(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
赤血球製剤または全血製剤から白血球及び血小板を除去するためのフィルターであって、ポリマーで被覆されたフィルター基材を包含し、該ポリマーは、該フィルター基材全表面単位面積当たり０．５〜１０ｍｇ／ｍ２含有され、該ポリマーのゲルパーミエーションクロマトグラムにおいて、ピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有する低分子量成分の含有率が２０％以下である分子量分布を有することを特徴とするフィルター。
【請求項２】
フィルター基材の全表面に対するポリマーの被覆率が７０％未満であることを特徴とする請求項１に記載のフィルター。
【請求項３】
ポリマーが非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基とを有することを特徴とする請求項１又は２に記載のフィルター。
【請求項４】
ポリマーの重量平均分子量が３００，０００〜３，０００，０００であることを特徴とする請求項１〜３に記載のフィルター。
【請求項５】
フィルター基材が熱可塑性ポリマーからなることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のフィルター。
【請求項６】
フィルター基材が不織布であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載のフィルター。
【請求項７】
未反応モノマー及び低重合体を含有するポリマー及び１種類以上の溶剤からなるポリマー溶液を熱誘起相分離法及び／又は非溶剤誘起相分離法によってポリマー濃厚相溶液とポリマー希薄相溶液とに液液相分離した後、分別回収したポリマー濃厚相溶液を溶剤で希釈してフィルター基材に被覆することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のフィルターの製造方法。
【発明の詳細な説明】
［技術分野］
本発明は、血液処理用フィルターに関する。より詳細には、本発明は、赤血球製剤または全血製剤から白血球と血小板とを同時に除去するためのフィルター及びその製造方法に関する。
［背景技術］
輸血分野においては、供血者から採血した血液に抗凝固剤を添加した全血を輸血するいわゆる全血輸血に加え、全血から授血者の必要とする血液成分を分離しこれを輸注するいわゆる成分輸血が一般的に行われている。成分輸血には、授血者が必要とする血液成分によって赤血球輸血、血小板輸血、血漿輸血などがあり、これらに用いられる血液成分製剤には赤血球製剤、血小板製剤、血漿製剤などがある。
また、近年これらの全血輸血及び成分輸血において、血液製剤中に含まれる混入白血球を除去して輸血する、いわゆる白血球除去輸血が行われるようになってきている。これは製剤中に混入している白血球が、輸血に伴う頭痛、吐き気、悪寒、非溶血性発熱反応、アロ抗原感作、ＧＶＨＤ、ウイルス感染などの副作用を誘発させることが明らかになったためである。従って、これらの副作用を防ぐには十分な程度に低い水準にまで血液製剤中の白血球を除去することが必要である。
一方、赤血球製剤に関していえば、遠心分離の際血小板が一部混入してくることがある。血小板が原因と思われる非溶血性副作用の報告もされており、可能な限り血小板を除去することが好ましい。さらに、血小板におけるプリオンの存在が近年報告されており、プリオン病感染のリスクを抑える観点から、赤血球製剤のみでなく全血製剤からも血小板除去の必要性は高いと考えられる。よって、血液製剤中の血小板を高除去率で除去できる方法を提供することが緊急の課題となっている。
血液をはじめとする、白血球を含有する細胞浮遊液から白血球を除去する方法としては、細胞浮遊液を遠心分離することにより白血球を除去する遠心法、細胞浮遊液をフィルターにかけ、白血球をフィルターに吸着させることにより除去するフィルター法、血液バッグ中の細胞浮遊液にデキストラン添加生理食塩水を加えて混和後、浮遊した白血球層を吸引除去するデキストラン法などがある。その中でも、白血球除去能に優れていること、操作が簡便であること、及びコストが低いことなどの利点を有することからフィルター法が広く用いられている。
特開平３−１５８１６８号公報（ＪＰ３−１５８１６８Ａ）では、繊維積層物を通過する白血球濃度が、繊維積層物の厚みに対して指数関数的に除去されることを見いだしている。このことは、白血球が繊維積層物を厚み方向に流れていく際に、繊維と繊維の交絡点付近に接触するごとに、一定の確率で吸着されていくことを示唆するものであり、上記の吸着除去説を裏付けている。
それ故、従来の白血球除去フィルターにおける高性能化の検討は、繊維と白血球との接触頻度を高めること、すなわち平均繊維直径を小さくすること、充填密度を高めること、或いはより均一な繊維直径分布を有する不織布を用いること（特開平２−２０３９０９号公報（ＪＰ２−２０３９０９Ａ））などに集中しており、不織布表面の化学性状に注目したものは少なかった。
平均繊維直径を小さくすること、充填密度を高めること、或いはより均一な繊維直径分布を有する不織布を用いることにより、良好な白血球及び血小板除去フィルターを得ることができるが、血液による濡れ斑が生じるためフィルター全体が有効に機能せず、結果として白血球除去及び血小板除去にばらつきが生じることから、不織布表面の化学性状を改善することが必要である。
不織布表面の化学性状に着目した数少ない他の検討例として、放射線グラフトによる表面改質方法がある（特開平１−２４９０６３号公報（ＪＰ１−２４９０６３Ａ）、特表平３−５０２０９４号公報（ＪＰ３−５０２０９４Ａ）等）。前者は血小板通過率を向上させるのが表面改質の目的であり、後者は親水性を付与して血液によるプライミングを容易にするのが目的であって、何れも白血球、あるいは白血球及び血小板の吸着確率を高めるのが目的ではない。
一方、特開平６−２４７８６２号公報（ＪＰ６−２４７８６２Ａ）には、塩基性官能基と非イオン性親水基を有し、塩基性官能基の非イオン性親水基に対するモル比が０．６以上６未満、かつ塩基性官能基を５×１０−５ｍｅｑ／ｍ２以上０．１ｍｅｑ／ｍ２未満の密度であるフィルター材が開示されている。しかしながら、このフィルター材は赤血球の付着抑制効果が充分でなく、また、白血球の除去能を安定して向上させることが困難であった。
また、ＷＯ８７／０５８１２号公報では非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基を有し、塩基性含窒素官能基を０．２重量％以上４．０重量％未満含有するポリマーを適量被覆したフィルター材が白血球除去能に優れ、且つ血小板の通過性が高いことが実施例で開示されている。また、より多くの塩基性含窒素官能基を含むポリマーを用いると、血小板、白血球ともに除去率が高まることが比較例に記載されている。しかし、ＷＯ８７／０５８１２号公報には、ウシ血液の処理に対しては具体的に記載されているが、ヒト血液の処理に対しては具体的に記載されておらず、ヒト血液に対する白血球及び血小板除去率は不明である。さらに、ＷＯ８７／０５８１２号公報には、赤血球製剤に対する白血球及び血小板の除去に関しては何ら開示されていない。
さらにまた、本発明者らは、フィルター基材にポリマーを被覆した血液処理用フィルターにおいて、該ポリマー中に含まれる低分子量成分の含有量がヒトの全血処理において白血球除去率と関連性を有することを見出し、全血からの白血球選択除去フィルターを特許出願した（日本国特願平２０００−０９９７１５号）。しかし、この出願発明では、全血や赤血球製剤からの白血球と血小板との同時除去に関しても何ら検討されていない。
［発明の開示］
このような状況において、本発明者らは、赤血球製剤または全血製剤から白血球と血小板とを同時に高い除去率で除去することができる血液処理用フィルターを開発すべく、鋭意研究を行った。
その結果意外にも、本発明者らは、ポリマーで被覆されたフィルター基材において、ポリマーを特定量被覆することによって、高い白血球除去能と、高い血小板除去率を併せ持つ血液処理用フィルターを得ることができることを見出した。
以上の新たな知見に基づき、本発明を完成した。
従って、本発明の主たる目的は、赤血球製剤または全血製剤から白血球と血小板とを同時に除去するために効果的に使用し得る血液処理用フィルター及びその製造方法を提供することにある。
本発明の上記及びその他の諸目的、諸特徴ならびに諸利益は、添附の図面を参照しながら行う以下の詳細な説明及び請求の範囲から明らかになる。
本発明によれば、赤血球製剤または全血製剤から白血球及び血小板を除去するためのフィルターであって、ポリマーで被覆されたフィルター基材を包含し、該ポリマーは、該フィルター基材全表面単位面積当たり０．５〜１０ｍｇ／ｍ２含有され、該ポリマーのゲルパーミエーションクロマトグラムにおいて、ピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有する低分子量成分の含有量が２０％以下である分子量分布を有することを特徴とするフィルターが提供される。
次に、本発明の理解を容易にするために、まず本発明の基本的特徴及び好ましい諸態様を列挙する。
１．赤血球製剤または全血製剤から白血球及び血小板を除去するためのフィルターであって、ポリマーで被覆されたフィルター基材を包含し、該ポリマーは、該フィルター基材全表面単位面積当たり０．５〜１０ｍｇ／ｍ２含有され、該ポリマーのゲルパーミエーションクロマトグラムにおいて、ピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有する低分子量成分の含有量が２０％以下である分子量分布を有することを特徴とするフィルター。
２．フィルター基材の全表面に対するポリマーの被覆率が７０％未満であることを特徴とする請求項１に記載のフィルター。
３．ポリマーが非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基とを有することを特徴とする請求項１又は２に記載のフィルター。
４．ポリマーの重量平均分子量が３００，０００〜３，０００，０００であることを特徴とする請求項１〜３に記載のフィルター。
５．フィルター基材が熱可塑性ポリマーからなることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載のフィルター。
６．フィルター基材が不織布であることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載のフィルター。
７．未反応モノマー及び低重合体を含有するポリマー及び１種類以上の溶剤からなるポリマー溶液を熱誘起相分離法及び／又は非溶剤誘起相分離法によってポリマー濃厚相溶液とポリマー希薄相溶液とに液液相分離した後、分別回収したポリマー濃厚相溶液を溶剤で希釈してフィルター基材に被覆することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のフィルターの製造方法。
以下、本発明について詳細に説明する。
本発明のフィルターは、ポリマーで被覆されたフィルター基材を包含し、該ポリマーは、該ポリマーのゲルパーミエーションクロマトグラムにおいて、ピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有する低分子量成分の含有量が２０％以下である分子量分布を有することを特徴とする。
本発明において低分子量成分とは、ポリマーのゲルパーミエーションクロマトグラム（図１参照）において、ピークトップ分子量、すなわち最大強度を有する分子量に対し、その１／４以下の分子量をもつ重合度の低い成分をいう。低分子量成分としては、例えばダイマー、トリマー、オリゴマー、等を挙げることができる。
本発明での、ゲルパーミエーションクロマトグラムにおいて、ピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有する低分子量成分の含有量が２０％以下とは、図１に示すゲルパーミエーションクロマトグラムにおける全ピーク面積に対してピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有するピーク面積部分の割合が２０％以下であることをいう。なお、図１において、横軸は分子量を、縦軸はＲＩ（示差屈折計による強度）を表す。
ポリマーの分子量及び分子量分布は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによって測定する。すなわち、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドに１ミリモルとなるようにＬｉＢｒ（臭化リチウム）を添加した溶液（以下「溶液Ａ」という）にポリマーを溶解した溶液をカラム接続したゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）（本体：日本国東ソー（株）製  ＨＬＣ−８０２０＋解析プログラム：ＧＰＣ−ＬＡＬＬＳ  Ｖｅｒ．２．０３）を用いて、４０℃の温度でＲＩ（示差屈折計）にて測定する。カラムは、ガードカラム（日本国東ソー（株）製  ＴＳＫｇｕａｒｄｃｏｌｏｕｍ  ＨＸＬ−Ｈ）と本カラム（前段カラム：日本国東ソー（株）製  ＴＳＫｇｅｌ  ＧＭＨＸＬ  Ｂ００３２、後段カラム：日本国東ソー（株）製  ＴＳＫｇｅｌ  α−Ｍ  Ｂ００１１）から成る。また、使用（測定）条件は、移動相：溶液Ａ、カラム温度：４０℃にて行う。尚、ポリマーの分子量及び分子量分布の算出には、日本国ジーエルサイエンス（株）販売（英国ポリマーラボラトリー社製）のポリメチルメタクリレート（Ｍ−Ｍ−１０セット）の既知の分子量と該ポリメチルメタクリレートのＧＰＣ測定値（Ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  Ｔｉｍｅ）との関係を用いる。
ポリマーの分子量あるいは分子量分布の測定は、ポリマーをフィルター基材に被覆する前でも可能であるが、フィルター中のポリマーについて測定するときには、フィルターからポリマーを抽出して測定することもできる。
フィルターからのポリマーの抽出は、フィルター基材を溶解しないがポリマーを溶解する溶剤中にフィルターを浸漬することにより行う。ポリマーが２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートとジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートからなる共重合体であれば、溶剤としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びメタノール、エタノール、プロパノール等のアルコール類を用いることができる。ポリマーを抽出後、乾燥により該溶剤を除去した後、ポリマーの分子量分布の測定を上記の方法により行う。
本発明のフィルターに用いるポリマーは、通常の重合方法によってポリマー合成した後、低分子量成分を低減するための精製を行わなければならない。
ポリマーのゲルパーミエーションクロマトグラムにおいてピークトップ分子量に対して１／４以下の分子量を有する低分子量成分を２０％未満に低減することは、ポリマーから低分子量成分を除去するための方法として従来から知られている再沈精製法、フラクショネーション法では困難である。
本発明において、ポリマーに含まれる低分子量成分の量を低下させ、上記のような分子量分布を示すようにするための方法は限定されるわけではないが、例えば、クロマトグラフィーや相分離法などを挙げることができる。本発明でいう相分離法を用いたポリマーの精製方法とは、ポリマー溶液を熱誘起相分離法及び／または非溶剤誘起相分離法によってポリマー濃厚相溶液とポリマー希薄相溶液とに液液相分離した後、ポリマー濃厚相溶液のみを分別回収する方法である。
容器内でポリマー溶液を液液相分離して一定時間これを放置すると、完全な２相の溶液に相分離し、比重の高いポリマー濃厚相溶液が下相の溶液となるので、上相のポリマー希薄相溶液を除去するか、または下相のポリマー濃厚相溶液のみを抜き取ることによりポリマー濃厚相溶液を分別回収することが可能である。
本発明でいう液液相分離とは、ある温度で均一に溶解しているポリマー溶液を、含まれるポリマーの濃度及び分子量分布の異なる２相の溶液（ポリマー濃厚相溶液とポリマー希薄相溶液）に分離することをいい、固相または固体ポリマーが析出する相変化を含まない。
本発明でいう熱誘起相分離法とは、ある温度で均一に溶解しているポリマー溶液を一定の速度で冷却または加熱することにより該ポリマー溶液を複数の相（例えば、液相と液相、液相と固相、液相と液相と固相等）に分離することをいう。この内、本発明では液相と液相に分かれる相変化のみを用いる。
また、本発明でいう非溶剤誘起相分離法とは、ある温度で均一に溶解しているポリマー溶液にそのポリマーの非溶剤を添加することにより、ポリマー溶液を複数の相（例えば、液相と液相、液相と固相、液相と液相と固相等）に分離することをいう。この内、本発明では液相と液相に分かれる相変化のみを用いる。
また一般に、分子量の特に高いポリマーを製造する際には、可能な限りモノマーの転化率を高めるために種々の工夫がなされる場合が多く、そのことに伴って、分子量の特に高いポリマーでは低分子量成分の含有量が極めて少ない場合がある。本発明において、そのような分子量の特に高いポリマーを用いる場合には、別段の処理をしなくとも、上記のような分子量分布を示すことがある。
本発明においては、フィルター基材を被覆するためのポリマーとして、重量平均分子量３００，０００〜３，０００，０００、好ましくは３００，０００〜２，０００，０００、より好ましくは３５０，０００〜２，０００，０００のポリマーを用いる。重量平均分子量が３００，０００未満では、本発明のフィルターにおける溶出物量が増加する傾向にある。また、重量平均分子量が３，０００，０００を超えるとポリマーが溶剤に溶解しにくくなり、被覆が困難となる傾向にある。
本発明に用いられるポリマーとしては、水中で膨潤するが、水に溶解しないものであれば良く、特に限定されないが、スルホン酸基、カルボキシル基、カルボニル基、アミノ基、アミド基、シアノ基、ヒドロキシル基、メトキシ基、リン酸基、オキシエチレン基、イミノ基、イミド基、イミノエーテル基、ピリジン基、ピロリドン基、イミダゾール基、４級アンモニウム基等を単独あるいは複数種有するポリマーを例示することができる。
なかでも、非イオン性親水基と塩基性含窒素官能基を有する共重合体が好ましい。
本発明において非イオン性親水基としてはヒドロキシル基及びアミド基などが挙げられる。
非イオン性親水基を含有するモノマーとしては上述のヒドロキシル基及びアミド基を含むモノマー、例えば２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、２−ヒドロキシプロピル（メタ）アクリレート、ビニルアルコール（酢酸ビニルとして重合後、加水分解させる）、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドンなどが挙げられる。また、非イオン性親水基としては、前期のヒドロキシル基及びアミド基の他にポリエチレンオキサイド鎖も挙げられる。ポリエチレンオキサイド鎖を含むモノマーとしては、メトキシエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシジエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシトリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシテトラエチレングリコール（メタ）アクリレートなどのアルコキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート類などが挙げられる。以上のモノマーの中でも、入手しやすさ、重合時の扱いやすさ、血液を流した時の性能などから、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートが好ましく用いられる。
また、塩基性含窒素官能基としては、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、４級アンモニウム基、及びピリジン基、イミダゾール基などの含窒素芳香族等が挙げられる。
塩基性含窒素官能基を含むモノマーとしては、アリルアミン；ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジメチルアミノプロピル（メタ）アクリレート、３−ジメチルアミノ−２−ヒドロキシル（メタ）アクリレート等の（メタ）アクリル酸の誘導体；ｐ（パラ）−ジメチルアミノメチルスチレン、ｐ−ジメチルアミノエチルスチレン等のスチレン誘導体；２−ビニルピリジン、４−ビニルピリジン、４−ビニルイミダゾール等の含窒素芳香族化合物のビニル誘導体；及び上記ビニル化合物をハロゲン化アルキル等によって４級アンモニウム塩とした誘導体を挙げることができる。以上のモノマーの中でも、入手しやすさ、重合時の取り扱いやすさ、血液を流した時の性能などから、ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート、ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレートが好ましく用いられる。
全血や赤血球製剤から白血球と血小板を同時に吸着除去するための、ポリマーの被覆量（コート量）は、０．５ｍｇ（ポリマー）／ｍ２（フィルター基材全表面単位面積当たり）〜１０ｍｇ／ｍ２、好ましくは１ｍｇ／ｍ２〜７．５ｍｇ／ｍ２である。コート量が０．５ｍｇ／ｍ２未満では白血球除去能のばらつきが大きく、１０ｍｇ／ｍ２を超えると血小板の除去率が９５％を下回る傾向にあるためである。
血小板についても同種免疫反応を誘引する為、オランダ等では赤血球製剤中の混入数を１．５×１０１０以下／ユニットと制限する基準を設けている。全血から遠心分離条件によらず濾過のみで充分な血小板の除去を行うには、９５％以上の除去率が要求される。
また本発明でいう全表面積（ｍ２）とは、被覆に用いたフィルター基材の重量（ｇ）と該フィルター基材の比表面積（ｍ２／ｇ）との積から得られる値をいい、フィルター基材の表面部分のみでなく、内部細孔の表面積も含む値である。また、本発明でいう比表面積とは、日本国（株）島津製作所製『アキュソーブ２１００Ｅ』又はこれと同等仕様機を用いて、０．５０ｇ〜０．５５ｇの範囲で秤量した
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ｇの減圧度（室温下）にて２０時間脱気処理した後、吸着ガス：クリプトンガス、吸着温度：液体窒素温度にて測定した値をいう。
なお、本発明におけるフィルター基材全表面単位面積（ｍ２）当たりのポリマーコート量Ｙ（ｍｇ／ｍ２）は、フィルター基材単位カット面積（ｍ２）当たりのポリマーコート量Ｘ（ｍｇ／ｍ２）、基材目付Ａ（ｇ／ｍ２）、及び基材の比表面積Ｂ（ｍｇ／ｍ２）から次式で求めることができる。ここで基材目付とは基材の単位カット面積当たりの重量（ｇ／ｍ２）を意味する。
Ｙ＝Ｘ／（Ａ×Ｂ）
図２には、本発明者らが、ポリマーのコート量と全血からの血小板除去性能の関連性を試験した結果を示す。図２には、基材の全表面積当たりのポリマーコート量（ｍｇ／ｍ２）に対する、全血からの血小板除去率を示した。この試験に用いたポリマーは、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートとジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートからなる共重合体、基材は平均繊維直径１．２μｍのポリエチレンテレフタレート繊維からなる不織布（４０ｇ／ｍ２目付、空隙率７９％、厚さ０．２５ｍｍ、比表面積２．０１ｍ２／ｇ）であった。図２に示されるように、ポリマーコート量が１０ｍｇ／ｍ２以下になると全血からの血小板除去率が顕著に増大することが分かる。
また、図３には、ポリマーのコート量と赤血球製剤からの血小板除去性能の関連性を試験した結果を示す。試験に用いたポリマー及び基材は、前記全血からの血小板除去性能試験と同一である。図３においても、ポリマーコート量が減少すると血小板除去率が増大しており、赤血球製剤からの血小板除去率に関しても、ポリマーコート量が１０ｍｇ／ｍ２以下になると顕著に増大することが分かる。
図２〜図３に示されるようなポリマーコート量と血小板除去率に関する特異性は、従来知られていたものではなく、今回、本発明者らによって初めて見出されたものである。
本発明のフィルターにおいて、フィルター基材の全表面に対するポリマーの被覆率は、７０％未満が好ましい。該被覆率（％）は、Ｘ線光電子分光法（ＸＰＳ）によって測定され、フィルター基材の被覆部分におけるポリマーの量とフィルター基材材料の量から求められる。
本発明において被覆率とは、フィルター基材を構成する各素子の全表面に対してポリマーにより被覆された表面の割合を意味する。現状では上記のフィルター基材の全表面の被覆率を的確に測定する手段がないため、本発明においては、フィルターの全表面における被覆率をＸＰＳによって測定し、得られた値をもってその代表値とする。ポリマーによるフィルター基材の全表面の被覆率は７０％未満、好ましくは５０％未満である。この点は、本発明において重要であり、本発明の目的である「高い白血球除去能と血小板除去率とを併せ持ち、赤血球製剤と全血からの白血球及び血小板除去処理に効果的に使用し得る血液処理用フィルターを提供する」するために、被覆率を７０％未満、好ましくは５０％未満にすることがより好ましい。被覆率が７０％以上では、血小板除去率が低下するか、または血小板除去率の値のばらつきが大きくなる傾向にある。
また、被覆率が低いほど血小板除去率も高くなるため、本発明においては被覆率をできるだけ低くすることが好ましい。
このように、被覆率とフィルターの性能、特に血小板除去率に密接な関係がある理由は明らかではないが、以下のようなことが推定される。
フィルター基材の表面には、血小板を吸着させやすい部位（以降このような部位を「血小板吸着サイト」と称する）が数多く存在するので、フィルター基材の表面をポリマーで覆わずにできるだけ露出した状態で血小板とフィルター基材が接触すると、血小板がフィルター基材に吸着されやすい。
本発明の血液処理用フィルターにおける、フィルター基材の被覆率は、単色化されたＸ線源を用い、物体の表面から通常数１０Å（オングストローム）〜１００Åの深さまでの化学的な状態を測定する際に使用されるＸ線光電子分光法（Ｘ−ｒａｙ  Ｐｈｏｔｏｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（以降、「ＸＰＳ」と称する）を用いて、以下に示すような方法によって測定することができる。
まず、ＸＰＳスペクトルにおいてフィルター基材とポリマーの存在比が最も明確に反映される元素または部分構造を選択する。この元素または部分構造は、フィルター基材とポリマーの構造の差、例えば、
・  フィルター基材にはある元素が含まれ、ポリマーには含まれない。
・  ある共通の部分構造の存在比が、フィルター基材とポリマーで異なっている。などの差を参考にして、選択する。
そして、フィルター基材の標品とポリマーの標品のそれぞれについてＸＰＳスペクトルを測定し、ＸＰＳスペクトル中に観測される、上記の選択された元素または部分構造に帰属されるピークの面積の、他の特定のピークの面積に対する比率を求め、フィルター基材についてＸ１、ポリマー標品についてＸ２とする。
一方、フィルター基材の表面をポリマーで被覆すると、本発明のフィルターの表面には、被覆の割合に応じてフィルター基材とポリマーが混在し、被覆率が高まるにつれ、フィルター表面におけるポリマーの存在比が増加する。この結果、上記のようなフィルターの表面のＸＰＳスペクトルを測定すると、フィルター基材とポリマーの混合物のスペクトルが得られ、このフィルターに関しての、上記した選択された元素または部分構造に帰属されるピークの面積の、他の特定ピークの面積に対する比率Ｘは、Ｘ１とＸ２の中間になる。このことを利用して、フィルター表面におけるフィルター基材とコート材（ポリマー）の存在比（即ち被覆率）を定義する。
上記の方法について、フィルター基材がポリエチレンテレフタレート（以降「ＰＥＴ」と称する）であり、ポリマーがポリヒドロキシエチルメタクリレート（以降「ＰＨＥＭＡ」と称する）である場合を例にとり、具体的に説明する。
ＰＥＴとＰＨＥＭＡはいずれも水素、炭素及び酸素から構成されているポリマーであり、ＰＥＴとＰＨＥＭＡのどちらか一方にしか含まれていない元素はない。従って、ＰＥＴとＰＨＥＭＡのどちらか一方にしか含まれていない元素の量を指標として、ＰＥＴ及びＰＨＥＭＡの存在比を測定することはできない。そこで、化学結合の状態の異なる炭素原子の含有量の違いに着目し、ＰＥＴ及びＰＨＥＭＡの存在比を測定する。
ＰＥＴ及びＰＨＥＭＡを構成する炭素原子は、次の３種類に分類することができる。
ａ）カルボニル炭素原子
ｂ）単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子
ｃ）酸素原子と直接結合していない炭素原子
ＰＥＴを構成する構造単位中には、カルボニル炭素原子２個、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子２個及び酸素原子と直接結合していない炭素原子６個が含まれる。
一方、ＰＨＥＭＡを構成する構造単位中には、カルボニル炭素原子１個、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子２個及び酸素原子と直接結合していない炭素原子３個が含まれる。
ＰＥＴ及びＰＨＥＭＡのそれぞれにおいて、酸素原子と直接結合していない炭素原子と、カルボニル炭素原子の存在比（個数の比）は、いずれも３：１である。
しかし、ＰＥＴにおいて、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子と、カルボニル炭素原子の存在比（個数の比）が１：１であるのに対し、ＰＨＥＭＡにおいて、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子と、カルボニル炭素原子の存在比（個数の比）は２：１である。
この比率の違いは、ＸＰＳスペクトルにおけるピーク強度比（ピーク面積比）の差として検出される。即ち、ＰＥＴのＸＰＳスペクトルにおいて、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子に帰属されるピークの強度（面積）と、カルボニル炭素原子に帰属されるピークの強度（面積）の比が１：１であるのに対し、ＰＨＥＭＡのＸＰＳスペクトルにおいて、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子に帰属されるピークの強度（面積）と、カルボニル炭素原子に帰属されるピークの強度（面積）の比は２：１である。
一方、ＰＥＴ繊維から製造された不織布の表面をＰＨＥＭＡで被覆すると、本発明のフィルターの表面には、被覆の割合に応じてＰＥＴとＰＨＥＭＡが混在し、被覆率が高まるにつれて、フィルター表面におけるＰＨＥＭＡの存在比が増加する。この結果、上記のような不織布の表面のＸＰＳスペクトルを測定すると、ＰＥＴとＰＨＥＭＡの混合物のスペクトルが得られ、単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子に帰属されるピークの強度（面積）と、カルボニル炭素原子に帰属されるピークの強度（面積）の比は、ＰＥＴとＰＨＥＭＡの中間である。被覆率が０％のとき、ピークの強度（面積）の比は１：１となるが、被覆率が高まるにつれて２：１に近づき、被覆率が１００％のとき、ピークの強度（面積）の比は２：１となる。
これを利用して、ＰＥＴ繊維から製造された不織布の表面をＰＨＥＭＡで被覆することによって得られる本発明のフィルターに関して、被覆率を定義することができる。
ＰＥＴ、ＰＨＥＭＡ及び本発明のフィルターは、ＸＰＳスペクトルにおいて概ね図４に示されるような位置にピークが観測される。図４中のピークａはカルボニル炭素原子、ピークｂは単結合のみによって酸素原子と直接結合している炭素原子、ピークｃは酸素原子と直接結合していない炭素原子に帰属される。
そして、ＰＥＴの標品におけるピークａとピークｂの面積比を１：ｘ、ＰＨＥＭＡの標品におけるピークａとピークｂの面積比を１：ｙとし、サンプルにおけるピークａとピークｂの面積比を１：ｚとするとき、サンプルにおける被覆率は、次の式により定義される。
被覆率（％）＝｛｜ｚ−ｘ｜／｜ｙ−ｘ｜｝×１００
フィルター基材とポリマーの組み合わせがＰＥＴとＰＨＥＭＡの組み合わせ以外の組み合わせである場合においても、同様の方法によって被覆率を求めることができる。
本発明においては、上記のようにして求められる、フィルター表面に関しての被覆率の値を、そのフィルターにおける被覆率とする。
しかし本発明においては、フィルター表面のみならず、フィルターを構成するフィルター基材素子の全表面が（即ちフィルター内部まで）ポリマーによって被覆されていなければ、所望の性能のフィルターを得ることが困難である。それ故以下の操作を行い、フィルター内部においてもフィルター基材が均一に被覆されていることを確認する。
まず、フィルター上の１箇所を適宜選択し、選択した個所でフィルターを切断する。そして、切断面のうち、一方の表面の近傍、もう一方の表面の近傍及び２つの表面から等距離にある部位の計３箇所についてそれぞれランダムに５箇所を選択し、ＸＰＳスペクトルを得る。そして、それらのＸＰＳスペクトルの形状が、大きく異なることなく同一であることを確認する。これによって、被覆の厚み方向の均一性を評価する。
フィルターの切断を行うとフィルターの断面においてフィルター基材が露出し、その結果フィルターの断面における被覆率が見かけ上大幅に低下する。このことのＸＰＳスペクトルに対する影響は大きく、フィルター断面のＸＰＳスペクトル中のポリマーのシグナル強度が低下してしまうので、フィルター断面のＸＰＳスペクトルの形状は、フィルター表面のＸＰＳスペクトルの形状とは異なる。また、個々のフィルター断面のＸＰＳスペクトルの形状を比較する際、測定領域を狭める必要がある関係上、ノイズが多くなりやすく、鮮明なスペクトルを得ることが困難となるので、それらのＸＰＳスペクトルにおけるシグナル強度比（ピーク面積比）までも比較することには意味がない。そこで、個々のフィルター断面のＸＰＳスペクトルにおいて、同一の位置にシグナルが観測されたとき、即ち、それぞれのＸＰＳスペクトルにおいて観測されたシグナルの化学シフトが等しいとき、スペクトルの形状が同一であると見なすものとする。
以下に、本発明の血液処理用フィルターの製造方法の例を説明する。
本発明の血液処理用フィルターは、（１）ポリマーを溶剤に溶解した溶液（以下「ポリマーコート溶液」という）をフィルター基材に被覆、または、ポリマー溶液中にフィルター基材を浸漬した後、（２）機械的な圧縮、重力、遠心分離、ガスによる吹き飛ばし、あるいは、減圧吸引などによって余剰の溶液をフィルター基材から除去してから、または、非溶剤に浸漬して脱溶剤してから乾燥することにより製造される。
コーティング（被覆）の前に、ポリマーとフィルター基材との接着をよくするために、フィルター基材の表面をγ（ガンマー）線照射、ＵＶ（紫外線）照射、コロナ放電、プラズマ処理、または化学薬品等を用いて酸化することも有効である。また、コーティングの後でガス中、または液体中で熱処理することにより、フィルター基材とポリマーとの接着を強めたり、ポリマー内で架橋反応を起こさせてコーティング層を安定化させたりすることもできる。尚、コーティングはフィルター基材を形成する時に同時に行っても良いし、成型後に行っても良い。
フィルター基材にポリマー溶液をコーティングする方法としては、フィルター基材に所望のコート量よりも余分にコーティングしておいた後に規定のコート量に減少させる後計量法、及びフィルター基材にコーティングする前にあらかじめ所望のコート量になるように計量しておいたポリマー溶液をフィルター基材に転移させる前計量法があるが、いずれでも良い。
コーティング後の乾燥方法としては、乾燥気体中または減圧雰囲気中で、常温で、または、加熱しながら乾燥するなどの方法が用いられる。
ポリマーの溶解に用いられる溶剤は、例えば、ポリマーが２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレートとジメチルアミノエチル（メタ）アクリレートからなる共重合体であればエチレングリコール、ジエチレングリコール等のグリコール類；メタノール、エタノール、ｎ（ノルマル）−プロピルアルコール、イソ−プロピルアルコール、ｎ−ブチルアルコール、ｔ（ターシャリー）−ブチルアルコール等のアルコール類；Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びメチルセルソルブ等を挙げることができる。これらの溶剤は単独で用いてもよく、複数種を混合して用いてもよい。また、それらに水を添加したものを用いることもできる。
本発明の血液処理用フィルターのフィルター基材としては、メルトブロー法やフラッシュ紡糸法あるいは抄造法等により作製された不織布の他、紙、織布、メッシュ及び高分子多孔質体などの公知のフィルター材料のいずれの形態であっても良いが、不織布は特に好適な形態である。尚、ここで不織布とは、編織によらずに繊維あるいは糸の集合体が、化学的、熱的、または機械的に結合された布状のものをいう。
繊維素材としては、ポリアミド、芳香族ポリアミド、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、ポリトリフルオロクロルエチレン、ポリスチレン、ポリメチル（メタ）アクリレート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ−４−メチルペンテン等の合成繊維や、セルロース、セルロースアセテート等の再生繊維などを例示することができる。
不織布及び織布からなるフィルター基材であれば、その平均繊維直径は０．３μｍ〜１０μｍ、好ましくは０．３μｍ〜３μｍ、さらに好ましくは０．５μｍ〜１．８μｍである。平均繊維直径が０．３μｍ未満の場合には、血液を濾過する際の圧力損失が高すぎて実用的でない恐れがあり、逆に１０μｍを超えると繊維と白血球との接触確率が低すぎるために、本発明の白血球除去が充分に発揮されない恐れがある。
なお、ここで平均繊維直径とは、フィルター基材を構成する不織布または織布から一部をサンプリングし、電子顕微鏡写真により測定した平均直径である。この平均繊維直径は以下の手順に従って求められる値をいう。
すなわち、フィルター基材である不織布または織布から実質的に均一と認められるフィルター基材の一部をサンプリングし、走査電子顕微鏡などを用いて、写真に撮る。サンプリングに際しては、フィルター基材を一辺が０．５ｃｍの正方形によって区分し、その中から６箇所をランダムサンプリングする。ランダムサンプリングするには、例えば上記各区分に番地を設定した後、乱数表を使うなどの方法で、必要個所の区分を選べば良い。また、初めにサンプリングした３区分は、一方の面（便宜上以下Ａ面と呼ぶ）について、また、残りの３区分は他方の面（便宜上以下Ｂ面と呼ぶ）について、その中央部分を拡大倍率２，５００倍で写真に撮る。サンプリングした各区分について中央部分及びその近傍の個所の写真を撮って行き、その写真に撮られた繊維の合計本数が１００本を超えるまで写真を撮る。このようにして得た写真について、写っている全ての繊維の直径を測定する。ここで直径とは、繊維軸に対して直角方向の繊維の幅をいう。測定した全ての繊維の直径の和を、繊維の数で割った値を平均直径とする。但し、複数の繊維が重なり合っており、他の繊維の陰になってその幅が測定できない場合、また、複数の繊維が溶融するなどして、太い繊維になっている場合、更に著しく直径の異なる繊維が混在している場合、等々の場合には、これらのデータは削除する。また、Ａ面とＢ面とで明らかに平均繊維直径が異なる場合には、もはやこれを単一なフィルター基材とは認めない。ここで「明らかに平均繊維直径が異なる」とは、統計的に有意差が認められる場合をいう。この場合は、Ａ面側とＢ面側とを異なるフィルター基材としてとらえ、両面の境界面を見つけた後、両者の平均繊維直径を別々に測定し直す。
また、不織布又は織布からなるフィルター基材の空隙率は、５０％以上９５％未満が好ましく、より好ましくは７０％以上９０％未満である。空隙率が５０％未満の場合には血液の流れが悪く、また９５％以上ではフィルター基材の機械的強度が弱いため適さない。空隙率の測定は、所定の面積に切断したフィルター基材の乾燥時の重量（Ｗ１）を測定し、さらに厚みを測定して体積（Ｖ）を算出する。このフィルター基材を純水中に浸漬し、脱気した後含水したフィルター基材の重量（Ｗ２）を測定する。これらの値から以下に示す算出式により空隙率が求められる。
なお、下記の算出式中のρは純水の密度である。
空隙率（％）＝（Ｗ２−Ｗ１）×１００／ρ／Ｖ
高分子多孔質体としては、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ−４−メチルペンテン、ポリビニルホルマール、ポリアクリロニトリル、ポリスルホン、セルロース、セルロースアセテート、ポリウレタン、ポリビニルアセタール、ポリエステル、ポリアミド、ポリエーテルイミド、ポリ（メタ）アクリレート、ポリフッ化ビニリデン、ポリイミドなどの多孔質体を例示することができる。
高分子多孔質体は、平均気孔径が１μｍ〜６０μｍ、好ましくは１μｍ〜３０μｍ、より好ましくは１μｍ〜２０μｍである。１μｍ未満では血液等の白血球及び血小板含有液の流れが悪く、６０μｍを超えると多孔質体と白血球との接触確率が低すぎるために白血球の除去率が低くなり、好ましくない。ここでいう平均気孔径とは、ＡＳＴＭ  Ｆ３１６−８６に記載されているエアーフロー法に準じてＰＯＲＯＦＩＬ（ＣＯＵＬＴＥＲ  ＥＬＥＣＴＲＯＮＩＣＳ  ＬＴＤ．製）液中にて測定した平均孔径を示す。
本発明の製造方法を用いて得られた血液処理用フィルターは、通常公知の血液の入口と出口を有する適当な血液濾過用のフィルター基材容器に充填して使用することが可能である。
本発明のフィルターは、その厚みによって異なるが、１枚で用いても良いし、複数枚重ねて用いても良い。重ねる枚数としては血液濾過条件によって異なり臨界的ではないが、通常数枚から数十枚が用いられる。また、フィルター基材が織布または不織布の場合、他の繊維からなるフィルター基材を重ねて用いることも可能である。
また、フィルターを複数枚重ねて用いる場合、赤血球製剤あるいは全血から白血球と血小板を効率良く除去するためには、ゲルパーミエーションクロマトグラムにおいてピークトップ分子量の１／４以下の分子量を有する低分子量成分の量が２０％以下である分子量分布を有するポリマーにより、フィルター基材のうち少なくとも最も孔径の小さい又は繊維径の小さいフィルター基材を用いているフィルター（メインフィルター）が、被覆されていることが好ましく、全てのフィルターが該ポリマーで被覆されていることがより好ましい。
孔径あるいは繊維径の異なる複数のフィルター基材を組み合わせた場合のフィルター基材に対するポリマーのコート量は、同一の孔径あるいは繊維径のフィルター基材を単独（１枚）あるいは複数（枚）をまとめて測定し、同一の孔径あるいは繊維径のフィルター基材ごとに算出する。
異なる種類のフィルター基材を複数枚重ねて用いる場合に、フィルターコート量がフィルター基材全表面単位面積当たり０．５〜１０ｍｇ／ｍ２であるとは、最も孔径の小さい又は繊維径の小さいフィルター基材を用いているフィルター（メインフィルター）のコート量がその範囲内であることが必要である。
［発明を実施するための最良の形態］
以下に実施例により本発明を説明するが、本発明はこれらになんら限定されるものではない。
＜被覆率の測定方法＞
各種の測定は、以下の方法によって行った。
１）フィルター基材表面のポリマー被覆率の測定方法
ポリマーで被覆されたフィルター基材表面の被覆率の測定は、フィルターを約１ｃｍ四方に切断したサンプルについて行った。
フィルム状又は板状のＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）標品、紛体をペレット状に押し固めたポリマー（２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体、又は２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体）標品を準備した。解析は、Ｘ線電子スペクトル（ＸＰＳ）装置（日本国（株）島津製作所製  ＡＸＩＳ−Ｕｌｔｒａ）、及びＸ線源：Ａｌ  Ｋα単色化光源（３００Ｗ）を用いて、Ｎａｒｒｏｗ  Ｓｃａｎ：１０ｅＶのＰａｓｓ  Ｅｎｅｒｇｙ及び分析面積７００μｍ×３００μｍ、帯電中和有りの条件にて行った。
図４に、上記解析で得られた、Ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｅｎｅｒｇｙ（ｅＶ）に対する強度（Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）（ａ．ｕ．）（ａｎｇｓｔｒｏｍ  ｕｎｉｔ）のＮａｒｒｏｗ  ＳｃａｎＸ線光電子スペクトルの一例を示す。
２）ピーク分離の詳細
ピーク分離にはＴｈｅ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  Ｄａｔａｓｙｓｔｅｍ  Ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．１（英国Ｆｉｓｏｎｓ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍ社製）のソフトウエアを用いた。
手順１．図４のＸ線光電子スペクトルに示されたａ〜ｃの３つのピークが入るようにピーク分離の面積を規定し、Ｓｈｉｒｌｅｙ法でバックグランドを除去した。
手順２．図４のａ（Ｏ−Ｃ＝Ｏ結合中の下線を付した炭素由来）、ｂ（Ｃ−Ｃ−Ｏ結合中の下線を付した炭素由来）、ｃ（Ｃ−Ｃ−Ｃ結合又はＣ−ＣＨ３結合中の下線を付した炭素由来）のピークに相当するそれぞれ３つのＧａｕｓｓｉｉａｎ／Ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎ混合ピークを指定し、ピークセンター、ピーク高さ、半値幅、Ｇａｕｓｓｉｉａｎ／Ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎ混合比、をピーク分離のパラメータとした。
手順３．ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｃｈｉ−Ｓｑｕａｒｅ法でピーク分離を実施し、ピークａとピークｂの面積比を求めた。ここで、ピーク分離に以下の制限を加えた。
▲１▼サンプルにおけるピークａとピークｂの半値幅の差は、ＰＥＴ標品におけるピークａとピークｂの半値幅の差±０．１ｅＶの範囲内とした。
▲２▼ピークａとピークｂのＧａｕｓｓｉｉａｎ／Ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎ混合比は０．２〜０．５の範囲とし、但しピークｂのＧａｕｓｓｉｉａｎ／Ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎ混合比は（ピークａの値）±０．１５とした。ピークｃのＧａｕｓｓｉｉａｎ／Ｌｏｒｅｎｔｚｉａｎ混合比は０．２〜０．５５の範囲とした。
手順４．ＰＥＴ標品におけるピークａとピークｂの面積比を１：ｘ、ポリマーの紛体をペレット状に成形したポリマー標品におけるピークａとピークｂの面積比を１：ｙとし、サンプルにおけるピークａとピークｂの面積比を１：ｚとした時の、そのサンプルの被覆率を次の式より計算した。
被覆率（％）＝｛｜ｚ−ｘ｜／｜ｙ−ｘ｜｝×１００
なお、測定に用いたフィルターのサンプルは、残溶剤量が１ｐｐｍ以下で厚みが０．１ｍｍ以上のものを使用した。
３）フィルター基材の厚み方向における被覆率の差の測定方法
Ｎａｒｒｏｗ  Ｓｃａｎ：４０ｅＶのＰａｓｓ  Ｅｎｅｒｇｙ及び分析面積２７μｍφの解析条件にした以外は、上記１）で説明した「フィルター基材表面の被覆率の測定方法」と同様な測定条件にて行った。
測定個所は、フィルターの一方の面の表面近傍の断面部分と他方の面の表面近傍の断面部分、及びフィルターの両表面の中間に位置する断面部分であり、それぞれランダムに選んだ５箇所を測定した。
以下の実施例及び比較例において、実施例１−１〜１−８、および比較例１−１〜１−３は、赤血球製剤処理に関するもの、実施例２−１〜実施例２−７、及び比較例２−１〜２−４は、全血処理に関するもの、参考例１及び２は用いたポリマーの溶出物試験に関する例である。
＜実施例１−１＞
（ポリマーコート溶液の調整）
２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート９７モル％とジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート３モル％からなる共重合体（重量平均分子量５７０，０００、塩基性窒素原子の含量０．３２重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量３モル％、ピークトップ分子量３．７５×１０５、低分子量成分の含有量２６．０％）からなる重合溶液（共重合体濃度３９重量％、エタノール溶液）に４倍体積量のエタノールを加えて４０℃にて均一に溶解した。この溶液を２５℃の室温下で１２時間放置することにより熱誘起相分離法にて液液相分離した後、ポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度３１重量％）のみを分別回収した。
得られたポリマー濃厚相溶液には、塩基性窒素原子の含量０．３２重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量３モル％、ピークトップ分子量３．９２×１０５、低分子量成分の含有量１４．５％の２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体が溶解していることが確認され、液液相分離精製によりポリマー中の低分子量成分が低減していることが明らかとなった。
このポリマー濃厚相溶液にエタノールを加えた後４０℃の温度で溶解して、共重合体濃度０．０６重量％の均一なポリマーコート溶液を調整した。
（コーティング）
図５に示す装置を用いて、ポリマーのコーティングを行った。図５における符号は次のとおりである。
１：フィルター基材供給ロール
２：ポリマー溶液コーティング槽
３：ポリマー溶液保温用恒温槽
４：ロール
５：ニップ用ロール
６：フィルター巻き取り用ロール
７：フィルター基材
８：ポリマー溶液
９：含浸ロール
１０：恒温槽内の温調水
１１：乾燥する手段（低温側）
１２：乾燥する手段（高温側）
図５の装置を用いて、平均繊維直径１．２μｍのポリエチレンテレフタレート繊維よりなる不織布（４０ｇ／ｍ２目付、空隙率７９％、厚さ０．２５ｍｍ、密度０．１６ｇ／ｃｍ３、巾３００ｍｍ、比表面積２．０１ｍ２／ｇ）３０ｍを連続的に上記４０℃の溶液に浸漬した後、間隙が０．１３ｍｍであるロール間を通過させることによりニップした。不織布は、４０℃の第１乾燥室内（風速１５ｍ／秒）を３ｍ通過させて、６０℃の第２乾燥室内（風速１５ｍ／秒）を３ｍ通過させた後巻き取った。ライン速度は、３ｍ／分に固定した。第１乾燥室通過直後の残エタノール量は１１％であった。また、巻き取り時の残エタノール量は１％以下であり、巻き取り後にフィルター同士が接着することはなく、効率良く生産することができた。フィルター中のポリマーのコート量は０．６２ｍｇ／ｍ２で、被覆率は２０％であった。
（血液評価）
このようにして製造したフィルターから任意に選んだ一部を６３ｍｍ×６３ｍｍの正方形状に切断したものを３６枚重ねて、血液の導入口と導出口を有する容器に、充填密度が約０．２３ｇ／ｃｍ３となるように充填した。フィルターの有効濾過断面積は６０ｍｍ×６０ｍｍ＝３，６００ｍｍ２であり、厚みは８ｍｍであった。
赤血球製剤には、ＣＰＤ液（ｃｉｔｒａｔｅ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｄｅｘｔｒｏｓｅ）を血液４５０ｍＬに対して６３ｍＬ添加したヒトの全血５１３ｍＬ（２５℃）から、採血後８時間以内に遠心分離によって多血小板血漿を除去し、赤血球保存液としてＳＡＧＭ（ｓａｌｉｎｅ−ａｄｅｎｉｎｅ−ｇｌｕｃｏｓｅ−ｍａｎｎｉｔｏｌ）を加えた濃厚赤血球製剤（ヘマトクリット６０％）２７０ｍＬを用いた。
上記フィルターを用い、上記の濃厚赤血球製剤を、落差７０ｃｍで濾過した。濾過中の血液処理速度は、２５ｍＬ／分に調整した。血液バッグ内に血液がなくなるまで濾過を行ない、濾過した血液を回収した。
濾過前の製剤（以下、濾過前液という）、及び回収された製剤（以下、回収液という）の白血球濃度と、濾過前液の体積及び回収液の体積を測定し、以下の式に従って白血球除去能を求めた。
0004115839.tif 000003
なお、濾過前液及び回収液の体積は、それぞれの重量を血液製剤の比重で割った値とした。濾過前液及び回収液の白血球濃度の測定は、以下に示す方法によって行なった。液６００μＬを既知数の蛍光ビーズが入ったＴｒｕＣＯＵＮＴ試験管に添加した。更にＬｅｕｃｏＣＯＵＮＴ試薬２，４００μＬを試験管に加え、緩やかに混和した。室温暗所にて、５分間インキュベートした。このように調整したＴｒｕＣＯＵＮＴ試験管を１０本連続でフローサイトメーター（ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ  ＨＧ  日本国日本ベクトンディッキソン（株）製）で測定した。また、ＬｕｅｃｏＣＯＵＮＴ試薬とＴｒｕＣＯＵＮＴ試験管はＬｅｕｃｏＣＯＵＮＴキット（日本国日本ベクトンディッキソン（株）製  ＢＤ−３４０５２３）を用いた。
また、製剤中の血小板の濃度は、多項目自動血球計数装置（日本国ＳＹＳＭＥＸ社製  Ｋ−４５００）にてストマライザー（日本国ＳＹＳＭＥＸ社製）を溶血剤に用いて測定し、血小板除去率は次式により算出した。
0004115839.tif 000004
このフィルターの血液評価を３回行い平均値として表１に示した。白血球選択除去フィルターでは、白血球除去能５Ｌｏｇ以上の性能が求められており、白血球除去能において高い性能が得られることが分かった。
また、血小板除去率においても９５％以上の高い除去性能が得られた。
＜実施例１−２＞
実施例１−１で用いたポリマー濃厚相溶液にエタノールを加えて、共重合体濃度１．２５重量％のポリマーコート溶液を用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は９．５５ｍｇ／ｍ２、被覆率は５０％であった。
この時の血液評価結果を表１に示す。高い白血球除去能が得られた。また、血小板除去率においても９５％以上の高い除去性能が得られた。
＜実施例１−３＞
実施例１−１で用いた不織布の代わりに平均繊維直径１．２μｍのポリ（トリメチレンテレフタレート）繊維よりなる不織布（４０ｇ／ｍ２目付、空隙率７５％、厚さ０．２３ｍｍ、密度０．１７ｇ／ｃｍ３、巾３００ｍｍ、比表面積１．９８ｍ２／ｇ）を用いた以外は実施例１−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．５４ｍｇ／ｍ２、被覆率２０％であった。
この時の血液評価結果を表１に示す。高い白血球除去能が得られた。また、血小板除去率においても９５％以上の高い除去性能が得られた。
＜実施例１−４＞
実施例１−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート９５モル％とジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート５モル％からなる共重合体（ピークトップ分子量４．０８×１０５、低分子量成分の含有量９．９％、塩基性窒素原子の含量０．５３重量％、非イオン性親水基９５モル％、塩基性窒素原子の量５モル％）からなるポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度３０重量％）を用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．７２ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
ここで、ピークトップ分子量４．０８×１０５、低分子量成分の含有量９．９％の２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体からなるポリマー濃厚相溶液は、２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート９５モル％とジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート５モル％からなる共重合体（重量平均分子量６５０，０００、塩基性窒素原子の含量０．５３重量％、非イオン性親水基９５モル％、塩基性窒素原子の量５モル％、ピークトップ分子量３．６２×１０５、低分子量成分の含有量２１．２％）からなる重合溶液（共重合体濃度４１重量％、エタノール溶液）を用いて実施例１−１と同様な方法により得られた。この液液相分離精製によりポリマー中の低分子量成分が低減していることが明らかとなった。
この時の血液評価結果を表１に示す。高い白血球除去能が得られた。また、血小板除去率においても９５％以上の高い除去性能が得られた。
＜実施例１−５＞
実施例１−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに、ピークトップ分子量３．８２×１０５、低分子量成分の含有量１２．４％の実施例１−１と同一の化学組成からなる共重合体（塩基性窒素原子の含量０．３２重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量３モル％）からなるポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度４０重量％）を用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．６８ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
ここで、ピークトップ分子量３．８２×１０５、低分子量成分の含有量１２．４％の２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体からなるポリマー濃厚相溶液は、実施例１で用いた精製前の重合溶液に２倍体積量のエタノールを加えて、４０℃にて均一に溶解した後、均一に攪拌しながら重合溶液に対して０．０３３倍体積量のｎ−ヘキサンを少量ずつ滴下することにより非溶剤誘起相分離法により液液相分離してポリマー濃厚相溶液のみを分別回収することにより得られた。この液液相分離精製によりポリマー中の低分子量成分が低減していることが明らかとなった。
この時の血液評価結果を表１に示す。高い白血球除去能が得られた。また、血小板除去率においても９５％以上の高い除去性能が得られた。
＜実施例１−６＞
実施例１−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに、ピークトップ分子量３．８０×１０５、低分子量成分の含有量１８．９％の実施例１−１と同一の化学組成からなる共重合体（塩基性窒素原子の含量０．３２重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量３モル％）からなるポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度２８重量％）を用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．５８ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
ここで、ピークトップ分子量３．８０×１０５、低分子量成分の含有量１８．９％の２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジメチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体からなるポリマー濃厚相溶液は、実施例１−１で用いた精製前の重合溶液に３倍体積量の純水を加えて４０℃にて均一に溶解した後、１５℃に調整した室温下で１２時間放置することによる熱誘起相分離法と非溶剤誘起相分離法の組み合わせで液液相分離することによりポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度２８重量％）のみを分別回収することにより得られた。この液液相分離精製によりポリマー中の低分子量成分量が低減していることが明らかとなった。
この時の血液評価結果を表２に示す。高い白血球除去能が得られた。また、血小板除去率においても９５％以上の高い除去性能が得られた。
＜比較例１−１＞
実施例１−４で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに、ピークトップ分子量３．６２×１０５、低分子量成分の含有量２０．６％の実施例１−４と同一の化学組成からなる共重合体（塩基性窒素原子の含量０．５３重量％、非イオン性親水基９５モル％、塩基性窒素原子の量５モル％）を用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。
この時の血液評価結果を表２に示す。また、フィルター中のポリマーのコート量は０．５０ｍｇ／ｍ２、被覆率２０％であった。
ここで、ピークトップ分子量３．６２×１０５、低分子量成分の含有量２０．６％の２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート−ジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート共重合体は、実施例１−４で用いた精製前の重合溶液を約２０倍体積量の純水中に均一に攪拌しながら少量ずつ滴下して析出させることにより再沈精製し、更に該析出物を４０℃にて真空乾燥することにより得た。白血球除去能が５Ｌｏｇを下回る結果となった。
＜比較例１−２＞
実施例１−１で用いたポリマー濃厚相溶液にエタノールを加えて、共重合体濃度０．０４重量％のポリマーコート溶液を用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。
この時の血液評価結果を表２に示す。３回行った血液評価の結果、白血球除去能のばらつきが大きく、平均した結果５Ｌｏｇを下回る結果となった。また、フィルター中のポリマーのコート量は０．４０ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
＜比較例１−３＞
実施例１−１で用いたコートフィルターの代わりにポリマー未コートのフィルター基材そのものを用いた以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。
この時の血液評価結果を表２に示す。３回行った血液評価の結果、白血球除去能のばらつきが大きく、平均した結果５Ｌｏｇを下回る結果となった。
＜実施例２−１＞
血液評価に用いた血液が全血である以外は、実施例１−１と同様な操作を行った。
すなわち、実施例１−１と同じ方法により、ポリマーコート溶液を調整しコーティングすることによってフィルターを作成した。実施例１−１と同様、低分子量成分の含有量は１４．５％、ポリマーコート量０．６２ｍｇ／ｍ２、被覆率２０％であった。フィルターには、赤血球製剤に代えて、ＣＰＤ液（ｃｉｔｒａｔｅ−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｄｅｘｔｒｏｓｅ）を血液４５０ｍＬに対して６３ｍＬ添加したヒトの１日保存全血５１３ｍＬから２７０ｍＬをフィルターに濾過した以外は、実施例１−１と同様に血液評価を行った。
このフィルターの血液評価を３回行い平均値として表３に示す。白血球除去能５Ｌｏｇ以上の結果が得られており、白血球除去能において高い性能が得られることが分かった。
＜実施例２−２＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液にエタノールを加えて、共重合体濃度１．２５重量％のポリマーコート溶液を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は８．９６ｍｇ／ｍ２、被覆率は５０％であった。
この時の血液評価結果を表３に示す。白血球除去能および血小板除去率共に高い結果が得られた。
＜実施例２−３＞
実施例２−１で用いた不織布の代わりに平均繊維直径１．２μｍのポリ（トリメチレンテレフタレート）繊維よりなる不織布（４０ｇ／ｍ２目付、空隙率７５％、厚さ０．２３ｍｍ、密度０．１７ｇ／ｃｍ３、巾３００ｍｍ、比表面積１．９８ｍ２／ｇ）を用いた以外は実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．６５ｍｇ／２ｍ、被覆率は２０％であった。
この時の血液評価結果を表３に示す。白血球除去能および血小板除去率共に高い結果が得られた。
＜実施例２−４＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート９５モル％とジエチルアミノエチル（メタ）アクリレート５モル％からなる共重合体（ピークトップ分子量４．０８×１０５、低分子量成分の含有量９．９％、塩基性窒素原子の含量０．５３重量％、非イオン性親水基９５モル％、塩基性窒素原子の量５モル％）からなるポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度２９重量％）を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．６０ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
この時の血液評価結果を表３に示す。白血球除去能および血小板除去率共に高い結果が得られた。
＜実施例２−５＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに、ピークトップ分子量３．８２×１０５、低分子量成分の含有量１２．４％の実施例１−１と同一の化学組成からなる共重合体（塩基性窒素原子の含量０．３２重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量３モル％）からなるポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度４０重量％）を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．６８ｍｇ／ｍ２、被覆率５０％であった。
この時の血液評価結果を表３に示す。白血球除去能および血小板除去率共に高い結果が得られた。
＜実施例２−６＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに、ピークトップ分子量３．８０×１０５、低分子量成分の含有量１２．９％の実施例１−１と同一の化学組成からなる共重合体（塩基性窒素原子の含量０．３２重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量３モル％）からなるポリマー濃厚相溶液（共重合体濃度２８重量％）を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．６２ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
この時の血液評価結果を表４に示す。白血球除去能および血小板除去率共に高い結果が得られた。
＜実施例２−７＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液にエタノールを加えて、共重合体濃度０．５０重量％のポリマーコート溶液を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は４．５８ｍｇ／ｍ２、被覆率は４０％であった。
この時の血液評価結果を表４に示す。白血球除去能および血小板除去率共に高い結果が得られた。
＜比較例２−１＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液の代わりに、ピークトップ分子量３．６２×１０５、低分子量成分の含有量２０．６％の実施例１−１と同一の化学組成からなる共重合体（塩基性窒素原子の含量０．５３重量％、非イオン性親水基９７モル％、塩基性窒素原子の量５モル％）を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。フィルター中のポリマーのコート量は０．５８ｍｇ／ｍ２、被覆率２０％であった。
この時の血液評価結果を表４に示す。３回行った血液評価の結果、血小板除去率のばらつきが大きく、平均した結果９５％を下回る結果となった。
＜比較例２−２＞
実施例２−１で用いたポリマー濃厚相溶液にエタノールを加えて、共重合体濃度０．０４重量％のポリマーコート溶液を用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。この時の血液評価結果を表４に示す。３回行った血液評価結果、白血球除去能のばらつきが大きく、平均した結果５Ｌｏｇを下回る結果となった。また、フィルター中のポリマーのコート量は０．４０ｍｇ／ｍ２、被覆率は２０％であった。
＜比較例２−３＞
実施例２−１で用いたコートフィルターの代わりにポリマー未コートのフィルター基材そのものを用いた以外は、実施例２−１と同様な操作を行った。この時の血液評価結果を表４に示す。３回行った血液評価の結果、白血球除去能のばらつきが大きく、平均した結果５Ｌｏｇを下回る結果となった。
【表１】
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【表２】
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【表３】
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【表４】
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＜参考例１＞
共重合体濃度３重量％のポリマーコート溶液を用いた以外は、実施例１−４と同様にしてコート量７３ｍｇ／ｍ２のフィルターを得た。得られたフィルターを「滅菌済み輸血セット基準（平成１０年１２月１１日医薬発第１０７９号）」のゴム製の材料に対する溶出物試験に準拠して評価した。その結果、過マンガン酸カリウム還元性は、消費量の差が０．２１ｍＬ、蒸発残留物は０．０５ｍｇであった。
＜参考例２＞
比較例１−１で用いたポリマーを用いた以外は、参考例１と同様にしてコート量７１ｍｇ／ｍ２のフィルターを得た。同様の溶出物試験を実施した結果、過マンガン酸カリウム還元性は、消費量の差が０．３６ｍＬ、蒸発残留物は０．２０ｍｇであった。
参考例１、２の比較より、本発明で用いられるフィルターからの溶出量が少なく、より安全性に優れている事が分かる。
［産業上の利用の可能性］
本発明の血液処理用フィルターを用いると、赤血球製剤あるいは全血から、血漿及び赤血球の損失を低く抑えながら、輸血後の種々の副作用の原因となる白血球と血小板を効率よく選択除去できる。本発明の血液処理用フィルターは、医薬用途、医療用途及び一般工業用途のための血液製剤の製造に極めて有利に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
図１は、本発明の血液処理用フィルターの製造において用いられるポリマーの分子量分布を示すグラフであり；
図２は、本発明の血液処理用フィルターのポリマーコート量と、全血からの血小板除去率との関係を示すグラフであり；
図３は、本発明の血液処理用フィルターのポリマーコート量と、赤血球製剤からの血小板除去率との関係を示すグラフであり；
図４は、本発明の血液処理用フィルターのＸ線光電子スペクトル（ＸＰＳ）の一例であり；
図５は、本発明の血液処理用フィルターを製造するための装置の一例を示す正面図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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