(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗メタロチオネイン抗体を有する非ヒト動物であって、さらに水銀を作用させたことを特徴とする骨密度減少関連疾患の非ヒトモデル動物。
【請求項２】
異種メタロチオネインを投与することにより抗メタロチオネイン抗体を誘導する工程及び水銀を作用させる工程をこの順に含むことを特徴とする、骨密度減少関連疾患の非ヒトモデル動物の作製方法。
【請求項３】
抗メタロチオネイン抗体を有する非ヒト動物に、被験化合物及び水銀を投与し、骨密度を測定して、骨密度低下を阻止する化合物を選択することを特徴とする、骨密度減少関連疾患の予防ないし治療薬のスクリーニング方法。
【請求項４】
請求項１に記載の非ヒトモデル動物に、被験化合物を投与し、骨密度を測定して、骨密度を増加させる化合物を選択することを特徴とする、骨密度減少関連疾患の予防ないし治療薬のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、金属アレルギーおよび骨密度減少関連疾患を含む抗メタロチオネイン抗体関連疾患のモデル動物及びその作製方法並びに骨密度減少関連疾患の予防ないし治療薬のスクリーニング方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及びその課題】
金属アレルギーは、ピアス等の装飾品、眼鏡、電磁波シールド用布帛、歯科用および生体用インプラント材などにおいて問題となっていたが、その有効な治療薬は開発されていなかった。
【０００３】
一方、骨密度が減少する疾患として、骨粗鬆症、歯槽骨減少、歯槽骨の吸収を伴う歯周炎、歯槽骨萎縮などが知られている。
【０００４】
骨密度減少疾患の動物モデルとしては、動物の卵巣を摘出する方法が知られているが、この方法では卵巣摘出から骨密度の減少までかなりの時間がかかるだけでなく、卵巣摘出による骨密度の減少は実際の疾患ではほとんど見られず、より適切な疾患モデルの作製が求められていた。
【０００５】
ところで、メタロチオネインは、重金属を包み込む金属プロテインであり、身体防御に関与する物質であることが知られているが、抗メタロチオネイン抗体と疾患との関連は明らかではなかった。
【０００６】
本発明は、骨密度減少および金属アレルギーなどの疾患を予防ないし治療するために関連する技術を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、骨粗鬆症患者において、抗メタロチオネイン抗体価の高い患者の存在に着目して研究を重ねた結果、抗メタロチオネイン抗体価の高い動物に金属を投与することで、動物の骨密度を減少でき、これが骨密度減少関連疾患の動物モデルとして有用であることを見出した。
【０００８】
また、金属アレルギー患者における抗メタロチオネイン抗体の陽性率が極めて高く、抗メタロチオネイン抗体価の高い動物は、金属アレルギー疾患のモデル動物としても有用であることを見出した。
【０００９】
本発明は、以下のモデル動物及びその作製方法並びに抗メタロチオネイン抗体関連疾患の予防ないし治療薬のスクリーニング方法に関する。
項１．  抗メタロチオネイン抗体を有する抗メタロチオネイン抗体関連疾患のモデル動物。
項２．  抗メタロチオネイン抗体関連疾患が、金属アレルギーおよび／または骨密度減少関連疾患である項１に記載のモデル動物。
項３．  異種メタロチオネインを投与することにより抗メタロチオネイン抗体を誘導する工程及び必要に応じて金属を作用させる工程を含むことを特徴とする、抗メタロチオネイン抗体関連疾患のモデル動物の作製方法。
項４．  抗メタロチオネイン抗体関連疾患が、金属アレルギーおよび／または骨密度減少関連疾患である項３に記載の方法。
項５．  抗メタロチオネイン抗体を有するモデル動物に、被験化合物及び金属を投与することを特徴とする抗メタロチオネイン抗体関連疾患の予防ないし治療薬のスクリーニング方法。
項６．  抗メタロチオネイン抗体関連疾患が、金属アレルギーおよび／または骨密度減少関連疾患である項５に記載のスクリーニング方法。
【００１０】
【発明の実施の形態】
抗メタロチオネイン抗体関連疾患は、金属アレルギーおよび骨密度減少関連疾患（特に骨粗鬆症、歯槽骨減少症、歯槽骨の吸収を伴う歯周炎、歯槽骨萎縮症）を含む。
【００１１】
動物の骨密度減少は、動物に異種のメタロチオネイン（以下、「ＭＴ」と略す）を投与して抗ＭＴ抗体を誘導し、次に金属化合物を投与するか、あるいは金属化合物と接触させることにより導くことができる。この骨密度の減少は、金属アレルギーと密接に関連している。
【００１２】
本発明の抗ＭＴ抗体関連疾患（金属アレルギーおよび骨密度減少関連疾患を含む）のモデル動物は、抗ＭＴ抗体を誘導した動物および、さらに金属化合物を作用させ、骨密度の減少を導いた動物の両方が該当する。抗ＭＴ抗体を誘導した動物は、抗ＭＴ抗体関連疾患の予防および治療の両方のスクリーニングに使用するモデル動物として有用である。この場合、金属アレルギーの予防ないし治療は、該モデル動物の抗ＭＴ抗体のレベルの低下の有無を測定することにより判定でき、骨密度関連疾患の予防ないし治療は、骨密度のレベルの増加の有無あるいは金属を作用させたときの骨密度低下を阻止する程度を測定することにより判定できる。
【００１３】
動物としては、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、イヌ、サルなどの非ヒト哺乳動物が例示される。抗ＭＴ抗体を有するモデル動物に金属化合物を作用させることにより、モデル動物の骨密度を減少させることができる。
【００１４】
金属化合物としては、金属単体、金属酸化物、金属ハロゲン化物（塩化物、臭化物、フッ化物、ヨウ化物）、金属水酸化物、金属塩（硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、酢酸等のカルボン酸塩、メタンスルホン酸などのスルホン酸塩）、金属錯体などが挙げられ、水溶性の金属塩ないし金属ハロゲン化物が好ましい。金属としては、水銀、金、銀、銅、白金、クロム、ニッケル、マンガン、亜鉛、コバルト、錫、アルミニウム、鉄、アンチモン、イリジウム、インジウム、パラジウム、モリブデンなどが例示される。
【００１５】
ここで、「動物に金属化合物を作用させる」とは、動物に水溶性の金属化合物を注射または経口的に投与するか、水不溶性の金属化合物ないし金属成形体を皮下等の体内に埋め込む方法、金属を口腔内（例えば歯）、鼻粘膜などに固定する方法が例示される。
【００１６】
抗ＭＴ抗体を有する動物は、動物に異種ＭＴを投与することにより作製できるが、抗ＭＴ抗体を誘導できる他の物質を投与してもよい。
【００１７】
抗ＭＴ抗体を誘導するために投与される異種のメタロチオネインの投与量は、１回当たり１〜２０μｇ／体重１ｋｇ程度であり、投与回数は２〜６回程度である。抗ＭＴ抗体の誘導を促進するために、ＭＴをアジュバントとともに投与することが好ましい。このようなアジュバントとしては、フロイントの完全又は不完全アジュバントが例示できる。
【００１８】
抗ＭＴ抗体を有するモデル動物に対し金属を投与することで、モデル動物の骨密度を減少させることができる。金属の投与方法としては、水溶性の金属化合物を経口ないし非経口（注射等）で投与する方法、或いは金属ないし合金を動物内に適用し、動物を金属と接触状態に保つ方法が例示される。
【００１９】
水溶性金属化合物の投与量は、特に限定されないが、通常１０〜１５００μｇ／ｋｇであり、１０〜２０回連続して或いは間欠に投与することができる。また、金属単体の場合には、５〜２５ｍｇ／ｋｇ程度を適用することができる。
【００２０】
骨密度が減少する骨部位としては、全身の骨組織が関係するが、骨折や歯の治療の際に金属製のインプラントを埋入したり、歯の治療でアマルガムを使用した場合には、骨折部位や歯の治療部位で骨密度の減少が起こり得、これらの部位における骨密度減少の治療剤を本発明のスクリーニング方法により見出すことができる。
【００２１】
本発明のスクリーニング方法は、抗ＭＴ抗体を有するモデル動物に、被験化合物と金属を投与する。被験化合物と金属は、同時に投与してもよく、予め金属を投与して骨密度を減少させ、骨密度の回復を試験してもよく、先に被験化合物を投与し、次に金属を投与し、金属投与による骨密度減少の抑制程度を試験してもよい。なお、モデル動物の骨密度の測定は、骨密度測定装置(例えば、GE Lunar)を用いて行うことができる。
【００２２】
本発明のスクリーニング方法で予防ないし治療剤をスクリーニングできる骨密度減少関連疾患としては、骨粗鬆症および歯巣骨の吸収を伴う歯周炎、歯槽骨萎縮等の歯槽骨喪失関連疾患が例示できる。
【００２３】
【発明の効果】
本発明によれば、骨密度の減少したモデル動物を簡便に作製することができ、この動物モデルを使用して、骨密度減少関連疾患の予防ないし治療剤を容易に得ることができる。
【００２４】
【実施例】
以下、本発明を実施例に基づきより詳細に説明する。
実施例１
BALB/cマウスにウサギ肝臓より精製されたメタロチオネイン（１０μｇ／マウス）を初回のみフロイントの完全アジュバント（投与量１００μｌ／マウス）とともに、２週間に１回、３ヶ月間に５回免役することにより、抗ＭＴ抗体を有するモデルマウスを得た。このモデルマウスに、ＬＤ50の１／５量に相当する１ｍｇ／ｋｇの水銀（HgCl2）を皮下に９回（３日おきに）注射した。マウスの血清中の抗メタロチオネイン抗体をＥＬＩＳＡ法により測定した。また、水銀投与後のマウス骨密度を骨密度測定装置Plxlmus mouse densitometer（ＧＥ  Ｌｕｎａｒ）で測定した。結果を図１に示す。図１において、「コントロール」は、メタロチオネイン及び水銀を投与していない未処理のマウス、「ＭＴ」は、抗ＭＴ抗体を有するマウス、「ＭＴ／Ｈｇ」は抗ＭＴ抗体を有するマウスに水銀を投与したマウス、「Ｈｇ」は、メタロチオネインを投与しない（抗ＭＴ抗体を有しない）マウスに水銀を投与したマウスを意味する。
【００２５】
水銀を投与された抗ＭＴ抗体陽性のマウスは、大脚骨で約１０％、全身で約５％の骨密度低下が見られた。
【図面の簡単な説明】
【図１】マウスの脚の骨密度を示す。
【図１】
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