【手続補正書】
【提出日】平成19年12月17日(2007.12.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
E型肝炎ウイルスに由来するポリヌクレオチド断片を包括的に得るためのユニバーサルプライマーセットであって、
（１）E型肝炎ウイルスのｃＤＮＡを作成するための
配列番号３２に示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第一の混合センスプライマー;
ｇｃａｇａｃｃａｃａｔａｔｇｔｇｇｔｃｇ、
ｇｃａｇａｃｃａｃａｔａｔｇｔｇｔｔｃｇ、
ｇｃａｇａｃｃａｃｇｔａｔｇｔｇｇｔｃｇ、および
ｇｃａｇａｃｃａｃｇｔａｔｇｔｇｔｔｃｇ、
および
配列番号３３により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第二の混合センスプライマー;
ｃｃａｃａｔａｔｇｔｇｇｔｃｇａｃｇｃｃ、
ｃｃａｃａｔａｔｇｔｇｇｔｃｇａｔｇｃｃ、
ｃｃａｃｇｔａｔｇｔｇｇｔｃｇａｃｇｃｃ、および
ｃｃａｃｇｔａｔｇｔｇｇｔｃｇａｔｇｃｃ、
並びに
配列番号３４により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第一の混合アンチセンスプライマー;
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ａｃｃａｇｃｔｇｃｃｇａｇｇｔｔｇｃａｔ、
ａｃｃａｇｃｔｇｃｃｇｇｇｇｃｔｇｃａｔ、および
ａｃｃａｇｃｔｇｃｃｇｇｇｇｔｔｇｃａｔ、
および
配列番号３５により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第二の混合アンチセンスプライマー;
ｃｇｃｔｇａａｔａｇｇａｔｇａｔｔｃｃａ、
ｃｇｃｔｇａａｔａｇｇａｔｇｇｔｔｃｃａ、
ｃｇｃｔｇａａｔａｇｇｇｔｇａｔｔｃｃａ、
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ｃｇｃｔｇａａｔｔｇｇｇｔｇａｔｔｃｃａ、
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ｃｇｔｔｇａａｔｔｇｇｇｔｇｇｔｔｃｃａ、
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ｃｇｔｔｇｇａｔａｇｇｇｔｇａｔｔｃｃａ、
ｃｇｔｔｇｇａｔａｇｇｇｔｇｇｔｔｃｃａ、
ｃｇｔｔｇｇａｔｔｇｇａｔｇａｔｔｃｃａ、
ｃｇｔｔｇｇａｔｔｇｇａｔｇｇｔｔｃｃａ、
ｃｇｔｔｇｇａｔｔｇｇｇｔｇａｔｔｃｃａ、および
ｃｇｔｔｇｇａｔｔｇｇｇｔｇｇｔｔｃｃａ、
並びに
（２）前記ｃＤＮＡを増幅するための
配列番号３６により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第一の混合センスプライマー；
ｔｇｇｔｃｇａｃｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃ、
ｔｇｇｔｃｇａｔｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃ、
ｔｇｔｔｃｇａｃｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃ、および
ｔｇｔｔｃｇａｔｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃ、
および
配列番号３８により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第二の混合センスプライマー；
ａｃｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃｃｃａｃｃａｇ、
ａｃｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃｃｃａｔｃａｇ、
ａｔｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃｃｃａｃｃａｇ、および
ａｔｇｃｃａｔｇｇａｇｇｃｃｃａｔｃａｇ、
並びに
配列番号３９により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第一の混合アンチセンスプライマー；
ｃｇａａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
ｃｇａａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
ｃｇｇａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
ｃｇｇａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
ｃｔａａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
ｃｔａａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
ｃｔｇａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、および
ｃｔｇａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔｃｇｃ、
および
配列番号４０により示される以下のプライマーまたはその相補鎖からなる第二の混合アンチセンスプライマー；
ｇｇｃｃｇａａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
ｇｇｃｃｇａａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
ｇｇｃｃｇｇａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
ｇｇｃｃｇｇａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
ｇｇｃｃｔａａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
ｇｇｃｃｔａａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
ｇｇｃｃｔｇａｃｃａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、および
ｇｇｃｃｔｇａｃｔａｃｃａｃａｇｃａｔｔ、
からなるユニバーサルプライマーセット。
【請求項２】
E型肝炎ウイルスの包括的に検出するための請求項１に記載のユニバーサルプライマーセットの使用。
【請求項３】
（１）対象より血清を得ること、
（２）前記（１）により得られた血清と、請求項１に記載の配列番号３２およびその相補鎖および配列番号３３およびその相補鎖により示される混合センスプライマーとしてのユニバーサルプライマーと、請求項１に記載の配列番号３４およびその相補鎖および配列番号３５およびその相補鎖により示される混合アンチセンスプライマーとしてのユニバーサルプライマーとポリメラーゼとを、適切な増幅が得られる条件下で反応させてcDNAを得ること、
（３）前記（２）の反応により得られた反応産物であるcDNAを、請求項１に記載の配列番号３６および配列番号３８およびその相補鎖により示される混合センスプライマーとしてのユニバーサルプライマーと、請求項１に記載の配列番号３９および配列番号４０およびその相補鎖により示される混合アンチセンスプライマーとしてのユニバーサルプライマーとポリメラーゼとを、適切な増幅が得られる条件化でnested PCR反応させること、
（４）前記（３）で得られた反応産物と、ｃｔｃｃｔｇｇｃａｔｃａｃｔａｃｔｇｃで示されるＨＥＶ−ＩおよびＩＩ用プローブ、ｃｔｃｃｔｇｇｃａｔｔａｃｔａｃｔｇｃで示されるＨＥＶ−ＩＩＩ用プローブ、並びにｃｔｃｃｔｇｇｃｇｔｃａｃｔａｃｔｇで示されるＨＥＶ−ＩＶ用プローブとを反応させ、そこにおけるハイブリダイゼーションの有無を検出すること、
（５）前記（４）の検出の結果から、前記サンプルに含まれるE型肝炎ウイルスのタイピングを行う方法。