(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式を有するタキサンであって、
0004192208.tif 000010
Ａ1がＨであるか、または化学式Ｚ−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（Ｃ6Ｈ5）ＣＨ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）−を有する基であり、
Ａ2がＨまたはＣＨ3Ｃ（Ｏ）−
Ａ3がＨまたはＯＨであり、
ＺがＣ6Ｈ5−，Ｃ6Ｈ5ＣＨ2−Ｏ−，Ｃ（ＣＨ3）3−Ｏ−またはＣＨ（ＣＨ3）＝Ｃ（ＣＨ3）−、
ＲおよびＲ1がそれぞれＨまたは式Ｙ1Ｙ2を有する基であり、ただし、ＲとＲ1のうちの少なくとも一方がＨではなく、又Ａ1がＨである場合Ｒ1がＨでなく、Ｙ1は、化学式Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）n1（ＣＨ＝ＣＨ）n2（ＣＨ2）n3（ＣＨ＝ＣＨ）n4（ＣＨ2）n5（ＣＨ＝ＣＨ）n6（ＣＨ2）n7（ＣＨ＝ＣＨ）n8（ＣＨ2）n9−を有する基であり、ここでｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は１から２１までの整数であり、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ独立してゼロまたは１であり、ｎ１はゼロまたは１から２１までの整数、ｎ３はゼロ、または１から１８までの整数、ｎ５はゼロまたは１から１５までの整数、ｎ７はゼロまたは１から１２までの整数、ｎ９はゼロまたは１から９までの整数であり、ｎ１からｎ９まではその時々に応じて同じか、または異なることができるものであり、
Ｘ1が水素よりも大きい電気陰性度を有する加水分解促進基であり、
Ｙ2が−ＣＨ3、−ＣＯ2Ｈまたは−ＣＨ2ＯＨであることを特徴とするタキサン。
【請求項２】
Ａ1が化学式Ｚ−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（Ｃ6Ｈ5）ＣＨ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）−を有する基である、請求項１に記載のタキサン。
【請求項３】
Ｒ1がＨである、請求項２に記載のタキサン。
【請求項４】
Ｒが化学式Ｙ1ＣＨ3を有する基である、請求項３に記載のタキサン。
【請求項５】
Ｒが−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）3ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）5ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）9ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）11ＣＨ3または−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）13ＣＨ3である、請求項４に記載のタキサン。
【請求項６】
ＲがＨである、請求項２に記載のタキサン。
【請求項７】
Ｒ1が化学式Ｙ1ＣＨ3を有する基である、請求項６に記載のタキサン。
【請求項８】
Ｒ1が−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）3ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）5ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）9ＣＨ3、または−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）13ＣＨ3である、請求項７に記載のタキサン。
【請求項９】
Ｘ1がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＣ6Ｈ4Ｘ2または−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ2であり、Ｘ2がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＣＮ、ＮＯ2またはＮＨ3+である請求項１に記載のタキサン。
【請求項１０】
ＺがＣ6Ｈ5である、請求項２に記載のタキサン。
【請求項１１】
Ａ2がＣＨ3Ｃ（Ｏ）−であり、Ａ3がＨである、請求項１０に記載のタキサン。
【請求項１２】
Ｒ1がＨであり、Ｒが−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）3ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）5ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）9ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）11ＣＨ3または−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）13ＣＨ3である、請求項１１に記載のタキサン。
【請求項１３】
Ｘ1がＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである、請求項１２に記載のタキサン。
【請求項１４】
Ｒ1がＨであり、Ｒが−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）3ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）5ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）9ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）11ＣＨ3または−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）13ＣＨ3である、請求項１１に記載のタキサン。
【請求項１５】
Ｘ1がＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである、請求項１４に記載のタキサン。
【請求項１６】
請求項１記載のタキサンと、薬学的に受容し得る、媒体とにより構成される医薬組成物。
【請求項１７】
薬学的に受容し得る媒体が脂質担体を含み、タキサンが該脂質担体と結合されている、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
脂質担体が脂肪酸、リン脂質、リポタンパク質、ミセル、脂質複合体またはリポソームである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
医薬組成物が、抗癌有効量のタキサンを含有する、請求項１６、１７または１８記載の医薬組成物。
【請求項２０】
タキサンの抗癌有効量が、動物の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから約１０００ｍｇである、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２１】
タキサンがリポソームと結合している、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２２】
Ａ1が化学式Ｃ6Ｈ5Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（Ｃ6Ｈ5）ＣＨ（ＯＲ）Ｃ（Ｏ）−を有する基であり、Ａ2がＣＨ3Ｃ（Ｏ）−であり、Ａ3がＨであり、ＲまたはＲ1のうちの一つが−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）3ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）5ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）9ＣＨ3、−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）11ＣＨ3または−Ｃ（Ｏ）ＣＨＸ1（ＣＨ2）13ＣＨ3である、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２３】
癌が、肺、結腸、脳、乳房、卵巣、前立腺または胃の癌であり、または白血病、リンパ腫、肉腫、または癌腫である、請求項１９記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、アシル鎖の付いたタキサン化合物に関するものである。アシル鎖は加水分解促進基を結合することにより得られる。また脂質担体を含有する薬剤組成物を含む化合物により構成される組成物、および癌に冒されたヒトなどの動物に前記組成物を投与する方法に関するものである。
発明の背景
タキサンは天然の原料から分離することができ、また天然に存在する前駆物質から合成により調製することができる。たとえば、パクリタクセル(ＴＡＸＯＬR、ブリストル・マイヤーズ  スクイブ社)はバカチンの水酸基に保護基を結合させることによってバカチンから調製することができ、バカチンの水酸基はパクリタクセルの水酸基となり、前駆物質バカチンをパクリタクセルへと変換し、水酸基から保護基を取除き、パクリタクセルを得ることができる。(たとえば、以下を参照：  Ｗ０９３／１００７６、国際公開日１９９３年５月２７日。Ｋ．Ｖ．Ｒａｏ、米国特許５，２００，５３４。Ｒ．Ａ．Ｈｏｌｔｏｎ、米国特許５，０１５，７４４。ＰＣＴ／ＵＳ９２／０７９９０。Ｖ．Ｊ．ＳｔｅｌｌａおよびＡ．Ｅ．Ｍａｔｈｅｗ、米国特許４，９６０，７９０。Ｋ．Ｃ．Ｎｉｃｏｌａｕ、Ｎａｔｕｒｅ３６４(１９９３)、ｐｐ．４６４−４６６。Ｎｉｃｏｌａｕ，Ｋ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ３６７(１９９４)、ｐｐ．６３０−６３４。Ｈｏｌｔｏｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１６(１９９４)、ｐｐ．１５９７−１６００。Ｗ０９３／１６０５９、国際公開日１９９３年８月１９日。ＥＰ５２８，７２９、公開１９９３年２月２４日。ＥＰ５２２，９５８、公開１９９３年１月１３日。Ｗ０９１／１３０５３、国際公開日１９９１年９月５日。ＥＰ４１４，６１０、国際公開日１９９１年２月２７日。これらの文書の内容は引照によりこの明細書に組入れられている。)
タキサンは各種の癌を治療するために効果的に用いることができる。たとえば、パクリタクセルは、卵巣癌や乳癌、また悪性黒色腫、大腸癌、白血病および肺癌に対して活性を有することが判っている。(たとえば、以下を参照：Ｂｏｒｍａｎ、Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｎｅｗｓ、１９９１年９月２日。ｐｐ．１１−１８。Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ(Ｇｏｏｄｍａｎ  Ｇｉｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．編集)，Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ(１９９０)、ｐ．１２３９。Ｓｕｆｆｎｅｓｓ、抗腫瘍アルカロイド、「アルカロイド」、ＸＸＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．(１９８５)、第１章、ｐｐ．６−１８。Ｒｉｚｚｏ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．＆Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．８(２)：１５９−１６４(１９９０)。Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ９：９３３−９３８(１９９１年１０月)。パクリタクセルは細胞核内のチューブリンに結合することによって癌細胞に作用し、微小管の分解を阻止し、その結果、細胞分裂を阻害する(Ｓｃｈｉｆｆ  ｅｔ  ａｌ．、Ｎａｔｕｒｅ  ２７７：６６５(１９７９)。
しかし、療法上有用な担体にタキサンを結合させて、動物にタキサンを投与できるようにすることは、水性または脂質性の担体に溶解しにくいというタキサン分子の性質により困難である。たとえば、パクリタクセルは、ヒマシ油とエタノールのポリオキシエチル化誘導体中のエマルジョンＣｒｅｍｏｐｈｏｒＥＬRとして現在供給されているが、これは水溶性または脂溶性が欠けているためである。しかし、クレモフォル(ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ)担体自体が動物に対して毒性があると考えられるので、クレモフォル系のパクリタクセル調剤の投与では一般に他の薬の前投与が必要であり、また大量の調剤成分をゆっくりと注入しなくてはならず、このため一晩入院しなくてはならず、付添人の費用も必要となる。
この明細書に述べる組成物は、アシル鎖を付けたタキサン化合物の形でタキサンを提供する。アシル鎖はタキサンの脂溶性を高め、その結果、タキサンは長時間にわたって脂質系担体、たとえばリポソームに対して安定したものとなる。アシル鎖それ自体は、親タキサンからの誘導アシル鎖の加水分解を促進する化学成分である加水分解促進基を結合することによって誘導され、タキサンが脂質系担体から解離すると親タキサンは治療に有用な形態となる。
この明細書に述べる化合物は、そのまま動物に投与することができ、あるいは投与の前に脂質系担体といっしょに調剤することができる。このような調剤成分は、動物の作用部位へのタキサンの送出を促進する。
発明の要旨
本発明は，下記の化学式を有するタキサンを提供する。
0004192208.tif 000002
ここで、Ａ1はＨであるか、または化学式Ｚ−Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−を有する基であり、ＺはＣ6Ｈ5−，Ｃ6Ｈ5ＣＨ2−Ｏ−，Ｃ(ＣＨ3)3−Ｏ−またはＣＨ(ＣＨ3)=Ｃ(ＣＨ3)−、Ａ2はＨまたはＣＨ3Ｃ(Ｏ)−、Ａ3はＨまたはＯＨであり、ＲおよびＲ1はそれぞれＨまたは式Ｙ1Ｙ2を有する基であり、ただし、ＲとＲ1のうちの少なくとも一方がＨではなく、Ｙ1は、化学式Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ２)n1(ＣＨ＝ＣＨ)n2(ＣＨ２)n3(ＣＨ＝ＣＨ)n4(ＣＨ２)n5(ＣＨ＝ＣＨ)n6(ＣＨ２)n7(ＣＨ＝ＣＨ)n8(ＣＨ２)n9−を有する基であり、ここでｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は１から２１までの整数であり、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ個別にゼロまたは１であり、ｎ１はゼロまたは１から２１までの整数、ｎ３はゼロ、または１から１８までの整数、ｎ５はゼロまたは１から１５までの整数、ｎ７はゼロまたは１から１２までの整数、ｎ９はゼロまたは１から９までの整数であり、ｎ１からｎ９まではそれぞれ同じか、または異なるものであり、Ｙ2は−ＣＨ3、−ＣＯ2Ｈまたは−ＣＨ2ＯＨである。
Ｘ1は加水分解基(“ＨＰＧ”)であり、下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、−ＯＣ6Ｈ4Ｘ2または−Ｃ(Ｏ)Ｘ2。ここでＸ2はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＨ3+、ＮＯ2またはＣＮである。好ましくは、Ｘ1はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。好ましくは、Ａ1はＺ−Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−である。Ｚは好ましくはＣ6Ｈ5であり、Ａ1はより好ましくはＣ6Ｈ5Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−であり、さらに好ましくはＡ1はＣ6Ｈ5Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ2はＣＨ3Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ3はＨである。すなわち、タキサンはパクリタクセルである。Ｒ1が水素であるときは、Ｒは−Ｙ1Ｙ2であり、Ｒが水素であるときはＲ1は−Ｙ1Ｙ2である。−Ｙ1Ｙ2は好ましくは化学式−Ｙ1ＣＨ3を有し、より好ましくは化学式−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)n1ＣＨ3を有し、さらに好ましくは、ｎ１は３、５、９、１１、１３または１５である。
またこの明細書に述べる組成物は、本発明のタキサンにより構成される。このような組成物はまた薬学的に受容可能な媒体を含むこともできる。また、この組成物は好ましくは脂質系担体を含み、これはたとえば、脂肪酸、リン脂質、リポタンパク質、ミセル、脂質複合体またはリポソームであり、タキサンはこれと結合して治療のため効果的となるような体内の部位へと送られる。
この明細書には、さらに、本発明のタキサン含有組成物を動物に投与することを含む、タキサンを動物に投与する方法が述べられている。動物は癌に冒されることがある。これはたとえば、脳、胃、肺、結腸、前立腺、乳房または卵巣の癌であり、また白血病、リンパ腫、癌腫または肉腫である。この方法による癌治療では、罹患した動物に抗癌有効量のタキサンを投与する。通常の場合、タキサンの抗癌有効量は動物の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから約１０００ｍｇである。このような抗癌治療では、投与する組成物は脂質担体を含むことが好ましい。好ましい抗癌性タキサンはパクリタクセル、すなわち、Ａ1がＣ6Ｈ5Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ2がＣＨ3Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ３がＨであるようなタキサンである。より好ましくは、ＲまたはＲ1が−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)n1ＣＨ3であり、さらに好ましくはｎ１が３、５、９、１１、１３または１５である。さらに、動物へのタキサンの投与の一部として、追加の生体活性成分を投与することができる。
【図面の簡単な説明】
図１  ＯＶＣＡＲ３腫瘍を有するＳＣＩＤマウスの生存に対する、パクリタクセル含有および２′−(２−ブロモ)疎水性パクリタクセル誘導体(“ＨＴＤ”)含有リポソームの効果を示す図である。黒い菱形はパクリタクセル・リポソームを示し、黒い四角形は２−ブロモ−Ｃ６  ＨＴＤを示す。(６炭素アシル鎖で置換されたパクリタクセルが、パクリタクセルの２′水酸基に結合し、臭素原子を有するアシル鎖が、そのアルファ炭素に結合している。)黒三角形は２−ブロモ−Ｃ８  ＨＴＤを示し、白い菱形は２−ブロモ−Ｃ１２  ＨＴＤを示し、白三角形は２−ブロモ−Ｃ１４  ＨＴＤを示し、白丸は２−ブロモ−Ｃ１６  ＨＴＤを示している。＊印は「空の」リポソーム(パクリタクセルまたは置換パクリタクセル誘導体を含まないリポソーム)を示す。
発明の詳細な説明
本発明は下記の化学式を有するタキサンを提供する。
0004192208.tif 000003
ここでＡ1はＨであるか、または化学式Ｚ−Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−を有する基であり、Ａ2はＨまたはＣＨ3Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ3はＨまたはＯＨである。ＺはＣ6Ｈ5−，Ｃ6Ｈ5ＣＨ2−Ｏ−，Ｃ(ＣＨ3)3−Ｏ−またはＣＨ(ＣＨ3)=Ｃ(ＣＨ3)−である。さらに好ましくはＡ1はＣ6Ｈ5Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ2はＣＨ3Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ3はＨである。したがって、最も好ましいタクサンはパクリタクセル(［化合物Ｉ］)、ＴＡＸＯＬR(Ｃ47Ｈ51ＮＯ)(ブリストル・マイヤーズ  スクイブ社)誘導体である。
しかし、タキソテレ(II)系誘導体も提供され、これはＣ−１２の位置にベンゾイル基の代わりにテルトブトキシ・カルボニル基を有し、Ｃ−１０の位置にアセチロキシ基の代わりに水酸基を有する点でパクリタクセルと異なっている。したがって、タキソテレについては、Ａ1はＣ(ＣＨ3)3ＯＣ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ2はＨであり、Ａ3はＨである。
さらに、本発明の実施によって有用となるタクサンは、下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、次の表に示すように、セファロマニン(III)、１９−ヒドロキシバカチンIII［IV］、バカチンＶ［Ｖ］、１０−デアセチル・セファロマニン［VI］、１０−デアセチル・パクリタクセル［VII］、７−エピ−１０−デアセチル・パクリタクセル［VIII］、７−エピ−１０−デアセチル・セファロマニン［IX］、および１０−デアセチル・バカチンIII［Ｘ］である。
0004192208.tif 000004
ＲおよびＲ1はそれぞれＨか、または化学式−Ｙ1Ｙ2を有する基である。ただし、ＲとＲ1のうち少なくとも一つはＨではない。Ｙ1はＣ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)n1(ＣＨ＝ＣＨ)n2(ＣＨ2)n3(ＣＨ＝ＣＨ)n4(ＣＨ2)n5(ＣＨ＝ＣＨ)n6(ＣＨ2)n7(ＣＨ＝ＣＨ)n8(ＣＨ2)n9−である。ここでｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の和は１から２１までの整数であり、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ個別にゼロまたは１である。ｎ１はゼロまたは１から２１までの整数、ｎ３はゼロ、または１から１８までの整数、ｎ５はゼロまたは１から１５までの整数、ｎ７はゼロまたは１から１２までの整数、ｎ９はゼロまたは１から９までの整数であり、ｎ１からｎ９まではそれぞれ同じか、または異なるものである。Ｙ1は飽和状態であることが好ましい。すなわち、隣接する炭素原子の間に二重結合はない。したがって、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれゼロであることが好ましく、ｎ３、ｎ５、ｎ７およびｎ９もそれぞれゼロであり、Ｙ1は−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)n1−であることが好ましい。あるいは、Ｙ1は不飽和状態であってもよい。すなわち、一つまたはそれ以上の二重結合、および一つまたはそれ以上のＣＨ＝ＣＨユニットがあってもよい。したがって、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８のうちの少なくとも一つが１である。たとえば、不飽和アシル鎖が一つの二重結合を有するときは、ｎ２は１であり、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれゼロである。Ｙ1は−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)n1ＣＨ＝ＣＨ(ＣＨ2)n3−であり、ｎ１はゼロまたは１から１８までの整数である。またｎ３もゼロまたは１から１８までの整数であり、ｎ１またはｎ３のうちの少なくとも一つがゼロではなく、ｎ１とｎ３の和が１から１９までの整数に等しい。
Ｙ2は−ＣＨ3であることが好ましく、したがってアシル鎖はモノカルボン酸から誘導されるが、−ＣＯ2Ｈであってもよく、アシル鎖はオメガ・ジカルボン酸から誘導されるか、または−ＣＨ2ＯＨであり、この場合、アシル鎖はオメガ・ヒドロキシ酸から誘導される。したがって、Ｙ1Ｙ2の化学式は−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)n1ＣＨ3であることが好ましく、ここでｎ１は３、５、９、１１または１３であることが好ましく、この基はＲ、Ｒ1に存在するか、またはＲとＲ1の両方に位置することが好ましい。
基−Ｙ1Ｙ2のタキサンへの「結合」は、この基とタキサンの間に化学的結合が形成されることを意味し、これはこのような結合を形成するための一般に技術上受け入れられている手段により行われる。結合は、タキサン上の一つまたはそれ以上の反応基、通常は水酸基に対して行われる。タキサンへのアシル鎖の結合は、タキサンと脂質担体の結びつきを安定させ、対応するアシル鎖のないタキサンよりも長時間にわたってタキサンと担体が動物の血漿内でいっしょに留まるようにする。結合の安定性が高まることによって、ｉｎ  ｖｉｖｏでの治療作用部位へのタキサンの到達が促進される。
パクリタクセルには、たとえばアシル鎖が結合することのできる二つの水酸基がある。これらは２′と７位置にあり、その相対的反応次数は一般に(最も反応性の高いものから最も低いものへ)２′＞７であると考えられている。酸の活性形態(たとえば塩化物や無水物)の化学量論的量を用いて、タキサンの一次反応基、たとえばパクリタクセルの２′ＯＨ基に炭化水素を結合させることができる。パクリタクセルの７の位置にある水酸基は、２′および７のＯＨ基にアシル鎖を結合させ、そのあと２′アシル鎖を除去することによって変えることができ、アシル鎖を７の位置でパクリタクセルに結合したままにすることができる。２′アシル鎖の選択的除去は、化学量論的量の弱塩基、たとえば重炭酸ソーダを用いて行うことができる。さらにパクリタクセルの７の位置にあるＯＨ基は、パクリタクセルとアシル鎖が共有結合する前に、２′の位置にあるＯＨ基を「保護」することによって変えることができる。また２′のＯＨ基は、一般に当業者に知られているプロセスを用いて、たとえば、トリフェニルメチル、メトキシトリフェニルメチル、トリフルオロアセチル、およびＴｒＯＣ(トリクロロメトキシ・クロロホルメート)の各基で保護することができる。保護されたパクリタクセルはアシル鎖の活性形態、たとえば無水有機溶媒中の無水物または塩化物、およびＤＭＡＰやピリジンなどの塩基と反応する。保護基は、弱い酸性または塩基性の条件下で、既知の手段および容易に実施される手段により、２′の位置から除去できる。たとえば、ＴｒＯＣ基は亜鉛還元反応によって除去できる。
反応は、ピリジン、ジメチルアミノピリジン(“ＤＭＡＰ”)、トリエチルアミン、その他のような塩基の存在下で、またジメチル・ホルムアミド、ジメチル・スルホキシドなどの通常の極性、非プロトン性有機溶媒中で行われる。反応の進行は多くの既知のクロマトグラフィ手段、たとえば３％メタノール・クロロホルム溶媒系を用いた薄層クロマトグラフィによりモニターすることができる。化合物の同一性は、ＮＭＲ分光法などの方法によって確認することができる。
たとえば、２′−(±)−２−ブロモアシル・パクリタクセルを調製するために、下記の反応スキーム、および下記の情報を用いることができる。
0004192208.tif 000005
しかし、特異反応および精製条件は、一般に多くの要因によって異なると考えられる。これらの要因は下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、用いられる原料および反応物質で、当業者の理解の範囲内で本発明の開示内容に応じて決定し、また調節できるもの。
アルファ炭素上で、加水分解促進基で置換されたアシル鎖は、市販の供給源から購入することができ、また脂肪酸のアルファ炭素上で水素原子を置換するための、技術上で一般に受入れられている手段により合成することができる。
「加水分解促進基」(“ＨＰＧ”)は、アシル鎖のアルファ炭素(Ｃα)での置換基であり、親タキサンとその結合アシル鎖の間の結合の加水分解を促進する。ＨＰＧは水素に対して電気的に陰性であり、これは水素原子が同一分子内で同一位置を占めるときには、ＨＰＧが電子を水素原子よりもＨＰＧの方へ引きつけることを意味する。したがって、アルファ炭素上で水素原子を加水分解促進基に置換すると、アシル鎖の電子密度の再分配が起こりアシル鎖の誘起効果が発生する。また、アルファ炭素に結合した水素を芳香族成分を含むＨＰＧで置換すると共鳴効果が起こり、この場合にも置換されたアシル鎖で電子密度の再分配が生じる。ＨＰＧにより引き起こされた誘起効果および共鳴効果によって酸に対応する塩基を安定させるが、酸自体を安定させるわけではなく、酸はアシル鎖でＨＰＧの代わりにＣＨ2基があるときよりも強い酸となる。したがってＨＰＧで置換されたアシル鎖は、一般にその対応する元の形(つまり、アルファ位置にＨＰＧ置換基の代わりにＣＨ2基がある形)よりもｐＫが低い。そこで、ＨＰＧで置換されたアシル鎖は置換されていないアシル鎖よりも、その親タキサンから加水分解され易い。したがって、加水分解促進基Ｘ1は、(１)水素よりも電気陰性の高い、また(２)アシル鎖のアルファ位置に結合できるような原子または原子グループである。たとえば、Ｘ1はＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＨ3+、−ＯＣ6Ｈ4Ｘ2、または−Ｃ(Ｏ)Ｘ2のいずれでもよく、Ｘ2はたとえば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＮＨ3+、ＮＯ2またはＣＮである。より好ましくは、Ｘ1はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。
また、この明細書により本発明のタキサンを含む組成物が提供される。タキサンを治療に用いるための組成物は、薬学的に受入可能な媒体を含み、これは一般に、動物に対する治療物質または診断物質のような活性成分の投与に関して一般に用いられる媒体である。これらは次のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、丸剤、カプセル剤、錠剤、ゲル、賦形剤、水性または非水性溶液である。薬学的に受入可能な媒体は、一般に当業者の理解の範囲内にある多くの要因に応じて調剤され、これらの要因は下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、使用される特定の活性成分、その濃度、安定性、目的とする生体内利用性、組成物で治療される疾患、障害または病状、患者、その年齢、体の大きさ、一般的条件、組成物の投与経路(たとえば、経鼻、経口、経眼、局所、経皮、経腟、皮下、乳房内、腹腔内、静脈内、または筋肉内)、である。(たとえば、以下を参照。Ｊ．Ｇ．Ｎａｉｒｎ：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ(Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編集)、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，(１９８５)、ｐｐ．１４９２−１５１７。この文書の内容は引照によりこの明細書に組入れられている。)非経口投薬に用いられる薬学的に受入可能な媒体は、たとえばＤ５Ｗ(５％ブドウ糖水溶液)、容量対重さで５％のデキシトロース(左旋糖)を含む水溶液、および生理的食塩水である。
この明細書に述べるタキサン含有組成物は、タキサンが結合した脂質担体を含むことが望ましい。「脂質担体」は動物への投与に適した疎水性または両親媒性の分子であり、下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、脂肪酸、リン脂質、ミセル、リポタンパク質、脂質複合体、つまり非リポソーム性、脂質系の構造体であって、一つまたはそれ以上の非脂質成分を含むが、必ずしも含む必要のないもの、およびリポソームである。できれば、脂質担体はリポソームであることが好ましい。
「リポソーム」は脂質分子の一つまたはそれ以上の二層膜を含んでいて、各二層膜は水性の小室を取囲んでいる。単(二分子)層リポソームには単一の脂質二層膜があり、多層リポソームには二つ以上の二層膜がある。脂質二層膜を形成している両親媒性の脂質分子は、極性(親水性)基と、一つまたはそれ以上のアシル鎖を含んでいる。極性基は、リン酸塩系、硫酸塩系、または窒素系基であるが、リン酸塩系基、たとえば、ホスホリルコリン、ホスホリルエタノールアミン、ホスホリルセリン、ホスホリルグリセロール、またはホスホリルイノシトール基であることが好ましい。アシル鎖は一般に１２から２４の炭素原子を含み、飽和状態(たとえば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミシン酸またはステアリン酸)、また不飽和状態(たとえば、オレイン酸、リノール酸またはアラキドン酸)である。また、リポソーム性脂質にはステロール、たとえばコレステロールやその他の脂質を含めてもよい。
リポソームはさまざまな方法で製造することができる。たとえば脂質／有機溶媒を乾燥し、次に乾燥した脂質を水性溶液で再水和する多層リポソーム(ＭＬＶ)を製造するためのＢａｎｇｈａｍの方法(Ｂａｎｇｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９６５を参照)。水性相と脂質含有有機相の二相混合物を形成し、脂質を水性相で乳化し、有機相を蒸発させることによる、本質的に同等の層間溶質分布(ＳＰＬＶ)を有するＭＬＶを製造するＬｅｎｋの方法(米国特許４，５２２，８０３、５，０３０，４５３および５，１６９，６３７を参照)。単相溶媒系を用いてＳＰＬＶを製造するＦｏｕｎｔａｉｎの方法(米国特許４，５８８，５７８)。凍結と解凍のサイクルをくり返すことによりＳＰＬＶを製造するＣｕｌｌｉｓの方法(米国特許５，００８，０５０)。油中水エマルジョンを形成してＲＥＶを調製し、これから有機相を蒸発させてゲルを取得し、次にゲルを攪拌してオリゴ層リポソームを得る方法(Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許４，２３５，８７１)。ＭＬＶの押出しにより単層リポソームを得る方法(たとえば、Ｃｕｌｌｉｓ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許４，９７５，２８２を参照)。また大型リポソームの超音波処理または均質化、またはエーテルまたはエタノール注入法(たとえば、Ｒ．ＤｅａｍｅｒおよびＰ．Ｕｓｔｅｒ、「リポソームの調製：方法およびメカニズム」、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ(Ｍ．Ｏｓｔｒｏ編集)、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，  Ｉｎｃ．，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ(１９８３)、ｐｐ．２７−５２を参照)。これらのリポソーム調製に関する文書の内容は、引照によりこの明細書に組入れられている。
この明細書で述べる「結合」(ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ)という用語は、タキサンに結合したアシル鎖と脂質担体の疎水性部分の間の結合を意味する。理論によって限定されることを意図するものではないが、このような結合は多くの影響力によって行われると考えられている。たとえば、水性環境で疎水性分子相互間に働くことが知られているファンデルワールスの力である。たとえば、脂質担体がリン脂質を含むときに、リンで回収されるタクサンの割合を決定することによって、このような結合の安定性を調べる手段は、本発明の開示内容にもとづいて当業者により容易に実施することができる。
本発明によるタキサンと結合する脂質担体は、追加の生体活性物質、つまり、タキサン以外の生体活性物質を含むことができる。脂質担体と生体活性物質を含めた調剤成分は、たとえば、生体活性物質の毒性を抑え、生体活性物質が動物の循環系から除去される速度を下げることによって、生体活性物質の治療係数を高めることができ、このことは、望みの治療効果を達成するのに投与する成分の量が少なくてすむことを意味する。「生体活性物質」とは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、または動物へ投与されたときに、動物の細胞に対して生物学的活性を有する化合物または物質組成物である。生体活性物質は治療活性および／または診断活性を有することがある。このような物質は下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、抗菌性物質、抗炎症性物質、抗癌物質、ならびに放射性同位元素、酵素および色素。また追加的生体活性物質としては生体活性脂質、たとえばそれ自体に治療上有利な性質を有する一部のセラミドおよびエーテル脂質がある。追加的生体活性物質は抗癌物質であることが好ましい。
また、脂質担体は一つまたはそれ以上の「ヘッドグループ変更脂質」を含むことができる。このような脂質担体は、ヘッドグループ変更脂質を含有する脂質担体への血清タンパク質の結合を阻害することのできる成分を結合させることによって誘導できる極性基を含んでいる。これによって担体の薬物動態特性が変えられ、担体は循環系内に長く留まるようになる。(たとえば、以下を参照。Ｂｌｕｍｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１１４９：１８０(１９９３)。Ｇａｂｉｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ，１０(５)：７０３(１９９３)。Ｐａｒｋ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１１０８：２５７(１９９２)。Ｗｏｏｄｌｅ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許５，０１３，５５６。Ａｌｌｅｎ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許４，８３７，０２８および４，９２０，０１６。これらの文書の内容は、引照によりこの明細書に組み入れられている。)
ヘッドグループ変更脂質は通常はホスファチジルエタノールアミン(ＰＥ)であり、これはたとえば、ジパルミトイル・ホスファチジルエタノールアミン(“ＤＰＰＥ”)、パルミトイルオレオイル・ホスファチジルエタノールアミン(“ＰＯＰＥ”)、ジオレオイル・ホスファチジルエタノールアミン(“ＤＯＰＥ”)である。このような脂質は、コハク酸またはグルタル酸(“ＧＡ”)などの有機ジカルボン酸や、これらの対応する無水物で一般に誘導されるヘッドグループを有している。
脂質担体に組入れられるヘッドグループ変更脂質の量は、当業者に知られている多くの要因によって定まり、また実験を行わずに決定できるような当業者の理解の範囲内にある。これらの要因は下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、担体の種類とサイズ、調剤成分の治療上の用途、である。通常は、ヘッドグループ変更脂質を含有する脂質担体中で、脂質の約５モル％から約２０モル％がヘッドグループ変更脂質である。
さらに、この明細書では、本発明の組成物を動物、とくに好ましくはヒトなどの哺乳類に投与するための、動物にタキサンを投与する方法を提供する。投与は、動物への治療物質の投与のため一般に受入れられている他のいかなる手段によってもよいが、静脈内または腹腔内投与が好ましい。癌に罹患した動物はタキサン含有組成物の治療投与によって治療することができ、この場合、この組成物は抗癌有効量のタキサンを含んでいる。
一般に、この方法によって治療することのできる癌は、対応する自由タキサン、すなわち、アシル鎖が結合していないタキサンによって治療され、または治療できる癌である。これらは下記のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、脳、乳房、結腸、肺、前立腺、膵臓、胃の癌、ならびに白血病、リンパ腫、肉腫および癌腫である。好ましくは、治療される癌は乳癌または卵巣癌である。治療される癌は、標準治療薬に対して耐性のある癌、すなわち薬剤耐性癌である。
タキサンの抗癌活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、たとえば癌細胞培養物を誘導体といっしょにインキュベートし、次に培養物中での細胞増殖の阻害を調べ、細胞の増殖を阻害するタキサンの能力を検査することによって決定することができる。あるいは、まず適当な試験動物、たとえばＳＣＩＤマウスなどの免疫不全マウスに腫瘍を形成し、この動物にタキサンを投与し、次に腫瘍の成長阻害と生存率を測定することによって、抗腫瘍活性についてタキサンをｉｎ  ｖｉｖｏで試験することができる。このようなｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ試験に適した細胞は以下のものを含むが、これらに限定されるものではない。すなわち、マウスＰ３８８白血病、Ｂ１６黒色腫およびＬｅｗｉｓ肺癌の細胞、ヒト乳癌ＭＣＦ７、ヒトＭＣＦ−７／ＡＤＲ(アドリアマイシン耐性)、ヒト卵巣ＯＶＣＡＲ−３、ヒトＨＴ−２９結腸癌、Ａ５４９ヒト肺癌の細胞、このような試験のため技術上一般に受入れられているその他の細胞(薬剤耐性細胞を含む)、である。当業者は、本発明の開示内容によりＧＩ50(５０％成長阻止)、ＥＤ50(５０％有効量)、生存率、その他通常のｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏ実験から得られたデータにもとづいて、癌に対して用いるため特定のタキサンを選ぶことができる。
タキサンの「抗癌有効量」とは、癌の形成、成長、転移、湿潤または拡散を改善させ、低減させ、阻害し、または防止するのに有効なタキサンの量であり、対応する自由タキサンの治療用量と同じ量である。しかしＨＰＧ誘導によるアシル鎖がタキサンに結合し、このタキサンが脂質担体と結合することによって、タキサンの治療係数が高まる。したがって、この誘導されたアシル鎖・タキサンの抗癌有効量は、対応する自由タキサンの抗癌有効量よりも低いことがある。タキサンの抗癌有効量は多くの要因、たとえば患者の年齢、体の大きさ、一般的身体状況、治療される癌、および誘導体の投与経路によって選ぶことができ、さまざまな手段、たとえば、本発明の開示内容にもとづいて当業者に知られており、また当業者が容易に実施できるような用量決定試験によって決定することができる。一般に、タキサンの抗癌有効量は、タキサン含有組成物が投与される動物の体重１ｋｇあたり少なくとも約０．１ｍｇのタキサンの量である。通常はタキサンの抗癌有効量は動物の体重１ｋｇあたり約０．１ｍｇから約１０００ｍｇであり、好ましくは動物の体重１ｋｇあたり約１ｍｇから２００ｍｇである。
この明細書に述べられているタキサン含有組成物は、好ましくは脂質担体を含み、より好ましくはリポソームを含み、さらに好ましくは直径が約２００ｎｍ未満の単層リポソームを含んでいる。好ましい抗癌性タキサンでは、Ａ1がＣ6Ｈ5Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ(Ｃ6Ｈ5)ＣＨ(ＯＲ)Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ2がＣＨ3Ｃ(Ｏ)−であり、Ａ3がＨである。つまり、パクリタクセルである。ＲまたＲ1のうちの少なくとも一つが、好ましくは−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)3ＣＨ3、−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)5ＣＨ3、−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)9ＣＨ3、−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)11ＣＨ3または−Ｃ(Ｏ)ＣＨＸ1(ＣＨ2)13ＣＨ3であり、ここでＸ1はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであることが好ましい。
(下記の)表３および４は、マウスにおけるパクリタクセルまたはパクリタクセル誘導体の急性毒性を示している。すなわち、注射後最初の１４日以内に死亡した各治療グループにおけるマウスの数を示している。この結果はパクリタクセル誘導体を含有するリポソームはいずれもパクリタクセル含有リポソームよりも毒性が低く、体重１ｋｇあたり１００ｍｇのパクリタクセルを受けたグループでは５匹のマウス全部が最初の１４日以内に死亡したことを示している。２−ブロモ−Ｃ１６パクリタクセル(すなわち、１６個の炭素原子を含むアシル鎖が２′の位置に結合しているパクリタクセルで、アシル鎖が、アルファ炭素水素原子を臭素原子で置換することにより誘導されているパクリタクセル)の誘導体を含有するリポソームは、２−ブロモ−Ｃ６パクリタクセルの誘導体を含むリポソームよりも毒性が低かった。(下記の)表３および４は、マウスにおけるパクリタクセルまたはパクリタクセル誘導体の急性毒性を示している。すなわち、注射後最初の１４日以内に死亡した各治療グループにおけるマウスの数を示している。この結果はパクリタクセル誘導体を含有するリポソームはいずれもパクリタクセル含有リポソームよりも毒性が低く、体重１ｋｇあたり１００ｍｇのパクリタクセルを受けたグループでは５匹のマウス全部が最初の１４日以内に死亡したことを示している。２−ブロモ−Ｃ１６パクリタクセル(アルファ炭素のところに臭素原子が結合した炭素原子１６個を含むヘキサノイル鎖で誘導されたパクリタクセル)の誘導体を含有するリポソームは、２−ブロモ−Ｃ６パクリタクセルを含むリポソームよりも毒性が低かった。さらに、パクリタクセルか、または２′(２−ブロモ)疎水性パクリタクセル誘導体(２′の位置にＣ−６(炭素原子６個)、Ｃ−８、Ｃ−１２、Ｃ−１４またはＣ−１６のアシル鎖を含む)を含有するリポソームを、ヒト卵巣癌(ＯＶＣＡＲ３)を有しているＳＣＩＤ(重症複合免疫不全症の)マウスに、体重１ｋｇあたりパクリタクセル１２．５ｍｇ、またはパクリタクセル誘導体５０ｍｇの用量で５回、腹腔内投与した。治療の結果をパクリタクセルまたはパクリタクセル誘導体の投与後のマウスの生存日数により図１に示す。これらの結果は明らかに、パクリタクセルのみ、または「空の」リポソーム(つまり、パクリタクセルもパクリタクセル誘導体も含んでいないリポソーム)で治療した場合に比べて、パクリタクセル誘導体での治療ではマウスの寿命が延びたことを示している。さらに、アシル鎖を有するパクリタクセル誘導体でアシル鎖の長さが長くなるほど、寿命を延ばすのに有効であった。
また、追加的生体活性物質を、本発明の方法の一部として動物に投与することができる。追加的生体活性物質は、タキサン含有組成物の一成分であることが好ましいが、必ずしもその必要はなく、組成物が脂質担体を含むときには脂質担体と結合していることが好ましいが、必ずしもその必要はない。脂質担体はできればリポソームであることが好ましい。脂質中、またはリポソームの調製に用いる水相中で、生体活性物質を可溶化することによってリポソームに生体活性物質を組入れることができる。あるいはイオン性生体活性物質をリポソームに次のようにして組入れることができる。すなわち、まずリポソームを形成し、次に最も外側のリポソーム二重膜に、たとえばｐＨ勾配によって、電気化学電位を確立し、そのあとリポソームの外側の水性媒体にイオン性物質を加える(Ｂａｌｌｙ  ｅｔ  ａｌ．、米国特許５，０７７，０５６を参照。これらの文章の内容は、引照によりこの明細書に組入れられている。)
本発明は下記の実施例によってよりよく理解できるであろう。しかし、当業者は、これらの実施例が、下記に述べる特許請求項に規定されている本発明の単なる例証にすぎないことを理解するはずである。
実施例
(実施例１)
２′−(±)−２−ブロモヘキサノイル・タキソールの調製
２′−(±)−２−ブロモ・オクタノイル、ドデカノイル、テトラデカノイルおよびヘキサデカノイル・パクリタクセルを、下記に述べる方法により調製し(収量８０〜９０％)、１Ｈ  ＮＭＲおよび元素分析により確認した。乾燥した塩化メチレン中３０ｍｌで、(±)−２−ブロモヘキサノン酸(２２９ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ)および１，３−ジシクロヘキシル・カルボジイミド(２４１ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ)の溶液を１０分間攪拌し、これにタキソール(５００ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ)と塩基、４−ジメチルアミノピリジン(７１．５ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ)を加えた。反応混合液を室温で５分間放置した。ジシクロヘキシル尿素の白い沈殿物をセライト・パッドを通して濾過した。濾過液を真空条件下で蒸発させ、このようにして得た残留物を、調製用薄層クロマトグラフィによりＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ(９５：５)中で精製し、望みの産生物を得た。メトリセル・フィルタ(０．１ｍ)を通してＣＨＣｌ３溶液からシリカゲルを除いたあと産生物をシクロヘキサンから凍結乾燥させ、５０７ｍｇを白色粉末として得た(収量８４％)。
δ(ｐｐｍ)における一部の特性ピークの1Ｈ  ＮＭＲ(ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ)の化学シフトは次の通りであった。すなわち、８．１４(ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ、芳香族)、７．７２(ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、２Ｈ、芳香族)、７．６１(ｍ、１Ｈ、芳香族)、７．５４−７．４８(ｍ、３Ｈ、芳香族)、７．４２−７．３６(ｍ、７Ｈ、芳香族)、６．８７(ｄｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、３．４Ｈｚ、１Ｈ、ＮＨ)、６．２９(ｍ、２Ｈ、Ｈ−１０およびＨ−１３)、６．０(ｍ、１Ｈ、Ｈ−３′)、５．６８(ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−２ｂ)、５．５０(ｄｄ、Ｊ＝１．４Ｈｚ、１．０Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−２′)、４．９７(ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−５)、４．４５(ｍ、１Ｈ、Ｈ−７)、４．３２(ｄ、Ｊ＝７．３Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−２０ａ)、４．２８(ｍ、１Ｈ、ＣＨ(Br))、４．２０(ｄ、Ｊ＝８．３Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−２０ｂ)、４．０(ｂｒ、ＯＨ)、３．８１(ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ、Ｈ−３)、０．８６(ａｐｐ．ｔ．３Ｈ、ｗ−ＣＨ3)。ＦＡＢＭＳ：(ＭＨ+)、Ｃ53Ｈ60ＮＯ15Ｂｒについて計算、１０２９．３２。検出値１０３０。
スキーム１
２′−(＋)−２−ブロモアシル・パクリタクセルの合成への経路(“ＤＣＣ”＝１．３−ジシクロヘキシルカルボジイミド。“ＤＭＡＰ”＝４−ジメチルアミノピリジン)
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(実施例２)
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究
表１(下記参照)はＧＩ５０(μＭ)値(±標準偏差)を示している。すなわち、ＨＴＤといっしょに細胞を７２時間インキュベートしたあとでの、各種の加水分解性タキサン誘導体(ＨＴＤ)およびヒトＭＣＦ−７乳癌細胞の５０％成長阻止のために必要な濃度を示している。
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表２(下記参照)は、細胞とＨＴＤを７２時間インキュベートしたあとでの、パクリタクセルおよび各種の２′−２−ブロモ・パクリタクセル誘導体、およびＡ−５４９ヒト肺癌、ＭＣＦ−７ヒト乳癌、ＭＣＦ−７／ＡＤＲ(アドリアマイシン耐性)およびＨＴ−２９ヒト結腸癌細胞についての、２回の個別の実験(ＳＲＢ標準細胞毒性検定)から平均したＧＩ５０(μＭ)値を示している。(Ｃ−６、Ｃ−８、Ｃ−１２、Ｃ−１４は、それぞれ６、８、１２、１４および１６個の炭素原子を有するアシル鎖がパクリタクセルに結合していることを示す。)
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(実施例３)
ｉｎ  ｖｉｖｏ研究
ＣＤＦ１雌マウス(各グループにマウス５匹または１０匹)に、マウスの体重１ｋｇあたり１２．５、２５、５０、１００、２００、３００、４００または５００ｍｇのパクリタクセルまたはパクリタクセル誘導体を単一用量または５回用量投与する形で、パクリタクセル、２′−Ｃ６−パクリタクセル誘導体、または２′−Ｃ１６−パクリタクセル誘導体を含有するリポソームを腹腔内投与した。(下記の)表３および４は、マウスにおけるパクリタクセルまたはパクリタクセル誘導体の急性毒性を示している。すなわち、注射後最初の１４日以内に死亡した各治療グループにおけるマウスの数を示している。この結果はパクリタクセル誘導体を含有するリポソームはいずれもパクリタクセル含有リポソームよりも毒性が低く、体重１ｋｇあたり１００ｍｇのパクリタクセルを受けたグループでは５匹のマウス全部が最初の１４日以内に死亡したことを示している。２−ブロモ−Ｃ１６パクリタクセルの誘導体を含有するリポソームは、２−ブロモ−Ｃ６パクリタクセルを含むリポソームよりも毒性が低かった。
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パクリタクセルか、または２′(２−ブロモ)疎水性パクリタクセル誘導体(２′の位置にＣ−６(炭素原子６個)、Ｃ−８、Ｃ−１２、Ｃ−１４またはＣ−１６のアシル鎖を含む)を含有するリポソームを、ヒト卵巣癌(ＯＶＣＡＲ３)を有するＳＣＩＤ(重症複合免疫不全症の)マウスに、体重１ｋｇあたりパクリタクセル１２．５ｍｇ、またはパクリタクセル誘導体５０ｍｇの用量で５回、腹腔内投与した。治療の結果をパクリタクセルまたはパクリタクセル誘導体の投与後のマウスの生存日数により図１に示す。これらの結果は明らかに、パクリタクセルのみ、または「空の」リポソーム(つまり、パクリタクセルもパクリタクセル誘導体も含んでいないリポソーム)で治療した場合に比べて、パクリタクセル誘導体での治療ではマウスの寿命が延びたことを示している。さらに、アシル鎖を有するパクリタクセル誘導体でアシル鎖の長さが長くなるほど、寿命を延ばすのに有効であった。
【図１】
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