(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料および溶離液をカラムに順次送液するように構成された液体クロマトグラフの制御装置において、
前記カラムへの溶離液の送液流量、前記カラムの寸法条件、前記カラム内の充填剤の種類を入力するための第１の入力手段と、
前記第１の入力手段によって入力された条件を記憶する第１の記憶手段と、
前記第１の記憶手段に記憶された条件に基づいて、前記第１の入力手段によって入力された種類に係る前記充填剤に吸着されない物質が前記カラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出するための演算手段と、
溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表す溶離液のグラジエントカーブにおける試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている各状態の維持時間を、前記演算手段で求められた基準時間ｔ0 にそれぞれ設定するための維持時間設定手段とを備えていることを特徴とする液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項２】
試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の値を２つ入力するための第２の入力手段と、
前記第２の入力手段によって入力された値を記憶する第２の記憶手段と、
溶離液の前記グラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を、前記第２の記憶手段に記憶された値にそれぞれ設定するための混合比設定手段とをさらに備えていることを特徴とする請求項１に記載の液体クロマトグラフの制御装置。
【請求項３】
試料および溶離液をカラムに順次送液するように構成された液体クロマトグラフの制御方法において、
前記カラムへの溶離液の送液流量、前記カラムの寸法条件、前記カラム内の充填剤の種類に基づいて、前記充填剤に吸着されない物質が前記カラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出するステップと、
溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表す溶離液のグラジエントカーブにおける試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている各状態の維持時間を、前記基準時間ｔ0 にそれぞれ設定するステップとを有していることを特徴とする液体クロマトグラフの制御方法。
【請求項４】
溶離液の前記グラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を、試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の２つの値にそれぞれ設定するステップをさらに有していることを特徴とする請求項３に記載の液体クロマトグラフの制御方法。
【請求項５】
試料および溶離液をカラムに順次送液するように構成された液体クロマトグラフをコンピュータによって制御するための制御プログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体であって、前記制御プログラムが、
前記カラムへの溶離液の送液流量、前記カラムの寸法条件、前記カラム内の充填剤の種類を入力するための第１の入力手段、
前記第１の入力手段によって入力された条件を記憶する第１の記憶手段、
前記第１の記憶手段に記憶された条件に基づいて、前記第１の入力手段によって入力された種類に係る前記充填剤に吸着されない物質が前記カラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出するための演算手段、および、
溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表す溶離液のグラジエントカーブにおける試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている各状態の維持時間を、前記演算手段で求められた基準時間ｔ0 にそれぞれ設定するための維持時間設定手段、
として前記コンピュータを動作させることを特徴とする液体クロマトグラフの制御プログラムを記録した記録媒体。
【請求項６】
前記制御プログラムが、
試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の値を２つ入力するための第２の入力手段、
前記第２の入力手段によって入力された値を記憶する第２の記憶手段、および、
溶離液の前記グラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を、前記第２の記憶手段に記憶された値にそれぞれ設定するための混合比設定手段、
としても前記コンピュータを動作させることを特徴とする請求項５に記載の液体クロマトグラフの制御プログラムを記録した記録媒体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、簡易に、しかも確実且つ迅速に試料を分析することが可能な液体クロマトグラフの制御装置および制御方法並びに制御プログラムを記録した記録媒体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
移動相として液体溶媒（溶離液）を用いる液体クロマトグラフにおいては、溶離液を送出するポンプと固定相が充填されたカラムとの間にインジェクターが接続され、インジェクターから試料および溶離液をカラム内に供給する構成になっている。カラム内に導入された試料内の各成分はそれぞれカラムを通過する時間が異なるため、カラムから排出される時点では各成分が分離されることになる。
【０００３】
この際、測定する試料により、通常２〜４種類の溶離液を混合することにより溶離液の成分を変えるのが一般的である。しかも、カラムから排出される試料の各成分が重ならないように且つ短時間で分離が行われるようにするため、溶離液の混合比を階段状におよび／または徐々に変化させることが行われている（グラジエント法）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
現在、溶離液の混合比の値および特定の混合比を維持する時間（維持時間）などで決定される、溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表すグラジエントカーブは、測定者の経験によってその場その場で逐次決められているのが実情であり、このような作業は決して能率的なものではない。また、グラジエントカーブの最適条件を見つけだすことが困難であるため、液体クロマトグラフにより試料の短時間での最適な分離を行うためには、測定者にも経験が求められるなどの制約がある。
【０００５】
そこで、本発明の目的は、カラムから排出される試料の各成分が重ならず且つ短時間で分離が行われるようにグラジエントカーブを自動的に設定して簡易且つ迅速にクロマトを行うことが可能な液体クロマトグラフの制御装置および制御方法並びに制御プログラムを記録した記録媒体を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、請求項１の液体クロマトグラフの制御装置は、試料および溶離液をカラムに順次送液するように構成された液体クロマトグラフの制御装置において、前記カラムへの溶離液の送液流量、前記カラムの寸法条件、前記カラム内の充填剤の種類を入力するための第１の入力手段と、前記第１の入力手段によって入力された条件を記憶する第１の記憶手段と、前記第１の記憶手段に記憶された条件に基づいて、前記第１の入力手段によって入力された種類に係る前記充填剤に吸着されない物質が前記カラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出するための演算手段と、溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表す溶離液のグラジエントカーブにおける試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている各状態の維持時間を、前記演算手段で求められた基準時間ｔ0 にそれぞれ設定するための維持時間設定手段とを備えていることを特徴とするものである。
【０００７】
また、請求項３の液体クロマトグラフの制御方法は、試料および溶離液をカラムに順次送液するように構成された液体クロマトグラフの制御方法において、前記カラムへの溶離液の送液流量、前記カラムの寸法条件、前記カラム内の充填剤の種類に基づいて、前記充填剤に吸着されない物質が前記カラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出するステップと、溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表す溶離液のグラジエントカーブにおける試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている各状態の維持時間を、前記基準時間ｔ0 にそれぞれ設定するステップとを有していることを特徴とするものである。
【０００８】
また、請求項５の液体クロマトグラフの制御プログラムを記録した記録媒体は、試料および溶離液をカラムに順次送液するように構成された液体クロマトグラフをコンピュータによって制御するための制御プログラムを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体であって、前記制御プログラムが、前記カラムへの溶離液の送液流量、前記カラムの寸法条件、前記カラム内の充填剤の種類を入力するための第１の入力手段、前記第１の入力手段によって入力された条件を記憶する第１の記憶手段、前記第１の記憶手段に記憶された条件に基づいて、前記第１の入力手段によって入力された種類に係る前記充填剤に吸着されない物質が前記カラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出するための演算手段、および、溶離液の混合比の時間の経過に伴う変化を表す溶離液のグラジエントカーブにおける試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている各状態の維持時間を、前記演算手段で求められた基準時間ｔ0 にそれぞれ設定するための維持時間設定手段、として前記コンピュータを動作させることを特徴とするものである。
【０００９】
請求項１、３、５によると、カラムへの溶離液の送液流量、カラムの寸法条件、カラム内の充填剤の種類に基づいて、充填剤に吸着されない物質がカラムを通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出することができ、そして、溶離液のグラジエントカーブの各状態における維持時間が基準時間ｔ0 にそれぞれ設定される。
【００１０】
このように、溶離液のグラジエントカーブの各状態における維持時間が自動的に基準時間ｔ0 に設定されることにより、試料の各成分がほとんど重なることがなく且つ短時間で分離を行うことが可能となるとともに、各状態の維持時間を個別に設定する手間が省けるため簡易且つ迅速にクロマトを行うことができる。つまり、請求項１においては、カラムへの溶離液の送液流量、カラムの寸法条件、カラム内の充填剤の種類といった簡単に知ることができるパラメータに基づいて求められた基準時間ｔ0 を用いてグラジエントカーブの各状態における維持時間を定めるようにすることで、好適なクロマト条件を簡易且つ迅速に決定することができるようにしたものである。
【００１１】
また、上述した基準時間ｔ0 を用いることには、以下のような利点もある（なお、以下の議論では、説明を簡略化するためにグラジエント溶出ではなく溶離液の混合比を変化させない場合を考える）。すなわち、実際にクロマトを行う場合、まず試料に対してＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）を行ってＲf 値から各成分の保持比ｋ´（＝（１／Ｒf ）−１）を求め、さらに、保持比ｋ´から各成分のピークがどれくらい離れているかを示す指標である分離度Ｒs （＝√Ｎ／４・（（α−１）／α）・（ｋ´／（ｋ´＋１））：Ｎは有効理論段差数、αは選択性因子）を求める。そして、分離度Ｒs が小さい場合には各成分を十分に分離するために保持比ｋ´を大きくする必要があり、そのためにはリテンションタイムｔr を大きくしてやることが必要となる（ｋ´＝（ｔr −ｔ0 ）／ｔ0 ）。そこで、維持時間を基準時間ｔ0 に設定しておけば、リテンションタイムｔr を基準時間ｔ0 に基づいて例えば２ｔ0 、３ｔ0 というように大きくまたは１／２ｔ0 、１／３ｔ0 というように小さく再設定することが容易であり、しかもこのようにして基準時間ｔ0 に基づいて保持比ｋ´を変更していくことによって、目標とする保持比ｋ´ひいては分離度Ｒs を達成するのが容易であるという利点がある。
【００１２】
言い換えると、クロマトを行う場合には試料の分離しやすさに応じてＲf 値を好ましい値に変更し、これに伴って、上記の保持比ｋ´とＲf 値との関係および保持比ｋ´とリテンションタイムｔr との関係に基づいてリテンションタイムｔr を変更する必要があるが、リテンションタイムｔr の初期値を基準時間ｔ0 にしておけばこれをその何倍かに変更するだけで、上記の２つの関係式から明らかなように目標とするリテンションタイムｔr をダイレクトにＲf 値と結びつけることが可能であり、その設定がきわめて容易になる。つまり、グラジエントカーブの各状態における維持時間を基準時間ｔ0 に設定しておくことで、ＴＬＣで求めたＲf 値と維持時間とを容易に関連付けて維持時間の簡易な調整ができるようになる。
【００１３】
なお、温度条件などの個別具体的な条件に対応することができるように、維持時間が基準時間ｔ0 に設定またはその整数倍（或いは整数分の１）に再設定された後、グラジエントカーブの各状態における維持時間の微調整が手動で行うことができるように構成されていてもよい。
【００１４】
また、本発明において、溶離液のグラジエントカーブにおける各状態とは、カラム内に残った試料の洗浄のための状態を除く、試料の分離のために溶離液の混合比又はその変化率が一定に保たれている状態をいうものとする。例えばグラジエント溶出では、クロマトの初期濃度保持状態（「ＷＡＩＴ」）と終濃度保持状態（「ＴＯＰ」）およびこれらの間のグラジエント状態（「ＧＲＡＤ」）をいい、順方向洗浄や逆方向洗浄のための状態は含まない。ただし、順方向洗浄や逆方向洗浄の維持時間を自動的に基準時間ｔ0 に設定するようにしてもよい。
【００１５】
また、請求項２の液体クロマトグラフの制御装置は、試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の値を２つ入力するための第２の入力手段と、前記第２の入力手段によって入力された値を記憶する第２の記憶手段と、溶離液の前記グラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を、前記第２の記憶手段に記憶された値にそれぞれ設定するための混合比設定手段とをさらに備えていることを特徴とするものである。
【００１６】
また、請求項４の液体クロマトグラフの制御方法は、溶離液の前記グラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を、試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の２つの値にそれぞれ設定するステップをさらに有していることを特徴とするものである。
【００１７】
また、請求項６の液体クロマトグラフの制御方法は、前記制御プログラムが、試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の値を２つ入力するための第２の入力手段、前記第２の入力手段によって入力された値を記憶する第２の記憶手段、および、溶離液の前記グラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を、前記第２の記憶手段に記憶された値にそれぞれ設定するための混合比設定手段、としても前記コンピュータを動作させることを特徴とするものである。
【００１８】
請求項２、４、６によると、溶離液のグラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比が、試料内の任意の一成分の保持比ｋ´が互いに異なるような溶離液の混合比の２つの値にそれぞれ設定される。ここで、試料内の任意の一成分の保持比ｋ´に関する条件は、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）によって測定されたＲf 値によって表現されたものであってよい。つまり、実際に液体クロマトグラフの制御装置に入力される値はＲf 値が互いに異なるような溶離液の混合比の２つの値であってよい。なお、請求項４の混合比設定ステップは、請求項３のどのステップの前後に行われてもよい。
【００１９】
このように溶離液のグラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態における溶離液の混合比を試料内の任意の一成分の保持比ｋ´に基づいて定められた２つの値に設定するようにしたため、基準となる試料内の任意の一成分の保持比ｋ´として適切な値を用いることでより良好な分離を行うことが可能になるとともに、上述した２つの状態における溶離液の混合比の設定が自動化されて簡易且つ迅速にクロマトを行うことができる。
【００２０】
なお、ここで「２つの状態」としたのは、例えばグラジエント溶出では、クロマトの初期濃度保持状態（「ＷＡＩＴ」）と終濃度保持状態（「ＴＯＰ」）に対応させるためであり、グラジエント状態（「ＧＲＡＤ」）での混合比はこれら２つの状態での混合比を時間に応じて比例配分すれば自動的に定められるからである。また、ステップワイズ溶出の場合でも、２つの混合比を初期濃度保持状態と終濃度保持状態の混合比にそれぞれ設定することができる。
【００２１】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の好適な実施の形態について説明する。
【００２２】
図１は、本発明の好適な一実施の形態に係る液体クロマトグラフの制御装置を液体クロマトグラフとともに示した概略的な模式図である。本実施の形態の液体クロマトグラフの制御装置は、パーソナルコンピュータシステム１によって構成されている。また、パーソナルコンピュータシステム１によって制御される液体クロマトグラフ２は、異なる溶離液Ａ〜Ｄがそれぞれ蓄えられた容器１１〜１４と、容器１１〜１４からの溶離液Ａ〜Ｄの供給をそれぞれ制御する電磁弁１５〜１７と、選択された溶離液Ａ〜Ｄを混合するための混合器１９と、混合された溶離液を送液するためのポンプ２０と、試料が充填されたインジェクター２２と、試料の各成分の分離が行われるカラム２４とを有している。カラム２４の下流側には、例えば分取用の紫外線検出器やフラクションコレクタ（ともに図示せず）が配置されていてよい。また、インジェクター２２および／またはカラム２４は複数設けられていてもよく、そのために流路の切り換えが適宜行われるように構成されていてもよい。
【００２３】
電磁弁１５〜１７は三方電磁弁であり、電磁弁１５は溶離液ＡとＢのいずれかを選択して後段に送ることができるようにされており、電磁弁１６は溶離液ＣとＤのいずれかを選択して後段におくることができるようにされている。そして、電磁弁１７は電磁弁１５の出口と電磁弁１６の出口のいずれかを選択して混合器１９に送るようにされている。例えば、溶離液ＡとＢを混合する場合には、電磁弁１７の左側（電磁弁１５側）を開いた状態にして電磁弁１５の左右を交互に開くようにする。また、溶離液ＣとＤを混合する場合には、電磁弁１７の右側（電磁弁１６側）を開いた状態にして電磁弁１６の左右を交互に開くようにする。また、溶離液ＡとＣを混合する場合には、電磁弁１５、１６をそれぞれ左側（Ａ側およびＣ側）に開いた状態にして電磁弁１７の左右を交互に開くようにする。
【００２４】
パーソナルコンピュータシステム１は、コンピュータ本体３と、これに接続された表示手段としてのモニタ４および入力装置（第１および第２の入力手段）５とを有している。コンピュータ本体３には、ＣＰＵ（演算手段、維持時間設定手段、混合比設定手段）６と、ＲＡＭ（第１および第２の記憶手段）７と、ハードディスク８とが含まれている。モニタ４には、後述するような液体クロマトグラフの条件設定画面（図３参照）やクロマトグラフによる分析結果などが表示される。入力装置５は、例えばキーボードや入力パッドなどの文字入力が可能な装置であり、マウスなどのポインティングデバイスを含んでいてもよい。
【００２５】
ハードディスク８は、本実施の形態に係る記録媒体に記録された制御プログラムや入力装置５から与えられたデータなどを磁気的に記憶する。ＲＡＭ７は、ハードディスク８から読み出されたプログラムや入力装置５から与えられたデータなどを一時的に記憶する。
【００２６】
ＣＰＵ６は、ハードディスク８に記憶された制御プログラムおよび入力装置５から入力されたデータなどに基づいて所定の制御演算を行い、その結果をＲＡＭ７および／またはハードディスク８に記憶させ、さらに必要であればモニタ４に表示させる。そして、その演算結果に基づいて３つの電磁弁１５〜１７の開閉を制御する。この電磁弁１５〜１７の開閉の時間制御によって、４種類の溶離液Ａ〜Ｄから選択された任意の２以上の溶離液の混合比を制御することが可能となる。例えば、溶離液Ａと溶離液Ｂの混合比を９：１にしようとする場合には、電磁弁１７の左側を開いた状態にして電磁弁１５の左側開時間を右側開時間の９倍に設定する。これにより、混合器１９には溶離液Ａと溶離液Ｂが９：１の体積割合で導かれる。
【００２７】
本実施の形態に係る制御プログラムが記録された記録媒体は、例えばフロッピーディスクやＣＤ−ＲＯＭであり、図１には示されていないものの、コンピュータ本体３にはフロッピーディスクドライブおよび／またはＣＤ−ＲＯＭドライブが装備されている。なお、本実施の形態の制御装置であるパーソナルコンピュータシステム１は、ハードディスク８を有するものであるが、上述の制御プログラムが記録されたフロッピーディスクなどから直接ＲＡＭ７にプログラムが読み込まれるように構成されていてもよく、コンピュータ本体３がハードディスク８を有していなくともよい。
【００２８】
次に、本実施の形態に係る制御装置であるパーソナルコンピュータシステム１によって実行される液体クロマトグラフの制御方法について、図２および図３をさらに参照して説明する。図２は本実施の形態に係る液体クロマトグラフの制御方法に関するフローチャートである。また、図３は本実施の形態に係る制御プログラムによるモニタへの表示画面の一例を示す図である。
【００２９】
本実施の形態の制御方法では、２種類の溶離液を混合するグラジエント溶出が行われるものとする。すなわち、極性の低い溶離液の比率が高い初期濃度保持状態（「ＷＡＩＴ」、以下”Ｗ”と記載することがある）、極性の高い溶離液の比率を徐々に増加させていくグラジエント状態（「ＧＲＡＤ」、以下”Ｇ”と記載することがある）、極性の高い溶離液の比率が高い終濃度保持状態（「ＴＯＰ」、以下”Ｔ”と記載することがある）が順次行われる。そして、次の試料の分離準備のために、順方向洗浄（「ＦＯＲＷＡＲＤＷＡＳＨ」、以下”ＦＷ”と記載することがある）、および、逆方向洗浄（「ＲＥＶＥＲＳＥＷＡＳＨ」、以下”ＲＷ”と記載することがある）が、”Ｔ”の後に引き続いて行われる。なお、”Ｇ”の維持時間を”０”に設定すれば、同様にしてステップワイズ溶出を行うこともできる。
【００３０】
まず、ステップＳ１において、例えばキーボードである入力装置５によって、カラム２４への送液流量（ｍｌ／分）が入力される（図３の領域３１参照）。そして、ステップＳ２において、円柱形状であるカラム２４の容量を決定するための寸法条件として、カラム径とカラム長が入力装置５によってそれぞれ入力される（図３の領域３２、３３参照）。なお、カラムの寸法条件として入力すべき条件は、カラムの形状によって異なる。
【００３１】
次に、ステップＳ３において、入力装置５によって、カラム２４内に充填された充填剤の種類が入力される（図３の領域３４参照）。充填剤としては、シリカゲルのほかＯＤＳ（オクタデシルシリカゲル）など公知のものをいずれも使用することが可能である。ステップＳ１〜３で入力された送液流量、カラム寸法および充填剤種類の条件は、ＲＡＭ７の所定領域に記憶されるとともに、図３に示すようにモニタ４の所定領域３１〜３４に表示される。
【００３２】
次に、ステップＳ４において、ステップＳ１〜３で入力されてＲＡＭ７に記憶された送液流量、カラム寸法および充填剤種類の条件に基づいて、カラム２４に充填された充填剤に吸着されない物質がカラム２４を通過するのに要する基準時間ｔ0 がＣＰＵ６によって算出されるとともに、モニタ４の領域３５に表示される。ステップＳ１〜３で入力された条件から基準時間ｔ0 が得られるのは、以下の理由による。まず、カラムの寸法条件からカラム２４の容積が求められる。そして、充填剤の種類（本明細書において充填剤の型番名を意味する）からその充填剤の粒子の大きさ、気孔のサイズ（ポアーサイズ：孔径）などが分かるため、カラム２４内に存在する実際の空間部分の体積、つまり気孔率（空隙率）が求められる。そして、この体積を送液流量で除算することにより、カラム２４に充填された充填剤に吸着されない物質がカラム２４を通過するのに要する基準時間ｔ0 を求めることができる。
【００３３】
次に、ステップＳ５において、ＲＡＭ７の所定領域に、”Ｗ”、”Ｇ”、”Ｔ”、”ＦＷ”、”ＲＷ”の各状態の維持時間として基準時間ｔ0 の値がＣＰＵ６からの命令によって書き込まれることにより、”Ｗ”、”Ｇ”、”Ｔ”、”ＦＷ”、”ＲＷ”の各状態の維持時間が基準時間ｔ0 に設定される。そして、各維持時間がモニタ４の領域３６〜４０にそれぞれ表示される。
【００３４】
次に、ステップＳ６において、ＴＬＣによって定められた、試料内の目的とする成分或いは最も構成比率が高い成分など任意の一成分のＲf 値が０．２および０．５になるとき（言い換えると、保持比ｋ´が４および１になるとき）の溶離液の混合比が、入力装置５によって入力される。そして、これら２つの値がＲＡＭ７の所定領域に記憶されるとともに、モニタ４の領域４１、４２にそれぞれ表示される。
【００３５】
次に、ステップＳ７において、ＲＡＭ７の所定領域に、”Ｗ”、”Ｔ”の各状態の混合比としてステップＳ６で入力および記憶された２つの混合比の値がＣＰＵ６からの命令によって書き込まれることにより、”Ｗ”、”Ｔ”の各状態の混合比が設定される。そして、これらの混合比がモニタ４の領域４３、４４にそれぞれ表示される。
【００３６】
本実施の形態において、Ｒf 値が０．２および０．５での混合比を入力するようにしたのは、多くの試料においてグラジエント分離を短時間で行うことができ、しかも成分の重なりがほとんど生じないようにすることができるからであるが、クロマト条件に応じて採用するＲf 値を適宜変更するようにしてもよい。なお、”Ｇ”での混合比は”Ｗ”、”Ｔ”の各状態の混合比を”Ｇ”の維持時間にしたがって比例配分することにより自動的に定められる。
【００３７】
次に、ステップＳ８において、”ＦＷ”、”ＲＷ”での溶離液の混合比（モニタ４の領域４５、４６）などのそのほかのクロマト条件が入力され、それらがＲＡＭ７の所定領域に記憶される。さらに、”ＦＷ”、”ＲＷ”の各状態の混合比が入力された値に設定されてモニタ４の領域４７、４８にそれぞれ表示される。また、これらステップＳ１〜８で入力された条件に基づいてクロマト所要時間や試料注入時間などがＣＰＵ６で演算され、モニタ４の領域４９、５０にそれぞれ表示される。なお、ステップＳ１〜８の順序を適宜入れ替えるようにしてもよい。
【００３８】
次に、ステップＳ９において、すべての条件の入力が完了したかどうかがＹＥＳ（「Ｙ」）またはＮＯ（「Ｎ」）で入力される（モニタ４の領域５１）。そして、入力が完了していない場合には、ステップＳ１（またはステップＳ１〜８のうちの任意のステップ）に戻って入力などの動作が行われる。また、入力が完了した場合には、ステップＳ１０に進む。
【００３９】
ステップＳ１０では、モニタ３６〜４０に表示された、”Ｗ”、”Ｇ”、”Ｔ”、”ＦＷ”、”ＲＷ”の各状態の維持時間、および、”Ｗ”、”Ｔ”における混合比の設定を変更する必要があるかどうかを測定者が判断し、変更する必要がなければステップＳ１２に進む。もし変更する必要があれば、ステップＳ１１に進んでこれらの設定のうち変更を希望する項目の値が入力装置５から入力される。そして、ＲＡＭ７の設定内容が入力された変更値にしたがって書き換えられるとともに、モニタ４の表示も変更される。
【００４０】
次に、ステップＳ１２では、測定者からのクロマトの実行命令を待機する状態となる。そして、クロマトの実行命令が入力装置５から与えられると、ステップＳ１３において、上述のように決定された設定内容にしたがって、３つの電磁弁１５〜１７の開閉命令がＣＰＵ６から出力される。これにより、液体クロマトグラフ２は、図３に示されたようなグラジエントカーブにしたがったクロマトを実行する。
【００４１】
そして、ステップＳ１４において、図示しない検出器から試料の分析結果がパーソナルコンピュータシステム１に与えられる。さらに、ステップＳ１５において、その分析結果がモニタ４に表示され、本実施の形態によって制御された液体クロマトグラフ２の一連の動作が終了する。
【００４２】
上述した本実施の形態によると、カラム２４への溶離液の送液流量、カラム２４の寸法条件、カラム２４内の充填剤の種類に基づいて、充填剤に吸着されない物質がカラム２４を通過するのに要する基準時間ｔ0 を算出することができ、そして、溶離液のグラジエントカーブの各状態（”Ｗ”、”Ｇ”、”Ｔ”）における維持時間が基準時間ｔ0 にそれぞれ設定される。このように、溶離液のグラジエントカーブの各状態における維持時間が自動的に基準時間ｔ0 に設定されることにより、試料の種類により多少の相違はあるものの、試料の各成分がほとんど重なることがなく且つ短時間で分離を行うことが可能となる。また、各状態の維持時間を個別に設定する手間が省けるため簡易且つ迅速にクロマトを行うことができる。特に、本実施の形態では、”ＦＷ”や”ＲＷ”の維持時間も自動的に基準時間ｔ0 に設定されるようにしているので、より一層簡易且つ迅速にクロマトを行うことが可能である。
【００４３】
また、溶離液のグラジエントカーブの各状態における維持時間を基準時間ｔ0 に設定しておくことにより、リテンションタイムｔr を基準時間ｔ0 に基づいてその整数倍または整数分の１に再設定することが容易であり、しかもこのようにして基準時間ｔ0 に基づいて保持比ｋ´を大きくしていくことによって、目標とする保持比ｋ´ひいては目標とする分離度Ｒs を達成するのが容易であるという利点がある。つまり、グラジエントカーブの各状態における維持時間を基準時間ｔ0 に設定しておくことで、ＴＬＣで求めたＲf 値と維持時間とを容易に関連付けて維持時間の簡易な調整ができるようになる。
【００４４】
さらに、グラジエントカーブの各状態における維持時間の微調整が手動で行うことができるように構成されているため、試料の個別具体的な条件に対応したより精度の高いクロマトを行うことが可能である。
【００４５】
また、溶離液のグラジエントカーブのうちの溶離液の混合比が互いに異なる２つの状態（”Ｗ”、”Ｔ”）における溶離液の混合比が、試料内の任意の一成分のＲf 値が例えば０．２と０．５のとき（すなわち、保持比ｋ´が４および１のとき）の溶離液の混合比の２つの値にそれぞれ設定されるので、より良好な分離を行うことが可能になるとともに、上述した２つの状態における溶離液の混合比の設定が自動化されて簡易且つ迅速にクロマトを行うことができる。
【００４６】
【発明の効果】
以上説明したように、請求項１、３、５によると、溶離液のグラジエントカーブの各状態における維持時間が自動的に基準時間ｔ0 に設定されることにより、試料の各成分がほとんど重なることがなく且つ短時間で分離を行うことが可能となるとともに、各状態の維持時間を個別に設定する手間が省けるため簡易且つ迅速にクロマトを行うことができる。
【００４７】
また、溶離液のグラジエントカーブの各状態における維持時間を基準時間ｔ0 に設定しておくことにより、リテンションタイムｔr を基準時間ｔ0 に基づいてその整数倍または整数分の１に再設定することが容易であり、しかもこのようにして基準時間ｔ0 に基づいて保持比ｋ´を大きくしていくことによって、目標とする保持比ｋ´ひいては分離度Ｒs を達成するのが容易となる。つまり、グラジエントカーブの各状態における維持時間を基準時間ｔ0 に設定しておくことで、ＴＬＣで求めたＲf 値と維持時間とを容易に関連付けて維持時間の簡易な調整ができるようになる。
【００４８】
また、請求項２、４、６によると、基準となる試料内の任意の一成分の保持比ｋ´として適切な値を用いることでより良好な分離を行うことが可能になるとともに、上述した２つの状態における溶離液の混合比の設定が自動化されて簡易且つ迅速にクロマトを行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の好適な一実施の形態に係る液体クロマトグラフの制御装置を液体クロマトグラフとともに示した概略的な模式図である。
【図２】  本発明の好適な一実施の形態に係る液体クロマトグラフの制御方法に関するフローチャートである。
【図３】  本発明の好適な一実施の形態に係る制御プログラムによるモニタへの表示画面の一例を示す図である。
【符号の説明】
１ パーソナルコンピュータシステム
２ 液体クロマトグラフ
１１〜１４ 容器
１５〜１８ 電磁弁
１９ 混合器
２０ ポンプ
２２ インジェクター
２４ カラム
３ コンピュータ本体
４ モニタ
５ 入力装置
６ ＣＰＵ
７ ＲＡＭ
８ ハードディスク
【図１】
0004173252.tif 000002
【図２】
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【図３】
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