(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
採取された血液を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液からなる定量用溶液、及び、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量するための希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する方法であって、
（１）採取された血液を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液で希釈する工程と、
（２）該希釈血液溶液を、分離手段により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液を調製する工程と、
（３）希釈血漿溶液の調製後に残った細胞画分を第２希釈用溶液で希釈し、希釈細胞画分溶液を調製する工程と、
を含むことを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項２】
請求項１記載の定量用溶液調製方法において、
分離手段が、フィルタ、物理的ストレス又はフィルタと物理的ストレスとの組合せであることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項３】
請求項２記載の定量用溶液調製方法において、
フィルタが、微細繊維集合体、多孔質ポリマー又は微粒子集合体であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項４】
請求項２記載の定量用溶液調製方法において、
物理的ストレスが、攪拌又は振動であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項５】
請求項１記載の定量用溶液調製方法において、分離手段が物理的ストレスである態様において、
第１希釈用溶液が、血液凝固を促進させるための凝固促進剤を含有していることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項６】
請求項１ないし５のいずれかに記載の定量用溶液調製方法において、
指示物質が、外因性指示物質であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項７】
請求項６記載の定量用溶液調製方法において、
外因性指示物質が、酸化カップリング発色型色原体であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項８】
請求項１ないし５のいずれかに記載の定量用溶液調製方法において、
指示物質が、内因性指示物質であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項９】
請求項８記載の定量用溶液調製方法において、
内因性指示物質が、コリン、グリセロール−３−リン酸、キサンチン、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−アセチルグルコサミン及び１，５−アンヒドログルシトールからなる群より選ばれる内因性指示物質であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項１０】
請求項１ないし９のいずれかに記載の定量用溶液調製方法において、
第２希釈用溶液が、ヘモグロビン安定化剤を含有する溶液であることを特徴とする定量用溶液調製方法。
【請求項１１】
血液を用いて、血漿中の被測定成分、及び、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法であって、
血漿中の被測定成分を定量する方法が、
（１）請求項１記載の方法にて希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、
（２）（１）の定量用溶液中の指示物質の濃度と、第１希釈用溶液中の指示物質の濃度とから、該定量用溶液中の血漿の希釈倍率を算出する工程と、
（３）該定量用溶液中の被測定物質の濃度を測定する工程と、
（４）（２）で算出した希釈倍率と、（３）で測定した定量用溶液中の被測定物質の濃度とから、該血漿中の被測定物質の濃度を定量する工程と、
を含み、
細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法が、
（５）請求項１記載の方法にて希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、
（６）（５）で調製された定量用溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する工程と、
を含むことを特徴とする定量方法。
【請求項１２】
互いに嵌合可能な第１容器及び第２容器を具備し、
第１容器は、所定量の希釈用溶液が収容される希釈用溶液収容部を備え、
一方、第２容器は、定量用溶液が収容される定量用溶液収容部と、この定量用溶液収容部に隣接して設けられ且つ第１容器の希釈用溶液収容部に嵌合する嵌合部と、この嵌合部に設けられ且つ定量用溶液収容部と第１容器の希釈用溶液収容部との間を相互に連通接続する連通部と、この連通部内に設けられて血漿と細胞画分とを分離する分離体と、前記定量用溶液収容部の連通部以外の一部に設けられる大気開放口とを少なくとも備える定量用溶液調製器具を使用するに際し、
第１容器の希釈用溶液収容部に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液を収容すると共に、
第１容器と第２容器とが嵌合される前において、第２容器の連通部のうち分離体の入口部に採取された血液を保持させ、
しかる後、第１容器と第２容器とを嵌合させ、第２容器の定量用溶液収容部に希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製することを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１３】
互いに嵌合可能な第１容器及び第２容器を具備し、
第１容器は、所定量の希釈用溶液が収容される希釈用溶液収容部を備え、
一方、第２容器は、定量用溶液が収容される定量用溶液収容部と、この定量用溶液収容部に隣接して設けられ且つ第１容器の希釈用溶液収容部に嵌合する嵌合部と、この嵌合部に設けられ且つ定量用溶液収容部と第１容器の希釈用溶液収容部との間を相互に連通接続する連通部と、この連通部内に設けられて血漿と細胞画分とを分離する分離体と、前記定量用溶液収容部の連通部以外の一部に設けられる大気開放口とを少なくとも備える定量用溶液調製器具を使用するに際し、
第１容器の希釈用溶液収容部に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液を収容すると共に、
前記第１希釈用溶液に採取された血液を添加し、
しかる後、第１容器と第２容器とを嵌合させ、第２容器の定量用溶液収容部に希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製することを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１４】
互いに嵌合可能な第１容器及び第２容器を具備し、
第１容器は、所定量の希釈用溶液が収容される希釈用溶液収容部を備え、
一方、第２容器は、定量用溶液が収容される定量用溶液収容部と、この定量用溶液収容部に隣接して設けられ且つ第１容器の希釈用溶液収容部に嵌合する嵌合部と、この嵌合部に設けられ且つ定量用溶液収容部と第１容器の希釈用溶液収容部との間を相互に連通接続する連通部と、この連通部内に設けられて血漿と細胞画分とを分離する分離体と、前記定量用溶液収容部の連通部以外の一部に設けられる大気開放口とを少なくとも備える定量用溶液調製器具を使用するに際し、
第１容器の希釈用溶液収容部に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液を収容すると共に、
第１容器と第２容器とが嵌合される前において、第２容器の連通部のうち分離体の入口部に採取された血液を保持させ又は第１希釈用溶液に採取された血液を添加し、
しかる後、第１容器と第２容器とを嵌合させ、第２容器の分離体内部に希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製することを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１５】
互いに嵌合可能な第１容器及び第２容器を具備し、
第１容器は、所定量の希釈用溶液が収容される希釈用溶液収容部を備え、
一方、第２容器は、定量用溶液が収容される定量用溶液収容部と、この定量用溶液収容部に隣接して設けられ且つ第１容器の希釈用溶液収容部に嵌合する嵌合部と、この嵌合部に設けられ且つ定量用溶液収容部と第１容器の希釈用溶液収容部との間を相互に連通接続する連通部と、この連通部内に設けられて血漿と細胞画分とを分離する分離体と、前記定量用溶液収容部の連通部以外の一部に設けられる大気開放口とを少なくとも備える定量用溶液調製器具の使用方法において、
第１容器の希釈用溶液収容部に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液を収容すると共に、
第１容器と第２容器とが嵌合される前において、第２容器の連通部のうち分離体の入口部に採取された血液を保持させ又は第１希釈用溶液に採取された血液を添加し、
しかる後、第１容器と第２容器とを嵌合させ、第２容器の定量用溶液収容部に希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製し、
次いで、第１容器及び第２容器の嵌合状態を解除した後に、前記第２容器の定量用溶液収容部から前記希釈血漿溶液からなる定量用溶液を取り除き、
一方、第１容器の希釈用溶液収容部に所定量の第２希釈用溶液を収容し、
しかる後、第１容器と第２容器とを嵌合させ、第２容器の定量用溶液収容部に希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製することを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１６】
互いに嵌合可能な第１容器及び第２容器を具備し、
第１容器は、所定量の希釈用溶液が収容される希釈用溶液収容部を備え、
一方、第２容器は、定量用溶液が収容される定量用溶液収容部と、この定量用溶液収容部に隣接して設けられ且つ第１容器の希釈用溶液収容部に嵌合する嵌合部と、この嵌合部に設けられ且つ定量用溶液収容部と第１容器の希釈用溶液収容部との間を相互に連通接続する連通部と、この連通部内に設けられて血漿と細胞画分とを分離する分離体と、前記定量用溶液収容部の連通部以外の一部に設けられる大気開放口とを少なくとも備える定量用溶液調製器具の使用方法において、
第２容器の分離体に採取された血液のうち細胞画分を分離保持させ、
第１容器と第２容器とが嵌合する前に、第１容器の希釈用溶液収容部に所定量の第２希釈用溶液を収容し、
しかる後、第１容器と第２容器とを嵌合させ、第２容器の定量用溶液収容部に希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製することを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１７】
請求項１２ないし１５のいずれかに記載の定量用溶液調製器具の使用方法において、
指示物質が、外因性指示物質であることを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１８】
請求項１７記載の定量用溶液調製器具の使用方法において、
外因性指示物質が、酸化カップリング発色型色原体であることを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項１９】
請求項１２ないし１５のいずれかに記載の定量用溶液調製器具の使用方法において、
指示物質が、内因性指示物質であることを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項２０】
請求項１９記載の定量用溶液調製器具の使用方法において、
内因性指示物質が、コリン、グリセロール−３−リン酸、キサンチン、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−アセチルグルコサミン及び１，５−アンヒドログルシトールからなる群より選ばれる内因性指示物質であることを特徴とする定量用溶液調製器具の使用方法。
【請求項２１】
血液を用いて血漿中の被測定成分を定量する方法であって、
（１）請求項１２ないし１５のいずれかに記載の方法にて希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、
（２）該定量用溶液中の指示物質の濃度と、第１希釈用溶液中の指示物質の濃度とから、該定量用溶液中の血漿の希釈倍率を算出する工程と、
（３）該定量用溶液中の被測定物質の濃度を測定する工程と、
（４）（２）で算出した希釈倍率と、（３）で測定した定量用溶液中の被測定物質の濃度とから、該血漿中の被測定物質の濃度を定量する工程と、
を含むことを特徴とする定量方法。
【請求項２２】
請求項２１記載の定量方法において、
指示物質が、外因性指示物質であることを特徴とする定量方法。
【請求項２３】
請求項２２記載の定量方法において、
外因性指示物質が、酸化カップリング発色型色原体であることを特徴とする定量方法。
【請求項２４】
請求項２１記載の定量方法において、
指示物質が、内因性指示物質であることを特徴とする定量方法。
【請求項２５】
請求項２４記載の定量方法において、
内因性指示物質が、コリン、グリセロール−３−リン酸、キサンチン、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−アセチルグルコサミン及び１，５−アンヒドログルシトールからなる群より選ばれる内因性指示物質であることを特徴とする定量方法。
【請求項２６】
血液を用いて、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法であって、
（１）請求項１５又は１６記載の方法にて希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、
（２）（１）で調製された定量用溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する工程と、
を含むことを特徴とする定量方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、臨床診断分野において行われる定量用溶液調製方法に係り、特に、希釈された血液（希釈血液溶液）を用いて、希釈血漿溶液からなる定量用溶液及び／又は希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する方法、調製した定量用溶液を用いて血漿中の被測定物質及び／又は細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法、並びに、血漿中の被測定物質及び／又は細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合の定量のための定量用溶液を調製するための器具の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から一般に行われている臨床診断のシステムは、被検者が病院や検査センターに出向き、看護婦や技師等の一定の資格を有する者が血液を採取し、採取された血液を用いて血漿中の被測定物質や細胞画分中の被測定物質を測定する、というシステムである。
血液はタンパク質や脂質などを多量に含んでおり、血液凝固因子の働きで採取後すぐに凝固が開始されるなど、非常に取扱いが難しく、血液から細胞画分を分離するには例えば高速の遠心分離機を使用する手法が採用される。しかしながら、遠心分離機を使用する手法にあっては、遠心分離機を用いる分離操作は、迅速である一方で、危険性が高い。また、遠心分離にはかなりの量の血液を必要とすることから、血液の取扱いにも細心の注意を払う必要がある。
近年、中空糸や膜等の分離手段により血液を血漿と細胞画分とに分離する方法も報告されているが、この中空糸や膜等による分離方法においては、血液によっては、凝固が早すぎて分離が困難な場合があった。また、中空糸や膜等による分離方法は細胞画分と血漿成分との分子サイズの違いを利用して分離する方法であるため、分子量の大きなタンパク質などは膜をうまく通過できず、得られる血漿中の組成が血液中の組成を正確に反映しない、という問題があった（例えば特開昭５３−７２６９１号、特開昭６０−１１１６６号公報）。
また、水性媒体等で希釈された血液から、中空糸や膜等の分離手段により調製される希釈された血漿は、血漿中の被測定物質の定量分析には採用できない、と考えられていた。
一方、近年、健康志向の流れから、血糖値の制御等の自己管理を目的に、個人で血液を採取することが多くなりつつある。しかし、個人で採血する場合、採取量が少量に限られているだけでなく、採取した血液の安定な保存・管理の問題があった。すなわち、採取した血液を乾燥状態、または、濾紙などに吸着させた状態で、常温で保存する場合、採取血液の安定性が担保されず、正確な値が得られないという問題があった。
このような状況の下で、採取された少量の血液を血漿と細胞画分とに、迅速、簡便、かつ、安全に分離する方法、得られた血漿及び／又は細胞画分を用いて該血漿中の被測定物質及び／又は該細胞画分中の被測定物質を定量するための器具並びに方法が望まれていた。
本発明は、このような技術的課題を解決するためになされたものであって、採取された少量の血液を血漿と細胞画分とに、迅速、簡便、かつ、安全に分離する定量用溶液調製方法、この定量用溶液を用いた定量方法、並びに、定量用溶液調製器具の使用方法を提供するものである。
【発明の開示】
【０００３】
（本発明の概要）
本発明は、希釈された血液（以下、希釈血液溶液とよぶ）を用いて血漿中の被測定物質及び／又は細胞画分中の被測定物質（特に、ヘモグロビンＡ１Ｃ）を定量するための定量用溶液、すなわち、希釈血漿溶液からなる定量用溶液及び／又は希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する方法に関する。
また、本発明は、調製された希釈血漿溶液からなる定量用溶液及び／又は希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いて、血漿中の被測定物質及び／又は細胞画分中の被測定物質（特に、ヘモグロビンＡ１Ｃ）を定量する方法に関する。
更に、本発明は、希釈血液溶液を用いて血漿中の被測定物質及び／又は細胞画分中の被測定物質（特に、ヘモグロビンＡ１Ｃ）を定量するための希釈血漿溶液からなる定量用溶液及び／又は希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製するための器具及びその使用方法に関する。
（血漿と細胞画分）
血液は、血漿と細胞画分から成り立っており、細胞画分には赤血球、白血球、血小板等が含有される。本発明において、血漿は本来の意味での血漿だけでなく、血液凝固反応によって凝集したフィブリンを除いた本来の意味での血清をも表す。以下、血清および血漿を合わせて、血漿とよぶこととする。また、本発明において、血液凝固反応が起こった場合には、細胞画分は血餅をも表す。以下、細胞画分及び血液凝固反応が起こった場合の血餅を合わせて、細胞画分とよぶこととする。
（血漿中の被測定物質、細胞画分中の被測定物質）
血漿中の被測定物質としては、生化学項目や免疫項目のいずれの項目も適用可能である。生化学項目としては、例えば、グルコース、１，５−アンヒドログルシトール、フコース、尿素、アンモニア、クレアチニン、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、ＲＬＰコレステロール、トリグリセライド、リン脂質、Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ、Ｃａ、総蛋白、アルブミン、グロブリン、ビリルビン、胆汁酸、シアル酸、遊離脂肪酸、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）、クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）、ホスホキナーゼ（ＰＫ）、アミラーゼ、リパーゼ、コリンエステラーゼ、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ、Ｌ−乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、アルドラーゼ、アルカリフォスファターゼ、酸フォスファターゼ等が挙げられる。免疫項目としては、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、アポ蛋白ＡＩ、アポ蛋白ＡＩＩ、アポ蛋白Ｂ、アポ蛋白Ｅ、リューマチファクター、Ｄ−ダイマー、酸化ＬＤＬ、グリコアルブミン、Ｔ３、Ｔ４、抗テンカン剤などの薬剤、α−フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＡ１９−９、ＣＡ−１２５、ＢＮＰ、トロポニンＴ、トロポニンＩ、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、インスリン、Ｃ−ペプタイド、エストロゲン、抗ＧＡＤ抗体、ペプシノーゲン、ＨＢ抗原、抗ＨＢ抗体、ＨＣＶ抗原、抗ＨＣＶ抗体、ＨＴＬＶ−Ｉ抗原、抗ＨＴＬＶ−Ｉ抗体、ＨＩＶ抗体、結核抗体、マイコプラズマ抗体等が挙げられる。細胞画分中の被測定物質としては、例えば、ヘモグロビンＡ１Ｃ等が挙げられる。
（希釈用溶液）
本発明における希釈用溶液は、採取された血液を希釈し溶解するための水性溶液である。希釈用溶液は、血漿中の被測定物質を測定する場合と細胞画分中の被測定物質を測定する場合とで、その組成が異なる。本発明では、血漿中の被測定物質を測定する場合に使用する希釈用溶液を第１希釈用溶液とよび、細胞画分中の被測定物質を測定する場合に使用する希釈用溶液を第２希釈用溶液とよぶ。尚、後述の様に、本発明の定量用溶液調製器具においては、希釈用溶液は第１容器の希釈用溶液収容部に収容される。
（定量用溶液）
本発明の定量用溶液は、希釈血漿溶液からなる定量用溶液及び／又は希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を表す。希釈血漿溶液からなる定量用溶液は、血漿中の被測定物質を定量するための溶液であり、採取された血液から分離された血漿を第１希釈用溶液中に含有する溶液である。希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液は、細胞画分中の被測定物質を定量するための溶液であり、採取された血液から分離された細胞画分を第２希釈用溶液中に含有する溶液である。本発明においては、細胞画分中の被測定物質としては特に、ヘモグロビンＡ１Ｃを表すので、「細胞画分中の被測定物質を定量する」とは、「細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する」ことを表す。
以下、詳述する。
先ず、本発明に関連する参考発明について説明すると、本発明に関連する参考発明は、図１（ａ）に示すように、採取された血液１を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製する方法であって、（１）採取された血液１を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａで希釈する工程と、（２）該希釈血液溶液３を、分離手段４により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液５を調製する工程と、を含むものである。
更に、希釈工程としては、結果的に希釈血液溶液３が調製されればよく、第１希釈用溶液２ａに採取された血液１を予め添加してもよいし、採取された血液１部分に第１希釈用溶液２ａを通過させることで調製してもよい。
更に、希釈工程と、調製工程とは明確に別れている態様に限られず、渾然一体として行われる態様も含む。
例えば、採取された血液１を、一定濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａで希釈しつつ、分離手段４により血漿と細胞画分とに分離する態様も含む。
更にまた、分離手段４による分離態様としては、希釈血漿溶液５を通過させるもののほか、内部に希釈血漿溶液５を保持し、後工程でサンプルノズルで取り出す態様（例えばスポンジ等の多孔質ポリマー）のものも含む。
更に、本発明に関連する参考発明の別の態様は、図１（ａ）に示すように、採取された血液１を用いて、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量するための希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製する方法であって、（１）採取された血液１を、第１希釈用溶液２ａで希釈する工程と、（２）該希釈血液溶液３を、分離手段４により血漿と細胞画分とに分離する工程と、（３）分離された細胞画分を第２希釈用溶液２ｂで希釈し、希釈細胞画分溶液６を調製する工程と、を含むものである。
ここでいう第１希釈用溶液２ａは、溶血させない溶液ならば特に制限はなく、必ずしも既知濃度の指示物質を含有する必要はないが、既知濃度の指示物質を含有した溶液であってもよい。
次に、本発明について説明すると、本発明は、図１（ａ）に示すように、採取された血液１を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液５からなる定量用溶液、及び、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量するための希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製する方法であって、（１）採取された血液１を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａで希釈する工程と、（２）該希釈血液溶液３を、分離手段４により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液５を調製する工程と、（３）希釈血漿溶液５の調製後に残った細胞画分を第２希釈用溶液２ｂで希釈し、希釈細胞画分溶液６を調製する工程と、を含むことを特徴とするものである。
この態様は、希釈血漿溶液５からなる定量用溶液、及び、希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製する方法である。
このような定量用溶液の調製方法において、分離手段４の代表的態様としては、フィルタ、物理的ストレス又はフィルタと物理的ストレスとの組合せが挙げられる。
フィルタとしては、微細繊維集合体、多孔質ポリマー又は微粒子集合体が挙げられる。
微細繊維集合体としては、表面に細胞画分を保持し、血漿を通過させるものであれば適宜選定して差し支えない。多孔質ポリマーとしては、表面に細胞画分を保持し、血漿を内部に保持するものであればよいが、血漿を通過させる機能を備えていてもよいし、水分を吸収し膨張する機能を備えていてもよい。微粒子集合体としては、表面に細胞画分を保持し、血漿を通過させるものであれば適宜選定して差し支えない。
微細繊維集合体、多孔質ポリマー又は微粒子集合体は単独で用いてもよいが、混合して用いてもよい。例えば、微細繊維集合体又は微粒子集合体に多孔質ポリマーを混在させて用いることができる。
また、物理的ストレスとしては、攪拌、振動等が挙げられる。分離手段４が物理的ストレスである態様においては、第１希釈用溶液２ａが、血液凝固を促進させるための凝固促進剤を含有していることが好ましい。凝固促進剤を含有させることにより、血液凝固がより促進され、血漿と細胞画分（正確には血清と血餅）との分離効果を高めることができる。
（指示物質）
指示物質は、希釈血漿溶液からなる定量用溶液における血漿の希釈倍率を算出するために用いる物質であり、血漿中の被測定物質の定量に影響を与えない物質であれば特に制限はない。この指示物質は、外因性指示物質と内因性指示物質とに大別される。
（外因性指示物質）
外因性指示物質は、血液中には存在しない物質であり、例えば、色素，還元発色型色原体，酸化発色型色原体（ロイコ型色原体，酸化カップリング発色型色原体），蛍光物質，発光物質等が挙げられるが、酸化カップリング発色型色原体が好ましい。
（内因性指示物質）
内因性指示物質は、血液中に極微量（血液中の濃度が０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以下）存在し、それ自身または誘導されて生成する物質に対応する酸化酵素（オキシターゼ）が存在する物質である。内因性指示物質としては、例えば、コリン、グルコース−３−リン酸、キサンチン、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、１，５−アンヒドログルシトール等が挙げられる。希釈倍率の算出に際して内因性指示物質を用いる場合には、外因性指示物質の場合と同様に、外部から添加する必要がある。
（第２希釈用溶液）
第２希釈用溶液は、細胞画分中の被測定物質を測定する場合に使用する、溶血用の水性溶液であり、希釈倍率算出のための指示物質を必ずしも含有しなくてもよい。第２希釈用溶液としては、細胞膜を破壊し、細胞画分中の成分を安定に保存する溶液であれば特に制限はない。第２希釈用溶液には、ヘモグロビン安定化剤が含有されることが好ましい。
また、本発明は、上述したように調製された定量用溶液を用いた定量方法をも対象とする。
この場合、本発明に係る定量方法は、血液を用いて、血漿中の被測定成分、及び、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法であって、血漿中の被測定成分を定量する方法が、（１）上述した本発明に係る定量用溶液調製方法にて希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、（２）該定量用溶液中の指示物質の濃度と、第１希釈用溶液中の指示物質の濃度とから、該定量用溶液中の血漿の希釈倍率を算出する工程と、（３）該定量用溶液中の被測定物質の濃度を測定する工程と、（４）（２）で算出した希釈倍率と、（３）で測定した定量用溶液中の被測定物質の濃度とから、該血漿中の被測定物質の濃度を定量する工程と、を含み、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法が、（５）上述した本発明に係る定量用溶液調製方法にて希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、（６）（５）で調製された定量用溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する工程と、を含むことを特徴とするものである。
更に、本発明は、上述した本発明に係る定量用溶液調製方法を具現化するための定量用溶液調製器具の使用方法をも対象とする。
この場合、本発明で用いられる定量用溶液調製器具は、例えば図１（ｂ）に示すように、互いに嵌合可能な第１容器７及び第２容器８を具備し、第１容器７が、所定量の希釈用溶液２が収容される希釈用溶液収容部９を備え、一方、第２容器８が、定量用溶液５（又は６）が収容される定量用溶液収容部１０と、この定量用溶液収容部１０に隣接して設けられ且つ第１容器７の希釈用溶液収容部９に嵌合する嵌合部１１と、この嵌合部１１に設けられ且つ定量用溶液収容部１０と第１容器７の希釈用溶液収容部９との間を相互に連通接続する連通部１２と、この連通部１２内に設けられて血漿と細胞画分とを分離する分離体１３と、前記定量用溶液収容部１０の連通部１２以外の一部に設けられる大気開放口１４とを少なくとも備えていればよい。
そして、この定量用溶液調製器具を使用するには、第２容器８に嵌合する前の第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の希釈用溶液２を収容した後に、第１容器７及び第２容器８を嵌合させ、第１容器７の希釈用溶液２を分離体１３を介して第２容器８の定量用溶液収容部１０側に向かって移動させ、希釈用溶液２と採取された血液１若しくは分離体１３に付着した細胞画分とに基づいて希釈血漿溶液５若しくは希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製するようにすればよい。
このような技術的手段において、希釈用溶液２（第１希釈用溶液２ａ又は第２希釈用溶液２ｂ）が収容される側を第１容器７とし、分離調製された定量用溶液（希釈血漿溶液５又は希釈細胞画分溶液６）が収容される側を第２容器８とした。
そして、両容器７，８の関係については嵌合可能であればよい。ここでいう嵌合は、ネジ部による係合に限られず、凹凸による係合をも含む。
第１容器７は少なくとも希釈用溶液収容部（希釈用溶液収容室を区画する部分に相当）９を備えていればよい。
一方、第２容器８は定量用溶液収容部（定量用溶液収容室を区画する部分に相当）１０を備えている。
ここで、定量用溶液は、希釈用溶液＋血漿（又は細胞画分）からなるものであるが、分離体１３に一部保持されることもあり得るため、定量用溶液収容部１０は希釈用溶液２よりも容積が大きいことを必ずしも必要としない。
また、第２容器８は、定量用溶液収容部１０に加えてこれに隣接した部位に、第１容器７の希釈用溶液収容部９に嵌合する嵌合部１１を備えていることが必要である。
更に、第２容器８としては、連通部１２、分離体１３及び大気開放口１４が必要である。ここでいう連通部（相互に連なって通じ合う部分）１２が溶液の通路であり、分離体１３が血漿と細胞画分とを分離するものであればよいが、代表的には、希釈血液溶液３が通過する条件下で少なくとも細胞画分が捕獲可能なフィルタ（微細繊維集合体、多孔質ポリマー、微粒子集合体等）であるものが挙げられる。
更に、大気開放口１４は、第１容器７、第２容器８を嵌合させ、希釈用溶液２を移動させる上で必要である。
そして、「第１容器７の希釈用溶液２を分離体１３を介して第２容器８の定量用溶液収容部１０側に向かって移動させ」とは、通常は定量用溶液を定量用溶液収容部１０に収容させることを意味するが、分離体１３が多孔質ポリマーのように高吸水性のものであれば、分離体１３の内部に血漿が保持され、定量用溶液収容部１０に定量用溶液が収容されないこともあり得ることを考慮したものである。
このような定量用溶液調製器具としては、自動分析装置への設置性を良好に保つという観点からすれば、第２容器８は、自動分析装置への設置個所に支持可能な支持片を備えていることが好ましい。
ここでいう支持片には、フランジ、リムなど第２容器８を支持する態様を広く含む。
また、希釈用溶液２を全て分離体１３側に効果的に導くには、第２容器８の嵌合部１１は、第１容器７の希釈用溶液収容部９との間が液密に保たれるシール部材を備えていることが好ましい。
更に、定量用溶液調製器具の運搬時の安全性（定量用溶液のこぼれ防止）を確保するには、第２容器８の大気開放口１４が開放可能に閉鎖せしめられる閉鎖手段１５を備えていることが好ましい。
この閉鎖手段１５の代表的態様としては、第２容器８から取り外し自在に取り付けられているものが好ましい。この態様によれば、閉鎖手段を取り外すことにより定量用溶液収容部１０の定量用溶液を直接サンプリングすることが可能になる。
また、閉鎖手段１５の代表的な態様の他の例としては、第２容器８の大気開放口１４に面して設けられ、常時は大気開放口１４を連通状態に保ち、定量用溶液に接した条件下で膨張して大気開放口１４を閉鎖する吸水性膨張材（高吸水性ポリマーなど）にて構成されるものが挙げられる。
次に、本発明の定量用溶液調製器具の使用方法について説明する。
先ず、定量用溶液調製器具の使用方法のうち、希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製する代表的態様としては、第２容器８側に採取した血液１を保持する態様が挙げられる。
これは、上述した定量用溶液調製器具を使用するに際し、第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａを収容すると共に、第１容器７と第２容器８とが嵌合される前において、第２容器８の連通部１２のうち分離体１３の入口部に採取された血液１を保持させ、しかる後、第１容器７と第２容器８とを嵌合させ、第２容器８の定量用溶液収容部１０に希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製するものである。
ここで、指示物質としては、外因性指示物質（例えば酸化カップリング発色型色原体）であってもよいし、内因性指示物質（例えばコリン、グリセロール−３−リン酸、キサンチン、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−アセチルグルコサミン及び１，５−アンヒドログルシトールからなる群より選ばれる内因性指示物質）であっても差し支えない。以下の定量用溶液調製器具の使用方法においても同様である。
また、定量用溶液調製器具の使用方法のうち、希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製する他の代表的態様としては、第１容器７側に採取した血液１を保持する態様が挙げられる。
これは、定量用溶液調製器具を使用するに際し、第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａを収容すると共に、前記第１希釈用溶液２ａに採取された血液１を添加し、しかる後、第１容器７と第２容器８とを嵌合させ、第２容器８の定量用溶液収容部１０に希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製するものである。
更に、定量用溶液調製器具の使用方法のうち、希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製する別の態様としては、分離体１３内部に定量用溶液を保持する態様が挙げられる。
これは、定量用溶液調製器具を使用するに際し、第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａを収容すると共に、第１容器７と第２容器８とが嵌合される前において、第２容器８の連通部１２のうち分離体１３の入口部に採取された血液１を保持させ又は第１希釈用溶液２ａに採取された血液を添加し、しかる後、第１容器７と第２容器８とを嵌合させ、第２容器８の分離体１３内部に希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製するものである。
このとき、分離体１３としては、多孔質ポリマーなどのフィルタを使用し、内部に保持した希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を後工程でサンプルノズル等で取り出すようにすればよい。
また、定量用溶液調製器具の使用方法のうち、希釈血漿溶液５及び希釈細胞画分溶液６からなる両方の定量用溶液を調製する代表的態様としては、以下のものが挙げられる。
これは、定量用溶液調製器具の使用方法において、第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２ａを収容すると共に、第１容器７と第２容器８とが嵌合される前において、第２容器８の連通部１２のうち分離体１３の入口部に採取された血液１を保持させ又は第１希釈用溶液２ａに採取された血液１を添加し、しかる後、第１容器７と第２容器８とを嵌合させ、第２容器８の定量用溶液収容部１０に希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製し、次いで、第１容器７及び第２容器８の嵌合状態を解除した後に、前記第２容器８の定量用溶液収容部１０から前記希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を取り除き、一方、第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の第２希釈用溶液２ｂを収容し、しかる後、第１容器７と第２容器８とを嵌合させ、第２容器８の定量用溶液収容部１０に希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製するものである。
本使用方法においては、希釈細胞画分溶液６を調製する段階において、第２容器８の定量用溶液収容部１０については、希釈血漿溶液５の影響が及ばないように、洗浄した後に使用することが好ましく、また、第１容器７としては、別パーツのものを使用してもよい。
また、定量用溶液調製器具の使用方法のうち、希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製する代表的態様としては、以下のものが挙げられる。
これは、定量用溶液調製器具の使用方法において、第２容器８の分離体１３に採取された血液１のうち細胞画分を分離保持させ、第１容器７と第２容器８とが嵌合する前に、第１容器７の希釈用溶液収容部９に所定量の第２希釈用溶液２ｂを収容し、しかる後、第１容器７と第２容器８とを嵌合させ、第２容器８の定量用溶液収容部１０に希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製するものである。
本態様では、分離体１３による細胞画分の分離保持手法としては、例えば希釈血液溶液３（図１（ａ）参照）が通過する条件下で少なくとも細胞画分が捕獲可能なフィルタを用いるようにすればよい。
そして、本態様においては、希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製することは要件にならない。
また、本発明の定量用溶液調製器具を用いて調製された定量用溶液を用いた定量方法としては、以下のものが挙げられる。
すなわち、本発明に係る定量方法は、血液を用いて血漿中の被測定成分を定量する方法であって、（１）上述した定量用溶液調製器具を使用する方法にて希釈血漿溶液５からなる定量用溶液を調製する工程と、（２）該定量用溶液５中の指示物質の濃度と、第１希釈用溶液２ａ中の指示物質の濃度とから、該定量用溶液５中の血漿の希釈倍率を算出する工程と、（３）該定量用溶液５中の被測定物質の濃度を測定する工程と、（４）（２）で算出した希釈倍率と、（３）で測定した定量用溶液５中の被測定物質の濃度とから、該血漿中の被測定物質の濃度を定量する工程と、を含むものである。
ここで、指示物質としては、外因性指示物質（例えば酸化カップリング発色型色原体）であってもよいし、内因性指示物質（例えばコリン、グリセロール−３−リン酸、キサンチン、Ｄ−アミノ酸、Ｎ−アセチルグルコサミン及び１，５−アンヒドログルシトールからなる群より選ばれる内因性指示物質）であっても差し支えない。
更に、本発明に係る定量方法の別の態様は、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法であって、（１）上述した定量用溶液調製器具を使用する方法にて希釈細胞画分溶液６からなる定量用溶液を調製する工程と、（２）（１）で調製された定量用溶液６におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する工程と、を含むものである。
【図面の簡単な説明】
【０００４】
【図１】図１（ａ）は本発明及び本発明に関連する参考発明に係る定量用溶液調製方法の概要を示す説明図、（ｂ）は本発明に係る定量用溶液調製器具の使用方法の概要を示す説明図である。
【図２】図２（ａ）（ｂ）は実施の形態１，２に係る希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製方法を示す説明図である。
【図３】図３（ａ）（ｂ）は実施の形態３，４に係る希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液の調製方法を示す説明図である。
【図４】図４  実施の形態５に係る希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液の調製方法を示す説明図である。
【図５】図５（ａ）は実施の形態６に係る希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いた定量方法を示す説明図、（ｂ）は実施の形態７に係る希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いた定量方法を示す説明図である。
【図６】図６（ａ）は実施の形態８で用いられる定量用溶液調製器具の第１容器の正面図及び平面図、（ｂ）は同定量用溶液調製器具の第２容器の正面図及び平面図である。
【図７】図７実施の形態８で用いられる定量用溶液調製器具の両容器の嵌合状態を示す説明図である。
【図８】図８実施の形態８で用いられる定量用溶液調製器具の斜視説明図である。
【図９】図９（ａ）〜（ｄ）は実施の形態８で用いられる定量用溶液調製器具の使用方法（１）を示す説明図である。
【図１０】図１０（ａ）〜（ｄ）は実施の形態８で用いられる定量用溶液調製器具の使用方法（２）を示す説明図である。
【図１１】図１１（ａ）（ｂ）は実施の形態８で用いられる定量用溶液調製器具の変形形態の使用方法を示す説明図である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
実施の形態１
図２（ａ）は、本発明が適用された定量用溶液調製方法の実施の形態１を示す。
これは、図２（ａ）に示すように、採取された血液２１を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する方法であって、採取された血液２１を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２で希釈する工程と、該希釈血液溶液２３を、分離手段としてのフィルタ２４により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する工程と、を含むものである。
このような定量用溶液調製方法においては、各要件は以下のようになっている。
（第１希釈用溶液）
第１希釈用溶液は、血漿中の被測定物質を測定する場合に使用する、血液を希釈・溶解するための水性溶液であり、希釈倍率算出のための指示物質が一定濃度で含有される水性溶液である。
（第１希釈用溶液調製用水性媒体）
第１希釈用溶液を調製するために使用する水性媒体としては、溶血させずに血液を安定に保存するものであれば特に制限はないが、例えば、等張液、生理食塩水、緩衝液等が挙げられる。等張液としては、例えば、ロック液、リンガー液、タイロード液、アール液、クレブス液、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）等が挙げられる。生理食塩水中の塩化ナトリウムの濃度は、０．１〜０．２ｍｏｌ／Ｌである。緩衝液に用いる緩衝剤としては、緩衝能を有するものならば特に制限されないが、ｐＨ２〜１１の例えば、乳酸緩衝剤、クエン酸緩衝剤、酢酸緩衝剤、コハク酸緩衝剤、フタル酸緩衝剤、リン酸緩衝剤、トリエタノールアミン緩衝剤、ジエタノールアミン緩衝剤、リジン緩衝剤、バルビツール緩衝剤、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝剤、イミダゾール緩衝剤、リンゴ酸緩衝剤、シュウ酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、ホウ酸緩衝剤、炭酸緩衝剤、グリシン緩衝剤、ＭＥＳ（２−モルホリノエタンスルホン酸）緩衝剤、ビス−トリス［ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス（ヒドロキシメチル）メタン］緩衝剤、ＡＤＡ［Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸］緩衝剤、ＰＩＰＥＳ［ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）］緩衝剤、ＡＣＥＳ｛２−［Ｎ−（２−アセトアミド）アミノ］エタンスルホン酸｝緩衝剤、ＭＯＰＳＯ（３−モルホリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸）緩衝剤、ＢＥＳ｛２−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］エタンスルホン酸｝緩衝剤、ＭＯＰＳ（３−モルホリノプロパンスルホン酸）緩衝剤、ＴＥＳ〈２−｛Ｎ−［トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝エタンスルホン酸〉緩衝剤、ＨＥＰＥＳ［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ’−（２−スルホエチル）ピペラジン］緩衝剤、ＤＩＰＳＯ｛３−［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸｝緩衝剤、ＴＡＰＳＯ〈２−ヒドロキシ−３−｛［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノ｝プロパンスルホン酸〉緩衝剤、ＰＯＰＳＯ［ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸）］緩衝剤、ＨＥＰＰＳＯ［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ’−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）ピペラジン］緩衝剤、ＥＰＰＳ［Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ’−（３−スルホプロピル）ピペラジン］緩衝剤、トリシン［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチルグリシン］緩衝剤、ビシン［Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン］緩衝剤、ＴＡＰＳ｛３−［Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル］アミノプロパンスルホン酸｝緩衝剤、ＣＨＥＳ［２−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）エタンスルホン酸］緩衝剤、ＣＡＰＳＯ［３−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸］緩衝剤、ＣＡＰＳ［３−（Ｎ−シクロヘキシルアミノ）プロパンスルホン酸］緩衝剤等のグッド緩衝剤等が挙げられる。緩衝液の濃度は特に制限はされないが、０．１〜１０００ｍｍｏｌ／Ｌが好ましく１〜５００ｍｍｏｌ／Ｌがより好ましい。
（第１希釈用溶液中の添加物）
第１希釈用溶液には必要に応じて、キレート剤、酵素安定化剤、防腐剤、凝固促進剤等の添加物が含有されてもよい。キレート剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等が挙げられ、酵素安定化剤としては、例えば、ＣＰＫの安定化剤としてのＮ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＣＰＫの安定化剤としてのα−ケトグルタル酸等が挙げられる。防腐剤としては、例えば、アジ化ナトリウム等が挙げられる。凝固促進剤としては、例えば、トロンビン、レクチン等が挙げられる。レクチンの由来としては、例えば、アブリン、トウアズキ、モクワンジュ、シベリア豆、海緑藻、タチナタ豆、大豆、スイートピー、レンズ豆、カブトガニ、トマト、オセージオレンジ、アボガド、ベニバナインゲンハナササゲ、赤インゲン豆、アメリカヤマゴボウ、エンドウ豆、ウィングビーン、ヒマ、ジャガイモ、コムギ麦芽、ソラ豆、ヨーロッパヤドリギ等が挙げられる。
外因性指示物質としては、例えば、色素、還元発色型色原体、酸化発色型色原体、蛍光物質、発光物質等が挙げられる。酸化発色型色原体としては、ロイコ型色原体、酸化カップリング発色型色原体が挙げられる。これらのうち、酸化カップリング発色型色原体が好ましい。
（色素）
色素としては、例えば、アシッドイエロー３、アシッドイエロー２３、アシッドイエロー２５、アシッドイエロー３６、アシッドオレンジ５、アシッドオレンジ６、アシッドオレンジ７、アシッドオレンジ１０、アシッドオレンジ１９、アシッドオレンジ５２、アシッドグリーン１６、アシッドグリーン２５、アシッドバイオレット４３、アシッドブルー３、アシッドブルー９（ブリリアントブルーＦＣＦ）、アシッドブルー４０、アシッドブルー４５、アシッドブルー４７、アシッドブルー５９、アシッドブルー７４、アシッドブルー１１３、アシッドブルー１５８、アシッドレッド１、アシッドレッド２、アシッドレッド１４、アシッドレッド１８、アシッドレッド２７、アシッドレッド３７、アシッドレッド５１、アシッドレッド５２、アシッドレッド８７、アシッドレッド８８、アシッドレッド９２、アシッドレッド９４、アシッドレッド９５、アシッドレッド１１１、フードレッド１７、フードイエロー３、ベーシックイエロー１、ベーシックイエロー２、ベーシックイエロー１１、ベーシックオレンジ１、ベーシックオレンジ２２、ベーシックグリーン４（マラカイトグリーン）、ベーシックバイオレット３、ベーシックバイオレット４、ベーシックバイオレット１０、ベーシックブルー１、ベーシックブルー３、ベーシックブルー９、ベーシックブルー２４、ベーシックレッド１、ベーシックレッド２、ベーシックレッド５、ベーシックレッド９、ベーシックレッド１８等が挙げられる。
（還元発色型色原体）
還元発色型色原体としては、例えば、３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウム ブロミド（ＭＴＴ）、２−（４−ヨードフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム モノナトリウム塩（ＷＳＴ−１）、２−（４−ヨードフェニル）−３−（２，４−ジニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム モノナトリウム塩（ＷＳＴ−３）等が挙げられる。
（酸化発色型色原体〜ロイコ型色原体）
ロイコ型色原体は、過酸化水素およびペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の共存下、単独で色素へ変換される色原体であり、例えば、１０−Ｎ−カルボキシメチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＣＣＡＰ）、１０−Ｎ−メチルカルバモイル−３，７−ビス（ジメチルアミノ）−１０Ｈ−フェノチアジン（ＭＣＤＰ）、Ｎ−（カルボキシメチルアミノカルボニル）−４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン ナトリウム塩（ＤＡ−６４）、４，４’−ビス（ジメチルアミノ）ジフェニルアミン、ビス［３−ビス（４−クロロフェニル）メチル−４−ジメチルアミノフェニル］アミン（ＢＣＭＡ）等が挙げられる。
（酸化発色型色原体〜酸化カップリング発色型色原体）
酸化カップリング発色型色原体は、過酸化水素およびペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の共存下、２つの化合物が酸化的カップリングして色素を生成する色原体である。２つの化合物の組み合わせとしては、カプラーとアニリン類との組み合わせ、カプラーとフェノール類との組み合わせが挙げられる。カプラーとしては、例えば、４−アミノアンチピリン（４−ＡＡ）、３−メチル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラジン等が挙げられる。アニリン類としては、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチルフェニル）−Ｎ’サクシニルエチレンジアミン（ＥＭＳＥ）、Ｎ−（３，５−ジメトキシフェニル）−Ｎ’サクシニルエチレンジアミン・ナトリウム塩（ＤＯＳＥ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−３，５−ジメチルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−ｍ−アニシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３−メチルアニリン・ナトリウム塩２水和物（ＴＯＯＳ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン、Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩（ＨＳＤＡ）、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−３，５−ジメチルアニリン、Ｎ−スルホプロピルアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−４−フルオロ−３，５−ジメトキシアニリン・ナトリウム塩（Ｆ−ＤＡＯＳ）等が挙げられる。フェノール類としては、フェノール、３−ヒドロキシ−２，４，６−トリヨウド安息香酸等が挙げられる。
（蛍光物質及び発光物質）
蛍光物質としては、例えば、４−ヒドロキシフェニル酢酸、３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸、クマリン等が挙げられる。発光物質としては、例えば、ルミノール、イソルミノール、ルシゲニン、アクリジニウムエステル等が挙げられる。
（フィルタ）
本実施の形態では、分離手段としてフィルタ２４が用いられている。このフィルタ２４としては、微細繊維集合体、多孔質ポリマー又は微粒子集合体が挙げられる。
（微細繊維集合体）
微細繊維集合体としては、例えば、ガラス繊維集合体、セルロース繊維集合体、合成繊維集合体等が挙げられる。合成繊維集合体の材質としては、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリアミド、ポリスルホン、ポリウレタン、ポリビニルホルマール、ポリ塩化ビニル、ポリエステル類等が挙げられる。必要に応じて、親水処理が施された微細繊維集合体も用いることができる。
（多孔質ポリマー及び微粒子集合体）
多孔質ポリマーとしては、例えば、熱硬化性ポリマー（フェノール系、尿素系、メラミン系、アルキド系、ポリエステルイソシアナート系）、熱可塑性ポリマー（ポリビニルホルマール、ポリ塩化ビニル、ポリスチレン、ポリエチレン）、セルロース誘導体（エステル体、エーテル体、ビスコース）等が挙げられる。微粒子集合体としては、例えば、シリカ微粒子集合体等が挙げられる。
ここで、フィルタ２４として多孔質ポリマーを使用する場合には、フィルタ２４内に希釈血漿溶液２５が保持されるため、図２（ａ）に仮想線で示すように、例えばサンプルノズルなどを用いてフィルタ２４内から希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を取り出すことが必要である。
実施の形態２
図２（ｂ）は、本発明が適用された定量用溶液調製方法の実施の形態２を示す。
これは、図２（ｂ）に示すように、採取された血液２１を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する方法であって、採取された血液２１を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２で希釈する工程と、該希釈血液溶液２３を、分離手段としての物理的ストレス２６により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する工程と、を含むものである。
このような定量用溶液調製方法においては、各要件は基本的に実施の形態１と同様であるが、一部異なっている。
（物理的ストレス）
物理的ストレス２６としては、例えば、攪拌や振動等が挙げられる。
採取された血液を第１希釈用溶液２２で希釈して調製された希釈血液溶液２３を例えば攪拌すると、血液凝固が促進される。この際、血液凝固をより促進させるため、「凝固促進剤」（例えばトロンビンやレクチン等）を第１希釈用溶液２２に含有させることが好ましい。
そして、攪拌や振動等の物理的ストレス２６により生成した、血漿と細胞画分とを含有する混合物から、希釈血漿溶液２５を取得する方法としては、例えばサンプルノズルで吸引する方法や、フィルタを用いて分離・取得する方法等が挙げられる。ここで、後者のフィルタを用いて分離・取得する方法は、物理的ストレス２６とフィルタ２４（図２（ａ）参照）との組合せに相当する。
実施の形態３
図３（ａ）は、本発明が適用された定量用溶液調製方法の実施の形態３を示す。
これは、図３（ａ）に示すように、採取された血液２１を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液、及び、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量するための希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液を調製する方法であって、採取された血液２１を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２で希釈する工程と、該希釈血液溶液２３を、分離手段としてのフィルタ２４により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する工程と、希釈血漿溶液２５の調製後に残った細胞画分を第２希釈用溶液２８で希釈し、希釈細胞画分溶液２７を調製する工程と、を含むものである。
このような定量用溶液調製方法においては、各要件は実施の形態１と略同様であるが、それ以外は以下のようになっている。
第２希釈用溶液２８としては、例えば、蒸留水や塩濃度の低い水溶液等の低張液が挙げられる。第２希釈用溶液２８には、必要に応じて、ヘモグロビン安定化剤、界面活性剤、脂質加水分解酵素等が含有され、特に、ヘモグロビン安定化剤が含有されることが好ましい。
（ヘモグロビン安定化剤）
ヘモグロビン安定化剤としては、例えば、糖類、アミノ酸類、プロテアーゼ阻害剤、キレート剤、鉄プロトポルフィリン、フッ化ナトリウム、アルブミン類、ハプトグロブリン等が挙げられる。界面活性剤としては、例えば、ノニオン性界面活性剤、カチオン性界面活性剤、アニオン性界面活性剤、両性界面活性剤等が挙げられる。脂質加水分解酵素としては、例えば、ホスホリパーゼ類やリポプロテインリパーゼ等が挙げられる。
実施の形態４
図３（ｂ）は、本発明が適用された定量用溶液調製方法の実施の形態４を示す。
これは、図３（ｂ）に示すように、採取された血液２１を用いて、血漿中の被測定物質を定量するための希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液、及び、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンの割合を定量するための希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液を調製する方法であって、採取された血液２１を、既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２で希釈する工程と、該希釈血液溶液２３を、分離手段としての物理的ストレス２６により血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する工程と、希釈血漿溶液２５の調製後に残った細胞画分を第２希釈用溶液２８で希釈し、希釈細胞画分溶液２７を調製する工程と、を含むものである。
このような定量用溶液調製方法においては、各要件は実施の形態２及び実施の形態３と略同様である。
実施の形態５
図４は、本発明が適用された定量用溶液調製方法の実施の形態５を示す。
これは、図４に示すように、採取された血液２１を用いて、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量するための希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液を調製する方法であって、採取された血液２１を、第１希釈用溶液２２で希釈する工程と、該希釈血液溶液２３を、分離手段としてのフィルタ２４により血漿と細胞画分とに分離する工程と、分離された細胞画分を第２希釈用溶液２８で希釈し、希釈細胞画分溶液２７を調製する工程と、を含むものである。
このような定量用溶液調製方法においては、希釈血漿溶液を調製する必要がないため、第１希釈用溶液２２としては既知濃度の指示物質を含有することは必ずしも必要ではない。
また、フィルタ２４としては、希釈血液溶液２３から血漿と細胞画分とを分離し、細胞画分を保持すると共に、この保持された細胞画分を第２希釈用溶液２８で希釈可能なものであれば、微細繊維集合体、多孔質ポリマー又は微粒子集合体など適宜選定して差し支えない。
実施の形態６
図５（ａ）は本発明が適用された定量用溶液を用いた定量方法の実施の形態６を示す。
これは、図５（ａ）に示すように、血液を用いて血漿中の被測定成分を定量する方法であって、
（１）上述した定量用溶液調製方法にて希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、
（２）該定量用溶液中の指示物質の濃度と、第１希釈用溶液中の指示物質の濃度とから、該定量用溶液中の血漿の希釈倍率を算出する工程と、
（３）該定量用溶液中の被測定物質の濃度を測定する工程と、
（４）（２）で算出した希釈倍率と、（３）で測定した定量用溶液中の被測定物質の濃度とから、該血漿中の被測定物質の濃度を定量する工程と、
を含むものである。
以下、本実施の形態における定量方法について詳述する。
血漿中の被測定物質の濃度（Ｘ）は、上述の２つの方法により調製された定量用溶液中の被測定物質の濃度（Ｙ）と、該定量用溶液中の血漿の希釈倍率（ａ）とから式１により求めることができる。
Ｘ＝ａ×Ｙ                  …（式１）
（定量用溶液中の血漿の希釈倍率を算出する方法）
第１希釈用溶液中の指示物質の量をＭ１、該第１希釈用溶液の容量をＶ１とすると、該第１希釈用溶液中の指示物質の濃度Ｃ１は、
Ｃ１＝Ｍ１／Ｖ１            …（式２）
で表される。
一方、血漿を含有する定量用溶液中の指示物質の濃度Ｃ２は、該血漿の容量をＶ２（但し、Ｖ２は測定されない）とすると、
Ｃ２＝Ｍ１／（Ｖ１＋Ｖ２）  …（式３）
で表される。
定量用溶液中の血漿の希釈倍率（ａ）は、
希釈倍率（ａ）＝（Ｖ１＋Ｖ２）／Ｖ２  …（式４）
であることから、従って、希釈倍率（ａ）は、Ｃ１及びＣ２の値から式５により求めることができる。
希釈倍率（ａ）＝Ｃ１／（Ｃ１−Ｃ２）  …（式５）
ここで、指示物質の濃度Ｃ１とＣ２は、指示物質が色素、色原体である場合には吸光度で、指示物質が発光物質である場合には発光強度で、指示物質が蛍光物質の場合には蛍光強度を計測することにより求められる。
指示物質を吸光度により定量する場合には濃度と吸光度は比例するので、血液希釈用溶液及び定量用溶液における指示物質の濃度と吸光度をそれぞれＣ１とＥ１、及びＣ２とＥ２とすると、
Ｃ２／Ｃ１＝Ｅ２／Ｅ１    …（式６）
が成り立つ。
よって、希釈倍率（ａ）は、
希釈倍率（ａ）＝Ｃ１／（Ｃ１−Ｃ２）＝Ｅ１／（Ｅ１−Ｅ２）
…（式７）
として求めることもできる。
以上のように希釈倍率は、Ｃ１及びＣ２値またはＥ１及びＥ２値により計算されうる。
尚、Ｃ１またはＥ１はあらかじめ既知の値に設定されていてもよいが、新たに調製した第１希釈用溶液を用いて定量することもできる。
この場合、指示物質と該指示物質由来の情報との関係を表した検量線を作成すれば、既知になることによる。
（指示物質の定量方法）
指示物質の定量方法としては、指示物質の濃度が定量できる方法であれば特に限定はない。指示物質が色素の場合は、定量用溶液そのものの吸光度を定量することができる。また、その他の場合には、定量用溶液から一定量の試料を取り出し、該試料中の指示物質の濃度を、指示物質の然るべき定量方法で定量する。定量に際し、吸光度を用いる場合には、指示物質の濃度に換算することなく直接、吸光度の値を用いることが出来る。
本例において指示物質の濃度を測定する方法としては、比色法、発光法、蛍光法などが挙げられるが、比色法が特に好ましい。
比色法に用いる指示物質としては、例えば、前述の色素、還元発色型色原体及び酸化発色型色原体が挙げられる。酸化発色型色原体としては、ロイコ型色原体、酸化カップリング発色型色原体が挙げられる。還元発色型色原体を用いた場合の比色法としては、還元発色型色原体を、ＮＡＤ（Ｐ）Ｈ等の還元型補酵素、ジアホラーゼ及び１−メトキシー５−メチルフェナジウムメチルサルフェート等の電子キャリアーの作用により色素に変換し、生成色素の吸光度を分光光度計で測定する方法が挙げられる。酸化発色型色原体を用いた場合の比色法としては、酸化発色型色原体を過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質の作用により色素に変換し、生成色素の吸光度を分光光度計で測定する方法が挙げられる。
蛍光法としては、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質により前述の蛍光物質から生じた蛍光を蛍光光度計で測定する方法が挙げられる。
発光法としては、過酸化水素及びペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質により前述の発光物質から生じた光（フォトン）をルミノメータで測定する方法が挙げられる。
尚、酸化発色型色原体として酸化カップリング発色型色原体を用いる場合には、定量用溶液中の指示物質として発色に与る２つの化合物のうちの一方の化合物が含有され、もう一方の化合物は別に保存される。
酸化発色型色原体を指示物質として用いる場合には、該酸化発色型色原体のモル数は過酸化水素のモル数よりも小さくすることが必要である。また、酸化カップリング発色型色原体を指示物質として用いる場合には、該色原体のモル数は過酸化水素ともう一方の化合物のそれぞれのモル数よりも小さくすることが必要である。
酸化発色型色原体の色素への変換に使用する過酸化水素は、過酸化水素そのものであっても、物質から酵素により直接または間接的に生成するものであってもよい。過酸化水素を直接または間接的に生成するような物質と酵素の組み合わせとしては、例えば、以下の組み合わせが挙げられる。
・コリン−コリンオキシダーゼ
・コレステロール−コレステロールオキシダーゼ、
・尿酸−ウリカーゼ、
・トリグリセライド−リポプロテインリパーゼおよびグリセロールオキシダーゼ、
・遊離脂肪酸−アシル−ＣｏＡシンセターゼおよびアシル−ＣｏＡオキシダーゼ、
・グルコース−ピラノースオキシダーゼ、
・リン脂質−ホスホリパーゼＤおよびコリンオキシダーゼ、
・クレアチン−クレアチナーゼおよびザルコシンオキシダーゼ、
・クレアチニン−クレアチニナーゼ、クレアチナーゼおよびザルコシンオキシダーゼ、
・乳酸−ラクトースオキシダーゼ、
・無機リン−プリンヌクレオシドホスホリラーゼおよびキサンチンオキシダーゼ、
・オルトトルオイルコリン−コリンエステラーゼおよびコリンオキシダーゼ、
・モノアミン類（アリルアミン等）−モノアミンオキシダーゼ。
（希釈倍率算出用試薬）
酸化発色型色原体を指示物質として用いた場合、該色原体を定量するための試薬は、該色原体を色素に変換する試薬を表す。この酸化発色型色原体を定量するための試薬は、１試薬系または複数の試薬系での保存が可能である。複数の試薬系での保存が好ましく、２試薬系での保存がより好ましい。過酸化水素そのものを用いる場合は、過酸化水素とペルオキシダーゼ等の過酸化活性物質との共存を避けるような２試薬系が好ましい。また、過酸化水素が物質から酵素により直接または間接的に生成する場合には、該物質と該物質と直接反応する酵素との共存を避けるような２試薬系が好ましい。
（希釈倍率算出用試薬の具体的保存形態）
酸化発色型色原体を定量するための試薬の具体的保存形態を以下に記す。しかし、保存形態はこれらの具体例に限定されるものではない。
定量用溶液中の指示物質：ＥＭＳＥ
第１試薬
ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．１）                  ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                              １０Ｕ／ｍＬ
塩化コリン                                    ０．０５ｍｇ／ｍＬ
アスコルビン酸オキシダーゼ                    ３Ｕ／ｍＬ
ノニオンＨＳ−２１０                          ０．１％
第２試薬
ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．０）                  ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                        ０．５ｇ／Ｌ
コリンオキシダーゼ                            １０Ｕ／ｍＬ
（希釈血漿溶液からなる定量用溶液中の被測定物質の定量）
該被測定物質としては、血漿中の成分であれば特に限定はないが、例えば、前述の生化学項目や免疫項目が挙げられる。該被測定物質の定量は、該被測定物質の定量法として確立されている一般的な方法により実施可能であり特に制限はないが、指示物質により実質的に影響されない定量方法が好ましい。また、希釈血漿溶液からなる定量用溶液中の被測定物質の定量に際しては、該定量用溶液を希釈して用いてもよい。
実施の形態７
図５（ｂ）は本発明が適用された定量用溶液を用いた定量方法の実施の形態７を示す。
これは、血液を用いて、細胞画分中のヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を定量する方法であって、
（１）上述した定量用溶液調製方法にて希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、
（２）（１）で調製された定量用溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合（比率）を測定する工程と、を含むものである。
（希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液中の被測定物質の定量）
該被測定物質としては、細胞画分中の成分であれば特に限定はないが、特に、ヘモグロビンＡ１Ｃが好ましく挙げられる。該被測定物質の定量は、該被測定物質の定量法として確立されている一般的な方法により実施可能である。
実施の形態８
図６〜図８は本発明が適用された定量用溶液調製方法を具現化した定量用溶液調製器具の実施の形態８を示す。
尚、図６（ａ）は第１容器３０の正面図及び平面図、図６（ｂ）は第２容器４０の正面図及び平面図、図７は両容器の嵌合状態を示す説明図、図８は第１容器３０及び第２容器４０の斜視説明図である。
本実施の形態において、定量用溶液調製器具は、血漿中の被測定物質または細胞画分中の被測定物質を定量するための定量用溶液を調製するための器具であり、図６〜図８に示すように、相互に嵌合可能な第１容器３０及び第２容器４０からなる。
ここで、第１容器３０及び第２容器４０は、プラスチック製が望ましく、材質としては、ポリエチレンやポリプロピレン、ポリカーボネイト、塩化ビニル、ポリエステル、ナイロン、ポリブデン、ポリブタジエン、あるいは、これらの共重合体などが挙げられる。
先ず、第１容器３０について説明すると、第１容器３０は、例えば円柱状の容器本体３１を有し、この容器本体３１には希釈用溶液（第１希釈用溶液２２又は第２希釈用溶液２８）が収容せしめられる希釈用溶液収容部３２（希釈用溶液収容室３３を区画する部分に相当）を設け、希釈用溶液収容部３２の内壁、言い換えれば、希釈用溶液収容室３３壁面入口側には雌ねじ部３４を形成する一方、前記容器本体３１の底部には下方へ突出する固定スタッド３５を形成し、この固定スタッド３５を図示外の固定ホルダのねじ孔部に係合固定することにより、固定ホルダに固定設置されるようになっている。
尚、容器本体３１の入口部には後述する第２容器４０の定量用溶液収容部４２と嵌合部４４との段差部が当接するフランジ部３６が設けられている。
一方、第２容器４０は、例えば円柱状の容器本体４１を有し、この容器本体４１には定量用溶液（希釈血漿溶液又は希釈細胞画分溶液）が収容せしめられる定量用溶液収容部４２（定量用溶液収容室４３を区画する部分に相当）を設け、更に、この定量用溶液収容部４２に隣接した箇所には第１容器３０側に向かって突出し且つ前記第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に嵌合する嵌合部４４を設け、この嵌合部４４には先端から定量用溶液収容部４２に向かって連通する連通部４５を形成したものである。
本実施の形態において、定量用溶液収容部４２は、円柱状形状にくりぬかれた収容室部分と、この下方に隣接して下方に向かって窄まるように円錐状形状にくりぬかれた収容室部分とからなる定量用溶液収容室４３を備えている。
また、前記嵌合部４４は定量用溶液収容部４２よりも小さな外径を有し、その周壁には第１容器３０の希釈用溶液収容部３２の雌ねじ部３４に螺合する雄ねじ部４６を形成したものである。
更に、連通部４５は、嵌合部４４の先端側から所定の内径に形成されるフィルタ保持孔４７と、このフィルタ保持孔４７よりも小径で前記定量用溶液収容室４３の下端部に連通接続される小径接続孔４８とを備えたものである。
また、本実施の形態において、第２容器４０のフィルタ保持孔４７にはフィルタ６０が挿入保持されており、このフィルタ６０はフィルタ保持孔４７より所定量ｍ突出して配設されている。
本実施の形態において、フィルタ６０は例えば前述したような微細繊維集合体、多孔質ポリマー又は微粒子集合体にて構成されており、例えば微細繊維集合体又は微粒子集合体を使用する態様にあっては、血漿以外の細胞画分が捕獲され、多孔質ポリマー、多孔質ポリマーが混在する微細繊維集合体又は多孔質ポリマーが混在する微粒子集合体を使用する態様にあっては、表面に細胞画分を保持し、内部に希釈血漿溶液を保持するようになっている。
尚、多孔質ポリマーのうち、特に、高吸水性に優れたものとしては、例えばポリアクリル酸樹脂、ポリエチレンオキシド樹脂、酢酸ビニル共重合体系樹脂、アクリル酸グラフト共重合体系樹脂などが挙げられる。
特に、本実施の形態では、嵌合部４４の長さ寸法ｋ及びフィルタ６０の嵌合部４４からの突出部寸法ｍの合計は、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２の深さ寸法ｎに対応して設定されている。
更に、前記嵌合部４４の先端側周囲には周辺シール部材としてのＯリング（オーリング）４９が設けられている。
更にまた、本実施の形態では、第２容器４０の定量用溶液収容部４２の上方側には当該定量用溶液収容部４２の上方を開放可能に覆う蓋部材５０が設けられている。
この蓋部材５０は、定量用溶液収容部４２の上方突出部４２ａに嵌合する凹部５１を有し、この凹部５１の内面には前記上方突出部４２ａに形成された雄ねじ部４２ｂに螺合する雌ねじ部５２を備えている。
そして、この蓋部材５０は大気に連通する微小な大気開放口５３を有しているが、この蓋部材５０は例えば高吸水性ポリマーにて構成されており、例えば希釈血漿溶液などの定量用溶液が接触した時点で膨張し、前記大気開放口５３を閉鎖する閉鎖系になっている。
尚、蓋部材５０そのものを高吸水性ポリマーにて構成しなくても、例えば定量用溶液収容部４２の頂部に大気開放口５３を設けておき、この頂部の大気開放口５３を取外し自在な蓋部材５０で開閉自在に閉鎖するようにしてもよい。
更にまた、本実施の形態では、容器本体４１の定量用溶液収容部４２の外周にはフランジ状の支持片５４が設けられている。
この支持片５４は、例えば自動分析装置に本件の調製器具を設置する際にサンプルテーブルの設置個所に調製器具を支えるためのものである。
また、本実施の形態に係る定量用溶液調製器具には、血液を皮膚より出す場合に使用する針などを備えた器具を別個、添付または連結することも可能である。
このような状況下では、例えば針などを備えた器具を連結させる場合、危険性の無いように針部分が外部から触れない様、例えば第１容器３０の下端に下を向いて取り付け、さらにキャップなどを被せるようにするか、キャップ部分に上を向いて装着し、第１容器３０の下端にキャップするときに針が第１容器３０の内部に隠れるようにすればよい。また、その他の部分に針を装着する方法も可能である。
次に、本実施の形態に係る定量用溶液調製器具の使用方法について説明する。
（希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製方法１）
今、第２容器４０のフィルタ保持孔４７にフィルタ６０として微細繊維集合体を挿入保持させた実施の形態モデルを使用する場合を想定する。
この場合、図９（ａ）に示すように、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２（例えば実施の形態１参照）を収容すると共に、第１容器３０と第２容器４０とが嵌合される前において、第２容器４０の連通部４５のうちフィルタ６０の先端部に採取された血液２１を保持させ、しかる後、図９（ｂ）（ｃ）に示すように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させ、第２容器４０の定量用溶液収容部４２に希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する。
本例の場合、第２容器４０の嵌合部４４が第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に嵌合していき、前記フィルタ６０の先端が第１希釈用溶液２２に浸漬すると、フィルタ６０の先端の血液２１は第１希釈用溶液２２に徐々に希釈される。
この状態において、更に、第１容器３０に第２容器４０を順次嵌合させていくと、第１容器３０に第２容器４０を押し込んでいる間、蓋部材５０の大気開放口５３が開放されているため、この大気開放口５３から空気が逃げ、第１希釈用溶液２２は血液２１を希釈しつつ、フィルタ６０を介して定量用溶液収容部４２側へと移動する。
このとき、希釈血液溶液中の細胞画分Ｓはフィルタ６０である微細繊維集合体の表面に保持されるため、希釈血液溶液のうち、血漿がフィルタ６０を透過して定量用溶液収容部４２に移動する。
このため、定量用溶液収容部４２には希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液が調製される。
特に、本実施の形態では、第２容器４０の定量用溶液収容部４２を覆う蓋部材５０は高吸水性ポリマーにて構成されているため、図９（ｃ）に示すように、定量用溶液収容部４２内に希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液が充満し、蓋部材５０に接触すると、蓋部材５０が膨張して前記大気開放口５３を閉鎖してしまい（図中×印は、大気開放口５３部分を閉鎖した状態を示す）、定量用溶液収容部４２を密封する。
また、連通部４５のうち、小径接続孔４８はフィルタ保持孔４７に保持されているフィルタ６０と定量用溶液収容部４２とを連通接続するが、その径が非常に細いため、定量用溶液収容部４２内の定量用溶液とフィルタ６０に残っている液とが混在することはない。
また、第２容器４０の定量用溶液収容部４２に希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液が充満収容されると、上述したように、蓋部材５０が大気開放口５３を閉鎖する。
それゆえ、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させたままの状態で、定量用溶液調製器具を搬送したとしても、蓋部材５０が定量用溶液収容部４２を閉鎖状態に保つため、定量用溶液収容部４２内の定量用溶液が不必要にこぼれる虞れはない。
よって、例えば各個人が、本件の定量用溶液調製器具を用いて希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製したとしても、これを検査センターなど、自動分析装置のある場所に搬送させることが可能である。
そして、本実施の形態では、図９（ｄ）に示すように、定量用溶液調製器具は前記調製器具そのものを前記支持片５４にて自動分析装置への設置個所に支持することができ、しかも、蓋部材５０を取り外すことにより、定量用溶液収容部４２内の希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を直接サンプリングすることが可能である。
（希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製方法２）
希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液の調製方法１と同様な実施の形態モデルを想定し、図９（ａ）に仮想線で示すように、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２を収容すると共に、前記第１希釈用溶液２２に採取された血液２１を添加し、しかる後、図９（ｂ）（ｃ）に示すように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させ、第２容器４０の定量用溶液収容部４２に希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する。
この調製方法では、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２内で希釈血液溶液を予め調製している点が、前記調製方法１とは異なるが、それ以降の動作過程は略同様である。
（希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製方法３）
今、第２容器４０のフィルタ保持孔４７にフィルタ６０として多孔質ポリマー（特に高吸収性ポリマー）を挿入保持させた実施の形態モデルを使用する場合を想定する。
この場合、図１１（ａ）に示すように、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２を収容すると共に、第１容器３０と第２容器４０とが嵌合される前において、第２容器４０の連通部４５のうちフィルタ６０の先端部に採取された血液２１を保持させ又は第１希釈用溶液２２に採取された血液２１を添加し、しかる後、図１１（ｂ）に示すように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させ、第２容器４０のフィルタ６０としての多孔質ポリマー内部に希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する。
この調製方法では、フィルタ６０としての多孔質ポリマー内部に保持した希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を後工程でサンプルノズル等で取り出すようにすればよい。
（希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液の調製方法１）
今、第２容器４０のフィルタ保持孔４７にフィルタ６０として微細繊維集合体を挿入保持させた実施の形態モデルを使用する場合を想定する。
この場合、図９（ａ）に示すように、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に所定量の既知濃度の指示物質を含有する第１希釈用溶液２２を収容すると共に、第１容器３０と第２容器４０とが嵌合される前において、第２容器４０の連通部４５のうちフィルタ６０の先端部に採取された血液２１を保持させ又は第１希釈用溶液２２に採取された血液２１を添加し、しかる後、図９（ｂ）（ｃ）に示すように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させ、第２容器４０の定量用溶液収容部４２に希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製し、次いで、図１０（ａ）に示すように、第１容器３０及び第２容器４０の嵌合状態を解除した後に、前記第２容器４０の定量用溶液収容部４２から前記希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を取り除き、一方、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に所定量の第２希釈用溶液２８を収容し、しかる後、図１０（ｂ）（ｃ）に示すように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させ、第２容器４０の定量用溶液収容部４２に希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液を調製する。
このような調製方法において、希釈細胞画分溶液２７を調製する段階において、第２容器４０の定量用溶液収容部４２については、希釈血漿溶液２５の影響が及ばないように、洗浄した後に使用することが好ましい。
また、第１容器３０には第２希釈用溶液２８を収容することになるが、第１希釈用溶液２２の影響が及ばないようにするには第１容器３０も洗浄後に第２希釈用溶液２８を収容させるようにするか、あるいは、第１容器３０として別パーツのものを使用することが好ましい。
この調製方法では、図１０（ｂ）（ｃ）のように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させると、第２希釈用溶液２８がフィルタ６０表面に保持された細胞画分Ｓを希釈し、定量用溶液収容部４２へと移動していく。
そして、定量用溶液収容部４２に希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液が充満すると、例えば蓋部材５０が膨張し、大気開放口５３を閉鎖状態にし、定量用溶液収容部４２を密封する。
このため、定量用溶液収容部４２内の希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液が不必要にこぼれることはなく、また、蓋部材５０を取り外すことで、図１０（ｄ）に示すように、定量用溶液調製器具自体を用いて直接サンプリングを行うことができる。
（希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液の調製方法２）
調製方法１では、希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液をも調製するようにしているが、希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液のみを調製するようにしてもよいことは勿論である。
この場合、図１０（ａ）に示すように、第２容器４０のフィルタ６０に採取された血液のうち細胞画分を分離保持させ、第１容器３０と第２容器４０とが嵌合する前に、第１容器３０の希釈用溶液収容部３２に所定量の第２希釈用溶液２８を収容し、しかる後、図１０（ｂ）（ｃ）に示すように、第１容器３０と第２容器４０とを嵌合させ、第２容器４０の定量用溶液収容部４２に希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液を調製する。
この調製方法において、フィルタ６０への細胞画分の分離保持手法については、フィルタ６０として微細繊維集合体を用いるなど適宜選定して差し支えないが、希釈血漿溶液２５からなる定量用溶液を調製する必要性がないため、例えばフィルタ６０として多孔質ポリマーなどを使用し、フィルタ６０内に希釈血漿溶液２５を保持したまま、希釈細胞画分溶液２７からなる定量用溶液を調製するようにしてもよい。
（希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いた定量方法）
これは、本件の定量用溶液調製器具にて調製された希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いた定量方法であり、（１）本件の定量用溶液調製器具を用いて希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、（２）該定量用溶液中の指示物質の濃度と、第１希釈用溶液中の指示物質の濃度とから、該定量用溶液中の血漿の希釈倍率を算出する工程と、（３）該定量用溶液中の被測定物質の濃度を測定する工程と、（４）（２）で算出した希釈倍率と、（３）で測定した定量用溶液中の被測定物質の濃度とから、該血漿中の被測定物質の濃度を定量する工程と、を含むものである（図５（ａ）参照）。
（希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いた定量方法）
これは、本件の定量用溶液調製器具にて調製された希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いた定量方法であり、（１）本件の定量用溶液調製器具を用いて希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する工程と、（２）（１）で調製された定量用溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を測定する工程と、を含むものである（図５（ｂ）参照）。
実施例１
（希釈血漿溶液からなる定量用溶液の攪拌による調製）
３．８％クエン酸ナトリウム０．５ｍＬをその中に含有するベノジェクトＩＩ真空採血管（テルモ社製）を用いて、健常人より血液４．５ｍＬを採取した。このベノジェクトＩＩ真空採血管に採取された血液をクエン酸ナトリウム全血とよぶこととする。
トロンビンおよび塩化カルシウムをそれぞれ３．０ｇ／Ｌ、０．１２５ｍｏｌ／Ｌの濃度で含有するｐＨ７．０の１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＭＯＰＳ緩衝液５０μＬを、シリコーン変性オイルＳＦ８４２７（東レ・ダウコーニング・シリコーン社製）で血餅付着防止処理した試験管（Ｒｏｈｒｅｎ Ｔｕｂｅｓ Ｎｏ．／ＲＥＦ ５５．４７６）に添加し、次いで、上記のクエン酸ナトリウム全血４５０μＬを添加した。ここで得られた血液溶液をトロンビン含有全血とよぶこととする。
第１希釈用溶液として、塩化ナトリウムおよびＥＭＳＥをそれぞれ５．０ｍｇ／ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬの濃度で含有するｐＨ７．５の５０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＨＥＰＥＳ緩衝液を調製した。
上記トロンビン含有全血１００μＬと、上記第１希釈用溶液５００μＬとを混合した後、得られた混合液をＶｏｌｔｅｘ Ｍｉｘｅｒ（ＬＡＢ−ＭＩＸＥＲ ＨＭ−１０Ｈ）で３分間攪拌し、さらに３分間静置した。上清をエッペンドルフピペットで取り出し、希釈血漿溶液からなる定量用溶液を得た。
実施例２
（コリンを指示物質として含有する第１希釈用溶液を用いた希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製）
総コレステロール濃度が１５３ｍｇ／ｄＬである血液（＝血清中の総コレステロール濃度が１５３ｍｇ／ｄＬである血液）１００μＬと、下記組成からなる第１希釈用溶液５００μＬとを混合した後、得られた混合液をガラス繊維（ＡＰ２５タイプ；ミリポア社製）に通すことにより、希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製した。
第１希釈用溶液
ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．０）                ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
アジ化ナトリウム                              ０．３ｇ／Ｌ
塩化コリン                                    ０．２ｇ／Ｌ
α−ケトグルタル酸                            １．５ｇ／Ｌ
塩化ナトリウム                                ５．０ｇ／Ｌ
実施例３
（実施例２の希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いた血漿中の総コレステロールの定量）
（１）希釈倍率算出
実施例２で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液における血漿の希釈倍率を、下記の希釈度算出用試薬を用いた吸光度測定により算出した。吸光度測定は、自動分析装置  東芝２００ＦＲを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液における血漿の希釈倍率は１０．３と算出された。
希釈度算出用試薬
第１試薬
ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．２）                ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
トリトンＸ−１００                            １．０ｇ／Ｌ
ＴＯＯＳ                                      ０．２ｇ／Ｌ
アジ化ナトリウム                              ０．３ｇ／Ｌ
第２試薬
リン脂質測定試薬  デタミナーＬ  ＰＬ（協和メデックス社製）の試薬Ｒ２
希釈倍率算出用測定パラメータ
サンプル容量：５μＬ
Ｒ１：１５０μＬ
Ｒ２：５０μＬ
主波長／副波長：６０４ｎｍ／７００ｎｍ
測光ポイント：（１４〜１６）−（３１〜３３）
（２）該定量用溶液中の総コレステロール濃度の測定
実施例２で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液における総コレステロールの濃度を、総コレステロール測定試薬  デタミナーＬ  ＴＣ２（協和メデックス社製）のＲ１およびＲ２を用いて測定した。測定は、自動分析装置  東芝２００ＦＲを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液中の総コレステロール濃度は１５．１ｍｇ／ｄＬであった。
総コレステロール濃度測定用測定パラメータ
サンプル容量：１０μＬ
Ｒ１：１５０μＬ
Ｒ２：５０μＬ
主波長／副波長：６０４ｎｍ／８０４ｎｍ
測光ポイント：（１４〜１６）−（３１〜３３）
（３）血漿中の総コレステロールの定量
（１）で算出された希釈倍率１０．３と、（２）で測定した該定量用溶液中の総コレステロール濃度１５．１ｍｇ／ｄＬとから、血漿中の総コレステロール濃度は１５６ｍｇ／ｄＬとなり、用いた血液の総コレステロール濃度１５３ｍｇ／ｄＬと極めて近い値が得られた。
実施例４
（実施の形態８の調製器具を用いた希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製）
下記の組成からなる第１希釈用溶液（１５０μＬ）を収容した第１容器、および、ガラス繊維集合体を連通部内に装着させた第２容器を具備する器具を用いて、採取された血液から希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製した。
第１希釈用溶液
ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）                ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＥＭＳＥ                                      ０．１ｇ／Ｌ
塩化ナトリウム                                ５．０ｇ／Ｌ
血液を第２容器のガラス繊維集合体の先端に付けて、ガラス繊維集合体に保持させた。次いで、上記第１希釈用溶液を収容する第１容器と該第２容器とを嵌合させ、第１容器内の第１希釈用溶液をガラス繊維集合体を介して第２容器の定量用溶液収容部へ移動させ、希釈血漿溶液からなる定量用溶液を該定量用溶液収容部に調製した。希釈血漿溶液からなる定量用溶液が該定量用溶液収容部に充満すると、閉鎖手段内の高吸水性ポリマーが該定量用溶液との接触により膨張し、器具全体が閉鎖系となった。
実施例５
（実施例４で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いたコレステロールの定量）
（１）希釈倍率算出
実施例４で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液における血漿の希釈倍率を、下記の希釈度算出用試薬を用いた吸光度測定により算出した。吸光度測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液における血漿の希釈倍率は４．６０と算出された。
希釈度算出用試薬
第１試薬
ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．１）                  ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
ペルオキシダーゼ                              １０Ｕ／ｍＬ
塩化コリン                                    ０．０５ｍｇ／ｍＬ
アスコルビン酸オキシダーゼ                    ３Ｕ／ｍＬ
ノニオンＨＳ−２１０                          １．０ｇ／Ｌ
第２試薬
ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７．０）                  ２０ｍｍｏｌ／Ｌ
４−アミノアンチピリン                        ０．５ｍｇ／ｍＬ
コリンオキシダーゼ                            １０Ｕ／ｍＬ
希釈倍率算出用測定パラメータ
サンプル容量：１０μＬ
Ｒ１：１５０μＬ
Ｒ２：５０μＬ
主波長／副波長：５４６ｎｍ／７００ｎｍ
測光ポイント：１６−３４
（２）該定量用溶液中の総コレステロール濃度の測定
実施例２で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液における総コレステロールの濃度を、総コレステロール測定試薬  デタミナーＬ  ＴＣ２（協和メデックス社製）のＲ１およびＲ２を用いて測定した。測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液中の総コレステロール濃度は３５．１ｍｇ／ｄＬであった。
総コレステロール濃度測定用測定パラメータ
サンプル容量：３μＬ
Ｒ１：３００μＬ
Ｒ２：１００μＬ
主波長／副波長：６００ｎｍ／８００ｎｍ
測光ポイント：１６−３４
（３）血漿中の総コレステロールの定量
（１）で算出された希釈倍率４．６と、（２）で測定した該定量用溶液中の総コレステロール濃度３５．１ｍｇ／ｄＬとから、血漿中の総コレステロール濃度は１６０ｍｇ／ｄＬと定量された。
一方、実施例４で用いた血液の提供者から別個血液（５ｍＬ）をヘパリン含有試験管に採取し、該ヘパリン含有血液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、血漿を得た。該血漿中の総コレステロールの濃度を、前記と同様に、総コレステロール測定試薬  デタミナーＬ  ＴＣ２（協和メデックス社製）のＲ１およびＲ２を用いて測定した。その結果、該血漿中の総コレステロールの濃度は１６４ｍｇ／ｄＬであり、本発明の方法で定量した総コレステロールの濃度１６０ｍｇ／ｄＬと極めて近い値であることから、本発明の方法による血漿中の総コレステロールの定量方法は、従来の総コレステロールの定量方法と何ら遜色のない方法であることが判明した。
実施例６
（希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液の調製）
実施例４に記載された方法により希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製した後、第２容器の定量用溶液収容部に収容された希釈血漿溶液からなる定量用溶液を取り除き、該収容部を蒸留水で洗浄した。器具から第１容器を取り外し、蒸留水で該第１容器の希釈用溶液収容部を洗浄し、該収容部に蒸留水（１５０μＬ）を第２希釈用溶液として充填した。この蒸留水を含有する第１容器と、定量用溶液収容部が蒸留水で洗浄された第２容器とを嵌合させ、第１容器内の第２希釈用溶液（＝蒸留水）をガラス繊維集合体を介して第２容器の定量用溶液収容部へ移動させ、希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を該定量用溶液収容部に調製した。
実施例７
（実施例６で調製した希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いたヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合の定量）
実施例６で調製した希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を蒸留水で２０倍希釈し、この２０倍希釈溶液を用いて、ヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を、ヘモグロビンＡ１Ｃ濃度測定試薬  デタミナーＨｂＡ１Ｃ（協和メデックス社製）のＲ１およびＲ２を用いて測定した。測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて下記の測定パラメータにより行った。
ヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合の定量用測定パラメータ
サンプル容量：６．４μＬ
Ｒ１：２４０μＬ
Ｒ２：８０μＬ
主波長／副波長：６６０ｎｍ／８００ｎｍ
測光ポイント：１９−３４
検量線：スプライン
キャリブレータ点：４．２、７．７、１１．５、１４．９
その結果、該２０倍希釈溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合は６．３５％であった。一方、実施例４で用いた血液の提供者から別個血液（５ｍＬ）をヘパリン含有試験管に採取し、該ヘパリン含有血液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、細胞画分を得た。該細胞画分を蒸留水で１００倍希釈し、この１００倍希釈溶液を用いて、ヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を前記と同様の条件で測定したところ６．２６％であり、本発明の方法での値６．３５％と極めて近い値であることから、本発明の方法によるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合方法は、従来の定量方法と何ら遜色のない方法であることが判明した。
実施例８
（ＴＯＯＳを指示物質として含有する第１希釈用溶液および本発明の器具を用いた希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製）
下記の組成からなる第１希釈用溶液（１５０μＬ）を収容した第１容器、および、ガラス繊維集合体を連通部内に装着させた第２容器を具備する器具を用いて、肝疾患患者の血液から、実施例４と同様の方法により希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製した。
第１希釈用溶液
ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）                ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
ＴＯＯＳ                                      ０．１２ｇ／Ｌ
塩化ナトリウム                                ５．０ｇ／Ｌ
α−ケトグルタル酸                            １．０ｇ／Ｌ
ＥＤＴＡ                                      ０．２５ｇ／Ｌ
実施例９
（実施例８の希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いた血漿中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）の定量）
（１）希釈倍率算出
実施例８で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液における血漿の希釈倍率を、実施例５の場合と同じ希釈度算出用試薬を用いて算出した。吸光度測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液における血漿の希釈倍率は６．０２と算出された。
希釈倍率算出用測定パラメータ
サンプル容量：１０μＬ
Ｒ１：１５０μＬ
Ｒ２：５０μＬ
主波長／副波長：５４６ｎｍ／７００ｎｍ
測光ポイント：１６−３４
（２）該定量用溶液中のＡＬＴ濃度の測定
実施例８で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液におけるＡＬＴの濃度を、ＡＬＴ測定試薬  デタミナーＡＬＴ（協和メデックス社製）を用いて測定した。測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液中のＡＬＴ濃度は１１７Ｕ／Ｌであった。
ＡＬＴ測定用測定パラメータ
サンプル容量：１０μＬ
Ｒ１：２１０μＬ
Ｒ２：７０μＬ
測定主波長：３４０ｎｍ
測定副波長：４０５ｎｍ
測光ポイント：２０−３４
（３）血漿中のＡＬＴの定量
（１）で算出された希釈倍率６．０２と、（２）で測定した該定量用溶液中のＡＬＴ濃度１１７Ｕ／Ｌとから、血漿中のＡＬＴ濃度は７０４Ｕ／Ｌと定量された。
一方、実施例８で用いた血液の提供者（肝疾患患者）から別個血液（６ｍＬ）をヘパリン含有試験管に採取し、該ヘパリン含有血液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、血漿を得た。該血漿中のＡＬＴ濃度を、前記と同様に、ＡＬＴ測定試薬  デタミナーＡＬＴ（協和メデックス社製）を用いて測定した。その結果、該血漿中のＡＬＴの濃度は７１９Ｕ／Ｌであり、本発明の方法で定量したＡＬＴ濃度７０４Ｕ／Ｌと極めて近い値であることから、本発明の方法による血漿中のＡＬＴの定量方法は、従来のＡＬＴの定量方法と何ら遜色のない方法であることが判明した。
実施例１０
（フェノールを指示物質として含有する第１希釈用溶液および本発明の器具を用いた希釈血漿溶液からなる定量用溶液の調製）
下記の組成からなる第１希釈用溶液（２００μＬ）を収容した第１容器、および、ガラス繊維集合体を連通部内に装着させた第２容器を具備する器具を用いて、炎症患者の血液から、実施例４と同様の方法により希釈血漿溶液からなる定量用溶液を調製した。
第１希釈用溶液
ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）                ５０ｍｍｏｌ／Ｌ
フェノール                                    ０．１ｇ／Ｌ
塩化ナトリウム                                ５．０ｇ／Ｌ
実施例１１
（実施例１０の希釈血漿溶液からなる定量用溶液を用いた血漿中のＣ−反応性タンパク（ＣＲＰ）の定量）
（１）希釈倍率算出
実施例１０で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液における血漿の希釈倍率を、実施例５の場合と同じ希釈度算出用試薬を用いて算出した。吸光度測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該定量用溶液における血漿の希釈倍率は５．２と算出された。
希釈倍率算出用測定パラメータ
サンプル容量：１０μＬ
Ｒ１：１５０μＬ
Ｒ２：５０μＬ
主波長／副波長：５０５ｎｍ／７００ｎｍ
測光ポイント：１６−３４
（２）該定量用溶液中のＣＲＰ濃度の測定
実施例１０で調製した希釈血漿溶液からなる定量用溶液を生理食塩水でさらに１００倍希釈し、この１００倍希釈定量用溶液におけるＣＲＰの濃度を、ＣＲＰ測定試薬  エクステルＣＲＰ（協和メデックス社製）を用いて測定した。測定は、自動分析装置  ＥＬ−１０６０（協和メデックス社製）を用いて、下記の測定パラメータにより行った。その結果、該１００倍希釈定量用溶液中のＣＲＰ濃度は０．０３３ｍｇ／ｄＬであった。
ＣＲＰ測定用測定パラメータ
サンプル容量：６μＬ
緩衝液Ｉ：９０μＬ
抗体感作ラテックス液：１５０μＬ
測光ポイント：２２−３５
（３）血漿中のＣＲＰの定量
（１）で算出された希釈倍率５．２と、（２）で測定した該１００倍希釈定量用溶液中のＣＲＰ濃度０．０３３ｍｇ／ｄＬとから、血漿中のＣＲＰ濃度は１７．１ｍｇ／ｄＬと定量された。
一方、実施例１０で用いた血液の提供者（炎症患者）から別個血液（６ｍＬ）をヘパリン含有試験管に採取し、該ヘパリン含有血液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、血漿を得た。該血漿を生理食塩水で１００倍希釈した後、該１００倍希釈血漿溶液中のＣＲＰ濃度を、前記と同様に、ＣＲＰ測定試薬  エクステルＣＲＰ（協和メデックス社製）および自動分析装置  ＥＬ−１０６０（協和メデックス社製）を用いて測定した。その結果、遠心分離により得られた該血漿中のＣＲＰの濃度は１７．６ｍｇ／ｄＬ（すなわち、１００倍希釈血漿溶液中のＣＲＰの濃度は０．１７６ｍｇ／ｄＬ）であり、本発明の方法で定量したＣＲＰ濃度１７．１ｍｇ／ｄＬと極めて近い値であることから、本発明の方法による血漿中のＣＲＰの定量方法は、従来のＣＲＰの定量方法と何ら遜色のない方法であることが判明した。
実施例１２
（希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液の調製）
第２希釈用溶液として蒸留水（１５０μＬ）を収容した第１容器、および、高吸水性ポリマーを混在させたセルロース繊維集合体（ヘパリンが薄く塗布されたセルロース繊維集合体）を連通部内に装着させた第２容器を具備する器具を用いて、採取された血液から希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製した。
例えば、第１容器に第１希釈用溶液を収容した後、血液を第２容器の該セルロース繊維集合体の先端に付け、第１容器と第２容器とを嵌合させることで、該セルロース繊維集合体の表面に細胞画分を保持させた。次いで、蒸留水（第２希釈用溶液）を収容する第１容器と該第２容器とを嵌合させ、第１容器内の蒸留水を該セルロース繊維集合体を介して第２容器の定量用溶液収容部へ移動させ、希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を該定量用溶液収容部に調製した。希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液が該定量用溶液収容部に充満すると、閉鎖部材である高吸水性ポリマーからなる蓋部材が該定量用溶液との接触により膨張し、器具全体が閉鎖系となった。
実施例１３
（実施例１２で調製した希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いたヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合の定量）
実施例１２で調製した希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を蒸留水で２０倍希釈し、この２０倍希釈溶液を用いて、ヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を、ヘモグロビンＡ１Ｃ測定試薬  デタミナーＨｂＡ１Ｃ（協和メデックス社製）のＲ１およびＲ２を用いて定量した。測定は、自動分析装置  日立７１７０Ｓを用いて実施例７の場合と同じ測定パラメータにより行った。
その結果、該２０倍希釈溶液におけるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合は６．３１％であった。一方、実施例１２で用いた血液の提供者から別個血液（５ｍＬ）をヘパリン含有試験管に採取し、該ヘパリン含有血液を遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）し、細胞画分を得た。該細胞画分を蒸留水で１００倍希釈し、この１００倍希釈溶液を用いて、ヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合を前記と同様の条件で測定したところ６．３８％であり、本発明の方法での値６．３１％と極めて近い値であることから、本発明の方法によるヘモグロビンＡ１Ｃのヘモグロビンに対する割合の定量方法は、従来の定量方法と何ら遜色のない方法であることが判明した。
【産業上の利用の可能性】
【０００６】
以上説明してきたように、本発明に係る定量用溶液調製方法は、採取された血液を希釈した後に、分離手段にて血漿と細胞画分とに分離し、希釈血漿溶液若しくは希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製する方法なので、採取された少量の血液を秤量することなく、迅速、簡便、かつ、安全に、希釈血漿溶液若しくは希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を調製することが可能となる。従って、希釈血漿溶液若しくは希釈細胞画分溶液からなる定量用溶液を用いた、血漿中の被測定物質若しくは細胞画分中の被測定物質（特に、ヘモグロビンＡ１Ｃ）の定量が可能となる。
また、本発明に係る定量用溶液調製器具の使用方法によれば、上述した定量用溶液の調製を簡単に実現することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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