(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の一般式（Ｉ）、
【化１】
0004170413.tif 000040
（上記式中、 Ｗは、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝したアルキレン基を表し、Ｘは、下記式（ＩＩ）、
【化２】
0004170413.tif 000041
（上記基中、Ｚは、オリゴヌクレオチドまたはそのリン酸エステル結合の全部または一部が、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホトリエステル、メチルホスホノチオエート、アルキルホスホルアミダイド及びボラノホスフェート誘導体から選ばれた１つ又はそれ以上の誘導体で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体を表す）で表される基を表し、Ｔ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ−（ＣＨ２）２−（ここで、ｔは１〜３の整数を表す）を表し、Ｔ２は、下記式（ＩＩＩ）：
【化３】
0004170413.tif 000042
（上記基中、Ｔ１＊およびＴ１＊＊は、それぞれ同一又は異なって、前記のＴ１と同じであり、そしてｎ＊、ｐ＊、ｑ＊、Ｔ３＊、Ｔ４＊およびＦ３は、それぞれ同一又は異なって、後述するｎ、ｐ、ｑ、Ｔ３、Ｔ４およびＦ１と同じことを意味する。）を表し、Ｔ３、Ｔ４、およびＴ５は、−ＣＯＮＨ−を表し、Ｔ６は、−ＯＣＯ−、又は−ＮＨＣＯ−基を表し、Ｆ１およびＦ２は、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、マンノース、ラクトース、グルコース、メリビオース、ゲンチビオース、イソマルトトリオース、フェニルグルコシド、ガラクトサミン，Ｎ−ベンゾイルガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ−ベンゾイルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラクトサミン、及びＮ−アセチルラクトサミンから選択されるいずれかの糖類、又はこれらの糖残基中の水酸基もしくはアミノ基のＮ−又はＯ−アシル誘導体、カルボキシル基で置換されたもしくは置換されていないＮ−又はＯ−アルキル誘導体、及びそれらの無機酸又は有機酸とのエステル誘導体から選択されるいずれかの糖類誘導体を表し、ｍは、２〜１０の整数を表し、ｎは、０〜４の整数を表し、ｐは、０〜４の整数を表し、ｑは、０〜４の整数を表し、そしてｒは、１を表す）で表される化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項２】
Ｔ６が−ＮＨＣＯ−基である請求項１に記載の化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項３】
下記の一般式（Ｉａ）
【化４】
0004170413.tif 000043
（上記式中、Ｗは、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝したアルキレン基を表し、Ｘは、下記式（ＩＩ）、
【化５】
0004170413.tif 000044
（上記基中、Ｚは、オリゴヌクレオチドまたはそのリン酸エステル結合の全部または一部が、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、アルキルホスホトリエステル、メチルホスホノチオエート、アルキルホスホルアミダイド及びボラノホスフェート誘導体から選ばれた１つ又はそれ以上の誘導体で置換されたオリゴヌクレオチド誘導体を表す。）で表される基を表わし、Ｔ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２−（ＣＨ２）２−を表し、Ｔ２は、下記式（ＩＩＩ）：
【化６】
0004170413.tif 000045
（上記基中、Ｔ１＊およびＴ１＊＊は前記したＴ１において定義された内容と、そしてＦ３は後述するＦ１において定義された内容と、それぞれ同一の内容を表すが、これらとは同一または異なっていてもよい）を表し、Ｔ６は、−ＯＣＯ−、又は−ＮＨＣＯ−基を表し、Ｆ１およびＦ２は、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、マンノース、ラクトース、グルコース、メリビオース、ゲンチビオース、イソマルトトリオース、フェニルグルコシド、ガラクトサミン，Ｎ−ベンゾイルガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ−ベンゾイルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラクトサミン、及びＮ−アセチルラクトサミンから選択されるいずれかの糖類、又はこれらの糖残基中の水酸基もしくはアミノ基のＮ−又はＯ−アシル誘導体、カルボキシル基で置換されたもしくは置換されていないＮ−又はＯ−アルキル誘導体、及びそれらの無機酸又は有機酸とのエステル誘導体から選択されるいずれかの糖類誘導体を表し、そして、ｍは、３〜９の整数を表す）で表される化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項４】
Ｆ１、Ｆ２、又は、Ｆ３が、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ラクトース、ラクトサミン、またはＮ−アセチルラクトサミンを表す、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項５】
Ｚが、オリゴデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチド、並びにこれらのホスホロチオエート誘導体およびメチルホスフェート誘導体から選択されるものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項６】
Ｚがアンチセンスオリゴヌクレオチドである請求項５に記載の化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項７】
Ｚが、配列番号１〜４に記載の配列から選択されるオリゴヌクレオチドである請求項５または６に記載の化合物、その塩又はその溶媒和物。
【請求項８】
次の一般式（ＩＶ）、
【化７】
0004170413.tif 000046
（上記式中、Ｔ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｔ−（ＣＨ２）２−（ここで、ｔは１〜３の整数を表す）を表し、Ｔ２は、下記式（ＩＩＩ）：
【化８】
0004170413.tif 000047
（上記基中、Ｔ１＊およびＴ１＊＊は、それぞれ同一又は異なって、前記のＴ１と同じであり、そしてｎ＊、ｐ＊、ｑ＊、Ｔ３＊、Ｔ４＊およびＦ３は、それぞれ同一又は異なって、後述するｎ、ｐ、ｑ、Ｔ３、Ｔ４およびＦ１と同じことを意味する。）を表し、Ｔ３、Ｔ４、およびＴ５は、−ＣＯＮＨ−を表し、Ｆ１およびＦ２は、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、マンノース、ラクトース、グルコース、メリビオース、ゲンチビオース、イソマルトトリオース、フェニルグルコシド、ガラクトサミン，Ｎ−ベンゾイルガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ−ベンゾイルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラクトサミン、及びＮ−アセチルラクトサミンから選択されるいずれかの糖類、又はこれらの糖残基中の水酸基もしくはアミノ基のＮ−又はＯ−アシル誘導体、カルボキシル基で置換されたもしくは置換されていないＮ−又はＯ−アルキル誘導体、及びそれらの無機酸又は有機酸とのエステル誘導体から選択されるいずれかの糖類誘導体を表し、ｍは２〜１０の整数を表し、ｎは、０〜４の整数を表し、ｐは、０〜４の整数を表し、ｑは、０〜４の整数を表し、そしてｒは、１を表す）で表される化合物、その塩又はその活性エステル。
【請求項９】
下記の一般式（ＩＶａ）
【化９】
0004170413.tif 000048
（上記式中、Ｔ１は、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）２−（ＣＨ２）２−を表し、Ｔ２は、下記式（ＩＩＩ）：
【化１０】
0004170413.tif 000049
（上記基中、Ｔ１＊およびＴ１＊＊は前記したＴ１において定義された内容と、そしてＦ３は後述するＦ１において定義された内容と、それぞれ同一の内容を表すが、これらとは同一または異なっていてもよい）を表し、Ｆ１およびＦ２は、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、マンノース、ラクトース、グルコース、メリビオース、ゲンチビオース、イソマルトトリオース、フェニルグルコシド、ガラクトサミン，Ｎ−ベンゾイルガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ−ベンゾイルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラクトサミン、及びＮ−アセチルラクトサミンから選択されるいずれかの糖類、又はこれらの糖残基中の水酸基もしくはアミノ基のＮ−又はＯ−アシル誘導体、カルボキシル基で置換されたもしくは置換されていないＮ−又はＯ−アルキル誘導体、及びそれらの無機酸又は有機酸とのエステル誘導体から選択されるいずれかの糖類誘導体を表し、そして、ｍは、３〜９の整数を表す）で表される化合物、その塩又はその活性エステル。
【請求項１０】
Ｆ１、Ｆ２、又は、Ｆ３が、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ラクトース、ラクトサミン、またはＮ−アセチルラクトサミンを表す、請求項８又は９に記載の化合物、その塩又はその活性エステル。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物を含有してなる医薬組成物。
【請求項１２】
悪性腫瘍治療剤、抗ウイルス剤、抗リウマチ剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、免疫抑制剤、循環機能改善剤および内分泌機能改善剤からなる群から選択される医薬である請求項１１に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、その末端に糖残基を有する組織細胞に特異的な化合物に関し、更に詳細にはこの化合物はオリゴヌクレオチド等が導入されたオリゴヌクレオチド等の誘導体であり、アンチセンスなどによる組織、特に臓器に特異的な治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、オリゴヌクレオチド、特にアンチセンスオリゴヌクレオチド、を用いて目的とする遺伝子の発現を抑制等する試みがなされている。しかしながら、オリゴヌクレオチドを生体に直接投与すると、血液中で容易に分解されるか、またはその大部分が尿中に容易に排泄されてしまうことが指摘されていた。
また、オリゴヌクレオチドは、目的とする病変臓器細胞に取り込まれず、分解または排泄されてしまうことも指摘されていた。
かかる問題を解決するため、アシアロオロソムコイドとポリ−Ｌ−リジンのコンジュゲートを作成し、ヒトＢ型肝炎ウイルスに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドとイオン的相互作用に基づいた複合体を形成させることにより、そのウイルス性タンパク質の生合成抑制効果を増強できること(G. Y. Wu and C. H. Wu.(1992) J. Biol. Chem. 267, 12436) および同様な複合体を用いてクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ遺伝子を肝臓に送達し、発現させ得ること(G. Y. Wu and C. H. Wu.(1991) Biotherapy 3, 879)が報告されている。これらの技術はＷＯ９３／０４７０１号および同９２／２０３１６号に記載されている。また、遺伝子の二重らせん構造内に入り込む化合物（すなわち、インターカレータ）を糖誘導体に共有結合させ遺伝子と混合することにより調整した複合体が、糖を特異的に認識する細胞に取り込まれ、効率よく遺伝情報を発現させる上で有用であることがＷＯ９３／１９７６８号に記載されている。Ｎａｋａｉらは、アンチセンス核酸の複合体を静注し、この複合体の肝臓移行量をシュミレーションした結果、複合体が血中で解離しやすいため、これら非共有結合による複合体では、十分な肝移行性を得られないことを示した。(D. Nakai, T. Seita, and Y. Sugiyama.(1995) PHARM JAPAN, 11, 27)。
【０００３】
一方、カルボキシメチル化したデキストランにガラクトースを導入したもの(M. Nishikawa, et al.(1993) Pharmaceutical Research 10 1253)およびポリ−Ｌ−グルタミン酸にガラクトースを導入したもの(H. Hirabayashi, et al. (1994)日本薬学会第１１４年会  一般講演３０（６）１５−４）が、肝実質細胞に選択的に分布することが知られている。
また、本発明者らは、オリゴヌクレオチドと、その末端に単糖残基を有するアミダイト誘導体との複合体が、臓器特異的な移行性を示し、かつ、臓器細胞における特定遺伝子の発現を抑制等をすることを報告してきた（ＷＯ９６／３０３８６）。しかし、このアミダイド誘導体は親水性の部分が多く含まれているため吸湿性が高く、水分の混入しやすかった。そのため、水分による分解が生じやすく不安定であり、アンチセンス核酸とのコンジュゲートの生成量がかならずしも一定ではなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は、水分などに対して安定で、かつ、アンチセンス核酸とのコンジュゲートの生成量が一定している、オリゴヌクレオチドを臓器、特に肝臓、細胞内に取り込ませることができる化合物を提供することをその目的とする。
【０００５】
【課題を解決する手段】
本発明は、下記の一般式（Ｉ）、
【０００６】
【化１１】
0004170413.tif 000002
（前記化１と同じ）
【０００７】
（上記式中、Ｗは、炭素数１〜１０の直鎖又は分枝したアルキレン基を表し、
Ｘは、下記式（ＩＩ）、
【０００８】
【化１２】
0004170413.tif 000003
（前記化２と同じ）
【０００９】
（上記式中、Ｚは、オリゴヌクレオチドまたはその誘導体を表す）で表される基を表すか、又は、Ｘと隣接するＷが一緒になって薬剤を表し、
Ｔ1は、−（ＣＨ2）ｓ−（ここで、ｓは２〜１０の整数を表す）、または、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）ｔ−（ＣＨ2）2−（ここで、ｔは１〜３の整数を表す）を表し、
Ｔ2は、−（ＣＨ2）ｕ−（ここで、ｕは２〜１０の整数を表す）、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）ｖ−（ＣＨ2）2−（ここで、ｖは１〜３の整数を表す）、または、
下記式（ＩＩＩ）、
【００１０】
【化１３】
0004170413.tif 000004
（前記化３と同じ）
【００１１】
（上記式中、Ｔ1*およびＴ1**は、前記したＴ1において定義された内容と、そしてｎ*、ｐ*、ｑ*、Ｔ3*、Ｔ4*、およびＦ3は後述するｎ、ｐ、ｑ、Ｔ3、Ｔ4、およびＦ1において定義された内容と、それぞれ同一の内容を表すが、これらとは同一または異なっていてもよい）で表される基を表し、
Ｔ3、Ｔ4、およびＴ5は、同一または異なっていてもよく、それぞれ−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、または−Ｏ−を表すが、但し、Ｔ3、Ｔ4、およびＴ5のいずれかが−Ｏ−を表すときは、他の２つの基は−Ｏ−以外の基を表し、
Ｔ6は、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、又は、−Ｏ−基を表し、
Ｆ1およびＦ2は、同一または異なっていてもよく、単糖類もしくはこれらの誘導体、またはこれらからなる多糖類を表し、
【００１２】
ｍは、０〜１０の整数を表し、
ｎは、０〜４の整数を表し、
ｐは、０〜４の整数を表し、
ｑは、０〜４の整数を表し、そして
ｒは、１を表す）
で表される化合物、その塩又はその溶媒和物に関する。
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、オリゴヌクレオチドや薬剤を臓器、特に肝臓、や組織細胞内に特異的に取り込ませることができ、組織に特異的な医薬として有用である。したがって、本発明は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物及び製薬上許容される担体とからなる医薬組成物に関する。
また、本発明は、一般式（ＩＶ）、
【００１３】
【化１４】
0004170413.tif 000005
【００１４】
（式中に示される各置換基は、前記一般式（Ｉ）と同じである。）
で表される化合物、その塩又はその反応性誘導体に関する。本発明の一般式（ＩＶ）で表される化合物は、前記一般式（Ｉ）で表される化合物を製造する際の中間体として有用である。
【００１５】
本発明の一般式（Ｉ）における置換基Ｆ1、Ｆ2、およびＦ3は、単糖類若しくはその誘導体又はそれらからなる多糖類であり、これらの糖残基は組織細胞に特異的な受容体に結合し得るものであれば特に制限はなく、受容体に結合し、目的の臓器又は組織細胞に一般式（Ｉ）の置換基Ｘの部分に結合しているオリゴヌクレオチドや薬剤を取り込ませることができる糖残基であればよい。また、これらの誘導体としては、例えば、糖残基中の水酸基やアミノ基のＮ−またはＯ−アシル誘導体（例えばＮ−又はＯ−アセチル誘導体）、Ｎ−又はＯ−アルキル誘導体（このアルキル基はさらに置換されていてもよい。例えば、カルボキシメチル基などのようなカルボキシル基で置換されていてもよい。）、それらの硫酸、リン酸またはカルボン酸等の無機酸又は有機酸とのエステル誘導体（例えば硫酸エステル誘導体）などが挙げられる。
【００１６】
置換基Ｆ1、Ｆ2、およびＦ3の糖類としては、例えば、ガラクトース、マンノース、ラクトース、グルコース、メリビオース、ゲンチビオース、イソマルトトリオース、フェニルグルコシド、ガラクトサミン、Ｎ−ベンゾイルガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、グルコサミン、Ｎ−ベンゾイルグルコサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン、ラクトサミン、Ｎ−アセチルラクトサミンなどを挙げることができる。好ましくは、ガラクトサミン、ガラクトース、Ｎ−アセチルガラクトサミンンを挙げることができ、より好ましくは、Ｎ−アセチルガラクトサミンを挙げることができる。
【００１７】
置換基Ｆ1、Ｆ2およびＦ3の糖残基の中の、反応に関与しない水酸基又はアミノ基は保護されていてもよい。このような保護基としてはアシル基が挙げられ、好ましくは直鎖状または分枝鎖状のＣ1〜6（好ましくはＣ1〜4）アルキルカルボニル基、より好ましくはアセチル基、である。また、これらの糖残基の中の反応に関与しない水酸基は保護されていてもよいが、これらの水酸基は保護されていないことが好ましい。
ここで糖残基は、その糖分子が有する水酸基（好ましくはアノマー位の水酸基）の水素原子が一つの除かれたものを意味する。この場合、Ｆ1、Ｆ2およびＦ3と、Ｔ1、Ｔ2およびＴ1**との結合は、αグリコシド結合であってもβグリコシド結合であってもよい。
【００１８】
置換基Ｔ1およびＴ2は、糖残基と分岐部分とをつなぐスペーサー部分に相当し、適度の水溶性を与える部分であり、かつ、糖残基と分岐部分との適度の距離を保たせるための部分である。したがって、このような機能を有すれば特に制限されるものではないが、エチレングリコール単位で０〜１０程度、また、アルキルスペーサーとして炭素数０〜１０個程度が好ましく、前記で定義したｓおよびｕでは２〜１０、より好ましくは２〜８の整数を表し、同様にｔおよびｖは１〜３、より好ましくは２の整数を表す。
本発明による化合物は、一般式（Ｉ）のＴ2において前記した式（III）を有していてもよい。この式（III）で表される基は、一般式（Ｉ）において、Ｘ−（ＣＨ2）ｍ−（Ｔ5）ｒ−および−Ｆ2の部分を除いた部分と実質的に同一の意味を有する（）但し、式（III)中では、Ｆ1がＦ3になっている。）。従って、Ｔ1*およびＴ1**はＴ1において定義された内容と同じ内容を表すが、これらとＴ1は同一または異なっていてもよい。また、ｎ*、ｐ*、およびｑ*は、ｎ、ｐ、およびｑにおいて定義された内容と同じ範囲の整数を表すが、これらとｎ、ｐ、およびｑとは同一または異なっていてもよい。さらに、Ｔ3*、Ｔ4*、およびＦ3は、Ｔ3、Ｔ4、およびＦ1において定義された内容と同一の内容を表すが、これらとＴ3、Ｔ4、およびＦ1とは同一または異なっていてもよい。
【００１９】
一般式（Ｉ）において、Ｔ3、Ｔ4、およびＴ5は、同一または異なっていてもよく、それぞれ−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、または−Ｏ−を表し、好ましくは−ＣＯＮＨ−を表す。但し、Ｔ3、Ｔ4、およびＴ5のいずれかが−Ｏ−を表すときは、他の２つの基は−Ｏ−以外の基を表すものであるが、好ましくは、−ＣＯＮＨ−又は−ＮＨＣＯ−基をあげることができる。
Ｔ6は、−ＣＯＯ−、−ＯＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、又は、−Ｏ−基を表し、好ましくは−ＣＯＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＣＯＯ−又は−ＯＣＯ−基であり、より好ましくは−ＣＯＮＨ−基である。
Ｗは、炭素数１〜２０の直鎖又は分枝したアルキレン基を表し、好ましくは炭素数１〜１０のものであり、より好ましくは炭素数３〜８のもである。
Ｆ1およびＦ2は、同一または異なっていてもよく、単糖類もしくはこれらの誘導体、またはこれらからなる多糖類を表し、
【００２０】
また、一般式（Ｉ）中の整数値ｍは、０〜１の整数を表し、好ましくは０または２〜１０、より好ましくは３〜９の整数を表し、ｎは、０〜４の整数を表し、好ましくは０〜２、より好ましくは０であり、ｐは、０〜４の整数を表し、好ましくは０〜２、より好ましくは０であり、ｑは、０〜４の整数を表し、好ましくは１または２、より好ましくは２の整数を表し、そして、ｒは、０または１の整数を表し、好ましくは１の整数を表す。ここで、ｒが０の場合には、−（Ｔ5）ｒ−のＴ5は存在せず、この基は単結合を表すことになる。
【００２１】
式（II）においてＺが表すオリゴヌクレオチドとしては、オリゴデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）およびオリゴリボヌクレオチド（ＲＮＡ）が挙げられる。また、その塩基配列および塩基数は特に限定されず、化合物の用途に応じて適宜決定することができる。
ヌクレオチドの誘導体としては、下記式で表されるようにリン酸エステル結合部分の一つまたは二つの酸素原子が他の原子または基と置換されたものが挙げられる。
【００２２】
【化１５】
0004170413.tif 000006
【００２３】
Ａ1およびＡ2の組み合わせ、並びにその誘導体名は以下の通りである。
【００２４】
【表１】
0004170413.tif 000007
【００２５】
表中、Ｒはアルキル基を表す。
なお、置換はヌクレオチド中のリン酸エステル結合の全部または一部において行われていてもよく、また、リン酸エステル結合ごとに異なる原子または基により置換がなされていてもよい。
合成が簡便なオリゴヌクレオチド誘導体としては、天然型のホスホジエステルの他にホスホロチオエート誘導体が挙げられる。
Ｚが表すオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドであることができる。アンチオリゴヌクレオチドとしては、抗ウイルス作用を示すもの、具体的にはＢ型肝炎ウイルスの表面抗原（ＨＢｓＡｇ）に対するもの(Goodarzi, G., et al. (1990) J. Gen. Virol. 71. 3021)、およびエンベロープタンパク質（ＨＢｅＡｇ）に対するもの(Blum, H. E., et al. (1991) Lancet 337, 1230)等が挙げられる。これら以外にもインターフェロンの抗ウイルス作用の本態として知られている２’，５’−オリゴアデニレート、または癌遺伝子の発現を抑制するものが挙げられる。
【００２６】
Ｚが表すオリゴヌクレオチドとしては、例えば、配列番号１〜４に記載されるＤＮＡ配列が挙げられる。
配列番号１に記載の配列は、マウス肝炎ウイルスＪＨＭ−Ｘ株遺伝子ＲＮＡのリーダー部分にに相補的な配列を有する２０ｍｅｒのオリゴデオキシヌクレオチド（アンチセンス配列）である。
配列番号２に記載の配列は、ヒトｃ−ｍｙｃ遺伝子由来のメッセンジャーＲＮＡの翻訳開始コドンから３′端側へ５コドンまでの部分の塩基配列と同じ配列を有する１５ｍｅｒのオリゴデオキシヌクレオチド（センス配列）である。
配列番号３に記載の配列は、ヒトｃ−ｍｙｃ遺伝子由来のメッセンジャーＲＮＡの翻訳開始コドンから３′端側へ５コドンまでの部分の塩基配列に相補的な配列を有する１５ｍｅｒのオリゴデオキシヌクレオチド（アンチセンス配列）である。
配列番号４に記載の配列は、ラット上皮細胞成長因子受容体タンパク質のメッセンジャーＲＮＡの３′未満から３３番目〜５０番目までの塩基配列に相補的な配列を有する１８ｍｅｒのオリゴデオキシヌクレオチド（アンチセンス配列）である。
【００２７】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の置換基Ｘ−Ｗ−は、オリゴヌクレオチドを含有するのみならず、基Ｘと基Ｗが一緒になって生理活性を有する薬剤であってもよい。ここで使用できる薬剤としては、組織、臓器に特異的に作用するものであって、分子中に一般式（ＩＶ）の末端のカルボキシル基などの反応性の官能基と化学結合をし得る反応性の官能基、例えば、アミノ基や水酸基などの官能基を有するものであれば特に制限はない。これらの薬剤としては、例えば、ヒドロクロロチアジド、トリクロロメチアジド、プラバスタチン、エチレフリン、アムリノン、アクチノマイシンＤ、ダウノルビシン、マイトマイシンＣ、ドキソルビシン、エピルビシン、ニムスチン、ペンフルチド、メトトレキセート、アシクロビル、ビダラビン、ara-Ａ、ara-ＡＭＰ、ara-Ｃ、アマンタジン、リマンタジン、アラノシン、シネファンジン、アジドチミジン、セフォタキシム、セフォジジムなどが挙げられる。
【００２８】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の塩としては無機酸又は有機酸との塩などをあげることができ、また、溶媒和物としては水和物などが挙げられる。
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、その末端に糖残基を有する。従って、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、特定の糖構造を特異的に認識する細胞に特異的に移行させることができる。そして、一般式（Ｉ）で表される化合物が有している置換基Ｚの部分のオリゴヌクレオチド又は薬剤を、特定の組織細胞に特異的に取り込ませることが可能となる。
【００２９】
本発明による好ましい化合物群としては、式（Ｉ）で表される化合物であって、Ｔ1が、−（ＣＨ2）ｓ−（ここで、ｓは２〜８の整数を表す）、または−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−（ＣＨ2）2−を表し、
Ｔ2が、−（ＣＨ2）ｕ−（ここで、ｕは２〜８の整数を表す）、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−（ＣＨ2）2−、または前記基（IV）（基中、Ｔ1*およびＴ1**は前記したＴ1と、そしてｎ*、ｐ*、ｑ*、Ｔ3、Ｔ4*およびＦ3は後述するｎ、ｐ、ｑ、Ｔ3、Ｔ4、およびＦ1と、それぞれ同一の意味を表すが、これらとは同一または異なっていてもよい）を表し、
Ｔ3、Ｔ4、およびＴ5が、−ＣＯＮＨ−を表し、
Ｆ1およびＦ2が、同一または異なっていてもよく、それぞれガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ−アセチルガラクトサミン、ラクトース、ラクトサミン、またはＮ−アセチルラクトサミンを表し、
ｍが、０または２〜１０の整数を表し、
ｎが、０〜２の整数を表し、
ｐが、０〜２の整数を表し、
ｑが、０〜２の整数を表し、そして
ｒが、１を表すもの、が挙げられる。
更に好ましい本発明による化合物は、次の一般式（Ｉａ）で表される化合物である。
【００３０】
【化１６】
0004170413.tif 000008
【００３１】
（上記式中、
Ｘは、下記式（ＩＩ）、
【００３２】
【化１７】
0004170413.tif 000009
【００３３】
（上記基中、Ｚは、オリゴヌクレオチドまたはその誘導体を表す）で表される基を表し、
Ｔ1は、−（ＣＨ2）ｓ−（ここで、ｓは２〜８の整数を表す）、または−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−（ＣＨ2）2−を表し、
Ｔ2は、−（ＣＨ2）ｕ−（ここで、ｕは２〜８の整数を表す）、−（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）2−（ＣＨ2）2−、または、下記式（ＩＩＩ）、
【００３４】
【化１８】
0004170413.tif 000010
【００３５】
（上記式中、Ｔ1*およびＴ1**は前記したＴ1において定義された内容と、そしてＦ3は後述するＦ1において定義された内容と、それぞれ同一の内容を表すが、これらとは同一または異なっていてもよい）を表し、Ｆ1およびＦ2は、同一または異なっていてもよく、ガラクトース、グルコース、およびガラクトサミンから選択される単糖もしくはこれら単糖の誘導体、またはこれら単糖および／または単糖の誘導体からなる二糖類を表し、これら単糖およびその誘導体並びに二糖類の反応に関与しない水酸基は保護されていてもよく、そして
ｍは、３〜９の整数を表す）
【００３６】
本発明のより好ましい一般式（Ｉ）で表される化合物の例としては、次の一般式（Ｉｂ）、
【００３７】
【化１９】
0004170413.tif 000011
【００３８】
（式中、各置換基は前記と同様のものを示す。）
で表される化合物をあげることができる。
また、さらに好ましい一般式（Ｉ）で表される化合物の例としては、次の一般式（Ｉｃ）、
【００３９】
【化２０】
0004170413.tif 000012
【００４０】
（式中の各置換基は、前記のものと同様のものを意味する。）
で表される化合物をあげることができる。
【００４１】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、置換基Ｔ6がカルボキシル基から誘導される基、例えば−ＣＯＮＨ−基などの場合の化合物は、一般式（ＩＶ）で示される化合物と、次式（Ｖ）又は（ＶＩ）、
Ｘ−Ｗ−ＮＨ2           （Ｖ）
Ｘ−Ｗ−ＯＨ            （ＶＩ）
（式中、置換基Ｘ及びＷは前記したものを示す。）
で表される化合物とを、通常のカップリング反応によりカップリングさせることにより製造することができる。
本発明の一般式（ＩＶ）で表される化合物の反応性誘導体としては、混合酸無水物や酸ハロゲン化物、活性エステル（例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなど）などの反応性を有するカルボン酸誘導体が挙げられる。
【００４２】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物のうち、置換基Ｔ6が単原子の官能基から誘導される基、例えば−Ｏ−基、−ＮＨＣＯ−基などの場合の化合物は、一般式（ＶＩＩ）、
【００４３】
【化２１】
0004170413.tif 000013
【００４４】
（式中、置換基Ｒ1は脱離基、水酸基又はアミノ基を示し、その他の置換基は前記と同様のものを示す。）
で表される化合物と、前記式（Ｖ）若しくは（ＶＩ）又は次式（ＶＩＩＩ）、
Ｘ−Ｗ−ＣＯＯＨ          （ＶＩＩＩ）
（式中、置換基Ｘ及びＷは前記したものを示す。）
で表される化合物とを、通常のカップリング反応によりカップリングさせることにより製造することができる。
これらのカップリング反応は、通常のエステル化、アミド化又はエーテル化などの方法により行うことができるが、好ましくはペプチド化学で行われる方法があげられる。
【００４５】
前記の一般式（ＩＶ）又は（ＶＩＩ）で表される化合物は、種々の方法で製造することができる。例えば、次の（１）〜（３）の方法を示すことができる。
（１）下記式（ＩＸ）、
【００４６】
【化２２】
0004170413.tif 000014
【００４７】
（上記式中、Ｒ1はハロゲン原子または保護されたもしくは保護されていない水酸基、アミノ基もしくはカルボキシル基を表し、Ｔ1〜4、Ｆ1、Ｆ2、ｎ、ｐ、およびｑは前記と同一内容を表すが、Ｆ1およびＦ2の反応に関与しない官能基は保護されているのが好ましい）
で表される化合物と、下記式（Ｘ）、
Ｒ2−（ＣＨ2）m−Ｒ1            （Ｘ）
（上記式中、Ｒ2はハロゲン原子、又は、保護されていてもよい水酸基、アミノ基若しくはカルボキシル基を表し、Ｒ1は前記と同一内容を表し、ｍは前記と同一内容を表す。）
で表される２官能性化合物、例えば、ジカルボン酸、ジアミン、アミノ酸など化合物の片方の官能基を反応に関与しないようにペプチド化学などに使用される保護基で保護しておき、他の官能基を反応性の基に活性化させた反応性の化合物と反応させることにより製造することができる。例えば、アミド結合させる場合には縮合剤（例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド）の存在下で行う縮合法、クロル炭酸イソブチル等の存在下で行う混合酸無水物法、またはヒドロキシコハク酸イミド等を用いる活性エステル法によって反応させることにより得ることができる。また、エーテル結合させる場合には、対応するハロゲン化合物とアルコキシドとの縮合反応によって得ることができる。この場合、反応温度および反応時間はこれらの方法に通常用いられている条件を適用することができる。
より具体的に示せば、上記式（ＩＸ）の化合物の置換基Ｒ1がアミノ基のものは、そのＢｏｃ（ベンジルオキシカルボニル基）保護基を定法によりトリフルオロ酢酸で除去することにより得ることができ、これを別に調製したモノベンジル基で片方のカルボキシル基を保護したアジピン酸の活性エステルとカップリングさせることによりモノベンジル基で保護されたカルボン酸誘導体を得ることができる。
上記式（ＩＸ）の化合物は、下記式（ＸＩ）、
【００４８】
【化２３】
0004170413.tif 000015
【００４９】
（上記式中、Ｒ1、ｎ、ｐ、およびｑは前記と同一内容を表す。）
で表される化合物と、下記式（ＸＩＩ）、
Ｒ1−Ｔ1−Ｆ1          （ＸＩＩ）
（上記式中、Ｒ1、Ｔ1、およびＦ1は前記と同一の内容を表す。）
で表される化合物とを、上記と同様に縮合反応等によって反応させ、場合によっては脱保護することによって得ることができる。また、式（ＩＸ）においてＴ2が前記基（ＩＩＩ）で表される場合は、上記式（ＸＩ）の化合物同士（これらは互いに同一であっても異なっていてもよい）を同様に縮合反応等によって反応させ、場合によっては脱保護し、次いで式（ＸＩＩ）で表される化合物を反応させることによって得ることができる。
【００５０】
より具体的には、Ｎ−Ｂｏｃ−グルタミル−γ−グルタミン酸の３個のカルボキシル基の保護基のベンジル基を接触還元などにより除去し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどとして活性化し、これを別に調製した前記式（ＸＩＩ）の置換基Ｒ１がアミノ基である化合物と通常の方法で反応させることにより、前記式（ＩＸ）で表される化合物のアミド誘導体を得ることができる。
また、式（ＸＩＩ）で表される化合物は、市販の糖のアセチル誘導体、又は無保護の糖を定法によりアセチル化した糖のアセチル誘導体等の保護された糖類や還元末端を定法により選択的に活性化した糖類の保護体と、末端の官能基が耐酸性の保護基で保護されたスペーサー用のアルコール誘導体を、必要に応じて活性化させて、通常の方法にしたがって、酸触媒（例えば、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート、トリフルオロメタンスルホン酸など）の存在下に、グリコシル化することにより製造することができる。
（２）下記式（ＸＩＩＩ）、
【００５１】
【化２４】
0004170413.tif 000016
【００５２】
（上記式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｔ5、ｍ、ｎ、ｐ、およびｑは前記と同一内容を表す。）で表される化合物と、前記式（ＸＩＩ）で表される化合物とを、上記と同様に縮合反応等によって反応させ、場合によっては脱保護することにより得ることができる。
上記式（ＸＩＩＩ）の化合物は、前記式（ＸＩ）の化合物と前記式（Ｘ）の化合物とを上記と同様に縮合反応等によって反応させ、場合によっては脱保護することにより得ることができる。また、式（Ｉ）においてＴ2が前記基（ＩＩＩ）で表される化合物は、上記式（Ｘ）の化合物と上記式（ＸＩＩＩ）の化合物とを同様に縮合反応等によって反応させ、場合によっては脱保護し、次いで式（ＸＩＩ）の化合物を反応させることによって得ることができる。
（３）下記式（ＸＩＶ）
【００５３】
【化２５】
0004170413.tif 000017
【００５４】
（上記式中、Ｔ1〜5、Ｒ2、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、およびｒは前記と同一内容を表す。）で表される化合物と、下記式（ＸＶ）の化合物：
Ｄ−Ｆ*                  （ＸＶ）
（上記式中、Ｄはハロゲン原子、アシルオキシ基（例えばアセトキシ基）、またはＣＣｌ3Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ−などの脱離基を表し、Ｆ*は前記Ｆ1またはＦ2を表す。）
で表される化合物とを、−２０℃〜室温の反応温度および１０分〜２４時間の反応時間のもとでグリコシル化反応を行い、場合によっては脱保護することにより得ることができる。
上記式（ＸＩＶ）の化合物は、上記式（ＸＩＩＩ）の化合物と下記式（ＸＶＩ）の化合物：
Ｒ3−Ｔ1−Ｒ2              （ＸＶＩ）
（上記式中、Ｒ2、Ｒ3およびＴ1は前記と同一内容を表す。）
とを、同様に縮合反応等によって反応させ、場合によっては脱保護することによって得ることができる。
【００５５】
前記の一般式（Ｖ）、（ＶＩ）又は（ＶＩＩＩ）で表される化合物は、前記の一般式（Ｉ）における置換基Ｘがオリゴヌクレオチドである場合には、ヌクレオチドとを、通常用いられるＤＮＡの合成方法、例えばβシアノエチルホスホルアミダイド法によって結合させることによって得ることができる。
β−シアノエチルホスホロアミダイド法は、まず、ヌクレオチドを固相に固定し、次いでこのヌクレオチドに活性化試薬（テトラゾール等）によって活性化されたアミダイトモノマー（結合に関与しない水酸基等は保護されていることが好ましい）をカップリングさせ、更に酸化剤（例えばヨウ素水溶液）で酸化し、固相から切り出し、場合によっては脱保護することによって行われる。固相に固定する天然型のホスホジエステル型オリゴヌクレオチドは、この反応を繰り返し行うことによって事前に得ることができる。
【００５６】
また、ホスホロチオネート型オリゴヌクレオチドは、酸化反応に遊離の硫黄原子を発生しうる試薬（例えばBeaucage試薬等）を用いることにより、合成することができる。
また、種々のリン酸エステル結合は、リン酸部分の酸素原子を種々の官能基で置き換えたアミダイトを用いることで形成できる。例えば、５′−ジメトキシトリチルデオキシヌクレオシド３′−（ジメチルアミノ）ホスホロチオアミダイトを用い、硫黄原子で酸化することによりホスホロジチオネート型オリゴヌクレオチドを得ることができる（W. K. D. Bill, et al. (1989) J. Am. Chem. Soc. 111, 2321）。また、５′−ジメトキシトリチルデオキシヌクレオシド  ３′−メチルホスホネートとメシチレンスルホニル−３−ニトロトリアゾールを用いることによりメチルホスホネート型リン酸エステル結合を形成させることができる（P. S. Miller, et al. (1983) Nucleic Acid Rec. 11, 6225）。また、５′−ジメトキシトリチルデオキシヌクレオシド  ３′−Ｏ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイトを用いることによりエチルホスホトリエステル型リン酸エステル結合を形成させることができる（K. A. Gallo, et al. (1986) Nucleic Acid Res. 14, 7405）。
【００５７】
合成終了後の化合物の精製は、分配クロマトグラフィー（例えば、オクタデシルシリカゲルカラム）、イオン交換クロマトグラフィー（例えば、陰イオン交換カラム）、アフィニティークロマトグラフィー（例えば、ＲＣＡレクチンアフィニティーカラム）等によって行うことができる。
【００５８】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物の置換基Ｘ−Ｗ−の部分を、１級又は２級のアミノ基などの反応性の官能基を有する薬剤から当該官能基、例えば、アミノ基、を除いた基とすることもできる。この場合には、薬剤の例えば、アミノ基を必要に応じて活性化させておき、前記一般式（ＩＶ）で表される化合物と通常のアミド化反応により、一般式（Ｉ）で表される化合物を製造することができる。この場合に使用する薬剤としては、１級又は２級のアミノ基を有する薬剤であればよいが、組織細胞に特異的な作用を有する薬剤が好ましい。
【００５９】
さらに、本発明の化合物の製造法をより具体的に説明するが、本発明の化合物がこれらの具体的な化合物に限定されるものではない。
まず、原料化合物３は、次式で示される反応式により製造することができる。
【００６０】
【化２６】
0004170413.tif 000018
【００６１】
この反応式で表される糖誘導体の製造法を以下にさらに具体的に説明する。
上記製造法は、アセチル基で保護したガラクトース誘導体１をアジドアルコール２と反応させ化合物３を得るものである。
アセチル基で保護したガラクトース誘導体１の１ミリモルに対して１．１〜３ミリモル程度のアジドアルコール２を、ルイス酸（例ＢＦ3ＯＥｔ2）２〜１２ミリモル程度とモレキュラーシーブスを用い、溶媒としてハロゲン化炭素類（例塩化メチレン、クロロホルム）、エーテル類（例ベンゼン、トルエン）、アセトニトリル、ピリジン、ジメチルホルムアミドそしてジメチルスルホキシドを用いることができるが、この中でも望ましくは塩化メチレンを用い、−７８℃〜８０℃程度、望ましくは０℃〜２５℃程度で通常反応時間０．５〜２０時間程度、望ましくは２〜１２時間程度反応させて化合物３を得ることができる。
【００６２】
糖部分がガラクトサミンである原料化合物３’は、前記の反応と同様な方法、即ち、次式で示される反応式により製造することができる。
【００６３】
【化２７】
0004170413.tif 000019
【００６４】
この反応式で表される糖誘導体の製造法を以下にさらに具体的に説明する。
市販のガラクトサミン塩酸塩を文献公知あるいはそれに準ずる方法によりアセチル化し、このアセチル基で保護したＮ−アセチルガラクトサミン誘導体１ミリモルに対して２ミリモル〜１０ミリモルのルイス酸（例トリメチルシリルトリフラート、３塩化鉄など）を用い、溶媒としてハロゲン化炭素類（例塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン）、エーテル類（例ベンゼン、トルエン）、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドを用いることができるが望ましくはジクロロエタンを用い、−７８℃〜８０℃程度、望ましくは０℃〜６０℃程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは２〜６時間程度反応させて中間体としてオキサゾリン誘導体を得る。
このオキサゾリン誘導体１ミリモルに対して１．１ミリモル〜１０ミリモルのアルコールと酸触媒として（例トリメチルシリルトリフラート、カンファースルホン酸）を用い、溶媒としてハロゲン化炭素類（例塩化メチレン、クロロホルム、ジクロロエタン）、エーテル類（例ベンゼン、トルエン）、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドを用いることができるが望ましくはジクロロエタンを用い、−７８℃〜８０℃程度、望ましくは０℃〜６０℃程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは５〜１５時間程度反応させて化合物３’を得ることができる。
【００６５】
化合物７は、次式で示される反応式により製造することができる。
【００６６】
【化２８】
0004170413.tif 000020
【００６７】
この反応式で表されるＢＯＣ誘導体の製造法を以下にさらに具体的に説明する。
この製造法は、アセチル基で保護したガラクトース誘導体４をＢＯＣ基で保護したグルタミルグルタミン酸誘導体のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルと反応させ化合物７を得るものである。
化合物３の１ミリモルに対して触媒量〜２倍量程度の触媒（リンドラー触媒、パラジウム炭素）と１ミリモル〜１．５ミリモル程度の酸触媒（例パラトルエンスルホン酸）を用い、溶媒としてアルコール類（例メタノール、エタノール）、酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミドを用いることができるが、この中でも望ましくはエタノールを用い、０℃〜５０℃程度、望ましくは室温程度で通常反応時間０．５〜８時間程度、望ましくは２〜４時間程度反応させて化合物４を得る。
一方、文献公知の方法で得られる化合物５に対して触媒量〜０．１当量程度の触媒（例パラジウム炭素）を用い、溶媒として酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、アルコール類（例メタノール、エタノール）を用いることができるが、この中でも望ましくは酢酸エチルとテトラヒドロフランの混合溶媒を用い、０℃〜５０℃程度、望ましくは室温程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは１２〜１８時間程度反応させて化合物５の脱ベンジル体を得る。
【００６８】
脱ベンジル体１ミリモルに対して１．１〜１．５ミリモル程度のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ，ＨＯＢｔ）と１．１〜１．５ミリモル程度のジシクロヘキシルカルボジイミドを用い、溶媒としてアセトニトリル、酢酸エチル、ジメチルホルムアミドを用いることができるが、この中でも望ましくはアセトニトリルを用い、−２０℃〜２５℃程度、望ましくは０℃〜５℃程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは５〜１６時間程度反応させて化合物６を得る。上記に示した方法により得られる化合物６１ミリモルに対して３．３〜４．５ミリモル程度の化合物４を用い、塩基としてＮ−メチルモルホリン、トリエチルアミン、ヒューニッヒ塩基を用いることができるが、この中で望ましくはＮ−メチルモルホリンを用い、−２０℃〜６０℃程度、望ましくは０℃〜２５℃程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは５〜１６時間程度反応させて化合物７を得る。
【００６９】
化合物１１は、次式で示される反応式により化合物１０を得、これを前記した化合物７と反応させることにより製造することができる。
【化２９】
0004170413.tif 000021
【００７０】
この反応式で表される化合物１０の製造法を以下にさらに具体的に示す。
この製造法は、アジピン酸８から中間体化合物９を経由して化合物１０を得るものである。
化合物８１ミリモルに対して１〜２ミリモルのベンジルアルコールと１．１〜２．５ミリモルの塩基（例ＮａＨ、トリエチルアミン、ピリジンなど）を用い、溶媒としてジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、トルエン、ベンゼンなどを用いることができるが、望ましくはジメチルホルムアミドを用い、−２０℃〜８０℃程度、望ましくは０℃程度で通常反応時間０．５〜２４時間程度、望ましくは２〜８時間程度反応させてモノベンジルエステル化合物９を得る。
更に、化合物９の１ミリモルに対して１．１〜１．５ミリモル程度のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ，ＨＯＢｔ）と１．１〜１．５ミリモル程度のジシクロヘキシルカルボジイミドを用い、溶媒としてアセトニトリル、酢酸エチル、ジメチルホルムアミドを用いることができるが、この中でも望ましくはアセトニトリルを用い、−２０℃〜２５℃程度、望ましくは０℃〜５℃程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは５〜１６時間程度反応させて化合物１０を得る。
得られた化合物１０を、次式で示される反応式により化合物１１を製造することができる。
【００７１】
【化３０】
0004170413.tif 000022
【００７２】
この反応式で表されるカルボン酸誘導体のベンジル保護体の製造法を以下にさらに具体的に示す。
この製造法は、アセチル基で保護したガラクトースの３分岐型ＢＯＣ誘導体７から化合物１１を得るものである。
化合物７を公知あるいはそれに準ずる方法により、脱ＢＯＣ化した後、これに上記に示した化合物１０を当量用い、塩基としてＮ−メチルモルホリン、トリエチルアミン、ヒューニッヒ塩基を用いることができるが、この中で望ましくはＮ−メチルモルホリンを用い、−２０℃〜６０℃程度、望ましくは０℃〜２５℃程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは５〜１６時間程度反応させて化合物１１を得ることができる。
化合物１２は、次式で示される反応式により製造することができる。
【００７３】
【化３１】
0004170413.tif 000023
【００７４】
この反応式で表されるカルボン酸誘導体の製造法を以下にさらに具体的に説明する。この製造法は、アセチル基で保護したガラクトースの３分岐型モノベンジル誘導体１１を選択的にベンジル基を脱保護して化合物１２を得るものである。化合物１１に対して触媒量〜０．１当量の触媒（例パラジウム炭素、二酸化白金）を用い、溶媒として酢酸エチル、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、アルコール類（例メタノール、エタノール）を用いることができるが、この中でも望ましくは酢酸エチルとエタノールの混合溶媒を用い、０℃〜５０℃程度、望ましくは室温程度で通常反応時間１〜２４時間程度、望ましくは１２〜１８時間程度反応させて次式で表される化合物１２を得ることができる。
【００７５】
【化３２】
0004170413.tif 000024
【００７６】
この化合物１２のカルボン酸とカップリングさせる基質は、第一級アミンもしくは第２級アミンが望ましく、文献公知もしくはそれに準ずる方法を用いることにより容易に糖誘導体を導入した医薬品を製造することができる。この方法は、例えば、第４版実験化学講座２２有機合成  酸、アミノ酸、ペプチド、第１３７頁〜第２５８頁に開示されている方法を参照することができる。
【００７７】
本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、その末端に単糖類若しくは多糖類又はそれらの誘導体からなる糖残基を有する。従って、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物を、特定の糖構造を認識する細胞に特異的に移行させることができる。また、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、オリゴヌクレオチド若しくは薬剤又はその誘導体をその末端に有することができる。このオリゴヌクレオチドは、標的器官の細胞において特定遺伝子の発現を抑制することができるもの、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドであることができる。従って、本発明による化合物は、種々の疾患の治療に用いることができる。
特に、本発明の一般式（Ｉ）で表される化合物は、糖レセプターの特性でもあるクラスター効果を考慮して化学合成した分岐型オリゴ糖を用いることにより、生体内に存在するグルコースレセプター、ガラクトースレセプターそしてマンノースレセプターなどの糖誘導体を認識するレセプターを利用して、医薬品分子を標的部位にまで送達でき、さらに細胞内に導入することができる。また、中性の医薬品に対してはポリヒドロキシル体としての糖誘導体が水溶液に対する溶解性を高める効果をもたらし、その結果医薬品の有効性を高めるなどの数多くの利点を賦与することができる。
【００７８】
本発明による化合物は、例えば、ウイルスに感染した肝細胞に抗ウイルス剤として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達し、抗ウイルス作用を増強することができる。また、本発明による化合物は、例えば、ガン化した肝細胞に抗悪性腫瘍剤として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチドを送達し、抗ガン作用を増強することができる。
【００７９】
本発明の他の面によれば、本発明による化合物を製薬学的に許容される担体とともに含んでなる医薬組成物が提供される。
ここで、上記医薬組成物は、悪性腫瘍治療剤（例えば、ガン治療剤）、抗ウイルス剤、抗リウマチ剤（例えば、腫瘍壊死因子の産生抑制剤）、抗炎症剤、抗アレルギー剤や免疫抑制剤（例えば、免疫担当細胞の炎症部位への遊走阻害剤）、循環機能改善剤（例えば、冠血管の再閉塞に関わる血管平滑細胞の増殖阻害剤）、内分泌機能改善薬（例えば、異常分泌されるホルモンの分泌阻害薬）、またはある特定のタンパク質の異常発現あるいは機能異常によって生じ、そのタンパク質の発現を抑制することにより症状の改善が認められる疾患に対する治療薬（例えば、細胞の受容体タンパク質の異常発現の抑制）として用いることができる。医薬組成物が悪性腫瘍治療剤である場合、一般式（Ｉ）中のＺはガン遺伝子の発現を抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチドであることができる。医薬組成物が抗ウイルス剤である場合、Ｚは抗ウイルス作用を示すアンチセンスオリゴヌクレオチドであることができる。
【００８０】
本発明による医薬組成物は、経口または非経口（例えば、静注、筋注、皮下投与、直腸投与、経皮投与、経鼻投与等）のいずれかの投与経路で、ヒトまたはヒト以外の動物に投与することができる。
本発明による医薬組成物は、例えばその用途に応じて、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠などの経口剤、静注および筋注などの注射剤、直腸投与剤、油脂性坐剤、水溶性坐剤などのいずれかの製剤形態に調製することができる。これらの各種製剤は、通常用いられている賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤化剤、崩壊剤、表面活性剤、潤滑剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤などを用いて常法により製造することができる。使用可能な無毒性の上記添加剤としては、例えば乳糖、果糖、ブドウ糖、でん粉、ゼラチン、炭酸マグネシウム、合成ケイ酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、シロップ、ワセリン、グリセリン、エタノール、プロピレングリコール、クエン酸、塩化ナトリウム、亜硫酸ソーダ、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。また、必要により本発明による化合物以外の有効成分を含んでいても良い。
【００８１】
投与量は、用法、患者の年齢、性別、症状の程度などを考慮して適宜決定されてよく、通常成人１日あたり約０．０５〜２５０ｍｇ、好ましくは約０．５〜５０ｍｇ程度とすることができ、これを１日１回または数回に分けて投与することができる。
本明細書において「治療」とは、確定した疾患の治療のみならず予防を含む意味で用いられるものとする。
本発明の他の面によれば、本発明による化合物をヒトを含む動物（例えば、ホ乳類）に投与することを含んでなる、悪性腫瘍、ウイルス感染症、炎症性疾患、アレルギー性疾患、免疫性疾患、循環器系疾患、および内分泌系疾患からなる群から選択される疾患の治療法が提供される。
本発明の他の面によれば、本発明による化合物の悪性腫瘍治療剤、抗ウイルス剤、抗リウマチ剤、抗炎症剤、抗アレルギー剤、免疫抑制剤、循環機能改善剤および内分泌機能改善剤からなる群から選択される薬剤の製造のための使用が提供される。
【００８２】
【実施例】
本発明を以下の実施例などによって詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
以下次の略号用いる。Ｂｏｃ：ベンジルオキシカルボニル基、ＴＨＦ：テトラヒドロフラン、ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド、、ＥＤＣ：１（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド、ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン、ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー、ＤＭＴ基：ジメチルトリチル基、ＴＥＡＡ：トリエチルアンモニウムアセテート、ＯＤＳカラム：オクタデシルシリカゲルカラム。
【００８３】
合成例１ アジピン酸無水物の合成
アジピン酸２５ｇ（０．１７ｍｏｌ）を塩化メチレン１２５ｍｌに溶解し、さらにジシクロヘキシルカルボジイミド３５．３ｇ（０．１７ｍｏｌ）の塩化メチレン１２５ｍｌ溶液を加えて２時間、室温で攪拌した。白色析出物をセライトで濾去し、ろ液を減圧下濃縮することにより標題化合物（２５．９ｇ，ｑ．ｙ．）を得た。この化合物は更に精製することなく次の反応に用いた。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
２．５０（ｍ，４Ｈ）、１．９３（ｍ，４Ｈ）。
【００８４】
合成例２ ５−ベンジルオキシカルボニル−ペンタン酸の合成
合成例１の化合物２５．９ｇ（０．１７ｍｏｌ）にベンジルアルコール２８ｍｌ（０．２７ｍｏｌ）を加えて、９０℃（オイルバス）で激しく５時間攪拌した。その後、過剰のベンジルアルコールを減圧下溜去した。残査をジエチルエーテル５００ｍｌで希釈し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（２５０ｍｌ×２）で抽出した。水層を２Ｎ−塩酸水溶液で酸性にし、塩化メチレン（２５０ｍｌ×２）で抽出した。有機層を水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧下溜去することにより標題化合物（１１．１ｇ，２８％）を得た。この化合物は更に精製することなく次の反応に用いた。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．３７−７．３４（ｍ，５Ｈ）、５．１２（ｓ，２Ｈ）、
２．４１−２．３６（ｍ，４Ｈ）、１．７３−１．６６（ｍ，４Ｈ）。
【００８５】
合成例３ ５−ベンジルオキシカルボニル−ペンタン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの合成
【００８６】
【化３３】
0004170413.tif 000025
【００８７】
合成例２の化合物１．０ｇ（４．２３ｍｍｏｌ）を酢酸エチル１２．５ｍｌに溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド０．４９ｇ（４．２３ｍｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド０．８７ｇ（４．２３ｍｍｏｌ）を加え、室温で２時間攪拌した。析出物をセライト濾去し、濾液を減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル  ２：１〜１：１）による精製により標題化合物（７４０ｍｇ，５３％）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．３７−７．３４（ｍ，５Ｈ）、５．１２（ｓ，２Ｈ）、
２．８９（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）、２．６３（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、          ２．４１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、
１．７９−１．７７（ｍ，４Ｈ）。
【００８８】
合成例４ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−１）エトキシエトキシエチルアミドの合成。
【００８９】
【化３４】
0004170413.tif 000026
【００９０】
Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリベンジルエステル２．３２３ｇ（３．５９ｍｍｏｌ）を酢酸エチルとテトラヒドロフランの混合溶媒（１：１．４５ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム−炭素０．２ｇを加えて１４時間常圧水素気流下攪拌した。触媒を濾去、溶媒を減圧下留去し、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−γ−Ｌ−グルタミル−γ−Ｌ−グルタミル酸を無色非晶質として得た。次いでこの粗生成物を乾燥アセトニトリル５０ｍｌに溶解し、氷冷下攪拌した。ここに、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド１．４９ｇ（１２．９ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド２．４４ｇ（１１．９ｍｍｏｌ）を加え、その温度で、３２時間攪拌した。この溶液を溶液１とした。
１−Ｏ−[２−｛２−（２−アジドエトキシ）エトキシ｝エトキシ]−２′，３′，４′，６′−テトラ−アセチル−ガラクトース５．６１ｇ（１１．１ｍｍｏｌ）をエタノール８５ｍｌに溶解し、リンドラー触媒６．０ｇとパラトルエンスルホン酸・一水和物２．７４ｇ（１４．４ｍｍｏｌ）を加え、中圧水素気流下室温で２時間攪拌した。その後、リンドラー触媒３．０ｇを加え、更に２時間攪拌した。触媒を濾去、溶媒を減圧下留去して１−Ｏ−[２−｛２−（２−アミノエトキシ）エトキシ｝エトキシ]−２′，３′，４′，６′−テトラ−アセチル−ガラクトース  パラトエンスルホナートを白色非晶質として得た。これを乾燥アセトニトリル１０ｍｌに溶解し、氷冷下攪拌した。これを溶液２とした。この溶液にＮ−メチルモルホリン１．５９ｍｌを加え、５分間攪拌した。これに先に調製した溶液１を加え、更に、１８時間氷冷下攪拌した。析出したＤＣウレアを濾去、溶媒を減圧下留去した。残留物を酢酸エチル２００ｍｌで希釈し、１：１飽和食塩水−水１００ｍｌで洗浄、無水硫酸マグネシウム上で乾燥、減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（４．９１ｇ，７８％）を無色透明無定型物質として得た。
【００９１】
[α]D19＝−１１．１４（ｃ１．０３，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．７０−７．６８（ｍ，１Ｈ）、７．２６（ｍ，２Ｈ）、
６．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．４７（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、
５．３９（ｂｒ  ｄ，３Ｈ）、５．２２−５．１６（ｍ，３Ｈ）、
５．０６−２．０１（ｍ，４Ｈ）、４．５８−４．５５（ｍ，３Ｈ）、          ４．４０−４．３３（ｍ，１Ｈ）、４．１８（ｄｄ，３Ｈ）、
４．１５−４．１０（ｍ，３Ｈ）、３．９８−３．９４（ｍ，６Ｈ）、
３．７６−３．３２（ｍ，３３Ｈ）、２．４０−２．２５（ｍ，４Ｈ）、          ２．１６（ｓ，９Ｈ）、２．０６−２．０５（ｍ，１８Ｈ）、
１．９９（ｓ，９Ｈ）、２．２０−１．９４（ｍ，４Ｈ）、
１．４２（ｓ，９Ｈ）。
ＦＡＢ−ＭＳ（positive）：[Ｍ＋Ｈ]＋；ｍ／ｚ１７６１，[Ｍ＋Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１７８３，[Ｍ＋Ｋ]＋；ｍ／ｚ１７９９
ＦＡＢ−ＭＳ（negative）：[Ｍ−Ｈ]−；ｍ／ｚ１７５９
【００９２】
実施例１ Ｎ−（５−ベンジルオキシカルボニル−１−ペンタノイル）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ−｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドの合成
【００９３】
【化３５】
0004170413.tif 000027
【００９４】
合成例４の化合物１．７７ｇ（１．０１ｍｍｏｌ）に、氷冷下トリフルオロ酢酸６．０ｍｌを加えそのまま２時間攪拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下留去し、減圧下室温で乾燥させた。これを塩化メチレン１００ｍｌに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液２０ｍｌで洗浄、無水硫酸マグネシウム上で乾燥、減圧下濃縮した。得られた残査を乾燥アセトニトリル６．０ｍｌに溶解し、氷冷下攪拌した。これにＮ−メチルモルホリン０．２２ｍｌ（１．９８ｍｍｏｌ）と合成例３の化合物０．３３ｇ（０．１０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル６ｍｌ溶液を加え、２４時間攪拌した。その後、溶媒を減圧下溜去した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（１．１４ｇ，６１％）を無色無定型物質として得た。
[α]D21＝−１２．００（ｃ１．０４，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．８３（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
７．３７−７．３０（ｍ，１Ｈ）、７．２６（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、
７．１３（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、７．０８（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
６．６１（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、５．３９（ｂｒ  ｄ，３Ｈ）、
５．２２−５．１７（ｍ，３Ｈ）、５．１１（ｓ，２Ｈ）、
５．０７−５．０２（ｍ，３Ｈ）、４．５７−４．５５（ｍ，３Ｈ）、
４．４６−４．３４（ｍ，１Ｈ）、４．２０−４．１０（ｍ，７Ｈ）、
３．９８−３．９２（ｍ，６Ｈ）、３．７６−３．３２（ｍ，３３Ｈ）
２．４０−２．３６（ｍ，２Ｈ）、２．３４−２．３０（ｍ，４Ｈ）、
２．２４−２．２０（ｍ，２Ｈ）、２．１５（ｓ，９Ｈ）、
２．０６−２．０５（ｍ，１８Ｈ）、２．０２−１．９６（ｍ，４Ｈ）、
１．９９（ｓ，９Ｈ）、１．６７−１．６５（ｍ，４Ｈ）。
ＦＡＢ−ＭＳ（positive）：[Ｍ＋Ｈ]＋；ｍ／ｚ１８７８，[Ｍ＋Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１９００
【００９５】
実施例２ Ｎ−（５−ヒドロキシカルボニル−１−ペンタノイル）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ−｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドの合成
【００９６】
【化３６】
0004170413.tif 000028
【００９７】
実施例１の化合物０．５ｇ（０．２７ｍｍｏｌ）を酢酸エチルとエタノールの混合溶媒（１：１，１５ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム−炭素５０ｍｇを加えて２２時間常圧水素気流下攪拌した。触媒を濾去し、濾液を減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（３５０ｍｇ，７４％）を無色油状物質として得た。
[α]D22＝−１０．５７（ｃ１．０７，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．８７（ｂｒｓ，１Ｈ）、
７．５２（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、７．３５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、
７．２１（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、７．１１（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
６．９４（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、５．３９（ｂｒ  ｄ，３Ｈ）、
５．２２−５．１８（ｍ，３Ｈ）、５．０７−５．０２（ｍ，３Ｈ）、
４．５９−４．５５（ｍ，３Ｈ）、４．４７−４．４３（ｍ，１Ｈ）、
４．２１−４．１１（ｍ，７Ｈ）、４．００−３．９３（ｍ，６Ｈ）、
３．７６−３．３８（ｍ，３３Ｈ）、２．３８−２．２２（ｍ，８Ｈ）、
２．１６（ｓ，９Ｈ）、２．０７−２．０５（ｍ，１８Ｈ）、
２．００−１．８９（ｍ，４Ｈ）、１．９９（ｓ，９Ｈ）、
１．７０−１．６５（ｍ，４Ｈ）。
ＦＡＢ−ＭＳ（positive）：[Ｍ＋Ｈ]＋；ｍ／ｚ１７８８，[Ｍ＋Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１８１０
【００９８】
実施例３ Ｎ−（５−ヒドロキシカルボニル−１−ペンタノイル）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの合成
【００９９】
【化３７】
0004170413.tif 000029
【０１００】
実施例２の化合物３５０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を乾燥アセトニトリルに溶解し、氷冷下Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド２３ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド４０ｍｇ（０．２ｍｍｏｌ）を加え２．５時間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（３３２ｍｇ，９０％）を無色油状物質として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．７０（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
７．２０（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、７．１０（ｂｒ  ｓ，２Ｈ）、
６．６８（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、５．３９（ｂｒ  ｄ，３Ｈ）、      ５．２２−５．１３（ｍ，３Ｈ）、５．０７−５．０２（ｍ，３Ｈ）、
４．５８−４．５５（ｍ，３Ｈ）、４．４７−４．３６（ｍ，２Ｈ）、
４．２０−４．１０（ｍ，６Ｈ）、３．９９−３．９３（ｍ，６Ｈ）、
３．７５−３．３５（ｍ，３３Ｈ）、２．８６（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）、
２．６４（ｂｒ  ｔ，２Ｈ）、２．４３−２．２７（ｍ，６Ｈ）、
２．１６（ｓ，９Ｈ）、２．０６−２．０５（ｍ，１８Ｈ）、
２．０２−１．８９（ｍ，４Ｈ）、１．９９（ｓ，９Ｈ）、
１．７８−１．６４（ｍ，４Ｈ）。
【０１０１】
合成例５ Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−γ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドの合成
【０１０２】
【化３８】
0004170413.tif 000030
【０１０３】
Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリベンジルエステル０．５ｇ（０．７７ｍｍｏｌ）を酢酸エチルとテトラヒドロフランの混合溶媒（１：１，１０ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム−炭素０．０５ｇを加えて１７時間常圧水素気流下攪拌した。触媒を濾去、溶媒を減圧下留去し、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−γ−Ｌ−グルタミル−γ−Ｌ−グルタミン酸を無色非晶質として得た。次いでこの粗生成物を乾燥アセトニトリル１２．５ｍｌに溶解し、氷冷下攪拌した。ここに、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド０．３２ｇ（２．７ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド０．５３ｇ（２．５ｍｍｏｌ）を加え、その温度で、２７時間攪拌した。この溶液を溶液１とした。
１−Ｏ−[２−｛２−（２−アジドエトキシ）エトキシ｝エトキシ]−２′，３′，４′，６′−テトラアセチル−グルコース５．１４ｇ（１０．２ｍｍｏｌ）をエタノール８０ｍｌに溶解し、リンドラー触媒６．０ｇとパラトルエンスルホン酸・一水和物２．５ｇ（２．４ｍｍｏｌ）を加え、中圧水素気流下室温で２時間攪拌した。その後、リンドラー触媒３．０ｇを加え、更に２時間攪拌した。触媒を濾去、溶媒を減圧下留去して１−Ｏ−[２−｛２−（２−アミノエトキシ）エトキシ｝エトキシ]−２′，３′，４′，６′−テトラアセチル−グルコースパラトエンスルホナートを白色非晶質として得た。これを乾燥アセトニトリル１０ｍｌに溶解し、氷冷下攪拌した。これを溶液２とした。この溶液２にＮ−メチルモルホリン１．４５ｍｌを加え、５分間攪拌した。これに先に調製した溶液１を加え、更に、１８時間氷冷下攪拌した。析出したＤＣウレアを濾去、溶媒を減圧下留去した。残留物を酢酸エチル２００ｍｌで希釈し、１：１飽和食塩水−水１００ｍｌで洗浄、無水硫酸マグネシウム上で乾燥、減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（１．２６ｇ，９３％）を無色透明無定型物質として得た。
【０１０４】
[α]D19＝−１３．３１（ｃ１．０４，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．７５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、
７．３０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、７．２０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、
６．９７（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、５．４６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ）、
５．２１（ｂｒ  ｔ，３Ｈ）、５．０９（ｂｒ  ｔ，３Ｈ）、
５．００（ｂｒ  ｔ，３Ｈ）、４．６１−４．５９（ｍ，３Ｈ）、
４．３９（ｍ，１Ｈ）、
４．２７（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．８，１２．０Ｈｚ）、
４．１５（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝２．０，１２．０Ｈｚ）、
４．１１（ｍ，１Ｈ）、３．９７−３．９４（ｍ，３Ｈ）、
３．７４−３．２５（ｍ，３６Ｈ）、
２．４０−２．２０（ｍ，４Ｈ）２．０９（ｓ，９Ｈ）、
２．０６（ｓ，３Ｈ）、２．０５（ｓ，６Ｈ）、
２．０３（ｓ，９Ｈ）、２．０１（ｓ，９Ｈ）、
２．１６−１．９２（ｍ，４Ｈ）、１．４２（ｓ，９Ｈ）。
ＦＡＢ−ＭＳ（positive）：[Ｍ＋Ｈ]＋；ｍ／ｚ１７６１，[Ｍ＋Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１７８３，[Ｍ＋Ｋ]＋；ｍ／ｚ１７９９
ＦＡＢ−ＭＳ（negative）：[Ｍ−Ｈ]−；ｍ／ｚ１７５９
【０１０５】
実施例４ Ｎ−（５−ベンジルオキシカルボニル−１−ペンタノイル）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドの合成
【０１０６】
【化３９】
0004170413.tif 000031
【０１０７】
合成例５の化合物１．２６ｇ（０．７２ｍｍｏｌ）に、氷冷下トリフルオロ酢酸６．０ｍｌを加えそのまま２時間攪拌した。トリフルオロ酢酸を減圧下留去し、減圧下室温で乾燥させた。これを塩化メチレン１００ｍｌに溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液２０ｍｌで洗浄、無水硫酸マグネシウム上で乾燥、減圧下濃縮した。得られた残査を乾燥アセトニトリル６．０ｍｌに溶解し、氷冷下攪拌した。これにＮ−メチルモルホリン０．１４ｍｌ（１．２９ｍｍｏｌ）と合成例３の化合物０．２２ｇ（０．６５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル６．０ｍｌ溶液を加え、１４時間攪拌した。その後、溶媒を減圧下溜去した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（６３０ｍｇ，５２％）を無色無定型物質として得た。
【０１０８】
[α]D27＝−１４．８４（ｃ１．０５，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．８６（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
７．３７−７．３３（ｍ，５Ｈ）、７．２５（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、
７．１６（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、７．０９（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
６．５９（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、５．３１（ｓ，２Ｈ）、
５．２５−５．１９（ｍ，３Ｈ）、５．１２−５．０７（ｍ，３Ｈ）、
５．０２−４．９７（ｍ，３Ｈ）、４．６２−４．５９（ｍ，３Ｈ）、
４．４５−４．３８（ｍ，２Ｈ）、
４．２７（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．４，１２．０Ｈｚ）、
４．１５（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝０．５，１２．０Ｈｚ）、
３．９８−３．９３（ｍ，３Ｈ）、３．７４−３．３５（ｍ，３６Ｈ）、
２．４４−２．３６（ｍ，２）、２．３３−２．２８（ｍ，４Ｈ）、
２．２４−２．１６（ｍ，２Ｈ）、２．１０（ｓ，９Ｈ）、
２．０６（ｓ，３Ｈ）、２．０５（ｓ，６Ｈ）、２．０３（ｓ，９Ｈ）、
２．０１（ｓ，９Ｈ）、２．１６−１．９２（ｍ，４Ｈ）、
１．６８−１．６６（ｍ，４Ｈ）。
ＦＡＢ−ＭＳ（positive）：[Ｍ＋Ｈ]＋；ｍ／ｚ１８７９，[Ｍ＋Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１９０１
ＦＡＢ−ＭＳ（negative）：[Ｍ−Ｈ]−；ｍ／ｚ１８７６．９
【０１０９】
実施例５ Ｎ−（５−ヒドロキシカルボニル−１−ペンタノイル）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドの合成
【０１１０】
【化４０】
0004170413.tif 000032
【０１１１】
実施例４の化合物０．４３ｇ（０．２３ｍｍｏｌ）を酢酸エチルとエタノールの混合溶媒（１：１，１２ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム−炭素４３ｍｇを加えて２７時間常圧水素気流下攪拌した。触媒を濾去し、濾液を減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ５０：１）により精製を行い標題化合物（１９５ｍｇ，４８％）を無色無定型物質として得た。
[α]D27＝−１１．６７（ｃ１．０１，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．５１（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、
７．３２（ｂｒ  ｔ，２Ｈ）、７．０８（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、
６．９７（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、５．２５−５．１９（ｍ，３Ｈ）、
５．１２−５．０７（ｍ，３Ｈ）、５．０２−４．９７（ｍ，３Ｈ）、
４．６３−４．５９（ｍ，３Ｈ）、４．４８−４．４１（ｍ，２Ｈ）、
４．２７（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．８，１２．４Ｈｚ）、
４．１５（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝１．６，１２．４Ｈｚ）、
３．９８−３．９４（ｍ，３Ｈ）、３．７６−３．３５（ｍ，３６Ｈ）、
２．３９−２．３３（ｍ，６Ｈ）、２．３１−２．２５（ｍ，２Ｈ）
２．０９（ｓ，９Ｈ）、２．０６−２．０５（ｍ，９Ｈ）、
２．０３（ｓ，９Ｈ）、２．０１（ｓ，９Ｈ）、
２．１６−１．８４（ｍ，４Ｈ）、１．７４−１．６９（ｍ，４Ｈ）。
ＦＡＢ−ＭＳ（positive）：[Ｍ＋Ｈ]＋；ｍ／ｚ１７８９，[Ｍ＋Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１８１１，[Ｍ＋２Ｎａ]＋；ｍ／ｚ１８３３
【０１１２】
実施例６ Ｎ−（５−ヒドロキシカルボニル−１−ペンタノイル）−Ｌ−グルタミル−Ｌ−グルタミン酸−α′，α，γ−トリ｛２−（２′，３′，４′，６′−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシル−１）エトキシ｝エトキシエチルアミドのＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの合成
実施例５の化合物４５ｍｇ（２５μｍｏｌ）を乾燥アセトニトリルに溶解し、氷冷下Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド３ｍｇ（２５μｍｏｌ）とジシクロヘキシルカルボジイミド５ｍｇ（２５μｍｏｌ）を加えＸ時間攪拌した。その後、反応混合物を減圧下濃縮した。得られた残査をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン：メタノール  ２０：１〜１０：１）により精製を行い標題化合物（３６ｍｇ，７６％）を無色無定型物質として得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ  ｉｎ  ＣＤＣｌ3）δTMS＝
７．７２（ｂｒ  ｔ，１Ｈ）、７．１８（ｂｒ  ｄ，２Ｈ）、
７．０８（ｍ，２Ｈ）、６．６４（ｂｒ  ｄ，１Ｈ）、
５．２４−５．１９（ｍ，３Ｈ）、５．１１−５．０７（ｍ，３Ｈ）、
５．０１−４．９７（ｍ，３Ｈ）、
４．６１−４．５９（ｂｒ  ｄ，３Ｈ）、
４．４７−４．３７（ｍ，２Ｈ）、
４．２６（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝４．８，１２．４Ｈｚ）、
４．１４（ｄｄ，３Ｈ，Ｊ＝２．４，１２．４Ｈｚ）、
３．９９−３．９３（ｍ，３Ｈ）、３．７４−３．３４（ｍ，３６Ｈ）、
２．８６（ｂｒ  ｓ，４Ｈ）、２．６４（ｍ，２Ｈ）、
２．４２−２．２５（ｍ，６Ｈ）、２．１７−１．８９（ｍ，４Ｈ）、
２．０９（ｓ，９Ｈ）、２．０５（ｍ，９Ｈ）、２．０３（ｓ，９Ｈ）、
２．０１（ｓ，９Ｈ）、１．７９−１．７８（ｍ，４Ｈ）。
【０１１３】
合成例６
アンチセンス核酸（化合物Ａ）の合成。
定法であるホスホロアミダイト（phosphoramidite）法により５′−ＡＧＧ−ＡＡＧ−ＴＧＣ−ＣＧＴ−ＴＴＡ−ＴＡＡ−ＡＧ−３′の塩基配列を有する２０メル（ｍｅｒ）のオリゴデオキシヌクレオチド  ホスホロチオエート類縁体（oligodeoxynucleotide phosphorothioate analogue）を自動ＤＮＡ合成機（Milligene製）を用いて固相合成した。ホスホロチオエート（phosphorothioate）化にはビューケイジ（Beaucage）試薬（Glen Research製）を用いた。合成用カラムは１５μｍｏｌ合成用のカラムを用いた。以上の反応は総て試薬及び機器に添付されている取り扱い説明書に従って行った。カラムから支持体を取り出して風乾した後、２８％アンモニア水７ｍｌに懸濁し、２４時間室温で放置した。ガラスフィルター付ロートで濾過して支持体を取り除き、濾液を回収した。この濾液に等容量のイオン交換水を添加した後、１Ｍ 酢酸トリエチルアンモニウム（triethylammonium-acetate）（ｐＨ７．０）で平衡化したオリゴ−パック  ＳＰ（Oligo-Pak SP）（Millipore製アンチセンス核酸精製用カラム）を通過させた。通過液を再びカラムに通した後、カラムに３％アンモニア水を通過させた。次いでイオン交換水を通過させた後、２％トリフルオロ酢酸（trifluoroacetic acid）を通し、２分間放置した。直ちにカラムをイオン交換水を通過させた。カラムに３０％アセトニトリル（acetonitrile）を通過させ、通過液を回収した。通過液の溶媒を遠心エバポレーターを用いて除去し、白色固体３４．５ｍｇを得た。
マススペクトル分析結果：ｍ．ｗ．６５１１．１±１．５。
【０１１４】
実施例７
ガラクトース誘導体−アンチセンス核酸（化合物Ｂ）の合成。
【０１１５】
【化４１】
0004170413.tif 000033
【０１１６】
定法であるホスホロアミダイト（phosphoramidite）法により５′−ＡＧＧ−ＡＡＧ−ＴＧＣ−ＣＧＴ−ＴＴＡ−ＴＡＡ−ＡＧ−３′の塩基配列を有する２０メル（ｍｅｒ）のオリゴデオキシヌクレオチド  ホスホロチオエート類縁体（oligodeoxynucleotide phosphorothioate analogue）を自動ＤＮＡ合成機（Milligene製）を用いて固相合成した。ホスホロチオエート（phosphorothioate）化にはビューケイジ（Beaucage）試薬（Glen Research製）を用いた。合成用カラムは１５μｍｏｌ合成用のカラムを用いた。固相合成した類縁体（analgue）の５′末端に、５′−修飾用物（Aminomodifier）（Glen Research製）を用いて６−アミノヘキサニル（６−aminohexanyl）基を付加した。以上の反応は総て試薬及び機器に添付されている取り扱い説明書に従って行った。反応の終了した合成カラムに１％（ｖ／ｖ）トリエチルアミン（Triethylamine）／ＤＭＦ１０ｍｌを通し、さらにＤＭＦ２０ｍｌを通した。
合成カラムから支持体を取り出して無水ＤＭＦ３ｍｌに懸濁し、これにガラクトース誘導体の活性エステル（実施例３）３００ｍｇを溶解したＤＭＦ２ｍｌおよびトリエチルアミン（Triethylamine）５０μｌを添加した後、室温で２４時間、緩やかに振とうした。
支持体をアセトニトリル１０ｍｌで３回洗浄して風乾した後、２８％アンモニア水７ｍｌに懸濁し、２４時間室温で放置した。ガラスフィルター付ロートで濾過して支持体を取り除き、濾液を遠心エバポレーターを用いて乾固させた。得られた白色固体にイオン交換水２ｍｌを加えて良く攪拌した後、不溶性物質を遠心分離により除いた。上清０．２ｍｌに等容量のホルムアミド（fomamide）と０．０５％ キシレンシアノールＦＦ（Xylene cyanol FF）１０μｌおよび０．０５％ ブロモフェノールブルー（Bromophenol Blue）１０μｌを添加し、６０℃で２分間加温した。氷水で急冷した後、５Ｍ 尿素（Urea）を含むポリアクリルアミド（polyacrylamide）ゲル（１５ｃｍ×１５ｃｍ×２ｍｍ）を用い、２００Ｖで電気泳動した。
【０１１７】
ブロモフェノールブルー（Bromophenol Blue）がゲルの先端まで移動した時点で電気泳動を終了した。蛍光物質を含むＴＬＣプレート上にゲルを乗せてＵＶ灯点灯下で観察しながら、蛍光発光せずに暗く抜ける部分をゲルから切り出した。これを電気泳動用の電極液とともに透析チューブ（分画分子量約３，０００）に入れ、サブマリン型泳動漕を用いて１００Ｖで１２時間泳動した。チューブ内の電極液を回収し、凍結乾燥を行った。得られた白色固体を１Ｍ 酢酸トリエチルアンモニウム（triethylammonium-acetate）（ｐＨ７．０）２ｍｌに溶解し、イオン交換水で平衡化したＮＡＰＳ−２５カラムを用いてゲルを濾過した。各フラクションをＨＰＬＣにより分析し、ガラクトース誘導体−アンチセンス核酸が含まれるフラクションを取り出し、凍結乾燥した。白色無定型固体２２．４ｍｇを得た。
マススペクトル分析結果：ｍ．ｗ．７９７１．６±１．１
【０１１８】
合成例７
アンチセンス核酸（化合物Ｃ）の合成。
合成例６と同様の方法で合成した。ただし、１μｍｏｌ合成スケールのカラムを用い、５′−ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ−３′の塩基配列（文献既知）を有するチオ化オリゴヌクレオチドを合成した。白色無定型固体３．６５ｍｇを得た。
【０１１９】
実施例８
ガラクトース誘導体−アンチセンス核酸（化合物Ｄ）の合成。
合成例７と同様の方法で合成した。ただし、アンチセンス核酸としては５′−ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ−３′（１５ｍｅｒ）の塩基配列を有するオリゴデオキシヌクレオチド  ホスホロチオエート類縁体（oligodeoxynucleotide phosphorothioate analogue）とし、１μｍｏｌ合成用のカラムを用いて合成した。白色無定型固体１．７３ｍｇを得た。
【０１２０】
導入量の評価
糖誘導体の活性エステルとアンチセンス核酸を固相合成支持体上で反応させた後、支持体を洗浄・風乾し、アンモニア水を加えて支持体から切り出した。反応溶液を一部採取し、溶媒を留去した後、５Ｍ尿素（Urea）を含むポリアクリルアミド（polyacrylamide）ゲル（１０ｃｍ×１０ｃｍ×１ｍｍ）を用い、２０ｍＡで電気泳動した。ゲルの銀染色を行い、スキャナーで染色像をコンピューターに取り込み、ＮＩＨ Image（画像解析用プログラム）を用いて糖誘導体が導入されたアンチセンス核酸と導入されていないアンチセンス核酸の染色像の定量的解析を行った。
この結果を表２に示す。
【０１２１】
【表２】
0004170413.tif 000034
【０１２２】
その結果、活性エステル法における使用した誘導体当たりの導入量は、従来の方法であるアミダイト法（ＷＯ９６／３０３８６）のそれに比較して３倍以上であり、反応のばらつきを示すＣＶ値も小さかった。本発明の方法による糖誘導体のアンチセンス核酸への導入はアミダイト法よりも優れていることが示された。
【０１２３】
薬理効果の評価
この評価に使用した化合物Ａ〜Ｄは前記の実施例及び合成例に記載のものであり、これに従来のアミダイト法での化合物Ｅを加えて評価した。これらの化合物Ａ〜Ｅをまとめて示すと次の通りとなる。
化合物Ａ：マウス肝炎ウイルスの増殖抑制効果を示すアンチセンス核酸
化合物Ｂ：化合物Ａに活性エステル法でガラクトース誘導体を導入したもの
化合物Ｃ：human c-myc proto-oncogeneに対するアンチセンス核酸
化合物Ｄ：化合物Ｃに活性エステル法でガラクトース誘導体を導入したもの
化合物Ｅ：化合物Ｃにアミダイト法でガラクトース誘導体を導入したもの
（ＷＯ９６／３０３８６の実施例１９−２に記載のもの）
【０１２４】
１）in vitro評価
ＢＡＬＢ／ｃマウス（６週令、雄）から単離し、９６−wellマイクロプレートを用いて培養した肝実質細胞と、化合物Ａあるいは化合物Ｂを０．１−１０００ｎｍｏｌ／Ｌの濃度で３７℃で１時間インキュベートした。
次いでマウス肝炎ウイルスＪＨＭ−Ｘ株１００PFU／wellを添加し、更に３７℃で１時間インキュベートした。細胞を新鮮な培地で洗浄した後に、新鮮な培地０．１ｍｌを添加し、２４時間培養した。培地を採取し、適宜希釈した。マウス肝炎ウイルスに対して感受性が高いマウス神経細胞腫由来のＤＢＴ細胞(Delayed Brain Tumor cell)を、あらかじめ６−wellマイクロプレートに培養してサブコンフルエントとし、これに希釈した培地０．１ｍＬを添加して、３７℃で１時間インキュベートした。更に０．５％メチルセルロース（methylcellulose）を含む培地２ｍｌを添加し、２４時間培養した。
各ウエル（well）に形成されたプラークの数を計測し、これをウエル当たりのPFU（plaque-forming unit（[PFU／well]treated））とした。同時に、化合物ＡあるいはＢを添加していない場合のPFU（plaque-forming unit（[PFU／well]control））を計測し、以下の式に従って複製阻害率（％Inhibition）を算出した。
【０１２５】
0004170413.tif 000035
【０１２６】
その結果を第１図に示す。マウス肝炎ウイルスＪＨＭ−Ｘ株の増殖に対する抑制効果については、化合物Ｂは化合物Ａに比べて著しく強い活性を示した（図１参照）。この効果は、ガラクトース誘導体をアンチセンス核酸に導入することにより、肝実質細胞に於けるアンチセンス核酸の抗ウイルス効果が増強されることを示している。
【０１２７】
２）in vito評価
ＢＡＬＢ／ｃマウス（４週令、雄）に化合物Ａあるいは化合物Ｂを０．１−１０００μｇ／headの投与量で尾静脈から投与した。２４時間後に再び投与し、直ちに腹腔内にマウス肝炎ウイルスＪＨＭ−Ｘ株１，０００PFU／headを接種した。ウイルス接種から４８時間後にマウスをエーテル麻酔下で放血致死せしめ、直ちに肝臓を摘出し、生理食塩水を用いて１０％ホモジネートを調製した。ホモジネートを濾過滅菌した後に適宜希釈し、前記のインビトロ（in vitro）評価と同様な方法でプラーク数（[PFU／well]treated）を計測した。同時に化合物ＡあるいはＢを投与していない場合のplaque-forming unit（[PFU／well]control）を計測した。得られた数値を以下の式に従って計算し、複製阻害率（％inhibition）を算出した。
【０１２８】
0004170413.tif 000036
【０１２９】
その結果を第２図に示す。マウス肝における肝炎ウイルスＪＨＭ−Ｘ株の増殖について、化合物Ｂの抑制効果は化合物Ａに比べて約２倍に増強された（図２参照）。この結果は、肝炎ウイルスに対するアンチセンス核酸の抗ウイルス効果がガラクトース誘導体の導入によって増強されることを示している。
【０１３０】
３）先行特許実施例との活性の比較
ヒト肝細胞癌由来の培養細胞株であるＨｅｐＧ２細胞を９６well microplateに一晩培養した後、化合物Ｃあるいは化合物Ｄを培地中に図に表記した濃度で加えて９６時間培養した。細胞数計測キット（Cell Counting Kit, 和光純薬製）を用いて生細胞数を計測し、下記の式に従って増殖阻害活性を測定した。
【０１３１】
0004170413.tif 000037
【０１３２】
その結果を第３図に示す。ＨｅｐＧ２細胞においては、ガラクトース誘導体（実施例３）を導入していない化合物Ｃに比べてガラクトース誘導体を活性エステル法で導入した化合物Ｄの増殖抑制効果は強く、その５０％阻害濃度は約１．５μｍｏｌ／Ｌであった（図３参照）。
【０１３３】
これらの試験結果から、アンチセンス核酸などの生理活性物質に活性エステル法を用いてガラクトース誘導体を導入することにより生物学的活性を増強することが可能であり、より有効性の高いアンチセンス核酸の開発が可能となることが示された。
【配列表】
0004170413.tif 000038
0004170413.tif 000039
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の糖残基を含有した化合物Ｂと、糖残基を含有していない化合物Ａの、マウス肝実質細胞における抗ウイルス作用の試験の結果を示す。
【図２】本発明の糖残基を含有した化合物Ｂと、糖残基を含有していない化合物Ａの、ＢＡＬＢ／ｃマウスの肝臓における抗ウイルス作用の試験の結果を示す。
【図３】本発明の糖残基を含有した化合物Ｄと、糖残基を含有していない化合物Ｃの、ＨｅｐＧ２細胞の増殖抑制試験の結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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