【手続補正書】
【提出日】平成20年8月29日(2008.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科（Compositae）のキンセンカ属植物（Calendula）のトウキンセンカ（Calendula
officinalis L.）の頭花から極性溶媒により抽出したエッセンスを含む、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
【請求項２】
キク科（Compositae）のキンセンカ属植物（Calendula）のトウキンセンカ（Calendula
officinalis L.）の頭花から極性溶媒により抽出したエッセンスを含む、マクロファージ由来のデンドライト伸長促進因子の抑制剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
他方、メラノサイトによって産生されるメラニン顆粒の異常によって生じる色素異常の解決は、美しい白い肌を具現化するための人類永年の解決課題であり、この為、種々の努力が為され、多くの成果が得られてきており、そのメカニズムについても様々なものが得られているが、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制に着目したものはなく、この様なメカニズムにより、光の関与する色素異常であって、炎症を伴う色素異常症の予防や改善などの対応にキク科（Compositae）のキンセンカ属植物（Calendula）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花から極性溶媒により抽出したエッセンスが有用であることは全く知られていない。又、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常に対
して、従来良く知られているアスコルビン酸などのメラニン生成阻害剤の効果が今ひとつであり、この様な色素異常の予防或いは改善手段の開発が望まれていた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
更に、キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）のエキスは、精油、苦味質、樹脂、カレンデュリンと称するゴム質を含み、芳香性苦味薬として用いられ、外傷にも利用される。又、頭花の乾燥したものが駆風、興奮剤として使われ、健胃、駆虫薬などの民間薬にされた。若芽や葉は、食用になり、飼料にも使われた。しかしながら、このエッセンスが、メラノサイトのデンドライトの伸長を抑制する作用を有していることは全く知られておらず、従って、このものを含有する化粧料などの皮膚外用剤がメラノサイトのデンドライトの伸長を抑制し、以て、色素異常、取り分け、光が関与し、炎症を伴って起こる色素異常の予防と改善に有用であることは全く知られていないことであった。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常に対して有効な予防或いは改善手段として好適なメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤を提供することを課題とする。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常に対して有効な予防或いは改善手段を求めて、鋭意研究を重ねた結果、キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）のエッセンスに優れたメラノサイトのデンドライトの伸長抑制作用を見出し、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は次に示す技術に関するものである。
（１）  キク科（Compositae）のキンセンカ属植物（Calendula）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花から極性溶媒により抽出したエッセンスを含む、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
（２）キク科（Compositae）のキンセンカ属植物（Calendula）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花から極性溶媒により抽出したエッセンスを含む、マクロファージ由来のデンドライト伸長促進因子の抑制剤。
以下、本発明について、実施の形態を中心に詳細に説明を加える。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤
本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤は、キク科（Compositae）のキンセンカ属植物（Calendula）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花から極性溶媒により抽出したエッセンスを含む。ここで、エッセンスとは、かかる植物の頭花の極性有機溶媒による抽出物、抽出物の溶媒を除去した、溶媒除去物、乃至はその溶媒除去物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出で精製した精製分画物などの総称を意味する。この様な極性溶媒としては、例えば、水、エタノール、メタノール、１，３−ブタンジオール、プロピレングリコールなどのアルコール類、酢酸エチルや蟻酸メチルなどのエステル類、アセトンやメチルエチルケトンなどのケトン類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル類から選ばれる１種乃至は２種以上が好ましく例示できる。これらの内、特に好ましいものは、水乃至はアルコールである。この様な抽出物を作成するには、植物体乃至はその加工物に１〜１０倍量の溶媒を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。しかる後に、不溶物を濾過などで除去し、必要に応じて減圧濃縮や凍結乾燥により溶媒除去することが出来る。キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花の場合、各部分を５０％エタノール抽出後、濾過し、減圧濃縮する、そして場合によって凍結乾燥するのがエッセンスとして特に好ましい。それは、頭花の部分がメラノサイトのデンドライドの伸長抑制成分が多く含まれており、特に好ましいからである。かくして得られた、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤である、キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花のエッセンスは、メラノサイトがデンドライトを伸長するのを抑制する作用に優れ、以て、メラノサイトより皮膚組織へメラニン顆粒が移動するのを抑制し、この様なメラニン顆粒の移動をメカニズムとする、光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用を有する。この様な作用は、マクロファージが放出するメラノサイトのデンドライトの伸長因子がメラノサイトに働きかけるのを阻害することを機序としていると考えられる。勿論、色素異常が、メラニン顆粒の産生にあたってこの様なルートをとることから、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤は、光照射による炎症を伴った黒化やソバカス以外の色素異常も抑制するが、この様な色素異常は他の手段でも予防や改善が可能であるため、本発明の効果の特徴は前記の光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用と言える。又、この様なエッセンスにはチロシナーゼ活性阻害やメラニン産生阻害作用を有する物質も含まれているため、この様な作用を目的として美白用の化粧料に含有させることも出来る。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
（２）本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤の皮膚外用剤への応用
本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤は、マクロファージが放出するメラノサイトのデンドライトの伸長因子がメラノサイトに働きかけるのを阻害することを機序
としているので、メラノサイトとマクロファージとが協調的に働く生命現象を抑制することが出来、この様なメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤を、メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象用の皮膚外用剤として用いると好ましい。ここで、本発明の皮膚外用剤は、メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用であって、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤を含有することを特徴とする。ここで、本発明で言う皮膚外用剤とは、皮膚に外用で適用される組成物の総称であって、貼付剤を含む皮膚外用医薬や洗浄剤を含む化粧料が好ましく例示でき、これらの内では、化粧料であることが特に好ましい。これは、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤の安全性が高く、作用が穏やかであるためである。メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象としては、特に好ましくは前述の光照射による炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常がまず一番重要な課題として挙げられるが、その他炎症反応なども含まれる。本発明に係るメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤に於ける、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤の好ましい含有量は、皮膚外用剤全量に対して、０．００１重量％〜１０重量％であり、更に好ましくは０．０１重量％〜５重量％である。これは、少なすぎるとデンドライトの伸長抑制作用が発揮されない場合があり、多すぎても効果が頭打ちになり他の処方成分の自由度を損なうことがあるからである。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明に係るメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤は、抗炎症剤として知られる、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、インドメタシン、ジクロフェナックナトリウム等を配合させれば相乗効果により日光による炎症を伴う黒化症に有意義である。また、上記必須成分以外に、通常化粧料や皮膚外用医薬で使用される任意の成分を含有することが出来る。かかる任意成分としては、例えば、スクワラン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、ホホバ油、カルナウバワックス，オレイン酸オクチルドデシル等のエステル類、オリーブ油、牛脂、椰子油等のトリグリセライド類、ステアリン酸、オレイン酸、リチノレイン酸等の脂肪酸、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール、スルホコハク酸エステルやポリオキシエチレンアルキル硫酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤類、アルキルベタイン塩等の両性界面活性剤類、ジアルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、これらのポリオキシエチレン付加物、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤類、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブタンジオール等の多価アルコール類、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色剤、防腐剤、粉体等を含有することができる。勿論、従来のメラニン産生抑制剤である、アスコルビン酸類やアルブチンなどのハイドロキノン類を含有することも相乗的な効果を発揮する場合があり、有利である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
＜実施例１＞
キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花のエッセンスは、頭花５００ｇに５ｌの５０％エタノールを加え、攪拌しながら一週間、室温で抽
出し、濾過して不溶物を取り除き、更に減圧濃縮をして、その後、凍結乾燥した。そして、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるスイカズラのエッセンス１を得た。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
＜実施例２＞
キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花のエッセンスは、頭花５００ｇに５ｌの５０％エタノールを加え、攪拌しながら２時間、９０℃で加熱し、室温まで冷却した後、濾過して不溶物を取り除き、更に減圧濃縮をして、その後、凍結乾燥した。そして、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス２を得た。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜実施例３＞
キク科（Compositae）のトウキンセンカ（Calendula officinalis L.）の頭花のエッセンスは、頭花５００ｇに５ｌの５０％メタノールを加え、攪拌しながら２時間、９０℃で加熱し、室温まで冷却した後、濾過して不溶物を取り除き、更に減圧濃縮をして、その後、凍結乾燥した。そして、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス３を得た。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
＜実施例４＞
上記実施例１、２、３のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤を用いて、デンドライト伸長抑制作用を調べた。即ち、予め常法に従い、マウス腹腔より、マクロファージを回収し、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地で希釈し、２×１０6セル／ｍｌの濃度のマクロファージ液を調製しておいた。このものを９０μｌずつ３５ｍｍシャーレに分注し、これに０．０５ｍＷ／ｃｍ2で２０分間の紫外線照射を行った。これらにメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス１、２及び３を乾燥重量％で０．００５％となるようＤＭＳＯに溶かして加え３７℃で１晩培養した。又、他方マウスの尾を切り、尾の表皮を細かく刻みシャーレに入れ０．５％トリプシンにて３７℃で一晩処理し、ピンセットを用いて、表皮と真皮に分離し、表皮のみを回収し、０．５％トリプシンにて３７℃で２０分間処理し、フィルター濾過でメラノサイトのみを濾液として集めた。このメラノサイトを含む濾液を、イーグルの最少培地に１０％ＦＢＳ、１０-4ＭのＩＢＭＸ及び１０ｎｇ／ｍｌのＴＰＡを加えた培地で、３７℃、４８時間培養した。これを同培地で懸濁させ、９６穴ウェルに１０００セル／ウェルずつ分注し、３７℃で一晩培
養した。メラノサイトの培地を捨て、ＰＢＳで３回洗浄した後、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地３５μｌに置換した。これに前記検体を含むマクロファージの培養上清３５μｌずつ添加し、３７℃で二晩培養し、光学顕微鏡下写真撮影を行い、この写真よりデンドライトの長さを測定した。結果を表１に示す。これより、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス１、２及び３はデンドライト伸長の抑制作用に優れることが分かる。
（検体）
１）ＵＶ照射＋メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス１のＤＭＳＯ溶液（０．００５％）
２）ＵＶ照射＋メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス２のＤＭＳＯ溶液（０．００５％）
３）ＵＶ照射＋メラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤であるトウキンセンカのエッセンス３のＤＭＳＯ溶液（０．００５％）
４）ＵＶ照射のみ（ポジティブコントロール）
５）ＵＶ非照射のみ（ネガティブコントロール）
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
＜応用例１＞
以下に示す処方で化粧水を作成した。即ち、処方成分を室温で攪拌可溶化して化粧水を得た。この化粧水について、シミ、そばかすに悩むパネラー1群３名を用いて、１ヶ月間、朝晩１日２回使用してもらいそのシミ、そばかすの予防及び改善効果を評価してもらった。評価基準は、評点２：著しい改善、評点１：明らかな改善、評点０．５：わずかな改善、評点０：改善なしの基準である。平均評点は０．９１であった。本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制効果のあるトウキンセンカのエッセンス１を含有する化粧水は、シミ、そばかすの改善に効果のあることが認められた。
実施例１のトウキンセンカのエッセンス１      １．０  重量部
１，３−ブタンジオール                      ５．０  重量部
グリセリン                                  ３．０  重量部
クエン酸ナトリウム                          ０．１  重量部
メチルパラベン                              ０．２  重量部
エタノール                                  ８      重量部
水                                        ８２．７  重量部
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
＜応用例２＞
以下に示す処方で化粧水を作成した。即ち、処方成分を室温で攪拌可溶化して化粧水を得た。この化粧水について、シミ、そばかすに悩むパネラー１群３名を用いて、１ヶ月間、朝晩１日２回使用してもらいそのシミ、そばかすの予防及び改善効果を評価してもらった。評価基準は、評点２：著しい改善、評点１：明らかな改善、評点０．５：わずかな改善、評点０：改善なしの基準である。平均評点は０．８６であった。本発明のメラノサイ
トのデンドライドの伸長抑制効果のあるトウキンセンカのエッセンス２を含有する化粧水は、シミ、そばかすの改善に効果のあることが認められた。
実施例２のトウキンセンカのエッセンス２      １      重量部
１，３−ブタンジオール                      ５      重量部
グリセリン                                  ３      重量部
クエン酸ナトリウム                          ０．１  重量部
メチルパラベン                              ０．２  重量部
エタノール                                  ８      重量部
水                                        ８２．７  重量部
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
＜応用例３＞
下記に示す処方に従って、皮膚外用医薬組成物を作成した。即ち、処方成分を攪拌分散して、皮膚外用剤を得た。このものは光による炎症を伴った、光による皮膚の黒化現象或いはソバカスに対して著効を示した。
実施例３のトウキンセンカのエッセンス３      ０．５  重量部
プレドニゾロン                              １      重量部
ワセリン                                  ８５      重量部
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
＜応用例４＞
以下に示す処方に従ってクリームを作製した。即ち、イ、ロ、ハをそれぞれ８０℃に加熱溶解して、イにロを徐々に加え、更にハを加え乳化した後、ホモミキサーにより乳化粒子を均一化し、冷却してクリームを得た。このクリームは、炎症を伴うそばかす等の予防改善に優れた効果があった。
イ）
スクワラン                                        １０      重量部
セタノール                                          ３      重量部
ソルビタンセスキステアレート                        ２      重量部
ポリオキシエチレン（２０）ベヘニルエーテル          ２      重量部
ビタミンＡ酸                                        １      重量部
ロ）
１，３−ブタンジオール                              ５      重量部
実施例１のトウキンセンカのエッセンス１              １      重量部
カルボキシビニルポリマー                            ０．３  重量部
水                                                ４０      重量部
ハ）
水                                                ３７．３  重量部
水酸化カリウム                                      ０．２  重量部
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２０】
＜応用例５＞
下記に示す処方に従って、皮膚外用医薬組成物を作成した。即ち、処方成分を攪拌分散して、皮膚外用剤を得た。このものは光による炎症を伴った、光による皮膚の黒化現象或いはソバカスに対して著効を示した。
実施例２のトウキンセンカのエッセンス２      ０．５  重量部
デキサメタゾン                              １      重量部
ワセリン                                  ８５      重量部
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
【発明の効果】
本発明によれば、炎症を伴った色素異常やソバカスなどの色素異常に対して有効なメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤を提供することができる。