(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ｇｐ１２０非結合性であり、かつ、コレセプター機能を保持する変異型ヒトＣＤ４分子であって、ヒトＣＤ４分子のアミノ酸配列において、配列番号１に示すアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列が配列番号２に示すアミノ酸配列で置換されている変異型ヒトＣＤ４分子。
【請求項２】
配列番号１９に示すアミノ酸配列を含む請求項１に記載の変異型ＣＤ４分子。
【請求項３】
請求項１または２に記載の変異型ＣＤ４分子をコードする遺伝子。
【請求項４】
請求項３に記載の遺伝子を導入することによって形質転換された、請求項１または２に記載の変異型ＣＤ４分子を発現する形質転換体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＨＩＶ耐性でかつ機能性の変異ヒトＣＤ４分子、その変異ヒトＣＤ４分子をコードする変異遺伝子、及び、その変異ヒトＣＤ４分子を発現する形質転換体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＨＩＶ感染により生じる後天性免疫不全症候群（AIDS）の本態は免疫系の「司令塔」であるＣＤ４+Ｔ細胞（ＣＤ４分子を有するＴ細胞）の機能不全である。このような病態は、ＨＩＶウィルス皮膜の糖タンパク質であるgp120がヒトＣＤ４分子に対して強い親和性を持つことに起因し、１）gp120／ＣＤ４結合を契機とするＨＩＶのＣＤ４+Ｔ細胞への感染、２）gp120のＣＤ４分子への結合により惹起される細胞死、３）可溶性gp120によるＣＤ４+Ｔ細胞の抗原認識の阻止、等の機構によりＣＤ４+Ｔ細胞の機能不全が起こると考えられている。このことから、もしgp120に対する親和性を持たずしかも生理機能を果たすことのできる変異ＣＤ４分子を設計することができれば、遺伝子操作の技術を用いてリンパ球のＣＤ４遺伝子を変異型に置き換えることによりＨＩＶ耐性の免疫系を再構築できる可能性が指摘されている。すなわち、実践的には、患者骨髄から採取した未感染造血幹細胞のＣＤ４遺伝子を変異遺伝子に置き換えて体内に戻し、その幹細胞から分化成熟してくるＨＩＶ耐性ＣＤ４+Ｔ細胞が徐々に増えていきやがてはＨＩＶ耐性免疫系が再構築されることを狙いとするものである。しかしながら、数多くの実験から得られた現在のコンセンサスではgp120に対する親和性を無くすような変異をヒトＣＤ４分子に導入するとその生理機能も同時に喪失してしまうと考えられている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ＨＩＶ耐性でかつ機能性の変異ヒトＣＤ４分子、すなわち、gp120非結合性でしかも生理機能を保持した変異ヒトＣＤ４分子、その変異ヒトＣＤ４分子をコードする変異遺伝子、及び、その変異ヒトＣＤ４分子を発現する形質転換体を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ＣＤ４分子の改変によって引き起こされるgp120結合能及び生理機能の喪失が異なる理由によって生じることを見い出し、その発見に基づいてgp120に対する親和性を持たず（ＨＩＶ耐性）しかも生理機能を保持した（機能性）変異ＣＤ４分子を設計することに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
すなわち、本発明は、ｇｐ１２０非結合性であり、かつ、コレセプター機能を保持する変異型ヒトＣＤ４分子（以下、本発明ＣＤ４分子ともいう）を提供する。
【０００６】
本発明ＣＤ４分子は、好ましくは、ヒトＣＤ４分子のアミノ酸配列において、配列番号１に示すアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列が配列番号２に示すアミノ酸配列で置換されているものである。より具体的には、配列番号１９および２１に示すアミノ酸配列を含むものが挙げられる。特に好ましくは配列番号１９に示すアミノ配列を含むものである。
【０００７】
また、本発明は、本発明ＣＤ４分子をコードする遺伝子も提供する。
さらに、本発明は、上記遺伝子を導入することによって形質転換された、本発明ＣＤ４分子を発現する形質転換体を提供する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明ＣＤ４分子は、ｇｐ１２０非結合性であり、かつ、コレセプター機能を保持する。
【０００９】
ｇｐ１２０結合能の評価は公知の方法によっておこなうことができる（Cell, 66, 1037-1049 (1991); Cell, 57, 469-481 (1989)等）。ｇｐ１２０非結合性とは、ＨＩＶがＣＤ４+Ｔ細胞に実質的に感染できない程度にｇｐ１２０に対するＣＤ４分子の親和性が低下していることを意味する。
【００１０】
ｇｐ１２０結合能の評価方法として、具体的には、後記実施例（２）に記載したような相対結合インデックスを測定する方法が挙げられる。この方法で測定した場合、ｇｐ１２０非結合性とは、相対結合インデックスが、通常、２以下、好ましくは１以下であることを意味する。
【００１１】
また、ｇｐ１２０結合能の評価は、ＣＤ４分子を発現するように形質転換された、ＨＩＶ感染のコレセプターを発現している細胞を用いて、ＨＩＶに対する感染感受性を調べることによって行うこともできる。このような方法として具体的には、後記実施例（３）に記載したような、ＨＩＶ感染のコレセプターであるケモカインレセプターCRCX2を発現しているHela細胞を、ＣＤ４分子を発現するように形質転換した細胞を用いて、ＨＩＶに対する感染感受性を調べる方法が挙げられる。
【００１２】
ＣＤ４分子の「コレセプター機能」とは、Ｔ細胞レセプター(TCR)が抗原ペプチドを提示するクラスII MHC分子を認識する際にMHC分子の保存された部位とTCR複合体に会合して三者複合体を形成し全体の安定度を増すことにより、認識およびそれに伴うシグナル伝達を大幅に促進する作用のことである。ＣＤ４分子はその細胞質部分にチロシンリン酸化酵素であるp56lckが会合しており、三者複合体が形成されるとTCRに会合しているCD3複合体のζ鎖をリン酸化し、これが細胞内シグナルの伝達の引き金となることが知られており、三者複合体の形成に基づくコレセプター機能は、生理機能の指標として極めて適切なものであると考えられる。
【００１３】
ＣＤ４分子のこの機能は、例えば、アロクラスII MHC（I-Ak）特異性のマウスＴ細胞ハイブリドーマに変異ヒトＣＤ４遺伝子をトランスフェクトし、これらの細胞の抗原認識反応をリンフォカイン産生により測定することで評価できる。すなわち、このハイブリドーマ(4QBW)をI-Akを発現しているＢ細胞腫(TA3)と共に培養すると、I-Ak認識の結果、IL-2産生を開始し培養上清中に放出するので、放出されたリンフォカインの量を測定することによりコレセプター機能を評価できる。このアッセイ系は、マウスTCRにおるマウスクラスII MHC認識系においてもヒトのＣＤ４分子がコレセプターとして機能することが後記実施例（４）に示すように確認されているので、ヒトＣＤ４分子のコレセプター機能を評価するものとして妥当であると判断される。
【００１４】
本発明ＣＤ４分子は、好ましくは、ヒトＣＤ４分子のアミノ酸配列において、配列番号１に示すアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列が配列番号２に示すアミノ酸配列で置換されているものである。ヒトＣＤ４分子のアミノ酸配列には、個体差などにより、ＣＤ４分子のコレセプター機能に影響しない、１または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加による変異が存在し得ることが予想されるが、このような同種変異体において配列番号１に示すアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を特定することは当業者であれば容易である。
【００１５】
また、本発明ＣＤ４分子は、ＣＤ４分子のコレセプター機能に影響しない限り、配列番号２に示すアミノ酸配列以外の部分に、人為的な１または数個のアミノ酸の置換、欠失または付加を有していてもよい。
【００１６】
本発明ＣＤ４分子として、具体的には配列番号１９及び２１に示すアミノ酸配列を含むものが挙げられ、特に好ましいものは配列番号１９に示すアミノ酸配列を有する。
【００１７】
本発明ＣＤ４分子をコードする遺伝子は、公知のヒトＣＤ４分子をコードする遺伝子の塩基配列のうち、配列番号１のアミノ酸配列をコードする部分を配列番号２のアミノ酸配列をコードするように改変することによって得ることができる。このような改変は、通常に用いられるＤＮＡ合成装置を用いて本遺伝子を含むＤＮＡを合成することによって行ってもよいし、公知のヒトＣＤ４分子をコードする遺伝子を含むＤＮＡに遺伝学的手法で変異を導入することによって行ってもよい。
【００１８】
変異の導入は、例えば、特定のアミノ酸を特定のアミノ酸に置換する部位特異的変異法によって行うことができる。部位特異的変異の手法には、様々な手法（R. Higuchi et al. Recombinant PCR in "PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications" p.177, Academic Press, 1990： Sambrook, Fritsch and Maniatis, "Molecular Cloning" Chapter 15, Site-directed Mutagenesis of Cloned DNA, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989等）があるが、部位特異的に変異を導入する手法であれば何れの手法を用いてもよい。
【００１９】
本発明ＣＤ４分子を発現する形質転換体及び本発明ＣＤ４分子は、本発明ＣＤ４分子をコードする遺伝子を用いて得ることができる。すなわち、この遺伝子を含むＤＮＡを宿主細胞に常法により導入することによって形質転換体を得ることができ、この形質転換体を培養し、培養物から本発明ＣＤ４分子を採取することによって本発明ＣＤ４分子を得ることができる。
【００２０】
宿主としては、樹立細胞系の細胞、Ｔ細胞およびＴ細胞に分化可能な細胞などを挙げることができる。
【００２１】
【実施例】
以下、実施例によりさらに具体的に説明するが、実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
【００２２】
（１）変異ＣＤ４遺伝子の作成
下記表１に示すアミノ酸配列を有する変異ＣＤ４分子（変異体#1〜#14及び#19〜#21(以下、M1〜M14及びM19〜M21と略す)）をコードする遺伝子を部位特異的突然変異で作成した。表１に示されたアミノ酸配列は、Ｄ１ドメインのＣ’、Ｃ”及びＤのβストランドを含む３６位から５９位までを示す。アミノ酸の位置番号はヒトＣＤ４の基準で付してあるため４１〜４２間及び４７〜４８間のものには番号がない。また、ヒト及びマウスの野生型分子のアミノ酸配列もあわせて示す。
【００２３】
M1〜M5は、gp120結合部位として知られるヒトＣＤ４分子Ｎ末Ｄ１ドメインのＣ’、Ｃ”及びＤのβストランド（以下、単にストランドともいう）並びにＣ’−Ｃ”及びＣ”−Ｄのループをそれぞれ、gp120に全く親和性を持たないマウスＣＤ４分子のアミノ酸配列に置換したものである。また、M6〜M14は、Ｃ”ストランドの内の１若しくは２個のアミノ酸を置換したもの、Ｃ’−Ｃ”ループ（一部）及びＣ”−Ｄループを置換したもの、又は、４３位のアミノ酸をフェニルアラニン以外のアミノ酸に置換したもの若しくは欠失させたものである。さらに、M19〜M21は、それぞれ、Ｃ’−Ｃ”ループ及びＣ”ストランドを置換したもの、Ｃ”ストランド及びＣ”−Ｄループを置換したもの、並びに、Ｃ’−Ｃ”ループ、Ｃ”ストランド及びＣ”−Ｄループを置換したものである。参考のため、ヒトＣＤ４のＮ末ドメイン（Ｄ１、Ｄ２）ドメインの構造を図１に示す。免疫グロブリン可変部様構造をしたＤ１ドメイン（上部）には、Ｃ’、Ｃ”及びＤの三つのβストランド及びそれらを結ぶ二つのループから成る突出した構造があり、ここが結合部位となっている。
【００２４】
部位特異的突然変異は、以下のようにして行った。Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488-492 (1985)に記載の塩基配列中、５’端から４３１番（MunIサイト）までの４３１ｂｐをＭ１３ベクターに導入して得られたベクターを、大腸菌CJ236 (dut- ung-)中で増やしチミン（Ｔ）の一部がデオキシウラシル（Ｕ）に置き換わったＤＮＡを合成させ、そして、一本鎖ＤＮＡを精製し、鋳型として用いた。得られた鋳型に変異導入用の合成オリゴヌクレオチドをハイブリダイズさせ、ポリメラーゼ及びリガーゼにより相補鎖を合成した後、ung+の大腸菌にトランスフェクトし、得られたクローンの内２〜４個について塩基配列を決定し、正しく変異の入ったクローンを選別した。変異クローンから必要な部分（HindIII-AflIIフラグメント）を切り出し、発現ベクターであるpEMosAfl-に組み込まれた遺伝子の相同部分と置き換えて、変異遺伝子を完成させた。
【００２５】
（２）gp120結合アッセイ
発現ベクターに入った変異遺伝子を電気穿孔法によりマウスＴ細胞腫BW5147にトランスフェクトしG418により選択後、クローン化し、それぞれの変異ＣＤ４について高発現のものを採った。これらのトランスフェクタントをFITC-OKT4及びビオチン−gp120と反応させて洗った後、PE-アビジンで染め、フローサイトメトリーで解析した。gp120結合能（相対結合インデックス(ＲＢＩ)）はそれぞれの抗体の単染色で蛍光強度の平均値を求め、FITC-OKT4による染色強度に対するgp120による染色強度の比を求め、その値を、平行して測定した野生型ヒトＣＤ４について得られた比の値の％として算出した。算出の計算式は以下の通りである。
【００２６】
【数１】
0004115578.tif 000002
（式中、Meは実験標本の平均蛍光強度、Mcは対照標本（反応しない抗体による疑似染色）の平均蛍光強度、FL1はOKT4による染色、FL2はgp120による染色である。mutantは変異ＣＤ４トランスフェクタントの値、wildは野生型ＣＤ４トランスフェクタントの値を示す。）
【００２７】
このようにして測定した各変異ＣＤ４のgp120結合能を表１の右端に示す。Ｃ’またはＤのβストランドをそれぞれマウス型に置き換えた変異（M1またはM5）はヒト野生型ＣＤ４と全く差のないgp120結合能を示した。Ｃ’−Ｃ”またはＣ”−Ｄのループをマウス型に置換した変異ではgp120結合能が大幅に減少した。これら二つのグループではマウスとヒトの間でアミノ酸の配列のみならずアミノ酸の数も異なるため局所的ではあっても立体構造の変化が起こるためと考えられる。Ｃ”ストランドの置換は最も影響が大きく、M2（Phe43→Val、Thr45→Ile及びLys46→Arg）はgp120結合能を完全に失っていた。
【００２８】
【表１】
0004115578.tif 000003
【００２９】
（３）ＨＩＶ感染感受性の評価
上記の変異ＣＤ４が実際にＨＩＶの感染に対するレセプターとしての機能をどの程度失っているのかを検討するために、これらの変異ＣＤ４をコードする遺伝子をＨＩＶ感染のコレセプターであるケモカインレセプターCRCX2を発現しているHela細胞にトランスフェクトしてSF2及びIIIBの二種のＨＩＶ株に対する感染感受性を調べた。ＨＩＶ感染は、培養上清中に検出されるウィルス遺伝子産物の一つであるp24の量をELISA法によって測定した。結果を図２に示す。吸光度が高いほど感染の程度が大きい。
【００３０】
gp120結合能が大幅に低下しているものの低いながら結合能を残しているM2とM4はこの感染実験系では耐性がみられず、この程度の親和性の低下は感染に対してあまり影響を与えないことが明らかになった。これに対し、gp120結合能を完全に喪失したM3はどちらのウィルス株の感染にも全く感受性を示さなかった。さらに、また、Phe43をValに換えた(M6)だけでは感染に対する耐性を獲得しないがPhe43と共にThr45をマウス型に置換するとM3と同様の耐性を持つようになることが分かった。
【００３１】
（４）コレセプター機能の評価
ＣＤ４分子のコレセプター機能とは、Ｔ細胞レセプター(TCR)が抗原ペプチドを提示するクラスII MHC分子を認識する際にMHC分子の保存された部位とTCR複合体に会合して三者複合体を形成し全体の安定度を増すことにより、認識およびそれに伴うシグナル伝達を大幅に促進する作用のことである。ＣＤ４分子のこの機能を検討するためにアロクラスII MHC（I-Ak）特異性のマウスＴ細胞ハイブリドーマに変異ヒトＣＤ４遺伝子をトランスフェクトし、これらの細胞の抗原認識反応をリンフォカイン産生により測定した。このハイブリドーマ(4QBW)をI-Akを発現しているＢ細胞腫(TA3)と共に培養すると、I-Ak認識の結果、IL-2産生を開始し培養上清中に放出する。
【００３２】
この系にマウスＣＤ４に対する抗体(GK1.5)を加えるとI-Ak認識が阻止されIL-2の産生は誘導されなくなり（図３左、図４）、この抗原認識がＣＤ４依存性であることが示された。この細胞をヒトの野生型ＣＤ４を発現するように形質転換した細胞(4Q/wild)のI-Ak認識は抗マウス抗体によって完全に抑えることができず、GK1.5と共に更にヒトＣＤ４に対する抗体(OKT4A, Leu3a)を加えたときに初めて阻止された（図３右、図５）。なお、図３におけるデータは、阻止抗体無しでの抗原認識によるIL-2産生量を１００としたときの％値で表している。また、TA3はI-Akの他にも大量のクラスII MHC分子(I-Ad, I-Ek, I-Ed)を発現しているが、TA3に対するIL-2産生反応は4QBW及び4Q/wild双方の場合ともI-Akに対する抗体によって完全に阻止された（図６）。従って、この系におけるリンホカイン産生が、I-Akの特異的な認識、すなわちTCRによるクラスII MHC分子の認識によって引き起こされるものであることが確認された。
【００３３】
これらの結果からマウスTCRによるマウスクラスII MHC認識系においてもヒトのＣＤ４がコレセプターとして機能することが明らかとなり、このアッセイ系を用いて変異ヒトＣＤ４の機能を検討した。
【００３４】
腫瘍細胞をさらにクローン化した場合、それぞれのクローンの反応性に違いが出てくることが避けられないため、それぞれの変異ＣＤ４について３〜５個のトランスフェクタントクローンを樹立し５〜１０回のアッセイを行った。結果を図７及び８に示す。
【００３５】
この結果、このアッセイ系で測定した変異ＣＤ４のほとんどのコレセプター機能はgp120結合能と大まかな平行関係にあることが明らかになった。M1、M2及びM5は野生型ＣＤ４と同程度の機能を保持していたが、M4の機能は低下しており、M3はコレセプターとしての機能を全く喪失していることが分かった。gp120親和性が完全に消失したM3はコレセプターとしての生理機能も同時に失っており、本発明の目的に不適であることが明らかであった。
【００３６】
一方、一部の変異ＣＤ４分子では、上記平行関係を示さないものが認められた。M19トランスフェクタントである4Q/M19のI-Ak認識は抗マウスＣＤ４抗体(GK1.5)で抑えきることができずGK1.5耐性の反応性はこの抗体に抗ヒトＣＤ４抗体OKT4Aを加えることによって阻止された。M21もM19と同様にコレセプター機能を発揮することが分かった。M20はM3の様にコレセプターとしては機能しなかった。
【００３７】
これらの結果から、Ｃ”ストランド単独ではなくその上流のＣ’−Ｃ”ループを同時にマウス型に置換することによりgp120結合能を完全に喪失しながらもヒト野生型ＣＤ４に匹敵するコレセプター機能を持つ変異ＣＤ４を作成することが可能であることが明らかとなった。
【００３８】
Ｃ"ストランド単独ではなくその上流のＣ'−Ｃ"ループを同時にマウス型に置換することにより目的の分子が得られる理由は以下のように推定される。Phe43→Valのアミノ酸置換を伴うヒトＣＤ４の変異がgp120結合能と同時にその生理機能も喪失させるということは一般的に認められており、本実施例で用いた変異ＣＤ４の大部分でも、これを支持する結果を与えたが、このことは必ずしもgp120結合能と生理機能が不可分の機能であることを意味する訳ではない。gp120結合については、他にいくつかの43位変異を作成し、検討した結果、43位に六員環を持つアミノ酸を持つことがgp120結合に必須であることが分かっている。一方、上記コレセプター機能の測定で明らかになったように、マウスの認識系でヒトのヒトＣＤ４がコレセプター機能を発揮できることはヒトとマウスのＣＤ４間のアミノ酸配列の差が機能上あまり問題ではないことを示している。それ故、M3の様にヒトＣＤ４の一部をマウス型にしたときに機能が無くなったことは何らかの高次構造上の変化が起きたことを疑わせる。M3でマウス型に置き換えられたＣ"ストランドとその上流にあるＣ'ストランドとの間を結ぶループ（Ｃ'−Ｃ"ループ）はヒトではたった２個のアミノ酸からなっているうえ、ヘアピン状のカーブを形成している。このような構造においてはしばしば隣接するβストランドの端のアミノ酸がヘアピンループの維持に決定的な役割を果たしていることがある。マウスではこのループは３個のアミノ酸から成っており、おそらく極端な負荷のかかる構造にはなっていないものと考えられる。これらの事からＣ"ストランドだけをマウス型に変えたときにＣ'−Ｃ"ループのヘアピン構造が崩れたのが、生理機能の喪失の原因であり、従って、Ｃ'−Ｃ"ループも共に置き換えることによって生理機能が発揮されるものと推測される。
【００３９】
【発明の効果】
本発明によればＨＩＶ耐性でかつ機能性の変異ヒトＣＤ４分子及びそれをコードする遺伝子が提供される。このような分子や遺伝子は、ＨＩＶ感染の機構の解明に有用であり、さらに、ＨＩＶ感染あるいはAIDS発症患者から採取した造血幹細胞のＣＤ４遺伝子を本発明の遺伝子に置き換えて(knock in)体内に戻せば、それらの幹細胞から分化成熟してくるＣＤ４+Ｔ細胞はgp120非結合性の変異ＣＤ４しか発現しないのでＨＩＶ耐性となると考えられ、従って、免疫不全の予防あるいは解決のための手段を提供すると期待される。
【００４０】
【配列表】
配列番号：１
配列の長さ：５
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ser Phe Leu Thr Lys
1              5
【００４１】
0004115578.tif 000004
【００４２】
配列番号：３
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                  15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００４３】
0004115578.tif 000005
【００４４】
配列番号：５
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Gln His Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                  15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００４５】
配列番号：６
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Lys Gly Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys
1               5                   10                 15
Leu Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20                  25
【００４６】
0004115578.tif 000006
【００４７】
配列番号：８
配列の長さ：２５
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Gly Ser Pro Ser
1               5                  10                  15
Gln Phe Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００４８】
配列番号：９
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                   15
Asn Asp Arg Phe Asp Ser Arg Arg
20
【００４９】
配列番号：１０
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Val Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                  15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００５０】
0004115578.tif 000007
【００５１】
配列番号：１２
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Phe Leu Thr Arg Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                   10                 15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００５２】
配列番号：１３
配列の長さ：２７
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Lys Ser Phe Leu Thr Lys Gly Gly Ser Pro
1               5                  10                  15
Ser Lys Leu Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20                  25
【００５３】
配列番号：１４
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Val Leu Thr Arg Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                  15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００５４】
0004115578.tif 000008
【００５５】
配列番号：１６
配列の長さ：２３
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu Asn
1               5                  10                  15
Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００５６】
配列番号：１７
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Tyr Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                   15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００５７】
配列番号：１８
配列の長さ：２４
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド配列
Ile Leu Gly Asn Gln Gly Ser Trp Leu Thr Lys Gly Pro Ser Lys Leu
1               5                  10                  15
Asn Asp Arg Ala Asp Ser Arg Arg
20
【００５８】
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【００５９】
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【００６０】
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【図面の簡単な説明】
【図１】ヒトＣＤ４のＮ末ドメインの構造を示す。
【図２】変異ＣＤ４を持つ細胞の感染耐性を検討した結果を示す。
【図３】ＣＤ４のコレセプター機能のアッセイ系を検討した結果を示す。
【図４】ＣＤ４のコレセプター機能のアッセイ系における抗マウスＣＤ４分子抗体(GK1.5)の影響を検討した結果を示す。
【図５】ＣＤ４のコレセプター機能のアッセイ系における抗ヒトＣＤ４分子抗体(OKT4A, Leu3a)の影響を検討した結果を示す。
【図６】ＣＤ４のコレセプター機能のアッセイ系における抗クラスII MHC分子(I-Ak)抗体の影響を検討した結果を示す。
【図７】変異ＣＤ４のコレセプター機能を検討した結果を示す。
【図８】変異ＣＤ４のコレセプター機能を検討した結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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