【手続補正書】
【提出日】平成20年10月1日(2008.10.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、
（ａ）配列データベースより感染力のあるウィルスのタンパク配列を取得し、少なくとも一つのエピトープを含むウィルスタンパク配列のセグメントを選択するステップ、
（ｂ）該ウィルスタンパクの選択されたセグメントをエンコードするDNA フラグメントにリバースエンジニアリングを行なうステップ、
（ｃ）緑膿菌外毒素(pseudomonas exotoxin;PE) ベクタ−にDNA フラグメントを差し込み、キメラ遺伝子プラスミドを得るステップであって、このPEベクターは、
i.結合ドメインと移行ドメインを有するPEフラグメント、
ii.３’末端にKDELを含むアミノ酸配列をエンコードするカルボキシル基部分、
を包含し、
選択した該ウィルスタンパクのセグメントをエンコードするDNA フラグメントは該PEフラグメントと該カルボキシル基部分の間に差し込まれ、これによりキメラ遺伝子プラスミドを生成するステップ、
（ｄ）宿主細胞においてキメラ遺伝子プラスミドを表現してキメラワクチンウィルス抗原タンパクを得るステップであって、
該キメラワクチンウィルス抗原タンパクはPEフラグメント、該ウィルスタンパクの該選択されたセグメント、３’末端のアミノ酸配列KDELを含むカルボキシル基部分を包含するステップ、
以上のステップを包含することを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項２】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、リバースエンジニアリングを行なうステップは更に、
i.ウィルスタンパク配列の該選択されたセグメントからヌクレオチド配列を推定するステップ、
ii.推定されたヌクレオチド配列から一対以上のプライマーを設計し、該プライマーの少なくとも一対は３’末端で互いに相補的であるステップ、
iii.一周以上のポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実行し、そのうち第１周ＰＣＲは無ＤＮＡテンプレートＰＣＲであり、それによりプライマーから該ウィルスタンパクの該選択されたセグメントをエンコードする該DNA フラグメントを生成するステップ、
を包含したことを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項３】
請求項２のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、ヌクレオチド配列を推定するステップが更に、エンコードされたアミノ酸を改変することなく少なくとも一つの遺伝子コドンを組換え、それにより宿主細胞におけるキメラワクチンウィルス抗原タンパクの表現を強化するステップを包含することを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項４】
請求項２のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、ヌクレオチド配列を推定するステップが更に、免疫毒性及び又はアレルギーを誘発する可能性のあり配列を削除或いは改変するステップを包含することを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項５】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該ウィルスタンパクの該選択されたセグメントは少なくとも一つの抗体中和エピトープを含むことを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項６】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該ウィルスタンパクの該選択されたセグメントは少なくとも一つのＢ細胞或いはＴ細胞刺激エピトープを含むことを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項７】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該感染力のあるウィルスは動物の種に感染力を有することを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項８】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該感染力のあるウィルスは鳥類或いは人類或いはその両方に感染力を有することを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項９】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該感染力のあるウィルスはインフルエンザウィルスであることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１０】
請求項９のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該インフルエンザウィルスは鳥或いはヒトインフルエンザウィルスであることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１１】
請求項９のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該インフルエンザウィルスはＨ１Ｎ１、Ｈ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ１からなる亜型群から少なくとも一種類が選択されることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１２】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該宿主細胞は微生物細胞、植物細胞及び動物細胞からなる群より少なくとも一種類が選択されることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１３】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該宿主細胞は大腸菌及び酵母からなる群より少なくとも一種類が選択されることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１４】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該ウィルスタンパクの該選択されたセグメントはフルレングスウィルスタンパク或いはその部分フラグメントであることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１５】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該ウィルスタンパクの該選択されたセグメントはＨ５Ｎ１−ＨＡ或いはＨ１Ｎ１−ＮＡの部分フラグメントであり、少なくとも一つの抗体中和エピトープを含むことを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１６】
請求項１のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該ウィルスタンパクは、ヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニラーゼ（ＮＡ）、Ｍ２、核タンパク（ＮＰ）、ＮＳ１、ＮＳ２、ＰＢ１、ＰＢ２、及びＰＡからなる群より選択された少なくとも一種類であることを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１７】
請求項１６のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該ウィルスタンパクがＭ２とされ、該選択されたセグメントがその疎水領域を持たないことを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１８】
請求項１６のキメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法において、該選択するステップでは、該ウィルスタンパク配列の一つ以上のセグメントを選択し、エンジニアリングのステップでは、それぞれ該ウィルスタンパクの一つ以上のセグメントをエンコードする一つ以上のDNA フラグメントを生成し、一つ以上のDNA フラグメントがリゲートされPEベクタ−へのサブ配列クローニングのためにDNA フラグメントを形成することを特徴とする、キメラワクチンウィルス抗原タンパクの調整方法。
【請求項１９】
ワクチン組成物であり、該ワクチン組成物は、動物の鳥インフルエンザウィルスに対する免疫を誘発し、キメラワクチンウィルス抗原タンパクを包含し、該キメラワクチンウィルス抗原タンパクは、
ａ．鳥インフルエンザウィルス由来のタンパクフラグメント、
ｂ．結合ドメインと移行ドメインを含むＰＥフラグメント、
ｃ．３’末端にアミノ酸配列KDELを含むカルボキシル基部分、
を有し、該タンパクフラグメントは少なくとも一つのエピトープを包含することを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項２０】
請求項１９記載のワクチン組成物において、該タンパクフラグメントはヘマグルチニン（ＨＡ）、ノイラミニラーゼ（ＮＡ）、Ｍ２、核タンパク（ＮＰ）、ＮＳ１、ＮＳ２、ＰＢ１、ＰＢ２、及びＰＡからなる群より選択された少なくとも一種類であることを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項２１】
請求項２０のワクチン組成物において、該ウィルスタンパクが疎水領域を持たないＭタンパク、或いはＨＡタンパクの部分フラグメントとされたことを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項２２】
請求項１９のワクチン組成物において、該タンパクフラグメントが鳥インフルエンザウィルス由来のフルレングスウィルスタンパク、或いはその部分フラグメントであることを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項２３】
請求項１９のワクチン組成物において、該鳥インフルエンザウィルスはＨ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ１Ｎ１からなる亜型群から少なくとも一種類が選択されることを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項２４】
請求項１９のワクチン組成物において、該タンパクフラグメントは少なくとも一つの抗体中和エピトープ、或いは少なくとも一つのＢ細胞或いはＴ細胞刺激エピトープを含むことを特徴とする、ワクチン組成物。
【請求項２５】
請求項１９記載のワクチン組成物の有効量を動物に与えるステップを包含することを特徴とする、動物における鳥インフルエンザウィルスに対する免疫誘発方法。
【請求項２６】
請求項１９記載のワクチン組成物の有効量を動物に与えるステップを包含し、該タンパクフラグメントは亜型鳥インフルエンザウィルスＨ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ１Ｎ１からなる群から選択された少なくとも一種類に由来することを特徴とする、動物における亜型鳥インフルエンザウィルスＨ５Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ１Ｎ１に対する免疫誘発方法。
【請求項２７】
請求項１９記載のワクチン組成物の有効量を動物に与えるステップを包含することを特徴とする、動物における鳥インフルエンザウィルスＨ５Ｎ１に対する免疫誘発方法。
【請求項２８】
請求項２０記載のワクチン組成物の有効量を動物に与えるステップを包含することを特徴とする、動物における鳥インフルエンザウィルスＨ５Ｎ１に対する免疫誘発方法。
該タンパクフラグメントが鳥インフルエンザウィルス由来のフルレングスウィルスタンパク、或いはその部分フラグメントであることを特徴とする、ワクチン組成物。