(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式のいずれかで表されるキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤であるアラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸キナプリル、塩酸テモカプリル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、トランドラプリル、ペリンドプリルエルブミン、マレイン酸エナラプリル、又はリシノプリルを有効成分として含有する心臓病の予防剤又は治療剤。
【化１】
0004173098.tif 000024
【請求項２】
前記心臓病が、心肥大である請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
前記心臓病が、心不全である請求項１に記載の薬剤。
【請求項４】
前記心臓病が、心筋梗塞である請求項１に記載の薬剤。
【請求項５】
前記キマーゼ阻害剤と前記ＡＣＥ阻害剤が、合剤を構成する請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項６】
前記キマーゼ阻害剤と前記ＡＣＥ阻害剤が、それぞれ独立した単剤である請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項７】
前記キマーゼ阻害剤と前記ＡＣＥ阻害剤とを含むキットの形態にある請求項１〜４のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項８】
前記キマーゼ阻害剤が下記式で表される化合物のいずれかである請求項１〜７のいずれか１項に記載の薬剤。
【化２】
0004173098.tif 000025
【請求項９】
下記式のいずれかで表されるキマーゼ阻害剤を有効成分として含有する心筋梗塞の予防剤又は治療剤。
【化３】
0004173098.tif 000026
【請求項１０】
前記キマーゼ阻害剤が下記式で表される化合物のいずれかである請求項９に記載の薬剤。
【化４】
0004173098.tif 000027
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、キマーゼ阻害剤及びＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤の両方を有効成分として含有する薬剤、あるいはキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を投与する予防方法又は治療方法に関する。さらに具体的には、該薬剤又は該方法の、循環器系疾患の予防剤、治療剤、予防方法、又は治療方法、あるいはアンジオテンシンＩＩ産生抑制剤又は抑制方法に関する。本発明の薬剤は、その強力なアンジオテンシンＩＩ産生抑制効果により、高血圧症、心臓病（心肥大、心不全、心筋梗塞など）、脳卒中、又は腎炎などの治療に有効である。
背景技術
アンジオテンシンＩＩは、全身血圧、体液量などの生体内恒常性維持に重要なレニン−アンジオテンシン系の主要な因子として研究されてきた。アンジオテンシンＩＩは、その強い血管収縮作用から高血圧性の疾患における原因物質として最も注目を集めてきた因子であり、その作用を抑制することにより循環器系疾患の薬剤治療薬が開発されてきた。さらに、近年、アンジオテンシンＩＩは増殖因子として繊維芽細胞の増殖などを促し、特に心血管系疾患においては、心筋細胞の肥大、平滑筋細胞の遊走・増殖、線維芽細胞の細胞内マトリックス産生刺激、アポトーシス誘導など広く細胞機能の調節に関わり、線維化や腎の硬化、動脈硬化巣の形成においても重要な役割を担うと考えられている。事実、アンジオテンシンＩＩを生成する酵素であるアンジオテンシン変換酵素（以下、「ＡＣＥ」という。）の阻害剤は、長く循環器系疾患における第１選択薬として用いられており、その有効性は臨床において明確にされている。
一方、このような局所アンジオテンシンＩＩの産生系の重要性が明らかにされる中で、ヒト組織局所におけるアンジオテンシンＩＩの産生に非ＡＣＥ依存の経路が見出され、特にヒトマスト細胞キマーゼ（キマーゼ）によるアンジオテンシンＩＩ産生経路に関して注目がされてきた。例えば、経皮的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の再狭窄において、ＡＣＥ阻害剤は無効であることが分かり（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９２；８６：１００−１１０，Ｊ．Ａｍ．Ｃｏｌｌ．Ｃａｒｄｉｏｌ  １９９５；２５：３６２−３６９）、アンジオテンシンＩＩの産生に関してＡＣＥ以外の産生酵素の存在が示唆された。浦田らは、ヒト心臓よりアンジオテンシンＩからアンジオテンシンＩＩを産生する酵素を単離抽出し、その酵素の化学構造および遺伝子クローニングからヒトマスト細胞キマーゼがアンジオテンシンＩＩの産生を担うことを明らかにした（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ  １９９０；２６５：２２２３４８−２２３５７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９９１；２６６：１７１７３−１７１７９）。これまでの研究では、キマーゼは組織結合型のマスト細胞のみでその存在が確認されており、組織局所において生理機能をもつとされる。血管壁において、正常時、キマーゼは外膜に最も多く、内膜にはむしろＡＣＥが局在しているが、一旦血管が障害をうけると、キマーゼは外膜の再構築および新生内膜増殖に関わると考えられている（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １９９６；９４：１６５５−１６６４）。
このキマーゼによる非ＡＣＥ依存のアンジオテンシンＩＩ産生経路は、ヒトにおいては他の動物種と比較して寄与が高いことが種々の報告から実証されている。例えば、サル、イヌの摘出血管におけるアンジオテンシンＩ添加の血管収縮作用は、ＡＣＥ阻害剤単独では３０％程度しか抑制されないことが古くから報告されており、セリンプロテアーゼ阻害蛋白であるキモスタチンの併用によってはじめて完全に抑制されることから、ＡＣＥ以外の酵素による何らかのアンジオテンシンＩＩ産生経路が存在し、しかもげっ歯類と比較してこれらの大動物においては非ＡＣＥ依存のアンジオテンシンＩＩ産生経路の寄与が大きいことが推測されてきた（Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎｓ  １９８４；２：２７７−１８９）。この非ＡＣＥ依存アンジオテンシンＩＩ産生経路は、後にキマーゼによることが明らかにされ、さらに、ヒト心臓においてのアンジオテンシンＩＩの生成は約８０％をキマーゼが担うという報告もある（Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．１９９０；６６：８８３−８９０）。
ヒトにおいて、ＡＣＥ依存と非ＡＣＥ依存の主要な二つのアンジオテンシンＩＩ生成経路を同時に抑制するために、近年アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤が開発されている。アンジオテンシンＩＩは細胞膜上のアンジオテンシンＩＩ受容体を介して作用することから、特に血管収縮に関わるアンジオテンシンＩＩ受容体であるＡＴ１受容体の拮抗剤が開発されている（特開平５６−１７０７３号公報、ＥＰ０２５３３１０号明細書、ＥＰ０２９１９６９号明細書、ＥＰ０３２４３７７号明細書、特開昭６３−２３８６８号公報、特開平１−１１７８６７６号公報、ＥＰ０３２３８４１号明細書、特開平１−２８７０７１号公報、特開平４−３６４１７１号公報など多数）。これらの受容体拮抗剤の多くは既に血圧降下剤として臨床応用され、ＡＣＥ阻害剤と同等以上の効果が認められつつある。そしてこれらの受容体拮抗剤によるＡＣＥ依存及び非ＡＣＥ依存の２つのアンジオテンＩＩを抑制することの有用性が臨床上において検証されつつある。しかしながら、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤によって循環器疾患の治療上の問題点がすべて解決されたとはいえない。
実際にＡＴ１受容体拮抗剤の大規模な臨床試験が実施されており、その臨床効果が明確になりつつある。しかしながら、ＡＴ１受容体拮抗剤の効果として、特に心不全などの心疾患においては、心血管イベントの再発や心不全の増悪による再入院などの患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ）を改善するものの、心不全患者の総死亡率低下そのものはＡＣＥ阻害剤と同等であって、未だ心疾患の治療上満足のいく結果とはなっていない（ＥＬＩＴＥＩＩ試験、Ｌａｎｃｅｔ  ２０００  ３５５巻１５８２頁、アメリカ心臓協会学術集会２０００年、２００１年；Ｖａｌ−ＨｅＦＴ試験、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｅｉｎｅ  ２００１年  ３４５巻、１６６７頁、アメリカ心臓協会学術集会２０００年、２００１年）。
また、近年のノックアウトマウスの研究から、心臓における肥大や線維化において、アンジオテンシンＩＩが、アンジオテンシンＩＩ受容体であるＡＴ２受容体に働いて増悪因子となり得る可能性を示唆する報告もされている（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００１年１０４巻２４７頁、Ｉｃｈｉｈａｒａら、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｍｅｄ，２００１年１１巻３２４頁、Ｉｎａｇａｍｉら）。
心疾患以外の循環器疾患においても、ＡＣＥ阻害剤やアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤によっても血圧が低下しない一部の高血圧患者が存在している。また、肺高血圧症においてもＡＣＥ阻害剤やアンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤の治療上の効果は明確ではない。
従って発明者らは、これまで臨床応用されていない新しい概念に基づく治療剤・治療法を開発し、これらの循環器疾患の治療における問題点を克服すべく本発明を提案するに至った。
発明の開示
本発明の課題は、心疾患（心肥大、心不全、又は心筋梗塞など）、脳卒中、ＰＴＣＡ後の再狭窄などの血管障害、動脈硬化、腎不全、腎炎、一部の高血圧症、又は肺高血圧症などの高血圧症における心血管系疾患に対する新たな治療薬を提供することである。
ＡＴ１受容体拮抗剤が、ＡＣＥ及び非ＡＣＥ依存の、２つのアンジオテンシンＩＩの作用を同時に抑制する薬剤でありながら、心疾患領域で期待されるほどの治療効果を得られていない点に関しては、次のような考察をすることができる。即ち、これらの受容体拮抗剤はＡＴ１受容体選択的な拮抗剤であり、ＡＴ１受容体以外のアンジオテンシンＩＩ受容体に対する作用を抑制するものではない。事実、ＡＴ１受容体の拮抗作用により血清中および組織中のアンジオテンシンＩＩ濃度が上昇することが知られていることから、これらのアンジオテンシンＩＩが他の受容体を刺激することが推察される。例えば、アンジオテンシンＩＩ受容体であるＡＴ２受容体は、ＡＴ１受容体と同様に重要な作用を有すると考えられてきたが、その循環器系疾患における役割は未だ不明確な点も多い。
前述した、心臓における肥大や線維化においてアンジオテンシンＩＩがＡＴ２受容体に働いて増悪因子となり得る可能性を示唆する報告から、ＡＴ１受容体の拮抗作用により血清中および組織中のアンジオテンシンＩＩ濃度が上昇し、これらのアンジオテンシンＩＩが他の受容体を刺激することが心疾患などの循環器疾患では病態増悪に働くという仮説を部分的に裏付けるものである。従って、慢性心不全などの心疾患は、最終的には広汎な心臓の線維化とそれに伴う心機能の低下によって死亡に至らしめるものであるが、これら心疾患の病態の進行過程においては、ＡＴ２受容体を刺激することは病態増悪につながる可能性があり、このＡＴ２受容体の刺激が、ＡＴ１受容体拮抗剤が慢性心不全、心筋梗塞後の心機能不全などの心疾患において治療効果が十分に得られない要因であると考えられる。
また、現在広く循環器系疾患の臨床に用いられているＡＣＥ阻害剤は、ブラジキニンなどの分解抑制を介して循環器系疾患に対する治療効果も発現すると考えられ、アンジオテンシン受容体拮抗剤が、完全にＡＣＥ阻害剤の治療効果を代替できるものではない。
更にキマーゼは、アンジオテンシンＩＩと同様に強力な血管収縮作用を有し様々な細胞に対して増殖作用を有する因子であるエンドセリンを活性化することからアンジオテンシンＩＩ受容体以外の機序による循環器疾患の病態形成に関与する可能性がある。また、キマーゼは炎症性サイトカインの一つであるＩＬ−１βの活性化を通じて心血管障害部位での炎症反応増悪や、フィブロネクチンやＩＶ型コラーゲンの分解、マトリックスプロテアーゼの活性化を通じての細胞外タンパク質の分解に寄与することや、トランスフォーミンググロースファクターβ（ＴＧＦβ）の遊離促進を通じて、線維芽細胞の分化増殖を促し、組織線維化／組織リモデリングを促進すると考えられる。従って、キマーゼ阻害剤はこれら循環器疾患において、アンジオテンシンＩＩの作用を抑制するのみならず、アンジオテンシン受容体拮抗剤で代替できない広汎な薬理作用を併せ持つ有用な循環器疾患治療薬であると考えられる。ところで、キマーゼ阻害剤としては、ベンズイミダゾール誘導体またはその医学上許容される塩が開示されている（ＷＯ０１／５３２９１号明細書、ＷＯ０１／５３２７２号明細書、ＷＯ００／０３９９７号明細書）。その化学構造は後述する。
更に、発明者らは、ＡＣＥ阻害剤とキマーゼ阻害剤を同時に投与することを実現する治療法あるいは治療剤が、相乗的な治療効果を期待し得る画期的な循環器治療法あるいは治療剤になると考えるに至った。即ち、本発明は、組織におけるＡＣＥ依存及び非依存のアンジオテンシンＩＩ産生を完全に抑制するのみならず、ＡＴ１受容体拮抗剤が有しないＡＣＥ阻害剤によるブラジキニン分解抑制による治療効果をも維持し、かつ、キマーゼの持つインターロイキン−１−β（ＩＬ−１β）の活性化、マトリックスプロテアーゼの活性化、フィブロネクチンやＩＶ型コラーゲンの分解、トランスフォーミンググロースファクター−β（ＴＧＦ−β）の遊離促進、サブスタンスＰやバソアクティブインテスティナルペプチド（Ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ  ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｐｅｐｔｉｄｅ，ＶＩＰ）の活性化などを抑制することにより、循環器系疾患において新しい治療剤の概念を与えるものである。
アンジオテンシンＩＩの産生に関し、病態局所においては、ＡＣＥとキマーゼがその役割を分担していると考えられ、ＰＴＣＡ後の再狭窄など血管障害性の病態ではむしろＡＣＥよりキマーゼが重要であると考えられる。さらに、血管粥状動脈硬化巣でのキマーゼ活性の上昇、先天性心疾患の肺血管病変の進行にキマーゼが関与すること、キマーゼによる心筋細胞のアポトーシスおよび心繊維芽細胞の増殖なども報告され、障害血管や心臓を中心とした循環器系組織リモデリングにキマーゼによるアンジオテンシンＩＩ産生がＡＣＥとともに関わると同時に異なる役割をもって関与しているとも考えられる。
したがって、ＡＣＥによるアンジオテンシンＩＩ産生とキマーゼによるアンジオテンシンＩＩ産生の両方の経路を同時に抑制することによって、生体内のアンジオテンシンＩＩ自体の濃度を低下させることは、循環器系疾患の治療に有効であり、心不全、心筋梗塞およびその予後、ＰＴＣＡなどの処置後血管再狭窄、肺高血圧に伴う心疾患、動脈硬化症、腎不全、一部の高血圧症などに広く有効であると考えられる。
本発明者らは、キマーゼがＡＣＥと共に心血管系の疾患に対してアンジオテンシンＩＩの産生を通じて深く関与することに着目し、鋭意研究を重ねてきた。ヒトキマーゼは、げっ歯類であるマウスおよびラットにおいてもその類似酵素が同定されているが、これらの類似酵素はヒトと異なりアンジオテンシンＩＩ産生活性ともにアンジオテンシンＩＩ分解活性を有し、げっ歯類におけるキマーゼ依存アンジオテンシンＩＩ産生経路の寄与はヒトと比較して低いとされる。したがって、キマーゼによるアンジオテンシンＩＩ産生が比較的ヒトに近いとされるハムスターを実験動物として用い、キマーゼによるアンジオテンシンＩＩ産生経路の寄与を検討してきた。さらに、ヒトキマーゼ遺伝子をマウス受精卵に移入することによりヒトキマーゼ過剰発現マウスを作成し、このヒト型のキマーゼを産生する遺伝子組み換え動物により、その循環器系疾患に対する作用を検討してきた。
本発明者らは、これら先進的な研究結果に基づき、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤を同時に投与することによって、循環器系疾患において極めて有効な治療薬となりうることを見出した。
すなわち、本発明は、キマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を有効成分として含有する薬剤あるいはキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を投与することによる予防方法又は治療方法である。
また本発明は、キマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を有効成分として含有する循環器疾患の予防剤又は治療剤あるいはキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を投与することによる循環器系疾患の予防方法又は治療方法である。
さらに本発明は、前記循環器系疾患が、高血圧症、心臓病、脳卒中、血管障害、動脈硬化、腎炎、又は腎不全である治療剤又は治療法である。
さらに本発明は、前記心臓病が、心肥大、心不全、又は心筋梗塞である循環器系疾患治療剤又は治療法である。
さらに本発明は、キマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を有効成分として含有するアンジオテンシンＩＩの産生抑制剤あるいはキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を投与することによるアンジオテンシンＩＩの産生抑制方法である。
発明を実施するための形態
本発明は、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤を有効成分として含有する薬剤、循環器系疾患治療剤、又はアンジオテンシンＩＩの産生抑制剤、あるいはキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤を投与する治療法、循環器系疾患治療方法、又はアンジオテンシンＩＩの産生抑制方法である。
本発明においては、キマーゼ阻害剤を第１有効成分として、ＡＣＥ阻害剤を第２有効成分として用いる。
ＡＣＥ阻害剤は、既に高血圧などの循環器疾患で有用性が確かめられている薬剤である。キマーゼ阻害剤は、局所アンジオテンシンＩＩの産生を抑制することによって心筋梗塞の予後等に有効であることが、本発明において確かめられている。従って、キマーゼ阻害剤単独でも、循環器系疾患の薬剤やアンジオテンシンＩＩの産生抑制剤として有用である。更に、本発明は、ＡＣＥ阻害剤とキマーゼ阻害剤を併用して用いることにより、ＡＣＥ阻害剤又はキマーゼ阻害剤を単独で用いるのに比べ、組織局所のアンジオテンシンＩＩの産生を完全に抑制し、ＡＣＥ阻害剤のブラジキニン分解抑制などの作用を維持し、且つ、キマーゼの媒介する様々な生理作用を抑制することにより、相乗的な治療効果を発揮し、循環器系疾患治療やアンジオテンシンＩＩ産生抑制等に効果的である。
本発明における薬剤は、キマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を同時にあるいは時間を置いて別々に投与する薬剤である。
本発明における薬剤は、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤を有効成分として含有していればよく、どのような形態の薬剤であっても構わない。本発明における薬剤の形態としては、例えば、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤を主成分とする合剤であってもよく、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤が合剤でなく独立した薬剤としてのそれぞれの単剤であってもよく、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤が配合された形態であれば、特に限定されない。ここで、合剤とは、単一の製剤に２つ以上の有効成分を配合したものを指し、単剤とは単一の製剤に単一の特定の有効成分を含むものを指す。
キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤の配合剤としては、例えば、キマーゼ阻害剤の有効成分とＡＣＥ阻害剤の有効成分のそれぞれの剤の効果が発揮できる適当量を合わせて、錠剤、カプセル剤、液剤などの剤形を製造する。このときキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤を合わせて配合剤とするタイミングは、合剤として剤型の製造段階で行ってもよいし、投与する直前に配合するものであってもよい。製造段階で行う場合には、例えばキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤のそれぞれの成分を適当量混合して、成型したり、詰め合わせたりすればよい。成型する方法としては、例えば、それぞれの剤を混合してもよいし、層状に積み重ねてもよく、特に限定されない。投与する直前に配合剤とする場合は、例えば投与直前までは、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤はそれぞれ独立の状態で保存され、投与する時に、液体状の剤を混合したり、液体状の剤に錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、又はカプセル剤等の固体の剤を溶かしたり、顆粒剤又は散剤等の固体の剤同士を混合したりする方法がある。直前に混合するための方法としては、手作業で行ってもよいし、切断したり、引いたり、裂いたり、引き抜く等して、簡単に両剤が混ざるようなパッケージのものを使用してもよい。配合剤の形態としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、又はカプセル剤等の剤型がある。
キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤が、それぞれ独立した単剤である薬剤とは、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤で、それぞれ単一に利用できる単剤を、組み合わせて利用する薬剤である。それぞれの剤の形態は、固体又は液体同士でもよいし、固体と液体でも良いし、特に限定されない。
本発明におけるキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤がキットの形態にあるとは、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤が容易に準備されるように、一式として揃えられた状態にある形態をいう。キットの形態とは例えば、剤の製造終了段階でＰＴＰやブリスターパック等で同一のパッケージがされたり、病院や薬局等で処方されるときに同一の袋に入れられたりしてもよく、特に限定されない。
また、本発明における予防方法又は治療方法は、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤の両剤を投与する方法であればよく、投与方法は特に限定されない。本発明における方法は、また、キマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を同時にあるいは時間を置いて別々に投与する方法である。
本発明のキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤を投与する方法としては、例えば、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤との合剤を投与する方法、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤の独立した単剤を準備して投与する方法、又はキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤とを配合したものを投与する方法等がある。
また本発明のキマーゼ阻害剤及びＡＣＥ阻害剤は、投与時が同時でも良いし、同時でなく別々でも良い。投与時が同時でない場合は、例えば、互いに交互に投与してもよいし、一方の剤を続けて投与した後に、他方の剤を投与してもよい。また、投与回数についても、両者が同じであっても、異なっていてもよい。
投与方法としては、両者とも経口又は非経口であってもよいし、一方が経口で他方が非経口であってもよい。
本発明におけるキマーゼ阻害剤のなかで、式（Ｉ）で表されるベンズイミダゾール誘導体は、製薬学的に許容される担体とともに医薬組成物として、該医薬組成物を種々の剤型に成型して経口あるいは非経口によって、ＡＣＥ阻害剤を含む医薬品組成物と別に投与されることが好ましい。あるいはまた、適当なＡＣＥ阻害剤との合剤又は配合剤を作製し、経口あるいは非経口投与されることが好ましい。
本発明において、キマーゼ阻害剤と併用するＡＣＥ阻害剤の投与方法および投与量は、疾患の種類、投与経路、患者の症状、年齢、性別、体重等により異なるが、幾つかの方法を用いることができる。例えば、ＡＣＥ阻害剤とキマーゼ阻害剤の合剤を製造し、同時内服投与することができる。例えば、ＡＣＥ阻害剤として塩酸テモカプリルを用いる場合は１−４ｍｇの塩酸テモカプリルおよび１−１０ｍｇのキマーゼ阻害剤を使用した合剤を製造し、経口にて内服投与することができる。あるいは、ＡＣＥ阻害剤とキマーゼ阻害剤を別々の錠剤にて製造し、それぞれ投与することも可能である。用法としては同時に内服することが望ましいが、症状や疾患状態に合わせ、それぞれの薬剤を独立に投与量を調整することも可能である。
本発明の医薬組成物の剤型としては、以下のようなものが挙げられる。例えば経口投与剤の場合は、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、又はカプセル剤等の剤型が挙げられる。
ここで、錠剤の成型方法としては、賦形剤、結合剤、及び／又は崩壊剤等の製薬学的に許容される担体を用いて通常の方法により成型することができる。丸剤、顆粒剤、又は散剤も錠剤の場合と同様に賦形剤等を用いて通常の方法により成型することができる。液剤、懸濁剤、又はシロップ剤の成型方法は、グリセリンエステル類、アルコール類、水、及び／又は植物油等を用いて通常の方法により成型することができる。カプセル剤の成型方法は、顆粒剤、散剤、あるいは液剤等を、ゼラチン等のカプセルに充填することによって成型することができる。
本発明で用いられるキマーゼ阻害剤としては、上述したＷＯ０１／５３２９１号明細書、ＷＯ０１／５３２７２号明細書、ＷＯ００／０３９９７号明細書で開示された下記式（Ｉ）で表されるベンズイミダゾール誘導体またはその医学上許容される塩を用いることが好ましい。
0004173098.tif 000002
［式（Ｉ）中、Ｒ１およびＲ２は、同一であっても相異なっていてもよく、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、シアノ基、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、またはＲ１およびＲ２は一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−（−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−の場合、その炭素原子は１つもしくは複数の炭素数１〜４のアルキル基で置換されていてもよい。）を表す。；
Ａは、置換もしくは無置換の炭素数１〜７の直鎖、環状、もしくは分岐状のアルキレン基またはアルケニレン基を表し、途中に−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ３−（ここで、Ｒ３は水素原子または直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基を表す。）を一つもしくは複数個含んでいてもよい。これらの基がもちうる置換基は、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルチオ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルスルホニル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、オキソ基、または一つ以上のハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基である。これらの置換基は、アルキレン基またはアルケニレン基の任意の場所で一つもしくは複数個それぞれ独立に置換していてもよい。；
Ｅは、−ＣＯＯＲ３、−ＳＯ３Ｒ３、−ＣＯＮＨＲ３、−ＳＯ２ＮＨＲ３、テトラゾール−５−イル基、５−オキソ−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル基、または５−オキソ−１，２，４−チアジアゾール−３−イル基（ここで、Ｒ３は前記定義に同じである。）を表す。；
Ｇは、置換もしくは無置換の炭素数１〜６の直鎖または分岐状のアルキレン基を表し、途中に−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ３−（ここで、Ｒ３は前記定義に同じである。これらの原子あるいは原子団が含まれる場合は、それらは直接ベンズイミダゾール環に結合することはない。）を一つもしくは複数個含んでいてもよい。かかるアルキレン基がもちうる置換基は、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、またはオキソ基である。；
Ｍは、単結合または−Ｓ（Ｏ）ｍ−を表し、ｍは０〜２の整数である。；
Ｊは、置換もしくは無置換の、酸素原子、窒素原子、および硫黄原子からなる群から選ばれたひとつ以上のヘテロ原子を環上にもつ炭素数４〜１０のヘテロアリール基を表す。ただし、ピリジン環は除く。かかるヘテロアリール基がもちうる置換基は、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルチオ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルスルホニル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基、置換もしくは無置換のアニリド基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、オキソ基、ＣＯＯＲ３基（ここで、Ｒ３は前記定義に同じである。）、または一つ以上のハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基である。これらの置換基は、環の任意の位置で一つもしくは複数個それぞれ独立に置換していてもよい。；またＪは、置換もしくは無置換の炭素数１〜６の直鎖、環状、もしくは分岐状のアルキル基、置換もしくは無置換の炭素数４〜１０のアリール基｛これらの基がもちうる置換基としては、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。）、直鎖、環状、もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキレン基、炭素数１〜６の直鎖状もしくは分岐状のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルチオ基、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルホニル基、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルフィニル基、炭素数１〜６のアシル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、オキソ基、または一つ以上のハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基である。これらの置換基は、アルキレン基またはアリール基の任意の場所で一つもしくは複数個それぞれ独立に置換していてもよい。また、これらの置換基は、さらにハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、アシル基、トリハロメチル基、フェニル基、オキソ基、またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基で置換されていてもよい。｝を表す。；
Ｘは、メチン（−ＣＨ＝）または窒素原子を表す。］
かかる式（Ｉ）で表される化合物のなかでも好ましいものを以下に述べる。
Ｒ１およびＲ２は、同一であっても相異なっていてもよく、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、シアノ基、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルコキシ基、またはＲ１およびＲ２は一緒になって−Ｏ−ＣＨ２−Ｏ−、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−、もしくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を表す。この場合、その炭素原子は１つもしくは複数の炭素数１〜４のアルキル基で置換されていてもよい。
Ｒ１およびＲ２の炭素数１〜４のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、（ｎ−，ｉ−）プロピル基、（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチル基を挙げることができる。より好ましくはメチル基を挙げることができる。炭素数１〜４のアルコキシ基としては、具体的にはメトキシ基、エトキシ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルオキシ基、（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルオキシ基を挙げることができる。
Ｒ１およびＲ２の好ましい基としては、水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、シアノ基、水酸基、炭素数１〜４のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルコキシ基を挙げることができる。さらには水素原子、ハロゲン原子、トリハロメチル基、シアノ基、炭素数１〜４のアルキル基、又は炭素数１〜４のアルコキシ基が好ましく、水素原子、塩素原子、フッ素原子、トリフルオロメチル基、メチル基、メトキシ基、又はエトキシ基がより好ましく、特に水素原子、メチル基、メトキシ基、又はエトキシ基が好ましい。
Ａは、置換もしくは無置換の炭素数１〜７の直鎖、環状、もしくは分岐状のアルキレン基またはアルケニレン基を表す。かかる無置換の炭素数１〜７の直鎖、環状、もしくは分岐状のアルキレン基としては、メチレン基、エチレン基、（ｎ−，ｉ−）プロピレン基、２，２−ジメチルプロピレン基、（ｎ−，ｉ−，ｔ−）ブチレン基、１，１−ジメチルブチレン基、ｎ−ペンチレン基、又はシクロヘキシレン基等を挙げることができる。好ましくはエチレン基、ｎ−プロピレン基、２，２−ジメチルプロピレン基、又は（ｎ−，ｔ−）ブチレン基が挙げられる。さらに好ましくは、ｎ−プロピレン基又は２，２−ジメチルプロピレン基が挙げられる。特に好ましくは、ｎ−プロピレン基を挙げることができる。無置換の炭素数１〜７の直鎖もしくは分岐状のアルケニレン基としては、ビニレン基、プロペニレン基、ブテニレン基、又はペンテニレン基等を挙げることができる。かかるアルキレン基またはアルケニレン基は、途中に−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ３−（ここで、Ｒ３は水素原子または直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基を表す。）を一つもしくは複数個含んでいてもよいが、これらの原子または原子団が、直接Ｍに結合することはない。具体的には、エチレン基、ｎ−プロピレン基、又は（ｎ−，ｔ−）ブチレン基の間に挟まれた基があげられる。さらに具体的には−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＮＲ４ＣＨ２−、又は−ＣＨ２ＮＲ４ＣＨ２ＣＨ２−等が挙げられる。好ましくは−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＣＨ２−、又は−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２−が挙げられる。
かかるアルキレン基又はアルケニレン基がもちうる置換基は、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基、直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルチオ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルスルホニル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、オキソ基、または一つ以上のハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基である。これらの置換基は、アルキレン基またはアルケニレン基の任意の位置で一つもしくは複数個それぞれ独立に置換していてもよい。
Ａの置換基のハロゲン原子としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子が挙げられる。好ましくは、フッ素原子又は塩素原子を挙げることができる。
Ａの置換基の直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、（ｎ−，ｉ−）プロピル基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチル基等が挙げられ、好ましくはメチル基又はエチル基を挙げることができる。さらに好ましくはメチル基を挙げることができる。
Ａの置換基の直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基としては、具体的にはメトキシ基、エトキシ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルオキシ基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルオキシ基等が挙げられ、好ましくはメトキシ基又はエトキシ基を挙げることができる。さらに好ましくはメトキシ基を挙げることができる。
Ａの置換基の直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルチオ基としては、具体的にはメチルチオ基、エチルチオ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルチオ基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルチオ基等が挙げられ、好ましくはメチルチオ基又はエチルチオ基を挙げることができる。さらに好ましくはメチルチオ基を挙げることができる。
Ａの置換基の直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルスルホニル基としては、具体的にはメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、（ｎ−，ｉ−）プロピルスルホニル基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルスルホニル基等が挙げられ、好ましくはメチルスルホニル基又はエチルスルホニル基を挙げることができる。さらに好ましくはメチルスルホニル基を挙げることができる。
Ａの置換基の直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基としては、アセチル基、エチルカルボニル基、（ｎ−，ｉ−）プロピルカルボニル基、（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）カルボニル基等が挙げられ、好ましくはアセチル基又はエチルカルボニル基を挙げることができる。さらに好ましくはアセチル基を挙げることができる。
Ａの置換基の直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基としては、具体的にはアセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルカルボニルアミノ基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）カルボニルアミノ基等が挙げられ、好ましくはアセチルアミノ基又はエチルカルボニルアミノ基を挙げることができる。さらに好ましくはアセチルアミノ基を挙げることができる。
Ａの置換基のトリハロメチル基としては、具体的にはトリフルオロメチル基、トリブロモメチル基、又はトリクロロメチル基が挙げることができる。好ましくはトリフルオロメチル基を挙げることができる。
なかでも、Ａとして好ましくは、置換もしくは無置換の炭素数１〜７の直鎖、環状、もしくは分岐状のアルキレン基｛途中に−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、−ＮＲ３−（ここで、Ｒ３は前記定義に同じである。）を一つもしくは複数個含んでいてもよいが、これらの原子または原子団が直接Ｍに結合することはない。｝が挙げられる。好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＦ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ３）２ＣＨ２−、又は−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−等が挙げられる。より好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＯＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＣＨ２−、−ＣＨ２Ｓ（＝Ｏ）ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＦ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＳＯ２ＣＨ２−、又は−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−が挙げられる。さらに好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−、又は−ＣＨ２Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２−を挙げることができる。特に好ましくは−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−を挙げることができる。
Ｅは、−ＣＯＯＲ３、−ＳＯ３Ｒ３、−ＣＯＮＨＲ３、−ＳＯ２ＮＨＲ３、テトラゾール−５−イル基、５−オキソ−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル基、または５−オキソ−１，２，４−チアジアゾール−３−イル基を表す（ここで、Ｒ３は水素原子または直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基を表す。）。
かかるＲ３としては、水素原子、メチル基、エチル基、（ｎ−，ｉ−）プロピル基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチル基等が挙げられる。好ましくは、水素原子、メチル基、又はエチル基が挙げられる。特に好ましくは水素原子が挙げられる。
なかでも、Ｅとして好ましくは、−ＣＯＯＲ３、−ＳＯ３Ｒ３、又はテトラゾール−５−イル基が挙げられる。さらに好ましくは−ＣＯＯＲ３を挙げることができる。特に好ましくは−ＣＯＯＨを挙げることができる。
Ｇは、置換もしくは無置換の炭素数１〜６の直鎖または分岐状のアルキレン基を表し、途中に−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ２−、又は−ＮＲ３−を一つあるいは複数個含んでもよい。ここで、Ｒ３は上記定義に同じである。また、これらのヘテロ原子あるいは原子団が含まれる場合は、これら原子あるいは原子団は、直接ベンズイミダゾール環には結合しない。かかるアルキレン基がもちうる置換基はハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基、直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基またはオキソ基である。具体的には、例えば−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＯ−、−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＣＯＮＨ−、−ＣＯ−、−ＳＯ２−、−ＣＨ２ＳＯ２−、−ＣＨ２Ｓ−、又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｓ−等が挙げられ、好ましいものとしては−ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＯ−、又は−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−を挙げることができる。さらに好ましくは−ＣＨ２−又は−ＣＨ２ＣＨ２−を挙げることができ、特に−ＣＨ２−が好ましい。ただし、ここに挙げられている基は左側がベンズイミダゾールの１位（Ｎ原子）と結合しており、右側がＪと結合している。
Ｍは単結合または−Ｓ（Ｏ）ｍ−を表し、ｍは０〜２の整数を表す。好ましくは−Ｓ−または−ＳＯ２−を挙げることができる。特に好ましくは−Ｓ−を挙げることができる。
ＪはＪ１またはＪ２で表される。
Ｊ１は、置換もしくは無置換の（酸素原子、窒素原子、および硫黄原子からなる群から選ばれたひとつ以上のヘテロ原子を環上にもつ炭素数４〜１０のヘテロアリール基）を表す。ただし、ピリジン環は除く。Ｊ２は、置換もしくは無置換の炭素数１〜６の直鎖、環状、もしくは分岐状のアルキル基、置換もしくは無置換の炭素数４〜１０のアリール基を表す。これらは化学的に合成可能なものに限られる。
Ｊ１の無置換の（酸素原子、窒素原子、および硫黄原子からなる群から選ばれた一つ以上のヘテロ原子を環上にもつ炭素数４〜１０のヘテロアリール基）としては、具体的には、フリル基、チエニル基、チアゾリル基、ピリミジニル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、ベンゾフリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キノキサリニル基、ベンゾオキサジアゾリル基、ベンゾチアジアゾリル基、インドリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾチエニル基、又はベンゾイソオキサゾリル基等を挙げることができる。好ましくは２環式のヘテロ芳香環、さらに好ましくはベンゾフリル基、ベンゾイミダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、キノキサリニル基、ベンゾオキサジアゾリル基、ベンゾチアジアゾリル基、インドリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾチエニル基、又はベンゾイソオキサゾリル基が挙げられ、特に好ましくはベンゾチエニル基又はインドリル基を挙げることができる。
かかるヘテロアリール基あるいはアリール基がもちうる置換基は、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基、直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基（隣接する２個がアセタール結合を形成している場合を含む。）、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルチオ基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルスルホニル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基、置換もしくは無置換のアニリド基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、または一つ以上のハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基である。これらの置換基は、環の任意の位置で一つあるいは複数個それぞれ独立に置換していてもよい。
Ｊ１の置換基であるハロゲン原子としてはフッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子が挙げられる。好ましくはフッ素原子又は塩素原子を挙げることができる。
Ｊ１の置換基である直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、（ｎ−，ｉ−）プロピル基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチル基等が挙げられ、好ましくはメチル基又はエチル基を挙げることができる。さらに好ましくはメチル基を挙げることができる。
Ｊ１の置換基である直鎖状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルコキシ基としては、具体的にはメトキシ基、エトキシ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルオキシ基、（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルオキシ基、又はメチレンジオキシ基等が挙げられ、好ましくは、メトキシ基又はエトキシ基を挙げることができる。さらに好ましくはメトキシ基を挙げることができる。
Ｊ１の置換基である直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキルチオ基としては、具体的にはメチルチオ基、エチルチオ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルチオ基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルチオ基等が挙げられ、好ましくはメチルチオ基又はエチルチオ基を挙げることができる。さらに好ましくはメチルチオ基を挙げることができる。
Ｊ１の置換基である直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルホニル基としては、具体的にはメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、（ｎ−，ｉ−）プロピルスルホニル基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチルスルホニル基等が挙げられ、好ましくはメチルスルホニル基又はエチルスルホニル基を挙げることができる。さらに好ましくはメチルスルホニル基を挙げることができる。
Ｊ１の置換基である直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基としては、アセチル基、エチルカルボニル基、（ｎ−，ｉ−）プロピルカルボニル基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）カルボニル基等が挙げられ、好ましくはアセチル基又はエチルカルボニル基を挙げることができる。さらに好ましくはアセチル基を挙げることができる。
Ｊ１の置換基である直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基としては、具体的にはアセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基、（ｎ−，ｉ−）プロピルカルボニルアミノ基、又は（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）カルボニルアミノ基等が挙げられ、好ましくはアセチルアミノ基、エチルカルボニルアミノ基を挙げることができる。さらに好ましくはアセチルアミノ基を挙げることができる。
Ｊ１の置換基であるトリハロメチル基としては、具体的にはトリフルオロメチル基、トリブロモメチル基、又はトリクロロメチル基を挙げることができる。
Ｊ２は置換もしくは無置換の炭素数１〜６の直鎖、環状または分岐状のアルキル基、或いは置換もしくは無置換の炭素数４〜１０のアリール基を表す。無置換の炭素数１〜６の直鎖、環状または分岐状のアルキル基としては、メチル基、エチル基、（ｎ−，ｉ−）プロピル基、（ｎ−，ｉ−，ｓ−，ｔ−）ブチル基、シクロペンチル基、又はシクロヘキシル基等が挙げられる。
Ｊ２の置換基としては、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、−ＣＯＯＲ４（Ｒ４は、水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。）、直鎖、環状もしくは分岐状の炭素数１〜６のアルキレン基、炭素数１〜６の直鎖状もしくは分岐状のアルコキシ基（この場合置換基としては、お互い隣接する部位でアセタール結合していてもよい。）、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルチオ基、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルホニル基、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルフィニル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシル基、直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜６のアシルアミノ基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、フェニル基、オキソ基、または一つ以上のハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基を表す。これらの置換基はアルキル基またはアリール基の任意の場所で一つもしくは複数個それぞれ独立に置換していてもよい。これらの置換基はさらにハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、アシル基、トリハロメチル基、フェニル基、オキソ基、またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基で置換されていてもよい。
なかでも、Ｊ２として好ましくは、置換もしくは無置換の炭素数４〜１０のアリール基が挙げられる。具体的には次式（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）
0004173098.tif 000003
［ここで、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４は、同一であっても相異なっていてもよく、それぞれ独立に、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、トリハロメチル基、トリハロメトキシ基、ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は水素原子または炭素数１〜４のアルキル基を表す。）、置換もしくは無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキル基、置換もしくは無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルコキシ基、置換もしくは無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキルチオ基、置換もしくは無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルホニル基、又は置換もしくは無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状の炭素数１〜３のアルキルスルフィニル基を表す。Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４のベンゼン環もしくはナフタレン環上の置換位置は限定されない。］で表される基が好ましい。
Ｊ２の置換基であるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子が挙げられる。好ましくは、フッ素原子又は塩素原子が挙げられる。トリハロメチル基としては、トリフルオロメチル基が好ましい。トリハロメトキシ基としては、トリフルオロメトキシ基が好ましい。無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキル基としては、具体的にはメチル基、エチル基、又は（ｎ−，ｉ−）プロピル基が挙げられる。無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルコキシ基としては、具体的にはメトキシ基、エトキシ基、又は（ｎ−，ｉ−）プロピルオキシ基等が挙げられる。無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキルチオ基としては、具体的にはメチルチオ基、エチルチオ基、又は（ｎ−，ｉ−）プロピルチオ基等が挙げられる。無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルホニル基としては、具体的にはメチルスルホニル基、エチルスルホニル基、又は（ｎ−，ｉ−）プロピルスルホニル基等が挙げられる。無置換の炭素数１〜３の直鎖もしくは分岐状のアルキルスルフィニル基としては、具体的にはメチルスルフィニル基、エチルスルフィニル基、又は（ｎ−，ｉ−）プロピルスルフィニル基等が挙げられる。
これらＪ２の置換基はさらに、ハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、アシル基、トリハロメチル基、フェニル基、オキソ基、またはハロゲン原子で置換されていてもよいフェノキシ基で置換されていてもよい。
式（ＸＩＩ）、（ＸＩＩＩ）のＸ２、Ｘ３、およびＸ４の置換位置については、特に限定されないが、より好ましくは式（ＸＩＩ）においては、（２位、３位）の組み合わせ、もしくは（２位、５位）の組み合わせである。式（ＸＩＩＩ）においては、（４位、７位、８位）、（４位、６位、８位）、もしくは（６位、７位、８位）の組み合わせが好ましい。
なかでも、Ｊ２として好ましくは、２−メチルフェニル基、２−エチルフェニル基、３−トリフルオロメチルフェニル基、２−エトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、２−クロロフェニル基、２−トリフルオロフェニル基、２，３−メチレンジオキシフェニル基、２−メチル−３−メトキシフェニル基、２−トリフルオロメチル−３−メトキシフェニル基、２−メチル−３−トリフルオロメトキシフェニル基、２，３−ジメチルフェニル基、２，３−ジクロロフェニル基、２，３−ジメトキシフェニル基、２，５−ジメトキシフェニル基、２，５−ジメチルフェニル基、２，５−ジクロロフェニル基、２，５−ジトリフルオロメチルフェニル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、８−メチル−１−ナフチル基、７−メチル−１−ナフチル基、６，８−ジメチル−１−ナフチル基、又は４，６，８−トリメチル−１−ナフチル基等を挙げることができる。
式（Ｉ）におけるＸは、−ＣＨ＝または窒素原子を表し、好ましくは−ＣＨ＝を挙げることができる。
式（Ｉ）で表される化合物として好ましいものは、好ましいものとして前述したそれぞれの基を組み合わせて構成される各種化合物群である。限定する意図ではないが、なかでも表１に記載されたものが好ましい。この表１中で特に好ましいものとしては、化合物番号２、６、７、９、１０、２０、２２、２４、２６、２７、３１、３３、４３、４５、５６、６０、６２、９２、１２８、１６４、１８２、１８７、１８９、２０１、２０２、２０４、２０６、２４０、又は２４２の化合物である。
なお、表１中のＡ１およびＪ１〜Ｊ３６は次式で表される基である。Ｊ１〜Ｊ３６の「−」の端で何も記載されていない部分では「−ＣＨ３」が省略されている。
式中、Ｅ、Ｇ、Ｍ、ｍ、およびＸは前記定義に同じであるが、ここでは特にＥがＣＯＯＨ、ＧがＣＨ２、ＭがＳ（ｍは０）または単結合（表中では−と表記）、Ｘが−ＣＨ＝であるものに代表させて記載してあるが、それらに限定する趣旨ではない。
0004173098.tif 000004
0004173098.tif 000005
0004173098.tif 000006
0004173098.tif 000007
0004173098.tif 000008
0004173098.tif 000009
0004173098.tif 000010
0004173098.tif 000011
0004173098.tif 000012
0004173098.tif 000013
0004173098.tif 000014
0004173098.tif 000015
本発明におけるキマーゼ阻害剤として、ＷＯ００／０５２０４号明細書記載の下記式（ＩＩ）で表されるものも挙げることができる。
0004173098.tif 000016
［式（ＩＩ）中、Ａは単結合、−ＣＯ−、−ＣＯＯ−、−ＣＯＣＯ−、−ＣＯＮＨ−または−ＳＯ２−であり、Ｒ１は置換基を有していてもよい低級アルキル、置換基を有していてもよい低級アルケニル、置換基を有していてもよい低級アルキニル、置換基を有していてもよいシクロアルキル、置換基を有していてもよいシクロアルケニルまたは置換基を有していてもよいアリールであり、Ａが単結合、−ＣＯ−、−ＣＯＣＯ−、く、Ｒ２およびＲ３は各々独立して水素、ハロゲン、置換基を有していてもよい低級アルキル、置換基を有していてもよい低級アルコキシカルボニル、置換基を有していてもよいアシル、置換基を有していてもよいアミノ、置換基を有していてもよいカルバモイル、または置換基を有していてもよいアリールであり、Ｂは単結合、−Ｓ−、−Ｏ−、−Ｓ−Ｓ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−であり、Ｒ４は水素、置換基を有していてもよい低級アルキル、置換基を有していてもよいアリールまたは置換基を有していてもよいヘテロ環であり、さらにＢが単結合、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＳＯ−または−ＳＯ２−である場合、置換基を有していてもよいアシルであってもよい。］
式（ＩＩ）で表されるキマーゼ阻害剤のうち、４−［１−｛［ビス（４−メチルフェニル）メチル］カルバモイル｝−３−（２−エトキシベンジル）−４−オキソ−アゼチジン−２−イルオイル］安息香酸は、ハムスター心筋梗塞モデルにおける単独の効果が既に報告されており（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ２００２年  ７１巻  ４３７頁）、循環器疾患においてＡＣＥ阻害剤との併用により著明な効果を期待し得るものである。
本発明におけるキマーゼ阻害剤として、下記式（ＩＩＩ）で表されるＷＯ９８／０９９４９号明細書にて開示されているキマーゼ阻害剤を挙げることもできる。
0004173098.tif 000017
［式（ＩＩＩ）中、Ｒ０はフェニル基であり、その環上には下記に定義され［式（ＩＩＩ）中、Ｒ０はフェニル基であり、その環上には下記に定義される基Ａから選択される１つまたはそれ以上の置換基を有する場合がある（基Ａ；基Ａはハロゲン、ニトロ、水酸基、低級アルコキシ基、低級アルキル基、またはハロゲノ置換低級アルキル基を示す。）。Ｒ１は（ｉ）アリール、（ｉｉ）ヘテロアリール、または（ｉｉｉ）Ｃ１〜６の直鎖、分岐鎖あるいは環状のアルキル基であり、それぞれ独立に、基Ａについて定義された置換基を１つまたはそれ以上有することがある；またはＲ１は前記（ｉ）〜（ｉｉｉ）の基上にＯＲａ、ＣＯＯＲａ、ＣＯＮＲｂＲｃ、ＮＲｂＲｃ、ＮＲｂＣＨＯ、ＮＲｂＣＯＲａ、ＳＯ２ＯＲａ、ＳＯ２Ｒａ、ＣＯＮＲｂＳＯ２Ｒａ、およびＰ（Ｏ）（ＯＲａ）２よりなる基Ｂから選択される１つまたはそれ以上の置換基を有する場合がある（この中で、Ｒａ〜Ｒｃは独立に水素、低級アルキルまたは置換低級アルキル；またはＲａ〜Ｒｃは独立にアリール（１−７Ｃ）アルキル、ヘテロアリール（１−７Ｃ）アルキル、アリールおよびヘテロアリールであり、これらの内、アリールまたはヘテロアリールの環上には前記に定義された基Ａから選択される１つまたはそれ以上、通常１ないし３個の置換基を有することがある。また置換低級アルキルは置換基としてハロゲン、ニトロ、水酸基から選ばれる原子または基を１ないし３個有する。）；あるいはＲ１は前記（ｉ）〜（ｉｉｉ）の基上に下記に定義される環状基Ｇを、置換基として一つまたはそれ以上有する場合がある（環状基Ｇ；環状基Ｇは酸素原子または窒素原子を１ないし３の範囲で含む５または６員環からなる複素環基を示し、置換基を有しても良い。）。Ｒ２は（１〜８Ｃ）アルキル、アリール（１〜７Ｃ）アルキル、ヘテロアリール（１〜７Ｃ）アルキル、アリール、；またはＲ２は前記に定義された基Ｂもしくは基Ｂを置換基として有する（１〜８Ｃ）アルキル；あるいは前記に定義された環状基Ｇを置換基として有する（１〜８Ｃ）アルキルを示す。Ｒ３は水素；またはＲ３は（ｉ）Ｄ（ＣＨ２）０−３・ＣＯ、（ｉｉ）Ｄ・ＣＯ・Ｅ・ＣＯ、あるいは（ｉｉｉ）Ｄ・ＳＯ２・Ｅ・ＣＯであるアシル基、；またはＲ３はＤ（ＣＨ２）０−３・ＳＯ２あるいはＤ・ＣＯ・Ｅ・ＳＯ２であるスルホニル基（ここで基Ｄは水素、Ｃ１〜６の直鎖、分岐鎖あるいは環状のアルキル基、アリール基、ハロゲノ低級アルキル、ハロゲノ低級アルコキシ、アミノ、低級アルコキシアミノ、ハロゲノ低級アルキルアミノ、ＲｂＲｃＮ、ＲｂＲｃＮ・Ｏ、ＲａＯ、Ｒａ、ＲａＯＣＯ、ＲｂＲｃＮＣＯ、ＲａＳＯ２ＮＲｂ、ＲａＳ、および前記に定義された環状基Ｇを示す。また基Ｅは炭素数１ないし６の２価の架橋基を示す。）；またはＲ３は基ＲｂＲｃＮＣＯで示されるウレア基；またはＲ３は、ＲｂＲｃＮ・ＣＳで示されるチオウレア；またはＲ３はＲａである。ＸおよびＹは、それぞれ独立に窒素原子または炭素原子を示し、Ｒａ〜Ｒｃで表される基で置換されていてもよい。Ｚはポリメチレン基を示し、ポリメチレン基上の水素原子は独立にＲａ、Ｒｂで置換されてもよい。］
特に、式（ＩＩＩ）で表される化合物のうち、次式（ＩＩＩ−Ｉ）で示す化合物はイヌ心筋梗塞モデルにおいて経口投与による有効性が報告されており（第７５回日本薬理学会年会報告）、心不全、心筋梗塞予後の改善などの循環器疾患において、本発明における第１有効成分であるキマーゼ阻害剤としての有用性が期待し得る。
0004173098.tif 000018
本発明のキマーゼ阻害剤として、下記式（ＩＶ）で示されるＷＯ９８／１８７９４号明細書で開示されている化合物も挙げることができる。
0004173098.tif 000019
〔式（ＩＶ）中、Ｒは水素原子、アルキル、−ＣＨＯ、−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＲ１、−ＣＯＯＲ１、−ＣＯＮＨＯＲ１、−ＣＯＮＨＲ１、−ＣＯＮＲ１Ｒ１’、−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ１、−ＣＯＳＲ１、−ＣＯＣＯＲ２、−ＣＯＣＯＯＲ２、−ＣＯＮＨＣＯＯＲ２、−ＣＯＣＯＮＲ３Ｒ４、−ＣＳＸＲ１、−ＳＯ２ＷＲ１、−ＳＯ２ＮＲ１Ｒ１’、または−ＳＯ２Ｅ（上記式中、Ｒ１、Ｒ１’は、同一または異なっていてもよく、それぞれ独立して、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロサイクルまたはヘテロサイクルアルキルを示し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４は、同一または異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキルまたはアリールアルキルを示し、また−ＮＲ３Ｒ４は一緒になってヘテロサイクルを示してもよく、Ｘは単結合、−ＮＨ−、−Ｏ−、または−Ｓ−を示し、Ｗは単結合、−ＮＨ−、−ＮＨＣＯ−、−ＮＨＣＯＯ−、または−ＮＨＣＯＮＨ−を示し、Ｅは水酸基またはアミノを示す。）を示し、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７は、同一または異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子またはアルキルを示すか、またはＲ５、Ｒ６、Ｒ７のうち１つはアリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、またはヘテロアリールアルケニルを、残りは水素原子を示し、Ｍは炭素原子または窒素原子を示し、但し、Ｍが窒素原子である場合はＲ６は存在せず、Ｙはシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールを示し、Ｚは式（ｉ）式（ｉｉ）または式（ｉｉｉ）
0004173098.tif 000020
｛式中、Ｒ８、Ｒ９は、同一または異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ハロゲン、トリフルオロメチル、シアノ、ニトロ、−ＮＲ１０Ｒ１０’、−ＮＨＳＯ２Ｒ１０、−ＯＲ１０、−ＣＯＯＲ１０、−ＣＯＮＨＳＯ２Ｒ１０または−ＣＯＮＲ１０Ｒ１０’（Ｒ１０、Ｒ１０’は、同一または異なっていてもよく、それぞれ独立して、水素原子、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、またはトリフルオロメチルを示し、また−ＮＲ１０Ｒ１０’は一緒になってヘテロサイクルを示してもよい。）を示し、Ａは−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＲ１２−（Ｒ１２は水素原子、アルキル、シクロアルキル、またはシクロアルキルアルキルを示す。）を示し、ａ、ｂ、ｃ、ｄは全て炭素原子であるか、またはいずれかひとつが窒素原子で残りが炭素原子を示す。｝で表される基を示し、ｎは０または１を示す。なお、上記基のうち、アルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、アリールアルケニル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、ヘテロアリールアルケニル、ヘテロサイクル、又はヘテロサイクルアルキルは、それぞれ置換基を有していてもよい。〕
式（ＩＶ）で表される化合物のうち、次の式（ＩＶ−Ｉ）で表される化合物は経口投与によるキマーゼ阻害活性がマウスアレルギーモデルなどで報告されており（ＷＯ００／５１６４０号明細書、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００１，４４巻、１２８６頁）、循環器疾患において、本発明におけるＡＣＥ阻害剤との併用による効果を期待し得る。
0004173098.tif 000021
現在のところ上述した以外にも、多くのキマーゼ阻害剤が報告されている。それらいずれも、本発明におけるキマーゼ阻害剤として用いることにより、心不全の治療や心筋梗塞予後の改善などの循環器疾患において有用な可能性を有する。
また、上記以外に既に提案されているキマーゼ阻害剤としては、例えば、ＷＯ０１／３２２２１４号明細書，ＷＯ０２／１８３７８号明細書，ＷＯ０１／１２２２６１号明細書，ＷＯ０１／３２６２１号明細書，ＷＯ０２／１２２５９５号明細書，特開平１１−４８７３９号公報，特開平１１−１４７９号公報、特開平１０−２５１２３９号公報、特開平８−２０８６５４号公報、特開２００１−９７９５７号公報、特開２０００−９５７７０号公報などに開示されているものがある。
本発明で用いるキマーゼ阻害剤は、ヒトキマーゼ活性を強く阻害するものである。具体的には、ＩＣ５０が１０００ｎＭ以下が好ましく、より好ましくは０．０１ｎＭ以上１０００ｎＭ未満、さらにより好ましくは０．０５ｎＭ以上５００ｎＭ未満である。このような優れたヒトキマーゼ阻害活性を有する薬剤はＡＣＥ阻害剤との併用によって、種々の循環器系疾患に対する臨床応用可能な予防剤および／または治療剤として使用することができる。
本発明においてキマーゼ阻害剤と共に使用するＡＣＥ阻害剤としては、特に限定されるものではない。ＡＣＥ阻害剤として、既に臨床応用されその使用法、安全性が確立されているものが多くある。例えば、アラセプリル、塩酸イミダプリル、塩酸キナプリル、塩酸テモカプリル、塩酸デラプリル、塩酸ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、トランドラプリル、ペリンドプリルエルブミン、マレイン酸エナラプリル、又はリシノプリルなどが挙げられる。これらいずれのＡＣＥ阻害剤も本発明において用いることができるが、特に好ましくは、カプトプリル、塩酸テモカプリル、マレイン酸エナラプリル、又はリシノプリルが挙げられる。もっとも、安全性および有効性の高いＡＣＥ阻害剤であればよく、これらの例に限られない。
実施例
本発明を以下に実施例によって具体的に説明する。しかし、本発明の範囲はこれらの実施例によっていかなる意味においても制限されない。
実施例１ 組換えヒトマストセルキマーゼの調製
組換えプロ型ヒトマストセルキマーゼは、浦田らの報告（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー第２６６巻、１７１７３頁（１９９１年））に従って調製した。すなわちヒトマストセルキマーゼをコードするｃＤＮＡを含有する組換えバキュロウイルスを感染させた昆虫細胞（Ｔｈ５）の培養液上清から、ヘパリンセファロース（ファルマシア）により精製した。さらに村上らの報告（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー第２７０巻、２２１８頁（１９９５年））に従ってヒトマストセルキマーゼを活性化した後、ヘパリンセファロースで精製して活性型ヒトマストセルキマーゼを得た。
実施例２ 組換えヒトマストセルキマーゼの酵素活性阻害測定
実施例１で得られた１〜５ｎｇの活性型ヒトマストセルキマーゼを含む５０μｌのバッファーＡ（０．５〜３．０Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  トリス塩酸、ｐＨ８．０）に本発明の化合物を含むＤＭＳＯ溶液２μｌを加えた後、基質として０．５ｍＭ  スクシニル−アラニル−ヒスチジル−プロリル−フェニルアラニルパラニトロアニリド（バッケム社）を含む５０μｌのバッファーＡを加え、室温にて５分間反応させた。４０５ｎｍの吸光度の経時変化を測定し、阻害活性を調べた。
その結果、化合物番号２４、２６、２７、３１、３３、５６、６２、１８７、２００、２０２、２０４、２０６、２４０、および２４２の化合物にＩＣ５０＝１ｎＭ以上１０ｎＭ未満、化合物番号２、６、９、１０、２０、２２、４３、４５、６０、６２、９２、１２８、１６４、１８２、および１８９の化合物にＩＣ５０＝１０ｎＭ以上１００ｎＭ以下の阻害活性を認めた。
以上のように本発明で用いるキマーゼ阻害剤のベンズイミダゾール誘導体は、強いキマーゼ阻害活性を示す。したがって、本発明で用いるキマーゼ阻害剤のベンズイミダゾール誘導体は、ヒトキマーゼが関与する各種疾患の予防および／または治療に用いられる臨床応用可能なヒトキマーゼ活性阻害物質であることが明らかとなった。
実施例３ ハムスターキマーゼを用いたキマーゼ阻害活性の測定
ハムスターキマーゼはハムスター舌組織から酸性緩衝液によって抽出した粗精製物をフェニル−セファロースカラム（溶出：０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、５０ｍＭ  リン酸ナトリウム、ｐＨ６．５、５０％エチレングリコール）およびヘパリンセルロファインカラム（溶出：０．５−２．０Ｍ  ＮａＣｌ）を用いて精製したものを用いた。Ｎ末端アミノ酸配列により、ハムスターキマーゼ−１であることを確認し、ヒトキマーゼと同様の方法によって阻害活性を測定した。ヒトキマーゼに対して阻害活性を有する化合物はいずれもハムスターキマーゼに対して阻害活性を見出した。表２に代表的な実験結果として化合物番号３３に関するハムスターキマーゼの阻害定数を示す。
0004173098.tif 000022
以上の結果から、本発明で用いられているヒトキマーゼ阻害剤は酵素選択性が高く、医薬品として極めて安全性が高い化合物であることが示された。
実施例４ 錠剤の製造
１錠が次の組成からなる錠剤を製造した。
化合物（化合物番号３３）          ５ｍｇ
塩酸テモカプリル                  １ｍｇ
乳糖                          ２３０ｍｇ
じゃがいもデンプン              ８０ｍｇ
ポリビニルピロリドン            １１ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム          ５ｍｇ
化合物番号３３の化合物、塩酸テモカプリル、乳糖、およびジャガイモデンプンを混合し、これをポリビニルピロリドンの２０％エタノール溶液で均等に湿潤させ、２０メッシュのふるいを通し、４５℃で乾燥させ、再度１５メッシュを通した。こうして得られた顆粒をステアリン酸マグネシウムと混和して錠剤に圧縮した。
実施例５ ハムスターを用いたキマーゼ阻害剤の経口投与による薬物血中濃度測定
化合物番号３３で表されるキマーゼ阻害剤を０．１％（ｗ／ｗ）の配合比になるようにＭＦ粉末飼料に混合したハムスター餌を調製し、ハムスターに５日間与えた。その後、エーテル麻酔下にて腹部大動脈より採血し、血清を採取し、血清中の化合物濃度を高速液体クロマトグラフィーにて測定した。
その結果、化合物番号３３で表されるキマーゼ阻害剤のハムスター血清中未変化体濃度は７．８９±１．０９μＭ（Ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．、Ｎ＝４）となり、阻害活性強度と比較して十分な薬物血中濃度を示すことが明らかとなった。
実施例６ ハムスターキマーゼ皮内注による血管透過性亢進モデルにおけるキマーゼ阻害剤の作用
化合物番号３３で表される化合物を０．１％（ｗ／ｗ）の配合比になるように粉末飼料に混合した餌を５日間ハムスター（Ｓｙｒｉａｎ  ｈａｍｓｔｅｒ、雄性、７週齢）に与えた。その後、エーテル麻酔下、ハムスター背面を剃毛し、その皮内にハムスターキマーゼを皮内注した（ハムスターキマーゼ；１、０．３、０．１μｇ／ｓｉｔｅ、およびＶｅｈｉｃｌｅ；０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、０．１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ、１０ｍＭ  Ｐｉ−Ｎａ、ｐＨ７．０）。予め皮内注直前にエバンスブルー（１％（ｗ／ｖ）溶液、５ｍｌ／ｋｇ）を静脈より投与しておき、キマーゼ皮内注によって生じる青色のスポットを定量した。すなわち、皮内注３０分後に腹部動脈より脱血死させ、ブルーイングスポットを指標に皮膚を採取した。採取した皮膚をガラス試験管に取りＥＢ抽出液（アセトン：０．３％  Ｎａ２ＳＯ４＝７：３）２ｍｌにて色素を抽出し、分光光度計により色素漏出量を比色定量した（６２０ｎｍ）。結果を第１図に示す。
予めキマーゼ阻害剤を投与した群ではいずれも漏出色素量の減少が認められた。また、化合物番号３３の化合物以外に、本実験系にてイミダゾリジン誘導体（ＷＯ９６／０４２４８号明細書）の代表的化合物として下記式化合物Ａ（ヒトキマーゼＩＣ５０値：９ｎＭ）、およびトリアジン誘導体（特開平８−２０８６５４号公報）の代表的化合物として下記式化合物Ｂ（ヒトキマーゼＩＣ５０値：３０ｎＭ）を用いて同様の実験を実施したが、明確な血管透過性亢進に対する抑制作用は認められなかった。
0004173098.tif 000023
本検討により、式（Ｉ）で示す化合物群は、キマーゼ阻害剤として好ましく、経口投与により生体内でキマーゼ阻害活性を有することが検証された。
実施例７ キマーゼ過剰発現マウスを用いたアンジオテンシン惹起血圧上昇モデルにおけるキマーゼ阻害剤およびＡＣＥ阻害剤の併用効果
アンジオテンシンＩＩ産生機能を有するヒトキマーゼ遺伝子を受精卵に導入して作成したヒトキマーゼ過剰発現マウス（以下ＴＧＭ）を動物モデルとして用いた。すなわち、８−１０週齢のＴＧＭを使用し、マウス皮下に埋め込まれたマイクロオスモテッィクポンプにより、アンジオテンシンＩを持続注入することにより（７００ｎｇ／ｋｇ／分）、持続的な高血圧マウスモデルを作成した。ＴＧＭ（ｎ＝６）においては、野生型（ｎ＝８）と比較して、アンジオテンシンＩ持続注入により３０ｍｍＨｇ程度の昇圧反応が確認され、同時にキマーゼ阻害剤（化合物番号３３、０．１％  ｄｉｅｔ、ｎ＝７）、ＡＣＥ阻害剤（塩酸テモカプリル２．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、ｎ＝６）、アンジオテンシン受容体拮抗剤（ＡＲＢ）（Ｖａｌｓａｒｔａｎ、１４ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、ｎ＝７）およびキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤の同時投与群（化合物３３；０．１％  ｄｉｅｔ、塩酸テモカプリル；２．０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ、ｎ＝６）における降圧作用を検討した。なお、ｎとは個体数である。その結果、キマーゼ阻害剤単独およびＡＣＥ阻害剤単独投与群ではコントロール群と比較して大幅な昇圧効果の抑制を認めず、本動物モデルがＡＣＥ阻害剤で血圧低下作用が認められにくい高血圧患者と類似のモデルであると推察した。本モデルにおいては同様にキマーゼ阻害剤単独においても昇圧効果の抑制を認められなかったが、ＡＣＥ阻害剤とキマーゼ阻害剤の併用群においては１０日目以降の血圧をほぼ正常値までもどし、統計的に有意な抑制結果を得た（Ｐ＜０．０５）。また、本動物モデルにおいては、持続的な昇圧によって同時に心肥大が起こるが、本モデルにおける心肥大は、ＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗剤（ｎ＝７）、キマーゼ阻害剤でそれぞれ単独での大幅な抑制は認められなかったが、キマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤の併用群でのみ統計的に有意な抑制が認められた。
これらの実験結果から、ＡＣＥ阻害剤およびキマーゼ阻害剤の併用によって初めて、従来の薬剤では有効性を発揮し得ない循環器疾患に有効である可能性を示した。
実施例８ ハムスター心筋梗塞（ＭＩ）モデルにおけるキマーゼ阻害剤およびＡＣＥ阻害剤との併用効果
８週齢雄シリアンハムスターを用い、ペントバルビタール麻酔下（５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）にて四肢心電図装着および気管内挿管を行い、レスピレーター管理下（ｖｏｌｕｍｅ：１０ｍｌ／ｋｇ、ＲＲ：６０／分）にて開胸し、起枝部２−３ｍｍにて、Ｌｅｆｔ  ｍａｉｎ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ（ＬＡＤ）を絹糸による完全結紮を行った。ＬＡＤ結紮後、３５日間、キマーゼ阻害剤（化合物番号３３、０．１％  ｄｉｅｔ）、ＡＣＥ阻害剤（塩酸テモカプリル、１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）、又はアンジオテンシン受容体拮抗剤（オルメサルタン、１０ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）をそれぞれ単独で投与した群と、ＡＣＥ阻害剤およびキマーゼ阻害剤を同時投与した群において、生存率および心機能の解析を行った。
その結果を第２図に示す。ＬＡＤ結紮後３０日間の生存率は、偽薬投与群が４８％であるのに対してキマーゼ阻害剤、ＡＣＥ阻害剤、又はアンジオテンシン受容体拮抗剤（ＡＲＢ）投与群においては６０−７０％以上の生存率を示し、それぞれの薬剤が単独で心筋梗塞後の予後改善に有効であることを示した。特にキマーゼ阻害剤は単独でも７１％程度の生存率を示し、既に臨床においてその効果が実証されているＡＣＥ阻害剤、アンジオテンシン受容体拮抗剤と同等以上の効果を示すことが確かめられた。更に、ＡＣＥ阻害剤とキマーゼ阻害剤の併用群においては、これらの単独の薬剤投与群と比較して統計的に有意な生存率の上昇を示した。ＬＡＤ結紮後２日目以降−３５日までの間ではＡＣＥ阻害剤およびキマーゼ阻害剤の併用投与群に死亡例が発生せず、本実験において臨床でＡＣＥ阻害剤およびキマーゼ阻害剤を併用することにより、心筋梗塞の治療に対して単剤での有効性と比較しても劇的に高い有効性を示すことが明らかとなった。
産業上の利用可能性
本発明のキマーゼ阻害剤とＡＣＥ阻害剤の併用による薬剤又は治療方法又は予防方法は、循環器系疾患治療剤又は治療法は、心疾患（心肥大、心不全、心筋梗塞など）、脳卒中、ＰＴＣＡ後の再狭窄などの血管障害、動脈硬化、腎不全、腎炎、肺高血圧症における心血管系疾患、一部の高血圧症等の循環器系疾患等に対して効果的である。
【図面の簡単な説明】
第１図は、血管透過性亢進に対するキマーゼ阻害剤の作用を示す図である。第２図は、ハムスター心筋梗塞モデルにおける薬剤効果を示す図である。
【図１】
0004173098.tif 000028
【図２】
0004173098.tif 000029