(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ドライパウダー吸入器で使用するパウダーであって、前記パウダーは、活性剤粒子と、前記ドライパウダー吸入器での使用に適した大きさを有しかつ活性剤粒子を運ぶためのキャリア粒子と、を含み、前記パウダーは、前記吸入器の作動時に前記キャリア粒子からの前記活性剤粒子の分散を促進するように、前記キャリア粒子の表面上に添加剤の粒子を有しており、
前記パウダーの製造が、前記キャリア粒子と前記添加剤粒子とを混合して、前記キャリア粒子の表面に前記添加剤粒子を付着させ、結果生じた粒子と前記活性剤粒子とを混合して、前記活性剤粒子を前記キャリア粒子及び／又は前記添加剤粒子の表面に付着させることによってなされ、
前記添加剤が、ロイシン、アスパルテーム、イソロイシン、リシン、フェルアラニン、バリン、メチオニンから選択されることを特徴とするドライパウダー吸入器で使用するパウダー。
【請求項２】
前記アミノ酸は、ロイシンであることを特徴とする請求項１記載のパウダー。
【請求項３】
前記パウダーは、前記パウダー重量に対して重量比で５％以下の添加剤を含むことを特徴とする請求項１または２記載のパウダー。
【請求項４】
前記パウダーは、前記パウダー重量に対して重量比で４％以下の添加剤を含むことを特徴とする請求項３記載のパウダー。
【請求項５】
前記パウダーは、前記パウダー重量に対して重量比で２％以下の添加剤を含むことを特徴とする請求項４記載のパウダー。
【請求項６】
前記吸入器の作動前では、前記キャリア粒子から前記活性剤粒子が分離しにくくなっていることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載のパウダー。
【請求項７】
前記キャリア粒子は、一種以上の結晶質の糖類を含むことを特徴とする請求項３〜６のいずれかに記載のパウダー。
【請求項８】
前記キャリア粒子は、ラクトース粒子であることを特徴とする請求項７記載のパウダー。
【請求項９】
前記キャリア粒子の実質的にすべて（重量で）は、直径が２０μｍから１０００μｍであることを特徴とする請求項３〜８のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１０】
前記添加剤粒子の少なくとも９５重量％は、直径が１００μｍ以下であることを特徴とする請求項１〜９のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１１】
前記添加剤粒子の質量中央径は、約１０μｍ以下であることを特徴とする請求項１０記載のパウダー。
【請求項１２】
前記パウダーは、前記キャリア粒子の重量に対して重量比で０．１％以上の添加剤粒子を含むことを特徴とする請求項１〜１１のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１３】
前記添加剤は、キャリア粒子表面を不連続にカバーすることを特徴とする請求項１〜１２のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１４】
前記添加剤は、前記キャリア粒子の表面に不連続にカバーする一方で、前記キャリア粒子の表面で飽和することを特徴とする請求項１２記載のパウダー。
【請求項１５】
前記活性剤粒子の質量中央径は、１０μｍ以下であることを特徴とする請求項１〜１４のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１６】
前記活性剤粒子は、β２−アゴニストを含むことを特徴とする請求項１〜１５のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１７】
前記活性剤粒子は、サルブタモール、サルブタモールの塩、または両者の組合せのいずれかを含むことを特徴とする請求項１６記載のパウダー。
【請求項１８】
前記活性剤粒子は、ベクロメタゾンジプロピオネートを含むことを特徴とする請求項１〜１５のいずれかに記載のパウダー。
【請求項１９】
請求項１〜１８のいずれかに記載のパウダーを製造する方法であって、前記方法は、ドライパウダー吸入器での使用に適した大きさのキャリア粒子と、前記キャリア粒子の表面に付着する添加剤と、を混合するステップを含むことを特徴とする方法。
【請求項２０】
前記方法は、前記キャリア粒子と前記活性剤粒子とを混合する前に、キャリア粒子のサンプルから、適当な大きさの範囲にあるキャリア粒子を選択するステップを含むことを特徴とする請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
前記方法は、前記キャリア粒子と前記添加剤粒子とを混合する前に、添加剤粒子のサンプルから、適当な大きさの範囲にある添加剤粒子を選択するステップを含むことを特徴とする請求項１９または２０記載の方法。
【請求項２２】
前記添加剤及び前記キャリア粒子は、０．１時間から０．５時間混合されることを特徴とする請求項１９〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記キャリア粒子は、タンブリングブレンダによって前記添加剤と混合されることを特徴とする請求項１９〜２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記方法は、前記キャリア粒子の表面から微小粒子を除去するように前記キャリア粒子を処理するステップを含み、前記処理の間、前記キャリア粒子の大きさは実質的に変化しないことを特徴とする請求項１９〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記キャリア粒子と前記添加剤粒子とを混合するステップが、前記キャリア粒子を処理するステップに先立って行われることを特徴とする請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
前記微小粒子は、前記キャリア粒子の表面に再付着することを特徴とする請求項２４又は２５記載の方法。
【請求項２７】
前記処理ステップは、粉砕ステップであることを特徴とする請求項２４〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記粉砕ステップは、ボールミルで行われることを特徴とする請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記粒子は、プラスチックボールを使用して粉砕されることを特徴とする請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記粒子は、０．２５時間〜６時間粉砕されることを特徴とする請求項２７〜２９のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、ドライパウダー吸入器に使用されるキャリア粒子に関する。より詳細には、本発明は、キャリア粒子の製造方法と、この粒子を添加したドライパウダー、及びキャリア粒子自体に関する。
吸入器は、吸入により気管あるいは呼吸道に薬剤を投与するための装置として良く知られており、特に気道の病変を治療するために広く用いられている。
今日では、用いることのできる吸入器として、多くの型のものが知られている。最も汎用されている型のものは、加圧計量投与吸入器（metered dose inhaler）（MDI）であり、この装置は、吸入管に薬剤を含有する液滴を放出させるような促進剤を使用する。上記装置は、CFCを促進剤として使用することから、環境面から難点があり、また、上記装置の吸入特性に関連する臨床的な観点からも難点がある。
MDIに代わる装置としては、上記したドライパウダー吸入器を挙げることができる。薬剤であるドライパウダー粒子を呼吸道にデリバリーするには、幾つかの難点が挙げられる。まず、吸入器は、肺に対して活性粒子を可能な限り最大効率で送らねばならず、さらに肺下部に対しても十分な割合で送ることが必要である。これは、特に喘息等に罹患して吸入能の低下した患者に対して必要とされるものである。しかしながら、現在用いることができるドライパウダー吸入装置の多くは、吸入に際して上記装置から吸入される活性粒子の約１０％が肺下部に付着されているにすぎない。従ってより効率的なドライパウダー吸入器によれば、大きな療法上の効果が期待される。
使用されるドライパウダー吸入器の型は、一定範囲のエアーフローにおいて呼吸道に活性粒子をデリバリーする効率に極めて重要である。また、用いられる上記活性粒子の物理的特性は、活性粒子のデリバリー効率とデリバリーの再現性、及び呼吸道内の付着サイトに影響を与える。
吸入装置から排出されると、活性粒子は、物理的、化学的に安定な空力学的コロイド、即ちエーロコロイド（aerocolloid）を形成する。このエーロコロイドは、肺動脈から分岐する細気管支（conducting bronchiole）あるいは支脈（smaller branching）、または、肺下部のその他の吸着サイトに到達するまで懸濁状態を維持するようになっていることが好ましい。吸着サイトに到達すると、活性粒子は、無駄なく効率よく吸着サイトから肺粘膜へと吸収されることが必要である。
活性粒子のサイズは、重要である。活性粒子を肺深部に効率よくデリバリーするには、活性粒子は、微小であり、かつ、実質的な等価空力学的直径（equivalent aerodinamic diameter）が０．１μｍから５μｍの範囲であり、呼吸道内でほぼ球形で単分散でなければならない。しかしながら、微小粒子は、その体積に対して大きな表面積を有していることから、熱力学的に不安定である。体積に対して表面積が大きいことは、表面自由エネルギーを高くしてしまい、粒子の凝集を促進してしまうためである。吸入器では、微小粒子の団粒化と、吸入器の壁への粒子の付着は、吸入器から排出される活性粒子を大きな団粒としてしまったり、吸入器から排出することができなくなり、吸入器の内部に付着したまま残されると言った問題を生じさせることになる。
吸入器を起動する度、また、吸入器が異なった場合でも、異なったバッチ間でも団粒化の量が不安定であることから、投与の再現性が低かった。粒子が直径約９０μｍ以上の直径を有している場合であれたば、粒子が再現性良く流動化可能であり、信頼性高く吸入装置から排出させることができることは従来から知られている。
従って、ドライパウダーエーロゾルを効率的なものとするためには、吸入器内では粒子を大きくし、呼吸道内では微小な粒子とする必要がある。
この様な条件を達成するための試みとして、ドライパウダー吸入器に使用されるドライパウダーの一形態として、吸入装置内では、微細な活性粒子をキャリア粒子に付着させておき、呼吸道内に吸入された際にキャリア粒子の表面から微細な活性粒子が分散していき、微細な懸濁状態となるものを挙げることができる。このキャリア粒子は、多くの場合、９０μｍよりも大きな粒子とされ、上述したように良好な流動性を与える。１０μｍよりも小さな粒径の粒子は、デリバリー装置の壁に付着してしまい、流動性が低く、かつ、その団粒化特性のために、投与の均一性が低くなってしまていた。
上記のような団粒又は、吸入に際してキャリア表面から微細な活性粒子を再分散させるための効率を増加させるのは、ドライパウダー吸入器の効率を改善するために極めて重要なステップである。
キャリア粒子の表面特性が重要であることが知られている。キャリア粒子の形状と材質とには、ドライパウダーの製造の間には活性粒子をドライパウダーの表面に保持するに十分な付着力が得られることが要求される。その一方で、この付着力は、呼吸道内で活性粒子を分散させることができる程度に小さいものとする必要がある。
キャリア粒子と、活性粒子と、の間の付着力を低下させるためには、第３の成分を加えるという提案がなされた。特に、ラクトースのキャリア粒子とサルブタモールの活性粒子を使用する場合には、マグネシウムステアリン酸またはエアロシル２００（Aerosil 200）（デグーサ社（Degussa）のコロイド状二酸化ケイ素の商品名）の粒子をラクトース−サルブタモール混合物に対するキャリア粒子の重量に対して１．５重量パーセントを加えることが提案された。
しかし、この提案に関しては、添加（additive）粒子の付加によって、キャリア粒子と活性粒子との間の付着は低下するが、添加粒子の付加は望ましくないとの結論であった。
本発明は、ドライパウダー吸入器に使用されるキャリア粒子及びパウダーの製造方法を提供することを目的とするとともに、上述した問題点を低減させることのできるキャリア粒子及びパウダーを提供することを目的とする。
このような従来技術の教示とは反対に、キャリア粒子から活性粒子の分散を促進するためにキャリア粒子の表面に添加粒子を付着させることは、添加粒子の量が、ドライパウダーの製造の際や、使用前のデリバリー装置内においてキャリア表面から活性粒子が分離しない程度の量である限り好都合であることがわかった。更に、必要とされる添加粒子の量は、驚くほど少量であり、それ以上の量を加えた場合であっても、吸入効率が更に向上するということはなく、むしろ、混合物を処理するにあたって不利に働く。必要とされる添加粒子の量は、粒子の組成によって決まる。添加粒子がマグネシウムステアリン酸（使用可能な材料ではあるが、所望な材料ではない）の場合には、パウダーの総重量の１．５重量パーセントでは量が多すぎてキャリア粒子から活性粒子が早期に分離してしまう。エアロシル２００に関しても、同様の問題点が生じると思われる。
本発明は、ドライパウダー吸入器で使用するパウダーを提供し、このパウダーは、活性粒子と、活性粒子を運搬するためのキャリア粒子とを含み、上記パウダーは更に、吸入器の作動時にキャリア粒子からの活性粒子分散を促進するためにキャリア粒子表面に付着させた添加剤を含む。上記パウダーは、吸入器の作動前にキャリア粒子より活性粒子が分散しにくいようになっている。
“吸入器の作動”とは、投与量（dose）のパウダーがその吸入器内の安静位（rest position）から通常患者の吸入によって除去される過程をいう。このステップは、吸入器にパウダーを投入して使用準備を整えた後に行われる。
本明細書では、活性粒子がキャリア粒子から分散しにくいが、吸入器の作動時には分散するように、添加剤の量が大変少ないパウダーの例を多く挙げている。吸入器の作動前にパウダーの活性粒子がキャリア粒子から分散されやすいかどうか実験する必要があれば、実験を行ってもよい。本明細書の最後には適当な実験を説明している。上記の実験を行った後に、変動割合の係数として計測されるパウダーの振動後の均一性（post-vibration homogeneity）が５％以下である場合、許容範囲とすることができる。以下で説明する本発明の実施例では、係数は約２％と最適であるが、１．５重量パーセントのマグネシウムステアリン酸を使用する以下で説明する他の実施例では、係数が約１５％と許容範囲外である。
キャリア粒子の表面は、通常平滑ではなく、突起と、割れ目とをその表面に有している。割れ目サイト又は、突起サイトは、表面エネルギーが高い領域であると考えられている。活性粒子は、この様な高エネルギーサイトに吸引されやすく、かつ、最も強固に付着し、このことによって、キャリア表面に活性粒子が不均一化され、かつ、その団粒化が悪化することになる。活性粒子が高エネルギーサイトに付着する場合には、キャリア粒子には、よりエネルギーが低いサイトにある粒子よりも大きな付着力が作用し、このため、吸入器の作動時にキャリア粒子表面からの離脱が低減されるとともに、呼吸道内での分散性が悪化してしまうことになる。従って、活性粒子が強固に付着しやすい高エネルギーサイトの数を減らすことは、大変利益が大きい。
添加剤は、キャリア粒子の表面の高エネルギーサイトに吸引され、付着する。添加粒子を挿入することによって、多くの高エネルギーサイトは占有され、活性粒子は、キャリア粒子表面の低エネルギーサイトに付着する。このことによって、吸入時に起こる空気流内での活性粒子の分散は、より容易かつ効率的に行われる。また、分散により、肺内部への活性粒子の付着は増加する。
しかし、上述したように、添加粒子は少量でよく、それ以上を加えても、商業的な製造において混合物を処理する上で不利に作用することとなる。
また、パウダーの吸入時に肺に届く添加剤は、少なければ少ない程よい。添加剤は、安全に肺に吸入することができるものが最も都合がよいが、安全であっても、肺、特に肺下部に届く添加剤はごく少量であることが望ましい。従って、添加剤やパウダーの他の特性を選択する場合と、他の理由でキャリア及び活性剤に第三の成分を加える場合と、では考慮する点が異なる。第三の成分を加える他の理由とは、例えば、肺での活性剤の吸収を改善するため等であり、この場合には、当然肺に届く添加剤は多ければ多い程よい。
本発明では、上記したように、添加剤の化学組成や他の特性によって決まる最適な量の添加剤が加えられる。しかし、多くの添加剤に関しては、パウダー内の添加剤の量は、パウダー重量の１０％以下であることが必要であり、５％以下である方が好都合であり、更に４％以下であるの方が望ましいと思われ、多くの材質に関しては、パウダー重量の２％以下であることが望ましいと思われる。以下で説明する実施例では、この量は約１％である。
添加剤は、非着性（anti-adherent）材であり、活性粒子とキャリア粒子の間での凝集力（cohesion）を低下させるような材料であることが好都合である。
また、添加剤は、減摩物質（anti-friction agent、glidant）であり、ドライパウダー吸入器内のパウダーの流れをよくするような材料であることが好都合であり、このことは、吸入器からの粒子の再現性の向上につながる。
上記の非着性材料及び減摩物質に関して、このような材料は、通常は非着性材料及び減摩物質といわれない材料であっても、活性粒子とキャリア粒子との間の凝集力を低下させ、また吸入器内のパウダーの流れをよくするような材料を含む。例えば、ロイシンは、ここで定義している非着性材料であり、一般的に非着性材料として認識されているが、レシチンは、一般的には非着性材料とは認識されていないが、活性粒子とキャリア粒子との間の凝集力を低下させるので、ここで定義している非着性材料に含まれる。
キャリア粒子は、吸入に適した医薬学上好適な不活性材料又はそれらの混合物を含有していても良い。キャリア粒子は、一つ以上の結晶性の糖を含有することが効果的であり、キャリア粒子は、一つ以上の糖アルコールまたはポリオルを含有してもよい。また、キャリア粒子は、ラクトース粒子であることが好適である。
さらに、実質的に全重量のキャリア粒子の直径は、２０μｍから１０００μｍの範囲であることが効果的であり、更に５０μｍから１０００μｍの範囲であることがより効果的である。実質的に全重量のキャリア粒子の粒径は、３５５μｍ未満、２０μｍから２５０μｍの範囲であることが望ましい。キャリア粒子の重量の最低９０％が６０μｍから１８０μｍの間の直径であることが望ましい。キャリア粒子の粒径が相対的に大きくなると、他の小さな粒子がキャリア粒子の表面に付着する確率が向上し、良好な流動性、団粒化特性を提供することができるとともに、空気流において活性粒子の放出性を改善することができる。このようにして、肺下部における活性粒子の付着性を増加させることができる。
なお、本明細書では、粒子の直径とは、粒子の空力学的直径のことをさす。好ましくは、添加剤の材質は、生物学的に許容される材質であることが好ましい。
上述したように、肺下部に到達する添加剤の量は少量であることが好ましい。また、添加剤の材質は、肺下部に安全に吸入されて、この肺下部で血流に吸収される材質であることが特に好ましい。更に、この添加剤は、肺下部において粒子の形態であることが好ましい。
この添加剤は、一種以上の材質の組み合わせから構成することも可能である。
添加剤の化学蘇生は特に重要である。
好ましくは、添加剤は、動物あるいは植物からの天然由来成分とする。
また、好ましくは、添加剤は、アミノ酸やその誘導体、分子量が０．２５〜１０００ＫＤａであるポリペプチド及びペプチドやその誘導体、のうち一種以上を含む。アミノ酸、ペプチド及びポリペプチドやその誘導体は、ともに生物学的に許容され、かつ、吸入において活性粒子を許容できる範囲でリリースするものである。
特に、添加剤は、アミノ酸を含有することが好ましい。アミノ酸は、添加剤として少量パウダーに存在する場合、パウダーの分離が小さく（little segregation）、活性剤の呼吸可能な画分（respirable fraction）が高くなっており、更に、肺下部には殆ど到達しない。好適なアミノ酸であるロイシンに関しては、例えば、平均投与量では、肺下部に到達する量は、僅か１０μｇである。この添加剤は、ロイシン、イソロイシン、リシン（lysine）、バリン、メチオニン、フェニルアラニン等のうち一種以上のアミノ酸を含む。
この添加剤は、アミノ酸の塩や誘導体としてもよく、例えばアスパルテーム（aspartame）やアセサルフェームＫ（acesulfame K）でもよい。
好ましくは、添加剤粒子は、実質的にロイシン、好ましくはＬ−ロイシンよりなる。上述したように、ロイシンは、吸入時に活性粒子を特に効果的にリリースする。Ｌ型のアミノ酸が以下の説明では用いられているが、Ｄ型、ＤＬ型のアミノ酸を用いることも可能である。
添加剤は、一以上の水溶性基質（substance）を含んでもよい。これは、添加剤が肺の下部に到達したときに、体への基質の吸着を補助する。この添加剤は、双極性イオンを含んでもよく、この双極性イオンは、両性イオンよりなる。
または、添加剤は、リン脂質またはその誘導体を含んでもよい。レシチンは、添加剤のよい材料であることが見いだされている。
添加剤は、一種以上の界面活性剤よりなるか、一種以上の界面活性剤を含んでもよく、特に、固体の状態で表面活性であって、水溶性であるもの、例えばレシチン、特に大豆レシチン（soya lecithin）が挙げられる。または、実質的に水溶性のもの、例えば固体の脂肪酸であるラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、エルカ酸、ベヘン酸が挙げられ、また、その誘導体（例えばエステルや塩）が挙げられる。
このような材質の特定の例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリルフマル酸ナトリウム（sodium stearyl fumarate）、ステアリルラクチルナトリウム（sodium stearyl lactylate）、ホスパチジルコリン（phospatidylcholines）、ホスファチジルグリセロール（phosphatidylglycerols）及び他の天然あるいは合成肺界面活性剤（lung surfactants）、リポゾーマルフォーミュレーション（Liposomal formulations）、ラウリン酸及びその塩、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、ディンサン１１８（Ｄｙｎｓａｎ１１８）やクチナＨＲ（ＣｕｔｉｎａＨＲ）等のトリグリセライド、及び糖のエステル等が挙げられる。
他に可能な添加剤としては、タルク、二酸化チタン、二酸化アルミニウム、二酸化ケイ素、デンプン等が挙げられる。
上述したように、添加剤は、少量を用いることが重要である。例えば、ステアリン酸マグネシウムは、高度に界面活性であり、従って、特に少量を用いるべきである。一方、ホスファチジルコリン（phospatidylcholines）やホスファチジルグリセロール（phosphatidylglycerols）は、活性がより低いので、より多量に用いることもできる。ロイシンに関しては、更に活性が低く、パウダーに対して２ｗｔ％添加することで、活性剤の呼吸可能画分に関して良好な結果が得られ、セグレゲーション即ち分離が小さく、肺下部に到達するロイシンも少量である。添加量を多量としても、結果は向上せず、特に、呼吸可能な画分は実質的に向上しない。従って、ロイシンを６ｗｔ％添加しても適当な結果を得ることはできるものの、体内に取り込まれる添加剤の量が多くなり、また、混合物の処理特性に不利に作用する。
添加剤は、多くの場合はパティキュレート即ち微粒子の形態で加えられるが、材質によっては液体や固体の状態で添加されることもあり、特に、材質を微粒子化することが容易ではないとき及び／又はこれらの粒子を特に小さくすべきときには、好ましくは、この添加剤を液体の形態、例えば懸濁液や溶液として加えることが好ましい。しかし、この場合であっても、最終的なパウダーにおける添加剤は、微粒子の形態となる。ただし、最終的に実質的にに微粒子の材質においても液体ままの添加剤も、ここでは“ドライパウダー”と呼称し、本願の発明の範囲内のものとする。
添加剤が粒子形態とならない場合に、臨床的に利点が得られる場合もある。特に、添加剤がキャリア粒子の表面から離れにくく、肺下部に到達しやすい場合がある。
最終パウダーの添加剤が粒子である場合、粒子の特性は重要である。添加剤粒子の形状は、非球形状であることが多い。以下の試験例１〜３では、添加剤粒子は、板状粒子である。あるいは、添加剤粒子は、例えばプリズム状、樹枝状等の、角張った（angular）形状をとることもある。非球形状の添加剤は、球形状や角張っていない形状のものよりも、キャリア粒子表面からの除去が容易であり、また、板状の粒子は、キャリア粒子間の界面相互作用及び研磨作用が向上する。
添加剤の表面積もまた重要である。添加剤の表面積は、ガス吸着技術を用いて測定すると、好ましくは、少なくとも５ｍ2ｇ-1である。多くの場合、小さな板状の粒子を含む添加剤が好適であることがみいだされた。
好ましくは、添加剤の少なくとも９５ｗｔ％は、その直径が１５０μｍ未満で、好ましくは１００μｍ未満、更に好ましくは５０μｍ未満である。好ましくは、添加剤粒子の質量中央粒径（mass median diameter）は、キャリア粒子の質量中央粒径より小さく、通常は、キャリア粒子の質量中央粒径の約１／１０〜１／１００となっている。
キャリア粒子、添加剤及び活性剤粒子の混合比率は、もちろん、用いられる吸入装置の種類、用いられる活性剤の種類、要求される分量（dose）に依存する。上述したように、添加剤の量は、特に重要である。好ましくは、添加剤の添加量は、キャリア粒子の重量を基準として重量比で０．１〜１０％である。以下の試験例では、パウダーは、好ましくは、キャリア粒子の重量を基準として、重量比で０．１％の添加剤を有し、また、パウダーの重量を基準として、重量比で０．１％の活性剤粒子を含む。更に、キャリア粒子は、パウダーを基準とした重量比で、好ましくは９０％、更に好ましくは９５％を占める。
添加剤によるキャリア粒子表面を覆う量の従来法による算出値によれば、好適なキャリア粒子及び好適量加えられる好適な添加剤においては、添加剤の量は、キャリア粒子を単層で覆うのに必要な量よりも非常に大きいことがわかった。例えば、以下の試験例１では、ロイシンは重量比で非常に少量でも単層コーティングを行うに十分であることが計算により求められており、この試験例ではロイシンは重量比で１％が用いられている。
更に、たとえ１％のロイシンであっても、従来用いられている意味でのキャリア粒子の“コーティング”、特に、キャリア粒子の周囲を連続的に覆う、という意味でのコーティングがなされている訳ではない。むしろ、キャリア粒子を電子顕微鏡で調べた結果、各ラクトース粒子の表面の多くは露出されたままであり、ロイシン粒子は、各ラクトース粒子の一部を限定的にカバーしているだけである。その結果、ラクトース粒子のカバーは不連続なものになっている。このような不連続な被覆状態は、“コーティング”とは対比的な概念であり、本発明の重要かつ有利な特徴となっている。
好ましくは、添加剤は、キャリア粒子を不連続にカバーするだけでなく、キャリア粒子の表面で飽和する。ここでいう“飽和”とは、添加剤が更に添加されても、キャリア粒子がカバーされる状態が変わらない、という意味で用いられている。最終的なパウダー内での添加剤が粒子となっているときは、添加剤粒子の一部は、個々に、あるいは団粒状態で、活性粒子のキャリアとして働く。そして、活性粒子をその表面につけた状態で、キャリア粒子の表面から分離させられるか、あるいは自ら分離する。活性粒子と添加剤粒子とが結合した状態でも、その大きさは、肺下部への付着（deposition）が、良好となる最適値の範囲内にある。
キャリア粒子上の添加剤粒子に付着する活性剤粒子は、場合によっては、優先的にキャリア粒子からリリースされた後に、添加剤粒子を伴うことなく肺下部に付着すると信じられる。
好ましくは、活性剤粒子の質量中央値は１０μｍを超えることはなく、好ましくは、５μｍを超えることはない。従って、粒子は、キャリア粒子から再分離（redisperation）したときに良好な懸濁状態を与え、呼吸道内深くに送られる。活性剤粒子が球形でないときは、粒子の直径は、レーザー回折またはその他の方法によって求められ、これによって粒子の空力学的直径が決定される。
本明細書では、活性材とは、薬学的プロダクト即ち薬学的製品、またはこの薬学的製品の複数種の混合物をいう。“活性材”という用語は、生物学的環境でプロセスのレートを増加あるいは減少させることができる、という意味での、生物活性を有する材質を指す。薬学的製品とは、呼吸器の疾病等の治療のために通常吸入による経口的に投与される製品を指し、例えばβ−作用薬即ちβ−アゴニスト（β−agonists）、サルブタモール（salbutamol）及びその塩、サルメテロール（salmeterol）及びその塩が挙げられる。ドライパウダー吸入器を用いて投与可能な他の薬学的製品としては、ペプチド、ポリペプチド、例えばＤＮａｓｅ、ロイコトリーン（leucotrienes）、及びインシュリンが挙げられる。
活性剤粒子には、β2−アゴニストを含むようにしてもよく、このβ2−アゴニストは、例えばターブタリン（terbutaline）、ターブタリンの塩、例えば硫化ターブタリン（terbutaline sulphate）、またはこれらの組み合わせ、またはサルブタモール、サルブタモールの塩またはその組み合わせが用いられる。サルブタモール及びその塩は、呼吸器の疾病の治療に広く用いられている。活性剤粒子は、硫酸サルブタモールとしてもよい。活性剤粒子は、臭化イパトロピウム（ipatropium bromide）としてもよい。
活性剤粒子としては、ベクロメタゾンジプロピオネート（beclomethasone dipropionate）やフルチカゾン（Fluticasone）等のステロイドを挙げることもできる。活性成分は、クロモリケートナトリウム（sodium cromoglycate）やネドクロミル（nedocromil）等のクロモン（cromone）を挙げることもできる。活性成分は、ロイコトリエンレセプター拮抗薬を有してもよい。また、活性成分は、炭水化物、例えばヘパリン（heparin）を有してもよい。
本発明によれば、上述したように、パウダーに用いられる粒子が得られ、この粒子は、ドライパウダー吸入器に好適に用いられるサイズ及び第１の組成を有するキャリア粒子と、第２の組成を有する添加剤と、が得られ。この添加剤は、キャリア粒子の表面に付着される。
本発明は、ドライパウダー吸入器に用いられるパウダーも提供し、このパウダーは、活性剤粒子と、この活性剤粒子を運ぶためのキャリア粒子とを有する。また、このパウダーは、さらに、キャリア粒子の表面に付着された添加剤を有する。添加剤によって、キャリア粒子からの活性剤粒子の離脱が促進される。
本発明によれば、ドライパウダー吸入器の粒子として好適に使用できる粒子の製造方法も提供される。この方法は、ドライパウダー吸入器での使用に好適なサイズを有するキャリア粒子と、添加剤と、を混合するステップを有し、この添加剤は、キャリア粒子の表面に付着される。
添加剤は、液体の形態でもよく、または、粒子、団粒（即ち粒子の集まり）でもよい。このような形態の添加剤は、キャリア粒子のサンプルに導入される。このサンプルのキャリア粒子は、例えば後述の例のように処理済みのものである。キャリア粒子と添加剤とは、添加剤がキャリア粒子の表面に付着するように混合される。
上述したように、キャリア粒子と添加剤粒子との正確な混合比は、もちろん、用いられる活性剤粒子や装置のタイプに依存する。上述したように、パウダー内における添加剤の比率は、特に重要である。
キャリア粒子のサイズは、吸入器の効率において重要なファクターであり、最適、あるいは最適に近い粒径サイズが好適に選択される。従って、好ましくは、この方法は、上述の混合ステップに先立って、キャリア粒子のサンプルから適当なサイズ範囲のキャリア粒子を選択するステップを有する。また、添加剤が粒子の形態でキャリア粒子に混合されるときは、好ましくは、上記混合ステップに先立って、添加剤粒子のサンプルから適当なサイズ範囲の添加剤粒子を選択するステップを有する。適当なサイズを選択するステップは、篩い分けを行うステップである。
好ましくは、添加剤及びキャリア粒子は、０．１〜０．５時間混合される。粒子は、回転ブレンダー（tumbling blender）、例えばTurbula Mixerを用いて混合される。
好ましくは、上記方法は、さらに、キャリア粒子の表面から小さなグレインを取り除くように、キャリア粒子をを処理するステップを有する。この処理の間、キャリア粒子のサイズは実質的に変化することはない。
上述したように、キャリア粒子の表面は、通常は滑らかではなく、突起部や裂溝部（割れ目）がある。その結果、表面には、表面エネルギーが高く活性粒子が優先的に付着する領域が生じる。高エネルギーサイトにおける活性粒子は、表面エネルギーの低いサイトに比較して、キャリア粒子の表面から離れにくく、また、呼吸道に拡散しにくい。上述のキャリア粒子の表面からグレインを除去する処理において、キャリア粒子表面の凹凸は、小さなグレイン即ち微粉末として除去され、これにより、キャリア粒子表面の凹凸による活性サイトは除去される。
好ましくは、混合ステップは、処理ステップに先立ってなされる。従って、添加剤は、大きな粒子のままで添加されて、上記の処理の間に小さな粒子となる。または、上記処理は、添加剤を加えるまえに行ってもよく、または、添加剤及び活性剤粒子の添加を行った後に行ってもよい。
上記グレイン即ち微粉末は、好ましくは、キャリア粒子の表面に再付着される。キャリア粒子を処理する目的は、キャリア粒子の表面にある高エネルギーサイトを減少させることにあり、このことによって、付着力によってキャリア粒子の表面に付着した活性粒子の団粒が均等に分散されることになり、吸入に際しての活性粒子の分散が効率的となる。微粉末として突起を除去することにより、突起に伴う高エネルギーサイトを除去することができるが、キャリア粒子の表面は、例えば裂溝部のような、別の高エネルギーサイトがまだ残っている。これらのサイトは、突起を除去する場合に除去する必要はない。従ってこれらの高エネルギーサイトの数を減少させるのは極めて有効であろう。
表面から除去される粒子は、微小であり、かつ、熱力学的に不安定である。このため、キャリア粒子の表面の残りの高エネルギーサイトに吸引され、付着しやすい。さらに、添加剤が粒子の形態で添加される場合、添加剤粒子は、高エネルギーサイトに引き寄せられ、従って、飽和状態となる。上述したように、このような状況は非常に好ましいものである。
活性粒子を導入する際には、多くの活性サイトは、すでに占有されており、従って、活性粒子は、キャリア粒子表面の低エネルギーサイトを占有するか、あるいは添加剤の表面に付着することとなる。このことによって、吸入により形成される空気流によって活性粒子の放出が効果的にされ、このことによって、肺内における活性粒子の付着を増加させることができる。
“キャリア粒子”という用語は、微小粒子が付着される粒子のことをいう。例えば、粒子のサイズに関しては、上述したキャリア粒子には、これらの微小粒子は含まれない。
効果的なステップとしては、粉砕工程を挙げることができる。粉砕工程は、上記キャリア粒子の上記表面にある突起を微粉末として除去する。上記微粉末のほとんどは、上記キャリア粒子の表面の高エネルギーサイトに再付着する。
上記粉砕工程は、ボールミルで行われる。上記粒子は、プラスチックボール又はスチールボールで粉砕することが好ましい。ポリプロピレン材よりなるボールは、あまり粉砕が激しくなく、一方、スチール製のボールは、より粉砕が激しい。このミルは、約６０回転／分で回転される。
または、６０回転／分未満の速度で回転させてもよく、例えば、２０回転／分、６回転／分で回転させてもよい。ボールミルによる粉砕を低速度にすると、上記粒子の表面から粉末を徐々に除去して行くことができるとともに、キャリア粒子の破砕が低減できる。
粉砕時間を長くするか、激しい粉砕を行うと、粒子の断片が広がり、キャリア材の断片化した粒子の団粒化が起こることなる。
好適には、粒子は、少なくとも０．２５時間以上、好ましくは６時間以下で行われる。この時間は、粉砕ボールがプラスチック製であるときに好適であることが見いだされた。より密度の高いボール、あるいは他の材質を用いた場合、粉砕時間は短くなる。これとは別に、別の粉砕法、例えば、循環した低エネルギー流体を使用する粉砕方法も使用でき、その後篩わけやサイクロン処理（集塵処理）といった方法で上記粒子の表面から粉体を除去する。
上述したように、粒子のサイズは重要であり、上記方法は、さらに、上記処理ステップに先立って、粒子の好適なサイズ範囲を選択するステップを有することもできる。
上記処理の間は、キャリア粒子のサイズは実質的には変わらないことは前述したが、もちろん、キャリア粒子のサイズに、ある程度の小さな変化は生じている。何故なら、粒子の一部は、上記処理の間に微小粒子として除去されているからである。しかし、このサイズの変化は、従来の、より激しい粉砕における粒径の変化より小さいものである。上記処理で用いられる穏やかな粉砕を、以下、「磨食（corrasion）と記載する。
本発明によれば、さらに、ドライパウダー吸入器で用いられるパウダーの製造方法が得られ、この方法は、
（ａ）添加剤がキャリア粒子の表面に付着するように、ドライパウダー吸入器に好適に用いられるサイズのキャリア粒子を添加剤と混合するステップと、
（ｂ）キャリア粒子の実質的なサイズを変更させずに、微小粒子を上記キャリア粒子の表面から移動させるように、上記キャリア粒子を処理するステップと、
（ｃ）活性剤粒子がキャリア粒子及び／または添加剤の表面に付着するように、ステップ（ｂ）で得られた処理済みのキャリア粒子を活性剤と混合するステップと、を有する。
また、活性剤粒子と、添加剤と、キャリア粒子とを一つのステップで一度に混合することによっても、良好なドライパウダーを得ることができる。または、キャリア粒子を最初に活性剤と混合し、その後に添加剤を混合してもよい。
さらに、上記とは異なる順にステップを行うことで、良好なドライパウダーを得ることもできる。例えば、キャリア粒子、添加剤、及び活性剤粒子を混合した後に粉砕ステップを行ってもよい。または、キャリア粒子を最初に粉砕した後に、添加剤及び活性剤と混合してもよい。
本発明によれば、ドライパウダー吸入器に用いられるパウダーの製造方法も得られる、この方法では、上述した粒子ををそれぞれ製造し、これらの粒子を活性剤粒子と混合して、キャリア粒子及び／または添加剤の表面に活性剤を付着させる。
本発明によれば、ドライパウダー吸入器に用いられるパウダー内での、キャリア粒子の表面に付着した添加剤を、活性剤粒子を運ぶために使用することも提供される。この添加剤の使用は、吸入の間にキャリア粒子の表面からの活性粒子のリリースを促進するためである。このさい、パウダーは、吸入器の作動前においてキャリア粒子から活性剤粒子がリリースされにくいというものである。
以下、図面を参照して本発明の実施形態を説明する。
図１は、添加剤粒子を表面に有したキャリア粒子の断面図である。
図２は、ドライパウダー吸入器の斜視図である。
図３は、ツインステージインピンジャ（impinger）の断面図である。
図４ａ，ｂは、図１のキャリア粒子の粉砕処理の効果の説明図である。
試験例１
キャリア粒子は、下記に示す方法によって製造した。メグルラクトース（Meggle lactose）EP D３０（αラクトース１水和物：純粋の乳糖結晶）を用いた。ラクトースEP D３０は、スタート粒径サイズ範囲が好適であり、好適な流動特性を有している。
（ａ）  上記ラクトースを下記方法によって篩い分けして直径９０μｍから１２５μｍの範囲の粒子を含むサンプルを得た。続いて、約５００ｇのラクトースを、ステンレススチールを連続的に織ってその目開き径が、６３μｍ、９０μｍ、１２５μｍである篩を重ね合わせて機械的に４０分篩い分けした。上記篩を、ボウルトン回転ジャイレータ（Boulton rotary gyrator）上で高速で振動させて、上記篩のメッシュにラクトース粒子が付着するのを防止した。この篩分けプロセスを効率化するために、上記篩い分け工程を２０分行った後、上記篩い分けを停止し、上記篩をそれぞれ取り外して、上記篩上の粉体を除去した。この篩を刷毛で清掃し、粉体を除去して、また上記篩に粉体を追加した。この篩を積み重ねた後、再度取り付けて、上記篩い分けを再開した。これは、上記篩い分け工程を効率化するために行うものである。
１２５μｍメッシュを通過し、９０μｍメッシュ上に残った粉体から、上記ラクトースEP D３０のサンプル２００ｇを分取した。この粒子は、直径９０μｍから１２５μｍの直径を有しているものと考えられる。
（ｂ）    上記ステップ（ａ）で得られたラクトースサンプルを、ラクトース粒子を添加剤粒子と混合することにより処理した。２ｇのロイシン（Ｌ−ロイシン  α−アミノイソカプロン酸）を１９８ｇのラクトース粒子に添加し、ターブラミキサ（Turbula Mixer）内で約１５分混合した。
用いられたロイシン粒子のサイズは、重量比で９５％の粒子が１５０μｍ未満の直径を有するものであった。得られた混合物は、重量比で約１％のロイシンを含んでいた。
図１は、突起部２と裂溝部３とを有する粒子を図示したものである。添加剤粒子４は、粒子の表面に付着し、その殆どは、表面の活性サイトに付着している。図１に示されるように、添加剤粒子４は、キャリア粒子の表面の一部のみをカバーし、その他の部分は、露出したままになっている。
（ｃ）  ステップ（ｂ）で得られる、添加剤粒子を含んだラクトース粒子のサンプルを複数とり、それぞれ活性粒子と混合した。質量中央粒径（mass median diameter）が1.13μｍである０．１３２ｇのベクロメタゾンジプロピオネート（beclomethasone dipropionate:BDP）を、２９．８６８ｇの粒子にガラス乳鉢内で添加した。これにより、上記各サンプルから、それぞれ３０ｇの混合物を得た。
また、０．１３２ｇのＢＤＰを、ステップ（ａ）で得られた約９０μｍ〜１２５μｍの直径を有するラクトース粒子のサンプル２９．８６８ｇと混合した。ただし、このラクトース粒子には、添加剤粒子を含ませておらず、このサンプルを比較例とした。
（ｄ）    一日後、添加剤粒子を含んだキャリア粒子を収容した容器から、それぞれ２５ｍｇの混合物サンプルをいくつかとりだした。また、添加剤粒子含まないキャリア粒子を収容した容器から、それぞれ２５ｍｇの混合物サンプルをとりだした。各サンプルは、それぞれサイズ３のカプセルの一つに満たされた［サイズ３透明カプセル、Dabcaps社製（Hitchen,Herts.,英国）］。これらの満たされたカプセルは、一日放置され、蓄積された電荷を減衰させた。
（ｅ）  ラクトース粒子を添加剤粒子と混合したことによる効果を、ドライパウダー吸入装置及び薬物収集装置（pharmacopoeial apparatus）を用いて、生体外即ちｉｎ  ｖｉｔｒｏの状態における吸入器の性能の検証を行った。
（ｅ）（ｉ）  図２は、ロータハーラー（Rotahaler）（Glaxo社の商標）として知られているドライパウダー吸入器である。吸入器は、外側の円筒形バレル１１と内側の円筒形バレル１２とを有しておりこれらは、同一の曲率を有しており、内側バレル１２は、外側バレル１１の内側にぴったりとはまり込むようになっている。メッシュ１３は、内側バレル１２の一端に取り付けられており、マウスピース１４は、内側バレル１２の端部領域の回りに取り付けられている。
外側バレル１１は、その一端が端部領域１５によって閉塞されていて、その端部領域１５には、複数のインレットスロット１６と、開口１７とが設けられている。内側バレル１２はまた、その開口端まで延び、かつ、内側バレルに長手方向に沿ったフィン１８を有しており、このフィンは、内側バレル１２の内側面から径方向内側に向かって延ばされている。
上記装置を作動させるため、内側バレル１２は、外側バレル１１の開口端に挿入されて、マウスピースが外側バレル１１に当接され、かつ、内側バレルの開口端は、端部領域１５にくるようになっている。キャリア粒子と活性粒子との混合物を含有しているカプセル１９は、開口１７に挿入され、カプセル１９部分は、端部領域１５に保持されている。また、カプセル１９の部分は内側バレル１２内に延びている。外側バレルは、内側バレル１２に対して回転するようにされており、このため、フィン１８は、カプセルを壊すような配置とされている。患者は、マウスピース１４を通して吸入を行い、空気は、ロータハーラーへとインレットスロット１６を通して導入されるようになっている。カプセルの内容物は、内側バレル内部に放出されて、粉体が雲状となり、マウスピース１４を介して吸入が行われる。メッシュ１３により、大粒子又は破壊されたカプセルが吸入されないようになっている。
（ｅ）（ｉｉ）  図３は、ツインステージインピンジャ（twin stage impinger）（TSI）の概略図である。TSIは、２つのステージに分離された、経口吸入装置を試験するための装置である。装置の第１ステージは、図３のラインＡＢの右側にあり、上部呼吸管を模したものである。ラインの左側は、第二ステージであり、このステージは、下部呼吸管（呼吸道）を模したものである。
TSIは、吸入装置のマウスピースが収容されるように成形されたポリジメチルシロキサン製アダプタを有するマウス２１と、上部呼吸管をシミュレートするようになっている上部チューブ２２と上部インピンジャ２３と、上部インピンジャに蓄えられた液体２４と、下部呼吸管をシミュレートする下部チューブ２５と下部インピンジャ２６と、下部インピンジャに蓄えられた液体２７とを有している。下部インピンジャ２６は、アウトレットパイプ２８を介して、ポンプ２９に連結されていて、このポンプ２９は、TSI装置から、所定の速度で空気を吸引する。下部チューブ２５の基部は、液体２７の面と同一となるようにされていて、TSIを通して吸引される空気のすべてが、液体２７を通してバブルされるようになっている。上部インピンジャと下部インピンジャの双方に用いられる液体は、試験される薬剤に好適な溶媒である。
使用するに際しては、吸入器をTSIのマウス２１に設置する。次いで、TSIの第二ステージに連結されているポンプ手段２９を用いて空気を装置を通して流す。空気は、マウス２１から装置を通して吸引され、上部チューブ２２を通り、上部インピンジャ２３と下部チューブ２５とを介して下部インピンジャ２６へと流れ、そこで、空気は液体２７にバブルされた後、アウトレットパイプ２８を通して排出される。上部インピンジャ２３内の液体２４は、比較的大きな粒子をトラップしてTSIの第二ステージに粒子が達しないようにしている。呼吸管の肺にまで達することができるような微粉体は、TSIの第二ステージへと通過し、これらは、下部インピンジャ内の液体２７へと流れていくようになっている。
（ｆ）    下部インピンジャには３０mlの溶媒を入れ、上部インピンジャ２３には、７mlの溶媒を入れた。下部チューブ２５は、その下部端が、下部インピンジャ２６の水面と同一となるように配置されている。ポンプ２９は、装置内の空気流速が６０リットル／分となるように調節した。
ロータハーラーを、空のときに重量を測定した。製剤したカプセルを開口１７へと挿入して、そのときの吸入器の重量を測定した。吸入器のマウスピース１４を、TSIのマウス２１に連結して、外側バレル１１を回転させ、カプセル１９を破壊し、ポンプの電源を投入し１０秒間作動させた。その後ポンプのスイッチを止めて、TSIからロータハーラーを除去し、その重量を再度測定し、吸入器から失われた粉体量を計算した。
吸入器内に残留していた粉体を、溶媒によってフラスコ内に洗い出して２５ｍｌとした。TSIの第一ステージを形成している装置領域を第二のフラスコへと洗い出して、溶媒によって５０mlとした。TSIの第二ステージを形成している装置領域を第三のフラスコに洗い出して溶媒によって１００mlとした。
別のカプセルについても同様にして予め定めた無作為な順番で試験を行なった。
ＴＳＩのステージからの先出物を有する上記フラスコからの内容物を、高性能液体クロマトグラフィ（High Performance Liquid Chromatography：ＨＰＬＣ）分析を用いて分析してＢＤＰを測定した。その結果を、ＢＤＰをそれぞれ０．５μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ含む各標準溶液と比較した。
ＴＳＩの各ステージにおけるＢＤＰの百分率は、各カプセルの標準レスポンス（standard response）から算出され、上記処理済みのサンプルと未処理のサンプルとの各平均値が算出された。
（ｇ）  以下の表１に、ＴＳＩの各段から回収された各ＢＤＰ量（μｇ）を、処理済み及び未処理の材料の平均として示す。呼吸可能画分（装置から流出したドラッグ即ち薬剤の総量の百分率として算出される）は、患者の肺深部に到達することとなる活性剤粒子の比率の指標となる。括弧内の数値は、各値の変動係数を示す。
0004042867.tif 000002
上記結果から、ＴＳＩの第２ステージにデポジット即ち付着する活性剤粒子が増加していることが示される。このことは、ロイシンを含有するサンプルは、肺の深部へのデポジション量、即ち付着した量が増加していることを示す。
加えて、処理済みのサンプルでは、各値の変動係数が減少している。このことは、結果の再現性が向上していることを示す（管理される薬剤の投与均一性が向上していることに対応する）。
試験例２
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）    上記ステップ（ａ）で得られたラクトースサンプルを、ラクトース粒子を添加剤粒子と混合することにより処理した。４ｇのロイシン（重量比で９５％の粒子が、１５０μｍ未満の直径を有する）を１９６ｇのラクトース粒子に添加し、試験例１（ｂ）と同様に混合した。得られた混合物は、重量比で約２％のロイシンを含む。
（ｃ）  ステップ（ｂ）で得られた、添加剤粒子を含んだラクトース粒子を、上記試験例１（ｃ）と同様にして、活性剤粒子と混合した。その後、このサンプルを、試験例１の（ｄ）〜（ｆ）に記載されたのと同様にして分析した。
（ｄ）  以下の表２に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、添加剤を含んだ各サンプルの平均値として示し、また、呼吸可能画分も示した。添加剤を含まない試験例１のサンプルも比較のために示した。
0004042867.tif 000003
試験例３
（ａ）  試験例１（ａ）（ｂ）と同様にして、ラクトース及び重量比で１％のロイシン粒子を含んだキャリア粒子のサンプルを調製した。
（ｂ）  キャリア粒子の幾つかのサンプルを、２０ｍｍプラスチックボール１２００ｍｌを用いてそれぞれ磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー：Pascall Engineering Company）内で粉砕した。
いくつかのうちのサンプル（Ａ）は、６０ｒｐｍで３時間粉砕された。
サンプル（Ｂ）は、６０ｒｐｍで６時間粉砕された。
サンプル（Ｃ）及び（Ｄ）は、４０ｒｐｍでそれぞれ２時間、４時間粉砕された。
（ｃ）  上記サンプルは、試験例１に記載されたようにそれぞれ活性粒子と混合されて、添加剤が添加され、試験例１の（ｄ）〜（ｆ）に記載されたように分析がなされた。
（ｄ）  表３に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、粉砕された各サンプルの平均値として示し、また、呼吸可能画分も示した。粉砕を行わなかった（１％のロイシンが添加されている）試験例１のサンプルも比較のために示した。
その結果、呼吸可能画分が大きく増加し、このことにより、粉砕されたサンプルの肺深部への付着が増加することが示される。
0004042867.tif 000004
図４ａ，ｂに、粉砕ステップの効果を示す。粒子１の斜線領域５は、粉砕の間に微小粒子として粒子の表面から除去されたセクションを示す。図４ｂに示されるように、微小粒子６は、特に活性サイトにおいて、粒子表面に再付着されている。
ロイシンの存在下における粉砕粒子のフロー特性の効果を調べた。ラクトース（直径９０〜１２５μｍ）の以下に示されるサンプル（Ｘ）、（Ｙ）、（Ｚ）のカー指標（Carr's index）を測定した。
（Ｘ）  粉砕されたラクトース粒子を含む
（Ｙ）  粉砕前にロイシン１％が添加されているラクトース粒子を含む
（Ｚ）  ロイシン１％が添加されて粉砕されたラクトース粒子を含む
各場合において、粉砕は、２０ｍｍプラスチックボール１２００ｍｌを用いた磁器ボールミル内で行われた。このミルは、６０ｒｐｍで６時間回転された。
各サンプルの重量（Ｗ）に対するカー指標は、２５０ｃｍ3のシリンダに注いだときの体積（Ｖloose）と、サンプルのコンスタントな体積が得られるようにこのシリンダをタップしたときの体積（Ｖtap）とを測定することで得られる。このルーズな状態での密度とタップ後の密度とは、それぞれＷ／ＶlooseとＷ／Ｖtapで表され、カー指標は、以下の式により算出される。
カー指標（%）＝［（Tapped−loose）／Tapped］×100
各サンプルごとに測定されたカー指標を表４に示す。カー指標が２５以下であると、通常は、フロー特性が良好であることが示される。カー指標が４０以上であると、フロー特性が良くないことが示される。
0004042867.tif 000005
上記結果から、粉砕前にロイシンを添加することによって、フロー特性が向上する、即ちフローが良好となることが示される。
試験例４
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記ステップ（ａ）で得られたラクトース粒子を添加剤粒子と混合することにより処理してサンプルを得た。
１ｇの大豆レシチン粒子を１９９ｇのラクトース粒子に加えて、ターブラミキサ内で１５分混合した。得られた混合物は、重量比で約０．５％の大豆レシチンを含んでいた。
（ｃ）  ステップ４（ｂ）で得られた粒子の幾つかのサンプルを、それぞれ磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内で、２０ｍｍプラスチックボール１２００ｍｌとともに粉砕した。これらのサンプルは、それぞれ６０ｒｐｍで６時間粉砕された。
（ｄ）  ステップ４（ｃ）で得られた粉砕されたサンプルと、ステップ４（ｂ）で得られた未粉砕のサンプルを、それぞれ試験例１（ｃ）と同様にして活性剤と混合し、試験例１のステップ（ｄ）〜（ｆ）と同様にして分析した。
（ｅ）  表５に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、粉砕された各サンプル及び未粉砕の各サンプルの平均値として示し、また、呼吸可能画分も示した。
0004042867.tif 000006
その結果、呼吸可能画分が大きく増加し、このことにより、粉砕されたサンプルの肺深部への付着が増加することが示される。
試験例５
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記ステップ（ａ）で得られたラクトース粒子のサンプルを添加剤粒子と混合することにより処理してサンプルを得た。
２ｇのアスパルテーム（Aspartame）粒子を１９８ｇのラクトース粒子に添加し、ターブラミキサ内で１５分間混合した。得られた混合物には、重量比で約１％のアスパルテームが含まれていた。
（ｃ）  ステップ５（ｂ）で得られた粒子の幾つかのサンプルを、それぞれ磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内で、２０ｍｍプラスチックボール１２００ｍｌとともに粉砕した。これらのサンプルは、それぞれ６０ｒｐｍで６時間粉砕された。
（ｄ）  ステップ５（ｃ）で得られた粉砕されたサンプルと、ステップ４（ｂ）で得られた未粉砕のサンプルを、それぞれ添加剤を含む粒子のための試験例１（ｃ）と同様にして活性剤と混合し、試験例１のステップ（ｄ）〜（ｆ）と同様にして分析した。
（ｅ）  表６に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、粉砕された各サンプル及び未粉砕の各サンプルの平均値として示し、また、呼吸可能画分も示した。
0004042867.tif 000007
これらの結果から、呼吸可能画分は大きく増加しており、粉砕されたサンプルにおいて肺深部への付着が増加することが示される。
試験例６
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記ステップ６（ａ）で得られたラクトース粒子のサンプルを添加剤粒子と混合することにより処理して、このラクトース−添加剤粒子混合物を粉砕した。
５つの異なるアミノ酸を添加剤として含有する５つの異なるサンプルセットを、以下のようにして調製した。
１２００ｍｌの２０ｍｍプラスチックボールを有する２．５リットルの磁器ポット内で、２ｇの添加剤粒子をステップ６（ａ）で得られた１９８ｇのラクトース粒子に添加した。このポットは、磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕を行った。
ここで５つのアミノ酸は、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、及びバリンであった。
（ｃ）  ステップ６（ｂ）で得られた粉砕されたサンプルを、活性粒子と混合した。上記粒子２９．８６８ｇに対して、ガラス乳鉢（glass mortar）内で、０．１３２ｇのベクロメタゾンジプロピオネート（beclomethasone dipropionate：ＢＤＰ）が添加された。これにより、それぞれ３０ｇの混合物が得られた。
（ｄ）  上記ステップ６（ｃ）で得られたパウダーのサンプルは、試験例１の（ｄ）〜（ｆ）と同様にしてＴＳＩを用いて分析された。
（ｅ）  表７に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、それぞれ異なる５種の添加剤ごとに、その平均値として示す。また、呼吸可能画分も示した。比較対照のために、上記ステップ６（ａ）〜（ｃ）と同様であるが添加剤を一切添加しなかったサンプルを調製し、上記ステップ（ｄ）と同様にして分析を行った。
0004042867.tif 000008
試験例７
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記ステップ７（ａ）で得られたラクトース粒子のサンプルを、このラクトース粒子にアスパルテームの粒子を添加することで処理し、この混合物を以下のように粉砕した。
１２００ｍｌの２０ｍｍプラスチックボールを有する２．５リットルの磁器ポット内で、２ｇのアスパルテーム粒子をステップ７（ａ）で得られた１９８ｇのラクトース粒子に添加した。このポットは、磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕を行った。
（ｃ）  ステップ７（ｂ）で得られた粉砕されたサンプルを、試験例６のステップ（ｃ）に記載されたようにして活性粒子と混合した。
（ｄ）  得られたサンプルを、試験例１の（ｄ）〜（ｆ）と同様にしてＴＳＩを用いて分析された。
（ｅ）  表８に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、サンプルの平均値として示す。また、呼吸可能画分も示した。試験例６の対照例の結果も、比較のために示す。
0004042867.tif 000009
試験例８
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記ステップ８（ａ）で得られたラクトース粒子のサンプルを、大豆レシチンの粒子と混合することにより処理して、この混合物を以下のように粉砕した。
１２００ｍｌの２０ｍｍプラスチックボールを収容した２．５リットルの磁器ポット内で、１ｇの大豆レシチンをステップ８（ａ）で得られた１９９ｇのラクトース粒子に添加した。このポットは、磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕を行った。
（ｃ）  ステップ８（ｂ）で得られた粉砕されたサンプルを、試験例６のステップ（ｃ）に記載されたようにしてＢＤＰと混合した。
（ｄ）  得られたパウダーのサンプルは、試験例１のステップ（ｄ）〜（ｆ）と同様にしてＴＳＩを用いて分析された。
（ｅ）  表９に、上記ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ（μｇ）を、サンプル平均値として示す。また、呼吸可能画分も示した。比較対照のために、試験例６の対照例を比較のために示す。
0004042867.tif 000010
試験例９
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記ステップ９（ａ）で得られたラクトース粒子のサンプルを、このラクトース粒子と小麦スターチ（wheat starch）の粒子との混合を粉砕することにより処理した。ラクトースとスターチとの粉砕されたサンプルは、以下のように調製された。
１２００ｍｌの２０ｍｍプラスチックボールを収容した２．５リットルの磁器ポット内で、１ｇの小麦スターチを１９９ｇのラクトース粒子に添加した。このポットは、磁器ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕を行った。
（ｃ）  ステップ９（ｂ）で得られた粉砕された粒子を活性粒子と混合した。ガラス乳鉢内で、０．２６４ｇの硫酸サルブタモール（salbutamol sulphate：ＳＢＳ）を２９．７３６ｇの粒子に添加し、それぞれ３０ｇの混合物を得た。
（ｄ）  ステップ９（ｃ）で得られたパウダーのサンプルは、試験例１のステップ（ｄ）〜（ｆ）と同様にしてＴＳＩを用いて、ＳＢＳ量が分析された。
表９に、上記装置及びＴＳＩの各ステージから回収されたＳＢＳ量（μｇ）を、サンプル平均値として示す。また、呼吸可能画分も示した。なお、括弧内の数値は、変動係数を示す。
0004042867.tif 000011
試験例１０
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  以下の手法によって、ラクトースに対して添加剤を添加した。
１ｇの大豆レシチン（重量比で９０％の粒子が７１０μｍ未満）を１０ｇの水と１０ｇのｌＭＳ（または２０ｇの９５％エタノール）とともに溶解させ、高剪断ミキサ内で、この溶解液を１９９ｇのラクトース粒子に加えた。
この高剪断ミキサ内の混合物を４分間混合し、その後にトレイ上で４０℃で６時間乾燥させた。このパウダーは、５００μｍシーブによってふるい分けられた。得られたサンプルには、重量比で約０．５ｇの大豆レシチンが含まれていた。
（ｃ）  ステップ１０（ｂ）で得られたサンプルを、試験例１（ｃ）における処理された粒子と同様にして、それぞれ活性粒子と混合した。その後、試験例１の（ｄ）〜（ｆ）と同様にして分析を行った。
（ｄ）  表１１に、ＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ量（μｇ）を、サンプル平均値として示す。また、呼吸可能画分も示した。
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この結果から、ＴＳＩの第２ステージ内に付着する活性剤が増加していることが分かる。このことは、大豆レシチンを含有するサンプルの肺深部への付着量が増加することを示す。
試験例１１
添加剤としてロイシンを含む粉砕されたラクトースのサンプルを複数調製し、ＴＳＩを用いて試験することで、異なるドライパウダー吸入装置及び異なる薬剤を用いることによる効果を検査した。
（ｉ）  ラクトースとロイシンの粉砕されたサンプルを以下のようにして調製した。
（ａ）  直径が９０〜１２５μｍの範囲であるラクトース粒子のサンプルを、試験例１（ａ）と同様にして調製した。
（ｂ）  上記ステップ１１（ａ）で得られたラクトース粒子の各サンプルを、ラクトース粒子にロイシン粒子を添加し、この混合物を粉砕することによって処理した。
１２００ｍｌの２０ｍｍプラスチックボールを収容した２．５リットルのポット内で、２ｇのロイシン粒子を１９８ｇのラクトース粒子に添加した。その後、このポットは、ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕を行った。
（ｉｉ）  上記ステップ（ｉ）で得られた粒子のサンプルの幾つかを、それぞれ以下のようにして活性剤粒子と混合した。
（ａ）  ガラス乳鉢内で、０．１３２ｇのＢＤＰを２９．８６８ｇの上記粒子に添加して混合した。
（ｂ）  ガラス乳鉢内で、０．１３２ｇのＳＢＳを２９．８６８ｇの上記粒子に添加して混合した。
（ｃ）  ガラス乳鉢内で、０．２６４ｇのブデゾナイド（budesonede：ＢＳＮ）を２９．７３６ｇの上記粒子に添加して混合した。
（ｉｉｉ）  上記（ｉｉ）で得られたパウダーを、３種のそれぞれ異なる吸入装置を用いて、ＴＳＩを用いて分析した。
（ａ）  ロータハラー（Rotahaler：Glaxo社の商標）
上記パウダーは、試験例１のステップ（ｄ）〜（ｆ）に記載の通りに分析された。
（ｂ）  ディスクハラー（Diskhaler：Glaxo社の商標）
容器から、上記パウダーの幾つかのサンプルをそれぞれ２５ｍｇずつ分取した。各サンプルは、市販のベコディスク（Glaxo社の商標）のパッケージのブリスターポケット（blister pocket）を満たすように用いられた。このブリスターポケットからは、市販の製剤（formulation）を予め除去しておいた。上記のように、市販の製剤を除去して再度上記サンプルで満たされたブリスターパッケージは、一日放置されて、蓄積された静電気を減少させた。
ディスクハラー内のパウダーの性能を検証するために、ブリスターパッケージをディスクハラー内に挿入し、この吸入器のマウスピースをＴＳＩのマウスピースに接続した。その分析は、試験例１のステップｅ（ｉｉ）〜（ｆ）と同様にしてなされた。
（ｃ）  サイクロハラー（Cycloyaler：Pharbita B.V社製）
上記パウダーの分析方法は、試験例１の（ｄ）〜（ｆ）と同様にしてなされた。
（ｉｖ）  各吸入装置に対して、市販の活性剤の製剤であるＢＤＰ，ＳＢＳ，及びＢＳＮを用いて、分析を繰り返した（これらの製剤は、添加剤を含有せず、また、（ｉｉｉ）での試験におけるパウダーの処理も行われていない）。
ロータハラーにおいては、市販のＢＳＮ製剤は得られなかった。そこで、比較のために、上述のロイシンを添加しない場合のようにして製剤を調製した。
表１２に、上記装置及びＴＳＩのステージ１、２における活性剤（ＢＤＰ，ＳＢＳ，ＢＳＮ）量（μｇ）と、呼吸可能画分とを示す。なお、試験は繰り返し行い、その平均値を表に示した。括弧内の数値は、変動係数を示す。表１２の結果は、３種のそれぞれ異なる吸入装置であるロータハラー（ＲＨ）、ディスクハラー（ＤＨ）、サイクロハラー（ＣＨ）に関して示したものであり、市販の製剤（commercial formation：Ｃ）と添加剤としてロイシン（leucine）を含有するパウダー（Ｌ）とのそれぞれの結果を示す。
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試験例１２
Ｌ−ロイシンを添加剤としてそれぞれ異なる濃度で含有する、粉砕されたラクトースのサンプルを調製し、ＴＳＩを用いて、ロイシン含有量の変化による効果を検証した。
（ａ）  粒径が９０〜１２５μｍの範囲にあるラクトース粒子のサンプルを、上記試験例１（ａ）と同様にして複数調製した。
（ｂ）  上記（ａ）で得られたラクトース粒子の各サンプルを、このラクトース粒子をＬ−ロイシンの添加剤粒子とともに粉砕（磨食：corrading）して処理した。
３ｍｍのスチールボール２００ｍｌを収容した２．５リットルのポット内で、適切な重量の添加剤粒子を適切な量のラクトース粒子に加えた。このポットは、どの場合においても、その後ボールミル（パスカルエンジニアリングカンパニー）に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕された。
種々のサンプルにおけるＬ−ロイシン（添加剤粒子）及びラクトース粒子の重量を、以下の表１３に示す。
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各濃度に対して複数のサンプルを調製した。
一旦各サンプルを全６時間粉砕した後に、上記ポットを開いて、パウダーを定性的に評価して、ケーキング（caking）の状態を調べた。ケーキングは、ポットのエッジ部分周囲の非再分散性の材質が出現したことを示し、処理性に乏しい（poor processibility）、即ちプロセスに対する順応性に乏しいことを表すものである。Ｌ−ロイシンの濃度が１〜６％に増加するに従って、ケーキングが非常に大きく増大していた。実際、Ｌ−ロイシンが６％になると、劇的に高いレベルのケーキングが観察された。このことは、この混合物を商業ベースで効率的に製造することは困難であることを示す。
（ｃ）  上記（ｂ）で得られた、粉砕されたサンプルは、その後、試験例１と同様にして、ＢＤＰの活性剤粒子と混合された。
（ｄ）  上記（ｃ）で得られた、活性剤粒子と混合した粉砕された各サンプルは、その後試験例１のステップ（ｄ）〜（ｆ）と同様にして分析された。
以下の表１４に、上記装置及びＴＳＩの各ステージから回収されたＢＤＰ量（μｇ）を、繰り返し行われた試験の平均値として示す。また、呼吸可能画分もあわせて示した。さらに、括弧内の値は変動係数を示す。ロイシン粒子を添加しない点を除いては上述のように調製を行って得られた試料における結果を、対照例として示す。
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上記結果から、ロイシン濃度が２％を越えると、呼吸可能画分は増加しないことが示される。ロイシン濃度が２％を超えると、上述のようにプロセスに対する順応性に悪影響を与え、ロイシン濃度が５％を超えると、得られる混合物は、製造が非常に困難となる。
どのパウダーに対しても、分離（segregate）しやすいかどうかの傾向を定性的に評価することが可能である。以下にその方法を示す。
１３個のインターロッキング（interlocking）プラスチックシリンダ（内直径及び高さは、それぞれ約１ｃｍである）をタワーに組み立てた。その後、このタワーに注意深くドライパウダー製剤のサンプルを満たして、この試験用のパウダーの高さ約１３ｃｍのスタックを製造した。その後、最上部のシリンダの頂面の異なる点から、このパウダーの約２５ｍｇの二つのサンプル（正確な重量は化学天秤で測定した）を取り出した。これにより、このパウダーの初期均一性を評価した。この最上部のシリンダをスライドさせてスタックから除去した。この処理を、元のスタックの最初の１０のシリンダのそれぞれから二つのサンプルが取り出されるまで繰り返した。
試験例１（ｆ）に記載したＴＳＩ試験を用いたＨＰＬＣ分析と同様にして、各パウダーサンプルの薬剤成分を調べた。
初期均一性を決定するために、各サンプルにおける薬剤量（ＨＰＬＣにより決定される）を、パウダーサンプルの元の記録された重量に対する百分率で表した。各サンプルにおける値の平均をとって平均値とし、その後に変動係数（coefficient variation：ＣＶ）を算出した。この変動係数は、混合物の均一性の直接的な指標となる。
その後、ドライパウダー薬剤の均一性における薬学上の処理条件効果をシミュレートするために、以下の処理を行った。
上述のようにドライパウダー試薬で満たされたシリンダタワーは、電気振動ユニットに取り付けられた。この振動ユニットは、振動数５０Ｈｚ、振動強さ（vibrational amplitude）２ｇに設定された。その後、振動ユニットのスイッチを入れて試験パウダーを収容したシリンダを垂直に１５分間振動させた。この振動を行う目的は、商用のプロセスの完に行われる処理に、このパウダーをさらすためである。その後、ドライパウダー薬剤の均一性を、上述したのと実質的に同様の処理を行うことで評価した。
振動処理を行うことで、パウダーがコンパクトになり、その結果、例えば、３つの最上部のシリンダからは振動の終了後にパウダーがなくなって空になっていた。これらの空になったシリンダは、統計解析には含まれない。
パウダーは、その振動後の均一性が振動係数百分率として測定された。振動係数が５％未満であれば許容範囲にあるとみなされ、２％であれば優れているといえる。
試験例１３
Ｌ−ロイシンやステアリン酸マグネシウム（magnesium stearate）とを添加剤として含むパウダーのサンプルを調製し、このパウダーの分離傾向を定性評価した。その方法の詳細を以下に示す。
（ａ）  試験例１（ａ）と同様にして、直径９０μｍから１２５μｍの範囲のラクトース粒子を得た。
（ｂ）  上記（ａ）で得られたラクトース粒子のサンプルを、このラクトース粒子と第３成分の添加剤粒子とを粉砕することによって処理した。この添加剤粒子は、Ｌ−ロイシンまたはステアリン酸マグネシウムよりなるものである。
２００ｍｌの３ｍｍスチールボールを収容した２．５リットルの磁器ポット内で、適切な重量のラクトース粒子に対して添加剤を適切な量だけ添加した。いずれの場合においても、このポットは、ボールミル（パスカル  エンジニアリング  カンパニー）内に配置され、６０ｒｐｍで６時間粉砕が行われた。
種々のテストにおける添加剤粒子の重量及びタイプと、ラクトース粒子の重量の詳細を以下の表１５に示す。
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（ｃ）  上記（ｂ）で得られた粉砕されたサンプルを、試験例１（ｃ）と同様にしてＢＤＰ活性粒子と混合した。
（ｄ）  その後、プラスチックシリンダのタワーを用いて、ステップ（ｃ）で得られたパウダーに対して上述した分離テストを行った。各パウダーにおいて、最初のテストでは、上記振動処理は行わず、これにより初期均一性を測定した。この初期均一性は、変動係数の百分率として示される。次に、振動後の均一性を測定するために、振動処理後に第２の試験が行われた。振動後の均一性も、変動係数の百分率として示される。
第２の試験においては、上部の３つのシリンダは、振動後に実質的に空になり、従って、これらのシリンダは、統計分析においては除外した。これらの試験の結果を表１６に示す。
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１．５％のステアリン酸マグネシウム混合物は、初期均一性が低く、従って、この混合物の分離性が非常に大きいことが示される。振動後の結果から、商用プロセスにおいてさらされることになる条件においては、混合物の安定性に乏しいことが示される。従って、ステアリン酸マグネシウムを１．５％添加した場合、呼吸可能画分に関しては満足し得る結果が得られているものの、商業ベースにおける環境で均質性を保つという、その他の重要な要求を満たすには至っていないことが示される。
一方、ロイシンを含有するパウダーは、呼吸可能画分が満足し得るレベルにあり、なおかつ、初期均一性に優れ、集中的に振動にさらされても、優れた均一性が維持されていることが示される。
【図１】
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【図４ａ】
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【図４ｂ】
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【図２】
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【図３】
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