(57)【要約】プロゲステロン受容体アイソタイプ特異抗体を利用するプロゲステロン陽性腫瘍を識別するためのシステムおよび方法を提供する。一つの態様は、腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから取得すること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、およびPRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定めることによって、プロゲステロン受容体陽性腫瘍を識別する方法を提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロゲステロン受容体陽性腫瘍を識別するにあたり、
腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、
組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、および
PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定めること
を含む、方法。
【請求項２】
組織サンプルは胸部組織から得られる、請求項1の方法。
【請求項３】
第一の抗体および第二の抗体はアイソタイプ特異抗体である、請求項1の方法。
【請求項４】
第一の抗体はPRAノバカストラ（PRA Novacastra）16であり、および第二の抗体はPRBノバカストラ16である、請求項3の方法。
【請求項５】
トリプルネガティブ表現型胸部ガン腫瘍を識別するにあたり、次の
腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、
組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、
エストロゲン受容体αを検出するための少なくとも一の抗体を用い、エストロゲン受容体αの存在を検出すること、HER2/neuの存在を定めるための少なくとも一の検証されたテストを用い、HER2/neuの存在を検出すること、および
PRA、PRB、ERα；エストロゲン受容体、およびHER2/neuの存在が検出されない場合、組織サンプルがトリプルネガティブ表現型であると定めること
を含む方法。
【請求項６】
組織サンプルは胸部組織から得られる、請求項5の方法。
【請求項７】
第一の抗体および第二の抗体はアイソタイプ特異抗体である、請求項5の方法。
【請求項８】
第一の抗体はPRAノバカストラ16であり、および第二の抗体はPRBノバカストラ16である、請求項7の方法。
【請求項９】
腫瘍をプロゲステロン陽性として分類するためのシステムであって、組織サンプルならびにPRAの検出が可能な少なくとも第一の抗体およびPRBの検出が可能な少なくとも第二の抗体を含み、腫瘍がPRA陽性もしくはPRB陽性またはPRA陽性およびPRB陽性の双方であるかを定めるために、少なくとも第一の抗体および少なくとも第二の抗体が用いられる、システム。
【請求項１０】
組織サンプルは胸部組織から得られる、請求項9の方法。
【請求項１１】
第一の抗体および第二の抗体はアイソタイプ特異抗体である、請求項9の方法。
【請求項１２】
第一の抗体はPRAノバカストラ16であり、および第二の抗体はPRBノバカストラ16である、請求項11の方法。
【請求項１３】
抗内分泌療法による処置に感受性なペイシェントに抗プロゲスチンを施すにあたり、次の、
胸部ガンをもつ患者からBCサンプルを得ること、
PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、組織サンプルにおいてプロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、
PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルはプロゲステロン受容体陽性であると定めること、
エストロゲン受容体を検出するための少なくとも一の抗体を用い、エストロゲン受容体αの存在を検出すること、および
組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性およびエストロゲン受容体α陽性であると定められる場合、抗内分泌療法をペイシェントに施すこと
を含む方法。
【請求項１４】
抗内分泌療法には、抗プロゲスチンが含まれる、請求項13の方法。
【請求項１５】
組織サンプルは胸部組織から得られる、請求項13の方法。
【請求項１６】
第一の抗体および第二の抗体はアイソタイプ特異抗体である、請求項13の方法。
【請求項１７】
第一の抗体はPRAノバカストラ16であり、および第二の抗体はPRBノバカストラ16である、請求項16の方法。
【請求項１８】
抗プロゲスチンは、オナプリストン、ロナプリサン、ミフェプリストン、PF-02413873、テラプリストン、リロプリストン、ORG2058、アポプリススニル、ウリプリスタル、ZM172406、ZM150271、ZM172405およびアグレプリストンからなる群より選ばれる、請求項14の方法。
【請求項１９】
さらに、oエベロリムス、トラスツズマブ、TM1-D、抗HER2薬物、ベバシズマブ、パクリタキセル、ドセタキセル、タキサン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ペグ化リポソームドキソルビシン、アントラサイクリン、アントラセンジオン、カルボプラチン、シスプラチン、5-FU、ゲムシタビン、シクロホスファミド、抗エストロゲン、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、アロマターゼインヒビター、および抗アンドロゲンからなる群より選ばれる抗腫瘍化合物を施与することが含まれる、請求項14の方法。
【請求項２０】
抗プロゲスチンによる増殖抑制に感受性な腫瘍の増殖を抑制するにあたり、
腫瘍形成性またはガン性と疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、
組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、
PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定めること、および
組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定められる場合、抗プロゲスチンをペイシェントに施すこと
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
背景、本出願は、2014年4月8日付け出願の米国仮特許出願第61/976872号に優先権を主張する。上記参照出願は、参照することによりここにすべて再び述べられるかのように組み込まれる。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００２】
トリプルネガティブ乳ガン（TNBC）は、エストロゲン受容体〔たとえば、エストロゲン受容体α（ERα）〕、プロゲステロン受容体（PR）、およびHER2/neuを発現しない乳ガン（BC）腫瘍に言及する。TNBCを有する患者は、BCについての目下の処置への対応に限られていた（例は、ホルモン処置および抗HER2処置）。TNBCのためのその限られた治療オプションを考えると、診断精度は、患者のために適切な処置を決定する際の重要な検討事項である。PRは、エストロゲン受容体（ER）のための代理マーカーとして使用され、検出されないERの存在が示された。目下の診断ツールは、直接的な治療的処置のための標的としてPRに向けられていない。
【０００３】
プロゲステロン受容体（PR）は、ステロイド受容体ファミリー、核内受容体ファミリーのサブセットに属し、およびプロゲステロン作用のメディエーターである。PRはリガンド活性化転写因子であり、それは、ホルモンに調節される組織において重要な役割を果たし、および二つの主要な形態；プロゲステロン受容体A（PRA）およびプロゲステロン受容体B（PRB）としてヒトにおいて発現される。乳ガン組織標本のルーチン免疫組織化学（IHC）テスティングにおいて、PRアイソタイプ〔例は、PRサブタイプA（PRA）およびPRサブタイプB（PRB）〕の双方に共通のエピトープを認識する二重特異性の抗体（Ab）は、PRの存在を決定するために使用される。したがって、目下の臨床診断ツールを使用して、PRのステータスを定めることは、一定の状況において、（1）ヒト乳ガンの多様性、ならびに（2）単一の二重特異性抗PR抗体により検出を逃れることがあるPRAおよびPRBのエピトープの存在にもかかわらず、PRAおよびPRBの双方を認識する単一の二重特異性抗体に依存している。
【０００４】
結合したプロゲスチンのリガンド、たとえばプロゲステロン（主要な黄体ホルモンの一種）のようなものの存在下では、PRは、特定の部位でリン酸化され、二量体化し、多数の異なる細胞要素（例は、p300およびステロイド受容体コアクチベーター）と複合体を形成し、そしてRNAへのDNAの転写を惹起するために、プロゲステロン応答要素（応答配列）（PREs）として知られる特定DNA配列に結合する。
【０００５】
PRのこれらの複雑な生物学的調節は、たとえば、異常なPRリン酸化が交互の生物学的経路を介して起こることがあるガンにおいて異常であると知られている。したがって、PRAおよびPRBが乳ガンおよび他のガンにおいて別個に変化し、および特定の方法において修飾されたPRアイソフォームに向けられた二重特異性抗体がPRAまたはPRBに対するその感度および特異性を失うであろうことは妥当と思われる。このように、標準的な診断方法はPRAおよびPRBを検出するのに失敗することがあり、TNBCの不正確な、または誤った分類がもたらされる。
【０００６】
正常な胸部組織と対照的に、PRAおよびPRB発現のレベルは等しい割合で存在しない。イムノブロットによって分けられたPRアイソタイプの相対的発現は、悪性腫瘍における予後（徴候）であるように思われる〔Hopp（ホップ）ら、Clin Cancer Res.（クリニカル・キャンサー・リサーチ）2004年4月15日；10（8）：2751-60）〕。腫瘍はPRAおよびPRB発現に関して不均質であることができ−同じ腫瘍における異なる細胞は異なるPRサブタイプを発現することができる。〔Mote（モテ）ら、Ernst Schering Foundation Proceedings（エルンスト・シェリング・ファウンデーション・シンポジウム・プロシーディングズ）、第1巻pp77-107、2008年〕。これらの悪性細胞はまた、ERαを異なって発現することができる〔Zukiwski（ズーキウスキ）ら、Proc ASCO（プロシーディングス・アメリカン・ソサエティ・オブ・クリニカル・オンコロジー）アブストラクト＃118076、2013年〕が、個々のガン細胞におけるERαおよびPRの重複発現は低い。ここで言及する刊行物は、その全体が参考として組み込まれる。
【０００７】
各PRアイソフォームは異なる生理学的役割を有する。PRは中心的なDNA結合性ドメインおよびカルボキシ末端リガンド結合性ドメインをもつ。PRBは、PRAと比較したとき、そのN末端にて追加の164のアミノ酸をもつ。二つのアイソフォームは他の点では同じである。〔Breast Cancer Res（ブレスト・キャンサー・リサーチ）2002年、4：187-190〕。アイソフォームは図1に示すように様々な条件下でリン酸化される。
【０００８】
ステロイド受容体のための標準的なテスティングは、プライマリーのBCsが通常、ERα陽性およびPR陽性であることを実証している。PRは、日常的にPRAおよびPRBの双方を検出するために選定された二重特異性抗体と共にアッセイされる。この方法により、ERα陽性のBCsの20％はPR陰性である一方、PR陽性のBCsの約5％はERα陰性である。トリプルネガティブBCsは、ERα、PR、およびHER2/neuネガティブとして規定される。原則的に、標準的IHCテスティング技術によって、TNBCsは双方がPRAおよびPRB陰性である。
【０００９】
トリプルネガティブ乳ガン表現型決定の精度は、部分的に、双方のPRAおよびPRBの発現を検出する抗体の能力に依存する。PRBが乳ガンにおいて独自に変えられる可能性があること、および単一の抗体によるPRAおよびPRBの双方のルーチン検出がPRAまたはPRBの変えられた発現を見逃す可能性があることでの事実を強調する（point to）生物学的元素（biological element）がある。真のトリプルネガティブBC表現型は、PRAおよびPRBの双方のエピトープを検出するために、抗体の感度/特異性に応じて、一つの単一のAbによる検出を逃れる可能性があり、患者に誤った情報を提供することにつながる可能性がある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
概略、一態様は、プロゲステロン受容体陽性腫瘍を識別する方法を提供し、それは、腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、およびPRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定めることによる。
【００１１】
他の態様は、トリプルネガティブ表現型を識別する方法を提供し、それは、腫瘍形成性またはガン性であると疑われるBC組織サンプルをペイシェントから得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、エストロゲン受容体を検出するための少なくとも一の抗体を用い、エストロゲン受容体α（ERα）の存在を検出すること、HER2/neuの存在を定めるための少なくとも一の検証されたテストを用い、HER2/neuの存在を検出すること〔例は、免疫組織化学、インシトゥー（in situ）ハイブリダイゼーション〕、およびPRA、PRB、ERαおよびHER2/neuの存在が検出されない場合、組織サンプルがトリプルネガティブ表現型であると定めることによる。
【００１２】
さらに他の態様は、抗プロゲスチンによる増殖抑制に感受性な腫瘍の増殖を抑制する方法を提供し、それは、腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織試料は、プロゲステロン受容体陽性であり、PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合プロゲステロン受容体陽性と定めること、および組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定められる場合、抗内分泌療法（例は、抗プロゲスチン）を施すことによる。
【００１３】
さらなる態様は、腫瘍をプロゲステロン陽性として分類するためのシステムを提供し、それには、組織サンプルならびにPRAの検出が可能な少なくとも第一の抗体または抗体結合フラグメント（抗体結合断片）およびPRBの検出が可能な少なくとも第二の抗体または抗体結合フラグメントが含まれ、そこでは、少なくとも第一の抗体または抗体結合フラグメントおよび少なくとも第二の抗体または抗体結合フラグメントは、腫瘍がPRA陽性またはPRB陽性またはPRA陽性およびPRB陽性の双方であるかどうかを定めるために使用される。
【００１４】
別の態様は、プロゲステロン陽性腫瘍を識別するためのキットを提供し、それには、PRAを検出することが可能な少なくとも第一の抗体または抗体結合フラグメントおよびPRBを検出することが可能な少なくとも第二の抗体または抗体結合フラグメントが含まれる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
本開示の特徴および性質は、以下に記載する詳細な説明から、参照符号が対応する事項を特定する添付図面と併せて用いて、より一層明らかになるであろう。
【図１】PRAおよびPRBアイソフォーム受容体ドメインおよび翻訳後修飾を示す。
【図２】乳ガン組織におけるエストロゲン受容体アルファを有するPRAおよびPRBのデュアルステイニングを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
詳細な記載、以下に開示される方法およびデバイスは、一般的並びに具体的の双方で説明しうる。説明がある態様に特異的であるとき、その態様は、ここに記載の態様の範囲を決して制限するものではないことに留意すべきである。ここに引用されるすべての参考文献は、ここにその全体が参考として組み込まれる。
【００１７】
一態様では、二つのアイソタイプ特異的PR AbsはPRのステータス（状況）を十分に特徴付けるために用いられる。この例では、利用可能な臨床および実験室のテスティングデータと共に520のアーカイブ（保存）されたBC標本を、Oscar Lambret Cancer Center（オスカル・ランブレ・キャンサー・センター）、Lille（リール市）、フランス国から入手した。HER2の状況は予め定めた。IHCは抗ERα、抗PRAおよび抗PRBのAbsを用いて実行した。この例では、ERαおよびPR陽性腫瘍は示された抗体を用い、≧1％染色された腫瘍細胞をもつ腫瘍として規定される。
【００１８】
IHCはアーカイブBC組織の3-4μm切片上で実行した。サンプルは標準的な方法論（例は、http://www.dako.com/us/ar38/p105760/prod_products.htm）を用いる免疫染色について調製した。標準ヘマトキシリンはIHCのために生成された。ネガティブコントロール（陰性対照）は、一次抗体をアイソタイプコントロールマウスIgG1でか、または単独の抗体希釈液（洗浄緩衝剤ネガティブコントロール）で置換することによって取得した。
【００１９】
520のアーカイブされた乳ガン腫瘍を取得し、そしてERα、PRAおよびPRBのために再テストした。71のケースは、再テスティングによるERα陰性およびペイシェント（受動体、患者など）の記録からのHER2陰性であると定められた。71のErα陰性およびHER2陰性のケースはまた、2PRの二重特異（性）抗体によりテストし、そしてこれらのケースの50は複数の抗体との十分なテスティングのために利用できる適当な組織をもった。
【００２０】
【表１】
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【００２１】
テストした二重特異抗体のうち、Pg636は質的により一層良好な染色をもち、およびより一層多くのBCはPR陽性として1A6抗体とよりも識別された（36対32％）。
【００２２】
Pg636または1A6に対するPRAおよびPRBの検出は、表2および3に示される。27/50のケースが、すべてのPR抗体を用い、「真」のトリプルネガティブであることが見出された。この例において、二重特異抗体は、個々のPRAおよびPRB抗体と同じ結果を提供した。13/50のケースは、試験されたすべての抗体によってPR陽性であった。しかし、10/50のケースはPRA、PRB、Pg636または1A6のいずれかについても不一致の結果を実証した。
【００２３】
表2：50 BC標本における二重特異抗体対PRAアイソフォーム特異抗体を用いるPR陽性サンプルのクロス表
【００２４】
以下に示すように、PRAアイソタイプ特異抗体〔PRA Novacastra（PRAノバカストラ）16〕により検出されたPRA陰性およびPRA陽性サンプルの割合は、括弧内に示され、その一方で、PG636および1A6の二重特異抗体により検出されたPR陰性および陽性サンプルの数は、括弧なしで示される。
【００２５】
【表２】
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【００２６】
表3：50 BC標本における二重特異抗体対PRBアイソフォーム特異抗体を用いるPR正値性（陽性）のクロス表
【００２７】
以下に示すように、PRAアイソタイプ特異抗体（PRA Novacastra SANS 27）により検出されたPRB陰性およびPRB陽性サンプルの割合は、括弧内に示され、その一方で、PG636および1A6の二重特異抗体により検出されたPR陰性および陽性サンプルの数は、括弧なしで示される。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
【表４】
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【００３０】
表4は、異なるPR抗体を用いたテスティングからの不一致のデータを有する10のケースを示す。表4において以下に示すように、二重特異抗体（Pg636および1A6）を用いPR陰性として分類されるサンプルは、PRAに対して、およびPRBに対して向けられるアイソタイプ特異抗体を用いてPRB陽性、PRA陽性、またはPRB陽性およびPRA陽性の双方として分類される。
【００３１】
テストした50サンプルのうち、37は、IHCテスティングのために使用されるPR抗体に応じて潜在的にトリプルネガティブとして分類することができた。10のケースは不一致のPRの結果をもった。一態様において、PRAおよびPRBアイソタイプ特異抗体の使用は、PR陽性であるが、以前に二重特異抗体を用いてトリプルネガティブ表現型として識別されたそれらのBCのケースを明らかにしうる。
【００３２】
一態様では、PRB（アイソタイプ特異的）およびPg636（二重特異性）によって捕捉された情報は一致しない。たとえば、Pg636がサンプルをPR陰性であったと示したとき、サンプルは4/5のケースにおいて、PRB陽性であった。Pg636がサンプルをPR陽性であったと示したとき、サンプルは5/5のケースにおいてPRB陰性であった。このように、二重特異抗体によって提供される診断上の情報は正しくなかった。
【００３３】
別の態様において、アイソタイプ特異的なPR抗体の使用は、PR陰性として分類され、そして従ってPR二重特異抗体を用いるトリプルネガティブ表現型を有するPR陽性BC組織サンプルを識別する。したがって、PRAおよびPRBアイソタイプ特異抗体の使用は、二重特異抗体を用いて検出されないことがあるPR陽性腫瘍を検出する重要な方法である。このように、以前に未検出なPR陽性の組織サンプルを有するペイシェント（受動体、患者など）は、抗プロゲスチンを含め、抗内分泌療法による処置に適している可能性がある。
【００３４】
【表５】
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【００３５】
表5に示すように、オスカル・ランブレ・キャンサー・センター、リール市、フランス国の440からの520の患者のPRおよびERステータスを定めた。サンプルは、それがPRAまたはPRB陽性のいずれかである場合、PR陽性であると考えられる。359のER陽性のケースのうち、41（9％）はPR陰性で−二重特異抗体の使用により期待される20％よりも11％低かった。11％は、二重特異抗体を用いてPR陰性であると定められたが、PRAおよびPRB抗体の使用を介して決定されるように、実際にはPR陽性であるサンプルを表す。11％は、したがって、抗プロゲスチンを含め、抗内分泌療法による処置に修正可能とすることができる患者からのものである。二重特異抗体を用いることで、これらの患者は、PR陽性であると識別されず、そして従って、治療の選択肢に関する不完全な情報を有することになる。
【００３６】
一態様において、抗プロゲスチンによる処置に感受性なペイシェントに対し抗プロゲスチンを施す方法が提供される。この態様では、胸部組織サンプルは胸部ガンをもつペイシェントから得られ、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体（または一次抗体）およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体（または二次抗体）を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞が識別されること、組織サンプルはPRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、プロゲステロン受容体陽性として識別される。ERαの存在は、エストロゲン受容体を検出するための少なくとも一の抗体を用いて定められ、そして組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性およびエストロゲン受容体陽性であると定められる場合、抗プロゲスチンがペイシェントに施される。
【００３７】
ここで用いるように、用語「抗体」または「抗体群」は、別段の指示がない限り、特異抗原に結合する免疫グロブリンを指し、そして制限されないが、ポリクローナル、モノクローナル、キメラの、またはヒト化抗体、Fabフラグメント（Fab断片）または抗原の少なくとも一部分に結合する任意の他のフラグメントが含まれる。「抗体」には、任意のクラスの抗体または免疫グロブリンが含まれ、制限されないが、IgG、IgA、IgM、IgD、IgE、および任意の構成において分泌免疫グロブリン（例は、二つの同一の重鎖および二つの軽鎖、単鎖抗体、二鎖抗体）が含まれた。
【００３８】
ここに説明する態様は、プロゲステロン受容体陽性腫瘍を識別する方法を提供し、それは、腫瘍形成性（発ガン性）またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、およびPRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルはプロゲステロン受容体陽性であると定めることによる。
【００３９】
さらなる態様は、トリプルネガティブ表現型胸部ガン腫瘍を識別する方法を提供し、それは、腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、エストロゲン受容体αを検出するための少なくとも一の抗体を用い、エストロゲン受容体αの存在を検出すること；HER2/neu（human epidermal growth factor receptor 2/neuroglioblastoma）の存在を定めるための少なくとも一の検証されたテストを用い、HER2/neuの存在を検出すること、およびPRA、PRB、ERα；エストロゲン受容体、およびHER2/neuの存在が検出されない場合、組織サンプルはトリプルネガティブ表現型であると定めることによる。
【００４０】
さらに追加の態様は、腫瘍をプロゲステロン陽性として分類するシステムを提供し、それには、組織サンプルならびにPRAを検出することが可能な少なくとも第一の抗体およびPRBを検出することが可能な少なくとも第二の抗体を含み、そこでは少なくとも第一の抗体および少なくとも第二の抗体は、腫瘍がPRA陽性またはPRB陽性またはPRA陽性およびPRB陽性の双方であるかどうかを定めるために用いられる。
【００４１】
プロゲステロン陽性腫瘍を識別するためのキットもまた提供され、これには、PRAを検出することが可能な少なくとも第一の抗体およびPRBを検出することが可能な少なくとも第二の抗体が含まれる。この態様では、キットはさらに、PRAおよびPRBを検出するのに必要な試薬を含むことができる。
【００４２】
別の態様において、ここに記載の態様のために用いられる組織サンプルは、胸部組織から得られる。別の態様では、第一の抗体および第二の抗体はアイソタイプ特異抗体である（例は、PRA Novacastra 16、PRB Novacastra 16）。
【００４３】
さらなる態様は、抗内分泌療法による処置に感受性なペイシェントに抗プロゲスチンを施す方法を提供し、それは、胸部ガンをもつペイシェントからBCサンプルを得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルはプロゲステロン受容体陽性であると定めること、エストロゲン受容体を検出するための少なくとも一の抗体を用い、エストロゲン受容体αの存在を検出すること、および組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性およびエストロゲン受容体α陽性であると定められる場合、抗内分泌療法をペイシェントに施すことによる。この態様において、抗内分泌療法には、抗プロゲスチンが含まれる。
【００４４】
さらなる態様は、増殖抑制に感受性な（または敏感な）腫瘍の増殖を抗プロゲスチンによって抑制する方法を提供し、それは、腫瘍形成性またはガン性であると疑われる組織サンプルをペイシェントから得ること、組織サンプルにおいて、PRAを検出するための少なくとも第一の抗体およびPRBを検出するための少なくとも第二の抗体を用い、プロゲステロン受容体陽性細胞を識別すること、PRAの存在またはPRBの存在が検出される場合、組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定めること、および組織サンプルがプロゲステロン受容体陽性であると定められる場合、抗プロゲスチンをペイシェントに施すことによる。
【００４５】
別の態様では、抗プロゲスチンは、オナプリストン、ロナプリサン（lonaprisan）、ミフェプリストン（mifepristone）、PF-02413873、テラプリストン（telapristone）、リロプリストン（lilopristone）、ORG2058、アポプリススニル（apoprisnil）、ウリプリスタル（ulipristal）、ZM172406、ZM150271、ZM172405およびアグレプリストン（aglepristone）からなる群より選ばれる。
【００４６】
オナプリストン、〔例は、 (8S,11R,13R,14S,17S)-11-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-17-ヒドロキシ-17-(3-ヒドロキシプロピル)-13-メチル-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-デカヒドロシクロペンタ[a]フェナントレン-3-オン〕は、以下の化学構造をもつ。
【化１】
2017512981.tif 000008
【００４７】
他の抗プロゲスチンには：プロゲスチオナール（progestational、プロゲステロンの）3-(6,6-エチレン-17B-ヒドロキシ-3-オキソ-17A-プレグナ（pregna）-4-エン-17A-イル（YL）)プロピオン酸G-ラクトン、3-(6,6-エチレン-17.ベータ.-ヒドロキシ-3-オキソ-17.アルファ.-プレグナ-4-エン-17.アルファ.-y-l）プロピオン酸.ガンマ.-ラクトン、および以下のものが含まれる：
【００４８】
ミフェプリストン
(10S,11S,14S,15S,17R)-17-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-14-ヒドロキシ-15-メチル-14-(プロパ（prop）-1-エン（yn）-1-イル（yl）)テトラシクロ[8.7.0.0^{2,7}.0^{11,15}]ヘプタデカ-1,6-ジエン-5-オン
【化２】
2017512981.tif 000009
【００４９】
リロプリストン
(11-ベータ,17-ベータ,17(z))-ロフェニル（ropenyl）);エストラ（estra）-4,9-ジエン（dien）-3-オン,11-(4-(ジメチルアミノ)フェニル)-17-ヒドロキシ-17-(3-ヒドロキシ-1-p;11β-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-17β-ヒドロキシ-17-[(Z)-3-ヒドロキシ-1-プロペニル]エストラ-4,9-ジエン-3-オン
【化３】
2017512981.tif 000010
【００５０】
ORG2058
(8R,9S,10R,13S,14S,16R,17S)-16-エチル-17-(2-ヒドロキシアセチル)-13-メチル-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-ドデカヒドロ-1H-シクロペンタ[a]フェナントレン-3-オン
【化４】
2017512981.tif 000011
【００５１】
ロナプリサン
(8S,11R,13S,14S,17S)-11-(4-アセチルフェニル)-17-ヒドロキシ-13-メチル-17-(1,1,2,2,2-ペンタフルオロエチル)-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-デカヒドロシクロペンタ[a]フェナントレン-3-オン
【化５】
2017512981.tif 000012
【００５２】
アソプリスニル
(8S,11R,13S,14S,17S)-11-[4-[(E)-ヒドロキシイミノメチル]フェニル]-17-メトキシ-17-(メトキシメチル)-13-メチル-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-デカヒドロシクロペンタ[a]フェナントレン-3-オン
【化６】
2017512981.tif 000013
【００５３】
ウリプリスタル
(8S,11R,13S,14S, 17R)-17-アセチル-11-[4-(ジメチルアミノ)フェニル]-17-ヒドロキシ-13-メチル-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-デカヒドロシクロペンタ[a]フェナントレン-3-オン
【化７】
2017512981.tif 000014
【００５４】
PF-2413873
4-[3-シクロプロピル-1-(メシルメチル)-5-メチル-1H-ピラゾール-4-イル]オキシ,-2,6-ジメチルベンゾニトリル
【化８】
2017512981.tif 000015
【００５５】
アグレプリストン
(8S,11R,13S,14S,17R)-11-(4-ジメチルアミノフェニル)-17-ヒドロキシ-13-メチル-17-[(Z)-プロパ（prop）-1-エニル（enyl）]-1,2,6,7,8,11,12,14,15,16-デカヒドロシクロペンタ[a]フェナントレン-3-オン：
【化９】
2017512981.tif 000016
【００５６】
追加の抗プロゲスチンには、以下のものが含まれる。
【００５７】
ZM172406−(R)-N-(3-クロロ-4-シアノフェニル-3,3,3-トリフルオロ-2-ヒドロキシ-2-メチルプロパンアミド：
【化１０】
2017512981.tif 000017
【００５８】
ZM172405−(S)-N-(3-クロロ-4-シアノフェニル)-3,3,3-トリフルオロ-2-ヒドロキシ-2-メチルプロパンアミド：
【化１１】
2017512981.tif 000018
【００５９】
ZM150271−N-(3-クロロ-4-シアノフェニル)-3,3,3,-トリフルオロ-2-ヒドロキシ-2-メチルプロパンアミド：
【化１２】
2017512981.tif 000019
【００６０】
さらなる態様において、抗プロゲスチンは、一日あたり約10mgから約200mgまでの量でペイシェントに施すことができる。随意に、抗腫瘍化合物（例は、エベロリムス、トラスツズマブ、TM1-D、抗HER2薬物、ベバシズマブ、パクリタキセル、ドセタキセル、タキサン（taxanes）、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン（liposomal doxorubicin）、ペグ化リポソームドキソルビシン、アントラサイクリン、アントラセンジオン、カルボプラチン、シスプラチン、5- FU、ゲムシタビン、シクロホスファミド、抗エストロゲン、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、アロマターゼインヒビター（アロマターゼ抑制物質）、および抗アンドロゲン）もまた、ペイシェントに、抗プロゲスチンによる処置と同時に、その前に、またはその後に施すことができる。
【実施例】
【００６１】
例1
【００６２】
半定量的PR/APR IHCアッセイを、プロゲステロン受容体（PR）ならびに新生物において、およびホルマリン固定され、そして組織学的評価のためにパラフィン埋設された（FFPE）正常組織周囲での活性化されたプロゲステロン受容体（APR、集計PR染色により明らかなように）の発現を識別するために設計した。提案されたアッセイは、以下のようである。
【００６３】
1）PR発現細胞の細胞質および核に位置するPR-AおよびPR-Bアイソフォームの双方を検出し、および
【００６４】
2）核内局在性を評価することによって、これらの受容体の活性化、および非活性化形態の間を区別する。
【００６５】
IHC技術は、PRの核内分布を評価し、および分析するためにFFPEの主要な類内膜ガン標本を利用して開発された。PR-AおよびPR-Bに対応する二つの抗PR抗体は、このアッセイにおいて使用され；それぞれNovocastra Clone（ノバカストラ・クローン）16およびNovocastra Clone SAN27である。技術および試薬の双方は提案されたIVDの基礎を形成する。
【００６６】
PR/APRの検出および分析は、各個々のペイシェントから外科的切除または生検によって入手される三つの別個のミクロトーム腫瘍セクション（切片）上で行われる。二つの抗PR抗体（PR-AおよびPR-B）およびアイソタイプコントロール抗体の各々について一つのミクロトーム切片である。
【００６７】
これらの抗PR抗体の双方は、正常および新生物性の細胞の双方の核における活性化および非活性化の双方の形態において、それらのそれぞれのPRターゲット（標的）に結合する。PR-AおよびPR-Bの発現および核の分布が変動し、および類内膜ガンを含むガン組織標本において一貫していないので、二つのアイソフォームについて抗体を開発する必要がある。
【００６８】
特異的PR抗体で染色した三つの個々のスライドを、以下の存在および相対的発現を半定性的に識別するために光学顕微鏡検査法によって試験し、および分析する。
【００６９】
1）腫瘍標本におけるPR
【００７０】
PRステータスの解釈は、慣習的な0、+1、+2、+3スケールを使用して、全体的な染色のための低倍率でのPR-AおよびPR-B染色スライドの各々の複数のフィールドの独立したレビューに基づいて行われ、2+またはそれよりも多く（+2以上）はPRposとして管理専門医（ordering physician）に報告され；および
【００７１】
2）腫瘍標本におけるAPR（活性化プロゲステロン受容体）；
【００７２】
APRステータスの解釈は、PRpos細胞のパーセントについて高倍率（少なくとも0.9のNAを有する少なくとも60×の対物レンズ）でPR-AおよびPR-B染色したスライドの各々の複数のフィールドの独立したレビューに基づいて行われ、それは、APRと一致する核焦点パターンを見せ、予想される臨床試験において定められる％が、APRposとして管理専門医（ordering physician）に報告される。
【００７３】
【表６】
2017512981.tif 000020
【００７４】
例2
【００７５】
分離試薬：（1）バッファ（緩衝剤）における脱パラフィン化（deparaffinizing）薬剤、（2）洗浄バッファ、（3）構造識別のための対比染色（例は、ヘマトキシリン）、（4）PRA検出用バッファ中のNovocastra Clone 16、（5）PRB検出用バッファ中のNovocastra Clone SANS27（6）酵素（例は、西洋ワサビペルオキシダーゼ）にコンジュゲート（結合）した各検出抗体のFABフラグメントに対する二次抗体を含むバッファ、（7）酵素コンジュゲート抗体のための基質溶液、および（8）酵素活性を停止させるクエンチ溶液。
【００７６】
装置：自動化、高度化されたスライド染色装置。
【００７７】
プロトコル：（すべてのステップは、最適化された時間および温度で実行される）
【００７８】
（1）二つ（2）の3-4μmスライドをミクロトームによりFFPEブロックから作成し、（2）各々を自動化、高度化したスライドステイナー（スライド染色装置）においてマウント（搭載）し、（3）薬剤を使用して脱パラフィン化するステップ、（4）洗浄ステップ、（5）対比染色と共にインキュベーション、（6）洗浄ステップ、（7）スライドあたり一の一次抗体とのインキュベーション（例は、Clone 16およびSANS27）、（8）洗浄ステップ、（9）二次抗体-酵素コンジュゲート（複合体）とのインキュベーション、（10）洗浄ステップ、（11）検出基質とのインキュベーション（12）洗浄ステップ（13）分析、（14）二つの抗PR-染色スライドが、各試料から、一つのヘマトキシリン/エオシン染色スライドと一緒に、PR発現およびAPRステータスについて少なくとも二つの適任の病理学者によって解釈され、（15）スライドが高解像度でスキャンされ、および画像が協議のために利用可能にされる。
【００７９】
ここに記載の要素のすべてが必要とされるわけではない。実際、本技術の熟練者は、ここに記載の方法に多数の付加的な使用および変形を見出すであろうが、それを本発明者は、請求の範囲によってのみ制限されると意図する。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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