(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(Ｉ)
【化１】
0004199315.tif 000022
（式中、Ｒ1及びＲ2は、共にクロロであり、Ｒ5は、Ｈ又はＣＨ3であり、Ｒ6は、(Ｃ1〜Ｃ5)−アルキルであり、Ｄは、(Ｃ2〜Ｃ5)−アルケンジイルである）
の化合物、又はその生理学的に許容される塩。
【請求項２】
ａ) 式(II)
【化２】
0004199315.tif 000023
（式中、Ｒ5は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を、不活性な溶媒中で、Ｃｓ2ＣＯ3又はＫ2ＣＯ3を用いて、脱プロトン化し、そして、それを室温で、式(III)
【化３】
0004199315.tif 000024
（式中、Ｒ1及びＲ2は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物と反応させ、
ｂ) 得られた式(IV)
【化４】
0004199315.tif 000025
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ5は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を、遷移金属ハライドによって還元して、式(Ｖ)
【化５】
0004199315.tif 000026
(式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ5は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を得、
ｃ) 式(Ｖ)の化合物を、活性化され、フタロイル基で保護されたグリシン誘導体と、不活性溶媒中で、適当である場合にはジメチルアミノピリジンを加えて反応させ、そしてこのようにして式(VI)
【化６】
0004199315.tif 000027
(式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ5は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を得、
ｄ) 式(VI)の化合物を、不活性溶媒中で、アルカリ金属水素化物、アルカリ金属炭酸塩又はアルコキシドを作用させた後、続いてＲ6Ｘ（式中、Ｒ6は請求項１記載の式(Ｉ)に定義した通りであり、Ｘは脱離基である）と処理して反応させ、式(VII)
【化７】
0004199315.tif 000028
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5及びＲ6は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を得、
ｅ) 式(VII)の化合物からフタロイル保護基を除去するために、溶媒としてのアルコール中で、室温と沸点の間の温度で、ヒドラジンと反応させて、式(VIII)
【化８】
0004199315.tif 000029
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ5及びＲ6は、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を得、
f1) 式(VIII)の化合物を、式(IX)
【化９】
0004199315.tif 000030
（式中、Ｄは、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りである）の活性化されたカルボン酸誘導体と反応させて、又は、
f2) 式(VIII)の化合物を、式(Ｘ)
【化１０】
0004199315.tif 000031
（式中、Ｄは、請求項１に記載された式(Ｉ)に定義した通りであり、ＺはＯＨ又はＮＨ2である）のアミン又はアルコールと反応させ、しかし、式(VIII)又は式(Ｘ)の化合物は、初めにウレア又はウレタン基を形成させるために、重複して活性化されたカルボニル化合物と反応させておき、又は、
f3) 式(VIII)の化合物を、適当なイソシアナート又はイソチオシアナートと反応させ、そして
ｇ) もし適当である場合には、得られた式(Ｉ)の化合物をその生理学的に許容される塩に変換することからなる請求項１に記載された式(Ｉ)の化合物の製造方法。
【請求項３】
請求項１に記載された式(Ｉ)の化合物又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含有する医薬製剤。
【請求項４】
請求項１に記載された式(Ｉ)の化合物又はその生理学的に許容される塩を有効成分として含有する、ブラジキニン又はその類縁体ペプチドにより媒介されるか、誘発される疾患の予防及び／又は治療剤。
【請求項５】
請求項１に記載された式(Ｉ)の化合物又はその生理学的に許容される塩からなるブラジキニンアンタゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ブラジキニン−拮抗作用を有する複素環フルオロアルキル置換された化合物、及びフルオロアルコキシ置換された化合物に関する。
EP-A 622 361、US 5,212,182、US 5,216,165及びUS 5,438,064には、ブラジキニン受容体アンタゴニストとして、Ｏ−及びＮ−置換されたキノリン及びそれらの使用が開示されている。
驚くべきことに、フルオロアルキル基を導入すると、著しい長期持続作用を有する化合物が生じることを見出した。
【０００２】
本発明は、式(Ｉ)
【化１１】
0004199315.tif 000002
（式中、各記号は次の意味を有し、
ａ) Ｘ1〜Ｘ3は、同一又は異なり、Ｎ又はＣＲ5であり、
ｂ) Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なり、
1.  Ｈ
2.  ハロゲンであり、
ｃ) Ｒ3及びＲ4は、同一又は異なり、
1.  Ｈ
2.  ハロゲン
3.  (Ｃ1〜Ｃ5)−アルキル
4.  (Ｃ2〜Ｃ5)−アルケニルであり、
【０００３】
ｄ) Ｒ5は、
1.  Ｈ
2.  ハロゲン
3.  (Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル
4.  Ｏ−Ｒ6
5.  Ｓ−Ｒ6
6.  ＮＨＲ6
7.  (Ｃ6〜Ｃ12)−アリール
8.  (Ｃ6〜Ｃ12)−アリール−(Ｃ1〜Ｃ3)−アルキル
9.  −Ｃ(Ｏ)−ＯＲ6
10.  −Ｃ(Ｏ)−Ｈであり、
そして、この３、７及び８の基は、一又はそれより多くの基、例えばＯＲ6、ＳＲ6、ＮＯ2、ＣＮ、ＮＨＲ6又はハロゲンによって、随意に置換されていてもよく、
【０００４】
ｅ) Ｒ6及びＲ8は、同一又は異なり、
1.  Ｈ
2.  (Ｃ1〜Ｃ5)−アルキル
3.  (Ｃ3〜Ｃ5)−アルケニル
4.  (Ｃ6〜Ｃ12)−アリール−(Ｃ1〜Ｃ3)−アルキルであり、
ｆ) Ｒ7は、
1.  (Ｃ1〜Ｃ5)−アルキルであり、その水素原子は部分的に又は完全にフッ素原子若しくは塩素原子で置換されており、
2.  (Ｃ1〜Ｃ5)−アルコキシであり、その水素原子は部分的に又は完全にフッ素原子若しくは塩素原子で置換されており、
ｇ) Ｂは、アミノカルボン酸であり、例えばメチオニン、アラニン、フェニルアラニン、２−クロロフェニルアラニン、３−クロロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、２−フルオロフェニルアラニン、３−フルオロフェニルアラニン、４−フルオロフェニルアラニン、チロシン、Ｏ−メチルチロシン、β−(２−チエニル)アラニン、グリシン、シクロヘキシルアラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、ノルロイシン若しくはフェニルグリシン、セリン若しくはシステイン、アミノプロピオン酸、アミノ酪酸であり、
ｈ) Ｄは、
1.  (Ｃ2〜Ｃ5)−アルケンジイル
2.  (Ｃ1〜Ｃ5)−アルカンジイル
3.  −(ＣＨ2)n−Ｙp−(ＣＨ２)m−であり、
【０００５】
ｉ) Ｅは、
1.  Ｏ
2.  Ｓであり、
ｊ) Ｙは、
1.  Ｏ
2.  Ｓ
3.  ＮＲ8であり、
ｋ) ｎ及びｍは、同一又は異なり、０〜３の数であり、
ｌ) ｏは、１〜３の数であり、
ｍ) ｐは、０又は１の数である）
の複素環フルオロアルキル誘導体又はフルオロアルコキシ誘導体、又はそれらの生理学的に許容される塩に関する。
【０００６】
アルキル及びアルケニルは、直鎖又は分岐していてもよい。このことは、それらから誘導される基、例えばアルコキシにも同様に適用される。
(Ｃ6〜Ｃ12)−アリールは、例えば、フェニル、ナフチル又はビフェニルであり、好ましくはフェニルである。このことは、又それから誘導される基、例えば、アラルキルにも同様に適用される。
ハロゲン(Ｈａｌ)は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素であり、好ましくは塩素である。
【０００７】
式(Ｉ)の化合物の生理学的に許容される塩とは、Remington's Pharmaceutical Sciences（A.R. Gennard編、Mack Publishing Co., Easton PA、第17版、1418頁(1985)）に記載されているように、有機塩及び無機塩の両方とも意味するものとする。物理化学的安定性及び溶解性のために、酸基に対しては、特にナトリウム、カリウム、カルシウム及びアンモニウム塩が好ましく、塩基性基に対しては、特に塩酸、硫酸、リン酸の塩、又はカルボン酸若しくはスルホン酸、例えば酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸及びｐ−トルエンスルホン酸などの塩が好ましい。
【０００８】
好ましい式(Ｉ)の化合物は、上記した式において、
ａ) Ｘ1〜Ｘ3が、ＣＲ5であり、
ｂ) Ｒ3及びＲ4が、同一又は異なり、
1.  Ｈ
2.  (Ｃ1〜Ｃ3)−アルキル
3.  (Ｃ3〜Ｃ5)−アルケニルであり、
ｃ) Ｒ5が、
1.  Ｈ
2.  (Ｃ1〜Ｃ6)−アルキル
3.  Ｏ−Ｒ6
4.  Ｓ−Ｒ6
5.  ＮＨＲ6
6.  (Ｃ6〜Ｃ12)−アリール
7.  (Ｃ6〜Ｃ12)−アリール−(Ｃ1〜Ｃ3)−アルキル
8.  −Ｃ(Ｏ)−ＯＲ6
9.  −Ｃ(Ｏ)−Ｈである
の化合物である。
【０００９】
特に好ましい式(Ｉ)の化合物は、上記した式において、
ａ) Ｂが、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、グリシン、セリン、アミノプロピオン酸、アミノ酪酸であり、
ｂ) Ｒ7が、
1.  ＣＦ3
2.  ＯＣＦ3であり、
ｃ) ｏが、１〜２である）
の化合物である。
【００１０】
本発明は、更に、
ａ) 式(II)
【化１２】
0004199315.tif 000003
（式中、Ｘ1−Ｘ3、Ｒ3及びＲ4は、上記の式（Ｉ）に定義した通りである）の化合物を、不活性な溶媒、好ましくはＤＭＦ又はＮ−メチルピロリジン中で、Ｃｓ2ＣＯ3又はＫ2ＣＯ3を用いて、脱プロトン化し、そして、それを室温で、式（III）
【００１１】
【化１３】
0004199315.tif 000004
（式中、Ｒ1及びＲ2は、上記の式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物と反応させ、
ｂ) このようにして得られた式(IV)
【化１４】
0004199315.tif 000005
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、上記の式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を、遷移金属ハライド、好ましくはＳｎＣｌ2又はＦｅＣｌ3によって還元して、式(Ｖ)
【００１２】
【化１５】
0004199315.tif 000006
(式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、上記の式(Ｉ)に定義した通りである）の化合物を得、
ｃ) 式(Ｖ)の化合物を、活性化され、適当に保護されたＢのアミノカルボン酸誘導体（Ｂ−Ｐｒｏｔ）、好ましくはフタロイル−保護されたＢのアミノカルボン酸誘導体の酸塩化物と、不活性溶媒、例えばＮＭＰ中で、適当である場合にはＤＭＡＰを加えて反応させ、そしてこのようにして式(VI)
【００１３】
【化１６】
0004199315.tif 000007
(式中、Ｂ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、上記の式(Ｉ)に定義した通りであり、Ｐｒｏｔは、T.W. Greene“Protective Groups in organic Synthesis", John Wiley 第２版、1991に記載されているようなアミノ保護基、例えばフタロイル、ベンジル又はパラメトキシベンジルである）の化合物を得、
ｄ) 式(Ｉ)の化合物を、不活性溶媒、好ましくはＤＭＦ又はＮＭＰ中で、アルカリ金属水素化物、アルカリ金属炭酸塩又はアルコキシドを作用させた後、続いてＲ6Ｘ（式中、Ｒ6は上記の式(II)に定義した通りであり、Ｘは脱離基、例えばハロゲン、メシラート、トシラートである）と処理して反応させ、式(VII)
【００１４】
【化１７】
0004199315.tif 000008
（式中、Ｂ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、上記の式(Ｉ)に定義した通りであり、Ｐｒｏｔは、上記の式(VI)に定義した通りである）の化合物を得、
【００１５】
ｅ) 式(VII)の化合物から保護基（Ｐｒｏｔ）を除去するために、フタロイル基の場合、溶媒としてのアルコール中で室温と沸点の間の温度で、好ましくは室温で、好ましくはヒドラジンと反応させて、式(VIII)
【化１８】
0004199315.tif 000009
（式中、Ｂ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ6、Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は、上記の式(Ｉ)に定義した通りであり、Ｐｒｏｔは、上記の式(VI)に定義した通りである）の化合物を得、
【００１６】
f1) 式(VIII)の化合物を、式(IX)
【化１９】
0004199315.tif 000010
（式中、Ｒ7、ｏ及びＤは、上記の式(Ｉ)に定義した通りである）の活性化されたカルボン酸誘導体、好ましくはペプチド合成で使用されるような試薬により活性化された式(IX)の酸塩化物又はカルボン酸と反応させ、又は、
【００１７】
f2) 式(VIII)の化合物を、式(Ｘ)
【化２０】
0004199315.tif 000011
（式中、Ｒ7、ｏ及びＤは、上記に定義した通りであり、ＺはＯＨ又はＮＨ2である）のアミン又はアルコールと反応させ、しかし、式(VIII)又は式(Ｘ)の化合物は、ウレア又はウレタン基を形成させるために、重複して活性化されたカルボニル化合物、例えばカルボジイミド、ホスゲン又はクロロ炭酸エステル、好ましくはホスゲン及びカルボニルジイミダゾールと、好ましくは０℃と室温の間の温度で、不活性溶媒、好ましくはジクロロメタン又はジメトキシエタン中で初めに反応させておき、又は、
f3) 式(VIII)の化合物を、適当なイソシアナート又はイソチオシアナートと、好ましくは０℃と室温の間の温度で、不活性溶媒、好ましくはジクロロメタン又はジメトキシエタン中で反応させ、そして
ｇ) もし適当である場合には、得られた式(Ｉ)の化合物をその生理学的に許容される塩に公知な方法で変換することからなる式(I)の化合物の製造方法にも関する。
【００１８】
ブロモエチル化合物への変換は、不活性溶媒、好ましくはブロモベンゼン又はシクロヘキサン中、６０℃からその沸点までの温度で、Ｎ−ブロモスクシンイミド、ジブロモヒダントイン又は臭素と、対応するメチル誘導体との反応により行われる。
使用されるカップリング試薬は、ペプチド合成で用いられる活性化試薬が全て可能である（例えば、Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, [Methods of Organic Chemistry], volume 15／２, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974を参照）が、特にカルボジイミド、例えばＮ,Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ,Ｎ′−ジイソプロピル−カルボジイミド又はＮ−エチル−Ｎ′−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドを使用することができる。この場合、カップリングは、活性化試薬に、適当である場合には、添加剤、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)（W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 708(1970)）若しくは３−ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒドロベンゾトリアジン(HOObt)（W. Konig, R. Geiger, Chem. Ber. 103, 2054(1970)）にカルボン酸誘導体を加えて直接に行うこともできるし、又は対称な無水物あるいはHOBt若しくはHOObtエステルとしてカルボン酸誘導体を前もって活性化することを別々に行うこともできるし、そして適当な溶媒中でその活性化種の溶液をアミンに加えることもできる。
【００１９】
上記の活性化試薬の一つへのアミノ酸誘導体のカップリング又は活性化を、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン又は塩化メチレンあるいはこれらの混合溶媒中で行うことができる。
フタロイル基の代わりに、アミノ基のプロトンの両方を保護する保護基、例えば２つのベンジル基を用いることもできる。
本発明による化合物は、個々に又は組合せて、ブラジキニン拮抗作用を有し、これらの作用は、様々なモデル（Handbook of Exp. Pharmacol. 25巻, Springer Verlag, 1970, 53-55頁参照）、例えば分離されたラット子宮、モルモット回腸、ウサギの頸静脈又はモルモットの分離された肺動脈で試験することができる。ブラジキニンで誘発された気管支狭窄及びカラギーナンで誘発された脚浮腫への式(Ｉ)の化合物の作用をBr. J. Pharmacol. 102, 774-777(1991)と同様にして測定できる。
【００２０】
モルモット回腸のブラジキニンＢ２レセプターへの結合の測定を以下に記載する（R.B. Innis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA；17（1981）2630）。
１. リガンド：３Ｈ−ブラジキニン（NEN Du Pontから）
２. バッファー混合物：
a)  ＴＥＳ−バッファー
25 mM TES（SIGMA、注文No. T-4152）
１mM １,１０−フェナントロリン（SIGMA、注文No. P-9375）
b)  インキュベーションバッファー
25 mM TES（SIGMA、注文No. T-4152）
１mM １,１０−フェナントロリン（SIGMA、注文No. P-9375）
0.1％牛アルブミン（SIGMA、注文No. A-7906）
140μg／ml バシトラシン（SIGMA、注文No. B-0125）
１mMジチオスレイトール（SIGMA、注文No. D-0632）
１μMカプトプリル→１−〔(2S)−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル〕−Ｌ−プロリン
両バッファー共に５モル濃度のＮａＯＨを用いてpH６.８に調節する。
【００２１】
３. 膜調製
腸の内容物を注意深く取り除くことにより、モルモットの回腸を大まかに洗い、そして０.９％濃度のＮａＣｌ溶液で洗浄する。
約２cmの回腸の断片を氷冷したＴＥＳバッファー（約１ｇ／１０ml）に移し、ウルトラツラクス（Ultraturrax）を用いて３０秒間、氷浴中でホモジナイズする。次いで、そのホモジネートを３層のガーゼを通してろ過し、そのろ液を１０分間、５０,０００ｇで遠心分離する。
上澄液を廃棄し、ペレットを同容量のＴＥＳバッファーで再ホモジナイズし、１０分間、５０,０００ｇで再度遠心分離する。
ペレットをインキュベーションバッファー（約１ｇ／５ml）で再ホモジネートし、２mlずつに分けて、凍結用試験管中、−７０℃で凍結する。
すぐに使用できる膜懸濁液のタンパク濃度を、ローリー法（LOWRY）により測定し、約１５μｇ／１００μｌになるようにする。
【００２２】
４. バインディングテスト
全てのインキュベーションを、マイクロタイタープレート（９６×３００μｌ)上で、体積２００μで、ｌ６０分間、室温で行う。全ての混合をインキュベーションバッファー中で行う。最後に、５０μｌの放射性リガンド、５０μｌの試験用製剤及び１００μｌの膜懸濁液をマイクロタイタープレートの穴に連続的にピペットで入れる。
ａ) 飽和実験（ホット飽和）
3Ｈ−ブラジキニン溶液の調製：この飽和実験のために、０.０５〜３.０pmol／mlに対応する、濃度０.０５、０.１、０.２、０.４、０.６、０.８、１.０、１.５、２.０、２.５、及び３.０nmol／ｌを用いる。対応する希釈調製後、サンプル当たり各５０μｌを初めに導入する。
非特異性結合：放射活性なリガンドのそれぞれの濃度に対して、非特異性結合を測定しなければならない。これは、高濃度（１〜１００μmol）の非標識リガンド、すなわちブラジキニンレセプターのアンタゴニスト又はアゴニストを添加して行うことができる。この試験では、HOE 140（１０μmol／ｌ）を用いる。このために、１.８６２mgを１mlのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、インキュベーションバッファーで１：２５に希釈し、この溶液の５０μｌをマイクロタイタープレート中のサンプルに加える。１００μｌの膜懸濁液を加えて、この反応を始める。
ｂ) 競合実験（ＩＣ50）
固定量の放射活性なリガンド（０.２５〜０.３nmol／ｌの３Ｈ−ブラジキニン）と種々の濃度の非標識化アゴニスト又はアンタゴニストを使用する。
１０−５から１０−１０mol／ｌの濃度で試験するために、５０μｌの製剤又はコントロールを、それぞれの場合に、５０μｌの３Ｈ−ブラジキニン溶液に加え、そして１００μｌの膜懸濁液を加えて反応を始める。この試験でも、３重の測定を行い、そして非特異性結合を測定するために、１０μmol／ｌのHOE 140を用いて３つのサンプルをインキュベートする。
競合実験用の試験用製剤は、普通１mmol／ｌの濃度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、その後さらにＤＭＳＯで希釈する。この溶液を更にインキュベーションバッファーで１：２５に希釈する。
インキュベーションした後、事前に０.１％のＰＥＩ（ポリエチレンイミン）で湿らせておいたワットマンＧＦ／Ｂ濾紙を付けたスカトロン（Skatron）セルハーベスターにより、サンプルを濾過し、サンプル当たり１０mlの氷冷したＴＥＳバッファーで洗浄する。まだ湿っている濾紙をミニ−シンチレーションチューブに打ち抜いて、そのチューブを３mlのシンチレーターで満たす。
約１２時間浸した後、サンプルを少し振り、ベータカウンターで測定する。
ｃ) スクリーニング
初期のスクリーニングでは、一般に、試験用製剤の１又は２種の濃度（１０-5及び１０-6mol／ｌ）のものだけを用いる。５０％又はそれ以上の放射性リガンドの変位が最も高濃度で測定できる場合、少なくとも８種類の濃度のものを用いて完全な分析（競合実験）を行う。
【００２３】
５. 評価
ＩＣ50及びＫｉ値を測定するために必要な計算をするリガンドプログラムパッケ−ジ（Mc Pherson, Minson & Rodbard, Marketing organization：Elsevier-BIOSOFT）により評価を行う。更に、このプログラムは、飽和曲線、変位曲線、及びスキャチャードプロット（SCATCHARD plot）、ヒルプロット（HILL plot）、又はホフステープロット（HOFSTEE plot）を図表で表示できる。
【００２４】
６. 試験結果
次のＩＣ50及びＫｉ値は、記載した式(Ｉ）のフルオロアルキル−及びフルオロアルコキシ−置換された複素環ブラジキニンアンタゴニストの代表的な化合物として、実施例１、２、８、２２及び２９の化合物に対して上記の方法により測定された。
【００２５】
【表１】
0004199315.tif 000012
モルモット回腸のブラジキニンで誘発された収縮における拮抗作用の測定を、次のプロトコールにより行った。
約３００ｇのモルモット（Morioth系統、♂♀）の頚部を強打し屠殺し、除血する。モルモットの回腸を約２０cmの長さに切断し、タイロード（Tyrode）溶液で洗浄し（レコードシリンジ）、腸の内容物を除去する。次いで、長さ１.５cmの部分に分ける。タイロード溶液で満たした容量１０mlのオーガンバス中にこれらを固定し、伸張測定用片に連結する（等尺性収縮測定）。前荷重は１ｇである。タイロード溶液を水浴上で３７℃に加温し、圧縮空気でバブリングする。３０分後、実験を開始する。
【００２６】
生物学的零線を記録した後、オーガンバス当たり４×１０−８mol／ｌの最終濃度で、ブラジキニンを加え、その濃度を記録する。次いで、オーガンバスをタイロード溶液で３分間洗浄し、２０分の中断後、ブラジキニンを再び加える。最大の収縮に達する（コントロール）。再び洗浄し、中断する。それから、ブラジキニンアンタゴニストを加える（作用時間１０分）。ブラジキニンを再び加え、順次起こる収縮をコントールのそれと比較する。実験は記録計上に記録される。タイロード溶液（mM）：
ＮａＣｌ              137
グルコース              5.05
ＫＣｌ                  2.68
ＮａＨＣＯ3            11.9
ＮａH2ＰＯ4             0.47
ＭｇＣｌ2×２Ｈ2Ｏ      0.49
ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ      0.68
増幅器：TF6 V3 Fleck, Mainz
記録計：Goerz Metrawatt SE 460, BBC
ブラジキニン：Bachem
このようにして、例えば実施例１及び２の化合物は、上記の方法により測定した以下のＩＣ50値をもつ。
【００２７】
【表２】
0004199315.tif 000013
式(Ｉ)の化合物の明瞭な長期持続作用はウサギの頸静脈で見出され、以下に記載する。
実施例１、Ｘ及びＹの化合物を比較した。例Ｘ及びＹはEP-A 622 361に記載されている。
【００２８】
【化２１】
0004199315.tif 000014
【００２９】
【表３】
0004199315.tif 000015
【００３０】
方法の説明
オスのウサギ（white New Zealand、飼育者：Mollegaard、デンマーク、２.５〜３.０kg）に過剰のペントバルビタール−Ｎａ（１mlのナルコレン(ｒ)＋０.５mlのヘパリン）を注射し殺す。二本の頸静脈を取り出して、らせん状に切り、そして長さ約１.５cmの断片を０.５ｇの張力を加えて、バッファーを添加化したオーガンバス（Krebs-Henseleitバッファー）中につるす。
３０分間の休止期間後、ブラジキニン（１０−７Ｍ）の添加により、始発値となる収縮を誘発する。その後、試験物質を１０−５Ｍの濃度で加える。示された阻害値は平均値（ｎ＝６）である。
時間１５分で指示された値は、さらに、バスの液体中の試験物質の存在下１５分間のインキュベーション後、ブラジキン誘発された収縮の阻害を示す。その後、ブラジキニン収縮は緩衝液で洗浄して終了する。
さらに示されたそれぞれの時間で、再び刺激をブラジキニンで行い（バスの液体中、試験物質の不存在下）、収縮の終了時に、バスの液体を緩衝液で置き換えた。
【００３１】
結果
例Ｙ及びＸの化合物と比較して、実施例１の化合物はインビトロで作用の持続が極めて長く優位性を示す。これはレセプターに対する結合の強さの尺度である。実施例１の化合物が６時間後にまだ６８％の阻害作用を示しているが、例Ｙ及びＸの化合物は４時間後にはもはや阻害を示さない。
経口投与形態又は粘膜への適用に対して、この活性化合物を、通常の添加剤、例えば賦形剤、安定剤、不活性な希釈剤などと混合し、そして通常の方法で、錠剤、コーティング錠、ハードゼラチンカプセル、水性、アルコール性若しくは油性懸濁液、又は水性、アルコール性若しくは油性溶液のような適当な投与形態にする。使用することができる不活性な賦形剤としては、例えばアラビアゴム、マグネシア、炭酸マグネシウム、りん酸カリウム、乳糖、グルコース、ステアリルフマル酸マグネシウム、又はデンプン、特にコーンスターチが挙げられる。この場合、乾燥した顆粒及び湿った顆粒として製剤化することができる。適当な油性賦形剤又は溶媒としては、植物性又は動物性油、例えばひまわり油及び魚肝油が挙げられる。
【００３２】
局所用製剤としては、水性若しくは油性溶液、ローション、エマルジョン若しくはゲル、軟膏若しくは脂肪質軟膏が、又、可能である場合には、噴霧形態が挙げられる。そして、ポリマーを加えて随意に粘着力を改善することができる。
鼻内への適用形態としては、これらの化合物を、安定剤又は不活性な希釈剤のような通常の添加剤とともに混合し、通常の方法で、水性、アルコール性若しくは油性懸濁液、又は水性、アルコール性若しくは油性溶液のような適当な投与形態にする。キレート剤、すなわちエチレンジアミン−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−四酢酸、クエン酸、酒石酸又はこれらの塩を水溶性鼻内用製剤に加えることができる。鼻用の溶液は、計量された噴霧器により又は粘性を増強する成分若しくは鼻用ゲルを有する点鼻剤、又は鼻用クリームとして投与することができる。
【００３３】
記載された式(Ｉ)の化合物及びそれらの薬理学上適切な塩は強力なブラジキニンアンタゴニストである。従って、これらの治療用途は、ブラジキニン及びブラジキニン類縁ペプチドにより媒介され、誘発され、又は持続される全ての病理学上の状態の治療及び／又は予防にある。これは、特にアレルギー、炎症、自己免疫疾患、ショック、苦痛、そして主として喘息、咳、気管支炎、鼻炎、慢性の肺疾患傷害、肺炎、敗血症ショック、内毒素ショック、アナフィラキシーショック、多発性血管内凝血異常、関節炎、リウマチ、変形性関節炎、腰痛、炎症誘発性骨吸収、結膜炎、虹彩炎、頭痛、偏頭痛、歯痛、背部痛、ガン関連の痛み、手術後の痛み、外傷（負傷、火傷など）、発疹、紅斑、浮腫、湿疹、皮膚炎、帯状疱疹、ヘルペス、掻痒、乾癬、苔癬、炎症性腸疾患、肝炎、膵炎、胃炎、食道炎、食物アレルギー、潰瘍、過敏性結腸、咽喉痛、脳浮腫、低血圧、血栓症、頭蓋脳及び脊髄の外傷、早産、動脈硬化、ガンにおける腹水、腫瘍転移、腫瘍における脳浮腫、脳に対する熱損傷及びウイルス性疾患を含む。
【００３４】
更に、ブラジキニンが、プロスタグランジン、ロイコトリエン、タキキニン、ヒスタミン及びトロンボキサンのようなメディエーターの放出に関連していることが知られているように、式(Ｉ)の化合物もこれらのメディエーターによって引起こされる疾患の治療及び／又は予防に対しても有効である。
従って、本発明は、又治療剤としての式(Ｉ)の化合物の使用及びこれらの化合物を含有する医薬製剤にも関する。
医薬製剤は、製薬上利用可能な無機又は有機の賦形剤と共に、有効量の式(Ｉ)の活性な化合物を単独で又は組合せたものを含む。
投与は、例えば、皮下内、筋肉、静脈、舌下、表皮、鼻、直腸、膣内、頬内、又は吸入により、経腸又は非経口で行うことができる。この活性化合物の投与量は、温血動物種、体重、年齢、及び投与方法による。
本発明の医薬製剤は、それ自体知られた溶解、混合、顆粒化，又は糖衣錠化により製造される。
吸入により投与するためには、噴霧器又は不活性なキャリアーガスを用いた加圧されたガスパックが使用される。
静脈内、皮下、表皮、皮膚内投与のためには、これらの活性化合物又はこれらの生理学上許容される塩を、所望ならば製薬上通常の補助剤、例えば等張化又はpH調節をするための補助剤及び溶解剤、乳化剤又は他の補助剤と共に溶液、懸濁液又は乳剤内に入れる。
【００３５】
上記の医薬物質の半減期が体液中で不十分ならば、注射可能な遅延−放出性製剤を使用するのが有効である。使用され得る医薬形態は、例えば油性の結晶懸濁液、マイクロカプセル、ロッド又は移植片等であり、後者に対しては、組織許容性重合体、特に、例えばポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー又はヒトアルブミンをベースとした生体内分解性高分子から形成することができる。
局所及び吸入投与形態に対しては、０.０１〜５mg／ｌを含有する溶液が適切な投与量であり、全身投与形態の場合には０.０１〜１０mg／kgが適当である。
一般に、成人（７５kg体重）一日当たり０.１mgから１０００mgまでの量を投与することができる。
【００３６】
省略形のリスト
ＡＩＢＮ        α,α′−アゾビスイソブチロニトリル
ＤＥＩ          脱着電子衝撃
ＤＣｌ          脱着−化学イオン化
ＥＡ            酢酸エチル
ＦＡＢ          高速原子衝撃
ＤＭＥ          ジメトキシエタン
ＤＭＦ          ジメチルホルムアミド
ＤＭＡＰ        ジメチルアミノピリジン
ＮＭＰ          Ｎ−メチルピロリドン
ｎ−Ｈ          ｎ−ヘプタン
ＲＴ            室温
ＣＨ2Ｃｌ2      ジクロロメタン
ｈ              時間
ＥＳＩ          電子スプレーイオン化
本発明を以下の実施例にて説明する。
【００３７】
【実施例】
実施例１
８−〔３−(Ｎ−(４−トランス−トリフルオロメチルシンナモイルグリシル)−Ｎ−メチルアミノ）−２,６−ジクロロベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
ａ) ２,６−ジクロロ−３−ニトロベンジルブロミド
ジブロモヒダントイン（７０ｇ、０.２４mol）とＡＩＢＮ（５ｇ）の混合物を、１５０℃でクロロベンゼン（４００ml）中の２,６−ジクロロ−３−ニトロトルエン（１００ｇ、０.４８mol）に少しずつ加えた。１時間後、ジブロモヒダントイン（３５ｇ、０.１２mol）とＡＩＢＮ（２.５ｇ）の混合物を、再び加えた。更に１.５時間後、その混合物を冷却し、ＥＡ（５００ml）を加えた。この混合物を飽和Ｎａ2ＳＯ3、Ｎａ2ＣＯ3及びＮａＣｌ溶液でそれぞれ１回洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、濃縮して、標題化合物を無定型粉末として得た。
Ｒf(ＥＡ／ｎＨ １／１）＝０.７、ＭＳ(ＤＥＩ)＝２８３(Ｍ＋)
ｂ) ８−(２,６−ジクロロ−３−ニトロベンジルオキシ)−２−メチルキノリンＣｓ2ＣＯ3（１０.８ｇ、３３.３mmol）を、室温でＤＭＦ（６５ml）中の８−ヒドロキシ−２−メチルキノリン（５ｇ、３３.３mmol）に加えた。３０分後、２,６−ジクロロ−３−ニトロベンジルブロミド（１３g、４５.６mmol）を加えた。１８時間後、Ｈ2Ｏを加え、沈殿物を吸引濾過し、ＥＡ（５０ml）で洗浄して、標題化合物を無定型物質として得た。
Ｒf(ＥＡ／ｎ−Ｈ １／２)＝０.３、ＭＳ(ＤＥＩ)＝３６２(Ｍ)
ｃ) ８−(２,６−ジクロロ−３−アミノベンジルオキシ)−２−メチルキノリンＳｎＣｌ2Ｈ2Ｏ（１５ｇ、６６.６mmol）を、ＥＡ（６０ml）中の実施例１ｂ）の標題化合物（４.５ｇ、１２.４mmol）に加え、その懸濁物を７０℃に加熱した。１時間後、室温まで冷却した後、その混合物を真空で濃縮し、２０％ＮａＯＨ溶液（１００ml）を加え、次いで、その混合物をＣＨ2Ｃｌ2で３回抽出した。有機層を合わせ、ＣａＣｌ2で乾燥し、濃縮した。
Ｒf(ＥＡ／ｎ−Ｈ １／１)＝０.４、ＭＳ(ＦＡＢ)＝３３３(Ｍ＋１)
【００３８】
ｄ) ８−(２,６−ジクロロ−３−フタロイルグリシルアミノベンジルオキシ)−２−メチルキノリン
フタロイルグリシルクロリド（３.４ｇ、１５mmol）を、ＮＭＰ（３０ml）とピリジン（１０ml）中の実施例１ｃ）の化合物（３.２ｇ、１０mmol）とＤＭＡＰ（１.２ｇ、１０mmol）に加えた。この混合物を５０℃で１.５時間加熱し、次いで０℃まで冷却し、Ｈ2Ｏ（３０ml）を加えた。沈殿物を吸引濾過し、ＥＡ（１００ml）で洗浄して、標題化合物を無定型粉末として得た。
Ｒf(ＥＡ／ｎ−Ｈ １／１)＝０.２、ＭＳ(ＦＡＢ)＝５２０(Ｍ＋１)
ｅ) ８−〔３−(Ｎ−フタロイルグリシル−Ｎ−メチルアミノ)−２,６−ジクロロベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
水素化ナトリウム（３１３mgの６０％懸濁物；〜８mmol）を、０℃で、ＤＭＦ（４０ml）中の実施例１ｄ）の標題化合物（３.７ｇ、７.１mmol）に加えた。３０分後、ヨウ化メチル（０.５ml、０.８mmol）を注入した。次いで、冷却器をとり除き、そして１時間後、その混合物を再び０℃まで冷却し、Ｈ2Ｏ（７５ml）を加えた。標題化合物を吸引濾過し、冷ＣＨ3ＯＨ（３０ml）で洗浄した。
Ｒf(ＥＡ／ｎ−Ｈ １／１)＝０.２、ＭＳ(ＦＡＢ)＝５３４(Ｍ＋１)
【００３９】
ｆ) ８−〔３−(Ｎ−グリシル−Ｎ−メチルアミノ)−２,６−ジクロロベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
エタノール（６０ml）中の実施例１ｅ）の標題化合物（１.５ｇ、２.８mmol）とヒドラジン水化物（０.５４ml、１１.２mmol）を、室温で１２時間攪拌した。次いで、その混合物を濃縮し、ＣＨ2Ｃｌ2（４０ml）を加え、その混合物を濾過し、その固体の残査をＣＨ2Ｃｌ2（４０ml）で洗浄した。ＣＨ2Ｃｌ2溶液を濃縮して、淡黄色の泡状物として標題化合物を得た。
Ｒf(ＥＡ／ＣＨ3ＯＨ １／１)＝０.２５、ＭＳ(ＦＡＢ)＝４０４(Ｍ＋１)
ｇ) トランス−４−トリフルオロメチルシンナモイルクロリド
塩化チオニル（３３５μｌ、４.６mmol）を、０℃で、乾燥したＣＨ2Ｃｌ2中の４−トリフルオロメチル−Ｅ−けい皮酸（１ｇ、４.６mmol）とピリジン（３７５μｌ、４.６mmol）に加えた。次いで、その混合物を冷却しないで１時間攪拌し、再び０℃に冷却し、湿気を入れないようにしながら濾過した。
濾液（１０ml）は標題化合物を含み、次の反応工程に一部を使用した。
【００４０】
ｈ) ８−〔３−(Ｎ−(４−トランス−トリフルオロメチルシンナモイルグリシル)−Ｎ−メチルアミノ）−２,６−ジクロロベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
実施例１ｇ）の標題化合物の溶液の一部分（２ml、１.５eq、０.９mmol）を、室温でＣＨ2Ｃｌ2（３ml）中の実施例１ｆ）の標題化合物（２５０mg、０.６mmol）に加えた。１８時間後、飽和Ｎａ2ＣＯ3溶液（１０ml）を加え、そしてその混合物をＣＨ2Ｃｌ2で３回抽出した（３×２０ml）。有機層を乾燥し（ＣａＣｌ2）、濃縮した。溶出液としてＥＡを用いたＳｉＯ2クロマトグラフィーに付して、実施例１の標題化合物を無定型粉末として得た。
Ｒf(ＥＡ)＝０.４、ＭＳ(ＥＳＩ)＝６０２(Ｍ＋１)
実施例２から１３の化合物を実施例１と同様にして得た（表１及び２）。
【００４１】
【表４】
0004199315.tif 000016
【００４２】
【表５】
0004199315.tif 000017
【００４３】
【表６】
0004199315.tif 000018
【００４４】
実施例１４
８−〔２,６−ジクロロ−３−(Ｎ−(４−トリフルオロメチルベンジルオキシカルボニルアミノアセチル)−Ｎ−メチルアミノ)ベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
４−トリフルオロメチルベンジルアルコール（６５mg、０.３７mmol）、１,１−カルボニルジイミダゾール（６０mg、０.３７mmol）及びＤＭＡＰ（１０mg）を、ジクロロメタン（５ml）中、室温で６時間攪拌した。次いで、実施例１ｆ）の標題化合物（１５０mg、０.３７mmol）を加え、そして更に１８時間後、酢酸エチル（４０ml）を加えた。その混合物を飽和Ｎａ2ＣＯ3及びＮａＣｌ溶液でそれぞれ１回洗浄し、ＭｇＳＯ4を用いて乾燥し、濃縮した。標題化合物を無色の発泡体として得た。
Ｒf(ＥＡ)＝０.５、ＭＳ(ＦＡＢ)＝６０６(Ｍ＋１)
実施例１５から２４の化合物を実施例１４と同様にして得た（表３）。
【００４５】
【表７】
0004199315.tif 000019
【００４６】
【表８】
0004199315.tif 000020
【００４７】
実施例２５
８−〔３−(Ｎ−(４−トリフルオロメチルフェニルウレイドアセチル)−Ｎ−メチルアミノ)−２,６−ジクロロベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
４−トリフルオロメチルフェニルイソシアナート（９３mg、０.４９mmol）を、ＤＭＥ（１０ml）中の実施例１ｆ）の標題化合物（２００mg、０.４９mmol）に加えた。室温で３時間後、溶媒を真空で除去した。
溶離液としてＥＡを用いたＳiＯ2クロマトグラフィーに付して、標題化合物を得た。
Ｒf(ＥＡ)＝０.４、ＭＳ(ＥＳＩ)＝５９１(Ｍ＋１)
実施例２６から２８の化合物を実施例２５と同様にして得た（表４）。
【００４８】
【表９】
0004199315.tif 000021
【００４９】
実施例２９
８−〔３−(Ｎ−(３−トリフルオロメチルフェニルチオウレイドアセチル−Ｎ−メチルアミノ)−２,６−ジクロロベンジルオキシ〕−２−メチルキノリン
３−トリフルオロメチルフェニルイソチオシアナート（５０mg、０.２４mmol）を、室温でＤＭＥ（４ml）中の実施例１ｆ）の標題化合物(１００mg、０.２４mmol)に加えた。２時間後、その混合物を真空で濃縮し、溶離液としてＥＡを用いたＳｉＯ2クロマトグラフィーに付して、標題化合物を得た。
Ｒf(ＥＡ)＝０.５、ＭＳ(ＦＡＢ)＝６０７(Ｍ＋１)