(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式ＩＩ：
【化１】
0004173541.tif 000061
｛上式中、
Ａ−Ｂは、
【化２】
0004173541.tif 000062
であり；
Ｒ18は、水素、Ｃ1-6アルキル、またはアリールで置換されたＣ1-6アルキルであり；
Ｅは、−ＮＨ−ＣＨ（Ｒ10）−（ＣＨ2）v−Ｒ9またはＲ6であり、ここで、ｖは、０、１、２、３または４であり；
Ｒ9は、水素、モルホリノ、ピペリジノ、−Ｎ（Ｒ11）−Ｒ12、または
【化３】
0004173541.tif 000063
（ここで、ｎは、０、１または２であり、そして、Ｒ19は、水素またはＣ1-6−アルキルである）
であり；
Ｒ11およびＲ12は、独立に水素またはＣ1-6−アルキルであり；
Ｒ10は、−Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＨ2Ｒ13、−ＣＯＲ13または−ＣＨ2ＯＨであり、ここで、Ｒ13は、ピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノまたは−Ｎ（Ｒ14）Ｒ15であり、Ｒ14およびＲ15は、独立に水素またはＣ1-6−アルキルであり；そして
Ｒ6は、−ＯＨまたは−Ｎ（Ｒ7）Ｒ8であり、ここで、Ｒ7およびＲ8は、独立に水素またはＣ1-6−アルキルである｝
により表される化合物、または医薬上許容されるその塩であって、次の化合物：
（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、
Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、
３−（Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−モルホリノプロパン、
２−（Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン、
（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2、
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−モルホリノプロパン、
２−（Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン、
２−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン、
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン、
３−（Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−モルホリノプロパン、
３−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−モルホリノプロパン、
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−モルホリノプロパン、
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン、および
２−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
を除いた化合物。
【請求項２】
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロパンおよびそのＴＦＡ塩；
３−（（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロパンおよびそのＴＦＡ塩；
（４−ピペリジンカルボニル）−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2；
Ｈ−Ａｉｂ−Ａｌａ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ2およびそのＴＦＡ塩；
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−モルホリノエタン；
（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ−Ｍｅ；
３−（（３−メチルアミノ）メチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ）−１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロパン；
（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−Ｎ−Ｍｅ2；
（３−アミノメチルベンゾイル）−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ−ＣＨ3およびそのＴＦＡ塩；
３−メチルアミノメチルベンゾイル−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨ−ＣＨ3およびそのＴＦＡ塩；そして
Ｈ−Ａｉｂ−Ｈｉｓ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｎ−Ｍｅ−Ｄ−Ｐｈｅ−ＮＨＭｅおよびその塩酸塩
から成る群より選ばれる、請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される塩。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、新規ペプチド誘導体、それらを含有する組成物および成長ホルモンの欠乏に起因する身体障害を治療するためのそれらの使用に関する。
発明の背景
成長ホルモンは成長能力のあるあらゆる組織の成長を刺激するホルモンである。その上、成長ホルモンは、代謝過程に対して多数の作用、例えばタンパク質合成および遊離脂肪酸動員の刺激を果たすこと並びに炭水化物代謝から脂肪酸代謝へのエネルギー代謝の変更を引き起こすことが知られている。成長ホルモンの欠乏は様々な深刻な身体障害、例えば小人症を引き起こし得る。
成長ホルモンは下垂体から放出される。この放出は直接的にまたは間接的に多数のホルモンと神経伝達物質の厳重な制御下にある。成長ホルモンの放出は、成長ホルモン放出ホルモン（GHRH）により刺激されそしてソマトスタチンにより阻害される。どちらの場合もホルモンは視床下部から放出されるが、それらの作用は下垂体にある特異的な受容体によって主に媒介される。下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激する別の化合物も記載されている。例えば、アルギニン、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニン（Ｌ−ドーパ）、グルカゴン、バソプレッシン、PACAP（下垂体アデニリルシクラーゼ活性化ペプチド）、ムスカリン性受容体アゴニストおよび合成ヘキサペプチドGHRP（成長ホルモン放出ペプチド）は、下垂体への直接作用によるかまたは視床下部からのGHRHおよび／またはソマトスタチンの放出に影響を及ぼすことにより、内因性成長ホルモンを放出させる。
成長ホルモンのレベルを高めることが望まれるような障害または状態では、成長ホルモンのタンパク性が非経口投与を余儀なくさせる。更に、他の直接作用する天然の分泌促進物質、例えばGHRHおよびPACAPは高分子量のポリペプチドであり、その理由のために非経口投与が好ましい。
哺乳類における成長ホルモンのレベルを増加させるための短鎖ペプチドの使用は、例えば欧州特許第18 072号、同第83 864号、国際公開第89/07110号、同第89/01711号、同第89/10933号、同第88/9780号、同第83/02272号、同第91/18016号、同第92/01711号および同第93/04081号公報において既に提案されている。
成長ホルモン放出ペプチドまたはペプチド誘導体の構造は、それらの成長ホルモン放出能およびそれらの生物学的利用能（バイオアベイラビリティ）にとって重要である。従って、本発明の目的は、この種類の既知ペプチドに対比して改善された性質を有する、成長ホルモン放出特性を有する新規ペプチドを提供することである。
発明の要約
一般式Ｉ：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ（−Ｅ）p        Ｉ
｛上式中、
ｐは０または１であり；
Ａは水素またはＲ1−（CH2）q−（Ｘ）r−（CH2）s−CO−であり
〔ここでｑは０または１，２，３，４，５の群から選ばれた整数であり；
ｒは０または１であり；
ｓは０または１，２，３，４，５の群から選ばれた整数であり；
Ｒ1は水素、イミダゾリル、グアニジノ、ピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノまたはＮ（Ｒ2）−Ｒ3（ここでＲ2およびＲ3は各々独立に水素であるか、または１もしくは複数のヒドロキシル基により、ピリジニル基によりまたはフラニル基により置換されることがある低級アルキルである）であり；そして
Ｘは、ｒが１である時、−NH−，−CH2−，−CH＝CH−，−Ｃ（Ｒ16）（Ｒ17）−，
0004173541.tif 000002
（ここでＲ16およびＲ17は各々独立に水素または低級アルキルである）である〕；
Ｂは（Ｇ）t−（Ｈ）uであり
〔ここでｔおよびｕは各々独立に０または１であり；
ＧおよびＨは天然Ｌ−アミノ酸もしくはそれらの対応するＤ−異性体、または非天然アミノ酸、例えば１，４−ジアミノ酪酸、アミノイソ酪酸、１，３−ジアミノプロピオン酸、４−アミノフェニルアラニン、３−ピリジルアラニン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロノルハルマン−３−カルボン酸、Ｎ−メチルアントラニル酸、アントラニル酸、Ｎ−ベンジルグリシン、３−アミノメチル安息香酸、３−アミノ−３−メチルブタン酸、サルコシン、ニペコチン酸もしくはイソニペコチン酸、から成る群より選ばれたアミノ酸残基であり；そしてｔとｕが共に１である時、ＧとＨの間のアミド結合はＹ−ＮＲ18−により置き換えられることがあり、ここでＹは−CO−または−CH2−でありそしてＲ18は水素、低級アルキルまたは低級アラルキルである〕；
Ｃは式−NH−CH（（CH2）w−Ｒ4）−CO−のＤ−アミノ酸であり
〔ここでｗは０，１または２であり；そして
Ｒ4は、場合により各々がハロゲン、低級アルキル、低級アルキルオキシ、低級アルキルアミノ、アミノまたはヒドロキシにより置換されることがある次の基：
0004173541.tif 000003
から成る群より選ばれる〕；
Ｄは、ｐが１である時、式
−ＮＲ20−CH（（CH2）k−Ｒ5）−CO−であり、または
ｐが０である時、式
−ＮＲ20−CH（（CH2）l−Ｒ5）−CH2−Ｒ6もしくは
−ＮＲ20−CH（（CH2）m−Ｒ5）−CO−Ｒ6であり
〔ここでｋは０，１または２であり；
１は０，１または２であり；
ｍは０，１または２であり；
Ｒ20は低級アルキルまたは低級アラルキルから成る群より選ばれ；
Ｒ5は、場合により各々がハロゲン、低級アルキル、低級アルキルオキシ、アミノまたはヒドロキシにより置換されることがある次の基：
0004173541.tif 000004
から成る群より選ばれ；
Ｒ6はピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、−ＯＨまたは−Ｎ（Ｒ7）−Ｒ8であり、ここでＲ7およびＲ8は各々独立に水素または低級アルキルである〕；
Ｅは、ｐが１である時、−NH−CH（Ｒ10）−（CH2）v−Ｒ9であり
〔ここでｖは０または１，２，３，４，５，６，７，８の群から選ばれた整数であり；
Ｒ9は水素、イミダゾリル、グアニジノ、ピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、−Ｎ（Ｒ11）−Ｒ12、または
0004173541.tif 000005
（ここでｎは０，１または２でありそしてＲ19は水素または低級アルキルである）
0004173541.tif 000006
（ここでｏは１，２，３の群より選ばれた整数であり、Ｒ11およびＲ12は各々独立に水素または低級アルキルである）、または
0004173541.tif 000007
（上記基は各々、ハロゲン、低級アルキル、低級アルキルオキシ、アミノ、アルキルアミノ、ヒドロキシにより置換されることがある）、またはアミノ基とヘキサピラノースもしくはヘキサピラノシル−ヘキサピラノースからのアマドリ転位生成物であり；そして
Ｒ10は、ｐが１である時、−Ｈ，−COOH，−CH2−Ｒ13，−CO−Ｒ13または−CH2−OHであり、ここで
Ｒ13はピペラジノ、モルホリノ、ピペリジノ、−OHまたは−Ｎ（Ｒ14）−Ｒ15であり、ここでＲ14およびＲ15は各々独立に水素または低級アルキルである〕；
ＣとＤの間の結合を除いた式Ｉ中の全てのアミド結合は独立に−Ｙ−ＮＲ18−により置き換えられてもよく、ここでＹは−CO−または−CH2−であり、そしてＲ18は水素、低級アルキルまたは低級アラルキルである｝
により表される化合物、または医薬上許容されるその塩であって、次の化合物：
（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
３−（H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
２−（H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe−NH）−２−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
２−（H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
２−（（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
３−（H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
３−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノプロパン
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
２−（（（３Ｒ）−ピペリジンカルボニル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
を除いた化合物。
式Ｉのペプチド誘導体は、場合により上記に指摘したような−Ｙ−ＮＲ18−〔例えばアミノメチレン（−CH2−NH−）〕によるアミド結合（−CO−NH−）の置換および／またはペプチドのＮ末端もしくはＣ末端における修飾と組み合わされた、ペプチド配列中の隣接Ｄ−アミノ酸の存在のため、酵素によるタンパク質分解に対して高められた耐性を示す。先行技術文献中に提案されたペプチドのものと比べて高められた本発明のペプチド誘導体の生物学的利用能は、本発明の化合物がタンパク質分解に対するそれらの耐性と小さいサイズとを合わせ持つことによってもたらされると抽象的には考えられる。
上記構造式中と本明細書全体を通して、下記の用語は後述するような意味を有する：
上述した低級アルキル成分は、直鎖または分枝鎖または環状構造のいずれかである指定の長さのアルキル成分、好ましくは炭素原子数１〜６のアルキル成分を包含するものである。直鎖アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチルおよびヘキシルである。分枝鎖アルキルの例はイソプロピル、sec−ブチル、tert−ブチル、イソペンチルおよびイソヘキシルである。環状アルキルの例はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。
上述した低級アルコキシ成分は、直鎖または分枝鎖または環状構造のいずれかである指定の長さのアルコキシ成分、好ましくは炭素原子数１〜６のアルコキシ成分を包含するものである。直鎖アルコキシの例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペントキシおよびヘキソキシである。分枝鎖アルコキシの例はイソプロポキシ、sec−ブトキシ、tert−ブトキシ、イソペントキシおよびイソヘキソキシである。環状アルコキシの例はシクロプロピルオキシ、シクロブチルオキシ、シクロペンチルオキシおよびシクロヘキシルオキシである。
上述した低級アルキルアミノ成分は、直鎖または分枝鎖または環状構造のいずれかである指定の長さのアルキルアミノ成分、好ましくは炭素原子数１〜６のアルキルアミノ成分を包含するものである。直鎖アルキルアミノの例はメチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、ペンチルアミノおよびヘキシルアミノである。分枝鎖アルキルアミノの例はイソプロピルアミノ、sec−ブチルアミノ、tert−ブチルアミノ、イソペンチルアミノおよびイソヘキシルアミノである。環状アルキルアミノの例はシクロプロピルアミノ、シクロブチルアミノ、シクロペンチルアミノおよびシクロヘキシルアミノである。
本明細書中、「アリール」なる語は、芳香族環、例えばフェニル、ナフチル、ピリジル、１−Ｈ−テトラゾール−５−イル、チアゾリル、イミダゾリル、インドリル、ピリミジニル、チアジアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チオフェネイル、キノリニル、ピラジニルまたはイソチアゾリルから成る群より選択された炭素環式および複素環式芳香族環であって、場合により１または複数のＣ1-6アルキル、Ｃ1-6アルコキシ、ハロゲン、アミノまたはアリールにより置換されることがある芳香族環を包含する。アリールは好ましくは、ハロゲンにより、アミノにより、ヒドロキシにより、Ｃ1-6アルキルによりもしくはＣ1-6アルコキシにより置換されることがある、フェニル、チエニル、イミダゾリル、ピリジル、インドリル、キノリニルまたはナフチルである。
上述した低級アラルキル成分は低級アルキル成分とアリール成分とから構成され、ここで前記低級アルキル成分とアリール成分は前に定義した通りである。
「ハロゲン」なる語はCl，Ｆ，BrおよびＩを包含する。
天然アミノ酸には慣用的な三文字記号、例えばアラニンにはAlaが使われる。
発明の詳細な説明
式Ｉの化合物の好ましい態様によれば、Ａは水素、３−N-Me-AMB、３−AMBまたはAibである。ｔが１である時、式Ｉの化合物中のＧは好ましくは、Ala、Gly、サルコシン、３−アミノメチルベンゾイル、Ｒ−ニペコチニル、ニペコチン酸またはイソニペコチン酸であり、より好ましくは３−アミノメチルベンゾイル、Ｒ−ニペコチニル、ニペコチン酸またはイソニペコチン酸である。。ｕが１である時、Ｈは好ましくはHis, Phe, Tic, Phe（4-NH2）， 3-Pyal, Gly, Ala, Sar, Pro, Tyr, Arg, Orn，３−アミノメチル安息香酸またはD-Pheであり、より好ましくはＨはHis， PheまたはAlaであり、最も好ましくはＨはHisまたはAlaである。式Ｉの化合物中のＣは好ましくはＤ−２−ナフチルアラニン（D-2Nal）、Ｄ−１−ナフチルアラニン（D-lNal）、D-PheまたはD-Trpであり、より好ましくはD-2NalまたはD-Pheであり、最も好ましくはN-Me-D-2Nal, D-2Nal, D-PheまたはN-Me-D-Pheである。式Ｉの化合物中のＤは、好ましくは−ＮＲ20−CH（（CH2）k−Ｒ5）−CO−（ここでｋは好ましくは１でありそしてＲ20は低級アルキルである）であり、より好ましくはＤはD-PheまたはD-2Nalである。最も好ましくは、ＤはN-Me-D-Phe-オール、N-Me-D-Phe、N-Me-D-2Nal-オール、N-Me-D-Phe−NH2、N-Me-D-Phe-NH-MeまたはN-Me-D-（4-I）Phe-NH-Meである。
式Ｉの化合物中のｐが１である時、Ｅは好ましくはLys-NH2、Ser-NH2、NH−（２−（１−ピペラジノ）エチル）、NH−（３−（１−モルホリノ）プロピル）、NH−（２−アミノエチル）、NH−（４−アミノメチルベンジル）、NH−（ベンジル）、Lys-OH、NH−（１−ヒドロキシ−６−アミノ−２Ｓ−ヘキシル）、NH−（２−（１−メチル−２−ピロリジニル）エチル）または３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピルであり、最も好ましくは、ＥはNH−（２−（１−メチル−２−ピロリジニル）エチル）、３−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロピル、Lys-NH2またはSer-NH2である。
式Ｉの化合物中のＲ4は好ましくは２−ナフチルである。Ｒ5は好ましくはフェニルである。ｖは好ましくは２〜６であり、そしてＲ9はNH2、２−モルホリノエチル、３−モルホリノプロピルまたは（１−メチルピロリジニル）エチルである。Ｒ10は好ましくは−COOH，−CH2-OH，−Ｈ，−CONH2または−CON（CH3）2である。
本発明の特定化合物の例を下記に示す：
（２Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−（２−ナフチル）プロパノール：
0004173541.tif 000008
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2：
0004173541.tif 000009
３−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン：
0004173541.tif 000010
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2：
0004173541.tif 000011
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2：
0004173541.tif 000012
H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−モルホリノエタン：
0004173541.tif 000013
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-Me：
0004173541.tif 000014
３−（（３−メチルアミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン：
0004173541.tif 000015
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-N-Me2：
0004173541.tif 000016
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe：
0004173541.tif 000017
３−メチルアミノメチル−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3：
0004173541.tif 000018
ピペリジン−４−カルボン酸Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルアミド：
0004173541.tif 000019
非天然アミノ酸残基の構造：
0004173541.tif 000020
ペプチド結合代替物に用いる略号：
0004173541.tif 000021
式Ｉの化合物は液相または固相ペプチド合成の常法により調製することができる。例えば、固相合成は、本質的にStewartおよびYoung, Solid Phase Peptide Synthesis，第２版，ロックフォード，イリノイ州，アメリカ合衆国，1976年により記載された通りに実施することができる。液相ペプチド合成は例えば本質的にBondansky他，Peptide Synthesis,第２版，ニューヨーク，ニューヨーク州，アメリカ合衆国，1976年により記載された通りに実施することができる。
アミド結合の代替物としてのアミノメチレンは例えばY. SasakiおよびD.H. Coy, Peptides 8（1）, 1987, 119-121頁により記載された方法に従って導入することができる。モノ−またはジ−ヘキサピラノースで誘導体化されたアミノ基を含むペプチド誘導体は、本質的にR. Albert他，Life Sciences  53, 1993, 517-525頁に記載された方法によるアマドリ転位によって、調製することができる。適当なモノ−またはジ−ヘキサピラノースの例は、グルコース、ガラクトース、マルトース、ラクトースまたはセロビオースである。合成の出発物質として用いる誘導体は商業的に入手でき且つ必要な時には適当な保護基を提供することができ、一般式Ｉの“Ａ”成分を調製するのに用いる出発物質は周知の方法により調製することができ且つ所望であればそれ自体既知の方法で保護することができる。
保護基に使われる略号：
0004173541.tif 000022
式Ｉの化合物の医薬上許容される酸付加塩としては、該ペプチドを無機または有機酸と、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、酢酸、リン酸、乳酸、マレイン酸、フタル酸、クエン酸、グルタル酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸、シュウ酸、トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸、スルファミン酸およびフマル酸と反応させることによって調製されるものが挙げられる。
別の面では、本発明は、医薬上許容される担体または希釈剤と共に、一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容される塩を活性成分として含んで成る医薬組成物に関する。
本発明の化合物を含有する医薬組成物は、常用技術により、例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, 1985に記載されたようにして、調製することができる。該組成物は常用の剤形、例えばカプセル剤、錠剤、エアゾール剤、液剤、懸濁液剤または局所用剤の剤形であることができる。
使用される医薬担体または希釈剤は、常用の固形または液状担体であることができる。固形担体の例はラクトース、石膏、ショ糖、シクロデキストリン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはセルロースの低級アルキルエーテルである。液状担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油、リン脂質、脂肪酸、脂肪酸アミン、ポリオキシエチレンおよび水である。
同様に、担体または希釈剤として、当該技術分野において知られている任意の持効性材料、例えば単独のまたはワックスと混合したグリセリルモノステアレートもしくはグリセリルジステアレートを挙げることができる。
固形担体を経口投与用に使う場合、製剤は錠剤に成形するか、粉末もしくはペレットの形で硬質ゼラチンカプセル中に入れるか、またはそれをトローチもしくはロゼンジの形態にすることができる。固形担体の量は広範囲に異なるだろうが、通常は約25mg〜約１ｇであろう。
常用の錠剤成形技術により製造することができる典型的な錠剤は下記の成分を含有することができる：
コア：
活性化合物（遊離化合物またはその塩として）      100mg
コロイド状二酸化ケイ素（Aerosil）               1.5mg
微結晶セルロース（Avicel)                        70mg
改質セルロースガム（Ac-Di-Sol）                 7.5mg
ステアリン酸マグネシウム
コーティング：
HPMC                                          約  9mg
*Mywacett 9-40                                約0.9mg
（*フィルムコーティング用の可塑剤として使われるアシル化モノグリセリド。）
液状担体を使う場合、製剤はシロップ剤、乳剤、軟質ゼラチンカプセル剤または無菌注射液剤、例えば水性もしくは非水性の懸濁液剤もしくは液剤の形態であることができる。
経鼻または肺投与用には、製剤はエアゾール投与用の液状担体、特に水性担体中に溶解または懸濁された式Ｉの化合物を含有することができる。担体は添加剤、例えば可溶化剤、例えばプロピレングリコール、界面活性剤、例えば胆汁酸塩、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールもしくはポリオキシエチレン高級アルコールエーテル、吸収促進剤、例えばレシチン（ホスファチジルコリン）もしくはシクロデキストリン、または保存剤、例えばパラベンを含んでもよい。
経皮投与用製剤は、貼付またはイオン電気導入に適当な形態であることができる。
一般に、本発明の化合物は、１回量あたり0.0001〜100mgの活性成分と医薬上許容される担体とを含んで成る１回量剤形に計量分配される。
本発明の化合物の用量は、薬剤として患者（例えばヒト）に投与される時、好ましくは１〜500mg／日、例えば約100mg／回である。
一般式Ｉの化合物が生体内で内因性成長ホルモンを放出させる能力を有することが証明された。従って、該化合物は、増加された血漿成長ホルモンレベルを必要とする状態の処置に、例えば成長ホルモンを欠損しているヒトにまたは高齢患者にまたは家畜に、使用することができる。
よって、特定の面によれば、本発明は、下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激するための医薬組成物であって、医薬上許容される担体または希釈剤と共に活性成分として一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容される塩を含んで成る組成物に関する。
別の面では、本発明は下垂体からの成長ホルモンの放出を刺激する方法であって、それを必要とする被検者に有効量の一般式Ｉの化合物またはそれの医薬上許容される塩を投与することを含んで成る方法に関する。
更に別の面では、本発明は、下垂体からの成長ホルオンの放出を刺激する薬剤の調製に、一般式Ｉまたはそれの医薬上許容される塩を使用する方法に関する。
式Ｉの化合物は重要な薬理学的性質を有する。そのような性質の例は、成長ホルモンそれ自体と同様な作用または用途を有する下垂体からの成長ホルモンの放出の刺激である。成長ホルモンの使用目的は次のように要約することができる：高齢者における成長ホルモン放出の刺激；糖質コルチコイドの異化副作用の予防、オステオポローシスの治療、免疫系の刺激、損傷治癒の促進、骨折修復の促進、成長遅滞の治療、成長遅滞に起因する腎不全もしくは機能不全の治療、成長ホルモン欠損児童を含む生理学的不足状態および慢性疾患に関連した不足状態の治療、肥満および肥満に関連した成長遅滞の治療、プラーダー−ヴィリ症候群およびターナー症候群に関連した成長遅滞の治療；火傷患者の回復の促進および入院の削減；子宮内発育遅滞、骨格形成異常、高コルチコイド症およびクッシング症候群の治療；拍動性成長ホルモン放出の誘導；ストレス患者における成長ホルモンの置換、骨軟骨形成異常、ヌーナン症候群、精神分裂病、うつ病、アルツハイマー病、遅延損傷治癒および心理社会的剥奪の治療、肺機能不全および呼吸器依存症の治療、大手術後のタンパク質異化反応の減衰、癌やエイズ（AIDS）のような慢性疾患によるタンパク損失および悪液質の減少；膵島細胞症を含む高インスリン血症の治療、排卵誘発のためのアジュバント療法；胸腺の発育を刺激するためおよび加齢に伴う胸腺機能の衰退を防ぐため、免疫抑制患者の治療、筋肉強度、運動性の向上、高齢者における皮膚の厚さ、代謝恒常性、腎恒常性の維持、骨芽細胞、骨再造形および軟骨成長の刺激、伴生動物における免疫系の刺激、伴生動物における高齢疾患の治療、家畜の成長促進並びにヒツジにおける増毛の刺激。
上記適応のための用量は、使用する式Ｉの化合物、投与の形式、および所望する療法に依存して異なるだろう。しかしながら、一般に、内因性成長ホルモンの効果的放出を得るために0.0001〜100mg／kg体重／日の用量レベルを患者および動物に投与することができる。普通、経口または経鼻投与に適する剤形は、医薬上許容される担体または希釈剤と混合された約0.0001mg〜約100mg、好ましくは約0.001〜約50mgの式Ｉの化合物を含んで成る。
式Ｉの化合物は、医薬上許容される酸付加塩の形で、または適当な場合にはアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩もしくは低級アルキルアンモニウム塩として、投与することができる。そのような塩の形態は遊離塩基の形態とほぼ同じオーダーの活性を示すと思われる。
所望により、本発明の医薬組成物は、別の活性を示す１または複数の化合物（例えば抗生物質または別の薬理活性物質）と組み合わせて式Ｉの化合物を含んで成ることができる。これは別の分泌促進物質、例えばGHRP（１または６）もしくはGHRHまたはそれらの類似体、成長ホルモンまたはそれの類似体、あるいはソマトメジン（例えばIGF-1またはIGF-2）であることができる。
投与経路は、活性化合物を適当なまたは所望の作用部位に効率的に運ぶ任意の経路、例えば経口、経鼻、肺、経皮または非経口であることができるが、経口経路が好ましい。
式Ｉの化合物の医薬用途の他に、それらは成長ホルモンの放出の制御を研究するための有用な試験管内手段であることができる。
式Ｉの化合物は、下垂体の成長ホルモン放出能力を評価するための有用な生体内手段であることもできる。例えば、それらの化合物をヒトに投与する前と後に採取した血清試料を、成長ホルモンについてアッセイすることができる。各血清試料中の成長ホルモンの比較は、成長ホルモンを放出する患者の下垂体の能力を直接決定するだろう。
式Ｉの化合物は、成長の速度および度合いを増加させるために、並びに乳生産を増加させるために、商業的に重要な動物に投与することができる。
薬理学的方法
式Ｉの化合物は、ラットの始原ソマトトロフ（ソマトトロピン産生細胞）において成長ホルモンを放出させるそれらの効能および活力について試験管内で評価することができる。
ラット始原ソマトトロフは本質的には以前に記載された通りに（Chen他，Endocrinology  1991, 129, 3337-3342およびChen他，Endocrinology  1989, 124, 2791-2798）調製することができる。簡単に言えば、まずラットを断頭により犠牲にし、下垂体を素早く切除する。下垂体をハンクス平衡塩類溶液中で0.2％コラーゲナーゼと0.2％ヒアルロニダーゼで消化する。0.37％NaHCO3、10％ウマ血清、2.5％ウシ胎児血清、１％非必須アミノ酸、１％グルタミンおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンを含有するダルベッコ改良イーグル培地（ＤＭＥＭ）中に懸濁し、1.5×105細胞／mlの密度に調整する。この懸濁液１mlを24ウエルプレートの各ウエルに入れ、そして２〜３日間おいた後で放出実験を実施する。
実験の第１日目に、細胞を25mM HEPES, pH7.4を含む前記培地で２回洗浄する。25mM HEPESと試験化合物を含有する培地の添加により成長ホルモン放出を開始させる。37℃で15分間のインキュベーションを行う。インキュベーション後、培地中に放出された成長ホルモンを標準ＲＩＡにより測定する。
式Ｉの化合物は、以前に記載されたように（Bercu他，Endocrinology 1991, 129, 2592-2598）ペントバルビタールで麻酔した雌ラットにおいて成長ホルモン放出に対するそれらの試験管内作用について評価することができる。簡単に言えば、成熟した雄Sprague-Dawleyラットを50mg／kg ipのペントバルビタールで麻酔する。ラットが十分に麻酔された後、ラットの頸動脈と頸静脈に気管カニューレとカテーテルを挿入する。15分間回復後、０時として血液試料を採取する。下垂体分泌促進薬をiv投与し、そして動脈血試料を15分間氷上におき、次いで12,000×gで２分間遠心分離する。血清をデカンテーションし、そして標準ＲＩＡを使って成長ホルモンの量を測定する。
本発明を下記の実施例において更に説明する。しかしながら、この実施例は本発明の範囲を限定するつもりではない。
下記の実施例において調製される化合物は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）塩として単離した。
実施例１
２（Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−フェニルプロパノールの調製
0004173541.tif 000023
165.7mgのBoc-N-Me-D-2Nal-OH、165.2mgの（Ｒ）−メチルアミノ−３−フェニルプロパン−１−オール（Mckennon, M.J.；Meyers, A.I., J. Org. Chem. 1993, 58, 3568-71に準じてH-N-Me-D-Phe-OHから調製）及び68.1mgのHOAtを、０℃において２mlのDMFと４mlのDCMからなる混合物に溶解した。115mgのEDACを添加し、該混合物を０℃で１時間、その後室温で18時間撹拌した。窒素流下で混合物からDCMを除去した後、50mlのEtOAcを添加し、生じた混合物を順次、５％炭酸水素ナトリウム水溶液100ml、水100ml、５％硫酸水素カリウム水溶液100ml及び水100mlで抽出した。硫酸ナトリウムを用いてその有機相を乾燥し、ロータリーエバポレーターを用いて真空下で濃縮してオイルとした。
DMF ２滴を添加して、502.6mgの3−Boc−アミノメチル安息香酸を10mlのDCMに溶解し、次いで191.6mgのEDACと共に10分間撹拌し対称無水物に転化した。５mlのDCM中に凍結乾燥済の前記２（Ｒ）−（H-N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−フェニルプロパノールと342μｌのDIEAを含有する溶液をこの混合物に添加し、室温で20時間反応させた。反応混合物を濃縮してオイルとし、それを50mlのEtOAcに再溶解させた。５％炭酸水素ナトリウム水溶液100ml、水100ml、５％硫酸水素カリウム水溶液100ml及び水100mlで順次この溶液を抽出した。得られた有機相を硫酸ナトリウムを用いて乾燥し、ロータリーエバポレーター上で真空下で濃縮してオイルとした。このオイルを４mlのDCM／TFA（１：１）中に溶解し撹拌した。10分後、混合物を窒素流下で濃縮し、得られたオイルを20mlの70％アセトニトリル／0.03Ｍ塩酸中に再溶解し、480mlの水を添加した。４Ｍの硫酸を用いてpHを2.5に調整した、28％アセトニトリルを含有する0.05Ｍ硫酸アンモニウムを用いて事前に平衡化し、７μ  Ｃ−18シリカを充填した25mm×250mmのカラム上での７回の半調製用HPLCにより粗生成物を精製した。
pH2.5、流速10ml／分の条件で47分間に渡る40℃で0.05Ｍの硫酸アンモニウム中のアセトニトリルの28％から38％の勾配によりカラムを溶出させ、回収したペプチド含有画分を３容量の水で希釈し、そして0.1％TFAで平衡化したSep-Pak▲Ｒ▼Ｃ18カートリッジ（Waters part.＃：51910）に投入した。70％アセトニトリル／0.1％TFAを用いてSep-Pak▲Ｒ▼カートリッジから該ペプチドを溶出させ、水で希釈した後、凍結乾燥して溶出液より単離した。分析用RP-HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により最終生成物を分析した。質量スペクトルの結果、得られた分子質量は実験誤差の範囲内で期待の構造のものと合致した（質量スペクトル±0.9amu）。RP−HPLC分析は214nmの紫外検出及び、１ml／分、42℃の条件で溶出させたVydac 218TP54 4.6mm×250mm ５μ  Ｃ−18シリカカラム（The Separation Group、Hesperia）を用いて行った。２つの異なる溶出条件を用いた。
Ａ：５％アセトニトリルを含有する、４Ｍの硫酸でpHを2.5に調整した0.1Ｍの硫酸アンモニウム緩衝液を用いてカラムを平衡化し、そして50分間かけて同緩衝液中のアセトニトリルの５％から60％への勾配により溶出させた。
Ｂ：５％アセトニトリル／0.1％ TFA／水でカラムを平衡化させ、50分間かけて５％アセトニトリル／0.1％ TFA／水から60％アセトニトリル／0.1％ TFA／水への勾配により溶出させた。
Ａ１及びＢ２の溶出条件を用いた結果、保持時間はそれぞれ29.90分及び31.52分であった。
３−Boc−アミノメチル安息香酸の合成
25％アンモニア／水70ml中に25ｇの３−シアノ安息香酸を溶解し、そこに200mlの水と５ｇの10％Pd／Ｃを窒素雰囲気下で添加した。12％アンモニア／水を添加してpHを常時10.5に調整しながら、この混合物を常圧下室温で水素化した。18時間に渡り４ｌの水素を吸収させた後反応を止め、濾過して触媒を除去した。真空下で濾液を20mlまで濃縮し、1.5Ｍの塩酸200mlで酸性化させた後、酢酸エチルで抽出して未反応の出発原料を除去した。水相を濃縮して乾固させ、400mlのTHFと343mlの１Ｍ水酸化ナトリウムに再溶解した。100mlのTHFに溶解した30ｇのBoc無水物を添加し、混合物を一晩撹拌した。その後、１Ｎ塩酸で混合物をpH3.0まで酸性化し、３×300mlのEtOAcで抽出した。有機相を蒸発させてフォームにした。収量は22ｇであった。
略号：
r.t.：室温
EDAC：Ｎ−エチル−Ｎ′−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
EtOAc：酢酸エチル
Boc：ｔ−ブチルオキシカルボニル
N-Me-D-2Nal：Ｎ−メチル−Ｄ−２−ナフチルアラニン
DCM：ジクロロメタン
DIEA：ジイソプロピルエチルアミン
DMF：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
HOAt：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
N-Me-D-Phe-ol：Ｎ−メチル−Ｄ−フェニルアラニノール
TFA：トリフルオロ酢酸
THF：テトラヒドロフラン
実施例２
３−（（３−アミノメチルベンゾイル））−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン
0004173541.tif 000024
Boc-N-Me-D-Phe-OH（279mg）をDMF（４ml）に溶解し、HoBt（168mg）及びEDAC（230mg）と共に10分間撹拌した。３−ジメチルアミノ−１−プロピルアミン（188μｌ）を添加し、室温で18時間撹拌した。その後、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）を添加し、得られた混合物をEtOAc（50ml）で抽出し、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮してオイルとした。TFA／DCM（１：１）（６ml）と共にこのオイルを室温で10分間撹拌した。その後TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）、１Ｎ塩酸（３ml）及び水（37ml）の混合液中に溶解し、その混合液を直ちに凍結させて凍結乾燥した。
凍結乾燥生成物をDMF（６ml）とDCM（12ml）に溶解した。撹拌しながら、この混合物にBoc-N-Me-D-2Nal-OH（494mg）、HOAt（204mg）、DIEA（171μｌ）を添加し、０℃に冷却した後でさらにEDAC（288mg）を添加した。室温で18時間撹拌した後、DCMを窒素流下で蒸発させ、EtOAc（100ml）を添加した。５％水性炭酸水素ナトリウム（100ml）及び水（100ml）を用いてこの混合物を２回抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮してオイルとした（480mg）。このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。その後、窒素流下でTFA／DCMを蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）中に再溶解した。１Ｎ塩酸（１ml）と水（47ml）を添加し、得られた混合物を直ちに凍結乾燥してオイルにした。（2HCl・H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-（CH2）3-N（CH3）2）。
上記のオイルの半量（2HCl・H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-（CH2）3-N（CH3）2）をDCM（９ml）に溶解し、DMF ２滴及びDIEA（342μｌ）を添加した。この溶液に、あらかじめ室温で15分間撹拌しておいたDCM（５ml）中のBoc-3AMB-OH（503mg）とEDAC（192mg）の溶液に添加した。20時間撹拌後、この反応混合物を窒素流下でオイルに濃縮し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）と共に15分間撹拌した。その後、EtOAc（50ml）を添加し、有機相を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）及び水（100ml）で抽出洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした（340mg）。
このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、水で希釈して最終容量50mlに調整した。実施例１に記載と同様の手順を用いて粗生成物を半調製用HPLCで８回に分けて精製した後、凍結乾燥した。得られた最終生成物を分析用RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：608.2amu）は実験誤差の範囲内で期待の構造のもの（理論MH+：608.8amu）と合致した。実施例１に示した溶出条件Ａ１及びＢ２を用いた結果、RP−HPLCの保持時間はそれぞれ25.23分及び26.58分であった。
実施例３
３−（（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプロパン
0004173541.tif 000025
実施例２でオイルとして得られた2HCl・H-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-（CH2）3-N（CH3）2の半量をDCM（９ml）に溶解し、DMF ２滴及びDIEA（342μｌ）を添加した。この溶液を、あらかじめ室温で15分間撹拌しておいたBoc-（R）ニペコチン酸（459mg）及びEDAC（192mg）含有のDCM（５ml）溶液に添加した。20時間撹拌後、この反応混合物を窒素流下で濃縮してオイルとし、そのオイルを５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）と共に15分間撹拌した。その後、EtOAc（50ml）を添加し、有機相を分離し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（100ml）及び水（100ml）で抽出し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした。このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。該TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）中に溶解し、水で希釈して最終容量50mlに調整した。粗生成物を半調製用HPLCで５回に分けて精製した後、実施例１に記載と同様の手順を用いて凍結乾燥した。分析用RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により最終生成物を分析した。実測の分子質量（MH+：586.3amu）は実験誤差の範囲内で期待の構造のもの（理論MH+：585.8amu）と合致した。実施例１に示した溶出条件Ａ１及びＢ２を用いた結果、RP−HPLCの保持時間はそれぞれ25.33分及び26.35分であった。
実施例４
２−（（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH）−１−（１−メチル−２−ピロリジニル）エタン
0004173541.tif 000026
Boc-N-Me-D-Phe-OH（279mg）をDMF（10ml）に溶解し、HOBt（168mg）及びEDAC（384mg）と共に室温で10分間撹拌した。２−（アミノエチル）−１−メチルピロリジン（290μｌ）とDIEA（171μｌ）を添加し、混合物を室温で20時間撹拌した。その後、混合物をオイル状にまで濃縮し、50mlの水に溶かし、乾燥させた。生成物を25mlの水に再溶解し、0.03Ｎの塩酸で平衡化したSep-Pak▲Ｒ▼Ｃ18カートリッジ（Waters part.＃：43345）に適用した。70％アセトニトリルを含有する0.03Ｎ塩酸でSep-Pak▲Ｒ▼カートリッジから溶出させた生成物を水で希釈した後、凍結乾燥して溶出液から単離した。得られた生成物をTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。その後、窒素流下でTFA／DCMを蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、１Ｎ塩酸（２ml）を添加した。水（50ml）で希釈した後、凍結乾燥により生成物を単離した。
得られた物質をDMF（３ml）に溶解し、Boc-N-Me-D-2Nal-OH（329mg）、HOAt（136mg）、EDAC（230mg）及びDIEA（171μｌ）を添加した後、18時間室温で撹拌した。その後、EtOAc（50ml）を添加し、この混合物を５％炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）、５％硫酸水素カリウム水溶液（50ml）及び水（50ml）で抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした。
このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。該TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、１Ｎ塩酸（３ml）を添加した。水（50ml）で希釈した後、凍結乾燥して生成物を単離した。
286mgの凍結乾燥生成物をDCM（15ml）とDIEA（171μｌ）に溶解した。あらかじめ室温で25分間撹拌しておいたDCM（10ml）中のBoc-（R）−ニペコチン酸（459mg）とEDAC（192mg）の溶液（10ml）にこの溶液を添加した。20時間撹拌後、この反応混合物を窒素流下でオイルに濃縮し、EtOAc（100ml）に再溶解し、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml）、５％硫酸水素カリウム水溶液（50ml）、及び水（50ml）でこの混合物を抽出洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空下で濃縮してオイルとした。このオイルをTFA／DCM（１：１）（６ml）と共に室温で10分間撹拌した。該TFA／DCMを窒素流下で蒸発させ、得られたオイルを70％アセトニトリル（10ml）に溶解し、水で希釈して最終容量50mlとした。実施例１に記載と同様の手順を用いて粗生成物を半調製用HPLCで３回に分けて精製した後、凍結乾燥した。分析用RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により最終生成物を分析した。実測分子質量（MH+：612.2amu）は実験誤差の範囲内で期待の構造のもの（理論MH+：612.39amu）と合致した。実施例１に示した溶出条件Ａ１を用いた結果、RP−HPLCの保持時間は25.80分であった。
実施例５
（２Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−（２−ナフチル）プロパノール
0004173541.tif 000027
（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）−プロピオン酸メチルエステル
0004173541.tif 000028
（Ｒ）−２−tert−ブトキシカルボニルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（5.0ｇ；16.4ミリモル）を乾燥DMF（50ml）に溶解した。ヨードメタン（6.2ml；98.4ミリモル）及び酸化銀（Ｉ）（13.3ｇ；57.4ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。反応混合物を濾過し、濾液を塩化メチレン（200ml）で抽出した。シアン酸カリウム（２×50ml；５％）及び水（３×75ml）で有機相を洗浄した。有機相を乾燥し（硫酸マグネシウム）、真空下で溶媒を除去した。溶離液として酢酸エチル／ヘプタン（１：２）を用いたクロマトグラフィーにより残油を精製し（シリカ、５×40cm）、4.98ｇの（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）−プロピオン酸メチルエステルを得た。
1H-NMR（CDCl3）：1.30, 1.35（2s, 9H）；2.71, 2.75（2s, 3H）；3.19, 3.47（2m, 2H）；3.74, 3.77（2s, 3H）；4.65, 5.05（2dd, 1H）；7.29-7.82（m, 7H）（回転異性体混合物）
（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸
0004173541.tif 000029
（Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）−プロピオン酸メチルエステル（21.73ｇ；65.57ミリモル）を１，４−ジオキサン（200ml）に溶解し、水（20ml）を添加した。反応混合物を氷沿中で冷却し、水酸化リチウム（1.73ｇ；72.13ミリモル）を添加した。15分後、水（140ml）を添加し、室温でさらに３時間混合物を撹拌し続けた。酢酸エチル（400ml）と水（300ml）を添加し、１Ｍ硫酸水素ナトリウム（110ml）でpHを2.5に調整した。相を分離し、水相を酢酸エチル（200ml）で抽出した。合わせた有機相を水（300ml）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を真空下で除去し、20.1ｇの（Ｒ）２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸を得た。
1H-NMR（DMSO）：1.18, 1.21（2s, 9H）；2.62, 2.66（2s, 3H）；3.11-3.58（m, 2H）；4.75, 4.90（2dd, 1H）；7.48-7.88（m, 7H）；1.85（s（br）, 1H）（回転異性体混合物）
（Ｒ）２−ホルミルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸
0004173541.tif 000030
（Ｒ）２−アミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（18.11ｇ；84.14ミリモル）をギ酸（204ml）に溶解し、無水酢酸（70ml）を滴下添加した。反応混合物を55℃に加熱し、室温で３時間半撹拌した。氷水（70ml）を滴下添加し、０℃で20分間撹拌した。反応混合物を濾過し、氷水（20ml）で洗浄し、20.26ｇの（Ｒ）２−ホルミルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸を得た。
1H-NMR（DMSO）：3.05（dd, 1H）；3.27（dd, 1H）；4.64（m, 1H）；7.48-7.87（m, 7H）；7.95（s, 1H）；8.45（d, 1H）；12.9（s（br）, 1H）
（Ｒ）−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロパン−１−オール
0004173541.tif 000031
（Ｒ）２−ホルミルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（4.37ｇ；18ミリモル）を乾燥テトラヒドロフラン（100ml）に溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（1.6ｇ；43.2ミリモル）を添加した。ヨウ素（4.57ｇ；18ミリモル）を乾燥テトラヒドロフラン（40ml）に溶解し、40℃以下に保ちながら反応混合物に滴下添加した。添加後、反応混合物を還流させながら12時間加熱した。水酸化カリウム（50ml；20％）を添加した。水相をメチルtertブチルエステル（４×50ml）で抽出した。合わせた有機相を飽和塩化ナトリウム（150ml）で洗浄し、乾燥し（硫酸マグネシウム）、溶媒を真空下で除去した。残渣をDCM／メタノール／アンモニア（100：10：１）を用いたクロマトグラフィー（シリカ；５×40cm）により精製して、1.81ｇの（Ｒ）−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロパン−１−オールを得た。
1H-NMR（CDCl3）：2.43（s, 3H）；2.88-3.05（m, 3H）；3.10（s（br）, 2H）；3.42（dd, 1H）；3.69（dd, 1H）；7.30-7.82（m, 7H）
Ｎ−｛（１Ｒ）−１−[Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル]−２−（２−ナフチル）エチル｝−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル
0004173541.tif 000032
（Ｒ）−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（0.55ｇ；1.67ミリモル）及び（Ｒ）−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロパン−１−オール（0.38ｇ；2.00ミリモル）を塩化メチレン（15ml）とジメチルホルムアミド（7.5ml）に溶解した。反応混合物を氷浴中で冷却した。１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（0.24ｇ；2.09ミリモル）及びＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ′−エチルカルボジイミド塩酸塩（0.38ｇ；2.0ミリモル）を添加した。反応混合物を室温で12時間撹拌した。反応混合物を真空下で濃縮した。酢酸エチル（200ml）を添加し、水（100ml）、炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウム（pH９）（75ml）、硫酸水素ナトリウム（75ml；10％）、水（100ml）で有機相を洗浄し、乾燥した（硫酸マグネシウム）。真空下で溶媒を除去し、残渣を酢酸エチルでクロマトグラフィーにより精製し（Silica；２×45cm）、0.25ｇのＮ−｛（１Ｒ）−１−（Ｎ−［（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル]−２−（２−ナフチル）エチル｝−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステルを得た。
1H-NMR（DMSO）：0.80-1.99（複数のs, 9H）；2.45-4.20（m, 12H）；4.70-5.12（m, 2H）（抜粋したピーク；回転異性体混合物）。
（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド
0004173541.tif 000033
Ｎ−｛（１Ｒ）−１−（Ｎ−［（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル]−２−（２−ナフチル）エチル｝−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル（0.25ｇ；0.475ミリモル）をDCM（3ml）に溶解した。トリフルオロ酢酸（１ml）を添加し、反応混合物を20分間撹拌した。溶媒を真空下で除去した。DCM（５ml）を添加し、真空下で除去した。この操作を繰り返した。残渣をメタノール（５ml）に溶解した。炭酸水素ナトリウム／炭酸ナトリウム（５ml；pH９）を添加し、溶液を酢酸エチル（２×10ml）で抽出した。有機相を乾燥し（硫酸マグネシウム）、溶媒を除去して0.22ｇの（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミドを得た。
1H-NMR（CDCl3）：1.70, 2.37, 2.45, 2.93（4s, 6H）；2.56-3.05（m, 2H）；3.52-3.85（m, 7H）；4.25, 4.97（2m, 1H）；6.86-7.78（m, 14H）（抜粋したピーク、回転異性体の混合物）
（２Ｒ）−２−（（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me）−３−（２−ナフチル）プロパノール
0004173541.tif 000034
３−Boc−アミノメチル安息香酸（502.6mg）をDCM（６ml）に溶解し、次いで15分間EDAC（191.6mg）と共に撹拌することにより、対称無水物に転化した。
DCM（５ml）に溶かした（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−（（２−ナフチル）メチル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（200mg）の溶液をこの混合物に添加し、室温で20時間反応させた。
つぎに反応混合物を濃縮してオイルとし、EtOAc（100ml）中に再溶解させた。この溶液を順次、５％NaHCO3水溶液（２×50ml）、５％KHSO4水溶液（２×50ml）およびH2O（２×50ml）で抽出した。生成した有機相をNa2SO4で乾燥し、ロータリーエバポレーターにより真空中で濃縮してオイルとした。このオイルをDCM／TFA（１：１）（６ml）中に溶解し、撹拌した。10分後、この混合物を窒素流により濃縮し、生成したオイルを70％ CH3CN／0.1％TFA（５ml）中に再溶解し、水で希釈して100mlの容量とした。
この粗生成物を二回に分けて半調製用HPLCで精製し、実施例１に記載したのと同様の手順により凍結乾燥した。
得られた最終生成物は、分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：559.5amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論値：MH+：560.72amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、33.07分及び34.63分であることがわかった。
実施例６
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000035
このペプチドは、NMP中のHBTU介在カップリング及びFmoc保護基の脱保護のUVモニタリングを使用する製造業者により供給されたFastMoc UVプロトコルを用いて、0.22ミリモルスケールでApplied Biosytems431A型ペプチド合成装置により、Fmoc法に従って合成した。合成に使用した出発樹脂は、スイス国ブーベンドルフのBachem Feinchemikalien AG社からのcat.＃：Ｄ−1675,（427）mgであり、これはアミド結合によりアミノメチルポリスチレン樹脂に結合したFmoc−２，４−ジメトキシ−４′−（カルボキシメチルオキシ）ベンズヒドリルアミンであった。置換能力は0.55ミリモル／ｇであった。使用された保護アミノ酸誘導体はFmoc-N-N-Me-D-Phe-OH, Fmoc-D-2Nal-OH, Fmoc-His（Trt）及びFmoc-Aib-OHであった。Fmoc-N-Me-D-Phe-OHのカップリングは二重カップリングとして実施した。合成後このペプチドを室温で180分間、８mlのTFA、600mgのフェノール、200μｌのエタンジチオール、400μｌのチオアニソール及び400μｌのH2Oと共に撹拌することにより、750mgのペプチド樹脂から開裂せしめた。開裂混合物を濾過し、濾液を窒素流によりほぼ２mlに濃縮した。この粗ペプチドを50mlのジエチルエーテルを用いてこのオイルから沈殿させ、50mlのジエチルエーテルで２回洗浄した。この粗ペプチドを乾燥し、半調製HPLCにより一回で洗浄し、実施例１に記載したものと同じ手順を用いて凍結乾燥した。
得られた最終生成物は、分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：598.5amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：598.73amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、24.68分及び25.58分であることがわかった。
実施例７
H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Ser-NH2
0004173541.tif 000036
この化合物は実施例６に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：685.6amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：685.81amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、24.42分及び25.92分であることがわかった。
実施例８
（３−アミノメチルベンゾイル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000037
この化合物は実施例６に記載したものと同様の手順を用いて合成した。但し、Fmoc-D-2Nal-OHのカップリングは活性化試薬としてHATUを用いて行われた。H-N-Me-D-Phe−樹脂（0.23ミリモル）をDIEA（２ミリモル）の存在下で１ミリモルのFmoc-D-2Nal-OHと150分間カップリングせしめた。
得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：511.2amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：509.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、30.73分及び32.47分であることがわかった。
実施例９
（４−ピペリジンカルボニル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000038
この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：486.8amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：487.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、27.03分及び28.48分であることがわかった。
実施例10
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000039
この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：486.9amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：487.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、28.03分及び29.50分であることがわかった。
実施例11
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000040
この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。但し最後の残渣を、対称無水物カップリング法を用いて導入した。Boc−３−アミノメチル安息香酸（251mg）を、DCMに溶かしたEDAC（96mg）と共に15分間撹拌した。次いで樹脂（429mg）を添加し、撹拌を18時間続けた。もう１つの例外は、樹脂からのペプチドの開裂時間が60分に短縮されたことであった。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：522.9amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：523.6amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、28.83分及び30.13分であることがわかった。
実施例12
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000041
この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成したが、Fmoc-N-Me-D-2Nal-OHとFmoc-His（Trt）の双方をHATUを用いてカップリングし、また樹脂からのペプチドの開裂時間を60分に短縮した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：612.3amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：612.8amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、24.33分及び26.20分であることがわかった。
実施例13
（３−アミノメチルベンゾイル）−D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
0004173541.tif 000042
この化合物は実施例８に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：587.2amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：586.74amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、21.13分及び22.60分であることがわかった。
実施例14
（３−アミノメチルベンゾイル）−N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
0004173541.tif 000043
この化合物は実施例11に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：601.6amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：601.77amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、20.40分及び21.70分であることがわかった。
実施例15
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
0004173541.tif 000044
この化合物は実施例11に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：579.4amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：579.8amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、19.88分及び21.20分であることがわかった。
実施例16
H-Aib-His-N-Me-D-Phe-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
0004173541.tif 000045
この化合物は実施例12に記載したもの同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：690.6amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：690.9amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、15.71分及び17.82分であることがわかった。
実施例17
（（３Ｒ）−３−ピペリジンカルボニル）−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH2
0004173541.tif 000046
この化合物は実施例11に記載したものと同様の手順を用いて合成したが、Fmoc-N-Me-D-Phe-OH、Fmoc-N-Me-D-2Nal-OH及びBoc-（R）−ニペコチン酸を使用した。ここでFmoc-N-Me-D-2Nal-OH及びBoc-（Ｒ）−ニペコチン酸の双方をHATUを用いてカップリングした。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：500.7amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：501.7amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、28.18分及び29.55分であることがわかった。
実施例18
H-Aib-Ala-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2
0004173541.tif 000047
この化合物は実施例６に記載したものと同様の手順を用いて合成した。得られた最終生成物を分析RP−HPLC（保持時間）及びプラズマ脱着質量スペクトル（分子質量）により分析した。実測分子質量（MH+：660.7amu）は、この方法の実験誤差範囲内で期待の構造（理論MH+：660.8amu）と合致した。
実施例１に規定される溶出条件Ａ１及びＢ１を用いたRP−HPLC保持時間は、それぞれ、25.63分及び26.75分であることがわかった。
実施例19
Ｈ−３−アミノメチルベンゾイル−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3
0004173541.tif 000048
Boc-3AMB-OH（115mg, 0.458ミリモル）、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（62mg, 0.458ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（97mg, 0.504ミリモル）をDCM（８ml）及びDMF（１ml）に溶かし、15分間撹拌した。DCM（５m）に溶解したＮ−メチル−２−メチルアミノ−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（185mg, 0.458mmol）を添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（80ml, 0.458ミリモル）を添加し、混合物を20時間撹拌した。
有機相を炭酸水素ナトリウム（50ml, ５％）、H2O（50ml）及び飽和NaCl／H2O（50ml）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。残渣をDCM（２ml）に溶かし、TFA（２ml）で10分間処理した。Ｎ2流により揮発分を除去した。この残渣を20％ MeCN 50mlに溶かし、H2Oで希釈して500mlとした。
半調製HPLC
10ml／分、５回、30−40％MeCN／0.1Ｍ（NH4）2SO4、pH2.5
検出276nm、Sep-Pak▲Ｒ▼、70％MeCN／0.1％TFA、凍結乾燥
0004173541.tif 000049
実施例20
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NHMe
0004173541.tif 000050
Fmoc-L-His（Trt）-OH（1.54ｇ, 2.48ミリモル）（BACHEM B-1570）及び１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール（338mg, 2.48ミリモル）を９mlのDMFに溶かし、０−４℃に冷却し、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（475mg, 2.48ミリモル）を添加した。反応混合物を15分間、０−４℃で撹拌した。塩化メチレン（18ml）に溶かしたＮ−メチル−２−メチルアミノ−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（500mg, 1.24ミリモル）を０−４℃に冷却して添加し、０−４℃で１時間撹拌し、次いでジイソプロピルエチルアミン（0.425ml, 2.48ミリモル）を添加した。この混合物の温度をゆっくり室温まで上昇させ、72時間撹拌した。DCMをＮ2流中で蒸発させ、この混合物に100mlの酢酸エチルを添加し、炭酸水素ナトリウム（２×100ml,５％）及び硫酸水素カリウム（100ml, ５％）で洗浄した。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。残渣をDMF（８ml）中に溶解し、ピペリジンで15分間処理し、H2O（100ml）で希釈し、酢酸（1.5ml）でクエンチングした。アセトニトリルを添加し、混合物をH2Oで希釈して250mlとした。透明な溶液を10ｇの“Seppaks”＃Waterに適用し、H2O／0.03Ｍ HClで洗浄し、50mlの35％MeCN／0.03Ｍ HClで溶出させた。H2Oにより希釈して200mlとして凍結乾燥した。
Boc−αアミノイソ酪酸（756mg, 3.72ミリモル）、１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール水和物（506mg, 3.72ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（713mg, 3.72ミリモル）をDMF（６mg）に溶かし、15分後に、DCM（12ml）に溶解したH-L-His（Trt）−NMe-D2Nal-NMe-D-Phe-NHCH3．2HClを添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（0.637ml）を添加し、72時間撹拌した。DCMをＮ2流中で蒸発させ、混合物に100mlの酢酸エチルを添加し、炭酸水素ナトリウム（２×50ml, ５％）及び硫酸水素カリウム（50ml, ５％）で洗浄した。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発した。残渣をDCM（６ml）中に溶かし、０−４℃に冷却し、TFA（６ml）で10分間、０−４℃で処理した。Ｎ2流により揮発物を除去した。油状残渣を35mlの70％アセトニトリルに溶解し、H2Oで希釈して50mlとし、10mlの濃塩酸（12モル）を添加し、72時間撹拌した。混合物をH2Oで希釈して200mlとし、固体炭酸ナトリウムで中和し、最後にH2Oで希釈して400mlとした。
半調製HPLC
0004173541.tif 000051
実施例21
３−メチルアミノメチルベンゾイル−N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH-CH3
0004173541.tif 000052
Boc-NMe3AMB-OH（658mg, 2.48ミリモル）、１−ヒドロキシアザベンゾトリアゾール水和物（338mg, 2.48ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（475mg, 2.48ミリモル）を６mlのDMFに溶解し、15分間撹拌した。
塩化メチレン（12ml）に溶かしたＮ−メチル−２−メチルアミノ−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−フェニルエチル）−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（500mg, 1.24ミリモル）を添加し、次いでジイソプロピルエチルアミン（0.425ml, 2.48ミリモル）を添加した。この混合物を20時間撹拌した。
DCMをＮ2流中で蒸発させ、この混合物に75mlの酢酸エチルを添加し、炭酸水素ナトリウム（２×50ml, ５％）及び硫酸水素カリウム（50ml, ５％）で洗浄した。相を分離し、有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空中で蒸発させた。残渣を10mlの塩化メチレンに溶解し、０−４℃に冷却し、TFA（10ml）で10分間、０−４℃で処理した。Ｎ2流で揮発物を除去した。油状残渣を25mlの70％MeCN／0.1％TFA中に溶かし、H2Oで希釈して600mlとした。
半調製HPLC
ラージカラム、40ml／分、８回28−40＆Pll（NH4）2SO4、276nM
Seppak、凍結乾燥
0004173541.tif 000053
実施例22
ピペリジン−４−カルボン酸Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルアミド
0004173541.tif 000054
（２Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（４−ヨードフェニル）プロピオン酸
0004173541.tif 000055
Can J. Chem.（1977）, 55, 906に従って調製した。
1H-NMR：（CDCl3）d 1.34（s, 4.5H）, 1.38（s, 4.5H）, 2.70（s, 1.5H）, 2.75（s, 1.5H）；2.85-3.10（m, 1H）, 3.2-3.4（m, 1H）；4.4-4.6（m, 0.5H）, 6.9-7.0（m, 2H）, 7.62（d, J=10Hz, 2Hz）, 9.5-10（bs, 1H）
Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル
0004173541.tif 000056
（２Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（４−ヨードフェニル）プロピオン酸（2.00ｇ, 4.9ミリモル）を塩化メチレン（20ml）に溶解した。ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（0.67ｇ, 4.9ミリモル）及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（0.99ｇ, 4.9ミリモル）を添加し、混合物を15分間撹拌した。メチルアミン（メタノール中40％溶液0.38ｇ、4.9ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。塩化メチレン（40ml）を添加し、混合物を炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（50ml）及び硫酸水素ナトリウム溶液（10％, 50ml）で洗浄した。有機相を乾燥（MgSO4）し、溶媒を真空中で除去した。残渣を、溶離剤として酢酸エチル／ヘプタン（２：１）を用いてシリカ（2.5×20cm）上でクロマトグラフィーにより精製して1.77ｇのＮ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステルを得た。
1H-NMR：（CDCl3）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 1.39（s, 9H）；2.75（s, 3H）；2.80（d, 3H）；3.29（dd, 1H）；4.88（t, 1H）。
（２Ｒ）−３−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−メチル−２−（メチルアミノ）プロピオンアミド
0004173541.tif 000057
Ｎ−（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバミン酸tert−ブチルエステル（1.7ｇ, 4.0ミリモル）を塩化メチレン（10ml）に溶解し、トリフルオロ酢酸（５ml）を添加した。混合物を１時間撹拌した。塩化メチレン（30ml）及び水（30ml）を添加した。固体の炭酸水素ナトリウムを加えてpH８とした。有機相を分離し、乾燥し（MgSO4）、真空中で蒸発して1.22ｇの（２Ｒ）−３−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−メチル−２−（メチルアミノ）プロピオンアミドを得た。
H-NMR：（CDCl3）d 2.28（s, 3H）；2.68（dd, 1H）；2.81（d, 3H）；3.08-3.19（m, 2H）；6.95（d, 2H）；7.63（d, 2H）
Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−（４−ヨードフェニル）エチル）カルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）カルバミン酸tert−ブチルエステル
0004173541.tif 000058
（２Ｒ）−２−（Ｎ−tert−ブトキシカルボニル−Ｎ−メチルアミノ）−３−（２−ナフチル）プロピオン酸（1.10ｇ, 3.30ミリモル）を塩化メチレン（10ml）に溶解し、HOAt（0.45ｇ, 3.1ミリモル）及びEDAC（0.66ｇ, 3.5ミリモル）を添加した。15分間撹拌した後、（２Ｒ）−３−（４−ヨードフェニル）−Ｎ−メチル−２−（メチルアミノ）プロピオンアミド（1.0ｇ, 3.1ミリモル）及びジイソプロピルエチルアミン（0.45ｇ, 3.4ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。塩化メチレン（30ml）を添加し混合物を、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（30ml）及び硫酸水素ナトリウム溶液（10％, 30ml）で洗浄した。有機相を乾燥し（MgSO4）、溶媒を真空下で除去した。残渣を、溶離剤として酢酸エチル／ヘプタン（２：１）を用いてシリカ（2.5×20cm）上でのクロマトグラフィーにより精製して1.74ｇのＮ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−（４−ヨードフェニル）エチル）カルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）カルバミン酸tert−ブチルエステルを得た。
1H-NMR：（CDCl3）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 1.38（s, 9H）；2.18（d, 3H）；2.45（s, 3H）；2.75（s, 3H）；5.05（m, 1H）；5.42（m, 1H）。
（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド
0004173541.tif 000059
Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−メチル−Ｎ−（（１Ｒ）−１−（メチルカルバモイル）−２−（４−ヨードフェニル）エチル）カルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）カルバミン酸tert−ブチルエステルを、塩化メチレンとトリフルオロ酢酸の混合物中に溶かし、15分間撹拌した。
塩化メチレン（20ml）及び水（30ml）を添加した。固体の炭酸水素ナトリウムを添加してpH８とした。有機相を分離し、乾燥し（MgSO4）、真空中で蒸発させて1.40ｇの（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミドを得た。
1H-NMR：（CDCl3）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 1.79（s, 3H）；2.02（d, 3H）；2.55（s, 3H）；3.78（dd, 1H）；5.44（dd, 1H）.
４−（Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル
0004173541.tif 000060
１−tert−ブトキシカルボニルピペリジン−４−カルボン酸（143mg, 0.66ミリモル）を塩化メチレン（10ml）中に溶かし、HOAt（90mg, 0.66ミリモル）及びEDAC（140mg, 0.73ミリモル）を添加した。15分間撹拌後、（２Ｒ）−Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチル−２−メチルアミノ−３−（２−ナフチル）プロピオンアミド（350mg, 0.66ミリモル）とジイソプロピルエチルアミン（85mg, 0.66ミリモル）を添加し、混合物を一晩撹拌した。塩化メチレン（20mg）を添加し、炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（20ml）及び硫酸水素ナトリウム溶液（10％, 20ml）で混合物を洗浄した。有機相を乾燥し（MgSO4）、溶媒を真空中で除去した。残渣を、溶離剤として酢酸エチルを用いてシリカ（2.5×20cm）上でのクロマトグラフィーにより精製して412mgの４−（Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステルを得た。
４−（Ｎ−（（１Ｒ）−１−（Ｎ−（（１Ｒ）−２−（４−ヨードフェニル）−１−（メチルカルバモイル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）−２−（２−ナフチル）エチル）−Ｎ−メチルカルバモイル）ピペリジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル（412mg, 0.56ミリモル）を、塩化メチレン（５ml）とトリフルオロ酢酸（５ml）の混合物に溶かし、５分間撹拌した。塩化メチレン（20ml）及び炭酸水素ナトリウムの飽和水溶液（20ml）を添加した。固体の炭酸水素ナトリウムを加えてpH８とした。相を分離し、有機相を乾燥（MgSO4）し、蒸発させて、255mgの表題化合物を得た。
1H-NMR：（CDCl3）（主回転異性体についての抜粋したピーク）d 2.32（d, 3H）；2.58（s, 3H）；2.68（s, 3H）；5.33（m, 1H）；5.84（t, 1H）
HPLC：rt＝33.35分（Ａ１）
PDMS：ｍ／ｚ 640.8（Ｍ＋Ｈ）+．
略号
HBTU：Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
NMP：Ｎ−メチルピロリドン
HATU：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
Trt-：トリチル
HOBT：７−ヒドロキシベンゾトリオゾール水和物
3-AmB：３−アミノメチルベンゾイル
N-Me-3-AMB：３−メチルアミノメチルベンゾイル