物と混合され、鋼鉄製もしくはプラスチック製の反応コイルを通過し、反応に必要とされる温度へと加熱される。
【０００４】
上記ニンヒドリン試薬は、上記アミノ酸および関連アミン化合物と反応して、光度計を使用してさらに分析され得る高度に呈色した反応生成物を形成する。各アミノ酸の正体は、クロマトグラム上のその移動特性および位置に基づいて確立される。各アミノ酸の濃度は、特定の波長における吸光度によって光度計で検出される上記呈色した生成物の強度によって決定される。
【０００５】
ニンヒドリンとアミノ酸もしくはアミンとの間の呈色反応は、室温では非常に遅い。それは、高温では有意により速くなるが、１３０℃およびこれより高い温度ですら、なお長い分数がかかる。良好なクロマトグラフィー性能を維持するために、上記呈色反応は、ほぼ１分間もしくはこれより短い期間に起こる必要がある。これを達成するために、ヒドリンダンチン（ニンヒドリンの還元形態）は、上記ニンヒドリン試薬が有効でありかつ受容可能な反応速度を提供するために必要とされる。ヒドリンダンチンが高温での上記呈色生成物の形成を加速する能力を説明するために、多くの示唆される理由もしくは機構が存在してきた。１つの示唆は、ヒドリンダンチンが反応中間体のうちの１つにとっての安定剤として作用することである。
【０００６】
しかし不運なことに、ヒドリンダンチンは、空気の存在下では特に不安定である、すなわち、空気中の酸素は、ヒドリンダンチンをニンヒドリンへと急速に酸化する。相対的にごく少量の空気が、試薬中のヒドリンダンチンの量をひどく消耗させ、従って、分光測定分析における色の生成の感度を実質的に低下させるために必要である。不活性雰囲気（通常は窒素）は、ヒドリンダンチンの酸化を低減させる試みにおいて、ニンヒドリン試薬の調製およびニンヒドリン試薬の使用の間の両方において使用され得る。認識され得るように、不活性雰囲気の必要条件が、迅速なアミノ酸分析に必須であるヒドリンダンチンが、その使用の前および／もしくは間に、受容できない速度で劣化しないことを確実にするために、複雑な装置および取り扱い手順の必要性を生じる。さらに、ヒドリンダンチンは、完全に水性の媒体に不溶性である。よって、有機溶媒の実質的な量が、そのヒドリダンチンの貯蔵および使用のために必要とされる。
【０００７】
上記に鑑みて、Ｍｏｏｒｅ、ＳｔｅｉｎおよびＳｐａｃｋｍａｎによって開発された方法は、ニンヒドリンを含む試薬および必要とされる場合には、ヒドリンダンチンを形成するためにニンヒドリンを還元し得る還元剤を利用した。使用前には、上記ニンヒドリン試薬は、酢酸ナトリウム緩衝液、ニンヒドリンおよび還元剤である塩化スズ（ＩＩ）を一緒に混合することによって調製される。次いで、上記ニンヒドリン試薬は、試薬レザバからポンプ輸送され、イオン交換カラムからの溶離物と混合され、鋼鉄製もしくはプラスチック製の反応コイルを通過し、反応に必要とされる温度へと加熱される。
【０００８】
室温ですら塩化スズ（ＩＩ）の強い還元活性によって引き起こされる欠点は、上記試薬がまず、ヒドリンダンチンの酸化のリスクを最小限にするために不活性容器の中で調製されなければならないことである。さらには、塩化スズ（ＩＩ）は、水酸化スズ化合物の沈殿（これは、分析設備を妨げ得る）を引き起こすことが公知である。
【０００９】
塩化スズ（ＩＩ）に代わる還元剤は、それ以来調査されてきた（例えば、シアニド、チタン（ＩＩＩ）塩、ボロヒドリドおよびアスコルビン酸）。これら強力な還元剤は、ニンヒドリンと即座に反応して、室温でヒドリンダンチンを生成する。シアニドは、毒性の観点および必要な安定性を欠いていることから、商業的には使用できなかった。より本格的な研究が、水素化ホウ素ナトリウムおよびアスコルビン酸還元剤に対して行われた。例えば、米国特許第３，７７８，２３０号および同第４，２７４，８３３号は、それぞれ、アスコルビン酸および水素化ホウ素ナトリウムもしくは塩化スズ（ＩＩ）を還元剤として含むニンヒドリン試薬を開示する。しかし、これら試薬は同様に、ヒドリンダンチンの酸化のリスクを最小限にするために、まず、周囲温度で不活性容器の中で調製されなければならない。米国特許第３，７７８，２３０号および還元剤としてのアスコルビン酸の使用を特に参照すると、重大な欠点は、結果の正確度に悪影響を及ぼす呈色した副生成物の生成である。
【００１０】
１つの代替法および今日使用される最も一般的な方法は、ニンヒドリンを含む試薬にヒドリンダンチンを直接添加することである。還元剤は利用されない。上記試薬（ニンヒドリンおよびヒドリンダンチンを含む）がいったん形成されると、それは、アミノ酸分析器で使用され得る。
【００１１】
実際には、ニンヒドリンを既存の還元剤と混合する間、もしくは既存のニンヒドリン試薬を、標準的なアミノ酸分析器で使用する間のいずれにも、空気を完全に排除することは不可能である。結果として、既存の試薬中の上記ヒドリンダンチン濃度は、何らの呈色反応も起こり得ないまでに不可逆的に着々と低下する。この理由から、ヒドリンダンチンを含む既存のニンヒドリン試薬は、１ヶ月以下、およびときには２週間程度の短さという限られた寿命を有する。
【００１２】
１つの解決策は、米国特許第３，６３２，４９６号に提供される。この文書は、ニンヒドリンを含む試薬のための方法および装置を開示する。上記装置は、細長い導管であって、そこを通るチャネル、試薬を受容するために一方の末端にある入り口および活性化された試薬を排出するために他方の末端にある出口を有する細長い導管を含む。上記チャネルは、ニンヒドリンをヒドリンダンチンへと電解により還元し得る金属被覆樹脂ビーズの表面によって画定される。好ましい実施形態において、電極は、電流を試薬に通過させるために提供され、これは、ヒドリンダンチンへのニンヒドリンの還元を促進するために特許請求されている。
【００１３】
還元剤は必要とされないものの、米国特許第３，６３２，４９６号で開示される方法は、その実行のために非常に複雑な装置を必要とする。例えば、上記金属被覆樹脂ビーズを形成するためのプロセスは、特に複雑である。さらに、上記チャネル内の高い表面積は、汚染をより容易に受けやすい。上記試薬からの不純物のあらゆる吸着は、生成されるヒドリンダンチンの濃度に影響を及ぼし、正確な結果を得るにあたって困難をもたらす。従って、上記樹脂ビーズの頻繁な置き換えが、特に、上記装置が商業スケールでもしくは忙しい研究室で使用されている場合には、必要とされるようである。さらに、開示されるニンヒドリン試薬は、溶媒の存在を必要とし、上記試薬の全体的コストを有意に増大させる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】米国特許第３，７７８，２３０号明細書
【特許文献２】米国特許第４，２７４，８３３号明細書
【特許文献３】米国特許第３，６３２，４９６号明細書
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｓｐａｃｋｍａｎ  ＤＨら、Ａｎａｌ  Ｃｈｅｍ，（１９５８）３０：１１９０〜１２０６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
よって、ヒドリンダンチンが必要されるときに限り形成されるように、ニンヒドリン試薬を調製するための代替法が、必要である。このような方法が、比較的単純かつ安価な装置を使用して実行されるのであれば、有利である。
【００１７】
ＥＰ  ２  ７３５  ８７６は、アミノ酸を分析するための方法および上記方法とともに使用するための試薬に関する近年の公報である。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
第１の局面において、本発明は、窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法を提供し、上記方法は、
ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程
を包含する。
【００１９】
本発明の方法において、ニンヒドリン試薬は、出発物質としてニンヒドリン含有組成物から形成される。本発明の方法に従って形成されるニンヒドリン試薬は、上記ニンヒドリン含有組成物に由来する構成要素およびヒドリンダンチンを含む。上記ニンヒドリン含有組成物の構成要素は、以下でより詳細に記載される。いったん上記ニンヒドリン試薬が本発明の方法に従って調製されると、上記試薬は、公知のおよび標準的な手順ならびに窒素含有化合物（アミノ酸が挙げられるが、これらに限定されない）の検出のための方法に従って使用され得る。上記ニンヒドリン含有組成物は、以下でより詳細に考察されるとおり、ヒドリンダンチンも還元剤も含む必要はない。実際に、好ましい実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物は、ヒドリンダンチンおよび／もしくはいかなる還元剤をも実質的に含まない。この結果として、上記ニンヒドリン含有組成物の構成要素は、酸素の存在下で非常に安定しているので、別個に貯蔵される必要も、使用直前に前もって混合される必要もない。本発明のニンヒドリン試薬は、一般に可視化剤として使用され得るが、ただし試験サンプルは、１種もしくはこれより多くの有機窒素含有化合物を含む。
【００２０】
上記で考察されるように、本発明は、窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法を提供する。
【００２１】
本発明の方法において使用されるニンヒドリン含有組成物は、任意の適切な量においてニンヒドリンを含み得る。好ましくは、上記組成物中のニンヒドリンの濃度は、０．１％〜５％  ｗ／ｖである。より好ましくは、ニンヒドリンの濃度は、０．７〜２．５％  ｗ／ｖである。なおさらにより好ましくは、上記組成物中のニンヒドリンの濃度は、１〜２％  ｗ／ｖである。一般に、加工処理される予定の上記組成物中に存在するニンヒドリンの量は、製品組成物において必要とされるヒドリンダンチンの濃度および上記組成物が照射される条件のような因子に依存する。
【００２２】
好ましい実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物は、ニンヒドリンおよび水性緩衝液を含む。ニンヒドリンおよび適切な水性緩衝液は、両方が市販されており、既存のニンヒドリン試薬において使用される。
【００２３】
任意の適切な水性緩衝液は、上記ニンヒドリン試薬の中で使用され得る。適切な緩衝液は、当該分野で公知である。酸性緩衝液が好ましい。より好ましくは、弱酸性緩衝液は、３〜７の間の、より好ましくは、４〜６、さらにより好ましくは、４．５〜５．５の値にｐＨを維持するために好ましい。特に適切なｐＨは、約５．２である。
【００２４】
上記緩衝液は、任意の弱酸とその共役塩基／塩のうちの１つとから調製され得る。上記酸は、有機酸であっても無機酸であってもよい。有機酸が好ましい。その例としては、低級カルボン酸、特に、１〜６個、より好ましくは、１〜４個の炭素原子を有するカルボン酸が挙げられ、酢酸、エタン酸およびプロパン酸が特に好ましい。１つの好ましい組み合わせは、酢酸とその塩のうちの１つである。
【００２５】
上記酸塩は、任意の適切な塩であり得る。上記塩は、任意の金属カチオンから形成され得る。適切な塩としては、周期表のＩ族もしくはＩＩ族の金属カチオンを有するものが挙げられる。しかし、上記塩がアルカリ金属のうちのいずれか１種、特に、リチウム、ナトリウムもしくはカリウムから形成されることは、好ましい。
【００２６】
ヒドリンダンチンは、完全に水性の媒体には不溶性である。この点に鑑みると、既存のニンヒドリン試薬（ヒドリンダンチンを含む）は、実質的な量の有機溶媒の存在なしでは製造も使用もできない。しかし、上記ニンヒドリン試薬を形成するために本発明において使用されるニンヒドリン含有組成物は、有機溶媒も有機溶媒の混合物も含む必要がないことは、本発明の利点である。結論として、製造コストは下げられ、上記試薬は、環境にとって有害性がより低く、廃棄物処理手順は単純化される。よって、一実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物は、有機溶媒を実質的に含まない。
【００２７】
有機溶媒の非存在は、結果として生じるヒドリンダンチンの沈殿のリスクを増大させ得、それによって、アミノ酸分析において使用される場合に、上記試薬の効力に影響を及ぼす。これにも関わらず、本発明の方法によって生成されるニンヒドリン試薬は、アミノ酸分析に使用される場合に、受容可能な結果を提供する。この理由は、以下でより詳細に考察される。
【００２８】
しかし、代替のおよび好ましい実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物および結果として生じるニンヒドリン試薬は両方とも、ニンヒドリン、適切な緩衝液および有機溶媒もしくは有機溶媒の混合物を含む。市販の試薬において代表的に使用され、本発明において使用されるニンヒドリン含有組成物における使用に適切な有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、プロピレングリコール、スルホラン、ヒドロキシエーテル、例えば、カルビトール（ｃａｒｂｉｔｏｌ）、プロピレングリコールモノメチルエーテルおよびメチルセロソルブ（ｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｏｓｏｌｖｅ）、ならびに単純アルコール、例えば、１〜４個の炭素原子を有する低級アルコール、特に、メタノール、エタノールおよびプロパノールが挙げられる。上記溶媒は、単独で、または２種もしくはこれより多くの溶媒の混合物としてのいずれかで使用され得る。
【００２９】
この代替の実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物中に存在する有機溶媒の合計濃度は、上記有機溶媒の性質に従って変化する。特に、使用される有機溶媒の合計濃度は、５％ｖ／ｖから７５％ｖ／ｖまで変化する。より好ましくは、使用される有機溶媒の合計濃度は、２５％ｖ／ｖから６５％ｖ／ｖまで変化する。なおさらにより好ましくは、使用される有機溶媒の合計濃度は、４０％ｖ／ｖから６０％ｖ／ｖまで変化する。
【００３０】
上記で考察されるように、本発明の方法は、上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程を包含する。ニンヒドリンは、１５０〜４３０ｎｍの領域にある波長で電磁放射線を吸収する。
【００３１】
上記で考察されるように、本発明の方法は、ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程を包含する。ＵＶ光を放射し得る任意の光源が使用され得る。さらに、１もしくはこれより多くのＵＶ光源が使用され得る。１つの波長もしくは複数のことなる波長でのＵＶ放射が使用され得る。ＵＶ放射の異なる波長は、単一のＵＶ源もしくは複数の異なる源を使用して生成され得る。
【００３２】
好ましい実施形態において、上記ＵＶ光源は、１もしくはこれより多くの発光ダイオード（ＬＥＤ）を含み、これらは、上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するために使用される。ＵＶ光源としてＬＥＤを使用することで、ヒドリンダンチンの形成速度に対する増大された制御が提供されることが見出された。特に、ＵＶ光強度は、ＬＥＤ光源を使用してより容易に制御され得る。ＵＶ光強度を制御することで、ニンヒドリンからのヒドリンダンチンの形成速度に対する増強された制御が提供される；特に、より短い反応時間が使用され得る。これは、アミノ酸分析のために本発明の方法に従って形成される上記ニンヒドリン試薬を使用する場合に、特に有利である。実際に、ＬＥＤ光源から放たれるＵＶ光の強度が低くても、アミノ酸分析の目的で十分迅速にヒドリンダンチンの形成が誘発されることが、見出された。さらに、ＬＥＤは、一般により低い出力を要し、伝統的なＵＶランプ（例えば、水銀、重水素、キセノンおよびハロゲンのガスおよび蒸気に基づくもの）より遙かに低い熱を生じる。
【００３３】
本発明の方法において使用される上記ＵＶ光源は、上記ニンヒドリン含有組成物内に存在するニンヒドリンのうちの少なくとも一部を変換して、ヒドリンダンチンを形成することを誘発するために使用される。上記で考察されるように、ヒドリンダンチンは、窒素含有化合物とニンヒドリンとの間の迅速な色形成反応のために必要とされる。しかし、ヒドリンダンチンは、空気の存在下で特に不安定であり、空気中の酸素は、上記ヒドリンダンチンをニンヒドリンへと迅速に酸化する。さらに、ヒドリンダンチンが多すぎると、溶液から沈殿し得る。しかし、ヒドリンダンチンの高すぎる濃度の形成を防止し、そしてさらなる加工処理に対して結果として生じる有害な効果を回避するために、ヒドリンダンチン形成速度が厳密に制御され得ることは、本発明の方法の利点である。
【００３４】
本発明の方法を使用して生成されるヒドリンダンチンの濃度は、好ましくは、最小の濃度のヒドリンダンチンが形成されるが、これがアミノ酸分析の間に最高の感度を提供するように、制御される。必要とされるヒドリンダンチンの最小の濃度を得るために、上記ニンヒドリン含有組成物は、６０分間以下、より好ましくは、４０分間までさらに、より好ましくは、２０分まで、なおさらにより好ましくは、１０分間まで、なおさらにより好ましくは、２〜１０分間にわたって、ＵＶ光で照射される。２分間未満の反応時間は、より高い強度のＵＶ放射を使用する場合に、例えば、より多数のＵＶ光源を使用することによって、達成され得る。
【００３５】
必要とされるヒドリンダンチンの最小の濃度は、上記窒素含有化合物を分析するために使用される方法および装置に従って変化する。アミノ酸分析法に関しては、標準的なアミノ酸分析器を使用して、０．０１〜０．３％  ｗ／ｖ、より好ましくは、０．０５〜０．２％  ｗ／ｖ、さらにより好ましくは、０．１０〜０．１４％  ｗ／ｖ、なおさらにより好ましくは、０．１２％  ｗ／ｖもしくは約０．１２％  ｗ／ｖの最小の濃度が必要とされる。
【００３６】
上記の濃度は、上記ニンヒドリン含有組成物が、多量の有機溶媒、特に、少なくとも５０％の有機溶媒を含むことを条件として、必要である。上記ニンヒドリン含有組成物が、有機溶媒を含まない場合には、０．０１〜０．１５％  ｗ／ｖ、より好ましくは、０．０３〜０．１０、より好ましくは、さらに０．０６〜０．１０％  ｗ／ｖ、なおさらにより好ましくは、０．０８％  ｗ／ｖもしくは約０．０８％  ｗ／ｖのヒドリンダンチンの最小の濃度が必要とされる。
【００３７】
上記で考察されるように、本発明の方法は、窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するために使用され得る。特に、ニンヒドリン含有組成物は、最小の濃度のヒドリンダンチンが形成されるように、ＵＶ光で照射される。いったん上記ニンヒドリン試薬が本発明の方法に従って調製され、最小の濃度のヒドリンダンチンが形成されると、上記ニンヒドリン試薬は、貯蔵され得るか、または窒素含有化合物の分析において直ぐに使用され得る。有利なことには、いったん上記ニンヒドリン試薬が本発明の方法に従って調製されると、ヒドリンダンチンの形成は継続しない。これは、上記ニンヒドリン試薬内に存在するヒドリンダンチンの濃度が、貯蔵の間にもしくはアミノ酸分析法において使用する間に増大せず、ヒドリンダンチンの形成に対する増強された制御を提供するという点で有利である。
【００３８】
本発明の方法を使用して生成されるヒドリンダンチンの濃度は、ＵＶ光源によって放たれる波長もしくは波長範囲を制御することによって、より容易に制御され得る。ＵＶ光を放つように構成される場合、ＬＥＤは、代表的には、３００〜４００ｎｍの領域にある波長を有する電磁放射線を放つ。しかし、１９０ｎｍ〜４３０ｎｍ、好ましくは、２２０ｎｍ〜３９０ｎｍの領域にある、より好ましくは、２６０ｎｍ〜３８０ｎｍ、さらにより好ましくは、３００ｎｍ〜３８０ｎｍ、なおさらにより好ましくは、３４０ｎｍ〜３７０ｎｍ、なおさらにより好ましくは、３５０ｎｍ〜３７０ｎｍ、なおさらにより好ましくは、３６０ｎｍ〜３６５ｎｍの領域にある波長でニンヒドリンを照射することで、ヒドリンダンチンを非常に迅速に形成させることが見出された。特に好ましい波長は、３６５ｎｍである。よって、前述の波長にあるＵＶ光を放つように構成されたＵＶ光源を使用することは、好ましい。
【００３９】
さらに、本発明の方法を使用して生成されるヒドリンダンチンの濃度は、上記ＵＶ光源によって放たれる光の強度を制御することによってより容易に制御され得る。上記ＵＶ光源によって放たれる光の強度は、上記ＵＶ光源に供給される電圧および／もしくは電流を変化させることによって、制御され得る。特に、電流律速パルス幅変調（ｃｕｒｒｅｎｔ  ｌｉｍｉｔｅｄ  ｐｕｌｓｅ  ｗｉｄｔｈ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ）の使用が、上記ＬＥＤ光源に供給される電圧および／もしくは電流を制御するにあたって特に有効であることが見出された。パルス幅変調技術は、公知であり、一般に使用される。
【００４０】
上記ＵＶ光源によって放たれる光の強度は、上記ニンヒドリン含有組成物がＵＶ光で照射される速度および同様に使用される光源の数に依存して変化させられ得る。例えば、上記ＵＶ光源によって放たれる光の強度は、１０ｍＷ〜１０，０００ｍＷの範囲に及び得る。
【００４１】
好ましい実施形態において、上記ＵＶ光源は、上記ニンヒドリン含有組成物を、室温において（これは、０℃〜５０℃の間、より好ましくは、２０℃〜３０℃の間、なおさらにより好ましくは、２０℃〜２５℃の間である）照射するために使用される。代替の実施形態において、上記ＵＶ光源は、上記ニンヒドリン含有組成物を室温より高い温度で（例えば、２５０℃までおよび２５０℃を含む温度）照射するために使用されるが、これは、あまり好ましくない。
【００４２】
１つの特に好ましい実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物は、１００℃未満の温度で照射される。
【００４３】
本発明のさらなる局面によれば、窒素含有化合物の分析、特に、アミノ酸分析に関して本明細書で先に記載されるとおりの方法によって得られ得るニンヒドリン試薬の使用が提供される。
【００４４】
上記で考察されるように、窒素含有化合物（例えば、アミノ酸分析におけるような）を分析するにあたって使用するためのニンヒドリン試薬を調製もしくは使用するための既存のデバイスは、複雑である。これは、不安定なヒドリンダンチンを含む貯蔵された組成物のために安定な環境を準備することに関与する複雑さに起因する。対照的に、本発明の方法は、より単純な装置が使用されることを可能にする、特に単純な装置が、上記ニンヒドリン含有組成物を照射して、所望の分析手順において使用される直前にもしくは使用されている最中に、ヒドリンダンチンを形成することを可能にする。
【００４５】
よって、さらなる局面において、本発明は、窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための装置を提供し、上記装置は、
ニンヒドリン含有組成物を受容するための入り口およびニンヒドリン試薬を排出するための出口を有する導管；ならびに
上記導管内の上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するための光源
を含む。
【００４６】
本発明は、窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための装置を提供する。本発明の装置を使用していったん調製されると、上記ニンヒドリン試薬は、公知のおよび標準的な手順、ならびに窒素含有化合物（アミノ酸が挙げられるが、これに限定されない）の検出のための方法に従って使用され得る。
【００４７】
上記のように、本発明の装置を使用して形成されるニンヒドリン試薬は、上記ニンヒドリン含有組成物に由来する構成要素およびヒドリンダンチンを含む。上記導管の入り口に提供される上記ニンヒドリン含有組成物は、ニンヒドリンを含むが、ヒドリンダンチンも、ニンヒドリンを還元して上記のヒドリンダンチンを形成し得る還元剤も含む必要はない。実際に、好ましい実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物は、ヒドリンダンチンおよび／もしくはいかなる還元剤をも実質的に含まない。上記ニンヒドリン含有組成物のさらなる構成要素は、本発明の第１の局面に関連して上記で記載されている。
【００４８】
使用時には、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記入り口を介して上記導管へと供給される。上記導管内に存在する間に、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記ニンヒドリンのある割合がヒドリンダンチンへと変換されるように、ＵＶ光で照射される。いったん必要とされる量のヒドリンダンチンが形成されると、上記ニンヒドリン試薬（ニンヒドリンおよびヒドリンダンチンの混合物を含む）は、上記出口を介して導管を出ることが可能にされる。上記で考察されるように、本発明の装置および方法を使用して調製されるニンヒドリン試薬は、窒素含有化合物を分析する（例えば、アミノ酸分析）目的で使用され得る。
【００４９】
上記装置の導管は、上記ニンヒドリン含有組成物を保持するために適した任意の形状もしくは構成のものであり得る一方で、それは、ＵＶ光で照射されている。好ましくは、上記導管は、形状が概して細長い。より好ましくは、上記導管は、上記導管の断面がその長さに沿って一様であり、その結果、ヒドリンダンチンの形成速度がより容易に制御され得るような形状にされる。好ましい実施形態において、上記導管は、円筒形のチューブの形態で、好ましくは、コイル状の円筒形のチューブもしくは反応コイルの形態で提供される。上記円筒形のチューブの「編まれた」配置はまた、上記ＵＶ放射への上記ニンヒドリン試薬のより良好な曝露を与えるために使用され得る。
【００５０】
上記導管は、それを通過するかもしくはその中にある上記材料の構成要素に対して耐性である任意の材料から形成され得る。適切な材料は、当該分野で公知である。好ましい実施形態において、上記導管のうちの少なくとも一部の材料は、ＵＶスペクトルにある電磁放射線に対して透過性である。好ましくは、上記導管のうちの少なくとも一部は、１５０ｎｍ〜４５０ｎｍの領域にある波長、より好ましくは、２００ｎｍ〜４２０ｎｍの領域にある波長、より好ましくは、３６５ｎｍもしくは約３６５ｎｍにある電磁放射線に対して透過性の材料から形成される。このような材料としては、ガラス、石英およびプラスチックが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
上記で考察されるように、上記導管内に存在する間に、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記ニンヒドリンのある割合がヒドリンダンチンへと変換されるように、ＵＶ光で照射される。ガラスおよび／もしくは石英のような材料から形成される場合、上記導管は、それ自体を正確な位置（これは、上記導管のうちの一部、より好ましくは、上記導管全体がＵＶ光で照射されることができる位置である）に支持することができる。しかし、プラスチックのような材料から形成される場合、上記導管は、それ自体を正確な位置に支持できなくてもよい。よって、上記導管がプラスチックのような材料から形成される場合、固定手段が、上記導管を正確な位置に固定するために好ましくは使用される。
【００５２】
上記導管を正確な位置に固定するために適した任意の手段が使用され得る。例えば、上記固定手段は、上記導管を正確な位置に固定し得る留め具の形態で提供され得る。あるいは、上記固定手段は、上記導管を正確な位置に支持するための支持体を形成し得る。上記導管は、上記支持体の周縁の周りに巻き付けられ得、上記支持体は、正確な位置に置かれる。上記支持体は、任意の適切な形状およびサイズのものであり得、任意の適切な材料から作製され得る。好ましくは、上記支持体は、１５０ｎｍ〜４５０ｎｍの領域にある波長、より好ましくは、２００ｎｍ〜４３０ｎｍの領域にある波長、より好ましくは、３６５ｎｍもしくは約３６５ｎｍにある電磁放射線に対して透過性の材料から形成される。このような材料としては、ガラス、石英およびプラスチックが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５３】
一実施形態において、上記支持体は、ＵＶ光の供給源であり、上記導管は、上記支持体によって支持されかつ照射されるように、上記支持体の周りに巻き付けられ得る。この実施形態において、上記ＵＶ光源は、好ましくは、概して細長くかつ円筒形であるが、他の形状が使用され得ることは認識されるべきである。
【００５４】
上記導管の入り口および出口は、上記導管の壁にある同じ開口部から形成され得る。このようにして、上記ニンヒドリン含有組成物および上記ニンヒドリン試薬はそれぞれ、上記導管を、同じ開口部を介して出入りする。
【００５５】
より好ましくは、上記入り口および出口は、異なる開口部から形成される。このようにして、上記導管の中へおよび上記導管から外へのニンヒドリン含有材料の一定の流れが、より容易に達成され得る。好ましい実施形態において、上記導管は、形状が細長く円筒形であり、上記入り口および出口は、上記導管のそれぞれの末端部分に提供される。
【００５６】
上記導管の設計（特に、上記導管の長さおよび内径）は、アミノ酸分析法におけるその後の使用のために必要とされるヒドリンダンチンの濃度に従って変化する。上記導管の設計に関連する他の因子としては、上記導管を通る上記ニンヒドリン含有組成物の流速および上記ニンヒドリン含有組成物がＵＶ光で照射される強度が挙げられる。それら因子は全て互いに関係し、必要に応じて変化させられ得る。
【００５７】
本発明の装置は、上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するための１もしくはこれより多くのＵＶ光源を含む。上記使用される１もしくはこれより多くのＵＶ光源は、上記導管内に設置され得る。代わりに、およびより好ましくは、上記ＵＶ光源は、上記導管に対して外側に設置され、上記ＵＶ光は、上記導管の壁を通過して、その中の内容物を照射する。
【００５８】
上記で考察されるように、本発明の装置は、上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するために１個もしくはより多くの光源を含む。ＵＶ光を放射し得る任意の光源が使用され得る。例えば、ＵＶランプが使用され得る（例えば、とりわけ、ＬＥＤ、水銀、重水素、キセノン、ハロゲンおよび同様にレーザーダイオードに基づくもの）。ＵＶ光はまた、光ファイバーを使用して、分光光度計のような分散性の機器（ｄｉｓｐｅｒｓｉｖｅ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ）から管で導かれ得る。好ましい実施形態において、ＵＶ光を放つように構成されたＬＥＤが使用される。本発明の第１の局面に関連して上記で考察されるように、上記ＬＥＤ光源は、ヒドリンダンチンの形成速度に対する増強された制御を提供する。さらに、上記ＬＥＤ光源は、ＵＶ光の他の供給源より低い出力を要する。
【００５９】
上記ＵＶ光源は、上記導管に対して何らかの方法でも位置づけられ得る。より好ましくは、上記光源は、上記導管のうちの全てもしくは大部分がＵＶ光で照射されるように、上記導管に対して位置づけられる。例えば、細長い導管（例えば、円筒形の導管）の場合には、上記光源は、上記導管の周囲の周りに位置づけられ得る。あるいは、上記導管は、上記光源の周囲の周りに位置付けられ得る。
【００６０】
上記で考察されるように、１もしくはこれより多くのＵＶ光源が使用され得る。しかし、好ましくは、複数のＵＶ光源が使用される。より好ましくは、上記１もしくはこれより多くのＵＶ光源の温度を、例えば、室温において維持し得る１もしくはこれより多くの冷却源（例えば、ファン、水ジャケットおよび／もしくはヒートシンク）もまた、使用される。ヒートシンクは、動作の間に非常にわずかな熱しか実際には生み出さないＬＥＤにとっては、特に適している。ヒートシンクは、一般に公知であり、市販されている。好ましい実施形態において、上記光源の温度は、０℃〜５０℃の間、より好ましくは、２０℃〜３０℃の間、なおさらにより好ましくは、２０℃〜２５℃の間で維持される。
【００６１】
好ましい実施形態において、上記導管は、ハウジング内に含まれる。このようにして、上記ハウジングは、上記光源によって放たれたＵＶ光を集中させるために形成され得る。上記ハウジングは、上記導管を囲み得る任意の形状のものであり得る。例えば、一実施形態において、上記ハウジングは、形状が正方形もしくは矩形である。
【００６２】
この好ましい実施形態において、上記ＵＶ光の供給源は、上記ハウジングに対して外側に、例えば、上記ハウジングの外側表面上にもしくは上記外側表面に隣接して、配置され得る。上記ハウジングの外側表面のうちの少なくとも一部、好ましくは、上記ＵＶ光源に対して隣接した上記外側表面のうちの一部は、電磁放射線に対して透過性の材料から形成される。このようにして、上記ＵＶ光源によって放射されたＵＶ光は、上記ハウジング内に存在する上記導管に向けて指向され得る。このような材料は、上記で考察されてきており、ガラス、石英およびプラスチックが挙げられるが、これらに限定されない。上記導管がプラスチックのような材料から形成される場合には、この配置は、上記ハウジングが密閉され、上記導管が不活性ガス雰囲気中でＵＶ光で照射され、このことが、上記導管の分解を防止するという点で有利である。
【００６３】
より好ましくは、上記ＵＶ光の供給源は、上記導管と上記ハウジングとの間に配置される。例えば、上記ＵＶ光の供給源は、上記ハウジングの内部表面上に配置され得るかもしくは上記内部表面に隣接して配置され得る。より好ましくは、上記光源は、上記導管のうちの少なくとも大部分もしくは全てがＵＶ光によって照射されるように、上記ハウジングの内部表面上に位置づけられ得るかもしくは上記内部表面に隣接して位置づけられ得る。あるいは、上記光源が上記で考察されるとおりの導管のための支持体を形成する実施形態において、上記光源は、上記ハウジング内のどこにでも、例えば、上記ハウジングの内部表面上にもしくは上記内部表面に隣接して提供され得る。
【００６４】
好ましい実施形態において、上記内部表面、より好ましくは、上記ハウジングの内部表面は、上記導管のうちの少なくとも大部分もしくは全てがＵＶ光によって照射されることを確実にするために、反射材料を含む。特に好ましい反射材料としては、アルミニウムおよび鋼鉄ならびに鏡面（ｍｉｒｒｏｒｅｄ  ｓｕｒｆａｃｅ）を有する他の材料が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
特に好ましい実施形態において、概して円筒形の導管は、ハウジング内に含まれ、上記ハウジングは、上記導管の入り口を受容するための第１の開口部および上記導管の出口を受容するための第２の開口部を含む。上記第１のおよび第２の開口部は、上記ハウジング上のどこにでも配置され得る。より好ましくは、上記第１のおよび第２の開口部は、上記ハウジングの対向する側に配置され、上記導管は、上記第１の開口部と上記第２の開口部との間に延びる。このようにして、上記ハウジングの外側から上記導管へのアクセスが可能である。使用時には、上記ニンヒドリン含有組成物の連続的なストリームが、上記導管の入り口へと送達され得、上記導管の出口を通って、上記ハウジングにおけるそれぞれの開口部を通って排出され得る。
【００６６】
この特に好ましい実施形態において、１もしくはこれより多くの光源は、上記ＵＶ光が上記円筒形の導管の周囲に向かって指向されるように、上記ハウジングの内部表面に隣接してもしくは上記内部表面に位置づけられる。あるいは、上記導管は、上記で考察されるとおりの上記１もしくはこれより多くの光源によって支持され得、上記１もしくはこれより多くの光源によってＵＶ光で照射され得る。１もしくはこれより多くのヒートシンクは、上記ＵＶ光源によって生成される熱を上記ハウジングから離れるように指向するために、上記ハウジングに対して外側にある表面上に好ましくは提供される。
【００６７】
先に考察されるように、本発明の装置および方法は、ヒドリンダンチンを含まず、そして有機溶媒および／もしくは還元剤を実質的にもしくは完全に含まないニンヒドリン含有組成物を使用し得、好ましくは使用する。その増大した安定性に起因して、上記ニンヒドリン試薬は、本発明の装置および方法を使用していったん調製されると、広い範囲の窒素含有化合物を同定および／もしくは定量するために、可視化剤として使用され得る。
【００６８】
しかし、好ましい実施形態において、上記ニンヒドリン試薬は、本発明の装置および方法を使用して調製され、アミノ酸分析のために、特に、公知のおよび標準的なアミノ酸分析器を使用して、使用される。
【００６９】
よって、なおさらなる局面において、本発明は、１種もしくはこれより多くの窒素含有化合物、特に、アミノ酸などを分析するための方法を提供し、上記方法は、
ニンヒドリン含有組成物を、活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射して、ニンヒドリン試薬を生成する工程；および
上記ニンヒドリン試薬と上記窒素含有化合物とを、反応ゾーンにおいて接触させる工程
を包含する。
【００７０】
ニンヒドリン含有組成物を、活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射して、ニンヒドリン試薬を生成する工程およびこの試薬と上記窒素含有化合物とを接触させる工程は、単一の段階において、または複数の別個の段階において、行われ得る。
【００７１】
本発明の方法は、窒素含有化合物、特に、アミノ酸、ならびにアミノ酸から形成される化合物（例えば、タンパク質、ペプチドなど）を分析するために特に適している。
【００７２】
上記窒素含有化合物は、任意の液体媒体もしくはストリームの中に存在し得る。好ましくは、本発明の方法は、従来のアミノ酸分析器を使用して行われる。上記で考察されるように、市販のアミノ酸分析器は、代表的には、試験サンプルをそのアミノ酸成分要素へと、イオン交換液体クロマトグラフィーによって分離する。その溶離されたアミノ酸は、次いで、ヒドリンダンチンもしくは１種もしくはこれより多くの還元剤を含むニンヒドリン試薬と混合され、反応コイル（複数可）内で加熱されて、呈色した反応生成物を形成し、これは、公知の様式で光度測定法へと供される。よって、好ましい実施形態において、上記窒素含有化合物は、従来の自動アミノ酸分析器内に存在し、本発明の方法において使用されるニンヒドリン試薬と接触させられる前に、それらのサイズ、溶解度、電荷および／もしくは結合アフィニティーのような特性に従って既に分離されている。標準的なアミノ酸分析器は、代表的には、イオン交換に基づくクロマトグラフィー分離技術を使用するが、クロマトグラフィーの他の形態も使用され得る。クロマトグラフィーでない技術もまた、使用され得る。
【００７３】
本発明の分析法において使用されるニンヒドリン含有組成物は、ニンヒドリン、好ましくは、適切な緩衝液、および必要に応じて、１種もしくはこれより多くの有機溶媒を含む。上記ニンヒドリン含有組成物の構成要素は、本発明の第１の局面に関連して上記で考察されるとおりであった。上記ニンヒドリン試薬は、上記ニンヒドリン含有組成物に由来する構成要素およびヒドリンダンチンを含む。
【００７４】
使用時には、上記ニンヒドリン含有組成物は、ヒドリンダンチンを含むニンヒドリン試薬を生成するために、上記活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射され、次いで、上記試薬は、上記分析されている窒素含有化合物：例えば、アミノ酸分析器に存在する窒素含有化合物と接触させられる。いったん接触させられると、上記窒素含有化合物およびニンヒドリン試薬は、上記分析されている窒素含有化合物を定量化および定性化（ｑｕａｌｉｆｙ）するためにさらに分析され得る色形成生成物を生成するために、反応ゾーンにおいて加熱される。特に、本発明に従って、例えば、上記窒素含有化合物と接触させる前に、上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射することは、上記ニンヒドリン含有組成物がヒドリンダンチンおよび／もしくは還元剤を含まないにも関わらず、優れた結果を提供することが、見出された。
【００７５】
上記で考察されるように、ヒドリンダンチンを含む上記ニンヒドリン試薬は、分析される上記窒素含有化合物と接触させられる。
【００７６】
一実施形態において、本発明の方法は、本発明のさらなる局面の装置の形態での活性化ゾーンと組み合わせたアミノ酸分析器を使用して行われる；その特徴は、上記で記載されている。このようにして、上記アミノ酸分析器への改変は必要ない。
【００７７】
使用時には、ニンヒドリン含有組成物は、上記活性化ゾーンに供給され、ＵＶ光で照射されて、ヒドリンダンチンを含むニンヒドリン試薬を形成する。必要とされる濃度のヒドリンダンチンがいったん生成されると、上記ニンヒドリン試薬は、上記活性化ゾーンの出口から集められ得る。一実施形態において、上記ニンヒドリン試薬は、容器などの中で貯蔵され、その後、上記アミノ酸分析器へライン上で（ｏｎｌｉｎｅ）注入される。上記ニンヒドリン試薬は、次いで、上記クロマトグラフィー分離カラムの下流にある上記標準的なアミノ酸分析器へライン上で注入されて、上記溶離されたアミノ酸と混合され、その後、その加熱された反応ゾーンにおいて加熱される。あるいは、上記ニンヒドリン試薬は、上記アミノ酸分析器の加熱された反応ゾーンへライン上で注入されて、その中の溶離されたアミノ酸と混合され得る。
【００７８】
代替の実施形態において、本発明の方法は、本発明のさらなる局面の装置の形態において、上記分析器における上記反応ゾーンの上流でニンヒドリン試薬を生成するための手段を提供するために活性化ゾーンを含むように改変されたアミノ酸分析器を使用して行われる。この代替の実施形態において、本発明の方法によって上記活性化ゾーンにおいて形成される上記ニンヒドリン試薬は、上記分析器において直接使用され得る。この代替の実施形態において、ヒドリンダンチンを含むニンヒドリン試薬の一定の流れは、上記活性化ゾーンにおいて形成され得、上記分析器へと送達され得る。
【００７９】
この代替の実施形態において、上記活性化ゾーンおよび上記反応ゾーンは、単一のチャンバもしくは容器内に収容されてもよいし、別個の容器内に収容されてもよい。上記で示されるように、本発明の装置は、既存の分析器を改変するための手段を、例えば、上記活性化ゾーンを上記分析器内の既存の反応ゾーンに追加することによって、提供する。
【００８０】
上記活性化ゾーンおよび上記反応ゾーンは、単一のチャンバ内に含まれ得る（上記活性化ゾーンは、上記反応ゾーンの上流に配置される）。この配置において、上記活性化ゾーンおよび上記反応ゾーンで普及する（ｐｒｅｖａｉｌｉｎｇ）温度および滞在時間のような条件は、各ゾーンにおいて起こる反応を最適化するために、同じであってもよいし、異なっていてもよい。この配置において、上記チャンバは、クロマトグラフィー分離カラムの下流に配置される。
【００８１】
使用時には、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記チャンバの上流にライン上で注入され得る。上記ニンヒドリン含有組成物は、次いで、上記チャンバの活性化ゾーンへと供給され、ＵＶ光で照射される。必要とされる量のヒドリンダンチンがいったん形成されると、上記ニンヒドリン試薬は、分析されている上記窒素含有化合物と反応させるために、隣接する加熱された反応ゾーンへと供給される。あるいは、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記活性化ゾーンへと直接供給され得る。上記溶離されたアミノ酸は、上記ニンヒドリン含有組成物と混合するために、上記活性化ゾーンの上流に供給され得る。あるいは、上記溶離されたアミノ酸は、上記ニンヒドリン含有組成物と混合するために、上記活性化ゾーンへと直接供給され得る。より好ましくは、上記溶離されたアミノ酸は、上記ニンヒドリン試薬と混合し、反応させるために、上記加熱された反応ゾーンへと直接供給される。
【００８２】
上記で考察されるように、上記活性化ゾーンは、上記反応ゾーンのものとは別個のチャンバ内に含まれ得る。その場合、上記活性化ゾーンは、上記反応ゾーンの上流に配置される。この配置において、上記活性化ゾーンおよび上記クロマトグラフィー分離カラムは、両方が上記反応ゾーンの上流に配置される。この配置において、上記活性化ゾーンおよび上記反応ゾーン内で普及する温度および滞在時間のような条件は、より容易に変化させられ得、独立して制御され得、上記活性化ゾーンにおけるヒドリンダンチンの形成および上記反応ゾーンにおける窒素含有化合物とのその後の反応の制御に関して、改善された融通性を提供する。
【００８３】
この配置において、上記活性化ゾーンは、上記反応ゾーンから分離しており、本発明のさらなる局面の装置の形態にある；その特徴は、上記で考察されている。使用時には、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記活性化ゾーンの上流にライン上で注入され得る。上記ニンヒドリン含有組成物は、次いで、上記活性化ゾーンへと供給され、ＵＶ光で照射される。必要とされる量のヒドリンダンチンがいったん形成されると、上記ニンヒドリン試薬は、分析されている上記窒素含有化合物と反応させるために、上記加熱された反応ゾーンへと供給される。あるいは、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記活性化ゾーンへと直接供給され得る。上記溶離されたアミノ酸は、上記活性化ゾーンの上流に供給され得る。あるいは、上記溶離されたアミノ酸は、上記ニンヒドリン含有組成物と混合するために、上記活性化ゾーンへと直接供給され得る。より好ましくは、上記溶離されたアミノ酸は、上記ニンヒドリン試薬と反応させるために、上記活性化ゾーンの下流へとライン上で供給される。
【００８４】
本発明の方法において使用される上記ニンヒドリン含有組成物の構成要素は、上記活性化ゾーンへと別個に送達され得る。例えば、上記ニンヒドリン、緩衝液および必要に応じて１種もしくはこれより多くの有機溶媒は、それぞれのポンプによって、別個の容器もしくはレザバから引き抜かれ得、共通するラインもしくは混合ゾーンへと送達され得、ここでそれらは、上記活性化ゾーンに入る前に混合物を形成するために合わされ得る。この混合物は、次いで、上記活性化ゾーンへと送達される。あるいは、上記ニンヒドリン、緩衝液および必要に応じて１種もしくはこれより多くの有機溶媒は、それぞれのポンプによって、別個の容器もしくはレザバから引き抜かれ、上記活性化ゾーンへと直接送達され、ここでそれらは、混合物を形成するために合わされる。
【００８５】
しかし、より好ましくは、上記ニンヒドリン、緩衝液および必要に応じて１種もしくはこれより多くの有機溶媒は、上記活性化ゾーンの上流に送達されるか、または混合物として一緒に、上記活性化ゾーンへと直接送達される。この技術は、使用するのがより単純であり、非常に単純な装置しか必要としない。さらに、本発明の方法において使用され得るニンヒドリン含有組成物の構成要素は、上記組成物が非常に安定であるようなものである。よって、上記組成物は、使用されるのに先だって十分に調製され得、単一のボトル中で非常に容易に貯蔵され得る。有利なことには、上記ニンヒドリン含有組成物は、空気の存在下および室温においてすらも、無期限に貯蔵され得る。
【００８６】
上記で考察されるように、上記ニンヒドリン試薬は、必要とされる量のヒドリンダンチンが上記反応ゾーンにおけるその後の使用のために形成されるように、上記活性化ゾーンにおいて照射される。上記で考察されるように、形成されるヒドリンダンチンの必要とされる量は、良好な感度を提供するが、溶液から沈殿しないようなものである。ヒドリンダンチンが形成される速度は、上記活性化ゾーン内の照射の継続時間および強度に主に従って変化する。上記活性化ゾーンにおいて上記ニンヒドリン含有組成物からヒドリンダンチンを形成するための条件は、本発明の第１の局面に関連して上記で記載されるとおりである。
【００８７】
本発明のさらなる局面の方法において、上記活性化ゾーン内の温度を室温もしくはほぼ室温（これは、０℃〜５０℃の間、より好ましくは、２０℃〜３０℃の間、なおさらにより好ましくは、２０℃〜２５℃の間である）で維持することは、特に好ましい。室温より高い温度が使用され得る（例えば、２５０℃までおよび２５０℃を含む）。好ましい実施形態において、１００℃未満の温度が使用される。
【００８８】
上記活性化ゾーン内の温度が、上記温度を上記活性化ゾーン内で一定に保持するために室温より高く維持される場合、サーモスタット制御ヒーター（ｔｈｅｒｍｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｈｅａｔｅｒ）が、好ましくは利用される。さらに、本発明のさらなる局面の装置に関連して考察される上記１もしくはこれより多くのＵＶ光源およびヒートシンクは、好ましくは、上記活性化ゾーンの外側にもしくはそこから近距離で設置される。
【００８９】
上記反応ゾーンは、ヒドリンダンチンを含むニンヒドリン試薬が上記窒素含有化合物（例えば、１種もしくはこれより多くのアミノ酸）と高温で反応して、ルーヘマン紫を形成し得るように、使用される。上記活性化ゾーンにおいてヒドリンダンチンの形成速度を制御することによって、上記反応ゾーンに存在するヒドリンダンチンの最終濃度は、厳密に調節され得る。有利なことには、いったん、必要とされる濃度のヒドリンダンチンが上記活性化ゾーンにおいて形成されて、上記ニンヒドリン試薬が上記反応ゾーンへと供給されると、ヒドリンダンチンの形成は継続しない。より重要なことには、上記反応ゾーン内の温度は、必要とされる濃度でヒドリンダンチンを形成する必要性によって制限されない。なぜならこれは、上記活性化ゾーンにおいて既に達成されてしまっているからである。このようにして、上記反応ゾーンにおける条件は、上記窒素含有化合物、特に、アミノ酸との色形成反応の分析のために最適化され得る。
【００９０】
上記反応ゾーンは、ヒドリンダンチンを含む上記活性化されたニンヒドリン試薬が、分析されている上記窒素含有化合物と反応することを可能にするために、任意の適切な構成のものであり得る。上記反応ゾーンに適切な構成としては、既存のアミノ酸分析器の色形成反応チャンバ（すなわち、コイルもしくはカラムの形態にある）が挙げられる。
【００９１】
全ての既存のアミノ酸分析器は、上記ニンヒドリン試薬と上記窒素含有化合物との間の色形成反応を最適化するために、上記反応ゾーン内の温度を変化させる手段を有する。好ましくは、上記反応ゾーン内の温度は、１００℃〜１６０℃、なおより好ましくは、１１５℃〜１４５℃、なおより好ましくは、１２０℃〜１３５℃の範囲にある。
【００９２】
上記反応ゾーンにおける上記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間はまた、上記ニンヒドリン試薬と上記窒素含有化合物との間の色形成反応を最適化するために、変化され得る。例えば、上記滞留時間は、上記活性化ゾーンにおいて形成されるヒドリンダンチンの量に従って変化され得る。好ましくは、上記反応ゾーンにおける滞留時間は、１０〜１８０秒、より好ましくは、２０〜８０秒、なおより好ましくは、３０〜６０秒の範囲にある。
【００９３】
本発明の実施形態は、ここで添付の図面を参照して単に例示によって記載される。
【図面の簡単な説明】
【００９４】
【図１】図１は、本発明の第１の局面の好ましい実施形態に従う装置の長手方向の断面図である。
【図２】図２は、本発明のさらなる局面の方法を実施するためのアミノ酸分析器を図示するフロー図である。
【発明を実施するための形態】
【００９５】
図１を参照すると、窒素含有組成物をＵＶ光で照射するために、装置（概して２として示される）が示される。上記装置２は、ハウジング４を含み、上記ハウジング４は、導管６を含む。上記導管６は、ニンヒドリン含有組成物を受容するための入り口８およびヒドリンダンチン含有組成物を排出するための出口１０を含む。示されるように、上記導管６は、形状が概して円筒形である。
【００９６】
上記ハウジング４は、上記導管６の入り口８を受容するための第１の開口部１２および上記導管６の出口１０を受容するための第２の開口部１４をさらに含む。示されるように、上記導管６は、上記ハウジング４の第１の開口部１２と第２の開口部１４との間に延びる。このようにして、上記導管６への上記ハウジング４の外側からのアクセスは可能である。使用時には、上記ニンヒドリン含有組成物の連続的なストリームは、上記ハウジング４のそれぞれの開口部（１２および１４）を通って、上記導管６の入り口８へと送達され得、上記導管６の出口１０を通って排出され得る。
【００９７】
上記導管６内に存在する間に、上記ニンヒドリン含有組成物は、上記ニンヒドリンのある割合がヒドリンダンチンへと変換されるように、ＵＶ光で照射される。この点に関して、上記ハウジング４は、上記導管６内のニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で放射するために、１もしくはこれより多くのＵＶ光源１６を含む。示されるように、上記１もしくはこれより多くのＵＶ光源１６は、上記ＵＶ光が上記導管６の周囲に向かって指向されるように、上記導管６の外側に、上記ハウジング４の内部表面１８上にもしくは上記内部表面１８に隣接して設置される。上記ハウジング４の内部表面１８は、上記導管のうちの少なくとも大部分、より好ましくは全てがＵＶ光によって照射されることを確実にするために、反射材料を含む。上記装置２は、上記１もしくはこれより多くのＵＶ光源の温度を室温に維持するために、１もしくはこれより多くのヒートシンク２０をさらに含む。１もしくはこれより多くのヒートシンクは、上記１もしくはこれより多くのＵＶ光源１６によって生成される熱を上記ハウジング４から離れるように指向するために、上記ハウジング４の外側表面２２上に提供される。
【００９８】
図１において、上記導管６は、プラスチックのような材料から作製され、従って、それ自体を正しい位置（それは、上記導管６のうちの少なくとも一部、より好ましくは上記導管６全体がＵＶ光で照射され得る位置である）に支持できない。よって、示されるように、上記導管６は、上記導管６を正しい位置に支持するために支持部材２４の周りに巻き付けられる。上記支持部材２４は、形状が概して円筒形であり、上記１もしくはこれより多くのＵＶ光源１６の直ぐ下に位置づけられる。
【００９９】
図２を参照すると、本発明の方法を実施するためのアミノ酸分析器（概して２６として示される）が示される。上記アミノ酸分析器２６は、アミノ酸サンプルをその構成要素（ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）へと分離するための手段を示さない。しかし、上記で考察されるように、アミノ酸を分離するための種々の公知の技術が使用され得る。上記アミノ酸分析器２６は、ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するための活性化ゾーン２８およびそのように生成された上記ヒドリンダンチン含有組成物と窒素含有化合物とを高温で反応させるために使用される反応ゾーン３０を含む。
【０１００】
上記活性化ゾーン２８および反応ゾーン３０は、本発明の好ましい実施形態に従って配置され、ここで上記活性化ゾーン２８は、反応ゾーン３０のものとは別個のチャンバもしくは容器内に含まれ、上記反応ゾーン３０の上流に配置される。代替の配置において、上記活性化ゾーン２８および上記反応ゾーン３０は単一のチャンバもしくは容器内にあり、上記活性化ゾーン２８は上記チャンバもしくは容器の上流領域を構成し、上記反応ゾーン３０は上記チャンバもしくは容器の下流領域を構成する。
【０１０１】
上記アミノ酸分析器２６は、第１の供給ライン３２をさらに含む。上記第１の供給ライン３２は、上記活性化ゾーン２８の上流に配置され、上記ニンヒドリン含有組成物を上記アミノ酸分析器２６へと送達するために使用される。この実施形態において、上記ニンヒドリン含有組成物の構成要素は、上記活性化ゾーン２８へと混合物として一緒に送達される。上記活性化ゾーン２８は、上記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で、室温において、所定の期間にわたって照射する。そのように生成された上記ヒドリンダンチン含有組成物は、次いで、上記反応ゾーン３０へと送達される。
【０１０２】
上記アミノ酸分析器２６は、第２の供給ライン３４をさらに含む。上記第２の供給ライン３４は、上記アミノ酸を上記アミノ酸分析器２６へと送達する。上記第２の供給ライン３４は、上記アミノ酸を、上記活性化ゾーン２８の下流にあるが、上記反応ゾーン３０の上流にある部位（３６と示される）へと送達する。３８として示される代替の実施形態において、上記第２の供給ライン３４は、上記アミノ酸を、上記反応ゾーン３０へと直接送達する。
【０１０３】
上記反応ゾーン３０は、活性化されたニンヒドリン試薬およびアミノ酸を、高温へと所定の期間にわたって加熱する。その反応生成物は、光度計４０（ここで上記アミノ酸の濃度および特性が検出および測定される）へと送達される。
【実施例】
【０１０４】
図１に従う装置を使用して、アミノ酸分析器で使用するためのヒドリンダンチンを含むニンヒドリン試薬を形成した。上記装置は、４個の高効率ＵＶ  ＬＥＤを含んだ；２５℃での各ＬＥＤの光学的特性は、以下のとおりである：
・ピーク波長：３６５ｎｍ
・７００ｍＡでの放射束（強度）：３２０ｍＷ
・視野角（ｖｉｅｗｉｎｇ  ａｎｇｌｅ）（２θ１／２）：８５°
・総内抱角（ｔｏｔａｌ  ｉｎｃｌｕｄｅｄ  ａｎｇｌｅ）（θ０．９Ｖ）：１００°
【０１０５】
各ＬＥＤの強度を、固定電流３６０ｍＡでのパルス幅変調を使用して制御した。使用時には、パルス幅は、最大総強度範囲（ｍａｘｉｍｕｍ  ｔｏｔａｌ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ  ｒａｎｇｅ）の６５８ｍＷ放射束を提供して、０％〜１００％の間で変化させることができた。
【０１０６】
上記導管（反応コイル）の特性は、以下のとおりであった；
・内径：０．１５ｃｍ
・長さ：１．７メートル
【０１０７】
２つの実験を行った。そのうちの１つは、有機溶媒を含むニンヒドリン含有組成物を、図１に従う装置を使用して、ＵＶ光で照射した。そのうちの別の１つは、有機溶媒を含まないニンヒドリン含有組成物を、図１に従う装置を使用して、ＵＶ光で照射した。これら２つの実験の結果は、以下のとおりである；
【０１０８】
（実施例１  −  有機溶媒を含むニンヒドリン含有組成物）
２％  ｗ／ｖ  ニンヒドリン、５０％  ｗ／ｖ  エチレングリコールおよび１Ｍ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ５．２に調節）を含むニンヒドリン含有組成物を、図１に従う装置を使用して、ＵＶ光で照射した。上記導管（反応コイル）を通る流速を、上記装置における滞在時間１０分間を与える、０．３０ｍｌ／分に設定した。パルス幅変調を、総放射束強度２３０ｍＷを与える、３５％に設定した。ヒドリンダンチン濃度０．１２％  ｗ／ｖを、結果として生じた生成物において得た。
【０１０９】
（実施例２  −  有機溶媒なしのニンヒドリン含有組成物）
２％  ｗ／ｖ  ニンヒドリンおよび１Ｍ  酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ  ５．２に調節）を含むニンヒドリン含有組成物を、図１に従う装置を使用して、ＵＶ光で放射した。上記導管（反応コイル）を通る流速を、上記装置における滞在時間１０分間を与える、０．３０ｍｌ／分に設定した。ＰＷＭを、総放射束強度１６５ｍＷを与える、２５％に設定した。ヒドリンダンチン濃度０．０８％  ｗ／ｖを、結果として生じた生成物において得た。
【０１１０】
生成されるヒドリンダンチンの濃度は、例えば、ニンヒドリンの濃度、流速、上記導管の長さ、ＬＥＤ光源の数およびそれらがＵＶ光を放射する強度を増大もしくは低減することによって、変化させられ得ることは、認識されるべきである。
【図１】
2017517744.tif 000003
【図２】
2017517744.tif 000004
【手続補正書】
【提出日】平成28年12月27日(2016.12.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法であって、該方法は、
ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程
を包含する方法。
【請求項２】
前記ニンヒドリン含有組成物に存在するニンヒドリン濃度は、０．１％〜５％  ｗ／ｖである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ニンヒドリン含有組成物は、水性緩衝液を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
前記水性緩衝液は、弱酸とその共役塩基／塩のうちの１つとを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記水性緩衝液は、３〜７の間の値でｐＨを維持する、請求項３または４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記ニンヒドリン含有組成物は、１種もしくはこれより多くの有機溶媒をさらに含む、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記有機溶媒は、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、プロピレングリコール、スルホラン、カルビトール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、メチルセロソルブ、メタノール、エタノールおよびプロパノールから選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記有機溶媒の濃度は、５％ｖ／ｖ〜７５％ｖ／ｖである、請求項６または７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ニンヒドリン含有組成物は、ヒドリンダンチンも還元剤も含まない、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記形成されるヒドリンダンチンの濃度は、０．０１〜０．３％  ｗ／ｖである、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記形成されるヒドリンダンチンの濃度は、０．０１〜０．１５％  ｗ／ｖである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
１もしくはこれより多くのＵＶ光源は、前記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で放射するために使用される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記ＵＶ光源は、発光ダイオード（ＬＥＤ）を含む、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記ＵＶ光源は、１９０ｎｍ〜４３０ｎｍの範囲にある波長を有するＵＶ光を放つように構成される、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記ＵＶ光源は、３５０ｎｍ〜３７０ｎｍの範囲にある波長を有するＵＶ光を放つように構成される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記ＵＶ光源は、３６５ｎｍの波長を有するＵＶ光を放つように構成される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ＵＶ光源によって放たれた光の強度は、１０ｍＷ〜１０，０００ｍＷの範囲にある、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
前記ニンヒドリン含有組成物は、ＵＶ光で、２〜１０分間照射される、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記ニンヒドリン含有組成物は、１００℃未満の温度において、ＵＶ光で照射される、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記ニンヒドリン含有組成物は、２０℃〜２５℃の温度においてＵＶ光で照射される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
窒素含有化合物を分析するための方法において、請求項１〜２０のいずれかに記載のプロセスによって得られ得るニンヒドリン試薬の使用。
【請求項２２】
１種もしくはこれより多くの窒素含有化合物を分析するための方法であって、該方法は、
活性化ゾーンにおいてＵＶ光でニンヒドリン含有組成物を照射して、ニンヒドリン試薬を生成する工程；および
該ニンヒドリン試薬と該窒素含有化合物とを反応ゾーンにおいて接触させる工程
を包含する方法。
【請求項２３】
前記ニンヒドリン含有組成物は、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法によって、前記活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記活性化ゾーン内の温度は、１００℃未満である、請求項２２または２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記反応ゾーン内の温度は、１００℃〜１６０℃の範囲にある、請求項２２または２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記反応ゾーン内の温度は、１２０℃〜１３５℃の範囲にある、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記反応ゾーンにおける前記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間は、１０〜１８０秒間の範囲にある、請求項２２〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記反応ゾーンにおける前記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間は、３０〜６０秒間の範囲にある、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
図１または図２のいずれかを参照して、実質的に上に記載のように窒素含有化合物の分析に使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法。
【請求項３０】
図１または図２のいずれかを参照して、実質的に上に記載のように１種もしくはこれより多くの窒素含有化合物を分析するための方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
上記反応ゾーンにおける上記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間はまた、上記ニンヒドリン試薬と上記窒素含有化合物との間の色形成反応を最適化するために、変化され得る。例えば、上記滞留時間は、上記活性化ゾーンにおいて形成されるヒドリンダンチンの量に従って変化され得る。好ましくは、上記反応ゾーンにおける滞留時間は、１０〜１８０秒、より好ましくは、２０〜８０秒、なおより好ましくは、３０〜６０秒の範囲にある。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための方法であって、該方法は、
ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射する工程
を包含する方法。
（項目２）
前記ニンヒドリン含有組成物に存在するニンヒドリン濃度は、０．１％〜５％  ｗ／ｖである、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ニンヒドリン含有組成物は、水性緩衝液を含む、項目１または２に記載の方法。
（項目４）
前記水性緩衝液は、弱酸とその共役塩基／塩のうちの１つとを含む、項目３に記載の方法。
（項目５）
前記水性緩衝液は、３〜７の間の値でｐＨを維持する、項目３または４のいずれかに記載の方法。
（項目６）
前記ニンヒドリン含有組成物は、１種もしくはこれより多くの有機溶媒をさらに含む、項目１〜５のいずれかに記載の方法。
（項目７）
前記有機溶媒は、ジメチルスルホキシド、エチレングリコール、プロピレングリコール、スルホラン、カルビトール、プロピレングリコールモノメチルエーテル、メチルセロソルブ、メタノール、エタノールおよびプロパノールから選択される、項目６に記載の方法。
（項目８）
前記有機溶媒の濃度は、５％ｖ／ｖ〜７５％ｖ／ｖである、項目６または７のいずれかに記載の方法。
（項目９）
前記ニンヒドリン含有組成物は、ヒドリンダンチンも還元剤も含まない、項目１〜８のいずれかに記載の方法。
（項目１０）
前記形成されるヒドリンダンチンの濃度は、０．０１〜０．３％  ｗ／ｖである、項目１〜９のいずれかに記載の方法。
（項目１１）
前記形成されるヒドリンダンチンの濃度は、０．０１〜０．１５％  ｗ／ｖである、項目１０に記載の方法。
（項目１２）
１もしくはこれより多くのＵＶ光源は、前記ニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で放射するために使用される、項目１〜１１のいずれかに記載の方法。
（項目１３）
前記ＵＶ光源は、発光ダイオード（ＬＥＤ）を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記ＵＶ光源は、１９０ｎｍ〜４３０ｎｍの範囲にある波長を有するＵＶ光を放つように構成される、項目１〜１３のいずれかに記載の方法。
（項目１５）
前記ＵＶ光源は、３５０ｎｍ〜３７０ｎｍの範囲にある波長を有するＵＶ光を放つように構成される、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記ＵＶ光源は、３６５ｎｍの波長を有するＵＶ光を放つように構成される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記ＵＶ光源によって放たれた光の強度は、１０ｍＷ〜１０，０００ｍＷの範囲にある、項目１〜１６のいずれかに記載の方法。
（項目１８）
前記ニンヒドリン含有組成物は、ＵＶ光で、２〜１０分間照射される、項目１〜１７のいずれかに記載の方法。
（項目１９）
前記ニンヒドリン含有組成物は、１００℃未満の温度において、ＵＶ光で照射される、項目１〜１８のいずれかに記載の方法。
（項目２０）
前記ニンヒドリン含有組成物は、２０℃〜２５℃の温度においてＵＶ光で照射される、項目１９に記載の方法。
（項目２１）
窒素含有化合物を分析するための方法において、項目１〜２０のいずれかに記載のプロセスによって得られ得るニンヒドリン試薬の使用。
（項目２２）
窒素含有化合物の分析において使用するためのニンヒドリン試薬を調製するための装置であって、該装置は、
ニンヒドリン含有組成物を受容するための入り口およびニンヒドリン試薬を排出するための出口を有する導管；ならびに
該導管内のニンヒドリン含有組成物をＵＶ光で照射するための光源
を含む装置。
（項目２３）
前記導管は、ハウジング内に含まれ、該ハウジングは、前記導管の入り口を受容するための第１の開口部および該導管の出口を受容するための第２の開口部を含む、項目２２に記載の装置。
（項目２４）
前記ハウジングの１つもしくはこれより多くの内部表面は、反射材料を含む、項目２３に記載の装置。
（項目２５）
前記光源は、前記導管と前記ハウジングとの間に設置される、項目２３または２４のいずれかに記載の装置。
（項目２６）
前記光源は、前記ハウジングの内部表面上に設置されているかまたは該内部表面に隣接して設置されている、項目２５に記載の装置。
（項目２７）
前記導管は、細長い、項目２２〜２６のいずれかに記載の装置。
（項目２８）
前記導管は、ＵＶスペクトルにある電磁放射線に対して透過性の材料から形成される、項目２２〜２７のいずれかに記載の装置。
（項目２９）
前記導管は、ガラス、プラスチックおよび／もしくは石英から形成される、項目２８に記載の装置。
（項目３０）
前記導管を保持する支持体をさらに含む、項目２２〜２９のいずれかに記載の装置。
（項目３１）
前記支持体は、ＵＶスペクトルにある電磁放射線に対して透過性の材料から形成される、項目３０に記載の装置。
（項目３２）
前記光源は、ＬＥＤである、項目２２〜３１のいずれかに記載の装置。
（項目３３）
前記光源の温度を制御するために使用される１もしくはこれより多くのヒートシンクをさらに含む、項目２２〜３２のいずれかに記載の装置。
（項目３４）
前記１もしくはこれより多くのヒートシンクは、前記ハウジングに対して外側にある表面上に提供される、項目３３に記載の装置。
（項目３５）
１種もしくはこれより多くの窒素含有化合物を分析するための方法であって、該方法は、
活性化ゾーンにおいてＵＶ光でニンヒドリン含有組成物を照射して、ニンヒドリン試薬を生成する工程；および
該ニンヒドリン試薬と該窒素含有化合物とを反応ゾーンにおいて接触させる工程
を包含する方法。
（項目３６）
前記ニンヒドリン含有組成物は、項目１〜２０のいずれかに記載の方法によって、前記活性化ゾーンにおいてＵＶ光で照射される、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
前記活性化ゾーン内の温度は、１００℃未満である、項目３５または３６のいずれかに記載の方法。
（項目３８）
前記反応ゾーン内の温度は、１００℃〜１６０℃の範囲にある、項目３５または３６のいずれかに記載の方法。
（項目３９）
前記反応ゾーン内の温度は、１２０℃〜１３５℃の範囲にある、項目３８に記載の方法。
（項目４０）
前記反応ゾーンにおける前記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間は、１０〜１８０秒間の範囲にある、項目３５〜３９のいずれかに記載の方法。
（項目４１）
前記反応ゾーンにおける前記構成要素の滞在時間もしくは滞留時間は、３０〜６０秒間の範囲にある、項目４０に記載の方法。
【国際調査報告】
2017517744.tif 000005
2017517744.tif 000006
2017517744.tif 000007
2017517744.tif 000008
2017517744.tif 000009