(57)【要約】  本発明は一般的に、プロバイオティクスを含み、かつ単一の統合または凝集性投与形態単位として提供される、層化酸保護経口投与製剤を含む、栄養補助食品及び医薬製剤に関する。凝集性投与形態の各個々の酸保護層は、異なるプロバイオティクスペイロード、胃腸管内の特定の領域へのプロバイオティクスの送達を標的化するための異なる放出プロファイル、または異なるプロバイオティクスペイロード及び胃腸管内の特定の領域への異なるプロバイオティクスの送達を標的化するための放出プロファイルの両方のうちの１つを提供する。【選択図】図１Ａ
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の層及び第２の層を含む、層化投与形態であって、各層が、１つまたは２つ以上の別個のプロバイオティクスを含む、層化投与形態。
【請求項２】
前記第１の層が、第１の放出速度を特徴とし、前記第２の層が、第２の放出速度を特徴とする、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項３】
前記第１の放出速度が、即時放出を提供し、前記第２の放出速度が、延長放出を提供する、請求項２に記載の層化投与形態。
【請求項４】
前記第１の層が、乳酸稈菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、及び連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属に由来する１つまたは２つ以上のプロバイオティクスを含み、前記第２の層が、バクテリオデス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ）属、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、及び真正細菌（Ｅｕｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属に由来する１つまたは２つ以上のプロバイオティクスを含む、請求項３に記載の層化投与形態。
【請求項５】
前記即時放出が、前記第１の層から実質的に全ての前記プロバイオティクスを、摂取後約４〜７時間以内に送達する、請求項３に記載の層化投与形態。
【請求項６】
前記延長放出が、前記第２の層から実質的に全ての前記プロバイオティクスを、摂取後約６〜１２時間以内に送達する、請求項３に記載の層化投与形態。
【請求項７】
前記第１の放出速度及び前記第２の放出速度が、実質的に同じである、請求項２に記載の層化投与形態。
【請求項８】
前記第１の層内の全ての前記プロバイオティクスが、前記第２の層内の全ての前記プロバイオティクスとは異なる、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項９】
前記第１の層及び前記第２の層の少なくとも１つの前記活性成分が、１つまたは２つ以上のプロバイオティクスから本質的になる、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項１０】
前記第１の層及び前記第２の層の各々の前記活性成分が、１つまたは２つ以上のプロバイオティクスから本質的になる、請求項９に記載の層化投与形態。
【請求項１１】
前記製剤が、圧縮された二層錠剤投与形態として提供される、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項１２】
前記投与形態が、約０．２５％以下の破砕性を有する、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項１３】
前記製剤が、以下の、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、及びリン酸ナトリウムの１つまたは２つ以上から選択される、酸保護構成成分を含む、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項１４】
乳酸稈菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、乳酸球菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、バクテリオイデス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）属の一員、及びそれらの部分、断片、構成成分、タンパク質、または副産物を含む群から選択されるプロバイオティクスを含む、請求項１に記載の層化投与形態。
【請求項１５】
前記プロバイオティクスが、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳｏｄＡ）を含む、請求項１４に記載の層化投与形態。
【請求項１６】
請求項１に記載の前記投与形態を作製する方法であって、
少なくとも第１の層及び第２の層の各々中に別個のプロバイオティクスを含む製剤を含むことと、
前記第１の層及び前記第２の層を圧縮することと、
単一の凝集性単位を形成することと、を含む、方法。
【請求項１７】
前記第１の層及び前記第２の層の１つの事前圧縮を更に含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記第１の層及び前記第２の層の各々について様々な量の製剤材料を提供することを更に含む、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
別個のプロバイオティクスの標的化送達を提供する方法であって、
必要のあるヒトまたは動物に層化投与形態を投与することを含む、方法。
【請求項２０】
第１のプロバイオティクスの
前記胃腸管の上部領域への放出を提供することと、
第２のプロバイオティクスの前記胃腸管の下部領域への放出を提供することと、を更に含む、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、２０１４年７月１日出願の米国仮特許出願第６２／０１９，７１７号の優先権を主張し、当該出願の内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明は一般的に、プロバイオティクスを含み、かつ単一の統合または凝集性投与形態単位として提供される、多層及び二層酸保護経口投与製剤を含む、栄養補助食品及び医薬製剤に関する。凝集性投与形態の各個々の酸保護層は、異なるプロバイオティクスペイロード、胃腸管内の特定の領域へのプロバイオティクスの送達を標的化するための異なる放出プロファイル、または異なるプロバイオティクスペイロード及び胃腸管内の特定の領域への異なるプロバイオティクスの送達を標的化するための放出プロファイルの両方のうちの１つを提供する。
【背景技術】
【０００３】
従来のプロバイオティクス投与形態は、その中に有するプロバイオティクスペイロードの単一の放出モードまたは放出速度を提供する。
【０００４】
様々なプロバイオティクス製剤及びかかる製剤の作製方法が当業者に知られている。例えば、均一な制御放出プロバイオティクス製剤は、米国特許第８，５４０，９８０号、同第８，００７，７７７号、同第７，１５０，６２３号、及び同第６，６２７，２２０号で開示されている。これらの特許の内容は、特に留意され、この参照により本開示に組み込まれる。具体的には、米国特許第８，５４０，９８０号及び同第８，００７，７７７号は、制御または持続的放出を有する様々な均一な単一の投与形態単位を作製するために使用される様々なプロバイオティクス事前配合粉末に関する。
【０００５】
従来のプロバイオティクス投与形態を用いて胃腸管の様々な領域に位置する別個の微生物のプロバイオティクス栄養補助の利益を求めるヒト及び動物は、（１）各特定の微生物の標的化送達及び問題の胃腸管領域に各々特異的な多数の投与形態を摂取するか、または（２）別個の微生物の均一な放出を提供する非効率的もしくはあまり有効でない単一の投与形態を摂取しなければならない。したがって、本発明者は、ある特定の場合には、様々なプロバイオティクスの混合物または組み合わせを含む均一な単一の単位投与形態製剤は、プロバイオティクスペイロードの非効率的かつあまり有効でない送達をもたらし得ると考えた。
【０００６】
混合または組み合わせた異成分からなる均一なプロバイオティクスペイロード投与形態は、非効率的な送達をもたらす場合があり、例えば、上部胃腸管への送達に最も適しているある特定の微生物は代わりに、全てまたは部分的に下部胃腸管に送達され、一方では、下部胃腸管への送達に最も適しているある特定の他の微生物は、全てまたは部分的に上部胃腸管に送達される場合がある。
【０００７】
別個のプロバイオティクスの別々の製剤及び放出を提供する投与形態単位について要求が存在している。更に、胃腸管の別個の領域、例えば上部胃腸管及び下部胃腸管に適しているプロバイオティクスの様々な放出速度及び標的化送達を提供するための、単一の凝集性層化酸保護投与形態単位について要求が存在している。
【発明の概要】
【０００８】
本発明者は、異なる層中に別個のプロバイオティクスを含む凝集性酸保護経口投与製剤及び投与形態を初めて開発し、ここで各層は同じまたは異なる放出速度を有する。発明にかかる層化経口投与製剤は、最大効果を達成するために、胃腸管内の異なる場所、例えば上部胃腸管、例えば口、食道、胃、十二指腸、空腸、及び近位回腸、並びにまた下部胃腸管、例えば遠位回腸、結腸、及び肛門への別個のプロバイオティクスの標的化送達を達成することができる。
【０００９】
本発明の製剤は、胃腸管内の様々な場所への即時、持続的、制御、間欠性、拍動性、及び／または標的化プロバイオティクス送達を達成し、したがって即時、間隔、拍動性、及び／または持続的もしくは延長期間のいずれかにわたる標的化プロバイオティクスの放出を送達するために使用することができる。本発明の発明者は、単一の統合または凝集性酸保護投与形態単位中で別個のプロバイオティクス製剤の送達を一緒に達成するための、別々の層中の様々な酸保護プロバイオティクス事前配合粉末の組み合わせを初めて実現し、可能にした。また、本発明の発明者は、単一の統合または凝集性酸保護投与形態単位中で様々な放出プロファイルを有する別個のプロバイオティクス製剤の送達を一緒に達成するための、別々の層中の様々な酸保護プロバイオティクス事前配合粉末の組み合わせを初めて実現し、可能にした。
【００１０】
酸保護製剤の各層は、属、種、亜種、及び菌株レベルの１つまたは２つ以上で区別できる、異なるプロバイオティクスまたはプロバイオティクスの混合物を含有してよい。各層は、即時放出、または変動するレベルの拍動性、持続的、延長、もしくは制御放出のいずれか１つを有することを特徴とすることができる。各層は異なるサイズのものであってよく、または他の層の１つまたは２つ以上に対して、最終投与形態のより大きな部分を含んでもよい。本発明の多層または二層プロバイオティクス酸保護投与形態間の投与形態単位凝集力は、好ましくは投与形態の各層中に同様または同一の量の１つまたは２つ以上の同様または同一の賦形剤を含むことにより最適化されることが、本発明の発明者により発見された。したがって、本発明の好ましい実施形態では、ある特定の製剤構成成分は、様々な層製剤にわたり共有される。
【００１１】
本発明の投与形態は、酸保護性であるが、各層は、変動するレベルの酸保護を含んでよい。変動するレベルの酸保護は、プロバイオティクスペイロードの標的化送達のための層放出プロファイルのカスタマイゼーションを促進することができる。
【００１２】
本発明の好ましい実施形態は、任意の腸溶コーティングを含まない。腸溶コーティングは本発明の利益を実現するために必要ではないので、本明細書で説明する投与形態は、かかる腸溶コーティングの包含と関連付けられる更なる製造複雑性及び費用を避ける。にもかかわらず、本発明の製剤は腸溶コーティングを含んでもよいが、腸溶コーティングは必要ではない。
【００１３】
本発明の製剤は、胃の厳しい酸環境からプロバイオティクスを保護するために使用することができる。
【００１４】
本発明の製剤は、直接圧縮により、層化錠剤もしくはカプレット、または同様の投与形態に形成してよい。本発明の製剤の各層は、圧縮前にルース粉末材料または混合物を含んでよい。最終的な圧縮に際して、本発明の実施形態は、層分離に抵抗性の単一の層化凝集性非破砕性投与形態単位を有利に形成する。本発明の各製剤層は、最初に別々に圧縮し、または事前圧縮し、次いで１つまたは２つ以上の追加の層と共に再び圧縮してよい。あるいは、製剤層は、一回の圧縮で共に圧縮されてもよい。層の各々の１つ及び／または製剤全体の圧縮について、変動する圧縮または圧密圧力を使用してよい。本明細書で説明するプロセスは、単に例であり、本発明を作製するために使用され得るプロセスの排他的な列挙を構成するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１Ａ】本発明に従って生成された二層錠剤の、酸（ＵＳＰ２型装置、３７℃でｐＨ２．５、５０ＲＰＭで設定したパドル撹拌を伴う）への曝露後、続く中性溶液中での連続溶解の、０時間での持続的放出の評価画像を示す。
【図１Ｂ】本発明に従って生成された二層錠剤の、酸（ＵＳＰ２型装置、３７℃でｐＨ２．５、５０ＲＰＭで設定したパドル撹拌を伴う）への曝露後、続く中性溶液中での連続溶解の、３時間での持続的放出の評価画像を示す。
【図１Ｃ】本発明に従って生成された二層錠剤の、酸（ＵＳＰ２型装置、３７℃でｐＨ２．５、５０ＲＰＭで設定したパドル撹拌を伴う）への曝露後、続く中性溶液中での連続溶解の、６時間での持続的放出の評価画像を示す。
【図１Ｄ】本発明に従って生成された二層錠剤の、酸（ＵＳＰ２型装置、３７℃でｐＨ２．５、５０ＲＰＭで設定したパドル撹拌を伴う）への曝露後、続く中性溶液中での連続溶解の、９時間での持続的放出の評価画像を示す。
【図２】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の小腸への制御放出に対する、親水剤の効果を示す。
【図３】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の小腸への制御放出に対する、電解質剤の添加の効果を示す。
【図４】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の小腸への制御放出に対する、ｐＨ及び酵素感受性剤の添加の効果を示す。
【図５】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の延長期間にわたる制御放出能を示す。
【図６】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの下部胃腸管に特異的な有益微生物の１２時間の延長期間にわたる制御放出を示す。
【図７】本発明における幾何拡張性、錠剤サイズ及び形状の変動の制御能、並びに新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の小腸への制御放出に対するかかる変化の効果を示す。
【図８】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の小腸への制御放出に対する、錠剤化前の剤の乾燥の効果を示す。
【図９】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤からの生存可能有益微生物の小腸への制御放出に対する、様々な粘度の親水剤を使用する親水性マトリックスの効果を示す。
【図１０】新規に適合され、二層投与形態の片側を形成するために使用され得る先行技術製剤の安定性に対する、生理学的に許容できる電解質剤の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
１．製剤構成成分
本発明のプロバイオティクスは、例えば乳酸稈菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、乳酸球菌（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）属、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属、バクテリオイデス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）属、もしくはプロバイオティクス効果を有することが分かっている他の生物、またはかかる生物の部分、断片、構成成分、タンパク質、もしくは副産物を含むが、これらに限定されない。具体的には、ビフィドバクテリウム・アニマリス亜種ラクティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｎｉｍａｌｉｓ  ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｉｆｉｄｕｍ）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｒｅｖｅ）、ビフィドバクテリウム・インファンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｉｎｆａｎｔｉｓ）、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｏｎｇｕｍ）（例えば、ＤＡＮＩＳＣＯ（登録商標）により製造される、販売店品目コード１２１７７９４及び１２４４８２４、商標名ＢＩ−０５  １００Ｂ  １ＫＧ、ＢＩ−０５  １００Ｂ  ２０ＫＧ、プロバイオティクス生存可能カウント≧１．０Ｅ＋１１ＣＦＵ／ｇ；ビフィドバクテリウム・ロンガム  Ｂ１−０５  ＳＤ−５５８８）、エンテロコッカス・デューランス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｄｕｒａｎｓ）、エンテロコッカス・ファシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ）、ラクトバチルス・アシドフィルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ亜種カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ  ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・カゼイ亜種ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃａｓｅｉ  ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ  ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・サケイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｋｅｉ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）（例えば、ＮＵＴＲＡＣＥＵＴＩＸ（登録商標）により製造される、プロバイオティクス生存可能カウント≧５．０Ｅ＋１０ＣＦＵ／ｇ、非ＧＭＯ源の材料を含む、ＳＤ−５８４７を含む）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｇａｓｓｅｒｉ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）、ラクトコッカス・ラクティス亜種ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｌａｃｔｉｓ  ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ  ｌａｃｔｉｓ）、ペディオコッカス・アシディラクティシ（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ）、ペディオコッカス・ペントサス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｅｎｔｏｓａｃｅｕｓ）、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）、サッカロマイセス・ブラウディ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ）、及び様々な改変土壌生物の培養物。本発明のプロバイオティクスは、天然に見られない微生物、または組換えＤＮＡを含む外来性遺伝子もしくは化学物質を含むように別の方法で変えられたプロバイオティクスを含んでよい。また、本発明のプロバイオティクスは、細菌により生成される、または細菌に由来する、もしくは細菌から単離されるプロバイオティクス酵素、及び例えばスーパーオキシドジスムターゼ（ＳｏｄＡ）を含む他のプロバイオティクス副産物を含む。また、本発明のプロバイオティクスは任意に、生存不能細胞またはその構成成分もしくは断片を含むことができる。
【００１７】
製剤の各層は、属、種、亜種、及び菌株レベルの１つまたは２つ以上で区別できる、異なるプロバイオティクスまたはプロバイオティクスの混合物を含有してよい。
【００１８】
本発明による製剤は、プロバイオティクスペイロードを胃酸の有害効果から保護する１つまたは２つ以上の構成成分を含む。かかる構成成分は、例えば炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、及びリン酸ナトリウムを含む。
【００１９】
プロバイオティクス製剤の追加の構成成分は、親水剤、例えば膨張剤、増粘剤、ゲル強度増強剤を含む。親水剤は、例えばデンプン（例えばトウモロコシ、米、またはジャガイモデンプン）、親水性ガム、多糖類もしくはガラクトマンナン（例えばペクチン、寒天、デキストラン、カラゲナン、トラガカントガム、イナゴマメガム、アカシアガム、グアーガム、キサンタンガム、ガティガム、アルギン酸、またはアルギン酸ナトリウム）、セルロース誘導体（例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、グリコール酸デンプンナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウムもしくはカルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシエチルメチルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、酢酸フタル酸セルロース、または微結晶セルロース）、シリカ（例えば二酸化シリコン、Ｇｌａｓｓｖｅｎにより製造される商標名ＰＲＩＯＳＩＬ  ＰＳ−２００；ＣＡＳ番号７６３１−８６−９）、珪酸アルミニウム、珪酸マグネシウム、珪酸アルミニウムマグネシウム、珪酸ナトリウムもしくは長石、水酸化アルミニウム、タンパク質（例えばゼラチンまたはカゼイン）、ポリメラ（ｐｏｌｙｍｅｒａ）（例えばアクリレート、カルボキシポリメチレン、ポリアルキレングリコール、またはポリビニルピロリドン）、親水性ポリマー（例えばセルロース誘導体、例えば微結晶セルロース（ＭＣＣ））（例えばＣＡＳ番号９００４−３４−６；Ａｃｃｅｎｔ  Ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ  Ｐｒｉｖａｔｅ  Ｌｔｄ．により製造される微結晶セルロース  ＭＣＣ１１２；材料は木材パルプから供給されてよく、非ＧＭＯ源を含む）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）（Ｈｙｐｒｏｍｅｌｌｏｓｅとしても知られる）（例えばＴＨＥ  ＤＯＷ  ＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＣＯＭＰＡＮＹにより製造されるＭＥＴＨＯＣＥＬ（登録商標）Ｋ１００  ＰＲＥＭＩＵＭ；材料は木材パルプ及び木綿リンタから供給されてよい；ＣＡＳ番号９００４−６５−３）、もしくはヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、またはガム及び多糖類、例えばグアーガムもしくはマルトデキストリンを含む群から選択してよい。また、例えばＦＭＣ  Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒにより製造されるＡＶＩＣＥＬ（登録商標）ＣＥ−１５（ＭＣＣ）及びグアーガム等の組み合わせ材料を使用してもよく、ここで各構成成分はそれぞれ、木材パルプ及び植物源から供給され、非ＧＭＯ源を含む；（ＣＡＳ番号９００４−３４−６及びＣＡＳ番号９００４−３０−０）。
【００２０】
また、蝋及び他の不活性材料、例えばエチルセルロースまたはカルナバ蝋を含む疎水剤を使用してもよい。
【００２１】
本製剤は、ｐＨ特異的膨張特性または部位特異的酵素分解を使用して、プロバイオティクスの制御放出をカスタマイズすることができる。例えば、以下の構成成分の１つまたは２つ以上を使用してもよく、または製剤中のその相対量を調節してもよい：アルギン酸塩、多糖類、例えば例えばゼラチンまたはコラーゲン、グアーガム、キサンタンガム、ペクチン（例えば、非ＧＭＯ柑橘類及びリンゴ果皮を含む柑橘類及びリンゴ果皮から供給される）、異種タンパク質混合物、ポリペプチド、多糖類（例えばＨｅｒｂｓｔｒｅｉｔｈ  ＆  Ｆｏｘにより製造されるＰＥＣＴＩＮ  １５０  ＳＬＯＷ  ＳＥＴ；ＣＡＳ番号９０００−６９−５）、ペクチン及び／またはアルギン酸塩及びガラクトマンナンガム（例えばグアーガム、キサンタンガム、及び／またはイナゴマメガム）、ポリエチレン誘導体（例えばポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ））、加水分解タンパク質（例えばゼラチン及び／またはコラーゲン）、並びにポリペプチド（例えばゼラチン、コラーゲン、カゼイン、または異種タンパク質混合物）。
【００２２】
加えて、とりわけ、例えばナトリウム、カリウム、無水炭酸ナトリウム（例えば食品グレードの無水炭酸ナトリウム、ＣＡＳ番号４９７−１９−８を含む）、またはカルシウム塩等の電解質を含めてもよい。生理学的に許容できる電解質の包含は、再構築及び放出が細菌の生存に最適なｐＨ条件下で起こることを可能にする、緩衝環境を生成することができる。電解質と、例えば親水剤との間の相互作用は、ｐＨとは独立したプロバイオティクスの放出を可能にするのみでなく、投与形態の内部ｐＨを安定化させることができる。安定な内部ｐＨを維持することは、プロバイオティクスの安定性に寄与する。
【００２３】
結合剤は、そのいくつかは上記に示されるように製剤中で２つの目的を果たすことができ、ＨＰＭＣ、ＭＣＣ、グアーガム、ペクチン（凝集性結合剤として）等を含んでよい。
【００２４】
追加の任意の成分は、塩、乾燥剤、崩壊剤、流動及びチュービング剤、潤滑剤、並びに着色剤を含む。例えば、生理学的に許容できる塩は、１．０：０．１〜１．０：２５のプロバイオティクス対塩の比で凍結乾燥中にプロバイオティクスに導入してよい。また、塩の添加は、投与形態それ自体内で一定ｐＨを維持する助けとなり、凍結乾燥プロセス中に凍結保護物質として働いて、細胞溶解を防ぐ助けとなる。乾燥剤は、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、コロイド状二酸化珪素、及び／またはこれらの組み合わせを含んでよい。崩壊剤は、例えばＢｌａｎｖｅｒ  Ｆａｒｍｏｑｕｉｍｉｃａ  ＬＴＤＡから入手可能なＳＯＬＵＴＡＢ（登録商標）として販売されるクロスカルメロースナトリウム、及びＢＡＳＦから入手可能なＫＯＬＬＩＤＯＮ（登録商標）として販売されるクロスプロビドン（ｃｒｏｓｐｒｏｖｉｄｏｎｅ）（不溶性ポリビニルピロリドン）を含んでよい。流動及びチュービング剤並びに潤滑剤は、例えば、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸（例えばＳＴＥＡＲＩＣ  ＡＣＩＤ  ＴＲＩＳＴＡＲ  １４９）を含んでよい。着色剤は、例えばウコン（例えば０３２５５番ＴＵＲＭＥＲＩＣ  ＣＧ  ９０）を含んでよい。
【００２５】
２．製剤の調製プロセス
発明にかかる製剤は、様々な粉末混合物を組み合わせることにより調製することができ、各混合物は、１つまたは２つ以上の事前に選択されたプロバイオティクスを含む。これらの混合物は、１回の圧縮により一緒に圧縮して層化投与形態にすることができる。あるいは、任意の１つの層を形成するために使用される混合物は、１つまたは２つ以上の追加の層と組み合わせる前に事前圧縮してよい。一実施形態では、投与形態は、多層錠剤またはカプレットである。好ましい実施形態では、投与形態は、経口投与のための二層錠剤またはカプレットである。別の好ましい実施形態では、投与形態は、両面を有する錠剤プレス上での連続直接圧縮により形成される二層錠剤である。圧縮は、プロバイオティクスの損傷を避けるための意図的な冷却の使用を含んでよい。
【００２６】
本発明で使用される粉末混合物は乾燥している。粉末混合物は、凍結乾燥プロバイオティクス事前配合物を含んでよい。具体的には、圧縮前の粉末混合物の含水量は、５％を超えない。本発明による完成した投与形態は、０．２７５Ａｗを超えない含水量を有する。
【００２７】
錠剤配合物の加工は、環境室温及び湿度で達成される。理想的には、加工室温及び湿度は、２３℃／４５ＲＨを超えないが、非常に低い湿度は、乾燥成分の静電気の問題並びに配合及び圧縮の困難さをもたらす場合がある。バルク培養濃縮物及び完成したバルク投与形態の保存は、−１０℃以下で維持される。プロセス中の錠剤配合物は、錠剤が積極的製造中でない場合、密閉ライナー中で４〜１５℃の冷蔵温度で保存される。
【００２８】
本明細書で説明する製剤の安定性は、様々な試験及びプロトコルを用いて査定することができる。例えば、製剤は好ましくは、例えば１日後及びその後１２０日後に再び、生存可能ＣＦＵについて、１８ヶ月の期間にわたり実時間で及び／または周囲安定性環境（１７〜２０℃／≦５０％相対湿度）で試験され得るが、これに限定されない。あるいは、例えば製剤は、例えば１日後及びその後１２０日後に再び、生存可能ＣＦＵについて、１８ヶ月の期間にわたり実時間で及び／または周囲安定性環境（２５℃／６０％相対湿度）で試験され得るが、これに限定されない。
【００２９】
安定性は影響を受けるべきでないことが企図されるが、しかしながら、初期圧縮損失は、多段階または２段階圧縮プロセスのためにより大きい場合がある。
【００３０】
プロバイオティクス二層カプレットまたは錠剤の製造は、二層投与形態を作製する圧縮製造業者により提供される標準設定及び教示に従ってよい。例えば、２回圧縮プロセスをとおして２つの独特の処方配合物を合体させるように設計された両面を有する錠剤プレスを組み立て、２つの供給ホッパーの各々中の配合物を充填する。加工が始まると、操作者は回転スピード、流速、圧縮力、及びパンチ深度を調節して、カプレットの第１段階（一次側）に配合物を導入し、それを圧縮する。こちらの側は第２段階の充填及び圧縮（二次側）まで型の中に存続し、単一の錠剤を形成する。
【００３１】
一実施形態では、一次側及び二次側の錠剤二層重量に対する相対量は、使用されるプレス及び錠剤型により、約６０％：４０％〜７０％：３０％変化してよい。特定の実施形態では、実施例１で示されるように、錠剤二層重量は、一次側圧縮で総重量の約６７％、及び二次側圧縮で総重量の約３３％を含む。一旦完成したら、錠剤はプレスから排出され、パンチ／型ステーションはその回転を第１段階に戻して、プロセスを繰り返して続ける。
【００３２】
３．製剤
本明細書で提供される一般製剤パラメータに加えて、本発明の任意の層、もしくは個々の側のいずれかもしくは両方で（二層錠剤の場合）、または各々の亜構成成分で（多層錠剤の場合）使用される製剤は、米国特許第８，５４０，９８０号及び同第８，００７，７７７号（ＢＩＯ−ｔｒａｃｔ（登録商標）製剤に関連し、及び／またはこれを説明する）で説明する均一な個々の投与形態単位製剤のある特定のいくつかと重複する。このため、本発明者は本明細書に先行技術の証拠を含め、それゆえ決定したある特定の均一な酸保護変動放出プロバイオティクス均一投与形態の調製に関連するデータは、有利に実質的に再設計され、再構成され、再利用されて、本発明の層化投与形態を形成することができ、ここで各層は別個のプロバイオティクスを含み、任意に別個の放出プロファイルを有する。実施例４〜１２及び図２〜１０を参照のこと。
【００３３】
好ましい実施形態では、本発明の二層錠剤の１つまたは２つ以上の個々の層または「側」は、５〜４０％の親水剤、５〜４０％の放出改変剤、及び１〜４０％の電解質を含んでよい。放出時間の改変は、放出剤の変動する入力％及び粘度の使用により最初に達成される。
【００３４】
例えば、一実施形態では、本発明による二層錠剤は、約９２３ｍｇの標的重量を有して提供され、第１の層は約６２１ｍｇを占め、第２の層は約３０２ｍｇを占める。第１の層が約６２１ｍｇ（±５０ｍｇ）を占め、第２の層が約３０２ｍｇ（±３０ｍｇ）を占める、この実施形態の変形を調製することができることが企図される。
【００３５】
また、各層に、ある特定の重量（ｗ／ｗ）割合（％）のある特定の同一成分を含めることは、統合凝集性層化投与形態の調製の成功に寄与し、最終投与形態の破砕性を軽減または除去することが、本発明者により発見された。例えば、主に別々の層化投与形態から別個のプロバイオティクスを提供するように設計した投与形態について、層にとっては、二層錠剤の一次側の層及び二次側の層を、同じ相対的割合の全ての成分で釣り合わせることが最適である。また、単位凝集性を最もよく促進するために、ＨＰＭＣ、ペクチン、ＭＣＣ、及びプロバイオティクス粉末事前配合物等の製剤構成成分が、各側で相対的に同様の量で存在することが特に重要であることが、本発明者により発見された。投与形態凝集性は、製品棚許容のためのみでなく、投与形態の安定性及び機能性のために重要である。これは、分離した、破壊した、及び分裂した投与形態は取り扱いがより困難であり、物理的により小さい投与質量サイズ並びに酸素（安定性）及び／または胃腸溶解剤に曝露される表面領域の量の増大をもたらし、これは早すぎる分解及びプロバイオティクスペイロードの非効率的または無効な送達をもたらす場合があるためである。
【００３６】
本発明のいくつかの二層錠剤製剤で、ＨＰＭＣ、ペクチン、ＭＣＣ、及びプロバイオティクス粉末事前配合物は、完成した投与形態中の主な入力構成成分（ｗ／ｗ）である。
【００３７】
一実施形態では、本発明の二層錠剤製剤は、統合凝集性層化投与形態の調製の助けとなるように、各層中に、同一の、または実質的に同様の、相対割合（ｗ／ｗ）量の１つまたは２つ以上の所与の製剤主要入力構成成分を含み、これは、ＨＰＭＣ、ペクチン、ＭＣＣ、及びプロバイオティクス粉末事前配合物を含むが、これらに限定されない。例えば、二層錠剤の各側中の所与の製剤構成成分の相対割合（ｗ／ｗ）量は、他の側の約２０％以内、より好ましくは他の側の約１５％以内、更により好ましくは他の側の約１０％以内、最も好ましくは他の側の約５％以内、及び任意に他の側の約１％以内であってよい。
【００３８】
本発明の投与形態は本明細書では最も頻繁に二層錠剤と呼ばれるが、本発明は多層製剤並びに錠剤及びカプレット等の全ての圧縮性経口摂取投与形態型を包含することに留意されたい。
【００３９】
４．標的化放出
様々な培養個体群が、ヒト胃腸管の様々な領域に優先的に宿っている。標的化放出プロバイオティクス摂取可能投与形態の目的のために、口腔及び食道領域に宿る微生物は本議論の部分ではない。小腸（十二指腸、空腸、及び回腸）の微生物生態では、例えば乳酸稈菌（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）及び連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種が優位に生息している。結腸（上行性、横断性、及び下行性）は、例えばビフィズス菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）、及びクロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、並びに腸内細菌科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）が優位を占めるいくつかの絶対嫌気性微生物個体群を含む。
【００４０】
ヒト胃腸管は、疾患を寄せ付けないための第１の防御機構の１つである。胃内の酵素及び酸は、病原体が感染し増殖する、または疾患を引き起こす機会を有する前に、病原体を殺すよう働く。プロバイオティクス培養物は、胃酸、消化酵素、及び胆汁酸への曝露により殺され得る。
【００４１】
培養物はこれらの消化性の剤に抵抗する能力が異なり、いくつかは非常に感受性であり、いくつかはより抵抗性である。しかしながら、一般的に、胃内では生存可能細胞の顕著な損失が起こる。プロバイオティクス選択は歴史的にこれらの剤に抵抗することができる菌株に焦点を当てており、胃腸管の消化領域を通り過ぎた感受性培養物を保護するためのいくつかの有効な送達技術は存在する。
【００４２】
多くの従来のプロバイオティクス製品の粉末化及び液体投与形態は、培養物投与量に酸保護を提供しておらず、多くの場合、胃を通る通路で生き残るのに培養物の天然の酸抵抗性に頼っている。多くの送達技術は、ｐＨ／酵素依存バースト応答で小腸の開始部でそれらの全てのペイロードを放出する。その環境に適合された培養物について、これは充分であり得るが、上部小腸の酸素ポテンシャルに感受性の培養物については、バーストまたは即時放出は生存性の損失をもたらす場合がある。上部小腸の酸素ポテンシャルに感受性の培養物についてより良い送達システムは、結腸を含む下部胃腸管への、後のまたは延長された期間にわたる生存可能培養物の保護及び放出を提供し得る。
【００４３】
一実施形態では、本発明は、少なくとも２つの分岐したクラスのプロバイオティクスをそれらの意図される微生物適所に優先的に堆積させるための様々な放出プロファイルの調製に関連する。例えば、本発明は、小腸または上部胃腸管内に乳酸稈菌及び連鎖球菌を、更に下部胃腸管にビフィズス菌のような絶対嫌気性菌を送達することができる。概要を示すための例の製剤は、各培養物の、陰性対照（保護なし）としての即時放出固体用量と、例えば本発明による二層錠剤との比較を含む。
【００４４】
ビフィドバクテリウム・インファンティスは、酸素及び酸曝露に非常に感受性である。例えば、ビフィドバクテリウム・インファンティス配合物は、例えば下部胃腸管への送達のために、延長された放出期間及び優れた酸保護を有するように設計してよい。また、ラクトバチルス・プランタラムは、耐気性及び酸抵抗性であり、この配合物は、例えば経口摂取投与形態による上部胃腸管への送達のために、中程度の酸保護及びより短い放出プロファイル用に設計される。
【００４５】
本発明の一実施形態では、一次側のビフィドバクテリウム・インファンティス配合物及び二次側のラクトバチルス・プランタラムの二層錠剤が、製造圧縮損失及び溶解中の時間にわたる示差的生存可能カウント放出について評価され得る。別の実施形態では、一次側のビフィドバクテリウム・ラクタス配合物及び二次側のラクトバチルス・ファーメンタムの二層錠剤が、製造圧縮損失及び溶解中の時間にわたる示差的生存可能カウント放出について評価され得る。
【００４６】
加えて、二次層に対する、二層錠剤の一次または第１の、層または側の追加の質量は、酸生き残りに影響し得ることに留意されたい。したがって、上記に示される二層実施形態は、どの層化投与形態が最も優れた全体的な生き残り率を提供するかを決定するために、第１または第２の層のいずれか中の各プロバイオティクスを比較することにより試験され得る。
【００４７】
好ましい組み合わせは、例えば３時間〜７時間の間に小腸用処方の固体用量重量の２５〜７０％、６時間〜１２時間の間に結腸用処方の３５〜９０％を放出し得る。
【００４８】
ある特定の二層錠剤実施形態では、例えば、固体用量重量の約３０〜４０％が、主に一次第１側から、３時間〜７時間の間に小腸用処方に送達される。続いて、固体用量重量の残りの量は、主に二次側から、６時間〜１２時間の間に結腸または下部腸管に送達される。ある特定の他の二層錠剤実施形態では、例えば、固体用量重量の約２０〜３０％が、主に一次第１側から、３時間〜７時間の間に小腸用処方に送達される。続いて、固体用量重量の残りの量は、主に二次側から、６時間〜１２時間の間に結腸または下部腸管に送達される。
【実施例】
【００４９】
実施例１：凝集性ビフィドバクテリウム・ラクティス及びラクトバチルス・ファーメンタム二層製剤及び調製
【００５０】
【表１】
2017520577.tif 000003
【００５１】
上記処方を用いて作製した二層錠剤を、Ｐｒｅｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ（記号ＩＶモデル）二層錠剤プレスを伴うＭａｎｅｓｔｙ（登録商標）Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｉｄｅｄ  Ｐｒｅｓｓを用いて、二回圧縮プロセスにより２つの独特の処方配合物を合体させて調製した。
【００５２】
使用される型またはパンチサイズは、０．３１２×０．７５０（パンチＩＤ：Ｄ２３）サイズである。二層錠剤は、１分間当たり１，０００ピルのタレット速度を用いて製造することができる。上部パンチ貫通は、後部８ｍｍ及び前部４ｍｍを含む。第１の層は、約０．５３１（設定点０．３７７）の充填深度を有し、第２の層は約０．５６４（設定点０．３９４）の充填深度を有する。平均パンチ圧力（ｌｂｓ／平方インチ）は第１の層について、約２０２での事前圧縮、及び約７３８での主圧縮である。第２の層についての平均パンチ圧力は、約６４での事前圧縮、及び約２１８８での主圧縮である。最終ＫＰ（キロポンド）は約１０７ＫＰ（平均）である。かかる二層錠剤の破砕性は約０．２５％であり、破砕性は、破壊したピルまたは層の分離を示す。
【００５３】
破砕性は、錠剤耐久性についてのＵＳＰ標準試験である。１０個の錠剤を秤量し、次いで標準寸法並びに回転スピード及び時間のタンブラに挿入し、その後再び秤量する。損失を割合として記録する。１％未満の損失はほとんどの栄養補助食品について優れているとされ、プロバイオティクスにとっては非常に優れている。
【００５４】
ここで、完成した投与形態重量（ｗ／ｗ）は約８７０ｍｇであり、標的重量は約９２３ｍｇであり、第１の層は約６２１ｍｇを占め、第２の層は約３０２ｍｇを占める。
【００５５】
実施例２：別個の培養物の錠剤化二層製剤の酸保護評価
【００５６】
生存可能プロバイオティクス培養物の生存を、５０ＲＰＭに設定したパドルで撹拌しながら３７℃でｐＨ２．５の３０分間の曝露の、絶食状態試験パラメータについてＵＳＰ２型溶解装置で評価した。各データ点は、９００ｍＬの溶解媒体中で個々に繰り返した３回の個々の用量試験の平均である。試験した投与形態は、実施例１に従って調製したものであった。
【００５７】
曝露の終了時の残留カプレット材料のプロバイオティクスカウントは、チャンバーから水和カプレットを穏やかに持ち上げ、穏やかな希釈及びストマッカー配合器でのホモジェナイズによりそれらをプレートカウントアッセイ用に処理し、続いて標準プレートカウントアッセイを行い、生存可能コロニー形成単位を数えることにより完了した。
【００５８】
非保護状態のプロバイオティクスの生存を査定するために、（カプレットを製造するために使用される）凍結乾燥粉末化培養物を、酸曝露の前に生存可能カウントをアッセイし、１ｇのこの材料を装置内の溶解媒体中で水和し、同じように曝露した。曝露後、試料を媒体から引き上げ、生存可能カウント用に上記のように処理した。
【００５９】
ビフィドバクテリウム・ラクティス及びラクトバチルス・ファーメンタムの示差的算出を、培養物の明確なコロニー外観により可能にし、希釈係数について調節した後、総回復生存可能細胞として報告した。酸後回復ＣＦＵを、導入したＣＦＵで割ることにより生存を決定し、割合として表した。これは、カプレット生存割合を、非保護粉末生存割合で割ることにより、個々の培養物の「保護係数」として更に表された。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
ラクトバチルス・ファーメンタムは、酸感受性培養物であるが、それが即時放出製剤または延長もしくは制御放出プロファイルを必要としない製剤に好適であると従来考えられ得るように、上部胃腸管への送達用に標的化される。ここでのデータは、ラクトバチルス・ファーメンタムが酸中で直接的に試験された場合、ラクトバチルス・ファーメンタム生存性がひどく失われること、及び実施例１で説明するもの等の酸保護存在発明投与形態中で調製された場合、それらの損失が顕著に避けられるか、または低減されることを示す。これらの結果は、投与される培養物が上部胃腸管への送達用に標的化されており、したがって胃酸からの保護が必要であると予想されていない場合でさえも、胃の通過中の酸保護についての重大な要求を強調する。
【００６２】
この一連の試験は、二層錠剤により提供されるプロバイオティクス培養物の２つの分岐した属の各々について生存可能なペイロードの優れた保護を示す。驚くべきことに、ラクトバチルス・ファーメンタム培養物は、本発明に従う製剤がなくては、酸に非常に感受性であることが分かった。実際に、本発明の製剤は、ラクトバチルス・ファーメンタム培養物について１８００倍を超える驚くべき製剤保護係数を提供することが、本発明者により発見された。
【００６３】
ここでは、ビフィドバクテリウム培養物ビフィドバクテリウム・ラクティスが、ラクトバチルス・ファーメンタム培養物より酸抵抗性であるという桁になった場合でさえも、両方の培養物は、二層錠剤投与形態により提供される酸保護から利益を得た。ここでのデータは、製剤に組み込まれる培養物（複数可）が多少酸感受性であるかどうかにかかわらず、及び標的化送達部位が上部胃腸管または下部胃腸管であるかどうかにかかわらず、全ての培養物について本明細書で開示される酸保護製剤を使用する重要な利点を示す。
【００６４】
更に、この実施例は、本発明の酸保護製剤は、例えば感受性または酸抵抗性培養物を含有する異なる製剤を一緒に、胃を通過した投与形態プロバイオティクスペイロードの輸送のための共有される同様の酸保護を提供する単一の凝集性投与形態中で組み合わせることを可能にすることを示す。したがって、この実施例は、本発明の酸保護層化投与形態が、酸感受性プロバイオティクスを含む適切なプロバイオティクスの、胃腸管の別個の領域内に位置する標的部位への堆積を促進することができることを示す。
【００６５】
実施例３：持続的放出評価
シミュレートされた腸通路を通る実施例１に従って調製した投与形態からの生存可能プロバイオティクスの持続的放出を示すために、実施例２で上記に示されるのと同じＵＳＰ２型装置及び試験パラメータを初期酸曝露に使用した（すなわち、
５０ＲＰＭに設定したパドルで撹拌しながら３７℃でｐＨ２．５での３０分間の曝露の、絶食状態試験パラメータについてＵＳＰ２型溶解装置）。次いで、３０分で、チャンバーのｐＨを中性ｐＨ７．０〜７．５に調節し、追加の溶解曝露のために３、６、または９時間の全時間まで用量をチャンバー内に残した。実施例１に従って調製した投与形態の画像は、それぞれ、０時間、３時間、６時間、及び９時間の各々について図１Ａ、１Ｂ、１Ｃ、及び１Ｄとして本明細書で提供される。試験期間の終わりに、残留投与形態を、穏やかにチャンバーから除去し、上記のように処理して、無傷のカプレット内に残る生存可能カウントを決定した。溶解媒体の試料を取り、媒体中に放出されたプロバイオティクス生存可能カウントについてアッセイした。溶解チャンバーに導入され、溶解チャンバーから回復された総ＣＦＵを反映するようにカウントを調節した。ここでも、各データ点について３回の複製を試験し、報告では平均化した。
【００６６】
以下のデータは、二層錠剤が溶解するにつれて徐々に増大する細胞カウント回復を示す。下部の総回復区分から、回復されるプロバイオティクスは徐々に低下するが、重要なことに、細胞回復は起こり、曝露から少なくとも約９時間をとおして存在することが示される。
【００６７】
【表３】
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【００６８】
【表４】
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【００６９】
【表５】
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【００７０】
投与形態が媒体中へ浸食されるにつれて、残留投与形態の生存可能カウントにおける低減が進行した。媒体試料は、試験した９時間をとおしてカウントが進行的に増大した。重要なことに、生存可能細胞回復は９時間をとおして持続され、総回復は、３０分の時点での初期用量の６６％から、３、６、及び９時間でそれぞれ、２６％、２４％、及び１４％まで落ちた。顕著な活性細胞カウントが溶解全体をとおして回復されたことに留意されたい。
【００７１】
以下の実施例は、本発明の投与形態の亜構成成分としての使用に提案される層製剤を提供する。これらの製剤単独では、多くの従来の層化錠剤プレスで作業するには、総質量が小さすぎると考えられる。総質量重量を増大させる１つの方法は、例えばＭＣＣまたはマルトデキストリン等の充填剤を含めることであることに留意されたい。しかしながら、ＭＣＣまたはマルトデキストリンの包含は錠剤圧縮に重要であり得るが、これらの構成成分は一般的に錠剤凝集性を補助しないことに留意されたい。更に、大量のＭＣＣまたはマルトデキストリンの包含は、錠剤放出速度に影響する、すなわち、放出速度を増大させる場合がある。
【００７２】
本発明の投与形態の調製は、本明細書で説明する他の層製剤と共に摂取される以下の層製剤の１つまたは２つ以上を含んで、本発明の層化凝集性酸保護製剤を形成し、別個のプロバイオティクス層を提供し、及び別個の放出プロファイルを有する別個のプロバイオティクス層を提供することができる。
【００７３】
実施例４
多層投与形態の１つの亜構成成分、または二層錠剤投与形態の片側は、約３８２ｍｇの重量であり、親水剤及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表４で示されるように調製された。群Ａ１は対照である。本実施例では、プロバイオティクス事前配合物は、凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物等の有益微生物、及びデンプンからなる。使用される親水剤は、微結晶セルロース（ＭＣＣ）、マルトデキストリン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、またはポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）である。親水剤の添加は、投与形態からのプロバイオティクスの放出を減速するであろう。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。
【００７４】
図２で示されるように、本実施例の結果は、親水剤及び凍結乾燥プロバイオティクスからなるマトリックスの使用をとおして与えられた二層投与形態の別々の側からの制御放出のレベルを反映している。この制御放出は、胃媒体への曝露後に送達される生存可能乳酸菌コロニー形成単位（ＣＦＵ）の、対照よりかなり高いレベルをとおして示される。ＭＣＣ及びマルトデキストリン等のあまり膨張性でない親水剤の使用は、充分であるが、より低いレベルの制御と関連付けられる。優れたレベルの制御は、ポリエチレンオキシド及びＨＰＭＣマトリックスの両方で示される。したがって、親水剤は、充分なマトリックス粘度が達成される限り、特定の種類の親水剤に限定されない。
【００７５】
【表６】
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【００７６】
実施例５
錠剤としての二層投与形態の片側は、約３８２ｍｇであり、親水剤、電解質剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表５で示されるように調製することができる。群Ｂ１は対照である。製剤は、親水剤としてＨＰＭＣを使用する。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、またはＮａＨ２ＰＯ４のいずれか１つを含む。この場合、プロバイオティクスは凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物及びデンプンからなる。電解質剤、ＮａＨＣＯ３、Ｎａ２ＣＯ３、またはＮａＨ２ＰＯ４のいずれか１つの添加は、送達システムの投与形態内の内部ｐＨを落ち着かせる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。
【００７７】
本実施例は、図３で示されるように、二層投与形態の別々の側の内部ｐＨは電解質剤の存在により変えられ、送達される生存可能ＣＦＵの量に影響することを示す。この特定の内部ｐＨを落ち着かせることは、所与の再構築凍結乾燥ＢＣの生存性の様々なレベルと関連付けられる。具体的には、製剤Ｂ２はＮａ２ＣＯ３を含有し、この電解質剤は送達システムの投与形態内の内部ｐＨを提供し、生存可能乳酸菌の再構築を補助する。
【００７８】
【表７】
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【００７９】
実施例６
錠剤としての二層投与形態の片側は、約３８２ｍｇであり、親水剤、放出改変剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表６で示されるように調製することができる。群Ｃ１は対照である。使用される親水剤は、ＨＰＭＣである。使用される放出改変剤は、ペクチンまたはゼラチンである。ＢＣは凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物及びデンプンからなる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。
【００８０】
本実施例は、図４で示されるように、放出改変剤が親水性膨張性マトリックスに添加された場合に可能な、制御レベルの増大を示す。放出改変剤としてのペクチンまたはゼラチンの存在は、ｐＨ依存性分解の程度、及びプロバイオティクスの放出を減速するマトリックス粘度の全体的増大と関連付けられる。このことは、胃ｐＨ媒体への曝露後に送達される生存可能ＣＦＵの増大で反映される。
【００８１】
【表８】
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【００８２】
実施例７
錠剤としての二層投与形態の片側は、約５３４ｍｇであり、親水剤、電解質剤、放出改変剤、不活性充填剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表７に示されるように調整された。使用される親水剤は、ＨＰＭＣである。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３である。使用される放出改変剤はペクチンであり、使用される不活性充填剤はＭＣＣである。本実施例で使用されるプロバイオティクス事前配合物は、凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物及びデンプンからなる。不活性充填剤の添加は、多くの場合製造プロセス中に有利である粉末流動性の増大と関連付けられる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。ウコンは、着色剤として含められる。
【００８３】
図５で示されるように、本実施例の結果は、延長期間にわたる生存可能プロバイオティクス細菌の制御放出能を示す。また、親水性マトリックスの制御放出は胃媒体への曝露期間にかかわらず、同様に実行することが示される。Ｅ１及びＥ２は、それぞれ、１時間または２時間の曝露時間に基づいて制御放出の差を示す同一の製剤である。
【００８４】
【表９】
2017520577.tif 000011
【００８５】
実施例８
錠剤としての二層投与形態の片側は、約５３２ｍｇであり、親水剤、電解質剤、放出改変剤、不活性充填剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表８に示されるように調製された。使用される親水剤は、ＨＰＭＣまたはＰＥＯである。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３である。使用される放出改変剤はペクチンであり、使用される不活性充填剤はＭＣＣである。本実施例で使用されるプロバイオティクスは、凍結乾燥粉末のビフィドバクテリウム事前配合物及びデンプンからなる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。ウコンは、着色剤として含められる。
【００８６】
図６で示されるように、本実施例の結果は、延長期間にわたるプロバイオティクスの制御放出能を示す。また、親水性マトリックスの制御放出は、この場合ビフィドバクテリウムからなるＢＣの送達に好ましいプロファイルで、８時間後に、放出することが示される。かかる実施例は、ビフィドバクテリウムを下部小腸に、及び下部小腸を超えて送達するのに有用であろう。
【００８７】
【表１０】
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【００８８】
実施例９
錠剤としての二層投与形態の片側（複数）は、それぞれ、約６８４ｍｇ及び３４２ｍｇであり、親水剤、電解質剤、放出改変剤、不活性充填剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表９で示されるように調製された。使用される親水剤は、ＨＰＭＣである。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３である。使用される放出改変剤は、ペクチンである。本実施例で使用されるプロバイオティクス事前配合物は、凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物及びデンプンからなる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。
【００８９】
本実施例の結果は、図７で示されるように、親水剤、電解質剤、及び放出改変剤の組み合わせは、一体式錠剤の親水性マトリックス及び投与形態中の送達システムからのプロバイオティクスの放出を制御しながら、幾何拡張性、錠剤形状、サイズ、及び体積を制御することができることを示す。投与形態を変化させるこの柔軟性は、様々な製剤体積が必要とされる、特に錠剤形状及びサイズを変える場合、製造で特に有用である。
【００９０】
【表１１】
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【００９１】
実施例１０
錠剤としての二層投与形態の片側は、約６８４ｍｇであり、親水剤、電解質剤、放出改変剤、不活性充填剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表１０で示されるように調製された。使用される親水剤は、ＨＰＭＣである。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３である。使用される放出改変剤はペクチンであり、使用される不活性充填剤はＭＣＣである。本実施例で使用されるプロバイオティクスは、凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物及びデンプンからなる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。ウコンは、着色剤として含められる。
【００９２】
本実施例の結果は、図８で示されるように、乾燥させていない事前配合物（Ｉ１）に対する、錠剤化前に事前配合物の賦形剤の同一の製剤を乾燥させる適用（Ｉ２）を示す。乾燥の有益効果は、乾燥させていない事前配合物Ｉ１と比較した場合の、乾燥事前配合物Ｉ２で送達される生存可能乳酸菌またはプロバイオティクスＣＦＵの増大により証明される。
【００９３】
【表１２】
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【００９４】
実施例１１
錠剤としての二層投与形態の片側は、約５３２ｍｇであり、親水剤、電解質剤、放出改変剤、不活性充填剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表１１に示されるように調製された。使用される親水剤は、粘度４０００ｍＰａ（Ｈ１）または１５０００ｍＰａ（Ｈ２）のＨＰＭＣである。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３である。使用される放出改変剤はペクチンであり、使用される不活性充填剤はＭＣＣである。本実施例で使用されるプロバイオティクス事前配合物は、凍結乾燥粉末のビフィドバクテリウム事前配合物及びデンプンからなる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。ウコンは、着色剤として含められる。
【００９５】
図９で示されるように、本実施例の結果は、様々な粘度の親水剤を使用することによる、生存可能プロバイオティクスの示差的制御放出能を示す。
【００９６】
【表１３】
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【００９７】
実施例１２
錠剤としての二層投与形態の片側は、約３４３ｍｇであり、親水剤、電解質剤、放出改変剤、不活性充填剤、及びプロバイオティクス事前配合物を含有し、表１２で示されるように調製された。使用される親水剤は、ＨＰＭＣである。使用される電解質剤は、ＮａＨＣＯ３である。使用される放出改変剤はペクチンであり、使用される不活性充填剤はＭＣＣである。本実施例で使用されるプロバイオティクス事前配合物は、凍結乾燥粉末の乳酸菌事前配合物及びデンプンからなる。ステアリン酸は流動剤として含められ、シリカは流動剤及び乾燥剤として使用される。ウコンは、着色剤として含められる。
【００９８】
図１０で示されるように、本実施例の結果は、比較的一定量の生存可能乳酸菌ＣＦＵにより証明される、周囲環境（２５℃、６０％相対湿度）で保存された場合の増大した経時安定能を示す。
【００９９】
【表１４】
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【０１００】
上記議論は説明、実例、及び例示であり、任意の付属の特許請求の範囲により画定される範囲を限定するとは解釈されるべきでない。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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