(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
損傷部位へのマクロファージ、好中球、他の白血球の浸潤により特徴づけられる脳卒中からもたらされる組織および細胞に対する損傷を治療するための薬剤であって、該薬剤がヒアルロン酸又はその薬理学的に許容し得る塩の有効量を含むと共に、静脈注射又は皮下注射に適した形態のものであることを特徴とする薬剤。
【請求項２】
前記薬剤がＮＳＡＩＤ、抗脳卒中剤、凝固溶解剤、ベータ・ブロッカー、アセチルサリチル酸、ストレプトキナーゼ、抗血小板薬、ヘパリン、プラスミノーゲン・アクチベーター、又はこれらの組合せから選ばれるものを更に含む請求項１記載の薬剤。
【請求項３】
前記ヒアルロン酸又はその薬理学的に許容し得る塩が、７５０，０００ダルトン未満の分子量を有するヒアルロン酸ナトリウムである請求項１又は２記載の薬剤。
【請求項４】
前記ヒアルロン酸又はその薬理学的に許容し得る塩が、３００，０００ダルトン未満の分子量を有するヒアルロン酸ナトリウムである請求項１又は２記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
発明の技術分野
本発明は酸素および／あるいはグルコース欠乏組織などの病気により損傷された部位への白血球の湿潤により特徴づけられる病気あるいは容体を治療するための薬剤に関する。この発明の適用の対象の１つは脳卒中である。この発明の適用の対象の他の１つは心筋梗塞である。さらに本発明の適用の対象は損傷部位への白血球の浸潤により特徴づけられる病気あるいは容体を治療するための薬剤である。
発明の背景
組織（および各細胞）が酸素および／あるいはグルコース欠乏の場合、細胞、したがってその細胞からなる組織が損なわれる。その結果、とりわけ、炎症反応がその損傷部位に生じる。この炎症反応はとりわけ、炎症細胞（マクロファージ、好中球、他の白血球）の損傷部位への移行が見られる。
例えば、脳卒中あるいは心筋梗塞、心臓発作の間、原因の如何を問わず、血管中の血液の供給が阻害され減少する。その結果、酸素およびグルコースの欠乏が生じ、少なくともその部位が損傷される。
この損傷により、とりわけ、炎症応答がその損傷部位に生じ、炎症細胞（マクロファージ、好中球、他の白血球）の損傷部位への移行が生じる。その損傷（外傷）のため、プロスタグランジン合成が増大する。
未熟児において酸素およびグルコースの欠乏が脳に生じた場合、同じシナリオ、つまり、乳児の脳の酸素欠乏により炎症応答（炎症細胞、例えばマクロファージ、好中球、他の白血球の移行）が生じる。
したがって、本発明の目的は、薬剤組成物（例えば注射可能（滅菌））、治療法、公知の薬品の新規な用途を提供するものであり、これにより組織、細胞の損傷（例えば脳卒中、心筋梗塞、その他の損傷部位へのマクロファージ、好中球、他の白血球の浸潤あるいは移行による炎症応答により特徴づけられる病気）を減少させることである。
本発明の他の目的は、薬剤組成物、治療法、公知の薬品の新規な用途を提供し、細胞の活性（マクロファージ、好中球、他の白血球）を抑え、人体の抗炎症応答を緩和（変化）させることである。
本発明の他の目的は以下の説明から当業者にとって自明であると思われる。
本発明の概要
本発明の１つの態様においては、酸素およびグルコースの欠乏により組織あるいは細胞に損傷が生じた場合、ヒアルロン酸あるいはその薬理学的に許容し得る塩（例えばヒアルロン酸ナトリウム）をその損傷部位にその時点（例えば、脳卒中、心筋梗塞、その他の損傷部位へのマクロファージ、好中球、他の白血球の浸潤による炎症応答により特徴づけられる病気の発生時点あるいはその直後）で投与することにより炎症細胞（例えば、マクロファージ、好中球、他の白血球）の活性を調整または転形する（例えば、それらの損傷部位への移行を減少させる）ことを特徴とする。この本発明の機構については確定したものでないが、ヒアルロン酸あるいはその塩（例えばヒアルロン酸ナトリウム）が結合を介して炎症細胞（例えば、マクロファージ、好中球、他の白血球）のヒアルロン酸（ＨＡ）レセプターをブロック（阻止）し、これら炎症細胞の損傷組織への移行をブロックするものと推察する。
この場合のヒアルロン酸の好ましい形態は分子量が７５０，０００ダルトン未満｛例えば５０，０００ダルトン未満、約１００，０００ないし３００，０００ダルトンの間のものである。
この炎症応答（損傷部位へのマクロファージ、好中球、他の白血球の移行、浸潤による炎症応答）を補助させるため、ＮＳＡＩＤ（非ステロイド系坑炎剤）を、ＨＡレセプターをブロックするヒアルロン酸系物質とともに与えてもよい。これによりプロスタグランジン合成の抑制が達成される。
ヒアルロン酸あるいはその塩（好ましくは分子量が７５０，０００ダルトン未満ヒアルロン酸ナトリウム）は、投与の形態にもよるが、１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重ないし１５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重、あるいはそれ以上、例えば２５ｍｇ／ｋｇ体重、さらに３０００ｍｇ／７０ｋｇ体重以上用いることもできる。成人（大人のラットを含め）の場合、ヒアルロン酸を過剰に投与することができるが、ラット新生児の場合は過剰の投与は損傷を生じさせる。
したがって、本発明の他の態様によれば、ＮＳＡＩＤ例えばインドメタシン（ｎ−メチルグルタミンに溶解して）あるいは他のＮＳＡＩＤ（例えばインドメタシンおよびＮＭＧ）を２００ｍｇ／７０ｋｇ体重以上のヒアルロン酸系物質、例えばヒアルロン酸ナトリウムとともに１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の割合で用いる場合も、胃腸障害、神経異常、鬱などの主な副作用を生じさせるおそれもなく、インドメタシンの量を必要に応じてこれより多くした場合でも、そのような副作用は生じない。もし、ヒアルロン酸の量をこの下限値より少なくした場合は、ＮＳＡＩＤに伴う通常の副作用が再発する。同じことが他の治療薬についても言え、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸ナトリウム）を２００ｍｇ／７０ｋｇ体重以上投与した場合は、主な副作用は生じない。
好ましくは（実際のテストに基づいて）、ヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸ナトリウム）の好ましい投与量は約１０〜２５ｍｇ／ｋｇ体重であり、例えば背中に皮下投与した場合は１８００ｍｇ／７０ｋｇ体重程度である。静脈投与の場合はヒアルロン酸系物質の量をより少なくすることができる。その好ましい投与量は約１０〜２０ｍｇ／ｋｇ体重である。
ラット新生児の最近のテストでは、適当な１回投薬量としてヒアルロン酸系物質（例えばヒアルロン酸ナトリウム）の血液中の濃度は成人の場合、約３ｍｇ／ｍｌとなることが見出された。投与量としては、約１０〜２５ｍｇ／ｋｇ体重（成人）の範囲である。より最近のラット新生児のテストでは、ヒアルロン酸の濃度は（ラット新生児に対し皮下投与後１２時間）、血液中濃度は１０ｍｇ／ｋｇとなることが見出された。これらの量は状況に応じて調整することができる。
この投与は病気あるいは容体（例えば、脳卒中、心筋梗塞）の発生時、あるいは直後（２４時間以内）になされるべきであり、投与は必要がなくなるまで続けられる。好ましくは、血液中の一定のレベルが持続されるべきである。例えば、最初の静脈注射で血液中で１５ｍｇ／ｋｇ体重のレベルが達成されたなら、そのレベルが皮下投与（例えば皮下注射）により維持されるべきである。
ＮＳＡＩＤの有効量を同時に与えてもよい（例えばインドメタシンの場合、これを１〜２ｍｇ／ｋｇ体重の割合で）。
心筋梗塞、脳卒中のための治療薬、例えば凝血溶解剤も投与してもよい。この凝血溶解剤はＴＰＡ、ストレプトキナーゼ（たんぱく質分解物）、ウロキナーゼなどである。他の薬剤としては、ＮＳＡＩＤ、アセチルサリチル酸（アスピリン）、ベータ・ブロッカー、ヘパリン、プラスミノーゲン・アクチべーターなどである。
ＮＳＡＩＤ以外にも、ヒアルロン酸（例えば、分子量が７５０，０００ダルトン未満、例えば３００，０００ダルトンのヒアルロン酸ナトリウム）とともに他の薬剤（脳卒中の場合）を投与してもよい。それらの薬剤は通常通りの量で用いられ、上記のものの他、抗血小板剤（凝血を防止し、血栓（凝固）を防止する）を用いてもよい。
ヒアルロン酸あるいはその塩（例えば、ヒアルロン酸ナトリウム）、あるいはヒアルロン酸の同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニットは、ステリベット（Aterivet）・ラバラトリーから入手することができる。その１つの分画はヒアルロン酸ナトリウム２０ｍｇ／ｍｌ（３００ｍｇ／瓶−ロット２Ｆ３）の１５ｍｌ瓶である。このヒアルロン酸ナトリウム分画は平均分子量約２２５，０００ダルトンの２％溶液である。この分画は、米国注射規格に従って３回蒸留され、滅菌された十分量の水を含んでいる。このヒアルロン酸あるいはヒアルロン酸ナトリウムの小瓶は第１種ホウケイ酸ガラスのもので内容物と反応しないブチル栓で密閉されている。
ヒアルロン酸および／またはその塩（ナトリウム塩）は以下の特徴を有する。
自然物から得られる精製され、実質的に発熱物質を含まないヒアルロン酸の分画は以下から選ばれる少なくとも１つの特徴を有する。
i）分子量が１５０，０００〜２２５，０００の範囲内である。
ii）全重量に基づいて硫酸塩化ムコ多糖類を約１．２５％未満含む。
iii）全重量に基づいて０．６％未満のタンパク質を含む。
iv）全重量に基づいて１５０ｐｐｍ未満の鉄を含む。
V）全重量に基づいて１５ｐｐｍ未満の鉛を含む。
Vi）０．００２５％未満のグルコサミンを含む。
Vii）０．０２５％未満のグルクロン酸を含む。
Viii）０．０２５％未満のＮ−アセチルグルコサミンを含む。
iX）０．００２５％未満のアミノ酸を含む。
X）ＵＶ吸収係数が２５７ｎｍで約０．２７５未満である。
Xi）ＵＶ吸収係数が２８０ｎｍで約０．２５未満である。
Xii）ｐＨが７．３〜７．９の範囲である。
好ましくは、ヒアルロン酸は水と混合され、ヒアルロン酸の分画が１５０，０００〜２２５，０００の範囲の平均分子量を有するものである。より好ましくは、ヒアルロン酸の分画は下記の特徴の少なくとも１つ有するものである（より好ましくはこれら全ての特徴を有していることである）。
i）全重量に基づいて硫酸塩化ムコ多糖類を約１％未満含む。
ii）全重量に基づいて０．４％未満のタンパクを含む。
iii）全重量に基づいて１００ｐｐｍ未満の鉄を含む。
iv）全重量に基づいて１０ｐｐｍ未満の鉛を含む。
V）０．００１６６％未満のグルコサミンを含む。
Vi）０．０１６６％未満のグルクロン酸を含む。
Vii）０．０１６６％未満のＮ−アセチルグルコサミンを含む。
Viii）０．００１６６％未満のアミノ酸を含む。
iX）ＵＶ吸収係数が２５７ｎｍで約０．２３未満である。
X）ＵＶ吸収係数が２８０ｎｍで約０．１９未満である。
Xi）ｐＨが７．５〜７．７の範囲である。
ヒアルロン酸および／またはその塩（ナトリウム塩）、およびその同族体、類似化合物、誘導体、錯体、エステル、分画（フラグメント）および／またはサブユニットを上記の他のメーカーからのものを選ぶこともできる。
本発明者はその他、LifeCore Biomedical社から製造、販売されていて、以下の特性を有するヒアルロン酸ナトリウムを使用することを提案する。
0004111537.tif 000002
投与は皮下、静脈、注射などにより行うことができる。
発明の詳細な説明
本発明を以下の実施例を参照して説明する。
実施例１
手術３０分前に７日齢のフィッシャ・ラット新生児に対し、分子量が３００，０００ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを０．６ｍｇ／６０μｌ／動物で、皮下注射した。手術後、この動物を毎日１回７日間注射し、手術後、１４日目に安楽死させた。右頸動脈を１時間、結紮した（脳卒中を生じさせるため）。動物を８％酸素の保育器に収容した。左側は縛らずにおき、対照とした。脳損傷は対照の動物において４日目、７日目までに発生したことが、ニスル染色（神経について）、グリオシス、ＧＦＡＰ、コネキシン４３およびマクロファージ（ＥＤ−１、エピトープ）についての増大した染色から判明した。同様に、ヒアルロン酸レセプターの増大した染色が認められ、ＣＤ４４もマクロファージおよびアストロサイトの増大が認められ、ＲＨＡＭＭはニューロン細胞、マクロファージのサブセットが増大した。組織的にも同様の損傷が認められ、ニューロンの明らかな損失が見られ、脳の右半分は崩壊した。７日間ＨＡで治療した動物は１４日目に安楽死させたが（対照動物と同様に）、上記のパラメータについてはいずれも陰性であった。すなわち、脳の崩壊、ニューロンの損失、マクロファージの増大、グリオチン蛋白あるいはヒアルロン酸レセプターの発現の増大は認められなかった。ヒアルロン酸で治療した動物の脳は形態学的に正常であった。但し、ニューロン活性についての機能テストは行わなかった。明瞭な形態学的変化がなかったことから、顕著な機能損傷は予想されなかった。
分子量が３００，０００ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを２３ｇの動物に皮下注射したことは、７０ｋｇのヒトにとって１．８ｇの皮下注射に相当する。なお、静脈注射の場合は、その量は少なくて済む。
ヒトにはｋｇ当り約８５ｃｃの血液がある。従って、平均の成人では血液が約６，０００ｃｃ（７０ｋｇの体重のヒト）となる。従って、ヒアルロン酸ナトリウムの濃度は血液１ｃｃ当り０．３ｇのオーダーとなる。この濃度を達成するにはヒトの場合、２５ｍｇ／ｋｇのオーダーの投与量となる。
実施例２
右頸動脈を３時間、結紮した（実施例１と比較して２時間長い）以外は実施例１と同様にして実験を行い、より大きい壊疽を生じさせた。この実施例２においては、各動物新生児に実際の体重に関係なく、同量（０．６ｍｇ）のヒアルロン酸ナトリウム（ＨＡ）を与えた。ヒアルロン酸ナトリウムの皮下注射は手術の際に行った。
皮下注射後、１２時間目のＨＡの血液中の濃度は１５〜２０ｍｇ／ｋｇであった。この濃度レベルを連続的に測定した結果、１５ｍｇ／ｋｇの濃度が２４時間保たれた。
手術後、ＨＡの注射を同じ量で２４時間おきに７日間継続した。その７日間において、１５ｍｇ／ｋｇの濃度が低下することはなかった。
この動物の脳を対照動物を含めて２週間目に検査した。
ＨＡの注射を行った３匹の動物は実施例１でＨＡの注射を行った動物の脳と同様の状態を示した。１匹の対照動物は著しい脳の損傷が認められた。これらのテストの結果から、１ｍｇ／ｋｇ（動物体重）の濃度でもマクロファージ、好中球、他の白血球の病気部位への浸潤をブロックでき、治療効果があると結論づけた。なお、ＨＡの投与量は１０ｍｇ／ｋｇ（動物体重）以上、例えば１０〜２０ｍｇ／ｋｇ（動物体重）が好ましい。
実施例３
ヒトおよび大人のラットはヒアルロン酸（ＨＡ）の過剰な投与に耐えられるが、ラット新生児はそれほど抵抗力はない。従って、実施例３では、より小さいラット新生児にＨＡを２５ｍｇ／ｋｇ（動物体重）で投与した。その結果、脳の損傷が認められた。
実施例４
４匹のラットをイソプテラノールに曝し、心筋梗塞（心臓発作）を誘発させた。このイソプテラノールに曝し心筋梗塞を誘発させる方法は当業者に周知の手段であるので、詳細は説明しない。このラットの内の２匹については心筋梗塞の直後に分子量が３００，０００ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを１５ｍｇ／ｋｇ（動物体重）注射した。この皮下注射は７日間（毎日、１回）継続して行われた。最初の皮下注射後、各ラットの１２時間目のＨＡの血液中濃度は１０ｍｇ／ｋｇであった。
他の２匹については心筋梗塞の直後に生理食塩水を注射した（対照）。この皮下注射は７日間（毎日、１回）継続して行われた。ついで、ラットを死亡させた。食塩水を注射したラットは心臓組織が多量に蓄積された白血球で壊疽の状態にあった。これに対し、ＨＡ−治療を行ったラットについては、心臓組織に損傷は認められず、白血球の蓄積はなかった（凍結片のＥ０−１染色により判定）。
これらのテストの結果から、ヒトにおいて、１０〜２０ｍｇ／ｋｇ（体重）の投与が適当であると結論した。これより少ない量でも治療効果はあるが、最良の結果が得られない。すなわち、最良の効果が脳卒中、心筋梗塞の治療に望ましいからである。
好ましくは、最初に適当なＨＡを静脈注射して血液中のＨＡレベルを確立する。その後、皮下投与（皮下注射）でそのレベルを保つようにする。
なお、上記実施例は単なる例示に過ぎず、本発明の範囲で種々の変更が可能なことは勿論である。