(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物において、
（ｉ）鉄（III）化合物、
（ii）鉄（II）イオン検出試薬、
（iii）酸化剤
を含み、かつ
酸化剤がヨウ素酸塩であることを特徴とするアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項２】
さらに、緩衝剤を含むことを特徴とする請求項１に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項３】
緩衝剤のｐＨが、２〜７であることを特徴とする請求項２に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項４】
さらに、ポリマーを含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項５】
さらに、界面活性剤を含むことを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項６】
鉄（III）化合物が、エチレンジアミン四酢酸一ナトリウム鉄（III）、シュウ酸アンモニュウム鉄（III）水和物、硫酸鉄（III）アンモニュウム水和物、及び
塩化鉄（III）のキレート化合物又はイオン化合物から選ばれることを特徴とする請求項１に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項７】
鉄（II）イオン検出試薬が、２，２′−ビピリジン、２，２′−ビキノリン、１，１０−フェナントロリン及びそれらの誘導体から選ばれることを特徴とする請求項１に記載のアスコルビン酸検出用組成物。
【請求項８】
液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試験片において、請求項１〜７のいずれかの試薬組成物を保持体に保持することを特徴とする試験片。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体試料中の、さらに詳しくは、全血、血清、血漿、尿、髄液、唾液などの生体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物及び試験片に関する。
【０００２】
【従来の技術】
液体試料中のアスコルビン酸を検出するための方法は、種々存在し、知られている。
例えば、特開昭５５−１４２２４９号には、キレート剤と鉄（III）イオン（又は銅（II）イオン）との錯体、金属指示薬、緩衝剤などを用いた方法が示されている。
また、特開昭５７−１５４０５６号、特開昭５８−６３８５０号、特開昭６０−１６２９５４号、特開平１−２５９２６０号には、インドフェノール系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭５４−８０７９３号、特開昭５９−１０６４７６号、特開平１−２１３５７４号には、テトラゾリウム系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭５４−３０８９０号には、オキサジン系色素を用いた方法が示されている。
また、特開昭４８−１００１８７号、特開昭５６−８５５０号には、モリブデン酸を用いた方法が示されている。
また、特開昭６０−６８７０号には、銅イオンを用いて、アスコルビン酸が酸化されて出る過酸化水素による検出を用いた方法が示されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
最近の尿試験片、例えばグルコース、潜血などの項目においては、尿中のアスコルビン酸等還元性物質の影響をある程度の濃度までは、回避できるように工夫されてきているが、充分なものではなく、還元性物質を検出するために、測定レンジが広い試験片が必要となってきている。
しかし、上記の従来技術では、１００ｍｇ／ｄｌ程度までのアスコルビン酸しか検出できないという課題があった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は、上記課題を解決するために、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試薬組成物において、
（ｉ）鉄（III）化合物、
（ii）鉄（II）イオン検出試薬、
（iii）酸化剤
を含み、かつ
酸化剤がヨウ素酸塩であることを特徴とするアスコルビン酸検出用組成物である。
また、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための試験片において、上記の試薬組成物を保持体に保持することを特徴とする試験片である。
【０００５】
【発明の実施の形態】
本発明は、さらに、緩衝剤を含むことが好ましい。
緩衝剤は、リン酸緩衝液、酢酸緩衝液、マロン酸緩衝液、クエン酸緩衝液など種々用いることができる。
また、緩衝剤のｐＨは、２〜７であることが好ましい。
【０００６】
さらに、本発明には、ポリマーや界面活性剤を含むことができる。
ポリマーは、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、アルギン酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、ゼラチンなど種々用いることができる。
界面活性剤は、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００）、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート（ツイーン２０）、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート（ツイーン６０）、ポリオキシエチレンラウリルエーテル（ブリッジ３５）、ポリオキシエチレンセチルエーテル（ブリッジ５８）など種々用いることができる。
【０００７】
本発明における鉄（ＩＩＩ）化合物は、エチレンジアミン四酢酸一ナトリウム鉄（ＩＩＩ）、シュウ酸アンモニュウム鉄（ＩＩＩ）水和物、硫酸鉄（ＩＩＩ）アンモニュウム水和物、塩化鉄（ＩＩＩ）等のキレート化合物やイオン化合物から選択することができる。
【０００８】
また、鉄（ＩＩ）イオン検出試薬は、２，２’−ビピリジン、２，２’−ビキノリン、１，１０−フェナントトリン等の化合物や誘導体から選択することができる。
【０００９】
また、酸化剤は、ヨウ素酸ナトリウム、ヨウ素酸カリウムなどのヨウ素酸塩であるが、ヨウ素酸ナトリウムが好ましい。
本発明は、さらに、液体試料中のアスコルビン酸を検出するための液状試薬や錠剤試薬に応用することも可能である。
以下に実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１０】
【実施例１】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
２，２’−ビピリジン（ナカライテスク製）                  ３  ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）−ナトリウム            ４  ｇ
（ナカライテスク製）
ヨウ素酸ナトリウム（ナカライテスク製）                    １  ｇ
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）        １０  ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）    ８０  ｍｌ
エタノール                                              ２０  ｍｌ
【００１１】
【実施例２】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
１，１０−フェナントロリン（ナカライテスク製）            ３  ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）−ナトリウム            ４  ｇ
（ナカライテスク製）
ヨウ素酸ナトリウム（ナカライテスク製）                    １  ｇ
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）        １０  ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）    ８０  ｍｌ
エタノール                                              ２０  ｍｌ
【００１２】
【比較例１】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
２，２’−ビピリジン（ナカライテスク製）                  ３  ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）一ナトリウム            ４  ｇ
（ナカライテスク製）
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）        １０  ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）    ８０  ｍｌ
エタノール                                              ２０  ｍｌ
【００１３】
【比較例２】
濾紙（ワットマン社製；３ＭＭＣｈｒ）を、下記に示す試薬含浸液に含浸、乾燥した。
＜処方＞
１，１０−フェナントロリン（ナカライテスク製）            ３  ｇ
エチレンジアミン四酢酸鉄（ＩＩＩ）一ナトリウム            ４  ｇ
（ナカライテスク製）
ポリビニルピロリドンＫ−３０（ナカライテスク製）        １０  ｇ
０．５Ｍクエン酸／クエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４）    ８０  ｍｌ
エタノール                                              ２０  ｍｌ
【００１４】
実施例１、２及び比較例１、２にて作製したこの片面に両面テープ（ソニーケミカル製；Ｔ４０００）を貼り、５ｍｍ×５ｍｍにカットし、試薬部分を得た。これを５ｍｍ×６０ｍｍのＰＥＴフィルムの先端部に貼付し、試験片を得た。
＜測定方法＞
実施例１、２及び比較例１、２にて作製した上記試験片の試薬部分に下記試料１〜６を７μｌ滴下して、各試験紙の最大吸収波長における１分後の反射率変化を、色差計（日本分光製；Σ−９０）を用いて、測定した。
試料１；蒸留水
試料２；アスコルビン酸水溶液  （  １０ｍｇ／ｌ）
試料３；アスコルビン酸水溶液  （  ３０ｍｇ／ｌ）
試料４；アスコルビン酸水溶液  （  ５０ｍｇ／ｌ）
試料５；アスコルビン酸水溶液  （１００ｍｇ／ｌ）
試料６；アスコルビン酸水溶液  （３００ｍｇ／ｌ）
ここで、最大吸収波長は、実施例１及び比較例１においては５４０ｎｍ、実施例２及び比較例２においては５１０ｎｍとなった。
＜結果＞
結果として、実施例と比較例の最大吸収波長における反射率変化をまとめ、表１に示す。
【００１５】
【表１】
0004071837.tif 000002
上記結果より、実施例１、２による試験片は、比較例１、２による試験片に比べて、測定レンジはかなり広くなっている。
しかも、試薬部分の発色は、発色系であるため肉眼比色においても有利である。
【００１６】
【発明の効果】
本発明によって、従来よりも広い測定レンジを持つ試験片を作製することが可能になった。