(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）  １種もしくはそれ以上の両親媒性物質及び製薬学的に活性な化合物を含有する水性一次分散液を０．３〜０．７ｍｍの直径のノズル腔を有する円筒状ホモジナイザーノズル（３）を通してポンプ供給して水性予備分散液を調製し、
（ｂ） 該水性予備分散液を０．１〜０．５ｍｍの直径のノズル腔を有する円筒状ホモジナイザーノズル（２）を通して６００バール〜９００バールの圧力下でポンプ供給してリポソーム分散液を調製する
ことを特徴とする、製薬学的に活性な化合物の担体としてリポソーム分散液を有する非経口的に投与可能な製薬学的調剤用の配合物の調製法。
【請求項２】
予備分散液をリポソーム分散液の平均粒度が４ｎｍ〜８ｎｍの標準偏差で３５ｎｍ〜８０ｎｍの範囲内になるまで円筒状ホモジナイザーノズルのノズル腔（１３）を通してポンプ供給することにより再循環させることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の方法。
【請求項３】
予備分散液をホモジナイザーノズル（２）の前に連結された熱交換器（８）により５０℃〜７０℃の範囲内の温度に加熱することを特徴とする請求の範囲第１又は２項に記載の方法。
【請求項４】
撹拌容器（１）中の予備分散液を≦５０℃の温度に保つことを特徴とする請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
ホモジナイザーノズル（２）中で加熱された分散液をホモジナイザーノズル（２）の後に連結された熱交換器（９）により５０℃〜７０℃の範囲内の温度に冷却することを特徴とする請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
入り口及び出口溝を有する少なくとも１つのホモジナイザーノズルから出発して請求の範囲第１〜５項のいずれかに記載の方法を実施するための装置であって、ホモジナイザーノズルがスチール本体（１２、１９）中に押し込まれた、０．１ｍｍ〜０．５ｍｍの腔（１３）を有する硬質セラミック板（１１）からなり、そして腔（１３）への入り口溝（１４、１６）及び腔（１３）からの出口溝（１５、１８）が同様にスチール本体（１２、１９）中に組み込まれていることを特徴とする装置。
【請求項７】
硬質セラミック板（１１）が酸化ジルコニウム又は炭化ケイ素からなることを特徴とする請求の範囲第６項に記載の装置。
【請求項８】
スチール本体（１９）が互いに対になって向かい合う数個のホモジナイザーノズルを有し、入り口溝（１６）が平行に連結されており、そしてスチール本体（１９）中の出口溝（１７）が共通の収集溝（１８）中に開いていることを特徴とする請求の範囲第６又は７項に記載の装置。
【発明の詳細な説明】
本発明は製薬学的活性化合物のための担体としてリポソーム分散液を有する非経口的に投与可能な製薬学的調剤のための配合物の製造法に関し、両親媒性物質の水性予備分散液がリポソーム分散液の調製のために高圧ホモジナイザーに供給される。この型の方法は原理的にＤＥ  ４２  ０７  ４８１に記載されている。
リポソームの調製のための多くの方法が記載されている（例えばＡｒｎｄｔ，“Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ”，Ａｋａｄｅｍｉｅ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｂｅｒｌｉｎ，１９８６を参照されたい）。これらの研究の主題は多くの場合実験室規模における実験である。この場合の通常の出発のプロセスは有機溶媒中のリン脂質の溶解であり、有機溶媒はさらなる調製プロセスの経過中に均質化の前に再び除去される。（ＤＥ  ３５  １５  ３３５）。
ＤＥ  ４２  ０７  ４８１に従う直接分散法の場合、リン脂質及び結晶性活性化合物が直接水中に分散される。水中におけるリン脂質の膨潤の後、粗く分割されたリポソームが最初に生じ、それを次いで機械的に粉砕しなければならない。ここで得られるリポソームの得られる脂質二重層上に活性化合物が付着又は堆積する。多くのリポソーム配合物は熱−滅菌可能でないので（粒子凝集、リン脂質加水分解）、リポソーム分散液が滅菌−濾過可能になるまで（粒度＜２００ｎｍ）高圧均質化によるリポソームの粉砕が必要である。
この場合の粉砕は２段階で行われる：
ａ）最初にリポソーム分散液を高速回転子／固定子機械を用いて５００〜５０００μｍの粒度に粉砕する。
ｂ）次いでそれ自体既知の高圧ホモジナイザーを用いて４０〜１００ｎｍの粒度に微粉砕を行う。
本発明は非経口的投与のための可能な限り微細な粒度を有するリポソームを再現性のある製品品質で調製するための方法の開発の目的に基づいている。この場合リポソーム分散液は一方でフィルター残渣なくして滅菌−濾過が可能でなければならず、他方で非経口的投与をされた場合に血管の最も微細な分枝を活性化合物が通過できる程微細でなければならない。
この目的は、本発明に従い、両親媒性物質の水性予備分散液を５００〜９００バール、好ましくは７００バール〜８００バールの圧力下でポンプにより、０．１ｍｍ〜０．５ｍｍ、好ましくは０．１ｍｍ〜０．２ｍｍの直径を有する円筒状ホモジナイザーノズルに通過させることで達成される。これらの条件下で３０ｎｍ〜１００ｎｍの平均粒度を有する極めて微細な粒子の分散液を得ることができる。
適した両親媒性物質は特にリン脂質、コレステロール誘導体及び合成両親媒性化合物である。
予備分散液の調製のために、両親媒性物質及び製薬学的化合物を含有する水性分散液から成る一次分散液を０．３ｍｍ〜０．７ｍｍの直径を有する比較的粗い円筒状ホモジナイザーノズルにポンプで通過させるのが有利である。この型の予備均質化により、予備分散のために現在まで多くの場合に用いられた回転子／固定子機械（rotor/stator machines）で起こる粒子汚染を避けることができる。
好ましい実施例に従うと、リポソーム分散液の平均粒度が３ｎｍ〜７ｎｍの標準偏差で３５ｎｍ〜８０ｎｍの範囲内となるまで予備分散液をポンピングによりホモジナイザーノズルを介して再循環させる。これらの粒子の特性は、特に予備分散液が１０〜３０回ホモジナイザーノズルを通って循環して流されると達成される。
分散液がホモジナイザーノズルの前に連結されている熱交換器により均質化回路において５０℃〜７０℃の範囲内の温度に加熱されると特に良い結果が達成される。
保存容器を比較的低い温度レベルに保ち、ノズルの直前のみで分散液を加熱するのが好ましい。
ホモジナイザーノズルにおいてエネルギーの散逸及びかくして加温が起こるので、ホモジナイザーノズルの直後で、その後に連結されている熱交換器を用いて５０℃〜７０℃の範囲内の温度に分散液を再び冷却するのが良い。
リポソーム分散液の再循環のために高圧ダイヤフラム−型往復ポンプを用いるのが有利であり、それは摩耗及び潤滑剤がポンプ室に到達できず、かくして汚染源として堆積しないという利点を有する。
該方法を行うための装置は入り口及び出口溝を有する少なくとも１つのホモジナイザーノズルを含み、ホモジナイザーノズルがスチール本体中に押し込まれた０．１ｍｍ〜０．５ｍｍ、好ましくは０．１ｍｍ〜０．２ｍｍの腔（bore）を有する硬質セラミック板から成ることならびに腔への入り口溝及び腔からの出口溝が同様にスチール本体中に組み込まれていることを特徴とする。
高いノズルの実用寿命を達成するために、酸化ジルコニウム又は炭化ケイ素から作られている硬質セラミック板をスチール本体中に押し込むのが有利である。
本発明のさらなる発展に従うと、スチール本体は互いに対になって向かい合う数個のホモジナイザーノズルを有し、ホモジナイザーノズルの入り口溝は平行に連結され、スーチル本体中の出口溝は共通の収集溝中に開いている。この実施態様は特に高い処理量において非常に適していることが証明された。この方法で正確なスケールアップを達成することができる。
以下の利点が本発明により達成される：
・特に水中における溶解性が低い活性化合物を有する安定なリポソーム配合物の調製及び提供。
・高い再現性を以て狭い粒度分布を達成すること。
・特に温度に敏感な活性化合物の穏やかな処理。
・ノズルホモジナイザー装置のモジュール構造の故の、問題がなくて正確なスケールアップ。
・ノズル摩耗の最小化及び高圧ダイヤフラム−型往復ポンプの使用の故の汚染源の減少。
・ギャップ及びデッドスペースが少ない構造の故の高い精製能力（ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ）。
・装置の実用寿命の向上。
下記において図面を用いて本発明の代表的態様をさらに詳細に示す：
図１は装置のフロースキームを示し、
図２はホモジナイザーノズルの構造を示し、
図３は平行に連結された数個の個別のノズルを含むノズルホモジナイザーの側面図を示し、
図４は図３に示されているホモジナイザーノズルを通る断面図を示し、
図５は代表的実施例Ｎｏ．２の場合の結果のグラフ図を示す。
図１に従うと、加熱可能及び冷却可能な撹拌容器１中で撹拌し、５０℃〜７０℃の温度及び５００〜１０００バールの圧力においてポンプにより、０．２ｍｍの直径を有するホモジナイザーノズル２又は０．５ｍｍの直径を有するホモジナイザーノズル３に、高圧ダイヤフラム−型往復ポンプ４を用いて４０〜２００バールの圧力において通過させることにより、レシチン／水粗分散液を最初に調製する。所望のノズル２又は３への切り替えはバルブ５、６及び７を用いて行われる。均質化は５０℃〜７０℃においてより好ましく進行するので、混合物をあらかじめ熱交換器８で加熱し、例えば加水分解の故の温度−関連の製品損傷を避けるために熱交換器９において再び冷却する。分散液はホモジナイザーノズルを通過する間にさらに加熱されるので、この冷却は必要である。撹拌容器１における温度は製品の損傷を最小にするために低いレベル（≦５０℃）に保たれる。次いで活性化合物を加え、撹拌機１０を用いて予備分散させる。この方法で調製される一次分散液を次いで比較的大きい直径を有するホモジナイザーノズル３に５回ポンプで通過させることにより予備分散させ、次いで熱交換器８及び９ならびにもっと細かいホモジナイザーノズル２を通って循環させて微細分散させる。例えば５００〜８００バールのホモジナイザー圧力における２０サイクルの後、３５〜６０ｎｍの平均粒度が達成されたら、リポソーム配合物を完全に冷却してポンプで排出し、滅菌−濾過する。
予備分散液の調製のために、水、リン脂質及び活性化合物の３つの成分のすべてを撹拌容器１において予備分散させ、次いでそれをノズル３で予備粉砕し、その後ノズル２を介してそれを微細に均質化することもできる。
図２は厳密に詳細なホモジナイザーノズルの構造を示す。それは例えば酸化ジルコニウムの硬質セラミック板１１から成り、それはスチール板１２中に押し込められ、中心に約０．２ｍｍの直径の円筒状ノズル腔１３を有する。ノズル腔１３は流れの方向に円錐状に広がっている。分散液のための入り口１４はノズル腔１３の前にある。出口１５は円錐状の広がりに連結している。この実施態様の場合、ノズルの後に発生するジェットにより破壊され得る向き合った壁面が存在しないのが重要である。この理由でノズルが互いに対になって向き合い、液体ジェットの衝撃が互いに均衡し、まだ存在する残留エネルギーを粉砕に用いることができるような配置が好ましいはずである。
図３及び４は、平行に連結され、星形の回転対称配置でに互いに対になって向き合っており（図４を参照されたい）、共通の環状空間供給ライン１６に連結されている多くのノズル腔を有する高処理量のためのノズルホモジナイザーの実施態様を示す。分散されるべき液体は環状空間供給ライン１６を通過し、分散又は均質化の後に出口溝１７を通って中心の共通収集溝１８中に流れる。すべての部品１１、１６、１７及び１８は円筒状スチールブロック１９中に組み込まれている。
ノズル腔１３及び円錐状の広がりを有するセラミック板１１（図２を参照されたい）はスチール本体１２中に押し込まれる前に正確な寸法に製造される。この場合腔径は０．１〜０．５ｍｍであり、長さ／直径比は１．５〜２である。図３及び４に示されている通り、腔は出口溝１７の直径まで広がっている。
セラミック円板における円形の腔の他に、楕円又はスリットなどの非円形の断面を有するノズル腔も可能である。全−セラミック構造も考えられるであろう。しかし可能な限り微細な粒度を有する再現性のある製品品質及び可能な限り低い摩耗という目的の観点から、スチール／セラミック複合構造が最も簡便であり、それは有意により高い製造精度が達成され、それは非常に高い処理量のために及び平行に連結される多くのノズルの場合に特に重要だからである。
代表的態様
実施例１：
図１に示される装置に６１の容積を有する撹拌容器１、６００１／時の処理量において最高で９００バールを達成することができる３重ダイヤフラム−型ポンプ４ならびにノズル２（ＳＤ１）の場合に０．２ｍｍの２つの向かい合った腔を有し、ノズル３（ＳＤ２）の場合に０．５ｍｍの直径の２つの向かい合った腔を有する図３及び４に示されているノズルホモジナイザーを備える。
撹拌容器１において、５．５９ｋｇの蒸留水に窒素を用いて３０分間通気する。通気の後、１６．２ｇのアスコルビン酸ナトリウムを水に溶解し、次いで５８０．５ｇの精製された卵レシチン（ホスファチジルコリン＞９４％）を加える。この混合物を高速撹拌機１０を用いて６５℃において３０分間分散させる。次いで分散液を８００バール及び６５℃（容器温度５０℃）における５回通過によりノズル２を用いて均質化する。次いで１４５ｇの活性化合物２−アミノ−１，４−ジヒドロ−５−シアノ−６−メチル−４−（３−フェニルキノリン−５−イル）ピリジン−３−カルボン酸イソプロピルを加え、２５バールの圧力においてノズル３を用いて予備均質化し、同様に５回再循環させる。次いで混合物を６５℃及び８００バールの予備圧における２０回通過によりノズル２を用いて均質化する。平均粒度は４８ｎｍであり、５ｎｍの標準偏差を有する。分散液は問題なく滅菌−濾過することができる。
実施例２：
実施例１に従い、７００バールのホモジナイザー圧力において異なる操作数（ｎｕｍｂｅｒ  ｏｆ  ｒｕｎｓ）を用いてバッチを調製する。結果を図５においてグラフにより示し、ナノジェット型の実験室用高圧ホモジナイザーで調製された同じ処方の１１バッチと比較する。出発粒度がより粗いにもかかわらず、本発明の方法を用いると、同じホモジナイザー圧力及び同じ操作数を用いて有意により微細な粒度が達成される。
実施例３：
８００ｇの注射用水を撹拌容器において窒素を用いて１０分間通気する。次いで１．１ｇのアスコルビン酸、１５０ｇのグルコース及び１ｇのＬ−アルギニンをこの量の水に溶解する。１．６６７ｇのニモジピン及び８３．３５ｇの高度に純粋な卵リン脂質（例えばＬｉｐｏｉｄ  ＥＰＣ）をこの媒体中に分散させ、窒素−通気された水を用いて１０５５．５ｇとする。
この分散液を高速撹拌機、例えばＵｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを用いて窒素保護下において７５℃で３０分間予備均質化する。次いでそれを直径が０．２ｍｍであり、薄刃の入り口及び出口ならびに０．４ｍｍ〜４５ｎｍのサファイア円板の厚さを有するの２つの向かい合ったサファイアノズルを有する実施例１に示されている装置を用い、７５℃及び８００バールにおいて均質化する。
分散液を冷却し、滅菌濾過の後に２５０ｍｌか又は５０ｍｌのびんに充填し、凍結乾燥する。
凍結乾燥物は、等調グルコース溶液を用いて２５０ｍｌにか又は注射用水を用いて５０ｍｌに再構成することができる。粒度は５０ｎｍであり、７ｎｍの標準偏差を有する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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