(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
0004151765.tif 000090
［式中、
Ｒ1は、式ＮＲ5Ｒ6（式中、Ｒ5およびＲ6は、独立して、Ｃ1-4アルキルおよび非置換アミノから成る群より選択される、但し、Ｒ5およびＲ6はともにアミノではないという条件付きである）によって表わされる置換アミノであり；
Ｒ2およびＲ3は、独立して、水素；Ｃ1-4アルキル；アミノ；および置換または非置換チオールから成る群より選択され；そして
Ｒ4は、場合により、１個またはそれ以上のヘテロ原子によって中断された且つ場合により、１個またはそれ以上の＝Ｏまたは＝Ｓによって置換された式（ＣＨ2）5-20−Ｘ12（式中、Ｘ12は、ヒドロキシ、アミノアルキル基、およびアミノ酸から成る群より選択される）を有する直鎖状炭素鎖から成る群より選択される］を有する化合物またはその製薬的に受容される塩。
【請求項２】
Ｒ4が（ＣＨ2）5-8−Ｘ12（式中、Ｘ12はＯＨである）である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ4が（ＣＨ2）−Ｌ−Ｏ−ＣＯ−Ｘ12（式中、Ｌは、場合により、１個またはそれ以上のＯまたはＳによって中断された直鎖状炭素鎖である）である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ12が（ＣＨ2）mＮＨ2（式中、ｍは１〜６の整数である）である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｍが２である請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘ12が、Ｄ−またはＬ−立体配置で天然に存在するアミノ酸である請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
前記アミノ酸が、アルギニン、グリシン、アラニン、グルタミン酸、バリン、オルニチン、またはシトルリンから成る群より選択される請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
前記アミノ酸がＤ−アルギニンである請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
前記アミノ酸がＬ−アルギニンである請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｌが、−（ＣＨ2）n−、−（ＣＨ2）m−Ｏ−（ＣＨ2）m−、−（ＣＨ2）m−Ｓ−（ＣＨ2）m−、および−（ＣＨ2）m−ＮＨ−（ＣＨ2）m−（式中、ｎは３〜６の整数であり、そしてｍは１〜３の整数である）から選択される請求項３に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1が、−Ｎ（ＣＨ3）2、−ＮＨＮＨ2、−ＮＨＣＨ3、−Ｎ（ＮＨ2）ＣＨ3から成る群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ2がＮＨ2である請求項１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ3がＳＨまたはＳＣＨ3である請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ1がＮ（ＣＨ3）2であり；Ｒ2およびＲ3が水素であり；そしてＲ4がペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニンまたはその製薬的に受容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
化合物＃Ｖ  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）ペンタノール；
化合物＃１  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃２  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃３ａ  Ｎ−（６−Ｎ−メチルアミノプリン−９−イル）ペンタノール；
化合物＃７  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃７ａ  Ｎ−（６−ヒドラジノプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃８  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃１４  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルグリシン；
化合物＃１５  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７′−エトキシエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃３７  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−シトルリン；
化合物＃４０  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−チオエトキシエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４８  Ｎ−（２−アミノ、６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃４９  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−メチルチオプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃５０  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−メチルチオプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃５４  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−オルニチン；
化合物＃５５  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｌ−オルニチン；
化合物＃５６  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｌ−バリン；
化合物＃５７  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−バリン；
化合物＃５８  Ｎ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニルエチルアミン塩酸塩；
化合物＃６３  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ブトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃６４  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ブトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃６６  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−６−ヘキサノール；
化合物＃６７  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−８−ヘキシルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃６８  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−８−ヘキシルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃７２  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−ペンチルアミン塩酸塩；
化合物＃７８  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃７９  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃８３  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−チオエトキシエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃８５  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシエタノール；
化合物＃８６  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；および
化合物＃８７  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
から成る群より選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
化合物＃Ｖ  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）ペンタノール；
化合物＃１  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃２  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃３ａ  Ｎ−（６−Ｎ−メチルアミノプリン−９−イル）ペンタノール；
化合物＃７  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃７ａ  Ｎ−（６−ヒドラジノプリン−９−イル）−５−ペンタノール；および
化合物＃８  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
から成る群より選択される請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
化合物＃１  Ｎ２−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニンである請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
薬学的に許容しうる量の請求項１、１５または１７に記載の化合物を含む、免疫不全症を治療するための薬剤組成物。
【請求項１９】
薬学的に許容しうる量の請求項１、１５または１７に記載の化合物を含む、ヒトを含めた哺乳動物において細胞障害性Ｔリンパ球の数を増加させるための薬剤組成物。
【請求項２０】
薬学的に許容しうる量の請求項１、１５または１７に記載の化合物を含む、ヒトを含めた哺乳動物における癌増殖を抑制するための薬剤組成物。
【請求項２１】
薬学的に許容しうる量の請求項１７に記載の化合物をシクロホスファミドとの組合わせで含む、ヒトを含めた哺乳動物における乳癌を抑制するための薬剤組成物。
【請求項２２】
請求項１、１５または１７に記載の化合物を５−フルオロウラシルとの組合わせで含む癌の治療用の薬剤組成物。
【請求項２３】
前記癌が結腸癌である請求項２２に記載の薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は置換プリニル化合物を含む。特に、本発明は６−置換プリニルアルコキシカルボニルアミノ酸化合物、より詳しくはアルギニン誘導体に関する。
発明の背景
免疫系の主要な機能は身体を疾患から保護することである。免疫系は細菌、ウイルス、その他の病原菌による作用に起因するような疾患からのみでなく、癌と、免疫不均衡、日和見性感染症又は自己免疫障害に起因する疾患状態とからも保護する。
薬剤的に誘導される刺激又は抑制による免疫系の調節は疾患の治療のための重要なアプローチを提供する。免疫系を非特異的に刺激する化合物は特に著しく医薬的に重要であり、長年にわたる研究努力の対象である。研究結果はしばしば、免疫調節化合物が弱い免疫刺激剤であって、このためあまり効果的でないか、又は強力な免疫刺激剤であって、このため効果的ではあるが、この強力な免疫刺激活性のために有害であるかのいずれかであることを示す。
免疫系を非特異的に刺激する多くの種類の化合物の中には、当該技術分野において周知のヌクレオシドが存在する。例えば、７−チア−８−オキソグアノシンはマウスにおける抗ウイルス剤としてＤ．Ｆ．Ｓｍｅｅ等によってＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ，９，２４〜３２，１９９０に述べられている。この化合物の活性はこの化合物が免疫系におけるＮＫ細胞とＢ細胞とを活性化して、インターフェロンを誘導することができることに由来する。しかし、Ｐ．Ｇ．Ｈｉｇｇｉｎｓ等によって，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２，６１〜６３，１９９１に報告されているような、その後の抗ウイルス研究は殆ど有望な結果を開示していない。１つの問題は経口による生体適合性の欠損であった。
改良された薬物を開発しようと試みて、他のヌクレオシドが合成され、研究されている。例えば、Ｄ．Ｆ．Ｓｍｅｅ等はＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，３５，１５２〜１５７，１９９１において、７−デアザグアノシンが経口投与後に重要な免疫刺激かつ抗ウイルス活性を有することを報告している。しかし、これらの結果は予備的である。多くのヌクレオシド化合物に関して、毒性は重要な問題であり、これも厳密に分析しなければならない。
特定の種類のヌクレオシド免疫刺激剤がイノシンと他の同様なヒポキサンチン含有化合物とから得られている。周知の例はイソプリノシン、イノシン含有複合体である。イソプリノシンは免疫調節剤として完全に研究されており、Ｃ．Ｄ．Ｓｉｍｏｎｅ等によってＴｈｙｍｕｓ，１９，５１〜５５，１９９２において“ゴールド  スタンダード（gold standard）”と呼ばれている。ヒポキサンチン（イノシン）含有化合物の活性に関する論理的根拠の一部は、アデノシンをイノシンに転化させる酵素であるアデノシンデアミナーゼの欠損が重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）を生じると言う観察から生じる。
イソプリノシンは全く無害であるが、効果的な免疫調節剤ではなく、これの免疫薬理学的性質を改良するために、Ｊ．Ｗ．Ｈａｄｄｅｎ等によって、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３，４９〜５４，１９９１（増補１）に報告されるように、多くの類似体が合成されている。特に、かれらはイノシン  ５’−モノホスフェート及びメチルイノシンモノホスフェート（ＭＩＭＰ）としてのプロドラッグを述べている（イノシンは、複合体化されないかぎり、殆どインビボ活性を有さない）。しかし、ＭＩＭＰはあまり活性な免疫調節剤ではない。
イソプリノシンの無毒性を維持するが、免疫刺激活性を強化しようと試みて、ペンタメチレン架橋によって共有結合した、ヒポキサンチンとアミノ酸Ｌ−アルギニンの両方を含む免疫調節剤を合成した。化合物，ＳＴ７８９（ヒポキサンチン  ペンチルオキシカルボニル  Ｌ−アルギニン、以前にはＰＣＦ３９）はＴｈｙｍｕｓの最新号，１９，Ｓ１〜Ｓ１１２（１９９２）に完全に述べられている。Ｌ−アルギニンは免疫活性化に役割を果たすことが知られ、例えばタフトシン、サブスタンスＰ、チモペンチン及びスプレノペンチンのような、多くの免疫調節ペプチドの末端に存在するので、Ｌ−アルギニンを選択した。ＳＴ７８９はヨーロッパ特許出願第＃９１８３０２８４号、公報第＃４６４，００９号（１９９２年１月２日発行）にさらに述べられている。天然生成Ｌ−アミノ酸から成るオリゴペプチドがＬ−アルギニンに置換したＳＴ７８９の類似体も、このヨーロッパ公報に述べられている。しかし、この分子のプリン塩基部分はヒポキサンチンのままである。
イソプリノシンとの免疫学的比較は行われなかったが、同様なパターンが現れた。これらの化合物は無毒性であるが、せいぜい、免疫刺激剤を調節するにすぎない。例えば、ＳＴ７８９又はその類似体が、例えば細胞毒性Ｔリンパ球（ＣＤＢ+Ｔ細胞）のような、重要な免疫細胞サブセットを刺激しうると言う証拠は存在しなかった。このサブセットはウイルス感染症及び癌からの身体の防御に重要な役割を果たす。
Ｐ．Ｃｏｒｎａｇｌｉａ−ＦｅｒｒａｒｉｓはＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３，１００５〜１０１２，１９９１にＳＴ７８９のさらに他の類似体を述べている。この発表された化合物では、Ｌ−アルギニンがボンベシンカルボキシ末端ジペプチドＬ−ロイシルＬ−メチオニンによって置換される。プリン塩基はヒポキサンチンのままである。実際に、プリン塩基がメチレン鎖によってアミノ酸又はオリゴペプチドに共有結合するこの種類の化合物では、ヒポキサンチン以外のプリン塩基を包含する化合物に関するデータが殆ど報告されていない。さらに、哺乳動物系における生理的に活性なアミノ酸の必要性のために、現在までに報告されている全ての研究が（中性）Ｌ−配置のアミノ酸を述べている。天然生成プリン塩基であるアデニン及びグアニンによるヒポキサンチンの置換についての簡単な説明の１つはＲ．Ｓｔｒａｄｉ等によって，Ｆ１．Ｆａｒｍａｃｏ，４５，３９〜４７，１９９０に報告されるが、重要な生理的活性については表示されていない。
上述したように、アデノシンデアミナーゼ（及び暗に、イノシン）は正常な免疫状態を維持するために必要である。それ故、１９９３年１２月２１日に発行された米国特許第５，２７２，１５１号では、Ｍ．Ｍａｒｚｉ等は、ＳＴ７８９においてヒポキサンチンをキサンチンオキシダーゼ阻害剤アロプリノールに置換することを報告している。この置換の結果、ＳＴ６８９（アロプリノールペンタノール）を生じる。この置換物は、イノシンがキサンチンに異化され、次に哺乳動物においてキサンチンオキシダーゼ酵素の存在下で尿酸に異化されるので、インビボにおいてイノシンの濃度を高めると期待される。しかし、米国特許第５，２７２，１５１号に報告されている免疫学的分析の大部分では、アロプリノールは免疫抑制性であることが認められ、ＳＴ６８９はＳＴ７８９よりも著しく大きく免疫刺激性ではなかった。
レバミゾールは悪性黒色腫に対して用いられる別の免疫調節剤である。悪性黒色腫のアジュバントレバミゾール療法を開始した後にラバミゾールが重大な血小板減少症を誘導することが現在発見されている［Ｍｅｄ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｏｎｃｏｌ．１９９５年４月，２４（４），２６２〜４］。
多くの免疫細胞サブセットを刺激する能力を有し、それによって著しい免疫調節活性を有するが、同時に毒性を欠いている化合物の必要性があることを、先行技術が示している。
発明の概要
本発明によると、インビトロとインビボの両方において有意な免疫刺激能力を有する化合物を提供する。
詳しくは、インビトロとインビボにおいて細胞毒性のＴ細胞の量を高める活性を有する化合物を提供する。
本発明の別の態様では、有意な毒性を有さず、特に、有意な又は強力な免疫刺激に付随した毒性を有さない免疫調節化合物を提供する。
本発明の別の態様では、天然の塩基ではないプリン誘導体を有する免疫調節化合物を提供する。
本発明の他の態様では、腫瘍増殖に対する抑制剤（control）として作用する化合物を提供する。
本発明は式（Ｉ）：
0004151765.tif 000002
で示される化合物又はその製薬的に受容される誘導体を包含する、上記式中、Ｒ1は水素；Ｃ1−Ｃ16アルキル；ハロゲン；置換又は非置換チオール；置換又は非置換アミノ；及びＯＲ8（式中、Ｒ8は水素、Ｃ1−Ｃ16アルキル、Ｃ1−Ｃ8アシル及びＣ7−Ｃ18アリールから成る群から選択される）から成る群から選択される；
Ｒ2とＲ3は水素；Ｃ1−Ｃ4アルキル；アミノ；置換又は非置換チオール；及びハロゲンから成る群から独立的に選択される；
Ｒ4は任意に１個以上のヘテロ原子によって中断され、任意に１個以上の＝Ｏ又は＝Ｓによって置換される式：（ＣＨ0-2）0-20−Ｘ12（式中、Ｘ12はヒドロキシ、アミノアルキル基、アミノ酸又は、２〜８アミノ酸のペプチドから成る群から選択される）で示される線状又は環状炭素鎖から成る群から選択される；
但し、Ｒ1がＮＨ2であり、Ｒ4がペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニンであるときに、Ｒ2は水素ではなく、Ｒ1がＯＨであり、Ｒ4がペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニンであるときに、Ｒ2はＮＨ2ではない。
本明細書では下記定義を用いる：本明細書で用いる“アルキル”なる用語は直鎖又は分枝鎖ラジカルの両方を意味し、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、ヘプチル、４，４−ジメチルペンチル、オクチル、２，２，４−トリメチルペンチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、これらの種々な分枝鎖異性体を意味する。鎖は飽和又は不飽和のいずれでもよく、例えば二重結合及び三重結合を含むことができる。アルキルは中断されることも、例えば１個以上のハロゲン、酸素、ヒドロキシ、シリル、アミノ、又は他の受容される置換基によって置換されることもできる。
本明細書で用いる“芳香環又は非芳香環”なる用語は、中断されない又は例えばＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ2及びＮのような１個以上のヘテロ原子によって中断された５員若しくは６員芳香環又は非芳香環を包含する、又はこれらの環は非置換であることも、例えばハロゲン、アルキル、アシル、ヒドロキシ、アリール及びアミノによって置換されることもでき、前記ヘテロ原子と置換基は例えばアルキル、アシル、アリール、アラルキルによって置換されることもできる。
本明細書で用いる“アシル”なる用語は、式−ＣＯＲ（式中、Ｒは例えばアルキル、アミノ、ハロゲン、チオール、酸素、ヒドロキシ、及び水素のような任意の置換基であることができる）で示されるカルボニル基を意味する。
本明細書で用いる“アリール”なる用語は、環部分が炭素数６〜１０である単環式又は二環式芳香族基、例えばフェニル、ナフチル、置換フェニル又は置換ナフチル（フェニル又はナフチルのいずれの置換基も例えばＣ1−Ｃ4アルキル、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、ヒドロキシ又はニトロであることができる）を意味する。
本明細書で用いる“アラルキル”なる用語は、アリール置換基を有する上記アルキル基、例えばベンジル、ｐ−ニトロベンジル、フェネチル、ジフェネチルメチル及びトリフェニルメチルを意味する。
本明細書で用いる“置換アミノ”なる用語は、例えばＣ1−Ｃ8アルキル、Ｃ1−Ｃ8アシル、Ｃ6−Ｃ12アリール、ヒドロキシ及び水素のような１個以上の置換基によって置換されうるアミノを意味する。
本明細書で用いる“アミノ酸”なる用語は、天然生成アミノ酸の全て、それらのＤ−及びＬ−配置であるようなアミノ酸、並びに例えばホモシステイン、オルニチン、ノルロイシン及びβ−アラニンのような、周知の非ネイティブ、合成及び修飾アミノ酸を包含し、網羅する。非天然アミノ酸のリストはＤ．Ｃ．ＲｏｂｅｒｔｓとＦ．Ｖｅｌｌａｃｃｉｏによる“Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，５巻，１９８３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，第６章に見いだすことができる。
本明細書で用いる場合の“線状又は環状”なる用語は、例えば、芳香環又は非芳香環によって任意に中断されることができる線状鎖を包含する。環状鎖は例えば該環の前又は後のいずれかに存在する炭素鎖に結合することができる、例えば芳香環又は非芳香環を包含する。
本明細書で用いる“製薬的に受容される誘導体”なる用語は、式Ｉ化合物の製薬的に受容される塩、エステル又はこのようなエステルの塩、或いはレシピエントへの投与時に式Ｉ化合物又はその活性代謝産物若しくは残基を直接又は間接に与えることができる任意の他の化合物を包含する。
【図面の簡単な説明】
図１はシクロホスファミド又は化合物＃１又は両方で治療されたマウスの腫瘍増殖の変化を説明する。
図２は図１と同じ方法（regimen）で治療されたマウスの体重変化を説明する。
図３はシトキサン又は化合物＃１又は両方で治療されたマウスの腫瘍量（tumorvolume）の変化を説明する。
図４は図３と同じ方法で治療されたマウスの体重変化を説明する。
図５は５ＦＵ、５ＦＵとラバミゾール、及び５ＦＵと化合物＃１によって治療されたマウスの腫瘍量の変化を説明する。
図６は高用量の化合物＃１で治療された雄Ｆｉｓｈｅｒラットの増殖曲線を説明する。
図７は高用量の化合物＃１で治療された雌Ｆｉｓｈｅｒラットの増殖曲線を説明する。
発明の説明
本発明の１態様では、式Ｉ［式中、Ｒ4は（ＣＨ0-2）1-8−Ｘ12であり、Ｘ12はＯＨである］で示される化合物を提供する。
本発明の他の態様では、式Ｉ［式中、Ｒ4は（ＣＨ2）−Ｌ−Ｏ−ＣＯ−Ｘ12であり、Ｌは１個以上のＯ、Ｓ又はＮＨで任意に中断される線状又は環状炭素鎖である］で示される化合物を提供する。
好ましくは、Ｘ12は（ＣＨ2）nＮＨ2であることができ、ｎは１〜６の整数である。より好ましくは、ｎは２である。
より好ましくは、Ｘ12はＤ−又はＬ−配置の天然生成アミノ酸であることができる。好ましくは、これらのアミノ酸はアルギニン、グリシン、アラニン、グルタミン酸、バリン、オルニチン又はシトルリン、又はこれらの保存置換体（conservative substitutions）から成る群から選択されることができる。
なお一層好ましくは、アミノ酸はＬ−アルギニンである。さらに一層好ましくは、アミノ酸はＤ−アルギニンである。
本発明の代替え実施態様では、Ｘ12は２〜８アミノ酸のペプチドであることができる。
好ましくは、このようなペプチドはＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ、又はＩｌｅ−Ｐｒｏ−Ｉｌｅ、又はこれらの保存置換体であることができる。
本発明の他の実施態様では、Ｌは−（ＣＨ2）n−、−（ＣＨ2）m−Ｈ−（ＣＨ2）m−及び（ＣＨ2）m−Ｃ≡Ｃ−（ＣＨ2）m−［式中、ＨはＯ、Ｓ又はＮＨであり、ｎは１〜６の整数であり、ｍは１〜３の整数である］から選択されることができる。
好ましくは、Ｌはフェニル、シクロヘキシル、ジオキソラニル、オキサチオラニル及びシクロペンチルから選択されることができる。
本発明の他の代替え実施態様（alternative）では、Ｒ1がＣ1−Ｃ16アルキルであるときに、Ｒ1は１個以上のヘテロ原子によって任意に中断され、及び１個以上のヘテロ原子、ヒドロキシ、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ16アルキル、Ｃ1−Ｃ16アシル、Ｃ6−Ｃ12アリール、ニトロ、又は置換若しくは非置換アミノによって任意に置換される芳香環又は非芳香環であることができる。
より好ましくは、Ｒ1はＯＨ、ＯＣＨ3、ＳＨ又はＳＣＨ3であることができる。
或いは、Ｒ1は水素、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ6アルキル、非置換又は置換アミノ、ＯＨ、及びＯＣ1−Ｃ6アルキル、ＳＨ又はＳＣ1−Ｃ6アルキルから成る群から選択されることができる。
好ましくは、Ｒ1はクロロであることができる。
或いは、Ｒ1は式ＮＲ5Ｒ6［式中、Ｒ5とＲ6は水素、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、Ｃ1−Ｃ4アシル、置換又は非置換アミノ、及びＣ6−Ｃ10アリールから成る群から独立的に選択される］によって示されることができる。
好ましくは、Ｒ1は下記要素：
0004151765.tif 000003
［式中、Ｒ20はＨ又はメチルである］
から成る群から選択されることができる。
さらにより好ましくは、Ｒ1は−Ｎ（ＣＨ3）2であることができる。さらにより好ましくは、Ｒ1は−ＮＨＮＨ2であるであることができる。さらにより好ましくは、Ｒ1は−ＮＨＣＨ3であることができる。さらにより好ましくは、Ｒ1は−ＮＨ2であるであることができ、さらに一層好ましくは、Ｒ1は−Ｎ（ＮＨ2）ＣＨ3であるであることができる。
最も好ましくは、Ｒ1は−Ｎ（ＣＨ3）2であることができる。
本発明の他の代替え実施態様では、Ｒ2とＲ3はＣｌ、Ｂｒ、Ｉ及びＦから成る群から独立的に選択されることができる。
好ましくは、Ｒ2とＲ3は独立的にＣｌ又はＢｒである。
より好ましくは、Ｒ2はＨ、Ｃｌ又はＮＨ2であることができる。
より好ましくは、Ｒ3はＨ、Ｂｒ、又はＳＨ若しくはＳＣＨ3であることができる。
最も好ましくは、本発明の化合物は式Ｉ［式中、Ｒ1はＮ（ＣＨ3）2であり；Ｒ2とＲ3は両方とも水素であり；Ｒ4はペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニンである］によって表される化合物又はその製薬的に受容される誘導体である。
本発明の好ましい化合物は下記化合物から選択される：
化合物＃ＩＩＩ  Ｎ−（６−クロロプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃Ｖ      Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−ペンタノール；
化合物＃１  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃２  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃３  Ｎ−モノメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃３ａ  Ｎ−（６−Ｎ−メチル−アミノプリン−９−イル）−ペンタノール；
化合物＃４  Ｎ−モノメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃５  アミノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃５ａ  Ｎ−（６−アミノプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃６  アミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃７  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃７ａ  Ｎ−（６−ヒドラジノプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃８  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃９  クロロプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃１０  クロロプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃１１  ヒドロキシプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃１２  メルカプトプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃１３  メルカプトプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃１４  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルグリシン；
化合物＃１５  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７’−エトキシ−エトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃１６  （２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−（メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）−１，３−ジオキソラン；
化合物＃１７  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−ブロモプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃１８  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−ブロモプリン−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃１９  Ｎ−９−プリニル−５−ペンタノール；
化合物＃２０  Ｎ−９−プリニル−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃２１  Ｎ−９−プリニル−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃２２  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−バリル  Ｌ−プロリル  Ｌ−ロイシン；
化合物＃２３  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−イソロイシル  Ｌ−プロリル  Ｌ−イソロイシン；
化合物＃２４  Ｎ−（６−シクロプロピルアミノプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃２５  Ｎ−（６−シクロプロピルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃２６  Ｎ−（６−シクロプロピルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃２７  Ｎ−（６−アゼチジンプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃２８  Ｎ−（６−アゼチジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃２９  Ｎ−（６−アゼチジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃３０  トランス−（Ｎ−６−クロロプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メタノール；
化合物＃３１  トランス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メタノール；
化合物＃３２  トランス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃３３  トランス−（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メタノール；
化合物＃３４  トランス−（Ｎ−６−メトキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メタノール；
化合物＃３５  シス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メタノール；
化合物＃３６  シス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃３７  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントオキシカルボニル−Ｄ−シトルリン；
化合物＃３８  Ｎ−（６−メチルアジリジンプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃３９  ラセミＮ−（６−メチルアジリジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４０  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリニル−９−イル）−７−チオエトキシ−エトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４１  メタ−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリニル−９−イル）−メチル−ベンジルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４２  ５−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリニル−９−イル）−３−ペンチニル−１−オキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４３  ラセミＮ−［６−（１−メチル−２−アセトキシ）−エチルアミノプリン−９−イル］−５−ペンタノール；
化合物＃４４  ラセミＮ−［６−（１−メチル−２−アセトキシ）エチルアミノプリン−９−イル］−７−ペンチルオキシ−カルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４５  Ｎ−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃４６  Ｎ−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃４７  Ｎ−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃４８  Ｎ−（２−アミノ，６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃４９  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−メチルチオプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃５０  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−メチルチオプリン−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃５１  Ｎ−（６−メトキシプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃５２  Ｎ−（６−メトキシプリン−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃５３  Ｎ−（２−クロロ−６−メトキシプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃５４  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｄ−オルニチン；
化合物＃５５  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｌ−オルニチン；
化合物＃５６  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｌ−バリン；
化合物＃５７  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−９−イル）７−ペントキシカルボニル−Ｄ−バリン；
化合物＃５８  Ｎ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニルエチルアミン塩酸塩；
化合物＃５９  Ｎ−（６−メルカプトプリン−９−イル）−ペンタノール；
化合物＃６０  Ｎ−（６−Ｎ−メチルチオプリン−９−イル）−ペンタノール；
化合物＃６１  Ｎ−（６−クロロプリン−９−イル）４−ブタノール；
化合物＃６２  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）４−ブタノール；
化合物＃６３  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−６−ブトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃６４  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−６−ブトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃６５  Ｎ−（６−クロロプリン−９−イル）−６−ヘキサノール；
化合物＃６６  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−６−ヘキサノール；
化合物＃６７  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−８−ヘキシルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃６８  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−８−ヘキシルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃６９  シス−（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メタノール；
化合物＃７０  シス−（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシル−メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃７１  トランス−（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃７２  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−ペンチルアミン塩酸塩；
化合物＃７３  Ｎ−（６−メチルアジリジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃７４  （２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン；
化合物＃７５  （１Ｓ，３Ｒ）及び（１Ｒ，３Ｓ）−１−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）メチル−３−シクロペンタンメタノール；
化合物＃７６  （１Ｓ，３Ｒ）及び（１Ｒ，３Ｓ）−１−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）メチル−３−（メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）シクロペンタン；
化合物＃７７  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエタノール；
化合物＃７８  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃７９  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃８０  ５−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−３−ペンチン−１−オール；
化合物＃８１  ５−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−３−ペンチニル−１−オキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃８２  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−チオエトキシ−エタノール；
化合物＃８３  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−チオエトキシ−エトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；
化合物＃８４  （２Ｓ，４Ｓ）及び（２Ｒ，４Ｒ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−（メトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）−１，３−オキサチオラン；
化合物＃８５  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシ−エトキシエタノール；
化合物＃８６  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシ−エトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃８７  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシ−エトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン；及び
化合物＃８８  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−ブロモプリン−９−イル）−５−ペンタノール。
より好ましくは、本発明の化合物は下記化合物から選択される：
化合物＃ＩＩＩ  Ｎ−（６−クロロプリン−９−イル）−５−ペンタノール；
化合物＃Ｖ      Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−ペンタノール；
化合物＃１  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃２  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃３  Ｎ−モノメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃３ａ  Ｎ−（６−Ｎ−メチル−アミノプリン−９−イル）−ペンタノール；
化合物＃５  アミノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃５ａ  Ｎ−（６−アミノプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃６  アミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃７  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃７ａ  Ｎ−（６−ヒドラジノプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃８  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−アルギニン；
化合物＃１１  ヒドロキシプリニルペントキシカルボニル  Ｄ−アルギニン；
化合物＃１９  Ｎ−９−プリニル−５−ペンタノール；
化合物＃２０  Ｎ−９−プリニル−５−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン；
化合物＃５１  Ｎ−（６−メトキシプリン−９−イル）５−ペンタノール；
化合物＃５９  Ｎ−（６−メルカプトプリン−９−イル）５−ペンタノール；及び
化合物＃６０  Ｎ−（６−Ｎ−メチルチオプリン−９−イル）−ペンタノール。
最も好ましくは、本発明の化合物はＮ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニンである。
本明細書では、下記略号と定義を用いる：
ＰＨＡ−フィトヘマグルチニン
ＣｏｎＡ−コンカナバリンＡ
ＣＹ−シクロホスファミド
ＰＷＭ−ポークウィードマイトジェン
ＬＰＳ−リポ多糖
ＤＥＡＤ−ジエチルアゾジカルボキシレート
ＰＢＳ−リン酸塩緩衝化生理食塩水
ＴＢＤＰＳＣｌ−ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド
ＣＴＸ−シトキサン
本明細書で用いる“保存置換体”なる用語は、保存的であるアミノ酸の修飾及び置換を意味する、即ち、アミノ酸又はペプチドの二次構造及びヒドロパチック（hydropathic）特性に与える影響が最小である置換を意味する。これらは例えばＤａｙｈｏｆｆによってＡｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ５，１９７８に、及びＡｒｇｏｓによってＥＭＢＯ  Ｊ．，８，７７９〜７８５，１９８９に述べられるような置換を包含する。例えば、下記群に属するアミノ酸が保存的変化（conservative change）を表す：ａｌａ、ｐｒｏ、ｇｌｙ、ｇｌｕ、ａｓｐ、ｇｌｎ、ａｓｎ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｙｒ、ｔｈｒ；ｖａｌ、ｉｌｅ、ｌｅｕ、ｍｅｔ、ａｌａ、ｐｈｅ；ｌｙｓ、ａｒｇ、ｈｉｓ；及びｐｈｅ、ｔｙｒ、ｔｒｐ、ｈｉｓ。好ましい置換は対応Ｌ−アミノ酸に代わるＤ−異性体の置換をも包含する。
驚くべきことに、充分に確立された先行技術とは対照的に、ＳＴ７８９と同様な種類の免疫刺激剤の設計にヒポキサンチン又はその他の天然生成プリン塩基（例えば、アデニン又はグアニン）を用いる必要がないことが判明した。実際に、生物学的系では生じない６−置換プリン塩基によってヒポキサンチンに置き換えると同等以上に大きい免疫刺激度を与えることができる。さらに、アミノ酸が（天然の）Ｌ−配置である必要がないことも驚くべきことに判明した。
天然生成アミノ酸の呼称がラセミ混合物又はＤ−エナンチオマーの使用を排除しないことは理解されるであろう、本発明の１実施態様では、Ｄ−配置のアミノ酸を用いることが特に好ましい。
本発明の化合物は、治療されるべき哺乳動物における細胞毒性Ｔリンパ球の数を増加させるインビトロ及びインビボ活性を有することが驚くべきことに判明した。
本発明の化合物は、驚くべきことに腫瘍増殖に対して有効であることもさらに判明した。本発明の化合物は悪性黒色腫の治療におけるレバミゾールの非毒性の代替物である。
マウスにおいて対照群に比べて試験したときに、本発明の化合物はシクロホスファミド又は５−フルオロウラシルと組合せて用いると、特に乳癌及び結腸癌に対して腫瘍増殖を有意に抑制する。
本発明の化合物は当該技術分野で周知の合成方法を用いて製造することができる。したがって、例えば、Ｒ．Ｓｔｒａｄｉ等によってＩｌ  Ｆａｒｍａｃｏ，４５，３９〜４７，１９９０に述べられている合成方法に従うことができる、但しクロロプリン中間体から塩素原子をヒドロキシル以外の適当な置換基によって排除しなければならない。しかし、下記実施例に概略を述べるように、出発物質として６−クロロプリンを用いることによってプリン環が既に形成されている場合には、この合成方法の改良方法を実施することが好ましい。これはプリン環を形成する必要性を回避し、それによって所望の免疫刺激剤のより効果的かつより高収率の製造を可能にする。この好ましい合成経路については、スキーム１に概略を述べる。
スキーム１において、Ｒ4’は上記で定義したような（ＣＨ0-2）1-8−Ｏ−ＣＯ−Ｘ12であり、このＲ4’を例えばＮａＨ／ＴＨＦのような塩基の存在下で保護基と反応させて、化合物Ｖを製造する。Ｌは当業者に周知である脱離基を表す。任意の適当な脱離基を用いることができる。Ｐｇは当業者に周知の保護基である。任意の適当な保護基を用いることができる。
0004151765.tif 000004
化合物Ｖを例えばＤＥＡＤとＰＰｈ3／ＴＨＦの存在下で化合物ＩＶとカップリングさせて、化合物ＩＩＩを製造する。化合物ＩＶは当該技術分野で周知の方法を用いて製造することができる。さらに、Ｒ1はこの工程の前に又は後の工程で当該技術分野で周知の方法を用いて加えることができる。
化合物ＩＩＩを当業者に周知の方法を用いて、例えばＯＴＢＤＰＳ保護基に対しては（Ｃ4Ｈ9）4ＮＦ／ＴＨＦとＡｃＯＨによって脱保護して、化合物ＩＩを製造する。この化合物をさらに任意にアミノ酸又は、１〜８アミノ酸長さのペプチドと例えばＣｌＣＯＣｌ／ＴＨＦとＨ2Ｏの存在下で反応させる。得られる化合物は式Ｉ化合物である。
Ｒ4がアミノ酸でもペプチド鎖でもない式Ｉ化合物は、工程１〜３を用いて付加的な工程４なしに合成することができることを当業者は理解するであろう。
本発明の化合物がその製薬的に受容される誘導体及び類似体の全てと、異性体及びエナンチオマーの全てとを包含することは、当業者によって理解されるであろう。
本発明の他の態様は式Ｉ化合物又は製薬的製剤の薬物の製造への使用である。
本発明の他の態様は、免疫不全の治療又は腫瘍増殖の抑制のためへの式Ｉ化合物、薬剤組成物又はその製薬的に受容される誘導体を投与する段階を含む、哺乳動物好ましくはヒトの治療方法である。
本明細書における治療への言及が明確な感染症又は症候群の予防並びに治療に及び、それ故、腫瘍の増殖（outgrowth）の抑制も包含することは、当業者によって理解されるであろう。
さらに、治療に用いるための本発明の化合物の必要量が選択した特定の化合物によってのみでなく、投与経路、治療されるべき状態の性質及び患者の年齢と状態によっても変化し、結局は主治医又は獣医の判断に任せられることはさらに理解されるであろう。
しかし、一般には、適当な用量は約０．１〜約２５０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲内であろう。好ましくは、用量は約１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。より好ましくは、約２〜約２０ｍｇ／ｋｇである。最も好ましくは、約２．５ｍｇ／ｋｇである。さらに最も好ましくは、約４５０ｍｇ／ｍ2である。
望ましい用量は、単回量で又は適当な間隔をおいて、例えば１日につき２、３、４回以上の分割量（subdose）として投与される分割投与量として便利にに提供される。
化合物は例えば単位投与形につき１０〜１５００ｍｇ、好都合には２０〜１０００ｍｇ、最も好都合には５０〜７００ｍｇの有効成分を含有する単位投与形で便利に投与される。
理想的には、活性化合物のピーク血漿濃度に達するように有効成分は投与されるべきである。これは例えば任意に生理食塩水中の有効成分の溶液の静脈注射によって、又はボラス（bolus）として投与されて達成されることができる。望ましい血液中レベルは連続注入によって又は間欠的注入によって維持されることができる。
治療に用いるために、本発明の化合物を加工していない化合物として投与することができるが、有効成分を薬剤製剤として提供することが好ましい。
したがって、本発明は式（Ｉ）化合物又はその製薬的に受容される誘導体をその１種以上の製薬的に受容されるキャリヤーと、任意に、他の治療的成分と共に含む薬剤製剤をさらに提供する。キャリヤー（単数又は複数）は製剤の他の成分と適合性であるという意味で“受容される”ものであり、レシピエントに対して有害であってはならない。
薬剤製剤は局所、経口、直腸、鼻腔若しくは非経口（筋肉内、皮下及び静脈内を含む）投与に適した製剤、又は吸入若しくは吹付けによる投与に適した形状の製剤を包含する。製剤は適当な場合には個別の投与単位として便利に提供され、製薬技術分野で周知の方法のいずれかによって製造されることができる。全ての方法は活性化合物を液体キャリヤー又は微粉状固体キャリヤー又は両方と一緒にし、必要な場合には生成物を所望の製剤に成形する工程を包含する。
表皮への局所投与のためには、本発明による化合物を軟膏、クリーム若しくはローションとして、又は経皮パッチとして処方することができる。このような経皮パッチは例えばリナロール（linalool）、カルバクロール、チモール、シトラール、メントール及びｔ−アネトールのような透過促進剤を含有することができる。軟膏及びクリームは例えば、適当な増粘剤及び／又はゲル化剤を添加した水性又は油性基剤を用いて処方することができる。ローションは水性又は油性基剤を用いて処方することができ、一般に１種以上の乳化剤、安定剤、分散助剤、沈殿防止剤、増粘剤又は着色剤をも含有する。
経口投与に適した薬剤製剤は例えばカプセル剤、カシェー又は錠剤のような個別の単位として便利に提供されることができる。各圧縮パックは例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、又は他の適当なガスのような、適当な噴射剤を含むことができる。圧縮エーロゾルの場合には、計量した量を投与するためにバルブを備えることによって、投与単位を決定することができる。
或いは、吸入又は吹付けによる投与のために、本発明による化合物は例えば化合物と適当な粉末基剤（例えば、ラクトース又は澱粉）との粉末ミックスのような乾燥粉末組成物の形状をとることができる。本発明による組成物は、それから吸入器若しくは吹き付け器によって粉末が投与されることができる、例えばカプセル若しくはカートリッジ又は例えばゼラチン若しくはブリスターパックに入れた単位投与形で提供されることができる。
必要な場合には、有効成分を持続放出するために適した上記製剤を用いることができる。
本発明の化合物は他の治療剤、例えば他の免疫調節剤又は腫瘍抑制剤と組合せて用いることもできる。
したがって、本発明は他の態様では式（Ｉ）化合物又はその生理的に受容される誘導体を他の治療有効剤と共に含む組合せを提供する。
このような治療有効剤は腫瘍の治療に用いられる細胞毒性剤を包含する。このような細胞毒性剤はシクロホスファミド又は５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）を含有する。
腫瘍の治療に用いられるシクロホスファミド用量は好ましくは約１０〜１０００ｍｇ／ｍ2の範囲である。より好ましくは、約１００〜約５００ｍｇ／ｍ2である。最も好ましくは、約３５０ｍｇ／ｍ2／日である。
また、腫瘍の治療に用いられる５−フルオロウラシル用量は好ましくは約０．１〜約２５０ｍｇ／ｋｇの範囲である。好ましくは、約１〜約５０ｍｇ／ｋｇである。より好ましくは、約５〜約２０ｍｇ／ｋｇである。最も好ましくは、約１２ｍｇ／ｋｇ（５００ｍｇ／ｍ2）である。
癌治療の技術分野に熟練した人々によって理解されるように、このような用量は治療すべき悪性腫瘍の種類、疾患の段階、腫瘍の反応性等によって変化する。
上述した組合せは薬剤組成物の形状で用いるために便利に提供されることができ、したがって、上記で定義された組合せをその製薬的に受容されるキャリヤーと共に含む薬剤組成物は本発明の他の態様を構成する。
このような組合せの個々の成分は分離した薬剤製剤又は複合薬剤製剤として連続的に又は同時に投与することができる。
式（Ｉ）の化合物又はその製薬的に受容される誘導体を第２治療剤と組合せて用いる場合に、各化合物の用量は化合物を単独で用いた場合の用量と同じであることも異なることも考えられる。適当な用量は当業者によって容易に判定されるであろう。
本発明の他の実施態様では、本発明の化合物の製薬的に受容される量を投与する工程を含む免疫不全の治療方法又は腫瘍増殖の抑制方法を提供する。
このような腫瘍は好ましくは悪性黒色腫、乳癌及び結腸癌を包含する。
より好ましくは、シクロホスファミドと組合せて本発明の化合物の製薬的に受容される量を投与する工程を含む乳癌の治療方法を提供する。
最も好ましくは、５−フルオロウラシルと組合せて本発明の化合物の製薬的に受容される量を投与する工程を含む結腸癌の治療方法を提供する。
本発明を下記実施例によってさらに説明するが、下記実施例は本発明の限定を意図するものではない。温度は全て摂氏度である。
実  施  例
式Ｉ化合物を以下で概略を述べる方法を用いて合成し、免疫学的活性に関して試験した。
実施例１ａ  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギンニン−化合物＃１の合成
0004151765.tif 000005
工程１：
（ａ）保護された１，５−ペンタンジオールの合成
４．０ｇ（３６．３ミリモル）のペンタンジオールを７５ｍｌの乾燥テトラヒドロフランに溶解し、アルゴン流下で撹拌した。水素化ナトリウム（１．４ｇ，５７．８ミリモル）を加え、この懸濁液を３０分間撹拌し、次に、２５ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン中に溶解したｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリルクロリド（８．０ｍｌ、３０．８ミリモル）をジオール溶液に滴加した。この反応物を周囲温度、アルゴン下において一晩撹拌した。次に、懸濁液を１００ｍｌのエーテル上に注入した。このエーテル性懸濁液を１０％炭酸カリウム（１００ｍｌ）と、ブライン（１００ｍｌ）とによって洗浄し、硫酸マグネシウムによって乾燥させた。真空中で溶媒を除去して、１０．３ｇ（３０．１ミリモル）の生成物を９８％の収率で得て、これをさらに精製せずに用いた。
（ｂ）化合物Ｉと６−クロロプリンとのカップリング
１００ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン中のトリフェニルホスフィン（４．７ｇ，１７．９ミリモル）と６−クロロプリン（２．３ｇ，１５．１ミリモル）との撹拌溶液に、アルゴン流下で、ジエチルアゾジカルボキシレート（ＤＥＡＤ，２．８ｍｌ，１７．９ミリモル）を加えた。１０分間後に、２０ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン中に溶解した化合物Ｉ（４．７ｇ，１３．７ミリモル）をこの反応物に滴加し、この反応物を次に周囲温度、アルゴン下において一晩撹拌した。真空中で溶媒を除去して、粗生成物を溶離剤として３０％酢酸エチル−ヘキサンを用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（Ｒ＝０．３０）。生成物、化合物ＩＩ（３．７ｇ，７．６ミリモル）が無色油状物として５５％収率で得られた。
工程２：シリル保護基の除去
２．３ｇ（４．４ミリモル）を４０ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン中に溶解し、アルゴン流下で撹拌した。テトラブチルアンモニウムフルオリド（５．３ｍｌ，５．１ミリモル）を加え、周囲温度、アルゴン下において一晩撹拌した。この溶液に氷酢酸（９０．３１ｍｌ，５．３ミリモル）を加え、真空中で溶媒を除去した。粗生成物を溶離剤として１０％メタノール−酢酸エチルを用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（Ｒｆ＝０．２０）。生成物を最小量の塩化メチレンに入れ、セライト（Celite）に通して濾過して、シリカを除去した。溶媒を真空下で除去し、生成物を乾燥させて、化合物ＩＩＩ（１．０ｇ，４．２ミリモル）を９５％収率で得た。
工程３：化合物ＩＩＩのＤ−アルギニンとのカップリング
１．０ｇ（４．２ミリモル）の６−クロロプリニルペンタノール、化合物ＩＩＩを７５ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン中に溶解し、アルゴン流下で撹拌した。トルエン性ホスゲン（４．４ｍｌ，８．３ミリモル）を加え、反応をＴＬＣ（メタノールで展開）で監視し、中間体のクロロホルメートが支配的な生成物になるまで（６〜１０時間）続けた。真空中で溶媒を除去して、残渣を５０ｍｌの乾燥テトラヒドロフラン中に入れた。５ｍｌの水に溶解したＤ−アルギニン（０．９４ｇ，５．４ミリモル）をクロロホルメート懸濁液に加えた。さらに５ｍｌのアリコートの水を用いて、アルギニン溶液を含有していたビーカーをすすぎ洗いして、この水を反応物に加えた。反応物を周囲温度において一晩撹拌し、次にトルエン（６０ｍｌ）によって抽出した。トルエンを水（６０ｍｌ）によって逆抽出し、一緒にした水性部分を５％炭酸水素ナトリウムの添加によって弱アルカリ性ｐＨにした。水を真空中で除去し、残渣をメタノール（１０ｍｌ）に溶解した。濾過後に、メタノール性溶液を５００ｍｌの激しく撹拌したアセトンに滴加した。沈殿を濾過によって回収し、アセトンで数回洗浄した。この濾液は未反応の化合物ＩＩＩを含有した。沈殿を乾燥させ、次に水（５０ｍｌ）に溶解し、この水溶液にジメチルアミン（４０％水溶液，５．０ｍｌ，４０ミリモル）を加えて、反応物を周囲温度において３時間撹拌した。溶媒を真空下で除去し、粗生成物を溶離剤としてメタノールを用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（Ｒｆ＝０．２５）。一緒にした生成物画分を減量し（約５ｍｌ）、４℃において２時間貯蔵した。この溶液を１０分間遠心分離して（３７５ｘｇ）、シリカを除去し、上清を５００ｍｌの激しく撹拌したエーテルに滴加した。沈殿を濾過によって回収し、乾燥させて、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン，化合物＃１（０．７９ｇ，１．８ミリモル）を４３％収率で得た。
ｍｐ＝（軟化１１９℃）＝１２３〜１２５℃。
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．３０
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm単位);9.40(1H,br,s,COOH);8.20(1H,s,プリン);8.15(1H,s,プリン);8.0-7.3(4H,b,グアニジン);6.33(1H,d,NH);4.13(2H,t,N-CH2);3.86(2H,t,O-CH2);3.63(1H,m,CαH);3.36(6H,s,b,N-(CH3)2);3.02(2H,b,CδH);1.8-1.2(10H,m,CβH,CγH,-(CH2)3)-).
ＭＳ（高分解ＦＡＢ，グリセロール）；ｍ／ｅ，４５０．２５７８０；Ｍ＋Ｈ+，（Ｃ19Ｈ32Ｏ4Ｎ9）として算出，４５０．２５７７３。
実施例１ｂ  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃１の代替え合成
0004151765.tif 000006
工程１：保護された６−クロロプリニルペンタノール，化合物ＩＩ（実施例１ａに述べたように製造）を水性ジメチルアミンと反応させた後に、脱保護して化合物Ｖを得て、これをＤ−アルギニンとカップリングさせて（このカップリング反応は実施例１ａに述べたとおりである）、生成物を得ることによって、化合物＃１の別法合成を行った。スペクトル特性とクロマトグラフィー特性は実施例１ａに述べた合成から得られた生成物と同じであった。
保護された６−クロロプリニルペンタノール，化合物ＩＩとジメチルアミンとの反応の典型的な例は次の通りである：２０ｍｌのテトラヒドロフラン中に溶解した０．１３ｇ（０．２６ミリモル）の化合物ＩＩに、ジメチルアミン（４０％水溶液，０．５ｍｌ，１０．０ミリモル）を加えた。この反応物を周囲温度において１８時間撹拌し、溶媒を真空中で除去した。粗生成物を溶離剤として５０％酢酸エチル−ヘキサンを用いてフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（Ｒｆ＝０．２７）。生成物の化合物Ｖ（０．１２ｇ，０．３０ミリモル）が９４％収率で得られた。
実施例２：  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃２の合成
化合物＃１のＬ−エナンチオマー（化合物＃２）を実施例１ｂに上述したように合成して、５０ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１１８℃）＝１２３〜１２５℃
スペクトル特性は化合物＃１と同じであった。
実施例３：  Ｎ−モノメチルアミノプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃３の合成
ジメチルアミンの代わりにメチルアミン（４０％水溶液）を用いて６−メチルアミノプリニルペンタノール化合物＃３ａを得たこと以外は、実施例１ｂに上述したように化合物＃３を合成した。これを次に実施例１ａに述べたようにＤ−アルギニンとカップリングさせて、３２ｍｇの生成物を得た。
ｍｐ（軟化１２７℃）＝１３３℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２０
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);
9.30(1H,b,COOH),8.21(1H,s,プリン);8.13(1H,S,プリン);7.8-7.2(4H,b,グアニジン);6.29(1H,d,NH);4.13(2H,t,N-CH2);3.86(2H,t,O-CH2);3.61(1H,m,CαH);3.17(1H,m,CH3-N-H);3.02(3H,b,HN-CH3);2.97(2H,b,CδH);1.9-1.2(10H,m,CβH,CδH,-(CH2)3-)-
実施例４：  Ｎ−モノメチルアミノプリニルペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃４の合成
化合物＃３のＬ−エナンチオマー（化合物＃４）を実施例３に上述したように合成して、４４ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１２３℃）＝１３２〜１３４℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２０
スペクトル特性は化合物＃３と同じであった。
実施例５：  アミノプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃５の合成
実施例１ｂに上述したように、但し、保護された６−クロロプリニルペンタノール、化合物ＩＩをジメチルアミンとではなく、アンモニアガスと反応させて、化合物＃５を合成した。このようにして、６−アミノプリニル（アデニン）生成物を脱保護してアルコール化合物＃５ａを得た。これを次にＤ−アルギニンとカップリングさせて、２６０ｍｇの生成物を白色固体として得た。化合物ＩＩとアンモニアとの反応の典型的な例は次の通りである：０．４２ｇ（０．８８ミリモル）の化合物ＩＩを７５ｍｌの無水エタノール中に溶解し、この溶液を氷浴上に置いた。この急冷した溶液に通してアンモニアガスを１０分間バブルさせ、飽和溶液をボンベ（１５０ｍｌシリンダー）に移した。アンモニアガスをこの溶液に通してさらに１分間バブルさせ、ボンベを密封し、ボンベを１２０℃油浴中で一晩加熱した。溶媒を真空中で除去して、０．４０ｇ（０．８８ミリモル）の生成物を９５％収率で得た。この生成物をさらに精製せずに用いた。
化合物＃５の特性：
ｍｐ（軟化１４３℃）＝１５０℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２０
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);9.40(1H,b,COOH);8.14(1H,s,プリン);8.13(1H,s,プリン);8.0-7.0(6H,m,グアニジン,-NH2);6.36(1H,b,NH);4.13(2H,t,N-CH2);3.87 5(2H,t,O-CH2);3.65(1H,m,CαH);3.03(2H,b,cδH);1.9-1.2(10H,m,CβH,CγH,-(CH2)3-)
実施例６：  アミノプリニルペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃６の合成
化合物＃５のＬ−エナンチオマー（化合物＃６）を実施例５に上述したように合成して、９３ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１４３℃）＝１５３〜１５５℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２２
スペクトル特性は化合物＃５と同じであった。
実施例７：  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃７の合成
化合物＃７を実施例１ａに上述したように、但しジメチルアミンの代わりに対応アルコール化合物＃７ａからのヒドラジンを用いて合成した。したがって、典型的な例では、５ｍｌの９５％エタノール中に溶解した５０ｍｇ（０．１１ミリモル）の６−クロロプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニンをヒドラジン水化物（１２μｌ、０．４０ミリモル）と周囲温度において一晩反応させた。次に、反応物を３時間かけて０℃に徐々に冷却し、生成した結晶を濾過によって回収し、冷エタノールによって洗浄した。白色固体生成物（３２ｍｇ、０．０７ミリモル）が６５％収率で得られた。
ｍｐ（軟化１３０℃）＝１３４℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２７
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);9.20(1H,b,COOH),-8.23(1H,s,プリン);8.14(1H,s,プリン);7.4(3H,b,グアニジン);6.6(2H,b,NH2);6.43(1H,d,NH);4.14(2H,t,N-CH2);3.87(2H,t,O-CH2);3.64(1H,m,CαH);3.04(2H,b,CδH);1.8-1.3(10H,m,CβH,CγH,-(CH2)3-)
実施例８：  ヒドラジノプリニルペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃８の合成
化合物＃７のＬ−エナンチオマー（化合物＃８）を実施例７に上述したように合成して、４０ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１３０℃）＝１３４℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２７
スペクトル特性は化合物＃７と同じであった。
実施例９：  クロロプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃９の合成
６−クロロプリニルペンタノール（化合物ＩＩＩ）とＤ−アルギニンとのカップリング反応によって、化合物＃９を実施例１ａに上述したように（カップリング反応後のジメチルアミンの添加を省略して）合成した。これは６２２ｍｇの生成物を白色固体として生成した。
ｍｐ（軟化１３７℃）＝１４５〜１４８℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．３５
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);9.15(1H,b,COOH);8.78 25(1H,s,プリン);8.74(1H,s,プリン);7.8-7.2(4H,b,グアニジン);6.33(1H,d,NH);4.29(2H,t,N-CH2);3.88(2H,t,O-CH2);3.64(1H,m,CαH);3.04(2H,b,CδH);1.95-1.20(10H,m,CβH,CγH,-(CH2)3-)
実施例１０：  クロロプリニルペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃１０の合成
化合物＃９のＬ−エナンチオマー（化合物＃１０）を実施例９に上述したように合成して、６５ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１３７℃）＝１４３〜１４６℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２６
スペクトル特性は化合物＃９と同じであった。
実施例１１：  ヒドロキシプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃１１の合成
化合物＃１１を実施例９に上述したように合成した、但し６−クロロプリニルペンタノール中間体（化合物ＩＩＩ）に対して最初に塩基触媒による加水分解を実施して、Ｄ−アルギニンとのカップリングの前に、６−ヒドロキシプリニル（ヒポキサンチン）ペンタノール化合物＃１１ａを得た。したがって、典型的な例では、３９８ｍｇ（１．７ミリモル）の化合物ＩＩＩを２５ｍｌの水に溶解した。水酸化ナトリウム（１．０ｍ、３．４ｍｌ）を加え、反応物を９０分間還流させた。冷却後に、反応物を酸性化し（５％塩酸）、溶媒を真空中で除去し、粗生成物を溶離剤として３０％メタノール−酢酸エチルを用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（Ｒｆ＝０．３２）。生成物、化合物＃１１ａ（２９０ｍｇ、１．３ミリモル）が白色固体として７９％収率で得られた。その後のＤ−アルギニンとのカップリングは１４８ｍｇの化合物＃１１を白色固体として生じた。
ｍｐ（軟化１６３℃）＝１８２℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．２２
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);9.28(1H,b,COOH);8.10(1H,s,プリン);8.04(1H,s,プリン);7.8-7.2(4H,b,グアニジン);6.38(1H,d,NH);4.32(1H,b,OH);4.13(2H,t,N-CH2);3.87(2H,t,O-CH2);3.61(1H,m,CαH);3.04(2H,b,CδH);1.8-1.1(10H,m,CβH,CγH,-(CH2)3-)
実施例１２：  メルカプトプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃１２の合成
化合物＃１２を実施例１ａに述べたように、但しジメチルアミンの代わりにチオ尿素を用いて合成した。したがって、典型的な例では、５ｍｌの無水エタノールに溶解した８０ｍｇ（０．１８ミリモル）の６−クロロプリニルペントキシカルボニルＤ−アルギニンをチオ尿素（１６ｍｇ、０．２１ミリモル）と５時間の還流下で反応させた。この反応物を０℃において一晩保存し、生じた結晶を濾過し、冷無水エタノールによって洗浄した。この生成物を無水エタノールから再結晶して白色固体（４８ｍｇ、０．１１ミリモル）を６１％収率で得た。
ｍｐ（軟化１８０℃）＝２００℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．５０
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);9.15(1H,b,COOH);8.29(1H,s,プリン);8.18(1H,s,プリン);7.5-7.3(4H,b,グアニジン);6.39(1H,d,NH);4.13(2H,t,N-CH2);3.87(2H,t,O-CH2);3.65(1H,m,CαH);3.04(2H,b,CδH);1.90-1.23(10H,m,CβH,CγH,-(CH2)3-)
実施例１３：  メルカプトプリニルペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃１３の合成
化合物＃１２のＬ−エナンチオマー（化合物＃１３）を実施例１２に上述したように合成して、４２ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１８０℃）＝２００℃
Ｒｆシリカ（メタノール）＝０．５０
スペクトル特性は化合物＃１２と同じであった。
実施例１４：  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニルグリシン−化合物＃１４の合成
化合物＃１４を実施例１ｂに上述したように合成した、但しカップリング反応はアルギニンとではなくグリシン（６８ｍｇ、０．９１ミリモル）と、より小さい規模で行い、３当量の炭酸ナトリウム（アルコールに対して）の添加によってグリシンの遊離塩基をその場で得た。粗生成物を溶離剤として５０％メタノール−酢酸エチルを用いるフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーによって精製した（Ｒｆ＝０．３５）。生成物を塩化メチレンに溶解した後に濾過して、シリカを除去した。溶媒を真空中で除去して、３０ｍｇの生成物を白色固体として得た。
ｍｐ（軟化１００℃）＝１２６℃
Ｒｆシリカ（１：１メタノール−酢酸エチル）＝０．３５
1HNMR(DMSO-d6,300MHz,δppm);8.20(s,1H,プリン);8.16(s,1H,プリン);6.05(1H,t,NH;4.14(2H,t.N-CH2);3.86(2H,t,O-CH2);3.33(6H,s,b,N-(CH3)2);3.18(2H,d,CαH2);1.80(2H,m,CH2);1.55(2H.m,CH2);1.26(2H,m,CH2);
実施例１５：  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７’−エトキシ−エトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃１５の合成
工程１：  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−エトキシエトキシ−ｔ−ブチルジフェニルシラン
無水ＴＨＦ（２．９ｍｌ）中のアルコール（０．２０１ｇ、１当量）の溶液に、室温、アルゴン下において６−クロロプリン（９０ｍｇ、０．５８ミリモル）と、Ｐｈ3Ｐ（０．１９９ｇ、１．３当量）と、ＤＥＡＤ（０．１２ｍｌ、１．３当量）とを連続的に加えた。この黄色溶液を室温において１５時間撹拌した。ＴＨＦを蒸発させて、残渣をクロマトグラフィーして（６：４、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）、（ＥｔＯ2ＣＮＨ）2と、カップリングしたプリンとの混合物を得た。ＴＨＦ（６ｍｌ）中のこの混合物の溶液に、室温において、４０％Ｍｅ2ＮＨ／Ｈ2Ｏ（０．７０ｍｌ、１０当量）を加えた。この溶液を室温において４５分間撹拌してから、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液／ＣＨ2Ｃｌ2中に注入した。相を分離し、水相をＣＨ2Ｃｌ2（２Ｘ）によって抽出した。一緒にした有機抽出物をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、固形物を濾別し、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、２：８  Ｈｅｘ／ＡｃＯＥｔ）によって精製して、カップリングしたジメチルアミノプリン０．１６ｇ（５５％）を得た。
工程２：Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−エトキシエタノール−化合物＃８５
無水ＴＨＦ（３．２ｍｌ）中のシラン（０．１６ｇ、０．３２ミリモル）の溶液に、室温、アルゴン下においてｎＢｕ4ＮＦ  １．０Ｍ／ＴＨＦ（０．３２ｍｌ、１．１ｅｑ）を加えた。この溶液を室温において３時間撹拌し、溶媒を真空中で蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、４：１、ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ）によって直ちに精製して、７２ｍｇ（８９％）のアルコール化合物＃８５を透明な油状物として得た。
1HNMR(CDCl3);δ8.29(s,1H,プリン),7.80(s,1H,プリン),4.33(t,2H,CH2),3.82(t,2H,CH2),3.68(t,2H,CH2),3.55(t,2H,CH2),3.50(m,6H,N(CH3)2)-
工程３：Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃１５
無水ＴＨＦ（４．８ｍｌ）中のアルコール化合物＃８５（７２ｍｇ、０．２９ミリモル）の溶液に、室温、アルゴン下においてＣＯＣｌ2／トルエン１．９３Ｍ（０．３０ｍｌ、２当量）を加え、この溶液を室温において５時間撹拌した。ＴＨＦを真空中で蒸発させて、残渣をＴＨＦ（３．６ｍｌ）に再溶解した。この溶液に、水中Ｄ−アルギニンの溶液（６５ｍｇ、１．３ｅｑ／０．５ｍｌ  Ｈ2Ｏ）を加えた。Ｄ−アルギニン溶液を含有していたフラスコを０．５ｍｌのＨ2Ｏですすぎ洗いし、反応混合物を室温において１５時間撹拌した。次に、これをトルエンで抽出し、トルエン相をＨ2Ｏによって逆抽出した。一緒にした水層をｐＨ７．５〜８．０にして（ＮａＨＣＯ3５％）、水を蒸発させた。残渣をフラシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００％ＭｅＯＨ）によって精製した。該化合物を含有する画分を蒸発させ、残渣を最少量のＭｅＯＨに溶解した。次に、Ｅｔ2Ｏを加え、溶媒をデカントして、白色ガムを得て、これを高度真空下で乾燥させた。該化合物が白色固体（４２ｍｇ、３３％）として得られた。
1H NMR(DMSO-d6):δ8.25(B,1H,プリン),8.14(a,1H,プリン),6.5(bd,1H,NH),4.37(t,2H,CH2リンカー),4.03(m,2H,CH2リンカー),3.81(m,2H,CH2リンカー),3.72(m,1H,CαH),3.60(m,2H,CH2 linker),3.55-3.89(m,6H,N(CH3)2),3.05(m,2H,CαH2),1.78-1.39(m,4H,CβH2,CγH2)
実施例１６：  （２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−（メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）−１，３−ジオキソラン−化合物＃１６
0004151765.tif 000007
工程１：（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−ｔ−ブチルジフェニルシリルメタノール
無水ＣＨ2Ｃｌ2（７６ｍｌ）中の（４Ｓ）−２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール（１ｇ、７．５７ミリモル）の溶液に、室温、アルゴン下においてイミダゾール（１．０３ｇ、２ｅｑ）とｔ−ＢｕＰｈ2ＳｉＣｌ（１．９５ｍｌ、１．１ｅｑ）とを連続的に加えた。直ちに白色沈殿が形成された。この懸濁液を室温において１時間撹拌し、次に飽和ＮａＨＣＯ3水溶液に注入した。相を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（２Ｘ）によって抽出した。一緒にした有機抽出物をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、固形物を濾別し、溶媒を蒸発させて、２．８０ｇ（１００％）のシランを透明な油状物として得た。
工程２：（２Ｓ）−３−ｔ−ブチルジフェニルシリルプロパントリオール
ＴＨＦ／Ｈ2Ｏの４：１混合物（１５ｍｌ）中のシラン（１．０１ｇ、２．７３ミリモル）の溶液に、室温において、ＴＦＡＡ（０．５ｍｌ、２．４ｅｑ）を加え、この溶液を５０℃において５時間加熱した。次に、これを飽和ＮａＨＣＯ3水溶液／ＣＨ2Ｃｌ2中に注入し、相を分離した。水層をＣＨ2Ｃｌ2（２Ｘ）によって抽出し、一緒にした有機抽出物をＭｇＳＯ4上で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１：１  Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、０．６２ｇ（７０％）のジオールを透明な油状物として得た。
工程３：（２Ｓ，４Ｓ）−２−ベンゾイルオキシメチル−４−ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル−１，３−ジオキソラン
無水トルエン（１９ｍｌ）中のジオール（０．６２ｇ、１．８９ミリモル）とアルデヒド（０．３１ｇ、１ｅｑ）との溶液に、室温、アルゴン下において、触媒量（cat.amount）のＰＰＴＳを加えた。この溶液を１８時間還流させ、その後に、これを飽和ＮａＨＣＯ3水溶液／ＣＨ2Ｃｌ2中に注入した。相を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（２Ｘ）によって抽出した。一緒にした有機抽出物をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、９：１，Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、０．４９ｇ（５５％）のジオキソランの５：１（シス／トランス）混合物を得た。
工程４：（２Ｓ，４Ｓ）−２−ヒドロキシメチル−４−ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル−１，３−ジオキソラン
無水ＭｅＯＨ（１０．３ｍｌ）中のベンゾエート（０．４９ｇ、１．０３ミリモル）の溶液に、室温、アルゴン下において、ＭｅＯＮａ／ＭｅＯＨ  ４．３７Ｍ（２４μｌ、０．１ｅｑ）を加えた。この溶液を１８時間撹拌し、その後に、これを飽和ＮＨ4Ｃｌ／ＣＨ2Ｃｌ2中に注入した。相を分離し、水層をＣＨ2Ｃｌ2（２Ｘ）によって抽出した。一緒にした有機抽出物をＭｇＳＯ4上で乾燥させ、固形物を濾別し、溶媒を蒸発させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、３：１，Ｈｅｘ／ＥｔＯＡｃ）によって精製して、シス−アルコール（０．２６ｇ、６７％）を透明な油状物として得た。
工程５：（２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ｔ−ブチルジフェニルシリルオキシメチル−１，３−ジオキソラン
実施例１５、工程１と同様な方法を用いて、この化合物を製造した。
工程６：（２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン
実施例１５、工程２と同様な方法を用いて、この化合物を製造した。
精製：１０％ＭｅＯＨ／ＥｔｏＡＣ
1HNMR(CDCl3):δ8.32(s,1H,プリン),7.75-(s,1H,プリン),5.33(dd,13,J=2.0,6.6,H-2-ジオキソラン,5.33(bs,1H,OH),4.45(dd,1H,J=6.6,14.3,CH2-プリン),4.20(dd,1H,J=2.0,14.3,CH2-プリン),4.20(m,1H,H-4-ジオキソラン),4.05(d,2H,J=7.2,H-5),3.78(d,1H,J=13.0;CH2-OH)3.53(bs,6H,(CH3)2N),3.40(d,1H,J=13.0,CH2-OH).
工程７：（２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−（メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）−１，３−ジオキソラン−化合物＃１６
実施例１５、工程３と同様な方法を用いて、化合物＃１６を製造した。
精製：  ＭｅＯＨ  １００％
1HNMR(DMSO-d6):δ8.43(s,1H,プリン),8.11(s,1H,プリン),6.6(m,1H,NH),5.28,(m,1H,H-2-ジオキソラン),4.39(m,2H,CH2-プリン),4.26(m,1H,H-4-ジオキソラン),3.97-3.81(m,3H,CαH,CH2-OCO-D-アルギニン),3.71(m,2H,H-5-ジオキソラン),3.39(bs,6H,(CH3)2N),3.07(m,2H,CδH2),1.70-1.45(m,4H,CβH2,CγH2)
実施例１７：  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−ブロモプリニル−９−イル）−ペントキシカルボニルＬ−アルギニン−化合物＃１７の合成
0004151765.tif 000008
ｍｐ（軟化１１５〜１１８°）＝１２４〜１２７℃
Ｒｆシリカ（７０％メタノール−酢酸エチル）＝０．２５
実施例１８：  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−ブロモプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニルＤ−アルギニン−化合物＃１８の合成
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ｍｐ（軟化１１６℃）＝１２２〜１２５℃
Ｒｆシリカ（７０％メタノール−酢酸エチル）＝０．２５
実施例１９：Ｎ−９−プリニル−５−ペンタノール−化合物＃１９
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精製：５％ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ
Ｒｆ（シリカ）０．２９（５％ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ）
実施例２０：  Ｎ−９−プリニル−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃２０
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精製：メタノール
Ｒｆ（シリカ）＝０．２３（メタノール）
実施例２１：  Ｎ−９−プリニル−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃２１
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精製：メタノール
Ｒｆ（シリカ）＝０．２３（メタノール）
実施例２２：  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−バリル  Ｌ−プロリル  Ｌ−ロイシン−化合物＃２２の合成
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ｍｐ＝１６８℃
Ｒｆシリカ（４０％メタノール−酢酸エチル）＝０．４０
実施例２３：  Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリニルペントキシカルボニル  Ｌ−イソロイシル  Ｌ−プロリル  Ｌ−イソロイシン−化合物＃２３の合成
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ｍｐ（軟化８３〜８６℃）＝９３℃
Ｒｆシリカ（４０％メタノール−酢酸エチル）＝０．３５
実施例２４：  Ｎ−（６−シクロプロピルアミノプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃２４の合成
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無色油状物
Ｒｆ＝０．３（１０％メタノール／酢酸エチル）
質量スペクトル：Ｈ+＝２６２（ＨＲＭＳ）
実施例２５：  Ｎ−（６−シクロプロピルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃２５の合成
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ｍｐ：軟化１４７℃、溶融１５１℃
Ｒｆ＝０．３４（ＭｅＯＨ）
質量スペクトル：Ｈ+＝４６２（ＨＲＭＳ）
実施例２６：  Ｎ−（６−シクロプロピルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃２６の合成
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ｍｐ：１４４〜１４６℃
Ｒｆ＝０．３５（ＭｅＯＨ）
質量スペクトル：Ｍ+＝４６２（ＨＲＭＳ）
実施例２７：  Ｎ−（６−アゼチジンプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃２７の合成
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ｍｐ：１０４〜１０６℃
Ｒｆ＝０．３３（１０％ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ）
質量スペクトル：Ｍ+＝２６２（ＨＲＭＳ）
実施例２８：  Ｎ−（６−アゼチジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃２８の合成
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ｍｐ：１９０〜１９２℃
Ｒｆ＝０．２５（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝４６２（ＨＲＭＳ）
実施例２９：  Ｎ−（６−アゼチジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃２９の合成
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ｍｐ（軟化１７５℃）１８７℃において溶融
Ｒｆ＝０．２７（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝４６２（ＨＲＭＳ）
実施例３０：  トランス−（Ｎ−６−クロロプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メタノール−化合物＃３０の合成
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ｍｐ（軟化１７６℃）＝１７８℃
Ｒｆ＝０．４（酢酸エチル）
実施例３１：  トランス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メタノール−化合物＃３１の合成
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ｍｐ＝１５１〜１５３℃
Ｒｆ＝０．４４（１０％メタノール−酢酸エチル）
実施例３２：  トランス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃３２の合成
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ｍｐ＝（軟化１５７℃）＝１６４〜１６６℃
Ｒｆ＝０．３５（メタノール）
実施例３３：  トランス−（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メタノール−化合物＃３３の合成
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ｍｐ＞２００℃
Ｒｆ＝０．３５（２０％メタノール−酢酸エチル）
実施例３４：  トランス−（Ｎ−６−メトキシプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メタノール−化合物＃３４の合成
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ｍｐ（軟化１５９℃）＝１６２℃
Ｒｆ＝０．２５（酢酸エチル）
実施例３５：  シス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メタノール−化合物＃３５の合成
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ｍｐ＝１５３〜１５６℃
Ｒｆ＝０．３（１０％メタノール−酢酸エチル）
実施例３６：  シス−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−メチル−シクロヘキシル−メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃３６の合成
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ｍｐ（軟化１５３℃）＝１６８〜１７０℃
Ｒｆ＝０．３５（メタノール）
実施例３７：  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−シトルリン−化合物＃３７の合成
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ｍｐ（軟化１７２〜１７６℃）＝１７８〜１８１℃
Ｒｆ＝０．２０（４０％メタノール−酢酸エチル）
実施例３８：  Ｎ−（６−メチルアジリジンプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃３８の合成
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低融点。
Ｒｆ＝０．４（２０％ＭｅＯＨ／ＡｃＯＥｔ）
質量スペクトル：Ｍ+＝２６２
実施例３９：  Ｎ−（６−メチルアジリジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃３９の合成
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ｍｐ：（軟化１９０℃）２００℃において溶融。
Ｒｆ：０．４（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝４６２
実施例４０：  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリニル−９−イル）−７−チオエトキシ−エトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃４０
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実施例４１  メタ（Ｎ−６−ジメチルアミノプリニル−９−イル）メチルベンジルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃４１
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実施例４２  ５−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリニル−９−イル）−３−ペンチニル−１−オキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃４０
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実施例４３  Ｎ−［６−（１−メチル−２−アセトキシ）エチルアミノプリン−９−イル］−５−ペンタノール−化合物＃４３−の合成
0004151765.tif 000034
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：8.36(s,1H,プリン),7.76(s,1H,プリン),6.58(bs,1H,NH),5.18(m,1H,OH),4.22(t,2H,CH2),3.92(bs,1H,CH),3.63(t,2H,CH2),2.05(s,3H,CH3),1.3-1.9(m,4xCH2,1xCH3).
173.04,156.6,155.8,154.2,142.8,120.5,71.66,68.61,63.10,45.43,33.54,31.42,24.54,21.69,18.25.
低融点
Ｒf＝０．５  １５％メタノール／酢酸エチル
質量スペクトル：Ｍ+＝３２２
実施例４４  Ｎ−［６−（１−メチル−２−アセトキシ）エチルアミノプリン−９−イル］−７−ペンチルオキシ−カルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃４４−の合成
0004151765.tif 000035
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤ3ＯＤ単位ｐｐｍ）：異性体混合物，8.05(s,1H,プリン),7.89(s,1H,プリン),4.92(m,1H,CH),4.03(t,2H,CH2),3.78(m,3H,CH2およびCαH),3.46(d,2H,CH2),2.99(m,2H,CH2),1.8(s,3H,CH3),1.1-1.79(m,13H,5xCH2および1xCH3).
13Ｃ  ＮＭＲ（δ，ＣＤ3ＯＤ単位ｐｐｍ）：異性体混合物，179.50,159.19,158.97,156.88,154.21,154.14,142.85,142.75,120.95,68.13,66.91,66.11,57.36,45.32,42.65,31.89,31.73,31.25,30.15,30.04,26.67,24.61,21.56,18.09.
融点：（１７７℃で軟化）１８５℃で融解
Ｒf：０．３５（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝５２２
実施例４５  Ｎ−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃４５−の合成
0004151765.tif 000036
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：8.11(s,1H,プリン),4.29(t,2H,CH2),3.66(t,2H,CH2),2.00(m,2H,CH2),1.64(m,2H,CH2),1.48(m,2H,CH2),1.3(t,1H,OH).
13Ｃ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：163.3,150.2,149.3,148.01,128.00,63.20,44.80,29.70,26.00,22.4.
融点：１３３−１３５℃
Ｒf：０．４  ５％メタノール／酢酸エチル
質量スペクトル：Ｍ+＝２６０（ＨＲＭＳ）
実施例４６  Ｎ−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃４６−の合成
0004151765.tif 000037
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＤＭＳＯ単位ｐｐｍ）：9.33(s,1H,COOH),8.75(s,1H,プリン),7.3-7.8(bs,4H,グアニジン),6.28(d,1H,NH),4.23(t,2H,CH2),3.86(t,2H,CH2),3.61(m,1H,CαH),3.015(m,2H,CH2),1.2-1.9(m,10H,5xCH2).
融点：１３６℃で軟化し１４７℃で融解
Ｒf：０．４６（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝４７６
実施例４７  Ｎ−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃４７−の合成
0004151765.tif 000038
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤ3ＯＤ単位ｐｐｍ）：8.38(s,1H,プリン),4.12(t,2H,CH2),3.80(m,3H,CH2およびCαH),2.97(m,2H,CH2),1.2-1.8(m,10H,5xCH2).
融点：１３７℃で軟化し、１４７℃で融解
Ｒf：０．４５（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝４７６
実施例４８  Ｎ−（２−アミノ−６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃４８
0004151765.tif 000039
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：7.46(s,1H,プリン),4.70(bs,2H,NH2),4.04(t,2H,CH2),3.65(t,2H,CH2),3.46(bs,6H,2xCH3),1.95(m,2H,CH2),1.65(m,2H,CH2),1.42(m,2H,CH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（δ，ＣＤ3ＯＤ単位ｐｐｍ）：158.27,154.08,150.74,136.12,112.96,60.28,41.97,36.50,30.71,28.38,21.64.
融点：１３９−１４１℃
Ｒf：０．５５（１５％メタノール／酢酸エチル）
質量スペクトル：Ｍ+＝２６５
実施例４９  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−メチルチオプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃４９
0004151765.tif 000040
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.24(1H,s,プリン),4.08(2H,t,N-CH2),3.61(2H,t,O-CH2),3.49(6H,br s,N-(CH3)2),2.07(3H,s,S-CH3),1.81(2H,p,CH2),1.67(1H,br s,OH),1.59(2H,p,CH2),1.39(2H,p,CH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：152.30,151.69,150.29,146.47,119.39,61.58,41.77,37.45,31.28,28.08,21.81,13.43.
実施例５０  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−メチルチオプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃５０−の合成
0004151765.tif 000041
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.13(1H,s,プリン),8.0-7.2(4H,br,グアニジン),6.32(1H,d,NH),4.01(2H,t,N-CH2),3.86(2H,t,O-CH2),3.65(1H,m,CαH),3.41(6H,br s,N-(CH3)2),3.02(2H,br,CδH2),1.8-1.2(10H,m,CβH2,CγH2,-(CH2)-).
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：175.09,156.83,155.01,152.01,151.87,150.46,146.70,118.84,62.82,54.61,41.66,39.91,37.32,29.26,27.80,27.69,24.62,22.05,13.38.
実施例５１  Ｎ−（６−メトキシプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃５１の合成
0004151765.tif 000042
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.43(1H,s,プリン),7.86(1H,s,プリン),4.18(2H,t,N-CH2),4.09(3H,s,O-CH3),3.55(2H,t,O-CH2),3.09(1H,br s,OH),1.86(2H,m,CH2),1.53(2H,m,CH2),1.37(2H,m,CH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：160.0,150.9,141.2,120.4,60.9,53.2,43.1,30.9,28.8,22.0.
融点＝１５０℃
Ｒf＝０．３０（１５％メタノール−酢酸エチル）
実施例５２  Ｎ−（６−メトキシプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃５２−の合成
0004151765.tif 000043
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，３００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.51(1H,s,プリン),8.39(1H,s,プリン),8.0-7.3(4H,br,グアニジン),6.29(1H,d,NH),4.22(2H,t,N-CH2),4.08(3H,s,O-CH3),3.86(2H,t,O-CH2),3.62(1H,m,CαH),3.02(2H,br,CδH2),1.8-1.2(10H,m,CβH2,CγH2,(CH2)3).
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：205.9,175.8,160.6,157.7,155.8,152.4,151.8,120.9,63.7,55.4,54.2,43.6,39.1,30.1,29.3,28.5,25.5,22.9.
融点（１３２℃軟化）＝１４８℃
Ｒf＝０．３５（４０％メタノール−酢酸エチル）
実施例５３  Ｎ−（２−クロロ−６−メトキシプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃５３−の合成
0004151765.tif 000044
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＤＭＳＯ単位ｐｐｍ）：9.41(bs,1H,COOH),8.42(s,1H,プリン),7.3-7.8(bd,4H,グアニジン),6.28(d,1H,NH),4.08(s,3H,CH3),3.87(t,2H,CH2),4.18(t,2H,CH2),4.08(s,3H,CH3),3.87(t,2H,CH2),4.08(s,3H,CH3),3.87(t,2H,CH2),3.61(m,1H,CαH),3.04(m,2H,CH2),1.22-1.87(m,10H,5xCH2).
融点：１２８℃で軟化し、１４１℃で融解
Ｒf：０．４５（メタノール）
質量スペクトル：Ｍ+＝４７１
実施例５４  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−オルニチン−化合物＃５４−の合成
0004151765.tif 000045
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.20(1H,s,プリン),8.12(1H,s,プリン),6.21(1H,d,NH),4.10(2H,t,N-CH2),3.87(2H,t,O-CH2),3.59(1H,m,CαH),3.4(br,N-(CH3)2,NH2),2.70(2H,m,CδH2),1.9-1.2(10H,m,(CH2)3,CβH2,CγH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：176.3,156.2,153.8,150.7,148.8,138.9,118.5,63.5,54.2,42.5,38.0,37.0,28.6,28.3,27.2,22.4,21.7.
融点（１８５℃軟化）＝１８９−１９０℃
Ｒf＝０．２０（メタノール）
実施例５５  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｌ−オルニチン−化合物＃５５−の合成
0004151765.tif 000046
分光特性は化合物＃５４と同一であった。
実施例５６  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｌ−バリン−化合物＃５６−の合成
0004151765.tif 000047
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.19(1H,s,プリン),8.16(1H,s,プリン),6.30(1H,d,NH),4.13(2H,t,N-CH2),3.87(2H,m,O-CH2),3.64(1H,m,CαH),3.4(br,s,N-(CH3)2),1.80(2H,p,CH2),1.25(2H,p,CH2),0.79(3H,d,CγH3),0.75(3H,d,CγH3).
13Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：174.6,156.7,153.7,150.5,148.9,138.6,118.6,63.4,59.2,42.3,36.729.6,28.3,27.3,21.7,17.5,15.9.
融点（１４０℃で軟化）＝１７２−１７６℃
Ｒf＝０．２０（３０％メタノール−酢酸エチル）
実施例５７  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペントキシカルボニル−Ｄ−バリン−化合物＃５７−の合成
0004151765.tif 000048
分光特性は化合物＃５６と同一であった。
実施例５８  Ｎ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニルエチルアミン塩酸塩−化合物＃５８−の合成
0004151765.tif 000049
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ単位ｐｐｍ）：8.40(s,1H,プリン),8.43(s,1H,プリン),8.04(bs,3H,NH3),4.24(t,2H,CH2),4.02(t,2H,CH2),2.99(m,2H,CH2),2.67(t,2H,CH2),1.83(m,2H,CH2),1.62(m,2H,CH2),1.28(m,2H,CH2).
Ｒf：０．３  １０％メタノール／酢酸エチル
質量スペクトル：Ｍ+＝３２１
実施例５９  Ｎ−（６−メルカプトプリン−９−イル）ペンタノール−化合物＃５９−の合成
0004151765.tif 000050
1Ｈ  ＮＭＲ（δ  ＤＭＳＯ単位ｐｐｍ）：8.30(s,1H,プリン),8.18(s,1H,C2-プリン),4.34(t,1H,OH),4.15(t,2H,CH2-O),3.34(t,2H,CH2-N),1.82(m,2H,CH2),1.42(m,2H,CH2),1.24(m,2H,CH2).
Ｒf：０．５７  ３０％メタノール／酢酸エチル
質量スペクトル：Ｍ+＝２３９
実施例６０  Ｎ−（６−メチルチオプリン−９−イル）ペンタノール−化合物＃６０−の合成
0004151765.tif 000051
1Ｈ  ＮＭＲ（δ  ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：8.74(s,1H,プリン),7.95(s,1H,プリン),4.27(t,2H,CH2-N),3.65(t,2H,CH2-O),2.74(s,3H,SCH3),1.94(m,2H,CH2),1.60(m,2H,CH2),1.43(m,2H,CH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（δ  ＣＤ3ＯＤ  単位ｐｐｍ）：163.23,153.42,149.96,145.89,132.48,63.08,45.60,33.62,31.24,24.54,12.29.
融点：９５−９７℃
Ｒf：０．２２（酢酸エチル）
質量スペクトル：Ｍ+＝２５３
実施例６１  Ｎ−（６−クロロプリン−９−イル）−４−ブタノール−化合物＃６１−の合成
0004151765.tif 000052
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.66(1H,s,プリン),8.16(1H,s,プリン),4.33(2H,t,N-CH2),3.67(2H,t,O-CH2),3.04(1H,br s,OH),2.01(2H,p,CH2),1.55(2H,p,CH2).
融点＝９７℃
実施例６２  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ブタノール−化合物＃６２−の合成
0004151765.tif 000053
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.24(1H,s,プリン),7.68(1H,s,プリン),4.33(2H,t,N-CH2),3.89(1H,br s,OH),3.64(2H,t,O-CH2),3.46(6H,br,N-(CH3)2),1.92(2H,p,CH2),1.53(2H,p,CH2).
融点＝７８℃
実施例６３  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ブトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃６３−の合成
0004151765.tif 000054
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.20(1H,s,プリン),8.18(1H,s,プリン),8.1-7.3(4H,br,グアニジン),6.40(1H,d,NH),4.16(2H,t,N-CH2),3.91(2H,t,O-CH2),3.65(1H,m,CδH),3.4(6H,br,N-(CH3)2),3.02(2H,m,CδH),1.9-1.3(8H,m,CβH,CγH,-(CH2)2-).
融点（８５℃で軟化）＝１４０−１４２℃
実施例６４  Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ブトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃６３−の合成
0004151765.tif 000055
分光特性は化合物＃６３と同一であった。
融点（８５℃で軟化）＝１３９−１４２℃
実施例６５  Ｎ−（６−クロロプリン−９−イル）−６−ヘキサノール−化合物＃６５−の合成
0004151765.tif 000056
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：8.69(s,1H,プリン),8.11(s,1H,プリン),4.27(t,2H,CH2),3.58(t,2H,CH2),2.21(bs,1H,OH),1.91(m,2H,CH2),1.43(m,2H,CH2),1.35(m,4H,2xCH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：152.45,151.60,145.69,132.16,112.00,63.00,44.96,32.86,30.39,26.87,25.67.
融点＝８４−８６℃
Ｒf＝０．５  １０％（メタノール／酢酸エチル）
質量スペクトル：Ｍ+＝２５５
実施例６６  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−６−ヘキサノール−化合物＃６６−の合成
0004151765.tif 000057
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：8.35(s,1H,プリン),7.71(s,1H,プリン),4.17(t,2H,CH2),3.61(t,2H,CH2),3.53(bs,6H,2xCH3),1.89(m,2H,CH2),1.71(bs,1H,OH),1.55(m,2H,CH2),1.45(m,4H,2xCH2).
13Ｃ  ＮＭＲ（δ，ＣＤＣｌ3単位ｐｐｍ）：154.44,152.90,150.95,138.72,120.53,63.04,44.08,39.28,32.95,30.61,26.80,25.64.
融点  ７５−７７℃
Ｒf＝０．４８  １０％メタノール−酢酸エチル
質量スペクトル：Ｍ+＝２６４
実施例６７  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−８−ヘキシルオキシシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃６７−の合成
0004151765.tif 000058
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤ3ＯＤ  単位ｐｐｍ）：7.98(s,1H,プリン),7.31(s,1H,プリン),3.98(t,2H,CH2),3.78(m,3H,CH2およびCαH),3.27(bs,6H,2xCH3),2.96(t,2H,CH2),1.1-1.78(m,12H,6xCH2).
実施例６８  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−８−ヘキシルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃６８−の合成
0004151765.tif 000059
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＣＤ3ＯＤ  単位ｐｐｍ）：8.00(s,1H,プリン),7.82(s,1H,プリン),4.00(t,2H,CH2),3.80(m,3H,CH2およびCαH),3.29(bs,6H,2xCH3),2.97(t,2H,CH2),1.13-1.72(m,12H,6xCH2).
実施例６９  シス（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシルメタノール−化合物＃６９−の合成
0004151765.tif 000060
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.08(1H,s,プリン),8.07(1H,s,プリン),4.21(2H,d,N-CH2),3.49(2H,d,O-CH2),2.16(1H,m,CH),1.7-1.2(9H,m,CH2-シクロヘキサン,CH).
融点  ＞２００℃
Ｒf＝０．３（２０％メタノール−酢酸エチル）
実施例７０  シス（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシルメチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃７０−の合成
0004151765.tif 000061
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，４００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.10(1H,s,プリン),8.09(1H,s,プリン),4.24(2H,d,N-CH2),3.65(1H,m,CαH),3.52(2H,d,O-CH2),2.95(2H,m,CδH2),2.2-1.2(14H,m,2xCH-シクロヘキサン,4xCH2-シクロヘキサン,CβH2,CγH2).
実施例７１  トランス（Ｎ−６−ヒドロキシプリン−９−イル）−４−メチルシクロヘキシルメチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃７１−の合成
0004151765.tif 000062
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ，３００ＭＨｚ，δ単位ｐｐｍ）：8.09(2H,s,プリン),4.12(2H,d,N-CH2),3.68(1H,m,CαH),3.36(2H,d,O-CH2),3.01(2H,m,CδH2),2.0-0.9(14H,m,2xCH-シクロヘキサン,4xCH2-シクロヘキサン,CβH2,CγH2).
融点  ＞２００℃
Ｒf＝０．２（メタノール）
実施例７２  Ｎ−（６−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−５−ペンチルアミン塩酸塩−化合物＃７２−の合成
0004151765.tif 000063
1Ｈ  ＮＭＲ（δ，ＤＭＳＯ  単位ｐｐｍ）：8.20(s,1H,プリン),8.16(s,1H,プリン),7.84(bs,3H,NH3),4.14(t,2H,CH2),3.44(bs,6H,2xCH3),2.73(t,2H,CH2),1.81(m,2H,CH2),1.56(m,2H,CH2),1.25(m,2H,CH2).
実施例７３  Ｎ−（６−メチルアジリジンプリン−９−イル）−７−ペンチルオキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃７３−の合成
0004151765.tif 000064
化合物＃７３の分光データは化合物＃３９について報告したデータに類似した。
実施例７４  （２Ｓ，４Ｓ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−ヒドロキシメチル−１，３−ジオキソラン−化合物＃７４
0004151765.tif 000065
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.32(s,1H,プリン),7.75(s,1H,プリン),5.33(dd,1H,J=2.0,6.6,H-2-ジオキソラン),5.33(bs,1H,OH),4.45(dd,1H,J=6.6,14.3,CH2-プリン),4.02(dd,1H,J=2.0,14.3,CH2-プリン),4.20(m,1H,H-4-ジオキソラン),4.05(d,2H,J=7.2,H-5),3.78(d,1H,J=13.0,CH2-OH),3.53(bs,6H,(CH3)2N),3.40(d,1H,J=13.0,CH2-OH).
実施例７５  （１Ｓ，３Ｒ）および（１Ｒ，３Ｓ）−１−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）メチル−３−シクロペンタンメタノール−化合物＃７５
0004151765.tif 000066
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，３００ＭＨｚ）：δ8.32(s,1H,プリン),7.71(s,1H,プリン),4.18(dd,1H,.J=8.6,13.7),4.06(dd,1H,J=6.7,13.7),3.61-3.53(m,8H),3.00(bs,1H,OH),2.48(m,1H),2.17(m,1H),1.88-1.68(m,3H),1.53(m,1H),1.43(m,1H),1.08(m,1H).
実施例７６  （１Ｓ，３Ｒ）および（１Ｒ，３Ｓ）−１−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）メチル−３−（メチルオキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）シクロペンタン−化合物＃７６
0004151765.tif 000067
実施例７７  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエタノール−化合物＃７７
0004151765.tif 000068
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，４００ＭＨｚ）：δ8.34(s,1H,プリン),7.79(s,1H,プリン),4.29(t,2H,J=5.8,-CH2-),3.62(m,2H,-CH2-),3.54(bs,6H,(CH3)2N),3.11(t,2H,J=5.8,-CH2-),2.81(t,2H,J=5.2,-CH2-),2.05(bs,2H,NHおよびOH).
実施例７８  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃７８
0004151765.tif 000069
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，３００ＭＨｚ）：δ9.36(m,1H),8.19(s,1H,プリン),8.11(s,1H,プリン),6.38(d,1H,J=7.0,NHカルバメート),4.17(t,2H,J=6.1,-CH2-),3.91-3.87(m,2H,-CH2-),3.65(m,1H,CH-COOH),3.43(bs,6H,(CH3)2N),3.03-3.01(m,2H,CH2-NHC(NH)NH2),2.90(t,2H,J=6.1,-CH2-),2.68(t,2H,J=5.6,-CH2-),1.64-1.44(m,4H,CH2-CH2-CH2NHC(NH)NH2).
実施例７９  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エチルアミノエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃７９
0004151765.tif 000070
分光特性は化合物＃７８と同一であった。
実施例８０  ５−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−３−ペンチン−１−オール−化合物＃８０
0004151765.tif 000071
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.34(s,1H,H-2プリン),7.89(s,1H,H-8プリン),4.91(m,2H,CH2-N),3.74(t,2H,J=6.2,CH2-OH),3.52(bs,6H,(CH3)2N),2.87(bs,1H,OH),2.50(m,2H,CH2-CH2OH).
実施例８１  ５−（Ｎ−６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−３−ペンチニル−１−オキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃８１
0004151765.tif 000072
分光特性は化合物＃４０と同一であった。
実施例８２  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−チオエトキシエタノール−化合物＃８２
0004151765.tif 000073
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.30(s,1H,プリン),7.75(s,1H,プリン),4.41(t,2H,J=6.5,CH2リンカー),4.11(bs,1H,OH),3.73(t,2H,J=6.5,CH2リンカー),3.51(bs,6H,(CH3)2N),2.99(t,2H,J=6.5,CH2リンカー),2.68(t,2H,J=6.5,CH2リンカー).
実施例８３  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−チオエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃８３
0004151765.tif 000074
分光特性は化合物＃４０と同一であった。
実施例８４  （２Ｓ，４Ｓ）および（２Ｒ，４Ｒ）−２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノプリン−９−イル）−４−（メトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン）−１，３−オキサチオラン−化合物＃８４
0004151765.tif 000075
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，３００ＭＨｚ）：δ8.49(s,1H,プリン),8.47(s,1H,プリン),6.60(bs,1H,NHカルバメート),6.22(m,1H,H-2-オキサチオラン),4.26-4.03(m,3H),3.63-3.00(m,11H),2.78-2.69(m,2H,H-5-オキサチオラン),1.53-1.40(m,4H,CH2-CH2-CH2NH-C(NH)NH2).
実施例８５  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシエタノール−化合物＃８５
0004151765.tif 000076
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.29(s,1H,プリン),7.80(s,1H,プリン),4.33(t,2H,CH2),3.82(t,2H,CH2),3.68(t,2H,CH2),3.55(t,2H,CH2),3.50(m,6H,N(CH3)2).
実施例８６  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシカルボニル−Ｄ−アルギニン−化合物＃８６
0004151765.tif 000077
1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ8.25(s,1H,プリン),8.14(s,1H,プリン),6.5(bd,1H,NHカルバメート),4.37(t,2H,CH2リンカー),4.03(m,2H,CH2リンカー),3.81(m,2H,CH2リンカー),3.72(m,1H,CH-COOH),3.60(m,2H,CH2リンカー),3.55-3.89(m,6H,N(CH3)2),3.05(m,2H,CH2-NH-C(NH)NH2),1.78-1.39(m,4H,CH2-CH2-CH2NH-C(NH)NH2).
実施例８７  Ｎ，Ｎ−（６−ジメチルアミノプリン−９−イル）−７−エトキシエトキシカルボニル−Ｌ−アルギニン−化合物＃８７
0004151765.tif 000078
分光特性は化合物＃８６と同一であった。
実施例８８  Ｎ−（６−ジメチルアミノ−８−ブロモプリン−９−イル）−５−ペンタノール−化合物＃８８
0004151765.tif 000079
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）４００ＭＨｚ）：δ8.27(s,1H,プリン),4.18(t,2H,J=7.2,CH2),3.64(t,2H,J=6.3,CH2),3.48(bs,6H,N(CH3)2),2.02(bs,1H,OH),1.85(五重線,2H,J=7.2,CH2),1.63(五重線,2H,J=6.3,CH2),1.46(m,2H,CH2).
生物学的データ
ｉｎ  ｖｉｔｒｏスクリーニング：
実施例８９：  脾臓細胞懸濁液でのマイトジェン増殖
分裂促進性レクチン（マイトジェン）は、特定の細胞表面炭水化物決定基を結合し且つ架橋し、そしてリンパ系細胞を多クローン性に刺激するタンパク質である。抗原かまたはマイトジェンによるリンパ球活性化は、細胞内変化を引き起こし、続いてリンパ芽球を発生させる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでのリンパ球のマイトジェン刺激は、特定の抗原によるそれらの刺激後にｉｎ  ｖｉｖｏで起こる連続した事柄に似ていると考えられる。ＰＨＡ、ＣｏｎＡおよびＰＷＭ、ＬＰＳマイトジェンは、Ｔ細胞およびＢ細胞活性それぞれの測定に用いることができる。
簡単にいうと、Ｃ５７ＢＬ／６マウスからの脾臓単核白血球を、マイトジェン存在下または不存在下において試験薬物と一緒にまたは不含でインキュベートした。７２時間後たは５日後に、3Ｈチミジン取込みは、細胞の形質転換および増殖の指標として記録された。
細胞２Ｘ１０6個／ｍｌ（細胞２Ｘ１０5個／ウェル）の懸濁液１００μｌを、ＰＨＡまたはＣｏｎＡまたはＰＷＭまたはＬＰＳの存在下において以下の濃度でインキュベートした。
ＰＨＡ＝０．０１％  最終濃度−０．００１％
ＣｏｎＡ＝２μｇ／ｍｌ−１μｇ／ｍｌ
ＰＷＭ＝０．２ｘ−０．０２ｘ
ＬＰＳ＝５μｇ／ｍｌ−２μｇ／ｍｌ
細胞を、薬物の存在下または不存在下で７２時間インキュベートした。トリチウム化チミジン（3Ｈ）０．５μＣｉまたは１μＣｉを、それぞれインキュベーションの最後の１８時間または６時間にウェルごとに加えた。細胞を採取し且つベータカウンターで計数した。
0004151765.tif 000080
実施例９０：  細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）および混合リンパ球反応（ＭＬＲ）検定
混合リンパ球反応は、同種移植拒絶のｉｎ  ｖｉｔｒｏ対応反応である。簡単にいうと、Ｔ細胞応答は、任意の種の２種類の異系繁殖個体からの２種類の同系繁殖系から得られた細胞を培養中にｉｎ  ｖｉｔｒｏ混合した場合に得られた。一方向応答にするために、どちらかの細胞種の増殖をＸ線照射またはマイトマイシンＣ処理によって阻止することができる。
４日間のインキュベーション後、3Ｈチミジン取込みおよび細胞障害性検定（ＣＴＬ）を行った。
Ｃ５７Ｂｌ／６マウス３匹およびＤＢＡ／２マウス３匹を殺し、そしてリンホライトＭを用いてリンパ球を調製した。細胞濃度をそれぞれの溶解について細胞１０ｘ１０6個／ｍｌに調整した。ＤＢＡ／２細胞に３０００ラドを照射した。Ｃ５７細胞１ｍｌ＋ＤＢＡ／２細胞１ｍｌ＋３種類の異なる濃度の薬物１ｍｌを一緒に５日間インキュベートした。正の対照は、最終濃度１５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２であった。５日後、ＣＴＬおよびＭＬＲ試験を行った。
ＭＬＲ
細胞を再懸濁させ、細胞懸濁液１００μｌをプレートの９６ウェルそれぞれに加え、２０μＣｉ／ｍｌのチミジン５０μｌを６時間加えた。次に、細胞を集め、そしてベータカウンターを用いて計数した。
ＣＴＬ
Ｐ８１５標的細胞をＣｒ51によって標識した。標識後、細胞を再懸濁させて細胞５ｘ１０4個／ｍｌにした。エフェクター細胞を、細胞２．５ｘ１０6個／ｍｌに調整した後、１：２および１：４に希釈して、必要なエフェクター対標的比率を得た。
５０：１（細胞２．５ｘ１０6個／ｍｌ：細胞５ｘ１０4個／ｍｌ）
２５：１（細胞１．２５ｘ１０6個／ｍｌ：細胞５ｘ１０4個／ｍｌ）
１２．５：１（細胞０．６２５ｘ１０6個／ｍｌ：細胞５ｘ１０4個／ｍｌ）
標的細胞１００μｌ＋Ｔ細胞１００μｌを４時間インキュベートした後、ガンマカウンターを用いて上澄み１００μｌを計数した。
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ｉｎ  ｖｉｖｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏスクリーニング
実施例９１：  免疫表現型決定
ｉｖ  ｖｉｔｒｏ薬物分析後、薬物を全血に対して薬物安定性および細胞障害性について評価した。更に、ｉｎ  ｖｉｖｏ／ｅｘ  ｖｉｖｏ分析を、正常なおよびシクロホスファミドで免疫抑制された動物および５Ｆｕで処置された動物について行った。細胞免疫表現型決定は、マウスの被処置血液および脾臓について行われた。以下の細胞表面抗原を分析した。
ＣＤ３（全Ｔ細胞）、ＣＤ４（Ｔヘルパー／インデューサー、クラスＩＩ制限Ｔ細胞に結合する）、ＣＤ８ａ（細胞障害性Ｔ細胞、ＣＴＬ付着）、ＣＤ１１ａ（Ｔ、Ｂ、ＮＫ、若干の幹細胞、ＣＴＬ付着抗ＬＦＡ−１α）、ＭＡＣ−１（単球／マクロファージ）、ＮＫ（ナチュラルキラー細胞）、Ｌｙ５（Ｂ細胞）、ＣＤ４５（全白血球、タンパク質チロシンリン酸）およびＴＣＲ（Ｔ細胞受容体）。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（６〜８週令）に４日間連続して毎日注射し、５日目に殺し、そして免疫表現型決定を血液および脾臓細胞について行った。
細胞をＰＢＳ中で２回洗浄し、ＲＰＭＩ  ２％ＦＢＳ  １ｍｌ中に再懸濁させ、そして単クローン性抗体と一緒に氷上で４５分間インキュベートした。細胞を１回洗浄し、１％パラホルムアルデヒドによって固定した後、ＸＬクールター（Ｃｏｕｌｔｅｒ）▲Ｒ▼カウンターを用いて分析した。結果を表３ａおよび３ｂで示す。
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抗腫瘍評価プロトコル
以下の手順を用いて、化合物の腫瘍増殖抑制について試験した。
実施例９２：  乳癌の増殖に対するシクロホスファミドと組合わせた化合物＃１の効果
Ｂａｌｂ／Ｃマウス（ｎ−５／Ｇｒ）を、ＤＡ−３乳癌細胞系と一緒に用いた。マウスを−２〜１３日間処置した。被験動物の腫瘍獲得／腫瘍大きさおよび体重について０日から２１日まで３週間監視した。Ｄ０は腫瘍細胞接種日であり且つＤ２１は実験終了日であった。
効果のパラメーターは、腫瘍増殖および増殖速度の阻害［腫瘍を最長軸（長さ）および垂直最短軸（幅）に沿って測定しそして腫瘍体積（Ｔ．Ｖ．±Ｓ．Ｅ．）を、式Ｔ．Ｖ．＝長さ（ｃｍ）ｘ（幅ｃｍ）2／２によって計算した。］と体重減少に評価によって測定された。
対照未処置および薬物処置群の腫瘍獲得および腫瘍大きさの間の差の統計的有意性は、カイ自乗およびスチューデントｔ検定をそれぞれ用いて、ｐ＜０．０５で決定される有意性によって推定される。
マウスを以下の５群に分けた。
Ｇｒ．１−正常食塩水（０．２ｍｌ／マウス、腹腔内、Ｄ２に開始）
Ｇｒ．２−ＣＹ（１００ｍｇ／ｋｇ、Ｄ０に１回の静脈内ボーラス）
Ｇｒ．３−化合物＃１（２５ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、Ｄ２に開始）
Ｇｒ．４−化合物＃１（５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、Ｄ２に開始）
Ｇｒ．５−ＣＹ（１００ｍｇ／ｋｇ、Ｄ０に静脈内＋化合物＃１  ５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、Ｄ２に開始）
結果を表６並びに図１および２で示す。
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実施例９３：  ＤＡ−３乳癌に対するシクロホスファミド（シトキサン）（ＣＴＸ、２０ｍｇ／ｋｇ）との組合わせの化合物＃１の評価
化合物＃１（２５および５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内、毎日）およびＣＴＸ（２０ｍｇ／ｋｇ、１回の静脈内ボーラス）の組合わせを、第４日の定着したＤＡ−３腫瘍に対して評価した。
結果は、化合物＃１（２５ｍｇ／ｋｇにおいて）およびＣＴＸの併用処置について有意の効果を示さなかった。しかしながら、一時的であるが有意な効果が、ＣＴＸおよび５０ｍｇ／ｋｇの化合物＃１によって９日目から１８日目まで見られた（図３）。正の抗腫瘍作用の衰退は、腫瘍増殖の後期においてＴサプレッサー細胞が発生するためであると考えられる。有意の体重減少は見られなかった（図４）。
実施例９４：  ＤＡ−３乳癌に対するシクロホスファミド（シトキサン）（ＣＴＸ、２８ｍｇ／ｋｇ）との組合わせの化合物＃１の評価
もう一つの実験において、ＣＴＸ処置を延長した。Ｂａｌｂ／ｃマウスに、ＤＡ−３腫瘍細胞５ｘ１０5個を第０日に皮下注射した。４日目に定着腫瘍が見られたら、腫瘍がある動物を無作為抽出し（ｎ＝１１／群）、そしてＣＴＸ（２８ｍｇ／ｋｇで）静脈内ボーラス注射によって４日目、１１日目および１８日目に注射した。化合物＃１による処置は、２日目に開始して２８日目まで５０ｍｇ／ｋｇを毎日腹腔内注射する標準的な処置計画を用いて開始された。
この実験の結果（表７）は、腫瘍増殖の１１日目から３０日目までの間において、化合物＃１（ＢＣＨ−１３９３）＋ＣＴＸ併用処置の極めて統計的に有意の（ｐ，０．００１〜ｐ＜０．００５）抗腫瘍作用を示す。有意の体重減少は見られなかった（表８）。
実施例９５：  結腸癌に対する５ＦＵとの組合わせの化合物＃１の評価
６〜８週令のＣ５７ＢＬ／６マウス（ｎ＝７〜９／群）に、ＭＣ３８結腸腺癌細胞３ｘ１０5個を第０日に皮下注射した。７日目に、腫瘍があるマウスを無作為抽出し、そして２０ｍｇ／ｋｇの５ＦＵを単独でかまたはレバミソール（ｌｅｖａｍｉｓｏｌｅ）２０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内と組合わせて、若しくは化合物＃１  ２５および５０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内と組合わせて４週間にわたって注射した。この期間中、被験動物は、１週間に５日間連続して処置され、２日間処置されず、そして再び５日間連続して４週間処置された。
この実験の結果は、対照未処置群と比較して、化合物＃１（５０および２５ｍｇ／ｋｇで）＋５ＦＵ（２０ｍｇ／ｋｇ）後の有意の用量依存性抗腫瘍作用を示す（図５）。５ＦＵ＋化合物＃１（５０ｍｇ／ｋｇで）の抗腫瘍作用は、５ＦＵ＋レバミソールのそれよりも顕著であった。弱い抗腫瘍反応は、５ＦＵ（２０ｍｇ／ｋｇ）単独または５ＦＵ（２０ｍｇ／ｋｇ）およびレバミソール（２０ｍｇ／ｋｇ）による処置後に見られた。これは、２０ｍｇ／ｋｇが、ＭＣ３８結腸腺癌に対する５ＦＵの最適以下の用量であるということによるかもしれない。
実施例９６：  化合物＃１のｉｎ  ｖｉｖｏ毒性
この研究の目的は、フッシャー（Ｆｉｓｈｅｒ）雄および雌ラットにおいて反復静脈内注射後の化合物＃１の毒性用量を見つけることであった。
雄ラット３匹および雌ラット３匹の群に、５日間連続して毎日静脈内注射した。第一群に５００ｍｇ／ｋｇ、第二群に２５０ｍｇ／ｋｇ、そして第三群に１２５ｍｇ／ｋｇを与えた。更に、雄１匹および雌１匹に１０００ｍｇ／ｋｇを注射した。未処置群（雄および雌）を実験に含めた。全ての用量に対して、０．１ｍｌ／１００ｇの一定量を用いた。注射は、第０日に開始され、そして４日目まで（５日間）続けられた。処置期間中、体重変化を毎日記録し、そして注射後少なくとも１時間は薬物作用の徴候についてラットを観察した。８日目に、ラットを安楽死させ、そして内部臓器の肉眼検査を行った。
１０００ｍｇ／ｋｇを静脈内注射された両方のラット（雄１匹および雌１匹）は、重症の結腸痙攣を示し、１０分以内に致死した。５００ｍｇ／ｋｇの場合、全てのラットは、胴体部分の単収縮、前足の振せんおよび跳躍症状を有することが観察された。これらの徴候は１時間未満続き、それぞれ５回の注射後に同様であった。被験動物の成長曲線は、対照と比較した場合、影響されなかった。二つの低い方の用量（２５０ｍｇ／ｋｇおよび１２５ｍｇ／ｋｇ）については、投薬中のどの時点でも異常な徴候が見られなかったし且つ成長曲線は正常であった（図６および７）。これらの被験毒物の剖検では、薬物による変化は見られなかった。
化合物＃１は、フィッシャーラットにおいて静脈内注射された場合、十分に許容された。連続５日間注射された２５０ｍｇ／ｋｇの用量は、毒性の徴候を生じなかった。化合物は、１０００ｍｇ／ｋｇの用量で結腸痙攣を引き起こし且つ致死的であった。５００ｍｇ／ｋｇの用量は、若干の短期間の異常な徴候を生じたが、被験動物の成長に対して致死作用はなかった。
結論
データから、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、本発明の化合物、特に、化合物＃１は、Ｔ細胞（ＣＴＬを含む）およびＢ細胞を活性化すると考えられる。
ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、本発明の化合物、特に、化合物＃１は、ＣＴＬの数を増加させる。
本発明の化合物、特に、化合物＃１は、十分に許容されると考えられる。
化合物＃１は、ｉｎ  ｖｉｖｏのマウス乳癌に対して、シクロホスファミドとの組合わせで腫瘍増殖を阻害すると考えられる。
化合物＃１は、ｉｎ  ｖｉｖｏのマウス結腸腺癌に対して、５ＦＵとの組合わせで腫瘍増殖を阻害すると考えられる。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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