(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セトロレリックスが（Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）１，Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）２，Ｄ−Ｐａｌ（３）３，Ｄ−Ｃｉｔ６，Ｄ−Ａｌａ１０）−ＬＨＲＨである、無菌セトロレリックス酢酸塩凍結乾燥物の製造法において、セトロレリックスを３０％ｖ／ｖの酢酸水中に１：１００〜１００００重量／重量の割合で溶解させ、溶液を注射用水で希釈し、マンニトールを添加し、溶液を無菌濾過し、注射バイアルに充填し、凍結乾燥させることを特徴とする、無菌セトロレリックス酢酸塩凍結乾燥物の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、ペプチド凍結乾燥物及び該乾燥物を含有する不妊症治療及び性腺保護用薬剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
セトロレリックス（Ｃｅｔｒｏｒｅｌｉｘ）は、末端酸アミド基を有し、酢酸塩として使用されるデカペプチドである。その合成及び若干の薬理学的作用はヨーロッパ特許出願第２９９４０２号明細書に記載されている。該作用物質は０．１〜２０ｍｇの用量で皮下的に適用できるといわれている。デカペプチドの水溶液は不安定であり、最終容器中での加圧滅菌は不可能である。デカペプチドは薬局方常用の滅菌下では分解する傾向がある。従って注射可能の溶液を得るためには、凍結乾燥物を開発する必要があった。しかし凍結乾燥すべき溶液中の該作用物質の量は極めて少ないので、低い作用物質濃度の場合には助剤を含まない溶液の乾燥後にアンプルのガラス壁にふわふわした綿毛状物しか形成されず、このものは滅菌用水蒸気流と一緒にこのガラス瓶から取り出される。それゆえに、安定な塊を形成する骨格形成剤を使用する必要がある。高い濃度の場合には、この助剤を省略することができる。骨格形成剤としては、次の助剤が該当する：ヘキシット、特にマンニット、グルシット、ソルビット例えばＤ−ソルビット、ズルシット（Ｄｕｌｃｉｔ）、アリット（Ａｌｌｉｔ）、アルトリット（Ａｌｔｒｉｔ）例えばＤ−及びＬ−アルトリット、イジット（Ｉｄｉｔ）例えばＤ−及びＬ−イジット、これらの光学活性形（Ｄ−及びＬ−形）及び相応のラセミ形。特に、Ｄ−マンニット、Ｌ−マンニット及びＤＬ−マンニットのようなマンニット、ソルビット及び／又はズルシットを使用し、その中でもＤ−マンニットが好ましい。またヘキシットとしては、前記ヘキシットの混合物、例えばマンニット及びソルビット及び／又はズルシットの混合物も使用することができる。ズルシットは、例えばマンニットよりも水溶性が小さいので、水溶液中のズルシット含分は３重量％を越えてはならない。これに対してマンニット及びソルビットは例えばすべての割合で混合することができる。
【０００３】
ヘキシットのほかに、他の常用の薬剤学的助剤も加えることができる、すなわち例えばアミノ酸、例えばアラニン、グリシン、リシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ロイシン；ラクトース、ポリビニルピロリドン、グルコース、フルクトース、アルブミン及び当量の骨格形成物質である。さらに骨格形成剤としては、尿素及び塩化ナトリウムも使用することができる。凍結乾燥用に使用される溶液中のこれらの物質の全量は、セトロレリックス１重量部に対して、例えば０〜１６．９重量部、例えば０．１〜７重量部である。完成凍結乾燥物中では、これらの助剤の全量は、ヘキシット１重量部に対して最高１６．９重量部であってよい。個々の場合には、該助剤の量は存在するヘキシットの量により決まる、換言すれば完成凍結乾燥物中のヘキシット及び他の該助剤の全量が、セトロレリックス１重量部に対して最高１７重量部以下であるようにする。従って凍結乾燥物中にヘキシットが０．１重量部しか存在しない場合には、該助剤は１６．９重量部まで存在することができる。またヘキシットがセトロレリックス１重量部に対して例えば８．５重量部存在する場合には、他の助剤の量は８．５重量部まで可能である。
【０００４】
しかし、凍結乾燥物を開発する作業の間に、作用物質が加工の際予想できないほど極めてさまざまに挙動することを確認せざるをえなかった。初めの溶液は良好な成績をもたらしたが、やがて、無菌濾過の際種々の難点が発生する結果、欠陥バッチが生じることが判明した。
【０００５】
文献、例えばＰｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓａｒｃｈ，１２５８−１２６３（８），１９９１；Ｄａｔｈｅ，Ｍ：Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｓ．３４４−３４９  （３６），１９９０；Ｓｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  １６−２２，１９９１から、オリゴペプチド、特に末端酸アミド官能基を有するものがゲルを形成する性質があることが公知である。この事実は、無菌濾過の際濾過速度から認識できるし、このような溶液の粘度は既に感覚刺激的（ｏｒｇａｎｏｌｅｐｔｉｓｃｈ）にさえ認められることが多い。無菌濾過器上にゼリー状の層が残存する。従って正確に限定された作用物質の含量を有する薬剤を製造することはもはや不可能である。
【０００６】
表１には、初めの１１種の溶液の種々の実験結果を記載してある。
【０００７】
作用物質の含量は１００％〜３６％の間で変動する。
【０００８】
【表１】
0004033919.tif 000002
【０００９】
上記のゲル形成を回避するために、文献では、実験的に使用された次の添加物が記載されている：
まず有機溶剤が該当する、例えばアセトニトリル、ｎ−ブタノール、ｔ−ブタノール、エタノール、イソプロパノール、オクタノール及びベンジルアルコールである。さらに塩及び緩衝溶液も使用できる、例えば酢酸塩緩衝液、クエン酸塩緩衝液、塩化ナトリウム、燐酸ナトリウム、ナトリウムＥＤＴＡ，炭酸ナトリウム、燐酸塩緩衝液、酢酸グアニジン、尿素である。また重合体も使用できる、例えばゼラチン、ポリエチレングリコール６００、ヒドロキシエチルデンプン、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコールである。また、アミノ酸、例えばアラニン、グリシン、リシン、フェニルアラニン、アスパラギン酸及びロイシンの添加も既に記載された。
【００１０】
酸としては、クエン酸、カプリル酸、オクタン酸、塩酸、硫酸及び酢酸が使用された。生理学的に危険のない界面活性剤としては、ベンズアルコニウムクロリド、セチルアルコール、胆汁酸、レシチン、ポリソルベート（Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ）、スパン（Ｓｐａｎ：商標名）及びプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ：商標名）を使用している。
【００１１】
また炭水化物及びシクロデキストリン、例えばグルコース、ラクトース、マンニトール、サッカロース、α−、β−及びγ−シクロデキストリン、ヒドロキシプロピル−α−及びβ−シクロデキストリン、ヒドロキシエチル−シクロデキストリンおよびメチル−シクロデキストリンもすでに使用された。これらの助剤は濾過助剤として試験された。
【００１２】
しかし課題の満足すべき解決策は認識できなかった。酢酸で酸性化することのみが部分的成果を納めた。しかしこの場合にも常にさらに大きい濾過損失を受けざるを得なかった。
【００１３】
ところが意外にも本発明により、セトロレリックスは酢酸３０％ｖ／ｖ中では良好に溶解することができることが判明した。次にこの溶液を注射目的のために水を補充してセトロレリックス３％の最終濃度にして、マンニットを加える。文献中には、酸性媒体中では末端アミド基が容易に加水分解することは記載されているけれども、前記事実はセトロレリックスの場合には確認することはできなかった。この方法により製造される溶液は、濾過の際に難点を生じなかった。常に正確な作用物質の含量が見出された。
【００１４】
濾過速度は、満足すべき製造過程を保証する値に達した。無菌凍結乾燥のための一般的方法は、ズッカー（Ｓｕｃｋｅｒ），フックス（Ｆｕｃｈｓ）及びシュパイザー（Ｓｐｅｉｓｅｒ）（編者）：“Ｐｈａｒｍａｚｅｕｔｉｓｃｈｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ”第２判  １９９１（Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ−Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ在Ｔｈｉｅｍｅ−Ｖｅｒｌａｇ刊），５５７−５５９頁に記載されている。使用された凍結乾燥法の他の記載は、ドイツ国特許出願公開第３７３５６１４号明細書にも見出される。
【００１５】
凍結乾燥物は女性の不妊症の治療で使用される。治療法の本質は従来、ヒトの閉経期性腺刺激ホルモンによって卵胞の成熟を刺激し、その後ヒトの絨毛膜性腺刺激ホルモンを投与して排卵を起こす点にある。これによって惹起される排卵は３２時間後に起こった。これによって得られる卵細胞は体外受精用に使用される。
【００１６】
作用薬（Ａｇｏｎｉｓｔ）を用いるこの治療法の欠点は、刺激段階で１０個までの卵胞が成熟するという事実である。このような増大された卵胞成熟によってＬＨ（黄体形成ホルモン）のホルモン水準のピークが幾度も現われる。これらのピークは卵胞成熟の段階を早期にし、予想されなかった時点での排卵をもたらす。この排卵障害は治療例の２５％に出現し、欠点となる。このような排卵障害を示す周期は卵細胞を得るためには不利であり、完全な治療のためには約１ヵ月後に再び繰り返されなければならない。
【００１７】
従来の刺激治療法の他の欠点は、満足すべき抑制を達成するために必要とする治療期間が４週間と長いことである。作用薬はさらに治療例の１〜２％において、卵胞細胞が肥大化される過剰刺激症候群を示す。過剰刺激の危険はポリジスチックな（ｐｏｌｙｚｙｓｔｉｓｃｈ）卵巣の場合には特に大きい。過剰刺激症候群は、死亡をもたらす怖れのある重い副作用である。
【００１８】
ところが、作用薬セトロレリックスはほかならぬこのような治療の場合に次の利点を有することが判明した：
全抑制を達成するためには、本発明によるセトロレリックスで治療すると５日間の治療期間で十分である。過剰刺激症候群は発症し得ない。さらに、第２治療段階（排卵発生期）においてＨＭＧ（ヒト閉経期性腺刺激ホルモン）を使わないで済ますことができる。これはこの胎外受精治療の少なからぬコスト上の利点である。胎外受精は例えば卵管異常が存在する場合に使用される。この治療の場合には、周期を精密にコントロールし、排卵の時点を正確に設定することが必要である。これは従来は限定的にしか達成されなかった。それとゆうのもＨＭＧ／ＨＣＧによる刺激によって前排卵のＬＨ増大が極めて早期に起こることが多いか又は十分長時間維持されなかったからである。しかし、受精時点を正確に設定するためには、この早すぎるＬＨの増大を防止することが治療効果を挙げるために決定的に重要である。これによって女性患者の肉体的及び精神的負担が軽減され、臨床論理学が最適に使用される。前記目的を高い信頼性をもって達成するためには、体内のホルモン生産（ＬＨ−ＦＳＨ、エストラジオール）をできるだけ完全に抑制し、同時に外生的性腺刺激ホルモン（ＨＭＧ／ＨＣＧ）の投与によって卵胞成熟を刺激しかつホルモン状態を常にコントロールすることが必要である。ほぼ同じ成熟度を有する十分に多数の卵胞（４〜６）を得る場合に初めて、ＨＣＧボーラス注射によって排卵が惹起される。
【００１９】
作用薬の使用によって、治療は女性患者にとって著しく有効にかつ確実に具体化される。
【００２０】
本発明によるセトロレリックスの凍結乾燥物の他の用途は男性患者の性腺保護の場合の使用である。男性患者はセトロレリックス凍結乾燥物で前治療され、性腺の活性が保護される。これによって、例えば放射線療法又は細胞増殖抑制療法のような他の侵害物も、敏感な性腺組織に作用する可能性を全く有しないか又はあほんの僅かしか有しない。
【００２１】
【実施例】
製造方法の例：
１つの適当なガラス容器中に注射用の水約１．５ｌを予め入れる。他のガラス容器中に注射用の水２１０ｇを仕込みかつ酢酸９１．１７ｇを加える。計算量のセトロレリックス酢酸塩（使用された仕込み量に応じて１．６２〜１．６９５ｇ）を調製された３０％酢酸中で撹伴下に溶かす。この溶液を注射用の水１．５ｌを含む前記のガラス容器に移し、マンニトール８２．２ｇを加えて溶かしかつ注射用の水を補充して３０３９ｇにする。
【００２２】
製造過程の調整：
ｐＨ値：    ２．５〜３．０
密度：      １．００９〜１．０１７ｇ／ｃｍ3（２０℃）
屈折率：    １．２２７〜１．３４０（４４０ｎｍ及び２０℃で）
溶液の滅菌は、無菌条件下で適当なメンブランフィルター（細孔径０．２μｍ）により濾過することにより行う。前流出物１００ｍｌは捨てなければならない。フィルターは高張水蒸気を用いて滅菌しなければならない。セトロレリックス凍結乾燥用溶液を再汚染から保護して保管する。この溶液を即座に無菌条件下に計量して注射剤瓶（ＤＩＮ  ２Ｒ  無色、加水分解等級Ｉ）に入れ、凍結乾燥用栓を施す。標準充填量は２．０ｍｌ＝２．０２６ｇである。
【００２３】
２ｍｌ注射剤瓶を注射剤瓶洗浄機で洗浄し、熱風で乾燥し、滅菌した。洗浄した凍結乾燥用栓は加圧滅菌した。予備的に閉鎖した注射剤瓶を凍結乾燥装置に移し、プレート温度−４０℃で凍結した。乾燥は−４０℃から＋２０℃に上昇するプレート温度で乾燥プログラムにより行う。次に凍結乾燥装置に無菌窒素を流し、該瓶を装置内で閉鎖し、栓をフランジ付きフラップ（Ｂｏｅｒｄｅｌｋｌａｐｐｅ）で止めた。
【００２４】
注射剤瓶を閉鎖欠陥及びその他の欠陥について視覚的に検査する。欠陥のある注射剤瓶を選別して、破壊する。
【００２５】
セトロレリックス凍結乾燥物１ｍｇは、灰色の凍結乾燥用栓及び黄色のフリップオフ（Ｆｌｉｐｐ−ｏｆｆ）フランジ付きフラップで閉鎖されている無色の２ｍｌ注射剤瓶中で白色固体の凍結乾燥塊である。