(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジラゼプ、その酸付加塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とするＶＣＡＭ−１発現抑制剤（但し、抗リウマチ剤である場合を除く）。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＶＣＡＭ−１の発現を抑制することによって細胞接着を阻害する作用を有し、抗アレルギー剤、抗喘息剤、抗リウマチ剤、抗炎症剤などとして有用な医薬品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
種々の炎症において、炎症部位への白血球やリンパ球の浸潤が認められる。このうち例えば、喘息患者の気管への好酸球の浸潤（大橋ら、アレルギー，39, 1541-1549(1990)）、動脈硬化症の血管へのマクロファージの浸潤（Ross R Nature, 362, 801-809(1993)）、急性炎症部位、接触性皮膚炎及び関節リウマチ患者の滑膜への種々の白血球の浸潤（Arend WP & Dzyer JM, Arthritis Rheum., 33, 305-315(1990)）がよく知られている。
【０００３】
これらの白血球やリンパ球の浸潤は、サイトカイン、ケモカイン、リピッド及び補体等によって惹起される（Albelda SMら, FASEB J., 8, 504-512(1994)）。活性化した流血中の白血球は、インターロイキン−１や腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−αなどのサイトカインにより活性化した血管内皮細胞とローリング（rolling）又はテターリング（tethering）と呼ばれる相互作用を行ない、血管内皮細胞と接着（adhesion）する。その後、血管内皮を潜りぬけ（transmigration）、炎症部位へと浸潤する。
【０００４】
この白血球と血管内皮細胞との相互作用の過程に、セレクチン、インテグリン及びイムノグロブリンファミリー、ＣＤ４４などの種々の接着分子が関与していることが報告されている（Albelda SMら, FASEB J., 4, 2868-2880(1990)）。また、これらの接着分子はリンパ球のホーミングにも関与していることが報告されている（Shimizu Yら, Immunology Today, 13, 106-112(1992)）。更にこれらの接着分子は癌の転移における血管内皮細胞との接着にも関与していることが報告されている（Gorsky A, 15, 251-255(1992)）。
【０００５】
このように白血球や癌細胞の血管内皮細胞への細胞接着は、種々の炎症疾患における白血球の炎症部位への浸潤又は癌の転移に重要な役割を果している。
【０００６】
従って、このような細胞接着及び細胞浸潤を阻害する物質が喘息、アレルギー、リウマチ等の疾患及び炎症や癌の転移に対して有効の薬剤となりうることが報告された（特開平９−１４３０７５号公報）。
【０００７】
一方、ＶＣＡＭ−１は免疫グロブリンスーパーファミリーに属する分子量１１０ｋＤａで７個の免疫グロブリン領域を持つ蛋白質である。ＶＣＡＭ−１は種々のケモカインや炎症性メディエーターにより活性化した血管内皮細胞及び濾胞樹状細胞（follicular dendritic cell）に発現していることが知られている。また、ＶＣＡＭ−１のリガンドとしては、ＶＬＡ−４（α４β１）が知られており好中球以外の白血球に分布している。また、α４β７もリガンドとして知られており、リンパ球、ＮＫ細胞及び好酸球に分布している（Erle DJ et al., J Immunol 153:517, 1994）。ＶＣＡＭ−１又はそのリガンドであるＶＬＡ−４が動脈硬化（Cybulsky MI et al., Science, 251:788-791, 1991, O'Brien Kdet al., J Clin Invest, 92:945-951, 1993）やリウマチ（Issekutz Acet al., J Exp Meds, 181:1197-1203, 1995, Postigo AA, et al., J Clin Invest, 89:1445-1452, 1992, Morales-Ducret Jet al., J Immunol, 149:1424-1431, 1992）、喘息（Nakajima H et al., J Exp Med, 179:1145-1154, 1994, Pretolani M et al., J Exp Med. 180:795-805, 1994）、腎炎（Mulligan MS et al., J Clin Invest, 91:577-587, 1993）、脳脊髄炎（Yednock Taet al., Nature, 356:63-66, 1992）などの炎症性疾患及び移植（Pelletier RP et al., J Immunol, 149:2473-2481, 1992）に関与していることが報告されている。従って、ＶＣＡＭ−１の発現を抑制する物質、又はＶＣＡＭ−１とそのリガンドの結合を抑制する物質は血管内皮細胞と白血球の細胞接着を阻害し、前述の疾患において治療効果が期待できる。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的はＶＣＡＭ−１の発現を抑制することにより細胞接着を阻害する種々の疾患の治療薬を提供するものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
斯かる実情に鑑み、本発明者らはＶＣＡＭ−１の発現を抑制する物質を得るべく鋭意研究を行なった結果、心・脳・腎疾患治療剤とて知られているジラゼプ又はその塩がＶＣＡＭ−１の発現を抑制し、優れた細胞接着阻害作用を有することを見出して本発明を完成した。
【００１０】
すなわち本発明は、ジラゼプ、その酸付加塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とするＶＣＡＭ−１発現抑制剤、細胞接着阻害剤、抗アレルギー剤、抗喘息剤及び抗リウマチ剤を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の有効成分であるジラゼプは公知の化合物であり、下記の式で表される。
【００１２】
【化１】
0004139453.tif 000002
【００１３】
特にジラゼプの塩酸塩・１水和物は血流量増加作用、抗血小板作用、赤血球機能・血液流動性の改善作用、心筋保護、脳代謝賦活作用、腎機能改善作用等を有し、虚血性心疾患、狭心症、脳梗塞後遺症、脳出血後遺症、脳動脈硬化症、腎機能障害等の治療剤として広く使用されている。しかしながら、この化合物がＶＣＡＭ−１の発現を抑制することは未だ報告されていない。
【００１４】
本発明の有効成分であるジラゼプは例えば特公昭４４−２３３３４号公報に記載の方法で製造することができる。
【００１５】
本発明においては、ジラゼプの酸付加塩を用いることもでき、酸付加塩は常法によって製造することができる。酸付加塩の酸としては、硫酸、塩酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸等の無機酸；酢酸、乳酸、コハク酸、酒石酸、リンゴ酸、マレイン酸、クエン酸、フマール酸、メタスルホン酸、トルエンスルホン酸等の有機酸などが挙げられる。
【００１６】
また、溶媒和物としては、製造時、精製時などに用いた溶媒例えば、水、アルコールなどが付加したものであり、細胞接着作用に悪影響を及ぼさないものであれば特に制限はない。溶媒和物としては水和物が好ましい。
【００１７】
後記実施例に示すようにジラゼプ又はその塩は、ＶＣＡＭ−１の発現を強く抑制し、これに基づく細胞接着阻害作用を有することから、抗アレルギー剤、抗喘息剤、抗リウマチ剤として有用である。本発明医薬の対象疾患としては、例えばアレルギー性結膜炎、春季カタル等のアレルギー性眼疾患；アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎等のアレルギー性皮膚疾患；アレルギー性鼻炎；気管支喘息；リウマチ等が挙げられる。
【００１８】
本発明の医薬は、ジラゼプ、その酸付加塩又は溶媒和物を有効成分とするものであり、この有効成分を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、担体、希釈剤などを用いて錠剤、カプセル剤、顆粒剤、注射剤、坐剤、点眼剤等の任意の剤型とすることができる。これらの製剤は公知の方法で製造することができる。例えば経口投与用製剤とする場合には、ジラゼプを澱粉、マンニトール、乳糖等の賦形剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤；結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤；タルク、スタリン酸マグネシウム等の滑沢剤；軽質無水ケイ酸等の流動性向上剤、などを適宜組み合わせて処方することにより製造することができる。
【００１９】
本発明の医薬の投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって異なるが、ジラゼプとして、通常成人の場合、１日０．１〜１，０００mgを１〜３回に分けて投与するのが好ましい。
【００２０】
【実施例】
以下に、塩酸ジラゼプ（１水和物）のＶＣＡＭ−１発現抑制作用及び細胞接着阻害作用の実施例を挙げて本発明を説明する。
【００２１】
実施例１
ヒト臍帯静脈内細胞（ＨＵＶＥＣs）を、塩酸ジラゼプを含む培養液で２０分間プレインキュベートした後、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ：１０Ｕ／ml）又はホルボールエステル（ＰＡＭ：５Ｕ／ml）で刺激し、４、８時間後の細胞表面上のＶＣＡＭ−１の抗原量をＥＬＩＳＡにより測定した。
その結果、図１及び図２に示すように塩酸ジラゼプはＴＮＦ、ＰＭＡ刺激によるＶＣＡＭ−１の発現を濃度依存的に強く阻害した。
【００２２】
実施例２
（細胞接着阻害作用）
ロス（Ross）らの方法（J. Biol. Chem., 267, 8537-8543(1992)）を参考にして行なった。すなわち、ヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞（HUVEC）を４８穴プレートでコンフルエントになるまで培養後、ＩＬ−１β、ＴＮＦα又はＬＰＳを添加した。添加５時間後にＰＫＨ２（大日本製薬社製）にてＦＩＴＣラベルしたヒト単球／組織球由来細胞であるＵ９３７を各ウェルに３×１０5 細胞添加した。４５分間室温で静置後、接着していないＵ９３７を洗い流し、１％Triton X-100で細胞を溶解して、残存している蛍光強度を測定した（Exi. 494nm, Emi. 504nm）。ＨＵＶＥＣはＥＧＭ−ＵＶ（クラボウ社製）で、また、Ｕ９３７はＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＣＳにて培養した。ＨＵＶＥＣへの薬物の添加はＩＬ−１β、ＴＮＦα及びＬＰＳ混合物添加時に、Ｕ９３７へは細胞接着試験の２４時間前に添加して作用を検討した。阻害活性は｛（薬物無添加でIL-1β、TNFα及びLPSの混合物刺激血管内皮細胞への薬物無添加Ｕ９３７の接着細胞数）−（薬物無添加で無刺激の血管内皮細胞への薬物無添加Ｕ９３７の接着細胞数）＝１００％｝として算定した。この結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
0004139453.tif 000003
【００２４】
以下に具体的な製剤例を示す。
【００２５】
実施例３（糖衣錠）
塩酸ジラゼプ                            ５０mg
トウモロコシ澱粉                        ２７mg
結晶セルロース                          １０mg
カルボキシメチルセルロース              １０mg
ヒドロキシプロピルセルロース              ２mg
ステアリン酸マグネシウム                  １mg
小  計                                １００mg 
コーティング（糖衣）                  １５０mg 
合  計（１錠当り）                  ２５０mg
【００２６】
塩酸ジラゼプからステアリン酸マグネシウムまでを用い、常法に従って素錠を製造した。次いで糖衣を施し、製品とした。
【００２７】
実施例４（錠剤）
塩酸ジラゼプ                            ２５mg
賦形剤（乳糖）                          ２０mg
澱粉                                    ５０mg
セルロース                                ５mg
結合剤                                  適量
滑沢剤                                  適量
以上の組成を混合し、打錠して錠剤を製造した。
【００２８】
実施例５（細粒）
塩酸ジラゼプ                            ５０mg
乳糖                                  ４４７mg
トウモロコシ澱粉                      １１９mg
硬化ヒマシ油                            ８０mg
カルボキシメチルセルロースナトリウム    ４０mg
カルボキシメチルセルロースカルシウム  １１９mg
ヒドロキシプロピルセルロース            ４５mg
２−メチル−５−ビニルピリジンメチルアクリレート
・メタアクリル酸コポリマー            ５２mg
ポリエチレングリコール６０００            ８mg
ステアリン酸ポリオキシル４０              ２mg
タルク                                    ８mg
白糖                                    ３０mg
【００２９】
塩酸ジラゼプからヒドロキシプロピルセルロースまでを用い、常法に従って細粒を製造した。残りのものを用いてコーティングし、製品とした。
【００３０】
実施例６（注射剤）
塩酸ジラゼプ                              ０．５mg
塩化ナトリウム                            ８．９mg
注射用蒸留水にて全量を１．０mlとする。
【００３１】
以上の組成を完全に溶解した後、無菌濾過し、アンプルに充填して注射剤を製造した。
【００３２】
実施例７（点眼剤）
１００ml中
塩酸ジラゼプ                              ０．１０ｇ
グリセリン                                １．８０ｇ
０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液            １．５０ml
塩化ベンザルコニウム                      ０．００５ｇ
滅菌精製水                                適量
【００３３】
滅菌精製水９０mlに塩酸ジラゼプを加えて溶解した後、グリセリン、塩化ベンザルコニウム及び０．１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を加えた後、滅菌精製水を加えて全量を１００mlとする。
【００３４】
【発明の効果】
ジラゼプは優れたＶＣＡＭ−１の発現抑制作用及び細胞接着阻害作用を有し、毒性も少ないので、抗喘息剤、抗アレルギー剤及び抗リウマチ剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＴＮＦ刺激によるＶＣＡＭ−１発現に対する塩酸ジラゼプの効果を示す図である。
【図２】ＰＭＡ刺激によるＶＣＡＭ−１発現に対する塩酸ジラゼプの効果を示す図である。
【図１】
0004139453.tif 000004
【図２】
0004139453.tif 000005