【手続補正書】
【提出日】平成20年9月29日(2008.9.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
皮膚より採取された角層細胞標本を、炭素数１〜４のアルコールの含有量が５０質量％以下である、角層細胞用の染色液に於いて、１）染料、２）芳香族アルコール及び３）有機酸を含有することを特徴とする、染色液で染色し、該角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、該画像をＣＧによって、色調整を行うことを特徴とする、角層細胞の拡大画像の調製方法。
【請求項２】
色の調整がゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる染色に近似させることを特徴とする、請求項１に記載の角層細胞の拡大画像の調製方法。
【請求項３】
前記染色液による染色が、即時的に行われるものであって、染色液の封入によることを特徴とする、請求項１又は２に記載の調製方法。
【請求項４】
該ＣＧによる色調整が、次に示す工程を構成要素とすることを特徴とする、請求項１〜３何れか１項に記載の角層細胞の拡大画像の調製方法。
（工程１）基準染色画像の色特性として、予め、標準調製用のサンプルとして調整された、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる基準染色画像の拡大イメージ画像の輝度及びＲＧＢの４チャネルのヒストグラム特性を得る。
（工程２）皮膚より採取された角層細胞を染色した、角層細胞標本の拡大イメージ画像の輝度及びＲＧＢの４チャネルのヒストグラム特性を得る。
（工程３）工程２と工程１との４チャネルのヒストグラム特性を比較し、差違のあるチャネルを選択する。
（工程４）工程３で得られたチャネル毎に、基準染色画像の方向にトーンカーブの補正を行う。
（工程５）補正されたトーンカーブに基づいて、ＣＧにより色調整された、皮膚より採取された、角層細胞標本の拡大イメージ画像を得る。
【請求項５】
請求項１〜４何れか１項に記載の拡大画像の調製方法であって、
該拡大画像が、データとして蓄積されている、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによって染色された角層細胞の拡大画像との比較用のものであることを特徴とする、
拡大画像の調製方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
本発明は、肌状態の鑑別や化粧料の適切な選択に有用な情報を与えることができる、角層細胞の標本作製のための拡大画像の調製方法に関する。更に詳しくは、染色及び標本作製の工程において、洗浄及び／又は乾燥の工程を要しない角層細胞の染色及び角層細胞標本作製の方法における拡大画像の調製方法に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
この様な状況下、本発明者らは、炭素数１〜４のアルコールの含有量が５０質量％以下において、染料、芳香族アルコール及び有機酸を含有することを特徴とする角層細胞用の染色液によって、どこでも、容易に、且つ瞬時に角層細胞をムラなく明瞭に即時的に染色でき、皮膚角層細胞評価方法のための染色液及び／又は染色方法を提供できることを見出し、特許出願を行っているが（特許文献３，４参照）、この方法により角層細胞の染色時間は極めて短時間に行えるようになったが、得られた角層細胞の拡大画像の印象が、ブリリアントグリーンとゲンチアナバイオレットの染色によるものとは異なり、角層細胞の鑑別にバラツキが生じ、過去の観察データの利用が出来にくい状況が存した。即ち、染色時間が短時間でありながら、過去の観察結果との比較可能な角層細胞の拡大画像の調製方法の開発が望まれていたと言える。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
本発明はこのような状況下為されたものであり、肌状態の鑑別や化粧料の適切な選択に有用な情報を与えることができる、角層細胞の染色及び角層細胞標本作製の方法において、染色時間が短時間でありながら、過去の観察結果との比較可能な角層細胞の拡大画像の調製方法を提供することを課題とする。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
このような状況を鑑みて、本発明者らは、角層細胞の染色及び角層細胞標本作製の方法において、染色時間が短時間でありながら、過去の観察結果との比較可能な角層細胞の拡大画像の調製方法を提供する技術を求めて、鋭意研究努力を重ねた結果、即時性の染色液を用いて染色し、角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、ＣＧによって色調整
を行う技術を見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示す通りである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
（１）皮膚より採取された角層細胞標本を、炭素数１〜４のアルコールの含有量が５０質量％以下である、角層細胞用の染色液に於いて、１）染料、２）芳香族アルコール及び３）有機酸を含有することを特徴とする、染色液で染色し、該角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、該画像をＣＧによって、色調整を行うことを特徴とする、角層細胞の拡大画像の調製方法。
（２）色の調整がゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる染色に近似させることを特徴とする、（１）に記載の角層細胞の拡大画像の調製方法。
（３）前記染色液による染色が、即時的に行われるものであって、染色液の封入によることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の調製方法。
（４）該ＣＧによる色調整が、次に示す工程を構成要素とすることを特徴とする、（１）〜（３）何れかに記載の角層細胞の拡大画像の調製方法。
（工程１）基準染色画像の色特性として、予め、標準調製用のサンプルとして調整された、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる基準染色画像の拡大イメージ画像の輝度及びＲＧＢの４チャネルのヒストグラム特性を得る。
（工程２）皮膚より採取された角層細胞を染色した、角層細胞標本の拡大イメージ画像の輝度及びＲＧＢの４チャネルのヒストグラム特性を得る。
（工程３）工程２と工程１との４チャネルのヒストグラム特性を比較し、差違のあるチャネルを選択する。
（工程４）工程３で得られたチャネル毎に、基準染色画像の方向にトーンカーブの補正を行う。
（工程５）補正されたトーンカーブに基づいて、ＣＧにより色調整された、皮膚より採取された、角層細胞標本の拡大イメージ画像を得る。
（５）請求項１〜４何れか１項に記載の拡大画像の調製方法であって、
該拡大画像が、データとして蓄積されている、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによって染色された角層細胞の拡大画像との比較用のものであることを特徴とする、
拡大画像の調製方法。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明は、皮膚より採取された角層細胞標本を、即時性の染色液を用いて染色・封入し、洗浄及び乾燥工程を省略し、該角層細胞標本を拡大イメージ画像として取り込み、ＣＧによって色調整を行うことを特徴とする。以下に、更に詳細に説明を加える。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
ＣＧによる色調整によって、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる染色に近似させることは、実際に工業的に実施され、多くの基礎データが存し、該データベースを利用できるという点で極めて好ましい。さらにＣＧによる色調整は、染色液による即時的染色と染色液の封入によって、これまでの染色及び標本作製における洗浄及び／又は乾燥の工程が省略され、時間、汚染及び作業場所等のコストダウン効果も得ることができる。このため、本発明において、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによって染色された角層細胞の拡大画像と比較できるレベルを維持するため、後述するような拡大画像より得られるヒストグラム特性値及びＣＧによる色調整した拡大イメージ画像にて確認することが望ましい。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
前記のＣＧによる色調整の工程は、以下のように行うことができる。
（工程１）基準染色画像の色特性として、予め、標準調製用のサンプルとして調整された、ゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる基準染色画像の拡大イメージ画像（図１参照）の輝度及びＲＧＢの４チャネルのヒストグラム特性を得る（図２参照）。（工程２）皮膚より採取された角層細胞を染色した、角層細胞標本の拡大イメージ画像（図３参照）の輝度及びＲＧＢの４チャネルのヒストグラム特性（図４参照）を得る。
（工程３）工程２と工程１との４チャネルのヒストグラム特性を比較し、差違のあるチャネルを選択する。
（工程４）工程３で得られたチャネル毎に、基準染色画像の方向にトーンカーブの補正を行う（図５参照）。
（工程５）補正されたトーンカーブに基づいて、ＣＧにより色調整された、皮膚より採取された、角層細胞標本の拡大イメージ画像（図６参照）を得る。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２３】
本発明の即時性の染色液による染色標本をＣＧで色調整した拡大イメージ画像の精度について、目視評価を行った。肌状態の異なる３名の女性の皮膚より採取された角層細胞標本３個について、即時性の染色液を用いて染色・封入した拡大イメージ画像を３枚を作製した（図７参照）。次に、即時性染色液で染色封入した３個の角層細胞標本を洗浄し、従来のゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる染色からの拡大イメージ画像３枚を作製した（図８参照）。先の即時性の染色液を用いて染色・封入からの拡大イメージ画像に対して、前述したＣＧによる色調整の工程に従って、拡大イメージ画像３枚を作製した（図９参照）。従来のゲンチアナバイオレットとブリリアントグリーンによる染色からの拡大イメージ画像とＣＧによる色調整からの拡大イメージ画像、各々３枚を対象に、角層細胞の配列規則性、面積及び剥がれ具合について、評価可能性を確認した結果、全く差違が感じられず、ＣＧで色調整した拡大イメージ画像を代用できることが分かる。