(57)【要約】  １型糖尿病の自己免疫を処置するための組成物は、治療的に有効な量のプレプロインスリンの２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含むことができ、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つは抗原性である。
2017520509.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療的に有効な量の配列番号：１の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、組成物。
【請求項２】
１型糖尿病の自己免疫を処置するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記フラグメントが約２０アミノ酸長である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記フラグメントが、約３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、および／または８アミノ酸長である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項５】
前記フラグメントが、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項６】
前記フラグメントが、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記フラグメントが約２０アミノ酸長であり、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項８】
前記フラグメントが約２０アミノ酸長であり、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項９】
前記フラグメントが、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれ以上の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントを含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記第１のポリペプチドフラグメントおよび／または前記第２のポリペプチドフラグメントが、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれ以上の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントを含む、請求項５から８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記フラグメントが少なくとも１つの内在性プレプロインスリンエピトープを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記フラグメントが２つ以上のプレプロインスリンエピトープを含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記フラグメントがインスリン様の代謝活性を示さない、請求項１から１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記フラグメントがインスリン中に存在しない少なくとも１つのエピトープを含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
前記２つ以上の重複フラグメントがそれぞれプレプロインスリンエピトープを含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１６】
調整免疫反応を促進するアジュバントをさらに含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１７】
油および乳化剤を含むアジュバントをさらに含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１８】
不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）をさらに含む、請求項１から１７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１９】
アラムアジュバントまたは他の薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む、請求項１から１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が免疫調節性である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２１】
前記組成物が非免疫抑制性である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２２】
前記組成物がＴｈ２免疫反応を誘発する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記組成物がＴｈ１免疫反応を誘発しない、請求項１から１９のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２４】
少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、および／または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインをさらに含む、請求項１から２３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２５】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤をさらに含む、請求項１から２４のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２６】
請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物の治療的に有効な量を、前記組成物を必要としている被験体に投与することを含む、１型糖尿病の自己免疫の処置。
【請求項２７】
前記被験体が成人である、請求項２６に記載の処置。
【請求項２８】
前記被験体が若年者である、請求項２６に記載の処置。
【請求項２９】
前記被験体が１型糖尿病を有し、前記処置が少なくとも１つの臨床的エンドポイントを達成する、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３０】
前記被験体が１型糖尿病を有し、前記処置が１型糖尿病の少なくとも１つの症状を緩和する、請求項２６から２９のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３１】
前記被験体が前臨床的１型糖尿病を有し、前記処置が１型糖尿病への進行を防ぐかまたは遅らせる、請求項２６から２８のいずれか一個に記載の処置。
【請求項３２】
前記被験体が、１型糖尿病が発症しやすい状態であり、前記処置が、１型糖尿病の発症を防ぐかまたは遅らせる、請求項２６から２８のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３３】
前記処置が膵β細胞に対する自己免疫を緩和する、請求項２６から３２のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３４】
前記投与するステップが、静脈内、筋肉内、または皮下投与を含む、請求項２６から３３のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３５】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤を投与することをさらに含む、請求項２６から３４のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３６】
前記治療的に有効な量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の前記組成物を被験体に投与するのに先立って、前記被験体が１型糖尿病の自己免疫の処置を必要としているかを決定することをさらに含む、請求項２６から３５のいずれか一項に記載の処置。
【請求項３７】
１型糖尿病の自己免疫の処置を必要としている被験体を選択するステップと、
治療的に有効な量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の前記組成物を前記被験体に投与するステップとを含む、１型糖尿病の処置。
【請求項３８】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤、ならびに／あるいは少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、および／または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインを投与することをさらに含む、請求項３７に記載の処置。
【請求項３９】
治療的に有効な量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の前記組成物と、
前記組成物を必要としている被験体に前記組成物を投与するための説明書とを含む、１型糖尿病の自己免疫を処置するためのキット。
【請求項４０】
１型糖尿病の自己免疫の診断薬と、
治療的に有効な量の請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物と、
被験体を診断し、前記被験体が前記組成物を必要としている場合に前記組成物を前記被験体に投与するための説明書とを含む、１型糖尿病の自己免疫を診断し処置するためのキット。
【請求項４１】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤、ならびに／あるいは少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、および／または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインをさらに含む、請求項３９または４０に記載のキット。
【請求項４２】
治療的に有効な量の配列番号：１の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の組成物を作成する方法。
【請求項４３】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤を、前記フラグメントおよび薬学的キャリア、ならびに／あるいは少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、および／または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインと組み合わせることをさらに含む、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
治療的に有効な量の配列番号：１の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、１型糖尿病の自己免疫の処置に使用される、組成物。
【請求項４５】
前記フラグメントが約２０アミノ酸長である、請求項４４に記載の使用のための組成物。
【請求項４６】
前記フラグメントが、約３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、および／または８アミノ酸長である、請求項４４に記載の使用のための組成物。
【請求項４７】
前記フラグメントが、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項４４から４６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項４８】
前記フラグメントが、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項４４から４６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項４９】
前記フラグメントが約２０アミノ酸長であり、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項４４に記載の使用のための組成物。
【請求項５０】
前記フラグメントが約２０アミノ酸長であり、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む、請求項４４に記載の使用のための組成物。
【請求項５１】
前記フラグメントが、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれ以上の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントを含む、請求項４４から５０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５２】
前記第１のポリペプチドフラグメントおよび／または前記第２のポリペプチドフラグメントが、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれ以上の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントを含む、請求項４７から５０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５３】
前記フラグメントが少なくとも１つの内在性プレプロインスリンエピトープを含む、請求項４４から５２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５４】
前記フラグメントが２つ以上のプレプロインスリンエピトープを含む、請求項４４から５２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５５】
前記フラグメントがインスリン様の代謝活性を示さない、請求項４４から５４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５６】
前記フラグメントがインスリン中に存在しない少なくとも１つのエピトープを含む、請求項４４から５４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５７】
前記２つ以上の重複フラグメントがそれぞれプレプロインスリンエピトープを含む、請求項４４から５６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５８】
調整免疫反応を促進するアジュバントをさらに含む、請求項４４から５７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項５９】
油および乳化剤を含むアジュバントをさらに含む、請求項４４から５８のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６０】
不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）をさらに含む、請求項４４から５９のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６１】
アラムアジュバントまたは他の薬学的に許容可能なキャリアをさらに含む、請求項４４から６０のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６２】
前記組成物が免疫調節性である、請求項４４から６１のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６３】
前記組成物が非免疫抑制性である、請求項４４から６２のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６４】
前記組成物がＴｈ２免疫反応を誘発する、請求項４４から６３のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６５】
前記組成物がＴｈ１免疫反応を誘発しない、請求項４４から６４のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６６】
少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインをさらに含む、請求項４４から６５のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６７】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤、ならびに／あるいは少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインをさらに含む、請求項４４から６６のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【請求項６８】
１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤、ならびに／あるいは少なくとも１つの調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン、または抗炎症性のロイコトリエン、サイトカインを投与することをさらに含む、請求項４４から６７のいずれか一項に記載の使用のための組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、全体として、自己免疫疾患の分野に関し、具体的には、１型糖尿病（Ｔｙｐｅ  １  ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍｅｌｌｉｔｕｓ）の処置、予防、または進行の遅延に関する。本発明は、より詳しくは、１型糖尿病の自己免疫に対する免疫調節療法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの１型糖尿病（「Ｔ１ＤＭ」）の発症は、Ｔ細胞媒介性自己免疫破壊によって引き起こされる、β細胞不全の臨床症状である。Ｔ１ＤＭにより、毎日のインスリン注射に生涯依存することになり、急性合併症および後期合併症の両方に晒される。Ｔ１ＤＭは、その処置において著しい発展を成してきたが、個人および社会に対するその負担は深刻である。Ｔ１ＤＭは、小児およびその家族にとって特に負担であり、最も深刻な慢性小児疾患の１つにあたる。Ｔ１ＤＭの発症は成人期に起こる場合があるが、大部分は小児および若者における問題である。Ｔ１ＤＭの発症には、４〜７歳と１４〜１６歳の２つのピーク年齢がある。Ｔ１ＤＭの世界的な出現率は増加しており、５歳未満の小児で最も増加している。したがって、この疾患を改善する必要性は差し迫っており、また増大している。
【０００３】
Ｔ１ＤＭは、小児における一般的な内分泌疾患であり、Ｔ１ＤＭを患っている小児の８０％以下が糖尿病ケトアシドーシス（ＤＫＡ）を示し、これは短期的リスクおよび長期的結果の両方と関連付けられる。短期的な、また多くの場合は生命を脅かす合併症としては、アシドーシスを併発する場合が多い低血糖および高血糖エピソードが挙げられる。長期合併症は、さらなる著しい罹患率および死亡率を示す場合がある。患者は、衰弱および生命の危険を伴う場合がある、大血管合併症および細小血管合併症、心血管合併症、高血圧症、網膜症、腎症、ならびに神経障害に直面することがある。これらは、医療の進歩によって低減される可能性があるが、現在は、Ｔ１ＤＭ患者において排除することができない。さらに深刻な合併症としては、腎不全、失明、および切断が挙げられる。
【発明の概要】
【０００４】
本発明は、様々な態様および実施形態において、治療剤（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、療法、診断薬（ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）、キット、および作成方法を含む、１型糖尿病（「Ｔ１ＤＭ」）の自己免疫治療を提供する。例えば、本発明は、治療的に有効な量の配列番号：１の２つ以上の重複フラグメント（即ち、プレプロインスリン）と、薬学的に許容可能な（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ）キャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、組成物を提供する。組成物は、１型糖尿病を処置するためのものであり得る。免疫調節性であることに加えて（例えば、免疫抑制性とは反対に）、本発明による特定の治療剤は代謝的に活性ではなく（例えば、インスリン様の活性を有さない）、したがって有利なことに、安全に使用される（即ち、大用量のインスリンのように、大用量によって患者を死に至らしめたり患者に害をなすことがない）。
【０００５】
臨床的Ｔ１ＤＭを緩和することに加えて、本発明は、特定の実施形態では、前臨床的Ｔ１ＤＭの発症または進行を防ぐことができる。様々な態様および実施形態において、Ｔ１ＤＭの臨床的発症を遅らせることができ、したがって、症状がない期間を延長するか、またはＴ１ＤＭの臨床的発症そのものを防ぐことができるので、これは有利であり得る。診断の時点で、Ｔ１ＤＭ患者は、相当量のインスリン産生（例えば、Ｃ−ペプチド量によって測定されるような、機能しているβ細胞）を依然として有していることがある。Ｔ１ＤＭにおける機能している残余のβ細胞が失われるのを止めるかまたは遅らせることができる治療介入は、Ｔ１ＤＭ発症後の「緩解」期を延長することがあるので、非常に望ましい。さらに、本発明は、特定の患者における急性および慢性合併症の発症を低減するかまたは遅らせることができる。
【０００６】
同様に、本発明は、糖尿病を患っている被験体の日常的管理を大幅に改善することができる。例えば、本発明は、低血糖症に対する保護を提供するとともに代謝制御を改善し、その結果、糖尿病の細小血管合併症および大血管合併症の発症を遅らせ、かつ／または低減することができる。概して、本発明による残余のβ細胞の保存は、Ｔ１ＤＭの短期および長期合併症の低減に結び付き得るので、非常に望ましい。
【０００７】
１つの態様では、本発明は、治療的に有効な量の配列番号：１（即ち、プレプロインスリン）の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、組成物を提供する。様々な実施形態では、組成物は１型糖尿病の処置用である。別の態様では、本発明は、治療的に有効な量の配列番号：１の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、１型糖尿病の自己免疫の処置に使用される、組成物を提供する。
【０００８】
別の態様では、本発明は、本発明による組成物のうちいずれか１つの組成物の治療的に有効な量を、それを必要としている被験体に投与することを含む、１型糖尿病の処置を提供する。
【０００９】
別の態様では、本発明は、（ｉ）１型糖尿病の自己免疫の処置を必要としている被験体を選択することと、（ｉｉ）本発明による組成物のうちいずれか１つの組成物の治療的に有効な量を被験体に投与することとを含む、１型糖尿病の処置を提供する。
【００１０】
別の態様によれば、本発明は、（ｉ）本発明による組成物のうちいずれか１つの組成物の治療的に有効な量と、（ｉｉ）組成物を必要としている被験体にそれを投与するための説明書とを含む、１型糖尿病の自己免疫を処置するためのキットを提供する。
【００１１】
別の態様では、本発明は、（ｉ）１型糖尿病の自己免疫診断薬（例えば、自己抗体試験−抗インスリンＩＡＡ、抗ＧＡＤ６５、抗ＩＡ２−インスリノーマ抗原２、抗Ｚｎ８−亜鉛トランスポーター８抗体、Ｔ細胞生物マーカーなど）と、（ｉｉ）請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物の治療的に有効な量と、（ｉｉｉ）被験体を診断し、被験体が組成物を必要としている場合にそれを投与するための説明書とを含む、１型糖尿病の自己免疫を診断し処置するためのキットを提供する。
【００１２】
別の態様では、本発明は、配列番号：１の２つ以上の重複フラグメントと薬学的に許容可能なキャリアとを組み合わせることを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、本明細書に記載される１型糖尿病を処置するための、本発明による組成物を作成する方法を提供する。
【００１３】
本発明の様々な実施形態では、上述の態様のうち任意のものを、後述するいずれか１つまたは複数の特徴と組み合わせることができる。
【００１４】
様々な実施形態では、フラグメントは約２０アミノ酸長である。
【００１５】
様々な実施形態では、フラグメントは、約３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、および／または８アミノ酸長である。本発明による組成物は、長さが均一（例えば、全て約２０アミノ酸長）、ならびに長さが分布するフラグメントを含むことができる。
【００１６】
様々な実施形態では、フラグメントは、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。
【００１７】
様々な実施形態では、フラグメントは、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。本発明による組成物は、重複が均一（例えば、全て約１０個のアミノ酸）、ならびに重複が様々であるフラグメントを含むことができる。
【００１８】
様々な実施形態では、フラグメントは約２０アミノ酸長であり、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。あるいは、フラグメントは約２０アミノ酸長であり、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。
【００１９】
様々な実施形態では、フラグメント、第１のポリペプチドフラグメント、および／または第２のポリペプチドは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれ以上の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントを含む。組成物は、プレプロインスリン配列全体を本質的に覆うフラグメントを含むことができ、またはプレプロインスリンエピトープの集合（ｓｅｔ）もしくは部分集合（ｓｕｂｓｅｔ）に限定されることがある。組成物は、フラグメントの所定の集合（例えば、それぞれ１０アミノ酸長の１００個のフラグメント）によって覆われた、プレプロインスリン配列全体（例えば、１１０個のアミノ酸）を含むことができる。
【００２０】
様々な実施形態では、フラグメントは、少なくとも１つの内在性プレプロインスリンエピトープを含む。フラグメントは、２つ以上のプレプロインスリンエピトープを含むことができる。
【００２１】
様々な実施形態では、フラグメントはインスリン様の代謝活性を示さない。
【００２２】
様々な実施形態では、フラグメントは、インスリン中に存在しない少なくとも１つのエピトープを含む。
【００２３】
様々な実施形態では、２つ以上の重複フラグメントはそれぞれ、プレプロインスリンエピトープを含む。エピトープは、既知のエピトープ、例えばＢ鎖Ｂ９−２３およびＡ鎖１−１５を含む。エピトープは、プレプロインスリンを断片化した結果として露出する潜在性エピトープ（即ち、天然の折り畳まれたプレプロインスリンの状態では溶媒アクセス不能であるエピトープ）を含むことができる。エピトープは、プレプロインスリン配列（またはその類似体）中に存在するエピトープの集合全体（ｆｕｌｌ  ｓｅｔ）を含むことができる。エピトープは、β細胞に特異的である１つ以上のエピトープ（即ち、Ｔ１ＤＭにおける自己免疫の特定の標的）を含むことができる。
【００２４】
様々な実施形態では、組成物は、調節免疫反応（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ）を促進するアジュバントを含む。
【００２５】
様々な実施形態では、組成物は、油と、水と混合した乳化剤とを含むアジュバントを含む。
【００２６】
様々な実施形態では、組成物は不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を含む。
【００２７】
様々な実施形態では、組成物はアラム（ａｌｕｍ）アジュバントを含む。様々な実施形態では、組成物は、スクアレン、死菌およびトキソイド、アルミニウム塩−アラム／無機化合物、リポソーム、ナノエマルジョン、デンドリマーなどのアジュバントを含む。
【００２８】
様々な実施形態では、組成物は免疫調節性である。
【００２９】
様々な実施形態では、組成物は非免疫抑制性である。
【００３０】
様々な実施形態では、組成物はＴｈ２免疫反応を誘発する。
【００３１】
様々な実施形態では、組成物はＴｈ１免疫反応を誘発しない。
【００３２】
様々な実施形態では、組成物は、１つ以上の追加の治療剤（例えば、Ｔ１ＤＭの第２の治療剤）をさらに含む。追加の治療剤の例としては、調節促進性の（ｐｒｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ）ロイコトリエン、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦβなど）、ならびに／あるいは調節反応を促進もしくは向上する、または自己免疫寛容を回復する、他の物質が挙げられる。追加の治療剤の他の例としては、自己免疫反応を阻害する、抗炎症性ロイコトリエンおよびサイトカイン（例えば、ＩＬ−１拮抗薬）が挙げられる。様々な実施形態では、組成物は、１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤をさらに含む。あるいは、１つ以上の追加の治療剤は組成物とは別個のものであり得る。これらの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤は、組成物と組み合わせて、かつ／または組成物とは別個に投与することができる。１つ以上の追加の治療剤は、組成物と同時に、ならびに／あるいは組成物の投与に先立って、かつ／またはそれに続いて投与することができる。例えば、１つ以上の追加の治療剤は、組成物の一部を形成してもよく、１つ以上の追加の治療剤とともに、組成物とは別個に、組成物と同時に、それに先立って、またはそれに続いて投与されてもよい。
【００３３】
様々な実施形態では、被験体は成人である。別の実施形態では、被験体は若年者である。
【００３４】
様々な実施形態では、被験体は１型糖尿病を有しており、処置は、少なくとも１つの臨床的エンドポイント（例えば、Ｃ−ペプチド分泌の改善、インスリン使用の低減、ＨｂＡ１ｃの改善など）を達成する。
【００３５】
様々な実施形態では、被験体は１型糖尿病を有しており、処置は、１型糖尿病の少なくとも１つの症状（例えば、低血糖症／高血糖症の頻度、糖尿の低減、入院の程度／回数、腎症、神経障害、および網膜症などの合併症の程度／回数）を緩和する。
【００３６】
様々な実施形態では、被験体は前臨床的１型糖尿病を有しており、処置は、臨床的１型糖尿病への進行を防ぐかまたは遅らせる。
【００３７】
様々な実施形態では、被験体は１型糖尿病が発症しやすい状態であり、処置は、１型糖尿病の発症を防ぐかまたは遅らせる。
【００３８】
様々な実施形態では、処置は膵β細胞に対する自己免疫を緩和する。
【００３９】
様々な実施形態では、投与するステップは、静脈内、筋肉内、または皮下投与を含む。
【００４０】
様々な実施形態では、方法はまた、１つ以上の追加の治療剤（例えば、Ｔ１ＤＭの第２の治療剤）を投与することを含む。追加の治療剤の例としては、β細胞の再生および／または成長を促進する薬剤（例えば、エキセナチド）、ならびに／あるいは他の抗炎症／抗自己免疫剤（例えば、ビタミンＤおよびその類似体）が挙げられる。様々な実施形態では、組成物は、１つ以上のβ細胞促進剤、抗炎症剤、および／または抗自己免疫剤をさらに含む。あるいは、１つ以上の追加の治療剤は組成物とは別個のものであり得る。これらの実施形態では、１つ以上の追加の治療剤は、組成物と組み合わせて、かつ／または組成物とは別個に投与することができる。１つ以上の追加の治療剤は、組成物と同時に、ならびに／あるいは組成物の投与に先立って、かつ／またはそれに続いて投与することができる。例えば、１つ以上の追加の治療剤は、組成物の一部を形成してもよく、１つ以上の追加の治療剤とともに、組成物とは別個に、組成物と同時に、それに先立って、またはそれに続いて投与されてもよい。
【００４１】
様々な実施形態では、方法はまた、治療的に有効な量の本発明による治療剤化合物または組成物の投与に先立って、被験体が１型糖尿病の自己免疫の処置を必要としているかを決定することを含む。
【００４２】
様々な実施形態では、治療的に有効な量は、５μｇ〜１０ｍｇ、０．５〜４．０ｍｇ、またはそれらの間の任意の値であることができる。様々な実施形態では、治療的に有効な量は、５、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、もしくは９００μｇ、またはそれらの間の任意の値であることができる。様々な実施形態では、治療的に有効な量は、１．０、１．２５、１．５、１．７５、２．０、２．２５、２．５、２．７５、３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、４．２５、４．５、４．７５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、もしくは１０ｍｇ、またはそれらの間の任意の値であることができる。
【００４３】
様々な実施形態では、投与は蓄積注射を含むことができる。投与は、約６か月〜２年の間隔で繰り返すことができる。様々な実施形態では、間隔は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１か月、または１、２、３、４年であることができる。様々な実施形態では、間隔は、３か月毎、半年毎、または１年毎であることができる。様々な実施形態では、免疫調節反応（例えば、Ｔｈ１／調節性細胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｅｌｌｓ））を監視し、処置を適宜調節する（例えば、Ｔ細胞の数／活性が低下し始めると再投与する）ことによって、間隔を決定することができる。
【００４４】
様々な実施形態の詳細な説明を、以下の図面を例として参照して、本明細書において以下に提供する。当業者であれば、後述する図面は単なる例証目的であることを理解するであろう。図面は、出願人による教示の範囲をいかなる形でも限定しようとするものではない。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】プレプロインスリンの１１０アミノ酸ペプチドを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本発明は、様々な態様および実施形態において、治療剤、療法、診断薬、キット、および作成方法を含む、１型糖尿病（「Ｔ１ＤＭ」）の自己免疫治療を提供する。例えば、本発明は、治療的に有効な量の配列番号：１の２つ以上の重複フラグメント（即ち、プレプロインスリン）と、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、１型糖尿病の自己免疫を処置するための組成物を提供する。
【００４７】
インスリンおよびプレプロインスリン
インスリンは、膵島β細胞でその前駆物質プレプロインスリンから合成される。インスリンは、膵β細胞内で産生されるとともに分解される。プレプロインスリンは、生物学的に活性の内分泌ホルモンインスリンに対する１１０アミノ酸の生物学的に不活性の前駆物質である。プレプロインスリンは、Ｎ末端からシグナルペプチドを除去するシグナルペプチダーゼによってプロインスリンへと変換される。最終的に、プロインスリンは、連結ペプチド（Ｃ−ペプチド）を除去することによって、生物活性ホルモンインスリンへと変換される。
【００４８】
シグナルペプチドの除去は別個のステップではなく、小胞体（ＥＲ）内へのタンパク質の転座と密接に結び付けられるので、プレプロインスリンはβ細胞外部にはほとんど存在しない。
同じ理由で、プレプロインスリンは、成熟製品であるインスリン、安定ＥＲ中間体であるプロインスリンとは異なり、医薬にはほとんど使用されない。
【００４９】
図１は、以下の配列を有するプレプロインスリンの１１０アミノ酸ペプチドの図である。
ＭＡＬＷＭＲＬＬＰＬＬＡＬＬＡＬＷＧＰＤＰＡＡＡＦＶＮＱＨＬＣＧＳＨＬＶＥＡＬＹＬＶＣＧＥＲＧＦＦＹＴＰＫＴＲＲＥＡＥＤＬＱＶＧＧＶＥＬＧＧＧＰＧＡＧＳＬＱＰＬＡＬＥＧＳＬＱＫＲＧＩＶＥＱＣＣＴＳＩＣＳＬＹＱＬＥＮＹＣＮ（配列番号：１）
【００５０】
様々な態様および実施形態では、本発明は、配列番号：１だけではなく、その相同体および類似体も想到する。例えば、本発明は、配列番号：１と構造的および／または機能的に相同である、プレプロインスリン配列を用いることができる。相同性は、９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％、７９％、７８％、７７％、７６％、７５％、７４％、７３％、７２％、７１％、または７０％の相同性を含むことができる。類似配列としては、非ヒト種からのプレプロインスリン配列、変異プレプロインスリン配列もしくはプレプロインスリン配列多型を有するヒトからのプレプロインスリン配列、および１つ以上のプレプロインスリンエピトープもしくは交差反応性エピトープを含む合成ペプチド配列を挙げることができる。
【００５１】
インスリン生合成は、粗面小胞体におけるプレプロインスリンの合成、およびプレプロインスリンからプロインスリンへの変換で始まる。プレプロインスリンは、粗面小胞体の内腔内へと転座した直後（またはその間）にプロインスリンに変換される。プロインスリンは次に、ゴルジ複合体のトランス槽に輸送され、そこで発生期の未成熟分泌顆粒へと方向づけられる。タンパク質分解切断によるプロインスリンからインスリンおよびＣ−ペプチドへの変換は、分泌顆粒内で生じ、ＡＴＰ依存性のプロトンポンプを介した酸性化に依存する。プロインスリンは、Ｂ鎖、Ｃ−ペプチド、およびＡ鎖から成る。Ｃ−ペプチドは切断され、ジスルフィド結合によって接続された２つの端部Ｂ鎖およびＡ鎖がインスリンを形成する。分泌顆粒は成熟プロセスを経て、インスリンコンテンツが亜鉛およびカルシウムとともに有芯顆粒として結晶化される。これらの新しい成熟した有芯インスリン顆粒は、即時放出可能プール（ＲＲＰ）と備蓄プールという２つの離散的な細胞内プールを形成する。有芯顆粒のこれら２つの集団は、インスリン放出の二相性に関与することがある。ＲＲＰ顆粒は、細胞膜と関連付けられ、第１相インスリン分泌に関与する急激なカルシウム依存性の放出が起こる。これらの顆粒コンテンツは、主にグルコースである適切な刺激薬に反応して、細胞外放出によって放出される。このプロセスは、健康な個体のβ細胞ではプロインスリンの９９％超が方向付けられる、調整された分泌経路を表す。対照的に、第２相インスリン分泌は、備蓄顆粒プールを細胞膜へと輸送することを要し、即時放出のためにゴルジ複合体から細胞膜へと生成物を迅速に移動することを伴う。インスリン顆粒が細胞膜と融合する最初のトリガーは、細胞内カルシウムの増加であり、グルコース刺激の場合、ＡＴＰ産生の増加、ＡＴＰ感受性カリウムチャネルの閉鎖、および細胞脱分極によってもたらされる。次いで、これによって電圧依存性のカルシウムチャネルが開いて、細胞外カルシウムの流入を増加させることが可能になる。カルシウムは、融合抑制タンパク質複合体を機能的に抑圧する、融合調節タンパク質シナプトタグミンのメンバーに結合してもよい。
【００５２】
端的に言えば、プレプロインスリンはβ細胞特異抗原であり、したがって、本発明によるＴ１ＤＭに対する免疫調節組成物および治療の基礎を形成することができる。
【００５３】
プレプロインスリンフラグメント
本発明は、様々な実施形態において、代謝的に不活性の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントへと分解することによって、プレプロインスリンを利用して、β細胞限定抗原としてのプレプロインスリンの免疫調節の可能性を捕える。プレプロインスリンを重複ペプチドへと分解することによって、プレプロインスリンに特異的であるが、（両方とも環状で存在する）インスリンにもＣ−ペプチドにも存在しないペプチド配列を用いて、免疫系を表現することができる。
【００５４】
様々な実施形態では、本発明は、免疫調節組成物にプレプロインスリンフラグメントを利用する。フラグメントは約２０アミノ酸長であることができる。あるいは、フラグメントは別の長さであることができ、例えば、フラグメントは、約３０、２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、および／または８アミノ酸長であることができる。本発明による組成物は、長さが均一（例えば、全て約２０アミノ酸長）、ならびに長さが分布するフラグメントを含むことができる。フラグメント長さまたはその分布は、免疫調節作用を最適にするように選択することができる。
【００５５】
様々な実施形態では、フラグメントは、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。あるいは、フラグメントは、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含むことができる。本発明による組成物は、重複が均一（例えば、全て約１０個のアミノ酸）、ならびに重複が様々であるフラグメントを含むことができる。やはり、重複長さまたはその分布は、免疫調節作用を最適にするように選択することができる。
【００５６】
様々な実施形態では、フラグメントは約２０アミノ酸長であり、約１０個のアミノ酸が重複する第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。あるいは、フラグメントは約２０アミノ酸長であり、約２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、または３個のアミノ酸が重複する、第１のポリペプチドフラグメントおよび第２のポリペプチドフラグメントを含む。
【００５７】
様々な実施形態では、フラグメント、第１のポリペプチドフラグメント、および／または第２のポリペプチドフラグメントは、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、もしくはそれ以上の重複プレプロインスリンポリペプチドフラグメントを含むことができる。組成物は、プレプロインスリン配列全体を本質的に覆うフラグメントを含むことができ、またはプレプロインスリンエピトープの集合もしくは部分集合に限定されることがある。組成物は、フラグメントの所定の集合（例えば、それぞれ１０アミノ酸長の１００個のフラグメント）によって覆われた、プレプロインスリン配列全体（例えば、１１０個のアミノ酸）を含むことができる。
【００５８】
様々な実施形態では、フラグメントは（例えば、被験者において）インスリン様の代謝活性を示さない。かかる実施形態は、好ましい、または最大許容用量のインスリンよりも高いフラグメントの濃度で、投与することが可能になるので、有利であり得る。
【００５９】
一実施形態では、フラグメントは少なくとも１つの内在性プレプロインスリンエピトープを含む。フラグメントは、２つ以上のプレプロインスリンエピトープを含むことができる。エピトープは、免疫調節作用を最適化するように選択することができる。
【００６０】
様々な実施形態では、フラグメントは、インスリン中に存在しない少なくとも１つのエピトープを含む。かかる実施形態は、有利なことに、本発明による組成物の作用を、プレプロインスリンを含む細胞に制限することができる。
【００６１】
一実施形態では、２つ以上の重複フラグメントはそれぞれプレプロインスリンエピトープを含む。エピトープは、既知のエピトープ、例えばＢ鎖Ｂ９−２３およびＡ鎖１−１５を含むことができる。エピトープは、プレプロインスリンを断片化した結果として露出する潜在性エピトープ（即ち、天然の折り畳まれたプレプロインスリンの状態では溶媒アクセス不能であるエピトープ）を含むことができる。エピトープは、プレプロインスリン配列（またはその類似体）中に存在するエピトープの集合全体を含むことができる。エピトープは、β細胞に特異的である１つ以上のエピトープ（即ち、Ｔ１ＤＭにおける自己免疫の特定の標的）を含むことができる。
【００６２】
一実施形態では、フラグメントは、インスリンＡ鎖１−１５エピトープ、Ｂ鎖９−２３またはＢ鎖１１−２７エピトープ、ならびにＣ−ペプチド上のエピトープＣ３−２７／Ｃ１３−３２およびＣ１３−２９のうち１つ以上を含む。
【００６３】
いかなる特定の理論によっても束縛されるものではないが、主要な自己抗原であるインスリンに対する自己免疫寛容の喪失によって、自己攻撃性Ｔ細胞が解放され、自己免疫が開始されることがある。したがって、インスリン産生細胞の破壊は、Ｔ１ＤＭの臨床的発症のかなり前に始まる場合がある。一部の被験体の臨床診断時、自己インスリン産生の約２０〜５０％がまだ残っている場合があるが、治療介入をしないと数年で完全に破壊される可能性がある。破壊プロセスはＴ細胞媒介性であり、ＣＤ４＋細胞が関与することがある。しかしながら、自己攻撃性Ｔ細胞の集団を抑制することができる調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）も重要な役割を果たすことがある。Ｔｒｅｇは、自然発生のＣＤ４+ＣＤ２５+細胞と、抗原誘導のＣＤ４+Ｔｈ２様の調節性細胞とを含む。Ｔ細胞の自己攻撃性の集合と調節性の集合との不均衡が、自己免疫の根幹を成すことがある。したがって、制御を再確立し、健康な均衡を作り出すために、自己攻撃性細胞の除去および／または調節性集団の増進によって、成功する介入が実施されてもよい。
【００６４】
やはり、いかなる特定の理論によっても束縛されるものではないが、自己免疫セッティングにおける抗原チャレンジは、Ｔ細胞部分集合（例えば、Ｔｈ２対Ｔｈ１）、サイトカイン産生、および／または調節性Ｔ細胞誘導における有益な変化を刺激することがある。実際には、自己免疫疾患に対する抗原特異的な治療アプローチは、疾病原因論において示唆されてきた推定自己抗原を使用してもよい。インスリンは、β細胞特異性の主要タンパク質であり、また、単独で使用した場合に適度に免疫原性である。しかしながら、インスリンが使用される場合、他の副作用の中でも特に低血糖症に関する懸念がある。したがって、インスリン関連ペプチドは、必ずしも低血糖作用を有さないので、ヒトに使用するにはインスリンよりも安全な選択であり得る。
【００６５】
自己抗原の持続的な末梢提示によって、低結合活性の自己反応性Ｔ細胞が、自己反応性の細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、および自己抗原の提示の両方を抑制する、メモリ様の自己調節性Ｔ細胞へと分化し、それによってβ細胞がさらなる損傷から保護される。Ｔ１ＤＭにおける自己免疫プロセスは、膵島のβ細胞を選択的に死滅させ、グルカゴン産生α細胞のような他の内分泌細胞は破壊しない。この選択性は、自己抗原になった抗原が恐らくはβ細胞に制限されることを示す。１つのペプチドのみがβ細胞中に特異的に存在し、他のいずれの細胞中にも存在せず、これは、インスリンの前駆物質であるプレプロインスリンである。対照的に、インスリンおよびＣ−ペプチドは分泌生成物であり、β細胞を離れて血中を循環する。
【００６６】
端的に言えば、主要自己抗原、例えばアジュバント中のプレプロインスリンポリペプチド、の末梢への再導入は、調整免疫反応を誘発し、Ｔ１ＤＭ患者における免疫寛容を再確立することができる。自己免疫プロセスをこの後期段階においても停滞させることができる場合、β細胞を保存し、場合によっては再生を可能にすることができる。これは、固有の、Ｔ１ＤＭ特異的な、ターゲットを絞った非免疫抑制的なアプローチであり、したがって、Ｔ１ＤＭを有する小児および若者に、ならびに危険な状態にある被験者における予防にも特に適している。
【００６７】
アジュバント
本発明による組成物は、（例えば、被験者における）調整免疫反応を促進するアジュバントを含むことができる。一実施形態では、組成物は、油と、水と混合した乳化剤とを含むアジュバントを含む。一実施形態では、組成物は不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）を含む。１つの代替実施形態では、組成物は、アラムアジュバントもしくはスクアレン、または死菌、またはトキソイド、または無機化合物、またはリポソーム、またはデンドリマー、またはナノエマルジョンなどを含む。
【００６８】
ＩＦＡ（例えば、フランスのセピック社（Ｓｅｐｐｉｃ  Ｉｎｃ．）からアジュバントモンタニド（Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ）ＩＣＡ  ５１として市販のもの）は、一般的に、油と乳化剤という２つの成分から成る。ＩＦＡを抗原とともに使用して、細胞媒介性免疫を誘発し、保護アイソタイプの抗体（マウスの場合はＩｇＧ２ａ、霊長類の場合はＩｇＧ１）の産生を誘発することができる。異なるタイプのアジュバントが、注射部位における反応、および発熱性など、類似の副作用を共有する。ヒトワクチンに一般に使用されるアジュバントであるアラムも、注射部位における明らかな肉芽腫性反応を起こすことがある。
【００６９】
不完全フロイントアジュバントの作用機序は、（例えば、被験者における）非特異的ならびに特異的な免疫反応を伴うことができる。ＩＦＡはまた、抗原ビヒクルとして作用することができ、また緩効性もしくは長期の抗原提示デバイスとして作用することができる。自己抗原の持続的な末梢提示によって、低結合活性の自己反応性Ｔ細胞が、自己反応性ＣＴＬ、および抗原提示細胞（ＡＰＣ）の自己抗原提示の両方を抑制する、メモリ様の自己調節性Ｔ細胞へと分化することができるので、これはＩＦＡの重要な特性であり得る。
【００７０】
抗原の免疫原性に対するＩＦＡの特異的な増強効果は、体液性免疫の向上（例えば、防御抗体（ヒトの場合はＩｇＧ１、マウスの場合はＩｇＧ２ａ）の優先的な産生）に結び付くことがあり、特異的な細胞介在性免疫（例えば、Ｔｈ２タイプ）を誘発することがある。防御の信頼性および継続性の理由で、自己抗原特異的な免疫処置療法をＴ１ＤＭに使用することは有利であり得る。
【００７１】
併用療法
本発明による組成物は、プレプロインスリンフラグメントに加えて、１つ以上の治療剤を含むことができる。追加の治療剤は、Ｔ１ＤＭおよび／または別の関連もしくは共存する症状のための治療剤であることができる。
【００７２】
追加の治療剤の例としては、調節促進性のロイコトリエン、サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＴＧＦβなど）、あるいは調節反応を促進もしくは向上する、または自己免疫寛容を回復する、他の物質が挙げられる。追加の治療剤の他の例としては、自己免疫反応を阻害する、抗炎症性ロイコトリエンおよびサイトカイン（例えば、ＩＬ−１拮抗薬）が挙げられる。追加の治療剤のさらなる例としては、β細胞の再生および／または成長を促進する薬剤（例えば、エキセナチド）、ならびに／あるいは他の抗炎症／抗自己免疫剤（例えば、ビタミンＤおよびその類似体）が挙げられる。１つ以上の追加の治療剤は組成物の一部であることができ、かつ／または１つ以上の追加の治療剤は組成物とは別個であることができる。１つ以上の追加の治療剤は、組成物と組み合わせて、かつ／または組成物とは別個に投与することができる。１つ以上の追加の治療剤は、組成物と同時に、ならびに／あるいは組成物の投与に先立って、かつ／またはそれに続いて投与することができる。例えば、１つ以上の追加の治療剤は、組成物の一部を形成してもよく、１つ以上の追加の治療剤とともに、組成物とは別個に、組成物と同時に、それに先立って、またはそれに続いて投与されてもよい。
【００７３】
医薬組成物およびキット
１つの態様では、本発明は、治療的に有効な量の配列番号：１（即ち、プレプロインスリン）の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、１型糖尿病の自己免疫を処置するための組成物を提供する。
【００７４】
多数の薬学的に許容可能なキャリアが当該分野で知られている。例えば、Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，Ｒｏｗｅ  ｅｔ  ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ；７  Ｕｐｄａｔｅｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｊｕｎｅ  ６，２０１２）に、例を見出すことができる。アジュバントの例としては、不完全フロイントアジュバント、アラム、スクアレン、死菌、トキソイドおよび無機化合物、リポソーム、脂質ベースのナノ粒子、ナノエマルジョンもしくはナノゲル、または標的薬物送達システム様のデンドリマーなどが挙げられる。
【００７５】
別の態様では、本発明は、（ｉ）本発明による組成物のうちいずれか１つの組成物の治療的に有効な量と、（ｉｉ）組成物を必要としている被験体にそれを投与するための説明書とを含む、１型糖尿病の自己免疫を処置するためのキットを提供する。
【００７６】
別の態様では、本発明は、（ｉ）１型糖尿病の自己免疫診断薬（例えば、自己抗体試験−抗インスリンＩＡＡ、抗ＧＡＤ６５、抗ＩＡ２−インスリノーマ抗原２、抗Ｚｎ８−亜鉛トランスポーター８抗体、Ｔ細胞生物マーカーなど）と、（ｉｉ）請求項１〜２１のいずれか一項に記載の組成物の治療的に有効な量と、（ｉｉｉ）被験体を診断し、被験体が組成物を必要としている場合にそれを被検体に投与するための説明書とを含む、１型糖尿病の自己免疫を診断し処置するためのキットを提供する。
【００７７】
製造方法
別の態様では、本発明は、配列番号：１（またはその類似体もしくは相同体）の２つ以上の重複フラグメントと、薬学的に許容可能なキャリアとを組み合わせることを含み、ポリペプチドフラグメントの少なくとも１つが抗原性である、本明細書に記載される１型糖尿病の自己免疫を処置するための、本発明による組成物を作成する方法を提供する。当業者であれば、既知のポリペプチド合成方法論を使用して、ポリペプチドフラグメントを合成できることを認識するであろう。１つの例示的な例を以下の実施例１で提供する。
【００７８】
使用方法
別の態様では、本発明は、本発明による組成物のうちいずれか１つの組成物の治療的に有効な量を、それを必要としている被験体に投与することを含む、１型糖尿病の自己免疫の処置を提供する。
【００７９】
別の態様では、本発明は、（ｉ）１型糖尿病の自己免疫の処置を必要としている被験体を選択することと、（ｉｉ）本発明による組成物のうちいずれか１つの組成物の治療的に有効な量を被験体に投与することとを含む、１型糖尿病の自己免疫の処置を提供する。処置を必要としている患者の選択は、医師および／または検査室検査による物理的検査を含むことができる。
【００８０】
一実施形態では、組成物は免疫調節性である。一実施形態では、組成物は非免疫抑制性である。一実施形態では、組成物はＴｈ２免疫反応を誘発する。一実施形態では、組成物はＴｈ１免疫反応を誘発しない。
【００８１】
一実施形態では、被験体は成人である。別の実施形態では、被験体は若年者である。
【００８２】
一実施形態では、被験体は１型糖尿病を有しており、処置は、少なくとも１つの臨床的エンドポイント（例えば、Ｃ−ペプチド分泌の改善、インスリン使用の低減、ＨｂＡ１ｃの改善、正常な血糖レベルへの接近、血糖レベル変動の減少など）を達成する。
【００８３】
一実施形態では、被験体は１型糖尿病を有しており、処置は、１型糖尿病の少なくとも１つの症状（例えば、低血糖症／高血糖症の頻度、糖尿の低減、入院の程度／回数、腎症、神経障害、および網膜症などの合併症の程度／回数）を緩和する。
【００８４】
一実施形態では、被験体は前臨床的１型糖尿病を有しており、処置は、臨床的１型糖尿病への進行を防ぐかまたは遅らせる。
【００８５】
一実施形態では、被験体は１型糖尿病が発症しやすい状態であり、処置は、１型糖尿病の発症を防ぐかまたは遅らせる。
【００８６】
一実施形態では、処置は膵β細胞に対する自己免疫を緩和する。
【００８７】
一実施形態では、投与するステップは、静脈内、筋肉内、または皮下投与を含む。
【００８８】
一実施形態では、方法はまた、治療的に有効な量の本発明による治療剤化合物または組成物の投与に先立って、被験体が１型糖尿病の自己免疫の処置を必要としているかを決定することを含む。
【００８９】
一実施形態では、治療的に有効な量は、５μｇ〜１０ｍｇ、０．５〜４．０ｍｇ、またはそれらの間の任意の値であることができる。様々な実施形態では、治療的に有効な量は、５、１０、２５、５０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、２２５、２５０、２７５、３００、３５０、４００、４５０、５００、６００、７００、８００、もしくは９００μｇ、またはそれらの間の任意の値であることができる。様々な実施形態では、治療的に有効な量は、１．０、１．２５、１．５、１．７５、２．０、２．２５、２．５、２．７５、３．０、３．２５、３．５、３．７５、４．０、４．２５、４．５、４．７５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、もしくは１０ｍｇ、またはそれらの間の任意の値であることができる。様々な実施形態では、治療的に有効な量は、有益な免疫反応（例えば、Ｔｈ２／Ｔｒｅｇ反応）の検出によって、かつ／または少なくとも１つの臨床的エンドポイントもしくは少なくとも１つの症状の低減（例えば、上記に考察したような）の検出によって、決定することができる。
【００９０】
一実施形態では、投与は蓄積注射を含むことができる。投与は、約６か月〜２年の間隔で繰り返すことができる。様々な実施形態では、間隔は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくは１１か月、または１、２、３、４年であることができる。様々な実施形態では、間隔は、３か月毎、半年毎、または１年毎であることができる。様々な実施形態では、免疫調節反応（例えば、Ｔｈ１／調節性細胞）を監視し、処置を適宜調節する（例えば、Ｔ細胞の数／活性が低下し始めると再投与する）ことによって、間隔を決定することができる。
【００９１】
実施例
実施例１−ポリペプチド合成
化学的性質および製造の概説：重複プレプロインスリンの２０アミノ酸ペプチドを、次のペプチドそれぞれの１０個のアミノ酸が先行するペプチド配列と重複するように設計する。これらのペプチドは、単成分ＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム）精製ペプチドとして作られ、タンパクコア実験室内でアプライドバイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）社製のタンパク質合成器モデル４３３Ａ上において、ペプチドインターナショナル（Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）社によるアミノ酸製剤を使用して合成される。これは、標準的な固相ペプチド合成（ＳＰＰＳ）手順であり、次の主なステップを有する。
【００９２】
鎖集合
タンパク質合成で使用される集合戦略は、ＡＢＩ（アプライドバイオシステムズ社）−Ｆｍｏｃ／Ｔｈｒである。Ｆｍｏｃ基はアミノ酸のαアミノ基を保護する。ペプチドは、固体支持体（樹脂）に付着した開始アミノ酸のαカルボキシル基とともに、Ｃ末端からＮ末端に向かって集合する。集合に使用される樹脂はポリスチレンビーズであり、ＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン）を用いた洗浄後に膨張した、直径４００〜１０００ミクロンのサイズの不溶性支持体である。樹脂にはＣ末端から第１アミノ酸（Ｔｈｒ）をプレロードする。
【００９３】
鎖集合の第１のステップは脱保護、つまり保護基の除去である。Ｆｍｏｃ保護基は２２％ピペリジンを使用して除去する。ピペリジン／ＮＭＰを用いてＦｍｏｃ基を除去することによって形成される、カルバミン酸塩の電気伝導度フィードバックを使用して、結合効率を示すことができる。
【００９４】
脱保護後、次のアミノ酸を活性化し、成長しているペプチドの脱保護されたアミノ末端に結合し、ペプチド結合を形成する。入ってくるアミノ酸カルボキシル基の活性化は、ＨＢＴＵ／ＨＯＢｔを使用して達成される。
【００９５】
結合と結合の間に、メタノールおよびＮＭＰ（Ｎメチルピロリドン）を用いてカラムを洗浄し、それによって樹脂を膨張させ、残留物を洗い流す。所望の長さのペプチドが達成されるまで、サイクルを繰り返す。
【００９６】
次に、ＤＣＭ（ジクロロメタン）を用いて樹脂を洗浄し、それによってＮＭＰを樹脂から除去し、次に、簡単に除去可能な溶媒である高揮発性のメタノールを用いて樹脂を十分に洗浄し、蒸発／乾燥を行う。
【００９７】
樹脂からの切断および側鎖保護基の除去
切断混合物を調製する（結晶フェノール０．７５ｇ＋エタンジチオール０．２５ｇ＋チオアニソール０．５ｍｌ＋脱イオンＨ２Ｏ  ０．５ｍｌ＋トリフルオロ酢酸１０ｍｌ）。乾燥したペプチド−樹脂を、氷浴（混合物１０ｍｌ／ペプチド−樹脂１００〜１５０ｍｇ）中の低温フラスコ内で１．５時間インキュベートする。次に、高真空下でガラス漏斗によって濾過することによって、ペプチドを反応混合物から分離する。ペプチドを、低温メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）を用いて沈殿させ、真空乾燥する。
【００９８】
滅菌条件下での精製
このステップは、逆相ＨＰＬＣを用いて行う。緩衝液Ａはトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０．１％、緩衝液Ｂはアセトニトリル７０％、Ｈ２Ｏ  ３０％、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）０．０９％。Ｃ１８カラムを使用することにより、サンプルの溶離は疎水性に基づく（疎水性のサンプルがより早く溶離する）。ピーク検出は、２１４ｎｍにおけるペプチド結合の吸光度測定によって行い、質量分析によって特定する。所望の画分を滅菌バイアルにプールし、、配列を確認するため、ＡＡＡ（アミノ酸分析）分析用逆相ＨＰＬＣおよび質量分析用に取ったサンプルとともに凍結乾燥させる。
【００９９】
実施例２−プレプロインスリンポリペプチドワクチン調合物
Ａ，プレプロインスリンポリペプチド（３Ｐ）ワクチン
３Ｐ免疫調節ワクチンは、水溶性プレプロインスリンの２０アミノ酸重複ポリペプチド混合物と、不完全フロイントアジュバント溶液との組み合わせである。注射液／エマルション（最終医薬品）は、層流保護フード内で、高圧滅菌シリンジを使用することによって滅菌条件下で、モンタニドＩＳＡ５１（０．５ｍｌ）（セピック社）と混合することによって、ヒトプレプロインスリンペプチド混合溶液（０．５ｍｌ）の５０／５０（重量パーセント）エマルジョンとして、投与する直前に準備される。
【０１００】
Ｂ．プレプロインスリンポリペプチド（３Ｐ）ワクチン
３Ｐ免疫調節ワクチンは、水溶性プレプロインスリンの２０アミノ酸重複ポリペプチド混合物と、不完全フロイントアジュバント溶液との組み合わせである。注射液／エマルジョン（例えば、最終医薬品）は、（例えば、製造セッティングで）事前準備され、延長された拡大貯蔵寿命（例えば、数年）を有することができる。
【０１０１】
Ｃ．プレプロインスリンポリペプチド（３Ｐ）ワクチン
３Ｐ免疫調節ワクチンは、水溶性プレプロインスリンの２０アミノ酸重複ポリペプチド混合物と、不完全フロイントアジュバント溶液との組み合わせである。注射液／エマルジョン（例えば、最終医薬品）は、異なる封止区画内の２つの主要成分（例えば、ペプチドおよびアジュバント）と、短時間（例えば、数日／数週）以内で使用される新鮮な混合物を調製する内蔵メカニズムとを備えた、キットとして準備される。
【０１０２】
Ｄ．プレプロインスリンポリペプチド（３Ｐ）ワクチン
３Ｐ免疫調節ワクチンは、水溶性プレプロインスリンの２０アミノ酸重複ポリペプチド混合物と、不完全フロイントアジュバント溶液との組み合わせであり、不完全フロイントアジュバント溶液はモンタニドＩＳＡ５１以外である。
【０１０３】
Ｅ．プレプロインスリンポリペプチド（３Ｐ）ワクチン
３Ｐ免疫調節ワクチンは、水溶性プレプロインスリンの２０アミノ酸重複ポリペプチド混合物と、不完全フロイントアジュバント溶液以外の免疫学的アジュバント（例えば、スクアラン、死菌およびトキソイド、アルミニウム塩−アラム／無機化合物など、またはリポソーム、脂質ベースのナノ粒子、ナノエマルジョン、ナノゲル、デンドリマーなど）との組み合わせである。
【０１０４】
実施例３−プレプロインスリンポリペプチドワクチン療法
Ａ．本発明による組成物を、１型糖尿病（例えば、臨床診断に加えて、ＩＡＡ、ＧＡＤ６５、Ｉａ２、Ｚｎトランスポーター８のような少なくとも１つの１型糖尿病特有の自己抗体が陽性または１型糖尿病特有のＴ細胞マーカーが陽性）と診断されている（例えば、任意の年齢および／または任意の疾患期間の）被験体に投与する。
【０１０５】
Ｂ．本発明による組成物を、１型糖尿病と臨床診断されていないが、少なくとも１つの１型糖尿病特有の自己抗体（例えば、ＩＡＡ、ＧＡＤ６５、Ｉａ２、Ｚｎトランスポーター８）または１型糖尿病特有のＴ細胞マーカーが陽性である被験体に投与する。被験体は、経口ブドウ糖負荷試験によって試験した、正常なグルコース状態または低下した耐糖能を有し得る。かかる被験体は、１型糖尿病をもつ患者の家族スクリーニングによって、またはより大きい集団のスクリーニングによって特定することができる。
【０１０６】
本明細書で使用した節の見出しは、単なる構成目的のものであり、記載する主題をいかなる形でも限定するものと解釈すべきでない。
【０１０７】
出願人の教示について様々な実施形態と併せて記載しているが、出願人の教示をかかる実施形態に限定しようとするものではない。対照的に、出願人の教示は、当業者には認識されるような様々な代替物、修正、および等価物を包含する。
【図１】
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【国際調査報告】
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