(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）又は（２）で示されるガラクトシルセラミド類縁体。
【化１】
0004070966.tif 000008
【化２】
0004070966.tif 000009
（但し、ＸはＳ、ＹはＯであり、Ｒ1、Ｒ2は炭素数９〜３５のアルキル基又はアルケニル基である。Ｒ3は、炭素数２〜３０のアルキル基又はアルケニル基である。）
【請求項２】
下記構造式（３）で表されるガラクトシルセラミド類縁体。
【化３】
0004070966.tif 000010
【請求項３】
下記構造式（６）で表されるガラクトシルセラミド類縁体。
【化４】
0004070966.tif 000011
【請求項４】
下記一般式（１）又は（２）で示されるガラクトシルセラミド類縁体を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【化５】
0004070966.tif 000012
【化６】
0004070966.tif 000013
（但し、Ｘ、Ｙは、Ｓ又はＯであり、Ｒ1、Ｒ2は炭素数９〜３５のアルキル基又はアルケニル基である。Ｒ3は、炭素数２〜３０のアルキル基又はアルケニル基である。）
【請求項５】
下記一般式（１）又は（２）で示されるガラクトシルセラミド類縁体を有効成分とするβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤。
【化７】
0004070966.tif 000014
【化８】
0004070966.tif 000015
（但し、Ｘ、Ｙは、Ｓ又はＯであり、Ｒ1、Ｒ2は炭素数９〜３５のアルキル基又はアルケニル基である。Ｒ3は、炭素数２〜３０のアルキル基又はアルケニル基である。）
【請求項６】
下記構造式（４）で表されるガラクトシルセラミド類縁体を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【化９】
0004070966.tif 000016
【請求項７】
下記構造式（５）で表されるガラクトシルセラミド類縁体を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
【化１０】
0004070966.tif 000017
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規ガラクトシルセラミド類縁体、皮膚外用剤及びβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤に関する。さらに詳しくは、特定のガラクトシルセラミド類縁体によって表皮中のβ−グルコセレブロシダーゼを活性化するβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤及び皮膚外用剤に関し、これらは、荒れ肌および各種皮膚疾患の改善が期待される。
【０００２】
【従来の技術】
荒れ肌とは、一般に角質細胞の剥離現象が認められる乾燥状態の皮膚をいう。このような荒れ肌はコレステロール、セラミド、脂肪酸等の角質細胞間脂質の溶出、および紫外線、洗剤等に起因する角質細胞の変性や表皮細胞の増殖・角化バランスの崩壊による角層透過バリアの形成不全等によって発生する。この荒れ肌を予防または治癒する目的で、角質細胞間脂質成分又はそれに類似する合成の角質細胞間脂質を供給したり、上皮増殖因子（ＥＧＦ；Epidermal  Growth  Factor)等の表皮細胞増殖・角化調節物質などを投与するなどの研究が行われている。
【０００３】
この角層細胞間脂質は、有棘層と顆粒層の細胞で生合成された層板顆粒が、角層直下で細胞間に放出され、伸展し、層板（ラメラ）構造をとり、細胞間に広がったものである。層板顆粒はグルコシルセラミド、コレステロール、セラミド、リン脂質等から構成されるが、角層細胞間脂質にはグルコシルセラミドは殆ど含まれていない。すなわち、層板顆粒中のグルコシルセラミドは、β−グルコセレブロシダーゼによって加水分解を受け、セラミドに変換され、このセラミドがラメラ構造をとる結果、角層細胞間脂質として角層透過バリアの形成を改善し、荒れ肌防御のバリアの働きを持つと考えられる。たとえば、β−グルコセレブロシダーゼを遺伝的に完全に欠損したゴーシェ病タイプ２の疾患患者では病的荒れ肌が観察され、また、その表皮の組織学的研究によって角層細胞間脂質のラメラ構造に異常が認められている。また、β−グルコセレブロシダーゼを人為的に欠損させたトランスジェニックマウスでも角層細胞間脂質のラメラ構造の異常と荒れ肌の相関が認められている。さらに実験的にも、β−グルコセレブロシダーゼを阻害した場合に荒れ肌と角層細胞間脂質のラメラ構造の異常が観察されている。これらの諸事実より正常な角層透過バリアの形成にはグルコシルセラミドがβ−グルコセレブロシダーゼによってセラミドに加水分解されることが必要であるといわれている。従って、β−グルコセレブロシダーゼを活性化させることによって、角層透過バリアの形成が改善され、その結果として荒れ肌を改善することが可能であると考えられる。
【０００４】
このような背景にあって、β−グルコセレブロシダーゼの活性化因子として、従来、モルモット脾臓から発見されたＳＡＰ−２やヒトゴーシェ病脾臓から発見されたＡｌａやサポシンＣが知られている。
【０００５】
しかし、これら活性化因子はタンパク質であってこれらを外用して表皮のβ−グルコセレブロシダーゼを活性化させることは経皮吸収性や安全性の点で大きな問題がある。また、これらのタンパク質を単離して産業上利用することはコスト面より極めて困難である。
【０００６】
一方、タンパク質以外のβ−グルコセレブロシダーゼ活性化因子としては、β−ガラクトシルセラミドが知られている。
【０００７】
しかし、現実的に利用可能なβ−ガラクトシルセラミドは、牛脳抽出物由来であり、これを外用に用いることは、安全性の点で大きな問題がある。また、β−ガラクトシルセラミドの大量合成は極めて難しく高コストであることが、産業上利用する上での欠点となっていた。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的とするところは、β−グルコセレブロシダーゼを活性化させることによって、角層透過バリアの形成が改善され、その結果として荒れ肌改善効果が期待される、容易に入手可能なβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤及び皮膚外用剤を提供するにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者らは、上記の事情に鑑み、従来の問題を解決する方法を鋭意研究した結果、後記特定の化合物によって意外にも表皮中のβ−グルコセレブロシダーゼを極めて容易に、強く活性化できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は、下記一般式（１）又は（２）で示されるガラクトシルセラミド類縁体、該ガラクトシルセラミド類縁体を含有することを特徴とする皮膚外用剤、該ガラクトシルセラミド類縁体を有効成分とするβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤にある。
【００１１】
【化７】
0004070966.tif 000002
【００１２】
【化８】
0004070966.tif 000003
【００１３】
（但し、Ｘ、Ｙは、Ｓ又はＯであり、Ｒ1、Ｒ2は炭素数９〜３５のアルキル基又はアルケニル基である。Ｒ3は、炭素数２〜３０のアルキル基又はアルケニル基である。）
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明で用いられるガラクトシルセラミド類縁体は、前記一般式（１）又は（２）で表わされる。Ｒ1及びＲ2は、炭素数９〜３５であり、好ましくは１４〜２４であり、飽和であっても、不飽和であっても良い。具体的には、例えば、下記の化学式で表わされるものを挙げることができる。
【００１５】
【化９】
0004070966.tif 000004
【００１６】
【化１０】
0004070966.tif 000005
【００１７】
【化１１】
0004070966.tif 000006
【００１８】
【化１２】
0004070966.tif 000007
【００１９】
これらの化合物は、公知のアミド合成方法で容易に製造することができる。例えば、合成方法の概略を示すとすれば、二本のアルキル鎖を有する一般式（２）で示される化合物は、アミン、カルボン酸部分を保護したセリン又はシステインに、グルコシル化反応によりガラクトースを導入した後、アミノ基部分の脱保護及び縮合反応により一つのアルキル基を導入し、続いてカルボン酸の保護基を除去し、三塩化リンを作用させ酸クロライドとした後、第一アミンと反応させ製造することができる。また、一本鎖の化合物を有する一般式（１）で示される化合物も同様に製造することができる。
【００２０】
本発明に係るβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤、皮膚外用剤は、軟膏、ローション、乳液、ミルク、パップ剤、パック、ミスト、フォーム、顆粒、粉末、ゲル等種々の剤形とすることができる。なお、本発明において、皮膚外用剤とは、頭皮を含む身体のすべての皮膚を対象とするものであり、入浴剤を包含するものである。基材は一般に用いられる外用基剤ならば特に制限されない。また、最終形態は、化粧料、医薬品、医薬部外品とすることができる。
【００２１】
ガラクトシルセラミド類縁体のβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤、皮膚外用剤への配合量は、組成物総量を基準として、全組成量の０．００５〜５．０質量％が好ましく、０．０１〜３．０質量％が更に好ましい。０．００５質量％未満の配合量では本発明の目的とする効果が充分でない場合があり、一方、５．０質量％を超えてもその増加分に見合った効果の向上はない場合がある。
【００２２】
【実施例】
以下、実施例により詳細に説明する。なお、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
【００２３】
実施例１
Ｎ−［２−β−D-ガラクトピラノシルチオ−１−（テトラデシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミド［一般式（５）の化合物］の製造：
（１）１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−D−ガラクトピラノシド３００ｍｇと２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メルカプトプロピオン酸メチル４３０ｍｇをクロロホルム４ｍＬに溶かし、０℃まで冷却した後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体１．３ｍＬを加え室温で２０時間攪拌した。反応混合液にクロロホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄した。残査を分取薄層クロマトグラフィー（展開溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製することによって、２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸メチルを３７０ｍｇ得た。
【００２４】
（２）２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸メチル３７０ｍｇを１，４−ジオキサン５ｍＬとメタノール５ｍＬの混合溶媒に溶かし、２０％水酸化パラジウムカーボン２００ｍｇを加え、水素気流下で１８時間攪拌した。セライトを用いて不溶物を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣をＤＭＦ６ｍＬに溶かし、ステアリン酸１９３ｍｇ、ＥＤＣ［；１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド］１８０ｍｇ、ＨＯＢｔ（；１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）１４０ｍｇを加え、室温で一晩攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで抽出し、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィ−（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製することによって、２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸メチルを３１３ｍｇ得た。
【００２５】
（３）２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸メチル３１３ｍｇをピリジン６ｍＬに溶かし、ヨウ化リチウム５１５ｍｇを加えた後、窒素雰囲気下、４時間加熱還流した。反応混合液を酢酸エチルで抽出し、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸で洗浄後、酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下溶媒を留去した。最後に得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１５：１）で精製することによって、２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸を２４７ｍｇ得た。
【００２６】
（４）２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）プロピオン酸２４７ｍｇをＤＭＦ４ｍＬに溶かし、ｎ−テトラデシルアミン８０ｍｇ、ＥＤＣ１００ｍｇ、ＨＯＢｔ８０ｍｇを加え、室温にて１７時間攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで抽出し、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣を中圧カラムクロマトグラフィ−（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製することによって、Ｎ−［１−（テトラデシルカルバモイル）−２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチル］オクタデカノイルアミドを２７８ｍｇ得た。
【００２７】
（５）Ｎ−［１−（テトラデシルカルバモイル）−２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチル］オクタデカノイルアミド２７８ｍｇをＴＨＦ５ｍＬとメタノール５ｍＬの混合溶媒に溶かし、２８％ナトリウムメチラートメタノール溶液を触媒量加え、室温で１時間攪拌した。反応混合液を陽イオン交換樹脂（ダウエックス５０Ｗ−Ｘ８）を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣をメタノールで結晶化することによって、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルチオ）−１−（テトラデシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミドを白色の結晶として２０２ｍｇ得た。
【００２８】
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．８６（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ），１．２４（ｓ，４６Ｈ），１．３５−１．５５（ｍ，４Ｈ），２．１５−２．５０（ｍ，２Ｈ），３．７１（ｂｓ，１Ｈ），４．２４（ｄｔ，１Ｈ），７．７１（ｂｔ，１Ｈ），７．９２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．９Ｈｚ）．
ＴＯＦ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ７６８（Ｍ＋Ｎａ）+，７８４（Ｍ＋Ｋ）+．
元素分析値（Ｃ41Ｈ80Ｎ2Ｏ7Ｓ・１／１０Ｈ2Ｏとして）
計算値（％）Ｃ，６５．９３；Ｈ，１０．８２；Ｎ，３．７５；Ｓ，４．２９
実測値（％）Ｃ，６５．６７；Ｈ，１０．８２；Ｎ，３．６８；Ｓ，４．２９．
【００２９】
実施例２
Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミド［一般式（４）の化合物］の製造：
（１）１，２，３，４，６−ペンタ−Ｏ−アセチル−β−D−ガラクトピラノシド１．８ｇと２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）エタノール１．２ｇを１，２−ジクロロエタン１０ｍＬに溶かし、０℃まで冷却した後、三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体３．６ｍＬを加え室温で１７時間攪拌した。反応混合液にクロロホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製することによって、２−（２，３，４，６−Ｏ−テトラ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）エチルカルバミン酸ベンジルを１．３ｇ得た。
【００３０】
（２）２−（２，３，４，６−Ｏ−テトラ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）エチルカルバミン酸ベンジル２５０ｍｇを１，４−ジオキサン３ｍＬとメタノール３ｍＬの混合溶媒に２０％水酸化パラジウムカーボン１７０ｍｇを加え、水素気流下で１８時間攪拌した。セライトを用いて不溶物を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣をＤＭＦ５ｍＬに溶かし、ステアリン酸１２３ｍｇ、ＥＤＣ９０ｍｇ、ＨＯＢｔ７５ｍｇを加え、室温で一晩攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで抽出し、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製することによって、Ｎ−［２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミドを１０３ｍｇ得た。
【００３１】
（３）Ｎ−［２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミド１０３ｍｇを１，４−ジオキサン２ｍＬとメタノール２ｍＬの混合溶媒に溶かし、２８％ナトリウムメチラートメタノール溶液を触媒量加え、室温で４時間攪拌した。反応混合液を陽イオン交換樹脂（ダウエックス５０Ｗ−Ｘ８）を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣をメタノールで結晶化することによって、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミドを白色の結晶として５９ｍｇ得た。
【００３２】
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．８４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．２６（ｓ，２８Ｈ），１．４５−１．５０（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ），３．４０−３．５０（ｍ，３Ｈ），３．６１（ｂｓ，１Ｈ），３．６８（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８，１０．２Ｈｚ），４．０５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），４．３２，４．５６，４．６７，４．８１（４ｂｓ，４Ｈ），７．７２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ）．
ＴＯＦ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ５１２（Ｍ＋Ｎａ）+，５２８（Ｍ＋Ｋ）+．
元素分析値（Ｃ26Ｈ51ＮＯ7・１／５Ｈ2Ｏとして）：
計算値（％）Ｃ，６３．３１；Ｈ，１０．５０；Ｎ，２．８４
実測値（％）Ｃ，６３．１４；Ｈ，１０．２２；Ｎ，２．８６．
【００３３】
実施例３
Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチル］オクタデカノイルアミド［一般式（３）の化合物］の製造：
（１）２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチルカルバミン酸ベンジル１．０ｇをメタノール１０ｍＬと１，４−ジオキサン１０ｍＬの混合溶媒に溶かし、水酸化パラジウム１ｇを加え、水素気流下で６時間攪拌した。セライトにて不溶物を濾別した後、濾液を減圧濃縮した。残渣をＤＭＦ１０ｍＬに溶かし、ステアリン酸４３２ｍｇ、ＥＤＣ３６４ｍｇ、ＨＯＢｔ２５７ｍｇを加え、室温にて一晩攪拌した。反応混合液をクロロホルムで希釈し、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、クロロホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製することによって、Ｎ−［２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチル］オクタデカノイルアミドを４４２ｍｇ得た。
【００３４】
（２）Ｎ−［２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチル］オクタデカノイルアミド４４０ｍｇを１，４−ジオキサン１０ｍＬとメタノール１５ｍＬの混合溶媒に溶かし、２８％ナトリウムメチラートメタノール溶液を触媒量加え、室温で２時間攪拌した。反応混合液を陽イオン交換樹脂（ダウエックス５０Ｗ−Ｘ８）を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣をメタノールで結晶化することによって、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチル］オクタデカノイルアミドを白色の結晶として２０９ｍｇ得た。
【００３５】
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．８５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．２６（ｓ，３０Ｈ），１．４５−１．５０（ｍ，２Ｈ），２．００−２．１０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），２．５５−２．７０（ｍ，２Ｈ），３．２０−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．３０−３．４０（ｍ，２Ｈ），３．４５−３．５０（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｂｓ，１Ｈ），４．２０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），４．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．５５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．７６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），７．８４（ｂｔ，１Ｈ）．
ＴＯＦ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ５２８（Ｍ＋Ｎａ）+，５４４（Ｍ＋Ｋ）+．
元素分析値（Ｃ26Ｈ51ＮＯ6Ｓとして）：
計算値（％）Ｃ，６１．７５；Ｈ，１０．１６；Ｎ２．７７；Ｓ，６．３４
実測値（％）Ｃ，６１．６５；Ｈ，１０．１０；Ｎ２．７７；Ｓ，６．３５
【００３６】
実施例４
Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）−１−（ヘキシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミド［一般式（６）の化合物］の製造：
（１）２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルチオ）エチルカルバミン酸ベンジル２．４ｇと３−ヒドロキシ−２−（オクタデカノイルアミノ）プロピオン酸メチル１ｇをクロロホルム３５ｍＬに溶かし、０℃まで冷却した後、Ｎ−ヨードコハク酸イミド１．４ｇとトリフルオロメタンスルホン酸０．１３ｍＬを加え、室温にて３時間攪拌した。次いで、反応液にクロロホルムを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と１０％チオ流酸ナトリウム水溶液で洗浄した。クロロホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させた後、硫酸マグネシウムを濾別し、濾液を減圧濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製することによって、２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）プロピオン酸メチルを１．４ｇ得た。
【００３７】
（２）２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）プロピオン酸メチル１．４ｇをピリジン２６ｍＬに溶かし、ヨウ化リチウム１．７ｇを加えた後、窒素雰囲気下で４時間加熱還流した。反応混合液にクロロホルムを加え、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸で洗浄し、クロロホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝６０：１）で精製することによって、２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）プロピオン酸を９４０ｍｇ得た。
【００３８】
（３）２−（オクタデカノイルアミノ）−３−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）プロピオン酸９４０ｍｇをＤＭＦ１０ｍＬに溶かし、ｎ−ヘキシルアミン１２０ｍｇ、ＥＤＣ２８５ｍｇ、ＨＯＢｔ２０１ｍｇを加え、室温にて４時間攪拌した。反応混合液にクロロホルムを加え、２ｍｏｌ／Ｌ塩酸と飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、クロロホルム層を無水硫酸マグネシウムで乾燥、次いで減圧下で溶媒を留去した。最後に得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ−（溶出溶媒；ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製することによって、Ｎ−［１−（ヘキシルカルバモイル）−２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミドを２９５ｍｇ得た。
【００３９】
（４）Ｎ−［１−（ヘキシルカルバモイル）−２−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンゾイル−β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミド２９０ｍｇを１，４−ジオキサン５ｍＬとメタノール５ｍＬの混合溶媒に溶かし、２８％ナトリウムメチラートメタノール溶液を触媒量加え、室温で３時間攪拌した。反応混合液を陽イオン交換樹脂（ダウエックス５０Ｗ−Ｘ８）を用いて中和した後、樹脂を濾別し、濾液を減圧濃縮した。最後に得られた残渣を蒸留水で結晶化することによって、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）−１−（ヘキシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミドを白色の結晶として１４４ｍｇ得た。
【００４０】
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ：０．８５（ｔ，６Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１．２４（ｓ，３４Ｈ），１．３０−１．４０（ｍ，２Ｈ），１．４０−１．５０（ｍ，２Ｈ），２．１０−２．１５（ｍ，２Ｈ），３．００−３．１０（ｍ，２Ｈ），３．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．４５−３．５５（ｍ，３Ｈ），３．６２（ｂｓ，１Ｈ），３．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，１０．２Ｈｚ），４．０７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），４．４０（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４，７．８Ｈｚ），４．５５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．６９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），７．６７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），７．８５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）．
ＴＯＦ−ＭＳ：ｍ／ｚ  ６３９（Ｍ＋Ｎａ）+，６５５（Ｍ＋Ｋ）+．
元素分析値（Ｃ33Ｈ64Ｎ2Ｏ8として）：
計算値（％）Ｃ，６４．２５；Ｈ１０．４６；Ｎ，４．５４
実測値（％）Ｃ，６４．０２；Ｈ１０．３２；Ｎ，４．５５
【００４１】
試験例１  表皮細胞のβ−グルコセレブロシダーゼ活性化能測定試験
（１）方法
（ａ）培養表皮細胞
ヒト正常表皮角化細胞は市販されているもの（Ｅｐｉｄｅｒｃｅｌｌ：クラボウ社製）を用いた。
【００４２】
（ｂ）細胞培養用培地
培地としてはＭｅｄｉｕｍ１５４Ｓ（クラボウ社製）、又増殖因子としてこれに添加する添加剤ＨＫＧＳ（クラボウ社製）を用いた。
【００４３】
（ｃ）Ｈｅｐｅｓ緩衝液の調製
Ｈｅｐｅｓ７．１５ｇ、グルコース１．８ｇ、塩化カリウム０．２２ｇ、塩化ナトリウム７．７ｇ、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物０．２７ｇを精製水に溶解し、１ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液にてｐＨ７．４に調整後、１Ｌにメスアップした。
【００４４】
（ｄ）細胞培養
ヒト正常表皮細胞の細胞数をＭｅｄｉｕｍ１５４Ｓにて２．５×１０4個／ｍＬに調整し、６０ｍｍコラーゲンコートプレート（ファルコン社製）に４ｍＬずつ播種し、９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％炭酸ガス（Ｖ／Ｖ）の雰囲気下、３７℃で４日間静置培養した。
【００４５】
培養上清を吸引除去し、前記実施例１、２、４で製造した各薬剤の２００μｍｏｌ／Ｌのエタノール溶液を終濃度５μｍｏｌ／Ｌとなるように添加したＭｅｄｉｕｍ１５４Ｓを４ｍＬずつ各ディッシュに加えた。このディッシュを９５％空気（Ｖ／Ｖ）−５％炭酸ガス（Ｖ／Ｖ）の雰囲気下、３７℃で４日間静置培養した。また、ガラクトシルセラミド類縁体を含有しないエタノールのみを比較例１とした。
【００４６】
（ｅ）粗酵素液の抽出
培養上清を吸引除去し、１ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水で2回洗浄した後、細胞をセルスクレーパー（住友ベークライト社製）でディッシュからかきとった。これに０．１ｍｍｏｌ／Ｌフッ化フェニルメチルスルホニル含有リン酸緩衝生理食塩水を添加し、超音波処理装置（ソニックスアンドマテリアルズ社製）で破砕し、遠心上清を粗酵素液として回収した。
【００４７】
（ｆ）β−グルコセレブロシダーゼ活性測定
ミエルとファンデルフルクの方法（ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・デルマトロジー、９５巻、頁２７１−２７４、１９７６年）に準じて測定した。すなわち、粗酵素液５０μＬに、１００ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸−２００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ５．６）を５００μＬと、１０ｍｍｏｌ／Ｌタウロコール酸−１００ｍｍｏｌ／Ｌクエン酸−２００ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ５．６）５００μＬを加えて、３７℃で１０分間加温した。次いで０．５ｍｍｏｌ／Ｌの４−メチルウンベリフェル−β−Ｄグルコシド（シグマ社製）を５０μＬ加えて、３７℃で６０分間加温した。その後、２００ｍｍｏｌ／Ｌ炭酸ナトリウム−炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０．５）を加え、励起波長３６０ｎｍ、吸収波長４５０ｎｍで蛍光強度を測定した。標準品の４−メチルウンベリフェロン（シグマ社製）の蛍光強度より作成した検量線をもとに酵素活性を計算した。
【００４８】
（２）結果
図１に示すように、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）エチル］オクタデカノイルアミド［実施例２；一般式（４）で示される化合物］、Ｎ−［２−β−D-ガラクトピラノシルチオ−１−（テトラデシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミド［実施例１；一般式（５）で示される化合物］、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）−１−（ヘキシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミド［実施例４；一般式（６）で示される化合物］は、すべてβ−グルコセレブロシダーゼ活性化効果が認められた。
【００４９】
試験例２  マウスにおける荒れ肌回復試験
（１）方法
（ａ）実験動物
試験開始時９週齢のヘアレスマウス１群５匹を用いた。
【００５０】
（ｂ）測定装置及び条件
経皮水分蒸散量（以下、ＴＥＷＬと略記する）は、連続発汗測定装置ハイドログラフＡＭＵ−１００（ケイアンドエス社製）を用いて次のとおりに測定した。１平方センチメートルのカプセルを皮膚に密着させ、カプセル内に窒素ガスを導入（３００ｍＬ／ｍｉｎ）し、カプセルに送り出す前とカプセルから回収した後の窒素ガス中の水蒸気量を測定した。この値の差から、１分当たり皮膚１平方センチメートルから蒸散する水分量（ｍｇ／ｃｍ2）を算出し、ＴＥＷＬとした。
【００５１】
（ｂ）試料と実験方法
基剤（プロピレングリコール：エタノール＝３：７）を用い、実施例４の化合物［一般式（６）で示される化合物］を０．１％、１．０％の濃度に調製した。この調製後の試料０．０５ｍＬを予めＴＥＷＬを測定したヘアレスマウスの背部皮膚（直径２．５ｃｍ）に１日１回、一週間に５回の頻度で４週間連続の塗布を行なった。その後、事前塗布の最終塗布から３日目に紫外線Ｂ波長（ＵＶＢ）を０．１５Ｊ／ｃｍ2、１回照射した。ＵＶＢ照射前、照射後３及び４日目のＴＥＷＬを測定し、基剤塗布前のＴＥＷＬに対する比率で比較評価した。
【００５２】
（２）結果
図２及び３に示すように、Ｎ−［２−（β−D−ガラクトピラノシルオキシ）−１−（ヘキシルカルバモイル）エチル］オクタデカノイルアミド［実施例４の化合物；一般式（６）の化合物］は、１．０％の濃度でｐ＜０．０１（Ｄｕｎｎｅｔｔ多重検定）の危険率で、基剤のみと比して有意にＴＥＷＬの値が減少し、荒れ肌が改善されていた。
【００５３】
実施例５
実施例１〜４で得たガラクトシルセラミド類縁体の１０％エタノール溶液１０ｇを湯浴で８０℃に加温し、混合した下記成分を加えて１００ｇの４種のローションを得た。
【００５４】
乳酸                                          ０．３ｇ
クエン酸ナトリウム                            ０．１ｇ
グリセリン                                    ２．０ｇ
防腐剤、香料及び界面活性剤                    適  量
精製水                      １００ｇを総量とする残量
【００５５】
【発明の効果】
以上記載の如く、本発明は簡便かつ容易に合成可能な、表皮のβ−グルコセレブロシダーゼ活性化剤を提供できることは明らかである。また、本発明によって荒れ肌の予防と防御および各種皮膚疾患の改善が可能となる。
【図面の簡単な説明】
【図１】表皮細胞のβ−グルコセレブロシダーゼ活性化能測定試験（試験例１）の結果を示す図である。
【図２】ＵＶＢによる荒れ肌に対する実施例４の化合物塗布の効果（試験例２の結果）を示す図である。
【図３】ＵＶＢによる荒れ肌に対する実施例４の化合物塗布の効果（試験例２の結果）を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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