(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
共役ジエンリノール酸の有効量を製剤担体と共に含有することを特徴とする肝臓脂肪蓄積抑制用医薬製剤組成物。
【請求項２】
共役ジエンリノール酸がシス−９，トランス−１１−オクタデカジエン酸、トランス−１０，シス−１２−オクタデカジエン酸、それらの異性体、並びにそれらの無毒性塩及びエステルから選択される少なくとも１種である請求項１に記載の肝臓脂肪蓄積抑制用医薬製剤組成物。
【請求項３】
共役ジエンリノール酸を有効成分として含有することを特徴とする肝臓脂肪蓄積抑制用食品添加剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は新しい肝臓脂肪蓄積抑制組成物及び肝臓脂肪蓄積抑制用食品添加剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
肝臓（肝細胞）に脂肪が過剰に蓄積される疾患である脂肪肝は、過栄養、過アルコール摂取、糖尿病、医薬品等の投与による副作用等によって惹起され、また慢性肝炎、肝硬変等の重篤な疾患の要因とも考えられ、その治療及び予防が重要な課題であるが、現在、摂取される栄養をコントロールすること以外に、安全且つ有効な治療及び予防方法は確立されておらず、そのための薬剤（医薬品）の開発も殆ど行なわれていないのが現状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明の目的は、上記肝臓脂肪の蓄積を抑制して、脂肪肝、惹いては慢性肝炎、肝硬変等の疾患を有効に予防することのできる新しい組成物を提供することにある。
【０００４】
本発明者らは上記目的より、鋭意研究を重ねた結果、共役ジエンリノール酸の摂取乃至投与によれば、肝臓脂肪の蓄積が見事に抑制されるという事実を見いだした。本発明はこの新しい知見により完成されたものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
即ち本発明によれば、共役ジエンリノール酸（conjugated linoleic acid, 以下「ＣＬＡ」という）の有効量を製剤担体もしくは食品用担体と共に含有することを特徴とする肝臓脂肪蓄積抑制組成物、及びＣＬＡを有効成分として含有することを特徴とする肝臓脂肪蓄積抑制用食品添加剤が提供される。
【０００６】
より詳しくは、本発明によれば、ＣＬＡがシス−９，トランス−１１−オクタデカジエン酸、トランス−１０，シス−１２−オクタデカジエン酸、それらの異性体、並びにそれらの無毒性塩及びエステルから選択される少なくとも１種である上記組成物及び添加剤、食品形態である上記組成物及び添加剤、並びに医薬品形態である上記組成物及び添加剤が提供される。
【０００７】
特に好ましい本発明組成物としては、乾燥重量基準でＣＬＡを０．２〜９０％（重量％、以下同じ）含有するものを例示できる。
【０００８】
本発明組成物は、上記構成としたことに基づき、その摂取乃至投与によって、肝臓脂肪の蓄積を顕著に抑制することができる。それ理由は現在不明であるが、上記ＣＬＡの摂取乃至投与によれば、生体におけるフリーラジカルの消去に関与しているとされるグルタチオンの肝臓中における貯蔵量が有意に高値であることから、上記ＣＬＡが該グルタチオンの合成能を向上させるか或いはグルタチオン消費を抑制し、これが肝臓脂肪蓄積抑制の一因となっている可能性が考えられる。いずれにしても、本発明は従来開発された例のない新しい肝臓脂肪蓄積抑制組成物乃至添加剤を提供するものであり、これは医薬品分野や食品分野で非常に有効であると考えられる。
【０００９】
【発明の実施の形態】
以下、本発明組成物につき詳述すれば、該組成物は、有効成分としてＣＬＡを添加配合することを必須としている。ここでＣＬＡとしては、従来より、反芻動物由来の加工食品、特にヨーグルト等の乳製品等に含まれるもの、その精製品、化学合成品等のいずれでもよい。その製法等に関する詳細は、例えばハーらの文献（Ha, Y.L., et al., Carcinogenesis, Vol. 8, 1881-1887 (1987)）やシンらの文献（Chin, S.F., et al., Journal of Food Composition and Analysis, Vol. 5, 185-197 (1992)に記載されている。
【００１０】
好ましい代表的製造法としては、例えばリノール酸又はこれを含む天然の供給源、より具体的にはコーン油、サフラワー油、バター脂等と、ミルクホエー蛋白質とをほぼ当量で室温で混合して反応させる方法を例示することができ、該方法により得られるＣＬＡは９，１１−オクタデカジエン酸及び／又は１０，１２−オクタデカジエン酸及びそれらの活性な異性体を含んでいる。之等は遊離形態（液状）でもまた例えばナトリウム塩、カリウム塩等の無毒性塩やメタノール、エタノール等の適当なアルコールとのエステル（メチルエステル、エチルエステル等）の形態として、乾燥させた粉末形態でも、本発明に同様に有利に用いることができる。
【００１１】
上記９，１１−ＣＬＡ及び１０，１２−ＣＬＡには、それぞれシス，シス、シス，トランス、トランス，シス及びトランス，トランスの４つの幾何異性体が存在し、それらはいずれも本発明組成物の有効成分として用いることができる。通常、天然之等の供給源から調製されるＣＬＡの場合は、かかる異性体の２以上の混合物として得られ、本発明では之等は特に単離することなく混合物のままで用いるのが一般的であるが、勿論、常法に従って単離して用いることもできる。
【００１２】
本発明組成物は、上記ＣＬＡを有効成分として含有させることを除いては、通常の食品組成物乃至医薬品と同様にして、適当な賦形剤乃至希釈剤等の担体を用いて、摂取乃至投与に適した形態に調製される。
【００１３】
上記食品組成物の形態としては、粉末、顆粒、錠剤、ブロック等の固剤形態及び飲料、スープ等に適した水性液、乳化液、分散液、懸濁液等の液剤形態を例示でき、之等は、適当な賦形剤、希釈剤、その他の可食性物質等の担体を用いて常法に従い調製される。
【００１４】
ここでは用いられる担体には、栄養源としての蛋白質、脂肪及び炭水化物が包含される。該蛋白質としては、例えばカゼイン及びその塩類、ゼラチン及びその塩類、水溶性ゼラチン（酵素分解ゼラチン等）、全脂粉乳、脱脂粉乳、大豆蛋白、コーングルテンミール、小麦蛋白等を、脂肪としては、例えば大豆油、オリーブ油、中鎖トリグリセライド（ＭＣＴ）、綿実油、ヒマワリ油、カカオ脂、ゴマ油、米油、サフラワー油、落花生油、パーム油、菜種油等を、また炭水化物としては例えばデキストリン、蔗糖、果糖、ブドウ糖等の単糖類、麦芽糖、マルトース等の二糖類、フラクトオリゴ糖、ラクトオリゴ糖、ガラクトシルラクトース、ラクトシュークロース等のオリゴ糖等をそれぞれ例示することができる。
【００１５】
特に好ましい本発明組成物における上記各成分の配合割合は、以下の範囲から選択される。
【００１６】
成分  可能配合割合(wt%) 好適配合割合(wt%) 最適配合割合(wt%)
ＣＬＡ      ０．１〜９０       ０．５〜６０           １〜２５
蛋白質        １０〜６５         ４０〜６５         ４０〜５３
脂肪            ５〜９０           ５〜８０         １０〜１８
炭水化物      １５〜７０         １５〜４０         ２０〜３５
尚、上記蛋白質量は、蛋白源としての純分換算量で表わされ、これは原料物質の窒素含量をケルダール法により測定して求めたものである。
【００１７】
更に、本発明組成物には、必要に応じてこの種食品に通常添加配合されることのよく知られている各種の添加剤を配合することができる。該添加剤としては、例えば各種ビタミン類、ミネラル類、合成香料及び天然香料等の香料、天然甘味剤（ソーマチン、ステビア等）、合成甘味剤（サッカリン、ステビア抽出物、アスパルテーム等）、着色料等や風味物質（チーズ、チョコレート等）、更に例えばポリデキストロース、ペクチン酸及びその塩類、アルギン酸及びその塩類等の所謂ダイエタリーファイバー等を例示することができる。之等は１種単独でもまた２種以上組合ても利用できる。之等添加剤の配合割合は、特に限定されるものではないが、通常本発明組成物１００重量部に対して０〜２０重量部程度の範囲から選択されるのが一般的である。
【００１８】
本発明組成物は、上記各成分を混合して調製され、その調製方法は特に制限されるものではないが、例えば脂溶性成分（油脂及びその他の油脂溶解性原料成分）に、必要に応じてレシチン、シュガーエステル等の通常慣用される乳化剤及び蛋白質、糖質等の乳化補助剤を加え、混合物を常法に従い機械的に乳化する方法を採用でき、これにより、本発明組成物を調製できる。
【００１９】
かくして得られる本発明組成物（液剤形態の本発明食品）は、これを適当な容器に充填した後、レトルト殺菌（１２０℃、２０分）して保存性を有する製品とすることができ、これは直接又は適宜希釈して利用できる。
【００２０】
上記の如くして調製される飲食品形態の本発明組成物の摂取量は、これを摂取するヒトの年齢、体重、性別、肝臓脂肪の蓄積の程度等に応じて適宜決定でき、特に限定的ではないが、通常、乾燥重量として１回約１０〜３０ｇ、全容量として約５０〜３００ｃｃの範囲から選択されるのがよい。
【００２１】
本発明組成物は、また、上記有効成分としてのＣＬＡと共に、適当な製剤担体を用いて一般的な医薬製剤組成物の形態に調製して実用することもできる。該製剤担体としては、製剤の投与単位形態に応じて、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の希釈剤あるいは賦形剤適宜選択使用することができる。
【００２２】
上記医薬製剤の投与単位形態としては、各種の形態が治療目的等に応じて選択でき、その代表的なものとしては錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、注射剤（液剤、懸濁剤等）、軟膏剤、輸液剤等が挙げられる。
【００２３】
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リン酸カリウム等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム等の崩壊剤、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド等の界面活性剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。
【００２４】
更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【００２５】
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００２６】
液剤、乳剤、懸濁剤等の注射剤乃至輸液剤として調製される場合、之等は殺菌され且つ血液と等張であるのが好ましく、之等の形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。尚、この場合等張性の溶液を調整するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを本発明組成物中に含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。
【００２７】
更に、医薬製剤中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有させることもできる。
【００２８】
ペースト、クリーム、ゲル等の軟膏剤の形態に成形するに際しては、希釈剤として例えば白色ワセリン、パラフイン、グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト等を使用できる。
【００２９】
かくして調製される医薬製剤形態の本発明組成物中に含有されるべき有効成分としてのＣＬＡの量は、特に限定されず広範囲より適宜選択されるが、通常医薬製剤中に約１０〜９０％程度含有されるものとするのがよい。
【００３０】
上記医薬製剤の投与方法は特に制限がなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じて決定される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与され、注射剤乃至輸液剤は単独で又はブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じ単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。
【００３１】
上記医薬製剤の投与量は、その用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等により適宜選択されるが、通常有効成分である本発明化合物の量が１日当り体重１ｋｇ当り約０．５〜２０ｍｇ程度とするのがよく、該製剤は１日に１〜４回に分けて投与することができる。
【００３２】
【実施例】
以下、本発明を更に詳しく説明するため、本発明組成物の調製例を実施例として挙げ、次いで本発明組成物を含む食品組成物の肝臓脂肪蓄積抑制効果を明らかにする試験例を挙げる。尚、各例中、％とあるは重量％を示す。
【００３３】
【実施例１】
シス−９、トランス−１１−オクタデカジエン酸３００ｍｇ又は５００ｍｇを含有するソフトカプセルを調製した。
【００３４】
【実施例２】
下記表１及び表２に示す蛋白質成分、糖質成分、ＣＬＡ成分及びその他の成分の所定量を水に加えて、飲料形態の本発明組成物を調製した。
【００３５】
尚、用いたＣＬＡ成分は、Ｎｕ−Ｃｈｅｋ−Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．より購入した遊離脂肪酸の形態のＣＬＡ混合物である。その組成は次の通りである。
【００３６】
シス-9,トランス-11-ＣＬＡ／トランス-9,シス-11-ＣＬＡ        ４１％
トランス-10,シス-12-ＣＬＡ                            ４４％
シス-10,シス-12-ＣＬＡ                              １０％
その他                                            ５％
【００３７】
【表１】
0004129566.tif 000002
【００３８】
【表２】
0004129566.tif 000003
【００３９】
【実施例３】
抗酸化ビタミン、ＣＬＡ成分、乳化剤、油剤、糖質成分、有機酸、オリゴ糖及びその他の成分を下記表３及び表４に示すそれぞれの配合量で用いて、飲料形態の本発明組成物を調製した。尚、ＣＬＡ成分中のＣＬＡ混合物は、実施例２に示すそれと同一のものである。
【００４０】
【表３】
0004129566.tif 000004
【００４１】
【表４】
0004129566.tif 000005
【００４２】
【試験例１】
この試験は、生後１８週頃より肥満を呈し、内臓や肝臓に脂肪が蓄積し、耐糖能異常をきたす遺伝的糖尿病モデルラット（ＯＬＥＴＦラット、大塚製薬株式会社）及び対照ラット（ＬＥＴＯラット、大塚製薬株式会社）を用いて、ＣＬＡの摂取が之等ラットの肝臓における脂肪の蓄積に及ぼす影響を調べたものであり、次の通り実施された。
【００４３】
（１）実験動物及びその飼育
５週齢ＯＬＥＴＦラット及びＬＥＴＯラット（特開平４−２５２１２９号公報参照）を１週間の予備飼育の後試験に供した。各ラットを次の３群（１群８匹ずつ）に分け、各群ラットをそれぞれ以下に示す飼料にて１８週間飼育した。
【００４４】
１群＝コントロール食／ＬＥＴＯ群
２群＝コントロール食／ＯＬＥＴＦ群
３群＝０．５％ＣＬＡ食／ＯＬＥＴＦ群
（２）飼育
飼育温度は２３±１℃とした。
【００４５】
飼育室の照明は朝７時から夜７時を明期とした。食餌は自由摂取させた。コントロール食としてＡＩＮ−７６精製飼料（成長期ラットの標準飼料）を、また０．５ｗ／ｗ％ＣＬＡ食として、該コントロール食に０．５％濃度となる量のＣＬＡを添加した食をそれぞれ摂取させた。１日当たりの平均飼料摂取量は、２８．０６±１．９６ｇであり、従って、３群における１日当たりのＣＬＡ摂取量は、０．１４±００１ｇとなった。
【００４６】
尚、試験期間中水は自由摂取させた。またＣＬＡとしては、Ｎｕ−Ｃｈｅｋ−Ｐｒｅｐ，Ｉｎｃ．より購入した遊離脂肪酸の形態のＣＬＡを用いた。その組成は前述した実施例２に示す通りである。
【００４７】
（３）脂質重量及びトリグリセライド量の測定
上記飼育期間終了後、各群ラットを屠殺し、肝臓を摘出して、該肝臓の脂質を抽出した後、重量法に従って総脂質重量を求めた〔フォルシュらの方法〔Folch, J., Lee, M., and Sloane-Stanley, G.H., J.Biol.Chem., 226, 497-509 (1957)〕。また、肝臓トリグリセライド量を和光純薬工業株式会社製測定キットであるトリグリセライドテストワコーを用いて測定した。グルタチオンの分析は、トヨオカらの方法を改変したＨＰＬＣ法にて行なった〔Toyooka, T., et al., Biomed.Chromatogr., 3, 166-172 (1989)〕。
【００４８】
（４）結果
得られた結果を下記表５に示す。
【００４９】
【表５】
0004129566.tif 000006
【００５０】
上記表より、以下のことが明らかである。即ち、同一コントロール食の摂取の場合、遺伝的糖尿病モデルラットであるＯＬＥＴＦラットは、その対照ラットであるＬＥＴＯラットに比較し、総脂質重量、トリグリセライド量とも有意に高値を示した。これに対して、０．５％ＣＬＡを含む飼料を摂取させたＯＬＥＴＦラットは、コントロール食を摂取させたＯＬＥＴＦラットに比較し、総脂質重量、トリグリセライド量とも有意に低値を示した。
【００５１】
尚、飼料摂取量、体重及び脂肪組織重量に関して、３群として用いた各ＯＬＥＴＦラット間では有意な差は認められず、ＣＬＡ摂取による個体差の影響はなかった。