【手続補正書】
【提出日】平成20年9月26日(2008.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下からなる群より選択される、不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする単離された核酸分子：
（a）配列番号：7、3、もしくは5に示したヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子、またはそれらの相補物；
（b）配列番号：8、4、もしくは6に示したアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子、またはそれらの相補物；
（c）配列番号：7、3、もしくは5のヌクレオチド配列全長との同一性が少なくとも90％であるヌクレオチド配列を含む単離された核酸分子、またはそれらの相補物；
（d）1つもしくは複数のヌクレオチド置換、付加もしくは欠失が導入されている配列番号：7、3、もしくは5のヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子、またはそれらの相補物；
（e）配列番号：8、4、もしくは6のアミノ酸配列を含むポリペプチドの機能的な天然の対立遺伝子バリアントをコードする単離された核酸分子、またはそれらの相補物；
（f）配列番号：7、3、もしくは5からなるヌクレオチド配列の相補物と高度にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする単離された核酸分子、またはそれらの相補物；
（g）配列番号：8、4、もしくは6のアミノ酸配列を含むポリペプチドの生物活性を有する断片であって、配列番号：8、4、もしくは6のアミノ酸配列の断片をコードする単離された核酸分子、またはそれらの相補物；および
（h）配列番号：8、4、もしくは6のアミノ酸配列全長との同一性が少なくとも90％であるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする単離された核酸分子、またはそれらの相補物。
【請求項２】
請求項１記載の核酸分子、および異種のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項３】
配列番号：8の残基42〜47、残基178〜183、残基215〜220、および残基400〜405からなる群より選択されるアミノ酸残基によって示される少なくとも一つのモチーフを含む不飽和化酵素分子をコードする、請求項１記載の核酸分子。
【請求項４】
少なくとも一つのヘム結合モチーフまたはヒスチジンモチーフを含む不飽和化酵素分子をコードする、請求項１記載の核酸分子。
【請求項５】
リノール酸（18:2）をガンマ-リノレン酸（GLA）（18:3(6,9,12)）に変換しうる、またはα-リノレン酸（ALA）（18:3）をステアリドン酸（SDA）（18:4(6,9,12,15)）に変換しうるΔ６脂肪酸不飽和化酵素分子をコードする、請求項１記載の核酸分子。
【請求項６】
請求項１記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項７】
発現ベクターである、請求項６記載のベクター。
【請求項８】
請求項７記載の発現ベクターをトランスフェクトした宿主細胞。
【請求項９】
植物細胞、微生物細胞および動物細胞からなる群より選択される、請求項８記載の宿主細胞。
【請求項１０】
植物細胞が、アマ（アマ属（Linum sp.））、ナタネ（アブラナ属（Brassica sp.））、ダイズ（ダイズ属（Glycine and Soja sp.））、ヒマワリ（ヒマワリ属（Helianthus sp.））、ワタ（ワタ属（Gossypium sp.））、トウモロコシ（ズィー・メイス（Zea mays））、オリーブ（モクセイ科（Olea sp.））、ベニバナ（ベニバナ属（Carthamus sp.））、カカオ（テオブロマ・カカオ（Theobroma cacao））およびラッカセイ（ラッカセイ属（Arachis sp.））からなる群より選択される脂肪種子作物から得られる細胞である、請求項９記載の宿主細胞。
【請求項１１】
微生物細胞が、ヤブレツボカビ（Thraustochytrium）、ピティウム・イレギュラレ（Pythium irregulare）、スキゾキトリウム（Schizochytrium）およびクリテコジニウム（Crythecodinium）からなる群より選択される、請求項９記載の宿主細胞。
【請求項１２】
ポリペプチドを産生させるために請求項８記載の宿主細胞を培養する段階を含む、ポリペプチドの生産方法。
【請求項１３】
以下からなる群より選択される、不飽和化酵素活性を有する単離されたポリペプチド：
（a）配列番号：8、4、または6のアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド；
（b）配列番号：7、3、または5のヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされる、単離されたポリペプチド；
（c）配列番号：7、3、または5のヌクレオチド配列全長との同一性が少なくとも90％であるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされる、単離されたポリペプチド；
（d）配列番号：8、4、または6のアミノ酸配列全長との同一性が少なくとも90％であるアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド；
（e）単離された、配列番号：8、4、または6のアミノ酸配列を含むポリペプチドの機能的な天然の対立遺伝子バリアント；および
（f）1つもしくは複数のアミノ酸置換、付加または欠失が導入されている配列番号：8、4、または6のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項１４】
さらに異種のアミノ酸配列を含む、請求項１３記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１５】
配列番号：8の残基42〜47、残基178〜183、残基215〜220および残基400〜405からなる群より選択されるアミノ酸残基によって示される少なくとも一つのモチーフを含む、請求項１３記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１６】
少なくとも一つのヘム結合モチーフまたはヒスチジンモチーフを含む、請求項１３記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１７】
リノール酸（18:2）をガンマ-リノレン酸（GLA）（18: 3(6,9,12)）に変換しうる、またはα-リノレン酸（ALA）（18:3）をステアリドン酸（SDA）（18:4(6,9,12,15)）に変換しうるΔ６脂肪酸不飽和化酵素分子である、請求項１３記載の単離されたポリペプチド。
【請求項１８】
不飽和脂肪酸の生産方法であって、不飽和脂肪酸が産生される条件下で請求項８記載の細胞を培養または栽培する段階を含む方法。
【請求項１９】
不飽和脂肪酸の生産方法であって、請求項１記載の単離された核酸分子による細胞のトランスフェクションまたは形質転換を行う段階、ならびに不飽和脂肪酸が産生される条件下で細胞を培養または栽培する段階を含む方法。
【請求項２０】
不飽和脂肪酸の生産方法であって、少なくとも1つの不飽和化酵素標的分子を含む組成物を、請求項１３記載の少なくとも1つの単離されたポリペプチドと、不飽和脂肪酸が生成される条件下で接触させる段階を含む方法。
【請求項２１】
不飽和脂肪酸の生産を調節するための方法であって、不飽和脂肪酸の産生の調節が起こるように請求項８記載の細胞を培養または栽培する段階を含む方法。
【請求項２２】
不飽和脂肪酸を産生しうる細胞の作製方法であって、脂肪酸アシル鎖における二重結合の形成を触媒する活性を有する不飽和化酵素をコードする核酸分子である、請求項１記載の核酸分子を該細胞に導入する段階を含む方法。
【請求項２３】
不飽和脂肪酸の大規模生産のための方法であって、不飽和脂肪酸が産生されるように請求項８記載の細胞を培養する段階を含む方法。
【請求項２４】
不飽和脂肪酸がGLA 18：3（6,9,12）またはSDA 18：4（6,9,12,15）である、請求項１８〜２３のいずれか一項記載の方法。
【請求項２５】
不飽和脂肪酸を回収する段階をさらに含む、請求項１８〜２３のいずれか一項記載の方法。
【請求項２６】
細胞が植物細胞、動物細胞および微生物細胞からなる群より選択される、請求項１８、１９、または２１〜２３のいずれか一項記載の方法。
【請求項２７】
植物が脂肪種子作物から選択される、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
脂肪種子作物が、アマ（アマ属）、ナタネ（アブラナ属）、ダイズ（ダイズ属（Glycine and Soja sp.））、ヒマワリ（ヒマワリ属）、ワタ（ワタ属）、トウモロコシ（Zea mays）、オリーブ（モクセイ科）、ベニバナ（ベニバナ属）、カカオ（Theobroma cacao）およびラッカセイ（ラッカセイ属）からなる群より選択される、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
不飽和脂肪酸の産生が増強される、請求項２１または２３記載の方法。
【請求項３０】
請求項１３記載のポリペプチドを含む組成物。
【請求項３１】
栄養補助食品として動物飼料中に用いられる、もしくは障害を有する患者を治療するために用いられる、請求項１２または１９記載の方法によって生産されたポリペプチドを含む組成物。
【請求項３２】
栄養補助食品として動物飼料中に用いられる、または障害を有する患者を治療するために用いられる、請求項２０記載の方法によって生産されたポリペプチドを含む組成物。
【請求項３３】
請求項22記載の方法によって作製された細胞を含む組成物。
【請求項３４】
動物飼料中に用いられる、請求項３０〜３３のいずれか一項記載の組成物。
【請求項３５】
栄養補助食品として用いられる、請求項３０〜３３のいずれか一項記載の組成物。
【請求項３６】
ヒトまたは動物の食事を補うために用いられる、請求項３０〜３３のいずれか一項記載の組成物。
【請求項３７】
障害を有する患者を治療するために用いられる、請求項３０〜３３のいずれか一項記載の組成物。
【請求項３８】
障害が、ストレス、糖尿病、癌、炎症性疾患および心血管疾患からなる群より選択される、請求項３７記載の組成物。
【請求項３９】
動物飼料として用いるための、請求項１８〜２３のいずれか一項記載の方法によって生産された不飽和脂肪酸を含む組成物。
【請求項４０】
栄養補助食品として用いるための、請求項１８〜２３のいずれか一項記載の方法によって生産された不飽和脂肪酸を含む組成物。
【請求項４１】
障害を有する患者の治療に用いるための、請求項１８〜２３のいずれか一項記載の方法によって生産された不飽和脂肪酸を含む組成物。
【請求項４２】
障害が、ストレス、糖尿病、癌、炎症性疾患および心血管疾患からなる群より選択される、請求項４１記載の組成物。
【請求項４３】
ヒトまたは動物の食事を補うために用いられる組成物を生産するための、請求項３０〜３３のいずれか一項記載の組成物の使用方法。
【請求項４４】
配列番号：3、5、または7のヌクレオチド配列の、少なくとも３０ヌクレオチド長の連続したヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチドを含み、不飽和化酵素ポリペプチドをコードする核酸分子を同定するためのハイブリダイゼーションプローブ、または不飽和化酵素ポリペプチドをコードする核酸分子の増幅または変異のためのPCRプライマーとして用いるための、単離された核酸分子。