(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
製薬上許容される担体と、以下の一般式Ｉの化合物またはその製薬上許容される塩を含む、薬理組成物：
0004190584.tif 000017
ここで、ＲおよびR1はそれぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ、低級アルキル基およびアミノ基からなる群から選ばれる基であるか、あるいはＲとR1とは一緒に酸素原子を表すことができ、
R2、R3およびR4は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基およびアルキルメルカプト基からなる群から選ばれる基であり、
R5、R6およびR7の少なくとも２つは同一であり得、ヒドロキシおよび低級アルコキシ基からなる群から選ばれ、かつその第三のものはヒドロキシ、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、アミノ基および低級ジアルキルアミノ基からなる群から選ばれる基であり、但し少なくとも一つのR2、R3またはR4が低級アルコキシ基である場合には、R5、R6およびR7の各々は、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基であることを条件とし、
R8は水素原子および低級アルキル基からなる群から選ばれ、
ｏは０、１または２であり、かつ
Ｍはアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、ポリヒドロキシアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ；ベンジルアミノ、アニリノおよびフェニルアルキルアミノからなる群から選ばれるアリールアルキルアミノ；アミノインダン、およびヘテロ環がピリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニルおよびＮ-モルホリノからなる群から選ばれ、該環状構造と該アミノ基との間にはアルキル基が存在しなくともよく、該環状構造が場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノおよびスルホンアミドによって置換されていてもよい、ヘテロシクロアルキルアミノ基からなる群から選ばれ、あるいはＭはNR’R’’であり、ここでNR’は上記の通りであり、R’’はアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、アルカノイルアルキルエステルおよびピリジニル基からなる群から選ばれるものである。
但し、（Ｚ）−５−フルオロ−２−メチル−１−（３，４，５−トリメトキシベンジリデン）−３−インデニルアセトアミド，Ｎ−ベンジルを除く。
【請求項２】
ｏが１または２であり、かつＭはアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキルアミノ；ベンジルアミノ、アニリノおよびフェニルアルキルアミノからなる群から選ばれるアリールアルキルアミノ；アミノインダン；およびヘテロ環がピリジニル、ピペリジニル、ピペラジニルおよびピロリジニルからなる群から選ばれ、環状構造とアミノとの間にはアルキルが存在しなくてもよく、かつ該環状構造が場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよい、ヘテロシクロアルキルアミノ基からなる群から選ばれ、あるいはＭはNR’R’’であり、ここでNR’は上記の通りであり、R’’はアルキル、シアノアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキルおよびアルカノイルアルキルエステル基からなる群から選ばれるものである、請求項１に記載の薬理組成物。
【請求項３】
Ｍがアルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ベンジルアミノおよびピリジニルアルキルアミノからなる群から選ばれ、ここで該環状構造は場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよく、あるいはＭはNR’R’’であり、ここでNR’は上記の通りであり、R’’はアルキル、アルキルアミノおよびジアルキルアミノアルキル基からなる群から選ばれるものである、請求項２に記載の薬理組成物。
【請求項４】
Ｍがアルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ベンジルアミノおよびピリジニルアルキルアミノからなる群から選ばれ、ここで該環状構造は場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよい、請求項３に記載の薬理組成物。
【請求項５】
Ｍがベンジルアミノ、および少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよいベンジルアミノ基からなる群から選ばれる、請求項４に記載の薬理組成物。
【請求項６】
ＲおよびR1がそれぞれ独立に水素原子およびヒドロキシ基からなる群から選ばれる基であり、R5、R6およびR7の少なくとも２つは低級アルコキシ基であり、かつその第三のものはヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノおよび低級ジアルキルアミノ基からなる群から選ばれる基であり、あるいはR5、R6およびR7の各々はヒドロキシル基である、請求項４に記載の薬理組成物。
【請求項７】
ＲおよびR1は水素原子であり、R2、R3およびR4は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基およびアルキルメルカプト基からなる群から選ばれる基であり、R5、R6およびR7の少なくとも２つは低級アルコキシ基であり、かつその第三のものはヒドロキシおよび低級アルコキシ基からなる群から選ばれる基であり、R8は低級アルキル基であり、かつｏは１であり、Ｍはアルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ベンジルアミノおよびピリジニルアルキルアミノからなる群から選ばれ、ここで該環状構造は場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよい、請求項６に記載の薬理組成物。
【請求項８】
R5、R6およびR7は各々低級アルコキシ基であり、R8はメチル基である、請求項７に記載の薬理組成物。
【請求項９】
R2がヒドロキシ、ハロゲン、低級アルコキシおよびアルキルメルカプト基からなる群から選ばれ、R4は水素原子であり、かつR5、R6およびR7は各々メトキシ基である、請求項８に記載の薬理組成物。
【請求項１０】
R2がヒドロキシ、ハロゲンおよび低級アルコキシからなる群から選ばれ、かつR3が水素原子である、請求項９に記載の薬理組成物。
【請求項１１】
R2がハロゲン原子である、請求項１０に記載の薬理組成物。
【請求項１２】
R2がフッ素原子である、請求項１１に記載の薬理組成物。
【請求項１３】
該化合物が（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；（E）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；および（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドからなる群から選ばれる、請求項１２に記載の薬理組成物。
【請求項１４】
前癌性病巣をもつ患者の治療用の、請求項１〜１３のいずれか１項記載の薬理組成物。
【請求項１５】
新生物細胞の成長阻害用の、請求項１〜１３のいずれか１項記載の薬理組成物。
【請求項１６】
ヒト細胞におけるアポトーシス誘発用の、請求項１〜１３のいずれか１項記載の薬理組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、前癌性病巣の治療もしくは予防のための化合物および方法に関するものである。
発明の背景
米国内だけでも、毎年莫大な数の人々において、前癌性病巣が発生している。これらの病巣は悪性腫瘍または癌に進行する強い傾向を示す。このような病巣は胸部の病巣（これは乳癌に進行する可能性がある）、皮膚の病巣（これは悪性黒色腫瘍または基底細胞癌に進行する可能性がある）、結腸腺腫様ポリープ（これは結腸癌に進行する恐れがある）およびその他のこの種の新生物を包含する。既存の前癌性または癌性病巣または癌の寛解を阻害または誘発する化合物は、癌の罹患または癌による死を大幅に低減するであろう。
例えば、約60,000名の人々が結腸癌により死亡し、また150,000名を越える新たな結腸癌患者が毎年診断されている。概して、米国民については、個人は6%の結腸癌発症の生涯危険率を有し、そのためこの国における癌の第二番目に高い罹患率を有する形態となっている。結腸癌は西欧においても罹患率が高い。高い食用脂肪の消費が、日本における結腸癌の危険率を高めているものと考えられている。
更に、報告によれば、結腸癌の発生率は、殊に40代以後には、加齢と共に増大するとされている。米国および西欧人の平均年齢は増大しつつあるので、結腸直腸癌の罹患率は、将来において増大するはずである。
これまで、ここ数十年に渡る５年生存率における変動がないことによって反映されるように、結腸直腸癌の予防並びに治療については殆ど進歩が見られていない。この癌の唯一の治癒法は、極初期段階における外科手術である。不幸にも、これらの癌の多くは、外科的な治癒のためには発見が遅すぎる。多くの場合において、これらの癌の患者は、該癌が悪性状態まで進行して初めて、その諸症状を経験する。
このような厳しい統計から、最近の努力は結腸癌の予防に集中している。結腸癌は、通常ポリープとして知られる先在性の良性新生物の成長により生ずる。予防努力は、結腸癌の同定および除去を強調している。ポリープは、X-線および／または結腸内視術により同定され、また通常は内視鏡と関連したデバイスにより除去されている。近年における結腸X-線および結腸内視術の利用の増大は、１年当たりの結腸癌に罹った個体数の４〜５倍の、臨床的に有意な前癌性ポリープを検出している。過去５年間だけでも、米国において推定3.5〜5.5百万人が、腺腫様結腸ポリープをもつものと診断され、しかもより一層多くの人々がこの状態に発展する可能性があると予想されているが、まだ未診断状態にある。事実、40歳を越える人々の10-12%に、臨床的に重大な腺腫様ポリープが形成されているであろうと推定されている。
ポリープの除去は、不快かつ経費のかかる（一回の内視鏡ポリープ除去術のコストは、内視鏡治療に対して1,000〜1,500ドルの範囲、また外科手術に対してはそれ以上である）外科手術または光ファイバー内視鏡検査ポリープ除去術の何れかによって達成され、また結腸穿孔の、小さいが重大な危険性を内包する。結局、毎年約25億ドルが、結腸癌の治療並びに予防のために、毎年米国内で消費されている。
上記の如く、各ポリープは癌に発展する可能性を有している。癌の可能性は、ポリープを除去した場合には減じられる。しかしながら、これら患者の多くは、将来付随的なポリープを発生する可能性をもつことが明らかとなっている。従って、該患者は、ポリープの再発について、その残された生涯に渡り、定期的に追跡する必要がある。
多くの場合（即ち、一般的な所謂散在性のポリープの場合）において、ポリープの除去は、癌の危険性を減ずる上で有効であろう。低率の場合（即ち、所謂ポリポーシス症候群の場合）、結腸の完全なまたは部分的な除去が必要とされている。一般的な散在性のポリープとポリポーシス症候群との間の差異は、著しいものである。一般的な散在性のポリープの症状は、ポリープの数が比較的少なく、その各々が通常結腸を完全に残したまま除去されることにより特徴付けられる。これとは対照的に、ポリポーシス症候群は、ポリープ数が多く（例えば、数百を越える）、実際に幾つかの例では結腸をも包含し、結腸の外科的除去を除き、ポリープの安全な除去を困難にしていることを特徴とする。
各ポリープは、癌進展の明らかな危険性をもち、ポリポーシス症候群に罹った患者は、治療しないで放置すると、不可避的に癌に進行する。これら多くの患者は、形状損傷的な外科手術の結果として、生活様式の多大な変更を強いられる。患者は厳格な食事療法による制限を受け、また多くの患者は、その腸管廃物を集めるための人工肛門器具を装着する必要がある。
癌を治療し、かつ予防するのに有用な薬物の、広範な研究が行われている。事実、今日の癌研究の多くは、癌の予防に集中している。というのは、治療はしばしば無効であり、重篤な副作用をもつからである。癌予防は、癌再発の危険性をもつ回復した癌患者に対して重要である。また、癌予防は、未だ癌に冒された経験はないが、癌発生の危険性のある遺伝的な因子をもつ人々にとっては重要である。新たな遺伝子スクリーニング技術の発展に伴って、化学予防薬物の多大な利益を受けるであろう、高い危険度因子、例えばポリポーシス症候群の可能性をもつ人々の同定は容易である。従って、長期間に渡って使用可能な抗癌剤等の発見は、多くの人々にとって大いに興味のあることとなっている。
このような薬物を見出すための一つの方法は、公知の化学予防薬物および化学療法剤に見られるものと同一の生物学的活性について数千にも及ぶ化合物をスクリーニングすることである。このような薬物の多くは、アポトーシス、あるいはしばしば「プログラム化された細胞死」と呼ばれる現象の誘発により癌細胞を殺傷すると考えられている。アポトーシスは、事実上殆ど全ての身体組織、特に自己−再生性の組織、例えば骨髄、腱および皮膚において自然に発生する。アポトーシスは、組織ホメオスタシスにおいて重大な役割を演じ、即ち生成される新たな細胞の数を、死滅した細胞数に等しいだけ補充する。例えば、腸管内面の細胞は、極めて迅速に分裂して、該腸管内面の過度な成育を防止するために、身体は僅か３日後に細胞を排除する必要がある。
最近、科学者等は、アポトーシスにおける異常が、前癌性病巣および癌の形成に導く可能性のあるものと認識した。また、最近の研究は、アポトーシスの欠陥が癌以外の他の疾患においても主要な役割を演じていることを示している。結果として、アポトーシスを調節する化合物が癌の予防および制御において、並びにその他の諸疾患の治療において使用できた。
不幸なことに、公知の化学療法剤はこのような望ましいアポトーシス作用を呈するが、多くの化学療法剤は、その長期に渡る使用あるいは前癌性病巣を有する他の健全な個体での使用を禁止する、重篤な副作用をもつ可能性がある。これらの副作用は、該薬物の高レベルの細胞毒性の結果であるが、毛髪の喪失、体重減少、嘔吐および骨髄免疫低下等を包含する。従って、ヒトに対するこのような重篤な副作用を示さない、治療用の新規な候補薬物を同定する必要性がある。
最近の数年間に、初め関節炎に対して開発された、数種の非−ステロイド系抗−炎症性薬物（“NSAIDs”）が、結腸ポリープを阻害し、かつ排除する上で有効性をもつことが示された。ポリープは、患者がこの薬物を摂取した場合、特に該NSAIDスリンダックを投与した場合には明らかに消失する。しかしながら、一般的に入手可能なNSAIDsの予防的使用が、ポリポーシス症候群患者においてさえ、胃腸管の刺激および潰瘍形成を包含する、重度の副反応により特徴付けられる。このような合併症のために、一旦NASAID治療を停止した場合、特にポリポーシス症候群患者において、該ポリープが再現される。
スリンダックは、ポリープの治療のために、該NSAIDsの中で、特に良く受け入れられている。スリンダック自体は、抗−関節炎剤として不活性であると考えられているスルホキシド化合物である。このスルホキシドは、肝臓の酵素によって対応するスルフィドに転化され、これがプロスタグランジン合成阻害剤としての活性部分であると認識されている。しかしながら、このスルフィドは公知のNSAIDsの示す副作用にも関連している。このスルホキシドは、またスルホン化合物に代謝され、これはプロスタグランジン合成の阻害剤として不活性であるが、前癌性病巣の阻害剤として活性であることが分かっている。
発明の概要
本発明は、化合物を含有する薬理組成物および以下に説明するこれら化合物の薬理的に有効な量を、このような治療を必要とする患者に投与することによる、前癌性病巣をもつ患者の治療法、両者を包含する。このような組成物は、アポトーシスを調節し、かつ前癌性病巣および新生物の成長を防止かつ阻害する上で効果的であるが、公知のNSAIDsのもつ上記の重篤な副作用によっては特徴付けられない。
本発明の治療において使用する化合物は、これらがそれ自体活性であり、あるいはこれらが代謝されて活性誘導体となることから、前癌性病巣に対して有効であると考えられている。
予想外のことに、本発明の化合物は、プロスタグランジン合成を大幅に阻害することはない（プロスタグランジン合成の阻害は、公知のNSAIDsの特徴である）が、本発明の化合物は、それにも拘らず前癌性病巣細胞に抗−増殖作用を及ぼすことを見出した。
発明の詳細な説明
上記のように、本発明は以下の一般式Ｉの化合物を含有し、前癌性病巣を有する患者を治療するための、薬理組成物を提供する：
0004190584.tif 000002
ここで、ＲおよびR1はそれぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ、低級アルキル基およびアミノ基からなる群から選ばれる基であるか、あるいはＲおよびR1は一緒に酸素原子を表すことができ、
R2、R3およびR4は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基およびアルキルメルカプト基からなる群から選ばれる基であり、
R5、R6およびR7の少なくとも２つは同一であり得、ヒドロキシおよび低級アルコキシ基からなる群から選ばれ、かつ第三のものはヒドロキシ、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基、アミノ基および低級ジアルキルアミノ基からなる群から選ばれる基であり、但し少なくとも一つのR2、R3またはR4が低級アルコキシ基である場合には、R5、R6およびR7の各々は、ヒドロキシまたは低級アルコキシ基であることを条件とし、
R8は水素原子または低級アルキル基からなる群から選ばれ、
ｏは０、１または２であり、かつ
Ｍはアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルコキシアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、ポリヒドロキシアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ；ベンジルアミノ、アニリノおよびフェニルアルキルアミノからなる群から選ばれるアリールアルキルアミノ；アミノインダン、およびヘテロ環がピリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピロリジニルおよびN-モルホリノからなる群から選ばれ、該環状構造と該アミノ基との間にはアルキル基が存在せず、該環状構造が場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノおよびスルホンアミドによって置換されていてもよい、ヘテロシクロアルキルアミノ基からなる群から選ばれ、あるいはＭはNR’R’’であり、ここでNR’は上記の通りであり、R’’はアルキル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、アルカノイルアルキルエステルおよびピリジニル基からなる群から選ばれるものである。
好ましくは、ｏは１または２であり、かつＭはアミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキルアミノ、ベンジルアミノ、アニリノおよびフェニルアルキルアミノからなる群から選ばれるアリールアルキルアミノ、アミノインダン、およびヘテロ環がピリジル、ピペリジル、ピペラジニルおよびピロリジニルからなる群から選ばれ、環状構造とアミノとの間にはアルキルが存在しなくてもよく、かつ該環状構造が場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよい、ヘテロシクロアルキルアミノ基からなる群から選ばれ、あるいはＭはNR’R’’であり、ここでNR’は上記の通りであり、R’’はアルキル、シアノアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキルおよびアルカノイルアルキルエステル基からなる群から選ばれるものである。
より好ましくは、Ｍはアルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ベンジルアミノおよびピリジニルアルキルアミノからなる群から選ばれ、ここで該環状構造は場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよく、あるいはＭはNR’R’’であり、ここでNR’は上記の通りであり、R’’はアルキル、アルキルアミノおよびジアルキルアミノアルキル基からなる群から選ばれるものである。
より一層好ましくは、Ｍはアルケニルアミノ、アルキニルアミノ、ベンジルアミノおよびピリジニルアルキルアミノからなる群から選ばれ、ここで該環状構造は場合により少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよい。
更に一層好ましくは、Ｍはベンジルアミノ、および少なくとも一つのハロゲン、アルコキシ、ヒドロキシ、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノによって置換されていてもよいベンジルアミノ基からなる群から選ばれる。更に一層好ましくは、Ｍはベンジルアミノ、および少なくとも一つのハロゲン、アルコキシおよびヒドロキシによって置換されていてもよいベンジルアミノ基からなる群から選ばれる。最も好ましくは、Ｍはベンジルアミノ基である。
Ｍが少なくともそのより一層好ましい形態にある場合の、式Ｉの該化合物の他の置換基に関連して、好ましくは、ＲおよびR1はそれぞれ独立に水素原子およびヒドロキシ基からなる群から選ばれる基であり、R5、R6およびR7の少なくとも２つは低級アルコキシ基であり、かつその第三のものはヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノおよび低級ジアルキルアミノ基からなる群から選ばれる基であり、あるいはR5、R6およびR7の各々はヒドロキシル基である。
より好ましくは、ＲおよびR1は水素原子であり、R2、R3およびR4は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ、ハロゲン原子、低級アルコキシ基、低級アルキル基およびアルキルメルカプト基からなる群から選ばれる基であり、R5、R6およびR7の少なくとも２つは低級アルコキシ基であり、かつその第三のものはヒドロキシおよび低級アルコキシ基からなる群から選ばれる基であり、R8は低級アルキル基であり、かつｏは１である。
より一層好ましくは、R5、R6およびR7は各々低級アルコキシ基であり、R8はメチル基である。
更により好ましくは、R2はヒドロキシ基、ハロゲン原子、低級アルコキシ基およびアルキルメルカプト基からなる群から選ばれる基であり、R4は水素原子であり、かつR5、R6およびR7は各々メトキシ基である。
更に一層より好ましくは、R2はヒドロキシ基、ハロゲン原子および低級アルコキシ基からなる群から選ばれ、R3は水素原子である。更に好ましくは、R2はハロゲン原子であり、好ましくはフッ素原子である。
化合物の好ましい群は以下のものを包含する：
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；
（E）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；および
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド。
好ましい化合物は、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドおよび対応するE-異性体である。最も好ましい化合物は、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドである。
本発明は、また前癌性病巣をもつ患者に、薬理的に有効な量の薬理組成物を投与することによる、該患者の治療方法にも係わり、該組成物は一般式Ｉの化合物を含有し、該一般式において、R1〜R8は上記定義通りである。好ましくは、この組成物は、治療的量のNSAIDの使用なしに、投与される。
本発明は、また前癌性病巣をもつ個体を、薬理的に有効な量の、腸溶性被覆された、本発明の化合物を含有する薬理組成物を投与することにより、治療する方法にも係わる。
また、本発明は、新生物細胞を有効量の一般式Ｉの化合物に暴露することにより、該細胞の成長を阻害する方法にも係わり、該一般式ＩにおいてR1〜R8は上記定義通りである。
更に別の態様において、本発明はヒト細胞を有効量の一般式Ｉの化合物に暴露することにより、該細胞におけるアポトーシスを誘発する方法にも係わり、該一般式ＩにおいてR1〜R8は上記定義通りであり、また該細胞はこれら化合物に対して敏感である。
また、更に別の態様において、本発明はアポトーシスの調節により利益を得る疾患に罹患した患者を、有効量の一般式Ｉの化合物で治療することによる、該患者の治療方法にも係わり、ここで該一般式ＩにおいてR1〜R8は上記定義通りである。アポトーシスの調節は、細胞成長パターンの異常性、例えば良性の前立腺過形成、神経変性疾患、例えばパーキンソン病、多発性硬化症およびリューマトイド関節炎を包含する自己免疫疾患、AIDS等の感染症、およびその他の疾患等と関連した諸疾患において重要な役割を演じるものと考えられている。
本明細書で使用する用語「前癌性病巣」とは、形成異常、組織の変化を含む、異常新生物により表される症候群を包含する。その例は、結腸、胸部、膀胱または肺組織における腺腫様成長、または形成異常性神経症候群、皮膚の悪性メラノーマの先駆体等の状態を包含する。その例はまた、形成異常性神経症候群以外にも、該病巣が臨床的に同定可能か否かとは無関係に、ポリポーシス症候群、結腸ポリープ、頸部の前癌性病巣（即ち、頸部形成異常）、前立腺形成異常、気管支形成異常、胸部、膀胱および／または皮膚並びに関連状態（例えば、紫外線角化症）をも包含する。
本明細書で使用する用語「癌（carcinomas）」とは、癌性の病巣を意味する。その例は、悪性メラノーマ、乳癌、前立腺癌および結腸癌を包含する。
本明細書で使用する用語「新生物」とは、前癌性および癌性病巣両者を意味する。
ここで使用する用語「ハロまたはハロゲン（haloまたはhalogen）」とは、クロロ、ブロモ、フルオロおよびヨード原子を意味し、また用語「アルキル」とは、直鎖、分枝鎖または環状アルキル基および置換アリールアルキル基を意味する。用語「低級アルキル」とは、C1〜C8アルキル基を意味する。
本発明の化合物は、経口投与用の固体または液体形状の、あるいは直腸投与用の、製薬上許容される担体と共に組成物に処方できるが、経口投与用の担体が最も好ましい。
経口投与用の製薬上許容される担体はカプセル剤、錠剤、ピル、粉剤、トローチ剤および顆粒剤を含む。このような固体投与形態において、該担体は、少なくとも１種の不活性希釈剤、例えばスクロース、ラクトースまたは澱粉を含むことができる。このような担体は，また通常の実務におけるように、希釈剤以外の付加的な物質、例えばステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤を含むこともできる。カプセル、錠剤、トローチおよびピルの場合、該担体はまた、緩衝剤を含むこともできる。錠剤、ピルおよび顆粒剤等の担体は、該錠剤、ピルまたは顆粒剤の表面上に腸溶性被膜をもつように調製することもできる。また腸溶性被覆された該化合物は、錠剤、ピル、または顆粒に圧縮して、該錠剤、ピル、または顆粒を患者に投与することができる。好ましい腸溶性被覆は、結腸のpHにおいて溶解または崩壊するもの、例えばシェラックまたはユードラゲット（Eudraget）S等を包含する。
製薬上許容される担体は、経口投与用の液状投与形態、例えば水等の当分野で通常使用される不活性希釈剤を含む、製薬上許容されるエマルション、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルを包含する。このような不活性な希釈剤以外にも、該組成物は、またアジュバント、例えば湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、並びに甘味付与剤、香料および香味剤を含むこともできる。
直腸投与のための製薬上許容される担体は、本発明の化合物以外に、ココアバターまたは坐剤ワックス等の賦形剤を含むことのできる、坐剤であることが好ましい。
該製薬上許容される担体および本発明の化合物は、患者に投与するための、単位投与形態に処方される。該単位投与形態における活性成分（即ち、本発明の化合物）の投与レベルは、所定の投与方法（即ち、経口または直腸投与法）に従って、病巣−排除活性を達成するのに有効な量の活性成分を得るべく、変えることができる。従って、選択された投与レベルは、投与される活性化合物の性質、投与経路、所定の治療期間、およびその他のファクタに依存する。必要ならば、該単位投与量は、該活性成分に対する１日当たりの所要量が単一投与量であり、あるいは１日当たり２〜４回等の、投与のために複数の服用量に分割するように決めることができる。
本発明の薬理組成物は、好ましくは使用上の指示、指針等を包含する適当な印刷物（例えば、包装挿入物）を有する、容器（例えば、箱、ボトルまたはその両者）に、包装される。
上記のことは、以下の実施例からより一層よく理解されよう。以下の実施例は例示の目的で与えられ、本発明の範囲を限定するものではない。以下の実施例で使用する、置換基に対する参照記号、例えばＲ、R1、R2等は、上記一般式Ｉにおける化合物および置換基に対応する。
実施例
実施例１：（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド；
（A）p-フルオロ-α-メチル桂皮酸
p-フルオロベンズアルデヒド（200g, 1.61mol）、プロピオン酸無水物（3.5g, 2.42mol）およびプロピオン酸ナトリウム（155g, 1.61mol）を、窒素でフラッシュ洗浄した１ｌの３ツ口フラスコ内で混合する。このフラスコを油浴中で徐々に140℃に加熱する。20時間後経過に、該フラスコを100℃に冷却し、8lの水中にあける。生成した沈殿を、2lの水に溶解した水酸化カリウム（302g）によって溶解する。この水性溶液をエーテルで抽出し、該エーテル抽出液を水酸化カリウム溶液で洗浄した。この併合した水性相を濾過し、濃厚HClで酸性にし、次いで濾過する。この集められた固体、即ちp-フルオロ−α−メチル桂皮酸を水で洗浄し、乾燥し、得られたままの状態で使用した。
（B）p-フルオロ−α−メチルヒドロ桂皮酸
p-フルオロ−α−メチル桂皮酸（177.9g, 0.987mol）を3.6lのエタノールに分散した液に、11.0ｇの5%Pd/Cを添加する。この混合物を室温にて、水素圧40p.s.i.の下で還元する。水素の取り込みが停止した時点で、該触媒を濾別し、得られる濾液を真空下で濃縮して、表記生成物、p-フルオロ−α−メチルヒドロ桂皮酸を得たが、これは秤量せずに次の工程で使用した。
（C）6-フルオロ-2-メチルインダノン
蒸気浴上で70℃に維持された932gのポリ燐酸に、p-フルオロ−α−メチルヒドロ桂皮酸（93.2g, 0.5mol）を、穏やかに攪拌しつつ添加する。該温度を徐々に95℃まで昇温し、該混合物をこの温度にて１時間維持する。この混合物を放冷し、２ｌの水を添加する。得られる水性相をエーテルで抽出し、該エーテル溶液を飽和塩化ナトリウム溶液で２度、5%のNa2CO3溶液、水で洗浄し、次いで乾燥する。該エーテル濾液を200gのシリカ−ゲルで濃縮し、5%のエーテル−石油エーテルを充填した５ポンドのシリカ−ゲルカラムに添加する。このカラムを5-10%のエーテル−石油エーテルで溶出して、6-フルオロ-2-メチルインダノンを得る。溶出はTLCにより追跡する。
（D）5-フルオロ-2-メチルインデニル-3-酢酸
6-フルオロ-2-メチルインダノン（18.4g, 0.112mol）、シアノ酢酸（10.5g, 0.123mol）、酢酸（6.6g）および酢酸アンモニウム（1.7g）を無水トルエン（15.5ml）中に分散した液を、攪拌しつつ21時間に渡り還流し、一方で遊離水をディーンシュターク（Dean Stark）トラップに集める。該トルエンを濃縮し、得られる残渣を加熱したエタノール60mlおよび14mlの2.2N水酸化カリウム水性溶液中に溶解する。150mlの水中の22ｇの85%KOHを添加し、この混合物を窒素雰囲気下で13時間還流する。該エタノールを真空下で除去し、500mlの水を添加し、得られる水性溶液をエーテルで十分に洗浄し、次いで活性炭と共に煮沸する。得られる水性濾液を50%の冷塩酸でpH２の酸性とする。沈殿させ、乾燥した5-フルオロ-2-メチルインデニル-3-酢酸（M.P. 164-166℃）を得る。
（E）（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸：
5-フルオロ-2-メチルインデニル-3-酢酸（15g, 0.072mol）、3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒド（17.85g, 0.091mol）およびナトリウムメトキシド（13.0g, 0.24mol）を、メタノール（200ml）中で、60℃にて、窒素雰囲気下で６時間攪拌しつつ加熱する。冷却後、この反応混合物を750mlの氷水中に注ぎ込み、2.5Nの塩酸で酸性とする。この集めた固体を少量のエーテルと共に圧潰して、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸（M.P. 166-169℃）を得る。
（F）（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルアセチルクロリド：
TNF（150ml）中の（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸（20.64g, 54.70mM）を、オキサリルクロリド（2MのCH2Cl2溶液, 35ml, 70mM）と還流条件下で反応（24時間）させる。溶媒を蒸発させて、表記化合物を得、これはそのまま次の工程で使用する。
（G）（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド：
方法I）: ベンジルアミン（0.55ml, 5mM）を、CH2Cl2（25ml）中の（Z）-5-フルオロ-2-メチル-2-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルアセチルクロリド（工程F, 1g, 2.5mM）溶液に室温にて徐々に添加する。この反応混合物を一夜還流し、水性HCl（10%）、水および水性NaHCO3（5%）で抽出する。得られる有機相を乾燥（Na2SO4）し、蒸発させて、黄色の表記化合物を得、これを酢酸エチルから再結晶化して、表記化合物を得る（M.P. 191℃）。
（R=H, R1=H, R2=F, R3=H, R4=H, R5=OCH3, R6=OCH3, R7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）
方法II）: DMA（5ml）中の（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸（1g, 2.60mM）の溶液を、室温にて２日間、N-（3-ジメチルアミノプロピル）-N’-エチルカルボジイミド塩酸塩（0.77g, 4mM）およびベンジルアミン（0.38ml, 3.5mM）と反応させる。この反応混合物を、攪拌した氷水（400ml）に滴添する。生成する黄色沈殿を濾別し、水（200ml）で洗浄し、真空下で乾燥する。酢酸エチルから再結晶化して表記化合物を得る。
方法III）：（Z）-5-フルオロ-2-メチルインデン-3-（N-ベンジル）-アセタミド（1g, 3.38mM）、3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒド（0.74g, 4mM）およびナトリウムメトキシド（30ml, 1M NaOCH3、メタノール中）を、窒素雰囲気下で攪拌しつつ60℃にて24時間加熱する。冷却後、この反応混合物を氷水（200ml）中に注ぎ込む。黄色固体を濾別し、水洗（100ml）し、真空下で乾燥する。酢酸エチルから再結晶化して、表記化合物を得る。
実施例2-51
実施例1（G）の方法に従って、但しベンジルアミンの代わりに、表１に掲載した各アミンを使用して、表２に記載の対応するアミドを得る。
0004190584.tif 000003
0004190584.tif 000004
0004190584.tif 000005
0004190584.tif 000006
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0004190584.tif 000009
実施例52: （E）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
製造工程1（E）の蒸発された母液由来の残渣を、CH3CNから再結晶化すると、（E）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニル酢酸が得られ、これを実施例１の手順に従ってベンジルアミンと反応させて、（E）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（M.P. 149-152℃）を得る。
実施例53-63
実施例１の手順に従い、置換ベンズアルデヒドを、工程（E）の3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドに代え、同一条件下で用いると、対応する酸が得られる。これら酸を、実施例１の工程（F）および（G）における（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸の代わりに使用して、以下の例で列挙するような対応するベンジルアミドを得ることができる。
53）2,4-ジメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4-ジメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5およびR6=OCH3, R7=H, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）
54）3,5-ジメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,5-ジメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5=H, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）
55）2,4,6-トリメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）; M.P. 224-225℃
56）4-クロロ-3,5-ジメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（4-クロロ-3,5-ジメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5=OCH3, R6=Cl, R7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）
57）2,3,4-トリメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）; M.P. 147-148℃
58）2,4,5-トリメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（2,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）; M.P. 203-204℃
59）4-メチル-2,3-ジメトキシベンズアルデヒド
（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（4-メチル-2,3-ジメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（RおよびR1=H, R2=F, R3およびR4=H, R5およびR6=OCH3, R7=CH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）
実施例60：5-メトキシ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）α−メチル−β-（p-メチルチオフェニル）プロピオン酸
無水アルコール100ml中にナトリウム2.3g（0.1M）を溶解した溶液に、17.4g（0.1M）のジエチルメチルマロネートおよび17.3g（0.1M）のp-メチルチオベンジルクロリドを添加する。得られるこの混合物を水浴上で３時間加熱還流する。この反応混合物を水中に注ぎ込み、この水性溶液を６回エーテルで抽出し、乾燥する。次に、これを蒸発させてジエチルメチルp-メチルチオベンジルマロネートを生成する。次いで、この粗生成物を、水性エタノール溶液中の4%水酸化ナトリウムの過剰量と共に加熱することにより鹸化する。このようにして生成したこの溶液を濃縮し、エーテルで抽出し、あらゆる中性物質を取り出し、希硫酸によって酸性にする。この酸性混合物を１時間蒸気浴上で加熱し、冷却し、次にエーテルで抽出する。該エーテル溶液の蒸発により、α−メチル−β-（p-メチルチオフェニル）プロピオン酸を得る。
ジエチルメチルマロネートの代わりに他の置換マロン酸エステルを、またp-メチルチオベンジルクロリドの代わりに他の置換ベンジルハライドを使用することにより、同様な方法で、対応する置換プロピオン酸、例えばα−メチル−β-（p-メトキシフェニル）プロピオン酸；α−アリル−β-（p-ニトロフェニル）プロピオン酸が得られる。
（B）6-メトキシ-2-メチルインダノン
α−メチル−β-（p-メトキシフェニル）プロピオン酸（15g）をポリ燐酸（170g）に、50℃にて添加し、この混合物を83-90℃にて２時間加熱する。このシロップを氷水中に注ぎ、１時間半攪拌し、次いでエーテルで３回抽出する。このエーテル溶液を水で２回洗浄し、全ての酸性物質が除去されるまで、5%NaHCO3で５回洗浄する。残留する中性溶液を水洗し、硫酸ナトリウム上で乾燥する。この溶液の蒸発により、上記インダノンを淡黄色のオイルとして得る。他のβ−アリールプロピオン酸化合物を、同様な方法で、本実施例の手順によって、対応するインダノンに転化する。
（C）メチル5-メトキシ-2-メチル-3-インデニルアセテート
45mlのベンゼンに溶解した13.4ｇの6-メトキシ-2-メチルインダノンおよび19.3ｇのメチルブロモアセテートの溶液を、５分間に渡り、110mlのベンゼンおよび40mlの無水エーテル中の、21ｇの亜鉛アマルガム（Organic Synthesis, Coll., Vol.3, p.444に従って調製）に添加する。ヨウ素の結晶数個を添加して、該反応を開始させ、この反応混合物を還流温度（約65℃）に維持する。３時間間隔で２バッチの10ｇの亜鉛アマルガムおよび10ｇのメチルブロモアセテートを添加する。次に、この混合物を８時間還流する。30mlのエタノールおよび150mlの酢酸を添加した後、この混合物を700mlの50%水性酢酸溶液に注ぐ。得られる有機相を分離し、かつ該水性相をエーテルで２回抽出する。これら有機相を併合し、併合した有機相を水、水酸化アンモニウムおよび水で十分に洗浄する。硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を真空下で蒸発させ、80℃（浴温）（1-2mm）にてポンピングして、粗生成物メチル（1-ヒドロキシ-2-メチルメトキシインデニル）アセテートを得る。
250mlのトルエン中の、上記粗製ヒドロキシエステル、20ｇのp-トルエンスルホン酸一水和物および20ｇの無水塩化カルシウムの混合物を、一夜還流する。この溶液を濾過し、得られる固体残渣をベンゼンで洗浄する。併合したベンゼン溶液を水、重炭酸ナトリウムおよび水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウム上で乾燥する。蒸発後、残留する粗製メチル5-メトキシ-2-メチル-3-インデニルアセテートを、酸−洗アルミナ上でクロマトグラフィー処理し、該生成物を石油エーテル−エーテル（v/v 50-100%）で溶出する。
メチル2,6-ジメチル-3-インデニルアセテート
実施例60（C）の上記反応を繰り返したが、出発物質は2,5-ジメチルインダノンおよびメチルブロモアセテートである。同一の反応条件および技術を利用して、メチル2,6-ジメチル-3-インデニルアセテートを得る。
実施例60（C）の上記反応を繰り返す。但し、出発物質は6-メチルチオインダノンおよびメチルブロモアセテートである。同一の反応条件および技術を用いて、メチル5-メチルチオ-2-メチル-3-インデニルアセテートを得る。
本明細書の他の実施例に記載される、他のインダノンの何れかを、上記手順における6-メトキシ-2-メチルインダノンの代わりに使用して、対応するメチルエステルを得る。
（D）5-メトキシ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸
メチル5-メトキシ-2-メチル-3-インデニルアセテート（8.7g, 0.037M）および2,3,4-トリメトキシベンズアルデヒド（7.99g, 1.1eq.）の溶液に、16+ml（2.0+eq.）の25%ナトリウムメトキシドメタノール性溶液を添加する。この混合物を２時間窒素雰囲気下で還流下に攪拌する。等体積の水を滴添し、還流を30分間継続する。この溶液を冷却し、水で希釈し、エーテルで抽出（3X）する。残留エーテルを窒素で蒸発させ、次いで該水性溶液を50%氷酢酸で酸性とする。沈殿した生成物を集め、十分に水洗する。この粗生成物を結晶化させて、5-メトキシ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸得る。
（E）5-メトキシ-2-メチル-1-（2,3,4-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例1（F）および（G）の手順に従って、かつ上記の酸を使用して、表記化合物を形成する（RおよびR1=H, R2=OCH3, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例61: 5-メトキシ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例60（D）および（E）の上記反応を、2,3,4-トリメトキシベンズアルデヒドの代わりに、3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドを使用して繰り返す。同一の反応条件および技術を利用して、5-メトキシ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを得る（RおよびR1=H, R2=OCH3, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例62: 5-ヒドロキシ-2-メチル-1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例60（D）および（E）の上記反応を、メチル5-ヒドロキシ-2-メチル-3-インデニルアセテートおよび2,4,6-トリメトキシベンズアルデヒドを出発物質として用いて繰り返し、5-ヒドロキシ-2-メチル-1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを得る（RおよびR1=H, R2=OH, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例60（C）の他のメチルエステルを、上記手順に従って、2,4,6-トリメトキシベンズアルデヒドと反応させて、対応する（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを生成する。
実施例63: 5-メトキシ-2-メチル-1-（2,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）6-メトキシ-2-メチルインダノン
500mlの三つ口フラスコに、36.2g（0.55M）の亜鉛屑を入れ、かつ250mlの滴下漏斗を、80mlの無水ベンゼン、20mlの無水エーテル、80ｇ（0.58M）のp-アニスアルデヒドおよび98ｇ（0.55M）のエチル-2-ブロモプロピオネートを含む混合物で満たす。約10mlの該混合物を、激しく攪拌しつつ該亜鉛屑に添加し、得られる懸濁液を、発熱反応が開始するまで、穏やかに加温する。残りの試薬を、該反応混合物が自発的に滑らかに還流するような速度で（約（30-35分間）滴添する。添加の完了後、該フラスコを水浴上に置き、該懸濁液を30分間加熱還流し、次いで０℃まで冷却する。硫酸（250ml, 10%）を、激しく攪拌しつつ添加する。得られるベンゼン相を２回50mlづつの5%硫酸で抽出し、50mlづつの硫酸（2X）および50mlづつの水（2X）で洗浄する。得られる酸性水性相を併合し、2x50mlのエーテルで抽出する。該併合したエーテルおよびベンゼン抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥する。該溶媒の蒸発および該残渣の６’’ビグルー（Vigreux）カラムを通しての分画は、生成物エチル-2-ヒドロキシ-（p-メトキシフェニル）-1-メチルプロピオネート（B.P. 155-160℃（1.5mm））を与える。
Vanden Zanden, Rec. trav. chim., 1949, 68, p.413に記載された方法によって、上記化合物を6-メトキシ-2-メチルインダノンに転化する。
5-エチル-2-メチルインダノン
実施例63（A）の上記反応を繰り返す。但し、出発物質はo-エチルベンズアルデヒドおよびエチル-2-ブロモプロピオネートである。同一の反応条件および技術を使用して、5-エチル-2-メチルインダノンを得る。
実施例63Aの手順において、以下の表３に列挙したベンズアルデビドを使用した場合には、対応するインダノンが得られる。
0004190584.tif 000010
（B）5-メトキシ-2-メチル-1-（2,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例60（C）-（E）の反応を繰り返し、5-メトキシ-2-メチル-1-（2,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを得る。
実施例64: 1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-メトキシ-3-インデニル-（N-ベンジル）-プロピオンアミド
（A）メチル−α-（5-メトキシ-2-メチル-3-インデニル）プロピオネート
実施例60（C）の手順を、該手順で使用したメチルブロモアセテートに代えて、等量のメチルα−ブロモプロピオネートを使用して、実施する。メチルα-（1-ヒドロキシ-6-メトキシ-2-メチル-1-インデニル）プロピオネートが得られ、これを、次に同様にして、脱水処理して、メチルα-（5-メトキシ-2-メチル-3-インデニル）プロピオネートを得る。
（B）α-［1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-メトキシ-3-インデニル］-プロピオン酸
３mlの無水ピリジン中に、0.5g（1.92mM）のメチルα-（5-メトキシ-2-メチル-3-インデニル）プロピオネートおよび0.77g（3.9mM）の3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドを溶解した溶液に、1.63ｇの水酸化ベンジルトリメチルアンモニウム（トライトン-B）の40%メタノール溶液を添加する。得られる赤−紫の溶液を室温にて一夜攪拌する。
この反応混合物を、氷と水との混合物に注ぎ、2.5N HClで酸性とし、エーテルで抽出する。次いで、このエーテル溶液を2.5N HClで、洗液が酸性となるまで洗浄（1回）し、次いで水で中性となるまで洗浄する。次に、得られるエーテル相を5%のNa2CO3溶液で抽出する。このNa2CO3溶液をエーテルで洗浄し、酸性とし、エーテルで抽出する。得られるエーテル溶液を水洗し、Na2SO4上で乾燥し、真空下で濃縮して、α-［1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-メトキシ-3-インデニル］-プロピオン酸を得る。
（C）1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-メトキシ-3-インデニル-（N-ベンジル）-プロピオンアミド
実施例1（G）の手順に従い、また上記酸を使用すると、表記化合物の生成へと導かれる（R=CH3, R1=H, R2=OCH3, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例65: 1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-5-ジメチルアミノ-2-メチル-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）メチル-3-ヒドロキシ-2-メチル-5-ニトロ-3-インデニルアセテート
実施例60（C）で使用した6-メチルオキシ-2-メチルインダノンの代わりに、等量の2-メチル-6-ニトロインダノンを用いて、実施例60（C）の手順を実施する。該混合物を濃縮した後、30mlのエタノールおよび50mlの酢酸を添加する。次に、この混合物を700mlの水中に注ぎ込む。エーテルで抽出することにより、メチル-3-ヒドロキシ-2-メチル-5-ニトロ-3-インデニルアセテートを得る。
（B）メチル-5-ジメチルアミノ-2-メチル-3-インデニルアセテート
100mlのエタノール中に、0.05Mのメチル-3-ヒドロキシ-2-メチル-5-ニトロ-3-インデニルアセテート、0.2Mの38%水性ホルムアルデヒド溶液および２mlの酢酸を溶解した溶液を、室温にて40lbp.s.i.の水素圧下で、10%Pd/C触媒の存在下で接触的に還元する。この溶液を濾過し、蒸発させ、かつ300gのシリカゲル上でクロマトグラフィー処理して、メチル-5-ジメチルアミノ-3-ヒドロキシ-2-メチル-3-インデニルアセテートを得る。次いで、このヒドロキシエステルを脱水して、メチル-5-ジメチルアミノ-2-メチル-3-インデニルアセテートを得る。
（C）1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-5-ジメチルアミノ-2-メチル-3-インデニル酢酸
2.5gの本実施例のパートＢからの該エステルを０℃にて、15mlの1,2-ジメトキシエタンに溶解した溶液に、1.95ｇの2,4,6-トリメトキシベンズアルデヒドを、次いで1.1gのカリウムt-ブトキシドを添加する。この反応混合物を氷浴中で４時間維持し、次いで室温にて18時間放置する。この混合物を15mlのエーテルで希釈し、該カリウム塩を濾別する。該塩を30mlの水に溶解し、希塩酸でpH6-6.5まで中和する。この沈殿した粗製酸を濾過により集め、再結晶して、1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-5-ジメチルアミノ-2-メチル-3-インデニル酢酸を生成する。
（D）1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-5-ジメチルアミノ-2-メチル-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例1（G）の手順に従って、上記の酸を使用することにより、表記化合物が生成される（RおよびR1=H, R2=N（CH3）2, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例66: α-［1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-ジメチルアミノ-3-インデニル］-（N-ベンジル）-プロピオンアミド
（A）α-［1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-ジメチルアミノ-3-インデニル］-プロピオン酸
実施例63（A）および（B）の手順を実施する。但し、該手順において使用した6-メトキシ-2-メチルインダノンの代わりに6-ジメチルアミノ-2-メチルインダノンを、またそこで使用したメチルブロモアセテートの代わりにメチルα−ブロモプロピオネートを使用する。α-［1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-ジメチルアミノ-3-インデニル］-（N-ベンジル）-プロピオンアミドが得られる（R=CH3, R1=H, R2=N（CH3）2, R3およびR4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例67: 5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）3,4-ジフルオロベンズアルデヒド
磁気攪拌子、温度計、コンデンサーおよび滴下漏斗を備えた250mlの三つ口フラスコに、25.6ｇ（0.2M）の3,4-ジフルオロトルエンを入れる。この液体を105℃に加熱し、67ｇ（0.42M）の臭素を徐々に添加しつつ、光照射する。その温度を105-110℃の範囲に維持し、一方で該臭素の最初の半分を１時間に渡り添加する。該臭素の残りを、約２時間に渡り添加し、温度を150℃まで上げ、この温度にて５分間維持する。
この反応混合物を冷却し、モーター駆動式の攪拌子およびコンデンサーを備えた１ｌの三つ口フラスコに移す。120mlのH2Oおよび90ｇの炭酸カルシウムを添加し、この混合物を20時間、十分に攪拌しつつ還流する。この反応混合物を、更にオイルが収集されなくなるまで、水蒸気蒸留する。該オイルを塩化メチレンに取り、MgSO4上で乾燥する。該溶媒の蒸発により、3,4-ジフルオロベンズアルデヒドを得、これは更に精製することなしに使用する。
（B）3,4-ジフルオロ−α−メチル桂皮酸
2.88ｇ（0.02M）の3,4-ジフルオロベンズアルデヒド、3.24ｇ（0.025M）の無水プロピオン酸および0.92ｇ（0.02M）のプロピオン酸ナトリウムの混合物を、窒素雰囲気下で、135℃にて磁気攪拌子により20時間攪拌する。この反応混合物を50mlの水中に注ぎ込む。固体が沈殿し、これは攪拌しつつ50mlの飽和K2CO3を添加した場合に溶解する。この塩基性溶液をエーテルで抽出（2X100ml）する。次いで、得られる水性相を過剰量の濃HClおよび氷に注ぎ込む。沈殿した白色固体を濾別し、乾燥し、3,4-ジフルオロ−α−メチル桂皮酸（M.P. 122-125℃）を得る。
4-トリフルオロメチル−α−メチル桂皮酸
実施例67（B）の上記反応を繰り返す。但し、出発物質として、4-トリフルオロメチルベンズアルデヒドを、3,4-ジフルオロベンズアルデヒドの代わりに使用する。同一の反応条件および技術を利用して、4-トリフルオロメチル−α−メチル桂皮酸を得る。
同様に、他のベンズアルデヒド、例えば4-メチルチオベンズアルデヒド、4-クロロベンズアルデヒド、および3-メチル-4-クロロベンズアルデヒドを使用することにより、それぞれ4-メチルチオ−α−メチル桂皮酸、4-クロロ−α−メチル桂皮酸および3-メチル-4-クロロ−α−メチル桂皮酸が得られる。
（C）3,4-ジフルオロ−α−メチルヒドロ桂皮酸
28g（0.141M）の3,4-ジフルオロ−α−メチル桂皮酸、1gのPtO2および250mlのMeOHの混合物を、理論的な取り込み量が達成されるまで、45p.s.i.の圧力下で水素添加する。該触媒を濾別し、該物質をその体積の1/3まで蒸発させる。15%の水酸化カリウム溶液（10ml）を添加し、この混合物を30分間還流し、水中に注ぎ込み、エーテルで抽出（2X100ml）する。該水性相を濃HClおよび氷で酸性とする。分離するオイルをエーテルで抽出し、該エーテル溶液をMgSO4上で乾燥し、溶媒を蒸発させて、透明なオイルを得る。これを結晶化して、3,4-ジフルオロ−α−メチルヒドロ桂皮酸（M.P. 55-56℃）を単離する。
（D）5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-インダノン
20g（0.1M）の3,4-ジフルオロ−α−メチルヒドロ桂皮酸を、250gのポリ燐酸に添加する。この混合物を蒸気浴上で２時間効率的に攪拌し、かつ加熱する。該混合物を氷水（400ml）に注ぎ込む。生成する沈殿を、エーテルで抽出（3X100ml）する。該抽出液を飽和炭酸カルシウム、水で洗浄し、次いで乾燥（MgSO4）する。該エーテル溶液は、蒸発させた場合に、固形の5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-インダノン（M.P. 66-68℃）を与える。これを、更に精製することなく使用する。
（E）5,6-ジフルオロ-2-メチルインデン-3-酢酸メチルエステル
250mlの無水ベンゼン中の、9.1g（0.05M）の5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-インダノン、4.0gの「活性化」亜鉛屑、7.6g（0.05M）のブロモ酢酸メチル、およびヨウ素結晶の混合物を、4-5時間還流する。TLC（20%Et2O-80%石油エーテル，Siゲル上）は、この時点で95%を越える転化率を示す。この反応混合物を、250mlの5%H2SO4に注ぎ込む。該有機相を乾燥（MgSO4）する。溶媒の除去は、油状のヒドロキシエステルを残すが、これを100mlのベンゼンに再溶解し、五酸化燐（20g）と共に30分間還流する。該有機相をデカンテーションし、該残渣をベンゼンで洗浄し、かつ併合した有機相を水洗（2X100ml）し、乾燥（MgSO4）する。該ベンゼンを蒸発させると、5,6-ジフルオロ-2-メチルインデン-3-酢酸メチルエステル（M.P. 86-90℃）が残される。
5-メチルチオ-2-メチルインデン-3-酢酸メチルエステル
実施例67（E）の上記反応を、5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-インダノンに代えて5-メチルチオ-2-メチルインダノンを用いて繰り返す。同一の条件および技術を用いて、5-メチルチオ-2-メチルインデン-3-酢酸メチルエステルを得る。
アシルアミノまたはスルホニルインダノンを、上記手順における出発物質として使用した場合には、対応するメチルエステルが得られる。
（F）5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-インデニル-3-酢酸
1.19g（5.0M）の5,6-ジフルオロ-2-メチルインデン-3-酢酸メチルエステルを10mlの無水ピリジンに溶解し、次いで0.98g（5.0M）の3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドを添加する。このフラスコを窒素雰囲気下に置き、5.0g（5.1M）のトライトンＢを添加する。この濃く着色した液を、一夜放置する。水（２ml）を添加する。15分間放置した後、該混合物を過剰量の水中に注ぎ込む。得られる有機相をエーテルで抽出（2X50ml）する。該水性相を10%HCl-氷に添加する。橙色のガム状固体が得られ、該沈殿を塩化メチレンで抽出し、乾燥（MgSO4）する。該溶媒を除去して、オレンジ色の固体を残す。該固体を濾過して、粗生成物を得、これを再結晶して、5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-インデン-3-酢酸を得る。3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドの代わりに、2,4,6-トリメトキシベンズアルデヒドまたは2,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドを使用した場合には、対応するインデン酢酸が得られる。
（G）5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例1（G）の手順に従い、上記の酸を使用すると、表記の化合物が生成される（RおよびR1=H, R2およびR3=F, R4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例68: 5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）3,4-ジフルオロベンズアルデヒド
250mlの塩化メチレン中の57g（0.5M）のo-ジフルオロベンゼンを、無水塩化アルミニウム100g（0.75M）に添加する。この混合物を機械的に０℃にて攪拌し、一方85.5g（0.75M）のジクロロメチルメチルエーテルを滴下する。激しいHClの発生が起こり、この反応混合物はオレンジ−赤色に変化する。この添加の後、該混合物を室温にて15分間攪拌し、該液体相を500mlの氷および水中でデカンテーションする。該反応フラスコ中の残渣を、無色となるまで塩化メチレンで洗浄し、洗液を水に添加する。この混合物を分液漏斗中で、該塩化メチレン相が緑色となるまで十分に振盪する。該有機相を、中性となるまで、飽和炭酸カリウム溶液で洗浄し、乾燥（MgSO4）し、蒸発させて、3,4-ジフルオロベンズアルデヒド（B.P. 70-74℃/20mm）を得る。蒸留ポット内の暗色の残渣は、冷却すると固化して、トリス-（3,4-ジフルオロフェニル）メタン（M.P. 95-96℃）を与える。
3,4-ジメチルベンズアルデヒド
実施例68（A）の上記反応を繰り返す。但し、出発物質はo-キシレンおよびジクロロメチルメチルエーテルである。同一の反応条件および技術を使用して、3,4-ジメチルベンズアルデヒドを得る。
4-メルカプトベンズアルデヒド
実施例68（A）の上記反応を繰り返す。但し、出発物質はメルカプトベンゼンおよびジクロロメチルメチルエーテルである。同一の反応条件および技術を使用して、4-メルカプトベンズアルデヒドを得る。
（B）5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例67（B）-（G）の反応を繰り返し、5,6-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを得る（RおよびR1およびR2およびR3=F, R4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
同様に、実施例68（B）の反応において、3,4-ジメチルベンズアルデヒドを使用した場合には、5,6-ジメチル-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを得る（R2およびR3=CH3）。
実施例68（B）の反応において、4-メルカプトベンズアルデヒドを使用した場合には、6-メルカプト-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドが得られる（R2=H, R3=SH, R4=H）。
実施例69: α-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-メトキシ-6-フルオロ-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）3-フルオロ-4-メトキシベンズアルデヒド
500mlの無水塩化メチレン中に101g（0.80M）のo-フルオロアニソールを溶解した溶液を、30分間に渡り、等体積の塩化メチレンに、182g（0.96M, 1.2eq）の四塩化チタンおよび110g（0.96M）のα，α−ジクロロメチルメチルエーテルを溶解した溶液に滴添する。その温度を氷浴により10-20℃に維持する。この混合物を室温にて１時間以上攪拌し、次に攪拌しつつ砕氷−水上に注ぎ込む。エーテル（1）を添加し、該混合物を窒素雰囲気下で溶液となるまで攪拌する。該有機相を水（3X）、重炭酸ナトリウム溶液（3X）で抽出し、乾燥（MgSO4）する。該溶媒を30℃にて蒸発させ、油状の粗生成物を得、これを真空下で、ジャケットを備えたビグルーカラムを通して蒸留して、3-フルオロ-4-メトキシベンズアルデヒド（B.P. 120-121（10mmHg）；シリカゲルＧ上で、塩化メチレンによるRf0.6）を得る。
（B）3-フルオロ-4-メトキシ−α−メチル桂皮酸
3-フルオロ-4-メトキシベンズアルデヒド（34.2g, 0.22M）、プロピオン酸無水物（50g, 0.38M）およびプロピオン酸ナトリウム（21g, 0.22M）の混合物を、窒素雰囲気下で150℃にて15時間攪拌する。次に、この反応混合物を1.3ｌの水中に攪拌しつつ注ぎ込み、該生成物を沈殿させる。2.0Nの水酸化カリウム溶液（500ml）を添加し、該混合物を数時間、該沈殿が溶解するまで攪拌する。
該水性溶液をエーテルで抽出（3X）し、攪拌しつつ濃塩酸を添加して、酸性とする。沈殿した生成物を集め、十分に水洗し、真空オーブン内で50℃にて、水酸化カリウムペレット上で乾燥して、3-フルオロ−α−メチル-4-メトキシ桂皮酸（M.P. 167-169℃；シリカゲルＧ上での、塩化メチレン−メタノール（1:1）によるRf0.5）を得る。
（C）3-フルオロ-4-メトキシ−α−メチルジヒドロ桂皮酸
800mlのメタノール中の、3-フルオロ-4-メトキシ−α−メチル桂皮酸（49.5g, 0.236M）を、室温にて43lbsなる圧力下で、水素の理論取り込み率が達成されるまで（20℃にて24分間、1.5gの酸化プラチナ触媒を使用）水素添加する。この溶液を濾過し、60℃まで加温し、蒸発させて、3-フルオロ-4-メトキシ−α−メチルジヒドロ桂皮酸（シリカゲルＧ上での、塩化メチレン−メタノール（9:1）によるRf0.5）を得る。
（D）5-フルオロ-6-メトキシ-2-メチルインダノン
49.3g（0.23M）の3-フルオロ−α−メチル-4-メトキシジヒドロ桂皮酸と、500gのポリ燐酸との混合物を、場合により攪拌しつつ水蒸気浴上で、95℃にて75分間加熱する。得られる濃赤色の溶液を3.0ｌの水に注ぎ、該混合物を一夜攪拌する。沈殿した生成物を集め、十分に水洗し、エーテルに溶解する。このエーテル溶液を水性重炭酸カリウムで抽出（4X）し、塩化メチレンで希釈し、乾燥（MgSO4）する。
この有機溶液を蒸発させ、塩化メチレン−石油エーテルから再結晶して、5-フルオロ-6-メトキシ-2-メチルインダノン（M.P. 76-78℃）を得る。
（E）メチル6-フルオロ-5-メトキシ-2-メチル-3-インデニルアセテート
500mlの、機械的攪拌機、還流コンデンサー、乾燥管、滴下漏斗および窒素導入口を備えた三つ口フラスコに、8.0gの亜鉛シートおよび100mlの無水ベンゼンを導入する。ヨウ素結晶を添加する。21.3g（0.11M）の5-フルオロ-6-メトキシ-2-メチルインダノンおよび18.36g（0.121M）のメチルブロモアセテートを、100mlの無水ベンゼンに溶解した溶液を、数mlの増加を示すように添加する。この混合物を攪拌しつつ穏やかに加熱する。該ヨウ素の色が消失した後、該混合物の残りを徐々に添加し、該反応フラスコを還流温度にて約18時間加熱する。該混合物を600mlの5%H3SO4および約500gの氷上に注ぎ込む。幾分かのエーテルを添加し、該有機相を分離し、5%H2SO4、水、KHCO3で３回、および最後に再度水で洗浄する。該有機相を乾燥（MgSO4）し、濃縮して、27.6gの赤みがかったオイルを得るが、これは放置した際に結晶化する。シリカゲルＧ上で、塩化メチレン−メタノール（99:1）により展開する薄層クロマトグラフィーは、生成物がRf（0.5）をもつことを示す。
更に精製することなしに、該ヒドロキシエステルを、脱水して該インデニルアセテートとする。200mlの乾燥ベンゼン中で、14.2g（53M）の粗製エステルおよび36gの五酸化燐を1/2時間攪拌しつつ還流する。冷却後に、該反応混合物を濾過し、かつ得られる固体残渣を十分にベンゼンで洗浄する。該ベンゼン濾液を塩水で２回洗浄し、乾燥（MgSO4）する。得られる有機相溶液を濃縮し、僅かに着色したオイルを得たが、これは迅速に結晶化する。この粗生成物を、塩化メチレン−石油エーテルから再結晶化して、メチル6-フルオロ-5-メトキシ-2-メチル-3-インデニルアセテート（M.P. 61-62℃）を得る。
（F）6-フルオロ-5-メトキシ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸
メチル-6-フルオロ-5-メトキシ-2-メチル-3-インデニルアセテート（9.3g, 0.037M）および3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒド（7.99g, 1.1eq）の溶液に、16ml（2.0eq）の25%のナトリウムメトキシドのメタノール性溶液を添加する。この混合物を窒素雰囲気下で２時間還流する。等量の水を滴添し、30分間還流を続ける。この溶液を冷却し、水で希釈し、エーテルで抽出（3X）する。残留エーテルを窒素により吹き飛ばし、次いで該水性溶液を50%氷酢酸で酸性とする。沈殿した生成物を集め、十分に水洗する。この粗生成物を再結晶化して、6-フルオロ-5-メトキシ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸を生成する。
（G）6-フルオロ-5-メトキシ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例1（F）および（G）の手順に従って、上記の酸を使用すると、表記化合物が生成する（RおよびR1=H, R2=OCH3, R3=F, R4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例70: シス-5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
（A）2,4-ジフルオロベンズアルデヒド
使用する250ml容量の三つ口フラスコには、攪拌機、温度計、該フラスコの底部までに伸びる枝を備えた滴下漏斗、およびフードの背後まで伸びている管を備えた還流コンデンサーが取り付けられている。50g（0.38M）の2,4-ジフルオロトルエンを攪拌しつつかつハノビア（Hanovia）紫外線ランプで照射しつつ、加熱還流する。41.5mlの臭素を徐々に添加する。この反応は2.5時間で完了するが、その間該還流温度は112℃から155℃に上昇する。
攪拌機と還流コンデンサーを備えた容量２ｌの三つ口フラスコに、200mlの水および140gの炭酸カルシウムを入れる。この冷却した上記の反応混合物を、濯ぎの目的で幾分かのエーテルを使用して、該２ｌ容量の三つ口フラスコに移す。この加水分解は、該反応混合物を攪拌しつつ18時間還流することにより完了する。このアルデヒドは水蒸気蒸留により単離する。該オイルを分離し、該水性相を一旦エーテルで抽出する。該オイルおよびエーテル抽出液を併合し、無水MgSO4上で乾燥し、減圧下で濃縮する。得られる2,4-ジフルオロベンズアルデヒドは幾分かのエーテルを含み、減圧下で、短いビグルー（Vigreux）カラムで蒸留することにより精製する。B.P. 56-58℃（12mm）。
（B）2,4-ジフルオロ−α−メチル桂皮酸
容量500mlの三つ口フラスコは、還流コンデンサー、乾燥管、攪拌機およびN2導入口を備えている。55.4g（0.39M）の2,4-ジフルオロベンズアルデヒドおよび56mlの無水プロピオン酸の混合物に、38g（0.39M）のプロピオン酸ナトリウムを添加する。この反応混合物を135-140℃（油浴温度）にて、窒素雰囲気下で攪拌しつつ19時間加熱する。依然として温かいこの溶液を、１ｌの水中に攪拌しつつ注ぎ込む。固体を分離し、これを56gの水酸化カリウムにより溶解する。この溶液をエーテルで抽出する。該水相を蒸気浴上で加熱して、エーテルを除去する。氷浴中で冷却した後、濃塩酸を攪拌しつつ添加する。分離する固体を集め、冷水で洗浄する。60℃にてKOH上で乾燥することにより、2,4-ジフルオロ−α−メチル桂皮酸M.P. 126-128℃）を得る。
（C）2,4-ジフルオロ−α−メチルジヒドロ桂皮酸
800mlのメタノール中で、60g（0.3M）の2,4-ジフルオロ−α−メチル桂皮酸を1.5gの酸化プラチナ触媒と共に、初期水素圧42lbsにて、１当量の水素が吸収されるまで振盪する。この反応時間は30分である。該触媒を濾過により分離し、メタノールで洗浄する。該メタノールを蒸発により除去する。得られる殆ど無色の残渣、即ち2,4-ジフルオロ−α−メチルジヒドロ桂皮酸を、更に精製することなしに、次の工程で使用する。
（D）4,6-ジフルオロ-2-メチルインダノン
125mlの塩化チオニルに、54.8g（0.274M）の2,4-ジフルオロ−α−メチルジヒドロ桂皮酸を溶解した溶液を室温にて90分間攪拌し、次に90分間還流する。該塩化チオニルを減圧下で蒸発させる。該酸クロリドは、油状物として得られる。
60g（0.45M）の粉砕した塩化アルミニウムを、０℃にて250mlの無水二硫化炭素中に分散させた懸濁液に、10分間に渡り、60gの該酸クロリドを100mlの二硫化炭素に溶解した溶液を滴下する。この添加後、氷浴を取り外し、その温度を徐々に室温まで昇温する。この混合物を室温にて20時間攪拌し、次いで２ｌの10%水性塩酸−砕氷中に攪拌しつつ注ぎ込む。エーテルを添加し、全ての物質が溶解するまで、該攪拌を継続する。該エーテル相を分離し、5%塩酸（2X）、水（2X）および重炭酸ナトリウム（2X）で抽出し、乾燥（MgSO4）する。該エーテルを蒸発させて、粗製4,6-ジフルオロ−α−メチルインダノンを、油状物として得るが、これは放置しておくと結晶化する。この粗生成物をシリカ−ゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー、即ち400gのJ.T.ベイカー（Baker）3405カラムを使用し、石油エーテル−塩化メチレン（2:1）で溶出することにより精製する。塩化メチレン−石油エーテルからの再結晶により、4,6-ジフルオロ-2-メチルインダノン（M.P. 68-69℃）を得る。
（E）メチル5,7-ジフルオロ-2-メチルインデニル-3-アセテート
100mlの無水ベンゼン中に、15.0g（83mM）の4,6-ジフルオロ-2-メチルインダノンおよび14.0g（1.1eq）のメチルブロモアセテートを含む約20%の溶液を、74mlの無水ベンゼン中に、6.5g（1.2eq）粉砕亜鉛屑（メルク（Merck），120℃/22mmで乾燥）を分散させ、攪拌した懸濁液に、窒素雰囲気下で添加する。ヨウ素結晶の幾つかを添加し、該混合物を徐々に還流状態にする。該溶液の残部を、10分間に渡り滴添し、該混合物を一夜、即ち17時間攪拌還流する。この反応混合物を室温まで冷却し、攪拌しつつ、2.0ｌの20%水性硫酸−砕氷中に注ぎ込む。エーテルを、透明な溶液が得られるまで添加する。このエーテル相を、5%水性硫酸溶液（3X）、水（3X）で抽出し、塩化メチレンで希釈し、乾燥（MgSO4）する。該溶媒を蒸発させて、粗製ヒドロキシエステルを得る。
粉砕した五酸化燐（60.0g）を、400mlの無水ベンゼンに該ヒドロキシエステル（20.0g）を溶解した溶液に添加する。この混合物を還流し、30分間攪拌する。この透明な溶液をデカンテーションする。得られる残渣をベンゼンで濯ぎ、次いでエーテルで濯ぐ。併合した有機溶液をエーテルで希釈し、水性硫酸ナトリウム溶液で６回、水性重炭酸ナトリウム溶液で２回抽出し、塩化メチレンで希釈し、乾燥（MgSO4）する。この粗インデニルアセテート生成物は、該溶媒を蒸発した場合に油状物として得られる。この生成物を石油エーテルから結晶化して、メチル5,7-ジフルオロ-2-メチルインデニル-3-アセテート（M.P. 69-70℃）を得る。
（F）5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸，幾何異性体混合物
2.2g（40mM）の粉砕したナトリウムメトキシドを、40mlの無水メタノール中にメチル5,7-ジフルオロ-2-メチルインデニル-3-アセテート（4.78g, 20mM）および4.32g（22mM）の3,4,5-トリメトキシベンズアルデヒドを分散させた懸濁液に、窒素雰囲気下で添加する。透明な溶液が得られ、これを60分間還流する。等量の水を添加し、窒素雰囲気下で30分間攪拌を維持して、鹸化を完了させる。この冷溶液を水で希釈し、エーテルで抽出する。窒素を該水性溶液に吹き込み、残留しているエーテル溶媒を除去する。50%の水性酢酸溶液（40ml）を使用して、該生成物を析出させる。この生成物を濾別し、水洗する。水酸化カリウムペレット上で、デシケータ内で乾燥させ、最後に100℃のオーブン内で乾燥する。この粗生成物を再結晶化させて、該酸のシスおよびトランス異性体の混合物を得る。
（G）シス-メチル5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルアセテートのカラムクロマトグラフィーによる単離
濃硫酸４滴を、60mlの無水メタノールに、5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸（1.0g, 2.8mM）を溶解した溶液に添加し、この溶液を一夜還流下で攪拌する。この溶液を冷却し、結晶を分離する。これらを集め、冷メタノール−水（1:1）で濯ぎ、水酸化カリウムペレット上で乾燥する。これらの結晶は、約95%のトランス−異性体であることが分かり、更に再結晶化により精製して、純粋なトランス−異性体を得る。第一の収穫物からの濾液に水を添加して、第二の収穫物を得る。この結晶の第二の収穫物はシス−異性体に富み、従ってジアゾメタンと反応させた後に、クロマトグラフィーのために使用する。
1.7gのシス−トランス混合エステルを、シリカ−ゲルカラム（3.0X90cm）、即ち250gのJ.T.ベイカー（Baker）3405カラム上でのクロマトグラフィー処理に付す。このカラムを展開し、かつハロゲン化溶媒で溶出する。このようにして、該トランス−異性体およびシス−異性体を得ることができる。
（H）シス-5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸
0.1N水性水酸化ナトリウム溶液（3.0ml, 3.0mM）を、シス-メチル5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルアセテート（266mg, 0.6mM）の、20mlメタノール溶液に、窒素雰囲気下で添加する。この混合物を１時間還流し、冷却し、水で希釈し、数mlの50%酢酸で酸性とする。結晶が形成され、また氷浴中で更に冷却した後に、該結晶を集め、十分に水洗し、ほぼ乾燥するまで吸引処理する。この生成物を再結晶化し、真空デシケータ内の水酸化カリウムペレット上で乾燥し、最後に100℃にて真空オーブン内で乾燥する。このようにして、シス-5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸を得ることができる。
（I）シス-5,7-ジフルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
実施例1（F）および（G）の手順に従って、上記の酸を使用すると、表記化合物が生成する（RおよびR1=H, R2=F, R3=H, R4=F, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例71: α-（1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5,6-ジフルオロ-3-インデニル）-（N-ベンジル）-プロピオンアミド
α-［1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5,6-ジフルオロ-3-インデニル］-（N-ベンジル）-プロピオンアミドを、実施例64（A）-（C）の手順に従って調製する（R=H, R1=CH3, R2=H, R3=F, R4=F, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例72: α-（1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-フルオロ-6-メトキシ-3-インデニル）-（N-ベンジル）-プロピオンアミド
α-（1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-フルオロ-6-メトキシ-3-インデニル）-（N-ベンジル）-プロピオンアミドを、実施例64（A）-（C）の手順に従って調製する（R=H, R1=CH3, R2=H, R3=F, R4=OCH3, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例73: α-（1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-フルオロ-3-インデニル）-（N-ベンジル）-プロピオンアミド
α-［1-（2,4,6-トリメトキシベンジリデン）-2-メチル-5-フルオロ-3-インデニル］-（N-ベンジル）-プロピオンアミドを、実施例64（A）-（C）の手順に従って調製する（R=H, R1=CH3, R2=H, R3=F, R4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
実施例74: （Z）-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンゾリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルホルムアミド
実施例1（E）-（G）の手順に従って、かつ3-メチルインデン-2-カルボン酸［Beil.9,644; アルドリッチ（Aldrich）］を使用して、表記化合物を生成する（o=0であるからR=R1=存在しない; R2=H, R3=H, R4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=0, M=PhCH2NH）。
実施例75: （Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルプロピオンアミド
（A）（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルメチルジアゾメチルケトン
エーテル（700ml）中のジアゾメタン（過剰）を、CH2Cl2（100ml）中の該酸クロリド（実施例1（F）, 5g, 12.5mM）と反応させる。30分後に、該溶媒を蒸発させて表記化合物を得る。これを、更に精製することなく次の工程で使用した。
（B）（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルプロピオン酸
水酸化ナトリウム（７ml, 1M）を、硝酸銀（1g, 5.89mM）を水（9ml）に溶解した溶液に添加する。生成する酸化銀を濾別し、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルメチルジアゾメチルケトン（1g, 2.44mM）をエタノール（100ml）に溶解した溶液と共に、３時間還流条件下で攪拌する。この溶液を濾過する。得られる濾液を塩基（2N NaOH, 1d）で処理し、かつ2N HClで酸性にする。この生成物を酢酸エチルで抽出する。得られる有機相を水洗し、Na2SO4上で乾燥する。アセトニトリルから再結晶して、表記化合物を得る。
（C）（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルプロピオンアミド
実施例1（F）および1（G）の手順に従って、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニル酢酸の代わりに、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-インデニルプロピオン酸を使用して、表記化合物を形成する（R=H, R1=H, R2=F, R3=H, R4=H, R5, R6およびR7=OCH3, R8=CH3, o=2, M=PhCH2NH）。
実施例76: （Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリヒドロキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド
CH2Cl2（30ml）中のBBr3（4.72ml, 50mM）を、-78℃にて、CH2Cl2（150ml）中の（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリメトキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミド（実施例1（G）; 5g, 10.56ml）に徐々に添加する。この反応混合物を-78℃にて２時間、次いで25℃にて２日間攪拌する。冷却後、この反応混合物を氷水（200ml）に注ぎ、酢酸エチルで抽出する。該有機相を乾燥（Na2SO4）し、蒸発させる。CH30H:H2O（7:3）に溶解した、生成残渣の溶液を、逆相シリカゲルクロマトグラフィーにかけて、（Z）-5-フルオロ-2-メチル-1-（3,4,5-トリヒドロキシベンジリデン）-3-（N-ベンジル）-インデニルアセタミドを得る（R=H, R1=H, R2=F, R3=H, R4=H, R5, R6およびR7=OH, R8=CH3, o=1, M=PhCH2NH）。
生物学的作用
（A）成長阻害
これら化合物を、成長阻害の程度を確認するために、ヒト結腸癌細胞系、即ちATCC（Rockville, Md）から入手したSW-480に及ぼす、該化合物の成長阻害活性についてアッセイした。この細胞系の成長阻害は、前癌性病巣および新生物に対する利益の指標となる。これら実験で使用した該細胞系および成長アッセイは十分に特徴付けされており、またNSAIDsの抗−新生物特性を評価するのに利用されている。このアッセイは、新規抗−癌剤についてのスクリーニングプログラムにおいて、ユナイテッドステーツナショナルキャンサーインスティチュート（United States National Cancer Institute）によって使用されている。
薬物母液を100%DMSO溶液として調製し、次いで細胞培養テストのためにRPMI培地で希釈した。全ての薬物溶液を、テスト日に新たに調製した。該培養細胞は継代#99において得、5%ウシ胎児血清および２mMのグルタミン、100U/mlのペニシリン、100U/mlのストレプトマイシンおよび0.25μg/mlのアンホテリシンを補充した、RPMI培地中で成育させた。これら培養物は、95%空気および5%CO2を含む湿潤大気中で、37℃に維持した。該培養物を、0.05%トリプシンおよび0.53mMのEDTAを含む溶液を使用して、前密集密度（preconfluent densities）において継代培養した。細胞を、96ウエルをもつ平底マイクロタイタープレートに対して、1000細胞／ウエルにて平板培養した。
腫瘍細胞成長阻害を、スルホローダミン（Sulforhodamine）B（SRB）タンパク質結合アッセイを利用して評価した。このアッセイにおいては、腫瘍細胞を96−ウエルのプレートに塗布し、６日間（連続的暴露）、薬物−含有培地で処理した。各プレートについて、６個のウエルを未処理のコントロールとし、６個のウエルを伝達体（0.1%DMSO）コントロールとし、残りのウエルを、各薬物濃度当たり３ウエルとなるように、薬物を希釈した。該暴露期間の終了時点において、該細胞を固定し、かつスルホローダミンＢ、即ちタンパク質結合染料で染色した。この染料を、次に可溶化し、得られた溶液の光学密度を、96−ウエルプレートリーダー上で測定した。次に、該処理したウエルの平均染料強度を、該コントロールウエル（各々６ウエル）における平均染料強度で割り、該細胞に及ぼす該薬物の作用を測定した。染料の強度は、ウエル当たりの細胞数またはタンパク質の量に比例する。かくして、得られる「阻害率，％」値は、該薬物により生ずる成長阻害の程度を表す。
各実験について、IC50値を測定し、比較するために使用した。この値は、腫瘍細胞の成長を50%阻害するのに必要とされる薬物の濃度と等価である。IC50値はテストした各薬物濃度に対する平均値を関連付けることによりグラフ的に得た。各実験は、薬物濃度当たり少なくとも３ウエルを含んでいた。濃度は、X-軸上に対数目盛りでプロットした。種々の実験の化合物について得られたIC50値を、該SW-480細胞系について、以下の表４に与える。
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（B）シクロオキシゲナーゼ（COX）阻害
本発明の化合物並びに正のコントロール、即ちスリンダックスルフィドを評価し、これらがシクロオキシゲナーゼの産生を阻害するか否かを決定した（以下の表５を参照のこと）。
COXはプロスタグランジンおよびトロンボキサンの形成を、アラキドン酸の酸化性の代謝により触媒する。本発明の化合物を、精製したCOXに及ぼす阻害作用について評価した。COXは、Boopathy, R. & Balasubramanian, J., 239:371-377, 1988に記載のように、雄ヒツジの精嚢から精製した。COX活性は、Evans, A.T.等の「アラキドネート代謝、抗−炎症能力をもつ酵素に及ぼす、大麻成分の作用（Actions of cannabis constituents on enzymes of arachidonate metabolism anti-inflammatory potential）」と題するBiochem. Pharmacol., 1987, 36:2035-2037に掲載された論文に記載のようにして、アッセイした。簡単に説明すれば、精製したCOXを、テスト化合物の存在下でまたは不在下で、アラキドン酸（100M）と共に、2.0分間、37℃にてインキュベートした。このアッセイはTCAの添加により停止し、かつCOX活性を530nmにおける吸光度によって測定した。
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（C）アポトーシス
アポトーシスを、アポトーシス性細胞（即ち、凝縮クロマチン）の形態学的特徴に基づく、細胞死に関するアッセイを利用して測定した。薬物の調製および細胞培養条件は、上記のSRBアッセイに関するものと同一であったが、ここではHT-29ヒト結腸癌細胞を使用した。密集培養は、12.5cm2フラスコ内で、0.5x106細胞／フラスコにて平板培養することにより達成した。この培養物を、アクリジンオレンジおよびエチジウムブロミドで標識した後、蛍光顕微鏡により、アポトーシスについてアッセイした。浮遊および付着した細胞を、トリプシン処理により集め、PBSで３回洗浄した。１mlのアリコートを、遠心分離処理（3g）した。得られたペレットを25μｌの培地およびPBS中で調製し、穏やかに混合した100μg/mlのアクリジンオレンジおよび100μg/mlのエチジウムブロミドを含有する染料混合物１μｌに再懸濁した。10μｌのこの混合物を、顕微鏡のスライド上に配置し、22mm2のカバースリップで覆い、エピルミネーションとフィルタとの組み合わせを使用して、40x乾燥対物レンズの下で検査した。該処理の同一性についてブラインド状態にある観測者は、サンプル当たり少なくとも100細胞を計数した。アポトーシス性細胞は、アクリジンオレンジまたはエチジウムブロミドで染色したクロマチンの核縮合（nuclear condensation）により同定された。これらの結果を以下の表６に与える。
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また、アポトーシスを、細胞溶解物中に含まれる、フラグメント化したDNAの量に基づいて測定した。簡単に説明すると、SW-480結腸腺癌細胞を、96ウエルマイクロタイタープレート（“MTP”）に、10Ｋ細胞／ウエルなる密度にて、180μｌ塗布し、24時間インキュベートした。次いで、細胞を適当に希釈した化合物のアリコート20μｌで処理し、更に48時間インキュベートした。
このインキュベーションの後、サンプルを以下の段階に従って調製した。該MTPを遠心分離処理（15分間, 1000rpm）し、得られる上澄を、該MTPの迅速な逆位により注意して除去した。次に、各ウエル中の該細胞ペレットを、200μｌの溶解バッファーに懸濁し、室温にて45分間インキュベートして、該細胞を溶解させた。次いで、この溶解物を遠心分離処理（15分, 1000rpm）し、該上澄のアリコート20μｌ（細胞質画分）を、分析のためにストレプタビジンで被覆したMTPに移した。該MTP中の該溶解されたペレット（高分子量のフラグメンテーションされていないDNAを含有する細胞核）を振盪しないように注意する。サンプルを迅速に分析した。というのは、４℃または-20℃での保存は、ELISA-シグナルを減ずるからである。
次に、サンプルをDNAフラグメンテーションアッセイプロトコールに従って処理し、ドーズ−応答曲線を、光学密度の読みに基づいて作成した。DNAの定量は市販品として入手可能な、Mannheim-Boehringerにより「セルデスディテクションELISAplusn（Cell Death Detection ELISAplusn）」として市販されている測光酵素−イムノアッセイにより実施した。このアッセイは、それぞれDNAおよびヒストンに対するマウスモノクローナル抗体を使用する、定量的サンドイッチ−酵素−イムノアッセイ−原理に基づくアッセイである。これは、細胞溶解物の細胞質画分中のモノおよびオリゴヌクレオソームの特異的検出を可能とする。簡単に説明すれば、このアッセイの手順は以下の通りである。該サンプル（細胞溶解物、血清、培養上澄等）を、ストレプタビジンで被覆したMTPに配置する。次いで、抗−ヒストン−ビオチンおよび抗-DNA-PODの混合物を添加し、２時間インキュベートする。このインキュベート期間中に、該抗−ヒストン抗体は該ヌクレオソームのヒストン−成分と結合し、同時にそのビオチン結合を介して、該ストレプタビジン被覆MTPに対する該免疫複合体を固定する。更に、該抗-DNA-POD抗体は該ヌクレオソームの該DNA成分と反応する。洗浄工程による未結合抗体の除去後、該ヌクレオソームの量を、該免疫複合体中に残されたPODにより定量する。PODは、基質としてのABTSR（2,2’-アジノ−ジ［3-エチルベンゾチアゾリン−スルホナート］）*を使用して光学的に測定する。
アポトーシス応答の指標である折り畳み刺激（FS=ODmax/ODveh）を、テストした各化合物について測定した。EC50値は、データ解析ソフトウエアにより特異的に測定するか、あるいは各化合物の有効濃度範囲（ECR=最小有効ドーズ−最小ドーズ対ピーク作用）に基づいて評価した。該テストした化合物に関するこれらのFSおよびEC50値は、上記表６に示されている。
本発明の化合物は、公知の方法に従って製薬上許容される担体と共に、単位投与形式に処方して、前癌性病巣に対する治療を必要とする患者に、周期的（例えば、１日当たり１回またはそれ以上）に、本発明の方法に従って化合物を摂取させることができる。本発明の化合物の正確な初期投与量は、妥当な実験により決定できる。当業者は、該初期投与量が、該化合物のIC50値のある割合に近い血漿濃度を達成するに十分な量であるべきであることを理解しているるはずであり、該割合は化学予防的（chemopreventive）または化学療法的指標に依存する。該初期投与量の計算では、幾つかのファクタ、例えば特定の化合物の該処方および経口または非経口等の投与形式等を考慮するであろう。例えば、約４ｌなる平均的な循環系容量をもつ患者を想定し、かつ実施例１の化合物に対する報告されたIC50値に基づいて、静脈内投与に対してこの化合物約0.075mgなる投与量を、該IC50濃度に等価な、全身的循環系濃度を達成するであろう。
本発明の精神、特に以下の請求の範囲において規定された本発明の範囲から逸脱することなしに、手順、処方および用途の細部に、種々の変更および改良を施すことが可能であることが理解されよう。