(57)【要約】少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）の混合物を、少なくとも１つのモノマー（Ｍ）と反応させて、アミド結合を形成して、イニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）のダイマー、イニシエータ（Ｉ）が１より多いモノマー（Ｍ）鎖に結合したオリゴマー前駆体、又はこれらの混合物を形成する工程１）と、少なくとも１つのターミネータ（Ｔ）を添加して、アミド結合形成による鎖状オリゴマー（Ｉ−Ｍ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｔ，．．．）又は鎖状オリゴマーの混合を製造し；又は工程１）で製造したダイマー又はオリゴマー前駆体の、少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）と好ましくは各末端モノマー（Ｍ）の間に連結共有結合を形成するように工程１）に対する反応条件を変更して、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合を製造する工程２）を含む、オリゴマー又はオリゴマー混合物を生成して、アミド形成オリゴマー化により化合物ライブラリーを生成する方法。
2017517475.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
オリゴマー又はオリゴマー混合物を生成して、アミド形成オリゴマー化により化合物ライブラリーを生成する方法であって、この方法は、以下の工程を含む：
１）少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）の混合物を、少なくとも１つのモノマー（Ｍ）と反応させて、アミド結合を形成して、イニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）のダイマー（Ｉ−Ｍ）、イニシエータ（Ｉ）が１より多いモノマー（Ｍ）鎖に結合したオリゴマー前駆体（Ｉ−Ｍ−Ｍ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｍ，．．．）、又はこれらの混合物を形成する、
２）少なくとも１つのターミネータ（Ｔ）を添加して、アミド結合形成による鎖状オリゴマー（Ｉ−Ｍ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｔ，．．．）又は鎖状オリゴマーの混合を製造し；又は
工程１）で製造したダイマー又はオリゴマー前駆体の、少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）の間に連結共有結合を形成するように工程１）に対する反応条件を変更して、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合を製造する、
ただし、工程２）を省略して、アミド結合形成による鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合として、イニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）のダイマー（Ｉ−Ｍ）、イニシエータ（Ｉ）が１より多いモノマー（Ｍ）鎖に結合したオリゴマー前駆体（Ｉ−Ｍ−Ｍ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｍ，．．．）、又はこれらの混合物を形成でき、
前記イニシエータ（Ｉ）は、下記からなる群から選択され、
【化４１】
2017517475.tif 000048
（ここで、アミド結合形成による鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合物の製造のために、
Ｒは、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、−Ｃ（ＮＨ２）ＲＩ、−Ｃ（ＮＨ２）｛ＲＩ−ＣＯ−Ｃ（ＮＨ２）｝ｎＲＩ（ここで、ｎは１又は２であり、ＲＩはＨ又はアミノ酸側鎖である）、蛍光色素、核酸又はこれらの誘導体、ペプチド核酸、フラッグオクタペプチド（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）、ビオチン又はアフニティー標識からなる群から選択され、又は
アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のために、
Ｒは、−｛（ＣＨ２）｝ｎＲｃ，−｛（ＣＨＣＨ３）｝ｎＲｃ，−｛（ＣＨ（１，１−ジメチルエチル））｝ｎＲｃ，−｛（ＣＨ（ベンジル））｝ｎＲｃ（ここで、ｎは１又は２であり、Ｒｃは、工程１）で製造されるダイマー又はオリゴマーの各末端モノマーに連結共有結合アミド結合を形成できる連結構造である）からなる群から選択され、
両方の場合、
Ｘ＋は、Ｋ＋，Ｃｓ＋，Ｌｉ＋，Ｎａ＋，Ｒ４Ｎ＋，Ｒ４Ｐ＋又はＲ３Ｓ＋からなる群から選択される対イオンであり（Ｒは有機基又はＨである）、
Ｘ，Ｙ，Ｚは、それぞれ独立して、Ｆ，ＯＲ，Ｎ＋Ｒ３，Ｎ＋Ｒ２ＯＲ，Ｎ＋Ｒ２ＳＲ，及びＮ＋Ｒ２ＮＲ２からなる群から選択され、任意に単環又は二環構造を形成する（Ｒは有機基又はＨである）。）
又は、これらの共有結合ダイマー又はトリマーであり、この場合、Ｒは共通の連結要素である、
モノマー（Ｍ）は、下記からなる群から選択され、
【化４２】
2017517475.tif 000049
（ここで、Ｘは、ハロゲン，−ＯＨ，−ＣＯＯＨ，−ＮＨ２，−Ｏ−アルキル，−Ｏ−アリール，−Ｏ−ＣＯ−アルキル，−Ｏ−ＣＯ−アリール，−ＳＨ，Ｓ−アルキル，−Ｓ−アリール，Ｎ−アシル，−ＮＨ−アルキル，−ＮＨ−アリール，−Ｎ（アルキル）２，−Ｎ（アリール）２，−Ｎ（アルキル）（アリール），−ＣＯ−ＮＨ−アルキル，−ＣＯ−ＮＨ−アリール，−ＣＯ−Ｎ（アルキル）２，−ＣＯ−Ｎ（アリール）２，−ＣＯ−Ｎ（アルキル）（アリール），−ＣＮ，−ＮＯ２，−Ｎ３，−Ｓ（Ｏ）アリール，−Ｓ（Ｏ）２アリールからなる群から選択され、
Ｙは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺからなる群から選択され、Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記した通りであり、
Ｚは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺからなる群から選択され、Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記したもの及びこれらの誘導体であり、ＸとＺが崩壊したとき又はＮＯ結合が分裂したときＹとなり、
Ｒは、Ｏ，Ｓ，ＮＲ１，Ｓｉ，ＣＨＲ１Ｒ２からなる群から選択され、
Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、互いに結合して形成された環からなる群から選択され、
Ｑは、Ｏ，Ｓ，Ｓｉ，ＮＲ１からなる群から選択され、Ｒ１は有機基又はＨである。）
ターミネータ（Ｔ）を使用するときは、下記からなる群から選択され、
【化４３】
2017517475.tif 000050
（ここで、Ｒは、ＣＨ２，（ＣＨ２）２，ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴ，（ＣＨ２）３，（ＣＨ２）２ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴＣＨ２，（ＣＨ２）４からなる群から選択され、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、
Ｒ１は、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリルからなる群から選択され、
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択される。）
又は、これらの共有結合ダイマー又はトリマーであり、この場合、Ｒ１及び／又はＲ７とＲ８の少なくとも１つは共通の連結要素である。
【請求項２】
以下の工程を用いて、オリゴマー又はオリゴマー混合物を生成する請求項１記載の方法：
１）少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）の混合物を、少なくとも１つのモノマー（Ｍ）と反応させて、アミド結合を形成して、イニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）のダイマー（Ｉ−Ｍ）、イニシエータ（Ｉ）が１より多いモノマー（Ｍ）鎖に結合したオリゴマー前駆体（Ｉ−Ｍ−Ｍ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｍ，．．．）、又はこれらの混合物を形成する、
２）少なくとも１つのターミネータ（Ｔ）を添加して、アミド結合形成による鎖状オリゴマー（Ｉ−Ｍ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｔ，．．．）又は鎖状オリゴマーの混合を製造し；又は
工程１）で製造したダイマー又はオリゴマー前駆体の、少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）と好ましくは各末端モノマー（Ｍ）の間に連結共有結合を形成するように工程１）に対する反応条件を変更して、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合を製造する。
【請求項３】
工程１）で単一のイニシエータ（Ｉ）を用い、アミド結合形成により鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合物を製造する場合は、工程２）で単一のターミネータ（Ｔ）を用いる請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
アミド結合形成による鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）が、下記からなる群から選択される請求項１〜３のいずれか記載の方法。
【化４４】
2017517475.tif 000051
（ここで、Ｍｅは−ＣＨ３である。）
【請求項５】
アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）において、連結構造が、アミノ酸、−ＣＯ（（ＣＨ２）２ＮＨ−の群から選択される１又は２の要素の鎖からなる群から選択され、この鎖は、下記から選択される基でターミネーションされる請求項１〜４のいずれか記載の方法。
【化４５】
2017517475.tif 000052
（ここで、Ｂｚはベンジルであり、Ｂｏｃはｔ−ブチロキシカルボニルである。）
【請求項６】
アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）が、下記からなる群から選択される少なくとも１つのイニシエータ部分を含む構造であり、
【化４６】
2017517475.tif 000053
（ここで、Ｒは連結要素であり、
Ｘ＋は、Ｋ＋，Ｃｓ＋，Ｌｉ＋，Ｎａ＋，Ｒ４Ｎ＋，Ｒ４Ｐ＋又はＲ３Ｓ＋からなる群から選択される対イオンであり、Ｒは有機基又はＨであり、
Ｘ，Ｙ，Ｚは、それぞれ独立して、Ｆ，ＯＲ，Ｎ＋Ｒ３，Ｎ＋Ｒ２ＯＲ，Ｎ＋Ｒ２ＳＲ，及びＮ＋Ｒ２ＮＲ２からなる群から選択され、任意に単環又は二環構造を形成し、Ｒは有機基又はＨである。）
少なくとも１つのターミネータ部分は、下記からなる群から選択され、
【化４７】
2017517475.tif 000054
（ここで、Ｒは、ＣＨ２，（ＣＨ２）２，ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴ，（ＣＨ２）３，（ＣＨ２）２ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴＣＨ２，（ＣＨ２）４からなる群から選択され、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、
Ｒ１は、連結要素であり、
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択され、ただし、Ｒ７とＲ８の少なくとも１つは連結要素であり、
イニシエータ部分のＲ又はターミネータ部分のＲ１又はＲ７又はＲ８による共通の連結要素により、連結される。）
好ましくは、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）は、下記からなる群から選択され、
【化４８】
2017517475.tif 000055
（ここで、Ｒ１は連結要素であり、
Ｒｑは、４，５，６又は７員環を補完する構造要素であり、好ましくは、−Ｃ−，−ＣＨ２−Ｃ−，−ＣＨＲＴ−Ｃ−，−（ＣＨ２）２−Ｃ−，−−（ＣＨＲＴ）２−Ｃ−，−（ＣＨ２）−Ｃ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−Ｃ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−Ｃ−（ＣＨＲＴ）−，−（ＣＨ２）３−Ｃ（ここで、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される）からなる群から選択され、
Ｒｔは、４，５，６又は７員環を補完する構造要素であり、好ましくは、−ＣＲＵ−，−ＣＨ２−ＣＲＵ−，−ＣＨＲＴ−ＣＲＵ−，−（ＣＨ２）２−ＣＲＵ−，−（ＣＨＲＴ）２−ＣＲＵ−，−（ＣＨ２）−ＣＲＵ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−ＣＲＵ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−ＣＲＵ−（ＣＨＲＴ）−，−（ＣＨ２）３−ＣＲＵ（ここで、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、ＲＵは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される）からなる群から選択され、
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択され、
Ｒは、Ｏ，Ｓ，ＮＲ１，ＳｉＲ１Ｒ２，ＣＲ１Ｒ２からなる群から選択され、Ｒ１とＲ２は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、
Ｙは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺからなる群から選択され、Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記した通りである。）
さらに好ましくはこの構造は、下記からなる群から選択され、
【化４９】
2017517475.tif 000056
（ここで、ｂｏｃはｔ−ブチロキシカルボニルであり、Ｐｈはフェニルであり、Ｆｍｏｃはフルオレニルメチレンオキシカルボニルであり、Ｍｅは−ＣＨ３であり、Ｂｚはベンジルである。）
請求項１〜５のいずれか記載の方法。
【請求項７】
モノマー（Ｉ）が下記からなる群から選択される請求項１〜６のいずれか記載の方法。
【化５０】
2017517475.tif 000057
（ここで、Ｍｅは−ＣＨ３であり、ｔＢｕは１，１−ジメチルエチルであり、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニルであり、ｉＰｒはイソプロピルであり、Ｐｈはフェニルである。）
【請求項８】
ターミネータ（Ｔ）が下記からなる群から選択される請求項１〜７のいずれか記載の方法。
【化５１】
2017517475.tif 000058
（ここで、Ｒ１は、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリルからなる群から選択され、
Ｍｅは−ＣＨ３であり、Ｅｔはエチルであり、Ｐｈはフェニルである。）
【請求項９】
工程１）及び／又は工程２）を、追加の化学試薬と触媒を添加することなく、溶剤から離れて実施する請求項１〜８のいずれか記載の方法。
【請求項１０】
工程１）及び／又は工程２）では、有機溶剤、水、水性バッファ又はこれらの組合せを使用する請求項１〜９のいずれか記載の方法。
【請求項１１】
工程１）では、１より多い、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜４の異なるモノマーを使用する、及び／又は、工程１）では、反応を実施して、少なくとも２つの、好ましくは２〜１０の、より好ましくは２〜６の、内部連結したモノマーを含むオリゴマーを得る請求項１〜１０のいずれか記載の方法。
【請求項１２】
工程１）では、反応条件を、好ましくは温度及び／又は圧力、及び／又は反応物質濃度及び／又は反応物質添加順序及び／又は反応物質添加時間及び／又は反応物質キラリティを、選択して、混合物において、異なるバッチ間で、目的とする異なるオリゴマーの異なる分布を得る請求項１〜１１のいずれか記載の方法。
【請求項１３】
工程１）で、単一のイニシエータ（Ｉ）、単一のモノマー（Ｍ）を用い、鎖状オリゴマーを生成する場合は、工程２）で単一のターミネータ（Ｔ）を用い、工程１）及び／又は２）の反応条件を、所定のトリマー構造を形成するように、調整する請求項１〜１２のいずれか記載の方法。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれか記載の方法を用いて製造した少なくとも１つのオリゴマー混合物に基づく化合物ライブラリーから、生物学的及び／又は化学的活性システムを同定する方法であって、前記オリゴマー混合物を、混合物から化合物を精製又は単離する前に、活性スクリーニングする方法。
【請求項１５】
請求項１０及び／又は１１記載の方法で製造した多量の異なる混合物を用いて、これら混合物の生物学的及び／又は化学的活性を検査し、活性パターンからイニシエータ及び／又はモノマー及び／又はターミネータ誘導活性を推測し、同定された活性イニシエータ及び／又はモノマー及び／又はターミネータだけに基づき、請求項１〜１２のいずれか記載の方法を用いてさらなる混合物を製造し、可能性ある活性オリゴマーの数を減らす請求項１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、オリゴマー又はオリゴマー混合物の生成方法、特に、活性スクリーニング用の化合物ライブラリーの提供方法に関する。本発明は、さらに、このようなライブラリーから、状況に応じたスクリーニングプロセスを用いて、活性化合物を同定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近代薬化学の現在のプラックティスは、ヒット同定、ヒット・トゥ・リード及びリード最適化の十分に確立された戦略による。この方法は、有機化合物の膨大なライブラリーの製造とハイスループットスクリーニングに基づく。ヒット同定では、ハイスループット生物学アッセイにおいて百万以上の化合物をスクリーニングすることも珍しくはない。このような膨大な数の化合物のスクリーニングには、ロボット工学、化合物精製、化合物保存の複雑な基盤を必要とする。典型的には、各々の化合物が、１つの分子体として、製造、精製、保存及びスクリーニングされる。これは、アクティブヒットの同定をシンプルにして偽陽性を減らすが、数百万を超える化合物ライブラリーの拡大を効果的に防ぐ。現在では、１施設では、数百万を超える有機化合物を保存し、取り扱い、スクリーニングすることが不可能であることが、広く認められている。
【０００３】
この物理的な限界を回避するために、化合物の混合物をスクリーニングできる。最初の試みは、化合物の非精製の組合せ混合物を合成しスクリーニングすることであるが、これは、再現性と生物学的活性不純物の問題が障害となっていた。代わりに、標識化合物（ファージ表示、リポソーム表示、ＤＮＡエンコードライブラリー等）の大量の混合物をスクリーニングする方法は、強力な高い成功率の方法を提供する。これらの方法の主要な限界は、生物学的方法で製造できるこの種の化合物の殆どが、天然Ｌ−アミノ酸からなるオリゴペプチドに限定されてしまうことである。非天然ユニットからなる分子を迅速に合成し、スクリーニングし、デコンボリューションできる方法が強く求められている。
【０００４】
Ｙｉｎｇ−Ｌｉｎｇ  Ｃｈｉａｎｇの論文「β３−ペプチドのシークエンス制御合成：固相合成とＤＮＡテンプレート合成」（ペンシルバニア大学、２０１３）は、α−ケト酸と単一のイソオキサゾリジンモノマーの生体ホモポリマー化について記載しているが、これは仮説で、反応結果に基づいたものではなく、さらに深刻な分解とフラグメント化の問題と共に、溶解性と反応性の問題が指摘されている。この論文のこれらに基づいて、異なる合成アプローチがとられる。ターミネーションは検討されていない。
【０００５】
イシダヒロシ等は、α−ケト酸−ヒドロキシアミンアミドの化学選択的生成を介して化学選択的にβ−オリゴペプチドを合成する際に、β３−アスパラギン酸を得るために、エナンチオピュアなイソオキサゾリジンモノマーを合成する新しい方法を提案した（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ５０（２００９）３２５８−３２６０）。提案されたルートには、３−チオフェニルプロパノールのニトロン環状付加が含まれ、他の可能性のある出発物質の制限は回避している。
【０００６】
Ｙｉｎｇ−Ｌｉｎｇ  Ｃｈｉａｎｇ等は、α−ケト酸−ヒドロキシアミン（ＫＡＨＡ）連結反応を介してβ３−オリゴペプチドを合成するために、鏡像異性的に純粋なイソオキサゾリジンモノマーの新規な合成方法を提案した（Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ  Ｃｈｉｍｉｃａ  Ａｃｔａ，９５巻（２０１２），２４８１）。このワンポット合成方法はメチル２−メトキシチクリレートとの非対称１，３−双極性環状付加のためのグロース誘導キラル補助基を生じる原位置生成ニトロンを用いる。得られる多様な側鎖（プロテイン性及び非プロテイン性）を有する鏡像異性的に純粋なイソオキサゾリジンモノマーは、各構造で合成できる（類似及び非類似構造）。イソオキサゾリジンモノマーの拡張可能で鏡像選択的な合成は、反復α−ケト酸−ヒドロキシアミン（ＫＡＨＡ）連結反応を介してβ３−オリゴペプチドの合成の利用を可能とする。
【０００７】
Ｎａｎｃｙ  Ｃａｒｒｉｌｌｏ等は、イソオキサゾリジンアセタールと試薬をカップリングしないα３−オリゴペプチドの反復水性合成を提案した（ＪＡＣＳ  ２００６，１２８，１４５２−１４５３）。
【発明の概要】
【０００８】
生物学的ターゲットに対するハイスループットスクリーニングを用いて数千又は数百万の有機化合物を製造することは、新薬開発のための普及された方法である。従って、簡単な操作で、最小の無駄で、容易に精製できる、複雑な官能基を有する化合物ライブラリーを迅速に製造する方法は、強く求められている。この要求に応じるために、化合物ライブラリーの「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」合成のための新しいアプローチが、水性バッファ内でモノマー構成ブロックを組合わせることにより、開発された。この新しく提案する方法は、特に、核心の技術として、化学選択的α−ケト酸−ヒドロキシアミン（ＫＡＨＡ）アミド生成連結反応を利用し、標準的なピヘット操作又は液体取扱い技術以外の何も用いずに、化合物ライブラリーを製造し、スクリーニングし、デコンボリューションすることを可能とする。化合物のモジュール的性質は、構造活性相関（ＳＡＲ）研究に容易に合わせられる。プルーフ・オブ・コンセプトスタディとして、Ｃ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）プロテアーゼ阻害剤ライブラリーを、構成ブロックを直接マルチウェルプレートで混合することにより、合成した。この反応は試薬を必要とせず、副生成物としてＣＯ２とシクロヘキサノンだけを生じた。各反応ウェルは、β−ペプチドα−ケトアミド生成物を含んでいた。これを、検査や精製することなく、希釈しＨＣＶプロテアーゼアッセイにかけた。活性ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤を含むウェルは、フォーカストライブラリーを製造してデコンボリューションし、全て水性条件下で、簡単な操作で活性化合物を合成し確認した。最終的に提案された阻害剤を、同じアプローチで再度合成し、単離し、十分に特性を明らかにし（full  characterize）、ＨＣＶプロテアーゼに対する活性としてＩＣ５０が１．０μＭであることを確認した。
【０００９】
薬剤開発のために化合物ライブラリーを合成することは、しばしば、有毒な試薬、有機溶媒、煩雑な精製、及び膨大な単離した個々の化合物の複雑な取扱いを伴う。単に構成ブロックを水溶液中で組み合わせるだけの、「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」な大きな化合物ライブラリーの製造方法が、提案される。得られるライブラリーは、精製や追加の操作無しで、エンザイムアッセイにおいてハイスループットスクリーニングにかけられる。デコンボリューション、再合成及び単離により、活性混合物から活性化合物を同定できる。この方法によれば、シンプルな操作、最小の無駄、再度製造可能な「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」ライブラリーの製造が可能であり、数千の個々の化合物を保存する必要が無い。試薬又は保護基は必要ではなく、少量の無害の副生成物が生成される。この化学は、β−ペプチドα−ケトアミドの組み合わさった混合物を迅速に準備でき、スクリーニングでき、デコンボリューションできる。構成ブロックが得られたなら、ライブラリーの製造に必要な唯一の技術は、マイクロリッターピペットを使う液体操作である。得られたライブラリーは、エンザイムアッセイを利用して、直接マルチウェルプレートでスクリーニングできる。ライブラリー自体は保存の必要はなく、廃棄でき、必要な時は速やかに再構築できる。我々は、たったの２３の構成ブロックから形成される６０００を超える化合物のライブラリーを製造し、反応混合物から直接にライブラリーをスクリーニングし、デコンボリューションして、１．０μＭのＣ型肝炎ウィルス（ＨＣＶ）プロテアーゼ阻害剤を同定することに成功した。
【００１０】
溶液内で、イソオキサゾリジンモノマーを用いて、β−ペプチドを合成できる（図１Ａ）。このモノマーは化学選択的にα−ケト酸と反応してアミド結合を形成する。モノマーカップリングとメチルケトエステル加水分解が連続して繰り返されることにより、β−ペプチドが得られる。この方法により、シークエスがコントロールされた官能化オリゴマーを形成する段階的な様式が提供される。しかしながら、化合物ライブラリーを合成するためには、ワンポット様式で大量の様々な化合物を生成できる方法が必要である。従って、連結反応により新規なα−ケト酸を生成する別のタイプのイソオキサゾリジンモノマー（Ｍ）が設計された（図１Ｂ）。このα−ケト酸も、Ｍとカップリングして、長さとシークエンスが異なるオリゴマーを生成できる。ターミネータ（Ｔ）を添加するとオリゴマー化が止まる。プロテアーゼ阻害剤のライブラリーを製造するために、セリンプロテアーゼやシスティンプロテアーゼ等の幾つかのクラスのプロテアーゼに対して優れた薬理作用団であることが知られているＣ末端α−ケトアミドを形成するターミネータが設計された。
【００１１】
ペプチドオリゴマーと少量のターミネータ（Ｔ）（過剰に使用）だけを含む非精製の混合物を精製することなく、直接生物学的アッセイにかけることができる。重要なことは、反応混合物の中で、α−ケト酸イニシエータ（Ｉ）、モノマー（Ｍ）及びターミネータ（Ｔ）の種類が増えると共に、生成物の数が飛躍的に増すことである（図１Ｃ）。ライブラリーに使用する各コンポーネントの数を増やすだけで、形成され得る分子の数を劇的に増やすことが可能となる。参考として、ほんの５０の異なるイニシエータ（Ｉ）、モノマー（Ｍ）及びターミネータ（Ｔ）の使用で、単にＩ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｔだけを考えて、３億を優に超える分子を形成できる。もしＩ−Ｍ−Ｍ−Ｍ−Ｔとそれ以上の高重合オリゴマーを考えれば、その数は直ぐに数億まで到達する。このコンセプトを示すために、以下に、かなり少ない数のコンポーネントと可能な生成物を分析する（６イニシエータ、８モノマー、９ターミネータで、約３０，０００の化合物）。もちろんさらに多い数の化合物は、生物学的な方法で容易に得られるが、現在、比較的少ない出発物質から水溶液で単にコンポーネントを混合するだけで、その後直接生物学的アッセイできる、この様に大きなライブラリーを得る合成方法は無い。このアプローチのプルーフ・オブ・コンセプトは、詳細な説明で行う。
【００１２】
概略すると、本発明は、請求項１に記載の方法に関し、その方法を提示する。即ち、オリゴマー又はオリゴマー混合物を生成して、アミド形成オリゴマー化により化合物ライブラリーを生成する方法である。この方法は、以下の工程をこの順に有する。
【００１３】
１）少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）の混合物を、少なくとも１つのモノマー（Ｍ）と反応させて、アミド結合を形成して、イニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）のダイマー（Ｉ−Ｍ）、イニシエータ（Ｉ）が１より多いモノマー（Ｍ）鎖に結合したオリゴマー前駆体（Ｉ−Ｍ−Ｍ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｍ，．．．）、又はこれらの混合物を形成する。
【００１４】
２）少なくとも１つのターミネータ（Ｔ）を添加して、アミド結合形成による鎖状オリゴマー（Ｉ−Ｍ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｔ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｍ−Ｔ．．．）又は鎖状オリゴマーの混合を製造し；又は
工程１）で製造したダイマー又はオリゴマー前駆体の、少なくとも１つのイニシエータ（Ｉ）とモノマー（Ｍ）（好ましくは各末端モノマー）の間に連結共有結合を形成するように工程１）に対する反応条件を変更して、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合を製造する。
【００１５】
工程１）において、単一のイニシエータを使用するなら、単一のタイプのダイマーを製造でき、単一のイニシエータと幾つかの異なるモノマーを組み合わせて使用するなら、１つのイニシエータと異なるモノマーの１つと良くコントロールされたダイマーのセットを製造できる。単一のイニシエータを使用するとき、反応条件と反応物質濃度を対応させて、イニシエータとモノマー鎖が組み合わさったオリゴマーも得ることができる。幾つかのイニシエータを使用する場合、異なるイニシエータが対応するモノマー鎖に結合した対応する混合物を得ることができる。従って、提案される反応スキームは副反応がほぼなく、続いて鎖を構築する必要は無く、反応生成物の分布に関してコントロールできる。さらに、良くコントロールされた無害の反応スキームにより、化合物ライブラリーの意味において、個々のシステム又はシステムの混合が得られる。システムの分布を調整することにより、対応する化合物ライブラリーの混合物は、分離／同定の努力を減らして、化学的及び／又は生物学的に活性なシステムを同定する、不完全な設計において非常に効率的に使用できる。
【００１６】
さらに、ターミネータを用いる反応を省略して、（Ｉ−Ｍ，Ｉ−Ｍ−Ｍ，Ｉ−Ｍ−Ｍ−Ｍ，．．．）のタイプの構造の最終鎖状オリゴマーを得ることができる。しかしながら、好ましくは最終鎖状オリゴマーはターミネータ構造で終わる。
【００１７】
好ましくは、（イニシエータ及び／又はモノマー及び／又はターミネータに、）ほぼエナンチオピュアな構成ブロックを使用する。
【００１８】
鎖状と環状が混ざっているシステムを同時に製造することも可能である。例えば、鎖状システムを形成するためのイニシエータを、環状システムを形成するためのイニシエータと混ぜて使用し、工程２）を鎖状システムの形成と環状システムの閉環を共に実施する。
【００１９】
迅速で合理的コストで化合物の大きな群を製造する重要性が認識されている。提案される方法では、化合物ライブラリーを効率的に提供し、工業的及び学術的にルーチンで実施できる。複雑な実験手続き、高価な立体特異的試薬、官能基の保護の必要性、偽陽性の発生、無駄なコストを生じる取扱い、時間のかかる精製、純粋で単離された化合物の製造と保存を必要とするライブラリー合成の主な障害等の通常の懸念は避けられる。
【００２０】
また、試薬や保護基を必要としない水性条件下のβペプチドライブラリー合成のための自己組立プロセスが提案される。得られる生成物混合物は、直接生物学的アッセイでスクリーニングでき、ライブラリーは、最適化やデコンボリーションのために、単にモノマーの組成又は添加の順序を変えるだけで、速やかに調整できる。ライブラリーは、必要に応じて迅速に再現可能に再合成でき、各成分の単離や精製の必要をなくす。必要な構成ブロックは鏡像異性的に純粋な形態で容易に合成され、長期間の保存で安定である。マイクロプレートで、単に構成ブロックを混合し、反応溶液を加熱するだけで、化合物ライブラリーは「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」合成される。特定の物理化学的性質を有するオリゴマーライブラリーを、自己組立プロセスのモジュール的性質のため、設計した構成ブロックを用いることにより、容易に得ることができる。天然の２０のアミノ酸を用いたペプチド及びタンパク質ライブラリー合成のための強力なファージ表示方法と同様に、使用される構成ブロックは、真直ぐに進む合成により、様々な官能基を取り込むことができ、マイルドな自己組立プロセス条件に耐える。
【００２１】
詳細な説明に記載するプルーフ・オブ・コンセプトとして、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤ライブラリーを合成した。目的分子を見い出すプロセスは、４段階に分けられる（図８）。（１）発見段階：様々な構成ブロックをライブラリー合成に使用する。不活性オリゴペプチドをもたらすコンポーネントは排除する。（２）最適化段階：選択する部分からフォーカストライブラリーを構築する。活性混合物を同定する。（３）デコンボリューション段階：フォーカストライブラリーの活性ウェルをデコンボリューションし、可能性のあるリード構造を提案する（４）同定段階：可能性のあるリード構造を、さらにＨＰＬＣ分離にかける。これら化合物の合成、精製、生物学的活性測定を実施する。予備リード化合物に基づいて、さらに最適化した構成ブロックを用いたライブラリーを合成できる。この方法により、新規なＩＣ５０が１．０μＭのＨＣＶプロテアーゼ阻害剤が単離され、十分に特性を明らかにした。これは単に中程度の阻害剤であり得られた分子は理想の経口投与の性質は有していないが、水性条件において少ない数のモノマーを単に組み合わせて見い出したという事実が、このアプローチがリード同定の有望な方法であることを示している。
【００２２】
提案された方法は、低コストの操作で、有害な有機化合物を使用しないで、工業的に使用できる。精製工程を伴わない水性ライブラリー合成は、浪費する有機溶剤の利用を最小にする。自己組立反応は、高価な試薬や金属触媒を使用しないで、穏やかな温度で容易に生じ、無害な副生成物しか生成しない。生物学的サンプルの扱いに慣れている研究所なら、構成ブロックからライブラリーを設計して製造できる。この方法は、オートメーションマイクロ流体装置を用いて改良できる。保存される構成ブロックを用いて、ライブラリー合成をオートメーションシステムによりプログラム化できる。
【００２３】
この方法は、出発物質の量を減らし、液体操作の正確さを確保し、ハイスループットスクリーニングを可能とする。新たに製造されたライブラリーは、追加に処理することなく直接容易に生物学的評価にかけられ、古い保存化合物ライブラリーに見られた予期できない分解の問題も回避できる。結論として、迅速に化合物ライブラリーを合成する新規な方法が提案される。この方法は、様々な目的のための化合物ライブラリー生成において、代替的概念的操作を提供する。異なる側鎖を有する膨大な数のβ−ペプチドを、α−ケト酸とイソオキサゾリジン構成ブロックの間の化学選択的な反応により、ワンポット様式で生成できる。得られるライブラリーは、精製することなく直接ＨＣＶプロテアーゼアッセイにかけた。デコンボリューションと最適化のための戦略がとられた。この方法で新規なＨＣＶプロテアーゼ阻害剤が同定された。
【００２４】
具体的には、好適なイニシエータ（Ｉ）は下記からなる群から選択される。
【化１】
2017517475.tif 000003
アミド結合形成による鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合物の製造のためには、Ｒは、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、−Ｃ（ＮＨ２）ＲＩ、−Ｃ（ＮＨ２）｛ＲＩ−ＣＯ−Ｃ（ＮＨ２）｝ｎＲＩ（式中、ｎは１又は２であり、ＲＩはＨ又はアミノ酸側鎖である）、蛍光色素、核酸又はこれらの誘導体、ペプチド核酸、フラッグオクタペプチド（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）、ビオチン又はアフニティー標識からなる群から選択される。好適な残基Ｒの炭素原子は１〜１０であり、より好ましくは、ベンジル、ＮＯ２、置換ベンジル、エチル、カルボキシエチル、ヘキシル、ｔブチルからなる群から選択される。
【００２５】
アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためには、Ｒは、好ましくは、−｛（ＣＨ２）｝ｎＲｃ，−｛（ＣＨＣＨ３）｝ｎＲｃ，−｛（ＣＨ（１，１−ジメチルエチル））｝ｎＲｃ，−｛（ＣＨ（ベンジル））｝ｎＲｃ（式中、ｎは１又は２であり、Ｒｃは、工程１）で製造されるダイマー又はオリゴマーの各末端モノマーに連結共有結合アミド結合を形成できる連結構造である）からなる群から選択される。
【００２６】
（鎖状オリゴマーと環状オリゴマーを製造する）両方の場合、好ましくは以下の定義が適用される。
Ｘ＋は、Ｋ＋，Ｃｓ＋，Ｌｉ＋，Ｎａ＋，Ｒ４Ｎ＋，Ｒ４Ｐ＋又はＲ３Ｓ＋からなる群から選択される対イオンである。Ｒは有機基又はＨであり、好ましくは置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、好適な残基Ｒの炭素原子は１〜１０である。
【００２７】
Ｘ，Ｙ，Ｚは、それぞれ独立して、Ｆ，ＯＲ，Ｎ＋Ｒ３，Ｎ＋Ｒ２ＯＲ，Ｎ＋Ｒ２ＳＲ，及びＮ＋Ｒ２ＮＲ２からなる群から選択され、任意に単環又は二環構造を形成する。Ｒは有機基又はＨであり、好ましくは置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、好適な残基Ｒの炭素原子は１〜１０である。
【００２８】
好適な実施形態では、アミド結合形成による鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）は、下記からなる群から選択される。
【化２】
2017517475.tif 000004
ここで、Ｍｅは−ＣＨ３である。
【００２９】
他の好適な実施形態では、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）において、連結構造は、アミノ酸、−ＣＯ（（ＣＨ２）２ＮＨ−の群から選択される１又は２の要素の鎖からなる群から選択される。この鎖は、好ましくは、下記から選択される基でターミネーションする。
【化３】
2017517475.tif 000005
【００３０】
これらの基の１つは、前記段落で示した要素無しで、直接連結基となることができ、上記のイニシエータの残基Ｒとなることができる。
【００３１】
さらに、好ましくは、イニシエータ（Ｉ）の例として、必須ではないが、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のために、上記構造の共有結合ダイマー又はトリマーが挙げられる。この場合、残基Ｒは共通の連結要素である。前記連結要素により連結された、下記からなる構造から選択される少なくとも２つのイニシエータ部分を含む構造も可能である。
【化４】
2017517475.tif 000006
ここで、Ｒは連結要素である。
Ｘ＋は、Ｋ＋，Ｃｓ＋，Ｌｉ＋，Ｎａ＋，Ｒ４Ｎ＋，Ｒ４Ｐ＋又はＲ３Ｓ＋からなる群から選択される対イオンである。Ｒは有機基又はＨである。
Ｘ，Ｙ，Ｚは、それぞれ独立して、Ｆ，ＯＲ，Ｎ＋Ｒ３，Ｎ＋Ｒ２ＯＲ，Ｎ＋Ｒ２ＳＲ，及びＮ＋Ｒ２ＮＲ２からなる群から選択され、任意に単環又は二環構造を形成する。Ｒは有機基又はＨである。
【００３２】
このようなイニシエータ（Ｉ）のためのダイマー又はトリマーは、以下の構造を有することができる。
【化５】
2017517475.tif 000007
式中、Ｒ１は連結要素であり、
Ｙは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺ（Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記した通りである）からなる群から選択される。
【００３３】
アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）の例として、下記に示すような少なくとも１つのターミネータ部分と、上記に示すような少なくとも１つのイニシエータ部分を含む構造を挙げられる。一般に、好適な、環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためイニシエータ（Ｉ）の例として、一端がヒドロキシアミンであり他端がケト酸又はアシルボロネートである構造を挙げられる。
【００３４】
好ましくは、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）は、下記からなる群から選択される。
【化６】
2017517475.tif 000008
式中、Ｒ１は連結要素であり、
Ｒｑは、４，５，６又は７員環を補完する構造要素であり、好ましくは、−Ｃ−，−ＣＨ２−Ｃ−，−ＣＨＲＴ−Ｃ−，−（ＣＨ２）２−Ｃ−，−−（ＣＨＲＴ）２−Ｃ−，−（ＣＨ２）−Ｃ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−Ｃ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−Ｃ−（ＣＨＲＴ）−，−（ＣＨ２）３−Ｃ（式中、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される）からなる群から選択される。
Ｒｔは、４，５，６又は７員環を補完する構造要素であり、好ましくは、−ＣＲＵ−，−ＣＨ２−ＣＲＵ−，−ＣＨＲＴ−ＣＲＵ−，−（ＣＨ２）２−ＣＲＵ−，−（ＣＨＲＴ）２−ＣＲＵ−，−（ＣＨ２）−ＣＲＵ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−ＣＲＵ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−ＣＲＵ−（ＣＨＲＴ）−，−（ＣＨ２）３−ＣＲＵ（式中、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、ＲＵは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される）からなる群から選択される。
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択される。
Ｒは、Ｏ，Ｓ，ＮＲ１，ＳｉＲ１Ｒ２，ＣＲ１Ｒ２からなる群から選択され、Ｒ１とＲ２は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される。
Ｙは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺからなる群から選択され、Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記した通りである。
【００３５】
他の好適な実施形態では、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためのイニシエータ（Ｉ）は、下記からなる群から選択される。
【化７】
2017517475.tif 000009
式中、ｂｏｃはｔ−ブチロキシカルボニルであり、Ｐｈはフェニルであり、Ｂｚはベンジルであり、Ｆｍｏｃはフルオレニルメチレンオキシカルボニルであり、Ｍｅはメチルである。
【００３６】
モノマー（Ｍ）は、好ましくは、下記からなる群から選択される。
【化８】
2017517475.tif 000010
【００３７】
好ましい定義は以下の通りである。
Ｘは、ハロゲン，−ＯＨ，−ＣＯＯＨ，−ＮＨ２，−Ｏ−アルキル（例えば−ＯＥｔ，−ＯｉＰｒ，−ＯＢｎ），−Ｏ−アリール（例えば−ＯＰｈ，−ＯＢｚ），−Ｏ−ＣＯ−アルキル，−Ｏ−ＣＯ−アリール，−ＳＨ，Ｓ−アルキル（例えば−Ｓ−Ｍｅ），−Ｓ−アリール（例えば−Ｓ−Ｐｈ），Ｎ−アシル，−ＮＨ−アルキル，−ＮＨ−アリール，−Ｎ（アルキル）２，−Ｎ（アリール）２，−Ｎ（アルキル）（アリール），−ＣＯ−ＮＨ−アルキル，−ＣＯ−ＮＨ−アリール，−ＣＯ−Ｎ（アルキル）２，−ＣＯ−Ｎ（アリール）２，−ＣＯ−Ｎ（アルキル）（アリール），−ＣＮ，−ＮＯ２，−Ｎ３，−Ｓ（Ｏ）アリール，−Ｓ（Ｏ）２アリールからなる群から選択される。
【００３８】
Ｙは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺからなる群から選択され、Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記した通りである。
【００３９】
Ｚは、−ＰＯ３Ｈ，−ＣＯＯＨ，−ＢＦ３−Ｘ＋，−ＢＸＹＺからなる群から選択され、Ｘ＋，Ｘ，Ｙ，Ｚはイニシエータ（Ｉ）の記載で上記したもの及びこれらの誘導体であり、ＸとＺが崩壊したとき又はＮＯ結合が分裂したときＹとなる。
【００４０】
Ｒは、Ｏ，Ｓ，ＮＲ１，Ｓｉ，ＣＨＲ１Ｒ２（Ｒ１とＲ２は以下のＲ１〜Ｒ８の定義と同様である）からなる群から選択される。
【００４１】
Ｒ１〜Ｒ８は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、互いに結合して形成された環からなる群から選択される。好ましくは残基の炭素原子数は１〜２０である。
【００４２】
Ｑは、Ｏ，Ｓ，Ｓｉ，ＮＲ１１からなる群から選択され、Ｒ１１は有機基又はＨであり、好ましくは上記Ｒ１〜Ｒ８の定義と同様である。
【００４３】
好ましくは、モノマーは下記からなる群から選択され、定義は上記の通りである。
【化９】
2017517475.tif 000011
【００４４】
下記のタイプのモノマーについて
【化１０】
2017517475.tif 000012
【００４５】
これらの合成方法の概略は、実施例で詳細に記載する。
【００４６】
上記の基の他のモノマーについては、以下の番号で表される。
【化１１】
2017517475.tif 000013
【００４７】
当業者は、以下の合成ルートを容易に用いることができる。
式（Ｖ）のモノマーは、以下に示すように、Ｏｒｇ．Ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｒｅｓ．Ｄｅｖ．，２０１２，１６，６８７−６９６に記載の方法と同様の方法で製造できる。
【化１２】
2017517475.tif 000014
【００４８】
式（ＶＩＩ）のモノマーは、以下に示すように、Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，２０１２，９５，２４８１に記載の方法と同様の方法で製造できる。
【化１３】
2017517475.tif 000015
【００４９】
式（ＶＩＩＩ）のモノマーは、以下に示すように、式（ＶＩＩ）の化合物を、適当な溶媒（メタノール等）中で適当な塩基（ＮａＯＭｅ等）で処理することにより、製造できる。
【化１４】
2017517475.tif 000016
【００５０】
式（ＸＩＩＩ）のモノマーは、以下に示すように製造できる。式（ＩＸ）の化合物を、適当な溶剤（メタノール／テトラヒドロフラン等）中で、還元剤（ＳｍＩ２等）で処理することにより、式（Ｘ）の化合物が得られる。式（Ｘ）の化合物を、適当な溶剤（ジクロロメタン等）中で、カルボン酸活性化剤（Ａｃ２Ｏ／ＡｃＯＮａ又はＤＣＣ等）で処理することにより、式（ＸＩ）の化合物が得られる。式（ＸＩ）の化合物から式（ＸＩＩ）の化合物への変換は、適当な溶剤（テトラヒドロフランやＤＭＰＵ等）中で、トリフラート剤（Ｔｆ２Ｏ又はＰｈＮＴｆ２等）と適当な塩基（Ｅｔ３Ｎ又はＫＨＭＤＳ等）を用いて実施する。式（ＸＩＩ）の化合物を、適当な溶剤（ＤＭＦ等）中で、適当な触媒（Ｐｄ（ＰＰｈ３）４等）と適当な塩基（Ｅｔ３Ｎ等）の存在下で、ＣＯで処理することにより、式（ＸＶ）の化合物が得られる。
【化１５】
2017517475.tif 000017
【００５１】
式（ＸＩＩ）の化合物を、高温で、適当な溶剤（１，４−ジオキサン等）中で、適当な塩基（ＡｃＯＫ等）の存在下で、適当な触媒（ＰｄＣｌ２ｄｐｐｆ等）と適当なボロン試薬（Ｂ２（ｐｉｎ）２等）で処理することにより、式（ＸＩＶ）のモノマーが得られる（下記スキーム参照）。ＸＩＶを、適当な溶剤（アセトン／水等）中で、適当なフッ素化剤（ＫＨＦ２等）でさらに処理すると、式（ＸＶ）のモノマーとなる。
【化１６】
2017517475.tif 000018
【００５２】
式（ＸＩＸ），（ＸＸ）のモノマーは、それぞれ、上記したモノマー（ＸＶ），（ＸＩＩＩ）と同様の方法で製造できる。
【００５３】
式（ＸＶＩＩＩ）のモノマー（Ｒは例えばＣＲ１Ｒ２である）は、適当な溶剤（キシレン等）中で、式（ＸＶＩ）の化合物と式（ＸＶＩＩ）の化合物間の付加環化反応することにより製造できる（下記スキーム参照）。Ｙ官能性の相互変換は、当業者に公知の方法で実施できる。
【化１７】
2017517475.tif 000019
【００５４】
好適な実施形態では、モノマー（Ｉ）は下記群から選択される。
【化１８】
2017517475.tif 000020
式中、Ｍｅは−ＣＨ３であり、ｔＢｕは１，１−ジメチルエチルであり、Ｃｂｚはベンジルオキシカルボニルであり、ｉＰｒはイソプロピルであり、Ｐｈはフェニルである。
【００５５】
鎖状生成物の場合のようにターミネータ（Ｔ）を使用するときは、下記群から選択される。
【化１９】
2017517475.tif 000021
【００５６】
好ましい定義は以下の通りである。
Ｒは、ＣＨ２，（ＣＨ２）２，ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴ，（ＣＨ２）３，（ＣＨ２）２ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴＣＨ２，（ＣＨ２）４からなる群から選択され、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、好ましくは残基の炭素原子数は１〜２０であり、より好ましくは１〜１０である。
【００５７】
Ｒ１は、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリルからなる群から選択され、好ましくは残基の炭素原子数は１〜２０であり、より好ましくは１〜１０である。
【００５８】
Ｒ７〜Ｒ９は、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択される。
【００５９】
好適な実施形態では、ターミネータ（Ｔ）は過剰に用い、さらに好ましくは下記からなる群から選択される。
【化２０】
2017517475.tif 000022
【００６０】
特に以下のタイプの構造のターミネータ（Ｔ）を使用できる。
【化２１】
2017517475.tif 000023
【００６１】
ここで、Ｍｅは−ＣＨ３であり、ｔＢｕは１，１−ジメチルエチルである。
【００６２】
ターミネータ（Ｔ）は、アミド結合形成による環状オリゴマー又は環状オリゴマーの混合物の製造のためには必要ではないが、他のターミネータ（Ｔ）として、上記構造の共有結合ダイマー又はトリマー（Ｒ１とＲ７又はＲ８が共通連結要素である）が挙げられる。ターミネータとして、下記からなる群から選択される少なくとも２つのターミネータ部分を含む構造も挙げられる。
【化２２】
2017517475.tif 000024
【００６３】
ここで、
Ｒは、ＣＨ２，（ＣＨ２）２，ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴ，（ＣＨ２）３，（ＣＨ２）２ＣＨＲＴ，ＣＨ２ＣＨＲＴＣＨ２，（ＣＨ２）４からなる群から選択され、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される。
Ｒ１は、共通の連結要素である。
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択される、ただし、Ｒ７又はＲ８の少なくとも１つは共通の連結要素である。
【００６４】
ターミネータ（Ｔ）として、以下のタイプのダイマー又はトリマー構造も可能である。
【化２３】
2017517475.tif 000025
【００６５】
式中、Ｒ１は連結要素であり、
Ｒｑは、４，５，６又は７員環を補完する構造要素であり、好ましくは、−Ｃ−，−ＣＨ２−Ｃ−，−ＣＨＲＴ−Ｃ−，−（ＣＨ２）２−Ｃ−，−−（ＣＨＲＴ）２−Ｃ−，−（ＣＨ２）−Ｃ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−Ｃ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−Ｃ−（ＣＨＲＴ）−，−（ＣＨ２）３−Ｃ（式中、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される）からなる群から選択される。
Ｒｔは、４，５，６又は７員環を補完する構造要素であり、好ましくは、−ＣＲＵ−，−ＣＨ２−ＣＲＵ−，−ＣＨＲＴ−ＣＲＵ−，−（ＣＨ２）２−ＣＲＵ−，−（ＣＨＲＴ）２−ＣＲＵ−，−（ＣＨ２）−ＣＲＵ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−ＣＲＵ−（ＣＨ２）−，−（ＣＨＲＴ）−ＣＲＵ−（ＣＨＲＴ）−，−（ＣＨ２）３−ＣＲＵ（式中、ＲＴは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択され、ＲＵは、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される）からなる群から選択される。
Ｒ７〜Ｒ９は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニル、エステル、カルバメート、スルホネート、スルフィネート、ホスフェート、シリル、互いに連結して形成される環、カルボニル、イミデート、チオミデートからなる群から選択される。
Ｒは、Ｏ，Ｓ，ＮＲ１，ＳｉＲ１Ｒ２，ＣＲ１Ｒ２からなる群から選択され、Ｒ１とＲ２は、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、置換又は無置換のアルキル、ヘテロアルキル、アリール、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアルキルアリール、アルケニル、ヘテロアルケニル、アルキニル、ヘテロアルキニルからなる群から選択される。
（Ａ−Ｄ）又は（Ｄ−Ａ）は、それぞれ、点線ボックス内に示される構造の１つを示す。
【００６６】
好適な実施形態では、単一のイニシエータ（Ｉ）を工程１）で使用でき、アミド結合形成により鎖状オリゴマー又は鎖状オリゴマーの混合物を製造する場合は、単一のターミネータ（Ｔ）を工程２）で使用できる。
【００６７】
工程１）及び／又は工程２）は、他のいかなる化学試薬や触媒を添加することなく、溶剤から離れて実施できる、このため、操作を簡略化でき、毒性の問題を低減できる。工程１）及び／又は工程２）では、有機溶剤、水、水性バッファ又はこれらの組合せを使用できる。
【００６８】
他の好適な実施形態では、工程１）では、１より多い、好ましくは２〜６、より好ましくは２〜４の異なるモノマーを使用できる。
【００６９】
工程１）では、反応を実施して、少なくとも２つの、好ましくは２〜１０の、より好ましくは２〜６の、内部連結したモノマーを含むオリゴマーを得ることができる。
【００７０】
工程１）では、反応条件を、好ましくは温度及び／又は圧力、及び／又は反応物質濃度及び／又は反応物質添加順序及び／又は反応物質添加時間を、選択して、混合物において、異なるバッチ間で、目的とする異なるオリゴマーの異なる分布を得ることができる。
【００７１】
工程１）で、単一のイニシエータ（Ｉ）、単一のモノマー（Ｍ）を用い、鎖状オリゴマーを生成する場合は、工程２）で単一のターミネータ（Ｔ）を、用いることができる。工程１）及び／又は２）の反応条件は、所定のトリマー構造を形成するように、調整できる。
【００７２】
さらに、本発明は、化合物ライブラリーから、好ましくは上記の方法を用いて製造したオリゴマーの少なくとも１つの混合物に基づき、生物学的及び／又は化学的活性システムの同定方法に関する。ここで、好ましくは、混合物から化合物を精製又は分離する前に、オリゴマー混合物の活性をスクリーニングする。
【００７３】
この方法の好適な実施形態では、上記の方法で製造した膨大な様々な混合物を使用し、生物学的及び／又は化学的活性について混合物を検査し、活性パターンから活性を含むイニシエータ及び／又はモノマー及び／又はターミネータを推測し、任意に、同定した活性イニシエータ及び／又はモノマー及び／又はターミネータだけに基づき、上記の方法でさらに混合物を製造する、このようにして、活性オリゴマーの数を減らすことができる。この方法は同様にして効率よくインコプリート要因計画スクリーニングプロセスに使用できる。
【００７４】
本発明のさらなる実施形態は従属クレームに記載される。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】図１は、α−ケト酸イニシエータ（Ｉ）とイソオキサゾリジンモノマー（Ｍ）の化学選択的カップリングを示す。（Ａ）はβ−ペプチドの反復合成を示し、（Ｂ）はワンポット化合物ライブラリー合成を示し、（Ｃ）は構成ブロックの数を増すと劇的に生成物が増加することを示す。
【図２】図２は、構成ブロックとしてＩ１（１．０当量），Ｍ１（０．５０当量），Ｍ２（０．５０当量）及びＴ１（２．０当量）を用いた生成物分布のＨＰＬＣトレースを示す。Ｍ１とＭ２は異なる順序で添加され、（Ａ）はＭ１を最初に添加し、（Ｂ）はＭ２を最初に添加した。
【図３Ａ】図３は、予備ライブラリー、ライブラリー１（Ａ）とライブラリー２（Ｂ）を示す。各ウェルは、１つのイニシエータ（１．０当量）、３つのモノマー（計２．０当量）及び１つのターミネータ（２．０当量）を含む。行と列は所定のイニシエータ／ターミネータが割り当てられる。例えば、ライブラリー１（Ａ）では、Ａ１〜Ａ８ウェルはイニシエータＩ１を含み、Ａ３〜Ｈ３ウェルはターミネータＴ３を有し、各予備ライブラリーは４つのセクターに分けられ、各セクターはモノマー混合（４種のモノマーから３つ）についてのみ異なる。例えば、ライブラリー１（Ａ）では、ウェルＡ１はイニシエータＩ１、モノマーＭ１，Ｍ３，Ｍ４及びターミネータＴ１を有し、ウェルＥ５はイニシエータＩ１、モノマーＭ１，Ｍ２，Ｍ４及びターミネータＴ１を有する。活性ウェルは黒で表している（選択基準については、好適な実施形態の記載を参照のこと）。
【図３Ｂ】図３は、予備ライブラリー、ライブラリー１（Ａ）とライブラリー２（Ｂ）を示す。各ウェルは、１つのイニシエータ（１．０当量）、３つのモノマー（計２．０当量）及び１つのターミネータ（２．０当量）を含む。行と列は所定のイニシエータ／ターミネータが割り当てられる。例えば、ライブラリー１（Ａ）では、Ａ１〜Ａ８ウェルはイニシエータＩ１を含み、Ａ３〜Ｈ３ウェルはターミネータＴ３を有し、各予備ライブラリーは４つのセクターに分けられ、各セクターはモノマー混合（４種のモノマーから３つ）についてのみ異なる。例えば、ライブラリー１（Ａ）では、ウェルＡ１はイニシエータＩ１、モノマーＭ１，Ｍ３，Ｍ４及びターミネータＴ１を有し、ウェルＥ５はイニシエータＩ１、モノマーＭ１，Ｍ２，Ｍ４及びターミネータＴ１を有する。活性ウェルは黒で表している（選択基準については、好適な実施形態の記載を参照のこと）。
【図４】図４は、フォーカストライブラリー、ライブラリー３を示す。セクター１において、各ウェルは、割り当てられたイニシエータ（１．０当量）、モノマーＭ２，Ｍ４，Ｍ５（計２．０当量）及びターミネータ（２．０当量）を含む。オリゴマー化とターミネーションが完了した後、セクター１を１０倍希釈してセクター２とした。活性ウェルは黒で表している（選択基準については、好適な実施形態の記載を参照のこと）。
【図５Ａ】図５は、デコンボリューションライブラリー１と２、ライブラリー４と５を示す。活性ウェルは黒で表している。行Ｂ〜Ｅの活性ウェルのうち、最良の結果のウェルはハイライトで示している（選択基準については、好適な実施形態の記載を参照のこと）。
【図５Ｂ】図５は、デコンボリューションライブラリー１と２、ライブラリー４と５を示す。活性ウェルは黒で表している。行Ｂ〜Ｅの活性ウェルのうち、最良の結果のウェルはハイライトで示している（選択基準については、好適な実施形態の記載を参照のこと）。
【図６】図６は、ライブラリー５における、ウェルＡ５，Ｃ５，Ｅ４のＨＣＶアッセイから読める蛍光とＨＰＬＣトレースを示す。２７．５分のフラクションが、ＨＣＶアッセイにおいて活性であった。
【図７】図７は、ａ）でリード化合物Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４の合成を示す。ｂ）では、この化合物のＨＰＬＣトレースとＨＣＶプロテアーゼに対する用量反応曲線を示す。この化合物は、ＩＣ５０が１．０μＭで、ＨＣＶプロテアーゼを阻害した。
【図８】図８は、「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」化合物ライブラリー合成の標準操作手順を示す。
【図９】図９は、構成ブロックとしてＩ１（１．０当量）、Ｍ１（各１．０，２．０，３．０当量）及びＴ１（２．０当量）を用いた生成物分布のＨＰＬＣトレースを示す。
【図１０】図１０は、ライブラリー合成の実験操作を示す。
【好適な実施形態の説明】
【００７６】
本発明の好適な実施形態を、図面を参照して以下に説明する。これは本発明の好適な実施形態を示すためであり、本発明を限定するためではない。
【００７７】
プルーフ・オブ・コンセプトとして、「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」ライブラリー合成を用いて、ＨＣＶプロテアーゼ阻害剤を製造しスクリーニングした。ライブラリー合成は、９６ウェルプレートで直接実施した。従来の「１ウェル１化合物」技術と対照的に、生成物の混合を含む各ウェルは希釈して直接スクリーニングした。
【００７８】
活性化合物は、シンプルなデコンボリューション戦略で同定した。この方法は、プロテアーゼ阻害剤ライブラリーを製造し有望なリードを同定する迅速で簡単な方法である。モノマー（Ｍ）とターミネータ（Ｔ）の反応性を調べるために、２つの初期実験を実施した。第１に、生成物分布が自己組立プロセスで使用するモノマーの量を反映するかを調べた。１当量のモノマーＭ１は、主要な生成物として、Ｉ１−Ｍ１−Ｔ１を生成した。Ｍ１を多く使用するほど、生成物分布は高重合オリゴマーにシフトした（下記参照）。モノマーの量を単に変えるだけで、生成物分布を変えられた。結果の再現性は、異なるモノマーを用いた実験と共に繰返しにより確認した。第２に、生成物シークエンスが添加順により偏りうることを示した。Ｍ１とＭ２を異なる順序で添加した実験をした。図２Ａでは、Ｍ１を添加して２時間イニシエータＩ１と反応させ、その後、Ｍ２を添加して、最後にＴ１でターミネーションした。Ｉ１−Ｍ−Ｍ−Ｔ１生成物のうち、Ｉ１−Ｍ１−Ｍ２−Ｔ１が主要生成物であり、Ｉ１−Ｍ２−Ｍ１−Ｔ１は検出されなかった。高重合生成物Ｉ１−Ｍ１−Ｍ２−Ｍ２−Ｔ１とＩ１−Ｍ１−Ｍ１−Ｍ２−Ｔ１も形成された。生成物は、ＭＳ／ＭＳにより単離し特性を明らかにした。その結果、生成物がＭ１とＭ２を共に含むとき、Ｍ１は、最初に添加されているので、Ｍ２より前に取り込まれた。Ｍ２を最初に添加したとき（図２Ｂ）、同じ傾向が実験で観察され、Ｍ１とＭ２を異なる順序で添加したとき、生成物分布がかなり変わった。
【００７９】
生成物分布をモノマー量を変えることと添加順序を変えることにより体系的にコントロールできるという発見により、モノマーの種類が増えたとき、反応混合物における主要生成物を予見することが可能となった。この自己組立方法を、プロテアーゼ阻害剤ライブラリー合成に使用し、市販のＨＣＶプロテアーゼアッセイを選んでスクリーニングした。ＨＣＶプロテアーゼは、その活性部位において、明確なポケットがない。報告されている阻害剤と浅い酵素ポケットの間の主要な相互作用は、触媒三残基のプロテアーゼセリンの阻害剤のα−ケトアミドへの求核攻撃からの可逆的な共有結合の形成と、残りの分子との疎水性相互作用である。トータルサイズ６０００までの化合物（４０までの化合物／ウェル）の２つの予備ライブラリー（ライブラリー１，２）を合成してスクリーニングした。報告された阻害機構に基づき、使用したモノマーとターミネータは共に疎水性側鎖を有し、ターミネーション工程で重要なα−ケトアミド官能基が生成した。
【００８０】
予備ライブラリーにおけるイニシエータ、モノマー、ターミネータを図３に示す。（１）行／列には特定のイニシエータ／ターミネータが割り当てられる。活性イニシエータとターミネータを含むウェルが、活性ウェルの高い発生に基づき認識された。例えば、ライブラリー１では、イニシエータＩ１Ｉ３とターミネータＴ２Ｔ４が同定された。（２）各ライブラリーは４つのセクターに分割され、同一のセクターのウェルには４つのモノマーから３つを割り当てた。同じアプローチを、大量のモノマー、イニシエータ又はターミネータについて用いることができる。それにより、各ウェルで形成できる生成物の数を増やせる。この設定は、モノマー選択プロセスを容易にするよう設計された。活性ウェルの数が最も少ないセクターの３つのモノマーは不活性と考え、排除した。例えば、ライブラリー１では、Ｍ１Ｍ２Ｍ３を含みＭ４は含まないセクターが活性ウェルが最も少なかった。ベンジルモノマーＭ４を次の研究に選択した。同じ原理に従い、ライブラリー２では、イニシエータＩ２Ｉ３Ｉ５、モノマーＭ５及びターミネータＴ５Ｔ８Ｔ９を選択した。この評価標準により、迅速に劣った部分を排除でき、続くフォーカストライブラリーのための構成ブロックを選択できた。
【００８１】
５×４ウェルフォーカストライブラリー（ライブラリー３、セクター１）は、選択したイニシエータＩ１Ｉ２Ｉ３Ｉ５、モノマーＭ２Ｍ４Ｍ５及びターミネータＴ２Ｔ４Ｔ５Ｔ８Ｔ９を含んだ。（Ｍ１とＭ２は両方ともライブラリー１の２番目に良いモノマーであるが、Ｍ２は、モノマー選択に多様性を提供し得るエステル官能性を有するため、Ｍ１より好ましかった。）選択は、生物学的アッセイに基づいて行った。この場合、蛍光基質を用いた市販のキットにより測定されるＨＣＶプロテアーゼ阻害剤であった。フォーカストライブラリーのサイズは、８００までの化合物に限定した。ライブラリー配列を図４に示す。ライブラリーを合成した後、希釈してセクター２を作った（１０倍希釈）。ウェルＣ２は、最初の濃度と１０倍希釈の濃度で、ポジティブな結果を示したが、ウェルＣ５は最初の濃度でのみ反応性を示した。従って、ウェルＣ２をデコンボリューションに選択した。イニシエータＩ３、モノマーＭ２Ｍ４Ｍ５及びターミネータＴ４を含む、ライブラリー３におけるウェルＣ２のデコンボリューションを簡単にするために、活性化合物がモノマー３分子を含んで構成されるなら、モノマーを１又は２当量しか含まない反応ウェルは活性が低いと仮定した。
【００８２】
この判定に基づき、ライブラリー４を合成した。ライブラリー設定を図５に示す。（１）ウェルＡ１，Ａ２，Ａ３，Ａ４，Ｂ１及びＢ２：各ウェルは１タイプのモノマーだけを含んだ。ウェルＡ１，Ａ４は共にモノマーＭ２を含んだが、生成物分布範囲を異ならせるため、異なる量で含んだ。ウェルＡ２／Ｂ１とＡ３／Ｂ２は、同じである。（２）ウェルＢ３，Ｂ４，Ｃ１：ウェルは、異なる順序で添加した２タイプのモノマーから構成された。（３）ウェルＣ２，Ｃ３，Ｃ４：（２）と同様に、ただしモノマーは同時に添加した。（２）と（３）のウェルの重なった又は重ならない生成物を比較すると、有望なリード構造をさらに限定できた。ＨＣＶアッセイ結果から、ウェルＢ２，Ｃ４が活性を示した。Ｂ２の活性化合物は、Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４又はＩ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４の可能性があった。Ｃ１では阻害が無かったので、Ｃ４の活性分子は、Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４，Ｉ３−Ｍ５−Ｍ２−Ｔ４，Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４，Ｉ３−Ｍ５−Ｍ２−Ｍ２−Ｔ４又はＩ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ２−Ｔ４である可能性が高い。これら限定されたリード候補をさらにデコンボリューションした。ライブラリー４のウェルＢ２において、異なる量のＭ５を用いて、活性化合物をデコンボリューションした。ライブラリー５行Ａ（図５）では、Ｍ５を１当量より多く含むウェルで、ポジティブな結果が観察された。Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４とＩ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４では、Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４の方が阻害剤の可能性が高い。行Ｂ〜Ｅは、ライブラリー４のＣ４をデコンボリューションするために設計された。Ｍ５とＭ２を異なる比率と量で同時に添加した。Ｍ５／Ｍ２の比が１より大きくなるとポジティブな傾向が見られた。この結果は、リード化合物がＭ２よりＭ５を取り込んでいることを意味する。従って、可能性のある活性構造はＩ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４とＩ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ２−Ｔ４に限定された。この段階で、可能性のあるリード構造が既に限定された。しかし各候補化合物の有機合成と精製の前に、ＨＰＬＣ分析を実施した。ライブラリー５におけるウェルＡ５，Ｃ５，Ｅ４のＨＰＬＣトレースを図６に示す。フラクションを集め、凍結乾燥し、ＤＭＳＯに再度溶かし、ＨＣＶプロテアーゼアッセイにかけた。結果から、これら３つのウェル全てで２７．５分のフラクションにＨＣＶプロテアーゼ阻害作用があり、Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４に対応することが分った。化合物Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４を、１．０当量のＩ３と３．６当量のＭ５を組み合わせて、２時間水性条件下で合成した後、２．０当量のＴ４を添加した。生成物をＨＰＬＣで単離して十分に特性を明らかにした。精製したものをＨＣＶプロテアーゼアッセイにかけ、１．０μＭのＩＣ５０を測定した（図７）。これにより、フォーカストライブラリー、ライブラリー３において、最も活性な化合物として同定した。
【実施例】
【００８３】
実験の詳細：
ライブラリーの合成、初期スタディ：
（ａ）様々な量のＭ１を用いた生成物分布
５：１ｔＢｕＯＨ／５０ｍＭトリス−ＨＣｌバッファ、ｐＨ７．０（以下、バッファと略す）（ｖ／ｖ）（８０μＬ）溶液に、イニシエータＩ１（１．３ｍｇ，８．１μｍｏｌ，１．０当量）及びモノマーＭ１（２．５ｍｇ，８．１μｍｏｌ，１．０当量）を添加した。混合物を４５℃で２時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却して、１６μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ中のターミネータＴ１（３．３ｍｇ，１６μｍｏｌ，２．０当量）を添加し、混合物を４５℃で２時間加熱した。この他に、同じ操作で、別々に、モノマーＭ１（５．０ｍｇ，２．０当量と７．５ｍｇ，３．０当量）を用いた２つの実験をした。反応混合物をＨＰＬＣで分析した（０．１％ＴＦＡを用いたＣＨ３ＣＮ勾配１０％から９０％、２０分）。結果を図９に示す。
【００８４】
（ｂ）Ｍ１とＭ２を異なる順序で添加した生成物分布
５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ（６０μＬ）溶液に、イニシエータＩ１（１．０ｍｇ，６．１μｍｏｌ，１．０当量）及びモノマーＭ１（０．９３ｍｇ，３．１μｍｏｌ，０．５０当量）を添加した。混合物を４５℃で２時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却して、モノマーＭ２（１．２ｍｇ，３．１μｍｏｌ，０．５０当量）を添加した。混合物を４５℃で２時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却して、ターミネータＴ１を添加し、混合物を４５℃で２時間加熱した。Ｍ１とＭ２を逆の順序で添加した実験を同じ操作で実施した。反応混合物をＨＰＬＣで分析した（０．１％ＴＦＡを用いたＣＨ３ＣＮ勾配１０％から９０％、２０分）。結果を図２に示す。
【００８５】
ライブラリーの「ｏｎ−ｄｅｍａｎｄ」合成の一般的方法：
（ａ）液体取扱い
ライブラリー合成を、９６−ウェルプレートで実施した（Ｔｈｅｒｍｏｆａｓｔ  ＡＢ−１１００）。イニシエータとモノマーの必要量を、５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に溶解し、マイクロピペット（エッペンドルフ・リサーチ）で対応するウェルに添加した。（詳細は各ライブラリーの合成に記載する。）
【００８６】
（ｂ）オリゴマー化とターミネーションの条件
イニシエータとモノマーの添加が完了した後、９６−ウェルプレートにキャップをして２分２０００ｒｐｍで遠心分離し、ＰＣＲ機械（キャップ上で溶媒濃縮を防ぐため１１０℃で加熱した蓋を備える）で４５℃で２時間加熱した。プレートを室温まで冷却して、マイクロピペットで保存溶液から対応するターミネータを各ウェルに添加した。プレートにキャップをして遠心分離し、４５℃で２時間加熱した。
【００８７】
（ｃ）希釈
得られた粗混合物を５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで連続して希釈して、生物学的アッセイに最適な濃度にした。（詳細は各ライブラリーの合成に記載する。）
【００８８】
（ｄ）ＨＣＶプロテアーゼＦＲＥＴアッセイ
ＨＣＶプロテアーゼアッセイキットを、プロテインワンから購入し、実験を備え付けのマニュアルに従い実施した。阻害剤無しで、ＨＣＶプロテアーゼはＦＲＥＴ基質を分解し、５３０ｎｍで蛍光シグナルを発した（励起波長４９０ｎｍ）。
【００８９】
１．０μＬの最適な濃度の希釈粗混合物を、各ウェルからアッセイプレート（Ｓｉｇｍａ  ＮＵＮＣ  Ｍａｘｉｓｏｒｐ）に移した。アッセイ溶液（１００μＬ）をマルチチェンネルピペット（エッペンドルフ・リサーチ）で各ウェルに添加し、蛍光シグナルを直ちに記録した。シグナルは５分ごとに２時間記録し、蛍光の減少により活性阻害剤を同定した。コントロール実験で、全てのイニシエータ、モノマー及びターミネータが１０μＭで不活性であることが証明された。同様に、溶媒、５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液及びＤＭＳＯも、結果に影響は与えなかった。
【００９０】
ライブラリー
（ａ）ライブラリー１，２：予備ライブラリー１，２
ライブラリー１，２のイニシエータ、モノマー、ターミネータを、図３Ａ，３Ｂに示す。同じ行のウェルは、同じイニシエータが割り当てられ、同じ例のウェルは同じターミネータが割り当てられた。各予備ライブラリーでは、トータルで４タイプのモノマーを使用した。プレートを、４つのセクタ―に分け、各々、４タイプのモノマーのうち３タイプを含んだ。オリゴマー化プロセスの間、各ウェルは、トータルで５μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液中に、１つのイニシエータ（０．５μｍｏｌ，１．０当量）と割り当てられた３つのモノマー（トータルで１．０μｍｏｌ，２．０当量）を含んでいた。３つのモノマーは、１：１：１の比であった（即ち、各モノマー０．６７μｍｏｌ）。例えば、ライブラリー１のウェルＡ１は、イニシエータＩ１（０．５μｍｏｌ，１．０当量）、モノマーＭ１（０．３３μｍｏｌ，０．６７当量）、モノマーＭ３（０．３３μｍｏｌ，０．６７当量）及びモノマーＭ４（０．３３μｍｏｌ，０．６７当量）を含んでいた。オリゴマー化プロセスが終了したとき、ターミネータＴ１（１．０μｍｏｌ，２．０当量）を添加した。
【００９１】
反応が完了した後、各ウェルは５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで希釈されて３５μＬとし、この粗溶液の１．０μＬをＨＣＶアッセイに使用した。最も高い値を１００として、アッセイ結果から得られた相対蛍光単位（ＲＦＵ）値を正規化した。正規化ＲＦＵ値が６５未満の活性ウェルを同定した（表１）。
【００９２】
【表１】
2017517475.tif 000026
2017517475.tif 000027
【００９３】
（ｂ）ライブラリー３：フォーカストライブラリー
図４は、ライブラリー３のイニシエータ、モノマー及びターミネータを示す。セクター１では、同じ行のウェルには同一のイニシエータが割り当てられ、同じ列のウェルには同一のターミネータが割り当てられ、各ウェルは全て３つのモノマーを含んだ。
【００９４】
オリゴマー化プロセスの間、セクター１の各ウェルは、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に、１つのイニシエータ（０．５μｍｏｌ，１．０当量）及び３つのモノマー（トータルで１．０μｍｏｌ，２．０当量）を含んだ。３つのモノマーは、１：１：１の比であった（即ち、各モノマー０．６７μｍｏｌ）。例えば、ウェルＡ１は、イニシエータＩ１（０．５μｍｏｌ，１．０当量）、モノマーＭ２（０．３３μｍｏｌ，０．６７当量）、モノマーＭ４（０．３３μｍｏｌ，０．６７当量）及びモノマーＭ５（０．３３μｍｏｌ，０．６７当量）を含んでいた。オリゴマー化プロセスが終了したとき、ターミネータＴ２（１．０μｍｏｌ，２．０当量）を添加した。反応が完了した後、各ウェルを５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで希釈して３５μＬとした。セクター１は、５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液で希釈してセクター２，３，４とした。各ウェルの１．０μＬをＨＣＶアッセイに使用した。アッセイ結果（表２）から、ウェルＣ２を選択した。
【表２】
2017517475.tif 000028
【００９５】
図５Ａは、ライブラリー４のイニシエータ、モノマー及びターミネータを示す。オリゴマー化プロセスの間、各ウェルは、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に、イニシエータＩ３（０．５μｍｏｌ，１．０当量）及びモノマー（図示の通り）を含んだ。例えば、ウェルＡ１は、イニシエータＩ３（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）、モノマーＭ２（０．５μｍｏｌ，１．０当量）を含んだ。ウェルＣ３は、イニシエータＩ３（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）、モノマーＭ５（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）及びモノマーＭ４（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）を含んだ。
【００９６】
２つのモノマーを続けて添加したウェル（ウェルＢ３，Ｂ４，Ｃ１）は、最初のモノマー（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）を、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液で、イニシエータ（０．５μｍｏｌ，１．０当量）と２時間反応させた。２．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液中の２番目のモノマー（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）を、この溶液に添加し、反応混合物をさらに２時間反応させた。例えば、ウェルＣ１は、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に、イニシエータＩ３（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）とモノマーＭ２（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）を含んだ。２時間の反応時間の後、２．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液中のモノマーＭ５（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）を添加した。
【００９７】
オリゴマー化プロセスが終了したとき、ターミネータＴ４（１．０μｍｏｌ，１．０μＬ，２．０当量）を各ウェルに添加した。反応が完了した後、各ウェルを５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで希釈して５０μＬとした（１回目の希釈）。希釈した溶液から１０μＬを取り出し、さらに５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで希釈して１００μＬとした（２回目の希釈）。１マイクロリットルの２回目の希釈溶液をＨＣＶアッセイに使用した。アッセイ結果（表３）から、最もＲＦＵの低いウェルＢ２，Ｃ４を活性と考えた。
【表３】
2017517475.tif 000029
【００９８】
図５Ｂは、ライブラリー５のイニシエータ、モノマー及びターミネータを示す。行Ａはライブラリー４のＢ２の、行Ｂ〜Ｅはライブラリー４のＣ４のデコンボリューションのために設計された。
【００９９】
オリゴマー化プロセスの間、各ウェルは、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に、イニシエータＩ３（０．５μｍｏｌ，１．０当量）及びモノマー（図示の通り）を含んだ。例えば、ウェルＡ４は、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に、イニシエータＩ３（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）とモノマーＭ５（２．０μｍｏｌ，４．０当量）を含んだ。ウェルＣ２は、トータルで５．０μＬの５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液に、イニシエータＩ３（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）、モノマーＭ２（１．０μｍｏｌ，２．０当量）及びモノマーＭ５（０．５０μｍｏｌ，１．０当量）を含んだ。
【０１００】
オリゴマー化プロセスが終了したとき、ターミネータＴ４（１．０μｍｏｌ，１．０μＬ，２．０当量）を各ウェルに添加した。反応が完了した後、各ウェルを５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで希釈して５０μＬとした（１回目の希釈）。希釈した溶液から１０μＬを取り出し、さらに５：１ｔＢｕＯＨ／バッファで希釈して１００μＬとした（２回目の希釈）。１マイクロリットルの２回目の希釈溶液をＨＣＶアッセイに使用した。正規化ＲＦＵが６５未満の活性ウェルを同定した。ライブラリー４のウェルＣ４のデコンボリューションライブラリーでは（行Ｂ〜Ｅ）、ハイライトのウェルが正規化ＲＦＵが４０以下であった（表４）。
【表４】
2017517475.tif 000030
【０１０１】
（ｅ）ＨＰＬＣ分離：ライブラリー５におけるウェルＡ５，Ｃ５，Ｅ４のデコンボリューション
ライブラリー５の選択したウェルＡ５，Ｃ５，Ｅ４から、１０μＬの１回目の希釈溶液をとり、分析ＨＰＬＣ分離にかけた（０．１％ＴＦＡを用いたＣＨ３ＣＮ勾配１０％から９０％、３０分）。主なフラクションを集め、凍結乾燥により溶媒を除いた。各フラクションを５０μＬのＤＭＳＯに再度溶かし、１ｍＬをＨＣＶプロテアーゼアッセイに用いた。
【０１０２】
Ａ５の場合、４つのフラクション（１，２，３，４）を集めた。フラクション３（保持時間２７．５分）だけＨＣＶプロテアーゼ阻害を示した（図６上部）。
【０１０３】
Ｃ５の場合、５つのフラクション（１，２，３，４，５）を集めた。フラクション５（保持時間２７．５分）だけＨＣＶプロテアーゼ阻害を示した（図６真中）。
【０１０４】
Ｅ４の場合、５つのフラクション（１，２，３，４，５）を集めた。フラクション４（保持時間２７．５分）だけＨＣＶプロテアーゼ阻害を示した（図６下部）。
【０１０５】
リード阻害剤合成、単離及び特性解明：
α−ケトグルタル酸の５：１ｔＢｕＯＨ／バッファ溶液（０．３０ｍＬ，０．１Ｍ）に、Ｉ３（４．４ｍｇ，０．０３０ｍｍｏｌ，１．０当量）及びモノマーＭ５（４０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ，３．６当量）を添加した。混合物を４５℃で２時間撹拌した。この溶液を室温まで冷却して、ターミネータＴ４（２４ｍｇ，０．０６０ｍｍｏｌ，２．０当量）を添加し、混合物を４５℃でさらに２時間反応させた。粗反応混合物を分取ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡを用いたＣＨ３ＣＮ勾配５５％から７５％、３０分）で２８分精製した。集めたフラクションを凍結乾燥して白色固体を得た（６．６ｍｇ，０．００７１ｍｍｏｌ，２４％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．０５５，ＨＦＩＰ）＝−５．２；ｍｐ＞２００ｏＣ；１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１２．０４（ｂｒｓ，１Ｈ），９．０７（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），４．１４−４．０７（ｍ，１Ｈ），４．０３−３．９５（ｍ，３Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝５．８，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．８４（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４５−２．００（ｍ，１２Ｈ），１．７３−１．６０（ｍ，１０Ｈ），１．６０−１．４７（ｍ，７Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），１．３６−１．２７（ｍ，３Ｈ），１．１６−１．００（ｍ，９Ｈ），０．９７−０．８６（ｍ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ｄ６−ＤＭＳＯ）δ１９６．４，１７３．９，１７１．９，１７０．２，１６９．８，１６９．５，１６９．５，１６０．９，１３７．７，１３１．４，１２９．２，１２８．２，７９．５，５０．３，５０．２，５０．０，４４．２，４２．２，４１．４，４０．９，４０．８，４０．５，３８．６，３８．４，３８．２，３１．３，３０．２，２９．５，２９．４，２９．２，２７．７，２７．１，２７．１，２７．１，２７．０，２６．０，２６．０，２５．９，２５．８，２５．７；ＩＲ（薄層）γ３３０３，２９２５，２８５２，１６４４，１５３９ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ４９Ｈ７５ＣｌＮ５Ｏ１０［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値９２８．５１９７，実測値９２８．５２０４
【０１０６】
ＩＣ５０：Ｉ３−Ｍ５−Ｍ５−Ｍ５−Ｔ４の異なる１０の濃度（ＤＭＳＯ中１０，５．０，２．５，１．０，０．７５，０．５０，０．３０，０．２５，０．０８０，０．０５０μＭ）を、ＨＣＶプロテアーゼアッセイで測定した。蛍光シグナルを９０分記録した。実験を３回繰り返した。ＩＣ５０を、ソフトウェアパッケージＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ５を用いて非線形回帰により計算した。
【０１０７】
一般的方法：
化学品はアクロス，シグマ−アルドリッチ又はＡＢＣＲから購入し、さらに精製することなく用いた。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、シリカゲルでプレコートしたガラス支持プレート（メルク、シリカゲル６０  Ｆ２５４）で実施し、ＵＶ光照射下で蛍光消光により、又は硫酸セリウムや過マンガン酸カリウムによる染色により視覚化した。フラッシュカラムクロマトグラフィーをシリサイクル・シリカ・フラッシュＦ６０（２３０−４００メッシュ）で０．５〜１．０バールで空気の強制流を用いて実施した。ＮＭＲスペクトルを、ＶＡＲＩＡＮ  Ｍｅｒｃｕｒｙ  ３００ＭＨｚ，７５ＭＨｚ，Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｖａｎｃｅ  ４００ＭＨｚ，１００ＭＨｚ又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＶ−ＩＩ  ６００ＭＨｚ，１５０ＭＨｚで、クライオプルーブを用いて測定した。化学シフトはパーツ・パー・ミリオン（ｐｐｍ）で表し、ＣＤＣｌ３７．２６ｐｐｍ，７７．０ｐｐｍ；ＣＤ３ＯＤ３．３１ｐｐｍ，４９．０ｐｐｍ；ｄ６−ＤＭＳＯ２．５０ｐｐｍ，３９．５ｐｐｍを基準とした。カップリング定数はヘルツ（Ｈｚ）で記載する。分裂パターンは以下のように示す。ｂｒ，ブロード；ｓ，シングレット；ｄ，ダブレット；ｔ，トリプレット；ｄｄ，ダブレットのダブレット；ｄｔ，トリプレットのダブレット；ｍ，マルチレット。赤外線（ＩＲ）スペクトルはＪＡＳＣＯ  ＦＴ／ＩＲ−４１００分光光度計で記録し波長（ｃｍ−１）で記載する。旋光性は、Ｊａｓｃｏ  Ｐ−２０００旋光計で、１００ｍｍ路長セルを用いて、ナトリウムＤ線（５８９ｎｍ）で測定し、［α］Ｄ２５（濃度ｇ／１００ｍＬ，溶媒），Ｔ＝温度（℃）で記録した。高解像マススペクトルとＭＳ／ＭＳスペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｄａｌｔｏｎｉｃｓ  ｍａＸｉｓ  ＥＳＩ−ＱＴＯＦで、ＥＴＨチューリッヒのＬａｂｏｒａｔｏｒｉｕｍ  ｆueｒ  Ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅ  Ｃｈｅｍｉｅのマススペクトルサービスにより測定した。融点は、オープングラスキャピラリーを用いて電熱Ｍｅｌ−Ｔｅｍｐ融点装置で測定し修正はしなかった。ＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ−）は、ＪＡＳＣＯ分析分取装置で実施した。分析分取ＨＰＬＣに使用したカラムは、Ｓｈｉｓｅｉｄｏ  ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＵＧ１２０（４．６ｍｍ，Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ）とＳｈｉｓｅｉｄｏ  Ｃａｐｃｅｌｌ  Ｐａｋ  Ｃ１８  ＭＧ  ＩＩ（１０ｍｍ，Ｉ．Ｄ．×２５０ｍｍ）であり、流速はそれぞれ１．０ｍＬ／ｍｉｎと１０ｍＬ／ｍｉｎであった。移動相は、０．１％ＴＦＡ（溶離液Ａ）を用いたＭＱ−Ｈ２Ｏと０．１％ＴＦＡ（溶離液Ｂ）を用いたＨＰＬＣグレードＣＨ３ＣＮであった。シグナルを２２０，２５４，３０１ｎｍでモニターした。ライブラリー合成はＴｅｃｈｎｅ  ＰＣＲ機械で実施した。蛍光をモルキュラーデバイスとサーモプレートリーダーで記録した。
【０１０８】
モノマーとターミネータの合成
一般的手順、（Ａ）モノマーの合成と（Ｂ）ターミネータの合成：
【化２４】
2017517475.tif 000031
【化２５】
2017517475.tif 000032
【０１０９】
（ａ）３−メチレン−１，４−ジオキサスピロ［４．５］デカン−２−オン（２）の製造
５−クロロメチル−２，２−ペンタメチレン−１，３−ジオキソラン−４−オン（１）（１．０当量）のＣＨＣｌ３（０．５０Ｍ）溶液に撹拌しながら、ＮＥｔ３（２．０当量）を添加し、溶液を加熱して１８時間還流した。この溶液を室温まで冷却して、ＣＨＣｌ３を減圧下除いて、アクリレート（２）を得た。これを精製することなく使用した。
【０１１０】
（ｂ）メチル２−メトキシアクリレート（８）の製造
文献に記載の方法で、メチル２−メトキシアクリレート（８）を製造した。
【０１１１】
（ｃ）付加環化
２，３：５，６−Ｏ−ジイソプロピリデン−Ｄ−グルコースオキシム（３）１（１．０当量）、アルデヒド４（１．０当量）とアクリレート２又は８（１．０〜２．０当量）のトルエン溶液（０．２０〜０．５０Ｍ）を、還流濃縮器を備えたディーン・スターク装置で２４時間加熱した。溶液を室温まで冷却してトルエンを減圧下除去した。粗付加環化物Ｄ−グルコース−イソオキサゾリジン５又は９を、フラッシュクロマトグラフィと再結晶で精製した。
【０１１２】
（ｄ）キラル補助基の開裂
付加環化物５又は９（１．０当量）のＣＨ３ＣＮ溶液（０．１０Ｍ）に、ＨＣｌＯ４（７０％ｗ／ｗ，３．０当量）を添加し、混合物を室温で５時間撹拌した。反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３で中和し、ＥｔＯＡｃで３回抽出した。組み合わせた有機相を塩水で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過した。溶媒を減圧下除去し、粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、保護されていないイソオキサゾリジン６又は１０を得た。
【０１１３】
（ｅ）モノマーＨＣｌ塩の製造
保護されていないイソオキサゾリジン６（１．０当量）をＥｔ２Ｏに溶解し（０．１Ｍ）、ジオキサン中の４ＭＨＣｌ（１．１当量）を添加した。溶液を室温で１５分撹拌し、白色沈殿が形成された。この沈殿物をろ取し真空乾燥し、白色固体の所望のイソオキサゾリジン塩酸塩７を得た。
【０１１４】
（ｆ）ターミネータの製造
対応するアミン（５．０〜１０当量）をイソオキサゾリジン１０（１．０当量）に添加し、混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し飽和ＮａＨＣＯ３で２回洗浄した。組み合わせた有機相を塩水で２回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下濃縮し、生成物を得た。必要に応じ、フラッシュクロマトグラフィーで精製した。
【０１１５】
モノマー合成の実験手順と特性データ
Ｄ−グルコース−β３ｈ−（チオフェン２−イル）−イソオキサゾリジン（１２）：
【化２６】
2017517475.tif 000033
アクリレート２を、一般的手順（ａ）に従い、ＣＨＣｌ３（１．５ｍＬ）中で、５−クロロメチル−２，２−ペンタメチレン−１，３−ジオキソラン−４−オン（１）（０．１５ｇ，０．７３ｍｍｏｌ，１．０当量）とＮＥｔ３（０．１９ｍＬ，１．５ｍｍｏｌ，２．１当量）から、製造した。一般的手順（ｃ）に従い、トルエン（１．５ｍＬ）中で、粗アクリレート２、Ｄ−グルコースオキシム３（０．２０ｇ，０．７３ｍｍｏｌ，１．０当量）及びチオフェン２−カルボキシアルデヒド（６８μＬ，０．７３ｍｍｏｌ，１．０当量）を用いて、付加環化を実施した。付加環化物を、フラッシュクロマトグラフィ（９：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、ヘキサン／ＥｔＯＡｃから再結晶して、白色固体（０．１９ｇ，０．３５ｍｍｏｌ，４８％）として生成物を得た。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．３，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋１５．０；ｍｐ＝１６２−１６４℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２４（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１６−７．０４（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝３．５，５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｄｄ，Ｊ＝３．６，８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９３（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｄ，Ｊ＝４．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３５（ｄｔ，Ｊ＝６．８，８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｄｄ，Ｊ＝６．８，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１９（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７１（ｄｄ，Ｊ＝３．６，１４．０Ｈｚ，１Ｈ），１．９１−１．５８（ｍ，８Ｈ），１．５０−１．４２（ｍ，５Ｈ），１．４０（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．９，１４２．９，１２６．８，１２５．５，１２５．３，１１２．９，１１２．１，１０９．８，１０５．５，９７．１，８４．６，８３．７，８０．３，７５．６，６６．０，６０．２，４３．１，３７．４，３６．３，２６．７，２６．１，２５．３，２４．８，２４．３，２２．９，２２．８；ＩＲ（薄層）γ２９８４，２９３８，１８６６，１８０１，１３７２，１２０９，１０９０ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２６Ｈ３６ＮＯ９Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値５３８．２１０５，実測値５３８．２０９８．
【０１１６】
β３ｈ−（チオフェン２−イル）−イソオキサゾリジン塩酸塩（Ｍ８）：
【化２７】
2017517475.tif 000034
一般的手順（ｄ）に従い、ＣＨ３ＣＮ（７．４ｍＬ）中で、Ｄ−グルコース−β３ｈ−（チオフェン２−イル）−イソオキサゾリジン（１２）（０．４０ｇ，０．７４ｍｍｏｌ，１．０当量）とＨＣｌＯ４（０．１９ｍＬ，２．２ｍｍｏｌ，３．０当量）から、補助基を開裂をした。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（３：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、保護されていないβ３ｈ−（チオフェン２−イル）−イソオキサゾリジンを、無色の液体として得た（０．２１ｇ，０．７１ｍｍｏｌ，９６％）。一般的手順（ｅ）に従い、保護されていないイソオキサゾリジンをＥｔ２Ｏ（７．０ｍＬ）に再度溶解し、ジオキサン中の４ＭＨＣｌ（０．２０ｍＬ，０．８１ｍｍｏｌ，１．１当量）で処理して、白色固体として、塩酸塩Ｍ８を得た（０．２０ｇ，０．６０ｍｍｏｌ，８５％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．３，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋３０．０；ｍｐ＝１１５−１１６℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．５５（ｄｄ，Ｊ＝１．２，５．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．２７（ｍ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝３．６，５．１Ｈｚ，１Ｈ），５．４０−５．０９（ｍ，１Ｈ），３．４６−３．２４（ｍ，１Ｈ），２．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１４．２Ｈｚ，１Ｈ），２．０−１．４５（ｍ，１０Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１６８．１，１３６．４，１２９．３，１２８．５，１２８．４，１１３．９，１０８．４，６０．９，４４．５，３８．２，３６．９，２５．２，２４．０，２４．０；ＩＲ（薄層）γ３２０８，２９４０，２８６４，１８０１，１４４９，１３７３，１２６９，１１７７，９３１，７０３ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１４Ｈ１８ＮＯ４Ｓ［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値２９６．０９５１，実測値２９６．０９４５．
【０１１７】
Ｄ−グルコース−β３ｈ−（２−フルオロフェニル）−イソオキサゾリジン（１３）：
【化２８】
2017517475.tif 000035
アクリレート２を、一般的手順（ａ）に従い、ＣＨＣｌ３（１５ｍＬ）中で、５−クロロメチル−２，２−ペンタメチレン−１，３−ジオキソラン−４−オン（１）（１．５ｇ，７．４ｍｍｏｌ，１．０当量）とＮＥｔ３（２．０ｍＬ，１５ｍｍｏｌ，２．０当量）から、製造した。一般的手順（ｃ）に従い、トルエン（１５７．９ｍＬ）中で、粗アクリレート２、Ｄ−グルコースオキシム３（２．０ｇ，７．４ｍｍｏｌ，１．０当量）及び２−フルオロベンジルアルデヒド（０．７８ｍＬ，７．４ｍｍｏｌ，１．０当量）を用いて、付加環化を実施した。付加環化物を、フラッシュクロマトグラフィ（５：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、ヘキサンから再結晶して、白色固体として生成物を得た（２．２ｇ，３．９ｍｍｏｌ，５３％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．５，ＣＨ３ＯＨ）＝＋２４．１；ｍｐ＝１０５−１０６℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．６７−７．６２（ｍ，１Ｈ），７．３５−７．２０（ｍ，１Ｈ），７．１５−７．０９（ｍ，１Ｈ），７．０６−６．９９（ｍ，１Ｈ），５．１６（ｄｄ，Ｊ＝８．２，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．９７（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝６．０，４．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄｔ，Ｊ＝６．６，８．５Ｈｚ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝６．６，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（ｄｄ，Ｊ＝４．０，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｄｄ，Ｊ＝６．６，８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１３．９Ｈｚ，１Ｈ），２．５５（ｄｄ，Ｊ＝３．６，１３．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９２−１．８０（ｍ，２Ｈ），１．８０−１．５４（ｍ，６Ｈ），１．５０−１．３７（ｍ，５Ｈ），１．３３（ｓ，３Ｈ），１．３０（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．９，１６０．３（ｄ，Ｊ＝２４７Ｈｚ），１２９．１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），１２８．６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），１２６．７（ｄ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ），１２４．０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），１１５．２（ｄ，Ｊ＝２１．４Ｈｚ），１１２．９，１１１．９，１０９．７，１０５．２，９７．１，８４．４，８３．７，８０．３，７５．６，６６．０，５７．８，４２．７，３７．４，３６．２，２６．６，２６．１，２５．３，２４．９，２４．２，２２．９，２２．８；ＩＲ（薄層）γ２９８６，２８６６，１８０２，１４９０，１４５４，１１５６，１０３６，８４９ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２８Ｈ３７ＦＮＯ９［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値５５０．２４４７，実測値５５０．２４４１．
【０１１８】
β３ｈ−（２−フルオロフェニル）−イソオキサゾリジン塩酸塩（Ｍ６）：
【化２９】
2017517475.tif 000036
一般的手順（ｄ）に従い、ＣＨ３ＣＮ（１８ｍＬ）中で、Ｄ−グルコース−β３ｈ−（２−フルオロフェニル）−イソオキサゾリジン（１３）（１．０ｇ，１．８ｍｍｏｌ，１．０当量）とＨＣｌＯ４（０．４７ｍＬ，５．５ｍｍｏｌ，３．１当量）から、補助基を開裂をした。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（５：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、保護されていないβ３ｈ−（２−フルオロフェニル）−イソオキサゾリジンを、無色の液体として得た（０．５１ｇ，１．７ｍｍｏｌ，９４％）。一般的手順（ｅ）に従い、保護されていないイソオキサゾリジンをＥｔ２Ｏ（１７ｍＬ）に再度溶解し、ジオキサン中の４ＭＨＣｌ（０．４８ｍＬ，１．９ｍｍｏｌ，１．１当量）で処理して、白色固体として、塩酸塩Ｍ６を得た（０．４０ｇ，１．２ｍｍｏｌ，７１％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．５，ＣＨ３ＯＨ）＝＋１５．２；ｍｐ＝１３７−１３８℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ７．７０−７．６３（ｍ，１Ｈ），７．５４−７．４５（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．２０（ｍ，２Ｈ），５．３１（ｍ，１Ｈ），３．４０−３．３２（ｍ，１Ｈ），２．９３（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１４．２Ｈｚ，１Ｈ），１．９７−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．７９（ｍ，４Ｈ），１．６０−１．３４（ｍ，２Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１６７．９，１６２．３（ｄ，Ｊ＝２４６．５Ｈｚ），１３２．７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），１３０．１（ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），１２６．０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），１２２．０（ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ），１１６．８（ｄ，Ｊ＝２１．６Ｈｚ），１１４．０，１０８．１，５９．１３（ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），４２．６，３８．２，３６．８，２５．２，２４．０，２４．０；ＩＲ（薄層）γ３３９８，２９４０，２８６４，１７９８，１６８２，１４５４ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１６Ｈ１９ＦＮＯ４［Ｍ−Ｃｌ］＋，計算値３０８．１２９３，実測値３０８．１２８７．
【０１１９】
ターミネータ合成の実験手順と特性データ
（３Ｓ，５Ｒ）−３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキサミド（Ｔ１）：
【化３０】
2017517475.tif 000037
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ１を、水酸化アンモニウム溶液（２５％ｗ／ｗ，０．５０ｍＬ，３．３ｍｍｏｌ，８．３当量）と（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（８６ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。生成物を白色固体として単離した（７３ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ，９０％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．４，ＣＨ３ＯＨ）＝＋１１８．０；ｍｐ＝１３６−１３８℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．６８（ｂｒｄ，１Ｈ），６．５１（ｂｒｄ，１Ｈ），５．５９（ｂｒｄ，１Ｈ），３．５０−３．３６（ｍ，１Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），２．６３（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．７０−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．５３−１．２７（ｍ，２Ｈ），０．９４−０．８３（ｍ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７０．５，１０９．０，５９．２，５１．６，４８．４，４０．４，２６．５，２２．６，２２．６；ＩＲ（薄層）γ３３９９，３２２０，３１４５，２９５２，２８７５，１６６６，１２２７，１０４７ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ９Ｈ１９Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値２０３．１３９０，実測値２０３．１３８１．
【０１２０】
（３Ｓ，５Ｒ）−Ｎ−シクロプロピル−３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキサミド（Ｔ２）：
【化３１】
2017517475.tif 000038
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ２を、シクロプロピルアミン（０．２０ｍＬ，２．９ｍｍｏｌ，４．８当量）と（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（０．１３ｇ，０．６０ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。生成物を無色液体として単離した（９２ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌ，６３％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．８，ＣＨ３ＯＨ）＝＋６７．４；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．６６（ｂｒｄ，１Ｈ），５．５５（ｂｒｄ，１Ｈ），３．４７−３．３０（ｍ，１Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ），２．８４−２．７２（ｍ，１Ｈ），２．５８（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９８（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．７０−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．５０−１．２７（ｍ，２Ｈ），０．９５−０．８５（ｍ，６Ｈ），０．８５−０．７０（ｍ，２Ｈ），０．５５−０．４５（ｍ，２Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．８，１０９．１，５９．３，５１．５，４８．１，４０．５，２６．５，２２．７，２２．６，２２．３，６．６，６．３；ＩＲ（薄層）γ３３１８，２９５６，１６７８，１５１９，１０７４，１０３５ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ２３Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値２４３．１７０３，実測値２４３．１６９６．
【０１２１】
（（３Ｓ，５Ｒ）−３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−イル）（モルホリノ）メタノン（Ｔ３）：
【化３２】
2017517475.tif 000039
モルホリン（０．３０ｍＬ，３．４ｍｍｏｌ，６．２当量）、１，２，４−トリアゾール（８．０ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ，０．２２当量）及び１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデス−７−エン（１６μＬ，０．１１ｍｍｏｌ，０．２０当量）を、（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（０．１２ｇ，０．５５ｍｍｏｌ，１．０当量）に添加した。この混合物を６０℃で１２時間撹拌した。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（１：３  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、生成物を無色液体として単離した（８９ｍｇ，０．３３ｍｍｏｌ，６０％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．６，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋７１．７；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．５０（ｂｒｄ，１Ｈ），３．９３−３．４２（ｍ，９Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），２．８８（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９０（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１２．９Ｈｚ，１Ｈ），１．７５−１．５６（ｍ，１Ｈ），１．４７（ｄｄ，Ｊ＝６．９，１３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．３６（ｄｄ，Ｊ＝７．０，１３．８Ｈｚ，１Ｈ），０．９６−０．５８（ｍ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６５．３，１１０．２，６７．０，６６．９，５９．３，５１．４，４６．７，４５．８，４３．１，４０．９，２６．５，２２．７，２２．７；ＩＲ（薄層）γ３２０３，２９５６，２８６７，１６５１，１４３４，１２５３，１１１６，１０６８，１０２９ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ２４Ｎ２ＮａＯ４［Ｍ＋Ｎａ］＋，計算値２９５．１６２８，実測値２９５．１６１３．
【０１２２】
ｔ−ブチル  ３−（（３Ｓ，５Ｒ）−５−（（４−クロロベンジル）カルバモイル）−５−メトキシイソオキサゾリジン−３−イル）プロパノエート（Ｔ４）：
【化３３】
2017517475.tif 000040
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ４を、４−クロロベンジルアミン（１．５ｍＬ，１２ｍｍｏｌ，８．６当量）とｔ−ブチル  ３−（（３Ｓ，５Ｒ）−５−（（４−クロロベンジル）カルバモイル）−５−メトキシイソオキサゾリジン−３−イル）プロパノエート（０．４０ｇ，１．４ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（１：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、生成物を白色固体として単離した（０．４８ｇ，１．２ｍｍｏｌ，８６％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．５，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋５１．０；ｍｐ＝６５−６７℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｂｒｔ，１Ｈ），５．６８（ｂｒｄ，１Ｈ），４．５０−４．３５（ｍ，２Ｈ），３．４２−３．３０（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．３０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．８８−１．７５（ｍ，２Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１７１．９，１６７．４，１３６．１，１３３．５，１２９．１，１２８．９，１０９．１，８０．７，６０．５，５１．５，４７．６，４２．６，３２．９，２８．０，２６．４；ＩＲ（薄層）γ３３５３，２９７８，２９３６，１７２６，１６８１，１５２３，１１５４，１０８９ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１９Ｈ２７ＣｌＮ２ＮａＯ５［Ｍ＋Ｎａ］＋，計算値４２１．１５０１，実測値４２１．１４９０．
【０１２３】
（３Ｓ，５Ｒ）−Ｎ−アリル−３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキサミド（Ｔ５）：
【化３４】
2017517475.tif 000041
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ５を、アリルアミン（０．３５ｍＬ，４．６ｍｍｏｌ，５．９当量）と（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（０．１７ｇ，０．７８ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。生成物を白色固体として単離した（０．１８ｇ，０．７４ｍｍｏｌ，９５％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝２．０，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋９５．３；ｍｐ＝３３−３５℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ６．７５（ｂｒｔ，１Ｈ），５．８８−５．７３（ｍ，１Ｈ），５．５９（ｂｒｄ，１Ｈ），５．２１−５．０９（ｍ，２Ｈ），４．０１−３．７９（ｍ，２Ｈ），３．５０−３．３２（ｍ，１Ｈ），３．２５（ｓ，３Ｈ），２．６０（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９９（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．７２−１．５３（ｍ，１Ｈ），１．５４−１．２７（ｍ，２Ｈ），０．９３−０．８５（ｍ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６７．４，１３３．４，１１６．７，１０９．２，５９．３，５１．５，４８．２，４１．５，４０．５，２６．５，２２．７，２２．６；ＩＲ（薄層）γ２９５７，２８７１，２８３７，１６７２，１６４５，１５２６，１２６１，１１４８，９９１，９１９ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１２Ｈ２３Ｎ２Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値２４３．１７０３，実測値２４３．１６９７．
【０１２４】
Ｄ−グルコース−β３ｈ−（４−メトキシフェニル）−イソオキサゾリジン（１４）：
【化３５】
2017517475.tif 000042
続いて、一般的手順（ｃ）に従い、トルエン（３５ｍＬ）中で、メチル  ２−メトキシアクリレート８（１．７ｇ，１５ｍｍｏｌ，２．１当量）、Ｄ−グルコースオキシム３（２．０ｇ，７．３ｍｍｏｌ，１．０当量）及び４−メトキシベンズアルデヒド（１．０ｇ，７．３ｍｍｏｌ，１．０当量）を用いて、付加環化を実施した。付加環化物を、フラッシュクロマトグラフィ（３：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、ヘキサンから再結晶して、白色固体として生成物を得た（２．５ｇ，４．９ｍｍｏｌ，６７％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．３，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋５４．０；ｍｐ＝５８−６０℃；１ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３６（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．７４（ｓ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝４．２，６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３２−４．１８（ｍ，２Ｈ），４．１８−４．０６（ｍ，１Ｈ），３．９２−３．８１（ｍ，４Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｄｄ，Ｊ＝７．０，８．３Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），２．９５（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．０，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６１（ｓ，３Ｈ），１．４２（ｓ，３Ｈ），１．３１（ｓ，３Ｈ），１．２８（ｓ，３Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．８，１５９．２，１３０．２，１２８．８，１１４．０，１１２．６，１０９．５，１０４．４，９８．２，８４．４，８２．５，８０．７，７５．８，６６．２，６５．９，５５．２，５２．９，５１．８，４８．７，２６．６，２６．０，２５．３，２４．８；ＩＲ（薄層）γ２９８６，２９３７，１７５０，１５１５，１４５６，１３７２，１２５１，１０６７ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ２５Ｈ３６ＮＯ１０［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値５１０．２３３４，実測値５１０．２３３２．
【０１２５】
β３ｈ−（４−メトキシフェニル）−イソオキサゾリジン（１５）：
【化３６】
2017517475.tif 000043
一般的手順（ｄ）に従い、ＣＨ３ＣＮ（５０ｍＬ）中で、Ｄ−グルコース−β３ｈ−（４−メトキシフェニル）−イソオキサゾリジン１４（２．６ｇ，５．１ｍｍｏｌ，１．０当量）とＨＣｌＯ４（１．３ｍＬ，１５ｍｍｏｌ，２．９当量）から、補助基を開裂をした。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（１：１  ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製し、生成物を白色固体として得た（０．９６ｇ，３．６ｍｍｏｌ，７１％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．５，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋４２．２；ｍｐ＝９２−９３℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．７０（ｂｒｄ，１Ｈ），４．４８−５．５７（ｍ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），２．９１（ｄｄ，Ｊ＝９．３，１３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．５２（ｄｄ，Ｊ＝７．４，１３．５Ｈｚ，１Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．０，１５９．７，１２９．０，１２８．０，１１４．２，１０８．３，６３．７，５５．２，５２．８，５１．７，４８．４；ＩＲ（薄層）γ２９５１，２８３８，１７４９，１５１６，１４３７，１０５９，８１１ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ１８ＮＯ５［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値２６８．１１７９，実測値２６８．１１８３．
【０１２６】
（３Ｒ，５Ｒ）−Ｎ−（３−（ジエチルアミノ）プロピル）−５−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）イソオキサゾリジン−５−カルボキサミド（Ｔ６）：
【化３７】
2017517475.tif 000044
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ６を、ＤＭＦ（０．６０ｍＬ）中で、Ｎ，Ｎ−ジエチル−１，３−ジアミノプロパン（０．６０ｍＬ，３．７ｍｍｏｌ，４．７当量）とβ３ｈ−（４−メトキシフェニル）−イソオキサゾリジン１５（０．１７ｇ，０．７８ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。生成物を無色液体として単離した（０．２１ｇ，０．５８ｍｍｏｌ，７４％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．５，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋２６．１；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．１１（ｂｒｔ，１Ｈ），７．３２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），５．７１（ｂｒｄ，１Ｈ），４．４３−４．３４（ｍ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．４８−３．３０（ｍ，２Ｈ），３．３０（ｓ，３Ｈ），２．７８（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６０−２．４３（ｍ，７Ｈ），１．７０−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．０３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６７．０，１５９．６，１２８．９，１２８．０，１１４．２，１０９．３，６３．６，５５．２，５２．０，５１．２，４８．０，４６．７，３９．３，２５．６，１１．４；ＩＲ（薄層）γ２９６７，２９３６，２８１１，１６７９，１５１５，１２５１，１０３４，８３０ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１９Ｈ３２Ｎ３Ｏ４［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値３６６．２３８７，実測値３６６．２３９７．
【０１２７】
（３Ｓ，５Ｒ）−３−ベンジル−５−メトキシ−Ｎ−（２−（ピロリジン−１−イル）エチル）イソオキサゾリジン−５−カルボキサミド（Ｔ７）：
【化３８】
2017517475.tif 000045
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ７を、２−シクロペンチルエタンアミン（０．４７ｍＬ，３．７ｍｍｏｌ，１０当量）と（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−ベンジル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（８７ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（９：１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）で精製し、生成物を無色液体として単離した（８７ｍｇ，０．２６ｍｍｏｌ，７３％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝１．０，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋５８．４；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３５−７．１３（ｍ，５Ｈ），７．０６（ｂｒｔ，１Ｈ），５．７５（ｂｒｄ，１Ｈ），３．７６−３．５７（ｍ，１Ｈ），３．５４−３．３１（ｍ，２Ｈ），３．２８（ｓ，３Ｈ），２．９８（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），２．７６（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６６−２．４５（ｍ，７Ｈ），２．１６（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．８７−１．６１（ｍ，４Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６７．５，１３７．４，１２８．７，１２８．７，１２６．７，１０９．２，６１．８，５４．５，５３．９，５１．５，４７．２，３８．０，３７．４，２３．５；ＩＲ（薄層）γ３３７０，２９３７，２８００，１６７７，１５２７，１４５５，１１５０，１０８５，７０１ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ２８Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値３３４．２１２５，実測値３３４．２１３２．
【０１２８】
（３Ｓ，５Ｒ）−３−イソブチル−５−メトキシ−Ｎ−（ピリジン−４−イルメチル）イソオキサゾリジン−５−カルボキアミド（Ｔ８）：
【化３９】
2017517475.tif 000046
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ８を、４−（アミノメチル）ピリジン（０．４０ｍＬ，４．０ｍｍｏｌ，５．１当量）と（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（０．１７ｇ，０．７８ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（９：１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）で精製し、生成物を白色固体として単離した（０．１８ｇ，０．６１ｍｍｏｌ，７８％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝１．０，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋６８．６；ｍｐ＝８２−８４℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ８．５３（ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１３−７．２０（ｍ，３Ｈ），５．５９（ｂｒｄ，１Ｈ），４．５７−４．３７（ｍ，２Ｈ），３．４７−３．３７（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｓ，３Ｈ），２．６１（ｄｄ，Ｊ＝８．２，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．０２（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．６９−１．５７（ｍ，１Ｈ），１．５０−１．３２（ｍ，２Ｈ），０．９３−０．８６（ｍ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６８．０，１５０．１，１４６．６，１２２．１，１０９．１，５９．４，５１．５，４８．０，４２．０，４０．５，２６．５，２２．６，２２．６；ＩＲ（薄層）γ３２０４，２９５５，１６７９，１５２３，１２２０，１０３０ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１５Ｈ２４Ｎ３Ｏ３［Ｍ＋Ｈ］＋，計算値２９４．１８１２，実測値２９４．１８１２．
【０１２９】
（３Ｓ，５Ｒ）−３−イソブチル−５−メトキシ−Ｎ−（４−スルファモイルフェネチル）イソオキサゾリジン−５−カルボキサミド（Ｔ９）：
【化４０】
2017517475.tif 000047
一般的手順（ｆ）に従い、ターミネータＴ９を、ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中で、４−（２−アミノエチル）ベンゼンスルホンアミド（０．７９ｇ，４．０ｍｍｏｌ，５．１当量）と（３Ｓ，５Ｒ）−メチル  ３−イソブチル−５−メトキシイソオキサゾリジン−５−カルボキシレート（０．１７ｇ，０．７８ｍｍｏｌ，１．０当量）から、製造した。粗反応混合物をフラッシュクロマトグラフィ（１９：１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ）で精製し、生成物を白色固体として単離した（０．２６ｇ，０．６８ｍｍｏｌ，８７％）。
［α］Ｄ２５（ｃ＝０．４，ＣＨ２Ｃｌ２）＝＋５５．０；ｍｐ＝６８−７０℃；１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．８５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），６．７８（ｂｒｔ，１Ｈ），５．５８（ｂｒｄ，１Ｈ），４．９８（ｓ，２Ｈ），３．７６−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．６１−３．５０（ｍ，１Ｈ），３．４１−３．２８（ｍ，１Ｈ），３．１７（ｓ，３Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），２．５１（ｄｄ，Ｊ＝８．１，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．９７（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１３．６Ｈｚ，１Ｈ），１．７０−１．５５（ｍ，１Ｈ），１．５０−１．３１（ｍ，２Ｈ），０．９４−０．８８（ｍ，６Ｈ）；１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１６７．８，１４３．８，１４０．６，１２９．４，１２６．６，１０９．１，５９．２，５１．５，４８．３，４０．４，３９．８，３５．３，２６．５，２２．７，２２．６；ＩＲ（薄層）γ２９３８，２８６６，１８０３，１４５１，１３７２，１２３０，１０８９，８４９ｃｍ−１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ２７Ｎ３ＮａＯ５Ｓ［Ｍ＋Ｎａ］＋，計算値４０８．１５６４，実測値４０８．１５５０．
【０１３０】
略称は以下の通りである。
Ｉ  イニシエータ
Ｔ  ターミネータ
Ｍ  モノマー
Ｍｅ  メチル
Ｐｈ  フェニル
ｔＢｕ  ターシャリーブチル
Ｂｏｃ  ターシャリーブチルオキシカルボニル
Ｂｚ  ベンジル
Ｅｔ  エチル
ｉＰｒ  イソプロピル
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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