(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
複数の多孔質中空繊維が配列された薄片であって、それら多孔質中空繊維の中空部には核酸が固定されているゲルが保持されており、複数の多孔質中空繊維が配列された配列体を繊維軸と交差する方向に切断することにより得られた、前記薄片。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、臨床検査、食品検査等の分野などに利用できる核酸が固定化された高分子材料に関する。詳しくは、多孔質中空繊維の中空部及び多孔質部に核酸固定化ゲルが保持された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維並びに該多孔質中空繊維配列体及びその薄片に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、各種生物におけるゲノムプロジェクトが進められており、ヒト遺伝子をはじめとして、多数の遺伝子とその塩基配列が急速に明らかにされつつある。 配列の明らかにされた遺伝子の機能については、各種の方法で調べることができるが、その有力な方法の一つとして、明らかにされた塩基配列情報を利用した遺伝子発現解析が知られている。例えば、ノーザンハイブリダイゼーションに代表されるような、各種の核酸：核酸間ハイブリダイゼーション反応や各種のPCR反応を利用した方法が開発され、当該方法により各種遺伝子とその生体機能発現との関係を調べることができる。しかしながら、これらの方法では適用し得る遺伝子の数に制限がある。したがって、今日のゲノムプロジェクトを通して明らかにされつつあるような、一個体レベルという極めて多数の遺伝子から構成される複雑な反応系全体からみると、上記方法により遺伝子の総合的・系統的解析を行うことは困難である。
【０００３】
最近になって、多数遺伝子の一括発現解析を可能とするＤＮＡマイクロアレイ法（ＤＮＡチップ法）と呼ばれる新しい分析法、ないし方法論が開発され、注目を集めている。
【０００４】
これらの方法は、いずれも核酸：核酸間ハイブリダイゼーション反応に基づく核酸検出・定量法である点で原理的には従来の方法と同じであるが、マイクロアレイ又はチップと呼ばれる平面基盤片上に、多数のＤＮＡ断片が高密度に整列固定化されたものが用いられている点に大きな特徴がある。マイクロアレイ法の具体的使用法としては、例えば、研究対象細胞の発現遺伝子等を蛍光色素等で標識したサンプルを平面基盤片上でハイブリダイゼーションさせ、互いに相補的な核酸（ＤＮＡあるいはＲＮＡ）同士を結合させ、その箇所を蛍光色素等でラベル後、高解像度解析装置で高速に読みとる方法が挙げられる。こうして、サンプル中のそれぞれの遺伝子量を迅速に推定できる。即ち、この新しい方法の本質は、基本的には反応試料の微量化と、その反応試料を再現性よく多量・迅速・系統的に分析、定量しうる形に配列・整列する技術との統合であると理解される。
【０００５】
核酸を基盤上に固定化するための技術としては、上記ノーザン法同様、ナイロンシート等の上に高密度に固定化する方法の他、更に密度を高めるため、ガラス等の基盤の上にポリリジン等をコーティングして固定化する方法、あるいはシリコン等の基盤の上に短鎖の核酸を直接固相合成していく方法などが開発されている。
【０００６】
しかし、例えば、ガラス等の固体表面を化学的又は物理的に修飾した基盤上に核酸をスポッティング固定化する方法[Science 270, 467-470(1995)]は、スポット密度でシート法より優れるものの、スポット密度及びスポット当たり固定できる核酸量がシリコン基盤上における直接合成法(U.S.Patent 5,445,934、U.S.Patent 5,774,305）と比較して少量であり、再現が困難である点が指摘されている。他方、シリコン等の基盤の上にフォトリソグラフィー技術を用い、多種の短鎖核酸をその場で規則正しく固相合成していく方法に関しては、単位面積当たりに合成しうる核酸種数（スポット密度）及びスポット当たりの固定化量（合成量）、並びに再現性等において、スポッティング法より優れるとされるものの、固定化しうる化合物種は、フォトリソグラフィーにより制御可能な比較的短鎖の核酸に限られる。さらに、高価な製造装置と多段の製造プロセスにより、チップ当たりの大きなコストダウンが困難とされる。その他、微小な担体上に核酸を固相合成しライブラリー化する手法として、微小なビーズを利用する方法が知られている。この方法は、チップ法より長鎖の核酸を多種・安価に合成することが可能であり、またｃＤＮＡ等より長鎖の核酸も固定可能と考えられる。しかしながら、チップ法と異なり、指定の化合物を指定の配列基準で再現性よく整列させたものを作製することは困難である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
このような状況下、鎖長によらず核酸を所定の濃度に固定化でき、測定可能な形に高密度に再現よく配列化可能で、安価な大量製造に適応しうる新たな体系的方法論の確立は、今後重要性を増すと考えられる遺伝子解析に強く求められるものであり、本発明が解決しようとする課題である。
【０００８】
具体的には、本発明が解決しようとする課題は、ナイロンシートやガラス基盤のような二次元担体上への微量スポッティングや微量分注による核酸配列体製造法に比べ、核酸固定化量が高く、単位面積あたり配列される核酸分子種の高密度化が可能で、大量生産により適した配列体、すなわち核酸が固定化された二次元的（平面的）配列体（固定化核酸二次元配列体という）の製造法の確立である。また、本発明が解決しようとする課題はシリコン基盤上へのフォトリソグラフィーと固相合成との組み合わせによる高密度オリゴ核酸配列体製造法と比べ、ｃＤＮＡを含む長鎖の核酸にも適応可能で、製造コストのより低い固定化核酸二次元配列体製造法の確立である。
そこで、本発明は、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維並びに核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体及びその薄片を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上述の如き課題を解決すべく、鋭意検討を重ねた結果、核酸整列化プロセスと固定化プロセスとを同一の二次元担体上で行う従来法の発想を改め、核酸の固定化プロセスを一次元構造体としての繊維上（1本の繊維上）に独立して行い、それらの整列化プロセスに各種の繊維賦形技術を導入することにより三次元構造体としての繊維束を作製し、得られる繊維束の切片化プロセスを経ることで、固定化核酸二次元高密度配列体を作製し得ることを見いだし、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、多孔質中空繊維の中空部及び多孔質部に核酸固定化ゲルが保持された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維である。
【００１０】
さらに、本発明は、前記核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の束を含む核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体である。該配列体中としては、例えば前記核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維が規則的に配列されたものが挙げられ、１ｃｍ2あたり１００本以上の繊維を含むものが挙げられる。また、上記配列体中に固定化された核酸の種類としては、各繊維の全部又は一部において異なるものが挙げられる。
さらに、本発明は、前記核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体の繊維軸と交差する切断面を有する、前記核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体の薄片である。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下本発明を詳細に説明する。
本発明の繊維は、核酸が固定化されたゲルを保持する中空繊維であって、該中空繊維が多孔質のもの（以下、「核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維」ともいう。）である。多孔質とは、繊維に無数に存在する空隙（隙間）を意味する。
【００１２】
本発明において、ゲルに固定化する対象となる核酸としては、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）やリボ核酸（ＲＮＡ）が挙げられる。本発明に用いる核酸は、市販のものでもよく、また、生細胞などから得られた核酸でもよい。
【００１３】
生細胞からのＤＮＡ又はＲＮＡの調製は、公知の方法、例えばＤＮＡの抽出については、Blinらの方法（ Blin et al., Nucleic Acids Res. 3: 2303 (1976)）等により、また、ＲＮＡの抽出については、Favaloroらの方法（ Favaloro et al., Methods Enzymol.65: 718 (1980) ）等により行うことができる。固定化する核酸としては、更に、鎖状若しくは環状のプラスミドＤＮＡや染色体ＤＮＡ、これらを制限酵素により若しくは化学的に切断したＤＮＡ断片、試験管内で酵素等により合成されたＤＮＡ、又は化学合成したオリゴヌクレオチド等を用いることもできる。
【００１４】
本発明に用いることができるゲルの種類は特に制限されないが、例えばアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−アクリロイルアミノエトキシエタノール、Ｎ−アクリロイルアミノプロパノール、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、ヒドロキシエチルメタクリレート、（メタ）アクリル酸、アリルデキストリン等の単量体の一種類または二種類以上と、メチレンビス（メタ）アクリルアミド、ポリエチレングリコールジ（メタ）アクリレート等との多官能性単量体を共重合したゲルを用いることができる。その他本発明において使用できるゲルとして、例えばアガロース、アルギン酸、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリエチレングリコール等のゲル、またはこれらを架橋したゲルを用いることができる。
【００１５】
本発明では、核酸をそのままゲルに固定化してもよく、また、核酸に化学的修飾を施した誘導体や、必要に応じて変成させた核酸を固定化してもよい。核酸のゲルへの固定化には、ゲルに物理的に包括する方法や、ゲル構成成分への直接的な結合を利用してもよく、核酸を一旦高分子体や無機粒子などの担体にに共有結合あるいは非共有結合により結合させ、その担体をゲルに固定化してもよい。
【００１６】
例えば、核酸の末端基にビニル基を導入し（WO98/39351）、アクリルアミド等のゲルの構成成分と共重合させることができる。共重合においては、単量体、多官能性単量体及び重合開始剤と共に共重合する方法、単量体及び重合開始剤と共に共重合したのち、架橋剤でゲル化する方法などがある。
【００１７】
また、アガロースを臭化シアン法でイミドカルボネート化しておき、末端アミノ化した核酸のアミノ基と結合させてからゲル化することもできる。この際、核酸固定化したアガロースと他のゲル（例えばアクリルアミドゲル等）との混合ゲルにしてもよい。
【００１８】
その他のゲル化方法としては、高分子粒子や無機粒子等の担体に核酸を結合し、該粒子を上述のゲルに包括固定化する方法が挙げられる。例えば、ビオチン化した核酸とアビジン化したアガロースビーズ（シグマ社製  アビジン化アガロース等）を反応させることによって、核酸が固定化されたアガロースビーズを得ることができる。核酸固定化アガロースビーズはアクリルアミドゲル等に包括固定化することができる。
【００１９】
また、ゲルや担体への結合においては、グルタルアルデヒドや１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド(EDC)等の架橋剤を用いて結合させることもできる。
【００２０】
核酸の一般的な化学的修飾としては、アミノ化、ビオチン化、ディゴキシゲニン化等が知られているが[Current Protocols In Molecular Biology, Ed.; Frederick M. Ausubel et al.(1990)、脱アイソトープ実験プロトコール(1)ＤＩＧハイブリダイゼーション（秀潤社）]、本発明ではこれらのいずれの修飾法も採用することができる。一例として、核酸へのアミノ基導入に関して説明する。
【００２１】
アミノ基を有する脂肪族炭化水素鎖と一本鎖核酸との結合位置は特に限定されるものではなく、核酸の５’末端または３’末端のみならず核酸の鎖中（例えば、リン酸ジエステル結合部位または塩基部位）であってもよい。この一本鎖核酸誘導体は、特公平3-74239号公報、米国特許4,667,025号、米国特許4,789,737号等に記載の方法にしたがって調製することができる。この方法以外にも、例えば、市販のアミノ基導入用試薬［例えば、アミノリンクII（商標名）； ＰＥバイオシステムズジャパン社、Amino Modifiers（商標名）；クロンテック社］などを用いて、又はＤＮＡの５’末端のリン酸にアミノ基を有する脂肪族炭化水素鎖を導入する周知の方法（Nucleic Acids Res.,11(18),6513-(1983) ）にしたがって調製することができる。
【００２２】
本発明において、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維として用いることができる多孔質中空繊維としては、多孔質中空繊維の中空部及び多孔質部に核酸固定化ゲルを固定化できるものであれば特に限定されるものではないが、合成繊維、半合成繊維、再生繊維、無機繊維のごとき化学繊維、及び天然繊維等が挙げられる。
【００２３】
合成繊維の代表例としては、ナイロン６、ナイロン６６、芳香族ポリアミド等のポリアミド系の各種繊維、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリ乳酸、ポリグリコール酸等のポリエステル系の各種繊維、ポリアクリロニトリル等のアクリル系の各種繊維、ポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフィン系の各種繊維、ポリビニルアルコール系の各種繊維繊維、ポリ塩化ビニリデン系の各種繊維、ポリ塩化ビニル系繊維、ポリウレタン系の各種繊維、フェノール系繊維、ポリフッ化ビニリデンやポリテトラフルオロエチレン等からなるフッ素系繊維、ポリアルキレンパラオキシベンゾエート系の各種繊維などが挙げられる。また、衣料用以外の、例えば、ポリメチルメタクリレートやポリスチレンなどの透明非晶質高分子を主材料とした光学繊維なども用いることができる。
【００２４】
半合成繊維の代表例としては、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、キチン、キトサン等を原料としたセルロース系誘導体各種繊維、プロミックスと呼称される蛋白質系の各種繊維などが挙げられる。
再生繊維の代表例としては、ビスコース法や銅−アンモニア法、或いは有機溶剤法によるセルロース系の各種再生繊維（レーヨン、キュプラ、ポリノジック等）などが挙げられる。
【００２５】
無機繊維の代表例としては、ガラス繊維、炭素繊維などが挙げられる。
天然繊維の代表例としては、綿、亜麻、苧麻、黄麻などの植物繊維、羊毛、絹などの動物繊維、石綿などの鉱物繊維などが挙げられる。
【００２６】
特に天然繊維以外の中空繊維は、特殊なノズルを用いて公知の方法で製造することができる。ポリアミド、ポリエステル、ポリオレフィン等は溶融紡糸法が好ましく、ノズルとしては馬蹄型やC型ノズル、２重環ノズルなどを使用することができる。本発明においては、連続した均一な中空部を形成させることができる点で２重環ノズルを用いるのが好ましい。
【００２７】
溶融紡糸ができない合成高分子、半合成繊維又は再生繊維に用いられる高分子の紡糸は溶剤紡糸が好ましく用いられる。この場合も、溶融紡糸と同じく２重環ノズルを用いて、中空部に芯材として適切な液体を充填しながら紡糸することにより連続した中空部を有する中空繊維を得ることができる。
本発明に用いる多孔質中空繊維は、溶融紡糸法又は溶液紡糸法に延伸法、ミクロ相分離法、抽出法などの公知の多孔化技術を組み合わせることにより得ることができる。
【００２８】
本発明に用いられる多孔質中空繊維の構造は、核酸が固定化されたゲルの充填が可能であれば特に制限はされないが、多孔質中空繊維の外表面から内表面まで孔が連通した三次元網目構造、フィブリル状のものにより構成された連通した孔を有する構造、指型構造、独立気泡構造、一部が連通した気泡構造であるものを用いることができ、特に三次元網目構造、フィブリル状のものにより構成される構造が好ましい。また、孔の大きさは、およそ0.01μm〜数十μm程度まで用いることができ、多孔質層の一表面から他表面にわたって均一の孔径であってもよいし、多孔質層の厚み方向に孔径の変化がある対称/非対称な傾斜構造を持つ多孔質体であってもよい。更に、その空孔率及び比表面積は、核酸を固定化したゲルをより強固に保持するという観点から、多孔質中空繊維としての取り扱い性を損なわない程度であれば、高いほど好ましい。
【００２９】
従って、市販されている精密ろ過、限外濾過を目的とした多孔質中空糸膜、多孔質な中空糸膜の外表面に無孔性の均質膜を被覆した逆浸透膜、ガス分離膜、多孔質層の中間に無孔性の均質層を挟んだ膜などを用いることができる。
【００３０】
いずれの場合も、高密度に核酸が固定化され多孔質中空繊維配列体の薄片を得るべく多孔質中空繊維を配列させるためには、多孔質中空繊維の外径は細い方が好ましい。本発明の好ましい実施態様においては、核酸の固定化は１cm2あたり１００以上の高密度であるが、これを達成するためには１本の多孔質中空繊維の外径はおよそ１mm以下であることが必要である。例えば、外径が500μm程度の多孔質中空糸膜を用いれば、１cm2あたり４００以上の核酸が固定化された多孔質中空繊維配列体の薄片を得ることができ、中空繊維紡糸技術を応用して外径が30μｍ程度の多孔質中空繊維を製造し、これを用いれば、１cm2あたり１０００００以上の核酸が固定化された多孔質中空繊維配列体の薄片を得ることが可能である。
【００３１】
本発明に用いる多孔質中空繊維は、そのまま用いてもよいが、核酸が固定化されたゲルとの親和性等を向上させるため、必要に応じて、反応性官能機を導入してもよく、また、プラズマ処理やγ線、電子線などの放射線による表面処理を施してもよい。
【００３２】
核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を作製する方法は、特に制限されるものではないが、例えば単量体、多官能性単量体、開始剤及び核酸または末端にビニル基を有する核酸を混合した液に多孔質中空繊維を浸し重合、ゲル化させる方法が挙げられる。また、単量体、多官能性単量体、開始剤及び高分子粒子や無機粒子等の担体に核酸を結合したものを混合した液に多孔質中空繊維を浸し重合、ゲル化させる方法が挙げられる。
【００３３】
その他に、単量体、開始剤及び末端にビニル基を有する核酸を共重合したものと架橋剤を混合した液に多孔質中空繊維を浸しゲル化する方法、単量体を開始剤で重合したもの、架橋剤および核酸または高分子粒子や無機粒子等の担体に核酸を結合した粒子を混合した液に多孔質中空繊維を浸しゲル化する方法、核酸を固定化したアガロース等を加熱溶解し、多孔質中空繊維を浸し、冷却ゲル化させる方法等が挙げられる。
【００３４】
また、上述の方法において、核酸等を含む液に多孔質中空繊維を浸漬する代わりに、該液を多孔質中空繊維の中空部及び多孔質部に注入又は吸引することにより充填した後ゲル化させてもよい。
多孔質中空繊維の中空部及び多孔質部に核酸が固定化されたゲルを固定する手順は、後述する多孔質中空繊維束となす前でもよいし、後でもよい。
【００３５】
上述の方法により得られた核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維は、ゲルが破壊されない限りにおいて適当な処理をすることができる。例えば、熱処理、アルカリ処理、界面活性剤処理などを行うことにより、固定化された核酸を変成させる。あるいは、細胞、菌体などの生材料から得られた核酸を使用する場合は、不要な細胞成分などを除去する。そして、処理後の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を核酸を検出する材料として用いることができる。なお、これらの処理は別々に実施してもよく、同時に実施してもよい。また、核酸を含む試料をゲルに固定化する前に実施してもよいし、核酸を含む試料をゲルに固定化した後、繊維に固定化する前に適宜実施してもよい。
【００３６】
上述の方法により得られた、核酸固定化ゲルがその中空部及び多孔質部に保持された多孔質中空繊維は、その中空部のみならず多孔質部までゲルが充填されることにより、核酸が固定化されたゲルと多孔質中空繊維との接触面積が大きく、複雑に入り組んだ形状となるなどのため、核酸が固定化されたゲルが強固に多孔質中空繊維に保持されることとなる。
【００３７】
上記の通り調製された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維は、本発明の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体を構成する基本単位とすることができる。そして、これらの核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を集束した後に接着して、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体となすことができる。この際、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を規則的に配列し、樹脂接着剤等で接着することにより、例えば、縦横に核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維が整然と規則的に配列した核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体を得ることができる。核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体の形状は特に限定されるものではないが、通常は、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を規則的に配列させることにより正方形又は長方形に形成される。
【００３８】
「規則的に」とは、一定の大きさの枠の中に含まれる核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の本数が一定となるように順序よく配列させることをいう。例えば、直径１ｍｍの核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を束にして断面が縦１０ｍｍ、横１０ｍｍの正方形となるように配列させようとする場合は、その正方形の枠内（１ｃｍ2）における１辺に含まれる核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の数を10本とし、この10本の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を1列に束ねて1層のシートとした後、このシートが10層になるように重ねる。その結果、縦に10本、横に10本、合計100本の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を配列させることができる。但し、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維を規則的に配列させる手法は、上記のようにシートを重層するものに限定されるものではない。
【００３９】
この場合に、特定の核酸が固定化された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の位置があらかじめ決められた状態で配列することが望ましいが、必ずしもそのように配列させる必要はない。その理由は、配列体を形成した段階では特定の核酸を固定化した核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維がどの位置に存在するのかが不明でも、配列体の断面を切断した後、一旦ハイブリダイゼーション手法等を用いて断面における核酸の配置位置を決定することにより、特定の核酸が固定された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の位置を確認することができるためである。従って、この手法を用いて、一度、薄片内に配置された複数種類の核酸の位置を決定しておけば、同一配列体から得られる薄片はすべて同一の位置配置であるので、同一配列体から得られるすべての薄片の核酸の位置配置がわかる。
【００４０】
なお、本発明において束にする多孔質中空繊維の本数は１００本以上、好ましくは１,０００〜１０,０００,０００本であり、目的に応じて適宜設定することができる。但し、配列体における多孔質中空繊維の密度が、１ｃｍ2当たり１００〜１,０００,０００本となるように調製することが好ましい。そして、高密度に核酸が固定化された繊維配列体の薄片を得るべく多孔質中空繊維を配列させるためには、多孔質中空繊維の太さは細い方が好ましい。本発明の好ましい実施態様においては、多孔質中空繊維１本の太さは１ｍｍ以下であることが必要である。
【００４１】
ゲルに固定化されている核酸の種類は、配列体中の各繊維ごとにそれぞれ異なるものとすることが可能であり、また、同一の核酸が固定化された繊維から任意の本数の繊維を選択し、その選択された繊維を束ねて適宜配列させることも可能である。即ち、本発明によれば、固定化された核酸の種類と配列の順序に関しては、目的に応じて任意に設定することが可能である。
【００４２】
本発明においては、上記の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体を繊維軸と交差する方向、好ましくは繊維軸に対して垂直方向に切断することにより、核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体断面を有する薄片を得ることができる。この際の切断方法としては、例えば、ミクロトームを用いて配列体から薄片を切り出す方法等が挙げられる。薄片の厚みは任意に調整することができるが、通常１〜５,０００μｍ、好ましくは１０〜２,０００μｍである。
【００４３】
得られた核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体断面を有する薄片には、該配列体を構成する核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の数に応じた核酸が存在する。薄片の断面積あたりの核酸の数に関しては、用いる核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維の外径や配列体作製時の方法等を適宜選択することにより、薄片断面積１ｃｍ2あたり１００以上、更には１０００以上の核酸が固定化された薄片を作製することも可能である。
【００４４】
これら薄片は、固定化された核酸をプローブとして、検体と反応させてハイブリダイゼーションを行うことにより、検体中の特定の塩基配列を有する核酸の検出に用いることができる。本発明で言うプローブとは、検出すべき遺伝子の塩基配列に相補的な塩基配列を有する核酸を指す。即ち、本発明の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体断面を有する薄片を検体と反応させてハイブリダイゼーションを行い、プローブと相補的な検体中に存在する核酸とのハイブリッドを形成させ、このハイブリッドを検出することにより、目的とする塩基配列を有する検体中の核酸を検出することができる。
【００４５】
ハイブリッドの検出には、ハイブリッドを特異的に認識することができる公知の手段を用いることができる。例えば、検体中の核酸に、蛍光物質、発光物質、ラジオアイソトープなどの標識体を作用させ、この標識体を検出することができる。これら標識体の種類や標識体の導入方法等に関しては、何ら制限されることはなく、従来公知の各種手段を用いることができる。
【００４６】
これら薄片は、固定化された核酸をプローブとして、検体と反応させてハイブリダイゼーションを行うことにより、検体中の特定の塩基配列を有する核酸の検出に用いることができる。本発明で言うプローブとは、狭義には検出すべき遺伝子の塩基配列に相補的な塩基配列を有する核酸を指す。即ち、本発明の核酸固定化繊維配列体断面を有する薄片を検体と反応させてハイブリダイゼーションを行い、プローブと相補的な検体中に存在する核酸とのハイブリッドを形成させ、このハイブリッドを検出することにより、目的とする塩基配列を有する検体中の核酸を検出することができる。また、本発明で言うプローブとは、広義には検体中に存在するするタンパク質や低分子化合物等と特異的に結合することができる核酸を指す。従って、これらの薄片の利用法としては、固定化された核酸（プローブ）とハイブリッドを形成する核酸を検出するための利用に留まらず、固定化された核酸と特異的に結合するタンパク質や低分子化合物等の各種試料（例えば生体成分等）を検出するための利用が挙げられる。
【００４７】
固定化された核酸とハイブリッドを形成する核酸や、固定化された核酸と特異的に結合する各種生体成分の検出には、公知の手段を用いることができる。例えば、検体中の核酸、タンパク質又は低分子化合物等に、蛍光物質、発光物質、ラジオアイソトープなどの標識体を作用させ、この標識体を検出することができる。これら標識体の種類や標識体の導入方法等に関しては、何ら制限されることはなく、従来公知の各種手段を用いることができる。
【００４８】
【実施例】
本発明を以下の実施例により更に詳細に説明する。但し、本発明はこれら実施例によりその技術的範囲が限定されるものではない。
〔参考例〕
(a) 5’末端にアミノ基あるいはビオチンを有するオリゴヌクレオチドの調整
以下に示したオリゴヌクレオチド（プローブＡ、プローブＢ）を合成した。
プローブＡ:GCGATCGAAACCTTGCTGTACGAGCGAGGGCTC（配列番号１）
プローブＢ:GATGAGGTGGAGGTCAGGGTTTGGGACAGCAG（配列番号２）
【００４９】
オリゴヌクレオチドの合成はＰＥバイオシステムズ社の自動合成機DNA/RNA synthesizer (model394)を用いて行い、ＤＮＡ合成の最終ステップで、アミノリンクII（商標名）（アプライドバイオシステム社）を用いてそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’未端にＮＨ2（ＣＨ2）6−を導入しアミノ化したプローブを、およびビオチンアミダイトを用いてビオチン化したプローブを調製した。これらは、一般的手法により脱保護及び精製して使用した。
【００５０】
(b)核酸の標識
試料核酸のモデルとして、(a)で合成したオリゴヌクレオチド（プローブＡ、プローブＢ）の配列の一部に相補的なオリゴヌクレオチド（Ｃ、Ｄ）を合成した。
オリゴヌクレオチド Ｃ： GAGCCCTCGCTCGTACAGCAAGGTTTCG（配列番号３）オリゴヌクレオチド Ｄ： CTGCTGTCCCAAACCCTGACCTCCACC（配列番号４）これらのオリゴヌクレオチドの5'末端を、(a)と同様にしてアミノリンクII（商標名）（ＰＥバイオシステムズジャパン社）を用いてそれぞれのオリゴヌクレオチドの５’未端にＮＨ2（ＣＨ2）6−を導入した後、以下のようにしてディゴキシゲニン(DIG: Digoxigenin、ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社)で標識した。
【００５１】
末端アミノ化されたオリゴヌクレオチドをそれぞれ100 mMホウ酸緩衝液(pH8.5)に終濃度2 mMになるように溶かした。等量のDigoxigenin-3-O-methylcarbonyl-ε-aminocapronic acid-N-hydroxy-succinimide ester (26mg/mlジメチルホルムアミド溶液)を加え、室温にて一晩静置した。
【００５２】
静置後の溶液の量を100μlに調整し、2μlのグリコーゲン（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社）、10μlの3M酢酸ナトリウム(pH5.2)、300μlの冷エタノールを加え、15,000rpm 15分の遠心により沈殿を回収した。沈殿に500μlの70%エタノールを加え15,000rpm 5分の遠心により沈殿を再びチューブの底に集めた。沈殿を風乾し、100μlの10 mM Tris-HCl (pH7.5),1 mM EDTAに溶かした。
このようにして得られたDIG標識オリゴヌクレオチドを核酸の標識モデルとして用いた。
【００５３】
〔実施例１〕多孔質中空繊維の作製
以下の組成からなる水溶液Ａを調整し、この水溶液Ａに無孔質な中間層を有するポリエチレン製多孔質中空糸膜MHF200TL(三菱レイヨン株式会社製，外径290μm，内径200μm)を浸した後、内部が水蒸気で飽和された密閉ガラス容器に移し、８０℃で４時間放置することにより重合反応を行った。
【００５４】
得られた多孔質中空糸膜の中空部及び無孔質な中間層よりも内側の多孔質層にはオリゴヌクレオチド(プローブＡまたはプローブＢ)がビオチン−アビジン結合を介して固定化されたゲルが保持されていた（図１）。図１において、(1)はプローブＡがゲルに固定化された核酸固定化ゲルを保持する多孔質中空繊維を、(2)はプローブＢがゲルに固定化された核酸固定化ゲルを保持する多孔質中空繊維を示す。
【００５５】
水溶液Ａ
アクリルアミド                                        3.7    質量部
メチレンビスアクリルアミド                            0.3    質量部
2,2'-アゾビス（2-アミジノプロパン）二塩酸塩           0.1    質量部
ビオチン化オリゴヌクレオチド                          0.005  質量部
（プローブＡまたはプローブＢ）
アビジン化アガロース（６％）懸濁液                    1.0    質量部
【００５６】
〔実施例２〕多孔質中空繊維配列体の作製
実施例１により得たプローブＡ固定化ゲルを保持する多孔質中空繊維20本を、テフロン板上に互いに重なることなく密着させて配列し両端を固定した。これにポリウレタン樹脂接着剤(日本ポリウレタン工業(株)コロネート4403,ニッポラン4223)を薄く塗布し、核酸固定化多孔質中空繊維を接着した。ポリウレタン樹脂が十分に固まった後これをテフロン板上から剥がし、核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維が一列に配列したシート状物を得た。
【００５７】
一方、プローブＢ固定化ゲルを保持する多孔質中空繊維についても同様の操作によりシート状物を得た。
次いで、これらのシート状物を図１(3)の配列となるように20枚積層し、上記接着剤で接着し、縦横各々20本ずつ、計400本の核酸固定化多孔質繊維が正方に規則的に配列した、核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維配列体を得た（図１(3)）。
【００５８】
〔実施例３〕  核酸固定化薄片の作製及び核酸の検出
実施例２で得た２種のオリゴヌクレオチド(プローブＡ及びＢ)を含む核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維配列体を、ミクロトームを用いて0.1mmの厚さに切り出し、縦横各20本ずつ計400本の核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維の断面が規則的に配列した薄片を得た（図１(4)）。この薄片には１cm2あたり約1100となる密度で核酸が固定化されていた。
【００５９】
この２種のオリゴヌクレオチド(プローブＡ及びプローブＢ)を含む核酸固定化薄片をハイブリダイゼーション用バッグに入れ、以下の組成からなるハイブリダイゼーション溶液を注ぎ込み、45℃で30分間プレハイブリダイゼーションを行った。
【００６０】
0004108891.tif 000002
【００６１】
続いて、(b)により得たDIG標識オリゴヌクレオチドＣを加え、45℃で15時間ハイブリダイゼーションを行った。
ハイブリダイゼーション終了後、核酸固定化薄片をあらかじめ保温しておいた50mlの0.1 x SSC、 0.1% SDS溶液に移し、振盪しながら45℃、20分間の洗浄を３回行った。
【００６２】
DIG緩衝液１を加え、室温で振盪しながらSDSの除去を行った。これを再度繰り返した後、DIG緩衝液２を加え１時間振盪した。緩衝液を除いた後、DIG緩衝液２に10000分の１量の抗DIGアルカリフォスファターゼ標識抗体溶液を加えた溶液10mlを加え、30分間ゆっくり振盪させることにより抗原抗体反応を行わせた。次に0.2% Tween 20を含むDIG緩衝液１で15分間２回振盪することにより洗浄し、引き続き DIG緩衝液３に３分間浸した。 DIG緩衝液３を除いた後、AMPPDを含むDIG緩衝液３mlを加え10分間平衡化した。
【００６３】
水分をきり、新しいハイブリダイゼーション用バッグに移し、37℃で１時間静置した後、X線フィルム用のバインダーにX線フィルムとともに挟みフィルムを感光させた。
【００６４】
DIG緩衝液１：0.1mol/lマレイン酸、0.15mol/l塩化ナトリウム(pH7.5)
DIG緩衝液２：緩衝液１に0.5%濃度でブロッキング試薬を添加したもの
DIG緩衝液３：0.1mol/lトリス−塩酸(pH9.5)、0.1mol/l塩化ナトリウム、0.05mol/l塩化マグネシウム
【００６５】
ブロッキング試薬、抗DIGアルカリフォスファターゼ標識抗体溶液および AMPPDはDIG Detectionキット（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社)中の試薬である。
上記オリゴヌクレオチドを用いたハイブリダイゼーションと同様の操作をオリゴヌクレオチドＤに対しても行った。
【００６６】
その結果、核酸固定化薄片中のプローブＡを固定化した多孔質繊維断面部にのみオリゴヌクレオチドＣが、プローブＢを固定化した多孔質繊維断面部にのみオリゴヌクレオチドＤが特異的にハイブリダイゼーションしていることが確認できた。
【００６７】
〔実施例4〕 核酸固定化薄片の作製及び核酸の検出
（１）染色体DNAの調製
ロドコッカス・ロドクロウスJ1株を栄養培地(グルコース15ｇ、酵母エキス1ｇ、グルタミン酸ナトリウム10ｇ、KH2PO4 0.5g,K2HPO4 0.5g,MgSO4・7H2O 0.5g/L pH7.2)100mlで30℃、3日培養し、集菌した。この菌体から染色体DNAを調製し、PCRの鋳型に用いた。なお、ロドコッカス・ロドクロウスJ1株はFERM BP-1478として工業技術院生命工学工業技術研究所（茨城県つくば市東1丁目1番3号）に寄託されている。
【００６８】
（２）プローブの作製
プローブ作製のために合成したオリゴヌクレオチドの位置を、図２に示した。オリゴヌクレオチドＡ（配列番号１）はオリゴヌクレオチドＢ（配列番号２）の約400塩基上流に位置しており、オリゴヌクレオチドＥ（配列番号5）はオリゴヌクレオチドＡから400塩基、オリゴヌクレオチドＦ（配列番号６）はオリゴヌクレオチドＢから600塩基下流に位置している。
オリゴヌクレオチドＥ：GCTCAAGCGC GATTTCGGTT TCGACATCCC C（配列番号５）
オリゴヌクレオチドＦ：CATGTCGCGT CGTTGTTGGA CGAAGCGGTA（配列番号６）
【００６９】
オリゴヌクレオチドＡ、Ｂの5’末端をアクリルアミド修飾(WO98/39351)したオリゴヌクレオチド（5’末端にアクリルアミドが結合したオリゴヌクレオチド）（和光純薬に委託合成）を合成し、PCRに使用した。
【００７０】
PCRは、一方のプライマーを他方の過剰量存在させるAsymmetric PCRを行い、プライマー濃度を5’アクリルアミド修飾オリゴヌクレオチドＡ：オリゴヌクレオチドＥ=100：1又は5’アクリルアミド修飾オリゴヌクレオチドＢ：オリゴヌクレオチドＦ=100：1に調製した。その他の条件はEx-Taq(宝酒造)の仕様書に従い、TaKaRa PCR Thermal Cycler PERSONALを用いて行った。反応は100μｌで行い、温度条件は93℃ 30秒、65℃ 30秒、72℃ 2分を40サイクル行った。
このPCRによって約400（プローブＧ：配列番号7）、600塩基（プローブＨ：配列番号8）の５'アクリルアミド修飾されたプローブDNAを増幅した。
【００７１】
（３）核酸固定化薄片の作製
核酸固定化薄片は、実施例１〜３と同様にして作製した。ただし、核酸のゲルへの固定化には工程２で作製したアクリルアミド修飾されたプローブDNAを用いた。これに伴い、水溶液Aの組成は以下のように変更した。
【００７２】
水溶液Ａ
アクリルアミド                                   3.7質量部
メチレンビスアクリルアミド                       0.3質量部
2,2'-アゾビス（2-アミジノプロパン）二塩酸塩      0.1質量部
プローブＧ（またはプローブＨ）                   0.005質量部
【００７３】
得られた多孔質中空糸膜の中空部及び無孔質な中間層よりも内側の多孔質層にはプローブGまたはＨが固定化されたゲルが保持されていた。
こうして得られたプローブＧ固定化ゲルを保持する多孔質中空繊維５本を、フロン板上に互いに重なることなく密着させて配列し、両端を固定した。これにポリウレタン樹脂接着剤(日本ポリウレタン工業(株)コロネート4403、ニッポラン4223)を薄く塗布し、核酸固定化多孔質中空繊維を接着した。ポリウレタン樹脂が十分に固まった後これをテフロン板上から剥がし、核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維が一列に配列したシート状物を得た。プローブＨについても同様のものを得た。また、核酸を固定化していない同様のシート状物を作製した（ブランク）。
【００７４】
次いで、これらのシート状物をブランク、プローブＧ、ブランク、プローブＨ、ブランクの順に５枚積層し、上記接着剤で接着し、縦横各々５本ずつ、計２５本の核酸固定化多孔質繊維が正方に規則的に配列した、核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維配列体を得た。
【００７５】
（４）蛍光標識検体の作製
プローブＧのみにハイブリダイズする検体の作製には、オリゴヌクレオチドＥとオリゴヌクレオチドＡを用いてPCRを行い、約400塩基の検体Ｉを調製した。
プローブＨのみにハイブリダイズする検体の作製には、オリゴヌクレオチドＦとオリゴヌクレオチドＢを用いてPCRを行い、約600塩基の検体Ｊを調製した。
【００７６】
検体を蛍光標識するために、オリゴヌクレオチドE、Fの5’末端がCy5でラベルされたもの（Cy5-オリゴヌクレオチドＥ、Cy5-オリゴヌクレオチドＦ）を合成し（アマシャムファルマシアバイオテク社、OlidoExpress）、PCRに使用した。PCRは、プライマー濃度をCy5-オリゴヌクレオチドＥ：オリゴヌクレオチドA=100：1又はCy5-オリゴヌクレオチドＦ：オリゴヌクレオチドＢ=100：1に調製し、その他はEx-Taq(宝酒造)の仕様書に従い、TaKaRa PCR Thermal Cycler PERSONALを用いて行った。反応は100μｌで行い、温度条件は93℃ 30秒、65℃ 30秒、72℃ 2分を40サイクル行った。このPCRによって約400（検体Ｉ：配列番号9）、600塩基（検体Ｊ：配列番号10）のDNAを増幅した。
【００７７】
反応終了液はSUPEC-02(宝酒造)を用いて未反応プライマーを除き、GFX PCR DNA and Gel Band Purification Kit（アマシャムファルマシアバイオテク）によって回収した。
【００７８】
（５）ハイブリダイゼーション
上記工程（３）で得た核酸固定化薄片をハイブリダイゼーション用バッグに入れ、ハイブリダイゼーション溶液を注ぎ、45℃で30分間プレハイブリダイゼーションを行った。続いて、蛍光標識検体を加え、さらに45℃で15時間ハイブリダイゼーションを行った。
【００７９】
ハイブリダイゼーション終了後、核酸固定化薄片をあらかじめ保温しておいた50mlの0.1xSSC、0.1% SDS溶液に移し、振盪しながら45℃、20分間の洗浄を３回行った。この後、0.5xSSCに置換し、蛍光検出器（蛍光顕微鏡）で観察した。
その結果、核酸固定化薄片中のプローブＧを固定化した多孔質繊維断面部にのみ検体Ｉが、プローブＨを固定化した多孔質繊維断面部にのみ検体Ｊが特異的にハイブリダイゼーションしていることが確認できた。
【００８０】
〔実施例5〕 核酸固定化薄片の作製及び核酸の検出
（１）酵母（JCM7255）染色体DNAの調製
Saccharomyces cerevisiae(JCM7255)をYPD培地(グルコース20ｇ、酵母エキス10ｇ、ポリペプトン20ｇ/L pH6.0)100mlで30℃、1日培養し、集菌した。この菌体から染色体DNAを調製し、PCRの鋳型に用いた。
【００８１】
（２）プローブの作製
酵母遺伝子群から任意に４種のオープンリーディングフレーム(ORF)を選び、そのORFをPCRで増幅した。4種のプローブ（配列番号11、12、13、14）とPCRに使用したオリゴの関係を表１に示した。オリゴヌクレオチドのうちオリゴO、P、Q、Rは、5’末端をアクリルアミド修飾したオリゴヌクレオチドであり、合成により得た（製造は和光純薬に委託）。PCRは、一方のプライマーを他方の過剰量存在させるAsymmetric PCRを行い、プローブＫを増幅する場合は、プライマー濃度を5’アクリルアミド修飾オリゴヌクレオチドO：オリゴヌクレオチドP=100：1に調製した。その他の条件はEx-Taq(宝酒造)の仕様書に従い、TaKaRa PCR Thermal Cycler PERSONALを用いて行った。反応は100μｌで行い、温度条件は93℃ 30秒、65℃ 30秒、72℃ 2分を40サイクル行った。このPCRによって約600（プローブＫ：配列番号11）の５’アクリルアミド修飾されたプローブDNAを増幅した。同様の方法で、プローブＬ、Ｍ、Ｎを調製した。
【００８２】
（3）核酸固定化薄片の作製
核酸固定化薄片は、実施例１〜３と同様にして作製した。ただし、核酸のゲルへの固定化には工程２で作製したアクリルアミド修飾されたプローブDNAを用いた。これに伴い、水溶液Aの組成は以下のように変更した。
【００８３】
水溶液Ａ
アクリルアミド                                   3.7質量部
メチレンビスアクリルアミド                       0.3質量部
2,2'-アゾビス（2-アミジノプロパン）二塩酸塩      0.1質量部
プローブＫ（またはプローブＬ，Ｍ，Ｎ）           0.005質量部
【００８４】
こうして得られたプローブＫ固定化ゲルを保持する多孔質中空繊維7本を、フロン板上に互いに重なることなく密着させて配列し、両端を固定した。これにポリウレタン樹脂接着剤(日本ポリウレタン工業(株)コロネート4403、ニッポラン4223)を薄く塗布し、核酸固定化多孔質中空繊維を接着した。ポリウレタン樹脂が十分に固まった後これをテフロン板上から剥がし、核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維が一列に配列したシート状物を得た。プローブＬ、Ｍ、Ｎについても同様のものを得た。また、核酸を固定化していない同様のシート状物を作製した（ブランク）。
【００８５】
次いで、これらのシート状物をブランク、プローブＫ、プローブＬブランク、プローブＮ、プローブＭ、ブランクの順に7枚積層し、上記接着剤で接着し、縦横各々7本ずつ、計49本の核酸固定化多孔質繊維が正方に規則的に配列した、核酸固定化ゲルを保持した多孔質中空繊維配列体を得た。
【００８６】
（４）蛍光標識検体の作製
それぞれのプローブにのみハイブリダイズする検体Ｗ（配列番号23）及びＺ（配列番号26）はオリゴヌクレオチドの5’末端がCy5でラベルされたものを、検体Ｘ（配列番号24）及びＹ（配列番号25）は5’末端がCy3でラベルされたものを合成（アマシャムファルマシアバイオテク社、OlidoExpress）し、用いた。
【００８７】
（５）ハイブリダイゼーション
工程３で得た核酸固定化薄片をハイブリダイゼーション用バッグに入れ、ハイブリダイゼーション溶液を注ぎ、45℃で30分間プレハイブリダイゼーションを行った。続いて、蛍光標識検体を加え、さらに45℃で15時間ハイブリダイゼーションを行った。
【００８８】
ハイブリダイゼーション終了後、核酸固定化薄片をあらかじめ保温しておいた50mlの0.1xSSC、0.1% SDS溶液に移し、振盪しながら45℃、20分間の洗浄を３回行った。この後、0.5xSSCに置換し、蛍光検出器（蛍光顕微鏡）で観察した。
【００８９】
その結果、核酸固定化薄片中のプローブＫを固定化した多孔質繊維断面部にのみ検体Ｗが、プローブＬを固定化した多孔質繊維断面部にのみ検体Ｘが、プローブＭを固定化した多孔質繊維断面部にのみ検体Ｙが、プローブＮを固定化した多孔質繊維断面部にのみ検体Ｚが、特異的にハイブリダイゼーションしていることが確認できた。
【００９０】
【表１】
0004108891.tif 000003
【００９１】
【発明の効果】
本発明により、核酸を高密度かつ強固に固定化させた核酸固定化高分子材料を得ることが可能となる。また、固定化プロセスを二次元平面上で行わず、一次元構造体としての繊維上にで分離・独立して行うことにより、鎖長によらず核酸の定量的固定が可能となったこと、整列化プロセスに各種の繊維賦形技術、ないし織物作製技術の導入により高密度化が可能となったこと、その結果得られる選られる三次元構造体としての繊維束から目的とする二次元配列体を作製するために従来法にはない切片化プロセスが新たに導入されたが、それに伴いスポッティング法のような誤差の多い微量分注操作が不要となり、連続切片化を可能としたことにより、わずかな面積に多種多数の核酸を固定化した薄片を多量にまた容易に得ることができる。これにより、遺伝子構造解析等を用いた臨床検査や、食品検査等の分野において有用である。
【００９２】
【配列表】
0004108891.tif 000004
0004108891.tif 000005
0004108891.tif 000006
0004108891.tif 000007
0004108891.tif 000008
0004108891.tif 000009
0004108891.tif 000010
0004108891.tif 000011
0004108891.tif 000012
0004108891.tif 000013
0004108891.tif 000014
0004108891.tif 000015
0004108891.tif 000016
【００９３】
【配列表フリーテキスト】
配列番号１：合成DNA
配列番号２：合成DNA
配列番号３：合成DNA
配列番号４：合成DNA
配列番号５：合成DNA
配列番号６：合成DNA
配列番号15：5’末端にアクリルアミドが結合した合成DNA
配列番号16：5’末端にアクリルアミドが結合した合成DNA
配列番号17：5’末端にアクリルアミドが結合した合成DNA
配列番号18：5’末端にアクリルアミドが結合した合成DNA
配列番号23：5’末端がCy5でラベルされた合成DNA
配列番号24：5’末端がCy3でラベルされた合成DNA
配列番号25：5’末端がCy3でラベルされた合成DNA
配列番号26：5’末端がCy5でラベルされた合成DNA
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維並びに核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体及びその薄片の模式図である。
(1)はプローブＡが固定化された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維、(2)はプローブＢが固定化された核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維、(3)はこれら２種の核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維からなる核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体、及び(4)はこの核酸固定化ゲル保持多孔質中空繊維配列体を繊維軸に対して垂直方向に切断した断面を示す。
【図２】プローブ作製のために合成したオリゴヌクレオチドの位置を示す図である。
【図１】
0004108891.tif 000017
【図２】
0004108891.tif 000018