【手続補正書】
【提出日】平成20年4月8日(2008.4.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００４】
免疫測定において測定感度の向上あるいは非特異反応抑制を図るための技術は多く開示されている。例えば、γ−グロブリンやその変性物を用いる方法（特開昭５５−１２４１９）、尿素、Ｎ−メチル尿素、Ｎ’，Ｎ’−ジメチル尿素、Ｎ−メチルホルムアミド等を用いる方法（特開昭５５−１６０８５３）、グアニジン類を用いる方法（特開昭５６−２５５６）、デキストラン硫酸、ヘパリン、ポリスチレンスルホン酸、フタル酢酸セルロ−ス、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸等のポリアニオンを用いる方法（特開昭５７−１８２１６９）、ポリエチレングリコールを共存させる方法（特開昭５８−４７２５６）、ゼラチン、オボアルブミン、ラクトアルブミン、動物血清アルブミン等の分解物のポリペプチドを添加する方法（特開昭５８−１４４７４８）、非イオン界面活性剤を用いる方法（特開昭５８−１８７８６２）、疎水性蛋白の０．１％以上を塩類の存在下に用いる方法（特開昭５９−２５１８４）、ブチロラクトン、バレロラクトン、カプロラクトン、ピロリドン等を用いる方法（特開昭５９−１５１０６１）、デキストランのような多糖類を用いる方法（特開昭５９−２２０６４６）、マウス血清、マウス腹水等を用いる方法（特開昭６１−６５１６２）、メチルセルロ−スやエチルセルロースのようなアルキル化多糖類を用いる方法（特開平２−１７３５６７）、ポリアクリル酸等のカルボキシル基含有重合体を含有する方法（特開平２−１９４３６０）、二価陽イオンを存在させる方法（特開平２−２２８５６０）、カルボキシメチルセルロ−スを用いる方法（特開平２−２３８３６０）、コンドロイチン硫酸を用いる方法（特開平２−２３８３６１）、アミノ酸を添加する方法（特開平３−１４８０６５）、ポリビニルピロリドンを用いる方法（特開平４−２０８５９）、グリコシド誘導体含有重合体を存在させる方法（特開平４−１２２８５８）、アルギン酸を用いる方法（特表平４−５０５５１０）、ヒドロキシメチルセルロースやヒドロキシエチルセルロースのようなヒドロキシアルキルセルロースを用いる方法（特開平５−１７２８１８）、プルランやポリビニルピロリドンを用いる方法（特開平５−１８０８３８）、ＨＬＢが１２から１９の非イオン界面活性剤を用いる方法（特開平６−６６７９８）、塩化ナトリウムイオン等のアルカリ金属イオン存在下の方法（特開平６−１３８１２４）、プルランやデンプンの分解物のようなマルトトリオ−ス重合体を用いる方法（特開平６−１６７４９３）、ヘパリンを含有する方法（特開平７−１５１７５４）、１−エチル−３−（３−ジメチル−アミノプロピル）ウレア、１−シクロヘキシル−３−（２−モルホリノエチル）ウレア−メト−ｐ−トルエンスルホネート、ジメチルアミン、ジエチルアミン等を含有する方法（特開平７−２５３４３０）、血漿蛋白質等と有機酸とを組合わせる方法（特開平７−２７０４１３）、グルコシルエチルメタクリレートやガラクトシルエチルメタクリレートのポリマーのような側鎖に糖類を有する高分子を用いる方法（特開平７−２７０４１７）、スレオ−１，４−ジメルカプト−２，３−ブタンジオールを添加する方法（特開平８−８６７８３）、ＥＤＴＡ、塩化ナトリウムを添加する方法（特開平８−１���５８９７）、マグネシウムイオンを存在させる方法（特開平８−２１１０５７）、ポリエチレングリコールのような凝集促進剤とアミノエタンスルホン酸誘導体等を組合わせて用いる方法（特開平８−２７８３０８）、卵アルブミンを含有する方法（特開平９−１０１３０９）、高分子非イオン界面活性剤を用いる方法（特開平９−２６９３２７）、スルホン酸基を含有する共役ジエン系重合体の存在下に行う方法（特開平９−３０４３８４）、ポリエチレングリコールやポリビニルピロリドンを用いる方法（特開平１０−２６６２２）、ＨＬＢが９−２０のモノマーからなる分子量が１０００−１５０万のポリマ−を含む方法（特開平１０−２８２１０１）、分子量が５００−２０００でステロイド環を有する界面活性剤を含む方法（特開平１０−２８２１０２）、硝酸塩やチオシアン酸塩を用いる方法（特開平１０−３１１８３０）、アルカリ性塩化物、アルカリ性酒石酸塩や改変熱ＢＳＡを用いる方法（特開平１１−２２３６３１）、Ｄ−アミノ酸からなるペプチドの使用（特開平１１−２４２０２８）、シクロデキストリンやその誘導体を含有する方法（特開平１１−２４８７０６）、親水部に二糖類を有する非イオン性界面活性剤を含有する方法（特開平１１−２５８２３９）、非特異因子に対する抗体を用いる方法（特開平１１−２８７８０１）、免疫学的に反応しない抗原を固定化した不溶性担体を用いる方法（特開平１１−３３７５５１）、リュウマチ因子またはリュウマチ因子様物質を添加する方法（特開平１１−３４４４９１）等である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
本発明の測定方法に使用されるコンドロイチン硫酸またはその塩およびポリアクリル酸またはその塩、ならびにブチロラクトン、バレロラクトン、カプロラクトン、バレロラクタム、カプロラクタムおよびピロリドンはすべて、市販品を用いることができる。コンドロイチン硫酸またはその塩としてはコンドロイチン硫酸、コンドロイチン硫酸Ａ、コンドロイチン硫酸Ｃやそれらのナトリウム塩などが挙げられる。ポリアクリル酸またはその塩としては、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸アンモニウムなどが挙げられる。その平均分子量が約５，０００から１，０００，０００のもの等が市販されている。分子量等によって好ましい使用濃度は変動するが、免疫反応液中での使用濃度はコンドロイチン硫酸またはその塩とポリアクリル酸またはその塩の１種または２種の全濃度が０．５−１０％（重量％、以下同じ）であり、好ましくは１−７％である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
実施例２
予備実験において、測定感度を向上させることが確認された試薬はデキストラン（２０−３０万）、コンドロイチン硫酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリル酸アンモニウム、ポリビニルアルコール（ｎ＝５００）、プルランおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）２０，０００であった。これら測定感度を向上させる試薬とγ−ブチロラクトンとの組み合わせを被検試薬とし、ＡＦＰ抗体結合金コロイド試薬によるＡＦＰ測定においてリュウマチ因子が引き起こす非特異反応に対する影響を調べた。
（１）試験溶液の調製
被検試薬を、γ−ブチロラクトンが３％、および測定感度を向上させる試薬が下記表２の各濃度となるようにベース緩衝液に添加し、試験溶液を調製した。
（２）検体の調製
干渉チェック・ＲＦプラス（国際試薬株式会社）のリュウマチ因子を含有する凍結乾燥物または含有しない凍結乾燥物を、ＡＦＰ標準０ｎｇ／ｍｌの溶液で溶解し、それぞれリュウマチ因子（＋）検体、リュウマチ因子（−）検体とした。
（３）試験方法
ＥＩＡマイクロプレートにＡＦＰ標準（０ｎｇ／ｍｌ、２０ｎｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ）、リュウマチ因子（＋）検体およびリュウマチ因子（−）検体１５μｌを分注し、さらに上記（１）の試験溶液１４０μｌを添加した後、以下、実施例１（２）と同様の方法にて吸光度変化を測定した。ＡＦＰ標準（０、２０、１００ｎｇ／ｍｌ）で得られた検量線から、リュウマチ因子（＋）検体およびリュウマチ因子（−）検体の測定値を算出した。
得られた結果を表２に示す。
【表２】
2002340899.tif 000001