(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ペデュンクラジンと、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４’，５，５’，６，６’−ヘキサヒドロキシジフェネート）とを含有する抗酸化用の組成物と、リボフラビンとを含有することを特徴とする、食品用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗酸化用の組成物に関し、更に詳細には、食品に好適な抗酸化用の組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
酸化は生命活動においては、生命活動の維持に必要なエネルギーを作り出す、重要な化学反応であり、且つ、免疫系において細菌などの侵入非自己生物を攻撃する有用な生体防御手段でもある。しかし、一方、酸化反応、それも生体による制御の効かない酸化反応は生体に大きなダメージを与える。特に、脂質などが酸化されて生じる過酸化物は生体にとって大きな傷害をもたらすし、光老化では過酸化物が大きな要因となっていることが指摘されている。又、炎症においても酸化は大きな役割を果たしており、慢性的な炎症が発ガンの重要因子であることを考えると、酸化は発ガンとも深い関係にあるといえる。即ち、生体において、適切に酸化反応、詳細に言えば、過酸化反応を制御することは、生体の維持と健康の維持にとって大変有用なことであるといえる。この様な目的で、種々の抗酸化剤が使用されており、例えば、この様な抗酸化剤としては、古くはＢＨＴ或いはＢＨＡと言った芳香族系の物質が存在し、近年においてはアスコルビン酸、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド等のアスコルビン酸類、トコフェロール類などが存在する。しかしながら、芳香族系の物質については安全性の懸念がぬぐいきれず、アスコルビン酸やその誘導体は、水溶性が高いために生体内での貯留時間に不適切な場合があったり、安定性に問題がある場合があった。トコフェロール類においては、着色や異臭の問題がある場合があり、これらを適度に組み合わせて使用しているのが現状であるといえる。組合せである以上、これらの組合せ素材のみでは対応できない場合があり、すそ野を広げる意味において、新規の抗酸化成分が求められていた。
【０００３】
一方、クルミの殻に抗酸化成分が含有されていることは既に知られていることであるが、可食部分について、抗酸化成分の存在は全く知られていなかった。又、この部分に数種類の４，４’，５，５’，６，６’−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体が含有されていることも知られていなかった。４，４’，５，５’，６，６’−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体が単独で使用された場合に抗酸化作用を発揮することは知られていたが、これらを二種以上組み合わせることにより格別の抗酸化効果を発揮することも全く知られていなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、新規の抗酸化成分を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題の解決手段】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、新規の抗酸化成分を求めて、鋭意研究努力を重ねた、４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結合物の少なくとも２種を含有する組成物に著しい抗酸化作用を認め、発明を完成させるに至った。即ち、本発明は以下に示す技術に関するものである。
（１）４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結合物の少なくとも２種を含有することを特徴とする、抗酸化用の組成物。
（２）４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートと糖とのエステル結
合物の少なくとも２種が、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンの２種の組合せであることを特徴とする、（１）に記載の抗酸化用の組成物。
（３）起源がナッツ類の可食部であることを特徴とする、（１）又は（２）に記載の抗酸化用の組成物。
（４）その製造過程において、脱脂工程を含むことを特徴とする、（３）に記載の抗酸化用の組成物。
（５）食品用であることを特徴とする、（１）〜（４）何れか１項に記載の抗酸化用の組成物。
（６）（１）〜（５）何れか１項に記載の抗酸化用の組成物を含有する食品又は皮膚外用剤。
（７）ナッツ及び／又はその微細化加工物を脱脂し、しかる後に中極性溶剤で抽出することを特徴とする、抗酸化用の組成物の製造法。
（８）ナッツ及び／又はその微細化加工物を水及び／又は低級アルコールで抽出し、低級アルコール分を除去した後、非極性溶剤を加えて液液抽出し、水層を濃縮してなる、抗酸化用の組成物。
以下、本発明について更に詳細に説明を加える。
【０００６】
【化１】
0004034984.tif 000002
ペデュンクラジン
【０００７】
【化２】
0004034984.tif 000003
α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）
【０００８】
【発明の実施の形態】
（１）本発明の抗酸化用の組成物本発明の抗酸化用の組成物は、少なくとも２種の４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体を含有することを特徴とする。かかる少なくとも２種の４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体としては、該４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの２つのカルボキシル基の一方のみが糖の水酸基とエステル結合したものでも良いし、２つが同一の糖と結合した、シクロエステル配糖体でも、異なる糖に結合したブリッジ型の配糖体でも構わない。又、通常グルコシド等の配糖体としては、α体とβ体とが存在するが、本発明の抗酸化用の組成物ではこれらの何れもが使用可能である。特に好ましいものは、α体とβ体の等量混合物であるアノマーである。これは、天然存在形であるからである。これらを少なくとも２種含むことが本発明の抗酸化用の組成物の特徴である。これらの配糖体の内、特に好ましいのはシクロエステル配糖体であり、該配糖体を構成する糖としては、グルコースが特に好ましく例示できる。具体的には、４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネートの配糖体が、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンの２種が好ましく例示でき、この２種を組み合わせて含有させることが特に好ましい。かかる組合せにおいて、好ましい量比としては、ペデュンクラジンの重量：α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）の重量＝２０：１〜５：１が好ましい。これは、この割合において、優れた抗酸化作用を発揮するためである。かかるα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）とペデュンクラジンとは、それぞれを予め合成した後、含有させることもできるし、これらの２種を含むように生薬などの抽出物を調整することもできる。この様な生薬の抽出物としては、例えば、クルミやペカンナッツ等のナッツ類の可食部から、非極性部分を除去した後、酢酸エチル、蟻酸メチル、ブタノールなどの中極性溶剤乃至はエタノール、イソプロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン等の水と任意の割合で混合しうる溶剤及び／又は水で抽出することにより、得ることができる。この様な抽出は、１〜１００倍量の溶剤を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。必要に応じて不要物を濾過して除去し、濃縮することができる。非極性部分の除去、即ち、脱脂工程は、物理的圧搾などによっても行うことができるし、ノルマルヘキサン等の溶剤を用いて抽出して行うこともできる。物理的に圧搾によって脱脂する場合には、ナッツ類の油かすを利用することができ、産業廃棄物を利用できる意味において好ましい。かかる圧搾はナッツ類に１〜１０００Ｋｇ／ｃｍ2程度の圧力をかけ、油脂を圧搾除去すればよい。又、抗酸化能を高めたい場合においては、ヘキサンなどの非極性溶剤で抽出、脱脂を行うことが好ましい。かかる抽出脱脂は、ナッツ類に対して１〜１００倍量の溶剤を加え、室温であれば、数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。かかる製造工程で作成される組成物は、ペデュンクラジンの重量：α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）の重量＝２０：１〜５：１の範囲内にこの両者を含有する。かかる抗酸化用の組成物は、化粧料や食品などに含有させることにより、優れた抗酸化作用を発揮する。これは、かかる組成物が適度な割合で親水性部分と親油性部分を有するため、水溶性物質に対しても油溶性物質に対しても有効であるからである。具体的な効果としては、経口投与においては、消化管の炎症の発生を抑え、発ガンの危険性を下げることができる。又、組織が酸化ストレスにより老化するのを防ぐことができる。かかる組成物を食品に含有させる場合、好ましい含有量は、食品の種類により異なるが、食品全量に対して、０．１〜３０重量％が好ましく、０．５〜２０重量％が特に好ましい。又、化粧品などの皮膚外用剤に含有させる場合においては、０．０５〜１０重量％が好ましく、更に好ましくは、０．１〜５重量％である。
【０００９】
（２）本発明の抗酸化用の組成物の製造法
本発明の抗酸化用の組成物の製造法は、上記に記述した方法に基づくものであり、ナッツ及び／又はその微細化加工物を脱脂し、しかる後に中極性溶剤で抽出することを特徴とする。ここで、起源とするナッツ類としては、食用に供されているナッツ類であれば特段の限定無く使用することができ、例えば、ピーナッツ、ペカンナッツ、アーモンド、ヘーゼルナッツ、マカデミアナッツ、クルミなどが好ましく例示でき、クルミとペカンナッツとがより好ましく、クルミが特に好ましい。部位としては、果実の可食部が好ましく例示できる。又、クルミとしてはクルミ科の植物の果実であって、可食のものであれば特段の限定はなく、例えば、オニグルミ、マンシュウグルミ、ウォールナッツなどが好ましく例示できる。上記のごとく、これらより油脂を取り除いた「油かす」を原料として用いることもできるし、果実の可食部を圧搾したり、粉砕など微細化した後、ノルマルヘキサンなどで溶剤抽出するなど脱脂工程を経た後、酢酸エチル、蟻酸メチル、ブタノールなどの中極性溶剤乃至はエタノール、イソプロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン等の水と任意の割合で混合しうる溶剤及び／又は水で抽出することにより、得ることができる。この様な抽出は、１〜１００倍量の溶剤を加え、室温であれば数日、沸点付近の温度であれば数時間浸漬すればよい。必要に応じて不要物を濾過して除去し、濃縮することができる。
【００１０】
（３）本発明の抗酸化用の組成物を含有する食品
本発明の食品は、上記本発明の抗酸化用の組成物を含有することを特徴とする。食品としては、飴、ガム、焼き菓子などの菓子やソーセージ、ハム、はんぺん、インスタントラーメン等の総菜などの通常の食品や健康維持や健康促進を目的とする、錠剤や顆粒剤、カプセル剤形式の健康食品或いは特定保険用食品などが好ましく例示できる。通常の食品においては、本発明の抗酸化用の組成物は、酸化から食品を守る目的で使用できる。又、健康維持や健康促進を目的とする、健康食品或いは特定保険用食品などでは、体内に於ける過酸化物の発生や炎症を防ぐ作用を発揮し、老化、発ガンなどを抑制する作用を発揮する。又、アスコルビン酸類やトコフェロール類など酸化を受けやすい有効成分の安定性を高める作用を発揮する。本発明の食品においては、必須成分の抗酸化用の組成物以外に食品で通常使用される任意成分を含有することができる。かかる任意の成分としては、例えば、賦形剤、結合剤、矯味剤、矯臭剤、滑沢剤、被覆剤、増粘剤、乳化剤、分散剤、着色剤、油脂等が好ましく例示できる。これら必須の成分と任意の成分とを常法に従って処理することにより、本発明の食品は製造できる。
【００１１】
（４）本発明の皮膚外用剤
本発明の皮膚外用剤は、上記本発明の抗酸化用の組成物を含有することを特徴とする。本発明の皮膚外用剤としては、化粧料、皮膚外用医薬などが好ましく例示できる。その薬理特性から、化粧料が特に好ましい。化粧料としては、化粧水、乳液、クリーム、パック剤等の基礎化粧料、ファンデーション、アンダーメークアップなどのメークアップ化粧料、養毛剤、シャンプー、リンスなどの毛髪用化粧料などが好ましく例示できる。かかる本発明の皮膚外用剤においては、本発明の抗酸化用の組成物は、皮膚上での酸化による皮膚のダメージ形成を予防したり、シワなどの形成の予防、炎症の発生の抑制等の直接的効果と酸化安定性の低いアスコルビン酸類やトコフェロール類等の有効成分や、色素類、香料類の安定化作用を発揮する。本発明の皮膚外用剤においては、これら必須成分以外に、通常化粧料や皮膚外用医薬で使用される任意の成分を含有することができる。かかる任意の成分としては、例えば、ワセリンやマイクロクリスタリンワックス等のような炭化水素類、ホホバ油やセチルイソオクタネート等のエステル類、オリーブ油等のトリグリセライド類、オクタデシルアルコールやオレイルアルコール等の高級アルコール類、グリセリンや１，３−ブタンジオール、１，２−ペンタンジオール、イソプレングリコール、ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、非イオン界面活性剤、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、エタノール、カーボポール等の増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤類等が例示できる。これらの内、好ましい形態としては、ジプロピレングリコールを４〜１０重量％含有する形態及び／又はフェノキシエタノールを０．２〜１重量％含有する形態が例示できる。本発明の皮膚外用剤は、この様な必須成分と任意成分とを常法に従って処理することにより、製造することができる。
【００１２】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、かかる実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００１３】
＜実施例１＞オニグルミの可食部５００ｇを圧搾用の型にいれ、３５℃条件下、１００Ｋｇ／ｃｍ2で４時間加圧して、油脂分を除去した。圧搾した残りを５０％エタノール水溶液で抽出し、濾過して不溶物を除去した後、減圧濃縮して残査１６．５ｇ（本発明の抗酸化用の組成物１）を得た。これを全て、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０〜９０：１０）で精製し、ペデュンクラジン（アノマー）１２．２ｇとα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）（アノマー）１．３ｇを得た。同定はＮＭＲスペクトルとＭａｓｓスペクトルより行った。これより、脱脂して、５０％エタノール水溶液で抽出し、減圧濃縮して得た残査の殆どが、ペデュンクラジンとα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）で構成されていることがわかる。
【００１４】
＜実施例２＞
オニグルミの可食部５００ｇを２００ｍｌの５０％エタノール水溶液を加えてホモジナイズし、濾過して不溶物を除去した後、ノルマルヘキサン２００ｍｌを加え、液液抽出した後、５０％エタノール水溶液層を取り、濃縮し、残査１４．１ｇ（本発明の抗酸化用の組成物２）を得た。これを全て、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０〜９０：１０）で精製し、ペデュンクラジン（アノマー）１２．５ｇとα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４’，５，５’，６，６’−ヘキサヒドロキシジフェネート）（アノマー）１．３ｇを得た。同定はＮＭＲスペクトルとＭａｓｓスペクトルより行った。
【００１５】
＜実施例３＞化３に示す反応式に基づき、キサンチン−キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）系により活性酸素のひとつであるスーパーオキシドアニオン（Ｏ2-）を発生させ、発生したＯ2-の生成率を亜硝酸法により測定し、この値をキサンチンオキシダーゼ阻害活性値で補正して抗酸化作用値を求めた。下記の表２に示す、ペデュンクラジン（ＰＤと表２に表記）とα−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）（ＧＨＤと表２に表記）との混合物である、本発明の抗酸化用の組成物と実施例１、２で得られた本発明の抗酸化用の組成物を５０μｇ／ｍｌの割合で含有する抗酸化組成物水溶液０．１ｍｌを、６５ｍＭリン酸２水素カリウム、３５ｍＭホウ酸ナトリウム、０．５ｍＭＥＤＴＡ２ナトリウム水溶液（以下、緩衝液Ａという）０．２ｍｌ、０．５ｍＭキサンチン溶液０．２ｍｌ、１０ｍＭヒドロキシルアミン塩酸塩水溶液０．１ｍｌ、純水０．２ｍｌの混合液に、加えてよく撹拌し試験液とした。同様にして、抗酸化用の組成物の代わりに純水０．１ｍｌを用いたコントロールの溶液を作製した上記各試験液及びコントロール溶液に、キサンチンオキシダーゼを１μｌ／ｍｌ濃度で含有する緩衝液Ａを０．２ｍｌ加えて撹拌した後、３７℃で３０分インキュベーションした。ブランクとして、上記と同様に調整された試験液及びコントロール溶液に、キサンチンオキシダーゼを含まない緩衝液Ａを０．２ｍｌ加え、上記と同様に処理した溶液を用意した。このようにして得られた各溶液のそれぞれに、３０μＭＮ−１−ナフチルエチレンジアミン塩酸塩、３ｍＭスルファニル酸、２５％氷酢酸混液２ｍｌを加え、３０分間室温で放置した後、各溶液について、５５０ｎｍでの吸光度で活性酸素の発生量を、２９５ｎｍの吸光度で尿酸の発生量を測定した。得られた値を用いて、以下の式に基づき、抗酸化作用値を算出した。又、比較として、実施例２のヘキサン層の減圧濃縮物（比較例１）、ペデュンクラジン（ＰＤ）のみ、α−Ｄ−グルコース−２，３−サイクリック（４，４'，５，５'，６，６'−ヘキサヒドロキシジフェネート）（ＧＨＤ）のみも同様に測定した。結果を表２に示す。
【００１６】
＜抗酸化活性を求める式＞
活性酸素発生率＝［（Ａ550-3−Ａ550-4）／（Ａ550-1−Ａ550-2）］×１００
尿酸生成率＝［（Ａ295-3−Ａ295-4）／（Ａ295-1−Ａ295-2）］×１００
抗酸化活性＝１００−（活性酸素発生率／尿酸生成率）×１００
但し、式中の記号は、表１に示す条件で調整された各溶液の吸光度の値とする。
【００１７】
【化３】
0004034984.tif 000004
【００１８】
【表１】
0004034984.tif 000005
【００１９】
【表２】
0004034984.tif 000006
【００２０】
＜実施例４＞
ペカンナッツの可食部を十倍量の70%EtOH中でホモジナイズし、ろ過したろ液をロータリーエバポレーターでアルコール分がなくなるまで濃縮し、ヘキサン、酢酸エチルで順次、液−液分配し、各エキスを得た。この内、酢酸エチル層の減圧濃縮物を本発明の抗酸化用の組成物５、最後に残った水層の減圧濃縮物を本発明の抗酸化用の組成物６とした。高速液体クロマトグラフィーで測定したところ、抗酸化用の組成物５では、ＰＤ（アノマー）が５７重量％、ＧＨＤ（アノマー）が４．６重量％であった。抗酸化用の組成物６ではＰＤ（アノマー）が４８重量％、ＧＨＤ（アノマー）が７．６重量％であった。実施例３の抗酸化活性値は、抗酸化用の組成物５が５４．５％抗酸化用の組成物６が５３．４％であった。
【００２１】
＜実施例５〜１０＞
下記に示す処方に従って、本発明の食品である錠剤を作成した。即ち、処方成分をフローコーターに仕込み、２０重量部の水を噴霧しながら、流動層造粒を行い、３時間４０℃で送風乾燥し、顆粒を得た。これを打錠して錠剤を得た。これらの錠剤を無色透明なガラス瓶に詰め、室内で電灯下１週間の露光試験を行った。比較例２として、抗酸化用の組成物を結晶セルロースに置換したものを、比較例３として、抗酸化用の組成物をＢＨＴに置換したものも作成した。対照として、これらのサンプルと同じものを遮光下にも別途保存した。露光試験後、対照と比較して退色の程度を次の基準に従って判定した。即ち、スコア５：対照とほぼ同じ色、スコア４：対照よりやや黄味が薄い、スコア３：対照に比して黄味の薄さが明白に感じられる、スコア２：かなり白い、スコア１：殆ど白であった。結果を表３に示す。これより、本発明の抗酸化用の組成物は酸化による退色を防ぐ作用に優れることがわかる。
結晶セルロース                      ４０重量部
乳糖                                ２０重量部
抗酸化用の組成物＊                  ３０重量部
リボフラビン                          １重量部
ヒドロキシプロピルメチルセルロース    ８重量部
ステアリン酸マグネシウム              １重量部
＊表３に詳細を示す。
【００２２】
【表３】
0004034984.tif 000007
【００２３】
＜実施例１１〜１６＞
下記に示す処方に従って、本発明の化粧料を作成した。即ち、イ、ロ、ハの成分をそれぞれ７０℃に加熱し、イにロを加え中和し、これに攪拌下徐々にハを加えて乳化し、粒子を整えた後、攪拌冷却して乳液を得た。対照例１としては、抗酸化用の組成物を水に置換したものを用いた。これらについて、４０℃１週間保存した後、アスコルビン酸の残存量を高速液体クロマトグラフィーで定量した。結果を表４に示す。これより、本発明の抗酸化用の組成物はアスコルビン酸など酸化によって劣化しやすい成分を安定化する作用に優れることがわかる。
イ
１，３−ブタンジオール                    ５    重量部
１，２−ペンタンジオール                  ３    重量部
フェノキシエタノール                      ０．５重量部
アクリル酸・メタクリル酸アルキル重合体    ０．５重量部
抗酸化用の組成物＊＊                      ０．５重量部
アスコルビン酸ナトリウム                  ０．５重量部
水                                      ５０    重量部
ロ
１０％水酸化カリウム水溶液                ５    重量部
水                                      ２０    重量部
ハ
スクワラン                              １５    重量部
＊＊表４に詳細を示す
【００２４】
【表４】
0004034984.tif 000008
【００２５】
＜実施例１７＞
実施例５の食品を用いて、飲用試験を行った。即ち、３月〜４月の花粉症の季節に花粉症に悩むパネラー１群２０名に実施例５の食品（本発明群）又は比較例２の食品（対照群）を１日２回５００ｍｇずつ１ヶ月飲用してもらった。その後、その年の花粉症の症状の出方について、（１）いつもの年より良い（２）いつもの年と同じ程度（３）いつもの年より悪いの３者択一の選択で評価してもらった。結果を表５に出現例数として示す。これより、本発明の食品飲用群はいつもの年より花粉症が軽度であったことがわかる。これは、本発明の抗酸化用の組成物により、炎症が抑えられているためと思われる。
【００２６】
【表５】
0004034984.tif 000009
【００２７】
【発明の効果】
本発明によれば、新規の抗酸化成分を提供することができる。