(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セイヨウカラハナソウ（ホップ）（Humulus lupulus）、ローマカミツレ（Anthemis nobilis）の中から選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物からなる、抗プラスミン剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は抗プラスミン剤に関する。さらに詳しくは、プラスミン（Plasmin）やプラスミノーゲンアクチベーター（Plasminogen activator；PA）の活性に対して優れた拮抗作用を有する抗プラスミン剤に関する。本発明は、プラスミン、ＰＡの活性変化が認められる種々の疾患を改善する製剤に適用され、特に、患部において前記プラスミン、ＰＡ活性変化が認められる接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡等の種々の皮膚疾患の他、乾燥や洗浄剤等によって惹起される肌荒れ、荒れ性に対して優れた改善、予防効果を有する皮膚外用剤に有利に適用される。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
従来より、皮膚疾患や肌荒れに対して改善・予防効果を有するものとして種々の治療薬、皮膚外用剤、化粧料等が知られている。これら従来の薬剤や化粧料等においては、有効成分として、消炎剤やアミノ酸、多糖、脂質等の他、抗炎症作用、あるいは高い保湿作用を有する各種動植物抽出エキスが、皮膚の炎症や角質層の水分の消失を防ぐ能力に優れているために用いられてきた。しかしながらいずれにおいてもその肌荒れ改善・予防効果は必ずしも十分ではなく、より優れた薬効剤の開発が期待されていた。
【０００３】
一方、皮膚の正常な角化過程においては、表皮細胞内のタンパク質分解酵素（プロテアーゼ）が重要な役割を果たしていると考えられているが（Ogawa H., Yoshiike T., "Int. J. Dermatol."；23,1984）、近年、種々の皮膚疾患の病像形成には特にプラスミン（Plasmin）やプラスミノーゲンアクチベーター（Plasminogen activator；PA）といった線溶系に関わるプロテアーゼの活性変化が深く関与していることが明らかにされつつある。ＰＡはプラスミンの前駆体であるプラスミノーゲンに特異的に働いて、それを活性なプラスミンに変換するプロテアーゼである。このＰＡと皮膚疾患との関係については、例えば、炎症性異常角化性疾患の代表である乾癬では、その患部表皮の錯角化部位に強いＰＡ活性が存在すること（Haustein, "Arch. Klin. Exp. Dermatol."；234,1969）や、乾癬鱗屑から高濃度の塩溶液を用いてＰＡを抽出したという報告（Fraki,Hopsu-Havu, "Arch. Dermatol. Res"；256,1976）がなされている。また、尋常性天疱瘡においては表皮細胞内で多量に産生されたＰＡが、細胞外に存在するプラスミノーゲンをプラスミンに転換し、このプラスミンが細胞間結合物質を消化することにより細胞間に組織液が貯留して表皮内水疱が形成されることが、in vitroの実験系のおいて明らかにされている（Morioka S. et al., "J. Invest. Dermatol."；76,1981）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者は、上記事情に鑑み鋭意研究を重ねた結果、プラスミンやプラスミノーゲンアクチベーターの活性変化に起因する種々の皮膚疾患、肌荒れ、荒れ性等の改善・予防には抗プラスミン剤が有効であると考え、広く種々の物質について抗プラスミン活性を調べた結果、特定の植物抽出物が優れた抗プラスミン活性を有していることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
すなわち本発明は、セイヨウカラハナソウ（ホップ）（Humulus lupulus）、ローマカミツレ（Anthemis nobilis）の中から選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物からなる、抗プラスミン剤に関する。
【０００６】
本発明者が知る限りにおいて、上記植物抽出物の抗プラスミン活性についての報告はこれまでなされていない。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について詳述する。
【０００８】
本発明の抗プラスミン剤は、セイヨウカラハナソウ（ホップ）（Humulus lupulus）、ローマカミツレ（Anthemis nobilis）の中から選ばれる１種または２種の植物またはその抽出物からなる。
【００１０】
セイヨウカラハナソウ（ホップ）（Humulus lupulus）は、クワ科（Moraceae）カナムグラ属（Humulus）に属する植物である。
【００１２】
ローマカミツレ（Anthemis nobilis）は、キク科（Compositae）カミツレモドキ属（Anthemis）に属する植物である。ヨーロッパ南部原産の多年草で、各地で薬用植物、切花用に栽培されている。
【００１３】
上記各植物はそれぞれ、生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、使用性、製剤化等の点から乾燥粉末あるいは溶媒抽出物として用いることが好ましい。
【００１４】
これら各植物の使用部位としては、樹皮、全草、または葉、花、根等、任意に用いられ得るが、セイヨウカラハナソウ（ホップ）では果穂が、ローマカミツレでは花が、それぞれ特に抗プラスミン活性が強いことから、好適に用いられる。
【００１５】
上記各植物の抽出物は常法により得ることができ、例えば、各植物をそれぞれ抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過し濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、1，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。上記溶媒で抽出して得た抽出液をそのまま、あるいは濃縮したエキスを吸着法、例えばイオン交換樹脂を用いて不純物を除去したものや、ポーラスポリマー（例えばアンバーライトＸＡＤ−２）のカラムにて吸着させた後、メタノールまたはエタノールで溶出し、濃縮したものも使用することができる。また分配法、例えば水／酢酸エチルで抽出した抽出物等も用いられる。
【００１６】
このようにして得た上記植物抽出物は、安全性が高く、優れた抗プラスミン活性を有する。
【００１７】
本発明の抗プラスミン剤は、プラスミン（Plasmin）やプラスミノーゲンアクチベーター（PA）活性に対し拮抗作用を有し、プラスミンの活性発現を直接あるいは間接的に阻害する製剤を広く意味する。
【００１８】
本発明の抗プラスミン剤は主として皮膚外用剤に用いられ、その場合の植物またはその抽出物の配合量は、外用剤全量中乾燥重量として０．００５〜２０重量％配合するのが好ましく、特には０．０１〜１０重量％である。０．００５重量％未満では抗プラスミン活性効果、肌荒れ改善・予防効果が十分に発揮され難く、一方、２０重量％を超えて配合してもさほど大きな効果の向上は認められず、また製剤化が難しくなるので好ましくない。
【００１９】
上記抗プラスミン剤を皮膚外用剤に用いる場合、上記各植物抽出物に加えて、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常化粧品や医薬品等の皮膚外用剤に用いられる他の成分、例えば保湿剤、酸化防止剤、油性成分、紫外線吸収剤、乳化剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色材、水性成分、水、各種皮膚栄養剤等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００２０】
さらに、エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸、リンゴ酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類なども適宜配合することができる。
【００２１】
また、本発明を皮膚外用剤に用いる場合、外皮に適用される化粧料、医薬品、医薬部外品、特に好適には化粧料に広く適用することが可能であり、その剤型も、皮膚に適用できるものであればいずれでもよく、溶液系、可溶化系、乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−油−粉末三層系、軟膏、ゲル、エアゾール等、任意の剤型が適用される。
【００２２】
また、その使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル化粧料やファンデーションの他、メーキャップ化粧料、芳香化粧料、浴用剤等に用いることができる。
【００２３】
なお、上記の剤型および使用形態に本発明の抗プラスミン剤が採り得る形態が限定されるものではない。
【００２４】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例によってなんら限定されるものでない。なお、配合量はすべて重量％である。
【００２５】
実施例に先立ち、本発明に用いられる植物抽出物の抗プラスミン作用および肌荒れ改善作用（実使用試験）について、試験方法およびその評価基準について説明する。
【００２６】
Ｉ．抗プラスミン活性試験
【００２７】
（１）試料の調製
ホップ（Humulus lupulus）の果穂、ローマカミツレ（Anthemis nobilis）の花を、それぞれ５０ｇ（湿重量）ずつ室温で１週間、５倍量のエタノールに浸漬し、抽出液を濃縮乾固した。この固形物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、３％溶液を作成した。これを用いて以下の実験を行った。
【００２８】
（２）抗プラスミン活性の測定
フィブリン平板法にて阻害率％を求めた。すなわち１．０％のプラスミノーゲン除去フィブリノーゲンを含むベロナール緩衝液（０．１２５モル／Ｌ−ＮａＯＨを含む２５ミリモル／Ｌバルビタール酸ナトリウム水溶液、ｐＨ７．４）６ｍＬを９ｃｍφシャーレに注ぎ、そこに１．０モル／Ｌ−ＣａＣｌ2を０．２ｍＬと２５Ｕ／ｍＬのトロンビン０．１ｍＬを加えて静かに混和し、１時間放置した。フィブリノーゲンがフィブリンに変化することによって形成された平板上に、５Ｕ／ｍＬのプラスミンと被験物質を２９：１の割合で混合した混合物を、３７℃で１０分間保温した後２０μＬ添加し、さらに３７℃で１８時間放置した。対照として被験試料の替わりにＤＭＳＯを用いて同様の操作を行い、その後、フィブリンが溶解して形成された溶解円の面積を測定し、下記の数式１によりプラスミン阻害率を求めた。結果を表１に示す。
【００２９】
【数１】
阻害率（％）＝［１−（被験試料の溶解円面積／対照の溶解円面積）］×１００
また、比較品として、高い抗プラスミン作用を有すると知られているザクロ（Pumica granatuum）の果実（特開平８−１２５８６号公報、等）のエタノール抽出物についても、上記と同様の試験を行った。その結果を併せて表１に示す。
【００３０】
【表１】
0004132351.tif 000002
【００３１】
表１から明らかなように、本発明品の各植物抽出物は、いずれも比較品のザクロ抽出物に比べ、高い抗プラスミン活性を有することがわかる。
【００３２】
ＩＩ．肌荒れ改善効果試験
【００３３】
（１）レプリカ法による実使用試験
試料として、表２に示すように、ホップ（Humulus lupulus）の果穂、ローマカミツレ（Anthemis nobilis）の花の各５０％エタノール抽出物のいずれかを含む本発明のローションと、すでに肌荒れに対する適用が知られているオウバク（Phellodendri cortex）の５０％エタノール抽出物を配合した比較用ローションを用いて、人体パネルで肌荒れに対する改善効果を評価した。
【００３４】
すなわち、女性健常人（顔面）の肌のレプリカをレプリカ剤を用いて採取し、皮膚表面形態を顕微鏡（１７倍）にて観察した。皮紋の状態および角層の剥離状態から下記の判定基準に基づいて肌荒れ評価１もしくは２と判断されたパネル４０名を用い、１０名ずつの顔面左右半々に、本発明品の１〜２のいずれかと比較品のローションを１日１回、４週間塗布した。４週間後、再び上述のレプリカ法に従って肌の状態を観察し、下記の判定基準に従って評価した。結果を表３に示す。
【００３５】
【表２】
0004132351.tif 000003
【００３６】
〈レプリカ判定基準〉
１：  皮溝、皮丘の消失、広範囲の角層のめくれが認められる
２：  皮溝、皮丘が不鮮明、角層のめくれが認められる
３：  皮溝、皮丘は認められるが、平坦
４：  皮溝、皮丘が鮮明
５：  皮溝、皮丘が鮮明で整っている
【００３７】
【表３】
0004132351.tif 000004
【００３８】
表３の結果から明らかなように、本発明品１〜４のローションは比較品のローションと比較し、顕著な肌荒れ改善効果が認められた。
【００４１】
0004132351.tif 000005
（製法）
（１３）に（７）、（８）を加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。（１）〜（６）、（９）〜（１２）を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。水相に油相をかき混ぜながら徐々に加え反応を行う。その後、ホモミキサーで均一に乳化し、よくかき混ぜながら３０℃まで冷却する。
【００４３】
0004132351.tif 000006
（製法）
（１４）に（８）を加え、加熱して７０℃に保つ（水相）。（１）〜（７）、（９）〜（１３）を混合し加熱融解して７０℃に保つ（油相）。油相をかき混ぜながら水相を徐々に加え、ホモミキサーで均一に乳化した後、よくかき混ぜながら３０℃まで冷却する。
【００４４】
0004132351.tif 000007
（製法）
（１１）（４）を均一に溶解し、一方、（１）に（７）、（３）を溶解し、水相に添加する。次いで（２）、（８）〜（１０）を加えた後、（５）、（６）で中和し増粘する。
【００４５】
0004132351.tif 000008
（製法）
Ａ相、Ｂ相をそれぞれ均一に溶解し、Ａ相にＢ相を加えて可溶化する。次いでここにＣ相を加えた後、容器に充填する。
【００４６】
実施例１〜７（ただし実施例１、２、４は欠番とする）はいずれも、優れた抗プラスミン活性を有し、肌荒れ改善・予防効果に優れる。
【００４７】
【発明の効果】
以上詳述したように、本発明によれば、プラスミンやプラスミノーゲンアクチベーターの活性に対して優れた拮抗作用を有する抗プラスミン剤が提供される。本発明の抗プラスミン剤は、プラスミン、ＰＡの活性変化が認められる種々の疾患を改善する製剤に適用され、特に、患部において前記プラスミン、ＰＡ活性変化が認められる接触性皮膚炎、乾癬、尋常性天疱瘡、先天性水疱瘡等の種々の皮膚疾患の他、乾燥や洗浄剤等によって惹起される肌荒れ、荒れ性に対して優れた改善、予防効果を有する皮膚外用剤に用いることができる。