(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号６に示される塩基配列からなるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項２】
配列番号５に示される塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつドレブリンＡ発現抑制作用を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項３】
請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドのリン酸エステル基をチオリン酸エステル基或いはメチルホスホネート基で置換したもの、及び、請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドのリボース部分の水酸基をメトキシ或いはアリロキシからなるアルコキシ基、アミノ基、又はフッ素原子で置換したもの、から選択される請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体。
【請求項４】
請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び／又は請求項３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体を担持したベクター。
【請求項５】
配列番号７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを特異的に認識する抗体。
【請求項６】
モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項５記載の抗体。
【請求項７】
請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び／又は請求項３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体を有効成分とするドレブリンＡの過剰発現・機能亢進に起因する疾病の治療薬。
【請求項８】
請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び／又は請求項３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体と薬学的に許容される細胞内導入試薬とからなるドレブリンＡの過剰発現・機能亢進に起因する疾病の治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ドレブリンＡ発現抑制作用を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドやその誘導体、それらを担持したベクター、ドレブリンＡの過剰発現・機能亢進に起因する疾病の治療薬等に関する。
【０００２】
【従来の技術】
神経細胞は、他の体細胞には見られない非常に複雑な形状を有し、核をもつ原形質部分である細胞体からは、樹状突起と軸索突起という２種類の突起が伸びている。樹枝状に伸びる樹状突起はスパイン（spine）と呼ばれる無数の棘構造を有し、他の細胞からの情報を受け取る機能をもつシナプス後部を形成している。この神経細胞特異的形態は、神経特異的なアクチン結合タンパクにより決定される。他方、本発明者らは、発生過程の神経細胞に多量発現するアクチン結合タンパクドレブリン（Drebrin）を世界に先駆けて発見し（J. Neurochem. 44, 1210-1216(1985)、J. Biochem. 117, 231-236 (1995)）、このドレブリンがアクチンファイバーの性状を変えることにより神経細胞の形態形成、特に突起形成に関わっていること（J. Neurosci. Res. 38: 149-159 (1994) 、Exp. Cell Res. 215:145-153 (1994) 、J. Biol. Chem. 269:29928-29933 (1994)）や、発生中で移動している神経細胞では、細胞体と突起全体に存在するが、成熟した神経細胞では棘構造中に特異的に存在すること（J. Neurosci. 15: 7161-7170 (1996)、Dev. Brain Res. 29, 233-244 (1986)、Brain Res. 413, 374-378 (1987)）を既に証明している。ドレブリンには、胚性型（embryonic type）のドレブリンＥと成体型（adult type）のドレブリンＡという２つのアイソフォームが存在しており（J. Biochem. 117, 231-236 (1995)）、成熟した神経細胞のスパインに特異的に見られるドレブリンＡは、神経細胞にしか発現しないという特徴を有している（Dev. Brain Res. 29, 233-244 (1986)、Brain Res. 413, 374-378 (1987)）。ドレブリンＡはalternative splicing機構によりドレブリンＥに“ｉｎｓ２”と呼ばれる領域が加わった配列をしている。すなわち、５′側から９５６ｂａｓｅ〜１０９３ｂａｓｅにｇｔｃｇｔｃｃｇｔａｃｔｇｃｃｃｔｔｔｃａｔａａａｇｇｃａｔｃｇｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｃｔｃｃｔｃｔｔｃｃｃｃｔｃｃａｃｇｇａｃｔｃｃｃｔｔｔｃｃｃｔａｔａｔｃａｃｃｔｇｃｃａｃｃｇｃａｃｃｃｃａａａｃｃｔｃｔｃｔｔｃｃｔｃｃｃｔｃｃｃａｔ）［配列番号１］が挿入されて発現したものである（Mol. Brain Res. 19, 101-114 (1993)、Neuroreport 3, 109-112 (1992)）。
【０００３】
また最近、本発明者らは、ドレブリンＡを初代培養神経細胞に発現させると自動的に樹状突起スパインに集まり、しかもその長さを長くしたり、ある一つのタンパク合成量を変化させることによってスパインの形態を変化させることができることを報告している（J. Neurosci. 19, 3918-3925 (1999)）。その他、ドレブリンの所属するタンパクファミリーに関して、ドレブリンがADF Homology Domainをもったアクチン結合タンパクの一種に分類できる可能性が示唆されている（Mol. Biol. Cell 9, 1951-1959 (1998)）。また、ドレブリンのホモローグとしてＳＨ３Ｐ７が発見されているが、ＳＨ３Ｐ７の機能が明らかになりつつある（Mol. Cell. Biol. 19, 1539-1546 (1999) 、Nature Biotech. 14, 741-744 (1996)）。
【０００４】
その他、神経栄養因子ＢＤＮＦ（Brain-derived neurotrophic factor）を特異ノックアウトするアンチセンスオリゴヌクレオチドを作製し、外来性のＢＤＮＦがスパイン密度をインビボ及びインビトロで増加させるエストラジオールの効果を遮断し、選択的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたＢＤＮＦの発現抑制がエストラジオールに似た効果をもたらし、抗ＢＤＮＦ抗体によりスパイン密度が増加するなど、スパイン密度の調節に関与するＢＤＮＦの役割が明らかにされている（Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 11412-11417, 1998）。また、脆弱Ｘ症候群（fragile X syndrome）は、Ｘ染色体にフラジャイル・サイトが存在するため起こる遺伝性の精神遅滞の原因としては最も頻度の高い病気であり、Ｘ染色体上の遺伝子ＦＭＲ１の発現異常、主に発現欠損により引き起こされ、ＦＭＲ１の発現異常は脳神経系の形態異常を伴うが、かかる脆弱Ｘ症候群などの脳神経疾患の治療法は、現在のところ見つかっていない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、脆弱Ｘ症候群の治療薬等としての有用性が期待できる、ドレブリンＡの発現を特異的に抑制することができるアンチセンスオリゴヌクレオチドを提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、発生過程の神経細胞に多量発現するアクチン結合タンパクドレブリンを世界に先駆けて発見して依頼、ドレブリンに関する研究を包括的かつ多面的に行っている。最近、本発明者らはマウスドレブリンＡのゲノミック遺伝子（Ｄｂｎ１）を世界で初めて単離し、その配列を決定した。配列番号２で示される塩基配列からなるマウスＤｂｎ１のエクソン−イントロン構成を図１として示す。第１エクソンが６７６７番目から始まる全長２０６７４ｂｐのマウスＤｂｎ１は、図２に示される染色体地図から、染色体１３番のほぼ中央に位置し、近くにインターロイキン−９（Il9）やpaired-like homeodomein transcription factor（Pitx1）が存在することがわかる。
【０００７】
マウスドレブリンＡのｃＤＮＡ（アクセッション番号；AF187147）と、配列番号３で示されるラットドレブリンＡのｃＤＮＡとの一致率は９４．０７％であり、マウスドレブリンＡと、配列番号４で示されるラットドレブリンＡとのアミノ酸レベルでの一致率は９５．３５％であるが、第１１エクソンを構成するマウスｉｎｓ２配列はラットｉｎｓ２配列と完全（１００％）に一致していた。本発明者らは、ドレブリンＥに存在せず、ドレブリンＡに特異的に存在し、動物種を超えてその配列がよく保存されているｉｎｓ２領域に注目し、このｉｎｓ２領域に対する４種類のアンチセンス鎖を作製し、神経細胞におけるドレブリンＡの発現を特異的に抑制する実験を行ったところ、ラットドレブリンＡのｃＤＮＡの５′側から９８０ｂ〜１００３ｂにかけたａｇｇｃａｔｃｇｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔ［配列番号５］の領域のアンチセンス鎖である２４−ｍｅｒのＳ−オリゴ（５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′）［配列番号６］がドレブリンＡの発現量を顕著に低下させることを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち本発明は、配列番号６に示される塩基配列からなるアンチセンスオリゴヌクレオチド（請求項１）や、配列番号５に示される塩基配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつドレブリンＡ発現抑制作用を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド（請求項２）や、請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドのリン酸エステル基をチオリン酸エステル基或いはメチルホスホネート基で置換したもの、及び、請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドのリボース部分の水酸基をメトキシ或いはアリロキシからなるアルコキシ基、アミノ基、又はフッ素原子で置換したもの、から選択される請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体（請求項３）や、請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び／又は請求項３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体を担持したベクター（請求項４）や、配列番号７に示されるアミノ酸配列からなるペプチドを特異的に認識する抗体（請求項５）や、モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項５記載の抗体（請求項６）や、請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び／又は請求項３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体を有効成分とするドレブリンＡの過剰発現・機能亢進に起因する疾病の治療薬（請求項７）や、請求項１又は２記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド及び／又は請求項３記載のアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体と薬学的に許容される細胞内導入試薬とからなるドレブリンＡの過剰発現・機能亢進に起因する疾病の治療薬（請求項８）に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドとしては、配列番号６に示される塩基配列（５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′）からなるＤＮＡや、配列番号５に示される塩基配列（ａｇｇｃａｔｃｇｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔ）とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつドレブリンＡ発現抑制作用を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド（アンチセンスＤＮＡ又はアンチセンスＲＮＡ）であれば特に制限されるものではないが、生体に投与した際の安定性がより高いという理由でアンチセンスＤＮＡの方が好ましい。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドはドレブリンＡの発現を顕著に抑制することができる上に、その選択的ハイブリダイズ特性からしてプローブとしても使用可能であり、他の脊椎動物のｃＤＮＡライブラリーから該プローブとハイブリダイズする当該動物におけるドレブリンＡ遺伝子のホモログ遺伝子であるｃＤＮＡを取得することもできる。
【００１０】
また、上記ストリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、４２℃でのハイブリダイゼーション、及び１×ＳＳＣ、０．１％のＳＤＳを含む緩衝液による４２℃での洗浄処理や、６５℃でのハイブリダイゼーション、及び０．１×ＳＳＣ，０．１％のＳＤＳを含む緩衝液による６５℃での洗浄処理を挙げることができる。なお、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響を与える要素としては、上記温度条件以外に種々の要素があり、当業者であれば、種々の要素を適宜組み合わせて、上記例示したハイブリダイゼーションのストリンジェンシーと同等のストリンジェンシーを実現することが可能である。このようにして得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１２塩基以上３９塩基以下、特に１５塩基以上２５塩基以下のアンチセンスＤＮＡ又はアンチセンスＲＮＡが好ましい。
【００１１】
本発明のアンチセンスオリゴヌクオレチドの合成方法としては、特に限定されないが、例えば、ＤＮＡ合成機（Applied Biosystems Inc.社製「３８１Ａ」）やＤＮＡ／ＲＮＡ合成機（Applied Biosystems Inc.社製「３９４」）等の通常の合成機を用いるホスホロアミダイト法、ホスホロチオエート法、ホスホトリエステル法等を挙げることができる。この場合、ＤＮＡ合成機等に添付されている説明書にしたがって操作を行い、得られた合成産物を逆相クロマトグラフィー等を用いたＨＰＬＣ法により精製することによって、目的のアンチセンスポリヌクレオチドやその誘導体を得ることができる。
【００１２】
また、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドの安定性や細胞に対する親和性を高めるために、その活性を著しく低下させない範囲で、リン酸エステル基又はリボース部分の水酸基を他の安定な基に置換した誘導体として用いることもできる。このようなアンチセンスオリゴヌクレオチドの誘導体の具体例としては、リン酸エステル基をチオリン酸エステル基やメチルホスホネート基等で置換したもの、リボース部分の水酸基をメトキシやアリロキシ等のアルコキシ基、アミノ基、またはフッ素原子等で置換したもの等を挙げることができる。
【００１３】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドやその誘導体は、神経細胞におけるドレブリンＡの発現を抑制するものであるため、神経細胞におけるドレブリンＡタンパクの過剰発現および機能亢進が原因の一つと考えられている疾患、例えばフラジャイルＸ症候群（脆弱Ｘ症候群）等を有効に治療することができる可能性が大きい。かかるドレブリンＡタンパクの過剰発現および機能亢進が原因の一つと考えられている疾患の治療に際しては、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその誘導体０．０１〜１００μＭ、好ましくは０．１〜１０μＭを投与することができ、また必要に応じて薬学的に許容される細胞内導入試薬、例えば、リポフェクチン試薬、リポフェクトアミン試薬、ＤＯＴＡＰ試薬、Ｔｆｘ試薬、人工合成脂質ベジクル、リポソーム、膜融合試薬、高分子ミセル化試薬、高分子坦体、またはその他の細胞内導入試薬とともに投与することができる。この場合、発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、単独でも投与可能であるが、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、可溶化剤、溶解補助剤、等張剤などの各種調剤用配合成分を添加することができる。またかかる治療剤は、経口的又は非経口的に投与することができる。すなわち通常用いられる投与形態、例えば粉末、顆粒、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で経口的に投与することができ、あるいは、例えば溶液、乳剤、懸濁液等の剤型にしたものを注射の型で非経口に局所に投与することができる。例えば、注射剤とする場合には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを水、生理食塩水またはブドウ糖溶液等に溶解させて調製することができ、必要に応じて緩衝剤、保存剤あるいは安定化剤等を含有させてもよい。投与量は、各疾患の症状の度合いや投与方法等に依存して変わりうるが、目安として、静脈内投与では体重当たり１ｍｇ／ｋｇから１ｇ／ｋｇ、好ましくは５ｍｇ／ｋｇから５００ｍｇ／ｋｇを例示することができる。
【００１４】
また、細胞への取り込みの促進や標的とする細胞への指向性を高める目的で、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド配列を発現させるようにデザインされたプラスミドやウイルスベクターを遺伝子治療用のベクターとして用いることもできる。このようなベクターとしては、ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ベクター等のウイルスベクターを好適に挙げることができるが、これらウイルスベクターの中でもＨＳＶベクターが好ましい。ＨＳＶベクターは、神経親和性が高く、ＨＳＶが細胞の染色体ＤＮＡに組み込まれないため安全であり、また、導入遺伝子の発現期間を調節することが可能である。また、ウイルスベクターを用いる場合、リコンビナーゼが認識する逆方向反復配列、例えば大腸菌Ｐ１ファージ由来のｌｏｘＰ配列又は酵母サッカロミセス・セレビッシェ由来の野生型ＦＲＴ配列を利用すると、所望の時期に本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを発現させることができる。
【００１５】
本発明の抗体は、配列番号５に示される塩基配列（ａｇｇｃａｔｃｇｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔ）を含む塩基配列（ａａｇｇｃａｔｃｇｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔｃｃ）（ラットドレブリンＡのｃＤＮＡの５′側から９７９ｂ〜１００５ｂ）の翻訳ペプチドであるＫＡＳＤＳＧＰＳＳ［配列番号７］又はこのペプチドを含む領域を特異的に認識する抗体であれば特に制限されるものではなく、かかる本発明の抗体としては、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、ヒト化抗体等の免疫特異的な抗体を具体的に挙げることができ、これらは上記ＫＡＳＤＳＧＰＳＳを抗原として用いて慣用のプロトコールに従い常法により作製することができるが、その中でもモノクローナル抗体がその特異性の点でより好ましい。かかるモノクローナル抗体等のＫＡＳＤＳＧＰＳＳに特異的に結合する抗体は、例えば、ドレブリンＡの変異又は欠失に起因する疾病の診断をする上で、また、神経細胞におけるドレブリンＡタンパクの過剰発現および機能亢進が原因の一つと考えられている疾患の治療上有用である。
【００１６】
【実施例】
以下に、実施例を挙げてこの発明を更に具体的に説明するが、この発明の範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
実施例１（神経細胞の培養）
妊娠２０日のSprague-Dawleyラットをエーテル麻酔し、断頭後、胎仔を取り出した。大脳皮質を摘出して髄膜を剥がし、パパイン添加ＣＧＢＤ溶液に入れて、３７℃恒温槽で１５分間放置した。上清を吸引除去し、ＭＥＭ培地５ｍｌで洗浄し、再度上清を吸引除去した後、ＭＥＭ培地３ｍｌと馬血清２ｍｌを加えてピペッティングし、神経細胞含有溶液をフィルター濾過してから遠心し、上清を捨て、５％牛血清、５％馬血清を含むＭＥＭ培地で攪拌し、直径３．５ｃｍのディッシュ内に３．０×１０6／２ｍｌ（ウェスタンブロット用）、又は２．０×１０6／２ｍｌ（免疫染色用）の濃度で２ｍｌずつそれぞれ注入した。これらディッシュ内の神経細胞をＣＯ2インキュベーター内で３７℃で培養した。５日目以降、ＡｒａＣ５μＭ入りグリアコンディション培地を用い、週に２回、培地を半量ずつ交換して培養を継続した。
【００１７】
実施例２（アンチセンスオリゴヌクレオチドの投与）
培養開始１２日目に、以下の４種類のアンチセンスオリゴヌクレオチドを最終濃度が１０μＭになるように培地内に投与し、その２日後に神経細胞を回収し、免疫染色とウェスタンブロットを行った。
5′-TTATGAAAGGGCAGTACGGACGAC-3′［配列番号８］
5′-AGGAAGGCCCACTGTCCGATGCCT-3′［配列番号６］
5′-TATAGGGAAAGGGAGTCCGTGGAG-3′［配列番号９］
5′-GGTTTGGGGTGCGGTGGCAGGTGA-3′［配列番号１０］
また、ポジティブコントロールとして、上記アンチセンス鎖の配列を逆向きにした４種類のreversedアンチセンス鎖を用いた。
【００１８】
実施例３（ウエスタンブロット分析）
アンチセンス鎖投与２日後における神経細胞内のドレブリンＡタンパクの発現量を調べるために、ウエスタンブロット分析を行った。神経細胞の抽出液をＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動法により分離し、分離したタンパク質をメンブレンフィルター（MILIPORE社製「Immobilon transfer membranes」）にブロッティングした。このブロッティングした膜を、５％スキムミルクを含むＴＢＳで５倍希釈した坑ドレブリンＡ抗血清（Exp. Cell Res. 215, 145-153 (1994)；坑ドレブリンＡポリクローナル抗体）含有溶液中、室温で６０分間インキュベーションした。０．０５％のツイーン２０を含むＴＢＳで洗浄後、５％スキムミルクを含むＴＢＳで希釈したＨＲＰ標識化抗ラビットＩｇＧ抗体のＦ(ａｂ′)2フラグメント（カッペル社製）溶液に上記インキュベーションした膜を浸した。抗原特異的ＨＲＰ反応により生じた化学ルミネッセンスをKodak Scientific Imaging Film（X-OMAT AR, Kodak）とECL detection kit（Amersham Pharmacia Biotech）により視覚化した。その結果、５′側から９８０ｂａｓｅ〜１００３ｂａｓｅ目にかけた、ａｇｇｃａｔｃｇｇａｃａｇｔｇｇｇｃｃｔｔｃｃｔの領域に対するアンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′投与の場合、アンチセンス鎖未投入のコントロールやreversedアンチセンス鎖投与のポジティブコントロールの場合に比べて、ドレブリンＡの発現量を特異的に低下させることに有効であることがわかった（図３）が、他の３種類のアンチセンス鎖では、ドレブリンＡの発現が抑制されていなかった。
【００１９】
実施例４［免疫染色］
アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′投与２日後における神経細胞を、３．５％のパラホルムアルデヒドを添加したＰＢＳにより４℃で１５分間振盪固定した後、ＴＢＳ中で室温にて５分間洗浄し、３％のＢＳＡを含むＰＢＳ中で室温にて１０分間ブロッキングし、坑ドレブリンＡ抗血清（Exp. Cell Res. 215, 145-153 (1994)；坑ドレブリンＡポリクローナル抗体）を３％のＢＳＡを含むＰＢＳで希釈して調製した溶液を用いて、室温で６０分間反応させた。これら反応させた標本をＰＢＳ中で室温にて５分間×３回振盪して洗浄した後、３％のＢＳＡを含むＰＢＳで１００倍希釈したＦＩＴＣ標識化抗マウスＩｇＧ抗体（カッペル社製）を用いて室温にて３０分間染色した。これら染色物を遮光したままＰＢＳ中で室温にて５分間×３回振盪して洗浄した後、パーマフロー（シャンドン社製）で封入し、蛍光顕微鏡で観察した。この結果を図４に示す。
【００２０】
また、免疫染色による細胞内のドレブリンＡの分布をＤｉＩ染色による神経細胞形態と比較して調べたところ、正常の発達をしている神経細胞では、樹状突起の棘構造であるスパインに局在するドレブリンＡがスパインではなく樹状突起に存在し、未熟な神経細胞と同様な局在を示しており、神経系の発達の遅れが示唆された。さらに、１ニューロン当たり４０〜６３のスパインをカウントし、各ニューロンのスパイン長を測定した。結果を図５に示す。図５から、アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′投与群（AS）では、コントロールであるアンチセンス鎖未投入群（Cont）やポジティブコントロールであるreversedアンチセンス鎖投与群（RAS）の場合に比べて、スパイン長が統計学上有意に短くなっていた。また、１樹状突起当たりのスパイン密度についても測定した。結果を図６に示す。図６からわかるように、スパイン密度については、アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′投与群（AS）と、コントロールであるアンチセンス鎖未投入群（Cont）やポジティブコントロールであるreversedアンチセンス鎖投与群（RAS）との間に統計学上有意な差を見い出すことができなかった。
【００２１】
【発明の効果】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いると、ドレブリンＡタンパク質の発現量が顕著に低下し、またかかるドレブリンＡの発現量が低下した神経細胞では、神経細胞において重要な構造である樹状突起の棘構造の長さが短くなることから、神経シナプス機能の調節を行うことが可能となり、精神・神経疾患や神経損傷の治療に応用できる。
【００２２】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】マウスドレブリンＡのゲノミック遺伝子のエクソン−イントロン構成を示す図である。
【図２】染色体１３番におけるマウスドレブリンＡのゲノミック遺伝子（Ｄｂｎ１）の染色体地図を示す図である。
【図３】アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′を投与した場合のウエスタンブロットの結果を示す図である。
【図４】アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′を投与した場合の免疫染色の結果を示す図である。
【図５】アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′を投与した場合のスパイン長の測定結果を示す図である。
【図６】アンチセンス鎖５′−ＡＧＧＡＡＧＧＣＣＣＡＣＴＧＴＣＣＧＡＴＧＣＣＴ−３′を投与した場合のスパイン密度の測定結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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