(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バラの花又はコラノキの種子から抽出されて成る植物抽出物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、バラ科バラ属又はアオギリ科等の植物から抽出される抗アレルギー作用を有する抽出物、及びこれを含有する医薬、化粧品、食品等に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、抗アレルギー活性を有する化合物は種々知られており、代表的なものとしては、ジソジウムクロモグリケート、ヨモギ抽出物に含まれるカフェー酸等を挙げることができる。
【０００３】
一方、アレルギー反応は、アレルゲンの侵入により産生されたＩｇＥの好塩基球、肥満細胞上のＩｇＥレセプターへの結合が引き金となって、これらの細胞よりヒスタミン、ロイコトリエン等の化学伝達物質が放出されることにより引き起こされる。従って、ＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を阻害することができれば、これらの化学伝達物質の放出を阻止することができ、アレルギー疾患に対する有効な治療となり得る（日医雑誌、第１１４巻、第９号（１９９５）、日本医師学会；実験医学増刊号、１２巻、１７号（１９９４）、洋土社）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記のジソジウムクロモグリケートは抗ヒスタミン活性を通じて抗アレルギー作用を発揮するものであり、又、カフェー酸は、５−リポキシゲナーゼ阻害活性により、アラキドン酸からのロイコトリエンの生合成を阻害することにより抗アレルギー作用を発揮するものであることから、アレルギー症状の包括的な改善という観点からは不十分なものであった。
なお、特開平２−５３７１７号公報には、バラ科ノイバラ又はその近縁植物の偽果又は果実（エイジツ、営実）がヒアルロニダーゼ阻害活性を有することが開示され、抗アレルギー作用を有することが示唆されているが、ここに示唆されている抗アレルギー作用は、ヒスタミン遊離阻害のみであり、同様にアレルギー症状の包括的な改善という観点からは不十分なものである。
【０００５】
一方、近年におけるアトピー性皮膚炎、花粉症をはじめとするアレルギー疾患の増加に伴い、化粧品、食品等に、抗アレルギー作用を付与する試みが行われている。
【０００６】
しかしながら、上記の化合物はいずれも医薬品として用いられるものであり、一定量以上を摂取すると肝臓等の障害を引き起こすとともに、眠気等の副作用もあることから食品等へ添加するのには適さないという問題があった。
【０００７】
従って、本発明は、ＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を阻害することにより、アレルギー症状を包括的に改善できる医薬、化粧品、食品等を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明によれば、バラ科バラ属又はアオギリ科に属する植物から抽出されて成る植物抽出物が提供される。この植物抽出物は抗アレルギー作用を有するものであるが、本発明において、上記バラ科バラ属に属する植物はバラであることが好ましい。又、上記アオギリ科に属する植物はコーラ属に属する植物であることが好ましく、コラノキであることがより好ましい。
【０００９】
又、本発明によれば、上記の植物抽出物を有効成分とする抗アレルギー性医薬が提供される。
【００１０】
又、本発明によれば、上記の植物抽出物を含有する化粧品、医薬部外品、食品等が提供される。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の植物抽出物は、ＩｇＥレセプターへの親和性が大きいため、ＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を競争的に阻害することにより抗アレルギー作用を示す。従って、好塩基球、肥満細胞からのヒスタミン、ロイコトリエン等の放出を阻止することができ、アレルギー症状を包括的に改善することが可能となる。
【００１２】
本発明の植物抽出物は、バラ科バラ属又はアオギリ科に属する植物から抽出されるが、これらの植物から抽出したものであれば、茎、根、葉、花、種子のいずれからの抽出物であってもよい。
【００１３】
抽出に用いる植物は、バラ科バラ属に属する植物としてはバラ（Rosa spp.）が好ましく、具体的には、ロサ・ガリカ（Rosa gallica）、ロサ・モスカタ（Rosa moschata）、ロサ・フォエティダ（Rosa foetida）、ロサ・ギガンテア（Rosa gigantea）、ノイバラ（Rosa multiflora）、テリハノイバラ（Rosa wichuraiana）等の野生種、又はこれらを交配して得られた園芸種の花、葉又は茎を用いることが好ましい。
【００１４】
又、アオギリ科に属する植物としてはコーラ属に属する植物を用いることが好ましく、具体的にはコラノキ（Cola vera）の種子（コーラナッツ）を用いることがより好ましい。
【００１５】
抽出には、水又は水とメタノール若しくはアセトン等の極性溶媒との混合溶媒が用いられ、抽出温度は室温から溶媒の沸点までの温度から適宜選択されるが、５０〜７０℃程度の熱水を用いることがより好ましい。
本発明の植物抽出物は、具体的には、例えば、以下のように製造される。
洗浄後、乾燥した原料を熱水と混合して破砕し、そのまま浸漬及び圧搾、又は加熱還流しながら抽出し、次いで減圧濃縮等により水を留去した後、遠心分離及び濾過、又は有機溶媒（ヘキサン、クロロホルム等）による分配及び濾過を行い、清澄抽出液を得る。
【００１６】
この清澄抽出液は適宜に濃縮して液体抽出物としてもよく、又、濃縮乾固して固体抽出物としてもよい。さらには、デキストリン等の粉末助剤を添加し、噴霧乾燥又は凍結乾燥を行なうことにより、粉末抽出物としてもよい。
【００１７】
本発明の植物抽出物は、医薬の成分として好適に用いることができるとともに、食品、化粧品等に添加することにより、これらに抗アレルギー機能を付与することができる。
【００１８】
又、近年、肥満細胞からのヒスタミンの遊離に際し、ヒアルロニダーゼが関与していることが示唆されており、又、上記酵素は炎症反応をも促進することが示されている。
本発明の植物抽出物は、ＩｇＥレセプター阻害活性に加えて、ヒアルロニダーゼ阻害活性をも有することから、ＩｇＥレセプターをブロックするのとは異なる機作によってもアレルギー反応を抑えることができ、さらに抗炎症作用をも兼ね備えている。
【００１９】
又、ヒアルロニダーゼ阻害活性を有することから、化粧品に添加した場合には、保水構造を有するヒアルロン酸の分解が阻止され、皮膚の水分含量を維持することが期待できる。さらに、食品に添加した場合には、老化に伴う体内のヒアルロン酸含量の低下を防止することができ、血管の水分含量の維持を通じて、血管の柔軟性を保つことが期待できる。
【００２０】
さらに、本発明の植物抽出物は抗酸化作用をも有するため、医薬、食品等に添加した場合、酸化防止によりそれらの品質を維持できるという効果を有する。
【００２１】
さらに、本発明の植物抽出物は強い抗菌作用を有するため、化粧品に抗菌作用を付与することができ、さらに、食品に添加すればその腐敗を抑えることができる。又、化膿の原因菌であるStaphylococcus aureusの増殖を効果的に抑えることから、傷口の化膿を防止することができ、傷口の化膿止め用の軟膏、噴霧剤等として用いることもできる。
又、アトピー性皮膚炎などの皮膚のアレルギー症状は、細菌によって引き起こされる場合があるため、抗菌作用を通じて、細菌に起因するアレルギー症状を抑えることができる。
【００２２】
上記の作用を有することから、本発明の植物抽出物は、抗アレルギー剤、抗炎症剤若しくは消毒剤として医薬に用いることができる。
上記抽出物を含有する医薬は、抽出物をそのまま、あるいは公知の医薬用担体と共に製剤化することにより調製され、錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤等の経口剤、坐剤、軟膏、噴霧剤、注射剤等の非経口剤とすることができる。
【００２３】
錠剤、散剤等の経口投与のための固体組成物の調製においては、上記の抽出物が不活性な希釈剤、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム等と混合される。
【００２４】
組成物は、常法に従って、例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、ラクトースのような安定化剤、グルタミン酸またはアスパラギン酸のような溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤は必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣、又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
【００２５】
シロップ剤等の経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤等を含んでもよく、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールを含んでもよい。さらに、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。
【００２６】
注射剤には、無菌の水性又は非水性の、溶液剤、懸濁剤、及び乳濁剤を包含する。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば注射剤用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤、懸濁剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（商品名）の様な界面活性剤等がある。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ラクトース）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合、又は紫外線若しくは放射線の照射によって無菌化される。これらはまた無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００２７】
又、本発明の植物抽出物は、飲料を含む、広く食品一般に添加して用いることができ、具体例としては、炭酸飲料、果実飲料、コーヒー、紅茶、茶、乳酸菌飲料、ヨーグルト、アイスクリーム、飴、ガム、菓子、パン、麺類等に好適に用いられる。
【００２８】
本発明の植物抽出物が添加される化粧品としては、具体的には、石鹸、洗顔料、クリーム、乳液、化粧水、オーデコロン、ひげそり用クリーム、ひげそり用ローション、化粧油、日焼け・日焼け止めローション、日焼け・日焼け止めオイル、おしろいパウダー、ファンデーション、香水、パック、爪クリーム、エナメル、エナメル除去液、眉墨、ほお紅、アイクリーム、アイシャドー、マスカラ、アイライナー、口紅、リップクリーム及び浴用化粧品等の皮膚化粧料、シャンプー、リンス、染毛料及び頭髪用化粧品等の毛髪化粧料、並びに歯みがき等が挙げられる。又、薬用化粧品、薬用歯みがき類、浴用剤等の医薬部外品にも好適に用いることができる。
【００２９】
なお、石鹸には浴槽に投入して使用されるものを含む。又、ひげそり用クリーム及びひげそり用ローションには、ひげそり時のみならずひげそり後に使用するものを含む。浴用化粧品とは、身体を清潔にする、香りを楽しむ等の目的で浴槽に投入され、又はこれに類する用法で使用されるものをいう。
【００３０】
本発明の植物抽出物を含有する化粧品には、更に必要に応じて通常の化粧品に用いられる水性成分、粉末、界面活性剤、油剤、保湿剤、アルコール類、ｐＨ調整剤、防腐剤、色素、酸化防止剤、増粘剤、香料等を適宜配合することができ、乳液、クリーム、化粧水、パック、軟膏、分散剤、洗浄料等の剤形とすることができる。
【００３１】
本発明の植物抽出物を用いて化粧品を調製する場合には、他の抗炎症剤、抗アレルギー成分、例えば、グリチルリチン酸等の甘草抽出成分、塩酸ジフェンヒドラミン、アズレン、ビタミンＢ2及びＢ6等と併用することにより、その効果を高めることができる。
【００３２】
又、エラスチン、コラーゲン、レシチン、スクワレン等の他の保湿・美肌性化粧品成分と併用することにより、その保湿効果を一層高めることができる。
【００３３】
さらに、本発明の植物抽出物は、ＩｇＥレセプターに拮抗的に結合することにより、ＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を阻害することから、医学や生化学等の分野における学術実験、医薬等の開発のための実験等において試薬として用いることができる。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に制限されるものではない。
【００３５】
（実施例１）  バラの花、葉、茎及びコラノキの種子（コーラナッツ）より抽出物を調製した。
まず、各試料５ｇを破砕して５０〜７０℃の熱水、１００ｍｌにて３０分間抽出した。次に、濾過により抽出液を分離し、５０℃にて１０〜４０分間、加熱濃縮した後、凍結乾燥して抽出物を得た。
【００３６】
（実施例２）
（ＩｇＥレセプター阻害活性）
実施例１で得た抽出物のＩｇＥレセプター阻害活性をＥＬＩＳＡ法にて調べた。
ＩｇＥレセプターを固着させたウェルに、最終濃度が１、０．１、０．０１％（ｗ／ｖ）となるように調製した試料及び最終濃度が０．４μｇ／ｍｌとなるようにヒトＩｇＥを加えてインキュベーションを行った後、洗浄を行い、遊離の試料及びヒトＩｇＥを除去した。次に、西洋ワサビパーオキシダーゼ（ＨＲＰ）を結合した抗ヒトＩｇＥ抗体を濃度が０．４μｇ／ｍｌとなるように加えてインキュベーションを行った後、洗浄を行い、遊離の抗ヒトＩｇＥ抗体を除去した。次に、ＨＲＰの基質としてｏ−フェニレンジアミン二塩酸塩（ＯＰＤ）を各ウェルに注いでＨＲＰと反応させ、発色させた後、各ウェルの吸光度をプレートリーダーにて測定した。
得られた吸光度の値に基づいてＩｇＥレセプター阻害活性を算出した。ヒトＩｇＥを添加しなかった場合の吸光度を発色率０％、ヒトＩｇＥのみを添加して試料を加えなかった場合の吸光度を発色率１００％として各試料の発色率を算出し、各試料の発色率を１００から差し引いた値をＩｇＥレセプター阻害率（％）とした。
【００３７】
結果を表１に示す。なお、ニンジンの抽出物について、同様の方法にてＩｇＥレセプター阻害活性を測定した値を併記する。
【００３８】
【表１】
0004097300.tif 000002
【００３９】
バラの花、葉、茎及びコラノキの種子から得た抽出物は、いずれも１％及び０．１％の濃度において、ＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を効果的に阻害した。
【００４０】
（実施例３）
（ＦＡＣＳ）
実施例１で得た抽出物のＩｇＥレセプター阻害活性をＦＡＣＳにて解析した。
ヒトＩｇＥレセプター発現組換えＣＨＯ細胞に、ＦＩＴＣで標識したヒトＩｇＥ及び各種濃度に調製した試料を加え、ＦＡＣＳ解析装置にて分析を行った。なお、ニンジンからの熱水抽出物についても同様の分析を行った。結果を図１に示す。
ニンジンからの熱水抽出物はＩｇＥレセプター阻害活性を示さなかったのに対し、バラの花及びコラノキの種子から得た抽出物は、０．０５％（ｗ／ｖ）及び０．００５％（ｗ／ｖ）の濃度においてＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を効果的に阻害した。又、いずれの植物からの抽出物も細胞毒性は示さなかった。
【００４１】
（実施例４）
（ヒスタミン遊離阻害活性）
実施例１で得た抽出物のヒスタミン遊離阻害活性を調べた。
常法によりヒト抹消血より分離した好塩基球に、ＴＢＳ−ＨＳＡに溶解した試料を０．１％（ｗ／ｖ）の濃度となるように加えた後、濃度が１μｇ／ｍｌとなるようにヒトＩｇＥを加えて好塩基球を感作した。ＴＢＳ−ＨＳＡにて洗浄し、遊離のヒトＩｇＥを除去した後、濃度が３μｇ／ｍｌとなるように抗ヒトＩｇＥ抗体を加えて、３７℃で４０分間インキュベーションを行った。上清を回収して過塩素酸で処理した後、ＨＰＬＣにて上清中のヒスタミン量を測定した。
ヒスタミン遊離阻害活性の大きさ（％）は、次の式により算出した。
｛１−（ＳＲ−Ｃ）／（Ｒ−Ｃ）｝×１００
なお、式中、Ｃは未処理の細胞より遊離されるヒスタミンの量を、Ｒは試料を加えずにヒトＩｇＥ及び抗ヒトＩｇＥ抗体により刺激した場合に遊離したヒスタミンの量を、ＳＲは試料の存在下で抗ヒトＩｇＥ抗体により刺激した場合に遊離したヒスタミンの量を表す。
結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
0004097300.tif 000003
【００４３】
バラの花及びコラノキの種子から得た抽出物は、いずれも好塩基球からのヒスタミンの遊離を効果的に阻害した。
【００４４】
（実施例５）
（ヒアルロニダーゼ阻害活性）
実施例１で得た抽出物のヒアルロニダーゼ阻害活性を調べた。
ヒアルロニダーゼを溶解した酢酸緩衝液に、１％及び０．１％（ｗ／ｖ）の濃度の試料を加え、３７℃で２０分間インキュベーションを行った。次に、酵素を活性化する目的で、酢酸緩衝液に溶解した塩化カルシウム・２水和物を加え、３７℃で２０分間インキュベーションを行った。次に、酢酸緩衝液に溶解した０．８ｍｇ／ｍｌのヒアルロン酸溶液を加え、さらに、３７℃で４０分間インキュベーションを行った。０．４Ｎの水酸化ナトリウム溶液及び０．１Ｎのホウ酸カリウム溶液を加えて、沸騰水中に３分間放置することにより酵素反応を終了させ、さらに、ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド溶液を加えて、３７℃で２０分間インキュベーションを行った。５８５ｎｍで吸光度を測定して、その値から、下式によりヒアルロニダーゼ阻害率を算出した。
ヒアルロニダーゼ阻害率（％）＝{１−(試料の値−ブランク（試料）の値）／（対照の値−ブランク（対照）の値）｝×１００
なお、ブランク（試料）の値は上記の操作においてヒアルロン酸溶液を加えなかった場合の値を、対照の値は上記の操作において試料を加えなかった場合の値を、又、ブランク（対照）の値は上記の操作において試料及びヒアルロン酸溶液を加えなかった場合の値を用いた。
【００４５】
結果を図２に示す。なお、高いヒアルロニダーゼ阻害活性を有することが確認されているインタール（クロモグリク酸ナトリウム）について、同様の方法により測定したヒアルロニダーゼ阻害率の値を併記する。
【００４６】
バラの花及びコラノキの種子から得た抽出物は、いずれも１％及び０．１％の濃度にて、高いヒアルロニダーゼ阻害活性を示した。
【００４７】
（実施例６）
（抗酸化作用）
実施例１で得た抽出物の抗酸化作用を調べた。
エタノールにリノール酸を４％の濃度で溶解した基質溶液５ｍｌに、４ｍｌの０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）及び試料の最終濃度が１００、１０ｐｐｍとなるように１ｍｌの試料液を加えた反応液を密栓試験管中で混和した。反応開始後７日目に反応液０．１ｍｌを採取し、４．７ｍｌの７５％エタノール、０．１ｍｌの３０％チオシアン酸アンモニウム水溶液及び０．１ｍｌの０．０２Ｍ塩化第一鉄溶液（３．５％塩酸で溶解）を加え、３分経過後に５００ｎｍにおける吸光度を測定した。
結果を図３に示す。なお、上記の操作において、試料の代わりに同容量のエタノールを加えた場合の測定値をコントロールとした。又、高い抗酸化作用を有することが確認されているＢＨＡについて、同様の方法により測定した値を併記する。
【００４８】
バラの花及びコラノキの種子から得た抽出物は、１００、１０ｐｐｍのすべての濃度において抗酸化作用を示した。特に、バラの花から得た抽出物は、いずれの濃度においてもＢＨＡよりも強い作用を示し、コラノキの種子の抽出物は、１００ｐｐｍの濃度においてＢＨＡよりも強い作用を示した。
【００４９】
（実施例７）
（抗菌作用）
アトピー性皮膚炎に関連があるとされるCorynebacterium属の菌、Staphylococcus epidermidis、及びStaphylococcus aeruginosaについて、実施例１で得た抽出物の抗菌作用を調べた。
０、０．０１、０．１、０．５、１．５％（ｗ／ｖ）の濃度で試料を含有する寒天培地をプレート中に調製し、各プレート当たり１．０×１０4個の菌をまいた。なお、寒天培地は、水１ｌ当たり３０ｇの寒天粉末を用い、ペプトン２０ｇ、酵母エキス１０ｇ、ＮａＣｌ１０ｇを加えて調製した。
３０℃で４８時間保存した後、菌の生育状況を目視にて観察し、以下の３段階による評価を行った。
＋      菌の生育が阻害された。
±      菌の生育がやや阻害された。
−      菌の生育は阻害されなかった。
結果を表３に示す。なお、ニンジンからの抽出物について、同様の方法により抗菌作用を測定した結果を併記する。
【００５０】
【表３】
0004097300.tif 000004
【００５１】
ニンジンからの抽出物は、抗菌作用をほとんど示さなかったのに対し、バラの花及びコラノキの種子から得た抽出物は、いずれも、０．１乃至０．５％以上の濃度で上記の菌の生育を阻害し、特にバラの花の抽出物は、強い抗菌作用を示した。
【００５２】
【発明の効果】
本発明の植物抽出物は、抗アレルギー作用を有し、医薬の成分としてのみならず、化粧品、食品、浴用剤等にも好適に用いることができ、これらに抗アレルギー作用を付与することができる。又、ＩｇＥのＩｇＥレセプターへの結合を阻害することにより抗アレルギー作用を発揮するため、アトピー性皮膚炎、花粉症等のアレルギー症状の包括的な改善が可能である。
【００５３】
さらに、抗菌作用、抗酸化作用を有することから、傷口の化膿止め用の軟膏等、あるいは、食品の酸化、腐敗を抑える用途にも用いることができる。
【００５４】
又、ヒアルロニダーゼ阻害作用を有することから、食品、化粧品に添加した場合には、血管等の組織、肌等の保湿効果を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【図１】      本発明の植物抽出物のＩｇＥレセプター阻害活性を示すＦＡＣＳ解析グラフである。
【図２】      本発明の植物抽出物のヒアルロニダーゼ阻害活性を示すグラフである。
【図３】      本発明の植物抽出物の抗酸化作用を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
0004097300.tif 000006
【図３】
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