(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
Ａｌａ  Ｖａｌ  Ｓｅｒ  Ｇｌｕ  Ｈｉｓ  Ｇｌｎ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ａｓｐ  Ｌｙｓ  Ｇｌｙ  Ｌｙｓ  Ｓｅｒ  Ｉｌｅ  Ｇｌｎ  Ａｓｐ  Ｌｅｕ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ａｒｇ  Ｘａａ22-31  Ｘａａ32  Ｘａａ33  Ｘａａ34  Ｔｅｒｍ
［式中、
Ｘａａ22-31は、Ｇｌｕ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕ  Ｌｅｕ  Ｇｌｕ  Ｌｙｓ  Ｌｅｕであり；
Ｘａａ32は、ＨｉｓまたはＰｒｏであり；
Ｘａａ33は、存在しない、またはＴｈｒであり；
Ｘａａ34は、存在しない、ＡｌａまたはｈＳｅｒであり；そして
Ｔｅｒｍは、ＯＨ、ＮＨ2、1,4−ジアミノブチリルラクタムまたはラクトンである］
で示される、修飾した副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒｐ）であるポリペプチドまたは医薬的に許容し得るそれらの塩。
【請求項２】
ポリペプチドが、
【化１】
0004106082.tif 000201
から選ばれる請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
請求項１に記載のポリペプチドまたは医薬的に許容し得るそれらの塩の骨量増加有効量、および医薬的に許容し得る担体を含んでなる、骨量の減少を特徴とする症状を予防または処置するための医薬組成物。
【請求項４】
０．００２ないし１μｇ／体重Ｋｇの請求項１に記載のポリペプチドまたは医薬的に許容し得るそれらの塩、および医薬的に許容し得る担体を含む投与形態ユニットである、骨量の減少を特徴とする症状を処置するための医薬組成物。
【請求項５】
請求項１に記載のポリペプチドの固相合成法であって、適当な樹脂支持体上の保護アミノ酸を連続的に結合させ、側鎖およびＮα保護基を除去し、そしてこのポリペプチドを樹脂支持体から開裂させることを含む方法。
【請求項６】
請求項１に記載のポリペプチドの調製法であって、該ポリペプチドをコードする遺伝子を発現させることを含む方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
ａ）発明の分野
本発明は、副甲状腺ホルモンおよび副甲状腺ホルモン関連ペプチドの新規な類似体、固相および組換え技術によるそれらの合成、ならびに哺乳動物対象における骨量増加のためのそれらの用途に関するものである。
ｂ）関連技術の説明。
骨粗鬆症は最も一般的な型の代謝上の骨疾患であり、骨喪失（オステオペニア）の徴候的、骨折段階であると考えられる。骨粗鬆症は幾つかの基礎疾患から二次的に起こり得るが、全症例の９０％は特発性であるように思われる。閉経後の女性はとりわけ特発性骨粗鬆症（閉経後またはＩ型骨粗鬆症）の危険性がある。特発性骨粗鬆症のもう一つの危険性の高い群は、両性の高齢者である（老人性またはＩＩ型骨粗鬆症）。骨粗鬆症はさらに、コルチコステロイドの使用、固定または長期の臥床、アルコール中毒症、糖尿病、生殖腺毒性化学療法、過プロラクチン血症、神経性食欲不振、原発性および続発性無月経、ならびに卵巣切除にも関連付けられている。
種々の型の骨粗鬆症においては、機械的不全の点にまで達した骨喪失の結果である骨折がしばしば起こる。閉経後骨粗鬆症は手首および背骨の骨折を特徴とし、一方大腿頸部骨折は老人性骨粗鬆症の顕著な特徴であるようである。
骨粗鬆症において骨が失われる機構は、骨格が自身を再生する過程における平衡異常が関わっていると信じられている。この過程は骨改変（ボーン・リモデリング）と呼称されている。これは一連の独立した活性のポケットにおいて起こる。これらのポケットは、骨吸収の部位として所定の骨表面上の骨マトリックス内に自然に現われる。破骨細胞（骨溶解または吸収細胞）が、通常一定の体積である骨の一部分の吸収を司っている。この吸収過程の後に、骨芽細胞（骨形成細胞）が現れ、次いでこれらが、破骨細胞により残された間隙を新たな骨で充填する。
健康な成人においては、破骨細胞および骨芽細胞の形成される速度は、骨形成および骨吸収が平衡するような速度である。しかしながら、骨粗鬆症患者においては、骨改変過程の平衡異常が進行し、その結果、骨の形成より速い速度で骨が失われる。この平衡異常は加齢と共に殆どの個体にある程度起こるが、閉経後骨粗鬆症患者または卵巣切除後においては、はるかに重篤であり、且つ若年で起こる。
さらなる骨喪失を遅らせるか、またはより望ましくは骨量の正味の増加をもたらすことを目標として、骨粗鬆症を処置する多くの試みがなされてきた。或る種の薬物、例えばエストロゲンおよびビスホスホネート類は、骨粗鬆症におけるさらなる骨喪失を遅らせるようである。骨吸収および形成の持続時間が異なることから骨喪失を遅延させる薬物は、骨量を増大させ得るようである（３ないし７％程度）。しかしながら、この見かけの増大は時間的に限られており、継続的でなく、そして「改変間隙（リモデリング・スペース）」の減少に起因するものである。さらに、吸収および形成の緊密な連携の故に、骨吸収を妨げる処置は最終的には骨形成をも妨げてしまう。
副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）による処置が、骨の再成（ターンオーバー）の増大および正のカルシウムバランスの両者を導くということが示唆されている。しかしながら、人間での治験は、海綿骨の増加は皮質骨の減少により相殺され、その結果、骨の合計には正味の増加が無いことを示している。
ヘフティ等は、クリニカル・サイエンス（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ）、６２巻３８９−３９６頁（１９８２）において、ｂＰＴＨ（１−８４）またはｈＰＴＨ（１−３４）のいずれかを毎日皮下投与すると、正常な雌ラット成体、および骨粗鬆症の雌ラット成体のいずれもにおいて総体内カルシウムおよび個々の骨の灰重量が増加することを報告した。
リュー等は、ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．）、６：１０、１０７１−１０８０頁（１９９１）において、雌ラット成体の卵巣切除が近位脛骨の骨幹端の海綿骨のパーセンテージを４７％低下させ、さらに骨芽細胞および海綿骨破骨細胞の数の有意な増加を伴うことを記している。ｈＰＴＨ（１−３４）を毎日皮下注射すると海綿骨の喪失を完全に逆転させ、擬似処理対照のそれを超える海綿骨の量をもたらした。骨芽細胞の数は増加し、破骨細胞の数は減少した。
ホック等は、ジャーナル・オブ・ボーン・アンド・ミネラル・リサーチ（Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎ．Ｒｅｓ．）、７：１、６５−７１頁（１９９２）において、健康な雄ラット成体に毎日、１２日間ｈＰＴＨ（１−３４）を皮下注射すると、海綿骨および皮質骨のカルシウムならびに乾燥重量が増加することを報告した。骨総量、海綿骨容量、海綿骨の厚さおよび数、ならびに骨芽細胞表面が増大した。
哺乳動物の副甲状腺ホルモン、例えばヒト（ｈＰＴＨ）、ウシ（ｂＰＴＨ）、およびブタ（ｐＰＴＨ）は、８４のアミノ酸残基からなり、およそ９５００の分子量を有する単一のポリペプチド鎖である。生物活性はＮ末端部分に付随し、残基（１−３４）が明らかに最低限必要である。
ヒトＰＴＨのＮ末端セグメントは、ウシおよびブタのホルモンのＮ末端セグメントと、それぞれ３および２個のアミノ酸残基が異なっているだけである：
ｈＰＴＨ（１−３４）：
0004106082.tif 000002
ｂＰＴＨ（１−３４）：
0004106082.tif 000003
ｐＰＴＨ（１−３４）：
0004106082.tif 000004
ＰＴＨの主たる機能は、細胞外液中のＣａ2+濃度を一定に保つ役割を果たす順応的変化を導き出すことである。ＰＴＨは腎臓に作用して尿からのＣａ2+の尿細管吸収を増加させ、そして、カルシフェジオールの、腸からのＣａ2+の吸収を司るカルシトリオールへの変換を刺激する。一つの顕著な作用は、骨からのＣａ2+の流出（モビライゼーション）を促進することである。ＰＴＨは骨に作用してＣａ2+およびホスフェートの吸収速度を増大させる。ＰＴＨは破骨細胞による骨吸収の速度を刺激し、間葉系細胞の破骨細胞への分化速度を増し、そして後者の細胞の半減期を延長する。ＰＴＨの長期の作用によって、骨を形成する骨芽細胞の軒数もまた増加し；したがって骨の再成および改変速度が増大する。しかしながら、個々の骨芽細胞は正常の場合より活性が低いように思われる。
ローゼンブラット等は、米国特許第４４２３０３７、４９６８６６９および５００１２２３号において、Ｎ末端（１−６）アミノ酸の除去およびＰｈｅ7、Ｍｅｔ8’18、およびＧｌｙ12の選択的置換により得られるＰＴＨアンタゴニストを開示している。報告によればＴｙｒ34−ＮＨ2はこれらの化合物の活性および安定性を増した。
副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒｐ）、１４０＋アミノ酸蛋白、およびそのフラグメントは、ＰＴＨの主要な生物活性を再現する。ＰＴＨｒｐはヒトおよび動物の腫瘍および他の組織の多くにより導き出され、悪性腫瘍の過カルシウム血症において役割を果たしているらしい。ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）の配列は以下の通りである：
0004106082.tif 000005
ｈＰＴＨおよびｈＰＴＨｒｐの間の配列相同性は１３のＮ末端残基に大体限定されており、このうち８個が同一である。ｈＰＴＨのレセプター結合領域（２５−３４）内の１０個のアミノ酸のうち１個だけがｈＰＴＨｒｐにおいて保存されている。コンホーメーションの類似性が共通の活性の基礎となっているかも知れない。コーエン等は、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２６６：３、１９９７−２００４頁（１９９１）において、ＰＴＨ（１−３４）およびＰＴＨｒｐ（１−３４）の配列の殆ど、特に領域（５−１８）および（２１−３４）は、α−ヘリックス配置をとっていると示唆しているが、一方、この配置が生理的条件下でカルボキシ末端に及んでいるかについては若干の疑問があると記している。このような二次構造は、脂質相互作用、レセプター相互作用、および／または構造の安定性にとって重要であり得る。
本発明者等は、骨粗鬆症に罹患しているものを含む哺乳動物対象における骨量の回復のための改善された治療薬を開発するという目的をもって、ＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの類似体を合成した。
発明の要約
本発明は、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒｐ）、およびＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、の合成ポリペプチド類似体、ならびにそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）は、配列：
0004106082.tif 000006
の順序の親水性アミノ酸（Ｈａａ）および親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選ばれる］を提供するものである。
この配列型の特定の例示的態様をＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、ならびにＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除類似体および同族体に挿入する時、得られるポリペプチドは有効な骨改変剤である。
一つの態様において本発明は、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、ならびにＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除類似体および同族体、の類似体、またはそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）の配列は、
0004106082.tif 000007
［式中、Ｘａａ1およびＸａａ4は個別にＧｌｕ、Ｇｌｕ（ＯＣＨ3）、Ｈｉｓ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ2はＬｅｕまたはＰｈｅであり；Ｘａａ5はＬｙｓまたはＨｉｓであり；Ｘａａ7およびＸａａ10は個別にＬｅｕまたはＩｌｅであり；Ｘａａ8はＡｌａ、Ａｒｇ、またはＧｌｕであり；そしてＸａａ9はＬｙｓまたはＧｌｕである］（配列番号８５）；好ましくは、
0004106082.tif 000008
［式中、ＸａａはＧｌｕまたはＡｒｇである］（配列番号２６）；
0004106082.tif 000009
［式中、Ｘａａ1およびＸａａ4は個別にＧｌｕ、Ｇｌｕ（ＯＣＨ3）、Ｈｉｓ、またはＰｈｅであり；Ｘａａ2はＬｅｕまたはＰｈｅであり；Ｘａａ8はＧｌｕ、Ｌｙｓ、またはＬｙｓ（ＣＯＣＨ2ＰＥＧＸ）であって、ＰＥＧＸは分子量１００ないし１００００のポリ−（エチレングリコールメチルエーテル）ラジカルである］（配列番号８６）；好ましくは、
0004106082.tif 000010
［式中、ＸａａはＧｌｕ、Ｌｙｓ、またはＬｙｓ（ＣＯＣＨ2ＰＥＧＸ）であって、ＰＥＧＸは分子量１００ないし１００００のポリ−（エチレングリコールメチルエーテル）ラジカルである］（配列番号２７）；
0004106082.tif 000011
から選ばれる］
を提供する。
別の態様において本発明は、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、ならびにＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、の類似体、またはそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）の配列は、
0004106082.tif 000012
［式中、ＸａａはＧｌｕまたはＡｒｇである］（配列番号２６）；
0004106082.tif 000013
［式中、ＸａａはＧｌｕ、Ｌｙｓ、またはＬｙｓ（ＣＯＣＨ2ＰＥＧＸ）であって、ＰＥＧＸは分子量１００ないし１００００のポリ−（エチレングリコールメチルエーテル）ラジカルである］（配列番号２７）；
0004106082.tif 000014
から選ばれる］
を提供する。
さらに、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ＰＴＨｒｐ）、ならびにＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、のポリペプチド類似体、ならびにそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）は、配列：
0004106082.tif 000015
の順序の親水性アミノ酸（Ｈａａ）および親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選ばれる］の骨量増加有効量を、医薬的に許容し得る担体と混合して含んでなる、骨量の減少を特徴とする症状の予防または処置のための医薬組成物もまた提供される。さらに、上記の化合物を医薬的に許容し得る担体と混合することからなる、医薬組成物製造法もまた提供される。
さらに、本発明は、骨量の減少を特徴とする哺乳動物の症状を処置する方法であって、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、またはＰＴＨもしくはＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、のポリペプチド類似体、またはそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）は、配列：
0004106082.tif 000016
の順序の親水性アミノ酸（Ｈａａ）および親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選ばれる］の骨量増加有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することからなる方法を提供する。
より詳細には、本発明は、骨量の減少を特徴とする哺乳動物の症状を処置する方法であって、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、またはＰＴＨもしくはＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体または類似体、のポリペプチド類似体、またはそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）の配列は、（配列番号２６、２７、２８、２９、および３０）から選ばれる］の骨量増加有効量を、それを必要とする哺乳動物に投与することからなる方法を提供する。
本発明はさらに、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、およびＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、のポリペプチド類似体、ならびにそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）は、配列：
0004106082.tif 000017
の順序の親水性アミノ酸（Ｈａａ）および親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選ばれる］の固相合成法であって、適当な樹脂支持体上の保護化アミノ酸を連続的に結合させ、側鎖およびＮα−保護基を除去し、そしてこのポリペプチドを樹脂から開裂させることからなる方法を包含する。
本発明はさらに、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、およびＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、のポリペプチド類似体、ならびにそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）の配列は、（配列番号２６、２７、２８、２９、および３０）から選ばれる］の固相合成法であって、適当な樹脂支持体上の保護化アミノ酸を連続的に結合させ、側鎖およびＮα−保護基を除去し、そしてこのポリペプチドを樹脂から開裂させることからなる方法を包含する。
さらに、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、およびＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、のポリペプチド類似体、ならびにそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）は、配列：
0004106082.tif 000018
の順序の親水性アミノ酸（Ｈａａ）および親油性アミノ酸（Ｌａａ）から選ばれる］の組換え合成のための方法が包含される。
本発明はさらに、かかるポリペプチド類似体の組換え合成のためのＤＮＡ配列、ベクター、およびプラスミドを包含する。詳細には、本発明は、ＰＴＨ、ＰＴＨｒｐ、およびＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、のポリペプチド類似体、ならびにそれらの塩［ここで、アミノ酸残基（２２−３１）は両親媒性α−ヘリックスを形成し、該残基（２２−３１）の配列は、（配列番号２６、２７、２８、２９、および３０）から選ばれる］の組換え合成のためのＤＮＡ配列、ベクター、およびプラスミドを提供する。
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明にかかるＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体をコードしている合成遺伝子のＤＮＡ配列および酵素制限部位を示す図である（ｈＰＴＨ  ＰＣＲ増幅）。
図２は、ＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子を組み込んだプラスミドの製造の概略を示す図である（Ｔｒｐ ＬＥ １８ ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）１の組み立て）。
図３は、２コピーのＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子を組み込んだプラスミドの製造の概略を示す図である（Ｔｒｐ ＬＥ １８ ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）２の組み立て）。
図４は、４コピーのＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子を組み込んだプラスミドの製造の概略を示す図である（Ｔｒｐ ＬＥ １８ ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４組み立て物）。
発明の詳細な説明
略語および定義
種々の一般的なヌクレオチド塩基およびアミノ酸についての一文字および三文字略語は、ピュア・アンド・アプライド・ケミストリー（Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．）、３１巻６３９−６４５頁（１９７２）および４０巻２７７−２９０頁（１９７４）に推奨される通りであり、３７ＣＦＲ§１．８２２（５５ＦＲ１８２４５、１９９０年５月１日）、およびＰＣＴ規則（ＷＩＰＯ標準ＳＴ．２３：特許出願および公開特許文書におけるヌクレオチドおよびアミノ酸配列の表示についての推奨）に従う。一文字および三文字略語は以下の通りである：
0004106082.tif 000019
略語は、別途Ｄ−またはＤ，Ｌ−と指定されない限り、Ｌ−アミノ酸を表わす。天然および非天然の或る種のアミノ酸は、例えばグリシンのようにアキラルである。全てのペプチド配列は、Ｎ末端アミノ酸を左に、Ｃ末端アミノ酸を右側に表示する。
その他のアミノ酸および本明細書中使用される化合物のさらなる略語は以下の通りである：
ｈＳｅｒ          ホモセリン
ｈＳｅｒｌａｃ    ホモセリンラクトン
Ｎｌｅ            ノルロイシン
ＰＥＧ２          ジエチレングリコールメチルエーテルの基。メトキシジ（エチレンオキシ）、ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−とも称する。（分子量＝１１９）
ＰＥＧ５０００    ポリ（エチレングリコールメチルエーテル）のラジカル。メトキシポリ（エチレンオキシ）、ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）110−とも称する。（平均分子量＝５０００）
ＰＥＧＸ          ポリ（エチレングリコールメチルエーテル）のラジカル。ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）n−、ｎ＝２−２２５。（平均分子量＝１００ないし１００００）
「親水性アミノ酸（Ｈａａ）」とは、ペプチド結合の形成に必要なラジカルに加えて少なくとも１個の親水性官能基を有するアミノ酸、例えばアルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グルタミン、ヒスチジン、リジン、セリン、トレオニン、およびこれらの同族体を意味する。
「親油性アミノ酸（Ｌａａ）」とは、非荷電、脂肪族または芳香族アミノ酸、例えばイソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、チロシン、バリン、およびこれらの同族体を意味する。
本発明の目的のため、アラニンは「両親媒性」、即ち親水性または親油性のいずれとしても挙動できるものとして分類する。
「ＰＴＨまたはＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体または類似体」とは、ＰＴＨまたはＰＴＨｒｐに見いだされる完全なアミノ酸配列より少ない配列からなるが、類似の生理学的応答を導くポリペプチドを意味する。末端切除ＰＴＨまたはＰＴＨｒｐは、類似の生理学的応答を導くためにＰＴＨまたはＰＴＨｒｐと完全に相同である必要はない。ＰＴＨ（１−３４）およびＰＴＨｒｐ（１−３４）がこの群の好ましい代表であるが、他を排除するものではない。
「両親媒性α−ヘリックス」とは、そのアミノ酸が、ヘリックスの長軸に沿った向きに向かい合っている極性および非極性面を有するα−ヘリックス配置をとっている、或るポリペプチドによって表わされる二次構造を意味する。目的のポリペプチド中のα−ヘリックス構造の可能性は、適当なピッチの「シファー−エドマンドソン・ホイール」（Ｍ．シファーおよびＡ．Ｂ．エドマンドソン、バイオフィジカル・ジャーナル（Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．）、７巻１２１頁（１９６７））の組み立て、および、ヘリックスの境界となっている円筒形の相対する面にある親水性および親油性残基の隔絶に注目することによって、或る程度探求することができる。別法として、与えられたポリペプチドにα−ヘリックス領域が存在する事を示す、円二色性またはＸ線回折データのような実験データを得ることもできる。理想的なα−ヘリックスは、１００°の弧によって隔てられた隣接する側鎖を有する、一回転につき３．６個のアミノ酸を有している。アイゼンバーグ等はネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）、２９９巻３７１−３７４頁（１９８２）およびプロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシズ・ＵＳＡ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ）８１巻１４０−１４４頁（１９８４）において、疎水性の尺度をヘリックスの環（helical wheel）と結び付けて両親媒性ヘリックスの概念を定量した。平均の疎水性モーメントは、ヘリックスを形作っている構成アミノ酸の疎水性のベクターの和として定義される。アミノ酸についての以下の疎水性は、「コンセンサスである」尺度としてアイゼンバーグ（１９８４）により報告されたものである：
Ｉｌｅ、０．７３；Ｐｈｅ、０．６１；Ｖａｌ、０．５４；Ｌｅｕ、０．５３；Ｔｒｐ、０．３７；Ｍｅｔ、０．２６；Ａｌａ、０．２５；Ｇｌｙ、０．１６；Ｃｙｓ、０．０４；Ｔｙｒ、０．０２；Ｐｒｏ、−０．０７；Ｔｈｒ、−０．１８；Ｓｅｒ、−０．２６；Ｈｉｓ、−０．４０；Ｇｌｕ、−０．６２；Ａｓｎ、−０．６４；Ｇｌｎ、−０．６９；Ａｓｐ、−０．７２；Ｌｙｓ、−１．１０；Ａｒｇ、−１．７６。
一回転につき３．６残基（または側鎖間の弧が１００°（＝３６０°／３．６）を有する理想的なα−ヘリックスに対する疎水性モーメント、μHは、
μH＝［（ΣＨNｓｉｎδ（Ｎ−１））2＋（ΣＨNｃｏｓδ（Ｎ−１））2］1/2
［式中、ＨNはＮ番目のアミノ酸の疎水性の値であり、この総和は、周期性（ペリオディシティー）δ＝１００°で、配列中のＮ個のアミノ酸にわたっている］から算出することができる。疎水性モーメントは、μHをＮで割って＜μH＞を得ることにより、残基毎の平均疎水性モーメントとして表わすことができる。１００°±２０°における＜μH＞の値が約０．２０またはそれ以上である場合、両親媒性ヘリックスの形成が示唆される。ｈＰＴＨｒｐ（２２−３１）およびｈＰＴＨ（２２−３１）についての１００°における＜μH＞値はそれぞれ０．１９および０．３７である。
コーネット等は、ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．）、１９５巻６５９−６８５頁（１９８７）において、両親媒性の予想値として「両親媒性指標」を導入することにより、両親媒性α−ヘリックスの研究をさらに拡大した。彼等は、既知の全てのα−ヘリックスのうちほぼ半分が両親媒性であること、そして支配的な周期は１００°でなく９７．５°であり、一回転当りの残基の数は３．６よりは３．７に近いことを結論付けた。このような細かな点は科学的には興味深いものであるが、アイゼンバーグ等の基本的捉え方は与えられた配列を両親媒性であると分類するに充分であり、特に両親媒性α−ヘリックスを形成する配列を最初から設計する場合には充分である。
代わりとなる両親媒性α−ヘリックスアミノ酸配列は、天然に存在するポリペプチドの所定のセグメントの配列との相同性を欠くこともあるが、類似の二次構造、即ち相対する極性および非極性面を有するα−ヘリックスを生理的環境において導き出す。天然に存在するアミノ酸配列を代わりの配列で置き換えることは、変化した親ポリペプチドの生理活性、安定性、または他の性質に有利な影響を及ぼし得る。このような配列の設計および選択に関する手引は、特にＪ．Ｌ．クルステナンスキー等、ＦＥＢＳ・レターズ（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ）、２４２：２、４０９−４１３頁（１９８９）、およびＪ．Ｐ．セグレスト等、プロテインズ：ストラクチャー、ファンクション、アンド・ジェネティクス（Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、８巻１０３−１１７頁（１９９０）に供されている。
本発明にかかる１０アミノ酸両親媒性α−ヘリックスは、式：
0004106082.tif 000020
［式中、前記定義の通り、Ｈａａは親水生アミノの群から選ばれ、Ｌａａは親油性アミノ酸の群から選ばれる］
を有する。理想とされるα−ヘリックスを想定する時、残基１、４、５、８、および９はヘリックスの一方の面（Ａ）に沿って互いに約１４０°の弧の内部に分布し、一方残基２、３、６、７、および１０はヘリックスの他方の面（Ｂ）上で相対する１４０°の弧を占めている。好ましくは、一方の面上の残基は全て同じ極性であり、他方の面上の残基は全て反対の極性、即ち、もし面Ａが全て親水性であるならば、面Ｂは全て親油性、またはその逆である。当業者は、本発明にかかるヘリックスは、
0004106082.tif 000021
により表わされるが、逆の配列、
0004106082.tif 000022
もまた残基の分布基準に適合し、本発明にかかるヘリックスの同等な記述子であることを認識するであろう。
Ａｌａは両親媒性α−ヘリックスのいずれの面にも容易に位置することができるため、アラニンは親水性または親油性アミノ酸のいずれとも置換することができるが、Ａｌａ10は両親媒性α−ヘリックスを形成しない。一般に、プロリン、システイン、およびチロシンは用いられない；しかしながら、そのセグメント内の残りのアミノ酸が実質上、親水性面−親油性面の区分に従っている限り、例えば親油性面上の親水性残基といったような、配列中のこれらの存在および無作為の過誤は寛容し得る。或る配列が充分両親媒性であって本発明にかかる配列であるかどうかを決定する簡便な方法は、前記定義のような平均疎水性モーメントを算出することである。もし１００°±２０°における残基当りの平均モーメントのピークが約０．２０を超えるならば、その配列は両親媒性ヘリックスであり、本発明にかかる配列である。
例えば、（配列番号２６）、Ｘａａ＝Ｇｌｕに対する１００°における残基当りの平均疎水性モーメントは、以下のように算出する：
0004106082.tif 000023
この配列では、平均のピーク疎水性モーメントは９２°で出現し、０．４８の値である。
この概念を副甲状腺ホルモンおよび副甲状腺ホルモン関連ペプチドに適用すると、（７−１６）および（２２−３１）のいずれかまたは両方の領域が、α−ヘリックス二次構造を表わし、そして生物活性の喪失または免疫反応の誘導をすることなく、類似の構造的傾向を有する非相同配列で置換できることが仮説として取り上げられた。
好ましい態様
一つの態様において本発明は、式（Ｉ）：
0004106082.tif 000024
［式中、
Ｘａａ5はＨｉｓまたはＡｌａであり；
Ｘａａ11およびＸａａ13は個別にＬｙｓ、Ａｒｇ、またはＬｅｕであり；
Ｘａａ19およびＸａａ21は個別にＬｙｓ、ＡｌａまたはＡｒｇであり；
Ｘａａ22-31は、
0004106082.tif 000025
［式中、ＸａａはＧｌｕまたはＡｒｇである］（配列番号２６）；
0004106082.tif 000026
［式中、ＸａａはＧｌｕ、Ｌｙｓ、またはＬｙｓ（ＣＯＣＨ2ＰＥＧＸ）であり、そしてＰＥＧＸは分子量１００ないし１００００のポリ（エチレングリコールメチルエーテル）ラジカルである］（配列番号２７）；
0004106082.tif 000027
から選ばれ；
Ｘａａ32はＨｉｓまたはＬｙｓであり；
Ｘａａ33はＴｈｒ、Ｇｌｕ、またはＡｌａであり；
Ｘａａ34はＡｌａ、ｈＳｅｒ、Ｔｙｒ、またはＬｅｕであり；
そしてＴｅｒｍはＧｌｙ Ａｒｇ Ａｒｇ、ラクトン、ＯＨまたはＮＲ2［式中、各々のＲはＨまたは（Ｃ1−Ｃ4）アルキルである］である］
で示される修飾した副甲状腺ホルモン関連ペプチド（ｐＴＨｒｐ）；および医薬的に許容し得るそれらの塩（式Ｉ）を包含する。
本発明のさらに特定の態様は、Ｘａａ22-31が、１００°における＜μH＞が０．４５を超える（配列番号２６）である、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。本発明のより特定の態様は、Ｘａａ22-31が（配列番号２６）であり、Ｘａａ11およびＸａａ13が共にＬｙｓであり；そしてＸａａ19およびＸａａ21が共にＡｒｇである、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。
代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000028
【化１３】
0004106082.tif 000029
を包含するが、これらに限定される訳ではない。
本発明の別の態様は、Ｘａａ22-31が（配列番号２６）であり；Ｘａａ11およびＸａａ13が共にＬｙｓであり；そしてＸａａ19およびＸａａ21のうち一方がＡｒｇであり他方がＡｌａである、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。この亜属の代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000030
を包含するが、これらに限定される訳ではない。
本発明の別の態様は、Ｘａａ22-31が（配列番号２６）であり；Ｘａａ11およびＸａａ13のうち一方がＬｅｕであり他方がＬｙｓであり；そしてＸａａ19およびＸａａ21が共にＡｒｇである、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。この亜属の代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000031
を包含するが、これに限定される訳ではない。
本発明の別の態様は、Ｘａａ22-31が、１００°における＜μH＞が０．５０を超える（配列番号２７）である、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。本発明のさらなる態様は、Ｘａａ22-31が（配列番号２７）であり；Ｘａａ11およびＸａａ13が共にＬｙｓまたは共にＡｒｇであり；そしてＸａａ19およびＸａａ21が共にＡｒｇである、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。この亜属の代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000032
を包含するが、これらに限定される訳ではない。
本発明の別の態様は、Ｘａａ22-31が、１００°における＜μH＞が約０．２５である（配列番号２８）である、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。この亜属の代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000033
を包含するが、これに限定される訳ではない。
本発明の別の態様は、Ｘａａ22-31が、１００°における＜μH＞が約０．２８である（配列番号２９）である、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。この亜属の代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000034
を包含するが、これに限定される訳ではない。
本発明の別の態様は、Ｘａａ22-31が、１００°における＜μH＞が約０．２９である（配列番号３０）である、式（Ｉ）のポリペプチドを包含する。この亜属の代表的ポリペプチドは、
0004106082.tif 000035
を包含するが、これに限定される訳ではない。
本発明のさらに別の態様において、驚くべき事に、３４より少ないアミノ酸を有するＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの同族体および類似体もまた強力な骨改変剤であることが判明した。これらの化合物は、一般式：
0004106082.tif 000036
を有する。
代表的ポリペプチドは、以下のものを包含するがこれらに限定される訳ではない：
0004106082.tif 000037
物理的データ
ｍ．ｐ．  １４２．８−１６６．１℃。
［α］D25  −５３．８０（ｃ  ０．３８、Ｈ2Ｏ）。
ＦＡＢ（Ｃ173Ｈ295Ｎ55Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+  ３９２９。
0004106082.tif 000038
0004106082.tif 000039
物理的データ
ｍ．ｐ．  １６１．０−１７７．０℃。
［α］D25  −６１．９７（ｃ  ０．１９、Ｈ2Ｏ）。
ＦＡＢ（Ｃ167Ｈ288Ｎ52Ｏ48）：［Ｍ＋Ｈ］+  ３７９２．０。
0004106082.tif 000040
当業者は、１００°±２０°における残基当りの平均疎水性モーメントが約０．２０より大きいアミノ酸配列が（２２−３１）位に挿入されるならば、本明細書に記載される望ましい属性を有する多くの組合せのポリペプチド類似体が合成され得るということが理解できるであろう。
ポリペプチドの古典的合成
本発明にかかるポリペプチドは、固相合成についてはＪ．Ｍ．ステュワートおよびＪ．Ｄ．ヤング、ソリッド・フェイズ・ペプタイド・シンセシス、２版、ピアス・ケミカル・Ｃｏ．、ロックフォード、イリノイ（１９８４）およびＪ．マイエンホーファー、ホーモナル・プロテインズ・アンド・ペプタイズ、２巻、アカデミック・プレス、ニューヨーク、（１９７３）、そして溶液合成についてはＥ．シュローダーおよびＫ．ルブケ、ザ・ペプタイズ、１巻、アカデミック・プレス、ニューヨーク、（１９６５）に開示されるような方法によって、合成することができる。
一般に、これらの方法は、伸長しつつあるペプチド鎖に、保護されたアミノ酸を連続的に付加することを含む。普通、第一のアミノ酸のアミノまたはカルボキシ基のいずれか、および反応性側鎖の基があればそれを保護する。次にこの保護されたアミノ酸を不活性固体支持体に結合させるか、または溶液中で使用し、そして、アミド結合の形成に従う条件下で、やはり適当に保護された配列中の次のアミノ酸を添加する。所望のアミノ酸が全て適正な配列に結合された後、保護基および固体支持体があればそれを除去して粗製ポリペプチドを得る。このポリペプチドを脱塩および好ましくはクロマトグラフィーにより精製し、最終生成物を得る。
約４０より少ないアミノ酸を有する生理学的に活性な末端切除ポリペプチドの類似体を製造する好ましい方法は、固相ペプチド合成を含む。この方法において、α−アミノ（Ｎα）官能基および反応性側鎖があれば、それを酸または塩基感受性基により保護する。保護基はペプチド結合形成の条件に対し安定でなければならず、一方現存のポリペプチド鎖に影響を及ぼすことなく容易に除去され得なければならない。好適なα−アミノ保護基は、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｏ−クロロベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル（Ａｍｏｃ）、イソボルニルオキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシ−カルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブトキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）等、好ましくはｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）を包含するが、これらに限定される訳ではない。好適な側鎖保護基は、アセチル、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｔ−ブチル、ｔ−ブチルジメチルシリル、２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）、２，６−ジクロロベンジル、シクロヘキシル、シクロペンチル、イソプロピル、ピバリル、テトラヒドロピラン−２−イル、トシル（Ｔｏｓ）、トリメチルシリル、およびトリチルを包含するが、これらに限定される訳ではない。
固相合成においては、Ｃ末端アミノ酸を最初に適当な樹脂支持体に結合させる。適当な樹脂支持体とは、段階的縮合および脱保護反応の試薬および反応条件に対し不活性であると同時に、用いられる媒質に不溶性であるような物質である。入手し得る市販の樹脂の例は、反応基で修飾されたスチレン／ジビニルベンゼン樹脂、例えばクロロメチル化コ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）、ヒドロキシメチル化コ−ポリ−（スチレン−ジビニルベンゼン）等を包含する。ベンジル化ヒドロキシメチル化フェニルアセトアミドメチル（ＰＡＭ）樹脂が好ましい。化合物のＣ末端がアミドである場合、好ましい樹脂はｐ−メチルベンズヒドリルアミノ−コ−ポリ（スチレン−ジビニル−ベンゼン）樹脂である。
ＰＡＭ樹脂への結合は、Ｎα−保護化アミノ酸、好ましくはＢｏｃ−アミノ酸を、エタノール、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等に入れたアンモニウム、セシウム、トリエチルアンモニウム、１，５−ジアザビシクロ−［５．４．０］ウンデカ−５−エン、テトラメチルアンモニウム、または類似の塩として、好ましくはＤＭＦに入れたセシウム塩として、昇温下に、例えば約４０°および６０℃の間、好ましくは約５０℃で、約１２ないし７２時間、好ましくは約４８時間、樹脂と反応させることにより達成することができる。
Ｎα−Ｂｏｃ−アミノ酸は、ジクロロメタンまたはジメチルホルムアミド、好ましくはジクロロメタンのような溶媒中、約１０°および５０℃の間、好ましくは２５℃の温度で約２ないし約２４時間、好ましくは約２時間の、例えばＮ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）仲介結合により、ベンズヒドリルアミン樹脂に結合させることができる。
保護化アミノ酸の連続的結合は、当分野で良く知られる方法、典型的には自動ペプチド合成機中で実施することができる。トリエチルアミンまたは類似の塩基による中和の後、各々の保護化アミノ酸を、好ましくはおよそ１．５ないし２．５倍の過剰モルで導入し、結合を、ジクロロメタン、ＤＭＦ、またはその混合物のような不活性非水性極性溶媒、好ましくはジクロロメタン中、周囲温度で実施する。代表的な結合剤は、単独または１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｏ−アシル尿素、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシトリス（ピロリジノ）ホスホニウム  ヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢＯｐ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、他のＮ−ヒドロキシイミド類、またはオキシム類の存在下のいずれかのＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）または他のカルボジイミドである。別法として、保護化アミノ酸活性エステル（例えばｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニル等）または対称無水物を使用することもできる。
固相合成の最後に、完全に保護されたペプチドを樹脂からはずす。樹脂支持体への結合がベンジルエステル型のものである場合、アルキルアミドＣ末端を有するペプチドに対してはアルキルアミンまたはフルオロアルキルアミンによるアミノリシスによって、非置換アミドＣ末端を有するペプチドに対しては例えばアンモニア／メタノールまたはアンモニア／エタノールによるアミノリシスによって、約−１０°および５０℃の間、好ましくは約２５℃の温度で、約１２および２４時間の間、好ましくは約１８時間で、開裂を行なうことができる。ヒドロキシＣ末端を有するペプチドは、ＨＦまたは他の強酸性脱保護法またはケン化によって開裂させることができる。別法として、ペプチドは例えばメタノールによるエステル転移反応とこれに続くアミノリシスまたはケン化によって樹脂からはずすこともできる。保護されたペプチドはシリカゲルクロマトグラフィーにより精製できる。
側鎖保護基は、アミノリシス生成物を、約−１０°および＋１０℃の間、好ましくは約０℃の温度で約１５分間および２時間の間、好ましくは約１．５時間、例えば、アニソールまたは他のカルボニウムイオン捕捉剤の存在下での無水液体フッ化水素による処理、フッ化水素／ピリジン複合体による処理、トリス（トリフルオロアセチル）ホウ素およびトリフルオロ酢酸による処理、水素および炭素上パラジウムまたはポリビニルピロリドンによる還元、または液体アンモニア中のナトリウムによる還元に付すことにより、好ましくは液体フッ化水素およびアニソールによって、ペプチドから除去することができる。
ベンズヒドリルアミン樹脂上のペプチドに対しては、上記の液体フッ化水素およびアニソールを利用して、樹脂の開裂と脱保護工程を合わせて一つの工程にすることができる。
この溶液を脱塩し（例えばバイオラドＡＧ−３（商標）陰イオン交換樹脂を用いる）、ペプチドを、以下の型のいずれかまたは全てを用いる一連のクロマトグラフィー工程によって精製することができる：アセテート型の弱塩基性樹脂上のイオン交換；非誘導体化コ−ポリ（スチレン−ジビニルベンゼン）、例えばアンバーライト（商標）ＸＡＤ上の疎水性吸着クロマトグラフィー；シリカゲル吸着クロマトグラフィー；カルボキシメチルセルロース上のイオン交換クロマトグラフィー；例えばセファデックス（商標）Ｇ−２５上の分配クロマトグラフィー；向流分配；または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、特にオクチル−またはオクタデシルシリルシリカ（ＯＤＳ）結合相カラムパッキング上の逆相ＨＰＬＣ。
したがって、本発明の別の態様は、ポリペプチドおよび医薬的に許容し得るその塩を製造する方法であって、適当な樹脂支持体上の保護化アミノ酸を連続的に縮合させ、保護基および樹脂支持体を除去し、そして生成物を精製し、ＰＴＨおよびＰＴＨｒｐの生理学的に活性な末端切除同族体および類似体、好ましくはＰＴＨ（１−３４）およびＰＴＨｒｐ（１−３４）の類似体［ここで（２２−３１）位のアミノ酸は前記定義による両親媒性α−ヘリックスペプチド配列を形成している］を得ることからなる方法に関するものである。
ポリペプチドの組換え合成
別法として、本発明にかかるポリペプチドは、所望のポリペプチドをコードしている遺伝子のクローニングおよび発現によって製造することができる。この方法においては、所望のＤＮＡ配列を含むプラスミドを製造し、適当な宿主微生物、典型的には細菌、例えば大腸菌、または酵母、例えばサッカロミセス・セレビシエ中に挿入し、宿主微生物が該プラスミド、そして本発明にかかるポリペプチド類似体をコードしているｃＤＮＡのコピーを多数産生するよう誘導する。
まず、後の改変を容易にするための都合の良い制限酵素開裂部位を有する、選択されたＰＴＨまたはＰＴＨｒｐ類似体をコードしている合成遺伝子を設計する。ミュリスが米国特許第４，６８３，１９５および４，６８３，２０２号において教示しているポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を用いてこの配列を増幅することができる。
増幅された合成遺伝子を分離し、Ｔｒｐ  ＬＥプラスミドのような適当なプラスミドにライゲーションするが、これには該遺伝子の４コピーが縦に並んで挿入され得る。Ｔｒｐ ＬＥプラスミドの製造は、米国特許第４，７３８，９２１号および欧州特許公開第０２１２５３２号に記載されている。Ｔｒｐ  ＬＥプラスミドは一般に、ＴｒｐＥプラスミドの８−１０倍の蛋白を産生する。次いでこの多コピー遺伝子を適当な宿主、例えば大腸菌またはＳ．セレビシエ中で発現させることができる。
本発明において使用される特異的発現ベクターは、以下の要素を含むＴｒｐ ＬＥ １８ Ｐｒｏｔ（Ｉｌｅ3，Ｐｒｏ5）であった：アンピシリン耐性遺伝子およびプラスミド複製起点を含むｐＢＲ３２２フラグメント（ＥｃｏＲＩ−ＢａｍＨＩ）；ｔｒｐプロモーターおよびｔｒｐＥ遺伝子を含むＥｃｏＲＩ−ＳａｃＩＩフラグメント；ＨＩＶプロテアーゼ（Ｉｌｅ3，Ｐｒｏ5）遺伝子フラグメント（ＳａｃＩＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ）；ｂＧＲＦ遺伝子フラグメント（ＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩ）；および大腸菌ｒｐｏｃ遺伝子からの転写ターミネーター。ＨＩＶプロテアーゼおよびｂＧＲＦ遺伝子フラグメントは重要でなく、所望ならば他のコード化配列に置き換えることができる。
発現された多量体の融合蛋白は細胞内に蓄積して安定な封入体となり、遠心によって細胞蛋白の他の部分から分離することができる。単離された融合蛋白を単量体ＰＴＨまたはＰＴＨｒｐ類似体に変換し、陽イオン交換および／または逆相ＨＰＬＣにより精製することができる。
クローニング、増幅、発現、および精製の別法は当業者にとって明らかであろう。代表的な方法は、マニアティス等、モレキュラー・クローニング、ア・ラボラトリー・マニュアル、第２版、コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー（１９８９）に開示されている。
用途および投与
本発明にかかるポリペプチドは、骨量の喪失により現われる哺乳動物の様々な症状の予防および処置に有用である。特に、本発明の化合物は、人間における骨粗鬆症およびオステオペニアの予防かつ治療的処置を適応とする。
一般に、本発明にかかるポリペプチド、またはその塩は、一日当り約０．００２および１μｇ／ｋｇ体重の間、好ましくは一日当り約０．０４ないし０．２μｇ／ｋｇ体重の量を投与する。５０ｋｇの女性対象に対しては、活性成分の日用量は約０．１ないし約５０μｇ、好ましくは約２．０ないし約１０μｇである。馬、犬、および牛のような他の哺乳動物においては、より高い用量が必要な場合もある。この用量を、最も効果的な結果の達成に必要とされるような、一回投与により、複数回適用により、または制御放出を介して、好ましくは一日に１回またはそれ以上の注射により、常套的医薬組成物として投与することができる。
正確な用量および組成物の選択ならびに最も適当なデリバリー法は、とりわけ、選択されたポリペプチドの薬理学的性質、処置されるべき症状の性質および重篤度、ならびに受容者の身体状態および精神的敏感さにより影響されるであろう。
代表的なデリバリー法は、経口、非経口（皮下、筋肉内および静脈内を包含する）、直腸内、口内（舌下を包含する）、肺、経皮、および経鼻を包含する。
医薬的に許容し得る塩は、毒性副反応無しに親ポリペプチドの望ましい生物活性を保持する。このような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、燐酸、硝酸等により形成される酸付加塩；ならびに有機酸、例えば酢酸、蓚酸、酒石酸、琥珀酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パム酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクトウロン酸等により形成される塩；（ｂ）亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム等のような多価金属陽イオンにより；またはＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンまたはエチレンジアミンから形成される有機陽イオンにより形成される塩基付加塩；または（ｃ）（ａ）および（ｂ）の組合せ、例えばタンニン酸亜鉛塩等である。
本発明のさらなる態様は、活性成分としての本発明にかかるポリペプチド、または医薬的に許容し得るその塩を、医薬的に許容し得る非毒性担体と混合してなる、医薬組成物に関するものである。上に述べたように、このような組成物は、非経口（皮下、筋肉内または静脈内）投与用に、特に液体溶液または懸濁液の形で；経口または口内投与用に、特に錠剤またはカプセル剤の形で；肺または鼻腔内投与用に、特に散剤、点鼻剤またはエアゾールの形で；そして直腸内または経皮投与用に製造することができる。
この組成物は、簡便には単位投薬型で投与してよく、例えばレミントンズ・ファーマシューティカル・サイエンシズ、１７版、マック・パブリッシング・カンパニー、イーストン、ＰＡ、（１９８５）に記載のような医薬的に良く知られる任意の方法によって製造することができる。非経口投与のための製剤は、賦形剤として、滅菌水または食塩水、プロピレングリコールのようなアルキレングリコール類、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール類、植物起源の油、水素化ナフタレン類等を含有することができる。経口投与のためには、胆汁酸塩またはアシルカルニチン類の添加によって製剤を向上させることができる。鼻腔投与用製剤は固体であってよく、賦形剤、例えば乳糖またはデキストランを含有することができ、または、点鼻剤もしくは定量供給スプレーの剤型における使用のためには水性または油性溶液であってよい。口内投与のためには、典型的な賦形剤は、糖、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、予めゼラチン化した澱粉等を包含する。
鼻腔投与のために製剤化する場合、鼻腔粘膜を介する吸収は、約０．２および１５重量パーセントの間の範囲、好ましくは約０．５および４重量パーセントの間、最も好ましくは約２重量パーセントの量の界面活性剤の酸、例えばグリココール酸、コール酸、タウロコール酸、エトコール酸、デオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デヒドロコール酸、グリコデオキシコール酸、シクロデキストリン類等によって向上させることができる。
対象への本発明化合物の長時間にわたるデリバリー、例えば１週間ないし一年間のデリバリーは、所望の放出期間のための充分な活性成分を含有する制御放出系の一回投与によって達成することができる。種々の制御放出系、例えばモノリシックまたは貯蔵器型のマイクロカプセル、デポインプラント、浸透圧ポンプ、小胞、ミセル、リポソーム、経皮パッチ、イオン導入装置およびこれらに代わる注射可能な投薬型をこの目的のために利用することができる。活性成分のデリバリーが望まれる部位への局在は、幾つかの制御放出手段のさらなる特徴であり、これは或る疾病の処置においては有利であると判明するであろう。
制御放出製剤の一つの型は、ケント、ルイス、サンダーズ、およびタイスの先駆的業績である米国４，６７５，１８９号に記載されるような、コポリ（乳酸／グリコール酸）のような徐々に分解する、非毒性の、非抗原性のポリマー中に分散またはカプセル化された該ポリペプチドまたはその塩を含む。この化合物または好ましくはそれらの比較的不溶性の塩は、コレステロールもしくは他の脂質マトリックスペレット、またはシラストマーマトリックスインプラントに製剤化することができる。さらなる徐放、デポインプラントまたは注射可能な製剤は当業者にとって明らかであろう。例えば、サステインド・アンド・コントロールド・リリース・ドラッグ・デリバリー・システムズ、Ｊ．Ｒ．ロビンソン編、マーセル・デッカー・Ｉｎｃ．、ニューヨーク、１９７８、およびＲ．Ｗ．ベイカー、コントロールド・リリース・オブ・バイオロジカリー・アクティヴ・エイジェンツ、ジョン・ウィレイ・アンド・サンズ、ニューヨーク、１９８７を参照されたい。
以下の個別的実施例は、本発明にかかる代表的化合物の合成および試験を例示することを意図しており、請求項の範囲を限定するものと解してはならない。実施例において、「ｍ．ｐ．」は融点、「［α］D25」は示された溶媒中の与えられた濃度における２５℃での光学活性、「ＦＡＢ」は高速原子衝撃質量分析、そして「ＡＡＡ」はアミノ酸分析であって実測値の後の括弧内に理論値を示す。このアミノ酸分析は、製造者の推奨するプロトコルの後にヒューレット−パッカード・アミノクアント・アナライザーにより実施した。一次アミノ酸はｏ−フタルアルデヒドにより、二次アミノ酸はＦｍｏｃにより誘導体化した。誘導体化されたアミノ酸の蛍光検出を定量に使用した。保護化アミノ酸はアプライド・バイオシステムズ・Ｉｎｃ．（フォスターシティー、ＣＡ）から得られた。
実施例１
化合物１（配列番号７）を、自動アプライド・バイオシステムズ・モデル４３０Ａペプチド合成機を使用し、４−メチルベンズヒドリルアミン樹脂上の固相法により、０．５ｍｍｏｌスケールで製造した。α−アミノ基はｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）で保護した。側鎖保護基は；Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびＳｅｒに対してはベンジル（Ｂｚｌ）；Ａｒｇに対してはトシル（Ｔｏｓ）；Ｈｉｓに対してはベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）；そしてＬｙｓに対しては２−クロロベンジル（Ｃｌ−ｚ）であった。ステュワートおよびヤング（上記）の方法に従い、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＤＣＣ／ＨＯＢｔ）を用いてアミノ酸を順次結合させた。各々のアミノ酸の結合の後に、Ｎ−メチルピロリドン中の無水酢酸およびジイソプロピルエチルアミンの混合物を用いてペプチドをアセチル化した。完成したペプチドを、アニソール（２．５ｍｌ）の存在下に無水ＨＦ（２５ｍｌ）を用いて−１０℃で３０分間、そして０℃で６０分間、樹脂から開裂させ、同時に側鎖保護基を脱保護した。ＨＦを減圧で蒸発させた後、残留物を無水エーテルで洗浄し、粗製のペプチドを１０％酢酸で抽出した。１０％酢酸抽出物を凍結乾燥すると９００ｍｇの粗生成物が得られた。このペプチドを、０．１％ＴＦＡ中２２−４５％ＣＨ3ＣＮの勾配を用いる中等度圧ＯＤＳ逆相カラムクロマトグラフィーにより精製した。三つの画分に溶出した生成物を濃縮し、凍結乾燥して、＞９８％純度の白色固体１３０ｍｇを得た。
0004106082.tif 000041
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５０−１５９℃。［α］D25−３４．８８°（ｃ０．１６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ300Ｎ56Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+４００５．５。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、１．９（２）；Ｇｌｕ、５．６（６）；Ｓｅｒ、１．６（２）；Ｈｉｓ、２．７（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．３（８）；Ｌｙｓ、４．０（４）。
同様にして、ヒドロキシ末端ポリペプチドの合成に必要なＰＡＭ樹脂に置き換えて化合物２、５−１８、２１−２７、２９−３６、３８−４８、５０−５４、５８−６４および６６−７０を製造および特性決定した。
0004106082.tif 000042
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５４−１７０℃。［α］D25−４９．３５°（ｃ０．４６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ301Ｎ57Ｏ50）：［Ｍ＋Ｈ］+４００５．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．８（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）。
0004106082.tif 000043
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４７−１６５℃。［α］D25−４９．１７°（ｃ０．６６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ299Ｎ59Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０６１。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｙ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、５．０（５）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．７（８）；Ｌｙｓ、１．９（２）。
0004106082.tif 000044
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５０−１７０℃。［α］D25−４８．６５°（ｃ０．５４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ299Ｎ63Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４１１８．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．２（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、６．９（７）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．８（８）。
0004106082.tif 000045
物理学的データ：ｍ．ｐ．１７７−１８２℃。［α］D25−４６．１７°（ｃ０．１４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ304Ｎ64Ｏ50）：［Ｍ＋Ｈ］+４１１７。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．０（２）；Ｇｌｕ、４．８（５）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、６．７（７）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｙｓ、７．７（８）；Ｌｙｓ、０．９（１）。
0004106082.tif 000046
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４７−１６５℃。［α］D25−４９．１７°（ｃ０．６６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ305Ｎ59Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３３．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．０（２）；Ｇｌｕ、４．８（５）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、２．７（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．９（４）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．９（８）；Ｌｙｓ、４．０（４）。
0004106082.tif 000047
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５８−１６０℃。［α］D25−４４．７６°（ｃ０．１、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ189Ｈ326Ｎ64Ｏ55）：［Ｍ］+４３７５．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．０（２）；Ｇｌｕ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、２．３（２）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、５．０（５）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．８（８）；Ｌｙｓ、４．３（４）。
0004106082.tif 000048
物理学的データ：ｍ．ｐ．１７０−１７５℃。［α］D25−３１．５９°（ｃ０．５４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ174Ｈ300Ｎ52Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+３９３６．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．０（２）；Ｇｌｕ、６．０（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、２．０（２）；Ｇｌｙ、１．２（１）；Ａｌａ、３．０（３）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、９．９（１０）；Ｌｙｓ、３．０（３）。
0004106082.tif 000049
物理学的データ：ｍ．ｐ．１７２−１７４℃。［α］D25−４３．２９°（ｃ０．２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ179Ｈ311Ｎ55Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０６５．８。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．２（２）；Ｇｌｕ、７．７（７）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．０（２）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、９．３（９）；Ｌｙｓ、５．１（５）。
0004106082.tif 000050
物理学的データ：ｍ．ｐ．１７８℃。［α］D25−３６．８８°（ｃ０．４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ182Ｈ295Ｎ50Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+４００１．６。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、６．５（６）；Ｓｅｒ、２．７（３）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、１．０（１）；Ｔｙｒ、０．８（１）；Ｖａｌ、２．０（２）；Ｐｈｅ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ＋Ｎｌｅ、８．５（７＋２）；Ｌｙｓ、３．１（３）。
0004106082.tif 000051
物理学的データ：ｍ．ｐ．２６０℃。［α］D25−３７．０２°（ｃ０．２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ184Ｈ304Ｎ56Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０８４。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、５．５（５）；Ｓｅｒ、２．６（３）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ａｌａ、１．０（１）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｒｇ、３．２（３）；Ｔｙｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｐｈｅ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、９．０（９）；Ｌｙｓ、３．０（３）。
0004106082.tif 000052
物理学的データ：ｍ．ｐ．１９０−２２５℃。［α］D25−５６．５８°（ｃ０．３６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ161Ｈ272Ｎ54Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+３７４７．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、４．９（５）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．６（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、７．６（７）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、６．６（６）；Ｌｙｓ、１．９（２）。
0004106082.tif 000053
物理学的データ：ｍ．ｐ．１７０−１８０℃。［α］D25−４８．１９°（ｃ０．２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ172Ｈ293Ｎ53Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+３９１９．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、３．０（３）；Ａｒｇ、２．１（２）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、４．４（４）。
0004106082.tif 000054
物理学的データ：ｍ．ｐ．１９０−１９５℃。［α］D25−５０．５０°（ｃ０．４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ172Ｈ293Ｎ53Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+３９１９．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、６．０（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、３．０（３）；Ａｒｇ、２．１（２）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）。
0004106082.tif 000055
物理学的データ：ｍ．ｐ．１９５−２０４℃。［α］D25−６７．１１°（ｃ０．３、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ163Ｈ280Ｎ54Ｏ50）：［Ｍ＋Ｈ］+３７９６．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、２．９（３）；Ｓｅｒ、６．８（７）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．２（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．２（８）；Ｌｙｓ、２．０（２）。
0004106082.tif 000056
物理学的データ：ｍ．ｐ．２００−２０７℃。［α］D25−６０．２６°（ｃ０．６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ174Ｈ284Ｎ56Ｏ50）：［Ｍ＋Ｈ］+３９６０．０。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．９（３）；Ｇｌｕ、３．５（４）；Ｓｅｒ、１．４（２）；Ｈｉｓ、２．６（３）；Ｇｌｙ、０．９（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、４．０（４）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｔｙｒ、０．９（１）；Ｖａｌ、１．９（２）；Ｐｈｅ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、３．６（４）；Ｌｙｓ、４．１（４）。
0004106082.tif 000057
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４８−１５５℃。［α］D25−４５．９７（ｃ０．２６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ184Ｈ304Ｎ56Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０８４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、５．０（５）；Ｓｅｒ、２．７（３）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｔｙｒ、０．９（１）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｐｈｅ、０．９（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、９．３（９）；Ｌｙｓ、３．２（３）。
0004106082.tif 000058
物理学的データ：ｍ．ｐ．１７５−１８２℃。［α］D25−４９．９９（ｃ０．４７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ299Ｎ49Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+３９０６．５。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、６．５（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．１（２）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、９．１（９）；Ｌｙｓ、６．５（６）。
0004106082.tif 000059
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３６．５−１５３．５℃。［α］D25−３２．５７（ｃ０．１３、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ300Ｎ60Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+４０６０．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．２（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．１（２）；Ａｒｇ、５．２（５）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．１（１）；Ｌｅｕ、８．４（８）；Ｌｙｓ、２．２（２）。
0004106082.tif 000060
物理学的データ：ｍ．ｐ．１２５．８−１２７．２℃。［α］D25−５４．６２（ｃ０．２３、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ180Ｈ306Ｎ60Ｏ53）：［Ｍ＋Ｈ］+４１５８．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、６．２（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、５．１（５）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、２．１（２）；Ｐｒｏ、１．１（１）。
0004106082.tif 000061
物理学的データ：ｍ．ｐ．１０６−１３７．３℃。［α］D25−３９．５５（ｃ０．６７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ189Ｈ326Ｎ68Ｏ55）：［Ｍ＋Ｈ］+４４３０．５。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．６（２）；Ｈｉｓ、２．７（３）；Ｇｌｙ、２．２（２）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、１．８（２）；Ａｒｇ、７．３（７）；Ｖａｌ、０．８（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．１（８）；Ｌｙｓ、２．１（２）。
0004106082.tif 000062
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６０−１７２℃。［α］D25−４９．８５（ｃ０．３４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ181Ｈ304Ｎ56Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０９６．９。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．６（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｔｙｒ、０．９（１）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．７（８）；Ｌｙｓ、４．４（４）。
0004106082.tif 000063
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３０−１７１℃。［α］D25−４０．６５（ｃ０．３４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ178Ｈ297Ｎ55Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３９．４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．５（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．４（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｔｙｒ、０．８（１）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．９（８）；Ｌｙｓ、３．４（３）。
0004106082.tif 000064
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４０−１６０℃。［α］D25−４４．４８（ｃ０．２５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ172Ｈ293Ｎ55Ｏ51Ｓ1）：［Ｍ＋Ｈ］+３９７９。
ＡＡＡ：Ａｓｘ＋Ｃｙｓ、３．０（２＋１）；Ｇｌｘ、５．６（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、２．５（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、３．３（３）。
0004106082.tif 000065
物理学的データ：ｍ．ｐ．（測定せず）。［α］D25（測定せず）。ＦＡＢ（Ｃ186Ｈ316Ｎ59Ｏ54Ｓ2）：［Ｍ＋Ｈ］+４３０６．６。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．８（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．３（８）；Ｌｙｓ、３．３（３）。
0004106082.tif 000066
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３５−２０５℃。［α］D25−２６．９２（ｃ０．１０４、５０％水性ＨＯＡｃ）。ＦＡＢ（Ｃ188Ｈ311Ｎ57Ｏ54）：［Ｍ＋Ｈ］+４２３３。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、１．９（２）；Ｇｌｘ、６．３（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．１（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．２（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．２（８）；Ｌｙｓ、４．５（４）。
0004106082.tif 000067
物理学的データ：ｍ．ｐ．９２．１−１４６．６℃。［α］D25−４０．７６（ｃ０．３４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ177Ｈ302Ｎ56Ｏ53）：［Ｍ＋Ｈ］+４０６２．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．７（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、２．２（２）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）。
0004106082.tif 000068
物理学的データ：ｍ．ｐ．（測定せず）。［α］D25−２１．９６（ｃ０．１３２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ181Ｈ311Ｎ55Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０８９．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、６．３（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．３（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）。
0004106082.tif 000069
物理学的データ：ｍ．ｐ．（測定せず）。［α］D25−４６．８０（ｃ０．０７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ182Ｈ313Ｎ55Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４１０３。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、６．２（６）；Ｓｅｒ、１．４（２）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．１（１）；Ａｌａ、１．７（２）；Ａｒｇ、３．２（３）；Ｖａｌ、０．６（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、４．１（４）。
0004106082.tif 000070
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５２．１−１８６．５℃。［α］D25−５５．９１（ｃ０．３３、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ180Ｈ306Ｎ56Ｏ53）：［Ｍ＋Ｈ］+４１０２．６。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．６（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．７（８）；Ｌｙｓ、４．３（４）。
0004106082.tif 000071
物理学的データ：ｍ．ｐ．１２０−１４８．２℃。［α］D25−５２．７８（ｃ０．４７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ177Ｈ301Ｎ55Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３１．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．５（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、３．６（３）；Ｐｒｏ、０．９（１）。
0004106082.tif 000072
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３３．９−１５５．１℃。［α］D25−５４．２２（ｃ０．３７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ177Ｈ302Ｎ56Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３０．７。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．６（６）；Ｓｅｒ、１．９（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；ＧＩｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、１．１（１）；Ｌｅｕ、７．８（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）；Ｐｒｏ、０．９（１）。
0004106082.tif 000073
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４２．８−１６６．１℃。［α］D25−５３．８０（ｃ０．３８、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ173Ｈ295Ｎ55Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+３９２９。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．７（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｖａｌ、１．２（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．４（８）；Ｌｙｓ、４．４（４）；Ｐｒｏ、０．９（１）。
0004106082.tif 000074
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６１．０−１７７．０℃。［α］D25−６１．９７（ｃ０．１９、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ167Ｈ288Ｎ52Ｏ48）：［Ｍ＋Ｈ］+３７９２．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．９（２）；Ｈｉｓ、２．１（２）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．９（８）；Ｌｙｓ、４．３（４）；Ｐｒｏ、０．９（１）。
0004106082.tif 000075
物理学的データ：ｍ．ｐ．１８１−２０２℃。［α］D25−４５．１４（ｃ０．１９、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ195Ｈ326Ｎ62Ｏ56）：［Ｍ＋Ｈ］+４４３５．２。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．８（６）；Ｓｅｒ、２．８（３）；Ｈｉｓ、２．８（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、３．７（４）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、４．３（４）；Ｔｒｐ、０．９（１）。
0004106082.tif 000076
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３０−１３２．２℃。［α］D25−４６．６６（ｃ０．１９５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ216Ｈ365Ｎ81Ｏ62）：［Ｍ＋Ｈ］+５０８８．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．０（６）；Ｓｅｒ、２．７（３）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、２．２（２）；Ｔｈｒ、２．１（２）；Ａｌａ、３．０（３）；Ａｒｇ、１０．５（１０）；Ｖａｌ、０．９（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．２（８）；Ｔｒｐ、１．０（１）。
0004106082.tif 000077
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５８−１７４℃。［α］D25−４３．５７（ｃ０．５３、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ216Ｈ366Ｎ82Ｏ61）：［Ｍ＋Ｈ］+５０８７．４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、１．９（２）；Ｇｌｘ、５．６（６）；Ｓｅｒ、２．６（３）；Ｈｉｓ、３．３（３）；Ｇｌｙ、２．１（２）；Ｔｈｒ、２．０（２）；Ａｌａ、２．９（３）；Ａｒｇ、１０．１（１０）；Ｖａｌ、０．９（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．３（８）；Ｔｒｐ、１．１（１）。
0004106082.tif 000078
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６５．４−１７５．２℃。［α］D25−４０．４３（ｃ０．２０、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ225Ｈ374Ｎ80Ｏ62）：［Ｍ＋Ｈ］+５１９１。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、６．３（６）；Ｓｅｒ、２．８（３）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、２．１（２）；Ｔｈｒ、２．０（２）；Ａｌａ、３．２（３）；Ａｒｇ、９．９（９）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．６（８）；Ｌｙｓ、１．１（１）；Ｔｒｐ、１．１（１）。
0004106082.tif 000079
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４０−１６０℃。［α］D25−５６．８８（ｃ０．１６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ180Ｈ287Ｎ55Ｏ58）：［Ｍ＋Ｈ］+３９８９．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、３．０（３）；Ｇｌｘ、２．９（３）；Ｓｅｒ、３．７（４）；Ｈｉｓ、２．８（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．９（２）；Ａｒｇ、２．０（２）；Ｔｙｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．７（２）；Ｐｈｅ、０．９（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ＋Ｎｌｅ、５．８（２＋４）；Ｌｙｓ、３．４（３）；Ｔｒｐ、１．１（１）。
0004106082.tif 000080
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４０−２１０℃。［α］D25−４７．７５（ｃ０．１７８、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ180Ｈ309Ｎ57Ｏ52Ｓ1）：［Ｍ＋Ｈ］+４１３５．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．３（２）；Ｇｌｘ、６．６（６）；Ｓｅｒ、１．４（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、０．９（１）；Ｍｅｔ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．８（８）；Ｌｙｓ、４．４（４）。
0004106082.tif 000081
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３６．５−１５６．８℃。［α］D25−４９．８９（ｃ０．２４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ182Ｈ300Ｎ56Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０５６．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、５．０（５）；Ｓｅｒ、１．９（２）；Ｈｉｓ、３．３（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．１（２）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｐｈｅ、２．０（２）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．２（７）；Ｌｙｓ、３．５（４）。
0004106082.tif 000082
物理学的データ：ｍ．ｐ．８０．７−１４１．０℃。［α］D25−５５．３８（ｃ０．２３、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ300Ｎ58Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０１２．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、４．９（５）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、４．３（４）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．１（８）；Ｌｙｓ、３．９（４）。
0004106082.tif 000083
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３４．３−１５７．９℃。［α］D25−５０．７２（ｃ０．４５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ295Ｎ57Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+４０１２．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、４．２（４）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．１（８）；Ｌｙｓ、３．１（３）。
0004106082.tif 000084
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４２．７−１５９．８℃。［α］D25−５４．０１（ｃ０．２１、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ173Ｈ298Ｎ56Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+３９４６．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、４．９（５）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、３．１（３）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．９（２）；Ｌｅｕ、７．０（７）；Ｌｙｓ、４．３（４）。
0004106082.tif 000085
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３８−１８５℃。［α］D25−５０．１７（ｃ０．１４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ174Ｈ295Ｎ55Ｏ53）：［Ｍ＋Ｈ］+４００５。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、７．１（７）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．８（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．１（２）；Ａｒｇ、３．１（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．７（２）；Ｌｅｕ、７．１（７）；Ｌｙｓ、２．７（３）。
0004106082.tif 000086
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５８−１６３℃。［α］D25−４６．０６（ｃ０．１７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ195Ｈ327Ｎ63Ｏ55）：［Ｍ＋Ｈ］+４４３４．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．５（６）；Ｓｅｒ、２．７（３）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、１．８（２）；Ａｒｇ、４．０（４）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ｖａｌ、０．９（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、３．９（４）；Ｔｒｐ、１．０（１）。
0004106082.tif 000087
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５６−１６２℃。［α］D25−４４．４４（ｃ０．１８９、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ197Ｈ328Ｎ62Ｏ55）：［Ｍ＋Ｈ］+４４４５．６。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、５．５（６）；Ｓｅｒ、２．８（３）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、４．０（４）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．５（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）；Ｎａｌ、１．１（１）。
0004106082.tif 000088
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５９−１６４℃。［α］D25−５０．９４（ｃ０．２９、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ192Ｈ320Ｎ60Ｏ55）：［Ｍ＋Ｈ］+４３４９．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．６（６）；Ｓｅｒ、２．７（３）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、３．１（３）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．６（８）；Ｌｙｓ、４．０（４）；Ｔｒｐ、１．０（１）。
0004106082.tif 000089
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５５−２１０℃。［α］D25−４６．１５（ｃ０．１２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ195Ｈ334Ｎ62Ｏ58）：［Ｍ＋Ｈ］+４４７５．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．９（７）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、３．１（３）；Ａｒｇ、４．０（４）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．９（２）；Ｌｅｕ、８．１（８）；Ｌｙｓ、４．１（４）。
0004106082.tif 000090
物理学的データ：ｍ．ｐ．１８６−２１８℃。［α］D25−５２．７３（ｃ０．２６５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ192Ｈ329Ｎ61Ｏ57）：［Ｍ＋Ｈ］+４４０４．４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、６．６（７）；Ｓｅｒ、１．９（２）；Ｈｉｓ、３．４（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．８（４）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．７（２）；Ｌｅｕ、７．９（８）；Ｌｙｓ、４．０（４）。
0004106082.tif 000091
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６９−２０５℃。［α］D25−５０．７８（ｃ０．５１、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ186Ｈ317Ｎ57Ｏ56）：［Ｍ＋Ｈ］+４２４８．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．８（７）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．３（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．８（２）；Ｌｅｕ、７．８（８）；Ｌｙｓ、３．６（４）。
0004106082.tif 000092
物理学的データ：ｍ．ｐ．１９９−２０５℃。［α］D25−５２．４７（ｃ０．４１、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ180Ｈ306Ｎ56Ｏ55）：［Ｍ＋Ｈ］+４１３５．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、６．６（７）；Ｓｅｒ、１．９（２）；Ｈｉｓ、３．３（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．２（８）；Ｌｙｓ、３．８（４）。
0004106082.tif 000093
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３４．２℃。［α］D25−４８．１２（ｃ０．３６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ167Ｈ286Ｎ54Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+３８３４．４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．７（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、２．８（３）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．４（８）；Ｌｙｓ、４．３（４）。
0004106082.tif 000094
物理学的データ：ｍ．ｐ．１２８．５−１８４．５℃。［α］D25−６．５３（ｃ０．６９、ＭｅＯＨ）。ＦＡＢ（Ｃ148Ｈ259Ｎ47Ｏ41）：［Ｍ＋Ｈ］+３３５３。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、４．１（４）；Ｓｅｒ、０．９（１）；Ｈｉｓ、２．１（２）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、０．９（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．１（８）；Ｌｙｓ、４．２（４）。
0004106082.tif 000095
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６５−２１０℃。［α］D25−３６．０５（ｃ０．１２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ142Ｈ248Ｎ46Ｏ40）：［Ｍ＋Ｈ］+３２３９．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、３．９（４）；Ｓｅｒ、０．９（１）；Ｈｉｓ、１．９（２）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、６．８（７）；Ｌｙｓ、４．２（４）。
0004106082.tif 000096
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５０−２１０℃。［α］D25−１８．０（ｃ０．６４、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ208Ｈ351Ｎ79Ｏ60）：［Ｍ＋Ｈ］+４９１８．６。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．２（６）；Ｓｅｒ、２．８（３）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、２．２（２）；Ｔｈｒ、２．２（２）；Ａｌａ、２．２（２）；Ａｒｇ、１０．４（１０）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｔｒｐ、１．１（１）。
0004106082.tif 000097
物理学的データ：ｍ．ｐ．１５０−２１０℃。［α］D25−４１．７０（ｃ０．３６、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ189Ｈ324Ｎ72Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４４３７．１４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、４．１（４）；Ｓｅｒ、１．９（２）；Ｈｉｓ、２．０（２）；Ｇｌｙ、２．１（２）；Ｔｈｒ、２．０（２）；Ａｌａ、２．１（２）；Ａｒｇ、９．７（１０）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．４（８）。
側鎖環化類似体（化合物５７）は、Ｎα−Ｂｏｃ−Ｎε−Ｆｍｏｃ−ＬｙｓおよびＮα−Ｂｏｃ−Ｎγ−Ｆｍｏｃ−Ａｓｐをそれぞれ１３位および１７位に位置させる外は上記と同様にして合成した。Ｂｏｃアミノ酸合成の完了時点で樹脂をＤＭＦ中の２０％ピペリジンで室温下に３０分間処理した。樹脂を濾過し、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＣＨ2Ｃｌ2で洗浄した。この樹脂（１．１ｇ）をＰｙＢＯＰ２５０ｍｇを含有するＤＭＦ１０ｍｌに懸濁した。ｐＨをＤＩＥＡで８−９に調節し、樹脂を１時間攪拌した。樹脂を濾過し、ＤＭＦおよびＣＨ2Ｃｌ2で洗浄し、次いでＤＭＦに再懸濁した。結合をＰｙＢＯＰ１２５ｍｇを用いて反復した。樹脂を濾過し、ＤＭＦ、ＭｅＯＨ、およびＣＨ2Ｃｌ2で洗浄し、乾燥した。次いでこの樹脂をＨＦで処理し、ペプチドを上記のように精製した。
0004106082.tif 000098
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４２．５−１６３．５℃。［α］D25−３４．３１（ｃ０．１７、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ175Ｈ298Ｎ56Ｏ50）：［Ｍ＋Ｈ］+３９８６．４。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、１．９（２）；Ｇｌｘ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．２（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、２．０（２）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、４．０（４）。
実施例ＩＩ
［Ｍｅｔ34，Ａｌａ35］化合物１、ＡＶＳＥＨＱＬＬＨＤＫＧＫＳＩＱＤＬＲＲＲＥＬＬＥＫ−ＬＬＥＫＬＨＴＭＡ−ＮＨ2（配列番号２５）を、実施例Ｉの方法に従って製造および精製した。このポリペプチドを、以下のようにしてホモセリンラクトンに変換した。精製したペプチド（１６０ｍｇ）を４４％蟻酸（４ｍｌ）に溶解した。この溶液を、４４％蟻酸（４ｍ１）中に臭化シアン（７００ｍｇ）およびフェノール（１．６ｍｇ）を前もって混合した溶液と０℃で合した。溶液を０℃で２時間、そして室温で２時間攪拌した。生成物の形成を、ＨＰＬＣ（ヴィダック（商標）Ｃ−１８、３００オングストローム、４．６ｘ２５０ｍｍ、流速１．２ｍｌ／分、０．１％ＴＦＡ中２５−４５％アセトニトリルの勾配で１０分間）によって監視した。反応は４時間以内で完結した。試料の半分を濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（ヴィダック（商標）Ｃ−１８、０．１％ＴＦＡ中２５−４５％アセトニトリルの勾配）により精製した。ホモセリンラクトンペプチド画分をプールし凍結乾燥すると、＞９５％純度の白色固体、化合物４が２８ｍｇ得られた。
0004106082.tif 000099
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３８−１４２℃。［α］D25−５０．６６（ｃ０．１、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ299Ｎ55Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０１７．６１。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．８（２）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｔｈｉ、１．１（１）；Ａｌａ、１．１（１）；Ａｒｇ、２．７（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．２（８）；Ｌｙｓ、３．８（４）；Ｇｌｙ、１．０９（１）；ｈＳｅｒ、１．０９（１）。
同様に、化合物６５をこの方法に従って製造した。
0004106082.tif 000100
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６６−１７６℃。［α］D25−５２．２２（ｃ０．２５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ180Ｈ288Ｎ54Ｏ50）：［Ｍ＋Ｈ］+４００８．６。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、３．１（３）；Ｇｌｘ、４．８（５）；Ｓｅｒ、２．９（３）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ａｌａ、１．１（１）；Ａｒｇ、２．０（２）；Ｖａｌ、２．７（３）；Ｐｈｅ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ＋Ｎｌｅ、５．９（４＋２）；Ｌｙｓ、２．８（３）。
実施例ＩＩＩ
ホモセリンアミドを製造するために、粗製ｈＳｅｒラクトン類似体、化合物４を濃縮し、メタノール中の飽和ＮＨ3２５ｍｌで処理した。この溶液を０℃で２時間、そして室温で１６時間攪拌した。反応はＨＰＬＣ（ヴィダック（商標）Ｃ−１８、３００オングストローム、４．６ｘ２５０ｍｍ、流速１．２ｍｌ／分、０．１％ＴＦＡ中２０−４５％アセトニトリルの勾配）により監視し、１８時間以内で完結した。この溶液を濃縮し、分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（ヴィダック（商標）Ｃ−１８、０．１％ＴＦＡ中２５−４５％アセトニトリルの勾配）により精製した。ホモセリンアミドペプチド画分をプールし凍結乾燥すると、＞９８％純度の白色固体、化合物３が３０ｍｇ得られた。
0004106082.tif 000101
物理学的データ：ｍ．ｐ．１３８−１４２℃。［α］D25−４５．９７（ｃ０．２５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ302Ｎ56Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３３．９。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．６（２）；Ｈｉｓ、２．８（３）；Ｇｌｙ、０．９７（１）；ｈＳｅｒ、０．９７（１）；Ｔｈｉ、１．０（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、７．６（８）；Ｌｙｓ、３．９（４）。
同様に、化合物２２、２３および２８をこの方法に従って製造した。
0004106082.tif 000102
物理学的データ：ｍ．ｐ．６９．４−１２８℃。［α］D25−４３．９３（ｃ０．１５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ179Ｈ302Ｎ56Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０２２．９。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、４．９（５）；Ｓｅｒ、２．６（３）；Ｈｉｓ、２．８（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｐｈｅ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．８（９）；Ｌｙｓ、３．４（３）。
同様に、化合物２２、２３および２８をこの方法に従って製造した。
0004106082.tif 000103
物理学的データ：ｍ．ｐ．８７．１−１４２．１℃。［α］D25−５２．１４（ｃ０．４１、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ179Ｈ303Ｎ57Ｏ49）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、４．９（５）；Ｓｅｒ、２．７（３）；Ｈｉｓ、２．８（３）；Ｇｌｙ、１．０（１）；ｈＳｅｒ、１．０（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｐｈｅ、０．９（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、７．９（８）；Ｌｙｓ、３．７（４）。
0004106082.tif 000104
物理学的データ：ｍ．ｐ．８０℃。［α］D25−４８．６４（ｃ０．０９、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ193Ｈ334Ｎ70Ｏ56）：［Ｍ＋Ｈ］+４５３０．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．２（２）；Ｇｌｘ、６．１（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．０（３）；Ｇｌｙ、１．９（２）；ｈＳｅｒ、１．０（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．１（２）；Ａｒｇ、７．２（７）；Ｖａｌ、０．８（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．４（８）；Ｌｙｓ、２．１（２）。
ホモセリンアルキルアミドは、同様に、対応する過剰のアルキルアミンを含有するＤＭＦ中にホモセリンラクトンを溶解することにより、ホモセリンラクトンから製造した。室温で数日間攪拌した後（反応は分析用ＨＰＬＣにより監視した）、混合物を蒸発乾固し、ペプチドを分取ＨＰＬＣによって精製した。代表的ホモセリンアルキルアミドは化合物５５および５６である。
0004106082.tif 000105
物理学的データ：ｍ．ｐ．（測定せず）。［α］D25（測定せず）。ＦＡＢ（Ｃ178Ｈ306Ｎ56Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４０６３．０。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、５．８（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、０．９（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．４（８）；Ｌｙｓ、３．７（４）；ｈＳｅｒ、０．９（１）。
0004106082.tif 000106
物理学的データ：ｍ．ｐ．（測定せず）。［α］D25（測定せず）。ＦＡＢ（Ｃ184Ｈ310Ｎ56Ｏ52）：［Ｍ＋Ｈ］+４１３８．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．０（２）；Ｇｌｘ、５．９（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、０．９（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、０．９（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．０（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、４．１（４）；ｈＳｅｒ、０．９（１）。
実施例ＩＶ
Ｎα−Ｂｏｃ−Ｎγ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−２，４−ジアミノ酪酸のセシウム塩をメリフィールド樹脂に結合させ（ＤＭＦ、５０℃、４８時間）、実施例ＩのようにしてＢｏｃ−Ａｌａ樹脂の代わりに固相合成に使用した。合成が完結した時点でペプチドをＤＭＦ中の２０％ピペリジンで室温下に３０分間処理して側鎖のＦｍｏｃ保護基を除去した。保護ペプチドは自然に環化してラクタムとなり、それにより樹脂から開裂した。この溶液を樹脂から濾過し、減圧下に蒸発させると油状物が得られた。残留物を実施例Ｉに記載のように液体ＨＦで処理して粗製の非保護ペプチドを生成させた。このペプチドを実施例Ｉに記載のように処理し精製した。
0004106082.tif 000107
物理学的データ：ｍ．ｐ．１６１−１８１℃。［α］D25−４８．３８（ｃ０．２５、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ300Ｎ56Ｏ51）：［Ｍ＋Ｈ］+４０１６．８。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、６．３（６）；Ｓｅｒ、１．７（２）；Ｈｉｓ、３．３（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、２．１（２）；Ａｒｇ、２．９（３）；Ｖａｌ、０．９（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、３．８（４）。
実施例Ｖ
実施例ＩＩからのホモセリンラクトン類似体の水溶液をブタ肝臓エステラーゼ（シグマ・ケミカル・カンパニー、セントルイス、ＭＯ）で処理した。Ｃ末端ホモセリンへのラクトンの加水分解を分析用ＨＰＬＣにより監視した。加水分解が完結したと判断された時、この物質を実施例Ｉと同様に分取ＨＰＬＣにより精製した。
0004106082.tif 000108
物理学的データ：ｍ．ｐ．（測定せず）。［α］D25（測定せず）。ＦＡＢ（Ｃ176Ｈ301Ｎ55Ｏ53）：［Ｍ＋Ｈ］+４０３５．１。
ＡＡＡ：Ａｓｘ、２．１（２）；Ｇｌｘ、５．９（６）；Ｓｅｒ、２．０（２）；Ｈｉｓ、３．１（３）；Ｇｌｙ、０．８（１）；ｈＳｅｒ、０．８（１）；Ｔｈｒ、１．０（１）；Ａｌａ、１．０（１）；Ａｒｇ、３．０（３）；Ｖａｌ、１．３（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．１（８）；Ｌｙｓ、３．８（４）。
実施例ＶＩ
実施例Ｉに従い、保護ペプチド−樹脂ＢｏｃＡＶＳ（Ｂｚｌ）Ｅ（ＯＢｚ）Ｈ（Ｂｏｍ）ＱＬＬＨＤ（ＯＢｚｌ）Ｒ（Ｔｓ）ＧＲ（Ｔｓ）Ｓ（Ｂｚｌ）ＩＱＤ（ＯＢｚ）ＬＲ（Ｔｓ）Ｒ（Ｔｓ）Ｅ（ＯＢｚ）ＬＬＥ（ＯＢｚｌ）Ｒ（Ｔｓ）ＬＬＫ（Ｆｍｏｃ）Ｒ（Ｔｓ）ＬＨ（Ｂｏｍ）Ｔ（Ｂｚｌ）Ａ−Ｏ−ＰＡＭを０．３５ｍｍｏｌスケールで合成した。Ｎα基は全てｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）で保護し；側鎖保護基は示された通りとした。合成が完結した後にペプチド樹脂をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の２０％ピペリジン５０ｍｌで室温下に３０分間処理して、リジン上のフルオレニルメトキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）保護基を除去した。樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、ＣＨ2Ｃｌ2で順次洗浄し乾燥すると、部分的に保護されたペプチド１．６ｇが得られた。この部分的に保護されたペプチド０．８ｇ（０．１７５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２０ｍｌ中、ベンゾトリアゾリルオキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＰｙＢｏｐ）０．１６ｇ（０．３ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）０．０６７ｇ（０．５２５ｍｍｏｌ）の存在下にメトキシジ（エチレンオキシ）酢酸［ＰＥＧ（２）ＣＨ2ＣＯＯＨ］０．４４ｇ（０．３ｍｍｏｌ）を用いて、室温で５時間リジンをアシル化した。５時間後、樹脂を濾過し、ＤＭＦ、ＭｅＯＨおよびＣＨ2Ｃｌ2で順次洗浄した。アシル化工程は、樹脂のニンヒドリン結果が陰性となるまで２回反復した。側鎖保護基の除去と共に最終ペプチドを樹脂から開裂させ、実施例Ｉと同様に精製し、１００ｍｇの化合物１９を得た。
0004106082.tif 000109
物理学的データ：ｍ．ｐ．１４５−１９５℃。［α］D25−４４．６０（ｃ０．２、Ｈ2Ｏ）。ＦＡＢ（Ｃ183Ｈ316Ｎ64Ｏ54）：［Ｍ＋Ｈ］+４２７６．２。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．１（２）；Ｇｌｕ、５．０（５）；Ｓｅｒ、１．６（２）；Ｈｉｓ、２．９（３）；Ｇｌｙ、０．９（１）；Ｔｈｒ、１．９（２）；Ａｒｇ、７．１（７）；Ｖａｌ、１．１（１）；Ｉｌｅ、１．０（１）；Ｌｅｕ、８．０（８）；Ｌｙｓ、０．９（１）。
実施例ＶＩＩ
アシル化剤として２−メトキシポリ（エチレン−オキシ）酢酸［ＰＥＧ（５０００）ＣＨ2ＣＯ2Ｈ］を使用する外は実施例ＩＶと同じ方法で、ペプチドを合成し、開裂させ、そして精製した。部分的に保護されたペプチド０．８ｇ（０．１７５ｍｍｏｌ）は３００ｍｇの純粋な化合物２０を生成した。
0004106082.tif 000110
物理学的データ：ｍ．ｐ．１０５℃。［α］D25−２２．９５（ｃ０．１１、５０％水性ＨＯＡｃ）。
ＡＡＡ：Ａｓｐ、２．０（２）；Ｇｌｕ、４．８（５）；Ｓｅｒ、１．６（２）；Ｈｉｓ、２．６（３）；Ｇｌｙ、１．１（１）；Ｔｈｒ、１．１（１）；Ａｒｇ、７．３（７）；Ｖａｌ、０．８（１）；Ｉｌｅ、０．９（１）；Ｌｅｕ、８．３（８）；Ｌｙｓ、１．１（１）；Ａｌａ、１．８（２）。
実施例ＶＩＩＩ
ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子の合成。
図１に示されるヌクレオチド配列および酵素制限部位を有するｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体化合物４（配列番号９）をコードしている合成遺伝子が設計された。必要なオリゴデオキシヌクレオチドは、シンハ等、ヌクレイック・アシド・リサーチ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、１２巻４５３９−４５５７頁（１９８４）のホスホルアミダイト法を使用しＤＮＡ合成機（ミリジェン／バイオサーチ）によって製造した。脱保護の後、粗オリゴヌクレオチドを分取１５％ポリアクリルアミドゲル上のゲル電気泳動によって精製した。オリゴヌクレオチドをＵＶにより位置決定し、ゲルから切取り、ウォーターズｃ１８セパック（商標）カートリッジで脱塩し、凍結乾燥した。
「ジーンアンプ」ＤＮＡ増幅キット（パーキン−エルマー・シータス）からのＴａｑポリメラーゼを含む試薬を使用し、パーキン−エルマー・シータス温度循環機上で、９４℃１分間、５０℃２分間、および７２℃３分間を２５サイクル実施して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）による増幅を実施した。
二つの重複するオリゴヌクレオチド、８８量体（２μｇ）、ＰＴＨ３、（配列番号３１）：
0004106082.tif 000111
およびアンチセンス９０量体（２μｇ）、ＰＴＨ４（配列番号３２）：
0004106082.tif 000112
が、ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子のための鋳型ＤＮＡ配列として製造された。二つのフランキングプライマー、ＰＴＨＰＣＲ１：
0004106082.tif 000113
およびＰＴＨＰＣＲ２：
0004106082.tif 000114
を利用して、遺伝子全体をＰＣＲによって増幅した。増幅されたＤＮＡ生成物を４％ヌシーヴ（商標）アガロースゲル上のゲル電気泳動により精製した。長さがおよそ１５０塩基の合成ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子を含むバンドをゲルから切取り、およそ２００ｎｇのＤＮＡを、エル−クイック（商標）ガラスゲルＤＮＡ抽出（シュライヒャー・アンド・シュエル、キーン、ＮＨ）により分離した。
実施例ＩＸ
ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）１類似体遺伝子の分子クローニング
実施例ＶＩのｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子をサブクローニングするために、増幅されたＤＮＡ２００ｎｇを分離し、制限酵素ＨｉｎＤＩＩＩおよびＳａｃＩＩで切断した。図２に示されるように、このＤＮＡを、予めＨｉｎｄＩＩＩおよびＳａｃＩＩで切断した２μｇのＴｒｐＬＥ１８Ｐｒｏｔ（Ｉｌｅ3，Ｐｒｏ5）プラスミドにライゲーションした。
ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子を１コピー含む得られたプラスミドＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）１を、次に、コンピテントなＥ．ｃｏｌｉＨＢ１０１細胞（クロンテク、パロアルト、ＣＡ）中に導入した。形質転換体をＰＣＲ分析に付して挿入を確認した。形質転換された細胞コロニーを選択し、水２００μｌ中で５分間煮沸し、２μｌを、挿入物に隣接する二つのプライマーと共にＰＣＲに付した。次にこのＰＣＲ生成物を１％アガロースゲル上で分析し、ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）遺伝子挿入物１コピーの存在を確認した。次いで、販売者のダイ・デオキシ・ターミネーター・シークエンシング・キットを用いる自動ＤＮＡシークエンサー（アプライド・バイオシステムズ・モデル３７３Ａ、フォスターシティー、ＣＡ）でＤＮＡ配列決定することにより、ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）１組み立て物を確認した。
実施例Ｘ
ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子のコピーを複数含むＴｒｐＬＥ１８ベクターの組み立て
唯一のＮｈｅＩおよびＸｂａＩ制限部位が、ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子配列の始点および終点付近に位置する。異なった配列を認識するが同一の一本鎖粘着端を生成するこれら二つの部位によって、ＴｒｐＬＥ１８ベクター内に、複数コピーのｈＰＴＨｒｐ（１−３４）遺伝子を組み立てることができる。
縦に繰り返されるｈＰＴＨｒｐ（１−３４）配列を組み立てる方法を、図３に概説する。別個の反応で、該遺伝子１コピーを含むプラスミドＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）１  ５μｇをＢａｍＨＩ＋ＮｈｅＩおよびＸｂａＩ＋ＢａｍＨＩで切断した。各々の消化物から、ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）類似体遺伝子を含むフラグメント約３００ｎｇを分離した。これら二つのフラグメントを混合し、ライゲーションしてＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）２プラスミドを形成させた。このプラスミドを使用してコンピテントなＥ．ｃｏｌｉ  ＨＢ１０１細胞を形質転換した。形質転換されたＰＣＲ生成物を１％アガロースゲル上でサイズ分けし、２コピーのｈＰＴＨｒｐ（１−３４）遺伝子挿入物の存在を決定した。次いで、該遺伝子２コピーを含むＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）２をＤＮＡ配列決定により確認した。二つのｈＰＴＨｒｐ（１−３４）遺伝子の正しい融合により、連結部のＮｈｅＩおよびＸｂａＩ部位が除かれる。これにより、該縦列遺伝子に隣接する残りのＸｂａＩおよびＮｈｅＩ部位が唯一のものとなる。
この工程を反復することにより、ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）遺伝子４コピーを含む最終的プラスミドＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４が、図４に示されるように組み立てられた。ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４の配列は、ＤＮＡ配列分析により、正しいものと判明した。
実施例ＸＩ
ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４の発現および精製
ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４の誘導
アンピシリン５０μｇ／ｍｌおよびトリプトファン１００μｇ／ｍｌを含有するＪ．Ｈ．ミラー、「エクスペリメンツ・イン・モレキュラー・ジェネティクス」、４３１頁（１９７２）（引用して本明細書の一部とする）のＬＢ培地５０ｍｌのスターター培養物を、ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４プラスミドを含む大腸菌細胞に接種し、Ａ550が約６となるまで激しく振盪しながら３７℃で一夜増殖させた。生産用のＬＢ培地２リットルを３７℃に予熱し、スターター培養物２０ｍｌを播種してＡ550が約０．０６となるようにした。次いでこの培養物を、Ａ550が０．６および０．８の間になるまで激しく振盪しながら増殖させ、この時点でアクリル酸インドール（ＩＡＡ）の１０ｍｇ／ｍｌ溶液２ｍｌを加えた。良好な通気を行ないつつ増殖を約１６時間継続し、最終Ａ550を約６（典型的には４および１０の間）とした。細胞を遠心により濃縮し、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ緩衝溶液（トリス緩衝液）５００ｍｌに再懸濁した。
過熱を避けるため最大能力の５０％で操作するヒート・システムズ−ウルトラソニックス・Ｉｎｃ．モデル２２０Ｆソニケーター（３／４”ホーンを装着）を用いて、懸濁液を超音波処理した。
誘導の程度を測定するため、全細胞をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析した。ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４組み立て物から誘導された遺伝子産物が、予想されたおよそ１７０００の分子量の主要なバンドとして観察された。これは細胞の総蛋白の１０％にも相当する。
融合蛋白の分離。
細胞溶解物を約３６００ｘｇで１５分間遠心してＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４融合蛋白をペレット化した。上清は廃棄した。このペレットをトリス緩衝液２００ｍｌに再懸濁した。（典型的には４０−８０Ａ550／ｍｌ）。
実施例ＸＩＩ
融合蛋白の処理およびホモ−ＳｅｒラクトンｈＰＴＨｒｐ（１−３４）ペプチドの精製
ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）多量体融合蛋白に隣接するメチオニン残基をＣＮＢｒによって切断すると、所望のホモ−ＳｅｒラクトンｈＰＴＨｒｐ（１−３４）ポリペプチドが開放され、これを下記のように精製した。
融合蛋白のＣＮＢｒ処理
ＴｒｐＬＥ１８ｈＰＴＨｒｐ（１−３４）４融合蛋白の洗浄されたペレットを、７０％蟻酸６０ｍｌ中で穏やかに攪拌することにより再懸濁した（約２０ｍｇ／ｍｌ総蛋白；典型的には、１０００Ａ550単位の細胞からの材料を３ｍｌに溶解する）。オクタノール数滴を加え、この溶液にＮ2を２０分間通気した後、ＣＮＢｒ５．５ｇを加えた。この反応を２５℃で６時間進行させ、次いで等容量の５０：５０  ＭｅＯＨ：Ｈ2Ｏを試料に混合し、この後ロータリーエバポレーターにより除去した。この工程を２ないし４回反復した後、蟻酸およびＣＮＢｒの大半を実質的に除去した。次に試料を蒸発乾固し、水２００ｍｌに再溶解し、保存のため凍結乾燥した。
ホモ−ＳｅｒラクトンｈＰＴＨｒｐ（１−３４）の精製
ＣＮＢｒ切断した上清を５０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ６．５）に対し、何回か取り替えて２４時間透析した。透析中、ｐＨは６．５に維持した。透析の後、沈澱を高速遠心により除去した。上清をゲルマン０．４５μフィルター装置を通して透明にした（アクロディスク４１８４）。
陽イオン交換クロマトグラフィー
最初の精製は、バイオ−ゲルＴＳＫ−ＳＰ−５ＰＷ  ＨＰＬＣカラム（２１．５ｘ１５０ｍｍ）上の陽イオン交換クロマトグラフィーにより達成した。流速８ｍｌ／分および高度精製ホモ−ＳｅｒラクトンｈＰＴＨｒｐ（１−３４）ペプチドの収量およそ１２ｍｇに対するクロマトグラフィー条件は以下の通りであった：
１．５０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4、ｐＨ６．５でカラムを平衡化。
２．透明にした上清１０ｍｌをロード（およそ１．５Ｌの培養ブロスまたは２．４ｇの含有物）。
３．ベースラインが安定化するまでカラムを５０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する５０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4（ｐＨ６．５）で洗浄。
４．カラムを９０ｍＭ  ＮａＣｌを含有する５０ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4ｐＨ６．５で溶出。約４５分間画分を集める。
５．ホモ−ＳｅｒラクトンｈＰＴＨｒｐ（１−３４）の含有に相当する９０ｍＭ  ＮａＣｌ画分をＣ１８  ＨＰＬＣにより分析し、後にプールし保存する。
逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー
逆相ポロスＲ／Ｈ４．６ｘ１００ｍｍカラム（パーセプティヴ・バイオシステムズ、ケンブリッジ、ＭＡ）を最終精製工程に使用した。クロマトグラフィー条件は以下の通りとした：
移動相Ａ：０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／水
Ｂ：０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／ＣＨ3ＣＮ
0004106082.tif 000115
ホモ−ＳｅｒラクトンｈＰＴＨｒｐ（１−３４）、化合物４の保持時間はおよそ２．９４３分であった。精製されたペプチドは、質量分析による測定によると９８％純粋であった。
実施例ＸＩＩＩ
本発明にかかる化合物を、一般的にガネス−ヘイおよびホック、Ｍｅｔａｂ．Ｂｏｎｅ  Ｄｉｓ．、５：１７７  １８１頁（１９８４）の方法に従って、卵巣切除ラットの骨量に及ぼす効果について評価した。
雌のスプラーグ−ドーレイラットの成体を順化させ、体重により群に分け（ｎ＝９、１０または１２）、両側卵巣切除（ＯＶＸ）または擬似手術に付した。投薬は手術の１７日後に開始し、２０日間続けた。被験化合物は、２％ラット血清／食塩水媒質で１日に１回皮下投与した。
２０日間の投薬の後、ラットを屠殺し、右大腿骨を摘出した。この大腿骨を半分に切り、遠位側半分の大腿骨（ＤＨＦ）を、骨梁に孔を空けることにより、さらに海綿骨（ＴＢ）および皮質骨（ＣＢ）に分割した。カルシウムを抽出しカルセットカルシウム分析機により測定し、平均骨Ｃａとしてｍｇ／ＤＨＦ／１００ｇ（体重）で表わした。
ＯＶＸおよび擬似群を比較するために、二試料ｔ試験を使用した。ＯＶＸ群の比較に一元（one-way）配置ＡＮＯＶＡを使用し、次に各処置群と媒質とを比較するためにフィッシャーのＬＳＤ多重比較を用いた。
卵巣切除は、主として海綿骨から、実質的な合計の骨喪失を誘発した。骨の総カルシウムは擬似操作対照より４７ないし５４％低かった。
８０μｇ／ｋｇ／日のｂＰＴＨ（１−３４）およびｈＰＴＨｒｐ（１−３４）は、それぞれ５３ないし９５％および１８ないし４０％の範囲で、処置ＯＶＸラットの総骨カルシウムを統計学上有意に増大させた。しかしながら皮質骨のカルシウムには有意な増大はなかった。
本発明にかかる化合物は、８０μｇ／ｋｇ／日で投与された場合、骨の総カルシウムを６６ないし１３８％、海綿骨カルシウムを８７ないし１２８％増大させた。皮質骨カルシウム、海綿骨の厚さ、および骨容量もまた非処置ＯＶＸ対照に比べ有意に増大した。
このアッセイにおいて、以下の化合物が試験された：
0004106082.tif 000116
同様の研究において、卵巣切除ラットに４０ug／kg／日を５、１０および２０日間投与して以下の結果となった：
0004106082.tif 000117
実施例ＸＩＶ
毒性
上の実施例ＸＩにおいて、本発明にかかる化合物に毒性効果は観察されなかった。
配列表
(1)一般情報：
(i)出願人：
(A)名称：シンテックス（ユー・エス・エイ）・インコーポレイテッド
(B)街：ヒルビュー・アベニュー３４０１番
(C)市：パロ・アルト
(D)州：カリフォルニア州
(E)国：アメリカ合衆国
(F)郵便番号（ＺＩＰ）：９４３０３
(G)電話：４１５−８５２−１３５６
(H)テレファクシミリ：４１５−４９６−３５２９
(ii)発明の名称：副甲状腺ホルモンおよび副甲状腺ホルモン関連ペプチドの類似体：合成および骨粗鬆症の処置のための用途
(iii)配列の数：８４
(iv)コンピューター読み取り形式：
(A)媒体の型：フロッピーディスク
(B)コンピューター：ＩＢＭ  ＰＣ  コンパチブル
(C)オペレーティングシステム：ＰＣ−ＤＯＳ／ＭＳ−ＤＯＳ
(D)ソフトウェア：パテントイン・リリース#1.0、バージョン#1.25(EPO)
(v)現行の出願データ：
出願番号：
(2)配列番号１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１：
0004106082.tif 000118
(2)配列番号２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号２：
0004106082.tif 000119
(2)配列番号３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号３：
0004106082.tif 000120
(2)配列番号４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４：
0004106082.tif 000121
(2)配列番号５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５：
0004106082.tif 000122
(2)配列番号６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６：
0004106082.tif 000123
(2)配列番号７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７：
0004106082.tif 000124
(2)配列番号８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ３４＝ホモセリン」
(xi)配列の記載：配列番号８：
0004106082.tif 000125
(2)配列番号９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ３４＝ホモセリンラクトン」
(xi)配列の記載：配列番号９：
0004106082.tif 000126
(2)配列番号１０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(xi)配列の記載：配列番号１０：
0004106082.tif 000127
(2)配列番号１１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１１：
0004106082.tif 000128
(2)配列番号１２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１２：
0004106082.tif 000129
(2)配列番号１３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１３：
0004106082.tif 000130
(2)配列番号１４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１４：
0004106082.tif 000131
(2)配列番号１５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１５：
0004106082.tif 000132
(2)配列番号１６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１６：
0004106082.tif 000133
(2)配列番号１７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号１７：
0004106082.tif 000134
(2)配列番号１８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２９
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２９＝リジン−（ＯＣＣＨ2（ＯＣＨ2ＣＨ2）2ＯＣＨ3）」
(xi)配列の記載：配列番号１８：
0004106082.tif 000135
(2)配列番号１９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２９
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２９＝リジン−（ＯＣＣＨ2（ＯＣＨ2ＣＨ2）110ＯＣＨ3」
(xi)配列の記載：配列番号１９：
0004106082.tif 000136
(2)配列番号２０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号２０：
0004106082.tif 000137
(2)配列番号２１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号２１：
0004106082.tif 000138
(2)配列番号２２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号２２：
0004106082.tif 000139
(2)配列番号２３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ８＝ノルロイシン」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１８＝ノルロイシン」
(xi)配列の記載：配列番号２３：
0004106082.tif 000140
(2)配列番号２４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ８＝ノルロイシン」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１８＝ノルロイシン」
(xi)配列の記載：配列番号２４：
0004106082.tif 000141
(2)配列番号２５に関する情報
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号２５：
0004106082.tif 000142
(2)配列番号２６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：１０アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ８＝グルタミン酸またはアルギニン」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：領域
(B)位置：１．．１０
(D)その他の情報：／注＝「配列２６は配列５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、および１４の２２ないし３１位にはめ込まれている」
(xi)配列の記載：配列番号２６：
0004106082.tif 000143
(2)配列番号２７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：１０アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ８＝グルタミン酸、リジン、またはリジン−（ＯＣＣＨ２ＰＥＧＸ）」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：領域
(B)位置：１．．１０
(D)その他の情報：／注＝「配列２７は配列１５、１６、１７、１８、および１９の２２ないし３１位にはめ込まれている」
(xi)配列の記載：配列番号２７：
0004106082.tif 000144
(2)配列番号２８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：１０アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：ペプチド
(B)位置：１．．１０
(D)その他の情報：／注＝「配列２８は配列２０の２２ないし３１位にはめ込まれている」
(xi)配列の記載：配列番号２８：
0004106082.tif 000145
(2)配列番号２９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：１０アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：ペプチド
(B)位置：１．．１０
(D)その他の情報：／注＝「配列２９は配列２１の２２ないし３１位にはめ込まれている」
(xi)配列の記載：配列番号２９：
0004106082.tif 000146
(2)配列番号３０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：１０アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：ペプチド
(B)位置：１．．１０
(D)その他の情報：／注＝「配列３０は配列２２の２２ないし３１位にはめ込まれている」
(xi)配列の記載：配列番号３０：
0004106082.tif 000147
(2)配列番号３１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：８８塩基対
(B)型：核酸
(C)鎖：一本鎖
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ｃＤＮＡ
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(iv)アンチセンス：Ｎｏ
(xi)配列の記載：配列番号３１：
0004106082.tif 000148
(2)配列番号３２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：９０塩基対
(B)型：核酸
(C)鎖：一本鎖
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ｃＤＮＡ
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(iv)アンチセンス：Ｙｅｓ
(xi)配列の記載：配列番号３２：
0004106082.tif 000149
(2)配列番号３３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：２３塩基対
(B)型：核酸
(C)鎖：一本鎖
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ｃＤＮＡ
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(iv)アンチセンス：Ｎｏ
(xi)配列の記載：配列番号３３：
0004106082.tif 000150
(2)配列番号３４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：２４塩基対
(B)型：核酸
(C)鎖：一本鎖
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ｃＤＮＡ
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(iv)アンチセンス：有り
(xi)配列の記載：配列番号３４：
(2)配列番号３５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号３５：
0004106082.tif 000151
(2)配列番号３６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａはホモセリンである」
(xi)配列の記載：配列番号３６：
0004106082.tif 000152
(2)配列番号３７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａはホモセリンである」
(xi)配列の記載：配列番号３７：
0004106082.tif 000153
(2)配列番号３８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号３８：
0004106082.tif 000154
(2)配列番号３９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号３９：
0004106082.tif 000155
(2)配列番号４０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４０：
0004106082.tif 000156
(2)配列番号４１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４１：
0004106082.tif 000157
(2)配列番号４２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３８アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３８
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａはホモセリンである」
(xi)配列の記載：配列番号４２：
0004106082.tif 000158
(2)配列番号４３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４３：
0004106082.tif 000159
(2)配列番号４４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４４：
0004106082.tif 000160
(2)配列番号４５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４５：
0004106082.tif 000161
(2)配列番号４６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１３
(D)その他の情報：／注＝「ＸａａはＣｙｓ（ＣＨ−２ＣＯＮＨ（ＣＨ−２）−２ＮＨ（ビオチニル））である」
(xi)配列の記載：配列番号４６：
0004106082.tif 000162
(2)配列番号４７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１３
(D)その他の情報：／注＝「ＸａａはＬｙｓ（７−ジメチルアミノ−２−オキソ−２Ｈ−１−ベンキソピラン−４−アセチル）である」
(xi)配列の記載：配列番号４７：
0004106082.tif 000163
(2)配列番号４８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号４８：
0004106082.tif 000164
(2)配列番号４９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３３アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ４はＧｌｕ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１０
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１０はＡｓｐ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１７
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１７はＡｓｐ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２２
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２２はＧｌｕ（ＯＣＨ３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２５
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２５はＧｌｕ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２９
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２９はＧｌｕ（ＯＣＨ−３）である」
(xi)配列の記載：配列番号４９：
0004106082.tif 000165
(2)配列番号５０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３３アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ４はＧｌｕ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１０
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１０はＡｓｐ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１７
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１７はＡｓｐ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２２
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２２はＧｌｕ（ＯＣＨ３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２５
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２５はＧｌｕ（ＯＣＨ−３）である」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：２９
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ２９はＧｌｕ（ＯＣＨ−３）である」
(xi)配列の記載：配列番号５０：
0004106082.tif 000166
(2)配列番号５１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ３４はホモセリンである」
(xi)配列の記載：配列番号５１：
0004106082.tif 000167
(2)配列番号５２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５２：
0004106082.tif 000168
(2)配列番号５３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５３：
0004106082.tif 000169
(2)配列番号５４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５４：
0004106082.tif 000170
(2)配列番号５５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３３アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５５：
0004106082.tif 000171
(2)配列番号５６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３２アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５６：
0004106082.tif 000172
(2)配列番号５７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５７：
0004106082.tif 000173
(2)配列番号５８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：４２アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５８：
0004106082.tif 000174
(2)配列番号５９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：４２アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号５９：
0004106082.tif 000175
(2)配列番号６０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：４２アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１３
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａ１３はＬｙｓ（ジヒドロシンナモイル）である」
(xi)配列の記載：配列番号６０：
0004106082.tif 000176
(2)配列番号６１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：８
(D)その他の情報：／注＝「Ｌｅｕ８はノルロイシンである」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１８
(D)その他の情報：／注＝「Ｌｅｕ１８はノルロイシンである」
(xi)配列の記載：配列番号６１：
0004106082.tif 000177
(2)配列番号６２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６２：
0004106082.tif 000178
(2)配列番号６３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３３アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３３
(D)その他の情報：／注＝「ＸａａはＴｈｒ１，４−ジアミノブチリルラクタムである」
(xi)配列の記載：配列番号６３：
0004106082.tif 000179
(2)配列番号６４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６４：
0004106082.tif 000180
(2)配列番号６５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６５：
0004106082.tif 000181
(2)配列番号６６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６６：
0004106082.tif 000182
(2)配列番号６７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６７：
0004106082.tif 000183
(2)配列番号６８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号６８：
0004106082.tif 000184
(2)配列番号６９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａはホモセリンである」
(xi)配列の記載：配列番号６９：
0004106082.tif 000185
(2)配列番号７０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａはホモセリンである」
(xi)配列の記載：配列番号７０：
0004106082.tif 000186
(2)配列番号７１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：両形態
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７１：
0004106082.tif 000187
(2)配列番号７２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７２：
0004106082.tif 000188
(2)配列番号７３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３６アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３６
(D)その他の情報：／注＝「ＸａａはＡｌａ３−（２−ナフチル）−Ｌ−アラニンである」
(xi)配列の記載：配列番号７３：
0004106082.tif 000189
(2)配列番号７４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７４：
0004106082.tif 000190
(2)配列番号７５に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３８アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７５：
0004106082.tif 000191
(2)配列番号７６に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７６：
0004106082.tif 000192
(2)配列番号７７に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３６アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７７：
0004106082.tif 000193
(2)配列番号７８に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(xi)配列の記載：配列番号７８：
0004106082.tif 000194
(2)配列番号７９に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３４アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：ペプチド
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：Ｎ末端
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：８
(D)その他の情報：／注＝「Ｌｅｕ８はノルロイシンである」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：１８
(D)その他の情報：／注＝「Ｌｅｕ１８はノルロイシンである」
(ix)特徴：
(A)名称／キイ：修飾部位
(B)位置：３４
(D)その他の情報：／注＝「Ｘａａはホモセリンラクトンである」
(xi)配列の記載：配列番号７９：
0004106082.tif 000195
(2)配列番号８０に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３２アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(xi)配列の記載：配列番号８０：
0004106082.tif 000196
(2)配列番号８１に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：２８アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(xi)配列の記載：配列番号８１：
0004106082.tif 000197
(2)配列番号８２に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：２７アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(xi)配列の記載：配列番号８２：
0004106082.tif 000198
(2)配列番号８３に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：４１アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(xi)配列の記載：配列番号８３：
0004106082.tif 000199
(2)配列番号８４に関する情報：
(i)配列の特徴：
(A)長さ：３５アミノ酸
(B)型：アミノ酸
(D)トポロジー：直鎖状
(ii)配列の種類：タンパク質
(iii)ハイポセティカル：Ｎｏ
(v)フラグメント型：中間部
(xi)配列の記載：配列番号８４：
0004106082.tif 000200
【図１】
0004106082.tif 000202
【図２】
0004106082.tif 000203
【図３】
0004106082.tif 000204
【図４】
0004106082.tif 000205