(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0004098836.tif 000013
［式中、
Ｒ0は水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルカノイル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシカルボニル、Ｃ3〜Ｃ8−シクロアルカノイル、Ｃ7〜Ｃ15−アロイル、Ｃ3〜Ｃ13−ヘテロアロイル、またはオリゴマーの細胞内取り込みに好ましい基であり、
Ａはアミノ酸残基であり、
ｋは０から２０までの整数であり、
Ｑはアミノ酸残基であり、
ｌは０から２０までの整数であり、
Ｂはヌクレオチド化学において慣用されるヌクレオチド塩基またはそのプロドラッグ型であり、
Ｑ0はヒドロキシル、ＮＨ2またはＮＨＲ″（Ｒ″はＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ2〜Ｃ18−アミノアルキルまたはＣ2〜Ｃ18−ヒドロキシアルキルである）であり、
ｎは１〜５０の整数である］
のＰＮＡオリゴマ−を製造するにあたり、
基Ｑ0を含有するアンカー基Ｌを備える式II
Ｌ−［ポリマー］              （II）
のポリマー支持体に、いずれかのアミノ酸（Ｑ′）を最初にカップリングさせ、中間体として式III
（Ｑ'）1−Ｌ−［ポリマ−］        （III）
（式中、Ｌは上記に定義した通りであり、Ｑ′は必要に応じて側鎖が保護されているアミノ酸Ｑであり、ｌは０から２０までの整数である）を得、ついで、
ａ）  式IV
【化２】
0004098836.tif 000014
（式中、
ＰＧは９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２,２−［ビス（４−ニトロフェニル）］エトキシカルボニル（Ｂｎｐｅｏｃ）、２−（２,４−ジニトロフェニル）エトキシカルボニル（Ｄｎｐｅｏｃ）、２−メチルスルホニルエチルオキシカルボニル（Ｍｓｃ）および１−（４,４−ジメチル−２,６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）から選ばれる塩基不安定性アミノ保護基であり、
Ｂ′は環外アミノ官能基が保護されているヌクレオチド塩基である）の化合物を、式IIIの化合物にカップリングさせるか、または式IVの化合物を式IIのポリマー支持体に直接カップリングさせ、
ｂ）  塩基不安定性アミノ保護基ＰＧを、塩基性の試薬を用いて除去し、
ｃ）  工程ａおよびｂをｎ−１回反復し、
ｄ）  Ａとして定義されたアミノ酸であるが必要に応じてそれらの側鎖が保護されたアミノ酸Ａ'をさらにカップリングさせ、ついでＲ0が水素ではない場合には基Ｒ0を導入し、
ｅ）  中間体として得られた式Ｉａ
【化３】
0004098836.tif 000015
（式中、Ｒ0、Ａ′、ｋ、Ｂ′、ｎ、Ｑ′およびｌは上記に定義した通りであり、Ｌはアンカー基である）の化合物を弱酸または中等度の強度の酸を用いてポリマー支持体から切断し、ヌクレオチド塩基の環外アミノ官能基およびアミノ酸の側鎖に必要に応じて存在する保護基を同時にまたは別個に除去することにより、式Ｉの化合物を得る方法。
【請求項２】
式Ｉにおいて、
Ａは、グリシン、ロイシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、システイン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸およびＮ−（２−アミノエチル）グリシンの群からのアミノ酸残基であり、
ｋは、０から１０までの整数であり、
Ｑは、グリシン、ロイシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、システイン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸およびＮ−（２−アミノエチル）グリシンの群からのアミノ酸残基であり、
ｌは０から１０までの整数であり、
Ｂは、アデニン、シトシン、グアニン、チミンおよびウラシルの群からの天然のヌクレオチド塩基、もしくはプリン、２,６−ジアミノプリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ4,Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6,Ｎ6−エタノー２,６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニル−ウラシル、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニル−シトシン、５−フルオロウラシル、プソイドイソシトシンおよび２−ヒドロキシ−５−メチル−４−トリアゾールピリミジン、またはそれらのプロドラッグ型であり、
ｎは４〜３５の整数である］
である請求項１に記載の式ＩのＰＮＡオリゴマーの製造方法。
【請求項３】
式IV
【化４】
0004098836.tif 000016
（式中、
ＰＧは９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、２,２−［ビス（４−ニトロフェニル）］エトキシカルボニル（Ｂｎｐｅｏｃ）、２−（２,４−ジニトロフェニル）エトキシカルボニル（Ｄｎｐｅｏｃ）、２−メチルスルホニルエチルオキシカルボニル（Ｍｓｃ）および１−（４,４−ジメチル−２,６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）から選ばれる塩基不安定性アミノ保護基であり、
Ｂ′は環外アミノ官能基が弱酸または中等度の強度の酸に不安定なウレタン型またはトリチル型の基である保護基によって保護されているヌクレオチド塩基である）の化合物。
【請求項４】
ＰＧはＦｍｏｃまたはＢｎｐｅｏｃまたはＤｎｐｅｏｃ保護基であり、Ｂ′は環外アミノ官能基が弱酸または中等度の強度の酸に不安定なウレタン型またはトリチル型の基である保護基によって保護されているヌクレオチド塩基である請求項３に記載の式IVの化合物。
【請求項５】
ＰＧはＦｍｏｃ保護基であり、Ｂ′は環外アミノ官能基が弱酸または中等度の強度の酸に不安定なウレタン型またはトリチル型の基である保護基によって保護されているヌクレオチド塩基である請求項４に記載の式IVの化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
ペプチド核酸（ＰＮＡ）はデオキシリボースホスフェート骨格がペプチドオリゴマーによって置換されたＤＮＡ類縁体の化合物である。これまでに、文献に報告されてきたその合成（Michael Egholm, Peter E. Nielsen, Ole Buchardt & Rolf H. Berg, J. Am. Chem. Soc, 1992, 114, 9677-9678；Ole Buchardt, Michael Egholm, Peter E. Nielsen & Rolf H. Berg, WO 92／20702）では、モノマ−のアミノ基を一時的に保護するために、中等度の強度の酸、たとえばトリフルオロ酢酸で除去される酸不安定性の三級ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基が用いられている。オリゴマーの固相合成では、ついで慣用の、たとえばMerrifield（B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 1963, 85, 2149）によって記載されたペプチド合成法に従って行われる。この場合、固体支持体からＰＮＡオリゴマーを切断するために、強酸、通常は液体フッ化水素が使用される。その結果、これらの反応条件とくにトリフルオロ酢酸による反復処理は、たとえば、多重ペプチドシンセサイザー［総説：G. Jung & A. Sickinger, Angew. Chem. 104(1992)375-391］が採用される場合のような開放反応容器での反応は許容されない。
【０００２】
本発明の目的は、ＰＮＡオリゴマーの構築のために、塩基不安定性の一時的アミノ保護基を使用し、弱いまたは中等度の強さの酸を用いる固体支持体からのオリゴマーの切断を可能にする合成方法を開発することにある。
【０００３】
本発明は、式Ｉ
【化９】
0004098836.tif 000002
［式中、
Ｒ0は水素、Ｃ1〜Ｃ18−アルカノイル、Ｃ1〜Ｃ18−アルコキシカルボニル、Ｃ3〜Ｃ8−シクロアルカノイル、Ｃ7〜Ｃ15−アロイル、Ｃ3〜Ｃ13−ヘテロアロイル、またはオリゴマーの細胞内取り込みに好ましいかまたはハイブリダイゼーションを誘導する標的核酸と相互作用する基であり、
Ａは、好ましくはグリシン、ロイシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、システイン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸およびＮ−（２−アミノエチル）グリシンの群からのアミノ酸残基であり、
ｋは０から２０まで、好ましくは０から１０までの整数であり、
Ｑは、好ましくはグリシン、ロイシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、システイン、リジン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、プロリン、テトラヒドロキノリン−３−カルボン酸、オクタヒドロインドール−２−カルボン酸およびＮ−（２−アミノエチル）グリシンの群からのアミノ酸残基であり、
ｌは０から２０まで、好ましくは０から１０の整数であり、
Ｂはヌクレオチド化学において慣用されるヌクレオチド塩基、たとえばアデニン、シトシン、グアニン、チミンおよびウラシルのような天然のヌクレオチド塩基、またはプリン、２,６−ジアミノプリン、７−デアザアデニン、７−デアザグアニン、Ｎ4,Ｎ4−エタノシトシン、Ｎ6,Ｎ6−エタノ−２,６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニル−ウラシル、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニル−シトシン、５−フルオロウラシルもしくはプソイドイソシトシン、２−ヒドロキシ−５−メチル−４−トリアゾロピリミジン、あるいはそれらのプロドラッグ型であり、
Ｑ0はヒドロキシル、ＮＨ2またはＮＨＲ″（Ｒ″はＣ1〜Ｃ18−アルキル、Ｃ2〜Ｃ18−アミノアルキルまたはＣ2〜Ｃ18−ヒドロキシアルキルである）であり、
ｎは１〜５０、好ましくは４〜３５の整数である］
のＰＮＡオリゴマ−を製造するにあたり、
基Ｑ0を潜在的様式で含有するアンカー基Ｌを備える式II
Ｌ−［ポリマー］              （II）
のポリマー支持体に、固相合成に慣用される方法を用いて、いずれかのアミノ酸（Ｑ'）を最初にカップリングさせ、中間体として式III
(Ｑ′)1−Ｌ−［ポリマー］     （III）
（式中、Ｌは上に定義した通りであり、Ｑ′は必要に応じて側鎖が保護されているアミノ酸Ｑであり、ｌは０から２０までの整数である）を得、ついで、
ａ）  式IV
【化１０】
0004098836.tif 000003
（式中、
ＰＧは塩基不安定性アミノ保護基であり、そして
Ｂ′は環外アミノ官能基が保護されているヌクレオチド塩基である）の化合物を、ペプチド化学において慣用されるカップリング試薬を用いて、式IIIの化合物にカップリングさせるか、または式IVの化合物を式IIのポリマー支持体に直接カップリングさせ、
ｂ）  一時的な、塩基不安定性保護基ＰＧを、適当な試薬を用いて除去し、
ｃ）  工程ａおよびｂをｎ−１回反復し、
ｄ）  Ａとして定義されたアミノ酸であるが、必要に応じてそれらの側鎖が保護されたアミノ酸Ａ′をさらに、固相合成に慣用される方法を用いてカップリングさせ、ついでＲ0が水素ではない場合には慣用方法を用いて基Ｒ0を導入し、
ｅ）  中間体として得られる式Ｉａ
【化１１】
0004098836.tif 000004
（式中、Ｒ0、Ａ′、ｋ、Ｂ′、ｎ、Ｑ′およびｌは上に定義した通りであり、Ｌはアンカー基である）の化合物を開裂剤を用いてポリマー支持体から切断し、ヌクレオチド塩基の環外アミノ官能基およびアミノ酸の側鎖に必要に応じて存在する保護基を同時にまたは別個に除去することにより式Ｉの化合物を得る方法に関する。
【０００４】
オリゴマーの細胞内取り込みに好ましい基の例には、各種の親油性基たとえば−(ＣＨ2)x−ＣＨ3（式中、ｘは６〜１８の整数である）、−(ＣＨ2)n−ＣＨ＝ＣＨ−(ＣＨ2)m−ＣＨ3（式中、ｎおよびｍは互いに独立に６〜１２の整数である）、−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)4−(ＣＨ2)9−ＣＨ3、−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)8−(ＣＨ2)13−ＣＨ3および−(ＣＨ2ＣＨ2Ｏ)7−(ＣＨ2)15−ＣＨ3、ならびにステロイド残基たとえばコレステリル、またはビタミン残基たとえばビタミンＥ、ビタミンＡまたはビタミンＤ、および天然のキャリアー系たとえば胆汁酸、葉酸、２−（Ｎ−アルキル、Ｎ−アルコキシ）−アミノアントラキノンを使用する他のコンジュゲート、ならびにマンノースおよびオリゴマーの受容体仲介エンドサイト−シスに導く相当する受容体のペプチドたとえばＥＧＦ（上皮増殖因子）、ブラジキニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）のコンジュゲートがある。標識基は、たとえばダンシル−（Ｎ−ジメチル−１−アミノナフチル−５−スルホニル−）誘導体、フルオレセイン誘導体もしくはクマリン誘導体の蛍光基、またはたとえばアクリジン誘導体の化学発光基ならびにＥＬＩＳＡを用いて検出可能なジゴキシゲニン系、ビオチン／アビジン系を用いて検出可能なビオチン基、または後で検出可能なレポーター基によって誘導体化することが可能な官能基を有する他のリンカーアームたとえば活性アクリジニウムエステルと反応して化学発光プローブを形成するアミノアルキルリンカーを意味するものと理解すべきである。
【０００５】
代表的な標識基は以下の基である。
【化１２】
0004098836.tif 000005
【０００６】
オリゴマーの標的核酸とのハイブリダイゼーションに際して、結合、架橋またはクリアリングによって核酸を攻撃する基はたとえば、アクリジン、ソラレン、フェナントリジン、ナフトキノン、ダウノマイシンまたはクロロエチルアミノアリールのコンジュゲートである。代表的な挿入残基および架橋残基は以下の通りである。
【０００７】
【化１３】
0004098836.tif 000006
【０００８】
官能基Ｑ0を潜在的様式で含有するアンカー基Ｌは、たとえば、George Barany，Nancy Kneib-Cordonier & Daniel G．Mullen，Int．J．Peptide Protein Res.，1987，30，705-739；Gregg B．Fields & Richard L．Noble，Int．J．Peptide Protein Res.，35，1990，161-214；K．Barlos，D．Gatos，J．Hondrelis，J．Matsoukas，G.J．Moore，W．Schaefer & P．Sotiriou，Liebigs Ann．Chem．1989，951-955；H．Rink，Tetrahedron Lett．1987，3787-3790；G．Breiphol，J．Knolle & R．Geiger，Tetrahedron Lett．1987，5647-5650；G．Breipohl，J．Knolle & W．Stueber，Int．J．Peptide Protein Res.，1989，34，262-267；W．Stueber，J．Knolle & G．Breipohl，Int．J．Peptide Protein Res.，1989，34，215-220；またはEP-A-0 264 802（HOE 86／F259)，EP-A-0 287 882（HOE 86／F101）およびEP-A-0 322 348（HOE 87／F386K）に記載されている。
【０００９】
基Ｑ0を潜在的様式で含有するアンカー基を備えたポリマ−支持体の例には、４−アルコキシベンジルアルコール樹脂、２−メトキシ−４−アルコキシベンジルアルコール樹脂、２−クロロトリフェニルメチル樹脂、２,４−ジメトキシベンズヒドリルアミン樹脂もしくは４−（２′,４′−ジメトキシフェニルアミノメチル）フェノキシメチル樹脂、または第一アミノ基で官能化されているポリマ−支持体、たとえばRpolyHIPE，RTentagel,RControlled Pore Glassもしくはポリスチレン上に、基Ｑ0を潜在的様式で含有するアンカー基の一つ、たとえば４−（４′−メトキシベンズヒドリル）フェノキシ酢酸、４−（４′−メトキシベンズヒドリル）フェノキシ酪酸、４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸、２−メトキシ−４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸、５−（４−アミノメチル−３,５−ジメトキシフェノキシ）吉草酸、３−（アミノ−４−メトキシベンジル）−４−メトキシフェニルプロピオン酸、５−（アミノ−４−メトキシベンジル）−２,４−ジメトキシフェニルプロピオン酸、４−（アミノ−（Ｃ2〜Ｃ8）アルキルアミノカルボニルオキシメチル）フェノキシ酢酸、シュウ酸モノ（アミノ−Ｃ2〜Ｃ16−アルキル）エステルまたはコハク酸モノ（アミノ−Ｃ2〜Ｃ16−アルキル）エステルがカップリングされたポリマー支持体がある。
【００１０】
以下のアンカー基、または既にポリマ−支持体に結合しているアンカー基の使用が好ましい。すなわち、４−アルコキシベンジルアルコール樹脂、メトキシ−４−アルコキシベンジルアルコール樹脂もしくは２−クロロトリフェニルメチル樹脂、または基Ｑ0を潜在的様式で含有するアンカー基、４−（４′−メトキシベンズヒドリル）フェノキシ酪酸、４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸、２−メトキシ−４−ヒドロキシメチルフェノキシ酢酸、５−（アミノ−４−メトキシベンジル）−２,４−ジメトキシフェニルプロピオン酸、４−（アミノ−（Ｃ2〜Ｃ8）−アルキルアミノカルボニルオキシメチル）フェノキシ酢酸、シュウ酸モノ（アミノ−Ｃ2〜Ｃ16−アルキル）エステルもしくはコハク酸モノ（アミノ−Ｃ2〜Ｃ16−アルキル）エステルがRTentagel，RControlled Pore Glassもしくはポリスチレン型の支持体上にカップリングされている樹脂であって第一アミノ基で官能化されているポリマーである。
【００１１】
塩基不安定性アミノ保護基ＰＧの例としては、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）および２,２−［ビス（４−ニトロフェニル）］エトキシカルボニル（Bnpeoc）がある（W．Koenig，D．Buecher，R．Knuettel，K．Lindner & A．Volk，Proceedings of the Akabori Conference，Grainau-Eibsee／Bavaria，1985年６月12〜13日、32頁およびR．Ramage，A.J．Blake，M.R．Florence，Th，Gray，G．Raphy & P.L．Roach，Tetrahedron 1991，37，8001-8024）、２−（２,４−ジニトロフェニル）エトキシカルボニル(Dnpeoc)(M．Acedo，F．Albericio，R．Eritja，Tetrahedron Lett．1992，4989-4992）、２−メチルスルホニルエチルオキシカルボニル（Msc）および１−（４,４−ジメチル−２,６−ジオキソシクロヘキシリデン）エチル（Dde）（B.W．Bycroft，W.C．Chan，S.R．Chabra & N.D．Home，J．Chem．Soc．Chem．Commun．1993，778-779）がある。Fmoc、BnpeocおよびDnpeocの使用が好ましく、Fmoc保護基がとくにきわめて好ましく使用される。
【００１２】
上述の合成方法の工程ａにおいて用いられた、ペプチド合成において慣用される活性化方法はたとえば、Houben Wyle，Methoden der Organischen Chemie（有機化学の方法）１５／２巻，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，1974に記載されている。その他の試薬たとえばBOP（B．Castro，J.R．Dormoy，G．Evin & C．Selve，Tetrahedron Lett．1975，1219-1222)，PyBOP（J．Coste，D．Le-Nguyen & B．Castro，Tetrahedron Lett．1990，205-208)，BroP（J．Coste，M．-N．Dufour，A．Pantaloni & B．Castro，Tetrahedron Lett．1990，669-672）またはPyBroP（J．Coste，E．Frerot，P．Jouin & B．Castro，Tetrahedron Lett．1991，1967-1970）およびウロニウム試薬たとえばHBTU（V．Dourtoglou，B．Gross，V．Lambropoulou，C．Zioudrou，Synthesis，1984，572-574)，TBTU，TPTU，TSTU，TNTU（R．Knorr，A．Trezeciak，W．Bannwarth & D．Gillessen，Tetrahedron Lett．1989，1927-1930)，TOTU(EP-A-0 460 446)，HATU(L.A．Carpino，J．Am．Chem．Soc．1993，115，4397-4398)，HAPyU，TAPipU（A．Ehrlich，S．Rothemund，M．Brudel，M．Beyermann，L.A．Carpino & M．Bienert，Tetrahedron Lett．1993，4781-4784）またはBOI（K．Akaji，N．Kuriyama，T．Kimura，Y．Fujiwara & Y．Kiso，Tetrahedron Lett．1992，3177-3180)、または酸クロリドもしくは酸フルオリド（L.A．Carpino，H.G．Chao，M．Beyermann & M．Bienert，J．Org．Chem．56(1991)，2635)；J．-N．Bertho，A．Loffet，C．Pinel，F．Reuther & G．Sennyey，〔in E．Giralt & D．Andreu(編)〕Peptides 1990，Escom Science Publishers B.V．1991，53-54頁；J．Green & K．Bradley，Tetrahedron，1993，4141-4146)，２,４,６−メシチレンスルホニル−３−ニトロ−１,２,４−トリアゾリド（MSNT)(B．Blankemeyer-Menge，M．Nimitz & R．Frank，Tetrahedron Lett．1990，1701-1704)、２,５−ジフェニル−２,３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチオフェンジオキシド(TDO)(R．Kirstgen，R.C．Sheppard，W．Steglich，J．Chem．Soc．Chem．Commun．1987，1870-1871)、あるいは活性化エステル（D．Hudson Peptide Res．1990，51-55）が対応する参考文献に記載されている。
【００１３】
カルボジイミド、たとえばジシクロヘキシルカルボジイミドまたはジイソプロピルカルボジイミドの使用が好ましい。ホスホニウム試薬、たとえばＰｙＢＯＰもしくはＰｙＢｒｏＰ、ウロニウム試薬、たとえばＨＢＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＰＴＵ、ＴＳＴＵ、ＴＮＴＵ、ＴＯＴＵもしくはＨＡＴＵ、ＢＯＩまたは酸クロリドもしくは酸フルオリドも同様に好ましく使用される。
【００１４】
この場合、カップリングは直接、樹脂に、アミノ酸誘導体または式IVのＰＮＡモノマーを活性化試薬とともに加え、必要に応じて添加物、たとえば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）（W．Koenig，R．Geiger，Chem．Ber．103，788(1970)）もしくは３−ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒドロベンゾトリアゾール（ＨＯＯＢｔ）（W．Koenig，R．Geiger，Chem．Ber．103，2034（1970)）を添加して行うことができ、または構造成分を別個に予め活性化して活性化エステルを形成させ、活性化した種の溶液を適当な溶媒中、カップリング可能なポリマーに添加することができる。
【００１５】
塩基不安定性アミノ保護基ＰＧと適合性がある保護基は弱酸または中等度の強度の酸に不安定な保護基、たとえばウレタン型たとえば三級ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、４−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）もしくは３,５−ジメトキシフェニル−２−プロピル−２−オキシカルボニル（Ｄｄｚ）、またはトリチル型たとえばトリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル（Ｍｍｔ）、（４−メチルフェニル）ジフェニルメチル（Ｍｔｔ）、ジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル（Ｄｍｔ）もしくは９−（９−フェニル）キサンテニル（ｐｉｘｙｌ）が、環外アミノ機能が保護されるヌクレオチド塩基Ｂ′における環外アミノ機能を保護するために使用される．ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、トリフェニルメチル（Ｔｒｔ）、（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル（Ｍｍｔ）、（４−メチルフェニル）ジフェニルメチル（Ｍｔｔ）またはジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル（Ｄｍｔ）の使用はとくに好ましく、Ｔｒｔ、Ｍｔｔ、ＭｍｔおよびＤｍｔは驚くべきことに、モノマーの溶解性に著しい改善を生じる。とくに、（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル（Ｍｍｔ）の使用はきわめて好ましい。
【００１６】
塩基不安定性アミノ保護基ＰＧを除去するための試薬の例にはピペリジン、モルホリン、ヒドラジンまたは１,８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）のジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）またはジクロロメタン（ＤＣＭ）中溶液がある。ＤＭＦまたはＮ−メチルピロリジノン中２０％ピペリジンならびにＤＭＦ中２％ＤＢＵおよび２％ピペリジンの混合物、またはＤＭＦ中０.１ＭのＤＢＵもしくはジクロロメタン中０.１ＭのＤＢＵの使用はＦｍｏｃ、ＤｎｐｅｏｃおよびＢｎｐｅｏｃ保護基にとくに好ましい。
【００１７】
式Ｉａのアミノ酸残基Ｑ′およびＡ′のカップリングは、好ましくは式IVの化合物にも使用される同じアミノ保護基ＰＧをもつアミノ酸誘導体を用いて行われるのが好ましい。存在するアミノ酸の側鎖の官能基には、たとえばＢｏｃ、Ｍｏｚ、ＯｔＢｕ、ｔＢｕ、Ｔｒｔ、ＭｔｒまたはＰｍｃのような弱酸ないし中等度の強度の酸に不安定な保護基を付与する。この場合、ＰＧ−Ｇｌｙ−ＯＨ、ＰＧ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、ＰＧ−Ａｒｇ(Ｍｔｒ)−ＯＨ、ＰＧ−Ａｒｇ(Ｐｍｃ)−ＯＨ、ＰＧ−Ａｒｇ(Ｔｒｔ)−ＯＨ、ＰＧ−Ｃｙｓ(Ｔｒｔ)−ＯＨ、ＰＧ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ、ＰＧ−Ｇｌｕ(ＯｔＢｕ)−ＯＨもしくはＰＧ−Ａｅｇ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、ＰＧ−Ｈｉｓ(Ｔｒｔ)−ＯＨ（ＰＧは上述の意味を有する）のようなアミノ酸誘導体が好ましい。この場合とくに、以下のアミノ酸誘導体、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｍｔｒ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｐｍｃ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ(Ｔｒｔ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ(Ｔｒｔ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ(ＯｔＢｕ)−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｂｏｃ)−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ(Ｔｒｔ)−ＯＨがきわめて好ましい。
【００１８】
上述の合成方法に用いられる式IV
【化１４】
0004098836.tif 000007
（式中、
ＰＧは塩基不安定性アミノ保護基であり、そして
Ｂ′は環外アミノ官能基が保護されているヌクレオチド塩基である）の化合物は新規である。
【００１９】
式IV
【化１５】
0004098836.tif 000008
の化合物は、式Ｖ
【化１６】
0004098836.tif 000009
（式中、
ＰＧは塩基不安定性アミノ保護基であり、
Ｒ1は、メチル、エチル、ブチル、２−（メトキシエトキシ）エチル、ベンジル、好ましくはメチルまたは２−（メトキシエトキシ）エチル、とくに好ましくはメチルのエステル保護基である）の化合物を、式VI
【化１７】
0004098836.tif 000010
（式中、
Ｂ′は、ヌクレオチド塩基の環外アミノ官能基が塩基不安定性アミノ保護基と適合性がある保護基、たとえば弱酸に不安定なウレタン型たとえばＢｏｃもしくはＭｏｚまたはトリチル型たとえばＴｒｔ、Ｍｍｔ、Ｄｍｔもしくはｐｉｘｙｌのような保護基によって保護されているヌクレオチド塩基である）の化合物と、適当な溶媒たとえばＤＭＦ、アセトニトリル、ジクロロメタンまたはこれらの溶媒の混合物中、カルボジイミド、ホスホニウム試薬、ウロニウム試薬、酸ハライドまたは活性化エステルのようなペプチド化学で慣用されるカップリング試薬を用いて０〜４５℃、好ましくは室温で反応させて式VII
【化１８】
0004098836.tif 000011
（式中、ＰＧ、Ｂ′およびＲ1は上に定義した通りである）
の化合物を得、ついでエステル保護基のＲ1を、適当な溶媒たとえばジオキサン、水、テトラヒドロフラン、メタノール、水またはこれらの溶媒の混合物中、０〜５０℃において、アルカリ金属水酸化物溶液を用いてまたはエステラーゼもしくはリパーゼを用いて酵素的に除去して得られる。
【００２０】
さらに式IVの化合物の合成には、式Ｖ
【化１９】
0004098836.tif 000012
（式中、
ＰＧは上述の意味を有する塩基不安定性アミノ保護基であり、
Ｒ1は水素または一時的なシリル保護基たとえばトリメチルシリルである）の化合物を式VIII
Ｂ′−ＣＨ2−ＣＯ−Ｒ2          （VIII）
（式中、
Ｂ′は式VIについて定義した通りであり、
Ｒ2は、ハロゲンたとえばフッ素、塩素もしくは臭素、または活性化エステル基たとえばＯＢｔ、ＯＯｂｔ、ＯＰｆｐもしくはＯＮＳｕである）の化合物と、適当な溶媒たとえばＤＭＦ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ジクロロメタンまたはこれらの溶媒の混合物中、０〜４０℃好ましくは２０〜３０℃で反応させる方法を選択することもできる。この場合、式Ｖの化合物中の酸官能基の一時的保護は、慣用のシリル化試薬たとえばビス（トリメチルシリル）アセトアミドとの反応によって行うことができる。この一時的保護基は、式VIIIの化合物が反応したのちに反応混合物に水またはアルコールを添加して除去される。
【００２１】
式Ｖの化合物の合成には、アミノエチルグリシンまたは相当するアミノエチルグリシンエステルに適当な塩基不安定性保護基が付与される。この場合、塩基不安定性保護基は文献で知られている方法を一部改良して用いて導入される。適当な試薬の例にはＦｍｏｃ−Ｃｌ、Ｆｍｏｃ−ＯＮＳｕ、Ｂｎｐｅｏｃ−ＯＮＳｕ、Ｄｎｐｅｏｃ−ＯＮＳｕ、Ｍｓｃ−Ｃｌおよび２−アセチルジメドン（Ｄｄｅ）がある。この反応では、アミノエチルグリシンの溶解性が改善できると同時に、慣用のシリル化試薬たとえばビス（トリメチルシリル）アセトアミドとの反応による酸官能基の保護が可能である。この一時的な保護基は、保護基試薬との反応後、反応混合物に水またはアルコールを添加することによって除去される。出発原料として用いられるアミノエチルグリシンは文献で知られている方法により製造される（E.P．Heimer，H.E．Gallo-Torres，A.M．Felix，M．Ahmad，T.J．Lambros，F．Scheidl & J．Meienhofer，Int．J．Peptide Protein Res．23，1984，203-211）。
【００２２】
アミノエチルグリシンを製造するための他のもっと簡単な方法に、エチレンジアミンを用いるグリオキシル酸の還元アミノ化があり、その方法は、同時に出願された発明の名称「アミノエチルグリシンの製造法」（HOE 94／F 061、DE-P 44 08 530.3）の出願に記載されている。
【００２３】
式VIのヌクレオチド塩基−酢酸誘導体は相当するヌクレオチド塩基またはそれらの環外アミノ官能基が保護されているヌクレオチド塩基を、クロロ酢酸、ブロモ酢酸、ヨード酢酸またはそれらのエステルでアルキル化することによって得られる。同時に、一時的保護基が、必要に応じて、選択的アルキル化のためにさらにヌクレオチド塩基に挿入される。塩基不安定性保護基ＰＧと適合性のあるすべての保護基がヌクレオチド塩基の保護基として使用できる。弱酸にに不安定なウレタン型たとえばＢｏｃ、ＭｏｚもしくはＤｄｚまたはトリチル型たとえばＴｒｔ、Ｍｍｔ、Ｄｍｔもしくｐｉｘｙｌのような保護基が環外アミノ官能基への使用に好ましい。とくに好ましい保護基は弱酸にに不安定なトリチル型たとえばＴｒｔ、ＭｍｔまたはＤｍｔ保護基であり、とくにＭｍｔが好ましい。この後者の保護基は驚くべきことにモノマー構造成分の溶解性を著しく改善し、自動合成装置たとえば多重ペプチドシンセサイザーに使用するための溶液を調製できる。
【００２４】
式Ｖの化合物の製造に用いられ、環外アミノ官能基が保護されているヌクレオチド塩基Ｂ′は、相当するヌクレオチド塩基から、それ自体文献から既知の方法により、適当な保護基試薬たとえばＢｏｃ2Ｏ、Ｍｏｚ−アジド、Ｔｒｔ−Ｃｌ、Ｍｔｔ−Ｃｌ、Ｍｍｔ−Ｃｌ、Ｄｍｔ−Ｃｌまたはｐｉｘｙｌ−Ｃｌを用いて製造される。必要に応じて、選択的アルキル化のために一時的保護基をさらにヌクレオチド塩基に同時に挿入される。
【００２５】
式VIのヌクレオチド塩基−酢酸は、ペプチド合成に慣用される上述の活性化方法を用いて、塩基不安定性保護基で保護されている式Ｖのアミノエチルグリシン誘導体にカップリングされる。カルボジイミドたとえばジシクロヘキシルカルボジイミドまたはジイソプロピルカルボジイミドの使用が好ましい。ホスホニウム試薬たとえばＢＯＰ（B．Castro，J.R．Dormoy，G．Evin & C．Selve，Tetrahedron Lett．1975，1219-1222）およびウロニウム試薬たとえばＨＢＴＵ（V．Dourtoglou，B．Gross，V．Lambropoulou，C．Zioudrou，Synthesis，1984，572-574）；TBTU，TPTU，TSTU，TNTU（R．Knorr，A．Trezeciak，W．Bannwarth & D．Gillessen，Tetrahedron Lett．1989，1927-1930)、TOTU（EP-A-0 460 446)、または酸クロリドもしくは酸フルオリド（L.A．Carpino，H.G．Chao，M．Beyermann & M．Bienert，J．Org．Chem．56 (1991)，2635)；J．-N．Bertho，A．Loffet，C．Pinel，F．Reuther & G．Sennyey，〔in E．Giralt & D．Andreu(編)〕Peptides 1990，Escom Science Publishers B.V．1991，53-54頁）も同様に好ましく使用する。
【００２６】
上述のＰＮＡは、適当な支持材料（たとえばポリスチレンまたはポリオキシエチレンで変性されたポリスチレン、たとえば RTentagelまたは RControlled Pore Glass）で、基Ｑ0を潜在的様式で含有するアンカー基Ｌが与えられている支持体上、固相合成によって構築される。固相合成はＰＮＡのＣ−末端において、塩基不安定性保護基で保護されたモノマーまたは必要に応じてその側鎖官能基が保護されたアミノ酸の適当な樹脂へのカップリングによって開始する。
【００２７】
樹脂にカップリングされた構造成分の塩基不安定性保護基を上述のような適当な試薬を用いて除去したのち、以後の保護された構造成分（ＲＮＡモノマ−およびアミノ酸誘導体）を順次、所望の配列で互いにカップリングさせる。中間体として生じ、Ｎ末端が塩基不安定性保護基で保護されているＰＮＡ樹脂は、次のＰＮＡモノマーとの連結の前に、上述の試薬によって脱保護される。
【００２８】
アミノ酸誘導体のカップリングまたは上述の活性化試薬の１種による活性化は、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノン、アセトニトリルもしくはメチレンクロリド、または上記溶媒の混合物中において実施できる。活性化された誘導体は通常１.５〜１０倍過剰で使用される。不完全なカップリングが生じる場合には、カップリングさせたばかりの構造成分のアミノ基を脱保護することなく、そのカップリング反応を反復する。
【００２９】
基Ｒ0がカルボン酸官能基を含有する場合に適用可能な基Ｒ0の挿入方法の例が、アミノ酸とＰＮＡモノマーのカップリングのための上述の方法である。他の方法には、イソシアネートたとえばフェニルイソシアネート、イソチオシアネートたとえばフルオレセインイソチオシアネート、クロロギ酸誘導体たとえばクロロホルミルカルバゾール、活性化炭酸エステルたとえばコレステリル−４−ニトロフェニルカーボネートもしくはアクリジニウムスクシンイミジルカーボネート、スルホニルクロリドたとえばダンシルクロリド等の反応がある。
【００３０】
上述の合成操作は、通常使用されるプログラムをわずかに改変すれば、市販の自動シンセサイザーたとえばペプチドシンセサイザー、多重ペプチドシンセサイザーまたはＤＮＡシンセサイザーを用いて行うこともできる。
上述の方法でＰＮＡが合成されたならば、ＰＮＡオリゴマ−は、適当な試薬たとえば弱酸または中等度の強度の酸に不安定なアンカー基の場合にはトリフルオロ酢酸を用いて、樹脂から切断することができる。使用されたリンカーおよび保護基の性質に依存して、ヌクレオチド塩基のオリゴマーと付加的な側鎖保護基が同時に切断される。これらの環境下には開裂試薬はまた適当な溶媒たとえばメチレンクロリドで希釈して使用することができる。必要に応じて、副反応を回避するために、この開裂試薬にはさらに添加物を加えることもできる。この場合に適当な陽イオン捕獲剤は、フェノール、クレゾール、チオクレゾール、アニソール、チオアニソール、エタンジチオール、ジメチルスルフィド、エチル−メチル−スルフィド、トリエチルシラン、トリイソプロピルシランのような物質または固相ペプチド合成に慣用される類似の添加物である。これらの添加物は、個々にまたはこれらの補助物質の２種以上の混合物として添加できる。
【００３１】
開裂が行われたならば、得られた粗製のオリゴマーは、たとえばＨＰＬＣ、イオン交換クロマトグラフィー等、ペプチドまたはヌクレオチド化学に慣用される方法を用いて精製する。
アミノ酸について使用する略号はペプチド化学において慣用される、Eur．J．Biochem．138，9（1984）に記載された三文字のコードに従う。使用される他の略号を以下に掲げる。
【００３２】
ＡＣＮ＝  アセトニトリル
Ａｅｇ＝  Ｎ−（２−アミノエチル）グリシル、−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＨ2−ＮＨ−ＣＨ2−ＣＯ−
Ａｅｇ（ＡMmt）＝  Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（（９−（Ｎ6−４−メトキシフェニルジフェニル）アデノシル）アセチル）グリシル
Ａｅｇ（ＣMmt）＝  Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（（１−（Ｎ4−４−メトキシフェニルジフェニル）シトシル）アセチル）グリシル
Ａｅｇ（Ｔ）＝  Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（（１−チミニル）アセチル）グリシル
Ａｅｇ（ＴBom）＝  Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（（１−（Ｎ3−ベンジルオキシメチル）チミニル）アセチル）グリシル
Ａｅｇ（Ｔtriazolo）＝  Ｎ−（２−アミノエチル）−Ｎ−（（２−ヒドロキシ−５−メチル−４−トリアゾロピリミジン−１−イル）アセチル）グリシル
Ｂｎｐｅｏｃ＝  ２,２−［ビス（４−ニトロフェニル）］エトキシカルボニル）三級ブチルオキシカルボニル
Ｂｏｃ＝  三級ブチルオキシカルボニル
ＢＯＩ＝  ２−（ベンゾトリアゾール−１−イル）オキシ−１,３−ジメチルイミダゾリジニウムヘキサフルオロホスフェート
【００３３】
Ｂｏｍ＝  ベンジルオキシメチル
ＢＯＰ＝  ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＢｒｏＰ＝  ブロモトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＢＳＡ＝  Ｎ,Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド
Ｂｕｔ＝  三級ブチル
Ｂｚｌ＝  ベンジル
Ｃｌ−Ｚ＝  ４−クロロベンジルオキシカルボニル
ＣＰＧ＝  制御多孔ガラス
ＤＢＵ＝  １,８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン
ＤＣＭ＝  ジクロロメタン
Ｄｄｅ＝  １−（４,４−ジメチル−２,６−ジオキシシクロヘキシリデン）エチル
Ｄｄｚ＝  ３,５−ジメトキシフェニル−２−プロピル−２−オキシカルボニル
ＤＭＦ＝  ジメチルホルムアミド
ＤＭＴ＝  ４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル
Ｄｍｔ＝  ジ−（４−メトキシフェニル）フェニルメチル
Ｄｎｐｅｏｃ＝  ２−（２,４−ジニトロフェニル）エトキシカルボニル
ＦＡＭ＝  フルオレセイン残基
Ｆｍｏｃ＝  ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
Ｈ−Ａｅｇ−ＯＨ＝  Ｎ−（２−アミノエチル）グリシン
【００３４】
ＨＡＰｙＵ＝  Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−ビス（テトラメチレン）ウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＡＴＵ＝  Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＢＴＵ＝  Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＯＢｔ＝  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＯＮＳｕ＝  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
ＨＯＯｂｔ＝  ３−ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒドロベンゾトリアジン
ＭｅＯＢｚ＝  ４−メトキシベンゾイル
Ｍｍｔ＝  ４−メトキシトリフェニルメチル
Ｍｏｚ＝  ４−メトキシベンジルオキシカルボニル
ＭＳＮＴ＝  ２,４,６−メシチレンスルホニル−３−ニトロ−１,２,４−トリアゾリド
Ｍｔｔ＝  ４−（メチルフェニル）ジフェニルメチル
ＮＢＡ＝  ニトロベンジルアルコ−ル
ＮＭＰ＝  Ｎ−メチルピロリジン
Ｐｉｘｙｌ＝  ９−（９−フェニル）キサンテニル
ＰｙＢＯＰ＝  ベンゾトリアゾリル−１−オキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
ＰｙＢｒｏＰ＝  ブロモトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
【００３５】
ＴＡＰｉｐｕ＝  Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−ビス（ペンタメチレン）ウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＢＴＵ＝  Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ｔＢｕ＝  三級ブチル
ｔＢｕＢｚ＝  ４−三級ブチルベンゾイル
ＴＤＢＴＵ＝  Ｏ−（３,４−ジヒドロ−４−オキソ−１,２,３−ベンゾトリアジン−３−イル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＤＯ＝  ２,５−ジフェニル−２,３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチオフェンジオキシド
ＴＦＡ＝  トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝  テトラヒドロフラン
ＴＮＴＵ＝  Ｏ−（５−ノルボルネン−２,３−ジカルボキシイミド）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＯＴＵ＝  Ｏ−[（シアノ（エトキシカルボニル）メチレン）アミノ］−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
ＴＰＴＵ＝  Ｏ−（１,２−ジヒドロ−２−オキソ−１−ピリジル）−１,１,３,３′−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
Ｔｒｔ＝  トリチル
ＴＳＴＵ＝  Ｏ−（Ｎ−スクシンイミジル）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート
Ｚ＝  ベンジルオキシカルボニル
ＭＳ（ＥＳ+）＝  静電スプレ−マススペクトル（陽イオン）
ＭＳ（ＥＳ-）＝  静電スプレ−マススペクトル（陰イオン）
ＭＳ（ＤＣＩ）＝  脱着化学イオン化マススペクトル
ＭＳ（ＦＡＢ）＝  高速原子衝突マススペクトル
以下の実施例は本発明の化合物を製造する好ましい方法を説明することを意図するものであり、本発明をそれに限定するものではない。
【００３６】
例１
Ｎ−（Ｆｍｏｃ−アミノエチル）グリシンメチルエステル塩酸塩
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌ
８.２ｇのアミノエチルグリシンメチルエステルニ塩酸塩を１００mlの水に溶解し、４００mlのジオキサン中１３.４８ｇのＦｍｏｃ−ＯＮＳｕを激しく撹拌しながら加える。ついで１５０mlの水中１０.０８ｇの炭酸水素ナトリウムを１５分の間隔内に滴下して加える。混合物を室温でさらに１５時間撹拌したままにしたのち、真空中で約１００mlに濃縮する。この濃縮された混合物を酢酸エチル６００mlで抽出し、有機相を各回５０mlの水で３回洗浄する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥しついで約５０mlの容量に濃縮する。１００mlのジクロロメタンと２０mlの２Ｎメタノール性塩酸を加えると、生成物が直ちに沈殿する。混合物を密閉フラスコ中４℃に一夜放置する。沈殿を吸引ろ過し、乾燥する。
収量：９.８ｇ
ＲF：０.５０（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：３６１.２［Ｍ＋Ｌｉ］+
【００３７】
例２
Ｎ−（Ｆｍｏｃ−アミノエチル）グリシン塩酸塩
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＨ・ＨＣｌ
１１.２１ｇのアミノエチルグリシンを２５０mlのＤＭＦに懸濁し、撹拌しながら９８.８mlのビス（トリメチルシリル）アセトアミドを加える。１５分間撹拌すると、澄明な溶液が得られる。それに、３３.７ｇのＦｍｏｃ−ＯＮＳｕのＤＭＦ２００ml中溶液を１５分の間隔内に滴下して加える。ついで反応混合物をさらに１時間撹拌したのち、それにメタノールおよび水各１００mlを加える。１０分後、１６.６mlの６Ｎ塩酸も加え、混合物をさらに１０分間撹拌する。次に混合物を真空中ロータリーエバポレーターで濃縮乾固し、２５０mlのジクロロメタンを残留物に加え、この混合物を撹拌する。最初は澄明な溶液を生じるが、約５分後にこれから生成物が徐々に沈殿する。さらに２５０mlのジクロロメタンをゆっくりと加え、混合物を計１.５時間撹拌する。沈殿した生成物を速やかに吸引ろ過し、ついで吸引ろ斗上で各回１５０mlのジクロロメタンを用いて２回撹拌し、吸引ろ過する。沈殿をついでフラスコに移し、４５℃で約３００mlの酢酸エチルと共に完全に撹拌し、沈殿を温溶液からろ過し、ついで少量の温酢酸エチルで洗浄する。沈殿を真空乾燥器中で完全に乾燥する。
収率：３４.４ｇ
【００３８】
例３
Ｆｍｏｃ−アミノエチルグリシンの遊離
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＨ
２３ｇの上記Ｆｍｏｃ−アミノエチルグリシン塩酸塩を、４００mlの熱メタノ−ルに溶解する。混合物を室温まで冷却したのち、完全に撹拌しながら、８０mlのメタノ−ル中２.２ｇのＮａＯＨの溶液を滴下して加える。次いで生成物が直ちに沈殿する。溶液についで４０mlの水を加え、この混合物を加熱すると澄明な溶液が得られ、これを放置して室温までゆっくりと冷却させ、ついでさらに１時間０℃に放置する。沈殿を吸引ろ過し、各回７０mlの９０％含水メタノ−ルを用いて３回洗浄し、ついで真空乾燥器中で十分に乾燥させる。
収率：１５.０ｇ
ＲF：０.５５（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ２：１：２）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ）：３４１.２［Ｍ＋Ｈ］+
【００３９】
例４
２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル酢酸メチルエステル
１.４３ｇの水素化ナトリウム（９５％）を最初に、アルゴン雰囲気下、十分に乾燥したガラス装置中に取り、２００mlの十分に乾燥したＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミドを水素化物上に注ぐ。１０.０ｇの２−アミノ−６−クロロプリンをついで加えると、気体と熱の発生が起こり、黄色の溶液が形成される。この溶液を１時間完全に撹拌したのち、４０mlのＤＭＦ中１０.８ｇのブロモ酢酸メチルエステルの溶液をそれに滴下して加える。反応混合物をさらに２時間撹拌し、ついで油圧ポンプ真空下にロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物に水を加え、この混合物をついで酢酸エチルで抽出する。有機相を濃縮乾固し、粗生成物をシリカゲル上ジクロロメタン／メタノ−ル（９５／５）を用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。
収量：生成物１１ｇ
ＲF：０.４４（ジクロロメタン／メタノール ９：１）
ＭＳ（ＣＩ）：２４２（Ｍ＋Ｈ）+
【００４０】
例５
２−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−６−クロロプリン−９−イル酢酸メチルエステル
１１ｇの２−アミノ−６−クロロプリン−９−イル酢酸メチルエステルをアルゴン下、７５mlのピリジンと９.５mlのトリエチルアミンの混合物中に懸濁し、１５ｇの４−メトキシフェニル−ジフェニルメチルクロリドを４回に分けて１時間内に加える。混合物を一夜そのまま反応させ、ついで濃縮乾固する。残留物を少量のトルエンとともに１回共蒸留し、粗生成物をシリカゲル上ジクロロメタン／メタノール（９８：２）を用いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。
収量：１５.５ｇ
ＲF：０.６０（ジクロロメタン／メタノール ９７：３）
ＭＳ（ＥＳ+）：５１４.２（Ｍ＋Ｈ）+
【００４１】
例６
２−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−６−ヒドロキシプリン−９−イル酢酸
０.５ｇの２−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−６−クロロプリン−９−イル酢酸メチルエステルを水酸化ナトリウムの１０％溶液１２ml中還流下に３時間加熱する。この混合物をついで室温に冷却させ、注意深く１０％の塩酸で中和する。沈殿した生成物を吸引ろ過し、数回水で洗浄し、十分に乾燥する。
収量：４００mg
ＲF：０.１（ジクロロメタン／メタノール ７：３）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：４８８.２（Ｍ＋Ｌｉ）+
【００４２】
例７
６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン
１３.５ｇの６−アミノプリンおよび４６.２ｇの４−メトキシフェニル−ジフェニルメチルクロリドを５００mlの乾燥ジメチルホルムアミドに懸濁し、トリエチルアミン１３.９mlを添加したのち、この混合物を６０℃に短時間加熱する。ほぼ澄明な緑色を帯びた溶液を一夜放置する。ついで混合物を真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮し、５０mlのメタノールを加えてもう一度濃縮する。残留物をシリカゲル上０.１％トリエチルアミン含有ジクロロメタン／メタノール混合物（９５／５）を用いてクロマトグラフィーにより精製する．
収量：泡状物９.８ｇ
ＲF：０.３５（ジクロロメタン／メタノール ９：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＭｅＯＨ／ＮＢＡ）：４０８.２（Ｍ＋Ｈ）+
【００４３】
例８
６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン
２０.２５ｇの６−アミノプリンおよび６９.３ｇの４−メトキシフェニル−ジフェニルメチルクロリドを５００mlの乾燥ピリジンに懸濁し、次に１９.１mlの４−エチルモルホリンを添加し、この混合物を約４０℃に短時間加熱する。この混合物を一夜放置する。ついで懸濁液を水およびジクロロメタンと撹拌し、沈殿を吸引ろ過する。ジクロロメタン相を真空中で濃縮乾固し、少量のジクロロメタンと磨砕する。沈殿を吸引ろ過し、最初に得られた沈殿と合わせる。乾燥後、４７.３ｇの生成物が得られる。
ＲF：０.５３（酢酸エチル）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＭｅＯＨ／ＮＢＡ）：４０８.２（Ｍ＋Ｈ）+
【００４４】
例９
６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン−９−イル酢酸メチルエステル
６.２ｇの６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリンを乾燥ジメチルホルムアミド７５ml中に分散し、ついで０.３６ｇの水素化ナトリウムを加える。次にこの混合物を１時間撹拌し、ついで２.５２ｇのブロモ酢酸メチルエステルを加えて、撹拌をさらに２時間継続する。反応混合物についで２mlのメタノールを加えて１０分間撹拌し、真空中ロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物をシリカゲル上０.５％のトリエチルアミンを含む酢酸エチルを用いてクロマトグラフィーにより精製する。
収量：泡状物４.０ｇ
ＲF：０.６８（酢酸エチル／メタノール ３：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：４８０.２（Ｍ＋Ｈ）+；４８５.２（Ｍ＋Ｌｉ）+
【００４５】
例１０
６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン−９−イル酢酸
３.０ｇの６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン−９−イル酢酸メチルエステルを２０mlのジメチルホルムアミドに溶解し、この溶液に水５ml中０.２５ｇのＮａＯＨを撹拌しながら加える。１０分後、加水分解は完結し、希酢酸を用いて反応混合物のpHを６に調整する。混合物を水１００mlでさらに希釈し、ついで真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。残留物を次に少量のトルエンと２回蒸留し、得られた残留物にジエチルエーテルを加えると生成物が析出する。沈殿した生成物を吸引ろ過し、ついで少量のジエチルエーテルで洗浄し、乾燥する。
収量：３.２ｇ
融点：１５７−１６０℃（分解）
ＲF：０.１５（酢酸エチル／メタノール ３：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：４６５.１（Ｍ＋Ｈ）+；４７２.１（Ｍ＋Ｌｉ）+；４７８.２（Ｍ＋２Ｌｉ）+
【００４６】
例１１
１−アセチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン
１−アセチルチミン
７５ｇのチミンを３７５mlの無水酢酸に懸濁し、この懸濁液を４５分間還流下に加熱する。ついで、この混合物を０℃に冷却すると、生成物が沈殿する。沈殿を吸引ろ過し、３７５mlの酢酸エチルと撹拌する。沈殿を吸引ろ過し、ついで少量のジエチルエーテルで洗浄して乾燥する。
収量：８９.１ｇ
融点：１８７−１８９℃
ＲF：０.６７（ジクロロメタン／メタノール ９５：５）
【００４７】
例１２
３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン
３−ベンジルオキシメチルチミン
５２.０ｇの１−アセチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジンを３００mlのＤＭＦ中に懸濁し、４７.５mlのトリエチルアミンを添加したのち、混合物を０℃に冷却する。５０mlのＤＭＦ中１００mlのベンジルクロロメチルエーテルをこの温度で、完全に撹拌した混合物に徐々に滴下して加える。混合物をついでさらに１時間撹拌したのち、一夜室温に放置する。反応混合物をついで真空中ロータリーエバポレーターで濃縮して、残留物を４５０mlのメタノールおよび３００mlの４０％メチルアミン水溶液に取り、この混合物を１.５時間還流下に煮沸する。ついで溶液を濃縮し、残留物を水６００ml中１０.８ｇの炭酸水素ナトリウムとともに撹拌する。沈殿した生成物を吸引ろ過し、水およびエタノールで洗浄し、エタノールから再結晶する。
収量：４６.６６ｇ
融点：１１９−１２０℃
ＲF：０.３８（ジクロロメタン／メタノール ９５：５）
【００４８】
例１３
３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン−酢酸エチルエステル
３−ベンジルオキシメチルチミニル酢酸エチルエステル
４.９７ｇの水素化ナトリウムを最初に１５０mlのＴＨＦ中に導入し、ついで５５０mlのＴＨＦに溶解した３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン４５.０４ｇを、Ｎ2雰囲気下０℃で滴下して加え、ついでこの温度で、７００mlのＴＨＦ中２１.４２ｇのブロモ酢酸エチルエステルを加える。ついで混合物をさらに５時間室温に撹拌しながら放置し、次に水を注意深く加える。有機相を分離し、水相をさらに４回ジクロロメタンで抽出する。有機相を合わせて硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮し、残留物をヘプタンと撹拌する。
収量：５２.４ｇ
ＲF：０.１５（ジクロロメタン／メタノール ９５：５）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ）：３１９.１（Ｍ＋Ｈ）+
【００４９】
例１４
２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸エチルエステル
チミニル酢酸エチルエステル
２５ｇの３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン−酢酸エチルエステルを１０００mlのジクロロメタン中に溶解し、この混合物を−７０℃に冷却し、ジクロロメタン中三塩化ホウ素の１Ｍ溶液３７５mlをこの混合物に、この温度で、完全に撹拌しながら滴下して加える。混合物をこの温度でさらに３時間反応させたのち、３２０mlのメタノ−ルを−７０℃〜−６０℃で滴下して加える。１時間後に、１９７.０５mlのトリエチルアミンを加え、混合物の温度を室温まで上昇させる。ついで、少量の水を加え、混合物をロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物を酢酸エチルに取り、この混合物を水で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、ついで濃縮乾固する。
収量：１２ｇ
ＲF：０.４５（ジクロロメタン／メタノール ９：１）
ＭＳ（ＤＣＩ）：１９９（Ｍ＋Ｈ）+
【００５０】
例１５
２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸
チミニル酢酸
１０ｇの２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸エチルエステルをジオキサン／水（１：１）１３０mlに溶解し、ついで６０mlの１Ｎ−ＬｉＯＨを加えたのち、混合物を室温で一夜撹拌する。ついでこれを小容量に濃縮し、水相をエーテルで洗浄し、ついでpHを２.５に調整する。この時点で生成物が沈殿する。これを吸引ろ過すると生成物４.９ｇが得られる。母液をペンタノールで抽出しヘプタン／エ−テルで沈殿させるとさらに１.５ｇの生成物が得られる。
収量：６.４ｇ
ＲF：０.３０（ジクロロメタン／メタノール ３：２）
ＭＳ（ＤＣＩ）：１８５（Ｍ＋Ｈ）+
【００５１】
例１６
Ｎ1−クロロカルボキシメチルチミン
チミニルアセチルクロリド
例１６ａ
２ｇの２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸を１５mlのチオニルクロリドと、６０℃で３時間、も早気体が発生しなくなるまで撹拌する。ついで過剰のチオニルクロリドを真空中ロータリーエバポレーターを用いて留去し、残留物をついで、少量のトルエンとともに３回蒸留する。得られた生成物はそのまま次の反応に使用する。
収量：２.４ｇ
ＭＳ（ＤＣＩ）：２０３（Ｍ＋Ｈ）+
【００５２】
例１６ｂ
Ｎ1−カルボキシメチルチミン（３.０ｇ；１６.３ミリモル）をチオニルクロリド（９０ml）に懸濁する。この懸濁液を７０℃に１.５時間加熱し、ついで室温に１６時間放置する。過剰のチオニルクロリドを真空中で除去し、残留物をトルエンとともに３回共蒸留する。得られた生成物をｎ−ヘキサンと２回磨砕し、真空中で乾燥する。化合物は淡橙色の粉末として得られる。
収量：３.３０ｇ
ＭＳ（ＣＩ；ジクロロメタン）：２０３（Ｍ＋Ｈ）+
ＲF：０.１０（ジクロロメタン／メタノール ７：３）
【００５３】
例１７
２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン
Ｎ4−Ｍｍｔ−シトシン
１１.６ｇの４−アミノ−２−ヒドロキシピリミジンおよび４６.２ｇの４−メトキシフェニルジフェニルメチルクロリドを５００mlの乾燥ピリジンに懸濁して、１２.８mlの４−エチルモルホリンを添加したのち、この混合物を約４０℃に短時間加熱する。この混合物を一夜放置する。ついで懸濁液を水およびジクロロメタンと撹拌し、沈殿を吸引ろ過する。ジクロロメタン相を真空中で濃縮乾固し、残留物を少量のジクロロメタンと磨砕する。沈殿を吸引ろ過し、最初に得られた沈殿と合わせる。乾燥後、１６.８ｇの生成物が得られる。
ＲF：０.４５（ジクロロメタン／メタノール ９：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＭｅＯＨ／ＮＢＡ）：３８４.２（Ｍ＋Ｈ）+
【００５４】
例１８
２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン−１−イル酢酸メチルエステル
Ｎ4−Ｍｍｔ−シトシル酢酸メチルエステル
１１.５ｇの２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジンを乾燥ジメチルホルムアミド１２０ml中に分散し、ついで０.７２ｇの水素化ナトリウムを加える。次にこの混合物を１時間撹拌したのち５.０５ｇのブロモ酢酸メチルエステルを加えて、撹拌をさらに２時間継続する。反応混合物についで２mlのメタノールを加えて１０分間撹拌し、真空中ロータリーエバポレーターで濃縮する。残留物を水と磨砕し、吸引ろ過して乾燥する。
収量：１０.７ｇ
ＲF：０.３９（酢酸エチル）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：４６２.２（Ｍ＋Ｌｉ）+
【００５５】
例１９
２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン−１−イル酢酸
Ｎ4−Ｍｍｔ−シトシル酢酸
１０.５ｇの２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン−１−イル酢酸メチルエステルを１００mlのジメチルホルムアミドに溶解し、この溶液に撹拌しながら、水５ml中０.９４ｇのＮａＯＨを加える。１０分後、加水分解は完結し、希酢酸を用いて反応混合物のpHを６に調整する。ついで混合物を水１００mlで希釈し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。残留物を次に少量のトルエンと２回蒸留し、これらの蒸留から得られた残留物にジエチルエーテルを加えると生成物が沈殿する。沈殿した生成物を吸引ろ過し、ついで少量のジエチルエーテルで洗浄し、乾燥する。
収量：８.５５ｇ
ＲF：０.２７（酢酸エチル）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：４４８（Ｍ＋Ｌｉ）+
【００５６】
例２０
Ｎ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−Ｎ1−カルボキシメチルシトシン
Ｎ4−Ｂｏｃ−シトシル酢酸
例２０ａ
Ｎ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−シトシン
Ｎ4−Ｂｏｃ−シトシン
シトシン（１１.１ｇ）を乾燥ピリジン（２５０ml）に懸濁する。ついで、ジ三級ブチルジカルボネート（２１.８ｇ）とスパーテルの先端量の４−ジメチルアミノピリジンを添加する。この混合物を６０℃で６時間撹拌すると、濃厚な沈殿が出現する。反応液を冷却し、沈殿を吸引ろ過する。沈殿を温水と撹拌し、吸引ろ過し、真空中で乾燥する。
収量：１０.２６ｇ
ＭＳ（ＤＣＩ）：２１２（Ｍ＋Ｈ）+
ＲF：０.６（ジクロロメタン／メタノール ６：４）
【００５７】
例２０ｂ
Ｎ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−Ｎ1−メトキシカルボニルメチルシトシン
Ｎ4−Ｂｏｃ−シトシル酢酸メチルエステル
Ｎ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−シトシン（１.６ｇ）を乾燥ＤＭＦ（３０ml）中に懸濁し、水素化ナトリウム（０.１９ｇ）を少量ずつ加え、混合物を室温で１.５時間、水素の発生が完結するまで撹拌する。次に、ブロモ酢酸メチルエステル（０.８４ml）を室温でシリンジを用いて滴下して加える。混合物を室温でさらに５時間撹拌し、ついでメタノール（１ml）を加える。溶媒を真空中で留去し、残った残留物をシリカゲル上溶出液としてジクロロメタンを用いてカラムクロマトグラフィーにより精製する。生成物を含有する分画を合わせて真空中で濃縮する。
収量：１.１ｇ
ＭＳ（ＤＣＩ）：２８４（Ｍ＋Ｈ）+
ＲF：０.５（ジクロロメタン／メタノール ９５：５）
【００５８】
例２０ｃ
Ｎ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−Ｎ1−カルボキシメチルシトシン
Ｎ4−（Ｂｏｃ−シトシル酢酸）
Ｎ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−Ｎ1−メトキシカルボニルメチルシトシン（４.２ｇ）を水（３０ml）に懸濁し、０℃でpHを制御（pH１２）しながら、メチルエステルが加水分解されるまで、水酸化ナトリウムの２Ｎ水溶液を滴下して加える。反応の進行はＴＬＣによってモニターする。反応溶液のpHを酢酸で３に調整し、溶媒を真空中で留去する。粗生成物をシリカゲル上溶出液としてジクロロメタン／メタノール／トリエチルアミン ８：１：１を用いてカラムクロマトグラフィーにより精製する。生成物を含有する分画を合わせて真空中で濃縮する。
収量：３.５ｇ
融点：９５−９８℃（分解）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＮＢＡ）：２７０.２（Ｍ＋Ｌｉ）+
ＲF：０.３５(ジクロロメタン／メタノ−ル／トリエチルアミン ８：１：１)
【００５９】
例２１
Ｎ−［２−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−６−ヒドロキシプリン−９−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシン
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＧMmt)−ＯＨ
１ｇの２−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−６−ヒドロキシプリン−９−イル酢酸をＤＭＦに溶解し、６８２mgのＴＯＴＵおよび２３９mgのＮ−エチルモルホリンを、順次、予め０℃に冷却した上記溶液に添加する。混合物をついで室温で２０分間撹拌する。１.０６ｇのＦｍｏｃ−アミノエチルグリシンの４mlのジメチルホルムアミドと１.５ｇのビス（トリメチルシリル）アセトアミド中溶液を別のフラスコ中に調製する。この溶液をついで、２−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）−６−ヒドロキシプリン−９−イル酢酸の予め活性化した溶液に加える。混合物をさらに２時間撹拌し、ついで濃縮乾固する。次に残留物を３０mlの酢酸エチルに取り、この混合物を各回１５mlの水で３回抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、シリカゲル上メタノール／ジクロロメタン／水／氷酢酸（１.５：１０：０.２５：０.０７５）を用いてクロマトグラフィーによって精製する。
収量：６００mg
ＲF：０.３５（メチレンクロリド：メタノール／７：３）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：８１０.３（Ｍ＋Ｌｉ）+
【００６０】
例２２
Ｎ−［６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン−９−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシンメチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＡMmt)−ＯＭｅ
８４８mg（２.６ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌおよび４０７mg（２.５ミリモル）のＨＯＯＢｔの混合物を５mlのＤＭＦに溶解し、ついでこの溶液に、５mlのＤＭＦに溶解した６４０μｌ（５ミリモル）のＮＥＭおよび１.２ｇ（２.５ミリモル）の６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン−９−イル酢酸の溶液を加える。その後、４７１μｌ（３ミリモル）のジイソプロピルカルボジイミドを加え、混合物を室温で４時間撹拌する。ついで混合物をろ過し、ろ液を真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。無定形の残留物をジクロロメタンに取り、この混合物を水および炭酸水素ナトリウム溶液で抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃縮乾固する。残留物を４.５mlの酢酸エチルに溶解し、ジイソプロピルエーテル２０mlを加をえて沈殿を生じさせる。得られた半固体の沈殿を２０mlのメタノールに溶解し、３０mlの水を加えて沈殿させ、ついで真空中で乾燥させる。
収量：１.０５ｇ
ＲF：０.８５（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：８０２.４（Ｍ＋Ｈ）+
【００６１】
例２３
Ｎ−［６−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）プリン−９−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシンの合成
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＡMmt)−ＯＨ
９００mg（１.１２５ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ(ＡMmt)−ＯＭｅを５mlのジオキサンおよび２.５mlの水の混合物中に溶解し、氷水で冷却しながら、２.４mlの１Ｎ−ＮａＯＨと２.５mlのジオキサンの混合物を少量ずつ添加して加水分解する。反応が完了したならば、混合物に少量の固体二酸化炭素を加えて緩衝化し、わずかに起こっていたＦｍｏｃの除去をＦｍｏｃ−ＯＮＳＵを添加して逆転させる。ついで大部分のジオキサンを真空中で留去し、溶液を水で希釈し、酢酸エチル／ｎ−ブタノール（１：１）で覆う。混合物を氷水で冷却しながら、硫酸水素カリウムの溶液を加えてpHを５〜６の酸性にする。有機相を分離し、水相はさらに２回酢酸エチル／ｎ−ブタノール（１：１）で抽出する。有機相を合わせて硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。残留物を５mlの酢酸エチルに溶解し、メチルブチルエーテル２０mlを加えて沈殿させる。
収量：１.０２ｇ
ＲF：０.７３（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：７８７(Ｍ＋Ｈ)+、７９４(Ｍ＋Ｌｉ)+
【００６２】
例２４
Ｎ−（２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イルアセチル）−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシン
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＨ
４.０３ｇのＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＨを８０mlのＤＭＦに懸濁し、４.３９mlのＮ,Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミドを加え、この混合物を室温で４０分間撹拌する。ついで澄明な溶液に、０℃で撹拌しながら、２.４ｇの２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジンアセチルクロリドを加える。この混合物を室温でさらに３時間反応させ、ついでロータリーエバポレーターで溶媒を留去する。生成した粗生成物に水を加え、この混合物を０℃に一夜放置する。ついで水を傾瀉し、残留物を高真空下に乾燥し、シリカゲル上ジクロロメタン／メタノール／氷酢酸／水（５００／１００／２５／２）を用いてクロマトグラフィーによって精製する。生成物の分画を合わせて濃縮乾固し、ついでさらに３回少量のトルエンとともに蒸留する。
収量：３.８ｇ
ＲF：０.４２（ジクロロメタン／メタノール／酢酸 １００：２０：５）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：５０７.３（Ｍ＋Ｈ）+
【００６３】
例２５
Ｎ−（２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イルアセチル）−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシン
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＨ
３８６mg（２ミリモル）の２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸および６５２mg（４ミリモル）のＨＯＯＢｔの混合物を６mlのＤＭＦ中７０〜８０℃に短時間加熱する。混合物を室温まで冷却したのち、３１４μｌ（２ミリモル）のジイソプロピルカルボジイミドを加え、混合物を３０分間撹拌する。その後、６８６mg（２ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＨを加え、３０分間隔で混合物を約７０℃に短時間３回加熱する。ついで溶媒を真空中ロータリーエバポレーターを用いて蒸発させ、残った残留物を水と磨砕する。得られた粗生成物をｎ−ブタノールと水に分配する。有機相を硫酸水素カリウム溶液、炭酸水素カリウム溶液および水で抽出する。有機相をついで真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮すると、生成物が沈殿する。
収量：２６０mg
ＲF：０.４０（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：５０７.３（Ｍ＋Ｈ）+
【００６４】
例２６
Ｎ−［２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン−１−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシンメチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣMmt)−ＯＭｅ
１.７ｇ（５ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌ、および６７５mg（５ミリモル）のＨＯＯＢｔの混合物を１０mlの乾燥ＤＭＦに溶解し、これに、１.２８ml（１０ミリモル）のＮＥＭを加える。ついでこの混合物を０℃に冷却し、２.２１ｇ（５ミリモル）の２−ヒドロキシ−４−(４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン−１−イル酢酸、続いて５ミリモルのジイソプロピルカルボジイミドを加え、この混合物をついで０℃で３０分間撹拌する。次に室温で４.５時間撹拌したのち、溶媒を真空中ロータリーエバポレーターを用いて留去する。残留物をジクロロメタンと水に分配し、有機相を炭酸水素ナトリウムの溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固する。残留物を１０mlのメタノールに溶解し、水１５mlを加えて沈殿させる。得られた生成物を少量の水と磨砕し、水酸化カリウム上真空乾燥器中で乾燥する。
収量：３.１９ｇ
ＲF：０.７９（ｎ−ブタノール／ピリジン／水／酢酸 ８：２：２：１０）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：７７８.４（Ｍ）+
【００６５】
例２７
Ｎ−［２−ヒドロキシ−４−（４−メトキシフェニルジフェニルメチルアミノ）ピリミジン−１−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシン
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣMmt)−ＯＨ
３.０ｇ（３.８６ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣMmt)−ＯＭｅを１５mlのジオキサンおよび１０mlの水の混合物中に溶解し、この溶液を氷水で冷却しながら、１０.２mlの１Ｎ−ＮａＯＨとジオキサンの混合物（１：１）を少量ずつ添加して加水分解する。反応が完了したならば、混合物に少量の固体二酸化炭素を加えて緩衝化し、わずかに起こっていたＦｍｏｃの除去を０.５ｇのＦｍｏｃ−ＯＮＳＵの添加ついで４５分間の撹拌により逆転させる。次に、混合物に硫酸水素カリウムの２Ｍ溶液０.５mlを加えてpHを６.５に調整する。ついで大部分のジオキサンを真空中で留去し、溶液を水で希釈し、酢酸エチルで覆う。混合物を氷水で冷却しながら、硫酸水素カリウムの溶液を加えてpHを５の酸性にする。有機相を分離し、水相はさらに２回酢酸エチルで抽出する。有機相を合わせて硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。残留物を５mlのメタノールと１５mlの酢酸エチルの混合物に溶解し、メチルブチルエーテル８０mlを加えて沈殿させる。生成物をろ過し、真空中で乾燥する。
収量：１.９５ｇ
ＲF：０.８０（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ／ＬｉＣｌ）：７７０.３(Ｍ＋Ｌｉ)+
【００６６】
例２８
Ｎ−［２−ヒドロキシ−４−（三級ブチルオキシカルボニルアミノ）ピリミジン−１−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシンメチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣBoc)−ＯＭｅ
０.８５（３ミリモル）のＮ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−Ｎ1−カルボキシメチルシトシンおよび０.４９ｇ（３ミリモル）のＨＯＯＢｔの混合物を５mlの乾燥ＤＭＦに溶解し、ついで、７８６μｌ（６ミリモル）のＮＥＭを、続いて１.０２ｇ（３ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌを加える。この混合物を０℃に冷却し、５６４μｌ（３.６ミリモル）のジイソプロピルカルボジイミドを加え、この混合物を０℃で３０分間、室温で４時間撹拌する。溶媒をついで真空中ロータリーエバポレーターを用いて留去する。残留物をジクロロメタンと水に分配し、有機相を炭酸水素ナトリウムの溶液および水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固する。残留物を２０mlの酢酸エチルから再結晶する。
収量：１.１９ｇ
ＲF：０.８８（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：６０６.３（Ｍ）+
【００６７】
例２９
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣBoc)−ＯＭｅ
２.８７ｇ（８.４７ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌと１.３８ｇ（８.４７ミリモル）のＨＯＯＢｔの混合物を１５mlの乾燥ＤＭＦに溶解し、これに、１.０８ml（８.４７ミリモル）のＮＥＭ、続いて２.４ｇ（８.４７ミリモル）のＮ4−（三級ブチルオキシカルボニル）−Ｎ1−カルボキシメチルシトシンを加える。この混合物をついで０℃に冷却し、１.３３ml（８.４７ミリモル）のジイソプロピルカルボジイミドを加え、０℃で３０分間、室温で３時間撹拌する。ついで溶媒を真空中ロータリーエバポレーターを用いて留去する。残留物を１００mlのジクロロメタンに取り、有機相を水、炭酸水素ナトリウムの溶液および水で順次洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固する。残留物をメチル三級ブチルエーテルと磨砕する。
収量：４.５ｇ
ＲF：０.８８（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
【００６８】
例３０
Ｎ−［２−ヒドロキシ−４−（三級ブチルオキシカルボニルアミノ）ピリミジン−１−イルアセチル］−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシン
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣBoc)−ＯＨ
７００mg（１.１５ミリモル）のＦｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣBoc)−ＯＭｅを６mlのジオキサンおよび３mlの水の混合物中に溶解して、０℃で２時間の間隔内に、計０.９５mlの２Ｎ−ＮａＯＨを少量ずつ加える。反応が完了したならば混合物に少量の固体二酸化炭素を加えて緩衝化し、わずかに起こっているＦｍｏｃの除去を５おmgのＦｍｏｃ−ＯＮＳＵの添加ついで４５分間の撹拌により逆転させる。次に、混合物に硫酸水素カリウムの２Ｍ溶液０.５mlを加えてpHを６.５に調整する。ついで大部分のジオキサンを真空中で留去し、この溶液を水で希釈し、酢酸エチルで覆う。混合物を氷水で冷却しながら、硫酸水素カリウムの溶液を加えてpHを５の酸性にする。有機相を分離し、水相はさらに２回酢酸エチルで抽出する。有機相を合わせて硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮すると、生成物が沈殿する。生成物をろ過し、真空中で乾燥する。
収量：４８５mg
ＲF：０.５５（ｎ−ブタノール／ピリジン／酢酸／水 ８：２：２：１０）
ＭＳ（ＦＡＢ、ＤＭＳＯ／ＮＢＡ）：５９２(Ｍ+)
【００６９】
例３１
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＭｅ
１１.７３ｇのＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌを５.５２ｇのチミニル酢酸とともに１００mlの乾燥ＤＭＦに溶解し、９.８４ｇのＴＯＴＵおよび２０.４mlのジイソプロピルエチルアミンを順次加える。混合物を室温で３時間撹拌し、真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮する。残留物を酢酸エチルに取り、この混合物を炭酸水素ナトリウム溶液および硫酸水素カリウム溶液でそれぞれ３回抽出する。有機相を濃縮し、残留物を少量の酢酸エチルに溶解しこの溶液にエーテルを加えると、生成物が沈殿する。
収量：１２.３ｇ
ＲF：０.６３（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＥＳ+）：５２１.４(Ｍ＋Ｈ)+
【００７０】
例３２
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＨ
１２.０ｇのＦｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＭｅを、１００mlのジオキサンと５０mlの水の混合物に懸濁し、３２mlの２Ｎ−ＮａＯＨを少量ずつ加えて加水分解する。反応が完了後、混合物に少量の固体二酸化炭素を加えて緩衝化し、部分的に起こっているＦｍｏｃの除去を、２.７mgのＦｍｏｃ−ＯＮＳＵの添加により逆転させる。次に、混合物をろ過し、ろ液を酢酸エチルで抽出する。水相に１Ｎ−ＨＣｌを加えてpHを２に調整すると、生成物が沈殿する。沈殿を吸引ろ過し、真空中で乾燥する（粗生成物１１.６ｇ）。塩を除去するため、粗生成物を穏やかに加温したＤＭＦ７０mlに取り、溶解しない物質をろ去し、ろ液を濃縮乾固する。残留物を酢酸エチルに取り、イソプロピルエーテルを加えて沈殿させる。生成物を吸引ろ過し、真空中で乾燥する。
収量：１０.４ｇ
ＲF：０.４０（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＥＳ+）：５０７.３(Ｍ＋Ｈ)+
【００７１】
例３３
３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸３−ベンジルオキシメチルチミニル酢酸
１３.６５ｇの３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸エチルエステルを４００mlのジオキサン、２００mlの水、１００mlのメタノールおよび４０mlの２Ｎ−ＮａＯＨの混合物中に溶解する。混合物を室温で２時間撹拌すると、加水分解は完結する。混合物を真空中ロータリーエバポレーターを用いて容量約２００mlに濃縮し、ついで水２００mlを加え、混合物を１回酢酸エチルで抽出する（捨てる）。水相のpHを１Ｎ−ＨＣｌにより１.５に調整し、１００mlの酢酸エチルで３回抽出する。酢酸エチル相を合わせて、硫酸ナトリウム上で乾燥する。乾燥剤をろ過後、ろ液を濃縮乾固する。粘稠な油状物が残り、これをそのまま次の反応に使用する。比較的長期間放置すると、油状物は固化する。
収量：１１.３５ｇ
ＲF：０.６４（２−ブタノン／ピリジン／水／酢酸 ７０：１５：１５：２）
ＭＳ（ＥＳ+）：３０５.２(Ｍ＋Ｈ)+
【００７２】
例３４
Ｎ−（３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イルアセチル）−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシンメチルエステル
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＴBom)−ＯＭｅ
３.０４ｇの３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン酢酸を１００mlの乾燥ＤＭＦに溶解、し３.９ｇのＦｍｏｃ−Ａｅｇ−ＯＭｅ・ＨＣｌ、３.２８ｇのＴＯＴＵおよび５.１mlのジイソプロピルエチルアミンを順次加える。混合物を室温で２時間撹拌し、次いで真空中ロータリーエバポレーターを用いて濃縮乾固する。残留物を酢酸エチルに取り、この混合物を炭酸水素ナトリウム溶液および硫酸水素カリウム溶液でそれぞれ３回抽出する。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、乾燥剤をろ過したのち濃縮する。残った泡状の残留物を石油エーテルと磨砕し、吸引ろ過し、真空中で乾燥する。
収量：４.６８ｇ
ＲF：０.７５（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＥＳ+）：６４１.４(Ｍ＋Ｈ)+
【００７３】
例３５
Ｎ−（３−ベンジルオキシメチル−２,４−ジヒドロキシ−５−メチルピリミジン−１−イルアセチル）−Ｎ−２−（９−フルオレニルメチルオキシカルボニルアミノ）エチルグリシン
Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＴBom)−ＯＨ
２.３ｇのＦｍｏｃ−Ａｅｇ(ＴBom)−ＯＭｅを３０mlのジオキサンと１５mlの水の混合物に溶解し、７.３６mlの１Ｎ−ＮａＯＨを少量ずつ加えて加水分解する。反応完結後、混合物に少量の固体二酸化炭素を加えて緩衝化し、部分的に起こっているＦｍｏｃの除去を０.４１ｇのＦｍｏｃ−ＯＮＳＵの添加により逆転させる。次に、混合物をろ過し、ジオキサンを真空中ロータリーエバポレーターを用いて留去し、残留溶液を３０mlの水で希釈し、まだアルカリ性の得られた溶液を酢酸エチルで１回抽出する。水相を１Ｎ−ＨＣｌでpH３に調整すると、生成物が沈殿する。混合物を冷室に４℃で一夜放置したのち、沈殿を吸引ろ過し、真空中で乾燥する。ろ液を小容量に濃縮すると、ろ液からさらに生成物が沈殿する。
収量：１.４７ｇ
ＲF：０.３７（ｎ−ブタノール／酢酸／水 ３：１：１）
ＭＳ（ＥＳ+）：６２７.２(Ｍ＋Ｈ)+
【００７４】
例３６
Ｈ−(Ａｅｇ(Ｔ)）8−Ｌｙｓ−ＮＨ2(Ｃ49Ｈ127Ｎ35Ｏ33、式量２２７５.２６)合成は、Abimed製の多重ペプチドシンセサイザー中、アンカー基として５−（Ｆｍｏｃ−アミノ−４−メトキシベンジル）−２,４−ジメトキシフェニルプロピオン酸を用い、アミノメチル−ポリスチレン樹脂上で行う。
１４.７mg（１０マイクロモル）のＦｍｏｃ−アミドアンカー樹脂をＤＭＦ中で予め膨潤させ、多重ペプチドシンセサイザーの反応容器に導入する。合成には以下の反応溶液を使用する。
１）  アクティベーター溶液：乾燥ＤＭＦ中０.８７６モルＰｙＢＯＰ溶液
２）  活性化用塩基：乾燥ＤＭＦ中３.９５モルＮＥＭ溶液
３）  Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.６５モル溶液
４）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ１ml中２５０mg
５）  ピペリジン：ＤＭＦ中２０％溶液
ピペリジン溶液によるＦｍｏｃの除去およびＤＭＦでの洗浄ののち、アクティベーター溶液、Ｆｍｏｃ誘導体および塩基を、反応容器中の脱保護樹脂に加える。カップリング時間は４０分とする。反応を２８分間進行させたのち、１００μｌのジクロロメタンを加える。ついで樹脂をＤＭＦで５回洗浄すると、ピペリジンによる次の処理が実施できる。Ｆｍｏｃの最後の除去後に、樹脂を乾燥し、計４mlの９５％ＴＦＡを少量ずつ加えて処理する（約２.５時間）。ＴＦＡ溶液を真空中で濃縮し、残留物を２５０μｌのＴＦＡに溶解する。この溶液を５個のエッペンドルフチューブに分配し、各チューブあたり６００μｌのメチル三級ブチルエーテルを加えて沈殿させる。遠心分離して沈殿を沈降させ、ついで上清を傾瀉して除去する。沈殿を少量のメチル三級ブチルエーテルに懸濁し、再び遠心分離して沈降させ、上清をもう一度傾瀉する。この操作をもう一度繰り返して生成物を真空中で乾燥する。精製はRＭｏｎｏＱカラム（Pharmacia，Munzingen）上、１０ｍＭ−ＮａＯＨ（pH１２）中０.１７〜０.４４Ｍの食塩勾配を用いるクロマトグラフィーによって行い、限外ろ過によって脱塩する。
収量：１９８ ＯＤ260
ＭＳ（ＦＡＢ、ＡｃＯＨ／ＮＢＡ）：２２９８（Ｍ＋Ｎａ）+
【００７５】
例３７
Ｈ−（Ａｅｇ(Ｔtriazolo)）8−Ｌｙｓ−ＮＨ2（Ｃ110Ｈ134Ｎ58Ｏ26、式量２６８２.６５）
合成は３８０Ｂ ＡＢＩ ＤＮＡシンセサイザー中、アンカー基として５−（Ｆｍｏｃ−アミノ−４−メトキシベンジル）−２,４−ジメトキシフェニルプロピオン酸を用い、アミノメチル−ポリスチレン樹脂上で行う。１４.７mg（１０マイクロモル）のＦｍｏｃ−アミドアンカー樹脂を、小合成カラム中、以下の溶液を添加するプログラムコントロールにより反応させる。
位置１：Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ：ＤＭＦ中０.６６モル溶液
位置２：乾燥ＤＭＦ２ml中Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔtriazolo)−ＯＨ ７３５mg
位置５：１.３５mlのＮＥＭと１.７mlのＤＭＦの混合物（３.４６モル）
位置６：ＰｙＢＯＰ：乾燥ＤＭＦ中０.９１モル溶液
位置１４：ＭＦ中２０％ピペリジン
位置１６：樹脂洗浄用ＤＭＦ
位置１７：反応用ＤＭＦ（乾燥）
充填に使用する量は流速により、リジン誘導体またはアミノエチルグリシン誘導体の５倍過剰に調整する。カップリングは各場合２回行う。化合物を樹脂から切断するためには、計約５mlの９０％ＴＦＡを小カラムから手動で２時間を要して押出す。ＴＦＡを真空中で濃縮し、残留物を３００μｌのＴＦＡに溶解する。この溶液を６個のエッペンドルフチューブに分配する。各チューブにメチル三級ブチルエーテル１mlを加えて生成物を沈殿させる。遠心分離して沈殿を沈降させ、ついで上清を傾瀉して除去する。沈殿を少量のメチル三級ブチルエーテルに懸濁し、再び遠心分離して沈降させ、上清をもう一度傾瀉する。この操作をもう一度繰り返して生成物を真空中で乾燥する。最後に、生成物をメチル三級ブチルエーテルにもう一度懸濁し、遠心分離して乾燥する。
収量：２７０ ＯＤ260
ＭＳ（ＦＡＢ／ＮＢＡ）：２６８４（Ｍ+）
【００７６】
例３８
Ｈ−(Ａｅｇ(Ｃ))7−Ｌｙｓ−ＮＨ2(Ｃ76Ｈ106Ｎ38Ｏ22、式量１９０３.９２)
１５mlの乾燥ＤＭＦに溶解した７５０mgのＦｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣMmt)−ＯＨを用いるほかは例３６の記載と同様に合成を行う。切断および沈殿は上述のように実施する。
収量：１６mgまたは２１８ ＯＤ260
ＭＳ（ＦＡＢ、ＴＦＡ／ＮＢＡ）：１９０５（Ｍ＋Ｈ）+
【００７７】
例３９
Ａｃ−Ａｅｇ(Ａ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ａ)−Ａｅｇ(Ｔ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ａ)−Ａｅｇ(Ｔ)−Ａｅｇ(Ｇ)−Ａｅｇ(Ｇ)−Ａｅｇ(Ｔ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ｇ)−Ｌｙｓ−ＮＨ2（Ｃ137Ｈ176Ｎ72Ｏ38、式量３４３９.３９）
ＰＮＡはEcosyn Ｄ３００ ＤＮＡシンセサイザー（Eppendorf／Biotronik製、Maintal）により、アンカー基として５−（Ｆｍｏｃ−アミノ−４−メトキシベンジル）−２,４−ジメトキシフェニルプロピオン酸を負荷したアミノプロピル−ＣＰＧ、１００mg（５マイクロモル）を用いて合成する。
【００７８】
合成には以下の溶液を使用した。
１）  アクティベーター溶液：乾燥ＤＭＦ中０.３モルＨＡＴＵ溶液
２）  活性化用塩基：乾燥ＤＭＦ中０.３モルＮＥＭ溶液
３）  Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ(Ｂｏｃ)−ＯＨ：ＤＭＦ中０.３モル溶液
４）  Ｆｍｏｃの除去：ＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液
５）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
６）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＡMmt)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
７）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣMmt)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
８）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＧMmt)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
ピペリジン溶液によるＦｍｏｃの除去およびＤＭＦでの洗浄ののち、アクティベーター溶液、Ｆｍｏｃ誘導体および塩基を、反応容器中の脱保護支持体に加える。カップリング時間は２０分とする。ついでＣＰＧをＤＭＦで５回洗浄すると、ピペリジンによる次の処理が実施できる。合成完了後、ＰＮＡ−ＣＰＧ支持体を乾燥し、ついで上述のように後処理する。
収量：２１０ ＯＤ260
ＭＳ：３４３９.４（ＥＳ+）：（Ｍ）+
【００７９】
例４０
Ｈ−Ａｓｐ−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ａ)−Ａｅｇ(Ｔ)−Ａｅｇ(Ｇ)−Ａｅｇ(Ｇ)−Ａｅｇ(Ｔ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｅｇ(Ｃ)−Ａｓｐ−ＮＨ−(ＣＨ2)6−ＯＨ（Ｃ119Ｈ157Ｎ57Ｏ38，式量２９９３.９４）
ＰＮＡはEcosyn Ｄ３００ ＤＮＡシンセサイザー（Eppendorf／Biotronik製、Maintal）により、６−メチルアミノヘキス−１−イルヘミスクシネートを負荷したアミノプロピル−ＣＰＧ、１３３mg(５マイクロモル)を用いて合成する。
【００８０】
合成には以下の溶液を使用した。
１）  アクティベーター溶液：乾燥ＤＭＦ中０.３モルＨＡＴＵ溶液
２）  活性化用塩基：乾燥ＤＭＦ中０.３モルＮＥＭ溶液
３）  Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯｔＢｕ)−ＯＨ：ＤＭＦ中０.３モル溶液
４）  Ｆｍｏｃの除去：ＤＭＦ中２０％ピペリジン溶液
５）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(Ｔ)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
６）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＡMmt)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
７）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＣMmt)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
８）  Ｆｍｏｃ−Ａｅｇ(ＧMmt)−ＯＨ：乾燥ＤＭＦ中０.３モル溶液
ピペリジン溶液によるＦｍｏｃの除去およびＤＭＦでの洗浄ののち、アクティベーター溶液、Ｆｍｏｃ誘導体および塩基を、反応容器中の脱保護支持体に加える。カップリング時間は２０分とする。ついでＣＰＧをＤＭＦで５回洗浄すると、ピペリジンによる次の処理が実施できる。合成完了後、ＰＮＡ−ＣＰＧ支持体を乾燥し、塩基上のＭｍｔ保護基をまず３％トリクロロ酢酸を用いて除去し、ついでアスパラギン酸上の三級ブチル基をジクロロメタン中６０％ＴＦＡを用いて除去する。次にＰＮＡを６５℃でアンモニア溶液によって処理して支持体から切断し、ついで上述のように後処理する。
収量：１００ ＯＤ260
ＭＳ：２９９４.４（ＥＳ+）：（Ｍ＋Ｈ）+