【手続補正書】
【提出日】平成20年7月11日(2008.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】モクセイ科（Oleaceae）のレンギョウ属植物（Forsythia）のエッセンスからなる、メラノサイトの伸長抑制剤。
【請求項２】レンギョウ属植物（Forsythia）がレンギョウ（Forsythia suspense Thunb.vahl)であることを特徴とする、請求項１に記載のメラノサイトの伸長抑制剤。
【請求項３】エッセンスが果実の極性溶媒による抽出物であることを特徴とする、請求項１又は２に記載のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤。
【請求項４】デンドライトの伸長抑制が、マクロファージ由来のデンドライト伸長促進因子の抑制作用に起因することを特徴とする、請求項１〜３の何れか一項に記載のメラノサイトの伸長抑制剤。
【請求項５】請求項１〜４の何れか一項に記載のメラノサイトの伸長抑制剤を含有することを特徴とする、メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
【請求項６】化粧料であることを特徴とする、請求項５に記載のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
【請求項７】メラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象が、光による炎症を伴った、皮膚の黒化現象或いはソバカスである、請求項５又は６に記載のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤。
【請求項８】モクセイ科（Oleaceae）のレンギョウ（Forsythia suspensa_Thunb.vahl)のエッセンスを含有する、美白用の化粧料。
【請求項９】モクセイ科（Oleaceae）のレンギョウ（Forsythia suspensa_Thunb.vahl)のエッセンスが果実の極性溶剤抽出物であることを特徴とする、請求項８に記載の美白用の化粧料。
【請求項１０】美白作用がメラノサイトに於けるデンドライトの伸長抑制作用をメカニズムとすることを特徴とする、請求項８又は９に記載の美白用の化粧料。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
【発明の実施の形態】
（１）本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤は、モクセイ科（Oleaceae）のレンギョウ属植物（Forsythia）のエッセンスからなる。レンギョウ属植物（Forsythia）には、レンギョウ（Forsythia suspense Thunb. vahl)、シナレンギョウ（Forsythia viridissima Lindly）、チョウセンレンギョウ(Forsythia korena Nakai)、ヤマトレンギョウ(Forsythia japonica Makino)、ヒロハレンギョウ(Forsythia ovata Nakai)等があり、本発明のデンドライトの伸長を抑制する物質は何れにも含まれている。従って、本発明のエッセンスとしてはこれらの植物の何れもが使用できる。しかし、中でもメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤のエキスを抽出するのには、レンギョウ（Forsythia suspense Thunb.)を用いるのが好ましい。これは、メラノサイトのデンドライトの伸長抑制物質が多く含まれているからである。ここで、エッセンスとは、かかる植物の植物体それ自身、植物体を乾燥或いは細切、粉砕など加工した加工物、植物体乃至はその加工物を溶媒で抽出した抽出物、抽出物の溶媒を除去した、溶媒除去物、抽出物乃至はその溶媒除去物をカラムクロマトグラフィーや液液抽出で精製した精製分画物などの総称を意味する。尚、エッセンスは、植物体の全草から抽出することができる。これらの内、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤としては、レンギョウ属植物（Forsythia）の場合は、果実の溶媒抽出物乃至はその溶媒除去物が好ましく例示でき、かかる溶媒としては、極性溶媒が特に好ましく例示できる。この様な極性溶媒としては、例えば、水、エタノール、メタノール、１，３−ブタンジオール、プロピレングリコールなどのアルコール類、酢酸エチルや蟻酸メチルなどのエステル類、アセトンやメチルエチルケトンなどのケトン類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトニトリル等のニトリル類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル類から選ばれる１種乃至は２種以上が好ましく例示できる。これらの内、特に好ましいものは、水乃至はアルコールである。この様な抽出物を作成するには、植物体乃至はその加工物に１〜１０倍量の溶媒を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。しかる後に、不溶物を濾過などで除去し、必要に応じて減圧濃縮や凍結乾燥により溶媒除去することが出来る。モクセイ科（Oleaceae）のレンギョウ（Forsythia suspensa Thunb. vahl)の果実の場合、果実部分を５０％エタノール抽出後、濾過し、減圧濃縮する、そして場合によって凍結乾燥するのがエッセンスとして特に好ましい。それは、果実の部分がメラノサイトのデンドライドの伸長抑制成分が多く含まれており、特に好ましいからである。かくして得られた、本発明のメラノサイトのデンドライトの伸長抑制剤である、モクセイ科（Oleaceae）のレンギョウ（Forsythia suspense Thunb. vahl)の果実のエッセンスは、メラノサイトがデンドライトを伸長するのを抑制する作用に優れ、以て、メラノサイトより皮膚組織へメラニン顆粒が移動するのを抑制し、この様なメラニン顆粒の移動をメカニズムとする、光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用を有する。この様な作用は、マクロファージが放出するメ���ノサイトのデンドライトの伸長因子がメラノサイトに働きかけるのを阻害することを機序としていると考えられる。勿論、色素異常が、メラニン顆粒の産生にあたってこの様なルートをとることから、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤は、光照射による炎症を伴った黒化やソバカス以外の色素異常も抑制するが、この様な色素異常は他の手段でも予防や改善が可能であるため、本発明の効果の特徴は前記の光照射時に生じる、炎症を伴った黒化やソバカスなどの色素異常を予防或いは改善する作用と言える。又、この様なエッセンスにはチロシナーゼ活性阻害やメラニン産生阻害作用を有する物質も含まれているため、この様な作用を目的として美白用の化粧料に含有させることも出来る。この様な作用は、前記本発明のデンドライト伸長抑制作用と相乗的或いは相加的に働くため、これらエッセンスを化粧料に含有させて、美白用の化粧料とすることも本発明の技術的範囲に属する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明のメラノサイトとマクロファージが関与する皮膚現象対応用の皮膚外用剤は、抗炎症剤として知られる、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、インドメタシン、ジクロフェナックナトリウム等を配合させれば相乗効果により日光による炎症を伴う黒化症に有意義である。また、上記必須成分以外に、通常化粧料や皮膚外用医薬で使用される任意の成分を含有することが出来る。かかる任意成分としては、例えば、スクワラン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、ホホバ油、カルナウバワックス，オレイン酸オクチルドデシル等のエステル類、オリーブ油、牛脂、椰子油等のトリグリセライド類、ステアリン酸、オレイン酸、リシノレイン酸等の脂肪酸、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール、スルホコハク酸エステルやポリオキシエチレンアルキル硫酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤類、アルキルベタイン塩等の両性界面活性剤類、ジアルキルアンモニウム塩等のカチオン界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセライド、これらのポリオキシエチレン付加物、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤類、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブタンジオール等の多価アルコール類、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色剤、防腐剤、粉体等を含有することができる。勿論、従来のメラニン産生抑制剤である、アスコルビン酸類やアルブチンなどのハイドロキノン類を含有することも相乗的な効果を発揮する場合があり、有利である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
＜実施例３＞上記実施例１、２のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤を用いて、デンドライト伸長抑制作用を調べた。即ち、予め常法に従い、マウス腹腔より、マクロファージを回収し、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地で希釈し、２×１０6セル／ｍｌの濃度のマクロファージ液を調製しておいた。このものを９０μｌずつ３５ｍｍシャーレに分注し、これに０．０５ｍＷ／ｃｍ2で２０分間の紫外線照射を行った。これらのメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるレンギョウのエッセンス１及び２を乾燥重量％で０．００５％となるようＤＭＳＯに溶かして加え３７℃で１晩培養した。又、他方マウスの尾を切り、尾の表皮を細かく刻みシャーレに入れ０．５％トリプシンにて３７℃で一晩処理し、ピンセットを用いて、表皮と真皮に分離し、表皮のみを回収し、０．５％トリプシンにて３７℃で２０分間処理し、フィルター濾過でメラノサイトのみを濾液として集めた。このメラノサイトを含む濾液を、イーグルの最少培地に１０％ＦＢＳ、１０-4ＭのＩＢＭＸ及び１０ｎｇ／ｍｌのＴＰＡを加えた培地で、３７℃、４８時間培養した。これを同培地で懸濁させ、９６穴ウェルに１０００セル／ウェルずつ分注し、３７℃で一晩培養した。メラノサイトの培地を捨て、ＰＢＳで３回洗浄した後、１０％ＦＢＳ加イーグルの最少培地３５μｌに置換した。これに前記検体を含むマクロファージの培養上清３５μｌずつ添加し、３７℃で二晩培養し、光学顕微鏡下写真撮影を行い、この写真よりデンドライトの長さを測定した。結果を表１に示す。これより、本発明のメラノサイトのデンドライト伸長抑制剤であるレンギョウのエッセンス１，２によるデンドライト伸長の抑制作用に優れることが分かる。
（検体）
１）ＵＶ照射＋メラノサイトのデンドライト伸長抑制剤
であるレンギョウのエッセンス１，２のＤＭＳＯ溶液
（０．００５％）
２）ＵＶ照射のみ（ポジティブコントロール）
３）ＵＶ非照射のみ（ネガティブコントロール）