(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンプトテシンを含む喜樹類からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、
抽出液を濃縮した液に石油系炭化水素を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる溶解析出工程と、
析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、
吸着媒に吸着させたカンプトテシンをトルエン又はメタノールのいずれか、又はトルエンとメタノールの混合液を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、
を含むカンプトテシンの製造方法。
【請求項２】
抽出工程において、メタノール又は含水メタノールを用いてカンプトテシンを抽出する請求項１に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項３】
更に、得られたカンプトテシンを再結晶により精製する精製工程を含む請求項１又は２に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項４】
吸着媒が、セライト又はシリカゲル、又はその混合物である請求項１から３のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項５】
更に、活性炭を用いてろ過するろ過工程を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項６】
トルエンとメタノールの混合液に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、１：９から８：２である請求項１から５のいずれかに記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項７】
トルエンとメタノールの混合液に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、２：８から５：５である請求項１から５のいずれかに記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項８】
石油系炭化水素が、トルエンである請求項１から７のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、癌の治療に有用な医薬品の原料となるカンプトテシンを、これを含有する植物原料から効果的に抽出精製する方法及びこれによるカンプトテシンの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
１９６６年にウオール（Ｗａｌｌ）らによって、喜樹から下記式１で表されるカンプトテシンが単離された[M. E. Wall, M. C. Wani, C. E. Cook, K. H. Palmer, A. T. McPhail, and G. A. Sim, J. Am. Chem. Soc., 94, 388 (1966)]。その後、カンプトテシンは、米国のNational Cancer Institute（国立癌研究所）において制癌効果のある薬物として薬理研究が行われた。
【０００３】
【化１】
0004136355.tif 000002
【０００４】
カンプトテシンは、抗腫瘍活性、すなわちＤＮＡ関連酵素阻害メカニズム（ＤＮＡトポイソメラーゼのＩ型を阻害するメカニズム）を有する事が発見され、新制癌剤への応用の期待が高まった。しかしながら、カンプトテシンは、高い骨髄抑制という毒性を有していた。
その後、カンプトテシンは化学修飾が加えられ、毒性が低減された。1994年1月には、カンプトテシン誘導体である下記式２で表されるＣＰＴ−１１（塩酸イリノテカン）が臨床試験を経て旧厚生省より認可を受けた。このようにして、カンプトテシン誘導体は日本で医薬品として認められることとなった。
【０００５】
【化２】
0004136355.tif 000003
【０００６】
癌治療に有用な塩酸イリノテカンの原料となるカンプトテシンは、世界の亜熱帯圏に広く分布する数種類の植物に含まれており、これら植物原料から抽出することにより製造されている。又、カンプトテシンは、化学合成によっても製造されている（例えば、米国特許４，８９４，４５６号等）。
【０００７】
カンプトテシンを喜樹類等の植物原料から製造する場合、植物原料からカンプトテシンを抽出し、できるだけ純度の高いカンプトテシンを収率良く得る必要がある。しかしながら、喜樹類の成木の幹部分におけるカンプトテシンの含有量は、カンプトテシンを含有する他の植物であるクサミズキの成木の幹部分の場合と比べた場合、明かに低い。
従来、カンプトテシン抽出用に伐採された植物原料は殆どがクサミズキの成木の幹部分であり、そこに含まれる樹脂等の不純物の量は少なかった。近年、環境保全の観点から、植物原料の栽培も行われるようになり、若年木も抽出に供されるようになってきた。若年の植物原料は皮部分が厚く、葉緑素を多く含むとともに、樹脂が多量に含まれる。
一方、喜樹の実または幼葉はカンプトテシンの含有量が高く、これを原料とすれば、クサミズキと同程度の収量が期待できる。しかしながら、喜樹の実は、クサミズキの成木の幹部分と比べると樹脂分が多く、喜樹の葉は葉緑素を多く含む。したがって、このような植物原料を用いてカンプトテシンを抽出した場合、葉緑素や樹脂が不純物として混入する割合が多くなり、これらをカンプトテシンから取り除くのが困難であり、その結果、クサミズキの成木の幹部分を用いて抽出した場合と同程度のカンプトテシンの純度及び収量を達成することが難しいという問題があった。
【０００８】
カンプトテシンを植物原料から抽出する方法としては、カンプトテシンを含有する植物（例えば、クサミズキなど）からメタノール等の水溶性溶媒を用いて抽出する方法や、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【０００９】
さらに、カンプトテシンは、一般の有機溶媒にとけにくい性質を有するためカンプトテシンをジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤に溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
例えば、喜樹の実からメタノールを用いてカンプトテシンを抽出した場合、一定のカンプトテシン濃度をもった抽出液を得ることができる。しかしながら、メタノールを用いた抽出工程だけでは高純度のカンプトテシンを単離することができないという問題があった。
また、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させた場合、カンプトテシンはアルカリ溶液に容易に溶解するが、カンプトテシンのラクトン環が開裂するといった問題があった。
また、ジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤を用いれば、メタノール抽出液のカンプトテシン吸着媒から目的とするカンプトテシンを効率よく抽出する事が可能であるが、葉緑素や樹脂等を同時に溶解し抽出してしまう為、その後の分離精製が困難であるという問題があった。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、以下の発明によって解決される。
すなわち、
（１）カンプトテシンを含む喜樹類からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、抽出されたカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる溶解析出工程と、析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、を含むカンプトテシンの製造方法、
（２）抽出工程において、メタノール又は含水メタノールを用いてカンプトテシンを抽出する（１）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（３）更に、得られたカンプトテシンを再結晶により精製する精製工程を含む（１）又は（２）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（４）第１の非水溶性溶媒がトルエンである（１）から（３）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（５）吸着媒が、セライト又はシリカゲル、又はその混合物である（１）から（４）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（６）更に、活性炭を用いてろ過するろ過工程を含む、（１）から（５）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（７）第２の非水溶性溶媒が、トルエンまたは、メタノールのいずれか又は両方を含む液である（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（８）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、１：９から８：２である（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（９）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、２：８から５：５である（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１０）第１の非水溶性溶媒が、石油系炭化水素である（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１１）第１の非水溶性溶媒が、トルエンである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１２）第２の非水溶性溶媒が、ハロゲン化アルキルである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１３）第２の非水溶性溶媒が、メチレンクロライドである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１４）カンプトテシンを含む喜樹類から非水溶性溶媒を用いてカンプトテシンを抽出する工程を含むカンプトテシンの製造方法、
によって解決される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の実施態様のひとつであるカンプトテシンの製造方法のひとつは、原料を破砕した後、カンプトテシンを含む喜樹類からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、抽出されたカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる溶解析出工程と、析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解、抽出し、これを濃縮して粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、当該工程により得られた粗カンプトテシンを再結晶することにより精製するカンプトテシン精製工程とを含む。
【００１３】
［カンプトテシンの原料］
カンプトテシンの原料としては、例えば、喜樹類(Camptotheca acuminata, Nyssaceae又は、Camptotheca acuminata Decne, Nyssaceae)等のカンプトテシンを含む植物が挙げられるが、カンプトテシンを含むものであれば限定されない。本明細書において、喜樹類には、カンレンボクやキジュのいずれか又はそれらの両方を意味する場合がある。カンプトテシンを抽出する植物原料としては、生育の早い喜樹類が好ましく、更に、元の木を残して収穫可能な喜樹類の実、小枝及び葉の生の状態又は乾燥した状態のいずれかが特に好ましい。
【００１４】
本発明は、カンプトテシンを含む植物原料のうちでも乾燥した喜樹類の実からカンプトテシンを製造する場合に特に好適に用いられる。例えば、本発明は、成長した喜樹が開花した後、形成され成熟した実などは勿論のこと、発芽してから１年程度の幼木の全てからカンプトテシンを抽出するのに好適に用いることができる。成熟した喜樹類の実、又は、喜樹類の幼木の小枝及び葉は、樹脂や葉緑素を比較的多く含んでいるが、このような場合に本発明は特に有効に用いられるのである。
【００１５】
カンプトテシンは、カンプトテシンの塩として製造されてもよい。カンプトテシンの塩としては、カンプトテシンのナトリウム塩、カリウム塩やカンプトテシンのテトラアルキルアンモニウム塩が含まれる（例えば、特許１８８８４０４号）。
【００１６】
原料を伐採し、そのままカンプトテシンを抽出してもよいが、抽出効率を上げるため、原料は細かく破砕されていることが好ましい。
【００１７】
例えば、破砕された原料は、溶液中でカンプトテシンが抽出される。この際に用いられる溶液としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、クメンなどの芳香族炭化水素類、フェノール、ベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチレンクロライドなどのハロゲン化アルキルが挙げられるが、カンプトテシンを溶解するものであれば限定されない。当該溶液としてトルエンやメチレンクロライドなどの非水溶性溶媒を用いてもよい。これらは、単独で用いられてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。これらのうちで、メタノール、トルエン、メチレンクロライドが入手容易であり、しかもカンプトテシンをよく溶解するため好ましい。原料からカンプトテシンを抽出する際は、不純物が比較的多く含まれるため、入手容易かつ安価なメタノールが特に好ましい。
【００１８】
トルエンは、常温において、カンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液に投入することによってカンプトテシンを析出させ、これをセライトに吸着させる働きがある。反対に、メタノールと混合した沸騰状態でのトルエンはカンプトテシンが吸着したセライトからカンプトテシン溶解し分離する働きがある。
トルエンは、常温で単独で使用した場合は、葉緑素及び樹脂を溶解したままカンプトテシンを析出させるためカンプトテシンの分離に好ましく用いられ、メタノールとトルエンの混合溶媒はその沸点においてカンプトテシンを極めて良く溶解するので、カンプトテシンの抽出又は再結晶の溶解に好ましく用いられる。
一方、メチレンクロライドは常温においてもカンプトテシンを溶解するので、トルエンの場合の様に、メチレンクロライドを用いてカンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液からカンプトテシンを析出させることはできない。
【００１９】
表１に、トルエン、キシレン、ヘキサン、メチレンクロライドの樹脂溶解性、それぞれに対するカンプトテシン（ＣＰＴ）溶解度、それぞれのメタノールとの混合能、およびそれぞれの沸点を示す。表１から、メタノール以外の溶液としては、トルエンとメチレンクロライドが好ましいことがわかる。さらに、メチレンクロライドは、樹脂を溶解させずに、カンプトテシンを溶解するという優れた効果を有することがわかる。
【００２０】
【表１】
0004136355.tif 000004
【００２１】
原料からカンプトテシンを抽出する際の温度としては、抽出に用いられる溶液にもよるが、例えばメタノールを用いた場合は、１０℃から６０℃が好ましく、３０℃から５５℃であれば更に好ましい。その理由は、低温で抽出を行うとカンプトテシンの溶解量がすくなく、高温で行うと、樹脂等のカンプトテシン以外の不純物を多く抽出する。
更に、植物原料に予め水分を持たせることにより、結果的に抽出工程におけるメタノールの含水量が１０から３０容量％の範囲内にあるのが好ましい。
【００２２】
原料からカンプトテシンを抽出した後、これをろ過することが好ましい。ろ液にはカンプトテシンが溶解している。この際、ろ過ケークにもカンプトテシンが残されているので、ろ過ケークから再度カンプトテシンを抽出し、ろ液を集めることも本発明の好ましい実施の態様である。
【００２３】
カンプトテシン抽出液は、液温を高める、減圧するなどして溶媒を蒸発させ、カンプトテシンの濃度を上昇させることが好ましい。カンプトテシンの濃度が高まると、カンプトテシンの微細結晶が析出してくる。同時に葉緑素及び樹脂も析出してくるので、その際に、カンプトテシンは溶解せず、葉緑素及び樹脂を溶解する石油系炭化水素を投入するのが良い。
この目的には、ノルマルヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン等の非水溶性溶媒が使用できるが、沸点、作業環境の問題、更にその後の工程での使用を考えると、トルエンが好ましい。トルエンの投入により、その後、吸着媒を混入することによって、カンプトテシンを吸着媒に選択的に吸着させることが可能となる。
この場合、メチレンクロライド等のハロゲン化アルキルはトルエンと同様に非水溶性溶媒ではあるが、常温でカンプトテシンを溶解するので、カンプトテシンを析出させる溶媒としては必ずしも適さない。
【００２４】
カンプトテシンの抽出液に混入される吸着媒としては、カンプトテシンを選択的に吸着するものが好ましく、例えば、シリカゲル、活性炭、活性白土、ゼオライト、吸着クロマトグラフィー、セライトを好適に用いることができるが、カンプトテシンを吸着することができるものであれば限定されない。これらのなかでも、セライトは特に好ましい吸着媒である。
【００２５】
吸着媒に吸着したカンプトテシンは、吸着媒ごと非水溶性溶媒に入れることにより再び溶液中に溶出する。吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる非水溶性溶媒としては、カンプトテシンを溶出することができる溶液であれば限定されず、先に掲げた溶液を用いることができる。これらの中では、メチレンクロライド、沸騰時のトルエン、及びこれらとメタノールの混合溶液を好適に用いることができる。
【００２６】
［吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液］
特に若い時期に伐採したクサミズキは、樹脂の含有量が多く、メタノールのみを用いてカンプトテシンを抽出した場合、当該樹脂が多く溶解するため、得られるカンプトテシンの純度が低くなる。このため吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる第２の非水溶性溶媒としては、メタノール単独だけではなく、メチレンクロライド及び／又は沸騰時のトルエン並びにこれらとメタノールの混同溶液が好適に用いられるのである。ただし、メチレンクロライドは、いわゆる環境ホルモンとして特定され、その排水中の規制限度値は０．２ｍｇ／Ｌ以下という厳しい規定が設けられている。このため、メチレンクロライドを用いると、特別な廃液処理を施さなくてはならないため必ずしも低コストが実現できない。したがって、沸騰時のトルエン又は沸騰時のトルエンとメタノールの混合溶液が、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として最も好ましい。
【００２７】
トルエンはメタノールと任意の割合で溶解し、トルエン自体又はメタノール自体とは異なった性質を示す。特に、カンプトテシンを溶解する能力はそれぞれ単独の場合と、混合した場合とで顕著に変化する。表２に、２０℃(実線)と７０℃(破線)における、トルエンとメタノールの重量比と溶解するカンプトテシン（ＣＰＴ）の量を示す。
【００２８】
【表２】
0004136355.tif 000005
【００２９】
表２に示すとおり、カンプトテシンの溶解度はメタノールとトルエンの混合の比率によって、大きく変化するが、メタノールとトルエンの混合液に含まれるメタノールの量は、特に限定されるものではなく、メタノール対トルエンの容積割合としては、１：９から８：２であることが好ましく、２：８から５：５であれば更に好ましく、３：７であれば特に好ましい。メタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合液では、常温（２０℃）と沸騰時（７０℃）とでカンプトテシンの溶解度に、２倍の差がある。例えば、この系の７０℃におけるカンプトテシン溶解度は、メチレンクロライドを用いた場合よりも高い。すなわち、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として、沸騰時のトルエンとメタノールの混合液が特に好ましいことがわかる。
【００３０】
吸着媒に吸着したカンプトテシンをメタノールとトルエンの混合液で溶出させた後は、ろ過を施し、放置冷却や撹拌冷却することによりカンプトテシンを晶析させることが好ましい。ろ液中のメタノールを蒸発させ、ろ液を濃縮した後にカンプトテシンを晶析させることは本発明の好ましい実施の態様である。この場合のメタノール濃縮割合は、メタノール対トルエンの容積割合が１：９程度とすることが好ましい。
このようにして得られた粗カンプトテシンとしては、カンプトテシン含有量が８５重量％以上のものであることが好ましい。カンプトテシン含有量が、８５重量％より少なければ、その後の再結晶による工程で結晶を精製しても好ましいカンプトテシンを製造することが困難になるからである。
【００３１】
［精製（再結晶）工程］
得られた粗カンプトテシンは、例えば再結晶を施すことによって精製されることが好ましい。再結晶に用いられる溶液としては、カンプトテシンを溶解し、温度によってカンプトテシンの溶解量が変化するものであれば限定されない。熱時にはカンプトテシンを良く溶解し、冷時はカンプトテンシンを析出させるが、樹脂や不純物は依然として溶解している溶媒組成が特に好ましい。このような観点から、再結晶に用いられる溶液としては、メタノールとトルエンの混合溶液が好ましい。
【００３２】
粗カンプトテシンに含まれる不純物のうち、樹脂は常温のトルエンで溶解される。しかしながら、カンプトテシン類縁化合物は、常温のトルエンに溶解しにくい。一方、これらカンプトテシン類縁化合物はメタノールとトルエンの混合溶液には溶解する。樹脂やカンプトテシン類縁化合物を除去するためには、樹脂やカンプトテシン類縁化合物を、好ましくはメタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合溶液に、カンプトテシンとともに熱時溶解させた後、ろ過して得たろ過液を濃縮し、メタノールを溜去してカンプトテシンを析出させ分離するが、その際に、ある程度のメタノールが残っており、樹脂及びカンプトテシン類縁化合物が溶液に溶解した状態であることが望ましい。
【００３３】
カンプトテシン類縁化合物はその種類によるが、常温において、カンプトテシンのように限定された割合でのメタノールとトルエンの混合液ではなく、メタノール又はトルエン単独の溶液に近い割合の場合に比較的よく溶解する。したがって、カンプトテシン類縁化合物を除去しつつ、カンプトテシンの回収率を上げるためには、表２からわかるように、カンプトテシン析出時の溶液ができるだけメタノール又はトルエン単独の溶媒に近い状態となっていることが好ましい。メタノール又はトルエンは沸点や溶解する物質の量が異なっているので、これらの混合比を蒸発等で制御することによって、効果的にカンプトテシンを回収することができる。
【００３４】
カンプトテシンを析出する際に含まれるべきメタノールの量は、粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の種類と量に比例すると考えられる。例えば、喜樹類を原料植物とする粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の量がx重量％のときには、カンプトテシン析出終了時のトルエンとメタノール溶液中のトルエンの量としては、ｘ重量％から１０ｘ重量％が好ましく、２ｘ重量％から５x重量％であればより好ましく、２．５x重量％から４x重量％であれば更に好ましい。このように、最終濃縮液に含まれるトルエンの割合を制御することによって、カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の含有量を低下させることができる。
【００３５】
なお、粗カンプトテシンに含まれる他の不純物としては、糖質がある。糖質はトルエンに比較的溶解しにくいため、粗カンプトテシンに糖質が多量に含まれている場合等は、再結晶における粗カンプトテシン溶解時等において、これらの不純物を吸着する吸着媒を再結晶工程の熱時溶解溶液に添加すればよい。このような吸着媒としては、活性炭が好ましい。
【００３６】
再結晶工程及び／又はろ過工程が繰り返し行われることは、本発明の好ましい別の実施態様である。このように再結晶工程及び／又はろ過工程を繰り返すことで、精製されるカンプトテシンの純度が高まりより好ましいカンプトテシン結晶を得ることが可能となる。
【００３７】
【実施例】
以下実施例をあげて本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されない。
【００３８】
【実施例１】
（工程１）
発芽後、１年６ヶ月程度生育した喜樹の枝付きの葉を7日間影干しした原料を２〜３mmφのスクリーンを装着した破砕機で破砕し、得られた水分が１７％の５０Ｋｇの破砕物をステンレス製８００L抽出機に投入し、９９％以上のメタノール５００Ｌを投入し、５０℃に加温しつつ６時間抽出を行った。 得られたメタノール抽出液をろ過し、１次抽出液を分離した。分離後の残さに、新たに９９％以上のメタノールを１００Ｌ投入し２次抽出液を得た。全てのメタノール抽出液を、５０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下で濃縮した。この濃縮液に１Ｋｇのセライトを加え、更に１Ｌのトルエンを投入し、３０分間攪拌したのち、減圧濾過してカンプトテシンが吸着したセライトを分離した。
【００３９】
（工程２）
上記工程１で得られたカンプトテシンが吸着したセライトを、ガラス製コンデンサーを付けた３００Ｌのグラスライニング製加熱攪拌機に予め１００Ｌのメチレンクロライドを投入した中に投入し、攪拌しながら加熱した。１時間後、加圧ろ過し、抽出液からセライトを分離し、得られた抽出液を５０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下で濃縮した後、２０℃にまで冷却し、析出した粗カンプトテシンをろ過し、１Ｌのメチレンクロライドで洗浄した。洗浄した粗カンプトテシンを６時間減圧乾燥し、メチレンクロライドを蒸発させ、カンプトテシン含量８５ %以上の粗カンプトテシンを３１．９ｇを得た。
【００４０】
（工程３）
１０Ｌガラス製の攪拌溶解機にメチレンクロライドとメタノール混合液(容量比４：１)を５Ｌ加え、攪拌しつつ、先に得られた３０ｇの粗カンプトテシンを投入した。この粗カンプトテシン溶解液をセライトを５０ｇを用いてろ過し、不溶物を分離した。得られたろ液を１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下、メチレンクロライドとメタノールを留去して濃縮した後、メタノールを投入して得られた析出物をろ集した。この再結晶工程で得られた結晶をメタノールで洗浄後、再び５Ｌのメチレンクロライドとメタノール混合液(容量比４：１)に攪拌下投入し、溶解・ろ過した液を濃縮し、メタノールの投入を繰り返して濃縮した。析出物をろ集し、メタノールを用いて析出物を洗浄し、減圧乾燥して精製結晶を１８．５ｇ得た。得られた精製結晶の品質はカンプトテシン含量が９８．２ %以上であった。
【００４１】
【実施例２】
（工程１）
１.７５Ｋｇの乾燥した喜樹の実(乾燥減量１１％)を、２〜３mmφのスクリーンを装着した破砕機で破砕し、得られた破砕物をガラス製５０Ｌフラスコに投入し、１.７Ｌの水を散水投入し一時間放置した後、９９％以上のメタノールを１７Ｌ投入し、５０℃に加温しつつ６０分間攪拌し抽出を行った。 得られたメタノール抽出液をろ過し、１次抽出液を分離した。分離後の残さに、新たに９９％以上のメタノールを１Ｌ投入し２次抽出液を得た。全てのメタノール抽出液を、１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置を用いて、減圧下で濃縮した。この濃縮液にトルエン１Ｌ及び１Ｋｇのセライトを加え、30分間攪拌したのち、減圧濾過してカンプトテシンが吸着したセライトを分離した。
【００４２】
（工程２）
実施例２の工程１で得たカンプトテシン吸着セライトをガラス製１０Ｌフラスコに投入し、これに３．５Ｌのトルエンと１．６Ｌのメタノールを投入し、攪拌しつつ加熱した。抽出液をろ紙を引いたろ過器に投入し、加温しつつ減圧ろ過した。 得られたろ液を１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置で濃縮し、濃縮装置内に析出した結晶にメタノール３Ｌを投入して洗浄し、減圧乾燥器で乾燥し、１２０．２ｇの粗カンプトテシンを得た。得られた粗カンプトテシンのカンプトテシン（ＣＰＴ）含有量は、８５重量％以上であった。
【００４３】
（工程３）
実施例２の工程２で得られた１００ｇの粗カンプトテシンと、活性炭２５ｇをガラス製１０Ｌフラスコに投入し、これに３．５Ｌのトルエンと１．６Ｌのメタノールを投入し、攪拌しつつ加熱した。抽出液をろ紙を引いたろ過器に投入し、加温しつつ減圧ろ過した。 得られたろ液を１０Ｌエバポレ−タ濃縮装置で濃縮した。濃縮装置内に析出した結晶にメタノール１Ｌを投入して洗浄し、減圧乾燥器で乾燥し、８４．９ｇの精製結晶を得た。得られた精製結晶のカンプトテシン（ＣＰＴ）含有量は、９８．５重量％以上であった。また、得られた精製結晶には、不純物であるカンプトテシン類縁化合物は、いずれも０．６重量％以下であり、不純物の少ないカンプトテシンが得られたことがわかる。
【００４４】
【発明の効果】
本発明によれば、喜樹類の実、又は、喜樹類の幼木の小枝及び葉等、樹脂や葉緑素の多い植物原料を用いた場合であっても、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることが可能となる。
【００４５】
本発明によれば、トルエン、メタノール混合溶液を用いてカンプトテシンを抽出した場合は、メチレンクロライドに見られるような環境上の問題もないので、環境保全のための特段の工程を必要とするといった不都合も無く、効果的にカンプトテシンを得ることができる。また、本発明によれば、トルエン、メタノール混合溶液の混合割合を制御することによってカンプトテシン類縁化合物等のカンプトテシン製造時に含まれる不純物を容易に除去することが可能となる。
【００４６】
トルエンを含んだ溶液を用いてカンプトテシンを抽出することで、カンプトテシンを含む植物原料の実又は葉からも効果的にカンプトテシンを得ることが可能となる。
【００４７】
活性炭等の吸着媒を用いてろ過を施すことで、粗カンプトテシンに含まれる糖質を効果的に除去し、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることができる。