(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＢ群の１種以上およびビタミンＥを有効成分とし、
ビタミンＢ１、Ｂ６、Ｂ１２及び葉酸を含み、
前記ビタミンＢ１２がメチルコバラミンである、
神経障害予防治療剤。
【請求項２】
メチルコバラミン、ビタミンＢ１、Ｂ６、Eおよび葉酸を含む、神経障害予防治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、神経障害予防治療用の医薬に関する。さらに詳しくは、ビタミン類複合剤による末梢神経障害予防治療用の医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
末梢神経障害は虚血、薬物中毒、外傷、ウイルス感染、栄養障害、遺伝、糖尿病、腫瘍、アレルギー、アルコールの多飲等、様々な原因から引き起こされることが知られている。障害の発生部位も局所的なものから、多発性のもの、全身性のものがある。その結果としておきる症状も、神経障害の発生部位によって、全身麻痺、筋肉萎縮、筋力低下、しびれ、疼痛、浮腫、難聴、視力低下、呼吸困難、皮膚潰瘍等多岐多様に渡っている。
【０００３】
上記の様な末梢神経障害に対しては、ビタミンＢ１２の投与が有効であることが報告されている（診療と新薬，２２，２１９−２２３頁，１９８５年）。また、特開平２−２２２２９号公報には、神経細胞及び神経線維の疾患及び予防に用いるイチョウ抽出物および、葉酸もしくはその誘導体、α−リポ酸、ビタミンＢグループもしくはその誘導体のうち少なくとも１つを含有する組み合わせ調合剤が報告されている。特開平５−２９４９６８号公報および特開平７−１８０８４号公報には、葉酸誘導体が癌治療、特定の貧血、自動免疫疾患、神経障害の治療に使用できることが開示されている。特開平１０−２１８７７５号公報には、大量のメチルコバラミン投与が筋萎縮性側索硬化症の治療に有効であることが記載されている。
さらに、しびれや痛みを示した末梢神経障害患者に、ビタミンＢ１２とビタミンＥを併せて投与することによって、ビタミンＢ１２単独のときよりも、神経障害の改善度が高くなり、これはビタミンＥの末梢循環促進作用に基づくものであると報告されている（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｋ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊｐｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，Ｖｏｌ．１３，３０６１−３０８４，１９８５）。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
葉酸は抗貧血因子として古くから知られている必須ビタミン類であり、プリン、ピリミジンの代謝、グリシン、セリン、ヒスチジン等の代謝に関与している。特開２００１−２３８６４０号公報には、貧血の改善に有効な葉酸及び／又はビタミンＢ１２をラクトフェリン類に保持させた複合物が記載されているが、神経修復作用については、何ら記載されていない。
そこで、本発明の目的は、従来知られているものよりも、さらに有効性の高い神経修復剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記事情に鑑みて鋭意研究を行った結果、特定のビタミン類を組み合わせた医薬が、従来知られている例えばビタミンＢ１２や葉酸単独の神経修復剤よりも高い効果があることを見出し、本発明を完成させた。
【０００６】
すなわち、本発明はビタミンＢ群の１種以上およびビタミンＥを有効成分とする神経障害予防治療剤である。また、本発明はさらに葉酸を含む上記神経障害予防治療剤である。さらに本発明は、上記ビタミンＢがＢ１、Ｂ２、Ｂ６およびＢ１２からなる群から選ばれる１種以上である神経障害予防治療剤である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明において，神経障害は器質的な障害または機能的な障害を意味する。すなわち、ニューロパチーや事故等による神経組織の損傷、腫瘍等の物理的圧迫による機能障害、ストレス等によって誘発される自律神経の失調、およびこれらに起因する痛み、しびれ、こり、倦怠感、筋力低下、眼精疲労、頭痛等の諸症状を意味する。
本発明に係る組成物は、食品、飲料、飼料、医薬品、医薬部外品、またはこれらの添加物として使用できる。
本発明に係る組成物の剤型は、錠剤、細粒剤、顆粒剤、粉剤、カプセル剤、カプレット、口腔内溶解型錠剤、注射剤、内服用液剤等であり、好ましくは錠剤またはカプセル剤である。
【０００８】
本発明においてビタミンＢ群には誘導体も含まれる。例えばビタミンＢ１（チアミン、フルスルチアミン等）、ビタミンＢ２（リボフラビン、リン酸リボフラビン、リボフラビンモノヌクレオチド等）、ビタミンＢ３（ナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシン、ピリドキサール、ピリドキサミン等）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン、メチルコバラミン、ヒドロキソコバラミン、アデノシルコバラミン）等である。好ましくはビタミンＢ１、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２である。
【０００９】
ビタミンＢ群の１日当たりの投与量は、経口投与する場合には、ビタミンＢ１およびＢ６では、通常０．０５〜２５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１２５ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｋｇである。また、ビタミンＢ１２では、通常０．１〜５０００μｇ／ｋｇ、好ましくは１〜５００μｇ／ｋｇ、さらに好ましくは１５〜４５μｇ／ｋｇである。
【００１０】
本発明においてビタミンＥとは、トコフェロール類およびトコトリエノール類を意味し、これらの塩および誘導体も含まれる。例えば、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、α−酢酸トコフェロール、α−コハク酸トコフェロール、コハク酸トコフェロールカルシウム、α−ニコチン酸トコフェロール、α−トコトリエノール、γ−トコトリエノール等を意味する。好ましくは酢酸ｄ−α−トコフェロールである。
【００１１】
ビタミンＥの１日当たりの投与量は特に限定されないが、通常０．０５〜２５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．１〜１２５ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは０．５〜５ｍｇ／ｋｇである。
【００１２】
本発明において葉酸には、プテロイルモノグルタメートまたは活性体、これらの塩、誘導体も含まれる。例えばジヒドロ葉酸、テトラヒドロ葉酸、５−メチルテトラヒドロ葉酸、５，１０−メチレンテトラヒドロ葉酸、１０−ホルミルテトラヒドロ葉酸等である。
【００１３】
葉酸の１日当たりの投与量は特に限定されないが、通常０．５〜６２．５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは１〜１００ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは２．５〜１０ｍｇ／ｋｇである。
【００１４】
本発明に係る液剤組成物の製剤化には、通常用いられる種々の添加剤を配合することができる。添加剤としては例えば、安定化剤、界面活性剤、可溶化剤、緩衝剤、甘味剤、矯味剤、懸濁化剤、抗酸化剤、清涼化剤、着香剤・香料、乳化剤、ｐＨ調整剤、分散剤、芳香剤、防腐剤、保存剤等が挙げられる。
【００１５】
安定化剤としては、例えばアジピン酸、アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、Ｌ−アルギニン、安息香酸ナトリウム、イノシトール、エデト酸ナトリウム、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、グリシン、グリセリン、グリセリン脂肪酸エステル、軽質無水ケイ酸、酢酸トコフェロール、ゼラチン、大豆油不けん化物、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、無水クエン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセリン、リン酸水素ナトリウム等が挙げられる。
【００１６】
界面活性剤としては、コレステロール、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、セスキオレイン酸ソルビタン、セタノール、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリソルベート、マクロゴール、モノオレイン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリン、モノラウリン酸ソルビタン、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロマクロゴール等が挙げられる。
【００１７】
可溶化剤としては、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−アルギニン、安息香酸ナトリウム、エタノール、塩化ナトリウムソルビタン脂肪酸エステル、炭酸水素ナトリウム、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリソルベート、ポリビニルアルコール、Ｄ−マンニトール、無水エタノール等を例示することができる。
【００１８】
緩衝剤としては、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸マグネシウム、アミノエチルスルホン酸、Ｌ−アルギニン、安息香酸、安息香酸ナトリウム、クエン酸、クエン酸カルシウム、クエン酸ナトリウム、クエン酸二ナトリウム、グリシン、炭酸水素ナトリウム、乳酸、ブドウ糖、無水クエン酸、無水クエン酸ナトリウム、無水リン酸一水素ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム等を使用することができる。
【００１９】
甘味剤としては、アスパルテーム、アマチャ、カンゾウ、果糖、果糖ブドウ糖液、ブドウ糖果糖液糖、還元麦芽糖水アメ、グリチルリチン酸二カリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、高果糖液糖、ブドウ糖、水アメ、乳糖、白糖、精製白糖、ハチミツ、サッカリン、サッカリンナトリウム、ステビア、スクラロース、エリスリトール、キシリトール、Ｄ−ソルビトール、マルチトール、マルトース、Ｄ−マンニトール、単シロップ等を挙げることができる。
【００２０】
矯味剤としては、アスコルビン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ＤＬ−アラニン、５′−イノシン酸二ナトリウム、ウイキョウ、塩化ナトリウム、オレンジ油、カカオ末、カンフル、グリシン、グリセリン、Ｌ−グルタミン酸、サフラン、酒石酸、ショウキョウ、Ｄ−ソルビトール、ハッカ、アジピン酸、フマル酸、ペパーミント、ボルネオール、メントール、リュウノウ、緑茶末、リンゴ果汁、リンゴ酢、レモン油、ローズ油、ローヤルゼリー等を使用することができる。
【００２１】
懸濁化剤としては、例えばアラビアゴム、カラギーナン、カルボキシビニルポリマー、カンテン、キサンタンガム、グリセリン脂肪酸エステル、酸化チタン、ショ糖脂肪酸エステル、ステリアルアルコール、ステアリン酸アルミニウム、セタノール、精製ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、大豆レシチン、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ペクチン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール、メチルセルロース、モノステアリン酸グリセリン、流動パラフィン等を挙げることができる。
【００２２】
抗酸化剤としては、アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸ステアリン酸エステル、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、エリソルビン酸、塩酸システイン、酢酸トコフェロール、大豆レシチン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル等を例示することができる。
【００２３】
清涼化剤としては、ゲラニオール、ハッカ水、ハッカ油、ボルネオール、メントール、ミント等が挙げられる。
【００２４】
着香剤・香料としては、ウイキョウ、エチルバニリン、エチルマルトール、オレンジ、カンフル、ケイヒ、シュガーフレーバー、シンナムアルデヒド、チェリーフレーバー、トウヒチンキ、ハッカ、バニラフレーバー、バニリン、ビターエッセンス、フルーツフレーバー、フレーバーＧＩ、ベルモットフレーバー、ミックスフレーバー、ミントフレーバー、メントール、ユーカリ油、リュウノウ、レモンパウダー、レモン油、ロジン、ローズ油等を例示することができる。
【００２５】
乳化剤としては、カラギーナン、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グァーガム、グリセリン脂肪酸エステル、ジステアリン酸ポリエチレングリコール、ショ糖脂肪酸エステル、ステアリルアルコール、ステアリン酸、セタノール、ゼラチン、ソルビタン脂肪酸エステル、大豆レシチン、ヒドロキシプロピルセルロース、プロピレングリコール、プロピレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリソルベート、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリン、モノラウリン酸ソルビタン、ラウリル硫酸ナトリウム等が挙げられる。
【００２６】
ｐＨ調整剤としては、希塩酸、クエン酸ナトリウム、グリシン、コハク酸、酢酸、酒石酸、水酸化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、フマル酸一ナトリウム、リン酸、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸二カリウム、リン酸二水素ナトリウム等が挙げられる。
【００２７】
分散剤としては、アミノアルキルメタクリレートポリマーＲＳ、アラビアゴム、オレイン酸、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、グリセリン、結晶セルロース、コリンリン酸塩、レシチン、セスキオレイン酸ソルビタン、デキストリン、トウモロコシデンプン、トリオレイン酸ソルビタン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、モノステアリン酸グリセリン、ラウリル硫酸ナトリウム、流動パラフィン等を使用することができる。
【００２８】
芳香剤としては、ウイキョウ、エチルバニリン、オレンジ油、カンフル、ケイヒ、ショウキョウ、ジンコウ、チョウジ、ハッカ、バニラ、バニリン、ボルネオール、マルトール、メントール、ユーカリ、リュウノウ、レモン、ローズ水等を挙げることができる。
【００２９】
防腐剤としては、アミノエチルスルホン酸、安息香酸、安息香酸ナトリウム、エタノール、エデト酸ナトリウム、カンテン、クエン酸ナトリウム、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸イソプロピル、パラオキシ安息香酸エチル、メントール等が挙げられる。
【００３０】
保存剤としては、安息香酸ナトリウム、エタノール、エデト酸ナトリウム、グリセリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、Ｄ−ソルビトール、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸イソブチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸メチル、プロピレングリコール等を挙げることができる。
【００３１】
【実施例】
以下に、実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【００３２】
実施例１
各群１０例の雄ラット（Ｃｒｊ：Ｗｉｓｔａｒ）を使って神経障害モデルを作成し、本発明の医薬組成物を投与して、その効果を調べた。
各ラットをペントバルビタールナトリウムで麻酔し、右側後肢の坐骨神経を露出させ、コッヘルで５秒間圧挫して神経障害モデルを作成した。
その後、６または８週間連続で、ビタミンＢ１（ＶＢ１）、ビタミンＢ６（ＶＢ６）、ビタミンＢ１２（ＶＢ１２）、ビタミンＥ（ＶＥ）、葉酸（ＦＡ）を１日１回、強制経口投与した（投与薬剤および投与量：表１）。対照群には媒体を投与した。
なお、飼料は低葉酸のもの（１２μｇ／１００ｇ）を使用し、さらに腸内細菌の影響を無くするために、スルファサクジン２５０ｍｇ／ｈｅａｄを毎日経口投与した。
【００３３】
0004091860.tif 000002
Ａ：ＶＢ１  ２ｍｇ／ｋｇ、ＶＢ６  ２ｍｇ／ｋｇ、ＶＢ１２  ０．０３ｍｇ／ｋｇ
およびＶＥ  ２ｍｇ／ｋｇの混合液（媒体；Ｔｗｅｅｎ８０）
Ｂ：葉酸０．０２ｍｇ／ｋｇ（媒体注射用水）
Ｃ：葉酸０．１ｍｇ／ｋｇ（媒体注射用水）
ＶＢ１  塩酸フルスルチアミン
ＶＢ６  塩酸ピリドキシン
ＶＢ１２メチルコバラミン
ＶＥ  酢酸ｄ−α−トコフェロール
【００３４】
投与開始６および８週後に、各群各１０例のラットをエーテル麻酔下で放血致死させ、坐骨神経を採取し、常法に従って病理組織学的検査用のプレパラートを作成した。
そして画像解析装置（ＭａｃＳＣＯＰＥ：商品名、Ｍｉｔａｎｉ  ｃｏ．ｌｔｄ．製）を使用して、各個体ごとに５００本の神経線維について有髄神経の短径を測定した。
【００３５】
図１は、６週後の、図２は、８週後の神経線維径の分布である。
ＶＢ１  ２ｍｇ／ｋｇ、ＶＢ６  ２ｍｇ／ｋｇ、ＶＢ１２  ０．０３ｍｇ／ｋｇ、ＶＥ  ２ｍｇ／ｋｇを投与した第１群では、投与６週後には、径４．５μｍ以上の神経線維の割合が、また、８週後には、４．０μｍ以上の神経線維の割合が対照群より増加した。
したがって、ビタミンＢ群とビタミンＥを投与することによって、末梢神経の修復作用が促進されることが明らかになった。
葉酸０．０２ｍｇ／ｋｇをさらに投与した第２群では、投与６週後と８週後共に４．５μｍ以上の大きい神経線維の割合が第１群よりもさらに増加していた。
また、葉酸０．１ｍｇ／ｋｇを投与した第３群では、投与６週後に、３．５μｍ以上の大きい神経線維の割合が、８週後に４．０μｍ以上の割合が第２群よりもさらに増加していた。
このように、第１群よりも第２群および第３群の方が有効性が高かったことから、ビタミンＢ群、Ｅにさらに葉酸を配合することによって相乗的な効果が得られることが明らかとなった。また、葉酸の配合量と末梢神経の回復促進効果の間には、明らかなＤｏｓｅ−Ｒｅｓｐｏｎｓｅがあることが認められた。
【００３６】
実施例２
整形外科的領域の神経疾患を持つ患者に本発明の医薬組成物を投与してその効果を調べた。
筋肉痛、関節痛（肩こり、腰痛、肩関節周囲炎、頚肩腕症候群など）、手足のしびれ、神経痛，肩や首筋のこりを有する患者５０人に対し、表２の成分を有する治療剤を一日３回に別け、食後に経口投与し、４週継続後、有効性について検討した。
0004091860.tif 000003
ＶＢ１２  メチルコバラミン
ＶＥ    酢酸ｄ−α−トコフェロール
ＶＢ１  塩酸フルスルチアミン
ＶＢ６  塩酸ピリドキシン
ＦＡ    葉酸
【００３７】
自覚症状別改善度は次のとおりである。
自発腰痛          ５３．３％（８／１５）
運動後の腰痛      ５０．０％（７／１４）
しびれ（上肢）    ６９．２％（９／１３）
こり（頚部）      ５４．５％（６／１１）
こり（腰部、背部）８０．０％（４／５）
筋肉痛            ６２．５％（５／８）
脱力感            ６６．７％（４／６）
疲労倦怠感        ８０．０％（８／１０）
冷感              ６０．０％（３／５）
熱感              ６６．７％（２／３）
【００３８】
他覚症状所見別の改善度は次のとおりである。
異常知覚（上肢）    ６２．５％（５／８）
知覚鈍麻（下肢）    ５０．０％（２／４）
脊柱運動制限        ４０．０％（２／５）
異常知覚（下肢）    ３７．５％（３／８）
【００３９】
全般改善度は次のとおりである。
改善度        ％（例数）
著明改善      ２０．５（９）
改善          ２０．５（９）
軽度改善      ３１．８（１４）
不変          ２７．３（１２）
悪化            ０．０（０）
合計                  （４４）
有効性評価例での「軽度改善度」以上の改善率は７２．７％（３２／４４）であった。
以上の成績から、本発明に係る医薬組成物は、筋肉痛（肩こり、腰痛症、五十肩など）、手足のしびれ、肩や首筋のこりなどの諸症状に対して有効であることが明らかになった。
【００４０】
実施例３
眼精疲労の患者４５人に対し、表２の成分を有する治療剤を１日３回に別け、食後に経口投与し、２週継続後と、４週継続後に、その有効性を評価した。
【００４１】
自覚症状別改善度は投与４週後で次のとおりである。
目が疲れる                      ６４．１％（２５／３９）
目が痛い                        ７９．２％（１９／２４）
上記以外の眼症状                ８０．０％（２０／２５）
（涙が出る、まぶしい、まぶたがぴくぴくする）
頭が痛い、重い                  ６３．０％（１７／２７）
筋症状                          ７８．４％（２９／３７）
（腰が痛い、肩がこる、首が痛い）
視機能                          ６４．３％（１８／２８）
（物が二重に見える、目の前がちらちらする、
物がはっきり見えない、ぼやけて見える）
疲労感                          ６３．６％（２１／３３）
（全身倦怠感、あくびがでる・ねむい、根気がなくなる）
主評価項目である自覚症状総合改善度は、投与２週後の判定では７６．７％（３３／４３）であった。投与４週後の判定では９０．５％（３８／４２）のであった。
【００４２】
全般改善度は次のとおりである。
改善度      ％（例数）
著名改善    １４．０（６）
改善        ４６．５（２０）
軽度改善    ３０．２（１３）
不変        ２．３（１）
軽度悪化    ７．０（３）
判定不能    ０．０（０）
評価例数          （４３）
有効性評価例での「軽度改善」以上の改善率は９０．７％（３９）であった。
【００４３】
以上の成績から、本発明に係る医薬組成物は、眼精疲労の治療薬として有効であることが明らかとなった。
【００４４】
実施例４
各群４例の雄ラット（ＳＤ、日本チャールスリバー）を使用して、異所性神経発火モデル（薬剤の鎮痛作用の検討モデル）を作製し、本発明に係る医薬組成物の効果を検討した。
各ラットをハロセンで麻酔し、左後肢を切開して、伏在神経を露出させた。伏在神経を約５ｍｍ切除し、術創を縫合した。その１週間後にラットをウレタン／α−クロラースで麻酔し、右頸静脈に薬物投与用のカテーテルを挿入した。さらに、切除した伏在神経の近位端を露出させて、白金製フック電極をかけ、メモリーオシロスコープを使用して神経発火を記録した。発火が安定したことを確認し、初期値として１０秒間の発火を記録した。
その後、カテーテルからビタミンＢ１（ＶＢ１）、ビタミンＢ６（ＶＢ６）、ビタミンＢ１２（ＶＢ１２）、ビタミンＥ（ＶＥ）、葉酸（ＦＡ）を投与して、神経発火を記録して初期値と比較した（投与薬剤および投与量：表３）。
その結果、ビタミンＢ１２を単独投与した第１群では効果は見られなかったが、ビタミンＢ１、Ｂ６、Ｂ１２およびビタミンＥを投与した第２群、ビタミンＢ１、Ｂ６、Ｂ１２および葉酸を投与した弟３群では、神経発火がそれぞれ初期値の６７％、７９％と低下した。また、ビタミンＢ１、Ｂ６、Ｂ１２、ビタミンＥおよび葉酸の５剤を投与した第４群では３１％にまで低下し、本発明に係る医薬組成物が大きな効果を発揮することが明らかになった。
【００４５】
0004091860.tif 000004
Ａ：ＶＢ１２（メチルコバラミン）  ０．６ｍｇ／ｋｇ
Ｂ：ＶＢ１（塩酸チアミン）２０ｍｇ／ｋｇ、ＶＢ６（塩酸ピリドキシン）２０ｍｇ／ｋｇ
Ｃ：ＶＥ（酢酸トコフェロール）  ２０ｍｇ／ｋｇ
Ｄ：ＦＡ（葉酸）６ｍｇ／ｋｇ
【００４６】
実施例５
ＰＣ１２細胞を用いて、ロテノン添加による細胞障害に対する、本発明に係る医薬組成物の保護効果を検討した。
ＰＣ１２細胞の培養には１０％ＦＣＳ、１０％ＨＳ含有ＤＭＥＭ培地を用いた。ＰＣ１２細胞を２４孔コラーゲンコート培養プレート（Ｆａｌｋｏｎ社製）に播種（１．３×１０５／孔）し、ＣＯ２インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ２）中で３日間、コンフルエントに達するまで培養した。培養液を除去後、ビタミンＢ１（ＶＢ１）、ビタミンＢ６（ＶＢ６）、ビタミンＢ１２（ＶＢ１２）、ビタミンＥ（ＶＥ）、葉酸（ＦＡ）の各種複合剤（薬剤および用量：表４）を加えた５％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ培地を添加し、培養６時間後に、ロテノン（１０ｎＭ、シグマ社製）を加えた。培養１日（２１時間）後に、生存細胞数の指標となるＭＴＴ  ａｓｓａｙを行った。各孔の培地に１／１０量のＭＴＴ溶液（５ｍｇ／ｍｌ、シグマ社製）を添加し、ＣＯ２インキュベーター内に入れ、その３時間後に１．５倍量の４０ｍＭ塩酸−イソプロパノール溶液を加え、一晩放置後、吸光度（ＯＤ５５０ｎｍ）を測定した。
その結果、ＶＢ１、ＶＢ６およびＶＢ１２を添加した第１群に対して、ＶＢ１、ＶＢ６、ＶＢ１２およびＶＥを添加した第２群、並びに、ＶＢ１、ＶＢ６、ＶＢ１２およびＦＡを添加した第３群では、第１群よりも吸光度値が上昇した。さらに、ＶＢ１、ＶＢ６、ＶＢ１２、ＶＥおよびＦＡを添加した第４群では最も高い吸光度値を示したことから、本発明に係る医薬組成物が大きな効果を発揮することが明らかになった。
【００４７】
0004091860.tif 000005
0004091860.tif 000006
Ａ：ＶＢ１（塩酸チアミン）２５μｇ／ｍｌ＋ＶＢ６（塩酸ピリドキシン）２５μｇ／ｍｌ＋ＶＢ１２（メチルコバラミン）１０μｇ／ｍｌ
Ｂ：ＶＥ（酢酸トコフェロール）２５μｇ／ｍｌ
Ｃ：ＦＡ（葉酸）１０μｇ／ｍｌ
【００４８】
【発明の効果】
本発明に係る医薬は、末梢神経障害の予防治療に有効である。
神経挫滅等の器質的障害の修復を促進し、整形外科的領域の疾患である痛み、こり、痺れ等の自覚症状の改善および眼精疲労に伴う症状の改善が認められた。また、鎮痛作用や細胞障害に対する保護効果が認められた。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１における対照群と、本発明治療剤投与６週後の各群の神経線維径分布を示す図
【図２】同上対照群と、本発明治療剤投与８週後の各群の神経線維径分布を示す図
【図１】
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【図２】
0004091860.tif 000008