(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0004181301.tif 000015
で示される２−アミノテトラリンまたは式（ＩＩ）：
【化２】
0004181301.tif 000016
で示される医薬上許容される塩：
［式中：
Ｒは、メチル；
Ｒ1は、アセチル；
Ｒ2は、水素；
Ｘ-は医薬上許容される酸の１価のアニオンである］。
【請求項２】
医薬上許容される酸の１価のアニオンが、塩化物、臭化物、オロチン酸塩、酸アスパラギン酸塩、酸クエン酸塩、酸リン酸塩、フマル酸塩および酸フマル酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩および酸マレイン酸塩、酸蓚酸塩、酸硫酸塩、グルコースリン酸塩、酒石酸塩および酸酒石酸塩から選択される塩を形成するアニオンである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
炎症性サイトカインにより誘発される炎症性および／または自己免疫性疾患の予防的および治療的処置のための、活性成分として請求項１または２に記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項４】
敗血性ショックの予防的および治療的処置のための請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
さらに医薬上許容される担体および/または希釈剤を含む、経口または非経口投与可能な請求項３または４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本明細書に記載の発明は、２−アミノテトラリンの誘導体およびそれらの薬理学上許容される塩、それらの製法、敗血症性ショックの予防および治療的処置、および下記により詳細に定義され、炎症性サイトカインの病因的役割がよく確立されている炎症性および／または自己免疫性疾患の治療に適当な医薬組成物に関する。
敗血症性ショックの治療に有効な６，７−置換−２−アミノテトラリンがよく知られている。
【０００２】
ＥＰ−Ａ−０７３０８６１は、参考として本明細書中に組み込まれているが、一連のかかる６，７−置換−２−アミノテトラリンおよび特に化合物（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン（本明細書では以後ＳＴ ６２６という）を記載している。
本明細書に記載の本発明の組成物を用いて治療されるべき炎症性および／または自己免疫性疾患は、例えば、慢性関節リウマチ、膵炎、炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎および脳脊髄炎である。
【０００３】
本明細書では以後、敗血症性ショックに関してのみ言及するが、炎症性サイトカインによる他の病状もまた本発明により有効に治療できることが理解されよう。
敗血症性ショックは、主にグラム陰性もしくはグラム陽性細菌、原生動物またはウイルスのいずれかによる感染の結果として引き起こされ、白血球増加症、発熱、頻脈、高血圧ならびに腎臓、呼吸、心臓および肝臓の機能不全を特徴とする非常に重篤な臨床的症候群である。
【０００４】
しかしながら、敗血症性ショックの重篤度は、症候群の原因となる微生物の型に無関係であるが（Parrillo J. E., Pathogenetic mechanisms of septic shock. New Engl. J. Med., 328: 1471-1477, 1993）、毒性傷害の原因となる抗原に対する個々の炎症性応答の程度に関連することが強調されるべきである。
【０００５】
抗生物質治療および集中治療部における介入プロトコールにおける有意な改善にもかかわらず、ここ２、３年にわたり、ショックは入院患者の罹患および死亡の主な原因の１つのままである。米国において１年あたりおよそ１００，０００件の死亡の原因であると見積もられている（Glauser M.P., Zanetti G., Baumgartner J.D., Cohen J., Septic shock: pathogenesis. Lancet, 338: 732-736, 1991）。
敗血症性ショックの最も決定的で特徴的な性質は、溶菌または微生物代謝由来の生産物に対する体の応答である。
【０００６】
同定されるべき第１のこれらの物質であって、実験的研究に最も使用される１つは、リポ多糖（ＬＰＳ）である。リポ多糖は、グラム陰性細菌壁の構成要素であり、化学的には、細菌種により変化する多糖部分および一定の脂質部分（リピドＡ）よりなり、敗血症対象の血中にミセル形態で存在する。動物に投与する場合、ＬＰＳは、ショックにおいて出くわす全ての心循環器系および神経学的症状を再現できる（Olson. N.C., Salzer W.L., McCall C.E., Biochemical, physiological and clinical aspects of endotoxaemia. Molec. Aspects Med., 10: 511-629, 1988）。したがって、それは、凝固カスケードおよび主にマクロファージ−単球起源のサイトカイン、例えば、ＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩＮＦ−γの分泌の内在性および外来性経路の活性化を経て臨床上の症状を誘発する一連の事象における主要な発動物質として同定できる（Bone R.C., A critical evaluation of new agents for the treatment of sepsis. J. Am. Med. Ass., 266: 1686-1691, 1991）。
【０００７】
ここ２、３年にわたり該症候群の重要性が増すにつれて、その重篤度および現在可能な不十分な治療法により、該疾患の進行に有効に抵抗できる治療薬の迅速な発見が非常に望ましいゴールとされた。
この度、新規な一連の６，７−置換−２−アミノテトラリンが上記の病状の予防および治療において強力な活性を示すことが見出された。
【０００８】
本発明の２−アミノテトラリン誘導体は、一般式（Ｉ）：
【化３】
0004181301.tif 000002
で示される遊離の塩基および一般式（ＩＩ）：
【化４】
0004181301.tif 000003
［式中：
ＲおよびＲ1は独立して、ハロゲン、特にフッ素；ヒドロキシ；ω位置が基ＯＨ、ＮＨ2、ＮＲ3Ｒ4（ここに、Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、置換されていないかまたはω位置が基ＯＨ、ＮＨ2で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルキルである）で置換されていてもよいＣ１−Ｃ４アルコキシ、特にメトキシ；Ｃ１−Ｃ４アルカノイル、特にアセチル；Ｃ１−Ｃ４アルキル；カルバモイル；カルバモイルオキシ；アミノ；アミノ置換ＮＲ3Ｒ4（ここに、Ｒ3およびＲ4は上記の通りである）であり；
Ｒ2は水素；ハロゲン、特にフッ素；ヒドロキシ；メトキシであり、但し、２−アミノテトラリンが（ａ）Ｒ＝Ｒ1＝ＣＨ3Ｏ；ＯＨ；Ｒ2＝Ｈ；または（ｂ）Ｒ＝Ｆ；Ｒ1＝ＣＨ3Ｏ；ＯＨ；Ｒ2＝Ｈであるラセミ体の場合は除外され；
Ｘ-は薬理学上許容される酸の１価のアニオンである］
で示される薬理学上許容される塩の両方として生じることができる。
【０００９】
式（ＩＩ）の化合物の薬理学上許容される塩なる語は、望ましくない毒性または副作用を生じない酸とのいずれかのその塩を意味する。かかる酸は、薬理学者ならびに薬学および製薬技術における専門家によく知られている。
かかる塩の例は、これらに限定するものではないが、塩化物、臭化物、オロット酸塩、酸性アスパラギン酸塩、酸性クエン酸塩、酸性リン酸塩、フマル酸塩および酸性フマル酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩および酸性マレイン酸塩、酸性蓚酸塩、酸性硫酸塩、グルコースリン酸塩、酒石酸塩および酸性酒石酸塩である。
【００１０】
ＦＤＡに認可された塩は、参考目的で本明細書に組み込まれているInt. J. of Pharm. 33 (1986）, 201-217に列挙されている。
本明細書に記載される本発明により特定の化合物の好ましい例は：
Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２３７）；
Ｒ（＋）−２−アミノ−６−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２３８）；
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−５，６−ジフルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６９）；
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メチルテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２７５）；
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−７−フルオロ−６−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６７）；
（Ｒ，Ｓ）−７−アセチル−２−アミノ−６−メチルテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２７４）；
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−７−フルオロ−６−メトキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６２）
である。
【００１１】
遊離の塩基または薬理学上許容される塩のいずれかとして本明細書に記載される本発明の化合物の製法は、以下の反応スキームにおいて報告される。
【００１２】
反応スキーム１
【化５】
0004181301.tif 000004
【００１３】
反応スキーム２
【化６】
0004181301.tif 000005
【００１４】
上記の反応スキームに関し、以下の実施例（ここに、Ｘ＝Ｃｌ-である）は本発明を例示するものであり、これらを限定するものではない。
【００１５】
実施例１（スキーム１）
Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ１２３７）８ａの調製
ａ）Ｓ（−）−トリフルオロアセチル−アスパラギン酸無水物１ａの調製
Ｌ−アスパラギン酸（１００ｇ；０．７５モル）をトリフルオロ酢酸（３００ｍＬ）中に懸濁し、得られた懸濁液を攪拌下に維持し、氷／塩浴中−２０℃に冷却した。攪拌下、無水トリフルオロ酢酸（３００ｍＬ；２．１６モル）をゆっくりとそれに加えた。添加終了後、得られた混合物を４５℃で一晩、用心深く還流した。
【００１６】
反応終了後、溶液を蒸発器中で乾固させ、固形残渣をヘキサンで攪拌しながら３回洗浄し、各回でデカンテーションによりヘキサンを除去し；再び、残渣を完全に乾固させた。最後に、残渣を攪拌下にヘキサン−エチルエーテルでトリチュレートし、得られた混合物をろ過し、残渣を真空乾燥させた。１５０ｇの化合物１ａを得た（収率９５％）。
Ｍ．Ｐ．：１４０−１４２℃
［α］D＝−４０．７（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ6）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．８５−３．３（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2）；４．９５−５．１（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ）；９．６−９．８（１Ｈ，ｂｄ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００１７】
ｂ）Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−４−オキソ−２−（Ｎ−トリフルオロ−アセチル）−アミノブタン酸３ａの調製
Ｓ（−）−トリフルオロアセチル−アスパラギン酸無水物（１５０ｇ；０．７１２モル）を２−フルオロアニソール（３００ｍＬ；２．６７モル）中に懸濁し、得られた混合物を勢いよく攪拌し、次いで、無水塩化アルミニウム（２４０ｇ；１．５７モル）をゆっくりと少量ずつ加えた。添加完了後、混合物を勢いよく攪拌しながら４０−４５℃で２４時間維持した。
無水ＣＨ2Ｃｌおよびさらに６０ｇのＡｌＣｌ3を加え、反応混合物を攪拌下でさらに４８時間維持した。
【００１８】
次いで、固形残渣を１リットルのＣＨ2Ｃｌ2で攪拌下に粉砕処理した。過剰のフルオロアニソールを含有する塩化メチレンを分離した。固形残渣をろ過し、２リットルの６Ｍ ＨＣｌに勢いよく攪拌しながら徐々に加えた。添加完了後、混合物を攪拌下で３０分間維持した。次いで、酸性相をエチルエーテルで繰り返し抽出した。合したエーテル相を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、次いで、乾固させた。粗固形残渣を得、それを１：１ ＡｃＯＥｔ／ヘキサンにより結晶化した。１８８ｇの化合物３ａを得た（収率７８％）。
Ｍ．Ｐ．：１１３−１１５℃
［α］D＝＋２７．５（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：３．６（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＮＨ）；３．９６（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；４．８８−５．０１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；７．１８−７．２２（１Ｈ，ｔ，Ａｒ）；７．７−７．８（１Ｈ，ｄｄ，Ａｒ）；７．８２−７．９（１Ｈ，ｂｄ，Ａｒ）
【００１９】
ｃ）Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）−アミノブタン酸４ａの調製
化合物３ａ（１００ｇ；０．２９７モル）をトリフルオロ酢酸（５００ｍＬ）中に溶解した。得られた溶液を０℃に冷却し、トリエチルシラン（３００ｍＬ；１．８９モル）をゆっくりと加えた。添加完了後、混合物をゆっくりとその沸点まで上昇させ、沸点温度で４時間維持した。
【００２０】
次いで、混合物を蒸発器中で完全に乾固させ；残渣をエチルエーテルで２回洗浄し、各回で混合物を乾固させてトリフルオロ酢酸を完全に除去した。このように得られた油状残渣を氷／塩浴中、−２０℃に冷却し、次いで、攪拌下、４Ｎ ＮａＯＨでｐＨ１０に調整したＮａＨＣＯ3飽和溶液で処理した。
【００２１】
最終的なアルカリ相を０℃にて、６Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ３まで用心深く酸性化した。沈殿を得、それをＣＨ2Ｃｌ2で繰り返し抽出した。合した有機抽出物を少量の水で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、乾固させた。油状残渣を少量の酢酸エチル中に溶解し、攪拌下、ヘキサンで沈殿させた。混合物を攪拌下に一晩維持し、ろ過し、残渣を乾燥させた。７２ｇの化合物４ａを得た（収率７５％）。
Ｍ．Ｐ．：１１３−１１５℃
［α］D＝＋１１．３（ｃ＝１％メチルアルコール）分析値：標準にしたがう。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．０−２．１８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．２２−２．３６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．６−２．７（２Ｈ，ｔ、ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．８４（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；４．６−４．７（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；６．７８（１Ｈ，ｂｄ、ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）；６．８−６．９２（２Ｈ，ｍ，Ａｒ）
【００２２】
ｄ）Ｓ（−）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシ−１−テトラロン５ａの調製
化合物４ａ（７０ｇ；０．２１７モル）を無水塩化メチレン（１４００ｍＬ）中に溶解した。得られた混合物を氷浴中で０℃に冷却し、次いで、５塩化リン（７０ｇ；０．３３６モル）をゆっくりと加えた。添加終了後、混合物を攪拌下に０℃で約２時間維持し、次いで、−２０℃まで冷却した。塩化アルミニウム（５６ｇ；０．４２モル）を少量ずつ混合物に加えた。
添加後、混合物を室温で２時間維持し、次いで、沸点まで用心深く加熱し、沸点温度で約６時間維持した。
【００２３】
次いで、混合物を０℃に冷却し、破砕した氷（約３００ｍＬ）を攪拌下で徐々に加え、過剰の反応物を破壊した。混合物はＣＨ2Ｃｌ2で３回抽出した。合した有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、乾固させた。黄色がかった固形物を得、それを少量の酢酸エチル中に溶解し、次いで、ヘキサンで沈殿させた。４０ｇの化合物５ａを得た（収率６０％）。
Ｍ．Ｐ．：１８４−１８５℃
［α］D＝−５５．４（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．８３−２．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．８−２．８８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．９−３．０（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ2）；３．１５−２．２６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ2）；３．９２（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；４．５３−４．６２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）；６．８８（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；７．５７（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；７．４３（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００２４】
ｅ）Ｓ（−）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシ−テトラリン６ａの調製
化合物５ａ（４０ｇ、０．１３１モル）をボロエテレートトリフルオリド（３４０ｍＬ）中に０℃で懸濁した。トリエチルシラン（９０ｍＬ；０．５６７モル）を懸濁液に０℃で加え、懸濁液を攪拌下に室温で４日間維持した。反応終了後、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液（ｐＨ８−９）を反応混合物に加え、水相をＣＨ2Ｃｌ2で４回抽出した。合した有機相を水で洗浄し、無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥し、ろ過し、乾固させた。
【００２５】
このように得られた粗化合物をイソプロピルエーテルから再結晶化した。３０ｇの化合物６ａが得られた（収率７８％）。
Ｍ．Ｐ．：４５−４７℃
［α］D＝−８０（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．７８−１．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＮＮＨ）；２．０−２．１５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．６−２．７２（１Ｈ，ｄｄ，ＰｈＣＨＨＣＨＮＨ）；２．７３−２．９（２Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＣＨＮＨ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；３．０３−３．１５（１Ｈ，ｄｄ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；４．２−４．３５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ）；６．３８（１Ｈ，ｂｄ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）；６．６（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；６．８（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）
【００２６】
ｆ）Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩７ａの調製
化合物６ａ（３０ｇ；０．１３モル）をメタノール（２２５ｍＬ）およびＫ2ＣＯ3（５４ｇ；０．３９１モル）を含有する水（２２５ｍＬ）中に溶解した。
得られた溶液を攪拌下で３時間還流した。
メタノールを真空下で除去し、さらに１００ｍＬの水を溶液に加えた。
【００２７】
水相をＣＨ2Ｃｌ2で繰り返し抽出した。合した有機相を無水Ｎａ2ＳＯ4で乾燥させ、ろ過し、乾固させた。このように得られた油状固形物をＨＣｌ（エタノール中１５％溶液）で酸性化したエチルエーテル中に溶解し、固形沈殿物をろ過し、メタノール中に再溶解し、活性炭で脱色し、ろ過し、真空下で濃縮し、最後にｎ−プロパノールで結晶化した。
結晶化を２回繰り返し、１２．６ｇの化合物７を得た（収率５３％）。
【００２８】
Ｍ．Ｐ．：２６３−２６５℃
［α］D＝−５２．５（ｃ＝１％Ｈ2Ｏ）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．６−１．８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ＋）；２．０−２．１５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ＋）；２．６−２．７５（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＣＨＮ＋，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；２．９５−３．０５（１Ｈ，ＤＤ，ＰｈＣＨＨＣＨＮ＋）；３．４５−３．５５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ＋）；６．７−６．７（２Ｈ，ｍ，Ａｒ）
【００２９】
ｇ）Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２３７）８ａの調製
Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩７ａ（３ｇ；０．１３モル）の臭化水素酸（４７％水溶液）２０ｍＬ中溶液を還流温度で一晩維持した。還流終了後、溶液を濃縮し、真空下で乾固させた。このように得られた残渣を攪拌下にアセトンで繰り返し洗浄し、ろ過し、１：１ 水／メタノール混合液中に再溶解し、塩基性形態で活性化された６０ｍＬのＡｍｂｅｒｌｙｓｔ Ａ２１樹脂を含有するカラムによって溶出した。
【００３０】
溶出液を２Ｎ塩酸で酸性化し、次いで、真空下で濃縮乾固させ；このように得られた残渣をアセトンで洗浄し、ろ過し、１：１ 水／メタノール中に再溶解し、酸性形態で活性化された６０ｍＬのＡｍｂｅｒｌｙｓｔ Ａ２１樹脂を含有するカラムによって溶出した。
溶出液を活性炭で脱色し、セライトでろ過し、少量に濃縮した。アセトンをそれに加え、沈殿を得、それをろ過し、真空下で加熱して乾燥させた。
２．２ｇの化合物８ａを得た（収率７８％）。
【００３１】
Ｍ．Ｐ．：２５９−２６１℃
［α］D＝−５５．４（ｃ＝１％Ｈ2Ｏ）
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．６−１．８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．０−２．１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．５−２．７（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2，ＰｈＣＨＨＮ+）；２．８５−３．０（１Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＮ+）；３．４−３．５５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ+）；６．５５−６．８（２Ｈ，２ｄ，Ａｒ）
【００３２】
実施例２（スキーム１）
Ｒ（＋）−２−アミノ−６−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２３８）８ｂの調製
ａ）Ｒ（＋）−トリフルオロアセチルアスパラギン酸１ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−トリフルオロ−アセチル−アスパラギン酸１ａに用いたものと同様であり、Ｄ（−）アスパラギン酸を出発生成物として用いる（収率８６％）。
Ｍ．Ｐ．：１４２−１４４℃
［α］D＝＋４０．０（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物１ａで得られたものに従い、一致する。
【００３３】
ｂ）Ｒ（−）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−４−オキソ−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸３ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−４−オキソ−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸３ａに用いたものと同様であり、無水物１ｂを出発物質として用いる（収率５７％）。
Ｍ．Ｐ．：８６−８８℃
［α］D＝−２８．０（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物３ａで得られたものに従い、一致する。
【００３４】
ｃ）Ｒ（−）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸４ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）−アミノブタン酸４ａに用いたものと同様であり、酸３ｂを出発物質として用いる（収率６５％）。
Ｍ．Ｐ．：１１０−１１２℃
［α］D＝−１１．２（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物４ａで得られたものに従い、一致する。
【００３５】
ｄ）Ｒ（＋）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシ−１−テトラロン酸５ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシ−１−テトラロン酸５ａに用いたものと同様であり、無水物４ｂを出発物質として用いる（収率８４％）。
Ｍ．Ｐ．：１８５−１８６℃
［α］D＝＋６６．０（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物５ａで得られたものに従い、一致する。
【００３６】
ｅ）Ｒ（＋）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン酸６ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−（N-トリフルオロアセチル）−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン酸６ａに用いたものと同様であり、テトラロン５ｂを出発物質として用いる（収率４７％）。
Ｍ．Ｐ．：１４５−１４７℃
［α］D＝＋９２．０（ｃ＝１％メチルアルコール）
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物６ａで得られたものに従い、一致する。
【００３７】
ｆ）Ｒ（＋）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩７ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩７ａに用いたものと同様であり、テトラリン６ｂを出発物質として用いる（収率６４％）。
Ｍ．Ｐ．：２６０−２６２℃
［α］D＝＋４８．５（ｃ＝１％Ｈ2Ｏ）
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物７ａで得られたものに従い、一致する。
【００３８】
ｇ）Ｒ（＋）−２−アミノ−５−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２３８）８ｂの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−アミノ−５−フルオロ−７−ヒドロキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２３７）８ａに用いたものと同様であり、テトラリン塩酸塩７ｂを出発物質として用いる（収率７８％）。
Ｍ．Ｐ．：２６０−２６２℃
［α］D＝＋５５．０（ｃ＝１％Ｈ2Ｏ）
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．６−１．８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．０−２．１（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．５−２．７（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2，ＰｈＣＨＨＣＨＮ+）；２．８５−３．０（１Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＣＨＮ）；３．４−３．５５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ+）；６．５５−６．８（２Ｈ，２ｄ，Ａｒ）
【００３９】
実施例３（スキーム１）
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−５，６−ジフルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６９）７ｃの調製
ａ）（Ｒ，Ｓ）−トリフルオロアセチル−アスパラギン酸無水物１ｃの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−トリフルオロアセチル−アスパラギン酸無水物１ａに用いたものと同様であり、Ｄ，Ｌ−アスパラギン酸を出発生成物として用いる（収率９６％）。
Ｍ．Ｐ．：１３３−１３４℃
1Ｈ−ＮＭＲ：生成物１ａで得られたものに従い、一致する。
【００４０】
ａ’）２，３−ジフルオロアニソール２の調製
２０ｇ（０．１５４モル）の２，３−ジフルオロフェノールを、ＮａＯＨ６．２４ｇの水６０ｍＬ中溶液中で室温にて生成物を振盪させることによって塩にし、完全に溶解させた。
約１０℃に冷却した溶液に、１４．４ｍＬの硫酸ジメチルをゆっくりと加え；次いで、溶液を還流温度に加熱し、２４時間還流した。
反応混合物を室温にし、塩化メチレンで抽出し；有機相を水、Ｎ硫酸および再び水で中性のｐＨになるまで洗浄した。
【００４１】
溶液を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を真空下で除去して、２１ｇの化合物ａ’を赤茶けた油状物として得、それをＮＭＲ分析した（粗物質で収率９４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：３．９（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．６−７．２（３Ｈ，ｍ，芳香族化合物）
【００４２】
ｂ）（Ｒ，Ｓ）−４−（２，３−ジフルオロ−４−メトキシフェニル）−４−オキソ−２（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸３ｃの調製
製法は、基本的に、Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−４−オキソ−２（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸３ａに用いたものと同様であり、無水物１ｃおよび２，３−ジフルオロアニソールを出発生成物として用い、４８時間の代わりに２および７２時間反応させる（収率２３％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：３．９（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．６−７．２（３Ｈ，ｍ，芳香族化合物）
【００４３】
ｃ）（Ｒ，Ｓ）−４−（２，３−ジフルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸４ｃの調製
製法は、基本的に、Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸４ａに用いたものと同様であり、酸３ｃを出発生成物として用いる（収率７６％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．０−２．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．２−２．４（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＮ）；２．６−２．８（２Ｈ，ｔ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．８６（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；４．６−４．７２（１Ｈ，ｂｑ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；６．６−６．７（１Ｈ，ｂｔ，Ａｒ）；６．７５−６．８８（２Ｈ，ｍ，Ａｒ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００４４】
ｄ）（Ｒ，Ｓ）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−５，６−ジフルオロ−７−メトキシ−１−テトラロン５ｃの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシ−１−テトラロン５ａに用いたものと同様であり、酸４ｃを出発生成物として用い、反応時間として６時間の代わりに塩化アルミニウム添加後３時間還流する（収率２６％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．８５−２．０（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ＋）；２．８４−３．０７（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＮＨ、ＰｈＣＨＨＣＨ2）；３．１３−３．２４（１Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；３．９３（１Ｈ，Ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；４．５５−４．６５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；７．３８−７．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ａｒ）；７．４３−（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００４５】
ｅ）（Ｒ，Ｓ）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−５，６−ジフルオロ−７−メトキシテトラリン６ｃの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン６ａ（実施例１）に用いたものと同様であり、テトラロン５ｃを出発生成物として用い、４日の代わりに７日間反応させる（収率４６％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．７５−１．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．０４−２．１６（２Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．６−２．９（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＮＨ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；３．０５−３．１５（１Ｈ，ｄｄ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；３．８４（３Ｈ，ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；４．２−４．３３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）；６．２２（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）；６．９−６．９４（１Ｈ，ｂｄ，Ａｒ）
【００４６】
ｆ）（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−５，６−ジフルオロ−７−メトキシ−１−テトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６９）７ｃの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩７ａに用いたものと同様であり、テトラリン６ｃを出発生成物として用い、結晶化溶媒としてイソプロパノールを用いる（収率６２％）。
Ｍ．Ｐ．：２１０℃で分解
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．６−１．８（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．０−２．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．５−２．９（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＣＨＮ+，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；２．９−３．１（１Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＣＨＮ+）；３．４−３．６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ+）；６．５−６．６（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）
【００４７】
実施例４（スキーム１）
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メチルテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２７５）７ｄの調製
ａ）（Ｒ，Ｓ）−トリフルオロアセチルアスパラギン酸無水物１ｃの調製（実施例３参照）
ｂ）（Ｒ，Ｓ）−４−（３−フルオロ−４−メチル−フェニル）−４−オキソ−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸３ｄの調製
製法は、基本的に、Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−４−オキソ−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸３ａに用いたものと同様であり、フルオロトルエンを出発生成物として用い、４８時間の代わりに７２時間反応させる（収率３６％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．１５（３Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ3）；３．３５−３．４２（１Ｈ，ｄｄ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；３．５−３．６（１Ｈ，ｄｄ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；４．６８−４．７６（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；６．８５−６．９５（１Ｈ，ｔ，Ａｒ）；７．５５−７．６５（２Ｈ，ｍ，Ａｒ）；８．０−８．１（１Ｈ，ｂｄ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００４８】
ｃ）（Ｒ，Ｓ）−４−（３−フルオロ−４−メチル−フェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸４ｄの調製
製法は、基本的に、Ｓ（＋）−４−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノブタン酸４ａに用いたものと同様であり、酸３ｄを出発生成物として用いる（収率５２％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian２００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．１５（３Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ3）；２．０−２．４（２Ｈ，ｄｄ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；２．５−２．７（２Ｈ，ｔ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；４．５−４．７（１Ｈ，ｂｑ，ＣＨ2ＣＨＮＨ）；６．６−６．７（１Ｈ，ｍ，Ａｒ）；６．７５−６．９５（２Ｈ，ｍ，Ａｒ）；７．３５−７．５（１Ｈ，ｂｄ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００４９】
ｄ）（Ｒ，Ｓ）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メチル−１−テトラロン５ｄの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシ−１−テトラロン５ａに用いたものと同様であり、酸４ｄを出発生成物として用い、反応時間として室温で２時間および塩化アルミニウムの添加後、６時間還流する代わりに１時間還流する（収率８０％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．８３−２．０（１Ｈ，ｄ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．３−（３Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ3）；２．８−２．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．９２−３．０３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ2）；３．１３−３．２５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨ2）；４．５３−４．６２（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）；７．２（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；７．６（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；７．４５（１Ｈ，ｂｓ，ＣＨＮＨＣＯＣＦ3）
【００５０】
ｅ）（Ｒ，Ｓ）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メチル−テトラリン６ｄの調製
製法は、Ｓ（−）−２−（Ｎ−トリフルオロアセチル）アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン６ａに用いたものに類似し、テトラロン５ｄを出発生成物として用いる（収率６０％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．７５−１．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．０−２．１５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮＨ）；２．２（３Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．６−２．７（１Ｈ，ｄｄ，ＰｈＣＨＨＣＨＮＨ）；２．７−２．９（２Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＨＣＨＮＨ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；３．０３−３．１５（１Ｈ，ｄｄ，ＰｈＣＨＨＣＨ2）；４．２５−４．３５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ）；６．２（１Ｈ，ｂ，ｓ，ＮＨＣＯＣＦ3）；６．７（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；６．９（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）
【００５１】
ｆ）（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ６−フルオロ−７−メチルテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２７５）７ｄの調製
製法は、基本的に、Ｓ（−）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩７ａに用いたものと同様であり、テトラリン６ｄを出発生成物として用いる（収率６７％）。
Ｍ．Ｐ．：２３０℃で分解
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．７−１．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．１５−２．２５（１Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＨＨＣＨＮ+）；２．１９（３Ｈ，Ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．７−２．９（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨＮＨ+，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．０５−３．６（１Ｈ，ｍ、ＰｈＣＨＨＣＨＮ+）；３．４５−３．６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮＨ3+）；６．７５−６．８（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；６．９５−７．０（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）
【００５２】
実施例５（スキーム２）
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−メトキシ−７−フルオロテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６２）６ａの調製
ａ）４−（６−メトキシ−７−フルオロフェニル）−３−カルボメトキシ−３−ブタン酸１ａの調製
９．４ｇ（０．０６１モル）の３−フルオロ−ｐ−アニスアルデヒドおよび１０ｇ（０．０６８モル）のコハク酸ジメチルを１５ｍＬの無水メタノール中に溶解した。このように得られた溶液を室温で、予め調製したナトリウムメトキシド１．６６ｇ（０．０７３モル）の溶液に滴下した。反応混合物を窒素雰囲気下で３時間還流し、次いで、冷却し、真空下で半量に濃縮した。
【００５３】
このように得られた溶液を２Ｎ ＨＣｌで酸性化し、氷浴中で冷却し、次いで、生成物の沈殿が起こるまで水で希釈した。沈殿をろ過し、炭酸水素ナトリウムの飽和溶液中に溶解した。水溶液を、エチルエーテルと一緒に繰り返し振盪し、２Ｎ ＨＣｌで再び酸性化し、氷浴中で冷却した。
無水硫酸ナトリウムを用いて、生成物を水溶液から繰り返し抽出し、真空下で溶媒除去し、固形生成物を得、酢酸エチル／ｎ−ヘキサン混合物でそれを結晶化し、乾固させて５．５ｇの酸１ａを得た（収率３３％）。
Ｍ．Ｐ．：１４１−１４４℃
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：３．５５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2ＣＯＯＨ）；３．８３（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；３．９（３Ｈ，ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．９５−７．２（３Ｈ，ｍ，Ａｒ）；７．８（１Ｈ，ｓ，ＣＨ＝Ｃ）
【００５４】
ｂ）（Ｒ，Ｓ）−４−（６−メトキシ−７−フルオロフェニル）−３−カルボメトキシブタン酸２ａの調製
２ｇ（０．００７５モル）の４−（６−メトキシ−７−フルオロフェニル）−３−カルボメトキシ−３−ブタン酸を８０ｍＬの酢酸エチル中に溶解し、次いで、Ｐａｒｒ装置中、２００ｍｇの炭上のパラジウムを用い、５．５ｐ．ｓ．ｉ水素圧で１．５時間水素化した。溶液をセライトでろ過し、触媒および溶媒を真空下で除去して、１．９ｇの油状物を得、それは自然に結晶化した（収率９３％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian２００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．３−２．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．５−２．７５（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＯＯＨ）；２．８−３．１（２Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2）；３．６（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；３．８（３Ｈ，ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．７５−６．９（３Ｈ，ｍ，Ａｒ）
【００５５】
ｃ）（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−４−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸エチルエステル３ａの調製
５．６ｇ（０．０２１モル）の（Ｒ，Ｓ）−４−（６−メトキシ−７−フルオロフェニル）−３−カルボメトキシ−ブタン酸２ａを１００ｍＬの無水塩化メチレン中に溶解し；５ｇ（０．０２４モル）の５塩化リンを加え、温度を０℃で４５分間維持した。温度を−１０℃にし、３．６ｇ（０．０２７モル）の塩化アルミニウムを溶液に加え；温度を２０℃に４０分で上昇させ、次いで、溶液を還流温度に１時間加熱した。
【００５６】
溶媒を真空下で蒸発させ；１００ｍＬの冷水を懸濁液に加え、酢酸エチル１５０ｍＬで３回抽出し；有機溶液を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を真空下で除去して、４．３ｇの固形生成物を得た（収率８１％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian２００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：２．３−２．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．５−２．７５（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＯＯＨ）；２．８−３．１（２Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2）；３．６（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；３．８（３Ｈ，ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．７５−６．９（３Ｈ，ｍ，Ａｒ）
【００５７】
ｄ）（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸メチルエステル４ａの調製
６ｇ（０．０２４モル）の（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−４−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸エチルエステル３ａを無水メタノールおよび氷酢酸５０ｍＬからなる１００ｍＬの混合液中に溶解し；溶液をＰａｒｒ装置中に８００ｍｇの炭上のパラジウムと一緒に５０ｐ．ｓ．ｉ水素圧で４時間置いた。
触媒をセライトでろ過し、溶媒を真空下で除去し、５．５ｇの固形生成物を得た（収率９８％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．７５−１．９（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．１−２．２２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．６−２．８（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＣＯＯＣＨ3，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．９（２Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；３．８３（３Ｈ，ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．６２（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；６．７８（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）
【００５８】
ｅ）（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸５ａの調製
５．２ｇ（０．０２２モル）の（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸４ａを５０ｍＬの５０％メタノール水溶液中２．２ｇの炭酸カリウムからなる溶液中に懸濁し；得られた溶液を１時間還流した。
メタノールを真空下で除去し、溶液を１５０ｍＬの水で希釈し、エチルエーテルで洗浄し；水溶液を１２Ｎ ＨＣｌで酸性化した。
このように得られた沈殿をろ過し、乾燥させて、４．８ｇの生成物を得た（収率９７％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．８−１．９５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．１−２．２５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．６５−２．８５（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＣＯＯＣＨ3，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．９５（２Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．８２（３Ｈ，ｓ，ＰｈＯＣＨ3）；６．６（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）；６．８（１Ｈ，ｄ，Ａｒ）
【００５９】
ｆ）（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−メトキシ−７−フルオロテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６２）６ａの調製
４．１１ｇ（０．０１８モル）の（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸５ａを９ｍＬの塩化チオニル中に窒素雰囲気下で溶解し、溶液を６０℃に４時間加熱し；次いで、トルエンを加え、真空下で溶液を繰り返し抽出した。
緑色の油状物を得、それを１２ｍＬの無水アセトン中に溶解し、１２ｍＬの水中におけるアジ化ナトリウム１．７５ｇ（０．０２４モル）の溶液に滴下し、反応混合物を０℃に冷却した。
【００６０】
混合物を攪拌下で３０分間反応させ、温度が２０℃まで上昇した。混合物を再び０−５℃に冷却し、１５０ｍＬの水を加えた。
このように得られた沈殿を真空下で乾固させ、３．９ｇの酸アジドを得た。
このように得られた生成物を１２ｍＬのトルエン中に溶解し、１００℃に３０分間加熱し；溶媒を除去し、濃厚な油状物を得、それに１０ｍLの無水ベンジルアルコールを加え、その後、溶液を再び１００℃で６時間加熱した。
溶液を５℃に一晩冷却し；次いで、このように得られた沈殿をろ過し、乾固させ、４．７ｇのカルボベンゾキシ誘導体を得た。
【００６１】
生成物を３５０ｍＬの無水エタノール中に入れ、わずかに加熱して溶解させ、約２ｍＬの濃ＨＣｌで酸性化し；５００ｍｇの炭上のパラジウムを加え、このように得られた混合物をＰａｒｒ装置中に置き、５０ｐ．ｓ．ｉ．水素圧で５時間水素化した。
触媒をセライトでろ過し、熱エタノールで繰り返し洗浄し；溶媒を真空下で除去し、このように得られた固形物をエタノール／エチルエーテル混合物を用いて結晶化させた（収率５８％）。
Ｍ．Ｐ．：２３０℃で分解
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ6）、Varian３００ＭＨｚ、δ（ｐ．ｐ．ｍ．）：１．６−１．８（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．０−２．２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．６−３．０（４Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2，ＰｈＣＨ2ＣＨＮ+）；３．８（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ3）；６．８−７．０（２Ｈ，２ｄ，Ａｒ）
【００６２】
実施例６（スキーム２ｇ）
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−ヒドロキシ−７−フルオロテトラリン塩酸塩（ＳＴ １２６７）７の調製
０．６ｇ（０．００２６ｍｏｌｅｓ）の（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−メトキシ−７−フルオロテトラリン塩酸塩６ａを８ｍｌの水中の臭化水素酸（４７％）溶液に懸濁し、ついで、１３０℃で一晩加熱した。
減圧蒸発により水分を除去し、暗色個体を得て、５０％メタノール水溶液に溶解し、塩基性型として活性化された２０ｍｌのＡ−２１樹脂カラムに通した。
溶出液を３Ｎ塩酸でｐＨ２とし、減圧濃縮し、塩酸塩型として活性化された２０ｍｌのＡ−２１樹脂カラムに通した。
溶媒を完全に減圧除去した。
かくして得られた固体をアセトンで処理し、濾別し、エチルエーテルを添加することによりメタノールから結晶化させて、３５０ｍｇの生成物を得た（収率６２％）。
融点：約２００℃で分解。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）、Varian ３００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：１．７〜１．９（１，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．１〜２．３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．７〜３．１（４Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2；ＰｈＣＨ2ＣＨＮ+）；３．４０３．６（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ+）；６．６〜６．８５（２Ｈ，２ｄ，Ａｒ）。
【００６３】
実施例７（スキーム２）
（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−メチル−７−アセチルテトラリン塩酸塩（ＳＴ１２７４）１０の調製
ａ）４−（６−メチルフェニル）−３−カルボメトキシ−３−酪酸１ｂの調製
ｐ−トルアルデヒドを出発物質として用い、３時間還流させ、シクロヘキサン／酢酸エチル混合物を結晶化溶媒として用い、４−（６−メトキシ−７−フルオロフェニル）−３−カルボメトキシ−３−酪酸１ａの場合と基本的に同様の方法で調製する（収率２７％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ２００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：２．３５（３Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；３．５８（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2ＣＯＯＨ）；３．８３（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；７．１５〜７．３（４Ｈ，ｍ，Ａｒ）；７．８７（１Ｈ，ｓ，ＣＨ＝Ｃ）。
ｂ）４−（６−メチルフェニル）−３−カルボメトキシ−３−酪酸２ｂの調製
酸１ｂを出発物質として用い、水素添加時間を２．５時間とし、４−（６−メトキシ−７−フルオロフェニル）−３−カルボメトキシ−３−酪酸２ａの場合と基本的に同様の方法で調製する（収率９４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ２００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：２．２３（１Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．２８〜２．４５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．５５〜２．７５（２Ｈ，ｍ，ＣＨ2ＣＯＯＨ）；２．９〜３．１（２Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2）；３．６２（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；６．９〜７．１（４Ｈ，ｍ，Ａｒ）
ｃ）（Ｒ，Ｓ）−６−メチル−４−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸メチルエステル３ｂの調製
酸２ｂを出発物質として用い、（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−４−オキソ−１，２，３，４−テトラヒドロフラン−２−ナフトエ酸メチルエステル３ａの場合と基本的に同様の方法で調製する（収率９４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ２００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：２．３５（３Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．７〜２．９（２Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2）；３．１〜３．２（３，ｍ，ＰｈＣＯＣＨ2，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；３．７（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；７．１〜７．３５（２Ｈ，ｍ，Ａｒ）；７．８（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）
ｄ）（Ｒ，Ｓ）−６−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸メチルエステル４ｂの調製
メチルエステル３ｂを出発物質として用い、（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸メチルエステル４ａの場合と基本的に同様の方法で調製する（収率９４％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ２００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：
１．７〜１．９５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＣＣｌ3）；２．１〜２．３（ＣＨＨＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．３（３Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．６〜２．８５（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＣＯＯＣＨ3，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．９〜３．０（２Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．７２（３Ｈ，ｓ，ＣＯＯＣＨ3）；６．８５〜７．１（３Ｈ，ｍ，Ａｒ）
ｈ）（Ｒ，Ｓ）−６−メチル−７−アセチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸メチルエステル８の調製
３．８ｇ（０．０１８６ｍｏｌｅｓ）の（Ｒ，Ｓ）−６−メチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸メチルエステル４ｂを３０ｍｌの塩化メチレンに溶解し、窒素雰囲気下で５℃に冷却された溶液に５．２ｇの塩化アルミニウムを添加し、ついで、同じ温度で撹拌しながら１．６ｍｌの塩化アセチルを滴下した。
反応混合物を室温で放置して１．５時間反応させ、ついで、１００ｍｌの冷水を、撹拌しながらきわめてゆっくりと添加することにより混合物を冷却した。合計１００ｍｌの塩化メチレンで繰り返し抽出し、冷水で繰り返し洗浄した。
有機相を無水硫酸ナトリウムで脱水し、溶媒を減圧除去して暗色固体を得て、これを乾燥させて３．８ｇの粗生成物を得て、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル ８：２を溶媒として用いるシリカゲルカラムクロマトグラフィー（５０ｍｌ）により精製した。
溶媒を減圧除去して１．８ｇの生成物を得た（収率４０％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ３００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：
１．７８〜２．０（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＣＯＯＣＨ3）；２．１〜２．３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．４５（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）；２．５５（３Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．６５〜２．８５（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＣＯＯＣＨ3，ＣＨＣＯＯＣＨ3）；２．９５（２Ｈ，ｄ，ＣＨ2ＣＨ２）；６．９５（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）；７．４５（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）
ｉ）（Ｒ，Ｓ）−６−メチル−７−アセチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸９の調製
メチルエステル８を出発物質として用い、反応物を１。５時間還流温度に置き、ｎ−ヘキサン／酢酸エチルを結晶化溶媒として用い、（Ｒ，Ｓ）−６−メトキシ−７−フルオロ−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸５の場合と基本的に同様の方法により調製する（収率８２％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ３００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：
２．７８〜２．９２（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＨ）；２．１〜２．２５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＣＯＯＨ）；２．４（３Ｈ，ｓ，ＣＯＣＨ3）；２．５（３Ｈ，ｓ，ＰｈＣＨ3）；２．７〜２．９（３Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＣＯＯＨ，ＣＨＣＯＯＨ）；２．９〜３．０（２Ｈ，ｄ，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；６．９（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）；７．４（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）
ｌ）（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−メチル−７−アセチルテトラリン塩酸塩（ＳＴ１２７４）１０の調製
６．５ｇ（０．０２８ｍｏｌｅｓ）の（Ｒ，Ｓ）−６−メチル−７−アセチル−１，２，３，４−テトラヒドロ−２−ナフトエ酸９を４０ｍｌの無水アセトンに溶解し、４．３ｍｌ（０．０３０７ｍｏｌｅｓ）のトリエチルアミンを懸濁液にゆっくりと滴下した。溶液温度を−５℃とし、４ｍｌのアセトンに溶解した２．９５ｍｌ（０．０３０７ｍｏｌｅｓ）のエチル−クロロホルミネートをゆっくりと滴下した。
８０ｍｌの水に溶解した３．６５ｇ（０．０５６ｍｏｌｅｓ）のアジ化ナトリウムを、溶液温度を０℃に維持しながら溶液に滴下し、かくして得られた混合物を撹拌しながら０℃に１時間保持し、沈殿を得た。さらに８０ｍｌの冷水を添加後、溶液を１００ｍｌのトルエンで抽出し、有機溶液を無水硫酸ナトリウムで脱水した。
１００℃に加熱された３０ｍｌのトルエンに溶液を添加し、さらに１．５時間１００℃に維持した。
溶媒を減圧蒸発させて４．９ｇの濃密でわずかに着色した油状物質を得て、これを５０ｍｌの８Ｎ ＨＣｌに懸濁し、撹拌しながら１００℃に１．５時間維持した。
溶媒を減圧除去し、ついで、１００ｍｌの水を添加し、アイスバスにて冷却し、撹拌しながら４Ｎ炭酸ナトリウムを用いて懸濁液をｐＨ１０とした。
水溶液を少量ずつに分け、１２０ｍｌのエチルエーテルで抽出した。有機相を無水硫酸ナトリウムで脱水し、塩化水素ガスをエーテル溶液に吹き込んだ。
得られた沈殿を減圧下で濾別し、風乾して２．３ｇのわずかに着色した固体を得て、酢酸エチル／メタノール混合物から結晶化させた。
固体をオーブンで乾燥させて２ｇの無色結晶生成物を得た（収率３０％）。
融点：１９５〜１９７℃で分解
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；Varian ３００ＭＨｚ，δ（ｐｐｍ）：
１．７５〜１．８５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．１５〜２．３（１Ｈ，ｍ，ＣＨＨＣＨＮ+）；２．４２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3ＣＯ）；２．５３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3Ｐｈ）；２．８〜３．０（４Ｈ，ｍ，ＰｈＣＨ2ＣＨＮ+，ＰｈＣＨ2ＣＨ2）；３．５〜３．６５（１Ｈ，ｍ，ＣＨＮ+）；７．０５（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）；７．６（１Ｈ，ｓ，Ａｒ）
【００６４】
臨床前研究において敗血性ショックにおける可能な防御的効果を評価する目的で最も広く使用される方法論的アプローチは、実験動物に直接注射された毒性物質あるいは動物に接種された感染細胞により大量に放出される毒性物質での実験的な興奮モデルを使用することである。
【００６５】
以下の薬理学的試験の説明は、本発明のいくつかの化合物により得られた結果を、対照化合物（Ｒ，Ｓ）−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン塩酸塩（ＳＴ６２６）と比較して示す。
上述のごとく、化合物ＳＴ６２６は既知化合物であり、構造的に本発明と類似であり、類似の薬理学的活性を有する。
これらの結果は、本発明化合物の予防的および治療的効果を示し、本発明化合物の好ましい薬理学的プロファイル、すなわち、炎症性サイトカイン（ＴＮＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＩＦＮ−γ）のレベルの劇的低下に関する考えられる作用機構も示す。
【００６６】
ネズミの敗血性ショックにおけるＳＴ１２３８、ＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５の効果についての評価
約６週齢のオスのＢＡＬＢ／Ｃマウス（C. River)を使用した（１実験群につき１０匹）。
２２±２℃、相対湿度５０±１５％のケージで、明るい時間（午前７時〜午後７時）および１２時間の暗い時間として、飼育された動物に、エサおよび飲料水を制限なく与えた。
使用物質は：ＬＰＳ（Escherichia coliセロタイプＯ２６：Ｂ６）バッチ７３５７０（Difco）、ＬＰＳ（Salmonella typhosa）バッチ８１Ｈ４０１８（Sigma）、ＳＥＢ（Staphylococcus aureus）バッチ１４４Ｈ４０２４（Sigma）、およびＤ−ガラクトサミンバッチ０３１ＥＥ００２４８５（Merck）であった。
試験化合物はＳＴ１２３８、ＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５であった。
必要な場合には、０．１Ｎ ＮａＯＨを用いて化合物溶液のｐＨを修正して（溶液を撹拌し冷却しながら）ｐＨ５．５よりも低くならないようにした。
【００６７】
エス・チフォサ（S. typhosa）ＬＰＳにより誘発される致死性
動物にエス・チフォサＬＰＳを腹腔内（ｉ．ｐ．）注射した。使用前に、エンドトキシンを滅菌セイラインに溶解し、ついで、２００μｌの体積（２７．０ｍｇ／ｋｇ、ほぼＬＤ80に相当）を注射した。
エンドトキシ（ＬＰＳ）での攻撃３０分前および５分後に体積２００μＬのセイライン溶液として試験化合物を静脈注射した（ＬＤ50のほぼ１／１０に相当）。
【００６８】
Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてイー・コリ（E. coli）ＬＰＳにより誘発される致死性
Ｄ−ガラクトサミン（１０００ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で動物を感作し、同時に全体積２００μｌのイー・コリＬＰＳ（０．３０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で処理した。
使用ＬＰＳ量は、Ｄ−ガラクトサミンで感作された動物のＬＤ50のほぼ１／１０に相当した。
ＬＰＳでの攻撃の３０分前および５分前、ならびに５分後および３０分後に、ＬＤ50のほぼ１／１０に相当する体積２００μｌの滅菌セイライン中の試験化合物を静脈注射した。
【００６９】
Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてＳＥＢ（Staphylococcus aureus）により誘発される致死性
Ｄ−ガラクトサミン（１０００〜１５００ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で動物を感作し、同時に、全体積２００μｌのエンテロトキシンＳＥＢ（３ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で処理した。ほぼＬＤ80に相当する使用ＳＥＢ用量を予備試験により調べておいた。
ＳＥＢでの攻撃の３０分前および５分前、ならびに５分後および３０分後に、試験化合物を滅菌セイライン中２００μｌの体積として静脈注射（ｉ．ｖ．）し、その用量はＬＤ50のほぼ１／１０に相当した。
すべての実験において１０日間にわたり毎日生存率を評価し、各動物が死亡した日を記録した。
one-tailed Fisher's extract testを用いて防御効果の統計学的有意さを評価した。
【００７０】
エス・チフォサＬＰＳでのエンドトキシンショックに関するこの実験モデルにおいて、攻撃前および後に投与した場合、化合物ＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５は致死性を有意に低下させた（それぞれｐ＜０．０１およびｐ＜０．０５）（表１）。
【００７１】
表１  エス・チフォサＬＰＳ注射により誘発された致死性に対するＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５の静脈投与の効果
攻撃前／後スケジュール（−３０分および＋５分）
0004181301.tif 000006
【００７２】
Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるイー・コリＬＰＳにより誘発される致死性
化合物ＳＴ１２３８は、適用したいずれの一時的処置プロトコールにおいても致死性を有意に低下させたが（ｐ＜０．００１およびｐ＜０．０１）（表２および３）、化合物ＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５は、攻撃前および後に投与するプロトコールにおいてのみ有意でない生存率の上昇パーセンテージ（２０％）を示した（表２）。
【００７３】
表２  Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてイー・コリＬＰＳ注射により誘発される致死性に対するＳＴ１２３８、ＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５の効果。攻撃前および後の処置スケジュール（−３０分および＋５分）。
0004181301.tif 000007
【００７４】
表３  Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてイー・コリＬＰＳ注射により誘発される致死性に対するＳＴ１２３８の効果。攻撃後のみの処置スケジュール（＋５分および＋３０分）。
0004181301.tif 000008
【００７５】
Ｄ−ガラクトシダーゼで感作されたマウスにおいてＳＥＢ（スタフィロコッカス・アウレウス）により誘発される致死性
この実験モデルを用いると、対照と比較した場合、すべての化合物は、攻撃３０分前および５分後に投与した場合、致死性を低下させた（７０〜９０％）（表４）。ＳＴ１２３８は、攻撃前のみの処置スケジュールにおいてさえも、極めて有意な防御効果を有している（ｐ＜０．００１）（表５）。
【００７６】
表４  Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいて、ＳＥＢ由来のＬＰＳを注射することにより誘発される致死性に対するＳＴ１２３８、ＳＴ１２７４およびＳＴ１２７５の静脈投与の効果
攻撃前および後の処置スケジュール（−３０分および＋５分）。
0004181301.tif 000009
【００７７】
表５  Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいて、ＳＥＢ由来のＬＰＳを注射することにより誘発される致死性に対するＳＴ１２３８の静脈投与の効果
攻撃後のみの処置スケジュール（＋５分および＋３０分）。
0004181301.tif 000010
【００７８】
ラット血液培養における、ＬＰＳにより誘発される血清ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）レベルに対するＳＴ１２３８の影響の評価
ＬＰＳにより刺激された全血細胞の培養物を実験モデルとして使用した。一定の制限があるにもかかわらず、このモデルは、グラム陰性細菌がリポ多糖を血流中に放出することによりそれが免疫細胞と接触するというエンドトキシン血症の生理病理学的様相を模倣する。
実際、このモデルは、最近になって、ＴＮＦおよびＩＬ−１の放出に対する潜在的阻害剤の評価に適用された（GC Rice et al., Shock, 4: 254-266, 1994; AJH Gearing et al., Nature, 370: 555-557, 1994; K. Tschaikowsky, Biochim. Biophys. Acta, 1222: 113-121, 1994; A. Haziot et al., J. Immunol., 152: 5868-5876, 1994）。
体重約１７５〜２００ｇのオスのWhistarラット（C. River）を使用した。
２２±２℃、相対湿度５０±１５％のケージで、明るい時間（午前７時〜午後７時）および１２時間の暗い時間として、飼育された動物に、エサおよび飲料水を制限なく与えた。
試験化合物はＳＴ１２３８であった。
使用エンドトキシンはSalmonella typhosa由来のＬＰＳバッチ８１Ｈ４０１８（Sigma）であった。
【００７９】
血液試料の処理
切頭法により屠殺したWhistarラットから、ヘパリン処理血液試料、０．４５０ｍｌ／バイアルを得た。
５％ ＣＯ2の加湿雰囲気下、３７℃で１時間インキュベーションしておいた試料に０．０２５ｍｌ（sol 20x）のサルモネラ・チフォサＬＰＳ（最終濃度１μｇ／ｍｌに等しい）を添加した。
試料を同じ条件下で４時間インキュベーションし、ついで、１００００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ＴＮＦアッセイ用に上清を−８０℃で保存した。
１％ ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ培地中でＴＮＦ生物学的活性を調べた。
【００８０】
ＴＮＦ生物学的アッセイ
ＴＮＦアッセイ用に、ＴＮＦを含有する試料の系列希釈を行って、Primaria９６−ウェルマイクロタイタープレートに直接入れた（５０μｌ）。１％ ＦＣＳを添加したＲＰＭＩ中に調製された最終濃度４μｇ／ｍｌのアクチノマイシンＤ（５０μｌ）をウェルに添加した。この阻害剤はＴＮＦに対する細胞の感受性を高める。
１００μｌのＬ９２９（ＴＮＦの毒性作用に対して感受性のあるネズミ線維肉腫）の懸濁液（４ｘ１０5個／ｍｌに標準化）を各ウェルに分配した。適切な対照、すなわち、アクチノマイシンＤ対照（細胞＋アクチノマイシンＤ、ＴＮＦ不含）および細胞対照（細胞＋培地のみ）も調製した。
５％ ＣＯ2雰囲気下、３７℃でさらに１８時間インキュベーションした後、後で説明する方法に従って新たに調製した１ｍｇ／ｍｌ ＸＴＴ（３’−［１−［（フェニルアミノ）−カルボニル］−３，４−テトラゾリウム］−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸ナトリウム水和物）および１２５μＭ ＰＭＳ（フェナジンメトサルフェート）の溶液で細胞を染色した。
ＸＴＴを６０℃のＲＰＭＩ培地に溶解する（１ｍｇ／ｍｌ）。
ＰＭＳをＰＢＳに溶解し、ついで、短時間超音波処理してＰＭＳを完全に溶解させることによりＰＭＳ母液１００ｍＭ（暗所において４℃で約２０日間安定）を調製する。ついで、１００ｍＭ ＰＭＳ溶液をＸＴＴ中に１：８００に希釈し、ＰＭＳ中最終濃度１２５μＭおよびＸＴＴ中１ｍｇ／ｍｌとする。染色混合物は使用前に濾過しなくてはならない。
５０μＬ／ウェルのＸＴＴ−ＰＭＳ染色溶液を添加して、最終体積２５０μＬ／ウェルとし、それぞれの最終濃度をＸＴＴ中０．２ｍｇ／ｍｌおよびＰＭＳ中２５μＭとすることにより細胞を染色した。２００μＬの培養物＋５０μＬのＸＴＴ−ＰＭＳ溶液を含む「ブランク」もウェル中に調製した。
マイクロタイタープレートを、５％ ＣＯ2雰囲気下、３７℃で２〜２．５時間インキュベーションする（合計のインキュベーション時間＝約２０時間）。
各試料の吸光度をマイクロタイタープレートリーダーで波長４５０ｎｍおよび対照波長６２０ｎｍにおいて読んだ（マイクロタイタープレートリーダーをプログラムして試料の値から「ブランク」の値を差し引くようにした）。
以下の方法を用いてＴＮＦ力価を計算した。
生物学的活性１ユニットは、アクチノマイシン−Ｄの吸光度の最大値の半分の値（＝５０％）により与えられるものと定義する。
試料希釈率により吸光度値曲線が得られ、その直線部分は等式ｙ＝ａｘ ＋ ｂにより表される。
ａおよびｂの値（コンピューターによる最小二乗法により得られる）を挿入し、アクチノマイシン−Ｄ対照の最大ちの半分の値（１生物学ユニットに相当）をｙに代入して、ｘについて等式を解くと、試料希釈率の逆数が得られる。
得られた値がＴＮＦ力価（ユニット／ｍｌ）である。
Two-tailed Student's testを用いてデータを統計学的に分析した。
【００８１】
結果
得られた結果（表６）によれば、化合物ＳＴ １２３８は、ＬＰＳで刺激されたラット血液培養物によるＴＮＦ産生を減少（３９％）させることが示される。
【００８２】
表６  エス・チフォサＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）で刺激されたラット血液培養物（ｎ＝５）において誘導されるＴＮＦ産生に対するＳＴ １２３８の影響
化合物濃度５０μＭとして試験した。実験条件は材料および方法に記載のものである。
0004181301.tif 000011
【００８３】
２種のネズミショックモデルにおける血清ＴＮＦレベルに対するＳＴ １２３８の影響の評価
約６週齢のオスのＢＡＬＢ／ｃマウス（C. River）を使用した（１実験群あたり１０匹）。
２２±２℃、相対湿度５０±１５％のケージで、明るい時間（午前７時〜午後７時）および１２時間の暗い時間として、飼育された動物に、エサおよび飲料水を制限なく与えた。
試験化合物はＳＴ１２３８であった。
使用物質は：ＬＰＳ（Escherichia coliセロタイプＯ２６：Ｂ６）バッチ７３５７０（Difco）、ＬＰＳ（Salmonella typhosa）バッチ８１Ｈ４０１８（Sigma）、ＳＥＢ（Staphylococcus aureus）バッチ１４４Ｈ４０２４（Sigma）、およびＤ−ガラクトサミンバッチ０３１ＥＥ００２４８５（Merck）であった。
【００８４】
Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてイー・コリＬＰＳにより誘発される致死性
実験条件はすでに説明したものと全く同じであった。
【００８５】
ＳＥＢ（スタフィロコッカス・アウレウス）により誘導される致死性
実験条件はすでに説明したものと全く同じであった。
【００８６】
血液試料
両方の実験モデルにおいて、攻撃９０分後（ピーク血清ＴＮＦレベル）に血液試料を採取した。
エーテル麻酔したマウスから、眼窩後部に穿刺することにより採血した。
血液試料を室温で２時間インキュベーションし、かくして得られた血清を３０００ｒｐｍで２０分遠心分離し、ＴＮＦアッセイまで−８０℃で保存した。
【００８７】
ＴＮＦ生物学的アッセイ
ＴＮＦ生物学的活性を、１％ ＦＣＳ含有ＲＰＭＩ培地中で測定した。
５０μｌ／ウェルのＴＮＦ含有試料の系列希釈物をPharmaciaのマイクロタイタープレートに直接添加した。
実験条件は上記条件と同じであった。
One-tailed Student's testを用いてデータを統計学的に分析した。
【００８８】
結果
Ｄ−カラクトサミンで感作されたマウスにおいてイー・コリＬＰＳにより誘発された致死性
この実験モデルにおいて得られた結果を表７に示す。化合物ＳＴ１２３８は、両方の処置スケジュール（攻撃前／後および攻撃後のみ；それぞれｐ＜０．００８およびｐ＜０．０００１）を用いてイー・コリＬＰＳにより誘導されたＴＮＦレベルを有意に低下させた。
【００８９】
表７  Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるイー・コリＬＰＳ注射によるＴＮＦ産生に対するＳＴ１２３８静脈投与（１８ｍｇ／ｋｇ）の影響
攻撃前／後の処置スケジュール（−３０および＋５分）および攻撃後のみの処置スケジュール（＋５および＋３０分）
0004181301.tif 000012
【００９０】
Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてエンテロトキシンＳＥＢにより誘発された致死性
Ｄ−ガラクトサミンで換算された動物においてＳＥＢエンテロトキシン由来のＬＰＳにより誘導されたＴＮＦ産生についての、この実験モデルにおいて得られた結果（表８）は、化合物ＳＴ１２３８が、攻撃前／後のスケジュール（ｐ＜０．０００１）および攻撃後のみのスケジュール（ｐ＜０．０００２）の両方によるＴＮＦ産生を有意に抑制することを示す。
【００９１】
表８  Ｄ−ガラクトサミンで換算されたマウスにおけるＳＥＢ由来のＬＰＳにより誘導されたＴＮＦ産生に対するＳＴ１２３８静脈投与（１８ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｖ．）の影響
攻撃前／後の処置スケジュール（−３０および＋５分）および攻撃後のみの処置スケジュール（＋５および＋３０分）
0004181301.tif 000013
【００９２】
マウスにおいてエンテロトキシンＳＥＢにより誘導された血清インターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）およびインターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）に対するＳＴ１２３８の影響についての評価
約６週齢のオスのＢＡＬＢ／ｃマウス（C. River）を使用した（１実験群あたり１０匹）。
２２±２℃、相対湿度５０±１５％のケージで、明るい時間（午前７時〜午後７時）および１２時間の暗い時間として、飼育された動物に、エサおよび飲料水を制限なく与えた。
試験化合物はＳＴ１２３８であった。
使用物質は：ＳＥＢ（スタフィロコッカス・アウレウス）由来のＬＰＳバッチ１４４Ｈ４０２４（Sigma）およびＤ−ガラクトサミンバッチ０３１ＥＥ００２４８５（Merck）であった。
Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてエス・アウレウスのＳＥＢにより致死性が誘導された。
実験条件は上記のものと全く同じであった。
【００９３】
血液試料
ＩＬ−６については攻撃２時間後、ＩＬ−１βについては攻撃４時間後、ＩＦＮ−ｇについては攻撃６時間後に血液試料を採取した。
エーテル麻酔したマウスの眼窩後部を穿刺することにより採血した。血液試料を室温で２時間インキュベーションし、かくして得られた血清を３０００ｒｐｍで２０分遠心分離し、アッセイするまで−８０℃で保存した。
【００９４】
生物学的試験
使用した個々のアッセイキットに示された手順に従って生物学的試験を行った：
マウスＩＬ−１βイムノアッセイ（MLB00.R&D Systems）
マウスＩＬ−６ＥＩＡ Ｋｉｔ（8-6706,PerSeptive Diagnostics）
マウスＩＦＮ−γ ＥＩＡ Ｋｉｔ（8-6716,PerSeptive Diagnostics）
one-tailed Student's testを用いてデータを統計学的に分析した。
【００９５】
結果化合物ＳＴ１２３８は炎症性サイトカインの産生を有意に抑制した（ＩＬ−１βについてｐ＜０．００１、ＩＬ−６についてｐ＜０．０００１、ＩＦＮ−γについてｐ＜０．０１）。得られた結果を表９に示す。
【００９６】
表９  Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおける、エス・アウレウスＳＥＢ由来のＬＰＳを用いる毒性モデルにおけるＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＩＦＮ−γ血清レベルに対するＳＴ１２３８（１９ｍｇ／ｋｇ、静脈注射）の影響
攻撃前／後の処置スケジュール（−３０および＋５分）。
0004181301.tif 000014