(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
粉砕した生姜の根を濾過して濾液および残渣を得る段階と、前記濾液を第１有機溶媒で抽出し、得られた抽出物溶液を回収し、有機溶媒を蒸発させ、第１濃縮抽出物溶液を得る段階と、前記残渣をアセトンで抽出し、得られた抽出物溶液を回収し、有機溶媒を蒸発させ、第２濃縮抽出物溶液を得る段階と、前記第１濃縮抽出物溶液および前記第２濃縮抽出物溶液を合わせる段階とからなる方法（Ｉ）；
粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を前記アセトンで抽出し、得られた抽出溶液を回収し、アセトンを蒸発させる方法（ＩＩ）；または
粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を蒸気蒸留し、得られた蒸留物を蒸発により濃縮する方法（ＩＩＩ）のいずれかによって生姜の粗抽出物を得る段階（ａ）と、
該粗抽出物を逆相カラムクロマトグラフィーで、水、メタノールの順に溶出させ、メタノールで溶出した第１溶出液を得る段階（ｂ）と、
第１溶出液からメタノールを蒸発させて除去し、有効成分を含む第１濃縮溶出液を得る段階（ｃ）と、
を含むことを特徴とする、第１濃縮溶出液の製造方法。
【請求項２】
該第１有機溶媒はエーテルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該粗抽出物は、方法（Ｉ）により得られる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
該粗抽出物は、方法（ＩＩ）により得られる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
該粗抽出物は、方法（ＩＩＩ）により得られる、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
該逆相カラムクロマトグラフィーは、多孔性の吸着剤を用いたものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法で得られる第１濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなる、抗炎症医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法で得られる第１濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなり、
前記第１濃縮溶出液は、前記方法（Ｉ）または前記方法（ＩＩ）で得られた粗抽出物を用いて製造されてなる、抗血小板凝集医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法で得られる第１濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなり、
前記第１濃縮溶出液は、前記方法（Ｉ）または前記方法（ＩＩ）で得られた粗抽出物を用いて製造されてなる、抗真菌医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜６いずれか一項に記載の段階（ｂ）の後に、さらに続いて第２溶剤で溶出させ、第２溶剤で溶出した第２溶出液を得る段階（ｂ’）と、
第２溶出液から第２溶剤を蒸発させて除去し、有効成分を含む第２濃縮溶出液を得る段階（ｄ）と、を含み、かつ段階（ｂ’）における第２溶剤は、アセトンであることを特徴とする、第２濃縮溶出液の製造方法。
【請求項１１】
請求項１０に記載の方法で得られる第２濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなる、抗炎症医薬組成物。
【請求項１２】
さらに該第１濃縮溶出液の有効治療量を含む、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
毛瘡白癬菌またはピチロスポルム−オバーレに関連する疾患の治療に用いられる、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
該疾患は、足部白癬、頭部白癬、股癬、円癬、爪真菌症、頭部糠疹、でん風、ピチロスポルム毛包炎、脂漏性皮膚炎、またはふけである、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
シャンプー、バスクリーム、石鹸、ボディローション、ボディクリームまたは洗浄剤の形態である、請求項１３または１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
シャンプーの形態である、請求項１５に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生姜から有効成分を含む抽出物を得る方法に関する。さらに、それを含む抗炎症、抗血小板凝集および抗真菌活性を有する医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、生姜は、漢方生薬として制吐剤、去痰剤、鎮咳剤および健胃剤として用いられてきた。生姜の主要な香気および辛味成分は、ジンゲロン、ジンゲロールおよびショウガオールである。ジンゲロールは、強心作用、マウスにおいて摘出門静脈の収縮抑制、マウスまたはラットにおいて血管のエイコサノイド誘発収縮の調節、などの作用があり、ショウガオールは、血管収縮作用、カラゲニン誘発足掌浮腫の抑制、血小板凝集の抑制、などの活性がある、と報告されている。例えば米国特許第５，８０４，６０３号を参照。
【０００３】
さらに、特開平７−２５８１０４号公報にはガン転移抑制剤として、特開平７−２５７７７号公報にはアルツハイマー痴呆症またはパーキンソン氏病等の神経退行性病に有効な向神経性因子の合成促進剤として、特開平６−２９３６５３号公報、米国特許第５，４９４，６６８号および５，６８３，６９８号には抗リュウマチ剤として、特開平６−２２７９３１号公報には抗微生物組成物として、特開平６−１０７５５６号公報には鎮痛組成物として、それぞれ生姜成分を用いた医薬が開示されている。
【０００４】
このような有効成分は生姜の精油に含まれている。これまでに２００種以上の様々な揮発成分が、精油中に見出されており、それらの薬理学的活性も確認されている。生姜の精油成分は種々のテルペンと若干の非テルペノイド化合物との混合物を含むことから、生姜は、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ生成物の活性を抑制する、即ち、エイコサノイド合成の二重抑制剤となり得る、ということが実験データから推測できる。
【０００５】
さらに、生姜は薬理効果があるだけでなく副作用がないという利点が臨床的に示されている。具体的には，リューマチ様関節炎患者２８人、骨関節炎患者１８人、筋肉症患者１０人の計５６名の患者に生姜粉末を投与したところ、３分の４以上のリューマチ関節炎患者において程度は異なるが疼痛や腫脹を軽減することができ、全ての筋肉症患者において疼痛を軽減することができ、さらに、３〜３０ヶ月間継続的に摂取しても副作用は生じなかった、と報告されている。詳しくはSrivastava and  Mustafa; Medical Hypotheses; 1992; 39 342-348を参照。
【０００６】
生姜は非ステロイド抗炎症薬としての作用も有する。具体的には、プロスタノイドの合成および５−リポキシゲナーゼの生成を抑制することにより、関節炎および筋肉症の症状を軽減することができる。この作用は、プロスタノイドおよびロイコトリエンの形成低減によるものと推測される。このような非ステロイド抗炎症薬は、抗炎症作用のほかに、鎮痛作用、解熱作用を有する。例えば、ラットに３ｇの生姜抽出物を投与して、カラゲニン誘発足掌浮腫の抑制効果を調べたところ、アセチルサルチル酸に匹敵する効果が得られることがMascolo等によって報告されている（Mascolo N. et al., Journal of Ethnopharmocology 1989, 27, 129-140）。
【０００７】
上述のような生姜の多様な有効成分を効果的に利用するには、生姜の粗抽出物を精製する必要がある。しかしながら従来の精製法では、単一成分にすることはできても、活性が弱まってしまったり、保存性が著しく低下したり、様々な問題点があった。
【０００８】
一方、皮膚糸状菌（Dermatophytes）、特に白癬菌［例えば、紅色白癬菌（Trichophyton rubrum）や、毛瘡白癬菌（Trichophyton mentagrophytes）など］は、爪真菌症および足部白癬の通常の病原である（Roberts DT., British Journal of Dermatology. 141 Supple 56:1-4, 1999 Nov.; Roldan YB. et al., Mycoses, 43(5):181-3, 2000参照）。ピチロスポルム−オバーレ（Pityrosporum ovale）またはマラセジア菌(Malassezia)は、でん風、毛包炎、間擦疹の病因となる菌である。いくつかの研究によれば、ピチロスポルム−オバーレが脂漏性皮膚炎および軽症脂漏性皮膚炎（ふけ）と深い関係があることが示唆されている（Nenoff P. et al., Dermatology. 191(4):311-4, 1995; Bulmer AC. et al., Mycopathologia, 147(2)63-5, 1999参照）。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、有効成分を含む生姜抽出物を活性を失うことなく製造する方法を提供することである。さらに、本発明の方法により得られた生姜抽出物を含む抗炎症医薬組成物、抗血小板凝集医薬組成物、または抗真菌医薬組成物を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明らは、生姜の根を有機溶媒、蒸気蒸留、または超臨界二酸化炭素で抽出し、得られた粗抽出物を逆相クロマトグラフィに通すことにより、例えばショウガオール、ジンゲロールまたはデヒドロジンゲルジオンなどの生姜の有効成分を含む抽出物が得られることを見出し、本発明を完成するに到った。
【００１１】
従って本発明は、粉砕した生姜の根を濾過して濾液および残渣を得る段階と、前記濾液を第１有機溶媒で抽出し、得られた抽出物溶液を回収し、有機溶媒を蒸発させ、第１濃縮抽出物溶液を得る段階と、前記残渣を第２有機溶媒で抽出し、得られた抽出物溶液を回収し、有機溶媒を蒸発させ、第２濃縮抽出物溶液を得る段階と、前記第１濃縮抽出物溶液および前記第２濃縮抽出物溶液を合わせる段階とからなる方法（Ｉ）；
粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を前記第２有機溶媒で抽出し、得られた抽出溶液を回収し、第２有機溶媒を蒸発させる方法（ＩＩ）；または
粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を蒸気蒸留し、得られた蒸留物を蒸発により濃縮する方法（ＩＩＩ）
のいずれかによって生姜の粗抽出物を得る段階（ａ）と、
該粗抽出物を逆相カラムクロマトグラフィーで、水、第１溶剤の順に溶出させ、第１溶剤で溶出した第１溶出液を得る段階（ｂ）と、
第１溶出液から第１溶剤を蒸発させて除去し、有効成分を含む第１濃縮溶出液を得る段階（ｃ）と、を含み、
該第１溶剤はクロロホルムよりも強い極性を有することを特徴とする、第１濃縮溶出液の製造方法である。
【００１２】
さらに本発明は、該粗抽出物または該第１濃縮溶出液１ｇ中に、０〜１０ｍｇの６−ショウガオール、１〜１５０ｍｇの６−ジンゲロール、および、０〜４０ｍｇの６−デヒドロジンゲルジオンを含む、前記方法である。
【００１３】
さらに本発明は、該第１溶剤はメタノールである、前記方法である。
【００１４】
さらに本発明は、該粗抽出物は、方法（Ｉ）により得られる、前記方法である。
【００１５】
さらに本発明は、該第１有機溶媒はエーテルである、前記方法である。
【００１６】
さらに本発明は、該第２有機溶媒はアセトン、メタノール、エタノールまたはそれらの混合物である、前記方法である。
【００１７】
さらに本発明は、該第２有機溶媒はアセトンである、前記方法である。
【００１８】
さらに本発明は、該粗抽出物は、方法（II）により得られる、前記方法である。
【００１９】
さらに本発明は、該第２有機溶媒はアセトン、メタノール、エタノールまたはそれらの混合物である前記方法である。
【００２０】
さらに本発明は、該第２有機溶媒はアセトンである、前記方法である。
【００２１】
さらに本発明は、該粗抽出物は、方法（III）により得られる、前記方法である。
【００２３】
さらに本発明は、該逆相カラムクロマトグラフィーは、多孔性の吸着剤を用いたものである、前記方法である。
【００３４】
さらに本発明は、前記方法で得られる第１濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなる、抗炎症医薬組成物である。
【００３５】
さらに本発明は、前記方法で得られる第１濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなり、前記第１濃縮溶出液は、前記方法（Ｉ）または前記方法（ＩＩ）で得られた粗抽出物を用いて製造されてなる、抗血小板凝集医薬組成物である。
【００３６】
さらに本発明は、前記方法で得られる第１濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなり、前記第１濃縮溶出液は、前記方法（Ｉ）または前記方法（ＩＩ）で得られた粗抽出物を用いて製造されてなる、抗真菌医薬組成物である。
【００３７】
さらに本発明は、前記段階（ｂ）の後に、さらに続いて第２溶剤で溶出させ、第２溶剤で溶出した第２溶出液を得る段階（ｂ’）と、第２溶出液から第２溶剤を蒸発させて除去し、有効成分を含む第２濃縮溶出液を得る段階（ｄ）とを含み、かつ段階（ｂ’）における第２溶剤は、第１溶剤より弱いがクロロホルムより強い極性を有することを特徴とする、第２濃縮溶出液の製造方法である。
【００３８】
さらに本発明は、上述の方法で得られる第２濃縮溶出液の有効治療量と、医薬上許容される担体または希釈剤とからなる、抗炎症医薬組成物である。
さらに本発明は、さらに該第１濃縮溶出液の有効治療量を含む、上述の医薬組成物である。
【００３９】
さらに本発明は、毛瘡白癬菌またはピチロスポルム−オバーレに関連する疾患の治療に用いられる、前記医薬組成物である。
【００４０】
さらに本発明は、該疾患は、足部白癬、頭部白癬、股癬、円癬、爪真菌症、頭部糠疹、でん風、ピチロスポルム毛包炎、脂漏性皮膚炎、またはふけである、前記医薬組成物である。
【００４１】
さらに本発明は、シャンプー、バスクリーム、石鹸、ボディローション、ボディクリームまたは洗浄剤の形態である、前記医薬組成物である。
【００４２】
さらに本発明は、シャンプーの形態である、前記医薬組成物である。
【００４３】
【発明の実施の形態】
本発明の生姜の有効成分を含む抽出物の製造方法は、新鮮な生姜または生姜の乾燥粉末を原料として粗抽出物を得て、これを逆相カラムクロマトグラフィーで水または溶剤で溶出させて各種溶出液を得て、これから溶媒を揮発させて濃縮溶出液を得ることを特徴とする。以下、各段階ごとに詳細に説明する。
【００４４】
まず生姜の粗抽出物を得る段階（ａ）について説明する。粗抽出物は以下の方法（Ｉ）〜（IV）のいずれかによって得られる。
【００４５】
方法（Ｉ）は、粉砕した生姜の根を濾過して濾液および残渣を得る段階と、前記濾液を第１有機溶媒で抽出し、得られた抽出物溶液を回収し、有機溶媒を蒸発させ、第１濃縮抽出物溶液を得る段階と、前記残渣を第２有機溶媒で抽出し、得られた抽出物溶液を回収し、有機溶媒を蒸発させ、第２濃縮抽出物溶液を得る段階と、前記第１濃縮抽出物溶液および前記第２濃縮抽出物溶液を合せる段階とからなる。有機溶媒の蒸発は、生姜の所望の成分の活性を失わないように、好ましくは減圧下でなされる。残渣からの抽出工程は、数回行ってもよい。
【００４６】
６−ショウガオール、６−ジンゲロール、および６−デヒドロジンゲルジオンを含むように抽出するためには、第１有機溶媒は、好ましくはエーテルであり、第２有機溶媒は、好ましくはアセトン、メタノール、エタノールまたはそれらの混合物であり、さらに好ましくはアセトンである。このような抽出方法では有機溶媒の種類によって抽出される成分も異なるため、抽出したい成分に応じて適宜選択されるべきである。
【００４７】
方法（II）は、粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を前記第２有機溶媒で抽出し、得られた抽出溶液を回収し、第２有機溶媒を蒸発させることからなる。好ましい第２有機溶媒は、方法（Ｉ）と同様である。抽出工程は、数回行ってもよい。
【００４８】
方法（III）は、粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を蒸気蒸留し、得られた蒸留物を蒸発により濃縮することからなる。当該方法において、蒸気は、一般的には水蒸気である。生姜の有効成分は水蒸気とともに沸騰し、この蒸気を冷却し、水分を蒸発させれば濃縮溶出液を得ることができる。
【００４９】
方法（IV）は、粉砕した生姜の根または生姜の乾燥根粉末を超臨界二酸化炭素で抽出し、得られた抽出溶液を回収し、二酸化炭素を蒸発させることからなる。このような超臨界流体を用いた抽出方法は、低温でなされるために熱に不安定な有効成分の失活を防ぎ、また有機溶媒が残留しない、という利点がある。本発明で用いられる超臨界二酸化炭素は、臨界温度が３１．１℃と常温に近いため、生姜の有効成分を分離するのに適している。
【００５０】
具体的な実験条件の一例を述べると、例えば、室温を３５〜６０℃に維持された、原料を中に含む抽出室に、流速４５Ｌ／分で二酸化炭素を送り、高圧ポンプで室圧を１．７×１０7〜２．８×１０7Ｐａに調節する。抽出終了後、粗抽出物から二酸化炭素を蒸発させる。各実験条件は、適宜選択されうるものであって、これに限られない。
【００５１】
次に段階（ｂ）において、段階（ａ）で得られた粗抽出物を逆相カラムクロマトグラフィーで、水、第１溶剤、第２溶剤の順に溶出させ、第１溶剤で溶出した第１溶出液および第２溶剤で溶出した第２溶出液を得る。当該クロマトグラフィーに用いられるカラムは、製造条件にあわせて適宜選択されるものであり、特に限定されない。用いられる吸着剤は、逆相カラムクロマトグラフィーに用いられるものであれば特に限定されないが、好ましくは多孔性の吸着剤が用いられる。生姜の有効成分を分離するためには、好ましくはＤＩＡＩＯＮ(R)ＨＰ２０（三菱化学株式会社）、セファデックスＬＨ−２０(ファルマシア社)、ＲＰ−１８（ナカライテスク社）、さらに好ましくはＤＡＩＡＩＯＮ(R)ＨＰ２０が好適に用いられる。これは化学的に安定であるため各種溶媒を溶出液として用いることができ、さらに、分子量数万もの天然有機物の吸着が可能であるため、好適に使用され得る。
【００５２】
第一溶剤および第二溶剤について、第２溶剤は、第１溶剤より弱いがクロロホルムより強い極性を有している。この条件を満たしていればいずれの溶媒も使用可能であるが、生姜の有効成分を分離する観点において、好ましくは、第１溶剤はメタノールであり、第２溶剤はアセトンである。
【００５３】
次に段階（ｃ）において、第１溶出液から第１溶剤を蒸発させて除去し、有効成分を含む第１濃縮溶出液を得る。同様に段階（ｄ）において、有効成分を含む第２溶出液から第２溶剤を蒸発させて除去し、第２濃縮溶出液を得る。蒸発方法は、好ましくは減圧することにより行われ、適切な程度まで濃縮させ得る。
【００５４】
このようにして得られた第１または第２溶出液は、その１ｇ中に、０〜１０ｍｇの６−ショウガオール、１〜１５０ｍｇの６−ジンゲロール、および、０〜４０ｍｇの６−デヒドロジンゲルジオンを有効成分として含むことが好ましく、医薬として有用である。具体的には、当業界周知の医薬上許容される担体または希釈剤とともに、抗炎症医薬組成物、抗血小板凝集医薬組成物、または、抗真菌医薬組成物に好適に用いられる。好ましくは、段階（ｃ）で得られた第１濃縮溶出液または段階（ｄ）で製造された第２濃縮溶出液のいずれかを含む医薬組成物である。
【００５５】
また、中間抽出物である段階（ａ）で得られた粗抽出物も、上記有効成分を含み、同様に医薬として有用に用いられ得る。具体的には、医薬上許容される担体または希釈剤とともに、抗炎症医薬組成物、抗血小板凝集医薬組成物、または抗真菌医薬組成物に好適に用いられ得る。
【００５６】
本発明の抗炎症活性を有する医薬組成物の投与方法としては、経口投与または非経口投与のいずれでもよい。製剤例としては、本発明の抽出物を含む、液剤、クリーム、軟膏の形態が挙げられるがこれらに限定されない。これらは治療の目的に合わせて適宜選択されるべきである。
【００５７】
このような抗炎症医薬組成物は、リューマチ様関節炎、骨関節炎などの関節炎および筋肉症の治療に適しており、この治療効果は、具体的には以下の３種類の作用によるものと推測される。第１は抗炎症作用であり、低血管拡張および間接低浮腫を導く血管拡張剤プロスタグランジン（ＰＧＥ2，ＰＧＩ2）の生産減少により達成される。第２は鎮痛作用であり、プロスタグランジンの生産減少により達成される（抗炎物質ブラジキニンおよび５−ヒドロキシトリプタミンに対する鎮痛神経末端の低敏感化によると推測される）。第３は解熱作用であり、インターロイキン−１等の炎症熱原に反応して発生するメディエータＰＧＥ2の減少によるものと考えられる。
【００５８】
本発明の抗血小板凝集活性を有する医薬組成物の投与方法としては、好ましくは注射などの非経口投与である。製剤例としては、本発明の抽出物を含む、注射剤の形態が挙げられるがこれらに限定されない。これらは治療の目的に合わせて適宜選択されるべきである。
【００５９】
このような抗血小板凝集医薬組成物は、心筋梗塞、狭心症、血栓症などの血小板凝集に起因する様々な疾患の治療に適している。
【００６０】
本発明の抗真菌活性を有する医薬組成物の投与方法としては、皮膚への局部投与が好ましい。製剤例としては、本発明の抽出物を含む、シャンプー、バスクリーム、石鹸、ボディローション、ボディクリームおよび洗浄剤の形態が挙げられるがこれらに限定されない。これらは治療の目的に合わせて適宜選択されるが、例えばふけの治療に用いるのであれば、シャンプーの形態が好ましい。
【００６１】
このような抗真菌医薬組成物は、白癬菌、特に、毛瘡白癬菌（Trichophyton mentagrophytes）、またはピチロスポルム−オバーレ（Pityrosporum ovale）に関連する疾患、例えば足部白癬、頭部白癬、股癬、円癬、爪真菌症、頭部糠疹、でん風、ピチロスポルム毛包炎（pityrosporum folliculitis）、脂漏性皮膚炎、またはふけの治療に有用であるが、これらに限られない。
【００６２】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【００６３】
＜有効成分の測定＞
下記の実施例において、製品の有効成分は、高速液体クロマトグラフィ（以下ＨＰＬＣと略す）により測定された。カラムは、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ５Ｃ−１８カラム（直径５μｍの吸着剤を充填した２５０ｍｍ×４．６ｍｍのカラム；ナカライテスク社）を用い、溶出液のＨＰＬＣスペクトルはＬＣ−１０ＡＴ（島津製作所）で記録した。ＨＰＬＣサンプルの調製は、適量の製品を移動相溶液（シアン化水素：水＝６５：３５，Ｖ／Ｖ）で２５ｍｌまで希釈し、０．２５μｍメンブレンで濾過した。濾液を上記カラムに注入し、移動相溶液で溶出した。ＵＶ検出器ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所）を用いて、溶出液の２３０ｎｍにおける吸収を測定した。
【００６４】
＜実施例１＞
新鮮な生姜の根２１００ｇを粉砕し、濾過し、濾液および残渣を得た。５００ｍｌの濾液をエーテル５００ｍｌで３回抽出し、分離した有機層と水層を合併し、エーテルを真空で蒸発させ、濃縮したエーテル抽出物（I-OE）を得た。生姜残渣をアセトン３０００ｍｌで３回抽出し、抽出溶液を濾過回収し、合併して、真空でアセトンを蒸発させ、濃縮アセトン抽出物（I-O）（１４．５ｇ）を得た。濃縮エーテル抽出物（I-OE）および濃縮アセトン抽出物（I-O）の混合物７ｇを逆相カラムクロマトグラフィー（直径５００〜８００μｍのＤＡＩＡＩＯＮ(R)ＨＰ−２０（１８０ｇ）を充填した、３００ｍｍ×３０ｍｍのカラム）により、水１５００ｍｌ、メタノール２５００ｍｌ、アセトン２０００ｍｌおよびクロロホルム２０００ｍｌで溶出した。
【００６５】
上記各溶出液で得られた水溶出液、メタノール溶出液、アセトン溶出液およびクロロホルム溶出液を別々に集め、減圧濃縮し、濃縮水溶出液（I-OW）０．２７ｇ、濃縮したメタノール溶出液（I-OM）１．４５ｇ、濃縮したアセトン溶出液（I-OA）２．６８ｇおよび濃縮したクロロホルム溶出液（I-OC）０．８３ｇを得た。I-O、I-OM、またはI-OAそれぞれ１ｇ中の、６−ショウガオール、６−ジンゲロール、および６−デヒドロジンゲルジオンの量（ｍｇ）をＨＰＬＣで測定した。その結果を表１に示す。
【００６６】
【表１】
0004052819.tif 000002
【００６７】
＜実施例２＞
新鮮な生姜の根５００ｇを粉砕し、アセトン（３×１０Ｌ）で抽出した。得られた抽出液３回分を濾過した後併せて、エーテルを減圧で揮発させ、濃縮したアセトン抽出物（II-O）を得た。濃縮アセトン抽出物（II-O）２０ｇを逆相カラムクロマトグラフィー（ＤＡＩＡＩＯＮ(R)ＨＰ−２０（６００ｇ）を充填した）で、水４Ｌ、メタノール６．５Ｌ、アセトン１５Ｌ、およびクロロホルム５Ｌで溶出した。水溶出液、メタノール溶出液、アセトン溶出液、およびクロロホルム溶出液を別々に集め、減圧濃縮し、濃縮した水溶出液（II-OW）２．５ｇ、濃縮したメタノール溶出液（II-OM）７．１ｇ、濃縮したアセトン溶出液（II-OA）６．９ｇ、および濃縮したクロロホルム溶出液（II-OC）３．５ｇを得た。II-O、II-OM、およびII-OAそれぞれ１ｇ中の、６−ショウガオール、６−ジンゲロール、および６−デヒドロジンゲルジオンの量（ｍｇ）をＨＰＬＣで測定した。その結果を表２に示す。
【００６８】
【表２】
0004052819.tif 000003
【００６９】
＜実施例３＞
新鮮な生姜の根１０ｋｇを粉砕し、蒸気で５時間蒸留し、真空で蒸発させ、４１０ｇの濃縮した蒸留物（III-O）を得た。この蒸留物（III-O）２０ｇを逆相カラムクロマトグラフィー（ＤＡＩＡＩＯＮ(R)ＨＰ−２０（６００ｇ）を充填した）で、水４．５Ｌ、メタノール４．５Ｌ、アセトン３Ｌ、およびクロロホルム５Ｌで溶出した。水溶出液、メタノール溶出液、アセトン溶出液、およびクロロホルム溶出液を別々に集め、減圧濃縮し、濃縮した水溶出液（III-OW）０．０３ｇ、濃縮したメタノール溶出液（III-OM）１４．５ｇ、濃縮したアセトン溶出液（III-OA）０．８５ｇ、および濃縮したクロロホルム溶出液（III-OC）０．２ｇを得た。
【００７０】
＜参考例１＞新鮮な生姜の根１０ｇを粉砕し、５０℃のアセトン１０００ｍｌで２時間抽出し、抽出液を分離し、減圧条件下（４０℃，７５ｍｍＨｇ）で濃縮し、濃縮したアセトン抽出物（ＩＶ−Ｏ）を得た。アセトン抽出物（ＩＶ−Ｏ）の色、粘度および収率は以下の表３の通りである。
【００７１】
＜参考例２＞新鮮な生姜の根１０ｇを粉砕し、蒸気で蒸留し、水を含む蒸留物得て、これより油状蒸留物を分離し、冷凍乾燥し、油状抽出物（Ｖ−Ｏ）を得た。油状抽出物（Ｖ−Ｏ）の色、粘度および収率は表３の通りである。
【００７２】
＜参考例３＞新鮮な生姜の根１０ｇを粉砕し、流速４５Ｌ／分の二酸化炭素を２５０ｍｌ抽出室に入れて、高圧ポンプ（Ｍｏｄｅｌ  Ｎｏ．ＥＫ−１，ＬＥＷＡ  Ｃｏ．，ＵＳ）で室圧を、１．７×１０７〜２．８×１０７Ｐａに調節し、室温を熱交換器（ＭｏｄｅｌＮｏ．Ｈ−２４１０，ＨＯＴＥＣ  Ｃｏ．，ＵＳ）および外循環システムで３５〜６０℃に維持し、二酸化炭素の体積が３００Ｌに達した時に、抽出を中止した。得られた抽出物から二酸化炭素を蒸発させた後、超臨界二酸化炭素抽出物（ＶＩ−Ｏ）を得た。超臨界二酸化炭素抽出物（ＶＩ−Ｏ）の色、粘度および収率を表３に、ＨＰＬＣで測定された成分の含有量を表４に示す。
【００７３】
【表３】
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【００７４】
【表４】
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【００７５】
＜実施例４：抗血小板凝集活性の評価＞ウサギの耳の静脈から採血し、１４倍量のＥＤＴＡ（１００ｍＭ）と混合し、室温、９０×ｇで１０分遠心分離して、血小板を豊富に含む血漿溶液を得た。この溶液をさらに５００×ｇで１０分遠心分離して、血漿に富んだ上清を除去し、沈殿をタイロード溶液（カルシウムを含まず、２ｍＭ  ＥＤＴＡを含む）に懸濁し、さらに５００×ｇで１０分遠心分離して、血小板をタイロード溶液（ＥＤＴＡを含まない）に懸濁した。同じ条件で遠心した後、沈殿を、ＮａＣｌ（１３６．８ｍＭ）、ＫＣｌ（２．８ｍＭ）、ＮａＮＣＯ３（１１．９ｍＭ）、ＭｇＣｌ２（１．１ｍＭ）、ＮａＨ２ＰＯ４（０．３３ｍＭ）、ＣａＣｌ２（１．０ｍＭ）、グルコース（１１．２ｍＭ）および牛血清アルブミン（０．３５％）を含むタイロード溶液に懸濁し、血小板溶液を調製した。その溶液の血小板数をクールター計数記（Ｍｏｄｅｌ  ＺＭ）で測定し、４．５×１０８血小板／ｍｌの濃度にした。
【００７６】
続いて、実施例１および２で得られた生姜抽出物、０．５％ＤＭＳＯを加えて３７℃で３分間インキュベートした後、アラキドン酸（１００μＭ）またはコラーゲン（１０μｇ／ｍｌ）を加え、血小板を凝集させた。対照として、アスピリンおよびインドメタシンを用いた。
【００７７】
上述の実験より得られた各サンプルの血小板凝集抑制度から、血小板凝集を抑制する割合（％）を下記式により計算し、その５０％抑制する濃度（μｇ／ｍｌ）を求めた。得られた値を、平均±標準誤差（ｎ＝３〜６）として表した。結果を表５に示す。
【００７８】
【数１】
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【００７９】
【表５】
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【００８０】
＜実施例５：カラゲニン誘発足掌浮腫抑制活性の評価＞カラゲニン誘発足掌浮腫抑制活性を、ウィンター等の方法（Ｗｉｎｔｅｒ  Ｃ．Ａ．ｅｔａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐｅｒ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１１１：５４４−５４７，１９６２．）により調べた。体重１５０±２０ｇの雄ウィスターマウスを一晩断食させ、左後足に０．１ｍｌの１％カラゲニン懸濁液を注射し足掌浮腫を誘発させた。続いて、実施例１、２および３で得られた各生姜抽出物および６−デヒドロジンゲルジオン（対照）をそれぞれ左後足に均等に塗布した。３時間後、左後足の体積を体積スキャナー（カタログ番号＃７１５０、ＵＧＯ  Ｂａｓｉｌ，Ｉｔａｌｙ）で測定し、左後足と右後足の体積差をカラゲニン誘発足部浮腫指数とした。各サンプルにおける浮腫指数の平均値より、カラゲニン誘発性足部浮腫に対する抑制活性（％）を計算した。得られた値を、平均±標準誤差（ｎ＝３〜６）として表した。結果を表６に示す。
【００８１】
【数２】
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【００８２】
【表６】
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【００８３】
＜実施例６：毛瘡白癬菌またはピチロスポルム−オバーレに対する抑制活性の評価＞
抗毛瘡白癬菌活性の分析生姜抽出物の最低抑制濃度（ＭＩＣ）を、エドワーズ等の方法（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｊ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  ＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ３３：２１５−２２２，１９８９）により測定した。試験物質を溶媒（１００％  ＤＭＳＯ）に溶解させ、連続的な濃度に希釈し、ストック濃度液を作った。各試験濃度液０．０１ｍｌを０．９９ｍｌのポテトデキストロース栄養培地（ＤＩＦＣＯ）およびｌ０３〜ｌ０４ＣＦＵ／ｍｌの毛瘡白癬菌（ＡＴＣＣ  ９５３３）を含む４８ウェルプレートに入れて、２８℃で７２時間インキュベートし、肉眼で検視採点した。対照として上記溶媒のみを用いた。各濃度につき二連で評価し、その結果を表７に示す。
【００８４】
抗ピチロスポルム−オバーレ分析
実施例１、２および３で得られた生姜抽出物の最低抑制濃度（ＭＩＣ）を、上記同様の方法により測定した。試験物質を溶媒（１００％ＤＭＳＯ）に溶解させ、連続的な濃度に希釈し、ストック濃度液を作った。各試験濃度液０．０１ｍｌを０．９９ｍｌの液体サブロー培地（ＤＩＦＣＯ）および１０3〜１０4ＣＦＵ／ｍｌのピチロスポルム−オバーレ（ＡＴＣＣ  ３８５９３）を含む４８ウェルプレートに入れて、３７℃で４８時間インキュベートし、肉眼で検視採点した。対照として上記溶媒のみを用いた。各濃度につき二連で評価し、その結果を表７に示す。
【００８５】
【表７】
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【００８６】
【発明の効果】
本発明の生姜の有効成分を含む抽出物の製造方法により、ショウガオール、ジンゲロールまたはデヒドロジンゲルジオンなどの生姜の有効成分を、高効率かつ高活性で含む抽出物を得ることができる。本発明の方法により得られた抽出物は、最終的な抽出物だけでなく中間抽出物も抗炎症活性、抗血小板凝集活性、または抗真菌活性を有することから、それぞれ医薬組成物に用いることができる。