(57)【要約】  下記式を有する６−置換エストラジオール化合物を用いたアルツハイマー病の治療方法を開示する。2017512769.tif 000032  当該方法は、リポタンパク質リパーゼまたはアポリポタンパク質Ｃ２の上方制御に関連する多様な疾患を治療するのに使用できる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効な量の式：
【化１】
2017512769.tif 000022
式中、
「ａ」環は、
【化２】
2017512769.tif 000023
からなる群より選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、スルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）、グルクロニド（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）、−ＯＨ、嵩高い基（ａ  ｂｕｌｋｙ  ｇｒｏｕｐ）、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ、ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）基、およびホスフィネート（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）基からなる群より選択され；
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、スルフェート、グルコロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２、および−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎからなる群より選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルコロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、および−ＮＨＮＨ２からなる群より選択され；
Ｙは、Ｈ、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）および−ＯＨからなる群より選択され；
Ｚは、Ｈおよびメチルからなる群より選択され；
ｍは、０〜２０の整数であり；
ｎは、０〜８の整数であり；
それぞれ、
記号
【化３】
2017512769.tif 000024
は、独立して、３または１７位でケト基を形成することができる、単結合または二重結合のいずれかを表し；および
記号
【化４】
2017512769.tif 000025
は、立体化学を問わない任意の形式の結合を表す；
を有する６−置換エストラジオール誘導体、ならびに前記化合物のそれぞれのエナンチオマー、他の立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体、および薬学的に許容される塩を、必要とする患者に投与することを含む、アルツハイマー病を予防または治療する方法。
【請求項２】
前記「ａ」環は、
【化５】
2017512769.tif 000026
であり；
Ｙは、−ＯＨであり；
Ｚは、メチルであり；
Ｒ１１は、Ｈであり；
Ｒ４は、Ｈ、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルからなる群より選択され；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、−ＯＨおよびハロからなる群より選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ハロおよび−ＯＨからなる群より選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；ならびに
ｎは、０〜４の整数である、
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキルＣ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３からなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記化合物は、
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
１−（（（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
１−（（（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−メトキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシオクチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イルステアリン酸塩；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル硫酸水素塩；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル硫酸水素塩；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；および
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
からなる群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記化合物は、（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールおよび（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールからなる群より選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
哺乳類のＬＰＬおよび／またはＡｐｏＣ２の機能活性を上方制御（ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）する方法であって、有効な量の式：
【化６】
2017512769.tif 000027
式中、
「ａ」環は、
【化７】
2017512769.tif 000028
からなる群より選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、スルフェート、グルクロニド、−ＯＨ、嵩高い基、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ、ホスフェート基、およびホスフィネート基からなる群より選択され；
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、スルフェート、グルコロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２、および−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎからなる群より選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルコロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２、−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３、および−ＮＨＮＨ２からなる群より選択され；
Ｙは、Ｈ、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）および−ＯＨからなる群より選択され；
Ｚは、Ｈおよびメチルからなる群より選択され；
ｍは、０〜２０の整数であり；
ｎは、０〜８の整数であり；
それぞれ、
記号
【化８】
2017512769.tif 000029
は、独立して、３または１７位でケト基を形成することができる、単結合または二重結合のいずれかを表し；および
記号
【化９】
2017512769.tif 000030
は、立体化学を問わない任意の形式の結合を表す；
を有する化合物、ならびに前記化合物のそれぞれのエナンチオマー、他の立体化学異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体および薬学的に許容される塩を、前記哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項７】
前記「ａ」環は、
【化１０】
2017512769.tif 000031
であり；
Ｙは、−ＯＨであり；
Ｚは、メチルであり；
Ｒ１１は、Ｈであり；
Ｒ４は、Ｈ、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルからなる群より選択され；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、−ＯＨおよびハロからなる群より選択され；
Ｒ３は、Ｈ、ハロおよび−ＯＨからなる群より選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；ならびに
ｎは、０〜４の整数である、
請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３からなる群より選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記化合物は、
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
１−（（（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
１−（（（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−メトキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシオクチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イルステアリン酸塩；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）ジオン；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル硫酸水素塩；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル硫酸水素塩；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール；および
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
からなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記化合物は、（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールおよび（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオールからなる群より選択される、請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２０１４年３月１９日に出願された米国仮特許出願番号６１／９５５，５７８号の優先権および利益を主張し、その全体は参照により本明細書に組み入れられる。
【０００２】
本願は、６−置換エストラジオール化合物およびこれらの薬学的に許容される塩またはプロドラッグを用いたアルツハイマー病（ＡＤ）の治療方法に関する。当該化合物は、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）および／またはＬＰＬを活性化するタンパク質であるアポリポタンパク質（ａｐｏｌｉｐｒｏｔｅｉｎ）Ｃ２（ＡｐｏＣ２）の上方制御を提供する。
【背景技術】
【０００３】
アルツハイマー病（ＡＤ）は、主に高齢者に影響を与える進行性の神経変性疾患である。ＡＤには２つの形態があり、それは早発型および遅発性である。早発性ＡＤはまれであり、早ければ２０代で感受性個体を襲い、遺伝子の小さなセットの変異としばしば関連する。遅発性、または自発的ＡＤは一般的であり、６０代または７０代で襲い、多くの遺伝的危険因子を有する多因子疾患である。遅発性ＡＤは、６５歳以上の人では認知症の主な原因である。アメリカの６５歳以上の人口のおよそ７〜１０％、およびアメリカの８０歳超の人口の４０％以下は、ＡＤに罹患している。疾患初期、患者は記憶および方向の損失を覚える。疾患が進行するにつれて、患者が完全に無能力となるまで、認知機能がさらに損なわれる。
【０００４】
脳の細胞外空間におけるアミロイドベータ（Ａβ）ペプチドの蓄積およびＡβ分子構成の変化が、ＡＤにおけるシナプスおよび認知の欠損の進行にとって決定的であることが広く許容されてきた。Ａβは、２種類のアスパルチルプロテアーゼ、βセクレターゼおよびγセクレターゼによるアミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）の連続的で制限されたタンパク質分解によって生成される。γセクレターゼによるタンパク質分解は最終のプロセス段階であり、Ａβの放出をもたらす。通常、γセクレターゼの切断は、４０アミノ酸長さのＡβタンパク質（Ａβ４０）および４２アミノ酸長さのＡβタンパク質（Ａβ４２）をもたらし、後者は老人斑における優勢種である（Ｉｗａｔｓｕｂｏ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ，１９９４  Ｎｅｕｒｏｎ  １３，４５−５３）。Ａβレベルは、生成および分解／クリアランス間のバランスによって決定づけられ、弱毒化したＡβ異化は、老化した脳におけるＡβの蓄積を引き起こすと示唆される（Ｔａｎｚｉ，Ｒ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ，２００４  Ｎｅｕｒｏｎ  ４３，６０５−６０８）。これまでの研究では、星状膠細胞およびミクログリアがＡβ４２を直接取り込んで分解すること（Ｗｙｓｓ−Ｃｏｒａｙ，Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ，２００３  Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９，４５３−４５７；Ｊｉａｎｇ，Ｑ．，  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｎｅｕｒｏｎ  ５８，６８１−６９３）、およびＡβの分解はエンドソーム−リソソーム区画で起こること（Ｍａｊｕｍｄａｒ，Ａ．，ｅｔ  ａｌ，２００７  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ  １８，１４９０−１４９６；Ｍａｎｄｒｅｋａｒ，Ｓ．，２００９  Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２９，４２５２−４２６２）が示されている。
【０００５】
リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）は、トリグリセリドの加水分解を触媒し、血管内でのリポタンパク質と硫酸化グリコサミノグリカン（ＧＡＧｓ）またはリポタンパク質受容体との「橋渡し分子」として機能することで細胞がリポタンパク質を取り込むのを媒介する（Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｋ．Ｊ．，ｅｔ  ａｌ，１９９２  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，１３２８４−１３２９２；Ｍｕｌｄｅｒ，Ｍ．，ｅｔ  ａｌ，１９９３  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，９３６９−９３７５）。硫酸化ＧＡＧｓは、細胞外マトリックス内および周辺組織（例えば、脂肪、心臓および骨格筋組織、および脳）の細胞表面上で通常発見されるプロテオグリカンの側鎖である。脳におけるＬＰＬの役割はこれまで知られていなかった。
【０００６】
興味深いことに、ＬＰＬはＡＤ脳の老人斑に蓄積することが示されている（Ｒｅｂｅｃｋ，Ｇ．Ｗ．，ｅｔ  ａｌ，１９９５  Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．３７，２１１−２１７）。さらに、ＬＰＬ遺伝子のコード領域の一塩基多型（ＳＮＰｓ）が、神経原線維変化および斑密度を含め、臨床的に診断されたＡＤ患者における疾患の発生、ＬＰＬ  ｍＲＮＡ発現レベル、脳コレステロールレベル、およびＡＤ病変の重症度と関連する（Ｂｌａｉｎ，Ｊ．Ｆ．，ｅｔ  ａｌ，２００６  Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４，１２４５−１２５１）。これらの結果から、ＬＰＬは脳において生理学的役割を有し、その変化がＡＤ病変と関連することが示唆される。
【０００７】
近年、研究者らは、ＬＰＬがＡβと相互作用して星状膠細胞におけるＡβの細胞取り込みおよび分解を促進するのかを確かめる実験を行い、ＬＰＬが、Ａβと複合体を形成し、ヘパラン硫酸およびコンドロイチン硫酸ＧＡＧ鎖に依存した機構を介して、マウス初代星状膠細胞においてＡβの細胞表面結合および取り込みを促進し、Ａβのリソソーム分解をもたらす証拠を発見した（Ｎｉｓｈｉｔｓｕｊｉ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ，２０１１  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６（８），６３９３−６４０１）。さらに、サイクリン依存性キナーゼ５（ＣＤＫ５）の活性向上がミクログリアにおけるＬＰＬの上方制御およびＡβの食作用促進に寄与するのに対し、ＣＤＫ５の阻害がＬＰＬ発現およびＡβの内在化を低減することが発見された。ゆえに、実行可能なＡＤ治療は、ＬＰＬの上方制御（および／またはＡｐｏＣ２、またはアポリポタンパク質Ｃ２、ＬＰＬを活性化するタンパク質）である。この目的を達成するために、スタチンのような化合物は、ＬＰＬ活性を刺激することが示されており、ゆえにＡＤ病変において役割を果たしうるかもしれない（Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ，１９９９  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ４５２，１６０−１６４；Ｍｅａｄ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ，２００２  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８０，７５３−７６９）。
【０００８】
これは、現行のＡＤ治療に比べて著しい進歩であろう。今日市販されているＡＤ治療専用薬であるＡｒｉｃｅｐｔ．ＲＴＭ、Ｃｏｇｎｅｘ．ＲＴＭ、Ｒｅｍｉｎｙｌ．ＲＴＭおよびＥｘｅｌｏｎ．ＲＴＭは、アセチルコリンエステラーゼ阻害剤である。これらの薬はＡＤの基礎病理に対処しない。これらは神経細胞が依然機能できるようその有効性を向上することはほとんどなく、疾患からの症状の緩和を提供するのみである。疾患は継続するため、これらの治療の恩恵はわずかである。
【０００９】
したがって、本明細書では、いくつかの６−置換エストラジオール誘導体がＬＰＬ（および／またはＡｐｏＣ２）の上方制御を提供することを開示する。エストロゲン受容体（ＥＲ）を安定的に発現する遺伝子組み換え３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞において、エストロゲン自身が、トリグリセリド蓄積と同様に、脂肪蓄積およびＬＰＬ  ｍＲＮＡの量を顕著に減少させることが過去に報告されているという点で、これは驚くべきことである（Ｈｏｍｍａ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ，２０００  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５（１５），１１４０４−１１４１１。以下に示すように、本開示は、ＡＤ治療のための異なる驚くべきアプローチを呈示し、それにより先行技術で示された欠陥に取り組む。
【発明の概要】
【００１０】
上述に照らし、本発明の目的は、治療上有効な量の６−置換エストラジオール誘導体を必要とする患者に投与することを含む、アルツハイマー病患者の治療方法を提供することにある。本発明の６−置換エストラジオール誘導体は、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）および／またはアポリポタンパク質Ｃ２（ＡｐｏＣ２）の上方制御を提供する。当業者であれば、本発明の１以上の態様がある目的を達成でき、その一方で１以上の他の態様が他のある目的を達成できることを、理解するであろう。それぞれの目的は、そのすべての点で、本発明のあらゆる態様に均等に適用されないこともある。このようにして、以下目的は、本発明のいずれか１つの形態について選択的に見ることができる。
【００１１】
したがって、本発明の一態様において、本明細書において開示される方法に用いられる６−置換エストラジオール誘導体は、式Ｉ：
【００１２】
【化１】
2017512769.tif 000002
【００１３】
式Ｉ中、
「ａ」環は、
【００１４】
【化２】
2017512769.tif 000003
【００１５】
からなる群より選択され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、独立して、水素、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロ、スルフェート、グルクロニド、−ＯＨ、嵩高い基（ａ  ｂｕｌｋｙ  ｇｒｏｕｐ）、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、−Ｎ（ＣＨ２）ｎ；ホスフェート基、およびホスフィネート基であり；
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６アルキル、ハロゲン、スルフェート、グルコロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ−、−ＮＨＣＮ−、−ＣＨＯ、＝ＣＨＯＣＨ３、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＮＨ２および−ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎからなる群より選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、ハロゲン、グルコロニド（ｇｌｕｃｏｒｏｎｉｄｅ）、−ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨ２、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、−ＣＨ２ＣＮ、−ＮＨＣＮ、−ＣＨＯ、−ＣＯＯ塩、−ＯＳＯ２アルキル、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−ＣＨ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］ＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−Ｎ（ＣＨ３）２、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−ＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−ＮＯ２，−ＳＣＮ、−ＳＯ２アルキル、−Ｂ（ＯＨ）２、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２、−ＮＨＣ（＝Ｓ）ＣＨ３および−ＮＨＮＨ２からなる群より選択され；
Ｙは、水素、＝Ｏ、−ＯＣＯ（Ｃ１−Ｃ２０アルキル）および−ＯＨから選択され；ならびに
Ｚは、水素またはメチルであり；
この際、
ｍは、０〜２０の整数であり、
ｎは、０〜８の整数であり、
記号
【００１６】
【化３】
2017512769.tif 000004
【００１７】
は３位および／または１７位でケト基を形成することができる単結合または二重結合のいずれかを表し；および
記号
【００１８】
【化４】
2017512769.tif 000005
【００１９】
は、立体化学に問わない任意の形式の結合を表す；
を有する化合物、ならびに前記化合物のそれぞれのエナンチオマー、他の立体異性体、水和物、溶媒和物、互変異性体および薬学的に許容される塩である。
【００２０】
本発明の他の態様において、当該方法は特に、エストロゲン受容体α（ＥＲ−α）およびエストロゲン受容体β（ＥＲ−β）の一方または両方と結合する化合物を提供する。かような方法は、ＬＰＬおよび／またはＡｐｏＣ２の発現のために、鍵であるシグナル経路に関与されるＲＮＡコード遺伝子への遺伝子転写を開始し、高め、または増進することを含んでもよい。
【００２１】
本発明の他の目的、特徴、恩恵および利点は、この要約および以下のいくつかの態様の記載から明らかであり、各種ステロイド化合物および関連する治療方法の知見を有する当業者にとって明白であろう。このような目的、特徴、恩恵および利点は、添付の実施例、データ、図面、または本明細書に組み込まれる文献の考慮と共に検討すれば、上述から明らかであろう。
【００２２】
（発明の詳細な説明）
別途に定義しない限り、本明細書で用いられる全ての技術的および科学的用語は、この発明が属する分野の当業者に一般的に理解されているのと同じ意味であり、後述の意味を持つものと理解される。本明細書で参照されるすべての刊行物および特許は、その全体が参照されて組み込まれる。特段の規定が無い限り、特定の化合物への参照は、これらのラセミおよび他の混合物を含む、その全ての異性体を含む。また、特段の規定が無い限り、特定の化合物への参照は、例えば本明細書で説明するように、これらのイオン性の、塩、溶媒和物（例えば、水和物）、保護された形態、プロドラッグ、および他の立体異性体を含む。
【００２３】
活性化合物に対応する塩（例えば、薬学的に許容される塩）を調製し、精製し、および／または取り扱うことが、便利であるか望ましいことがある。薬学的に許容される塩の例としては、Ｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９７７，「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  Ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ  Ｓａｌｔｓ，」Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，Ｖｏｌ．６６，ｐｐ．１−１９に詳しく述べられており、本明細書においても説明される。
【００２４】
本明細書中、疾患を治療する文脈において使用される用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療（ｔｈｅｒａｐｙ）」は、一般的に哺乳類被験体、ヒトまたは非ヒト動物（例えば、獣医学の応用）のいずれかの治療に関し、例えば、疾患の進行が阻害されるなど何らかの望ましい治療効果が達成され、さらに、進行速度の低下、進行速度の停止、疾患の改善、および／または疾患の治癒を含む。また、予防策としての治療も含まれる。治療は、組み合わせの治療を含み、例えば、順次または同時に、２以上の治療が組み合わされる。治療の例は、特に制限されるものではないが、化学療法（例えば、薬、（例えば免疫療法にあるような）抗体、抗炎症、（例えば３位または１７位などの適切な位置にリン酸誘導体およびホスフィネートなどの保護基を有する）プロドラッグ、光力学治療に用いられる他の化合物、ＧＤＥＰＴ、ＡＤＥＰＴなどの活性剤の投与）、手術、放射線治療、および遺伝子治療が挙げられる。
【００２５】
本明細書で用いられる「立体化学異性体（ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｓｏｍｅｒ）」という用語は、空間における原子の配向の仕方のみが互いに異なる異性体を意味する。本発明において特に重要な２つの立体異性体はエナンチオマーおよびジアステレオマーであり、２つの異性体が互いの鏡像体であるか否かに依存する。好ましい実施形態では、請求項に係る製剤は、単離され、光学分割され、および「実質的に他の異性体を含まない（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｆｒｅｅ  ｏｆ  ｏｔｈｅｒ  ｉｓｏｍｅｒｓ）」化合物を含む。
【００２６】
本明細書で用いられる「治療上有効な量」という用語は、活性化合物、または活性化合物を含む材料、組成物もしくは剤形の量に関し、これは合理的な利益／リスク比に見合う、何らかの望ましい治療効果を生じさせるのに有効である。「有効な量」という用語は、一般的に、検出可能な効果をもたらしうる量を意味する。
【００２７】
「患者」または「被験体」という用語は、哺乳類を含む動物を指し、好ましくはヒトである。
【００２８】
「組織」という用語は、一般的に、特定の機能を発揮しうる特殊化した細胞を指す。「組織」という用語は、個々の細胞または複数のもしくは凝集した細胞を指すこともあり、例えば、膜、血液または臓器である。また、「組織」という用語は、異常細胞または複数の異常細胞を含む。典型的な組織の例としては、乳腺細胞などの乳房組織、内皮および上皮を含む膜組織、ラミナ、間質組織を含む結合組織、脳組織ならびに腫瘍が挙げられる。
【００２９】
本発明中、「アルキル」とは、１〜２０個、および好ましくは１〜１２個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基を意味する。例としては、特に制限されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、２−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、および３−メチルペンチルが挙げられる。各アルキル基は、任意に、例えば、ハロ、シクロアルキル、アリール、アルケニル、またはアルコキシ基などの１個、２個、または３個の置換基で置換されてもよい。
【００３０】
「アリール」は、単環（例えば、フェニル）、多環（例えば、ビフェニル）、または少なくとも１つが芳香族である複数の縮合環（例えば、１，２，３，４−テトラヒドロナフチル）を有する、芳香族炭素環基を意味する。また、アリール基は、任意に、例えば、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはアルコキシなどで、１置換、２置換または３置換されてもよい。
【００３１】
「ヘテロアリール」は、窒素、酸素または硫黄から選択されるヘテロ原子を少なくとも１個、最大で４個まで含む、５員環、６員環または７員環の、１または複数の縮合芳香族環系を意味する。例としては、特に制限されないが、フラニル、チエニル、ピリジニル、ピリミジニル、ベンズイミダゾリルおよびベンゾオキサゾリルが挙げられる。また、ヘテロアリール基は、任意に、例えば、ハロ、アルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはアルコキシなどで、１置換、２置換、または３置換されてもよい。
【００３２】
「シクロアルキル」は、単環（例えば、シクロヘキシル）、多環（例えば、ビシクロヘキシル）、複数の縮合環（例えば）を有する、炭素環基を意味する。シクロアルキル基は、任意に、１〜４個のヘテロ原子を含んでもよい。加えて、シクロアルキル基は、１以上の二重結合を有していてもよい。また、シクロアルキル基、任意に、例えば、ハロ、アルキル、アルケニル、アリールまたはアルコキシなどで、１置換、２置換、または３置換されてもよい。
【００３３】
「アルコキシ」は、アルキル部分を有するオキシ含有基を意味する。例としては、特に制限されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシおよびｔｅｒｔ−ブトキシが挙げられる。また、アルコキシ基は、任意に、例えば、ハロ、アリール、シクロアルキルまたはアルコキシなどで、１置換、２置換、または３置換されてもよい。
【００３４】
「アルケニル」とは、２〜２０個、および好ましくは２〜６個の炭素原子、ならびに１〜３個の二重結合を有する直鎖または分枝鎖の炭化水素基を意味し、例えばエテニル、プロペニル、１−ブト−３−エニル、１−ペント−３−エニル、１−ヘキス−５−エニルが挙げられる。また、アルケニル基は、任意に、例えば、ハロ、アリール、シクロアルキルまたはアルコキシなどで、１置換、２置換、または３置換されてもよい。
【００３５】
「ハロ（ｈａｌｏ）」または「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を有するハロゲン基である。
【００３６】
「グルクロニド（ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）」は、グルクロン酸のグルコシド基を意味する。
【００３７】
「スルフェート（ｓｕｌｆａｔｅ）」という用語は、一般式−ＯＳ（Ｏ）２−ＯＲ’を有する基を指し、式中、Ｒ’は水素、金属またはアルキル基である。
【００３８】
「ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）」という用語は、一般式−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）２を有する基を指し、式中、各Ｒ’は独立して水素、金属またはアルキル基である。
【００３９】
「ホスフィネート（ｐｈｏｓｐｈｉｎａｔｅ）」という用語は、一般式−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ’）２を有する基を指し、式中、各Ｒ’は独立して水素、金属またはアルキル基である。
【００４０】
「嵩高い基（ｂｕｌｋｙ  ｇｒｏｕｐ）」は、それが結合している空間について立体障害を生じさせる置換基（例えば、ｔ−ブチル基）を指す。
【００４１】
本明細書で用いられる「アミノアルキル（ａｍｉｎｏ  ａｌｋｙｌ）」という用語は、アミノ基がそこに付いたアルキル基（例えば、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２−、Ｈ２Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−、Ｍｅ２ＮＣＨ２−など）を指し、この際、接続点はアルキル鎖の炭素である；本明細書で用いられる「アルキルアミノ（ａｌｋｙｌ  ａｍｉｎｏ）」という用語は、窒素原子に接続したアルキル基を有するアミノ基（例えば、ＣＨ３ＮＨ−、ＥｔＮＨ−、ｉＰｒ−ＮＨ−など）を指し、この際、接続点はアミノ基の窒素原子を経由する。連結した基が用いられる全ての他の用語は、類似の規則に従う。
【００４２】
本発明の一実施形態において、治療上有効な量の式Ｉを有する６−置換エストラジオール誘導体を必要とする患者に投与することを含む、患者のアルツハイマー病を治療または予防する方法が望ましい。好ましくは、当該方法は、哺乳類のＬＰＬおよび／またはＡｐｏＣ２の機能活性の上方制御を提供し、前記方法は、有効な量の式Ｉを有する化合物を前記哺乳類に投与することを含む。
【００４３】
また、アミロイド斑の構築に関与する他の疾患が式Ｉを有する化合物によって治癒されてもよく、特に制限されないが、例えば、レビー小体型認知症、封入体筋炎、脳アミロイド血管症が挙げられる。
【００４４】
本発明の一実施形態において、当該方法の化合物は、下記式（Ｉａ）：
【００４５】
【化５】
2017512769.tif 000006
【００４６】
式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＸおよびＹは、上記の式（Ｉ）で定義したものと同様である、
で示される一般的構造を有する。
【００４７】
さらにより好ましくは、
Ｙは、＝Ｏおよび−ＯＨから選択され；
Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；
ｎは、０〜８の整数であり；および
記号
【００４８】
【化６】
2017512769.tif 000007
【００４９】
は単結合または二重結合のいずれかを表す、
で示される一般構造を有する。
【００５０】
さらにより好ましくは、
Ｙは、（Ｓ）−ＯＨであり；
Ｒ４は、水素またはアルキルから選択され；
Ｒ２は、水素であり；
Ｒ３は、水素であり；および
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；
ｎは、０〜４の整数であり；および
Ｃ−１３メチルは（Ｓ）型立体配置である。
【００５１】
本発明の別の実施形態は、式（Ｉｂ）：
【００５２】
【化７】
2017512769.tif 000008
【００５３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、上記の式（Ｉ）で定義したものと同様である、
を有する化合物を用いる方法を対象とする。
【００５４】
さらにより好ましくは、
Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；
Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、水素およびハロから選択され；Ｒ３は水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である。
【００５５】
さらにより好ましくは、
Ｒ１は、水素であり；
Ｒ４は、水素またはアルキルから選択され；
Ｒ２は、水素であり；
Ｒ３は、水素であり；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜１２の整数であり；
ｎは、０〜４の整数であり；ならびに
Ｃ−１３メチルおよびＣ−１７ヒドロキシルは、（Ｓ）型立体配置である。
【００５６】
本発明のさらに別の実施形態は、式（Ｉｃ）：
【００５７】
【化８】
2017512769.tif 000009
【００５８】
式中、Ｒ１１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは上記の式（Ｉ）で定義したものと同様である、
を有する化合物を用いる方法を対象とする。
【００５９】
さらにより好ましくは、
Ｒ１１は、水素またはＣ１−Ｃ６アルキルであり；
Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、水素およびハロから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である。
【００６０】
さらにより好ましくは、
Ｒ１１は、水素であり；
Ｒ４は、水素またはアルキルから選択され；
Ｒ２は、水素であり；
Ｒ３は、水素であり；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは１〜１２の整数であり；
ｎは０〜４の整数であり；ならびに
Ｃ−１３メチルおよびＣ−１７ヒドロキシルの両方は、（Ｓ）型立体配置である。
【００６１】
本発明のさらに別の実施形態は、式（Ｉｄ）：
【００６２】
【化９】
2017512769.tif 000010
【００６３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＸは、上記の式（Ｉ）で定義したものと同様である、
を有する化合物を用いる方法を対象とする。
【００６４】
さらにより好ましくは、
Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；
Ｒ２は、水素およびハロから選択され；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルキニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である。
【００６５】
さらにより好ましくは、
Ｒ１およびＲ２は、水素であり；
ｍは、１〜１２の整数であり；
ｎは、０〜４の整数であり；ならびに
Ｃ−１３メチルおよびＣ−１７ヒドロキシルの両方は、（Ｓ）型立体配置である。
【００６６】
本発明のさらに別の実施形態は、式（Ｉｅ）：
【００６７】
【化１０】
2017512769.tif 000011
【００６８】
式中、ｍ、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、上記の式（Ｉ）で定義したものと同様であり、かつ、Ｚは、−Ｏ−、−Ｓ−および−ＮＨ−から選択される、
を有する化合物を用いる方法を対象とする。
【００６９】
さらにより好ましくは、
ｍは、１〜１２であり、
ｎは０〜４であり、
Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；
Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、水素およびハロから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；
Ｚは、−Ｏ−および−Ｓ−から選択され；ならびに
Ｃ−１３メチルおよびＣ−１７ヒドロキシルの両方は、（Ｓ）型立体配置である。
【００７０】
本発明のさらに別の実施形態は、式（Ｉｆ）：
【００７１】
【化１１】
2017512769.tif 000012
【００７２】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸは、上記の式（Ｉ）で定義したものと同様である、
を有する化合物を用いる方法を対象とする。
【００７３】
さらにより好ましくは、
Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；
Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、水素およびハロから選択され；
Ｒ３は、水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびに
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である。
【００７４】
さらにより好ましくは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素であり；
ｍは、１〜１２の整数であり；ならびに
ｎは、０〜４の整数である。
【００７５】
本発明のさらに別の実施形態は、式（Ｉｇ）：
【００７６】
【化１２】
2017512769.tif 000013
【００７７】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１１およびＸは、上記の式（Ｉ）で定義したものと同様である、
を有する化合物を用いる方法を対象とする。
【００７８】
さらにより好ましくは、
Ｒ１は、水素、−ＯＨおよびハロから選択され；
Ｒ４は、水素、ハロおよびＣ１−Ｃ６アルキルから選択され；
Ｒ２は、水素およびハロから選択され；
Ｒ３は水素、ハロおよび−ＯＨから選択され；ならびに
ＸはＣ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍＣＯＯＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルケニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−Ｃ２−Ｃ８アルキニル−Ｎ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＮＨ２、−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＮＨ２、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨ３、ＮＨ（ＣＨ２）ｍＯＣＨ３、−ＮＨ（ＣＨ２）ｍＣＨＯＨ−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍ（ＮＨ）ＣＨ２ＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｍＮ（ＣＨ３）−ＳＯ２−ＮＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−ＳＯ２−ＮＨ２から選択され；
Ｘは、Ｃ１−Ｃ１２アルキル、Ｃ２−Ｃ１２アルケニル、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｍ−Ｏ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３、（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｍ−Ｓ−（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され；
ｍは、１〜２０の整数であり；
【００７９】
【化１３】
2017512769.tif 000014
【００８０】
は＝Ｏまたは−ＯＨのいずれかであり；ならびに
ｎは、０〜８の整数である。
【００８１】
さらにより好ましくは、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、水素であり；
ｍは、１〜１２の整数であり；および
ｎは、０〜４の整数である。
【００８２】
式（Ｉ）および（Ｉａ）〜（Ｉｆ）を有する化合物の具体例としては、以下に示されるものである：
【００８３】
【化１４−１】
2017512769.tif 000015
【００８４】
【化１４−２】
2017512769.tif 000016
【００８５】
【化１４−３】
2017512769.tif 000017
【００８６】
本発明の実施形態の化合物は、医薬組成物に用いられてもよい。かような組成物は、上述したもの、以下に示すもの、またはそうでなければ本明細書から推測されるもの、およびこれらの組み合わせから選択される１以上の化合物を含んでもよい。いくつかの実施形態では、かような化合物はＳおよびＲエナンチオマーとして存在してもよく、好ましくは他の異性体が実質的に無い単離および精製された形態である。
【００８７】
本発明の化合物は、不斉中心を有してもよく、（ＣｈｅｍＤｒａｗ  Ｕｌｔｒａ，Ｖｅｒｓｉｏｎ  １１．０（３）または１２．０で名づけられた）以下のものなど、ラセミ化合物、ラセミ混合物として、または単体および精製されたジアステレオマーもしくはエナンチオマーとして生じてもよい：
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン（化合物１）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１５，１６−オクタヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７（１４Ｈ）−オン（化合物２）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物４）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物５）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１７−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物６）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物７）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（ヒドロキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物８）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物９）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１０）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１１）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物１２）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（アミノオキシ）メチル）−１７−ヒドロキシ−１３−メチル−６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−ドデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−オン（化合物１３）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１４）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（（（メトキシメチル）アミノ）メチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１５）；
１−（（（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン（化合物１６）；
１−（（（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３，１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）メチル）アミノ）プロパン−２−オン（化合物１７）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−メトキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１８）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（２−メトキシエチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物１９）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（４−メトキシブチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２０）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２１）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシオクチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２２）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−３−ヒドロキシ−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−１７−イルステアリン酸塩（化合物２３）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン（化合物２４）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６−デカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７（６Ｈ）−ジオン（化合物２５）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２６）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチル−４，５，６，７，８，９，１０，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−テトラデカヒドロ−３Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２７）；
（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル硫酸水素塩（化合物２８）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１３−メチル−１７−オキソ−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３−イル硫酸水素塩（化合物２９）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（４−プロポキシブチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３０）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−１３−メチル−６−（５−エトキシペンチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３１）；
（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１０Ｒ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（メトキシメチル）−１０，１３−ジメチルヘキサデカヒドロ−１Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３２）；および
（６Ｒ，８Ｓ，９Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（メトキシメチル）−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物３３）。
【００８８】
本発明の方法の化合物は、（参照によって本明細書に組み込まれる）Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１２／６２７，８７４に記載されるように調製され、エストラジオールの６−ヒドロキシメチル、６−アルコキシアルキル、６−アルキルチオアルキル、６−アミノメトキシ、６−メチルアミノメトキシ、または６−メトキシアミン誘導体を調製する方法に関する。エストラジオール誘導体を調製する反応スキームを以下、スキーム１〜３に示す。かような方法は、エストラジオールのｔ−ブチルジメチルシリル誘導体をＬＩＤＡＫＯＲ／ＴＨＦ／ホルムアルデヒドと反応させて６−ヒドロキシル化された化合物を得た後、（ｉ）加水分解してエストラジオールの６−ヒドロキシメチル誘導体を得る；および／または（ｉｉ）硫酸ジメチルで処理した後、加水分解してエストラジオールの６−メチルオキシメチル誘導体を得る；といった段階を経ることを含んでもよい。化合物１は、化合物３をＣ−１７ヒドロキシル位にてさらに酸化することによって得ることができる。化合物３３および他のジメチル化合物は、（参照によって本明細書に組み込まれる）Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１３／２３２，７９８に従って調製することができる。
【００８９】
代わりのアプローチとして、本発明に係る化合物は、（ｉ）エストラジオール化合物を保護し、（ｉｉ）保護されたエストラジオール化合物のベンジルの６位を、ＬＩＤＡＫＯＲ／ブチルリチウム／ジイソプロピルアミン／ｔｅｒｔ−アミラートカリウムでアシル化し、（ｉｉｉ）水素化アルミニウムリチウムで６位アルデヒドを還元し、（ｉｖ）前記エストラジオール化合物の保護部位を脱保護する；といった段階を含む方法によっても調製してもよい。エストラジオール誘導体を調製するための反応スキームを、以下のスキーム２に示す。
【００９０】
本発明に係る化合物は、以下のスキームに表されるような方法に従うことで合成できる。
【００９１】
【化１５−１】
2017512769.tif 000018
【００９２】
【化１５−２】
2017512769.tif 000019
【００９３】
この発明に従えば、各種のアルキルオキシアルキル誘導体は、アルキル化試薬の選択を含む。かような誘導体は、この発明を認識する当業者によって理解されるであろうし、本明細書に記載された種類の合成手順を通して入手可能である。従って、限定することなく、各種Ｃ１−Ｃ６アルキルおよび置換アルキル試薬を本明細書に記載のように用いて、対応するアルキルオキシアルキル誘導体を調製することができる。
【００９４】
本発明の別の態様において、エストラジオールの６−アミノ誘導体を調製する方法は、下記の反応スキームで開示される。従って、スキーム１〜２に記載の６−メトキシル化エストラジオールが用いられ、それらの各アミノ誘導体へ変換される。
【００９５】
【化１６】
2017512769.tif 000020
【００９６】
アルツハイマー病および関連する疾患を予防するための方法および化合物が提供される。本発明の一態様において、細胞内でＬＰＬタンパク質遺伝子および／またはＡｐｏＣ２タンパク質遺伝子をコードするＲＮＡへの遺伝子転写を開始し、高め、または増進する方法が提供され、当該方法は、有効な量の式（Ｉ）および（Ｉａ）〜（Ｉｆ）から選択される６−置換エストラジオール誘導体を細胞と接触させることを含む。かような遺伝子転写を開始し、高め、または増進することは、これらの遺伝子の１つ以上で起こってもよいことを理解すべきである。
【００９７】
本明細書に記載のように、この発明の化合物の塩は、非毒性の「薬学的に許容される塩」を指す。しかしながら、その他の塩も、本発明に係る化合物またはこれらの薬学的に許容される塩の調製に有用でありうる。本発明の化合物が塩基性基を含む場合、「薬学的に許容される塩」との用語に含まれる塩は、適切な有機酸または無機酸と遊離塩基とを反応させることで通常調製される、非毒性の塩を指す。代表的な塩は、当該技術分野で公知のいかなるかような塩も含む。本発明の化合物が酸性部分を有する場合、これらの適切な薬学的に許容される塩は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩またはマグネシウム塩）；および適切な有機リガンドと形成される塩（例えば、第四級アンモニウム塩）などが挙げられうる。
【００９８】
本明細書に記載のように、本発明の化合物は、他の薬剤または哺乳類被験体の治療計画を高める他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。例えば、当該方法の化合物は、他のエストロゲン受容体βモジュレーターと組み合わせて使用してもよい。かような組み合わせの個々の成分は、患者またはかような治療を必要とするかような患者の部位に、治療経過中の異なる時点で別々に、または分割されたもしくは単一の組み合わせ形態で同時に投与されてもよい。ゆえに、本発明は、同時治療または交互治療の全てのかような計画を包含するものと理解されるべきであり、「投与」という用語はそれに応じて解釈される。この発明の化合物と、標的とする疾患を治療するのに有用な他の薬剤とを組み合わせる範囲は、原則として、エストロゲン機能に関連する疾患を治療するために有用ないかなる医薬組成物とのいかなる組み合わせも含むことが理解されるであろう。
【実施例】
【００９９】
以下の非限定的な例およびデータは、本発明の化合物、組成物および／または方法に関する様々な態様および特徴を示し、本明細書に記載の手順を通じて入手可能な６−置換エストラジオール誘導体の合成を含む。本発明の化合物および方法は、先行技術と比較して、驚くべきであり、予測不可能であり、かつそれらに反する結果およびデータを提供する。本発明の有用性は、いくつかの化合物、それらの部分および／または置換基の調製ならびに使用を通じて示されるが、各種の他の化合物、部分および／または置換基についても同等の結果が得られ、それはこの発明の範囲に見合うものであることが当業者によって理解されるであろう。
【０１００】
上述のように、当該方法の化合物は、Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１２／６２７，８７４およびＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１３／２３２，７９８に開示された手順に従って調製される。上述の合成スキームおよびＵ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．１２／６２７，８７４にあるものを詳しく実証するため、実施例１では化合物２１の調製を提供する。
【０１０１】
＜実施例１＞
［化合物２１の調製方法］
ａ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン
クロロメチルメチルエーテル（７．０ｍＬ、９２．０ｍｍｏｌ）を、β−エストラジオール（５ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１６．０ｍｌ  ９２ｍｍｏｌ）の溶液（ＴＨＦ１００ｍＬ中）に加える。反応混合物を加熱して還流させ、１８時間攪拌する。ＴＨＦを真空下で除去し、黄色／褐色のオイルを水およびＣＨ２Ｃｌ２に分配する。有機層を分離し、塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、金色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、粘性のある透明なオイル（５．７ｇ、８６％）として表題の化合物が得られる。
【０１０２】
ｂ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オール
アルゴン下で−７８℃に冷却されたカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（８．８７ｇ、７９．０ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（１１．２ｍＬ、７９．０ｍｍｏｌ）の溶液（無水ＴＨＦ８０ｍＬ中）に、ｎ−ブチルリチウム（４９．４ｍＬ、７９．０ｍｍｏｌ、ヘキサン中１．６Ｍ）を滴下して加える。反応混合物を、−７８℃で３０〜４５分間攪拌する。その後、ａ）由来化合物（５．７ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）の溶液（ＴＨＦ４５ｍＬ中）を滴下して加え、反応混合物を−７８℃で３時間攪拌する。ａ）由来化合物を添加している間、反応は深い赤色に変化する。その後、ホウ酸トリメチル（１０．６ｍｌ、９４．８ｍｍｏｌ）をゆっくり加え、混合物を０℃まで温め、２時間攪拌する。その後、過酸化水素（３０％水溶液で２４ｍＬ）を加え、反応混合物を室温まで温め、さらに１時間攪拌する。反応を０℃まで冷却し直し、１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液（７０ｍｌ）で注意深くクエンチする。得られる混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、混合有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、金色／褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、白色固体（３．５ｇ、５９％）として表題の化合物が得られる。
【０１０３】
ｃ）（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン
デス・マーチン・ペルヨージナン（９．４６ｇ、２２．３ｍｍｏｌ）を、ｂ）由来化合物（７．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）の溶液（ＣＨ２Ｃｌ２３００ｍＬ中）に少しずつ加える。得られる反応混合物を室温で３時間攪拌する。混合物を水に注ぎ、層を分離する。水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出し、混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、べたつく褐色の固形物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、淡黄色の粘性のあるオイル（６．０ｇ、８６％）として表題の化合物が得られる。
【０１０４】
ｄ）エチル２−（（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イリデン）アセテート
ホスホノ酢酸トリエチル（４．１ｍｌ、２０．８ｍｍｏｌ）を、室温で水素化ナトリウム（８３２ｍｇ、２０．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）混合物へ加える。約１０分後、ｃ）由来化合物（３．９ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）の溶液（ＴＨＦ１０ｍＬ中）を、滴下して加える。得られる反応混合物を加熱してシールしたチューブ内で７２時間還流する。混合物を真空下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから４０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘへのグラジエント）により精製することで、透明な粘性のオイル（３．４ｇ、７４％）として表題の化合物が得られる。
【０１０５】
ｅ）２−（（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イリデン）エタノール
ｄ）由来化合物（３．１ｇ、６．９７ｍｍｏｌ）の溶液（ＴＨＦ６５ｍＬ中）について、水素化アルミニウムリチウム（５．２ｍＬ、１０．４６ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中２Ｍ）を０℃で滴下して処理する。冷却浴を取り除き、反応混合物を室温で１５分間攪拌する。反応を０℃まで冷却し直し、水１．３ｍＬ、２Ｎ  ＮａＯＨ  ２．６ｍＬ、水１．３ｍＬを順に注意深く加えてクエンチする。白色の固形分が形成するまで、混合物を激しく攪拌する。混合物を濾過し、濾過物を真空下で濃縮することで、透明なオイル（２．８ｇ、９９％）として表題の化合物が得られる。
【０１０６】
ｆ）２−（（６Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）アセトアルデヒド
ｅ）由来化合物（３．０９ｇ、７．６８ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（５００ｍｇ）の混合物（酢酸エチル１００ｍＬ中）を、４０ｐｓｉのＨ２（ｇ）下、室温で５時間撹拌する。混合物をセライトを通じて濾過し、前記セライトを酢酸エチルで十分に洗浄する。濾過物を真空下で濃縮することで、淡黄色のオイル（３．１ｇ）が得られる。前記オイルをジクロロメタン１００ｍＬに溶解させ、デス・マーチン・ペルヨージナン（３．９ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。得られる反応混合物を室温で３０分間攪拌する。混合物を水に注ぎ、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出する。混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、褐色の固形物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（１５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ）による精製によって、透明なオイル（２．０ｇ、６５％）として表題化合物が得られる。
【０１０７】
ｇ）４−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ブト−２−エン−１−オール
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（１８．４ｍＬ、１８．４ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を、（２−ヒドロキシエチル）トリフェニルホスホニウムブロミド（３．３７ｇ、８．７０ｍｍｏｌ）の懸濁物（ＴＨＦ６０ｍＬ中）に０℃で滴下して加える。１時間後、金褐色溶液について、ｆ）由来化合物（１．４ｇ、３．４８ｍｍｏｌ）の溶液（ＴＨＦ１０ｍＬ中）を滴下して処理する。得られる反応混合物を０℃で４０分間攪拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。得られる混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、混合有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから７５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘへのグラジエント）による精製によって、黄色の粘性のオイル（６８０ｍｇ、４５％）として表題の化合物が得られる。
【０１０８】
ｈ）４−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ブト−２−エナール
デス・マーチン・ペルヨージナン（４３７ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を、ｇ）由来化合物（３７０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）の溶液（ＣＨ２Ｃｌ２１５ｍＬ中）に室温で加える。得られる反応混合物を１０分間攪拌した後、水に注ぐ。層を分離し、水層をＣＨ２Ｃｌ２（２×）で抽出する。混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、真空下で蒸発させ、褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から１０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２へのグラジエント）による精製によって、淡黄色の粘性のオイル（３５８ｍｇ、８６％）として表題の化合物が得られる。
【０１０９】
ｉ）６−（（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−イル）ヘキサ−２，４−ジエン−１−オール
リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（４．３ｍｌ、４．２９ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を、（２−ヒドロキシエチル）トリフェニルホスホニウムブロミド（７８６ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）の懸濁物（ＴＨＦ１４ｍＬ中）に０℃で滴下して加える。３０分後、金褐色の溶液について、ｈ）由来化合物（３４５ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の溶液（ＴＨＦ２ｍＬ中）を滴下して処理する。得られる反応混合物を０℃で２０分間攪拌し、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液でクエンチする。得られる混合物をＥｔＯＡｃ（２×）で抽出し、混合有機抽出物を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて褐色のオイルを得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２から４０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２へのグラジエント）による精製によって、黄色の粘性のオイル（１４０ｍｇ、３８％）として表題の化合物が得られる。
【０１１０】
ｊ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキサ−２，４−ジエン−１−イル）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン
ｉ）の化合物（１３５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の溶液を０℃まで冷却し、水素化ナトリウム（１２０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を少しずつ加える。５〜１０分後、ヨードメタン（０．１９ｍｌ、３．０ｍｍｏｌ）を滴下して加え、得られる反応混合物を室温まで温め、４時間攪拌する。ＥｔＯＡｃを加え、水で反応を注意深くクエンチする。層を分離し、有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させて褐色のオイル状残留物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（５％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘから２０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘへのグラジエント）による精製によって、透明のオイル（９２ｍｇ、６５％）として表題の化合物が得られる。
【０１１１】
ｋ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン
ｊ）由来化合物（９０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（１００ｍｇ）の混合物（酢酸エチル５〜１０ｍＬ中）を、Ｈ２（ｇ）のバルーン下において１６時間室温で撹拌する。混合物はセライトを通じて濾過し、前記セライトを酢酸エチルで十分に洗浄する。濾過物を真空下で濃縮することで、透明なオイル（９０ｍｇ、９９％）として表題の化合物が得られる。
【０１１２】
ｌ）（６Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ）−６−（６−メトキシヘキシル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（化合物２１）
ｋ）由来化合物（９０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液（６Ｎ  ＨＣｌおよびＴＨＦ各１．５ｍＬ中）を５時間室温で撹拌する。反応混合物を水で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２×）で抽出する。混合有機抽出物を乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、濾過し、蒸発させ、透明なオイル状の残留物を得る。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２から３０％ＥｔＯＡｃ／ＣＨ２Ｃｌ２へのグラジエント）による精製によって、白色の固形泡状物（３８ｍｇ、５２％）として化合物２１が得られた。
【０１１３】
＜実施例２＞
［化合物３および４の調製方法］
スキーム２に概説したように、エストラジオール誘導体化合物３および４は、以下のような手順で合成される。保護されたエストラジオール化合物は、トルエンスルホン酸またはカンファースルホン酸を触媒として用い、ＴＨＦ中のジヒドロピランとβ−エストラジオールとの反応によって調製される。当業者が理解できるように、この反応は、平衡反応であり、そのような条件下では完全には進まない。従って、両方のモノ保護エストラジオールが、反応混合物に見出される。このような粗反応混合物は、アセトニトリルとの粉砕段階を経て、所望のビス−ＴＨＰエストラジオールをもたらし、約７０％の収率で結晶化する。
【０１１４】
スキーム２に示すように、ＬｉＤＡＫＯＲ（ブチルリチウム、ジイソプロピルアミン、およびｔｅｒｔ−アミラートカリウム）と呼ばれる強塩基の混合物を用いたベンジル６位のアシル化を経て、重要な中間体が得られる。−７０℃のような条件下で、当業者は、ベンジル位のプロトン引き抜きを理解することができる。中間体は、その後、カラムクロマトグラフィーにより精製されて約５０％の収率でシロップとなり、少量の不純物およびカラム溶媒を依然含む。過剰の水素化アルミニウムリチウムによってアルデヒドを還元することで、高収率でラセミのヒドロキシメチルエストラジオール化合物を得られる。
【０１１５】
化合物３および４を調製する目的で、水素化ナトリウムおよびヨウ化メチルでヒドロキシメチルエストラジオール化合物をメチル化することで、メトキシメチル化合物は調製される。メトキシメチル化合物は、カラムクロマトグラフィーにより精製され、ガラス状の泡状物を与える。保護基を脱保護することで、ラセミの６−メトキシメチルエストラジオール化合物が得られる。エナンチオマーの分離はキラル分取ＨＰＬＣを用いて行われ、化合物３および４が得られる。化合物４については、＞９５：５  Ｒ：Ｓのキラル純度を実現する。化合物３については、８６：１４  Ｓ：Ｒのキラル純度を実現する。それは、４−および６−プロトンの診断に用いる６位の絶対立体化学を決定するためのＮＭＲを採用する当業者のレベルの十分な範囲内である。
【０１１６】
＜実施例３＞
［肺、膵臓、および卵巣腫瘍細胞株における化合物の発現プロファイリング］
研究は、３種類のヒト腫瘍細胞株：Ａ５４９、Ｐａｎｃ−１、およびＳＫ−ＯＶ−３を含む。株は、それぞれ２つのフラスコ内で約４０％コンフルエントまで培養して成長させる。フラスコの１つは、様々な濃度（すなわち１０μＭ、２０μＭ、５０μＭ、１００μＭ、または２００μＭ）で化合物を培地に添加することで処理される。もう一方の、模擬処理フラスコは、薬を可溶化させ運搬するために使用される賦形剤のみで処理される。処理済みおよび未処理のサンプルのペアから抽出したＲＮＡは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｗｈｏｌｅ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ（Ｇ４１１２Ｆ）のマイクロアレイ分析に供される。各分析は、アレイ上の４１，０００の特異的ｍＲＮＡディテクターの各々について、メッセンジャーＲＮＡの存在量の差を報告する。各細胞株についての未処理サンプルに対する処理サンプルのこの直接比較は、薬処理に起因するｍＲＮＡ存在量の変動の非常に敏感な検出を提供する。各細胞株の比較は自動正規化されるため、高信頼性でサンプル間で結果を比較できる。
【０１１７】
［細胞調製］
３種類のヒト腫瘍細胞株（Ａ５４９、Ｐａｎｃ−１、およびＳＫ−ＯＶ−３）を、それぞれ２つのフラスコ内で約４０％コンフルエントまで培養して成長させる。フラスコの一つは、１０μＭ、５０μＭ、または１００μＭの濃度で化合物を培地に添加することで処理される。もう一方の、模擬処理フラスコは、薬を可溶化させ運搬するために使用される賦形剤のみで処理される。全てのフラスコを、さらに２４時間培養後、こすり取って遊離させ、氷冷ＰＢＳ中で洗浄後、遠心分離によって回収する。採取した細胞は、すぐに冷凍し、−８０℃以下の低温で保管する。
【０１１８】
［ＲＮＡ精製］
Ｔｒｉｚｏｌ系の細胞溶解を使い、冷凍組織サンプルからトータルＲＮＡを調製し、続けて６５℃熱フェノール抽出、ＲＮｅａｓｙクロマトグラフィー精製する。精製ＲＮＡサンプルを、分光光度法で分析する。ＲＮＡ濃度は、２６０ｎｍ（Ａ２６０）の吸光度を測定することで求める。ｐＨ１１で測定した際、２６０ｎｍで１ユニットの吸光度を示せば、ｍｌ当りＲＮＡ３５μｇに相当する。
【０１１９】
［ＲＮＡ品質評価−Ａ２６０／Ａ２８０吸光度比］
２６０ｎｍおよび２８０ｎｍでの測定値の比（Ａ２６０／Ａ２８０）は、タンパク質などのＵＶを吸収する夾雑物に対するＲＮＡの純度の推定を与える。ＲＮＡは、理論上のＡ２６０／Ａ２８０比（１０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−Ｃｌ、ｐＨ７．５）が約２．１である。Ａ２６０／Ａ２８０比が１．８以上である抽出後ＲＮＡは、このアッセイにおいて優れた結果を提供する。
【０１２０】
［ＲＮＡ品質評価−キャピラリー電気泳動］
キャピラリー電気泳動（Ａｇｉｌｅｎｔ  ＢｉｏＡｎａｌｙｚｅｒ）を用いて、インタクトな２８Ｓおよび１８ＳリボソームＲＮＡの比を求めることで、前記ＲＮＡは相対的な完全性が評価される。完全にインタクトなＲＮＡは、２８Ｓ／１８Ｓ比が２．２である。アレイ分析に受け入れられるＲＮＡは全て１を超える比を有し、これは２８Ｓ／１８Ｓ比の異なるサンプル間で内部再現性を総括することで決定される、信頼性のある再現可能なマイクロアレイ結果についての最小の２８Ｓ／１８Ｓ比である。
【０１２１】
［プローブ製造およびチップハイブリダイゼーション］
全てのＲＮＡは、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｌｏｗ  Ｉｎｐｕｔ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ反応への投入量として、１マイクログラムのＲＮＡを使って標識する。
【０１２２】
試験ＲＮＡはＣｙ５（６５０ｎｍエミッタ）で標識し、参照ＲＮＡはＣｙ３（５５０ｎｍエミッタ）ヌクレオチドで標識化する。標識化、ハイブリダイゼーション、およびそれに続く洗浄は、アジレントＨ１Ａｖ２ヒト発現チップ上で行われる。得られるハイブリダイズ後チップは、アジレントマイクロアレイスキャナーでスキャンされ、各ディテクタースポットについての強度情報は、Ａｇｉｌｅｎｔ機能抽出ソフトウェア（ｆｅａｔｕｒｅ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｓｏｆｔｗａｒｅ）を用いてスキャン画像から抽出される。
【０１２３】
ハイブリダイゼーションの品質の最有効試験は、これらのチップ上にプリントされた多数の遺伝子重複（ｄｕｐｌｉｃａｔｅｓ  ｏｆ  ｇｅｎｅｓ）から報告された比の分散レベルである。遺伝子プローブのセットは、アレイ全域でランダムな位置にそれぞれ１０回プリントされる。全てのセットにわたるｌｏｇ２比の標準偏差の中間値が、アレイ全体にわたる総合的な標準偏差の推定値として使用される。
【０１２４】
［データおよび解析］
全ての３つのハイブリダイゼーションについての重要なデータは、ＦｉｌｅＭａｋｅｒ  Ｐｒｏリレーショナルデータベースに収集され、特定の転写パターンを示す遺伝子を同定することができる検索の容易な定式化を許容する。報告されたデータは、赤（処処理された）と緑（未処理の）のバックグラウンドを差し引いたシグナルである。これは、最小限修正された形式のデータである。バックグラウンドの「表面」は、ヒトＤＮＡに相補的でない多数のプローブに基づいて、スライド全域で推定される。これらは、アレイ表面への標識ｃＲＮＡの非特異的結合および固定化ＤＮＡオリゴマーへの標識ｃＲＮＡの非特異的結合の両方の推定値としての役割を果たす。この情報を用いて、各プローブの周囲の局所ノイズが推定され、これは、アレイ上の各特異的プローブ機能についてオリゴヌクレオチドが堆積した領域で検出されるシグナルから減算される（ｇＢＧＳｕｂＳｉｇｎａｌ、ｒＢＧＳｕｂＳｉｇｎａｌ）。処理された細胞のＲＮＡおよび未処理細胞のＲＮＡからのシグナル比は、直接の比およびｌｏｇ２比（Ｒａｔｉｏ、Ｌｏｇ２Ｒａｔｉｏ）の両方で報告される。比は、各チャネルにおける強度を正規化する反復プロセスによって求められるので、ほぼ同一の転写レベルを有する多数の遺伝子の強度の類似性を最大化するスカラーが見出され、ゆえに１に非常に近い比となる。
【０１２５】
正規化後データについて比を計算後、各種対照および重複サンプルを分析して、どの程度再現可能な結果であるのか、ならびにシグナル強度およびノイズに依存してこの再現性がどのように変化するのかについてのモデルを構築する。これらのパラメータを用いて、仮に同じ強度分布を生じる単一プロセスからランダムに赤と緑の強度が導き出された場合にそれぞれの比が生じるであろう尤度の推定値が生成される。この確率は各サンプルについて報告され、比が処理済および未処理シグナル強度間の差（ＰＶａｌＬｏｇＲａｔｉｏ）を示す確率の尺度である。この確率は、変動したおよび変動しない遺伝子への結果の閾値に用いられる。データベースでは、ｐ≦０．００１の閾値が、処理済みおよび未処理のサンプル間のｍＲＮＡ存在量の有意な変動の切り分け点（Ｓｉｇ０．００１）として用いられる。この閾値は予想される偽陽性の数を合理的なレベルまで低下させ、各アッセイで調査される約４０，０００の比が与えられる。未処理サンプルに対して有意な変動および変動方向を示す領域は、３つの部分からなるカテゴリー（１，未処理に比べて上方制御された、０，未処理に比べて変動なし、および−１，未処理に比べて下方制御された（Ｔｒｉ））にアッセイの結果を低下させる。この表現を使用することで、誰でも容易に、いかなる単一または複数の実験セットにおいて変動した遺伝子を同定する検索を構築する。
【０１２６】
以下の表１に見られる遺伝子発現データは、化合物４および化合物２１が、ＬＰＬおよびＡｐｏＣ２遺伝子については上方制御するが、ＡｐｏＣ３遺伝子についてはそうでないことを示す。表１に示される遺伝子発現値は、３種類のヒト腫瘍細胞株（ＳＫＯＶ−３、Ａ５４９およびＰａｎｃ−１）から得られるＬｏｇ２値および平均値である。遺伝子発現の有意な変動は、ｐ≦０．００１である。遺伝子ＩＤ（ＧｅｎｅＩＤ）は、Ｅｎｔｒｅｚ  Ｇｅｎｅデータベース向けに国立バイオテクノロジー情報センター（ＮＣＢＩ）で開発された規格に準拠する。
【０１２７】
【表１】
2017512769.tif 000021
【０１２８】
特許を含めた全ての文献および参照の開示は、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明ならびにこれを製造しかつ使用する手段およびプロセスは、適切ないかなる当業者もが同じものを作りかつ使用することができるように、かように十分な、明確な、簡潔な、かつ正確な用語でここに開示される。本明細書で言及される全ての参照は、参照によって本明細書に組み込まれる。上記の説明は本発明の好ましい実施形態を開示しており、その変更は、本発明の精神または範囲から逸脱することなくその中にされうると理解されるべきである。