(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（ＩＩＩ）
【化３】
0004076441.tif 000025
（式中、ｎは１〜１１の整数であり、ｌは１〜１６の整数である）
で表される脂肪族化合物であって、（２Ｓ、３Ｒ、２’ＲＳ）の立体配置を有する化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
式（ＩＩＩ）の化合物が式（Ｖ）
【化５】
0004076441.tif 000026
で表される化合物である請求項１の化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
（１）ＨＯ−ＣＨ2−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ3）−（ＣＨ2）nＣＨ3（ｎは請求項１と同じ字義を表す）の不飽和部分を接触還元によって飽和すること、
（２）第（１）工程生成物の水酸基を臭素で置換すること、
（３）第（２）工程生成物の臭素をＣＨ3−Ｃ≡Ｃ−で置換すること、
（４）第（３）工程生成物の三重結合の位置を末端に移動させて、末端三重結合化合物を得ること、
（５）末端三重結合化合物に、下記式のＮ−保護された（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体：
【化１０】
0004076441.tif 000027
（式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基である）
を反応させること、
（６）第（５）工程生成物の三重結合を（Ｅ）型二重結合にし、同時に、オキサゾリジンを開環しながら脱保護して、ＮＨ2基及びＯＨ基を有する化合物を得ること、
（７）第（６）工程生成物の水酸基を保護し、この保護した化合物と、
下記式の化合物：
【化１１】
0004076441.tif 000028
（式中、Ｒ” はＯＨの保護基であり、ｌは請求項１と同じ字義を表す）とを反応させること、
（８）水酸基の保護基を脱保護し、Ｒ”基を脱離させること、を含む請求項１の化合物の製造方法。
【請求項４】
請求項１または請求項２に記載の化合物を有効成分とする、内皮分化遺伝子（Ｅｄｇ）受容体に拮抗する医薬。
【請求項５】
循環器系疾患を治療するための請求項４の医薬。
【請求項６】
循環器系疾患が動脈硬化症である請求項５の医薬。
【請求項７】
がんを治療するための請求項４の医薬。
【請求項８】
リウマチを治療するための請求項４の医薬。
【請求項９】
糖尿病性網膜症を治療するための請求項４の医薬。
【請求項１０】
呼吸器系疾患を治療するための請求項４の医薬。
【請求項１１】
循環器系疾患が心臓疾患である請求項５の医薬。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は新規脂肪族化合物、その製造方法、及び脂肪族化合物を有効成分とする医薬に関する。
背景技術
止血過程で、活性化血小板から放出されるα類粒には、セロトニン、ＡＤＰなどとともに脂肪族誘導体２−アミノ−３−ヒドロキシ−４−オクタデセン−１−リン酸、２−ａｍｉｎｏ−３−ｈｙｄｒｏｘｙ−４−ｏｃｔａｄｅｃｅｎｅ−１−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＡＨＯＰ）が含まれるが、セロトニンは血管収縮、ＡＤＰは血小板凝集を、それぞれ示し、どちらも止血を促進するが、一方、ＡＨＯＰについてはその役割が未知であった。近年、ＡＨＯＰを内因性リガンドとするオーファン受容体である、内皮分化遺伝子ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｇｅｎｅ（Ｅｄｇ）が見い出され、ＡＨＯＰとＥｄｇの結合が、血行動態悪化や血管平滑筋増殖など、動脈硬化促進性の方向に、あるいは呼吸器系疾患進行の方向に作用している可能性が示されつつある。
Ｅｄｇは１９９０年にオーファン受容体として遺伝子がクローニングされた［Ｅｄｇ−１（ＪＢＣ，’９０，２６５，ｐ．９３０８）］が、その後、Ｅｄｇ−１のホモログとして、Ｅｄｇ−３（ＢＢＲＣ，’９６，２２７，ｐ．６０８）、Ｅｄｇ−５（ＡＧＲ１６／Ｈ２１８）（ＪＣＢ，’９６，１３５，ｐ．１０７１）が得られたものの、その生理的役割は不明だった。ところが、’９８年、ＡＨＯＰがＥｄｇ−１の内因性リガンドとなっている可能性が示唆され（Ｓｃｉｅｎｃｅ’９８，２７９，ｐ．１５５２）、その後、Ｅｄｇ−３、及びＥｄｇ−５もＡＨＯＰ特異的受容体である事が示された（ＢＢＲＣ’９９，２６０，ｐ．２６３、ＪＢＣ’９９，２７４，２７，ｐ．１８９９７）。
血管内皮細胞上のＥｄｇ−１がＡＨＯＰの刺激によって、低分子量ＧＴＰ結合性タンパク質Ｒｈｏの活性化経由にてカドヘリンなど接着タンパク質をアップレギュレートし（Ｓｃｉｅｎｃｅ’９８，２７９，ｐ．１５５２）、Ｔリンパ球由来株化細胞が、ＡＨＯＰの刺激によって、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ疑似血管モデルでの血管層侵入を増長する（ＥＭＢＯＪ．’９８，ｖｏｌ．１７，Ｎｏ．１４，ｐ．４０６６）。また、岡島らはＥｄｇ−１、或いはＥｄｇ−３を強制発現させたＣＨＯ細胞を用い、疑似血管遊走試験を行ったところ、どちらの場合も、ＡＨＯＰ濃度依存的に遊走が促進された（’９９年日本生化学会大会要旨集ｐ．８８３）。一方、五十嵐らは、がん細胞株Ｆ１０が疑似血管モデルにてＡＨＯＰ１０−８〜１０−６Ｍにて濃度依存的に最大８０％ほど遊走抑制を受ける事を示したが、Ｆ１０細胞ではＥｄｇ−１、或いはＥｄｇ−３は殆ど発現しておらず、Ｅｄｇ−５が発現していた（’９９年日本生化学会）。このことについて、発現亜種が異なる事が原因となって、ＡＨＯＰが遊走抑制を示した可能性が指摘されている（’９９年生化学会大会要旨集ｐ．６７５、８８３）。
血管平滑筋細胞（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．’９８，２５７，ｐ．４０３）、或いは気道平滑筋細胞（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．’９９，３３８，ｐ．６４３）で、どちらも、ＡＨＯＰ応答性にＭＡＰキナーゼ活性化が観察されており、ＡＨＯＰが血管平滑筋細胞増殖の方向に作用する可能性が指摘されている。
杉山らは、ラットにＡＨＯＰを尾静脈経路で投与し血行動態を観察したところ、収縮期血圧、及び左心室圧時間微分の二指標の有意な低下を観察し、ＡＨＯＰが、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、心機能低下の方向に作用している可能性を示した（’００年薬理学会要旨集Ｐ．１２７）。
ＡＨＯＰがムスカリン受容体内向きＫ＋整流を活性化し不整脈を引き起こす可能性が指摘されている（’９９  Ｐｆｕｇｅｒｓ  Ａｒｃｈ−Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈｉｓｉｏｌ  ４３８，ｐｐ．６４２−６４８）事より、Ｅｄｇ受容体拮抗物質が不整脈に奏効する可能性を考える事ができる。
血管内皮細胞に及ぼすＡＨＯＰの作用を、血管新生動物モデルを用いて検討した結果、ＶＥＧＦ、やＦＧＦ−２などの増殖因子による血管新生を、ＡＨＯＰがＥｄｇ−１、Ｅｄｇ−３と結合する事によって相乗的に促進させ、Ｅｄｇがリウマチ、固形がんや糖尿病性網膜症の進行に作用している可能性が指摘されている（Ｃｅｌｌ’９９，ｐ．３０１）。
ＡＨＯＰとＥｄｇ受容体の結合によって引き起こされる過剰な炎症や気道のリモデリングの結果、肺炎、慢性閉塞性気道疾患（ＣＯＰＤ：ｃｈｌｏｎｉｃ  ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  ａｉｒｗａｙ  ｄｉｓｅａｓｅ）、呼吸器系高血圧が進行する可能性が指摘されている（Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ＆  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ’２０００，１３，ｐ．９９）。
原虫トリパノゾーマの撲滅薬、スラミンがＥｄｇ−３特異的な拮抗性を示し、ＡＨＯＰとＥｄｇの結合のシグナルを阻止する事が報じられている（Ｊ．Ｂ．Ｃ．’９９，２７４，２７，ｐ．１８９９７）。スラミンは動脈硬化病態モデルに治癒的に奏効する事が示されている（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，’９９、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓ．，’９４，２８，ｐ．１１６６）が、この薬効の機作にＥｄｇ拮抗性が絡んでいる可能性が考えられる。
これらの知見を総合すると、ＡＨＯＰがＥｄｇと結合すると、炎症性細胞活性化や血管平滑筋細胞増殖、血行動態悪化など動脈硬化促進的に作用し、また、血管新生を促進し、リウマチ、固形がん、糖尿病性網膜症の進行の方向に作用する可能性が示されている事になる。即ち、Ｅｄｇに拮抗する物質が、抗循環器系疾患性（例えば、抗動脈硬化性、抗心臓疾患性（例えば、抗不整脈性、抗心筋梗塞性））、抗リウマチ性、抗がん性、抗糖尿病性網膜症性や抗呼吸器系疾患性を示す可能性が考えられる。
本発明者らは、上記の点に鑑み、鋭意研究を行った結果、下記式（Ｉ）〜（Ｖ）で示される化合物を新たに発見し、これらの化合物（以下、「本発明化合物」という）がＥｄｇ受容体に拮抗する事を見い出した。本発明はこの知見に基づくものであり、その目的は、新規な脂肪族化合物、その製造方法及び医薬を提供することにある。
発明の開示
本発明は、式（Ｉ）
0004076441.tif 000002
（式中、ｎは１〜１１の整数であり、ｌは１〜１６の整数である）
で表される脂肪族化合物であって、８位が二重結合である場合には、（２Ｒ、３Ｓ、２’Ｓ）の光学異性体であり、また８位が単結合である場合には、（２Ｓ、３Ｒ、２’ＲＳ）の光学異性体である化合物に関する。
尚、上記式中、波線は、（Ｒ）、（Ｓ）及びラセミ体のいずれの光学異性を含むことを意味する。また、本願明細書において、上の鎖を第１鎖と呼び、下の鎖を第２鎖と呼ぶ。
発明を実施するための最良の形態
好ましい態様としては、以下のものがあげられる。
本発明は、前記式（Ｉ）の化合物が下記の式（ＩＩ）である化合物を提供する。
式（ＩＩ）
0004076441.tif 000003
（式中、ｎ及び１は式（Ｉ）化合物の記号の字義と同一である。）
本発明は、前記式（Ｉ）の化合物が式（ＩＩＩ）である化合物を提供する。
式（ＩＩＩ）
0004076441.tif 000004
（式中ｌ及びｎは式（Ｉ）化合物の記号の字義と同一である。）
本発明の式（Ｉ）、（ＩＩ）及び（ＩＩＩ）の化合物において、好ましくは
、ｎは１〜１０であり、またｌは１〜１５である、さらに好ましくは、ｎは１〜８であり、またｌは１〜１３である。
また、本発明は、前記式（Ｉ）の化合物が式（ＩＶ）である化合物：（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオールを提供する。
式（ＩＶ）
0004076441.tif 000005
本発明は、前記式（Ｉ）の化合物が式（Ｖ）である化合物：（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４−オクタデセン−１，３−ジオールを提供する。
式（Ｖ）
0004076441.tif 000006
本発明の化合物はその薬理学的に許容される塩を形成することもでき、その塩としては、特に制限されないが、例えば、フッ素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、硫酸鉛、リン酸塩、炭酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸塩、トリフロオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などのカルボン酸塩、グリシン塩、アラニン塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩などがあげられる。
本発明化合物はいずれも内皮分化遺伝子（Ｅｄｇ）受容体拮抗性を示し、Ｅｄｇ受容体に対するＡＨＯＰ、スフィンゴシルフォスフォリルコリンなどのＥｄｇ受容体作動物質の結合に拮抗し、これらによる細胞内シグナル伝達系を阻止することができる。
従って、本発明は、式（Ｉ）〜（Ｖ）の化合物を有効成分として含有する、内皮分化遺伝子（Ｅｄｇ）受容体に拮抗する医薬を提供する。
また、本発明は、炎症性細胞活性化や血管平滑筋増殖、血行動態悪化、さらに血管新生によって生じる疾患、例えば、循環器系疾患（例えば、動脈硬化、心臓疾患（例えば、心筋梗塞、不整脈））、リウマチ（例えば、慢性関節リウマチ）、がん、糖尿病性網膜症、呼吸器系疾患（例えば、肺炎、慢性閉塞性気道疾患、呼吸器系高血圧）を治療するための上記医薬を提供する。
ここで、「治療」とは予防も包含する。
ここで、「循環器系疾患」とは、血液、リンパなどの循環状態が障害され、組織や細胞に障害をおこしている疾患をいい、例としては、動脈硬化性疾患（例えば、アテローム（粥状）硬化症）、心臓疾患（例えば、心筋梗塞、不整脈）がある。
ここで、「呼吸器系疾患」とは、気管、気管支、肺などの呼吸器が障害されている疾患及びそれに関連した症候をいい、例としては、喘息（即時型、遅発型、アレルギー性喘息等）、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、好酸球浸潤、気管支炎（慢性気管支炎等）、気道炎症、肺気腫、肺炎、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、急性呼吸窮迫症候群、呼吸器系高血圧、呼吸困難、疼痛、咳、痰、嘔吐、息切れがある。
本発明の化合物を医薬として用いるためには、固体組成物、液体組成物およびその他の組成物のいずれの形態でもよく、必要に応じて最適のものが選択される。医薬組成物は、本発明の化合物を常用の賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、ｐＨ調節剤、溶解剤、などを添加し、常用の製剤技術によって、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤などに調製することができる。賦形剤、増量剤としては、例えば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげることができる。
製剤の酸化を防止するためには、酸化防止剤（トコフェロール等）を添加したり、シクロデキストリン等の包接剤で包接したり、ゼラチン等の皮膜でカプセル化することができる。
更に、前記化合物を、乳化剤として、リン脂質あるいは非イオン界面活性剤を用いて、Ｏ／Ｗ型製剤として、特開平６−２９８６４２に記載のように調製することができる。乳化剤は、単独あるいは２種以上組み合わせて使用でき、添加量は、適宜でよいが、０．００１〜１０％（Ｗ／Ｖ）、好ましくは０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）である。
リン脂質としては、大豆由来リン脂質、卵黄由来リン脂質、リゾレシチン、フォスファチジルコリン（レシチン）、フォスファチジルセリンなどの単独あるいは組み合わせが使用可能である。非界面活性剤としては、分子量５００〜１５０００のポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロック共重合体（例えば、プルロニックＦ−６８）、分子量１０００〜１００００のポリアルキレングリコール、分子量１０００〜２００００のポリオキシアルキレン共重合体、硬化ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、ヒマシ油ポリオキシアルキレン誘導体、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステルなどの単独あるいは組み合わせが好適に用いられるがこれに限定されない。
本発明化合物は、約０．０００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日を１日１回又は数回に分けて経口又は非経口で投与することができる。この投与量は疾患の種類、患者の年齢、体重、症状により適宜増減することができる。
本発明の化合物は、以下の製造法によって製造することができる。
（合成例１）
式（Ｉ）の化合物の製造法について、反応原料の調製例を含めて以下に説明する。
（１）反応原料の調製例
（Ａ）オキサゾリンアルデヒド誘導体の合成
下記式のオキサゾリンアルデヒド誘導体は従来法で合成することができる。
0004076441.tif 000007
〔式中Ｒ’はアルキル基またはアリール基である、Ｒ’は好ましくはアリール基（例えば、フェニル基である）〕
例えば、（Ｌ）−セリンを出発原料にする場合には以下のように製造することができる。
（Ｌ）−セリンをそのエステル（例えば、Ｍｅエステル）へ変換する（Ｂｅｒ．Ｄｔｓｃｈ．Ｃｈｅｍ．Ｇｅｓ．３９，２９４９（１９０６））。ここで、セリンは、目的化合物の第１鎖の光学異性が、２Ｒ−異性体である場合には、Ｒ−セリンを用い、２Ｓ−異性体である場合には、Ｓ−セリンを用いる。
次に、生じるセリンエステルをエリオット条件（Ｅｌｌｉｏｔｔ’ｓ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．５８９（１９４９））下で、イミノエーテル（例えばベンズイミノエチルエーテル）を用いて反応させ、オキサゾリンエステル誘導体を得る。ここで生成するオキサゾリンエステルは、出発物質のセリンと同じ光学異性を保ち、ラセミ化は観察されないため、目的とする光学異性体を得るために好都合である。
次に、生成したオキサゾリンエステル誘導体から、オキサゾリンアルデヒド誘導体を得る。
この還元反応は、金属水素化物（例えば、ＤＩＢＡＬ−Ｈ（水素化ジイソブチルアルミニウム））共存下、不活性溶媒（例えば、ヘキサン）中で行い、反応を停止後、次に溶媒抽出（例えば、酒石酸ＮａＫ水溶液及びＥｔＯＡｃ）することによって行うことができる。
生成するオキサゾリンアルデヒド誘導体は不安定であるため、即座に次段階の反応に処することが好ましい。
（Ｂ）（Ｅ）体のアルケニルアランの合成
下記式のアルケニルアランは従来法で合成することができる。
0004076441.tif 000008
（式中ｎは式（Ｉ）化合物の字義と同一であり、Ｒはアルキル基、好ましくはｉ−Ｂｕである）
例えば、Ｒがｉ−Ｂｕのアルケニルアランは、アルキンにＤＩＢＡＬ−Ｈを付加することによって目的のアルケニルアランを得ることができる（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９５，４０９８（１９７３））。
この反応は、不活性溶媒中（例えば、ヘキサン）で、温度は、２０〜５０℃で行うことができる。
アルケニルアランは、不安定なので、好ましくは得られた生成物のまま次の工程に用いる。なお、アルケニルアランは、生成工程に用いる物質及びその後の工程の生成物により、容易に確認できる。
上記アルケニルアラン合成の原料であるアルキンは、種々な方法で合成できるが、例えば以下の方法があげられる。
アルコール体をトシレートを経由してブロミド体に通常の方法によって変換する。ブロミド体をニトリル体に変換し、更に、金属水素化物（例えば、ＤＩＢＡＬ−Ｈ）共存下で還元することによってアルデヒド体を得る。次に、コーリーらの方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．３７６９（１９７２））によって、Ｐｈ３ＰとＣＢｒ４を用いて、アルデヒドをジブロモアルケンに変換し、さらに、強塩基（例えば、ｎ−ＢｕＬｉ）存在下でアルキンを合成する。
（２）式（Ｉ）の化合物の合成
式（Ｉ）の化合物の合成スキームを以下に示す。
0004076441.tif 000009
第１工程：  上記（１）（Ａ）で得たオキサゾリンアルデヒド誘導体を、上記（１）（Ｂ）で得たアルケニルアランでアルケニル化することによって、ジアステレオマー混合物を得る。ここで用いるオキサゾリンアルデヒド誘導体は、目的化合物の第１鎖の２位置と同じ光学異性を有するものを用い（目的化合物が２Ｒ−異性体である場合には、Ｒ−体を用い、目的化合物が２Ｓ−異性体である場合には、Ｓ−体を用いる）。
この反応は、不活性溶媒中（例えば、エーテル）で、温度は、−５〜１０℃で行うことができる。
この反応によって生じたジアステレオマー混合物は、オキサゾリンアルデヒド誘導体とアルケニルアランとの反応によって生じたＯＨ基の光学異性が、ＲとＳの２種の化合物を含む。従って、目的化合物に応じたジアステレオマーを分離することが好ましい（目的化合物の第１鎖の３位の光学異性が３Ｒ−異性体である場合には、Ｒ−体を分離し、目的化合物が３Ｓ−異性体である場合には、Ｓ−体を分離する）。
ここで、ジアステレオマーの分離には、通常のクロマトグラフィーを用いることができる。
第２工程：  上記生成物を、オキサゾリン環を開環して、ＮＨ２基及び−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ’基を有する化合物を得る。開環は、酸（例えば、希釈ＨＣｌ）の存在下で行うことができる。
第３工程：  開環後、目的化合物の第２鎖の２’位と同じ光学異性をもったアシル化剤によって選択的Ｎ−アシル化し、次に、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’基を脱離させることによって式（Ｉ）化合物を合成することができる。
アシル化剤としては、Ｈ３Ｃ−（ＣＨ２）ｌ−ＣＨ（ＯＨ）Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨ（式中、ｌは式（Ｉ）化合物の字義と同一である）のエステル体（例えば、ｐ−ニトロフェニルエステル体）を用いることができる。ここで、アシル化剤の水酸基は、保護（例えば、アセチル（Ａｃ）で）することが好ましい。
選択的Ｎ−アシル化は、塩基性溶媒（例えば、ピリジン）中で、３０〜４５℃の温度で行うことができる。
−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ’基の脱離は、塩基（例えば、ＮａＯＨ）で行うことができ、上記のように水酸基をＡｃで保護した場合には、この脱離と同時にＡｃ基も脱離させることができる。
（合成例２）
式（ＩＩ）の化合物の製造法について、反応原料の調製例を含めて以下に説明する。
（１）反応原料の調製例
（Ａ）（Ｅ）体のＨＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｎＣＨ３の合成
ここでは、ｎ＝８の場合の（Ｅ）−６−メチル−５−ペンタデセン−１−インを例にして説明するが、他のｎ（ｎは、（ＩＩ）化合物の字義と同一である）の場合は、２−ウンデカノンの代わりにＨ３ＣＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ３を用いることによって以下の反応と同様に合成することができる。
合成例１で述べた方法を用いることもできるが、ここでは以下の方法を用いる。
２−ウンデカノンをホーナーウイティッヒ（Ｈｏｒｎｅｒ−Ｗｉｔｔｉｇ）反応に処することによってメチル３−メチル−２−ドデセノエートの幾何異性体を得る。
このエステルを金属水素化物（例えば、ＬｉＡｌＨ４）下でアルコールにし、アルコール体（Ｅ）−３−メチル−２−ドデセン−１−オールを含むＥ／Ｚ混合物として得る。この混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに処することにより、（Ｅ）−異性体を分離する。
次に、（Ｅ）−異性体の水酸基を臭素で置換することによって、（Ｅ）−１−ブロモ−３−メチル−２−ドデセンを得る。この反応は、水酸基を臭素で置換する反応条件で行うことができる。例えば、臭素をホスフィン（例えば、トリフェニルホスフィン）存在下、不活性溶媒（例えば、アセトニトリル）中で作用させることによって行うことができる。
次に、（Ｅ）−１−ブロモ−３−メチル−２−ドデセンをハロゲン化プロパルギル（例えば、臭化プロパルギル）から調製したグリニヤル試薬と反応させる事によって（Ｅ）−６−メチル−５−ペンタデセン−１−インを得る。この反応は、触媒（例えばＣｕＣｌ）存在下、不活性溶媒（例えば、ジエチルエーテル）中０〜５℃の温度で行うことができる。
（Ｂ）Ｎ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
下記式のＮ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体は従来法で合成することができ、例えば、（Ｒ）−セリンから森らの方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  １９８５、４１、２３７９−２３８６）によって合成することができる。
0004076441.tif 000010
（式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基（例えば、メチル基）である）
ここで、Ｎの保護基Ａとしては、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミノオキシカルボニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。好ましくは、Ｂｏｃが用いられる。
（２）式（ＩＩ）の化合物の合成
式（ＩＩ）の化合物の合成スキームを以下に示す。
0004076441.tif 000011
第１工程：上記（１）（Ａ）で得た（Ｅ）体のＨＣ≡Ｃ−（ＣＨ２）２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｎＣＨ３と、上記（１）（Ｂ）で得たＮ−保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体とを反応させる。
第１工程の反応は、塩基（例えば、ｎ−ブチルリチウム）下で、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中−１０〜−３０℃の温度で行うことができる。
第２工程：第１工程生成物の三重結合を（Ｅ）型二重結合に還元し、同時に、オキサゾリジンを開環しながら脱保護して、ＮＨ２基及びＯＨ基を有する化合物を得る。
第２工程の反応は、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中アルカリ金属とアミン（例えば、エチルアミン存在下リチウム）で、−７０〜−７８℃の温度で行うことができる。
第３工程：
（１）第２工程生成物を水酸基の保護剤で処理する。
ここで、水酸基の保護剤としては、例えば、２，２−ジメトキシプロパンを用いることができ、この反応は、酸触媒（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム）存在下、不活性溶媒（例えば、トリクロロメタン）中で行うことができる。
（２）次に、この保護した化合物と、
下記式のカルボン酸化合物：
0004076441.tif 000012
（式中、Ｒ”はＯＨの保護基であり、ｌは式（ＩＩ）化合物と同じ字義を表す）とを反応させる。
この反応は、脱水縮合剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）存在下、不活性溶媒（例えば乾燥ジクロロメタン）中で行うことができる。
ここで用いたカルボン酸化合物は、森らの方法（Ｌｉｅｂｉｇｓ  Ａｎｎ．Ｃｈｅｍ．１９９４、４１−４８）によって合成することができ、Ｒ”は、ＯＨ保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）基をあげることができる。
第４工程：水酸基の保護基を脱保護し、Ｒ”基を脱離させる。
ここで、水酸基の保護基の脱保護には、酸触媒（例えば、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム）存在下、不活性溶媒（例えば、ＣＨ２Ｃｌ２及びＭｅＯＨ）中で行うことができる。ＴＢＤＰＳ基の脱離は、フッ素陰イオン（例えば、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド）、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中で行うことができる。
（合成例３）
式（ＩＩＩ）の化合物の製造法について、反応原料の調製例を含めて以下に説明する。
（１）反応原料の調製例
（Ａ）ＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｎＣＨ３の合成
Ｈ３ＣＣ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｎＣＨ３（式中、ｎは式（ＩＩＩ）化合物の字義と同一である）から合成例２と同様に得ることができる。
（Ｂ）Ｎ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
下記式のＮ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体は従来法で合成することができ、例えば、（Ｓ）−セリンから合成例２で述べたのと同様にして合成する。
0004076441.tif 000013
（式中ＡはＮの保護基であり、Ｂ及びＣはアルキル基（例えば、メチル基）である）
ここで、Ｎの保護基Ａとしては、例えば、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ｔ−アミノオキシカルボニル（Ａｏｃ）、イソボニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−クロル−ベンジルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホルミル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニルホスフイノチオイルなどの基が挙げられる。好ましくは、Ｂｏｃが用いられる。
（２）式（ＩＩＩ）の化合物の合成
式（ＩＩＩ）の化合物の合成スキームを以下に示す。
0004076441.tif 000014
第１工程：上記（１）（Ａ）で得たＨＯ−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｃ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｎＣＨ３の不飽和部分を接触還元によって飽和する。
この反応は、接触還元で通常用いられる種々な触媒下で行うことができる。例えば、パラジウム触媒（パラジウム−炭、Ｐｄ−Ｃ等）を用いることができる。第２工程：第１工程生成物の水酸基を臭素で置換する。
臭素化は、アルコールを臭素化できる方法で行うことができる。例えば、トシラートにした後、臭素化することによって行うことができる。
この場合、不活性溶媒（例えば、ピリジン）中塩化パラトルエンスルホニルと反応させることによってトシラートを得、次にトシラートを不活性溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液）中臭化物（例えば、臭化ナトリウム）存在下で反応させることができる。
第３工程：第２工程生成物の臭素をＣＨ３−Ｃ≡Ｃ−で置換する。
ＣＨ３−Ｃ≡Ｃ−置換に用いる反応原料は、例えば、ＣＨ３−Ｃ≡Ｃ−Ｌｉを用いることができ、ＣＨ３−Ｃ≡Ｃ−Ｌｉの場合は、例えば、以下のように第３工程の反応を行うことができる。
プロピンの不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ溶液）に（好ましくはＡｒ下）、配位剤（例えば、テトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ））を加える。そこに、アルキルリチウム（例えば、ｎ−ＢｕＬｉ）を加えて、ＣＨ３−Ｃ≡Ｃ−Ｌｉを得る。この際、反応温度は、−７８〜０℃が好ましい。
次に、ここに、第２工程生成物の溶液（例えば、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）とＴＨＦとの混合液）を加えることによって行うことができる。この際、反応温度は、−７８〜２０℃が好ましい。
第４工程：第３工程生成物の三重結合の位置を末端に移動させて、末端三重結合化合物を得る。
第４工程の反応は、例えば、次のように行うことができる。
アミン塩基（例えば、１，３−ジアミノプロパン）に（好ましくはＡｒ下）、アルカリ金属（例えばリチウム）を加える。この反応は、−７８〜−７０℃で行うのが好ましい。
次に、強塩基性アルコラート（例えば、カリウムｔ−ブトキシド）を加え、ここに第３工程生成物を加えることによって、反応を行う。この反応は、１５〜２５℃で行うのが好ましい。
第５工程：第４工程生成物に上記（１）（Ｂ）で得たＮ−保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体とを反応させる。
第５工程の反応は、塩基（例えば、ｎ−ブチルリチウム）下で、不活性溶媒（例えば、ＴＨＦ）中−１５〜−２８℃の温度で行うことができる。
以下の第６工程以降は、合成例２の第２工程以降と同様に行うことができる。第６工程：第４工程生成物の三重結合を（Ｅ）型二重結合に還元し、同時に、オキサゾリジンを開環しながら脱保護して、ＮＨ２基及びＯＨ基を有する化合物を得る。
第７工程：この（Ｅ）型二重結合化合物を水酸基の保護剤で処理し、この保護した化合物と、下記式のカルボン酸化合物：
0004076441.tif 000015
（式中、Ｒ”はＯＨの保護基であり、ｌは式（ＩＩＩ）化合物と同じ字義を表す）とを反応させる。
ここで用いた、カルボン酸化合物は、合成例２と同様に合成することができる。
第８工程：水酸基の保護基を脱保護し、Ｒ”基を脱離させる。
実施例
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、これは本発明の技術範囲を限定するものではない。
実施例１（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオールの合成
実施例１の合成スキームは、下記に示す。
0004076441.tif 000016
（１）反応原料の調製
（Ａ）アルケニルアラン（８）の合成
（Ｅ）−４−メチル−３−トリデセン−１−オール（１）（３３ｇ、１５５ｍｍｏｌ）のピリジン（１２０ｍｌ）攪拌冷却溶液に、ｐ−ＴｓＣｌ（４５ｇ、２３６ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を８時間攪拌した。次に、この混合物を氷水（５００ｍｌ）に注ぎ、エーテル（５００ｍｌ）で抽出した。このエーテル溶液を、２Ｎ−ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び飽和食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。残さの粗油状物（Ｅ）−４−メチル−３−トリデセン−１−トシレート（２）（５８ｇ）をＤＭＦ（２５０ｍｌ）に溶解した。
これに、ＬｉＢｒ（４０ｇ、４６０ｍｍｏｌ）を加え、この混合物を１８時間室温で攪拌した。次に、これを氷水（１Ｌ）に注ぎ、エーテル（３００ｍｌｘ３）で抽出した。このエーテル溶液を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。残さを蒸留して、３８．３ｇ（９３．４％）の（Ｅ）−１−ブロモ−４−メチル−３−トリデセン（３）を得た。
ＤＭＦ（１００ｍｌ）及び水（３０ｍｌ）中の（Ｅ）−１−ブロモ−４−メチル−３−トリデセン（３）（３８．０ｇ、１３８ｍｍｏｌ）とＫＣＮ（１１．５ｇ、１７６ｍｍｏｌ）との混合物を７０℃において２４時間攪拌した。次に、これを氷水（１Ｌ）に注ぎ、エーテル（５００ｍｌ）で抽出した。このエーテル溶液を、水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。残さをシリカゲルクロマトグラフィーに処し、ｎ−ヘキサン−エーテル（１００：１）で溶出して、３０．０ｇ（９８％）の（Ｅ）−５−メチル−４−テトラデセンニトリル（４）を油状物として得た。
（Ｅ）−５−メチル−４−テトラデセンニトリル（４）（３０．０ｇ、１３６ｍｍｏｌ）のエーテル（７００ｍｌ）中の攪拌冷却溶液に、ＤＩＢＡＬ−Ｈのｎ−ヘキサン溶液（１．７Ｍ，１２３ｍｌ，２０９ｍｍｏｌ）をアルゴンガス下−６０℃において滴加した。この混合物を、−６０℃において１時間、室温において３時間攪拌した。過剰な試薬をＨＣＯ２Ｅｔ（５ｍｌ）の添加によってクエンチした。３０分間攪拌後、この混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１．５Ｌ）に注いだ。生じた混合物を２０分間攪拌し、２０％Ｈ２ＳＯ４水溶液（１Ｌ）で酸性にし、エーテルで抽出した。このエーテル溶液を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、真空濃縮した。油状残さをＦｌｏｒｉｓｉｌ（４５０ｇ）上でクロマトグラフィーに処し、ｎ−ヘキサン−エーテル（５０：１）で溶出して、２９．０ｇ（９５．４％）の（Ｅ）−５−メチル−４−テトラデセナール（５）を得た。
ＣＢｒ４（８５ｇ，２５６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１００ｍｌ）をＰｈ３Ｐ（１３８ｇ，５２６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン攪拌氷冷溶液（３００ｍｌ）に滴加した。ここに（Ｅ）−５−メチル−４−テトラデセナール（５）（２９．０ｇ，１２９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１００ｍｌ）を０℃に冷却し、攪拌しながら加え、０℃において１５分間攪拌した。この混合物の反応を氷冷した水（１００ｍｌ）で停止し、２０分間攪拌後に有機層を分離した。この有機溶液を乾燥（硫酸マグネシウム）後真空濃縮した。残さをペンタン（１Ｌ）で摩砕し、不溶性Ｐｈ３ＰＯをろ過によって除去した。ろ液を真空濃縮後、油状残さをシリカゲルカラムクロマトグラムに処し、ｎ−ヘキサンで溶出し、３８．１ｇ（７７．６％）の油状（Ｅ）−１，１−ジブロモ−６−メチル−１，５−ペンタデカジエン（６）を得た。
（Ｅ）−１，１−ジブロモ−６−メチル−１，５−ペンタデカジエン（６）（３７．０ｇ，９７．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４００ｍｌ）の攪拌冷却溶液にｎ−ＢｕＬｉのｎ−ヘキサン溶液（１．５Ｍ，１５０ｍｌ，２２５ｍｍｏｌ）をＡｒガス下−７０℃において滴加し、この混合物を−７０℃にて１時間、室温にて１．５時間攪拌した。その後、反応液を１．５ｌの氷水に注ぎ、ｎ−ヘキサンで抽出した。このヘキサン溶液を水で洗浄後、硫酸ナトリウムによって乾燥し、真空濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラムに処し、ｎ−ヘキサンで溶出し、（Ｅ）−６−メチル−５−ペンタデセン−１−イン（７）１８．９ｇ（８８．０％）を油状物として得た。
（Ｅ）−６−メチル−５−ペンタデセン−１−イン（７）（１．４ｇ，６．４ｍｍｏｌ）のｎ−ヘキサン（５ｍｌ）攪拌溶液に、ｎ−ヘキサン中のＤＩＢＡＬ−Ｈ（１．７Ｍ，３．８ｍｌ，６．４ｍｍｏｌ）溶液をＡｒガス存在下で滴加した。この混合物を５０℃にて２時間攪拌し、生成したアルケニルアラン（８）の溶液を氷浴にて冷却した。
（Ｂ）（Ｒ）−４−ホルミル−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エンの合成
（Ｒ）−セリン（９）（２５ｇ，２３８ｍｍｏｌ）の乾燥ＭｅＯＨ溶液にＨＣｌガスを勢いよくバブルさせ、溶液が非常に熱くなるまで行った（自発的還流）。この溶液を室温において１６時間放置し、次にＭｅＯＨを真空除去した。残さをエーテル（５０ｍｌ）によって摩砕した。（Ｒ）−セリン  Ｍｅエステル（１０）の固体をろ紙上で回収し、エーテル（５０ｍｌ）で洗浄し、真空乾燥した。ＭｅＯＨ−エーテル（１：３）から再結晶して、３５．９ｇ（９７．０％）の（Ｒ）−セリン  Ｍｅエステル（１０）を得た。
ジクロロメタン（１００ｍｌ）中ＰｈＣ（＝ＮＨ）ＯＥｔ（６０ｇ，０．４ｍｏｌ）溶液を（Ｒ）−セリンＭｅエステルＨＣｌ（３３ｇ，０．２１ｍｏｌ）水溶液（２０ｍｌ）に加えた。この混合物を室温にて２４時間激しく攪拌した。これをろ過し、ろ液をジクロロメタン（１００ｍｌ）、及び水（５０ｍｌ）にて希釈し、有機溶液を分離し、硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、真空濃縮した。残さを蒸留して、３３．３ｇの（Ｒ）−４−メトキシカルボニル−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エン（１１）、ｂｐは１２０〜１２３℃／０．０９ｍｍ、［α］Ｄ２１＝−１１８．２°（ｃ＝１．１３，ＣＨＣｌ３）を得た。
ｎ−ヘキサン中のＤＩＢＡＬ−Ｈ溶液（１．７Ｍ，６．０ｍｌ，１０．２ｍｍｏｌ）を（Ｒ）−４−メチルカルボニル−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エン（１１）（１．４ｇ，６．８ｍｍｏｌ）のトルエン（３０ｍｌ）及びｎ−ヘキサン（５ｍｌ）の攪拌冷却溶液にＡｒガス下−７０℃において滴加し、−７０℃において２時間攪拌した。続いて、ＭｅＯＨ（１ｍｌ）を−７０℃において滴加し、３０分間攪拌後、ＥｔＯＡｃ溶液（１０ｍｌ）と飽和酒石酸ＮａＫ水溶液（２０ｍｌ）とを加え反応を停止した。冷浴を除くことによって温度を室温まで昇温させた。この混合物をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と飽和酒石酸ＮａＫ水溶液（１．５Ｌ）との間で分配し、有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥後、真空濃縮し、１．４ｇ（定量的）の（Ｒ）−４−ホルミル−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エン（１２）を粗黄色油として得た。
（２）実施例１の化合物の合成
工程１：上記（１）（Ａ）で得たアルケニルアラン（８）の溶液に、エーテル（５ｍｌ）中に溶解した上記（１）（Ｂ）で得た（Ｒ）−４−ホルミル−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エン（１２）（１．２ｇ，約５．８ｍｍｏｌ）を加え０〜５℃にて攪拌した。温度を室温に戻し、攪拌を２時間継続した。この混合物を飽和酒石酸ＮａＫ（４００ｍｌ）溶液に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（４００ｍｌ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ溶液を硫酸マグネシウムで乾燥後真空濃縮した。残さのＴＬＣ分析（ｎ−ヘキサン：エーテル／３：７）によって、２つの化合物の混合物であることがわかり、一つのＲｆは０．５６、もう一つは０．３９だった。これらの２つの化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに処した。ｎ−ヘキサン：エーテル／３：１で溶出して、最初に非極性結晶異性体、４０４ｍｇ（化合物（７）から２１．４％）の（１’Ｒ）−異性体（ｎ−ヘキサンから再結晶）を得、同じ溶媒でさらに溶出して、極性異性体、２９４ｍｇ（化合物（７）から１５．６％）のその（１’Ｓ）−異性体である、（４Ｒ，１’Ｓ）−４−（１’−ヒドロキシ−７’−メチル−２’，６’−ヘキサデカジエニル）−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エン異性体（１３）を得た。この結晶性異性体が、エリトロ体である事は、後に最終生成物（４Ｅ，８Ｅ）体に変換することによって確認した。
工程２：（４Ｒ，１’Ｓ）−４−（１’−ヒドロキシ−７’−メチル−２’，６’−ヘキサデカジエニル）−２−フェニル−１，３−オキサゾリン−２−エン（１３）（１６０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４ｍｌ）に２Ｎ−ＨＣｌ（１ｍｌ）を加えた。この混合物を室温にて２０時間攪拌した。これを氷水（１０ｍｌ）で希釈し、ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ（８７：１３，２５ｍｌ×３）で抽出した。有機溶液を硫酸マグネシウムで乾燥し、真空濃縮し、約２００ｍｇ（定量的）の化合物（１４）を得た。
工程３：  これをピリジン（１ｍｌ）に溶かし、これにｐ−ニトロフェニル（Ｓ）−２−アセトキシヘキサデカノエート（４００ｍｇ，０．９２ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１ｍｌ）を加え、４５℃にて２０時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに処した。ｎ−ヘキサン：エーテル／２：１で溶出し、黄色油を得、この少量のｎ−ヘキサン中の溶液は、（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−Ｎ−２’−アセトキシヘキサデカノイル−１−Ｏ−ベンゾイル−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオールの結晶を沈殿した。これをｎ−ヘキサンから再結晶して、１８４ｍｇの純粋な生成物を得た。
この生成物（４２５ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）をＣＨＣｌ３（３０ｍｌ）に溶解し、ＮａＯＨのＭｅＯＨ溶液（０．３Ｎ，２０ｍｌ）に加え、混合物を室温にて１５分攪拌した。これを氷冷した水（１００ｍｌ）に注ぎ、ＣＨＣｌ３（３００ｍｌ×２）にて抽出した。このＣＨＣｌ３溶液を、洗浄（飽和食塩水）、乾燥（硫酸マグネシウム）し、真空濃縮してから、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに処した。ＣＨＣｌ３−ＥｔＯＡｃ（３：２）で溶出して固体を得、これをｎ−ヘキサンから再結晶して、２４８ｍｇ（７３．４％）の（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオール（１５）を得た。
ｍｐ：６２．０−６３．０℃、〔α〕２３Ｄ：−７．３（ｃ＝０．６１、ＣＨＣｌ３）
実施例２（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオールの合成
（１）反応原料の調製
（Ａ）Ｎ−Ｂｏｃ保護した（Ｒ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
（Ｒ）−セリンより以下のスキームによって、Ｎ−Ｂｏｃ保護した（Ｒ）−２，２−ジメチル−４−ホルミルオキサゾリジンを合成した。
（Ｂ）ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）保護酸の合成
以下のスキームによって、（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ヘキサデカン酸を合成した。
0004076441.tif 000017
（２）出発物質及び実施例２の化合物の合成
合成スキームは、下記に示す。
0004076441.tif 000018
（Ａ）出発物質の合成
２−ウンデカノン（メチルノニルケトン）（１’）（７３．９ｇ，４３４ｍｍｏｌ）とメチル（ジエチルホスホノ）アセテート（９９．４ｇ，４３３ｍｍｏｌ）を乾燥ベンゼン（３００ｍｌ）中に溶解した。溶液を室温にて攪拌し、メタノール中の２８％ナトリウムメトキシド溶液（８３．７ｇ）をゆっくり加えた。攪拌を終夜、室温にて継続した。反応混合物を氷水に注ぎ、ジエチルエーテルにて抽出した。有機層を洗浄（水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸ナトリウム）し、溶媒を真空除去し、メチル  ３−メチル−２−ドデセノエート（２’）の幾何異性体混合物を得た。
粗生成物、メチル  ３−メチル−２−ドデセノエート（２’）（Ｅ／Ｚ混合物、９８．５ｇ，０．４３５ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液（１５０ｍｌ）を、ＬｉＡｌＨ４（１６．５ｇ，０．４３５ｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３００ｍｌ）攪拌懸濁液に室温で滴加した。反応混合物を還流しながら２時間加熱した。室温に戻した後、これに水と１０％硫酸を続けてゆっくりと加え、この混合物をジエチルエーテルにて抽出した。有機層を水、飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後真空濃縮し、粗（Ｅ）−３−メチル−２−ドデセン−１−オール（８５．５ｇ、９９％）をＥ／Ｚ混合物として得た。粗アルコール混合物のＥ／Ｚ比は、２５０ＭＨｚ１Ｈ−ＮＭＲ解析によって９６：４であることが解った。この残さの一部（５０ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン溶出）に処し、純粋なＥ異性体（３’）４１．３ｇ（８３％）を得た。
トリフェニルホスフィン（１８．６ｇ，７０．９ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１００ｍｌ）を０℃にて攪拌した。この溶液に、臭素（１１．４ｇ，３．７ｍｌ，７１．３ｍｍｏｌ）をゆっくり混和した。この混合物に、（Ｅ）−３−メチル−２−ドデセン−１−オール（３’）のアセトニトリル（３０ｍｌ）溶液を滴加し、０℃にて２時間攪拌した。溶媒を真空除去し、残さをジクロロメタンに溶解した。この溶液を飽和炭酸水素ナトリウム及び飽和食塩水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。ペンタンを残さに加え、生じた固体をろ過除去した。ろ液を真空濃縮し、１７．９ｇ（９７％）の（Ｅ）−１−ブロモ−３−メチル−２−ドデセン（４’）を得た。
臭化プロパルギル（２２．４ｇ，１９０ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル溶液（１００ｍｌ）をマグネシウム（５．２０ｇ，２１０ｍｍｏｌ）とＨｇＣｌ２（３６０ｍｇ，１．３３ｍｍｏｌ）に滴加し、臭化プロパルギルマグネシウム（グリニャール試薬）を得た。ＣｕＣｌ（２００ｍｇ，２．０２ｍｍｏｌ）をこのグリニャール試薬に加え、この溶液を氷冷した。（Ｅ）−１−ブロモ−３−メチル−２−ドデセン（４’）（１８．８ｇ，７２．０ｍｍｏｌ）のジエチルエーテル（１００ｍｌ）溶液を滴加した後、０℃にて３時間攪拌した。反応液を氷水に注ぎ、希塩酸で酸性にし、ジエチルエーテルを用いて数回抽出した。有機層を一緒にし、水及び飽和食塩水で洗浄した。少量のアレン型不純物はシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサンで溶出）によって除去し、純粋な（Ｅ）−６−メチル−５−ペンタデセン−１−イン（５’）（１２．７ｇ、８０％）を得た。
（Ｂ）実施例２の化合物の合成
工程１：  ｎ−ブチルリチウムのｎ−ヘキサン溶液（１．６８Ｍ，１０ｍｌ，１６．８ｍｍｏｌ）を、上記（１）（Ｂ）で合成した（Ｅ）−６−メチル−５−ペンタデセン−１−イン（５’）（４．０ｇ，１８．２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（５０ｍｌ）溶液に−２３℃にて加え、その後同温度にて１時間アルゴンガス下で攪拌した。上記（１）（Ａ）で合成したＮ−Ｂｏｃ保護した（Ｒ）−２，２−ジメチル−４−ホルミルオキサゾリジン（３．７ｇ，１６．１ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液を、この攪拌混合物に−２３℃にて混和し、その後、同温度にて３時間攪拌した。引き続き氷水に注ぎ、数回ジエチルエーテルで抽出した。一緒にした有機抽出物を洗浄（水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、これを真空濃縮して、得られる淡黄色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝２０：１で溶出）によって精製し、５．１７ｇ（１１．５ｍｍｏｌ、７１％）のｔｅｒｔ−ブチル  （４Ｒ，１’Ｓ）−４−（１’−ヒドロキシ−７’−メチル−６’−ヘキサデセン−２’−イニル）−２，２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレート（６’）を精製した。
工程２：  ｔｅｒｔ−ブチル（４Ｒ，１’Ｓ）−４−（１’−ヒドロキシ−７’−メチル−６’−ヘキサデセン−２’−イニル）−２，２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレート（６’）（８．４ｇ，１８．７ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を、リチウム（２ｇ、２８８ｍｍｏｌ）のエチルアミン（５０ｇ）青色溶液に１時間かけて、−７０℃にて攪拌しながら滴加した。４時間、−７０℃にて攪拌し、この混合物を徐々に周囲温度に戻し、飽和塩化アンモニウム溶液で処理した。エチルアミンと溶媒を真空除去し、残さに水を加えた。この混合物をジエチルエーテルにて数回抽出した。一緒にした有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥させ、真空濃縮して、粗（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ）−９−メチル−２−アミノ−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオール（７’）を４．５ｇ（１４．４ｍｍｏｌ，７７％）の褐色油として得た。
工程３：粗（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ）−９−メチル−２−アミノ−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオール（７’）（４．３ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）と、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ）（３．４７ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）と２，２−ジメトキシプロパン（２０ｍｌ）とのトリクロロメタン（１２０ｍｌ）中混合物を４時間還流しながら加熱した。この混合物を室温に冷却し、トリクロロメタンで希釈した。これを洗浄（飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水、及び飽和食塩水）後、乾燥（硫酸ナトリウム）し、真空濃縮した。残さをシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝５０：１で溶出）によって精製し、４．１０ｇの（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ）−２−アミノ−１，３−Ｏ−イソプロピリデン−９−メチル−４，８−オクタデカジエン（８’）の淡褐色油（６’化合物に基づいて収率８８％）を得た。ｎＤ２２：１．４７５１、［α］２４Ｄ＝−８．７８（ｃ＝１．８５，ＣＨＣｌ３）
上記（１）（Ｂ）で合成した（２Ｓ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ヘキサデカン酸（２．２０ｇ，４．１０ｍｍｏｌ）と、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，８５０ｍｇ，４．１ｍｍｏｌ）と、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（５５５ｍｇ，４．１０ｍｍｏｌ）とを乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）中に溶解した。この溶液を室温にて攪拌しながら、（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ）−２−アミノ−１，３−Ｏ−イソプロピリデン−９−メチル−４，８−オクタデカジエン（８’）（１．４ｇ，４．１ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン溶液（２０ｍｌ）を滴加した。反応混合物を室温にて２時間攪拌後、量が半分となるまで真空濃縮し、生成した尿素をセライトろ過によって除去した。ろ液を洗浄（飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、真空濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ／５０：１で溶出）精製し、１．８２ｇ（５１％）の（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−２−〔２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ〕−１，３−Ｏ−（イソプロピリデンジオキシ）−９−メチル−４，８−オクタデカジエン（９’）を得た。
工程４：  （４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−２−〔２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ〕−１，３−Ｏ−（イソプロピリデンジオキシ）−９−メチル−４，８−オクタデカジエン（９’）（１．１ｇ，１．２６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，２０ｍｌ）に溶解した。ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ，３２０ｍｇ）をこの溶液に加え、室温にて１時間攪拌し、溶媒を真空除去した。残さをＡｃＯＥｔに溶解の後、この溶液を洗浄（飽和炭酸水素ナトリウム、水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、真空濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−２−［２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ］−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオール（１０’）（６８０ｍｇ，６５％）を得た。
ＴＢＤＰＳエーテル、（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−２−［２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ］−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオール（１０’）（６４０ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解し、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、１．２ｍｌ、１．２ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１時間室温にて攪拌した。これを水に注ぎ、ジクロロメタンにて抽出した。有機層を水及び飽和食塩水にて洗浄後、硫酸マグネシウムを用いて乾燥し、真空濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ，１：１で溶出）で精製し、アセトンから再結晶して、（４Ｅ，８Ｅ，２Ｒ，３Ｓ，２’Ｓ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４，８−オクタデカジエン−１，３−ジオール（１１’）（４２４ｍｇ，９３％）を得た。
ｍｐ：８２．０℃、〔α〕２４Ｄ：＋８．２（ｃ＝１．０、ＣＨＣｌ３）
実施例３（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４−オクタデセン−１，３−ジオールの合成
（１）反応原料の調製
（Ａ）Ｎ−Ｂｏｃ保護した（Ｓ）−ホルミルオキサゾリジン誘導体の合成
（Ｓ）−セリンより以下のスキームのように、Ｎ−Ｂｏｃ保護した（Ｓ）−２，２−ジメチル−４−ホルミルオキサゾリジンを合成した。
（Ｂ）ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）保護酸の合成
以下のスキームのように、（２ＲＳ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ヘキサデカン酸を合成した。
0004076441.tif 000019
（２）実施例３の合成
合成スキームは、下記に示す。
0004076441.tif 000020
工程１：  ２−ウンデカノン（１”）から実施例２と同様にして得た、３−メチル−２−ドデセン−１−オール（３”）（３０ｇ，０．１５ｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（３００ｍｌ）にＰｄ−Ｃ（１．０ｇ）を加え、水素雰囲気下３日間攪拌した。反応液をセライトろ過し、得られたろ液を濃縮後、減圧蒸留することによって３−メチルドデカン−１−オール（４”）（２０ｇ、６７％）を得た。ｂ．ｐ．１２２〜１２３℃／４トール。１Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．８−１．０（６Ｈ，ｍ，Ｍｅ），１．０−１．７（２０Ｈ，ｍ，  ２〜１１−Ｈ及びＯＨ）、３．６６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７，１−Ｈ）。
工程２：  ３−メチルドデカン−１−オール（４’’）（１２．８ｇ，６３．９ｍｏｌ）の塩化メチレン（５０ｍｌ）溶液にピリジン（２０ｍｌ）を加え、さらに塩化パラトルエンスルホニル（１２．８ｇ，６７．１ｍｍｏｌ）を氷冷下加えた。反応液を４℃にて終夜攪拌した後、希塩酸に注ぎ、ヘキサン抽出した。有機層を洗浄（水、飽和重曹水、飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。これを減圧濃縮し、２１．７ｇのトシラートを得た。得られたトシラートのＤＭＦ溶液（１００ｍｌ）に、臭化ナトリウム（９．９ｇ，９６ｍｏｌ）を加え、室温にて終夜攪拌した。反応液を水に注ぎ、ヘキサン抽出した。有機層を洗浄（水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、減圧濃縮し、１−ブロモ−３−メチルドデカン（５”）（１５．１ｇ，９０％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．８−１．０（６Ｈ，ｍ，Ｍｅ），１．０−２．０（１９Ｈ，ｍ，２〜１１−Ｈ）、３．４３（２Ｈ，ｂｒ  ｔ、Ｊ＝７，１−Ｈ）。工程３：  プロピン（約４ｇ，０．１ｍｏｌ）のＴＨＦ（８０ｍｌ）溶液にアルゴン下、テトラメチルエチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）（１５ｍｌ）を加えた。そこに、ｎ−ＢｕＬｉ（１．５５Ｍ，６４．５ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）を−７８℃にて滴加した。徐々に０℃まで昇温しながら１．５時間攪拌した後、−７８℃まで再び冷却した。そこへ１−ブロモ−３−メチルドデカン（５”）（１３．２ｇ，５０ｍｍｏｌ）のＨＭＰＡ−ＴＨＦ（２０ｍｌ＋２０ｍｌ）溶液を滴加し、徐々に室温まで昇温しながら終夜攪拌を続けた。反応液を飽和塩化アンモニウム水溶液に注ぎヘキサン抽出し、得られた有機層を洗浄（水、飽和重曹水、飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、これを減圧濃縮して得られる残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、６−メチル−２−ペンタデシン（６’’）（１２．１ｇ，９７％）を得た。１Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，６−Ｍｅ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７，１５−Ｈ），１．０−１．６（１９Ｈ，ｍ，５〜１４−Ｈ）、１．７７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．５，１−Ｈ），２．１２（２Ｈ，ｍ，４−Ｈ）。
工程４：  蒸留した無水１，３−ジアミノプロパン（１８０ｍｌ）にアルゴン気流下金属リチウム（２．８ｇ，０．４ｍｏｌ）を加え、７０℃にて２時間攪拌した。放冷後、カリウムｔ−ブトキシド（２７ｇ，０．２４ｍｏｌ）を加え、さらに１５分間攪拌した。そこに６−メチル−２−ペンタデシン（６”）（１２．１ｇ、５４．５ｍｍｏｌ）を滴加し、室温にて終夜攪拌した。この反応を飽和塩化アンモニウム水溶液にて注意深くクエンチした後、混合物をエーテル抽出した。得られた有機層を洗浄（希塩酸、飽和重曹水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。これを減圧濃縮して得られる残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、６−メチル−１−ペンタデシン（７”）（９．９０ｇ，８２％）を得た。これは、ＩＲ或いは１Ｈ−ＮＭＲによって分析した結果、ＩＲ（ｆｉｌｍ）３３００（ｍ，Ｃ≡ＣＨ），２１３０ｃｍ−１（ｗ，Ｃ≡Ｃ）。１Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７，６−Ｍｅ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７，１５−Ｈ），１．０−１．６（２１Ｈ，ｍ，４〜１４−Ｈ）、１．９３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝２．５，１−Ｈ），２．０−２．３（２Ｈ，ｍ，３−Ｈ）となった。
工程５：  ｎ−ブチルリチウムのｎ−ヘキサン溶液（１．６８Ｍ，１０ｍｌ，１６．８ｍｍｏｌ）を６−メチル−１−ペンタデシン（７”）（４．０ｇ，１８．２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液に−２３℃にて加え、その後同温度にて１時間アルゴンガス下で攪拌した。上記（１）（Ａ）で得たＮ−Ｂｏｃ保護した（Ｓ）−２，２−ジメチル−４−ホルミルオキサゾリジン（３．７ｇ，１６．１ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液を、この攪拌混合物に−２３℃にて混和し、その後、同温度にて３時間攪拌した。引き続き氷水に注ぎ、数回ジエチルエーテルで抽出した。得られた有機抽出物を洗浄（水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）した。これを真空濃縮して得られる淡黄色油状物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ＝２０：１で溶出）によって精製して、５．１７ｇ（１１．５ｍｍｏｌ、７１％）のｔｅｒｔ−ブチル  （４Ｓ，１’Ｒ）−４−（１’−ヒドロキシ−７’−メチルヘキサデカン−２’−イニル）−２，２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレート（８”）を精製した。
工程６：  ｔｅｒｔ−ブチル  （４Ｓ，１’Ｒ）−４−（１’−ヒドロキシ−７’−メチルヘキサデカン−２’−イニル）−２，２−ジメチル−３−オキサゾリジンカルボキシレート（８”）（８．４ｇ，１８．７ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を、リチウム（２ｇ、２８８ｍｍｏｌ）のエチルアミン（５０ｇ）青色溶液に１時間かけて、−７０℃にて攪拌しながら滴加した。４時間、−７０℃にて攪拌し、この混合物を徐々に周囲温度に戻し、飽和塩化アンモニウム溶液で処理した。エチルアミンと溶媒を真空除去し、残さに水を加えた。この混合物をジエチルエーテルにて数回抽出した。一緒にした有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムにて乾燥させ、真空濃縮して、粗（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ）−９−メチル−２−アミノ−４−オクタデセン−１，３−ジオール（９’’）を４．５ｇ（１４．４ｍｍｏｌ，７７％）の褐色油として得た。
工程７：  粗（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ）−９−メチル−２−アミノ−４−オクタデセン−１，３−ジオール（９”）（４．３ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）と、ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ）（３．４７ｇ，１３．８ｍｍｏｌ）と、２，２−ジメトキシプロパン（２０ｍｌ）とのトリクロロメタン（１２０ｍｌ）中混合物を４時間還流しながら加熱した。この混合物を室温に冷却し、トリクロロメタンで希釈した。これを洗浄（飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水、及び飽和食塩水）後、乾燥（硫酸ナトリウム）し、真空濃縮した。残さをシリカゲルクロマトグラフィー（ＣＨ２Ｃｌ２：ＭｅＯＨ＝５０：１）によって精製し、４．１０ｇの（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−１，３−Ｏ−イソプロピリデン−９−メチル−４−オクタデセン（１０”）の淡褐色油（８”化合物に基づいて収率８８％）を得た。
上記（１）（Ｂ）で得た（２ＲＳ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルオキシ）ヘキサデカン酸（２．２０ｇ，４．１０ｍｍｏｌ）と、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ，８５０ｍｇ，４．１ｍｍｏｌ）と、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（５５５ｍｇ，４．１０ｍｍｏｌ）とを乾燥ジクロロメタン（４０ｍｌ）中に溶解した。この溶液を室温にて攪拌しながら、（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ）−２−アミノ−１，３−Ｏ−イソプロピリデン−９−メチル−４−オクタデセン（１０”）（１．４ｇ，４．１ｍｍｏｌ）の乾燥ジクロロメタン溶液（２０ｍｌ）を滴加した。反応混合物を室温にて２時間攪拌後、量が半分となるまで真空濃縮し、生成した尿素をセライトろ過によって除去した。ろ液を洗浄（飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水、及び飽和食塩水）、乾燥（硫酸マグネシウム）し、真空濃縮し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって（ヘキサン：ＡｃＯＥｔ／５０：１で溶出）精製し、１．８２ｇ（５１％）の（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−２−〔２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ］−１，３−Ｏ−（イソプロピリデンジオキシ）−９−メチル−４−オクタデセン（１１”）を得た。
工程８：  （４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−２−〔２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ］−１，３−Ｏ−（イソプロピリデンジオキシ）−９−メチル−４−オクタデセン（１１”）（１．１ｇ，１．２６ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１：１，２０ｍｌ）に溶解した。ｐ−トルエンスルホン酸ピリジニウム（ＰＰＴＳ，３２０ｍｇ）をこの溶液に加え、室温にて１時間攪拌し、溶媒を真空除去した。残さをＡｃＯＥｔに溶解の後、溶液を洗浄（飽和炭酸水素ナトリウム、水及び飽和食塩水）し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、真空濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製し、（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−２−［２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ］−９−メチル−４−オクタデセン−１，３−ジオール（１２”）（６８０ｍｇ，６５％）を得た。
ＴＢＤＰＳエーテル、（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−２−［２’−（ＯＴＢＤＰＳ）ヘキサデカノイルアミノ］−９−メチル−４−オクタデセン−１，３−ジオール（６４０ｍｇ，０．７１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５０ｍｌ）に溶解し、テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ  ＴＨＦ溶液、１．２ｍｌ、１．２ｍｍｏｌ）をこの溶液に加え、１時間室温にて攪拌した。これを水に注ぎ、ジクロロメタンにて抽出した。有機層を洗浄（水及び飽和食塩水）後、乾燥（硫酸マグネシウム）し、真空濃縮した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ，１：１）で精製し、アセトンから再結晶して、（４Ｅ，２Ｓ，３Ｒ，２’ＲＳ）−Ｎ−２’−ヒドロキシヘキサデカノイル−９−メチル−４−オクタデセン−１，３−ジオール（１３”）（４００ｍｇ、８９％）を得た。
ｍｐ：５２−５７℃、［α］２０Ｄ：＋３．７（ｃ＝０．０６，ＣＨＣｌ３）
実施例４  Ｅｄｇ受容体応答性試験
ＨＬ６０細胞を細胞銀行より入手し、ＢＢＲＣ’９８，２６３，ｐ．２５３記載の方法に従って、１０％ウシ胎児血清を含有したＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）を用いて半年間５０継代前後培養し、Ｅｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を調製した。このＥｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を用いて、被験物質の細胞応答性を検討した。細胞応答の指標として、細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇を測定した。なお、ＨＬ６０細胞表面上のＥｄｇ受容体は、ＡＨＯＰと結合すると、Ｇタンパク質をリン酸化し、ＩＰ３キナーゼを活性化した後に細胞内Ｃａ２＋濃度が上昇することが報告されている（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒ’９６，３７９，ｐ．２６０，ＢＢＲＣ’９８，２５３，ｐ．２５３）ので、細胞内Ｃａ２＋濃度がＥｄｇ受容体応答性の指標となる。
Ｃａ２＋キレート試薬Ｆｕｒａ−２ＡＭをＨＬ６０細胞に取り込ませた。
石英製セル内に細胞懸濁液１．２ｍｌを充填し蛍光光度計ＬＳ５０Ｂ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、細胞測定用）に装着し、０．５秒毎に励起波長を３４０ｎｍ（Ｃａ２＋をキレートしたＦｕｒａ−２を励起）と３８０ｎｍ（未反応Ｆｕｒａ−２を励起）に交互に切り替え５１０ｎｍの蛍光光度を測定した。
被験物質をそれぞれ３０μＭ終濃度で、マイクロシリンジを用いて加えた後蛍光光度を追跡してＣａ２＋が増加するかどうか検討した。また、被験物質添加後にＡＨＯＰ（１μＭ）を追加した際、Ｃａ２＋が増加するかどうか確認し、各物質のＡＨＯＰ拮抗性について検討した。
実施例２の化合物、或いは実施例３の化合物を添加した後、ＡＨＯＰ追加による細胞内Ｃａ２＋濃度増加が阻止された事より、これら二物質がＥｄｇ拮抗性である可能性が示唆された。
次に、拮抗の可能性が示唆された二物質、すなわち実施例２の化合物及び実施例３の化合物による細胞内Ｃａ２＋増加阻止作用の用量依存性を検討した。比較として、既に、拮抗作用が確認されているスラミンを用いた。実験手法は、各濃度の被験物質添加後ＡＨＯＰ（１μＭ）を添加した以外は上記と同様に行った。また、Ｃａ２＋濃度増加は、陰性対照群（薬剤無添加）でのＣａ２＋増加濃度に対する相対値として、Ｃａ２＋増加濃度％で評価した。
その結果、実施例３の化合物が、０．３〜３μＭ濃度において、実施例２の化合物が０．０３〜０．３μＭ濃度において、用量依存的にＡＨＯＰによるＣａ２＋濃度増加を抑制した。その結果を図１に示す。
また、細胞内Ｃａ２＋濃度増加の５０％阻止濃度（ＥＤ５０）は、実施例３の化合物で、１．２±０．１μＭ、実施例２の化合物で、０．０４１±０．１μＭであった。既にＥｄｇ拮抗性が報告されているスラミンのＥＤ５０値が１．８±０．１μＭであるのと比較すると実施例２の化合物の作用強度はおよそ４０倍強いことになる。これらのＥＤ５０値を表１に示す。
0004076441.tif 000021
実施例５  ３Ｈ−ＡＨＯＰを用いた競合実験
実施例４と同じＥｄｇ受容体を細胞表面に発現している前骨髄芽腫細胞株ＨＬ６０を用いた。細胞を遠心分離によって回収後Ｆ−１２培地（４℃保存、１０ｍｌ）に懸濁し、ＲＩ実験室に搬入した。細胞懸濁液２００μｌ（１×１０６細胞／ｍｌＦ−１２）に、終濃度１ｎＭの３Ｈ−ＡＨＯＰ（１５μＣｉ／１ｎＭ）と終濃度１０ｎＭ、３０ｎＭ又は１００ｎＭの非標識化合物（実施例２または実施例３の化合物）を加え、４℃にて３０分間（時々攪拌して）結合試験を行った。７分間１２，０００ｒｐｍにて遠心分離後、上澄を素早く（細胞ペレットを傷付けない様に）マイクロピペッターで捨て去り、細胞ペレットをレディソルブ（ベックマン）１．５ｍｌで懸濁後バイアルに移し液体シンチレーンョンカウンターＬ２１００（ベックマン）で放射活性を測定した。
その結果、ＡＨＯＰと同様、実施例２及び実施例３の化合物が、３Ｈ−ＡＨＯＰに競合した事より、これら二物質がＥｄｇと特異的に結合していると考えられた。
なお、実施例２の化合物、及び実施例３の化合物の添加を１ｎＭ、３ｎＭ、及び１０ｎＭで行う以外は上記と同様な競合実験に供したところ、用量依存的な３Ｈ−ＡＨＯＰの（ＨＬ６０細胞への）結合阻止を観察した。その結果を図２に示す。
実施例６  血管平滑筋に及ぼす作用
被験物質について血管平滑筋増殖への作用を検討した。
動脈硬化症の進行に伴って血管平滑筋細胞が収縮型から合成型に形質転換し、炎症性サイトカインを分泌しながら血管平滑筋細胞が増殖し動脈硬化巣が進展すると考えられている（ロスの仮説）。血管平滑筋細胞の表面にはＥｄｇ受容体が発現している事が報告されており（Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ’  ００，Ｖｏｌ．５８，４４９頁、ＡＨＯＰと同様、Ｅｄｇ受容体に作動するスフィンゴシルフォスフォリルコリンに応答して血管平滑筋細胞が増殖する事が報じられている（Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ’  ９８，Ｃ１２５５頁））。
従って、実施例２及び実施例３の化合物による血管平滑筋増殖への作用を以下のように測定した。陽性対照として、Ｅｄｇ受容体拮抗性が確認されているスラミンを用いた。
ラット頚動脈内膜をバルーニングによって擦過し、２週間後にエクスプラント法（ｅｘｐｌａｎｔ  ｃｕｌｔｕｒｅ）によって調製した血管平滑筋細胞を１０％ウシ胎児血清を含んだＤＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）にて培養し、数回継代し安定させた後、５×１０３細胞／ｃｍ２の細胞密度に蒔種し実験に用いた。
増殖因子スフィンゴシルフォスフォリルコリン（１０μＭ）と併せて実施例２、実施例３の化合物或いはスラミンを上記細胞に添加し、２４時間後、ＢｒｄＵアッセイ（Ｓｃｉｅｎｃｅ’８２，２１８，ｐ．４７４，Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ’８５，６，ｐ．５８４）によって細胞密度を測定した。
その結果、実施例２及び実施例３の化合物はそれぞれ０．３〜３μＭ濃度及び１〜１０μＭ濃度において、用量依存的に血管平滑筋細胞増殖を抑制した。なお、陽性対照として用いたスラミンについては３０、１００μＭ濃度において血管平滑筋細胞増殖を抑制した。その結果を図３に示す。
実施例７  疑似血管モデルを用いた抗炎症試験
体内の損傷部位で、露出を受けたコラーゲン（細胞外マトリックス）が損傷シグナルとして標的になり、血小板が凝集してくるが、凝集して活性化した血小板から放出されるＰＤＧＦなどの炎症性サイトカインは、炎症を進行させ、また重度の炎症は循環器の恒常性を破綻させ、動脈硬化を進行させると考えられている。ＡＨＯＰも、ＰＤＧＦと同様の作用を有すると考えられている。
そこで、ＡＨＯＰを炎症惹起剤として用いて、疑似血管ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルを確立して、そのモデルを用いて、本発明化合物が抗炎症作用を示し、それによって、循環器の恒常性を維持し、病態を改善する方向に作用する可能性があるか否かを検討した。
（１）疑似血管モデルを用いたＡＨＯＰの炎症惹起作用
多孔膜により上室と下室とに区切られたトランスウェルを用い、トランスウェル上室底面の孔膜上に一層のウシ内皮細胞を培養し、トランスウェル上室に蛍光標識した好中球浮遊液を加え、下室にＡＨＯＰを終濃度０．１〜１０ｍｉｃｒｏＭとなるように懸濁した。即ち、トランスウェルの上室と下室は内皮層を隔てて隔離され、上室が血管内部、下室が血管外の炎症部に対応する疑似血管ｉｎ  ｖｉｔｒｏ炎症モデルとなっている。上室から内皮層を潜り抜けて下室へ透過した好中球数、及び、内皮層に粘着した好中球数を測定したところ、ＡＨＯＰ  １０  ｍｉｃｒｏＭにて、有意に好中球の内皮層透過、及び、粘着が促進を受けた。つまり、ＡＨＯＰが炎症惹起物質として作用していると考えられた。
（２）炎症細胞−血管内皮細胞相互作用に及ぼす本発明化合物（Ｅｄｇ拮抗物質）の作用
ＡＨＯＰを炎症惹起物質として用い、Ｅｄｇ拮抗性を示す実施例２、３の化合物が疑似血管ｉｎ  ｖｉｔｒｏ炎症モデルに及ぼす影響を検討した。
即ち、トランスウェル上室或いは下室に実施例２または３の化合物を０．０１〜１ｍｉｃｒｏＭで添加し、ＡＨＯＰ  １０  ｍｉｃｒｏＭを下室に入れて炎症を惹起した。コントロールは、薬剤無添加で上記と同様に炎症を惹起したものを用いた。
上室から内皮層を抜け下室へ透過した好中球数及び内皮層に粘着した好中球数を測定し、相対的好中球数％を以下の式により算出した。
相対的好中球数％＝［実験群での好中球（透過及び粘着）数］／［コントロールでの好中球（透過及び粘着）数］ｘ１００
その結果を図４に示す。図に示されるように、実施例２及び３の化合物の０．１、１ｍｉｃｒｏＭにて、好中球透過及び粘着が抑制を受けた。
従って、疑似血管ｉｎ  ｖｉｔｒｏモデルにおいて、ＡＨＯＰを炎症惹起剤として用いた場合、実施例２、３の化合物は抗炎症的に作用する事より、循環器の恒常性を維持し、病態を改善する方向に作用する可能性が考えられる。
実施例８  結紮による心筋梗塞モデル
実施例２の化合物を被験物質とし、ウサギ冠動脈結紮再灌流による心筋梗塞に及ぼす影響を検討した。
ウサギは、ＮＺＷ系雄性（体重２．８３−３．２０ｋｇ）を北山ラベス社より購入し、室温２０−２６℃、湿度４０−７０％、照明時間１２時間／日（７−１９時）の条件下で飼育し、飼料及び水を自由に摂取させ、２週間以上の検疫および馴化飼育した後、健康状態の良好なものを用いた。
上記ウサギを麻酔下、実施例２の化合物１０ｍｇ／ｋｇ量を頚部静脈内投与し、その後実施例２の化合物６．９ｍｉｃｒｏ  ｇ／ｋｇ／分量を持続投与した。コントロールとして生理食塩水（以下、生食と略する）を実験群と同様に投与した。次に、冠動脈を３０分間結紮した後糸を解いて再灌流し、頚動脈内血圧、脈拍及び不整脈数を測定した。頚動脈内血圧及び脈拍は、投与前、持続静注中、結紮期間（１５分後及び３０分後）、或いは再灌流中に各々測定した。頚動脈内血圧は、平均血圧として算出した。不整脈数は、結紮期間（３０分間）或いは再灌流の期間に出現した期外収縮数を測定した。それらの結果を下記の表２及び３に示す。
再灌流３時間後に心臓を摘出し、６切片に薄切し、２，３，５−トリフェニルテトラゾリウム塩酸塩（２，３，５−ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＴＴＣ））で生きている組織を染色し、結紮による梗塞領域の面積を測定し、左心室の面積当たりの梗塞領域率を算出した。その結果を下記の表４に示す。
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その結果、実施例２の化合物はウサギ急性心筋梗塞モデルにおいて、結紮による脈拍低下を抑え、不整脈数を減少させる傾向を示した。また、実施例２の化合物は梗塞領域率を減少する傾向を示した。
産業上の利用可能性
本発明の化合物は、優れたＥｄｇ受容体拮抗作用を示し、本発明の化合物を有効成分とする医薬は循環器系疾患（例えば、動脈硬化症、心臓疾患）、がん、リウマチ、糖尿病性網膜症、呼吸器系疾患に対して優れた治療効果を示す。
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明の化合物が用量依存的にＥｄｇ拮抗性を示すグラフである（スラミン：対照）。
図中、白三角は、被験物質をいれない場合のデータである。
図２は、本発明の化合物が用量依存的にＡＨＯＰ競合作用を示すグラフである。
図中、白丸は、被験物質をいれない場合のデータである。
図３は、本発明の化合物が用量依存的に血管平滑筋細胞増殖の抑制作用を示すグラフである（スラミン：対照）。
図中、白四角は、被験物質をいれない場合のデータであり、また、＊：陰性対照に対し、危険率ｐ≦５％にて有意に抑制、＊＊：陰性対照に対し、危険率ｐ≦１％にて有意に抑制を示す。
図４は、内皮細胞−好中球相互作用に及ぼす本発明の化合物の作用を示し、また、＊＊：コントロールに対し、危険率ｐ≦１％にて有意に抑制を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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