(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
0004077052.tif 000032
（式中、
Ｒは、２−１６炭素原子を有する直鎖または分枝、飽和または不飽和アルカノイル基、
Ｙは、３−６炭素原子を有する直鎖または分枝アルキレン、またはオルソ、メタまたはパラ−キシリレン、
Ｘ−は、薬理学的に許容可能な酸のアニオン）
のＤＬ−、Ｄ−、Ｌ−カルニチンエステル。
【請求項２】
Ｒが９−１３炭素原子を有するアルカノイル基である、請求項１のエステル。
【請求項３】
Ｙがトリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレンおよびヘキサメチレンから選択される、請求項１のエステル。
【請求項４】
Ｘ−は、クロライド、ブロマイド、メタンスルフォネート、ホスフェート、酸フマレート、フマレート、酸タルトレートおよびタルトレートから選択される、請求項１のエステル。
【請求項５】
ビス（ウンデカノイル−Ｌ−カルニチンクロライド）p−キシリレンジエステル、ビス（トリデカノイル−Ｌ−カルニチンクロライド）トリメチルジエステル、ビス（ウンデカノイル−Ｌ−カルニチンクロライド）o−キシリレンジエステル、ビス（ウンデカノイル−Ｌ−カルニチンクロライド）m−キシリレンジエステルおよびビス（ウンデカノイル−Ｄ−カルニチンクロライド）p−キシリレンジエステルからなる群から選択される、請求項１のエステル。
【請求項６】
式（Ｉ）
【化２】
0004077052.tif 000033
（式中、
Ｒは、２−１６炭素原子を有する直鎖または分枝、飽和または不飽和アルカノイル基、
Ｙは、３−６炭素原子を有する直鎖または分枝アルキレン、またはオルソ、メタまたはパラ−キシリレン、
Ｘ−は、薬理学的に許容可能な酸のアニオン）
の化合物を活性成分としておよびその薬理学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項７】
細菌、イースト、真菌および原虫による皮膚疾患の治療のために、局所適用するのに適した、請求項６の組成物。
【請求項８】
式（Ｉ）の化合物を０.５−２重量％およびその薬理学的に許容される賦形剤を含む、請求項７の組成物。
【請求項９】
クリーム、軟膏、ゲル、ローションまたは溶液の形態での請求項７または８の組成物。
【請求項１０】
ａ）アルカノイルＬ−カルニチン内部塩を有機無水不活性溶媒中に懸濁し、
ｂ）懸濁液に０℃−１０℃で式Ｚ−Ｙ−Ｚ（Ｙは上記の意味を有し、Ｚはハロゲンである）の化合物をアルカノイルＬ−カルニチンの１／２モルに匹敵する量で加え、
ｃ）懸濁液を20℃−50℃で２４時間撹拌して、懸濁液を完成に溶液とし、
ｄ）溶媒を加えることにより反応粗生成物を沈澱せしめ、濾過し、アセトンまたはメチルエチルケトンで洗浄して、固体の生成物を得て、
ｅ）生成物を水に溶かし、式ＨＸの適当な酸で活性化した強力な塩基性樹脂で溶出し、望ましい形で塩の形成した生成物を得て、
ｆ）固体の生成物を単離するために溶出物を凍結乾燥し、
ｇ）Ｈ２Ｏ／ＣＨ３Ｎ７０：３０による溶出でＣ８シリカクロマトグラフィーにより工程（ｆ）の固体物を精製する、
の工程を含む、式（Ｉ）
【化３】
0004077052.tif 000034
（式中、
Ｒは、２−１６炭素原子を有する直鎖または分枝、飽和または不飽和アルカノイル基、
Ｙは、３−６炭素原子を有する直鎖または分枝アルキレン、またはオルソ、メタまたはパラ−キシリレン、
Ｘ−は、薬理学的に許容可能な酸のアニオン）
の化合物を製造する方法。
【請求項１１】
ａ'）アルカノイルＬ−カルニチン酸クロライドを有機無水不活性溶媒中に懸濁し、
ｂ'）懸濁液に室温で式Ｚ−Ｙ−Ｚ（Ｙは上記の意味を有し、ＺはＯＨ）の化合物をアルカノイルＬ−カルニチンの１／２モルに匹敵する量で加え、
ｃ'）懸濁液を室温で１６−２４時間撹拌して、懸濁液を完成に溶液とし、
ｄ'）溶液を減圧で濃縮して乾燥し、
ｅ'）Ｈ２Ｏ／ＣＨ３ＣＮ溶液での溶出でシリカゲルクロマトグラフィーにより得た粗生成物を精製し、
ｆ'）化合物を濃縮および続いての凍結乾燥により単離する
の工程を含む、式（Ｉ）
【化４】
0004077052.tif 000035
（式中、
Ｒは、２−１６炭素原子を有する直鎖または分枝、飽和または不飽和アルカノイル基、
Ｙは、３−６炭素原子を有する直鎖または分枝アルキレン、またはオルソ、メタまたはパラ−キシリレン、
Ｘ−は、薬理学的に許容可能な酸のアニオン）
の化合物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、下記の式のＤＬ−、Ｄ−、Ｌ−カルニチンエステルに関する。
【化５】
0004077052.tif 000002
式中、
Ｒは、２−１６炭素原子を有する直鎖または分枝、飽和または不飽和のアルカノイル基、
Ｙは、３−６炭素原子を有する直鎖または分枝アルキレン、またはオルソ、メタまたはパラ−キシリレン、
Ｘ-は、薬理学的に許容可能な酸のアニオン、である。
式（Ｉ）の化合物では２つのキメラセンターを有する。これらの各々は、ＤまたはＬ立体配置であって、夫々独立して存在し得る。
式（Ｉ）の化合物は、強力な抗菌、抗真菌および抗原虫活性を有している。
【０００２】
本発明はまた、単純または混合感染の病原体として細菌、イースト、真菌または原虫により引きおこされた皮膚病の治療のために、化合物（Ｉ）および医薬組成物を製造する方法にも関する。
【０００３】
本発明の組成物によって治療され得る皮膚感染症の例として、皮膚糸状菌（ティネア・コルポリス、ティネア・カルリス、ティネア・カピティス、ティネア・ペディス、ティネア・バーバエ、ティネア・アングイス）によるもの、鳶口瘡、ケリティス、鼻咽炎、外陰部膣炎、亀頭包皮炎、間擦疹、癜風粃糠疹、耳炎、卵巣膣炎、爪床周囲炎などのイースト様糸状体によるもの、膿痂疹、スタフィロコッカス鼻キャリッジ、紅色陰癬、膣症などの細菌によるもの、皮膚レイヒマニアシスなどの原虫によるもの、アカンタモエバによる角膜炎、トリコモナスによる膣炎がある。
【０００４】
混合皮膚感染には、外陰部膣炎、膣症、亀頭炎、亀頭包皮炎、卵巣膣炎、爪床周囲炎があり、糖尿病患者の感染皮膚潰瘍、外耳感染、免疫不全患者の感染などが挙げられる。
【０００５】
本発明の組成物は、最も普通の抗カビ、抗生物質に酸性菌による皮膚病因の治療および外科的にむき出された組織の感染防御にも有用である。
式（Ｉ）の化合物において、Ｒは望ましくは９−１３炭素原子を有し、
Ｒは、望ましくはデカノイル、ウンデカノイルおよびトリデカノイルであり、
Ｙは、望ましくはトリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレンおよびオルソ、メタまたはパラ−キシリレンから選択され、
Ｘ-は、望ましくはクロライド、ブロマイド、メタンスルフォネート、ホスフェート、酸フマレート、フマレート、酸タルタレートおよびタルタレートより選択される。
【０００６】
式（Ｉ）の化合物は皮膚疾患の治療に特に有効であるので、本発明の望ましい組成物は、クリーム、軟膏、ゲル、ローション、溶液などの局所使用に適した皮膚製剤である。適切な組成物は、０.５−２重量％、望ましくは１−１.５重量％の式（Ｉ）の化合物の一つを含有している。
【０００７】
本発明の組成物の製造において使用される賦形剤は既知のものであり、薬学および製薬技術の当業者にとって、製造されるべき特定の組成物に関して明らかであろう。
【０００８】
先行技術として、精造および活性の点からして本発明の化合物に最も近似している化合物は、本出願人の知るところでは、下記の式を有するアシルＬ−カルニチンの長鎖エステルである
【化６】
0004077052.tif 000003
（式中、Ｒは２−１６炭素原子を有する直鎖または分枝アシル基、ｎは７−１５の整数、Ｘ-は薬理学的に許容される酸のアニオンである）。これは、本出願と同じ出願人にかかるＥＰ−Ａ−Ｏ ５５２ １３７およびＥＰ−Ａ−０ ５５２ １３８に開示されている。ＥＰ−Ａ−Ｏ ５５２ １３７は抗菌活性を、ＥＰ−Ａ−０ ５５２ １３８は抗真菌活性をそれぞれ本化合物について開示している。
これらの既知化合物のうちで、イソバレリルＬ−カルニチンウンデシルエステルメタンスルホネート（化合物番号ＳＴ １１０３)は、抗菌および抗真菌剤として最も活性であることが示されている。
【０００９】
式（Ｉ）の化合物は既知化合物よりもさらに強力な抗菌および抗真菌活性、優れた皮膚耐性および低い細胞毒性を有していることがここに見出された。
これらの化合物は、既知化合物について以前には開示されていなかった抗原虫活性をも有することが明らかになった。
【００１０】
反応大要に関して、Ａ＝Ｏ-（Ｃl-が除かれている）のとき、反応は次の工程を含む。
ａ）アルカノイルＬ−カルニチン内部塩をＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリルまたはメチレンクロライドなどの有機無水不活性溶媒中に懸濁し、
ｂ）懸濁液に０℃−１０℃で式Ｚ−Ｙ−Ｚ（Ｙは上記の意味を有し、Ｚはハロゲン、望ましくは塩素または臭素、Ｏ−メシルまたはＯ−トシル）の化合物をアルカノイルＬ−カルニチンの１／２モルに匹敵する量で加え、
ｃ）懸濁液を20℃−50℃で２４時間撹拌して、懸濁液を完成に溶液とし、
ｄ）エチルエーテルまたはヘキサンなどの溶媒を加えることにより反応粗生成物を沈澱せしめ、濾過し、アセトンまたはメチルエチルケトンで洗浄して、固体の生成物を得て、
ｅ）生成物を水に溶かし、式ＨＸの適当な酸で活性化したアンベルライトＩＲＡ−４０２などの強力な塩基性樹脂で溶出し、望ましい形での塩の形成した生成物を得て、
ｆ）固体の生成物を単離するために溶出物を凍結乾燥または濃縮し、
ｇ）Ｈ2Ｏ／ＣＨ3Ｎ７０：３０による溶出でＣ8シリカクロマトグラフィーにより工程（ｆ）の固体物を精製する。
【００１１】
別法として、Ａ＝Ｃlの場合、製法に次の工程が含まれる。
ａ'）アルカノイルＬ−カルニチン酸クロライドをＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトニトリルまたはメチレンクロライドなどの有機無水不活性溶媒中に懸濁し、
ｂ'）懸濁液に室温で式Ｚ−Ｙ−Ｚ（Ｙは上記の意味を有し、ＺはＯＨ）の化合物をアルカノイルＬ−カルニチンの１／２モルに匹敵する量で加え、
ｃ'）懸濁液を室温で１６−２４時間撹拌して、懸濁液を完成に溶液とし、
ｄ'）溶液を減圧で濃縮して乾燥し、
ｅ'）Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ溶液での溶出でシリカゲルクロマトグラフィーにより得た粗生成物を精製し、
ｆ'）化合物を濃縮および続いての凍結乾燥により単離する
【００１２】
【化７】
0004077052.tif 000004
【００１３】
本発明の化合物のいくつかについて製法および物理化学的特性を下記の非限定的実施例に示す。
【実施例】
実施例１
ビス（ウンデカノイル−Ｌ−カルニチンクロライド)−Ｐ−キシリレンジエステル（ＳＴ １２２６）の製造
【化８】
0004077052.tif 000005
ウンデカノイルＬ−カルニチン内部塩（８.５g；０.０２５mol）を無水Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド５０mＬに懸濁した。
０℃に冷やして、懸濁液にα,α'−ジブロモｐ−キシレン（３.４g；０.０１３mol）を加えた。得た混合物を４時間撹拌し、完成な溶解が達成された。溶液にエチルエーテルを、ゼリー状の塊が形成するまで加えた。得た粗生成物をアセトンでくり返して洗い、減圧濾過すると固形生成物７gを得た。モル収率６５％（α,α−ジブロモｐ−キシレンより計算）。
生成物を水に溶解し、Ｃl-形で活性化したＩＲＡ−４０２（１４０mＬ）で溶出した。
凍結乾燥溶出物から、やや吸湿性の生成物６.３gを得た。
【００１４】
【表１】
0004077052.tif 000006
【００１５】
実施例２
ビス(ウンデカノイルＬ−カルニチンクロライド)ｐ−キシリレンジエステル（ＳＴ１２２６）の製造（酸クロライドのルート経由、反応大要参照、Ａ＝Ｃl）
ウンデカノイルＬ−カルニチンクロライド（１８g；０.０５mols）をメチレンクロライド５０mＬに懸濁し、得た混合物にチオニルクロライド（７.５mＬ；０.１mols）を加えた。混合物を室温で３時間撹拌した。
混合物を減圧で濃縮し、残査をＥt2Ｏでくり返し洗い、濃縮した。
反応生成物を水性メチレンクロライド（ＳＴ１２２６）に懸濁し、混合物に１,４−ベンゼンジメタノールを少量づつ２時間以上かけて加えた。反応混合物を室温で一夜撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。
反応粗生成物をＣ8シリカゲル上のクロマトグラフィー、Ｈ2Ｏ／ＣＨ3ＣＮ７０：３０での溶出で精製した。
標記化合物（ＳＴ１２２６)を含有する分画を濃縮し、次いで凍結乾燥した。
得た化合物は、実施例１で得た化合物と同じ特性を示した。
【００１６】
実施例３
ビス(トリデカノイルＬ−カルニチンクロライド）トリメチレンジエステル（ＳＴ１２３３）の製造
【化９】
0004077052.tif 000007
トリデカノイルＬ−カルニチン内部塩（５.１５g；０.０１４４moles）を無水Ｎ,Ｎ−ＤＭＦ５０mＬに懸濁した。０℃に冷やし、懸濁液に１,３−ジブロモプロパン（０.７３mＬ；０.００７２moles）を加えた。得た混合物を室温で一夜撹拌した。
次いで、過剰のトリデカノイルＬ−カルニチン内部塩（０.５g）を３度加え、反応混合物が完全に溶けるまで一夜撹拌をさらに続けた。
反応の終了時に、反応粗生成物が完全に沈殿するまでエチルエーテルを加えた。
固体物を濾取し、生成物６gを得、水に溶解して、Ｃl-形で活性化したＩＲＡ−４０２（１２０mＬ）上で溶出した。
標記化合物（ＳＴ１２３３）５gを得た。収率４４％。
【表２】
0004077052.tif 000008
【００１７】
実施例４
ビス（ウンデカノイルＬ−カルニチンクロライド)−ｏ−キシリレンジエステル（ＳＴ１２４９）の製造
【化１０】
0004077052.tif 000009
標記化合物を実施例１記載のように製造し、単離した。収率５８％。
【表３】
0004077052.tif 000010
【００１８】
実施例５
ビス(ウンデカノイルＬ−カルニチンクロライド)−ｍ−キシリレンジエステル（ＳＴ１２５０）の製造
【化１１】
0004077052.tif 000011
標記化合物を実施例１記載のように製造し、単離した。収率７８％。
【表４】
0004077052.tif 000012
【００１９】
本発明化合物の強力な抗菌、抗真菌、抗原虫活性および、上記のイソバレリルＬ−カルニチンウンデシルエステルメチルスルフォネート（ＳＴ１１０３）などの近接先行化合物に対するその優越性をいくつかの薬理学的試験で検定した。その一部を次に記載する。
【００２０】
インビトロ抗菌活性
グラム陽性菌およびグラム陰性菌（皮膚研究所の保存株および新鮮臨床分離株）に対する、ＳＴ１１０３との比較におけるＳＴ１２２６の最小阻止濃度（mcg／ml)。
材料および方法
細菌懸濁をミュラーヒルトンブロスに一夜培養して製し、同じ培地で９６ウエルミクロタイタープレートの各ウエル中の最終濃度が５.０×１０4細胞／mlになるように調整する。ミュラーヒルトンブロス中の物質希釈液（０.３log）を懸濁液に加えて、最終濃度を０.１９−１００mcg／mlの範囲にする。
ミクロタイターを３７℃で１８時間インキュベートする（参照、Ｌ.Ｄ.ＴＨＲＵＰＰ，Ｓusceptibility testing of antibiotics in liquid media，in：Ａntibiotics in laboratory medicine.Ｖ.ＬＯＲＩＡＮ Ｅd.,II edition，４，93−150，Ｗilliams ＆ Ｗilkins,Ｂaltimora，ＭＤ 21202 Ｕ.Ｓ.Ａ）。
【００２１】
結果
研究所保存株および臨床分離株に関するデータは、夫々表１および表２に示す。単純な結果と平均ＭＩＣ値とから分かるように、ＳＴ１２２６は、グラム陽性菌に対してＳＴ１１０３よりも高い活性を示す（表１ａおよび１ｂ）。
逆に、グラム陰性菌に対しては２物質間に有意な差異が見出されなかった（表２ａおよび２ｂ）。
【００２２】
【表５】
0004077052.tif 000013
【００２３】
【表６】
0004077052.tif 000014
【００２４】
【表７】
0004077052.tif 000015
【００２５】
【表８】
0004077052.tif 000016
【００２６】
グラム陽性菌およびグラム陰性菌（研究所保存株および臨床分離株）に対する、ＳＡＴ１１０３との比較におけるＳＴ１２２６の最小阻止濃度（mcg／ml)。
材料および方法
ペトリ皿上のウイルキンス−シャングレン（Ｗ.Ｃ.）培地で培養の細菌を、嫌気ジャー中で３５℃で生育し、ブルセラブロスに再懸濁した。懸濁液を１.０×１０8細胞／mlに調整し、ミクロタイタープレート（９６−ウエル  Ｕ−底プレート）中に分布した（０.２ml／ウエル)。同時に、物質の０.３log希釈を４区割のペトリ皿中のＷ.Ｃ.寒天培地と混合する。この培地はマルチポイントインキュベータによって細菌懸濁液（１.０×１０5細胞／スポット）を植えつけたものである。プレートを嫌気ジャー中で３５℃、４８時間インキュベートする（参照、Ｊ.Ｅ.ＲＯＳＥＮＢＬＡＴＴ，Ａntimicrobial susceptibility testing of anaerobes, in Ａntibiotics in laboratory medicine.Ｖ.ＬＯＲＩＡＮ Ｅd.,II edition，６，159−180，Ｗilliams ＆ Ｗilkins,Ｂaltimora，ＭＤ 21202 Ｕ.Ｓ.Ａ)。
【００２７】
結果
３嫌気性菌株に対する化合物のＭＩＣ価（mcg／ml）を表３に示す。ＳＴ１２２６の平均ＭＩＣ価はＳＴ１１０３よりも小さい。
【表９】
0004077052.tif 000017
【００２８】
イースト菌株（研究所保存株および臨床分離株）に対する、ＳＴ１１０３との比較におけるＳＴ１２２６の最小阻止濃度（mcg／ml)。
材料および方法
サボラウドブロス中の一夜イースト培養を適当に洗い、アスパラギンおよびグルコース（Ｙ.Ｎ.Ｂ.ｓ）を補ったイースト窒素ベース中で希釈すると、ミクロタイターウエル中に約５.０×１０4ＣＦＵ／mlで得られる。Ｙ.Ｎ.Ｂ.ｓ中の物質希釈液（０.３log）をこれらの懸濁液に加えて、最終濃度を０.１９−１００mcg／mlの範囲にする。ミクロタイタープレートを３５℃２４−４８時間インキュベートする。（参照、ＰＦＡＬＬＥＲ Ｍ.，ＲＩＮＡＬＤＩ Ｍ.Ｇ.，ＧＡＬＧＩＡＮＩ Ｊ.Ｍ.，ＢＡＲＴＬＥＴＴ Ｍ.Ｓ.，ＢＯＤＹ Ｂ.Ａ.，ＥＳＰＩＮＥＬ−ＩＮＧＲＯＦＦ Ａ.，ＦＲＯＭＴＬＩＮＧ Ｒ.Ａ.，ＨＡＬＬ Ｇ.Ｓ.，ＨＵＧＨＥＳ Ｇ.Ｅ.，ＯＤＤＳＦ.Ｃ.，ＳＵＧＡＲ Ａ.Ｍ.，Ｃollaborative investigator of variables in susceptibility testing of yeasts，Ａnt.Ａgent and Ｃhemoth.，３４，９：1648−1656，1990．ＣＯＯＫ Ｒ.，ＭcＩＮＴＹＲＥ.Ｋ.Ａ.ＧＡＬＧＩＡＮＩ Ｊ.Ｍ.，Ｅffects of incubation temperature，inoculum size，and medium on agreement of macro and microdilution broth susceptibility test，results for yeasts，Ａnt.Ａgent and Ｃhemoth.，３４，８：1542−1545，1990．ＡＮＡＩＳＳＩＥＥ.，ＰＡＥＴＺＮＩＣＫ Ｖ.，ＢＯＤＥＹ Ｇ.Ｐ.，Ｆluconazole susceptibility testing of “Ｃandida albicans" microtiter method that is indipendent of inoculum size，temperature，and time of reaching，Ａnt.Ａgent and Ｃhemoth.，３５，８：1641−1646，1991）。
【００２９】
結果
研究所保存株および臨床分離株に関するデータは、夫々表４および表５に示す。ＳＴ１２２６は、主に皮膚研究所のＣandida臨床分離株に対してＳＴ１１０３よりも高い活性を示した。
【表１０】
0004077052.tif 000018
【００３０】
【表１１】
0004077052.tif 000019
【００３１】
糸状真菌（研究所保存株）に対する、ＳＴ１１０３との比較におけるＳＴ１２２６の最小阻止濃度（mcg／ml)。
材料および方法
サボラウド寒天中での７２時間培養から分生胞子をサボラウドブロスおよび０.５％ツイン８０で洗うことで収集する。
粗い濾過および洗浄の後に、得た懸濁液をミクロタイタープレート中で最終濃度約５.０×１０4ＣＦＵ／mlに調整する。物質（Ｙ.Ｎ.Ｂ.s中０.３log希釈）を真菌懸濁液に加えて、最終濃度を０.１９−１００mcg／mlの範囲にする。次いでミクロタイタープレートを３５℃４８−７２時間インキュベートする。
【００３２】
結果
２化合物について得た結果を表６に示す。単純結果およびＭＩＣ価の両方とも、ＳＴ１２２６がＳＴ１１０３よりも顕著に高い活性を有することを明白に示す。
【表１２】
0004077052.tif 000020
【００３３】
皮膚糸状菌（皮膚科の臨床分離株）に対する、ＳＴ１１０３との比較におけるＳＴ１２２６の最小阻止濃度（mcg／ml)。
材料および方法
菌糸体フラグメント、ミクロおよびマクロ粉状胞子を、ポテトデキストロース寒天中で３０℃で７日生育した真菌培養からサボラウドブロスおよび０.５％ツイン８０で洗うことにより収集する。
粗い濾過および洗浄後、アスパラギンおよびグルコース（ＹＮＢs）で補ったイースト窒素ベースに真菌懸濁液を再懸濁して、ミクロタイタープレート中で最終濃度を１.０×１０5感染単位／mlにする。
物質（Ｙ.Ｎ.Ｂ.s中の０.３log希釈）を最終懸濁液に加えて、最終濃度を０.１９−１００mcg／mlの範囲にする。次いでミクロタイタープレートを３０℃で９６−１２０時間インキュベートする。
【００３４】
結果
２化合物について得た結果を表７に示す。皮膚糸状菌に対してＳＴ１２２６はＳＴ１１０３より高い活性を示すことが容易に分かり得る。
【表１３】
0004077052.tif 000021
【００３５】
【表１４】
0004077052.tif 000022
【００３６】
原虫（膣トリコモナス）に対する、ＳＴ１１０３との比較におけるＳＴ１２２６の最小阻止濃度（mcg／ml)。
材料および方法
１０％熱不活性化ＦＣＭを補ったダイアモンドＴ.Ｙ.Ｍ.ブロス中で３７℃、５％ＣＯ2で２４時間生育した培養から原虫懸濁液を製造する。
懸濁液を同じ培地で調整して、最終濃度を９５−ウエルミクロタイター皿の各ウエル中細胞／mlにする。物質希釈液（０.３log）を懸濁液に加えて、最終濃度を２.５×１０5細胞／mlの範囲にする。次いでミクロタイターを３７℃、５％ＣＯ2で２４時間インキュベートする。ＭＩＣは、原虫鞭毛虫のいずれかを阻止する、あるいは波状膜運動性に対する最小濃度として表示する（参照、ＪＵＬＩＡＮＯ Ｃ.，ＭＡＲＴＩＮＯＴＴＩ Ｍ.Ｇ.，ＣＡＰＰＵＣＣＩＮＥＬＬＩ Ｐ.，Ｉn vitro effect of microtubule inhibitiors on Ｔ.vaginalis，Ｍicrobiologia，８：３１−４２，1985．ＬＯＶＧＲＥＮ Ｔ．and  ＳＡＬＭＥＬＡ Ｉ.，Ｉn vitro sensitivity of Ｔ.vaginalis and Ｃ.albicans to chemotherapeutic agents，Ａcta Ｐath.Ｍicrobiol.Ｓcand.，８６：１５５−１５８，1978。）
【００３７】
結果
２化合物について得た結果を表８に示す。ＳＴ１２２６はＳＴ１１０３より大きい活性（２倍）を示す。
【表１５】
0004077052.tif 000023
【００３８】
インビボ活性
皮膚糸状菌（Ｔricophyton quinckeanum）およびグラム陽性菌（Ｓtaphylococcus aureus）による局所混合感染に対するＳＴ１２２６およびＳＴ１１０３のインビボ感染効果の検定
材料および方法
動物：
雄合系ＢＡＬＢ／cマウス（Ｃ.ＲＩＶＥＲ)、６週令を用いた（１群５匹)。
菌株：
動物にトリコフィトン（Ｔricophyton quinckeanum ＮＣＰＦ ３０９）およびスタフィロコッカス（Ｓtaphylococcus aureus ＬＣ１）の病原株を局所感染せめた。
実験方法：
糸状菌微細粉状胞子および細菌の懸濁液を最終濃度がそれぞれ５.０×１０7および１.０×１０7細胞／mlになるよう調整する。各懸濁液の０.２ml量を動物の上側後部に適用した。この部位はあらかじめ毛をそり、剃毛ナイフでゆっくりと“きらきら光るまで”こすっておいた。治療は接種３０時間後に開始し、ゲル型(１％テスト)の各物質５０mgを感染皮膚に１日１回連続５日間与えた。最後の治療２日後、動物を殺し、感染皮膚を集めた。均質化と培地での適当な希釈化の後に、組織サンプルをプレートにとり（真菌および細菌それぞれ、微生物寒天およびアニトール塩寒天中）病原菌の生長を選択的に検定した。真菌生長は人為スケールで評価し、細菌生長はＣＦＵ（コロニー形成単位）を決めて評価した。
【００３９】
結果
２化合物について得た結果を表９に示す。Ｓ.aureusに対しては両者は同じ活性であったが、抗真菌活性はＳＴ１２２６がＳＴ１１０３よりも大きかった。
【表１６】
0004077052.tif 000024
ａ＝実験群当り５匹
ｂ＝動物に１％ゲル中の各物質を５０mg／日投与して、連続５日間局所的に治療した。（ヒドロキシエチル−セルロース、２.５gr.；グリシン７.０gr.プロピレングリコール７.０gr.；
0004077052.tif 000025
【００４０】
マウス剃毛皮膚に対するＳＴ１２２６およびＳＴ１１０３による連続治療後の皮膚耐性についての試験
材料および方法
動物：
雄ＣＤＩマウス（Ｃ.ＲＩＶＥＲ）、６週令を用いた（１群５匹）。
物質：
物質製剤（１％テスト）をゲル中で製造した（ヒドロキシエチルセルロース２.５g、グリシン７g、プロピレングリコール７.０  水  全量１００mlに)。
実験方法：
動物の中で中心背部を最初に毛をそり、剃毛ナイフでゆるやかにこすった。皮膚処理の１日後に各物質製剤５０mgを１日１回、連続１０日間与えることにより治療した。
その皮膚部位を剃毛後５、７、９および１１日目に検査した。評価は、下記の点数によって紅斑（Ｅ）、落屑（Ｄ）およびひび割れ（Ｃ）として病傷の等級に基づいた。
【表１７】
0004077052.tif 000026
同じ動物群における各パラメータ価の平均は、実験で各物質によりおこされた組織障害を評価するのを可能とした。
【００４１】
結果
化合物について得た結果は、同じ実験群における各パラメータの平均として表され、表１０に示す。ＳＴ１２２６はＳＴ１１０３よりも耐性がよいことが認められる。
【表１８】
0004077052.tif 000027
【００４２】
トリコフィトン株（Ｔ.mentagrophytes ＩＤＩ Ｄ１０４９）でもってモルモットの足裏に起こした実験的感染モデル（足部白輪癬）におけるＡＴ１２２６（１％および１.５％）およびミコナゾール（１.５％）の抗真菌活性の検定
慢性感染の特性およびヒト感染との類似性は、組織的および臨床的見地からこのモデルが最も多い皮膚真菌病症（水虫）の研究するのに非常に有用とする。その上、治療の結果が良いものであれば、それから他の皮膚糸状菌の相違する体の部位への有効な適応を推測せしめ得る。さらに、この感染が慢性的であることは（６カ月以上）、常にヒトで生じているように、長期間治療で本物質を研究できるようにする。
本試験において、ＳＴ１２２６が相違する２濃度で局所皮膚糸状菌感染を治癒し得るかどうかを検討した。この感染はヒトにおいて長期持続しかつおこりやすいものである。
【００４３】
材料および方法
動物：
１２匹の雄ハートレイモルモット（Ｃ.ＲＩＶＥＲ）、体重３５０−４００gを用いた（１実験群につき３匹）。
感染株：
１臨床分離株（Ｔricophyton mentagrophyted ＩＤＩ Ｄ１０４９ Ｉmmacolata 皮膚研究所、ローマ）を用いた。
接種物の製造：
ポテトデキストローマ寒天で７日間生長真菌培養からかき集めることにより微細粉子胞子を最初に採取し、サボラウドブロス中に０.５％ツイン８０で再懸濁した。
洗浄後、胞子を無菌塩分液中で標準化し、最終濃度１.０×１０8胞子／mlを得た。
実験動物群：
５実験群を次のように設定した。
対照Ｉ：  感染動物
対照II：  感染かつプラセボ処理動物
処理Ｉ：  感染かつ１％ＳＴ１２２６処理動物
処理II：  感染かつ１.５％ＳＴ１２２６処理動物
処理III： 感染かつ１.５％ミコナゾール処理動物
各群は３匹からなり、左後足に接種した。２対照群について、計３匹が用いられ、各動物の両後足に接種した。
実験方法：
フィルタペーパー（直系１２mm、厚さ０.３mm）をアルミニウムホイルで、低部をおおい、接種物が拡がらないようにした。このフィルターを、足まわりを巻いたガーゼに付けた両面接着テープに接着した。
フィルターペーパーディスクを感染懸濁液１００μlで湿らし、次いでモルモットの足に固定した。
足をホウタイとテープでしばり、その状態で７日間放置した。
感染７日後、感染部位をはがし、創傷の程度を下記の人為スケールによって等級づけた。
【００４４】
【表１９】
0004077052.tif 000028
これらの“臨床”兆候はさらに＋１４日、＋２１日および＋３１日（動物を殺す日）に調べた。創傷型の最初の観察から３日後（＋１０）、異なる製剤での処置を開始し、２０日間（１日１回）続けた。最後の処理から２日後（＋３１日）、動物を殺し、足のテープを各足につき１０部分に分割した。
これらの部分を、ペニシリンＧおよびストレプトマイシン（１００mcg／ml）を補ったミクロビィオティク寒天の上においた。両抗生物質の５０μl量をテープ部画に加えて、実験サンプル中Ｔ.mentagrophytes生長に介入するかも知れない菌の生長を防いだ。
得たデータは、全実験分画に対する微生物学的に無菌の皮膚分画の数として示す。
【００４５】
結果
この実験モデルでＳＴ１２２６について得た結果は、“微生物学的回復”に関して有望なものであった（１％および１.５％ＳＴ１２２６でそれぞれ８０％および１００％）
ミコナゾル処理（１.５％）は同様にすべての処理サンプルからの感染を根絶し得た。
【００４６】
【表２０】
0004077052.tif 000029
【００４７】
１％ＳＴ１２２６含有４水性処方マウス剃毛皮膚に対する耐性についての比較評価
材料および方法
動物：
４５匹の雄ＣＤ１マウス（Ｃ.ＲＩＶＥＲ）、７週令を用いた（１実験群につき５匹）
物質処方：
【表２１】
クリームＴＦ２４／６３２７
成  分 ％
ＳＴ１２２６                    １
パラコンビン               ０.２５
ポリプロピレングリコール        ２
セピゲル３０５                  ５
ワセリン油                    １０
Ｈ2Ｏで１００とする
クリームＴＦ２５／６３２７
成  分 ％
ＳＴ１２２６                    １
ファトラン                    １６
グリセリン                      ３
プロピレングリコール            ５
ニパセプト                   ０.２
Ｈ2Ｏで１００とする
クリームＴＦ２８／６３２７
成  分 ％
ＳＴ１２２６                    １
ファトラン                 １１.５
Ｔｗｅｅｎ８０               ０.３
ＢＨＡ                   ０.００４
ソルビン酸                   ０.２
ＥＤＴＡ                     ０.１
ワセリン                      １２
プロピレングリコール         ２.５
シリコン油
ＡＫ３５０                   ０.１
ワセリン油                      ５
Ｈ2Ｏで１００とする
クリームＴＦ１４／６３２７
成  分 ％
ＳＴ１２２６                    １
ヒドロキシエチルセルロース   １.６
グリセリン                      ８
プロピレングリコール            ３
エタノール                    １５
Ｐｅｒｆｕｍｅ           ０.０５０
Ｈ2Ｏで１００とする
実験方法：
動物の中心背部の毛を最初にそり、次いで剃毛ナイフでゆるやかにこすった。皮膚処理の１日後に各物質製剤５０mgを１日１回、連続１０日間与えることにより治療した。
その皮膚部位を剃毛後５、７、９および１１日目に検査した。評価は、下記の点数によって紅斑（Ｅ）、落屑（Ｄ）およびひび割れ（Ｃ）として病傷の等級に基づいた。
【００４８】
【表２２】
0004077052.tif 000030
同じ動物群における各パラメータ価の平均は、実験で各物質により生じた組織障害を評価するのを可能とした。
【００４９】
結果
すべてのプラセボは耐性が非常によいとみられる。これに反し１％ＳＴ１２２６水性クリームの中で、ＴＦ２４／６３２７およびＴＦ１４／６３２７のみが完全に安全であり、ＴＦ２５／６３２７は低程度で、ＴＦ２８／６３２７は高程度で耐性の悪い結果となった（表１２）。
【００５０】
【表２３】
0004077052.tif 000031