(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤であって、
（ａ）内水相が、浸透圧０．１〜３．５ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液であり、
（ｂ）油相が、油脂類及び油性界面活性剤を含有しており、前記油性界面活性剤が、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油及びポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル系界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種であり、
（ｃ）内水相と外水相の体積比が１：１０〜１：０．１の範囲にあり、
（ｄ）内水相と油相の体積比が１：９〜１：０．１の範囲にあり、
（ｅ）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の平均粒径が４０〜５００μｍである、ことを特徴とする、肝臓癌を治療するための抗癌剤含有乳化製剤。
【請求項２】
油性界面活性剤を０．１〜２０重量％含む請求項１記載の抗癌剤含有乳化製剤。
【請求項３】
動脈内に投与する、請求項１又２記載の抗癌剤含有乳化製剤。
【請求項４】
請求項１に記載の抗癌剤含有乳化製剤の製造方法であって、
Ｗ／Ｏ型エマルション製剤を、多孔質ガラス膜を介して、浸透圧０．１〜０．７ＭＰａの外水相となる水相に圧入分散させることにより、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションからなる製剤を得る方法であって、（ａ）Ｗ／Ｏ型エマルション製剤における水相の浸透圧を、外水相となる水相の浸透圧以上の値とし、（ｂ）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションにおける内水相及び外水相の浸透圧を、生理食塩水の浸透圧を超える値とすることを特徴とする抗癌剤含有乳化製剤の製造方法。
【請求項５】
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの内水相及び外水相の浸透圧を、０．７５〜３．５ＭＰａとする請求項４記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、化学療法におけるドラッグデリバリーシステム（薬物送達システム；以下「ＤＤＳ」という）において使用される抗癌剤含有乳化製剤及びその製造方法に関する。
【０００２】
【従来技術】
一般に、癌の化学療法としては、静脈投与、粘膜下に注入する局所投与、動注投与等の種々の薬剤投与方法があり、これらは癌の種類と部位に応じて適宜使い分けされている。とりわけ動注投与による治療は、癌組織に向かう動脈に薬剤を注入するため、薬剤の大部分を癌組織に到達させることができる。例えば、図１に示すように、肝臓（１）の肝臓癌（２）の治療においては、右大腿動脈から分岐した肝動脈（３）の中に挿入されたカテーテル（４）を通じ、注射器（５）或いはインジェクターを用いて、水溶性抗癌剤とゼラチンスポンジを注入する肝動脈塞栓術が行われている。
【０００３】
近年では、油性Ｘ線造影剤であるヨウ素化けし油脂肪酸エチルエステル  （「Lipiodol Ultra-Fluide」ラボラトワール・ゲルベ社製；以下「リピオドール」という）が肝臓癌に対して特異的に沈着する性質を利用し、肝動脈塞栓術を用いて効率的に抗癌剤を肝臓癌に到達させる方法が実施されている。
【０００４】
具体的には、油性高分子抗癌剤を上記リピオドールに懸濁させた製剤を使用する方法がある。この製剤は、熊本大学医学部で開発され（Konno T. et al, Jpn. Cancer Chemother., 9, 2005-2015(1982)）、製造販売されているものである（「スマンクス（SMANCS）」山之内製薬（株））。
【０００５】
他の一つとしては、長崎大学医学部で開発されたものであって（Kanematsu T. et al, J. Surg. Oncol., 25, 218-226(1984)）、リピオドール、水溶性Ｘ線造影剤及び水溶性抗癌剤を乳化させた製剤である。
【０００６】
しかしながら、前者の懸濁製剤は、抗癌剤が油性高分子であるため、これを所定の癌細胞へ到達させることが難しく、十分な薬効を得ることができない。しかも、現在認可されている水溶性抗癌剤を使用できないという欠点もある。
【０００７】
後者の乳化製剤は、エマルション自体が不安定であるため、リピオドールと抗癌剤が分離し易く、分離した場合には抗癌剤が血流にのって癌組織から流失してしまうという欠点がある。
【０００８】
ところで、粒径が均一な単分散エマルションを得る方法として、多孔質ガラス膜を用いる乳化方法（以下「膜乳化法」という）が提案された（特開平２−９５４３３号）。この膜乳化法によれば、細孔径が異なる多孔質ガラス膜を利用することによって、０．３〜４０μｍの範囲において単分散Ｗ／Ｏ型エマルション及び単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを製造することができる。
【０００９】
そこで、本発明者は、膜乳化法を用い、動注療法において使用できる粒径３０μｍの単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を開発し、その臨床結果を報告した
（“Arterial-Injection Chemotherapy for Hepatocellular Carcinoma Using
Monodispersed Poppy-Seed Oil Microdroplets Containing File Aqueous
Vesicles of Epirubicin”, CANCER, 75, 1245(1995)）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記方法による製剤は、特に癌組織（例えば肝臓癌等）に対する沈着性等が未だ不十分であり、それらの点についてさらに検討・改善する余地があった。
【００１１】
従って、本発明は、特に癌組織に対する沈着性に優れた製剤を提供することを主な目的とする。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記従来技術の問題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、特定の方法により得られるエマルションは、その特異な構造をもつゆえに癌組織に対して優れた沈着性を発現することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、下記の抗癌剤含有乳化製剤及びその製造方法に係るものである。
【００１４】
１．Ｗ／Ｏ型エマルション製剤であって、
（ａ）水相が、浸透圧０．０１〜７．０ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液であり、
（ｂ）油相が、油脂類及び油性界面活性剤を含有しており、
（ｃ）水相と油相の体積比が１：９〜１：０．２の範囲にあり、
（ｄ）水相粒子の平均粒径が２００μｍ以下であって、かつ、最大粒径が４００μｍ以下であり、
（ｅ）上記平均粒径の７５％から１５０％の粒径をもつ水相粒子が全水相粒子の５０容積％以上である
ことを特徴とする抗癌剤含有乳化製剤。
【００１５】
２．浸透圧０．０１〜７．０ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液からなる水相を、油性界面活性剤０．１〜１０重量％を含む油相に分散させることにより、Ｗ／Ｏ型エマルションを得ることを特徴とする抗癌剤含有乳化製剤の製造方法。
【００１６】
３．Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤であって、
（ａ）内水相が、浸透圧０．１〜３．５ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液であり、
（ｂ）油相が、油脂類及び油性界面活性剤を含有しており、
（ｃ）内水相と外水相の体積比が１：１０〜１：０．１の範囲にあり、
（ｄ）内水相と油相の体積比が１：９〜１：０．１の範囲にあり、
（ｅ）Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の平均粒径が４０〜５００μｍである、
ことを特徴とする抗癌剤含有乳化製剤。
【００１７】
４．Ｗ／Ｏ型エマルション製剤を、多孔質ガラス膜を介して、浸透圧０．１〜０．７ＭＰａの外水相となる水相に圧入分散させることにより、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションからなる製剤を得る方法であって、
（ａ）Ｗ／Ｏ型エマルション製剤における水相の浸透圧を、外水相となる水相の浸透圧以上の値とし、
（ｂ）得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションにおける内水相及び外水相の浸透圧を、生理食塩水の浸透圧を超える値とする
ことを特徴とする抗癌剤含有乳化製剤の製造方法。
【００１８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明をその実施の形態とともに説明する。なお、本明細書中では、原則的に各用語を次のようにそれぞれ記す。
【００１９】
▲１▼  Ｗ／Ｏ型エマルション製剤（例えば図２（ａ））の場合、その粒子（６）を「水相粒子」、分散媒（７）を「油相」と記す。さらに、このエマルションを用いて製造したＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤（例えば図２（ｂ））の場合、抗癌剤を含む水相粒子（８）を「内水相粒子」、これを油相で包含している油滴（９）を「Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子」、分散媒（１０）を「外水相」と記す。また、Ｗ／Ｏ型エマルション製剤とＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤とを総称して「乳化型ＤＤＳ製剤」と記す。
【００２０】
▲２▼  「単分散エマルション」は、基本的には上記平均粒径の７５％から１５０％の粒径をもつ粒子が全粒子の５０容積％以上であるものを示し、このような粒径分布をもたないエマルションを「多分散エマルション」と記す。
【００２１】
▲３▼  Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤においてＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子が占める割合（容積％）を「充填率」と記す。
【００２２】
まず、本発明に係るＷ／Ｏ型エマルションからなる抗癌剤含有乳化製剤について説明する。
【００２３】
水相は、抗癌剤含有水溶液であり、その浸透圧は通常０．０１〜７．０ＭＰａ程度の範囲内に調整されている。抗癌剤は、水溶性であれば特に制限されず、例えば白金錯化合物系、アントラキノン系、アントラサイクリン系等の各種の抗癌剤が使用でき、その他の市販ものも使用できる。抗癌剤の使用量は、癌組織の部位、大きさ等に応じて適宜設定すれば良い。
【００２４】
本発明では、抗癌剤以外にも、実質上人体に無害な化合物を添加することができる。例えば食塩のほか、ナトリウム塩（例えば、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、デキストラン硫酸ナトリウム等）、カルシウム塩（例えば塩化カルシウム、グルコン酸カルシウム等）の各種塩類、ブドウ糖、乳糖等の各種糖類を挙げることができる。さらに、グリセリン、Ｄ−マンニトール、アミノ酸等も使用することができる。
【００２５】
水相の浸透圧は、癌組織の性質、部位、大きさ等に応じて上記範囲内で適宜設定すれば良い。例えば、エマルション粒子（水相粒子）を体内でさらに膨張させようとする場合には、生理食塩水の浸透圧を超える値、好ましくは生理食塩水の浸透圧の通常１．１〜５倍（０．７５〜３．５ＭＰａ）程度に調節すれば良い。これにより、血液中にＷ／Ｏ型エマルション製剤を動注した後、血液中の水が水相粒子に移動する結果、血管の中で水相粒子が膨張する。膨張させる必要が特にない場合は、血液と同じ生理食塩水の浸透圧に設定すれば、そのままの粒径を維持することができる。上記浸透圧は、例えば抗癌剤、上記添加剤等の添加量によって調節できる。なお、本発明における生理食塩水の浸透圧は、約３７℃における値を基準とする。
【００２６】
油相中には、油脂類及び油性界面活性剤が含まれている。油脂類としては、薬理的に許容されるものであれば特に制限されず、例えば大豆油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、ナタネ油、トウモロコシ油、ラッカセイ油、メンジツ油、ヨード油、強ヨード油等を使用することができる。
【００２７】
油性界面活性剤としては、薬理的に許容される限り特に制限されず、市販のものを使用できる。この中でもポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が好ましく、特に酸化エチレン付加４０モルのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（例えば、「ＨＣＯ−４０」日光ケミカルズ（株）製など）が生体に対する安全性がより高く、少ない濃度で安定性に優れたＷ／Ｏ型エマルション製剤及びＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を調製できる点から好ましい。
【００２８】
また、油性界面活性剤として、テトラグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（例えば、「ＣＲ−３１０」阪本薬品工業（株）製など）、デカグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（例えば、「ＣＲ−５００」阪本薬品工業（株）製など）等のポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステル系の界面活性剤を使用しても安定なＷ／Ｏ型エマルション製剤及びＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を調製することができる。
【００２９】
油性界面活性剤の添加量は、用いる油脂類等に応じて適宜設定することができるが、通常０．１〜２０重量％程度、好ましくは０．５〜１０重量％とする。
【００３０】
油相中にはさらに他の添加成分が含まれていても良い。例えば、抗癌剤、レシチン、コレステロール、ビタミンＥ等が挙げられる。抗癌剤としては、油溶性のものであれば特に制限されず、市販のものも使用することができる。例えば、抗癌剤ジノスタチンスチラマーを含有する上記スマンクス等を使用することができる。含有量は、用いる油脂類、油性界面活性剤等に応じて適宜定めることができる。
【００３１】
上記の水相と油相の体積比は、通常１：９〜１：０．２程度、好ましくは１：９〜１：０．５とする。特に１：４〜１：０．５とすることがより好ましい。このような体積比とすることによって、エマルションの粘度を自由に調節することができ、優れた沈着性が得られる。また、抗癌剤の徐放速度を調節することもできる。水相の割合が大きすぎる場合には、粘度が非常に高くなり、動注自体が困難となるので好ましくない。水相の割合が少なすぎる場合には、抗癌剤の含有量が少なくなるため、所望の薬効が期待できない。
【００３２】
水相粒子の平均粒径は、通常２００μｍ以下であり、好ましくは０．５〜１０μｍである。また、水相粒子の最大粒径は、通常は４００μｍ以下、好ましくは２００μｍ以下である。なお、これらの粒径は、投与前における粒径である。
【００３３】
また、本発明製剤の粒径分布は、上記の粒径範囲内にあれば特に制限されないが、上記平均粒径の７５％から１５０％の粒径をもつ水相粒子が全水相粒子の５０容積％以上であることが好ましい。すなわち、本発明では単分散エマルションであることが好ましい。
【００３４】
特に、水相粒子の平均粒径の５０％以下の粒径をもつ水相粒子及び平均粒径の２００％以上の粒径をもつ水相粒子を実質的に含まず、かつ、上記平均粒径の  ７５％から１５０％の粒径をもつ水相粒子が全水相粒子の８０容積％以上であることがより好ましい。この場合、水相粒子の平均粒径の５０％以下の粒径をもつ水相粒子及び平均粒径の２００％以上の粒径をもつ水相粒子は、本発明の効果を損なわない範囲内において含まれていても差し支えない。
【００３５】
本発明Ｗ／Ｏ型エマルション製剤の製造方法は、浸透圧０．０１〜７．０ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液からなる水相を、油性界面活性剤０．１〜１０重量％を含む油相に分散させることにより、Ｗ／Ｏ型エマルションを得ることを特徴とする。分散させる方法は、特に制限されず、例えば攪拌、ホモジナイザー、超音乳化機等による公知の乳化方法に従えば良い。特に、上記水相を多孔質ガラスを介して上記油相に圧入分散させる膜乳化方法では、単分散性のより高いＷ／Ｏ型エマルション製剤が得られるという点で好ましい。
【００３６】
本発明の製造方法では、水相として浸透圧０．０１〜７．０ＭＰａ程度、好ましくは０．１〜３．５ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液を用いる。抗癌剤としては、前記の水溶性のものを使用することができる。また、油相としては油性界面活性剤０．１〜２０重量％程度を含むものを用いる。油相は、例えば油脂類を用いて調製することができる。油性界面活性剤及び油脂類としては前記Ｗ／Ｏ型エマルション製剤と同様のものを使用することができる。
【００３７】
油性界面活性剤の濃度は、その種類、水相／油相の体積比等に応じて上記範囲内で適宜設定することができる。また、添加方法も用途等に応じて適宜決定することができる。例えば、予め０．１〜１０重量％の範囲に調整して安定なＷ／Ｏ型エマルションを得た後、さらに得られたＷ／Ｏ型エマルションに油性界面活性剤を全量が２０重量％以下となる範囲内で追加すれば、得られたＷ／Ｏ型エマルション粒子（水性粒子）を効果的に膨張させることができる。また、膨張させない場合は、Ｗ／Ｏ型エマルションを得た時点における油性界面活性剤の濃度をそのまま維持すれば良い。このように、油性界面活性剤を追加することによってＷ／Ｏ型エマルション粒子の大きさ等を任意にコントロールすることができる。
【００３８】
本発明では、特に多孔質ガラス膜を介してＷ／Ｏ型エマルション製剤を調製することが望ましい。この方法では、エマルションの安定性を維持しつつ油性界面活性剤の追加量を減らすことができ、この点において機械的乳化法に比してより有利である。また、膜乳化法によれば、０．５〜１０μｍ程度の小さな水相粒子が確実に得られ、しかもこの範囲で粒径を自由にコントロールすることができる。また、機械的方法による場合と異なり乳化する際に熱が発生することもないため、熱に敏感な抗癌剤にも適用することができる。
【００３９】
上記多孔質ガラス膜としては、公知のものが使用でき、例えばガラスのミクロ相分離を利用して製造されたものを好適に使用できる。具体的には、特許第１５０４００２号に開示されたＣａＯ−Ｂ2Ｏ3−ＳｉＯ2−Ａｌ2Ｏ3系多孔質ガラス、特許第１５１８９８９号及び米国特許第４６５７８７５号に開示されたＣａＯ−Ｂ2Ｏ3−ＳｉＯ2−Ａｌ2Ｏ3−ＮａＯ2系多孔質ガラス、ＣａＯ−Ｂ2Ｏ3−ＳｉＯ2−Ａｌ2Ｏ3−ＮａＯ2−ＭｇＯ系多孔質ガラス、ＣａＯ−Ｂ2Ｏ3−ＳｉＯ2−ＺｒＯ2系多孔質ガラス等が挙げられる。
【００４０】
これらの多孔質ガラスの中でも、特に、相対累積細孔分布曲線において、細孔容積が全体の１０％を占める時の細孔径を細孔容積が全体の９０％を占める時の細孔径で除した値が実質的に１から１．５までの範囲内にあるミクロ多孔膜体を用いることが望ましい。このような膜は、特に細孔が均一であり、膜乳化に適している。
【００４１】
また、圧入する際の圧力は、水相又は油相の組成等に応じて適宜定めることができるが、通常Ｐｃ＞２γｃｏｓθ／ｒ（但し、Ｐｃは圧力、γは界面張力、θは接触角、ｒは多孔膜体細孔半径を示す。）なる圧力とすれば良い。
【００４２】
本発明Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤は、その内水相が浸透圧０．１〜３．５ＭＰａの範囲に調整された抗癌剤含有水溶液である。抗癌剤は、水溶性であれば特に制限されず、例えば白金錯化合物系、アントラキノン系、アントラサイクリン系等の各種のもの或いは市販のものが使用できる。抗癌剤の使用量は、癌組織の部位、大きさ等に応じて適宜設定すれば良い。また、抗癌剤のほかにも、前記Ｗ／Ｏ型エマルション製剤の水相に添加されている成分が含まれていても良い。これら抗癌剤等の添加量によって内水相の浸透圧を調節することができる。
【００４３】
油相には、油脂類及び油性界面活性剤が含まれている。これらは、前記Ｗ／Ｏ型エマルション製剤で用いるものと同様のものを使用することができる。油性界面活性剤の含有量は、通常０．１〜２０重量％程度、好ましくは０．５〜１０重量％とする。また、油相には、他の成分が含まれていても良く、例えば抗癌剤、レシチン、コレステロール、ビタミンＥ等が挙げられる。抗癌剤としては、油溶性のものであれば特に制限されず、前記と同様の油溶性抗癌剤を使用できる。
【００４４】
外水相の組成としては、薬理的に許容されるものであれば特に制限はなく、例えば塩類、糖類等の水溶液を用いることができる。塩類、糖類等としては、前記Ｗ／Ｏ型エマルション製剤と同様のものを使用できる。これらの塩類、糖類等の濃度によって、浸透圧を調整することができる。
【００４５】
また、外水相には、他の成分が含まれていても良い。例えば、必要に応じて水性界面活性剤を含有させることができる。水性界面活性剤は、人体に実質的に無害であれば特に制限されず、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤プルローニックＦ６８（「ポロクサマー１８８」ミドリ十字（株）製）のほか、リゾレシチン、胆汁酸等の市販のものも使用できる。この中でもポリオキシエチレン硬化ヒマシ油が好ましく、特に酸化エチレン付加６０モルのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（例えば、「ＨＣＯ−６０」日光ケミカルズ（株）製など）が生体に対する安全性がより高く、少ない濃度で安定性に優れたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを調製できる点でより好ましい。
【００４６】
内水相と外水相の体積比は、通常１：１０〜１：０．１程度、好ましくは１：５〜１：１の範囲である。また、内水相と油相の体積比は、通常１：９〜１：０．１程度、好ましくは１：９〜１：０．５の範囲である。これら体積比は、水相・油相の種類、癌組織の性質等に応じて適宜変更することができる。
【００４７】
本発明Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の平均粒径は、通常４０〜５００μｍ程度、好ましくは６０〜２００μｍである。なお、これらの粒径は、投与前における粒径である。
【００４８】
また、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の粒径分布は、上記の粒径範囲内にあれば特に制限されないが、上記平均粒径の７５％から１５０％の粒径をもつＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子が全粒子の５０容積％以上であることが好ましい。
【００４９】
殊に、上記平均粒径の５０％以下の粒径をもつＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子及び平均粒径の２００％以上の粒径をもつＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子を実質的に含まず、かつ、上記平均粒径の７５％から１５０％の粒径をもつＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子が全粒子の８０容積％以上であることが好ましい。この場合、上記平均粒径の５０％以下の粒径をもつＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子及び上記平均粒径の２００％以上の粒径をもつＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子は、本発明の効果を損なわない範囲内において含まれていても差し支えない。
【００５０】
本発明のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤は、Ｗ／Ｏ型エマルション製剤を、多孔質ガラス膜を介して、浸透圧０．１〜０．７ＭＰａの外水相に圧入分散させることにより製造できる。
【００５１】
このＷ／Ｏ型エマルション製剤としては、本発明Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを調製できる限り制限されないが、特に本発明に係る前記Ｗ／Ｏ型エマルション製剤を用いることが望ましい。また、Ｗ／Ｏ型エマルション製剤は、機械的乳化方法、膜乳化法等のいずれの乳化方法で得られたものも用いることができるが、特に膜乳化法で得られたものを用いるのが好ましい。
【００５２】
本発明では、特に、Ｗ／Ｏ型エマルション製剤における水相の浸透圧を、外水相となる水相の浸透圧以上の値とし、かつ、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションにおける内水相及び外水相の浸透圧を、生理食塩水の浸透圧を超える値とすることが望ましい。これにより、より沈着性に優れたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を得ることができる。上記の場合において、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの内水相及び外水相の浸透圧は、生理食塩水の浸透圧の通常１．１〜５倍（０．７５〜３．５ＭＰａ）とすることがより好ましい。
【００５３】
本発明Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤において、内水相及び外水相の浸透圧は、エマルション製剤の機能、体積比等に影響を与えるものであり、次の３つの場合に分けることができる。
【００５４】
（ａ）内水相と外水相の浸透圧が生理食塩水のそれに等しい場合
動注後も内水相及びＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの粒径は実質的に変化しない。内水相と油相の体積比は通常１：９〜１：０．５程度、内水相と外水相の体積比は通常１：１０〜１：２程度の範囲となり、充填率は通常６０容積％以下である。
【００５５】
（ｂ）内水相と外水相の浸透圧が等しく、かつ、その浸透圧が生理食塩水の浸透圧を超える値に調整した場合
動注後に外水相は血液で置換され、内水相との間に浸透圧差が生じる。その結果、浸透圧が等しくなるように血液中の水が内水相に移動し、血管の中でエマルション粒子は膨張する。
【００５６】
（ｃ）外水相に対して内水相の浸透圧が高い条件下で膜乳化を行った場合
浸透圧差により、外水相から内水相に水が移動するため、油相及び外水相に対する内水相の体積比が増加し、充填率の高い単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を製造できる。
【００５７】
この場合、水の移動が停止した時点で内水相と外水相の浸透圧が生理食塩水のそれと等しくなるように設計した場合には、動注後もＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の粒径は変化しない。一方、水の移動が停止した時に内水相と外水相の浸透圧が生理食塩水のそれよりも高くなるように設計した場合には、動注後に血管の中でＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子が膨張する。
【００５８】
特に、本発明において、上記（ｃ）の場合は重要である。通常は、膜乳化法で単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を製造するためには、外水相を十分循環させることによって、生成したＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子を多孔質ガラスの膜面から離脱させる操作が不可欠である。ところが、充填率が高く、エマルションの粘度が上昇した場合には、循環による剪断力が低下して粒子の離脱が困難になり、エマルションは多分散化する。従って、一般に単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの調製においては、充填率６０容積％程度が限界である。一方、臨床試験の結果から、充填率６０容積％を超えるエマルション製剤を動注投与した場合には、特に癌組織に対する沈着性が顕著となり、優れた薬効を得ることが可能となる。
【００５９】
このため、本発明方法では、調製が比較的容易な充填率６０容積％以下の単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを予め製造し、次いで浸透圧差を利用して外水相の水を内水相に移動させ、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子を膨張させることにより充填率を６０容積％以上（好ましくは充填率６０〜８０容積％）にすることが望ましい。これによって、癌組織に対する沈着性がより優れたエマルション製剤を得ることができる。
【００６０】
本発明の乳化型ＤＤＳ製剤の投与方法は、癌組織に確実に到達させることができる限り特に制限はなく、例えば注射剤としてそのまま又は必要に応じて他の補液（ブドウ糖、アミノ酸等）とともに粘膜下の局所投与又は動脈内に投与することができる。特に、動注投与による方法が効果的であり、例えば図１に示すように肝臓癌（２）の治療においては右大腿動脈から分岐した肝動脈（３）の中に挿入するカテーテル（４）を通じて注射器等で投与することができる。また、投与する量は、製剤の性状（内容物）、患者の年齢、性別又は症状等に応じて適宜決定すれば良い。
【００６１】
【発明の効果】
本発明によれば、以下のような効果が得られる。
【００６２】
（１）本発明Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤は、特定の粒径及び体積比（充填率）を有するため、肝臓癌、卵巣癌、乳癌、腎臓癌等の癌組織に対して優れた沈着性を発揮することができる。すなわち、癌組織に対する選択性に優れている。しかも、いったん沈着すれば、その徐放性により長期間にわたり抗癌作用を持続させることもできる。
【００６３】
殊に、本発明製剤は、肝臓癌に対する沈着性に優れており、中でも外科的治療による除去が困難とされている多発性肝臓癌に有効であり、進行性末期の肝臓癌治療にも効果がある。すなわち、肝臓の局部に点在した癌組織のみにそれぞれ沈着して、それらを縮小乃至壊死させることができる。
【００６４】
また、沈着性に優れていることから、抗癌剤が血流等にのって他の臓器に影響を与えることがなく、そのため副作用を軽減することもできる。また、放射線療法のように他の臓器の機能を損なわせるようなこともない。
【００６５】
さらに、エマルションそのものが安定であるため、長期間放置しても分離等を起こさず、保存性に優れている。
【００６６】
（２）本発明Ｗ／Ｏ型エマルション製剤も、特定の粒径及び体積比（充填率）を有するため、上記製剤と同様に癌組織に対する沈着性に優れている。特に、粘性の高い液状で動注する場合には、局部的に集中して発生した癌組織に一層確実に到達させることができる。
【００６７】
また、血液と接触する界面積が小さいために抗癌剤の放出速度がより遅く、特に大量の抗癌剤を長期間にわたって投与する必要がある場合には有効である。
【００６８】
さらに、上記製剤と同様に長期間放置しても油水分離したり或いは水相粒子どうしが結合して粒径分布が変化したりすることがなく、安定性にも優れている。
【００６９】
（３）本発明乳化型ＤＤＳ製剤は、例えば以下のような剤型の製剤とすることにより、さまざまな症状、治療方法等に適用することが可能となる。
【００７０】
▲１▼  水相に水溶性抗癌剤を溶解し、油相に油溶性抗癌剤を溶解して、両抗癌剤を併用した製剤
▲２▼  ２種以上の水溶性抗癌剤を水相或いは内水相に溶解した製剤
▲３▼  薬効が失われるため混合使用できない水溶性抗癌剤を別々の水相或いは内水相に溶解してそれぞれの薬効を発揮し得る製剤
▲４▼  解熱剤、抗生物質等の化学療法に用いられる薬剤を別々の水相或いは内水相に溶解してそれぞれの薬効を発揮し得る製剤など
（４）本発明製剤の投与のみで肝臓癌が完治した実例もあるように、危険を伴う外科的手術による切除等を必要とすることなく癌治療が可能となる結果、ＱＯＬ（Quality of Life,  生活の質）の向上を図ることができる。
【００７１】
【実施例】
製造例１
本発明Ｗ／Ｏ型エマルション製剤を調製した。
【００７２】
抗癌剤としてアントラサイクリン系の塩酸エピルビシン（「Farmorubicin」ファルマシア社製）３０ｍｇを用い、０．４５重量％の食塩水溶液３ｍｌに上記抗癌剤を溶解したものを水相とした。
【００７３】
一方、酸化エチレン付加４０モルのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（「ＨＣＯ−４０」日光ケミカルズ（株）製）を１０重量％の濃度となるように前記「リピオドール」に溶解した１０ｍｌを油相とした。
【００７４】
次いで、細孔径２．０μｍの疎水性多孔質ガラス膜を用いて、上記水相を上記油相に分散させることにより、Ｗ／Ｏ型エマルションを得た。その水相粒子の粒径分布を図３（１１）に示す。得られたＷ／Ｏ型エマルションの平均粒径は７．３μｍであった。
【００７５】
一方、上記と同じ水相及び油相を用いて、これらの混合物をホモジナイザー（「ULTRA-TURRAX」ユンク・クンネル社製）を使って調製したＷ／Ｏ型エマルションの水相粒子の粒径分布を図３（１２）に示す。平均粒径は０．７３μｍ、最大粒径６μｍであった。
【００７６】
なお、粒径分布は、レーザー回折／散乱式粒度分布計（「ＳＡＬＤ−２０００」島津製作所製）により測定し、粒子体積Ｖｐを粒径の対数ｌｏｇＤｐで微分したΔＶｐ／ΔｌｏｇＤｐで表した。
【００７７】
製造例２
製造例１においてホモジナイザーで製造したＷ／Ｏ型エマルションを多孔質ガラス膜を介して外水相に圧入分散して、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を調製した。
【００７８】
多孔質ガラス膜としては、細孔径が異なる３種類を用いた。外水相には酸化エチレン付加６０モルのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（「ＨＣＯ−６０」日光ケミカルズ（株）製）を０．５重量％含有した生理食塩水７ｍｌを使用した。
【００７９】
細孔径１０．６μｍの膜で得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの平均粒径は  ４２．０μｍ、細孔径１４．７μｍの膜で得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの平均粒径は６２．１μｍ、及び細孔径１６．０μｍの膜で得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの平均粒径は１７４．９μｍであった。これらＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの粒径分布を図４（１３）〜（１５）にそれぞれ示す。また、細孔径１０．６μｍの膜で得られたエマルションの写真を図５に示す。いずれも単分散であり、内水相、油相及び外水相の体積比は、１：１．８：２．３であり、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの充填率は５５容積％であった。
【００８０】
製造例３
抗癌剤として白金錯化合物系のカルボプラチン（「Paraplatin」ブリストル・マイヤーズ・スクイブ社製）１０ｍｇ及びアントラキノン系の塩酸ミトキサントロン（「Novantron」レダリー社製）１０ｍｇを用い、細孔径１０．６μｍの多孔質ガラス膜を用いて製造例２と同様の条件でそれぞれ膜乳化を行った。その結果 、製造例２の塩酸エピルビシンを使った場合（細孔径１０．６μｍの多孔質ガラス膜を用いた場合）とほとんど同じ平均粒径及び粒径分布を有する単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤が得られた。
【００８１】
製造例４
▲１▼内水相として塩酸エピルビシン９０ｍｇを純水３ｍｌに溶解したもの（浸透圧１．１ＭＰａ：生理食塩水の１．５倍）、▲２▼油相として酸化エチレン付加４０モルのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（「ＨＣＯ−４０」日光ケミカルズ（株）製）を１０重量％の濃度となるように前記「リピオドール」に溶解したもの５．５ｍｌ、▲３▼外水相として酸化エチレン付加６０モルのポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（「ＨＣＯ−６０」日光ケミカルズ（株）製）を０．５重量％含有した０．６重量％の食塩水溶液７ｍｌ（浸透圧０．４８ＭＰａ：生理食塩水の２／３）を使用した。このうち、上記▲１▼及び▲２▼を用いて、製造例１と同様にしてＷ／Ｏ型エマルションを調製した。
【００８２】
次いで、得られたＷ／Ｏ型エマルションを細孔径１４．７μｍの多孔質ガラス膜を用いて、上記▲３▼の外水相中に圧入して単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を製造した。但し、油相に対する油性界面活性剤の濃度は、乳化前が５重量％とし、Ｗ／Ｏ型エマルション調製後に追加して全量で１０重量％とした。
【００８３】
この結果、浸透圧差によって外水相から内水相へ水が移動し、内水相の粒子が膨張したため、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の粒径が大きくなった。調製直後に測定した平均粒径６１．４μｍの単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布と１日経過して平均粒径７７．７μｍにまで膨張したときの粒径分布とを比較して図６（１６）（１７）に示す。これによれば、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤は単分散性が維持されたまま膨張していることがわかる。また、膨張に伴い外水相の容積が減少するため、内水相、油相及び外水相の体積比は、１：１．８：２．３から１：１．１：１．０に変化した。これに伴い、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の充填率は５５容積％から６７容積％に上昇した。
【００８４】
製造例５
内水相として塩酸エピルビシン９０ｍｇを生理食塩水３ｍｌに溶解したもの、外水相として０．１重量％の食塩水溶液を外水相として用いたほかは、製造例４と同様に膜乳化を行い、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを調製した。この場合、内水相の浸透圧が生理食塩水の２．５倍と高く、逆に外水相は生理食塩水の１／９と低いため、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の充填率は５５容積％から９４容積％に上昇した。最密充填率７４容積％をはるかに超えており、粘性が極めて高く、ほとんど流動性を示さないエマルション製剤を得た。内水相、油相及び外水相の体積比は１：０．６：０．１であることから、条件を変えることによって体積比を容易に調整できることがわかる。
【００８５】
試験例１
製造例４で得られた単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を用い、肝動脈塞栓術による臨床試験を実施した。
【００８６】
この製剤は、図７のコンピューター断層撮影（ＣＴ）の写真でも明らかなように、肝臓の中に複数存在する癌組織（矢印）に良好に沈着した。図７中、（ａ）が投与前の肝臓を示し、白い部分が正常な肝臓組織、黒い部分が癌組織を示す。（ｂ）の白い部分はエマルション製剤（造影剤を含有する）が存在している部分を示す。図７（ａ）（ｂ）より、エマルション製剤が癌組織の部分のみに沈着されていることがわかる。
【００８７】
また、肝臓癌によって特異的に放出される酵素であるアルファ・フェトプロテイン（ＡＦＰ）の血中濃度を測定すると、図８に示すように１７人中１５人の患者においてその濃度の減少が認められた。
【００８８】
なお、一部においてＡＦＰ濃度が増加に転じる例もあるものの、こうした患者に対して再度上記製剤を動注した場合、再びＡＦＰ濃度が低下することが明らかになっている。
【００８９】
正常値１０ｎｇ／ｍｌ程度までＡＦＰの濃度が低下した患者を手術し、切除した肝臓癌を観察した結果、癌組織は著しく縮小乃至壊死していることが判明した。
【００９０】
これらの中で顕著な効果が認められた１つの症例を図９に示す。患者は６６歳の男性であり、直径１〜１０ｃｍの癌が肝臓の広い領域にわたって多発していたため、手術による切除が不可能であった。そこで、本発明の単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を用いた動注療法を１９９４年８月及び９月の２回行った。その結果、治療前に４００ｎｇ／ｍｌから１１００ｎｇ／ｍｌまで急激に上昇したＡＦＰ濃度が動注後に著しく低下して２ヶ月後には正常値に戻り、またＣＴ上からも肝臓癌が消失し、ほぼ完治した。図９中、黒丸印が測定したＡＦＰ濃度の値である。
【００９１】
試験例２
１９９３年から１９９５年の３年間にわたって行った臨床試験の結果について、他の動注療法と比較して図１０に示す。図１０では、患者の生存率の推移として表した。生存率の算定はカプラン−マイヤー（Kaplan-Meier）法による。
【００９２】
製造例４で得られた単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を用いた２６例  （１８）では、２年生存率が８０％を示した。一方、ゼラチンスポンジに抗癌剤アドレアマイシン水溶液を含ませて動注した３２例（１９）では約１０％であった。リピオドールとアドレアマイシン水溶液を混和して動注し、ゼラチンスポンジで肝動脈毛細血管を閉塞した３９例でも２年生存率約４０％であった。この結果より、本発明単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤が優れた効果を発揮することがわかる。
【００９３】
試験例３
臨床試験により、本発明の単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤及び本発明範囲外の平均粒径をもつ単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の薬効について比較しながら調べた。
【００９４】
これらの製剤はいずれも、▲１▼内水相として塩酸エピルビシン６０ｍｌを純水３ｍｌに溶解したもの（浸透圧０．７４ＭＰａ）、▲２▼油相として油性界面活性剤を１０重量％含むリピオドール５ｍｌ、及び▲３▼外水相として「ＨＣＯ−６０」を１重量％含有した０．３重量％食塩水溶液７ｍｌ（浸透圧０．２４ＭＰａ）を用いた。
【００９５】
本発明の単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤としては、細孔径１４．７μｍの多孔質ガラス膜を使用して製造例４と同様にして製造した平均粒径７０μｍの単分散エマルション（本発明製剤１）、及び細孔径１０．６μｍの多孔質ガラス膜を使用して製造例４と同様にして製造した平均粒径４０μｍの単分散エマルション（本発明製剤２）を用いた。これに対し、比較のために細孔径３．２μｍの多孔質ガラス膜を使用した以外は製造例４と同様にして製造した平均粒径１０μｍの単分散エマルション（比較製剤）を用いた。
【００９６】
各製剤を原発性肝臓癌患者に経カテーテル動注投与し、１週間後のＡＦＰ血中濃度の変化を調べた。本発明製剤１を投与した患者は３５名、本発明製剤２を投与した患者は１８名、比較製剤を投与した患者は２名とした。なお、製剤投与前のＡＰＦ血中濃度は個人差があり、約２０〜３００００ｎｇ／ｍｌの間に分布していたため、平均値と標準偏差で比較した。得られた結果を表１に示す。
【００９７】
【表１】
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表１の結果からも明らかなように、本発明製剤１ではＡＰＦ血中濃度を大幅に低下させることができ、また数値の有意水準も低いことから、高い信頼性を有することがわかる。本発明製剤２では、本発明製剤１ほどでないがＡＰＦ濃度を低下させることができた。これに対し、比較製剤では、ほとんど癌組織に沈着しておらず、その薬効が得られないことがわかる。
【００９８】
試験例４
試験例３と同じ本発明製剤１及び本発明製剤２を用い、ＡＰＦ血中濃度が１０００ｎｇ／ｍｌを超える重篤患者（正常値は１０ｎｇ／ｍｌ以下）に対して、試験例３と同様の臨床試験を行い、製剤投与１週間後の治療効果を調べた。その結果を表２に示す。
【００９９】
【表２】
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表２の結果より、本発明製剤１を投与した患者のほとんどは、ＡＰＦ血中濃度が半減しており、製剤の薬効が明瞭であった。一方、本発明製剤２を投与した患者については、若干であるが治療効果が認められた。これより、本発明Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤において、平均粒径４０μｍ以上で有効な沈着性が得られることがわかる。
【０１００】
この試験において、本発明の製剤が肝臓に良く沈着していることを示す１つの例として図１１を示す。図１１は、肝臓癌の患者に本発明製剤を投与した後、７日間のグルタミン酸・オキザロ酢酸トランスファーゼ（ＧＯＴ）、グルタミン酸・ピルビン酸トランスファーゼ（ＧＰＴ）及び総ビリルビン（Ｔ−Ｂｉｌ）の血中濃度を表している。
【０１０１】
本発明製剤１では、動注投与直後に数値が著しく増加し、やがて投与前の数値に落ち着く傾向が見られた（図１１（２４）〜（２６））。一方、本発明製剤２では、動注投与後もＧＯＴ、ＧＴＰ及びＴ−Ｂｉｌはほとんど変化しなかった（図１１（２１）〜（２３））。これは、本発明製剤１においては、本発明製剤２よりも肝臓に多く沈着し、一時的にＧＯＴ、ＧＴＰ及びＴ−Ｂｉｌが増加し、その後に正常組織から製剤が除かれるために徐々に各数値が低下したものと考えられる。
【０１０２】
試験例５
ホモジナイザーを用いて調製した平均粒径０．７μｍ、最大粒径３μｍのＷ／Ｏ型エマルション製剤を使用し、臨床試験を行った。この製剤は、水相として塩酸エピルビシン６０ｍｇを純水３ｍｌに溶解したもの（浸透圧０．７４ＭＰａ）、油相として油性界面活性剤が５重量％含有するリピオドール５ｍｌから構成される。
【０１０３】
患者は５６歳の男性であり、１回目には試験例３の本発明製剤２、２回目には試験例３の本発明製剤１を投与してもほとんど製剤粒子の沈着が観察されなかった特異な例である。上記Ｗ／Ｏ型エマルション製剤を投与した後、当初は１５００ｎｇ／ｍｌあったＡＰＦ血中濃度が１週間後には１０００ｎｇ／ｍｌ、２週間後には７５０ｎｇ／ｍｌにまで低下させることができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】肝動脈塞栓術における動注投与方法の一例を示す図である。
【図２】エマルション製剤の概念図である。
【図３】Ｗ／Ｏ型エマルション製剤の粒径分布を示す図である。
【図４】単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布を示す図である。
【図５】単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒子構造を示す図である。
【図６】単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤粒子が膨張する状態を示す図である。
【図７】肝臓癌組織における生物の形態を示す図である。
【図８】単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤動注後のＡＦＰ血中濃度の経時的変化を示す図である。
【図９】単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の動注療法によるＡＦＰ血中濃度の経時的変化を示す図である。
【図１０】臨床試験による肝臓癌患者の生存率を示す図である。
【図１１】本発明製剤１及び２の肝臓組織に対する沈着性を示す図である。
【符号の説明】
１  肝臓
２  肝臓癌
３  肝動脈
４  カテーテル
５  注射器
６  内水相粒子
７  油相
８  内水相粒子
９  Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子
１０  外水相
１１  単分散Ｗ／Ｏ型エマルション製剤の粒径分布
１２  ホモジナイザーで調製したＷ／Ｏ型エマルション製剤の粒径分布
１３  細孔径１０．６μｍの膜で調製した単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布
１４  細孔径１４．７μｍの膜で調製した単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布
１５  細孔径１６．０μｍの膜で調製した単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布
１６  調製直後に測定した単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布
１７  膨張した単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤の粒径分布
１８  単分散Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤を動注した患者の生存率
１９  ゼラチンスポンジにアドレアマイシン水溶液を含ませて動注した患者の生存率
２０  リピオドールとアドレアマイシン水溶液を混和して動注し、ゼラチンスポンジで肝動脈毛細血管を閉塞した患者の生存率
２１  本発明製剤２を動注投与した後のＧＯＴ変化
２２  本発明製剤２を動注投与した後のＧＰＴ変化
２３  本発明製剤２を動注投与した後のＴ−Ｂｉｌ変化
２４  本発明製剤１を動注投与した後のＧＯＴ変化
２５  本発明製剤１を動注投与した後のＧＰＴ変化
２６  本発明製剤１を動注投与した後のＴ−Ｂｉｌ変化
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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