(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表されるカルバ糖アミン誘導体。
【化１】
0004057264.tif 000032
但し、Ｒ１及びＲ２はそれぞれ独立にＨ、アルキル基、アルコキシ基もしくはアシルオキシ基で置換されたアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、−ＣＯ−Ｒで表されるアシル基であって、Ｒはアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基から選択されるいずれかの基、アリール基、アルキル基もしくはアシル基で置換されたアリール基、又はアラルキル基を示す。但し、双方共にＨであることはない。
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６はそれぞれ独立にヒドロキシル基又はアラルキル基、シリル基、アルカノイル基、アロイル基、アルコキシアルキル基もしくはアラルキルオキシアルキル基を有するヒドロキシル基である。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２はいずれか一方が直鎖又は分枝を有する炭素数１〜２３のアルキル基であって他方がＨであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６がそれぞれヒドロキシル基である請求項１記載のカルバ糖アミン誘導体。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はβ-ガラクトシダーゼ阻害活性を有する擬似糖に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖脂質代謝異常症としては、従来GM1ガングリオシドーシス、ニーマン・ピック病、モルキオB病、クラッベ病、ファブリー病、ゴーシェ病、テイサックス病、サンドホフ病、フコシドーシスなどが知られている。これらの疾病は各種の糖分解酵素が変異を起こした結果生じる疾病である。その中でもGM1ガングリオシドーシス、モルキオB病、クラッベ病はβ-ガラクトシダーゼが変異して酵素活性を失って生ずる疾病であるが、未だ有効な医薬は開発されていない。
【０００３】
ところで、ファブリー病はα-ガラクトシダーゼの変異によって生ずる疾病であるが、この疾病はα-ガラクトシダーゼ阻害剤が有効な治療薬となる可能性があることが知られている（Nature Medicine 5(1) 112-115(1999)）。上記酵素阻害剤が酵素の活性を取り戻すメカニズムは明らかにされていないが、強力な酵素阻害剤が細胞内で発現した変異酵素タンパク質を安定化させるためであると考えられる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
酵素阻害剤が変異酵素タンパク質を安定化させ得るのであれば、β-ガラクトシダーゼが変異して惹起される疾病の治療薬として、β-ガラクトシダーゼ阻害剤が有効である可能性が高い。
しかし、ヒトのβ-ガラクトシダーゼを特異的且つ強力に阻害するβ-ガラクトシダーゼ阻害剤は得られていない。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題に鑑み、β-ガラクトシダーゼ活性を特異的に阻害する糖アナログを鋭意検索、検討した結果、特定のカルバ糖アミン誘導体が、強いβ-ガラクトシダーゼ阻害活性を示すことを発見し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は下記一般式（１）で表されるカルバ糖アミン誘導体である。
【０００６】
【化２】
0004057264.tif 000002
【０００７】
但し、R1及びR2はそれぞれ独立にH、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、又はアラルキル基を示す。但し、双方共にHであることはない。R3、R4、R5及びR6はそれぞれ独立にヒドロキシル基又は置換基を有するヒドロキシル基である。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、発明の実施の形態により、本発明をより詳細に説明する。
本発明は、上記一般式（１）により表されるカルバ糖アミン誘導体（以下「本発明物質」とも記載する）である。
ここで、R1及びR2はそれぞれ独立にH、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アシル基、アリール基、又はアラルキル基等の修飾や側鎖の保護に用いられる官能基を示す。しかし、R1及びR2は特にいずれか一方がアルキル基であり、他方がHであることが好ましい。
【０００９】
上記アルキル基としては例えば炭素数1〜23、好ましくは2〜20の直鎖又は分枝を有するアルキル基が挙げられ、炭素数2〜18の直鎖のアルキル基を有することが最も好ましい。特にスフィンゴ糖脂質代謝異常症の治療剤として好ましいと考えられるガラクトシダーゼ阻害剤とする場合には、本発明物質はスフィンゴ糖脂質のアナログとなりうる方が好ましい。
【００１０】
またアルキル基は、下記式（２）で示すようなアルキルグリセロール由来の骨格を有するアルコキシアルキル基または、アシルグリセロール由来の骨格を有するアシルオキシアルキル基でもよい（下記構造式中l, mはそれぞれ独立に０〜１８の整数を示し、Xはそれぞれ独立にメチレン基またはカルボニル基を示す）。
【００１１】
【化３】
0004057264.tif 000003
【００１２】
上記アルケニル基及びアルキニル基は、炭素数1〜23、好ましくは2〜20であることが好ましく、炭素原子同士の二重結合、三重結合を複数有していてもよい。しかし、これらの炭素原子に結合した水素原子は、２以上のアミノ基又は置換基を有するアミノ基、及びヒドロキシル基又は置換基を有するヒドロキシル基に置換されているものは、その合成工程が煩雑化するため、好ましくない。
上記アシル基とは、一般に-CO-Rで表される基であればいずれでもよいが、アシル基全体で炭素数は1〜23、好ましくは2〜20である。尚、上記一般式においてRは上述したアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、後述のアリール基、アラルキル基から選択されるいずれかの基である。
【００１３】
また、上記アリール基とは例えばフェニル基、ナフチル基等の芳香族炭化水素残基又は、更にアルキル基やアシル基等の置換基が芳香環の水素原子に置換している芳香族残基（例えばトリル基等）が例示される。
上記アラルキル基とは前記アリール基（Ar）にアルキル基が結合したAr-(CH2)n-を一般式で表される残基であり、前記nは1〜20が好ましく、2〜18がより好ましい。このようなアラルキル基としては、例えばベンジル基、フェネチル基、α-メチルベンジル基等が例示される。
【００１４】
R3、R4、R5、及びR6はヒドロキシル基又は置換基を有するヒドロキシル基を示すが、特にヒドロキシル基が好ましい。ここで、置換基とは、アラルキル基（ベンジル基、フェネチル基、α-メチルベンジル基等）、シリル基（トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリイソプロピルシリル（TIPS）基、t-ブチルジフェニルシリル（TBDPS）基、t-ブチルジメチルシリル（TBDMS）基等）、アルカノイル基（アセチル基、ブチリル基等）、アロイル基（ベンゾイル基、トルオイル基、ナフトイル基等）、アルコキシアルキル基（メトキシメチル（MOM）基等）、アラルキルオキシアルキル基（ベンジルオキシメチル（BOM）基等）が例示されるが、その中では特にMOM基が、安定性、取り扱い及び脱離の容易性の観点から好ましいがこれに限定はされない。
尚、本発明物質は擬似糖の１種であるため、本明細書中における炭素番号の付与は、ヘキソースの例に従って下記構造式（３）に示す方法によって記載する。
【００１５】
【化４】
0004057264.tif 000004
【００１６】
また、本発明物質は、5a-カルバ-D-ヘキソピラノースの(5-5a)不飽和誘導体と見なせるため、一般式（１）中、NR1R2で示される置換アミノ基が六員環に対して上側にあるものをβ型、反対側にあるものをα型とし、本発明物質はβ型である。
従って、本発明物質の内、最も好ましい物質は下記構造式（４）で示される物質である。
【００１７】
【化５】
0004057264.tif 000005
【００１８】
ただし、n=0〜22である。
本発明物質は、哺乳動物、特にヒト由来のβ-ガラクトシダーゼに対する阻害活性が高いため、in vitro 又はin vivo（細胞、組織など）においてこれらの酵素を阻害するための試薬及びこのような酵素阻害作用に基づく医薬として使用することが可能であり、また、β-ガラクトシダーゼの変異によって惹起される疾病の病態研究などに使用することができる。
【００１９】
尚、β-ガラクトシダーゼに対する阻害活性は、β-ガラクトシダーゼと基質が存在する溶液中に、本発明物質を添加し、酵素活性を本発明物質無添加の場合と比較することで、その阻害活性を算出することが可能である。
【００２０】
本発明物質は、ヒト由来のβ-ガラクトシダーゼの活性に対し、1μM未満の50%阻害濃度（IC50）を有していることが好ましく、特にIC50は0.5μM未満であることが好ましい。
【００２１】
本発明物質の調製は、既知物質であるDi-O-イソプロピリデン-β-バリエナミン（Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 6 (1996) 929-932：下記(５)）を用いて行うことができる（図１）。
【００２２】
【化６】
0004057264.tif 000006
【００２３】
例えば、di-O-イソプロピリデン-β-バリエナミンのアミノ基を一般式R1'-COClで表される酸クロリド等のアシル基の活性化体でアシル化して化合物２を得る。化合物２のアミド結合を水素化リチウムアルミニウムで還元して、化合物３とし、４位のヒドロキシル基をグルコース型配置からガラクトース型配置へ変換する反応の際に他の官能基への影響を防止するため、ヒドロキシル基およびアミノ基を適当な保護基で保護して化合物９とした後、４位のヒドロキシル基を酸化してケトン体（化合物１０）とし、カルボニル基の還元を行って、下記一般式６（式において-CH2-R1'はアシル基、アリール基以外である場合のR1に相当し、-CO-R2'はアシル基である-R2に相当する。以下「本発明物質１」という）を得ることができる。本発明物質１を脱保護することにより、下記一般式７（式において-CH2-R1'は一般式６におけるものと同様）で表される本発明物質２を得ることができ、また、本発明物質１のアミド結合を還元して、下記一般式８（式において-CH2-R1'は一般式６と同様、-CH2-R2'はアシル基、アリール基以外である場合のR2に相当する）で表される本発明物質３とした後、これを脱保護することによって、下記一般式９（式において-CH2-R1'及び-CH2-R2'は一般式８におけるものと同様）で表される本発明物質４を得ることができる（図１）。
【００２４】
【化７】
0004057264.tif 000007
【００２５】
【化８】
0004057264.tif 000008
【００２６】
【化９】
0004057264.tif 000009
【００２７】
【化１０】
0004057264.tif 000010
【００２８】
上記アシル化、水素化リチウムアルミニウムによる還元、保護基の変換、ヒドロキシル基の酸化、カルボニル基の還元、脱保護は当業者であれば容易に行うことができる。
【００２９】
具体的には、アシル化は一般式R1'-COClで表される酸クロリド等のアシル基の活性化体またはR1'-CO-O-CO-R1'で表される酸無水物のようなアシル化剤を原料のアミンとピリジン等の塩基性有機溶媒中で反応させることによって行う。反応溶媒としてピリジンの代わりに、ジクロロメタン等の非活性溶媒を使用し、トリエチルアミン等の塩基の存在下で反応を行ってもよい。反応温度は氷冷下から室温にて行うのが一般的であるが、必要に応じ60℃程度に加熱してもよい。反応時間は20分から20時間程度であるが、1〜2時間が好ましい。水素化リチウムアルミニウムによる還元は、通常テトラヒドロフラン等の無水有機溶媒中で行う。反応温度は氷冷下から室温が好ましいが、必要に応じて還流温度下で行う。反応時間は30分から24時間であるが、2時間程度が好ましい。
【００３０】
保護基としては、4位水酸基の酸化およびそれに引き続いたカルボニル基の還元に差し支えない保護基であればかまわないが、取り扱い易さおよび脱離のし易さの点から、TBDMS基、MOM基等を使用することができる。保護基の変換例を図１に従って説明する。化合物３をトリエチルアミンの存在下、di-tert-ブチルジカルボネートと反応させて、アミノ基をブトキシカルボニル基により保護してN-置換-N-tert-ブトキシカルボニル-1-デオキシ-2,3:4,6-di-O-イソプロピリデン- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物４）を得ることができる。化合物４は、2，3位、及び4，5位で環状構造を形成しているが、この環状構造を開裂したN-置換-N-tert-ブトキシカルボニル-1-デオキシ- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物５）は化合物４を含水酢酸などの弱酸により処理することによって得ることが可能である。
【００３１】
化合物５にα,α-ジメトキシトルエン及びp-トルエンスルホン酸・H2Oを作用させることで、ベンジリデン化されたN-置換- N-tert-ブトキシカルボニル-4,6-O-ベンジリデン- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物６）を得、化合物６の2位及び3位のヒドロキシル基を例えば1,2-クロロメチルエーテル及びN、N-ジイソプロピルエチルアミンと反応させることで保護基であるメトキシメチル（MOM）基を結合させてN-置換- N-tert-ブトキシカルボニル-4,6-O-ベンジリデン- 2,3-di-O-メトキシメチル- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物７）とした後、含水酢酸などの弱酸により4,5,6位のベンジリデン環を開裂してN-置換-N-tert-ブトキシカルボニル-2,3-di-O-メトキシメチル- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物８）を得ることができる。
【００３２】
化合物８とイミダゾール、tert-ブチルクロロジメチルシランとを反応させることで、6位ヒドロキシル基をtert-ブチルジメチルシリル化し、N-置換- N-tert-ブトキシカルボニル-2,3-di-O-メトキシメチル-6-O-tert-ブチルジメチルシリル-5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物９）を得ることができる。
【００３３】
更に化合物９の４位水酸基を、ピリジニウムクロロクロメート等の酸化剤で処理した後、tri-sec-ブチル水素化ホウ素等の還元剤で還元することにより4位ヒドロキシル基を反転させてガラクトタイプの立体構造を形成させたN-置換-N-tert-ブトキシカルボニル-2,3-di-O-メトキシメチル-6-O-tert-ブチルジメチルシリル-5a-カルバ-α-L-arabino-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（図１の本発明物質１または、図６の本発明物質１７：下記式１０）を得た後、塩酸などの強酸で処理することにより6位ヒドロキシル基の保護基であるtert-ブチルジメチルシリル基、及び1位アミノ基に結合した保護基であるブトキシカルボニル基を除去して最も好ましい本発明物質であるN-置換-5a-カルバ-α-L-arabino-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（図１の本発明物質２または、図６の本発明物質１８：下記式１１）を得ることができる。
【００３４】
【化１１】
0004057264.tif 000011
【００３５】
【化１２】
0004057264.tif 000012
【００３６】
また、特開平8-48658に記載されている化合物 1-アミノ-6-O-(t-ブチルジメチルシリル)-5a-カルバ-1-デオキシ-2,3-ジメトキシメチル-α-L-アラビノ-ヘキソ-5-エノピラノース（図２および図３に示した化合物１１）を原料として、アシル化して本発明物質５（下記一般式１２）を得、さらに水素化リチウムアルミニウムによる還元、脱保護を上記と同様に行うことにより、本発明物質２を得ることができる（図２）。また、本発明物質７を原料に、アシル化、水素化リチウムアルミニウムによる還元、脱保護を順次組み合わせて行うことにより、本発明物質８、本発明物質３を順に経由して本発明化合物４を得ることができる。
【００３７】
【化１３】
0004057264.tif 000013
【００３８】
また、本発明物質５を酸性条件下で脱保護することにより、アシル誘導体である本発明物質６（下記一般式１３）が得られ、同様に本発明物質８（アシル誘導体：下記一般式１４）を処理することにより、本発明物質９（下記一般式１５）が得られる。
【００３９】
【化１４】
0004057264.tif 000014
【００４０】
【化１５】
0004057264.tif 000015
【００４１】
【化１６】
0004057264.tif 000016
【００４２】
また、原料化合物（例えば化合物１１）のアミノ基を一般式R1'-COClで表される酸クロリドでアシル化する代わりに、一般式R1-Z（但し、ここでR1は一般式（１）のアルキル基と同様、Zはハロゲン原子又はメシルオキシル基、トシルオキシル基等の活性化基を示す）で表されるハロゲン化アルキル、または、メシルオキシル基、トシルオキシル基等の活性化基を有するアルキル誘導体と反応させてR1を導入して本発明物質１０（下記一般式１６）とした後、同様に脱保護して本発明物質１２（下記一般式１７）を得ることができる（図３）。
【００４３】
【化１７】
0004057264.tif 000017
【００４４】
【化１８】
0004057264.tif 000018
【００４５】
また、本発明物質１０に対し、再度R2（但し、ここでR2は一般式（１）のアルキル基と同様）の結合および脱保護を行って、本発明物質１３（ジアルキル体：下記一般式１８：但し、一般式１８、１９、２０及び２１においてR1、R2、及びR2'はアルキル基を示す）を得ることも可能である。また、本発明物質１０に対し、同様にアシル化を行った後（本発明物質１４：下記一般式１９）、水素化リチウムアルミニウムによる還元（本発明物質１５：下記一般式２０）、脱保護を行って本発明物質１６（下記一般式２１）を得ることもできる。
【００４６】
【化１９】
0004057264.tif 000019
【００４７】
【化２０】
0004057264.tif 000020
【００４８】
【化２１】
0004057264.tif 000021
【００４９】
【化２２】
0004057264.tif 000022
【００５０】
【実施例】
以下、本発明を実施例により具体的に説明する。
＜１＞本発明物質（N-オクチル置換体：上記一般式（４）中n=7）の合成
（１）N-オクチル-N-tert-ブトキシカルボニル-1-デオキシ-2,3:4,6-di-O-イソプロピリデン- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物１２）の合成
【００５１】
【化２３】
0004057264.tif 000023
【００５２】
式中：Bocはtert-ブトキシカルボニル基を示す。以下同様である。
Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 6 (1996) 929-932に記載された方法で調製したN-オクチル-2,3:4,6-Di-O-イソプロピリデン- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（644mg、1.75mmol）のジクロロメタン溶液（13ml）にトリエチルアミン（0.97mL,7.01mmol）とdi-tert-ブチルジカルボネート（0.81mL、3.50mmol）を添加し、1.5時間室温で攪拌した。トリエチルアミン（0.97mL、7.01mmol）、tert-ブチルジカルボネート（0.81mL、3.50mmol）を加えた後、更に１時間攪拌を継続した。反応混液を180mLの酢酸エチルで希釈した後、溶液を60mLの炭酸水素ナトリウム溶液、その後60mLの食塩水で2回洗浄し、その後乾燥して濃縮した。
【００５３】
粗精製物はシリカゲルクロマトグラフィー（50g、濃度勾配溶出、1:11→1:8 酢酸エチル/ヘキサン）で精製し、無色の油状物質として化合物１２を得た（807mg、収率99%）。
【００５４】
TLC：Rf＝0.49（1:5 酢酸エチル／トルエン）
[α]22D：−61°（c=0.90  クロロホルム）
IR（Neat）：υ(cm-1)＝2960（CH3）、2930及び2855（CH2）、1695（アミド）
1H NMR（300MHz、（CD3）2SO, 110℃）
δ=5.22（br s, 1H, H-5a）, 4.59 (br d, 1H, J4,3=9.3Hz, 4-H), 4.57(br d, 1H, J1,2=9.3Hz, 1-H), 4.40 and 4.13 (2d, each 1H, Jgem=13.7Hz, 6,6-H), 3.74 (dd, 1H, J2,3=9.3Hz, 2-H), 3.59 (dd, 1H, 3-H), 3.11 and 2.93 (2m, each 1H, NCH2), 1.54-1.18 (m, 12H, 6×CH2), 1.47, 1.37, 1.36 and 1.29 (4s, each 3H, 2×CMe2), 1.40 (s, 9H, t-Bu), 0.86 (t, 3H, J=6.6Hz, CH2CH3)
Anal. Calcd for C26H45NO6: C,66.78; H,9.70; N, 3.00.
Found: C66.57; H, 10.10; N, 3.11.
【００５５】
（２）N-オクチル-N-tert-ブトキシカルボニル-1-デオキシ- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物１３）の合成
【００５６】
【化２４】
0004057264.tif 000024
【００５７】
化合物１２（768mg、1.64mmol）と60%の酢酸溶液（16mL）を60℃で30分間攪拌し、濃縮した。残渣をエタノールで3回エバポレートした。粗精製物はシリカゲル（47g）によりカラムクロマトグラフィー（濃度勾配溶出法、1:10→1:4  エタノール／トルエン）により精製し（539mg、収率85%）、無色の油状物質として化合物１３を得た。
【００５８】
TLC：Rf＝0.54（1:5 メタノール／クロロホルム）
[α]20D：−87°（c=1.10  メタノール）
IR（KBr-Disk）：υ(cm-1)＝3445（OH）、2960（CH3）、2930及び2855（CH2）
1H NMR（270MHz、1:2  CD3OD/CDCl3）
δ=5.42（br s, 1H, H-5a）, 4.38-4.05 (m, 2H, H-1, H-4), 4.20 and 4.10 (2d, each 1H, Jgem=13.4Hz, 6,6-H), 3.72 (dd, 1H, J1,2=9.2Hz, J2,3=9.5Hz, 2-H), 3.31 (dd, 1H, J2,3=9.5Hz, J3,4=8.0Hz, 3-H), 3.26 (m, 1H, 1'a-H), 3.01 (m, 1H, 1'b-H), 1.73-1.18 (m, 12H, CH2×6: H-2'-H-7'), 1.47 (s, 9H, t-Bu: Boc), 0.89 (t, 3H, J=6.4Hz, CH2CH3)
【００５９】
（３）N-オクチル- N-tert-ブトキシカルボニル-4,6-O-ベンジリデン- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物１４）の合成
【００６０】
【化２５】
0004057264.tif 000025
【００６１】
化合物１３（242mg, 0.624mmol）のDMF溶液（6mL）にα,α-ジメトキシトルエン（112μL, 0.746mmol）、p-トルエンスルホン酸・H2O（12mg, 0.063mmol）を添加し、減圧条件下45℃で3.5時間攪拌した。更にα,α-ジメトキシトルエン（50μL, 0.333mmol）を添加し、更に2時間攪拌した。反応混液を60mLの酢酸エチルで希釈し、この溶液を20mLの水、次に20mLの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、更に20mLの水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後濃縮した。この濃縮物を薄層クロマトグラフィーで分析した結果、２種類の成分が検出された（Rf 0.33及び0.74:アセトン／トルエン、1:5； Rf 0.05及び0.70:酢酸エチル／トルエン、1:5）。
【００６２】
粗精製物をシリカゲルクロマトグラフィー（16g、濃度勾配溶出法、1:24→1:3酢酸エチル／トルエン）を行い、無色の油状物質である2,3:4,6-di-O-ベンジリデン化化合物（化合物１５：最初の溶出画分：159mg、収率45%）及び無色の油状物質である化合物１４を得た（化合物１７：164mg、収率55%）。
化合物１５を5mLのメタノールに溶解した後、0℃でp-トルエンスルホン酸一水和物（3mg、0.016mmol）を添加し、10分間攪拌した後、トリエチルアミンを滴下して中和し、濃縮した。粗精製物をシリカゲルクロマトグラフィー（7g、1:7アセトン／トルエン）で精製し、化合物１４を得た（110mg、化合物１６からの直接の反応生成物と合わせた収率82%）。
【００６３】
TLC：Rf＝0.33（1:5 アセトン／トルエン）
[α]22D：−57°（c=0.97  クロロホルム）
IR（neat）：υ(cm-1)＝3420（OH）、2960（CH3）、2925及び2855（CH2）、1695（アミド）
1H NMR（300MHz、(CD3)2SO、110℃）
δ=7.46-7.27（m, 5H, Ph）, 5.65 (s, 1H, CHPh), 5.31 (br s, 1H, 5a-H)、4.39(br s、2H、6,6-H), 4.36 (br d, 1H, J3,4=7.6Hz, 4-H), 4.16 (br s, 1H, 1-H), 3.64 (dd, 1H, J1,2= J2,3=9.3Hz, 2-H), 3.52 (dd, 1H, 3-H), 3.25-2.80 (m, 2H, NCH2), 1.57-1.17 (m, 12H, 6×CH2), 1.39 (s, 9H, CMe3), 0.87 (t, 3H, J=6.2Hz, CH2CH3).
元素分析
計算値 C27H41NO6・0.5H2O: C,66.92; H,8.73; N, 2.89.
実測値: C, 66.94; H, 8.85; N, 2.91.
【００６４】
（４）N-オクチル- N-tert-ブトキシカルボニル-4,6-O-ベンジリデン- 2,3-di-O-メトキシメチル- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物１６）の合成
【００６５】
【化２６】
0004057264.tif 000026
【００６６】
化合物１４（269mg、0.566mmol）の1,2-ジクロロエタン溶液（7mL）にクロロメチルエーテル（0.43mL、5.66mmol）及びN,N-ジイソプロピルエチルアミン（1.97mL、11.31mmol）を添加し、60℃で3時間攪拌した。反応混液を60mLのクロロホルムで希釈し、30mLの1N塩酸、30mLの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、30mLの水で順に洗浄し、濃縮した。粗精製物をシリカゲルクロマトグラフィー（20g、濃度勾配溶出、1:14→1:9  酢酸エチル／トルエン）を行い、化合物１６を無色油状物質として得た（315mg、収率99%）。
【００６７】
TLC：Rf＝0.44（1:5 酢酸エチル／トルエン）
[α]21D：−126°（c=1.10  クロロホルム）
IR（neat）：υ(cm-1)＝2960（CH3）、2925及び2855（CH2）、1695（アミド）
1H NMR（300MHz、(CD3)2SO、110℃）
δ=7.45-7.28（m, 5H, Ph）, 5.70 (s, 1H, CHPh), 5.38 (br s, 1H, 5a-H)、4.79 and 4.77(2d, each 1H, Jgem=6.1Hz)and 4.75 and 4.63 (2d, each 1H, Jgem=6.3Hz)（2×OCH2）, 4.57 (br d, 1H, J3,4=7.7Hz, 4-H), 4.43 (br s, 2H, 6,6-H), 4.27 (br s, 1H, 1-H), 3.99 (dd, 1H, J1,2=9.3Hz, J2,3=10.0Hz, 2-H), 3.78 (dd, 1H, 3-H), 3.28-3.27 (2s, each 3H, 2×OMe), 3.07-2.87 (m, 2H, NCH2), 1.62-1.20 (m, 12H, 6×CH2), 1.39 (s, 9H, t-Bu), 0.87 (t, 3H, J=6.5Hz, CH2CH3)
元素分析
計算値 C31H49NO8: C,66.05; H,8.76; N, 2.48.
実測値: C, 65.80; H, 8.99; N, 2.42.
【００６８】
（５）N-オクチル-N-tert-ブトキシカルボニル-2,3-di-O-メトキシメチル- 5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物１７）の合成
【００６９】
【化２７】
0004057264.tif 000027
【００７０】
化合物１６（315mg、0.559mmol）の60%酢酸水溶液（8mL）を60℃で2時間攪拌して濃縮した。残渣をエタノールを用いて3回エバポレートした後、トルエンを用いて3回エバポレートした。化合物１７の粗精製物をシリカゲルクロマトグラフィー（20g、濃度勾配溶出、1:6→1:5  アセトン／トルエン）で無色の油状物質として化合物１７を得た（216mg、収率83%）。
【００７１】
TLC：Rf＝0.13（1:5 アセトン／トルエン）
[α]20D：−141°（c=1.11  クロロホルム）
IR（neat）：υ(cm-1)＝3440（OH）、2955（CH3）、2925及び2855（CH2）、1695（アミド）
1H NMR（300MHz、(CD3)2SO、110℃）
δ=5.32 (br s, 1H, H-5a)、4.83 and 4.76(2d, each 1H, Jgem=5.6Hz, CH2:MOM), 4.73 and 4.61 (2d, each 1H, Jgem=5.9Hz, CH2:MOM), 4.23 (br s, 1H, 1-H), 4.10 (br s, 1H, 4-H), 3.99 (br s, 2H, 6,6-H), 3.84 (dd, 1H, J1,2=8.8Hz, J2,3=9.5Hz, 2-H), 3.52 (dd, 1H, J2,3=9.5Hz, J3,4=7.8Hz, 3-H), 3.36 and 3.26 (2s, each 3H, 2×CH3: MOM), 3.26-2.83 (m, 2H, H-1'a, 1'b-H), 1.63-1.17 (m, 12H, CH2×6: H-2'-H-7'), 1.38 (s, 9H, t-Bu: BOC), 0.86 (t, 3H, J=6.1Hz, CH2CH3)
【００７２】
（６）N-オクチル- N-tert-ブトキシカルボニル-2,3-di-O-メトキシメチル-6-O-tert-ブチルジメチルシリル-5a-カルバ-β-D-xylo-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（化合物１８）の合成
【００７３】
【化２８】
0004057264.tif 000028
【００７４】
化合物１７（159mg、0.334mmol）のN,N'-ジメチルホルムアミド（以下「DMF」と記載する）溶液（5mL）にイミダゾール（91mg、1.34mmol）及びtert-ブチルクロロジメチルシラン（100mg、0.670mmol）を添加し、室温で１時間攪拌した。反応混液を60mLの酢酸エチルで希釈し、20mLの水で３回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥、ろ過後、濃縮した。化合物１８の粗精製物は、シリカゲルクロマトグラフィーグラフィー（20g、1:6  酢酸エチル／トルエン）により無色の油状物質として化合物１８が得られた（194mg、収率98%）。
【００７５】
TLC：Rf＝0.24（1:5 酢酸エチル／トルエン）
[α]23D：−101°（c=0.95  クロロホルム）
IR（neat）：υ(cm-1)＝3445（OH）、2955（CH3）、2925及び2855（CH2）、1695（アミド）
1H NMR（300MHz、(CD3)2SO、110℃）
δ=5.36 (br s, 1H, 5a-H)、4.83 and 4.76(2d, each 1H, Jgem=6.1Hz)and 4.73 and 4.60 (2d, each 1H, Jgem=6.3Hz)（2×OCH2）, 4.21 and 4.11(ABq, Jgem=13.9Hz, 6,6-H), 4.12-4.04 (m, 2H, 1-H, 4-H), 3.87 (dd, 1H, J1,2=9.3Hz, J2,3=9.9Hz, 2-H), 3.53 (dd, 1H, J3,4=7.9Hz, 3-H), 3.35 and 3.26 (2s, each 3H, 2×OCH3), 3.05-2.88 (m, 2H, NCH2), 1.60-1.20 (m, 12H, 6×CH2), 1.38 (s, 9H, OCMe3), 0.89 (s, 9H, CCMe3), 0.86 (t, 3H, J=6.8Hz, CH2CH3), 0.05 (s, 6H, SiMe2).
元素分析
計算値 C30H59NO8Si: C,61.08; H,10.08; N, 2.37.
実測値: C, 60.82; H, 10.38; N, 2.45.
【００７６】
（７）N-オクチル- N-tert-ブトキシカルボニル-2,3-di-O-メトキシメチル-6-O-tert-ブチルジメチルシリル-5a-カルバ-α-L-arabino-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（本発明物質１７）の合成
【００７７】
【化２９】
0004057264.tif 000029
【００７８】
化合物１８（75mg、0.127mmol）のジクロロメタン溶液（2mL）に粉末状の4Åモレキュラーシーブ（75mg）とピリジニウムクロロクロメート（41mg、0.190mmol）を加え、室温で1時間攪拌した。ピリジニウムクロロクロメート（41mg、0.190mmol）を更に加え、1時間更に攪拌した。セライトフィルターを通した後、短いシリカゲルカラムに通した（溶出液：ジエチルエーテル）。溶出液をエバポレートし、粗精製のケトンを得た後、ケトン体をテトラヒドロフラン（以下「THF」と記載する）（0.7mL）に溶解し、1Mリチウム-tri-sec-ブチル水素化ホウ素／THF溶液（0.51mL、0.51mmol）で、アルゴン雰囲気下-78℃で30分間処理した。反応混液を0℃まで暖め、飽和塩化アンモニウムにより反応を停止した。この反応混液に硫酸マグネシウムを添加した後、セライトろ過した。溶出液をエバポレートし、シリカゲルクロマトグラフィー（7g、濃度勾配溶出、1:9→1:6  酢酸エチル／トルエン）により無色の油状物質として本発明物質１７を得た（49.1mg、収率66%）。
【００７９】
TLC：Rf＝0.16（1:5 酢酸エチル／トルエン）
[α]23D：−68°（c=1.13  クロロホルム）
IR（neat）：υ(cm-1)＝3460（OH）、2955（CH3）、2930及び2855（CH2）、1695（アミド）
1H NMR（300MHz、(CD3)2SO、110℃）
δ=5.36 (br s, 1H, 5a-H)、4.71 and 4.59(2d, each 1H, Jgem=5.6Hz,)and 4.75-4.66 (m, 2H)（2×OCH2）, 4.38 (br s, 1H, 1-H), 4.19 and 4.12 (2d, each 1H, Jgem=13.2Hz, 6,6-H), 4.13-4.02 (m, 2H, 2-H, 4-H), 3.46 (dd, 1H, J2,3=10.3Hz, J3,4=2.0Hz, 3-H), 3.33 and 3.25 (2s, each 3H, 2×OM2), 3.10-2.86 (m, 2H, 1',1'-H), 1.62-1.16 (m, 12H, 6×CH2), 1.39 (s, 9H, CCMe3), 0.89 (s, 9H, SiCMe3), 0.86 (t, 3H, J=7.3Hz, CH2CH3), 0.05 (s, 6H, SiMe2).
元素分析
計算値 C30H59NO8Si: C,61.08; H,10.08; N, 2.37.
実測値: C, 60.80; H, 10.37; N, 2.53.
【００８０】
（８）N-オクチル-5a-カルバ-α-L-arabino-ヘキソ-5(5a)-エノピラノシルアミン（一般式（１）（R1=オクチル基、R2、R3、R4、R5=ヒドロキシル基）の本発明物質１８）の合成
【００８１】
【化３０】
0004057264.tif 000030
【００８２】
THF（0.5mL）に溶解した本発明物質１７（29mg、0.049mmol）に4Nの塩酸（1.5mL）を添加し、65℃で1.5時間攪拌し、濃縮した。残渣をエタノールで3回エバポレートした。生成物をイオン交換カラム（Dowex 50-X2(H+)）により精製した。溶出には1%メタノール性アンモニウムを用い、本発明物質１８を白色固体として得た（12.8mg、収率91%）。
【００８３】
融点：126〜128℃
TLC：Rf＝0.76（35:60:5メタノール／クロロホルム／水）
[α]23D：＋16°（c=0.64  メタノール）
IR（KBr-Disk）：υ(cm-1)＝3485（OH）、3250（アミン）、2960（CH3）、2925及び2855（CH2）
1H NMR（300MHz、1:2 CD3OD／CHCl3）
δ=5.73 (d, 1H, J1,5a =1.8Hz、5a-H)、4.16 (d, 1H, J3,4=4.2Hz, 4-H), 4.16 (br s, 2H, 6,6-H), 3.64 (dd, 1H, J1,2=8.1Hz, J2,3=10.0Hz, 2-H), 3.48 (dd, 1H, 3-H), 3.12 (dd, 1H, 1-H), 2.78(ddd, 1H, J1'a,2'=7.4Hz, Jgem=11.2Hz)and 2.57 (ddd, 1H)（NCH2）, 1.64-1.21(m, 12H, 6×CH2), 0.89 (t, 3H, J=6.7Hz, CH2CH3).
元素分析
計算値 C15H29NO4: C,62.69; H,10.17; N, 4.87.
実測値: C, 62.67; H, 10.47; N, 5.01.
【００８４】
＜２＞ガラクトシダーゼ阻害活性の測定
ヒト正常β-ガラクトシダーゼ(GP8)cDNA（Biochem． Biophys. Res. Commun., 157(1), 238-244, 1988）を導入し、SV40ウイルス遺伝子で不死化したノックアウトマウス皮膚線維芽細胞を37℃、5％CO2、10% 牛胎児血清（以下「FCS」と記載する）を含むダルベッコ改変イーグル培地（以下「DMEM」と記載する：ギブコ社製）で培養し、8割コンフルエントになった状態で10mM のNH4Clを含む FCS非添加DMEMに培地交換した。24時間培養した後、培養上清を回収し、10mM リン酸緩衝液(pH=6.5)で4時間透析した。その後、VIVAPORE-20（Vivapore社製）で濃縮し、酵素源として使用した。蛍光基質として4-メチルウンベリフェリル-β-D-ガラクトピラノシドを使用し、被検物質の存在下及び非存在下で、30分間の酵素活性を測定した（表１）。本発明物質１８の最終濃度は、0.05、0.125、0.25、0.5、1、2.5、5μMとした。
【００８５】
【表１】
表１
0004057264.tif 000031
【００８６】
【発明の効果】
本発明によりβ-ガラクトシダーゼ阻害活性を有する新規な擬似糖が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明物質１〜４の一般的な合成スキームを示す図である。
【図２】本発明物質２〜９の一般的な合成スキームを示す図である。
【図３】本発明物質１０〜１６の一般的な合成スキームを示す図である。
【図４】本発明物質１８の合成中間体である化合物１４の合成スキームを示す図である。
【図５】本発明物質１８の合成中間体である化合物１８を化合物１４から合成するスキームを示す図である。
【図６】化合物１８から本発明物質１７及び１８を合成するスキームを示す図である。
【図１】
0004057264.tif 000033
【図２】
0004057264.tif 000034
【図３】
0004057264.tif 000035
【図４】
0004057264.tif 000036
【図５】
0004057264.tif 000037
【図６】
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