(57)【要約】  本発明はα−シヌクレイン病の治療又予防方法で使用するための医薬組成物に関し、この組成物は、哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節するための分子を含む。本発明は、哺乳動物である被験体におけるα−シヌクレイン病の治療又は予防方法にも関し、この方法は治療有効量の少なくとも１種の組成物を被験体に投与することを含み、組成物は哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節する分子を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の脳におけるガレクチン−３活性を阻害するための分子を含む、α−シヌクレイン病の治療又は予防方法で使用するための組成物。
【請求項２】
前記分子は、薬剤、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド及びＤＮＡ又はＲＮＡ等の遺伝物質の少なくとも１種から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
炎症を特徴としたα−シヌクレイン病に関連づけられる疾患又は状態の治療又は予防方法において効果的である、請求項１〜２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項４】
前記分子は、グリコピラノース、チオ−ジガラクトシド、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−Ｄ−ガラクトース及びＣ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−１−チオ−Ｄ−ガラクトースから選択される炭水化物を含む低分子量化合物から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
前記分子は、１０００Ｄａ未満の分子量を有する低分子量化合物である、請求項２又は４に記載の組成物。
【請求項６】
前記哺乳動物の脳はヒトの脳である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記疾患又は状態は神経変性疾患又は状態から選択され、例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される、請求項３に記載の組成物。
【請求項８】
前記疾患又は状態はパーキンソン病及びアルツハイマー病から選択される、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記分子はベータ−ガラクトシドであり、誘導体化又は官能化される、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記分子は以下の一般式：
【化１】
2017512822.tif 000017
を有し、式中、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、
ＹはＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ1はサッカリド、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び複素環から成る群から選択され、
Ｒ2はＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ及びＰＯ2から成る群から選択され、
Ｒ3は、少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、少なくとも４個の炭素原子のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル又はアルケニル基、カルボキシ基及びアミノ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、ハロゲンで置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、フェニル基、カルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、アルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲン及び少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲン及び少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、ニトロ基で置換されたフェニル基、スルホ基で置換されたフェニル基、アミン基で置換されたフェニル基、ヒドロキシ基で置換されたフェニル基、カルボニル基で置換されたフェニル基、置換カルボニル基で置換されたフェニル基並びにフェニルアミノ基から成る群から選択され、
Ｒ4は、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び複素環から成る群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記分子は、一般式：
【化２】
2017512822.tif 000018
を有し、式中、ピラノース環の一方の構成はβ−Ｄ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択され、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択される又は結合であり、
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ1及びＲ3は独立してＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ2、ＰＯ及びＣＨ2から成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ2及びＲ4は独立して、少なくとも４個の炭素のアルキル基、少なくとも４個の炭素のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、アミノ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、アミノ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、アミノ基及びカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、アミノ基及びカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたフェニル基、ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基並びに少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたヘテロアリール基から成る群から選択され、Ｒ6及びＲ8は独立して、水素、アシル基、アルキル基、ベンジル基及びサッカリドから成る群から選択され、Ｒ7は、水素、アシル基、アルキル基及びベンジル基から成る群から選択され、Ｒ9は、水素、メチル基、ヒドロキシメチル基、アシルオキシメチル基、アルコキシメチル基及びベンジルオキシメチル基から成る群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記分子は、一般式：
【化３】
2017512822.tif 000019
を有し、式中、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、
ＹはＣＨ2、ＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ2、ＰＯ及びフェニルから成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ1は、サッカリド、置換サッカリド、Ｄ−ガラクトース、置換Ｄ−ガラクトース、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−置換Ｄ−ガラクトース、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、複素環及びその誘導体並びにアミノ基、置換アミノ基、イミノ基又は置換イミノ基から成る群から選択され、
Ｒ2は、水素、アミノ基、置換アミノ基、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、アルコキシ基、置換アルコキシ基、アルキルアミノ基、置換アルキルアミノ基、アリールアミノ基、置換アリールアミノ基、アリールオキシ基、置換アリールオキシ基、アリール基、置換アリール基、ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基、複素環及び置換複素環から成る群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記分子は、以下に示す一般式：
【化４】
2017512822.tif 000020
を有し、式中、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ及びＳＯから成る群から選択され、
Ｙ及びＺは独立して、ＣＯＮＨ又は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環から選択され、Ｒ1及びＲ2は独立して、少なくとも４個の炭素のアルキル基、少なくとも４個の炭素のアルケニル基、少なくとも４個の炭素のアルキニル基、カルバモイル基、アルキル基で置換されたカルバモイル基、アルケニル基で置換されたカルバモイル基、アルキニル基で置換されたカルバモイル基、アリール基で置換されたカルバモイル基、置換アルキル基で置換されたカルバモイル基、置換アリール基で置換されたカルバモイル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメチル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメトキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたフェニル基、ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたヘテロアリール基、チエニル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたチエニルチエニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたチエニル基及び少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたチエニル基から成る群から選択される、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記分子は、一般式（１３）：
【化５】
2017512822.tif 000021
を有し、式中、ピラノース環の少なくとも一方の構成はＤ−ガラクトであり、Ｘは結合であり、Ｒはフェニル基であり、前記フェニル基は任意の位置でメチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フルオロ、クロロ、ブロモ及びトリフルオロメチルから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換され、あるいはＲはチエニル基である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記分子はビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（ＴＤ１３９）であり、任意で遊離の形態、例えば結晶形態である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はα−シヌクレイン病の治療又予防方法で使用するための組成物に関し、この組成物は、哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節するための分子を含む。本発明は、この分子を含む医薬組成物にも関する。さらに、本発明は、哺乳動物である被験体におけるα−シヌクレイン病の治療又は予防方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
中枢神経系（ＣＮＳ）の一部の急性及び慢性の疾患には神経炎症及びミクログリア細胞が関与している。ミクログリアの活性化の制御が、ＣＮＳの急性損傷に関して緩徐進行性神経変性疾患の両方にとっての妥当な治療ターゲットである（Ｌｙｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。α−シヌクレインは、典型的なα−シヌクレイン病（パーキンソン病（ＰＤ）、レヴィ小体型認知症及び多系統萎縮症を含めた幾つかの神経変性障害に関わると考えられているシナプスタンパク質である。全ての神経変性状態に共通する特徴は、ミクログリア細胞の活性化である。
【０００３】
パーキンソン病（ＰＤ）は運動緩慢、固縮及び振戦を特徴とする進行性の運動神経変性障害であり、６０歳を超える人口の約１％が罹患する（Ｓａｍｉｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｃａｓｅｙ，２０１３）。病理学的には、ＰＤは、グリア細胞の活性化、脳炎、進行性のドーパミン作動性細胞の変性（Ｑｉａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）並びにレヴィ小体及びレヴィ神経突起と称される目印のタンパク質封入体へのα−シヌクレインの蓄積を特徴とする（Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９９７）。炎症応答中のミクログリアの活性化がＰＤにおける神経変性に関わっていると考えられている（Ｔｏｍａｓ−Ｃａｍａｒｄｉｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００４；Ｖｉｌｌａｒ−Ｃｈｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。しかしながら、ミクログリアの応答及び神経変性の調節プロセスはいまだに解明されていない。ＰＤとα−シヌクレインとの明確な関連は、ＰＤの病理発生に関係している可能性があるα−シヌクレイン遺伝子（ＳＮＣＡ）における変異により示されている（Ｋｒｕｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。α−シヌクレインタンパク質は主にシナプス前終末に見られ、ヒトの脳には極めて豊富に存在し、他の特徴の中でもシナプスの再編成、神経発達及び神経可塑性と関連がある（Ｇｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５；Ｋｈｏｌｏｄｉｌｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９；Ｓｔｅｆａｎｉｓ，２０１２）。主にニューロンで発現するが、免疫細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞）を含めた様々な細胞型及び単球でも発現する。さらに、分泌されたα−シヌクレインは、凝集のシーディングを含めた有害な作用を周囲の細胞に及ぼすことで疾患の伝播に寄与している可能性がある（Ｓｔｅｆａｎｉｓ，２０１２；Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１４）。
【０００４】
炎症性のミクログリア応答におけるα−シヌクレインの役割は、インビトロ及びインビボの両方で実証されている。例えば、α−シヌクレインでの処理は、単球（Ｃｏｄｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）におけるＩＬ−１βの放出を引き起こすことができ、またＴｏｌｌ様受容体２（ＴＬＲ２）（Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）及びＴｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）（Ｆｅｌｌｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）の活性化は、ミクログリアのα−シヌクレイン誘発性活性化に関与している受容体であると特定されている。今日まで、様々な研究施設が、細胞外α−シヌクレインがミクログリアの活性化及び炎症応答に及ぼす作用について報告している。例えば、Ｃｏｄｏｌｏらは、線維性α−シヌクレインが炎症応答を引き起こし得ると報告している。Ｋｉｍらは、具体的にはニューロンから放出されたオリゴマー状のα−シヌクレインもミクログリアの活性化を引き起こし得ると報告している。これらの発見は、ミクログリア応答への作用がタンパク質の起源（細胞由来対組み換え）、使用したタンパク質のタイプ（野生型又は変異体）（Ｒｏｊａｎａｔｈａｍｍａｎｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）に左右されること、あるいはタンパク質が生成される分子の状態（モノマー状、オリゴマー状又は線維状）がミクログリアに様々な作用を及ぼし得ることを実証している。
【０００５】
活性化したミクログリアは主に２種の特徴がはっきりしたプロファイル、すなわち代替プロファイル（抗炎症性）及び古典的プロファイル（炎症促進性）を示し得て、表面タンパク質の違いがミクログリア細胞による環境の知覚を可能にする。刺激に応じて、ミクログリア細胞は静止状態から炎症又は抗炎症プロファイルへとシフトし得る。炎症促進性プロファイルにおいて、ミクログリア細胞は、神経細胞の生存を弱体化させると判明している様々な炎症促進分子（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γ又は一酸化窒素）を放出する（Ｄｅ  Ｐａｂｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｚｉｎｄｌｅｒ  ａｎｄ  Ｚｉｐｐ，２０１０）。代替プロファイルは、ミクログリアの活性化を低下させることができる抗炎症因子（ＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＴＧＦ−β）の放出を特徴とする（Ｓｔｉｒｌｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。ＥＲＫ  １／２、ｐ３８  ＭＡＰＫ、インフラマソーム経路及びＮＦ−κβを含め、α−シヌクレインミクログリア活性化には様々な経路が関わっていると言われているが、炎症モジュレータ、例えばガレクチン−３の役割は研究されていない。ガレクチン−３は活性化時のミクログリアを含めた免疫細胞を含め幅広い細胞で発現し、また脳脊髄炎、外傷性脳損傷、ＥＡＥ及び虚血性脳障害等の障害に関わっている分子である（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００９；Ｌａｌａｎｃｅｔｔｅ−Ｈｅｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｐａｊｏｏｈｅｓｈ−Ｇａｎｊｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。しかしながら、ＰＤに関わる病理学的プロセスにおけるガレクチン−３の役割はいまだに研究されていない。
【０００６】
ガレクチン−３はβ−ガラクトシド結合レクチンファミリーに属するメンバーであり、非ＣＲＤ  Ｎ末端に結合した糖鎖認識ドメイン（ＣＲＤ）から構成される。これまでの研究から、細胞接着、増殖、クリアランス（Ｌｅｅ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）、アポトーシス、細胞活性化、細胞遊走（Ｓｈｉｎ，２０１３）及び炎症制御（Ｌｉｕ  ａｎｄ  Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ，２０１０）を含めた様々な生物学的活性においてガレクチン−３が役割を果たすことが判明している。ガレクチン−３は、様々な組織、また細胞質又は核の細胞内外で見られる（Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。最新のエビデンスは、ガレクチン−３が細胞型及び侵襲の種類に応じて炎症促進性及び抗炎症性の両方のプロファイルにおいて役割を果たすことを示唆している（Ｓｈｉｎ，２０１３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Ｌｙｍａｎ  Ｍ，Ｌｌｏｙｄ  ＤＧ，Ｊｉ  Ｘ，Ｖｉｚｃａｙｃｈｉｐｉ  ＭＰ，Ｍａ  Ｄ（２０１４）Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ａｎｄ  ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７９Ｃ：１−１２
【非特許文献２】Ｓａｍｉｉ  Ａ，Ｎｕｔｔ  ＪＧ，Ｒａｎｓｏｍ  ＢＲ（２００４）Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅ  Ｌａｎｃｅｔ  ３６３：１７８３−１７９３
【非特許文献３】Ｃａｓｅｙ  Ｇ（２０１３）Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ａ  ｌｏｎｇ  ａｎｄ  ｄｉｆｆｉｃｕｌｔ  ｊｏｕｒｎｅｙ．Ｎｕｒｓｉｎｇ  Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  １９：２０−２４
【非特許文献４】Ｑｉａｏ  Ｓ，Ｌｕｏ  ＪＨ，Ｊｉｎ  ＪＨ（２０１２）［Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ］．Ｚｈｅｊｉａｎｇ  ｄａ  ｘｕｅ  ｘｕｅ  ｂａｏ  Ｙｉ  ｘｕｅ  ｂａｎ＝Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｚｈｅｊｉａｎｇ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ４１：２１０−２１４
【非特許文献５】Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ  ＭＧ，Ｓｃｈｍｉｄｔ  ＭＬ，Ｌｅｅ  ＶＭ，Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋｉ  ＪＱ，Ｊａｋｅｓ  Ｒ，Ｇｏｅｄｅｒｔ  Ｍ（１９９７）Ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｉｎ  Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｉｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ３８８：８３９−８４０
【非特許文献６】Ｔｏｍａｓ−Ｃａｍａｒｄｉｅｌ  Ｍ，Ｒｉｔｅ  Ｉ，Ｈｅｒｒｅｒａ  ＡＪ，ｄｅ  Ｐａｂｌｏｓ  ＲＭ，Ｃａｎｏ  Ｊ，Ｍａｃｈａｄｏ  Ａ，Ｖｅｎｅｒｏ  ＪＬ（２００４）Ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅａｃｔｉｏｎ，ｐｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｎｉｔｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ  ｂａｒｒｉｅｒ，ａｎｄ  ｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｎｉｇｒａｌ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｓｙｓｔｅｍ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  １６：１９０−２０１
【非特許文献７】Ｖｉｌｌａｒ−Ｃｈｅｄａ  Ｂ，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ−Ｍｅｉｊｉｄｅ  Ａ，Ｊｏｇｌａｒ  Ｂ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐｅｒｅｚ  ＡＩ，Ｇｕｅｒｒａ  ＭＪ，Ｌａｂａｎｄｅｉｒａ−Ｇａｒｃｉａ  ＪＬ（２０１２）Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ  ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ−ｋｉｎａｓｅ  ｐａｔｈｗａｙ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ  ｎｅｕｒｏｎ  ｄｅａｔｈ．Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｖｉａ  ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ  ｔｙｐｅ  １  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｄｉｓｅａｓｅ  ４７：２６８−２７９
【非特許文献８】Ｋｒｕｇｅｒ  Ｒ，Ｋｕｈｎ  Ｗ，Ｍｕｌｌｅｒ  Ｔ，Ｗｏｉｔａｌｌａ  Ｄ，Ｇｒａｅｂｅｒ  Ｍ，Ｋｏｓｅｌ  Ｓ，Ｐｒｚｕｎｔｅｋ  Ｈ，Ｅｐｐｌｅｎ  ＪＴ，Ｓｃｈｏｌｓ  Ｌ，Ｒｉｅｓｓ  Ｏ（１９９８）Ａｌａ３０Ｐｒｏ  ｍｕｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅ  ｅｎｃｏｄｉｎｇ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ  １８：１０６−１０８
【非特許文献９】Ｇｅｏｒｇｅ  ＪＭ，Ｊｉｎ  Ｈ，Ｗｏｏｄｓ  ＷＳ，Ｃｌａｙｔｏｎ  ＤＦ（１９９５）Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｄｕｒｉｎｇ  ｔｈｅ  ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｐｅｒｉｏｄ  ｆｏｒ  ｓｏｎｇ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｚｅｂｒａ  ｆｉｎｃｈ．Ｎｅｕｒｏｎ  １５：３６１−３７２
【非特許文献１０】Ｋｈｏｌｏｄｉｌｏｖ  ＮＧ，Ｎｅｙｓｔａｔ  Ｍ，Ｏｏ  ＴＦ，Ｌｏ  ＳＥ，Ｌａｒｓｅｎ  ＫＥ，Ｓｕｌｚｅｒ  Ｄ，Ｂｕｒｋｅ  ＲＥ（１９９９）Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｒａｔ  ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ  ｎｉｇｒａ  ｐａｒｓ  ｃｏｍｐａｃｔａ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ  ｂｙ  ｍＲＮＡ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｄｉｓｐｌａｙ  ｉｎ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ  ｔａｒｇｅｔ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ７３：２５８６−２５９９
【非特許文献１１】Ｓｔｅｆａｎｉｓ  Ｌ（２０１２）ａｌｐｈａ−Ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｉｎ  Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ２：ａ００９３９９
【非特許文献１２】Ｌｅｅ  ＨＪ，Ｂａｅ  ＥＪ，Ｌｅｅ  ＳＪ（２０１４）Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ−ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  ｃｒｕｃｉａｌ  ｆａｃｔｏｒ  ｉｎ  Ｌｅｗｙ  ｂｏｄｙ  ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ  ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ
【非特許文献１３】Ｃｏｄｏｌｏ  Ｇ，Ｐｌｏｔｅｇｈｅｒ  Ｎ，Ｐｏｚｚｏｂｏｎ  Ｔ，Ｂｒｕｃａｌｅ  Ｍ，Ｔｅｓｓａｒｉ  Ｉ，Ｂｕｂａｃｃｏ  Ｌ，ｄｅ  Ｂｅｒｎａｒｄ  Ｍ（２０１３）Ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｓｏｍｅ  ｂｙ  ａｇｇｒｅｇａｔｅｄ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ，ａｎ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｉｎ  ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ．ＰｌｏＳ  ｏｎｅ  ８：ｅ５５３７５
【非特許文献１４】Ｋｉｍ  Ｃ，Ｈｏ  ＤＨ，Ｓｕｋ  ＪＥ，Ｙｏｕ  Ｓ，Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｓ，Ｋａｎｇ  Ｊ，Ｊｏｏｎｇ  Ｌｅｅ  Ｓ，Ｍａｓｌｉａｈ  Ｅ，Ｈｗａｎｇ  Ｄ，Ｌｅｅ  ＨＪ，Ｌｅｅ  ＳＪ（２０１３）Ｎｅｕｒｏｎ−ｒｅｌｅａｓｅｄ  ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｉｓ  ａｎ  ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  ａｇｏｎｉｓｔ  ｏｆ  ＴＬＲ２  ｆｏｒ  ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ．Ｎａｔｕｒｅ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ４：１５６２
【非特許文献１５】Ｆｅｌｌｎｅｒ  Ｌ，Ｉｒｓｃｈｉｃｋ  Ｒ，Ｓｃｈａｎｄａ  Ｋ，Ｒｅｉｎｄｌ  Ｍ，Ｋｌｉｍａｓｃｈｅｗｓｋｉ  Ｌ，Ｐｏｅｗｅ  Ｗ，Ｗｅｎｎｉｎｇ  ＧＫ，Ｓｔｅｆａｎｏｖａ  Ｎ（２０１３）Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ４  ｉｓ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ  ａｎｄ  ａｓｔｒｏｇｌｉａ．Ｇｌｉａ  ６１：３４９−３６０
【非特許文献１６】Ｒｏｊａｎａｔｈａｍｍａｎｅｅ  Ｌ，Ｍｕｒｐｈｙ  ＥＪ，Ｃｏｍｂｓ  ＣＫ（２０１１）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｔａｎｔ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  ８：４４
【非特許文献１７】Ｄｅ  Ｐａｂｌｏｓ  ＲＭ，Ｈｅｒｒｅｒａ  ＡＪ，Ｖｉｌｌａｒａｎ  ＲＦ，Ｃａｎｏ  Ｊ，Ｍａｃｈａｄｏ  Ａ（２００５）Ｄｏｐａｍｉｎｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｉｎ  ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ  ｎｉｇｒａ．ＦＡＳＥＢ  ｊｏｕｒｎａｌ：ｏｆｆｉｃｉａｌ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １９：４０７−４０９
【非特許文献１８】Ｚｉｎｄｌｅｒ  Ｅ，Ｚｉｐｐ  Ｆ（２０１０）Ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ＣＮＳ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｂｅｓｔ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ＆  ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎａｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ２４：５５１−５６２
【非特許文献１９】Ｓｔｉｒｌｉｎｇ  ＤＰ，Ｃｕｍｍｉｎｓ  Ｋ，Ｍｉｓｈｒａ  Ｍ，Ｔｅｏ  Ｗ，Ｙｏｎｇ  ＶＷ，Ｓｔｙｓ  Ｐ（２０１３）Ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ  ｉｓ  ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ａｆｔｅｒ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎｊｕｒｙ．Ｂｒａｉｎ：ａ  ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ
【非特許文献２０】Ｊｉａｎｇ  ＨＲ，Ａｌ  Ｒａｓｅｂｉ  Ｚ，Ｍｅｎｓａｈ−Ｂｒｏｗｎ  Ｅ，Ｓｈａｈｉｎ  Ａ，Ｘｕ  Ｄ，Ｇｏｏｄｙｅａｒ  ＣＳ，Ｆｕｋａｄａ  ＳＹ，Ｌｉｕ  ＦＴ，Ｌｉｅｗ  ＦＹ，Ｌｕｋｉｃ  ＭＬ（２００９）Ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｔｈｅ  ｓｅｖｅｒｉｔｙ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １８２：１１６７−１１７３
【非特許文献２１】Ｌａｌａｎｃｅｔｔｅ−Ｈｅｂｅｒｔ  Ｍ，Ｓｗａｒｕｐ  Ｖ，Ｂｅａｕｌｉｅｕ  ＪＭ，Ｂｏｈａｃｅｋ  Ｉ，Ａｂｄｅｌｈａｍｉｄ  Ｅ，Ｗｅｎｇ  ＹＣ，Ｓａｔｏ  Ｓ，Ｋｒｉｚ  Ｊ（２０１２）Ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  Ｉｓ  Ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｉｄｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｇｌｉａ  Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｉｓｃｈｅｍｉｃ  Ｉｎｊｕｒｙ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ３２：１０３８３−１０３９５
【非特許文献２２】Ｐａｊｏｏｈｅｓｈ−Ｇａｎｊｉ  Ａ，Ｋｎｏｂｌａｃｈ  ＳＭ，Ｆａｄｅｎ  ＡＩ，Ｂｙｒｎｅｓ  ＫＲ（２０１２）Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ａｆｔｅｒ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎｊｕｒｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ．Ｂｒａｉｎ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  １４７５：９６−１０５
【非特許文献２３】Ｌｅｅ  ＨＪ，Ｓｕｋ  ＪＥ，Ｂａｅ  ＥＪ，Ｌｅｅ  ＳＪ（２００８）Ｃｌｅａｒａｎｃｅ  ａｎｄ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ａｌｐｈａ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎ  ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ  ｉｎ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ３７２：４２３−４２８
【非特許文献２４】Ｓｈｉｎ  Ｔ（２０１３）Ｔｈｅ  ｐｌｅｉｏｔｒｏｐｉｃ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  ｉｎ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：  ａ  ｒｅｖｉｅｗ．Ａｃｔａ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ  １１５：４０７−４１１
【非特許文献２５】Ｌｉｕ  ＦＴ，Ｒａｂｉｎｏｖｉｃｈ  ＧＡ（２０１０）Ｇａｌｅｃｔｉｎｓ：  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ａｎｄ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  １１８３：１５８−１８２
【非特許文献２６】Ｙａｎｇ  ＲＹ，Ｈｓｕ  ＤＫ，Ｌｉｕ  ＦＴ（１９９６）Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｇａｌｅｃｔｉｎ−３  ｍｏｄｕｌａｔｅｓ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ  ９３：６７３７−６７４２
【発明の概要】
【０００８】
発明者は、α−シヌクレイン、特には凝集形態にあるα−シヌクレインがミクログリアの活性化を誘発することを実証した。発明者は、ガレクチン−３が、α−シヌクレインが誘発するミクログリアの炎症促進応答において重要な役割を果たすことを示す。特に、ガレクチン−３がミクログリアにおいてアルファ−シヌクレインが引き起こす炎症応答を律速すると判明している。α−シヌクレインで処理すると、マウスミクログリア細胞株ＢＶ２において、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）、貪食及び炎症促進性サイトカイン（ＩＬ−１β及びＩＬ−１２）等の幾つかの炎症促進マーカーの増加として測定される炎症活性化の顕著な増大が見られた。低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用したガレクチン−３レベルの低下、ガレクチン−３ＫＯマウス由来のミクログリアの使用又はビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（公知のガレクチン−３阻害物質）を使用したガレクチン−３活性の薬理学的介入はα−シヌクレインが誘発する炎症応答を著しく低下させることが判明した。
【０００９】
すなわち、最新のデータは、α−シヌクレイン誘発性の炎症応答を低下させてニューロン喪失の防止に役立ち得ることから、ガレクチン活性、特にはガレクチン−３活性を薬理学的に調節することがα−シヌクレイン病（例えば、パーキンソン病（ＰＤ）、レヴィ小体型認知症、多系統萎縮症）を含めた神経変性疾患の新しい治療アプローチになり得ることを示唆している。
【００１０】
アルツハイマー病におけるα−シヌクレインの関与が示唆されており、アルツハイマー病患者においては可溶性α−シヌクレインが２倍に増加し、典型的なアルツハイマー病関連タンパク質Ａβ及びタウのレベルより認知機能障害と強く相関している（Ｌａｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２）。
【００１１】
多発性硬化症は強い炎症性要素を伴う神経変性疾患であり、α−シヌクレインは病変部のミクログリアで発現し、また疾患の進行に寄与し得る（Ｌｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。α−シヌクレインは虚血発作にも関わっており、虚血脳におけるα−シヌクレインの線維化は正常なマウスにおけるα−シヌクレイン凝集体の形成につながり、またα−シヌクレインを過剰発現しているマウスにおける虚血（及びその結果としてのα−シヌクレイン原線維形成増加）はより大きな梗塞巣を有する。
【００１２】
てんかんは、梗塞巣の活性化と関連づけられている（Ｕｎａｌ−Ｃｅｖｉｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）。脳のてんかん原性部位では活性化したミクログリア細胞が見られ、α−シヌクレインタンパク質レベルが高いため（Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２０１０）、α−シヌクレインがミクログリアの活性化を誘発し、疾患の進行に寄与する。
【００１３】
中枢神経系の外傷により脳脊髄液中のα−シヌクレインレベルは上昇するが、これは潜在的にはミクログリア細胞の活性化を含めた神経病理学上の二次的な事象を反映していると示唆されている（Ｍｏｎｄｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）
【００１４】
乳児神経軸索ジストロフィ（ＩＮＡＤ）は、α−シヌクレインタンパク質の凝集（Ｒｉｋｕ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）及びミクログリアの活性化（Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１１）とそれゆえのα−シヌクレイン誘発性ミクログリア活性化の潜在的な関与を特徴とする神経変性障害である。
【００１５】
アルツハイマー病（ＡＤ）は最も一般的な神経変性疾患であり、脳血管性認知症を併発することが多い。疫学的研究及び臨床研究から、疾患プロセスにおいては神経炎症が重要な役割を果たすことが判明している（Ｈｅｎｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。アルツハイマー病の病態形成の中心となるのは脳におけるプラークの形成である。これらのプラークは凝集したアミロイド−β（Ａβ）から成り、神経炎症を引き起こすのはこれらの凝集体の蓄積である。脳の一次免疫細胞であるミクログリアはＡβプラークを取り囲み、貪食及び分解により除去しようとする。これらの細胞は進化的に特定の分子に反応するように進化してきており、細菌等の外部からの物質に迅速に応答する。脳内のＡβは細菌上に存在する分子構造体とほぼ同じである（Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８）。脳において、制御不能又は慢性的な炎症応答は神経細胞を損傷する場合がある。
【００１６】
急性炎症事象への反応においては、末梢性炎症に応答して脳において炎症を鎮める調節機構が幾つかある（Ｈｅｎｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。しかしながら、アルツハイマー病における神経炎症は慢性的な炎症であり、これはミクログリアが既に予備刺激されていてさらなる活性化に応答性があり、有害なＭ１ミクログリア表現型への迅速な切り換えを引き起こすからである（Ｈｅｎｅｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００１７】
炭水化物結合タンパク質ｇａｌ３は、中枢神経系疾患及び慢性炎症を含めた幾つかの炎症状態において重要であると示唆されている（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｓｅｔｈｉ，２００９）。本発明の発明者は最近、自然免疫における新しい分子経路を特定した。ミクログリアにより産生されたｇａｌ３は炎症における重要な受容体であるＴＬＲ４に結合することができる（Ｂｕｒｇｕｉｌｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。この研究において、本発明の発明者は、ｇａｌ３の欠損は脳卒中／脳虚血の動物モデル及びパーキンソン病のモデルにおいて神経保護的であることを示した（Ｂｕｒｇｕｉｌｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，２０１５）。
【００１８】
第１の態様において、本発明は、α−シヌクレイン病の治療又は予防方法で使用するための組成物、例えば医薬組成物に関し、この組成物はガレクチン活性を薬理学的に調節する分子、典型的には哺乳動物の脳、例えばヒトの脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節するための分子を含む。
【００１９】
組成物の一実施形態において、ガレクチン活性はガレクチン−３活性である。
【００２０】
さらなる実施形態において、ガレクチン活性の薬理学的な調節は、ガレクチン活性、例えばガレクチン−３活性の阻害である。
【００２１】
さらに別の実施形態において、分子は、薬剤、ポリマー、タンパク質、ペプチド、炭水化物、低分子量化合物、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド及び遺伝物質、例えばＤＮＡ又はＲＮＡの少なくとも１種から選択される。典型的には、分子はβ−ガラクトシドであり、誘導体化又は官能化される。特定の実施形態において、分子は、グリコピラノースから選択される炭水化物を含む低分子量化合物から選択される。別の特定の実施形態において、分子は、チオ−ジガラクトシドから選択される炭水化物を含む低分子量化合物から選択される。別の特定の実施形態において、分子はＣ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−Ｄ−ガラクトースから選択される炭水化物を含む低分子量化合物から選択される。別の特定の実施形態において、分子は、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−１−チオ−Ｄ−ガラクトースから選択される炭水化物を含む低分子量化合物から選択される。好ましくは、低分子量化合物は１０００Ｄａ未満、例えば５００Ｄａ未満である。
【００２２】
さらなる実施形態において、組成物は、炎症を特徴としたα−シヌクレイン病に関連づけられる疾患又は状態の治療又は予防方法において効果的である。
【００２３】
さらに別の実施形態において、疾患又は状態は、神経変性疾患又は状態から選択される。神経変性疾患又は状態のさらなる実施形態は、パーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される。特定の実施形態において、α−シヌクレイン病はパーキンソン病から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病はレヴィ小体型認知症から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病はアルツハイマー病から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は外傷性脳損傷から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は筋萎縮性側索硬化症から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病はピック病から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は脳卒中から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は多発性硬化症から選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病はてんかんから選択される。別の実施形態において、α−シヌクレイン病は乳児神経軸索ジストロフィから選択される。
【００２４】
さらなる実施形態において、分子は以下の一般式：
【００２５】
【化１】
2017512822.tif 000002
【００２６】
を有し、式中、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、
ＹはＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ1はサッカリド、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び複素環から成る群から選択され、
Ｒ2はＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ及びＰＯ2から成る群から選択され、
Ｒ3は、少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、少なくとも４個の炭素原子のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル又はアルケニル基、カルボキシ基及びアミノ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、ハロゲンで置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、フェニル基、カルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、アルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲン及び少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲン及び少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、ニトロ基で置換されたフェニル基、スルホ基で置換されたフェニル基、アミン基で置換されたフェニル基、ヒドロキシ基で置換されたフェニル基、カルボニル基で置換されたフェニル基、置換カルボニル基で置換されたフェニル基並びにフェニルアミノ基から成る群から選択され、
Ｒ4は、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び複素環から成る群から選択される。一実施形態において、Ｒ1は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、上記のサッカリドの少なくとも２種を含む二糖又はオリゴ糖及びこれらの誘導体から成る群から選択されるサッカリドである。
【００２７】
さらなる実施形態において、ＹはＮＨである。
【００２８】
さらに別の実施形態において、ＸはＯである。
【００２９】
さらなる実施形態において、ハロゲンは個別にＦ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから成る群から選択される。
【００３０】
さらに別の実施形態において、分子は、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［３−カルボキシプロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［｛Ｚ｝−３−カルボキシプロペンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−ベンズアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−ベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［４−メトキシ−２，３，５，６−テトラフルオロベンズ（ｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｂｅｎｚ）−アミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−３，４，５，６−テトラフルオロベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−メタンスルホンアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［−４−ニトロベンゼンスルホンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−フェニルアミノカルボニルアミノ−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−アミノアセトアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド及びメチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（−３−［｛２Ｓ｝−２−アミノ−３−カルボキシ−プロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシドから選択される。
【００３１】
別の実施形態において、分子は、一般式：
【００３２】
【化２】
2017512822.tif 000003
【００３３】
を有し、式中、ピラノース環の一方の構成はβ−Ｄ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択され、
ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択される又は結合であり、
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ1及びＲ3は独立してＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ2、ＰＯ及びＣＨ2から成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ2及びＲ4は独立して、少なくとも４個の炭素のアルキル基、少なくとも４個の炭素のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、アミノ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、アミノ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、アミノ基及びカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、アミノ基及びカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたフェニル基、ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基並びに少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたヘテロアリール基から成る群から選択され、Ｒ6及びＲ8は独立して、水素、アシル基、アルキル基、ベンジル基及びサッカリドから成る群から選択され、Ｒ7は、水素、アシル基、アルキル基及びベンジル基から成る群から選択され、Ｒ9は、水素、メチル基、ヒドロキシメチル基、アシルオキシメチル基、アルコキシメチル基及びベンジルオキシメチル基から成る群から選択される。
【００３４】
一実施形態において、ＹはＮＨである。さらなる実施形態において、ＺはＮＨである。さらに別の実施形態において、ＸはＳである。さらなる実施形態において、Ｒ1はＣＯである。さらに別の実施形態において、Ｒ3はＣＯである。さらなる実施形態において、Ｒ2又はＲ4は芳香族、例えば芳香環であり、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8のいずれかは水素であり、あるいはＲ9はヒドロキシメチル基である。
【００３５】
さらに別の実施形態において、分子は、ビス−（３−デオキシ−３−ベンズアミド−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−（３，５−ジメトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス（３−デオキシ−３−（２−ナフトアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［４−（ジメチルアミノ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−メチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−アセチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［２−（３−カルボキシ）−ナフトアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−［３−デオキシ−３−（３，４−メチレンジオキシ）ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−メトキシカルボニルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−カルボキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ヒドロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３，５−ジベンジルオキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ノニルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−ノニルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［３−ベンジルオキシ−５−（４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［３−メトキシ−５−（４−メチル−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン及びビス−（３−デオキシ−３−（３−アリルオキシ−５−ベンジルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンから選択される。
【００３６】
別の実施形態において、分子は、一般式：
【００３７】
【化３】
2017512822.tif 000004
【００３８】
を有し、式中、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、
ＹはＣＨ2、ＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ2、ＰＯ及びフェニルから成る群から選択される又は結合であり、
Ｒ1は、サッカリド、置換サッカリド、Ｄ−ガラクトース、置換Ｄ−ガラクトース、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−置換Ｄ−ガラクトース、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、複素環及びその誘導体並びにアミノ基、置換アミノ基、イミノ基又は置換イミノ基から成る群から選択され、
Ｒ2は、水素、アミノ基、置換アミノ基、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、アルコキシ基、置換アルコキシ基、アルキルアミノ基、置換アルキルアミノ基、アリールアミノ基、置換アリールアミノ基、アリールオキシ基、置換アリールオキシ基、アリール基、置換アリール基、ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基、複素環及び置換複素環から成る群から選択される。
【００３９】
一実施形態において、Ｒ1は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、上記のサッカリドの少なくとも２種を含む二糖又はオリゴ糖及びこれらの誘導体から成る群から選択されるサッカリドである。典型的には、Ｒ1はガラクトース、グルコース又はＮ−アセチルグルコサミンである。別の実施形態において、Ｒ1は置換ガラクトースである。さらなる実施形態において、Ｒ1は置換グルコース又は置換Ｎ−アセチルグルコサミンのいずれかである。別の実施形態において、Ｒ1はＣ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−置換ガラクトースである。
【００４０】
さらなる実施形態において、ＹはＣＯ、ＳＯ2又は結合である。
【００４１】
さらに別の実施形態において、Ｒ2はアミン又はアリール基であり、あるいはＲ2は置換フェニル基であり、置換基は、ハロゲン、アルコキシ、アルキル、ニトロ、スルホ、アミノ、ヒドロキシ又はカルボニル基から成る群から選択される１種以上である。
【００４２】
さらなる実施形態において、ＸはＯ又はＳである。
【００４３】
さらに別の実施形態において、分子は、メチル３−デオキシ−３−（１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−プロピル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−メトキシカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−（１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−フェニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−ｐ−トリルスルホニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−ブチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−ベンジルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−｛４−（３−ヒドロキシプロパ−１−イルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−｛４−［２−（Ｎ−モルホリノ）−エチルアミノカルボニル］−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−メチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド、ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３デオキシ−３−｛４−（４−メトキシフェニル）−Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（３，５−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（１−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−���オ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール−カルバルドキシム（ｃａｒｂａｌｄｏｘｉｍ）、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム及びＯ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシムから選択される。
【００４４】
別の実施形態において、分子は、以下に示す一般式：
【００４５】
【化４】
2017512822.tif 000005
【００４６】
を有し、式中、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、
ＸはＯ、Ｓ及びＳＯから成る群から選択され、
Ｙ及びＺは独立して、ＣＯＮＨ又は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環から選択され、Ｒ1及びＲ2は独立して、少なくとも４個の炭素のアルキル基、少なくとも４個の炭素のアルケニル基、少なくとも４個の炭素のアルキニル基、カルバモイル基、アルキル基で置換されたカルバモイル基、アルケニル基で置換されたカルバモイル基、アルキニル基で置換されたカルバモイル基、アリール基で置換されたカルバモイル基、置換アルキル基で置換されたカルバモイル基、置換アリール基で置換されたカルバモイル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメチル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメトキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたフェニル基、ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたヘテロアリール基、チエニル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたチエニルチエニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたチエニル基及び少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたチエニル基から成る群から選択される。
【００４７】
一実施形態において、ＹはＣＯＮＨである。
【００４８】
別の実施形態において、ＹはＣＯＮＨであり、ＣＯＮＨ基はＮ原子を介してピラノース環に結合する。
【００４９】
さらなる実施形態において、Ｙは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環である。
【００５０】
さらに別の実施形態において、Ｙは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環はＮ１原子を介してピラノース環に結合する。
【００５１】
さらなる実施形態において、ＺはＣＯＮＨである。
【００５２】
さらに別の実施形態において、ＺはＣＯＮＨであり、ＣＯＮＨ基はＮ原子を介してシクロヘキサンに結合する。
【００５３】
さらなる実施形態において、Ｚは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環である。
【００５４】
さらに別の実施形態において、Ｚは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環はＮ１原子を介してシクロヘキサンに結合する。
【００５５】
さらなる実施形態において、Ｒ1は、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合する。
【００５６】
さらに別の実施形態において、Ｒ1はアルキル化カルバモイル基、フッ素化フェニル基又はチエニル基である。
【００５７】
さらなる実施形態において、Ｒ2は、１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合する。
【００５８】
さらに別の実施形態において、Ｒ2はアルキル化カルバモイル基、フッ素化フェニル基又はチエニル基である。
【００５９】
別の実施形態において、Ｒ1及びＲ2は独立して、カルバモイル基、アルキル化カルバモイル基、アルケニル化カルバモイル基、アリール化カルバモイル基、フェニル基、置換フェニル基、ハロゲン化フェニル基、フッ素化フェニル基、塩素化フェニル基、臭素化フェニル基、アルキル化フェニル基、アルケニル化フェニル基、トリフルオロメチル化フェニル基、メトキシル化フェニル基、トリフルオロメトキシル化フェニル基、ナフチル基、置換ナフチル基、ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基、チエニル基及び置換チエニル基から成る群から選択される。
【００６０】
さらなる実施形態において、ＸはＯ又はＳである。
【００６１】
さらに別の実施形態において、分子は、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）シクロヘキシル）３−デオキシ−（３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル））−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、（（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−（４−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（３−チエニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−（３−チエニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−（Ｎ−（１−プロピル）−カルバモイル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド及び（１Ｒ，２Ｒ，３Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−シクロヘキシル）３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシドから選択される。
【００６２】
さらに具体的な実施形態において、分子は一般式（１３）：
【００６３】
【化５】
2017512822.tif 000006
【００６４】
を有し、式中、ピラノース環の少なくとも一方の構成はＤ−ガラクトであり、Ｘは結合であり、Ｒはフェニル基であり、フェニル基は任意の位置でメチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フルオロ、クロロ、ブロモ及びトリフルオロメチルから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換され、あるいはＲはチエニル基である。好ましくは、Ｒは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環に結合したフェニル基であり、このフェニルは任意の位置でフルオロ、クロロ及びブロモから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換される。さらなる実施形態において、Ｒは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環に結合したフェニル基であり、このフェニルは任意の位置でフルオロから選択される１つ以上の置換基で置換される。
【００６５】
さらなる実施形態において、式（１３）中の両方のピラノース環の構成はＤ−ガラクトである。
【００６６】
さらに別の実施形態において、分子は、
【００６７】
【化６】
2017512822.tif 000007
【００６８】
（本明細書においてはＴＤ１３９とも称する）であり、任意で遊離の形態、例えば結晶形態である。
【００６９】
別の態様において、本発明は、哺乳動物である被験体におけるα−シヌクレイン病の治療又は予防方法に関し、本方法は、治療有効量の少なくとも１種の組成物を被験体に投与することを含み、組成物は、哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節する分子を含む。
【００７０】
一実施形態において、ガレクチン活性はガレクチン−３活性である。
【００７１】
さらなる実施形態において、ガレクチン活性の薬理学的調節は、ガレクチン活性又はガレクチン−３活性の阻害である。
【００７２】
さらに別の実施形態において、本方法は、炎症を特徴とするα−シヌクレイン病に関連づけられる疾患又は状態を治療又は予防することである。
【００７３】
さらなる実施形態において、この疾患又は状態は神経変性疾患又は状態から選択され、例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される。
【００７４】
さらに別の実施形態において、投与は、被験体又は被験体の組織に、少なくとも約１ナノグラム（ｎｇ）〜約１００ｎｇ、約１００〜約１０００ｎｇ、約１０００〜約２０００ｎｇ、約２０００〜約３０００ｎｇ、約３０００〜約４０００ｎｇ、約４０００〜約５０００ｎｇ、約５０００〜約１００００ｎｇ、１００００〜約２００００ｎｇ、２００００〜約３００００ｎｇ、約３００００〜約４００００ｎｇ、約４００００〜約６００００ｎｇ、約６００００〜約８００００ｎｇ、約１００マイクログラム（μｇ）〜約５００μｇ、約５００〜約２０００μｇ、約２０００〜約４０００μｇ、約４０００〜約６０００μｇ、約６０００〜約８０００μｇ、約８０００〜約１００００μｇ、約１００００〜約２００００μｇ、約２００００〜約３００００μｇ及び約３００００〜約４００００μｇの用量の分子を接触させることを含む。
【００７５】
さらなる実施形態において、組成物は、上記の第１の態様及び実施形態に記載の組成物のいずれかから選択される。
【００７６】
さらに別の実施形態において、投与は、経口、静脈内、局所、腹腔内、経鼻、頬側、舌下、脳への注入又は皮下投与である。
【００７７】
さらなる実施形態において、組成物は、錠剤、カプセル、粉末、ナノ粒子、結晶、非晶質物質、溶液、経皮パッチ又は座剤の形態である。
【００７８】
本発明を説明するための、特には実施に関する追加の詳細を提供するための、本明細書で用いる特許を含めた出版物及び他の資料は参照により全て援用される。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】α−シヌクレインによるミクログリアの活性化及びガレクチン−３阻害物質による阻害。異なる濃度：５μＭ、１０μＭ及び２０μＭのα−シヌクレインモノマー（Ａ）及びα−シヌクレイン凝集体（Ｂ）との１２時間にわたるインキュベーション後に、ウェスタンブロットによりミクログリア細胞におけるｉＮＯＳの発現を測定した。ｉＮＯＳは、両方のα−シヌクレインタンパク質調製物において有意にアップレギュレートされた。α−シヌクレイン凝集体（Ｂ）は、モノマー（Ａ）より３倍高い活性化を誘発した。ガレクチン−３の役割を明らかにするために、前処理を行い、ガレクチン−３阻害物質（ＴＤ１３９）を３０分間にわたってインキュベートし、次に１２時間にわたって細胞を、最高濃度２０μＭでα−シヌクレインモノマー又は凝集体とインキュベートした。α−シヌクレインモノマーが誘発したより低いｉＮＯＳ発現は、ガレクチン−３阻害物質（ＴＤ１３９）（Ｃ）により有意に阻害されなかった。ガレクチン−３阻害物質（ＴＤ１３９）は、α−シヌクレイン凝集体（Ｄ）が誘発したｉＮＯＳ発現を有意に阻害し、１００μＭの（ＴＤ１３９）阻害物質はｉＮＯＳ発現を５０％を超えてダウンレギュレートした。発明者は、最も高い応答を、各実験において、残りの濃度に対する応答を評価するための内部コントロールとして用いる。（ＡＮＯＶＡ）（*Ｐ＜０．０５；**Ｐ＜０．００５）エラーバー、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎ＝３）。
【図２】α−シヌクレイン活性化後のＢＶ２ミクログリア培地における上昇したサイトカインレベル。濃度５、１０及び２０μＭでのα−シヌクレイン凝集体との１２時間にわたるインキュベーション後のＢＶ２ミクログリア培地におけるサイトカインレベル。α−シヌクレイン凝集体は炎症促進性サイトカイン：ＴＮＦ−α（Ａ）、ＩＬ−１２（Ｂ）及びＩＬ−２（Ｃ）のサイトカインレベルにおける有意な上昇を誘発した。サイトカインレベルは、ｐｇ／μｌとして表される（ＡＮＯＶＡ）（*Ｐ＜０．０５；**Ｐ＜０．００５；****Ｐ＜０．０００１）、エラーバー、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ（ｎ＝３）。
【図３】ガレクチン−３ｓｉＲＮＡはα−シヌクレイン凝集体が誘発したミクログリア活性化を低下させる。１２時間にわたって２０μＭのα−シヌクレイン凝集体で活性化させたＢＶ２ミクログリアは、ガレクチン−３をｓｉＲＮＡでノックダウンした場合、８０％のｉＮＯＳの強力なダウンレギュレーションを示す（左）。（ＡＮＯＶＡ）（*Ｐ＜０．０５）（ｎ＝３）、エラーバー、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．。
【図４】１２時間にわたってガレクチン−３阻害物質ＴＤ１３９で処理したＢＶ２ミクログリア細胞は低下した貪食能を示す。ミクログリア細胞の貪食能を試験するために、発明者は、ミクログリアによる蛍光ビーズの取り込み能を研究した。ガレクチン−３阻害物質（ＴＤ１３９）（１００μＭ）を前処理（３０分）として使用し、次に細胞を１２時間にわたってα−シヌクレイン及び／又はα−シヌクレイン（２０μＭ）とインキュベートした。ＴＤ１３９は貪食を強力に阻害した。ガレクチン−３の添加により、同時に阻害物質を使用する場合であっても、貪食能を回復することができた。（ｎ＝３）（ＡＮＯＶＡ）（*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．００５）、エラーバー、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．。
【図５】α−シヌクレイン活性化に続くガレクチン−３ＫＯ一次ミクログリア細胞における炎症促進応答の向上。α−シヌクレイン凝集体との１２時間にわたるインキュベーション後、一次ミクログリア細胞の培地中のサイトカインレベルを測定した。１２時間にわたる５μＭ及び２０μＭのα−シヌクレイン凝集体での野生型ミクログリアの処理は、ＩＬ−１β（Ａ）、ＩＬ−１２（Ｂ）、ＩＦＮ−γ（Ｃ）及びＩＬ−４（Ｄ）のレベル上昇を誘発した。ガレクチン−３ノックアウトミクログリアでの同じ処理では、２０μＭのα−シヌクレイン凝集体（Ｂ）を使用してＩＬ−１β（Ａ）、ＩＬ−１２のレベルが低下した。ＩＦＮ−γ（Ｃ）及びＩＬ−４（Ｄ）のサイトカインレベルは、野生型ミクログリアと比較して、ガレクチン−３ノックアウトにおいて変化しなかった。電気化学発光ＥＬＩＳＡを使用してサイトカインレベルを測定した。（ＡＮＯＶＡ）（*Ｐ＜０．０５、**Ｐ＜０．００５）（ｎ＝５）エラーバー、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．。
【図６】ガレクチン−３ノックアウトマウスからの一次ミクログリア細胞によるＩＬ−８サイトカイン放出の減少。細胞をアミロイド−ベータ原線維（ヒト組み換えタンパク質、Ａβ４２）で処理した後、一次ミクログリア細胞におけるサイトカインレベルを分析した。ガレクチン−３ノックアウトマウスからのミクログリアは、１０μＭのアミロイド−ベータ原線維Ａβ４２又はＬＰＳ（１μｇ／μｌ）への曝露後に、野生型のミクログリアと比較して、ＩＬ−８のサイトカイン放出において有意な減少を示した（６５％の減少、Ｐ＜０．０５、ｎ＝５）。
【図７】ガレクチン−３を欠損しているアルツハイマー病マウスの血液におけるＩＦＮ−ガンマレベルの低下。ガレクチン−３を欠損していない正常なアルツハイマー病マウス（５ｘＦＡＤ、ｎ＝５）と比較して、ガレクチン−３を欠損している（Ｇａｌ３ＫＯ）アルツハイマー病マウス（５ｘＦＡＤ）、すなわちＧａｌ３ＫＯ／５ＸＦＡＤ（ｎ＝６）の血液では、ＩＦＮ−ガンマの７０％の大幅なダウンレギュレーションが見られた。ナイーブ野生型マウス（ＷＴ）において、ＩＦＮ−ガンマはかろうじて検出可能であった。
【発明を実施するための形態】
【００８０】
ガレクチンは糖鎖認識ドメインＣＲＤを有する（Ｎｉｌｓｓｏｎら、米国特許公報番号第２０１１／０１３０５５３号、２０１１年６月２日公開。参照により本明細書に全て援用される）。ＣＲＤは、約１３０のアミノ酸（約１５ｋＤａ）から成る堅く畳まれたβ−サンドイッチ構造体であり、β−ガラクトース結合部位及び約７のアミノ酸の配列モチーフにおける十分な類似性という２つの大きな特徴があり、アミノ酸の殆ど（約６個の残基）がβ−ガラクトース結合部位を構成している。さらに、隣接部位は天然のサッカリドの堅い結合に必要とされ、これらの選好の違いが、天然のサッカリドに対するガレクチンの特異性の微妙な違いを付与する。
【００８１】
ヒト、マウス及びラットのゲノム配列の解析が完了し、１つの哺乳動物のゲノムにおける約１５種のガレクチン及びガレクチン様タンパク質は種間で若干異なることが明らかとなった（Ｌｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１９：４３３−４４０；Ｈｏｕｚｅｌｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｅｖｏｌ．２１（７）：１１７７−１１８７）。
【００８２】
ガレクチンサブユニットは１本のペプチド鎖内に１又は２個のＣＲＤを有する。最初のカテゴリーであるモノ−ＣＲＤガレクチンは、脊椎動物においてモノマー又はダイマー（２つのタイプ）として生じる。ガレクチン−１はダイマーであり、ガレクチン−３は溶液中でモノマーであり、凝集し、リガンドと出会うと多量体になる（Ｌｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１９：４３３−４４０；Ａｈｍａｄ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：１０８４１−１０８４７）。
【００８３】
ガレクチンを、遊離リボソーム上の細胞質タンパク質として、シグナルペプチドなしで合成する。ガレクチンタンパク質のＮ末端はアセチル化され（細胞質タンパク質の典型的な修飾）、ガレクチンはサイドゾル内に長時間にわたって留まる（分泌タンパク質としては異例）。サイトゾルからガレクチンは核、特定の細胞質部位に向かう、あるいは未だ不明ではあるがおそらくはインターロイキン−１（ＩＬ−１）の排出と同様に、非古典的（非ＥＲ−ゴルジ）経路により分泌される（誘発される又は構造的に）（Ｌｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１９：４３３−４４０）。
【００８４】
ガレクチンタンパク質に関するアミノ酸配列及び相同性データはＰａｎｊｗａｎｉの米国特許出願番号第２０１０／０００４１６３  Ａ１号（２０１０年１月７日に公開）に示され、この文献は参照により本明細書に全て援用される。
【００８５】
ガレクチン阻害物質
ガレクチンタンパク質の発現及び／又は活性のガラクトシド阻害物質を投与することにより例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される神経変性疾患又は状態を治療又は予防するための組成物、方法及びキットを本発明において提供する。特定の実施形態においては、ガラクトシド阻害物質ＴＤ１３９を使用してガレクチン−３タンパク質の活性を調節し、また例えばパーキンソン病から選択される神経変性疾患又は状態を治療又は予防する。神経変性疾患又は状態を治療又は予防するための本発明の様々な組成物、方法及びキットで使用するガレクチン阻害物質は、例えばＮｉｌｓｓｏｎらの米国特許公報番号第２００４／０１４７７３０  Ａ１号（シリアル番号１０／４６６９３３）（２００４年７月２９日公開）、Ｎｉｌｓｓｏｎらの米国特許公報番号第２００７／０１８５０３９号（シリアル番号１１／５６１１２４）（２００７年８月７日公開）、Ｌｅｆｆｌｅｒらの米国特許公報番号第２００７／０１８５０４１号（シリアル番号１１／５６１４６５）（２００７年８月９日に公開）、Ｎｉｌｓｓｏｎらの米国特許公報番号第２０１１／０１３０５５３号（シリアル番号１２／９９２３２８）（２００４年７月２９日に公開）及びＬｅｆｆｌｅｒらの米国特許公報番号第２０１２／０１６５２７７号（シリアル番号１３／２６６９６０）（２０１２年６月２８日に公開）に記載されており、各文献は参照により本明細書に全て援用される。
【００８６】
本明細書に記載の組成物、方法及びキットでは、例えばパーキンソン病から選択される神経変性疾患又は状態を身体における他の望ましいプロセスに悪影響を及ぼすことなく選択的に治療又は予防するためにガレクチンタンパク質の阻害物質を使用する。
【００８７】
ガレクチン−３は細胞表面滞留時間を長引かせることで、別のマクロファージのＭ２マクロファージへの分化を制御するＴＧＦ−β受容体の応答性を強化すると判明している（Ｐａｒｔｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３０６：１２０−１２４）（ＭａｃＫｉｎｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．２００８．Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．１８０：２６５０−２６５８）。ガレクチン−３は、線維芽細胞の動員及び活性化、したがって腎臓、肝臓及び肺を含めた様々な臓器における瘢痕組織の形成において中心的な役割を果たすことも判明している（ＭａｃＫｉｎｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  ２０１２；１８５（５）：５３７−４６；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈｏｌ  ２００８：１７２；２８８；Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ２００６：１０３（１３）；５０６０）。
【００８８】
固相結合アッセイ及び阻害アッセイにより、ガレクチン結合能を有するサッカリド及びグリココンジュゲートは特定されている（Ｌｅｆｆｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｇａｌｅｃｔｉｎｓ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ−ａ  ｓｙｎｏｐｓｉｓにおいて概説（Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｃｒｏｃｋｅｒ，Ｐ．，ｅｄ．，ｐｐ．５７−８３；Ｌｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ．Ｊ．１９：４３３−４４０）。ガレクチンはラクトースと解離定数（ＫD）０．５〜１ｍＭで結合する。ＫDは結合定数の逆数であり、低いＫDは分子間の結合親和性の上昇を示す。Ｄ−ガラクトースのガレクチンへの結合親和性は概して、ラクトースのガレクチンへの結合親和性より約５０〜１００倍低い。Ｎ−アセチルラクトサミン及び関連する二糖の結合親和性は様々であるが、これはこれらの分子がラクトース（ＫD約０．５〜１ｍＭ）及び他のガレクチンと同様にガレクチンの一部とラクトースより約１０倍低い又は高い親和性で結合するからである。小さいサッカリドリガンドは、ラクトース又はｌａｃＮＡｃ残基に結合した血液型Ａ決定基を保持するガレクチン−３タンパク質の結合に効果的であり、またラクトースの場合の結合親和性の約５０倍の高さで結合することが観察されている。ガレクチン−１はこれらのサッカリドへの選好を示さない。
【００８９】
ポリラクトサミンタイプより大きいサッカリドが、ガレクチン−３タンパク質（ただしガレクチン−１を除く）等のガレクチンにとっての好ましいリガンドとして提案されている（Ｌｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１０１１９−１０１２６）。修飾植物性ペクチン多糖はガレクチン−３に結合すると確認されている（Ｐｉｅｎｔａ  ｅｔ  ａｌ．１９９５  Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．１９９５  Ｍａｒ  １；８７（５）：３４８−５３）。
【００９０】
ガレクチン−３リガンドとして特定されている上記の天然のサッカリドは医薬組成物における有効成分としての使用には適していない。胃内での酸加水分解及び酵素分解に弱いからである。加えて、天然のサッカリドは本質的に親水性であり、経口投与しても消化管からすぐには吸収されない。
【００９１】
阻害物質の合成
抗がん活性を有するアミノ酸に結合したサッカリドは血清中の天然化合物であり、合成の類似体が生成されている（Ｇｌｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．１９９６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５６：５３１９−５３２４）。ラクトース又はガラクトースがアミノ酸に結合しているサッカリドはガレクチンを、対応する非誘導体化糖とほぼ同じ作用強度で阻害する。化学修飾した形態のシトラスペクチン（Ｐｌａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．１９９２  Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ．Ｉｎｓｔ．８４：４３８−４４２）はガレクチン−３の阻害物質及びインビボでの抗腫瘍薬として記載されている（Ｐｉｅｎｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．９４：１８５４−１８６２）。
【００９２】
天然のオリゴ糖、グリコクラスター、グリコデンドリマー及びグリコポリマーは極性が高すぎ且つ大きすぎるため身体に効果的に吸収されず、場合によっては患者（患畜）において免疫応答を引き起こしてしまう。さらに、胃内での酸加水分解及び酵素分解に弱い。
【００９３】
チオジガラクトシド分子は合成及び加水分解安定性であり、Ｎ−アセチルラクトサミンとほぼ同程度に効率的である（Ｌｅｆｆｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．１９８６  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１０１１９−１０１２６）。ペンタペプチドのライブラリを用いて、ガラクトースと同様のＫD値を有するガレクチン−１及びガレクチン−３タンパク質の低親和性阻害物質を得た（Ａｒｎｕｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．２００４  Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１４：１４３７−１４４０）。さらに、ペプチドはインビボでガレクチンをターゲットとする物質としてはそれほど理想的ではない。ペプチドは加水分解されやすく、典型的には極性だからである。芳香族アミド又は置換ベンジルエーテルをＣ−３’に有するＮ−アセチルラクトサミン誘導体はガレクチン−３の極めて効率的な阻害物質であり、ＩＣ50値は４．８μＭと低く、これは天然のＮ−アセチルラクトサミン二糖と比較して阻害において２０倍の改善である（Ｓｏｒｍｅ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．２００２  Ｃｈｅｍｂｉｏｃｈｅｍ．３（２−３）：１８３−１８９；Ｓｏｒｍｅ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．２００３  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．３６３：１５７−１６９）。芳香族アミド部分の存在によりＮ−アセチルラクトサミン誘導体は全体としての極性が低く、インビボでガレクチンを阻害するための物質としてより適格となる。さらに、Ｃ３−トリアゾリルガラクトシドは、一部のガレクチンの対応するＣ３−アミドと同程度に強力な阻害物質であることが実証されている。したがって、いずれの正しい構造のガラクトースＣ３−置換基もより高いガレクチン親和性を付与し得る。
【００９４】
Ｃ３−アミド及びＣ３−トリアゾリル誘導体化化合物は、ガラクトース及びＮ−アセチルラクトサミンサッカリド部分中のグリコシド結合の存在によりインビボでは加水分解し易く、またガレクチン−３の強力な小分子阻害物質ではあるものの、より改善された親和性及び安定性が望ましい、したがって、Ｏ−グリコシド易加水分解性及び易酵素分解性結合を欠いた、チオジガラクトシドの３，３’−ジアミド−又は３，３’−ジトリアゾリル誘導体化をベースとした阻害物質が開発されている（Ｃｕｍｐｓｔｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２００５  Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．４４：５１１０−５１１２；Ｃｕｍｐｓｔｅｙ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．１４：４２３３−４２４５；Ｄａｍ  ｅｔ  ａｌ．２００８  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ４７：８４７０−８４７６；国際出願番号ＷＯ２００５１１３５６９及びＷＯ２００５１１３５６８、米国特許公報番号第２００７／１８５０４１号及び米国特許番号第７６３８６２３  Ｂ２号。各文献は参照により全て本明細書に援用される）。
【００９５】
しかしながら、３，３’−誘導体化チオジガラクトシドには、３−Ｎ−誘導体化ガラクトース構成ブロックを得るための二重転化反応を伴う多段階合成を含めた複数の欠点がある。さらに、チオジガラクトシド分子中の１つのガラクトース環をシクロヘキサンで置換するとガラクトース環を模倣したものとなり、これらのガレクチン−１及び−３阻害物質にジアミド−及びジトリアゾリル−チオジガラクトシド誘導体のものに近い効率がもたらされる（国際公報番号ＷＯ２０１０／１２６４３５。参照により全て援用される）。Ｄ−ガラクトピラノース単位を置換シクロヘキサンで置き換えると極性、易代謝性が低下するため薬剤様特性が改善される。
【００９６】
公知の化合物は以下に示す一般式：
【００９７】
【化７】
2017512822.tif 000008
【００９８】
を有し、式中、第２構造Ｒ1はＤ−ガラクトースになり得る。
【００９９】
例えばガラクトシド及び中間体のためのガレクチンタンパク質阻害物質を合成により調製する方法は、Ｎｉｌｓｓｏｎらの米国特許公報番号第２００４／０１４７７３０  Ａ１号（シリアル番号１０／４６６９３３）（２００４年７月２９日公開）、Ｎｉｌｓｓｏｎらの米国特許公報番号第２００７／０１８５０３９号（シリアル番号１１／５６１１２４）（２００７年８月７日公開）、Ｌｅｆｆｌｅｒらの米国特許公報番号第２００７／０１８５０４１号（シリアル番号１１／５６１４６５）（２００７年８月９日公開）、Ｎｉｌｓｓｏｎらの米国特許公報番号第２０１１／０１３０５５３号（シリアル番号１２／９９２３２８号）（２００４年７月２９日公開）及びＬｅｆｆｌｅｒらの米国特許公報番号第２０１２／０１６５２７７号（シリアル番号１３／２６６９６０）（２０１２年６月２８日公開）に記載され、各文献は参照により全て本明細書に援用される。ガラクトシドを合成するための方法は、３−アジド−ガラクトシルチオウロニウム塩誘導体（対応するチオールにインシチュで活性化される）を３−アジド−ガラクトシルブロミドと反応させることで３，３’−ジ−アジド−チオ−ジ−ガラクトシドにすることを含む。
【０１００】
特定の実施形態において、パーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィの治療方法で使用するための医薬組成物は、ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファンを含み、これは以下の構造：
【０１０１】
【化８】
2017512822.tif 000009
【０１０２】
を有する。Ｍａｃｋｉｎｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．Ｍａｒｃｈ  １，２０１２  ｖｏｌ．１８５  ｎｏ．５  ５３７−５４６を参照のこと。この文献は参照により全て本明細書に援用される。
【０１０３】
様々な実施形態において、分子はベータ−ガラクトシドであり、誘導体化又は官能化され、例えば分子は以下の一般式：
【０１０４】
【化９】
2017512822.tif 000010
【０１０５】
を有し、ピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、ＹはＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、Ｒ1は、サッカリド、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び複素環から成る群から選択され、Ｒ2は、ＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ及びＰＯ2から成る群から選択され、Ｒ3は、少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、少なくとも４個の炭素原子のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル又はアルケニル基、カルボキシ基及びアミノ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、ハロゲンで置換された少なくとも４個の炭素原子のアルキル基、フェニル基、カルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、アルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲン及び少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲン及び少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、ニトロ基で置換されたフェニル基、スルホ基で置換されたフェニル基、アミン基で置換されたフェニル基、ヒドロキシ基で置換されたフェニル基、カルボニル基で置換されたフェニル基、置換カルボニル基で置換されたフェニル基又はフェニルアミノ基から成る群から選択され、Ｒ4は、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基及び複素環から成る群から選択される。様々な実施形態において、組成物は非代謝性であり、あるいは様々な実施形態において、組成物は代謝性である。
【０１０６】
特定の実施形態において、サッカリド（Ｒ1）は、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、上記のサッカリドの少なくとも２種を含む二糖又はオリゴ糖及びこれらの誘導体から成る群から選択される。特定の実施形態において、ＹはＮＨであり、ＸはＯであり、ハロゲンはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩから成る群から選択される。
【０１０７】
特定の実施形態における分子は、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［３−カルボキシプロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［｛Ｚ｝−３−カルボキシプロペンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−ベンズアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−ベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［４−メトキシ−２，３，５，６−テトラフルオロベンズ−アミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［２−カルボキシ−３，４，５，６−テトラフルオロベンズアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−メタンスルホンアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−［−４−ニトロベンゼンスルホンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−フェニルアミノカルボニルアミノ−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（３−アミノアセトアミド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシド及びメチル２−アセトアミド−２−デオキシ−４−Ｏ−（−３−［｛２Ｓ｝−２−アミノ−３−カルボキシ−プロパンアミド］−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−β−Ｄ−グルコピラノシドから成る群から選択される。
【０１０８】
様々な実施形態において、分子は一般式：
【０１０９】
【化１０】
2017512822.tif 000011
【０１１０】
を有し、式中のピラノース環の一方の構成はβ−Ｄ−ガラクトであり、ＸはＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択され、ＹはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択される又は結合であり、Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ5から成る群から選択される又は結合であり、Ｒ1及びＲ3は独立して、ＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ2、ＰＯ及びＣＨ2から成る群から選択される又は結合であり、Ｒ2及びＲ4は独立して、少なくも４個の炭素のアルキル基、少なくも４個の炭素のアルケニル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、カルボキシ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、アミノ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、アミノ基で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、アミノ基及びカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素のアルキル基、アミノ基及びカルボキシ基の両方で置換された少なくとも４個の炭素のアルケニル基、１つ以上のハロゲンで置換されたアルキル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたフェニル基、ナフチル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのニトロ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのジアルキルアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアルキル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換された��テロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基及び少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたヘテロアリール基から成る群から選択される。Ｒ6及びＲ8は独立して、水素、アシル基、アルキル基、ベンジル基及びサッカリドから成る群から選択される。Ｒ7は、水素、アシル基、アルキル基及びベンジル基から成る群から選択される。Ｒ9は、水素、メチル基、ヒドロキシメチル基、アシルオキシメチル基、アルコキシメチル基及びベンジルオキシメチル基から成る群から選択される。
【０１１１】
特定の実施形態において、ＹはＮＨであり、ＺはＮＨであり、ＸはＳであり、Ｒ1はＣＯであり、Ｒ3はＣＯであり、Ｒ2又はＲ4は芳香族、例えば芳香環であり、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8は水素であり、あるいはＲ9はヒドロキシメチル基である。特定の実施形態において、組成物は、ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−（３，５−ジメトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス（３−デオキシ−３−（２−ナフトアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−メトキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ニトロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［４−（ジメチルアミノ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−メチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−クロロベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−アセチルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［２−（３−カルボキシ）−ナフトアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−［３−デオキシ−３−（３，４−メチレンジオキシ）ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（４−メトキシカルボニルベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−カルボキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ヒドロキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３，５−ジベンジルオキシベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ベンジルオキシ−５−ノニルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−メトキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−（３−ヒドロキシ−５−ノニルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［３−ベンジルオキシ−５−（４−フルオロ−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン、ビス−（３−デオキシ−３−［３−メトキシ−５−（４−メチル−ベンジルオキシ）−ベンズアミド］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファン又はビス−（３−デオキシ−３−（３−アリルオキシ−５−ベンジルオキシ−ベンズアミド）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）スルファンである。
【０１１２】
様々な実施形態において、分子は３−トリアキソリル−ガラクトシドを含み、例えば、組成物は以下の一般式：
【０１１３】
【化１１】
2017512822.tif 000012
【０１１４】
を有し、式中のピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、ＸはＯ、Ｓ、ＮＨ、ＣＨ2及びＮＲ4から成る群から選択される又は結合であり、ＹはＣＨ2、ＣＯ、ＳＯ2、ＳＯ、ＰＯ2、ＰＯ及びフェニルから成る群から選択される又は結合であり、Ｒ1は、サッカリド、置換サッカリド、Ｄ−ガラクトース、置換Ｄ−ガラクトース、Ｃ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−置換Ｄ−ガラクトース、水素、アルキル基、アルケニル基、アリール基、ヘテロアリール基、複素環及びその誘導体、アミノ基、置換アミノ基、イミノ基並びに置換イミノ基から成る群から選択され、Ｒ2は、水素、アミノ基、置換アミノ基、アルキル基、置換アルキル基、アルケニル基、置換アルケニル基、アルキニル基、置換アルキニル基、アルコキシ基、置換アルコキシ基、アルキルアミノ基、置換アルキルアミノ基、アリールアミノ基、置換アリールアミノ基、アリールオキシ基、置換アリールオキシ基、アリール基、置換アリール基、ヘテロアリール基、置換ヘテロアリール基、複素環及び置換複素環から成る群から選択される。
【０１１５】
様々な実施形態において、サッカリドは、グルコース、マンノース、ガラクトース、Ｎ−アセチルグルコサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、フコース、フルクトース、キシロース、シアル酸、グルクロン酸、イズロン酸、ガラクツロン酸、上記のサッカリドの少なくとも２種を含む二糖又はオリゴ糖及びこれらの誘導体から成る群から選択される。
【０１１６】
分子の様々な実施形態において、ＹはＣＯ、ＳＯ2又は結合であり、Ｒ2はアミン又はアリール基であり、Ｒ1はガラクトース、グルコース又はＮ−アセチルグルコサミンであり、Ｒ1は置換ガラクトース、グルコース又はＮ−アセチルグルコサミンであり、Ｒ1はＣ３−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル−置換ガラクトースであり、あるいはＸはＯ又はＳである。
【０１１７】
分子の様々な実施形態において、Ｒ２は置換フェニル基であり、置換基は、ハロゲン、アルコキシ、アルキル、ニトロ、スルホ、アミノ、ヒドロキシ又はカルボニル基から成る群から選択される１つ以上である。
【０１１８】
様々な実施形態において、分子は、メチル３−デオキシ−３−（１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−プロピル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−メトキシカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−（１−ヒドロキシ−１−シクロヘキシル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−フェニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−（４−ｐ−トリルスルホニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−メチルアミノカアルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−ブチルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−ベンジルアミノカルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−｛４−（３−ヒドロキシプロパ−１−イルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−｛４−［２−（Ｎ−モルホリノ）−エチルアミノカアルボニル］−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−（４−メチルアミノカアルボニル−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル）−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド、ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−フルオロフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−メトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３デオキシ−３−｛４−（４−メトキシフェニル）−Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（３，５−ジメトキシフェニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（１−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１���チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ナフチル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（２−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（３−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、メチル３−デオキシ−３−｛４−（４−ピリジル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル｝−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−３−インドール−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２−ヒドロキシ−５−ニトロ−フェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−（２，５−ジヒドロキシフェニル）−カルバルドキシム、Ｏ−｛３−デオキシ−３−［４−フェニル−［１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシム又はＯ−｛３−デオキシ−３−［４−（メチルアミノカルボニル）−１Ｈ−［１，２，３］−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−１−ナフチル−カルバルドキシムである。
【０１１９】
様々な実施形態において、分子はチオジガラクトシドを有し、例えば、分子は以下の一般式：
【０１２０】
【化１２】
2017512822.tif 000013
【０１２１】
を有し、式中のピラノース環の構成はＤ−ガラクトであり、ＸはＯ、Ｓ及びＳＯから成る群から選択され、Ｙ及びＺは独立して、ＣＯＮＨ又は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環から選択され、Ｒ1及びＲ2は独立して、少なくも４個の炭素のアルキル基、少なくとも４個の炭素のアルケニル基、少なくとも４個の炭素のアルキニル基、カルバモイル基、アルキル基で置換されたカルバモイル基、アルケニル基で置換されたカルバモイル基、アルキニル基で置換されたカルバモイル基、アリール基で置換されたカルバモイル基、置換アルキル基で置換されたカルバモイル基、置換アリール基で置換されたカルバモイル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメチル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのトリフルオロメトキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたフェニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたフェニル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたフェニル基、ナフチル基，少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルキル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたナフチル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたナフチル基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたナフチル基、ヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたヘテロアリール基、少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたヘテロアリール基、チエニル基、少なくとも１つのカルボキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのアルコキシ基で置換されたチエニルチエニル基、少なくとも１つのスルホ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのアリールアミノ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されたチエニル基、少なくとも１つのハロゲンで置換されたチエニル基、少なくとも１つのカルボニル基で置換されたチエニル基及び少なくとも１つの置換カルボニル基で置換されたチエニル基から成る群から選択される。
【０１２２】
様々な実施形態において、分子は、ＹがＣＯＮＨであり、このＣＯＮＨ基がＮ原子を介してピラノース環に結合し、ＺがＣＯＮＨであり、例えばこのＣＯＮＨ基がＮ原子を介してシクロヘキサンに結合する、あるいはＹが１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、例えばこの１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環がＮ１原子を介してピラノース環に結合する式を有する。組成物の様々な実施形態において、Ｒ1は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合し、Ｚは１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環であり、例えばこの１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環はＮ１原子を介してシクロヘキサンに結合し、あるいはＲ2は１Ｈ−１，２，３−トリアゾール環のＣ４原子に結合する。
【０１２３】
様々な実施形態において、分子はジガラクトシドを含み、例えば、分子は、一般式（１３）：
【０１２４】
【化１３】
2017512822.tif 000014
【０１２５】
を有し、式中、ピラノース環の少なくとも一方の構成はＤ−ガラクトであり、Ｘは結合であり、Ｒはフェニル基であり、このフェニル基は任意の位置でメチル、エチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、フルオロ、クロロ、ブロモ及びトリフルオロメチルから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換され、あるいはＲはチエニル基である。
【０１２６】
分子の様々な実施形態において、Ｒは、任意の位置でフルオロ、クロロ及びブロモから成る群から選択される１つ以上の置換基で置換されるフェニル基である。例えば、Ｒは、任意の位置でフルオロから選択される１つ以上の置換基で置換されるフェニル基である。典型的には、両方のピラノース環の構成はＤ−ガラクトである。
【０１２７】
本明細書において、用語「アルキル基」には、一重結合で結合された水素及び炭素のみから成る化合物が含まれる。例えば、アルキル基は約１〜約７個の炭素原子を含み、様々な実施形態において、約１〜約４個の炭素原子を含む。アルキル基は直鎖又は分岐鎖になり得て、また３〜７個の炭素原子、例えば３、４、５、６又は７個の炭素原子を含む環も形成し得る。したがって、アルキルとは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、３−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及び１−メチルシクロプロピルのいずれかのことである。
【０１２８】
本明細書において、用語「アルケニル基」とは、少なくとも１つの二重結合を含む官能基又は置換基である。アルケニル基は約２〜約７個の炭素原子を含む。アルケニル基は、ビニル、アリル、ブタ−１−エニル、ブタ−２−エニル、２，２−ジメチルエテニル、２，２−ジメチルプロパ−１−エニル、ペンタ−１−エニル、ペンタ−２−エニル、２，３−ジメチルブタ−１−エニル、ヘキサ−１−エニル、ヘキサ−２−エニル、ヘキサ−３−エニル、プロパ−１，２−ジエニル、４−メチルヘキサ−１−エニル、シクロプロパ−１−エニル基、及び他のいずれかを含む。
【０１２９】
本明細書において、用語「アルキル化」はアルキル基での置換を意味する。本明細書において、用語「アルケニル化」とは、アルケニル基で置換されることを指す。
【０１３０】
本明細書において、用語「アリール基」とは、芳香環由来であり且つ約４〜約１２個の炭素原子を有する官能基又は置換基のことである。アリール基は例えばフェニル基又はナフチル基になり得る。上記の基は、有機化学分野で公知のいずれの他の置換基でも置換し得る。これらの基は２個以上の置換基でも置換し得る。置換基の例は、ハロゲン、アルキル、アルケニル、アルコキシ、ニトロ、スルホ、アミノ、ヒドロキシ及びカルボニル基である。ハロゲン置換基はブロモ、フルオロ、ヨード及びクロロである。アルキル基は例えば、約１〜約７個の炭素原子を含む。アルケニル基は例えば２〜７個の炭素原子、例えば２個の炭素原子又は４個の炭素原子を含む。アルコキシ基は１〜７個の炭素原子を含み、不飽和炭素原子を含み得る。トリフルオロメチル等の置換基の組み合わせが存在し得る。
【０１３１】
本明細書において、用語「アルコキシ基」は酸素に結合した炭素原子、例えば約１〜約７個の炭素原子を含む官能基又は置換基である。アルコキシ基は、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペントキシ基、イソペントキシ基、３−メチルブトキシ基、２，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキソキシ基、２−メチルペントキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、ｎ−ヘプトキシ基、２−メチルヘキソキシ基、２，２−ジメチルペントキシ基、２，３−ジメチルペントキシ基、シクロプロポキシ基、シクロブトキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロヘプチルオキシ基及び１−メチルシクロプロピルオキシ基になり得る。
【０１３２】
本明細書において、用語「アルキルアミノ基」は、孤立電子対を伴う窒素原子に結合しているアルキル基（約１〜約７個の炭素原子）を含む官能基又は置換基である。例えば、アルキル基は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、３−メチルブチル、２，２−ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、２−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、ｎ−ヘプチル、２−メチルヘキシル、２，２−ジメチルペンチル、２，３−ジメチルペンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及び１−メチルシクロプロピルのいずれかである。
【０１３３】
本明細書において、用語「アリールアミノ基」はアンモニアの誘導体に結合しているアリール基であり、アンモニアの誘導体は孤立電子対を伴う塩基性窒素原子を有する。アリールアミノ基は例えば、約４〜約７個の炭素原子を有するアリール基を有する。アリールアミノ基は例えば、アニリン、カルボキシル化アニリン又はハロゲン化アニリンであり、ハロゲンは上で定義した通りである。
【０１３４】
本明細書において、用語「アリールオキシ基」は、酸素に結合したアリール官能基である。例えば、アリールオキシ基は約４〜約１２個の炭素原子を含む。アリールオキシ基は、フェノール、カルボキシル化フェノール又はハロゲン化フェノールになり得て、ハロゲンは上で定義した通りである。
【０１３５】
本明細書において、用語「ヘテロアリール基」は、約４〜約１８個の炭素原子を含むアリール基であり、環の少なくとも１つの原子はヘテロ原子であり、すなわち炭素ではない。様々な実施形態において、ヘテロ原子はＮ、Ｏ又はＳである。特定の実施形態において、ヘテロアリール基はピリジン又はインドール基である。
【０１３６】
上記の基は、有機化学分野で公知での他の置換基で置換し得る。基は２個以上の置換基でも置換し得る。置換基の例は、ハロゲン、アルコキシ、ニトロ、スルホ、アミノ、ヒドロキシ及びカルボニル基である。ハロゲン置換基は、ブロモ、フルオロ、ヨード及びクロロである。様々な実施形態において、アルキル基は、約１〜約７個の炭素原子を有する。様々な実施形態において、アルケニル基は約２〜約７個の炭素原子を有する。様々な実施形態において、アルコキシは約１〜約７個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有し、また不飽和炭素原子を有し得る。
【０１３７】
本明細書において、用語「被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）」とは、様々な実施形態において、哺乳動物のことであり、ヒト、霊長類、家畜（例えば、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ロバ）、実験室試験用動物（例えば、マウス、ウサギ、ラット、モルモット）、ペット（例えば、イヌ、ネコ）並びに重要な動物園及び捕獲野生動物（例えば、キツネ、カンガルー、ゾウ、シカ）を含む。
【０１３８】
ポリヌクレオチド阻害物質
本明細書において、本発明の実施形態は、哺乳動物である被験体においてα−シヌクレイン病を治療又は予防するための方法を提供し、本方法は、治療有効量の少なくとも１種の組成物を被験体に投与することを含み、組成物は、哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節するための分子を含む。例えば、阻害物質は、インシチュ又はエクスビボで投与される遺伝子組み換えにより生み出されたタンパク質である。用語「組み換え体」とは、遺伝子改変生物、例えば培養微生物又は真核細胞の操作により生み出されたタンパク質を指す。
【０１３９】
本発明の実施形態において、組成物及び方法は阻害物質であるモジュレータのソース、例えば阻害タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を含み、例えばポリヌクレオチド配列を遺伝子操作することで、阻害タンパク質又はその一部の適切な宿主細胞における発現を指示する組み換えＤＮＡ分子にする。生物学的に活性な阻害物質を発現させるために、この阻害物質をコードしているヌクレオチド配列又は機能的な均等物を適切な発現ベクター、すなわち阻害タンパク質のアミノ酸配列をコードしているヌクレオチド配列に操作により連結される、挿入するコード配列の転写及び翻訳を調節する要素をコードしている必要な核酸を含有するベクターに挿入する。
【０１４０】
当業者に周知の方法を用いることで、例えば適切な転写及び翻訳制御要素に操作により連結されるタンパク質又はペプチドをコードしている核酸配列を含有する発現ベクターを構築する。これらの方法はインビトロでの組み換えＤＮＡ技法、合成技法及びインビボでの組み換え又は遺伝子組み換えを含む。技法はＳａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ，１９８９に記載されている。
【０１４１】
多種多様な市販の発現ベクター／宿主系が、タンパク質又はペプチドをコードする配列の収容及び発現に有用である。これらには、以下に限定するものではないが、微生物、例えば組み換えバクテリオファージ、プラスミド又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌、酵母発現ベクターで形質転換した酵母、ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）と接触させた昆虫細胞系、ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）をトランスフェクトした若しくは細菌発現ベクター（例えば、Ｔｉ、ｐＢＲ３２２、ｐＥＴ２５ｂプラスミド）で形質転換した植物細胞系又は動物細胞系が含まれる。Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８９を参照のこと。
【０１４２】
ウイルスベクターには、以下に限定するものではないが、アデノウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター及びヘルパー依存型アデノウイルスベクターが含まれる。例えば、これらのベクターは、本明細書で示すように筋サテライト細胞の分化転換を調節する転写因子又は転写因子に結合する物質をコードする核酸配列を送達する。アデノウイルスパッケージングベクターはＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（マナサス、ヴァージニア）から市販されている。アデノウイルスベクターを構築、使用する方法はＫｌｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，１１４：２５３−２６２，２００７及びｖａｎ  Ｌｅｅｕｗｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．，１８：８４５−８５４，２００３に記載されている。
【０１４３】
アデノウイルスベクターは、真核生物の遺伝子発現（Ｌｅｖｒｅｒｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，１０１：１９５−２０２，１９９１）及びワクチン開発（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ７，（Ｍｕｒｒａｙ，Ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｌｉｆｔｏｎ，ＮＪ，１０９−１２８，１９９１）に使用されてきた。さらに、組み換えアデノウイルスベクターは遺伝子治療に使用されている（Ｗｕら、米国特許番号第７２３５３９１号、２００７年６月２６日に発行）。
【０１４４】
組み換えアデノウイルスベクターは、例えばシャトルベクターとプロウイルスベクターとの相同組み換えから作製する（Ｗｕら、米国特許番号第７２３５３９１号）。これらの組み換えアデノウイルスベクターに使用するためのヘルパー細胞株はヒトの細胞、例えば２９３ヒト胚性腎細胞、筋細胞、造血細胞又は他のヒト胚性間葉若しくは上皮細胞由来になり得る。あるいは、ヘルパー細胞は、ヒトアデノウイルスを許容する他の哺乳動物種の細胞に由来し得て、例えばベロ細胞又は他のサル胚性間葉若しくは上皮細胞である。ヘルパー細胞株を使用したこれらの複製欠損アデノウイルスベクターの作製及び増殖はＧｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ，１９９７  Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９−７２，１９７７に記載されている。
【０１４５】
レンチウイルスベクターパッケージングベクターはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（カールスバッド、カリフォルニア）から市販されている。レンチウイルスベクターを作製するためのＨＩＶベースパッケージング系は、Ｎａｌｄｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２７２：２６３−２６７，１９９６；Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１５：８７１−８７５，１９９７及びＤｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８４６３−８４７１，１９９８に記載のコンストラクトを使用して用意する。
【０１４６】
多数のベクターコンストラクトを、系を使用して、第３世代レンチウイルスＳＩＮベクターバックボーンをベースにしてパッケージング可能である（Ｄｕｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：８４６３−８４７１，１９９８）。例えば、ベクターコンストラクトｐＲＲＬｓｉｎＣＭＶＧＦＰｐｒｅは、ＨＩＶプロモーター配列がラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）の配列で置き換えられた５’ＬＴＲ、Ｕ３プロモーター領域に欠失がある自己不活性化３’ＬＴＲ、ＨＩＶパッケージングシグナル、ＣＭＶプロモーターにより駆動されるＡｅｑｕｏｒａクラゲ緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）から成るマーカー遺伝子カセットに連結されたＲＲＥ配列及び核外輸送を強化すると考えられるウッドチャック肝炎ウイルスＰＲＥ要素を含有する。ＧＦＰマーカー遺伝子は、ＵＶ蛍光顕微鏡法又はフローサイトメトリでの直接の観察による、トランスフェクション又は形質導入効率の定量化を可能にする（Ｋａｆｒｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．，１７：３１４−３１７，１９９７及びＳａｋｏｄａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ．，３１：２０３７−２０４７，１９９９）。
【０１４７】
タンパク質をコードする遺伝子を含有しているレトロウイルスベクターを構築するためのレトロウイルス核酸の操作及び細胞におけるパッケージング方法は、当該分野で公知の技法を用いて成し遂げられる。Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｖｏｌｕｍｅ  １，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ＩＩＩ（ｕｎｉｔｓ９．１０．１−９．１４．３）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８９．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ．Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｍｉｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．７：９８１−９９０，１９８９；Ｅｇｌｉｔｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．６：６０８−６１４，１９８８；米国特許番号第４６５０７６４号、第４８６１７１９号、第４９８０２８９号、第５１２２７６７号及び第５１２４２６３並びにＰＣＴ特許公報番号ＷＯ８５／０５６２９、ＷＯ８９／０７１５０、ＷＯ９０／０２７９７、ＷＯ９０／０２８０６、ＷＯ９０／１３６４１、ＷＯ９２／０５２６６、ＷＯ９２／０７９４３、ＷＯ９２／１４８２９及びＷＯ９３／１４１８８を参照のこと。
【０１４８】
レトロウイルスベクターは、アンホトロピックパッケージング系を用いて非感染性形質導入ウイルス粒子（ビリオン）に構築、パッケージングされる。そのようなパッケージング系の例は、例えばＭｉｌｌｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．６：２８９５−２９０２，１９８６；Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１１２０−１１２４，１９８８；Ｃｏｓｓｅｔ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：１０７０−１０７８，１９９０；米国特許番号第４６５０７６４号、第４８６１７１９号、第４９８０２８９号、第５１２２７６７号及び第５１２４２６３号並びにＰＣＴ特許公報番号ＷＯ８５／０５６２９、ＷＯ８９／０７１５０、ＷＯ９０／０２７９７、ＷＯ９０／０２８０６、ＷＯ９０／１３６４１、ＷＯ９２／０５２６６、ＷＯ９２／０７９４３、ＷＯ９２／１４８２９及びＷＯ９３／１４１８８に記載されている。
【０１４９】
「プロデューサー細胞」の作製は、レトロウイルスベクターのパッケージング細胞への導入により成し遂げる。そのようなレトロウイルスベクターの例は、例えばＫｏｒｍａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８４：２１５０−２１５４，１９８７；Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：３５８７−３５９６，１９９０；米国特許番号第４４０５７１２号、第４９８０２８９号及び第５１１２７６７号並びにＰＣＴ特許公報番号ＷＯ８５／０５６２９、ＷＯ９０／０２７９７及びＷＯ９２／０７９４３に記載されている。
【０１５０】
ヘルペスウイルスパッケージングベクターはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（カールスバッド、カリフォルニア）から市販されている。例示的なヘルペスウイルスはα−ヘルペスウイルス、例えば水痘帯状疱疹ウイルス若しくは仮性狂犬病ウイルス、単純ヘルペスウイルス、例えばＨＳＶ−１若しくはＨＳＶ−２又はヘルペスウイルス、例えばエプスタイン−バーウイルスである。所望のヌクレオチドセグメントをパッケージングできる空のヘルペスウイルス粒子を用意する方法はＦｒａｅｆｅｌらの米国特許番号第５９９８２０８号（１９９９年１２月７日に発行）に記載されている。
【０１５１】
ヘルペスウイルスＤＮＡベクターは、当業者になじみ深い技法を用いて構築することができる。例えば、ヘルペスウイルスの全ゲノムをコードしているＤＮＡセグメントを、大きなＤＮＡセグメントを保持可能な多数のベクター、例えばコスミド（Ｅｖａｎｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  ７９，９−２０，１９８９）、酵母人工染色体（ＹＡＣＳ）（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９）又は大腸菌Ｆ因子プラスミド（Ｏ’Ｃｏｎｎｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４４：１３０７−１３１３，１９８９）間で分割する。
【０１５２】
例えば、エプスタイン−バーウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、仮性狂犬病ウイルス及びＨＳＶ−１を含めた多種多様なヘルペスウイルスの全ゲノムを表す重複クローンを含有するコスミド群が単離されている。Ｍ．ｖａｎ  Ｚｉｊｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２，２１９１，１９８８；Ｃｏｈｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９０，７３７６，１９９３；Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７，７２９８，１９９３及びＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １９７，１１６，１９９３を参照のこと。
【０１５３】
ＡＡＶは依存性パルボウイルスであり、別のウイルス（アデノウイルス又はヘルペスウイルスファミリーのメンバー）との同時感染に依存することで培養細胞において増殖性感染する（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５８：９７  １２９，１９９２）。例えば、組み換えＡＡＶ（ｒＡＡＶ）ウイルスを、目的の遺伝子、例えばＮｋｘ３．２遺伝子を含有しているプラスミドをコトランスフェクトすることで作製する。また、細胞をアデノウイルス又はＡＡＶヘルパー機能に必要なアデノウイルス遺伝子を保持しているプラスミドと接触させる又は細胞にアデノウイルス又はＡＡＶヘルパー機能に必要なアデノウイルス遺伝子を保持しているプラスミドをトランスフェクトする。そのようにして調製した組み換えＡＡＶウイルスストックは、組み換えＡＡＶ粒子から物理的に分離しなくてはならないアデノウイルスを含む（例えば、塩化セシウム密度遠心分離による）。
【０１５４】
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）パッケージングベクターは、ＧｅｎｅＤｅｔｅｃ（オークランド、ニュージーランド）から市販されている。ＡＡＶは高い組み込み効率を有し且つ非分裂細胞に感染すると判明しているため、組織培養下の哺乳動物細胞への遺伝子送達に有用である（Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒ  Ｔｏｐ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５８：９７  １２９，１９９２）。ＡＡＶは、感染性に関して広い宿主範囲を有する（Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，４：２０７２  ２０８１，１９８４；Ｌａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６０（２）：５１５  ５２４，１９８６；Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８（１０）：３９８８  ３９９６，１９８８；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２（６）：１９６３  １９７３，１９８８）。
【０１５５】
ＡＡＶベクターの構築及び使用方法は、例えば米国特許番号第５１３９９４１号及び第４７９７３６８号に記載されている。遺伝子送達におけるＡＡＶの使用はさらに、ＬａＦａｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１６２（２）：４８３  ４８６，１９８８；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ，２１：９２８  ９３３，１９９３；Ｆｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３４９  ３５６，１９９２及びＷａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，９４：１４４０  １４４８，１９９４に記載されている。
【０１５６】
組み換えＡＡＶベクターは、マーカー遺伝子のインビトロ及びインビボでの形質導入（Ｋａｐｌｉｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔ  Ｇｅｎｅｔ．，８（２）：１４８  ５４，１９９４；Ｌｅｂｋｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，８（１０）：３９８８  ３９９６，１９８８；Ｓａｍｕｌｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３９４１  ３９５０，１９９１；Ｓｈｅｌｌｉｎｇ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１：１６５  １６９，１９９４；Ｙｏｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，８２（Ｓｕｐｐ．）：１：３４７Ａ，１９９４；Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ，２１：９２８  ９３３，１９９３；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，５：３２５８  ３２６０，１９８５；ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２（６）：１９６３  １９７３，１９８８）並びにヒトの疾患に関わる遺伝子の形質導入に使用されている（Ｆｌｏｔｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３４９  ３５６，１９９２；Ｏｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ，８９（２）：２７９  ２８２，１９９０；Ｗａｌｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，９４：１４４０  １４４８，１９９４及びＷｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ，１：２６１  ２６８，１９９４）。
【０１５７】
抗体阻害物質
本発明は、様々な実施形態において、ガレクチン活性を薬理学的に調節するためのガレクチンタンパク質の阻害物質を含む。タンパク質であるガレクチン阻害物質のある実施形態は、ガレクチンタンパク質又はガレクチンタンパク質の発現若しくは活性に影響する分子に結合する抗体を含む。本明細書において、用語「抗体」には、全抗体及び抗原結合フラグメント（すなわち、「抗原結合部」）又はこれらの単鎖が含まれる。天然の「抗体」は、ジスルフィド結合で相互につながれた少なくとも２本の重鎖（Ｈ）及び２本の軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質である。
【０１５８】
様々な実施形態において、「ガレクチンタンパク質に特異的に結合する」抗体とは、ガレクチンタンパク質に、血管新生を阻害又は調節するのに十分なＫDで結合する抗体のことであり、例えばＫDは５ｘ１０-9Ｍ以下、２ｘ１０-9Ｍ以下又は１ｘ１０-10Ｍ以下である。例えば、抗体はモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体である。本明細書において、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」とは、単一の分子組成の抗体分子調製物のことである。モノクローナル抗体組成物は、転写因子又は転写因子の特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。抗体は例えばＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、例えばＩｇＧ１又はＩｇＧ４を含む。
【０１５９】
用語「ポリクローナル抗体」又は「ポリクローナル抗体組成物」とは、それぞれが免疫原に見られる多数の異なるエピトープの１つに特異的であり且つそのエピトープに対する特異的な親和性を特徴とする抗体の大きな集まりのことである。エピトープは最小の抗原性決定因子であり、タンパク質の場合、長さ６〜８個の残基のペプチドを含む（Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ，Ｊ．ａｎｄ  Ｉ．Ｂｅｒｋｏｗｅｒ，（１９９３），ｉｎ  Ｐａｕｌ，Ｗ．，Ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，ｐ．２４６）。親和性は低いもの、例えば１０-6Ｍから高いもの、例えば１０-11Ｍに及ぶ。哺乳動物の血清から収集したポリクローナル抗体画分を周知の技法（例えば、タンパク質Ａ等の免疫グロブリン分子に選択的に結合するアフィニティマトリックスを用いたクロマトグラフィ）により単離することでＩｇＧ画分を得る。抗体の純度及び特異性を強化するために、特異的抗体をさらに、固相固定免疫原を用いた免疫親和性クロマトグラフィで精製し得る。抗体を固相固定免疫原に、免疫原が抗体分子と免疫反応して固相固定免疫複合体を形成するのに十分な時間にわたって接触させる。結合した抗体を標準的な技法、例えばｐＨを低下させる又はイオン強度を上昇させるバッファを使用して固相から溶出させ、溶出した画分をアッセイし、特異的抗体を含有する画分を合わせる。
【０１６０】
本発明の方法では、組み換え抗体である抗体も有用である。本明細書において、用語「組み換えヒト抗体」には、組み換え技法により調製、発現、作製又は単離した抗体が含まれる。本発明の方法で使用する組み換え抗体を発現させるための哺乳動物宿主細胞には、例えばＲ．Ｊ．Ｋａｕｆｍａｎ  ａｎｄ  Ｐ．Ａ．Ｓｈａｒｐ，１９８２  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されるようなＤＨ  ＦＲ選択可能マーカーと共に使用される、Ｕｒｌａｕｂ  ａｎｄ  Ｃｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：４２１６−４２２０，１９８０に記載のｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含めたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）、ＮＳＯ骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞が含まれる。特に、ＮＳＯ骨髄腫細胞と使用する場合の別の発現系は、ＷＯ８７／０４４６２、ＷＯ８９／０１０３６及びＥＰ３３８８４１に記載のＧＳ遺伝子発現系である。抗体を産生させるために、抗体遺伝子をコードしている発現ベクターを哺乳動物宿主細胞に導入し、宿主細胞を、宿主細胞において抗体が発現する又は宿主細胞を培養している培地に抗体が分泌されるのに十分な時間にわたって培養する。抗体を、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から回収する。
【０１６１】
様々な種のターゲットに対する抗体の結合能を評価するための標準的なアッセイが当該分野で公知であり、例えばＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）が含まれる。抗体の結合動態（例えば、結合親和性）も、当該分野で公知の標準的なアッセイ、例えばＢｉａｃｏｒｅ分析により評価することができる。
【０１６２】
抗血清を産生させるための動物を選択する際に考慮すべき基準を含めた抗体産生のための一般手法は、Ｈａｒｌｏｗ  ｅｔ  ａｌ．（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｐｐ．９３−１１７，１９８８）に記載されている。例えば、適切なサイズの動物、例えばヤギ、イヌ、ヒツジ、マウス又はラクダをある量の免疫原、例えば免疫応答を引き出すのに効果的な、ヒト転写因子由来のエピトープを有するインタクトタンパク質又はその一部の投与により免疫化する。例示的なプロトコルでは、動物のサイズに応じて１００マイクログラム〜１００ミリグラムの抗原を皮下注射し、続いて３週間後に、動物のサイズに応じて１００マイクログラム〜１００ミリグラムの免疫原をアジュバント、例えばフロイント完全アジュバントと共に腹腔内注入する。追加の腹腔内注入をアジュバント、例えばフロイント不完全アジュバントと共に２週間毎に、動物の血中において適切な抗体力価が達成されるまで行う。例示的な力価には、少なくとも約１：５０００の力価又は１：１０００００以上の力価、すなわち検出可能な抗体活性を有することを示す最大希釈が含まれる。抗体を例えば、ヒトＭＡＣを有するカラムへの結合を用いたアフィニティ精製により精製する。
【０１６３】
モノクローナル抗体は、ヒトリンパ球のインビトロ免疫化により産生される。ヒトリンパ球のインビトロ免疫化技法は、Ｉｎａｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，９９（５）：３３５  ３６２，Ｍａｙ１９９３；Ｍｕｌｄｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３６（３）：１８６  １９２，１９９３；Ｈａｒａｄａ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｏｒａｌ  Ｐａｔｈｏｌ．Ｍｅｄ．，２２（４）：１４５  １５２，１９９３；Ｓｔａｕｂｅｒ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１６１（２）：１５７  １６８，１９９３及びＶｅｎｋａｔｅｓｗａｒａｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１１（６）７２９  ７３９，１９９２に記載されている。これらの技法を用いて、抗原特異性ＩｇＧ及びＩｇＭモノクローナル抗体を含めた抗原反応性モノクローナル抗体を産生させることができる。転写因子に対して親和性を有し且つ特異的な抗体又はそのフラグメントは、本発明で提供するモジュレータ分子の範囲内にある。
【０１６４】
本明細書において、用語「抗体」には、全抗体及び抗原結合フラグメント（すなわち、「抗体結合部」）又はその単鎖、例えばＦｖフラグメントが含まれる。天然の「抗体」は、ジスルフィド結合で相互につながれた少なくとも２本の重鎖（Ｈ）及び２本の軽鎖（Ｌ）を含む糖タンパク質である。各重鎖は重鎖可変部（本明細書においてはＶHと省略）及び重鎖定常部から構成される。重鎖定常部は３つのドメイン：ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は軽鎖可変部（本明細書においてはＶLと省略）及び軽鎖定常部から構成される。軽鎖定常部は、１つのドメイン：ＣLから構成される。ＶH及びＶLはさらに、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより高度に保存された領域が分散した超可変領域に分割することができる。各ＶH及びＶLは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置された３個のＣＤＲ及び４個のＦＲから構成される。重鎖及び軽鎖の可変部は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常部は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的補体系の第１成分（Ｃｌｑ）を含めた宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
【０１６５】
本明細書において、抗体の「抗原結合部」（又は単に「抗原部」）という用語は、ターゲット（例えば、ガレクチン又はガレクチンのフラグメント又はガレクチン阻害物質又は組織中のガレクチンのリガンド）に特異的に結合する能力を保持する完全長の抗体又は１つ以上の抗体フラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は完全長の抗体のフラグメントにより果たされることが判明している。抗体の「抗原結合部」という用語に含まれる結合フラグメントの例には、ＶL、ＶH、ＣL及びＣＨ１ドメインから成る一価フラグメントであるＦａｂフラグメント、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２個のＦａｂフラグメントを含む二価フラグメントであるＦ（ａｂ）2フラグメント、ＶH及びＣＨ１ドメインから成るＦｄフラグメント、抗体の１本のアームのＶL及びＶHドメインから成るＦｖフラグメント、ＶHドメインから成るｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．１９８９  Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４）並びに単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が含まれる。
【０１６６】
さらに、Ｆｖフラグメントの２個のドメイン（ＶL及びＶH）は別々の遺伝子によりコードされるものの、組み換え法を用いて、ＶL及びＶH領域が対となって一価分子を形成する１本のタンパク質鎖（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる。例えば、Ｂｉｒｄ  Ｒ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３及びＨｕｓｔｏｎ，Ｊ．Ｓ．ｅｔ  ａｌ．１９８８  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８５：５８７９を参照のこと）としての形成を可能にする合成リンカーにより接合することができる。そのような単鎖抗体も、抗体の「抗原結合部」という用語に含めるものとする。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の慣用の技法を用いて得られ、フラグメントは、インタクト抗体と同じやり方で有用性についてスクリーニングされる。
【０１６７】
本明細書において、「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を持つ他の抗体を実質的に有さない抗体のことである（例えば、ガレクチン又はガレクチンのフラグメント又はガレクチン阻害物質又は組織中のガレクチンのリガンド等のターゲットに特異的に結合する単離された抗体は、このターゲット以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に有さない）。しかしながら、ＤＥＣ２０５に特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原、例えば他の種由来の対応するターゲット分子に対する交差反応性を有し得る。さらに、単離された抗体は、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に有さないものになり得る。
【０１６８】
本明細書において、用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」は、単一の分子組成の抗体分子調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性及び親和性を示す。
【０１６９】
本明細書において、用語「ヒト抗体」には、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列に由来する可変部を有する抗体が含まれるものとする。さらに、抗体が定常部を有する場合、この定常部もそのようなヒト配列（例えば、ヒト生殖系列配列又はヒト生殖系列配列の突然変異バージョン）に由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト配列によりコードされないアミノ酸残基を含み得る（例えば、インビトロのランダム若しくは部位特異的変異誘発又はインビボでの体細胞突然変異により導入された突然変異）。しかしながら、本明細書において、用語「ヒト抗体」には、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体が含まれないものとする。
【０１７０】
用語「ヒトモノクローナル抗体」は、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト配列に由来する可変部を有する、単一結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態において、ヒトモノクローナル抗体は、永久増殖細胞に融合させたヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するヒトではないトランスジェニック動物、例えばトランスジェニックマウスから得たＢ細胞を含むハイブリドーマにより産生される。
【０１７１】
本明細書において、用語「組み換えヒト抗体」には組み換え手段により調製、発現、作製又は単離される全てのヒト抗体が含まれ、例えばヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニック若しくはトランスクロモソーマルな動物（例えば、マウス）又はそこから調製するハイブリドーマから単離した抗体、ヒト抗体を発現するように形質転換した宿主細胞、例えばトランスフェクトーマから単離した抗体、組み換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリから単離した抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子、配列の全て又は一部を他のＤＮＡ配列にスプライシングすることを含む他の手段により調製、発現、作製又は単離する抗体である。そのような組み換えヒト抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変部を有する。しかしながら、特定の実施形態において、そのような組み換えヒト抗体は、インビトロでの変異誘発（又は、ヒトＩｇ配列に関してトランスジェニックな動物を用いる場合はインビボでの体細胞変異誘発）に供することができるため、組み換え抗体のＶH及びＶL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶH及びＶL配列に由来及び関連する一方でインビボのヒト抗体生殖系列レパートリー内に天然で存在し得ない配列である。
【０１７２】
本明細書において、「アイソタイプ」とは、重鎖定常部遺伝子により決定される抗体クラス（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、例えばＩｇＧ１又はＩｇＧ４）のことである。
【０１７３】
「抗原を認識する抗体」及び「抗原に特異的な抗体」という句は、本明細書において、用語「抗原に特異的に結合する抗体」と互換的に使用される。
【０１７４】
本明細書において、樹状細胞受容体（例えば、具体的にはヒト組織中のガレクチンのリガンド等のヒトターゲットであるターゲット）に特異的に結合する抗体又は抗体融合タンパク質は、約５ｘ１０-9Ｍ以下、約２ｘ１０-9Ｍ以下又は約１ｘ１０-1Ｍ以下のＫDでヒトターゲットに結合する抗体であるとする。「ヒトターゲット以外の抗原と交差反応する」抗体とは、約０．５ｘ１０-8Ｍ以下、約５ｘ１０-9Ｍ以下又は約２ｘ１０-9Ｍ以下のＫDで抗原に結合する抗体であるとする。「特定の抗原と交差反応しない」抗体とは、約１．５ｘ１０-8Ｍ以上のＫD、約５〜１０ｘ１０-8Ｍ又は約１ｘ１０-7Ｍ以上のＫDでその抗原に結合する抗体であるとする。特定の実施形態において、抗原と交差反応しないそのような抗体は、標準的な結合アッセイにおいてこれらのタンパク質に対して本質的に検出不可能な結合を示す。
【０１７５】
本明細書において、ガレクチンへのターゲットの結合を阻害する抗体とは、約１ｎＭ以下、約０．７５ｎＭ以下、約０．５ｎＭ以下又は約０．２５ｎＭ以下のＫで受容体に結合するターゲットを阻害する抗体のことである。ＧＬ１１７は、細菌抗β−ガラクトシダーゼ非特異的アイソタイプマッチラットモノクローナル抗体ネガティブコントロールである（Ｈａｗｉｇｅｒ，Ｄ．ｅｔ  ａｌ．２００１  Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９４：７６９−７７９）。
【０１７６】
本明細書において、「Ｋassoc」又は「Ｋa」は、特定の抗体−抗原相互作用の会合速度のことであるとし、本明細書において、「Ｋdis」又は「ＫD」という用語は、特定の抗体−抗原相互作用の解離速度を指すものとする。本明細書において、用語「ＫD」は解離定数を指すものとし、Ｋaに対するＫdの比（すなわち、Ｋd／Ｋa）から得られ且つモル濃度（Ｍ）として表される。抗体に関するＫD値は、当該分野において十分に確立された方法を用いて求めることができる。抗体のＫDを求める方法は表面プラズモン共鳴の使用又はバイオセンサシステム、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムの使用である。
【０１７７】
本明細書において、用語「親和性」は、単一の抗原部位での抗体と抗原との相互作用の強度を指す。各抗原部位内で、抗体の「アーム」の可変部は、弱い非共有結合力を介して抗原と多数の部位で相互作用し、相互作用が多くなればなるほど、親和性は強くなる。
【０１７８】
本明細書において、用語「アヴィディティ」は、抗体−抗原複合体の全体的な安定性又は強度の有益な尺度を指す。アヴィディティは３つの主要な要素：抗体エピトープ親和性、抗原及び抗体の両方の原子価並びに相互作用部の構造的な配置により制御される。最終的には、これらの要素が抗体の特異性、すなわち特定の抗体が精確な抗原エピトープに結合する尤度を決定する。
【０１７９】
本明細書において、用語「交差反応性」は、抗体又は抗体の集合体が他の抗原上のエピトープに結合することを指す。これは抗体の低いアヴィディティ若しくは特異性又は同一若しくは極めて似たエピトープを有する多数の別個の抗原により引き起こされ得る。関連抗原群への全般的な結合を望む場合又は抗原エピトープ配列が進化において高度に保存されないケースで異種間標識化を試みる場合、交差反応性が望ましいこともある。
【０１８０】
本明細書において、ＩｇＧ抗体に関する用語「高親和性」は、ターゲット抗原に対して抗体が１０-8Ｍ以下、１０-9Ｍ以下又は１０-10Ｍ以下のＫDを有することを指す。しかしながら、「高親和性」結合は他の抗体アイソタイプでは異なり得る。例えば、ＩｇＭアイソタイプの場合、「高親和性」結合とは、抗体が１０-7Ｍ以下又は１０-8Ｍ以下のＫDを有することである。
【０１８１】
様々な種のターゲットに対する抗体の結合能を評価するための標準的なアッセイは当該分野で公知であり、例えばＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット及びＲＩＡが含まれる。適切なアッセイについては実施例で詳述する。抗体の結合動態（例えば、結合親和性）も当該分野で公知の標準的なアッセイ、例えばＢｉａｃｏｒｅ分析で評価することができる。抗体の機能特性に対する抗体の効果（例えば、受容体結合、自己免疫疾患の予防又は改善）を評価するためのアッセイについては実施例で詳述する。
【０１８２】
したがって、当該分野で公知であり且つ本明細書に記載の方法にしたがって求められるこれらのガレクチン関連機能特性（例えば、生化学的、免疫化学的、細胞性、生理的又は他の生物学的活性など）の１つ以上を「阻害する」抗体は、抗体不在下（例えば、又は無関係の特異性のコントロール抗体が存在する場合に）で見られるものとは相対的に、特定の活性において統計的に有意な低下に関連していると理解される。ガレクチン関連活性を阻害する抗体は、測定したパラメータの少なくとも１０％、少なくとも５０％、８０％又は９０％のそのような統計的に有意な低下をもたらし、特定の実施形態において、本発明の抗体は、ガレクチン機能活性を９５％、９８％又は９９％を超えて阻害し得る。
【０１８３】
ＲＮＡ干渉
阻害性物質には、ガレクチンタンパク質をコードする又はガレクチンタンパク質の活性を調節する分子をコードし、それによって血管新生を調節する核酸に結合するＲＮＡ干渉物質が含まれる。核酸結合のための方法及び組成物には、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の利用が含まれる。ＲＮＡｉは、細胞内に存在する短い（例えば、３０ヌクレオチド）二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子により誘発される。これらの短いｄｓＲＮＡ分子は低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と称され、ｓｉＲＮＡと配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の破壊を引き起こす。Ｂｅａｃｈらの国際公報番号ＷＯ／２００３／０６２３９４（２００３年７月３１日公開）、ＭｃＳｗｉｇｇｅｎらの米国特許公報番号第２００５／００３２７３３号（２００５年２月１０日公開）、Ｃｉｃｃｉａｒｅｌｌｉらの米国特許番号第８２３６７７１号（２０１２年８月７日発行）。様々な実施形態において、ターゲット核酸配列はガレクチンタンパク質又はその一部をコードする。例えば、ＲＮＡ干渉物質は、ガレクチン１〜１１又はその一部（例えば、糖鎖結合ドメイン）の発現を負に調節する。
【０１８４】
合成ｓｉＲＮＡ又はアンチセンス発現カセットを構築してベクターの組み換え操作した核酸に挿入する方法は当該分野で周知であり、例えばＲｅｉｃｈらの米国特許番号第７８４７０９０号（２０１０年１２月７日に発行）、Ｒｅｉｃｈらの米国特許番号第７６７４８９５号（２０１０年３月９日に発行）、Ｋｈｖｏｒｏｖａらの米国特許番号第７６４２３４９号（２０１０年１月５日に発行）に記載される。例えば、本明細書に記載の発明は、センスＲＮＡ鎖及びアンチセンスＲＮＡ鎖を含む合成ｓｉＲＮＡを含み、センスＲＮＡ鎖は、細胞中にターゲット核酸配列と実質的に同一のヌクレオチド配列を含む。したがって、細胞がｓｉＲＮＡをコードするウイルスベクターと接触している状況下、細胞は、次にターゲット核酸配列の発現を負に調節するｓｉＲＮＡを発現する。
【０１８５】
ガレクチン
レクチンタンパク質は特異的に炭水化物及び凝集細胞に結合する（国際公報番号ＷＯ／２００６／１１３３１１を参照のこと。参照により全て本明細書に援用される）。レクチンは、細胞−細胞及び細胞−マトリックス相互作用を含めた多種多様な細胞機能に関与していると判明している。レクチンは、植物、無脊椎動物及び哺乳動物間に広く見られる。動物レクチンは、Ｃ型レクチン、Ｐ型レクチン、ガレクチン（以前はＳ型レクチンと称された）及びペントラキシンのファミリーに分類される（例えば、Ｂａｒｏｎｄｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２０８０７，１９９４を参照のこと）。
【０１８６】
哺乳動物ガレクチンは、ラクトース及び関連ガラクトシドを認識する。全ての哺乳動物ガレクチンが小さなβ−ガラクトシドに対する同様の親和性を共有する一方で、より複雑なグリココンジュゲートに対する結合特異性においては著しい違いを示す（Ｈｅｎｒｉｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ  ８：４５，１９９８；Ｓａｔｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：６９８３，１９９２及びＳｅｅｔｈａｒａｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：１３０４７，１９９８）。β−ガラクトシド糖への結合に加え、ガレクチンは血球凝集活性を有する。多数のポリラクトサミン鎖を有する天然の糖タンパク質であるラミニンは、特定のガレクチンにとっての天然のリガンドであることが判明している。ラミニンは、全ての上皮の下にあり個々の筋肉、脂肪及びシュワン細胞を取り囲む細胞外マトリックスである基底膜の構成要素である。細胞と基底膜との相互作用は、哺乳動物の成長中に様々な細胞型の遊走及び／又は分化に影響を及ぼすことが知られている。ガレクチンは膜輸送を指定する従来型の配列を有さないが、細胞内で分泌され、また細胞内に位置する。β−ガラクトシド糖に対する親和性に加えて、ガレクチンファミリーのメンバーは糖鎖認識ドメイン（ＣＲＤ。糖鎖結合ドメインとも称する）において高い配列類似性を共有し、その関連アミノ酸残基はＸ線結晶解析により特定されている（Ｌｏｂｓａｎｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２７０３４，１９９３及び上記のＳｅｅｔｈａｒａｍａｎらの文献）。ガレクチンは、細胞接着（Ｃｏｏｐｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１１５：１４３７，１９９１）、増殖制御（Ｗｅｌｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ６４：９１，１９９１）、細胞遊走（Ｈｕｇｈｅｓ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：６８７，１９９２）、腫瘍性転化（Ｒａｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ４６：８７１，１９９０）及び免疫応答（Ｏｆｆｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１７７，１９９０）を含めた多種多様な生物学的機能に関わる。
【０１８７】
ガレクチン−１
ガレクチン−１は１４キロダルトンのサブユニットのホモダイマーであり、各サブユニットは１つの結合部位を有する。ガレクチン−１は、レクチンがモノマーの形態で蓄積する哺乳動物細胞のサイトゾルで合成される（Ｃｕｍｍｉｎｇｓらの米国特許番号第５９４８６２８号（１９９９年９月７日発行）、Ｃｕｍｍｉｎｇｓらの米国特許番号第６２２５０７１号（２００１年５月１日発行）、Ｈｏｒｉｅらの米国特許番号第６８９０５３１号（２００５年５月１０日発行）及びＣａｍｂｙらの米国特許番号第７９６４５７５号（２０１１年６月２１日発行）。
【０１８８】
ガレクチン−３
タンパク質のガレクチン−３ファミリーのメンバー（以前は、ＣＢＰ−３５、Ｍａｃ−２、Ｌ−３４、εＢＰ及びＲＬ−２９として知られていた）は、典型的には約２４０〜２７０のアミノ酸の配列を有し、また約２５〜約２９ｋＤａの分子量を有する。ガレクチン−３タンパク質は概して、短いＮ末端ドメイン、ガラクトシド結合領域を含むＣ末端ドメイン並びに７〜１０の保存されたアミノ酸の繰り返しを含む介在プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメインから構成される（Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３５：６０７３，１９９６及びＣｈｅｒａｙｉｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：７３２４，１９９０）。タンデム反復は、コラーゲン遺伝子スーパーファミリーに見られるものに類似している。繰り返しの数はガレクチン−３タンパク質同士で異なり、異なる種由来のガレクチン−３タンパク質間でのサイズ差の原因である。ガレクチン−３のＮ−末端ドメインは、グリココンジュゲートリガンドを有する表面への結合時のタンパク質による多量体化を可能にする。
【０１８９】
ガレクチン−３は、様々な炎症細胞（例えば、活性化マクロファージ、好塩基球及びマスト細胞）並びに様々な組織の上皮及び繊維芽細胞で発現する（Ｐｅｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７６：４０２，１９９８）。ガレクチン−３は、細胞表面上、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）内、細胞質内及び細胞の核に見られる。細胞表面上又はＥＣＭにおいて、ガレクチン−３は、数多くのＥＣＭ及び細胞表面分子に見られるポリラクトサミン鎖を有する相補的グリココンジュゲートに結合することで細胞−細胞及び細胞−マトリックス相互作用を媒介すると考えられる。ガレクチン−３は、ラミニンに結合することで細胞−マトリックス接着を阻害すると考えられる。細胞の核において、ガレクチン−３は、周知の細胞接着分子（例えば、α６β１及びα４β７インテグリン。Ｗａｒｌｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｖａｓｉｏｎ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  １７：１０１，１９９７及びＭａｔａｒｒｅｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８５：５４５，２０００）及びサイトカイン（例えば、ＩＬ−１。Ｊｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．４２：１１３，１９９４）の発現に作用することで細胞−マトリックス相互作用に間接的に影響を及ぼし得る。ガレクチン−３の発現は、腎臓等の選択した臓器において発達的に制御され、肺胞上皮細胞及び肝細胞におけるその発現レベルは損傷後にアップレギュレートされる。ガレクチン−３は、増殖中に特定の細胞型の核に集中すると判明している。ガレクチン−３の発現は特定の腫瘍において増加し、ガレクチン−３が転移において役割を果たすことを示唆している。実際、転移性が弱い細胞株におけるガレクチン−３の過剰発現は、転移能の著しい上昇を引き起こした（上記のＲａｚらの文献）。
【０１９０】
ヒトガレクチン−３は長さが２５０のアミノ酸であり、およそ２６．１ｋＤａの分子量を有する。
【０１９１】
本明細書で定義されるように、「ガレクチン−３タンパク質」は、ガレクチン−３「Ｎ末端ドメイン」、ガレクチン−３「プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメイン」及び／又はガレクチン−３「ガラクトシド結合ドメイン」を含む。これらドメインはさらに、以下のように定義される。
【０１９２】
本明細書において、ガレクチン−３「Ｎ末端ドメイン」は、ヒトガレクチン−３のアミノ酸１〜１４と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を共有する約１０〜２０のアミノ酸、好ましくは約１４のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。Ｎ末端ドメインは、Ｎ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）及び／又はカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）を含み得る。ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎ−糖鎖付加部位はコンセンサス配列：Ｎ−｛Ｐ｝−［ＳＴ］−｛Ｐ｝を有し、ＰＲＯＳＩＴＥカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位はコンセンサス配列：［ＳＴ］−Ｘ（２）−［ＤＥ］を有する。上記のコンセンサス配列及び本明細書に記載の他のモチーフ又はシグネチャー配列においては、アミノ酸に関する標準ＩＵＰＡＣの１文字コードが使用される。パターンの各要素はダッシュ（−）で隔てられ、角括弧（［］）はその位置で受容される特定の残基を示し、Ｘは任意の残基がその位置で受容されることを示し、丸括弧（（））の中の数字は、付随するアミノ酸によって表わされる残基の数を示す。特定の実施形態において、Ｎ末端ドメインは、ヒトガレクチン−３のアミノ酸Ｌ７及びＬ１１を含む。
【０１９３】
本明細書において、ガレクチン−３「プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメイン」は、ヒトガレクチン−３のアミノ酸１５〜１１６と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を共有する約６０〜約１４０のアミノ酸、より好ましくは約８０〜１２０のアミノ酸又は約９０〜１１０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメインは、コンセンサス配列：Ｇ−｛ＥＤＲＫＨＰＦＹＷ｝−Ｘ（２）−［ＳＴＡＧＣＮ］−｛Ｐ｝を有する１、２、３、４、５、６、７又は８個のＮ−ミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）も含み得る。特定の実施形態において、プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１の以下のアミノ酸及び領域を含む：Ｇ２１、Ｐ２３、Ｇ２７、Ｎ２８、Ｐ３０、Ｇ３２、Ｇ３４、Ｐ３７、Ｙ４１−Ｐ４６、Ｇ５３、Ｙ５５−Ｇ５７、Ｐ６１、Ｇ６２、Ｇ６６、Ｐ７２、Ｇ７３、Ｇ７７、Ｙ７９−Ｇ８１、Ｐ８３、Ｇ８７、Ｙ８９、Ｐ９０、Ｇ９９、Ｙ１０１、Ｐ１０２、Ｐ１０６、Ｙ１０７、Ａ１０９、Ｌ１１４及びＶ１１６。これらのアミノ酸及び領域は幾つかの哺乳動物種ガレクチン−３で保存され、また触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。
【０１９４】
本明細書において、ガレクチン−３「ガラクトシド結合ドメイン」は、ＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７（ＩＤ  ＮＯ：３）に対する配列のアラインメントに関して少なくとも１５０のビットスコアを有する約８０〜約１８０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ガレクチン−３ガラクトシド結合ドメインは少なくとも約１００〜１６０のアミノ酸、より好ましくは約１１０〜１５０のアミノ酸又は約１２０〜約１４０のアミノ酸を含み且つＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関して少なくとも１５０、少なくとも１７５又は２００以上のビットスコアを有する。
【０１９５】
ＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する特定の配列のアラインメントに関するビットスコアを計算するために、目的の配列を、ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｓｏｆｔｗａｒｅ／Ｐｆａｍで利用可能なデフォルトパラメータを使用してＨＭＭｓのＰＦＡＭデータベース（例えば、ＰＦＡＭデータベース、リリース２．１）で検索することができる。ＰＦＡＭデータベースについては上記のＳｏｎｎｈａｍｍｅｒらの文献に記載があり、ＨＭＭｓについては、例えばＧｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：１４６，１９９０及びＳｔｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２：３０５，１９９３で詳述されている。
【０１９６】
ガレクチン−３ガラクトシド結合ドメインはさらに、１つ、好ましくは２つのプロテインキナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）、カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）及び／又はガラプチンシグネチャー配列（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）を含み得る。プロテインキナーゼＣリン酸化部位は以下のコンセンサス配列：［ＳＴ］−Ｘ−［ＲＫ］を有する。ガラプチンシグネチャー配列は以下のコンセンサス配列：Ｗ−［ＧＥＫ］−Ｘ−［ＥＱ］−Ｘ−［ＫＲＥ］−Ｘ（３，６）−［ＰＣＴＦ］−［ＬＩＶＭＦ］−［ＮＱＥＧＳＫＶ］−Ｘ−［ＧＨ］−Ｘ（３）−［ＤＥＮＫＨＳ］−［ＬＩＶＭＦＣ］を有する。特定の実施形態において、ガレクチン−３ガラクトシド結合ドメインは、ＩＤ  ＮＯ：１の以下のアミノ酸及び領域：Ｐ１１７、Ｙ１１８、Ｌ１２０−Ｌ１２２、Ｇ１２５、Ｐ１２８、Ｒ１２９、Ｌ１３１−Ｉ１３４、Ｇ１３６−Ｖ１３８、Ｎ１４１、Ｎ１４３、Ｒ１４４、Ｌ１４７、Ｆ１４９、Ｒ１５１、Ｇ１５２、Ｄ１５４、Ａ１５６−Ｆ１６３、Ｅ１６５、Ｒ１６９−Ｎ１７４、Ｎ１７９−Ｇ１８２、Ｅ１８４−Ｒ１８６、Ｆ１９０−Ｅ１９３、Ｇ１９５、Ｐ１９７−Ｋ１９９、Ｑ２０１−Ｌ２０３、Ｅ２０５、Ｄ２０７−Ｑ２２０、Ｎ２２２、Ｒ２２４、Ｌ２２８、Ｉ２３１、Ｉ２３６、Ｇ２３８−Ｉ２４０及びＬ２４２−Ｓ２４４を含む。これらのアミノ酸及び領域は幾つかの哺乳動物種ガレクチン−３で保存され、また触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。
【０１９７】
特定のガレクチン−３タンパク質は、ヒトガレクチン−３のアミノ酸配列を含む。他のガレクチン−３タンパク質は、ヒトガレクチン−３のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含む。用語「実質的に同一の」は、本明細書において、第１アミノ酸が、第２アミノ酸配列のアラインされたアミノ酸残基と同一である十分な又は最小限の数のアミノ酸残基を含み、第１及び第２アミノ酸配列が共通する構造ドメイン及び／又は共通する機能活性を有し得ることを指す。例えば、ヒトガレクチン−３に対して少なくとも約６０％又は６５％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、より好ましくは少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含むアミノ酸配列は、ヒトガレクチン−３のアミノ酸配列と実質的に同一であると称される。特に、偶然又は故意に誘発された変更、例えばヒトガレクチン−３の特定のアミノ酸残基の欠失、付加、置換又は修飾を含むタンパク質は、本明細書におけるガレクチン−３タンパク質の定義内にある。また、当然のことながら、本明細書で定義されるように、ガレクチン−３タンパク質は、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、マウス及びウマの種を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物種から得たガレクチン−３のアミノ酸配列で表わされる領域を含み得る。
【０１９８】
配列間の配列同一性の計算は以下のように行われる。２個のアミノ酸配列のパーセント同一性（ｐｅｒｃｅｎｔ  ｉｄｅｎｔｉｔｙ）を求めるにあたっては、最適な比較を行うために配列をアラインする（例えば、最適なアラインメントのために、第１及び第２アミノ酸配列の一方又は両方にギャップを導入することができる）。次に、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置にあるアミノ酸残基を比較する。第１配列におけるある位置が第２配列の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドで占められているならば、それらのタンパク質はその位置で同一である。２個の配列間でのパーセント同一性はこれらの配列が共有する同一位置の数の関数であり、２個の配列を最適にアラインするために導入する必要があるギャップの数及び各ギャップの長さを考慮にいれる。
【０１９９】
配列の比較及び２個の配列間のパーセント同一性の決定は、数学アルゴリズムを使用して成し遂げることができる。好ましい実施形態において、２個のアミノ酸配列間のパーセント同一性は、デフォルトパラメータを用いるアラインメントソフトウェアプログラムを使用して求められる。適切なプログラムには、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２２：４６７３，１９９４（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｃｌｕｓｔａｌｗ））、ＢＬ２ＳＥＱ（Ｔａｔｕｓｏｖａ  ａｎｄ  Ｍａｄｄｅｎ，ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．１７４：２４７，１９９９（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／ｂｌ２ｓｅｑ／ｂｌ２．ｈｔｍｌ））、ＳＡＧＡ（Ｎｏｔｒｅｄａｍｅ  ａｎｄ  Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２４：１５１５，１９９６（ｉｇｓ−ｓｅｒｖｅｒ．ｃｎｒｓ−ｍｒｓ．ｆｒ／〜ｃｎｏｔｒｅｄ））及びＤＩＡＬＩＧＮ（Ｍｏｒｇｅｎｓｔｅｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  １４：２９０，１９９８（ｂｉｂｉｓｅｒｖ．ｔｅｃｈｆａｋ．ｕｎｉ−ｂｉｅｌｅｆｅｌｄ．ｄｅ／ｄｉａｌｉｇｎ））が含まれる。
【０２００】
ガレクチン−７
タンパク質のガレクチン−７ファミリーのメンバーは、典型的には、約１３０〜約１４０のアミノ酸を含み且つ約１５〜約１６ｋＤａの分子量を有するモノマーとして存在する（例えばＭａｇｎａｌｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．１６８：２５９，１９９５及びＭａｄｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：５８２３，１９９５を参照のこと）。ガレクチン−７の発現は、上皮の層形成に関係づけられている（Ｔｉｍｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．４３：２２９，１９９９）。ガレクチン−７は、細胞−マトリックス及び細胞−細胞相互作用において役割を果たすと考えられている。ガレクチン−７は、細胞間の接触領域に見られる（例えば、ヒト表皮の上層）。その発現は足場非依存性角化細胞において鋭敏にダウンレギュレートされ、悪性角化細胞株には存在しない。ガレクチン−７は、正常な角化細胞の維持に必要とされ得る（上記のＭａｄｓｅｎらの文献を参照のこと）。
【０２０１】
ヒトガレクチン−７は１３６のアミノ酸を含み、またおよそ１５．１ｋＤａの分子量を有する。
【０２０２】
本明細書で定義されるように、「ガレクチン−７タンパク質」は、ガレクチン−７「ガラクトシド結合ドメイン」を含む。このドメインはさらに以下のように定義される。
【０２０３】
本明細書において、ガレクチン−７「ガラクトシド結合ドメイン」は、ＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関して少なくとも８０のビットスコアを有する約８０〜約１８０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ガレクチン−７ガラクトシド結合ドメインは、少なくとも約１００〜１６０のアミノ酸又は約１１０〜１５０のアミノ酸又は約１２０〜１４０のアミノ酸を含み且つＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関して少なくとも８０、より好ましくは少なくとも１００、最も好ましくは１２０以上のビットスコアを有する。ガレクチン−７ガラクトシド結合ドメインは、１つのＮ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）、１つのプロテインキナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）、１つのカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）、１つ若しくは２つのミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）及び／又はガラプチンシグネチャー配列（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）を含み得る。特定の実施形態において、ガレクチン−７ガラクトシド結合ドメインは、ヒトガレクチン−７の以下のアミノ酸及び領域：Ｍ１、Ｓ２、Ｈ６、Ｋ７、Ｌ１０、Ｐ１１、Ｇ１３、Ｒ１５、Ｇ１７−Ｖ１９、Ｒ２１−Ｇ２４、Ｖ２６、Ｐ２７、Ａ３０、Ｒ３２−Ｑ４３、Ｄ４６−Ｎ６３、Ｋ６５、Ｑ６７、Ｇ６８、Ｗ７０−Ｇ７６、Ｇ７８、Ｐ８０−Ｌ９０、Ｉ９２、Ｇ９７−Ｋ９９、Ｖ１０１、Ｇ１０３、Ｄ１０４、Ｙ１０７、Ｈ１０９、Ｆ１１０、Ｈ１１２、Ｒ１１３、Ｐ１１５、Ｖ１１９、Ｒ１２０、Ｖ１２２−Ｌ１３０、Ｓ１３２、Ｉ１３５及びＦ１３６を含む。これらのアミノ酸及び領域は幾つかの哺乳動物種ガレクチン−７で保存され、また触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。
【０２０４】
特定のガレクチン−７タンパク質は、ヒトガレクチン−７のアミノ酸配列を含む。他のガレクチン−７タンパク質は、ヒトガレクチン−７のアミノ酸配列と実質的に同一であるアミノ酸配列を含む。特に、偶然又は故意に誘発された変更、例えばヒトガレクチン−７の特定のアミノ酸残基の欠失、付加、置換又は修飾を含むタンパク質は、本明細書におけるガレクチン−７の定義に含まれ得る。また、当然のことながら、本明細書で定義されるように、ガレクチン−７タンパク質は、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、マウス及びウマの種を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物種から得たガレクチン−７のアミノ酸配列で表わされる領域を含み得る。
【０２０５】
ガレクチン−８
ガレクチン−８は広く発現するンパク質であり、例えば肝臓、心臓、筋肉、腎臓、脾臓、後肢及び脳内に存在し、ヒト及びラットガレクチン−８遺伝子及びタンパク質の配列が利用可能である（例えばＨａｄａｒｉ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｇｌｙｃｏｓｃｉ  ａｎｄ  Ｇｌｙｃｏｔｅｃｈｎｏｌ．９：１０３−１１２，１９９７を参照のこと）。
【０２０６】
ヒトガレクチン−８のための代替アミノ酸配列形態が知られており、例えば、３１６アミノ酸形態（アクセッション番号Ｏ００２１４、１９９７年１１月１日に作成）及び３５９アミノ酸形態（アクセッション番号Ｑ８ＴＥＶ１、２００２年６月１日に作成）である。これらの配列は、かなりの長さにわたって類似している又は同一であるものの、全体として長さが異なるだけの変化形ではなく、異なる部位を有する。
【０２０７】
本明細書で定義されるように、「ガレクチン−８タンパク質」は、ガレクチン−８「Ｎ末端ドメイン」、ガレクチン−８「プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメイン」並びに／又はガレクチン−８「ガラクトシド結合ドメイン」を含み得る。これらのドメインはさらに、以下のように定義される。
【０２０８】
本明細書において、ガレクチン−８「Ｎ末端ドメイン」は、ヒトガレクチン−８のアミノ酸１〜１４と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を共有する約１０〜２０のアミノ酸、好ましくは約１４のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。Ｎ末端ドメインは、Ｎ−糖鎖付加部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００１）及び／又はカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）を含み得る。ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎ−糖鎖付加部位は、コンセンサス配列：Ｎ−｛Ｐ｝−［ＳＴ］−｛Ｐ｝を有し、ＰＲＯＳＩＴＥカゼインキナーゼＩＩリン酸化部位は、コンセンサス配列：［ＳＴ］−Ｘ（２）−［ＤＥ］を有する。上記のコンセンサス配列、他のモチーフ又はシグネチャー配列において。
【０２０９】
本明細書において、ガレクチン−８「プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメイン」は、各ヒトガレクチン−８のアミノ酸１５〜１１６と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％又は１００％の同一性を共有する約６０〜１４０のアミノ酸、より好ましくは約８０〜１２０のアミノ酸又は約９０〜１１０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメインは、コンセンサス配列：Ｇ−｛ＥＤＲＫＨＰＦＹＷ｝−Ｘ（２）−［ＳＴＡＧＣＮ］−｛Ｐ｝を有する１、２、３、４、５、６、７又は８個のＮ−ミリストイル化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００８）も含み得る。特定の実施形態において、プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメインは、ヒトガレクチン−８の以下のアミノ酸並びに領域：Ｇ２０、Ｐ２３、Ｐ２８、Ｇ２９、Ｇ３６、Ｐ３９及び当業者に明白な他の同様の残基を含む。これらのアミノ酸及び領域は幾つかの哺乳動物種ガレクチン−８で保存され、また触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。特定の実施形態において、プロリン、グリシン及びチロシンリッチなドメインは、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５の以下のアミノ酸並びに領域：Ｇ２１、Ｐ２４、Ｐ２９、Ｇ３０、Ｇ３７、Ｐ４０及び当業者に明白な他の同様の残基を含む。
【０２１０】
本明細書において、ガレクチン−４「ガラクトシド結合ドメイン」は、ＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関して少なくとも１５０のビットスコアを有する約８０〜１８０のアミノ酸のアミノ酸配列を含む。好ましくは、ガレクチン−３ガラクトシド結合ドメインは、少なくとも約１００〜１６０のアミノ酸、より好ましくは約１１０〜１５０のアミノ酸又は約１２０〜１４０のアミノ酸を含み且つＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する配列のアラインメントに関して少なくとも１５０、より好ましくは少なくとも１７５、最も好ましくは２００以上のビットスコアを有する。
【０２１１】
ＰＦＡＭからのコンセンサス配列ＰＦ００３３７に対する特定の配列のアラインメントに関するビットスコアを計算するために、目的の配列を、ｗｗｗ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／Ｓｏｆｔｗａｒｅ／Ｐｆａｍで利用可能なデフォルトパラメータを使用してＨＭＭｓのＰＦＡＭデータベース（例えば、ＰＦＡＭデータベース、リリース２．１）で検索することができる。ＰＦＡＭデータベースについては上記のＳｏｎｎｈａｍｍｅｒらの文献に記載があり、ＨＭＭｓについては、例えばＧｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：１４６，１９９０及びＳｔｕｌｔｚ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉ．２：３０５，１９９３で詳述されている。
【０２１２】
ガレクチン−８ガラクトシド結合ドメインはさらに、１又は２つのプロテインキナーゼＣリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００５）、カゼインキナーゼＩＩリン酸化部位（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００００６）及び／又はガラプチンシグネチャー配列（ＰＲＯＳＩＴＥ  Ｎｏ．ＰＳ００３０９）を含み得る。プロテインキナーゼＣリン酸化部位はコンセンサス配列：［ＳＴ］−Ｘ−［ＲＫ］を有する。ガラプチンシグネチャー配列は以下のコンセンサス配列：Ｗ−［ＧＥＫ］−Ｘ−［ＥＱ］−Ｘ−［ＫＲＥ］−Ｘ（３，６）−［ＰＣＴＦ］−［ＬＩＶＭＦ］−［ＮＱＥＧＳＫＶ］−Ｘ−［ＧＨ］−Ｘ（３）−［ＤＥＮＫＨＳ］−［ＬＩＶＭＦＣ］を有する。特定の実施形態において、ガレクチン−８ガラクトシド結合ドメインは、ヒトガレクチン−８の以下のアミノ酸及び領域：Ｌ１２３−Ｌ１２４、Ｇ１２６、Ｐ１３１、Ｒ１２８、Ｌ１４０−Ｉ１４６及び上述のものと同様の他の部位を含む。これらのアミノ酸及び領域は幾つかの哺乳動物種ガレクチン−８で保存され、また触媒及び／又は構造的な役割を果たし得る。
【０２１３】
特定のガレクチン−８タンパク質はヒトガレクチン−８のアミノ酸配列を含む。他のガレクチン−８タンパク質は、ヒトガレクチン−８のアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含む。用語「実質的に同一の」という表現は、本明細書において、第１アミノ酸が、第２アミノ酸配列のアラインされたアミノ酸残基と同一である十分な又は最小限の数のアミノ酸残基を含み、第１及び第２アミノ酸配列が共通する構造ドメイン及び／又は共通する機能活性を有し得ることを指す。例えば、ヒトガレクチン−８に対して少なくとも約６０％又は６５％の同一性、好ましくは少なくとも７５％の同一性、より好ましくは少なくとも８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有する共通の構造ドメインを含むミノ酸配列は、ヒトガレクチン−８のアミノ酸配列と実質的に同一であると称される。特に、偶然又は故意に誘発された変更、例えばヒトガレクチン−８の特定のアミノ酸残基の欠失、付加、置換又は修飾を含むタンパク質は、本明細書におけるガレクチン−８の定義に含まれ得る。また、当然のことながら、本明細書で定義されるように、ガレクチン−８タンパク質は、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、マウス及びウマの種を含むがこれらに限定されない他の哺乳動物種から得たガレクチン−８のアミノ酸配列で表わされる領域を含み得る。
【０２１４】
ガレクチンタンパク質の調製
当業者ならば、本発明のガレクチンはいずれの利用可能なソースからも得られることがわかる。利用可能なソースには、以下に限定するものではないが、天然の供給源から単離されたタンパク質、組み換えにより作製されたタンパク質又は例えば固相手順で合成されたタンパク質が含まれる。本発明において、ガレクチン−３、ガレクチン−７又はガレクチン−８をコードするポリヌクレオチド配列は、適切な宿主細胞において本発明のガレクチンの発現を指示する組み換えＤＮＡ分子で使用し得る。上記のＣｈｅｒａｙｉｌらの文献、上記のＭａｄｓｅｎらの文献及び上記のＨａｄｒｉらの文献には、ヒトガレクチン−１、ヒトガレクチン−３、ヒトガレクチン−７及びヒトガレクチン−８のクローニングがそれぞれ詳述されている。生物学的に活性なガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７又はガレクチン−８を発現させるために、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７、ガレクチン−８又はそれらの機能的な均等物をコードするヌクレオチド配列を適切な発現ベクター、すなわち挿入するコード配列の転写及び翻訳に必要な要素を含むベクターに挿入する。当業者に周知の方法を用いて、ガレクチン−１コード配列、ガレクチン−３コード配列、ガレクチン−７コード配列又はガレクチン−８コード配列及び適切な転写又は翻訳制御因子を含む発現ベクターを構築する。これらの方法には、インビトロの組み換えＤＮＡ技法、合成技法及びインビボの組み換え又は遺伝子組み換えが含まれる。欠失、付加又は置換の導入は当該分野で公知の任意の技法を用いて達成され、例えばＰＣＲベースの変異誘発を用いる。そのような技法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ，１９８９及びＡｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９８９に記載されている。様々な発現ベクター／宿主系を利用してガレクチン−１コード配列、ガレクチン−３コード配列、ガレクチン−７コード配列又はガレクチン−８コード配列を収容し得る及び発現させ得る。これらには、以下に限定するものではないが、微生物、例えば組み換えバクテリオファージ、プラスミド又はコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換した細菌、酵母発現ベクターで形質転換した酵母、ウイルス発現ベクター（例えば、バキュロウイルス）に感染させた昆虫細胞系、ウイルス発現ベクター（例えば、カリフラワーモザイクウイルス、ＣａＭＶ、タバコモザイクウイルス、ＴＭＶ）をトランスフェクトした若しくは細菌発現ベクター（例えば、Ｔｉ、ｐＢＲ３２２、ｐＥＴ２５ｂプラスミド）で形質転換した植物細胞系又は動物細胞系が含まれる。あるいは、ガレクチンを、ガレクチン−１アミノ酸配列、ガレクチン−３アミノ酸配列、ガレクチン−７アミノ酸配列又はガレクチン−８アミノ酸配列を全体的又は部分的に合成する化学的方法を用いて生成する。例えば、ペプチド合成は様々な固相技法（Ｒｏｂｅｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ���６９：２０２，１９９５）を用いて行うことができ、自動合成は、例えば、製造業者が提供する説明書にしたがって４３１Ａペプチドシンセサイザ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、フォスターシティ、カリフォルニアから入手可能）を使用して達成し得る。
【０２１５】
医薬組成物
本発明の１つ態様においては医薬組成物を提供し、これらの組成物はガレクチンタンパク質（例えば、ガレクチン−１タンパク質、ガレクチン−３タンパク質、ガレクチン−７タンパク質、ガレクチン−８タンパク質）の活性の少なくとも１種の阻害物質を含み、また任意で薬学的に許容可能な担体を含む。特定の実施形態において、これらの組成物は任意で、１種以上の治療薬をさらに含む。
【０２１６】
「薬学的に許容可能な担体」及び「薬学的に適切な担体」という句は本明細書において互換的に使用され、また所望の特定の剤形に適した溶媒、希釈剤、他の液状ビヒクル、分散又は懸濁補助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤、乳化剤、防腐剤、固形バインダ、滑沢剤等のいずれか及び全てを含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｅｄ．（Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９９５）には、医薬組成物を処方する際に用いられる様々な担体及びその調製のための公知の技法が開示されている。薬学的に許容可能な担体になり得る材料の一部の例には、以下に限定するものではないが、糖、例えばグルコース及びスクロース、デンプン、例えばトウモロコシデンプン及びジャガイモデンプン、セルロース及びその誘導体、例えばカルボキシルメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース及び酢酸セルロース、粉末トラガカント、麦芽、ゼラチン、タルク、賦形剤、例えばカカオバター及び座剤用ワックス、油、例えばピーナツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油及び大豆油、グリコール、例えばプロピレングリコール、エステル、例えばオレイン酸エチル、ラウリン酸エチル、寒天、緩衝剤、例えば水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウム、アルギン酸、発熱物質非含有水、等張食塩水、リンゲル液、エチルアルコール並びにリン酸緩衝液が含まれ、処方者の判断により他の非毒性且つ適合性の滑沢剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム及びステアリン酸マグネシウム、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、香味料、芳香剤、防腐剤及び酸化防止剤も組成物中に存在し得る。
【０２１７】
治療有効用量
さらに別の態様において、本発明の治療組成物又は方法において、本方法は、哺乳動物である被験体におけるα−シヌクレイン病の治療又は予防に関し、本方法は、治療有効量の少なくとも１種の組成物を被験体に投与することを含み、組成物は、哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を薬理学的に調節するための分子を含む。したがって、本発明はα−シヌクレイン病を治療するための方法を提供し、本方法は、ガレクチン−３、ガレクチン−７及び／又はガレクチン−８を阻害する活性薬剤を含む治療有効量の医薬組成物を、それを必要としている被験体に、所望の結果を得るのに必要な量及び時間で投与することを含む。当然のことながら、これには本発明の医薬品を、例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される神経変性疾患又は状態等のα−シヌクレイン病を予防又は治療するための治療手段として投与することが含まれる。特定の実施形態において、医薬組成物の「治療有効量」とは、哺乳動物の脳におけるガレクチン活性を調節するのに有効な量である。本発明の方法において、組成物は、神経変性疾患又は状態の治療に効果的な投与量及び経路で投与し得る。精確な用量は、各医師が治療対象である患者（患畜）を見て選択する。用量及び投与を調節することで、活性薬剤を十分なレベルにする又は所望の効果を維持する。考慮し得る追加の要素には、疾患状態の重症度、例えば神経変性障害の程度、状態の経緯、患者（患畜）の年齢、体重及び性別、食事、投与の時間及び頻度、併用薬、反応感受性並びに治療に対する耐容能／応答が含まれる。長時間作用型の医薬組成物は、特定の組成物の半減期及びクリアランス速度に応じて１日数回、毎日、３〜４日、毎週又は２週間に１回投与し得る。
【０２１８】
本発明の活性薬剤を、好ましくは、投与し易く且つ均一に投薬するために、単位剤形として製剤する。本明細書において、「単位剤形」という表現は、治療対象である患者（患畜）とって適切な、活性薬剤の物理的に別個の単位を指す。しかしながら、当然のことながら、組成物の１日の合計使用量は、妥当な医学的判断の範囲内で担当医が決定する。活性薬剤に関し、治療有効用量はまず、細胞培養アッセイ又は動物モデル（通常、マウス、ウサギ、イヌ又はブタ）において推定することができる。また、動物モデルを、望ましい濃度範囲及び投与経路の達成に使用する。治療有効用量とは、症状又は状態を改善する活性薬剤量のことである。活性薬剤の治療有効性及び毒性は細胞培養又は実験動物における標準的な製薬手順にしたがって求めることができ、例えばＥＤ５０（その用量は個体群の５０％に治療的に有効である）及びＬＤ５０（その用量は個体群の５０％に致死性である）。毒性と治療効果との用量比が治療指数であり、比ＬＤ５０／ＥＤ５０と表すことができる。大きい治療指数を示す医薬組成物が好ましい。細胞培養アッセイ及び動物研究から得たデータを、ヒトに使用するための用量範囲の選定に使用する。
【０２１９】
医薬組成物の投与
適切な薬学的に許容可能な担体と共に所望の用量で調製した後、本発明の医薬組成物をヒト及び他の哺乳動物に、治療対象である状態の重症度に応じて、局所、経口、直腸内、非経口、大槽内、膣内、腹腔内、皮下、筋肉内、頬側又は経鼻投与することができる。合成小分子阻害物質の場合は経口投与が効果的であると考えられる。
【０２２０】
経口投与用の液状剤形には、以下に限定するものではないが、薬学的に許容可能なエマルション、マイクロエマルション、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が含まれる。活性薬剤に加えて、液状剤形は当該分野で一般的に使用される不活性な希釈剤、例えば水又は他の溶媒、可溶化剤及び乳化剤、例えばエチルアルコール、イソプロピルアルコール、
エチルカーボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ひまし油及びごま油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、ソルビタンの脂肪酸エステル及びこれらの混合物を含有し得る。不活性な希釈剤に加えて、経口組成物はアジュバント、例えば湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味料、香味料及び芳香剤も含み得る。
【０２２１】
本発明の医薬組成物を局所投与又は経皮投与するための剤形には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、散剤、溶液、スプレー剤、吸入剤又はパッチが含まれる。活性薬剤を無菌条件下で薬学的に許容可能な担体及び必要な防腐剤又はバッファと必要なだけ混合する。投与は治療又は予防を目的とし得る。
【０２２２】
散剤及びスプレー剤は、本発明の薬剤に加えて、賦形剤、例えばタルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、ポリアミド粉末又はこれら物質の混合物を含有し得る。スプレー剤は、慣用の噴射剤、例えばＨＦＡを追加で含有し得る。
【０２２３】
経皮パッチには、有効成分を身体に制御しながら送達できるというさらなる利点がある。そのような剤形は、化合物を適切な媒体に溶解させる又は分注することで形成することができる。吸収促進剤を使用して皮膚への化合物の浸透量を増加させることもできる。浸透速度は、速度制御膜を用いる又はポリマーマトリックス若しくはゲルに分子を分散させることで制御することができる。
【０２２４】
注射用製剤、例えば、無菌の注射用水性又は油性懸濁液を、公知の技法にしたがって、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁剤を使用して調製し得る。無菌注射用製剤は、毒性がなく非経口で許容可能な希釈剤又は溶媒中の無菌注射用溶液、懸濁液又はエマルションにもなり得て、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液である。利用し得る許容可能なビヒクル及び溶媒には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張食塩水がある。加えて、慣用的には無菌の固定油を溶媒又は懸濁媒体として利用する。これを目的として、合成モノグリセリド又はジグリセリドを含めたいずれの刺激のない固定油も用いることができる。加えて、オレイン酸等の脂肪酸を注射剤の調製に使用する。注射用製剤は、例えば細菌保持フィルタでの濾過又は使用前に滅菌水若しくは他の無菌注射用媒体に溶解若しくは分散させることができる滅菌固形組成物の形態の滅菌剤の投入により滅菌することができる。活性薬剤の効果を長引かせるために、多くの場合、皮下注射又は筋肉内注射からの薬剤の吸収を遅くすることが望ましい。非経口投与した活性薬剤の遅延吸収は、薬剤を油型ビヒクルに溶解又は懸濁させることで成し遂げ得る。注射用デポ剤は、生分解性ポリマー、例えばポリラクチド−ポリグリコリド中の薬剤のマイクロカプセル化マトリックスを形成することでつくられる。活性薬剤のポリマーに対する比及び用いる特定のポリマーの性質に応じて、活性薬剤の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例にはポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。注射用デポ製剤も、身体組織と適合性があるリポソーム又はマイクロエマルションに薬剤を封入することで調製する。
【０２２５】
経口投与用の固形剤形には、カプセル、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が含まれる。そのような固形剤形においては、活性薬剤を、少なくとも１種の不活性で薬学的に許容可能な賦形剤若しくは担体、例えばクエン酸ナトリウム、二リン酸カルシウム並びに／又は（ａ）フィラー若しくは増量剤、例えばデンプン、スクロース、グルコース、マンニトール、ケイ酸、（ｂ）バインダ、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、アラビアゴム、（ｃ）保水剤、例えばグリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば寒天−寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモ若しくはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、炭酸ナトリウム、（ｅ）溶液遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｒｅｔａｒｄｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、例えばパラフィン（ｆ）吸収促進剤、例えば四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコール、グリセロールモノステアレート、（ｈ）吸収剤、例えばカオリン、ベントナイト粘土、（ｉ）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム及びこれらの混合物と混合する。
【０２２６】
同様のタイプの固形組成物も、高分子量ポリエチレングリコール等だけでなく乳糖等の賦形剤を使用して、ソフト及びハードゼラチンカプセルにおけるフィラーとして用い得る。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸剤及び顆粒剤の固形剤形は、コーティング及びシェル、例えば腸溶コーティング、放出制御コーティング及び製薬分野で周知の他のコーティングを施して調製することができる。そのような固形剤形においては、活性薬剤を少なくとも１種の不活性な希釈剤、例えばスクロース又はデンプンと混合し得る。そのような剤形は、通常のプラクティスとして、不活性な希釈剤以外の追加の物質、例えば打錠滑沢剤及び他の打錠補助剤、例えばステアリン酸マグネシウム及び結晶セルロースも含み得る。カプセル、錠剤及び丸剤の場合、剤形は緩衝剤も含み得る。これらは任意で乳白剤を含有し得て、また腸管の特定の部位においてのみ又は優先的に活性薬剤を（任意には遅延型で）放出する組成物にもなり得る。使用し得る埋め込み組成物の例にはポリマー物質及びワックスが含まれる。
【０２２７】
医薬組成物の用途
上述したように、また実施例において詳述するように、ガレクチン−３、ガレクチン−７及びガレクチン−８の少なくとも１種の阻害は、他の受容体若しくは調節タンパク質への結合又は分泌ムチン〜膜貫通ムチン（又は他の糖タンパク質）のオリゴ糖鎖への結合により、特定の理論又は作用機序に制限されることなく、例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される神経変性疾患又は状態の治療に有用である。概して、これらのガレクチン阻害物質は、例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される神経変性疾患又は状態の発症の抑制に臨床的に有用であると考えられている。
【０２２８】
概して、これらのガレクチン阻害物質が、例えばパーキンソン病、レヴィ小体型認知症、純粋型自律神経不全症（ＰＡＦ）、アルツハイマー病、タイプＩの脳内での鉄の蓄積を伴う神経変性（成人神経軸索ジストロフィ又はハレルフォルデン・スパッツ症候群とも称される）、外傷性脳損傷、筋萎縮性側索硬化症、ピック病、多系統萎縮症（シャイ・ドレーガー症候群、線条体黒質変性症及びオリーブ橋小脳萎縮症を含む）、脳卒中、多発性硬化症、てんかん及び乳児神経軸索ジストロフィから選択される神経変性疾患又は状態の抑制に臨床的に有用であることが本明細書で示される。
【０２２９】
ガレクチン１〜１１（例えば、ガレクチン−１、ガレクチン−３、ガレクチン−７及びガレクチン−８）のいずれか少なくとも１種の阻害物質を含有する医薬組成物は、例えば本明細書において、α−シヌクレイン病の治療に有用である。
【０２３０】
実施例に記載の動物に対する処置は全て、Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ  Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌｓ  ｉｎ  Ｖｉｓｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ及びＮＩＨ  Ｇｕｉｄｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌａｂｏｒａｔｏｙｒ  Ａｎｉｍａｌｓの勧告に準拠している。
【０２３１】
本発明の様々な実施形態は以下の請求項により例示され、実施例及び図面は例にすぎず、さらに限定するとは解釈されない。
【０２３２】
本願で引用する非特許参考文献、発行済み特許及び公開特許出願を含めた全ての参考文献の内容は、参照により全て本明細書に援用される。
【０２３３】
本明細書で開示の化合物及び医薬組成物を上記の治療に使用する場合は、治療有効量の少なくとも１種化合物を、その治療を必要とする哺乳動物に投与する。
【０２３４】
本明細書において、用語「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」及び「治療する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」は、ある状態、例えば疾患又は障害に対抗することを目的とした患者（患畜）の管理及びケアを意味する。この用語は、患者（患畜）が患っているある状態に対するあらゆる方面の治療を含むものとし、例えば症状若しくは合併症を緩和するため、疾患、障害若しくは状態の進行を遅延させるため、症状及び合併症を緩和若しくは軽減するため並びに／又は疾患、障害若しくは状態を治癒若しくは排除するため、またその状態を予防するための活性化合物の投与であり、予防とは、疾患、状態又は障害に対抗することを目的とした患者（患畜）の管理及びケアであると理解され、また症状又は合併症の発生を予防するための活性化合物の投与を含む。治療は急性期又は慢性期に施し得る。治療対象である患者（患畜）は好ましくは哺乳動物、特にはヒトであるが、イヌ、ネコ、ウシ、ヒツジ及びブタ等の動物も含み得る。
【０２３５】
本明細書において、本発明の式（Ｉ）の化合物の「治療有効量」という用語は、ある疾患及びその合併症の臨床的な徴候を治癒、緩和又は部分的に阻止するのに十分な量を意味する。これを達成するための十分な量を「治療有効量」と定義する。各目的に有効な量は、疾患又は損傷の重症度、また被験体の体重及び全身状態に左右される。当然のことながら、適切な用量は、値のマトリックスを作成し、このマトリックス内の様々な点を試験するルーチンの実験法により求め得て、全て熟練の医師又は獣医師の通常の技術の範囲内である。
【０２３６】
さらに別の態様において、本発明は、式（Ｉ）の化合物及び任意の薬学的に許容可能な添加剤、例えば担体又は賦形剤を含む医薬組成物に関する。
【０２３７】
本明細書において、「薬学的に許容可能な添加剤」は、制限なく、医薬組成物を創るにあたって本発明の化合物を調合する際に当業者が使用を考える担体、賦形剤、希釈剤、アジュバント、着色料、香料、防腐剤等を含むものとする。
【０２３８】
本発明の組成物に使用し得るアジュバント、希釈剤、賦形剤及び／又は担体は、式（Ｉ）の化合物及び医薬組成物のその他の成分に対して適合性があるという意味で薬学的に許容可能なものでなくてはならず、また投与を受けるものに有害であってはならない。アレルギー反応等の有害な反応を引き起こし得る物質を本発明の組成物が含有しないことが好ましい。本発明の医薬組成物で使用し得るアジュバント、希釈剤、賦形剤及び担体は当業者に周知である。
【０２３９】
上述したように、本明細書で開示の組成物、特に医薬組成物は、本明細書で開示の化合物に加え、少なくとも１種の薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、賦形剤及び／又は担体をさらに含み得る。幾つかの実施形態において、医薬組成物は、１〜９９重量％の上記少なくとも１種の薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、賦形剤及び／又は担体並びに１〜９９重量％の本明細書で開示の化合物を含む。有効成分並びに薬学的に許容可能なアジュバント、希釈剤、賦形剤及び／又は担体の総量は、組成物、特には医薬組成物の１００重量％を超え得ない。
【０２４０】
一部の実施形態においては、上述の目的のために、本明細書で開示の化合物を１種のみ使用する。
【０２４１】
幾つかの実施形態においては、上述の目的のために、本明細書で開示の化合物を２種以上組み合わせて使用する。
【０２４２】
本明細書に記載の化合物を含む組成物、特に医薬組成物は、経口、静脈内、局所、腹腔内、経鼻、頬側、舌下若しくは皮下投与用又は例えばエアロゾル若しくは空気浮遊微粉体の形態での気道を介した投与用に構成し得る。したがって、医薬組成物は、例えば錠剤、カプセル、粉末、ナノ粒子、結晶、非晶質物質、溶液、経皮パッチ又は座剤の形態になり得る。
【０２４３】
組成物、特に医薬組成物は任意で本発明の２種以上の化合物を含み得る。また、組成物は、関連障害を治療するための、当該分野における他の薬物と共に使用し得る。
【０２４４】
本明細書に記載の化合物の典型的な用量は広い範囲に及び、数多くの要素、例えば投与経路、治療を必要としている個体の要件、個体の体重、年齢及び全身状態に左右される。
【０２４５】
式（Ｉ）の化合物は、以下の実験セクションに記載の通りに調製し得る。
【０２４６】
プロセスのさらなる実施形態は本明細書の実験セクションに記載されており、各プロセス及び各出発物質は実施形態を構成し、これらの実施形態は実施形態の一部を構成し得る。
【０２４７】
上記の実施形態は、ある実施形態が本発明の特定の態様に関すると明記されていない限り、本明細書に記載の態様（「治療法」、「医薬組成物」、「薬物として使用するための化合物」又は「方法で使用するための化合物」）のいずれか、また本明細書に記載の実施形態のいずれかのことであるとみなされたい。
【０２４８】
本明細書で引用する、出版物、特許出願及び特許を含めた全ての参考文献は、あたかも各参考文献が参照により本明細書に個別且つ具体的に援用され、なおかつ本明細書に全てが記載されたかのごとく、参照により本明細書に援用される。
【０２４９】
本明細書において、全ての見出し及び副題は便宜上のものにすぎず、本発明をいかなる形でも限定しないと解釈されるべきである。
【０２５０】
上記の要素の、その考えられる全ての変化形の組み合わせは、本明細書に別段の定めがない限り、あるいは文脈に明らかに反していない限り、本発明に含まれる。
【０２５１】
本発明の文脈において、「ある」、「その」及び同様の語は、本明細書に別段の定めがない限り、あるいは文脈に明らかに反していない限り、単数及び複数の両方をその範囲に含むと解釈されたい。
【０２５２】
本明細書において、値の範囲の列挙は、本明細書において別段の定めがない限り、その範囲内にある別個の各値に個々に言及するのを省略する方法にすぎず、別個の各値は、あたかも本明細書中に個別に列挙されているかのごとく本明細書に援用される。本明細書で提供される全ての正確な値は、別段の定めがない限り、対応する近似値を代表するものである（例えば、特定の因子又は測定に関して与えられた全ての正確な例示的な値は、必要に応じて、「約」で修飾された対応する近似値も提供するとみなすことができる）。
【０２５３】
本明細書に記載の方法は全て、本明細書において別段の定めがない限り又は文脈に明らかに反していない限り、いずれの適切な順序でも実施することができる。
【０２５４】
本明細書で挙げる全ての例又は例示を意味する語句（例えば、「〜等」」は本発明をより明確にしようとして使用しているにすぎず、別段の定めがない限り、本発明の範囲を限定するものではない。明細書中のいずれの語句も、明示的に別段の定めがない限り、本発明の実践にとってどの要素も必要不可欠であることを示すと解釈されるべきではない。
【０２５５】
本明細書における特許文献の引用及び援用は便宜上のものにすぎず、これらの特許文献の有効性、特許性及び／又は執行力に関するいずれの観点も反映していない。
【０２５６】
１つ又は複数の要素について「備える、含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」又は「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」等の用語を使用する本発明の態様又は実施形態についての本明細書における記載は、別段の定めがない限り又は文脈に明らかに反していない限り、上記特定の１つ又は複数の要素「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｏｆ）」、「から本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｓ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」又は「を実質的に含む（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ  ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」本発明の同様の態様又は実施形態をサポートするものとする（例えば、特定の要素を含むと本明細書に記載の組成物は、別段の定めがない限り又は文脈に明らかに反していない限り、その要素から成る組成物についても説明していると理解されるべきである）。
【０２５７】
本発明は、本明細書で提示した態様又は請求項に記載の主題の全ての改変物及び均等物を、適用される法が許す最大範囲で含む。
【０２５８】
以下の実施例を用いて本発明についてさらに説明するが、これらの実施例は保護範囲を限定すると解釈されない。これまでの説明及び以下の実施例で開示した特徴は、個別及び組み合わせの両方で、本発明をその多様な形態で実現するための素材となり得る。
【実施例】
【０２５９】
実験
実施例１：ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファンを合成するための材料及び機器
ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（ＴＤ１３９）は、Ｈａｋｏｎ  Ｌｅｆｆｌｅｒ教授及びＵｌｆ  Ｎｉｌｓｓｏｎ教授（Ｌｕｎｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）から入手し、本明細書に記載の材料及び方法を用いて調製した。
【０２６０】
融点をコフラー装置（Ｋｏｆｌｅｒ  ａｐｐａｒａｔｕｓ）（Ｒｅｉｃｈｅｒｔ）で記録し、補正しなかった。プロトン核磁気共鳴（１Ｈ）スペクトルを、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ  ４００（４００ＭＨｚ）又はＢｒｕｋｅｒ  ＡＲＸ  ３００（３００ＭＨｚ）分光計を使用して記録した。多重度を、シングレット（ｓ）、ダブレット（ｄ）、ダブレットのダブレット（ｄｄ）、トリプレット（ｔ）、見かけのトリプレット（ａｔ）又はダブレットの見かけのトリプレット（ａｔｄ）で示した。炭素核磁気共鳴（１３Ｃ）スペクトルをＢｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ  ４００（１００．６ＭＨｚ）分光計を使用して記録した。スペクトルをＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ及びＤＥＰＴ実験を用いて割り当てた。すべての化学シフトを、百万分の一（ｐｐｍ）のｄ−スケールで示した。
【０２６１】
低分解能及び高分解能（ＦＡＢ−ＨＲＭＳ）高速原子衝撃質量スペクトルを機器ＪＥＯＬ  ＳＸ−１２０を使用して記録し、低分解能及び高分解能（ＥＳ−ＨＲＭＳ）を機器Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  Ｑ−ＴＯＦで記録した。旋光度をＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ３４１施光計により１ｄｍの路長で測定した。濃度は１００ｍＬあたりのｇ数で表す。薄層クロマトグラフィ（ＴＬＣ）をＭｅｒｃｋ  Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌシートを使用して行い、６０Ｆ２５４シリカでプレコーティングした。プレートを１０％硫酸で展開した。フラッシュカラムクロマトグラフィをシリカ（Ｍａｔｒｅｘ、６０Å、３５〜７０μｍ、Ｇｒａｃｅ  Ａｍｉｃｏｎ）で行った。アセトニトリルを水素化カルシウムから蒸留し、４Åモレキュラーシーブ上に保存した。ＤＭＦを４Åモレキュラーシーブから蒸留し、４Åモレキュラーシーブ上で保存した。
【０２６２】
ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（ＴＤ１３９）を、以下の反応スキーム１にしたがって調製した。
【０２６３】
【化１４】
2017512822.tif 000015
【０２６４】
化合物１（上の反応１）をＣａｒｂｏｓｙｎｔｈ  Ｌｉｍｉｔｅｄ  ８＆９Ｏｌｄ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｐａｒｋ−Ｃｏｍｐｔｏｎ−Ｂｅｒｋｓｈｉｒｅ−ＲＧ２０  ６ＮＥ（英国）から入手した。あるいはＤ−ガラクトースから３つの近似定量的ステップで合成した（Ｌｉ，Ｚ．ａｎｄ  Ｇｉｌｄｅｒｓｌｅｅｖｅ，Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，１１６１２−１１６１９を参照のこと）。
【０２６５】
実施例２．フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−３−Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（スキーム１中の構造２）の合成
化合物１（１０．５グラム、２９．２ｍｍｏｌ）を乾燥ピリジン（４．７３ｍＬ、５８．４ｍｍｏｌ）及び乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１３２ｍＬ）に溶解させた。反応混合物を撹拌しながら−２０℃まで冷却した（氷及びＮａＣｌ浴３：１）。ゆっくりと、Ｎ2雰囲気下、Ｔｆ2Ｏ（５．６８ｍＬ、３３．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＴＬＣによりモニタした（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１及びトルエン：アセトン、１０：１）。反応完了後、ＡｃＣｌ（２．２９ｍＬ、３２．１ｍｍｏｌ）を添加し、撹拌を維持し、温度を室温まで上昇させた。この混合物をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１及びトルエン：アセトン、１０：１）でモニタした。反応完了後、反応をＣＨ2Ｃｌ2でクエンチし、５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3（飽和）及びＮａＣｌ（飽和）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。
【０２６６】
実施例３．フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グロピラノシド（スキーム１の構造３）の合成
テトラブチルアンモニウムニトライト（２５．３ｇ、８７．７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１１０ｍＬ）中の化合物２（１５．６ｇ、２９．２ｍｍｏｌ）の溶液に添加し、Ｎ2雰囲気下、５０℃で撹拌を継続した。まず紫色になり、次にガーネット色になる反応を観察した。反応をＴＬＣによりモニタし（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１及びトルエン：アセトン、１０：１）、ＣＨ2Ｃｌ2でクエンチした。混合物を５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3（飽和）及びＮａＣｌ（飽和）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、続いてフラッシュクロマトグラフィで精製し（溶出剤ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１及びヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：２）、ＥｔＯＡｃ及びヘプタン（１：３）の混合物から再結晶化させた。ＣＤＣｌ3中における1Ｈ  ＮＭＲ、δ７．６０−７．５７（ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．４３−７．４０（ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．３７−７．３４（ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、７．２９−７．２５（ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５０（ｓ、１Ｈ、ＰｈＣＨ）、５．１５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．２９Ｈｚ、Ｈ−１）、５．１０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．２７Ｈｚ、２．８５Ｈｚ、Ｈ−２）、４．３６（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．４９Ｈｚ、１．４Ｈｚ、Ｈ−６）、４．１８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｈ−３）、４．０８（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．５９Ｈｚ、１．０４Ｈｚ、Ｈ−６）、４．０３（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．５３Ｈｚ、１．７５Ｈｚ、Ｈ−４）、３．８８（ｓ、２Ｈ、Ｈ−５＋ＯＨ）、２．１２（ｓ、３Ｈ、ＯＡｃ）。
【０２６７】
実施例４．フェニル２−Ｏ−アセチル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−３−Ｏ−トリフルオロメタンスルホニル−β−Ｄ−グロピラノシド（スキーム１の構造４）の合成
化合物３（１．００ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１２．５ｍＬ）及び乾燥ピリジン（０．４０ｍＬ、４．９６ｍｍｏｌ）に溶解させた。反応混合物を撹拌しながら−２０℃まで冷却した（氷及びＮａＣｌ浴３：１）。ゆっくりと、Ｎ2雰囲気下、Ｔｆ2Ｏ（０．４８ｍＬ、２．８５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＴＬＣによりモニタした（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１及びトルエン：アセトン、１０：１）。反応完了後、ＣＨ2Ｃｌ2でクエンチし、５％ＨＣｌ、ＮａＨＣＯ3（飽和）及びＮａＣｌ（飽和）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥するまで濃縮した。
【０２６８】
実施例５．フェニル２−Ｏ−アセチル−３−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（スキーム１の構造５）の合成
テトラブチルアンモニウムアジド（２．１２ｇ、７．４４ｍｍｏｌ）を慎重に、ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物４（１．３２５６ｇ、２．４８ｍｍｏｌ）の溶液に撹拌しながらＮ2雰囲気下、５０℃で添加した。反応をＴＬＣ（Ｅ：Ｈ、１：１）でモニタし、減圧下で濃縮し、続いてフラッシュクロマトグラフィで精製した（溶出剤ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、２：１及びヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）．ＣＤＣｌ3中における1Ｈ  ＮＭＲ、δ７．６１−７．５８（ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．４４−７．４１（ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．３９−７．３６（ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、７．３０−７．２４（ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．５９（ｓ、１Ｈ、ＰｈＣＨ）、５．３５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝９．９５Ｈｚ、Ｈ−２）、４．７３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６３Ｈｚ、Ｈ−１）、４．４４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．２４Ｈｚ、１．６０Ｈｚ、Ｈ−６）、４．３５−４．３４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．３３Ｈｚ、０．８８Ｈｚ、Ｈ−４）、４．１１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１２．４８Ｈｚ、１．６７Ｈｚ、Ｈ−６）、３．５７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．１５Ｈｚ、Ｈ−５）、３．４４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．２１Ｈｚ、３．２９Ｈｚ、Ｈ−３）、２．１７（ｓ、３Ｈ、ＯＡｃ）。
【０２６９】
実施例６．フェニル２−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（スキーム１の構造６）の合成
化合物５（４７０ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）を８０％酢酸（７５ｍＬ）に溶解させ、混合物を加熱し、６０℃で維持した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）でモニタした。反応完了後、混合物を減圧下で加熱しながら濃縮した。
【０２７０】
実施例７．フェニル２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−１−チオ−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（スキーム１の構造７）の合成
無水酢酸（３０ｍＬ）を、乾燥ピリジン（３０ｍＬ）中の化合物６（３７３ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）でモニタし、反応完了後、減圧下で濃縮した。ＣＤＣｌ3中における1Ｈ  ＮＭＲ、δ７．５４−７．５１（ｍ、２Ｈ、Ａｒ）、７．３５−７．３０（ｍ、３Ｈ、Ａｒ）、５．４６（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−４）、５．２３（ｔ、１Ｈ、Ｈ−２）、４．７３（ｄ、１Ｈ、Ｈ−１）、４．１５（ｄ、２Ｈ、Ｈ−６、Ｈ−６）、３．９４（ｄｔ、１Ｈ、Ｈ−５）、３．６８（ｄｄ、１Ｈ、Ｈ−３）、２．１８（ｓ、３Ｈ、ＯＡｃ）、２．１５（ｓ、３Ｈ、ＯＡｃ）、２．０６（ｓ、３Ｈ、ＯＡｃ）。
【０２７１】
実施例８．２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（スキーム１の構造８）の合成
化合物７（２３７．４ｍｇ、５６０μｍｏｌ）を乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（２ｍＬ）に溶解させ、臭素（３２μｌ、６２０μｍｏｌ）を添加した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）でモニタした。反応完了後、少量のシクロペンテンを反応混合物に添加することで残っている未反応のＢｒ2を除去した。混合物を減圧下で濃縮し、高速フラッシュクロマトグラフィにより精製した（溶出剤：５００ｍＬヘプタン：ＥｔＯＡｃ、２：１）。
【０２７２】
実施例９．２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノース−１−イソチオウロニウムブロミド（スキーム１の構造９）の合成
反応性が高い臭化化合物８（７０．６ｍｇ、１８０μｍｏｌ）を速やかに乾燥アセトニトリル（１．７ｍＬ）に溶解させ、チオウレア（１３．７ｍｇ、１８０μｍｏｌ）とＮ2下で４時間にわたって還流させた。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）でモニタし、反応完了後、混合物を冷却した。
【０２７３】
実施例１０．ビス−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−アジド−３−デオキシ−ｂ−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（スキーム１の構造１０）の合成
反応性が高い臭化化合物８（７７．０ｍｇ、１９６μｍｏｌ）及びＥｔ3Ｎ（６０μｌ、４３０μｍｏｌ）を最後の混合物（化合物９）に添加した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）でモニタした。反応完了後、混合物を減圧下で、加熱することなく濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィで精製した（溶出剤：ヘプタン：ＥｔＯＡｃ、１：１）。ＣＤＣｌ3中における1Ｈ  ＮＭＲ、δ５．５０（ｄｄ、２Ｈ、Ｈ−４）、５．２３（ｔ、２Ｈ、Ｈ−２、Ｈ−２’）、４．８３（ｄ、２Ｈ、Ｈ−１、Ｈ−１’）、４．１５（ｄｄ、４Ｈ、Ｈ−６、Ｈ−６、Ｈ−６’、Ｈ−６’）、３．８９（ｄｔ、２Ｈ、Ｈ−５、Ｈ−５’）、３．７０（ｄｄ、２Ｈ、Ｈ−３、Ｈ−３’）、２．１９（ｓ、６Ｈ、２ＯＡｃ）、２．１５（ｓ、６Ｈ、２ＯＡｃ）、２．１８（ｓ、６Ｈ、２ＯＡｃ）。
【０２７４】
実施例１１．ビス−（３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−スルファン（スキーム１の構造１１）の合成
化合物１０（１６０ｍｇ、０．０００２４ｍｏｌ）を乾燥ＭｅＯＨ（２．６ｍＬ）及び乾燥ＣＨ2Ｃｌ2（１．６ｍＬ）に溶解させ、ＮａＯＭｅ（１Ｍ、２４μｌ、２４μｍｏｌ）を添加した。反応をＴＬＣ（ヘプタン：ＥｔＯＡｃ１：１及びＤ：Ｍ５：１）でモニタした。反応完了後、混合物をＤｕｏｌｉｔｅ  Ｃ４３６で、ｐＨ７になるまで中和し、濾過し、ＭｅＯＨで洗浄した。濾過した溶液を減圧下で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィで精製すると（溶出剤：ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ、５：１）、純粋な化合物１１（７４．１ｍｇ、７５％）が得られた。ＣＤＣｌ3中における1Ｈ  ＮＭＲ、δ４．７２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝９．７Ｈｚ、Ｈ−１、Ｈ−１’）、３．９５（ｂｒ  ｓ、２Ｈ、Ｈ−４、Ｈ−４’）、３．８４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝９．８Ｈｚ、Ｈ−２、Ｈ−２’）、３．７４（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝１１．４７Ｈｚ、７．２３Ｈｚ、Ｈ−６、Ｈ−６’）、３．６４（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝１１．４８Ｈｚ、４．７２Ｈｚ、Ｈ−６、Ｈ−６’）、３．６０−３．５５（ｄｄｄ、２Ｈ、７．１５Ｈｚ、４．６７Ｈｚ、０．９３Ｈｚ、Ｈ−５、Ｈ−５’）、３．３６（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝１０Ｈｚ、３．０５Ｈｚ、Ｈ−３、Ｈ−３’）。
【０２７５】
実施例１２．ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファン（ＴＤ１３９）の合成
ＴＤ１３９を周囲温度で、ビス−（３−アジド−３−デオキシ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−スルファン（化合物１１）と３−フルオロフェニルアセチレン（３ｅｑ．）との間でのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドＤＭＦ、１００ｍＬ／ｍｍｏｌスルファン）中のＣｕ（Ｉ）（０．２ｅｑ）、トリエチルアミン（２ｅｑ．）でのＣｕ（Ｉ）触媒環状付加により合成した。完了するまで反応をＴＬＣでモニタし、濃縮し、まずフラッシュクロマトグラフィ（溶出剤：ＣＨ2Ｃｌ2：ＭｅＯＨ、８：１）、次に分取ＨＰＬＣで精製するとＴＤ１３９が収率７６％で白色で非晶質の固体として得られた。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ、４００ＭＨｚ）ｄ  ８．５９（ｓ、２Ｈ、トリアゾール−Ｈ）、７．６３（ｂｒ  ｄ、２Ｈ、７．６Ｈｚ、Ａｒ−Ｈ）、７．５７（ｂｒ  ｄ、２Ｈ、８．４Ｈｚ、Ａｒ−Ｈ）、７．４１（ｄｔ、２Ｈ、６、０及び８．０Ｈｚ、Ａｒ−Ｈ）、７．０５（ｂｒ  ｄｔ、２Ｈ、２．４及び６．４Ｈｚ、Ａｒ−Ｈ）、４．９３（ｄｄ、２Ｈ、２、４及び１０．４Ｈｚ、Ｈ３）、４．９２（ｄ、２Ｈ、１０．４Ｈｚ、Ｈ１）、４．８４（２Ｈ、１０．４Ｈｚ、Ｈ２）、４．１８（ｄ、２Ｈ、２．４Ｈｚ、Ｈ４）、３．９２（ｄｄ、２Ｈ、４．２及び７．６Ｈｚ、Ｈ５）、３．８４（ｄｄ、２Ｈ、７．６及び１１．４Ｈｚ、Ｈ６）、３．７３（ｄｄ、２Ｈ、４．２及び１１．４Ｈｚ、Ｈ６）；ＦＡＢ−ＨＲＭＳｍ／ｚ、Ｃ28Ｈ30Ｆ2Ｎ6ＮａＯ8Ｓについて計算（Ｍ＋Ｎａ+）、６７１．１７１２；測定値、６７１．１７０５。
【０２７６】
化合物ＴＤ１３９の構造を以下に示す。
【０２７７】
【化１５】
2017512822.tif 000016
【０２７８】
実施例１３
材料及び方法
動物
一次ミクログリア培養物のために、純粋（Ｃ５７ＢＬ／６遺伝的背景）を有するガレクチン−３ヌル変異マウス（Ｃｏｌｎｏｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８ａ）をＧｏｔｈｅｎｂｕｒｇ  ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙのドクターＫ．Ｓａｖｍａｎから入手した。脳内注入用に、発明者はＣｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからＣ５７Ｂｌ／６Ｊの生後３ヶ月の雌のマウスを購入し、ルンドにあるＢＭＣ動物施設で１２時間明／１２時間暗サイクル下、餌及び水を不断給餌して飼育した。全ての手順を国際的なガイドラインに準拠して行い、Ｍａｌｍｏ−Ｌｕｎｄ  Ｅｔｈｉｃａｌ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ａｎｉｍａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｍ２５０−１１）から承認を得た。
【０２７９】
遺伝子型判定
ｇａｌ３−／−及びｇａｌ３＋／＋マウスの遺伝子型を統合抽出増幅キット（Ｅｘｔｒａｃｔ−Ｎ−Ａｍｐ（商標）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）により判定した。ＰＣＲは、９４℃での５分間、次の４０サイクルの９４℃での４５秒間にわたる変性、５５℃での３０秒間にわたるアニーリング及び７２℃での１．５分間にわたる伸長から成る。使用したプライマー（ＣｙｂｅｒＧｅｎｅ）は以下の通りである：ガレクチン−３コモン５−ＣＡＣ  ＧＡＡ  ＣＧＴ  ＣＴＴ  ＴＴＧ  ＣＴＣ  ＴＣＴ  ＧＧ−３’）、ｇａｌ３−／−５−ＧＣＴ  ＴＴＴ  ＣＴＧ  ＧＡＴ  ＴＣＡ  ＴＣＧ  ＡＣＴ  ＧＴＧ  Ｇ−３！（３８４塩基対のシングルバンド）及びｇａｌ３＋／＋５−ＴＧＡ  ＡＡＴ  ＡＣＴ  ＴＡＣ  ＣＧＡ  ＡＡＡ  ＧＣＴ  ＧＴＣ  ＴＧＣ−３（３００塩基対のシングルバンド）（Ｄｏｖｅｒｈａｇ  ｅｔ  ａｌ．，２００８；Ｓｖｅｄｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００７）。発明者は、ゲル電気泳動（アガロース、臭化エチジウムで標識）でＰＣＲ産物を分離し、ＣＣＤカメラで可視化した（ＳＯＮＹ、東京、日本）。
【０２８０】
細胞培養及び処理
マウス（ミクログリア細胞株（ＢＶ２細胞））を、１０％ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を１００Ｕ／ｍｌのペニシリン及び１００Ｕ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に含有するダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で５％のＣＯ2雰囲気中、３７℃で培養した。１日前に、ＢＶ２を２４ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）に濃度２ｘ１０5細胞／ウェルで播種した。ＢＶ２細胞を、異なる濃度：５μＭ、１０μＭ及び２０μＭのα−シヌクレインモノマー及び凝集体で処理した。細胞を１μｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でも処理した。全ての処理を１２時間にわたって行った。
【０２８１】
一次培養物
野生型マウス（Ｃ５７  ｂ１６）及びガレクチン−３ＫＯ子マウスからの一次ミクログリア培養物を出生から１〜３日後に用意し、上述したように培養した（Ｄｅｉｅｒｂｏｒｇ，２０１３）。簡単に説明すると、３０匹のマウスからの大脳皮質を、二価イオン不含トリプシン（０．１％）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＤＮａｓｅ（０．０５％）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）含有氷冷ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で取り出した。細胞を、１０％ウシ胎仔血清（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を１００Ｕ／ｍｌのペニシリン及び１００Ｕ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に含有する１０ｍｌ／フラスコのダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が入った７５ｃｍ2フラスコに５％のＣＯ2雰囲気中、３７℃でプレーティングした。１０日後、フラスコを１０〜２０回叩いて細胞を培地で採取し、９６ウェルプレートに密度２ｘ１０5細胞／ウェルでプレーティングした。一次培養物を、異なる濃度：５０ｎＭ、２００ｎＭ、１μＭ、５μＭ及び２０μＭのα−シヌクレイン凝集体で処理した。
【０２８２】
α−シヌクレイン凝集体調製物
α−シヌクレインモノマー及びα−シヌクレイン凝集体（α−シヌクレインモノマー及びα−シヌクレイン凝集体のタンパク質調製物。発明者はα−シヌクレイン調製物を透過型電子顕微鏡写真（ＴＥＭ）及びウェスタンブロットにより分析した。ＴＥＭ画像は、モノマー調製物中の小分子及び凝集調製物中のより大きな分子群であると考えられるシグナルを示し、これはそれぞれモノマー及びオリゴマー／原線維タンパク質構造体を示唆している。ウェスタンブロット分析により、モノマータンパク質調製物中のモノマータンパク質が約１５ｋＤａであることが確認された。凝集タンパク質調製物において、発明者は、ミクログリア細胞の活性化に使用した約３０〜７５ｋＤａのオリゴマー、モノマー及び少量の原線維（＞２５０ｋＤａ）を発見した。モノマーを濃度７０μＭで使用し、凝集体を４０μＭで使用した。凝集体を調製するために、発明者はオービタルシェーカーを２５０ｒｐｍで使用し、モノマーを５日間にわたって３７℃、ＰＢＳ中で振盪した。５日間のインキュベーション後、タンパク質凝集体をＢｒａｎｓｏｎ  Ｓｏｎｉｆｉｅｒ  ２５０を以下の条件：３／９出力及び３０／１００デューティサイクルで使用して超音波処理した。発明者は、ウェスタンブロット及び透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を使用して凝集体及びモノマーの組成物を試験した。発明者はモノマー及び凝集体に同じ濃度４０μＭを用い、またＦｉｅｌｄ  Ｅｍｉｓｓｉｏｎ  ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＦＥＩ、アイントホーフェン、オランダ）のｂｉｏｔｗｉｎレンズを備えたＴｅｃｈｎａｉ  Ｓｐｉｒｉｔ透過型電子顕微鏡に１００ｋＶの加速電圧を印加した。発明者は、水中の２％酢酸ウラニルを使用することでモノマー及び超音波処理済み凝集形態のα−シヌクレインのネガティブ染色を行った。
【０２８３】
ガレクチン−３阻害物質
ガレクチン−３活性に小阻害分子ビス−｛３−デオキシ−３−［４−（３−フルオロフェニル）−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−１−イル］−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝スルファンを使用した（Ｍａｃｋｉｎｎｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２，Ｖｏｌａｒｅｖｉｃ  ｅｔ  ａｌ．，２０１２；Ｓａｋｓｉｄａ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。研究中、この阻害物質を３０分間にわたる前処理として使用した。ただしインキュベーション時間が１２時間の貪食アッセイを除く。阻害物質のα−シヌクレイン誘発性の炎症を変化させる能力を試験するために、５〜１００μＭの様々な濃度で試験を行った。阻害物質での３０分間の前処理後、発明者は、様々な濃度のα−シヌクレインモノマー又は凝集体での１２時間にわたる処理を追加した。阻害物質は、ストック濃度４ｍＭのＤＭＳＯ（４０％）及び蒸留水（６０％）中、希薄である。
【０２８４】
トランスフェクション条件
ＢＶ２細胞のトランスフェクションを、製造業者の推奨にしたがってＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して行った。ノンターゲティングコントロール及びガレクチン−３ｓｉＲＮＡをＤｈａｒｍａｃｏｎから得た。（ＳＭＡＲＴプール）ｓｉＲＮＡ配列を使用した：ｓｉＬＧａｌ３Ｓ３（１）Ｊ−０４１０９７−０９  ＧＡＧＡＧＡＵＡＣＣＣＡＵＣＧＣＵＵＵ、ｓｉＬＧａｌ３Ｓ３（２）Ｊ−０４１０９７−１０  ＡＣＵ−ＵＣＡＡＧＧＵＵＧＣＧＧＵＣＡＡ、ｓｉＬＧａｌ３Ｓ３（３）Ｊ−０４１０９７−１１  ＡＣＡＧＵＧＡＡＡＣＣＣＡＡＣＧＣＡＡ、ｓｉＬ−Ｇａｌ３Ｓ３（４）Ｊ−０４１０９７−１２  ＧＧＡＵＧＡＡＧＡＡＣＣＵＣＣＧＧＧＡ。
【０２８５】
ウェスタンブロット
ウェスタンブロットを、ＢＶ２ミクログリア細胞又は一次ミクログリア細胞についてｉＮＯＳ及びガレクチン−３タンパク質レベルについて行った。簡単に説明すると、５又は１０μｇのタンパク質試料を４〜２０％Ｍｉｎｉ−ＰｒｏｔｅａｎＴＧＸ  Ｐｒｅｃａｓｔ  Ｇｅｌ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）にのせ、Ｔｒａｎｓ−Ｂｌｏｔ  Ｔｕｒｂｏ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を使用してニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）に移した。室温で、１時間の間に膜をＰＢＳで希釈した１０％カゼイン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でブロックした（錠剤、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）。ブロック後、適切な一次抗体と４℃で一晩インキュベートした。膜をＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ  ２０（０．１％）で清浄化し、次に２時間の間、室温で、適切な二次ペルオキシダーゼ抗体（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）とインキュベートした。各ブロットをＣｌａｒｉｔｙ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  ＥＣＬ基質（Ｂｉｏｒａｄ）を用いて展開した。Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定したタンパク質レベルを正規化し、タンパク質レベルをβ−アクチンで補正した。結果を各実験で用いた最高濃度（２０μＭ）にあわせて正規化することで炎症応答を正規化した。発明者はウェスタンブロットも用いて、モノマーα−シヌクレインから作り出したα−シヌクレイン凝集体の組成を推定した。
【０２８６】
抗体
発明者は以下の一次抗体を使用した：抗ウサギｉＮＯＳ一次抗体（１：５０００、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ）、抗ラットガレクチン−３抗体（１：３０００、Ｈａｋｏｎ  Ｌｅｆｆｌｅｒ氏の研究室から入手したＭ３８クローン）、抗マウスアクチン１：８０００（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、抗ヒトシヌクレイン抗体（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）及び抗ウサギＩＢＡ−１（１：５００、ＷＡＫＯ）。
【０２８７】
サイトカイン分析
発明者は、１２時間にわたる処理後、ＭＳＤ  Ｔｈ１／Ｔｈ２超高感度サイトカインプレート（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ、米国）でＢＶ２及び一次ミクログリア細胞からの馴化培地におけるサイトカインレベルを測定し、以下のサイトカイン：ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＫＣ／ＧＲＯ／ＣＩＮＣ、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（トータル）及びＴＦＮ−αを分析した。この電気化学発光結合免疫吸着法は、ＳＥＣＴＯＲ  Ｉｍａｇｅｒ  ６０００（Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）を使用し、製造業者の推奨にしたがって行われた。馴化培地をドライアイス上で急速凍結し、分析に先立って−８０℃の冷凍庫で保存した。各ケースにおいて２５μｌの試料を用いることで様々なサイトカインのレベルを測定した。分析したサイトカインはＩＦＮ−γ、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＴＮＦ−αであった。
【０２８８】
生存能アッセイ
α−シヌクレイン、ガレクチン−３阻害物質又はその両方が異なる条件下でＢＶ２細胞にとって毒性であるか否かを試験するために、ＸＴＴ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）還元分光光度法をベースとしたＩｎ  ｖｉｔｒｏ生存能アッセイキットを使用して生細胞におけるミトコンドリア活性を推定した。アッセイは、キットに同封された製造業者のプロトコルにしたがって行われた。吸光度を、プレートリーダーを使用して分光光度的に測定した。
【０２８９】
貪食アッセイ
貪食アッセイキット（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍ、米国）を製造業者が提供するプロトコルにしたがって使用してミクログリアの貪食を測定した。９６ウェルプレートに１２時間にわたって５ｘ１０4細胞／ウェルをプレーティングしてから、細胞をさらに１２時間にわたって２０μＭのα−シヌクレインで処理した。その後、ＩｇＧ−ＦＩＴＣビーズを、ガレクチン−３阻害物質と共に又は伴うことなく、１２時間にわたって添加した。貪食能を、蛍光プレートリーダー（ＦｌｕｏＳｔａｒ  Ｏｐｔｉｍａ、ＢＭＧ、ＬａｂＴｅｃｈ、スウェーデン）で分析した。
【０２９０】
統計的解析
実験グループ間の差を、図のレジェンドで示すように、一元ＡＮＯＶＡ＋事後テューキー法、二元ＡＮＯＶＡ＋事後ダネット検定又はｔ−検定で評価した（別段の定めがない限り）。Ｐ＜０．０５は統計的に有意であるとみなされた。グラフに関しては、ＰＲＩＳＭ６を使用した。グループ内変動が大きいため、ＢＶ２細胞からのサイトカインの分析には対数化データを使用した。正規分布したデータを、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍとして表現し、表した。
【０２９１】
結果
α−シヌクレインはミクログリア活性化を促進させる
様々な形態のα−シヌクレインがミクログリア細胞を活性化させると知られている（Ｃｏｄｏｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３；Ｋｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，２０１３）。モノマー及び凝集形態で用いたα−シヌクレインタンパク質の量及び質をウェスタンブロット及び電子顕微鏡法により確認したところ、発明者のα−シヌクレイン凝集体は主にオリゴマーを含有していることが判明した。発明者はまず、異なる濃度（５μＭ、１０μＭ及び２０μＭ）のモノマー及び凝集形態のα−シヌクレインの炎症応答の研究に着手した。ＬＰＳ処理（４、８、１２及び２４時間）に続く一時的なｉＮＯＳ応答に基づいて１２時間のインキュベーション時間を採用し、発明者は１２時間後にｉＮＯＳ発現におけるピークを発見し（データは示さず）、これは他の研究者の報告と同様であった（Ｈｅｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。異なる濃度を用いて（５μＭ、１０μＭ及び２０μＭ）、発明者は、モノマーα−シヌクレイン及びα−シヌクレイン凝集体の両方に続く顕著なｉＮＯＳ発現の濃度依存性のアップレギュレーションを発見した（それぞれ図１Ａ及び図１Ｂ）。しかしながら、最高濃度２０μＭでは、α−シヌクレイン凝集体でモノマーより３倍高いｉＮＯＳタンパク質発現が生じた（Ｐ＜０．０５、ｎ＝３）。ウェスタンブロット分析はｉＮＯＳ及びβ−アクチンタンパク質レベルを示す。すなわち、データは、発明者のα−シヌクレイン調製物がミクログリア活性化を成功裡に誘発できることを実証している。
【０２９２】
実施例１４
ガレクチン−３の阻害はミクログリア細胞におけるｉＮＯＳ発現を防止する
次に、発明者は、ミクログリア細胞のα−シヌクレイン誘発性活性化におけるガレクチン−３阻害の役割を評価しようとした。これを目的として、ミクログリア細胞を異なる濃度（５、２５、５０及び１００μＭ）のガレクチン−３阻害物質で３０分間にわたって前処理し、次に細胞を洗浄して阻害物質を除去し、さらに細胞をα−シヌクレインモノマー又は凝集体（２０μＭ）で１２時間にわたって処理し、その後ｉＮＯＳタンパク質発現レベルを分析した。際立って、ガレクチン−３の化学的阻害後に、α−シヌクレイン凝集体に応答して（図１Ｄ）濃度依存的にα−シヌクレイン誘発性ミクログリア活性化はｉＮＯＳ発現の観点で有意に阻害されたが、モノマーには応答しなかった（図１Ｃ）。実際、５０及び１００μＭの阻害物質での処理によりｉＮＯＳ発現は５０％を超えてダウンレギュレートされた。
【０２９３】
ガレクチン−３阻害は細胞生存能を損なわない
ガレクチン−３及び／又はα−シヌクレイン凝集体の阻害物質が細胞生存に影響するか否かを試験するために、発明者はその効果をＸＴＴ生存能アッセイを用いて評価し、ガレクチン−３及び／又はα−シヌクレイン凝集体が単独でもα−シヌクレイン凝集体と組み合わせでも細胞生存能に負に影響しないことを実証した（データは示さず）。
【０２９４】
炎症性サイトカインレベルはα−シヌクレイン処理後に上昇する
α−シヌクレイン処理後のＢＶ２ミクログリア細胞のサイトカイン産生レベルを求めるために、発明者は、電気化学発光ＥＬＩＳＡを用いて、α−シヌクレイン凝集体で処理した細胞の培地におけるサイトカインを測定した。図２に示すように、α−シヌクレイン凝集体との１２時間にわたるインキュベーション後、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２及びＩＬ−２分泌は有意にアップレギュレートされた。注目すべきは、サイトカインのアップレギュレーションが濃度依存的に起きることであり、２０μＭのタンパク質凝集体は最大のサイトカイン分泌を誘発した。すなわち、α−シヌクレイン凝集体が誘発するミクログリア活性化は、ＰＤで観察されるものと同様の炎症促進性カスケードを増進させる（Ｚｉｎｄｌｅｒ  ａｎｄ  Ｚｉｐｐ，２０１０；Ｂｌａｎｄｉｎｉ，２０１３）。
【０２９５】
ＢＶ２ミクログリア細胞におけるガレクチン−３ノックダウンはｉＮＯＳ発現のダウンレギュレーションを誘発する
ミクログリア活性化におけるガレクチン−３の役割をさらに試験するために、発明者は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用し、ＢＶ２細胞におけるガレクチン−３発現をノックダウンすることにした。ガレクチン−３及びｓｉＲＮＡネガティブコントロールノックダウン細胞をα−シヌクレイン凝集体（２０μＭ）で１２時間にわたって処理し、ｉＮＯＳ発現レベルをウェスタンブロット分析で比較した。驚くべきことに、ｉＮＯＳ発現レベルにおいて８０％の低下が観察された（Ｐ＜０．０５、ｎ＝３）（図３）。ウェスタンブロット分析は、ｉＮＯＳ及びβ−アクチンタンパク質レベルを示す。すなわち、結果は、ｓｉＲＮＡを使用したガレクチン−３の阻害がα−シヌクレイン誘発性ミクログリア活性化を低下させ、またｉＮＯＳタンパク質発現を有意に低下させることを示した。
【０２９６】
ガレクチン−３の薬理学的介入はミクログリア貪食能を低下させる
ガレクチン−３がオプソニンとして作用可能であり且つ貪食を促進することは知られている（Ｓａｎｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００３；Ｋａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００９）。
【０２９７】
α−シヌクレイン誘発性活性化モデルにおけるミクログリア細胞の貪食能へのガレクチン−３の関連を試験するために、発明者は細胞を１００μＭのガレクチン−３阻害物質で３０分間にわたって前処理し、続いて細胞をα−シヌクレイン凝集体で処理した又は両者を１２時間にわたって組み合わせた。α−シヌクレインで活性化させたミクログリア細胞は高い貪食活性を示す（図４）。前処理として阻害物質を使用した貪食能に違いは見られなかった（データは示さず）。しかしながら、図４に示すように、阻害物質とα−シヌクレインとを１２時間にわたって組み合わせることで、貪食能は、ガレクチン−３阻害時にコントロールレベルまで（**Ｐ＜０．００５）で強力に低下した。興味深いことに、ガレクチン−３タンパク質の添加は貪食能をα−シヌクレイン凝集体と同程度まで上昇させる。ガレクチン−３及びα−シヌクレイン凝集体を併用する相乗効果は認められなかった。これらの結果は、貪食の誘発がα−シヌクレイン凝集体によるミクログリア活性化の重要な側面であること、またガレクチン−３が貪食におけるこのα−シヌクレイン誘発性の上昇の重要な成分であることを示唆している。
【０２９８】
α−シヌクレイン誘発性活性化後、ガレクチン−３ＫＯミクログリアはｉＮＯＳ発現をダウンレギュレートする
マウスミクログリア細胞株（ＢＶ２細胞）で得られた結果をさらに検証するために、炎症応答に対するガレクチン−３の役割を、野生型及びガレクチン−３ＫＯマウスから単離した一次ミクログリア細胞で試験した。野生型においては、１２時間のα−シヌクレイン処理（凝集体、２０μＭ）に続く明瞭なｉＮＯＳアップレギュレーションが認められたが、ガレクチン−３ＫＯミクログリアでは完全に阻害された。野生型マウスからの一次ミクログリア培養物は、２０μＭのα−シヌクレイン凝集体又はＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍｌ）への１２時時間にわたる曝露後に強力なｉＮＯＳ発現を示した。５μＭ以下のより低いα−シヌクレイン凝集体濃度では野生型ミクログリアにおけるｉＮＯＳ発現誘発に失敗した。ガレクチン−３ノックアウトマウスからの一次ミクログリアは、１２時間にわたる２０μＭのα−シヌクレイン凝集体への曝露後、ｉＮＯＳアップレギュレーションを完全に欠く。ウェスタンブロット分析は全ての条件でのβ−アクチンタンパク質レベルを示し、それにより適切なタンパク質試料（ｎ＝５）を検証した。これらのデータは、ｉＮＯＳアップレギュレーションがガレクチン−３依存性であることを明確に示唆している（ｎ＝５）。
【０２９９】
一次ミクログリア細胞におけるサイトカインレベルはα−シヌクレイン活性化後にアップレギュレートされる
一次ミクログリア細胞におけるサイトカインレベルを調べるために、細胞をα−シヌクレイン凝集体で処理した後、馴化培地を分析した。ＢＶ２サイトカインデータに沿って、発明者は炎症促進性サイトカイン、すなわちＩＬ−１β（図５Ａ）、ＩＬ−１２（図５Ｂ）及びＩＦＮ−ガンマ（図５Ｃ）、また抗炎症性サイトカインＩＬ−４（図５Ｄ）に関して、野生型ミクログリアにおけるα−シヌクレイン凝集体での１２時間にわたるインキュベーション後に強力なアップレギュレーションを発見した。重要なことに、ノックアウトマウスからのミクログリアは、α−シヌクレイン凝集体への曝露（２０μＭ、図５）に続き、野生型ミクログリアと比較して、ＩＬ−１β（５５％低下、Ｐ＜０．０５、ｎ＝５）及びＩＬ−１２（７５％低下、Ｐ＜０．０１、ｎ＝５）のサイトカイン放出における有意な低下を示した。炎症促進性サイトカインＩＦＮ−γ又は抗炎症性サイトカインＩＬ−４の濃度レベルに違いは認められなかったが、これはガレクチン−３の機能のブロックが特定の炎症経路を阻害することを示唆している。すなわち、結果は、サイトカインＩＬ−１β及びＩＬ−１２が関わる特定の炎症経路の炎症促進的な活性化にガレクチン−３が関与していることを示している。
【０３００】
実施例１５
アルツハイマー関連タンパク質であるアミロイド−β（Ａβ）の潜在的な炎症作用を調べるために、発明者はミクログリア細胞を原線維組み換え形態のアミロイド−ベータＡβ４２（最も毒性が強いＡβ形態）に曝露した。ガレクチン−３ＫＯからの一次ミクログリア細胞におけるサイトカインレベルを、アミロイド−ベータ原線維（ヒト組み換えタンパク質、Ａβ４２）で処理した細胞からの馴化培地を用いて分析した。サイトカインを、上述したような電気化学発光ＥＬＩＳＡをベースとした高感度システムを使用して測定した（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ、ＭＳＤ、米国）。発明者は、Ａβ４２に曝露したミクログリア細胞からの培地における分泌サイトカインレベルを１２時間のインキュベーション後に測定した。重要なことに、ガレクチン−３ノックアウトマウスからのミクログリアは、１０μＭのＡβ４２原線維又はＬＰＳ（１μｇ／μｌ）に曝露した野生型ミクログリア（ｎ＝５）と比較して、ＩＬ−８のサイトカイン放出において有意な減少を示した（図６を参照のこと。６５％の減少、Ｐ＜０．０５、ｎ＝５）。このデータは、ガレクチン−３がミクログリアの炎症促進的な活性化に関与していること、またガレクチン−３の欠損が、アルツハイマータンパク質であるアミロイド−ベータ（Ａβ４２）への曝露後の炎症性サイトカインＩＬ−８の活性化及び分泌を強力に減少させることを示している。ガレクチン−３はミクログリア表現型の主要制御因子となり、抗炎症性表現型への移行にとって重要である。
【０３０１】
実施例１６
一般に用いられるＡＤのマウスモデルは５ｘＦＡＤである。このマウスモデルは、アルツハイマー病に関わる５種の異なる変異を有する（ＰＭＩＤ：２５２１３０９０）。このモデルを用いる主な理由は、アミロイド−ベータの蓄積、炎症、グリア細胞の活性化、神経原線維タングル形成及びタウリン酸化を含めたアルツハイマー病に関わる幅広い神経病理学的特徴がマウスの寿命中に明確に表れるからである。このマウスモデルにより、他とは対照的に、アルツハイマー病を罹患しているヒトの脳に存在し得るほぼ全ての主な特徴におけるガレクチン−３調節の影響を評価することができる。生後３〜４ヶ月で既に神経病理学的表現型が存在し、罹患したマウスの寿命中に安定した進行を示す。したがって、ガレクチン−３の影響を調べるために、発明者は５ｘＦＡＤマウスをガレクチン−３ノックアウトマウス（Ｇａｌ３ＫＯ）と交雑させた。生後６ヶ月の時点で、ガレクチン−３を欠損した（Ｇａｌ３ＫＯ）アルツハイマーマウス（５ＸＦＡＤ）、すなわち５ｘＦＡＤ／Ｇａｌ３ＫＯ（ｎ＝６）の血中における、ガレクチン−３が存在する正常なアルツハイマーマウス５ｘＦＡＤ（ｎ＝５）と比較して７０％の大幅なＩＦＮ−ガンマのダウンレギュレーションを発見した（図７を参照のこと）。サイトカインを、上述したような電気化学発光ＥＬＩＳＡ（Ｍｅｓｏｓｃａｌｅ、ＭＳＤ，米国）で測定した。このデータは、ガレクチン−３に対する薬理学的又は遺伝的介入が炎症応答を強力にダウンレギュレートすることを示唆している。アルツハイマー病患者（患畜）の脳における進行中の炎症／ミクログリア活性を考慮すると、発明者は、ＩＦＮ−ガンマ（ミクログリアにとっての重要な炎症促進性メディエータ）は有益となり得ると考えている。したがって、ガレクチン−３のブロックは脳に直接影響を及ぼすことができ、これは発明者の発見で最も重要なことであるが、全身レベルで炎症応答を変化させることもでき、これは脳におけるミクログリアの炎症促進的な活性の低下にとって有益である。
【図１Ａ】
2017512822.tif 000022
【図１Ｂ】
2017512822.tif 000023
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図３】
2017512822.tif 000029
【図４】
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【図５Ａ】
2017512822.tif 000031
【図５Ｂ】
2017512822.tif 000032
【図５Ｃ】
2017512822.tif 000033
【図５Ｄ】
2017512822.tif 000034
【図６】
2017512822.tif 000035
【図７】
2017512822.tif 000036
【配列表】
2017512822000001.app
【国際調査報告】
2017512822.tif 000037
2017512822.tif 000038
2017512822.tif 000039
2017512822.tif 000040
2017512822.tif 000041
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