(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィターゼを給与することを特徴とする、ほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療方法。
【請求項２】
フィターゼを飼料乾物１ｋｇ当たり５０〜５０００単位添加した飼料を給与することからなる、請求の範囲第１項記載のほ乳動物(人を除く) の乳房炎の予防・治療方法。
【請求項３】
ほ乳動物がウシであり、飼料が乳用牛飼育配合飼料である請求の範囲第１項記載の乳房炎の予防・治療方法。
【請求項４】
フィターゼを含有することを特徴とする、ほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療用組成物。
【請求項５】
組成物がフィターゼと配合飼料とからなる、請求の範囲第４項記載のほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療用組成物。
【請求項６】
組成物が硫酸亜鉛メチオニンを含有することからなる請求の範囲第５項記載のほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ほ乳動物の生殖器病の中で最も発生率の多い病気である乳房炎を予防・治療するためにフィターゼを単独または飼料に混合してほ乳動物に給与する方法およびフィターゼを含有したほ乳動物の乳房炎の予防・治療用組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳房炎は、細菌等のほ乳動物の乳房内への侵入・増殖により発生する乳管系や乳腺組織に生じた炎症をいう。乳房炎に罹病すると、炎症によって乳汁を合成する機能が障害されるため、異常乳を分泌し、乳汁中に白血球などの体細胞数が増加し、乳腺の細胞が損傷を受け、委縮したり結合組織が増殖するため泌乳量が減少する。酪農業においては、時には泌乳を停止し酪農経営に大きな損害を与えることが知られている（「獣医診療指針」、原茂、１９８８年、講談社刊）。
【０００３】
また、乳房炎により牛乳中の体細胞数も増加するため、牛乳の商品価値が低くなり、体細胞数が５０万ｃｅｌｌ／ｍｌを越えた牛乳は廃棄されている。
【０００４】
乳房炎は現在のところ、薬剤やワクチン接種などによる予防・治療が難しく、乳房炎の効果的な予防・治療方法は確立されていない。急性症の対処方法としては、抗生物質を主剤とする乳房内薬液注入、坑ヒスタミン剤または５％ブドウ糖液の乳房への注射、カナマイシンおよびアンピシリンなどの抗生物質の動脈内への注射が行われている（「獣医診療指針」、原茂、１９８８年、講談社刊）。これらの処理を施した乳牛は、薬剤の残留性の問題などから牛乳の生産から外され、農家の生産性を著しく低下させる。この他、最近では硫酸亜鉛メチオニンなどの有機亜鉛製剤を経口投与する事により乳房炎の兆候である体細胞数の増加が抑制されたと言う報告もあるが（Ｆｅｅｄｓｔｕｆｆｓ，５７，５２，ｐ１１，１９８５）、一方で効果がないという報告もあり（Ｆｅｅｄｓｔｕｆｆｓ，５８，１２，ｐ１０，１９８６）、その効果は定かではない。
【０００５】
フィターゼは難消化性の有機リンであるフィチン酸を加水分解し、その吸収を促進する酵素である。豚および家禽などの単胃動物では、消化管内にフィターゼを持たないため、フィチン酸を消化吸収することができない。
【０００６】
このため、フィターゼは、日本においては飼料添加物として指定されており（「飼料添加物の成分規格等収載書  第８版」、１９９６年、日本科学飼料協会刊）、国内外でも、主に養豚、養鶏用飼料に広く用いられている。これらの動物では、飼料にフィターゼを添加することにより、リンだけでなくカルシウム、亜鉛、蛋白質などの消化率が有意に向上する事が数多く報告されている（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １９９６ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｌｅｔｈｂｒｉｇｅ，Ａｌｂｅｒｔａ，Ｃａｎａｄａ，Ａ．Ｗ．Ｊｏｎｇｂｌｏｅｄ ｅｔ．ａｌ，１９９６；Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，６４，５２５−５４０，Ｐ．Ｃ．Ｓｉｍｏｎｓ ｅｔ．ａｌ，１９９０）が、乳房炎への予防効果は知られていない。
【０００７】
これに対し乳牛などの反芻動物は、反芻胃内の微生物がフィターゼを産生する（Ｊ．Ａｎｉｍ．Ｓｃｉ．７３，２０００−２００８，Ｇ．Ｌ．Ｃｒｏｍｗｅｌｌ ｅｔ．ａｌ，１９９５）ため、反芻動物自身でフィチン酸を分解することが可能で、フィターゼを給与しても効果は期待できないとされているため、飼料には添加されていない。
従って、本発明は、乳牛等家畜動物に乳房炎が発生する結果生じる牛乳量生産低下を防ぐため、ほ乳動物の乳房炎を予防・治療する新規方法および乳房炎予防・治療用組成物を提供することを目的とする。
【発明の開示】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究を行ったところ、ほ乳動物に、フィターゼを給与するにより、ほ乳動物の乳房炎の予防・治療が可能であることを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、
(１)フィターゼを給与することを特徴とする、ほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療方法、
(２)フィターゼを飼料乾物１ｋｇ当たり５０〜５０００単位添加した飼料を給与することからなる、(１)記載のほ乳動物(人を除く) の乳房炎の予防・治療方法、
(３)ほ乳動物がウシであり、飼料が乳用牛飼育配合飼料である(１)記載の乳房炎の予防・治療方法、
(４)フィターゼを含有することを特徴とする、ほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療用組成物、
(５)組成物がフィターゼと配合飼料とからなる、(４)項記載のほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療用組成物、
(６)組成物が硫酸亜鉛メチオニンを含有することからなる(５)記載のほ乳動物(人を除く)の乳房炎の予防・治療用組成物、
(７)フィターゼを泌乳期間の乳牛に給与することを特徴とする、ウシの泌乳量の増加方法、
(８)フィターゼを飼料乾物１ｋｇ当たり５０〜５０００単位添加した飼料を給与することを特徴とする、(７)記載のウシの泌乳量の増加方法に関する。
【００１０】
本発明をより詳細に説明するために、以下に実施例を記載するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１１】
本発明に用いるフィターゼ〔酵素番号：３．１．３．２６および３．１．３．８〕としては、カビ類、酵母類、細菌類などの微生物由来のフィターゼ、大麦、小麦、米糠などの植物由来のフィターゼ、または、前記のフィターゼの遺伝子を、通常遺伝子操作で用いられる手段で、大腸菌等の宿主細胞に組み込み、該宿主細胞から生産されたフィターゼ等があげられるが、カビ由来のフィターゼを用いることが好ましい。
【００１２】
乳房炎予防・治療に必要なフィターゼの投与量は、哺乳動物に対して体重１Ｋｇ当たり１日１〜１００単位／Ｋｇ、好ましくは１０〜５０単位／Ｋｇである。乳房炎予防．治療用組成物のうち飼料にフィターゼを投与する場合のフィターゼの給与する割合は、飼料乾物１ｋｇ当たり５０〜５０００単位、好ましくは１００〜１５００単位、とりわけ好ましくは２５０〜７５０単位添加すれば良い。
【００１３】
ここで言うフィターゼの単位とは、「飼料及び飼料添加物の成分規格に関する省令」別表第２の５「飼料添加物一般の試験法」中の酵素力試験法、フィチン酸分解力試験法に規定されたフィチン酸分解力単位を表す〔飼料添加物の成分規格等収載書、第８版、亀岡 一編、平成８年日本科学飼料協会刊〕。
【００１４】
本発明においてフィターゼを給与する対象となるほ乳動物とは、ヒト以外のほ乳動物を表し、牛、豚、山羊などの家畜、犬、猫等の愛玩動物を表すが、とりわけ牛に投与することが好ましい。
【００１５】
本発明においてフィターゼのほ乳動物への給与方法としては、フィターゼを直接飼料に添加し、添加後の飼料をほ乳動物へ給与する方法、または乳房炎予防・治療用組成物に含有させて、該組成物を経口でほ乳動物へ給与する方法があげられる。
【００１６】
飼料としては、通常家畜用飼料として用いられるものであれば良く、単体飼料、粗飼料または配合飼料のいずれでもよい。単体飼料としては加熱大豆、綿実、大豆等があげられ、粗飼料としては、グラスサイレージ、アルファルファヘイ、ビートパルプ、グラスヘイ、乾草等があげられる。また、配合飼料としては、乳用牛飼育用配合飼料、肉用牛飼育用配合飼料、肉豚肥育用配合飼料、種豚用配合飼料、馬用飼料、山羊用配合飼料、ミンク用配合飼料、ウサギ用配合飼料があげられる〔配合飼料講座、上巻、配合飼料講座編纂委員会編、昭和５５年、チクサン出版社刊〕。これらの飼料のうち、とりわけ乳用牛飼育用配合飼料を本発明に用いることが好ましい。
【００１７】
乳用牛飼育用配合飼料とは、前記の粗飼料、単体飼料、穀類、そうこう類、植物性油粕等の濃厚飼料、骨粉、炭酸カルシウム等の無機飼料、ビタミン類、無機塩類、アミノ酸添加物等の特殊飼料を公知の方法により適宜配合したものである〔配合飼料講座、上巻、配合飼料講座編纂委員会編、昭和５５年、チクサン出版社刊〕。
【００１８】
本発明において乳房炎予防・治療用組成物としては、フィターゼを動物用医薬品用錠剤、動物用医薬品用カプセル剤等に含有させた組成物、フィターゼをペットフードに含有させた組成物、フィターゼと配合飼料とからなる組成物等があげられる。なお、フィターゼを配合飼料に含有させた組成物のほ乳動物への給与方法は、フィターゼを配合飼料に含有させた組成物単独または該組成物を粗飼料等飼料と混合した後、該混合飼料を動物に給与することにより行う。
【００１９】
動物用医薬品用錠剤は、通常動物用医薬品に用いられるものであればどのようなものでもよく、主剤であるフィターゼ以外に、乳糖、白糖等の糖類、デンプン等からなるふ形剤、ゼラチン、メチルセルロース等からなる結合剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等からなる滑沢剤を含んでいても良い。
【００２０】
動物用医薬品用カプセル剤としては、通常動物用医薬品に用いられるものであればどのようなものでもよく、主剤であるフィターゼとともに、必要であれば前記のふ形剤、結合剤等を、硬カプセル等の日常用いられるカプセルに充填したものがあげられる。動物用医薬品用錠剤、動物用医薬品用カプセル剤は公知〔製剤学、大塚昭信ら編、１９９５年、南江堂刊〕の方法に準じて製造することができる。
【００２１】
動物用医薬品用錠剤または動物用医薬品用カプセル剤１錠中に、フィターゼは１００〜２００００単位、好ましくは１０００〜１００００単位含有される。フィターゼを含有した動物用医薬品用錠剤または動物用医薬品用カプセル剤は、乳房炎の予防・治療のどちらにでも適用することができるが、動物医薬品として治療剤に用いることが好ましい。
ペットフードとしては、通常ペットフードとしてイヌ、ネコ等愛玩動物の食餌用に用いられるものであればどのようなものでもよく、イヌ用ドライフード、イヌ用精製飼料、イヌ用セミモイストフード等のイヌ用ペットフード、ネコ用ドライフード、ネコ用精製飼料、ネコ用アミノ酸飼料等のネコ用ペットフード等があげられる。ペットフード１００ｇ中にフィターゼは５〜５００単位、好ましくは２５〜１００単位含有されればよい。該ペットフードは、通常のペットフードの製造方法〔配合飼料講座、上巻、配合飼料講座編纂委員会編、昭和５５年、チクサン出版社刊〕に準じて製造することができる。
【００２２】
フィターゼを含有したペットフードは、乳房炎の予防・治療のどちらにでも適用することができるが、動物健康食的な乳房炎予防食として給与することが好ましい。
【００２３】
フィターゼと配合飼料とからなる組成物における配合飼料とは前記と同義であり、飼料安全法に規定された飼料添加物、例えばプロピオン酸カルシウム、プロピオン酸ナトリウム等の品質低下防止剤、ビタミン類、アミノ酸類、ミネラル類またはこれらの混合物を含有していても良い。フィターゼと配合飼料とからなる組成物において、好ましい配合飼料としては乳用牛飼育配合飼料が好ましい。
【００２４】
フィターゼと配合飼料からなる組成物１００ｇ中にフィターゼは１０００〜２０００００単位、好ましくは５０００〜１０００００単位含有されればよく、該組成物は、公知の方法に準じて得ることができる〔配合飼料講座、下巻、配合飼料講座編纂委員会編、昭和５４年、チクサン出版社刊〕。
【００２５】
フィターゼと配合飼料からなる組成物は、乳房炎の予防・治療のどちらにでも適用することができるが、乳牛等が乳房炎に罹る前から乳牛等の餌として給与すれば、乳牛が乳房炎にならない環境で酪農業を営むことができるので、予防用組成物として用いることが好ましい。
【００２６】
なお、前記の乳房炎予防・治療用組成物には、硫酸亜鉛メチオニンなどの有機亜鉛、炭酸亜鉛あるいは硫酸亜鉛などの無機亜鉛、炭酸マンガンあるいは硫酸マンガンなどのマンガン化合物、ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミンＥなどのビタミン類、アルファルファミール、圧ペントウモロコシ等が含有されていてもよく、好ましくは有機もしくは無機亜鉛、とりわけ好ましくは硫酸亜鉛メチオニンが含有されていてもよい。なお嗜好性を高めるため、同時にフレーバーなどを給与してもよい。また、該組成物等の給与の時期および本発明方法の実施期間は、予防用組成物としては、動物が乳を出すようになってから泌乳期間継続して給与する事が好ましい。また動物が乳房炎に罹った場合は、乳房炎予防・治療用組成物を飼料とともに給与し、必要によりフィターゼを含有した動物用医薬品用錠剤または動物用医薬品用カプセル剤を投与してもよい。
【実施例】
【００２７】
（実施例１）フィターゼを用いた乳牛の飼育
ホルスタイン種乳牛１日１頭当たり、グラスサイレージ２８ｋｇ、アルファルファヘイ１．５ｋｇ、ビートパルプ２ｋｇ、加熱大豆０．７ｋｇ、綿実１．２ｋｇ、大豆粕０．９ｋｇ、濃厚飼料６ｋｇからなる乳用牛飼育配合飼料に、市販フィターゼ（商品名フィターゼ協和；協和発酵工業株式会社製、カビ由来フィターゼ５００単位／ｇ含有）３０ｇを混合して給与した。飼養形態はフリーストール形式で合計６５頭に３０日間給与した。乳成分の検査は２週間ごとに全頭の合乳について行った。
結果を表１に示す。
【００２８】
【表１】
0004180795.tif 000002
【００２９】
表１によれば、供試した牛群はフィターゼ給与前には体細胞数が２５×１０４ｃｅｌｌ／ｍｌを越え、軽い乳房炎の兆候が認められたが、フィターゼ給与後は明らかに体細胞数が減少し乳房炎の発症を未然に防ぐ事ができた。
また、フィターゼを２週間あるいは４週間給与することによって、給与２週前や給与開始時より平均泌乳量が増加している。
【００３０】
（実施例２）フィターゼを用いた乳牛の飼育
タイストール形式の牛舎でホルスタイン種乳牛４０頭の牛群を２０頭ずつに分け、一方をフィターゼを給与する試験区とし、もう一方をフィターゼを給与しない対照区とした。飼料は１日１頭当たり、コーンサイレージ１５ｋｇ、グラスヘイ８ｋｇ、ビートパルプ３ｋｇ、乾草４ｋｇ、圧ペントウモロコシ、大豆粕、無機質およびビタミンなどからなる濃厚飼料８．０ｋｇからなる乳用牛飼育配合飼料を与え、試験区には市販フィターゼ（商品名フィターゼ協和；協和発酵工業株式会社製、カビ由来フィターゼ５００単位／ｇ含有）２５ｇを飼料の上に振りかけて給与した。乳質検査は１カ月毎、個体毎に行った。
結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0004180795.tif 000003
【００３２】
表２によれば、供試した牛群はフィターゼ給与前には体細胞数が３０×１０４ｃｅｌｌ／ｍｌを越え、軽い乳房炎の兆候が認められた。フィターゼを給与した試験区では給与１ヶ月後に明らかに体細胞数が減少しているが、フィターゼを給与しない対照区では、体細胞数が増加し２ヶ月目に１頭、３ヶ月目に２頭の牛が乳房炎と診断され、乳生産群から排除された。
また、フィターゼを給与した試験区では、フィターゼを給与しない対照区と比較して平均泌乳量が給与１ヶ月で約３．５％、給与２ヶ月で約１１．５％も増加している。
【００３３】
（実施例３）フィターゼを用いた乳牛の飼育；硫酸亜鉛メチオニンとの比較
タイストール形式の牛舎でホルスタイン種乳牛４０頭の牛群を２０頭ずつに分け、一方をフィターゼを給与する試験区とし、もう一方を硫酸亜鉛メチオニンを給与する対照区とした。飼料は１日１頭当たり、コーンサイレージ１５ｋｇ、グラスヘイ８ｋｇ、ビートパルプ３ｋｇ、乾草４ｋｇ、圧ペントウモロコシ、大豆粕、無機質およびビタミンなどからなる濃厚飼料８．０ｋｇからなる乳用牛配合用飼料を与え、試験区には市販フィターゼ（商品名フィターゼ協和；協和発酵工業株式会社製、カビ由来フィターゼ５００単位／ｇ含有）を１日１頭当たり２５ｇ、対照区には市販硫酸亜鉛メチオニン製剤（Ｚｉｎｐｒｏ４０；ジンプロ社製）を１日１頭当たり４ｇ飼料の上に振りかけて給与した。乳質検査は１カ月毎、個体毎に行った。
結果を表３に示す。
【００３４】
【表３】
0004180795.tif 000004
【００３５】
表３によれば、供試した牛群はフィターゼ給与前には体細胞数が３０×１０４ｃｅｌｌ／ｍｌを越え、軽い乳房炎の兆候が認められた。フィターゼを給与した試験区では給与１ヶ月後に明らかに体細胞数が減少している。硫酸亜鉛メチオニンを給与した対照区の体細胞数も減少しているが、添加効果は試験区の方が顕著であった。
また、平均泌乳量も硫酸亜鉛メチオニンを給与した対照区では給与開始時と同じかやや下がる傾向にあるが、フィターゼを給与した試験区では、４．４％あるいは７．５％増加している。
【００３６】
（実施例４）乳房炎予防用組成物Ａ
以下の表４に示された飼料添加物を含む市販の乳用牛飼育配合飼料〔商品名セルカット−２：協和醗酵工業株式会社製造〕１Ｋｇにフィターゼ（商品名フィターゼ協和；協和発酵工業株式会社製、カビ由来フィターゼ５００単位／ｇ含有）２００ｇを添加し乳房炎予防用組成物Ａを製造した。
【００３７】
【表４】
0004180795.tif 000005
【００３８】
（実施例５）乳房炎予防用組成物Ｂ
以下の表５に示された飼料添加物を含む市販の乳用牛飼育配合飼料〔商品名スーパービタミンサプリメント：協和醗酵工業株式会社製造〕１Ｋｇにフィターゼ（商品名フィターゼ協和；協和発酵工業株式会社製、カビ由来フィターゼ５００単位／ｇ含有）２００ｇを添加し乳房炎予防用組成物Ｂを製造した。
【００３９】
【表５】
0004180795.tif 000006
【００４０】
（実施例６）乳房炎予防用組成物Ｃ
以下の表６に示された飼料添加物を含む市販の乳用牛飼育配合飼料〔商品名セルカット―１：協和醗酵工業株式会社製造〕１Ｋｇにフィターゼ（商品名フィターゼ協和；協和発酵工業株式会社製、カビ由来フィターゼ５００単位／ｇ含有）４００ｇを添加し乳房炎予防用組成物Ｃを製造した。
【００４１】
【表６】
0004180795.tif 000007
【００４２】
（実施例７）組成物Ｃを用いた乳房炎予防方法
１群５０頭の乳牛に対して、通常の飼料または実施例６で得られた組成物Ｃを１日５ｋｇ配合した飼料を、２週間間隔で交換し、給与した。
なお、給与群はＡ、Ｂ２群に分け、第１図に示したスイッチバック法に従い、Ａ群は組成物Ｃ含有飼料から、Ｂ群は組成物Ｃを含まない飼料から給与を行った。
給与開始後、２週間ごとに乳汁を採取し１群の乳牛から得た乳汁を全て併せてから、乳房炎の指標となる乳汁中の体細胞数を測定した。
結果を表７及び図２に示す。
【００４３】
【表７】
0004180795.tif 000008
【００４４】
表７及び図２によれば、試験開始から約８週間目には、ＡＢ両群の体細胞数は試験開始前に比べ減少していることから乳房炎の抑制効果が確認された。
また、試験開始から２週間目までの体細胞数の変化を観察すると、組成物Ｃを含有する飼料を給与したＡ群は体細胞数が減少しているのに対して、単に飼料を給与したＢ群は体細胞数が増加していることから、飼料に組成物Ｃを含有させることにより、乳房炎の予防にも効果を奏することが認められた。
【産業上の利用可能性】
【００４５】
本発明により、ほ乳動物（人を除く）に発生する乳房炎の予防・治療方法および乳房炎予防・治療用組成物が提供される。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。
【図面の簡単な説明】
第１図は、スイッチバック法による乳牛への飼料の給与スケジュールを示す図である。
――――は、組成物Ｃを配合した飼料を毎日給与することを示す。
…………は、組成物Ｃを配合していない飼料を毎日給与することを示す。
→は、乳汁を採取し、乳汁中の体細胞数を測定した日を示す。
第２図は、試験中における乳汁中の体細胞数の変化を示す。
――――は、Ａ群における体細胞数を示す。
…………は、Ｂ群における体細胞数を示す。
【図１】
0004180795.tif 000009
【図２】
0004180795.tif 000010