(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
内部に血小板保存液が充填された容器であって、前記血小板保存液は、５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース、２〜２０ｍｍｏｌ／Ｌの重炭酸ナトリウム、５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸および／またはその塩を含有し、かつ、ｐＨが６．５〜７．４であり、前記容器は、血小板を収納可能な内部収納力および血小板を注入するための注入口を有する合成樹脂製容器であり、かつ前記合成樹脂の表面にガスバリアー性を有する樹脂の被覆を有するもしくはガスバリアー性包材により包装されており、さらに、前記血小板保存液は、前記容器とともに加熱滅菌されていることを特徴とする内部に血小板保存液が充填された容器。
【請求項２】
前記血小板保存液は、１００〜２００ｍＥｑ／Ｌのナトリウムイオン、２〜６ｍＥｑ／Ｌのカリウムイオン、１〜５ｍｍｏｌ／Ｌのマグネシウム塩、２〜１０ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸および／またはその塩、５〜１５ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸および／またはその塩を含有している請求項１に記載の内部に血小板保存液が充填された容器。
【請求項３】
前記血小板保存液は、血小板を５日間保存した時のｐＨが６．５〜７．４の範囲にある請求項１または２に記載の内部に血小板保存液が充填された容器。
【請求項４】
ガスバリアー性包材は、炭酸ガス透過性が５０ｍｌ／ｍ2・２４ｈｒ・ａｔｍ（２５℃−７０％ＲＨ）以下のものである請求項１ないし３のいずれかに記載の内部に血小板保存液が充填された容器。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、血小板保存液に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、血小板製剤は、ＣＰＤ液またはＡＣＤ液で凝固阻止された全血から製造され、濃縮血小板（ＰＣ）として血漿中に浮遊した状態で保存されている。従って、血小板の保存に用いられた血漿は、血小板輸血を必要とする患者に血小板と共に輸注される。この場合、血小板を保存するために用いられた血漿は、受血者に発熱・悪寒・ショックなどのアレルギー・免疫反応を引き起こすことがあり、輸血の副作用として問題となっている。
【０００３】
さらに、近年輸入血漿製剤に由来するヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）感染者の発生が大きな社会問題となっており、国内での血漿製剤の自給のため、これに必要な量の血漿を確保することが必要となっている。
【０００４】
これらの問題を解決する一つの方法として、ＰＣ中の血漿をできるだけ少なくすることにより、副作用発生の減少と血漿製剤用への利用を図り、血漿のかわりに血小板保存液を添加することが検討されている。
【０００５】
血小板の保存に果たす血漿の役割は２つある。１つは血小板への代謝基質の供給であり、もう１つはｐＨなど血小板をとりまく環境の維持である。したがって、一般に血小板保存液には代謝基質としてグルコースや酢酸塩、ｐＨ維持のためにグルコン酸塩やリン酸塩などの緩衝剤が添加される。このような従来の血小板保存液を用いて血小板を保存する場合、血漿を保存液で完全には置換せずに約２０％程度以上の血漿を混入させておく必要がある。なぜならば、従来の血小板保存液に用いられているグルコン酸塩やリン酸塩のｐＨ緩衝能が不十分なため、これを血漿の緩衝作用で補わなければならないからである。しかしながら、血漿由来の輸血副作用を防止するためには血漿をほぼ完全に（９５％以上）除去する必要があり、この目的には従来の血小板保存液は不適当である。もちろん、グルコン酸塩・リン酸塩などの緩衝剤の濃度を非常に高くすれば十分なｐＨ緩衝能が得られるが、このような液が体内に輸注された場合、腎臓などの臓器に負担がかかり、臨床上好ましくない結果を引き起こすことが懸念される。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
上述の問題を解決するために、生理的適合性が高くまた緩衝能が大きい緩衝剤として、重炭酸塩を使用した血小板保存液が提案されている（特表昭６３−５０３３８１号）。しかしながら、この保存液には、血中濃度に匹敵する２３〜５０ｍｍｏｌ／Ｌという高濃度の重炭酸塩が配合されているため、通常雰囲気中（空気中）に放置しておくと、重炭酸塩が炭酸ガスとなって揮散してｐＨが急激に上昇する。このため５％炭酸ガス雰囲気中で血小板を保存する必要があり、特別な装置を必要とする。
【０００７】
また、かかる高濃度の重炭酸塩が配合された液を加熱滅菌すると、血小板保存液中の他の成分、特にカルシウム，マグネシウムと反応して炭酸塩の沈殿が生じたり、また加熱中のｐＨの上昇によってグルコースが変性、分解して液が着色する等の問題があるため、実用化されていない。
【０００８】
さらに別の方法として、血液抗凝固保存液であるＣＰＤ液と、細胞浮遊液として知られているＴｙｒｏｄｅ（タイロード）液を混合したＣＰＤ−Ｔｙｒｏｄｅ液が提案されている（米国特許明細書４，４４７，４１５号）。この液によれば、通常雰囲気下（空気中）での血小板の保存が可能であるが、血小板の代謝基質として重要な酢酸塩が含まれていないため、長期（３日以上）の保存には不適である。
【０００９】
このような現状から、血漿とほぼ完全に置換可能で、通常雰囲気下（空気中）で血小板機能を良好に保存でき、安全性の高い血小板保存液が切望されている。
従って、本発明の目的は、血漿とほぼ完全に置換してもｐＨを良好な範囲内に維持する緩衝能を持ち、通常雰囲気下での血小板保存が可能であり、さらに、熱滅菌に対する安定性を備えた血小板保存液を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するものは、内部に血小板保存液が充填された容器であって、前記血小板保存液は、５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース、２〜２０ｍｍｏｌ／Ｌの重炭酸ナトリウム、５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸および／またはその塩を含有し、かつ、ｐＨが６．５〜７．４であり、前記容器は、血小板を収納可能な内部収納力および血小板を注入するための注入口を有する合成樹脂製容器であり、かつ前記合成樹脂の表面にガスバリアー性を有する樹脂の被覆を有するもしくはガスバリアー性包材により包装されており、さらに、前記血小板保存液は、前記容器とともに加熱滅菌されている内部に血小板保存液が充填された容器である。
【００１１】
そして、血小板保存液は、１００〜２００ｍＥｑ／Ｌのナトリウムイオン、２〜６ｍＥｑ／Ｌのカリウムイオン、１〜５ｍｍｏｌ／Ｌのマグネシウム塩、２〜１０ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸および／またはその塩、５〜１５ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸および／またはその塩を含有していることが好ましい。また、血小板保存液は、血小板を５日間保存した時のｐＨが６．５〜７．４の範囲にあることが好ましい。
【００１２】
また、ガスバリアー性包材は、炭酸ガス透過性が５０ｍｌ／ｍ2・２４ｈｒ・ａｔｍ（２５℃−７０％ＲＨ）以下のものであることが好ましい。
【００１３】
本発明の血小板保存液について、説明する。
本発明の血小板保存液は、５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース、２〜２０ｍｍｏｌ／Ｌの重炭酸ナトリウム、５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸および／またはその塩を含有し、かつ、ｐＨが６．５〜７．４に調整され、さらに、熱滅菌されている。
【００１４】
特に、グルコース及び重炭酸ナトリウムを配合する組成を上記のように選択することにより、高いｐＨ緩衝能と、通常雰囲気下（空気中）での血小板保存が可能であり、さらに、１００℃以上の熱滅菌を行っても、グルコースの変性、分解などが発生せず、それに起因する着色なども生じない。このため、熱滅菌された状態で提供することができる。つまり、本発明の血小板保存液は、従来の重炭酸塩含有の血小板保存液（特表昭６３−５０３３８１号）に比較して重炭酸の含有量が低いため、１００℃以上の高圧蒸気滅菌または熱水滅菌によってもグルコースの分解はほとんど起こらず、着色や沈澱も認められない。
【００１５】
本発明の血小板保存液の上述のような特性をさらに向上させるためには、血小板保存液は、他には生理的な成分、例えばナトリウム、カリウム、マグネシウム、酢酸、クエン酸、リン酸等を生理的な濃度あるいは血小板の機能維持に最適な濃度で含有することが好ましい。
【００１６】
本発明の血小板保存液の上記の成分を含めた好適配合としては、５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース（好ましくは、１０〜１８ｍｍｏｌ／Ｌ）、２〜２０ｍｍｏｌ／Ｌの重炭酸ナトリウム（好ましくは、２〜１５ｍｍｏｌ／Ｌ）、５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸および／またはその塩（好ましくは、１０〜２０ｍｍｏｌ／Ｌ）、１００〜２００ｍＥｑ／Ｌのナトリウムイオン（なお、このナトリウムイオンは血小板保存液中の全ナトリウムイオンを示す）、２〜６ｍＥｑ／Ｌのカリウムイオン、１〜５ｍｍｏｌ／Ｌのマグネシウム塩、２〜１０ｍｍｏｌ／Ｌのクエン酸および／またはその塩、５〜１５ｍｍｏｌ／Ｌのリン酸および／またはその塩を含有し、ｐＨが約６．５〜約７．４、好ましくは、６．７〜７．１に調整される。
【００１７】
そして、本発明の血小板保存液は、血漿とほぼ完全に置換しても、通常雰囲気下で少なくとも５日間の血小板の保存においても、ｐＨが６．５〜７．４の範囲に維持できるものであり、逆に、このような効果が生じるように上記の成分の配合比を調整することが好ましい。さらに、好ましくは６．７〜７．１の間に維持できることが望ましい。
【００１８】
次に、本発明の他の実施例血小板保存液について説明する。
本発明の血小板保存液は、容器と、該容器内に収納された血小板保存液とからなり、加熱滅菌されている。
血小板保存液については、上述した通りである。
【００１９】
容器としては、熱滅菌可能なものであり、かつ、血小板保存が可能であればどのようなものでもよく、硬質容器、軟質容器のいずれでもよい。好ましくは、取り扱いの容易なことより、軟質容器が好適であり、例えば、血液保存容器（例えば、血液バッグ）、さらに、輸液用のプラスチック容器などが使用が可能であり、特に高圧蒸気滅菌または熱水滅菌に耐えられるものが使用される。
【００２０】
軟質容器の材質としては、合成樹脂であり、輸液用プラスチック容器試験に適合するものであれば通常のものでもよい。例えば、ポリエチレン、ポリプロピレンなどのポリオレフィン、ポリ塩化ビニル、エチレン−酢酸ビニル共重合体等であり、高圧蒸気滅菌または熱水滅菌可能なものが使用できる。さらに、容器としては、血小板を収納可能な内部収納力を有すること、および、血小板を注入するための注入口を有することが好ましい。注入口としては、無菌的に接続可能なものが好適である。
【００２１】
また、合成樹脂は、ある程度のガス透過性を有するため、収納した血小板保存液中の水分の蒸散により、成分濃度が変化、炭酸ガスの流出による重炭酸ナトリウムの濃度変化などの可能性がある。このため、合成樹脂容器を用いる場合、合成樹脂の表面にガスバリヤー性を有する樹脂を被覆するか、血小板保存液の包装形態による対応を行うことが好ましい。
【００２２】
包装形態としては、ガスバリアー性包材を用いることが考えられる。そして、血小板保存液の外面の滅菌性を保証するためには、ガスバリアー性包材内に血小板保存液を収納した状態で、熱滅菌することが好ましい。このため、ガスバリアー性包材としては、高圧蒸気滅菌または熱水滅菌に耐えられるものが好適となる。ガスバリアー性包材の具体例としては、炭酸ガス透過性が５０ｍｌ／ｍ2・２４ｈｒ・ａｔｍ（２５℃−７０％ＲＨ）以下のものが望ましく、例えば、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、エチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＯＨ）、ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ），ポリアミド（ＰＡ）、アルミラミネート等のものやこれらの材質の組み合わせからなる多層フィルムからなるもの、あるいはこれらの多層フィルムに酸化金属やセラミックを蒸着コートしたもの等が挙げられる。容器をガスバリアー性包材で包装する形態については、通常の工程によっておこなわれている真空包装が好適である。
【００２３】
ラミネートガスバリヤー性包材の具体例としては、アルミナ蒸着ＰＥＴフィルム［ＰＥＴ−Ａｌ、ＰＥＴ／アルミナ蒸着ＰＥＴ／ＣＰＰ（ポリプロピレン），富士産業株式会社製）］、エチレンビニルアルコール共重合体ラミネートフィルム（ＰＥＴ／ＥＶＯＨ／ＮＹ（ナイロン）／ＣＰＰ，富士産業株式会社製）、ポリ塩化ビニリデンラミネートフィルム［酸化金属蒸着ＰＥＴ／ＰＶＤＣ−ＭＡ（メチルアクリレート）／ＰＡ（ポリアミド）／ＣＰＰ，細川洋行株式会社製］、ラミネートＰＥＴフィルム［ＰＥＴ／ＳｉＯｘ蒸着ＰＥＴ／ＣＰＰ、凸版印刷株式会社製］などがある。
【００２４】
また、血小板保存用容器を形成する合成樹脂の表面にガスバリヤー性を有する樹脂を被覆方法としては、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、エチレンビニルアルコール共重合体（ＥＶＯＨ）、ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ），ポリアミド（ＰＡ）などを被覆することが考えられる。
【００２５】
そして、このように、内部に血小板保存液が充填された容器は、このまま、もしくは、上記のように包装された後、熱滅菌される。熱滅菌としては、高圧蒸気滅菌もしくは熱水滅菌が好適であるが、特に、高圧蒸気滅菌が好適であり、例えば、１００〜１２０℃で１０〜６０分程度行うことが考えられる。
このようにして、本発明の血小板保存液中の血小板保存液は、調整された濃度およびｐＨ条件が、使用時まで維持され、保存中での変性がほとんどない。
【００２６】
【実施例】
次に、本発明の血小板保存液の具体的実施例について説明する。
【００２７】
（実施例１〜３および比較例１〜５）
［血小板保存液の調整］
表１に示す組成の実施例１〜３の血小板保存液および本発明の範囲を外れる表２に示す組成の比較例１〜５の血小板保存液を調製した。これらの液を２００ｍｌずつエチレンビニルアルコール共重合体製の軟質プラスチックバックに充填し、高圧蒸気滅菌（１１０℃、２０分間）を行い、血小板保存液を作成した。
【００２８】
［滅菌後の血小板保存液の性状の確認］
上記実施例１〜３および比較例１〜５の血小板保存液を室温まで冷却した。そして、以下の点について確認した。
▲１▼  血小板保存液の外観の肉眼による観察
▲２▼  ｐＨ測定［使用機器：ｐＨメーター（東亜電波工業株式会社製、ＨＭ−２０Ｅ型）］
▲３▼  浸透圧測定［使用機器：浸透圧計（アドバンスド・インダストリーズ・インク製、３Ｃ２型）］
▲４▼  グルコースの分解生成物である５−ヒドロキシメチルフルフラール（５−ＨＭＦ）の生成量の指標となる２８４ｎｍにおける吸光度の測定［使用機器：分光光度計（島津製作所株式会社製：ＭＰＳ−２０００型）］
【００２９】
［滅菌後の血小板保存液の性状の確認結果］
本発明の実施例１〜３の血小板保存液、および比較例１・２・５の液においては外観は無色澄明であり２８４ｎｍの吸光度も０．００３以下であったが、重炭酸濃度の高い比較例３の液では液の着色および沈殿の生成がおこり、また２８４ｎｍの吸光度も０．０８２に達し、成分が変性していることが示された。また、リン酸濃度の高い比較例５の液では沈殿の生成が見られた。
【００３０】
［血小板保存性の確認実験］
８名の同型（Ａ型）の健常成人からそれぞれ４００ｍｌの血液を市販の血液バッグ（テルモ製：ＢＢ−ＴＣ４０７Ｊ、ＣＰＤ液入り）に採血し、１２５０Ｇで６分間遠心して上層に多血小板血漿（ＰＲＰ）を得た。８人分のＰＲＰを混合した後、８つの血液バッグ（テルモ製：ＢＢ−ＴＣ４０７Ｊの子バッグ）に１５０ｍｌずつ分注した。これらのバッグを３０００Ｇで６分間遠心し、上澄の乏血小板血漿（ＰＰＰ）を除去し、残った血小板ぺレットに実施例１〜３、比較例１〜５の液５０ｍｌを加えて１時間静置した後に、血液バッグ用振盪機（タイテック製、ＮＲ−３０型）で１時間振盪して血小板を再浮遊させた。得られた濃縮血小板（ＰＣ）を振盪しながら２２℃で５日間保存した。
【００３１】
ＰＣ調製直後および保存１、３、５日後にサンプリングし、ｐＨおよびＡＴＰ（アデノシン三リン酸）含有量を測定した。ｐＨの測定は血液ガス分析装置（ラジオメーター株式会社製、ＡＢＬ−３０型）で、ＡＴＰ量はＰＣを０．６Ｎ過塩素酸で除タンパクした後に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（島津製作所株式会社製、ＬＣ−６Ａ型）で測定した。
【００３２】
保存中のＰＣのｐＨ、乳酸産生量およびＡＴＰ含有量の変動を図１〜３に示す。本発明の実施例１〜３の液中で保存した血小板はいずれも良好な血小板保存能を示したのに対して、比較例１〜５の液では血小板保存能が著しく劣っていた。すなわち、比較例１の液はグルコースを含有しないため代謝基質が枯渇し、保存３、５日目にＡＴＰ含有量が顕著に低下した。比較例２の液は重炭酸塩を含有しないためｐＨ緩衝能が不足し、保存３、５日目にｐＨの著しい低下を示した。また、高濃度の重炭酸塩を含有する比較例３の液においてはｐＨが著しく上昇し、この環境悪化によって血小板の代謝が阻害され、結果としてＡＴＰレベルの顕著な低下を示した。さらに、比較例４および５の液は酢酸塩を含有しないために代償的にグルコースの嫌気的代謝が亢進して多量の乳酸が産生され、保存３、５日目にｐＨの著しい低下を示した。
【００３３】
【表１】
0004041171.tif 000002
【００３４】
【表２】
0004041171.tif 000003
【００３５】
Ａ：無色澄明，Ｂ：微黄色・白色沈殿，Ｃ：白色沈殿
Ｄ：ＡＴＰレベル低下，Ｅ：ｐＨ低下，Ｆ：ｐＨ上昇・代謝阻害
【００３６】
（実施例４〜６）
表１に示す組成の実施例１〜３の血小板保存液を２００ｍｌずつエチレンビニルアルコール共重合体製の軟質プラスチックバックに注入した。軟質プラスチックバックとしては、容量４００ｍｌ、接続針および注射針による接続可能な注入口を有するものを用いた。そして、ラミネートガスバリヤー性包材（アルミナ蒸着ＰＥＴフィルム、ＰＥＴ−Ａｌ、ＰＥＴ／アルミナ蒸着ＰＥＴ／ＣＰＰ，富士産業株式会社製）にて真空包装したのち、高圧蒸気滅菌（１１０℃、２０分間）を行い、本発明の血小板保存液を作成した。
【００３７】
【発明の効果】
本発明は、内部に血小板保存液が充填された容器であって、前記血小板保存液は、５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコース、２〜２０ｍｍｏｌ／Ｌの重炭酸ナトリウム、５〜３０ｍｍｏｌ／Ｌの酢酸および／またはその塩を含有し、かつ、ｐＨが６．５〜７．４であり、前記容器は、血小板を収納可能な内部収納力および血小板を注入するための注入口を有する合成樹脂製容器であり、かつ前記合成樹脂の表面にガスバリアー性を有する樹脂の被覆を有するもしくはガスバリアー性包材により包装されており、さらに、前記血小板保存液は、前記容器とともに加熱滅菌されている。特に、５〜２０ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースを含有するから、血小板は十分な量の代謝基質を得ることができ、保存中そのＡＴＰレベルが高く維持される。また、２〜２０ｍｍｏｌ／Ｌの重炭酸ナトリウムを含有しかつｐＨが６．５〜７．４の範囲にあるから、保存中のｐＨが良好に維持され、通常雰囲気（空気中）で保存してもｐＨが高くなりすぎることがなく、血漿とほぼ完全に置換してもｐＨを良好な範囲内に維持する緩衝能を持ち、通常雰囲気下での血小板保存が可能である。
【００３８】
そして、グルコースと重炭酸ナトリウムが上記範囲であるため、熱滅菌を行ってもグルコースの変性がなく、それに起因する着色なども生じなく、熱安定性が高い。そして、この血小板保存液を用いることにより、実質的に血漿を使用しないで血小板を良好に保存でき、血漿輸注に起因する臨床上の問題もなく安全である。さらに、特殊な設備を必要とせずに通常雰囲気下で容易に血小板が保存可能である。
【００３９】
また、本発明の血小板保存液は、容器と、該容器内に収納された上記の血小板保存液とからなり、加熱滅菌されているので、血小板保存にそのまま使用できる。さらに、容器として、血小板の注入が可能なものであれば、この容器内に血小板を注入することにより、血小板を容易に保存することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、本発明の実施例および比較例の血小板保存液の血小板保存性の確認実験におけるｐＨ変動を示す図である。
【図２】図２は、本発明の実施例および比較例の血小板保存液の血小板保存性の確認実験における乳酸産生量変動を示す図である。
【図３】図３は、本発明の実施例および比較例の血小板保存液の血小板保存性の確認実験におけるＡＴＰ含有量変動を示す図である。
【図１】
0004041171.tif 000004
【図２】
0004041171.tif 000005
【図３】
0004041171.tif 000006