(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｄ−システノール酸を有効成分として含有する、コレステロールに比較して中性脂肪の生成を選択的に抑制する選択的中性脂肪生成抑制剤。
【請求項２】
過酸化脂質生成をも同時に抑制する、請求項１に記載の選択的中性脂肪生成抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、医薬組成物および医薬品の原料、健康食品、家畜および魚の試料の活性成分としてのＤ−システノール酸の使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
Ｄ−システノール酸（C3H9NO4S：分子量155）は、1957 年に B.ウィッチバーグによって紅藻から初めて分離され同定された。次いで、1963 年には、伊藤(広島大学)によって、Ｄ−システノール酸は海藻である緑藻や褐藻にも存在することが明らかにされた。その後、Ｄ−システノール酸が、イワシにも含まれることが明らかにされ、これが血栓防止効果を有することが明らかになり、血栓症の治療および予防剤として出願されている(特願昭61-47800)。また、システノール酸またはその胆汁酸抱合体は、コレステロール低下作用剤としても特許出願されている(特願平3-49113)。以上のようなＤ−システノール酸の生理活性に関連する幾つかの発明が、現在までに出願されているが、依然として、Ｄ−システノール酸の活性には不明な部分が多い。
【０００３】
近年、食生活の欧米化に伴い、血管や肝臓等における脂肪の蓄積が人々の間に広がり、動脈硬化、急性肝炎および脂肪肝等の成人疾病の原因となることが問題となっている。これらの原因となる蓄積される脂肪の由来は、大別すると（１）コレステロール由来、（２）中性脂肪（即ち、トリグリセリド）由来、（３）これらの複合物由来の３つに分類される。このうち、コレステロール抑制剤は、医薬品メーカーから様々な薬品が製品化されており、数千億円以上の市場となっている。一方、上記の中性脂肪（即ち、トリグリセリド）抑制剤、および複合物抑制剤は、幾つかの医薬品が商品化されてはいるものの、効果が高く、且つ副作用の少ない安全性の高い化合物はまだなく、従って、効果、安全性共に高い医薬品の開発が期待されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
このような状況から、本発明の目的は、ヒトおよび家畜等の動物に対する毒性が低く、且つ効果的な中性脂肪（即ち、トリグリセリド）の生成抑制剤を提供することである。なお、中性脂肪生成とは、中性脂肪の合成と分解の総和、即ち、バランスであり、合成に限るものではない。
【０００５】
また、中性脂肪の生成抑制作用に、脂質の酸化劣化の原因となる過酸化脂質の抑制効果が更に加われば、より効果的に血中トリグリセリド濃度を低下し、並びに中性脂肪の蓄積および動脈硬化の形成等を抑制できることが期待できる。従って、本発明の更なる目的は、過酸化脂質生成抑制作用と中性脂肪（即ち、トリグリセリド）生成抑制作用とを併せて有する毒性の低い抑制剤を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、鋭意研究の結果、下記の手段により上記の課題を解決し、目的を達成することを見いだした。
【０００９】
その第１の手段は、Ｄ−システノール酸を有効成分として含有する、コレステロールに比較して中性脂肪の生成を選択的に抑制する選択的中性脂肪生成抑制剤である。
また、第２の手段は、過酸化脂質生成をも同時に抑制する、第１の手段の選択的中性脂肪生成抑制剤である。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明で使用するＤ−システノール酸は、以下の式Ｉで示す化合物である。
【００１１】
【化４】
0004153649.tif 000002
【００１２】
本発明で使用するＤ−システノール酸は、天然物質からの抽出物であってよく、または合成により製造されるものでもよいが、好ましくはアオサから工業的に製造できる。
【００１３】
アオサからのＤ−システノール酸の製造方法は、例えば、海よりアオサを採取して培養した後でそのアオサを回収し、乾燥し、それを適切な溶媒を用いて抽出し、Ｄ−システノール酸を得て、更に得られたＤ−システノール酸を精製することにより行うことが可能である。このようなアオサからのＤ−システノール酸の製造方法は、発明者らが既に出願している(特願平11-222470を参照されたい)。
【００１４】
本発明は、アオサ由来のＤ−システノール酸の有効利用法について、本願発明者が鋭意研究を重ねた結果、Ｄ−システノール酸が、実施例でデータを示す通りの顕著な中性脂肪（即ち、トリグリセリド）生成抑制作用と、過酸化脂質の生成抑制作用とを同時に有することを明らかにしたことに基づく。
【００１５】
Ｄ−システノール酸は、肝臓における中性脂肪の生成を抑制し、また、血管壁および肝臓等における過酸化脂質の生成を抑制する。ここでいう「生成」とは、生体における中性脂肪の合成と分解の総和、即ちバランスをいうのであって、合成に限るものではない。
【００１６】
Ｄ−システノール酸のこのような効果は、眼科、皮膚科、外科および内科等における広範に亘り、予防および治療学的に利用することが可能である。また、医学および薬学等の広範な分野における実験室等で、中性脂肪および過酸化脂質生成抑制剤として使用することも可能である。更に、中性脂肪生成と過酸化脂質生成とを同時に阻害することが可能であるため、高脂血症等の疾患に対して優れた予防および治療効果を期待できる。
【００１７】
本発明は、Ｄ−システノール酸を有効成分として具備する中性脂肪および過酸化脂質生成抑制剤を提供する。本発明の抑制剤は、更に、Ｄ−システノール酸以外の賦形剤等の所望に応じた物質、また、例えば、他の活性成分を含有することも可能である。
【００１８】
更に、本発明は、Ｄ−システノール酸を活性成分として具備する医薬組成物を提供する。本発明の組成物は、中性脂肪の蓄積および血中トリグリセリド濃度の上昇および過酸化脂質に関連する疾患を予防または治療するために使用できる。特に、活性酸素と脂質の反応物である過酸化脂質の関与する様々な疾患、例えば、虚血性疾患、動脈硬化、血栓症、糖尿病、腎炎、老化、肝炎および脂肪肝、並びに種々の癌等、更に、皮膚科的および眼科的疾患等の予防および治療に効果的である。なお、本発明の医薬組成物についての詳細は後述する。
【００１９】
また、本発明は、Ｄ−システノール酸を活性成分として具備する食品を提供する。本発明のＤ−システノール酸を添加した食品は、栄養強化食品または特定保険食品として用いることも可能である。更に、抗酸化剤として食品その他に用いることも可能である。なお、本発明の食品についての詳細は、更に後述する。
【００２０】
更にまた、本発明は、Ｄ−システノール酸を活性成分として具備する化粧品または化粧品原料を提供する。本発明のＤ−システノール酸を化粧品および頭髪等における活性酸素による過酸化脂質の影響を回避することが可能である。本発明の化粧品は、クリーム、化粧水、乳液、クレンジング、マッサージ用調製物、パック、シャンプーおよびリンス等様々な形態または種類の製品を含み、更に、前記製品に使用するための原料であってもよい。その製造方法は、従来の何れの方法も用いることが可能である。
【００２１】
以下に、本発明で用いられる医薬組成物について説明する。
【００２２】
本発明の医薬組成物は、上述した通り、その活性成分であるＤ−システノール酸によって中性脂肪および過酸化脂質の生成が抑制され、それによって虚血性疾患、動脈硬化、糖尿病、腎炎、癌、皮膚科的疾患、および眼科的疾患等の過酸化脂質に関連する疾患を予防および／または治療することが可能である。
【００２３】
また、本発明の医薬組成物は、Ｄ−システノール酸と共に、治療及び／または予防効果を有する様々な他の活性成分を含むことも可能である。
【００２４】
本発明の医薬組成物は、Ｄ−システノール酸を有効量で含有し、例えば、単回投与量として約０．２５ｍｇ／体重Ｋｇから約５０ｍｇ／体重Ｋｇの範囲内で含有することが可能である。また、その投与は、１日当たりの投与量を１回で投与することも可能であるし、または数回に分割する方法で投与することも可能である。厳密な容量は投与様式、投与役の剤形、治療する対象の症状および体重等によって広範に変化し得るので、責任ある医師若しくは獣医師の経験と選択によって決定されるものである。
【００２５】
投与経路は、活性物質が適切且つ希望する作用部位に効果的に輸送される限り、経口または非経口投与、例えば、経直腸、経皮膚、皮下、静脈内、尿道内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内および眼科的経路等の如何なる経路による投与も可能であるが、経口が好ましい。
【００２６】
典型的な組成物は、薬学的に許容される担体と組み合わせた本発明の活性成分を含む。医薬組成物の製造においては、該抽出物を薬学的に使用可能な賦形剤および補助剤を含む担体を含有することが可能であり、それ自身公知の方法、例えば、慣用的な混合、顆粒化、糖衣形成、溶解または凍結乾燥工程のような方法で製造できる。例えば、該活性成分を、通常の担体と混合し、担体により希釈し、または担体内に封入することができる。更にこれらをアンプル、カプセル、紙またはその他の容器中に加えることもできる。希釈剤として担体を用いるときは、その担体は、該活性成分のための媒体、賦形剤または媒介物となり得るような固体、半固体または液体材料等である。適切な担体として、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ひまし油、ゼラチン、乳糖、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、珪酸、脂肪酸モノグリセライドおよびジグリセライド、ペンタエリスリトール脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース並びにポリビニルピロリジン等が挙げられるが、これらに制限されるものではない。
【００２７】
得られた医薬組成物は、滅菌することができ、また所望とあれば、本発明の活性成分と無害に混合できるものである限り、如何なる補助剤、乳化剤、浸透圧調整用塩、緩衝液および／または着色剤等と共に混合することができる。
【００２８】
経口剤に使用可能な薬学的製剤は、薬学的に経口剤として許容される限り、粉末、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル、軟カプセル、溶液、懸濁液、シロップ等の如何なるものも可能である。
【００２９】
非経口投与のための適切な処方には、薬学的に非経口投与剤として使用できるものである限り、注射用水溶液、注射用水性懸濁液、油性注射剤用懸濁液等の如何なるものも可能である。
【００３０】
以下に、本発明の食品について説明する。本発明のＤ−システノール酸は、中性脂肪および過酸化脂質生成抑制作用を有する添加剤として、如何なる種類、また如何なる形状の食品にも含ませることが可能である。該添加物を添加することにより、様々な食品を健康食品（または少量に含有する食品）に補うことにより、本発明の食品を摂取した健康な対象において、中性脂肪および過酸化脂質の生成を抑制することによって健康を恒常的に維持することに寄与する。例えば、中性脂肪の蓄積および血中トリグリセリド濃度の上昇および過酸化脂質に関連する疾患、例えば、虚血性疾患、動脈硬化、血栓症、糖尿病、腎炎、老化、肝炎および脂肪肝、並びに種々の癌等、更に、皮膚科的および眼科的疾患等を食品として穏やかに予防し、それにより健康の維持と体調の改善に寄与することが可能である。
【００３１】
また、例えば、糖尿病、高脂血症、動脈硬化、虚血性疾患、腎炎、老化および種々の癌、並びに皮膚化的および眼科的疾患等の過酸化脂質に関連する疾患を罹患する対象が本発明の食品を摂取すれば、中性脂肪および過酸化脂質の生成を抑制することにより、医師若しくは獣医師により施される医療効果を補助することも可能であろう。
【００３２】
本発明の食品には、Ｄ−システノール酸を食品として相応しい有効量で添加することが適切である。
【００３３】
当業者に周知のことであるように、前記罹患の対象に与える場合の本発明は、該疾患に悪影響を与えない組成にする必要がある。
【００３４】
Ｄ−システノール酸を添加することが可能な食品には、米類、豆類、麦類、小麦類、澱粉、砂糖、澱粉糖、パン類、麺類、菓子類、食用油、乳製品（バター、チーズ、アイスクリーム、乳酸菌製品等）、豆製品、園芸加工品（缶詰、ジャム、乾燥果実、果実飲料等）、清涼飲料、発酵食品類（酒類、食酢、醤油、ソース、味噌、納豆、漬物等）、肉製品類（ハム、ベーコン、ソーセージ、缶詰類）、卵製品、水産食品類、各種冷凍食品類、乾燥食品類、インスタント食品類、レトルト食品類等が例に挙げられ、また、調味料類、酵素製品類等に添加することも可能であるがこれらの限られるものではない。また、前記食品への添加の方法は、当業者に公知の如何なる方法によっても可能である。
【００３５】
【実施例】
以下実施例により本発明の中性脂肪および過酸化脂質の生成を抑制する選択的中性脂肪生成抑制剤を更に具体的に説明する。
【００３６】
１．Ｄ−システノール酸の製造
横浜市金沢区八景島付近から入手した溶存態窒素濃度が約１．１ｐｐｍの海水を用いて、アオサＭＨＩ−ＡＴＲＣ−１株を屋外の透明アクリル製の培養装置（４０Ｌ）で培養した。尚、この不稔性アオサＭＨＩ−ＡＴＲＣ−１株は、工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託申請したが、「緑藻であるため」との理由により受託を拒否された。
【００３７】
該培養は以下の操作で行った。空気を培養槽に０．１５Ｌ／海水容量Ｌ・分速で供給し、海水はアオサへの溶存態窒素を供給するため２Ｌ／ｈｒの流速で入れ替えた。３日間の予備培養の後、１１日間培養した。この培養によって増殖速度を求めた結果、１５ｇ（乾燥重量）／ｍ２・日で増殖することが確認された。
【００３８】
次に、このような培養により得られたアオサからＤ−システノール酸を抽出および精製した。即ち、前記工程で得られたアオサを純水で洗浄した後で脱水し、室内で乾燥した。これにより、乾燥重量として２０ｇのアオサを得た。このアオサを６０(v/v)％エタノール水溶液に浸し、温浴上にて抽出した。この液を減圧濃縮した後、ジエチルエーテルで脱脂および脱色し、半透明な水溶液を得た。次に、この溶液を活性炭処理して余分な色素を吸着させた後、濾過して透明な水溶液を得た。
【００３９】
得られた濾液を濃縮し、得られた抽出溶液を強酸性陽イオン交換体に添加し、素通り画分を得た。この画分を濃縮し、弱塩基性陰イオン交換体に添加し、素通りさせた後、酢酸水溶液にて溶出した画分を得た。次に、この画分濃縮し、更に、弱塩基性陰イオン交換体を用い、酢酸水溶液を用いて溶出して画分を得た。こうして得られた画分の余剰な酢酸をエバポレーターで除去した後、得られるシロップ状の液を水に溶解させた。その後、終濃度７５(v/v)％のエタノールを加え、冷却下で保存、静置することで白色針状の結晶Ｄ−システノールを得た。
【００４０】
２．Ｄ−システノール酸によるＨｅｐＧ２細胞における中性脂肪濃度低下作用実施例１で得られたＤ−システノール酸について、培養細胞における中性脂肪低下作用と、コレステロール低下作用を調べるため、ヒト肝臓モデル培養細胞ＨｅｐＧ２を用いてＤ−システノール酸添加による細胞内中性脂肪(トリグリセリド)濃度を測定した。
【００４１】
ＨｅｐＧ２の培養は、ＣＯ２インキュベーターを用いて、３７℃、５％ＣＯ２の条件で行った。培養培地は、１０％ＬＰＤＳ（リポタンパク質を含まない血清）を含有するＤＭＥＭ(Delbecco’s modified Eagle’s medium)を用いた。前培養後、Ｄ−システノール酸を含む同培地を添加して２４時間培養し、培地と細胞を回収した。次に、細胞からクロロホルム−メタノールを用いて総脂質を抽出し、減圧エバポレーターで濃縮した。総脂質は、一定量の石油エーテルに溶解し、その一部をトリグリセリド濃度の定量に用いた。また、Ｄ−システノール酸のトリグリセリド低下作用の特異性を調べるために、該総脂質の一部をコレステロールを定量するために使用した。
【００４２】
その結果を図１に示す。図１から明らかである通り、Ｄ−システノール酸無添加に比べ、Ｄ−システノール酸の添加は、培養細胞内トリグリセリド濃度を低下した。トリグリセリド低下の割合は、Ｄ−システノール酸１〜１００μＭ添加で約４０％の低下であった。
【００４３】
これらの結果から、Ｄ−システノール酸には、低濃度で、中性脂肪生成抑制作用、即ち、中性脂肪(即ち、トリグリセリド)を大幅に低下する効果のあることが明らかになった。
【００４４】
また、図１に示すように、コレステロールについては、Ｄ−システノール酸無加群に比べ、Ｄ−システノール酸１００μＭを添加した群であっても６％程度の低下しか示さなかった。従って、Ｄ−システノール酸は、中性脂肪（即ち、トリグリセリド）を特異的且つ顕著に低下する効果を有することが明らかになった。
【００４５】
３．Ｄ−システノール酸の抗脂質過酸化作用
次に、Ｄ−システノール酸の抗脂質過酸化作用を証明するために、ラット肝臓のミクロソームを用いて、ＮＡＤＰＨ依存性の過酸化脂質の生成に対するＤ−システノール酸の効果を調べた。
【００４６】
過酸化脂質の定量は、チオバルビツール酸(以下、TBAとも称す)法によって行った。ミクロソームをｐＨ７．４のリン酸緩衝液に懸濁し、ＮＡＤＰＨを加え、３７℃で３０分間反応させた。このとき、Ｄ−システノール酸添加群には、該反応液にＤ−システノール酸を共存させた。３０分の反応後で生じた過酸化脂質量の変化を測定した。
【００４７】
その結果を図２に示す。図２から明らかであるように、０．１から５０ｍＭのＤ−システノール酸添加のうち、０．１〜１ｍＭの低濃度のＤ−システノール酸添加において過酸化脂質が約２５％低下した。これらの結果から、Ｄ−システノール酸には、低濃度でも過酸化脂質の生成を抑制する作用のあることが判明した。
【００４８】
なお、データには示さないが同様な試験を健康食品や医薬品として多用されるタウリンでも行った。その結果、タウリンの場合には、同定度の効果を発揮するためには２５〜５０ｍＭと高濃度が必要であった。
【００４９】
上記の２つの試験の結果から、Ｄ−システノール酸は、中性脂肪低下作用および抗脂質過酸化作用の両者を同時に有し、この作用のために、Ｄ−システノール酸は、健康食品、医薬品、または化粧品等の活性成分として有利に使用することが可能であることが明らかになった。
【００５０】
【発明の効果】
本発明のＤ−システノール酸を活性成分として具備し、コレステロールに比較して中性脂肪の生成を選択的に抑制し、またさらには、過酸化脂質生成をも同時に抑制する選択的中性脂肪生成抑制剤によって、種々の疾患や、老化等の原因となる中性脂肪(即ち、トリグリセリド)を低下し、同時に、過酸化脂質の生成を抑制することが可能である。
【００５１】
また、本発明は、食品として用いられると共に、安全性の高いアオサ由来のＤ−システノール酸の予防医学的な新たな利用法を提供できる。また同時に、本発明によってアオサそのもの、即ち、アオサの乾燥物等の新たな利用法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｄ−システノール酸によるトリグリセリドの生成抑制効果を示すグラフ。
【図２】Ｄ−システノール酸による過酸化脂質の生成抑制効果を示すグラフ。
【図１】
0004153649.tif 000003
【図２】
0004153649.tif 000004