(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ダイオキシン分解性微生物と、前記ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物とを用いてダイオキシンを処理するダイオキシン分解方法において、ダイオキシン分解性微生物が、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）であり、ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物が、アルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）及びステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）を併用することを特徴とするダイオキシン分解方法。
【請求項２】
ダイオキシン分解性微生物と、前記ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物とを含むダイオキシン処理剤において、ダイオキシン分解性微生物が、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）であり、ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物が、アルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）及びステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）を併用することを特徴とするダイオキシン処理剤。
【請求項３】
アルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）およびステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）からなる群より選ばれるダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、複合微生物系によるダイオキシンの分解方法およびダイオキシン処理剤に関する。
さらに詳しく言えば、テラバクター（Terrabacter）属に属するダイオキシン分解性微生物と、前記ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物とを併用するダイオキシンの分解方法、ダイオキシン処理剤およびダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物に関する。
【０００２】
【従来技術とその課題】
酸素で架橋された２個のベンゼン核の１乃至８個の水素が塩素により置換されたクロロジベンゾジオキシンには７５個の異性体が存在する。これらは毒性が高く、人体に対しては、例えば皮膚の色素沈着、脱毛、多毛、肝機能異常などを引き起こすことが知られ、環境汚染との関わりでダイオキシンと呼ばれている。中でも２，３，７，８−テトラクロロジベンゾ−ｐ−ジオキシンは最も毒性が高く、この化合物自体をダイオキシンと呼ぶ場合もあるが、本発明は前記クロロジベンゾジオキシン類を分解の対象とする。
【０００３】
ダイオキシン類は、近年、ごみ焼却施設の焼却灰や集塵灰からも検出されており、焼却によりダイオキシン類を生ずる可能性のある物質の使用を規制する等の対策が採られつつあるが、一旦生成したダイオキシン類についてはこれをいち早く分解して無毒化する必要がある。
【０００４】
ダイオキシンを分解する方法としては、従来、シュードモナス（Pseudomonas）等の細菌を用いた方法（例えば、中宮邦近ら、第１０回廃棄物学会研究発表会講演論文集、p.880,1999）や白色腐朽菌を用いた方法（例えば、近藤隆一郎ら、第１０回廃棄物学会研究発表会講演論文集、p.877,1999）等の微生物学的な方法が報告されているが、ダイオキシン分解活性は十分満足できるものではない。
本発明の課題は、ダイオキシンを効率よく分解出来る微生物系を見出し、微生物を利用したダイオキシンの分解方法及び分解処理剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ダイオキシン分解活性を有する微生物に着目し、これら微生物を用いたダイオキシンの分解能を向上させるべく鋭意検討を行なった結果、日本各地から採取した土壌や水サンプルの中からダイオキシン類を良好に分解する微生物系を見出した。本発明者らは、その微生物系を詳細に調べた結果、その微生物系の中でダイオキシン分解活性を有するものはテラバクター（Terrabacter）属に属する微生物であり、それ以外の微生物はダイオキシン分解活性を有さないが前記テラバクター属に属する微生物と併用したとき、テラバクター属に属する微生物単独による場合に比べてダイオキシン分解活性が向上することを見出した。テラバクター属に属する特定の微生物がダイオキシン分解活性を有することは従来知られているが（J. Ferment. Bioeng., 84, 387-399 (1997), J. Bacteriol., 172, 53-62 (1997)）、他の微生物を共存させたときにダイオキシン分解活性が向上することは本発明者らが今回初めて見出したことである。
【０００６】
すなわち、本発明は、以下の複合微生物系によるダイオキシン分解方法、ダイオキシン処理剤、ダイオキシン分解活性を有する新規な微生物およびダイオキシンの分解活性を増強する新規な微生物を提供するものである。
【０００７】
１．テラバクター（Terrabacter）属に属するダイオキシン分解性微生物と、前記ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物とを用いてダイオキシンを処理することを特徴とするダイオキシン分解方法。
２．ダイオキシン分解性微生物が、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）である前記１に記載のダイオキシン分解方法。
３．ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物が、アルカリゲネス（Alcaligenes）属またはステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌である前記１または２に記載のダイオキシン分解方法。
４．ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物として、アルカリゲネス（Alcaligenes）属に属する菌およびステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌を併用する前記１または２に記載のダイオキシン分解方法。
５．前記アルカリゲネス（Alcaligenes）属に属する菌が、アルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）である前記３または４に記載のダイオキシン分解方法。
６．前記ステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌が、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）である前記３または４に記載のダイオキシン分解方法。
７．テラバクター（Terrabacter）属に属するダイオキシン分解性微生物と、前記ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物とを含むことを特徴とするダイオキシン処理剤。
８．ダイオキシン分解性微生物が、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）である前記７に記載のダイオキシン処理剤。
９．ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物が、アルカリゲネス（Alcaligenes）属またはステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌である前記７または８に記載のダイオキシン処理剤。
１０．ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物として、アルカリゲネス（Alcaligenes）属に属する菌およびステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌を併用する前記７または８に記載のダイオキシン処理剤。
１１．前記アルカリゲネス（Alcaligenes）属に属する菌が、アルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）である前記９または１０に記載のダイオキシン分解方法。
１２．前記ステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌が、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）である前記９または１０に記載のダイオキシン分解方法。
１３．ダイオキシン分解活性を有するテラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）。
１４．アルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）およびステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）からなる群より選ばれるダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物。
【０００８】
以下、本発明について詳述する。
（１）ダイオキシン分解性微生物
本発明のダイオキシン分解方法で使用するダイオキシン分解性微生物は、テラバクター（Terrabacter）属に属するダイオキシン分解活性を有する微生物である。好ましくは本発明者らが土壌より分離した微生物の一種であり、平成１３年２月２３日付で経済産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所にテラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）として寄託されている。
【０００９】
以下に、その菌学的性状を示す。
（ｉ）コロニーの形態（３１℃、１日培養）
・培地名            ：ＳＣＤ（Soybean Casein Digest）寒天培地
・コロニーの大きさ  ：０.５ｍｍ未満
・コロニーの形      ：点状
・コロニーの隆起    ：扁平状
・コロニー周辺の形状：全円
・コロニー表面の形状：平滑
・コロニーの質      ：バター質
・コロニーの透明度  ：不透明
・コロニーの光沢    ：湿光
・コロニーの色調    ：ベージュ
【００１０】
（ii）微生物の形状
・微生物の形態        ：短桿性
・微生物の運動性      ：なし
・微生物の大きさ（幅）：０.６〜０.８μｍ
【００１１】
（iii）生理的性状（＋：陽性、−：陰性、±：擬陽性）
・グラム染色                    （−）
・β−ガラクトシダーゼ          （−）
・アルギニンジヒドロラーゼ      （−）
・リジンデカルボキシラーゼ      （−）
・オルニチンデカルボキシラーゼ  （−）
・クエン酸の利用性              （−）
・硫化水素産生                  （−）
・ウレアーゼ                    （−）
・マッコンキー培地生育          （＋）
・トリプトファンデアミナーゼ    （−）
・インドール産生                （−）
・アセトイン産生                （−）
・ゼラチン液化                  （−）
・グルコース                    （−）
・マンニトール                  （−）
・イノシトール                  （−）
・ソルビトール                  （−）
・ラムノース                    （−）
・白糖                          （−）
・メリビオース                  （−）
・アミグダリン                  （−）
・アラビノース                  （−）
・硝酸塩還元                    （−）
・窒素ガス産生                  （−）
・オキシダーゼ                  （−）
【００１２】
以上の菌学的性状から、本微生物はアシネトバクター（Acinetobacter）属に属するものと当初考えられたが、後述する実施例２のｒＤＮＡ遺伝子分析の結果からテラバクター属に属するものと同定した。
【００１３】
（２）ダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物
本発明において、上記テラバクター属に属する微生物と併用するダイオキシン分解活性を増強する微生物としては、例えばアルカリゲネス（Alcaligenes）属またはステノトロホモナス（Stenotrophomonas）属に属する菌がある。特にこの二種の菌を共存させたときにダイオキシン分解活性が増強される。
【００１４】
アルカリゲネス属に属する菌としては、例えば本発明者らが土壌より分離した微生物で、平成１３年２月２３日付で経済産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所にアルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）として寄託した菌株が挙げられる。
ステノトロホモナス属に属する菌としては、例えば本発明者らが土壌より分離した微生物の一種であり、平成１３年２月２３日付で同研究所にステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）として寄託した菌株が挙げられる。
上記の２種の菌株の菌学的性状を示す。
【００１５】
アルカリゲネス・エスピーＨＮ−２株（FERM P-18228）の菌学的性状
（ｉ）コロニーの形態（３１℃、１日培養）
・培地名            ：ＳＣＤ（Soybean Casein Digest）寒天培地
・コロニーの大きさ  ：０.５ｍｍ未満
・コロニーの形      ：点状
・コロニーの隆起    ：扁平状
・コロニー周辺の形状：全円
・コロニー表面の形状：平滑
・コロニーの質      ：バター質
・コロニーの透明度  ：不透明
・コロニーの光沢    ：湿光
・コロニーの色調    ：黄褐色
【００１６】
（ii）微生物の形状
・微生物の形態        ：長桿性
・微生物の運動性      ：あり
・微生物の大きさ（幅）：０.４μｍ
【００１７】
（iii）生理的性状（＋：陽性、−：陰性、±：擬陽性）
・グラム染色                        （−）
・芽胞形成                          （−）
・オキシダーゼ                      （＋）
・硝酸塩還元                        （−）
・インドール産生                    （−）
・グルコース酸化（嫌気）            （−）
・アルギニンジヒドロラーゼ          （−）
・ウレアーゼ                        （−）
・エスクリン加水分解                （−）
・ゼラチン液化                      （−）
・β−ガラクトシダーゼ              （−）
・グルコース（同化）                （−）
・アラビノース（同化）              （−）
・マンノース（同化）                （−）
・マンニトール（同化）              （−）
・Ｎ−アセチルグルコサミン（同化）  （−）
・マルトース（同化）                （−）
・グルコン酸カリウム（同化）        （−）
・ｎ−カプリン酸（同化）            （＋）
・アジピン酸（同化）                （±）
・ｄｌ−リンゴ酸（同化）            （＋）
・クエン酸ナトリウム（同化）        （＋）
・酢酸フェニル（同化）              （＋）
【００１８】
ステノトロホモナス・マルトフィリアＨＮ−３株（FERM P-18229）の菌学的性状
（ｉ）コロニーの形態（３１℃、１日培養）
・培地名            ：ＳＣＤ（Soybean Casein Digest）寒天培地
・コロニーの大きさ  ：０.５ｍｍ
・コロニーの形      ：点状
・コロニーの隆起    ：扁平状
・コロニー周辺の形状：全円
・コロニー表面の形状：平滑
・コロニーの質      ：バター質
・コロニーの透明度  ：不透明
・コロニーの光沢    ：湿光
・コロニーの色調    ：黄色
【００１９】
（ii）微生物の形状
・微生物の形態        ：長桿性
・微生物の運動性      ：あり
・微生物の大きさ（幅）：０.４μｍ
【００２０】
（iii）生理的性状（＋：陽性、−：陰性、±：擬陽性）
・グラム染色                        （−）
・芽胞形成                          （−）
・オキシダーゼ                      （±）
・硝酸塩還元                        （−）
・インドール産生                    （−）
・グルコース酸化（嫌気）            （−）
・アルギニンジヒドロラーゼ          （−）
・ウレアーゼ                        （−）
・エスクリン加水分解                （＋）
・ゼラチン液化                      （＋）
・β−ガラクトシダーゼ              （＋）
・グルコース（同化）                （＋）
・アラビノース（同化）              （−）
・マンノース（同化）                （＋）
・マンニトール（同化）              （−）
・Ｎ−アセチルグルコサミン（同化）  （＋）
・マルトース（同化）                （＋）
・グルコン酸カリウム（同化）        （−）
・ｎ−カプリン酸（同化）            （−）
・アジピン酸（同化）                （−）
・ｄｌ−リンゴ酸（同化）            （＋）
・クエン酸ナトリウム（同化）        （＋）
・酢酸フェニル（同化）              （−）
【００２１】
（３）培養条件
本発明においては、テラバクター属に属するダイオキシン分解性微生物とダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する微生物は、好気的または嫌気的条件、好ましくは好気的条件下で培養し増殖することができる。
好気培養は、通常の中温菌の培養に準じ、静置培養でも振盪培養でも良い。培養液のｐＨは２〜８、好ましくは５〜８である。
【００２２】
培養温度は１０〜４０℃、好ましくは２０〜３０℃である。培養を継続する時間は、目的とするダイオキシン含有物質中のダイオキシンを分解するに十分な時間であり、通常は１〜２０日間、好ましくは２週間程度である。
嫌気培養は、上記の好気培養に準じ、静置培養にて行なう。
培地は、通常の微生物に用いるものであれば特に制限されない。例えば、ブイヨン培地、Ｌ培地等を用いることができる。
【００２３】
培地には、必要に応じて各種の炭素源あるいは窒素源を添加することができる。炭素源としては、ブドウ糖、ショ糖、マルトース、サッカロース、上白糖、黒糖、糖蜜、廃糖蜜、マルツエキス等が挙げられる。窒素源としては、肉エキス、ペプトン、グルテンミール、大豆粉、乾燥酵母、酵母エキス、硫酸アンモニウム、酒石酸アンモニウム塩、尿素等が挙げられる。その他、必要に応じて、ナトリウム塩、マグネシウム塩、マンガン塩、鉄塩、カルシウム塩、リン酸塩、亜鉛塩等の無機塩類や、イノシトール、ビタミンＢ1塩酸塩、Ｌ−アスパラギン、ビオチン等のビタミン類を添加してもよい。
【００２４】
（４）ダイオキシン分解方法
本発明のダイオキシン分解方法は、上記ダイオキシン分解性微生物とダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する菌とを複合した培養物またはその処理物でダイオキシンを処理することにより行なわれる。例えば、上記の培養液にダイオキシン含有物質を添加するか、逆にダイオキシン含有物質に上記の培養液またはその抽出成分を添加して処理する。
【００２５】
反応は、バッチ法、連続法、半連続法等のいずれでも行なうことができる。また、ダイオキシン分解活性を有する菌とダイオキシン分解活性を増強する菌とを含有するものであれば、他のダイオキシン分解菌と共に用いてもよい。
培養液にダイオキシン含有物質を添加して処理する場合の培養は上記の培養条件に準じて行なうことが出来る。
【００２６】
（５）ダイオキシン処理剤
本発明によるダイオキシン処理剤は、前記ダイオキシン分解性微生物とダイオキシン分解性微生物の分解活性を増強する菌を含むものであり、液状であると固体状であるとを問わない。すなわち、上記のダイオキシン分解活性菌と分解活性増強菌とを含有する培養液自体をダイオキシン処理剤として用いることができる。また、培養液を乾燥し製造助剤を加えて固形剤としたものを、処理するダイオキシン含有物質自体に、または処理媒体中に添加して使用することもできる。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
【００２８】
実施例１：微生物の単離
表１に示す最少培地２.５ｍｌをネジ付き試験管（２０ｍｍ×１２５ｍｍ）に分注し、ダイオキシン類のモデル化合物としてのジベンゾフラン（ＤＢＦ）２.５ｍｇ（１０００ｍｇ／ｌ）を加え、炭素源の分散剤としてジメチルホルムアミド５μｌ（０.２％（ｖ／ｖ））を添加した。ここに日本各地から採集した土壌や水のサンプルを少量接種し、３０℃、１４０ｒｐｍにて振盪培養を行なった。数回の継代培養後も良好な生育を示す培養系が得られたため、培養液の一部を最少培地寒天プレートに塗布し、ＤＢＦのエーテル溶液を噴霧して３０℃にて静置培養を行なったところ、ＤＢＦ層が溶解したコロニーが形成された（図１および図２参照）。
この培養液を希釈してNutrient broth寒天プレート上に塗布して３０℃で静置培養することによりＤＢＦ分解菌の単離を行なった。その結果、この培養系は３種類の菌より構成されていることが明らかになった。
この３種の菌を単離し（ＨＮ−１株、ＨＮ−２株、ＨＮ−３株）、菌学的性状を調べた結果は前述の通りであった。
【００２９】
【表１】
0004200196.tif 000002
【００３０】
実施例２：微生物の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子のシーケンス決定
上記３種の菌について近隣結合法による系統解析を行なうため、１６ＳｒＲＮＡ遺伝子のシーケンスを決定し、シーケンス解析により微生物の属種の同定を行なった。
【００３１】
（１）ＤＮＡ抽出
菌体からのＤＮＡ抽出は以下のように行なった。Ｃ培地で３０℃、２００ｒｐｍで２日間培養した菌体を5000ｒｐｍ、３分の遠心により集菌して菌体を得た。菌体は３６０μｌのＴＥ（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ8.0）、１ｍＭＥＤＴＡ）に再懸濁し、４０μｌの１０ｍｇ／ｍｌリゾチーム（最終濃度１ｍｇ／ｍ１）を加えて、５０℃で３０分インキュベートした。さらにｌ００μｌの１ｍｇ／ｍｌプロテイナーゼＫ（最終濃度０.１ｍｇ／ｍｌ）と５００μｌのＢＬ緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐΗ8.0；４０ｍＭ）、Tween 20（１％）、Nonidet P-40（０.２％）、ＥＤＴＡ（０.２ｍＭ））を加えてさらに３０分インキュベートした。その後、凍結・融解を２回行ない、９０℃、１０分のインキュベーションでプロテイナーゼＫを失活させた後、その１μｌを以下に示すＰＣＲ反応に用いた。
【００３２】
（２）ＰＣＲ増幅
ＰＣＲ反応はタカラ・ＰＣＲサーマルサイクラーＭＰ（Takara PCR Thermal Cycler MP ；宝酒造製）を用いて行なった。ＰＣＲに用いたプライマー・セットは真正細菌の小サブユニット・リボソーマルＲＮＡ（１６ＳｒＲＮＡ）遣伝子のほぼ全長（11〜1511塩基部位）を特異的に増幅できるように設計し、Ｅｕｂ１１ｆ３ｍｘ（５'−ｔｇｒｇｔｔｔｇａｔｃｍｔｇｇｃｔｙａｇ（配列番号１））ならびにＥｕｂ１５１１ｒ１ｍｘ（５'−ｔｇｇｈｔａｃｃｔｔｇｔｔａｃｇａｃｔｔ（配列番号２））を用いた。ＰＣＲのサイクル・プログラムは９５℃、３分のプレヒーティングの後に、３５サイクルのＰＣＲを行なった。１サイクルの構成は、変性ステップを９５℃、３０秒、アニーリング・ステップを５０℃、３０秒、伸長ステップを７２℃、１.５分として行なった。
得られたＰＣＲの増幅産物を１％のアガロースゲル電気泳動により生成量及び長さを確認した後、スピン・カラム（QIA quick PCR Purification Kit，QIAGEN製）によって精製してシーケンス用の鋳型ＤＮＡとした。
【００３３】
（３）シーケンス決定
シーケンスの決定はクローニングを介さずにＰＣＲ増幅産物のダイレクト・シーケンスによって行なった。シーケンスの決定は増幅された１６ＳｒＲＮＡ遺伝子のほぼ全長にあたる約１.４ｋｂについて行なった。シーケンス・プライマーとしてはＥｕｂ１１ｆ３ｍｘ（配列番号１）、Ｅｕｂ５１４ｆ１ｍｘ（５'−ｇｔｇｃｃａｇｃｍｇｃｃｇｃｇｇｔａａ（配列番号３））、Ｅｕｂ９０６ｆ１ｍｘ（５'−ａａａｃｔｃａａａｇｇａａｔｔｇｒｃｇｇ（配列番号４））、Ｅｕｂ５３２ｒ（５'−ｔｔａｃｃｇｃｇｇｃｋｇｃｔｇｇｃａｃ（配列番号５））、Ｅｕｂ９２０ｒ１ｍｘ（５'−ｃｃｇｙｃａａｔｔｃｃｔｔｔｇａｇｔｔｔ（配列番号６））およびＥｕｂ１４０５ｒ（５'−ｇａｃｇｇｇｃｇｇｔｇｔｇｔｒｃａ（配列番号７））を用い、シーケンスの決定はＡＢＩ３７７蛍光自動シーケンサー（パーキン・エルマー製）を用い、シーケンス反応は専用キットであるビッグ・ダイ・ターミネーター・サイクル・シーケンス・キット（BigDye terminator Cycle sequence kit；パーキン・エルマー製）を用いて行なった。その結果、ＨＮ−１株、ＨＮ−２株およびＨＮ−３株についてそれぞれ配列番号８、９および１０に示す配列を得た。
【００３４】
（４）系統解析
前記で得たシーケンス・データをデータ・ベース（GenBank, EMBL, DDBJ, RDP）から集めた既に報告されている１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列とともにプログラム・パッケージＣｌｕｓｔａｒ−Ｘを用いてアライメントした。近隣結合法による系統解折は系統解析プログラムＰＨＹＬＩＰを用いて行なった。
【００３５】
ＨＮ−１株のシーケンス・データ（配列番号８）は、統計的処理で遺伝子レベルについて比較したところ、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）の遺伝子データと９９.７０％一致した。他のテラバクターグループの１６ＳｒＲＮＡ遺伝子配列と近隣結合法による遺伝子レベルで比較した系統樹を図３に示す。
【００３６】
以上の結果から、ＨＮ−１株を、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）であると同定し、経済産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所にテラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）として寄託した。
【００３７】
また、ＨＮ−２株およびＨＮ−３株についても同様に分析し、それぞれアルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）およびステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）であると同定し、それぞれアルカリゲネス・エスピー（Alcaligenes sp.）ＨＮ−２株（FERM P-18228）、ステノトロホモナス・マルトフィリア（Stenotrophomonas maltophilia）ＨＮ−３株（FERM P-18229）として経済産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所に寄託した。
【００３８】
実施例３：
単離した各微生物を液体最少培地に接種したところ、テラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）のみがＤＢＦを資化可能であり、他の２株はＤＢＦを資化しなかった。
そこで、最少培地寒天プレート上でテラバクター・エスピーＨＮ−１株（FERM P-18227）を単独培養したところ、１０日目にＤＢＦ層が溶解したコロニーを形成した。一方、他の２株を共存させて培養を行なうと５日目にコロニーが形成された。
このことから、テラバクター・エスピーＨＮ−１株単独で処理するよりも、３種類の菌株を混合した複合微生物系により処理することで増殖速度が向上することが分かる。
【００３９】
実施例４：休止菌体によるＤＢＦの分解試験
３種の菌株の複合微生物系の休止菌体を調製しＤＢＦ分解試験を行なった。
液体最少培地にて複合微生物系を培養し、遠心分離にて集菌後、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７.０）にて２回洗浄を行なった。この菌体をリン酸緩衝液にＯ.Ｄ.６６０＝２.０となるように懸濁したものを反応に用いた。共栓付き試験管（１８ｍｍ×１８０ｍｍ）に休止菌体懸濁液２ｍｌを分注し、１０ｍＭ  ＤＢＦのジメチルホルムアミド溶液２０μｌを添加（ＤＢＦ終濃度１００μＭに相当）して３０℃、１４０ｒｐｍにて振とう反応を行なった。反応後、１２Ｎ塩酸４０μｌと内部標準として５ｍＭアントラセンジメチルホルムアミド溶液１０μｌを添加した（アントラセン終濃度２５μＭに相当）。ここに酢酸エチル２ｍｌにて抽出を行ないＧＣ−ＭＳによる分析を行なった。
また、対照として休止菌体をオートクレーブ滅菌したものについて同様に処理し、ＧＣ−ＭＳによる分析を行なった。
【００４０】
ＧＣ−ＭＳによる測定条件は以下の通りである。
ＧＣ−ＭＳ装置：Turbo Mass GC Mass Spectrometer （Perkin Elmer社製）、
イオン源（Ion source）：７０ｅＶ、
カラム：NEUTRA BOND-1 column（GL Science社製）；内径０.２５ｍｍ、長さ３０ｍ、
オーブンプログラム：初期温度１００℃で２分間維持→１０℃／分で昇温し２００℃となったところで２分間維持→１０℃／分で昇温し３００℃となったところで６分間維持。
【００４１】
結果を図４に示す。反応開始直後ではＤＢＦのピークが検出されたが（図４Ａ）、１時間後の反応液中にはＤＢＦの存在は全く確認されなかった（図４Ｂ）。オートクレーブ処理した休止菌体を用いた場合には２４時間の反応後もＤＢＦの減少が確認されなかった（図４Ｃ）。したがって、複合微生物系の休止菌体では１００μＭのＤＢＦを１時間で分解可能であることが分った。
【００４２】
【発明の効果】
本発明によれば、テラバクター（Terrabacter）属に属するダイオキシン分解性微生物と、前記ダイオキシン分解活性を増強する微生物とを共存させた複合微生物系を用いることにより、ダイオキシンを効果的に分解することができる。
【００４３】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の複合微生物系により形成されたコロニーの写真。
【図２】  図１における菌体濃度を１０-4倍に希釈した場合のコロニーの写真。
【図３】  近隣結合法によるテラバクター・エスピー（Terrabacter sp.）ＨＮ−１株（FERM P-18227）の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子解析の系統樹である。図中の目盛りの「0.01」は遺伝的近隣度を表わしている。
【図４】  休止菌体を用いたジベンゾフランの分解を示すＧＣ−ＭＳクロマトグラムであり、（Ａ）は反応開始直後、（Ｂ）は反応開始１時間経過後のものであり、（Ｃ）はオートクレーブ処理した休止菌体を用いた場合の２４時間経過後のものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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