(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
日本酒又はみりんの製造時に生ずる酒粕を、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールおよびその混合物またはそれらと水との混合物から選択されるアルコール系溶媒で抽出することを特徴とする、αーアミラーゼ阻害剤。
【請求項２】
無水アルコール又は含水率５０％までのアルコール系溶媒により抽出することを特徴とする、請求項１に記載のα―アミラーゼ阻害剤。
【請求項３】
請求項１〜２の何れかに記載のαーアミラーゼ阻害剤を添加したダイエット食品。
【請求項４】
日本酒又はみりんの製造時に生ずる酒粕を、アルコールおよびその混合物またはそれらと水との混合物から選択されるアルコール系溶媒で抽出することを特徴とする、αーアミラーゼ阻害剤の製造方法。
【請求項５】
メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールおよびその混合物またはそれらと水との混合物から選択されるアルコール系溶媒で抽出することを特徴とする、請求項４に記載のαーアミラーゼ阻害剤の製造方法。
【請求項６】
無水アルコール又は含水率５０％までのアルコール系溶媒により抽出することを特徴とする、請求項４又は５に記載のα―アミラーゼ阻害剤の製造方法。
【請求項７】
酒粕を１００％エタノールに浸漬し、ときどき攪拌しながら室温にて放置して抽出し、その濾液を減圧下濃縮することを特徴とする、請求項４〜６の何れかに記載のαーアミラーゼ阻害剤の製造方法。
【請求項８】
酒粕に１００％エタノールを加え、ミキサーにてよく粉砕し、その後室温にてときどき攪拌しながら放置して抽出し、その濾液を減圧下濃縮することを特徴とする、請求項４〜６の何れかに記載のαーアミラーゼ阻害剤の製造方法。
【請求項９】
酒粕を９０％エタノールと共に加熱還流して抽出を行い、その濾液を減圧下濃縮することを特徴とする、請求項４〜６の何れかに記載のα―アミラーゼ阻害剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、化粧品用ならびにダイエット食品用素材として有用な、酒粕由来の酵素阻害剤に関し、さらに詳しくはチロシナーゼインヒビターならびにα−アミラーゼインヒビターを含有する組成物に関する。
【０００２】
【従来技術と発明が解決すべき課題】
メラニンは、メラノサイト中のチロシナーゼによりＬ−チロシンが酸化され、幾つかの中間体を経て形成される褐色ないし黒色の色素である。美容上の観点のみならず、増加傾向にある皮膚がんの防止等の医学的な見地からも、メラニン形成の抑制が必要な場合があり、有効なメラニン形成阻害剤の開発が求められている。
また、肥満は、成人のみならず、若年層にもその弊害が多く認められており、安全かつ有効な抗肥満治療のための有効成分の開発が求められている。
【０００３】
メラニン形成や肥満の防止は、それらに至る生体内の反応に関与する酵素の活性を阻害する物質を用いることにより、達成し得る。即ち、メラニンは、Ｌ−チロシンのチロシナーゼによる酸化を含む酵素反応で生成され、他方、肥満は、例えば、澱粉のα−アミラーゼによる消化を発端としている。従って、これらの酵素の活性を阻害するチロシナーゼインヒビターおよびα−アミラーゼインヒビターを用いることにより、上記の目的が達成できると考えられる。具体的には、前者の例として、コウジ酸やアルブチンなどの物質が化粧品添加物として使用されており（機能性化粧品、２１３頁〜２２３頁、日本化粧品科学研究会編、シーエムシー出版社）、後者の例として、小麦からの抽出物が抗肥満用ダイエット食品として示されている（白石、化学と生物、２７巻、４９１頁、１９８９年）。しかしながら、多くの需要に応えるためには、より有効かつ安全な酵素阻害剤を大量に供給することが必要である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、有効かつ安全なチロシナーゼインヒビターおよびα−アミラーゼインヒビターを得ることを目的として鋭意研究を重ねた結果、日本酒やみりんの製造時に生ずる酒粕（以下、酒粕と称する）の抽出物にこれらの酵素阻害物質が多量に含有されていることを見い出し、本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は、日本酒およびみりんの製造時に生ずる酒粕から抽出して得られる酵素阻害剤を提供するものである。
【０００５】
本発明の酵素阻害剤は、酒粕を原料として、通常の方法で抽出することによっても得ることができるが、下記の本発明方法により抽出することが好ましい。従来、酒粕は、各種のアミノ酸や無機成分等を豊富に含有する優れた食品であることは知られていたが、チロシナーゼインヒビターならびにα−アミラーゼインヒビターを含有することは、本発明以前には知られていなかった。酒粕の年間生産量は約１０万トン（例、平成４年７月から平成５年６月の１年間に９７、３５０トン）にものぼるが、漬け物や粕汁などに利用されるのは僅か約５０％にすぎず、残りは廃棄されていた。酒粕の用途開発は、廃棄処理に伴う経費や公害問題を解決するばかりか、貴重な資源の有効利用という点で極めて重大な意義がある。従って、本発明は、酒粕の有効利用を可能にするものでもある。
【０００６】
本発明の酒粕由来の酵素阻害剤を得るには、清酒もしくはみりん由来の酒粕を適当な溶媒で抽出する。酒粕の圧搾程度は任意であり、本発明を制限しない。抽出効率を良くするためミキサーなどを用いて材料を粉砕しても良い。
抽出溶剤としては、アルコール系溶媒が好ましく、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコールなどのアルコール類、これらの混合物あるいは、これらアルコール系溶媒と水との混合物が挙げられるが、抽出効率や人体への安全性を考慮してエタノールが良い。
【０００７】
アルコール類は、無水アルコールから、含水率約５０％まで、好ましくは０〜約２０％までの含水率のものを用いる。例えば、乾燥した酒粕製品を用いる場合、５０〜８０％程度のアルコールで抽出することが好ましく、圧搾程度が比較的弱い酒粕の場合、アルコールとともに水分がかなり含まれているので、無水アルコールで抽出するとよい。
材料に対する抽出溶剤の割合は材料の重量１００に対して重量比でその３〜１０倍程度である。抽出温度、時間には特に制限はないが、室温ないし溶媒であるアルコール類の沸騰温度の範囲である。室温の場合数時間から１〜３０日程度、沸騰温度の場合は１時間程度で行う。
【０００８】
抽出した溶液を通常の方法で処理し、濃縮する。例えば、抽出した溶液を、ガーゼなどで荒く濾過したのち、濾紙、ガラスフィルターなどを使用して濾過し、減圧にて溶媒を留去すれば、白色の固形分を含む黄色もしくは黄褐色のシラップが得られる。必要に応じて、これを加熱（例えば１００℃、１時間）して残存するα−アミラーゼを失活させ透析（例えばセロファン膜を使用して流水中にて実施：本処理によりぶどう糖、ミネラル類など低分子物質が除かれる）し、のち減圧にて濃縮後、凍結乾燥すれば酵素阻害剤を含む黄白色の粉末が得られる。よく圧搾された酒粕１ｋｇから、通常、２０〜５０ｇ程度の本粉末が得られる。本粉末はさらにクロマトグラフイーなどの手段で精製することもできる。
ここに得られた粉末は、後述するように、α−アミラーゼインヒビター活性およびチロシナーゼインヒビター活性を有するので、ダイエット食品や日焼け防止クリームの有効成分として用いることができる。即ち、食品たとえば菓子類に添加すればダイエット食品が得られ、皮膚適用のための軟膏、クリーム、乳液、ローションなどに添加すれば日焼け防止のための化粧品が得られる。
【０００９】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を説明するが、これらは本発明を制限するものではない。
実施例１  酒粕１ｋｇ（水分４７．３重量％）を１００％エタノール１０００ｍｌに浸漬し、ときどき撹拌しながら室温にて１昼夜放置して抽出を行う。次にガーゼで濾過後、その濾液を少量のセライトを敷いたエナグラスにて減圧濾過を行う。得られた濾液を減圧下、５０〜６０℃で濃縮して白色の固形分を含む黄色シラップを得る。このままでも使用可能であるが、便宜上、これを凍結乾燥し、黄白色の粉末５０ｇが得られた。
【００１０】
実施例２
酒粕２０ｋｇ（水分４７．３重量％）を１００％エタノール３０ｌに浸漬し、３８℃、４日間時々攪拌しながら抽出を行う。次に濾布で濾過後、その濾液を少量のセライトを敷いたエナグラスにて減圧濾過を行う。得られた濾液を減圧濃縮すると油分が分離してくる。これを分液ロートで分離除去後、１００℃、１時間加熱処理後濃縮を続けシラップ状にする。ここに得られた残渣を水１．５ｌに溶解し、透析膜に入れ２日間流水透析を行う（温度１０〜１５℃）。透析内液を減圧濃縮後凍結乾燥すれば黄白色の粉末２５ｇが得られた。
【００１１】
実施例３
みりん由来の酒粕（水分４６．４％）１ｋｇに１００％メタノール１０Ｌを加え，ミキサーにてよく粉砕する。粉砕後、室温にてときどき撹拌しつつ２日間放置して抽出を行い、以下実施例１と同様に処理すれば黄白色の粉末１５ｇが得られた。
【００１２】
実施例４
酒粕１ｋｇ（水分１２．５重量％）を９０％エタノール１０００ｍｌと共に１時間、加熱還流して抽出を行う。以下、実施例１と同様に処理すれば、黄白色の粉末７５ｇが得られた。
【００１３】
実施例５
酒粕（水分４７．３重量％）１ｋｇを１００％イソプロピルアルコール５００ｍｌに浸漬し、ときどき撹拌しながら室温にて１昼夜放置して抽出を行う。以下、実施例１と同様に処理すれば、黄白色の粉末４５ｇが得られた。
【００１４】
実施例で得た酒粕抽出物のαーアミラーゼインヒビター活性を試験した。
【００１６】
試験例２  酒粕抽出物のα−アミラーゼインヒビター活性
９本の試験管に水１ｍｌずつを入れ、この最初の試験管に１ｍｌのα−アミラーゼ（０．５％水溶液、細菌由来、和光純薬）を加えてよく混合し。そのうち１ｍｌを２番目の試験管に入れ混合し、その１ｍｌをさらに３番目の試験管に加え混合する。この操作を順次繰り返し、９本目の試験管までの希釈系列を作る。９本目の液の１ｍｌは捨てる。水を加えずアミラーゼ溶液１ｍｌのみの試験管も用意して０本目とする。以上を氷水中に冷却しておく。次に各試験管に１％可溶性澱粉液５ｍｌずつを加え、全部加え終わった後一斉に４０℃の恒温槽に置き、１時間酵素反応を行う。次に試験管を氷水中に入れて冷却する。冷却後、試験管の高さの８０％程度まで水を加え、この上に０．１Ｎヨード液１滴を加えてヨード澱粉反応による呈色（青紫色〜赤色）を見る。実施例で得られた粉末１％溶液１ｍｌ＋水９ｍｌの溶液を上記水１ｍｌの代わりに各試験管に入れ、同様に酵素反応を行い、ヨード澱粉反応による呈色を見る。結果を表２に示す。
【００１７】
【表２】
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0004135164.tif 000003
表２から明らかなように、本発明の酒粕抽出物は優れたα−アミラーゼインヒビター活性を有する。
【００１８】
試験例３
実施例２で得られた粉末を次の酵素反応にて阻害効果を調べた。
阻害条件：
０．０５％α−アミラーゼ・・・・・・１ｍｌ
（Ｔｙｐｅ    −  Ｂ：Ｐｏｒｃｉｎｅ  ｐａｎｃｒｅａ，Ｓｉｇｍａ）
０．０１％  検体溶液・・・・・・・・１ｍｌ（対照の場合は水）
精製水・・・・・・・・・・３ｍｌ
３７℃、１０分
酵素反応：
１％馬鈴薯でんぷん溶液・・・・３ｍｌ
上記阻害反応溶液・・・・・２ｍｌ
３７℃、１５分反応
生成ぶどう糖の測定
酵素反応液を一定量とり、ｓｏｍｏｇｙｉ法にて生成ぶどう糖量を求め、次の式で阻害率を求めた。
阻害率（％）＝１００−［阻害剤添加時のぶどう糖量／対照ぶどう糖量］×１００
実施例２で得られた検体粉末の阻害活性を本法で測定した結果
対照液の生成ぶどう糖量は２．４４ｍｇ
検体の生成ぶどう糖量は０．０２ｍｇ
阻害率は９９．２％であった。
【００１９】
実施例６
美白クリームの調製
実施例１で得られた粉末１ｇをとり、次の処方で美白クリームを調製した。
本発明にかかわる酒粕抽出物粉末              １．０ｇ
ステアリルアルコール                        ６．０ｍｌ
ステアリン酸                                １．０
水添ラノリン                                ５．０
オクチルドデシルアルコール                １０．０
ポリオキシエチレン（２０モル）モノセチル
アルコールエーテル                          ４．０
グリセリンモノステアリン酸エステル          ２．０
プロピレングリコール                        ５．０
精製水                                    ６６．０
香料                                        適量
防腐剤                                      適量
上記成分を良く混合し、適当な容器に充填する。
【００２０】
実施例７
ダイエット用クッキーの調製
ショートニング３００ｇ，牛乳２０ｇ，砂糖５０ｇ，アスパラテーム５ｇを泡立て器でよく混合する。これに卵６０ｇを少しずつ加えてさらによく混ぜ合わせる。  別に小麦粉３００ｇ，ベーキングパウダ１ｇおよび実施例１で得られた粉末５０ｇ相当分をよく練り合わせる。これを先の混ぜ合わせたものとよく混合したのち、冷蔵庫で３０分放置する。
次にこれを適当な型に成型し、約１７０℃で２０分間焼成して、目的のクッキーを約７００ｇ得る。
【００２１】
【発明の効果】
本発明の酒粕抽出物は優れたαーアミラーゼインヒビター活性を有し、ダイエット食品などの有効成分として有用である。また、多量の余剰酒粕の有効利用を可能にし、酒粕の廃棄に伴う公害、余分な経費負担を軽減することに大きく貢献することができる。