(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＨＲＨアナログであるデカペプチド化合物を含むＬＨＲＨ拮抗物質であって、天然の哺乳動物のＬＨＲＨの６位におけるアミノ酸に一致するペプチド化合物の残基が、Ｄ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギン、またはＬ−グルタミンであって、該デカペプチド化合物は、ＬＨＲＨ化拮抗物質活性を有する、ＬＨＲＨ拮抗物質またはその製薬上許容し得るその塩。
【請求項２】
少なくとも５μｇ／ラットの用量で標準的なラット抗排卵アッセイにおいて処置されたラットの少なくとも５０％において排卵を阻害し、少なくとも３μｇ／ｍｌのヒスタミン放出についてＥＤ50を有する、請求項１に記載のＬＨＲＨ拮抗物質。
【請求項３】
少なくとも２μｇ／ラットの用量で標準的なラット抗排卵アッセイにおいて処置されたラットの少なくとも５０％において排卵を阻害する、請求項１に記載のＬＨＲＨ拮抗物質。
【請求項４】
少なくとも１μｇ／ラットの用量で標準的なラット抗排卵アッセイにおいて処置されたラットの少なくとも５０％において排卵を阻害する、請求項１に記載のＬＨＲＨ拮抗物質。
【請求項５】
少なくとも５μｇ／ｍｌのヒスタミン放出についてＥＤ50を有する、請求項２に記載のＬＨＲＨ拮抗物質。
【請求項６】
少なくとも１０μｇ／ｍｌのヒスタミン放出についてＥＤ50を有する、請求項２に記載のＬＨＲＨ拮抗物質。
【請求項７】
下記の構造を含むペプチド化合物：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、D-Asnであり；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及びJは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩。
【請求項８】
下記の構造を含むペプチド化合物：
Ac-D-Nal-4-Cl-D-Phe-D-Pal-Ser-N-Me-Tyr-D-Asn-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2；
又は製薬上許容し得るその塩。
【請求項９】
下記の構造を含むペプチド化合物：
Ac-D-Nal-4-Cl-D-Phe-D-Pal-Ser-Tyr-D-Asn-Leu-Lys(iPr)-Pro-D-Ala-NH2；
又は製薬上許容し得るその塩。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項に記載のペプチド化合物及び製薬上許容し得るキャリヤーを含む薬剤組成物。
【請求項１１】
治療において使用するための医薬の製造における、請求項１〜９のいずれかの1項に記載の化合物の使用。
【請求項１２】
前立腺癌、卵巣癌、良性の前立腺肥大、性的早熟、エンドメトリオーシス、子宮フィブロイド、乳癌、月経前症候群および多嚢胞性卵巣症候群からなる群より選ぶ疾患を治療するための医薬を製造する際の請求項１１に記載の使用
【請求項１３】
ＬＨＲＨ活性に関連した障害の処置のための医薬の製造における、請求項１〜９のいずれか1項に記載の化合物の使用。
【請求項１４】
前記ＬＨＲＨ活性に関連した障害が性ホルモン依存性がんである、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記性ホルモン依存性がんが前立腺がんである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記性ホルモン依存性がんが卵巣がんである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１７】
前記性ホルモン依存性がんはエンドメトリオーシスである、請求項１４に記載の使用。
【請求項１８】
前記ＬＨＲＨ活性に関連する障害が、良性の前立腺肥大である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１９】
前記ＬＨＲＨ活性に関連する障害が、性的早熟、前立腺癌、卵巣癌、良性の前立腺肥大、エンドメトリオーシス、子宮フィブロイド、乳癌、月経前症候群、多嚢胞性卵巣症候群、及び生殖腺ホルモンの過剰から生じる疾病からなる群より選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項２０】
生殖を制御するための医薬の製造における請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２１】
治療によりヒトまたは動物の体の処置のための方法を除く、オスまたはメスにおける生殖を制御するための請求項１〜９のいずれか1項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチド及びそれらの用途に関する。
黄体化ホルモン（ＬＨ）及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）は、下垂体によって放出されるホルモンである。これらのホルモンは、生殖腺の機能並びに生殖体の産生及び成熟を調節する。ＬＨ及びＦＳＨは、下垂体により視床下部からホルモンを誘発する前の放出時に放出されるのが普通である。黄体化ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ；また、ゴナドトロピン放出ホルモン又はＧｎＲＨとしても知られている）は、ＬＨの放出を誘発する主視床下部ホルモンの内の一つである。これより、ＬＨＲＨの放出は、生殖腺機能の生理的な調節における調節点を表わす。哺乳動物のＬＨＲＨの構造が求められてき、デカペプチドであることが分かった：
0004164125.tif 000002
ＬＨ放出は、排卵のために必要である；これより、ＬＨＲＨの作用をブロックすることによってＬＨ放出を抑制する化合物は、避妊剤として有用である。ＬＨＲＨ拮抗物質は、また、雄哺乳動物においてゴナドトロピンの分泌を調節するために有用であり、これより雄避妊薬として用いることができる。加えて、ＬＨＲＨ拮抗物質は、性ホルモン依存性癌（例えば、前立腺癌）の治療において用いることができ、この場合、ゴナドトロピンのレベルを増大すると、腫瘍増殖を増大の速度をさせる。
拮抗物質の効力を増大させ、好ましくは、同時にまた拮抗物質の酵素分解に対する抵抗を増大させようとして、多数の改質されたＬＨＲＨ類似ペプチドが合成されてきた。例えば、改質された又は自然でないアミノ酸を加入した合成のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドが試験された。一般的な置換は、２位におけるHisに代えた4-Cl-D-Pheの置換、或は１０位におけるGly-NH2に代えたD-Ala-NH2の置換を含む。
ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドにおいてよく遭遇される問題の一つは、ヒスタミン放出活性が発生することである。このヒスタミン放出活性は、ヒスタミン放出が水腫やかゆみのような副作用を生じることから、そのような拮抗物質を臨床上使用することに対してひどい障害を表わす。これより、低ヒスタミン放出活性を有するＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドが特に望ましい。ＬＨＲＨ拮抗物質とヒスタミン放出性とは、必ずしも関係しないが、低ヒスタミン放出活性と高いＬＨＲＨ拮抗物質活性とを組み合わせた従来技術の化合物は、極めて少ない。多くの従来技術のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、また、水溶性不良の悩みがあり、投与するための拮抗物質の配合を複雑なものにする。
発明の要約
本発明は、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチド、ＬＨＲＨ活性を調節する方法、及び被験者を発明の拮抗物質で治療する方法を特徴とする。一実施態様では、ＬＨＲＨ拮抗物質は、ペプチド化合物であって、自然の哺乳動物のＬＨＲＨの６位におけるアミノ酸に一致するペプチド化合物の残基が、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)、D-Lys(Dodac)、D-Lys(pGlu)、D-Lys(Otac)及びD-Lys(Onic)又は二極性成分、スルホニウム成分、レセプター改質用成分及び小極性成分からなる群より選ぶ成分を、ペプチド化合物がＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように含み、但し、二極性成分は両性イオン性ピリジニウムでなくかつ残基はD-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でないペプチド化合物を含む。ペプチド化合物は、残基を約８〜約１２個含むのが好ましい。ペプチド化合物は、残基を１０個含むのが一層好ましい。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド化合物：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)、D-Lys(Dodac)、D-Lys(pGlu)、D-Lys(Otac)、D-Lys(Onic)又は下記の構造である：
0004164125.tif 000003
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｙは、二極性成分、スルホニウム成分、レセプター改質用成分及び小極性成分からなる群より選ぶ成分を含み、但し、二極性成分は両性イオン性ピリジニウムでなくかつＦは、D-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でない；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
発明は、また、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドの薬剤組成物を提供する。
別の態様では、発明は、被験者に有効量のＬＨＲＨ拮抗物質を、ＬＨＲＨ活性を抑制するように投与することを含む、被験者においてＬＨＲＨ活性を抑制する方法を提供する。
別の態様では、発明は、細胞にＬＨＲＨ拮抗物質を、ＬＨＲＨ活性を抑制するように接触させることを含む、細胞においてＬＨＲＨ活性を抑制する方法を提供する。
別の態様では、発明は、被験者に有効量のＬＨＲＨ拮抗物質を、腫瘍増殖を抑制するように投与することを含む、被験者においてホルモン依存性腫瘍の増殖を抑制する方法を提供する。
別の態様では、発明は、被験者に有効量のＬＨＲＨ拮抗物質を、排卵を抑制するように投与することを含む、被験者において排卵を抑制する方法を提供する。
別の態様では、発明は、ＬＨＲＨ拮抗物質を、ＬＨＲＨ活性に関する疾患を有する被験者を治療するためにＬＨＲＨ拮抗物質を使用するための教示をと共にパッケージさせてなる、被験者をＬＨＲＨ活性に関する疾患について治療するためのパッケージした配合物を提供する。
【図面の簡単な説明】
図１は、ＬＨＲＨ拮抗物質＃３８２７を８回の皮下注入を投与量１、１０又は１００μｇ／ｋｇで、３時間毎に１回の注入で投与した成体雄ラットにおける血漿テストステロンレベル（ｎｇ／ｍｌで表わす）を示すグラフである。
図２は、ＬＨＲＨ拮抗物質＃３８２７を浸透型ポンプによって皮下投与した成体雄ラットにおける血漿テストステロンレベル（ｎｇ／ｍｌで表わす）を示すグラフである。投与量は、２週間３００μｇ／ｋｇ／日、次いで更に２週間１５μｇ／ｋｇ／日であるか又は２週間１０００μｇ／ｋｇ／日、次いで更に２週間５、１５又は５０μｇ／ｋｇ／日であるかのいずれかであった。
図３は、ＬＨＲＨ拮抗物質＃３８２７を浸透型ポンプによって皮下投与した成体雄ラットにおける血漿テストステロンレベル（ｎｇ／ｍｌで表わす）を示すグラフである。投与量は、２週間３０μｇ／ｋｇ／日、次いで更に２週間５μｇ／ｋｇ／日であるか、２週間１００μｇ／ｋｇ／日、次いで更に２週間５μｇ／ｋｇ／日であるかもしくは２週間３００μｇ／ｋｇ／日、次いで更に２週間０又は５μｇ／ｋｇ／日であるかのいずれかであった。
発明の詳細な説明
本発明が一層容易に理解されるために、初めにいくつかの用語を定義する。
本明細書中で用いる通りの「ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチド」とは、インビボ又はインビトロでＬＨＲＨ活性を抑制する（すなわち、「ＬＨＲＨ拮抗物質活性」を有する）ペプチド又はペプチド類似体を含む意図である。候補ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、例えばＣｏｒｂｉｎ及びＢｅａｔｔｉｅ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２：１（１９７５）（及び以下を参照）に記載されている動物モデルでアセイすることができる。このアセイでは、候補化合物のＬＨＲＨ拮抗物質活性は、ラットにおける化合物の抗排卵活性（ＡＯＡ）を測定することによってアセイされる。
本明細書中で用いる通りの「ヒスタミン放出活性」なる用語は、被験者に投与した際に、化合物がヒスタミンを放出する傾向を言う。化合物のヒスタミン放出活性は、インビトロアセイ（以下に一層詳細に説明する）によって測定することができる。好適なＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、ラット抗排卵活性アセイにおいて高い活性を有するが、低いヒスタミン放出活性を有する。好適なＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、ヒスタミン放出アセイにおいてＥＤ50少なくとも３μｇ／ｍｌ、一層好ましくは少なくとも５μｇ／ｍｌ、なお一層好ましくは少なくとも１０μｇ／ｍｌを有する。
本明細書中で用いる通りの「アルキル」なる用語は、炭素原子約１〜約１０を有する直鎖又は枝分れ鎖炭化水素基を言う。「低級アルキル」なる用語は、炭素原子約１〜約６を有するアルキル基を言う。低級アルキル基の例は、下記を含む：メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒ−ブチル、ｎ−ペンチル、及びｎ−ヘキシル。アルキル基は、未置換でも又は１つ又はそれ以上の位置において下記で置換されてもよい：例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等。好適なアルキルは、低級アルキルである。
「シクロアルキル」なる用語は、炭素原子３〜８を有する環状の飽和炭化水素基を言う。シクロアルキルの例は、シクロプロル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、及びシクロオクチルを含む。シクロアルキル基は、未置換でも又はアルキルについて記載した通りに１つ又はそれ以上の環位置において置換されてもよい。すなわち、シクロアルキル基は、下記で置換されてもよい：例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等。
本明細書中で用いる通りの「アルケニル」及び「アルキニル」なる用語は、長さ及び可能な置換が上記したアルキルと同様であるが、それぞれ少なくとも１つの炭素−炭素二重結合又は三重結合を含有する不飽和基を言う。
本明細書中で用いる通りの「アリール」なる用語は、ヘテロ原子を０〜４個含んでよい４−、５−、６−及び７−員の単環芳香族基、例えばベンゼン、ピロール、フラン、チオフェン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、等を含む。環構造中にヘテロ原子を有するそれらのアリール基もまた「アリール複素環」又は「ヘテロ芳香族」と呼ぶことができる。芳香族環は、１つ又はそれ以上の環位置において上記したような置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等で置換されることができる。芳香族環は、また、例えば、ビフェニルのように別の芳香族環で置換されてもよい。アリール基は、また、縮合又は多環式芳香族系も含む。
「複素環」又は「複素環式基」なる用語は、ヘテロ原子を１〜４個含む、４−〜１０員環構造、一層好ましくは５〜７員環を言う。複素環式基は、ピロリジン、オキソラン、チオラン、イミダゾール、オキサゾール、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンを含む。複素環式環は、１つ又はそれ以上の位置において上記したような置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、その他の複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等で置換されることができる。複素環は、また、上記した通りのその他の環式基にブリッジされても又は縮合されてもよい。
「多環」又は「多環式基」なる用語は、２個又はそれ以上の炭素が２つの隣接する環に共通する２個又はそれ以上の環式環（例えば、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキニル、アリール及び／又は複素環）を言い、例えば、環は「縮合環」である。非隣接原子によって結合される環を「ブリッジド環」と言う。多環の環の各々は、上記したような置換基、例えば、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等で置換されることができる。
本明細書中で用いる通りの「ヘテロ原子」なる用語は、炭素又は水素と異なる任意の元素の原子を言う。好適なヘテロ原子は、窒素、酸素、硫黄、リン及びセレンである。
本明細書中で用いる通りの「アリールアルキル」なる用語は、アルキル基に付けられたアリール基を言い、ベンジル、ナフチルメチル、ピリジルメチル、等を含み、これらに限定されない。
「イリド」なる用語は、当分野において知られており、陽荷電された原子（特に、周期表のＶ及びＶＩ族から）が、不共有電子対を保持する炭素原子に結合された成分を言う。これより、イリドは、下記の共鳴形態を有する：
0004164125.tif 000004
ここで、ＷはＳ、又はＰのようなヘテロ原子であり、Ｒ1及びＲ2は、独立にＨ、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、アルコキシ、チオアルコキシ、等である。ヘテロ原子は、適当な数の置換基（すなわち、Ｎ及びＳについて２個、Ｐについて３個）で置換される；置換基は、独立にアルキル、シクロアルキル、アリール、等である。窒素イリドは、非電荷分離共鳴形態（上記の右側）からの有意の寄与を有しない。
本明細書中で用いる通りの「二極性成分」なる用語は、陽及び陰の両方の電荷を有する共有結合された成分（例えば、両性イオン性成分）を言う。二極性基の例は、イリド（例えば、Ｓ、Ｎ、又はＰの）、第三級アミンオキシド、ニトロン、ピリジン−Ｎ−オキシド、ニトリルオキシド、第四級アミノ酸（例えば、２−（Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキルアンモニウム）アセテート）、アミノ酸、スルホニウムアレーンオキシド（例えば、米国特許第４，１１１，９１４号に記載されてる通り）、ベタイン（例えば、トリゴネリン）、等を含む。所定の好適な実施態様では、二極性成分はピリジン−Ｎ−オキシドである。その他の好適な実施態様では、二極性成分は両性イオン性ピリジニウム成分である。所定のその他の実施態様では、二極性成分は両性イオン性ピリジニウム成分でない。
本明細書中で用いる通りの「カチオン性成分」とは、少なくとも１つの原子が陽電荷を有する成分であり、その成分は実効陽電荷を有する。これより、例えば、Ｎ−アルキル（又はＮ−アルケニル、−アルキニル、又は−アリール、本明細書で一まとめにして「Ｎ−置換されたピリジニウム」と言う）は、カチオン性成分にすることができる（かつ本明細書中で「カチオン性ピリジニウム成分」と言う）が、ピリジン−Ｎ−オキシドは、それが実効陽電荷を持たなければ、カチオン性成分でない。上記し通りに、ピリジン−Ｎ−オキシドは二極性成分になることができる。カチオン性成分のその他の例は、第四級アミン、スルホニウム塩、ホスホニウム塩、等を含む。所定の好適な実施態様では、カチオン性成分はスルホニウム成分である。
スルホニウム成分は、下記の構造を有する：
0004164125.tif 000005
ここで、Ｒ3及びＲ4は、各々独立にアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、等である。
その他の好適な実施態様では、カチオン性成分はカチオン性ピリジニウム成分である。カチオン性ピリジニウム成分、下記の構造を有する：
0004164125.tif 000006
Ｒ12はアルキル又はアリールであり、Ｒ13〜Ｒ17は、各々独立に水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、その他の複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等である。好適なカチオン性ピリジニウム成分は、Pal(iPr)及びPal(Bzl)を含む。Ｎ−メチルピリジニウム成分は好適ではない。
上記の例はピリジン（又はピリジニウム）成分について記載しているが、本明細書中に記載するピリジン（又はピリジニウム）成分に代えて、他のＮ−ヘテロ芳香族成分（すなわち、少なくとも１個の窒素が芳香族環中に存在する成分）が置換されてもよいことは、当業者にとって明らかであると思う。Ｎ−ヘテロ芳香族の例は、チアゾール、トリアゾール、テトラゾール、ピラゾール、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、等を含む。これより、Ｎ−置換されたピラジン、ピリダジン、等は、本発明において用いることを意図する。
本明細書中で用いる通りの「第三級アミン」は、トリアルキルアミン、トリアリールアミン、及びアルキル及びアリールの両方の置換基を有するアミンを含む。
本明細書中で用いる通りの「両性イオン性ピリジニウム成分」とは、下記の形態を有する成分を言う：
0004164125.tif 000007
式中、Ｒ6はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、又はアリール成分を含み、Ｒ7〜Ｒ11は、各々独立に水素、ハロゲン、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、その他の複素環、ヒドロキシル、アミノ、ニトロ、チオール、アミン、イミン、アミド、ホスホネート、ホスフィン、カルボニル、カルボキシル、シリル、エーテル、チオエーテル、スルホニル、セレノエーテル、ケトン、アルデヒド、エステル、−ＣＦ3、−ＣＮ、等であり、但し、Ｒ6〜Ｒ11の内の少なくとも１個はアニオン性成分で置換される。本明細書中で用いる通りの「アニオン性成分」とは、実効陰電荷を有する成分である。アニオン性成分は、その他の成分と適合しかつ安定な化合物を形成するように選ぶ。アニオン性成分の例は、カルボキシレート、ホスフェート、ホスホネート、スルフェート、スルホネート、等を含む。所定の好適な実施態様では、アニオン性成分はカルボキシレートである。その他の好適な実施態様では、アニオン性成分はスルホネートである。好適な実施態様では、Ｒ6は下記を含む：
0004164125.tif 000008
ピリジン−Ｎ−オキシドは、下記の形態を有する成分である：
0004164125.tif 000009
ここで、Ｒ13〜Ｒ17は、上に定義した意味を有する。
本明細書中で用いる通りの「親水性Ｎ−アシル成分」とは、親水性成分を形成するように、窒素原子をアシル化させてなる成分を言う。これより、親水性Ｎ−アシル成分は、下記の形態を有することができる：
0004164125.tif 000010
ここで、Ｒ41及びＲ42は、各々独立にＨ、アルキル、シクロアルキル、アリール、等であり；Ｒ43はアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、等であり；Ｒ41〜Ｒ43は、親水性成分を形成するように選ぶ。好適な実施態様では、Ｒ41及びＲ42は、共にＨになることはない。
相対的な親水性は、当分野において知られているいくつかの方法（オックスフォード、Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９０年、Ｈａｎｓｃｈ編、「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、４巻）の内のいずれかによって求めることができ、かつ発明において用いるための可能な親水性成分の選定をガイドするのに用いることができる。１−オクタノールと水との間の分配係数Ｐが、化合物の親水性を測定するための参照として用いられてきた。親水性は、分配係数の対数であるｌｏｇ  Ｐとして表わすことができる（Ｈａｎｓｃｈ等、Ｎａｔｕｒｅ  １９４：１７８（１９６２）；フジタ等、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８６：５１７５（１９６４））。多数の分子についての親水性、及び多数の官能基についての親油性（疎水性）置換基定数（πと表わす）の標準テーブルが蓄積されてきた（例えば、ニューヨーク、ニューヨーク、Ｗｉｌｅｙ、Ｈａｎｓｃｈ及びＬｅｏ、「Ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ  Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」（１９７９）を参照）。広い範囲の候補親水性成分の親水性は、これらのテーブルの助けによって極めて正確に予測することができる。例えば、ナフタレンの測定されたｌｏｇ  Ｐ（オクタノール／水）は３．４５である。−ＯＨについての置換基定数ｐは−０．６７である。従って、β−ナフトールについての予測されたｌｏｇ  Ｐは３．４５＋（−０．６７）＝２．７８である。この値は、２．８４であるβ−ナフトールについての測定されたｌｏｇ  Ｐと良く一致している。所定の好適な実施態様では、親水性Ｎ−アシル成分は、ｌｏｇ  Ｐの値−１〜＋２、一層好ましくは−０．５〜＋１．５を有する。好適な親水性アシル成分を加入する残基の例は、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)、D-Lys(Dodac)、D-Lys(pGlu)、D-Lys(Otac)、及びD-Lys(Onic)である。親水性アシル成分を加入するその他の好適な残基は、Lys(Imdac)、Lys(Ppic)、Lys(Dodac)、Lys(pGlu)、Lys(Otac)、及びLys(Onic)を含む。
「小極性成分」なる用語は、小さい立体的バルクを有しかつ相対的に極性である成分を言う。所定の実施態様では、小極性成分は、D-Cit、D-Hci又はこれらの低級アルキル誘導体でない。極性は、上記したＰスケールによって親水性として測定する。所定の好適な実施態様では、小極性成分は、ｌｏｇ  Ｐ−１〜＋２を有する。特に好適な実施態様では、小極性成分は、残基６を変異する。好適な実施態様では、小極性成分の立体的バルクは、Trpの立体的バルクよりも小さい。好適な小極性成分を加入する残基の例は、D-又はL-Asn、D-又はL-Gln、及びD-又はL-Thrである。好適な実施態様では、小極性成分は、Glu又はGluのカルボン酸エステルでない。特に好適な実施態様では、小極性成分は、D-Asnである。
「離脱基」なる用語は、当分野において知られており、本明細書中で用いる通りに、ヘテロリティック結合開裂する際に、電子対と共に去る官能価を言う。通常、良好な離脱基は、荷電されていようと或は荷電されていまいと、基体から弱塩基として駆逐されるそれらの成分である。例えば、スルフェート、スルホネート、スルフィド、クロリド、ブロミド、ヨージド、ホスフェート、ホスフィネート、等は、良好な離脱基である。換言すると、例えばスルホニウム成分のＣ−Ｓ結合が開裂される場合に、スルフィドが、（電子対と共に）去る。
本明細書中で用いる通りの「レセプター改質用成分」なる用語は、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドについてのレセプターを、共有的に又は非共有的に改質することができる成分を言う。例えば、最近に、マウスＬＨＲＨレセプターのGlu301（ヒトＬＨＲＨレセプターにおけるAsp301に対応する）が、ＬＨＲＨアゴニスト中のArg8と相互作用することが示された（Ｃ．Ａ．Ｆｌａｎａｇａｎ等、（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２２６３６）。これより、（アルキル化剤のような）カルボキシレート改質用試薬は、Glu301（Asp301）を改質することができ、こうしてマウス（又はヒト）ＬＨＲＨレセプターを改質することができる。レセプター改質用成分は、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドをレセプターに結合させるように作用してもよく（例えば、離脱基を変位させることによって拮抗物質をレセプターにエステル化する）、或はそれは、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドをレセプターに結合させないでレセプターを改質してもよい（例えば、メチルスルホニウム成分でメチル化するこにより）。ＬＨＲＨレセプターのその他の残基もまた改質することができ、そのような残基を改質することができる成分もまたレセプター改質用成分である。レセプター改質用試薬の例は、下記を含む：アルキル及びベンジルハライド（例えば、沃化メチル又は臭化ベンジル）、α−ハロケトン、α−ハロエステル及びα−ハロアミド（一まとめにして「α−ハロカルボニル」と言う）、スルホニウム塩、スルフェート、アルキル又はアリールスルホネート、及び上記した通りの良好な離脱基を含むその他の試薬。その他のレセプター改質用試薬は、例えば、アムステルダム、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  Ｐｒｅｓｓ、Ａ．Ｊ．Ｂａｒｒｅｔｔ及びＧ．Ｓａｌｖｅｓｅｎ編、（１９８６）「Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ」、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ、１２巻に記載されている。
所定の実施態様では、発明のＬＨＲＨ拮抗物質はレセプター改質用成分を含有するとしても、発明は、実際にレセプター残基を改質するそれらの拮抗物質に限定することを意図しない。レセプター改質用成分を含むが、実際にはレセプターを改質しないＬＨＲＨ拮抗物質は、それでもなお有効なＬＨＲＨ拮抗物質になり得る。しかし、レセプター残基を改質するそれらの拮抗物質について、一つの利点は、そのような成分を、標的するレセプターだけを選択的に改質し、それにより非特異的反応を減少させかつ毒性の副作用の可能性を低減させるようにデザインすることができることである。
本明細書中で用いる通りの、成分「によって改質される側鎖を有するペプチド」なる用語は、少なくとも１個の残基がその成分を構成する側鎖を有するペプチド（又はペプチド模倣体、下記を参照）を言う。これより、例えば、「二極性成分によって改質される側鎖を有するペプチド」とは、少なくとも１つの側鎖が二極性成分を構成するペプチドを意味する。
本発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、また、ペプチド類似体及びペプチド模倣体も含む。本明細書中で用いる通りの「ペプチド化合物」なる用語は、ペプチド、ペプチド類似体、ペプチド誘導体及びペプチド模倣体を包含することを意図する。本明細書中で用いる通りの「ペプチド類似体」、「ペプチド誘導体」及び「ペプチド模倣体」なる用語は、ペプチドの化学構造をまねかつペプチドの機能特性を保持する分子を含むことを意図する。「残基」とは、アミド結合又はアミド結合模倣体によってペプチド化合物中に加入されるアミノ酸又はアミノ酸模倣品を言う。ペプチド類似体をデザインするアプローチは、当分野において知られている。例えば、下記を参照：ニューヨーク、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ（Ｅ．Ｊ．Ａｒｉｅｎｓ編）、１９８０年、１０巻、１１９〜１４３頁におけるＦａｒｍｅｒ，Ｐ．Ｓ．；Ｂａｌｌ．Ｊ．Ｂ．及びＡｌｅｗｏｏｄ，Ｐ．Ｆ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ３：５５；Ｍｏｒｇａｎ，Ｂ．Ａ．及びＧａｉｎｏｒ，Ｊ．Ａ．（１９８９）Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２４：２４３；並びにＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ，Ｒ．Ｍ．（１９８９）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１０：２７０。
「アミノ酸模倣体」とは、ペプチドの機能（例えば、ペプチドとＬＨＲＨレセプターとの相互作用）を有意な程度に不利に妨げないでペプチド化合物中の特定のアミノ酸に代わる代用品として配座的にかつ機能的に働く天然産のアミノ酸を言う。いくつかの情況では、アミノ酸模倣体による置換は、実際にペプチドの性質（例えば、ペプチドとＬＨＲＨレセプターとの相互作用）を増進させ得る。アミノ酸模倣体の例はD-アミノ酸を含む。D-アミノ酸１個又はそれ以上で置換されたＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、良く知られているペプチド合成手順を用いて造ることができる。D-アミノ酸又はその他のアミノ酸模倣体によるアミノ酸置換の作用は、アセイ、例えば下記に記載する通りのＡＯＡ及びヒスタミン放出アセイを用いて試験することができる。アミノ酸模倣体による置換の作用を求めるその他の方法は、当業者にとって明らかであると思う。
発明のペプチド類似体又は模倣体は同配体を含む。本明細書中で用いる通りの「同配体」なる用語は、第一配列の立体配座が第二配列について特異な結合部位に適合することから、第二配列に代えることができる２個又はそれ以上の残基の配列を言う。その用語は、特に当業者に良く知られているペプチド主鎖変異（すなわち、アミド結合模倣体）を含む。そのような変異は、アミド窒素、α−炭素、アミドカルボニルの変異、アミド結合の完全な変位、拡張、欠失又は主鎖架橋を含む。Ψ［ＣＨ2Ｓ］、Ψ［ＣＨ2ＮＨ］、Ψ［Ｃ（Ｓ）ＮＨ2］、Ψ［ＮＨＣＯ］、Ψ［Ｃ（Ｏ）ＣＨ2］、及びΨ［（Ｅ）又は（Ｚ）ＣＨ＝ＣＨ］を含むいくつかのペプチド主鎖変異が知られている。上で用いた命名法では、Ψは、アミド結合が存在しないことを示す。アミド基に取って代わる構造を括弧内に特定する。同配体のその他の例は、ベンゾジアゼピン分子１個又はそれ以上で置換されたペプチドを含む（例えば、Ｊａｍｅｓ，Ｇ．Ｌ．等（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ２６０：１９３７〜１９４２を参照）。
その他の可能な変異は、Ｎ−アルキル（又はアリール）置換（Ψ［ＣＯＮＲ］）、ラクタムやその他の環状構造を構築するための主鎖架橋、又はレトロ−インバーソアミノ酸加入（Ψ［ＮＨＣＯ］）を含む。「インバーン」とは、配列のL-アミノ酸をD-アミノ酸で代えることを意味し、「レトロ−インバーソ」又は「エナンショ−レトロ」とは、アミノ酸の配列を逆転させ（「レトロ」）かつL-アミノ酸をD-アミノ酸で代えることを意味する。例えば、親のペプチドがThr-Ala-Tyrであるとすれば、レトロ改質された形態はTyr-Ala-Thrであり、インバーソ形態はthr-ala-tyrであり、レトロ−インバーソ形態はtyr-ala-thrである（小文字はD-アミノ酸を言う）。レトロ−インバーソペプチドは、親のペプチドに比べて、実質的に側鎖の元の空間配座を保持しながら、逆転された主鎖を有し、親のペプチドに良く似ておりかつ選定したＬＨＲＨレセプターに結合することができる位相学を有するレトロ−インバーソ異性体を生じる。Ｇｏｏｄｍａｎ等、「Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  ｉｎ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、２８３〜２９４頁（１９８１）を参照。また、「レトロ−インバーソ」ペプチドのそれ以上の説明についてはＳｉｓｔｏによる米国特許第４，５２２，７５２号も参照。
発明は、アミノ酸置換されたＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドに加えて、また、その他の変異を有するＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドも包含する。例えば、ペプチドのアミノ末端又はカルボキシ末端を改質することができる。「アミノ誘導体基」なる用語は、発明のペプチド化合物のアミノ末端変異を含む意図である。Ｎ−末端変異の例は、アルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、及びアシル基を含む。好適なＮ−末端変異はアセチル化である。Ｎ−末端残基をアミノ酸と異なる種々の成分、例えば、取り分けポリエチレングリコール（テトラエチレングリコールカルボン酸モノメチルエーテルのような）、ピログルタミン酸、スクシノイル、メトキシスクシノイル、ベンゾイル、フェニルアセチル、２−、３−又は４−ピリジルアルカノイル、アロイル、アルカノイル（アセチル及びシクロアルカノイル、例えばシクロヘキシルプロパノイルを含む）、アリールアルカノイル、アリールアミノカルボニル、アルキルアミノカルボニル、シクロアルキルアミノカルボニル、アルキルオキシカルボニル（カルバメートキャップ）、及びシクロアルコキシカルボニルに結合させてもよい。
「カルボキシ誘導体基」なる用語は、発明のペプチド化合物のカルボキシ末端変異を含む意図である。Ｃ−末端の変異の例は、Ｃ−末端残基のカルボニル炭素を改質してカルボキシ末端アミド又はアルコール（還元形態）を形成することを含む。通常、Ｃ−末端残基上のカルボニル炭素に共有結合されたアミド窒素は、２個の置換基を有することになり、それらの各々は水素、アルキル又はアルキルアリール基（置換又は未置換の）になることができる。Ｃ−末端は、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＣＨ3、−ＣＯＮＨＣＨ2Ｃ6Ｈ5又は−ＣＯＮ（ＣＨ3）2のようなアミド基が好ましく、−ＣＯＮＨ2が最も好ましいが、また２−、３−又は４−ピリジルメチル、２−、３−又は４−ピリジルエチル、カルボン酸、エーテル、カルボニルエステル、アルキル、アリールアルキル、アリール、シクロヘキシルアミド、ピペリジンアミド、その他のモノ又はジ置換されたアミド、尿素又はカルバメートでもよい。Ｃ−末端残基に結合させることができるその他の成分は、ピペリジン−４−カルボン酸又はアミド及びｃｉｓ−又はｔｒａｎｓ−４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸又はアミドを含む。
L-又はD-アミノ酸置換、側鎖の末端の共有改質並びにペプチド類似体及び模倣体を含む発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドの改質された形態は、ペプチドの物理的又は化学的性質を所望に変更する、例えば安定性、溶解性、生物学的利用能の増大、免疫度性の増大又は低減、等のために選ぶことができる。発明のペプチドは、当分野において知られている方法、例えばＢｏｄｏｒのジヒドロピリジン−ピリジニウムキャリヤー（例えば、米国特許第４，５４０，５６４号を参照）によって特定の器官（例えば、脳）に標的にすることができる。適例となる実施態様では、ピリジニウム成分によって改質された側鎖を所望する場合には、対応するＮ−アルキル化されたジヒドロピリジン側鎖をペプチド中に加入する。ペプチドを被験者に投与する場合には、Ｎ−アルキル化されたジヒドロピリジン側鎖をインビボ酸化させて所望のピリジニウム成分にする。
本発明の好適なＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、長さが残基約８〜約１２個、一層好ましくは残基９〜１１個の範囲であり、長さは残基１０個が最も好ましい。
本発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、溶液相及び固相化学合成を含む任意の適したペプチド合成方法によって調製することができる。ペプチドは、固体担体上に合成するのが好ましい。ペプチドを化学的に合成する方法は、当分野において良く知られている（例えば、ベルリン、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｏｄａｎｓｋｙ，Ｍ．、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ  ｏｆ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９３）及びニューヨーク、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｇｒａｎｔ，Ｇ．Ａ．（編）、Ｓｙｎｔｈｅｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ  Ｕｓｅｒ’ｓ  Ｇｕｉｄｅ（１９９２）を参照）。ペプチド自動合成装置が市販されている。
リガンドを識別するのに組合せライブラリーを利用することは、今、定着している（例えば、Ｍ．Ａ．Ｇａｌｌｏｐ等、（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３；及びＥ．Ｍ．Ｇｏｒｄｏｎ等、（１９９４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１３８５；及び本明細書中で引用する参考文献を参照）。従って、ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、組合せライブラリー（例えば、ペプチド又はペプトイドの）の化学的（例えば、溶液又は固相）合成及び生成したライブラリーの既知の技術に従うスクリーニングによって識別することができる。これより、多数の可能なリガンドを短い時間で合成しかつスクリーンすることができ、最も活性なリガンドを更に試験又は使用するために選ぶことができる。
発明のペプチドを説明する場合、標準の略語及び約束を本開示全体を通して用いる。ペプチドは、左側のＮ−末端及び右側のカルボキシル末端を持って書く。アミノ酸は、他に記述しない場合は、L-形態であり、例えば、D-LysはD-形態のリシンを意味する。Ac-Xaaは、Ｎ−末端残基がＮ−アセチル化されていることを意味し；Ｃ−末端アミドはXaa-ＮＨ2と表わす。表１では、天然の哺乳動物のＬＨＲＨと異なる残基だけを注記する；これより、記号法Ｍｅｔ（Ｓ+Ｍｅ）8-ＬＨＲＨ．ＴＦＡは、天然の哺乳動物のＬＨＲＨと、８位の天然のArgに代えてＭｅｔ（Ｓ+Ｍｅ）を置換する点だけで異なるペプチドを意味する（ＴＦＡはトリフルオロアセテート塩を示す）。Lys(iPr)は、Ｎ−ε−２−プロピル−１−リシニルを表わし；その他のアルキル化用及びアシル化用成分を同様に示す。これより、例えばＭｅｔ（Ｓ＋ＣＨ2Ｃ6Ｈ5）はＳ−ベンジルメチオニンを表わす。所定のその他の非標準の残基及び成分を下記の通りに略書きする：
0004164125.tif 000011
0004164125.tif 000012
Ｉ．発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチド
一態様では、発明はＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドに関する。
一実施態様では、発明は、ペプチド化合物を含むＬＨＲＨ拮抗物質であって、天然の哺乳動物のＬＨＲＨの６位におけるアミノ酸に一致するペプチド化合物の残基が、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)、D-Lys(Dodac)、D-Lys(pGlu)、D-Lys(Otac)及びD-Lys(Onic)又は二極性成分、スルホニウム成分、レセプター改質用成分及び小極性成分からなる群より選ぶ成分を、ペプチド化合物がＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように含み、但し、二極性成分は両性イオン性ピリジニウムでなくかつ残基はD-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でないものを提供する。ペプチド化合物は、残基を約８〜約１２個含むのが好ましい。ペプチド化合物は、残基を１０個含むのが一層好ましい。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド化合物：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)、D-Lys(Dodac)、D-Lys(pGlu)、D-Lys(Otac)、D-Lys(Onic)又は下記の構造である：
0004164125.tif 000013
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｙは、二極性成分、スルホニウム成分、レセプター改質用成分及び小極性成分からなる群より選ぶ成分を含み、但し、二極性成分は両性イオン性ピリジニウムでなくかつＦは、D-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でない；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
サブ実施態様では、Ｙは二極性成分を含み、但し、二極性成分は両性イオン性ピリジニウムでない。好適な二極性成分は、イリド、第三級アミンオキシド、ニトリルオキシド及びピリジン−Ｎ−オキシドを含む。
別のサブ実施態様では、Ｙはスルホニウム成分を含む。
別のサブ実施態様では、Ｙはレセプター改質用成分を含む。好適なレセプター改質用成分は、イリド、スルホニウム成分、α−ハロカルボニル、スルフェート、スルホネート、アルキルハライド及びベンジルハライドを含む。
別のサブ実施態様では、Ｆは、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)及びD-Lys(Dodac)、D-Lys(pGlu)、D-Lys(Otac)又はD-Lys(Onic)である。
別のサブ実施態様では、Ｙは小極性成分を含み、但し、Ｆは、D-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でない。Ｆは、D-Asn、D-Gln及びD-Thrからなる群より選ぶのが好ましい。Ｆは、D-Asnであるのが一層好ましい。
一実施態様では、発明は、ペプチド化合物を含むＬＨＲＨ拮抗物質であって、天然の哺乳動物のＬＨＲＨの６位におけるアミノ酸に一致するペプチド化合物の残基が、小極性成分を、ペプチド化合物がＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように含み、但し、残基はD-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でないものを提供する。拮抗物質は、ラット抗排卵アセイにおいてラット当り約１μｇよりも少ない抗排卵活性を有し及び／又は拮抗物質は、ヒスタミン放出アセイにおいてＥＤ50少なくとも約５μｇ／ｍｌを有するのが好ましい。ペプチド化合物は、残基を約８〜約１２個含むのが好ましい。ペプチド化合物は、残基を１０個含むのが一層好ましい。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド化合物：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、下記である：
0004164125.tif 000014
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｌは、小極性成分を含み、但し、Ｆは、D-Cit、D-HciもしくはD-Cit又はD-Hciの低級アルキル誘導体でない；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。Ｆは、D-Asn、D-Gln及びD-Thrからなる群より選ぶのが好ましい。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド化合物：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、D-Asnであり；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド化合物：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、D-Arg、D-Lys(iPr)、D-Pal(iPr)、D-Cit又はＱであり、ここで、Ｑは下記の構造を有する：
0004164125.tif 000015
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｚは、スルホニウム成分を含む；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、Arg又はＱであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2であり；
但し、Ｆ及びＨの内の少なくとも一つはＱである；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
好適な特定の実施態様では、発明は、下記の構造のペプチド化合物：
0004164125.tif 000016
及び製薬上許容し得るそれらの塩を提供する。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、下記である：
0004164125.tif 000017
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｙは、二極性成分を含み；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。好適な実施態様では、Ｙは、イリド、第三級アミンオキシド、ニトリルオキシド、ピリジン−Ｎ−オキシド及びピリジニウム両性イオンからなる群より選ぶ。特に好適な実施態様では、Ｙは、イリド、ピリジン−Ｎ−オキシド又はピリジニウム両性イオンである。
別の態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、D-Arg、D-Lys(iPr)、D-Pal(iPr)、D-Cit又はＱであり、ここで、Ｑは下記の構造を有する：
0004164125.tif 000018
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｚは、カチオン性ピリジニウム成分及びスルホニウム成分からなる群から選ぶカチオン性成分を含み、但し、カチオン性成分はＮ−メチルピリジニウムでない；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、Arg又はＱであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2であり；
但し、Ｆ及びＨの内の少なくとも一つはＱである；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
好適な実施態様では、ＦはＱでありかつＺはカチオン性ピリジニウム成分である。好適な実施態様では、ＺはＮ−ベンジルピリジニウムで成分である。その他の好適な実施態様では、ＦはＱでありかつＺはスルホニウム成分である。なおその他の好適な実施態様では、ＨはＱでありかつＺはスルホニウム成分である。
別の態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、下記である：
0004164125.tif 000019
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｔは、レセプター改質用成分を含み；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
好適な実施態様では、Ｔは、イリド、スルホニウム成分、α−ハロカルボニル、スルフェート、スルホネート、アルキルハライド及びベンジルハライドからなる群より選ぶ。特に好適な実施態様では、Ｔはα−ハロカルボニルである。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、
0004164125.tif 000020
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｍは、Ｎ−アシル親水性成分を含み；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
別の実施態様では、発明は、下記の構造を含むペプチド：
Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｄ−Ｅ−Ｆ−Ｇ−Ｈ−Ｉ−Ｊ
ここで、
Ａは、pyro-Glu、Ac-D-Nal、Ac-D-Qal、Ac-Sar、又はAc-D-Palであり；
Ｂは、His又は4-Cl-D-Pheであり；
Ｃは、Trp、D-Pal、D-Nal、L-Nal-D-Pal(N-O)、又はD-Trpであり；
Ｄは、Serであり；
Ｅは、N-Me-Ala、Tyr、N-Me-Tyr、Ser、Lys(iPr)、4-Cl-Phe、His、Asn、Met、Ala、Arg又はIleであり；
Ｆは、下記である：
0004164125.tif 000021
ここで、
Ｒ及びＸは、独立にＨ又はアルキルであり；並びに
Ｌは、小極性成分を含み；
Ｇは、Leu又はTrpであり；
Ｈは、Lys(iPr)、Gln、Met、又はArgであり；
Ｉは、Proであり；及び
Ｊは、Gly-NH2又はD-Ala-NH2である；
又は製薬上許容し得るその塩を提供する。
別の態様では、発明は、改質されたペプチドを形成する二極性成分により、改質されたペプチドがＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように改質された側鎖を有するペプチドを含むＬＨＲＨ拮抗物質を提供する。好適な実施態様では、二極性成分は、イリド、第三級アミンオキシド、ニトリルオキシド、ピリジン−Ｎ−オキシド、及びピリジニウム両性イオンからなる群より選ぶ。一層好適な実施態様では、二極性成分は、イリド、ピリジン−Ｎ−オキシド又はピリジニウム両性イオンである。その他の好適な実施態様では、ペプチドは、残基を約８〜約１２個含む。一層好適な実施態様では、ペプチドは、残基を１０個含む。所定の好適な実施態様では、二極性成分は、残基６を改質する。所定の好適な実施態様では、ＬＨＲＨ拮抗物質はペプチド模倣体である。
別の実施態様では、発明は、改質されたペプチドを形成する、カチオン性ピリジニウム成分及びスルホニウム成分からなる群より選び、但し、Ｎ−メチルピリジニウムでないカチオン性成分により、改質されたペプチドがＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように改質された側鎖を有するペプチドを含むＬＨＲＨ拮抗物質を提供する。好適な実施態様では、カチオン性成分はカチオン性ピリジニウム成分である。その他の好適な実施態様では、カチオン性成分はスルホニウム成分である。その他の好適な実施態様では、ペプチドは、残基を約８〜約１２個含む。一層好適な実施態様では、ペプチドは、残基を１０個含む。その他の好適な実施態様では、カチオン性成分は、残基６及び残基８の内の少なくとも一つを改質する。その他の好適な実施態様では、ＬＨＲＨ拮抗物質はペプチド模倣体である。
別の実施態様では、発明は、改質されたペプチドを形成するレセプター改質用成分により、改質されたペプチドがＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように改質された側鎖を有するペプチドを含むＬＨＲＨ拮抗物質を提供する。好適な実施態様では、レセプター改質用成分は、イリド、スルホニウム成分、α−ハロカルボニル、スルフェート、スルホネート、アルキルハライド及びベンジルハライドからなる群より選ぶ。好適な実施態様では、ペプチドは、残基を約８〜約１２個含む。一層好適な実施態様では、ペプチドは、残基を１０個含む。好適な実施態様では、レセプター改質用成分は、残基６を改質する。好適な実施態様では、ＬＨＲＨ拮抗物質はペプチド模倣体である。
別の実施態様では、発明は、改質されたペプチドを形成する親水性Ｎ−アシル成分により、改質されたペプチドがＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように改質された側鎖を有するペプチドを含むＬＨＲＨ拮抗物質を提供する。好適な実施態様は、親水性Ｎ−アシル成分は６位を改質する。好適な実施態様では、残基は、D-Lys(Imdac)、D-Lys(Ppic)及びD-Lys(Dodac)からなる群より選ぶ親水性Ｎ−アシル成分を含む。好適な実施態様では、親水性Ｎ−アシル成分は、−１〜＋２のｌｏｇＰを有する。
別の実施態様では、発明は、６位において小極性成分を、ペプチドがＬＨＲＨ拮抗物質活性を有するように有するペプチドを含むＬＨＲＨ拮抗物質を提供する。好適な実施態様では、拮抗物質は、約１μｇよりも小さいＡＯＡを有する。好適な実施態様では、拮抗物質は、ヒスタミン放出活性少なくとも約５μｇを有する。
ＩＩ．薬剤組成物
発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、被験者に投与するのに適した薬剤組成物中に加入することができる。好適な実施態様では、薬剤組成物は、発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチド及び製薬上許容し得るキャリヤーを含む。
「治療上有効な量」とは、所望の結果を達成するのに必要な投与量でかつ時間の間有効な量を言う。本発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドの治療上有効な量は、個人の疾病状態、年齢、性、及び体重、並びに個人において所望の応答を引き出すための拮抗物質の能力のような要因に従って変わり得る。最適な治療応答をもたらすために、投与量養生法を調節してもよい。治療上有効な量は、また、治療上有利な作用が拮抗物質の毒性又は有害な作用に勝る量でもある。ＬＨＲＨ拮抗物質の治療上有効な量についての範囲は、０．０１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．０１〜５ｍｇ／ｋｇであり、これらの範囲は、制限するものではない。投与量値は、軽減させるべき症状の発病度によって変わり得ることに留意すべきである。更に、いずれの特定の被験者についても、具体的な投与量養生法が、個人の要求及び組成物の投与を施す又は指示する者の専門的な判断に従って時間をかけて調節すべきでありかつ本明細書中に挙げる投与量範囲が単に例にすぎず、特許請求する組成物の範囲又は実施を制限する意図でないことは了解されるべきである。
本明細書中で用いる通りの「製薬上許容し得るキャリヤー」とは、任意の及びすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤、抗真菌剤、等張性及び吸収遅延剤、生理学的に適合し得る同様の物を含む。キャリヤーは、静脈、筋内、皮下又は非経口投与（例えば、注射による）用に適するのが好ましい。投与のルートに応じて、活性な化合物を、酸や化合物を不活性化し得るその他の自然の条件から化合物を保護するために物質で被覆してもよい。
「製薬上許容し得る塩」とは、親の化合物の所望の生物学的活性を保持しかつ望まない毒物学的作用を付与しない塩を言う。そのような塩の例は、下記のような酸の塩である：塩化水素酸、塩化臭素酸、硫酸、リン酸、硝酸、等；酢酸、シュウ酸、酒石酸、こはく酸、りんご酸、安息香酸、パモン酸（ｐａｍｏｉｃ  ａｃｉｄ）、アルギン酸、メタスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、等。また、ナトリウム、カリウム、リチウム、亜鉛、銅、バリウム、ビスマス、カルシウム、等のようなカチオン；又はトリアルキルアンモニウムのような有機カチオンの塩も含む。上記の塩の組合せもまた有用である。
ＬＨＲＨ−Ｒ拮抗物質は、当分野において知られている種々の方法によって投与することができる。好適な実施態様では、ＬＨＲＨ−Ｒ拮抗物質は、限時放出配合物で、例えば、放出ののろいポリマーを含む組成物で、又はデポー注射によって投与する。活性な化合物は、移植片、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）パッチ及びマイクロ被包された送達系を含む放出調節配合物のような、化合物を急速な放出に対して保護するキャリヤーで調製することができる。エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、ポリ乳酸及びポリ乳酸系、ポリグリコール酸系コポリマー（ＰＬＧ）のような生物分解性、生物適合性ポリマーを用いることができる。そのような配合物を調製するための多数の方法が特許されており又は一般的に当業者に知られている。例えば、ニューヨーク、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、１９７８年、Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ  ａｎｄ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓを参照。特に好適な配合物は、ロイプロリド（商品名：Ｌｕｐｒｏｎ（登録商標））を投与するために当分野において知られているような放出調節組成物、例えば、マイクロカプセル（米国特許第４，６５２，４４１号及び同第４，９１７，８９３号）、注入可能な配合物（米国特許第４，８４９，２２８号）、マイクロカプセル又は注入可能な配合物を製造するのに有用な乳酸−グリコール酸コポリマー（米国特許第４，６７７，１９１号及び同第４，７２８，７２１号）、並びに水溶性ポリペプチドについての放出持続組成物（米国特許第４，６７５，１８９号）を含む。
ＬＨＲＨ−Ｒ拮抗物質は、適当に配合する場合、例えば、不活性な希釈剤又は吸収可能な食用キャリヤーによって経口投与してもよい。また、ＬＨＲＨ拮抗物質及びその他の成分を、硬質又は軟質シェルゼラチンカプセルで囲っても、圧縮して錠剤にしても、或は直接被験者のダイエット中に加入しもよい。経口治療投与するために、ＬＨＲＨ拮抗物質を賦形剤と合同させ、摂取可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁剤、シロップ、オブラート、等の形態で用いてもよい。組成物及び製剤中のＬＨＲＨ拮抗物質のパーセンテージを変えてよいのはもちろんである。そのような治療上有用な組成物中のＬＨＲＨ拮抗物質の量は、適した投与量が得られるようにする。
ＬＨＲＨ拮抗物質を非経口と異なる投与によって施すには、化合物を、不活性化を防ぐための物質で被覆する、又は化合物を不活性化を防ぐための物質と共に同時に施すことが必要かもしれない。例えば、ＬＨＲＨ拮抗物質を、適したキャリヤー、例えばリポソーム或は希釈剤に入れて被験者に投与してもよい。製薬上許容し得る希釈剤は、サリーン及び緩衝水溶液を含む。リポソームは、油中水形、水中油形ＣＧＦエマルション並びに慣用のリポソームを含む（Ｓｔｒｅｊａｎ等、（１９８４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７：２７）。製薬上許容し得るキャリヤーは、無菌の水溶液又は分散液及び無菌の注入可能な溶液又は分散液を即座に調製するための無菌の粉末を含む。製薬上活性な物質についてそのような媒体や剤を使用することは、当分野において良く知られている。慣用の媒体又は剤が活性な化合物と不適合である限りの外は、発明の薬剤組成物中にそれらを使用することは、意図するものである。補足の活性な化合物もまた組成物中に加入することができる。
治療組成物は、典型的には、製造や貯蔵の条件下で、無菌にしかつ安定でなければならない。その組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、又は高い薬剤濃度に適したその他の規則構造として配合することができる。キャリヤーは、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコール、等）、及びそれらの適した混合物を含有する溶媒又は分散媒にすることができる。適した流動性は、例えばレシチンのようなコーティングを用いることによって、分散液の場合、必要とする粒径を保つことによって、界面活性剤を用いることによって保つことができる。等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールのようなポリアルコール、又は塩化ナトリウムを組成物中に入れることが好ましい場合が数多くある。組成物中に吸収を遅らせる剤、例えばモノステアレート塩やゼラチンを入れることによって、注入可能な組成物の長期の吸収をもたらすことができる。
無菌の注入可能な溶液は、活性な化合物（例えば、ＬＨＲＨ拮抗物質）を必要とする量で適した溶媒に、必要とする通りに上に列挙した成分の内の一種又はそれらの組合せと共に加入し、次いで無菌ろ過することによって、調製することができる。分散液は、活性な化合物を、塩基性分散媒及び上に列挙した成分からの必要とするその他の成分を含有する無菌のビヒクル中に加入することによって調製するのが普通である。無菌の注入可能な溶液を調製するための無菌の粉末の場合、好適な調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、これらは活性な成分＋先の無菌ろ過した溶液からの更なる所望の成分の粉末を生じる。
最適な治療応答をもたらすために、投与養生法を調節してもよい。例えば、単一の丸薬を投与してもよく、何回かに分けた投与量を時間をかけて投与してもよく或は投与量を治療状態の要求によって示される通りに比例して減らしても又は増やしてもよい。投与を容易にしかつ投与量を均一にするために、非経口組成物を計量ユニット形態で処方するのが特に有利である。本明細書中で用いる通りの計量ユニット形態とは、治療すべき哺乳動物被験者について個々の投与量として適した物理的に別個のユニットを言い；各々のユニットは、必要とする薬剤キャリヤーに関連した所望の治療効果を生じるように計算した所定量の活性な化合物を収容する。発明の計量ユニット形態についての規格は、（ａ）活性な化合物の特有の特性及び達成すべき特別の治療効果、並びに（ｂ）個々における病気度を治療するためにそのような活性な化合物を配合する分野において固有な制限によって指図されかつこれらに直接依存する。
ＩＩＩ．発明のＬＨＲＨ拮抗物質の使用方法
本発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、性的早熟、前立腺癌、卵巣癌、良性の前立腺肥大、エンドメトリオーシス、子宮フィブロイド、乳癌、月経前症候群、多嚢胞性卵巣症候群、及びいずれの性のヒト又は動物における生殖腺ホルモンの過剰から生じる疾病のような症状を治療するために有用である。発明のＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、また、挙動変異（例えば、「化学的な去勢」）についても有用である。ＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドは、また、雄及び雌の両方において生殖を調節するためにも有用である。その上に、発明のペプチドは、例えば米国特許第５，００３，００１号に記載されている通りに、免疫抑制された患者を治療するのに用いてもよい。
これより、一実施態様では、発明は、被験者に有効量の本発明のＬＨＲＨ拮抗物質を、ＬＨＲＨ活性を抑制するように投与することを含む、被験者においてＬＨＲＨ活性を抑制する方法を提供する。
別の実施態様では、発明は、細胞に発明のＬＨＲＨ拮抗物質を、ＬＨＲＨ活性を抑制するように接触させることを含む、細胞においてＬＨＲＨ活性を抑制する方法を提供する。
別の実施態様では、発明は、被験者に有効量の発明のＬＨＲＨ拮抗物質を、腫瘍増殖を抑制するように投与することを含む、被験者においてホルモン依存性腫瘍の増殖を抑制する方法を提供する。好適な実施態様では、発明のＬＨＲＨ拮抗物質を、前立腺の腫瘍を抑制するために前立腺癌に悩む被験者に投与する
別の実施態様では、発明は、被験者に有効量の発明のＬＨＲＨ拮抗物質を、排卵を抑制するように投与することを含む、被験者において排卵を抑制する方法を提供する。
別の態様では、発明は、発明のＬＨＲＨ拮抗物質を、ＬＨＲＨ活性に関する疾患を有する被験者を治療するためにＬＨＲＨ拮抗物質を使用するための教示と共にパッケージさせてなる、被験者をＬＨＲＨ活性に関する疾患について治療するためのパッケージした配合物を提供する。
別の態様では、発明は、発明のペプチド化合物を、ＬＨＲＨ活性を抑制するのが有利な疾患を治療するための医薬を製造する際に使用することを包含する。例えば、ＬＨＲＨ活性を抑制するのが有利な疾患は、性的早熟、前立腺癌、卵巣癌、良性の前立腺肥大、エンドメトリオーシス、子宮フィブロイド、乳癌、月経前症候群、多嚢胞性卵巣症候群、及びいずれの性のヒト又は動物における生殖腺ホルモンの過剰から生じる疾病からなる群より選ぶことができる。
本発明は、更に下記の例によって例示するが、下記の例は、制限するものと考えるべきでない。本出願全体を通して引用したすべての参考文献、特許及び公表された特許の内容は、本明細書中に援用する。
例において、下記の略語を用いる：
Ｂｏｃ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル
ＨＯＢｔ：１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＭＣＰＢＡ：ｍ−クロロ過安息香酸
ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド
例１：ＬＨＲＨ拮抗物質の抗排卵及びヒスタミン放出活性
抗排卵活性（ＡＯＡ）は、Ｃｏｒｂｉｎ及びＢｅａｔｔｉｅ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２：１（１９７５）に記載されている通りにして、ラットにおいてビボアセイによって測定した。簡潔に言うと、雌のラットに、発情前期の日に候補ＬＨＲＨ拮抗物質を注射する；通常、候補ＬＨＲＨ拮抗物質は、０．１％ＤＭＳＯに溶解した。候補ペプチドが排卵を抑制する能力は、排卵するラットの数を求めることによって測定する。候補ペプチドは、ラット当りの投与量５μｇで処理したラットの少なくとも５０％において排卵を抑制するならば、ＬＨＲＨ拮抗物質特性を有すると考える。好適なＬＨＲＨ拮抗物質は、投与量２μｇ／ラット、一層好ましくは投与量１μｇ／ラット、更に一層好ましくは投与量０．５μｇ／ラットで、ラットの少なくとも５０％において排卵を抑制する。
ヒスタミン放出活性は、Ｒｏｅｓｋｅに係る米国特許第４，８５１，３８５号に記載されている方法によってアセイした。簡潔に言うと、ラット肥満細胞の懸濁液を濃度を上げるＬＨＲＨ拮抗物質ペプチドに加えかつ３７℃で１５分間インキュベートした。緩衝剤は、２５ｍＭ  ＰＩＰＥＳ、ｐＨ７．４、ＮａＣｌ（１１９ｍＭ）、ＫＣｌ（５ｍＭ）、ＮａＯＨ（４０ｍＭ）、グルコース（５．６ｍＭ）、ＣａＣｌ2（１ｍＭ）及び０．１％ボウバイン血清アルブミンを含有するものであった。反応を、４℃で４００×ｇにおいて１５分間遠心分離することによって停止させ、上澄み液をヒスタミン含量について、公表されている方法（Ｓｉｒｉｇａｎｉａｎ（１９７４）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５７：３８３及びＮ．Ｒ．Ｒｏｓｅ，Ｈ．Ｆｒｉｅｄｍａｎ、及びＪ．Ｌ．Ｆａｈｅｙ編、「Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、３版、８０８頁におけるＳｉｒｉｇａｎｉａｎ及びＨｏｏｋ（１９８６））により、或は同様の結果をもたらしたマニュアル方法によってアセイした。最大のヒスタミン放出が、急速に、典型的には１分よりも短い時間で起きた。試験したペプチドのいずれについても、細胞毒の跡は見られなかった。ペプチドのヒスタミン放出活性は、μｇ／ｍｌで表わすＥＤ50として測定し；ＥＤ50が大きい程、ヒスタミン放出が少ないことを表わす。
いくつかのペプチドのＡＯＡ及びヒスタミン放出活性を表１にまとめる。
0004164125.tif 000022
0004164125.tif 000023
0004164125.tif 000024
0004164125.tif 000025
0004164125.tif 000026
0004164125.tif 000027
0004164125.tif 000028
0004164125.tif 000029
スルホニウム成分は、ペプチドに、６位（例えば、化合物３８７９）又は８位（例えば、化合物３９８３）に加入した場合に、高いＡＯＡを授与する。化合物３９２５（２個のスルホニウム成分を有する）は、低いヒスタミン放出を示した。アルキル及びα−（スルホニウム）カルボニルの両方の成分（例えば、化合物４０２３）は有効である。ＬＨＲＨアゴニスト及び拮抗物質による予備実験は、ブロモアセチル成分を加入した化合物がレセプターに結合され、繰り返し洗浄によって除かれないことを示唆している。
Ｎ−アルキルピリジニウム成分を６位に有する所定のペプチドは、ＡＯＡアセイにおいて予期されない程に活性である（例えば、化合物３８５１）。いくつかは、標準のNal-Argに比べて、ヒスタミン放出活性をほどんど持たない（例えば、化合物３７６３）。これらの結果は、Ｎ−メチルピリジニウム化合物の前に報告されたＡＯＡ活性及びヒスタミン放出特性に照らして予期されないものである。
二極性成分は、通常適度のＡＯＡを示した。Lys(Onic)6を含む化合物は、好都合な性質を示した；一つ（化合物３８２８）は、低いヒスタミン放出活性を示し、化合物３５０７は、高いＡＯＡを示した。
アシル化されたレシンを６位に有するペプチドをいくつか試験し、流行な活性を示した（例えば、化合物３７４１及び３７６０）。
小極性成分を６位に有する化合物は、ＡＯＡとヒスタミン放出活性との好都合な組合せを示した。例えば、D-Asn（小さい、親水性成分）を６位に有する化合物３８２７は、中位のＡＯ活性を示した。D-Gln、D-Asn及びD-Thrをそれぞれ有する化合物３３４１、３３４２、及び３３４３は、中位のＡＯＡを極めて低いヒスタミン放出と組み合わせた。Gluのタウリンアミドを６位に有する化合物３３６１もまた極めて低いヒスタミン放出を示した。D-Citを６位に有する化合物３３６９もまた低いヒスタミン放出を示した。
表１に掲記する類似体のすべては、自動合成装置（例えば、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｍｏｄｅｌ  ９９０）を使用して固相法によって合成することができる。用いたアミノ酸残基は、商業上の出所（例えば、ウィスコンシン、ミルウォーキー、Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．）から購入することができ、又は市販されている出発原料から知られている方法に従って製造することができる。例えば、ピリジニウム−Ｎ−オキシドは、対応するピリジンを、例えばｍＣＰＢＡのようなペルオキシ酸で酸化することによって製造することができる（例えば、下記の例３を参照）。ピリジニウム成分、例えばＮ−ベンジルピリジニウム化合物は、対応するピリジンを、例えば不活性な溶媒中で臭化ベンジルと共に加熱することによりＮ−アルキル化することにって製造することができる（例えば、下記の例１及び２を参照）。同様に、スルホニウム及びホスホニウム塩は、それぞれスルフィド及びホスフィンを、例えば沃化メチルのようなアルキル化剤でＳ−アルキル化又はＰ−アルキル化することにって製造することができる。商業上得られないアミノ酸は、カップリングについて保護された形態で合成することができ、或は適しているならば、カップルさせてペプチドを形成し、次いで所望の形態に改質することができる。
例２：  Boc-D-Pal(Bzl)ヒドロブロミド塩の合成：
Boc-D-Pal（１．３６ｇ、６．０ｍモル）をアセトニトリル６０ｍｌ中に懸濁させた。臭化ベンジル（約５０ｍモル）を加え、混合物を水浴で暖めて５０℃にした。透明な溶液が生成し、これを室温で１６時間攪拌した。白色沈殿が生成した；１７時間後にＴＬＣは、いくらかの出発残留出発原料を示した；攪拌を合計５日続け、その時に反応が完了した。溶媒を減圧下で蒸発させ、ＥｔＯＨ／酢酸エチルから残分が再晶出した。収率：８５％；融点１６６〜１７０℃。
例３：  Boc-D-Pal(iPr)の合成：
Boc-D-Pal（４．０ｇ、１７．７ｍモル）及びＡｇ2Ｏ（８．０ｇ、３４．４ｍモル）を水２２ｍｌに入れ、室温で４時間攪拌した。反応容器を冷却して０℃にし、２−プロパノール４０ｍｌ中の２−ヨードプロパン（２０．４ｇ、１２０ｍモル）を加えた。添加を完了した後に、混合物を暖めさせて室温にし、４日間攪拌した。２４時間後にかつ再び４８時間後に、更にＡｇ2Ｏ（２ｇ）及び２−ヨードプロパン（２ｇ）を加えた。混合物をろ過し、沈殿をエタノール（２×１５ｍｌ）で洗浄した。ろ液を蒸発させて黄色油４．３ｇを生じた。エタノール／酢酸エチルから晶出して淡黄色結晶（３．０ｇ）をもたらした。収率：８５％；融点１８２〜１８５℃。
例４：  Boc-D-Pal(N-O)の合成：
Boc-D-Pal（２．０ｇ、７．５ｍモル）をアセトン４０ｍｌに溶解しかつＭＣＰＢＡ（５７〜８６％；Ａｌｄｒｉｃｈから購入して受け入れたままで使用した）２．４８ｇ（１６．５ｍモル）をアセトン８０ｍｌに溶解したものを１回分で加えた。混合物を室温で４０時間攪拌し；反応が進行するにつれて、白色沈殿が少量生成した。沈殿をろ過し、母液を蒸発させて白色沈殿を生じた。一緒にした固形分をエーテルで洗浄し（クロロ安息香酸を除き）、酢酸エチル／ヘキサンから再晶出させた。収量：１．７ｇ（８０％）；融点１５５〜１５７℃。
例５：  ペプチドの合成：
ペプチド合成装置（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｍｏｄｅｌ  ９９０）でのBoc−アミノ酸によるペプチドの合成のための典型的なカップリングサイクルは、下記の通りであった：
メチルベンジルヒドラミン（ＭＢＨＡ）樹脂（１．１８ｇ、アミノ基０．８５ｍ当量／樹脂１ｇ）を秤量して反応容器に入れ、２回分のクロロホルム（各々２６ｍｌ）で洗浄した。樹脂をジクロロメタン（ＤＣＭ）１４ｍｌ中の２２％チオアニソール（５ｍｌ）／６６％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）で５分間予備洗浄し、次いで同じチオアニソール／ＴＦＡ混合物で３０分間脱保護した。樹脂を３回のクロロホルム（各々２０ｍｌ）、２回の２−プロパノール（各々２６ｍｌ）及び２回のＤＣＭ（各々２６ｍｌ）で洗浄した。樹脂を２回の１２％ジイソプロピルエチルアミン（ＤＡＰＥＡ）（各々２６ｍｌ）で中和し、次いで４回のＤＣＭ（各々２６ｍｌ）、次いで２部の１：１のＤＣＭ：ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（各々２６ｍｌ）で洗浄した。Boc−保護されたアミノ酸（２．５モル当量）及びＨＯＢｔ（２．５モル当量）の溶液をＤＭＦ１０ｍｌ中の溶液として導入し、ＤＣＣを加えた（６ＤＭＦ中２５６ｍｇ）。カップリングを３時間、又は一晩進行させた。ヒンダード樹脂（例えば、主鎖Ｎ−メチルアミノ酸）は、一層長いカップリング時間を要した。樹脂をＤＭＦ２６ｍｌ分、次いで２−プロパノール２６ｍｌ分、次いでＤＣＭ２６ｍｌ分で洗浄した。カップリングの完了をカイザーの試験（ニンヒドリン試験）によってアセイした。カップリングが完了しないならば、ダブルカップリングを行った（すなわち、樹脂を上記の通りにして中和し、カップリング工程を繰り返した）。完全なカップリングを達成した時に、サイクルを次のアミノ酸で繰り返した。
合成を完了した際に、液状弗化水素酸（ＨＦ）で０℃において４５分間処理することによって、ペプチドを樹脂から開裂させた。ＨＦを蒸発させ、ペプチドを水性酢酸で処理し、凍結乾燥した。粗製のペプチドを、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によりＣ18カラムで精製し、水中のアセトニトリルと０．１％ＴＦＡとの混合物で溶離した。精製したフラクション（ＵＶ及びＴＬＣ分析により均質）を一緒にし、凍結乾燥した。分析ＨＰＬＣを用いて最終生成物の純度を求めた；合成したペプチドは、すべて純度少なくとも９８％であった。
例６：プラズマテストステロンレベルの抑制
発明のＬＨＲＨ拮抗物質がプラズマテストステロンレベルを抑制する能力を、成体雄ラットにおいて調べた。ラットにＬＨＲＨ拮抗物質＃３８２７（それの構造を表１に示す）を投与した。一つの実験では、ＬＨＲＨ拮抗物質の単一注入を皮下に投与量３００又は１０００μｇ／ｋｇで施した。動物は、急速な著しいプラズマテストステロンの低減を示し、投与後６時間までに検出し得ないに近いレベルまでになった。テストステロンレベルは、３００μｇ／ｋｇを投与した後に２４時間までに正常に戻ったが、１０００μｇ／ｋｇを投与した後には、７２時間までに正常に戻らなかった。
別の実験では、ＬＨＲＨ拮抗物質＃３８２７を、３時間毎に８回の１、１０又は１００μｇ／ｋｇの静脈内投与量で施し、投与量は、それぞれ８、８０又は８００μｇ／ｋｇ／日に相当するものであった。結果を図１にグラフで示す。テストステロンの去勢レベルは、３時間毎の投与量１０μｇ／ｋｇで達成された。８μｇ／ｋｇ／日に相当する１μｇ／ｋｇ程に少ない投与量は、実験期間全体を通してプラズマテストステロンレベルの有意の低下を誘発した。
別の実験では、ＬＨＲＨ拮抗物質＃３８２７の連続した皮下注入を、浸透型ポンプを使用することによって達成した。５匹の雄のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットの各々に、Ａｌｚｅｔ浸透型ミニポンプによって投与量３００又は１０００μｇ／ｋｇ／日（「ハイドース」）を皮下に２週間施した。１０００μｇ／ｋｇ／日を受けた動物に、次いで更に２週間５、１５又は５０μｇ／ｋｇ／日（「ロードース」）を続けた後に、ポンプを完全に取り去った。結果を図２にグラフで示す。ラットをＬＨＲＨ拮抗物質により初期投与量３００又は１０００μｇ／ｋｇ／日で長期にわたって処理すると、どちらの初期投与量によっても初めの７日以内で（おそらく初めの２４時間以内で）去勢レベルのテストステロンを生じ、続く３つの投与量を更に２１日間続けた。去勢をこの期間中ずっと続け、その他のインヒビターに関して記載されてきたような明らかな「去勢応答」はなかった。ハイドースポンプを５μｇ／ｋｇ／日程に少ない投与量を与えるメインテナンスロードースポンプに取り替えた場合に、動物は、実験全体を通して完全に去勢されたままであった。ＬＨＲＨ拮抗物質処理を完了した後に、プラズマテストステロンにおいて投与量依存性回復が観測された：最も多いメインテナンス投与量を受けた動物は、少ないメインテナンス投与量で処理した動物に比べて、回復は一層遅いようであった。ポンプを取り去った後のテストステロンレベルの回復は、２週間以内で完全であった。追従研究（それの結果を図３にグラフで示す）では、テストステロンの去勢レベルへの完全な抑制は、３０μｇ／ｋｇ／日程に少ない投与量で達成された。去勢レベルは、再び５μｇ／ｋｇ／日程に少ないＬＨＲＨ拮抗物質の投与量で保たれた。
均等物
当業者ならば、本明細書中に記載する発明の特定の実施態様への多くの均等物を認識し、或は日常に過ぎない実験を用いて、確認することができるものと思う。そのような均等物は、次の請求の範囲によって包含されることを意図する。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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