(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化１で示される構造式を有する抗酸化性物質、すなわち、６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン（ジオスミン−６，８−Ｃ−ジ−β−Ｄ−グルコピラノシド）、又は、下記化２で示される構造式を有する抗酸化性物質、すなわち、６−Ｃ−グルコシルジオスミン（ジオスミン−６−Ｃ−β−Ｄ−グルコピラノシド）を有効成分とする抗酸化剤。
【化１】
0004188433.tif 000009
【化２】
0004188433.tif 000010
【請求項２】
前記抗酸化性物質がレモン、ライム、グレープフルーツ、ユズ、ネーブルオレンジ、バレンシアオレンジ、サワーオレンジ、はっさく、温州みかん、アマナツ、キンカン、イヨカン、夏ミカン、ダイダイ、ブンタン、カボス、スダチ、ポンカン、その他柑橘類のうち１種又は２種以上を使用して抽出されたものであること、を特徴とする請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
抗酸化剤が飲食品用抗酸化剤であること、を特徴とする請求項１又は請求項２に記載の抗酸化剤。
【請求項４】
柑橘類の果汁、果皮、果皮含有物及び／又は搾り粕を、水、有機溶媒又はこれらの混合物で抽出し、得られた抽出物を逆相樹脂処理を行い、液体クロマトグラフィー等の精製処理を行うこと、を特徴とする請求項１から３のいずれか１項に記載の抗酸化剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗酸化システムに関するものであって、更に詳細には、柑橘果実の果皮、果汁から新規抗酸化性物質（６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、及び／又は、６−Ｃ−グルコシルジオスミン）を抽出し、これを抗酸化剤、特に飲食品用抗酸化剤として応用したり、または、これを飲料、食品に添加強化し、生体内抗酸化の食品素材として生活慣習病（成人病）、癌予防食品に応用するトータルシステムに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、飲食品、医薬品、化粧品のほか各種工業製品において、天然色素の経時的変色ないし退色、植物性油脂や魚油の変敗、β−カロチンやビタミンＣ等有効成分の酸化分解、フレーバーの経時的劣化等、成分の酸化による各種の被害が重要な問題となっている。
【０００３】
また近年になって、活性酸素の害作用がクローズアップされるようになり、例えば、食品中に含まれるリノール酸、リノレン酸などの栄養学的に必須な不飽和脂肪酸は、空気中の酸素により容易に過酸化されて過酸化脂肪酸や、反応性ラジカル（フリーラジカル）を生成すると共に、マロンジアルデヒドなどの発がん性物質を生成することが報告されている。また脂質中の不飽和脂肪酸分子が過酸化されて生成する過酸化脂質は、化学反応により、生体中の蛋白や核酸を変質させるため、生体に発がん作用などの影響を与えることも報告されている。
【０００４】
このような酸素による害作用を防止するために、抗酸化剤が開発され、例えばブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）やブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）などの合成抗酸化剤が多用されるようになった。また、天然抗酸化剤についても、ビタミンＥ、ビタミンＣ、β−カロチン、カテキン類が知られており、一部は実用に供されている。
【０００５】
しかしながら、合成抗酸化剤は、天然物嗜好の強い現在の消費者のニーズには、適合しないし、従来の天然抗酸化剤は、例えばビタミンＥ、ビタミンＣ等は極端な脂溶性ないし水溶性という性質を有しているため、その利用には自ずから限度があり、充分なものとはいえない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
酸素による重大な害作用に鑑み、飲食品、医薬品、化粧品その他工業製品における酸化、あるいは生体内での過酸化を防止するために、ＢＨＡやＢＨＴ等合成抗酸化剤に代る新しいタイプの抗酸化剤を開発する目的で、本発明はなされたものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために各方面から検討した結果、安全性の高い、天然由来の抗酸化性物質は、生体内における抗酸化的な生体の防御機構を支援する物質として食品、特に健康食品や栄養食品のほか、医薬品や化粧品の技術分野において、非常に期待されている点に着目した。
【０００８】
そして鋭意研究の結果、レモン等の柑橘類から抽出した糖誘導体である６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、６−Ｃ−グルコシルジオスミンにきわめてすぐれた抗酸化性がありしかも安全性にも問題がないことを確認し、こ（れら）の物質を有効成分とする抗酸化剤に関する本発明を完成するに至った。
以下、本発明について詳しく説明する。
【０００９】
本発明に係る抗酸化剤の有効成分として使用するグルコシルジオスミンの内、６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミンは、分子式Ｃ28Ｈ32Ｏ16（分子量：６２４）を有し、下記化１に示される構造式を有する化合物である（構造式名：ジオスミン−６，８−Ｃ−ジ−β−Ｄ−グルコピラノシド）。
【００１０】
【化１】
0004188433.tif 000002
【００１１】
本発明に係る抗酸化剤の有効成分として使用するグルコシルジオスミンの内、６−Ｃ−グルコシルジオスミンは、分子式Ｃ22Ｈ22Ｏ11（分子量：４６２）を有し、下記化２に示される構造式を有する化合物である（構造式名：ジオスミン−６−Ｃ−β−Ｄ−グルコピラノシド）。
【００１２】
【化２】
0004188433.tif 000003
【００１３】
これらのグルコシルジオスミンは柑橘類に存在し、特にレモンやライムに多く含まれ、オレンジ類の柑橘果実にも存在するが、該グルコシルジオスミンがすぐれた抗酸化特性を有することは従来全く知られておらず、新規な知見である。
【００１４】
本グルコシルジオスミンは、柑橘類、特にその果汁、果肉、果皮、果皮含有物、及び／又は搾り粕を原料とし、これを抽出して採取するものである。そして必要あれば、天然物化学において常用される各種精製処理（イオン交換樹脂、膜分画、吸着クロマトグラフィー、（高速）液体クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、親和クロマトグラフィー、その他のクロマトグラフィー、再結晶等の各処理）を単独で又は組み合わせて用いて、精製グルコシルジオスミンを得る。
【００１５】
本発明に係る抗酸化性物質グルコシルジオスミンは、水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒で抽出する。かかる水溶性溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の低級アルコール類、アセトン、ジメチルアセトンアミド、ジメチルホルムアミド等が挙げられる。
【００１６】
柑橘類としては、レモン、ライム、グレープフルーツ、ユズ、ネーブルオレンジ、バレンシアオレンジ、サワーオレンジ、はっさく、温州ミカン、アマナツ、キンカン、イヨカン、夏ミカン、ダイダイ、ブンタン、カボス、スダチ、ポンカンその他柑橘類が１種又は２種以上使用される。
【００１７】
本グルコシルジオスミンを製造するには、先ず柑橘類を上記したように水、有機溶媒、又はこれらの混合物で抽出する。抽出は室温〜高温で行う。次いで抽出物は、必要あれば（減圧）濃縮した後、上記したように樹脂処理、膜処理、クロマトグラフィー等の精製処理を行い、活性画分をそれぞれ集めて、凍結乾燥等によって乾燥処理して、本グルコシルジオスミンの精製粉末をそれぞれ得る。
【００１８】
このようにして得られた６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、６−Ｃ−グルコシルジオスミンの理化学的性質は、それぞれ、下記の表１、表２に示すとおりである。
【００１９】
【表１】
0004188433.tif 000004
【００２０】
【表２】
0004188433.tif 000005
【００２１】
本発明に係る抗酸化剤は、こ（れら）のグルコシルジオスミンを有効成分とするものであるが、グルコシルジオスミンとしては、精製物を使用できることはもちろんであるが、例えば飲食品等に添加使用する場合等、必らずしも精製物を使用する必要がない場合には、精製工程で得られる各種の粗製品も充分に使用することができる。グルコシルジオスミンは各々を単用してもよいし、両者を適当な比率で併用してもよいし、両者を含有する画分を直接使用してもよい。また、他の合成又は天然の抗酸化剤との併用も可能である。
【００２２】
本グルコシルジオスミンは、天然物由来の成分であり、既に食経験があるレモン、ライム等の柑橘果汁に数ｍｇ／１００ｍｌと多量に含まれており、生体への安全性は問題ない。Ｒｅｃ−ａｓｓａｙ法やＡｍｅｓ法による変異原性試験でも陰性であり、安全性を確認した。
【００２３】
本発明に係る抗酸化物質６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、又は、６−Ｃ−グルコシルジオスミンは、ジュース、炭酸飲料、スポーツドリンク、調味料、キャンディー、スープ等の飲料、食品に添加し、健康性飲料、食品とすることができる。その使用量は、従来の酸化防止剤と同様であって、従来法にならって添加使用すれば良く、この点も本発明の特徴のひとつである。
以下、本発明の実施例について述べる。
【００２４】
【実施例１】
レモン果皮１．５Ｋｇをホモジナイザーで粉砕し、５Ｌのメタノールに浸漬し、室温３日間放置した。その後、抽出液を濾過して濾液を得た。これを、エバポレーターで減圧濃縮して抽出液を得た。次に、２００ｍｌの水に溶かし、逆相樹脂カラム（４．０ｃｍ×５０ｃｍ、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ  ７５Ｃ１８−ＯＰＮ；（株）ナカライ  テスク）に供した。順次、１．５Ｌの水、２０％メタノール、４０％メタノール、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノールで溶出した。そこで、４０％メタノール溶出画分を減圧濃縮し、濃縮物を５ｍｌのメタノールに溶かした。これを、分取高速液体クロマトグラフィー（流速１０ｍｌ／ｍｉｎ、溶出溶媒４０％メタノール、検出波長２８０ｎｍ、カラム：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ２５０×２０ｍｍ、（株）ワイエムシイ）により、各ピークを分取することにより、６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、６−Ｃ−グルコシルジオスミンのピークを得、これを濃縮乾固した。純度を上げるには、再結晶化を行った。
【００２５】
【実施例２：リノール酸を用いた抗酸化力測定】
油脂の抗酸化度を調べるために、リノール酸を用いた抗酸化力測定を行った。それには、リノール酸の自動酸化で生じるヒドロペルオキシドをチオシアン酸で発色させるロダン鉄法を用いて、抗酸化物価を測定することにより行った。なお、コントロール（無添加）及び天然抗酸化剤であるα−トコフェロールについても抗酸化力測定を行った。
【００２６】
すなわち、リノール酸（和光純薬工業製）を特級エタノールに溶解し、１．３％濃度としたものを基質とした。この基質１０ｍｌに、サンプルを一定量添加し、５０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．０で全量を２５ｍｌとした液を、５０ｍｌ容共栓付き三角フラスコに移し、５０℃のインキュベーターに遮光保存した。１週間後にこの反応液１．０ｍｌを採取し、試験管に取り、７５％エタノール４．７ｍｌ、３０％チオシアン酸アンモニウム０．１ｍｌを添加した。次いで、０．０２Ｍ塩化第一鉄の３．５％塩酸溶液０．１ｍｌを加え、３分後、５００ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロール（無添加）の吸光値を１００％とし、過酸化度を算出した。結果を下記表３に示した。数値が低いほど抗酸化が高いと判断した。
【００２７】
【表３】
0004188433.tif 000006
【００２８】
【実施例３：リポソーム膜を用いた抗酸化力測定】
抗酸化剤の生体での抗酸化力を調べることを目的に、卵レシチンから擬似生体膜であるリポソーム膜を調製した。抗酸化力測定は、卵由来レシチンから調製したリポソーム膜を酸化誘導させ、これによって生じる過酸化物を定量測定することにより行った。なお、コントロール（無添加）及び天然抗酸化剤であるα−トコフェロールについても抗酸化力測定を行った。
【００２９】
すなわち、卵由来レシチン１００ｍｇを１０ｍｌの１０ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．４に溶かし、超音波洗浄機で処理した。次ぎに、カップホーンタイプの超音波破砕機で１２０Ｗ、２０分超音波処理を行いリポソーム膜溶液を調製した。反応系に終濃度が１ｍｇ／ｍｌリポソーム膜溶液、１ｍＭリン酸緩衝液ｐＨ７．４、２ｍＭ２，２′−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩になるように各試薬を添加し、３７℃で６時間インキュベートした。そして、生成された過酸化物のマロンジアルデヒド及びＭＤＡ様物質（ＴＢＡＲＳ）が酸性条件下でチオバルビツール酸と縮合して生成する赤色物質を、５３２ｎｍの吸光度を測定した。モル吸光係数を１．５６×１０5（Ｍ-1×ｃｍ-1）として、ＴＢＡＲＳ量を算出した。コントロール（無添加）のＴＢＡＲＳ量を１００％とし、過酸化度を算出した。結果を下記表４に示した。数値が低いほど抗酸化力が高いと判断した。
【００３０】
【表４】
0004188433.tif 000007
【００３１】
【実施例４：赤血球膜ゴーストを用いた抗酸化力測定】
抗酸化剤の生体での抗酸化力を調べることを目的に、ウサギ血液より実際の生体膜である赤血球膜ゴーストを調製し、これを酸化誘導させこれによって生じる過酸化物を定量測定することにより抗酸化力測定を行った。
【００３２】
すなわち、ウサギ血液から遠心分離をくり返すことにより、ウサギ赤血球膜ゴーストを調製した。反応系に終濃度１．０ｍｇ／ｍｌ蛋白質のウサギ赤血球膜ゴースト、０．３ｍＭ  ｔｅｒｔ−ブチルヒドロペルオキシド、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）、１５２ｍＭ塩化ナトリウムになるように各試薬を添加し、３７℃、３０分間インキュベートした。そして、生成された過酸化物のマロンジアルデヒド及びＭＤＡ様物質（ＴＢＡＲＳ）が酸性条件下でチオバルビツール酸と縮合して生成する赤色物質を、５３２ｎｍの吸光度を測定した。モル吸光係数を１．５６×１０5（Ｍ-1×ｃｍ-1）として、ＴＢＡＲＳ量を算出した。コントロール（無添加）のＴＢＡＲＳ量を１００％とし、過酸化度を算出した。結果を下記表５に示した。数値が低いほど抗酸化力が高いと判断した。
【００３３】
【表５】
0004188433.tif 000008
【００３４】
【実施例５】
濃縮グレープフルーツジュース１００ｇ、糖類１５０ｇ、蜂蜜１５ｇ、６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン１．５ｇ、香料適量に水を加えて１ｋｇとし、これを９５℃で２０分間殺菌し、１００ｍｌずつ無菌的にビンに充填して、グレープフルーツジュースドリンクを製造した。
【００３５】
【実施例６】
薬用ニンジンエキス２００ｇ、６−Ｃ−グルコシルジオスミン５ｇ、硝酸チアミン１０ｇ、ニコチン酸アミド２０ｇ、無水カフェイン５０ｇ、香料適量に脱イオン水を加えて全量を３０リットルとし、殺菌した後３０ｍｌずつ無菌的にビンに充填して、医薬品タイプの健康ドリンクを製造した。
【００３６】
【発明の効果】
本発明によれば、６，８−ジ−Ｃ−グルコシルジオスミン、又は、６−Ｃ−グルコシルジオスミンを有効成分とする抗酸化剤が提供される。こ（れら）のグルコシルジオスミンは、抗酸化作用にすぐれているだけでなく、天然物由来であるため、安全性にも問題がなく、飲料、食品、医薬品、化粧品、その他工業製品の抗酸化剤として広範に使用することができる。
【００３７】
また、最近は、天然抗酸化剤のビタミンＥ、β−カロチンや、緑茶中のカテキン類は、ラジカル補足能、活性酸素消去能から生体内での酸化防止効果があることが示されている。これは、高血圧防止効果や、心筋梗塞のような血管疾患、癌予防効果等があることが示されており、生活慣習病（成人病）予防食品の素材として注目されている。柑橘由来の抗酸化性を示す、本グルコシルジオスミンは、同様な効果が期待でき、これを利用した生活慣習病（成人病）予防食品、飲料としても利用することができ、本グルコシルジオスミンを添加した飲食品は、健康飲食品としても有利に利用することができる。