(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
1-(カルバゾール-4-イルオキシ)-3-[[2-(o-メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール及びその光学活性体、並びに薬理学的に許容されるそれらの塩からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むIFN-γ産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は医薬の発明に関するものであり、より具体的には、ウイルス性疾患の予防及び／又は治療に有用な医薬の発明に関する。
【従来の技術】
急性心筋炎は心筋の炎症性障害を伴う疾患であり、急性期から完全に回復した場合には予後は比較的良好であるものの、一部は炎症の増悪と軽快を繰り返して慢性化し、拡張型心筋症へと進行する。拡張型心筋症は発病から５年以内に約半数が死亡する難病であり、欧米における心臓移植患者の半数を占めている。従って、急性心筋炎を急性期から速やかに回復させ、慢性化や難治化を予防することが極めて重要である。
【０００２】
急性心筋炎の原因は必ずしも明らかではないが（原因不明の急性心筋炎を突発性心筋炎と呼ぶ場合がある）、急性期心筋炎および拡張型心筋症の心筋生検組織においてウイルス遺伝子の存在が報告されていることから、そのほとんどの症例にウイルス感染が関与していると考えられている（ウイルス感染が直接的又は間接的に証明された症例についてはウイルス性心筋炎と呼ぶ場合がある）。原因ウイルスの持続感染や反復感染が生じると、感染に伴う自己免疫機序を介して心筋炎が慢性化し、難治性の拡張型心筋症を発症する場合がある。従って、急性心筋炎の急性期には、心筋炎の炎症の治療とともに、慢性化や拡張型心筋症への難治化を予防するためにウイルス感染に対して十分な治療を行う必要性がある（拡張型心筋症及び心筋炎については、最新内科学大系、第32巻、「心筋症と心筋炎」、株式会社中山書店発行、pp.3-9、及びpp.347-351などを参照）。
【０００３】
急性心筋炎の治療については臨床および実験の両面から種々の検討がなされているが、現在のところ満足する成績は得られていない。例えば、炎症に対して対症療法的にステロイド剤が用いられているが、急性期においてはウイルス感染を増悪させる可能性があり、ステロイド剤自体の強い副作用が治療上問題になる場合もある。また、特異抗体を含む抗血清による治療やワクチンによる予防の有効性が実験的に確認されているが、原因ウイルスの特定が困難な臨床では実用的な手段とはいえない。広範囲な抗ウイルス・スペクトルを有する抗ウイルス剤の開発が期待されているが、未だ実用化には至っていない。
【０００４】
ウイルス性心筋炎マウスの心臓においてTNF-α、インターフェロン・ガンマ、インターロイキン-10 などのサイトカインが産生されることが知られている（塩井ら、厚生省特定疾患、突発性心筋症調査研究班、平成６年度研究報告集、pp.165-167, 1995) 。また、実験的には、インターフェロンを投与すると心筋病変が軽減するとともに心筋内のウイルスの量も減少することが確認されている。したがって、ウイルス増殖抑制作用を有するインターフェロンを外因的に投与することにより、ウイスル性心筋炎を治療できる可能性もある。しかしながら、インターフェロンはそれ自体が起炎作用などを有していることから、急性期の心筋炎の患者にインターフェロンを外因的に投与することは副作用の面から好ましいとはいえない。
【０００５】
このような理由から、急性心筋炎に関与するウイルス感染を軽減ないし根絶することによって、炎症に対する対症療法の効果を高めるとともに、心筋炎の難治化や慢性化を予防できる医薬の開発が切望されている。生体の有する内因的な機序でウイルス感染を排除できる医薬は、上記の目的のために特に有用であることが期待される。
【０００６】
一方、血管拡張作用及び血圧降下作用を有するカルバゾリル-(4)- オキシ- プロパノールアミン誘導体が知られれており、その作用はβ−遮断作用であることが明らかにされている（特公平1-23462 号公報）。また、その光学活性体が同様な作用を有することも知られている（特開昭59-222473 号公報）。これらのうち、代表的な化合物であるカルベジロール[(±)-1-（カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール］は、すでに高血圧や狭心症の治療薬として臨床上広く用いられている（製品名「アーチスト」、第一製薬製造及び販売）。
【０００７】
β−受容体とサイトカイン産生との関係については、サルブタモールなどのβ−アゴニストが、植物性赤血球凝集素 (phytohemagglutinin) 刺激末梢血単核球のインターフェロン・ガンマの産生を阻害することが報告されている (Coquert, O., et al., Clin. Exp. Allergy, 25, pp.304-311, 1995)。しかしながら、β−ブロッカー（β−遮断剤）とサイトカイン産生との関係については従来明らかにされていない。上記のカルベジロールなどカルバゾリル-(4)- オキシ- プロパノールアミン誘導体（特公平1-23462 号公報）についても、インターフェロン産生との関連を示唆ないし教示する報告は従来全くない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、ウイルス感染症の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することにある。より具体的には、生体の有する内因的な機序でウイルス感染を排除できるウイルス感染症の予防及び／又は治療剤を提供することが本発明の課題である。好ましくは、ウイルス感染が関与する急性心筋炎の予防及び／又は治療に有用な医薬を提供することが本発明の課題であり、急性心筋炎の治療を可能にするとともに、急性心筋炎の難治化及び慢性化を予防できる医薬を提供することが本発明の課題である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意検討した結果、エンセファロミオカルヂチス (Encephalomyocarditis: EMC)ウイルスを接種した心筋炎マウスに (±)-1-（カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノールを投与すると、心臓におけるインターフェロン・ガンマ（以下、本明細書において「IFN-γ」と略する場合がある。）の産生量が増加するとともに、それに伴って心臓におけるウイルス力価が低下することを見出した。本発明者らはさらに研究を進め、上記化合物が生体内でIFN-γの産生を促進する作用を有しており、このIFN-γ産生促進作用に基づいて上記化合物がウイルス感染を排除する作用を有することを見いだした。本発明は上記の知見を基にして完成されたものである。
【００１０】
すなわち本発明は、 1-(カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール及びその光学活性体、並びに薬理学的に許容されるそれらの塩からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むウイルス性疾患の予防及び／又は治療剤を提供するものである。この発明の好ましい態様によれば、ウイルス感染が関与する心筋炎に適用する上記予防及び／又は治療剤；心筋炎が急性心筋炎である上記予防及び／又は治療剤；急性心筋炎の難治化及び／又は慢性化の予防に用いる上記予防及び／又は治療剤；並びに、生体内でのIFN-γ産生促進作用に基づくウイルス感染排除作用を有する上記予防及び／又は治療剤が提供される。
【００１１】
また、本発明の別の態様によれば、 1-(カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール及びその光学活性体、並びに薬理学的に許容されるそれらの塩からなる群から選ばれる物質を有効成分として含むIFN-γ産生促進剤が提供される。さらに本発明の別の態様によれば、上記のウイルス性疾患の予防及び／又は治療剤の製造のための上記物質の使用；上記のIFN-γ産生促進剤の製造のための上記物質の使用；並びに、ウイルス感染が関与する急性心筋炎の治療方法、又はウイルス感染が関与する急性心筋炎の進行の予防方法であって、 1-(カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール及びその光学活性体、並びに薬理学的に許容されるそれらの塩からなる群から選ばれる物質をヒトを含む哺乳類に投与する工程を含む方法が提供される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の医薬の有効成分として用いられる 1-(カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール及びその光学活性体、並びに薬理学的に許容されるそれらの塩からなる群から選ばれる物質は公知であり、当業者に容易に入手可能である。例えば、特公平1-23462 号公報の実施例の例２には上記化合物のラセミ体の製造方法が具体的に開示されており、特開昭59-222473 号公報には、その光学活性体が具体的に開示されている。また、これらの化合物の薬理学的に許容される塩については、特公平1-23462 号公報及び特開昭59-222473 号公報に具体的に開示されている。本発明の医薬の有効成分としては、上記化合物のラセミ体、光学的に純粋な形態の光学活性体、光学活性体の任意の混合物、これらの化合物の生理学的に許容される任意の塩のいずれか１種、又は２種以上を用いることができる。また、これらの物質の任意の水和物又は溶媒和物を用いてもさしつかえない。
【００１３】
本発明の医薬は、生体内でIFN-γの産生を促進する作用を有しており、該IFN-γ産生促進作用に基づいてウイルス感染を排除する作用を有するという特徴がある。従って、本発明の医薬は、各種のウイルスによる感染が関与するウイルス性疾患の予防及び／又は治療に有用である。本発明の医薬は、ヒトを含む哺乳類動物の上記疾患の予防及び／又は治療に用いることができる。
【００１４】
本発明の医薬の適用対象となるウイルス性疾患としては、例えば、DNA ウイルス又はRNA ウイルスのいずれかに属する病原性ウイルスの１種又は２種以上の感染に起因するウイルス性疾患を挙げることができる。病原性ウイルスとしては、例えば、ポックスウイルス、ヘルペスウイスル、アデノウイルス、パルボウイルスなどのDNA ウイルス；又は、レオウイルス、トガウイルス、コロナウイルス、ラブドウイルス、パラミクソウイルス、オルトミクソウイルス、ブンヤウイルス、アレナウイルス、レトロウイルス、ピコルナウイルス、カリシウイルスなどのRNA ウイルスを挙げることができるが、本発明の医薬の適用対象となるウイルスはこれらのウイルスに限定されることはない。
【００１５】
本発明の医薬の適用対象となるウイルス性疾患としては、例えば、ウイルス性肝炎 (A, B, C,若しくは E型など）、インフルエンザ、ウイルス性肺炎、ウイルス性気管支炎、ヘルペス感染症［単純ウイルス、EBウイルス（伝染性単核症）、若しくは帯状疱疹］、ポリオ、AIDA (HIV 感染症）、成人Ｔ細胞白血病 (ATL)、パピローマ、麻疹、風疹、突発性発疹、伝染性紅斑、ウイルス脳炎、ウイルス性髄膜炎、サイトメガロウイルス感染症、流行性耳下腺炎、水痘、狂犬病、ウイルス性腸炎、ウイルス性心筋炎、又はウイルス性心膜炎などを挙げることができるが、本発明の医薬の適用対象はこれらのウイルス性疾患に限定されることはない。また、ウイルス感染を伴う臓器や組織の種類も限定されることはなく、例えば、心臓、肝臓、腎臓、膵臓、脳、肺、血液などのいずれであってもよい。
【００１６】
急性心筋炎などの心筋炎のほとんどの症例にウイルス感染が関与していることが示唆されているので、急性心筋炎などの心筋炎は本発明の医薬の好適な適用対象である。心筋炎の個々の症例において病原性ウイルスによる感染が直接的又は間接的に証明されない場合においても、心筋炎に本発明の医薬を適用してもさしつかえないが、ウイルス感染の関与が直接的又は間接的に証明された心筋炎に対して本発明の医薬を適用することが好ましい。ウイルス感染を直接証明するには、例えば心臓組織の生検を行えばよく、間接的な証明は、例えば血中のウイルス抗体価を測定することにより行われる。本発明の医薬を適用することにより、突発性心筋炎を含む急性心筋炎における心筋のウイルス感染を速やかに排除することができ、急性心筋炎の原因を排除することが可能になる。また、ウイルス感染を排除することにより、急性心筋炎の慢性化や難治性の拡張型心筋症への進行の予防が可能になる。
【００１７】
本発明の医薬としては、上記の物質それ自体を用いてもよいが、通常は、当業者に利用可能な製剤用添加物を用いて上記の物質を有効成分として含む医薬組成物を製造して用いることが好ましい。薬理学的及び製剤学的に許容しうる製剤用添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊剤ないし崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、コーテイング剤、色素、希釈剤、基剤、溶解剤ないし溶解補助剤、等張化剤、ｐＨ調節剤、安定化剤、噴霧剤、又は粘着剤などを用いることができる。経口投与に適する製剤としては、例えば、錠剤、カプセル剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、またはシロップ剤などを挙げることができる。また、非経口投与に適する製剤としては、例えば、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経粘膜吸収剤、経皮吸収剤、点鼻剤、点耳剤、又は貼付剤などを挙げることができる。
【００１８】
経口投与、あるいは経皮または経粘膜投与に適する製剤には、薬理学的及び製剤学的に許容しうる製剤用添加物として、例えば、ブドウ糖などの賦形剤；カルボキシメチルセルロースなどの崩壊剤ないし崩壊補助剤；ヒドロキシメチルセルロースなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのコーテイング剤；ワセリンなどの基剤を用いることができる。また、製剤用添加物として、例えば、圧縮ガスなどの噴霧剤；ポリアクリル酸ナトリウムなどの粘着剤；木綿などの基布を用いてもよい。注射又は点滴用に適する製剤には、製剤用添加物として、注射用蒸留水などの水性媒体；用時溶解型注射剤を構成しうる溶解剤ないし溶解補助剤；ブドウ糖などの等張化剤；無機酸、有機酸、無機塩基、又は有機塩基などのpH調節剤を用いることができる。
【００１９】
本発明の医薬の特に好適な有効成分であるカルベジロール[(±)-1-（カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール］を含む製剤が、すでに高血圧や狭心症の医療用医薬品として臨床上広く用いられている（製品名「アーチスト」、第一製薬製造及び販売）。従って、本発明の医薬として上記の製剤をそのまま用いてもよい。本発明の医薬の投与量は対象となる疾患の種類、患者の症状や年齢、予防や治療の目的など種々の条件に応じて適宜増減されるべきであり、その量は当業者がこれらの因子を考慮して適宜選択できる。なお、本発明の医薬の好ましい有効成分であるカルベジロールは、すでに臨床で用いられているとおり高い安全性が確認されている。
【００２０】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されることはない。実施例中、本発明の医薬としてカルベジロール[(±)-1-（カルバゾール-4- イルオキシ)-3-[[2-(o- メトキシフェノキシ）エチル］アミノ]-2-プロパノール] を用い、同様にβ受容体遮断作用を有する化合物として知られているメトプロロール［ 1-[イソプロピルアミノ]-3-[p-(β- メトキシエチル）フェノキシ]-2-プロパノール・酒石酸塩］と比較した。
【００２１】
例１：ウイルス性心筋炎マウスにおけるカルベジロールの心臓でのIFN-γ産生促進効果
カルベジロール（第一製薬株式会社製）又はメトプロロール(Sigma Chemical Co. 製) は 1% メチルセルロースを含むリン酸緩衝化生理食塩液(PBS) に溶解して使用した。接種用EMC ウイルスとしてＭ変種 (American Type Culture Collectionより入手) を用い、イーグルMEM 培地（EMEM: 日水製薬株式会社製）で 100 pfu/ml に濃度調整して使用した (pfu:プラーク形成単位）。４週齢のDBA/2 雄性マウスを３群に分け、EMC ウイルス 0.1 ml (10 pfu/匹）を腹腔内接種した。接種当日より各群について以下の条件で被験化合物を連日経口投与し、７日目に生存していたマウスより心臓を摘出し、PBS で脱血して洗浄後、心臓の重量を測定した。
試験群：カルベジロールを 10 mg/kg 体重
比較群：メトプロロールを 30 mg/kg 体重
対照群：PBS
【００２２】
摘出した心臓に1 mlのPBS を加えた後、超音波破砕機 (ASTRASON社製) を用いて 20 秒間ホモゲナイズした。心臓の全容量を測定した後、全量のホモゲネートを４℃で20分間遠心し(14,000 ×rpm, 10,000 g)、上清を分離して試料とした。ウイルス性心筋炎マウスはMatsumori らの方法 (Matsumori, A. and Kawai, C., Circulation, 66, pp.355-360, 1982) に従って作製した。試料の調製方法は Sekido らの方法 (Sekido, N., et al., Nature, 365, pp.654-657, 1993)と Torre-Amione らの方法 (Torre-Amione, G., et al., Circulation, 93, pp.704-711, 1996)に記載された方法を一部改変して用いた。IFN-γの測定は INTERTESTTM -γ・マウスインターフェロン−γ ELISAキット（Genzyme 製）により行い、IFN-γの量は心臓 mg 当たりで表示した。統計学的処理はボーンフェローニの多重比較法による分散分析 (ANOVA)法で行ない、p ＜0.05を統計学的に有意差ありと判定した。最終的に各群とも９匹を検定に供した。
【００２３】
比較群と対照群との間には心臓 mg 当たりのIFN-γ量に差を認めなかったが、試験群は対照群に比べて有意にIFN-γ量が多く、また、比較群と比べても有意にIFN-γ量が多く、カルベジロールのIFN-γ産生促進効果が確認された。結果を表１に示す。
【表１】
0004126345.tif 000002
【００２４】
例２：ウイルス性心筋炎マウスにおけるカルベジロールによるウイルス感染の排除効果
試験化合物、比較化合物、及び接種用EMC ウイルスは例１の方法に従って調製して用いた。４週齢のDBA/2 雄性マウスを３群に分け、EMC ウイルス 0.1 ml (10 pfu/匹）を腹腔内接種した。接種当日より各群について以下の条件で被験化合物を連日経口投与し、７日目に生存していたマウスより無菌的に心臓を摘出し、滅菌したPBS で脱血して洗浄後、心臓の重量を測定した。
試験群：カルベジロールを 10 mg/kg 体重
比較群：メトプロロールを 30 mg/kg 体重
対照群：PBS
【００２５】
摘出した心臓の重量 (1 mg) あたり 1 ml の滅菌したPBS を加えた後、超音波破砕機 (ASTRASON社製) を用いて 2分間ホモゲナイズした。心臓の全容量を測定した後、全量のホモゲネートを４℃で15分間遠心し(1,500×g, 5,000 rpm) 、上清を分離して試料とした。ウイルス力価の測定方法としては EL-プラークアッセイ法 (Matsumori, A., et al., Circulation, 71, pp.834-839, 1985) により行った。６ウェルプレート中（コーニング社製）でFL細胞（ヒト羊膜細胞）を10% の牛胎児血清(FCS) を含む 4 ml のEMEMとともに 5% CO2 の存在下に37℃で飽和密度まで培養して単層に成育させた。その後、FL細胞が単層に生育したウェルをPBS で３回洗浄した。このウェルに 1 ml の希釈した試料を加えてときどき振とうしながら１時間インキュベートした。さらに 2% FCS と 1% メチルセルロースとを含む 4 ml のEMEMを加え、 5% CO2 の存在下に37℃で30時間インキュベートした。
【００２６】
インキュベートの終了後、酸性エチルアルコールを加えて固定化し、さらに、クリスタル−バイオレットにより染色してプラークを計数した。計数を二度行って平均を測定値とし、 Log pfu/mg 心臓でウイルス力価を表示した。統計学的処理はクラスカル−ウオーリス試験で行った。p ＜0.05を統計学的に有意差ありとした。最終的に試験群12匹、比較群17匹、対照群18匹を比較匹数とした。比較群と対照群との間には、心臓 mg 当たりのウイルス力価の差を認めなかったが、試験群は対照群に対して有意にウイルス力価が減少しており、また、比較群に対しても同様に有意にウイルス力価が減少しており、本発明化合物のウイルス感染排除効果が確認された。結果を表２に示した。
【００２７】
【表２】
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【００２８】
【発明の効果】
本発明の医薬は、生体内でIFN-γの産生を促進する作用を有しており、このIFN-γ産生促進作用に基づいてウイルス感染を排除する作用を有している。従って、本発明の医薬はウイルス性疾患の予防及び／又は治療に有用であり、例えば、ウイルス感染が関与する急性心筋炎の原因を確実に排除でき、急性心筋炎を有効に治療することが可能になる。