(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式で表される構造を有するスフィンゴ糖脂質。
【化１】
0004173944.tif 000027
（上式において、Ｒ1は以下の式（Ａ）で表される糖鎖であり、Ｒ2は以下の式ａ〜ｃのいずれかで表される基であり、Ｒ3は炭素数１２の直鎖アルキル基である。）
α−Ｍａｎ−（１→３）−β−ＧｌｃＮ−（１→６）−α−ＧｌｃＮ−
（１→４）−α−ＧｌｃＡ−                        （Ａ）
（上式において、Ｍａｎはマンノース、ＧｌｃＮはグルコサミン、ＧｌｃＡはグルクロン酸を示す）
【化２】
0004173944.tif 000028
【請求項２】
請求項１のスフィンゴ糖脂質を含む化粧品。
【請求項３】
請求項１のスフィンゴ糖脂質を含む保湿剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新しいスフィンゴ糖脂質およびその用途に関する。より詳細には、糖部部に特徴的な構造を有するスフィンゴ糖脂質およびその化粧品および医薬品としての用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
肌荒れは、空気が乾燥しているときや肌を洗浄する際に、皮膚表面から水分が過度に失われることによって引き起こされる。また、現代では多種多様な化学物質が社会に氾濫していることから、これらの化学物質に触れた皮膚の機能が阻害され、脂質分泌機能低下などによる肌荒れ状態を招くことも多い。このため、肌荒れを事前に防止し、優れた保湿作用を有する化合物を提供することが求められている。
【０００３】
保湿効果を有する化合物として、これまでに水溶性のポリオールを中心として様々な化合物が提供されてきた。その中には、プロピレングリコールのようにすでに実用化されているものもある。しかしながら、実用化されている保湿性化合物の中には、適用したときに不快感が伴うものや、保湿効果が不十分であるものも多く、新たな保湿性化合物の開発が依然として求められている。
【０００４】
このような状況の中で、安全な保湿性化合物としてスフィンゴ糖脂質が注目されている。
たとえば、特開平１−２４２６９０号公報、特開平２−４８５２０号公報、特開平４−１５９２０３号公報および特公平６−８０００７号公報には、スフィンゴ糖脂質に皮膚水分保湿効果があることが記載されている。また、特開平６−１５７２８３号公報には、特定の一般式で表されたスフィンゴ糖脂質を一構成成分として含有することを特徴とする保湿用皮膚外用化粧品が開示されている。しかしながら、これらの広報に記載されるスフィンゴ糖脂質の構造の詳細は明確ではなかった。
【０００５】
保湿効果を有するスフィンゴ糖脂質を具体的に特定しているものとして、特開昭６１−２８６３０７号公報がある。この公報には、ガングリオシドに皮膚保湿効果および皮膚柔軟効果があることが記載されており、ガングリオシドやその塩を含む皮膚化粧料が開示されている。ガングリオシドは、中性糖の他にアミノ糖とシアル酸を含むことを特徴とするスフィンゴ糖脂質である。
【０００６】
また、特開平５−３９４８５号公報、特開平７−１３３２１７号公報および特開平７−２８５８２７号公報には、セレブロシドを使用した皮膚外用剤が開示されている。セレブロシドは、脂肪酸、スフィンゴシン塩基および中性糖（ガラクトースまたはグルコース）各１モルからなるスフィンゴ糖脂質である。
【０００７】
さらに特開平１１−４３４３７号公報には、特定の構造を有するスフィンゴ糖脂質に保湿効果があることが記載されている。その糖鎖は、ウロン酸、グルコサミン、ガラクトース、マンノースからなる群より選択される１〜４個のヘキソース、または１個のウロン酸に限定されている。
【０００８】
このように皮膚に対する保湿効果を有するスフィンゴ糖脂質は、数種類の構造が特定されているが、さらに新しい構造を有する新規なスフィンゴ糖脂質を提供することが求められている。特に、比較的容易に製造することができて、保湿効果を始めとする種々の効果を有する新規なスフィンゴ糖脂質を提供することが求められている。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
これらの従来技術を考慮して、本発明は、新しい構造を有するスフィンゴ糖脂質を提供することを課題とした。特に、保湿効果を始めとする種々の活性を有し、かつ、比較的容易に製造することができるスフィンゴ糖脂質を提供することを課題とした。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、スフィンゴモナス属に属する特定の菌体から抽出した成分の中に新しいスフィンゴ糖脂質が含まれていることを見いだして、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、α−グルコサミンとβ−グルコサミンを含む糖鎖を有することを特徴とするスフィンゴ糖脂質を提供する。
本発明のスフィンゴ糖脂質の糖鎖はマンノース、β−グルコサミン、α−グルコサミンおよびグルクロン酸から構成され、以下の構造を有する。
α−Ｍａｎ−（１→３）−β−ＧｌｃＮ−（１→６）−α−ＧｌｃＮ−
（１→４）−α−ＧｌｃＡ−                        （Ａ）
（上式において、Ｍａｎはマンノース、ＧｌｃＮはグルコサミン、ＧｌｃＡはグルクロン酸を示す）
【００１１】
本発明のスフィンゴ糖脂質は、特に以下の式で表される構造を有する。
【化３】
0004173944.tif 000002
（上式において、Ｒ1は式（Ａ）で表される糖鎖であり、Ｒ2は以下の式ａ〜ｃのいずれかで表される基であり、Ｒ3は炭素数１２の直鎖アルキル基である。）
【化４】
0004173944.tif 000003
【００１２】
なお、本明細書において「〜」はその前後に記載される数値をそれぞれ最小値および最大値として含む範囲を意味する。
さらに本発明は、上記スフィンゴ糖脂質を含む化粧品、医薬組成物、特に保湿剤、免疫賦活剤も提供する。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下において、本発明のスフィンゴ糖脂質およびその用途について詳細に説明する。
本発明のスフィンゴ糖脂質は、その糖鎖がα−グルコサミンとβ−グルコサミンを含むことを特徴とする。
【００１８】
本発明のスフィンゴ糖脂質は、スフィンゴ糖脂質を有する菌体から抽出することによって得ることができる。スフィンゴ糖脂質は、スフィンゴモナス属に属する菌体中に含まれていることから、スフィンゴモナス属に属する菌のいずれかを用いて抽出すれば本発明のスフィンゴ糖脂質を得ることができる。特に Sphingomonas sp. ＭＫ３４６（ＩＡＭ１４８２４）から抽出すれば容易に得ることができる。
【００１９】
本発明のスフィンゴ糖脂質は、アセトンに対して不溶性であることから、抽出操作を行なう前に菌体をアセトンで洗浄しておくのが好ましい。本発明のスフィンゴ糖脂質の抽出に用いる溶媒は、メタノールなどのアルコール系溶媒またはアルコール系溶媒とクロロホルムなどの極性溶媒の混合溶媒にするのが収率の点で好ましい。ただし、スフィンゴ糖脂質溶解性の溶媒であれば、これらの以外の溶媒を用いても構わない。
【００２０】
スフィンゴ糖脂質の混合物が得られた場合は、クロマトグラフィー法などの本技術分野で周知の方法にしたがって各成分を分離することができる。充填剤、溶出液、溶出速度、圧力、温度などのクロマトグラフィーの分離条件については、適宜調節することができる。また、スフィンゴ糖脂質の混合物に含まれる特定の物質のみに選択的に反応する試薬を作用させて該物質の誘導体を調製し、その誘導体の化学的性質または物理的性質を利用して分離を行なうこともできる。具体的な方法の詳細については、下記の実施例の記載を参考にすることができる。
【００２１】
本発明のスフィンゴ糖脂質は、周知の合成法を組み合わせることによって合成することもできる。たとえば、糖とスフィンゴシン部分をあらかじめ合成するか、菌体から抽出しておき、アミド結合を形成することによって本発明のスフィンゴ糖脂質を調製することができる。ただし、一般に菌体からの抽出法に比べて、合成法を組み合わせて調製することは困難が伴うため、菌体からの抽出法を選択する方が好ましい。
【００２２】
本発明のスフィンゴ糖脂質は、さまざまな有用性を示す。例えば、保湿効果や免疫賦活活性を示す。このため、本発明のスフィンゴ糖脂質は、化粧品や医薬組成物として有用である。
本発明のスフィンゴ糖脂質を含有する化粧品や医薬組成物の形態は特に制限されない。したがって、固体、液体、ペースト、ゼリー、粉末などのいずれの状態をとるものであってもよい。このような状態を形成するために、例えばゲル化剤を用いて固化したり、液体を用いて分散状態にしたりすることができる。また、溶媒を添加して溶液にしたり、噴霧乾燥して粉末状にしたりすることもできる。
【００２３】
例えば、化粧石鹸、シャンプー、洗顔料、リンス、アイクリーム、アイシャドウ、クリーム・乳液、化粧水、香水、おしろい、化粧油、頭髪用化粧品、染毛料、練香水、パウダー、パック、ひげそり用クリーム、びげそり用ローション、日焼けオイル、日焼け止めオイル、日焼けローション、日焼け止めローション、日焼けクリーム、日焼け止めクリーム、ファンデーション、粉末香水、ほお紅、マスカラ、眉墨、爪クリーム、美爪エナメル、美爪エナメル除去液、洗毛料、浴用化粧品、口紅、リップクリーム、アイライナー、歯磨き、デオドラント剤、オーデコロン、養毛剤および育毛剤などとして使用することができる。また、軟膏剤や湿布剤などとして使用することもできる。
【００２４】
本発明の化粧品や医薬組成物には、使用目的に応じてスフィンゴ糖脂質以外のさまざまな成分をさらに添加させておくことができる。例えば、エモリエント効果改善、使用感改善、使用後のかさつき軽減、可溶性改善、乳化性改善、乳化安定性改善、油剤成分との相溶性改善、使用後のつっぱり感軽減、肌への馴染み改善、皮膚上におけるのびの改善、べたつきの軽減、肌荒れ防止、美肌効果改善、皮膚保護効果改善、角質改善、表皮角化正常化（皮膚のターンオーバー亢進による不全角化予防、表皮肥厚化予防、表皮脂質代謝異常抑制）、老人性乾皮症などの乾皮症軽減、ひび割れや落屑などの皮膚乾燥状態改善、しわ発生抑制、しわ消滅、創傷治療、色素沈着予防および改善、老化防止、ふけやかゆみの軽減、脱毛軽減、頭皮疾患予防および治療、保存性改善、柔軟性改善、弾力性改善、艶付与、メラニン色素産生抑制、日焼け防止などを目的として適当な成分を添加させることができる。
【００２５】
本発明の化粧品や医薬組成物に添加しうる成分として、例えば、油脂成分、リン脂質、ＵＶ吸収剤、ＩＲ吸収剤、乳化剤、界面活性剤、防腐剤、防黴剤、酸化防止剤、美白剤、ビタミン、アミノ酸、ホルモン、ペプチド、生理活性植物抽出物、蛍光材料、顔料、色素、香料、スクラブ剤、金属イオン封鎖剤、バインダー、増量剤、増粘剤、糖類、栄養成分、ｐＨ調節剤、キレート剤、殺菌剤、角質改善剤、角質溶解剤、抗生物質、皮膚透過促進剤、血行促進剤、消炎剤、細胞賦活剤、抗炎症剤、鎮痛剤、皮膚軟化剤、皮膚緩和剤、創傷治療剤、新陳代謝促進剤などを使用目的に応じて適宜配合することができる。また、式（Ｉ）で表されるスフィンゴ糖脂質以外の保湿成分をさらに添加することもできる。
【００２６】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができる油脂成分として、脂肪酸（例えばオレイン酸、ベヘン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、リノール酸、γ−リノレン酸、コルンビン酸、エイコサ−（ｎ−６，９，１３）−トリエン酸、アラキドン酸、α−リノレン酸、チムノドン酸、ヘキサエン酸）、エステル油（例えばペンタエリスリトール−テトラ−２−エチルヘキサノエート、イソプロピルミリステート、ブチルステアレート、ヘキシルラウレート、オクチルドデシルミリステート、ジイソプロピルアジペート、ジイソプロピルセバケート）、ロウ（例えばミツロウ、鯨ロウ、ラノリン、カルナウバロウ、キャンデリラロウ、ワセリン）、動物油および植物油（例えばミンク油、オリーブ油、ヒマシ油、カカオ脂、パーム油、タラ肝油、牛脂、バター脂、月見草油、コメヌカ油、スクワラン）、鉱物油（例えば炭化水素系オイル、流動パラフィン）、シリコーンオイル（例えばメチルフェニルシリコン、ジメチルシリコン）、高級アルコール（例えばラウリルアルコール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、セチルアルコール、２−オクチルドデカノール、２−デシルテトラデカノール）およびこれらの誘導体を例示することができる。また、有機酸として、α−ヒドロキシ酸、ヒドロキシカルボン酸、ジカルボン酸、グリチルチリン酸、グリチルレチン酸、メバロン酸（メバロノラクトン）などを使用することができる。
【００２７】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができるリン脂質として、モノアシルエステル型グリセロリン脂質やジアシルエステル型グリセロリン脂質を例示することができる。具体的には、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルセリン、リゾホスファチジルイノシトール、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴエミリンを挙げることができる。また、天然由来のレシチン（例えば卵黄）や、上記具体例の水素添加物も使用することができる。
【００２８】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができるＵＶ吸収剤として、オキシベンゾン（２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン）、オキシベンゾンスルホン酸、オキシベンゾンスルホン酸（三水塩）、グアイアズレン、サリチル酸エチレングリコール、サチチル酸オクチル、サリチル酸ジプロピレングリコール、サリチル酸フェニル、サリチル酸ホモメンチル、サリチル酸メチル、ジイソプロピルケイ皮酸メチル、シノキサート（ｐ−メトキシケイ皮酸２−エトキシエチル）、ジ−ｐ−メトキシケイ皮酸モノ−２−エチルヘキシル酸グリセリル、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシメトキシベンゾフェノンジスルホン酸ナトリウム、ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸エチル、ｐ−アミノ安息香酸グリセリル、ｐ−ジメチルアミノ安息香酸アミル、ｐ−ジメチルアミノ安息香酸２−エチルヘキシル、ｐ−ヒドロキシアニソール、ｐ−メトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、ｐ−メトキシケイ皮酸イソプロピル、ジイソプロピルケイ皮酸エステル、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシベンゾイルメタン、サリチル酸−２−エチルヘキシル、グリセリル−ｐ−ミノベンゾエート、オルトアミノ安息香酸メチル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、アミル−ｐ−ジメチルアミノベンゾエート、２−フェニルベンゾイミダゾール−５−スルフォン酸、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルフォン酸、ジカロイルトリオレエート、ｐ−メトキシケイ炭酸−２−エトキシエチル、ブチルメトキシベンゾイルメタン、グリセリル−モノ−２−エチルヘキサノイル−ジ−ｐ−メトキシベンゾフェノン、２−エチルヘキシル−２−シアノ−３，３'−ジフェニルアクリレート、２，２'−ジヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、エチル−４−ビスヒドロキシプロピルアミノベゾエートを例示することができる。
【００２９】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができる乳化剤および界面活性剤として、ノニオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤を挙げることができる。
ノニオン界面活性剤として、ソルビタンエステル（例えばソルビタンモノラウレート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタンモノイソステアレート）、ポリオキシエチレンソルビタンエステル（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノイソステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、グリセロールエーテル（例えばグリセロールモノイソステアレート、グリセロールモノミリステート）、ポリオキシエチレングリセロールエーテル（例えばポリオキシエチレングリセロールモノイソステアレート、ポリオキシエチレングリセロールモノミリステート）、ポリグリセリン脂肪酸エステル（例えばジグリセリルモノステアレート、デカグリセリルデカイソステアレート、ジグリセリルジイソステアレート）、グリセリン脂肪酸エステル（例えばグリセリルモノカプレート、グリセリルモノラウレート、グリセリルモノミリステート、グリセリルモノパルミテート、グリセリルモノオレエート、グリセリルモノステアレート、グリセリルモノリノレエート、グリセリルモノイソステアレート、グリセリルモノジリノレエート、グリセリルモノジカプレート）、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル（例えばポリオキシエチレングリセリルモノミリステート、ポリオキシエチレングリセリルモノオレエート、ポリオキシエチレングリセリルモノステアレート）、ポリオキシエチレン分岐アルキルエーテル（例えばポリオキシエチレンオクチルドデシルアルコール、ポリオキシエチレン−２−デシルテトラデシルアルコール）、ポリオキシエチレンアルキルエーテル（例えばポリオキシエチレンオレイルアルコールエーテル、ポリオキシエチレンセチルアルコールエーテル）、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油脂肪酸エステル（例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンジヒドロコレステロールエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油イソステアレート）、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル（例えばポリオキシエチレンオクチルフェノールエーテル）などを例示することができる。
【００３０】
また、陰イオン界面活性剤として、高級脂肪酸（例えばオレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、バルミチン酸、ミリスチン酸、ベヘン酸）の塩（例えばジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、アミノ酸塩、カリウム塩、ナトリウム塩）、エーテルカルボン酸アルカリ塩、Ｎ−アシルアミノ酸塩、Ｎ−アシルサルコン塩、高級アルキルスルホン酸塩を例示することができる。さらに、陽イオン界面活性剤または両性界面活性剤として、アルキル４級アンモニウム塩、ポリアミン、アルキルアミン塩などを例示することができる。
【００３１】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができる粉末剤として、タルク、カオリン、フラー土、ゴム、デンプン、シリカ、珪酸、珪酸アルミニウム水和物、化学修飾珪酸アルミニウムマグネシウム、ポリアクリル酸ナトリウム、テトラアルキルアリールアンモニウムスヌクタイト、トリアルキルアリールアンモニウムスヌクタイト、モノステアリン酸エチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシビニルポリマー、チョーク、ガム質、エチレングリコールモノステアレート、エチレングリコールジステアレートを例示することができる。
【００３２】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができるポリオールとして、グリセリン、ジグリセリン、トリグリセリン、テトラグリセリンなどのポリグリセリン、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、エリスリトール、マルトトリオース、スレイトール、ショ糖、グルコース、マルトース、マルチトース、フルクトース、キシリトースを例示することができる。
【００３３】
本発明の化粧品や医薬組成物に使用することができるその他の材料として、ビタミン（例えばビタミンＡ、ビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12、ビタミンＣ、ビタミンＤ、ビタミンＥ、ビタミンＫ）、アミノ酸（例えばプロリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン、スレオニン、リジン、システイン、アルギニン）、ホルモン（例えば卵胞ホルモン、プレグネノロン、副腎皮質ホルモン）、ペプチド類（例えばケラチン、コラーゲン、エラスチン）、糖類（例えばポリオールの項で例示したもの）、無機塩（例えば塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、ホウ砂、硫酸ナトリウム、硫化ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、酸化マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、塩化カリウム、硫化カリウム）、乳酸菌培養物、ステロール類（例えばコレステロール、プロビタミンＤ3、カンペステロール、スチグマスタノール、スチグマステロール、５−ジヒドロコレステロール、α−スピナステロール、コレステロール脂肪酸エステル）、スフィンゴシン類（例えばスフィンゴシン、ジヒドロスフィンゴシン、フィトスフィンゴシン、デヒドロスフィンゴシン、デヒドロフィトスフィンゴシン、スフィンガジエニン）、セラミド、プソイドセラミド、サポニン、キチン誘導体、オリゴ糖（例えばマルトース、キシロビオース、イソマントース、ラクトース、スクロース、ラフィノース、マルトトリオース、キシロトリオース、マルトテトラオース、キシロテトラオース、マルトペンタオース、キシロペンタオース、マルトヘキサオース、キシロヘキサオース、マルトヘプタオース、キシロヘプタオース）、酸性ムコ多糖（ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸）、酵母エキスを例示することができる。
【００３４】
さらに、本発明の化粧品や医薬組成物には、増粘剤（例えばカルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、アルギン酸塩、アルギン酸プロピレングリコールエステル、ゼラチン、塩化ナトリウム等の電解質）、美白剤（例えばアルブチン、アラントイン、ビタミンＥ誘導体、グリチルリチン、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩、コージ酸、パンテリン酸誘導体、プラセンタエキス、ヨクイニン、緑茶、葛根、桑白皮、甘草、オウゴン、アロエ、橙皮、カミツレ、霊芝）、皮膚保護剤（例えばレチノール、レチノールエステル、レチノイン酸）、皮膚軟化剤（例えばステアリルアルコール、グリセリルモノリシノレアート、ミンク油、セチルアルコール、ステアリン酸、ヤシ油、ヒマシ油、オイソステアリン酸）、皮膚緩和剤（例えばステアリルアルコール、モノリシノール酸グリセリン、モノステアリン酸グリセリン、セチルアルコール）、皮膚透過促進剤（例えば２−メチルプロパン−２−オール、２−プロパノール、エチル−２−ヒドロキシプロパノアート、２，５−ヘキサンジオール、アセトン、テトラヒドロフラン）、生理活性植物抽出物（例えばアロエ、アルニカ、カンゾウ、セージ、センブリなどの抽出物）、保存剤（例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウム、尿素、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン）、抗炎症剤（例えばサリチル酸）、殺菌剤（例えばトリクロサン）、酸化防止剤（例えばα−トコフェロール、ブチルヒドロキシトルエン）、緩衝剤（例えばトリエタノールアミンまたは水酸化ナトリウムと乳酸の組み合わせ）、角質溶解剤（例えば乳酸、グリコール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸）、スクラブ剤（例えばポリエチレン粉末）、顔料（例えばカルシウム、バリウム及びアルミニウムのレーキ、酸化鉄、二酸化チタン、雲母）などを使用することができる。
【００３５】
これら以外の材料についても、用途に応じて本発明の化粧品や医薬組成物に添加することができる。各成分の添加量や添加方法については、本技術分野に周知の方法に従うことができる。
また、本発明の化粧品や医薬組成物の使用量は、所期の効果を十分に奏する範囲内で適宜決定する。
【００３６】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。以下の実施例に示す材料、使用量、割合、処理内容、処理手順等は、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す具体例に限定されるものではない。
【００３７】
（実施例１）
１）粗抽出物の調製
Sphingomonas sp. ＭＫ３４６の乾燥菌体を２００ｍｌ金属遠心チューブにとり（３．０ｇ×６本）、クロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）を遠心チューブ当たり１００ｍｌずつ加え、１分間ホモジェナイズした。高速遠心機で１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心し、上清を除き、その残渣について同様の抽出操作を行った。次に残渣を風乾し、クロロホルム／メタノール（１：３，ｖ／ｖ）２００ｍｌを加え、１時間、８０℃で還流し抽出した。高速遠心機で１０，０００ｒｐｍ、４℃で２０分間遠心し、上清を除き、残渣に同様の抽出操作を行った。この２回の抽出の上清を合わせて濃縮し、粗抽出物とした。
【００３８】
２）カラムクロマトグラフィーによるスフィンゴ糖脂質の精製
粗抽出物をクロロホルム／メタノール（１：３，ｖ／ｖ）２０ｍｌに懸濁させ、これを４回に分けて（５ｍｌずつ）をカラムクロマトグラフィーにより精製した。カラムにクロロホルムに懸濁したシリカゲル（Ｍｅｒｃｋ，７０〜２３０ｍｅｓｈ）を充填（２×１２ｃｍ）し、粗抽出物を５ｍｌ導入した。続いてクロロホルム／メタノール（４：１，ｖ／ｖ）５０ｍｌ、クロロホルム／メタノール（２：１，ｖ／ｖ）５０ｍｌ、クロロホルム／メタノール（１：１，ｖ／ｖ）１００ｍｌ、クロロホルム／メタノール（１：３，ｖ／ｖ）１００ｍｌで順次溶出した。次に薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）により溶出された脂質を調べた。ＴＬＣプレート（Ｍｅｒｃｋ製、ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４）５×７．５ｃｍを用いクロロホルム／メタノール／酢酸／水２５：１５：４：２で展開後、１０％硫酸／エタノールを噴霧し加熱することで検出した。その結果より、目的とするオリゴ糖型のスフィンゴ糖脂質が溶出された画分を集め減圧乾固した。これに０．１ＮのＮａＯＨ１０ｍｌを加え湯浴にて８０℃、２時間で弱アルカリ処理した。続いて１ＮのＨＣｌで中和し、外液に水を用い透析（３時間×３回）した後に凍結乾燥した。凍結乾燥したスフィンゴ糖脂質を上記の条件でカラムクロマトグラフィーを行い、得られたスフィンゴ糖脂質の画分を減圧乾固した。そのサンプルをエタノール０．５ｍｌ、水２ｍｌに懸濁して透析チューブに移し、外液にトリエチルアミンを加え（０．００５％、ｐＨ８〜９）透析（３時間×３回）した。これを凍結乾燥し、精製スフィンゴ糖脂質とした。
【００３９】
３）脂肪酸の定量
精製スフィンゴ糖脂質（０．５ｍｇ）を４ＮのＨＣｌ（５００μｌ）中で、１００℃、５時間加水分解し脂肪酸を抽出した後、５％ＨＣｌ／メタノールによりメチルエステル化し、ガスクロマトグラフィー（ＧＬＣ）により分析した。ＧＬＣのカラムにはＣＢＰ１キャピラリーカラム（２５ｍ Ｓｈｉｍａｄｚ）を用いた。
【００４０】
４）中性糖の分析
精製スフィンゴ糖脂質（０．５ｍｇ）を０．１Ｎ塩酸５００μｌ中で、１００℃、４８時間加水分解し、ＮａＢＨ4により還元して得られる糖アルコールをアセチル化し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。ＧＬＣのカラムにはＣＢＰ１を用いた。
【００４１】
５）グルコサミンの分析
精製スフィンゴ糖脂質（０．５ｍｇ）を、４ＮのＨＣｌ０．５ｍｌ中で、１００℃、１６時間加水分解した。得られたアミノ糖を中性糖と同様の誘導体として、ガスクロマトグラフィーにより分析した。ＧＬＣのカラムにはＣＢＰ１を用いた。
【００４２】
６）スフィンゴシンの組成比の分析
精製スフィンゴ糖脂質４ｍｇを水１ｍｌに懸濁し、０．０２５ＭのＮａＩＯ4５ｍｌを加え、撹押下に４℃、５日間反応させて糖部分を酸化した。酸化物から試薬を除き、凍結乾燥したものについて、１ＮのＨＣｌ／メタノール１ｍｌ中で１００℃、５時間メタノリシスし、続いてアセチル化してガスクロマトグラフィーにより分析した。ＧＬＣのカラムにはＣＢＰ１を用いた。
【００４３】
７）スフィンゴ糖脂質のメチル化分析
スフィンゴ糖脂質（２ｍｇ）を箱守法により完全メチル化した。
メチル化スフィンゴ糖脂質を２Ｎあるいは１Ｎのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）１ｍｌ中で１２０℃で２時間加水分解した。反応後、ＮａＢＨ4で還元して、得られた部分メチル化糖アルコールをアセチル化し、ガスクロマトグラフィー分析、およびガスクロマトグラフィー／マススペクトロメトリー（ＧＣ−ＭＳ）分析を行った。
【００４４】
８）成分分析の結果
精製スフィンゴ糖脂質を構成する脂肪酸、中性糖およびグルコサミンについて定量した結果、２−ヒドロキシミリスチン酸、マンノース、グルコサミンをモル比１：１．１：２．１で同定することができた。また、スフィンゴシンの分析の結果、２−アミノ−１，３−オクタデカンジオール、２−アミノ−１３，１４−メチレン−１，３−エイコサンジオール、及び２−アミノ−１３−エイコセン−１，３−ジオールの存在を１．９：１．０：０．１の比で確認できた（比は各ピークの面積比である）。
【００４５】
９）メチル化分析の結果
精製スフィンゴ糖脂質（２ｍｇ）をＮ−アセチル化し、続いて直接メチル化した後、４０ｍｇＮａＢＨ4／メタノール，水１：１混液１ｍｌで一晩還元し、ウロン酸のカルボキシル基の還元を行った。続いて上記７）に記述した手順に従って加水分解、還元、アセチル化を行い、ＧＣ−ＭＳ分析（ＥＩ−ＭＳおよびＣＩ−ＭＳ）を行った。次にサンプルと市販の糖試薬から調製したスタンダードのＧＬＣによるリテンションタイムを比較した。その結果、１，５−ジ−Ｏ−アセチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチルマンニトール、１，４，５，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２，３−ジ−Ｏ−メチルグルシトール、１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−３，４−ジ−Ｏ−メチル−２−（Ｎ−メチルアセタミド）−グルシトール、１，３，５−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−４，６−ジ−Ｏ−メチル−２−（Ｎ−メチルアセタミド）グルシトール誘導体を同定できた。
【００４６】
１０）部分分解物の分析結果
精製スフィンゴ糖脂質（１ｍｇ）を４ＮのＨＣｌにより１００℃で５時間加水分解し、加水分解物中の二糖についてＮ−アセチル化とＮａＢＨ4による還元を行った後、メチル化してＧＣ−ＭＳ分析を行った。その結果、分子量５２６と５５３の２つの二糖誘導体が検出された。そのうちの一つは、ＥＩ−ＭＳスペクトルから完全メチル化α−ＧｌｃＮＡｃ−（１→４）−ＧｌｃＡ−ｏｌと同定された。他の誘導体もＥＩ−ＭＳスペクトルから、完全メチル化β−ＧＩｃＮＡｃ−（１→６）−ＧｌｃＮＡｃ−ｏｌと同定された。
【００４７】
１１）1Ｈ−および13Ｃ−ＮＭＲによる解析
精製スフィンゴ糖脂質の1Ｈ−ＮＭＲ分析の結果を、図１に示す（ＣＤＣｌ3／ＣＤ3ＯＤ（１：２，ｖ／ｖ）、４００ＭＨｚ、４５℃）。５．０ｐｐｍ〜５．７ｐｐｍのアノマープロトン（Ｈ−１）領域に４本の同等のシグナルが見られ、糖鎖部分が四糖構造であることが推定された。これまでの他のスフィンゴ糖脂質に関するデータから各々のＨ−１シグナルの帰属を推定し化学シフト値と結合定数を求めた（表１）。さらに、13Ｃ，1Ｈ−ＣＯＳＹスペクトルからＣ−１シグナルの帰属を推定し、マンノースとグルクロン酸のＣ−１の化学シフト値と結合定数を求めた（表２）。この結果より、α−マンノース、α−グルコサミン、β−グルコサミン、α−グルクロン酸を同定した。
【００４８】
【表１】
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【表２】
0004173944.tif 000005
【００４９】
以上より、精製スフィンゴ糖脂質は、式（Ｉ）で表される構造を有しており、Ｒ1が式（Ａ）で表される糖鎖であり、Ｒ2が構造ａ〜ｃを有する基であり、Ｒ3が炭素数１２の直鎖アルキル基であることが確認された。
【００５０】
以下の実施例２〜２１では、式（Ｉ）で表されるスフィンゴ糖脂質の活性成分として、表３に記載される各成分を用いた。活性成分に含まれるスフィンゴ糖脂質のＲ1はすべて式（Ａ）で表される糖鎖であり、Ｒ3はすべて炭素数１２の直鎖アルキル基である。
【表３】
0004173944.tif 000006
【００５１】
（実施例２）化粧用乳液の製造
７５℃で各成分を混合して調製した第１液を、７５℃で各成分を混合して調製した第２液に添加して、７５℃で十分に乳化することによって化粧用乳液を製造した。
【００５２】
【表４】
0004173944.tif 000007
【００５３】
（実施例３）化粧用美容液の製造
以下の表に記載される各成分を室温にて混合し、十分に攪拌することによって化粧用美容液を製造した。
【００５４】
【表５】
0004173944.tif 000008
【００５５】
（実施例４）パウダーファンデーションの製造
以下の表に記載される各成分を室温にて混合し、十分に攪拌することによってパウダーファンデーションを製造した。
【００５６】
【表６】
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【００５７】
（実施例５）美白パウダーの製造
以下の表に記載される各成分を室温で混合粉砕することによって美白パウダーを製造した。
【００５８】
【表７】
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【００５９】
（実施例６）エモリエントクリームの製造
以下の表に記載される１，３−ブチレングリコールと精製水を混合し７０℃に加熱した後、残余の成分の加熱溶解混合物を加え、ホモミキサーで乳化粒子を均一化し冷却することによりエモリエントクリームを製造した。
【００６０】
【表８】
0004173944.tif 000011
【００６１】
（実施例７）プレシェーブローションの製造
以下の表に記載される各成分を室温にて混合し、十分に攪拌することによってプレシェーブローションを製造した。
【００６２】
【表９】
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【００６３】
（実施例８）クレンジングフォームの製造
以下の表に記載されるステアリン酸、パルミチン酸、ミリスチン酸、ラウリン酸、ヤシ油および防腐剤を加熱溶解して７０℃に保ち、水酸化カリウムと精製水の混合物を攪拌しつつ添加した後、残余の成分を添加し十分に攪拌した後に脱気し冷却することによってクレンジングフォームを製造した。
【００６４】
【表１０】
0004173944.tif 000013
【００６５】
（実施例９）パックの製造
以下の表に記載される酸化チタンおよびタルクを精製水に十分に分散した後、ソルビトールを添加し７０℃に加温溶解し、残余の成分の混合物を添加し十分攪拌した後、脱気、冷却することによりペースト状パックを製造した。
【００６６】
【表１１】
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【００６７】
（実施例１０）口紅の製造
以下の表に記載される各成分を７０℃に加熱後混合し、十分に攪拌し型入れして急冷することによって口紅を製造した。
【００６８】
【表１２】
0004173944.tif 000015
【００６９】
（実施例１１）リップクリームの製造
以下の表に記載される活性成分、ステアリン酸、ステアリルアルコール、ステアリン酸ブチルを７０℃で加温後混合し、残余の成分の混合物を添加し、十分に攪拌することによってリップクリームを製造した。
【００７０】
【表１３】
0004173944.tif 000016
【００７１】
（実施例１２）頬紅の製造
以下の表に記載される香料と流動パラフィン以外の各成分を室温で混合し、その後、香料と流動パラフィンを噴霧して粉砕し、圧縮成形することによって頬紅をを製造した。
【００７２】
【表１４】
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【００７３】
（実施例１３）アイライナーの製造
以下の表に記載されるカーボンブラックを粉砕後精製水に分散し、残余の成分を室温にて混合することによってアイライナーを製造した。
【００７４】
【表１５】
0004173944.tif 000018
【００７５】
（実施例１４）マスカラの製造
以下の表に記載される酸化鉄、精製水およびポリアクリル酸エステルエマルジョンを７０℃で混合し、残余の成分を７０℃で加熱溶解した混合物を添加して乳化分散することによってマスカラを製造した。
【００７６】
【表１６】
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【００７７】
（実施例１５）眉墨の製造
以下の表に記載される粉末以外の各成分を融解混合し、これに粉末成分を添加して練り合わせて成形することによって眉墨を製造した。
【００７８】
【表１７】
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【００７９】
（実施例１６）ハンドクリームの製造
以下の表に記載される各成分を７０℃で加熱混合し、十分に攪拌することによってハンドクリームを製造した。
【００８０】
【表１８】
0004173944.tif 000021
【００８１】
（実施例１７）毛髪用シャンプーの製造
以下の表に記載される各成分を７０℃で加熱混合し、十分に攪拌することによって毛髪用シャンプーを製造した。
【００８２】
【表１９】
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【００８３】
（実施例１８）毛髪用リンスの製造
以下の表に記載される各成分を７０℃に加熱し混合し、十分に攪拌することによって毛髪用リンスを製造した。
【００８４】
【表２０】
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【００８５】
（実施例１９）ヘアリキッドの製造
以下の表に記載される各成分を室温で混合することによってヘアリキッドを製造した。
【００８６】
【表２１】
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【００８７】
（実施例２０）染毛剤の製造
以下の表に記載される各成分を室温で混合することによって染毛剤を製造した。
【００８８】
【表２２】
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【００８９】
（実施例２１）浴剤の製造
以下の表に記載される各成分を室温にて混合し、十分に攪拌することによって浴剤を製造した。
【００９０】
【表２３】
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【００９１】
【発明の効果】
本発明によれば、α−グルコサミンとβ−グルコサミンを含む糖鎖を有することを特徴とする新しいスフィンゴ糖脂質が提供される。本発明のスフィンゴ糖脂質は、容易かつ安価に製造することが可能であり、保湿効果および免疫賦活活性を示す点で有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例１で得られた精製スフィンゴ糖脂質の1Ｈ  ＮＭＲスペクトルである。
【図１】
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