(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セトロレリックスと、ポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸からなる群から選択されるポリアミノ酸との新規複合体。
【請求項２】
ポリアミノ酸の平均分子量が２０００〜２００００ｇ／モルである、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
請求項１または２に記載のセトロレリックスと、平均分子量２０００〜２００００ｇ／モルを有するポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸からなる群から選択されるポリアミノ酸との複合体からなる、固定化され、かつ活性安定化された非経口投与可能なペプチドホルモン製剤の製法において、ポリアミノ酸−ペプチドホルモン複合体を水溶液から沈殿させることを特徴とする、固定化され、かつ活性安定化された非経口投与可能なペプチドホルモン製剤の製法。
【請求項４】
所望の制御可能なホルモン含有率を有するポリアミノ酸−ペプチドホルモン複合体を水溶液の凍結乾燥により製造する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ポリマー骨格中に疎水性アミノ酸を導入するか、又は部分的なエステル化により作用物質の放出を制御する、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
請求項１または２に記載の複合体１種以上並びに場合により助剤及び骨格物質並びに安定剤を含有する、薬剤。
【請求項７】
ホルモン感受性腫瘍の治療、良性前立腺肥大の治療、受胎障害、子宮内膜症の治療のために、かつヒステロスコピーと組み合わせて並びに試験管内受精のために使用される薬剤において、請求項１または２に記載の複合体を含有することを特徴とする、薬剤。
【発明の詳細な説明】
本発明はＬＨＲＨアンタゴニスト、例えば、アンチド（Antide）、アンタレリックス（Antarelix）、アザリン（Azaline）、A−75998、ガニレリックス（Ganirelix）、Nal-Gluアンタゴニストとポリアミノ酸、殊にポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸との活性安定化された遅延性複合体並びにその製法及びこれらを含有する薬剤に関する。
前記のペプチド−ホルモンポリアミノ酸複合体は薬剤中で、例えば乳ガン及び前立腺がんのようなホルモン感受性腫瘍、良性前立腺肥大の治療のために、かつ子宮内膜症、ヒステロスコピーの処置のため、かつ受胎障害の治療のための婦人科学で使用することができる。
東ドイツ特許（ＤＤ）第２５７１９７号明細書、同第２６９７８５号明細書及び同第２９９２６５号明細書中にインスリン及び他の生物学的に活性なプロテオホルモンに関して、固定化され、その生物学的活性で安定化され、かつその薬物学的特性を変性されたペプチド製剤が記載されており、その本質的な特徴は、各ペプチドとポリアミノ酸との複合体形成である。
前記の特許には、ギ酸並びに有機溶剤、例えばクロロホルムの作用下及び強烈な製造条件下で複合体を生じさせる製法が記載されている。その際、ペプチドホルモンに、部分的な失活化及び安定性の低下の危険性が存在する。
文献中では１９８１年に初めて、ヨーロッパ特許（ＥＰ）第００４２７５３号明細書及びヨーロッパ特許（ＥＰ）第００４９６２８号明細書中で、ＬＨＲＨアナローグの難溶性塩又は複合体が記載された。これらの錯体の製造は、様々な薬剤投与のための薬品開発に関して行われる。
１９８９年に、ORSOLINIはドイツ特許（ＤＥ）第３８２２４５９号明細書中で、エンボン酸（Embonsaure）、タンニン及びステアリン酸を用いてのＬＨＲＨ−アナローグの複合体形成による水不溶性ポリペプチドの製造を記載している。得られた難溶性複合体はその場合、付加的に（乳酸−グリコール酸）コポリマーからなるポリマーマトリックス中に埋め込まれる。
（乳酸−グリコール酸）コポリマー中に埋め込まれたセトロレリックス（Cetrorelix）の複合体の他の製法が、１９９３年にORSOLINI及びHEIMGARTNERによってドイツ特許（ＤＥ）第４２２３２８２号明細書及び同第４２２３２８４号明細書中に記載されている。この特許には、エンボン酸、タンニン、ステアリン酸及びパルミチン酸との難溶性セトロレリックス複合体が挙げられている。
本発明の目的は、そのために公知の分野、例えばホルモン感受性腫瘍、例えば乳ガン、前立腺ガン、良性前立腺肥大、子宮内膜症、ヒステロスコピーでの治療で、かつ受胎障害の治療のための、改善された制御可能な遅延特性及びＬＨＲＨアンタゴニストの予定よりも早い蛋白分解に対する高められた安定性を有するデポ製剤を提供すること、かつこれらの製剤の簡単に制御可能で、かつ環境に優しい製法を示すことである。
本発明の課題は、生分解可能なポリマーを伴うＬＨＲＨアンタゴニスト、例えばアンチド（Antide）、アンタレリックス（Antarelix）、アザリン（Azaline）、A−75998、ガニレリックス（Ganirelix）、Nal-Gluアンタゴニスト、しかし有利にはセトロレリックスの改善された制御可能な遅延特性を有する新規のデポ製剤を提供し、並びにその製法を示すことにある。
本発明によりこの課題は、有機溶剤を避けて水性溶液からポリアミノ酸−ペプチドホルモン複合体を沈殿させることにより、ポリアミノ酸、殊にポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸とのＬＨＲＨアンタゴニストの複合体から、固定化され、かつ活性安定化された非経口投与可能なペプチドホルモン製剤を製造することにより解決される。有利には更に、制御可能なホルモン含有率を有するポリアミノ酸−ペプチドホルモン複合体を水溶液の凍結乾燥により製造することができる。
ポリアミノ酸の種類及びモル量により、ポリマー骨格中への疎水性アミノ酸の導入により、又は部分的なエステル化により、作用物質の放出速度を制御することができる（図面２及び３）。
本発明の複合体は、ホルモン感受性腫瘍を治療するための、殊に乳ガン及び前立腺がん、良性前立腺肥大を治療するための薬剤中で、並びに排卵誘発、試験管内受精及び子宮内膜症のための婦人科学で、かつヒステロスコピーとの組合せで使用される。
「複合体」という概念には本発明の範囲では、化学量論的に証明されない難溶性系への２種又は数種の成分の組合せが包含される。その際、相互作用が重なり、主に副原子価結合が重要である。文献中に難溶性ペプチド錯体が時に「塩」とも記載されている。この記載は同じく多くの場合に正確ではない。それというのも、前記のように、これは、定義された組成を有する物質に関するためである。
ペプチド及びタンパク質の場合には確かに、イオン系の相互作用が生じるが、これらは単独では構造又は凝集状態変化の原因とはならない。
ペプチド及びタンパク質に関して、概念「複合体」及び「塩」は多数の官能基に基づき把握されるべきである。それというのもペプチド及びタンパク質の構造をもたらす幾つかの相互作用が重なるためである。
ペプチドのための親性元素担持材料として好適なポリアミン酸を使用する。本発明ではその場合、作用物質が化学的にポリマーに結合しているのではなく、単に副原子価結合及び疎水性相互作用によってポリマーに固定されていることが重要である。
予期せずに、特にＬＨＲＨアンタゴニストのセトロレリックスはポリアミノ酸、殊にポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸に対して非常に高い結合親和性を有することが判明した。セトロレリックスのそのような高い親和性は従来の文献をベースにしても予見することはできず、かつペプチドの構造の故に意外であった。
自発的に生じる複合体は一定の再現可能なホルモン含有率を有する。
これに対して複合体中のホルモン含有率が変動され、かつ正確に規定されているべき場合には、凍結乾燥が好適な方法である。
この製造条件は先行特許文献中に記載の条件よりもかなり穏やかであり、従ってホルモンのありうる失活化を阻止する。
溶液の混合の際に生じる分子間の相互作用が安定な複合体をもたらし、これは、制御可能な作用物質放出プロフィール及び高められた蛋白分解安定性を有する。
従ってポリアミノ酸は遅延特性に影響を及ぼすだけでなく同時に、不所望な予想よりも早い蛋白分解に対する保護に影響を及ぼす。この側面は特に、このような製剤の長期使用に関して有利である。
ポリアミノ酸の種類及びモル量により、ポリマー骨格中への疎水性側鎖を有するアミノ酸の導入により、かつ存在するカルボキシル基の部分的なエステル化により、複合体の遅延特性にかなり影響を及ぼすことができる。
本発明を次の実施例に基づき詳述するが、それにより本発明が制限されることはない。
沈殿によるポリアミノ酸−ペプチド複合体の製造
例１
ポリアミノ酸５０ｍｇをＨ2Ｏ５ｍｌ中に、ポリ−Ｇｌｕで１Ｎ  ＮＨ4ＯＨの添加、４０℃までの弱い加温及び超音波処理の下に溶かし、セトロレリックス（酢酸塩として）５０ｍｇをＨ2Ｏ４ｍｌ中に溶かす。ポリアミノ酸溶液を撹拌し、かつセトロレリックス溶液を少量づつ添加し、かつ引き続き４℃で４時間、保管する。この後、沈殿物を４０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上澄みを除去し、かつ沈殿物を真空中、Ｐ2Ｏ5上で２４時間乾燥させる。化学量論的な複合体は存在しないので、収率は出発物質の合計に対する。図１は、モル量に関する統計的な遊離系での様々な放出カーブを示している（放出媒体：酢酸アンモニウム０．０１ｍ、ｐＨ７．０）。
収率：理論量の５０〜６５％
複合体中のセトロレリックス含有率は第１表参照。
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凍結乾燥による一定のペプチド含有率を有するポリアミノ酸−ペプチド複合体の製造
例２
５０％ペプチド含有率を有するセトロレリックス複合体
ポリアミノ酸５０ｍｇをＨ2Ｏ５ｍｌ中に、ポリ−Ｇｌｕで１Ｎ  ＮＨ4ＯＨの添加、４０℃までの弱い加温及び超音波処理の下に溶かし、セトロレリックス（酢酸塩として）５０ｍｇをＨ2Ｏ４ｍｌ中に溶かす。ポリアミノ酸溶液を撹拌し、かつセトロレリックス溶液を一度に添加し、かつ更に２分撹拌する。生じた複合体を−２０℃で凍結させ、かつ続いて凍結乾燥させた。化学量論的な複合体は存在しないので、収量は出発物質の合計に対する
収率：理論量の９０〜９５％
錯体中のセトロレリックス含有率：４５〜５０％
例３
ポリアミノ酸及びセトロレリックスの量を相応に変化させて、同じ方法で、７０％セトロレリックス−複合体を製造した。
例４
遅延特性の上昇と結びついた疎水性の上昇は特に、カルボキシル基の部分的なエステル化により達成することができる。図２には、ポリグルタミン酸メチルエステルとのセトロレリックス複合体の放出カーブが示されている。図３はロイシン及びフェニルアラニンを有するポリグルタミン酸のセトロレリックス錯体の放出カーブを示している。
例５
インビトロ−放出試験の実施のために、セトロレリックス-ポリアミノ酸複合体を動物実験でテストした。
これは、次のポリアミノ酸とのセトロレリックス複合体に関する。
−ポリグルタミン酸、Ｍ    ５０００ｇ／モル
−ポリグルタミン酸、Ｍ  １６０００ｇ／モル
−ポリアスパラギン酸、Ｍ  ７３００ｇ／モル
図４中には、１．５ｍｇ／ｋｇの皮下注射１回の後の雄ラットでのテストステロン抑制が示されている。各試験群で５匹を試験した。
この結果では、試験された複合体は、テストステロン抑制において６００時間を超える長期作用をもたらすことが示されえた。セトロレリックス−ポリアミノ酸複合体のデポ製剤としての原則的な効果及び適性が証明された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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