(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
0004182218.tif 000058
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただしＸ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］
で示される化合物。
【請求項２】
一般式（ＩＩ）
0004182218.tif 000059
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑ、Ｗは同一または異なるアルキルシリル基アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］、
一般式（ＩＩＩ）
0004182218.tif 000060
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］、
一般式（ＩＶ）
0004182218.tif 000061
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］、または
一般式（Ｘ）
0004182218.tif 000062
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、そしてＡ、Ｂ、Ｃの少なくとも一つはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であるものとし、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］
で示される化合物を、脱シリル化剤と反応させて、一般式（Ｉ）
0004182218.tif 000063
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただしＸ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］
で示される化合物を製造する方法。
【請求項３】
一般式（ＸＩＩＩ）
0004182218.tif 000064
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物を、一般式（ＸＩＶ）
0004182218.tif 000065
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただし、Ｘ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはないものとする］で示される化合物と反応させて、一般式（Ｉ）
0004182218.tif 000066
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、ＹおよびＺは上記した意味を有する］で示される化合物を製造する方法。
【請求項４】
請求項１記載のグルコース誘導体を有効成分とし、不要または病原細胞に対してアポトーシスを選択的に誘発させて、該細胞により発生する疾患を治療及び／または予防するための医薬。
【請求項５】
癌を治療及び／または予防するための請求項４記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明はアポトーシス誘導能を有する新規なグルコースのアセタール誘導体、その製造方法及びこれを有効成分として含有する医薬に関し、詳しくはアポトーシスを誘導することによって治療及び／または予防することが期待できる疾患、例えば腫瘍、大腸ポリポーシス、慢性関節リウマチや全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患、ウイルス感染症、及び炎症性疾患の治療薬及び／または予防薬に有効なグルコースのアセタール誘導体である新規化合物、その製造方法及びその医薬としての用途に関する。
背景技術
アポトーシス（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）は、遺伝子にプログラム化された細胞死の一様式である．これは個体の発生過程の形態形成や、成体での血液細胞や表皮細胞などの細胞交代等において見ることが出来る。細胞死の形態は、細胞の凝縮、微絨毛の消失、核の断片化、及びゲノムＤＮＡのヌクレオソーム単位での切断、アポトーシス小体の形成とその被貧食によって達成される［Ｃｅｌｌ，８８巻，３４７−３５４頁，１９９７年及びＳｃｉｅｎｃｅ，２６７巻，１４５６−１４６２頁，１９９５年］。アポトーシスが疾患と関連して注目される理由は、（１）自己反応性の免疫担当細胞の排除に関与すること、（２）エイズウイルスや肝炎ウイルスなどによるウイルス感染症に関与すること、（３）アルツハイマー病などの神経変性疾患や自己免疫疾患である脳脊髄膜炎の発生に関与すること、（４）癌病巣内での腫瘍細胞の自然消失や制癌剤による細胞死に関与すること等が挙げられる。
このようなアポトーシスの制御異常によって発症する様々な疾患に対する薬物の探索が盛んに行なわれている。なかでも、アポトーシスを促進する物質は従来の抗癌剤を始め多くの物質で発見されている。これらの物質は非常に活性が強くその活性のみの評価としては申し分ないほどに細胞レベルでは有効であるが、同時にこれらの薬剤はほとんどアポトーシス促進作用と並行して強い細胞毒性を持ち、コントロールが難しいと言う欠点がある。
そこで毒性が低く且つ病原細胞に選択性の高い新規なアポトーシス誘導剤の開発が望まれている。既にこの分野の研究によって構造と活性の相関についての研究の蓄積がなされている。このような化合物の構造的な特徴は、水酸基を持つ生体成分である水可溶性の化合物［例えばアスコルビン酸（ＷＯ９５２８９２５）］を中心に、水酸基を保護するアセタール部分があり、更にその外に細胞内への取り込みが容易に行われるように長鎖の脂肪酸残基を配置してなるものである。長鎖脂肪酸との結合様式としては、アミド結合は生体内で解裂されにくいため、エステル結合が好ましい。このように設計された化合物は細胞内へ取り込まれやすく、また細胞内においてはアセタール部分及びエステル部分がすみやかに解裂し、それぞれが生体に作用すると推察される。
発明の開示
本発明者らは、上記の課題を解決するために、水溶性の中心部分にグルコースを据え、これを化学修飾する事によって目的とするアポトーシス誘導能と毒性とを乖離できる化合物の合成を試みた。特にアポトーシス誘導能に加え、薬剤として必須な要件である水溶性の向上と生体内への取り込みが促進されるような分子を設計した。そして下記する新規なグルコースのアセタール誘導体が不要のまたは病原性の細胞、例えば癌細胞に対して選択的にアポトーシスを誘導し得ることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）
0004182218.tif 000002
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただしＸ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物に関する。
また、本発明は、一般式（ＩＩ）
0004182218.tif 000003
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑ、Ｗは同一または異なるアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］、
一般式（ＩＩＩ）
0004182218.tif 000004
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］、
一般式（ＩＶ）
0004182218.tif 000005
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］、または
一般式（Ｘ）
0004182218.tif 000006
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、そして、Ａ、Ｂ、Ｃの少なくとも一つはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であるものとし、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］
で示される化合物を、脱シリル化剤と反応させて、一般式（Ｉ）
0004182218.tif 000007
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただし、Ｘ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物を製造する方法にも関する。
さらにまた本発明は、一般式（Ｉ）
0004182218.tif 000008
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただしＸ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはなく、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物を有効成分とし、不要または病原細胞に対してアポトーシスを選択的に誘発させて、該細胞により発生する疾患を治療及び／または予防するための医薬にも関する。
本発明の上記したグルコース誘導体の一般式（Ｉ）中のＲ１、Ｒ２、Ｒ３のアシル基としては、ブチリル基、イソブチリル基、ピバロイル基、バレリル基、オクタノイル基、デカノイル基、ラウロイル基、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、メタクリロイル基、クロトノイル基、オレオイル基、リノレオイル基、リノレノイル基、アラキドノイル基、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエノイル基、５，８，１１，１４−エイコサテトラエノイル基、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイル基等が挙げられる。
また本発明の上記したグルコース誘導体の一般式（Ｉ）中のＸ、Ｙ、Ｚのハロゲン化アルキル基のハロゲンとしては、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素等が挙げられる。ハロゲン化アルキル基のアルキルとしては、直鎖状、分枝鎖状アルキルのいずれでもよく、炭素原子１〜６個の低級アルキルが挙げられる。具体的にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル等が挙げられる。またハロゲン化アルキルとしては、前記アルキルの一部の水素原子がハロゲン化されたもの、例えば（ＣＦ３）２ＣＨＣＨ２−、ＣＦ３ＣＨ２−、ＣＨＦ２−等であってもよく、また、全ての水素原子がハロゲン化されたもの、例えばトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル等であってもよい。また、アルコキシ基としては炭素数原子１〜６個の低級アルコキシ基が好ましく、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔ−ブトキシ基等が挙げられる。
前記したアポトーシスの促進がその治療／または予防に有効な疾患としては、例えば、癌、成人Ｔ細胞白血病、大腸ポリポーシス、全身性エリテマトーデス、慢性関節リウマチ等の膠原病、Ｃ型肝炎等のウイルス性疾患、原発性胆汁性肝硬変、突発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、及び潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群等、炎症性疾患等を挙げることができるが、アポトーシスを誘導することにより生体にとって不都合な細胞の除去が可能になり、そのことによって治療／または予防に有効であるような疾患であれば上記した疾患に限られない。
本発明の化合物は以下に述べる合成方法によって得ることができる。
すなわち、一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＩＩ）
0004182218.tif 000009
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基あるいはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑ、Ｗは同一または異なるアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３から２５個の炭化水素基である］で示される化合物に、テトラブチルアンモニウムフルオライド、フッ化カリウムなどの脱シリル化剤を反応させて得ることが出来る。
アルキルシロキシ基としては例えばトリメチルシロキシ基、トリエチルシロキシ基、トリイソプロピロシロキシ基、ｔ−ブチルジメチルシロキシ基等が挙げられる。アルキルアリールシロキシ基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシロキシ基等が挙げられる。アリールシロキシ基としては例えばトリフェニルシロキシ基等が挙げられる。アルキルシリル基としては例えばトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピロシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基等が挙げられる。アルキルアリールシリル基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシリル基等が挙げられる。アリールシリル基としては例えばトリフェニルシリル基等が挙げられる
また、一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＩＩＩ）
0004182218.tif 000010
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基あるいはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物にテトラブチルアンモニウムフルオライド、フッ化カリウムなどの脱シリル化剤とを反応させて得ることが出来る。
アルキルシロキシ基としては例えばトリメチルシロキシ基、トリエチルシロキシ基、トリイソプロピロシロキシ基、ｔ−ブチルジメチルシロキシ基等が挙げられる。アルキルアリールシロキシ基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシロキシ基等が挙げられる。アリールシロキシ基としては例えばトリフェニルシロキシ基等が挙げられる。アルキルシリル基としては例えばトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピロシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基等が挙げられる。アルキルアリールシリル基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシリル基等が挙げられる。アリールシリル基としては例えばトリフェニルシリル基等が挙げられる。
また、一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＩＶ）
0004182218.tif 000011
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基あるいはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、Ｑはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基、またはアリールシリル基であり、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物にテトラブチルアンモニウムフルオライド、フッ化カリウムなどの脱シリル化剤とを反応させて得ることが出来る。
アルキルシロキシ基としては例えばトリメチルシロキシ基、トリエチルシロキシ基、トリイソプロピロシロキシ基、ｔ−ブチルジメチルシロキシ基等が挙げられる。アルキルアリールシロキシ基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシロキシ基等が挙げられる。アリールシロキシ基としては例えばトリフェニルシロキシ基等が挙げられる。アルキルシリル基としては例えばトリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピロシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基等が挙げられる。アルキルアリールシリル基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシリル基等が挙げられる。アリールシリル基としては例えばトリフェニルシリル基等が挙げられる。
そして一般式（ＩＩ）で示される化合物は、例えば、一般式（Ｖ）
0004182218.tif 000012
［式中、Ｑ、Ｗ、Ａ、Ｂ、Ｃは一般式（ＩＩ）について述べた通りの意味を有する］で示される化合物とＲ４ＣＯＯＨで示されるカルボン酸またはその機能的誘導体とを反応させて得ることが出来る。
Ｒ４ＣＯＯＨで示されるカルボン酸の具体例としては酪酸、イソ酪酸、ピバル酸、吉草酸、オクタン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、メタクリル酸、クロトン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸、４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸等が挙げられる。
一般式（Ｖ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＶＩ）
0004182218.tif 000013
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｑは一般式（ＩＩ）について述べた通りの意味を有する］で示される化合物を、例えばトリメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリド、トリイソプロピロシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド等のアルキルシリル化剤、またはｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド等のアルキルアリールシリル化剤またはトリフェニルシリルクロリド等のアリールシリル化剤などを反応させて得ることが出来る。
一般式（ＩＩＩ）及び一般式（ＩＶ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＶＩ）
0004182218.tif 000014
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｑは一般式（ＩＩ）について述べた通りの意味を有する］で示される化合物とＲ４ＣＯＯＨで示されるカルボン酸またはその機能的誘導体とを反応させ得ることが出来る。Ｒ４ＣＯＯＨで示されるカルボン酸としては上記したものと同じものが用いられる。
一般式（ＶＩ）の化合物は、例えば、一般式（ＶＩＩ）
0004182218.tif 000015
［式中、Ｑは一般式（ＩＩ）について述べた通りの意味を有する］で示される化合物と、３−Ａ−４−Ｂ−５−Ｃベンズアルデヒド誘導体との反応により得ることが出来る。ここでＡ、Ｂ、Ｃは一般式（ＩＩ）について述べた通りの意味を有する。
一般式（ＶＩＩ）の化合物は、例えば、一般式（ＶＩＩＩ）
0004182218.tif 000016
［式中、Ｑは一般式（ＩＩ）について述べた通りの意味を有する］で示される化合物をパラジウム炭素などを用いた接触水素化などにより、ベンジル基（Ｂｎ）を除去することにより得ることが出来る。
一般式（ＶＩＩＩ）の化合物は、例えば、市販の一般式（ＩＸ）
0004182218.tif 000017
で示される化合物を、例えばトリメチルシリルクロリド、トリエチルシリルクロリド、トリイソプロピロシリルクロリド、ｔ−ブチルジメチルシリルクロリド等のアルキルシリル化剤、またはｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド等のアルキルアリールシリル化剤あるいはトリフェニルシリルクロリド等のアリールシリル化剤などを反応させて得ることが出来る。
また、一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（Ｘ）
0004182218.tif 000018
［式中、Ａ、Ｂ、Ｃは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基、アルコキシ基、アルキルシロキシ基、アルキルアリールシロキシ基またはアリールシロキシ基であり、ただしＡ、Ｂ、Ｃは同時に水素となることはなく、そしてＡ、Ｂ、Ｃの少なくとも一つはアルキルシリル基、アルキルアリールシリル基またはアリールシリル基であるものとし、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物にテトラブチルアンモニウムフルオライド、フッ化カリウムなどの脱シリル化剤とを反応させて得ることが出来る。
アルキルシロキシ基としては例えばトリメチルシロキシ基、トリエチルシロキシ基、トリイソプロピロシロキシ基、ｔ−ブチルジメチルシロキシ基等が挙げられる。アルキルアリールシロキシ基としては例えばｔ−ブチルジフェニルシロキシ基等が挙げられる。アリールシロキシ基としては例えばトリフェニルシロキシ基等が挙げられる。
一般式（Ｘ）の化合物は、例えば、一般式（ＸＩ）
0004182218.tif 000019
［式中、Ｒ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物と３−Ａ−４−Ｂ−５−Ｃベンズアルデヒド誘導体との反応により得ることが出来る。ここで、Ａ、Ｂ、Ｃは一般式（Ｘ）について述べた通りの意味を有する。
一般式（ＸＩ）の化合物は、例えば、一般式（ＸＩＩ）
0004182218.tif 000020
［式中、Ｒ４は一般式（ＸＩ）について述べた通りの意味を有する］で示される化合物をパラジウム炭素などを用いた接触水素化などにより、ベンジル基（Ｂｎ）を除去することにより得ることが出来る。
一般式（ＸＩＩ）の化合物は、例えば、市販の一般式（ＩＸ）
0004182218.tif 000021
で示される化合物とＲ４ＣＯＯＨで示されるカルボン酸またはその機能的誘導体とを反応させ得ることが出来る。Ｒ４ＣＯＯＨで示されるカルボン酸は上記と同じものが用いられる。
上記した、一般式（ＩＩ）、一般式（ＩＩＩ）、一般式（ＩＩ）または一般式（Ｘ）で示される化合物の脱シリル化反応は、この技術分野における慣用の反応条件下で行われ、例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、アセトン、メチルエチルケトン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの有機溶媒、水、またはこれら有機溶媒と水との混合物を溶媒として、これに脱シリル化を行うべき化合物を溶解し、テトラブチルアンモニウムフルオライド、フッ化カリウムなどの脱シリル化剤を反応させて行うことができる。反応温度は溶媒の沸騰点から凝固点までの広い範囲で行うことができるが、−１０℃〜室温程度の温度で普通に行われる。反応時間は反応温度にも依存するが、数時間〜１昼夜程度で普通に行われる。
さらにまた、一般式（Ｉ）で示される化合物は、例えば、一般式（ＸＩＩＩ）
0004182218.tif 000022
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は同一または異なり、水素またはアシル基（ＣＯＲ４）であり、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３は同時に水素となることはなく、そしてＲ４は飽和または不飽和の直鎖または分枝鎖状の炭素原子３〜２５個の炭化水素基である］で示される化合物を、一般式（ＸＩＶ）
0004182218.tif 000023
［式中、Ｘ、Ｙ、Ｚは同一または異なり、それぞれ、水素、ハロゲン化アルキル基、水酸基またはアルコキシ基であり、ただし、Ｘ、Ｙ、Ｚは同時に水素となることはないものとする］で示される化合物と反応させて得ることができる。この反応は、適当な溶媒、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ジエチルエーテル、イソプロピルエーテル、アセトン、メチルエチルケトン、塩化メチレン、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドなどの有機溶媒中で、縮合触媒例えば、ピリジニウムパラトルエンスルフォナートの存在または不存在下でおこなわれる。反応温度は溶媒の沸騰点から凝固点までの広い範囲で行うことができるが、−１０℃〜室温程度の温度で普通に行われる。反応時間は反応温度にも依存するが、数時間〜１昼夜程度で普通に行われる。
一般式（Ｉ）で示される化合物を得る反応を反応スキームで示すと次の通りである。
0004182218.tif 000024
本発明の前記式（Ｉ）を有する化合物は種々の形態で投与される。その投与形態としては例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤等による経口投与または、注射剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点滴剤、座剤による非経口投与を挙げることができる。これらの各種製剤は、常法に従って主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑択剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。
これらの補助剤としては、例えば、水、グルコース、ラクトース、コーンスターチ、ゼラチン、マンニトール、澱粉ペースト、トリケイ酸マグネシウム、ケラチン、コロイド状シリカ、バレイショ澱粉、尿素などがあげられる。その投与量は症状、年令、体重、投与方法によって異なるが、通常は成人に対して１日１ｍｇ〜４０００ｍｇを投与することができる。また、この範囲では毒性は認められない。
発明を実施するための最良の形態
以下に本発明を製造例、実施例および製造剤によってさらに説明する。製造例は本発明化合物の合成中間体製造の具体例のいくつかを示し、実施例は本発明の化合物の製造の具体例を示し、そして製造例は本発明の化合物のを有効成分とする医薬製剤の具体例を示すものである。なおこれらは本発明を単に説明するだけのものであって、本発明を限定するものとして解してはならない。
［製造例−１）
３，４−ジメトキシベンズアルデヒドジメチルアセタール
0004182218.tif 000025
３，４−ジメトキシベンズアルデヒド（５．０ｇ，３０．０９ｍｍｏｌ）と、オルト蟻酸メチル（１２．７７ｇ，１２０．３５ｍｍｏｌ）のベンゼン（２００ｍｌ）溶液にパラトルエンスルホン酸（０．５２ｇ，３．０１ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液をＤｅａｎ−Ｓｔａｒｋを用いて脱水しながら６時間還流した後、水（５０ｍｌ）、飽和重曹水（５０ｍｌ）、ＩＰＥ（１００ｍｌ）を加えた。有機層を水（５０ｍｌ）、飽和食塩水（５０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付しヘキサン／酢酸エチル＝７５／２５を溶離液として３，４−ジメトキシベンズアルデヒド  ジメチルアセタール（６．３８ｇ，収率１００％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ３．３３（ｓ，６Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），５．３３（ｓ，１Ｈ），６．８４−６．８７（ｍ，１Ｈ），６．９７−７．００（ｍ，２Ｈ）
［製造例−２］
４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド
0004182218.tif 000026
バニリン（２．０ｇ，１３．１４ｍｍｏｌ）とイミダゾール（１．１６ｇ，１７．０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１５ｍｌ）溶液にｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（３．９７ｇ，１４．４６ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１時間撹拌後、ＩＰＥ（１００ｍｌ）を加えた。有機層を水（５０ｍｌ）３回、飽和食塩水（５０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０を溶離液として４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド（３．１８ｇ，収率６２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．１２（ｓ，９Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），６．７９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．４４（ｍ，７Ｈ），７．６８−７．７０（ｍ，４Ｈ），９．７７（ｓ，１Ｈ）
［製造例−３］
４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒドジメチルアセタール
0004182218.tif 000027
製造例−２で得た４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒド（５．２ｇ，１３．３１ｍｍｏｌ）とオルト蟻酸メチル（７．０６ｇ，６６．５７ｍｍｏｌ）のメタノール（１００ｍｌ）溶液にピリジニウムパラトルエンスルホナート（０．６７ｇ，２．６６ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１９時間撹拌後、飽和重曹水（３０ｍｌ）を加えて減圧濃縮をした。この溶液に水（５０ｍｌ）、ＩＰＥ（１００ｍｌ）を加え、水層をＩＰＥ（５０ｍｌ）で２回抽出をした。合わせた有機層を水（３０ｍｌ）２回、飽和食塩水（３０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０を溶離液として４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒドジメチルアセタール（５．３８ｇ，収率９３％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．１０（ｓ，９Ｈ），３．２７（ｓ，６Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ），５．２５（ｓ，１Ｈ），６．６８−６．７３（ｍ，２Ｈ），６．８４−６．８６（ｍ，１Ｈ），７．３０−７．４２（ｍ，６Ｈ），７．６９−７．７１（ｍ，４Ｈ）
［製造例−４］
１−Ｏ−パルミトイル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000028
市販の２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−ａ−Ｄ−グルコピラノース（１．４７ｇ，２．７２ｍｍｏｌ）とパルミチン酸無水物（３．２３ｇ，６．５３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１４ｍｌ）溶液にピリジン（２．１５ｇ，２７．２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を還流下１５時間撹拌後、ジエチルエーテル（２００ｍｌ）を加えた。有機層を３Ｎ−ＨＣｌ（３０ｍｌ）、飽和塩化アンモニウム水溶液（５０ｍｌ）、水（５０ｍｌ）３回、飽和食塩水（５０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をし、１−Ｏ−パルミトイル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノースを得た。このものは特に精製することなく次の反応へ用いた。
［製造例−５］
１−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−４で得た粗１−Ｏ−パルミトイル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノースのエタノール（２５ｍｌ）溶液に５％−Ｐｄ／Ｃ（８６５．９ｍｇ，０．４１ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を水素雰囲気下室温で１６時間撹拌後、セライトろ過をした。ろ液を減圧濃縮し、残留物をヘキサン／酢酸エチルより再結晶し１−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース（９５２ｍｇ，２−ｓｔｅｐｓ，収率８４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６−０．９０（ｍ，３Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．６１−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３４−２．４２（ｍ，２Ｈ），３．４１−３．８８（ｍ，６Ｈ），５．５２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，０．７Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，０．３Ｈ）
［製造例−６］
１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース及び１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000030
製造例−５で得た１−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース（３１０ｍｇ，０．７４ｍｍｏｌ）と４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒドジメチルアセタール（３．２３ｇ，７．４１ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍｌ）とジオキサン（５ｍｌ）溶液にピリジニウムパラトルエンスルホナート（２６０．３ｍｇ，１．０４ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で５時間撹拌後、水（１０ｍｌ）、飽和重曹水（１０ｍｌ）、クロロホルム（２０ｍｌ）を加えた。水層をクロロホルム（１０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を水（２０ｍｌ）、飽和食塩水（２０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝７０／３０を溶離液として１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース（４１０ｍｇ，収率７０％）と１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース（１４０ｍｇ，収率２４％）をそれぞれ得た。
１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．５７−１．６６（ｍ，２Ｈ），２．４１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．３９−３．７２（ｍ，３Ｈ），３．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），５．４０（ｓ，１Ｈ），５．６４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７５（ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−７．４０（ｍ，６Ｈ），７．６７−７．７０（ｍ，４Ｈ）
１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．５７−１．６６（ｍ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｔ，Ｊ＝１０．４Ｈｚ，１Ｈ），３．８０−３．８８（ｍ，２Ｈ），３．９５（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），６．２３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．２Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），７．２６−７．４２（ｍ，６Ｈ），７．６８−７．７１（ｍ，４Ｈ）
［製造例−７］
１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド
0004182218.tif 000031
２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノース（１．１ｇ，２．０３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４ｍｌ）溶液に、イミダゾール（２７６ｍｇ，４．０６ｍｍｏｌ）とｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（４６０ｍｇ，３．０５ｍｍｏｌ）を室温で加えた．この溶液を室温で１６時間撹拌した後、酢酸エチルを加えた。水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド（１．３２ｇ，収率９７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．０９（ｓ，０．６Ｈ；α体），０．１１（ｓ，０．６Ｈ；α体），０．１５（ｓ，２．４Ｈ；β体），０．１８（ｓ，２．４Ｈ；β体），０．９２（ｓ，１．８Ｈ；α体），０．９５（ｓ，７．２Ｈ；β体），３．３６−３．７１（ｍ，６Ｈ），４．４２−５．２４（ｍ，９Ｈ），７．１１−７．３７（ｍ，２０Ｈ）
［製造例−８］
１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド
0004182218.tif 000032
製造例−７で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド（１．３２ｇ，２．０３ｍｍｏｌ）のエタノール（１０ｍｌ），酢酸エチル（２０ｍｌ）溶液に１０％Ｐｄ−Ｃ（０．４ｇ）を加え、水素雰囲気下室温で８８時間撹拌した。セライト濾過後、減圧濃縮した。残留物（６２０ｍｇ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）溶液に、ｐ−アニスアルデヒドジメチルアセタール（３．７ｇ，２０．３ｍｍｏｌ）とピリジニウムパラトルエンスルホナート（２０４ｍｇ，０．８１ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を室温で２４時間撹拌後、酢酸エチルを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（６００ｍｇ，２工程で収率７２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．１５  ａｎｄ  ０．１６５  ａｎｄ  ０．１７０（ｓ，６Ｈ），０．９３（ｓ，７．５Ｈ；β体），０．９４（ｓ，１．５Ｈ；α体），１．８５−２．００（ｍ，０．２Ｈ；α体），２．３９（ｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈ；β体），２．６４−２．６８（ｍ，０．２Ｈ；α体），２．６８−２．７３（ｍ，０．８Ｈ；β体），３．３８−３．９３（ｍ，５Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．２１（ｄｄ，０．２Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，９．６Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，９．６Ｈｚ；β体），４．６３（ｄ，０．８Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ；β体），５．２１（ｄ，０．２Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ；α体），５．４９（ｓ，０．８Ｈ；β体），５．５０（ｓ，０．２Ｈ；α体），６．８７−６．９０（ｍ，２Ｈ），７．４０−７．４５（ｍ，２Ｈ）
［製造例−９］
１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノシド
0004182218.tif 000033
製造例−８で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（６００ｍｇ，１．４５ｍｍｏｌ）とパルミチン酸（４８５ｍｇ，１．８９ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍｌ）とＤＭＦ（３ｍｌ）溶液に、氷冷下ＤＭＡＰ（３５ｍｇ，０．２９ｍｍｏｌ）とＤＣＣ（３５９ｍｇ，１．７４ｍｍｏｌ）を順次加えた。この溶液を室温で４０時間撹拌した後、セライト濾過をした。クロロホルムを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝８０／２０を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノシド（５６０ｍｇ，収率５９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．１５（ｓ，６Ｈ），０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９２（ｓ，９Ｈ），１．５９−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３６（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），３．４６−３．５５（ｍ，２Ｈ），３．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），３．７５−３．８０（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．２８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．２Ｈｚ，１０．４Ｈｚ），４．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），５．２０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），５．４４（ｓ，１Ｈ），６．８４−６．８９（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．３８（ｍ，２Ｈ）
［製造例−１０］
１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド
0004182218.tif 000034
製造例−７で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−グルコピラノシド（５．７５ｇ，７．３８ｍｍｏｌ）のエタノール（１００ｍｌ）、酢酸エチル（２１０ｍｌ）溶液に１０％Ｐｄ−Ｃ（１．０ｇ）を加え、水素雰囲気下室温で６４時間撹拌した。セライト濾過後、減圧濃縮した。残留物のＤＭＦ（４０ｍｌ）溶液に４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシベンズアルデヒドジメチルアセタール（１１．５７ｇ，２６．６ｍｍｏｌ）とピリジニウムパラトルエンスルホナート（３８３ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を室温で１８時間撹拌した後、酢酸エチルを加えた。水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝６０／４０を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（４．６１ｇ，収率７９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０７（ｓ，９Ｈ），１．１０（ｓ，９Ｈ），２．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），２．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），３．１２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ），３．４８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），３．５２−３．７０（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｓ，３Ｈ），４．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１０．０Ｈｚ），４．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．３５（ｓ，１Ｈ），６．６０−６．７５（ｍ，２Ｈ），６．８４−６．８８（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．４６（ｍ，１２Ｈ），７．６１−７．７５（ｍ，８Ｈ）
【製造例−１１】
１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノシド
0004182218.tif 000035
製造例−１０で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（７９０ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）とエイコサペンタエン酸（３６２ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（８ｍｌ）とＤＭＦ（２ｍｌ）溶液に氷冷下ＤＭＡＰ（２４ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）とＤＣＣ（２４８ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を順次加えた。この溶液を室温で２４時間撹拌した後、セライト濾過をした。酢酸エチルを加え、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝８０／２０を溶離液として、目的物１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノシド（４３０ｍｇ，収率４０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９７（ｔ，３Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ），１．６３−１．７４（ｍ，２Ｈ），２．０１−２．１１（ｍ，４Ｈ），２．３５（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），２．４０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），２．７４−２．８５（ｍ，８Ｈ），３．１４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，９．６Ｈｚ），３．５１−３．６６（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），４．０４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１０．４Ｈｚ），４．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），５．０４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），５．２６−５．４４（ｍ，１０Ｈ），６．５８−６．６８（ｍ，２Ｈ），６．８１−６．８４（ｍ，１Ｈ），７．２７−７．４６（ｍ，１２Ｈ），７．６３−７．７２（ｍ，８Ｈ）
［製造例−１２］
１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシド
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製造例−１０で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（１．０ｇ，１．２６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１３ｍｌ）溶液に、トリエチルアミン（０．６１ｍｌ，４．４１ｍｍｏｌ）とトリエチルシリルクロリド（０．６４ｍｌ，３．７９ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を室温で１６時間撹拌した後、ジエチルエーテルを加えた。水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝９０／１０を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシド（１．１１ｇ，収率９７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．５０−０．５７（ｍ，６Ｈ），０．８５（ｔ，９Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），１．０８（ｓ，９Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ），２．２７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ），２．９４−３．０７（ｍ，１Ｈ），３．３８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），３．５４（ｓ，３Ｈ），３．４５−３．６２（ｍ，３Ｈ），３．９９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．６Ｈｚ），４．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），５．３０（ｓ，１Ｈ），６．５９−６．７５（ｍ，２Ｈ），６．８１−６．８９（ｍ，１Ｈ），７．２６−７．４６（ｍ，１２Ｈ），７．６２−７．７３（ｍ，８Ｈ）
［製造例−１３］
１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノシド及び１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノシド
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製造例−１０で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−Ｄ−グルコピラノシド（１．０ｇ，１．２６ｍｍｏｌ）とデカン酸（２６２ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１５ｍｌ）溶液に氷冷下、ＤＭＡＰ（３１ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌ）とＤＣＣ（３１４ｍｇ，１．５２ｍｍｏｌ）を順次加えた。この溶液を室温で６４時間撹拌した後、セライト濾過をした。ジエチルエーテルを加え、水、飽和塩化アンモニア水溶液、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝８８／１２を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノシド（４００ｍｇ，収率２９％）を、ヘキサン／酢酸エチル＝８５／１５を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノシド（６２０ｍｇ，収率５２％）を得た。
１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノシド：
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．０７（ｓ，９Ｈ），１．０９（ｓ，９Ｈ），１．１５−１．３５（ｍ，１２Ｈ），１．５３−１．６５（ｍ，２Ｈ），２．３４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），２．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４Ｈｚ），３．１４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ），３．５０−３．６７（ｍ，３Ｈ），３．５４（ｓ，３Ｈ），４．０５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ），４．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．０３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），５．３１（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），６．６５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，８．０Ｈｚ），６．８３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ），７．２８−７．４８（ｍ，１２Ｈ），７．６２−７．７５（ｍ，８Ｈ）
１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノシド：
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８３−０．９２（ｍ，６Ｈ），１．０４（ｓ，９Ｈ），１．０７（ｓ，９Ｈ），１．１６−１．３４（ｍ，２４Ｈ），１．４６−１．５４（ｍ，４Ｈ），２．１０−２．３１（ｍ，４Ｈ），３．１４（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ），３．５４（ｓ，３Ｈ），３．５４−３．６８（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ），４．７０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），５．０８−５．１９（ｍ，２Ｈ），５．３１（ｓ，１Ｈ），６．５９−６．６７（ｍ，２Ｈ），６．８０−６．８３（ｍ，１Ｈ），７．２８−７．４６（ｍ，１２Ｈ），７．５４−７．７１（ｍ，８Ｈ）
［実施例−１］
１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（３，４−ジメトキシ）ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−５で得た１−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース（１．７２ｇ，４．１２ｍｍｏｌ）と３，４−ジメトキシベンズアルデヒド  ジメチルアセタール（８．７４ｇ，４１．１８ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（２０ｍｌ）溶液にピリジニウムパラトルエンスルホナート（１．４５ｇ，５．７７ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で５時間撹拌後、水（２０ｍｌ）、飽和重曹水（２０ｍｌ）、クロロホルム（５０ｍｌ）を加えた。水層をクロロホルム（２０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を水（３０ｍｌ）、飽和食塩水（３０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝８０／２０を溶離液として目的物  １−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（３，４−ジメトキシ）ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノース（１．０３ｇ，収率４４％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．５４−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５３（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８３（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３，６０（ｄｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６６（ｄｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｄｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），４．３６（ｄｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，１Ｈ），５．４８（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．０２−７．０４（ｍ，２Ｈ）
［実施例−２］
１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−６で得た１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノース（４１０ｍｇ，０．５２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液に氷冷下テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（０．７８ｍｌ，０．７８ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１時間撹拌した後、水（１０ｍｌ）飽和塩化アンモニウム水溶液（１０ｍｌ）、ＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）を加えた。水層をＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を水（１０ｍｌ）、飽和食塩水（１０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮をした。残留物をＡｃＯＥｔ−Ｈｅｘより再結晶し１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノース（２４５ｍｇ，収率８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．５４−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．５０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），２．８０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６１（ｄｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｄｔ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，８．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｄｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，９．２Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ），４．１４（ｄｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），５．４７（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），５．６９（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ）
［実施例−３］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−６で得た１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−α−Ｄ−グルコピラノース（１４０ｍｇ，０．１７７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍｌ）溶液に氷冷下テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（０．２７ｍｌ，０．２７ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で５時間撹拌した後、水（５ｍｌ）飽和塩化アンモニウム水溶液（５ｍｌ）、ＡｃＯＥｔ（１０ｍｌ）を加えた。水層をＡｃＯＥｔ（１０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を水（１０ｍｌ）、飽和食塩水（１０ｍｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し精製し、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。酢酸エチル−ヘキサンより再結晶し４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース（４４ｍｇ，収率４５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ，０．８８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．５８−１．６４（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．４０（ｍ，２Ｈ），３．５０−４．１３（ｍ，４Ｈ），３．９０（ｓ，３Ｈ），４．１２（ｄｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ，０．７Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，０．７Ｈ），４．３４（ｄｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ，０．３Ｈ），５．１９（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，０．３Ｈ），５．３１−５．３４（ｍ，０．３Ｈ），５．３４（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，０．７Ｈ），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，０．７Ｈ），６．８６−７．０１（ｍ，３Ｈ）
［実施例−４］
１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−６で得た１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−α−Ｄ−グルコピラノース（３５０ｍｇ，０．４４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１０ｍｌ）と水（４ｍｌ）溶液にフッ化カリウム（１０９．２ｍｇ，１．８８ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１６時間撹拌した後、水（２０ｍｌ）とＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）を加え、水層をＡｃＯＥｔ（２０ｍｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を水（２０ｍｌ）、飽和重曹水（２０ｍｌ）、飽和食塩水（２０ｍｌ）で順次洗浄し無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝４０／６０を溶離液として１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノースを得た。酢酸エチル−ヘキサンより再結晶し１−Ｏ−パルミトイル−４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−ａ−Ｄ−グルコピラノース（１６７ｍｇ，収率６９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ），１．２０−１．４０（ｍ，２４Ｈ），１．５２−１．７０（ｍ，２Ｈ），２．２６（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ），２．４３（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１Ｈ），３．５４（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８２−３．９１（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｄｔ，Ｊ＝２．４Ｈｚ，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．２９（ｄｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４８（ｓ，１Ｈ），６．２５（ｄ，Ｊ＝４．０Ｈｚ，１Ｈ），６．９１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．９８−７．０２（ｍ，２Ｈ）
［実施例−５］
４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−９で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノシド（５６０ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（２０ｍｌ）、ＴＨＦ（６ｍｌ）、水（３ｍｌ）溶液にフッ化カリウム（３００ｍｇ，５．１６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を室温で３時間撹拌した後、フッ化カリウム（３００ｍｇ，５．１６ｍｍｏｌ）を更に加えた。この溶液を室温で１８時間撹拌し減圧濃縮した。酢酸エチルを加え、水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に氷冷下、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液、１．０ｍｌ，１．０ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を氷冷下１時間撹拌した後、酢酸エチルを加えた。飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、４，６−Ｏ−４−メトキシベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。酢酸エチル−ヘキサンより結晶化し、４，６−Ｏ−（４−メトキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース（２１０ｍｇ，収率４５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．１５−１．３４（ｍ，２４Ｈ），１．５８−１．６８（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．４１（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ；α体），２．８９−２．９４（ｍ，０．３Ｈ；β体），３．２８−３．３２（ｍ，０．７Ｈ；α体），３．４８−３．８２（ｍ，３．６Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），４．１１（ｄｔ，０．７Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．０Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ；α体），４．３３（ｄｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１１．２Ｈｚ；β体），４．７７−４．８１（ｍ，０．３Ｈ；β体），５．１８（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；β体），５．２９−５．３７（ｍ，１．４Ｈ；α体），５．４６（ｓ，１Ｈ），６．８４−６．９２（ｍ，２Ｈ），７．３３−７．４４（ｍ，２Ｈ）
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３０Ｈ４８Ｏ８：Ｃ，６７．１４；Ｈ，９．０１．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６７．３６；Ｈ，９．１９．
［実施例−６］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000043
製造例−１１で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノシド（４３０ｍｇ，０．４０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（１．０ｍｌ，１．０ｍｍｏｌ）を氷冷下加えた。この溶液を氷冷下１５分撹拌し、水、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。酢酸エチルで２回抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノース（１４０ｍｇ，収率５８％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．６６−１．７４（ｍ，２Ｈ），２．０１−２．１３（ｍ，４Ｈ），２．３９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．７２−２．８８（ｍ，８Ｈ），３．４４−３．７７（ｍ，３．２Ｈ），３．８８（ｓ，３Ｈ），４．０８−４．１５（ｍ，０．８Ｈ；α体），４．２３−４．３４（ｍ，１Ｈ），４．７２（ｄ，０．２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ；β体），５．１８（ｔ，０．２Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ；β体），５．２４−５．４６（ｍ，１２．６Ｈ），６．８２−６．９４（ｍ，２Ｈ），６．９６−７．０２（ｍ，１Ｈ）Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ３４Ｈ４６Ｏ９：Ｃ，６８．２１；Ｈ，７．７４．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，６８．２９；Ｈ，７．９４．
［実施例−７］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノース
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製造例−１２で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシド（１．２３ｇ，１．３６ｍｍｏｌ）とエイコサペンタエン酸（４９２ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１０ｍｌ）とＤＭＦ（３ｍｌ）溶液に、氷冷下ＤＭＡＰ（３３ｍｇ，０．２７ｍｍｏｌ）とＤＣＣ（３３７ｍｇ，１．６３ｍｍｏｌ）を順次加えた。この溶液を室温で４１時間撹拌した後、セライト濾過をした。ジエチルエーテルを加え、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル９３／７を溶離液として、目的物１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−エイコサペンタエノイル−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシドと原料１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシドの混合物（７７０ｍｇ）を得た。このものは更に精製することなく次の工程に用いた。
この混合物（７７０ｍｇ）のＴＨＦ（２５ｍｌ）溶液に氷冷下テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（２．３ｍｌ，２．３ｍｍｏｌ）を加えた．この溶液を氷冷下１時間撹拌し、更にテトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（１．５ｍｌ，１．５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で１．５時間撹拌した後、酢酸エチルを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−エイコサペンタエノイル−Ｄ−グルコピラノース（１２０ｍｇ，２工程で収率１５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９７（ｓ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．６６−１．７９（ｍ，２Ｈ），２．０１−２．１７（ｍ，２Ｈ），２．４０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．６１−２．９１（ｍ，８Ｈ），３．４８−３．８０（ｍ，３．３Ｈ），３．８９（ｓ，３Ｈ），４．０４−４．１７（ｍ，０．７Ｈ；α体），４．２４−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．７９（ｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ；β体），５．１９（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ；β体），５．２４−５．７６（ｍ，１３．４Ｈ），６．８３−７．０２（ｍ，３Ｈ）
［実施例−８］
４，６−Ｏ−（３，４−ジヒドロキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース
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１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（３，４−トリイソプロピルシロキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノシド（２１０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（０．７７ｍｌ，０．７７ｍｍｏｌ）を氷冷下加えた。この溶液を氷冷下３時間撹拌し、水、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。酢酸エチルで２回抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、目的物４，６−Ｏ−（３，４−ジヒドロキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。ジエチルエーテル−ヘキサンより結晶化し４，６−Ｏ−（３，４−ジヒドロキシ）ベンジリデン−３−パルミトイル−Ｄ−グルコピラノース（３８ｍｇ，収率３７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８８（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．１５−１．３６（ｍ，２Ｈ），１．５６−１．６８（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），３．３７−３．７８（ｍ，３．４２Ｈ），４．０２−４．１１（ｍ，０．５８Ｈ；α体），４．１９−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．６８（ｄ，０．４２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ；β体），５．１７（ｔ，０．４２Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；β体），５．２２（ｄ，０．５８Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ；α体），５．３３（ｔ，０．５８Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；α体），５．３８（ｓ，１Ｈ），６．７６−６．８５（ｍ，２Ｈ），６．９１−６．９６（ｍ，１Ｈ）
［実施例−９］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000046
製造例−１１に記載の方法にしたがって、ただしエイコサペンタエン酸の代わりにペンタン酸を用いて得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース（５２０ｍｇ，０．５９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に氷冷下テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（２．３ｍｌ，２．３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を氷冷下１時間撹拌し、更にテトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（１．８ｍｌ，１．８ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を室温で３０分間撹拌した後、酢酸エチルを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝２０／８０を溶離液として、目的物４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。酢酸エチル−ヘキサンより結晶化し、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース（１８０ｍｇ，収率７７％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．２８−１．３８（ｍ，２Ｈ），１．５７−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．４３（ｍ，２Ｈ），２．６５−２．７３（ｍ，０．７Ｈ；α体），２．８１−２．８８（ｍ，０．３Ｈ；β体），３．１３−３．２４（ｍ，０．７Ｈ；α体），３．５０−３．８１（ｍ，３．３Ｈ），３．８９７（ｓ，０．９Ｈ；β体），３．９０１（ｓ，２．１Ｈ；α体），４．１３（ｄｔ，０．７Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１０．０Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．６Ｈｚ；α体），４．３４（ｄｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．６Ｈｚ；β体），４．８０（ｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ；β体），５．１９（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ；β体），５．３０−５．３７（ｍ，１．４Ｈ；α体），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．６５（ｓ，１Ｈ），６．８５−６．９５（ｍ，２Ｈ），６．９８−７．０３（ｍ，１Ｈ）、Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ１９Ｈ２６Ｏ９：Ｃ，５７．２８；Ｈ，６．５８．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，５７．１４；Ｈ，６．６３．
［実施例−１０］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000047
製造例−１３に記載の方法にしたがって、ただしデカン酸の代わりにペンタン酸を用いて得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（３−メトキシ−４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ）ベンジリデン−２，３−Ｏ−ジペンタノイル−Ｄ−グルコピラノシド（２００ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（０．６３ｍｌ，０．６３ｍｍｏｌ）を氷冷下加えた．この溶液を氷冷下２時間撹拌し、水、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。酢酸エチルで２回抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチルｔ＝６０／４０を溶離液として、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース（８６ｍｇ，収率８５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８１−０．９４（ｍ，６Ｈ），１．２３−１．３９（ｍ，４Ｈ），１．５１−１．６４（ｍ，４Ｈ），２．８４（ｓ，０．６Ｈ；α体），３．４３−３．５０（ｍ，０．４Ｈ；β体），３．５２−３．８３（ｍ，２．４Ｈ），３．８９１（ｓ，１．２Ｈ；β体），３．８９９（ｓ，１．８Ｈ；α体），４．０９−４．２２（ｍ，０．６Ｈ；），４．２８（ｄｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．６Ｈｚ；α体），４．３６（ｄｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．６Ｈｚ；β体），４．８０（ｔ，０．４Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ；β体），４．８６−４．９８（ｍ，１Ｈ），５．３６−５．４７（ｍ，２Ｈ），５．６１−５．６８（ｍ，１．６Ｈ），６．８５−６．９３（ｍ，２Ｈ），６．９６−７．０２（ｍ，１Ｈ）
［実施例−１１］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000048
製造例−１２で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシド（１．４０ｇ，１．５５ｍｍｏｌ）と吉草酸（２３７ｍｇ，２．３２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１６ｍｌ）溶液に、氷冷下ＤＭＡＰ（３８ｍｇ，０．３１ｍｍｏｌ）とＤＣＣ（４７８ｍｇ，２．３２ｍｍｏｌ）を順次加えた。この溶液を室温で４５時間撹拌した後、セライト濾過をした。ジエチルエーテルを加え、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝９３／７を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−ペンタノイル−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシドと原料１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシドの混合物（９５０ｍｇ）を得た。このものは更に精製することなく次の工程に用いた。
この混合物（９５０ｍｇ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）、酢酸（０．１ｍｌ）溶液にテトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（６．０ｍｌ，６．０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を室温で６時間撹拌し、水、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。酢酸エチルで２回抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。酢酸エチル−ヘキサンより結晶化し、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−ペンタノイル−Ｄ−グルコピラノース（１１０ｍｇ，２工程で収率１８％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．３３（ｄｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），１．５６−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３６−２．４３（ｍ，２Ｈ），２．７１（ｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；α体），２．８７（ｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝４．０Ｈｚ；β体），３．２６（ｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ；α体），３．４９−３．８１（ｍ，３．６Ｈ），３．８９６（ｓ，０．９Ｈ；β体），３．９００（ｓ，２．１Ｈ；α体），４．１２（ｄｔ，０．７Ｈ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１０．０Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ；α体），４．３４（ｄｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．８Ｈｚ；α体），４．８０（ｄｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ；β体），５．１９（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；β体），５．２９−５．３７（ｍ，１．４Ｈ；α体），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），６．８５−６．９５（ｍ，２Ｈ），６．９８−７．０２（ｍ，１Ｈ）
［実施例−１２］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000049
製造例−１３で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノシド（６２０ｍｇ，０．６６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液に氷冷下テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（１．７ｍｌ，１．７ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を氷冷下３０分間撹拌した後、酢酸エチルを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。酢酸エチル−ヘキサンより結晶化し、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−デカノイル−Ｄ−グルコピラノース（２１４ｍｇ，収率６９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．１５−１．３４（ｍ，１２Ｈ），２．３８（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．７４（ｄ，０．６６Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ；α体），２．９４（ｄ，０．３４Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ；β体），３．３９（ｄ，０．６６Ｈ，Ｊ＝２．８Ｈｚ；α体），３．４９−３．８０（ｍ，３．６８Ｈ），３．８９４（ｓ，１．０２Ｈ；β体），３．８９７（ｓ，１．９８Ｈ；α体），４．１２（ｄｔ，０．６６Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．６６Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ；α体），４．３３（ｄｄ，０．３４Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ；β体），５．２８−５．３７（ｍ，１．３２Ｈ；α体），５．４３（ｓ，１Ｈ），５．６７（ｓ，１Ｈ），６．８４−６．９５（ｍ，２Ｈ），６．９７−７．０２（ｍ，１Ｈ）
元素分析（Ｃ２４Ｈ３６Ｏ９）
計算値：Ｃ  ６１．５２、Ｈ  ７．７４
実測値：Ｃ  ６１．３８、Ｈ  ７．８５
［実施例−１３］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000050
製造例−１３で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノシド（４００ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液に，テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（０．９５ｍｌ，０．９５ｍｍｏｌ）を氷冷下加えた。この溶液を氷冷下３０分間撹拌し、ジエチルエーテルを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝５０／４０を溶離液として、目的物４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。ジエチルエーテル−ヘキサンより結晶化し、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２，３−ジデカノイル−Ｄ−グルコピラノース（１４０ｍｇ，収率６２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８３−０．９２（ｍ，６Ｈ），１．１１−１．３４（ｍ，２４Ｈ），１．５２−１．６５（ｍ，４Ｈ），２．２２−２．３９（ｍ，４Ｈ），２．８８（ｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ；α体），３．５０（ｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ；β体），３．５２−３．８２（ｍ，２．４Ｈ），３．８９０（ｓ，１．２Ｈ；β体），３．８９７（ｓ，１．８Ｈ；α体），４．１８（ｄｔ，０．６Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．６Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．４Ｈｚ；α体），４．３６（ｄｄ，０．４Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．８Ｈｚ；β体），４．８０（ｔ，０．４Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ；β体），４．８６−４．９７（ｍ，１Ｈ），５．３６−５．４７（ｍ，２Ｈ），５．６０−５．６８（ｍ，１．６Ｈ），６．８４−６．９４（ｍ，２Ｈ），６．９６−７．０２（ｍ，１Ｈ）
元素分析（Ｃ３４Ｈ５４Ｏ１０）
計算値：Ｃ  ６５．５７、Ｈ  ８．７４
実測値：Ｃ  ６５．７０、Ｈ  ８．９０
［実施例−１４］
４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−デカノイル−Ｄ−グルコピラノース
0004182218.tif 000051
製造例−１２で得た１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシド（１．３５ｇ，１．４９ｍｍｏｌ）とデカン酸（４３７ｍｇ，２．５３ｍｍｏｌ）の塩化メチレン（１５ｍｌ）溶液に、氷冷下ＤＭＡＰ（３６ｍｇ，０．３０ｍｍｏｌ）とＤＣＣ（５２３ｍｇ，２．５３ｍｍｏｌ）を順次加えた。この溶液を室温で４０時間撹拌した後、セライト濾過をした。ジエチルエーテルを加え、水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝９３／７を溶離液として、１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−デカノイル−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシドと原料１−Ｏ−ｔ−ブチルジフェニルシリル−４，６−Ｏ−（４−ｔ−ブチルジフェニルシロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−３−Ｏ−トリエチルシリル−Ｄ−グルコピラノシドの混合物（１．３９ｇ）を得た。このものは更に精製することなく次の工
この混合物（１．３９ｇ）のＴＨＦ（３０ｍｌ）溶液に氷冷下、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（５．３ｍｌ，５．３ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を氷冷下２時間撹拌した後、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）（２．６ｍｌ，２．６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。この溶液を室温で３．５時間撹拌し、酢酸エチルを加え、水、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後減圧濃縮をした。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサン／酢酸エチル＝３０／７０を溶離液として、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−デカノイル−Ｄ−グルコピラノースを得た。ジエチルエーテル−ヘキサンより結晶化し、４，６−Ｏ−（４−ヒドロキシ−３−メトキシ）ベンジリデン−２−デカノイル−Ｄ−グルコピラノース（２１０ｍｇ，収率６２％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．８７（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．１５−１．３５（ｍ，１２Ｈ），１．５７−１．６７（ｍ，２Ｈ），２．３５−２．４２（ｍ，２Ｈ），２．７１（ｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；α体），２．８８（ｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝３．２Ｈｚ；β体），３．２５−３．３０（ｍ，０．７Ｈ；α体），３．４９−３．８１（ｍ，３．６Ｈ），３．８９５（ｓ，０．９Ｈ；β体），３．９００（ｓ，２．１Ｈ；α体），４．１２（ｄｔ，０．７Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，９．６Ｈｚ；α体），４．２８（ｄｄ，０．７Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，１０．０Ｈｚ；α体），４．８０（ｄｄ，０．３Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，７．６Ｈｚ；β体），５．１９（ｔ，０．３Ｈ，Ｊ＝９．６Ｈｚ；β体），５．２９−５．３７（ｍ，１．４Ｈ；α体），５．４４（ｓ，１Ｈ），５．６６（ｓ，１Ｈ），６．８５−６．９６（ｍ，２Ｈ），６．９７−７．０２（ｍ，１Ｈ）
元素分析（Ｃ２４Ｈ３６Ｏ９）
計算値：Ｃ  ６１．５２、Ｈ  ７．７４
実測値：Ｃ  ６１．２５、Ｈ  ７．８５
次に本発明の化合物を有効成分とする医薬製剤の具体例を製剤例として示す。
［製剤例−１］
0004182218.tif 000052
各成分を均一に混合し、直打用粉末とした。これを、ロータリー式打錠機で直径７．５ｍｍ、重量２００ｍｇの錠剤にした。
［製剤例−２］
0004182218.tif 000053
Ａの成分を均一に混合した後、Ｂの水溶液を加えて練合し、押出造粒法で整粒し、次いで６０℃乾燥機で乾燥する。乾燥上がりの顆粒を粒度３００μｍ〜１７００μｍにふるい分けたものを顆粒剤とする。１分包量を２００ｍｇとする。
［製剤例−３］
0004182218.tif 000054
白糖、Ｄ−ソルビトール、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピルおよび主薬を温水６０ｇに溶解する。冷却後、グリセリンおよびエタノールに溶解した香味料の溶液を加える。次にこの混合物に水を加えて１００ｍＬとする。
次に本発明化合物の薬理効果について述べる。
本発明化合物は、アポトーシスを誘導して、癌細胞の増殖を阻止する。更に、本発明化合物は、細胞の壊死を僅かではあるが誘導する。
アポトーシスは、２つの基本的シグナル経路で誘導され得る。１つはＦａｓ／ＣＤ９５、ＴＮＦ−α等のリガンドが細胞表面受容体と結合することによって出される死のシグナル（ｄｅａｔｈ  ｓｉｇｎａｌ）によって、カスパーゼ−８が活性化されるものである。  抗癌剤やＸ−線照射のようなアポトーシス性の多数の刺激によって誘導される経路は、ミトコンドリアからチトクロームｃが細胞質に放出され、それがカスパーゼ−９等を活性化するものである。このイニシエーターカスパーゼであるカスパーゼ−８およびカスパーゼ−９の活性化に続いて、エフェクターカスパーゼであるカスパーゼ−３、カスパーゼ−６およびカスパーゼ−７が活性化される。本発明化合物は、プロカスパーゼ−８、プロカスパーゼ−９およびプロカスパーゼ−３を活性化カスパーゼ−８、カスパーゼ−９およびカスパーゼ−３に変換する。そこで、本発明化合物が、どのカスパーゼを活性化することによりアポトーシス誘導を支配しているかについて調べた。カスパーゼ−８の阻害剤は、本発明の化合物によるＤＮＡの断片化を抑制するのに対し、カスパーゼ−９の阻害剤は抑制しなかった。このことから、本発明の化合物は主にカスパーゼ−８活性化によりアポトーシスを誘導することが示された。
活性化されたカスパーゼ−８から出たシグナルは２つの経路に分かれる。１つは、カスパーゼ−３を直接活性化するものであり、もう１つはＢｉｄを限定分解させ、断片化したＢｉｄがミトコンドリアに移行し、それがチトクロームｃの細胞質への放出を促すものである。本発明化合物は、Ｂｉｄを限定分解し断片化する。本発明化合物は、主にカスパーゼ−８を活性化し、同時にＢｉｄを介して、バイパス的にカスパーゼ−９を活性化する。
上記の本発明化合物の薬理作用、作用機序を確認する試験を、次に記載する。
１．癌細胞の増殖阻害効果
細胞生存率は、生存細胞のミトコンドリア性デヒドロゲナーゼ活性によって決定した。癌細胞を９６ウェルプレートに４Ｘ１０４細胞／ウェルとなるよう播種し、実施例８の化合物（濃度０−１００μＭ）となるように添加した。単層培養する場合は、細胞を９６ウェルプレートに４Ｘ１０３細胞／ウェルとなるように加え、一晩培養し、ついで実施例８の化合物を同様に添加した。４４時間後にセル  プロリフェレーション  キット  ＩＩ試薬（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）を加えた。３７℃で４時間培養後４９０ｎｍおよび６５０ｎｍで吸光度を測定した。各細胞種について、少なくとも３回の実験を行った。ＩＣ５０値は非線形回帰曲線から計算した。結果を表１に示す。
0004182218.tif 000055
２．ＨＬ−６０細胞に対するアポトーシス誘導活性
本発明化合物のアポトーシス誘導活性を、ヒト前骨髄性白血病細胞（ＨＬ−６０細胞）でのＤＮＡフラグメンテーション能によって評価した．ＨＬ−６０細胞（５ｘ１０５細胞）を本発明化合物存在下、３７℃、ＣＯ２インキュベーター内で５時間処理した後、アガロース電気泳動によりＤＮＡの断片化を確認し、その割合（アポトーシス誘導率）を算出した。結果を表２に示す。
0004182218.tif 000056
３．ＳＷ４８０細胞に対するアポトーシス誘導活性
本発明化合物のアポトーシス誘導活性を、大腸腺腫細胞（ＳＷ４８０細胞）で核が擬集あるいは断片化している細胞の割合と、ＤＮＡフラグメンテーション能によって評価した。ＳＷ４８０細胞（１ｘ１０６細胞）に本発明化合物を添加し、３７℃、ＣＯ２インキュベーター内で２日間処理した後、エチレンブロマイドとアクリジンオレンジによって二重染色した。核が凝集あるいは断片化している細胞数をカウントし、アポトーシス細胞の誘導率を算出した。また、アガロース電気泳動によりＤＮＡの断片化を確認した。
0004182218.tif 000057
４．アポトーシス細胞と壊死細胞の定量
アポトーシス初期に、フォスファチジルセリンが形質膜の内層から外層へ移動する。ファオスファチジルセリンは、それが外層に存在する（細胞表面に露出している）場合においてのみ、細胞上においてアネキシンＶと結合する。実施例８の化合物によって誘起されたアポトーシス細胞を次のようにして測定した。
Ｕ−９３７細胞（１Ｘ１０６細胞／ｍｌ）を新しいプレートに播種し、各種濃度の実施例８の化合物で処理した。６時間後、細胞を回収し、ＰＢＳで２回洗浄した。細胞をアネキシン  Ｖ−フルオレセインチオシアネート（Ａｎｎｅｘｉｎ  Ｖ−ＦＩＴＣ、和光純薬のアネキシン  Ｖ蛍光染色キット使用）溶液に懸濁し１０分間放置する。アネキシンＶ−ＦＩＴＣで染色された細胞を蛍光顕微鏡下で数え、アポトーシス誘発細胞の割合を決定した（図１Ａ）。
同時に実施例８の化合物が壊死を誘起するか否かについて調べた。壊死細胞では、形質膜の透過性は失われ、臭化エチジュウムが壊死細胞に容易に入り込む。臭化エチジュウム陽性細胞の割合を、壊死細胞率として算出した（図１Ａ）。
５０μＭの実施例８の化合物を使用し、０−２４時間で処理時間を変化させて同様な測定をした（図１Ｂ）。
図中●は、アポトーシス性の細胞を表し、▲は壊死性の細胞を表す。結果はそれぞれについて３つのレプリカからの平均±標準偏差である。
５．アポトーシス誘導機序の解明
（１）カスパーゼ活性の測定
実施例８の化合物で誘起されたアポトーシスに、どのカスパーゼの活性化が関与しているかを調べるため、カスパーゼ−９、カスパーゼ−８およびカスパーゼ−３の活性を次のようにして調べた。
Ｕ−９３７細胞（１Ｘ１０６細胞／ｍｌ）を５０μＭの実施例８の化合物で０、３、６、９または２４時間処理した。細胞を洗浄後、溶解緩衝液（２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．５）、１０％グリセロール、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ）に１Ｘ１０６細胞／２００μｌとなるように添加する。混合物を、凍結、融解を３回くり返し、且つ各工程にて超音波処理することにより細胞を溶解させた。１２０００ＸＧで１５分間遠心分離して、上清液を得た。小分けした溶解液をアッセイ緩衝液で希釈し、カスパーゼ−９、カスパーゼ−８およびカスパーゼ−３活性を測定するため、それぞれの蛍光性ペプチド基質、Ａｃ−ＬＥＨＤ−ＭＣＡ（アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−７−アミノ−４−メチルクマリン）、Ａｃ−ＩＥＴＤ−ＭＣＡ（アセチル−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＭＣＡ）およびＡｃ−ＤＥＶＤ−ＭＣＡ（アセチル−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＭＣＡ）（ペプチド基質はＰｅｐｔｉｄｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ製）をそれぞれ最終濃度１０μＭとなるように加え反応させた。蛍光を４６０ｎｍで測定した。結果は、細胞蛋白質１μｇ当たり、１分間の蛍光強度として表されている。
カスパーゼ−９、カスパーゼ−８およびカスパーゼ−３の活性測定結果を、図２Ａ、ＢおよびＣに示した。
（２）プロカスパーゼ−９、プロカスパーゼ−８、プロカスパーゼ−３およびＤＦＦ４５の限定分解の確認
プロカスパーゼ−９、プロカスパーゼ−８、プロカスパーゼ−３は限定分解されて活性化する。ＤＦＦ４５（ＤＮＡ  ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｆａｃｔｏｒ  ４５）は、活性化されたカスパーゼ−３による限定分解をうけてＤＮＡ断片化誘導活性を示すようになる。これらの限定分解を確認するため次のようにウエスタンプロットを行った。
実施例８の化合物（７５μＭ）で０、３，６および９時間処理したＵ−９３７細胞を、ＰＢＳで２度洗浄し、ＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ  ７．４）、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＥＧＴＡ、０．１％  トリトン−Ｘ  １００、０．０５％  ＳＤＳおよび１％デオキシコール酸塩、蛋白質分解酵素カクテル）に懸濁した。超音波処理および遠心分離した後、上清液を１２％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ついでＰＶＤＦ膜に移した。その膜を、ＴＢＳＴ液中の２％脱脂乳でブロックし、それぞれカスパーゼ−９、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３、ＤＦＦ４５に対する一次抗体（カスパーゼ−９のヤギモノクローナル抗体はＭｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製、カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびＤＦＥ４５のそれはＳａｎｔａ  Ｃｒｕｚ製）により４℃で一晩処理した。その膜をＴＢＳ／０．２％  Ｔｗｅｅｎ−２０で洗浄し、西洋わさびペルオキシダーゼと複合させた対応する２次抗体で１時間処理した。十分に洗浄した後、ＥＣＬ試薬（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃ．）を用いて化学発光法によって検出した。
実施例８の化合物による処理６時間後にはプロカスパーゼ−９の限定分解が観察され、プロカスパーゼ−９が時間と共に消失した。プロカスパーゼ−８の限定分解も観察され、実施例８の化合物で処理６時間後に、プロカスパーゼ−８の５５ｋＤａの断片は減少し、４８ｋＤａ断片が見出された。プロカスパーゼ−３の限定分解も、時間依存的に検出された。ＤＦＦ４５も時間依存的に限定分解された。
（３）細胞質中のチトクロームｃの検出
ミトコンドリアから放出されたチトクロームｃはＡｐａｆ−１と結合し、そしてカスパーゼ−９が活性化される。実施例８の化合物が、ミトコンドリアから細胞質へのチトクロームｃ放出を誘起するか否かを調べた。
Ｕ−９３７細胞（１Ｘ１０６細胞／ｍｌ）を７５μＭの実施例８の化合物で、０、３、６および９時間処理した。細胞をＰＢＳで洗浄し、１０μｇ／ｍｌのジギトニンを含有するＰＢＳ中で３７℃で１０分間インキュベートした。１２０００ｒｐｍで２０分間遠心分離して細胞質の画分を採取し、これに４０％ＴＣＡ溶液を加え、氷上で１０分間放置した。氷冷アセトンで３回洗浄後、沈殿した蛋白質を１５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分画した。蛋白質のバンドをＰＶＤＦ膜に移し、上述の抗−チトクロームｃ抗体を用いてチトクロームｃを検出した。その結果、実施例８の化合物で処理４時門後に細胞質中へのチトクロームｃの遊離が観察された。
（４）Ｂｉｄの限定分解
活性化されたカスパーゼ−８はＢｉｄ（Ｂｃｌ−２ファミリー蛋白質の１つ）を直接的に限定分解し、断片化したＢｉｄはミトコンドリアに移行し、その際チトクロームｃが放出されるのを促進する。活性化されたカスパーゼ−８のシグナルは、断片化したＢｉｄによってミトコンドリアに伝達されるか否かを以下のように調べた。Ｕ−９３７細胞を７５μＭの実施例８の化合物で０、３、６および９時間処理した。その細胞溶解物を、抗Ｂｉｄ抗体（Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）を用いたウエスタンブロットにかけ、Ｂｉｄの限定分解を検出した。その結果、Ｂｉｄは時間依存的に分解されることが判明した。この結果から、実施例８の化合物によるアポトーシスのシグナルは、カスパーゼ−８によって、切断されたＢｉｄを介して、ミトコンドリアに伝えられることが示された。
（５）支配的カスパーゼの検討
本発明化合物によって惹起されるアポトーシスが、カスパーゼ−８あるいはカスパーゼ−９のどちらの酵素によって、主に誘導されるかを以下の方法で検討した。Ｕ−９３７細胞を１００μＭのカスパーゼ−８の阻害剤Ａｃ−ＩＥＴＤ−ｆｍｋ（アセチル−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−フルオロメチルケトン）またはカスパーゼ−９の阻害剤Ａｃ−ＬＥＨＤ−ｆｍｋ（アセチル−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−フルオロメチルケトン）（阻害剤はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ製）と１時間予めインキュベートした。さらに細胞を７５μＭの実施例８の化合物または対照としてのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で８時間処理し、ＤＮＡ断片化をアガロースゲル電気泳動法によって検出した。Ｕ−９３７細胞をカスパーゼ−８の阻害剤で前処理すると、ＤＮＡ断片化は完全に抑えられた。しかし、カスパーゼ−９の阻害剤はＤＮＡ断片化を抑えなかった。
ペプチド阻害剤は他のカスパーゼを交叉抑制するので、活性化カスパーゼ−８、カスパーゼ−３およびＢｉｄの直接基質に対する阻害効果をウエスタンブロットによって測定した。実施例８の化合物に８時間露呈するとプロカスパーゼ−３が減少し、活性型のｐ１１サブユニットが蓄積した。Ｕ−９３７をカスパーゼ−８の阻害剤（Ａｃ−ＩＥＴＤ−ｆｍｋ）で前処理すると、プロカスパーゼ−３の減少は完全に消失するが、カスパーゼ−９の阻害剤（Ａｃ−ＬＥＨＤ−ｆｍｋ）はプロカスパーゼ−３の限定分解を抑制しなかった。
Ｂｉｄもまた実施例８の化合物処理によって限定分解される。カスパーゼ−８の阻害剤（Ａｃ−ＩＥＴＤ−ｆｍｋ）による前処理はＢｉｄの限定分解を抑制したが、カスパーゼ−９の阻害剤（Ａｃ−ＬＥＨＤ−ｆｍｋ）はＢｉｄの限定分解をわずかに抑制したに過ぎなかった。これらの結果は、カスパーゼ−３は、カスパーゼ−８で媒介された経路によって主として活性化され、部分的にカスパーゼ−９によって活性化されることを示している。このように、実施例８の化合物は、カスパーゼ  カスケードによってＵ−９３７にアポトーシスを惹起し、カスパーゼ−８はこのカスケードの最上流で機能していることが示された。
６．本発明化合物の正常細胞に対する影響
本件発明化合物の正常細胞に対する影響を調べた結果、以下に記載するごとく、極めて小さいことが判明した。
（１）．実施例３の化合物のアポトーシス誘導活性について正常人リンパ球を用いてＤＮＡフラグメンテーション能によって評価した。その結果、濃度１００、３００、１０００μＭでアポトーシス誘導活性は４〜８％であった。
（２）．ＨＴ−２９細胞のＣＯＸに対する実施例３の化合物の作用について、２４時間後のＰＧＥ２産生量を測定することにより、評価を行った．１００μＭと２００μＭで実施例３の化合物は、ＨＴ−２９細胞のＰＧＥ２分泌量に影響は与えなかった。
（３）．プラスミドＤＮＡであるｐＢＲ３２２への実施例３の化合物の直接作用を評価した。４００μＭと８００μＭで実施例３の化合物は、直接的なＤＮＡ切断化活性を示さなかった。
産業上の利用可能性
本発明の化合物はアポトーシス誘導作用を有し、かつ低毒性あるいはほとんど毒性がない。したがって、本発明の化合物は癌細胞等の好ましからぬ細胞にアポトーシスを起こさせることにより疾病の治療に用いることができる。
本発明の化合物は化合物の構造上毒性が極めて少ないので、安全域の広い医薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明化合物による細胞のアポトーシス効果および壊死効果を示す。図中の●はアポトーシスを起こした細胞を示し、▲は壊死した細胞を示す。
図２は本発明化合物によるカスパーゼ−９（図２Ａ）、カスパーゼ−８（図２Ｂ）、カスパーゼ−３（図２Ｃ）の活性化を示す。
【図１】
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【図２】
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