(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造：
【化１】
0004080560.tif 000005
［式中、Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物。
【請求項２】
ｎ＝８〜２００である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
ｎ＝８〜１３５である請求項１記載の化合物。
【請求項４】
ｎ＝８〜２０である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
ｎ＝９０〜１２０である請求項１記載の化合物。
【請求項６】
メトキシポリ（エチレングリコール）チオール５０００による３１，４２−ジエステルである請求項１記載の化合物。
【請求項７】
メトキシポリ（エチレングリコール）チオール５０００による４２−エステルである請求項１記載の化合物。
【請求項８】
メトキシポリ（エチレングリコール）チオール７５０による４２−エステルである請求項１記載の化合物。
【請求項９】
哺乳動物の移植時拒絶反応または宿主対移植片疾患を治療するための医薬組成物であって、抗拒絶反応有効量の構造：
【化２】
0004080560.tif 000006
［式中、Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物からなる医薬組成物。
【請求項１０】
哺乳動物の真菌感染症を治療するための医薬組成物であって、抗真菌有効量の構造：
【化３】
0004080560.tif 000007
［Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物からなる医薬組成物。
【請求項１１】
哺乳動物の慢性関節リウマチを治療するための医薬組成物であって、抗関節炎有効量の構造：
【化４】
0004080560.tif 000008
［Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物からなる医薬組成物。
【請求項１２】
哺乳動物の再狭窄を治療するための医薬組成物であって、抗増殖有効量の構造：
【化５】
0004080560.tif 000009
［Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物からなる医薬組成物。
【請求項１３】
哺乳動物の肺炎を治療するための医薬組成物であって、抗炎症有効量の構造：
【化６】
0004080560.tif 000010
［Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物からなる医薬組成物。
【請求項１４】
哺乳動物の充実性腫瘍を治療するための医薬組成物であって、抗腫瘍有効量の構造：
【化７】
0004080560.tif 000011
［Ｒ１は、−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３であり、Ｒ２は、水素または−ＣＯＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２−（ＣＨ２ＯＣＨ２）ｎ−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ３；および
ｎ＝８〜４５０である］
で示される化合物からなる医薬組成物。
【請求項１５】
前記充実性腫瘍が癌腫または肉腫である請求項１４記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する分野】
本発明は、ラパマイシンの水溶性メトキシポリ(エチレングリコール)エステル、ならびに、免疫抑制を誘発したり、移植時拒絶反応、宿主対移植片疾患、自己免疫疾患、炎症の疾患、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、充実性腫瘍、真菌感染症および過増殖性血管病の治療に有用な医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ラパマイシンは、ストレプトマイセス・ハイグロスコピカス（Streptomyces hygroscopicus）によって産生される大環状トリエン系の抗生物質であり、インビトロおよびインビボの両方において、抗真菌活性、特にカンジダ・アルビカンス（Candida albicans）に対する抗真菌活性を有することが見い出されている［シー・ヴェチーナ（C. Vezina）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J. Antibiot.）28，721（1975）；エス・エヌ・セーガル（S.N. Sehgal）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J. Antibiot.）28，727（1975）；エイチ・エイ・ベイカー（H.A. Baker）ら、ジャーナル・オブ・アンチバイオティクス（J. Antibiot.）31，539（1978）；米国特許第3,929,992号；および米国特許第3,993,749号］。
【０００３】
ラパマイシンは、単独で（米国特許第4,885,171号）またはピシバニルと組み合わせて（米国特許第4,401,653号）、抗腫瘍活性を有することが示されている。アール・マーテル（R. Martel）ら［カナディアン・ジャーナル・オブ・フィジオロジー・アンド・ファーマコロジー（Can. J. Physiol. Pharmacol.）55，48（1977）］は、ラパマイシンが実験的アレルギー性脳脊髄炎モデルや多発性硬化症のモデルにおいて、アジュバント関節炎モデルや慢性関節リウマチのモデルにおいて有効であり、また、ＩｇＥ様抗体の形成を効果的に阻害したことを開示した。
【０００４】
ラパマイシンの免疫抑制効果は、ファセブ（FASEB）3，3411（1989）に開示されている。他の大環状分子であるシクロスポリンＡおよびＦＫ-５０６についても、免疫抑制薬として有効であり、それゆえ移植体拒絶反応を予防するのに有用であることが示されている［ファセブ（FASEB）3, 3411（1989）；ファセブ（FASEB）3, 5256（1989）；およびアール・ワイ・カルネ（R.Y. Calne）ら、ランセット（Lancet）1183（1978）；および米国特許第5,100,899号］。
【０００５】
また、ラパマイシンは、全身性紅斑性狼瘡［米国特許第5,078,999号］、肺炎［米国特許第5,080,899号］、インスリン依存性糖尿病［第５回炎症研究学会国際会議，121（要旨），（1990）］、血管損傷後における平滑筋細胞増殖および血管内膜肥厚化［モリス, アール（Morris, R.）、ジャーナル・オブ・ハート・アンド・ラング・トランスプラント（J. Heart Lung Transplant）11（pt.2）：197（1992）］、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫［欧州特許出願第525,960 A1号］および眼の炎症［欧州特許出願第532,862 A1号］を予防または治療するのに有用であることが示されている。
【０００６】
ラパマイシンのモノ-およびジ-アシル化誘導体（２８位および４３位でエステル化されている）は、抗真菌薬として有用であることが示され（米国特許第4,316,885号）、また、ラパマイシンの水溶性アミノアシルプロドラッグを製造するのに用いられている（米国特許第4,650,803号）。最近、ラパマイシンの番号付けの規約が変更されており；それゆえ、ケミカル・アブストラクツ（Chemical Abstracts）の命名法に従えば、上記エステルは、３１位および４２位におけるものとなる。米国特許第5,023,263号は、４２-オキソラパマイシンの製造および使用について記載しており、米国特許第5,023,264号は、ラパマイシンの２７-オキシムの製造および使用について記載している。
【０００７】
ポリエチレングルコール（ＰＥＧ）は、様々な分子量で入手可能な線状または分枝状の中性ポリマーであり、水および大抵の有機溶媒に可溶である。分子量が１０００未満の場合は粘稠の無色液体であるが、分子量がより高いＰＥＧはワックス状の白色固体である。かかる固体の融点は分子量に比例し、６７℃でプラトーに近づく。分子量が数１００〜約２０,０００の範囲内にあるものは、通常、生物学的および生物工学的な用途に用いられる。生物医学の領域で非常に興味深いのは、ＰＥＧが無毒性であるという事実であり、生体内での使用に対し、ＦＤＡによって認可された。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、水溶性ラパマイシンエステルおよびそれらを有効成分とする医薬組成物を提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明は、構造：
【００１０】
【化８】
0004080560.tif 000002
【００１１】
［式中、Ｒ1およびＲ2は、各々独立して、水素または-ＣＯＣＨ2-Ｓ-ＣＨ2ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)n-ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2ＣＨ2-ＯＣＨ3；および
ｎ＝８〜４５０；
ただし、Ｒ1およびＲ2は両方ともが水素であることはない］
で示される、ラパマイシンのメトキシポリ(エチレングリコール)エステルを提供する。
【００１２】
本発明の化合物は、免疫抑制薬、抗炎症薬、抗真菌薬、抗増殖薬および抗腫瘍薬として有用な、ラパマイシンの水溶性プロドラッグである。本発明の化合物において、好ましくはｎ＝８〜２００であり、より好ましくはｎ＝８〜１３５である。最も好ましいメンバーは、ｎ＝８〜２０の化合物およびｎ＝９０〜１２０の化合物である。
【００１３】
４２位または３１,４２位においてエステル化されている本発明の化合物は、まずラパマイシンの４２位または３１,４２位を、カップリング剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ））および塩基（ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ））の存在下、一般式Ｘ-ＣＨ2ＣＯ2Ｈ［式中、Ｘは適当な脱離基（例えば、ヨウ素）］で示されるアシル化剤でアシル化して、以下の構造：
【００１４】
【化９】
0004080560.tif 000003
【００１５】
を有する４２-または３１-,４２-アシル化ラパマイシンを得ることによって調製することができる。
【００１６】
４２-および３１-,４２-エステルの混合物は、クロマトグラフィーによって分離することができる。塩基（例えば、プロトンスポンジ（PROTON SPONGE；［１,８-(ビス(ジメチルアミノ)ナフタレン)，Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'-テトラメチル-１,８-ナフタレンジアミン］）または重炭酸ナトリウム）の存在下におけるアシル化ラパマイシンとモノメトキシポリ(エチレングリコール)チオールの反応は、本発明による所望の４２-または３１-,４２-エステルを与える。
【００１７】
本発明の３１-エステルは、ラパマイシンの４２-アルコールを保護基（例えば、tert-ブチルジメチルシリル基）で保護した後、上記の方法で３１位をエステル化することによって調製することができる。ラパマイシンの４２-シリルエーテルの調製は、米国特許第5,120,842号明細書（その開示内容は、出典を示すことによって、本明細書の一部をなす）に記載されている。保護基を除去すると、３１位がエステル化された化合物が得られる。tert-ブチルジメチルシリル保護基の場合、脱保護化は、穏やかな酸性（例えば、酢酸／水／ＴＨＦ）条件下で達成することができる。脱保護化の方法は、米国特許第5,118,678号（その開示内容は、出典を示すことによって、本明細書の一部をなす）の実施例１５に記載されている。
【００１８】
３１位をエステル化し、４２位を脱保護化した後、４２位は、３１-アルコールと反応させたものとは異なるアシル化剤を用いてエステル化して、３１位および４２位に異なるエステルを有する化合物を得ることができる。あるいは、上記にように調製した４２位がエステル化された化合物は、異なるアシル化剤と反応させて、３１位および４２位に異なるエステルを有する化合物を得ることができる。
【００１９】
本発明は、２９-デメトキシラパマイシン［米国特許第4,375,464号、ＣＡ命名法では３２-デメトキシラパマイシン］；１位、３位および／または５位の二重結合が還元されているラパマイシン誘導体［米国特許第5,023,262号］；２９-デスメチルラパマイシン［米国特許第5,093,339号、ＣＡ命名法では３２-デスメチルラパマイシン］；７,２９-ビスデスメチルラパマイシン［米国特許第5,093,338号、ＣＡ命名法では７,３２-デスメチルラパマイシン］；および２７-ヒドロキシラパマイシン［米国特許第5,256,790号］および１５-ヒドロキシラパマイシン［米国特許第5,102,876号］などの他のラパマイシンの類似エステルをも包含するが、これらに限定されない。本発明は、４２-オキソラパマイシン［米国特許第5,023,263号］の３１位におけるエステルをも包含する。上で引用した米国特許の開示内容は、出典を示すことによって、本明細書の一部をなす。
【００２０】
本発明化合物の調製に用いる試薬は、市販品を入手するか、あるいは、文献に記載の標準的な方法によって調製することができる。
【００２１】
本発明の代表的な化合物の免疫抑制活性は、試験化合物の免疫抑制活性だけでなく、試験化合物が移植体拒絶反応を阻害または治療する能力を測定するインビボでの皮膚ピンチグラフトによる標準的な薬理学的試験法によって評価された。この標準的な薬理学的試験法の手順および得られた結果を以下に示す。
【００２２】
本発明の代表的な化合物は、雄Ｃ3Ｈ（Ｈ-２Ｋ）レシピエントに移植された、雄ＢＡＬＢ／ｃドナーの皮膚ピンチグラフトの生存期間を調べるために設計されたインビボでの試験法で評価した。この方法は、ビリンガム・アール・イー（Billingham R.E.）およびメダワォー・ピー・ビー（Medawar P.B.）、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・バイオロジー（J. Exp. Biol.）28：385-402（1951）から採用したものである。簡単に説明すると、ドナーの皮膚ピンチグラフトを同種異系移植片としてレシピエントの背中に移植し、同種同系移植片を同じ領域の対照として用いた。レシピエントを様々な濃度の試験化合物で腹腔内または経口的に処理した。ラパマイシンを試験対照として用いた。非処理のレシピエントは拒絶反応の対照として役立つ。移植片を毎日モニターし、観察結果は移植片が乾燥して黒ずんだ痂皮を形成するまで記録した。この日を拒絶反応が現れた日として見なした。薬物処理群における平均の移植片生存期間（日数±Ｓ.Ｄ.）を対照群と比較した。結果は平均の生存期間（日数）として表す。非処理（対照）の皮膚ピンチグラフトは、通常６〜７日以内に拒絶反応を起こす。４ｍｇ／ｋｇでラパマイシンを腹腔内（i.p.）投与した場合、生存期間は１１.６７±０.６３日であった。本発明の化合物はラパマイシンのプロドラッグであるので、以下に示す投与量は、ラパマイシンの等価な投与量で与える（実施例２の化合物６.２ｍｇは、ラパマイシン１ｍｇの等価物を含有する）。実施例２の化合物、ＰＥＧ-５０００および無処理対照群について得られた結果を以下の表に示す。
【００２３】
【表１】
0004080560.tif 000004
【００２４】
この標準的な薬理学的試験法の結果は、本発明化合物の免疫抑制活性を示している。さらに、皮膚移植片による試験法で得られた結果は、本発明の化合物が移植時拒絶反応を治療または阻害する能力を示している。
【００２５】
これらの標準的な薬理学的試験法の結果に基いて、上記化合物は、腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、膵臓（膵島細胞）、角膜、小腸および皮膚の同種異系移植片、ならびに心臓弁の異種移植片などの移植時拒絶反応の治療または阻害；宿主対移植片疾患の治療または阻害；狼瘡、慢性関節リウマチ、糖尿病、重症筋無力症および多発性硬化症などの自己免疫疾患；ならびに、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏症、炎症性腸疾患、肺炎（喘息、慢性閉塞性肺疾患、気腫、急性呼吸窮迫症候群、気管支炎など）および眼ブドウ膜炎などの炎症の疾患の治療または阻害に有用である。
【００２６】
得られた活性プロフィールゆえに、本発明の化合物は、抗腫瘍活性、抗真菌活性および抗増殖活性をも有すると考えられる。それゆえ、本発明の化合物は、星状細胞腫、前立腺癌、乳癌、小細胞肺癌および卵巣癌などの、肉腫および癌腫を含む充実性腫瘍；成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫；真菌感染症；ならびに、再狭窄およびアテローム性動脈硬化症などの過増殖性血管病を治療するのにも有用である。再狭窄に用いる場合、本発明の化合物は、血管形成術後に生じる再狭窄を治療するのに用いるのが好ましい。この目的で用いる場合、本発明の化合物は、術前、術中、術後、または、その組み合わせで投与することができる。
【００２７】
上記の疾患状態を治療または阻害するために投与する場合、本発明の化合物は、哺乳動物に対して、経口的、非経口的、鼻腔内、気管支内、経皮的、局所的、膣内または直腸内に投与することができる。
【００２８】
本発明の化合物は、それらが水溶性であることから、特に、免疫抑制薬、抗炎症薬、抗真菌薬、抗増殖薬および抗腫瘍薬として、好都合である。例えば、水に対する溶解度がラパマイシンは１.２μｇ／ｍＬであるのに、実施例２の化合物は１００ｍｇ／ｍＬ以上であるので、処方および投与が容易になる。
【００２９】
本発明の化合物は、免疫抑制薬や抗炎症薬として用いる場合、１種またはそれ以上の他の免疫調節薬と共に投与することができる。このような他の免疫調節薬としては、アザチオプリン、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾンおよびメチルプレドニゾロン）、シクロホスファミド、ラパマイシン、シクロスポリンＡ、ＦＫ-５０６、ＯＫＴ-３およびＡＴＧなどが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の化合物を、免疫抑制を誘発したり、炎症状態を治療したりするこのような他の薬物または薬剤と併用することによって、所望の効果を達成するのに必要とされる上記薬剤の各々の量は、より少なくなる。このような組合せ治療の基礎は、ステプコフスキー（Stepkowski）によって確立されたが、その結果は、治療量以下のラパマイシンおよびシクロスポリンＡを組み合わせて用いることによって、心臓同種異系移植片の生存期間が有意に延長されることを示した［トランスプランテーション・プロシーディングズ（Transplantation Proc.）23：507（1991）］。
【００３０】
本発明の化合物は、それを必要とする哺乳動物に対して、そのままで、または、医薬用担体と共に、処方することができる。医薬用担体は、固形または液状のいずれでもよい。
【００３１】
固形担体としては、香味剤、滑沢剤、可溶化剤、懸濁化剤、充填剤、流動化剤、圧縮補助剤、結合剤または錠剤崩壊剤としても作用しうる１種またはそれ以上の物質を挙げることができる。それはカプセル化材料とすることもできる。散剤の場合、担体は、細かく粉砕された固体であって、やはり細かく粉砕された有効成分と混合される。錠剤の場合、有効成分は、必要な圧縮性を有する担体と適当な割合で混合され、所望の形状および寸法に成形される。散剤および錠剤は、好ましくは９９％までの有効成分を含有する。適当な固形担体としては、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、デキストリン、デンプン、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、低融点ワックスおよびイオン交換樹脂が挙げられる。
【００３２】
液状担体は、液剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤および加圧組成物を調製するのに用いられる。有効成分は、医薬上許容される液状担体（例えば、水、有機溶媒、両方の混合物、または医薬上許容される油脂）中に溶解または懸濁させることができる。液状担体は、他の適当な医薬用添加剤（例えば、可溶化剤、乳化剤、緩衝化剤、保存剤、甘味剤、香味剤、懸濁化剤、増粘剤、着色剤、粘度調節剤、安定化剤または浸透圧調節剤）を含有することができる。経口および非経口投与用の液状担体の適当な例としては、水（上記の添加剤、例えば、セルロース誘導体、好ましくはカルボキシメチルセルロースナトリウム溶液を部分的に含有する）、アルコール（一価アルコールおよび多価アルコール、例えば、グリコールを含む）およびそれらの誘導体、レシチンならびに油（例えば、分別ヤシ油および落花生油）が挙げられる。非経口投与の場合、担体は、オレイン酸エチルおよびミリスチン酸イソプロピルなどの油状エステルとすることもできる。無菌の液状担体は、非経口投与用の無菌液状組成物に有用である。加圧組成物用の液状担体は、ハロゲン化炭化水素または他の医薬上許容される噴射剤とすることができる。
【００３３】
無菌の液剤または懸濁剤である液状医薬組成物は、例えば、筋肉内、腹腔内または皮下への注射によって利用することができる。無菌液剤は、静脈内投与することもできる。上記化合物は、液状または固形のいずれの組成物形態でも、経口的に投与することができる。
【００３４】
本発明の化合物は、従来の坐剤の形態で直腸内に投与してもよい。鼻腔内または気管支内への吸入または吹入による投与の場合、本発明の化合物は、水溶液または部分的な水溶液に処方すればよく、次いで、エアロゾルの形態で利用することができる。本発明の化合物は、活性化合物と、この活性化合物に対して不活性であり、皮膚に対して毒性を有さず、しかも、皮膚を介して全身吸収用薬剤を血流中に送達するような担体とを含有する皮膚貼付薬を用いて、経皮的に投与してもよい。このような担体は、クリーム剤および軟膏剤、パスタ剤、ゲル剤、ならびに密閉用具などの数多くの形態をとりうる。クリーム剤および軟膏剤は、水中油型または油中水型のいずれかのタイプの粘稠液または半固形乳剤であればよい。有効成分を含有する鉱油または親水ワセリン中に分散させた吸収性粉末からなるパスタ剤も適当でありうる。例えば、必要に応じて担体と共に有効成分を含有する貯蔵部を覆う半透膜や、有効成分を含有するマトリックスのように、様々な密閉用具を用いて、有効成分を血流中に放出させてもよい。他の密閉用具は文献で知られている。
【００３５】
さらに、本発明の化合物は、医薬上許容される賦形剤が、真菌感染した領域に投与すればよい活性化合物を０.１〜５％、好ましくは２％の割合で含有するように処方することによって、液剤、クリーム剤またはローション剤として用いてもよい。
【００３６】
用量に対する必要条件は、採用した特定の組成物、投与の経路、発現した症状の重篤度、および治療中の特定の患者によって変化する。標準的な薬理学的試験法で得られた結果に基いて、活性化合物の計画的な一日量は、０.１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０.００１〜２５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０.０１〜５ｍｇ／ｋｇである。一般的には、治療は、上記化合物の適量より少ないわずかな用量から開始する。その後、このような状況下で至適な効果に達するまで用量を増大させる。経口的、非経口的、鼻腔内または気管支内への投与に対する正確な用量は、治療を受ける個々の患者による経験に基いて、投与する医師が決定する。好ましくは、上記医薬組成物は、例えば、錠剤またはカプセル剤のような単位投与形態である。このような形態では、かかる組成物は、適当量の有効成分を含有する単位投与量に細分される。単位投与形態は、包装された組成物、例えば、分包散剤、バイアル、アンプル、前充填シリンジまたは含液薬袋とすることができる。単位投与形態は、例えば、カプセル剤または錠剤それ自体としたり、このような組成物を適当数だけ包装した形態とすることもできる。
【００３７】
【実施例】
以下の実施例は、本発明の代表的な化合物の調製および生物学的活性を示す。
【００３８】
実施例１
ラパマイシンの４２-ヨード酢酸エステル
ラパマイシン（０.５ｇ、５.５×１０-4モル）およびＤＭＡＰ（３.０ｍｇ）を１５ｍＬの無水塩化メチレンに溶解した。ヨード酢酸（０.１２３ｇ、６.６×１０-4モル）およびＤＣＣ（０.１３６ｇ、６.６×１０-4モル）を２０ｍＬの無水塩化メチレンに溶解し、得られた混合物を滴下ロートに移した。この混合物を上記のラパマイシン溶液に、撹拌しながら３０分間かけて、ゆっくり添加した。この反応混合物を室温でさらに１時間撹拌した。
【００３９】
得られた溶液を焼結ガラスフィルターで濾過した。濾液を分液ロートに移し、まず４０ｍＬずつの重炭酸ナトリウム溶液（５.５ｇ／１００ｍＬ）で２回、次いで水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。塩化メチレン層を３ｇの無水硫酸ナトリウムで５時間乾燥させた。次いで、硫酸ナトリウムを濾過によって除去し、塩化メチレンをエバポレートして、０.５３ｇの淡黄色の固形化合物を得た。ＨＰＬＣは、４２-エステル（５５％）、３１-エステル（９.２％）、３１,４２-ジエステル（１７％）および未反応ラパマイシン（１７％）の存在を示した。
【００４０】
純粋な４２-ヨード酢酸エステルは、プライムスフェア（Primesphere）（２５０×５０ｍｍ、１０ミクロン）カラム上での分取ＨＰＬＣによって単離した。ラパマイシンの４２-ヨード酢酸エステルは、８０％塩化メチレン（溶液Ａ）および２０％溶液Ｂを用いて、８.１分で溶出した。溶液Ｂは、８５％塩化メチレンおよび１５％溶液Ｃ（２：１＝メタノール：イソプロパノール）から構成されていた。
【００４１】
溶出液をエバポレートし、残渣を塩化メチレンに溶解し、乾燥させ、エバポレートして、０.２０６ｇの固形化合物を得た。
（＋）イオンＭＳ ｍ／ｚ １０９９.５（Ｍ＋ＮＨ4）+；（−）イオンＭＳ ｍ／ｚ １０８０.５。
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ-ｄ6）δ３.７８（ｓ，２Ｈ，ＣＯ-ＣＨ2-Ｉ），４.５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ-４２）。
元素分析の結果：
計算値（Ｃ53Ｈ80ＮＯ4Ｉ）：Ｃ，５８.８３；Ｈ，７.４５；Ｎ，１.２９
実測値：Ｃ，５８.９７；Ｈ，７.６４；Ｎ，１.３６。
【００４２】
実施例２
メトキシポリ(エチレングリコール)チオール５０００によるラパマイシンの４２-エステル
方法１
ラパマイシンの４２-ヨード酢酸エステル（０.１ｇ、９.２×１０-5モル）を塩化メチレン（１５ｍＬ）およびメタノール（１５ｍＬ）に溶解した。次いで、この反応溶液に、ｍＰＥＧ-ＳＨ５０００（０.６ｇ、１.２×１０-4モル）およびプロトンスポンジ（PROTON SPONGE）（２０ｍｇ、９.３×１０-5モル）を添加し、室温で一晩撹拌した。次いで、１０ｍｇのプロトンスポンジ（PROTON SPONGE）を再び添加し、この反応溶液を再び室温で一晩撹拌した。エーテル（２００ｍＬ）を添加することによって、この反応物をクエンチした。白色の沈澱物を濾過し、エーテル（３×２０ｍＬ）で洗浄して、０.５９ｇの粗生成物を得た。
【００４３】
この粗生成物を、３０〜８０％溶液Ｂと共に勾配溶液Ａを用いるゾルバックス（Zorbax）Ｃ８カラム（２５０×２０ｍｍ）上での分取ＨＰＬＣによって、さらに精製した。溶液Ａは、９０％ ０.１Ｍ ＴＥＡＡ（酢酸テトラエチルアンモニウム）ｐＨ４.５ 緩衝液および１０％アセトニトリルから構成されていた。溶液Ｂは、１０％ ０.１Ｍ ＴＥＡＡ ｐＨ４.５ 緩衝液および９０％アセトニトリルから構成されていた。ラパマイシン４２-ｍＰＥＧ-Ｓ５０００酢酸エステルは、２１分で溶出した。水相を塩化メチレン（２×５０ｍＬ）で溶出した。有機層は、無水硫酸ナトリウムで１４時間乾燥させ、減圧下で容量１０ｍＬまで濃縮した。エーテル１００ｍＬを添加することによって、生成物を沈澱させた。白色の沈澱物を焼結ガラスフィルターで採集し、エーテル（３×２０ｍＬ）で洗浄し、１０９.６ｍｇの生成物を得た。
【００４４】
方法１
ラパマイシンの４２-ヨード酢酸エステル（０.５ｇ、４.６×１０-4モル）を、５０％アセトニトリルおよび５０％ＮａＨＣＯ3（０.１Ｍ）水溶液を含有する１３０ｍＬの溶液に溶解した。この溶液をＮ2で１０分間フラッシュした。初期反応物の状態を確認するために、２０μＬの試料を取り、１ｍＬのアセトニトリルに添加した。この溶液を濾過し、１０μＬの試料をＨＰＬＣ分析に付した。
【００４５】
上記の反応溶液にｍＰＥＧ-ＳＨ５０００（３.１５ｇ、６.３×１０-4モル）を１.５時間かけて添加し、この反応物を室温でさらに１.５時間撹拌した。さらに２０μＬの試料を取り、１ｍＬのアセトニトリルと混合し、濾過し、上記のＨＰＬＣ系に注入した。ＨＰＬＣ分析の結果は、ラパマイシンのヨード酢酸エステルが４２-ｍＰＥＧ-Ｓ５０００酢酸エステルに定量的に変換されたことを示した。
【００４６】
上記の反応混合物を塩化メチレン（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、濾過した後、濾液を容量約２０ｍＬまで濃縮した。エーテル２５０ｍＬを添加することによって、最終的な粗生成物を沈澱させ、次いでこのスラリーを濾過し、真空下で乾燥させ、３.１３ｇの乾燥した白色物質を得た。
未反応のｍＰＥＧ-ＳＨは、方法１で説明した分取ＨＰＬＣによって除去した。
【００４７】
ＭＳ（ＭＡＤＩ／ＴＯＦ）は、生成物の平均分子量が５８７７.４７であり、出発材料のｍＰＥＧ-ＳＨ５０００の平均分子量が４９２３.６６であることを示す。質量の差（９５３.８１）は、ラパマイシンの４２-酢酸エステル部分（９５３.６）と正確に一致した。エステル側鎖は、式-ＣＯＣＨ2-Ｓ-ＣＨ2ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)n-ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2ＣＨ2-ＯＣＨ3（ここで、ｎは平均１０８個の繰り返し単位である）によって示すことができる。
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：δ２.８４（ｔ，２Ｈ，Ｓ-ＣＨ2-ＣＨ2），３.２７（ｓ，２Ｈ，ＣＯ-ＣＨ2-Ｓ），３.３６（ｓ，３Ｈ，-ＯＣＨ3），３.６４（ｍ，４Ｈ，Ｏ-ＣＨ2-ＣＨ2-Ｏ），４.６９（ｍ，１Ｈ，Ｈ-４２）。
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ／ＴＯＦ） ｍ／ｚ ５８７７.４７（平均分子量）。
ＵＶ（ＣＨ3ＣＮ）λmax ２６８，２７８，２９０ｎｍ。
【００４８】
実施例３
ラパマイシンの３１,４２-ジヨード酢酸エステル
ラパマイシン（０.５ｇ、５.５×１０-4モル）、ＤＣＣ（０.２８ｇ、１.４×１０-3モル）およびＤＭＡＰ（３０ｍｇ）を無水塩化メチレン（１５ｍＬ）に溶解した。この反応溶液にヨード酢酸（０.２５ｇ、１.４×１０-3モル）を添加し、この反応混合物を室温で１時間撹拌した。次いで、この溶液を焼結ガラスフィルターで濾過した。濾液を４０ｍＬずつの重炭酸ナトリウム溶液（５.５ｇ／１００ｍＬ）で２回、および水（２×５０ｍＬ）で洗浄した。塩化エチレン層を３ｇの無水硫酸ナトリウムで５時間乾燥させた。次いで、硫酸ナトリウムを濾過によって除去し、塩化メチレンをエバポレートして、０.６３ｇの淡黄色の固形物質を得た。ＨＰＬＣデータは、９９.４％のラパマイシンの３１,４２-ジヨード酢酸エステルが形成されていることを示した。
（＋）イオンＭＳ ｍ／ｚ １２７２.３（Ｍ＋Ｎａ）+。
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ３.７７（ｑ，２Ｈ，ＣＯ-ＣＨ2-Ｉ，３１-エステル），３.７８４（ｓ，２Ｈ，ＣＯ-ＣＨ2-Ｉ，４２−エステル），４.３１（ｄ，１Ｈ，Ｈ-３１），４.５４（ｍ，１Ｈ，Ｈ-４２）。
【００４９】
実施例４
メトキシポリ(エチレングリコール)チオール５０００によるラパマイシンの３１,４２-ジエステル
ラパマイシンの３１,４２-ジヨード酢酸エステル（５.９９ｍｇ，４.８×１０-5モル）を、７０ｍｌの５０％ＣＨ3ＣＮ-５０％ＮａＨＣＯ3（０.１Ｍ）溶液に溶解した。この溶液を窒素で１０分間パージした。この反応溶液に、ｍＰＥＧ-ＳＨ５０００（０.７７８ｇ、１.５６×１０-4モル）を添加した。この反応溶液を３０分間撹拌した後、３０μＬの試料を取り、１ｍＬのアセトニトリルと混合し、濾過した。試料（１０μＬ）をＨＰＬＣ分析に付した。そのデータは、ラパマイシンのジヨード酢酸エステルがラパマイシン-３１,４２-ジ（ｍＰＥＧ-Ｓ-５０００酢酸）エステルに１００％変換されていることを示した。
【００５０】
上記の反応混合物を乾燥した塩化メチレン（２×３００ｍＬ）で抽出した。塩化メチレン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を容量２０ｍＬまで濃縮した。エーテル２５０ｍＬを添加することによって、生成物を沈澱させ、濾過し、真空下で乾燥させ、０.２２ｇの白色物質を得た。
ＭＳ（ＭＡＬＤ／ＴＯＦ）は、平均分子量が１０９８３.６Ｄａであることを示す。エステル側鎖は、式-ＣＯＣＨ2-Ｓ-ＣＨ2ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)n-ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2ＣＨ2-ＯＣＨ3（ここで、ｎは平均１０８個の繰り返し単位である）によって示すことができる。
1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ３.２３（ｑ，２Ｈ，ＣＯ-ＣＨ2-Ｓ，３１-エステル），３.２５（ｓ，２Ｈ，ＣＯ-ＣＨ2-Ｓ，４２−エステル），４.６５（ｍ，１Ｈ，Ｈ-４２），５.２５（ｄ，１Ｈ，Ｈ-３１）。
【００５１】
メトキシポリ(エチレングリコール)チオール７５０によるラパマイシンの４２-エステル
ラパマイシンの４２-ヨード酢酸エステル（１００ｍｇ，９.２×１０-5モル）を、３０ｍｌの５０％ＣＨ3ＣＮ-５０％ＮａＨＣＯ3（０.１Ｍ）溶液に溶解した。この溶液を窒素で１０分間パージした。この反応溶液に、ｍＰＥＧ-ＳＨ-７５０（１.２５ｇ、１.６７×１０-3モル）を添加した。この反応溶液を３０分間撹拌した後、３０μＬの試料を取り、１ｍＬのアセトニトリルと混合し、濾過した。試料（１０μＬ）をＨＰＬＣ分析に付した。そのデータは、ラパマイシンの４２-ヨード酢酸エステルがラパマイシン ４２-ｍＰＥＧ-Ｓ-７５０ 酢酸エステルに定量的に変換されていることを示した。
【００５２】
上記の反応混合物を乾燥した塩化メチレン（２×３００ｍＬ）で抽出した。塩化メチレン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過した。濾液を容量２０ｍＬまで濃縮した。エーテル２５０ｍＬを添加することによって、生成物を沈澱させ、濾過し、真空下で乾燥させ、８０ｍｇの粘稠な油状液体物質を得た。
【００５３】
エステル側鎖は、式-ＣＯＣＨ2-Ｓ-ＣＨ2ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2-(ＣＨ2ＯＣＨ2)n-ＣＨ2-Ｏ-ＣＨ2ＣＨ2-ＯＣＨ3（ここで、ｎは平均１４個の繰り返し単位である）によって示すことができる。
ＥＳＩ-ＭＳ（Ｍ＋ＮＨ4）+ ｍ／ｚ １４６０.１（ｎ＝１０），１５４８.１（ｎ＝１２），１５９２.２（ｎ＝１３），１６３６.２（ｎ＝１４），１６８０.１（ｎ＝１５），１７２４.０（ｎ＝１６），１７６９.０（ｎ＝１７），１８１２.９（ｎ＝１８）；（Ｍ＋ＮＨ4）2+ ｍ／ｚ ８７１.３（ｎ＝１６），８９３.５（ｎ＝１７），９１５.５（ｎ＝１８），９３７.０（ｎ＝１９），９５９.４（ｎ＝２０），９８１.４（ｎ＝２１）。