(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストを、それを必要とする対象に投与することによって、ドライアイ疾患を治療するための方法を提供する。
2017536391.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドライアイ疾患を治療または予防するための方法であって、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）アンタゴニストを、それを必要とする対象に投与することを含む前記方法。
【請求項２】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストの投与時またはその直前の対象は、中等度から重度のドライアイ疾患を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、シクロスポリンＡまたはＴＮＦ−アルファアンタゴニストを含む追加の治療活性剤と組み合わせて投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−６Ｒに特異的に結合する抗体、またはＩＬ−６Ｒに特異的に結合する抗体の抗原結合断片である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、（ａ）トシリズマブ、（ｂ）サリルマブ、（ｃ）ＩＬ−６Ｒとの結合に関してトシリズマブと競合する抗体、（ｄ）トシリズマブと同じＩＬ−６Ｒ上のエピトープに結合する抗体、（ｅ）ＩＬ−６Ｒとの結合に関してサリルマブと競合する抗体、および（ｆ）サリルマブと同じＩＬ−６Ｒ上のエピトープに結合する抗体からなる群から選択される抗ＩＬ−６Ｒ抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、対象に、全身投与されるか、眼、眼内、硝子体内、もしくは結膜下の注射によって投与されるか、または局所投与される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
局所投与は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストを含む点眼剤、ゲル、もしくは軟膏の形態での直接的な適用を介するか、または、眼表面デポー、涙点プラグ、もしくは眼瞼下デポーを介して、対象の眼に行われる、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ドライアイ疾患を治療または予防する際の使用のための医薬製剤であって、
インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）アンタゴニスト；および
シクロスポリンＡまたはＴＮＦ−アルファアンタゴニストからなる群から選択される追加の治療活性剤
を含む前記医薬製剤。
【請求項９】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、ＩＬ−６Ｒに特異的に結合する抗体、およびＩＬ−６Ｒに特異的に結合する抗体の抗原結合断片からなる群から選択される、請求項８に記載の医薬製剤。
【請求項１０】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、（ａ）トシリズマブ、（ｂ）サリルマブ、（ｃ）ＩＬ−６Ｒとの結合に関してトシリズマブと競合する抗体、（ｄ）トシリズマブと同じＩＬ−６Ｒ上のエピトープに結合する抗体、（ｅ）ＩＬ−６Ｒとの結合に関してサリルマブと競合する抗体、および（ｆ）サリルマブと同じＩＬ−６Ｒ上のエピトープに結合する抗体からなる群から選択される抗ＩＬ−６Ｒ抗体である、請求項９に記載の医薬製剤。
【請求項１１】
全身、眼、眼内、硝子体内、結膜下の注射および局所からなる群から選択される経路による投与のために製剤化される、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の医薬製剤。
【請求項１２】
点眼剤、ゲル、軟膏、眼表面デポー、涙点プラグおよび眼瞼下デポーからなる群から選択される形態である、請求項１１に記載の医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、眼の疾患および障害の治療のための療法に関する。より具体的には、本発明は、ドライアイ疾患を治療するためのＩＬ−６受容体アンタゴニストの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ドライアイ疾患は、涙膜の異常、ならびに眼の不充分な潤滑性および／または水分に関連する種々の状態を指す。ドライアイ疾患の症状としては、眼の乾燥、掻傷、掻痒、灼熱感、刺激、および砂が入ったようなざらつき感が挙げられる。ドライアイ疾患はまた、視覚の乱れおよび涙膜の不安定さをもたらすことがあり、眼表面に損傷を与える可能性がある。ドライアイ疾患は、涙液の浸透圧の増加と関連することがある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
ドライアイ疾患を治療するために、様々な市販の処置や処方箋に基づく治療が利用可能であるにもかかわらず、当技術分野では、疾患の根本的な生物学的原因にさらに直接的に対処する新しい治療の選択肢が求められている。したがって、当技術分野では、ドライアイ疾患の治療のための新規の治療アプローチを求める満たされていないニーズが存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、ドライアイ疾患を治療または予防するための方法を提供する。本発明の方法は、インターロイキン−６受容体（ＩＬ−６Ｒ）アンタゴニストを、それを必要とする対象に投与することを含む。
【０００５】
本発明の方法は、全身的（例えば、静脈内もしくは皮下）、硝子体内、もしくは局所投与（例えば、点眼剤、ゲル、軟膏などの形態での眼への直接的な適用を介して）を含めた種々の経路を介するか、または、結膜下の注射、涙点プラグ、眼瞼下デポー、および眼表面デポー（例えば、コンタクトレンズや他の眼表面の接着デバイスに埋め込まれたもの）などの投与経路、ならびに当技術分野で公知および本明細書に別途記載の他の投与経路を介する、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストの投与を含む。
【０００６】
本発明の方法はまた、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストを追加の治療活性剤と組み合わせて患者に投与することを含む。例えば、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、ドライアイ疾患の１つまたはそれ以上の症状を改善または軽減することが公知の他の医薬品または活性要素と組み合わせて投与することができる。追加の治療活性剤は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストとの単一の製剤で投与することができるが、あるいはまた、追加の治療活性剤は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストを含む製剤もしくは剤形とは分離された別個の製剤もしくは剤形で、対象に投与することができる。
【０００７】
本発明の方法のある特定の実施形態によれば、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、抗ＩＬ−６Ｒ抗体とすることができる。本発明の状況で使用することができる例示的な抗ＩＬ−６Ｒ抗体としては、例えば、サリルマブもしくはトシリズマブ、またはＩＬ−６Ｒとの結合に関してそれらと競合する抗体が挙げられる。
【０００８】
本発明の他の実施形態は、これに続く詳細な記載を検討することから明らかになると予想される。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ナイーブ動物、偽処置された動物、または塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）、もしくはＢＡＣとＳｃｏｐとの組合せ（ＢＡＣ＋Ｓｃｏｐ）を用いて処置された動物における、３日目（ベースライン）、７日目、１４日目、２１日目、および２８日目の涙液の産生の結果を示す図である。
【図２】ナイーブ動物、偽処置された動物、または塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）、もしくはＢＡＣとＳｃｏｐとの組合せ（ＢＡＣ＋Ｓｃｏｐ）を用いて処置された動物における、３日目（ベースライン）、７日目、１４日目、２１日目、および２８日目の角膜のフルオレセイン染色スコアを示す図である。
【図３】ナイーブ動物、偽処置された動物、または塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）、もしくはＢＡＣとＳｃｏｐとの組合せ（ＢＡＣ＋Ｓｃｏｐ）を用いて処置された動物における、４週目の角膜血管の骨格化の長さを示す図である。
【図４】ナイーブ動物、偽処置された動物、または塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）、もしくはＢＡＣとＳｃｏｐとの組合せ（ＢＡＣ＋Ｓｃｏｐ）を用いて処置された動物における、４週目の角膜リンパ管の骨格化の長さを示す図である。
【図５】ナイーブ動物、偽処置された動物、または塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、スコポラミン（Ｓｃｏｐ）、もしくはＢＡＣとＳｃｏｐとの組合せ（ＢＡＣ＋Ｓｃｏｐ）を用いて処置された動物由来の眼窩外の涙腺からＦＡＣＳによって決定されるときの、４週目の生細胞のＣＤ４５＋パーセンテージを示す図である。
【図６】本明細書の実施例１に記載のドライアイモデルでの未処置動物、対照処置動物（ｍＦｃ）、ならびに抗ｍＩＬ−６Ｒ抗体を１０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで用いて処置された動物における、３日目、７日目、１４日目、２１日目、および２８日目の涙液の産生の結果を示す図である。
【図７】本明細書の実施例１に記載のドライアイモデルでの未処置動物、対照処置動物（ｍＦｃ）、ならびに抗ｍＩＬ−６Ｒ抗体を１０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで用いて処置された動物における、３日目、７日目、１４日目、２１日目、および２８日目の角膜のフルオレセイン染色スコアを示す図である。
【図８】本明細書の実施例１に記載のドライアイモデルでの未処置動物、対照処置動物（ｍＦｃ）、ならびに抗ｍＩＬ−６Ｒ抗体を１０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで用いて処置された動物における、角膜血管の骨格化の長さを示す図である。
【図９】本明細書の実施例１に記載のドライアイモデルでの非処理動物、対象処置動物（ｍＦｃ）、ならびに抗ｍＩＬ−６Ｒ抗体を１０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで用いて処置された動物における、角膜リンパ管の骨格化の長さを示す図である。
【図１０】本明細書の実施例１に記載の実験に従って処置された動物における、リンパ管の長さ（ｙ軸）と角膜のフルオレセイン染色スコア（ｘ軸）との間の関係のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明を記載する前に、この発明は記載される特定の方法および実験条件に限定されず、そのような方法および条件は変わる場合があることを理解されたい。また、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるため、本明細書で使用される用語は、単に特定の実施形態を説明するためのものであり、限定を意図するものではないことを理解されたい。
【００１１】
別段に定義のない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、この発明の属する技術分野の当業者が一般に理解するものと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、用語「約」は、記載される特定の数値に関連して使用されるとき、値が、記載される値から１％以下変動する場合があることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、表現「約１００」は、９９および１０１、ならびにその間にある全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）を含む。
【００１２】
本明細書に記載のものと同様または同等のあらゆる方法および材料が本発明の実施で使用できるが、ここで好適な方法および材料を記載する。
【００１３】
ドライアイ疾患
本発明は、ドライアイ疾患を治療または予防するための方法を含む。本明細書で使用される場合、「ドライアイ疾患」（「ドライアイ症候群」、「ドライアイ障害」などとしても公知）は：（ａ）涙液の産生の低下；（ｂ）涙膜の蒸発の増加；（ｃ）粘液を含有する結膜杯細胞の喪失；（ｄ）角膜上皮の剥離；および／または（ｅ）角膜−涙液の境界の不安定化のうち、１つまたはそれ以上によって特徴付けられる任意の疾患、状態または苦難を指す。ドライアイ疾患は、公知の臨床の判断基準に従って、軽度、中等度、中等度から重度、および重度のドライアイ疾患として特徴付けることができる。したがって、本発明は、軽度ドライアイ疾患、中等度ドライアイ疾患、中等度から重度のドライアイ疾患、または重度のドライアイ疾患を含めた、任意の程度のドライアイ疾患を治療する方法を提供する。ドライアイ疾患は、急性である場合も慢性でもある場合もある。したがって、本発明は、急性または慢性のいずれかのドライアイ疾患を治療する方法を提供する。ドライアイ疾患はまた、「涙液不足型ドライアイ疾患」または「蒸発型ドライアイ疾患」のいずれかに分類することができる。したがって、本発明は、涙液不足型ドライアイ疾患および／または蒸発型ドライアイ疾患を治療するための方法を提供する。
【００１４】
本発明によれば、「ドライアイ疾患」としては、例えば、加齢性のドライアイ、眼瞼炎、結膜炎、角膜剥離、角膜浸潤、上皮浮腫、巨大乳頭結膜炎、低酸素症、乾性角結膜炎（ＫＣＳ）、細菌性角膜炎、小嚢胞、眼の瘢痕性類天疱瘡、スティーブンス・ジョンソン症候群、シェーグレン症候群、および潰瘍性角膜炎が挙げられる。「ドライアイ疾患」としてはまた、角膜の傷害、角膜の外科手術（ＬＡＳＩＫを含む）、コンタクトレンズの使用、感染症、栄養障害もしくは欠乏、薬理作用剤、眼のストレス、腺および組織の破壊、汚染物質および環境状態（例えば、スモッグ、煙、過剰に乾燥した空気）への曝露、大気粉塵、自己免疫性および他の免疫不全障害、ならびに個人がまばたきする能力を損なったりまたは阻害したりする他の状態に関連がある、ドライアイ状態が挙げられる。本発明の方法は、「ドライアイ疾患」の定義に該当する上述の状態のいずれかを治療または予防するために使用することができる。
【００１５】
インターロイキン−６受容体アンタゴニスト
用語「インターロイキン−６受容体」（ＩＬ−６Ｒ）は、ヒトインターロイキン−６（ＩＬ−６）に特異的に結合するヒトサイトカイン受容体を意味する。ヒトＩＬ−６は、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ０００５９１に規定されるアミノ酸配列を有するサイトカインである。ヒトＩＬ−６Ｒは、ＩＬ−６Ｒサブユニット（「ＩＬ−６Ｒ−アルファサブユニット」としても公知）およびＧＰ１３０シグナル伝達サブユニットからなるタンパク質複合体である。ＩＬ−６Ｒサブユニットは、ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ０００５５６に規定されるアミノ酸配列を有する。本明細書で使用される場合、表現「インターロイキン−６受容体アンタゴニスト」または「ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト」は、ＩＬ−６Ｒと結合するかまたは相互作用して、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６Ｒのインビトロまたはインビボで正常な生物学的シグナル伝達機能を阻害する、任意の薬剤を意味する。
【００１６】
本発明の方法で使用するためのＩＬ−６Ｒアンタゴニストとして機能する場合がある分子の例示的なクラスとしては、抗ＩＬ−６Ｒ抗体が挙げられる。例えば、本発明の状況で使用することができるＩＬ−６Ｒアンタゴニストとしては、例えば、キメラ抗ＩＬ−６Ｒ抗体、ヒト化抗ＩＬ−６Ｒ抗体、もしくは完全ヒト抗ＩＬ−６Ｒ抗体、またはこれらの種類の抗体のいずれかの抗原結合断片が挙げられる。
【００１７】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、特定の抗原（例えば、ＩＬ−６Ｒ）と特異的に結合するかまたは相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。用語「抗体」は、４本のポリペプチド鎖、すなわち、ジスルフィド結合によって相互に連結された２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにそれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略記される）と重鎖定常領域とを含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわちＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略記される）と軽鎖定常領域とを含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）とよばれる高頻度可変領域にさらに細分することができ、ＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）とよばれる、より保存されている領域を介して散在する。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲとから構成され、それらは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順番：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で、配置されている。
【００１８】
用語「抗体」は、本明細書で使用される場合、全長抗体分子の抗原結合断片も含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成し、天然に存在するか、酵素的に取得可能であるか、合成されているか、または遺伝的に操作されている、任意のポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、タンパク質分解性消化、または抗体の可変ドメインと場合により定常ドメインとをコードするＤＮＡの操作および発現を含む組換え遺伝子工学手法など、任意の適した標準的な手法を使用して、例えば、全長抗体分子から得ることができる。そのようなＤＮＡは公知であるか、および／もしくは例えば、商業的な供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ抗体ライブラリーが挙げられる）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、配列決定され、例えば、１つまたはそれ以上の可変ドメインおよび／または定常ドメインを適した構成に配置するか、またはコドンを導入する、システイン残基を作成する、アミノ酸を修飾、付加、もしくは欠失させるなどのために、化学的にまたは分子生物学的手法を使用して操作されることがある。
【００１９】
非限定的な、例示的な抗原結合断片としては：（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の高頻度可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小限の認識ユニット（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束性ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドが挙げられる。他の操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば１価のナノボディ、２価のナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬（ｓｍａｌｌ  ｍｏｄｕｌａｒ  ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどもまた、本明細書で使用される場合、表現「抗原結合断片」の中に包含される。
【００２０】
抗体の抗原結合断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むと予想される。可変ドメインは、任意のサイズのアミノ酸組成物とすることができ、一般に、１つまたはそれ以上のフレームワーク配列に隣接しているかまたはインフレームである、少なくとも１つのＣＤＲを含むと予想される。ＶＬドメインと会合しているＶＨドメインを有する抗原結合断片では、ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、互いに対して任意の適した配置で位置していることがある。例えば、可変領域は、二量体であり、ＶＨ−ＶＨ二量体、ＶＨ−ＶＬ二量体、またはＶＬ−ＶＬ二量体を含有することがある。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体のＶＨまたはＶＬドメインを含有することがある。
【００２１】
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合している少なくとも１つの可変のドメインを含有することがある。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出すことができる可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な、例示的な構成としては：（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上記に列挙された例示的な構成のいずれかを含む、任意の構成の可変ドメインおよび定常ドメインにおいて、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接的に連結されるか、全長もしくは一部のヒンジもしくはリンカー領域によって連結されるかのいずれかにすることができる。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子中の隣接している可変ドメインおよび／または定常ドメインの間にフレキシブルまたはセミフレキシブルな連結をもたらす、少なくとも２個（例えば、５個、１０個、１５個、２０個、４０個、６０個、またはそれ以上）のアミノ酸からなるものとすることができる。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いに非共有結合的に会合して、および／または１つもしくはそれ以上の単量体のＶＨドメインもしくはＶＬドメイン（例えば、ジスルフィド結合による）を用いて、上記に列挙された可変ドメインおよび定常ドメインの構成のいずれかのホモ二量体もしくはヘテロ二量体（または他の多量体）を構成してもよい。
【００２２】
本明細書で使用される場合、表現「抗ＩＬ−６Ｒ抗体」はまた、多特異性抗原結合分子（例えば、二重特異性抗体）を含み、多特異性抗原結合分子の少なくとも１つの結合ドメイン（例えば、「結合アーム」）がＩＬ−６Ｒに特異的に結合する。
【００２３】
本発明の状況で使用することのできる例示的な抗ＩＬ−６Ｒ抗体としては、例えば、ヒト化抗ＩＬ−６Ｒ抗体のトシリズマブ（中外製薬）（例えば、ＵＳ５，７９５，９６５に規定されている）、および完全ヒト抗ＩＬ−６Ｒ抗体のサリルマブ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ｓａｎｏｆｉ）（例えば、ＵＳ７，５８２，２９８に規定の、配列番号１９および配列番号２７のアミノ酸配列をそれぞれ有する重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む抗ＩＬ−６Ｒ抗体）が挙げられる。本発明の方法の状況で使用することのできる他のＩＬ−６Ｒアンタゴニストとしては、ＡＬＸ−００６１とよばれる抗ＩＬ−６Ｒナノボディ（Ａｂｂｖｉｅ、Ａｂｌｙｎｘ）（例えば、ＵＳ２０１００２１５６６４に規定されている）、ＡＰＸ００７（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）（例えば、ＵＳ８，７５３，６３４に規定されている）、第２世代トシリズマブ（中外製薬）（例えば、ＵＳ２０１３／０３１７２０３に規定されている）、ＣｙｔｏｍＸの抗ＩＬ−６Ｒ抗体（例えば、ＷＯ２０１４／０５２４６２に規定されている）、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅの抗ＩＬ−６：ＩＬ６Ｒａ複合体抗体（例えば、ＵＳ８，１５３，１２８に規定されている）、およびＮＩ−１２０１（Ｎｏｖｉｍｍｕｎｅ）（例えば、ＵＳ８，０３４，３４４に規定されている）が挙げられる。
【００２４】
本発明はまた、本明細書で言及された特異的な抗ＩＬ−６Ｒ抗体のうちいずれか１つと同じエピトープに結合するか、または結合に関して競合する、抗ＩＬ−６Ｒ抗体の使用を含む。
【００２５】
抗体が、参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体と同じエピトープに結合するか、または結合に関して競合するかは、当技術分野で公知の慣例的な方法を使用することによって、容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体と同じエピトープに結合するか否かを決定するためには、参照抗体をＩＬ−６Ｒタンパク質（例えば、ＩＬ−６Ｒ細胞外ドメインの可溶性部分または細胞表面で発現しているＩＬ−６Ｒ）に結合させる。次に、試験抗体のＩＬ−６Ｒ分子に結合する能力を評価する。参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体による飽和結合に続いて、試験抗体がＩＬ−６Ｒに結合することができるならば、試験抗体は、参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体とは異なるエピトープに結合するものと結論を下すことができる。一方、参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体による飽和結合に続いて、試験抗体が、ＩＬ−６Ｒ分子に結合することができないならば、試験抗体は、本発明の参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体の結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。次いで、追加の慣例的な実験（例えば、ペプチドの突然変異および結合分析）を実施して、観察される試験抗体の結合の欠如が、実際に参照抗体と同じエピトープへの結合に起因するものか否か、または、立体的な遮断（もしくは別の現象）が、観察される結合の欠如に関与するのかを、確認することができる。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、Ｂｉａｃｏｒｅ、フローサイトメトリー、または当技術分野で利用可能な任意の他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを使用して、実施することができる。本発明のある特定の実施形態に従うと、競合結合アッセイで測定するとき、例えば、１倍、５倍、１０倍、２０倍、または１００倍過剰な一方の抗体が、他方の結合を少なくとも５０％、しかし好ましくは７５％、９０％、またはさらに９９％阻害する場合には、２つの抗体は、同じ（または重複する）エピトープに結合する（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０：５０：１４９５〜１５０２を参照）。あるいは、一方の抗体の結合を低減または排除する、抗原中の本質的に全てのアミノ酸変異が、他方の結合を低減または排除する場合には、２つの抗体は、同じエピトープに結合するものとみなされる。一方の抗体の結合を低減または排除するアミノ酸変異のサブセットのみが、他方の結合を低減または排除する場合には、２つの抗体は、「重複するエピトープ」を有するものとみなされる。
【００２６】
抗体が結合に関して参照抗ＩＬ−６Ｒ抗体と競合するか否かを決定するために、上に記載の結合方法は２つの方針で実施される：第１の方針では、参照抗体を、飽和条件下でＩＬ−６Ｒタンパク質（例えば、ＩＬ−６Ｒ細胞外ドメインの可溶性部分または細胞表面で発現しているＩＬ−６Ｒ）と結合させ、続いてＩＬ−６Ｒ分子への試験抗体の結合の評価を行う。第２の方針では、試験抗体を、飽和条件下でＩＬ−６Ｒ分子と結合させ、続いてＩＬ−６Ｒ分子への参照抗体の結合の評価を行う。両方針において、最初の（飽和）抗体のみがＩＬ−６Ｒ分子と結合することができるならば、試験抗体および参照抗体は、ＩＬ−６Ｒとの結合に関して競合するものと結論が下される。当技術分野の当業者であれば理解すると予想されるように、結合に関して参照抗体と競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同じエピトープに結合しないことがあり、重複しているかまたは隣接しているエピトープと結合することによって、参照抗体の結合を立体的に遮断することがある。
【００２７】
ＩＬ−６Ｒアンタゴニストを含む医薬組成物
本発明は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−６Ｒ抗体）を含む医薬組成物、およびその使用の方法を含む。本発明のこの態様による医薬組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤をさらに含むことがある。生物学的治療剤を合剤化するための方法は、当技術分野で公知であり、本発明の医薬組成物を作製するために、当技術分野の当業者によって使用されることがある。
【００２８】
本明細書で使用される場合、表現「薬学的に許容される担体または希釈剤」は、適した担体、賦形剤、および適した移送、送達、耐性などをもたらす他の薬剤を含む。本発明の状況で有用な例示的な製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、イーストン、ペンシルベニア州に見出すことができる。許容される製剤としては、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂肪、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有小胞（ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油および油中水エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固形ゲル、およびカーボワックスを含有する半固形混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ  ｏｆ  ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」ＰＤＡ（１９９８）、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  Ｔｅｃｈｎｏｌ、５２：２３８−３１１も参照されたい。
【００２９】
本発明の状況で使用することができる抗ＩＬ−６Ｒ抗体を含む例示的な医薬組成物は、例えば、ＵＳ２０１１／０１７１２４１に規定されている。
【００３０】
追加の治療剤
本発明は、１つまたはそれ以上の追加の治療活性要素と組み合わせたＩＬ−６Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−６Ｒ抗体）を含む、組成物および治療製剤を含む。本発明はまた、そのような組合せを、それを必要とする対象に（例えば、単一の剤形で）投与することを含む、治療の方法を含む。同様に、本発明は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−６Ｒ抗体）を１つまたはそれ以上の追加の治療活性要素と組み合わせて投与することを含む、対象でドライアイ疾患を治療する方法であって、１つまたはそれ以上の追加の治療活性要素は、別々の剤形で対象に投与される方法を含む。
【００３１】
本発明の状況で、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストと組み合わされるおよび／または組み合わせて投与される、追加の治療活性要素としては、例えば、以下：ＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば、アフリベルセプトもしくはＵＳ７，０８７，４１１に規定されるような他のＶＥＧＦ阻害融合タンパク質などの「ＶＥＧＦ−トラップ」、抗ＶＥＧＦ抗体、またはそれらの抗原結合断片（例えば、ベバシズマブ、ラニビズマブ）、ＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブ、またはパゾパニブ）、抗ＶＥＧＦ受容体抗体、抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（例えば、ＵＳ２０１４／０１９３４０２に規定されているような抗ＰＤＧＦＲ−ベータ抗体（例えば、Ｈ４Ｈ３３７４ＮまたはＨ４Ｈ３０９４Ｐとよばれる抗体））、ＰＤＧＦリガンドアンタゴニスト（例えば、抗ＰＤＧＦ−ＢＢ抗体、抗ＰＤＧＦ−ＤＤ抗体、抗ＰＤＧＦ−ＣＣ抗体、抗ＰＤＧＦ−ＡＢ抗体、または他のＰＤＧＦリガンドアンタゴニスト、例えばアプタマー（例えば、Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐ．、プリンストン、ニュージャージー州のＦｏｖｉｓｔａ（商標）などの抗ＰＤＧＦ−Ｂアプタマー）、アンチセンス分子、リボザイム、ｓｉＲＮＡ、ペプチボディ、ナノボディ、もしくはＰＤＧＦリガンドに対する抗体断片など）のうち１つまたはそれ以上が挙げられる。
【００３２】
本発明の状況で、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストと組み合わされるおよび／または組み合わせて投与される、他のタイプの追加の治療活性要素としては、例えば、抗感染剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症薬、抗アレルギー剤、血管収縮薬、血管拡張薬、局所麻酔薬、鎮痛薬、眼圧降下剤、免疫調節薬、抗酸化薬、ビタミンおよびミネラル、コルチコステロイド、ステロイド、ＣＯＸ阻害薬、心血管保護薬、金属キレート薬、ＩＦＮ−ガンマ、および／またはＮＳＡＩＤが挙げられる。そのような追加の治療活性要素の具体的な例としては、例えば、銀、ヨウ素、アミノグルコシド、キノロン、マクロライド、セフェム、およびサルファ薬、例えば、スルファメトキサゾール、スルフイソキサゾール、スルフイソミジン、スルファジアジン、スルファジメトキシン、スルファメトキシピリダジン、ファムシクロビル、ペンシクロビル、アシクロビル、インドメタシン、ジクロフェナク、プラノプロフェン、チアプロフェン酸、トルフェナム酸、プレドニゾロン、グリチルリチン酸ジカリウム、アラントイン、イプシロンアミノカプロン酸、塩化ベルベリン、硫酸ベルベリン、グアイアズレンスルホン酸ナトリウム、硫酸亜鉛、乳酸亜鉛、塩化リゾチーム、ケトチフェン、オキサトミド、セチリジン、クロモグリク酸ナトリウム、メキタジン、マレイン酸クロルフェニラミン、ジフェンヒドラミン塩酸塩、ナファゾリン、テトラヒドロゾリン、オキシメタゾリン、フェニレフリン、エフェドリン、エピネフリン、リドカイン塩酸塩、プロカイン塩酸塩、ジブカイン塩酸塩、シクロスポリンＡ、タクロリムス、ビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ１２、ニコチン酸、パントテン酸、およびビオチンなどが挙げられる。
【００３３】
追加の治療活性要素、例えば、上記に列挙された薬剤のいずれかもしくは誘導体、またはそれらの組合せは、本発明の状況では、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストの投与の直前に、同時に、または少し後に投与されることがある；（本開示の目的では、そのような投与レジメンは、追加の治療活性要素「と組み合わせた」ＩＬ−６Ｒアンタゴニストの投与と考えられる）。本発明は、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストが、本明細書に別途記載のように追加の治療活性要素のうち１つまたはそれ以上と合剤化されている、医薬組成物を含む。
【００３４】
薬物送達および投与方法
ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト（またはＩＬ−６Ｒアンタゴニストを含む医薬製剤）は、任意の公知の送達システムおよび／または投与方法によって、患者に投与することができる。ある特定の実施形態では、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、眼、眼内、硝子体内、または結膜下の注射によって、患者に投与される。他の実施形態では、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、局所投与によって、例えば、点眼剤、またはＩＬ−６Ｒアンタゴニストを含有し、眼に直接的に適用することのできる他の液体、ゲル、軟膏、もしくは流体を介して、患者に投与することができる。本発明の状況で使用することのできる他の投与方法としては、例えば、眼にもしくはその周囲に設置したデポーを介するＩＬ−６Ｒアンタゴニストの投与が挙げられ、デポーとしては、コンタクトレンズもしくは他の眼表面の接着デバイスに、または涙点プラグに埋め込まれた活性薬剤が挙げられる。他のあり得る投与経路としては、例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、および経口が挙げられる。
【００３５】
様々な送達システム、例えば、リポソーム、マイクロ粒子、マイクロカプセル中の被包化、変異体ウイルスを発現することが可能な組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕら、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照）が、公知であり、本発明の医薬組成物を投与するために使用することができる。組成物は、任意の簡便な経路によって、例えば、点滴またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜の内層（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜など）を通じた吸収によって、投与してもよく、他の生物学的活性薬剤と共に投与してもよい。
【００３６】
本発明の医薬組成物（例えば、単一の治療活性剤、または２種以上の治療活性剤の組合せを含む）は、標準的な針および注射器を用いて、皮下または静脈内に送達することができる。さらに、皮下の送達について、ペン型送達デバイスが、本発明の医薬組成物を送達する際に容易に適用される。そのようなペン型送達デバイスは、再利用可能であってもよいし、または使い捨てであってもよい。再利用可能なペン型の送達デバイスは、一般に、医薬組成物を含有する取り替え可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の全ての医薬組成物が投与されると、カートリッジは空になり、空のカートリッジは、容易に廃棄され、医薬組成物を含有する新しいカートリッジに取り替えることができる。ペン型送達デバイスは、次いで、再利用することができる。使い捨てのペン型送達デバイスの中には、取り替え可能なカートリッジは存在しない。正確に言えば、使い捨てのペン型送達デバイスは、デバイス内のリザーバーに入れられた医薬組成物が予め充填されて供給される。リザーバー中の医薬組成物がなくなると、デバイス全体が廃棄される。
【００３７】
ある特定の状況では、医薬組成物を、徐放システムで送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することがある。別の一実施形態は、ポリマー材料を使用することができる；Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、ボカラトン、フロリダ州を参照されたい。さらに別の一実施形態では、徐放システムを、組成物の標的に近接して設置することができ、そのため全身用量のごく一部を必要とするにすぎない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ、前掲、ｖｏｌ．２、ｐｐ．１１５〜１３８を参照）。他の徐放システムは、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７〜１５３３による概説で議論されている。
【００３８】
注射可能な調製物としては、静脈内、皮下、皮内、および筋肉内の注射、滴下点滴などの剤形を挙げることができる。これらの注射可能な調製物は、公知の方法によって調製することができる。例として、注射可能な調製物は、例えば、従来注射に使用されている滅菌済みの水性培地または油性培地中で、上に記載の抗体またはその塩を、溶解、懸濁、または乳濁化することによって調製することができる。注射に用いる水性培地として、例えば、生理食塩水、グルコースおよび他の助剤を含有する等張溶液などがあり、これらは、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、ポリプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（水素化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加物）などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用することができる。油性培地として、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが利用され、それらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用することができる。そうして調製された注射は、好ましくは適切なアンプルに充填される。
【００３９】
有利には、上に記載される経口または非経口の使用のための医薬組成物は、活性成分の用量に合わせるのに適した単位用量の剤形に調製される。そのような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、ピル剤、カプセル剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが挙げられる。
【００４０】
投薬量
本発明の医薬組成物内に含有されるおよび／または本発明の方法に従って対象に投与される活性成分（例えば、ＩＬ−６Ｒアンタゴニスト）の量は、概して治療有効量である。本明細書で使用される場合、ＩＬ−６Ｒアンタゴニストの文脈での表現「治療有効量」は、ヒトまたは動物の対象中で測定可能な生物学的効果を生じることができる、単独または別の治療剤との組合せでの治療剤の量を意味する。そのような測定可能な生物学的効果の例としては、例えば、対象の血清中の医薬分子の検出、対象から採取された生体試料中の関連の代謝産物の検出、対象から採取された試料中の関連のバイオマーカーの濃度の変化、ドライアイ疾患の徴候もしくは症状の改善および／または任意の他の関連する治療パラメータまたは臨床パラメータの改善が挙げられる。
【００４１】
抗ＩＬ−６Ｒ抗体の場合、治療有効量を約０．０５ｍｇから約６００ｍｇ、例えば、約０．０５ｍｇ、約０．１ｍｇ、約１．０ｍｇ、約１．５ｍｇ、約２．０ｍｇ、約１０ｍｇ、約２０ｍｇ、約３０ｍｇ、約４０ｍｇ、約５０ｍｇ、約６０ｍｇ、約７０ｍｇ、約８０ｍｇ、約９０ｍｇ、約１００ｍｇ、約１１０ｍｇ、約１２０ｍｇ、約１３０ｍｇ、約１４０ｍｇ、約１５０ｍｇ、約１６０ｍｇ、約１７０ｍｇ、約１８０ｍｇ、約１９０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２１０ｍｇ、約２２０ｍｇ、約２３０ｍｇ、約２４０ｍｇ、約２５０ｍｇ、約２６０ｍｇ、約２７０ｍｇ、約２８０ｍｇ、約２９０ｍｇ、約３００ｍｇ、約３１０ｍｇ、約３２０ｍｇ、約３３０ｍｇ、約３４０ｍｇ、約３５０ｍｇ、約３６０ｍｇ、約３７０ｍｇ、約３８０ｍｇ、約３９０ｍｇ、約４００ｍｇ、約４１０ｍｇ、約４２０ｍｇ、約４３０ｍｇ、約４４０ｍｇ、約４５０ｍｇ、約４６０ｍｇ、約４７０ｍｇ、約４８０ｍｇ、約４９０ｍｇ、約５００ｍｇ、約５１０ｍｇ、約５２０ｍｇ、約５３０ｍｇ、約５４０ｍｇ、約５５０ｍｇ、約５６０ｍｇ、約５７０ｍｇ、約５８０ｍｇ、約５９０ｍｇ、または約６００ｍｇの抗ＩＬ−６Ｒ抗体とすることができる。
【００４２】
対象に投与される抗ＩＬ−６Ｒ抗体の量は、対象の体重１キログラム当たりの抗体のミリグラム（すなわちｍｇ／ｋｇ）に換算して表すことができる。例えば、抗ＩＬ−６Ｒ抗体は、対象の体重１ｋｇ当たり約０．０００１から約１０ｍｇの用量で、患者に投与することができる。
【実施例】
【００４３】
以下の実施例は、当技術分野の当業者に、どのように本発明の方法および組成物を成して使用するかについて、完全な開示および記載を提供するように示されており、本発明者らが何を自分の発明であるものと考えているのかについて、範囲を限定することを意図するものではない。使用される数（例えば、量、温度など）について正確を期すように取り組みが行われるが、いくらかの実験上のエラーおよび偏差が考慮されるべきである。別段に指示のない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度はセ氏度であり、圧力は大気圧であるかまたはそれ付近である。
【００４４】
実施例１．マウスドライアイモデルにおける抗ＩＬ−６Ｒ抗体の効能
この実施例では、マウスドライアイモデルを構築し、このモデルにおけるＩＬ−６受容体の拮抗作用の影響を評価した。これらの実験で使用したＩＬ−６Ｒアンタゴニストは、マウス抗ＩＬ−６受容体に特異的なマウスモノクローナル抗体（「抗ｍＩＬ６Ｒ  Ａｂ」）であった。これらの実験で開発したドライアイモデル系は、涙液欠乏症と局部的な角膜炎症との組合せを含む。
【００４５】
方法：
成体の雄のＣ５７ＢＬ／６マウス（Ｔａｃｏｎｉｃ  ｌａｂｓ）を、ナイーブ群、偽群、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）群、スコポラミン群、またはＢＡＣプラススコポラミン群に無作為化した。スコポラミン群では、スコポラミンで満たした浸透圧ポンプ（２ｍｇ／２０ｇ体重／日を送達）をマウスに皮下移植し、４週間継続した。ＢＡＣ処理では、１μＬの０．２％ＢＡＣを、右眼表面に１日２回、２日／週で局所投与した。
【００４６】
抗体処置のため、マウスに、ＢＡＣプラススコポラミン、および抗ｍＩＬ６Ｒ  Ａｂ（１０、３５、もしくは１００ｍｇ／ｋｇ）またはマウスＩｇＧ２ａ（「ｍＦｃ」）対照（３３．３ｍｇ／ｋｇ）のいずれかを、４週間にわたって週２回皮下投与して与えた。
【００４７】
涙液の産生および角膜のフルオレセイン染色を４週間にわたって毎週測定した。
【００４８】
ドライアイ疾患の誘導後２８日目に、マウスを安楽死させて、角膜の血管新生およびリンパ脈管新生のために、眼球を４％ＰＦＡ中に採集した。さらに、眼窩外の涙腺をフローサイトメトリーのために収集して、免疫細胞の浸潤を測定した。角膜を切り出して、ＰＢＳで洗浄し、室温で１時間ブロッキングして、ＬＹＶＥ１およびラット−抗マウスＣＤ３１抗体（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、ＳＣ−７１８７１；１：１００）を用いて４℃で終夜染色した。ＰＢＳ中で洗浄した後、組織を、二次抗体コンジュゲートと共に室温で２時間インキュベートし、スライドガラスの上に平らに載せた。デジタルＲＴ  ＳＥ  Ｓｐｏｔカメラを取り付けた蛍光顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ８０ｉ）を使用して、染色された血管およびリンパ管の画像を取り込んだ。Ｉｍａｇｅ  Ｊソフトウェアを画像分析に使用した。フローサイトメトリーおよび分析のために処理するまで、眼窩外の涙腺を３％ＦＢＳ中で保持した。
【００４９】
涙腺の解離およびフローサイトメトリー分析のため、眼窩外の涙腺を周囲組織から切り出して、小片（直径１〜２ｍｍ）に切り分け、Ｌｉｂｅｒａｓｅ  ＤＬ（０．５ｍｇ／ｍｌ）と共に３７℃で、５分毎にチューブを転倒混和しながら、２０分間インキュベートした。ＥＤＴＡ（１０ｍＭ）を添加して反応を止めた。組織を１ｍｌピペットで再懸濁し、７０μｍセルストレーナーで濾過した。細胞懸濁液を採集して、５ｍｌのＦＡＣＳバッファーで濯ぎ、生死染色およびＣＤ４５について染色し、ＢＤ  ＬＳＲＩＩ機を使用して分析した。
【００５０】
結果：
ドライアイモデルの評価
ＢＡＣプラススコポラミンで処置された野生型マウスは、強固なドライアイ症候群を示した。涙液の産生は、スコポラミン処置群とＢＡＣ＋スコポラミン処置群との両方で、５０％超阻害された。（図１）。角膜のフルオレセイン染色スコアは、スコポラミンプラスＢＡＣ群で他の群に比べて有意に増加した（ｐ＜０．００１）。（図２）。このドライアイモデルでは、角膜の血管新生およびリンパ脈管新生もまた、有意に増加した。（図３および４）。興味深いことに、血管新生ではなくリンパ球新生が、角膜のフルオレセイン染色に有意に相関した（ｐ＜０．０１）。ＣＤ４５、Ｂ２２０、ＣＤ４およびＣＤ８陽性細胞の浸潤が、眼窩外の涙腺に見出された（例えば、図５（ＣＤ４５＋細胞）を参照されたい）。
【００５１】
ドライアイモデルにおける抗ＩＬ−６Ｒ抗体の効能
上記のドライアイモデルにおける、涙液の産生、角膜のフルオレセイン染色、角膜血管の骨格化について表した抗ＩＬ−６Ｒ抗体の効果を対照と比較して、図６〜９に示す。２８日目では、未処置対照に比べて、ｍＦｃまたは抗ＩＬ−６Ｒ  Ａｂの処置群は、体重または涙液の産生に有意差がなかった。ｍＦｃに比べて、抗ＩＬ−６Ｒ処置により、３週目または４週目で、用量依存的および有意に角膜のフルオレセイン染色が低下し（１００ｍｇ／ｋｇで３０％の減少）（図７）、４週目で角膜のリンパ脈管新生が減少した（１００ｍｇ／ｋｇで５０％の減少）。（図８および９）。さらに、角膜のフルオレセイン染色とリンパ管長とが、互いに高く相関することが見出された（ｐ＝０．００９、スピアマン試験）。（図１０）。
【００５２】
このように、この実施例で使用されたドライアイモデルでは、抗ＩＬ−６Ｒ処置によって、体重または涙液の産生に影響を及ぼすことなく、用量依存的な様式で角膜の損傷が低下した。さらに、抗ＩＬ−６Ｒ処置によって、角膜のリンパ脈管新生が有意に低下したが、角膜血管長には影響がなかった。
【００５３】
結論：
この実施例は、涙液分泌が減少し、角膜の損傷および角膜のリンパ脈管新生および涙腺の炎症が亢進された、新規のドライアイモデルの開発を記載している。抗ＩＬ−６Ｒ抗体の全身投与によって、角膜の損傷が軽減され、涙腺でのリンパ球浸潤が減少することが示された。この実施例は、ドライアイ疾患の治療戦略として抗ＩＬ−６Ｒ治療の使用を支持する。
【００５４】
本発明は、本明細書に記載されている特定の実施形態による範囲に限定されるものではない。実際に、本明細書に記載されるものに加えて本発明の様々な改変が、上述の記載および添付された図面から、当技術分野の当業者に明らかになると予想される。そのような改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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