(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分を臨床的に有効な量で含む抗うつ薬組成物であって、前記有効成分が、下記段階（１）〜（３）を含む方法で調製された有機溶媒溶離液に含まれる成分、または下記段階（１）〜（４）を含む方法で調製されたろ過液に含まれる成分である、抗うつ薬組成物：
（１）ヒメハギ科ポリガラ属植物を、水、および／または、エタノールもしくはメタノールを含む極性溶媒で抽出して極性溶媒抽出液を得る段階、
（２）前記極性溶媒抽出液を第１有機溶媒で抽出して水層フラクションを得る段階、
（３）前記極性溶媒抽出液または前記水層フラクションを逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出して有機溶媒溶離液を得る段階、
および、
（４）前記有機溶媒溶離液をろ過して分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液を得る段階。
【請求項２】
前記ヒメハギ科ポリガラ属植物は、Polygala tenuifolia Willd.、Polygala sibirica L.、Polygala sibirica var. megalopha Franch.、Polygala japonica Houtt.、Polygala hybrida DC、Polygala arillata Buch.-Hamex D. Don、Polygala glomerata Lour.、Polygala arvensis Willd.、Polygalatatarinowii、Polygala fallax Hemsl.、Polygala wattersii Hance、Polygalahongkongensis var. stenophyllaまたはPolygala senega L.である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ヒメハギ科ポリガラ属植物の、根、茎、葉またはその混合物が使用される、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ヒメハギ科ポリガラ属植物の根が使用される、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ヒメハギ科ポリガラ属植物の根の皮が使用される、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記段階（１）は、前記極性溶媒で前記ヒメハギ科ポリガラ属植物を０．５〜１０時間還流し、液相を前記極性溶媒抽出液として回収することによって行われる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
前記段階（１）は、前記液相をさらに濃縮することにより行われる、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記第１有機溶媒は、酢酸エチルまたはブタノールである、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記段階（３）は、前記極性溶媒抽出液を用いて前記有機溶媒溶離液を得る、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１０】
前記段階（３）は、前記水層フラクションを用いて前記有機溶媒溶離液を得る、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１１】
前記段階（３）における前記第２有機溶媒は、エタノール、または、水とエタノールとの混合物である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１２】
前記段階（３）における前記第２有機溶媒は、１０〜９５体積％エタノールを含む水とエタノールとの混合溶媒である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記段階（３）で得られた前記有機溶媒溶離液に含まれる成分が有効成分である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
前記段階（４）で得られた前記ろ過液に含まれる成分が有効成分である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１５】
分子量３キロダルトン以下の物質が前記ろ過液に含まれ、かつ有効成分である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ヒメハギ科ポリガラ属植物を水で抽出して水抽出物を得る段階Iと、
前記水抽出液を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出し、有機溶媒溶出物を得る段階IIと、
前記有機溶媒溶出物を濾過し、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液を得る段階IIIと、
を含む方法で調製した医薬組成物。
【請求項１７】
段階IIIで得られた前記ろ過液は分子量３キロダルトン以下の物質を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
段階Ｉで得られた前記水抽出物は、水でヒメハギ科ポリガラ属植物を０．５〜１０時間還流した抽出液であり、かつ、前記第２有機溶媒はエタノールまたは水とエタノールとの混合溶媒である、請求項１６または１７に記載の組成物。
【請求項１９】
段階Ｉで得られた前記水抽出物は、水でヒメハギ科ポリガラ属植物を０.５〜１０時間還流した抽出液をさらに濃縮することにより得られる、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第２有機溶媒は１０〜９５体積％エタノールを含む水とエタノールの混合溶媒である、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒメハギ科ポリガラ属植物、特に遠志の抽出物を含む医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヒメハギ科ポリガラ属（Polygalaceae）植物の数種は伝統的に漢方薬として用いられており、例えば、細葉遠志（Polygala tenuifolia WILLDENOW、日本名；イトヒメハギ）や寛葉遠志(Polygala sibirica L.)などの遠志は、その根全体や根の皮が精神安定剤、咳止め、消炎剤などの原料として有用である。Ｋｏｏ等の論文によれば、遠志の根の水抽出物は、Ｈｅｐ  Ｇ２細胞のアポトーシスを抑制し、エタノール誘導の細胞毒性を予防できることが報告されている[Koo HN, Jeong HJ, Kim KR, Kim JC, Kim KS, Kang BK, Kim HM and Kim JJ. Immunopharmacology & Immunotoxicology. 22(3): 531-44, 2000]。Ｋｉｍ等の論文によれば、遠志の根からの水抽出物は、インターロイキン−１の分泌を抑制して腫瘍壊死因子αの分泌を抑え、中枢神経において消炎効果をもつことが報告されている[Kim HM, Lee EH, Na HJ, Lee SB, Shin TY, Lyu YS, Kim NS and Nomura S. Journal of Ethnopharmacology. 61(3): 201-8, 1998]。その上、医薬的に有用な植物であるPolygala audataは、神経薬理的に有効な化合物であるキサントン誘導体を含むことが報告されている[Mak NK, Li WK, Zhang M, Wong RN, Tai LS, Yung KK and Leung HW. Life Sciences. 66(4): 347-54, 2000]。一方で、遠志に含まれるサポニンは、特異性免疫反応を促進するワクチン免疫賦活剤とする効果をもつことが報告されている[Estrada A, Katselis GS, Laarveld B and Barl B. Comparative Immunology, Microbiology & Infectious Diseases. 23(1): 27-43, 2000]。同様に、著しい免疫的効果も報告されている[Desbene S, Hanquet B, Shoyama Y, Wagner H and Lacaille-Dubois MA. Journal of Natural Products. 62(6): 923-6, 1999]。これ以外にも、ヒメハギ科ポリガラ属植物に関する様々な薬理活性が報告されているが、遠志に含まれる成分が抗うつ薬効果を有することを指摘する報文は未だ見出されていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明の目的は、遠志などのヒメハギ科ポリガラ属植物からの抽出物を有効成分とする抗うつ薬組成物を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、乾燥したヒメハギ科ポリガラ属植物の各部位を様々な溶媒で抽出して得られた抽出物の抗うつ薬効果を調べた。その結果、水、または、水とエタノールもしくはメタノールとの混合溶媒による抽出物が、特に著しい抗うつ薬活性を有することが分かった。
【０００５】
すなわち本発明は、ヒメハギ科ポリガラ属植物を、水、および／または、エタノールもしくはメタノールを含む極性溶媒で抽出して得られた極性溶媒抽出液（１）、極性溶媒抽出液（１）を第１有機溶媒で抽出して得られた水層フラクション（２）、極性溶媒抽出液（１）または水層フラクション（２）を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出して得られた有機溶媒溶離液（３）、および、有機溶媒溶離液（３）を濾過して得られた分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４）、からなる群より選択される１以上に含まれる成分を有効成分として臨床的に有効な量で含む、抗うつ薬組成物である。
【０００６】
前記ヒメハギ科ポリガラ属植物は、Polygala tenuifolia Willd.、Polygala sibirica L.、Polygala sibirica var. megalopha Franch.、Polygala japonica Houtt.、Polygala hybrida DC、Polygala arillata Buch.-Ham ex D. Don、Polygala glomerata Lour.、Polygala arvensis Willd.、Polygala tatarinowii、Polygala fallax Hemsl.、Polygala wattersii Hance、Polygala hongkongensis var. stenophyllaまたはolygala senega L.であることが好ましい。さらにこれらヒメハギ科ポリガラ属植物の、好ましくは根、茎、葉またはその混合物、より好ましくは根、さらにより好ましくは根の皮を使用する。
【０００７】
本発明において、極性溶媒抽出液（１）は、前記極性溶媒で前記ヒメハギ科ポリガラ属植物を０．５〜１０時間還流した抽出液から得られることが好ましく、必要に応じて該抽出液をさらに濃縮することがより好ましい。
【０００８】
本発明において、第１有機溶媒は、酢酸エチルまたはブタノールであることが好ましい。
【０００９】
本発明において、極性溶媒抽出液（１）または水層フラクション（２）を用いて有機溶媒溶離液（３）を得ることが好ましい。
【００１０】
第２有機溶媒は、エタノール、または、水とエタノールとの混合物であり、１０〜９５体積％エタノールを含む水とエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。
【００１１】
本発明の抗うつ薬組成物において、有効成分は極性溶媒抽出液（１）、水層フラクション（２）、有機溶媒溶離液（３）、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４）、および、ろ過液（４）に存在する３キロダルトン以下の分子からなる群より選択される少なくとも一つであることが好ましい。
【００１２】
さらに本発明は、ヒメハギ科ポリガラ属植物を水で抽出して水抽出物を得る段階Iと、段階Ｉで得られた水抽出液を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出し、有機溶媒溶出物を得る段階IIと、段階IIで得られた有機溶媒溶出物を濾過し、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液を得る段階IIIと、を含む方法で調製した医薬組成物である。
【００１３】
本発明において、段階IIIで得られたろ過液の分子量が３キロダルトン以下であることが好ましい。
【００１４】
本発明において、段階Ｉの水抽出物は、０．５〜１０時間還流した抽出液であり、必要に応じて該抽出液をさらに濃縮することにより得られることが好ましく、段階IIの溶離に使われる第２有機溶媒はエタノールまたは水とエタノールとの混合溶媒であることが好ましい。
【００１５】
本発明において、段階IIに使われる第２有機溶媒は１０〜９５体積％エタノールを含む水とエタノールの混合溶媒であることが好ましい。
【００１６】
【発明の実施の形態】
本発明の抗うつ薬組成物は、ヒメハギ科ポリガラ属植物から得られた有効成分を含むことを特徴とする。
【００１７】
本発明の抗うつ薬組成物に含まれる有効成分の原料は、抗うつ薬活性成分を含有するヒメハギ科ポリガラ属植物であればよい。具体的には、Polygala tenuifolia Willd.、Polygala sibirica L.、Polygala sibirica var. megalopha Franch.、Polygala japonica Houtt.、Polygala hybrida DC、Polygala arillata Buch.-Ham ex D. Don、Polygala glomerata Lour.、Polygala arvensis Willd.、Polygala tatarinowii、Polygala fallax Hemsl.、Polygala wattersii Hance、Polygala hongkongensis var. stenophyllaまたはPolygala senega L.が高い抗うつ薬活性を有するため好ましく、なかでもPolygala tenuifolia Willd.（遠志）が特に高い抗うつ薬活性を有するため特に好ましい。
【００１８】
ヒメハギ科ポリガラ属植物の使用部位は、いずれの部位でもよく特には限定されないが、具体的には根、茎、葉またはその混合物が抗うつ薬活性の有効成分を多く含有するため好ましく、なかでも根が抗うつ薬活性の有効成分をさらに多く含有するためより好ましく、さらに根の皮が抗うつ薬活性の有効成分を最も多く含有するため最も好ましい。
【００１９】
ヒメハギ科ポリガラ属植物は、新鮮なものでも乾燥したものでもよく、好ましくは、有効成分が濃縮され、かつ保存に優れるため、乾燥したものである。さらに粉末状にして使用してもよい。粉末にすることによって有効成分を効率よく抽出することができる。
【００２０】
ヒメハギ科ポリガラ属植物は、まず、水、または、水とエタノールまたはメタノールとを含む極性溶媒で抽出して、極性溶媒抽出液（１）を得る。なお本発明において極性溶媒とは、水、エタノールおよびメタノールを意味するものとする。抽出方法はどのような方法でもよく特には限定されないが、例えば、極性溶媒でヒメハギ科ポリガラ属植物を還流する方法、水または極性溶媒とヒメハギ科ポリガラ属植物とを混合し加熱する方法、水または極性溶媒にヒメハギ科ポリガラ属植物を漬け込むこと、などが挙げられ、なかでも還流する方法が、有効成分の抽出が効率よく行われるため好ましい。還流する方法を具体的に説明すると、水または極性溶媒でヒメハギ科ポリガラ属植物を０．５〜１０時間還流し、得られた溶媒の固相と液相とを分離することにより液相フラクションを得、必要に応じて該フラクションをさらに濃縮することにより、極性溶媒抽出液（１）が得られる。還流は、従来周知の一般的な還流装置および方法によって行うことができる。還流時間は上述したように５〜１０時間であることが好ましく、ここで還流時間が５時間未満の場合、抽出が不十分に成る恐れがあり、一方で１０時間を超過する場合、還流時間に見合った有効成分の抽出がなされず、工程時間が不必要に長くなる恐れがある。還流時の加熱温度は、用いる溶媒の沸点前後の温度であることが好ましい。例えば、溶媒として水を用いる場合、加熱温度は１００〜１２０℃であることが好ましく、溶媒として水とメタノールとの混合溶媒を用いる場合、加熱温度は６４〜１２０℃であることが好ましく、溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いる場合、加熱温度は７８〜１２０℃であることが好ましい。
【００２１】
固相と液相との分離は、例えばデカンテーション、ろ紙、篩などを用いて分離することができる。フラクションを濃縮する場合は、溶媒を揮発させることによって濃縮することが好ましく、例えば自然に揮発させる、加熱して揮発させる、減圧して揮発させる、凍結乾燥させる、などの方法が挙げられる。なかでも、含有成分が変性し難く、簡便な減圧して揮発させる方法、凍結乾燥方法が好ましい。
【００２２】
抽出に用いられる水は、有効成分の活性に影響を与えないものであれば特には限定されないが、好ましくは、医薬製造で用いられるグレードの水である。例えば蒸留水、脱イオン水、ＲＯ水（逆浸透水）、純水などが挙げられる。
【００２３】
続いて、極性溶媒抽出液（１）を、第１有機溶媒で抽出して水層フラクション（２）を得ることができる。第１有機溶媒とは、極性溶媒抽出液（１）を水層と有機層とに分離し得るような溶媒であれば良い。例えば、酢酸エチル、酢酸ブチル、ブタノール、イソプロピルアルコールなどが挙げられ、なかでも酢酸エチルまたはブタノールが、有効成分を多く含んだ水層フラクションの抽出に適しており、かつ入手容易であるため好ましい。またここで同時に得られる有機層フラクション（２’）も、水層フラクション（２）同様に有効成分として用いることができる。
【００２４】
第１有機溶媒での抽出は、従来周知の方法により行うことができるが、例えば、極性溶媒抽出液（１）とほぼ同体積の第１有機溶媒を添加し、全体が均一になるように攪拌し、一定時間静置することによって水層と有機層とに分離させる方法が好ましい。また、第1有機溶媒での抽出は、必要に応じて複数回行ってもよい。複数回行うことによって、所望の層中に含まれる不純物を減らすことができる。
【００２５】
続いて、極性溶媒抽出液（１）または水層フラクション（２）を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出して、有機溶媒溶離液（３）を得ることができる。第２有機溶媒とは、逆相クロマトグラフィーにおいて有効成分を溶離することができればどのような有機溶媒でも使用可能である。例えば、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールおよびこれらの混合溶媒、ならびに、これらと水との混合溶媒などが挙げられ、なかでもエタノール、または、水とエタノールとの混合溶媒が、有効成分を多く含んだ有機溶媒溶離液（３）の溶離に適しており、かつ入手容易であるため好ましい。水とエタノールとの混合物を用いる場合は、エタノールの含有量を混合物中１０〜９５体積％にすることによって、有効成分を効率よく溶離し得るため好ましい。具体的には、９５体積％、７０体積％、５０体積％エタノールが、有効成分の抽出に適している。場合によっては、水とエタノールとを適切な濃度勾配を有するようにエタノール含有量１０〜９５体積％の範囲内で両者を混合し複数の混合物を得て、その複数の混合物を順次用いて溶出してもよい。このようにすることによって、より高濃度で有効成分を含むフラクションを限定的に得ることができる。
【００２６】
逆相クロマトグラフィーは、従来周知の一般的なカラム、樹脂を組み合わせて用いればよく、また、すでに樹脂が充填された製品を用いてもよい。例えば、ＤＩＡＩＯＮ(R)  ＨＰ−２０（三菱化学株式会社）、Ｓｅｐｈａｄｅｘ(R)ＬＨ−２０（ファルマシア社）、ＲＰ−１８（ナカライテスク社）などの多孔性樹脂充填カラムが好ましく、なかでもＤＩＡＩＯＮ(R)  ＨＰ−２０が、化学的に安定であるため各種溶媒を溶出液として用いることができ、さらに、高分子量の天然有機物の吸着が可能であるため本発明において好ましく使用できる。逆相クロマトグラフィーの温度条件は、特には限定されないが、４℃〜常温で行うことができる。なかでも、４℃前後の低温で処理すれば、成分が変性する恐れが低くなるため好ましい。
【００２７】
有機溶媒溶離液（３）の抽出には、有効成分が含まれていれば、極性溶媒抽出液（１）または水層フラクション（２）のいずれを用いてもよく、もちろん両方を用いてもよい。極性溶媒抽出液（１）または水層フラクション（２）をカラムに添加する際、そのまま添加しても良いが、濃縮して液量を減らしてから添加しても良い。
【００２８】
続いて、有機溶媒溶離液（３）を濾過して、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４）を得ることができる。
【００２９】
本発明者等は、有機溶媒溶離液（３）をさらに分子量によって分画し、それぞれの抗うつ薬活性を調べたところ、３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液がより高い活性を有することを見出した。従って、分子量３０キロダルトン以下の物質に限定することによって、有効成分を高濃度で、かつ不純物がより少ない状態で得、組成物の抗うつ薬活性をより高めることができる。例えば遠志の根の皮を用いた場合は、上述の逆相カラムクロマトグラフィーにおいて７０質量％エタノールでの溶離で得られた溶離液から得られた３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４）が、高い抗うつ薬活性を有するため好ましい。
【００３０】
さらに３０キロダルトン未満の分子量で分画したろ過液も好ましく、例えば、分子量１０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４’）、分子量３キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”）、または、分子量１キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”’）を同様に得ることができ、有効成分の含有量が高いろ過液を適宜選択して用いることが好ましい。例えば遠志の根の皮を用いた場合は、上述の逆相カラムクロマトグラフィーにおいて７０質量％エタノールでの溶離で得られた溶離液から得られた３キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”）が、高い抗うつ薬活性を有するため好ましい。
【００３１】
有機溶媒溶離液（３）を分子量により分画する方法は、従来周知の様々な方法が使用可能であり、例えば、特定の分子量の物質のみを通すフィルターを用いた限外ろ過法、ゲルろ過法などが挙げられる。なかでも、物質が変性し難く、比較的短時間で簡便に処理することのできる、限外ろ過法が好ましい。限外ろ過に用いられるフィルターおよびチューブ等は、従来周知の製品が使用でき、特に限定されないが、例えば、ミリポア社製のセントリコンシリーズなどが挙げられる。
【００３２】
本発明の抗うつ薬組成物は、以上に説明した、極性溶媒抽出液（１）、水層フラクション（２）、有機溶媒溶離液（３）および分子量３０キロダルトン以下のろ過液（４）からなる群より選択される一以上を有効成分として含むものである。さらに、有機層フラクション（２’）、水溶離物（３’）、分子量１０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４’）、分子量３キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”）および分子量１キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”’）からなる群より選択される一以上を有効成分として含むものも本発明の範囲とする。好ましくは、より精製度の高い分子量３０キロダルトン以下のろ過液（４）や分子量３キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”）を含む抗うつ薬組成物であり、高い抗うつ薬活性を実現することができる。
【００３３】
上記（１）〜（４）および（２’）〜（４”’）は、いずれも得られた状態、すなわち液体のままでもよいが、濃縮や乾燥等の処理を施すことによって、ペースト状、固形状、粉末状または顆粒状にしてもよい。
【００３４】
また本発明は、ヒメハギ科ポリガラ属植物を水で抽出して水抽出物を得る段階Iと、段階Ｉで得られた水抽出液を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出し、有機溶媒溶出物を得る段階IIと、段階IIで得られた有機溶媒溶出物を濾過し、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液を得る段階IIIと、を含む方法で調製することができる医薬組成物である。この方法によって調製されるヒメハギ科ポリガラ属植物から得られた有効成分を含む医薬組成物は、ポリガラ属植物の有効成分を豊富に含みかつ毒性が低いため、様々な用途に適用され得るものであり、好ましくは上述したような抗うつ薬組成物である。以下、当該方法について詳細に説明する。
【００３５】
まず、ヒメハギ科ポリガラ属植物を水で抽出して水抽出物を得る（段階I）。原料として用いられるヒメハギ科ポリガラ属植物は、上記抗うつ薬組成物と同様のものが使用可能であり、特に抗うつ薬組成物を製造する場合には、Polygala tenuifolia Willd.（遠志）がより高い抗うつ薬活性を有するため特に好ましい。水抽出物を得る方法は、どのような方法でもよく特には限定されないが、具体的には、水でヒメハギ科ポリガラ属植物を還流する方法、水にヒメハギ科ポリガラ属植物を漬け込む方法などが挙げられる。好ましくは、水でヒメハギ科ポリガラ属植物を還流する方法である。還流方法は、上記抗うつ薬組成物で説明した通りであるためここでの記載を省略する。さらに得られた水抽出物を濃縮してもよく、その方法は、上記抗うつ薬組成物で説明した通りであるためここでの記載を省略する。
【００３６】
続いて、段階Ｉで得られた水抽出液を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒で順次溶出する（段階II）。第２有機溶媒とは、上記抗うつ薬組成物における第２有機溶媒で説明した通りであるためここでの記載を省略する。水とエタノールとの混合物を用いる場合は、エタノールの含有量を混合物中１０〜９５体積％にすることによって、有効成分を効率よく溶離し得るため好ましい。具体的には、９５質量％、７０質量％、５０体積％エタノールが、有効成分の抽出に適している。場合によっては、水とエタノールとを適切な濃度勾配を有するようにエタノール含有量１０〜９５体積％の範囲内で両者を混合し複数の混合物を得て、その複数の混合物を順次用いて溶出してもよい。このようにすることによって、より高濃度で有効成分を含むフラクションを限定的に得ることができる。
【００３７】
逆相クロマトグラフィーで用いられるカラム、樹脂および温度条件等は、上記抗うつ薬組成物で説明した通りであるためここでの説明を省略する。
【００３８】
続いて、段階IIで得られた有機溶媒溶出物を濾過し、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液を得る（段階III）。例えば抗うつ薬組成物を製造する場合、上記抗うつ薬組成物で説明した通り、３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液がより高い活性を有する。さらに３０キロダルトン未満の分子量で分画したろ過液も好ましく、例えば、分子量１０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４’）、分子量３キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”）、または、分子量１キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”’）を同様に得ることができ、有効成分の含有量が高いろ過液を適宜選択して用いることが好ましい。例えば遠志を用いた場合は、３キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４”）が好ましい。
【００３９】
段階IIIにてろ過液を分子量により分画する方法は、従来周知の様々な方法が使用可能であり、上記抗うつ薬組成物において説明したとおりであるためここでの記載を省略する。
【００４０】
本発明の抗うつ薬組成物および医薬組成物は、経口投与または非経口投与のいずれも可能であり、投与方法に応じて適切な医薬的に許容される担体や希釈剤をさらに含んでもよい。
【００４１】
本発明の抗うつ薬組成物および医薬組成物を経口投与用とする場合には、本組成物を適当な添加剤、例えば、乳糖、ショ糖、マンニット、トウモロコシデンプン、合成もしくは天然ガム、結晶セルロース等の賦形剤、デンプン、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボシキメチルセルーロースカルシウム、カルボシキメチルセルーロースナトリウム、デンプン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム等の滑沢剤、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム等の充填剤または希釈剤等と適宜混合して、錠剤、散剤（粉末）、丸剤、および顆粒剤等の固形製剤にすることができる。また、硬質または軟質のゼラチンカプセル等を用いてカプセル剤としてもよい。これらの固形製剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、セルロースアセテートフタレート、（メタ）アクリレートコポリマー等の被覆用基剤を用いて腸溶性被覆を施してもよい。さらに、本組成物を、精製水等の一般的に用いられる不活性希釈剤に溶解して、必要に応じて、この溶液に浸潤剤、乳化剤、分散助剤、界面活性剤、甘味料、フレーバー、芳香物質等を適宜添加することにより、シロップ剤、エリキシル剤等の液状製剤とすることもできる。
【００４２】
また、本発明の抗うつ薬組成物および医薬組成物を非経口投与用とする場合には、本組成物を精製水、リン酸緩衝液等の適当な緩衝液、生理的食塩水、リンガー溶液、ロック溶液等の生理的塩類溶液、エタノール、グリセリン及び慣用される界面活性剤等と適当に組み合わせた滅菌された水溶液、非水溶液、懸濁液、リポソームまたはエマルジョンとして、好ましくは注射用注入用または噴霧用滅菌水溶液として、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、腸内、気管支内等に投与される。この際、液状製剤は、生理学的なｐＨ、好ましくは６〜８の範囲内のｐＨを有することが好ましい。さらに、本組成物は、ペレットによる埋め込み、または坐薬用基剤を用いた坐薬として投与されることも可能である。
【００４３】
上述したうち、好ましい製剤や投与形態等は、担当の医師によって選択されることが好ましい。
【００４４】
本発明の抗うつ薬組成物および医薬組成物の濃度は、投与形態、疾病の種類や重篤度や目的とする投与量などによって様々であるが、一般的には、上記製剤の全質量に対して０．１〜１００質量％、好ましくは１〜９０質量％である。特に、本組成物を含む製剤が経口投与される場合には、上記製剤の全重量に対して１〜１００質量％、好ましくは５〜９０質量％であり、非経口投与される場合には、上記製剤の全体積に対して０．１〜９０体積％、好ましくは１〜８０体積％であることが好ましい。この際、本組成物の濃度が前記上限値を超えると過剰な投与量に見合った病態改善効果が得られない恐れがあり、前記下限値未満であると病態改善効果が十分に期待できない恐れがある。
【００４５】
本発明の抗うつ薬組成物および医薬組成物の投与量は、患者の年齢、体重及び症状、目的とする投与形態や方法、治療効果、および処置期間等によって異なり、正確な量は医師により決定されるものであるが、通常、本組成物が経口投与される場合には、本組成物の投与量換算で、０.２５〜４ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量の範囲であり、１日１〜３回に分けて投与されることが好ましい。この際、１日当たりの経口投与量が多い場合には、１回に複数個の錠剤等の製剤を投与してもよい。
【００４６】
【実施例】
実施例１：極性溶媒抽出液の調製
乾燥したP. tenuifolia Willd.（以下、単に遠志と称する）の根全体を、遠志１ｇに対し水１０ｍｌの割合で水に浸し、１時間還流した後、３５０メッシュの篩で濾過して水抽出物を得た。この水抽出物を減圧濃縮した後、凍結乾燥して粉末を得た。この粉末をＷと標識した。
【００４７】
実施例２：極性溶媒抽出液の調製
乾燥した遠志の根全体の代わりに根の皮をのみを用いた以外は実施例１の方法と同様にして粉末を得た。この粉末をＣと標識した。
【００４８】
実施例３：有機層フラクションおよび水層フラクションの調製
実施例１で得られた極性溶媒抽出液に、同体積のブタノールを添加し、有機層フラクションと水層フラクションとを分離し、減圧濃縮、凍結乾燥し、有機層フラクションおよび水層フラクションの粉末を得た。得られた粉末をＷ−ＢＰ（有機層フラクション）、Ｗ−ＢＰ−Ｈ2Ｏ（水層フラクション）と標識した。
【００４９】
実施例４：有機層フラクションおよび水層フラクションの調製
ブタノールの代わりに酢酸エチルを添加したこと以外は実施例３の方法と同様にして、有機層フラクションおよび水層フラクションの粉末を得た。得られた粉末をＷ−ＥＰ（有機層フラクション）、Ｗ−ＥＰ−Ｈ2Ｏ（水層フラクション）と標識した。
【００５０】
実施例５：有機層フラクションおよび水層フラクションの調製
実施例２で得られた極性溶媒抽出液に、同体積の酢酸エチルを添加し、得られた水層に再び同体積の酢酸エチルを添加し、得られた水層にさらに同体積の酢酸エチルを添加した。三回目の添加によって分離された有機層と水層とを減圧濃縮、凍結乾燥し、有機層フラクションおよび水層フラクションの粉末を得た。得られた粉末をＣ−３ＥＰ（有機層フラクション）、Ｃ−３ＥＰ−Ｈ2Ｏ（水層フラクション）と標識した。
【００５１】
実施例６：水溶離液および９５体積％エタノール溶離液の調製
実施例２で得られた極性溶媒抽出液を濃縮して半流動性状態にした。半流動性の極性溶媒抽出液１ｇに対して樹脂２０〜１２０ｇの割合で、５００〜８００μｍのＤＩＡＩＯＮ(R)ＨＰ−２０樹脂を充填した逆相クロマトグラフィーに注入した。樹脂総容積の三倍量の水と、９５体積％エタノールとで順次に溶出し、それぞれの溶離液を分画、減圧濃縮、凍結乾燥して粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ９５−Ｈ2Ｏ（水溶離液）、Ｃ−ＲＣ９５（９５体積％エタノール溶離液）と標識した。
【００５２】
実施例７：水溶離液および７０体積％エタノール溶離液の調製
９５体積％エタノールの代わりに７０体積％エタノールで溶出したこと以外は実施例６の方法と同様にして粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ７０（７０体積％エタノール溶離液）と標識した。
【００５３】
実施例８：水溶離液および５０体積％エタノール溶離液の調製
９５体積％エタノールの代わりに５０体積％エタノールで溶出したこと以外は実施例６の方法と同様にして粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ５０（５０体積％エタノール溶離液）と標識した。
【００５４】
実施例９：３キロダルトン以下の物質を含むろ過液の調製
実施例７で得られた７０体積％エタノールを２０倍濃縮し、Ｓ１Ｙ３分子篩（ミリポア社）で濾過して分子量３キロダルトン以下の物質を含むろ過液を得た。ろ過液を減圧濃縮、凍結乾燥して粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ７０−３０００と標識した。
【００５５】
実施例１０：１キロダルトン以下の物質を含むろ過液の調製
Ｓ１Ｙ３分子篩（ミリポア社）の代わりに１キロダルトン以下の物質を分離するＳ１Ｙ１分子篩（ミリポア社）を用いたこと以外は実施例９の方法にと同様にして、分子量１キロダルトン以下の物質を含むろ過液からなる粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ７０−１０００と標識した。
【００５６】
実施例１１：１０キロダルトン以下の物質を含むろ過液の調製
Ｓ１Ｙ３分子篩（ミリポア社）の代わりに１０キロダルトン以下の物質を分離するＳ１Ｙ１０分子篩（ミリポア社）を用いたこと以外は実施例９の方法と同様にして、分子量１０キロダルトン以下の物質を含むろ過液からなる粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ７０−１００００と標識した。
【００５７】
実施例１２：３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液の調製
Ｓ１Ｙ３分子篩（ミリポア社）の代わりに３０キロダルトン以下の物質を分離するＳ１Ｙ３０分子篩（ミリポア社）を用いたこと以外は実施例９の方法と同様にして、分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液からなる粉末を得た。得られた粉末をＣ−ＲＣ７０−３００００と標識した。
【００５８】
抗うつ薬活性の測定
抽出物の抗うつ薬活性は、テトラベナジン法により測定した[Gylys J. et al., Annals NY Acad. Sci., 107: 899, 1963; Maryanoff B.E. et al., J. Med. Chem., 27: 1067, 1984; Katsuyama M. et al., Arch. Intern. Pharmacodyn. Thera. 283: 61, 1986]。２２±２ｇのＩＣＲ系オスまたはメスのマウス３匹を一組として、各マウスに溶媒（脱イオン水、１０ｍｌ／ｋｇ体重）や実施例１〜１２で得られた本発明の抽出物を経口投与し、６０分後にテトラベナジンメタンスルホン酸塩（ＴＢＺ；７５ｍｇ／ｋｇ体重）を腹腔内注射した。溶媒や本発明の抽出物を投与する前の体温、ならびに、ＴＢＺの腹腔内注射して６０、９０および１２０分後の体温を記録し、ＴＢＺ誘導の体温下降反応の抑制効果を以下の式で計算した。式中、「Δ溶媒または抽出物」は、溶媒または抽出物を投与されたマウスにＴＢＺを投与する前の体温と、投与した後での体温との差をあらわす。
【００５９】
【数１】
0004109907.tif 000002
【００６０】
【表１】
0004109907.tif 000003
【００６１】
以上の結果よりわかるように、実施例１〜４で得られた遠志の水抽出物、有機層フラクションおよび水層フラクションは、いずれも抗うつ薬活性を示した。なかでも実施例３のブタノールによる水層フラクション、および、実施例４のエタノールによる水層フラクションが、より高い抗うつ薬活性を示した。
【００６２】
【表２】
0004109907.tif 000004
【００６３】
以上の結果よりわかるように、実施例５〜１２で得られた遠志の水抽出物、有機層フラクションおよび水層フラクション、ならびに、水溶離液およびエタノール溶離液は、いずれも抗うつ薬組成物を示した。なかでも実施例５の酢酸エチルによる水層フラクション、実施例６〜８のエタノール溶離液、実施例９〜１２の各ろ過液は、より高い抗うつ薬活性を示した。特に、分子量３０キロダルトンの物質を含むろ過液、および、分子量３キロダルトンの物質を含むろ過液が、なかでも高い抗うつ薬活性を示した。
【００６４】
また、表１に記載の遠志の根全体を用いた水抽出物より、表２に記載の遠志の根の皮のみを用いた水抽出物のほうが、高い抗うつ薬活性を示した。すなわち、遠志の根の皮により多く有効成分が含まれていることがわかった。
【００６５】
【発明の効果】
本発明は、ヒメハギ科ポリガラ属植物、特に遠志を、極性溶媒で抽出して得られた極性溶媒抽出液（１）、極性溶媒抽出液（１）を第１有機溶媒で抽出して得られた水層フラクション（２）、極性溶媒抽出液（１）または前記水層フラクション（２）を逆相クロマトグラフィーにかけ、水と第２有機溶媒とで順次溶出して得られた有機溶媒溶離液（３）、および、前記有機溶媒溶離液（３）を濾過して得られた分子量３０キロダルトン以下の物質を含むろ過液（４）からなる群より選択される１以上を有効成分として用いることによって、高い抗うつ薬活性を実現するものである。本発明の抗うつ薬組成物は、高い抗うつ薬活性を有するものであり、さらに、天然材料から製造されるため、副作用が少なく、長期服用が可能であるという利点も有する。また、有効成分を汎用の溶媒により抽出するという比較的簡便な方法で製造できることから、製造コストや製造時間などを改善することができる。