(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィルター基材表面にポリマーを有してなる白血球選択除去用フィルター材において、該ポリマーはヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートまたはその混合物由来のユニットと塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットから構成され、ポリマー中の塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットが２ｍｏｌ％以上１０ｍｏｌ％未満であり、ポリマーの重量平均分子量が１．５×１０4以上２．５×１０5以下であることを特徴とする白血球選択除去用フィルター材。
【請求項２】
ポリマーがビニル系ポリマーであることを特徴とする請求項１に記載の白血球選択除去用フィルター材。
【請求項３】
塩基性含窒素部分が３級アミノ基である請求項１または請求項２に記載の白血球選択除去用フィルター材。
【請求項４】
塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーがＮ,Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートである請求項１〜３のいずれかに記載の白血球選択除去用フィルター材。
【請求項５】
フィルター基材の単位表面積あたりのポリマーの重量が、５ｍｇ／ｍ2以上９０ｍｇ／ｍ2未満であることを特徴とする濃厚血小板製剤を処理するために用いられる請求項１〜４のいずれかに記載の白血球選択除去用フィルター材。
【請求項６】
フィルター基材の単位表面積あたりのポリマーの重量が、９０ｍｇ／ｍ2以上３００ｍｇ／ｍ2以下であることを特徴とする全血製剤を処理するために用いられる請求項１〜４のいずれかに記載の白血球選択除去用フィルター材。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血液製剤から白血球を高度に除去し、血小板を回収する為の白血球選択除去フィルター材に関するものである。特に、溶出物が極めて少なく、且つ、滅菌後のフィルター材としての性能変化が微小な白血球選択除去フィルター材に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
現在、輸血の分野においては、患者に必要な成分のみを輸血する成分輸血が主流となりつつあり、成分輸血に用いられる赤血球濃厚液（ＣＲＣ）、濃厚血小板液（ＰＣ）、乏血小板血漿（ＰＰＰ）などは遠心分離法により分離、分画調整されるが、通常、相当数の白血球が混入していることが知られている。
【０００３】
輸血時における白血球の混入は、種々の副作用を誘発することが知られている。例えば、白血球が輸注されつづけると、体内に抗白血球抗体が産出され、輸血血液中の白血球との間に抗原抗体反応を引き起こし、悪感・発熱などの原因になる。また、患者の免疫系の弱体化が引き起こされている場合には、輸血後ＧＶＨＤ（移植片対宿主疾患）を引き起こす可能性が高いことも示唆されている。また、白血球中に存在するウイルスの感染など、重篤な副作用を誘発させることもあり血液製剤から白血球を除去する白血球除去フィルターが広く使用されている。
【０００４】
一般的な白血球除去フィルターとして市販されているものは、ポリエステルなどの合成繊維やポリウレタンなどの多孔質体をフィルター材として用いている。これらは血液を濾過する過程で白血球を付着させて除去するためのものであるが、これらのフィルター材の多くは疎水性高分子材料よりなるために、白血球のみならず、一般的に高い粘着能を示す血小板をも吸着除去してしまう問題があり、ＰＣ、ＰＲＰ（多血小板血漿）、新鮮全血などの血液製剤から白血球のみを選択的に除去し血小板を回収することは出来なかった。
【０００５】
このような課題に対し、特公平６−５１０６０号公報には血漿、赤血球、血小板は通過させるが白血球は捕捉する白血球除去フィルターが開示されている。該特許では前出の欠点をフィルター材に親水性ポリマーを導入することで解消しようとしている。親水性ポリマーとして、ジエチルアミノエチル（メタ）クリレートとヒドロキシエチル（メタ）アクリレートとの共重合体を用いているが、この公報にはヒト全血の処理に用いる場合の記載がない。本発明者らの実験によると、このフィルターをヒト血液の処理に用いる場合、白血球除去も血小板回収も不十分であることが分かった。
【０００６】
さらに、本発明者らは、ヒト血液処理に適するフィルター材をさらに研究して、ＪＰ００／０７７０７号として特許出願した。この発明は、親水性ポリマーとして、ジエチルアミノエチル（メタ）クリレートとヒドロキシエチル（メタ）アクリレートとの共重合体を用いるものであるが、親水性ポリマーの分子量を調整することで、ヒト血液の処理に用いる場合の白血球除去率と血小板通過率を向上させることができた。
【０００７】
しかし、本発明者らが、さらに研究を進めたところ、かかるポリマーをコーティングによってフィルター材表面に導入した場合には、親水性が高く血小板の通過性は向上するが、親水性が高いことでポリマーの溶出が懸念されることを見出した。人体に対するより高い安全性を確保する為には、更に低溶出性化する必要がある。溶出性を抑制する手段としてポリマーをより疎水化する方法が挙げられるが、かかる方法でフィルター材の表面を改質した場合、疎水性が強すぎると、血液の濡れ性が悪化することによるチャネリングや、流れ不良、あるいはフィルター材有効利用面積の減少により逆に白血球除去性能不足を起こす恐れもある。
また、本発明者らが検討した所、疎水性を過度に強めると、高圧蒸気滅菌のような過酷な滅菌履歴によって血小板回収率が低下することを知見した。即ち、ポリマーの疎水性をただ強めるだけでは目的を達成することは出来ないことが分かった。
【０００８】
また特開平５−２６２６５６号公報には、アルコキシ（メタ）アクリレート単量体を主成分とした重合体をフィルター表面に保持させた白血球除去フィルターが示されている。これはアルコキシ（メタ）アクリレートを用いることで血小板の粘着を防ぎ白血球を選択的に除去することを目的としたフィルターであるが、その低い親水性のためにプライミングに時間を要し目詰まりを起こす可能性も高く、全血製剤における実施例は無い。実際全血製剤に用いた場合は血液の流れ性が悪いばかりではなく、血小板回収率も低くなることを確認し、本発明の目的とするものでは無いことが分かった。
【０００９】
また、特開平５−１９４２４３号公報や特開平７−２５７７６号公報には、繰り返し単位が２から１５のポリエチレンオキサイド鎖を含有する白血球除去フィルターについて開示されている。該フィルターに用いるポリマーは親水性が高く血小板の粘着性を低下させる。しかし、その一方で白血球の粘着性も低下する懸念があり、実施例においても全血製剤を用いた例は無い。さらに、ポリエチレンオキサイド鎖が長くなると、その高い親水性により血液成分への溶出が懸念される。
【００１０】
【本発明が解決しようとする課題】
本発明は、血液処理フィルターにおける上記のような問題点を解決することで、溶出物が極めて少なく、滅菌後のフィルター材としての性能低下が微小で、血液製剤から白血球を高度に除去し血小板を回収する為の白血球選択除去フィルター材を提供することを課題とする。ここで、高度に白血球を除去しつつ血小板を回収するということは、高い白血球除去性能を示しながら、濃厚血小板製剤、多血小板血漿製剤、全血製剤などから血小板を回収することが可能であることを意味し、さらには血小板輸血や血液の体外循環白血球除去療法にも有効に用いることが出来ることを意味する。特に、血小板が通過し難い傾向にある新鮮全血に対しても、高い血小板通過性を維持して白血球を選択的に除去することが出来る白血球除去フィルター材を提供することを課題としている。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決すべく本発明者らが鋭意検討したところ、フィルター基材表面に保持するポリマーとして、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートまたはその混合物由来のユニットと塩基性含窒素を含むモノマー由来のユニットを含むポリマーを用い、組成比と分子量を制限することにより、驚くべきことに目的とする高い白血球除去性能と、高い血小板回収性能と、滅菌後においてもフィルター材としての性能低下が微小で、かつ、著しく低い溶出性という性能を全て兼ね備えるフィルター材の提供できることを見出し、本発明を完成するに至った。本発明のフィルター材によると、血小板を多く含有する製剤、特に、濃厚血小板製剤、新鮮全血などの全血製剤に対して用いた場合にも、白血球のみを選択的に除去することが可能となる。
【００１２】
従来、フィルター基材表面に保持するポリマーとして、ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートと塩基性含窒素部分を含むモノマーとの共重合体が主として用いられていた。ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートは、親水性が高く、溶出が懸念されるので、本発明者らは、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートのアルキル鎖を長くして、疎水性を強めた方が、溶出を抑制でき、白血球選択除去能が向上するのではないかと考えた。しかし、本発明者らは、疎水性を強めすぎると、オートクレーブ等による滅菌処理によって、大きな性能低下がみられることを見出した。さらに、疎水性が強すぎると、血液の濡れ性が悪化するために、目詰まりやチャンネリングの問題も生じる。そこで、本発明においては、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレートにヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート及び／またはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートを選択することで、溶出を抑制し、耐滅菌性を向上させた。
【００１３】
また、ポリマーの分子量を上げると疎水性が高まり、溶出も抑制することができるが、やはり耐滅菌性が低下してくる。そこで、本発明においては、ポリマーの分子量を調整することによって、溶出性と耐滅菌性のバランスを図った。
【００１４】
さらに、本発明においては、ポリマー中のヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート及び／またはヒドロキシブチル（メタ）アクリレート由来のユニットと塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットの比を選ぶことで、白血球除去能と血小板回収率とを向上させた。
【００１５】
即ち、本発明は、以下の（１）から（６）に関するものである。
（１）フィルター材表面にポリマーを有してなる白血球選択除去用フィルター材において、該ポリマーはヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートまたはその混合物由来のユニットと塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットから構成され、ポリマー中の塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットが２ｍｏｌ％以上７ｍｏｌ％以下であり、ポリマーの重量平均分子量が１．５×１０4以上２．５×１０5以下であることを特徴とする白血球選択除去用フィルター材、
（２）ポリマーがビニル系ポリマーであることを特徴とする（１）に記載の白血球選択除去用フィルター材、
（３）塩基性含窒素部分が３級アミノ基である（１）または（２）に記載の白血球選択除去用フィルター材、
（４）塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーがＮ,Ｎ−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートである（１）〜（３）に記載の白血球選択除去用フィルター材、
（５）フィルター基材の単位表面積あたりのポリマーの重量が、５ｍｇ／ｍ2以上９０ｍｇ／ｍ2未満であることを特徴とする濃厚血小板製剤を処理するために用いられる（１）〜（４）に記載の白血球選択除去用フィルター材、及び
（６）フィルター基材の単位表面積あたりのポリマーの重量が、９０ｍｇ／ｍ2以上３００ｍｇ／ｍ2以下であることを特徴とする全血製剤を処理するために用いられる（１）〜（４）に記載の白血球選択除去用フィルター材。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明は、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートまたはその混合物由来のユニットと塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットから構成されるポリマーを表面に有する白血球選択除去用フィルター材に関するものである。なお、本発明において（メタ）アクリレートというときには、アクリレート及び／またはメタクリレートのことをさす。
【００１７】
ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートまたはその混合物由来のユニットは、存在する水酸基に起因する親水性の性質を示す一方、同じ水酸基を持つ（メタ）アクリレートである２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートなどと比べると水への溶解度が低いこと（２０℃において、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートは任意に溶解するが、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートは約１３ｗｔ％溶解する）から、親水性、疎水性の両方の性質を見込むことが出来る。即ち、適度な親水性を有して血液の流れ性の確保と血小板の通過性に効果を示すだけではなく、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートあるいはその混合物を多く含むポリマーは低い溶出性を示すことから、本発明の目的を達成するのに好都合である。
【００１８】
また、ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートには異性体が存在する。本特許において用いられるヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートとは、その単体あるいは異性体との混合物、またはヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートとヒドロキシブチル（メタ）アクリレートの混合物の何れの場合でも構わないが、好ましくはヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートの単体あるいは異性体との混合物である。なお、本発明で言うユニットとは、ポリマー中の一部分であり、その構造は重合性モノマーの重合などで構成し得る最小繰り返し単位を意味する。
【００１９】
塩基性含窒素を有する材料は、細胞を浮遊させるような生理的液体中で材料表面が正電荷を有するようになり、負電荷を有する白血球を粘着させるというのが一般的な特性であった。即ち、高白除能を可能とするためにはヒドロキシプロピル（メタ）アクリレートまたはヒドロキシブチル（メタ）アクリレートの他に、塩基性含窒素が必要となる。しかし驚くべきことに、塩基性含窒素部分がポリマーに適量存在することにより、白血球を捕捉するという効果のみならず、濾材の親水性を上げて血小板の通過性を向上させることが出来る。本発明の場合、ポリマー中の組成において、塩基性含窒素部分を有するモノマー由来のユニットが２ｍｏｌ％以上１０ｍｏｌ％未満を占める必要があり、好ましくは２ｍｏｌ％以上７ｍｏｌ％以下である。２ｍｏｌ％未満であると親水性が不足し血小板の回収率が低くなり、１０ｍｏｌ％以上であると、白血球のみならず血小板の吸着も顕著になり課題を達成することが困難となる。
【００２０】
塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーとしては、ビニルアミン、２−ビニルピリジン、４−ビニルピリジン、２−メチル−５−ビニルピリジン、４−ビニルイミダゾール、Ｎ−ビニル−２−エチルイミダゾール、Ｎ−ビニル−２−メチルイミダゾール等の含窒素芳香環化合物のビニル誘導体、ジメチルアミノエチルアクリレート、ジメチルアミノエチルメタクリレート、ジエチルアミノエチルアクリレート、ジエチルアミノエチルメタクリレート、３−ジメチルアミノ−２−ヒドロキシプロピルアクリレート、３−ジメチルアミノ−２−ヒドロキシプロピルメタクリレート等のアクリレート及びメタクリレート、Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリル酸アミド、 Ｎ−ジメチルアミノエチルメタアクリル酸アミド、Ｎ−ジエチルアミノエチルアクリル酸アミド、 Ｎ−ジエチルアミノエチルメタアクリル酸アミド等のアクリル酸アミド及びメタアクリル酸アミド誘導体、ｐ−ジメチルアミノメチルスチレン、ｐ−ジエチルアミノエチルスチレン等のスチレン誘導体、及び上記誘導体をハロゲン化アルキル基によって４級アンモニウム塩としたものが挙げられるが、入手が容易であること、取り扱いやすいことや合成しやすい等の理由により、アクリレートまたはメタクリレートがより好ましく、特に３級アミノ基を含む、ジメチルアミノエチルアクリレート、ジメチルアミノエチルメタクリレート、ジエチルアミノエチルアクリレート、ジエチルアミノエチルメタクリレートが好ましい。
【００２１】
本発明の白血球選択除去用フィルター材に含まれるポリマーの重量平均分子量は１．５×１０4以上２．５×１０5以下が好ましく、８．０×１０4以上２．０×１０5以下であるとより好ましい。重量平均分子量が１．５×１０4未満だと血液と接触した時にポリマーの血液への溶出がおこりやすく、また重量平均分子量が２．５×１０5を超える場合は親水性と疎水性のバランスを考えた場合に疎水性の効果が強まり、血液接触時において血液の流れ性悪化による濾過時間の延長や、フィルター材が有効に使用されないことがあり、時には白血球除去性能が低下する場合がある。また、原因は明らかにされていないが、重量平均分子量が高過ぎると、特に高圧蒸気滅菌後に血小板回収率の低下を引き起こすことがあり、安定した性能を発揮しない恐れがある。なお分子量は種々の公知の方法により求められるが本発明ではポリメチルメタクリレートを標準分子量物質とするゲルパーミエーションクロマトグラフィー（以下ＧＰＣと略する）測定による値を採用している。
【００２２】
本発明の白血球選択除去用フィルター材は、フィルター基材を表面修飾することによって得ることができる。表面修飾には、一般的な表面修飾方法を用いることができる。具体的には、ポリマーのフィルター材表面へのコーティング、あるいは本発明の表面修飾ポリマーを構成するモノマーあるいはポリマーをフィルター表面に共有結合させる方法、より具体的には重合性モノマーや重合性ポリマーなどの化学種の放射線グラフト重合やプラズマ照射による導入、電子線や紫外線を照射して導入する方法などが挙げられる。また、表面修飾の前処理として、本発明のポリマーとフィルター材の素材との接着性をより高めるなどのため、フィルター材の素材の表面を酸、アルカリなどの適当な薬品で処理をしたり、プラズマを照射することもできる。更に、ポリマーを表面に修飾した後に熱処理や、γ線、電子線などの放射線を照射する後加工を施し、フィルター材の素材と該ポリマーとの接着性を更に強化することもできる。
【００２３】
本発明では、ポリマーは、ビニル系ポリマーが好ましい。本発明でいうビニル系ポリマーとは、広義の意味でのビニル系ポリマーであり、主鎖が非環式からなる重合体を意味する。その具体例としては、「Ｊ  Ｂｒａｎｄｒｕｐ；Ｅ．Ｈ．Ｉｍｍｅｒｇｕｔ．１９８９．“Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ”Ａ  Ｗｉｌｅｙ−ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，ｐVII−５〜VII−１８」に示される、ポリアクリル酸およびそのα−置換体とその誘導体、ポリビニルエーテル、ポリビニルアルコール、ポリビニルエステル、ポリスチレンとその誘導体などを挙げることができが、本発明では、ポリアクリル酸の誘導体が最も好ましい。
【００２４】
基材修飾の為に用いられるポリマーは公知の重合法によって得ることができる。例えば、連鎖反応である付加重合、環化重合、異性化重合、開環重合、逐次反応である脱離反応、重付加、重縮合や付加重縮合等が挙げられ、モノマーとしては上記重合反応可能なものであれば構わないが、重合性部分がビニル基であるモノマーが好ましい。また、得られたポリマーは、ランダム、ブロックどちらでも良いが、ランダムコポリマーが好ましい。これは、塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットが連鎖した部分が多くなると、血小板の吸着が顕著になっていく傾向があり本発明の血小板通過率を向上させようという目的と合致しなくなるからである。
【００２５】
フィルター基材の単位表面積あたりのポリマーの重量は、全血製剤から白血球を選択的に除去する場合には、９０ｍｇ／ｍ2以上３００ｍｇ／ｍ2以下である必要がある。９０ｍｇ／ｍ2未満である場合には血小板の回収率が低下し、３００ｍｇ／ｍ2より多い場合は、白血球除去性能が低下する。また、濃厚血小板製剤から白血球を選択的に処理する場合には、５ｍｇ／ｍ2以上９０ｍｇ／ｍ2未満である必要がある。濃厚血小板製剤は全血製剤と比較して血小板数が約１０倍と多く、低いポリマー重量でも充分に血小板を回収できるが、５ｍｇ／ｍ2未満である場合にはそれでも血小板回収率の低下を引き起こし、９０ｍｇ／ｍ2より多い場合は、存在する白血球の捕捉効率、特にリンパ球の捕捉効率が低下して充分な白血球除去性能を示さない場合がある。ここで、本発明においてフィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量とは、フィルター基材の全表面積の単位面積あたりのポリマー重量のことである。フィルター基材の全表面積とは、ポリマーが存在しない状態のフィルター材、すなわちフィルター基材の表面積をＢＥＴ吸着法により算出した値である。
【００２６】
また、本発明におけるフィルター基材の素材表面の該ポリマーの存在量の算出方法は、表面修飾前後の重量変化から簡易的に求めることができる。また、修飾前の重量が未知の場合でも、ポリマーのみを溶解する良溶媒が存在する場合には、良溶媒にポリマーを溶解させてポリマー重量を算出することも可能である。また、フィルター材そのものを溶媒により全溶解させて核磁気共鳴分光法（ＮＭＲ）により算出する方法や、ポリマー中にアミノ基などの荷電性官能基が含まれていて、その共重合組成が既知の場合には、その荷電性官能基にイオン的に吸着する色素を用いる色素吸着法による算出も可能である。
【００２７】
またポリマーは該白血球選択除去用フィルター材表面の少なくとも一部に存在すればよいが、ポリマーによる被覆率、すなわちフィルター基材の全表面に対してポリマーにより被覆された面積の割合が、好ましくは７０％以上、さらに好ましくは９０％以上である。被覆率は高いほど血小板吸着サイトが減少して血小板通過率が上昇するので、理想的な被覆率は１００％である。なお、被覆率の測定は、Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）など公知の解析方法で解析することが可能である。ＸＰＳの場合は、ポリマーが存在しない基材そのもののスペクトルの中で特徴的なピークの強度に注目し、ポリマーが被覆されるとその強度が低下していくことを利用して算出することが出来る。
【００２８】
本発明のフィルター材の平均気孔径は１μｍ以上６０μｍ以下、好ましくは１μｍ以上３０μｍ以下、より好ましくは１μｍ以上２０μｍである。平均気孔径が１μｍ未満では全血などを濾過する際の圧力損失が高すぎて実用的でない恐れが有り、６０μｍ以上ではフィルター材と白血球との接触確率が低下し、十分な白血球除去能を示さない可能性がある。尚、ここで言う平均気孔径とは、ＡＳＴＭ Ｆ３１６−８６に記載されているエアーフロー法に準じてＰＯＲＯＦＩＬ（ＣＯＵＬＴＥＲ  ＥＬＥＣＴＲＯＮＩＣＳ  ＬＴＤ．製）液中にて測定した平均気孔径を指す。
【００２９】
また、本発明のフィルター材の嵩密度は０．１０ｇ／ｃｍ3以上０．５０ｇ／ｃｍ3以下、好ましくは０．１０ｇ／ｃｍ3以上０．３５ｇ／ｃｍ3以下、より好ましくは０．１５ｇ／ｃｍ3以上０．３０ｇ／ｃｍ3以下の性状を有するものである。嵩密度が０．１ｇ／ｃｍ3未満である場合には機械的強度が不足し血液濾過の際にフィルター材が変形する恐れが有る。また、嵩密度が０．５ｇ／ｃｍ3より高い場合には血液の通液抵抗が高くなり、濾過時間の延長などの不具合を起こす可能性がある。なお、ここで言う嵩密度とは、フィルター材の重量をその寸法から算出される厚みと面積を乗じて求めた体積で除した値のことであり、厚みは任意の３箇所以上の測定値を平均した値を用いる。
【００３０】
本発明の白血球除去用フィルター材の素材とは、具体的には、ポリエチレンやポリプロピレン等のポリオレフィン、ポリエステル、ポリウレタン、ポリアミド、エチレン−ビニルアルコール共重合体、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリスルホン、セルロース、セルロースアセテート、ポリフッ化ビニル、ポリフッビニリデン、ポリエーテルスルホン、ブタジエン−アクリロニトリルコポリマー、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリテトラエチレンテレフタレート、天然繊維、ガラス繊維、あるいはそれらの混合物などが挙げられるが、上記例示に限定されるものではない
。
【００３１】
また、フィルター材の形態としては、血液を濾過し得る細孔を有するもので血球にダメージを与えにくいものであれば特に限定はなく、何れの形態を有する物も含まれる。具体的には編布、織布、不織布などの繊維状媒体や多孔膜、三次元網目状連続孔を有するスポンジ状構造物であるが、その中でも不織布とスポンジ状構造物が、切断等の加工性に優れるためより好ましい形態である。
【００３２】
本発明の白血球除去用フィルター材に滅菌を施す場合、高圧蒸気滅菌(以後、ＡＣ滅菌と略する)だけでなく、γ線滅菌や電子線滅菌など公知の何れの滅菌方法を用いても構わない。
【００３３】
本発明で処理する血液製剤は、採血された全血そのものでも、また、適当量の抗凝固剤が添加される、あるいは遠心分離を施される等の加工が施された血液製剤でもよい。濾過する血液製剤の容量は特に限定は無い。
【００３４】
また、本発明で言う全血製剤とは、ＡＣＤ（アシッドサイトレートデキストローズ）やＣＰＤ（サイトレートフォスフェートデキストローズ）などの抗凝固剤を含む、採血後３日以内、望ましくは１日以内、更に望ましくは８時間以内の血液製剤のことである。本発明ではその中で、特に採血後８時間以内の血液を新鮮全血としている。また、全血製剤の中でも、採血後にフィルターで濾過するまでの間に、４℃以上３０℃未満、好ましくは１５℃以上２５℃未満の温度で保存された血液製剤であることが望ましい。採血後３日を超えて保存された全血製剤や、４℃以下の温度で保存された全血製剤は、含まれる血小板の機能が低下する恐れがある為に望ましくない。また３０℃を超える温度で保存した全血製剤は、血漿タンパク質の変性などが起こりやすく、血小板回収率の向上が見られない可能性がある為好ましくない。
【００３５】
また、濃厚血小板製剤（ＰＣ）や多血小板血漿製剤（ＰＲＰ）は、採血した全血製剤を遠心して調製されたか、または成分採血によって調整された血小板製剤や血漿製剤があり、調整後５日以内であることが望ましい。また、かかる製剤は、調整後にフィルターで濾過するまでの間は、２０℃以上２５℃未満の温度下で振とう保存されたものが望ましい。調製後５日を超え、上記の温度範囲外で保存された製剤は、血小板機能の低下などを引き起こす恐れがあり、好ましく無い。
【００３６】
以下にこの発明の実施例を示すがこれに限定されるものではない。
【実施例１】
（ＰＭ２）
（ポリマーの合成）
フィルター材の表面をコーティングにより修飾する場合に用いる多量体の合成方法の一例を示す。
エタノール（１００ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３００分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしては２−ヒドロキシプロピルメタクリレート（以後ＨＰＭＡと略する）４２．３４ｇ（２９４．０ｍｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するジメチルアミノエチルメタクリレート（以後ＤＭと略する）を０．９４ｇ（６．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９８．０ｍｏｌ％、ＤＭが２．０ｍｏｌ％である。なお、一般に市販されている２−ヒドロキシプロピルメタクリレートは、２−ヒドロキシメタクリレートと１−ヒドロキシプロピルメタクリレートが混在しているが、本発明の実施例と比較例に用いたヒドロキシプロピルメタクリレートは、２−ヒドロキシメタクリレートがほぼ８０ｍｏｌ％であることをＮＭＲにより確認した。また、開始剤溶液としてアゾビスイソバレロニトニル（以下Ｖ−６５と略する）を０．１２４ｇ（０．５０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液を用いた。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。
次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ２と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ２中のＨＰＭＡの含量は９８ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は２ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．２×１０5であった。
【００３７】
（フィルター材の作成）
フィルター材の作成方法としての例として次に示す。得られたポリマー（ＰＭ２）１０ｇをイソプロパノールと純水の混合溶媒１００ｇに溶解させ、その溶液に、フィルター基材としてポリエチレンテレフタレート製不織布（平均孔径７μｍ、目付け４０ｇ／ｍ2、以後ＰＥＴ不織布と略する）を浸漬させ、余分な液を除去した後に４０℃で２時間乾燥させて目的のフィルター材を得た。
【００３８】
（ポリマー存在量）
次に使用したフィルター基材であるＰＥＴ不織布の全表面積測定を行った。測定方法はＢＥＴ吸着法で、測定装置は、島津アキュソープ２１００Ｅ、吸着ガスはクリプトンガス、吸着温度は液体窒素温度である。測定の結果、フィルター基材の全表面積は、１．２０ｍ2／ｇであり、フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２５０ｍｇ／ｍ2であった。
なお、以後の実施例あるいは比較例に用いているＰＥＴ不織布はすべて同一のものであり、フィルター基材の全表面積の単位面積あたりの重量を算出する際に用いるフィルター基材の全表面積として、前出の１．２０ｍ2／ｇを採用した。
【００３９】
（溶出物試験）
次に溶出物試験方法を記述する。溶出物試験とは、作成したフィルター材約２５ｍｇを３００ｍｌの純水中において、２５℃で１６時間浸浸させたのちにフィルターを真空乾燥させ、次式（１）によりポリマーの重量変化率を算出するる。
0004082893.tif 000002
溶出物試験の結果、重量変化率は、０．１％であった。なお、ポリマー重量は、各ポリマーの良溶媒に完全溶解させて測定した。なおその際、基材にポリマーが残っていないことは、ＮＭＲ測定により確認している。
【００４０】
（白血球除去能の測定）
次に白血球除去の性能を試験する方法を記述する。血液評価に用いた血液は新鮮全血であり、採血血１００ｍｌに対して濾過済みＣＰＤ溶液（クエン酸三ナトリウム・二水和物２．６３０ｇとクエン酸一水和物０．３２７ｇと燐酸二水素ナトリウム・二水和物０．２５１ｇとグルコース２．３２０ｇを注射用蒸留水１００ｍｌに溶解させた物を０．２μｍのフィルターで濾過）を１４ｍｌ加え混和し２３℃で２時間静置した物である（以後、濾過前血という）。血液評価は次のように行った。即ち、前記のとおりに作成した２０ｍｍΦ大のフィルター１６枚（約２５０ｍｇ）を充填したカラムに（充填密度は約０．３０ｇ／ｃｍ3）、血液流速を０．９ｍｌ／ｍｉｎに調整した血液を通過濾過させ、濾過血８ｍｌを回収液とした。白血球除去率はフローサイトメトリー法（装置：ＢＥＣＴＯＮ  ＤＩＣＫＩＮＳＯＮ社製  ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ）を用い、次の（２）式に従い計算した。
0004082893.tif 000003
なお、各試料の調製は、血液１００μｌをサンプリングし、ビーズ入りＬｅｕｃｏｃｏｕｎｔキット（日本ベクトン・ディッキンソン社）を用いて調製した。
【００４１】
（血小板回収率）
血小板回収率は、自動血球数測定装置（東亜医用電子株式会社Ｓｙｓｍｅｘ  Ｋ４５００）にて測定を行い、次の（３）式に従い計算した。
0004082893.tif 000004
結果は、白血球除去能は３．１、血小板回収率は８４％であった。
また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．１％、白血球除去能が３．３、血小板回収率が８０％であった。
なお、実施例１の結果も含めて以降の実施例および比較例に記述される溶出物
試験結果ならびに血液評価結果については【表１】にすべてまとめてある。
【００４２】
【実施例２】
（ＰＭ３）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７５℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３９０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１８２．９８ｇ（１．２７ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを６．１８ｇ（３９．３ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＭが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を１．２０ｇ（４．８３ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ３と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ３中のＨＰＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．９×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２７８ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．１％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．２、血小板回収率が８８％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．１％、白血球除去能が３．５、血小板回収率が８７％であった。また、同じフィルター材で、γ線滅菌処理（２５ＫＧｙ）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．１％、白血球除去能が３．３、血小板回収率が９０％であった。
【００４３】
【実施例３】
（ＰＭ７）
エタノール（１００ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７５℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３００分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを４０．１８ｇ（０．２７９ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを３．３０ｇ（２１．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９３．０ｍｏｌ％、ＤＭが７．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を０．１２４ｇ（０．５０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ７と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ７中のＨＰＭＡの含量は９３ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は７ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．４×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２３９ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．１％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．３、血小板回収率が８５％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．１％、白血球除去能が３．４、血小板回収率が８４％であった。
【００４４】
【実施例４】
（ＰＭ９）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７５℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３３０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１７０．３５ｇ（１．１８ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを１８．２９ｇ（１１７ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９１．０ｍｏｌ％、ＤＭが９．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を１．２０ｇ（４．８３ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ９と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ９中のＨＰＭＡの含量は９１ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は９ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．５×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２６２ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．２％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．５、血小板回収率が８０％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．１％、白血球除去能が３．６、血小板回収率が７９％であった。
【００４５】
【実施例５】
（ＰＭ３Ｌ）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３６０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１６７．６２ｇ（１．１６ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを５．６６ｇ（３６．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＭが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を２．９８ｇ（１２．０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ３Ｌと略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ３Ｌ中のＨＰＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は８．０×１０4であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２６７ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．２％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．８、血小板回収率が８９％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．２％、白血球除去能が３．７、血小板回収率が８９％であった。
【００４６】
【実施例６】
（ＰＭ３ＬＬ）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を２４０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１６７．６２ｇ（１．１６ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを５．６６ｇ（３６．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＭが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を５．９６ｇ（２４．０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ３ＬＬと略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ３ＬＬ中のＨＰＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．８×１０4であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の全表面積の単位表面積あたりのポリマー重量は２５３ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．８％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．７、血小板回収率が８８％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．７％、白血球除去能が３．７、血小板回収率が８６％であった。
【００４７】
【実施例７】
（ＰＥ３）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３６０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１６７．６２ｇ（１．１６ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＮ,Ｎ−ジエチルアミノエチルメタクリレート（以後ＤＥと略する）を６．６７ｇ（３６．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＥが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を０．９９３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＥ３と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＥ３中のＨＰＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＥの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は２．０×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２６２ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．１％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．３、血小板回収率が８７％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．１％、白血球除去能が３．６、血小板回収率が８１％であった。
【００４８】
【実施例８】
（ＢＭ３）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３６０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはヒドロキシブチルメタクリレート（以後ＨＢＭＡと略する）を１８３．８８ｇ（１．１６ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを６．６７ｇ（３６．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＢＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＥが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を０．９９３ｇ（４．０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＢＭ３と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＢＭ３中のＨＢＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．８×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２６０ｍｇ／ｍ2あった。
溶出物試験の結果、重量変化率は０．０％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．３、血小板回収率が８２％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．０％、白血球除去能が３．４、血小板回収率が７９％であった。
【００４９】
【実施例９】
（ＰＭ３  濃厚血小板製剤処理の場合）
実施例２で用いたポリマーであるＰＭ３を１ｇ、イソプロパノールと純水の混合溶媒１００ｇに溶解させ、その溶液にＰＥＴ不織布を浸漬させ、余分な液を除去した後に４０℃で２時間乾燥させて目的のフィルター材を得た。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２０ｍｇ／ｍ2であった。血液評価は次のように行った。即ち、２０ｍｍΦ大のフィルター材１４枚（約２００ｍｇ）を充填したカラムに（充填密度は約０．２２ｇ／ｃｍ3）、血液流速を１．２ｍｌ／ｍｉｎに調整した血液を通過濾過させ、濾過血８ｍｌを回収液とした。白血球除去能および血小板回収率の測定方法は実施例１と同じである。
血液評価の結果は、白血球除去能が３．２、血小板回収率が９２％であった。溶出物試験の結果、重量変化率は０．０％であった。また、同じフィルター材で、γ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．０％、白血球除去能が３．３、血小板回収率が９０％であった。
【００５０】
【比較例１】
（ＨＥ５）
エタノール（２８０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３３０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーは、２−ＨＥＭＡを１６１．９６ｇ（１．２４ｍｏｌ）と、塩基性含窒素部分を含む重合性単量体に該当するＤＥを１２．０９ｇ（６５．３ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、２−ＨＥＭＡが９５．０ｍｏｌ％、ＤＥが５．０ｍｏｌ％、である。開始剤溶液はＶ−６５を１．２０ｇ（４．８３ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＨＥ５と略）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＨＥ５中のＤＥの含量は５ｍｏｌ％である。ＧＰＣ測定により重量平均分子量は２．０×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２４７ｍｇ／ｍ2あった。
また、溶出物試験の結果、重量変化率は２．１％であった。血液評価の結果は、白血球除去率が２．９、血小板回収率が７９％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が１．９％、白血球除去能が３．４、血小板回収率が６８％であった。また、同じフィルター材で、γ線滅菌処理（２５ｋＧｙ）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が２．８％、白血球除去能が３．０、血小板回収率が８２％であった。この比較例から、ＨＰＭＡの代わりに２−ＨＥＭＡを用いると溶出物が増加し、白血球除去能も低下することが分かる。さらに、ＡＣ滅菌を施した場合には血小板回収率が低下し、γ線滅菌を施すと溶出物が増加することがわかる。
【００５１】
【比較例２】
（ＰＭ１）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７５℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３６０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１８６．７５ｇ（１．３０ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを２．０６ｇ（１３．１ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９９．０ｍｏｌ％、ＤＭが１．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を１．２０ｇ（４．８３ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ１と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ１中のＨＰＭＡの含量は９９ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は１ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．４×１０5であった。
血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２６２ｍｇ／ｍ2あった。溶出物試験の結果、重量変化率は０．０％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．２、血小板回収率が５９％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．０％、白血球除去能が３．３、血小板回収率が２０％であった。この比較例から塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットが少なすぎると、血小板回収率が低下することが分かる。さらに、ＡＣ滅菌処理を施すと血小板回収率が低下することが分かる。
【００５２】
【比較例３】
（ＰＭ１０）
エタノール（２６０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７５℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１２０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を３３０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１６８．４８ｇ（１．１７ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを２０．４４ｇ（１３０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９０．０ｍｏｌ％、ＤＭが１０．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を１．２０ｇ（４．８３ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ１０と略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ１０中のＨＰＭＡの含量は９０ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は１０ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．７×１０5であった。
血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２４４ｍｇ／ｍ2あった。溶出物試験の結果、重量変化率は０．３％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．５、血小板回収率が１０％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．４％、白血球除去能が３．６、血小板回収率が８％であった。この比較例から塩基性含窒素部分を含む重合性モノマー由来のユニットが多すぎると、血小板回収率が低下することが分かる。さらに、ＡＣ滅菌処理を施すと血小板回収率が低下することが分かる。
【００５３】
【比較例４】
（ＰＭ３ＬＬＬ）
エタノール（３００ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７８℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを１３５分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を１５０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを８３．８１ｇ（０．５８２ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを２．８３ｇ（１８．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＭが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を５．９６１ｇ（２４．０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ３ＬＬＬと略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ３ＬＬＬ中のＨＰＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は１．１×１０4であった。
血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２３２ｍｇ／ｍ2あった。溶出物試験の結果、重量変化率は２．０％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．５、血小板回収率が８５％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が２．２％、白血球除去能が３．５、血小板回収率が８６％であった。この比較例から分子量が小さすぎると溶出物が増加することが分かる。
【００５４】
【比較例５】
（ＰＭ３Ｈ）
エタノール（２５０ｍｌ）を還流装置を設置した反応容器に入れ、７０℃で１時間窒素でバブリング・溶液の攪拌を行った後に窒素雰囲気を維持したまま、モノマーを９０分かけて系中に滴下し、併行して開始剤溶液を２４０分かけて系中に滴下し、開始剤溶液滴下完了後２時間さらに重合を行った。モノマーとしてはＨＰＭＡを１６７．６２ｇ（１．１６４ｍｏｌ）、および塩基性含窒素部分を含む重合性モノマーに該当するＤＭを５．６６ｇ（３６．０ｍｍｏｌ）を含む液体である。つまり各モノマーの仕込量は、ＨＰＭＡが９７．０ｍｏｌ％、ＤＭが３．０ｍｏｌ％である。開始剤溶液はＶ−６５を０．４９７ｇ（２０．０ｍｍｏｌ）含むエタノール溶液である。ポリマーは重合溶液を純水に滴下して回収し、析出したポリマーを細断化したものを再度純水に添加して１時間攪拌することでポリマーの洗浄を行った。
次に洗浄を完了したポリマーを２７℃で真空乾燥させて目的のポリマーを得た（以下ＰＭ３Ｈと略する）。得られたポリマーの組成分析をアミノ基の中和滴定、及び、ＮＭＲ測定の積分値から算出したところほぼ仕込比どおりであることを確認したことから、ＰＭ３Ｈ中のＨＰＭＡの含量は９７ｍｏｌ％であり、ＤＭの含量は３ｍｏｌ％である。また、ＧＰＣ測定により重量平均分子量は２．９×１０5であった。血液評価方法、フィルター作成方法は実施例１と同様とした。フィルター基材の単位表面積あたりのポリマー重量は２５７ｍｇ／ｍ2あった。溶出物試験の結果、重量変化率は０．０％であった。血液評価の結果は、白血球除去能が３．５、血小板回収率が７９％であった。また、同じフィルター材で、ＡＣ滅菌処理（１１８℃、３０分）を施したものも同様に溶出物試験および血液評価を行った。結果は、重量変化率が０．０％、白血球除去能が５．１、血小板回収率が２％であった。この比較例から分子量が大きすぎるとＡＣ滅菌処理を施した場合に血小板回収率が大きく低下することが分かる。
【００５５】
【表１】
0004082893.tif 000005
【００５６】
【発明の効果】
表１に示すように本発明は、血液製剤に用いる白血球選択除去用フィルター材、あるいは、血小板輸血や血液の体外循環白血球除去療法に用いることのできるフィルター材として、溶出性が極めて低く、滅菌後のフィルター材としての性能変化も微小で、従来よりも高い白血球除去性能を示しながら新鮮全血や濃厚血小板製剤、あるいは多血小板血漿から血小板回収も目的とする場合においては、白血球のみを選択的に除去することを可能とした。