(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドまたはその塩を有効成分とする腫瘍治療剤。
【請求項２】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの平均分子量が 15,000 以下である請求項１に記載の腫瘍治療剤。
【請求項３】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの平均分子量が1,000 から8,000 である請求項１に記載の腫瘍治療剤。
【請求項４】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドが平均分子量1,700 から5,000 である請求項１に記載の腫瘍治療剤。
【請求項５】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドを表面張力抑制剤と共用することを特徴とする請求項１から４のいずれかの項に記載の腫瘍治療剤。
【請求項６】
表面張力抑制剤が、ポリエチレングリコ−ルである請求項５に記載の腫瘍治療剤。
【請求項７】
ポリエチレングリコ−ルに対するポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの割合が６：１から２４：１である請求項６に記載の腫瘍治療剤。
【請求項８】
ポリエチレングリコ−ルに対するポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの割合が１２：１ないし２２：１である請求項７に記載の腫瘍治療剤。
【請求項９】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドが乳酸フリーのリンゲル液または食塩溶液に含有される請求項１から８のいずれかの項に記載の腫瘍治療剤。
【請求項１０】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの濃度が0.0001ないし１重量％である請求項１から９のいずれかの項に記載の腫瘍治療剤。
【請求項１１】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの濃度が0.0005ないし0.1 重量％である請求項１から９のいずれかの項に記載の腫瘍治療剤。
【請求項１２】
ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニドの濃度が 0.001ないし0.04％である請求項１から９のいずれかの項に記載の腫瘍治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ポリ（ヘキサメチレン）ビグアニド（以下ではＰＨＭＢと略称する）またはその塩を有効成分とする腫瘍治療剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ＰＨＭＢが殺菌性と防かび性を有することは知られている（たとえば英国特許１，２０２，４９５号参照）。ＰＨＭＢは例えば溶液または噴霧液状で使用され、食品工業では室内や機械器具の清浄殺菌に、水泳プ−ルでは藻やバクテリアの成育阻止に使用される。
ドイツ特許公報ＤＥ−ＯＳ３，５３７，６２７から、少量のポリエチレングリコールを含む分子量1,700 から2,500 のＰＨＭＢが、傷の局所殺菌剤として用いられることは公知である。このドイツ特許公報ＤＥ−ＯＳによればＰＨＭＢの市販品としては、たとえばＩＣＩ社のＶａｎｔｏｃｉｌＩＢ（登録商標）がある。
【０００３】
ヨ−ロッパ特許ＥＰ０４５０，１１７には、殺菌作用のある局部外傷処理剤としてのリンゲル液とその応用が記載され、この乳酸フリーのリンゲル液は、ＰＨＭＢ塩酸塩20重量％及び100 ml当たり１ｇのポリエチレングリコール（分子量約4,000 ，以下でＰＥＧと略称する）を含む溶液を0.1 ％〜0.2 ％含有するものである。ＰＨＭＢとしては、同じくＶａｎｔｏｃｉｌＩＢが適当であると記載されている。Ｌａｖａｓｅｐｔ（登録商標）は傷薬として知られている。これはＬａｖａｓｅｐｔの濃度がＰＨＭＢ20重量％とポリエチレングリコール4,000 の１重量％水溶液であり、このＰＨＭＢは市販品のＶａｎｔｏｃｉｌＩＢである。ＵＳＰ４，７５８，５９１には、ＰＨＭＢまたはその水溶性塩の微生物、真菌に有効に作用するものは、ＰＨＭＢ0.000001〜0.0003重量％を含む水溶液であり、コンタクトレンズ、眼科検眼具や皮膚腫瘍に使用されることが記載されている。
ＧＢＰＳ１，４３２，３４５から、目とコンタクトレンズの結合部に使用する組成は、少なくとも角膜受容ビグアニドポリマーを含むことが知られている。腫瘍は前記のように最も多い病気に属し、種々の効能をもつ多くの薬剤が提案されている。新しい抗腫瘍剤の合成と開発並びにすでに公知の物質から抗腫瘍性物質をスクリーニングすることが今日の癌研究の主たる課題である。前記のように、腫瘍ないし腫瘍疾患に有効に使用できる薬剤は大きな需要がある。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の課題はとくに局部的に場合によっては全身的に投与でき、腫瘍に高度に有効な、腫瘍の周囲の組織を破壊しない腫瘍疾患に有効で速く治癒する薬剤を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
この課題は、意外にも本発明により局部的に場合によっては全身的に投与でき、腫瘍に高度に有効なＰＨＭＢまたはその塩を使用することによって解決できることが見いだされた。本発明はＰＨＭＢまたはその塩を有効成分とする腫瘍治療剤を要旨とする。
ＰＨＭＢは、種々の腫瘍種の増殖を抑制することができる。さらに本発明によりＰＨＭＢが、意外にも特定の腫瘍タイプ、とくに結腸腫瘍に選択的に作用することがわかった。ＰＨＭＢに対して感受性の高い腫瘍（即ちＰＨＭＢが有効な腫瘍）のなかには他の公知の抗腫瘍剤［たとえばEur J Cancer Clin. Oncol, 1987,123;937-948;Fiebig,Berger,(eds.)Immunodeficient Mice in Oncology,Contrib.Basel,Karger,1992,Vol 42,321-351:Med.Welt 1984;35:52-58,81-86 参照] に対して高い抵抗性を示すものがある。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明によれば、ＰＨＭＢは平均分子量が15,000以下のものが優れている。とくに好ましいＰＨＭＢは、平均分子量が1,000 から8,000 とくに平均分子量1,700 〜5,000 、たとえば平均分子量2,600 、2,800 、3,500 、4,000 または4,500 のＰＨＭＢである。平均分子量の測定はビスコシメター法で行われる。
本発明で使用されるＰＨＭＢの製造は、公知の方法で行われる。たとえばＤＥ−ＰＳ１，６２０，９３８またはＧＢＰＳ１，２０２，４９５に開示された方法で行われる。この方法で得られたＰＨＭＢは、望ましくない不純物を、たとえば透析、モレキュラシーブ、ＨＰＬＣ，ゲル浸透クロマトグラフィー（ＧＰＣ）などの公知の方法で分離できる。これに関連してＰＣＴ／ＥＰ９４／０１５８７が参考となる。本発明においては市販のＰＨＭＢ、たとえばＶａｎｔｏｃｉｌＩＢ、ＣｏｓｍｏｃｉｌＣＱまたはＡｒｌａｇａｒｄＥや他の市販品から前記方法で望ましくない有害成分を分離して使用する。
【０００７】
本発明において使用するＰＨＭＢは、遊離体または塩酸塩のような水溶性塩が使用可能であり、100 ％濃度の粉末（たとえば凍結乾燥品）または水溶液である。これは濃度がたとえば２〜40重量％、好ましくは３〜30重量％、とくに好ましくは４〜20重量％たとえば４重量％、4.5 重量％、 ５重量％、６重量％の水溶液（濃度として）が使用される。本発明におけるＰＨＭＢの塩は、たとえば、塩酸塩のような水溶性塩である。
本発明で腫瘍または腫瘍疾患に使用するＰＨＭＢまたはＰＨＭＢの水溶液濃度は、その使用目的によって異なる。適当な濃度は、一般に0.0001ないし１重量％、好ましくは0.0005〜0.1 重量％、さらに好ましくは0.001 〜0.04重量％、たとえば0.01〜0.03重量％（純ＰＨＭＢベースで）である。
本発明で用いるＰＨＭＢは、たとえばＰＥＧのような表面張力抑制剤とともに用いることができる。好ましくは分子量が1,500 〜6,000 で、とくに分子量4,000 のＰＥＧは、ＢＡＳＦ社から市販されているＬｕｔｏｒｏｌ（登録商標）が好適である。ＰＨＭＢ／表面張力抑制剤の比は６：１〜２４：１好ましくは１２：１〜２２：１とくに２０：１である。
【０００８】
本発明の腫瘍治療剤は局部的または全身的に、たとえば経口、直腸、膣または腸管外投与、好ましくは局部的に投与される。
本発明の腫瘍治療剤の剤形は、意図する治療方針によって、たとえば水溶液（場合によっては乳酸フリーのリンゲル液または食塩溶液、とくに乳酸フリーのリンゲル液）、エマルジョン、サスペンジョン、ゲル、軟膏、パスタ、クリーム、糖衣錠または錠剤として使用される。
また対象とする腫瘍の種類によってたとえば、黒芽細胞腫のような皮膚癌には腫瘍内注射液、ゲル、軟膏、パスタが；腹腔内への転移癌（結腸癌）の腹腔内洗浄用液、結腸洗浄用液  、尿道洗浄用溶液などの投与態様；選択的に腸に作用する耐胃酸性の糖衣錠のような投与態様；選択的に胃に作用する投与態様などが可能である。
これらの用途に調製したＰＨＭＢには（ＰＣＴ／ＥＰ９４／０１５８７に記載）低分子部分を除去した平均分子量2,900 〜15,000のものがある。
これらの投与剤には必要に応じて補助剤および添加剤を添加することができる。本発明の腫瘍治療剤のヒトおよび動物への適用では、とくにヒトの場合に効果的である。
【０００９】
【実施例】
次に、本発明を実施例をあげて説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１０】
（実施例１）
平均分子量2,800 のＰＨＭＢ、分子量4,000 のＰＥＧ（LutrolE 4,000 BASF製）および水を混合して下記組成の溶液を調製した。
ＰＨＭＢ                                                20重量％
ＰＥＧ                                                  １重量％
水                                                      79重量％
調製した相当する濃度の液を腫瘍の治療に用いた。ＰＨＭＢ塩酸塩としては、市販のＰＨＭＢ製剤であるＶａｎｔｏｃｉｌＩＢ，ＣｏｓｍｏｃｉｌＣＱおよびＡｒｌａｇａｒｄＥが使用された。ＶａｎｔｏｃｉｌＩＢ、ＣｏｓｍｏｃｉｌＣＱおよびＡｒｌａｇａｒｄＥは、ＰＨＭＢ塩酸塩を有効成分として２０重量％含む水溶液である。
【００１１】
（実施例２）
実施例１のＰＨＭＢ塩酸塩の代わりに、相当するＰＨＭＢを使用した以外は実施例１と同じ方法を繰り返した。
【００１２】
（実施例３）
ＰＨＭＢ塩酸塩（平均分子量2,800 ）の抗腫瘍性試験
この試験は、実施例１の溶液を使用して次のように行った。試験は、表１に示す各腫瘍について行った。
腫瘍の性質は文献 [たとえばBerger et al.:Establishment and Characterization of Human Tumor Xenografts in thymusaplastic nude mice. In: Fiebig,Berger(eds.) Immunodeficient Mice in Oncology.Contrib.Oncol.,Basel,Karger,1992;Vol.42,S. 97-97 und  Fiebig,Berger(eds.) Immunodeficient Mice in Oncology,Contrib.Oncol.,Basel,Karger,1992,Vol.42,S. 148-151] を参考にした
【００１３】
【表１】
0004171086.tif 000002
【００１４】
各タイプの腫瘍細胞種片に対するＰＨＭＢの試験管内活性は、次の文献記載の２層式ソフト寒天培養システムによって測定された。
Fiebig et al.[Eur J Cancer Clin. Oncol. 1987,123:937-938;Fiebig,Berger,(eds.)Immunodeficient Mice in Oncology, Contrib.Oncol.Basel,Karger,1992,Vol 42,321-351:Med. Welt 1984;35:52-58,81-86]modifizierten Protokoll des Zwei-Lagen-Weichagar-Kulturverfahrens(two-layer-soft agar culture system) nach Hamburger und Salmon(Science 197:461-463,1977)]
【００１５】
以下個々の試験について述べる。固体の腫瘍物質をストマッヘル内で注意深く機械的に細分し0.05％コラゲナーゼ、0.07％ＤＮＡｓｅと0.1 ％ヒアルロニダーゼからなる酵素カクテルで37℃で30分培養した。ついで細胞を細胞培養培地中で２回成長させ200 μｍと50μｍのフイルターを通過させた。細胞の生死の判定は、トリパンブルー染色法によって行った（生きた細胞は着色しない）。
腫瘍細胞の懸濁液を牛の胎児の血清20％と寒天 0.7％のＩｓｃｏｖｅ培地 0.2mlを含むボトム層を介して24個のくぼみをもつマルチ力価プレートに注入した。寒天0.4 ％の同じ培地0.2 mlに20,000から200,000 個の細胞を添加し、この懸濁液をボトム層上に注入した。僅かの寒天成分によって腫瘍コロニーの３次元的成長が可能な海綿状構造の培地が得られた。検体は0.2 mlの細胞培地で種々の濃度でブランクテストと共に３回連続試験（ドラッグオーバレイ法）した。培養は飽和湿度の大気中で、７％ＣＯ2 ，37℃、６〜18日間行つた。
【００１６】
腫瘍コロニー成長の測定は、活性物質のないコントロールバッチ内で転回顕微鏡により行った。培養の継続により成長した試験管内のコロニーは直径50μm を超えた。コロニー成長が最大になった時点でマルチ力価プレートを自動映像分析機（Bausch und Lomb Omunicom FAS 1V ) で評価した。造影を良くするため、コロニーは評価する24時間前にテトラゾリウムコロライドで染色した。
【００１７】
（検体の試験培養方法）
ＰＨＭＢ塩酸塩( 平均分子量2,800)を、10、30、100 、300 および1,000 μｇ／mlの各段階ごとに試験した。培養時間は細胞増殖時間毎に５〜18日であった。検体を培地で３倍希釈し、これをトップ層としてマルチ 力価プレートのクボミに注入した。こうしてボトム層と腫瘍細胞層において拡散され検体の濃度を所望のものとした。検体を含まないコントロールバッチでは、各試験とも急速に腫瘍細胞が増殖した。対照試験製剤５−ＦＵのバッチは急速に陽性コントロールとなった。検体に対する効果を計算するために、各種腫瘍細胞の生存細胞数を百分率で表した。検体処理バッチのコロニー数Ｔとコントロールバッチ（検体非処理）のコロニー数Ｃとの間の次式が使用される。
Ｔ／Ｃ＝［コロニー数（処理コントロール）／コロニー数（非処理コントロール）］×100
テストは次の基準が満たされたとき完全に評価できる。
a)コントロールバッチ内のコロニー数のうち直径50μm 以上のものが20より大、b)コントロールバッチ内の最初の１日当りコロニー数が０であるかまたは、最終のコロニー数の30％が２より大、
c)コントロール群の変動率が50％未満、
d)対照試験製剤５−ＦＵの投与量 1,000μg ／mlの時の各種腫瘍細胞の生存率が非処理コントロールの各種腫瘍細胞の生存率の30％より小さい。
【００１８】
（試験結果）
ＰＨＭＢ 300μg ／ml濃度で、供試17例中13例で、コロニー成長を非処理コントロールの30％未満にまで抑止し、ＰＨＭＢ 100μg ／mlの濃度で、供試例中の５例で非処理コントロールの30％まで抑制された。結果は表２および図１のグラフに示す。表２のＩＣ70値とは、70％のコロニーが消滅するＰＨＭＢ濃度（μg ／ml）である。最も感受性の高い腫瘍は、結腸癌ＣＸＦ２８０，ＣＸＦ６０９およびＣＸＦＨＴ２９Ｘ，肺癌ＬＸＦＳ６５０、黒色肉腫ＭＥＦＸ９８９、腎臓癌ＲＸＦ４８６およびＲＸＦ１２２０、および乳房癌ＭＣＦ７であった。
【００１９】
表２に種々の腫瘍の成育に対するＰＨＭＢの効果をＩＣ70値で示した。
【表２】
0004171086.tif 000003
【００２０】
結腸癌ＣＸＦ２８０及びＣＸＦ６０９、肺癌ＬＸＦＳ６５０はＰＨＭＢに対して他の感受性の高い腫瘍タイプよりも更に一桁高い感受性を示した。３番目の結腸癌ＣＸＦＨＴ２９ＸがＰＨＭＢに対して最も高い感受性を示した。
【００２１】
（実施例４）
平均分子量 2,800のＰＨＭＢの坑腫瘍性試験、実施例２で調製したのと同じ溶液を使用して実施例３の方法により実施した。この試験結果は実施例３の結果と同等である。
（実施例５）
ポリエチレングリコール（分子量 4,000）の代りに水を使用した以外は実施例１と全く同様の方法で実施した。溶液の組成は下記の通りであった。この溶液は実施例３と全く同じ方法で試験され、この結果は実施例３の結果と同等である。
ＰＨＭＢ塩酸塩（平均分子量 2,800）                        20重量％
水                                                        80重量％
（実施例６）
ＰＨＭＢ塩酸塩の代りに相当するＰＨＭＢが使用された以外は全く実施例５と同じ方法で試験を実施した。
【００２２】
（実施例７）
ＰＨＭＢの平均分子量を 3,500とし、ポリエチレングリコール分子量を 4,000とし、水を使用した下記の組成の溶液を使用した以外は実施例１と全く同じ方法で試験した。ＰＨＭＢ塩酸塩は市販品のＰＨＭＢ即ち Vantocil IB、Cosmocil CQ またはArlagard Eを公知のフラクション蒸留で精製して使用した。 Vantocil IB、Cosmocil CQ またはArlagard Eは20％のＰＨＭＢ塩酸塩を活性成分として含有する水溶液である。
ＰＨＭＢ塩酸塩                                            20重量％
ＰＥＧ                                                    １重量％
水                                                        79重量％
（実施例８）
実施例７の平均分子量 3,500のＰＨＭＢ塩酸塩の代りに平均分子量 5,000のＰＨＭＢ塩酸塩を使用した以外は全く実施例７と同じ方法で試験を実施した。
【００２３】
（実施例９）
下記の組成の溶媒を使用して試験を実施した。ＰＨＭＢは実施例７で述べられた方法で得た。図２は市販のＰＨＭＢ（平均分子量 2,610）とＰＨＭＢ（平均分子量 4,000）の分子量分布を示したものである。
ＰＨＭＢ（平均分子量 4,000）                             4.5重量％
水                                                      95.5重量％
（実施例１０）
ＰＨＭＢ（平均分子量 5,000）の水溶液で試験した。ＰＨＭＢは実施例７記載の方法で得た。
ＰＨＭＢ                                                 4.0重量％
水                                                      96.0重量％
【００２４】
（実施例１１）
実施例７の方法で調製した下記組成のＰＨＭＢ水溶液を使用して試験した。
ＰＨＭＢ（平均分子量 4,500）                             4.2重量％
水                                                      95.8重量％
（実施例１２）
平均分子量 4,000のＰＨＭＢの水溶液を使用して試験した。ＰＨＭＢは実施例７の方法で調製した。
ＰＨＭＢ                                                  20重量％
水                                                        80重量％
【００２５】
（実施例１３）
静脈投与用液は実施例１１の溶液をラクテートフリーのリンゲル液で希釈して最終ＰＨＭＢ濃度0.0012重量％（平均分子量 4,500）として調製した。
（実施例１４）
他の静脈投与用液は実施例１１の溶液をラクテートフリーのリンゲル液でＰＨＭＢ（平均分子量 4,500）濃度0.01重量％に希釈して調製した。
（実施例１５）
他の静脈投与用液は実施例１０の溶液を 0.9％の食塩水で希釈して最終のＰＨＭＢ（平均分子量 5,000）濃度 0.005重量％に希釈して調製した。
【００２６】
【発明の効果】
本発明で用いるＰＨＭＢは、たとえば結腸腫瘍、黒芽細胞腫、腎臓腫瘍、卵巣腫瘍、肺臓腫瘍、乳房腫瘍、膵臓腫瘍などに有効である。とくにこれは、結腸腫瘍、肺臓腫瘍、乳房腫瘍に使用されるが、とくに結腸腫瘍の治療に効果がある。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＰＨＭＢ各種腫瘍の成育に対する抑止効果を示すグラフである。
【図２】分子量 2,610のＰＨＭＢと分子量4,000 のＰＨＭＢの分子量分布を示すグラフである。
【図１】
0004171086.tif 000004
【図２】
0004171086.tif 000005