(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
第１の血液凝固促進剤および第２の血液凝固促進剤が封入された採血管であって、いずれか一方が顆粒の血液凝固促進剤であり、第１の血液凝固促進剤、第２の血液凝固促進剤の順に血液に接触または溶解するように構成されていることを特徴とする採血管。
【請求項２】
前記顆粒の血液凝固促進剤が血液凝固活性を有する物質を含むものであり、他方の血液凝固促進剤が無機物であることを特徴とする請求項１に記載の採血管。
【請求項３】
前記顆粒の血液凝固促進剤が血液凝固活性を有する物質とバインダーとからなる請求項１又は２に記載の採血管。
【請求項４】
前記無機物がシリカ粒子、ガラス粉末、または珪藻土やカオリン等のＳｉＯ2を含む混合物である請求項２又は３に記載の採血管。
【請求項５】
前記血液凝固活性を有する物質が、トロンビン、トロンビン様酵素、またはそれらを含む蛇毒抽出物質である請求項２〜３のいずれか一つに記載の採血管。
【請求項６】
前記採血管内に血清分離剤が封入され、前記第１の血液凝固促進剤および前記第２の血液凝固促進剤が血清分離剤に接着しないように、または捕捉されないように封入された請求項１〜５のいずれか一つに記載の採血管。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血液検査に用いる血液試料を採取するための採血管に関する。
【０００２】
【従来の技術】
採血後の血液凝固時間を短縮するべく採血管内に封入される血液凝固促進剤としては、シリカ粒子、トロンビン、蛇毒抽出物等が用いられ、この内１種類の血液凝固促進剤が単独で封入されているものが多かった。従来用いられているシリカ粒子では血液凝固時間に２０分を要するが、トロンビン、蛇毒抽出物等の血液凝固促進剤では２０分より短い時間で凝固できた。しかしながら、トロンビン、蛇毒抽出物等の血液凝固促進剤では凝固時間に個人差があり、おおよそ５分〜２０分と大きなばらつきを生じていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、採血管内に異なる種類の血液凝固促進物質を異なる形態で配置することにより血液の凝固速度をコントロールし、凝固時間が早く、個人差のない、確実かつ安定した採血管を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明は次の手段によって達成される。
【０００７】
（１）第１の血液凝固促進剤および第２の血液凝固促進剤が封入された採血管であって、いずれか一方が顆粒の血液凝固促進剤であり、第１の血液凝固促進剤、第２の血液凝固促進剤の順に血液に接触または溶解するように構成されていることを特徴とする採血管。
【０００８】
（２）前記顆粒の血液凝固促進剤が血液凝固活性を有する物質を含むものであり、他方の血液凝固促進剤が無機物であることを特徴とする（１）に記載の採血管。
【０００９】
（３）前記顆粒の血液凝固促進剤が血液凝固活性を有する物質とバインダーとからなる（１）又（２）に記載の採血管。
【００１０】
（４）前記バインダーが、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等の水溶性物質、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の水溶性セルロース誘導体、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシプロピルアクリレート等の水溶性アクリル酸誘導体、ゼラチン、でんぷん等の水溶性多種タンパク質の混合物質からなる群のいずれか１種以上の物質を含む（３）に記載の採血管。
【００１１】
（５）前記無機物がシリカ粒子、ガラス粉末、または珪藻土やカオリン等のＳｉＯ2を含む混合物である（２）〜（４）のいずれか一つに記載の採血管。
【００１２】
（６）前記血液凝固活性を有する物質が、トロンビン、トロンビン様酵素、またはそれらを含む蛇毒抽出物質である（２）〜（５）のいずれか一つに記載の採血管。
【００１３】
（７）前記採血管内に血清分離剤が封入され、前記第１の血液凝固促進剤および前記第２の血液凝固促進剤が血清分離剤に接着しないように、または捕捉されないように封入された（１）〜（６）のいずれか一つに記載の採血管。
【００１４】
（８）前記採血管内が空間遮断部材により２つの空間に分割され、一方の空間に血清分離剤、他方の空間に顆粒の血液凝固促進剤が封入された（７）に記載の採血管。
【００１５】
（９）前期採血管内で血清分離剤の露出している部分の上にシリコーンの層が存在している（７）に記載の採血管。
【００１６】
（１０）前記顆粒の血液凝固促進剤に水溶性シリコーンが表面コートされた（７）に記載の採血管。
【００１７】
（１１）前記顆粒の血液凝固促進剤に水溶性シリコーンが混合された（７）に記載の採血管。
【００１８】
（１２）血液安定剤として抗プラスミン剤を含む第２の血液凝固促進剤が封入された（７）に記載の採血管。
【００１９】
【発明の実施の形態】
本発明は２種類以上の血液凝固促進剤が封入された採血管であって、２種類以上の血液凝固促進剤を用いることにより、血液凝固時間の短縮を図ることを目的とする。そして、そのうちの少なくとも１種類以上の血液凝固促進剤が顆粒であることが必要である。
【００２０】
また、２種類以上の血液凝固促進剤のうち、１種類が無機物であり、かつ他の１種類が血液凝固活性を有する物質であることが望ましい。例えばシリカ粒子等の無機物である第１の血液凝固促進剤と、トロンビンや蛇毒抽出物質等の生物由来の第２の血液凝固促進剤とを用いることにより、血液凝固時間を大幅に短縮することが可能となる。
【００２１】
前述の組み合わせの採血管では、採血後血液は先に第１の血液凝固促進剤であるシリカに接触するため、シリカは血液中に素早く均一に分散し血液は緩慢な凝固を開始する。続いて第２の血液凝固促進剤に血液が触れ、血液中にバインダーが溶解することによりトロンビンが血液中に溶解し、更に凝固が促進される。その結果急速で安定した凝固が可能となる。
【００２２】
バインダーがない場合ではシリカとトロンビンが同時に溶解するが、トロンビンの凝固促進が非常に急速なため、トロンビンが血液全体に拡散する以前に部分凝固してしまい、トロンビンの分散ムラを生じ、ひいては血液全体の凝固ムラを生じやすい。
【００２３】
しかし本発明では、バインダーが徐々に溶解するのに伴ってトロンビンも徐々に溶解するため、トロンビンが血液中に均一に分散し、トロンビンが溶解した後はさらに血液の凝固が促進される。
【００２４】
従って、本発明は、第１および第２の血液凝固促進剤が同一の速度で溶解するのではなく、シリカすなわち無機質の血液凝固促進剤の方を分散速度が速く、トロンビンすなわち生物由来の血液凝固促進剤の方を分散速度が遅くすることによって、それぞれの血液凝固促進剤の反応のタイミングをずらし、血液全体をムラなく凝固させることを可能とした。
【００２５】
本発明の第１の血液凝固促進剤として採血管に封入される無機物としては、シリカ粒子、ガラス粉末、または珪藻土やカオリン等のＳｉＯ2を含む混合物等がある。
【００２６】
本発明の第２の血液凝固促進剤として採血管に封入される血液凝固活性を有する物質としては、トロンビン、トロンビン様酵素がある。また、透析患者等のヘパリン加血に対してはトロンビン様酵素を含む蛇毒抽出物質等がある。さらに、これらの物質を適宜組み合わせても良い。
【００２７】
本発明の顆粒である第２の血液凝固促進剤を得る方法としては、一旦、バインダーと血液凝固活性を有する物質とを水に溶かし、これを凍結乾燥した後に砕き、更にふるいを通し粒径を揃えて顆粒の血液凝固促進剤を得る方法がある。粒径は約３２ｍｅｓｈのふるいを通り約６０ｍｅｓｈのふるいを通らない範囲のものが、計量および採血管への分注に適している。また、この範囲であれば血液に触れたときの分散速度が適当であり、急速な溶解による凝固ムラを防ぐことができる。
【００２８】
本発明のバインダーとしては、例えば、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール等の水溶性物質、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルヒドロキシエチルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の水溶性セルロース誘導体、２−ヒドロキシエチルアクリレート、２−ヒドロキシプロピルアクリレート等の水溶性アクリル酸誘導体、ゼラチン、でんぷん等の水溶性多種タンパク質の混合物質などが挙げられる。
【００２９】
上記方法によって得られた顆粒である第２の血液凝固促進剤の表面に、無機物の第１の血液凝固促進剤を存在させることによって、第１の血液凝固促進剤よりも第２の血液凝固促進剤の溶解速度が遅くなり、それぞれの血液凝固促進剤の反応のタイミングをずらすことが可能となる。例えば、適切な有機溶媒中にシリカ粒子を分散させ、その中へ顆粒の血液凝固促進剤をディッピングさせたのち乾燥させるという方法がある。
【００３０】
本発明において、血液安定剤を顆粒である第２の血液凝固促進剤に含有させてもよい。血液安定剤である抗プラスミン剤としては、アプロチニン等がある。
【００３１】
本発明において、採血管内に血清分離剤が収納されていてもよい。血清分離剤としてはオレフィン系樹脂に無機充填剤を配合したもの、ポリエステル系樹脂に無機充填剤を配合したもの、ポリブテン系樹脂に無機充填剤を配合したもの、アクリル系樹脂に無機充填剤を配合したもの等が挙げられる。
【００３２】
血清分離剤が封入されている採血管においては、第１および第２の血液凝固促進剤は血清分離剤と接触していないのが好ましい。血液凝固促進剤が血清分離剤に接触し血清分離剤に接着、または血清分離剤中に捕捉された場合は血液凝固促進能の低下を生じる。これを防止するには、成形物やフィルムを空間遮断物として用い、血清分離剤表面から離れた位置に配置してもよいし、血清分離剤の表面を密着して覆うように配置してもよい。いずれの方法においても、成形物やフィルムは採血管の空間を２つに分ける壁の様に存在させ、一方の空間には血清分離剤、他方の空間には血液凝固促進剤を封入する。血清分離剤と顆粒の血液凝固促進剤を物理的に離すことにより、血清分離剤と顆粒が直接接触せず、血清分離剤の影響を受けないようにできる。
【００３３】
このような採血管の製造方法としては、例えば、採血管内に血清分離剤を分注後、射出成形、ブロー成形、プレス成形等の各種成形方法または切削によって得られた成形品、フィルム、不織布またはそれらを重ねたものを挿入して壁の代わりとし、更にその上に血液凝固促進剤を分注する方法がある。
【００３４】
また、上記フィルムに、第１の血液凝固促進剤をコートする方法もある。具体的には、シリカ粒子及びポリビニルピロリドンをアルコール中に分散させ、この溶液をフィルムまたは不織布に噴霧またはコーティングの方法により塗布し乾燥する。更にこのフィルムまたは不織布を円形に打ち抜き採血管内に封入するという方法である。
【００３５】
こうすることにより血清分離剤と顆粒を分離するものと、血液凝固促進剤の支持体とが兼用でき、部材を少なくすることが可能となる。
【００３６】
成形品としては、プラスチック製のものであれば何でもよく、ポリプロピレン・ポリエチレン等のオレフィン樹脂、ポリアミド、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート等のポリエステル樹脂、アクリル樹脂、塩化ビニル、ポリカーボネート、アクリロニトリルブタジエンスチレン樹脂等の各種熱可塑性樹脂、およびフィラー入りポリプロピレン、フィラー入りポリカーボネート等の各種充填剤入り熱可塑性樹脂、各種熱可塑性エラストマー、熱硬化性樹脂等が用いられ、天然ゴム・合成ゴム等のゴム材質や、金属、ガラス等でも可能であり、血清より比重の大きいものが好ましい。
【００３７】
フィルムとしては、プラスチック製フィルムであれば何でもよく、例えば、延伸ＰＥＴフィルム、ナイロンフィルム、フィラー充填ＰＰフィルム、フィラー充填ＰＥフィルム、プラスチックラミネートアルミ箔フィルム等が用いられ、さらに血液凝固促進剤が付着しやすいように、表面処理、例えばプラズマ処理やエンボス加工を施したものも用いられる。不織布の材料としては、ポリエステル、ナイロン、レーヨンおよびそれらを組み合わせたものが用いられる。いずれも血清より比重の大きいものが好ましい。
【００３８】
さらに、血液凝固促進剤が血清分離剤に接着しないように、または血清分離剤中に捕捉されないようにするその他の方法としては、採血管内の血清分離剤が露出している部分の表面にシリコーンを噴霧しコートする方法。または、採血管内にシリコーン溶液を満たした後除去し、風乾、減圧乾燥等の方法により乾燥するという方法（ディッピング方式）。水溶性シリコーンを顆粒の血液凝固促進剤の表面に噴霧しコートする方法。造粒時に血液凝固促進剤やポリビニルピロリドン等と一緒に水溶性シリコーンを混合し造粒する方法などがある。
【００３９】
これらの方法により、長期保存後でも血液凝固促進剤が血清分離剤の影響を受けて血液への溶解が血清分離剤により阻害されることがなく、凝固時間に誤差が生じる等の問題がなくなる。
【００４０】
本発明の採血管の材質としては、ポリエチレンテレフタレート、共重合ポリエチレンテレフタレート等のポリエステル、ポリアクリロニトリル、ポリメチルメタアクリレート、ポリメタアクリル酸等のアクリル樹脂、ポリプロピレン、ポリエチレン等のポリオレフィン、ポリ塩化ビニル、ナイロン等のポリアミド、ポリスチレンなどの熱可塑性樹脂のほか、ガラス等の無機材質が用いられ、ガスバリアー性の高いものがより好ましい。
【００４１】
また、採血管の内面には血餅剥離性物質を塗布することが好ましい。血餅剥離性物質としては、ポリエーテル変性シリコーンオイル等の水溶性シリコーン、ジメチルポリシロキサン等の変性シリコーンオイル、ポリプロピレングリコール等のグリコール類、パラフィン、ワックス類、フタル酸ジオクチル等の可塑剤、各種セルロース誘導体等が好ましい。
【００４２】
採血管内に血餅剥離性物質を塗布する方法としては、採血管内に噴霧または採血管内に血餅剥離性物質を満たした後除去し、風乾、熱乾燥、減圧乾燥等の方法により乾燥するという方法がある。
【００４３】
【実施例】
（減圧採血管の作成）
（実施例１）
血液凝固活性を有する物質としてトロンビン（牛血漿由来：持田製薬株式会社製）を２００ＩＵ、バインダーとしてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を１００ｍｇ、これらを一旦水に溶解させ、凍結乾燥した。更に得られたものを砕き、ふるいにかけて粒径を揃えた。得られた顆粒の粒径は３２ｍｅｓｈ〜６０ｍｅｓｈのものであった。
【００４４】
採血管に、作製した顆粒を採血管１本当たり１０ｍｇ分注した。
【００４５】
更にシリカ粒子及びポリビニルピロリドンをアルコール溶液中に分散させ、この溶液をポリエステルフィルムにコーティングし、乾燥したものを円形に打ち抜き封入した（図１参照）。
【００４６】
（実施例２）
血液凝固活性を有する物質としてトロンビン（牛血漿由来：持田製薬株式会社製）を  ２００ＩＵ、バインダーとしてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を１００ｍｇ、これらを一旦水に溶解させ、凍結乾燥した。更に得られたものを砕き、ふるいにかけて粒径を揃えた。得られた顆粒の粒径は３２ｍｅｓｈ〜６０ｍｅｓｈのものであった。
【００４７】
採血管にオレフィン系樹脂に無機充填剤を配合した分離剤をノズルの後方より圧力をかけて１．６ｍｌ充填した。
【００４８】
分離剤が存在する側と空間を２分するように円形に打ち抜いたポリエステルフィルムを挿入し、このポリエステルフィルムの上に先に造粒した顆粒を１０ｍｇ分注した。
【００４９】
更にシリカ粒子及びポリビニルピロリドンをアルコール溶液中に分散させ、この溶液をポリエステルフィルムにコーティングし、乾燥したものを円形に打ち抜き封入した（図２参照）。
【００５０】
（実施例３）
血液凝固活性を有する物質としてトロンビン（牛血漿由来：持田製薬株式会社製）を２００ＩＵ、バインダーとしてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を１００ｍｇ、水溶性シリコーン５ｍｇ、これらを一旦水に溶解させ、凍結乾燥した。更に得られたものを砕き、ふるいにかけて粒径を揃えた。得られた顆粒の粒径は３２ｍｅｓｈ〜６０ｍｅｓｈのものであった。
【００５１】
採血管にオレフィン系樹脂に無機充填剤を配合した分離剤をノズルの後方より圧力をかけて１．６ｍｌ充填した。
【００５２】
採血管に、作製した顆粒を採血管１本当たり１０ｍｇ分注した。
【００５３】
更にシリカ粒子及びポリビニルピロリドンをアルコール溶液中に分散させ、この溶液をポリエステルフィルムにコーティングし、乾燥したものを円形に打ち抜き封入した（図３参照）。
【００５４】
（実施例４）
血液凝固活性を有する物質としてトロンビン（牛血漿由来：持田製薬株式会社製）を  ２００ＩＵ、バインダーとしてポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を１００ｍｇ、これらを一旦水に溶解させ、凍結乾燥した。更に得られたものを砕き、ふるいにかけて粒径を揃えた。得られた顆粒の粒径は３２ｍｅｓｈ〜６０ｍｅｓｈのものであった。更に、シリカ粒子を１％濃度になるように適切な有機溶媒に分散させ、造粒した顆粒を浸した後取り出して風乾させた。
【００５５】
採血管に、オレフィン系樹脂に無機充填剤を配合した分離剤をノズルの後方より圧力をかけて１．６ｍｌ充填し、更に血清分離剤の露出している部分に、水溶性シリコーンを塗布し、作製した顆粒を分注した。
【００５６】
（比較例１）
血液凝固活性を有する物質としてトロンビン（牛血漿由来：持田製薬株式会社製）を用い１００ＩＵ／ｍｌ濃度のトロンビン水溶液を調整。採血管にトロンビン溶液を１００μｌ分注し、採血管ごと凍結乾燥機に入れトロンビンを凍結乾燥させた。
【００５７】
（比較例２）
シリカ粒子及びポリビニルピロリドンをアルコール溶液中に分散させ、この溶液をポリエステルフィルムにコーティングし、乾燥したものを円形に打ち抜いた。
【００５８】
採血管に、打ち抜いたフィルムを挿入した。
【００５９】
（比較例３）
清浄されたガラス試験管を用意した。
【００６０】
上記各実施例及び比較例において作製した採血管を減圧下にて、採血管材質と熱融着する性質を持つフィルムを採血管の開口部に熱融着、減圧採血管を作製した。
【００６１】
（凝固時間の測定）
上記の減圧採血管を用い、人より９ｍｌの採血を行い血液の凝固時間を観察した。
【００６２】
血液凝固完了時点の見極めは、採血管を横に倒し血液の流動性を確認、流動性が無くなった時点を血液の血液凝固完了時間とした。採血後は１２００Ｇの強さで１０分間の遠心分離を行い血清の分離を行った。
【００６３】
各実施例および比較例の結果を表１に示す
【００６４】
【表１】
0004053659.tif 000002
【００６５】
【発明の効果】
本発明は、２種類以上の血液凝固促進剤のうち少なくとも１種類以上の血液凝固促進剤を顆粒とするものであり、また、２種類以上の血液凝固促進剤のうち、１種類が無機物であり、かつ他の１種類が血液凝固活性を有する物質である。
【００６６】
本発明では、シリカ粒子等の第１の血液凝固促進剤と、トロンビンのように急速に血液凝固を促進する生物由来の第２の血液凝固促進剤とを併用し、順に血液に接触させることにより、トロンビン単独よりも短時間でかつ安定して血液を凝固させることが可能となる。さらにバインダーを用いて顆粒を形成することにより、血液への溶解速度をコントロールすることができ、血液の凝固速度も同時にコントロールすることが可能となる。
【００６７】
また、血液凝固促進剤を顆粒状にすることで容易に管体に封入し効率よく生産でき、血液凝固促進剤の塗布や凍結乾燥の工程等が不必要となり製造効率の高い製品が提供できる。
【００６８】
前述の実施例によれば、血液は初めに無機物の血液凝固促進剤に触れて緩慢な凝固を開始し、続いて血液凝固活性を有する生物由来の血液凝固促進剤に触れて急速に凝固が促進され、ムラなく確実に凝固を完了することができる。顆粒に含まれたバインダーの作用によりトロンビンの溶解がシリカ粒子よりも遅れることで血液凝固速度にばらつきが生じない。
【００６９】
さらに採血管内に血清分離剤が封入される場合は、プラスチック製フィルムによって空間を２分し、それぞれの空間に血液凝固促進剤と血清分離剤を存在させることで両者の接触を防止できる。また、水溶性シリコーンを血清分離剤や顆粒に塗布したり、顆粒の中に混合することによっても、血液凝固促進剤が血清分離剤に接着しないように、または血清分離剤中に捕捉されないように工夫でき、長期保存後でも血液凝固促進能の低下を防ぐことを可能にし、血液凝固時間に誤差を生じることがない。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の一実施例の減圧採血管を説明するための中央断面図である。
【図２】本発明の一実施例の減圧採血管を説明するための中央断面図である。
【図３】本発明の一実施例の減圧採血管を説明するための中央断面図である。
【図１】
0004053659.tif 000003
【図２】
0004053659.tif 000004
【図３】
0004053659.tif 000005