(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イチゴの培養方法であって、
イチゴの苗の芽の数を増やす増殖期に、２〜１０倍希釈ＭＳ液体培地に０．５％以上２％未満のブドウ糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含ませてある培地で前記イチゴの苗を培養し、
前記増殖したイチゴの苗を伸長させる伸長期に、窒素、燐、カリウムの比（Ｎ：Ｐ：Ｋ）が、６．５：６：１９である肥料に、ＭＳ培地の微量要素とＭＳ培地のビタミン類要素、及び、３０ｍｇ／リットルのエチレンジアミン四酢酸鉄、及び、０．５％以上３％以下の糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含有させてある液体培地で前記イチゴの苗を培養し、
その後、前記伸長したイチゴの苗を地植え出来るように成長させる肥大期に、２〜１０倍希釈ＭＳ培地に、２％以上５％以下のブドウ糖もしくはショ糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含有させてある液体培地で前記イチゴの苗を培養するイチゴ培養方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、イチゴの苗を大量培養する技術に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、イチゴ用液体培地組成物としては、ＭＳ培地にショ糖を含有させてあるものが知られており、さらに、そのイチゴ用液体培地組成物にベンジルアデニン（以下ＢＡと略称する）を含有させてあるものも知られており、そのようなイチゴ用液体培地組成物のみによってイチゴの芽数を増やし（増殖）、かつ、草丈を伸ばし（伸長）、かつ、赤みがかった太いものに肥大し、自然環境の乾燥等に耐えやすい組織を形成することが行われていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
上述した従来のイチゴの栽培方法によれば、イチゴの苗は増殖し、かつ、伸長するものの、その増殖度合いや、伸長度合いには不十分な面があり、増殖効率が低かったり、十分な草丈にならず、取り扱い困難な苗しか得られないという状況があった。また、それに加えて、十分自然環境の乾燥等に耐える組織を形成させにくく、自然環境に順化させたとしても、十分丈夫な苗に生育しにくいという問題点も指摘されており、より確実に栽培容易なイチゴの苗を得る技術が望まれていた。
【０００４】
従って、本発明の目的は、上記実情に鑑みなされたものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、液体培地の組成を変更することにより、栽培容易なイチゴの苗を得ることができるようになるのではないかと考え、種々の液体培地組成物について調べたところ、イチゴの芽数の増殖度、草丈の伸長度、苗の肥大度に関する種々の新知見を得た。本発明は、前記新知見に基づき成されたものであって、
この目的を達成するための本発明の特徴手段は、イチゴの苗の芽の数を増やす増殖期に、２〜１０倍希釈ＭＳ液体培地に０．５％以上２％未満のブドウ糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含ませてある培地で前記イチゴの苗を培養し、
前記増殖したイチゴの苗を伸長させる伸長期に、窒素、燐、カリウムの比（Ｎ：Ｐ：Ｋ）が、６．５：６：１９である肥料に、ＭＳ培地の微量要素とＭＳ培地のビタミン類要素、及び、３０ｍｇ／リットルのエチレンジアミン四酢酸鉄、及び、０．５％〜３％のブドウ糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含有させてある液体培地で前記イチゴの苗を培養し、
その後、前記伸長したイチゴの被培養組織を地植え出来るように成長させる肥大期に、〜１０倍希釈ＭＳ培地に、２％以上５％以下のブドウ糖もしくはショ糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含有させてある液体培地で前記イチゴの苗培養することにあり、その作用・効果は以下の通りである。
【０００６】
〔作用効果〕
まず、本発明者らは、液体培地によってイチゴの苗を増殖させる場合には先述のＭＳ培地を希釈して用いると、イチゴの苗の増殖効率を高くする事ができるという知見を得ている（特願平５−１５８４２９号公報参照）。これに基づき、さらに、前記液体培地の組成を種々に変更を加えたところ、糖の含有量を比較的低濃度に抑制しておけば、前記イチゴの苗の増殖率を高くできるという新知見を得た。さらに本発明者らは、多糖類よりも単糖類の方がイチゴ苗による吸収性が良いと考え、種々の液体培地について調べたところ、糖としては、ショ糖を用いるよりも、ブドウ糖を用いた場合には、抑えるより高い増殖効率が得られるという新知見を得るに至った。さらに、本発明者らは、ブドウ糖の含有率について検討を加えたところ、０．５％以上２％未満としておくことが望ましいという知見を得た。
また、窒素、燐、カリウムの比（Ｎ：Ｐ：Ｋ）が、６．５：６：１９である肥料に、ＭＳ培地の微量要素とＭＳ培地のビタミン類要素、及び、３０ｍｇ／リットルのエチレンジアミン四酢酸鉄を含有させておいた培地を用いた場合に、イチゴの草丈が極めて効率よく伸長するという新知見を得た。また、イチゴ用液体培地組成物には、ＢＡ及び糖を含有させておくことが望ましい。
尚、この場合糖としてはショ糖よりもブドウ糖を用いる方が望ましいという新知見も得ている。
またさらに、ＭＳ培地の４倍希釈液に２％以上５％以下の糖を添加してあるばあいに、特に、イチゴの苗が、赤みがかった太いものになり（肥大し）やすくなり、自然環境の乾燥等に耐えやすい組織を形成しやすいという新知見を得た。
また、この場合も植物を増殖させる培地組成物に、ＢＡを添加しておくと、植物の増殖が効率よく行われるということも知られている。
つまり、イチゴの苗を大量培養するに際しては、増殖、伸長、肥大の３要素が揃ったときに、自然環境下で確実に栽培容易なイチゴの苗を効率良く提供できるわけであり、これらの要素を一種の培地組成物のみで満たそうとする点に従来の培養方法の無理があったと考え、これらの３要素を満たすために、それぞれの要素を満たすのに適した培地組成物を用いて培養を行えば、前述の３要素を全て満たして自然環境下で確実に栽培容易なイチゴの苗を提供できるということが言えるわけである。
そこで、上述の種々の新知見より、イチゴの苗を増殖させるための増殖期に、２〜１０倍希釈ＭＳ液体培地に０．５％以上２％未満のブドウ糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含ませてある培地で、そのイチゴ苗を増殖させ、さらに、窒素、燐、カリウムの比（Ｎ：Ｐ：Ｋ）が、６．５：６：１９である肥料に、ＭＳ培地の微量要素とＭＳ培地のビタミン類要素、及び、３０ｍｇ／リットルのエチレンジアミン四酢酸鉄、及び、０．５％以上３％以下の糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含有させておいた培地で増殖したイチゴの苗を伸長させ、さらに、ＭＳ培地の２〜４倍希釈液に２％以上５％以下の糖、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を添加してある培地で肥大させれば、イチゴの苗は、増殖し、かつ、伸長した丈夫な苗（以下健苗と称する）に成長し、自然環境に移植した場合にも、確実に作物を栽培できるイチゴの苗を効率よく提供できるようになった。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下に本発明の実施の形態を図面に基づいて説明する。
まず、常法に従ってイチゴの茎の先端の生長点を得るとともに、常法にしたがって培養し、１つの植物体１（以下、この段階の植物体を苗と称する）にする。この苗を、ステンレス鋼製の網２ａからなる支持台２の上に支持させ、密封容器３に設けた載置部３ａに載置する。また、密封容器３中には植物体の下部に接するように液体培地４として培地Ａ（後述）が入れてある。そして、この密封容器は、振とう台上に固定して培養期間中振とうを続け、前記培地Ａを常時攪拌して、クラウン部に栄養分を供給し続けるようにして、収容した植物体を５週間培養して増殖させる。（図１参照）
【０００８】
このようにしてイチゴの苗を増殖させると、平均約１３０倍に増加した。さらに増殖したイチゴ苗は、株分けし、クラウン部の上下各２ｃｍの所で切断し、クラウン部１ｄを含まない根部１ａ、葉部１ｂ、茎部１ｃを除去した後、このクラウン部を含む切断されたイチゴ苗を再生した植物体１としてさらに培養、増殖される。
【０００９】
増殖させた前記苗の３本を、クラウン部の上下各２ｃｍの所で切断し、クラウン部１ｄを含まない根部１ａ、葉部１ｂ、茎部１ｃを除去した後、先と同様に、液体培地４とともに密封容器３中に入れ、振とう台上に固定して培養期間中振とうを続けながら、前記収容した苗を９週間培養して増殖伸長させる。このとき、液体培地４としては培地Ｂを用いた。
【００１０】
このようにしてイチゴの苗を培養させると、草丈１５ｍｍ以上のもの（健苗）が容器当たり平均約１３０本に増加するとともに、ほぼ全般的に２ｃｍ以上の取り扱い容易な長さに伸長した。
【００１１】
次に、伸長した前記苗を、前記液体培地４とともに密封容器３中に収容してに固定して培養期間中振とうを続け、前記液体培地４を常時攪拌して、クラウン部に栄養分を供給し続けるようにして、収容した植物体を５週間培養して増殖させる。このとき、液体培地４としては培地Ｃを用いた。
【００１２】
このようにしてイチゴの苗を増殖させると、赤みがかった丈夫な苗になっていることが判った。さらに肥大したイチゴ苗は、株分けし培土に移植された後、イチゴの果実を栽培するため順化して、自然環境下に移植して用いられる。
【００１３】
尚、ここで用いた振とう台は、振とう台上に固定した密封容器３を、水平面上に円を描くように垂直軸心回りに回転させ、密封容器３内の培地４を攪拌出来るものである。また、ここで用いる密封容器とは、内外で気体の出入りを許容し、かつ、雑菌等の侵入を遮断する容器を意味する。
【００１４】
尚、液体培地ＡとしてはＭＳ培地（後述）を、４倍に希釈したもの（以下１／４ＭＳと称す）（以下１／ｎＭＳと称するものはＭＳ培地をｎ倍に希釈したものを指す）にブドウ糖を、１重量％、ＢＡを、０．０３ｍｇ／リットルになるように添加してある培地である。前記液体培地Ｂには、窒素、燐、カリウムの比（Ｎ：Ｐ：Ｋ）が、６．５：６：１９である液体肥料として、微粉ハイポネックス（ハイポネクス社製）の０．１％水溶液にＭＳ培地の微量要素（後述）とＭＳ培地のビタミン類要素（後述）とを含有させてあるものを基本培地（以下ＨＹ培地と称する）とし、０．５％以上３％以下のブドウ糖、及び、３０ｍｇ／リットルのエチレンジアミン四酢酸鉄、及び、０．５ｍｇ／リットル以下のベンジルアデニン（ＢＡ）を含有させてあるものを用いた。また液体培地Ｃとしては１／４ＭＳ培地にブドウ糖を４重量％、ＢＡを、０．０３ｍｇ／リットルになるように添加してある培地を用いた。
【００１５】
以下にＭＳ培地の組成、及び、ＭＳ培地の微量要素、ビタミン類要素の組成を１リットル当たりの重量（単位ｍｇ）で示す。
【００１６】
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尚、エチレンジアミン四酢酸鉄を含有させておく場合には、硫酸鉄７水和物、及び、エチレンジアミン４酢酸２ナトリウムは省略する。
【００１７】
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【００１８】
ＭＳ培地のビタミン類要素：
ニコチン酸                    ……………………        ０．５
チアミン塩酸塩                ……………………        ０．１
ピリドキシン塩酸塩            ……………………        ０．５
ｍ−イノシト−ル              ……………………    １００
グリシン                      ……………………        ２
【００１９】
【実施例】
以下に本発明の実施例を図面に基づいて説明する。
常法に従って生長点を培養して得たイチゴの苗１を３本づつ、培地Ａ１、Ａ２，Ｄ１〜Ｄ４の５０ｍｌずつ入った密封容器３それぞれに密封し、前記振とう台を用いて液体培地４を常時攪拌し続ける条件下、３５日間イチゴ苗の培養を行って苗の増殖数を調べた。
尚、各培地の組成は、表１に示す通りである。
その結果表２のようになった。
【００２０】
【表１】
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【００２１】
【表２】
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【００２２】
つまり、先の液体培地組成物Ａ１でイチゴ苗１を培養して増殖を行うと、実験誤差によるばらつきがあるものの、１３０倍程度増殖することが分かり、糖としてブドウ糖を用いた場合にはショ糖を用いた場合に比べ高い増殖性を示すことがわかった。
また、１／４ＭＳに、カイネチンを添加した液体培地４（培地Ｄ２〜Ｄ５）を用いた場合には、ＢＡを用いた場合に比べ、増殖速度が全体的に低いものの、ＢＡを用いた場合に匹敵する増殖率を示した。つまり、１／２ＭＳ〜１／１０ＭＳにカイネチンを添加した液体培地４を用いれば、高い増殖率を得られ、この培地にＢＡを添加すれば、試験例１以上の増殖率の向上を期待することが出来る。尚、カイネチンは、１ｍｇ／リットル以下の範囲で用いていればＢＡと同様の効果を奏することが経験的に知られている。
【００２３】
上述の方法によって増殖したイチゴの苗１を３本づつ、培地Ｂ１、Ｂ２，Ｄ６，Ｄ７の５０ｍｌずつ入った密封容器３それぞれに密封し、前記振とう台を用いて液体培地４を常時攪拌し続ける条件下、培養を行ってイチゴ苗の１５ｍｍ以上のものの数を調べた。
尚、各培地は液体培地Ａ１の基本培地の種類や濃度を様々に変更したものであって、表３に示す通りである。
【００２４】
その結果、平均増殖本数は表４のようになった。
尚、培養期間は９週間である。
【００２５】
【表３】
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【００２６】
【表４】
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【００２７】
〔試験例２〕
表３に示す液体培地Ｄ及び液体培地Ｅを用いて、試験例１と同様にイチゴ苗を６週間培養して、１５ｍｍ以上の苗の数を調べた。その結果表４のようになった。
【００２８】
表４より、ＨＹ培地を用いた場合には、２５ｍｍ〜３５ｍｍに伸長した比較的長い芽の割合が高く、かつ、取り扱い容易な長い芽数も多く培養されていることがわかる。また同様に、表５に示す液体培地Ｂ２及びＢ３を用いて、イチゴ苗を６週間培養して１５ｍｍ以上の苗の数を調べた。その結果表６のようになった。
【００２９】
【表５】
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【００３０】
【表６】
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【００３１】
その結果、伸長期に用いる液体培地組成物に用いる糖としては、ショ糖に比べてブドウ糖が好ましいことがわかった。
【００３２】
次に、先の培養によって伸長したイチゴの苗１を、培地Ｃ１〜Ｃ５のそれぞれ５０ｍｌとともに各別に密封容器３に密封し、前記振とう台を用いて液体培地４を常時攪拌し続ける条件下、培養を行ってイチゴ苗の草丈が１５ｍｍ以上で、かつ、赤みがかった太いもの肥大したものの数を調べた。尚、各培地の組成は、表３に示す通りである。
【００３３】
その結果、平均増殖本数は図のようになった。
【００３４】
【表７】
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【００３５】
図２より、ショ糖濃度の高い１／４ＭＳ培地を用いた場合には、２５ｍｍ〜３５ｍｍで肥大した芽の割合が高く培養されていることがわかる。
また、各培地Ｃ６〜Ｃ８のそれぞれ５０ｍｌとともに各別に密封容器に封入し、同様に培養したところ、図３のようになった。図３より、培地に含有させる糖分はショ糖よりもブドウ糖が好ましく、糖濃度としては３〜５％程度が好ましいということがわかる。
【図面の簡単な説明】
【図１】イチゴ培養方法を示す工程図
【図２】イチゴ肥大度のショ糖濃度依存性を示すグラフ
【図３】イチゴ肥大度の糖度依存性を示すグラフ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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