(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１ｍｇ／ｍｌ〜１５ｍｇ／ｍｌの量におけるヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）；
１ｍｇのｈＧＨあたり０．０５〜０．５ｍｇの量におけるヒスチジン；
１ｍｇのｈＧＨあたり０．１〜２ｍｇの量におけるポロキサマー１８８；
等張性付与量におけるマンニトール；及び
保存料としてのフェノール、
を含む水性医薬製剤であって、６．０〜６．３のｐＨを有する水性医薬製剤。
【請求項２】
６．１のｐＨを有する請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
請求項１に記載の水性医薬製剤を調製するための方法であって、最終水性製剤中１ｍｇ／ｍｌ〜１５ｍｇ／ｍｌの量をもたらす量において、ｈＧＨを水溶液中に溶解する工程を含んで成り、該水溶液が、
脱イオン水；
最終水性製剤中、１ｍｇのｈＧＨあたり０．０５〜０．５ｍｇの量をもたらす量におけるヒスチジン；
最終水性製剤中、１ｍｇのｈＧＨあたり０．１〜２ｍｇの量をもたらす量におけるポロキサマー１８８；
最終水性製剤中、等張性付与量をもたらす量におけるマンニトール；及び
フェノール、
を含んで成り、
ここで、生じた製剤のｐＨが６．０〜６．３の値を有するように調整される、方法。
【請求項４】
前記生じた製剤のｐＨが６．１の値を有するように調整される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ヒト成長ホルモンにより影響を受けうる障害を治療するための医薬の製造における、請求項１又は２に記載の水性医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
発明の属する分野
本発明は、成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体及びAsp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸及び少なくとも１個の酸性アミノ酸を含むペプチドの群から選択されるアミノ酸及び非イオン洗浄剤、たとえば、ポリソルベートまたはポロキサマー（poloxamer）を含む医薬配合物に関する。さらに、この発明は上記配合物を製造する方法及び上記配合物を用いる治療法に関する。
発明の背景
ヒト及び一般的な家畜からの成長ホルモンは下垂体の前葉（anterior lope）で合成され、分泌される約191アミノ酸のタンパク質である。ヒト成長ホルモンは191アミノ酸から成る。
成長ホルモンは身体の成長の調節のみならず、タンパク質、炭水化物及び脂質の代謝の調節に関係する鍵ホルモンである。成長ホルモンの主要な効果は成長を促進することである。
成長ホルモンの影響を受ける組織系は、骨格、結合組織、筋肉及び内臓、たとえば、肝臓、腸及び腎臓を包含する。
いまや、工業規模での、たとえばヒト成長ホルモン（hGH）及びMet-hGHの生産の原因となっている、組換え技術及び成長ホルモンのクローン化の進展までは、ヒト成長ホルモンはヒトの死体の下垂体からの抽出によってのみ得ることができた。成長ホルモンの非常に限定された供給は、なかんずく、低身長（成長ホルモンの欠損、通常の低身長及びターナー症候群による）、成人における成長ホルモン欠損、不妊症、やけどの治療、傷の治癒、ジストロフィー、骨の癒合、骨粗しょう症、びまん性胃出血及び偽関節の治療のために提案されていたとしても、小人症の治療のための子供時代及び思春期における縦の成長促進のためにそれらを用いることに制限した。
さらに、成長ホルモンは家畜の成長速度の増加及び脂肪の割合の減少のために提案されてきた。
成長ホルモンの医薬製剤は不安定な傾向がある。分解生成物、たとえば、脱アミド化生成物またはスルホキシド化生成物及び２量体型またはポリマー型が特に成長ホルモンの溶液中で生じる。
hGHの主な化学的分解反応は、１）直接的な加水分解によりまたは環式スクシンイミド中間体を経て、種々な量のＬ−asp-hGH、Ｌ−イソ−asp-hGH、Ｄ−asp-hGH及びＤ−イソ−asp-hGHを生成する脱アミド化（参考文献１〜３）、２）位置14及び125におけるメチオニン残基の酸化（参考文献４〜９）及び３）ペプチド結合の開裂である。
脱アミド化は特に位置149におけるAsnで起こる。
スルホキシドを生成する溶液におけるhGHの酸化は通常製剤中に溶解した酸素によるから、hGHは特に溶液中では（４〜８）、むしろ、位置14及び125で容易に酸化される。
現在では、これらの分解生成物は毒のもしくは変更された生物活性または受容体結合特性を有するはずであるとは信じられないが、スルホキシドのコンフォメーション安定性は未変性のhGHに比べて低下するという影響の徴候がある。
成長ホルモンの他の「分解生成物」は、集合体生成物、たとえば、２量体およびポリマーである。未変性のhGHに対する測定可能な量の抗体を伴う免疫応答を引き起こすことにおける、これらの形の役割を明らかにする研究が行なわれてきた。これらの研究はhGHの集合体は患者における免疫原性の主要な原因であることを示した。
したがって、上記集合体は所望しない免疫原性または半減期の変更を引き起こす能力があるから、医薬配合物中においては、成長ホルモンの集合体の形成を回避することが望ましい。
分解の動力学はhGH製剤中の温度、pH及び種々の添加剤またはアジュバントに依存する。
不安定性のため、成長ホルモン配合物は現在では通常凍結乾燥され、分解を最小限にするために、使用のために再構成するまで、凍結乾燥した形で２〜８℃で貯蔵される。hGHを含む凍結乾燥された医薬配合物は、患者により再構成され、次いで30日までの使用期間（その間、いくらかの分解が起こるだろう）の間、溶液として貯蔵される。
現在では、使用の前にできるだけ、おそく成長ホルモンを再構成し、凍結乾燥状態で製剤を貯蔵し、出荷することが好ましい。製造者から薬局への鎖は、３年までの有効期間を可能にする、たとえば、約２〜８℃の制御された低温で製剤を取り扱うのに適切である。
好ましくは、凍結乾燥され、次いで再構成された製剤は、凍結乾燥された状態で約１ケ月、カートリッジの意図した期間の使用のためにペン装置中で再構成された状態でさらに１ケ月、最終使用者のところで安定であるべきである。
凍結乾燥され、再構成された製剤の代わりに、成長ホルモンをガラスびんまたは自己治療のためのペンシステム中で用いるのに適切な液体配合物として配合することもできる。自己治療のためのペンシステムの広範囲の使用及び拡大した使用分野は、最終使用者のもとで十分に長期間安定である製剤を必要とする。このような安定化は、成長ホルモンの投与が、診療所から、最適な貯蔵状態が得られない、治療される個人の家庭に移動した時に非常に重要である。さらに、「すぐに使える」配合物は、再構成に関係するすべての取り扱いの問題を減らし、したがって患者に便利さを再び提供する。
成長ホルモンを含む安定な溶解した製剤は、慣用の注射器と組み合わせて患者が用いるガラスびんの形で、または患者が用いるペン装置へのカートリッジ付属品としてすぐに用いられるように製造できる。どちらの場合も、それで、患者は製剤の再構成を避けられ、したがって、凍結乾燥された製剤、再構成のための適切な賦形剤、並びに製剤の殺菌した再構成のために必要な技術と殺菌装置を所有する必要がないだろう。安全性の理由も、製剤の使用直前の凍結乾燥された製剤の再構成を避けることを望ましいものとしている。
製造者の観点からは、成長ホルモン製剤の製造における凍結乾燥工程を回避することは有利である。凍結乾燥は時間と金のかかる過程であり、凍結乾燥機の限られた能力のため、しばしば製造における「ネック」でもある。
このように、患者により行なわれる操作を容易にするために成長ホルモンのもっと安定な溶解した製剤に対するニーズがある。
このように、溶解したhGH製剤が有効期間及び約１ケ月までの使用期間の間安定であることを可能にするために、分解過程の速度を減ずる必要もある。
従来技術
hGHを安定化する従来の試みは２量体の生成を防止するのに完全には成功しなかった。２量体の生成に伴う問題は、たとえば、Becker, G. W.の「Biotechnology and Applied Biochemistry」9, p.478（1987年）に記載されている。
国際特許公開WO89／09614号及びオーストラリア特許出願第30771／89号は、ヒト成長ホルモン、グリシン及びマンニトールを含有する安定な医薬配合物を開示している。このような配合物は通常の加工及び凍結状態における貯蔵の間並びに再構成後の使用期間に改良された安定性を示す。
公開された欧州特許出願第303746号は、動物成長ホルモンは種々の安定剤で安定化され、不溶解物の生成を減少させ、水性環境における溶解性活性の保持を示すことができ、上記安定剤は特定のポリオール、アミノ酸、生理的pHで荷電した側基を有するアミノ酸のポリマー及びコリン塩を包含することを開示している。ポリオールは、非還元糖、糖アルコール、糖酸、ペンタエリスリトール、ラクトース、水溶性デキストラン及びフィコール（Ficoll）からなる群から選択される。アミノ酸は、グリシン、サルコシン、リシンまたはそれらの塩、セリン、アルギニンまたはそれらの塩、ベタイン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン、アスパラギン酸またはそれらの塩、グルタミン酸またはその塩からなる群から選択される。生理的pHで荷電した側基を有するアミノ酸のポリマーはポリリシン、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリアルギニン、ポリヒスチジン、ポリオルニチン及びそれらの塩から選択でき、コリン誘導体は塩化コリン、二水素クエン酸コリン、重酒石酸コリン、重炭酸コリン、クエン酸三コリン、アスコルビン酸コリン、ホウ酸コリン、グルコン酸コリン、リン酸コリン、硫酸二コリン及びムチン酸二コリンからなる群から選択される。
米国特許第4,917,685号は、欧州特許第303746号に言及されたのと同じ安定剤を用いて安定化された成長ホルモンを含む埋め込まれるように設計されたデリバリー装置を開示している。
公開された欧州特許出願第374,120号はhGH及び３個の水酸基を有するポリオールを含む安定化された配合物を開示する。グリセロール及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンが言及されている。さらに、ポリオールといっしょに緩衝剤としてヒスチジン塩酸塩の存在が開示されている。
国際特許公開WO93／12811号は、アスパラギンを含む凍結乾燥された粉末または水溶液の形の成長ホルモンの安定化された配合物を開示している。
国際特許公開WO93／12812号は、ヒスチジンを含む凍結乾燥された粉末または水溶液の形の成長ホルモンの安定化された配合物を開示する。このような配合物においては脱アミド化は、リン酸塩緩衝剤を含む相当する成長ホルモンの製剤に比較して25〜30％減少する。
国際特許公開WO96／11703号はイソロイシンを含む、安定化された成長ホルモンの配合物を開示する。
国際特許公開WO96／11702号はバリンを含む安定化された成長ホルモンの配合物を開示する。
国際特許公開WO96／11704号はロイシンを含む安定化された成長ホルモンの配合物を開示する。
国際特許公開WO93／19776号は、緩衝物質としてクエン酸塩を含む成長ホルモンを含むタンパク質配合物はリン酸塩緩衝剤を含む配合物よりも安定であることを開示する。その配合物は、アミノ酸、たとえば、グリシン及びアラニン及び／またはマンニトールまたは他の糖アルコール及び／またはグリセロール及び／または他の炭水化物並びに任意に防腐剤、たとえばベンジルアルコールも含むことができる。
国際特許公開WO94／03198号は、ヒト成長ホルモン、緩衝剤、非イオン界面活性剤及び任意に中性塩、マンニトールまたは防腐剤を含有する安定な水性配合物を開示する。緩衝剤はクエン酸塩が好ましいけれどもヒスチジンでよい。この出願は緩衝剤としてクエン酸塩、そして安定化のために塩化ナトリウム及びポリソルベート20（Tween 20）を含有する好ましい配合物を開示している。この組み合わせは前記水性配合物を集合体に対して安定化するが、相当な量の脱アミド化成長ホルモンを生ずる。
国際特許公開WO95／35116号は、サッカロース及び任意にマンニトールを含有する安定な凍結乾燥された配合物を開示している。
発明の詳細な説明
さて、驚いたことに、成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体、及びAsp，Ile，Val，Leuまたはヒスチジンから選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体、または少なくとも１種の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１種の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含む医薬配合物であって、ペプチドまたはAsp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体の量が、GH １mg当り約0.01〜約10mgであるものは、脱アミド化及び集合に対して高度な安定性を示すことを発見した。その生成物の安定性は、凍結乾燥された状態または溶解されたもしくは再溶解された配合物の形でのそれらを貯蔵または出荷を可能にする。
本発明で用いられる少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチドは、20アミノ酸残基まで、好ましくは３〜10アミノ酸残基、より好ましくは３〜６アミノ酸残基、たとえば３または４アミノ酸残基（たとえば、Lys-Gly-Asp-Ser）を含むペプチドであり得る。本発明の一面では、より短いペプチドの塩基性及び酸性アミノ酸残基は、１または２アミノ酸残基により分離されている。ペプチドは好ましくは天然のαアミノ酸残基を含む。アミノ酸はＬアミノ酸またはＤアミノ酸またはそれらの混合物であってよい。「酸性アミノ酸残基」は、たとえば、GluまたはAspで、「塩基性アミノ酸残基」は、たとえば、LysまたはArgである。
本発明で用いられるヒスチジンの誘導体は、ヒスチジンのアミドまたはエステル、たとえば、メチルエステルまたはエチルエステル、配列His−ＸまたはＸ−Hisを有するジペプチド（式中、Ｘは天然のα−アミノ酸残基である）、及びHisの類似体または誘導体、たとえば、イミダゾール、脱アミノ−Hisまたはポリ−Hisであり得る。
好ましい面では、本発明は、成長ホルモン（GH）または成長ホルモンの誘導体及びAsp，Ile，ValまたはLeuの群から選択されるアミノ酸及び非イオン洗浄剤を含み、Asp，Ile，ValまたはLeuの群から選択されるアミノ酸の量がGH １mg当り約0.01〜約10mgである、医薬配合物に関する。他の好ましい面では、本発明は、成長ホルモン（GH）または成長ホルモンの誘導体及びヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含み、ペプチドまたはヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体の量はGH １mg当り約0.01〜約10mgである、医薬配合物に関する。
上記面の好ましい態様では、ペプチドまたは選択されたアミノ酸またはヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体の量はGH １mg当り約0.05〜約５mg、より好ましくはGH １mg当り約0.05〜約１mg、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.05〜約0.7mg、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.05〜約0.5mgである。
上記面の好ましい態様では、非イオン洗浄剤は、ポリソルベートまたはポロキサマー、たとえばポリソルベート20、ポロキサマー188またはポロキサマー407〔たとえば、Pluronic（登録商標）Ｆ68、Lutrol 127、Tween 20〕から選択され、最も好ましくはポロキサマー188である。
他の面では、本発明はAsp，Ile，Val，LeuまたはHisから選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体、または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含む、成長ホルモンまたは成長ホルモン誘導体の医薬配合物であって、非イオン洗浄剤の量がGH １mg当り約0.01〜約10mgである前記医薬配合物に関する。
好ましい面では、本発明は、成長ホルモン（GH）または成長ホルモンの誘導体、及びAsp，Ile，ValまたはLeuの群から選択されるアミノ酸、及び非イオン洗浄剤を含む医薬配合物であって、非イオン洗浄剤の量がGHの１mg当り約0.01〜約10mgである前記配合物に関する。他の好ましい面では、本発明は、成長ホルモン（GH）または成長ホルモンの誘導体及びヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド、及び非イオン洗浄剤を含む医薬配合物であって、非イオン洗浄剤の量がGH １mg当り約0.01〜約10mgである前記配合物に関する。
上記面の好ましい態様では、非イオン洗浄剤の量はGH １mg当り約0.01〜約10mg、より好ましくはGH １mg当り約0.05〜約５mg、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.1〜約３mg、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.1〜約２mgである。
上記面の好ましい態様では、非イオン洗浄剤はポリソルベートまたはポロキサマー、たとえば、ポリソルベート20、ポロキサマー188またはポロキサマー407〔たとえば、Pluronic（登録商標）Ｆ68、Lutrol 127、Tween 20〕から選択され、最も好ましくはポロキサマー188である。
本発明の他の面は、成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体及びAsp，Ile，Val，LeuまたはHisからなる群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または、少なくとも１個の塩基性アミノ酸及び少なくとも１個の酸性アミノ酸を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含み、ペプチドまたはAsp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体の量はGH １mg当り約0.01〜約10mgで、非イオン洗浄剤の量はGH １mg当り約0.1〜約２mgである、医薬配合物である。
好ましい面では、本発明は成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体及びAsp，Ile，ValまたはLeuの群から選択されるアミノ酸及び非イオン洗浄剤を含み、GH １mg当りのAsp，Ile，ValまたはLeuの量が約0.01〜約10mgで、GH １mg当りの非イオン洗浄剤の量が約0.1〜約２mgである医薬配合物に関する。
他の好ましい面では、本発明は成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体及びヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含み、GH １mg当りのペプチドまたはヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体の量は約0.01〜約10mgで、GH １mg当りの非イオン洗浄剤の量は約0.1〜約２mgである医薬配合物に関する。
上記面の好ましい態様では、ペプチドまたはAsp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体の量はGH １mg当り約0.05〜約５mg、より好ましくはGH １mg当り約0.05〜約１mg、さらに好ましくはGH １mg当り約0.05〜約0.7mgで、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.05〜約0.5mgである。
上記面の好ましい態様では、非イオン洗浄剤はポリソルベートまたはポロキサマー、たとえばポリソルベート20、ポロキサマー188、またはポロキサマー407〔たとえば、Pluronic（登録商標）Ｆ68、Lutrol 127、Tween 20〕から選択され、最も好ましくはポロキサマー188である。
本発明の別の面は、成長ホルモンまたはAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸、またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及びポロキサマーを含む医薬配合物に関する。
好ましい面では、本発明は成長ホルモン（GH）または成長ホルモンの誘導体、及びAsp，Ile，ValまたはLeuの群から選択されるアミノ酸、及びポロキサマーを含む医薬配合物に関する。他の好ましい面では、本発明は成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体、及びヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド、及びポロキサマーを含む医薬配合物に関する。
上記面の好ましい態様では、ポロキサマーはポロキサマー188またはポロキサマー407から選択され、ポロキサマー188〔たとえば、Pluronic（登録商標）Ｆ68〕が最も好ましい。他の好ましい態様では、前記配合物はヒスチジンまたはヒスチジンの誘導体を含む。好ましい態様では、ペプチドまたはAsp，Ile，Val，LeuもしくはHis、またはヒスチジンの誘導体の量はGH １mg当り約0.05〜約５mgで、より好ましくはGH １mg当り約0.05〜約１mg、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.05〜約0.7mgで、さらにより好ましくはGH １mg当り約0.05〜約0.5mgである。好ましい態様では、非イオン洗浄剤の量はGH １mg当り約0.05〜約５mg、より好ましくはGH １mg当り約0.1mg〜約３mg、より好ましくはGH １mg当り約0.1〜約２mgである。
本発明の配合物は、後で慣用の賦形剤、たとえば、蒸留水または注射用の水を用いて再構成される凍結乾燥された粉末の形であるか、または成長ホルモンを含む水溶液の形であることができる。上記賦形剤は、慣用の防腐剤、たとえば、ｍ−クレゾール、フェノール及びベンジルアルコールを含んでもよい。凍結乾燥のための増量剤として、糖アルコール、たとえばマンニトール及び二糖類、たとえばスクロースからなる群から、１または２以上の要素を選択し得る。
スクロースを含む凍結乾燥された製剤は、非常に高安定性であるため好ましく、スクロース及びマンニトールを含む製剤は、容易に溶解でき、溶解後長期間溶液中で非常に安定である、硬い凍結乾燥された製品を与える、非常に高い安定性と非常に良好な加工性を併せ持ち、特に好ましい。さらに本発明による好ましい製剤は凍結乾燥の増量剤としてマンニトール及びスクロースまたはトレハロースを含む製剤である。マンニトール及び二糖類を含む本発明の製剤は通常２つの構成成分を重量基準で約等量含む。
本発明の製剤中に存在するスクロースの量は広範囲に変化し得る。成長ホルモン対スクロースの比は重量基準で0.005〜1.5に変化し得る。したがって、スクロースの量は、成長ホルモン１mg当り0.67〜200mgでよく、成長ホルモン１mg当り1.1〜50mgの量が好ましい。
本発明の好ましい態様では、成長ホルモンはヒト成長ホルモン（hGH）で医薬組成物はさらに水性緩衝液の形で担体を含んでいる。このような水性製剤はすぐに使える形にあり、いかなる考慮に入れるべき分野もないものとして貯蔵及び出荷できる。
成長ホルモンの溶液に用いられる緩衝液は、たとえば、ヒスチジン、クエン酸塩、酒石酸塩またはリン酸塩緩衝液であり得る。Ｌ−ヒスチジンは6.0のpKAを有し、したがって、自体緩衝剤としてpH約５〜約７の間において適切である。
さらなる面では、本発明は、成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体、及びAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含み、適当な量の成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体が、脱イオン水中のAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド、及び非イオン洗浄剤、たとえば、ポリソルベートまたはポロキサマーを含み、任意に防腐剤を含有し、任意に張性を調整するための試薬を含有する溶液に溶解し、そして任意にpHを約6.0〜約8.8に調整することを含み、前記適当な量のGHが、ペプチド、Asp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体の量を、GH １mg当り約0.01〜約10mgの範囲にさせるものである、医薬配合物を調製する方法に関する。
さらなる面では、本発明は、成長ホルモンまたは成長ホルモン誘導体及びAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸、またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含み、そこで、前記成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体は、脱イオン水中のAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び適当な量の非イオン洗浄剤、たとえば、ポリソルベートまたはポロキサマーを含み、任意に防腐剤を含有し、そして任意に張性を調整するための試薬を含有する溶液に溶解し、任意にpHを約6.0〜約8.8に調整することを含み、前記適当な量の非イオン洗浄剤が非イオン洗浄剤の量をGH １mg当り約0.01〜約10mgの範囲にさせるものである医薬配合物を調製する方法に関する。
さらなる面では、本発明は、成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体、及びAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及び非イオン洗浄剤を含む医薬配合物の調製方法であって、脱イオン水中に、Asp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸の残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸を含むペプチドを含み、非イオン洗浄剤の量がGH １mg当り約0.1〜約２mgであるような量の非イオン洗浄剤、たとえば、ポリソルベートまたはポロキサマーを含み、任意に防腐剤を含有し、任意に張性を調整するための試薬を含有する溶液に、Asp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体を約0.05〜約0.5mgにする量の成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体を溶解させ、任意にpHを約6.0〜約8.8に調整することを含む前記方法に関する。
さらなる面では、本発明は、成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体及びAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチド及びポロキサマーを含む医薬配合物の調製方法であって、そこで、前記成長ホルモンまたは成長ホルモンの誘導体を、脱イオン水中のAsp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸、またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基、及びポロキサマーを含み、任意に防腐剤を含有し、任意に張性を調整するための試薬を含有する、溶液中に溶解し、そして任意にpHを約6.0〜約8.8に調整することを含む前記方法に関する。
Asp，Ile，Val，LeuまたはHisの群から選択されるアミノ酸またはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸及び少なくとも１個の酸性アミノ酸を含むペプチドの濃度は好ましくは約１mM〜約100mMである。より好ましくは、Asp，Ile，Val，LeuもしくはHisまたはヒスチジンの誘導体または少なくとも１個の塩基性アミノ酸及び少なくとも１個の酸性アミノ酸を含むペプチドの濃度は約２mM〜約20mMで、最も好ましくは約５mM〜約15mMである。
本発明の医薬配合物は、あらゆる適切な方法での投与、たとえば、非経口もしくは経口投与または粘膜への投与、たとえば、経鼻投与のために配合することができる。前記医薬配合物は、ガラスびんまたはカートリッジまたは、あらゆる他の適切な容器、たとえば、前もって充てんした注射器またはペン装置に含まれた１回分の薬の形で提供することができる。
本発明の医薬製剤はさらにその加工、たとえば凍結乾燥または再構成を容易にするために慣用される塩を含むことができる。
安定性の理由のため、溶液のpHは好ましくは約6.0〜約8.8、好ましくは約6.0〜約7.0、より好ましくは約6.0〜約6.8、さらにより好ましくは約6.0〜6.3、そして最も好ましくは約6.0〜6.2（たとえば、約6.1）の間の値に調整される。
pHは成長ホルモンに悪影響をもたない酸、好ましくは生理的に許容し得る酸、たとえば、鉱酸、たとえば、塩酸、硫酸もしくは硝酸または有機酸、たとえば、酢酸もしくはクエン酸を加えることにより調整し得る。
本発明の医薬配合物はさらに張性を調整するための塩及びその加工、たとえば、凍結乾燥及び使用前に前記配合物を再構成する時に凍結乾燥された配合物の速くて完全な溶解を容易にするために任意に補形剤を含むことができる。
上記塩は慣用の添加物、たとえば、有機酸、たとえば、クエン酸、酒石酸もしくは酢酸のアルカリ金属、アルカリ土金属もしくはアンモニウム塩、たとえば、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウムもしくは酢酸ナトリウム、または無機酸、たとえば塩酸のアルカリ金属、アルカリ土金属もしくはアンモニウム塩、たとえば、塩化ナトリウムから選択することができる。
補形剤は二糖類、たとえば、ラクトース、トレハロース及びスクロース、糖アルコール、たとえば、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、ソルビトールもしくはグリセロール、多糖類、たとえば、Dextran（登録商標）製品、たとえばDextran（登録商標）40、Dextran（登録商標）70もしくはDextran（登録商標）75、及びFicoll（登録商標）として商品化されているポリマー並びに多価アルコールたとえば、ポリエチレングリコールもしくはポリビニルアルコールまたはこれらの２または３以上の組み合せから選択し得る。
本明細書の文脈においては、「成長ホルモン」または「GH」は、あらゆる起原からの成長ホルモン、たとえば、トリ、ウシ、ウマ、ヒト、ヒツジ、ブタ、サケ、マスまたはマグロの成長ホルモン、好ましくは、ウシ、ヒトまたはブタ成長ホルモンでよく、ヒト成長ホルモンが最も好ましい。本発明に従って用いられる成長ホルモンは天然源から、たとえば、慣用の方法で脳下垂体から抽出により単離された未変性の成長ホルモンまたは組換え技術、たとえば、イー・ビー・ジェンセン及びエス・カールソン「Biotech and Bioeng.」第36巻第１〜11頁（1990年）に記載されているような技術により産生された成長ホルモンであり得る。「成長ホルモン誘導体」は、１または２以上のアミノ酸残基が欠失している、端を切り取られた形の成長ホルモン、未変性の分子中の１または２以上のアミノ酸が他のアミノ酸残基、好ましくは天然のアミノ酸残基により置換されているそれらの類似体であって、その置換がいかなる悪影響、たとえば、抗原性または低下した作用を有しないもの、またはそれらの誘導体、たとえば成長ホルモンの脱アミド化形もしくはスルホキシド化形またはＮ−もしくはＣ−末端延長、たとえば、Met-hGH、Met-Glu-Ala-Glu-hGHもしくはAla-Glu-hGHを有する形であり得る。好ましい成長ホルモンはhGHである。成長ホルモンは、直接に発酵ブロスから得られた濃縮物または適当な溶媒に溶解されている慣用の凍結乾燥された製剤であり得る。
用語「ヒスチジンの誘導体」は、この目的のためには、ヒスチジンのアミド及びエステル、たとえばメチルまたはエチルエステル、ジペプチド、たとえば、His-Gly、His-Ala、His-Leu、His-Lys、His-Ser、His-Phe及びジペプチド、たとえば、Ala-His、Gly-His、Val-His、Glu-His、Met-His、Arg-His、Asp-His、Leu-His、Ser-His並びにHisの類似体または誘導体、たとえば、イミダゾール、脱アミノ−Hisまたはポリ−Hisを呼ぶのに用いられる。
この明細書の文脈では、「非イオン洗浄剤」または「非イオン界面活性剤」は、ポリソルベート、たとえば、ポリソルベート20または80等、及びポロキサマー、たとえば、ポロキサマー188または407、Pluronic（登録商標）、ポリオール及び他のエチレン／ポリプロピレンポリマー等であり得る。安定で水性の配合物を与えるのに有効な量は、通常、成長ホルモン１mg当り約0.01〜約10mgの洗浄剤、好ましくは成長ホルモン１mg当り約0.05〜約５mgの洗浄剤、より好ましくは成長ホルモン１mg当り約0.1〜約２mgの洗浄剤の範囲で用いられるだろう。
非イオン洗浄剤を用いると、タンパク質の変性を引き起こさずに、剪断応力及び表面応力にさらすことができる。
配合物中の非イオン洗浄剤の量は成長ホルモン１mg当り0.01〜約10mgの洗浄剤、好ましくは成長ホルモン１mg当り0.05〜約５mgの洗浄剤、最も好ましくは成長ホルモン１mg当り0.1〜約２mgの洗浄剤の範囲で用いることができる。
本明細書の文脈では、「二糖類」は、天然の二糖類、たとえば、スクロース、トレハロース、マルトース、ラクトース、セファロース、ツラノース、ラミナリビオース、イソマルトース、ゲンチオビオースまたはメリビオースを称するのに用いる。
本発明で用いられる少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含むペプチドは好ましくは天然のα−アミノ酸残基を含んでいる。このアミノ酸はＬ−アミノ酸もしくはＤ−アミノ酸またはそれらの混合物でよい。少なくとも１個の塩基性アミノ酸残基及び少なくとも１個の酸性アミノ酸残基を含む好ましくペプチドはLys-Gly-Asp-Serである。
本明細書の文脈では、「酸性アミノ酸残基」は、たとえば、GluまたはAspで、「塩基性アミノ酸残基」は、たとえば、LysまたはArgである。
本発明の方法で用いられる溶媒は、水、アルコール、たとえば、エチルアルコール、ｎ−プロピルアルコールもしくはイソプロピルアルコール、ブチルアルコールまたはそれらの混合物であり得る。微生物の増殖を遅延するために、溶媒は、防腐剤、たとえば、ｍ−クレゾール、フェノールまたはベンジルアルコールを含むことができる。
成長ホルモンの「１回分の服用量」という用語は、投与養生法において治療効果を与える量をいう。この配合物は、すぐに使える配合物で計算して、少なくとも約0.1mg／ml、好ましくは約１mg／mlを超え、好ましくは約１mg／ml〜約40mg／ml、より好ましくは約１mg／ml〜約25mg／ml、より好ましくは約１mg／ml〜約15mg／ml、たとえば１mg／ml〜約10mg／mlの量のhGHを含有するように調製される。下垂体性小人症にかかっているヒトに投与するのにこれらの組成物を用いるためには、たとえば、これらの配合物は、意図された治療のために最近期待された投与量養生法に相当する、約0.1mg／ml〜約10mg／mlを含有する。濃度範囲はこの発明には重要ではなく、投与を監督する医者により変化させることができる。
本発明の別の面は、前記疾患を治療するのに有効な量の本発明の医薬配合物を用いて患者を治療することを含む、成長ホルモンにより影響を受けることができる患者を治療する方法に関する。
本発明を説明する下記の例において、本発明をもっと詳細に説明する。それらは、添付の請求の範囲により定義される本発明の範囲を制限するものと考えるべきではない。
実験の部
例  １
凝集の抑制
hGHの液体配合物をhGHを補形剤の溶液に溶解させ、HCl／NaOHを用いてpHを調整することにより調製した。配合物の組成は、
hGH                     ５mg／ml
マンニトール            45mg／ml
Ｌ−ヒスチジン          0.62mg／ml
フェノール              2.5mg／ml
界面活性剤              ｘmg／ml
pH＝ｙ（6.1〜6.8）
であった。
溶液の外観を、それぞれ、溶液を８℃で１日貯蔵させた後及び25℃で19時間（20rpm）で回転させた後に視覚で調べた。
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例  ２
脱アミド化の速度
下記の表にした８つの配合物を補形剤を含有する溶液にhGHを加えることにより調製した。pHを6.1に調整した。次にその製剤を25℃で28日間及び37℃で14日間置き、hGHの脱アミド化形の生成について分析した。脱アミド化の速度定数を安定性のデータに基づいて計算した。下表において、hGH及び補形剤の量はmg／mlで示され、速度定数ｋ25℃及びｋ37℃は１日当りで示されている。
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例  ３
脱アミド化形の生成
下表の配合物を補形剤を含有する溶液にhGHを加え、pHを調整することにより調製した。次に製剤を８℃及び25℃で３ケ月置き、hGHの脱アミド化形の生成について分析した。
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例  ４
下記処方から24の配合物を調製した。
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補形剤の溶液に、hGHを加えることにより配合物を調製した。pHを6.8に調整した。配合物を25℃に４週間保ち、次いで溶液の透明性を340nmでの吸収として測定した。340nmでの吸収は溶液中の集合体の程度を示す。
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参考文献
1） Y.-C.J. Wang及びM.A. Hanson．タンパク質及びペプチドの非経口配合物：安定性及び安定剤「J. Parenteral Science and Technology」42（増補）（1988）53-525.
2） M.C. Manning, K. Patel, R.T. Borchardt．タンパク質医薬の安定性「Pharmaceutical Research」6（11）（1989）903-918.
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