(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血清及び／又は血液を８０〜１００重量％含有する培地を用い、黄色ブドウ球菌が産生する毒素を検出することを特徴とする黄色ブドウ球菌産生毒素の力価の測定方法。
【請求項２】
前記血清及び／又は血液が、哺乳動物に由来することを特徴とする、請求項１記載の黄色ブドウ球菌産生毒素の力価の測定方法。
【請求項３】
前記哺乳動物が、ヒト、ウマ、ウシ、ウサギ及びヒツジからなる群より選択される１種以上の哺乳動物であることを特徴とする、請求項２記載の黄色ブドウ球菌産生毒素の力価の測定方法。
【請求項４】
前記黄色ブドウ球菌産生毒素が、毒素性ショック症候群毒素−１であることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項記載の黄色ブドウ球菌産生毒素の力価の測定方法。
【請求項５】
ＣＯ2存在下で行うことを特徴とする請求項１〜４のいずれか１項記載の黄色ブドウ球菌産生毒素の力価の測定方法。
【請求項６】
黄色ブドウ球菌を、ＣＯ2存在下、血清及び／又は血液を８０〜１００重量％含有する培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標として黄色ブドウ球菌の強毒株を選別することを特徴とする、黄色ブドウ球菌の強毒株の選別方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、黄色ブドウ球菌産生毒素の検出用培地、並びに該培地を利用した黄色ブドウ球菌産生毒素の検出方法、該培地を利用した黄色ブドウ球菌の分類方法、及び該培地を利用した黄色ブドウ球菌の強毒株の選別方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
黄色ブドウ球菌により引き起こされる毒素性ショック症候群は、高熱、血圧低下、全身赤斑、血膜充血、多臓器傷害等の種々の症状を呈する。
毒素性ショック症候群の患者から分離された黄色ブドウ球菌は、同一の外毒素である毒素性ショック症候群毒素−１（以下、「TSST-1」という）を産生することが知られている（Todd,J.,et.al:Lancet,ii,p1116(1978)、Cohen,M,L.,et.al:Science,211,p842(1981)）。
【０００３】
また、近年本邦において、院内感染の原因菌として分離頻度が増加しているメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（MRSA）の多くがTSST-1を産生することが知られている。
従って、黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性の有無及び程度を識別することは、臨床上極めて重要である。
従来から、黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性の識別は、in vivo試験系とin vitro試験系とで行われている。
【０００４】
in vivo試験系による識別は、例えば、毒素性ショック症候群の患者より分離された黄色ブドウ球菌をマウス等の実験動物に接種して、その実験動物の生死を観察することにより行われている。
また、in vitro試験系による識別は、例えば、黄色ブドウ球菌をブレインハートインフュージョン培地等の液体培地で好気的に培養し、培養液中に分泌されたTSST-1を免疫学的手法により検出することにより行われている。
【０００５】
しかしながら、実験動物を用いたin vivo試験系では、▲１▼最終結果が得られるまでに１週間程度の時間を要する、▲２▼試験を行うために技術の熟練や特殊な実験施設を必要とする、▲３▼検出された毒素がTSST-1であるか黄色ブドウ球菌が産生する他の毒素であるかを区別することが困難であり、臨床的意義に乏しい、等の問題点があった。
【０００６】
また、培養液中に分泌されたTSST-1を免疫学的手法により検出するin vitro試験系では、TSST-1を特異的に検出できるものの、in vitro試験系での培養条件は必ずしも生体内での黄色ブドウ球菌の環境を反映しているとは言えなかった。すなわち、in vitro試験系によりTSST-1産生株であると同定された被検菌であっても、その菌株が分離された患者において必ずしも毒素ショック症候群が発症しているか又は将来的に発症するとは限られないため、in vitro試験系における黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性と生体内における黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性との関連が不明であった。
【０００７】
このような状況の下、最近、毒素性ショック症候群の患者血液中のTSST-1量を測定することによって、黄色ブドウ球菌感染の有無を診断する方法が報告されている（特開平10-62423号公報）。しかし、この方法は、in vitro試験系における黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性と生体内における黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性との関連を明らかにするものではない。
そこで、黄色ブドウ球菌のin vitro試験系におけるTSST-1産生性と生体内におけるTSST-1産生性との関連を明らかにするために、生体内における黄色ブドウ球菌の環境をよく反映したin vitro試験系の開発が切望されている。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、黄色ブドウ球菌のin vitro試験系におけるTSST-1産生性と生体内におけるTSST-1産生性との関連を明らかにするために、生体内における黄色ブドウ球菌の環境をよく反映したin vitro試験系を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するするための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、黄色ブドウ球菌が産生する毒素（TSST-1）の力価が、培地中の血清及び／又は血液含有量によって有意に変化することを見出した。
すなわち、血清及び／又は血液含有量が８０％未満である培地中で黄色ブドウ球菌を培養した場合と、血清及び／又は血液が全く含まれない培地中で培養した場合とでは、産生される毒素力価に有意な差はないが、血清及び／又は血液含有量が８０〜１００重量％である培地中で培養した場合と、血清及び／又は血液が全く含まれない培地中で培養した場合とでは、産生される毒素力価に有意な差があること、特に、ＣＯ2存在下、血清及び／又は血液含有量が８０〜１００重量％である培地中で培養した場合には、血清及び／又は血液が全く含まれない培地中で培養した場合と比較して、産生される毒素力価が有意に増加することを見出した。
【００１０】
また、本発明者らは、ＣＯ2存在下、血清及び／又は血液含有量が８０〜１００重量％である培地中で培養した場合に、血清及び／又は血液が全く含まれない培地中で培養した場合と比較して有意に大きい力価の毒素を産生する黄色ブドウ球菌株は、生体内においても高力価の毒素を産生する強毒株であることを見出した。
すなわち、培地中にＣＯ2が存在し、かつ培地中の血清及び／又は血液含有量が８０〜１００重量％である条件下での培養が、生体内における黄色ブドウ球菌の環境をよく反映していることを見出した。
【００１１】
以上の知見に基づいて、本発明は完成されるに至った。
すなわち、本発明は、血清及び／又は血液を８０〜１００重量％含有することを特徴とする、黄色ブドウ球菌産生毒素の検出用培地である。
また、本発明は、黄色ブドウ球菌を上記培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素を検出することを特徴とする、黄色ブドウ球菌産生毒素の検出方法である。
【００１２】
さらに、本発明は、黄色ブドウ球菌を上記培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標として黄色ブドウ球菌を分類することを特徴とする、黄色ブドウ球菌の分類方法である。
さらに、本発明は、黄色ブドウ球菌を、ＣＯ2存在下、上記培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標として黄色ブドウ球菌の強毒株を選別することを特徴とする、黄色ブドウ球菌の強毒株の選別方法である。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明の黄色ブドウ球菌産生毒素の検出用培地は、血清及び／又は血液を８０〜１００重量％含有することを特徴とする。
本発明の培地中に含有される血清及び／又は血液は、いかなる動物由来の血清及び／又は血液であってもよいが、哺乳動物由来の血清及び／又は血液が好ましく、ヒト、ウマ、ウシ、ウサギ及びヒツジからなる群より選択される１種以上の哺乳動物由来の血清及び／又は血液がさらに好ましい。
【００１４】
本発明の培地中に含有される血清及び／又は血液の含有量は、培地全体の８０〜１００重量％である。血清及び／又は血液の含有量が８０重量％未満である場合には、黄色ブドウ球菌の毒素産生性に対する血清及び／又は血液の効果はほとんど得られず、血清及び／又は血液が全く含まれない培地における黄色ブドウ球菌の毒素産生性と有意な差がない。
本発明の培地中に含有される血清及び／又は血液以外の成分は、特に限定されないが、通常は、黄色ブドウ球菌の培養に必要な成分である。このような成分としては、例えば、黄色ブドウ球菌の培養に通常使用される培地（例えば、TSB培地、BHI培地、TH培地等）と同様の成分、すなわち、ペプトン、デンプン、牛脳浸出物、牛心臓浸出物、等が挙げられる。
【００１５】
本発明の培地で検出し得る毒素は、黄色ブドウ球菌が産生する毒素であれば特に限定されない。黄色ブドウ球菌が産生する毒素としては、例えば、毒素性ショック症候群毒素−１（TSST-1）、エンテロトキシンＡ-Ｄ等が挙げられるが、本発明の培地は、特にTSST-1の検出に適している。
本発明の培地は、以下で説明する黄色ブドウ球菌産生毒素の検出方法、黄色ブドウ球菌の分類方法、及び黄色ブドウ球菌の強毒株の選別方法に使用することができる。
【００１６】
本発明の黄色ブドウ球菌産生毒素の検出方法は、黄色ブドウ球菌を上記本発明の培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素を検出することを特徴とする。
本発明における黄色ブドウ球菌の培養は、上記本発明の培地を使用する限り、いかなる培養方法を用いて行ってもよい。また、培養条件も特に限定されず、培養温度は、例えば30〜37℃とすることができ、培養時間は、例えば10〜48時間とすることができる。
【００１７】
本発明における黄色ブドウ球菌が産生する毒素の検出は、いかなる検出方法によって行ってもよい。例えば、黄色ブドウ球菌の培養物を遠心分離（例えば、4℃下、5,000rpmで15分間）し、培養物上清中の毒素の力価を例えば市販のＲＰＬＡ試薬（reversed passive latex agglutination kit）（デンカ生研社製）を使用して測定することにより、毒素の検出及び毒素力価の測定を行うことができる。
本発明の黄色ブドウ球菌の分類方法は、黄色ブドウ球菌を上記本発明の培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標として黄色ブドウ球菌を分類することを特徴とする。
【００１８】
本発明の分類方法は、黄色ブドウ球菌を上記本発明の培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標として黄色ブドウ球菌の分類を行う限り、いかなる実施態様をもとり得る。
例えば、特定の力価を基準として、黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価がその特定の力価以上であるか又は以下であるかによって、黄色ブドウ球菌に分類することができる。具体的には、例えば力価128及び4096を基準として、黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価が128未満であるもの、128以上4096未満であるもの、4096以上であるものに分類することができる。
【００１９】
また、本発明の培地中で培養した場合に産生される毒素力価と、血清及び／又は血液含有量が８０重量％未満である培地中で培養した場合に産生される毒素力価との比率を求め、その比率を基準として黄色ブドウ球菌を分類することもできる。
本発明の黄色ブドウ球菌の強毒株の選別方法は、黄色ブドウ球菌を、ＣＯ2存在下、上記本発明の培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標として黄色ブドウ球菌の強毒株を選別することを特徴とする。
【００２０】
ここで、「黄色ブドウ球菌の強毒株」とは、生体に感染した場合に、生体内において高力価の毒素を産生する黄色ブドウ球菌の菌株をいう。また、「高力価」とは、例えば、産生される毒素がTSST-1である場合には、毒素性ショック症候群を発症させる程度のTSST-1力価をいい、その力価は感染動物や菌株の種類等に応じて相違するが、一般には、血液中のTSST-1力価が8192以上である場合をいう。
本発明の選別方法において、「ＣＯ2存在下」とは、培地中にＣＯ2が存在する限り、その濃度は特に限定されないが、５〜10％が好ましく、５％がさらに好ましい。
【００２１】
本発明の選別方法は、黄色ブドウ球菌を、ＣＯ2存在下、上記本発明の培地中で培養し、該黄色ブドウ球菌が産生する毒素の力価を測定し、毒素の力価を指標して黄色ブドウ球菌の強毒株を選別する限り、いかなる実施態様をもとり得る。例えば、産生される毒素がTSST-1である場合には、上記本発明の培地中で、37℃、16時間培養した結果、産生されるTSST-1の力価が4096以上である菌株を強毒株として選別することができる。
【００２２】
【実施例】
〔実施例１〕黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性に対する血清及び血液並びにＣＯ2の影響
（１）毒素ショック症候群の原因であるTSST-1を多量に産生する黄色ブドウ球菌Sak-1株及びMu48株を、全血［ヒト全血、ヒツジ全血（Bio-Test Lab.社）、ウマ全血（Bio-Test Lab.）］中、血清［ヒト血清、ウマ血清（GIBCO社）、仔ウシ血清（GIBCO社）、ウサギ血清（GIBCO社）］中、又は種々の濃度（2.5%、5%、10%、20%、40%及び80%）のウマ血清を含有するTH培地（Todd Hewitt broth）（DIFCO社）中で、37℃で一晩培養した。
一方、対照として、Sak-1株及びMu48株を、血液及び血清を含有しないTH培地、TSB培地又はBHI培地中で、上記と同様に培養した。
【００２３】
なお、TH培地の組成（1Lあたり）は、Beef Heart infusion 3.1g；Bacto Neopeptone 20g；Bacto Dextrose 2.0gであり、TSB培地の組成（1Lあたり）は、Bacto Tryptone 17g；Bacto Soytone 3.0g；Bacto Dextrose 2.5gであり、BHI培地の組成（1Lあたり）は、Calf Brain and Beef Heart infusion 450g；Bacto proteose peptone 10g；Bacto Dextrose 2.0gである。
いずれの培養においても、Sak-1株及びMu48株の培養開始時の細胞濃度を、約２×106CFU/mlとした。
【００２４】
（２）上記培養後、Sak-1株及びMu48株の培養物を、5%CO2の存在下、37℃で20時間インキュベーションした後、4℃の温度条件下、5,000rpmで15分間遠心分離した。
遠心分離により得られた上清を回収し、上清中に含有されるTSST-1力価を、reversed passive latex agglutination kit（TST-RPLATM及びSET-RPLATM, デンカ生研）を使用して測定した。すなわち、Ｖ底マイクロタイタープレート中で、TSST-1に対する抗体が結合しているラッテクス粒子と2倍ずつ段階希釈した培養上清とを同量ずつ加えて混和し、室温で20時間インキュベーションした後、TSST-1力価を測定した。
【００２５】
一方、Sak-1株及びMu48株の培養物を、CO2の不在下、37℃で20時間インキュベーションした後、上記と同様に遠心分離し、上清中に含有されるTSST-1力価を上記と同様に測定した。
また、Sak-1株及びMu48株の培養物中のコロニー数をBHIアガープレート上でカウントし、培養物の細胞濃度を求めた。すなわち、Sak-1株及びMu48株の培養物を105、106及び107倍に希釈し、各希釈物100μlを２対のBHIアガープレート上にとり、37℃で16〜20時間インキュベーションした後、コロニー数をカウントした。各希釈物中のコロニー数から細胞濃度を計算し、それらの平均をとって培養物の細胞濃度とした。
【００２６】
（３）TSST-1力価の測定結果及び培養物の細胞濃度を図１に示す。なお、図１中、「Ａ」は5%CO2存在下での培養を意味し、「Ｂ」はCO2不在下での培養を意味する。
図１に示す結果を以下に要約する。
▲１▼  Sak-1が産生するTSST-1力価の変化
i) 5%CO2存在下で培養した場合
2.5〜40%ウマ血清を含むTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価と有意な差はなかった。
【００２７】
しかし、80%ウマ血清を含むTH培地、100%ウマ血清、100%ヒト血清、100%仔ウシ血清又は100%ウサギ血清、あるいは100%ウマ血液又は100%ヒト血液中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価よりも有意に大きかった。但し、100%ヒツジ血液中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価と有意な差はなかった。
【００２８】
ii) CO2不在下で培養した場合
2.5〜80%ウマ血清を含むTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価と有意な差はなかった。
しかし、100%ウマ血清、100%ヒト血清、100%仔ウシ血清又は100%ウサギ血清、あるいは100%ウマ血液、100%ヒト血液又は100％ヒツジ血液中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にSak-1株が産生するTSST-1力価よりも有意に小さかった。
【００２９】
▲２▼  Mu48が産生するTSST-1力価の変化
i) 5%CO2存在下で培養した場合
2.5〜40%ウマ血清を含むTH培地中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価と有意な差はなかった。
しかし、80%ウマ血清を含むTH培地、100%ウマ血清、100%ヒト血清、100%仔ウシ血清又は100%ウサギ血清、あるいは100%ウマ血液、100％ヒト血液又は100%ヒツ血液中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価よりも有意に小さかった。
【００３０】
ii) CO2不在下で培養した場合
2.5〜40%ウマ血清を含むTH培地中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価と有意な差はなかった。
しかし、80%ウマ血清を含むTH培地、100%ウマ血清、100%ヒト血清、100%仔ウシ血清又は100%ウサギ血清、あるいは100%ウマ血液、100％ヒト血液又は100%ヒツジ血液中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価は、TSB培地、BHI培地又はTH培地中で培養した場合にMu48株が産生するTSST-1力価よりも有意に小さかった。
【００３１】
以上の結果より、黄色ブドウ球菌が産生するTSST-1力価は、培地中に含有される血清及び／又は血液含有量並びにCO2の存在の有無によって有意に変化することが判明した。
すなわち、培地中の血清及び／又は血液含有量が８０〜１００重量％である場合と、培地中の血清及び／又は血液含有量が８０重量％未満である場合とでは、産生される毒素力価に有意な差があること、並びに、培地中の血清及び／又は血液含有量が８０〜１００重量％である場合には、ＣＯ2の存在の有無によって、産生される毒素力価が有意に変化することが判明した。
【００３２】
〔実施例２〕黄色ブドウ球菌の分類
（１）日本各地の医療機関で単離された黄色ブドウ球菌MRSA256株及びMSSA285株（合計541株）を、TH培地又はウマ血液中で、5%CO2存在下、37℃で20時間培養し、産生されるTSST-1力価を上記と同様に測定した。MRSAはメチシリン耐性黄色ブドウ球菌を意味し、MSSAはメチシリン感受性黄色ブドウ球菌を意味する。使用した541菌株のうち、249株（MRSA79株及びMSSA170株）は1981〜1982年に単離されたものであり、残りの292株（MRSA177株及びMSSA115株）は1992〜1996年に単離されたものである。
【００３３】
なお、黄色ブドウ球菌の同定は、グラム陽性菌のVITEK同定システム（Bio Merrius S.A.,フランス）を用いたカタラーゼテスト及びコアグラーゼテストにより行い、さらに、DNase産生及びStaphyslideテスト（Bio Merieus USA）を用いて黄色ブドウ球菌であることを確認した。MRSAは、NCCLS（National Commuittee for Clinical laboratory Standards）によるMIC測定の結果、オキサシリンに対するMICが４mg/L以上である黄色ブドウ球菌として同定した。
【００３４】
（２）TSST-1力価の測定結果を図２に示す。
【００３５】
図２に示すように、MRSA及びMSSAの各菌株によって産生されるTSST-1力価の分布は、TH培地中で培養した場合とウマ血液中で培養した場合とで有意な差があった。
（３）図２のTSST-1力価の測定結果に基づいて、ウマ血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価が、TH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価の４倍を超えるか（タイプＩ）、４倍未満であるか（タイプII）、あるいは４倍又は４倍よりやや小さいか（タイプIII）によってMRSA及びMSSAを分類した。その結果を図３に示す。
図３に示すように、黄色ブドウ球菌をウマ血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価とTH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価との比率に基づいて、黄色ブドウ球菌を分類することができることが判明した。
【００３６】
〔実施例３〕黄色ブドウ球菌の強毒株の選別
（１）９種の黄色ブドウ球菌（Sak-1株、331-1株、332-1株、507-2株、520-1株、607-2株、Mu40株、Mu48株及びMu50株）を、TH培地中及びウマ血液中で、5%CO2存在下、37℃で20時間培養した。培養後、培養物を上記と同様にして遠心分離し、上清中のTSST-1力価を測定した。
TSST-1力価の測定結果を図４に示す。
【００３７】
図４に示されるように、９種の各菌株によって産生されるTSST-1力価は、TH培地中で培養した場合とウマ血液中で培養した場合とで有意な差がみられた。
すなわち、Sak-1株、332-1株、507-2株、520-1株及び607-2株においては、TH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価よりも、ウマ血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価の方が有意に大きかった。
一方、331-1株、Mu40株、Mu48株及びMu50株においては、TH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価よりも、ウマ血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価の方が有意に小さかった。
【００３８】
（２）上記９種の黄色ブドウ球菌の培養物を生理食塩水で希釈した後、各培養物0.2mlを５週齢雄ICRマウスの尾静脈から投与した。各培養物0.2ml中に含まれる細胞数を図４に示す。
投与後７日目に、マウス心臓から採血し、血液中の細胞数をカウントするとともに、血液中のTSST-1力価を測定した。血液から回収された細胞数及び血液中のTSST-1力価を図４に示す。なお、図４中の「ND」は、黄色ブドウ球菌607-2株の投与後４日目にマウスが死亡したことを示す。
図４に示すように、血液中のTSST-1力価は、Sak-1株及び332-1株を投与した場合のみ大きく（力価1024）、他の菌株を投与した場合は小さかった。但し、607-2株の場合には、マウスが投与後４日目に死亡していることから、高力価のTSST-1が産生されたと推測される。
【００３９】
（３）以上の結果より、CO2存在下、TH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価よりも、CO2存在下、ウマ血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価の方が有意に小さい菌株（すなわち、331-1株、Mu40株、Mu48株及びMu50株）は、血液中TSST-1力価も小さいことが判明した。すなわち、生体内で高力価のTSST-1を産生する強毒株の黄色ブドウ球菌は、少なくとも、CO2存在下、TH培地中で培養した場合に産生するTSST-1力価よりも、CO2存在下、ウマ血液中で培養した場合に産生するTSST-1力価の方が有意に大きいことが判明した。
従って、CO2存在下、ウマ血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価の方が、CO2存在下、TH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価よりも有意に大きい菌株を選別することにより、強毒株である黄色ブドウ球菌を選別することができるが判明した。
【００４０】
【発明の効果】
本発明により、黄色ブドウ球菌産生毒素の検出用培地が提供される。
本発明の培地中で培養した場合の黄色ブドウ球菌の毒素産生性と、血清及び血液を含まない通常の培地（TSB培地、BHI培地、TH培地等）中で培養した場合の黄色ブドウ球菌の毒素産生性とには有意な差がある。従って、本発明の培地中で黄色ブドウ球菌を培養した場合の該黄色ブドウ球菌の毒素産生性を指標として黄色ブドウ球菌を分類することにより、従来の分類方法とは異なる指標により黄色ブドウ球菌を分類することができる。
【００４１】
また、黄色ブドウ球菌を、CO2存在下、本発明の培地中で培養した場合に産生される毒素の力価が、CO2存在下、血清及び血液を含まない通常の培地（TSB培地、BHI培地、TH培地等）中で培養した場合に産生される毒素の力価よりも有意に大きい黄色ブドウ球菌株を選別することにより、生体内で高力価の毒素を産生する強毒株を選別することができる。すなわち、本発明の培地を使用したCO2存在下での培養は、黄色ブドウ球菌のin vivoにおける環境をよく反映していると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】黄色ブドウ球菌のTSST-1産生性に対する血清及び血液の影響を表す図である。
【図２】  TH培地及び血液中で黄色ブドウ球菌を培養することにより産生されるTSST力価の測定結果を表す図である。
【図３】  TH培地中で培養した場合に産生されるTSST-1力価と血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価の相違に基づく、黄色ブドウ球菌の分類結果を表す図である。
【図４】黄色ブドウ球菌をTH培地及び血液中で培養した場合に産生されるTSST-1力価と、接種後の血中TSST-1力価との関係を表す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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