(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の式Ｉ：
【化１】
0004203133.tif 000007
〔式中、Ｙは−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2、−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ6)(ＯＨ)または−Ｐ(Ｏ)Ｒ6(ＯＨ)であり、ここで、Ｒ6は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、
ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、
Ｒは水素原子または−Ｃ(Ｏ)ＮＨＣ6(Ｒ7)5であり、ここでＲ7は相互に独立して水素原子、ＯＨ、ハロゲン、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2または−ＳＯ3Ｈである〕の化合物および／または式Ｉの化合物の生理学的に許容されうる塩。
【請求項２】
次の式II：
【化２】
0004203133.tif 000008
〔式中、Ｙは−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2、−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ6)(ＯＨ)または−Ｐ(Ｏ)Ｒ6(ＯＨ)であり、ここで、Ｒ6は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、
ＸはＮＨまたはＯであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4またはＲ5は相互に独立して水素原子、ＯＨ、ハロゲン、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2または−ＳＯ3Ｈである〕の請求項１記載の化合物および／または式IIの化合物の生理学的に許容されうるナトリウム塩。
【請求項３】
Ｙが−ＣＯＯＨまたは−ＰＯ3Ｈ2であり、ＸはＮＨまたはＯであり、そしてＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4またはＲ5は相互に独立して水素原子または塩素である請求項１または２記載の式IIの化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は酵素β−グルクロニダーゼの新しい阻害剤、腫瘍生長および腫瘍転移の抑制剤としてのその使用、並びに炎症性疾患の治療のための使用に関する。
β−グルクロニダーゼは細胞外マトリックスおよび内皮細胞基底膜の腫瘍構成成分であるプロテオグリカンの多糖類部分（グリコサミノグリカン）の変性に或る役割を果たしている。グリコサミノグリカン（硫酸コンドロイチン、硫酸デルマタン、硫酸ヘパラン）はβ−グルクロニダーゼがエキソ−およびエンドグルコース分解的（exo- and endoglycolytically）に攻撃できる成分としてβ−グルクロン酸を含んでいる。活性化Ｔリンパ球およびマクロファージもまた血管系を離れる際に硫酸ヘパラン分解性エンドグリコシダーゼを発現することが知られている（Y. Naparstek等, Nature 310, 241-244ページ, 1984）。腫瘍細胞に関して、その転移性はそのヘパラナーゼ（エンド−β−グルクロニダーゼ）活性と相関していることが明らかにされている（M. Nakajima等, Journal of Cellular Biochemistry 36：157-167, 1988）。さらにまた、モデル系において腫瘍の転移をヘパラナーゼ（M. Nakajima等, Journal of Cellular Biochemistry 36：157-167, 1988）または（エキソ−）β−グルクロニダーゼ（T. Niwa等, Journal of Biochemistry 72：207-211, 1971）の阻害剤が抑制できることが知られている。
これらの所見にもかかわらず、腫瘍転移の抑制または炎症性疾患の治療のための臨床使用可能なβ−グルクロニダーゼ阻害剤は今日まで存在しなかった。
【０００２】
本発明の目的は腫瘍の転移を抑制するβ−グルクロニダーゼの新しい阻害剤を発見することである。今回我々は上記基準を満足する次の式Ｉ：
【化３】
0004203133.tif 000002
〔式中、Ｙは−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2、−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ6)(ＯＨ)、−Ｐ(Ｏ)Ｒ6(ＯＨ)、テトラゾールまたは−ＳＯ3Ｈであり、ここで、Ｒ6は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、
ＸはＮＨ、ＯまたはＳであり、
Ｒは水素原子または−Ｃ(Ｏ)ＮＨＣ6(Ｒ7)5であり、ここでＲ7は相互に独立して水素原子、ＯＨ、ハロゲン、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2または−ＳＯ3Ｈである〕の化合物を見出した。
式Ｉの化合物の生理学的に許容されうる塩も本発明に包含される。
【０００３】
好ましい化合物は、下記式II：
【化４】
0004203133.tif 000003
〔式中、Ｙは−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2、−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ6)(ＯＨ)または−Ｐ(Ｏ)Ｒ6(ＯＨ)であり、ここで、Ｒ6は（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルであり、
ＸはＮＨまたはＯであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4またはＲ5は相互に独立して水素原子、ＯＨ、ハロゲン、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ3Ｈ2または−ＳＯ3Ｈである〕の化合物である。
【０００４】
式IIの化合物の好ましい塩はナトリウム塩である。
特に好ましい式IIの化合物は、Ｙが−ＣＯＯＨまたは−ＰＯ3Ｈ2であり、ＸはＮＨまたはＯであり、そしてＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4またはＲ5は相互に独立して水素原子または塩素であるような化合物である。
式ＩまたはIIの化合物は例えばEP 0642799号に記載のそれ自体知られた方法により調製できる。
【０００５】
本発明は式ＩまたはIIの化合物および／または式Ｉおよび／またはIIの化合物の生理学的に許容されうる塩の少なくとも１つを含有する薬剤に関する。式ＩまたはIIの化合物の薬理学的特徴により、これらの化合物は例えば手術後の癌性疾患の治療または腫瘍転移の抑制のために使用できる。更に、炎症性疾患も治療できる。
【０００６】
本発明はまた薬学的に適し生理学的に許容される賦形剤、および、適切には、別の適当な活性化合物、添加剤または補助剤とともに式ＩまたはIIの化合物および／または式Ｉおよび／またはIIの化合物の生理学的に許容されうる塩を適当な投与形態にすることを包含する薬剤の製造方法に関する。本発明の薬剤は、経口、局所、肛門、静脈内または非経腸で投与できる。
【０００７】
適当な固体または液体の剤形は、例えば、顆粒、粉末、コーティング錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル、坐薬、シロップ、ジュース、懸濁液、乳液、ドロップまたは注射用溶液、さらに活性化合物遅延放出製剤であり、これらの調製においては、慣用的な補助剤、例えば賦形剤、錠剤崩壊剤、バインダー、コーティング剤、膨潤剤、潤滑剤または滑沢剤、フレーバー剤、甘味料または可溶化剤を使用する。頻繁に使用される補助剤の例は炭酸マグネシウム、二酸化チタン、乳糖、マンニトールおよび他の糖類、タルク、乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロースおよびその誘導体、動物性および植物性の油、ポリエチレングリコールおよび溶媒類、例えば、滅菌水および１価または多価のアルコール類、例えばグリセロールである。
【０００８】
好ましくは製剤は、各単位が式ＩまたはIIの化合物および／またはそれらの化合物の生理学的に許容されうる塩の特定の用量を活性成分として含有するような単位投与形態で調製して投与する。錠剤、カプセルまたは坐薬のような固体投与単位の場合は、この用量は約１ｇ以下である。
成人患者（７０kg）の治療のためには、式Ｉおよび／またはIIの化合物および／またはこれらの化合物の生理学的に許容されうる塩は、早期の場合一日当たり最大４ｇを静脈内注入により投与し、後期の場合は一日当たり１ｇを３回経口投与する。
【０００９】
しかしながら特定の状況ではより高用量または低用量を投与してよい。用量は個々の投与単位または数個のより低用量の単位の形態で単回投与により、そしてまた特定の間隔を置いた分割用量の複数回の投与により投与できる。
式ＩまたはIIの化合物および／またはその相当する塩はまた、上記薬学的投与形態の調製中、他の活性化合物、例えば、細胞増殖抑制剤、プロテアーゼ阻害剤、新生血管形成抑制剤、抗炎症活性化合物または他の腫瘍転移抑制剤と組み合わせることができる。
【００１０】
β−グルクロニダーゼ阻害剤およびその合成について以下の実施例に記載する。
実施例１
(Ｚ)−Ｏ−（Ｄ−グルコピラヌロノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメート（ナトリウム塩)(１０）の合成
【化５】
0004203133.tif 000004
【００１１】
ベンジル（１,２,３,４−テトラ−Ｏ−アセチル−α／β−Ｄ−グルコピラン)ウロネート（１／２）
ＤＭＦ（３０ml）中のグルクロン酸ナトリウム×Ｈ2Ｏ（２.００ｇ、８.５４ミリモル）の溶液をＢｎＢｒ（１.５ml、１２.６ミリモル）と混合し、２４時間約２３℃で撹拌し、ハイフロスーパーセル(R)で濾過し、Ａｃ2Ｏ（２０ml）およびピリジン（４０ml）と共に１４時間約２３℃で処理した。慣用的な後処理（ＣＨＣｌ3、水、Ｈ2ＳＯ4およびＮａＨＣＯ3溶液で洗浄）およびフラッシュクロマトグラフィー（ＦＣ）（ＳｉＯ2 ８０ｇ上）により１／２ １：１（１.９０ｇ、４９％）を得た。試料をＥｔ2Ｏから結晶化させ、無色の結晶を得た。
【００１２】
融点137.5〜139.5℃
Rf（ヘキサン／AcOEt 2:1）0.17
IR (CHCl3)：2961w, 1761s, 1499w, 1456w, 1429w, 1369m, 1091m, 1041m, 913w
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)：1.77 (1.5H); 1.80 (1.5H); 2.00 (3.0H); 2.02 (1.5H); 2.03 (1.5H); 2.09 (1.5H); 2.17 (1.5H, 4AcO); 4.22 (d, J＝9.6, 0.5H); 4.45 (d, J＝10.0, 0.5H, H-C(5)); 5.09-5.29 (m, 4.5H); 5.49 (t, J≒9.9，0.5H); 5.77 (d, J＝7.6, 0.5H); 6.40 (d, J＝3.7, 0.5H, H-C(1)); 7.32-7.39(m, 5芳香族 H)
13C-NMR (75 MHz, CDCl3)：20.25-20.82 (数個のq); 68.01 (2t); 68.87 (2d); 69.06 (d); 69.15(d); 70.20 (d); 70.49 (d); 71.94 (d); 73.01(d); 88.79 (d); 91.35 (d); 128.35-128.84 (数個のd); 134.55 (2s); 166.33 (s); 166.74 (s); 168.47 (s); 168.83 (s); 169.17 (s); 169.33 (2s); 169.52(s); 169.89 (s); 170.00 (s)
FAB-MS (3-NOBA)：475 (6,[M+Na]+), 394 (24)，393 (100,[M-OAc]+), 193 (48), 154 (22), 137 (57), 136 (29), 106（25）
元素分析値：C21H24O11(452.41)
計算値：C 55.75, H 5.35
測定値：C 55.66, H 5.41
【００１３】
ベンジル（２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−α／β−Ｄ−グルコピラン）ウロネート（３／４）
ＤＭＦ（１００ml）中の１／２ １：１（６.３５ｇ、１４.０４ミリモル）の溶液を４時間約２２℃で（ＮＨ4)2ＣＯ3（３.１８ｇ）で処理し、５℃に冷却し、ＣＨ2Ｃｌ2（２００ml）および氷（約４００ml）と混合した。ＣＨ2Ｃｌ2で抽出し、合わせた有機層を０.５Ｍ Ｈ2ＳＯ4および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させＦＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ １：１）に付して無色油状物として３／４ ４：１（３.８５ｇ、６７％）を得た。
【００１４】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:2）0.44
IR (CHCl3): 3594w, 2960w, 1754s, 1498w, 1456w, 1429w, 1369m, 1146w, 1065m, 1040m, 908w
1H-NMR (200 MHz, CDCl3)(71/72の), 3のシグナル: 1.77; 2.01; 2.08 (3s, 3AcO); 3.50 (br. s, ca. 1H, CD3OD交換, OH); 4.62 (d, J＝10.1, H-C(5)); 4.92 (dd, J＝10.1, 3.6, H-C(2)); 5.10 (d, J＝12.0); 5.19 (d, J＝12.0, PhCH2); 5.20 (t, J≒10.1, H-C(4)); 5.55 (d, J≒3.6, 0.13ppmの高磁場側へのCD3OD付加, H-C(1)); 5.56 (t, J≒9.7, H-C(3)); 7.35 (s, 5芳香族 H)
13C-NMR (75 MHz, CDCl3)(3/4の)4:1, 3のシグナル: 20.30-20.67 (数個のq); 67.95 (t); 67.98 (d); 69.30 (d); 69.50 (d); 70.74 (d); 90.19 (d); 128.66-128.86 (数個のd); 134.59 (s); 168.13 (s), 169.69 (s); 170.12 (s); 170.24(s); 72のシグナル: 20.30-20.67 (数個のq); 68.07 (t); 69.34 (d); 71.76 (d); 72.54 (d); 72.75 (d); 95.45 (d); 128.66-128.86 (数個のd); 134.52 (s); 167.17-170.45 (数個のs)
FAB-MS (3-NOBA): 433 (11, [M+Na]+), 394 (17), 393 (76, [M-OH]+), 307 (19), 303 (13), 289 (14), 193 (29), 155 (38), 154 (100)
【００１５】
ベンジル（Ｅ／Ｚ）−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルクロネート１−オキシム（５／６）
ピリジン（５５ml）中の３／４ ４：１（３.８５ｇ、９.３８ミリモル）の溶液を２.５時間約２３℃でＨ2ＮＯＨ・ＨＣｌ（１.９６ｇ、２８.２ミリモル）で処理し、ＨＣ2Ｃｌ2／Ｈ2Ｏで希釈し、振盪した。０.５Ｍ Ｈ2ＳＯ4および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で有機層を洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させて黄色の泡状物として５／６ ７：３（３.４５ｇ、８６％）を得た。これはこのままその後使用した。
【００１６】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:2）0.35 (5)，0.29 (6)
IR (CHCl3): 3573w, 3038w, 1751s, 1498w, 1456w, 1428w, 1373m, 1086m, 1045m, 958w
1H-NMR (500 MHz, CDCl3)(5/6の)7:3：1.85; 1.86; 2.05; 2.09; 2.09; 2.10 (6s, 3AcO); 3.43 (br. s, CD3OD交換, HO-C(5)); 4.21 (d, J＝7.4, 0.7H); 4.23 (d, J＝6.3, 0.3H, H-C(5)); 5.11 (d, J＝11.9, 0.7H); 5.20 (d, J＝12.1, 0.7H); 5.14 (d, J＝12.0, 0.3H); 5.22 (d, J≒12.7, 0.3H, PhCH2); 5.22 (dd, J≒6.3, 5.1, 0.3H); 5.23 (dd, J＝7.4, 3.5, 0.7H, H-C(4)); 5.56 (dd, J＝7.1, 5.8, 0.7H); 6.14 (t, J＝5.7, 0.3H, H-C(2)); 5.67 (dd, J＝7.1, 3.5, 0.7H); 5.76 (dd, J＝5.6, 4.7, 0.3H, H-C(3)); 6.55 (d, J＝5.8, 0.3H); 7.29 (d, J＝5.8, 0.7H; H-C(1)); 7.33-7.40 (m, 5芳香族 H); 8.34 (br. s, CD3OD交換, 0.7H); 8.55 (br. s, CD3OD交換, 0.3H, NOH)
13C-NMR (125 MHz, CDCl3)(5/6の)7:3, 5のシグナル：20.47-20.64 (数個のq); 68.55 (t); 68.95 (d); 69.34 (d); 69.81 (d); 71.11 (d); 128.68-129.05 (数個のd); 134.37 (s); 145.50 (d); 169.60 (s); 169.81 (s); 170.20 (s); 171.81 (s); 6のシグナル：65.65 (d); 68.55 (t); 69.25 (d); 69.42 (d); 71.79 (d); 134.46 (s); 146.41 (d); 169.63 (s); 169.85 (s); 170.34 (s); 171.63 (s)
FAB-MS (3-NOBA): 427 (26), 426 (100, [M+1]+), 366 (22)
【００１７】
（Ｚ）−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルカルヒドロキシモ−１,５−ラクトンベンジルエステル（７）
ＣＨ2Ｃｌ2（１００ml）中の５／６ ７：３（３.１５ｇ、約７.４１ミリモル)の溶液を−７８℃でＤＢＵ（１.３６ｇ、８.９３ミリモル）およびＮＣＳ（１.１９ｇ、８.９１ミリモル）で処理し、３０分かけて約２３℃に加温した。溶液をＣＨ2Ｃｌ2およびＨ2Ｏと混合し、振盪し、相を分離させ、次に有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、ＦＣ（ＳｉＯ2 １００ｇ上、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ ２：１）に付した。吸湿性の泡状物として７（２.４０ｇ、７７％の３／４）を得た。
【００１８】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:2) 0.33
IR (CHCl3): 3573w, 1760s, 1680w, 1498w, 1456w, 1372m, 1145w, 1097w, 1053m, 963w, 909w
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 1.91; 2.03; 2.13 (3s, 3AcO); 4.97 (d, J＝5.5, H-C(5)); 5.18 (t, J≒3.7, H-C(3)); 5.22 (d, J＝12.1); 5.28 (d, J≒12.7, PhCH2); 5.30 (s, CD3OD付加→部分交換, OH); 5.36 (dd, J≒5.0, 4.2, H-C(4)); 5.49 (d, J＝3.9, H-C(2)); 7.36-7.40 (m, 5芳香族 H)
13C-NMR (75 MHz, C6D6): 19.87 (q); 20.03 (q); 20.16 (q); 66.73 (d); 68.04 (t); 69.70 (d); 70.69 (d); 75.23 (d); 128.75 (d); 128.87 (2d); 128.94 (2d); 135.34 (s); 147.53 (s); 166.76 (s); 168.67 (s); 168.97 (s); 169.05 (s)
FAB-MS (3-NOBA): 426 (6), 425 (25), 424 (100, [M+1]+), 307 (16)
元素分析値：C19H21NO10(423.37)
計算値：C 53.90, H 5.00, N 3.31
測定値：C 53.37, H 5.40, N 3.39
【００１９】
ベンジルＯ−（(Ｚ)−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−Ｄ−グルコピラヌロノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメート（８）
ＣＨ2Ｃｌ2（２０ml）中の化合物７（５００mg、１.１８ミリモル）の溶液をＰｈＮＣＯ（０.２５ml、２.２９ミリモル）およびｉＰｒ2ＥｔＮ（３０ml、０.１８ミリモル）で０℃で処理し、即座に２３℃に加温し、３０分間撹拌した。蒸発させ、ＦＣに付して泡状物として化合物８（４９２mg、７７％）を得た。
【００２０】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:1) 0.36
〔α〕＝15.4（c＝1.14、 CHCl3)
IR (CHCl3): 3393w, 3038w, 1762s, 1670w, 1602w, 1523m, 1445m, 1372m, 1312w, 1178m, 1133w, 1101m, 1052m, 1010m
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): 1.98; 2.03; 2.18 (3s, 3AcO); 5.03 (d, J＝5.6, H-C(5)); 5.21 (t, J≒3.5, H-C(3)); 5.23 (d, J≒13.2); 5.28 (d, J＝11.9, PhCH2); 5.37 (dd, J≒5.6, 3.1, H-(4)); 5.64 (d, J＝4.0, H-C(2)); 7.09-7.48 (m, 10芳香族 H); 7.79 (br. s, NH)
13C-NMR (75 MHz, CDCl3): 20.43 (q); 20.50 (q); 20.66 (q); 65.54 (d); 68.50 (t); 68.83 (d); 69.64 (d); 75.42 (d); 119.31 (2d); 124.22 (d); 128.76 (2d); 128.82 (2d); 128.99 (d); 129.14 (2d); 134.18 (s); 136.92 (s); 150.57 (s); 150.94 (s); 165.80 (s); 168.26 (s); 168.59 (s); 168.91 (s)
FAB-MS (3-NOBA): 545 (7), 544 (31), 543 (100, [M+1]+), 424 (22), 423 (13), 307 (30), 289 (17)
元素分析値：C26H26N2O11(542.50)
計算値：C 57.56, H 4.83, N 5.16
測定値：C 57.58, H 5.01, N 5.29
【００２１】
（Ｚ）−Ｏ−（Ｄ−グルコピラヌロノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメート（ナトリウム塩)(１０）
ＭｅＯＨ（６ml）中の化合物８（２５５mg、０.４７ミリモル）の溶液をＰｄ／Ｃ（１０％、５mg）の存在下Ｈ2（１−２bar）で３０分間約２３℃で処理した。ＴＬＣにより反応の終了（Ｒf（ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ ７：２：１）０.３２に新スポット）が認められたため、ＭｅＯＨ中のＮＨ3の溶液（３.０ml）を滴下添加した。３時間後、混合物をハイフロスーパーセル(R)で濾過し、蒸発させた。残存物９を水に溶解し、Dowex 50W X2（５０−１００メッシュ、Ｎａ+型）を充填したカラムで濾過した。（Ｚ）−Ｏ−（Ｄ−グルコピラヌロノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメートを含有する画分を収集し、LiChroprep(R) RP-18 （４０−６３mm）を充填したカラムに適用した。水で溶離させ、凍結乾燥し、ＭｅＯＨ／ＥｔＯＨから析出させ、凍結乾燥することにより（Ｚ）−Ｏ−（Ｄ−グルコピラヌロノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメートのナトリウム塩（１０）を得た。
【００２２】
Rf 0.47
10のIR (KBr): 3380s, 1751m, 1620s, 1550m, 1501w, 1447m, 1406w, 1318w, 1254w, 1211m, 1110w, 1062w, 1020m, 753w
1H-NMR (200 MHz, CD3OD)(9の): 3.73 (dd, J＝7.0, 4.9, H-C(4)); 4.02 (t, J≒5.5, H-C(3)); 4.40 (d, J＝7.2, H-C(5)); 4.56 (d, J＝6.1, H-C(2)); 7.01-7.09 (m, 1芳香族 H); 7.25-7.33 (m, 2芳香族 H); 7.42-7.52 (m, 2芳香族 H)
13C-NMR (50 MHz, CD3OD)(9の): 70.73 (d); 75.07 (d); 77.66 (d); 82.21 (d); 120.60 (d); 124.92 (2d); 130.21 (2d); 139.79 (s); 155.52 (s); 161.00 (s); 174.92 (s)
FAB(-)-MS(グリセロール)(10の); 325 (32, [M-Na+]-), 183 (100), 181(41)
【００２３】
実施例２
ナトリウム（５Ｒ,Ｚ）−Ｏ−（５−Ｃ−ホスホナト−Ｄ−キシロピラノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメート（９）の合成
【化６】
0004203133.tif 000005
【００２４】
（５Ｒ）−１,２,３,４−テトラ−Ｏ−アセチル−５−Ｃ−（ジフェニルオキシホスホリル）−α／β−Ｄ−キシロピラノース（１／２）
水（９００ml）中の３−Ｏ−アセチル−１,２−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｏ−グルコフラノース（６０.０ｇ、２２９ミリモル）の溶液をＮａＩＯ4（５５.０ｇ、２５７ミリモル）で処理し、１５分間撹拌し、再度ＮａＩＯ4（１７.０ｇ、７９ミリモル）で処理した。１時間後、溶液をＣＨＣｌ3（１０×３００ml)で抽出し、合わせた有機層を蒸発させた。残存物をＣＨ2Ｃｌ2（３００ml）に溶解し、新しく蒸留したＨＯＰ（ＯＰｈ)2（５３ml、２７５ミリモル）およびｉＰｒ2ＥｔＮ（２ml、１２ミリモル）と混合し、３０分間撹拌し、蒸発させた。残存物（１１０ｇ）をＡｃＯＥｔ／ＨＣＯ2Ｈ／Ｈ2Ｏ ４：４：１（５３６ml)に溶解し、９０分間還流下に加熱し、蒸発させた。残存物をトルエン(８００ml)および１,４−ジオキサン(３００ml)中に懸濁させた。Ｈ2ＯおよびＨＣＯ2ＨをDean-Stark装置で約８０mbarで除去した。蒸発後、残存物をＡｃ2Ｏ(１２０ml)に懸濁し、透明な赤味を帯びた溶液となるまで激しく撹拌しながら７０％ＨＣｌＯ4（４×２ml）で処理した。溶液を氷（約６００ml）上に注ぎ込み、ピリジン（１０ml）およびＣＨＣｌ3（２５０ml）で処理し、６０分間激しく撹拌した。相を分離させ、ＣＨＣｌ3（３×２５０ml)で水層を抽出し、合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（pH１１）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させ、ＦＣ（ＳｉＯ2 ８００ｇ上、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ １：１）に付し、１／２ ３：２（1Ｈ−ＮＭＲ：１９.８ｇ、１６％）を得た。
【００２５】
１のデータ：無色油状物
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:1) 0.21
〔α〕＝98.2（c＝0.62, CHCl3)
IR (CHCl3): 3008w, 2959w, 1758s, 1591m, 1490s, 1371m, 1161s, 1084m, 1047s, 1026m, 1010m, 986w, 957s, 986w, 957s, 906w, 838w
FAB-MS (3-NOBA): 552 (10), 551 (33, [M+1]+), 457 (21), 330 (31), 329 (100), 301 (12)
元素分析値：C25H27O12P (550.45)
計算値：C 54.55, H 4.94
測定値：C 54.55, H 4.81
【００２６】
２のデータ：無色結晶。融点107.0-108.0℃（ヘキサン／Et2O）
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:1) 0.24
〔α〕＝32.4 (c＝0.50, CHCl3)
IR (CHCl3): 3008w, 1762s, 1591m, 1490s, 1369m, 1273m, 1161m, 1073s, 1040s, 958s, 906m
FAB-MS (3-NOBA): 551 (5, [M+1]+), 492 (11), 491 (40), 457 (6), 389 (12), 330 (26), 329 (100), 308 (8), 307 (30), 289 (17), 253 (14)
元素分析値：C25H27O12P (550.45)：
計算値：C 54.55, H 4.94
測定値：C 54.35, H 4.83
【００２７】
（５Ｒ）−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−５−Ｃ−（ジベンジルオキシホスホリル）−α／β−Ｄ−キシロピラノース（３／４）
ＢｎＯＨ（３.７ml）中の１／２ ３：２（１ｇ、３.３０ミリモル）の溶液をＴｉ(ＯｉＰｒ)4（０.８ml）で６０℃で処理し、約９０分間撹拌した。後処理し、ＦＣ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ ３：２→１：１→１：３）に付し、３／４ ７：１（３４１mg、３５％）を得た。
【００２８】
３／４のデータ：無色長針状物。融点100.5〜102.0℃(CH2Cl2／ヘキサン)
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:3) 0.25
〔α〕＝90.2 (ca. 10min) 73.2 (24h)(c＝1.30, CHCl3)
IR (CHCl3): 3550w, 3275w, 3069w, 3008m, 2962w, 1752s, 1603w, 1456m, 1369m, 1161m, 1040s, 1009s, 999s, 965m, 922w, 887w, 601m
31P-NMR (121 MHz, CDCl3)(3/4の)7:1, 4のシグナル: 17.45
FAB-MS (3-NOBA): 538 (31), 537 (100, [M+1]+), 391 (22), 307 (26), 155 (18), 154 (44), 138 (23), 137 (41), 136 (33), 123 (17), 91 (54)
元素分析値：C25H29O11P (536.47)
計算値：C 55.97, H 5.45, P 5.77
測定値：C 55.96, H 5.63, P 5.49
【００２９】
（５Ｒ,Ｅ／Ｚ）−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−５−Ｃ−（ジベンジルオキシホスホリル）−Ｄ−キシロースオキシム（５／６）
ピリジン（１２.５ml）中の３／４（５００mg、０.９３２ミリモル）の溶液を４時間約２３℃でＨ2ＮＯＨ・ＨＣｌ（１９５mg、２.８１ミリモル）で処理し、ＨＣ2Ｃｌ2およびＨ2Ｏで希釈し、振盪した。０.５Ｍ Ｈ2ＳＯ4および飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で有機層を洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、蒸発させて黄色の油状物として得られた５／６（４８７mg、９５％）を即座に次段階で使用した。
【００３０】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:4) 0.24 (5), 0.19 (6)
IR (CHCl3): 3574w, 3249m, 3093w, 3069w, 3008w, 2959w, 1751s, 1603w, 1498w, 1456m, 1431w, 1373s, 1041s, 998s, 967m, 869w, 601m
FAB-MS (3-NOBA): 552 (8, [M+1]+), 189 (8), 181 (9), 171 (23), 170 (100), 136 (29)
【００３１】
（５Ｒ,Ｚ）−２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−５−Ｃ−（ジベンジルオキシホスホリル）−Ｄ−キシランヒドロキシモ−１,５−ラクトン（７）
ＣＨ2Ｃｌ2（１２ml）中の５／６（３００mg、約０.５４ミリモル）の溶液を−７８℃でＣＨ2Ｃｌ2（３ml）中のＤＢＵ（９５mg、０.６２ミリモル）の溶液およびＮＣＳ（８４mg、０.６３ミリモル）で処理し、３０分かけて約２３℃に加温した。溶液をＣＨ2Ｃｌ2およびＨ2Ｏを添加し、振盪し、相を分離させ、有機層を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、ＦＣ（ＳｉＯ2 ３０ｇ上、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ １：１）に付して無色の泡状物として化合物７（２６９mg、８８％の３／４）を得た。
【００３２】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:2) 0.28
〔α〕＝＋50.2 (c＝0.83, CHCl3)
IR (CHCl3): 3265w, 3008m, 1754s, 1498w, 1458m, 1430w, 1374s, 1044s, 998s, 967m, 871w
31P-NMR (121 MHz, CDCl3): 15.53
FAB-MS (3-NOBA): 552 (9), 551 (37), 550 (100, [M+1]+), 388 (10)
元素分析値：C25H28NO11P (549.47)：
計算値：C 54.65, H 5.14, N 2.55
測定値：C 54.37, H 5.35, N 2.33
【００３３】
（５Ｒ,Ｚ）−Ｏ−（２,３,４−トリ−Ｏ−アセチル−５−Ｃ−（ジベンジルオキシホスホリル）−Ｄ−キシロピラノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメート（８）
ＣＨ2Ｃｌ2（６ml）中の化合物７（１８２mg、０.３３ミリモル）の溶液をＰｈＮＣＯ（７２ml、０.６６ミリモル）およびｉＰｒ2ＥｔＮ（３０ml、０.１８ミリモル）で３０分間０℃で処理した。蒸発させＦＣ（ＳｉＯ2 ５０ｇ上、ヘキサン／ＡｃＯＥｔ １：１）により泡状物として化合物８（２１７mg、９８％）を得た。
【００３４】
Rf（ヘキサン／AcOEt 1:2) 0.32
〔α〕＝＋53.2 (c＝0.75, CHCl3)
IR (CHCl3): 3393w, 3008w, 2964w, 1762s, 1669m, 1602m, 1522m, 1456w, 1445m, 1373m, 1311w, 1296w, 1043s, 1008s, 996s
FAB-MS (3-NOBA): 670 (35)，669 (100, [M+1]+), 551 (20), 550 (68, [M+1-PhNCO]+), 490 (25), 460 (21), 307 (27), 182 (20), 181 (39)
元素分析値：C32H33N2O12P (668.59)：
計算値：C 57.49, H 4.97, N 4.19
測定値：C 57.20, H 5.15, N 4.21
【００３５】
ナトリウム（５Ｒ,Ｚ）−Ｏ−（５−Ｃ−ホスホナト−Ｄ−キシロピラノシリデン）アミノＮ−フェニルカーバメート（９）
ＭｅＯＨ（６ml）中の化合物８（１８０mg）とＰｄ／Ｃ（１０％、５mg）の混合物を３０分間１atmでＨ2で処理し、Ｒf（ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ ４：２：１）０.５０に新しいスポットが形成したことでＴＬＣによる反応終了が確認されたため、ＭｅＯＨ中のＮＨ3の溶液（４.５ml）を滴下添加した。反応終了（３時間）後、混合物をハイフロスーパーセル(R)で濾過し、蒸発させ、水に溶解し、Dowex(R) 50W X2 ５０−１００メッシュ（Ｎａ+型）を充填したカラムで濾過した。含まれる９画分を集め、LiChroprep(R) RP-18 (４０〜６３mm）の入ったカラムに適用し、水で溶離した。凍結乾燥し、水＋ＥｔＯＨから析出させて、凍結乾燥することにより、純粋な化合物９（５０mg、４８％）を得た。
【００３６】
Rf（AcOEt／MeOH／H2O 4:2:1) 0.23
IR (KBr): 3407s, 1750m, 1654m, 1604m, 1558m, 1502w, 1447m, 1318w, 1256w, 1214m, 1082s, 976m, 907w
31P-NMR (162 MHz, D2O): 2.63
FAB(-)-MS (グリセロール): 361 (16, [M-Na+]), 275 (17), 183 (100), 181 (38)
【００３７】
実施例３
β−グルクロニダーゼの阻害
ヒトβ−グルクロニダーゼの阻害について基質として４−メチルウンベリフェリル−β−Ｄ−グルクロニドを用いて測定した。被験混合物の組成は２.５mM４−メチルウンベルフェリル−β−Ｄ−グルクロニド７５μl、酵素（０.６μg／ml）２５μlおよび０,０００１〜１００mMの濃度範囲の式Ｉの化合物１０μlとし、全て、２００mM酢酸ナトリウム緩衝液および０.１mg／mlウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、pH５中に調製した。３７℃で１０分間インキュベートした後、混合物に０.２Ｍグリシン／０.２％ＳＤＳ、pH１１.７ １.５mlを添加して反応を終了させた。酵素から放出されたメチルウンベリフェロンを３６０nmの励起波長および４５０nmの発光波長で蛍光光度計で測定した。
【００３８】
ソフトウエアプログラムGraFit ２.０（Erithacus Software Ltd.）を用いて連続希釈した阻害剤からIC50値を計算した。
【表１】
0004203133.tif 000006