(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004142444.tif 000011
［式中、Ｒ１は、３−フルオロ−２−ピリジル基を意味する。Ｒ２は、４−メトキシフェニル基を意味する。Ｒ３は、メチル基を意味する。］
で表される化合物に含水エタノール中で、シュウドモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属に属する微生物由来のリパーゼを作用させることを特徴とする式（ＩＩ）
【化２】
0004142444.tif 000012
（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は前記に同じ。）
で表される化合物の製造方法。
【請求項２】
リパーゼが固定化されたものである請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
固定化されたシュウドモナス属に属する微生物由来のリパーゼがＰＳ−ＣＩである請求項２に記載の製造方法。
【請求項４】
式（ＩＩａ）
【化３】
0004142444.tif 000013
［式中、Ｒ１は、３−フルオロ−２−ピリジル基を意味する。Ｒ２は、４−メトキシフェニル基またはビス（４−メトキシフェニル）メチル基を意味する。Ｒ３は、メチル基を意味する。］
で表される化合物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は２-アゼチジノン誘導体の製造方法に関する。
背景技術
２-アゼチジノン誘導体は、抗癌作用を有する下記構造化合物の１３位置換基を形成するための反応性化合物として重要な化合物である。
【化１】
0004142444.tif 000002
例えば、この様な反応性化合物としては、下記構造の化合物（１）（ＴＩＰＳ：トリイソプロピルシリル基、Ｂｏｃ：第三級ブトキシカルボニル基（以下、ｔ−ブトキシカルボニル基のように“第三級”を“ｔ−”と記す））が用いられる。
【化２】
0004142444.tif 000003
この化合物（１）は、ラセミ体化合物（２）（ＰＭＰ：パラメトキシフェニル基（４−メトキシフェニル基）、Ａｃ：アセチル基、３位のアセトキシ基と４位の３−フルオロ−２−ピリジル基はシス配置である）
【化３】
0004142444.tif 000004
から３位Ａｃの脱保護、ＴＩＰＳ化、再結晶、１位の脱ＰＭＰ、カラムクロマトグラフィー（以下、カラムとも称する）による分離の各工程を経て得られた化合物（３）
【化４】
0004142444.tif 000005
を光学分割カラムにより分離した後に保護基を施されて得られたものである。
先行技術文献としては、Rosario Brieva et al., J.Org.Chem., 58, 5, 1068-1075, 1993、特開平６−１７２２７６号公報（ＥＰ０５８２４６９Ａ２）が挙げられる。
ラセミ体化合物（２）から化合物（１）を得る工程は、エピ化、再結晶溶媒変更、カラム単離等操作性が煩雑で、かつ低収率であるという問題があった。更に、化合物（１）を得るためには最終工程の前工程で光学分割カラムにより化合物（３）を分離しなければならず、大量生産にはコスト高になるという問題があった。
本発明は光学活性な２-アゼチジノン誘導体を効率的に、低コストかつ大量に生産可能な製造方法を提供することにある。
発明の開示
本発明者は、ラセミ体化合物である２−アゼチジノン誘導体にエステル不斉加水分解能を有する酵素を作用させることにより、光学活性な２−アゼチジノン誘導体を効率的に、低コストで、かつ大量に生産可能な製造方法を見出し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は式（Ｉ）
【化５】
0004142444.tif 000006
［式中、Ｒ１は、フェニル基またはピリジル基（いずれの基もハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる１または２以上の基を有していてもよい。）を意味する。Ｒ２は、水素原子、ヒドロキシ基、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルカノイル基、置換基を有していてもよい炭素数２から６のアルケノイル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリーロイル基、または置換基を有していてもよいアラルキル基を意味する。Ｒ３は、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルキル基または置換基を有していてもよい炭素数２から６のアルケニル基を意味する。］
で表される化合物にエステル不斉加水分解能を有する酵素を作用させることを特徴とする式（ＩＩ）
【化６】
0004142444.tif 000007
（式中、Ｒ１、Ｒ２、およびＲ３は前記に同じ。）
で表される化合物の製造方法に関する。
さらに、本発明は、次の各々に関するものである。
Ｒ１が３−フルオロ−２−ピリジル基である上記製造方法；
Ｒ２がフェニル基（ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる１または２以上の基を有していてもよい。）またはアラルキル基（炭素数１から６のアルキル基上に１または２以上のアリール基が置換した構造であって；アリール基部分はハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる基を１または２以上有していてもよい。）である上記製造方法；
Ｒ２が４−メトキシフェニル基またはビス（４−メトキシフェニル）メチル基である上記製造方法；
Ｒ３がメチル基である上記製造方法；
酵素がリパーゼである上記製造方法；
リパーゼがシュウドモナス(Pseudomonas)属に属する微生物由来のリパーゼである上記製造方法；
リパーゼがアスペルギルス(Aspergillus)属に属する微生物由来のリパーゼである上記製造方法；
リパーゼが固定化されたものである上記製造方法；
式（ＩＩ）
【化７】
0004142444.tif 000008
［式中、Ｒ１は、フェニル基またはピリジル基（いずれの基もハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる１または２以上の基を有していてもよい。）を意味する。Ｒ２は、水素原子、ヒドロキシ基、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルカノイル基、置換基を有していてもよい炭素数２から６のアルケノイル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリーロイル基、または置換基を有していてもよいアラルキル基を意味する。Ｒ３は、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルキル基または置換基を有していてもよい炭素数２から６のアルケニル基を意味する。］
で表される化合物；
Ｒ１が３−フルオロ−２−ピリジル基である上記化合物；
Ｒ２がフェニル基（ハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる１または２以上の基を有していてもよい。）またはアラルキル基（炭素数１から６のアルキル基上に１または２以上のアリール基が置換した構造であって；アリール基部分はハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる基を１または２以上有していてもよい。）である上記化合物；
Ｒ２が４−メトキシフェニル基またはビス（４−メトキシフェニル）メチル基である上記化合物；
Ｒ３がメチル基である上記化合物；
等に関する。
本発明は、式（Ｉ）で表される化合物（以下、化合物（Ｉ）と記す。他の式で表される化合物についても同様に記す）にエステル不斉加水分解能を有する酵素（以下、単に「酵素」とも記す）を作用させることにより化合物（ＩＩ）を得るものであるが、通常、下記の反応のように化合物（ＩＩ）と共に化合物（ＩＩＩ）も生ずる。
【化８】
0004142444.tif 000009
ここで、化合物（Ｉ）は、３位のアシルオキシ基と４位のＲ１とがシス配置であることが好ましく、その場合に化合物（Ｉ）は（３Ｒ，４Ｓ）体と（３Ｓ，４Ｒ）体とからなるラセミ体であり、化合物（ＩＩ）は（３Ｒ，４Ｓ）体であり、化合物（ＩＩＩ）は（３Ｓ，４Ｒ）体である。酵素により化合物（Ｉ）のうちの（３Ｓ，４Ｒ）体が選択的にエステル加水分解を受けるために化合物（Ｉ）のうちの（３Ｒ，４Ｓ）体、即ち化合物（ＩＩ）が選択的に残される。そして、化合物（ＩＩ）と化合物（ＩＩＩ）の混合物から化合物（ＩＩ）を単離するには、化合物（ＩＩ）が結晶性の場合は、カラムを用いることなく、好適な溶媒を用いて通常の再結晶を行えばよい。また、化合物（ＩＩ）の３位のＲ３ＣＯＯをエステル加水分解してＯＨにしても、かつこれに所望の保護基を導入しても３位のＲ配置及び４位のＳ配置は維持され、また１位の脱保護または保護化しても３位のＲ配置及び４位のＳ配置は維持されるという利点があり、カラムによる光学分割を用いることなく上記化合物（１）を形成できるため極めて効率的であるという効果がある（実施例、参考例参照）。
本発明に用いられる酵素は、化合物（Ｉ）のうちの（３Ｓ，４Ｒ）体の３位のエステル結合を立体選択的に加水分解する機能を有するものであれば、特に制限することなく用いることができる。
上記不斉エステル加水分解反応で得られる化合物（ＩＩＩ）の光学純度は高ければ高いほど化合物（Ｉ）における（３Ｓ，４Ｒ）体のエステル加水分解への選択性が高いので、そのような能力を持った酵素を用いることがより好ましい。
本発明に用いられる酵素としては、上記不斉エステル加水分解反応で得られる化合物（ＩＩＩ）の光学純度が８０％ｅｅ以上であるものが好ましく、更には９０％ｅｅ以上のものが好ましく、特に９５％ｅｅ以上のものが好ましい。
本発明に用いられる酵素としては、リパーゼが好ましく、特に微生物由来のもの、例えば、シュウドモナス(Pseudomonas)属やアスペルギルス(Aspergillus)属由来のリパーゼが好ましい。
これらリパーゼは、固定化されたものも好ましく、例えば、セラミックや珪藻土などに固定化されたものが挙げられる。
リパーゼの具体例としては、Ａｍａｎｏ  ＰＳ、Ａｍａｎｏ  ＰＳ−ＣＩ、Ａｍａｎｏ  ＰＳ−ＤＩ、Ａｍａｎｏ  ＡＫ（天野エンザイム（株）製）等が挙げられる。
上記酵素を化合物（Ｉ）に作用させるには、化合物（Ｉ）と酵素を接触させる必要があり、その方法としては特に限定されないが、化合物（Ｉ）を適当な溶媒に溶解して酵素を化合物（Ｉ）に接触させる方法が好ましい。
上記酵素を化合物（Ｉ）に接触させる時間としては、所望の水解率と光学純度を達成できる時間を適宜選択すればよい。本発明においては、酵素として固定化されたリパーゼを使用すると、化合物（Ｉ）との接触時間が短時間でも反応が進行する。具体的には０．５時間から４８時間が好ましく、さらに０．５時間から２４時間がより好ましく、特に０．５時間から１８時間が好ましい。
溶媒としては、上記不斉エステル加水分解反応を阻害しなければ良く、特に限定されないが、有機溶媒、例えば、トルエン、イソプロピルエーテル、酢酸エチル、エタノール、アセトニトリル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、アセトン等またはこれらと水との混合溶媒が使用できる。有機溶媒と水との混合溶媒の場合は、水の混合率（容量）が５％以上８０％以下であることが好ましく、特に有機溶媒がエタノールの場合は４０％が好ましい。
反応温度は溶媒により適宜選定されるが、酢酸エチルやトルエン系では約４０℃、エタノール系では約２５℃が好ましい。
撹拌は、攪拌子、攪拌羽根、振盪器等を用いることができ、適宜選定される。
基質、即ち化合物（Ｉ）の濃度と酵素量の関係も適宜調整される。一般に、基質濃度が上がれば酵素の選択性は低下していく傾向が見られ、また、酵素量の減少によっても、選択性が低下していく傾向が見られる。基質濃度５％、酵素量０．４（酵素質量／基質質量）程度が好ましい。
反応系のｐＨは、反応の間、酵素の至適ｐＨに調整されるのが通常であるが、本発明の場合、初発ｐＨと反応後のｐＨ値に差異が小さいので、ｐＨ制御は特に必要ないという利点がある。
酵素反応後は、ろ過等による酵素除去後、溶媒を減圧濃縮し、溶媒抽出、減圧濃縮し、好適な溶媒にて晶析させることにより、化合物（ＩＩ）を高純度（９９％以上）かつ高光学純度（９９％ｅｅ以上）で得ることができる。
晶析のための溶媒としては、含水メタノールが好ましく、特にメタノール：水＝１７：１９（容積）が好ましい。
得られた化合物（ＩＩ）は、新規な光学活性化合物である。
化合物（Ｉ）及び化合物（ＩＩ）において、置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は、反応の前後で不変である。
以下、置換基Ｒ１、Ｒ２及びＲ３について詳述する。
Ｒ１は、フェニル基またはピリジル基を意味し、いずれの基もハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる１または２以上の基を有していてもよく、中でもハロゲン原子、アルコキシ基を有していることが好ましい。
Ｒ１は特に３−フルオロ−２−ピリジル基であることが好ましい。
Ｒ２は、水素原子、ヒドロキシ基、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルコキシ基、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルカノイル基、置換基を有していてもよい炭素数２から６のアルケノイル基、置換基を有していてもよいアリール基、置換基を有していてもよいアリーロイル基、または置換基を有していてもよいアラルキル基を意味する。
Ｒ２はフェニル基またはアラルキル基が好ましい。フェニル基はハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる１または２以上の基を有していてもよく、中でもアルコキシ基を有していることが好ましい。アラルキル基は炭素数１から６のアルキル基上に１または２以上のアリール基が置換した構造であって；アリール基部分はハロゲン原子、炭素数１から６のアルキル基、炭素数１から６のハロゲノアルキル基、炭素数１から６のアルコキシ基、ニトロ基、カルバモイル基、およびシアノ基からなる群から選ばれる基を１または２以上有していてもよい。
Ｒ２は特に４−メトキシフェニル基またはビス（４−メトキシフェニル）メチル基であることが好ましい。
Ｒ３は、置換基を有していてもよい炭素数１から６のアルキル基または置換基を有していてもよい炭素数２から６のアルケニル基を意味し、特にＲ３はメチル基であることが好ましい。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明の実施例について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
尚、光学純度測定要件は、以下の通りである。
カラム：ＵＬＴＲＯＮ  ＥＳ−ＯＶＭ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍφ）信和化工
移動相：  ＭｅＯＨ：０．０２Ｍリン酸緩衝液ｐＨ７．０＝５：９５
流速：１．０ｍｌ／分
温度：４０℃
検出：２５４ｎｍ
保持時間：目的物（３Ｒ，４Ｓ）−エステル体：１７分、（３Ｓ，４Ｒ）−エステル体：１１分、（３Ｒ，４Ｓ）−アルコール体：８．３分、（３Ｒ，４Ｓ）−アルコール体：９．３分、ｔｒａｎｓ−アルコール体：１１、３１分
実施例 １：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン
シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン（４８０ｇ）をエタノール（５．７６ｌ）および０．１Mリン酸緩衝液ｐＨ７．０（３．８４ｌ）との混合液に懸濁し、酵素リパーゼＰＳ−ＣＩ（１４４ｇ）を加え、２５℃にて１６時間攪拌した。エタノールを留去後、塩化メチレンにて抽出し、有機層を留去した。得られた残渣にメタノール（８．１６ｌ）および水（９．１８ｌ）を加え、１０℃にて１６時間攪拌した。析出した結晶を濾取後、減圧乾燥し標題化合物（１８２ｇ、９９．７％ｅｅ）を微褐色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．８０（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），５．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），６．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），６．７７−６．８３（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３３（ｍ，１Ｈ），７．４１−７．４６（ｍ，１Ｈ），８．４３−８．４６（ｍ，１Ｈ）
実施例 １ａ：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン
シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン（１ｇ）をエタノール（６ｍｌ）および０．１Mリン酸緩衝液ｐＨ７．０（４ｍｌ）との混合液に懸濁し、酵素リパーゼＰＳ−ＣＩ（１ｇ）を加え、２５℃にて３０分攪拌した。エタノールを留去後、塩化メチレンにて抽出し、有機層を留去した。得られた残渣にメタノール（１７ｍｌ）および水（１９ｍｌ）を加え、１０℃にて１６時間攪拌した。析出した結晶を濾取後、減圧乾燥し標題化合物（４００ｍｇ、９９．９％ｅｅ）を微褐色結晶として得た。１Ｈ−ＮＭＲデータは、実施例１で得たものと一致した。
実施例２−１４：
不斉加水分解反応に使用する酵素および反応溶媒を変化させ、実施例１と同様にして反応を行った。
【表１】
0004142444.tif 000010
実施例１５：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン
シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン（２００ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍｌ）および０．１Mリン酸緩衝液ｐＨ７．０（１８ｍｌ）との混合液に懸濁し、酵素リパーゼＰＳ−ＣＩ（２００ｍｇ）を加え、２５℃にて２日間攪拌した。反応液を塩化メチレンにて抽出した。有機層を水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、標題化合物（９０ｍｇ、９９．７％ｅｅ）を無色油状物として得た。また、（３Ｓ，４Ｒ）−シス−３−ヒドロキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン（９６ｍｇ，９９．５％ｅｅ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７５（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），５．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．９１（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），６．６４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），６．８３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．０６−７．２０（ｍ，６Ｈ），８．３５−８．４２（ｍ，１Ｈ）
参考例１：Ｎ−［（Ｅ）−（３−フルオロ−２−ピリジル）メチリデン］−４−メトキシアニリン
３−フルオロ−２−ホルミルピリジン（２２９ｇ）および パラアニシジン（２２５ｇ）をトルエン（２．２９ｌ）に溶解し、無水硫酸ナトリウム （３３４ｇ）を加え室温にて１時間攪拌した。不溶物をろ去した後、反応液を減圧濃縮し、標題化合物（４４９ｇ）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．８５（ｓ，３Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，２Ｈ），７．３６−７．４３（ｍ，１Ｈ），７．５３（ｍ，１Ｈ），８．６２（ｄ，Ｊ＝４．３Ｈｚ，１Ｈ），８．８６（ｓ，１Ｈ）．
参考例２：シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン
Ｎ−［（Ｅ）−（３−フルオロ−２−ピリジル）メチリデン］−４−メトキシアニリン（４４９ｇ）およびトリエチルアミン（２０４ｇ）のジクロロメタン溶液（２．２９ｌ）を−１０℃ に冷却し、アセトキシアセチルクロライド （２５０ｇ）を滴下し、そのままの温度にて３０分間攪拌した。その後、室温まで昇温させた後、１６時間攪拌した。反応液を水で洗浄後、溶媒を減圧濃縮して粗体の（７２３ｇ）を得た。得られた粗体をエタノール（６．９ｌ）および酢酸エチル（３５０ｍｌ）の混合溶媒を用いて再結晶することにより、標題化合物（４８６ｇ）を褐色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．８０（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），５．７２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），６．０９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），６．７７−６．８３（ｍ，２Ｈ），７．２１−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．３３（ｍ，１Ｈ），７．４１−７．４６（ｍ，１Ｈ），８．４３−８．４６（ｍ，１Ｈ）
参考例３：シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン
窒素気流下、３−フルオロ−２−ホルミルピリジン（６．２ｇ）およびビス（４−メトキシフェニル）メチルアミン（１２ｇ）をトルエン（３０ｍｌ）に溶解し、無水硫酸ナトリウム （１２ｇ）を加え室温にて３０分間攪拌した。不溶物をろ去した後、反応液を減圧濃縮し、イミン体を得た。得られたイミン体およびトリエチルアミン（８．２ｍｌ）のジクロロメタン溶液（６０ｍｌ）を−５℃ に冷却し、アセトキシアセチルクロライド （６．３ｍｌ）を滴下し、そのままの温度にて３０分間攪拌した。その後、室温まで昇温させた後、１６時間攪拌した。反応液を水で洗浄後、クロロホルムにて抽出し、有機層を合わせて、水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を減圧濃縮し、得られた残渣を酢酸エチル（２０ｍｌ）およびジイソプロピルエーテル（６０ｍｌ）を加え、室温にて攪拌した。析出した結晶を濾取し、標題化合物（２１．８ｇ）を白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７５（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），５．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．９１（ｓ，１Ｈ），５．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），６．６４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），６．８３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），７．０６−７．２０（ｍ，６Ｈ），８．３５−８．４２（ｍ，１Ｈ）
参考例４：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−ヒドロキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン（１８１ｇ，９９．７％ｅｅ）を塩化メチレン（７２５ｍｌ）およびメタノール（７２５ｍｌ）の混合液に溶解し、０℃にて、炭酸カリウム（５．４３ｇ）を加え、そのままの温度にて１時間攪拌した。反応液にＤｏｗｅｘ５０（２７ｇ）を加え、攪拌した後、不溶物を濾去後、溶媒を留去した。得られた残渣にトルエンを加え、共沸させることにより、標的化合物（１５７．９ｇ、９９．７％ｅｅ）を白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．７４（ｓ，３Ｈ），５．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．６２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５，１Ｈｚ），６．７８−６．８１（ｍ，２Ｈ），７．１５−７．３８（ｍ，３Ｈ），７．５２−７．５９（ｍ，１Ｈ），８．４５−８．４７（ｍ，１Ｈ）
参考例５：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−ヒドロキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−２−アゼチジノン（１２６．５ｇ，９９．７％ｅｅ）を塩化メチレン（１．４５ｌ）に溶解し、トリイソプロピルシリルクロリド（１１８ｇ）およびイミダゾール（７５ｇ）を加え、室温下１２時間攪拌した。反応液を水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を留去後、得られた残渣にｎ−ヘキサンを加え、室温にて２時間、０℃にて２時間攪拌した。析出した結晶を濾取し、標題化合物（１７６ｇ、９９．７％ｅｅ）を白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．９１−１．０６（ｍ，２１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），５．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．１Ｈｚ），５．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ），６．７８−６．８１（ｍ，２Ｈ），７．２３−７．３０（ｍ，３Ｈ），７．３５−７．３９（ｍ，１Ｈ），８．４１−８．４３（ｍ，１Ｈ）
参考例６：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−ヒドロキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−アセトキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン（９０ｍｇ，９９．５％ｅｅ）をテトラヒドロフラン（０．３ｍｌ）、メタノール（０．３ｍｌ）および塩化メチレン（０．３ｍｌ）の混合液に溶解し、炭酸カリウム（２．３ｍｇ）を加え、０℃にて１時間３０分間攪拌した。反応液にＤｏｗｅｘ５０（１０ｍｇ）を加え、５分間攪拌した。不溶物を濾去し、溶媒を留去し、標題化合物（８１．６ｍｇ，９９．５％ｅｅ）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：３．７０（ｓ，３Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），５．０８−５．２７（ｍ，２Ｈ），５．９４（ｓ，１Ｈ），６．５５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．８５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．１５−７．２０（ｍ，６Ｈ），８．３６−８．４１（ｍ，１Ｈ）
参考例７：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−３−ヒドロキシ−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−２−アゼチジノン（８１．６ｍｇ，９９．５％ｅｅ）を塩化メチレン（１ｍｌ）に溶解し、トリイソプロピルシリルクロリド（５５．３μｌ）およびイミダゾール（２０．４ｍｇ）を加え、室温下１６時間攪拌した。反応液を水にて洗浄後、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を留去後、標題化合物（１１２．８ｍｇ，９９．５％ｅｅ）を無色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．６２−１．００（ｍ，２１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），５．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），５．９３（ｓ，１Ｈ），６．６２（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），６．８４（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．０５−７．１９（ｍ，３Ｈ），８．３１−８．３４（ｍ，１Ｈ）
参考例８：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−（４−メトキシフェニル）−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン（１６７ｇ，９９．７％ｅｅ）をアセトニトリル（５ｌ）に溶解し、−１０℃に冷却した。次いで、アンモニウムセリウムニトレイト（５１５ｇ）の水溶液（５ｌ）を加え、そのままの温度にて３０分間攪拌した。反応液にジイソプロピルエーテルを加え、水、４％チオ硫酸ナトリウム水溶液および２％炭酸水素ナトリウム水溶液にて洗浄した。溶媒を留去後、得られた残渣をメタノール（１．６７ｌ）に溶解し、活性炭（１６７ｇ）を加え、室温にて１６時間攪拌した。活性炭を濾去後、溶媒を留去し、得られた残渣にエタノール（８３５ｍｌ）および水（１．２５ｌ）を加えた。室温にて５時間攪拌した。析出した結晶を濾取し、標題化合物（９７．５ｇ、９９．７％ｅｅ）を白色結晶として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：０．８９−１．０８（ｍ，２１Ｈ），５．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，１．４Ｈｚ），５．３５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９，１．５Ｈｚ），６．１８（ｂｒｓ，１Ｈ），７．２２−７．２６（ｍ，１Ｈ），７．３３−７．４１（ｍ，１Ｈ），８．４２−８．４４（ｍ，１Ｈ）
参考例９：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−１−｛ビス（４−メトキシフェニル）メチル｝−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン（１１２．８ｍｇ，９９．５％ｅｅ）をアセトニトリル（０．５６ｍｌ）に溶解し、−１０℃に冷却した。次いで、アンモニウムセリウムニトレイト（３４６ｍｇ）の水溶液（４ｍｌ）を加え、そのままの温度にて３０分間攪拌した。反応液にクロロホルムを加え、水にて洗浄し、無水硫酸マグネシウムにて乾燥した。溶媒を留去後、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、標題化合物（５９．２ｍｇ、９９．５％ｅｅ）を白色結晶として得た。１Ｈ−ＮＭＲデータは参考例８で得たものと一致した。
参考例１０：（３Ｒ，４Ｓ）−シス−１−（ｔ−ブトキシカルボニル）−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン
（３Ｒ，４Ｓ）−シス−４−（３−フルオロ−２−ピリジル）−３−トリイソプロピルシリロキシ−２−アゼチジノン（４４．９ｇ，９９．７％ｅｅ）をテトラヒドロフラン（４４８．６ｍｌ）に溶解し、室温にて４−ジメチルアミノピリジン（１．６２ｇ）およびジｔ−ブチルジカルボネート（３６．５ｍｌ）を加え、そのままの温度にて１時間攪拌した。反応液にｎ−ヘキサンを加え、４％炭酸水素ナトリウム水溶液および水にて洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムにて乾燥後、溶媒を留去し、標題化合物（５８．１ｇ，９９．７％ｅｅ）を褐色油状物として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ＴＭＳ）δ：０．８８−１．０２（２１Ｈ，ｍ），１．４４（９Ｈ，ｓ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），７．２３−７．２８（１Ｈ，ｍ），７．３４−７．４１（１Ｈ，ｍ），８．４１−８．４４（１Ｈ，ｍ）
産業上の利用可能性
本発明は、ラセミ化合物（Ｉ）から光学活性化合物（ＩＩ）を化合物（Ｉ）にエステル不斉加水分解能を有する酵素を作用させるだけで得ることができるので、本発明の方法は、化合物（ＩＩ）を効率的に、大量に、かつ低コストで得ることができる。