(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リポ蛋白質をポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法で電気泳動を行い濃度図を作成し、脂質正常者に出現するＶＬＤＬとＨＤＬを脂質異常者の濃度図のＶＬＤＬとＨＤＬのそれぞれのピーク位置が一致するように重ねあわせてＶＬＤＬ、ＬＤＬ、ＨＤＬの濃度差及びそれらの相対移動度が分かるように構成された分析法においてＶＬＤＬのピーク位置を０としＨＤＬのピーク位置を１としたとき、脂質異常者のＩＤＬ、ＬＤＬ、ＳｍａｌｌＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）の相対移動度を求め、脂質正常者のＬＤＬより移動度が早くかつ相対移動度が０．４以上の部分を小粒子ＬＤＬとし、ＬＤＬより移動度が遅く相対移動度が０．２近辺とする部分をＩＤＬとし表示区分することを特長とするリポ蛋白質の検体検査方法
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】血液検査の結果は、臨床検査室や衛生検査所から医師に、また健診の結果などは直接患者に報告される事が多い。医師向けの検査結果は検査結果の羅列ばかりではなく、数字で表せないものは写真または図表でなされている。本願発明は、特に数字だけでの報告が難しい血液中のリポ蛋白質の電気泳動結果について、健常人と異なる部分をより強調し、かつ一定の判断基準に基づいたより分かりやすいリポ蛋白質の検体検査方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】従来より電気泳動などの検査結果は、電気泳動像の濃淡を光学的に読み取った波形とそれぞれの画分を面積比や蛋白濃度などで表現している。これら検査結果は、一般的に専門の医師により解読され、診断に活用されている。例えばポリアクリルアミドゲルを用いるヒトの血清中のリポ蛋白質のディスク電気泳動像による健常者の分離分析では、陰極側から超低比重リポ蛋白質（ＶＬＤＬ）と，低比重リポ蛋白質（ＬＤＬ）および高比重リポ蛋白質（ＨＤＬ）が存在する（参考文献１，２，３，４）。通常これらの言葉が一般の人には難しく周知されていない。
一般的には、そのリポ蛋白質中のコレステロールのみを言うことが多く、ＬＤＬ中のコレステロールは悪玉、ＨＤＬ中のコレステロールは善玉と言われている。実はＬＤＬコレステロールは、健常人では極正常の脂質の一部であり、これ全体が悪玉というのは間違っている。健常者の血液中には必ずリポ蛋白質のＶＬＤＬ，ＬＤＬ，ＨＤＬが粒子状態で存在し血液中を循環しており、脂質の栄養素やホルモンの原料として体の隅々まで運ばれ利用されている。
今までの電気泳動などの特殊分析結果は専門の医師向けにのみに行われており、リポ蛋白分画精密測定法についても波形と面積比の報告で十分診断の役に立っていたのである。【０００３】従来一般的な電気泳動像の結果は、完全な山の形をした部分または山の裾にこぶのようにくつついた部分で区切ってそれぞれの山としその部分の面積または面積比を算出していた。【０００４】最近、我が国でも生活習慣病という言葉が定着し、高血圧・糖尿病・高脂血症がその代表症例として認知されるに至っている。高血圧と糖尿病はそれぞれ血圧の測定、尿糖や血糖の測定のように患者自ら簡単に測定できるシステムが出来上がっている。反面高脂血症の測定については、現在患者自らこれを検査できるシステムはまだ存在しない。コレステロールの測定について最近、郵便健診という検査方式がコンビニエンスストアーでも売られるようになってきたが、専門の医師の間では、採血を伴う検査法についてその論理を知らない一般個人による採血の実施や濾紙採血によるコレステロール値の正確な測定は無理と言われている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】本願発明は、生活習慣病の１つである高脂血症について、前項に記載したようにＬＤＬ中のコレステロールが悪玉だという短絡的な概念が大衆に誤って認識されている点を、正しく認識してもらうと共に、その真の悪玉の存在を一般の人にも理解してもらうために、正確で分かりやすいリポ蛋白質の検体検査方法を提供するためになされた。
具体的に説明すると、動脈硬化の真の悪玉物質が何であるかは、動脈硬化やリポ蛋白質を専門にしている研究者や医師により下記参考論文等で既に報告されている。その要約を下記する。
コレステロール、中性脂肪などの脂質は水や血液には直接溶けないので必ずリポ蛋白質いわゆるＶＬＤＬ，ＬＤＬ，ＨＤＬのような粒子状で存在している。この状態のリポ蛋白質なら動脈硬化の原因物質にはならない。リポ蛋白質の代謝過程で何らかの要因でその代謝が停滞しＩＤＬ（ミッドバンド）やＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）などが蓄積するため動脈硬化を引き起こすと言われている。【０００６】              参考文献
１．  動脈硬化Ｖｏｌ．１５，１５６１，１９８８
２．  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｖｏｌ．１４，ｎｏ．１０，４４８９−４４９７，１９９３
３．  動脈硬化Ｖｏｌ，２５，６７−７０，１９９７
４．  生物物理化学，Ｖｏｌ．４５，１５９−１６４，２００１【０００７】ポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法によるリポ蛋白質の分析により、不安定なリポ蛋白質が実は真の悪玉物質であり、それはＩＤＬ（ミッドバンド）やＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）と呼ばれている。しかしそれらの判断はごく一部の医師の判断により成されており具体的にどれがそれに当たるかと言う説明は曖昧であった。診療においてこれら不安定なリポ蛋白質が特定の治療薬や食事療法、運動療法で無くすことができるため（参考文献２〜３）注目を浴びた。ということはその存在を医師や患者自らが知ることで治療や食事・運動療法が的確になり、生活習慣病の予防に役立つのである。しかしどれがＩＤＬ（ミッドバンド）なのか、どれがＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）なのかは、専門の医師や臨床検査技師ですら判別が難しいといわれている。
以上のように専門医でも難しい動脈硬化の危険因子の存在を誰でも分かるようにすることが課題である。
【課題を解決するための手段】
【０００８】本願発明は以上の課題解決のため、ポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法によるリポ蛋白質の電気泳動像の濃度図においてリポ蛋白質や脂質が正常といわれる人のＶＬＤＬとＨＤＬの波形のピーク位置を、患者のそれと完全に一致させ、ＬＤＬのピーク位置の差異やその量の差異を明確にし、同時にＶＬＤＬとＨＤＬの量の差異もわかる方法を用い、ＬＤＬ画分の相対移動度を計算しその数値を判断基準にした。以下にその具体的実施例を詳細に説明する。
従来のポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動でリポ蛋白質を分析する方法を図１に示す。単にＶＬＤＬ（１），ＬＤＬ（２），ＨＤＬ（３）やそれ以外の特殊な山のミッドバンド（４）を図のように単に谷や肩で区切りそれぞれの分画％を表示（５）しているのみであった。これでは前述の真の悪玉物質がどれであるかを推定することが出来ない。ＬＤＬとは超遠心分離器で分離した時低比重のリポ蛋白質として分離された脂質の一群であり、安定したものや不安定な様々な大きさのものが含まれている。ポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動ではこの色々なＬＤＬ分子の電気泳動的に異質なものを区分する機能に優れており、この分析法によりＬＤＬの移動度の差異を数字で表したのが相対移動度である。
今まで言われてきた相対移動度とは、図２−１と図２−２に示すような２種類の考え方がある。図２−１はＶＬＤＬ（６）の立ち上がり部分いわゆるデイスクゲルの分離ゲルの最初の位置を基点（７）としＨＤＬ（８）の山の頂点いわゆるピークまでの距離をＢ１とした場合、その中間にあるＬＤＬ（９）のピークの位置までの距離Ａ１をそれぞれ物差しで測り計算にて相対移動度を算出する。
相対移動度１＝Ａ１／Ｂ１
図２−２はＶＬＤＬ（１０）のピーク位置を基点としＨＤＬ（１１）のピーク位置までの距離をＢ２とし、ＬＤＬ（１２）のピークの位置までの距離をＡ２とした場合の相対移動度をそれぞれ物差しで測り算出するものである。
（参考文献４）
相対移動度２＝Ａ２／Ｂ２【０００９】本願発明は、ポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法によるリポ蛋白質の分析において、ＶＬＤＬのピーク位置を０としＨＤＬのピーク位置を１としたときの、ＩＤＬ、ＬＤＬ、Ｓｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）のピーク位置をそれぞれの相対移動度とした上で、ＩＤＬ（ミッドバンド）は相対移動度０．２を中心とする一定の幅例えば±０．０５とし、Ｓｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）は０．４以上のＨＤＬを含まない部分として特定の色調で表し、それぞれ正常とは違うリポ蛋白質の存在を明らかにした。特に従来と異なる点は、波形の山の裾から裾の一定のピークとしてのみ捉えるだけでなく、相対移動度という概念を取り入れかつ０．４以上の山またはその裾から先をＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）とし特別の色調で表している点である。またミッドバンドいわゆるＩＤＬとしては、例えば相対移動度が０．２±０．０５の部分を特別な山や肩がない状態でも区切り別の色調で表し、その存在を明確に指示することとし、動脈硬化の危険因子の存在を明確にする方法である。但し正常人もポリアクリルアミドゲルディスク電気泳動法のゲルの性格上多少ミッドバンド付近やＳｍａｌｌ  ＬＤＬ付近では尾を引いていたり肩またはこぶになることが多いので、前述のように正常人のＶＬＤＬとＨＤＬの波形のピーク位置を、患者のそれと完全に一致させて、ＬＤＬのピーク位置の差異およびその量の差異を明確にした。このことで各画分の相対移動度が簡単に算出できるようになった。
結果的に正常人と患者の波形が特にずれている部分が、ＬＤＬの位置と量的差異がクローズアップされたばかりかＶＬＤとＬＨＤＬの量の差異も同時に分かることとなった。【００１０】図３に本願発明の報告方法を示した。ここで破線で示したＶＬＤＬ（１３），ＬＤＬ（２０）、ＨＤＬ（１４）が正常人の波形で、実線で患者の波形ＶＬＤＬ（１５）、ＨＤＬ（１６）、やミッドバンド（１７），ＬＤＬ（１８），小粒子ＬＤＬ（１９）を示した。
これらの区別にそれぞれ独特の色調を用いることで正常との差を明確にすることは容易である。これらは図３に示すような完全な山の形ではなくても、それぞれのピークが明確な山を呈する場合も同様に表現することができる方法である。相対移動度については文献３に記載されており、正常人のＬＤＬの相対移動度は、０．２８〜０．３２であり０．４以上はＳｍａｌｌ  ＬＤＬと記載されているが実際それらを表記したものはなかった。
【実施例１】
【００１１】図３の実施例は山や谷が明確でない患者の悪玉物質であるＩＤＬ（ミッドバンド）（１７）やＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）（１９）の存在を同時に示した図であり、正常人の波形（破線で示す）と患者の波形（実線で示す）のＶＬＤＬ（１３）と（１５）、ＨＤＬ（１４）と（１６）の山の先端のピーク位置を完全に重ね合わせして、その違いが一目瞭然に分かるようにした上で、相対移動度をＶＬＤＬのピーク位置を‘０’ＨＤＬのピーク位置を‘１’としてＬＤＬの画分の内、ＩＤＬ（ミッドバンド）を０．１５〜０．２５の範囲と規定（１７）した。またＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）を０．４以上と規定（１９）した例である。それぞれを図３に斜線で示した。
【実施例２】
【００１２】図４はＶＬＤＬ（２１）、ＬＤＬ（２２）、ＨＤＬ（２３）の他に明確な山として小粒子ＬＤＬ（２４）が出現している場合で、下記の相対移動度で区切った実施例である。
小粒子ＬＤＬが相対移動度０．４以上の部分としＬＤＬのＨＤＬ側に出現しているものを色調で示す代わりに斜線で示した。斜線の部分は赤色に識別した。ＨＤＬ（２３）は基本的に善玉リポ蛋白質であるので、色調としては緑色に識別した。この図では説明を分かり易くするため正常人の波形の重ねあわせを省略して示した。
【実施例３】
【００１３】図５はＶＬＤＬ（２５）、ＬＤＬ（２６）、ＨＤＬ（２７）の他にＶＬＤＬとＬＤＬの中間にＬＤＬの肩状にＩＤＬ（ミッドバンド）（２８）が出現している場合で、下記の相対移動度で区切った実施例である。この場合は相対移動度０．２５以下の部分について斜線でミッドバンドを示した。この図でも説明を分かり易くするため正常人の波形の重ねあわせを省略して示した。
【発明の効果】
【００１４】本願発明は従来のリポ蛋白分画が特定の専門医の判断に任されていた点に、ＩＤＬ（ミッドバンド）とＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）の位置を明確にし同時に正常人の波形を重ね合わせることでその量的差異が同時に誰でも分かる方法となった。
本願出願の実用化により、今後は悪玉コレステロールといった不完全な検査から脱却し、不安定なリポ蛋白質をはっきり区別でき医者ばかりでなく患者に超悪玉のリポ蛋白質の存在を説明できるようになった。
今後はこの方法を活用することで、広く一般に真の悪玉の存在が知られるようになり、高脂血症の予防と治療に大きな貢献ができる。実際参考文献２〜３にあるように悪玉リポ蛋白質であるＩＤＬ（ミッドバンド）やＳｍａｌｌ  ＬＤＬ（小粒子ＬＤＬ）は、食事療法や薬物治療で無くすことができる事が分かっているので、このＩＤＬやＳｍａｌｌ  ＬＤＬの存在を個人的なレベルでも把握できるようになったことは本願発明の最大の効果となる。
特に今後は自分の健康は自分で守るという健康志向が求められているのでそれが分かる検査システムの普及が前提になる。本願発明のリポ蛋白質の検体検査方法が医師や患者または健診受診者に正確に伝わり、治療が必要な人に正しく治療を受けさせ、また治療不要な人は経過観察することになるので、医療費の削減につながりかつ疾病の低減につながることになる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】従来の方法
【図２−１】相対移動度その１
【図２−２】相対移動度その２
【図３】悪玉表示の特定方法
【図４】小粒子ＬＤＬの特定方法
【図５】ミッドバンドの特定方法
【符号の説明】
【００１６】（１）  ＶＬＤＬ
（２）  ＬＤＬ
（３）  ＨＤＬ
（４）  ミッドバンド
（５）  分画％の表示
（６）  ＶＬＤＬ
（７）  デイスクゲルの分離ゲルの位置の基点
（８）  ＨＤＬ
（９）  ＬＤＬ
（１０）ＶＬＤＬ
（１１）ＨＤＬ
（１２）ＬＤＬ
（１３）正常人の波形のＶＬＤＬ
（１４）正常人の波形のＨＤＬ
（１５）患者の波形のＶＬＤＬ
（１６）患者の波形のＨＤＬ
（１７）ミッドバンド
（１８）患者の波形のＬＤＬ
（１９）小粒子ＬＤＬ
（２０）正常人の波形
（２１）ＶＬＤＬ
（２２）ＬＤＬ
（２３）ＨＤＬ
（２４）小粒子ＬＤＬ
（２５）ＶＬＤＬ
（２６）ＬＤＬ
（２７）ＨＤＬ
（２８）ミッドバンド
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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