(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
非導電性支持体、銀層とハロゲン化銀層とからなる互いに電気的に絶縁された一対の電極層、電解質層、およびイオン選択性膜がこの順に積層されてなるイオン選択電極を少なくとも二個有し、かつその二個のイオン選択電極のそれぞれはカルシウムイオン選択電極と水素イオン選択電極であり、そして被検液付与用開口部と参照液付与用開口部とを有する非導電性部材、付与された被検液を各イオン選択電極の一方の電極に供給する分配部材、付与された参照液を他方の電極に供給する分配部材、および被検液と参照液を電気的に導通させる架橋部材を備えた複合イオン選択性電極において、該カルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜の膜厚が５μｍ以上３０μｍ以下であり、そして該水素イオン選択電極のイオン選択性膜がトリ−ｎ−ドデシルアミンおよびトリスエチルヘキシルトリメリテートを含有することを特徴とする複合イオン選択性電極。
【請求項２】
カルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜が、カルシウム・ジ［４−（１，１，１，３−テトラメチルブチル）フェニル］ホスフェート、ジオクチルフェニルホスホネート、および塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体からなる請求項１に記載の複合イオン選択性電極。
【請求項３】
カルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜の膜厚が２０μｍ以下である請求項１または２に記載の複合イオン選択性電極。
【請求項４】
カルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜の膜厚が１０μｍ以上１８μｍ以下である請求項３に記載の複合イオン選択性電極。
【請求項５】
水素イオン選択電極のイオン選択性膜の膜厚が５μｍ以上３０μｍ以下である請求項１乃至４のうちのいずれかの項に記載の複合イオン選択性電極。
【請求項６】
各イオン選択電極の電解質層が塩化ナトリウムからなる請求項１乃至５のうちのいずれかの項に記載の複合イオン選択性電極。
【請求項７】
請求項１乃至６のうちのいずれかの項に記載の複合イオン選択性電極を用いて被検液である血液中のカルシウムイオンおよび水素イオンの濃度を測定した後、得られた各濃度値を下記式：
Log（ｉＣａ at 7.4）＝Log（ｉＣａ at ｐＨ）−0.22×（7.4−ｐＨ）
（ただし、ｉＣａはカルシウムイオン濃度を表し、ｐＨは水素イオン濃度を表す）
に代入して換算することにより、カルシウムイオンのｐＨ７．４における標準化濃度を求めることからなる血液中のカルシウムイオン濃度検出方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、カルシウムイオン濃度および水素イオン濃度を測定するための乾式のイオン選択性電極に関する。特に、血液、血清など体液中のこれらイオン濃度をポテンシオメトリカルに測定するためのイオン選択性電極、およびそれを用いた検出方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
液体（水道水、河川水、下水、産業排水など）や生物体液（血液、尿、唾液など）の中に含まれる特定のイオンの濃度（または活量）を、イオン選択性電極を用いて測定する方法は既に知られている。
【０００３】
この測定方法には湿式法と乾式法とがあり、湿式法では一般に、電極内部に標準液を有するバレル型電極が用いられているが、電極の保守、洗浄、コンディショニング、寿命、破損などの点で管理が厄介であり、また針状の電極を試料液に浸漬するために数百μＬ以上もの試料液を必要とするとの欠点がある。
【０００４】
このような不便を排除するために、乾式のフィルム状のイオン選択性電極を用いる方法が提案されている。乾式のイオン選択性電極は、水性液体、特に血液、尿、唾液などの生物体液の液適量を用いて、その中に含まれる特定イオンの濃度をポテンシオメトリカルに測定するための測定具（イオン活量測定器具とも称する）であり、その基本的構成については既に特公平３−５４７８８号および同４−５０５３０号公報などに記載されている。すなわち、イオン選択性電極は、支持体、導電性金属層（例えば、銀層）、該金属の水不溶性塩を含む層（例えば、塩化銀層）、該水不溶性塩の陰イオンと共通の陰イオンとカチオン（例えば、カリウムイオン、ナトリウムイオン）との電解質塩（例えば、塩化カリウム、塩化ナトリウム）とバインダーとを含む電解質層、およびイオン選択性膜がこの順に一体化された基本構成を有する乾式の電極フィルムである。この電極フィルム２個を一対として、架橋部材で連絡し、電位差計に接続した後、試料液（被検液）と標準液（参照液）をそれぞれ各電極フィルムの上に点着し、その電位差を測定することにより、試料液中の特定イオンの濃度を求めることができる。このフィルム状のイオン選択性電極を用いる乾式法によれば、電極のメンテナンスが不要であり、測定具を小型化できるのでベッドサイドでイオン濃度を測定することが可能であり、そして測定に必要な試料液の量を大幅に低減することができる。
【０００５】
乾式のイオン選択性電極は、イオン選択性膜の種類を変えることにより、水素イオン（Ｈ+）、リチウムイオン（Ｌｉ+）、ナトリウムイオン（Ｎａ+）、カリウムイオン（Ｋ+）、マグネシウムイオン（Ｍｇ2+）、カルシウムイオン（Ｃａ2+）、塩素イオン（Ｃｌ-）、炭酸水素イオン（ＨＣＯ3-）、炭酸イオン（ＣＯ32-）など無機イオンの濃度を測定することができる。
【０００６】
一方、測定具に複数個のイオン選択電極を組み込んで、被検液と参照液をそれぞれ１回付与することにより複数種のイオン濃度を同時に測定できるようにした複合型のイオン選択性電極も知られており、例えば特公平４−７６５７７号および同５−５６８１９号公報に記載されている。
【０００７】
生物体液中の上記のような無機イオン濃度を測定することは臨床医学的に重要であるが、それらのうちでも血液中のイオン化カルシウム（ｉＣａ）濃度の測定は、カルシウムの代謝異常（例えば、副甲状腺機能障害、癌の骨への転移）を診断する上で欠くことのできないものである。また、手術中に行われる輸血の際のカルシウム補給のモニター（カルシウムイオンが抗凝固剤として添加されるクエン酸と結合して、血中カルシウムイオンが減少することがある）や、臨床検査スクリーニングにおいても重要な測定項目となっている。一方、水素イオン濃度（ｐＨ）も、体液の酸・塩基平衡状態を知る上での指標となるものであり、重要な測定項目であると言える。このような臨床検査においては一般に、血液中のイオン化カルシウム濃度はｐＨ７．４における濃度で標準化されているが、そのためにはカルシウムイオン濃度とともに水素イオン濃度も併せて測定する必要がある。
【０００８】
乾式のイオン選択性電極は、上述したように基本的には単純な構成からなる微小なチップであるので、試料液の必要量が極めて少なくて済み、従って体液などのように試料液の量に制限がある場合に非常に有用である。また、このように単純かつ微小な構成のイオン選択性電極は、電位差測定機とは独立に取り扱うことができ、測定毎に新たな電極に取り替えることができるとの利点もある。しかしながら一方では、微小なイオン選択性電極はその測定精度が不充分となりやすい。すなわち、イオン選択性電極を同一の方法および操作により製造しても個々のイオン選択性電極によって測定値にずれが生じて測定値の再現性が低かったり、さらには測定値が一定になるまでの応答時間が長いとの問題がある。また、製造後時間が経過すると、その電極性能が徐々に劣化しがちであるために、個々のイオン選択性電極によって測定値にずれが生じて測定値の再現性が低かったり、また的確な電位を示し難いとの問題がある。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、測定精度の優れた、特に測定値の再現性の高いカルシウムイオンおよび水素イオン分析用の複合イオン選択性電極を提供することにある。
さらに本発明は、測定精度の優れた血液中のカルシウムイオン濃度検出方法を提供することにもある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、カルシウムイオンおよび水素イオン分析用の乾式イオン選択性電極について研究を重ねた結果、カルシウムイオン濃度については、イオン選択性膜の膜厚を一定以下に薄くすることにより、測定値の再現性および測定時の応答性を高めることができることを見い出した。示差式電位測定法固有の問題である電極対の左右バランスを取るためにも、イオン選択性膜の膜厚を薄くすることは好都合である。特に、イオン選択性膜を、カルシウム・ジ［４−（１，１，１，３−テトラメチルブチル）フェニル］ホスフェート、ジオクチルフェニルホスホネート、および塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体の組合せから構成することにより、電極性能を高めてカルシウムイオン濃度の測定精度を顕著に高めることができることを見い出した。
【００１１】
また本発明者は、水素イオン濃度については、イオン選択性膜の材料としてトリ−ｎ−ドデシルアミンおよびトリスエチルヘキシルトリメリテートを用いることにより、経時による電極性能の劣化を防いで、測定値の再現性を高めることができることを見い出した。特に、イオン選択性膜をトリ−ｎ−ドデシルアミン、トリスエチルヘキシルトリメリテート、カリウム・テトラキス（ｐ−クロロフェニルボレート）、および塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体の組合せから構成することにより、測定値の再現性を顕著に高めることができることを見い出した。
【００１２】
従って本発明は、非導電性支持体、銀層とハロゲン化銀層とからなる互いに電気的に絶縁された一対の電極層、電解質層、およびイオン選択性膜がこの順に積層されてなるイオン選択電極を少なくとも二個有し、かつその二個のイオン選択電極はそれぞれカルシウムイオン選択電極と水素イオン選択電極であり、そして被検液付与用開口部と参照液付与用開口部とを有する非導電性部材、付与された被検液を各イオン選択電極の一方の電極に供給する分配部材、付与された参照液を他方の電極に供給する分配部材、および被検液と参照液を電気的に導通させる架橋部材を備えた複合イオン選択性電極において、該カルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜の膜厚が５μｍ以上３０μｍ以下であり、そして該水素イオン選択電極のイオン選択性膜がトリ−ｎ−ドデシルアミン、トリスエチルヘキシルトリメリテート、カリウム・テトラキス（ｐ−クロロフェニルボレート）、および塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体からなることを特徴とする複合イオン選択性電極にある。
【００１５】
さらに本発明は、上記の複合イオン選択性電極を用いて被検液である血液中のカルシウムイオンおよび水素イオンの濃度を測定した後、得られた各濃度値を下記式：
Log（ｉＣａ at 7.4）＝Log（ｉＣａ at ｐＨ）−0.22×（7.4−ｐＨ）
（ただし、ｉＣａはカルシウムイオン濃度を表し、ｐＨは水素イオン濃度を表す）
に代入して換算することにより、カルシウムイオンのｐＨ７．４における標準化濃度を求めることからなる血液中のカルシウムイオン濃度検出方法にもある。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明の（複合）イオン選択性電極は、種々の具体的構成をとることができるが、その例として図面を参照しながら説明する。
図１は、本発明のカルシウムイオン及び水素イオン分析用イオン選択性電極の構成の例を示す概略斜視図である。図１において、イオン選択性電極は、順に非導電性支持体１１、銀層１２ａ、１２ｂ（銀層は、図示したように支持体表面の一部に達する切削溝により二つの領域に分離されている）、塩化銀層１３ａ、１３ｂ、電解質層１４、およびイオン選択性膜１５が積層された構成を有する。イオン選択性膜１５の上には、水不透過性の非導電性部材１６が設けられ、非導電性部材１６には、一対の銀層と塩化銀層（電極層）の対応する位置それぞれに、被検液付与用の開口部１７ａおよび参照液付与用の開口部１７ｂが設けられている。そして開口部１７ａ、１７ｂには被検液と参照液を電気的に導通させるための架橋部材１８が備えられている。
【００１７】
図２は、本発明の複合イオン選択性電極の構成の例を示す分解斜視図である。図２の複合イオン選択性電極において、三対のフィルム状のイオン選択電極２１ａ、２１ｂ、２１ｃが、上部枠体２２と下部枠体２３との間に配置されている。上部枠体２２には、被検液付与用の開口部２４ａおよび参照液付与用の開口部２４ｂが設けられている。開口部２４ａ、２４ｂには被検液と参照液を電気的に導通させるための架橋部材２５が備えられている。下部枠体２３の上面には、被検液および参照液をそれぞれ各電極まで水平方向に移送するための分配部材２６ａ、２６ｂが設けられている。また、下部枠体２３には、各イオン選択電極の両端の電極接続領域を下方に向けて露出させるための孔２７、および空気抜き孔２８が設けられている。三対のイオン選択電極２１ａ、２１ｂ、２１ｃはいずれも、上記図１と同様の層構成を有し、イオン選択性膜が下側となるように倒立した状態で配置されている。
【００１８】
図２において、三対のイオン選択電極のうち２１ａはカルシウムイオン選択性の電極対であり、２１ｂは水素イオン選択性の電極対であり、そして２１ｃは主として金属銀からなる仮の電極対であって放電機能を果たす。なお、本発明の複合イオン選択性電極において、イオン選択電極は三対に限定されるものではなく、また複数の電極対のうちの２個がカルシウムイオン選択電極および水素イオン選択電極である限り、残りの電極対は任意のイオン選択性あるいは放電機能を果たす仮の電極対とすることができる。
【００１９】
本発明のイオン選択性電極において、カルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜は、測定精度、特に測定値の再現性を高めるために、その膜厚が５μｍ以上３０μｍ以下でなければならない。好ましくは、イオン選択性膜の膜厚は５μｍ以上２０μｍ以下であり、特に好ましくは１０μｍ以上１８μｍ以下である。
【００２０】
また、カルシウムイオン選択性膜の材料は、後述するようにイオン選択性電極のカルシウムイオン選択性膜として公知の材料の中から任意に選択して用いることもできるが、特に好ましいのは、カルシウム・ジ［４−（１，１，１，３−テトラメチルブチル）フェニル］ホスフェート、ジオクチルフェニルホスホネート（可塑剤）、および塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体の組合せである。なお、これらの材料と公知材料とを適宜組み合わせて使用することもできる。
【００２１】
一方、水素イオン選択電極のイオン選択性膜の材料としては、経時による電極性能の劣化を防いで測定精度、特に測定値の再現性を高めるために、トリ−ｎ−ドデシルアミンおよび可塑剤としてトリスエチルヘキシルトリメリテートが用いられる。イオン選択性膜の特に好ましい組合せは、トリ−ｎ−ドデシルアミン、トリスエチルヘキシルトリメリテート、カリウム・テトラキス（ｐ−クロロフェニルボレート）、および塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体からなる組合せである。なお、上記材料と他の公知材料とを適宜組み合わせて使用することもできる。
【００２２】
水素イオン選択性膜の膜厚は、測定値の再現性の点から、そして示差式電位測定法固有の問題である電極対の左右バランスを取るためにも、５μｍ以上３０μｍ以下であることが好ましい。より好ましくは、イオン選択性膜の膜厚は５μｍ以上２０μｍ以下である。
【００２３】
上記いずれのイオン選択性膜も、従来公知の方法により形成することができるが、例えば上記組合せからなる材料を適当な溶媒に溶解した後、電解質層の上に塗布、乾燥して形成する。その際に電極性能を安定化させるために、３５℃の温度で２４時間エージングすることが好ましい。
【００２４】
本発明において、イオン選択性電極は前記図１および図２の構成に限定されるものではなく、公知の各種の構成をとることができる。また、イオン選択性電極の各層および各部材の材料並びにその製造方法についても公知の材料および方法の中から任意に選択して用いることができる。そのようなイオン選択性電極の構成、材料および製造法については、例えば特公昭５８−４９８１号、特開昭５２−１４２５８４号、同５７−１７８５２号、同５８−２１１６４８号、特公平４−５０５３０号の各公報；米国特許第４０５３３８１号、同第４１７１２４６号、同第４２１４９６８号の各明細書；および「Research Disclosure」誌報文No.１６１１３（１９７７年９月号）に詳細に記載されている。
【００２５】
血液中のカルシウムイオン濃度の測定は、本発明の複合イオン選択性電極を用いて以下のようにして行うことができる。
例えば図２に示したような複合イオン選択性電極の開口部２４ａ、２４ｂに、被検液である血液および参照液をそれぞれ点着付与する。付与された被検液および参照液はそれぞれ、図２に矢印で示したように分配部材２６ａ、２６ｂに浸透し、分配部材により移送されて各イオン選択電極２１ａ、２１ｂ、２１ｃのイオン選択性膜表面に供給され、各イオン選択電極の電極対間には電位差が発生する。この電位差をそれぞれ各電極の両端の電気接続領域を介して電位差計２９で測定する。
【００２６】
さらに、得られた測定値と予め調製した検量線とから、カルシウムイオン濃度および水素イオン濃度を算出した後、下記式：
【００２７】
【数１】
Log（ｉＣａ at 7.4）＝Log（ｉＣａ at ｐＨ）−0.22×（7.4−ｐＨ）
（ただし、ｉＣａはカルシウムイオン濃度を表し、ｐＨは水素イオン濃度を表す）
【００２８】
に代入、換算して、カルシウムイオンのｐＨ７．４における標準化された濃度を検出する。このようにして、一回の測定で、カルシウムイオンおよび水素イオンの両濃度を求めることができるとともに、臨床検査で通常要求されるカルシウムイオンのｐＨ７．４における標準化濃度を正確かつ簡単に求めることができる。
【００２９】
なお、本発明のイオン選択性電極は、上述したような血液中のカルシウムイオン濃度および／または水素イオン濃度（０．５〜２．５ｍＭ）の測定に限定されるものではなく、参照液の濃度を変えることにより、それより高濃度あるいは低濃度の試料（例えば、食物、血液以外の体液）にも適用することができる。また、試料が雨水、水道水などであれば、水の硬度や酸性・塩基性度を求めることも可能である。
【００３０】
【実施例】
［参考例１］  カルシウムイオン選択性電極
ポリエチレンテレフタレートフィルム（支持体、厚み：１８８μｍ、寸法３０ｍｍ×１００ｍｍ）の上に、真空蒸着により厚み約８００ｎｍの金属銀層（蒸着銀層）を形成した。この銀層の両端部を特開昭５８−１０２１４６号公報に開示のポリマー組成物液状レジストで被覆して保護し、一方銀層の中央部分をバイトを用いて切削除去して浅いＵ字型溝状の絶縁部分を設けた。
【００３１】
次に、銀層の非被覆部分に、塩酸および重クロム酸カリウム含有処理液（塩化水素３６ｍＭ／ｌと重クロム酸カリウム１６ｍＭ／ｌを含む水溶液）を用いて、約６０秒間接触酸化塩化処理を行った。処理終了後、積層体を水洗、乾燥して一対のフィルム状の銀・塩化銀電極（支持体、銀層、塩化銀層からなる積層体）を得た。
【００３２】
塩化ナトリウム２８．８ｇを、エタノール１９２ｇと精製水２４０ｇの混合溶媒に溶解して電解質塗布液を調製した。この塗布液を銀・塩化銀電極フィルム上に塗布した後、空気中に放置して塗布層を自然乾燥した。乾燥後の塗布層（電解質層）の重量は２．１ｇ／ｍ2であった。
【００３３】
この電解質層の上に、下記の組成からなるカルシウムイオン選択性膜を常法により膜厚が２６μｍとなるように形成して、カルシウムイオン選択電極を得た。その際に、３５℃の温度で２４時間エージングを行った。
［カルシウムイオン選択性膜の組成］
カルシウム・ジ［４−（１，１，１，３−テトラメチルブチル）
フェニル］ホスフェート（ｔ−ＨＤＯＰＰ）          ０．３ｇ
ジオクチルフェニルホスホネート（ＤＯＰＰ）          ３．０ｇ
塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体（ＶＹＮＳ）          ３．０ｇ
メチルエチルケトン                                ２０ｇ
【００３４】
得られたカルシウムイオン選択電極のイオン選択性膜上に、２つの液受け孔を有するプラスチックフィルム製液受けマスクを接着付設した後、その液受け孔を連絡するようにポリエステル紡績糸製ブリッジを付設して、カルシウムイオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した（図１参照）。
【００３５】
［参考例２］
参考例１においてイオン選択性膜の膜厚を１５μｍとしたこと以外は参考例１と同様にして、カルシウムイオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した。
【００３６】
［比較例１］
参考例１においてイオン選択性膜の膜厚を３４μｍとしたこと以外は参考例１と同様にして、比較のためのカルシウムイオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した。
【００３７】
［カルシウムイオン選択性電極の性能評価］
得られた多数のイオン選択性電極について、下記表１に示す組成の評価液および参照液を用い、電位差測定機（FDC800、富士写真フィルム(株)製）を用いて、電位の時間変化を測定した後、点着６０秒後における電位の標準偏差を求め、電位の収束度（ＳＤ）としてその電極性能を評価した。得られた結果をまとめて図３〜５および表２に示す。
【００３８】
【表１】
0004184568.tif 000002
【００３９】
図３〜５はそれぞれ、参考例１、２および比較例１のカルシウムイオン選択性電極について、時間と電位との関係を表すグラフである。
【００４０】
［表２］
表２
───────────────────────────
膜厚（μｍ）          ＳＤ（ｍＶ）      
Ｌ        Ｍ        Ｈ
───────────────────────────
参考例１    ２６        ０．５    ０．５    ０．９
２    １５        ０．３    ０．３    ０．３
───────────────────────────
比較例１    ３４        ０．４    ０．８    １．３
───────────────────────────
【００４１】
図３〜５および表２に示した結果から明らかなように、参考例１、２のカルシウムイオン分析用イオン選択性電極はいずれも、比較のためのイオン選択性電極（比較例１）と比べて電位の収束度、すなわちばらつきが小さかった。また、電位が一定となるまでの時間が短かった。特に、イオン選択性膜の膜厚が１５μｍのカルシウムイオン選択性電極（参考例１）は、電位の収束性および安定性が極めて良好で、優れた電極性能を示した。
【００４２】
［参考例３］  水素イオン選択性電極
ポリエチレンテレフタレートフィルム（支持体、厚み：１８８μｍ、寸法３０ｍｍ×１００ｍｍ）の上に、真空蒸着により厚み約８００ｎｍの金属銀層（蒸着銀層）を形成した。この銀層の両端部を特開昭５８−１０２１４６号公報に開示のポリマー組成物液状レジストで被覆して保護し、一方銀層の中央部分をバイトを用いて切削除去して浅いＵ字型溝状の絶縁部分を設けた。
【００４３】
次に、銀層の非被覆部分に、塩酸および重クロム酸カリウム含有処理液（塩化水素３６ｍＭ／ｌと重クロム酸カリウム１６ｍＭ／ｌを含む水溶液）を用いて、約６０秒間接触酸化塩化処理を行った。処理終了後、積層体を水洗、乾燥して一対のフィルム状の銀・塩化銀電極（支持体、銀層、塩化銀層からなる積層体）を得た。
【００４４】
塩化ナトリウム２８．８ｇを、エタノール１９２ｇと精製水２４０ｇの混合溶媒に溶解して電解質塗布液を調製した。この塗布液を銀・塩化銀電極フィルム上に塗布した後、空気中に放置して塗布層を自然乾燥した。乾燥後の塗布層（電解質層）の重量は２．１ｇ／ｍ2であった。
【００４５】
この電解質層の上に、下記の組成からなる水素イオン選択性膜を常法により膜厚が２０μｍとなるように形成して、水素イオン選択電極を得た。その際に、３５℃の温度で２４時間エージングを行った。
［水素イオン選択性膜の組成］
トリ−ｎ−ドデシルアミン（ＴＤＤＡ）                ０．１ｇ
トリスエチルヘキシルトリメリテート（TrisＥＨＴ）    ３．０ｇ
カリウム・テトラキス（ｐ−クロロフェニルボレート）
（ＫＴｐＣＰＢ）                                  ０．０６ｇ
塩化ビニル・酢酸ビニル共重合体（ＶＹＮＳ）          ３．０ｇ
メチルエチルケトン                                ２０ｇ
【００４６】
得られた水素イオン選択電極のイオン選択性膜上に、２つの液受け孔を有するプラスチックフィルム製液受けマスクを接着付設した後、その液受け孔を連絡するようにポリエステル紡績糸製ブリッジを付設して、水素イオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した（図１参照）。
【００４７】
［比較例２］
参考例３においてイオン選択性膜の可塑剤として、TrisＥＨＴの代わりにジオクチルセバケート（ＤＯＳ）を用いたこと以外は参考例３と同様にして、比較のための水素イオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した。
【００４８】
［比較例３］
参考例３においてイオン選択性膜の可塑剤として、TrisＥＨＴの代わりにジブチルセバケート（ＤＢＳ）を用いたこと以外は参考例３と同様にして、比較のための水素イオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した。
【００４９】
［比較例４］
参考例３においてイオン選択性膜の可塑剤として、TrisＥＨＴの代わりにニトロフェニルオクチルエーテル（ＮＰＯＥ）を用いたこと以外は参考例３と同様にして、比較のための水素イオン分析用イオン選択性電極を多数個製造した。
【００５０】
［水素イオン選択性電極の性能評価］
得られた多数のイオン選択性電極について、４５℃の温度で３週間放置した後、上記表１に示す組成の評価液および参照液を用い、電位差測定機（FDC800、富士写真フィルム(株)製）を用いて、点着６０秒後における電位を１０回測定し、その標準偏差を求め、電位の収束度（ＳＤ）とした。また、各電位の平均値を求め、これらの値によりその電極性能を評価した。得られた結果をまとめて表３および表４に示す。
【００５１】
［表３］
表３
────────────────────────────────────
可塑剤                    ＳＤ（ｍＶ）            
Ｌ            Ｍ            Ｈ
────────────────────────────────────
参考例３    TrisＥＨＴ      １．４５      １．４８      １．３８
────────────────────────────────────
比較例２    ＤＯＳ          ４．４７      ５．３５      ４．４６
比較例３    ＤＢＳ          ６．５６      ８．１５      ８．２６
比較例４    ＮＰＯＥ      １２．１３      ６．５２    １０．３２
────────────────────────────────────
【００５２】
［表４］
表４
────────────────────────────────────
可塑剤                電位の平均値（ｍＶ）          
Ｌ            Ｍ            Ｈ
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参考例３    TrisＥＨＴ    −２１．７０    −１．８６    ２１．９９
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比較例２    ＤＯＳ          −７．８０      ９．６８    ３０．１５
比較例３    ＤＢＳ          −１．５９      ３．８６      ４．７７
比較例４    ＮＰＯＥ        −９．９２      ６．７２    ２８．２５
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【００５３】
表３に示した結果から明らかなように、参考例３の水素イオン分析用イオン選択性電極は、比較のための従来のイオン選択性電極（比較例２〜４）と比べて電位の収束度、すなわちばらつきが極めて小さかった。また、電位の平均値に関しては、Ｍレベルの評価液と参照液は同一であるので示差法の原理からＭレベルは電位０ｍＶを示すべきであるが、表４に示した結果から明らかなように、参考例３の水素イオン選択性電極の電位の平均値が最も０ｍＶに近く、的確な値を示した。また、ＬレベルおよびＨレベルについても、参考例３のイオン選択性電極はその評価液のｐＨに対応してＭレベルから同等に隔たった値を示した。
【００５４】
［実施例１］  複合イオン選択性電極
参考例２で得られたカルシウムイオン選択電極、参考例３で得られた水素イオン選択電極、および別途形成した支持体と金属銀層とからなる仮の電極をそれぞれ、支持体が上側、イオン選択性膜が下側になるようにして、２つの液受け孔を有するプラスチックフィルム製液受けマスクと同じくプラスチックフィルム製分配マスクとで挟んで接着付設した後、その液受け孔を連絡するようにポリエステル紡績糸製ブリッジを付設して、本発明の複合イオン選択性電極を製造した（図２参照）。
【００５５】
【発明の効果】
本発明によれば、カルシウムイオン選択性膜の膜厚を一定以下に薄くすることにより、電位のばらつきを小さくして測定値の再現性を高め、また測定時の応答時間を短くすることができる。特に、特定の材料からなる膜厚の薄いイオン選択性膜を用いることにより、測定値の再現性が高く電極性能の優れたカルシウムイオン選択性電極を得ることができる。
【００５６】
また本発明によれば、水素イオン選択性膜に特定の材料を用いることにより、時間経過による電極性能の劣化が殆ど生じなく、従って経時後の測定値の再現性の顕著に高い水素イオン選択性電極を得ることができる。
よって、本発明の複合イオン選択性電極は、測定値の再現性が高く電極性能の優れたものであり、これを用いた本発明の方法によれば、血液中のカルシウムイオンの標準化濃度を高精度で検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  カルシウムイオンまたは水素イオン分析用のイオン選択性電極の構成の例を示す概略斜視図である。
【図２】  本発明の複合イオン選択性電極の構成の例を示す分解斜視図である。
【図３】  参考例１のイオン選択性電極について時間と電位との関係を表すグラフである。
【図４】  参考例２のイオン選択性電極について時間と電位との関係を表すグラフである。
【図５】  比較例１のイオン選択性電極について時間と電位との関係を表すグラフである。
【符号の説明】
１１  非導電性支持体
１２ａ、１２ｂ  銀層
１３ａ、１３ｂ  塩化銀層
１４  電解質層
１５  イオン選択性膜
１６  非導電性部材
１７ａ、１７ｂ、２４ａ、２４ｂ  液付与用開口部
１８、２５  架橋部材
２１ａ、２１ｂ、２１ｃ  イオン選択電極
２２  上部枠体
２３  下部枠体
２６ａ、２６ｂ  分配部材
【図１】
0004184568.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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