(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
蔗糖をイソマルチユロース及びトレハルロースを含有する生成物に酵素転換し、次いで水素添加して6-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール (=1,6-GPS)と1-O-α-D-グルコピラノシル-D-マンニトール (=1,1-GPM)と1-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール (=1,1-GPS)とを含有する生成物を形成する、1,6-GPSと1，1-GPMと1,1-GPSとを内容物とする甘味料の製造方法であって、
a) 第１段階では、蔗糖を「異性化蔗糖」と称され、そしてトレハルロースとイソマルチユロースを含有し、かつ、少なくとも８５重量％の二糖類を含む糖類混合物に酵素転換し、
b)  第２段階では、未反応の残存蔗糖を、酵素及び／又はＨ型強酸性陽イオン交換体を用いて加水分解することにより「異性化蔗糖」から除去し、
c)  次の段階では、「異性化蔗糖」を触媒の存在下で水素添加し、そして
d)  6-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール (=1,6-GPS)と1-O-α-D-グルコピラノシル-D-マンニトール (=1,1-GPM)と1-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール (=1,1-GPS)との混合物を分離する、
ことを特徴とする甘味料の製造方法。
【請求項２】
蔗糖の酵素転換が、蔗糖の酵素転換をするシュードモナス・メソアジドフィラ種の菌体を用いて水溶液中で実施され、そして５〜１０重量％の1,6-GPSと３０〜４０重量％の1,1-GPSと４５〜６０％の1,1-GPMとの混合物が分離されることを特徴とする請求項１記載の甘味料の製造方法。
【請求項３】
蔗糖の酵素転換が、シュードモナス・メソアジドフィラ MX-45(BP 3619)の菌体を用いることを特徴とする請求項２記載の甘味料の製造方法。
【請求項４】
触媒の存在下で水素添加の前又は後に、さらなる段階として、得られた混合物をクロマトグラフにより異性化蔗糖又は水添された異性化蔗糖を分離することを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の甘味料の製造方法。
【請求項５】
クロマトグラフによる分離が、ナトリウム、カリウム又はカルシウム型の強酸性陽イオン交換樹脂、あるいは Si/Al比が50より大きいゼオライトを用いて、混合物中のオリゴ糖アルコール及び／又は単糖アルコールを分離することを特徴とする、請求項４記載の甘味料の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新しい甘味料、その製造方法、及びそれを食品または嗜好品に利用する方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
蔗糖はカロリーが高く、虫歯の原因となり、また糖尿病患者には適さず、一方サッカリン、サイクラメートまたはアスパルテームのような合成甘味料は雑味がありボディー効果が無いため、これらとは異なる別の甘味料が求められている。このような甘味料として今までに、虫歯の原因とならない低カロリーの甘味料として、マルチトール、ラクチトール及びイソマルチトールが提案されてきている。しかし、マルチトールとラクチトールはシロップ状のため使用が限られており、イソマルチトールは経済的な方法で製造することができなかった。
【０００３】
イソマルチトールは、例えばドイツ特許明細書 DE 22 17 628 A1 に述べられているように、イソマルチュロースを中間生産物としてこれを触媒存在下で水素添加させることによって得られる。中間生産物のイソマルチュロースの収率はわずか４５％しかないことから、イソマルチトールの総合的な収率は４１％にとどまった。
【０００４】
ヨーロッパ特許出願公開第 28 900 号、同 49 472 号および同 91 063 号明細書では、固定化バクテリア菌体を用い蔗糖をイソマルチュロースへ、約８０％の収率で転換（本明細書では、「転移」という）させることができる。しかし、イソマルチトールの製造には精製されたイソマルチュロースが必要なことから、イソマルチュロースの結晶化の段階で収率の低下が生じでしまった。
【０００５】
また、イソマルチトールは溶解度が小さいため、食品の中で晶出しやすいという欠点がある。そのため、例えばチョコレートではざらついた食感となり、ハードキャラメルは透明感を失い、マーマレード中では晶出する。
【０００６】
ドイツ特許出願公開第 25 20 173 号明細書では、イソマルチュロースの中性水溶液を触媒の存在下で還元することによって、6-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール (=1,6-GPS)の他に、立体異性体である1-O-α-D-グルコピラノシル-D-マンニトール (=1,1-GPM)がほぼ１：１の重量比で得られることが知られている。1,1-GPMは溶解度が小さいため容易に分離することができる。また、低カロリーでボディー効果があるため糖尿病患者用の食事療法食には適しているが、低溶解性のため食品中でイソマルチトールよりも容易に晶出しやすく、また甘味度が蔗糖の約４０％であるため同じ甘味効果を得るためには多量に使用しなければならないという問題点がある。
【０００７】
しかし、1,6-GPSや1,1-GPMと他の糖アルコールまたは糖を混合しても満足できる製品は得られていない。結晶化を抑制する性質を有するソルビトールを用いても、高吸湿性で粘着性のある製品が得られるだけである。
【０００８】
ヨーロッパ特許出願公開第 109 009 号明細書には、プロタミノバクター・ルブラム(Protaminobacter rubrum)(CBS 574.77)を用いて蔗糖から製造した、以下の組成を有する転移反応生成物が記載されている。
【０００９】
フラクトース                  乾燥固形分重量比    ５−８％
グルコース                    乾燥固形分重量比    ２−５％
蔗糖                          乾燥固形分重量比    ０−０．５％
イソマルチュロース            乾燥固形分重量比  ６５−７２％
トレハルロース                乾燥固形分重量比  １０−２０％
その他のオリゴ糖類            乾燥固形分重量比    ３−６％
このような糖混合物は、糖尿病患者用の食事療法食には適さない。なぜならば、これらのうちの幾つかの成分は、カロリー源となり、インスリンの分泌を刺激し、う蝕を促進するからである。また、この糖混合物を遊離または固定化バクテリア細胞と共に約１００時間適当な条件下で維持することによって、トレハルロースの含有量を３５％まで上昇させることができるが、この方法は経済的ではない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
それゆえ、本発明は次のような課題をもつ。すなわち、新しい、低カロリーで虫歯の原因にならず、かつ、糖尿病患者に適した甘味料であって、十分なボディー効果と共に好ましい甘味効果を有しており、固形化するのが簡単で、経済的に製造でき、利用上十分な高濃度で再結晶化が起こらない、このような甘味料を提供することを本発明の課題とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
この課題を解決するために、請求項１の甘味料の製造方法、請求項６〜９の甘味料、及びこの甘味料を食品や嗜好品に利用する方法を提案する。下位の請求項においてこれらをさらに発展させたものを提案する。
【００１２】
この発明は、蔗糖の転移反応段階、未反応の蔗糖の除去、及び触媒存在下の水素添加反応を組み合わせ、好ましくは水素添加反応の前後の何れかにクロマトグラフィーで処理し、特に菌株を特別に選択することによって、好ましい特性を有する甘味料が得られるという驚くべき確証に基づいている。
【００１３】
以下、本発明を詳しく説明するが、必要に応じて次の略号を使用する。
【００１４】
1,6-GPSは、 6-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール
1,1-GPSは、 1-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール
1,1-GPMは、 1-O-α-D-グルコピラノシル-D-マンニトール
さらに留意しておかなければならないことは、水素添加により
イソマルトースから       1,6-GPS が１００％、
イソマルチュロースから   1,1-GPM が４３〜５７％、
1,6-GPS が４３〜５７％、
トレハルロースから       1,1-GPM が５０〜８０％、
1,1-GPS が２０〜５０％ が得られることである。
本発明の方法によると、第１段階では、プロタミノバクター・ルブラム(Protaminobacter rubrum)(CBS574.77)、セラチア・プリムチカ(Serratia plymuthica)(ATCC 15928)、セラチア・マルセッセンス(Serratia marcescens)(NCIMB 8285)、ロイコノストック・メセントロイデス(Leuconostoc mesenteroides)(NRRL-B 512 F (ATCC 10830a))またはエルヴイニア・ラポンティシ(Erwinia rhapontici)(NCPPB 1578又はATCC29283)の菌株を用いることによって、蔗糖の酵素転換を行なう。
【００１５】
第２段階では、転移反応によって得られた「異性化蔗糖」から未反応の残存蔗糖を除去する。これが本発明の核心部分であり、転化酵素及び／または転化樹脂を使って純粋な蔗糖溶液をグルコースとフラクトースからなる混合物に加水分解することは従来から知られていることであるが、他の二糖類が多量に存在する中これらを損なわずに蔗糖のみを加水分解できることは今までに知られていなかった。
【００１６】
第３段階では、残存蔗糖が除去された「異性化蔗糖」を水素添加する。この時、以下の組成の混合物が得られる。
【００１７】
マンニトール（フラクトースから）                   重量比  ３〜４％
ソルビトール（フラクトースとグルコースから）       重量比  ４〜９％
6-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール
(1,6-GPS)    （イソマルチュロースから）            重量比１０〜５５％
1-O-α-D-グルコピラノシル-D-ソルビトール
(1,1-GPS)    （トレハルロースから）                重量比  ２〜２０％
1-O-α-D-グルコピラノシル-D-マンニトール
(1,1-GPM) （イソマルチュロースとトレハルロースから）重量比 ２〜２０％
オリゴ糖の糖アルコール                              重量比   ３〜６％
蔗糖                                                重量比   １％以下
ＧＰＳ／ＧＰＭの比率は水素添加条件（アルカリ性／中性）により、およそ２：１から１：７である。
【００１８】
オリゴ糖は、製品の利用上の性質あるいは生理学的な性質に悪影響を及ぼす可能性があるので、付加的かつ優先的に陽イオン交換樹脂あるいはゼオライトを用いたクロマトグラフィーによってこれを分離する。
【００１９】
クロマトグラフィー分離によって得られたソルビトール、マンニトール、1.6-GPS、1.1-GPS、 1.1-GPM からなる混合物は、 液状または乾燥状態の流動性の高い甘味料として使用することができる。
陽イオン交換樹脂またはゼオライトを用いたクロマトグラフィー分離により、「異性化蔗糖」生成物から水素添加できない未反応の残存蔗糖や、特にグルコース、フラクトース及びオリゴ糖を分離除去することもできる。
【００２０】
乾燥固形分含量が高い食品にこの甘味料をより良く混合するためには、1.1-GPS の含有量を高めることによって 1.1-GPM の結晶化傾向を抑制することが有利である。
【００２１】
これは次のようにしても達成することができる。すなわち、 水溶液中で蔗糖をシュードモナス・メソアシドフィラまたはアグロバクテリウム・ラジオバクター種の菌の持つ酵素によってトレハルロースを主成分とする糖の混合物に変え、 この混合物を触媒存在下水素添加し、精製する。 特にシュードモナス・メソアシドフィラ MX-45（BP3619）またはアグロバクテリウム・ラジオバクター MX-232（BP 3620）が使用される。
ソルビトール、マンニトール、1.6-GPS、 1.1-GPS 及び 1.1-GPM からなる液状の甘味料を乾燥状態にするには、 溶剤として存在する水を蒸発さなければならない。 その際、 あらかじめソルビトールとマンニトールの含有量を 5 〜 0% に、 好ましくは 1 〜 0% に低下させることが有利である。 これは適当な陽イオン交換樹脂ないしゼオライトを用いたクロマトグラフィー分離によって行なう。
この発明の方法で製造された混合物は、 蔗糖に似た雑味のない甘味を有する。 しかし、 甘味度は 40 〜 50% しかないため、必要に応じて合成甘味料を添加することによって甘味度を高めることができるし、 例えば蔗糖と同等の甘味度に調整することもできる。 カラメルやマーマレードに使用する場合、蔗糖と同程度のボディー効果を与えても再晶出が起こらない。
【００２２】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２３】
【実施例】
実施例１
A. 生体触媒の製造
プロタミノバクタ・ルブラム(Protaminobacter rubrum)（CBS 574.77）菌株の保存スラント上の菌体を、甜菜糖工場の濃厚汁 8 kg （乾燥固形分 = 65%）、コーンスティープリカー  2 kg 、 （NH4）2 HPO4  0.1 kg 及び蒸留水 89.9 kg （必要に応じpH 7.2 に調整）からなる殺菌培地 10 mlに懸濁した。 この懸濁液を種菌として、 上記成分の培地 200 ml が入った 1 リットルフラスコ中で振盪機による前培養を行なった。
【００２４】
１０本のフラスコで、29°C 30 時間前培養した後、 内容物（合計量は 2ｌ）を、上記培地 18ｌが入っている 30ｌの小型培養装置の中に植菌し、 29°C で毎分20ｌの空気と毎分 350 回転の撹拌速度で培養した。
菌数が 5 × 109/ml 以上になった時点で培養を終了させた。 遠心分離により培養液から菌体を集菌し、 その菌体を2% のアルギン酸ナトリウム溶液の中で懸濁させた後、 その懸濁液を 2% の塩化カルシウム溶液に滴下して細胞を固定化した。
この固定球を水で洗浄した。 この生体触媒は + 4°C で数週間保存可能であった。
【００２５】
B. 「異性化蔗糖」の製造
A で得られた固定化細胞を、 25 〜 30°C に温度調節されたカラム型リアクターに充填し、 乾燥固形分 35 〜 45% の蔗糖溶液を連続的に通液した。 流速は、 投入された蔗糖の少なくとも 97% が転移されるように調節した。
カラム型リアクターから出て来た「異性化蔗糖」の HPLC 分析により以下の組成が明らかになった。
フラクトース                     乾燥固形分     ２．５％
グルコース                       乾燥固形分     ２．０％
蔗糖                             乾燥固形分     １．０％
イソマルチュロース               乾燥固形分   ８２．５％
トレハルロース                   乾燥固形分     ９．５％
イソマルトース                   乾燥固形分     １．５％
その他のオリゴ糖類（DP＞ 3）     乾燥固形分     １．０％
C.蔗糖の分離
このようにして得られた「異性化蔗糖」から水素添加できない未反応の残存蔗糖を除去するため、H+型の強酸性陽イオン交換体あるいは適切な酵素を用い、カラム型リアクターの中で以下のように処理した。
【００２６】
i) 強酸性陽イオン交換体による残存蔗糖の除去
強酸性陽イオン交換体（例、 レヴァチット(Lewatit(R)) 0C 1052）100 ml を 60°C に加温した適当なガラス製のカラムに充填し、 HCl による周知の方法でH+型に再生した。
H+型の陽イオン交換体が充填されたカラムに、Bで得られた「異性化蔗糖」をポンプで100 ml・ｈ-1 の流速で通液した。 カラムの出口で得られた生成物の組成はHPLC 分析により以下の通りであった。
【００２７】
フラクトース              乾燥固形分     ３．０％
グルコース                乾燥固形分     ２．５％
蔗糖                                     −
イソマルチュロース        乾燥固形分   ８２．３％
トレハルロース            乾燥固形分     ９．５％
イソマルトース            乾燥固形分     １．５％
その他のオリゴ糖類        乾燥固形分     １．２％
ii）酵素による蔗糖の除去
固定化転化酵素（例えばコペンハーゲンのノボ ノルディスク社の SP 362）11 g （ベッド容量が 33 cm3 に相当する）を 、60°C に温度調節された適当なガラスカラムに充填した。
B で得られた「異性化蔗糖」を、 210 ml・ｈ-1 の流速で連続して通液した。「転化酵素カラム」から流出した生成物の組成はHPLC 分析により以下の通りであった。
【００２８】
フラクトース                     乾燥固形分     ３．０％
グルコース                       乾燥固形分     ２．５％
蔗糖                                            −
イソマルチュロース               乾燥固形分   ８２．５％
トレハルロース                   乾燥固形分     ９．５％
イソマルトース                   乾燥固形分     １．５％
その他のオリゴ糖類（DP＞ 3）     乾燥固形分     １．０％
両方の場合とも、 残存蔗糖はグルコースとフラクトースに完全に分解された。 単糖類の含有量はこれに応じて高くなっているが、「異性化蔗糖」その他の成分の含有量に変化はなかった。
D.「異性化蔗糖」の水素添加
「異性化蔗糖」の残存蔗糖除去物を、 ラネー・ニッケルの存在下 80°C で約 10 MPa の水素ガスで連続水素添加した。 ニッケルの分離とイオン交換樹脂による精製を行なった後の、 中性条件下で水素添加した「異性化蔗糖」水添物はおよそ以下の組成であった。
マンニトール                      乾燥固形分     １．５％
ソルビトール                      乾燥固形分     ４．０％
1.6-GPS                           乾燥固形分   ４４．４％
1.1-GPS                           乾燥固形分     ３．８％
1.1-GPM                           乾燥固形分   ４５．３％
水素添加された、及び
水素添加されてないオリゴ糖        乾燥固形分     １．０％
この生成物は水を蒸発させた後甘味料として使用できるが、 その吸湿性のために、特にオリゴ糖の含有割合により、 限られた形でしか使用することができなかった。 特に依然として存在するオリゴ糖の一部は、 小腸の中で分解されてソルビトール、 マンニトール、特にグルコースやフラクトースを遊離するので、 糖尿病患者用食品に用いるには問題がある。
実施例２
実施例 1 の A から C に従い「異性化蔗糖」を製造した。グルコース、フラクトース、オリゴ糖を除去するため、水素添加前にクロマトグラフィーによる糖の分離がなされた。その際、イソマルチュロース、イソマルトース、トレハルロースといった二糖類の損失が避けられなければならなかった。
【００２９】
クロマトグラフィーカラムとして、温度調節が可能で目皿の付いた長さ 10 m、直径 25 cm のカラムを使用した。 このカラムを完全に水で満たし、 続いて4 〜6% の架橋度の粒度約 0.4 〜 0.5 mm を有するカルシウム型強酸性陽イオン交換樹脂を、樹脂が完全に水で覆われるようにしながら供給した。
実施例 1 の A および B の方法で得られた「異性化蔗糖」から残存蔗糖を除去した後、 乾燥固形分として約 18 kg を約 75°C に温度調節されたカラムに供給し、 脱イオン水を用いて流速（線速）毎分約 2 cm で溶離した。 カラムの出口では 10 分毎に分画し、 各フラクションの糖組成を HPLC で分析した。
最初の 4 つのフラクションには、オリゴ糖のうちの約 60%、 イソマルチュロースうちの約 10%、 イソマルトースのうちの約 25% が含まれていた。 最後の 5つのフラクションにはフラクトースのうちの約 70%、 トレハルロースのうちの約
10%、 グルコースのうちの約 20% が含まれていた。
【００３０】
クロマトグラフィー処理によって得られた「異性化蔗糖」の組成は以下のようであった。
【００３１】
フラクトース              乾燥固形分     １．０％
グルコース                乾燥固形分     ２．３％
イソマルチュロース        乾燥固形分   ８５．１％
トレハルロース            乾燥固形分     ９．８％
イソマルトース            乾燥固形分     １．３％
その他のオリゴ糖類        乾燥固形分     ０．５％
この分離方法により少なくともオリゴ糖のうちの約 60%、 フラクトースの約 70%、 グルコースの約 20% を分離することができた。 ただし、 イソマルチュロースの 10%、トレハルロースの 10%、 イソマルトースの25% の損失を甘受しなければならない。
得られた生成物を実施例 1 C の方法で水素添加し、 以下の成分の混合物を得た。
マンニトール              乾燥固形分     ０．５％
ソルビトール              乾燥固形分     ３．３％
1.6-GPS                   乾燥固形分   ４３．８％
1.1-GPS                   乾燥固形分     ３．９％
1.1-GPM                   乾燥固形分   ４８．５％
その他のオリゴ糖類        乾燥固形分     ０．５％
実施例 1 で得られた生成物と比較して、 ソルビトールおよびマンニトールの含有量は少なかった。 また、水素添加されたオリゴ糖及び水素添加されないオリゴ糖の含有量は半分しかなかった。
実施例３
実施例 2 に準じた方法で行なったが、 ここでは Si/Al の割合を約 50 にしたゼオライトを分離カラムに充填した。
最初の 5 つのフラクションに、 オリゴ糖、 グルーコース、 フラクトースの全量とイソマルトースうちの約 50% が含まれていた。 そしてトレハルロースもイソマルチュロースもこれらのフラクションの中には見られなかった。
【００３２】
実施例１ および 実施例２ における「異性化蔗糖」中のイソマルトースの含有量は、乾燥固形分として 1.5 〜 1.3% なので、 この方法で損失する二糖類は約 0.8 ないし 0.5% にすぎなかった。 同時に、好ましくない存在であるオリゴ糖、 グルコース、 フラクトースは完全に分離除去された。
得られた「異性化蔗糖」の糖組成は以下の通りであった。
【００３３】
フラクトース                              −
グルコース                                −
イソマルチュロース        乾燥固形分    ８９．０％
トレハルロース            乾燥固形分    １０．２％
イソマルトース            乾燥固形分      ０．８％
その他のオリゴ糖類                        −
これらを実施例 1 D に準じた方法で水素添加し、 以下の成分の混合物を得た。
1.6-GPS           乾燥固形分    ４５．３％
1.1-GPS           乾燥固形分      ４．１％
1.1-GPM           乾燥固形分    ５０．６％
マンニトール、 ソルビトールおよびオリゴ糖が含まれていないこの生成物は、 ほとんど吸湿性がなく、糖尿病患者にも適したすばらしい甘味料であった。
実施例４
実施例 1 の方法で得られた、水素添加された「異性化蔗糖」を、 実施例 2 において水素添加の前段階で使用したようなクロマトグラフィーカラムを用いて処理を行なった。 この際、 水素添加された「異性化蔗糖」を乾燥分で約 18 kg供給し、 毎分 2 cm の流速（線速）で溶離した。 ただし、 この場合は、分離カラムにはナトリウム型の強酸性陽イオン交換樹脂を充填した。
最初の 3 つのフラクションには、オリゴ糖の全量と1.1-GPMのうちの約 4%が含まれていた。 さらに 4 から 8 までのフラクションには 1.1-GPM の残りのパーセント分、 1.1-GPS の全量、1.6-GPSのうちの約 99% 、マンニトールの約 50%とソルビトールのうちの少量が含まれていた。量の収支から、 4 から 8 までのフラクションは、GPMとGPSの合計含有量が約97重量%であることが明らかになった。 1.6-GPS、 マンニトールやソルビトールの残りのパーセント分は 9 以降のフラクションに溶離されていた。 クロマトグラフィー分離をアルカリ土類金属型の陽イオン交換体を用いた実施例２の方法に比べ、 二糖類と単糖類アルコールとの間の分離がよく行われ、 従って主生成物の中に97重量%以上の所望の二糖類アルコールを得ることができたのに対して、カルシウム型の陽イオン交換体では収率が約 85% であった。 驚いたことに、 利用可能な副産物として純度 98% 以上のソルビトールが収率 90% 以上で得られるというもうひとつの利点が判明した。
【００３４】
その生成物の成分は以下のような組成であった。
【００３５】
1.6-GPS           乾燥固形分    ４６．２％
1.1-GPS           乾燥固形分      ４．１％
1.1-GPM           乾燥固形分    ４９．６％
実施例５
同じように、 水素添加後、 クロマトグラフィー分離を行ったが、 今度は実施例 3 に従い、 ゼオライトを使用した。 水素添加された「異性化蔗糖」を 15 から 20 kg（乾燥固形分）供給し、 脱イオン水で溶離した。
得られたフラクションを分析したところ、 マンニトール、 ソルビトールおよびオリゴ糖が最初の 5 つのフラクションの中にすべて存在していることが判明していた。 さらにその中にはGPMのうちの約5%も含まれていた。 残りの GPM、 1.1-GPS ならびに 1.6-GPSの全量は、 フラクション 6 から 16 の中に存在した。
このようにして、 ソルビトール、 マンニトール、 オリゴ糖を除去し、所望の二糖類アルコールの 97% 以上を得ることに成功した。
【００３６】
実施例６
二糖類アルコールを含むフラクションを結晶化するには、 一般に水分を蒸発させる。このようにして例えば実施例 5 で得たフラクションを、 減圧下で蒸発させ乾燥固形分を 90 から 95% まで濃縮した後、 冷した平面の上で凝固させた後擦り潰した。 これにより、微粒で粘着性のないさらさらした生成物が得られた。
乾燥分が多い食品の中に甘味料を混入させるとき、 1.1-GPS の含有量を高めることによって1.1-GPM の結晶化傾向を抑制することが有利である。 このような甘味料は以下の実施例に示されるように、 他の種類の菌株を使用して得られる。
実施例７
シュードドモナス・メソアシドフィラ(Pseudomonas mesoacidophila) MX-45（BP 3619）菌株の保存スラント上の菌体を、甜菜糖工場の濃厚汁 8 kg （乾燥固形分 = 65%）、コーンスティープリカー 2 kg、（NH4）2 HPO4  0.1 kg 及び蒸留水 89.9 kg （pH 7.2 に調整）からなる殺菌培地 10 mlに懸濁した。 この懸濁液を種菌として、 上記成分の栄養液 200 ml が入った 1 リットルフラスコ中で振盪機による前培養を行なった。
【００３７】
１０本のフラスコで、29°C  30 時間前培養した後、 内容物（合計量は 2ｌ）を、上記培地 18ｌが入っている 30ｌの小型培養装置の中に植菌し、 29°C で毎分20ｌの空気と毎分 350 回転の撹拌速度で培養した。
菌数が 5 × 109/ml 以上になった時点で培養を終了させた。 遠心分離により培養液から菌体を集菌し、 その菌体を2% のアルギン酸ナトリウム溶液の中で懸濁させた後、 その懸濁液を 2% の塩化カルシウム溶液に滴下して細胞を固定化した。この固定球を水で洗浄した。 この生体触媒は + 4°C で数週間保存可能であった。
「異性化蔗糖」を製造するために、このようにして得られたシュードモナス・メソアシドフィラ MX-45（BP 3619）固定化細胞を、 約 25 〜 30°C に温度調節された円筒形リアクターに充填し、 乾燥固形分約 35 〜 45% の蔗糖溶液を連続して通液する。そのときの流速は、 供給された蔗糖の少なくとも 97% が転移するように調節した。
円筒形リアクターから出て来た「異性化蔗糖」の HPLC 分析により、 以下の成分が明らかになった。
フラクトース                   乾燥固形分     ０．２％
グルコース                     乾燥固形分     ０．２％
蔗糖                           乾燥固形分     １．０％
イソマルチュロース             乾燥固形分   １２．５％
イソマルトース                 乾燥固形分     ０．２％
トレハルロース                 乾燥固形分   ８５．７％
その他のオリゴ糖類（DP＞ 3）   乾燥固形分     ０．２％
このようにして製造された「異性化蔗糖」は、実施例 1 と同様に、 まず水素添加できない未反応の残存蔗糖を除去し、 次にラネー・ニッケルの存在下約80°Cで約 8 〜 12 MPa の圧力の水素ガスで連続的に水素添加した。
ニッケルの分離とイオン交換樹脂による精製を行なった後の、 中性条件下で水素添加した「異性化蔗糖」の組成は以下の通りであった。
【００３８】
マンニトール                乾燥固形分     ０．４％
ソルビトール                乾燥固形分     １．０％
1.1-GPM                     乾燥固形分   ５７．７％
1.1-GPS                     乾燥固形分   ３４．４％
1.6-GPS                     乾燥固形分     ６．４％
水素添加された、及び水素
添加されてないオリゴ糖      乾燥固形分     ０．２％
水素添加された、 および水素添加されていないオリゴ糖とソルビトールを生成物から除去するために、 水素添加後、 実施例４の方法に準じてナトリウムないしカリウム型の強酸性陽イオン交換樹脂を用いてクロマトグラフィー分離を行った。
【００３９】
フラクションの分析を行なったところ、 最初の 3 つのフラクションにはオリゴ糖と GPM のうちの約 4% が含まれていた。また 4 から 8 のフラクションには残りのGPM、 1.1-GPS の全量、 1.6-GPS の約 99% ならびにマンニトールの約 50% が含まれていた。 1.6-GPS 、ソルビトールおよびマンニトールの残りは 9 以降のフラクションの中に溶離されていた。
実施例８
相対甘味度を確認するために、 それぞれ 15 人の実験員による３点比較法によって、以下の溶液を相互に比較した。
a) 実施例 3 の新しい甘味料の 15.5% 溶液 1 つに対して、 7% のサッカロース溶液 2 つ。
b) 同じ甘味料の 17.5% 溶液 1 つに対し、 7% のサッカロース溶液 2 つ。
c) 同じ甘味料の 18.5% 溶液 1 つに対し、 7% のサッカロース溶液 2 つ。
テスト a) では 6 人がこの新しい甘味料を見つけだすことができたが、 統計学的な有意差はなかった。
テスト b) では 2 人がこの新しい甘味料の方を「さらに甘い」と感じた。
【００４０】
統計学的な有意差が見られた （ p ＜ 0.01）。
【００４１】
テスト c) では同様に 12 人がこの新しい甘味料の方が「さらに甘い」と感じた。統計学的な有意差が見られた （ p ＜ 0.01）。
【００４２】
本発明の甘味料の甘味度は、 蔗糖の 45% であった。 甘味度を増すためには、 この新しい甘味料に、フラクトース、 キシリトール、 サッカリン、 サイクラメート、 アスパルテームあるいはアセスルファム−Ｋ（Acesulfam-K）を混合することができる。
実施例９
新しい甘味料を使用してアイスクリームを製造する場合、 スイート クリーム（固形分の40%が脂肪） 22.1 kg 、 全乳（固形分の 3.7% が脂肪）58.1 kg、脱脂粉乳 4.5 kg に実施例 3 の甘味料 15 kg と 安定剤 0.3 kg を混合し、 ホモジナイズしてから、 殺菌する。 殺菌後、 粉末状のフェニルアラニンアスパラギン酸メチルエステル 53 g をこのアイスクリームの固まりに添加し、 混ぜ合わせ、 撹拌し、 冷凍した。 この製品は 15 kg の砂糖を使用して製造したアイスクリームと同程度の甘味度であった。
フルーツ アイスクリームの場合、 さらに甘味を加えない方が有利でさえある。というのはこの新しい甘味料は果実味をかなりよく引き立たせるからである。実施例１０
低カロリーのイチゴジャムを作るには、 潰したイチゴ 1 kg 、この新しい甘味料1 kg 、中程度にエステル化された 150°SAG-USA のペクチン 8 g（ウルマン著、工化学百科事典、3 版、 13 巻、 180 頁）ならびに 7 g のワインビネガーを混合し、 3 分間煮詰めて、 準備したグラスにあけた。
砂糖で作られたジャムとの比較では、 硬度に関しては全く差はなく、 甘味は多少弱かった。 しかし、 その代わりにイチゴの味はより強く感じられた。 6カ月の保存期間後も甘味料の結晶化は見られなかった。