(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトヘモグロビンを溶液中で安定化する方法であって、ヒトヘモグロビンと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質とを、ｐＨが5.5から7.5の範囲である溶液中に共存させる方法。
【請求項２】
前記物質が、ホウ酸又はその塩である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される少なくとも１種の物質との組み合わせである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
さらに、カゼインを溶液中に共存させる、請求項１ないし３いずれかの項に記載の方法。
【請求項５】
ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有し、ｐＨが5.5から7.5の範囲である、ヒトヘモグロビン含有物を溶解するための緩衝液。
【請求項６】
前記物質が、ホウ酸又はその塩である、請求項５に記載の緩衝液。
【請求項７】
前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質との組み合わせである、請求項５に記載の緩衝液。
【請求項８】
さらに、カゼインを含有する、請求項５ないし７いずれかの項に記載の緩衝液。
【請求項９】
前記ヒトヘモグロビン含有物が、ヒト糞便である、請求項５ないし８いずれかの項に記載の緩衝液。
【請求項１０】
ヒトヘモグロビンと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質とを含有し、ｐＨが5.5から7.5の範囲である、ヒトヘモグロビン含有溶液。
【請求項１１】
前記物質が、ホウ酸又はその塩である、請求項１０に記載のヒトヘモグロビン含有溶液。
【請求項１２】
前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質との組み合わせである、請求項１０に記載のヒトヘモグロビン含有溶液。
【請求項１３】
さらに、カゼインを含有する、請求項１０ないし１２いずれかの項に記載のヒトヘモグロビン含有溶液。
【請求項１４】
前記ヒトヘモグロビン含有溶液が、ヒトヘモグロビンの陽性コントロール液またはヒトヘモグロビン標準溶液である、請求項１０ないし１３いずれかの項に記載のヒトヘモグロビン含有溶液。
【請求項１５】
ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有し、ｐＨが5.5から7.5の範囲であるヒトヘモグロビン含有物溶解用緩衝液を含む、ヒトヘモグロビン測定用採便容器。
【請求項１６】
さらに、カゼインを含有する、請求項１５に記載のヒトヘモグロビン測定用採便容器。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、溶液中におけるヒトヘモグロビンの安定化方法およびヒトヘモグロビン含有物を溶解する緩衝液、ヒトヘモグロビンを安定に保持する緩衝液あるいはヒトヘモグロビンを安定に含有している溶液に関するものである。さらに、本発明は、ヒトヘモグロビンを安定に保持する緩衝液を含んでいるヒトヘモグロビン測定用採便容器に関する。
【０００２】
本発明のヒトヘモグロビンを安定化する方法をヒトヘモグロビンの検出に適用することにより、種々の溶液中、例えば、標準溶液、陽性対照溶液（以下、陽性コントロール液という）および被検試料（例えば、糞便溶解液）中でのヒトヘモグロビンの変性および／または分解が抑制され、より正確にヒトヘモグロビン濃度を測定することができる。
【０００３】
【従来の技術】
近年、大腸癌などの下部消化器の疾患の早期検出方法として、消化器官からの出血に起因する糞便中の便潜血成分、特にヒトヘモグロビンの検出が広く行われている。このようなヒトヘモグロビンの検出方法として、従来必要とされていた食品摂取の制限あるいは薬剤投与の制限等を必要としない、免疫学的検出法が普及し、手軽な検査方法として定着している。
【０００４】
上記ヒトヘモグロビンの免疫学的検出法としては、例えば寒天平板内で抗ヒトヘモグロビン抗体と被検試料中のヒトヘモグロビンとの沈降線を利用する一次元免疫拡散法、抗ヒトヘモグロビン抗体を感作した動物血球を用いる逆受身血球凝集法、抗ヒトヘモグロビン抗体を感作したラテックス粒子を用いるラテックス凝集法、酵素や放射性元素で標識した抗ヒトヘモグロビン抗体を用いる酵素免疫法や放射性免疫法、抗ヒトヘモグロビン抗体を感作した金コロイド粒子を用いる金コロイド凝集比色法等が挙げられる。
【０００５】
上記検出法においては、被検物質であるヒトヘモグロビンは、通常、溶液状態で検査に供される。例えば、便潜血検査では糞便を生理食塩水や緩衝液中に溶解し、その溶液をヒトヘモグロビン測定用の被検試料として用いている。
【０００６】
被検試料中のヒトヘモグロビンは、温度上昇および時間経過に伴い、変性されあるいは分解されることが知られている。このヒトヘモグロビンの変性あるいは分解により抗原決定基が失活し、免疫学的検出方法における検出感度が著しく低下する。特に、ヒトヘモグロビンの濃度が低い場合には、上記、変性あるいは分解により、ヒトヘモグロビンの濃度が検出限界以下となり、診断を誤ることになる。同様なヒトヘモグロビンの変性あるいは分解は、検査性能の確認に利用する陽性コントロール液、あるいはヘモグロビンの定量を行うために利用するヘモグロビン標準溶液中でも生じ、正確な測定の障害ともなっている。
【０００７】
ところで、便潜血検査の実情は、被験者自身が自宅などで採便し、これを便溶解液に溶かし、郵送又は被験者が病院へ持参することが多い。このため、便潜血検査のサンプルは、採便から検査機関における検査を開始するまでに、溶液状態で数日間置かれることが多い。また、検査機関で採便する場合においても、他項目の検査を実施しているため、便潜血の検査までに多くの時間を要することもある。このような状況下での検査は、前述のようにヒトヘモグロビンの変性あるいは分解が生じ、正確な測定ができない等の点で、好ましくない。
【０００８】
このようなヒトヘモグロビンの変性あるいは分解を防止する目的で、便潜血検出用の便溶解液に種々の物質を添加する方法が検討されている。例えば、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）あるいは、チメロサール、アジ化ナトリウム等の一般的抗菌剤の添加、動物血清の添加（特開平4-145366号公報）、糖類の添加（特開昭63-243756 号公報）、アジ化ナトリウム、アルブミンおよび乳酸の添加（特開平6-281654号公報）、溶菌酵素の添加（特開平5-69466 号公報）、プロテアーゼ阻害物質の添加（特開平3-279859号公報）、鉄プロトポルフィリンの添加（特開平5-281227号公報）等が報告されている。また、ｐＨをコントロールする方法（特開平5-281226号公報）も報告されている。さらに、ヘモグロビンの分解を防止する方法として、ヘモグロビンに特定の含窒素化合物を添加して、ヘム部からの鉄の遊離を防止するヘモグロビンの分解防止方法（特開昭60-35270号公報）あるいはヘモグロビン含有試料に、非ペニシリン系抗生物質を共存させることによるヘモグロビンの分解抑制法（特開平7-72154 号公報）が報告されている。その他に、キレート試薬を添加する方法（特開平5-99923 号公報並びに特開平2-221859号公報）、水溶性遷移金属錯体を添加する方法（特開平7-229902号公報）が報告されている。更には、フッ化ナトリウムの添加（特開平7-191026号公報）、動物ヘモグロビンの添加（特開平2-296149号公報）、ヘモグロビン以外の鉄タンパクとフェリシアンイオンとをヘモグロビンと共存させる方法（特開平8-262020号公報）等が報告されている。
【０００９】
しかし、これら公知のヒトヘモグロビン安定化技術では、糞便を含む被検試料中のヒトヘモグロビンの変性あるいは分解を十分に抑制するには至っていない。
【００１０】
更に、糞便を含まない陽性コントロール液や標準溶液として利用する目的で、ヒトヘモグロビン標品あるいは赤血球より調製したヒトヘモグロビンを溶液中で安定化させるために上記公知技術を用いても、ヒトヘモグロビンは不安定でありその変性あるいは分解を十分に防ぐには至っていない。従って、糞便中のヘモグロビンあるいはヘモグロビン標品、赤血球から調製したヘモグロビン等の各種ヘモグロビンを溶液中で安定に保持する方法が望まれている。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
かくして、本発明の目的は、新規なヒトヘモグロビンの安定化方法を提供することにある。さらに具体的には、本発明の目的は、糞便を含む被検試料中のヒトヘモグロビンの安定性を増すことによって、より正確な測定値を得ることにある。また、本発明の目的は、糞便を溶解し被検試料とする場合に、その中に含まれるヒトヘモグロビンを安定化するための糞便溶解液、その溶解液を含む糞便採取用容器を提供することにある。さらに本発明の目的は、ヒトヘモグロビンを安定化した優れた陽性コントロール液またはヘモグロビン標準溶液を提供することにある。
【００１２】
上記の実情および目的に鑑み、本発明者らはヒトヘモグロビンの溶液中での変性あるいは分解を抑制するための改良された安定化方法を見い出すべく鋭意研究を重ねた結果、ヒトヘモグロビンと、カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を溶液中に共存させることにより、ヘモグロビンを安定化する方法を見いだして、本発明を完成した。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明は、ヒトヘモグロビンを溶液中で安定化する方法であって、ヒトヘモグロビンと、カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を溶液中に共存させる方法に関する。
【００１４】
好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、カゼインと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される少なくとも１つの物質とを含む。
【００１５】
また、好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質とを含む。
好適な実施態様においては、前記溶液のｐＨが5.5 から7.5 の範囲である。
好適な実施態様においては、前記ヒトヘモグロビンが、糞便中のヒトヘモグロビンである。
【００１６】
また、本発明は、カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有する、ヒトヘモグロビン含有物を溶解するための緩衝液に関する。
【００１７】
好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、カゼインと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１つの物質である。
【００１８】
また、好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質である。
また、好適な実施態様においては、前記緩衝液のｐＨが、5.5 から7.5 の範囲である。
好適な実施態様においては、前記ヒトヘモグロビン含有物が、ヒト糞便である。
【００１９】
さらに、本発明は、ヒトヘモグロビンとカゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有する、ヒトヘモグロビン含有溶液に関する。
【００２０】
好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、カゼインと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質である。
【００２１】
また好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質である。
さらに好適な実施態様においては、前記緩衝液のｐＨが、5.5 から7.5 の範囲である。
また好適な実施態様においては、前記ヒトヘモグロビン含有溶液が、ヒトヘモグロビンの陽性コントロール液またはヒトヘモグロビン標準溶液である。
【００２２】
さらに、本発明は、カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有するヒトヘモグロビン含有物溶解用緩衝液を含む、ヒトヘモグロビン測定用採便容器に関する。
【００２３】
好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、カゼインと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質である。
【００２４】
また、好適な実施態様においては、前記２種以上の物質が、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質である。
さらに好適な実施態様においては、前記緩衝液のｐＨが、5.5 から7.5 の範囲である。
【００２５】
上記本発明によれば、溶液中でのヒトヘモグロビン安定化を図ることが出来る。また、本発明によれば、長期にわたって使用可能である安定な陽性コントロール液やヘモグロビン標準溶液を提供できる。また、糞便を溶解してその中のヒトヘモグロビンを安定化する糞便溶解用緩衝液およびその緩衝液を含む採便用容器を提供することができ、さらに臨床検査の分野において、ヘモグロビン測定の精度を向上させる方法を提供することができる。従って、本発明により、上記目的を達成できる。
【００２６】
【発明の実施の形態】
本発明の方法等に用いられるヒトヘモグロビンとしては、糞便中に含まれるヒトヘモグロビン、赤血球から調製したヒトヘモグロビンおよび市販のヒトヘモグロビンのいずれであってもよい。赤血球からのヒトヘモグロビンは、常法によりヒト赤血球を採取し、あるいは、市販のヒト赤血球を購入して、蒸留水中で赤血球を破壊することにより調製される。
【００２７】
溶液中でヒトヘモグロビンを安定化するのに用いるカゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムとしては市販品を用いることができる。
【００２８】
本発明に用いるカゼインの濃度は、約0.01％〜約1.0 ％（重量％、以下同じ）であり、好ましくは、約0.05％〜約0.2 ％である。
【００２９】
ホウ酸塩としては、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウム等が挙げられる。ホウ酸又はその塩の濃度は、ホウ酸の濃度として約0.02％〜約2.0 ％であり、好ましくは約0.1 ％〜約0.5 ％である。
【００３０】
アルミニウム塩としては塩化アルミニウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム等が挙げられる。アルミニウム塩の濃度は、塩化アルミニウムの濃度として約0.001 ％〜約0.5 ％であり、好ましくは約0.005 ％〜約0.1 ％である。
【００３１】
チオ尿素の濃度は約0.00005 ％〜約0.01％であり、好ましくは約0.0001％〜約0.001 ％である。  塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムの濃度は約0.005 ％〜約2.0 ％、好ましくは約0.02％〜約0.4 ％である。
【００３２】
これらの、カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムは、単独で添加してもよいし、これらの物質を２種以上組み合わせて添加してもよい。
【００３３】
２種類の物質を組み合わせて用いる場合には、カゼインと、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムからなる群から選択される少なくとも１種の物質とを含むようにすることが好ましい。好ましい組み合わせとしては、カゼインとホウ酸、カゼインと塩化アルミニウム、カゼインとチオ尿素、またはカゼインと塩化カルシウムとの組み合わせが挙げられる。
【００３４】
また、ホウ酸又はその塩と、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる少なくとも１種の物質を含むようにすることも好ましい。好ましい組み合わせとしては、ホウ酸と塩化アルミニウム、ホウ酸とチオ尿素、およびホウ酸と塩化カルシウムの組み合わせが挙げられる。
【００３５】
また、塩化アルミニウムとチオ尿素、塩化アルミニウムと塩化カルシウム、塩化アルミニウムと酢酸カルシウムとを組み合わせて用いてもよく、チオ尿素と塩化カルシウムを組み合わせて用いてもよい。
【００３６】
また、３種類の組み合わせの場合は、カゼインとホウ酸と塩化アルミニウム、カゼインとホウ酸とチオ尿素、カゼインとホウ酸と塩化カルシウム、カゼインとホウ酸と酢酸カルシウム、ホウ酸と塩化アルミニウムと塩化カルシウム、ホウ酸とチオ尿素と塩化カルシウムの組み合わせが好適である。さらに、４種類以上の物質を含んでいてもよい。これらの物質を２種以上共存させる場合の添加濃度は、上記濃度範囲でよい。
【００３７】
上記物質を１種または２種以上含ませた場合に、ヒトヘモグロビンを安定化する溶液のｐＨは、約5.0 〜約8.5 、好ましくは約5.5 〜約7.5 、より好ましくは約6.0 〜約7.0 の範囲である。極端な酸やアルカリ条件下ではヘモグロビンの安定性を損なう恐れがあるからである。ｐＨの維持のためには適切な緩衝剤が用いられる。
【００３８】
本発明のヒトヘモグロビン含有物を溶解するための緩衝液（以下、単に本発明の緩衝液という）は、上記カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有する。これにより、本発明の緩衝液にヒトヘモグロビン含有物を溶解したときに、ヒトヘモグロビンが安定に保持される。本発明の緩衝液のｐＨは、上記と同様、約5.0 〜約8.5 、好ましくは約5.5 〜約7.5 、より好ましくは約6.0 〜約7.0 の範囲である。このｐＨを維持する緩衝液であれば、特に限定はない。好適な緩衝液としては、当業者に周知のリン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、β−β’ジメチルグルタル酸緩衝液、グッドの緩衝液等が挙げられる。グッドの緩衝液としては、グリシン、グリシルグリシン、トリス- 塩酸、ＭＥＳ（2-(N- モノホリノ) エタンスルホン酸）、ＨＥＰＥＳ（Ｎ-2- ヒドロキシエチル- ピペラジン- Ｎ’- エタンスルホン酸）、ＴＥＳ（Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸）、ＭＯＰＳ（３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸）等が好適に用いられる。
【００３９】
本発明のヒトヘモグロビン含有溶液は、ヒトヘモグロビンと上記カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウムおよび酢酸カルシウムからなる群から選択される１種または２種以上の物質を含有する。これにより、本発明のヒトヘモグロビンの含有溶液中では、ヒトヘモグロビンが安定に保持される。本発明のヒトヘモグロビンの含有溶液は、具体的には陽性コントロール液またはヒトヘモグロビン標準溶液である。ヒトヘモグロビンの含有溶液中のヒトヘモグロビン濃度は、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌが適切である。
【００４０】
本発明のヒトヘモグロビンの安定化方法、ヒトヘモグロビン含有溶液又はヒトヘモグロビン含有物を溶解するための緩衝液中には、保存安定性を高めるために、抗菌剤（例えば、アジ化ナトリウム）、蛋白質安定剤（例えば、アルブミン）、塩化ナトリウム等を添加することが望ましい。アジ化ナトリウムの濃度としては約0.02〜約2.0 ％、好ましくは約0.1 〜約0.5 ％である。アルブミンとしては牛血清アルブミン（ＢＳＡ）が好ましく、濃度としては約0.01〜約2.0 ％、好ましくは約0.05〜約0.5 ％が好ましい。塩化ナトリウムは生理的食塩水の濃度近傍が好ましい。また、その他の無機塩類や糖類、アミノ酸類、キレート剤等を添加してもよい。
【００４１】
本発明のヒトヘモグロビン測定用採便容器は、上記本発明の緩衝液を含む。緩衝液は、好適には、ガラス製、プラスチック性の容器に適切な量含まれている。採便容器には、採便器具（例えば、スティック等）を付属することができ、当該採便器具で糞便を採取し、一定量の糞便を緩衝液に溶解させるようにすることができる。
【００４２】
本発明におけるヒトヘモグロビンの測定方法は免疫学的方法である。即ち、上記本発明の緩衝液に溶解したヒトヘモグロビン標品、赤血球から調製したヒトヘモグロビン、あるいはヒト糞便中のヒトヘモグロビンと抗ヒトヘモグロビン抗体とを抗原抗体反応させる。抗原抗体反応条件は、当業者に周知である。適切な緩衝液と温度、例えば30℃〜40℃、で適切な時間反応させる。
【００４３】
さらに、抗原抗体反応をコントロールする目的で、ポリエチレングリコール（2,000 、4,000 、6,000 、20,000）やデキストラン等の物質を、本発明のヒトヘモグロビン含有溶液又はヒトヘモグロビン含有物を溶解するための緩衝液に添加してもよい。添加する濃度は、約0.001 〜約４％が好適である。
【００４４】
ヒトヘモグロビンの測定方法としては、抗ヒトヘモグロビン抗体を用いた免疫学的検出方法であればどのようなものでもよい。好適には金コロイド凝集比色法が用いられる。この方法は、金コロイド標識抗ヒトヘモグロビン抗体がヘモグロビンを介して凝集する際に生じる色差（色調変化）を光学的に測定して、ヒトヘモグロビンを検出する方法である。金コロイド標識抗ヒトヘモグロビン抗体としては、周知の方法で抗ヘモグロビン抗体を作成して金コロイドに標識してもよく、あるいは、市販の金コロイド試薬凍結乾燥品（例えばメイチェックヘモプレート（オート）：日本商事（株）製）を、適切な緩衝液に溶解して金コロイド試薬液として用いてもよい。
【００４５】
【実施例】
以下、実施例に基づいて本発明をさらに具体的に説明するが本発明はこれらに限定されるものではない。
（実施例１）
(1) ヒトヘモグロビンの調製
市販のヒト赤血球を蒸留水中で破壊した後、シアンメトヘモグロビン法（ネスコートヘモキット−Ｎ；日本商事( 株) 製）にてヘモグロビン濃度を測定した。その後、生理食塩水を用いてヒトヘモグロビン溶液（1mg/ml）を調製し-40 ℃で凍結保存した。
【００４６】
(2) 対照溶液の調製
1mg/mlヒト糞便を、0.9 ％塩化ナトリウム、1.8 ％ポリエチレングリコール20,000、0.2 ％ＢＳＡ、0.2 ％アジ化ナトリウムを含む30mM  ＭＥＳ緩衝液ｐＨ6.3 に溶解し、対照溶液を調製した。
【００４７】
(3) 試験溶液の調製
(2) で得られた対照溶液に表１に記載の物質を添加し、試験溶液を調製した。なお、表１記載の添加物質の濃度( ％) は、試験溶液中におけるその物質の終濃度（重量％）を示す。表２および表３においても同様である。
【００４８】
(4) 検体希釈液
0.9 ％塩化ナトリウム、1.8 ％ポリエチレングリコール20,000、0.05％BSA 、0.1 ％DL- アスパラギン、0.05％アジ化ナトリウムを含む、30mM  ＭＥＳ緩衝液ｐＨ5.7 を調製し、検体希釈液とした。
【００４９】
(5) 試験方法
上記対照溶液および試験溶液に、上記(1) で調製したヒトヘモグロビンを200ng/mlとなる様に添加して試料とし、以下の方法でヒトヘモグロビンを測定した。
ヒトヘモグロビンの測定には、市販の金コロイド試薬凍結乾燥品（メイチェックヘモプレート（オート）：日本商事（株）製）を、0.1 ％ＢＳＡ、3.0 ％マンニトール、0.05％アジ化ナトリウムを含む10mM  ＨＥＰＥＳ緩衝液ｐＨ7.5 、30mlで溶解して、金コロイド試薬液として用い、金コロイド凝集比色法で行った。
ＥＩＡ用マイクロプレートに試料25μｌを分注し、検体希釈液50μｌと金コロイド試薬液100 μｌとを添加後１０秒間マイクロミキサー（三光純薬（株）製）で攪拌した。金コロイド試薬添加１分後と７分後の吸光度（主波長540nm 、副波長700nm ）をマイクロプレートリーダー（和光純薬工業（株）製）を用いて測定し、その吸光度差を求めた。
【００５０】
試料調製当日および37℃、１日保存後に測定を行った。各試料の調製当日の吸光度差と、37℃、１日保存後の吸光度差の比から残存率( ％) を求め、ヘモグロビン安定化の指標とした。その結果を表１に示す。
【００５１】
【表１】
0004033534.tif 000002
【００５２】
表１より、対照溶液でのヘモグロビン残存率に比して、カゼイン、塩化アルミニウム、硫酸アンモニウムアルミニウム、硫酸カリウムアルミニウム、ホウ酸、チオ尿素、塩化カルシウム、酢酸カルシウムを含有する溶液の残存率は高く、ヘモグロビンの安定化効果が認められた。
【００５３】
（実施例２）
実施例１にて、ヘモグロビン安定化効果が認められた物質のうち、カゼイン、塩化アルミニウム、ホウ酸、塩化カルシウム、およびチオ尿素について、安定化効果の確認と、添加濃度の検討を行った。安定化効果の確認は実施例１と同じ方法で行った。その結果を表２に示す。
【００５４】
【表２】
0004033534.tif 000003
【００５５】
カゼイン、塩化アルミニウム、ホウ酸、塩化カルシウム、およびチオ尿素は各々、検討した濃度において安定化効果が認められた。
【００５６】
（実施例３）
実施例１および２でヘモグロビン安定化効果が認められた物質を組み合わせて用いた場合の安定化効果を、実施例１と同様の方法で評価した。その結果を表３に示す。
【００５７】
【表３】
0004033534.tif 000004
【００５８】
カゼイン、塩化アルミニウム、チオ尿素、塩化カルシウム、ホウ酸をそれぞれ単独で配合する場合と同様に、これらの物質を組み合わせて存在させた場合にも、安定化効果が認められた。
【００５９】
【発明の効果】
本発明の溶液中におけるヒトヘモグロビンの安定化法によれば、カゼイン、ホウ酸又はその塩、アルミニウム塩、チオ尿素、塩化カルシウム及び酢酸カルシウムから選ばれる１種または２種以上の物質を含有させることにより、ヒトヘモグロビンの変性または分解を抑制することができる。本発明により、便潜血検査において糞便を含む被検試料中のヒトヘモグロビンを数日間安定化することが可能となり、検査施設で検出するまで安定な状態で保存でき、より正確な測定結果を得ることができる。また、ヒトヘモグロビンを含む安定な陽性コントロール液または標準溶液を作製し、測定値の精度管理を行うことが可能となる。