(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５０ｎｍ〜１０００ｎｍの平均直径の、水不溶性の微小滴マトリックスの、安定な無菌の注射可能な水性分散物であって、
（ａ）１〜１５％のプロポフォール（propofol）、
（ｂ）１〜８％のプロポフォール可溶希釈剤、ただしプロポフォール可溶該希釈剤は１種以上の脂肪親和性剤を含み、
（ｃ）０．５〜５％の表面安定化両親媒性剤、
（ｄ）マンニトール及びトレハロースより成る群から選択される、張性調節剤として働く、医薬的に受容できる水溶性ポリヒドロキシ添加剤、及び
（ｅ）水
を含有し、
（ｆ）ただし、プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤に対する比が１：４〜１：０．１であり、プロポフォールの表面安定化両親媒性剤に対する比が１：０．８〜１：２．５であり、そして該分散物が３センチポイズより大きく１５センチポイズ以下の粘度を有し、
ここで、該分散物は
（１）次の試験によって測定された、少なくとも７日間の、Staphylococcus aureus (ATCC 6538)、Escherichia coli (ATCC 8739)、Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)、Candida albicans (ATCC 10231)及びAspergillus niger (ATCC 16403)のそれぞれの初期接種物からの０．５log増加以下と定義されるように、微生物生長を抑制し：
該試験において、各微生物の洗浄サスペンションが２０〜２５℃の範囲の温度で、ｍＬあたりほぼ１０００コロニー形成単位（ｃｆｕ）で、別々のアリコートの分散物へ加えられ、その後該アリコートを２０〜２５℃でインキュベートして、該生物のコロニーを２４、４８時間及び７日後に計数することによって定義された、接種された分散物内の微生物の生育力について試験し、
次の試験によって証明されるように、注入部位でほとんどまたは全く刺激を生じない：
該試験において、ラットの尾静脈内、ほぼ３０秒間、２〜３日連続で、体重を基準として１２．５ｍｇ／ｋｇの１回の毎日の大量注射として投与した結果、ラットの尾部の直径の視覚的増加が注射後４８時間後にみとめられない、
前記の分散物。
【請求項２】
表面安定化両親媒性剤が、イオン化可能かまたはイオン化不能なリン脂質若しくはコレステロールまたはこれらの混合物から選択される１種以上の天然または合成表面変性剤であり、プロポフォールの表面安定化両親媒性剤に対する比が１：０．８〜１：２．５であり、そして、表面安定化両親媒性剤が、
（ｉ）ヒトまたは動物の血液の溶血が存在しないかまたは最小限であり、
（ｉｉ）注射部位における組織への刺激が存在しないかまたは最小化されており、そして
（ｉｉｉ）静脈内投与によって温血動物及びヒト対象において麻酔効果を誘起する
該分散物を与えている、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
プロポフォール可溶希釈剤を構成する脂肪親和性剤が、合成若しくは天然脂肪酸、それらのトリグリセリド若しくはそれらのエステル、またはそれらの混合物である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤を構成する脂肪親和性剤に対する比が１：３〜１：０．５である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
水不溶性マトリックスが、請求項２の１種以上の表面安定化両親媒性剤と、請求項３又は４のプロポフォール可溶希釈剤を構成する１種以上の脂肪親和性剤と、プロポフォールとの混合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、プロポフォール（２，６−ジイソプロピルフェノール）を含む組成物に関し、該組成物は低い脂質含量を有し、そして最終的に水蒸気滅菌できる。これらの配合物は、微生物の生長の可能性が非常に低いかまたは取り除かれている麻酔剤として使用されることができる。これらの配合物の低い脂質含量は、高脂血症の発生の低い危険性またはその不存在を与える。さらに、これらの配合物は注射部位のまわりにほとんどまたは全く刺激を引き起こさない。
【０００２】
背景
従来技術
プロポフォール製剤は麻酔剤として使用されている。プロポフォールの組成物及びそれらの臨床用途は科学文献に記述されている。米国特許第４０５６６３５号（１９７７）、米国特許第４４５２８１７号（１９８４）、及び米国特許第４７９８８４６号（１９８９）に記述されるように、ＧｌｅｎとＪａｍｅｓの一連の特許は、温血動物における麻酔を生じるための非経口投与に適したプロポフォール含有組成物を記述している。
【０００３】
Ｇｌｅｎ及びＪａｍｅｓによって米国特許第４０５６６３５号及び４４５２８１７号に記述された組成物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ−ＲＨ４０またはＣｒｅｍｏｐｈｏｒ−ＥＬまたはＴｗｅｅｎ−８０のような界面活性剤とプロポフォールとの水性媒質中の混合物であり、これはさらにエタノールまたは他の医薬的に受容できる成分を含んでいる。
【０００４】
米国特許第４４５２８１７の継続において、ＧｌｅｎとＪａｍｅｓは、落花生油またはオレイン酸エチルのような油中に溶解されているかまたは単独の、１〜２％のプロポフォールを含むプロポフォール組成物を記述する（米国特許第４７９８８４６号）。これらの製剤は、ポリオキシエチレンラウレート、ステアレート、またはオレエート；エチレンオキサイドとひまし油との縮合生成物；ポリオキシエチレンセチル、ラウリル、ステアリル、またはオレイルエーテル；ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、モノパルミテート、モノステアレート、またはモノオレエート；ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー；レシチン；及びソルビタンモノラウレート、モノパルミテート、モノステアレートまたはモノオレエートから選択される界面活性剤の十分な量によって安定化されていることが要求されている。
【０００５】
上記特許に基づき、臨床用途のためのプロポフォール製剤（ＰＤＲ１９９６）が商業的に入手でき（Ｄｉｐｒｉｖａｎ(R)１％注）、これは大豆油中に溶解され卵レシチンによって安定化されたプロポフォールを含む。この製剤の各１ｍＬは、１０ｍｇ／ｍＬのプロポフォール、１００ｍｇ／ｍＬの大豆油、２２．５ｍｇ／ｍＬのグリセロール、１２ｍｇ／ｍＬの卵レシチン、ｐＨを７〜８．５の調整するための水酸化ナトリウム及び十分な量の水からなる。臨床的には有用であるが、この製剤は抗菌性の保存剤の非存在及び微生物の生長の付随した可能性によって、その取扱いの間に厳重な無菌技術の使用を要求する。まさに、ヒト患者における重篤な感染の多くの原因が商業的に入手できるプロポフォール製剤であるＤｉｐｒｉｖａｎｔ(R)の使用と関連している（Nichols et al.(1995), Tessler et al.(1992), Ardulno et al. (1991), Sosis and Braverman (1993), Sosis et al (1995), Crowther st al. (1996))。
【０００６】
静脈内投与の間のプロポフォールの製剤の取扱いから生じる感染の機会を最小化するために、ＪｏｎｅｓとＰｌａｔｔは最近、本質的に以前の組成とこれに加えた抗菌保存剤成分とに基づく新しいプロポフォール製剤を導入した。この製品は米国特許第５７１４５２０号、５７３１３５５号及び５７３１３５６号に記述されている。この新しい製剤に加えられる抗菌保存剤は、エデト酸二ナトリウムである。米国特許第５７１４５２０号において、一定量のエデト酸誘導体の添加がStaphylococcus aures ATCC 6538、Escherichia coli ATCC 8739、Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027及びCandida albicans ATCC 10231の各々の少なくとも２４時間の生長により、試験によって決定された１０倍以下に微生物の生長を限定することが請求されている。該試験において、２０〜２５℃の範囲の温度において、各該生物の洗浄サスペンションがほぼ５０コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬで該組成物の別々のアリコートに加えられ、そして２４時間後に該生物の生菌数について試験されるが、エデト酸誘導体の量は該組成物の０．１重量％以下である。
【０００７】
しかし、微生物の生長に対する保存剤としてのエデト酸誘導体の存在にもかかわらず、米国特許第５７１４５２０（Ｄｉｐｒｉｖａｎ(R)）の製品は、幾人かの著者、例えばＳｋｌａｒ（１９９７）によってＵＳＰ基準下で抗微生物的に保存された製品とは考えられていない。提示された量で、エデト酸誘導体は該特許に請求されているいくつかのタイプの生物の生長に対して有効であるが、プロポフォールが投与される臨床的状況において有病でありうる種々の他の生物、例えば米国特許第５７１４５２０号に記されているC. albicans ATCC 10231に対しててそれほど有効ではないかもしれない。実際に、米国特許第５７１４５２０号には、製剤化されたプロポフォールが、C. albicans ATCC 10231に対して抗菌性ではなく、接種物濃度においてほぼ１０倍の生長が４８時間後に観察されることが記載されている。この結果は、Ｄｉｐｒｉｖａｎ(R)製剤における微生物の生長に対して保存剤としてエデト酸誘導体が、もし引用されているもの以外の他の生物によってまたは１００ＣＦＵ／ｍＬを超える高い含量の生物によって攻撃されると、無効である可能性を指摘する。事実、エデト酸誘導体の製剤への添加は真の改善の方法においてほとんどなにも与えない。この「改善された」製剤は、抗菌有効性に関して、Ｈａｙｎｅｓの特許（米国特許第５６３７６２５号、以下を参照）に記述される発明に劣っている。
【０００８】
米国特許第５７１４５２０号、５７３１３５５号、及び５７３１３５６号に基づく製剤は、高い量の大豆油（１０％）を含み、幾人かの患者において高脂血症の発生に関係している。エデト酸誘導体の添加とは異なり、この製剤は本質的に以前に商業化されたＤｉｐｒｉｖａｎ(R)製剤と本質的に同じである。事実、現行のＰＤＲ，１９９９におけるこれらの症状についての引用された発生率によって証明されるように以前の製品と同じ副作用の発生を有する。
【０００９】
商業的なプロポフォール製剤の臨床使用における問題
多くの著者がプロポフォール製剤の臨床使用を検討してきた。例えば、Ｓｍｉｔｈら（１９９４）は、プロポフォール注射が、外来患者の麻酔、神経外科麻酔及び小児科の麻酔を起こさせ、かつ維持するため、モニターされた麻酔ゲアのため、集中的なケア鎮静、及び他の臨床的状況のために使用されてきたことを説明している。プロポフォールの商業的製剤の注射後の痛みが患者の２８〜９０％で起こることが報告されている。例えば、Ｍｉｒａｋｈｕｒ（１９８８）、Ｓｔａｒｋら（１９８５）、Ｍａｎｇｅｒ及びＨｏｌａｋ（１９９２）を参照されたい。鎮静のために投与されるの低用量のプロポフォールを使用してさえ、痛みの発生は３３〜５０％であり得る（Ｗｈｉｔｅ及びＮｅｇｕｓ，１９９１：Ｇｈｏｕｒｉら，１９９４）。プロポフォール投与時の静脈痛の原因である機構は知られていない。以前のプロポフォール製剤のオリジナルの賦形剤、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬは最初に原因となる薬剤と考えられた。しかし、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ系のプロポフォール製剤から市販されている大豆油系及びレシチン系の製剤へ変更された後もなんら測定し得る痛みの減少はなかった（例えばＭｉｒａｋｈｕｒ（１９９８）、Ｓｔａｒｋら（１９８５）Ｍａｎｇｒ及びＨｏｌａｋ（１９９２）、Ｗｈｉｔｅ及びＮｅｇｕｓ（１９９１）、及びＧｈｏｕｒｉら（１９９４）を参照）。痛みは製剤よりも薬剤そのものの機能であると考えられる（Ｓｍｉｔｈら（１９９４））。
【００１０】
プロポフォール製剤の注射のときの痛みの傾向を減じるために、Ｂａｂｌら（１９９５）は、分散油相中の中程度の鎖のトリグリセライド（ＭＣＴ）及び長い鎖のトリグリセライド（ＬＣＴ）の混合物を使用した１％及び２％プロポフォール製剤を報告している。同様に、Ｄｏｅｎｉｃｋｅら（１９９６及び１９９７）は、ヒトボランティアにおいて、プロポフォール製剤中のＭＣＴの使用が、商業的な製剤（５９％）の注射後のものに比較して、注射時の激しいかまたは中程度の痛みの発生をより小さくできる（９％）ことを示した。これらの著者はより小さい痛みの発生を、製剤中の油濃度を増すことによって達成される遊離のプロポフォールのより小さい水性相濃度の結果のためとしている。
【００１１】
油の量を増すことは水性プロポフォール濃度を下げ、それによって注射時の痛みを減じるが、これらの著者によって使用された２０％程度に高い油量（Ｂａｂｌら（１９９５）及びＤｏｅｎｉｃｋｅら（１９９６及び１９９７））は、高脂血症に通じる可能性のある集中治療室において、プロポフォールの長期投与を要求する患者をさらに危険にさらすようである。
【００１２】
注射時の痛みは投与した製剤の注射部位組織刺激またはトロンボゲン形成に関係するかもしないかもしれないが、これらの副作用は、いまだに頻繁であり、そして症状がプロポフォールの臨床使用において継続的に報告されている。例えば、Ｄｉｐｒｉｖａｎ(R)の場合において、これらの症状は血栓症及び静脈炎の範囲を広げ、そして炎症／刺痛または痛みの１７．６％以下の発生率を含む（ＰＤＲ  １９９９、３４１６頁）。
【００１３】
明らかに、現在市販された製剤及び以前試験された製剤の３つの最も頻繁に示された欠点を満足することができる臨床的に受容できるプロポフォール製剤のための必要性が今も存在する。
・微生物の生長
・過剰な脂質の含量、及び
・注射部位における刺激及び／または注射時の痛み。
【００１４】
商業的（Ｄｉｐｒｉｖａｎ(R)）または試験的（例えばＢａｂｌら（１９９５）及びＤｏｅｎｉｃｋｅら（１９９６及び１９９７）によって記述されたものなプロポフォールの注射可能な製品と関連する、上述の臨床的問題のいくつかを処理する代わり製剤は、米国特許第５６３７６２５号中にＨａｙｎｅｓによって教示されている。例えば、Ｈａｙｎｅｓは、１％プロポフォール及び１０％大豆油を含む商業的な製剤中の大量の植物油の使用と関連する２つの問題を認識している。
【００１５】
（１）集中治療室（ＩＣＵ）における長期の鎮静を受ける患者における高脂血症、及び
（２）高い脂質含量及び抗菌保存剤を欠くことに従属的な細菌汚染の危険性。
【００１６】
Ｈａｙｎｅｓは、脂肪の過負荷なしに長期間にわたって麻酔及び慢性的な鎮静を提供する、脂肪及びグリセライドを欠くプロポフォールの、リン脂質でコートされた微小滴の製剤を記述する。Ｈａｙｎｅｓの教示前は、１０重量％未満の油担体を含むプロポフォール製剤は主張されていない。Ｈａｙｎｅｓは、これらの微滴製剤が、細菌の生長を支持できる物質を含まず、それによって延長された貯蔵寿命を有するので、抗菌性（例えば自己殺菌性）であると主張している。
【００１７】
プロポフォールの臨床文献、特に上記のもの中に引用された観察を考慮して、Ｈａｙｎｅｓは３つの欠点のうち２種を処理できたようである。しかし、大量の静脈内注射として投与できるかまたは点滴として、例えばＩＣＵにおいて投与でき、そして次の特性の全てを有する無菌のプロポフォール製剤に対する必要性が存在する。
・患者を高脂血症の犠牲者に陥れる傾向を減じるために、油またはトリグリセライドの過剰量を有せず、
・十分な殺菌性または静菌性を有し、その結果臨床のセッティングにおける使用の間に、患者の安全性を高め、そして保存寿命を伸ばし、そして
・注射部位において、組織の刺激をほとんどまたは全く引き起こさない。
【００１８】
発明の説明
発明の概要
驚くべきことに、プロポフォール及びプロポフォール可溶剤を含む水に不溶性のマトリックスの注射可能な水性分散物として調製された、ある種のプロポフォール組成物がある種の微生物の生長を実質的に限定するかまたは禁止できそして、インビトロの試験によって証明されるように、注射部位において刺激の発生を示さないことが発見された。
【００１９】
この製剤中の微生物の生長の禁止の傾向は、抗菌性保存剤の添加を必要としない。
さらに驚くことは、プロポフォールの該水性分散物は、最終的に水蒸気滅菌でき、かつその水相中に種々のポリヒドロキシ化合物を含む安定な製品として調製できるという事実であった。これらのポリヒドロキシ化合物は通常、静脈注入として使用される。ポリヒドロキシ化合物を使用して製造されたプロポフォール製剤が、比較的高い粘度を有することが発見された。
【００２０】
リン脂質含量が減じられたので、これらの新規な製剤は、本発明のＩＶ製剤を投与されたヒト患者において高脂血症を生じる傾向がはるかに小さいと考えられる。さらに、ＬＣＴ及びＭＣＴの混合物は、より速い代謝クリアランスを受けることが知られており、従って、本発明のプロポフォール製剤においける使用は臨床的に有利である（Ｃａｉｒｎｓら（１９９６）及びＳａｎｄｓｔｒｏｍら（１９９５））。従って、ＬＣＴ及びＭＣＴの混合物は本発明の１つの好ましい態様である。
【００２１】
さらに、例えば１０重量％のプロポフォールを含む、非常に高い効能のプロポフォール組成物を容易に配合できることが、本発明において示された。
組成物
本発明において記述される新規な組成物は、ナノメーター〜マイクロメーターのサイズの、約１５％以下、好ましくは約１０％以下のプロポフォールを水性相中に分散された状態で含む、水不溶性マトリックスで、以下のものから成る。
【００２２】
水不溶性マトリックスは、麻酔をひきおこすプロポフォール及び溶解された脂肪親和性剤を含み、抗菌活性のレベル及び注射時の局所反応の程度を調節する。そのような脂肪親和性剤の例は、ミリスチン酸イソプロピル、コレステリルオレエート、エチルオレエート、スクアレン、スクアラン、アルファ−トコフェロール及び／またはアルファ−トコフェロールの誘導体、合成若しくは天然産の中鎖及び／または長鎖脂肪酸のエステルまたはトリグリセライドを含むがこれらに限定されない。天然のトリグリセライドは特に、植物または動物由来のもの、例えば医薬的に受容できる植物油または魚油から選択できる。後者はオメガ−３ポリ不飽和油としても既知である。脂肪親和性剤は、プロポフォール可溶剤または希釈剤と考えることもできる。
【００２３】
水不溶性のマトリックスの表面は両親媒性剤であり、これは分散物を安定化し、そして注射時の局所作用の程度に影響することにおいて重要である可能性がある。そのような両親媒性剤の例は、荷電または非荷電の、天然由来のリン脂質、例えば卵または大豆レシチン、水素化レシチン（Ｎａｔｔｅｒｍａｎからのｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ−９０Ｈまたはｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｏｎ−１００Ｈ）、またはホスファチジルコリン若しくはホスファチジルグリセロールのような合成リン脂質、医薬的に受容できる非イオン性界面活性剤、例えばｐｏｌｏｘａｍｅｒ類（プルロニック系の界面活性剤）、ｐｏｌｏｘａｍｉｎｅ類（テトロニック系の界面活性剤）、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えばＴｗｅｅｎ(R)系の界面活性剤）、コレステロール、または医薬製品に通常使用される他の表面改質剤、またはこれらの表面改質剤の組合せを含む。
【００２４】
水相は、静脈内点滴に通常されるもののような、医薬的に受容できるポリヒドロキシ張性調節剤、例えば蔗糖、デキストロース、トレハロース、マンニトール、乳糖、グリセロール等の混合物を実質的に含む。好ましくは、ポリヒドロキシ化合物は、最終組成物を血液と等張にするかまたは静脈内注射に適切にするのに十分な量である。これらのポリヒドロキシ化合物の製剤中の量が、血液と等張でないように選択された場合には、それは張性を調節するために注射前に適切な希釈液で希釈できる。この水相はさらに、水酸化ナトリウム及び／または医薬的に受容できる酸及び／または関連するこれらの塩のようなｐＨ調節剤のある量を含み得る。好ましくはｐＨは約９〜約４の間に、さらに好ましくは約８〜５の間にあるように調節される。医薬的に受容できる緩衝系も利用できる。
【００２５】
本発明の組成物は所望によって、他の医薬的に受容できる薬剤、例えば他の抗菌剤、局所もしくは持続作用性の麻酔剤、キレート剤または抗酸化剤を含み得る。これらの例は、パラベン類またはエデト酸誘導体、リドカインまたはメタ重亜硫酸塩を含むがこれらに限定されない。
【００２６】
好ましくは、本発明の組成物は、医薬的に受容できる条件下で最終滅菌に安定であるように選択される。
ポリヒドロキシ化合物を使用して調製されたプロポフォール製剤が、比較的高めの粘度を有することが発見された。これらの製剤の粘度は約１．５〜８センチポイズ、さらに好ましくは約４〜６センチポイズである。いずれかの特別の理論に拘束されないが、そのような高粘度は、製剤の皮膚刺激を最小化するために部分的に役立っているかもしれない。
【００２７】
方法
プロポフォールは、ほとんど水に溶けない液体である。望まれる抗菌性、低い脂質含量及び低い注射部位作用性を有し、かつ混合または貯蔵の間にプロポフォールの分離がほとんどまたは全くない、安定な注射可能プロポフォール製剤を製造するために、製剤の適切な組成を選択するだけではなく、適切な処理条件を使用することが必要であることが発見された。適切な処理条件の例は、激しい機械攪拌または高い剪断を与えるものである。例えばＨａｙｎｅｓによって記述された例を参照されたい（米国特許第５６３７６２５号）。この製剤は、脂質相及び水相の最初の調製（これらはその後混合される）によって調製されるが、当業者は代替のアプローチが適切であり得、そしてそのようなアプローチを決定できることを認識する。例えば、次の文節に簡単に説明される装置処理は適切であると証明された。
【００２８】
プレミックスの調製
プロポフォール、他の脂質剤、及び両親媒性剤を混合して脂質相を調製する。溶解工程は、混合物を高速ホモジナイザーで混合しながら加熱することによって加速される。水相は通常、水中のポリヒドロキシ化合物の混合物であり、いくらかの場合には、高速ホモジナイザーを使用して調製された十分に分散されたリン脂質をも含む。プレミックスは、脂質相を水相に、高速ホモジナイザーでの攪拌下に加え、ｐＨを調節することによって調製される。これらの全ての操作は、一般に不活性な雰囲気中、例えば窒素ブランケットで実施され、そして温度は酸化を最小化するために制御される。
【００２９】
均質化
水媒質中の水不溶性マトリックスの分散物は、いくつかの均質化法のいずれかによって調製される。例えば、分散物は、プレミックスの高圧均質化、例えばＲａｎｎｉｅのＭＩＮＩ−ＬＡＢタイプ８．３０Ｈホモジナイザーを利用することによって調製される。代わりに、分散物は、プレミックスをＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ  Ｍ１１０ＥＨ（マサチューセッツ州ニュートンのＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）でミクロ流動化することによって製造される。処理流体の温度は、高圧の均質化によって迅速に上昇する。高温での高圧均質化（約３０℃より上のホモジナイザー入口温度）は、相分離をうける傾向がある分散物を生じる。従って、ホモジナイザーの流出物を冷却して、ホモジナイザーの入口温度を受容できる温度に冷却する。
【００３０】
包装及び滅菌
上記工程の１つによって調製された水性分散物をガラスバイアルに約７０〜９０体積％に満たし、一般に不活性な雰囲気、例えば窒素でパージングし、そして薬剤に影響のないストッパー及びシールでシールする。包装した新規なプロポフォール製剤は、一般に安定な医薬的に受容できる水蒸気滅菌サイクルであることが発見された。
【００３１】
ラット尾静脈刺激試験
上述の方法を使用して調製したプロポフォール製剤を、ラットへの静脈内注射による静脈組織への刺激を生じるそれらの能力について試験した。雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（ほぼ１１〜１２週の年齢）をチャールス・リバー、Ｓｔ．Ｃｏｎｓｔａｎｔ，ＰＱから購入した。順化期間の後、健康に見え、そして２００〜２５０ｇの体重のラットを使用した。
【００３２】
試験する製剤を、２日間、すなわち第１日、第２日について１日１回の大量注射として投与した。尻尾の末端からほぼ５ｃｍの位置の尾部静脈内において、ほぼ３０秒間にわたり注射を行った。第１日において決定された体重を基準として、１２．５ｍｇ／ｋｇのプロポフォール用量を与えた。第１日〜第３日の毎日、次のようにラットを観察した。
【００３３】
Ｉ．一般的観察
一般的な健康／死亡率び病的状態について３日連続で１日一回動物をチェックした。詳細な臨床観察を毎日記録した。静脈内投与の後の明白な毒性効果について動物を観察した。
【００３４】
ＩＩ．尾部刺激
ラットの尾部の周囲を、試験製剤の投与前に動物の体に最も近いほぼ２．５インチで測定した。この測定は、製剤の静脈投与時の尾部の膨潤可能性を評価するためのベースライン値として役立つ。各試験日において、処理部位は注意深く、測定されたラットの尾部周囲のなんらかの作用を検出するために試験した。ラットの尾部の周囲の変化を、第２日及び第３日の測定値を試験製品を投与する前に得られたベースライン値と比較して評価した。
【００３５】
薬力学的指標
上記試験の各ラットを注射中及び後に観察した。意識の消失のための必要な時間（誘導時間）を記録した。４本足で立ち上がろうとする実的な試みによって示される、回復のための時間（光照射応答時間）も測定した。麻酔の期間を、光照射応答が起こるときの時間から、意識が消失するときの時間を引いた差として測定した。
【００３６】
溶血能
本発明の製剤のヒトでの溶血影響のインビトロ評価を、注射部位の周りの刺激を生じる傾向が低い製剤の選択へのさらなるガイドとして決定した。製剤の血液に対する溶血能力を、赤血球細胞質マーカー酵素のラクテートデハイドロゲナーゼ（ＬＤＨ）のアッセイによって評価した。赤血球細胞質マーカー酵素のＬＤＨ（これは漏れのあるまたは熟した赤血球から血液の血漿区画内に逃げる）の測定は注射可能な製剤の溶血能力の評価のために文献に記述される、通常使用される定量的なアッセイの一つである（Ｓｔｅｎｚ及びＢａｕｅｒ（１９９６））。血液を、１８〜６５歳の男性または女性のカフカス人ボランティアから得、そしてヘパリンナトリウムで安定化した。試験製剤を等量のヒト全血と混合し、３７℃で約１時間インキュベートした。次に混合物を周囲温度で３０分間保持し、その後１５００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。血清中のＬＤＨの量を、この技術における科学者に既知の標準的手順によって決定した。本研究のためのガイドとして、受容性の好ましい上限を、アミオダロン塩化水素（臨床セッティング（ＰＤＲ１９９９、３２８９頁）における静脈注射時の静脈刺激を生じることが知られている化合物）に溶血能力方法論を応用することから得られたＬＤＨレベルを測定することによって、決定した。アミオダロン塩化水素ＩＶ溶液（５０ｍｇ／ｍＬ、及び製品モノグラフに指示されるように、デキストロース５％水溶液で１．５ｍｇ／ｍＬへの希釈の後に試験）は８１９０  ＩＵ／Ｌ及び６７３  ＩＵ／ＬのＬＤＨ値をそれぞれ生じた。
【００３７】
微生物の禁止
本発明に説明された製剤を、臨床状況においてもっともありそうな感染の源である微生物の生長を禁止するそれらの能力について試験した。Staphylococcus aures ATCC 6538、Escherichia coli ATCC 8739及びATCC 8454、Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027及びCandida albicans ATCC 10231、及びAspergillus niger ATCC 16403を、20〜25℃の温度で、ほぼ１０００コロニー形成単位（ＣＦＵ）／ｍＬでの別々のアリコートの製剤に、各生物の洗浄されたサスペンションを加えた。接種した混合物を２０〜２５℃においてインキュベートした。接種された製剤中の微生物の生育力を、該生物のコロニーを２４及び４８時間、７日及び他の適切な時間の後に計数することによって決定した。
【００３８】
実施例
本発明に従うものを含む種々の製剤の例を、次の実施例において簡単に概説する。いくつかの特定の組成物のインビボ及びインビトロ挙動もこれらの実施例において示される。
【００３９】
他に注記しない限り、ここに報告する全ての部及び百分率は単位重量あたりの重量（Ｗ／Ｗ）であり、分母中の重量は、製剤の全重量を示す。寸法の直径はミリメータ（ｍｍ＝１０-3メータ）、マイクロメータ（μｍ＝１０-6メータ）、またはナノメータ（ｎｍ＝１０-9メータ）で与えられる。体積はリットル（Ｌ）、ミリリットル（ｍＬ＝１０-3Ｌ）及びマイクロリットル（μＬ＝１０-6Ｌ）で与えられる。本発明の組成物は、前述の物質から本質的に成り、該方法はそのような物質を使用した前述の工程から本質的になる。
【００４０】
本発明は以下の好ましい態様を参照してさらに説明され、そして望ましくない組成物も記載される。実施例のために使用されあ一般的な手順は上述されたが、例外も記載される。製剤は、上述の方法によって製造された。本発明の製剤を調製するために使用した原料を下にまとめる。
【００４１】
【数１】
0004198318.tif 000002
【００４２】
実施例１：製剤中の油含量を増すことの影響
本実施例の試験は、望まれる特性を支持する因子である製剤変数を同定するために実施された。
【００４３】
表１に、プロポフォール製剤のいくつかの例と、その油の量を増したときの性質をまとめた。これらの製剤の油含量を、エチルオレエートの量を０．４％から１．０％に増すことによって増やした。プロポフォール濃度は１％に維持した。リン脂質混合物（Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ８０及びＤＭＰＧ）の量を、油の量を増すことによって調節して良好な安定性の製剤を得た。
【００４４】
ラット尾部の膨潤（製剤の皮膚刺激傾向の指標：上述した）は、油の量を増すことによって減じられることが発見された。４〜１０％のエチルオレエート含量の製剤番号１．４〜１．６は、認知し得る程度のラット尾部の膨潤を生じないようである。この結果は、プロポフォール製剤中の油の高めの量の使用が、多分プロポフォールの水性濃度の減少によって注射時の痛みの発生を減じるという発見（Ｂａｂｌら（１９９５）、及びＤｏｅｎｉｃｋｅら（１９９６及び１９９７））と平行している。しかし、これらの著者は、そのプロポフォール製剤中にＭＣＴ及びＬＣＴの混合物をはるかに多量に使用しており、そしてそのような製剤は微生物の生長を支持することが予期される。
【００４５】
【表１】
0004198318.tif 000003
【００４６】
表１中の製剤の溶血能力を、等量の製剤と混合したヒト血液の試料中のＬＤＨ活性を測定することによって上述のように評価した。表１にまとめた結果は、製剤の溶血能力がエチルオレエートの量を増すと共に減じられることを示した。
【００４７】
１０％のエチルオレエートを使用した製剤番号１．６は、許容できる溶血及び注射部位組織刺激能力を有し得るが、この製剤は高い量の油、すなわちエチルオレエートを含むので、本発明の目的のためには満足にはほど遠い。現在上市されており、または試験的なプロポフォール製剤と関連した問題が従来技術において述べられてきた。大量静脈注射または注入のための望ましいプロポフォール製剤は次の全ての特性を同時に有するべきである。
・患者が高脂血症に陥る傾向を減ずるために、製剤は過剰量の油またはトリグリセライドを有せず、
・製剤は注射部位においてほとんどまたは全く刺激を起こさず、そして
・臨床セッティングにおいて、患者の安全性を高め、かつ使用中の保存寿命を延ばすために、十分な殺菌または静菌性を有する。
【００４８】
従って、より適している製剤は、受容できるレベルの注射部位組織刺激の能力を有するが、本実施例の製剤（番号１．６）においてはるかに低い油含量を同時に有する。これらの基準を満たす多くのそのような製剤が以下の実施例に記述される。
【００４９】
実施例２：ラット尾静脈刺激及び溶血能力
本試験において、上述の手順に従って調製され、かつラット尾静脈膨潤試験（上述）によって評価される受容できる注射部位組織刺激を示す、多数の製剤が示される。これらの製剤を表２にまとめた。刺激能力が存在しないことが、例えば製剤番号２．１〜２．２５のラットへの尾静脈内投与時の尾部の周囲の増加がなかったことによって示される。
【００５０】
しかし、尾静脈の観察し得る刺激を引き起こす多数の組成物があった。例えば、製剤番号２．２６〜２．２９並びに２．３０であり、これらはＨａｙｎｅｓ特許（米国特許第５６３７６２５号）によって記述されたものをここで再現したものである。
【００５１】
実施例１において、製剤中の油の含量を０．４から１０％以上に増加することによって、組織刺激能力は減じられた。しかし、実施例２は、この単純化しすぎた考えが制限のないものであることを示す。なぜなら、いくつかのケースにおいて、プロポフォール製剤中の油の量を単に増加することが、より刺激の低い製剤を生み出さないからである。例えば、製剤２．２６において、油含量は６％のエチルオレエートに増され、そして２．２７及び２．２８においては４％のＭｉｇｌｙｏｌ−８１０に増されているが、これらの製剤は注射部位組織刺激性であり、これはこれらの製剤についての尾部膨潤値から証明される。
【００５２】
２．２６〜２．２８の製剤は刺激性であるが、４％以下のみの油を含む多くの組成物は非刺激性であることは驚くことである。例えば、わずか２％程度に低い油を含む製剤２．１５は非刺激性の製剤である。この予期されない結果は、これらの製剤の好まし組成が、可能性のある相乗効果を表すことができない線型階乗試験デザインを使用した伝統的な製剤アプローチから自明でないことを示す。受容できる性質を示す、製剤の組成の要素についての受容できる範囲を決定すると、好ましい態様の選択は、上述のアプローチを使用する日常的な決定の問題である。
【００５３】
表２のデータの調査は、受容できる低いＬＤＨを有すると共に注射部位組織刺激がないことを維持する組成物の多くが、その水相中にマンニトールまたはトレハロースのいずれかをも有するという驚くべき発見につながる。これらの組成物の多くの粘度が１．２センチポイズよりも大きく、そして多くの場合３センチポイズよりも大きいことがさらなる驚きである。これらの製剤の高い粘度は多分それらをその溶血能力に関してより安全にし得る。
【００５４】
実施例１、そして再度この実施例２において確立されたように、製剤中の油含量を単に増すことは、溶血能力または注射部位での組織への刺激を減じることの結果を生じない。油の一定量未満（例えば＜１０％）において、溶血能力または組織刺激を改善するための原因となる因子は、特定の組成物から由来する種々の因子の組み合わせである。従って、溶血の低い能力を有する非刺激性製剤は、好ましい製剤の刺激性をさらに小さくする共同作用を与える種々の製剤成分によって特徴づけられる。
【００５５】
実施例３：微生物の禁止
製剤がラットにおけるトロンボゲン刺激の非存在を示すか、またはそのような刺激を起こす場合、その全てを上述の抗菌または静菌有効性について試験し、このうちいくつかの関連する結果を表３にまとめた。表３にはまた、比較としてＤｉｐｒｉｖａｎ(R)についての殺菌有効性試験結果を示した。
【００５６】
微生物の生長を禁止することが発見された多くの組成物がある。微生物の生長は、接種微生物のコロニーの数の減少または維持によって決定された。例えば、表２の製剤番号２．１、２．３及び２．４は、要求される全ての性質、すなわち刺激能力の減少（ラット尾静脈の膨潤が無さ）、受容できる溶血能力（低いＬＤＨ値）、並びに試験した微生物の生長の禁止（表３を参照）を一斉に示す。
【００５７】
【表２】
0004198318.tif 000004
【００５８】
記号と注記
ＤＭＰＣ：ジミリストイルホスファチジルコリン、ＤＭＰＧ：ジミリストイルホスファチジルグリセロール、Ｅ８０：Ｌｉｐｏｉｄ  Ｅ８０、ＥＯ：エチルオレエート、ＥＰＣ：卵ホスファチジルコリン、ＥＰＬ：卵リン脂質、ＧＬＹ：グリセリン、Ｍ８１０：Ｍｉｇｌｙｏｌ−８１０、ＭＡＮ：マンニトール、ＳＯ：大豆油、ＳＰＣ：大豆ホスファチジルコリン、ＳＳＰＣ：飽和大豆ホスファチジルコリン、ＴＲＥ：トレハロース、これらの原料の供給源は上述した。
【００５９】
【表３】
0004198318.tif 000005
【００６０】
これらの組成物がマンニトールまたはトレハロースを水性相中に有することに気づくことは驚くべきことである。これらの組成物の粘度が約４．２〜約５．３センチポイズのような高いことはさらに驚くべきことである。
【００６１】
Ｈａｙｎｅｓ（米国特許第５６３７６２５号）によって教示されるように、製剤中の脂質栄養分の量を増すことが製剤に微生物の生長を支持させると考えられる。しかし、油の量を増す（４〜６％まで）ことによって、製剤２．１、２．３、または２．４は細菌の生長のための媒質を提供しないことに注目することが驚くべきことである。製剤２．１、２．３、及び２．４が刺激性でも溶血性でもなく同時に微生物の生長を禁止することに注目することは価値がある。これらの非刺激性、非溶血性、及び殺菌性または静菌性製剤は、本発明の好ましい組成物の非限定例として特徴づけられる。
【００６２】
実施例４：高い効能のプロポフォール製剤
表４中の高い効能のプロポフォール製剤４．１〜４．３を、上述の方法によって調製した。これらの製剤は不安定化せずに最終水蒸気滅菌されることが見いだされた。
【００６３】
【表４】
0004198318.tif 000006
【００６４】
これらの高い効能の製剤は非常に安定であり、薬剤の有効性を変えることなく医薬的に受容できる成分を使用することが発見された。例えば、１０ｍｇ／ｋｇの用量のラットへの静脈内投与時に、製剤４．１は一般的な麻酔の受容できる有効性を示した。
【００６５】
製剤４．２は、２．５％グリセロールの水性担体中の均質なプロポフォール分散物を示す。これは１０％プロポフォール程度の高さを有し、同時に非常に低い脂肪（コレステロール及びコレステリルオレエート）含量を維持する。これは凍結／融解のような種々のストレスに曝したときに有意に変化しない、８２ｎｍの体積加重平均粒子サイズ（３サイクル後の１２８ｎｍ）を有した。
【００６６】
製剤４．３も、２．５％のグリセロールの水性担体中の非常に均質な分散物であり、そして１０％のプロポフォールを含み、同時に非常に低い脂肪含量を維持する。これは２５℃での貯蔵時に有意に変化しない、８０ｎｍの体積加重平均粒子サイズ（７０日後の７１ｎｍ）を有した。
【００６７】
高い効能の製剤（例えば１０％プロポフォール）は、静脈内投与のためにはるかに低い体積を達成し、同時に同じ有効用量を与えるために有用である。従って、この実施例において記述される製剤は製剤と血液器壁の比較的小さい接触面積を許容し、そして注射時の痛みまたは他の局所的副作用の発生を最小化することに関して重要であり得る。
【００６８】
プロポフォールそのような高い効能の安定な製剤が調製され、そしてここに最初に記述される。
実施例５：薬力学
本発明のプロポフォール製剤を、対照の商業的製剤であるＤｉｐｒｉｖａｎ(R)（１％）及びＤｉｓｏｐｒｉｖａｎ(R)（２％）と、ラットにおける麻酔の導入と期間について比較した。ラットにおけるこれらの製剤の１２．５ｍｇ／ｋｇの１回の大量静脈注射に続いて、意識の消失のための時間及び光照射応答時間を、試験方法セクションに記述したように測定した。結果を、これらの配合物の有効性を示す表５に示す。
【００６９】
【表５】
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【００７０】
上述の実施例に従って、本発明はプロポフォール製剤の特定を次のように与える。
（ａ）水蒸気滅菌中及び後に安定であり、
（ｂ）温血動物への静脈内注射時に要求される麻酔効果を与え、
（ｃ）微生物の生長を禁止し、
（ｄ）局所血管反応の発生が最小または存在しないことを示し、そして
（ｅ）高脂血症の発生が最小または存在しないことを示す。
【００７１】
本発明及び実施例が現在のところ最も実用的で好ましい態様であると考えられるものと関連して記述されてきたが、本発明は開示された態様に限定されるべきではなく、反対に特許請求の範囲の精神及び範囲内に含まれる種々の修正及び均等な範囲をカバーする意図であることが理解されるべきである。
【００７２】
【数２】
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【００７３】
【数３】
0004198318.tif 000009
【００７４】
【数４】
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［本発明の態様］
［１］ 約５０ｎｍ〜約１０００ｎｍの平均直径の、水不溶性の微小滴マトリックスの、安定な無菌の注射可能な水性分散物であって、（ａ）約１〜約１５％のプロポフォール（propofol）、（ｂ）約１〜約８％のプロポフォール可溶希釈剤、（ｃ）約０．５〜約５％の表面安定化両親媒性剤、（ｄ）張性調節剤として働く、医薬的に受容できる水溶性ポリヒドロキシ添加剤、及び（ｅ）ただし、プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤に対する比が約１：４〜約１：０．１であり、プロポフォールの表面安定化両親媒性剤に対する比が約１：０．８〜約１：２．５であり、そして該分散物が約０．８〜約１５センチポイズの粘度を有し、 ここで、該配合物は（１）次の試験によって測定された、少なくとも７日間の、Staphylococcus aureus (ATCC 6538)、Escherichia coli (ATCC 8739及びATCC 8454)、Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)、Candida albicans (ATCC 10231)及びAspergillus niger (ATCC 16403)のそれぞれの初期接種物からの０．５log増加以下と定義されるように、微生物生長を抑制し： 該試験において、各微生物の洗浄サスペンションが２０〜２５℃の範囲の温度で、ｍＬあたりほぼ１０００コロニー形成単位（ｃｆｕ）で、別々のアリコートの配合物へ加えられ、その後該アリコートを２０〜２５℃でインキュベートして、該生物のコロニーを２４、４８時間及び７日後、または他の適切な期間後に計数することによって定義された、接種された配合物内の微生物の生育力について試験し、 次の試験によって証明されるように、注入部位でほとんどまたは全く刺激を生じない： 該試験において、ラットの尾静脈内、ほぼ３０秒間、２〜３日連続で、体重を基準として１２．５ｍｇ／ｋｇの１回の毎日の大量注射として投与した結果、ラットの尾部の直径の視覚的増加が注射後４８時間後にみとめられない、前記の分散物。
［２］ 表面安定化両親媒性剤が、イオン化可能かまたはイオン化不能なリン脂質若しくはコレステロールまたはこれら表面安定化両親媒性剤の混合物から選択される１種以上の天然または合成表面変性剤であり、表面安定化両親媒性剤の全量がプロポフォールの表面安定化両親媒性剤に対する比が約１：０．８〜１：２．５であり、そして個々の表面安定化両親媒性剤のタイプ及び量が、（ｉ）該分散物がヒトまたは動物の血液の溶血についての能が存在しないかまたは最小限であり、そして（ｉｉ）注射部位における組織への刺激が存在しないかまたは最小化されており、そして（ｉｉｉ）該分散物が、静脈内投与によって温血動物及びヒト対象において麻酔効果を誘起することを与えるように選択される、１に記載の分散物。
［３］ プロポフォール可溶希釈剤が、合成若しくは天然脂肪酸、それらのトリグリセリド若しくはそれらの他の適切なエステル、またはそれらの混合物である、１に記載の分散物。
［４］ プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤に対する比が約１：３〜約１：０．５である、１に記載の分散物。
［５］ プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤に対する比が約１：２〜約１：１である、１に記載の分散物。
［６］ プロポフォール可溶希釈剤が、中鎖トリグリセリド及び植物油の混合物である、１に記載の分散物。
［７］ 中鎖トリグリセリドの植物油に対する比が１：３〜３：１である、６に記載の分散物。
［８］ 水不溶性マトリックスが、２の表面安定化両親媒性剤と４〜７のプロポフォール可溶希釈剤とプロポフォールとの混合物を含む、１に記載の分散物。
［９］ 分散物が、約２〜約１０％のプロポフォールを含む、１に記載の分散物。
［１０］ 分散物が、約２５０〜約７００ミリオスモラールの浸透圧のプロポフォール含有分散物を与える医薬的に受容できる水溶性ポリヒドロキシ添加剤を含む、１に記載の分散物。
［１１］ 浸透圧が約３００〜約５００ミリオスモラールである、１に記載の分散物。
［１２］ 粘度が約２〜約５センチポイズである、１に記載の分散物。
［１３］ 約５０ｎｍ〜約１０００ｎｍの平均直径の水不溶性微小滴マトリックスの安定で無菌かつ抗菌の水性分散物を投与することによって、プロポフォールを含む配合物の注射の際の刺激を減じるかまたは実質的に完全に取り除く方法であって、該水性分散物が本質的に、活性成分として約１〜約１５％のプロポフォール、約７％以下のプロポフォール可溶希釈剤、及び約０．８〜約４％の表面安定化両親媒性剤から成り、そして該分散物の水性相は医薬的に受容できる水溶性ポリヒドロキシ張性調節剤を含み、該分散物は追加の殺菌または静菌保存剤を含まず、但し、プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤に対する比は約１：４〜約１：０．１であり、そしてプロポフォールの表面安定化両親媒性剤に対する比は約１：０．８〜約１：２．５であり、そして該分散物が約０．８〜約１５センチポイズの粘度を有することを条件とする、前記の方法。
［１４］ 約５０ｎｍ〜約１０００ｎｍの平均直径の水不溶性微小滴マトリックスの安定で無菌かつ抗菌の注射可能な水性分散物の麻酔誘導量を麻酔誘導が必要な対象に投与することを含む、麻酔を誘導する方法であって、該水性分散物が本質的に、活性成分として約１〜約１５％のプロポフォール、約７％以下のプロポフォール可溶希釈剤、及び約０．８〜約４％の表面安定化両親媒性剤を含み、そして該分散物の水性相は医薬的に受容できる水溶性ポリヒドロキシ張性調節剤を含み、該分散物は追加の殺菌または静菌保存剤を含まず、但し、プロポフォールのプロポフォール可溶希釈剤に対する比は約１：４〜約１：０．１であり、そしてプロポフォールの表面安定化両親媒性剤に対する比は約１：０．８〜約１：２．５であり、そして該分散物が約０．８〜約１５センチポイズの粘度を有することを条件とする、前記の方法。