(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩を有効成分とするトロンボモジュリン発現促進剤。
【請求項２】
（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩を有効成分とする抗血栓剤。
【請求項３】
（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩を有効成分とする敗血症予防・治療剤。
【請求項４】
（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩を有効成分とする抗血小板剤。
【請求項５】
（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩を有効成分とする抗凝固剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、特に（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩（以下、ピタバスタチンと略すことが有る）を有効成分とするトロンボモジュリン発現促進剤に関する。トロンボモジュリンは抗血液凝固物質であり、血液凝固能異常に関わる疾患及び／又は敗血症の予防及び治療剤として有用である。また、本発明は、ピタバスタチン又はその塩を有効成分とする抗血栓剤、敗血症予防・治療剤、抗血小板剤、及び抗凝固剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
トロンボモジュリン（以下、ＴＭと略すことがある。）は、血管内皮細胞膜上に存在する糖蛋白のひとつであり、トロンビンに結合し、トロンビンによるプロテインＣ活性化の補酵素として、主に血液凝固系の調節因子として機能している。
また近年、敗血症患者において活性型プロテインＣが減少していることが明らかとなっており、プロテインＣ活性化の補酵素であるＴＭが敗血症の予防・治療剤として有望視されている（N Engl J Med，Vol．344，No.10 759-762（2001））。
ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤（以下、スタチンと略すことが有る。）は、本来のＬＤＬ−コレステロール低下作用の他に、脂質代謝以外への効果、すなわち内皮細胞機能の改善、平滑筋細胞の増殖・遊走の抑制、プラークの安定化（マクロファージ泡沫化抑制やマトリクスプロテアーゼ（ＭＭＰ）の発現抑制など）、抗血栓作用、抗酸化作用などの多面的機能（pleiotropic effect）を持つことが近年明らかになっている。
スタチンの抗血栓作用については、これまでＬＤＬの酸化抑制による内皮細胞の抗血栓作用改善（Atherosclerosis ，Vol．138，p271−280（1998））、凝固第VII因子の活性化抑制作用（Atheroscler Tromb Vasc Biol ，Vol．17，p265−272（1997））、血小板機能の亢進抑制作用（Atheroscler Tromb Vasc Biol ，Vol．15，p247−251（1995））、血小板の粘着抑制作用（Atheroscler Tromb Vasc Biol ，Vol．19，p1812−1817（1999））などが報告されている。
しかしながら、スタチンのＴＭの発現促進作用については全く知られていなかった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、特に（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩の新規な薬理作用を提供するものである。より詳細には、本発明は、ＴＭの発現を調節できる薬剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは、血管内皮細胞を用いてＴＭのｍＲＮＡ及び蛋白の発現に影響を及ぼす物質を探索した結果、全く意外にもスタチンにＴＭの発現促進作用が有り、しかも特にピタバスタチンに強いＴＭ発現促進作用が有ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、特に（＋）−（３Ｒ，５Ｓ，６Ｅ）−７−〔２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−３−キノリル〕−３，５−ジヒドロキシ−６−ヘプテン酸又はその塩を有効成分とするＴＭ発現促進剤を提供するものである。
【０００６】
スタチンは高脂血症治療剤として知られている化合物であるが、スタチンがＴＭの発現に作用するか否かについては全く知られていない。
スタチンとしては、特に制限されるものではないが、例えば米国特許第４，７３９，０７３号及びヨーロッパ特許願第１１４，０２７号；ヨーロッパ特許出願公開第３６７，８９５号；米国特許第５，００１，２５５号、第４，６１３，６１０号、第４，８５１，４２７号、第４，７５５，６０６号及び第４，８０８，６０７号、第４，７５１，２３５号、第４，９３９，１５９号、第４，８２２，７９９号、第４，８０４，６７９号、第４，８７６，２８０号、第４，８２９，０８１号、第４，９２７，８５１号、第４，５８８，７１５号；及びF．G．Kathawala，Medical Research Reviews，11，121-146（1991）、また、ヨーロッパ特許出願公開第３０４，０６３号；ヨーロッパ特許出願公開第３３０，０５７号及び米国特許第５，０２６，７０８号及び第４，８６８，１８５号；ヨーロッパ特許出願公開第３２４，３４７号；ヨーロッパ特許出願公開第３００，２７８号；米国特許第５，０１３，７４９号、第５，８７２，１３０号及び第５，８５６，３３６号、米国特許第４，２３１，９３８号、米国特許第４，４４４，７８４号、米国特許第４，３４６，２２７号、米国特許第５，３５４，７７２号、米国特許第５，２７３，９９５号、米国特許第５，１７７，０８０号、米国特許第３，９８３，１４０号、日本国特許第２，６４８，８９７号、米国特許第５，２６０，４４０号あるいはBioorganic & Medicinal Chemistry，5，pp437，(1977)および日本国特許第２，５６９，７４６号、ヨーロッパ特許第３０４，０６３号あるいは米国特許第５，８５６，３３６号に記載されている。
【０００７】
特に、米国特許第４，２３１，９３８号にはロバスタチンが、米国特許第４，４４４，７８４号にはシンバスタチンが、米国特許第４，３４６，２２７号にはプラバスタチンが、米国特許第５，３５４，７７２号にはフルバスタチンが、米国特許第５，２７３，９９５号にはアトルバスタチンが、米国特許第５，１７７，０８０号にはセリバスタチンが、米国特許第３，９８３，１４０号にはメバスタチンが、また日本国特許第２，６４８，８９７号、米国特許第５，２６０，４４０号あるいはBioorganic & Medicinal Chemistry，5，pp437，(1977)にはロスバスタチン、すなわちモノカルシウム  ビス（＋）−７−［４−（４−フルオロフェニル）−６−イソプロピル−２−（N−メチル−N−メタンスルフォニルアミノピリミジン）−５−イル］−（３R，５S）−ジヒドロキシ−（E）−６−ヘプテノエートが記載されている。同様にピタバスタチンカルシウムは、日本国特許第２，５６９，７４６号、ヨーロッパ特許第３０４，０６３号あるいは米国特許第５，８５６，３３６号に記載されている。
【０００８】
本発明のＴＭ発現促進剤は、抗血液凝固作用及び血小板凝集抑制作用を有し、抗血液凝固活性をコントロールすることが望まれる疾患の予防及び治療において、抗血栓剤（抗血小板剤及び／又は抗凝固剤）及び／又は敗血症の予防・治療剤として有用である。
本発明のＴＭ発現促進剤を医薬として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などによる経口投与又は静脈内注射剤、筋肉注射剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤などによる非経口投与が挙げられる。またこのような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、この有効成分を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤などを適宜組み合わせて用いることができる。これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口投与用製剤の調製にあたっては、有効成分の安定性を考慮して例えば特開平２−６４０６号、特許第２，７７４，０３７号、ＷＯ９７／２３２００の記載に従ってｐＨを調整するのが好ましい。本発明の医薬の投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって異なるが、通常成人の場合、一般式（１）で表される化合物として、一日０．０１〜１０００mg、特に０．１〜１００mgを、１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
本発明のＴＭ発現促進剤は、経口投与又は非経口投与により投与される。
本発明のＴＭ発現促進剤の投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって異なるが、通常成人の場合、一日０．０１〜１０００  ｍｇ、好ましくは０．１〜１００  ｍｇを１〜３回に分けて投与するのが好ましい。
【０００９】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。
【００１０】
実施例１
正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVECs）を２％（vol／vol）牛胎児血清、５０μg/ml ゲンタマイシン、５０ng/ml アンフォテリシン B、１０ ng/ml hEGF、５ ng/ml hFGF-B、 １ μg/ml ハイドロコルチゾン及び１０ μg/ml ヘパリンを添加したHuMedia-EG2培地（クラボウ社）の２４穴プレートに２×１０５cells／wellになるように撒く。次に、各検体（ピタバスタチン、フルバスタチン及びプラバスタチン）を終濃度１０−７Ｍ〜１０−３Ｍとなるように培地に加え、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で２４時間培養した。培養後、リン酸緩衝液（pH7.4）で３回洗浄し、０．１５ mol/L NaCl、０．５% Triton X-100、及び １ mmol/L ベンズアミド ハイドロクロライドを含む５０ mmol/L トリス‐塩酸 (pH 7.4)に懸濁後、TMを抽出した。ＴＭ抗原量はＴＭｍＡｂ  ２，１１及び２０モノクローナル抗体を用いて酵素免疫測定法により測定した。コントロール（等量のＤＭＳＯ（０．０１％）を含む）を１００％とした場合の、各検体の添加による細胞蛋白質中のＴＭ抗原の存在量に与える影響を測定した
【００１１】
結果を図１に示す。図１の縦軸はＴＭ抗原量／細胞蛋白質をコントロールに対する比率（％）で示したものである。横軸は各スタチンの濃度を示す。各濃度における白抜き部分はピタバスタチン（Ｐｉｔ）、黒抜きはフルバスタチン（Ｆｌｕ）、及び灰色抜きはプラバスタチン（Ｐｒａ）をそれぞれ示す。
この結果、何れのスタチンもＴＭの発現量を増大させることがわかる。特にピタバスタチン（Ｐｉｔ）による増加量が顕著であることがわかる。
【００１２】
実施例２
HUVECsを２％（vol／vol）牛胎児血清、５０μg/ml ゲンタマイシン、５０ng/ml アンフォテリシン B、１０ ng/ml hEGF、５ ng/ml hFGF-B、 １ μg/ml ハイドロコルチゾン及び１０ μg/ml ヘパリンを添加したHuMedia-EG2培地（クラボウ社）に撒き、ピタバスタチン（終濃度１０−５Ｍ）を培地に加え、５％ＣＯ２、３７℃の条件下で一定時間毎培養した。総ＲＮＡはTRIZOL 試薬 (ライフ テクノロジー社)を用いて抽出し、定法のノーザンブロット法によりＴＭ ｍ−ＲＮＡの発現量を測定した
結果を図２に示す。図２の縦軸はＴＭの発現量をコントロールに対する比率（％）で示したものである。横軸は時間（時間）を示す。１２時間後から急激に発現量が増加していることがわかる。
【００１３】
【発明の効果】
本発明によれば、スタチンが主に血液凝固系の調節因子として機能しているＴＭの発現を促進し、特にピタバスタチンは他のスタチンに比較し有意にＴＭの発現を促進できるので、抗血栓剤及び／又は敗血症予防・治療剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明のスタチンによるトロンボモジュリンの抗原量の変化の結果を示すものである。図１の縦軸はＴＭ抗原量／細胞蛋白質をコントロールに対する比率（％）で示したものである。横軸は各スタチンの濃度を示す。各濃度における白抜き部分はピタバスタチン（Ｐｉｔ）、黒抜きはフルバスタチン（Ｆｌｕ）、及び灰色抜きはプラバスタチン（Ｐｒａ）をそれぞれ示す。
【図２】図２は、本発明のピタバスタチンによるトロンボモジュリンの発現量の経時変化を示したものである。図２の縦軸はＴＭの発現量をコントロールに対する比率（％）で示したものである。横軸は時間（時間）を示す。
【図１】
0004187141.tif 000002
【図２】
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