(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（４）：
0004166688.tif 000013
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、低級アルキル基を表す、
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物４の製造方法であって、
式（２）：
0004166688.tif 000014
式中、Ｒ１及びＲ２は、上記と同義である、
で示される２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物２に、ホルミル化剤を反応させて、式（３）：
0004166688.tif 000015
式中、Ｒ１及びＲ２は、上記と同義である、
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミルエリスロマイシンＡ化合物３を得、
次に、化合物３に、酸を反応させることによりヘミケタール化した後、水性溶液中、塩基性水溶液を加えることによって、化合物４を遊離結晶として析出させることを特徴とするエリスロマイシン化合物の製造方法。
【請求項２】
請求の範囲第１項記載の方法において、化合物２にホルミル化剤を反応させる前に、式（１）：
0004166688.tif 000016
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、低級アルキル基を表す、
で示されるエリスロマイシンＡ化合物１に、アセチル化剤を反応させて、化合物２を得る工程を更に含む、請求の範囲第１項記載の製造方法。
【請求項３】
アセチル化剤を反応させた後に、得られた化合物２を単離・精製することなくホルミル化剤との反応を連続して行う、請求の範囲第２項記載の製造方法。
【請求項４】
ホルミル化剤を反応させた後に、得られた化合物３を単離・精製することなくヘミケタール化を連続して行う、請求の範囲第１項〜第３項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
ヘミケタール化した後、塩基性水溶液を加えて、反応液のｐＨを６．５〜１０．０にする、請求の範囲第１項〜第４項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
Ｒ１及びＲ２が、それぞれメチル基である、請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
Ｒ１が、メチル基であり、Ｒ２が、イソプロピル基である、請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
ホルミル化剤が、ギ酸類−酢酸化合物混合物及び１−ホルミルイミダゾールから成る群より選ばれたものである請求の範囲第１項〜第７項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
ホルミル化剤が、ギ酸−無水酢酸、ギ酸ナトリウム−塩化アセチル及び１−ホルミルイミダゾールから成る群より選ばれたものである請求の範囲第１項〜第７項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
ホルミル化剤が、ギ酸−無水酢酸及びギ酸ナトリウム−塩化アセチルから成る群より選ばれたものである請求の範囲第１項〜第７項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
アセチル化剤が、無水酢酸、ハロゲン化アセチル、酢酸塩及び１−アセチルイミダゾールから成る群より選ばれたものである請求の範囲第２項〜第１０項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１２】
アセチル化剤が、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸ナトリウム及び１−アセチルイミダゾールから成る群より選ばれたものである請求の範囲第２項〜第１０項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１３】
アセチル化剤が、無水酢酸及び塩化アセチルから成る群より選ばれたものである請求の範囲第２項〜第１０項のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１４】
式（４）：
0004166688.tif 000017
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、低級アルキル基を表す、
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物を単離精製する方法であって、該化合物及び不純物を含む水性溶液中に塩基性溶液を加えることによって、該水性溶液から該化合物を遊離結晶として析出させることを特徴とする製造方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、エリスロマイシン化合物の製造方法に関する。
背景技術
エリスロマイシン化合物である、式：
0004166688.tif 000002
式中、Ｒ′は、低級アルキル基を表す、
で示される化合物Ａ（１１−オキソ−１２−アルコキシ−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）は、消化管運動促進剤（例えば、デ（Ｎ−メチル）−１１−デオキシ−Ｎ−イソプロピル−１２−Ｏ−メチル−１１−オキソ−８，９−アンヒドロキシエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミアセタール（ＧＭ−６１１）、Ｎｅｗ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  ７（１３），ｐ１９−２１，１９９６年６月１０日号を参照）の合成原料として有用な化合物である。このエリスロマイシン化合物を製造する方法は既に知られている。そのうち、式：
0004166688.tif 000003
で示されるエリスロマイシンＡから、式：
0004166688.tif 000004
で示される２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ、次に式：
0004166688.tif 000005
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミルエリスロマイシンＡを経由して、式：
0004166688.tif 000006
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタールを製造し、最終的に上記の化合物Ａを得る方法が、特開平９−１００２９１号公報（対応米国特許第５９５９０８８号）に開示されている。しかしながら、この方法では、ホルミル化工程において、１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミルエリスロマイシンＡが副生し、それがまたヘミケタール化されて１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタールが、副生成物として生成する。この副生成物は、目的生成物である２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタールと分離することが極めて困難であり、目的生成物を高純度で得ることが困難であるという問題があった。このため、この方法は、純度規格や優れた品質が要求される医薬品合成原料の工業的な製造方法としては不適当であった。
上記問題を解決するために、本発明者らは、最終目的生成物である２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタールを、副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）をほとんど含まない高純度な状態で回収する方法を求めて鋭意研究を行なった結果、２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物にホルミル化剤を反応させるホルミル化の後、酸を反応させることによりヘミケタール化した後、水性溶液中、塩基性水溶液を加えることによって結晶を析出させると、副生成物をほとんど含まず、２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物を高純度に含む結晶が得られることを発見して、本発明を完成するに至った。
発明の開示
本発明は、式（４）：
0004166688.tif 000007
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して低級アルキル基を表す、
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物（化合物４）の製造方法であって、
式（２）：
0004166688.tif 000008
式中、Ｒ１及びＲ２は、上記と同義である、
で示される２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物（化合物２）に、ホルミル化剤を反応させて、式（３）：
0004166688.tif 000009
式中、Ｒ１及びＲ２は、上記と同義である、
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミルエリスロマイシンＡ化合物（化合物３）を得、
次に、化合物３に、酸を反応させることによりヘミケタール化した後、水性溶液中、塩基性水溶液を加えることによって、化合物４を遊離結晶として析出させることを特徴とするエリスロマイシン化合物の製法に関する。
本発明はまた、上記の方法において、化合物２にホルミル化剤を反応させる前に、式（１）：
0004166688.tif 000010
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、低級アルキル基を表す、
で示されるエリスロマイシンＡ化合物（化合物１）に、アセチル化剤を反応させて、出発化合物である化合物２を得る工程を更に含む方法にも関する。
発明を実施するための最良の形態
上記の本発明の方法を以下の反応スキームにまとめて示す。
0004166688.tif 000011
本発明の方法において使用される各化合物において、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、低級アルキル基であり、この低級アルキル基としては、具体的には、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等の直鎖状又は分岐状の炭素数１〜４のアルキル基を挙げることができる。好ましくはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基を挙げることができる。なかでもＲ１及びＲ２がそれぞれメチル基である場合、並びにＲ１がメチル基であり、Ｒ２がイソプロピル基である場合を好ましく挙げることができる。
（Ａ）ホルミル化工程
本発明の方法においては、上記の２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物（化合物２）にホルミル化剤を反応させて、化合物２の４″位の水酸基をホルミル化して化合物３を得る。
このホルミル化の工程においては、ホルミル化剤としては、水酸基にホルミル基を導入し得る試薬であれば任意の試薬を用いることができ、例えば、ギ酸−無水酢酸、ギ酸ナトリウム−塩化アセチル等のギ酸類−酢酸化合物混合物、並びに１−ホルミルイミダゾールを挙げることができる。好ましくはギ酸類−酢酸化合物混合物、更に好ましくはギ酸−無水酢酸を使用することができる。これらホルミル化剤は、単独又は二種以上を混合して使用しても良い。なお、ギ酸類−酢酸化合物混合物は、予め別途混合して調製したものを加えても良いし、別々に加えて反応系内で調製しても良い。その際のギ酸類と酢酸化合物の混合割合については、使用するギ酸類と酢酸化合物の種類によって最適な範囲は異なるが、例えば、ギ酸−無水酢酸を使用する場合には、ギ酸１モルに対して、好ましくは無水酢酸約０．５〜１．０モル、ギ酸ナトリウム−塩化アセチルを使用する場合には、ギ酸ナトリウム１モルに対して、好ましくは塩化アセチル約１．０〜２．０モルを使用する。
前記ホルミル化剤の使用量は、化合物２に対して、好ましくは約１〜１０倍モル、更に好ましくは約２〜７倍モル、特に好ましくは約４〜６倍モルである。
ホルミル化工程は、反応速度を向上させるために、塩基の存在下で行うのが望ましい。使用し得る塩基としては、好ましくは有機塩基、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；トリエチルアミン等の三級アミン類；ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン等の二級アミン類を挙げることができる。特に好ましくはピリジンを使用することができる。これら塩基は、単独又は二種以上を混合して使用しても良い。
前記塩基の使用量は、化合物２に対して、好ましくは約１．０〜５．０倍モル、更に好ましくは約１．０〜１．５倍モルである。なお、化合物２が、化合物１を塩基の存在下でアセチル化することによって得たものであり、アセチル化の工程で得られた化合物２をそのままこのホルミル化の反応に付す場合は、更に塩基を加えることなく反応を行ってもよい。
ホルミル化は、溶媒の存在下で行うのが望ましい。使用する溶媒及びその量は、反応を阻害しないものならば特に限定されないが、アセチル化、ホルミル化及びヘミケタール化の全ての工程において反応を阻害しないものを好適に用いることができる。例えば、酢酸エチル等のカルボン酸エステル類；アセトン等のケトン類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化脂肪族炭化水素類を挙げることができるが、好ましくは酢酸エチル、アセトン、更に好ましくは酢酸エチルを使用することができる。これら溶媒は、単独又は二種以上を混合して使用しても良い。
前記溶媒の使用量は、反応液の均一性や攪拌性により適宜調節し得るが、化合物２  １モルに対して、好ましくは１０００〜５０００ｍｌ、更に好ましくは２２００〜４４００ｍｌである。なお、化合物２が、化合物１を溶媒中でアセチル化することによって得たものであり、アセチル化の工程で得られた化合物２をそのままこのホルミル化の反応に付す場合は、当然ながらアセチル化で用いたのと同じ溶媒で反応を行うことができる。
ホルミル化は、例えば、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴン、ヘリウム等）の雰囲気にて、化合物２（アセチル化の後そのままホルミル化するのであれば、単離・精製されていなくとも良い）、ホルミル化剤、塩基及び溶媒を混合して反応させる等の方法によって行う。その際の反応温度は、好ましくは約−４０〜５℃、更に好ましくは−２０〜０℃であり、反応圧力は特に制限されない。反応時間は、好ましくは約７時間である。
本発明のホルミル化工程によって得られた化合物３は、反応終了後、一旦、蒸留、再結晶、カラムクロマトグラフィー等による一般的な方法によって単離・精製した後に、次のヘミケタール化工程に付してもよいが、化合物３を単離・精製せずにホルミル化工程からヘミケタール化工程を連続して行うのが反応の操作上より好ましい。
（Ｂ）ヘミケタール化工程
ヘミケタール化においては、先の工程でホルミル化された化合物３に酸を反応させることにより、６位の水酸基と９位のケト基とをヘミケタール化して化合物４とした後、水性溶液中、塩基性水溶液を加えることによって化合物４を結晶として析出させる。この工程により、化合物４を遊離の結晶として得ることができる。
ヘミケタール化において、使用し得る酸としては、好ましくは有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、プロピオン酸等を挙げることができるが、特にギ酸を好ましく使用することができる。これらの酸は、単独又は二種以上を混合して使用しても良い。なお、先のホルミル化の工程で出発化合物として使用した化合物２が、化合物１を酸の存在下でアセチル化することによって得たものであり、アセチル化工程からホルミル化及びヘミケタール化工程を連続して行う場合、又はホルミル化工程においてギ酸などの酸を使用し、ホルミル化工程からヘミケタール化工程を連続して行う場合には、更に酸を加えることなく反応を行ってもよい。
前記酸の使用量は、化合物３に対して、好ましくは約２〜１００倍モル、更に好ましくは約４〜２０倍モル、特に好ましくは約５〜１５倍モルである。
ヘミケタール化は、溶媒の存在下で行うのが望ましく、使用し得る溶媒及びその量は、先のホルミル化において記載したものと同じである。なお、先のホルミル化の工程で出発化合物として使用した化合物２が、化合物１を溶媒中でアセチル化することによって得たものであり、アセチル化からホルミル化及びヘミケタール化を連続して行う場合、又はホルミル化において溶媒を使用し、ホルミル化からヘミケタール化を連続して行う場合には、当然ながらアセチル化又はヘミケタール化工程と同じ溶媒で反応を行うことができる。
酸により化合物３をヘミケタール化して化合物４とした後、化合物４を結晶として析出させるために加える塩基性水溶液としては、好ましくは無機塩基の塩基性水溶液、例えば、水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液等のアルカリ金属水酸化物水溶液；水酸化カルシウム水溶液、水酸化マグネシウム水溶液等のアルカリ土類金属水酸化物水溶液；炭酸ナトリウム水溶液、炭酸カリウム水溶液等のアルカリ金属炭酸塩水溶液；炭酸水素ナトリウム水溶液、炭酸水素カリウム水溶液等のアルカリ金属炭酸水素塩水溶液を挙げることができる。好ましくは水酸化ナトリウム水溶液、水酸化カリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液、更に好ましくは水酸化ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液を使用することができる。これら塩基性水溶液は、単独又は二種以上を混合して使用しても良い。なお、塩基性水溶液は、予め別途調製したものを加えても良いし、水と塩基を別々に加えて反応系内で調製しても良い。その際の塩基性水溶液の濃度は、特に制限されないが、好ましくは約０．１〜１０モル／Ｌ、更に好ましくは約１〜７モル／Ｌである。
前記塩基性水溶液の使用量は、反応液のｐＨを、好ましくは約６．５〜１０．０、更に好ましくは約７．０〜９．０にする量ならば特に制限されない。
このヘミケタール化及び結晶を析出させる工程は、例えば、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴン、ヘリウム等）の雰囲気にて、化合物３（単離・精製されていなくとも良い）、酸及び溶媒を混合して、好ましく約は０〜６０℃、更に好ましくは約２０〜５０℃で、約２時間反応させることにより行う。その後、塩基性水溶液を、反応液の温度が、好ましくは約−５〜３０℃、更に好ましくは約０〜２０℃になるようにして加えて、化合物４を遊離の結晶として析出させる。この工程における反応温度、反応圧力は特に制限されない。なお、塩基性水溶液を加える前に、反応液を水又は無機塩の水溶液で洗浄することにより、塩基性水溶液の使用量を低減させることもできる。
上記のヘミケタール化工程によって得られ、結晶として析出された化合物４は、反応終了後、濾過した後に、水又は無機塩の水溶液で洗浄及び乾燥させて単離・精製することができるが、引き続き、以下の精製工程を行うことによって、更に高純度の化合物４を得ることができる。
（Ｃ）精製工程
この精製工程では、先のヘミケタール工程で得られ、結晶として析出させた化合物４を、有機溶媒に溶解後、水又は無機塩の水溶液で洗浄した後に濃縮し、次いで、濃縮液を飽和炭化水素溶媒中で加熱攪拌することによって再結晶させることにより、更に高純度の化合物４の結晶を得ることができる。
精製工程において使用する有機溶媒としては、化合物４を溶解するものならば特に限定されず、例えば、酢酸エチル等のカルボン酸エステル類；トルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類；塩化メチレン等のハロゲン化脂肪族炭化水素類を挙げることができるが、好ましくは酢酸エチル、塩化メチレン、更に好ましくは酢酸エチルを使用することができる。
前記有機溶媒の使用量は、化合物４を完全に溶解するのに充分な量であれば特に制限されないが、化合物４  １モルに対して、好ましくは約１５００〜６００００ｍｌ、好ましくは約９０００〜３００００ｍｌである。化合物１のアセチル化の工程で得られた化合物２をそのままホルミル化及びそれに続くヘミケタール化の反応に付している場合は、アセチル化工程において使用した化合物１  １モルに対して、好ましくは約１０００〜３００００ｍｌ、更に好ましくは約５０００〜１５０００ｍｌである。
精製工程において、化合物４を有機溶媒に溶解して得た溶液を洗浄するために使用する無機塩の水溶液としては、中性の無機塩の水溶液を好ましく挙げることができ、例えば、塩化ナトリウム水溶液等を使用することができる。なお、無機塩の水溶液の濃度は、特に制限されない。
上記のように洗浄後の化合物４の溶液と混合し、加熱撹拌するために使用し得る飽和炭化水素溶媒としては、好ましくは直鎖状、分岐状又は環状の炭素数５〜１２の飽和炭化水素、例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン（以上は各種異性体を含む）、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロペンタン等を挙げることができるが、好ましくはヘキサン、シクロヘキサン、更に好ましくはヘキサンを使用することができる。これらの飽和炭化水素溶媒は、単独又は二種以上を混合して使用しても良い。
前記飽和炭化水素溶媒の使用量は、精製する化合物４  １モルに対して、好ましくは約９００〜３８０００ｍｌ、更に好ましくは約３８００〜１３０００ｍｌである。化合物１のアセチル化の工程で得られた化合物２をそのままホルミル化及びそれに続くヘミケタール化の反応に付している場合は、アセチル化工程において使用した化合物１  １モルに対して、好ましくは約５００〜２００００ｍｌ、更に好ましくは約２０００〜７０００ｍｌである。
この精製工程においては、ヘミケタール工程で得られ、塩基性水溶液を加えることによって結晶として析出させた化合物４を、上述した有機溶媒に溶解後、水又は無機塩の水溶液で洗浄した後に、溶液の体積が約０．０５〜０．５倍になるまで濃縮し、次いで、濃縮液を飽和炭化水素溶媒と混合し、好ましくは約３５〜１００℃、更に好ましくは約５０〜８０℃で、約０．５時間、加熱して攪拌する等の方法によって再結晶させることにより精製を行う。なお、精製された高純度の化合物４の結晶は、濾過後、洗浄及び乾燥することによって、容易に単離することができる。
（Ｄ）アセチル化工程
上述したように本発明の方法は、２′位がアセチル化されたエリスロマイシンＡ化合物である２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物（化合物２）から２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物（化合物４）を製造する方法に関するが、この化合物２は、エリスロマイシンＡ化合物（化合物１）に、アセチル化剤を反応させて、化合物１の２′位の水酸基をアセチルすることによって得ることができる。したがって本発明はまた、上記の本発明の方法において、化合物２にホルミル化剤を反応させる前に、上記式（１）のエリスロマイシンＡ化合物（化合物１）に、アセチル化剤を反応させて、式（２）の化合物２を得る工程を更に含む方法にも関する。
このアセチル化工程において使用するアセチル化剤としては、例えば、無水酢酸；塩化アセチル等のハロゲン化アセチル；酢酸ナトリウム等の酢酸塩；１−アセチルイミダゾールを挙げることができるが、好ましくは無水酢酸、塩化アセチル、更に好ましくは無水酢酸を使用することができる。これらアセチル化剤は、単独又は二種以上を混合して使用してもよい。
前記アセチル化剤の使用量は、化合物１に対して、好ましくは約１．０〜２．０倍モル、更に好ましくは約１．０〜１．５倍モル、特に好ましくは約１．０〜１．２倍モルである。
アセチル化工程は、反応速度を向上させる上で、塩基の存在下で行うのが望ましい。使用される塩基としては、好ましくは有機塩基、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン等のピリジン類；トリエチルアミン等の三級アミン類；ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピロリジン、ピペリジン、モルホリン等の二級アミン類を挙げることができるが、特に好ましくはピリジンを使用することができる。これら塩基は、単独又は二種以上を混合して使用してもよい。
前記塩基の使用量は、化合物１に対して、好ましくは約１．０〜５．０倍モル、更に好ましくは約１．０〜１．５倍モルである。
アセチル化工程は、溶媒の存在下で行うのが望ましい。使用し得る溶媒としては、反応を阻害しないものならば特に限定されないが、アセチル化工程、及びこれに引き続いて行うホルミル化工程及びヘミケタール化工程の全ての工程において反応を阻害しないものを用いるのが好ましい。このような溶媒としては、例えば、酢酸エチル等のカルボン酸エステル類；アセトン等のケトン類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化脂肪族炭化水素類を挙げることができるが、好ましくは酢酸エチル、アセトン、更に好ましくは酢酸エチルを使用することができる。これら溶媒は、単独又は二種以上を混合して使用してもよい。
前記溶媒の使用量は、反応液の均一性や攪拌性により適宜調節することができるが、化合物１  １モルに対して、好ましくは約１０００〜５０００ｍｌ、更に好ましくは約２２００〜４４００ｍｌである。
アセチル化工程は、例えば、不活性ガス（例えば、窒素、アルゴン、ヘリウム等）の雰囲気にて、化合物１、アセチル化剤、塩基及び溶媒を混合して反応させる等の方法によって行うことができる。その際の反応温度は、好ましくは約０〜５０℃、更に好ましくは１０〜３０℃であり、反応時間は、約１時間であり、反応圧力は特に制限されない。
アセチル化工程によって得られた化合物２は、反応終了後、一旦、蒸留、再結晶、カラムクロマトグラフィー等による一般的な方法によって単離・精製した後に、次の本発明のホルミル化工程に使用することができるが、化合物２を単離・精製せずにアセチル化工程からホルミル化工程を連続して行うのが反応の操作上より好ましい。
上述したように本発明の方法は、２′位がアセチル化されたエリスロマイシンＡ化合物である２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物（化合物２）から出発してホルミル化及びヘミケタール化により得られた２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物（化合物４）に、水性溶液中、塩基性水溶液を加えることによって、高純度の遊離結晶として析出させる方法に関する。本発明の方法の工程のうち、塩基性水溶液を加えることによって、化合物４を含む水性溶液から該化合物を高純度の遊離結晶として析出させることにより該化合物を単離精製する方法もまた、本発明の一部とすることができる。したがって、本発明はまた、式（４）：
0004166688.tif 000012
式中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立して、低級アルキル基を表す、
で示される２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物を単離精製する方法であって、該化合物及び不純物を含む水性溶液中に塩基性溶液を加えることによって、該水性溶液から該化合物を遊離結晶として析出させることを特徴とする方法にも関する。本方法により、上述したような一連の工程を経て製造された２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物に加えて、単離が困難である各種副生成物を含む反応溶液から、２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物を選択的に析出させることによって、該化合物の高純度結晶を得ることができる。
なお、本願発明の方法において出発化合物として使用される式（２）の化合物を得るために使用される式（１）のエリスロマイシンＡ化合物は、特開平９−１００２９１号（対応米国特許第５９５９０８８号）に記載の方法、及び当業界において周知の方法により調製することができる。
実施例
次に、実施例及び比較例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらに限定されるものではない。
実施例１
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積２００００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１、特開平９−１００２９１号に記載の方法により得た）１０００ｇ（１．３６ｍｏｌ）、無水酢酸１６７ｇ（１．６４ｍｏｌ）、ピリジン１７２ｇ（２．１８ｍｏｌ）及び酢酸エチル４０００ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、ギ酸５６４ｇ（１２．３ｍｏｌ）及び無水酢酸６２６ｇ（６．１３ｍｏｌ）の混合物を添加し、−５℃で８時間、１０℃で３時間、５０℃で２時間反応させた。
反応終了後、反応混合液の液温を１０℃に保ちながら、水３０００ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液３７３０ｍｌ（２２．４ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．０〜７．５に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム３０ｇ（０．３６ｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．４〜７．７に調整して−５〜１５℃で２時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶７１８ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９７．４％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．６：１．４であった。
引き続き、前記の白色結晶を酢酸エチル１１１１０ｍｌに溶解した後、１５質量％塩化ナトリウム水溶液１１００ｇで洗浄し、有機層を取り出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン６８００ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル１２００ｍｌを加えた後に０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９７．４％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ５１９ｇを得た（化合物１基準の単離収率：４８％）。
なお、化合物４の物性値は以下の通りであった。
融点；２３３〜２３６℃
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、δ（ｐｐｍ））；０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）、１．５５（３Ｈ，ｓ）、２．０５（３Ｈ，ｓ）、２．２７（６Ｈ，ｓ）、３．３６（３Ｈ，ｓ）、４．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）、４．８６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．１，２．４Ｈｚ）、５．１６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ）、８．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ）
実施例２
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積１０００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１）５０ｇ（６８ｍｍｏｌ）、無水酢酸８．４ｇ（８２ｍｍｏｌ）、ピリジン８．６ｇ（１１０ｍｍｏｌ）及び酢酸エチル２００ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、ギ酸２８．２ｇ（６１０ｍｍｏｌ）及び無水酢酸３１．３ｇ（３１０ｍｍｏｌ）の混合物を添加し、−５℃で７時間、１０℃で１４時間、５０℃で２時間反応させた。
反応終了後、反応混合液の液温を１０℃に保ちながら、水１５０ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１８４ｍｌ（１．１ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．０〜７．７に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム１．５ｇ（１８ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．５〜８．６に調整して−５〜１５℃で２時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶２８．９ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９６．２％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．２：１．８であった。
実施例３
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積１０００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１）１００ｇ（１４０ｍｍｏｌ）、無水酢酸１６．７ｇ（１６０ｍｍｏｌ）、ピリジン１７．２ｇ（２２０ｍｍｏｌ）及び酢酸エチル４００ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、ギ酸５６．４ｇ（１２３０ｍｍｏｌ）及び無水酢酸６２．６ｇ（６２０ｍｍｏｌ）の混合物を添加し、−５〜０℃で８時間、１０〜１５℃で１１時間、４０〜５０℃で２時間反応させた。
反応終了後、反応混合液を２分割した（以下、それぞれ、反応混合液Ａ及び反応混合液Ｂと称する）。
反応混合液Ａの液温を１０℃に保ちながら、水１５０ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１８２ｍｌ（１．１ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．４６に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム１．５ｇ（１８ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．８〜８．１に調整して−５〜１５℃で３時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶３３．８ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９６．６％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．４：１．６であった。
引き続き、前記の白色結晶を酢酸エチル５５５ｍｌに溶解した後、１５質量％塩化ナトリウム水溶液５０ｍｌで２回洗浄し、有機層を取り出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン３４０ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル６０ｍｌを加えた後に０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９７．４％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ２６．０ｇを得た（化合物１基準の単離収率：２４％）。
反応混合液Ｂの液温を１０℃に保ちながら、水１５０ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１８０ｍｌ（１．１ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．４７に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム１．５ｇ（１８ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．５〜８．０に調整して−５〜０℃で１時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶２９．０ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９６．９％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．５：１．５であった。
引き続き、前記の白色結晶を酢酸エチル５５５ｍｌに溶解した後、１５質量％塩化ナトリウム水溶液５０ｍｌで２回洗浄し、有機層を取り出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン３４０ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル６０ｍｌを加えた後に０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９７．９％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ２１．０ｇを得た（化合物１基準の単離収率：２０％）。
実施例４
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積１０００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１）１００ｇ（１４０ｍｍｏｌ）、無水酢酸１６．７ｇ（１６０ｍｍｏｌ）、ピリジン１７．２ｇ（２２０ｍｍｏｌ）及び酢酸エチル４００ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、ギ酸５６．４ｇ（１２３０ｍｍｏｌ）及び無水酢酸６２．６ｇ（６２０ｍｍｏｌ）の混合物を添加し、−１０〜５℃で８．５時間、１１℃で１４．５時間、４０〜５０℃で２時間反応させた。
反応終了後、反応混合液を２分割した（以下、それぞれ、反応混合液Ａ及び反応混合液Ｂと称する）。
反応混合液Ａの液温を１０℃に保ちながら、水１５０ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１８３．５ｍｌ（１．１ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを８．１０に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム１．５ｇ（１８ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを８．３〜８．４に調整して−５〜１５℃で２時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶を得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９６．１％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．１：１．９であった。
引き続き、前記の白色結晶を酢酸エチル５５５ｍｌに溶解した後、飽和塩化ナトリウム水溶液１００ｍｌで２回洗浄し、有機層を取り出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン３４０ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル３４０ｍｌを加えた後に０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９７．１％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ２５．７ｇを得た（化合物１基準の単離収率：２４％）。
反応混合液Ｂの液温を１０℃に保ちながら、水１５０ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１８１．６ｍｌ（１．１ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．０８に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム１．５ｇ（１８ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．６〜７．７に調整して−５〜１５℃で２時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶３４．０ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９６．３％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．２：１．８であった。
引き続き、前記の白色結晶を酢酸エチル５５５ｍｌに溶解した後、飽和塩化ナトリウム水溶液１００ｍｌで２回洗浄し、有機層を取り出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン３４０ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル６０ｍｌを加えた後に０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９７．３％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ２６．１ｇを得た（化合物１基準の単離収率：２４％）。
実施例５
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積１００００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１）１０４１ｇ（１．４２ｍｏｌ）、無水酢酸１７４ｇ（１．７０ｍｏｌ）、ピリジン１７９ｇ（２．１８ｍｏｌ）及び酢酸エチル４１６４ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、ギ酸５８８ｇ（１２．７ｍｏｌ）及び無水酢酸６５２ｇ（６．３９ｍｏｌ）の混合物を添加し、−５〜０℃で９時間、１０〜２０℃で１２時間、４０〜５０℃で３時間反応させた。
反応終了後、反応混合液の液温を３０℃に保ちながら、３質量％塩化ナトリウム水溶液２０８２ｍｌ、１０質量％塩化ナトリウム水溶液２０８２ｍｌの順で洗浄し、水２６００ｍｌ、７．５モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１６５０ｍｌ（１２．４ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．０〜７．７に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム３０ｇ（３６ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．８〜８．２に調整して０〜１０℃で１時間攪拌し、遊離の結晶を析出させた。得られた結晶を濾過して、白色結晶９３０ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は９４．８％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９８．３：１．７であった。
引き続き、前記の白色結晶を酢酸エチル１３８４９ｍｌに溶解した後、飽和塩化ナトリウム水溶液１２５０ｇで２回洗浄し、有機層を取り出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン７０７９ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル１２４９ｍｌを加えた後に０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９７．３％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ５９２ｇを得た（化合物１基準の単離収率：５３％）。
参考例１（未精製２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール（化合物４）の合成）
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積３０００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１）３００ｇ（４０９ｍｍｏｌ）、無水酢酸５０．４ｇ（４９４ｍｍｏｌ）、ピリジン５１．８ｇ（６５５ｍｍｏｌ）及び酢酸エチル１２００ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、ギ酸１６９．３ｇ（３．６８ｍｏｌ）及び無水酢酸１８８．３ｇ（１．８４ｍｏｌ）の混合物を添加し、０〜５℃で３時間、１０〜２０℃で１２時間、４０〜５０℃で３時間反応させた。
反応終了後、反応混合液の液温を２０℃に保ちながら、水９００ｍｌ、６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１１２５ｍｌ（６．７５ｍｏｌ）の順で添加して、反応液のｐＨを７．７に調整した。更に、炭酸水素ナトリウム１０ｇ（１１９ｍｍｏｌ）を加え、反応液のｐＨを７．９に調整して、遊離の結晶を析出させた。反応液を濾過して結晶と母液に分離し、母液は水層を分離後、有機層を飽和塩化ナトリウム水溶液６１５ｍｌで２回洗浄した。また、結晶は酢酸エチル３３３０ｍｌに溶解した後、飽和塩化ナトリウム水溶液６１５ｍｌで２回洗浄し、有機層を取り出し、前記の母液と混合し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、濾液を減圧下で濃縮し、濃縮液とｎ−ヘキサン２０５５ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル３６０ｍｌを加えた後に、０〜５℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶２３６ｇを得た（化合物１基準の単離収率：７３％）。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、未精製２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は純度９１．１％（面積百分率、分析条件１）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール）の存在比は、９４．６：５．４であった。
実施例６
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積２００ｍｌのフラスコに、参考例１で得られた未精製２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール（化合物４）８．０ｇ（１０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル４０ｍｌ及び水６０ｍｌを加え、０〜１０℃で攪拌させた。同温度でギ酸０．５６ｇ（１２ｍｍｏｌ）を添加し、その後３モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液６．５ｍｌ（１９．５ｍｍｏｌ）を添加して、反応液のｐＨを６．２〜７．９に調整して０〜１０℃で１時間攪拌し、結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９６．４％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  ５．９ｇを得た（未精製化合物４基準の単離収率：７４％）。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール）の存在比は、９８．５：１．５であった。
実施例７
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積２００ｍｌのフラスコに、参考例１で得られた未精製２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール（化合物４）１６．０ｇ（２０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル８０ｍｌ及び水６０ｍｌを加え、０〜１０℃で攪拌させた。同温度でギ酸１．１２ｇ（２４ｍｍｏｌ）を添加し、その後６モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液４．０ｍｌ（２４ｍｍｏｌ）を添加して、反応液のｐＨを９．４に調整して０〜１０℃で１時間攪拌し、結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９５．９％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４  １０．０ｇを得た（未精製化合物４基準の単離収率：６３％）。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール）の存在比は、９８．０：２．０であった。
実施例８
攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積２００ｍｌのフラスコに、参考例１で得られた未精製２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール（化合物４）１２．０ｇ（２０ｍｍｏｌ）、酢酸エチル６０ｍｌ及び水９０ｍｌを加え、０〜１０℃で攪拌させた。同温度で、ギ酸ナトリウム２２．５ｇ（３３１ｍｍｏｌ）及びギ酸２．４６ｇ（５３ｍｍｏｌ）を添加し、その後３モル／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液１５ｍｌ（４５ｍｍｏｌ）を添加して、反応液のｐＨを７．７に調整して０〜１０℃で１時間攪拌し、結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶として純度９５．５％（高速液体クロマトグラフィーによる面積百分率、分析条件１）の化合物４８．８ｇを得た（未精製化合物４基準の単離収率：７３％）。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ６，９−ヘミケタール）の存在比は、９７．８：２．２であった。
比較例１
特開平９−１００２９１号公報に記載の方法に順じて、２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）を調製した。攪拌装置、温度計及び滴下漏斗を備えた内容積３００ｍｌのフラスコに、エリスロマイシンＡ（化合物１）２０．４４ｇ（２７．８ｍｍｏｌ）、無水酢酸３．４１ｇ（３３．４ｍｍｏｌ）、ピリジン３．５３ｇ（４４．６ｍｍｏｌ）及び酢酸エチル８２ｍｌを加え、２０〜３０℃で１時間反応させた。その後、反応液を０℃に保ちながら、ギ酸１１．５４ｇ（２５１ｍｍｏｌ）及び無水酢酸１２．８ｇ（１２５ｍｍｏｌ）の混合物を添加し、そのまま３時間反応させ、室温で一晩放置後、４０〜５０℃で２時間反応させた。
反応終了後、酢酸エチル１２３ｍｌを加え、氷水１２３ｍｌで洗浄した。有機層を分離し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液１２３ｍｌ（１３６ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム１４．０ｇ（１６７ｍｍｏｌ）を加えて中和した（ｐＨ＝６．５）。再び、有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液４１ｍｌで３回洗浄後、酢酸エチル３０ｍｌを加え、更に飽和塩化ナトリウム水溶液４１ｍｌで洗浄した。中和後の水層を酢酸エチル７０ｍｌで抽出し、先の有機層と合わせて無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した後、濃縮液とｎ−ヘキサン１３９ｍｌを混合し、還流（６７℃）させながら３０分間、更に室温まで冷却して酢酸エチル２５ｍｌを加えた後に０℃で１時間攪拌した。得られた結晶を濾過して乾燥させ、白色結晶１５．５５ｇを得た。その結晶を高速液体クロマトグラフィーにより分析したところ（分析条件１）、目的物とする２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール（化合物４）の純度は８７．０％（面積百分率）であった。なお、化合物４と副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）の存在比は９５．６：４．３であった。
なお、実施例１で得られた化合物４の結晶の純度を１００％として、高速液体クロマトグラフィーで分析（内部標準法、分析条件１）したところ、前記結晶中の化合物４の含有率は８０％であった。
なお上記の実施例、参考例及び比較例における高速液体クロマトグラフィーの分析条件は、以下の通りである。
−分析条件１−
カラム：クロマシル（Ｋｒｏｍａｓｉｌ）ＫＲ１００−５Ｃ１８
カラム温度：３０℃
流出溶媒：アセトニトリル／水／２８％アンモニア水（＝７００／３００／３（容量比））
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２１５ｎｍ
−分析条件２−
カラム：エル−カラム（Ｌ−ｃｏｌｕｍｎ）ＯＤＳ
カラム温度：２５℃
流出溶媒：アセトニトリル／水／２８％アンモニア水（＝７２５／２７５／４０（容量比））
流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ．
検出波長：２１５ｎｍ
産業上の利用可能性
本発明により、２′−Ｏ−アセチルエリスロマイシンＡ化合物から出発して、副生成物（１１−Ｏ−ホルミル−２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール）をほとんど含まない高純度の２′−Ｏ−アセチル−４″−Ｏ−ホルミル−８，９−アンヒドロエリスロマイシンＡ  ６，９−ヘミケタール化合物（化合物４）を結晶で得ることを可能とする、工業的に好適なエリスロマイシン化合物の製法を提供することができる。