(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定化および可溶化する量の洗剤と共に、グルカゴンおよびグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）から選択されたペプチドを含む溶液形態にある水性組成物であって、該ペプチドは０.１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度であり、該洗剤がラウロイルリゾホスファチジルコリンまたはミリストイルリゾホスファチジルコリンである水性組成物。
【請求項２】
ペプチドが、０.２〜５ｍｇ／ｍｌの濃度である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
洗剤が、ペプチド ｍｏｌあたり０.３〜４０ｍｏｌの洗剤の量である、請求項１または２記載の組成物。
【請求項４】
０.５〜２.５ｍｇ／ｍｌのペプチドおよび１〜３ｍＭのラウロイルリゾホスファチジルコリンまたはミリストイルリゾホスファチジルコリンを含んでなる、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
ＮａＣｌ、グリセロールまたはマンニトールから選ばれた等張剤、アセテート、シトレートまたはホスフェートから選ばれ、ｐＨ４〜８で緩衝能を示す緩衝物質をさらに含んでなる、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
ｍ−クレゾール、フェノールまたはベンジルアルコールから選ばれた保存剤をさらに含んでなる、請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
グルカゴンおよびグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）から選択されたペプチドを含み、該ペプチドが０.１〜１０ｍｇ／ｍｌの濃度にある溶液の形態にある水性組成物を安定化するための方法であって、該組成物に安定化および可溶化させる量の洗剤を添加することからなり、該水性組成物中でペプチドが安定化され、かつ該安定化および可溶化させる洗剤がラウロイルリゾホスファチジルコリンまたはミリストイルリゾホスファチジルコリンである方法。
【請求項８】
水性組成物が請求項２〜６のいずれかに規定されたものである、請求項７記載の方法。
【請求項９】
患者におけるインスリン依存性またはインスリン非依存性糖尿病または肥満を治療するための薬剤の調製のための、請求項１〜６いずれかに記載の水性組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、ペプチド、例えばグルカゴン、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１、例えばＧＬＰ−１（７−３７）およびＧＬＰ−１（７−３６）アミド）およびそのアナログおよびその誘導体の安定な、注射し得る、水性溶液に関する。
【０００２】
（背景技術）
グルカゴンおよびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）は、共にグルカゴン前駆体から誘導されたポリペプチドホルモンである。組織特異的なプロセッシングによって、グルカゴンは膵臓中で作られるが、一方ＧＬＰ−１は腸に優勢的に分泌される。生理学的に、両ペプチドは、血液グルコースの調整に大きな役割を担っている。グルカゴンは、グリコーゲン分解さらに糖新生効果に直接関与している。ＧＬＰ−１は、インスリンの刺激およびグルカゴン分泌の抑制を介して間接的に関与している。即ち、２つのペプチドは、反対の方向で血液グルコースに影響する。
【０００３】
肝臓に対するグルコース分解の影響のため、グルカゴンは、急性低血糖（例えば「インスリンショック」)を治療するために使用される。加えて、グルカゴンは平滑筋への鎮痙性への影響を示し、この影響は、幾つかの造影方法、特に放射性診断と関連して治療学的に使用される。
【０００４】
ＧＬＰ−１フラグメント、例えばＧＬＰ−１（７−３７）、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびその機能的アナログ（本明細書において、ＧＬＰ−１化合物を示す）は、グルコースの存在下において膵臓性インスリン放出を刺激し、この発見によって、ＧＬＰ−１化合物はII型糖尿病の治療において有用であることを示唆され得る。
【０００５】
グルカゴン（２９アミノ酸；参照 The Merck Index,アミノ酸配列のための編集第１０版）およびＧＬＰ−１化合物（通常、約２９〜３１アミノ酸）は、単鎖のホモロジーが高いペプチドである。ＧＬＰ−１化合物の溶液挙動に関して、情報が殆ど利用できないが、グルカゴンの物理化学的特性は、引用文献[J.Biol.Chem.244,6675-6679(1969);Nature 257, 751-757(1975);FEBS Letts.199, 265-270(1980)]中において、十分に記載されている。該ペプチドは、約４〜９範囲のｐＨで、水中での非常に低い溶解度を示す。この範囲外では、一般に水溶液は、準安定性であって、調製の数時間以内にゲル化または凝集する傾向がある。
【０００６】
従って、注射のためのグルカゴン組成物は、使用する直前に適当な希釈剤を使用して再び元に戻す凍結粉末の形態で現在販売されている。そうして、得られた酸性溶液を注射することができる。急性低血糖症および放射線診断における運動性適応に使用されるグルカゴンの１回用量の組成物と対照的に、II型糖尿病を治療するためのＧＬＰ−１化合物の使用は、一般に複数回用量の可溶性組成物を包含する。グルカゴンの不安定性が示されると、そのような組成物の処方は、本質的に困難である。
【０００７】
従って、グルカゴンおよびＧＬＰ−１化合物のようなペプチドの安定な水性配合物が必要とされている。グルカゴンの場合、即時使用の組成物を使えることが、急性低血糖の緊急治療に対して望ましく、患者またはその場所にいる患者以外の人間が低血糖症状を直ちに治療し得る可能性を与える。放射線診断において使用されるグルカゴンの運動性適応に対しても、またＧＬＰ−１化合物に対するII型糖尿病適応に対しても、即時使用の水性組成物が利用できることは、簡便性かつ安全性の点で明らかな利点を提供する。
【０００８】
洗剤（界面活性剤）の添加によって可溶化されたグルカゴン組成物は、比較的その文献においては注目されていない。英国特許No.1 202 607は、カチオン（第四級アンモニウム塩）またはアニオン（アルキル−アリル−スルホネート）どちらかの、一価洗剤の使用を記載している。これらの化合物は、洗剤の６倍過剰モルを使用して、限定されたｐＨ範囲を超えて、１ｍｇ／ｍｌのグルカゴンの可溶化が高くなることを示した。
【０００９】
グルカゴン−洗剤の相互作用に関する一連の別の研究は、より低いグルカゴン濃度を用い、ペプチドの溶解度に対する洗剤の効果を述べていない。即ち、両性（Twitterionioc）洗剤のトリの卵リゾレシチン(０〜２００μＭ)を用いる研究において、洗剤の結合によって、約０.０２ｍｇ／ｍｌのペプチドを含有するグルカゴンの溶液中で部分的なヘリックス構造を誘導することが示された[J.Biol.Chem.247,4986-4991;4992-4995;(1972)]。同様に、グルカゴン希釈溶液（０.００５〜０.０５ｍｇ／ｍｌ）を用いる研究では、リゾレシチンが、グルカゴン中の部分的なヘリックス構造を誘導することで、アニオン洗剤、ジパルミトイルホスファチジル酸およびドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）以上に有効であることが見出された[Biopolymers 21, 1217-1228(1982);Biopolymers 22, 1003-1021(1983)]。
【００１０】
別の極端な例において、グルカゴンと濃縮した洗剤溶液との相互作用を特徴づける幾つかの例がある。これらは、ｐＨ２、２５ｍＭで、アニオン洗剤ＳＤＳのミセルと希釈グルカゴンとの結合[Biochemistry 19, 2117-2122(1980)]、および４０倍のモル過剰で存在する両性ドデシルホスホコリンのミセルと結合することによるグルカゴン（２０ｍｇ／ｍｌまで）の可溶化[例えば、３．５ ｍｇ／ｍｌ グルカゴンは、中性ｐＨで４０ｍＭ洗剤を用いて可溶化される；Biochim. Biophys. Acta 603, 298-312(1980)]を包含する。
【００１１】
上記の２８０ｍＭでのドデシルホスホコリンのミセルに結合する２０ｍｇ／ｍｌＧＬＰ−１（７−３６）アミドの可溶化を記述している一例を除外して（参照、上記グルカゴンの例、Biochemistry 33, 3532-3539,1994）、ＧＬＰ−１化合物による洗剤の結合や、その結果として起こるペプチドの溶解度および安定性への影響に関する報告はない。対照的に、ＧＬＰ−１化合物の持続的送達を調整するための幾つかの方法が記載されている（例えば、欧州特許出願Ｎo.0619322および米国特許No. 5,120,712の欄６）。この将来性としては、ポリマーの使用、ポリマー材料の粒子中への導入または油懸濁物中への導入、亜鉛イオン、プロタミンスルフェートおよび／またはフェノール化合物の添加、および非晶質／結晶性配合物の製造を含む。
【００１２】
（発明の要旨）
驚くべきことに、グルカゴンおよびＧＬＰ−１化合物の可溶性で安定な配合物が、多価の電荷（即ち、２つまたは２つ以上の負、２つまたは２つ以上の陽、または陽または負両方の電荷）を帯びた洗剤を添加することによって調製することができることが明かになった。例えば、ペプチドのモルあたり、洗剤の約０.５〜２０モルに対応する量を添加する場合、このクラスの洗剤は、ｐＨ４〜９の全範囲において、医薬的に適切な濃度のグルカゴンおよびＧＬＰ−１化合物を可溶化することができる。ｐＨ範囲が広くなると、可溶化ペプチドの化学的分解を抑制する条件を適切に選択できるようになる。さらに、好ましい洗剤は、以前に記載されたものよりもより生物学的に許容できる天然に存在する構造ブロック（building block）からなる。
【００１３】
従って、その広い態様において、本発明は、多価の電荷を帯びた洗剤との相互作用によって安定化された両親媒性α−ヘリックスを含有するポリペプチドを含む溶液形態にある医薬組成物に関する。そのようなポリペプチドは、グルカゴン、ＧＬＰ−１化合物、コルチコトロピン（ＡＣＴＨ）、カルシトニン、およびそれらの機能的アナログを包含するが、それらのペプチドには限定されない。
【００１４】
本発明の１つの態様は、安定化および可溶化する量の少なくとも１つの洗剤と共に、グルカゴン、ＧＬＰ−１およびそのアナログおよび誘導体から選択された少なくとも１つのペプチドを含む溶液形態にある水性組成物であって、該洗剤が少なくとも２つの陽電荷または少なくとも２つの負電荷を持つものか、または少なくとも１つの陽電荷および負電荷の組合せを持つものであって、該ペプチドまたはそのアナログまたは誘導体が、少なくとも約０.１ｍｇ／ｍｌの濃度にある水性組成物に関する（ただし、洗剤がドデシルホスホコリンである場合を除く）。
【００１５】
本発明の別の態様は、そのような多価の電荷を持つ、安定化および可溶化する量の少なくとも１つの洗剤を組成物に添加することによって、グルカゴン、ＧＬＰ−１およびそのアナログおよび誘導体から選択される少なくとも１つのペプチドを含む溶液形態にある水性組成物を安定化するための方法に関する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、本発明細書中に記載したような適切に安定化した水性組成物の治療学的な有効量を患者に投与することを含む、そのような治療を必要とする患者において、インスリン依存性またはインスリン非依存性の真性糖尿病または肥満患者を治療するための方法に関する。
【００１７】
（本発明の詳細な説明）
グルカゴンおよびＧＬＰ−１化合物は、両親媒性ヘリックス（即ち、ヘリックス構造の１つの面は主に疎水性アミノ酸の側鎖を示し、一方別の面は親水性および／または電荷を帯びた側鎖を示す）を形成する可能性を有するポリペプチド類に属する。このタイプのポリペプチドにおいて、両親媒性ヘリックス構造の形成は、疎水性区分によって限定された境界面に沿ったペプチド間ヘリックスの自己会合に関連することが多い。
【００１８】
単純な系を用いて、ＧＬＰ−１のフラグメントおよびアナログを記述する。即ち、例えば、Ｇｌｙ8−ＧＬＰ−１（７−３７）は、アミノ酸残基番号１〜６を排除し、天然に存在する８位（Ａｌａ）にあるアミノ酸残基をＧｌｙに置換することによって、ＧＬＰ−１から形式的に誘導されたＧＬＰ−１のフラグメントを示す。同様にして、Ｌｙｓ34（Ｎε−テトラデカノイル)−ＧＬＰ−１（７−３７）は、３４位にあるリジン残基のε−アミノ基がテトラデカノイル化されたＧＬＰ−１（７−３７）を示す。
【００１９】
ＧＬＰ−１（７−３６）アミドおよびＧＬＰ−１（７−３７）のアミノ酸配列は、以下の配列（Ｉ）：
0004072319.tif 000002
[配列中、ＸがＮＨ2であるときは、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドを、ＸがＧｌｙ-ＯＨであるときは、ＧＬＰ−１（７−３７）を示す。]
で与えられる。
【００２０】
本明細書中、「アナログ」なる用語は、基本ＧＬＰ−１ペプチドの１または１以上のアミノ酸残基が別のアミノ酸残基に置換されているおよび／またはペプチドの１または１以上のアミノ酸残基が除去されているおよび／または１または１以上のアミノ酸残基がペプチドに付加されているペプチドを示すために使用される。そのような付加は、Ｎ−末端またはＣ−末端のいずれかまたはその両方で起こり得る。「誘導体」なる用語は、ペプチドの１または１以上のアミノ酸残基が化学的修飾(例えば、アルキル化、アシル化、エステル形態またはアミド形態)されたペプチドを明示するために本明細書中で使用される。単純化のために、「ペプチド」なる用語は、グルカゴンおよびＧＬＰ−１ペプチドそれ自身、またそのアナログおよび誘導体を明示するために本明細書中で一般に使用する。
【００２１】
本発明は、推定上の両親媒性ヘリックスの親水性区分が２つまたは２つ以上の電荷を示す状況を基としている。多価の電荷の補足的セットを持つ洗剤を添加することによって、ヘリックス形成を安定化および可溶化する効果は、２つの要因の組合せ、即ち、
１）洗剤の極端基とヘリックスの電荷を帯びたアミノ酸側鎖との間の電荷−電荷の相互作用;および
２）同じ疎水区分またはその近傍のヘリックスのものとの会合のためにテンプレートとして働く洗剤の疎水端部、
から生じる。
【００２２】
本発明の安定化溶液は、経腸、経肺または経鼻投与に対して使用し得る。そのような溶液は、長い期間に、例えば４〜２５℃の温度で貯蔵された場合、安定のままであり、生物学的活性が保持される。
【００２３】
本発明の適当な洗剤は、多価の電荷、即ち２つまたは２つ以上の陽電荷、２つまたは２つ以上の負電荷、または少なくとも１つの陽電荷および少なくとも１つの負電荷の組合せを持つことを特徴とする。一価イオン洗剤に対して、多価の電荷の利点を添付の図１に示した。この図は、添加剤の非存在下、グルカゴン１ｍｇ／ｍｌ溶液と以下の１ｍＭの各洗剤：
ａ)セチル-トリメチルアンモニウムブロマイド(ＣＴＡＢ、即ち一価カチオン)、
ｂ)ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ、即ち、一価アニオン）および
ｃ）ミリストイルリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣＭ、即ち両性）、
存在下との平衡溶解度のｐＨ依存性を比較したものである。
【００２４】
これらのデータは、一価のカチオンおよびアニオン洗剤が溶解曲線の酸性および塩基周縁部で各々の溶解度が促進される一方、両性洗剤は、全ｐＨ範囲にわたって十分な溶解度をもたらすことを示す。さらに、両性洗剤の効果は、一価洗剤各々にみられる効果の判断から予想以上により強力であることが明白である。
【００２５】
本発明に従って使用した洗剤は、２つまたは２つ以上の電荷および、各々少なくとも６個の炭素原子を有する１または１以上の脂肪族側鎖を有する極端基（polar head group）を含む。好ましい洗剤において、脂肪族側鎖は、８〜２０、例えば１０〜１８の炭素原子を持つ。極端基に関して、有用な洗剤は、リゾホスホリピド（例えば、エタノールアミン、コリン、セリンまたはスレオニンの１−アシル−sn-グリセロ−３−ホスフェートエステル）からなる群から選択されるものを包含する。リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルセリンおよびリゾホスファチジルスレオニンのラウロイルおよびミリストイル誘導体が特に有用である。あるいは、極端基は、塩基性アミノ酸（例えば、リジン、アルギニンまたはヒスチジンのＮα−アシル化誘導体、または、リジンまたはアルギニンの側鎖のアシル化誘導体）であってよい。また、ジペプチド（例えば、リジン、アルギニンまたはヒスチジンおよび中性または酸性アミノ酸の全ての組合せからなるジペプチドのＮα−アシル化誘導体）またはトリペプチド(例えば、中性アミノ酸および２つの電荷を帯びたアミノ酸の全ての組合せからなるトリペプチドのＮα−アシル化誘導体）であってもよい。また、極端基は、ベタインの群（即ち、塩基性基が第四級アンモニウム、スルホニウムまたはホスホニウムであって、酸性基がカルボキシレート、カルボキシアルキル、スルホネートまたはプロパンスルホネートである場合の両親媒性化合物）から選択されてもよい。最終的に、該洗剤は、イミダゾリン誘導体の群から選択されてもよい。しかし、該洗剤は、ドデシルホスホコリンではないのが好ましい。
【００２６】
本発明の適当な組成の例は、１ｍｌあたり、約０.５〜２.５ｍｇのペプチド（例えば、１ｍｌあたり約１ｍｇのペプチド）および約１〜３ｍＭ（例えば、約２ｍＭ）の洗剤（例えば、ラウロイルまたはミリストイルリゾホスファチジルコリン）を含むものである。
【００２７】
本発明のグルカゴンおよびＧＬＰ−１化合物の、安定な水性の注射し得る溶液は、ペプチド、水および安定化および可溶化する量の洗剤と共に用いて調製することができる。通常、該溶液は、イオン強度を調整するための別の賦形剤を包含し、緩衝能および必要なように抗菌作用を提供する。最終ペプチド濃度は、少なくとも約０.１ｍｇ／ｍｌ、通常、約０.２〜５ｍｇ／ｍｌ、例えば０.５〜３ｍｇ／ｍｌであって、該洗剤は、通常、ペプチド ｍｏｌあたり、洗剤の少なくとも約０.３ｍｏｌに対する量、より一般的には少なくとも約０.５ｍｏｌ洗剤／ｍｏｌペプチドまで、約４０ｍｏｌ洗剤／ｍｏｌペプチドまで、通常約３０ｍｏｌ洗剤／ｍｏｌペプチド、例えば約１〜２０ｍｏｌ洗剤／ｍｏｌペプチド、例えば約１〜１０ｍｏｌ洗剤／ｍｏｌペプチドに相当する量を用いる。与えられるペプチドと洗剤およびペプチドの与えられる濃度に対して、当分野の技術者は、容易に、望ましい安定化を発生させる適当な洗剤の濃度を決定することができるであろう。等張イオン強度は、従来の医薬的に許容し得る剤、例えばＮａＣｌ、グリセロールまたはマンニトールによって提供することができる。ｐＨは、約４〜８の所望の範囲で、通常、当分野で周知の１〜１０ｍＭの濃度でアセテート、シトレートまたはホスフェート緩衝液を使用することによって緩衝することができる。最後に、保存剤を必要とする場合、適当な抗菌作用は、通常フェノール、ｍ−クレゾールまたはベンジルアルコールまたはその混合物の添加によって確保される。
【００２８】
本発明の組成物は、グルカゴン、ＧＬＰ−１またはそのアナログまたは誘導体を投与することによって治療し得る様々な疾患の治療に使用することができる。使用されるべき特別なペプチドおよび全ての患者に対する至適用量レベルは、治療すべき疾患に、および用いられる特定のペプチドの効力、患者年齢、体重、身体活性力、食事、他の薬物との起こり得る組合せ、症例の重症度などを含む要因の多様性に依存する。血液糖レベルの調節に対するＧＬＰ−１の通常の用量は、例えば１日に一回、約０.５〜１ｍｇであってよい。グルカゴンに対する通常用量は、例えば胃腸造影に対して、おおよそ１ｍｇであろう。活性な化合物の用量は当技術者によって個々の患者各々に対して決定されることを勧める。
【００２９】
本発明を以下の実施例でさらに説明するが、これは本発明を制限するものではない。
【００３０】
（実施例）
材料および方法
溶解平衡：ｐＨの溶解度のプロファイルに対して、適当な濃度でのペプチドおよび添加剤（洗剤および指示された場合は別の賦形剤）を含有する溶液を、ｐＨ９〜１０に調整した。該溶液を濾過し、試料を回収し、ｐＨを３〜８の範囲で所望の値に調整した。該試料を２４時間、２３℃で放置し、溶解平衡に到達させた。各試料の遠心分離（２０,０００ｇ、２０分間、２３℃）の後、ｐＨを測定し、この溶解度を、上清の２７６ｎｍでの吸光度を測定することによって決定した。
【００３１】
長期の物理安定性
グルカゴンおよびＧＬＰ−１（７−３７）を所望の終濃度の２倍で溶解し、ｐＨ１１.５、２３℃で、短いインキュベーション（＜１０分間）を行い、濾過し、所望の終濃度の２倍濃度で、全ての賦形剤を含む濾過溶液と同体積とを混合する。次いで、ｐＨを測定し、必要に応じて調整した。該溶液を小さなガラスボール（溶液粘度における変化を視覚的に決定する）を含むペン様カートリッジに移した。この容器を封止し、４℃〜３７℃の任意の温度でインキュベートした。適当な時間間隔で、この試料を静かに回転させ、ライトボックスを使用して視覚的に試験した。物理的変化（沈殿、結晶化またはゲル化）が明らかであった場合、この試料を遠心分離にかけ、上清中の吸光度を測定し、溶液の析出する成分が、該ペプチドか否かを決定した。
【００３２】
実施例１
溶解平衡を、添加剤の非存在下および１または２ｍＭ洗剤ＬＰＣＬ（ラウロイルリゾホスファチジルコリン）の存在下、１ｍｇ／ｍｌグルカゴン溶液に対するｐＨの関数として測定した。この結果を図２に示した。これにより優れた結果、即ち試験したｐＨ範囲にわたって約１００％の溶解度が、ＬＰＣＬの両濃度で得られることを示した。添加剤を含まない対照溶液に対して、許容し得る溶解度は、ｐＨ３で唯一得られた。
【００３３】
実施例２
溶解平衡を、添加剤の非存在下および２.５ｍＭの洗剤ＬＰＳＬ（パルミトイルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン）およびＬＰＣＭ（ミリストイルリゾホスファチジルコリン）存在下、グルカゴン溶液（２ｍｇ／ｍｌ）に対してｐＨ６〜８範囲のｐＨの関数として測定した。この結果を図３に示した。両添加剤によって、試験を行ったｐＨ６〜８のｐＨ範囲で１００％の溶解度を得た。
【００３４】
実施例３
溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加する量のＬＰＣＭ（ミリストイルリゾホスファチジルコリン）存在下、グルカゴン溶液（１ｍｇ／ｍｌ）に対するｐＨの関数として測定した。該結果を図４に示した。１または２ｍＭのＬＰＣＭを含有する溶液に対して、全ｐＨ範囲にわたって、約１００％の溶解度を得るが、一方０.５ｍＭ ＬＰＣＭは、ｐＨ４〜８で不十分な溶解度を示した。しかし、０.５ｍＭ ＬＰＣＭの添加でさえ、実質的には対照溶液を上回る改善を示した。
【００３５】
実施例４
以下の実施例は、本発明に従って調製された様々なグルカゴン溶液を示す。提示された全ての溶液は、透明（即ち、少なくとも４週間の観察継続中、グルカゴンは完全に溶解していた）なままであった。：
【表１】
0004072319.tif 000003
LPCM=ミリストイルリゾホスファチジルコリン
【表２】
0004072319.tif 000004
HPS=N-ヘキサデシル−Ｎ,Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート
LPCL＝ラウロイルリゾホスファチジルコリン
【００３６】
実施例５
溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加する量の洗剤ＬＰＣＬ（ラウロイルリゾホスファチジルコリン）存在下で、ＧＬＰ−１（７−３７）（２ｍｇ／ｍｌ）溶液に対するｐＨの関数として測定した。この結果を図５に示した。２.５および５ｍＭ ＬＰＣＬを含む溶液に対して、１００％の溶解度が全ｐＨ範囲を通して観察された。１.０ｍＭ ＬＰＣＬは、完全な効果を与えなかったが、洗剤を含まない対照組成物と比べて溶解度を著しく増加させた。
【００３７】
実施例６
溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加する量の洗剤ＬＰＣＭ（ミリストイルリゾホスファチジルコリン）存在下で、ＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ2溶液（２ｍｇ／ｍｌ）に対するｐＨの関数として測定した。この結果を図６に示し、この結果から、２ｍＭ ＬＰＣＭによって、対照組成物と比較して完全な溶解度が得られたことがわかった。
【００３８】
実施例７
溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加する量の洗剤ＬＰＣＬ（ラウロイルリゾホスファチジルコリン）存在下で、アシル化ＧＬＰ−１（７−３７）アナログＮε−ヘキサデカノイル−γ−グルタミル−Ｌｙｓ２６,Ａｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）溶液（１ｍｇ／ｍｌ）に対するｐＨの関数として測定した。この結果を、１ｍＭおよび２ｍＭ ＬＰＣＬが、対照組成物に関して溶解度を増加させるが、一方完全な溶解度が５ｍＭ ＬＰＣＬの存在下で得られたことを示す図７に示した。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１は、添加剤の非存在下、グルカゴン１ｍｇ／ｍｌ溶液と以下の１ｍＭの各洗剤：
ａ)セチル-トリメチルアンモニウムブロマイド(ＣＴＡＢ、即ち一価カチオン)、
ｂ)ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ、即ち、一価アニオン）および
ｃ）ミリストイルリゾホスファチジルコリン（ＬＰＣＭ、即ち両性）、
存在下との平衡溶解度のｐＨ依存性を比較したものである。
【図２】  図２は、溶解平衡を、添加剤の非存在下および１または２ｍＭ洗剤ＬＰＣＬ（ラウロイルリゾホスファチジルコリン）の存在下、１ｍｇ／ｍｌグルカゴン溶液に対するｐＨの関数として測定した結果である。
【図３】  図３は、溶解平衡を、添加剤の非存在下および２.５ｍＭの洗剤ＬＰＳＬ（パルミトイルリゾホスファチジル−Ｌ−セリン）およびＬＰＣＭ（ミリストイルリゾホスファチジルコリン）存在下、グルカゴン溶液（２ｍｇ／ｍｌ）に対してｐＨ６〜８範囲のｐＨの関数として測定した結果である。
【図４】  図４は、溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加的量のＬＰＣＭ（ミリストイルリゾホスファチジルコリン）存在下、１ｍｇ／ｍｌグルカゴン溶液に対するｐＨの関数として測定した結果である。
【図５】  図５は、溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加的量の洗剤ＬＰＣＬ（ラウロイルリゾホスファチジルコリン）存在下で、ＧＬＰ−１（７−３７）（２ｍｇ／ｍｌ）溶液に対するｐＨの関数として測定した結果をである。
【図６】  図６は、溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加的量の洗剤ＬＰＣＭ（ミリストイルリゾホスファチジルコリン）存在下で、ＧＬＰ−１（７−３６）−ＮＨ2溶液（２ｍｇ／ｍｌ）に対するｐＨの関数として測定した結果である。
【図７】  図７は、溶解平衡を、添加剤の非存在下および増加的量の洗剤ＬＰＣＬ（ラウロイルリゾホスファチジルコリン）存在下で、アシル化ＧＬＰ−１（７−３７）アナログＮε−ヘキサデカノイル−γ−グルタミル−Ｌｙｓ２６,Ａｒｇ３４−ＧＬＰ−１（７−３７）溶液（１ｍｇ／ｍｌ）に対するｐＨの関数として測定した結果である。
【図１】
0004072319.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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