(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
0004089981.tif 000043
〔式中、Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは、以下のものを表す：
Ａ：
0004089981.tif 000044
（式中、
ｍは、０、１または２、
ｎは、０、１または２、
Ｒ１は、ＨＯＯＣ−、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−ＯＯＣ−、アリール−Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−ＯＯＣまたは−ＯＨ、
Ｒ２は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−またはＲ１−（ＣＨ２）ｍ−、
Ｒ３は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−
を表す）、
Ｂ：
0004089981.tif 000045
（式中、
Ｒ４は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−またはＲ１−（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｒ１およびｍは上記のものを表す）、
ｐは、０または１、
Ｒ５は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−、
Ｒ６は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル−、フェニル−（これは３個までの同じかまたは異なる群Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−、ＣＦ３−、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ−、Ｆ−またはＣｌ−の基を有していてもよい）、Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキル（これは４個までの同じかまたは異なるＣ１〜Ｃ４−アルキル基を有していてもよいか、または式中、環内のＣ−Ｃ単結合一個または二個がＣ＝Ｃ二重結合により置換されていてもよいか、またはフェニル環と縮合していてもよい）、Ｃ７〜Ｃ１２−ビシクロアルキル−またはＣ１０−トリシクロアルキル−、または
Ｒ４とＲ６とが一緒になって、エチレン基またはプロピレン基、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル、フェニル−（これは３個までの同じかまたは異なる群Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−、ＣＦ３−、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ−、Ｆ−またはＣｌ−の基を有していてもよい）、Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキル−（これは４個までの同じかまたは異なるＣ１〜Ｃ４−アルキル基を有していてもよい）、
Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４−アルキル）、
Ｅ：
0004089981.tif 000046
（ｑ＝０または１）、
Ｄ：
0004089981.tif 000047
（式中、
Ｒ９は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ３−アルキル−、
Ｒ１０は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−、
Ｒ１１は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲ１２（Ｒ１２＝Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−）、
Ｙは、−Ｎ＝または−ＣＲ１３＝（Ｒ１３＝Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−）、Ｃｌ、ＣＦ３、
Ｚは、−Ｎ＝または−ＣＲ１３＝を表す）〕
の化合物ならびにこれらの生理学的に許容される酸との塩。
【請求項２】
疾患の制圧の際に使用するための請求項１記載の式Ｉの化合物。
【請求項３】
表面被覆のための、請求項１記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
式ＩＩａおよびＩＩｂ
0004089981.tif 000048
〔式中、基Ａ、Ｂ、ＥおよびＤは、請求項１記載のものを表す〕の化合物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規の五構成要素から成る複素環式アミジン、その製造およびトリプシン類似セリンプロテアーゼ、殊にはトロンビンおよびキニノゲナーゼ、例えばカリクレインの競合阻害剤としてのその使用に関する。また、本発明は、本化合物を有効成分として含む薬剤組成物ならびにトロンビン阻害剤、抗凝血剤としておよび抗炎症剤としての本化合物の使用にも関する。
トロンビンは、セリンプロテアーゼ群に属し、かつ血液凝固カスケードの終末酵素として中心的な役を果たしている。内因性あるいは外因性の凝固カスケード経路は、数段の強化段階を経てプロトロンビンからトロンビンの生成に導く。次いで、トロンビン触媒によるフィブリノーゲンのフィブリンへ分割は、凝血および血小板の凝固に導き、これはそれ自身で血小板因子３と凝血因子ＸＩＩＩとの結合ならびに一連の高活性メディエーターによりトロンビン形成を強化する。
トロンビン形成およびトロンビン作用は、白色の動脈内あるいは赤色の静脈内トロンビンの生成の中心的症状およびこれにより薬剤の有効な攻撃点となり得る。トロンビン阻害剤は、ヘパリンとは反対に、補因子とは無関係に遊離トロンビンの作用と同時に血小板との結合の作用を完全に阻害できる。これらは、急性フェーズにおいて経皮経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）後の血栓塞栓症候群および溶血を抑制し、かつ抗凝血剤として体外循環（心臓−肺−装置、血液透析）に役立つことができる。また、これらは、一般に血栓症予防、例えば外科的手術の後にも使用できる。
合成アルギニン誘導体が、プロテアーゼ・トロンビンの活性セリン基と相互作用して、血栓症の酵素活性に影響することは公知である。Ｎ−末端アミノ酸がＤ−形で存在するＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇに基づくペプチドは、殊に有利なことが分かっている。Ｄ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−イソプロピルエステルは、競合的に作用するトロンビン阻害剤として記載されている〔Ｃ・マットソンら（C. Mattson u.a., Folia Haematol, 109, 43-51, 1983）〕。
Ｃ−末端アルギニンのアルデヒドへの誘導は、阻害剤作用の強化となる。このように、「活性」セリンのヒドロキシル基をヘミアセタールとして結合できる多数のアルギナールが記載されている〔欧州特許（ＥＰ）第１８５３９０号、第４７９４８９号、第５２６８７７号、第５４２５２５号；ＷＯ９３／１５７５６、ＷＯ９３／１８０６０の各明細書〕。
ペプチド性ケトン、フッ素化アルキルケトンならびにケトエステル、ホウ酸誘導体、リン酸エステルおよびα−ケトカルボン酸アミドのトロンビン阻害性作用も、同様にそのセリン−相互作用を用いて説明できる〔〔欧州特許（ＥＰ）第１１８２８０号、第１９５２１２号、第３６２００２号、第３６４３４４号、第４１０４１１号、第４７１６５１号、第５８９７４１号、第２９３８８１号、第５０３２０３号、第５０４０６４号、第５３０１６７号；ＷＯ９２／０７８６９、ＷＯ９４／０８９４１の各明細書〕。
Ｊ．オレクシシンら〔J. Oleksyszin u.a.（J. Med. Chem. 37, 226-231（1994））〕が記載しているペプチド性リン酸４−アミジノフェニル−グリシン−ジフェニルエステルは、そのセリンプロテアーゼに対して不十分な選択性を有する不可逆性トロンビン阻害剤である。
ドイツ特許（ＤＥ）第３１０５５１０号、ＷＯ９３／１１１５２および欧州特許（ＥＰ）第６０１４５９号の各明細書中には、セリンプロテアーゼの活性セリンと相互作用を行えないアグマチンおよびこのアルギニン誘導体が記載されている。
ＷＯ９４／２９３３６、欧州特許（ＥＰ）第０６０１４５９およびＷＯ９５／２３６０９の各明細書は、さらに発展を記載しており、その際アグマチン基はアリールアミジン基により置換されている。
キニノゲナーゼは、キニノーゲンから血管作用性ペプチド、いわゆるキニン（ブラジキニン、カリジンおよびＭｅｔ−Ｌｙｓ−ブラジキニン）を遊離させるセリンプロテアーゼである。キニノーゲンは、凝血および炎症のカスケード反応の際に出現する多官能性タンパクである。阻害剤として、これはシステイン−プロテアーゼによる崩壊から細胞を保護する〔ミュラー・エステルル（Mueller Esterl, 1985, FEBS, Lett. 182, 310-314）〕。重要なキニノゲナーゼは、血漿カリクレイン、組織カリクレインおよびマスト細胞トリプターゼである。
ブラジキニンおよびカリジンのようなキニンは、多数の生物学的プロセスに影響する血管作用性のペプチドである。これらは炎症プロセスに重要な役割を果たす。これらは血管透過性を高めて、緊張低下および水腫に導く。さらにこれらは著しく有効な疼痛発生アンタコイドであり、細胞メディエーターとして喘息、アレルギー性鼻炎および関節炎の病態生理学に重要な意義を有する〔Ｋ．Ｄ．ボーラら（K.D. Bhoola, C.D. Figueroa, K. Worthy, Pharmacological Revies 1992, 44（1）, 1-80）〕。
炎症プロセスに基づく機構とは無関係に、これは循環血液のすべてのタンパク系を含む血管からの液体の滲出となる。すなわち、血管から血漿液の滲出は、喘息、関節炎および炎症による内部疾患などの疾患に関与することを意味する。殊にはアレルギー性プロセスにおいて、マスト細胞−トリプターゼが遊離される〔サロモンソンら（Salomonsson et al., Am. Rev. Respir. Dis., 1992, 146, 1535-1542）〕。
アルギニン−クロロメチルケトンＨ−（Ｄ）−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＨ２ＣｌおよびＨ−（Ｄ）−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＣＨ２Ｃｌは、ケットナー（Kettner）およびショー（Shaw）により血漿−カリクレイン阻害剤として記載されている（Biochem. 1978, 17, 4778-4784およびMeth.Enzym. 1981, 80, 826-842）。
ベンズアミジンおよびベンジルアミンの種々の合成誘導体は、血漿カリクレインの阻害剤として知られており、その際、ベンズアミジンが著しく強い阻害作用を有する〔Ｆ．マルクヴァルトら（F. Markward, S. Drawert, P. Walsmann, Biochemical Pharmacology 1974, 23, 2247-2256）〕。
また、ＰＫＳＩ−５２７、Ｎ−（トランス−４−アミノメチルシクロヘキシルカルボニル）−Ｌ−フェニルアラニン−４−カルボキシメチル−アニリドの塩酸塩も、これらのキニノゲナーゼの有効な阻害剤である〔ワナカ、オハモトら（Wanaka, Ohamoto et al., Thromb. Res. 1990, 57（6）, 889-895）〕。
本発明の対象は、式Ｉの化合物
0004089981.tif 000002
〔式中、Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは以下のものを表す：
Ａ：
0004089981.tif 000003
（式中、
ｍは、０、１または２、
ｎは、０、１または２、
Ｒ１は、ＨＯＯＣ−、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−ＯＯＣ−、アリール−ＯＯＣまたは−ＯＨ、
Ｒ２は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−またはＲ１−（ＣＨ２）ｍ−、
Ｒ３は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−
を表す）、
Ｂ：
0004089981.tif 000004
（式中、
Ｒ４は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−またはＲ１−（ＣＨ２）ｍ−（式中、Ｒ１およびｍは上記のものを表す）、
ｐは、０または１、
Ｒ５は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−、
Ｒ６は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル−、フェニル−（これは３個までの同じかまたは異なる群Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−、ＣＦ３−、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ−、Ｆ−またはＣｌ−の基を有していてもよい）、Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキル（これは４個までの同じかまたは異なるＣ１〜Ｃ４−アルキル基を有していてもよいかまたは式中で環内のＣ−Ｃ単結合一個または二個がＣ＝Ｃ二重結合により置換されていてもよいか、またはフェニル環と縮合していてもよい）、Ｃ７〜Ｃ１２−ビシクロアルキル−またはＣ１０−トリシクロアルキル−、または
Ｒ４とＲ６とが一緒になって、エチレン基またはプロピレン基、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル−、フェニル−（これは３個までの同じかまたは異なる群Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−、ＣＦ３−、Ｃ１〜Ｃ４−アルコキシ−、Ｆ−またはＣｌ−の基を有していてもよい）、Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキル−（これは４個までの同じかまたは異なるＣ１〜Ｃ４−アルキル基を有していてもよい）、
Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４−アルキル）、
Ｅ：
0004089981.tif 000005
（ｑ＝０または１）、
Ｄ：
0004089981.tif 000006
（式中、
Ｒ９は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ３−アルキル−、
Ｒ１０は、Ｈ−またはＣ１−Ｃ４−アルキル−、
Ｒ１１は、Ｈ−またはＣ１〜Ｃ４−アルキル−、
Ｘは、Ｏ、Ｓ、−ＮＲ１２（Ｒ１２＝Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ６−アルキル−）、
Ｙは、−Ｎ＝または−ＣＲ１３−（Ｒ１３＝Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−、Ｃｌ、ＣＦ３）、
Ｚは、−Ｎ＝または−ＣＲ１３＝を表す）〕
ならびにこれらの生理学的に許容される酸との塩である。
Ｂにより表されるアミノ酸誘導体は、有利には（Ｄ）配置であり、３，４−デヒドロプロリンならびに４，５−デヒドロピペコリン酸は（Ｌ）配置である。
有利には、基Ａ〜Ｆが下記を表す式Ｉの化合物である。
Ａ：
ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）ｔ−（ｔ＝１，２または３）、（ＨＯＯＣ−ＣＨ２）２−ＣＨ、（ＨＯ−ＣＨ２）２ＣＨ２−、ＨＯＯＣ−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＯＯＨ）−、ＨＯＯＣ−ＣＨ（ＣＨ２−ＣＨ２−ＯＨ）−、ＨＯＯＣ−ＣＨ（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）−、ＨＯＯＣ−Ｃ（Ｃ１〜Ｃ４−アルキル）２−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−ＯＯＣ−（ＣＨ２）ｔ−、
Ｂ：
0004089981.tif 000007
〔式中、
ｐは、０、１、
Ｒ４は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル−またはＨＯＯＣ−（ＣＨ）ｍ−（ｍ＝１、２または３）、
Ｒ５は、Ｈ−、メチル−、
Ｒ６は、Ｈ−、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル−、フェニル−（これは３個までの同じかまたは異なる群ＣＨ３−、ＣＦ３−、ＣＨ３−Ｏ−、Ｆ−またはＣｌ−の基を有していてもよい）、Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキル−（これは４個までのメチル基を有していてもよい）、シクロヘキサ−１，４−ジエニル−、ビシクロ〔２．２．２〕−オクチル−、ビシクロ〔２．２．１〕−ヘプチル−、ノルボルニル−、アダマンチル−、インダニル−、デカリニル−、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル−、フェニル−（これは３個までの同じかまたは異なる群ＣＨ３−、ＣＦ３−、ＣＨ３−Ｏ−、Ｆ−またはＣｌ−の基を有していてもよい）、Ｃ３〜Ｃ８−シクロアルキル−（これは４個までのメチル基を有していてもよい）、
Ｒ８は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ４−アルキル
（構成要素Ｂは、有利にはＤ−配置である）〕、
Ｅ：
0004089981.tif 000008
〔ｑ＝０、１、
（構成要素Ｅは、有利にはＬ−配置である）〕、
Ｄ：
0004089981.tif 000009
0004089981.tif 000010
殊に有利には、Ａ、Ｂ、ＤおよびＥが下記のものを表す式Ｉの化合物である。
0004089981.tif 000011
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ８−アルキル−、Ｃ５〜Ｃ８−シクロアルキル（これは４個までのメチル基を有していてもよい）、ビシクロ〔２．２．２〕−オクチル、ビシクロ〔２．２．１〕−ヘプチル、ノルボルニル、アダマンチル、インダニル、デカリニル、その際、シクロペンチル−、シクロヘキシル−およびシクロヘプチルが殊に有利であり、
0004089981.tif 000012
0004089981.tif 000013
0004089981.tif 000014
下記の物質が殊に有利である。
0004089981.tif 000015
0004089981.tif 000016
省略記号表：
Ａｄａａｌａ：    アダマンチルアラニン
Ａｄａｇｌｙ：    アダマンチルグリシン
ＡＩＢＮ：        アゾビスイソブチロニトリル
Ａｃ：            アセチル
Ａｌａ：          アラニン
ａｍ：            アミジノ
Ａｓｐ：          アスパラギン酸
Ａｚｅ：          アゼチジンカルボン酸
Ｂｎ：            ベンジル
Ｂｏｃ：          ｔ−ブチロキシカルボニル
Ｂｕ：            ブチル
Ｃｂｚ：          ベンシルオキシカルボニル
Ｃｈａ：          シクロヘキシルアラニン
Ｃｈｅａ：        シクロヘプチルアラニン
Ｃｈｅｇ：        シクロヘプチルグリシン
Ｃｈｇ：          シクロヘキシルグリシン
Ｃｏｇ：          シクロオクチルグリシン
Ｃｐａ：          シクロペンチルアラニン
Ｃｐｇ：          シクロペンチルグリシン
ＤＣ：            薄層クロマトグラフィー
ＤＣＣ：          ジシクロヘキルカルボジイミド
Ｄｃｈ：          ジシクロヘキルアラニン
Ｄｃｈａ：        ジシクロヘキルアミン
ＤＣＭ：          ジクロロメタン
Ｄｅｐ：          ４，５−デヒドロピペコリン酸
ＤＭＦ：          ジメチルホルムアミド
ＤＩＰＥＡ：      ジイソプロピルエチルアミン
Ｄｐａ：          ジフェニルアラニン
Ｄｉｐｈｅ：      ２，５−ジヒドロフェニルアラニン
Ｅｔ：            エチル
Ｅｑ：            当量
Ｇｌｙ：          グリシン
ｆｕｒ：          フラン
ｈａｍ：          ヒドロキシアミジノ
ＨＯＳｕｃｃ：    ヒドロキシスクシンイミド
ＨＰＬＣ：        高速液体クロマトグラフィー
Ｈｙｐ：          ヒドロキシプロリン
ｉｍｉ：          イミダゾール
２−Ｉｎｄ：      ２−ジヒドロインドールカルボン酸
ｉＰｒ：          イソ−プロピル
Ｌｅｕ：          ロイシン
Ｌｓｇ：          溶液
Ｍｅ：            メチル
α−ＭｅＣｈａ：  α−メチルシクロヘキシルアラニン
ββ−Ｍｅ２Ｃｈａ：２−アミノ−３−シクロヘキシル−３−メチル−酪酸またはββ−ジメチルシクロヘキシルアラニン
４−ＭｅＣｈａ：  （４−メチルシクロヘキシ−１−イル）アラニン
γ−ＭｅＣｈａ：  （１−メチルシクロヘキシ−１−イル）アラニン
３，３−Ｍｅ２Ｃｈａ：（３，３−ジメチルシクロヘヘキシ−１−イル）アラニン
４−ＭｅＣｈｇ：  （４−メチルシクロヘキシ−１−イル）グリシン、
３，３−Ｍｅ２Ｃｈｇ：（３，３−ジメチルシクロヘキシ−１−イル）−グリシン
ＭＰＬＣ：        中圧液体クロマトグラフィー
ＭＴＢＥ：        メチル−ｔ−ブチル−エーテル
ＮＢＳ：          Ｎ−ブロモスクシンイミド
Ｎｏｇ：          ノルボルニルグリシン
Ｏｘａｄｉａｚ：  １，２，４−オキサジアゾール
Ｏｘａｚ：        オキサゾール
Ｐｈ：            フェニル
Ｐｈｅ：          フェニルアラニン
２Ｐｈｉ：        ２−ペルヒドロインドールカルボン酸
ｐｉｃ：          ピペコリン酸
ｐｉｃｏ：        ピコリル
ｐｉｍ：          ピペリジニルメチル
ＰＰＡ：          無水プロピルホスホン酸
Ｐｒｏ：          プロリン
Ｐｙ：            ピリジン
Ｐｙｒ：          ３，４−デヒドロプロリン
ｐｙｒａｚ：      ピラゾール
ｐｙｒｒ：        ピロール
ＲＴ：            室温
ＲＰ−１８：      逆相Ｃ−１８
ｔ：              第三級
ｔＢｕ：          ｔ−ブチル
ｔｅｒｔ：        第三級
ＴＢＡＢ：        臭化テトラブチルアンモニウム
ＴＥＡ：          トリエチルアミン
ＴＦＡ：          トリフルオロ酢酸
ＴＦＦＡ：        無水トリフルオロ酢酸
ｔｈｉａｚ：      チアゾール
ｔｈｉｏｐｈ：    チオフェン
１Ｔｉｃ：        １−テトラヒドロイソキノリンカルボン酸
３Ｔｉｃ：        ３−テトラヒドロイソキノリンカルボン酸
ＴＯＴＵ：        Ｏ−（シアン−エトキシカルボニルメチレン）−アミノ−〕−Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート
ｔｒｉａｚ：      １，３，４−トリアゾール
Ｚ：              ベンジルオキシカルボニル
さらに、本発明の対象は、構造要素
0004089981.tif 000017
〔式中、ＥおよびＤは上記のものを表し、かつ、構成要素Ｅの窒素原子に、水素原子、保護基、場合によれば置換されている天然または非天然アミノ酸、場合によれば置換されているカルボン酸またはスルホン酸または場合によれば置換されているアルキル基が存在している〕を有する化合物である。この構成要素は、セリンプロテアーゼ阻害剤および殊にはトロンビン阻害剤およびカリクレイン阻害剤の成分として価値が高い。
さらに、本発明の対象は、式ＩＩａおよびＩＩｂ
0004089981.tif 000018
〔式中、Ａ、Ｂ、ＥおよびＤは、請求項１記載のものを表す〕の中間製品である。
この新規の中間製品は、化合物Ｉの製造に役立ち、かつセリンプロテアーゼ阻害剤の合成のための価値のある構成要素である。
式Ｉの化合物は、そのままでまたは生理学的に許容される酸との塩の形で存在することができる。このような酸の例は下記である：塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フマル酸、コハク酸、ヒドロキシコハク酸、安息香酸、グルタル酸、アスパラギン酸、ピルビン酸、安息香酸、グルクロン酸、シュウ酸、アスコルビン酸およびアセチルグリシン。
式Ｉの新規の化合物は、下記の適応症に使用できる。
−その病理機構が、直接または間接にトロンビンのタンパク分解作用に基づく疾患、
−その病理機構が、受容体および信号伝達のトロンビン依存活性化に基づく疾患、
−体細胞内の遺伝子発現の刺激〔例えばＰＡＩ−１、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、Ｐ−セレクチン、ＩＣＡＭ−１、組織因子〕または阻害（例えば平滑筋肉細胞内のＮＯ−合成）から由来する疾患、
−トロンビンのマイトジェン作用に基づく疾患、
−上皮細胞（例えば血管外細胞）のトロンビンに依存する収縮性変化および浸透性変化に基づく疾患、
−トロンビン依存の血栓塞栓性症候群、例えば深い静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞または脳梗塞、心房細動症、バイパス閉塞症、
−血管内凝固症候群（ＤＩＣ）、
−血栓崩壊剤、例えばストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ｔ−ＰＡ、ＡＰＳＡＣ、動物の唾液腺からのプラスミノーゲン活性化因子ならびにこれらすべての物質の組換えおよび突然変異形を用いる混合投与の際の再崩壊および再灌流時間の短縮のため、
−早期の再崩壊の出現およびその後のＰＴＣＡの後の再狭窄、
−平滑筋細胞のトロンビン依存増殖、
−中枢神経系内の活性トロンビンの蓄積（例えばＭ．アルツハイマー）、
−腫瘍増殖ならびに腫瘍細胞の癒着および転移に対抗。
殊には、この新規の化合物は、トロンビン依存性血栓塞栓の症候群、例えば深い静脈血栓症、肺塞栓症、心筋梗塞または脳梗塞、および不安定アンギーナの治療および予防のため、さらには血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の治療のために使用できる。さらに、これらは、血栓治療薬、例えばストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼ、ｔ−ＰＡ、ＡＰＳＡＣおよびその他の再灌流時間短縮および再閉塞時間延長のためのプラスミノーゲン活性化剤との混合治療のために好適である。
別の好適な利用分野は、血栓依存性の早期の再閉塞および経皮経管冠動脈形成術後の再狭窄の阻止、血栓誘導性平滑筋増殖の阻止、中枢神経系内の活性トロンビンの蓄積（例えばＭ．アルツハイマーの場合）の阻止、腫瘍制圧および腫瘍細胞の癒着および転移となる機構の阻止である。
この新規の化合物は、人口表面、例えば血液透析膜およびこれに必要な管システムおよび導管ならびに血管外循環の酸素供給器、ステントおよび心臓弁膜の被覆にも使用できる。
この新規の化合物は、さらにその病理機構が、直接または間接にキニノゲナーゼ、殊にはカリクレインののタンパク分解作用に基づく疾患、例えば炎症性疾患、例えば喘息、膵炎、鼻炎、関節炎、じんま疹およびその他の体内炎症に使用できる。
本発明による化合物は、通常の方法により、経口または非経口（皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、直腸内）で投与できる。適用は、蒸気または噴霧により鼻−咽喉部に行うこともできる。
投与量は、患者の年齢、状態および体重ならびに投与方法により異なる。通常、一人当たりの有効物質日量は、経口投与の場合に約１０〜２０００ｍｇ、また非経口投与の場合には約１〜２００ｍｇである。この投与は、２〜４回に分割投与またはデポ剤として一日一回投与してもよい。
この新規の化合物は、慣用の製剤投与形により、固体または液体で投与ができ、例えば錠剤、フィルム錠剤、カプセル、散剤、粒剤、糖衣錠、座薬剤、液剤、軟膏剤、乳剤または噴霧剤である。これらは、通例の方法で製造できる。その際、有効成分は、通常の製剤助剤、例えば錠剤結合剤、充填剤、保存剤、錠剤崩壊剤、流動性調節剤、軟化剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶剤、徐放剤、抗酸化剤および／または噴霧ガスを用いて加工できる〔Ｈ．ズッケルら（H. Sucker et al：Pharmazeutische Technologie, Thieme Verlag, Stuttgart, 1978）参照〕。このようにして得られた適用形は、有効成分を通常０．１〜９９重量％の量を含む。
実験の部
式Ｉの化合物は、相当するスキームＩ〜ＩＩＩに従って製造される。
構成要素Ａ、Ｂ、ＥおよびＤは、有利にはあらかじめ別々に構成され、好適な保護形（スキームＩ−ＩＩＩ参照）で使用される。
0004089981.tif 000019
スキームＩは、アミンＨ−Ｄ−ＣＮとＮ−保護アミノ酸Ｐ−Ｅ−ＯＨとのＰ−Ｅ−Ｄ−ＣＮへのカプリング、Ｎ−末端保護基のＨ−Ｅ−Ｄ−ＣＮへの分割、Ｎ−保護アミノ酸Ｐ−Ｂ−ＯＨを用いるＰ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＮへのカプリング、保護基ＰのＨ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＮへの分割、引き続き場合によれば保護されている（Ｐ）−Ａ−Ｕ−構成要素（Ｕ＝脱離基）を用いるアルキル化、または（Ｐ）−Ａ′−Ｕ（Ｕ＝アルデヒド、ケトン）を用いる還元アルキル化、または好適な（Ｐ）−Ａ″−Ｃ＝Ｃ−誘導体を用いる（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＮへのマイケル付加による分子Ｉの線型構成を記載している。ニトリル官能基のアミジン基への変換は、従来のピンナー合成〔Ｒ．ボーダーら（R. Boder, D.G. Neilson, Chem. Rev. 1962, 61, 179）〕によるか、または中間工程としてイミノチオエステル塩を経由する変形ピンナー合成〔Ｈ．フィヴェークら（H. Vieweg et al., Pharmazie 1984, 39, 226）〕によるか、または直接Ａ．エシェンモーゼルの方法〔A. Eschenmoser, Helv. Chimica Acta, 69,（1986）1224〕のいずれかによって行われる。引き続き、分子内にまだ存在する保護基を有利には酸性加水分解により分割する。
構成要素ＤをＨ−Ｄ−ＣＯＮＨ２として合成内に組み込む場合には、保護された中間物に対して、アミド官能基のニトリル官能基への脱水またはチオアミド官能基への変換により行われる。あるいは、その外に、構成要素Ｄは、Ｈ−Ｄ−ＣＳＮＨ２として合成に使用できる。
0004089981.tif 000020
スキームＩＩは、Ｈ−Ｂ−Ｐのそれぞれ適当で場合によれば保護されているＡ構成要素への（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｐへのアルキル化、還元アミン化またはマイケル付加、Ｃ−末端保護基の（Ｐ）−Ａ−Ｂ−ＯＨへの分割、Ｈ−Ｅ−Ｐの（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｐへのカプリング、Ｃ−末端保護基の（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−ＯＨへの分割、Ｈ−Ｄ−ＣＮを用いる（Ｐ）−Ａ−Ｅ−Ｃ−Ｄ−ＣＮへのカプリングおよびこれらの中間製品の最終製品へのスキームＩと同様の変換による分子Ｉの線型構成を記載している。
まだ遊離しているＢのＮＨ−官能基を有する化合物（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｐの場合に、これらは、Ｃ−末端保護基分割の前に、さらに一個の好適な保護基を備えなければならない。使用されたいずれの保護基も、互いにオルト位置でなければならない。
Ｈ−Ｄ−ＣＮ構成要素の代わりに、Ｈ−Ｄ−ＣＯＮＨ２、Ｈ−Ｄ−ＣＳＮＨ２、Ｈ−Ｄ−Ｃ（ＮＨ）ＮＨ２、Ｈ−Ｄ−Ｃ（ＮＰ）ＮＨ２、Ｈ−Ｄ−Ｃ（ＮＰ）ＮＨＰも使用でき、その際、最初の場合に、カプリングした中間製品（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＯＮＨ２を（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＮに脱水するか、または直接（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＳＮＨ２に変換する。
0004089981.tif 000021
スキームＩＩＩは、収束合成による化合物Ｉの製造のための著しく効率的な方法を記載している。適当に保護されている構成要素（Ｐ）−Ａ−Ｂ−ＯＨおよびＨ−Ｅ−Ｄ−ＣＮを一緒にカプリングし、生成した中間製品（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＮをスキームＩと同様にして最終製品に変換する。
Ｈ−Ｅ−Ｄ−ＣＮへの別の方法もまたＨ−Ｅ−Ｄ−ＣＯＮＨ２またはＨ−Ｅ−Ｄ−ＣＳＮＨ２も使用でき、その際、第一の場合には、カプリングした中間製品（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＯＮＨ２を（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＮに脱水するか、または（Ｐ）−Ａ−Ｂ−Ｅ−Ｄ−ＣＳＮＨ２に誘導する。
Ｎ−末端保護基として、Ｂｏｃ、ＣｂｚまたはＦｍｏｃ、有利にはＢｏｃが使用され、Ｃ−末端保護基は、メチル、ｔ−ブチルおよびベンジルである。複数の保護基が分子中に存在する場合、これらを同時には分割しなくてもよい場合には、これらは互いに直交していなければならない。中間製品が構造要素Ｅを有する場合には、Ｃｂｚ−保護基およびベンジル保護基は適しない。
要求されるカプリング反応および通例の保護基導入および保護基分割の反応は、ペプチド化学の標準条件に従って行われる〔Ｍ．ボダンスキーら（M. Bodansky, A. Bodansky「ペプチドプチ℃合成の実際（The Practice of Peptide Synthesis）」第二版、Springer Verlag, Heidelberg, 1994参照〕。
Ｂｏｃ−保護基は、ジオキサン／ＨＣｌまたはＴＦＡ／ＤＣＭを用いて、Ｃｂｚ−保護基は水素化分解またはＨＦを用いて分割される。エステル官能基の鹸化は、ＬｉＯＨを用いてアルコール性溶剤中またはジオキサン／水中で行われる。ｔ−ブチルエステルは、ＴＦＡまたはジオキサン／ＨＵを用いて分割される。
反応は、ＤＣを用いて監視し、その際通常下記の溶離剤が用いられる。
0004089981.tif 000022
カラムクロマトグラフィー分離に言及されている場合には、その分離はシリカゲル上において、上記の溶離剤を用いて行った。
逆相ＨＰＬＣ分離は、アセトニトリル／水およびＨＯＡｃ緩衝液を用いて行った。
出発化合物は、下記の方法により製造された。
構成要素Ａとして、アルキル化に対しては、例えばα−ブロモ酢酸−ｔ−ブチルエステル、β−ブロモプロピオン酸−ｔ−ブチルエステル、α−ブロモプロピオン酸−ｔ−ブチルエステル、γ−ブロモ酪酸−ｔ−ブチルエステル、α−ブロモ酪酸−ｔ−ブチルエステル、ＴＨＰ保護ブロモエタノール、ＴＨＰ保護ブロモプロパノール、α−ブロモ−γ−ブチロラクトン、還元アミン化には、例えばジヒドロキシアセトン、アセトンジカルボン酸ジ−ｔ−ブチルエステル、かつマイケル付加に対しては、例えばアクリル酸−ｔ−ブチルエステル、メタクリル酸−ｔ−ブチルエステル、フマル酸ジ−ｔ−ブチルエステルが使用される。上記のｔ−ブチルエステルは、購入できない場合には、Ｇ．ウレイら（G. Uray, W. Lindner, Tetrahedron 1988,44, 4357-4362）に従って製造した。
Ｂ−構成要素
アミノ酸の一般的および特殊な合成に関して、文献中に多数の方法が利用できる。その総説は、なかでもＢａｎｄ  Ｅ１６ｄ／第一部−Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ、４０６頁以降である。
しばしば使用される原料は、ベンゾフェノンイミン酢酸エチルエステル、アセトアミドマロン酸ジエチルエステルおよびイソニトリル酢酸エチルエステルであった。
種々のグリシン誘導体およびアラニン誘導体の製造は、例えばイソニトリル酢酸エチルエステルおよび適当なケトンならびにアルデヒドから出発して行った〔プレトリウスら（H.-J. Praetorius, J. Flossdorf, M.-R. Kula, Chem. Ber. 1975, 108, 3079）参照〕。
シクロオクタグリシン、２−ノルボルニルグリシン、アダマンチルアラニン、γ−メチルシクロヘキシルアラニン、４−イソプロピルシクロヘキシ−１−イルアラニン、４−メチルシクロヘキシル−１−イル−アラニンおよび４−メチルシクロヘキシル−１−イル−グリシンの合成は、相当する２−ホルミルアミノ−アクリル酸エチルエステルを経由し〔Ｕ．シェルコップら（U. SchoellkopfおよびR. Meyer Liebigs Ann. Chem.. 1977, 1174）〕、イソシアン酢酸エチルエステルから出発し、それぞれカルボニル化合物、シクロオクタノン、２−ノルボルナノン、１−ホルミルアダマンタン、１−ホルミル−１−メチル−シクロヘキサン、１−ホルミル−４−イソプロピルシクロヘキサン、１−ホルミル−４−メチル−シクロヘキサンおよび４−メチルシクロヘキサノンと一緒に下記の一般的方法により行われた。
２−ホルミルアミノアクリル酸エチルエステルの合成のための一般操作方法
ＴＨＦ１５０ｍｌ中のカリウム−ｔ−ブチラート１００ミリモルに、０〜−１０℃においてＴＨＦ５０ｍｌ中のイソシアン酢酸エチルエステル１００ミリモルの溶液を滴下した。１５分後に同じ温度においてＴＨＦ５０ｍｌ中の相当するカルボニル化合物１００ミリモルを加え、反応混合物をゆっくりと室温に上昇させ、溶剤を回転蒸発器で除去した。残留物を水５０ｍｌ、酢酸１００ｍｌおよびＤＣＭ１００ｍｌと混合させ、生成物をＤＣＭを用いて抽出した。ＤＣＭ相をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、溶剤を回転蒸発器で除去した。ほとんど純粋で析出した生成物は、必要の都度カラムクロマトグラフィーによりシリカゲル上（溶離剤：エーテル／石油エーテル混合物）上でさらに精製できた。
２−ホルミルアミノ−アクリル酸エチルエステルから出発するアミノ酸塩酸塩の一般的方法
２−ホルミルアミノ−アクリル酸エチルエステル１００ミリモルを氷酢酸２００ｍｌ中でＰｄ／Ｃ（１０％）−水素を用いて完全に変換するまで水素化した。次いで、触媒を濾別し、酢酸を可能な限り回転蒸発器で除去し、残留物を中濃度塩酸２００ｍｌを用いて５時間還流するまで加熱した。塩酸を回転蒸発器で除去し、生成物を５０℃、真空中で乾燥し、数回エーテルを用いて洗浄した。塩酸塩は薄く着色した結晶として析出した。
シクロオクタノン１８．９ｇ（１５０ミリモル）から出発して、シクロオクチルグリシン−塩酸塩２５．０ｇが得られた。２−ノルボルナノン１６．５ｇ（１５０ミリモル）から出発して、２−ノルボルニルグリシン−塩酸塩２６．６ｇが得られた。１−ホルミルアダマンタン１９．７ｇ（１２０ミリモル）から出発して、アダマンチルアラニン−塩酸塩２６．０ｇが得られた。１−ホルミル−１−メチル−シクロヘキサン１２．６ｇ（１００ミリモル）から出発して、γ−メチルシクロヘキシルアラニン−塩酸塩１６．６ｇが得られた。４−メチルシクロヘキサノン１６．８ｇ（１５０ミリモル）から出発して、４−メチルシクロヘキシルグリシン塩酸塩２５．９ｇが得られた。トランス−１−ホルミル−４−メチルシクロヘキサン１５ｇから出発して、トランス−４−メチルシクロヘキシ−１−イル−アラニン−塩酸塩１８ｇが得られた。３，３−ジメチル−１−ホルミルシクロヘキサン９ｇから出発して、３，３−ジメチルシクロヘキシ−１−イル−アラニン−塩酸塩１０ｇが得られた。
合成に必要なアルデヒド、１−ホルミル−３，３−ジメチルシクロヘキサンは、モスカル（Moskal）およびレンゼン（Lensen）（Rec. Trav. Chim. Pays-Bas 1987, 106, 137-141）に従って製造した。
ｎ−ヘキサン中のｎ−ブチルリチウムの溶液（７２ｍｌ、１１５ミリモル）を１０分以内に−６０℃において、無水ジエチルエーテル２８０ｍｌ中のリン酸ジエチルイソシアノメチル（１７ｍｌ、１０５ミリモル）の撹拌溶液に滴下した。生成した懸濁液を１５分間−６０℃においてさらに攪拌し、１０分以内に無水ジエチルエーテル１００ｍｌ中の３，３−ジメチルシクロヘキサノン（１３ｇ、１０５ミリモル）の溶液と混合させ、その際、温度は４５℃以下に保った。反応混合物を０℃とし、９０分間この温度で攪拌し、注意して３８％塩酸水溶液１５０〜２００ｍｌを加えた。完全に加水分解させるために、１５時間、室温で激しく攪拌した。有機相を分離し、それぞれ２００ｍｌの水、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液を用いて洗浄した。硫酸マグネシウム上で乾燥、濾別および回転蒸発器で濃縮して溶剤を除去した。得られた残留物をこれ以上は精製しないでアミノ酸の合成のための出発物質として使用した。
Ｂｏｃ−（Ｄ）−α−メチル−シクロヘキシルアラニン
Ｂｏｃ−（Ｄ）−α−メチル−Ｐｈｅ−ＯＨ３．４ｇ（１２．２ミリモル）をＭｅＯＨ１００ｍｌ中、５０℃、Ａｌ２Ｏ３担持５％Ｒｈ２５０ｍｇの存在下、２４時間、１０バールにおいて水素を用いて水素化した。濾過および溶剤除去の後、Ｂｏｃ−（Ｄ）−α−メチル−Ｃｈａ−ＯＨ２．８ｇが得られた。
0004089981.tif 000023
Ｂｏｃ−（３−Ｐｈ）−Ｐｒｏ−ＯＨは、Ｊ．Ｙ．Ｌ．チュンら（J.Y.L. Chung et al., J. Org. Chem. 1990, 55, 270）の方法と同様にして合成した。
Ｂｏｃ−１−テトラリニルグリシンの製造
Ｂｏｃ−１−テトラリニルグリシンは、１，２−ジヒドロナフタレンから出発して製造した。１，２−ジヒドロナフタレンを最初にＨＢｒを用いて臭化１−テトラリルに誘導した（J. Med. Chem. 1994, 37, 1586と同様にして）。引き続き、この臭化物をアセトアミドマロン酸ジエチルエステルと反応させ、加水分解により分割し、得られたα−アミノ酸を標準条件下でＢｏｃにより保護された形に誘導した。その他の製造方法は、Ｅ．ライマン（E. Reiman）およびＤ．フォス（D. Voss）が記載している（E. Reiman；D. Voss Arch. Pharm. 1977, 310, 102）。
Ｂｏｃ−１−（Ｄ，Ｌ）Ｔｉｃ−ＯＨの製造
Ｂｏｃ−１−（Ｄ，Ｌ）Ｔｉｃ−ＯＨは、Ｒ．Ｔ．シュマンらの方法により製造した（R.T. Shuman et al., J. Med. Chem. 1993, 36, 314）。
Ｂｏｃ−（Ｄ，Ｌ）Ｄｃｈ−ＯＨの製造
Ｂｏｃ−（Ｄ，Ｌ）Ｄｐａ−ＯＨ（１ミリモル）をＭｅＯＨ１２ｍｌ中で触媒量の５％Ｒｈ／Ａｌ２Ｏ３と一緒に５バールにおいて水素化した。濾過および真空中における溶剤除去の後に、製品が定量的収率で得られた。
シクロヘプチルグリシン、シクロペンチルグリシン、４−イソプロピルシクロヘキシルグリシンおよび３，３−ジメチルシクロヘキシルグリシンの製造
これらのアミノ酸の製造は、シクロヘプタノン、シクロペンタノン、４−イソプロピルシクロヘキサノンならびに３，３−ジメチルシクロヘキサノンとイソニトリル酢酸エチルエステルとの反応をＨ．−Ｊ．プレトリウスの方法（H.-J. Praetorius, J. Flossdorf, M. Kula, Chem. Ber. 1985, 108, 3079）により行った。
Ｈ−Ｄ，Ｌ−Ｃｈｅａ−ＯＨの製造
シクロヘキシルメタノールとメタンスルホン酸クロリドとから製造されたシクロヘプチルメチルメタンスルホナート４．０ｇ（１９．３９ミリモル）を、ベンゾフェノンイミングリシンエチルエステル４．９ｇ（１８．４７ミリモル）、乾燥した微粉砕炭酸カリウム８．９ｇ（６４．６５ミリモル）および乾燥アセトニトリル５０ｍｌ中の臭化テトラブチルアンモニウムと一緒にして１０時間、不活性気体中で還流しながら加熱した。その後、炭酸カリウムを濾別し、濾液を乾燥するまで蒸発濃縮し、粗製品を直接エタノール４０ｍｌ中の２Ｎ塩酸２０ｍｌを用いて１．５時間攪拌しながら室温で加水分解した。反応溶液を希釈した後に、酢酸エステルを用いて酸性範囲内においてベンゾフェノンを抽出し、引き続きアルカリ性範囲内（ｐＨ＝９）でＨ−Ｄ，Ｌ−Ｃｈｅａ−ＯＥｔをＤＣＭを用いて抽出し、溶液を硫酸マグネシウム上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。収量３．７ｇ、理論値の約９５％。
Ｂｏｃ−Ｄ，Ｌ−（３，４，５−（ＭｅＯ）３）Ｐｈｅ−ＯＨの製造は、ベンゾフェノンイミングリシンエチルエステルのトリメトキシベンジルクロリドを用いるアルキル化、引き続くＢｏｃ−保護基導入およびエステル鹸化により行った。
Ｄ−（１，４−シクロヘキサジエン−１−イル）ａｌａ−ＯＨの製造は、Ｇ．ジビリコフスキら（G. Zivilichovsky, V. Gurvich, J. Chem. Soc., Perkin Trans I 19,（1995）2509-15）により行った。
Ｈ−（Ｄ，Ｌ）−ββ−Ｍｅ２Ｃｈａ−ＯＨの製造は、Ｕ．シェルコップら（U. Schoellkopf, R. Meyer, L. Ann. Chem. 1977, 1174-82）に従って行った。
上記のアミノ酸は、一般に公知の方法により、水／ジオキサン中のジ−ｔ−ブチル−ジカルボナートを用いてそれぞれのＢｏｃ−保護形に誘導し、引き続き酢酸エステル／ヘキサン混合物から再結晶するかまたはシリカゲル上のカラムクロマトグラフィー（溶離剤：酢酸エステル／石油エーテル混合物）により精製した。
Ｂｏｃ−保護アミノ酸は、Ｂ−構成要素としてスキームＩに従って使用した。
上記のアミノ酸は、Ｂ−構成要素として一部は相当するベンジルエステルにも誘導し、適当な保護されたＡ−構成要素と結合させた。さらに遊離のＮ−Ｈ−官能基を有する化合物の場合には、これを引き続きＢｏｃ−基を用いて保護し、ベンジルエステル基を脱水素し、構成要素Ａ−Ｂ−ＯＨを結晶化、塩析出ならびにカラムクロマトグラフィーにより精製した。この経路を、例としてｔＢｕＯＯＣ−ＣＨ２−（Ｂｏｃ）（Ｄ）Ｃｈａ−ＯＨについて以下に記載する。
Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステルの合成
トルエン２２００ｍｌ中のＤ−シクロヘキシルアラニン−塩酸塩１００ｇ（４８１ミリモル）、ベンジルアルコール１０４ｇ（９６２ミリモル）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物１０９．７ｇ（５７７ミリモル）の懸濁液を水分離器を用いてゆっくりと還流するまで加熱した。温度範囲８０〜９０℃において、塩化水素の発生ならびに懸濁液の透明溶液への溶解が観察された。水が分離されなくなると（約４時間）、トルエン５００ｍｌを蒸留して除去し、反応混合物を一晩冷却し、生成した残留物を濾別し、さらにそれぞれヘキサン１０００ｍｌを用いて二回洗浄した。次いで、生成した残留物（１９５ｇ）をジクロロメタン２０００ｍｌ中でスラリー化し、水１０００ｍｌと混合させ、攪拌しながら５０％カセイソーダを少しづつ加えてｐＨ９〜９．５に調整した。有機相を分離し、これを二回、それぞれ水５００ｍｌを用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し、かつ濾液を濃縮し、これにより標題製品１１５ｇ（９４％）が透明な油状物として得られた。
Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル
Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル１１５ｇ（４４０ミリモル）をアセトニトリル２０００ｍｌ中に溶かし、室温において炭酸カリウム６０７．５ｇ（４．４０ミリモル）およびブロモ酢酸−ｔ−ブチルエステル９４．３ｇ（４８４ミリモル）と混合させ、かつ３日間この温度で攪拌した。炭酸塩を濾別し、さらにアセトニトリルを用いて洗浄し、母液を濃縮し（３０℃、２０ミリバール）、残留物をメチル−ｔ−ブチルエーテル１０００ｍｌ中に取込み、有機相を５％クエン酸および飽和炭酸水素ナトリウム溶液を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し、濃縮し、得られた油状物（１６８ｇ）を直接次の反応に使用した。
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−ベンジルエステル
前の合成で得られた油状物（１６８ｇ、４４７ミリモル）をアセトニトリル１４００ｍｌ中に溶かし、炭酸カリウム粉末６１８ｇ（４．４７モル）およびジ−ｔ−ブチルジカルボナート１０７．３ｇ（４９２ミリモル）と混合させ、６日間、室温で攪拌した。炭酸カリウムを吸引濾過し、アセトニトリル約１０００ｍｌを用いて洗浄し、濾液を濃縮した。希望する製品２３０ｇが得られた。
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−シクロヘキシルアンモニウム塩
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−ベンジルエステル１１５ｇを純エタノール１０００ｍｌ中に溶かし、２５〜３０℃において活性炭担持１０％Ｐｄ９ｇの存在下で２時間、常圧において水素を用いて水素化した。濾過し、回転蒸発器で溶剤を除去した後に、黄色の油状物１００ｇ（２６０ミリモル）が得られ、これをアセトン１６００ｍｌ中に取込み、還流するまで加熱した。加熱浴を取り除き、滴下漏斗を用いて迅速にアセトン中のシクロヘキシルアミン２７ｇ（２７３ミリモル）の溶液を加えた。反応混合物を室温に冷却すると、希望する塩が晶出した。固体を濾別し、アセトン２００ｍｌを用いて洗浄し、最終精製のためにさらに一回アセトンから再結晶した。残留物を真空槽内、３０℃において乾燥した後に、希望する塩７０．２ｇが白色粉末として得られた。
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−Ｄ−シクロヘキシルグリシン−シクロヘキシルアンモニウム塩は、同様にしてシクロヘキルグリシンを原料として製造された。
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルエチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−シクロヘキシルアンモニウム塩
ａ）３−ブロモ−プロピオン酸−ｔ−ブチルエステル、
ブロモプロピオン酸１６．６４ｇ（１０９ミリモル）、凝縮した２−メチルプロペン１５０ｍｌおよび濃硫酸２ｍｌを−３０℃、窒素気流中においてオートクレーブに好適なガラス容器内に入れ、緊密に封入し、７２時間、室温で攪拌した。処理のために、反応容器を改めて−３０℃に冷却し、反応溶液を注意して氷冷却した飽和炭酸水素ナトリウム溶液２００ｍｌ中に注入した。攪拌しながら、過剰の２−メチルプロペンを蒸発させ、残留物を三回それぞれジクロロメタン５０ｍｌを用いて抽出し、一緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾別し、水流真空中で濃縮した。油状残留物をカラムクロマトグラフィーで精製した（溶離剤：ｎ−ヘキサン、後にｎ−ヘキサン／ジエチルエーテル９：１）。標題化合物１８．８６ｇが得られた。
ｂ）Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルエチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル
Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル４９．４ｇ（１８９ミリモル）をアセトニトリル２５０ｍｌ中に溶かし、室温においてブロモプロピオン酸−ｔ−ブチルエステル３１．６ｇ（１５１ミリモル）と混合させ、５日間、還流しながら煮沸した。生成した沈殿を濾別し、数回アセトニトリルを用いて洗浄し、濾液を水流真空中で濃縮し、残留物をジクロロメタン３５０ｍｌ中に取込み、有機相を５％クエン酸および飽和炭酸水素ナトリウム溶液を用いて抽出した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し、濃縮した。油状の残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤：ジクロロメタン、後にジクロロメタン／メタノール９５：５）。わずかに不純物がある油状物が得られ、これを直接次の反応に使用した。
ｃ）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルエチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル
前の合成で得られた油状物（３０ｇ、最高７０ミリモル）をアセトニトリル１５０ｍｌ中に溶かし、ジ−イソプロピルエチルアミン２８ｍｌ（１６０ミリモル）およびジ−ｔ−ブチルジカルボナート１９．２ｇ（８８ミリモル）と混合させ、３日間室温において攪拌した。反応混合物を回転蒸発器において水流真空中で濃縮し、残留物をｎ−ヘキサン中に取込み、五回それぞれ５％クエン酸溶液３ｍｌを用いて洗浄し、一緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別し、濃縮し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ヘキサン／酢酸エチルエステル９５：５）分離した。希望する製品３２．６６ｇ（６４ミリモル）が得られた。
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルエチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニン−シクロヘキシルアンモニウム塩
ｄ）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルエチレン）−Ｄ−シクロヘキシルアラニンベンジルエステル３２．６６ｇ（６４ミリモル）を純エタノール３２５ｍｌ中に溶かし、２５〜３０℃、活性炭担持１０％Ｐｄ３ｇの存在下において１４時間常圧で水素を用いて水素化した。セライト（Celite）（Ｒ）を通して溶液を濾過した後、エタノールを用いて洗浄し、回転蒸発器を用いて溶剤を除去すると、黄色の油状物２６．７ｇが得られ、これをアセトン中に取込み、還流するまで加熱した。加熱浴を取り除き、滴下漏斗を用いて迅速にアセトン中のシクロヘキシルアミン７ｇ（７０ミリモル）を加えた。反応混合物を室温に冷却する際に、希望する塩が晶出した。固体を濾別し、アセトン２５ｍｌを用いてさらに洗浄し、最終精製のためにさらに一回アセトンから再結晶した。残留物を真空乾燥器内で３０℃において乾燥した後に、希望する塩２６．６ｇ（５４ミリモル）が白色粉末として得られた。Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリン
ａ）Ｎ−Ｂｏｃ−Ｐｙｒ−ＯＨ（５ｇ、２３．４５ミリモル）をＭｅＯＨ（５０ｍｌ）中に溶かし、ジオキサン中のＨＣｌ（４Ｎ、３０ｍｌ）と混合させた。引き続き１２時間、還流しながら加熱した。溶剤を回転蒸発により除去すると、Ｈ−Ｐｙｒ−ＯＭｅ塩酸塩が製品として得られる。収量：３．８４ｇ（１００％）、
ｂ）Ｎ−（ｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２）−Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−Ｃｈａ−ＯＨ（８ｇ、２０．７５ミリモル）をジクロロメタン（７５ｍｌ）中に溶かし、−１０℃においてエチルジイソプロピルアミン（１５．５ｍｌ、８９．２４ミリモル）と混合させた。５分間、この温度で攪拌した後に、ジクロロメタン（２５ｍｌ）中のＨ−Ｐｙｒ−ＯＭｅ塩酸塩（３．４ｇ、２０．７５ミリモル）の溶液を滴下した。引き続き、酢酸エチルエステル中の無水プロパンホスホン酸溶液（５０％、２０ｍｌ、２６．９６ミリモル）を滴下し、２時間、−１０〜０℃において攪拌した。内容物をジクロロメタンを用いて薄め、飽和炭酸水素ナトリウム（二回、８０ｍｌ）、５％クエン酸溶液（二回、１５ｍｌ）および飽和塩化ナトリウム溶液（一回、２０ｍｌ）を用いて洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し溶剤を回転蒸発により除去した。粗製品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝９５／５）により精製した。収量６．２ｇ（６０％）。
ｃ）Ｎ−（ｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２）−Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−Ｃｈａ−Ｐｙｒ−ＯＭｅ（５．５ｇ、１１．１２ミリモル）をジオキサン（４０ｍｌ）中に溶かし、カセイソーダ（１Ｎ、２２．２ｍｌ、２２．２４ミリモル）と混合させ、２時間、室温において攪拌した。ジオキサンを回転蒸発により除去し、水相を酢酸エチルエステルを用いて洗浄し、硫酸水素カリウム溶液（２０％）を用いてｐＨ１〜２に酸性化した。水相をジクロロメタンを用いて抽出し、一緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥した。収量５ｇ（９４％）、無色の発泡体。水を飽和させたｎ−ヘキサンから再結晶すると無色の結晶が得られた（融点＝１５８〜１６０℃）。
Ｎ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリン
この化合物は、同様にしてＮ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシンおよび３，４−デヒドロプロリンメチルエステルから製造された。
Ｅ−構成要素として使用される（Ｌ）３，４−デヒドロプロリンは、購入して入手でき、（Ｄ，Ｌ）−４，５−デヒドロピペコリン酸は、Ａ．ブルグシュターレルら（A. Burgstahler, C.E. Aiman, J. Org. Chem. 25,（1960）, 489）またはＣ．ヘルダイスら（C. Herdeis, W. Engel, Arch. Pharm 326,（1993）297）に従って製造され、引き続き（Ｂｏｃ）２Ｏを用いてＢｏｃ−（Ｄ，Ｌ）−Ｄｅｐ−ＯＨに誘導された。
Ｄ−構成要素の合成は下記のように行った：
５−アミノメチル−２−シアノチオフェン
この構成要素の製造は、ＷＯ９５／２３６０９の記載に従って行った。
４−アミノメチル−２−シアノチオフェン
ａ）２−ブロモ−４−ホルミルチオフェン
３−ホルミルチオフェン３６ｇ（３２０ミリモル）を塩化メチレン６００ｍｌ中に溶かし、５℃に冷却し、少しずつ三塩化アルミニウム１００ｇ（７５０ミリモル）と混合させ、引き続き反応混合物を還流しながら加熱した。４５分以内に塩化メチレン４０ｍｌ中の臭素５９ｇ（１９ｍｌ、３６０ミリモル）の溶液を滴下し、４時間還流しながらさらに反応させた。冷却した後、反応溶液を氷水６００ｇに注入し、塩化メチレンを用いて抽出し、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空中で回転蒸発した。粗製品６４．５ｇが得られこれをカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、塩化メチレン／石油エーテル）を用いて精製した。これにより、僅かに不純物を含む製品が合計して５６．５ｇ得られた。
ｂ）２−シアノ−４−ホルミルチオフェン
ＤＭＦ２５ｍｌ中の２−ブロモ−４−ホルミルチオフェン１３．５３ｇ（７０．８２ミリモル）の溶液に、シアン化銅（Ｉ）７．６ｇ（８５ミリモル）を加え、反応混合物を３．５時間、還流しながら加熱し、これにより最初は淡緑色の懸濁液が黒色溶液に変化した。水を加えた後、反応混合物を酢酸エステルを用いて数回抽出し、有機相を一緒にし、飽和食塩溶液を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、わずかな真空中で回転蒸発させた。残留物（７ｇ）をエーテルと混合させると、純粋の製品１．６ｇが得られた。母液を他の生成物の粗製品と一緒にし、クロマトグラフィー（シリカゲル、塩化メチレン／石油エーテル１：１）により精製した。合計して、２−ブロモ−４−ホルミルチオフェン５６．５ｇが２−シアノ−４−ホルミルチオフェンに変換し、これにより純粋の製品１２．６ｇが得られた（収率３１％）。
ｃ）２−シアノ−３−ヒドロキシメチルチオフェン
エタノール２００ｍｌ中の２−シアノ−４−ホルミルチオフェン１２．６ｇ（９１．８ミリモル）の懸濁液に、水素化ホウ素ナトリウム３．４７ｇ（９１．８ミリモル）を少しずつ加え、室温において２時間攪拌すると、その間に反応混合物はゆっくりと透明な溶液となった。真空中で濃縮した後に、残留物を酢酸エステル中に取込み、飽和食塩溶液、５％クエン酸および飽和食塩溶液を用いて順に洗浄し、有機相を硫酸ナトリウムを用いて乾燥させ、真空中で濃縮した。ほとんど純粋の製品１１．７ｇが得られた（収率９１．５％）。
ｄ）３−ブロモメチル−２−シアノチオフェン
２−シアノ−３−ヒドロキシメチルチオフェン１１．７ｇ（８４．０７ミリモル）をトリフェニルホスフィン２４．１ｇ（９１．８７ミリモル）と一緒にＴＨＦ１０ｍｌ中に、室温において溶かし、冷却（氷浴）しながら少しずつテトラブロモメタン３０．４７ｇ（９１．８７ミリモル）と混合させた。室温において３時間攪拌の後に、真空中で濃縮し、シリカゲル上（塩化メチレン／石油エーテル）でクロマトグラフィーにより精製した。まだ石油エーテルを含んでいる結晶性淡黄色製品１８．８ｇが得られた。
ｅ）４−Ｎ，Ｎ−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノメチル−２−シアノチオフェン
３−ブロモメチル−２−シアノチオフェン１８．８１ｇ（粗製品、最高８４．０７ミリモル）をＴＨＦ１６０ｍｌ中に溶かし、５℃に冷却し、少しずつ８０％水素化ナトリウム懸濁液３．０７ｇ（１０２．４ミリモル）と混合させた。引き続きＴＨＦ１６０ｍｌ中に溶けているジ−ｔ−ブチル−イミノジカルボキシラート２２．２５ｇ（１０２．４ミリモル）を５℃で滴下し、その後一晩室温で攪拌した。ＤＣによると変換が不十分であったので、４．５時間、３０〜３５℃に加温した。０〜５℃に冷却した後に、ゆっくりと飽和塩化アンモニウム溶液３３ｍｌを滴下し、ＴＨＦを真空中で蒸留除去し、残留物を数回酢酸エステルを用いて抽出し、酢酸エステル相を飽和食塩溶液を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で回転蒸発させた。赤色の粘度が高い液体残留物（３４．６１ｇ）は、粗製品として引き続く反応に使用した。
ｆ）４−アミノメチル−２−シアノチオフェン−塩酸塩
４−Ｎ，Ｎ−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）−アミノメチル−２−シアノチオフェン３４．６１ｇ（粗製品、最高８４．０７ミリモル）を酢酸エステル６００ｍｌ中に溶かし、０〜５℃に冷却し、ＨＣｌガスを用いて飽和させ、室温に加温した。３時間後に生成した懸濁液を回転蒸発により濃縮し、塩化メチレンと一緒に数回同時蒸留し、残留物をエーテルと一緒によく攪拌し、残留物を真空中で乾燥させた。製品１３．８５ｇが淡色の粉末として得られた。２工程の間の収率９４．３％。
２−アミノメチル−４−シアノチオフェン
ａ）４−シアノ−チオフェン−２−カルボアルデヒド
４−ブロモ−チオフェン−２−カルボアルデヒド４９．３ｇ（２５８．０５ミリモル）およびシアン化銅（Ｉ）２７．８ｇ（３１０．４１ミリモル）を純ＤＭＦ１３０ｍｌ中に懸濁し、８時間還流しながら加熱した。溶剤を真空中、４０℃において回転蒸発させて除去し、残留物を酢酸エステル中に懸濁し、ソックスレー装置に送った。残留物を一晩抽出し、黄色の溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で回転蒸発し、得られた黄色の固体をエーテルから再結晶した。製品２５．３ｇが得られた（理論値の８０％）。
ｂ）４−シアノ−チオフェン−２−カルボアルデヒド−オキシム
４−シアノ−チオフェン−２−カルボアルデヒド１１．６ｇ（８４．６ミリモル）をメタノール１４０ｍｌ中に溶かし、炭酸ナトリウム１２．３ｇ（１１６．１ミリモル）と混合させた。引き続き、ヒドロキシルアミン−塩酸塩６．５ｇ（９３．５ミリモル）を少しずつ冷却しながら１５℃において加え、さらに２時間、１０℃において攪拌した。水８０ｍｌを加えた後に、反応混合物を五回それぞれジエチルエーテル５０ｍｌを用いて抽出し、有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶剤を真空中で除去した。希望する製品１２．５ｇが、黄色の結晶粉末として得られた（理論値の９６％）。
ｃ）２−アミノメチル−４−シアノチオフェン−塩酸塩
亜鉛微粉１１．２２ｇ（１７１．６４ミリモル）を多数の小部分に分けて注意しながら０〜５℃に冷却したトリフルオロ酢酸５０ｍｌ中の４−シアノ−チオフェン−２−カルボアルデヒド−オキシム４．６５ｇ（３０．６０ミリモル）の溶液に、温度が１５℃を越えないようにして加えた。３時間、室温において攪拌した後に、過剰の亜鉛をデカンテーションして除去し、トリフルオロ酢酸を真空（油ポンプ）中で十分に除去し、残留した油状物を０℃に冷却し、少しずつ０℃に冷却した３Ｎカセイソーダ１５０ｍｌと塩化メチレン２ｌとの混合物と混合させた。非溶解物を濾過した後に、有機相を分離し、水相を八回塩化メチレン２０ｍｌを用いて抽出し、集めた有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、引き続き氷冷却して６Ｍメタノール性塩酸２０ｍｌと混合させた。その際、製品は塩酸塩の形で白色固体として析出し、その際、結晶化を完全にするために、懸濁液を一晩４℃に冷却した。製品２．２ｇが、無色の針状物として得られた（理論値の５０％）。
５−アミノメチル−３，４−ジメチル−チオフェン−２−カルボン酸アミド−塩酸塩
５−シアノ−３，４−ジメチル−２−カルボン酸アミド１９ｇ（１０５．４２ミリモル）をメタノール７６０ｍｌおよび２Ｎ塩酸溶液１１−ｍｌ中に懸濁し、活性炭担持Ｐｄ（１０％）９．５ｇと混合させ、室温において水素化した。水素４．７ｌを吸収した後（４時間）、メタノールを真空中で蒸留除去し、水相を三回酢酸エステルを用いて抽出し、水相を引き続き冷凍乾燥した。希望する製品１６．３ｇが白色の固体物質として得られた（理論値の７０．４％）。
５−アミノメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸アミド
ａ）５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルエステル
１０〜１５℃に冷却した２−クロロ−２−ヒドロキシイミノ−酢酸エチルエステル３０ｇ（１９８ミリモル）および塩化プロパルギル１５０ｍｌから成る混合物に、トリエチルアミン２１．２ｇ（２１０ミリモル）を攪拌しながら滴下し、１時間室温においてさらに攪拌し、引き続き水と混合させ、エーテルを用いて抽出し、有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、真空中で回転蒸発させた。残留物を真空中、０．５トール（Ｔｏｒｒ）において蒸留し、その際、製品が１１６〜１２２℃で留出した。
ｂ）５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸
５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルエステル４７．３ｇ（２５０ミリモル）をエタノール１５０ｍｌ中で水酸化カリウム１４ｇ（２５０ｍｌ）と混合させ、反応混合物を６時間、６０〜７０℃において攪拌した。冷却した後に、真空中で濃縮し、残留物を水中に取込み、エーテルを用いて抽出し、水相を塩酸を用いて酸性化し、引き続き数回エーテルを用いて抽出し、エーテル相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空中で濃縮した（油ポンプ、５０℃）。希望する製品３１ｇが得られた（理論値の７７％）
ｃ）５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸クロリド
５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸１２０ｇ（７４３ミリモル）を塩化チオニル５００ｍｌおよびピリジン２滴と一緒に１０時間還流しながら加熱し、引き続き、真空中で濃縮し、次いで２０トールにおいて蒸留した。製品を１２５〜１３３℃において蒸留した。７８ｇが得られた（理論抽出液の５８％）。
ｄ）５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸アミド
塩化メチレン１００ｍｌ中の５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸クロリド１０ｇ（５５．５６ミリモル）の溶液中に、１０〜１５℃において１時間でアンモニアを導入し、引き続き、１時間、室温においてさらに攪拌した。溶液を０℃に冷却した後に、沈殿物を吸引濾過し、少量の低温塩化メチレンを用いて洗浄し、残留物を二回水を用いてアンモニウム塩を除去するために十分に攪拌した。真空中で乾燥した後に、純製品６．５８ｇが、淡色の粉末として得られた（理論抽出液の７４％）
ｅ）５−アミノメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸アミド−塩酸塩
濃アンモニウム溶液１００ｍｌおよびメタノール７２ｍｌから成る混合物に、５−クロロメチル−イソオキサゾール−３−カルボン酸アミド２．４４ｇ（１５．２ミリモル）を加え、反応溶液を４０℃に加温し、その際、常にアンモニアガスを用いて飽和させた。６時間後に、原料が変換した。メタノールを真空中で除去し、水相を二回塩化メチレンを用いて抽出し、引き続き水相を注意して真空中で乾燥するまで回転蒸発させた。白色固体残留物は粗製品としてＢｏｃ−デヒドロプロリンとのカプリングに使用した。
２−アミノメチル−チアゾール−４−チオカルボキシアミドは、Ｇ．ヴィデノフら（G. Videnov, D. Kaier, C. Kempter, G. Jung, Angew. Chemie（1996）108、1604）に従って製造し、その際、記載されているｎ−Ｂｏｃ−保護化合物をエーテル性塩酸を用いて塩化メチレン中で脱保護した。
４−アミノメチル−チアゾール−２−チオカルボキシアミド
原料の４−アミノメチル−チアゾール−２−カルボン酸エチルエステルを米国特許（ＵＳ）第４８２６８１６号明細書に従って製造した。Ｂｏｃ−保護基のアミン官能基への導入の後、エステル基を鹸化し、生成した酸官能基を混合無水物（炭酸イソブチルエステル）を経由してカルボン酸アミドに、引き続きラヴェッソン（Lawesson）試薬を用いてチオアミドに誘導した。保護基分離の後に、上記の中間化合物が得られた。
５−アミノメチル−２−シアノフラン
ａ）５−シアノフラン−２−カルボアルデヒド：
−７８℃に冷却したテトラヒドロフラン６００ｍｌ中のジイソプロピルアミン２６．７ｇ（２６４ミリモル）の溶液に、２０分以内にｎ−ヘキサン中のｎ−ブチルリチウムの１．６モル溶液１６５ｍｌ（２６４ミリモル）を加えた。この溶液を−２０℃とし、再度−７５℃に冷却し、この温度においてゆっくりとテトラヒドロフラン１００ｍｌ中の２−シアノフラン２２．３ｇ（２４０ミリモル）の溶液を滴下した。３０分間さらに攪拌し、ゆっくりとジメチルホルムアミド９３ｍｌを滴下し、さらに３０分間攪拌した。処理のために−７０℃において水２００ｍｌ中のクエン酸４０ｇの溶液と混合させた。回転蒸発器で濃縮し、飽和硫酸ナトリウム溶液６００ｍｌと混合させ、三回、ジエチルエーテルそれぞれ２００ｍｌを用いて抽出した。一緒にした有機抽出液を硫酸マグネシウム上で乾燥した。乾燥剤を濾別した後に、溶剤を水流真空中で蒸留除去し、残留物をカラムクロマトグラフィー（溶離剤：ジクロロメタン）により精製した。溶出液を濃縮し、残留物を水蒸気蒸留により取り出した（水との共沸物の沸点範囲：６０〜６５℃、ｐ＝０．１ｍｍＨｇにおいて）。留出物をジエチルエーテルを用いて抽出した後に、有機相を乾燥し、溶液を濃縮して、標題化合物１０．６ｇ（８８ミリモル、３６％）が得られた。
0004089981.tif 000024
ｂ）５−ヒドロキシメチル−２−シアノフラン：
純エタノール５００ｍｌ中の５−シアノフラン−２−カルボアルデヒド３０ｇ（０．２５ミリモル）の溶液に、−３０℃において少しずつ水素化ホウ素ナトリウム２．３４ｇ（６２ミリモル）を加えた。２時間、−３０℃において攪拌し、冷却した反応溶液を５％クエン酸水溶液を用いてｐＨ７とした。反応混合物を水流真空中で濃縮し、残留物を飽和塩化ナトリウム溶液と混合させ、数回ジエチルエーテルそれぞれ１５０ｍｌを用いて抽出し、一緒にした有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させ、乾燥剤を濾別し、溶剤を水流真空中、室温において蒸留除去した。このようにして、標題化合物２７ｇ（２２ミリモル、８８％）が暗赤色の油状物をして得られ、これはそのまま精製しないで引き続く反応に使用した。
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ｃ）５−ブロモメチル−２−シアノフラン：
テトラヒドロフラン２５０ｍｌ中の５−ヒドロキシメチル−２−シアノフラン１５ｇ（１２１ミリモル）の溶液に、トリフェニルホスフィン３８ｇ（１４５ミリモル）を加えた。−１０℃に冷却し、テトラヒドロフラン１００ｍｌ中のテトラブロモメタン４８ｇ（１４５ミリモル）の溶液を加えた。室温に加温し、３時間、この温度で攪拌した。反応混合物を回転蒸発器で水流真空中において濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィーにより精製した（溶離剤  石油エーテル：ジクロロメタン１：１、Ｒｆ＝０．５）。標題化合物１１．５ｇが得られた。
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ｄ）５−Ｎ，Ｎ−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノメチル−２−シアノフラン：
０℃に冷却したテトラヒドロフラン４００ｍｌ中の５−ブロモメチル−２−シアノフラン２２．９ｇ（１２３ミリモル）の溶液を少しずつ水素化ナトリウム４．０ｇ（１３５ミリモル）（鉱油中の８０％懸濁液）と混合させた。引き続き、テトラヒドロフラン２００ｍｌ中のジ−ｔ−ブチル−イミノジカルボキシラート２９．４ｇ（１３５ミリモル）の溶液を滴下し、その際、温度は５℃を越えなかった。室温に加温し、一晩攪拌した。反応は不完全であったので（ＤＣで検査）、９時間の間に、さらに水素化ナトリウムを合計して）１．２ｇを三回にわけて追加して加えた。反応の完結のためにさらに３時間３５℃に加温し、その後室温に冷却し、ゆっくりと飽和塩化アンモニウム溶液６００ｍｌと混合させた。溶剤を水流真空中で蒸留除去し、残留物を数回酢酸エチルエステルを用いて抽出し、一緒にした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液を用いて洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、回転蒸発器で濃縮した。まだジ−ｔ−ブチル−イミノジカルボキシラートを含む油状残留物３７．３ｇが得られ、粗製品として引き続き反応に使用した。
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ｅ）５−アミノメチル−２−シアノフラン塩酸塩：
５−Ｎ，Ｎ−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノメチル−２−シアノフラン３７．３ｇ〔ｄ）からの粗製品、最高１２３ミリモル〕を酢酸エチルエステル６００ｍｌ中に溶かし、０℃に冷却した。塩化水素ガスを用いて飽和させ、これにより３０分後に白色の沈殿が析出した。室温とし、一晩攪拌し、生成した懸濁液を引き続き回転蒸発器で濃縮し、残留物をジエチルエーテルと一緒によく攪拌し、溶剤から濾別し、固体残留物を室温、真空中で乾燥させた。標題化合物１５．１ｇ（二段階での収率７７％）が淡い黄土色粉末として得られた。
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５−アミノメチル−３−シアノフラン
ａ）４−オキソペンタン酸エチルエステル
４−オキソペンタン酸１００ｇ（０．８６モル）、エタノール１５０ｇおよび硫酸１ｍｌをベンゼン２００ｍｌ中で還流しながら、ディーン−シュタルク−トラップ（Dean-Stark-Falle）への水分離が終わるまで加熱した。冷却した反応混合物を水、炭酸ナトリウム溶液および再度水を用いて洗浄し、次いで還流しながらディーン−シュタルク−トラップを用いて乾燥させた。水相の分離が終了した後に溶剤を蒸留除去し、残留物を減圧下で蒸留した。沸点８５〜８７℃／１６ｍｍＨｇ、収量１０５．５ｇ（８５％）。
ｂ）４，４−ジエトキシペンタン酸エチルエステル
４−オキソペンタン酸エチルエステル１７１．３ｇ（１．１９モル）、オルトギ酸トリエチル２０７ｍｌ（１８４．２ｇ、１．２４モル）、無水エタノール２６ｍｌおよびｐ−トルエンスルホン酸１ｇから成る混合物を十分に攪拌して８時間、還流しながら加熱し、次いで真空中で蒸留した。４，４−ジエトキシペンタン酸エチルエステル１８７．９ｇ（７２．５％）が得られた。沸点１０４〜１０６℃／１４ｍｍＨｇ。
ｃ）２−ホルミルラブリン酸エチルエステル
４，４−ジエトキシペンタン酸エチルエステル１０６．３ｇ（０．４８９モル）およびギ酸エチル８０ｍｌ（７３．６ｇ、０．９９モル）から成る混合物を十分に攪拌しながら、無水ベンゼン３００ｍｌ中の（薄板状）ナトリウム１２．７ｇ（０．５５グラム原子）から成る懸濁液に３時間、１０〜１５℃において滴下して加えた。攪拌をさらに３時間続け、反応混合物を一晩放置した。水２５０ｍｌを十分に攪拌しながら加え、これをさらに１５分間続けた。水層を分離し、ベンゼン層を水７０ｍｌを用いて抽出した。一緒にした水抽出液をｐＨ値２に酸性化し、酢酸エチルを用いて抽出（五回、各５０ｍｌ）し、有機抽出液を塩化カルシウム上で乾燥した。
酢酸エチル溶液を真空中で蒸留し、沸点１０２〜１１０℃／１ｍｍＨｇを有する画分を集めた。この画分は、２−ホルミルレブリン酸エチルエステルおよびそのジエチルケタールから成る混合物である。その混合比は、攪拌操作の強さとホルミル化生成物の単離の際の相分離の期間により異なる。
ベンゼン層を同様に塩化カルシウム上で乾燥し、溶剤を除去し、かつ残留物を減圧下で蒸留し、その後生成したレブリン酸エチルエステル−ケタール−混合物をｂ）の記載と同様にしてレブリン酸エチルエステル−ケタールの代わりに処理した。工程（２）および（３ａ）は、必要量の２−ホルミルレブリン酸エチルエステルが得られるまで反復した。
ｄ）５−メチルフラン−３−カルボン酸エチルエステル
２−ホルミルレブリン酸エチルエステルおよびそのジエチルケタールから成る上記の混合物をベンゼン中に溶かし、触媒を加え、得られた溶液をディーン−シュタルク−トラップを用いて３〜３．５時間、還流しながら、水が完全に除去されるまで継続した。その後、反応混合物を減圧下で蒸留し、これにより５−メチルフラン−３−カルボン酸エチルエステル１５ｇ（９７ミリモル）、沸点９７℃／１５ｍｍＨｇが得られた。
ｅ）５−メチルフラン−３−カルボン酸
５−メチルフラン−３−カルボン酸エチルエステル３１．７ｇ（２０６ミリモル）、４５％水酸化カリウム４０ｍｌおよび水１００ｍｌから成る混合物を４時間、還流しながら撹拌、加熱し、次いで１０℃に冷却し、１５％塩酸を用いてｐＨ値１に酸性化した。生成した反応混合物を２時間、この温度で放置し、沈殿物を濾別し、４５〜５０℃において一定重量となるまで乾燥し、これにより５−メチルフラン−３−カルボン酸２３．７ｇ（１８８ミリモル）が得られた。
ｆ）５−メチルフラン−３−カルボン酸クロリド
ベンゼン１００ｍｌ中の５−メチルフラン−３−カルボン酸２３．７ｇ（１８８ミリモル）の懸濁液に、塩化リン（Ｖ）３９．２ｇ（１８８ミリモル）を少量ずつ攪拌しながら加えた。著しい熱発生および塩化水素発生が観察された。生成した混合物を４時間還流および攪拌しながら放置し、次いで真空中で蒸留した。酸クロリド２４．７ｇ（１７１ミリモル、９１％）が得られた。沸点７９℃／１２ｍｍＨｇ。
ｇ）５−メチルフラン−３−カルボン酸アミド
５−メチルフラン−３−カルボン酸クロリド２４．７ｇ（１７１ミリモル）を攪拌しながら２５％水酸化アンモニウム溶液８０ｍｌおよびベンゼン８０ｍｌから成る混合物中に２５〜４０℃において滴下した。生成した混合物を３時間攪拌し一晩放置した。次の日に白色のアミド結晶を濾別し、冷水を用いて洗浄し、４０〜４５℃において一定重量となるまで乾燥した。収量１９．７ｇ（１５８ミリモル、９２％）。融点１５８℃。
ｈ）５−メチル−３−シアノフラン
ベンゼン１００ｍｌ中の５−メチルフラン−３−カルボン酸アミド１９．７ｇ（１５８ミリモル）から成る懸濁液に、塩化リン（Ｖ）３２．９ｇを少量づつ３０〜４０℃において加えた。生成した混合物を透明となるまで（３．５〜４時間）還流および攪拌を続け、引き続き減圧下で蒸留した。沸点７９〜１４０℃／１５ｍｍＨｇを有する画分を集めた。二回目の蒸留から標題化合物１２．７ｇ（１１９ミリモル、７５％）が得られた。沸点７９〜８０℃／１５ｍｍＨｇ。
ｉ）５−ブロモメチル−３−フランカルボニトリル
５−メチル−３−シアノフラン１２．７ｇ（１１９ミリモル）を四塩化炭素１００ｍｌ中に溶かし、ＮＢＳ２２ｇ（１２２ミリモル）およびＡＩＢＮ１２ｇ（７３ミリモル）を加えた。生成した混合物を十分に攪拌しながら７０℃に加熱すると、発熱反応が開始した。発熱が終了した後に、反応混合物を３時間、８０℃で攪拌し、次いで室温に冷却し、生成したスクシンイミドを濾別し、フィルター上で四塩化炭素を用いて（二回、１５ｍｌ）洗浄した。
溶剤を減圧下で除去し、残留物を真空中で蒸留し、これにより５−ブロモメチル−３−フランカルボニトリル１２．７ｇ（８６ミリモル、５７％）、沸点１０５℃／１ｍｍＨｇ、が得られた。１Ｈ−ＮＭＲ−スペクトルによると、δ１．３および２．２ｐｐｍの信号を発生する不純物が含まれている。二回目の蒸留の後に、その含有量は満足できる程度に低下したが、製品の約１５％が失われた。５−ブロモメチル−３−フランカルボニトリルは、白色結晶性物質、融点４０〜４５℃の物質である。
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反応生成物は、著しく刺激性であり、そのために殊に注意して取り扱わなければならない。
５−Ｎ．Ｎ−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノメチル−３−シアノフランの合成は、５−Ｎ．Ｎ−ビス（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノメチル−２−シアノフランの合成と同様にして行った。引き続くｔ−ブトキシカルボニル基の分割は、クロロホルム中の塩化水素飽和溶液内で行った。
２−アミジノ−５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタート
ａ）５−シアノ−１−メチルピロール−２−カルボアルデヒド
１−メチルピロールは、アセトニトリル中のクロロスルホニルイソシアナートとジメチルホルムアミドとの反応により、２−シアノ−１−メチルピロールに誘導できる〔例えば、Ｃ．Ｅ．ローダーら（C.E. Loader et al., Can.J. Chem.（1981）, 59, 2673-6）参照〕。
ジイソプロピルアミン（１７．５ｍｌ、１２４．３８ミリモル）を窒素雰囲気中でＴＨＦ（１００ｍｌ）内に入れた。−７８℃においてヘキサン中のｎ−ブチルリチウム溶液（１５％、７５．９ｍｌ、１２４．３８ミリモル）を滴下した。引き続き４５分間、−２０℃において攪拌し、次いで再び−７８℃に冷却した。この温度において、ＴＨＦ（５０ｍｌ）中のＮ−メチルピロール−２−カルボニトリル（１２ｇ、１１３．０７ミリモル）の溶液を滴下した。４５分、−７８℃において攪拌した後に、ＤＭＦ（４３．９ｍｌ、５４６．４６ミリモル）を滴下し、さらに２時間、この温度において攪拌した。クエン酸一水和物（２０．５６ｇ）を加えた後に、室温に加温し、水（１１２ｍｌ）と混合させた。ＴＨＦを回転蒸発により除去し、水相を塩化ナトリウムを用いて飽和し、ジエチルエーテル（三回、２００ｍｌ）を用いて抽出した。一緒にした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン）を用いて精製した。収量８．２５ｇ（５４％）。
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ｂ）５−ヒドロキシメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリル
ａ）により得られた製品（８．２ｇ、６１．１ミリモル）をエタノール（２００ｍｌ）中に溶かし、−１０℃にいて水素化ホウ素ナトリウム（２．３１ｇ、６１．１３ミリモル）と混合させた。１．５時間、０〜５℃で攪拌した後に、溶剤を回転蒸発により除去し、残留物を氷水および２０％硫酸水素ナトリウム溶液を混合させた。水相を酢酸エチルエステルを用いて抽出した。一緒にした有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液および水を用いて中性となるまで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール＝９７．５／２．５）により精製した。収量：７．６ｇ（９１％）
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ｃ）５−アジドメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリル
ｂ）により得られた製品（７．５ｇ、５５．０８ミリモル）をＤＭＦ（２２０ｍｌ）中に溶かし、０℃においてトリフェニルホスフィン（４３．３４ｇ、１６５．２５ミリモル）と混合させた。５分間、この温度で攪拌した後に、テトラブロモメタン（５４．８ｇ、１６５．２５ミリモル）を加えた。引き続き、３０分間、０℃においておよび１．５時間、室温において攪拌した。０℃に冷却した後にアジ化ナトリウム（４．３７ｇ、６７．２１ミリモル）と混合させた。引き続き４．５時間、室温で攪拌した。０℃において飽和塩化ナトリウム溶液を滴下し、内容物を酢酸エチルエステルを用いて希釈した。有機相を分離し、水相をジエチルエーテルを用いて抽出した。一緒にした有機相を水を用いて洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチルエステル／ヘキサン＝１／２０）により精製した。収量：５．６ｇ（６３％）。
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ｄ）５−アミノメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリル
ｃ）により得られた製品（４．７１ｇ、２９．２５ミリモル）をメタノール（１００ｍｌ）中に溶かし、活性炭担持パラジウム（１０％、１ｇ）と混合させた。引き続き、４時間、１気圧において水素を用いて水素化した。触媒をセライト（R）上で濾別し、濾液を回転蒸発により濃縮した。残留物をジクロロメタン／ジエチルエーテル＝１／１と一緒に十分に攪拌した。製品を吸引濾過し、真空乾燥器内で３５℃において乾燥した。収量：２．７ｇ（６８％）。
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ｅ）５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロール−２−カルボニトリル
ｄ）で得られた製品（２．７ｇ、１９．９７ミリモル）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中に溶かし、トリエチルアミン（２．８ｍｌ、１９．９７ミリモル）と混合させた。引き続き、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中のジ−ｔ−ブチルジカルボナート（４．３６ｇ、１９．９７ミリモル）の溶液を滴下した。２時間、室温において攪拌した後に、水と混合させ、水相をジクロロメタンを用いて抽出した。一緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。粗製品は、これ以上は精製しないで引き続く反応に使用した。収量：４．４ｇ（９４％）。
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ｆ）５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロール−２−ヒドロキシアミジン
ｅ）で得られた製品（４．３ｇ、１８．２７ミリモル）をメタノール／ジクロロメタン（１００ｍｌ、１／１）中に溶かし、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３．１７ｇ、４５．６１ミリモル）と混合させた。引き続き、エチルジイソプロピルアミン（１９．１ｍｌ、１０９．６５ミリモル）を室温において滴下した。１２時間、４０℃で攪拌した後に、溶剤を回転蒸発により除去し、残留物を水と混合させ、酢酸を用いてｐＨ５に酸性化し、ジクロロメタンおよび酢酸エチルエステルを用いて抽出した。一緒にした有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、回転蒸発により濃縮した。粗製品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン／メタノール９５／５）を用いて精製した。収量３．４ｇ（６９％）。
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ｇ）２アミジノ−５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタート
ｆ）で得られた製品（３．４ｇ、１２．６７ミリモル）をメタノール（１５０ｍｌ）中に溶かし、酢酸（１．４５ｍｌ、２５．３１ミリモル）およびラネーニッケル（４２１ｍｇ）と混合させた。引き続き５時間、５０℃、１気圧の水素内で水素化した。室温に冷却した後に、触媒をセライト（R）を通して濾別し、濾液を濃縮した。このようにして得られた製品はこれ以上は精製しないで次の反応に使用した。収量３．７ｇ（９４％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２５３
２−アミジノ−４−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタート
ａ）５−シアノ−１−メチルピロール−３−カルボアルデヒド
三塩化アルミニウム（２４．２４ｇ、１８０．８６ミリモル）をニトロメタン／ジクロロメタン（１／１、３２０ｍｌ）中に溶かし、−２０℃に冷却し、１−メチルピロール−２−カルボニトリル（８ｇ、７５．３６ミリモル）と混合させた。引き続き、ジクロロメタン（４２ｍｌ）中に溶かしたα、α−ジクロロジメチルエーテル（１０．４ｇ、９０．４３ミリモル）を滴下した。４時間、１０℃において攪拌した後に、内容物を氷（２００ｇ）上に注いだ。水相をジエチルエーテルを用いて抽出した。一緒にした有機相を飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水および飽和塩化ナトリウム溶液を用いて中性となるまで洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後に、溶剤を回転蒸発により除去した。粗製品はこれ以上は精製しないで次の反応に使用した。収量９．２ｇ（９１％）。
0004089981.tif 000036
ｂ）４−アミノメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリルは、５−シアノ−１−メチルピロール−３−カルボアルデヒドから出発して、５−アミノメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリルの合成と同様にして製造した。しかし、４−アジドメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリルの還元は、シュタウディンガー反応〔例えばＢ．Ｓ．ナガラヤンら（B.S. Nagarajan et al., J. Org. Chem. 1987, 52, 5044-6参照）により有利に行った。
ｃ）２−アミジノ−４−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタートは、４−アミノメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリルから出発して、２−アミジノ−５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタートの合成と同様にして製造した。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２５３
４−アミジノ−２−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタート
ａ）４−シアノ−１−メチルピロール−２−カルボアルデヒド
１−メチルピロール−２−カルボアルデヒド（１０ｇ、９１．６ミリモル）をアセトニトリル（１００ｍｌ）中に溶かし、−４５℃に冷却した。アセトニトリル（４０ｍｌ）中のクロロスルホニルイソシアナート（３８．９ｇ、２７４．９ミリモル）を４０分間で滴下した。引き続き１２時間、室温において攪拌した。ジメチルホルムアミド（３５ｍｌ）の滴下添加の後に、１時間、５０℃に加温した。室温に冷却した後に、反応混合物を氷（２００ｍｌ）および２Ｎカセイソーダ（２８６ｍｌ）上に加えた。形成された沈殿を吸引濾過した。濾液をジエチルエーテルを用いて抽出した。一緒にしたエーテル相を希炭酸水素ナトリウム溶液および水を用いて中性となるまで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を水流真空中で蒸留除去し、残留物を前に得られた沈殿物と一緒にした。石油エーテルからの再結晶により、４−シアノ−１−メチルピロール−２−カルボアルデヒド（４．３ｇ）が得られた〔例えばＣ．Ｅ．ローダーら（C.E. Loader et al., Can. J. Chem.（1981）、59、2673-6）参照〕。
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ｂ）５−アミノメチル−１−メチルピロール−３−カルボニトリルは、４−シアノ−１−メチルピロール−２−カルボアルデヒドから出発して、５−アミノメチル−１−メチルピロール−２−カルボニトリルの合成と同様にして製造した。
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ｃ）３−アミジノ−５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタートは、５−アミノメチル−１−メチルピロール−３−カルボニトリルから出発して、２−アミジノ−５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロールヒドロアセタートの合成と同様にして製造した。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：２５３
５−アミノメチル−３−シアノ−１，２，４−オキサジアゾール塩酸塩
ａ）Ｎ−Ｂｏｃ−５−アミノメチル−３−シアノ−１，２，４−オキサジアゾール
Ｎ−Ｂｏｃ−５−アミノメチル−１，２，４−オキサジアゾール−カルボン酸エチルエステル〔Ｓ．ボルグら（S. Borg et al., J. Org. Chem. 1995, 60, 3112-20）〕をメタノール（５０ｍｌ）中に溶かした。この溶液内に−１０℃〜室温において、アンモニアを完全に反応するまで導入した。溶剤を回転蒸発により除去した。このようにして得られた粗製品をジクロロメタン（７０ｍｌ）中に溶かし、−５℃においてジイソプロピルエチルアミン（２．９ｍｌ、１６．５５ミリモル）と混合させた。引き続き、ジクロロメタン（１０ｍｌ）に溶かした無水トリフルオロ酢酸（１．０６ｍｌ、７．６１ミリモル）を滴下した。１．５時間、０℃において攪拌した後に内容物をジクロロメタンを用いて希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で二回、５％クエン酸溶液で二回および飽和塩化ナトリウム溶液で一回洗浄し、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール＝９７．５：２．５）により精製した。収量１．２ｇ（８０％）。
ｂ）５−アミノメチル−３−シアノ−１，２，４−オキサジアゾール塩酸塩
ａ）で得られた製品（０．９ｇ、４．０ミリモル）をジクロロメタン（４５ｍｌ）中に溶かし、室温においてジオキサン中の４Ｍ塩酸（３．９ｍｌ、１５．６１ミリモル）と混合させた。１６時間、室温において攪拌した後に、溶剤を回転蒸発により除去した。収量６４５ｍｇ（１００％）。
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Ｎ−メチル−５−アミノメチル−ピラゾール−３−カルボン酸アミド
ａ）Ｎ−メチル−５−アミド−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル
Ｎ−メチル−５−メトキシカルボニル−ピラゾール−５−カルボン酸クロリド（Ｎ−メチル−３−メトキシカルボニル−３−カルボン酸３．７ｇ、２０．０９ミリモルから製造、J. Org. Chem., 1989, 54, 428）をトルエン中に溶かし、−１０℃に冷却した。引き続き、−１０℃〜０℃において、アンモニアを完全に反応するまで導入した。溶剤を回転蒸発により除去した。残留物をエタノール中に取込んだ。１５分間攪拌した後に、エタノールを回転蒸発により除去し、残留物を温水中に溶かし、０℃に冷却して析出させた。沈殿物を吸引濾過し、アセトンを用いて洗浄し、真空中、４５℃において乾燥した。収量：１．５ｇ（４１％）。
ｂ）Ｎ−メチル−５−シアノ−ピラゾール−３−カルボン酸メチルエステル
ａ）で得られた製品（１．５ｇ、８．１９ミリモル）をジクロロメタン（２１ｍｌ）中に取り込んだ。−１０℃においてジイソプロピルエチルアミン（３．８５ｇ、２２．１１ミリモル）と混合させ、この温度において、ジクロロメタン（５ｍｌ）中の無水トリフルオロ酢酸（１．３ｍｌ、９．４４ミリモル）の溶液を４５分間で滴下した。引き続きさらに１時間０℃において攪拌した。内容物をジクロロメタンを用いて希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で二回、５％クエン酸溶液で二回、および飽和塩化ナトリウム溶液で一回洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後に、溶剤を回転蒸発により除去した。収量１．３５ｇ（１００％）。
ＥＩ−ＭＳ（Ｍ＋）：１６５
ｃ）Ｎ−メチル−５−シアノ−ピラゾール−３−カルボン酸アミド
ｂ）で得られた製品（１．３５ｇ、８．１９ミリモル）をメタノール（５０ｍｌ）中に入れ、−１０℃に冷却した。引き続き８時間でアンモニアを導入した。１２時間、室温において攪拌した後、原料は完全に反応していた。析出した製品を吸引濾過し、冷メタノールを用いて洗浄し、真空中で乾燥した。収量１．２２ｇ（１００％）。
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ｄ）Ｎ−メチル−５−アミノメチル−ピラゾール−３−カルボン酸アミド
ｃ）で得られた製品（０．４ｇ、２．６６ミリモル）を酢酸（３０ｍｌ）中に溶かし、活性炭担持性１０％パラジウム（７８ｍｇ）と混合させた。引き続き、室温、常圧において完全に変換するまで水素化した。触媒をセライト（R）上で濾別し、溶剤を回転蒸発により除去した。収量０．４ｇ（１００％）。
ＥＩ−ＭＳ（Ｍ＋）：１５４
実施例１：Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ａ）３，４−デヒドロプロリル−５−（２−シアノ）−チエニルメチルアミド：
Ｂｏｃ−３，４−デヒドロプロリン（５ｇ、２３．４ミリモル）および５−アミノメチル−２−シアノチオフェン塩酸塩（４，５ｇ、２５．８ミリモル）をジクロロメタン（２５ｍｌ）中に溶かし、０℃において、酢酸エチルエステル（２４．８ｍｌ、１１７ミリモル）中の無水プロパンホスホン酸の５０％溶液を伴うエチルジイソプロピルアミン（２８ｍｌ、１６３．８ミリモル）と混合させた。１時間、０℃において攪拌の後に、室温に加温し、１２時間、室温においてさらに攪拌した。反応混合物をジクロロメタンを用いて希釈し、硫酸水素ナトリウム溶液（四回）、炭酸水素ナトリウム溶液（三回）および飽和塩化ナトリウム溶液（一回）を用いて洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤を濾別した後に、溶剤を水流真空中で蒸留除去した。残留物をＢｏｃ基の分割のために、ジクロロメタン（９５ｍｌ）と混合させ、室温において攪拌し、乾燥するまで蒸発濃縮し、二回、ジクロロメタンを用いて同時蒸留し、再度濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製した。まだ僅かに溶剤を含んでいる希望する製品６．６ｇが得られた。
ｂ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−シアノ）−チエニルメチルアミド
ｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２−Ｂｏｃ−（Ｄ）−Ｃｈａ−ＯＨ（７．３ｇ、１８．９８ミリモル）およびＨ−Ｐｙｒ−ＮＨ−ＣＨ２−５−（２−ＣＮ）−チオフ−塩酸塩（５．１２ｇ、１８．９８ミリモル）をジクロロメタン（１００ｍｌ）中に溶かし、エチルジイソプロピルアミン（１２．２６ｇ、９４．９ミリモル）と混合させた。反応混合物を０℃に冷却し、酢酸エチルエステル中の無水プロパンホスホン酸の５０％溶液（２０ｍｌ）を滴下して混合させた。３時間、０〜１０℃において攪拌した後に、ジクロロメタン（１００ｍｌ）を用いて希釈し、希硫酸水素ナトリウム溶液（三回）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（二回）および水（一回）を用いて洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後に、乾燥剤を分離した後に溶剤を水流真空中で蒸留除去した。淡褐色の油状物１２．４７ｇが得られた。
ｃ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミドチオカルボニル）−チエニルメチルアミド
ｂ）で得られた製品をピリジン（７０ｍｌ）およびトリエチルアミン（１２ｍｌ）中に溶かした。反応混合物を０℃に冷却し、硫化水素を飽和させた（溶液は緑色に着色）。引き続き、４８時間、室温においてさらに攪拌した。過剰の硫化水素を窒素を用いて追い出し、溶剤を水流真空中で蒸留除去した。残留物をジエチルエーテル（２００ｍｌ）中に溶かし、希硫酸水素ナトリウム溶液（二回）飽和炭酸水素ナトリウム溶液（二回）および水（一回）を用いて洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後に、溶剤を水流真空中で蒸留除去した。粗製品（１２．６ｇ）をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタンからジクロロメタン：メタノール＝４０：１まで勾配溶離）により精製した。まだわずかに溶剤を含んでいる希望する製品１２．１ｇが得られた。
ｄ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−Ｓ−メチルイミドカルボニル）−チエニルメチルアミド−ヨウ化水素酸塩
ｃ）で得られた製品をジクロロメタン（１２０ｍｌ）中に溶かし、ヨウ化メチル（１６．２４ｇ，１１４．３８ミリモル）と混合させた。１２時間、室温において攪拌した後、溶剤を水流真空中で蒸留除去した。黄色がかった油状物１４．６ｇが得られた。
ｅ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ｄ）で得られた製品をアセトニトリル（９０ｍｌ）中に溶かし、酢酸アンモニウム（２．９４ｇ、３８．１２ミリモル）と混合させた。２時間、室温および１．５時間、４０℃において攪拌した後、メタノール中の１０％酢酸アンモニウム溶液（１４．６５ｇ、１９．０５ミリモル）と混合させた。さらに４．５時間、５０℃において攪拌し、溶剤を水流真空中で蒸留除去した。残留物をジクロロメタンと混合させ、塩を吸引濾過し、濾液を濃縮した。残留物をイオン交換体〔フルカ（Fulka）、注文番号００４０２〕上で酢酸塩に誘導し、これにより黄色がかった油状物１１．１５ｇが得られた。
ｆ）Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ｅ）で得られた製品をジクロロメタン（１７５ｍｌ）中に溶かし、エーテル性塩酸溶液（３８．３ｍｌ）を滴下して混合させた。２時間、室温において攪拌した後に、溶剤を水流真空中で蒸留除去した。残留物をジクロロメタンと混合させ、溶剤を水流真空中で蒸留除去した（二回）。粗製品（９．３５ｇ）をイオン交換体（フルカ、注文番号００４０２）上およひ引き続くフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール：４：１からジクロロメタン：メタノール：５０％酢酸：４０：１０：２を経てジクロロメタン：メタノール：５０％酢酸＝３５：１５：５まで勾配溶離）により精製した。このようにして得られた製品を水中に溶かした。不溶性成分を濾過分離し、濾液を凍結乾燥した。これにより無定形白色固体として５．５５ｇが得られた。
ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ＋Ｈ＋）：４６２
実施例１と同様にして、下記が得られた：
実施例２：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−エチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４７６
この製造は、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−エチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニンおよび３，４−デヒドロプロリル−５−（２−シアノ）−チエニルメチルアミドから出発して、実施例１と同様に数段を経て行った。
実施例３：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４８
この製造は、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシンおよび３，４−デヒドロプロリル−５−（２−シアノ）−チエニルメチルアミドから出発して、実施例１と同様に数段を経て行った。
実施例４：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ−３，４−ジメチル）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４９０
この製造は、５−アミノメチル−３，４−ジメチル−チオフェン−２−カルボン酸アミドから出発し、Ｂｏｃ−３，４−デヒドロプロリンとのカプリングによりＢｏｃ−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−カルバモイル−３，４−ジメチル）−チエニルメチルアミドに実施例１と同様にして行った。Ｂｏｃ−保護基を分割した後に、この構成要素をＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニンを用いて実施例１と同様にしてカプリングした。ニトリル官能化へのアミドの脱水は、下記のようにして行った。
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−カルバモイル−３，４−ジメチル）−チエニルメチル−アミド４．８ｇ（７．４２ミリモル）を塩化メチレン６０ｍｌ中に溶かし、ジイソプロピルエチルアミン３．８３ｇ（２９．６４ミリモル）と混合させ、０℃に冷却した。これに塩化メチレン３ｍｌ中の無水トリフルオロ酢酸２．８ｇをゆっくりと滴下して加え、２時間、０〜５℃においてさらに攪拌した。その後、塩化メチレン６０ｍｌを用いて希釈し、反応混合物を順に２０％クエン酸２０ｍｌを用いて三回、飽和炭酸水素ナトリウム溶液２０ｍｌを用いて二回、飽和食塩溶液を用いて二回洗浄し、塩化メチレン相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で回転蒸発により濃縮した。まだ溶剤を含んでいるＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−シアノ−３，４−ジメチル）−チエニルメチルアミド５．３５ｇが得られ、これは直接次の工程に使用された。
ニトリル官能基のアミジン基への変換および引き続く保護基分割は、実施例１と同様にして行った。
実施例５：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート：
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６２
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、５−アミノメチル−２−シアノチオフェン−塩酸塩の代わりに、５−アミノメチル−３−シアノチオフェン−塩酸塩を用いた。
実施例６：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６２
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、５−アミノメチル−２−シアノチオフェン−塩酸塩の代わりに、４−アミノメチル−２−シアノチオフェン−塩酸塩を用いた。
実施例７ａ：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−（Ｄ）−４，５−デヒドロピペコリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミドヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４７６
実施例７ｂ：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−４，５−デヒドロピペコリル−５−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミドヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４７６
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、Ｂｏｃ−３，４−デヒドロプロリンの代わりに、ラセミ体のＢｏｃ−（Ｄ．Ｌ）−４，５−デヒドロピペコリン酸を用いた。Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニルメチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−（Ｄ．Ｌ）−４，５−デヒドロピペコリル−５−（２−シアノ）−チエニルメチルアミドの工程において、両方のジアステレオマー化合物は、クロマトグラフィー（シリカゲル、シクロヘキサン／酢酸エステル７：３）により分離できた。両方のジアステレオマーは、引き続き実施例１と同様にして最終製品に誘導された。
実施例８：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート：
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４８
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、原料５−アミノメチル−３−シアノチオフェンおよびＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリンから出発した。
実施例９：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−４−（２−アミジノ）−チエニルメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４８
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、原料４−アミノメチル−２−シアノチオフェンおよびＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリンから出発した。
実施例１０：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−フラニルメチルアミド−ヒドロアセタート：
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４６
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、５−アミノメチル−２−シアノチオフェン−塩酸塩の代わりに、５−アミノメチル−２−シアノフラン−塩酸塩を用いた。
実施例１１：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−エチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−フラニルメチルアミド−ヒドロアセタート：
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６０
この製造は、実施例１と同様にして行い、その際、５−アミノメチル−２−シアノチオフェン−塩酸塩の代わりに、５−アミノメチル−２−シアノフラン−塩酸塩を用いた。
実施例１２：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−フラニルメチルアミド−ヒドロアセタート：
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４３２
実施例１３：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−フラニルメチルアミド−ヒドロアセタート：
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４６
実施例１４：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ−１−メチル）ピロールメチルアミド塩酸塩：
ａ）５−（Ｎ−Ｂｏｃ−アミノメチル）−１−メチルピロール−２−アミジン塩酸塩（１．５ｇ、４．４ミリモル）をイソプロパノール（７０ｍｌ）中に溶かし、イソプロパノール性塩酸（５．５Ｍ、４．５ｍｌ、２４．０ミリモル）と混合させ、２時間、５０℃に加温した。室温に冷却した後に、溶剤を回転蒸発により除去し、残留物をＤＭＦ（５０ｍｌ）中のｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈａ−Ｐｙｒ−ＯＨの溶液に加える。溶液を０℃に冷却し、Ｎ−メチルモルホリン（１．９２ｍｌ、１７．４４ミリモル）と混合させた。引き続き、ＴＯＴＵ（１．１８ｇ、３．５８ミリモル）を少しずつ加えた。４５分間、０℃において攪拌した後に、溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をＨＰＬＣを用いて精製した（ＲＰ−１８、アセトニトリル／水）、収量：９８０ｍｇ（４５％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６１５
ｂ）ａ）で得られた製品（５５０ｍｇ、０．８４５ミリモル）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中に溶かし、溶液を０〜５℃においてＨＣｌ−ガスで飽和させた。引き続き、１．５時間、０℃において攪拌した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品を冷凍乾燥した。収量：４５０ｍｇ（１００％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４５９
実施例１５：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−２−（４−アミジノ−１−メチル）ピロールメチルアミド塩酸塩を、実施例１４と同様にして製造した。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４５９
実施例１６：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４−（２−アミジノ−１−メチル）ピロールメチルアミド塩酸塩を、実施例１４と同様にして製造した。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４５９
実施例１７：
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−２−（４−アミドチオカルボニル）オキサゾールメチルアミド塩酸塩：
ａ）ｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２−（Ｂｏｃ）−（Ｄ）−Ｃｈａ−Ｐｙｒ−ＯＨ（２．３６ｇ、４．９２ミリモル）をジクロロメタン（６０ｍｌ）中に溶かした。−１０℃においてジイソプロピルエチルアミン（４．３ｍｌ、２４．５９ミリモル）を滴下した。５分間、この温度において攪拌した後、２−アミノメチル−オキサゾール−４−チオカルバミド塩酸塩〔１ｇ、５．１６ミリモル、Ｇ．ヴィデノブら（G. Videnov et al., Angew. Chem. 1996, 108, 1604-9）、この文献に記載されているＮ−Ｂｏｃ−２−アミノメチルオキサゾール−４−チオカルバミド中のＢｏｃ−基は、エーテル性塩酸を用いて分割され、相当する塩酸塩が濃縮により得られる〕を加え、引き続きジクロロメタン（１０ｍｌ）を用いて希釈した酢酸エチルエステル中の無水プロパンホスホン酸５０％溶液（５．０６ｍｌ、６．３９ミリモル）を２０分間で滴下した。１時間、０℃において攪拌した後、３時間、室温に加温した。内容物をジクロロメタンを用いて希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムを用いて二回、５％クエン酸溶液を用いて二回および飽和塩化ナトリウムを用いて一回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール＝９５：５）。収量：２．５ｇ（８２％）。
0004089981.tif 000041
ｂ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−２−（４−アミジノ）オキサゾールメチルアミド塩酸塩：
ａ）で得られた製品をアセトン（５０ｍｌ）中に溶かし、ヨウ化メチル（１．９７ｍｌ、３１．２９ミリモル）と混合させ、２時間還流しながら加熱した。溶剤および過剰のヨウ化メチルを回転蒸発により除去した。このようにして得られた粗製品をテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）中に溶かし、酢酸アンモニウム（４６６ｍｇ、６．０５ミリモル）と混合させ、１．５時間、６０℃で加温した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をイオン交換体（ポリマー担体上の酢酸塩、フルカ００４０２）を用いて酢酸塩に誘導し、これを引き続きクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール：酢酸＝７５：２０：５）。収量：２．０ｇ（７５％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６０３
ｃ）Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−２−（４−アミジノ）オキサゾールメチルアミド塩酸塩：
ｂ）で得られた製品（１．９５ｇ、２．９４ミリモル）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中に溶かし、ジオキサン中の４Ｍ塩酸（３．７ｍｌ、１４．７１ミリモル）と混合させた。２０時間、室温において攪拌した後に、溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品を水中に溶かし、冷凍乾燥した。収量：１．５ｇ（１００％）。
0004089981.tif 000042
実施例１８：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−１，２，４−オキサジアゾールメチルアミド塩酸塩：
ａ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−シアノ）−１，２，４−オキサジアゾールメチルアミド
Ｎ−（ｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２）−Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−Ｃｈａ−Ｐｙｒ−ＯＨ（１．９３ｇ、４．０ミリモル）をジクロロメタン（６５ｍｌ）中に溶かし、−１０℃においてジイソプロピルエチルアミン（３．１ｍｌ、１７．６７ミリモル）と混合させた。引き続きジクロロメタン（３０ｍｌ）中に溶かした５−アミノメチル−３−シアノ−１，２，４−オキサジアゾール塩酸塩（６４５ｍｇ、４．０ミリモル）を加えた。５分間攪拌した後、酢酸エチルエステル（１５ｍｌ）を用いて希釈した酢酸エチルエステル中の無水プロパンホスホン酸の５０％溶液（３．９ｍｌ、４．９３ミリモル）を３０分間で滴下した。１時間、０℃の後、内容物をジクロロメタンを用いて希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムを用いて二回、５％クエン酸溶液を用いて二回および飽和塩化ナトリウムを用いて一回洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をクロマトグラフィーにより精製した（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール＝９５：５）。収量：１．５５ｇ（７１％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：５８７
ｂ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−１，２，４−オキサジアゾールメチルアミドヒドロアセタート
ａ）で得られた製品（１．５ｇ、２．５６ミリモル）をメタノール（５ｍｌ）中に溶かし、アセチルシステイン（４５０ｍｇ、２．７６ミリモル）と混合させた。引き続き、３５℃においてアンモニアを完全に変換するまで導入した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をイオン交換体（ポリマー担体上の酢酸塩、フルカ００４０２）を用いて酢酸塩に誘導した。このようにして得られた粗製品をクロマトグラフィーにより精製した（ＲＰ−１８、アセトニトリル、水）。収量：３００ｍｇ（１８％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６０４
ｃ）Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−１，２，４−オキサジアゾールメチルアミド塩酸塩
ｂ）で得られた製品（３００ｍｇ、０．４５ミリモル）をジクロロメタン（２０ｍｌ）中に溶かし、室温においてジオキサン中の４Ｍ塩酸溶液（０．６ｍｌ、２．４８ミリモル）と混合させた。２０時間、室温において攪拌した後に、溶剤を回転蒸発により除去し、製品を水中に溶かし、冷凍乾燥した。収量：２３０ｍｇ（９８％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４８
実施例１９：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ−Ｎ−メチル）ピラゾールメチルアミド塩酸塩
ａ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミド−Ｎ−メチル）−ピラゾールメチルアミド
Ｎ−（ｔ−ＢｕＯ２Ｃ−ＣＨ２）−Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−Ｃｈａ−Ｐｙｒ−ＯＨ（１．２５ｇ、２．５９ミリモル）をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に入れた。−１０℃においてジイソプロピルエチルアミン（１．９５ｍｌ、１１．１６ミリモル）を滴下した。引き続きテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）中のＮ−メチル−５−アミノメチル−ピラゾール−３−カルボン酸アミド（０．４ｇ、２．５９ミリモル）の溶液を加えた。５分間攪拌した後、無水プロパンホスホン酸の５０％酢酸エチルエステル溶液（２．３６ｍｌ、３．１１ミリモル）およびジクロロメタン（５ｍｌ）を５分以内に滴下した。４５分間、０℃において攪拌した後、１２時間、室温で加温した。溶剤を回転蒸発により除去し、残留物をジクロロメタン中に取込み、飽和炭酸水素ナトリウムを用いて二回、５％クエン酸溶液を用いて二回および飽和塩化ナトリウムを用いて一回洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶剤を回転蒸発により除去した。粗製品をクロマトグラフィーにより精製した（ＲＰ−１８、アセトニトリル、水）。収量：２２０ｍｇ（１４％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６１７
ｂ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−シアノ−Ｎ−メチル）−ピラゾールメチルアミド
ａ）で得られた製品（２２０ｍｇ、０．３６ミリモル）をジクロロメタン（１５ｍｌ）中に溶かし、−１０℃においてジイソプロピルエチルアミン（０．１７ｍｌ、０．９６ミリモル）と混合させた。５分間攪拌した後に、ジクロロメタン（１ｍｌ）中の無水トリフルオロ酢酸（０．０５７ｍｌ、０．４１ミリモル）の溶液を滴下した。１時間、０℃の後にジクロロメタンを用いて希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムを用いて二回、５％クエン酸溶液を用いて二回および飽和塩化ナトリウムを用いて一回洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶剤を回転蒸発により除去した。収量：１８０ｍｇ（８４％）。
ｃ）Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ−Ｎ−メチル）−ピラゾールメチルアミドヒドロアセタート
ｂ）で得られた製品（１８０ｍｇ、０．３ミリモル）をメタノール（１ｍｌ）中に溶かし、アセチルシステイン（５２．８ｍｇ、０．３２ミリモル）と混合させた。引き続き、３５℃においてアンモニアを完全に変換するまで導入した。溶剤を回転蒸発により除去し、粗製品をイオン交換体（ポリマー担体上の酢酸塩、フルカ００４０２）を用いて酢酸塩に誘導した。粗製品をクロマトグラフィーにより精製した（ＲＰ−１８、アセトニトリル、水）。収量：５０ｍｇ（１６％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：６１６
ｄ）Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ−Ｎ−メチル）ピラゾールメチルアミド塩酸塩
ｃ）で得られた製品（５０ｍｇ、０．０８１ミリモル）をジクロロメタン（５ｍｌ）中に溶かし、ジエチルエーテル中の５Ｍ塩酸（０．１４７ｍｌ）と混合させた。１２時間、室温において攪拌した後、溶剤を回転蒸発により除去し、製品を水中に取込み、冷凍乾燥した。収量：４０ｍｇ（９２％）。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６０
実施例２０：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−イソオキサゾールメチルアミド−塩酸塩
この製造は、５−アミノメチルイソオキサゾール−３−カルボン酸アミドおよびＢｏｃ−３，４−デヒドロプロリンから出発した。カプリングおよびＢｏｃ−保護基の分割の後に、得られた構成要素をＮ−（ｔ−ブトキシカルボニルメチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニンを用いて、Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニルメチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−カルバモイル）イソオキサゾールメチルアミドに結合させた。実施例と同様に第一級アミンをニトリル官能基へ脱水した後、アミド形成は下記のようにして行った。
Ｎ−（ｔ−ブトキンカルボニルメチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−アミジノ）−イソオキサゾールメチルアミド塩酸塩：
Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−（Ｎ−Ｂｏｃ）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（３−シアノ）−イソオキサゾールメチルアミド１．７５ｇ（３．０ミリモル）をメタノール（１０ｍｌ）中に溶かし、Ｎ−アセチルシステイン０．５４ｇ（３．２８ミリモル）と混合させ、気体状アンモニアを通過させて４時間、還流しながら加熱した。Ｎ−アセチルシステインの分離、製品の精製および酢酸塩への誘導は、ＭＰＬ−クロマトグラフィー（ＲＰ−１８、アセトニトリル／水０．１ｍ酢酸）を用いて行った。冷凍乾燥の後、白色粉末として１．３９ｇが得られた。（理論値の７０％）。
塩化メチレン中のエーテル性塩酸を用いる精製製品の脱保護により、標題化合物が得られた。
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４８
実施例２１：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−２−（４−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６３
この製造は実施例１と同様にして行ったが、その際、原料２−アミノメチル−チアゾール−４−チオカルボキシアミドおよびＮ−Ｂｏｃ−Ｎ−（ｔ−ブチロキシカルボニルメチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリンから出発した。
実施例２２：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−２−（４−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−塩酸塩
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４９
実施例２３：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−４−（２−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６３
この製造は実施例１と同様にして行ったが、その際、原料４−アミノメチル−チアゾール−２−チオカルボキシアミドおよびＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリンから出発した。
実施例２４：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−４−（２−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４９
この製造は実施例１と同様にして行ったが、その際、原料４−アミノメチル−チアゾール−２−チオカルボキシアミドおよびＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル−メチレン）−Ｎ−Ｂｏｃ−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリンから出発した。
実施例２５：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−２−（５−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６３
この製造は、実施例２１と同様にして行った。
実施例２６：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−２−（５−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４９
この製造は、実施例２２と同様にして行った。
実施例２７：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルアラニル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４６３
この製造は、実施例２３と同様にして行った。
実施例２８：
Ｎ−（ヒドロキシカルボニル−メチレン）−（Ｄ）−シクロヘキシルグリシル−３，４−デヒドロプロリル−５−（２−アミジノ）−チアゾールメチルアミド−ヒドロアセタート
ＦＡＢ−ＭＳ（Ｍ＋Ｈ＋）：４４９
この製造は、実施例２４と同様にして行った。