(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナート、その薬学的に許容できる塩またはそのジアステレオマーの製造方法であって、
以下の工程：
（ａ）２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−１，３−プロパンジオール（ガンシクロビル）またはその塩を、場合により置換されているトリチル化合物と反応させる工程；
（ｂ）Ｎ−トリチル  ２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−トリチルオキシ−プロパン−１−オールまたはその塩を、Ｌ−バリンの活性化誘導体でエステル化する工程；
（ｃ）すべてのトリチル基および場合によりすべてのアミノ−保護基を、式：
0004181215.tif 000010
（式中、Ｐ2は、場合により置換されているトリチル基またはアミノ保護基であり、Ｐ3は、アミノ保護基であり、Trtは、場合により置換されているトリチル基である）の化合物から除去し、化合物２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナートまたはその薬学的に許容される塩を得る工程；
（ｄ）場合により、化合物２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナートを、その薬学的に許容される塩に転化する工程；
（ｅ）場合により、化合物２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナートの酸付加塩を、非塩形態に転化する工程；または
（ｆ）場合により、２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナートを、その（Ｒ）および（Ｓ）ジアステレオ異性体に分割する工程
を含むことを特徴とする方法。
【請求項２】
該トリチル化合物が、トリチルクロリドまたはトリチルブロミドである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｌ−バリンの活性化誘導体が、Ｚ−バリン−Ｎ−カルボキシ無水物またはブチルオキシカルボニル−Ｌ−バリンである、請求項１記載の方法。
【請求項４】
該トリチル基を、トリフルオロエタノール／トリフフルオロ酢酸、またはトリフフルオロ酢酸／ジクロロメタンで除去する、請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
発明の分野
本発明は、ガンシクロビルのプロドラッグ製剤およびその薬学的に許容される塩の製造方法に関する。さらに詳しくは、本発明は、２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−１，３−プロパン−ジオールから誘導されたＬ−モノバリンエステルおよびその薬学的に許容される塩に関する。
背景情報
イギリス特許第１５２３８６５号明細書は、９−位に非環式鎖を有する抗ウイルス性のプリン誘導体を記載している。これらの誘導体の中で、ＩＮＮ命名法でアシクロビルと呼ばれる２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−エタノールは、単純ヘルペスのようなヘルペスウイルスに対して強い活性を有することが見出された。
米国特許第４，３５５，０３２号明細書は、ＩＮＮ命名法でガンシクロビルと呼ばれる化合物、９−〔（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−エトキシ）−メチル〕−グアニンまたは２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−１，３−プロパン−ジオールまたは９−〔（１，３−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）−メチル〕−グアニン（ＤＨＰＧ）を開示している。ガンシクロビルは、ヘルペス科のウイルス、例えば単純ヘルペスおよびサイトメガロウイルスに対し大変有効である。
ヨーロッパ特許出願公開第３７５３２９号明細書は、以下の式：
0004181215.tif 000002
（式中、ＲおよびＲ1は、それぞれ水素原子およびアミノアシル残基から選ばれるが、ただし、ＲおよびＲ1の少なくとも一つは、アミノ酸アシル残基を表し、Ｂは、式：
0004181215.tif 000003
〔式中、Ｒ2は、Ｃ1-6の直鎖、Ｃ3-6の分岐鎖もしくはＣ3-6の環状アルコキシ基、またはヒドロキシまたはアミノ基または水素原子を表す）の基を表す〕
を有するプロドラッグ化合物およびそれらの生理学的に許容される塩を開示している。これらのプロドラッグ化合物は、経口経路に投与するときに有利な生物学的利用能を有し、体内で高い親化合物の濃度が得られると記載されている。
ヨーロッパ特許出願公開第３７５３２９号明細書の実施例３（ｂ）は、白色泡状体としての、ガンシクロビルのビス（Ｌ−イソロイシナート）エステルの製造を開示している。実施例４（ｂ）は、白色固体としての、ガンシクロビルのビス（グリシナート）エステルの製造を開示している。実施例５（ｂ）は、固体としての、ガンシクロビルのビス（Ｌ−バリナート）エステルの製造を開示している。実施例６（ｂ）は、９０％のビスエステルおよび１０％のモノエステルを含むシロップとしての、ガンシクロビルのビス（Ｌ−アラニナート）エステルの製造を開示している。ビス−エステルは、ガンシクロビルを、場合により保護されたアミノ酸またはその機能的同等物と反応させることにより製造される。その反応は、従来の方法で、例えばピリジン、ジメチルホルムアミドなどのような溶媒中、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドのようなカップリング剤の存在下で、場合により４−ジメチルアミノピリジンのような触媒能を有する塩基の存在下で行われる。記載されたビスエステルは、経口投与用薬剤の製造のために処理が困難な非結晶性物質である。
イギリス特許出願第８８２９５７１号は、ヨーロッパ特許出願公開第３７５３２９号明細書および米国特許第５，０４３，３３９号明細書の優先権特許出願であり、式：
0004181215.tif 000004
（式中、Ｒは、ヒドロキシまたはアミノ基または水素原子を表す）の化合物のアミノ酸エステルおよびその生理学的に許容される塩を開示している。
好ましいアミノ酸の例は、例えば、グリシン、アラニン、バリンおよびイソロイシンのような６個までの炭素原子を含む脂肪族酸を含む。アミノ酸エステルは、モノエステルもジエステルも含む。このジエステルの製造法は、ヨーロッパ特許出願公開第３７５３２９号明細書中の製造法と同一である；しかしながら、この特許出願並びにヨーロッパ特許出願公開第３７５３２９号明細書および米国特許第５，０４３，３３９号明細書は、モノエステルの製造、またはそれらの有用性を示唆するいかなるデータも開示していない。
Leon Collaらの、J.Med.Chem.（1983）26,602-604は、アシクロビルのいくつかの水溶性エステル誘導体およびそれらの塩を、アシクロビルのプロドラッグとして開示している。著者らは、アシクロビルが、水へのその限られた溶解性のために目薬または筋肉注射剤として投与できないことを述べ、したがって、親化合物よりもさらに水溶性であるアシクロビル誘導体を合成している。著者らは、グリシルエステルの塩酸塩、アラニルエステルの塩酸塩、β−アラニルエステルの塩酸塩、コハク酸エステルのナトリウム塩、およびアジド酢酸エステルを開示している。アラニルエステルは、アシクロビルを対応するＮ−カルボキシ−保護アミノ酸とピリジン中で、１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび触媒量のｐ−トルエンスルホン酸の存在下で反応させ、そして続いて接触還元によりα−およびβ−アラニルエステルを塩酸塩として得る方法を含む、従来のエステル化法で製造された。
L.M.Beauchampらの、Antiviral Chemistry & Chemotherapy（1992）,3（3）,157-154は、抗ヘルペス剤アシクロビルの１８個のアミノ酸エステルおよびアシクロビルのプロドラッグとしてのそれらの有用性を開示し、ラットでアシクロビルの尿中回収量を測定することにより評価した。１０個のプロドラッグ、例えばグリシル、Ｄ，Ｌ−アラニル、Ｌ−アラニル、Ｌ−２−アミノブチレート、Ｄ，Ｌ−バリル、Ｌ−バリル、Ｄ，Ｌ−イソロイシル、Ｌ−イソロイシル、Ｌ−メチオニル、およびＬ−プロリルエステルは、尿中にアシクロビル自体よりも多量の親薬剤を生じた。著者らによれば、アシクロビルのＬ−バリルエステルは、研究されたエステルの中で最も優秀なプロドラッグであった。これらのエステルは、Collaらによって使用された方法と同様の方法で製造された。
ヨーロッパ特許出願公開第３０８０６５号明細書は、アシクロビルのバリンおよびイソロイシンエステル、好ましいものとして、他のエステルおよびアシクロビルと比較した場合、経口投与後に腸管からの吸収作用がかなり増加することを示すので、そのＬ型を開示している。アミノ酸エステルは、アシクロビルをＮ−カルボキシ−保護アミノ酸または酸ハロゲン化物またはアミノ酸の酸無水物と、ピリジンまたはジメチルホルムアミドのような溶媒中で、場合により触媒性塩基の存在下で反応させることを含む、従来のエステル化法で製造される。
ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ  ９４／２９３１１号明細書は、アシクロビルまたはガンシクロビルを含む、ヌクレオシド類似体のアミノ酸エステルの製造方法を開示している。この方法は、エステル化可能なヒドロキシ基をその線状または環式エーテル部分中に有するヌクレオシド類似体を、式：
0004181215.tif 000005
（式中、Ｒ1は、水素、Ｃ1-4のアルキルもしくはアルケニル基または他のアミノ酸側鎖を表してもよく、Ｒ2は、水素または基ＣＯＯＲ3を表してもよいが、ここでＲ3は、ベンジル、ｔ−ブチル、フルオレニルメエチル、または場合によりハロ置換された線状または分岐状のＣ1-8のアルキル基である）の２−オキサ−４−アザ−シクロアルカン−１，３−ジオンと反応させることを含む。好ましいＲ1基は、それぞれ、アシクロビルまたはガンシクロビルのグリシン、アラニン、バリンおよびイソロイシンエステルを生じる、水素、メチル、イソプロピルおよびイソブチルを含む。ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ９４／２９３１１号明細書の実施例１〜３は、従来の方法によるバリン−置換２−オキサ−４−アザ−シクロアルカン−１，３−ジオン（Ｚ−バリン−Ｎ−カルボキシ無水物）によるアシクロビルの縮合のみを開示している。そのＰＣＴ出願のアミノ酸エステルは、アシクロビルエステルおよびガンシクロビル（ＤＨＰＧ）エステルの両方を含むが、その出願は、ガンシクロビルエステル、ましてガンシクロビルのモノ−エステルの製造方法を開示していない。
２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−１，３−プロパン−ジオールから誘導されたＬ−モノバリンエステルおよびその薬学的に許容される塩は、強い抗ウイルス剤であり、かつヨーロッパ特許出願公開第６９４５４７号明細書に記載されている。これらの化合物は、改良された経口吸収作用および低毒性を有することが見出されている。この特許出願は、ここで記載した方法とは異なった、これらエステルのあるいくつかの製造方法をも開示している。
本発明は改良法に関し、これによりガンシクロビルをトリチル化合物と反応させ、脂肪族ヒドロキシル基の１個とグアニン基の２−アミノ部分に、トリチル保護基を有するガンシクロビル中間体を供する。この中間体は、高収率かつ高純度で単離され、また、Ｌ−バリン誘導体によるモノ−エステル化により、ガンシクロビルのＬ−モノバリンを製造することを可能にする。
発明の要約
本発明は、式Ｉ：
0004181215.tif 000006
の化合物およびその薬学的に許容される塩の製造方法を提供するが、この化合物を、以下、２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナートまたはモノ−Ｌ−バリンガンシクロビルと呼ぶ。
この方法は、ガンシクロビルとトリチル化合物との反応に関し、脂肪族ヒドロキシル基の１個とガンシクロビルのグアニン基の２−アミノ部分に、トリチル保護基を有するガンシクロビル中間体を供するものである。この中間体は、順に、Ｌ−バリン誘導体によるモノ−エステル化によりガンシクロビルのＮ，Ｏ−ビストリチル−モノバリンエステルを供し、次いで、保護基の除去により式Ｉのプロドラッグを産する。任意に、この方法はまた、式Ｉのプロドラッグの塩の形成工程、式Ｉのプロドラックの酸付加塩の非塩形態への転化工程、式Ｉのプロドラッグの光学分割工程または式Ｉのプロドラッグの結晶形態での製造工程を含んでいてもよい。この方法の詳細を以下に記述する。
発明の詳細な説明
定義
特に断らないかぎりは、詳細な説明および請求項で使用する以下の用語は、以下に与えられた意味を有する。
「アルキル」は、１乃至指定された炭素原子数を有する線状または分岐状の飽和炭化水素ラジカルを意味する。例えばＣ1-7のアルキルは、少なくとも１個、しかしながら、７個を超えない炭素原子を有するアルキル、例えばメチル、エチル、イソプロピル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘプチルなどである。
「低級アルキル」は、１乃至６個の炭素原子のアルキルを意味する。
「アリール」は、一つの水素原子を除去することによって芳香族炭化水素から誘導された有機ラジカルを意味する。好ましいアリールラジカルは、一つの環（例えば、フェニル）または二つの縮合環（例えば、ナフチル）を有する芳香族炭素環式ラジカルである。フェニル基：Ｃ6Ｈ5−が最も好ましい。
「アラルキル」は、水素原子が上記定義のアリール基、例えばベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル等により置換されているアルキルから誘導される有機基を意味する。
「アシル」は、有機酸から水酸基を除去することにより誘導された有機ラジカルである；例えばＣＨ3ＣＯ−すなわちアセチルはＣＨ3ＣＯＯＨのアシルラジカルである。そのようなアシル基の他の例は、プロピオニル、またはベンゾイルなどである。「アシル」なる用語は、有機ラジカルＲＣＯ−（ここで、Ｒは上記定義のようなアルキル基である）である「アルカノイル」なる用語を含む。
「低級アルコキシ」、「（低級アルキル）アミノ」、「ジ（低級アルキル）アミノ」、「（低級アルカノイル）アミノ」、および同様の用語は、アルコキシ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノなどを意味し、ここで、各アルキルラジカルは、上記した「低級アルキル」である。
「ハロゲン」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。
化合物の「誘導体」は、元の化合物から単純な化学操作によって得ることができる化合物を意味する。
化合物の「活性化誘導体」は、所望の化学反応において該化合物を活性化する、元の化合物の反応性の形態を意味するが、ここで、元の化合物は、わずかに反応性があるかまたは反応性はない。活性化は、元の化合物の自由エネルギー量よりも大きな自由エネルギー量を有する誘導体、または分子内での化学的部分を形成して、別の試薬とより反応しやすい活性化型を与えることにより達成される。本発明においては、カルボキシ基の活性化は特に重要であり、対応する活性化剤またはカルボキシ基を活性化させる基部分は、以下でさらに詳しく述べる。活性化されたＬ−バリン誘導体の例は、式III：
0004181215.tif 000007
（式中、Ｐ3は、アミノ−保護基であり、Ａは、カルボキシ−活性基、例えばハロ、低級アシルオキシ基、カルボジイミド基、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＡＣ）、イソブチラート基などである）の化合物である。
該アミノ酸（特にＬ−バリン）をエステル化しやすくさせる、アミノ酸の活性化した形態であるアミノ酸無水物は、本発明で特に重要なものである。アミノ酸無水物は、上記式IIIの化合物に含まれる。ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ  ９４／２９３１１号明細書に記載されたＬ−バリンの環状アミノ酸無水物、例えば式IIIａ：
0004181215.tif 000008
（式中、Ｐ3は、アミノ保護基である）
の２−オキサ−４−アザ−５−イソプロピル−シクロアルカン−１，３−ジオンは、本発明に特に有用である。環状アミノ酸無水物の他の例は、以下にさらに詳しく記載された保護されたアミノ酸Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡｓ）である。
「保護基」は、（ａ）反応性基を、望ましくない化学反応中での部分イソプロピルアルコール化から保護し；そして（ｂ）反応性基の保護がもはや必要なくなった後に容易に除去できる化学基を意味する。例えばベンジル基は、第１級ヒドロキシル官能基のための保護基である。
「アミノ−保護基」は、さもなければ特定の化学反応により変性されるであろう反応性アミノ基を保護する保護基である。その定義は、トリチル基：−Ｃ（Ｐｈ）3（すなわち、トリフェニルメチル）、または置換トリチル基、例えばモノメトキシトリチル基、４，４′−ジメトキシトリチルすなわち４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル基のようなジメトキシトリチル基、ホルミル基または２〜４個の炭素原子を有する低級アルカノイル基、特にアセチルまたはプロピオニル基、トリクロロアセチル基、トリフルオロアセチル基、およびＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）すなわち「ＦＭＯＣ」基、アリルオキシカルボニル基または（Ｃ6−Ｃ12）アリール低級アルキルカーボネート（例えば、ベンジルクロロカーボネートから誘導されたＮ−ベンジルオキシカルボニル基）のようなハロカーボネートから誘導されるか、あるいはビフェニルアルキルハロカーボネート、または第３級アルキルハロカーボネート（例えば第３級ブチルハロカーボネート、特に第３級ブチルクロロ−カーボネート）、またはジ（低級）アルキルジカーボネート、特にジ（ｔ−ブチル）−ジカーボネートから誘導される他の保護基、フタリル基およびトリフェニルメチルクロリドのようなトリフェニルメチルハライド、およびトリフルオロ酢酸無水物を含む。
本発明の内容に関しては、アミノ保護基は、ガンシクロビルのグアニン基の２−アミノ部分に、または、Ｌ−バリン誘導体のアミノ基に存在してもよい。本発明に関して特に重要であるものは、ガンシクロビルのグアニン基の２−アミノ部分についてのアミノ保護基としてのトリチル基および置換トリチル基である。
「Trt」は、上記で定義したような、トリチルまたは置換トリチル基である。
「ヒドロキシ保護基」は、別の状況で、ある化学反応により修飾されるであろうヒドロキシ基を保護する保護基を意味する。本発明の内容に関しては、ヒドロキシ保護基は、上記で定義したような、トリチル基：−Ｃ（Ｐｈ）3（すなわち、トリフェニルメチル）または置換トリチル基である。
アミノ−またはヒドロキシ保護基のようなトリチル保護基は、ガンシクロビルのグアニン基上の２−アミノ基か、ガンシクロビルの側鎖ヒドロキシ部分と、場合により置換されているトリチル化合物との反応から誘導される。トリチル化合物は、当業界で周知であり、一般に、ＸＣ（Ｐｈ）3の構造式である（式中、Ｘは、クロロまたはブロモである）。置換トリチル化合物は、上記で定義したような置換トリチル基、例えばモノメトキシトリチル基、ジメトキシトリチル基、例えば４，４′−ジメトキシトリチルすなわち４，４′−ジメトキシトリフェニルメチル基を産する。
「脱離基」は、化学反応で別の基により置換される置換されやすい基を意味する。脱離基の例は、ハロゲン、場合により置換されたベンジルオキシ基、イソプロピルオキシ基、メシルオキシ基、トシルオキシ基またはアシルオキシ基である。
式Ｉの化合物の製造に使用されるすべての活性化剤および保護剤は、以下の条件を満たさなければならない；（１）それらの導入は、定量的に、かつＬ−バリン成分のラセミ化なしで進めなければならない；（２）所望の反応の間、存在する保護基は、使用される反応条件に対して安定であるべきである；（３）該基は、エステル結合が安定でありかつエステルのＬ−バリン成分のラセミ化が起こらない条件で容易に除去されなければならない。
本発明の方法は、式Ｉのプロドラッグの光学分割をも含むことができる。これら化合物の立体化学および光学分割に関する用語は、ヨーロッパ特許出願公開第６９４５４７号明細書に記載されている。
「場合による」または「場合により」は、記載された事柄（event）または情況（circumstance）が起こるかまたは起こらないかもしれないことおよびその記述が該事柄（event）または情況（circumstance）が起こった例および起こらなかった例を含むことを意味する。例えば「場合により置換されたフェニル」は、フェニルが置換されているかまたは非置換であることおよびその記述が非置換フェニルおよびその中に置換基があるフェニルをも含むことを意味する；「場合により、次に遊離塩基を酸付加塩に転化する」は、該転化が、記載されたその方法が本発明の範囲内にあるように行われるかまたは行われないことを意味し、かつ本発明は、遊離塩基を酸付加塩に転化する方法および遊離塩基を転化しない方法を含む。
「薬学的に許容される」は、一般に安全かつ非毒性である薬学組成物を製造するのに有用であることを意味し、かつ家畜への使用並びに人間への薬剤使用に許容できることを含む。
「薬学的に許容される塩」は、所望の薬理活性を有し、かつ生物学的にもそうでなくても有害でない塩を意味する。そのような塩は、例えば塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸；例えば酢酸、プロピオン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、シクロペンタン−プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、乳酸、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ｏ−（４−ヒドロキシ−ベンゾイル）−安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタン−ジスルホン酸、２−ヒドロキシエタン−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ショウノウスルホン酸、４−メチル−ビシクロ〔２，２，２〕オクト−２−エン−１−カルボン酸、グルコ−ヘプトン酸、４，４′−メチレンビス（３−ヒドロキシ−２−ナフトエ）酸、３−フェニルプロピオン酸、トリメチル−酢酸、第３級ブチル酢酸、ラウリル硫酸、グルコン酸、グルタミン酸、ヒドロキシ−ナフトエ酸、サリチル酸、ステアリン酸、ムコン酸などの有機酸で形成された酸付加塩を含む。好ましい薬学的に許容される塩は、塩化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸またはメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタン−スルホン酸、ベンゼン−スルホン酸、ｐ−クロロベンゼン−スルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、およびショウノウスルホン酸で形成された塩である。
合成反応パラメーター
そうでないと明記しない限りは、ここに記載した反応は、大気圧下で５℃から１７０℃（好ましくは１０℃から５０℃；最も好ましくは「室温」または「雰囲気温度」、例えば２０℃から３０℃）の温度範囲内で起こる。しかしながら、化学反応で使用される温度範囲は、これら温度範囲より上下の温度であろういくつかの反応が存在することは明らかである。さらに、断らない限りは、反応時間および条件は、おおよそのものであるが、例えば、ほぼ大気圧で、約５℃から約１００℃（好ましくは約１０℃から約５０℃；最も好ましくは約２０℃）の温度範囲内で、約１から約１００時間（好ましくは約５から６０時間）の間に起こる。例中で与えられたパラメーターは、おおよそではなく特定されている。
ここで記載した化合物および中間体の単離および精製は、所望ならば、適切な分離および精製方法、例えば濾過、抽出、結晶化、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、厚層クロマトグラフィー、またはこれら方法の組み合わせにより達成できる。適切な分離および単離方法の具体例は、下記の例を参照することで示される。しかしながら、他の同等な分離ないし単離方法も、もちろん使用できる。
目下の好ましい態様
本発明の最も広い定義は、発明の要約中に、式Ｉの化合物およびその薬学的に許容される塩の製造方法として示されているが、（Ｒ，Ｓ）混合物およびある特定の塩が好ましい。
以下の酸は、式Ｉの化合物と薬学的に許容される塩を形成するために好ましい：塩化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、１，２−エタンジスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸およびショウノウスルホン酸である。最も好ましいものは、塩化水素酸、硫酸またはリン酸のような強無機酸である。
最も好ましい化合物は、２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル  Ｌ−バリナートの塩化水素塩および酢酸塩である。これら化合物は、結晶性物質として製造でき、それゆえ安定した経口製剤に容易に製造できる。
ここに記載したいかなる方法においても、式Ｉ、II、III、IIIａ、IVまたはVについては、Ｐ1、Ｐ2、Ｐ3、TrtおよびＡが、発明の要約中で述べられた最も広い定義中で定義された式のことであり、これらの方法は、目下の好ましい態様に適用できる。
合成方法の詳細
本発明の方法は、以下に示す反応シーケンス中に描かれている。
0004181215.tif 000009
ここで、Ｐ1は、水素またはアミノ保護基、Ｐ2は、場合により置換されているトリチル基またはアミノ保護基であり、Ｐ3は、アミノ保護基であり、Trtは、場合により置換されているトリチル基である。
２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−１，３−プロパンジオール（ガンシクロビル）を、上記で定義したような場合により置換されているトリチル化合物と反応させて、脂肪族ヒドロキシ基の１個と２−アミノ官能基にトリチル保護基を有する、Ｎ，Ｏ−ビストリチルガンシクロビル中間体（式II）を産する。この反応生成物を、式IIIまたはIIIａのＬ−バリン誘導体でエステル化し、ガンシクロビルのＮ，Ｏ−ビストリチル−モノバリンエステル（式IV）を生成し、続いて、トリチル保護基および他の保護基の除去により、式Ｉの化合物を与える。
本発明のこの方法は、式IIのＮ，Ｏ−ビストリチルガンシクロビル中間体を製造するための迅速かつ簡便な方法である。このビストリチル中間体を、高純度で、かつ６０％を超える収率で回収することができ、濾過および単純な抽出により、モノ−およびトリ−トリチル化不純物から容易に分離することができる。その後、この中間体をＬ−バリン誘導体でモノエステル化することにより、式Ｉの化合物を供する。
式Ｉの化合物は、場合によりその薬学的に許容される塩に転化できる。その方法は、式Ｉのプロドラッグの酸付加塩の非塩型への転化、式Ｉの化合物の光学分割または式Ｉの結晶状の化合物の製造も含むことができる。
式Ｉの化合物を生産する方法は、好ましい方法は保護されたアミノ基なしで行われるが、グアニン塩基の２−位におけるアミノ基の保護を含むかまたは含まない。出発物質ガンシクロビルが、保護されたアミノ基を有する場合については、その保護基は、当業界においてよく知られた従来の方法で除去される。例えば、アミノ−保護基が、低級アルカノイル基ならば、塩基性条件（ｐＨ８〜１１）が保護基を除去するのに使用される。例えば、２−Ｎ−アセチル−ガンシクロビルは、アセチル基が完全に除去されるまでアルカリ剤、例えば水酸化アンモニウム、炭酸ナトリウムまたは炭酸カリウム、水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムで処理される。一般に、この反応は、低級アルカノールのような適切な溶媒の存在下で行われる。好ましくは出発物質をメタノールに溶解し、化学量論的に過剰量の水酸化アンモニウムを加える。反応温度は、０から５０℃、好ましくは室温に保持される。反応が終了後（ＴＬＣで決定できる）、他の溶媒、例えば、従来の分離法を使用してろ別および単離できる脱アセチル化生成物の沈殿を導くエチルエーテルを加え、脱−保護生成物の単離を容易にする。
出発物質
式Ｉの化合物を製造するために使用されるすべての出発物質は、ガンシクロビル、トリチル化合物、保護剤およびカルボキシル基−活性化剤のような、既知のものである。
工程II（エステル化工程）を実施する前に、Ｌ−バリン誘導体のアミノ基を保護して望ましくないアミド形成によるエステル化の妨害を避けなければならない。本発明で有用な種々のアミノ−保護されたＬ−バリン誘導体は、例えばＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリン、ＢＯＣ−Ｌ−バリンおよびＦＭＯＣ−Ｌ−バリン、Ｎ−ホルミル−Ｌ−バリンおよびＮ−ベンジルオキシカルボニル−Ｎ−カルボキシ−Ｌ−バリン無水物は、すべて商業的に入手可能（SNPE Inc.,Princeton,NJ,Aldrich Chemical Co.,Milwaukee,WIおよびSigma Chemical Co.,St.Louis,MO）であるか、または、例えば、Ｎ−アリルオキシカルボニル−Ｌ−バリンのように、文献中に記載されている。環状アミノ−保護されたＬ−バリン誘導体は、上記したような文献中にも記載されている。ベンジルオキシカルボニル−バリン−置換２−オキサ−４−アザ−シクロアルカン−１，３−ジオン（Ｚ−バリン−Ｎ−カルボキシ−無水物、またはＺ−バリン−ＮＣＡ）およびBoc−Ｌ−バリンは、本発明で特に重要であり、商業的にも入手できる（SNPE Inc.,Princeton NJ）。あるいは、保護工程は、従来の方法で行われる。
本発明の化合物の製造のための好ましいガンシクロビル出発物質は、米国特許第４，３５５，０３２号明細書に記載された保護されていないガンシクロビル（２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）メトキシ−１，３−プロパンジオール）である。他のガンシクロビル出発物質、例えば２−（２−アシル−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）メトキシ−１，３−プロパンジオールは、２−アミノ基において保護されている。トリチルクロリドおよびトリチルブロミドが、好ましいトリチル化合物である。
Ｌ−バリンの活性誘導体の製造
工程II（エステル化工程）を実施する前に、Ｌ−バリンは、活性化もされなければならない。保護アミノ酸の少なくとも１当量および適切なカップリング剤または脱水剤の１当量、例えば１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたは塩基性基を有するそのようなジイミドの塩を、最初から使用するべきである。Ｎ，Ｎ′−カルボニルジイミダゾールのような他のカルボジイミドを使用することもできる。さらなる有用な脱水剤は、無水トリフルオロ酢酸、混合無水物、酸塩化物、１−ベンゾ−トリアゾリルオキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−４−アザベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール、Ｎ−エチル−Ｎ′−（３−（ジメチルアミノ）−プロピル）カルボジイミド塩酸塩、３−ヒドロキシ−３，４−ジヒドロ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウリニウムテトラフルオロボレート、Ｏ−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−ビス（テトラメチレン）ウロニウムヘキサフルオロホスフェートまたはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−ビス（テトラメチレン）ウロニウムヘキサフルオロホスフェートである。L.A.Carpinoによるこれらカップリング剤の記載は、J.Am.Chem.Soc.1993,115,p.4397-4398に見出すことができる。
アミノ酸の活性化した形態であるウレタンで保護されたアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物（ＵＮＣＡ’ｓ）は、この目的にも有効であり、これらは、William,D.Fullerらの、J.Am.Chem.Soc.1990,112,7414-7416に記載されているが、これは参考文献として本明細書に組み込まれる。他の保護されたアミノ酸のＮ−カルボキシ無水物は、前に論じたＰＣＴ特許出願公開ＷＯ９４／２９３１１号明細書に記載されている。要約すれば、保護されたアミノ酸の無水物または他の活性化誘導体を緩やかな条件下で生成するすべての他の試薬は、カップリング剤として使用できる。
そのアミノ−保護されたアミノ酸は、ハロゲン化低級アルカン、好ましくはジクロロメタンのような不活性溶媒中に、不活性雰囲気下で、例えば窒素雰囲気下で溶解され、そのカップリング剤（好ましくは１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド）が加えられる。その反応混合物は、０から５０℃、好ましくはほぼ室温で攪拌される。その反応混合物は、濾過され、反応生成物（保護されたアミノ酸の無水物）は、単離される。得られた生成物は、乾燥ジメチルホルムアミドのような乾燥不活性溶媒中に溶解され、窒素下に置かれる。
モノ−Ｌ−バリンガンシクロビルの製造
工程Ｉ：
ガンシクロビルをトリチル化合物と反応させ、脂肪族ヒドロキシル基の１個とガンシクロビルのグアニン環系の２−アミノ基に、トリチル保護基を有するガンシクロビル中間体（式II）を供する。
例えば、２〜３当量のトリチルクロリド溶液を、不活性溶媒、好ましくはジメチルホルムアミドのような非プロトン性極性溶媒中のガンシクロビルの懸濁液に、０〜１００℃、好ましくは４０〜６０℃下で添加する。これにより、Ｎ−トリチル−ガンシクロビル、Ｏ−トリチル−ガンシクロビル、Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビルおよびトリス−トリチル−ガンシクロビルの混合物を産する。トリス−トリチル−ガンシクロビルは不溶性であり、これをろ去する。モノ−およびビス−トリチル化ガンシクロビルを溶媒溶液から沈殿させ、ある程度の純度のビス−トリチル化化合物を供する。さらなる精製を、酢酸エチルのような有機溶媒で洗浄することにより達成し、この酢酸エチル洗浄液からの結晶化により、溶解したすべてのビス−トリチルを回収することができる。
工程II：
この工程においては、式IVまたはIVａのアミノ保護Ｌ−バリンの活性化誘導体を、工程Ｉで得たＮ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル中間体でエステル化する。Ｌ−バリン誘導体の適切なアミノ−保護基は、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル基、フタリル基、第３級ブチルオキシカルボニル基およびＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）すなわち「ＦＭＯＣ」基である。
不活性溶媒中の工程ＩでのＮ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル生成物溶液を、約１〜３当量の活性化Ｌ−バリン誘導体、好ましくはＺ−バリン−Ｎ−カルボキシ無水物またはＢｏｃ−Ｌ−バリンに、有機塩基、好ましくはトリエチルアミン（ＴＥＡ）の存在下で添加する。反応混合物を、１０〜４０℃、好ましくは周囲温度下で、１０〜９０時間、好ましくは約２４時間攪拌する。この生成物、例えばＮ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Ｚ−Ｌ−バリン）−ガンシクロビルを濾過により捕集し、洗浄し、１０〜７０℃の減圧下で乾燥させる。
工程III：
前工程の終了後、トリフルオロエタノール（ＴＦＥ）のような極性有機溶媒中に工程IIの生成物を溶解し、続いてトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のような無水アルカン酸を添加することにより、トリチル保護基を除去することができる。この反応混合物を、反応がＴＬＣにより完結するまで、周囲温度下で３０分間〜１０時間攪拌する。固体物を濾過により除去する。トリフルオロエタノール／トリフルオロ酢酸の大部分は、蒸留により除去される。その後、反応混合物を、有機溶媒の混合物、好ましくはテトラブチルメチルエーテル（ＭＴＢＥ）：ヘキサン（１：１）にゆっくりと添加する。生成物を溶液から沈殿させ、濾過により捕集し、減圧下で１０〜２４時間乾燥させる。この生成物を、結晶化によりさらに精製することができる。
工程IV：
工程IIIの生成物のバリン保護基は、脱−保護反応により、好ましくは酸性の媒質または溶媒中で、最も好ましくは水素化分解で除去される。酸性条件下の脱−保護は、それが脱−保護反応で遊離したアミノ基がプロトン化することを保証するので好適である。すなわち、式Ｉの塩基が脱−保護反応で形成された遊離アミノ基は、存在する酸の少なくとも化学量論量により捕捉される。酸付加塩として式Ｉの化合物の単離は、式Ｉの化合物の所望の立体配置を保護するであろう。したがって、脱−保護工程を示す、下記のこれらの例は、付随する塩形成工程をも示している。
その脱−保護反応は、不活性溶媒、好ましくは酸性溶媒中において、水素化分解触媒、例えば白金、または炭素上の水酸化パラジウム、炭素上のパラジウムを使用して、１〜２０００psi（０．０７〜１４０気圧）、好ましくは５０〜２００psi（３．５〜１４気圧）、最も好ましくは５〜２０psi（０．３５〜１．４気圧）の上昇した水素圧で、前工程の生成物を溶解して行われる。その反応の完了は、通常のＴＬＣ分析を使用して監視できる。必要ならば、さらに水素化触媒を加えて、その水素化分解は、転化が完了するまで続けられる。触媒は、除去され、洗浄される。濾過工程からのろ液および洗浄液を一緒にし、これを濃縮および凍結乾燥し、ガンシクロビルＬ−バリンエステルを単離する。その生成物の精製および結晶状のエステルの単離は、再結晶化または液体クロマトグラフィーのような他の精製技術によって行われる。
存在するならば、グアニン基の２−アミノ基のどのような保護基も上記したような通常の方法で除去できる。
もし第３級ブチルオキシカルボニル基が、アミノ−保護基として使用されるならば、その除去は、ＨＣｌのような酸および溶媒としてのイソプロパノールで、またはトリフルオロ酢酸だけで行われる。
塩の製造
当業者は、式Ｉの化合物が、酸付加塩としてまたは対応する遊離塩基として製造できることを理解するであろう。酸付加塩として製造されるならば、その化合物は、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムなどのような適切な塩基で処理することにより遊離塩基に転化できる。しかしながら、式Ｉの遊離塩基は、特徴づけることが酸付加塩よりも困難であることを指摘することは重要である。遊離塩基を酸付加塩に転化するときに、その化合物を、（前に記述した）適切な有機酸または無機酸と反応させる。これらの反応は、（酸付加塩を製造する場合には）少なくとも化学量論量の適切な酸であるいは（式Ｉの遊離化合物を遊離させる場合には）塩基で処理することにより行われる。本発明の塩−形成工程において、典型的には遊離塩基は、水または低級アルカノール（好ましくはイソプロパノール）およびその混合物のような極性溶媒中に溶解され、酸は、水中または低級アルカノール中に必要量加えられる。その反応温度は、通常、約０℃〜５０℃、好ましくはほぼ室温に保持する。その対応する塩は、自然に沈殿するか、あるいはより小さな極性の溶媒の添加、蒸発または真空による溶媒の除去、または溶液の冷却によって溶液から取り出すことができる。
立体異性体の単離および結晶状の２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリナートの製造
式（Ｉ）から、本発明の化合物は、Ｌ−バリン中の非対称炭素原子のほかに、一つの非対称炭素原子（キラル中心）をプロピル鎖中に有することは明らかである。したがって、二つのジアステレオマー型、Cahnらの規則によって決定されるような、（Ｒ）−および（Ｓ）−型が存在する。そのジアステレオマーの分離のための適切な方法は、ヨーロッパ特許出願公開第６９４５４７号明細書に記載されている。
式（Ｉ）の化合物は、また非結晶状の形態よりも多くのよく知られた利点を有する結晶状の形態に製造される。本発明の化合物を結晶状の形態に製造する適切な方法は、ヨーロッパ特許出願公開第６９４５４７号明細書にも記載されている。
以下の製造例および例は、当業者が本発明をさらに明瞭に理解でき、かつ実施できるように与えられている。それらは、本発明の範囲を限定すると考えるべきではなく、単にそれらの例および典型例としてだけ考えるべきである。
実施例１
Ｎ−トリチル−２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−トリチルオキシ−プロパン−１−オールの製造
２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−１，３−ジオール（ガンシクロビル）を、下記のとおり、ＮおよびＯ官能基でビストリチル化した：ジメチルホルムアミド（３８．３kg）中のガンシクロビル４．１kg、ＤＭＡＰ９．５ｇおよびＴＥＡ８．６５kgの５０℃のスラリーに、ジメチルホルムアミド３８．２kg中の塩化トリチル１１．９kgの溶液を２５分かけて加えた。反応混合物を加熱し、５０℃で終夜攪拌した。翌朝、ＨＰＬＣによって、反応は完了した。これによって、Ｎ−トリチル−ガンシクロビル、Ｏ−トリチル−ガンシクロビル、Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビルおよびトリス−トリチル−ガンシクロビルの、モノ対ジ対トリ置換ガンシクロビルの比が約１：２：１である混合物を得た。次いで、ジメチルホルムアミド不溶性であるトリストリチルガンシクロビルを、反応混合物を１０℃に冷却し、トリストリチルガンシクロビルを濾取することによって、ジメチルホルムアミド混合物から濾過した。トリス−トリチル化ガンシクロビルをジメチルホルムアミド１０kgで洗浄し、移送ラインをジメチルホルムアミド２．３kgで洗浄した。次いで、ビストリチル−ガンシクロビル／モノトリチル−ガンシクロビル／ジメチルホルムアミド溶液を２０℃に温め、水９０kgを１時間かけて加えることによって、このジメチルホルムアミド溶液からモノ−およびビス−トリチル化ガンシクロビルを沈殿させた。次いで、追加の水６０kgを加えた。この時点で、モノトリチル−ガンシクロビルからのビストリチル−ガンシクロビルの多少の精製が生じる。上記混合物の温度は３２℃に上昇した。混合物にＮ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル０．５ｇを種晶として加え、室温で終夜成長させた。翌朝、結晶が形成されていた。固体を濾取した。固体を水５０kg、次いで酢酸エチル２１kgで洗浄することによって、ビストリチルガンシクロビルのそれ以上の精製を達成した。固体を、窒素気流下で終夜、次いで真空オーブン（〜５０℃、〜６５０ミリトル、窒素掃気）内で４日間乾燥した。収率：６３．２％。重量：７．５１kg。ＨＰＬＣ：Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル＞９０％。不純物１．８％。
実施例２
２Ａ．Ｎ−トリチル−２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−トリチルオキシ−１−プロピル−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−バリネートの製造
Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビルを、下記のとおり、Ｚ−バリン−ＮＣＡ（Ｎα−ベンジルオキシカルボニル−Ｌ−バリン−Ｎ−カルボキシル無水物）１．２当量とカップリングさせた：Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル３．７kgをジメチルホルムアミド１７．７kgおよびトルエン１．８５リットルに溶解した。トルエンを２．５時間留去した（２９インチ〔７３６．６mm〕Hg、５０℃まで）。ジメチルホルムアミド／Ｎ，Ｏ-ビストリチル−ガンシクロビル溶液を２２℃まで冷却し、次いで、ＴＥＡ０．７リットル／ジメチルホルムアミド０．２リットルを加えた。この混合物に、ジメチルホルムアミド４．２リットルに溶解したＺ−バリン−ＮＣＡ１．６７kgの溶液を２２℃で０．５時間にわたって加えた。反応をＴＬＣ（塩化メチレンへの１０％メタノール、シリカ）によって確認し、１時間後に、反応は約９０％完了した。反応を終夜放置して混合させた。翌朝、ＨＰＬＣによって反応は完了した。カップリングした反応混合物を、水２３kgに２０分かけて加え、ポット温度は２２℃から３１℃へと上昇した。この混合物を２６℃に冷却し、４５分間熟成した。次いで、混合物を２時間１５分かけて１０℃まで冷却した。固体を濾取し、真空オーブン（５０℃、〜２８インチ〔７１１．２mm〕Hg、窒素掃気）内で４日間乾燥した。重量：４．８kg。ＨＰＬＣ：Ｎ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Ｚ−Ｌ−バリン）−ガンシクロビル９３．５％。
２Ｂ．Ｎ−トリチル−２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−トリチルオキシ−１−プロピル−Ｎ−（ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−バリネートの製造
ジクロロメタン８０ml中の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１２．６ｇを、ジクロロメタン１００mlに溶解したBoc−Ｌ−バリン２６．５ｇに０〜２℃下で加えることによって、Boc−Ｌ−バリンの対称無水物を形成した。ＤＣＣ添加の際に、温度が約１０℃に上昇した。溶液を０〜３℃下で３０分間攪拌し、次いで、１，３−ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を溶液から濾去した。この溶液を、ジメチルホルムアミド１８０ml中のＮ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビルの３６．５ｇに、ＤＭＡＰ６３．６mgおよびＴＥＡ８．５mlの存在下で１１℃で加えた。このカップリング混合物を室温で１６．５時間攪拌した。ＨＰＬＣによって、反応は完了したと判断された（Ｎ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Boc−Ｌ−バリン）−ガンシクロビル９１％、Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル０．１６％）。水３８０mlを加え、反応混合物を１時間攪拌した。ジクロロメタン層を分離し、溶媒を蒸発させて、残渣を得た。水層を酢酸エチル７５０mlで抽出した。酢酸エチルを分離し、次いで、ジクロロメタンの残渣と併せた。この酢酸エチル層にトルエン７５０mlを加えた。有機層を、水２５０mlで１回、５％ＮａＨＣＯ3２５０mlで１回、そして水２５０mlで２回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4上で乾燥し、次いでＭｇＳＯ4を濾去した。溶媒を５０℃で留去した。残渣を得た。重量：５３．６４ｇ（いくらかの溶媒が依然として存在）。
２Ｃ．Ｎ−トリチル−２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−トリチルオキシ−１−プロピル−N−（ブチルオキシカルボニル）−Ｌ−バリネートの製造
ジメチルホルムアミド５ml中のＮ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル１ｇに、Boc−Ｌ−バリン−ＮＣＡ４６０mgおよびＴＥＡ０．２mlを加えた（終夜攪拌した）。ＴＬＣによって反応を確認し、完了したと判定された（ＨＰＬＣによりＮ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Boc−Ｌ−バリン）−ガンシクロビル９０％）。この溶液に水５mlを加えて、生成物を沈殿させた。固体を濾取し、水洗した。固体を真空オーブン（約５０℃、２５インチ〔６３５mm〕Hg、窒素掃気）内で終夜乾燥した。重量：１．１２ｇ。ＨＰＬＣ：Ｎ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Boc−Ｌ−バリン）−ガンシクロビル92％、Ｎ，Ｏ−ビストリチル−ガンシクロビル３．６％。
実施例３
２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｎ−（ベンジルオキシカルボニル）−Ｌ−バリネートの製造
Ｎ，Ｏ−ビストリチル−（Ｎα−Ｚ−バリン）−ガンシクロビルのトリチル基を、下記のとおり除去した：ＴＦＥ１７．４kg中のＮ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Ｚ−Ｌ−バリン）ガンシクロビル４．８kgに、ＴＦＥ１７．３kg中のＴＦＡ１．７リットルの溶液を１５分かけて加えた。反応温度は１８℃から２０℃に上昇した。混合してから４時間後に、ＴＬＣ（塩化メチレン中の１０％メタノール、シリカ）によって、反応は８５〜９５％完了した。混合してから５時間後に、固体を濾取した。固体をＴＦＥ５．６kgで洗浄した。ＴＦＥ／ＴＦＡを１時間２０分かけて減圧蒸留した（４５℃までのポット温度、２６インチ〔約６６０mm〕Hgまでの真空）。約８０体積％のＴＦＥを蒸留した後、ポット残渣をＭＴＢＥ３７kgおよびヘキサン３２．４kgに、激しく混合しながら加えた。次いで、沈殿を濾取し、固体をＭＴＢＥ７．４kg／ヘキサン６．６kgの溶液で洗浄した。固体を窒素気流下で乾燥した。このＯ−（Ｎα−Ｚ−Ｌ−バリン）−ガンシクロビルをメタノール３８．８kgに４１℃で溶解し；水５９kgを加え、この間に、メタノールを５８℃のジャケット温度、約２８インチ〔６６０．４mm〕Hgまで留去した。ポット温度は、１６〜２６℃の範囲にわたった。固体を濾取し、水１３．２kgで洗浄した。固体を窒素気流下で乾燥した；カール・フィッシャー試験によって、１．２％の水が決定された。重量：１．７８kg。ＨＰＬＣ：Ｚ−バリン−ガンシクロビル＞９０％、ガンシクロビル＜０．５％。
実施例４
２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリネート塩酸塩の製造
４Ａ．Ｎ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Boc−Ｌ−バリン）ガンシクロビル１０ｇをジクロロメタン２０mlに溶解した。これに、ジクロロメタン中の５０％ＴＦＡ８０mlを加え、反応混合物を１時間攪拌した。ＴＬＣによって、トリチル基およびバリン保護基の切断が完了したと判定された。反応液をＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）１リットルに３０分かけて滴加した。沈殿を濾取し、ＭＴＢＥ：ヘキサン（１：１）５００mlで洗浄した。固体を真空オーブン（約５０℃、２５インチ〔６３５mm〕Hg、窒素掃気）内で終夜乾燥した。沈殿の粗重量：４．３１ｇ。酢酸２〜３mlを含有するアセトン２００mlに、固体を溶解した。この溶液に、酢酸エチル中の４．２M ＨＣｌ４mlを加えて、固体を形成させた。その後、４５分間攪拌し、次いで酢酸エチル中の４．２M ＨＣｌをさらなるml量加えた。これを３０分間攪拌し、次いで固体を濾取した。固体をアセトン５０mlで洗浄し、次いで、真空オーブン（約５０℃、２５インチ〔６３５mm〕Hg、窒素掃気）内で終夜乾燥した。重量：３．８２ｇ。ＨＰＬＣ：Ｌ−バリン−ガンシクロビル９７．４％；ガンシクロビル２．１％；グアニン０．５％。
４Ｂ．これに代えて、２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリネートを、下記のとおり、Ｎ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Boc−Ｌ−バリン）ガンシクロビルから直接製造してもよい：Ｎ，Ｏ−ビストリチル−Ｏ−（Ｎα−Boc−Ｌ−バリン）−ガンシクロビル４７１mgに、酢酸エチル中の２．１MＨＣｌ１０mlを加えた。この反応混合物を１５分間攪拌し、ＴＬＣによって、反応は完了したと判定された。固体を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。固体を真空オーブン（約５０℃、２５インチ〔６３５mm〕Hg、窒素掃気）内で乾燥した。重量：１６５mg。ＨＰＬＣ：Ｌ−バリン−ガンシクロビル９１％；グアニン５．９％；ガンシクロビル２．３％。
実施例５
２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリネート塩酸塩の製造
実施例３で製造したＯ−（Ｎα−Ｚ−バリン）−ガンシクロビルから、下記のとおり、Ｚ（ベンジルオキシカルボニル）基を除去した：１０％炭素担持Ｐｄ１７４ｇおよびＺ−バリン−ガンシクロビル１．７４kgに、１２MＨＣｌ３５７mlと混合したメタノール１４kgを加えた。この反応混合物を５〜１０psi（０．３５〜０．７気圧）の水素下に置いた。攪拌して２．５時間後に、この反心応混合物からアリコートを取り出した。ＴＬＣ（アセトニトリル１０ml、水１ml、酢酸１ml、シリカ）によって、反応は完了した。攪拌して３．５時間後に、Solka Floc層を介しての反応混合物の濾過によって、触媒を除去した。Solka Floc層をメタノール１３．７kgで洗浄した。メタノール溶液を併せた。ロータリーエバポレータでの６０℃の浴温までの蒸発、および約２８インチ〔７１１．２mm〕Hgの最終的な減圧によって、メタノールを除去した。次いで、残渣を滅菌水１．４リットルに５０〜６０℃で溶解した。この溶液を酢酸エチル１リットルで洗浄し、次いで、酢酸エチル層を分離した。蒸発によって、この水溶液からすべての残留溶媒が除去された。約５０℃のイソプロピルアルコール５．６リットルを、この水溶液に５０℃で滴加した。反応混合物に、２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリネート塩酸塩の以前の回分を種晶として加えた。この結晶化混合物を、３０℃まで徐々に冷却し、その後、イソプロピルアルコール４．２リットルを３７〜３０℃でさらに滴加した。この混合物を終夜攪拌しながら、室温まで徐々に冷却した。翌朝、結晶化混合物を−５℃に冷却し、２時間熟成した。固体を濾取し、次いで、イソプロピルアルコール中の５％の冷水２リットル、次いで冷イソプロピルアルコール４リットルで洗浄した。固体を、真空オーブン（６７５ミリトル、５０℃、窒素掃気）内で５０時間乾燥した。固体の質量：１．０５kg。出発材料のガンシクロビルからの全体の収率：３４％。ＨＰＬＣ：２−（２−アミノ−１，６−ジヒドロ−６−オキソ−プリン−９−イル）−メトキシ−３−ヒドロキシ−１−プロピル−Ｌ−バリネート塩酸塩９８．４％；ＭＳ：３５５（ＭＨ）+。