(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
0004049477.tif 000012
で表される５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン又は医薬として許容されるその塩を有効成分とする抗腫瘍剤の副作用軽減剤。
【請求項２】
抗腫瘍剤の副作用が悪心、嘔吐、下痢、食欲不振および体重減少である請求項１記載の副作用軽減剤。
【請求項３】
抗腫瘍剤が代謝拮抗剤、アルキル化剤、植物由来物質、抗生物質又は白金製剤である請求項１又は２記載の副作用軽減剤。
【請求項４】
抗腫瘍剤が５−トリフルオロメチル−２′−デオキシウリジン、５−フルオロウラシル、塩酸イリノテカン又はシスプラチンである請求項１又は２記載の副作用軽減剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗腫瘍剤の副作用軽減剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
癌の化学療法に用いられている薬剤の多くは細胞増殖を行っている細胞に作用し、細胞回転を停止させ、増殖を抑制する事により癌組織の増殖の停止あるいは縮小を促す。しかし、その反面、細胞増殖の著しい消化管の幹細胞にも同様に作用することから、消化管の粘膜細胞の増殖を抑制する事で粘膜の繊毛の萎縮を招き、食物などの外的刺激からの消化管の抵抗性が低下し、炎症状態を引き起こし、下痢や栄養吸収阻害等の消化管毒性を起こす事が広く知られている。
【０００３】
抗腫瘍剤投与による癌治療において、悪心、嘔吐、下痢、体重減少等の副作用が患者にとって耐え難いものであり、薬剤投与の中断を余儀なくせざる得ないことは、臨床上しばしば遭遇することである。このような副作用を軽減する目的で、例えばジチオビス（２，２−ジメチルプロピオンアミド）誘導体をフルオロピリミジン系抗腫瘍剤に（特開平１０−１５８１６３号）、ジチオビスカルボン酸誘導体をフルオロピリミジン系抗腫瘍剤に（特開平１０−１５８１５９号）、コナゲニンを代謝拮抗剤、アルキル化剤および植物由来化合物の癌化学療法剤に（特開平８−１６５２３６号）、ピリミジンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤を５’−デオキシ−５−フルオロウリジンに（特開平５−２１３７６１号）、オキソン酸をフルオロピリミジン系抗腫瘍剤に（特開平５−７８２４９号）それぞれ適用する事が報告されているが、実用に供されているのはオキソン酸のみである。臨床的には塩酸イリノテカン（ＣＰＴ−１１）の遅延性の下痢を予防するために半夏瀉心湯の投与も検討されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、いずれの手段の副作用軽減効果も充分ではない。
従って、本発明の目的は、抗腫瘍剤を生体内に投与することにより生じる悪心、嘔吐、下痢、体重減少、および食欲不振等の副作用を著しく軽減させることのできる薬剤を提供し、患者の苦痛を軽減させるとともに、これら副作用によって中断せざるえなかった抗腫瘍剤による癌治療の継続を可能ならしめることにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
斯かる実情に鑑み本発明者らは、下式（１）で表される５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン又は医薬として許容されるその塩についてさまざまな観点から鋭意研究を行った結果、これらの化合物が抗腫瘍剤による悪心、嘔吐、下痢、体重減少および食欲不振等の消化管障害に起因する副作用軽減させる効果が優れていることを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は式（１）；
【０００６】
【化２】
0004049477.tif 000002
【０００７】
で表される５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン又は医薬として許容されるその塩を有効成分とする抗腫瘍剤の副作用軽減剤を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオンは公知化合物であり、その薬理作用については抗腫瘍効果の増強作用（国際特許公開ＷＯ／９６３０３４６号公報参照）及び癌転移抑制作用（国際特許公開ＷＯ／９８１３０４５号公報参照）が知られているが、抗腫瘍剤の副作用軽減作用については一切知られていない。
【０００９】
本発明の副作用軽減剤の対象となる抗腫瘍剤としては、例えば５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テガフール、カルモフール、テガフール−ウラシル配合剤（商品名  ユーエフティ  大鵬薬品工業株式会社製）、５−トリフルオロメチル−２′−デオキシウリジン、５−フルオロ−２′−デオキシウリジン、カペシタビン、塩酸ゲムシタビン、メソトレキサート等の代謝拮抗剤；塩酸イリノテカン（ＣＰＴ−１１）、エトポシド、ビンデシン、ビンクリスチン、パクリタキセル、ドセタキセル等の植物由来化合物；シクロホスファミド、イホスファミド、ラニムスチン等のアルキル化剤；ダウノルビシン、ドキソルビシン、ピラルビシン、ネオカルチノスタチン、マイトマイシンＣ等の抗癌抗生物質；シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン等の白金化合物及びそれらの医薬として許容される塩を挙げることができる。これらの中でも５−フルオロウラシル、テガフール、カルモフール、テガフール-ウラシル配合剤、５−トリフルオロメチル−２′−デオキシウリジン、シスプラチン、エトポシド、イリノテカンが好ましく、５−フルオロウラシル、５−トリフルオロメチル−２′−デオキシウリジン、塩酸イリノテカン、シスプラチンが最も好ましい。
【００１０】
本発明化合物（１）の医薬として許容されるその塩としては、特に限定されないが、薬学的に許容される酸を作用させた酸付加塩が好ましい。この酸付加塩としては、例えば塩酸、硫酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸との塩；シュウ酸、マレイン酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸等の有機酸との塩が例示できるが、塩酸又はｐ−トルエンスルホン酸との塩が好ましい。本発明化合物（１）又はその塩の特に好ましい具体例としては、５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン  塩酸塩、５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン  トシル酸塩が挙げられる。
【００１１】
本発明化合物（１）又はその塩は、それぞれ単独で各種の投与単位形態に製剤化し、やはり各種の投与単位形態に製剤化した抗腫瘍剤と、それぞれ別個又は同時に投与することもできるが、両者を予め配合しておき、これらを各種の投与単位形態に製剤化した後投与することもできる。また別々に投与する時は、該抗腫瘍剤の投与前、後の任意の時期に投与することができる。
【００１２】
本発明の副作用軽減剤及び抗腫瘍剤を人を含む哺乳動物の悪性腫瘍の治療剤として使用する際には、治療目的に応じて各種の薬学的投与形態とすることができ、具体的には錠剤、被覆錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤等の経口剤；注射剤、坐剤等の非経口剤とすることができる。これら投与剤は、医薬的に許容される担体等を用い、この分野で通常知られた慣用的な製剤方法により製剤化することができる。錠剤の形態に成形するに際しては、担体として、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパノール、コーンスターチ、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤；乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、デンプン等の保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤などを使用できる。更に、錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。丸剤の形態に成形するに際しては、担体として、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナラン、カンテン等の崩壊剤などを使用できる。カプセル剤は常法に従い、上記で例示した各種の担体と混合して硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。経口用液体製剤とする場合は、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を用い、常法により、内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合、矯味剤としては、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が、緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体として、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライド等を使用できる。注射剤とする場合、液剤、乳剤及び懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ましく、これらの形態に成形するに際しては、希釈剤として、例えば水、乳酸水溶液、エチルアルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレン化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を使用できる。尚、この場合、等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖又はグリセリンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。更に上記各製剤には必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や、他の医薬品を配合してもよい。本発明の製剤中に含まれる抗腫瘍剤及び本発明化合物（１）又はその医薬として許容される塩の量は特に限定されず、適宜選択することができるが、いずれも通常製剤中０．０１〜７０重量％程度とするのが好ましい。
【００１３】
本発明の副作用軽減剤の投与方法は特に限定されず、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、患者の症状の程度等に応じて適宜決定される。例えば錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤及び乳剤は経口投与される。注射剤は単独で又はブドウ糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与され、更に必要に応じて単独で動脈内、筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤は直腸内投与される。
【００１４】
本発明の副作用軽減剤の有効成分の投与量は、用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等により適宜選択できる。通常本発明化合物（１）又はその医薬として許容される塩の投与量は０．０１〜１０００mg／kg／日程度、好ましくは０．１〜１００mg／kg／日程度の範囲となる量であり、抗腫瘍剤を前もって配合する場合は抗腫瘍剤の量は０．０１〜１００mg／ kg ／日程度、好ましくは０．０５〜５０mg／ kg ／日程度を目安とするのがよい。また、これら本発明の製剤は１日１回又は２〜４回程度に分けて投与することができる。
【００１５】
本発明の副作用軽減剤を投与することにより治療できる悪性腫瘍としては、併用する抗腫瘍剤で治療できるものでよく、具体的には食道癌、胃癌、肝臓癌、胆のう・胆管癌、膵臓癌、結腸癌、直腸癌、頭頚部癌、肺癌、乳癌、子宮頚癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、骨・軟部肉腫、皮膚癌、悪性リンパ腫、白血病、脳腫瘍等が挙げられる。
【００１６】
【実施例】
以下、参考例、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１７】
参考例１
（５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン  塩酸塩（化合物１）の合成）
（１）６−クロロメチルウラシル（１６３ｇ）の酢酸（５００ml）懸濁液に塩化スルフリル（１２０ml）を室温下２０分間で滴下し、同温で３時間攪拌した。反応液を氷水（５００ml）に注ぎ、晶出物を濾取し、５−クロロ−６−クロロメチルウラシルを１８２．３ｇ（収率９２％）得た。
融点：２２５℃以上（分解）
ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ
４．４６（２Ｈ，ｓ），１１．５７（１Ｈ，ｓ），１１．７１（１Ｈ，ｓ）
【００１８】
（２）５−クロロ−６−クロロメチルウラシル５．０ｇ、２−イミノピロリジン６．１４ｇ及びナトリウムエトキシド５．２４ｇのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ml）溶液を、室温下１４時間攪拌した。晶出物を濾取し、水３０mlに懸濁、酢酸で中和、洗浄後、不溶物を濾取し１Ｎ−塩酸６０mlに溶解後、活性炭を加え濾過した。濾液を減圧下濃縮し、得られた残渣をエタノールで洗浄、濾取し、標記化合物を２．６８ｇ（収率３８％）得た。
融点：２５５℃以上（分解）
ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ
２．０４（2H, quintet, J=7.6Hz）, ２．８７（2H, ｔ, J=7.6Hz），
３．５９（2H, ｔ, J=7.6Hz），４．６９（２Ｈ，ｓ），
９．４０（１Ｈ，ｓ），１１．４６（１Ｈ，ｓ），１１．７３（１Ｈ，ｓ）
【００１９】
参考例２
（５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン  トシル酸塩（化合物２）の合成）
参考例１と同様な方法で１Ｎ−塩酸の代わりにｐ−トルエンスルホン酸を用いて反応を行い、標記化合物を収率２６％で得た。
融点：２１０℃以上（分解）
ＮＭＲスペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ
２．０５（2H, quintet, J=7．７Hz）, ２．２９（3H, s),
２．８７（2H, ｔ, J=7.７Hz），３．６０（2H, ｔ, J=7.７Hz），
４．５６（２Ｈ，ｓ），７．１１（2H, ｄ, J=7.３Hz），
７．４７（2H, ｄ, J=7.３Hz），９．５１（１Ｈ，ｂｒ-ｓ），
１１．０−１１．８（２Ｈ，very  br）
【００２０】
処方例１
化合物１                            ２５．０mg
乳  糖                                ８．０mg
結晶セルロース                        ４．０mg
ステアリン酸マグネシウム              １．０mg
タルク                                １．０mg
コーンスターチ                        ３．５mg
ヒドロキプロピルメチルセルロース      ２．５mg
１錠当り                            ４５．０mg
常法により、上記配合割合で錠剤を調製した。
【００２１】
処方例２
化合物２                            ５０．０mg
乳  糖                              ８５．０mg
コーンスターチ                    １００．０mg
ヒドロキプロピルメチルセルロース      ３．０mg
１包当り                          ２３８．０mg
常法により、上記配合割合で顆粒剤を調製した。
【００２２】
処方例３
化合物２                      ５０．０mg
乳糖                          ２４．０mg
結晶セルロース                １３．０mg
ステアリン酸マグネシウム        １．０mg
１カプセル当り                ８８．０mg
常法により、上記配合割合でカプセル剤を調製した。
【００２３】
処方例４  注射剤
化合物１                            ５０．０mg
注射用蒸留水   適 量  
１アンプル当り                            ５ml
常法により１アンプル当り、上記配合割合で注射剤を調製した。
【００２４】
処方例５  坐剤
化合物１                          １００．０mg
ウイテップゾールＷ−３５        １４００．０mg
（登録商標、ダイナマイトノーベル社製）        
１個当り                        １５００．０mg
常法により１個当り、上記配合割合で坐剤を調製した。
【００２５】
処方例６  抗腫瘍注射用合剤
化合物２                          １０．０mg
シスプラチン                      ２５．０mg
注射用蒸留水 適 量  
１アンプル当り                    ５０．０ml
常法により１アンプル当り、上記配合割合で注射剤を調製した。
【００２６】
処方例７  抗腫瘍経口用合剤
化合物１                                                  ５０．０mg
５−トリフルオロメチル−２′−デオキシウリジン（ＦＴＤ）  １２．５mg
乳糖                                                      ８５．０mg
コーンスターチ                                          １００．０mg
ヒドロキシプロピルメチルセルロース                          ２．５mg
１包当り                                                ２５０．０mg
常法により、上記配合割合で顆粒剤を調製した。
【００２７】
試験例１（体重増加抑制に対する軽減効果）
（ａ）被験液の調製Ｉ：
５−フルオロウラシル（以下、５−ＦＵと略す）を２．０mg／mlになるように生理食塩水に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、２０mg／kg／dayの５−ＦＵ投与薬液を得た。
（ｂ）被験液の調製II：
シスプラチン（以下、ＣＤＤＰと略す）を０．１mg／mlになるように生理食塩水に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、１．０mg／kg／dayのＣＤＤＰ投与薬液を得た。
（ｃ）被験液の調製III：
化合物１を１０mg／mlになるように水に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、１００mg／kg／dayの化合物１の投与薬液を得た。
【００２８】
（ｄ）試験：
生後５週齢のドンリュー系雄性ラットを前もって、各薬剤投与群の体重の平均、標準偏差（Ｓ．Ｄ．）ともできる限り均等になるように対照群と治療群を設定した後、薬剤投与を開始した。単独投与群は１日１回の割合で体重１００ｇに対し上記の、５−ＦＵの投与薬液とＣＤＤＰ投与薬液をそれぞれ１．０mlを４日間静脈内投与し、それと同時に水を同様に１日１回の割合で体重１００ｇに対し１．０mlを４日間経口投与した。併用投与群は１日１回の割合で体重１００ｇに対し上記の、５−ＦＵの投与薬液とＣＤＤＰ投与薬液をそれぞれ１．０mlを４日間静脈内投与し、それと同時に化合物１の投与薬液を１日１回の割合で体重１００ｇに対し１．０mlを４日間経口投与した。対照群は１日１回の割合で体重１００ｇに対し生理食塩水１．０mlを静脈内に、それと同時に水１．０mlを４日間経口投与した。
【００２９】
体重変化は最終薬剤投与の翌日（day５）と薬剤投与前（day１）に測定し、下記式により体重変化率を求めて表１に示した。
結果の統計的解釈は、スチューデント（Student's）−Ｔ法を用い、対照群に対しては（＊；ｐ＜０．０５）、（＊＊；ｐ＜０．０１）と表記し、抗腫瘍剤単独投与群に対しては（＃；ｐ＜０．０５）、（＃＃；ｐ＜０．０１）と表記した。
【００３０】
【数１】
0004049477.tif 000003
【００３１】
【表１】
0004049477.tif 000004
【００３２】
５−ＦＵ２０mg／kg／day及びＣＤＤＰ１．０mg／kg／dayをそれぞれ４日間連日投与した単独投与群ではラットの体重の増加抑制が認められた。この体重の増加抑制は化合物１を１００mg／kg／day併用投与することによりいずれも軽減された。なお、一般症状観察で化合物１併用投与群は、抗腫瘍剤投与群に比べて下痢の発生頻度が少なかった。
【００３３】
試験例２（下痢発生の遅延効果）
（ａ）被験液の調製Ｉ：
塩酸イリノテカン（以下ＣＰＴ−１１と略す、株式会社ヤクルト製カンプト注１００mg／５ml）を６mg／mlになるように生理食塩水を加えて希釈し、６０mg／kg／dayのＣＰＴ−１１投与薬液とした。
（ｂ）被験液の調製II：
化合物１を３mg／mlになるように０．５％ヒドロキシプロピルメチルセルロース溶液（以下０．５％ＨＰＭＣと略す）を加えて懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、３０mg／kg／dayの化合物１の投与薬液とした。
【００３４】
（ｃ）試験方法：
生後５週齢のドンリュー系雄性ラットを前もって、各薬剤投与群の体重の平均、標準偏差（Ｓ．Ｄ．）ともできる限り均等になるように対照群と治療群を設定した後、薬剤投与を開始した。単独投与群は１日１回の割合で体重１００ｇに対し上記の、ＣＰＴ−１１の投与薬液１．０mlを５日間静脈内投与した。それと同時に０．５％ＨＰＭＣ溶液を同様に１日１回の割合で体重１００ｇに対し１．０mlを５日間経口投与した。併用投与群は１日１回の割合で体重１００ｇに対し、上記のＣＰＴ−１１の投与薬液１．０mlを５日間静脈内投与し、それと同時に化合物１の投与薬液を同様に１日１回の割合で体重１００ｇに対し１．０mlを５日間経口投与した。対照群は１日１回の割合で体重１００ｇに対し生理食塩水をそれぞれ１．０mlを静脈内に、それと同時に０．５％ＨＰＭＣ溶液を５日間経口投与した。毎日、化合物投与前に便及び肛門部の汚れを観察し下痢の発現の有無を観察した。観察期間中、一度でも下痢の発現が認められたラットは、下痢発生ラットとし、下記式により蓄積下痢発生率を求めて図１に示した。
【００３５】
【数２】
0004049477.tif 000005
【００３６】
その結果、図１に示すように、ＣＰＴ−１１を６０mg／kg連日投与した時３日目より下痢の発生が認められた。これに対し、化合物１を３０mg／kg併用投与することにより下痢の発生を遅延させた。
【００３７】
試験例３（制癌剤の抗腫瘍効果に対する影響）
（ａ）被験液の調製Ｉ：
ＣＤＤＰを０．６mg／mlになるように生理食塩水に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、６．０mg／kg／dayのＣＤＤＰ投与薬液を得た。
（ｂ）被検液の調製II：
化合物１を３mg／ml、１０mg／ml、及び３０mg／mlになるように０．５％ＨＰＭＣ溶液に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に超音波処理し、３０mg／kg／day、１００mg／kg／day及び３００mg／kg／dayの化合物１の投与薬液を得た。
【００３８】
（ｃ）試験：
生後５週齢のドンリュー系雄性ラットを前もって、各薬剤投与群の体重の平均、標準偏差（Ｓ．Ｄ．）ともできる限り均等になるように対照群と治療群を設定した後、ラットの背部皮下にYoshida sarcoma （２×１０4cells／０．１ml／rat）を移植した。移植翌日より薬剤投与を開始した。ＣＤＤＰ単独投薬群は体重１００ｇに対し上記の６．０mg／kgのＣＤＤＰ投与薬液１．０mlを投与初日に静脈内投与し、それとともに、０．５％ＨＰＭＣ溶液を１日１回の割合で体重１００ｇに対し１．０mlを７日間経口投与した。同様に、併用投与群は体重１００ｇに対し上記の６．０mg／kgのＣＤＤＰ投与薬液を１．０mlを投与初日に静脈内投与し、それとともに、３０mg／kg／day、１００mg／kg／day及び３００mg／kg／dayの化合物１の投与薬液をそれぞれ１日１回の割合で体重１００ｇに対し１．０mlを７日間経口投与した。対照群は坦癌ラットの体重１００ｇに対し生理食塩水を１．０mlを投与初日に静脈内に、それとともに、０．５％ＨＰＭＣ溶液を７日間経口投与した。また、化合物１自身の作用を観察するため３０mg／kg／day、１００mg／kg／day及び３００mg／kg／dayの化合物１単独投与群を設定した。体重変化は移植日（day０）と最終薬剤投与の翌日（day８) に測定し、下記式により体重抑制率を求めた。
【００３９】
【数３】
0004049477.tif 000006
【００４０】
腫瘍重量は最終投与翌日に屠殺し、腫瘍重量を測定し、下記式により腫瘍縮小率（％）を求めた。
【００４１】
【数４】
0004049477.tif 000007
【００４２】
上記の結果を表２に示した。
【００４３】
【表２】
0004049477.tif 000008
【００４４】
ＣＤＤＰを６mg／kg単独投与すると対照群に対し有意な腫瘍重量の抑制と体重抑制が認められた。この腫瘍重量の抑制と体重抑制は化合物１を７日間経口投与することにより、抗腫瘍効果には影響を及ぼさず、体重抑制を軽減させた。
【００４５】
試験例４
（体重増加抑制と小腸及び大腸における炎症性サイトカインの変動）
（ａ）被検液の調製Ｉ：
５−トリフルオルメチル−２′−デオキシウリジン（以下ＦＴＤと略す）を２０mg／mlになるように０．５％ＨＰＭＣ溶液に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、２００mg／kg／dayのＦＴＤ単独投与薬液を得た。
（ｂ）被検液の調製II ：
ＦＴＤを２０mg／mlになるように０．５％ＨＰＭＣ溶液に懸濁させた。これに化合物１を９．４mg／mlになるように加え、室温にてスターラーで約２０分間攪拌した後、氷冷下に超音波処理し、ＦＴＤと化合物１の混合薬液（モル比１：０．５）を得た。
（ｃ）被検液の調製III：
化合物１を１０mg／mlになるように０．５％ＨＰＭＣ溶液に懸濁させ、室温にてスターラーで約２０分攪拌した後、氷冷下に５分間超音波処理し、１００mg／kg／dayの化合物１単独投与用薬液を得た。
【００４６】
（ｄ）試験：
生後８週齢の雄性ＩＣＲマウスを前もって、各薬剤投与群の体重の平均、標準偏差（Ｓ．Ｄ．）ともできる限り均等になるように対照群と治療群を設定した後、薬剤投与を開始した。ＦＴＤ単独投与群は１日１回の割合でマウスの体重１００ｇに対し、２００mg／kg／dayの投与薬液１．０mlを８日間経口投与した。併用投与群は１日１回の割合でマウスの体重１００ｇに対し、ＦＴＤと化合物１との混合投与薬液１．０mlを８日間経口投与した。対照群は０．５％ＨＰＭＣ溶液のみを８日間経口投与した。 また、化合物１自身の作用を観察するため１００mg／kg／dayの化合物１単独投与群を設定した。
【００４７】
（体重変化の測定）
体重変化は薬剤投与の前日（day０）と最終薬剤投与の翌日（day９）に測定し、下記式により体重変化率を求めて表３に示した。
【００４８】
【数５】
0004049477.tif 000009
【００４９】
結果の統計的解釈は、ダンネット（Dunnett）法（＊；ｐ＜０．０５）、（＊＊；ｐ＜０．０１）に従って実施した。
【００５０】
【表３】
0004049477.tif 000010
【００５１】
ＦＴＤを２００mg／kgマウスに８日間連日単独投与した時、最終投与の翌日の体重は投与前の体重に対して約１８％減少した。この体重減少は化合物１を９４mg／kg／day配合することにより阻止された。
【００５２】
（小腸及び大腸内サイトカインの測定）
薬剤投与終了日の翌日に上記体重測定後、エ−テル麻酔し、大腸の肛門より３〜６cm及び小腸の十二指腸を除いた空回腸のすべてをそれぞれ採取し、生理食塩水にて洗浄後、ただちに−８０℃凍結保存した。サンプル調剤は、それぞれの組織を約１０％（Ｗ／Ｖ）となる様に０．０５Ｍリン酸緩衝液（pH７．４）を加え、ホモゲナイズし、超音波処理後、凍結融解を２回行った。次に、１２，０００ｇ、１５分間遠心し、その上清をサイトカイン測定用サンプルとした。
【００５３】
各種サイトカインの測定はＩＬ−１βおよびマウスＩＬ−６の測定はエンドジェン社（Endogen, Inc.）製のマウス用ＥＬＩＳＡキットを用いて実施した。その結果を表４に示した。
結果の統計的解釈は、ダンネット（Dunnett）法（＊；ｐ＜０．０５）、（＊＊；ｐ＜０．０１）により実施した。
【００５４】
【表４】
0004049477.tif 000011
【００５５】
ＦＴＤ２００mg／kg／dayをマウスに８日間連日単独投与した時炎症性サイトカインＩＬ−６が小腸及び大腸において対照群に対して高値を示した。またＩＬ−１βにおいても大腸で高値を示した。これらの炎症性サイトカインの上昇は化合物１を９４mg／kg配合した投薬群では対照群と同じレベルまで抑制された。
【００５６】
【発明の効果】
５−クロロ−６−（２−イミノピロリジン−１−イル）メチル−２，４（１Ｈ，３Ｈ）−ピリミジンジオン（１）及びその塩は、抗腫瘍剤投与によって誘発される消化管での炎症抑制活性を有し、癌化学療法剤投与に伴う下痢症状又は体重減少を抗腫瘍効果を抑制することなく軽減するという利点を有しており、癌化学療法の継続且つ体力の消耗を防止する副作用軽減剤として極めて有用性の高いものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】蓄積下痢発生率と投与日数との関係を示す図である。
【図１】
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