(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）組成物の２重量％から１２重量％の量のα−ヒドロキシ酸であって、乳酸、２−ヒドロキシオクタン酸、ヒドロキシラウリン酸、グリコール酸およびそれらの混合物から成る群から選択されるもの、
（ｉｉ）組成物の０．０５重量％から２０重量％の量のペトロセリン酸、および
（ｉｉｉ）化粧品として許容可能なビヒクル
を含んでなる組成物。
【請求項２】
ヒドロキシ酸がグリコール酸、乳酸、およびそれらの混合物から成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
α−ヒドロキシ酸を含有する組成物の局所塗布によって誘発される刺痛または刺激を軽減するための方法であって、α−ヒドロキシ酸が、乳酸、２−ヒドロキシオクタン酸、ヒドロキシラウリン酸、グリコール酸およびそれらの混合物から成る群から選択されるものであり、該組成物によって誘発される刺激を軽減するために効果的な量でペトロセリン酸を局所的に塗布することを含んでなる化粧法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の属する技術分野
本発明は、α−ヒドロキシ酸によって誘発される皮膚刺激または刺痛を軽減または除去するための組成物および方法におけるペトロセリン酸の使用に関する。
【０００２】
発明の背景
α−ヒドロキシ酸（ＡＨＡ）は、光により損傷した皮膚または自然に老化した皮膚の外観、皮膚の明色化、年齢によるシミの処置などを改善するなどの化粧利点を発揮することが証明されている。残念ながら、高濃度でのそれらの使用は、塗布に基づく皮膚刺激、例えば皮膚の赤みおよび刺痛感覚を時折伴うことがある。Ｋｌｉｇｍａｎ  ＡＭ，Ｊ．Ｇｅｒｉａｔｒ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９７；５（３）：１２８−１３１を参照のこと。この刺激は、組成物中の活性成分の量を低下させること、または活性成分の皮膚への浸透を低減させることによって改善することができる。両方法の深刻な欠点は、その有効性が損なわれることである。ＡＨＡの刺激は、組成物のｐＨを上げることによって軽減することができるが、この方法は皮膚へのＡＨＡの浸透を低減させるため有効性の低下をもたらす。ＡＨＡの有効性を維持しながら、刺激の潜在性を軽減または除去することが望ましい。
【０００３】
欧州特許出願第０６３１７２２号（ジョンソン・アンド・ジョンソン（Ｊｏｈｏｎｓｏｎ  ＆  Ｊｏｈｏｎｓｏｎ））は、レチノールによる皮膚の刺激を軽減するためのグリコール酸の使用を開示している。米国特許第５，５１６，７９３号（デュフィー（Ｄｕｆｆｙ））は、ＡＨＡを含む種々の局所用成分によってもたらされる刺激を改善するためのアスコルビン酸の使用を開示している。
【０００４】
ペトロセリン酸を多量に含む油、例えばコエンドロ実油の皮膚用化粧品組成物中での使用が開示されている（ＥＰ  ０７０９０８４  Ａ２）。ＥＰ０７０９８４は、加湿剤としてコエンドロ実油の使用を教示しているが、刺激を軽減するためのペトロセリン酸の性質は開示していない。さらに、任意の種々添加剤の存在、例えば、ヒドロキシ酸（５−サリチル酸ｎ−オクタノール）などの角質溶解剤に言及している。サリチル酸はβ−ヒドロキシ酸であり、これはα−ヒドロキシ酸とは異なる方法で作用することが知られていると共に、より刺激が少ないものと考えられている。
【０００５】
上で論じた技術は、化粧品組成物におけるＡＨＡとコエンドロ実油またはペトロセリン酸との組み合わせを開示しておらず、またＡＨＡの使用に関連した刺激または刺痛を軽減するためのペトロセリン酸の使用を教示しているようには見えない。
【０００６】
発明の要約
本発明は、α−ヒドロキシ酸（ＡＨＡ）を含有すると共に、ペトロセリン酸をさらに含有する組成物を一部包含する。
【０００７】
本発明は、ＡＨＡを含有する組成物の局所塗布によって誘発される刺激または刺痛を軽減するための化粧法であって、この組成物によって誘発される刺激を軽減するためにペトロセリン酸を局所的に塗布することを含んでなる方法も包含する。本発明の方法によると、ペトロセリン酸は同じ組成物中にＡＨＡと共に存在してもよいし、またはペトロセリン酸を別の組成物から塗布してもよい。
【０００８】
本発明によると、ペトロセリン酸の局所塗布の効力によって、ＡＨＡの局所塗布により誘発される刺激または刺痛が軽減または除去される。本発明の一部として、公知の抗刺激剤がＡＨＡ誘発刺激を改善することを見出した。
【０００９】
従って、本発明は、ＡＨＡ誘導刺激または刺痛を軽減するための化粧品組成物におけるペトロセリン酸の使用も包含する。
【００１０】
発明の詳細な説明
別途規定しない限り、すべての量は組成物の重量でのものである。
【００１１】
ペトロセリン酸（ＣＨ３（ＣＨ２）１０ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）４ＣＯＯＨ）は、本発明の組成物の必須成分である。
【００１２】
本発明の組成物中のペトロセリン酸の量は、組成物の０．０５重量％から２０重量％、好ましくは０．１重量％から１０重量％、最も好ましくは０．５重量％から５重量％の範囲にわたる。
【００１３】
ＡＨＡは、ケラチン生成細胞中で増殖を強化すると共にセラミドの生合成を増進させ、表皮厚を増やし、また普通肌の落屑を増進して、よりなめらかで若若しく見える肌にする。
【００１４】
ＡＨＡは、ステレオ異性体（ＤＬ、ＤまたはＬ）の組み合わせである。
【００１５】
ＡＨＡは、一般式（１）：
【００１６】
【化１】
0004129121.tif 000002
（式中、Ｍは水素、または炭素数１から２７の飽和または不飽和、直鎖または分枝状の炭化水素鎖である。）を有する。
【００１７】
なお更に好ましくは、ヒドロキシ酸は、乳酸、２−ヒドロキシオクタン酸、ヒドロキシラウリン酸、グリコール酸、およびそれらの混合物から選択される。ステレオ異性体が存在する場合は、Ｌ−異性体が最も好ましい。
【００１８】
組成物のｐＨに依存次第で、ヒドロキシ酸が塩、例えば、アンモニウム塩またはカリウム塩もしくはナトリウム塩として存在しうることは理解されるべきである。
【００１９】
本発明の組成物は、２．５から１０の一般範囲中でどのｐＨを有してもよいが、（特に、それらがヒドロキシ酸を含有する場合）酸性ｐＨ、最も好ましくは３〜４のｐＨである時、本発明の組成物は特に有用である。その理由は、こうした組成物が特に意図した効果を生じるからであるが、残念なことにこのｐＨでも組成物は刺激性である。
【００２０】
本発明の組成物の特別の利点は、より大量のヒドロキシ酸またはレチノイドを皮膚刺激をもたらすことなく使用することができるということである。好ましくは、本発明による組成物中に存在するヒドロキシ酸成分の量は、０．０１から２０重量％、好ましくは０．１から１２重量％、最も好ましくは２から１２重量％である。
【００２１】
ペトロセリン酸抗刺激剤を含有する最も好ましい本発明の組成物には、グリコール酸および／または乳酸が含まれる。その理由は、これらの成分が刺激の原因となることはわかっているが、化粧利点を発揮する際に特に意図した効果を生じることがわかっていたからである。
【００２２】
本発明のスキンケア組成物は、化粧品として許容可能なビヒクルまたはキャリヤーも含み、これらは不活性であり、通常、最も大量に存在する成分であり、活性成分または効能成分を送達する機能を果たしている。
【００２３】
水以外のビヒクルは、液体または固体の皮膚軟化剤、溶媒、保湿剤、増粘剤、および粉体を含むことができる。特に好ましい非水キャリヤーは、ポリジメチルシロキサンおよび／またはポリジメチルフェニルシロキサンである。本発明のシリコーンは、２５℃で概して約１０から１０，０００，０００センチストークスの範囲にわたる粘度を有するものである。低粘度および高粘度シリコーンの混合物が特に望ましい。これらのシリコーンは、商品名ビカシル（Ｖｉｃａｓｉｌ）、ＳＥおよびＳＦとしてゼネラルエレクトリック社（Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｉｃ  Ｃｏｍｐａｎｙ）から、および２００および５５０シリーズとしてダウコーニング社（Ｄｏｗ  Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ）から入手することができる。本発明の組成物中で使用することができるシリコーンの量は、概して組成物の５から９５重量％、好ましくは２５から９０重量％の範囲にわたる。ビヒクルの量は、全組成物の約２から約９９重量％、好ましくは約５０から約９９重量％、最も好ましくは約８０から９９重量％の範囲にわたってもよい。
【００２４】
本発明によると、ビヒクルは、ビヒクルの重量に対して好ましくは少なくとも６０重量％が水である。本発明の組成物は、ヒドロキシ酸の皮膚送達を改善するために好ましくは油−水乳濁液である（サー（Ｓａｈ  Ａ．）による「皮膚へのα−ヒドロキシ酸（乳酸）の送達における処方の変化および生成物の構造の影響に関するインビトロでの研究（Ａｎ  ｉｎ−ｖｉｔｒｏ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ  ｖａｒｉａｂｌｅｓ  ａｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａｌｐｈａ−ｈｙｄｒｏｘｙ  ａｃｉｄ  （Ｌａｃｔｉｃ  ａｃｉｄ）ｔｏ  ｓｋｉｎ）」、修士論文、オハイオ州、シンシナティ大学、薬学カレッジの薬品科学学部、１９９６年７月を参照のこと）。こうした改善された送達は、多くの場合、刺激／刺痛の増大を伴うので、こうした乳濁液中でのペトロセリン酸の使用が特に重要になる。本発明による好ましい水中油乳濁液において、水は本発明の乳濁液の少なくとも５０重量％、最も好ましくはその組成物の５０から７０重量％を構成する。
【００２５】
任意の皮膚利益材料および化粧品添加剤
本発明の化粧品組成物中には多様なタイプの活性成分が存在できる。活性成分は、皮膚軟化剤以外の、および組成物の物理的特性を単に改善する成分以外の皮膚利益剤として定義する。このカテゴリーに限定されないが、一般例には抗シワ化合物および日焼け止め剤、ならびに日焼け剤が挙げられる。
【００２６】
日焼け止め剤には、紫外線を遮断するために通常用いられるような材料が挙げられる。例示的な化合物には、二酸化チタン、ＰＡＢＡ、シンナメートおよびサリチラートの誘導体がある。例えば、オクチルメトキシシンナメート、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとしても知られる）を用いることができる。オクチルメトキシシンナメート、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、各々、パーゾールＭＣＸ（Ｐａｒｓｏｌ  ＭＣＸ）およびベンゾフェノン−３（Ｂｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎ−３）の商品名で市販されている。乳濁液に用いられる日焼け止め剤の正確な量は、ＵＶ放射から保護する所望の度合いに依存して変化しうる。
【００２７】
本発明の化粧品組成物中の機能性成分のもう一つのカテゴリーは増粘剤である。増粘剤は、通常、概して組成物の０．１から２０重量％、好ましくは約０．５から１０重量％の量で存在する。増粘剤の例には、商品名カルボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）としてグッドドリッチ社（Ｂ．Ｆ．  Ｇｏｏｄｒｉｃｈ  Ｃｏｍｐａｎｙ）から入手することができる架橋ポリアクリレート材料がある。キサンタン、カラゲナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチンおよびローカストビーンガムなどのゴムを用いることもできる。一定の状況下では、シリコーンすなわち皮膚軟化剤としても働く材料が増粘剤機能を達成することができる。例えば、１０センチストークスを超過するシリコーンゴム、およびグリセロールステアレートなどのエステルは二元機能性である。
【００２８】
本発明の化粧品組成物中に粉体を配合してもよい。これらの粉体には、チョーク、タルク、フラー土、カオリン、スターチ、スメクタイトクレー、化学変性ケイ酸マグネシウムアルミニウム、有機変性モンモリロナイトクレー、水和珪酸アルミニウム、ヒュームドシリカ、アルミニウムスターチオクテニルスクシネート、およびそれらの混合物が挙げられる。
【００２９】
その他の添加剤微量成分を化粧品組成物に配合してもよい。これらの成分には、着色剤、乳白剤および香料を挙げることができる。これらのその他の成分材料の量は、概して組成物の０．００１重量％から２０重量％までの範囲にわたってもよい。
【００３０】
組成物の使用
本発明による組成物は、主にヒトの皮膚への局所塗布用製品として、特に皮膚の調子を整えてなめらかにし、シワの寄ったまたは老化した皮膚の外観を予防または軽減するための薬剤として意図されたものである。
【００３１】
使用の際、少量、例えば１から１０ｍｌの組成物を、必要な場合には適する容器またはアプリケータから皮膚の暴露面に塗布し、その後、手または指もしくは適する道具を用いて皮膚に広げ、および／またはこすりつける。
【００３２】
本発明の方法によると、活性成分により誘発される皮膚刺激は、ペトロセリン酸の局所塗布によって軽減または除去される。ペテロセリン酸は活性成分と共に存在してもよいし、または活性成分とは別に皮膚に塗布してもよい。
【００３３】
製品形態および包装
本発明の局所皮膚処置組成物をローション、液状クリーム、クリームまたはジェルとして処方することができる。組成物をその粘度に合う、消費者による使用を意図した適する容器内に包装することができる。例えば、ローションまたは液状クリームは、ビンまたは回転球付きアプリケータ、もしくはカプセル、あるいは噴射剤により作動するエアゾール装置または指での操作に適するポンプを装着した容器内に包装することができる。組成物がクリームである場合には、チューブまたは蓋付きビンなどの変形しないビンまたはスクィーズ容器に簡単に保存することができる。
【００３４】
従って、本発明は、本明細書中で規定する化粧品として許容可能な組成物を収容する密閉容器も提供する。
【００３５】
ペトロセリン酸をＡＨＡを含有する組成物とは別に包装してもよい。
【００３６】
以下の特定の実施例によって本発明をさらに説明するが、本発明をそれらに制限するものではない。
【００３７】
比較例１
以下の処方を有する乳濁液ベースを調製した。
【００３８】
【表１】
0004129121.tif 000003
【００３９】
以下の表１中の追加成分を水の代わりに添加した。
【００４０】
以下に記載の刺激試験法に従って、被験者を試験した。
【００４１】
刺激試験法
四暴露パッチ試験：目的は、パッチの貼付けを繰り返した後に種々の試験材料によって生じる刺激のレベルを比較することであった。試験材料は、閉塞条件下で皮膚との接触を保った。パネリストの上腕の外側を貼付け面として指定した。包帯タイプの外傷用医薬材料（スキャンパー（Ｓｃａｎｐｏｒ）（登録商標）テープ）を用いて、パッチ（直径１８ｍｍの円板のウェブリル（Ｗｅｂｒｉｌ）（登録商標）パジングの付いた２５ｍｍのヒルトップ（Ｈｉｌｌ  Ｔｏｐ）（登録商標）チャンバ）を適所に保持した。パッチは、バランスのとれた無作為の順番で貼付けた。
【００４２】
パッチを月曜日の午前９：００に貼付けて、火曜日の午前９：００に取外した（２４時間暴露）。新しいパッチセットを火曜日の午後３：００に貼付けて、水曜日の午前９：００に取外した（１８時間暴露）。第三のパッチセットを水曜日の午後３：００に貼付けて、木曜日の午前９：００に取外した（１８時間暴露）。最後のパッチセットを木曜日の午後３：００に貼付けて、金曜日の午前９：００に取外した（１８時間暴露）。
【００４３】
パッチを取外すたびに、その部位を温水ですすぎ、軽くなでて水気を拭き取った。その後、等級を付ける、次のパッチ貼付け位置を確かにするために試験部位を外科用皮膚マーカーでマークした。この調査の火曜日、水曜日、木曜日および金曜日の午後３：００、再びパッチする前に試験部位を評価した。
【００４４】
試験部位の穏やかな赤み、乾燥および／またはかゆみなどの皮膚刺激が予測される。試験部位の腫脹もありうる。評価時にいずれかの試験が穏やかな赤みまたは何らかの腫脹を有するようなら、その特定試験部位には再びパッチすべきではない。
【００４５】
各腕の試験部位をばらつきのない照明の下で二人の熟練試験官によって視覚的にランク付けした。試験部位を過酷さ順にランク付けした。第一評価期間において反応をランク付けした試験官が、その調査を通して、各日、その部位のランク付けを継続した。
【００４６】
反応のランク付けにおいて、最も過酷な反応を示した部位に最も低い評点を与えた。二番目に過酷な反応を示した部位に二番目に低い評点等々を与えた。無理なランキングはしなかった。二つ以上の部位が反応を示さなかったり、同じ反応を示した（部位の間に差がない）場合には、ランクの平均値を割当てた。刺激の度合いによってある部位が打ち切られた場合、その部位は、投薬が打ち切られた時点で受けたランクを保持した。
【００４７】
統計的分析
パッチ処置によるランク付け結果を非母数統計法によって統計学的に比較した。フリードマンランク合計を用いて、抗刺激剤を含有する試験材料をヒドロキシ酸のみおよび／またはレチノイドを含有する対応する対照と比較した。一つのブロックとして役割を果たすパネリスト（すなわち、各パネリストは、各試験処置で試験された）での処理を各評価時点でフリードマンの分析を用いて処方２（対照）と比較した。０．１未満のｐ−値は統計的に有意であると考えられた。
【００４８】
表１に示した成分を含有する組成物を刺激試験法を用いて試験した。２０人の被験者を試験した。ランクの合計が高い方が刺激の過酷さが小さかった。
【００４９】
【表２】
0004129121.tif 000004
【００５０】
表１における結果から、四回の暴露後、０．０７５レチノールを伴う８％グリコール酸（＃２）は基礎処方＃１より著しく刺激が大きかったことがわかる。１％ニワトコまたは３％黒スグリ実油は、刺激をさほど軽減しなかった。α−ヒドロキシ酸によってもたらされる刺激が問題であるにも関わらず、ニワトコおよび黒スグリなどのよく知られた抗刺激剤を塗布してもこの問題を解決することができない。
【００５１】
比較例２
表２に示した成分を含有する組成物１、５および１１〜１４を実施例１に記載の刺激試験法を用いて試験した。１７人の被験者を試験した。得られた結果を表２にまとめる。ランクの合計が高い方が刺激が小さい。
【００５２】
【表３】
0004129121.tif 000005
【００５３】
表２における結果から、試験した知られた抗刺激剤はどれも組成物＃５（８％グリコール酸および０．０７５％レチノールを含有する）によって誘発される刺激を有意に軽減することができなかったことがわかる。
【００５４】
実施例３
この実施例は、ＡＨＡの局所塗布によって角質層からＩＬ−１αが放出されることを実証する。
【００５５】
角質層は、前炎症性サイトカンＩＬ−１αの貯蔵庫であることが知られている（ウッド（Ｌ．Ｗｏｏｄ）、エリアス（Ｐ．Ｅｌｉａｓ）、カルホウン（Ｃ．Ｃａｌｈｏｕｎ）、ツァイ（Ｊ．Ｔｓａｉ）、グランフェルド（Ｃ．Ｇｒｕｎｆｅｌｄ）、フェインゴールド（Ｋ．Ｆｅｉｎｇｏｌｄ）による、「バリヤー破壊がネズミの表皮中の予備形成プールからのインターロイキン−１αの発現および放出を促進する（Ｂａｒｒｉｅｒ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  Ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ  Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ  −１α  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｐｒｅ−Ｆｏｒｍｅｄ  Ｐｏｏｌ  ｉｎ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ）」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０６：３９７−４０３，１９９６）。以下の実施例は、ＡＨＡの局所塗布がヒトの皮膚中のＩＬ−１αの放出を誘導することを説明する。
【００５６】
生体からのＩＬ−１αの免疫組織化学染色
ヒトの死体の皮膚を、８％グリコール酸（ＧＡ）、ｐＨ３．８、またはビヒクルクリーム（基礎処方）、もしくは乳酸（ＬＡ）の８％水溶液、ｐＨ３．８、あるいはトリス緩衝液（ｐＨ７．６）をさらに含有する基礎処方（比較例１参照のこと）を用いて３０分間氷上で処理した。８ｍｍのパンチバイオプシーを採取して、ホルマリン中に固定した。５μの切片をポリクローナル抗ヒトＩＬ−１α（Ｒ＆Ｄシステムズ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、１／５０希釈）と共にインキュベートし、製造者側のインストラクション（ベクターラボ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ））によるアビジン−ビオチン−ウマ−ラディッシュペルオキシダーゼ複合手順、および色原体として３−アミノ−９−エチルカルバゾールを用いて展開した。ＩＬ−１α用の陽性標識の強度（変色範囲％）をイメージプロプラスバージョン３（ＩｍａｇｅＰｒｏ  Ｐｌｕｓ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３）（メリーランド州、シルヴァースプリングのメディアサイバネティクス（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ））を用いて定量した。得られた結果を表３にまとめる。
【００５７】
【表４】
0004129121.tif 000006
【００５８】
表３の結果から、８％乳酸での処理は、その対照であるトリス緩衝液と比較してＩＬ−１α変色を増大させたことがわかる。さらに、８％グリコール酸クリームは、ベヒクルに対するＩＬ−１α変色の顕著な増大を誘発した。ＡＨＡ（グリコール酸およびＬ−乳酸）の局所塗布は、表皮中のＩＬ−１αの即時放出を促進するようであった。高レベルのＩＬ−１αは角膜細胞に／周辺に貯蔵されることが知られているので、角質層は最も明らかな源であると思われる。
【００５９】
ＡＨＡ処理によって放出されるＩＬ−１αは、アラキドン酸をプロスタグラジンＥ２（ＰＧＥ２）などの多様な炎症性代謝物質に転化するアラキドン酸カスケードを始動させることができる。プロスタグランジンは炎症における中心的役割を果たし、従って、刺激の病因および治療に直接関係がある（クッパー（Ｋｕｐｐｅｒ  Ｔ）による、免疫学における「免疫および炎症における細胞および細胞質分裂（Ｔｈｅ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）」、オッペンハイム（Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ  ＪＪ）およびシェバック（Ｓｈｅｖａｃｈ  ＥＪ）編集、オックスフォード大学プレス（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｐｒｅｓｓ）、ニューヨーク、１９９０年、２８５〜３０５頁）。
【００６０】
実施例４
以下の実施例は、ペトロセリン酸が、ＡＨＡによって次々に放出されるＩＬ−１αによってもたらされるＰＧＥ２の誘導を効果的に抑制することを実証する。従って、ペトロセリン酸は、ＡＨＡによってもたらされる刺激を軽減するのに効果的であろう。
【００６１】
ヒトの新生児の皮膚の線維芽細胞（継代接種５〜９）を、９６ウェルの組織培養処理プレート（ニューヨーク、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）のコーニングコスター（Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ））におけるくぼみ１つ当り７５００個の細胞密度で接種した。用いた媒質は、ダルベッコ改良イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ’ｓ  Ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）、２ｍＭのＬ−グルタミン、１０％のウシ胎仔血清、抗生物質溶液および抗真菌性溶液（すべてギブコ／ライフテクノロジーズ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））を追加したハイ−グルコース（メリーランド州、ゲーサーズバーグのギブコ／ライフテクノロジーズ（Ｇｉｂｃｏ／Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ））であった。４８時間後、各ウェルを２００μｌの無血清ＤＭＥＭで二回すすぎ、１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１αを含有するＤＭＥＭ  ＋  Ｌ−グルタミンおよび／または活性成分における２００μｌをその細胞に投与した。６時間後、細胞を定性的生育性に関して顕微鏡で検査し、媒質を回収して、分析まで冷凍した。各処理を４回ずつ行った。
【００６２】
酵素免疫測定を市販のＰＧＥ２キット（イングランド州、バッキンガムシアのアメルシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））を用いて行った。ＰＧＥ２−特定抗体をマイクロタイターセットのウェルに下塗りした。分析は、標識されていないＰＧＥ２（標準物質またはサンプル）と、限定量のよく結合したＰＧＥ２−特定抗体用の固定量のペルオキシダーゼ標識付きＰＧＥ２との間の競争試験に基づく。０、１、２、４、８、１６および３２ｐｇ／ウェルまたは５０μｌ媒質／ウェルの標準物質に、５０μｌ／ウェルの０．１Ｍのホスフェート緩衝液ｐＨ７．５を４℃で３時間塗布した。インキュベーションの終わりに、５０μｌ／ウェルのホースラディッシュペルオキシダーゼ複合ＰＧＥ２をすべてのウェルに添加して、プレートを１時間４℃でインキュベートした。プレートを０．５％のトゥイーン（Ｔｗｅｅｎ）２０を含有する３００μｌ／ウェルの０．０１Ｍホスフェート緩衝液ｐＨ７．５で４回洗浄した。２０％ジメチルホルムアミド中の１５０μｌ／ウェルの３，３，５，５−テトラメチルベンジジン／過酸化水素基質を添加して、プレートを正確に３０分間室温でインキュベートした。１００μｌ／ウェルの１Ｍ硫酸を添加することによって反応を停止した。ダイナテック（Ｄｙｎａｔｅｃｈ）ＭＲ７０００ミクロ平板スペクトロメータ（バージニア州、シャンティイのダイナテック（Ｄｙｎａｔｅｃｈ））を用いて、４５０ｎｍでの吸収を読み取ることによってウェル内の色を定量した。標準曲線をプロットし、サンプル中のＰＧＥ２の量をその曲線から推定した。
【００６３】
試験化合物の抗炎症性の潜在性は、その化合物がＩＬ−１α誘導ＰＧＥ２を抑制する能力によって評価した。統計的な有意性をスチューデントｔ検定を用いて決定した。得られた結果を表４にまとめる。
【００６４】
【表５】
0004129121.tif 000007
【００６５】
表４における結果から、ペトロセリン酸は、ＡＨＡにより次々に放出されるＩＬ−１αによってもたらされるＰＧＥ２の誘導を効果的に抑制することができる。従って、ペテロセリン酸は、ＡＨＡによってもたらされる刺激を軽減するのに有効であろう。
【００６６】
実施例５〜８は、本発明による局所用組成物を説明するものである。これらの組成物は、従来の方法で処理することができる。これらは化粧品用途に適する。特に、これらの組成物は、肌の外観および触感を改善するためにシワの寄った肌、荒れた肌、乾燥肌、はげ落ちやすい肌、老化した肌および／またはＵＶによって損傷した肌へ塗布することに適し、ならびに肌状態の悪化を防止または抑制するために健康な肌に塗布することに適する。
【００６７】
実施例５
本発明の範囲内の典型的な水中油乳濁液は、以下のとおりである。
【００６８】
【表６】
0004129121.tif 000008
【００６９】
実施例６
本発明の範囲内のもう一つの典型的な水中油懸濁液は、以下のとおりである。
【００７０】
【表７】
0004129121.tif 000009
【００７１】
実施例７
本発明の範囲内の典型的な油中水分散液は、以下のとおりである。
【００７２】
【表８】
0004129121.tif 000010
【００７３】
実施例８
本発明の範囲内の以下の水中油乳濁液を調製した。
【００７４】
【表９】
0004129121.tif 000011
【００７５】
本明細書中に説明および記載されている本発明の特定の形態が単に代表例のつもりであることは、理解されるべきである。