(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
(Ａ)Ｌ-カルニチンまたは、アルカノイルが２-８の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の基であるアルカノイルＬ-カルニチンまたは薬理学上許容されるその塩;および、(Ｂ)トリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベンを含有する、加齢または神経毒性薬の使用による神経細胞または脳の変質による病態、脳卒中、記憶喪失、初老性または老年性痴呆またはアルツハイマー病の予防および治療のための医薬組成物。
【請求項２】
アルカノイルが２-６の炭素原子を含む請求項１記載の組成物。
【請求項３】
アルカノイルが、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリルおよびイソバレリルから成る群から選択される請求項２記載の組成物。
【請求項４】
成分(Ｂ)が、３,４',５-トリヒドロキシスチルベン(レスベラトロール)または薬理学上許容されるその塩である請求項１-３いずれかに記載の組成物。
【請求項５】
レスベラトロールが、ビティス・ビニフェラ、ビティス・ロタンジフォリア、またはビティス・ラブラスカから抽出されるレスベラトロールである請求項４記載の組成物。
【請求項６】
成分(Ｂ)が、ビティス・ビニフェラ、ビティス・ロタンジフォリアまたはビティス・ラブラスカのブドウの皮またはブドウの茎の、または、ポリゴナム・カスピダーツムまたはポリゴナム・マルチフローラムの根の抽出物または天然生成物の粉末から成る請求項１-５いずれかに記載の組成物。
【請求項７】
重量比(Ｂ):(Ａ)が１:１〜１:１,０００である請求項１-６記載いずれかに記載の組成物。
【請求項８】
重量比(Ｂ):(Ａ)が１:１〜１:５００である請求項７記載の組成物。
【請求項９】
(Ａ)Ｌ-カルニチンまたは、アルカノイルが２-８の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の基であるアルカノイルＬ-カルニチンまたは薬理学上許容されるその塩および、
(Ｂ)トリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベンを、
(Ａ)および(Ｂ)が混合された状態で含むか、または(Ａ)および(Ｂ)を別個に含む、請求項１-８いずれかに記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、加齢および、神経毒性薬の使用によりひきおこされる脳障害の予防的または治療的処置のためのＬ-カルニチンまたはアルカノイルＬ-カルニチンおよびトリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベンの組み合わせ組成物の新規使用に関する。
従って、該組成物は、使用する特定個人に対して該組成物が発揮することが意図される補助的または予防的作用または狭義の治療的作用により栄養補助食品または実際の薬の形態をとり、その作用を発揮することができる。
【０００２】
(Ａ)Ｌ-カルニチンまたは、直鎖または分枝鎖アルカノイル基が２-８の炭素原子を含むアルカノイルＬ-カルニチンおよび薬理学上許容されるその塩;および、
(Ｂ)トリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベン、典型的にはレスベラトロール;の組み合わせの、多くの異なる病状の予防的および治療的処置における使用はすでに公知である。米国特許第５,７４７,５３６号は実際、糖尿病性神経障害および、アテローム性動脈硬化障害の予防および治療のための、および、血小板凝集の阻害のための前記組み合わせの使用を開示する。
本発明による使用は、そのようなすでに公知の使用とは全く関連せず、またはそれらから導き出すこともできない。
【０００３】
そのより広い側面において本発明は、Ｌ-カルニチンまたはアルカノイルＬ-カルニチンまたはその薬理学上許容される塩および、トリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベンの、前記病気の予防または治療のための協調使用に関し、ここでこれらの活性成分の「協調使用」が意味するのは、その共投与、すなわち、Ｌ-カルニチンまたはアルカノイルＬ-カルニチンまたは薬理学上許容されるその塩およびトリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベンの実質的な同時投与か、該活性成分の混合物を含む一組成物の投与の区別なく、その両方である。
【０００４】
以下、開示を簡潔かつ単純にするためにＬ-カルニチンに関してのみ言及するが、記載は前記アルカノイルＬ-カルニチンおよびその薬理学上許容される塩にも当てはまることが理解されるべきである。同様に、以下、レスベラトロール(トランス-３,４',５-トリヒドロキシ-スチルベン)に関してのみ言及するが、記載は、シス-レスベラトロールおよび、対応するトランスおよびシス-グリコシドのみならず、一般に、トリヒドロキシおよびテトラヒドロキシスチルベンにも当てはまることが理解されるべきである。
【０００５】
レスベラトロールはブドウに見出され、特にビティス・ビニフェラ(Vitis vinifera)、ビティス・ロタンジフォリア(Vitis rotundifolia)およびビティス・ラブラスカ(Vitis labrusca)のブドウの皮、種、茎およびブドウの木の葉および特に、それらのブドウから得られるワインおよび前記天然生成物の抽出物および粉末中に特に見出される。レスベラトロールは、ポリゴナム・カスピダーツム(Polygonum genus)およびポリゴナム・マルチフローラム(Polygonum multiflorum)のような多くのポリゴナム(Polygonum)属(ポリゴナシエ・ファミリー(Polygonaceae family))種の根にも存在する。
本発明の目的に関して「レスベラトロール」が意味するのは、トランス-３,４'-５-トリヒドロキシスチルベン(すなわちレスベラトロールそのもの)およびそのシス異性体の両方、各グリコシドおよび、いずれかの適当な植物種から得られるレスベラトロール含有抽出物および粉末である。
【０００６】
普段の食事で適度の量のワインを飲む人々は、その食習慣でワインを飲まない人々よりも心血管事故の割合が低いことを立証した疫学研究の後で、ブドウおよびワインに存在する天然ポリフェノールが近年、多くの研究者グループの注目を集めている。研究されている種々のポリフェノールの中でレスベラトロールは、血小板凝集に対して有意な活性を、ならびに有意な抗炎症および血管保護活性を発揮することができるために最も興味深いと考えられている。
【０００７】
ワインに存在するレスベラトロールおよびポリフェノールの他の側面は、ワインを適度に飲むことにより特に年配の人々において誘導することができる、初老性および老年性痴呆の発症の有意な低下に関連するものである。大きな母集団において行われた近年の疫学研究により、脳卒中による死亡(これは、適量のワインを飲む人では、飲まない人よりも低い)に関して、類似するこれまでの研究によりすでに示されていることが確認されている。
【０００８】
Ｌ-カルニチンのすでに公知の治療的使用に関して、この物質は例えば、急性および慢性心筋虚血、狭心症、心障害および心不整脈の治療および、末梢血管障害に関する心血管分野で用いられている。腎臓学分野ではＬ-カルニチンは、定期的な血液透析治療を行っている慢性尿毒症の患者に、筋無力症および、筋肉痙攣の発生を抑えるために投与される。他の治療的使用は、ＨＤＬ/ＬＤＬ+ＶＬＤＬ比の正常化および全非経口栄養に関連する。Ｌ-カルニチンの使用は、ある種の筋疾患および筋ジストロフィーの治療に関しても知られている。
【０００９】
驚くべきことに、特徴成分として以下の組み合わせを含む組成物が、加齢および、毒性薬物の使用により引き起こされる脳障害の予防的および/または治療的処置に、その成分が発揮する強い共同効果の結果として非常に有効であることが今回見出された。:
(Ａ)Ｌ-カルニチンまたは、アルカノイルが２-８の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルカノイル基であるアルカノイルＬ-カルニチンまたはその薬理学上許容される塩;および、
(Ｂ)トリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベン。
【００１０】
それゆえ本発明は、(Ａ)Ｌ-カルニチンまたは、アルカノイルが２-８の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の基であるアルカノイルＬ-カルニチンまたは薬理学上許容されるその塩;および、(Ｂ)トリヒドロキシまたはテトラヒドロキシスチルベン;の、神経または脳障害に関連する疾患形態の予防および治療のための医薬品であって、(Ａ)および(Ｂ)が一緒に混合して、または別々に充填されているものを調製するための使用に関する。活性成分(Ａ)および(Ｂ)を一緒に混合することができることまたは、別に充填することができることは、該成分の「協調使用」に関して前に記載したことと一致する。
好ましくは、アルカノイル基は２-６の炭素原子を含み、よりいっそう好ましくは、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリルおよびイソバレリルＬ-カルニチンからなる群から選択される。
【００１１】
成分(Ｂ)は、好ましくは、３,４',５-トリヒドロキシスチルベン(レスベラトロール)または３,４',５-トリヒドロキシ-３-β-モノ-Ｄ-グルコシドまたは薬理学上許容されるその塩の一つである。レスベラトロールは、合成調製された形態であり得、または、ビティス・ビニフェラ、ビティス・ロタンジフォリア、ビティス・ラブラスカから、または、ポリゴナム・カスピダーツムまたはポリゴナム・マルチフローラムの根から抽出された形態であり得る。
成分(Ｂ)は、ビティス・ビニフェラ、ビティス・ロタンジフォリア、ビティス・ラブラスカのブドウの皮、種または茎の、またはポリゴナム・カスピダーツムまたはポリゴナム・マルチフローラムの根からの抽出物または粉末のような、レスベラトロールを含む天然生成物の抽出物または粉末から成るものであってもよい。
【００１２】
(Ｂ):(Ａ)の重量対重量比は、１:１〜１:１,０００および好ましくは１:１〜１:５００の範囲内である。
本発明により予防的および治療的に処置される、加齢により引き起こされる脳障害には、特に、脳卒中、初老性および老年性痴呆およびアルツハイマー病が含まれる。
本発明による「協調」使用がかなり有効であることが分かっている効果に対する神経毒性薬の例は、シスプラチンである。
【００１３】
脳神経レベルで成分(Ａ)および(Ｂ)が発揮する思いがけない共同性を、脳神経系レベルにおける保護活性を示唆し、および、ヒト患者において脳神経異常を克服するための組み合わせ物の有効使用を予測するものとしてよく認識されている実験モデルを用いて得られる結果により立証する。
【００１４】
毒性
マウスとラットの両方に、Ｌ-カルニチンおよびそのアルカノイル誘導体両方および、レスベラトロールまたは、およそ０.１％のレスベラトロール含量を有するポリフェノール含有ブドウ抽出物の高投与量の組み合わせを投与して行った試験により、本発明による組成物の低毒性および良好な耐性が立証された。ラットにおける、１ｇ/ｋｇまでのＬ-カルニチンまたはそのアルカノイル誘導体の、高投与量のレスベラトロール(０.５ｍｇ/ｋｇまでおよびそれ以上)またはブドウ抽出物(１ｇ/ｋｇまでおよびそれ以上)と合わせた経口投与で、注目に値する毒性反応は示されなかった。Ｌ-カルニチンまたはそのアルカノイル誘導体のいずれかと、レスベラトロールまたはレスベラトロール含有ブドウ抽出物の、前に記載した製剤に用いた投与量の四分の一に等しい投与量での組み合わせの、３ヶ月間毎日連続して食事と一緒に行った長期投与も同様に良好に耐性であることが明らかになった。この処置の終わりに、評価した種々の生物学的パラメータ(体重増加、ヘマトクリット、血清グルコース、ＢＵＮなど)の、または、試験した主要器官(肝臓、心臓、肺、腎臓、副腎、生殖腺)における組織学的知見の異常は全く認められなかった。以下に、カルニチンまたはそのアルカノイル誘導体および、レスベラトロールまたはその誘導体を含む新規組成物が脳神経系レベルで発揮する実質的な共同効果の証拠を提供するいくつかの試験を示す。
【００１５】
カルニチンおよびレスベラトロールの単独または組み合わせの、行動反応異常への効果に関する試験
エンドセリンのような血管作用性ペプチドおよび神経調節物質の作用の一つは、動物の行動において、動物の運動性および前庭反応を減じることにそれが及ぼす影響である。
これらの試験で、マウスにおいて、１ｐｍｏｌ/マウスの投与量で大脳内に注射したエンドセリン(ＥＴ-１)の典型的な活性(動物の自発的行動を実質上減じる)が、カルニチンおよびレスベラトロールの前投与によりかなり有意な程度まで阻害され得、特に、これら２タイプの物質の組み合わせが協調的に作用して、エンドセリン投与により低下する運動性がほとんど正常値まで回復し得ることが観察された。
【００１６】
１０匹のマウスを同時に、光電池および自動運動測定機を有する一つの容器に入れ、該値を観察した。該測定は、エンドセリン(ＥＴ-１)注射１５分後、５分間マウスを観察することにより行った。
観察された運動低下の割合は、エンドセリン単独では８５.５％、および、Ｌ-カルニチン、アセチルＬ-カルニチンおよびプロピオニルＬ-カルニチンそれぞれ(これらは該試験の３日前および、ＥＴ-１注射の１時間前に、動物に、３００ｍｇ/ｋｇの投与量にて腹腔内投与した)に関しては６９.６-６５.５％および、６０.３％であった。
【００１７】
レスベラトロール単独(２.５ｍｇ/ｋｇ)では６０.４％の低下が導かれ、ポリフェノールを含有し、かつ前記レスベラトロール投与量に相当する量のレスベラトロールを含有するブドウ抽出物を用いておよそ同じ低下が達成された。しかし、レスベラトロールとカルニチンの組み合わせにより、エンドセリン処置した動物の運動性はほとんど正常レベルに回復した。レスベラトロールとプロピオニルＬ-カルニチンの組み合わせ投与の場合、動物の運動数はコントロール動物のものと実際上同一であり、こうして該効果の意外な共同相乗効果が立証された。
有意な共同活性は、レスベラトロールまたはレスベラトロール含有天然ポリフェノール生成物の、アセチルＬ-カルニチンまたは、より少ない程度までだがＬ-カルニチンと組み合わせた使用に関しても認められた。
【００１８】
Ｈ２Ｏ２に暴露し、Ｌ-カルニチンまたはレスベラトロールを用いて、または、２つの生成物を組み合わせて用いて処置したクロム親和細胞腫細胞(ＰＣ-１２)の生存に関する試験
３×１０５個の細胞/ｍｌを含むクロム親和細胞腫細胞(ＰＣ-１２)培養物を０.１ｍＭ濃度のＨ２Ｏ２に３０分間暴露した。Ｈ２Ｏ２単独で処置した細胞の生存率は２４時間後ではおよそ４５％であったのに対し、Ｌ-カルニチンまたはレスベラトロールを用いて処理した細胞の生存率はこれよりもかなり高く、１０−８Ｍの濃度のＬ-カルニチン、アセチルＬ-カルニチンおよびプロピオニルＬ-カルニチンを用いて処理した細胞に関してはそれぞれ５５、６０および６２％の生存率、１０−４Ｍの濃度でレスベラトロールを用いて処置した細胞に関しては６９％の生存率であった。
【００１９】
前で用いた濃度のアセチルＬ-カルニチンとレスベラトロールの組み合わせを用いた生存率は８８％であり、これにより、当物質の共同効果が立証される。
さらに、この組み合わせを用いて、他の場合と異なり、細胞変性の兆項は全く認められなかった。
【００２０】
シスプラチンにより誘導される感覚神経障害における、カルニチン、レスベラトロールおよびこれらの組み合わせの保護効果に関する試験
これらの試験では特に、感覚神経に障害を起こし、自己受容性認知を損ない得る神経毒因子としてシスプラチンを用いた。該試験は、カルニチン、レスベラトロールおよびこれらの物質の組み合わせの、シスプラチンの注射により損なわれる、マウスの末梢感覚認知を回復させる能力を評価した。この能力は、テイル-フリック(tail-flick)試験に従い、または回転棒試験(the rotating bar test)(Apfel S.C., Lipon R.B., Ann. Neurol., 29, 87-90, 1991)を用いて、加熱水溶液（この中に動物の尾を浸す）により誘発される温痛に対する反応を評価することにより評価した。
【００２１】
シスプラチンを１０ｍｇ/ｋｇの投与量で、８日間連続して皮下投与した。同じ期間、マウスに１００ｍｇ/ｋｇのカルニチンおよび２.５ｍｇ/ｋｇのレスベラトロールまたはこれらの生成物の組み合わせの注射を施した。
これら２つの試験の結果により、該組み合わせにより与えられる強い保護活性の証拠を得、これは、アセチルＬ-カルニチンおよびプロピオニルＬ-カルニチンの、レスベラトロールまたはレスベラトロール含有ブドウ抽出物との組み合わせの場合に特に明らかである。
これらの場合、痛刺激に対する応答は、正常レベルまで回復した(痛みに対する応答は、組み合わせ物を用いて処置した動物では、コントロールと比較しておよそ２℃高まった)。
【００２２】
回転棒試験でも、コントロール動物(１グループあたり１０匹の動物)における安定時間の持続は１４.６秒であったのに対し(シスプラチン処置動物ではおよそ８秒まで低下した)、安定時間の有意な増加が、カルニチンを用いて処置したグループおよび、レスベラトロールを用いて処置したグループの両方において明らかであった。しかし、試験組み合わせ物を用いて処置した動物のグループで、増加は非常に有意であった。観察された値は実際には、アセチルＬ-カルニチンとレスベラトロールを用いて処置した動物においては１３.５秒であり、プロピオニルＬ-カルニチンとレスベラトロールを用いて処置した動物においては１４.４秒であった。
これらの試験においても、カルニチンとレスベラトロールの間の意外な協調性が立証される。
本発明による製剤を説明する、無制限の例を以下に示す。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
【表２】
表１のつづき
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【００２５】
【表３】
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【００２６】
【表４】
表２のつづき
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【００２７】
Ｌ-カルニチンまたはアルカノイルＬ-カルニチンの薬理学上許容される塩が意味するのは、望ましくない毒性または副作用を生じない酸との、これら活性成分のいずれかの塩である。これらの酸は製薬の専門家には周知である。
【００２８】
適当な塩の無制限の例は次のようである:クロライド;ブロマイド;ヨーダイド;アスパルテート、酸アスパルテート;シトレート、酸シトレート;タートレート;ホスフェート、酸ホスフェート;フマレート、酸フマレート;グリセロホスフェート;グルコースホスフェート;ラクテート;マレエート、酸マレエート;オロテート;オキサレート、酸オキサレート;スルフェート、酸スルフェート;トリクロロアセテート;トリフルオロアセテート;および、メタンスルホネート。
ＦＤＡが認可する薬理学上許容される塩のリストは、Int.J. of Pharm. 33, (1986), 201-217に記載されており、この刊行物は本明細書中に引用により組み込む。
【００２９】
前記組成物の関連物は、経口、非経口、直腸または経皮で、固体、半固体、液体、半液体、微粉、顆粒またはリポソーム形態(liposomic form)で投与するべく調製することができる。
特徴的な活性成分(Ａ)および(Ｂ)に加えて、該組み合わせ組成物は、１またはそれ以上の次の成分を含んでもよい。:ポリフェノール、アントシアニン、タンニン、アントシアノシド、ビタミン、補酵素、無機塩、植物繊維、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、グリセリルホスホリルコリン、チョウセンニンジンおよびギンコ・ビロバ抽出物、ビタミンおよび抗酸化剤。