(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母を蛋白質分解酵素を含む酵素剤処理により分解した後、水溶性成分を分離せず又は水溶性成分を分離除去することによって得られる酵素分解組成物であって、前記酵素剤処理に用いる酵素剤のグルカナーゼ活性総量が原料酵母乾燥重量１ｇあたり５ｕｎｉｔ以下であり、水溶性成分と水不溶性成分との比率が乾燥重量で３０：７０から８０：２０の範囲である酵母分解組成物を投与することを特徴とする魚介類の飼育方法。
【請求項２】
酵母分解組成物の投与量が、魚介体重１ｋｇあたり０．０１〜１．０ｇ／日であることを特徴とする請求項１に記載の魚介類の飼育方法。
【請求項３】
魚介類が魚類である請求項１又は２に記載の魚介類の飼育方法。
【請求項４】
酵母を蛋白質分解酵素を含む酵素剤処理により分解した後、水溶性成分を分離せず又は水溶性成分を分離除去することによって得られる酵素分解組成物であって、前記酵素剤処理に用いる酵素剤のグルカナーゼ活性総量が原料酵母乾燥重量１ｇあたり５ｕｎｉｔ以下であり、水溶性成分と水不溶性成分との比率が乾燥重量で３０：７０から８０：２０の範囲である酵母分解組成物を添加してなることを特徴とする魚介類の飼育に用いる飼料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、養殖魚介類の免疫活性を向上させ、養殖の生産性と養殖した魚介類の食品としての安全性を向上させる魚介類の飼育方法及び魚介類の飼育に用いる飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
魚介類の養殖は、経済的に確立して以来、生産量と対象魚種は、引き続き増加傾向にあり、さらに一層生産性と食品としての安全性の向上が求められるようになっている。とりわけ、高密度の飼育や水質の汚染による病気発生への対策が重要となっており、病気予防には、ビタミン、各種免疫賦活剤または生菌剤などの投与が、病気の治療には抗生物質、抗菌剤などの投与が行われてきた。しかし、抗生物質や抗菌剤などの薬剤の多用は、耐性菌の発生はもとより、水質を始めとする環境の汚染と生産物への残留が食品としての安全性の面で危惧される。
【０００３】
そこで、抗生物質や抗菌剤などの病気治療用の薬剤の使用はできるだけ限定することが求められ、病気に罹らないようにするか、罹患しても被害が抑えられるようにする新たな対策が近年盛んに試みられるようになっている。具体的には、人間に使用される健康食品である、キトサン、生菌剤、ポリフェノール、ニンニク、漢方、グルタチオン、オリゴ糖、多糖類などの投与が例示される。また、酵母由来の成分を投与する方法として、自己消化などによる分解後の水溶性成分である酵母エキスを投与する方法（特開平７−１８４５９５）、酵母を出発原料として、数回のアルカリ抽出処理及び数回の酸抽出処理を行って不溶性酵母成分を回収することにより得られる純度の高いグルカンなどを投与する方法（特開平４−２５３７０３）などが例示できる。これらの酵母由来の成分の中には、免疫活性の向上効果をうたったものもある。しかし、実際の製品のカタログや文献には、免疫活性を維持するために、これらの酵母由来の成分を１週間ごとに間歇投与するように求めるものもある。このため業界では、通常、間歇投与が実施されており、日常的に給与する飼料に添加して用いることができず、必ずしも使い易い状況とはいえず、さらに効果の明確な物質が求められていた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、食品のような安全なものから、魚介類の免疫活性を向上させる物質を見出し、使用することにより、魚介類の養殖における生産性の向上と環境保全、養殖される魚介類の食品としての安全性の向上を達成することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記課題を達成するために、本発明者らは、安全で、かつ魚介類の免疫機能を向上させる物質を見出すために、種々の物質をスクリーニングした。その結果、酵母を自己消化法や蛋白質分解酵素を含んだ酵素剤処理で分解して得られる組成物であって、水溶性成分及び水不溶性成分を含む酵母分解組成物、特に前記水溶性成分と水不溶性成分の両成分を適度の比率で、具体的には乾燥重量で３０：７０から８０：２０の比率で含んでいる酵母分解組成物が、魚介類に対して優れた免疫賦活効果を示すこと、即ち従来から用いられている酵母エキスのような水溶性成分のみを投与したり、酵母細胞壁に由来する不溶性のグルカン類のみを投与するより、より優れた免疫賦活効果が達成できることを見出した。また、酵母の分解に使用する酵素剤を選択することにより、さらに優れた効果を示すことを見出した。
【０００６】
即ち、本発明の第１は、酵母を蛋白質分解酵素を含む酵素剤処理により分解した後、水溶性成分を分離せず又は水溶性成分を分離除去することによって得られる酵素分解組成物であって、前記酵素剤処理に用いる酵素剤のグルカナーゼ活性総量が原料酵母乾燥重量１ｇあたり５ｕｎｉｔ以下であり、水溶性成分と水不溶性成分との比率が乾燥重量で３０：７０から８０：２０の範囲である酵母分解組成物を投与することにより免疫活性を向上させることを特徴とする魚介類の飼育方法である。また、本発明の第２は、前記酵母分解組成物を含んだ魚介類用の飼料である。
【０００７】
本発明における酵母の分解方法は、自己消化法と蛋白質分解酵素を含む酵素剤処理の両者を併用してもよい。本発明で用いる酵母分解組成物中の水溶性成分と水不溶性成分との比率は、乾燥重量で３０：７０から８０：２０の範囲とする。前記酵母分解組成物中の水溶性成分と水不溶性成分との比率は、酵母を分解した後、必要に応じて水溶性成分を分離除去することによって前記の範囲に調整してもよい。
【０００８】
前記酵母分解組成物の投与量としては、魚介体重１ｋｇあたり０．０１〜１．０ｇ／日とすることが好ましい。
【０００９】
本発明によれば、養殖魚介類の免疫活性を向上させることができる。また、従来の免疫賦活剤の場合には、通常７日間毎の間歇投与が必要なことが多いが、本発明によると、酵母分解組成物は間歇投与することなく持続的に免疫効果が得られ、日常的に給与する飼料に添加しておくことができ、給餌の煩雑さを省くことができる。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明で対象とする魚介類とは、魚類、甲殻類など、養殖される全ての魚介類が対象となる。魚類としては、例えばタイ、ブリ、アユ、フグ、ウナギ等の養殖されている食用の魚類が挙げられ、海産魚、淡水魚の別を問わない。さらに、食用の養殖魚のみでなく、金魚、熱帯魚など鑑賞用の養殖魚も対象とすることができる。また、甲殻類としてはクルマエビなどが挙げられる。対象となる魚介の大きさは、孵化直後から、稚魚、成魚の段階までの全ての段階の魚介であり、成長の段階を問わない。
【００１１】
本発明で用いられる酵母としては、例えば、トルラ酵母、パン酵母、ビール酵母、清酒酵母、赤色酵母と称せられる、キャンディダ属、サッカロマイセス属、クルイベロマイセス属、ファフィア属などに属する酵母が挙げられる。上記酵母の培養条件は特に制限は無く、通常の培養条件で用いたものが使用可能である。さらに、市販のパン酵母、例えば商品名「カネカレッドイースト」（鐘淵化学工業(株)製）、商品名「オリエンタルイースト」（オリエンタル酵母(株)製）、商品名「ダイヤイースト」（協和醗酵工業(株)製）などを用いることもできる。又、乾燥した酵母でも、乾燥していない酵母でも使用可能である。
【００１２】
本発明で用いる酵母分解組成物とは、酵母を自己消化法及び／又は蛋白分解酵素を含む酵素剤により分解することにより得られる組成物であり、その典型的な製造方法は特開平１１−３３２５１０に記載されている。即ち、酵母分解組成物を得るための自己消化法としては、通常の酵母エキス製造に用いる方法でよく、例えば原料酵母を水に菌体乾燥重量として約１０〜１５％の濃度に懸濁させた後、６０〜６５℃にて５〜２０秒間加熱処理を行い、次に食塩、酢酸エチルなどを添加し、４０〜５０℃、ＰＨ５〜９にて１０〜２４時間保持させることにより行うことができる。又、酵母に酵素剤を作用させて酵母分解組成物を得る方法としては、通常の酵母エキスを得る方法で良く、例えば、原料酵母を菌体乾燥重量として３〜３０％の濃度となるように水に懸濁し、ＰＨ、温度、添加量を使用する酵素剤の好適の範囲にコントロールして分解反応をする。使用する酵素剤としては、エンドプロテアーゼ、エキソプロテアーゼなどの蛋白質分解酵素や溶菌酵素が使用可能であり、市販品としては、商品名「サモアーゼＰＣ」（大和化成(株)製）、商品名「プロチンＡ」（大和化成(株)製）、商品名「プロチンＡＹ−１０」（大和化成（株）製）、商品名「ＹＬ−ＮＬ」（天野製薬(株)製）、商品名「ツニカーゼＦｎ」（大和化成（株）製）、商品名「デナチームＡＰ」（長瀬産業(株)製）などが例示できる。
【００１３】
本発明で用いる酵母分解組成物は、上記のようにして分解後、分離工程を経ずに得たものでも、水溶性成分を一定程度分離除去して得られらものでもよいが、水溶性成分と水不溶性成分の比率が、乾燥重量当り３０：７０から８０：２０の範囲であることが必要である。それにより、分解によって得られる、次に述べるような酵母由来の成分が、効果的に魚介類の生体に影響を与え、免疫活性を向上させることができる。
【００１４】
前記酵母分解組成物の主要成分は、水不溶性成分としては、細胞壁由来のβ−１，３グルカン及びβ−１，６グルカン、セルロース、前記グルカンの構成糖であるグルコースとマンノースとの共重合物であるグルコマンナン、前記グルカンと蛋白との複合物であるペプチドグルカン類、さらに不溶性の構成蛋白質が挙げられ、又、水溶性成分としては、アミノ酸、ペプタイド、各種糖類、ビタミン類、核酸成分が挙げられ、これら以外に脂質類も含有する。
【００１５】
尚、本発明でいう水不溶性成分は、乾燥重量５ｇの試料を水１００ｍｌに分散・溶解し、１００００Ｇで１０分間遠心分離し、沈降物を水１００ｍｌに分散・溶解、１００００Ｇで１０分間遠心分離する操作を２回繰り返して得られる沈降物の乾燥重量を水不溶性成分の乾燥重量とした。又、水溶性成分は、試料乾燥重量から前記水不溶性成分の乾燥重量を減じた値を水溶性成分の乾燥重量とした。
【００１６】
さらに、本発明で用いる好ましい酵母分解組成物としては、酵素剤処理に使用する酵素剤のグルカナーゼ活性総量が、原料酵母乾燥重量１ｇあたり２０ｕｎｉｔ以下となるように酵母に酵素剤を作用させて得られた酵母分解組成物である。グルカナーゼ活性総量が前記の範囲の酵素剤で酵母を分解処理することで、魚介類の免疫活性をより一層向上させることができる。前記酵素剤のグルカナーゼ活性総量のより好ましい範囲は、原料酵母乾燥重量１ｇあたり１０ｕｎｉｔ以下であり、さらに好ましくは５ｕｎｉｔ以下である。尚、本発明でいうグルカナーゼ活性とは、酵素をサッカロマイセス・セレビシェ(Saccharomyces cerevisiae)ＩＦＯ  ０３０９の凍結乾燥菌体１ｍｇに３５℃で作用させたときに、反応液の濁度（具体的には波長６６０ｎｍにおける吸光度）を1分間あたり１％低下させる酵素量を１ｕｎｉｔとして定義する。
【００１７】
使用する酵素剤のグルカナーゼ活性総量を原料酵母乾燥重量１ｇあたり２０ｕｎｉｔ以下にするためには、使用する各酵素のグルカナーゼ活性を予め測定して使用する酵素全体のグルカナーゼ活性を調整してもよいし、また使用する酵素全体のグルカナーゼ活性をまとめて測定して調整してもよい。但し、自己消化法との組み合わせでは、使用する酵素剤のグルカナーゼ活性のコントロールが困難な場合がある。従って、酵素剤処理による酵母の分解の実施態様としては、酵素剤処理による分解を単独で行うことが好ましい。
【００１８】
さらに、酵母中の核酸成分をヌクレアーゼ、デアミナーゼ処理をして、イノシン酸、グアニル酸を酵母分解組成物中に生成させることにより、嗜好性の向上が達成されるが、本発明の目的には必須ではない。
【００１９】
酵母を分解したのちは、必要に応じて水溶性成分を分離除去して、酵母分解組成物中の水溶性成分と水不溶性成分との比率が乾燥重量で３０：７０から８０：２０の範囲となるように調整する。水溶性成分を分離除去する方法としては、遠心分離、ろ過、静置分離など、通常の方法を採用することができる。こうして得られた酵母分解組成物は、常法により濃縮して、さらに水分を除去してペースト状にするか、公知の乾燥法で乾燥粉末状にすることにより、使用に供する。
【００２０】
本発明による魚介類の飼育方法の好ましい実施の態様としては、上記酵母分解組成物の投与量が、一日に魚介体重１ｋｇあたり０．０１〜１．０ｇとなるように投与することである。投与量がこれより少なくては、所定の効果が得られず、これより多いと経済性などの点で生産性向上の目的が達成出来ない。酵母分解組成物は、単独で魚介類に投与してもよいし、飼料に混合して投与してもよい。飼料に混合する場合は、例えば飼料に対して０．１重量％添加するなどして、魚介が上記の量を摂取するようにすればよい。投与の方法は、あらかじめ飼料へ規定量の酵母分解組成物を配合して、例えばペレット状などに成型乾燥したものを通常の給餌作業と同様に行えばよい。投与の期間は、１日から飼育期間全体を通じて可能であり、間歇投与は必要でない。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例１（試料１）は本発明の実施例ではなく、参考例である。
【００２２】
（実施例１）
原料酵母としてサッカロミセス属に属するパン酵母（商品名「カネカレッドイースト」鐘淵化学工業(株)社製）３００ｋｇ（乾燥菌体重量として１００ｋｇ）を水７００Ｌに懸濁して９０℃で６０分の加熱処理を行って、菌体内の酵素を失活させた。５０℃に冷却後、ＮａＯＨでＰＨを６．３に調整し、プロテアーゼ（商品名「プロチンＡＹ−１０」大和化成(株)製）を酵母乾燥菌体重量に対し０．５％、細胞壁溶解酵素（商品名「ツニカーゼＦｎ」大和化成(株)製）を酵母乾燥菌体重量に対し０．５％添加し、５０℃で２４時間攪拌しながら反応させた。その後、９５℃で３０分間加熱して酵素を失活させ、濃縮後、スプレー乾燥し、酵母分解組成物の試料１を得た。得られた組成物の重量は、９５ｋｇであった。このとき、使用した酵素剤のグルカナーゼ活性総量は、原料酵母乾燥重量１ｇあたり２２．０ｕｎｉｔであった。また、試料１中の水不溶性成分は３３重量％（乾燥重量）であった。
【００２３】
なお、参考として試料１中のβ−グルカン量を、以下に示す方法で測定した。すなわち、アミラーゼで、試料中の炭水化物を可溶化し、８０％エタノールで多糖類を沈澱させ、水溶性の単糖、オリゴ糖を分離除去した後、得られた沈澱を塩酸で加水分解しグルコースを比色法で定量した。定量されたグルコース量の９０％をβ−グルカン量とした。試料１の水不溶性成分の比率、β−グルカン量の測定結果を表１に示す。また、β−１，３／１，６−グルカンを主成分とする市販の免疫賦活剤（商品名「マクロガード」ＢＩＯＴＥＣ−ＭＡＣＫＺＹＭＡＬ社（ノルウェー）製）についての水不溶性成分及びβ−グルカン量の測定結果を表１に併せて示す。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
試験に用いた飼料の配合率を表２に示す。対照区として小麦粉・魚粉を主体とした飼料を設定した。試験区としては、上記試料1を０．１重量％添加して試験飼料を調製した（試料１）。また、比較例として比較1では従来から免疫賦活剤として使用されている宮入菌体末（商品名「ミヤリサン」日本化薬（株）製）を試料１と同じく０．１重量％添加した。比較２ではβ−１，３／１，６−グルカンを主成分とする免疫賦活剤（商品名「マクロガード」ＢＩＯＴＥＣ−ＭＡＣＫＺＹＭＡＬ社（ノルウェー）製）を０．０５重量％添加した。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
ブリ当歳魚を用いて、試験飼料投与の試験を次のように実施した。すなわち、飼育試験は１月中旬から４月中旬までの９０日間とした。供試魚は平均魚体重約１．０ｋｇのブリ当歳魚を用い、２トン円形水槽に各区２５尾ずつ収容した。給餌は１日１回飽食量を週６日給餌した（試料１は、１日に魚体重１ｋｇあたり０．０１ｇ）。飼育期間中の平均水温は１７．２±０．９（最低水温１６．０℃、最高水温１９．４℃）℃であった。
【００２８】
飼育開始時から２週間後、４週間後、６週間後及び１２週間後に各区より５尾をサンプリングし、心臓から採血して個体別に血漿リゾチーム活性、白血球の貪食能（貪食率および貪食指数）の測定を行い、免疫賦活効果を調べた。なお、血漿リゾチーム活性、白血球の貪食能の測定は次の手順にて行った。
【００２９】
リゾチーム活性の測定は、松山らの方法（Matsuyama, H. Remy E. P. Mangindaan and T. Yano: Protective effect of schizophyllan and scleroglucan against Streptococcus sp. Infection in yellowtail(Seriola quinqueradiata). Aquaculture, 101, 197-203 (1992).）を改良して行った。簡単に述べると、９６穴マイクロプレートに０．０６６Ｍリン酸緩衝液（ＰＨ＝６．２）に懸濁させたMicrococcus lysodeikticussと分離した血漿を加え、マイクロプレートリーダーを用いて波長４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。リゾチーム活性は、下式（１）に示すように、１分間に吸光度が０．００１減少する状態を１ｕｎｉｔとして表した。
【００３０】
ｕｎｉｔ＝ decrease in absorbance of 0.001/min・・・（１）
【００３１】
白血球分離に用いる血液はリゾチーム活性に用いた血液と同じものを使用した。採取した血液をあらかじめガラス遠心管に準備したＨＩＳＴＯＰＡＱＵＥ−１０７７（Ｓｉｇｍａ社製）に重層し、４００Ｇ、３０分遠心し、形成された白濁層を取り出した後、洗浄して実験に供した。
【００３２】
白血球の貪食能は、貪食率及び貪食指数を測定した。即ち、分離した白血球をチェンバースライドに１ウェル当たりの細胞が１×１０6個となるように添加し、２時間、２０℃で培養した。培養後、残った細胞懸濁液を除去し、洗浄した後、オプソニン化したラテックスビーズを添加して、２時間、２０℃で培養した。ラテックスビーズ懸濁液を除去し、洗浄した後、定法に従いメイ・グリュンワルド・ギザム（May-Grunwald Giemsa）染色を施して光学顕微鏡で観察した。貪食率及び貪食指数は以下の式（２）、（３）を用いて算出した。
【００３３】
貪食率（％）＝（ビーズを有した貪食細胞数÷計測された貪食細胞数）×１００・・・（２）
貪食指数＝（ビーズを有した貪食細胞数÷計測された貪食細胞数）×（摂取されたビーズ数÷計測された貪食細胞数）×１００・・・（３）
【００３４】
上記免疫賦活効果の測定結果のうち、リゾチーム活性の測定結果を図１に、白血球の貪食率の測定結果を図２に、さらに白血球の貪食指数を図３にそれぞれ示す。
【００３５】
図１〜３から、水溶性成分及び水不溶性成分を含む試料１の酵母分解組成物を投与した場合は、従来のβ−グルカンを多く含む酵母由来組成物（比較２）以上の免疫賦活効果を有することが確認できる。
【００３６】
（実施例２）
使用する酵素を、プロテアーゼ（商品名「ＹＬ−ＮＬ」天野製薬(株)製）酵母乾燥重量当り０．２％、及びプロテアーゼ（商品名「プロチンＡＹ−１０」大和化成(株)製）酵母乾燥重量当り０．５％とした以外は、実施例１と同様に酵素剤処理により酵母の分解反応を行った。酵素剤処理後、遠心分離して水溶性成分を一部除去し、残りの部分を乾燥させ、酵母分解組成物の試料２を得た。得られた組成物の重量は、４５ｋｇであった。試料２中の水不溶性成分の含有量は６３重量％であった。なお、試料２中のβ−グルカン量は、１６．５重量％であった。また、このとき、使用した酵素剤のグルカナーゼ活性総量は、酵母乾燥重量１ｇあたり１．１ｕｎｉｔであった。
【００３７】
試験に用いた飼料の配合率を表３に示す。対照区として小麦粉・魚粉を主体とした飼料を設定した。試験区としては、上記試料２の添加率を０．１重量％、０．５重量％、１．０重量％と変え、それに対応して試料中のその他成分（色素、強肝剤、賦形剤など）のうち賦形剤の量を調整して全部で１００重量％となるようにして、試験飼料を調製した。
【００３８】
【表３】
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【００３９】
ブリ当歳魚を用いて、試験飼料投与の試験を次のように実施した。すなわち、飼育期間は１０月中旬から１１月中旬までの３６日間とした。供試魚は平均魚体重約４２０ｇのブリ当歳魚を用い、１．５トン楕円形ＦＲＰ水槽に各区２５〜２７尾収容した。給餌は１日１回飽食量を週６日間給与した（試料２は、１日に魚体重１ｋｇあたり０．０２ｇ、０．１０ｇ又は０．２１ｇ）。飼育期間中の平均水温は２３．５±０．７℃であった。
【００４０】
飼育開始時、飼育開始２週間後及び４週間後に各区より５尾をサンプリングし、心臓から採血して個体別に血漿リゾチーム活性、白血球の貪食能（貪食率および貪食指数）の測定を行い、免疫賦活効果を調べた。飼育試験開始時における血漿リゾチーム活性、飼育開始２週間後における血漿リゾチーム活性、白血球の貪食率および貪食指数、さらに飼育開始４週間後におけるそれらの測定値を表４に示した。なお、各免疫能の測定方法は実施例１に準じて行った。
【００４１】
【表４】
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【００４２】
表４の結果から、酵母を所定のグルカナーゼ活性の酵素剤で分解した、水溶性成分と不溶性成分とを含む酵母分解組成物は、顕著な免疫賦活効果があることが分かる。
【００４３】
（実施例３）
酵素剤処理による分解後、分離工程を経ずに濃縮して、乾燥する以外は、実施例２と同様な方法で処理をして、酵母分解組成物の試料３を得た。得られた試料３の重量は９６ｋｇで、また水不溶性成分の比率は３１重量％、β−グルカンの含有量は９．４重量％であった。
【００４４】
実施例１で用いたと同じ酵母分解組成物の試料１及び上記酵母分解組成物の試料３を用いて免疫賦活効果の確認試験を実施した。試験飼料は、市販のブリ稚魚用飼料（商品名「ハマチＥＰ３０」日本配合飼料（株）製）を対照とし、試料１および試料３をそれぞれ飼料重量に対して０．５％を水に懸濁させて対照飼料に混合攪拌し、充分に吸着させた。
【００４５】
供試魚として平均魚重量約８０ｇのブリ稚魚を用い、１．５トン円形水槽に各区４００尾ずつ収容して６月下旬から７月上旬までの１４日間飼育した。魚への給餌は、１日１回飽食量を週７日間給与した（試料１、試料３の摂取量は、いずれも魚体重１ｋｇあたり０．１５ｇであった）。飼育期間中の水温は平均２６．０±０．６℃であった。
【００４６】
試験開始時及び２週間後に各区より５尾をサンプリングし、心臓から採血し、実施例１と同様にして個体別に血漿リゾチーム活性を測定し、免疫賦活効果を比較確認した。その結果を表５に示す。
【００４７】
【表５】
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【００４８】
表５の結果から、水溶性成分及び水不溶性成分を含む酵母分解組成物が、免疫賦活効果があり、さらにグルカナーゼ活性総量が乾燥酵母１ｇあたり２０ｕｎｉｔを超える酵素剤を用いた処理により調製した試料１に比べて、グルカナーゼ活性総量が乾燥酵母１ｇあたり２０ｕｎｉｔ以下の酵素剤を用いた処理により調製した試料３の酵母分解組成物は、さらに免疫賦活効果が強いことが確認できた。
【００４９】
（比較例）
実施例２において、酵素剤処理後、遠心分離して上澄の部分を濃縮後、乾燥させた、水不溶性成分を含まない酵母分解成分を比較例３として調製した。
【００５０】
水不溶性成分を含まない酵母分解組成物のサンプルとして上記比較例３、使用した酵素剤のグルカナーゼ活性総量が酵母乾燥重量１ｇあたり２０ｕｎｉｔを超えた条件で調製された水溶性成分と水不溶性成分とを含む酵母分解組成物である試料１、使用した酵素剤のグルカナーゼ活性総量が酵母乾燥重量１ｇあたり２０ｕｎｉｔ以下の条件で調製された水溶性成分及び水不溶性成分を含む酵母分解組成物である試料３の３種類の酵母分解組成物サンプルを用いて免疫賦活効果の確認試験を実施した。
【００５１】
試験飼料は、市販のブリ用ＥＰ飼料（商品名「ハマチＥＰ１２０」日本配合飼料（株）製）を用いた。この飼料に対して外割りで各サンプル０．５％重量分を少量の水で懸濁して吸着させ、各試験区の飼料を調製した。
【００５２】
供試魚として平均魚体重約４００ｇのブリ当歳魚を用い、２トン円形水槽に各区７０尾ずつ収容して、９月下旬から１０月下旬まで３６日間飼育した。魚への給餌量は、１日１回、試験開始時の魚体重に対して２．５％の重量とした（１日に魚体重１ｋｇあたり各サンプル０．１２５ｇ）。飼育期間中の水温は平均２５．１±０．７℃であった。
【００５３】
試験開始時、３日後、７日後、１４日後のリゾチーム活性、白血球の貪食率、白血球の貪食指数を実施例１と同様にして測定した。その結果を表６及び図４、図５、図６に示す。
【００５４】
【表６】
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【００５５】
表６及び図４〜６の結果から、水不溶性成分を含まない比較例３に比べ、試料１及び試料３は免疫賦活効果が高く、また試料１より試料３がさらに免疫賦活効果が高いことが分かる。
【００５６】
【発明の効果】
本発明によれば、酵母を分解した水溶性成分と水不溶性成分とを含む組成物、さらには、前記水溶性成分と水不溶性成分の比率を調整した組成物を魚介類に投与することにより、魚介類の免疫活性を向上させることができ、魚介類の養殖の生産性向上と、安全な生産物の提供、さらに環境の汚染を削減することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  リゾチーム活性測定結果を示すグラフ。
【図２】  白血球貪食率測定結果を示すグラフ。
【図３】  白血球貪食活性測定結果を示すグラフ。
【図４】  リゾチーム活性測定結果を示すグラフ。
【図５】  白血球貪食率測定結果を示すグラフ。
【図６】  白血球貪食活性測定結果を示すグラフ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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