(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
液体中に難溶性の亜鉛徐放性亜鉛含有リン酸カルシウムからなる微粒子を含有する懸濁液からなり、前記亜鉛含有リン酸カルシウムが、亜鉛含有水酸アパタイト、亜鉛含有低結晶性アパタイト、亜鉛含有αリン酸三カルシウム、亜鉛含有βリン酸三カルシウム、亜鉛含有リン酸水素カルシウム、亜鉛含有非晶質リン酸カルシウム、ＣａＺｎ２（ＰＯ４）２・ｎＨ２Ｏ（ｎは０以上２以下）のなかから選ばれた１種または２種以上の化合物であって、且つ、亜鉛含有リン酸カルシウム中の亜鉛含有量が６５重量ｐｐｍ〜１３重量％であることを特徴とする亜鉛欠乏症治療用注射薬。
【請求項２】
ビタミンＤ、α−カルシドール、エストロゲン製剤、カルシトニン、ビスフォスフォネート、カルシウム製剤の中から選ばれた造骨化合物が更に添加されていることを特徴とする請求項１に記載の亜鉛欠乏症治療用注射薬。
【請求項３】
前記液体が、生理食塩水、食塩濃度２．５重量％以下の食塩水、リンゲル液、精製水、注射用水、蒸留水、生理的塩類溶液、プロピレングリコール、エタノール、これらの水を含有するプロピレングリコール、又はこれらの水を含有するエタノールから選ばれた水溶性溶媒であることを特徴とする請求項１又は２に記載の亜鉛欠乏症治療用注射薬。
【請求項４】
前記液体が、トリグリセロイド、サフラワー油、大豆油、ごま油、菜種油、落花生油から選ばれた非水溶性溶媒又はポリエチレングリコールから選ばれたものであることを特徴とする請求項１又は２に記載の亜鉛欠乏症治療用注射薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する分野】
本発明は、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウム含有懸濁液または粒子溶媒混合系、及び亜鉛欠乏または境界性亜鉛欠乏に起因する、骨疾患、皮膚疾患、味覚障害、免疫低下などの病気や欠乏状態の改善のための治療用剤に関する。この治療薬は、亜鉛徐放性の難溶性リン酸カルシウムを有効成分とするものであり、亜鉛欠乏又は境界性亜鉛欠乏に起因する疾患や欠乏状態の改善のために有効である。
【０００２】
【従来の技術】
亜鉛は、生体内において骨芽細胞を刺激すると共に、破骨細胞の活性を押さえる作用があることが知られている（Res Exp Med 186, 337, 1986; Bio Pharmacol., 36, 4007, 1987; Biochem Pharmacol, 48, 1225, 1994; J. Biomed Mater Res. 50, 184, 2000）。このことから、亜鉛は、骨形成を促進させるものであるということができる。
亜鉛が欠乏すると、具体的には、骨吸収の促進、骨形成能低下、皮膚疾患、味覚障害、免疫低下等の疾患や欠乏症が生じることも知られている（Endocrinol 114, 1860, 1984; Newer trace elements in nutrition, p.255, 1971; Am J Clin Nutr, 68, 447S, 1998）。
健康な体を維持するためには、成人の１日の亜鉛必要量は約15mgといわれている。偏食や外食などに依存する生活を送っていると、この必要量を摂取することは、意外に難しく、亜鉛は不足しがちになる金属元素とされ、皮膚障害や味覚障害のある人は増加しているとされている。
不足する亜鉛を補う具体的な方法としては、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、リン酸亜鉛、リン酸水素亜鉛（PCT/US91/05496）、酸化亜鉛（08.12.88  AU  1849／88）、アセキサム酸亜鉛(特開平10−218767）、L-カルノシン亜鉛塩（特開平3−120257）、アラニルLヒスティディン亜鉛（12.04.91GB910783）、アミノ酸キレート（PCT/US87/00310）、クエン酸亜鉛、グリシン亜鉛（12.04.91GB9107833）、水溶性亜鉛化合物（昭61−282317）を用いることが知られている。これらの方法では、前記の化合物を薬剤とし、経口投与又は非経口投与で用いることが提案されている。
これらを用いることにより治療が施されるが、これらの従来知られている化合物を投与すると、投与箇所近傍の組織（口腔、消化管、注射部位）や患部組織の亜鉛濃度が短時間に急激に高まり、やがて時間と共に徐々に減少するという亜鉛濃度変化を繰り返す。このとき、投与箇所近傍の組織（口腔、消化管、注射部位）や患部の亜鉛濃度が高くなりすぎると、亜鉛過剰投与となり、副作用として毒性を発現する結果となり、満足する結果を得ることはできないことが指摘されている。
そこで、本発明者らは指摘されている点を解消することを目的として研究を進め、新たに亜鉛の含有量を減少させ、一定量の亜鉛を長期間徐放させることによって、亜鉛の過剰投与の問題を克服した亜鉛徐放性亜鉛含有リン酸カルシウムセラミックスを開発した（特開平11−157923）。このセラミックスは、亜鉛を徐放する事が可能となり、亜鉛の過剰摂取を防ぐことができ、又用いた場合には生体適合性が高く、生体代替材料として利用できるものであり、前記の指摘されている点を解決することができた。
この亜鉛徐放性亜鉛含有リン酸カルシウムセラミックスは、当該物質が、体内に存在する限り、亜鉛を徐放することが可能で、極めて長期的にわたり、過剰にならない量の亜鉛を体内の必要とされる部位に徐放できるものであり、かつ、生体適合性を有するものであるから、亜鉛欠乏症などに対する処置を、的確にほどこすことができることとなった。しかしながら、徐放性亜鉛含有リン酸カルシウムセラミックスは、焼結することにより製造されるものであり、焼結工程を経て特定の形状とするものであるから、煩雑な工程を必要とされ、使用に際しては、必ず手術等の手段によって身体を切開し、特定の部位に固定することが必要とされている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、難溶性の亜鉛徐放性亜鉛含有リン酸カルシウム粒子を懸濁液または粒子溶媒混合系とせしめ、経口投与剤、注射薬、添付剤、坐剤、軟膏等として、身体の切開を行わずに利用することができる亜鉛欠乏症治療用薬剤を提供することにある。
【０００４】
本発明者らは、亜鉛含有量が少ない特定量の亜鉛含有リン酸カルシウム難溶性化合物を合成し、微粒子とすることにより、液体中に懸濁分散させることができる懸濁液または粒子溶媒混合系の製造に成功し、懸濁液または粒子溶媒混合系の状態でラットなどの動物に投与すると、亜鉛を過剰投与することなく、体内において亜鉛を徐放した状態に保つことができることにより、亜鉛の生体内への補給を可能とすることができること、併せて、利用後においても生体適合性が高い結果が得られることを見出した。
【０００５】
この知見に基づいて、亜鉛含有リン酸カルシウム微粉体を溶媒に懸濁させた前記懸濁液または粒子溶媒混合系を用いて、亜鉛を生体に投与するすることができ、特に 長期間にわたり亜鉛を徐放しつつ 、過剰投与することなく亜鉛を補給することができ、生体に用いたときに細胞及び組織に対して生体適合性を有する、亜鉛欠乏症に対する治療薬に関する本発明を完成させた。
【０００６】
本発明によれば、以下の発明が提供される。
（１）液体中に難溶性の亜鉛徐放性亜鉛含有リン酸カルシウムからなる微粒子を含有する懸濁液からなり、前記亜鉛含有リン酸カルシウムが、亜鉛含有水酸アパタイト、亜鉛含有低結晶性アパタイト、亜鉛含有αリン酸三カルシウム、亜鉛含有βリン酸三カルシウム、亜鉛含有リン酸水素カルシウム、亜鉛含有非晶質リン酸カルシウム、ＣａＺｎ２（ＰＯ４）２・ｎＨ２Ｏ（ｎは０以上２以下）のなかから選ばれた１種または２種以上の化合物であって、且つ、亜鉛含有リン酸カルシウム中の亜鉛含有量が６５重量ｐｐｍ〜１３重量％であることを特徴とする亜鉛欠乏症治療用注射薬。
（２）ビタミンＤ、α−カルシドール、エストロゲン製剤、カルシトニン、ビスフォスフォネート、カルシウム製剤の中から選ばれた造骨化合物が更に添加されていることを特徴とする（１）に記載の亜鉛欠乏症治療用注射薬。
（３）前記液体が、生理食塩水、食塩濃度２．５重量％以下の食塩水、リンゲル液、精製水、注射用水、蒸留水、生理的塩類溶液、プロピレングリコール、エタノール、これらの水を含有するプロピレングリコール、又はこれらの水を含有するエタノールから選ばれた水溶性溶媒であることを特徴とする（１）又は（２）に記載の亜鉛欠乏症治療用注射薬。
（４）前記液体が、トリグリセロイド、サフラワー油、大豆油、ごま油、菜種油、落花生油から選ばれた非水溶性溶媒又はポリエチレングリコールから選ばれたものであることを特徴とする（１）又は（２）に記載の亜鉛欠乏症治療用注射薬。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明の懸濁液または粒子溶媒混合系は、難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウム化合物からなる微粒子を含有する。
この難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウム化合物は、リン酸成分、カルシウム成分、亜鉛成分、場合によってはこれらに加えてさらにH2O成分の各成分を含有する化合物から合成されるものである。
具体的には、カルシウム化合物又はカルシウムイオン、燐化合物又はリン酸イオン、並びに亜鉛化合物又は亜鉛イオンによる固相反応、液相反応又はメカノケミカル反応によって、調製することができる。
固相反応で亜鉛含有リン酸カルシウムを製造するためには、リン酸成分を含む原料物質とカルシウム成分を含む原料物質と亜鉛成分を含む原料物質を高温で反応させる。具体的にはリン酸成分を含む原料物質として、リン酸アンモニウム、リン酸カルシウム、無水リン酸、リン酸水素カルシウム、グリセロリン酸、グリセロリン酸カルシウム等を挙げることができる。カルシウム成分を含む原料物質としては、炭酸カルシウム、水酸化カルシウム、リン酸カルシウム、酸化カルシウム、硝酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、酢酸カルシウム、カルシウムエトキサイド等を挙げることができる。亜鉛成分を含む原料物質としては、酸化亜鉛、硝酸亜鉛、リン酸亜鉛、炭酸亜鉛、水酸化亜鉛、乳酸亜鉛、酢酸亜鉛等をあげることができる。さらに、亜鉛含有リン酸カルシウム自身を原料物質にすることもできる。
メカノケミカル反応で亜鉛含有リン酸カルシウムを製造するためには、リン酸成分を含む原料物質とカルシウム成分を含む原料物質と亜鉛成分を含む原料物質を摩砕、粉砕によってメカノケミカル反応させ、必要に応じて加熱して反応させる。リン酸成分を含む原料物質とカルシウム成分を含む原料物質と亜鉛成分を含む原料物質には、固相反応で使用する上記原料物質を使用することができる。さらに、亜鉛含有リン酸カルシウム自身を原料物質にすることもできる。
液相反応により難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウムを製造するためには、リン酸成分を含む原料物質を溶解させたときに、酸性または中性の水溶液の状態でリン酸イオンを放出できるものであれば、リン化合物の原料物質として使用することができる。具体的には、無水リン酸、リン酸及びリン酸塩を挙げることができる。リン酸は通常不純物を含有しているので、アルコールなどの有機溶媒により精製して得られる精製リン酸を用いる。リン酸塩には、リン酸カリウム、リン酸アンモニウム、リン酸二水素カルシウム、グリセロリン酸、グリセロリン酸カルシウム、リン酸カルシウム等を挙げることができる。
カルシウム成分は中性または酸性の水溶液の状態で、カルシウムイオンを放出できるものであれば、原料物質として使用することができる。具体的には、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硝酸カルシウム、塩化カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、乳酸カルシウム、酢酸カルシウム、などを挙げることができる。
亜鉛成分は中性または酸性の水溶液の状態で、亜鉛イオンを放出できるものであれば、原料物質として使用することができる。具体的には、硝酸亜鉛、水酸化亜鉛、酸化亜鉛、炭酸亜鉛、酢酸亜鉛、乳酸亜鉛などを挙げることができる。さらに、亜鉛含有リン酸カルシウム自身を原料物質にすることもできる。
これらは、リン酸カルシウム、例えば、水酸アパタイトを形成する溶液に、亜鉛化合物を添加しても、目的生成物を得ることができる。
液相反応により難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウムを製造するには、上記の水溶液反応法の他にも、アルコールを用いたゾル-ゲル法を利用することもできる。例えば、カルシウムエトキサイド、リン酸、酢酸亜鉛を窒素雰囲気下アルコール中で反応させる方法も、その一例である。
【０００８】
原料物質として前記のリン酸、カルシウム、及び亜鉛を含有する化合物を用いて、固相反応またはメカノケミカル反応で得られる難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウム化合物は、亜鉛含有低結晶性アパタイト、亜鉛含有水酸アパタイト、亜鉛含有αリン酸三カルシウム、亜鉛含有βリン酸カルシウム、CaZn２(PO４)２・nH２O(nは0)であり、これらの混合物又はこれらを含む混合物として得られることもある。
原料物質として前記のリン酸、カルシウム、及び亜鉛を含有する化合物を用いて、液相反応を行うと、難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウム化合物からなる沈殿物を生成させることができる。得られる化合物は、亜鉛含有水酸アパタイト、亜鉛含有低結晶性アパタイト、亜鉛亜鉛含有βリン酸三カルシウム、亜鉛含有リン酸水素カルシウム、亜鉛含有非晶質リン酸カルシウム、CaZn２(PO４)２・nH２O(nは1以上2以下)であり、これらの混合物又はこれらを含む混合物として得られることもある。
本発明で用いられる化合物の亜鉛含有リン酸カルシウムは、亜鉛含有量が０．６重量ｐｐｍ−１３重量％、好ましくは、１２０重量ｐｐｍ−１３重量％となるように特定されるが、このような特定の範囲の目的生成物を得るためには、各々の原料使用量を選択して、目的生成物中の亜鉛含有量を、特定の範囲のものとする。
【０００９】
前記のリン酸、カルシウム、及び亜鉛を含有する化合物からなる原料物質を用いて、固相反応またはメカノケミカル反応で得られた生成物を微粉状とする。液相反応で得られた生成物は濾別し、乾燥させ、場合によっては加熱した後、得られた生成物を微粉状とする。
前記固相反応の加熱温度及び液相反応後の加熱処理温度は作製する微粒子によって異なる。亜鉛含有非晶質リン酸カルシウム、亜鉛含有低結晶性アパタイト、亜鉛含有リン酸水素カルシウム、CaZn２(PO４)２・nH２O(nは１又は2)  の微粒子を作製する場合は加熱を行わなず、沈殿を濾別乾燥後粉砕する。その理由は、加熱により亜鉛含有非晶質リン酸カルシウムは亜鉛含有リン酸三カルシウムに、亜鉛含有低結晶性アパタイトは亜鉛含有水酸アパタイトに、亜鉛含有リン酸水素カルシウムは結晶水の脱水が生じて生体適合性の低いピロリン酸カルシウムに、CaZn２(PO４)２・nH２O(nは１又は2)は脱水が生じてCaZn２(PO４)２に変化してしまうためである。
亜鉛含有水酸アパタイトを作製する場合は、加熱は通常酸素の存在下で、通常７００℃から１２００℃の範囲、好ましくは７００℃から１０００℃で行う。加熱温度の範囲を通常７００℃から１２００℃としたのは、７００℃未満の加熱温度では亜鉛含有水酸アパタイトの結晶性は依然として低く、１２００℃以上の加熱温度では亜鉛含有水酸アパタイトは分解して、亜鉛含有αリン酸三カルシウム相や酸化亜鉛相を生じるからである。
亜鉛含有βリン酸三カルシウムを作製する場合の加熱は、通常酸素の存在下で、通常７００℃から１２５０℃の範囲、好ましくは７００℃から１０５０℃で行う。加熱温度の下限を通常７００℃としたのは、７００℃未満の加熱温度では亜鉛含有βリン酸三カルシウムは非晶質リン酸カルシウムであったり、低結晶性の亜鉛含有Ca欠損水酸アパタイトであったりするためである。加熱温度の上限は理論的には亜鉛含有βリン酸三カルシウムが一部相転移して、亜鉛含有αリン酸三カルシウムに変化する相転移温度で規定されるが、相転移温度は亜鉛０重量ｐｐｍで１１３０℃、亜鉛３００重量ｐｐｍで１１８０℃、亜鉛０．７重量％で１２５０℃のように、亜鉛含有量によって異なる。亜鉛０．７重量％以上では１２５０℃以上で加熱することも可能であるが、１２５０℃以上で加熱すると粒成長と、結晶の完全性の向上が著しく、亜鉛放出速度が低下するために、特段の利点がない。以上の理由により加熱温度の範囲は７００℃から１２５０℃の範囲とする。
亜鉛含有αリン酸三カルシウムを作製する場合の加熱は、通常酸素の存在下で、通常１１５０℃から１５００℃の範囲、好ましくは１２００℃から１４５０℃で行う。加熱温度の下限を１１５０℃としたのは、１１５０℃未満では０．６ｐｐｍ以上の亜鉛を含有した亜鉛含有αリン酸三カルシウム単相を得ることができず、亜鉛含有βリン酸三カルシウム単相または、亜鉛含有βリン酸三カルシウムと亜鉛含有αリン酸三カルシウムの混合物になってしまうからである。加熱温度の上限を１５００℃としたのは、１５００℃以上では亜鉛の含有量に関わらず、固相としては亜鉛含有スーパーαリン酸三カルシウムが唯一の安定相であり、亜鉛含有αリン酸三カルシウムは存在し得ないからである（E.R. Eric & F.A. Hummel,  Inorganic Chem, 6, 524, 1967）。
亜鉛含有βリン酸三カルシウムと亜鉛含有αリン酸三カルシウムの混合微粒子を作製する場合の加熱は、通常酸素の存在下で、通常１１５０℃から１５００℃の範囲、好ましくは１１５０℃から１４００℃で行う。加熱温度の範囲を１１５０℃から１５００℃としたのは、亜鉛含有βリン酸三カルシウムと亜鉛含有αリン酸三カルシウムの安定共存領域が１１３０±５℃から１５００℃の範囲にあるからである（E.R. Eric & F.A. Hummel,  Inorganic Chem, 6, 524, 1967）。
亜鉛含有βリン酸三カルシウムと亜鉛含有水酸アパタイトの混合微粒子を作製する場合の加熱は、通常酸素の存在下で、通常７００℃から１２００℃の範囲、好ましくは８００℃から１２００℃で行う。加熱温度の範囲を通常７００℃から１２００℃としたのは、７００℃未満の加熱温度では亜鉛含有水酸アパタイトの結晶性は依然として低く、１２００℃以上の加熱温度では亜鉛含有水酸アパタイトは分解して、亜鉛含有αリン酸三カルシウム相や酸化亜鉛相を生じるからである。
CaZn２(PO４)２・nH２O(nは０)を作製する場合の加熱は、通常酸素の存在下で、通常４００℃から１０５０℃の範囲、好ましくは６００℃から１０５０℃で行う。加熱温度の範囲を４００℃から１０５０℃としたのは、３８５℃以下の温度ではCaZn２(PO４)２・nH２Oの結晶水が残存する結果となって不純物としてCaZn２(PO４)２・nH２O(nは１又は２)等が共存し、１０５０℃より高い温度ではCaZn２(PO４)２・nH２O(nは０)が溶融するからである（B. Darko et al., Am Mineralogist, 66, 843, 1981;E.R. Eric & F.A. Hummel,  Inorganic Chem, 6, 524, 1967）。
CaZn２(PO４)２・nH２O(nは０)と亜鉛含有βリン酸三カルシウムの混合微粒子を作製する場合の加熱は通常７００℃から１０５０℃の範囲、好ましくは７５０℃から９５０℃で行う。加熱温度の範囲を７００℃から１０５０℃としたのは、７００℃未満の温度では亜鉛含有βリン酸三カルシウムは非晶質リン酸カルシウムであったり、低結晶性の亜鉛含有Ca欠損水酸アパタイトであったりするためであり、１０５０℃より高い温度ではCaZn２(PO４)２・nH２O(nは０)が溶融するからである。
得られた生成物を微粉にするためには、粉砕機により粉砕し、篩い分け、水ひを利用して、粒径０．１μｍ〜２０００μｍ、好ましくは５μｍ〜１００μｍ程度とする。粉砕機としては、この程度の粒径を得ることができるものであれば、適宜用いることができる。通常、３００μｍ〜３２μｍまでは篩い分けによって粒径を揃える。それ以下の粒度については、水溶性または非水溶性の溶媒中での水ひを利用して粒径を揃えることができる。
【００１０】
前記のように、得られる難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムは、単独の化合物として得られるか又は各種の混合物として得られる。具体的には、亜鉛含有非晶質リン酸カルシウム、亜鉛含有水酸アパタイト、亜鉛含有低結晶性アパタイト、亜鉛含有αリン酸三カルシウム、亜鉛含有βリン酸三カルシウム、亜鉛含有リン酸水素カルシウム、CaZn２(PO４)２・nH２O(nは0以上2以)の化合物を含むものであり、これらの一部を含むもの、それらの中の特定化合物のみから成る化合物であり、さらに他の化合物を添加して特定の化合物からなる化合物に変化させることができる。
【００１１】
本発明では、これらの化合物の中の単独の化合物のみ成らず、これらの組み合わせから成る複数の混合物としても用いることができる。したがって、これらの化合物は、成分単独に分離して用いることもできるし、分離することなく混合物としても用いることができる。これらの各成分については、粉末Ｘ線解析により確認することができる。
【００１２】
難溶性の亜鉛含有リン酸カルシウム化合物を得るに当たり、原料物質の割合を変化させることにより、得られる生成物は変化する。そして、更に、特定の物質を添加することにより、特定の物質から成る微粒子を製造することができる。
例えば、カルシウム成分を含む原料（水酸化カルシウム）、リン酸及び亜鉛成分を含む原料（硝酸亜鉛）の割合を、モル比（１．５３：１．２０：０．２７）〜（１．２６：１．２０：０．５４）として水中で反応させ、空気中で８５０℃で加熱すると、亜鉛含有リン酸カルシウム粉末は、亜鉛含有βリン酸三カルシウムとCaZn２(PO４)２の混合物として得られる。このようにして得られる混合物にリン酸三カルシウムを添加して焼成すると、固相反応が生じて亜鉛含有βリン酸三カルシウムからなる粉末とすることができる。
例えば、カルシウム成分を含む原料である酸化カルシウム、リン酸及び亜鉛成分を含む原料である硝酸亜鉛６水和物を、（Ca+Zn）/Pモル比＝１．５０を維持しながら、重量比（８３．３６：９７．９９：４．０５）〜（８４．１０：９７．９９：０．０９）として水中で反応させ、沈殿を濾別、乾燥後、空気中で１４００℃で加熱すると、亜鉛含有量０．５重量％から１２０重量ｐｐｍの亜鉛含有αリン酸三カルシウムからなる粉末とすることができる。
例えば、カルシウム成分を含む原料（水酸化カルシウム）、リン酸及び亜鉛成分を含む原料（硝酸亜鉛）の割合を、モル比１．９９６：１．２０：０．００４として水中で反応させて亜鉛含有量０.１３重量％の低結晶性亜鉛含有水酸アパタイトの懸濁液とする。この懸濁液中に水酸アパタイト粉末を添加して、良く撹拌の後に濾別、８５０℃加熱すると、水酸アパタイトと亜鉛含有量０.１３重量％の低結晶性亜鉛含有水酸アパタイトが固相反応して、亜鉛含有量０．６重量ｐｐｍ以上０．１３重量％未満の亜鉛含有水酸アパタイト粉末を得ることができる。
例えば、カルシウム成分を含む原料（水酸化カルシウム）、リン酸及び亜鉛成分を含む原料（硝酸亜鉛）の割合を、（Ca+Zn）/Pモル比＝１．６７を保ちながら水中で反応させると、Zn/Caモル比が２．０%までは亜鉛含有低結晶性水酸アパタイトとして沈殿を得ることができる。このとき、亜鉛含有低結晶性水酸アパタイトの亜鉛含有量は１．３重量％である。原料の割合を（Ca+Zn）/Pモル比＝１．5に保ち、急速に水中で反応させると亜鉛含有非晶質リン酸カルシウムとして沈殿を得ることができる。
例えば、カルシウム成分を含む原料（水酸化カルシウム）、リン酸及び亜鉛成分を含む原料（硝酸亜鉛）の割合を、モル比１：２：２として室温で水中で反応させる。濾別後、加熱をしなければCaZn２(PO４)２・nH２O(n＝2)が得られる。これを１００−３００℃の範囲で加熱すると、CaZn２(PO４)２・nH２O(n＝１または2)、またはCaZn２(PO４)２・nH２O(n＝１)を含む混合物が得られる。４００―１０５０℃の範囲で加熱するとCaZn２(PO４)２・nH２O(n＝０)が得られる。
例えば、カルシウム成分を含む原料（炭酸カルシウム）、リン酸及び亜鉛成分を含む原料（硝酸亜鉛）の割合を、モル比１：１：０．００４−０．０２で、室温にて水中で反応させると、亜鉛含有リン酸水素カルシウム２水塩を得ることができる。
【００１３】
本発明の化合物の粒径は、液体に分散させた薬剤として用いられたときには、薬物の放出量に影響を与える。前記範囲の粒径を超えて、より大きものを用いると、薬物として用いた場合には薬剤の放出量が少ない結果となる。また、前記範囲の粒径を超えて、より大きものを用いると、注射針やカテーテルの穴を通過することができず、非経口投与の場合は身体の切開が必要になってしまう。粒径をこの範囲のもとすることにより、亜鉛を初めとして各種の成分の放出量を良好に保つことができる。この範囲に満たないものを用いると、液体は事実上コロイド溶液の状態となり、亜鉛の急激な放出、タンパク質等の生体成分の吸着や変性、体液局所pHの急変などが生じ、好ましくないことがある。
【００１４】
このようにして得られる生成物中の亜鉛の含有量は 、0.6重量ppm−13重量％、好ましくは、120重量ppm−13重量％ の範囲である。この亜鉛含有量から換算したZnO成分の含有量に対応して、リン酸成分の含有量、カルシウム成分の含有量、H2O成分の含有量はP2O5３３−５７重量％、CaO１０−６５重量％、及びH2O ０−２８重量％の範囲内で、ZnO成分、P2O5成分、CaO成分、H2O成分の和が１００％になるように、任意に選択できる。
【００１５】
粉体の亜鉛濃度を0.6重量ppm−13重量％と限定した理由は、以下のことによる。
亜鉛は、唾液、体液、血液中に、健常人で0.8重量ppm−1.1重量ppm、亜鉛欠乏症患者で0.5重量ppm−0.8重量ppm含まれている。
亜鉛による治療効果、亜鉛の補給効果を達成する観点から、本発明の懸濁液に用いる微粒子中の亜鉛含有量は、亜鉛欠乏患者の体液亜鉛濃度よりも高い亜鉛濃度とする必要がある。
したがって、粉体の亜鉛濃度の下限は0.6重量ppmとする。すなわち、０．６重量ppm未満の場合には亜鉛の欠乏症に対して治療効果及び補給効果を期待することはできない。
一方、粉体の亜鉛濃度の上限は、懸濁液の生体適合性が損われない上限の値を求めて、規定したものである。具体的には本発明の難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムを用いて、生体適合性を損なわない亜鉛の含有量を動物実験により確認したものである。本発明者らの実験によれば、１２．０７重量％までは生体適合性が損なわれない結果が得られることを確認した。この結果に基づいて、上限を13重量％としたものである。この程度の差によっては生体適合性を損なうことはないと考えられるので、その上限を１３重量％であるとして差し支えない。この範囲にあるものを、用いていれば安全性が確保される。
【００１６】
前記特定の範囲の亜鉛含有量の亜鉛含有リン酸カルシウムには、造骨作用のある成分を併せて用いることができる。このようにするため添加する造骨作用がある化合物としては、リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、などの化合物のほか、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウムなどのカルシウム製剤などを挙げることができる。さらに、造骨作用を有する，ビタミンＤ、α−カルシドール、エストロゲン製剤、カルシトニン、ビスフォスフォネート、などを挙げることができる。
予め製造した亜鉛含有量が特定の範囲にある亜鉛含有リン酸カルシウム化合物の沈殿物、乾燥物、場合によってはこれらの焼成物、更に微粒子物に、リン酸カルシウム、リン酸三カルシウム、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、グルコン酸カルシウムなどのカルシウム化合物の乾燥物、場合によってはこれらの焼成物、更に微粒子物を混合することにより、微粒状添加物の含有量が特定範囲にある亜鉛含有リン酸カルシウム化合物を製造することもできる。
【００１７】
前記のようにして得られた、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムからなる微粒子を、液体媒体中に分散懸濁させることにより、本発明の懸濁液または粒子溶媒混合系を得ることができる。さらに液体媒体中に、造骨作用を有するビタミンＤ、α−カルシドール、エストロゲン製剤、カルシトニン、ビスフォスフォネートを添加して、これらの添加物含有量が特定範囲にある懸濁液または粒子溶媒混合系を得ることができる。
液体媒体中に分散させることにより、液体媒体中に含まれる難溶性亜鉛を含有させたリン酸カルシウムを、人や動物に投与できるようにすることができる。このように液体に分散懸濁または混合することが、本発明では重要な点である。
このようにして、液体媒体中では、難溶性で亜鉛を含有するリン酸カルシウムを分散状態に保たれることとなる。
その結果、本発明の懸濁液または粒子溶媒混合系は、経口投与剤、非経口投与剤、添付剤、軟膏、坐剤等として用いて生体に直接投与することが可能となり、又、用いた結果、高い生体適合性を得ることができるようになる。
【００１８】
液体媒体中に、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムからなる微粒子を分散懸濁させるために添加する前記微粒子の添加量は、必要とされる亜鉛含有量から、用いる難溶性亜鉛を含有させたリン酸カルシウム化合物の全体量を算出し、算出結果を投与量とすることとなる。
この計算された投与量に基づいて、後で述べる微粒子径と用いる液体の粘度を考慮して定められる微粒子沈降速度を、意図する範囲のものになるように、液体媒体量を適宜定めればよい。
【００１９】
懸濁液または粒子と液体溶媒の混合比は、投与等の治療行為を可能にさせる難溶性亜鉛を含有させたリン酸カルシウム懸濁液または粒子溶媒混合系の粘性の観点から規定される。
すなわち、懸濁液または粒子溶媒混合系の全体の粘度は、室温で、２秒間以上、好ましくは１０秒以上にわたり、3000Pa s以下、好ましくは300Pa s以下に保つことができるようにする。これ以下の場合には格別問題はない。懸濁液の粘性は限りなく水に近い場合であっても特に問題無く使用可能であるため、粘性の下限の値は、２０℃の水の粘性値に相当する1.00mPa sである。
【００２０】
粘度の上限を3000Paｓとしたことは以下の事柄を考慮したことによる。すなわち粘度3000Paｓは分子量４万のポリアミドMXD6-Gの２６０℃における溶融粘度に相当し、仮に、これ以上粘度が高い状態の液体とは、事実上流動性を失い、加圧しても注射器やカテーテルを通過することができなくなる状態、または軟膏のように手で変形することができなくなる状態である。このことから明らかなように、懸濁液または粒子溶媒混合系の粘度が3000Paｓを超えるような場合には、注射器やカテーテルを使用して体内に投与したり、添付剤、軟膏として使用することのできない状態を意味する。
【００２１】
このようにして得られる、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムが分散懸濁状態にある、本発明の懸濁液または粒子溶媒混合系では、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムは、少なくとも、２秒間以上、好ましくは１０秒以上の時間にわたり、懸濁状態が保たれることが必要である。人や動物等に投与する場合には、分散懸濁状態で投与することが必要であり、投与する際に、特定の時間、懸濁状態が保たれることにより、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムを前記のように人や動物に投与することが可能となる。
例えば、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムの分散懸濁液組成物は、内服用容器（コップ）や注射器などの容器に注入したり、充填することにより利用される。これらの容器又は注射器では最大でも8cm程度の深さ又は高さを有するものである。難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムは、粒子沈降速度が4cm/s以下、好ましくは0.8 cm/s以下となるように、調節される。その結果、前記容器内では２秒以上、好ましくは１０秒以上の時間にわたって、分散懸濁状態が保持される。この程度の時間が確保されると、人や動物に投与するために必要な時間が保持される。
【００２２】
この条件を満たすうえでは、前記のように、懸濁液の流動性を確保する観点から、懸濁液または粒子溶媒混合系の粘度が3000Pa s以下、好ましくは300Pa s以下となるような液体が選択される。具体的に用いられる液体としては、生理食塩水、食塩濃度2.5重量％以下の食塩水、リンゲル液，精製水，注射用水，蒸留水，生理的塩類溶液、プロピレングリコール，エタノール，などの水溶性溶媒、又トリグリセロイド、サフラワー油、大豆油，ごま油，菜種油，落花生油等の非水溶性溶媒、各種のポリエチレングリコール（マクロゴール）等を挙げることができる。プロピレングリコールやエタノールなどは生理食塩水、リンゲル液、精製水、注射用水、蒸留水などを適度に含有させた状態で用いることができる。
これにより、結果として手術を必要とせず、経口又は非経口投与によっても投与できる、生体適合性が高く且つ持続性の長い、亜鉛徐放性難溶性リン酸カルシウムの懸濁液または粒子溶媒混合系を得ることができる。
【００２３】
このような条件の下で、粒子の沈降速度（本発明では粒子は、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウム微粒子に相当）は、実測することもできる。
ストークスの法則の関係を用いることにより、以下のような関係にあることが導き出され、この関係を用いると、粒子沈降速度を計算することもできる。すなわち、粒子の粒径と用いる溶媒の比重、粘度を組み合わせる。粒子沈降速度Vは、粉体の半径（ｒ）、溶媒の比重(ｄ１）、粒子の比重（ｄ２）、溶媒の粘度(ｎ）、重力加速度（ｇ）から、下記のように決めることができる。
V＝2gr2（ｄ２−ｄ１）/９ｎ
また、逆にＶの値として前記の範囲 （ 粒子沈降速度が4cm/s以下、好ましくは0.8 cm/s以下）の中の特定の希望する値を、又、粒子径として実測値（粒径分布から算出した平均値等）の値、さらに粒子の比重値を上式に代入することにより、溶媒を選択することもできる。すなわち、沈降速度Ｖの値、粒子径ｒの値、粒子の比重ｄ１の値を上記の式に代入すると、下記のような溶媒の比重と粘度の間に成立する１次式の関係式を算出することができる。
ｄ１＝ｄ２−（９V／２ｇｒ２）ｎ＝A−B・ｎ
ただし、A、Bは定数である。比重ｄ１と粘度ｎの値がこの関係式に適合するような溶媒を選択すれば、目的の沈降速度を得ることができる。
以上のようにすることにより、Vが4cm/s以下、好ましくは0.8 cm/s以下となるようにすることを前提にして、粒子径、溶媒の組み合わせを決定できる。
これらについては、ストークスの法則はニュートン流体に適用する式であることを前提として算出したものであるが、非ニュートン流体の溶媒を用いる場合であっても沈降速度範囲が小さいために実用上問題視することなく、前記の関係を用いて算出することができる。
【００２４】
溶媒が透明な場合の沈降速度の測定には、懸濁液に半導体レーザー光を照射して、光路が目視できるまでの時間を測定し、測定された時間をもって、沈降速度を定めることが行われる。照射する半導体レーザーには１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を利用し、懸濁液に入射したレーザー光が粒子によって全て散乱して、懸濁液中に光路を確認できない最小粒子濃度をまず求める。次ぎに、この最小粒子濃度の懸濁液を静置すると、時間が経過して、一部懸濁粒子が沈降してくることにより、入射レーザー光が懸濁液中を通過できるようになり、懸濁液中に残っている懸濁分散して存在する微粒子にレーザーが当たり、チンダル現象による直線光路が出現してくる。
１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を懸濁液に照射し、懸濁液中を通過する入射光の光路が目視で確認できるまでの時間を測定し、これと粒子沈降距離から粒子の沈降速度を算出できる。
【００２５】
本発明の難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムの確認は以下のようにして行う。
本発明の難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムを投与したことによる結果と、亜鉛を含有しないリン酸カルシウムを投与したことによる結果の対比を行う。このようにして徐放性亜鉛の効果を確認することができる。
また、難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムを投与した後、用いた細胞や組織の観察を行って生体適合性があることを確認する。
【００２６】
難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムを投与したものと、亜鉛を含有しないリン酸カルシウムを投与した結果の比較を行うには、以下のように行う。
ラットを用いて普通食で飼育したもの（Ｎ群）、亜鉛の含有量の相違するリン酸カルシウムを投与したもの（Ｄ１群、Ｄ２群）及び亜鉛を含有しないβリン酸三カルシウムを投与したもの（Ｄ３群）からなる亜鉛の影響を調べるものとの比較を行う。
具体的には、以下のようにする。
ウイスター系メスラット（例えば、発育状態にあるものの場合は５週令）に特定の餌を与えて、病気の発現を促す。これらのラットを以下のような4群に分けて飼育する（例えば９週間）。
N群：卵巣摘出せず、普通食を与える
D1群：卵巣を摘出し、低亜鉛低ビタミンD食を与える
D2群：卵巣を摘出し、低亜鉛低ビタミンD食を与える
D3群：卵巣を摘出し、低亜鉛低ビタミンD食を与える
D1群からD3群までは9週目までに亜鉛欠乏性骨粗鬆症を発症する。その後、
N群とD1群には「Ca混合食を与えて6.17重量％亜鉛含有βリン酸三カルシウム懸濁液を筋肉注射」、D2群には「Ca混合食を与えて12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を筋肉注射」、D3群には「Ca混合食を与え、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を筋肉注射」を行う。Ca混合食は骨の原材料を供給することに相当し、人体にあってはカルシウム製剤を経口投与することに相当する。
これによりN群は正常状態を維持するが、D3群は依然として亜鉛欠乏性骨粗鬆症病態を維持する。D1群、D2群、D3群の病態をN群と比較することで、亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液（D1群、D2群）による亜鉛欠乏性骨粗鬆症改善効果が評価できる。
懸濁液の筋肉注射はいずれも左大腿部筋肉に毎週1回行う。使用した懸濁液はいずれも粒径38ミクロン以下の粒子10mgを生理食塩水0.2mlに懸濁したものである。
18週目すなわち筋肉注射開始9週目で、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD3群と亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を注射投与したD1、D2群の骨密度の比較を行う。
このようにして、亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を亜鉛欠乏性骨粗鬆症の骨近傍に投与することで、亜鉛含有リン酸カルシウムから亜鉛が徐放され、亜鉛欠乏性骨粗鬆症を局所的に改善できることを確認し、骨折を未然に防止できる可能性を検討する。
18週目すなわち筋肉注射開始9週目で左右大腿骨を摘出し、インストロン型の万能試験機を用いて、3点曲げ試験により骨の三点曲げ強度を測定する。
すなわちN群の大腿骨と、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD3群の大腿骨の破壊強度を三点曲げ試験で測定する。一方、6.17重量％亜鉛含有βリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD1群に関し、及び12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を注射投与したD2群に関し、同じく大腿骨の強度を測定し、亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を亜鉛欠乏性骨粗鬆症の骨近傍に投与することによる、骨強度の回復の状況を調べる。
【００２７】
次に、 難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムを投与した後の、投与部位での発赤の有無、脱毛の有無を調べ、さらに骨組織周辺の筋肉組織を切開して浸潤液の有無、炎症の有無、肉芽組織の有無などを調べて難溶性亜鉛含有リン酸カルシウムの生体適合性を検討する。
【００２８】
本発明の難溶性亜鉛含有リン酸カルシウム化合物の微粒子を含有する懸濁液または粒子溶媒混合系は、生体適合性が高く長期的な亜鉛欠乏症に対する補給剤として優れた亜鉛含有リン酸カルシウムからなり、なおかつ水溶性又は非水溶性の溶媒に懸濁、又は分散しているため、経口投与でも非経口投与でも局所に投与することができ、又接触する組織に対して生体適合性が高い薬剤として作用するものである。この際に亜鉛の含有量を多くすると、亜鉛欠乏症に対して良好な結果が得られる。
亜鉛含有リン酸カルシウム化合物の微粒子に関して、平均粒子径が小さいと、薬物の放出量は大きく、平均粒子径が大きいと、薬物の放出量は少ないということがある。
亜鉛含有リン酸カルシウム化合物とカルシウム製剤を併用することにより、効果的に骨粗鬆症の改善を図ることができる。
亜鉛含有リン酸カルシウム化合物を骨の近傍に注射等の手段により投与すると、局所的な治療をはかることができる。
【００２９】
【実施例】
以下実施例により更に詳細に本発明の内容を説明する。しかしながら、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００３０】
実施例１
Ca(OH)２   3.24.mol、 H３PO４  2.40 mol 、及びZn(NO３)２・6H2O   0.360molを、超純水に加えて、撹拌し、沈殿を生成させた。
これを濾別、乾燥させて、得られた生成物を、850℃で加熱し、粉砕することにより、12.07重量％の亜鉛を含有するリン酸カルシウム粉末を得た。
この亜鉛含有リン酸カルシウム粉末は、Ｘ線解析の結果、亜鉛含有βリン酸三カルシウムとCaZn２(PO４)２からなる混合物であることを確認した。
この亜鉛含有リン酸カルシウム粉末に、純粋なリン酸三カルシウム粉末を混合し、850℃で5時間、次に1000℃で5時間にわたって処理することにより反応させて、亜鉛含有量316重量ppmから6.17重量％までの粉末を得た。この亜鉛含有リン酸カルシウム粉末は、亜鉛含有βリン酸三カルシウムであることを確認した。
このようにして得られた粉体を分級し、固液比2 mg/mlの割合となるように、擬似体液、生理食塩水、蒸留水、菜種油、アルコール中に懸濁させて、粒子沈降速度を測定した。
この範囲の固液比からなる懸濁液に、１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を光路長１０ｍｍで照射すると、全粒子が懸濁している間は、入射レーザー光が全て散乱して、懸濁液中に光路を確認することはできない状態が観察された。時間が経過して、一部懸濁粒子が沈降してくると、１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を懸濁液に照射すると、入射レーザー光が懸濁液中を通過できるようになり、懸濁液中にチンダル現象による直線光路が出現してきて、懸濁液中を通過する入射光の光路が目視で確認できるまでの時間を測定し、これと粒子沈降距離から粒子の沈降速度を算出した。
その結果を表1に示した。
懸濁液の粘度は、水溶液、アルコールで1.0-1.2mPa s、菜種油で200-1000 mPa
sであり、いずれも300 Pa s以下であった。
【００３１】
【表１】
0004161031.tif 000002
【００３２】
前記表１は、亜鉛含有ベータリン酸三カルシウム微粒子を種々の溶媒に分散懸濁させて得られる懸濁液の態様を示している。いずれも、沈降速度０．８ｃｍ／ｓ以下の結果を得ており、経口投与或いは非経口で投与できるものであることを示している。
【００３３】
実施例２
得られる生成物の亜鉛含有量が129重量ppm〜0.129重量％、（Ca+Zn）／P  の原子比が1.67になるように、Ca(OH)２、 H３PO４、及びZn(NO３)２・6H2O    を超純水に加えて、撹拌して沈殿を生成させた。沈殿生成物を濾別、乾燥後、850℃の温度下に加熱した。
得られた生成物を粉砕して、各々亜鉛の含有量が0.129重量％及び0.129重量％である亜鉛含有水酸アパタイト粉末を得た。
この亜鉛含有水酸アパタイト粉末を２００メッシュ（孔径７５μm）のふるいを通し、亜鉛含有水酸アパタイト粉末単独または純粋な水酸アパタイト及びリン酸三カルシウムと混合して、蒸留水、菜種油、35%PEG溶液、アルコールに、固液比2mg/mlの割合で、懸濁させて懸濁時間を測定した。懸濁時間は１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を懸濁液に照射し、懸濁液中を通過する入射光の光路が目視で確認できるまでの時間とした。その結果を表２に示す。また、懸濁液の粘度は蒸留水、アルコールで1.0-1.2mPa s、菜種油で200-1000 mPa s、35％ポリエチレングリコール（PEG）溶液で150-300 mPa sであり、いずれも300 Pa s以下であった。
【００３４】
【表２】
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【００３５】
前記表２は、亜鉛含有水酸アパタイト、亜鉛含有水酸アパタイトとリン酸三カルシウム、亜鉛含有水酸アパタイトと水酸アパタイトからなる微粒子を種々の溶媒に分散懸濁させて得られる懸濁液の態様を示している。いずれも、沈降速度０．８ｃｍ／ｓ以下の結果を得ており、経口投与或いは非経口で投与できるものであることを示している。
【００３６】
実施例３
得られる生成物の亜鉛含有量65ppm、（Ca+Zn）／P  の原子比が1.67になるように、Ca(OH)２、 H３PO４、Zn(NO３)２・6H2O    を超純水に加え、沈殿を生成させた。
この沈殿物を濾別し、乾燥後、粉砕して65ppm亜鉛含有低結晶性水酸アパタイト粉末を得た。これを分級し、蒸留水、菜種油、35％ポリエチレングリコール（PEG）溶液に、固液比2mg/mlの割合となるように懸濁させて、前記と同様にして懸濁時間を測定した。
懸濁時間は１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を懸濁液に照射し、懸濁液中を通過する入射光の光路が目視で確認できるまでの時間とした。その結果を表３に示す。また、懸濁液の粘度は蒸留水、アルコールで1.0-1.2mPa s、菜種油で200−1000mPa s、35％PEG溶液で150−300mPa sであり、いずれも300Pa s以下であった。
【００３７】
【表３】
0004161031.tif 000004
【００３８】
前記表３は、亜鉛含有低結晶水酸アパタイト微粒子を蒸留水やポリエチレングリコール溶媒に分散懸濁させて得られる懸濁液の態様を示している。いずれも、沈降速度０．８ｃｍ／ｓ以下の結果を得ており、経口投与或いは非経口で投与できるものであることを示している。
【００３９】
実施例４
Ca(OH)２、 H３PO４、及びZn(NO３)２ を混合し、得られた混合物の（Ca+Zn）／  Pの原子比が1.50になるような割合で、超純水に加えて撹拌混合させて、沈殿を生成させた。
これを濾別、乾燥、粉砕し、1400℃5時間加熱して、亜鉛含有αリン酸三カルシウムを得た。これを分級して粒子径38ミクロン以上106ミクロン以下とし、蒸留水、菜種油、に固液比2mg/mlで懸濁させて懸濁時間を測定した。懸濁時間は１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を懸濁液に照射し、懸濁液中を通過する入射光の光路が目視で確認できるまでの時間とした。その結果を表４に示す。また、懸濁液の粘度は蒸留水で1.0−1.2mPa s、菜種油で200−1000mPa sであり、いずれも300  Pa s以下であった。
【００４０】
【表４】
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【００４１】
前記表４は、亜鉛含有αリン酸三カルシウム微粒子を蒸留水及び菜種油に分散懸濁させて得られる懸濁液の態様を示している。いずれも、沈降速度０．８ｃｍ／ｓ以下の結果を得ており、経口投与或いは非経口で投与できるものであることを示している。
【００４２】
実施例５
H３PO４4.89ｇ（８５％リン酸5.76g相当）を87.75gの水に加え希リン酸溶液とした。これに室温で炭酸カルシウム５ｇと硝酸亜鉛6水和物を0.06-4.095g添加した。このとき溶液中のリン酸とカルシウムのモル比は１：１である。そのまま１２時間撹拌しつづけ、その後、沈殿を濾別、室温乾燥した。粉末X線回折を行ったところ、硝酸亜鉛6水和物の添加量が0.25ｇ以下の時には生成物は亜鉛含有リン酸水素カルシウム2水塩、添加量が0.25ｇ以上のときは亜鉛含有リン酸水素カルシウム2水塩とCaZn２(PO４)２・nH２O(n＝2)であった。これを分級して粒子径38ミクロン以下とし、場合によっては炭酸カルシウム粉末を50％添加して、水、菜種油、35％ポリエチレングリコール（PEG）溶液、６０％ポリエチレングリコール（PEG）溶液に固液比2mg/mlで懸濁させて懸濁時間を測定した。懸濁時間は１mW未満半導体レーザー（JISクラスII650nm）を懸濁液に照射し、懸濁液中を通過する入射光の光路が目視で確認できるまでの時間とした。その結果を表４に示す。また、懸濁液の粘度は菜種油で200−1000mPa s、３５％PEGで150−300 mPa s、６０％PEGで1−3 Pa s、であり、いずれも300Pa s以下であった。
【００４３】
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【００４４】
前記表５は、亜鉛含有リン酸水素カルシウム微粒子または亜鉛含有リン酸水素カルシウム微粒子と炭酸カルシウム微粒子、または亜鉛含有リン酸水素カルシウム微粒子とCaZn２(PO４)２・nH２O(n＝2)微粒子と炭酸カルシウム微粒子を菜種油、35％PEG、６０％PEGに分散懸濁させて得られる懸濁液の態様を示している。いずれも、沈降速度０．８ｃｍ／ｓ以下の結果を得ており、経口投与或いは非経口で投与できるものであることを示している。
【００４５】
実施例６
５週令ウイスター系メスラットを用い、これらのラットを以下のような4群に分けて9週間飼育した。
N群：卵巣摘出せず、普通食を与えた。
D1群：卵巣を摘出し、低亜鉛低ビタミンD食を与えた。
D2群：卵巣を摘出し、低亜鉛低ビタミンD食を与えた。
D3群：卵巣を摘出し、低亜鉛低ビタミンD食を与えた。
その結果、D1群からD3群までのラットは、9週目までに亜鉛欠乏性骨粗鬆症に陥った。次に、N群のラットとD1群のラットには、「Ca混合食を与えて6.17重量％亜鉛含有ベータリン酸三カルシウム懸濁液を筋肉注射」を行った。
同じく、  D2群には「Ca混合食を与えて、12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を筋肉注射」を行った。
同じく、  D3群には「Ca混合食を与えて、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を筋肉注射」を行った。Ca混合食を与えることはカルシウム製剤を経口投与することに相当する。
その結果、N群は正常状態を維持し、D3群は亜鉛欠乏性骨粗鬆症病態を維持した。
D1群、D2群、D3群の病態をN群と比較することで、亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液（D1群、D2群）による亜鉛欠乏性骨粗鬆症改善効果の評価をおこなった。
なお、懸濁液の筋肉注射は、いずれも左大腿部筋肉に毎週1回行った。使用した懸濁液はいずれも粒径38ミクロン以下の粒子10mgを生理食塩水0.2mlに懸濁した。
以上のことから、以下のことが分かった。
18週目、すなわち筋肉注射開始9週目で、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD3群では、左大腿骨の骨密度はN群の73％であった。
一方、6.17重量％亜鉛含有βリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD1群では、左大腿骨の骨密度はN群の84％まで、統計的有意に（p<0.05）改善した。
12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を注射投与したD2群では回復効果はさらに高く、左大腿骨の骨密度はN群の90％まで統計的有意に（p<0.005）改善したことがわかった（図１）。
しかも、懸濁液を注射してない右大腿骨の骨密度は、左大腿骨に比較して有意に低かった。これらのことから、Caの投与だけでは亜鉛欠乏性骨粗鬆症が改善しないこと、及びCaを投与しておいて、亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を亜鉛欠乏性骨粗鬆症の骨近傍に局所的に投与することで、亜鉛含有リン酸カルシウムから亜鉛が徐放され、亜鉛欠乏性骨粗鬆症を局所的に改善できることがわかり、骨折を未然に防止できる可能性が示唆された。
【００４６】
実施例７
実施例６における各群の大腿骨を、18週目すなわち筋肉注射開始9週目で摘出し、インストロン型の万能試験機を用いて、3点曲げ試験により骨の三点曲げ強度を測定した。その結果、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD3群では、左大腿骨の破壊強度はN群の強度の64％であった。
一方、6.17重量％亜鉛含有βリン酸三カルシウム懸濁液を注射投与したD1群では、左大腿骨の破壊強度はN群の76％まで、統計的有意に（＜0.05）改善したことが分かった。
1２．05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を注射投与したD2群でも、左大腿骨の破壊強度はN群の76％まで統計的有意に（＜0.005）改善したことが分かった（図２）。
これらのことから、Ca投与だけでは亜鉛欠乏性骨粗鬆症が効果的に改善しないこと、及びCaを投与しておいて、亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を亜鉛欠乏性骨粗鬆症の骨近傍に局所的に投与することで、亜鉛含有リン酸カルシウムから亜鉛が徐放され、亜鉛欠乏性骨粗鬆症を効果的に改善でき、骨強度を回復できることがわかった。
又、懸濁液を注射投与した部位の皮膚には、発赤や脱毛等の異常所見は認められなかった。注射投与した筋肉組織を切開して検討したところ、懸濁液が接触していた組織には、炎症、浸潤液、肉芽組織は認められなかった。12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を投与したD2群（図３）とβリン酸三カルシウム懸濁液を投与したD3群（図４）との間に皮膚組織、筋肉組織とも肉眼所見で差はなかった。このことは、筋肉組織内で12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液が、顆粒状人工骨や多孔性人工骨として広く臨床応用されている高生体適合性のβリン酸三カルシウムの懸濁液と同等の生体適合性を持つことを意味する。
【００４７】
【発明の効果】
以上のように本発明による亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液又は粒子-溶媒混合系によれば、生体適合性が高く長期的な亜鉛徐放性に優れた亜鉛含有リン酸カルシウムを、経口投与は無論のこと非経口投与においても投与することができ、なおかつ接触する組織に対して生体適合性が高い亜鉛薬剤を提供することができ、その結果亜鉛欠乏に由来する疾患を改善できる効果がある。
【図面の簡単な説明】
【図１】亜鉛欠乏性骨粗鬆症ラットに筋肉注射した場合の骨密度改善効果を示す図
【図２】亜鉛欠乏性骨粗鬆症ラットに筋肉注射した場合の骨強度改善効果を示す図
【図３】亜鉛欠乏性骨粗鬆症ラットに、12.05重量％亜鉛含有リン酸カルシウム懸濁液を筋肉注射した後の組織
【図４】亜鉛欠乏性骨粗鬆症ラットに、亜鉛を含まないβリン酸三カルシウム懸濁液を筋肉注射した後の組織
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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