(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表記される５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル（５,１５−ｄｉａｃｅｔｙｌ−３−ｂｅｎｚｏｙｌｌａｔｈｙｒｏｌ）化合物。
【化１】
0004063496.tif 000011
【請求項２】
化学式１の５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル化合物を、組成物総量に対して０.００００１〜１０.０重量％含む皮膚美白用組成物。
【化２】
0004063496.tif 000012
【請求項３】
前記５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロルが、続隨子（Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ ｌａｔｈｙｒｉｓ Ｌ.）からメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、ヘキサン、シクロヘキサンおよび石油エーテルからなる群から選択される１種以上の溶媒を用いて液−液抽出し、シリカゲルまたは活性アルミナから選択される充填物でクロマトグラフィして得たものであることを特徴とする請求項２に記載の皮膚美白用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル（５,１５−ｄｉａｃｅｔｙｌ−３−ｂｅｎｚｏｙｌｌａｔｈｙｒｏｌ：ＥＬ−１）化合物およびこれを含有した皮膚美白用組成物に関し、さらに詳しくは、５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル化合物を含有することによってしみまたはそばかすを改善するだけでなく、皮膚美白剤として使用が可能な医薬品および化粧品組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
白くきめ細かい皮膚は多くの人々の願望である。人の皮膚の色は皮膚内のメラニン（ｍｅｌａｎｉｎ）の濃度と分布によって遺伝的に決められるが、太陽の紫外線や疲労、ストレスなどの環境的または生理的条件によっても影響を受ける。メラニンはアミノ酸の一種であるチロシン（ｔｙｒｏｓｉｎｅ）にチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）という酵素が作用してドーパ（ＤＯＰＡ）やドーパキノン（ｄｏｐａｑｕｉｎｏｎｅ）に変えた後、非酵素的酸化反応を経て生成される。ところが、メラニンが生成される経路は知られているが、メラニン合成を誘導するメカニズムあるいはチロシナーゼが作用する以前の段階については現在まで詳細には知られていない。
【０００３】
従来は、ハイドロキノン（ｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）やアスコルビン酸（ａｓｃｏｒｂｉｃ ａｃｉｄ）、コウジ酸（ｋｏｊｉｃ ａｃｉｄ）、グルタチオン（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ）などのようにチロシナーゼの活性を阻害する物質を軟膏や化粧料に配合して、皮膚美白やしみ、そばかす改善のために用いてきた。しかし、ハイドロキノンの場合、美白効果は認められるが皮膚刺激作用が激しいため、きわめて制限された量しか用いることができないという問題点がある。アスコルビン酸は酸化しやすいため、これを配合した化粧料は変色、変臭するという問題点があり、グルタチオン、システインなどのチオール（ｔｈｉｏｌ）系化合物は経皮吸収において問題点があるだけでなく、特異な不快臭があり、配糖体およびその誘導体は極性が高いため、化粧料の配合成分としては不適当であるという問題点がある。
【０００４】
また、皮膚美白用組成物として胎盤抽出物などを用いる場合もあるが、これらは臨床試験で美白効果が充分でないという問題点があるなど、従来知られている数多くの美白剤は毒性や安定性に問題があって使用に限界があった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は前記のような問題点を解決するためのものであって、その目的は、生体に安全でありかつメラニン生成抑制効果および美白効果の高い皮膚美白用組成物を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
前記目的を達成するために本発明は、メラニン生成抑制効果および美白効果が高い下記化学式１の５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル（５,１５−ｄｉａｃｅｔｙｌ−３−ｂｅｎｚｏｙｌｌａｔｈｙｒｏｌ：ＥＬ−１）化合物を含む皮膚美白用組成物を提供する。
【０００７】
【化３】
0004063496.tif 000002
【０００８】
本発明およびその付随する利点の多くのさらなる充分な評価は、本発明が添付の図面とともに参酌され、以下の詳細な説明を考慮して一層理解されることから容易に明らかとなるであろう。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下の記載においては本発明を実施する本発明者等が試みた最良形態のものを例示することによって、単に本発明の好ましい実施態様のもののみが記され説明されている。容易に理解されることであるが、本発明は様々な観点から変形することは可能であるが、それらは全て本発明と別個のものではない。したがって、図面および説明内容はその本質において例示的なものであり、限定的なものではないと考えられるべきである。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１０】
本発明者等は、メラニン合成の誘導自体を抑制する物質までもスクリーニングできるマウスのB-16メラノーマ（ｍｅｌａｎｏｍａ）細胞を用いて、天然に自生する動植物を対象として新しい美白剤を開発しようと研究を繰り返した結果、ＥＬ−１が非常に強力なメラニン生成抑制効果と美白効果があることを明らかにして本発明を完成した。
【００１１】
続隨子（ホルトソウ、Ｅｕｐｈｏｒｂｉａ ｌａｔｈｙｒｉｓ Ｌ.）は２年生植物標本であり、本発明では続隨子の種子を用いた。続隨子抽出物の効能としては、水腫、流行性浮腫などの症状に効果があることが東醫寶鑑に記載がある。また、続隨子抽出物の美白効果に関して日本国特開平０８-１７５９５４号公報に開示されたことがあるが、アレルギー反応などの毒性があるという報告例もあり、該抽出物を直接皮膚の外用製剤として用いるには無理がある（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｈｅｒｂｓ、Ｊａｍｅｓ Ａ、Ｄｕｋｅ.、ＣＲＣ ｐｒｅｓｓ、１８９ｐ、１９８５）。
【００１２】
本発明の皮膚美白用組成物は５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル（ＥＬ−１）化合物を含む。５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル（ＥＬ−１）に関しては、３番位置にアセチル基が結合し５番位置にベンゾイル基が結合しているＥＬ−１の構造異性体に関する論文（日本薬学雑誌９５（６）、７６０−７６３、１９７５）と、構造が明確に同定されていない、つまり３番位置と５番位置の誘導体に関する正確な同定なしに発表された論文（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２９（６）、２０２５−２０２６、１９９０）とがあるが、本発明のＥＬ−１では３番位置にベンゾイル基が結合し、５番位置にアセチル基が結合しているという点から従来の論文として発表された化合物と本発明のＥＬ−１とは明白な相違があるといえる。
【００１３】
したがって、本発明のＥＬ−１は分子式がＣ31Ｈ38Ｏ7であるラチランジテルペン（ｌａｔｈｙｒａｎｅ ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ）の一種であり、これまでに単離されたことはない。本発明のＥＬ−１は植物に存在するものだけでなく、化学的に合成されたものも用いることができる。本発明のＥＬ−１は、量の差異はあるが続隨子以外の植物にも含まれており、本発明はこの植物に限られない。
【００１４】
本発明では、様々な植物のうちで多量含んでいる続隨子抽出物からＥＬ−１を精製した。このような精製過程でメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトン、エーテル、ベンゼン、クロロホルム、ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテルなどの溶媒を用いて液−液抽出を行なった後、シリカゲル、活性アルミナなどの合成樹脂を充填するカラムクロマトグラフィおよび高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）などで精製したが、精製方法がこれに限られるわけではない。
【００１５】
次に本発明のＥＬ−１を抽出および精製する方法について詳細に説明する。
生薬として市販されている続隨子を購入して細かく粉砕した後、粉砕物をその乾燥重量当たり５〜２０容量％となるように水の中に入れ、炭素数１〜４の無水または含水低級アルコール、酢酸エチル、ヘキサンまたはクロロホルムを加え、還流冷却器が付けられた抽出器で５０〜１００℃の温度で１〜５時間加熱して抽出する。抽出物を２００〜４００メッシュ濾過布で濾過した後、残留物を同じ方法で更に１回抽出する。抽出液を合せて減圧濃縮した後、濃縮抽出液を凍結乾燥または噴霧乾燥して乾燥抽出物を収得する。
【００１６】
前記乾燥された続隨子抽出物を水に懸濁させ、同一容量のヘキサンを加え液−液抽出して油相としてヘキサン分画を得る。または、続隨子を細かく粉砕し、常温〜２５０℃の範囲の温度で圧搾、濾過して続隨子のオイルを得る。前記で得た油相のヘキサン分画や圧搾濾過して得たオイルに、オイルの０.２〜１０倍量の溶媒を加える。溶媒はエタノール、メタノール、アセトニトリル、精製水、あるいはそれらの混合物であってもよい。溶媒は各種割合で添加してもよく、液−液抽出して溶媒可溶性の分画を得る。これをカラムクロマトグラフィを用いてＥＬ−１を単離し、これを再び高速液体クロマトグラフィを用いて精製する。単離された精製物質を質量分析および核磁気共鳴スペクトルによってその構造を分析して、前記精製物質がＥＬ−１であることを確認する。
【００１７】
前記精製物の分子量は、図１の質量分析スペクトルで５２３の［分子量＋Ｈ］+ピークと５４５.３の［分子量＋Ｎａ］+ピークから、５２２であることを確認した。
図２は、水素核磁気共鳴スペクトルで５.８２（ｄｄ）ｐｐｍと６.２１（ｄ）ｐｐｍのピークがそれぞれ前記化学式１の３番水素ピーク、５番水素ピークであると同定した結果を示すものである。図２のピークの同定は、１−Ｈ：３.５２（ｍ）、１.７０（ｍ）、２−Ｈ：２.３５（ｍ）、３−Ｈ：５.８２（ｄｄ）、４−Ｈ：２.９０（ｄｄ）、５−Ｈ：６.２１（ｄ）、７−Ｈ：２.１０（ｍ）、２.０６（ｍ）、８−Ｈ：１.９４（ｍ）、１.７５（ｍ）、９−Ｈ：１.２６（ｍ）、１１−Ｈ：１.４１（ｄｄ）、１２−Ｈ：６.５４（ｄ）、１６−Ｈ：０.９４（ｄ）、１７−Ｈ：５.０１（ｓ）、４.７８（ｓ）、１８−Ｈ：１.１７（ｓ）、１９−Ｈ：１.１７（ｓ）、２０−Ｈ：１.７２（ｓ）、２１−Ｈ：２.２１（ｓ）、２２−Ｈ：１.８３（ｓ）、２７−Ｈ：８.０３（ｄ）、２８−Ｈ：７.４５（ｔ）、２９−Ｈ：７.５７（ｔ）、３０−Ｈ：７.４５（ｔ）、３１−Ｈ：８.０３（ｄ）を示した。
【００１８】
図３は、炭素核磁気共鳴スペクトルで８０.９ｐｐｍと６５.４ｐｐｍを各々３番と５番の炭素ピークであると同定した結果であり、図３のピークは、Ｃ：４８.５、２−Ｃ：３７.９、３−Ｃ：８０.８、４−Ｃ：５２.２、５−Ｃ：６５.４、６−Ｃ：１４４.５、７−Ｃ：３４.９、８−Ｃ：２１.６、９−Ｃ：３５.４、１０−Ｃ：２５.３、１１−Ｃ：２８.５、１２−Ｃ：１４６.５、１３−Ｃ：１３４.２、１４−Ｃ：１９６.７、１５−Ｃ：９２.５、１６−Ｃ：１４.２、１７−Ｃ：１１５.４、１８−Ｃ：２９.０、１９−Ｃ：１６.８、２０−Ｃ：１２.４、２１−Ｃ：２２.０、２２−Ｃ：２０.９、２３−Ｃ：１６９.７、２４−Ｃ：１７０.１、２５−Ｃ：１６６.１、２６−Ｃ：１３０.１、２７−Ｃ：１２９.６、２８−Ｃ：１２８.３、２９−Ｃ：１３３.１、３０−Ｃ：１２８.３、３１−Ｃ：１２９.６であると同定された。
【００１９】
このような方法で製造された続隨子抽出物であるＥＬ−１で、マウスのB-16メラノーマ細胞を処置すると、強力なメラニン合成阻害効果を示した。また、前記のようにして得られたＥＬ−１を含有する皮膚外用軟膏またはローションなどのいろいろな化粧料を製造して人の皮膚に塗布すると皮膚美白効果が優れているだけでなく、副作用も発生しない。これよりＥＬ−１は安全であり、非常に優れた、しみやそばかすの改善および皮膚美白作用をもつ物質であることがわかる。
【００２０】
皮膚外用軟膏または化粧料に含まれるＥＬ−１の含量は、組成物総量に対して乾燥重量で０.００００１〜１０.０重量％、好ましくは０.００１〜１.０重量％である。ＥＬ−１の含量が組成物総量に対して乾燥重量で０.００００１重量％未満であると皮膚美白などの明確な効果が現れず、１０.０重量％を超過すると含有量の増加による明確な効果の増加が現れなかった。
【００２１】
【実施例】
次に、本発明の理解を助けるために実施例および比較例を提示する。しかし、下記の実施例は本発明をより容易に理解するために提供されるものであり、本発明が下記の実施例に限られるわけではない。
【００２２】
【実施例１】
続隨子粉砕物１００ｇを８０％メタノール溶液５００ｍｌに入れ、冷却コンデンサーが付けられた還流抽出器で約３時間沸騰させて抽出した後、３００メッシュの濾過布で濾過し、残留物を同じ方法でもう１回抽出した。各々の抽出液を合せて常温にてワットマン２番濾過紙で濾過することにより不溶性物質を除去した後、冷却コンデンサーが付けられた蒸留装置で６０℃にて減圧濃縮した。濃縮物を精製水３００ｍｌに懸濁した後、ヘキサン３００ｍｌを加えよく振ってヘキサン溶解物を得た。このヘキサン溶解物をシリカゲルカラムでクロマトグラフィして有効成分を含有する分画４５０ｍｇを得て、その分画を再び高速液体クロマトグラフィで精製してＥＬ−１、３５０ｍｇを単離した。
【００２３】
【実施例２】
続隨子を購入し、その粉砕物１００ｇを常温で圧搾、濾過して続隨子のオイル３５ｍｌを得た。このようにして得たオイルにエタノール３５ｍｌを加えて、混合物の液−液抽出により得たエタノール分画を、シリカゲルカラムでクロマトグラフィして有効成分を含有する分画３００ｍｇを得た。この分画を再び高速液体クロマトグラフィで精製してＥＬ−１、２００ｍｇを単離した。
【００２４】
【実施例３】
抽出溶媒として１００％のエタノール溶液５００ｍｌを用いることを除けば、実施例１と同様な方法で抽出を行ってＥＬ−１、３４０ｍｇを得た。
【００２５】
【実施例４】
抽出溶媒として９９.９％のクロロホルム溶液５００ｍｌを用いることを除けば、実施例１と同様な方法で抽出を行ってＥＬ−１を３００ｍｇ得た。
【００２６】
【実施例５】
抽出溶媒として９９.９％のｎ−ヘキサン溶液５００ｍｌを用いることを除けば、実施例１と同様な方法で抽出を行ってＥＬ−１を３１０ｍｇ得た。
【００２７】
【実施例６】
続隨子を購入し、実施例２と同様な方法で得た続隨子のオイル３５ｍｌに８０％のエタノール溶液１００ｍｌを加えた後、液−液抽出で得たエタノール分画をシリカゲルカラムでクロマトグラフィして、有効成分を含有する分画２３０ｍｇを得た。前記分画を再び高速液体クロマトグラフィで精製してＥＬ−１を１７０ｍｇ単離した。
【００２８】
【実施例７】
続隨子を購入し、その粉砕物１００ｇを１５０℃で圧搾、濾過して続隨子のオイル４０ｍｌを得た。前記で得られたオイルに９０％のアセトニトリル２００ｍｌを加えた後、液−液抽出で得たアセトニトリル分画をシリカゲルカラムでクロマトグラフィして、有効成分を含有する分画４７０ｍｇを得た。前記分画を再び高速液体クロマトグラフィで精製してＥＬ−１を３４０ｍｇ単離した。
【００２９】
【実験例１】
ＥＬ−１の細胞レベルでのメラニン生成阻害効果の試験
前記実施例１〜７で得られたＥＬ−１をマウスのB-16メラノーマ細胞の培養液に添加して、細胞レベルでの美白効果を次のように実験した（Ｌｏｔａｎ Ｒ.，Ｌｏｔａｎ Ｄ.Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ. ４０：３３４５−３３５０、１９８０）。実施例１〜７で得られたＥＬ−１を最終濃度がそれぞれ１μｇ／ｍｌ、５μｇ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌになるようにして、マウスのＢ−１６メラノーマ細胞の培養液に添加し、３日間培養した。その細胞にトリプシンを加え、溶液を培養容器から取り出して遠心単離した後、メラニンを抽出した。抽出されたメラニンに水酸化ナトリウム溶液（１Ｎ濃度）１ｍｌを加え、約１０分間沸騰させてメラニンを溶かした。分光光度計で４００ｎｍでの吸光度を測定し、生成メラニン量を、単位細胞数当りの吸光度、すなわちＡ400／１０6細胞として示す方式で試験を行った。このような試験を３回繰り返し、その平均値を用いて対照群に対する相対的メラニン生成量を阻害率（％）として計算し、その結果を下記の表１に示した。
【００３０】
【表１】
0004063496.tif 000003
【００３１】
前記表１に示したように、実施例１〜７によって得られたＥＬ−１は、従来知られている美白物質であるハイドロキノンと比較すると、培養されたマウスのメラノーマ細胞に対して同等のメラニン生成抑制能があることがわかる。また、ハイドロキノンは低濃度で強力なメラニン生成抑制能を示す反面、その高い細胞毒性のため１０μｇ／ｍｌを超える濃度では実験を行うことができない。これに反し、ＥＬ−１は５０μｇ／ｍｌ濃度でも細胞毒性が現れないとともにハイドロキノンよりも高いメラニン生成抑制効果を有する。このことからみると、これは本発明がしみやそばかすの改善にも皮膚美白にも非常に有用であるということを示す。
【００３２】
【製造例１および比較例１】
下記の表２に示した各々の成分を下記表２に示した比率で混合して皮膚外用軟膏を製造した。ここで、ＥＬ−１は各々実施例１〜７から得られたものである。
【００３３】
【表２】
0004063496.tif 000004
【００３４】
【製造例２および比較例２】
下記の表３に示した各々の成分を下記表３に示した比率で混合して化粧クリームを製造した。ここで、ＥＬ−１は各々実施例１〜７から得られたものである。
【００３５】
【表３】
0004063496.tif 000005
【００３６】
【製造例３および比較例３】
下記の表４に示した各々の成分を下記表４に示した比率において混合して軟性化粧水（ローション）を製造した。ここで、ＥＬ−１は各々実施例１〜７から得られたものである。
【００３７】
【表４】
0004063496.tif 000006
【００３８】
【製造例４および比較例４】
下記の表５に示した各々の成分を下記表５に示した比率で混合して化粧エッセンスを製造した。ここでＥＬ−１は各々実施例１〜７から得られたものである。
【００３９】
【表５】
0004063496.tif 000007
【００４０】
【製造例５および比較例５】
下記の表６に示した各々の成分を下記表６に示した比率で混合して、化粧用顔パックを製造した。ここでＥＬ−１は各々実施例１〜７から得られたものである。
【００４１】
【表６】
0004063496.tif 000008
【００４２】
【製造例６および比較例６】
下記の表７に示した各々の成分を下記表７に示した比率で混合して栄養化粧水（ローション）を製造した。ここで、ＥＬ−１は各々実施例１〜７から得られたものである。
【００４３】
【表７】
0004063496.tif 000009
【００４４】
【実験例２】
被験者として健康な男女２０名を選定して、両腕の下部を直径７ｍｍの大きさの孔を６個ずつ２列に配置したアルミニウムフォイルのマスクで覆った後、腕から１０ｃｍの距離で「オリル日光模擬装置」（ＯＲＩＥＬ Ｓｏｌａｒ Ｓｉｍｕｌａｔｏｒ １０００ワット）で６０ｍＪ／ｃｍ2の光量を照射した。照射する３日前から照射後の３週間まで１日２回ずつ、製造例１〜６および比較例１〜６によって製造されたＥＬ−１を含有した試料とＥＬ−１を含有しない試料とを、一対の指定された穴の位置で被験者の皮膚に塗布した。ここで、製造例５および比較例５の顔用パックを処方した場合は、塗布した１５分後に剥した。前記の穴各々に対して製造例と比較例の色素沈着度を肉眼で観察することにより判定し、その判定結果を下記の表８に示した。
【００４５】
【表８】
0004063496.tif 000010
【００４６】
前記表８からわかるように、製造例１〜６によって製造されたＥＬ−１を含有した美白軟膏および化粧料は被験者２０名のうち少くとも１０名に対して美白効果を現した。とくに、多量のＥＬ−１が適用された製造例１と比較例１の比較実験では３５％が明確な色素沈着阻害効果を現した。また、皮膚内でいかなる有害な副作用も現れなかった点から、ＥＬ−１は安全でありかつしみやそばかすの改善に優れた効果がある皮膚美白剤であることがわかる。
【００４７】
【発明の効果】
本発明のＥＬ−１を含有する皮膚美白組成物は、配合時の溶解性および保存安定性が優れており適用も容易であるため、高濃度で配合できるという長所があるだけでなく、優れたメラニン生成抑制効果および色素沈着阻害効果を現すことから、しみまたはそばかす改善効果を現し、有害な副作用も発生しないので安全性も優れている。
【００４８】
本発明を好ましい実施例に沿って詳細に説明してきた。この技術に熟達した当業者にとっては、これらの変更、置換は可能であるが、それらもここに添付の特許請求の範囲に記載の本件発明の精神と範囲内にあると認められる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  ＥＬ−１（５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル）の質量分析スペクトルである。
【図２】  ＥＬ−１（５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル）の水素核磁気共鳴スペクトルである。
【図３】  ＥＬ−１（５,１５−ジアセチル−３−ベンゾイルラチロル）の炭素核磁気共鳴スペクトルである。
【図１】
0004063496.tif 000013
【図２】
0004063496.tif 000014
【図３】
0004063496.tif 000015