(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物性タンパク質材料中のイソフラボン複合体をイソフラボンアグルコンに転換する方法であって、
イソフラボン複合体を含む植物性タンパク質材料の水性のスラリーを形成する工程、
該スラリーを、ｐＨ約１１〜約１３．５かつ温度約５℃〜約５０℃で、約１５分〜約４５分間処理する工程、
イソフラボンのグルコシド結合を切断することができる酵素と、該スラリー中のイソフラボングルコンとを、ｐＨ約３〜約９かつ温度約５℃〜約７５℃で、該植物性タンパク質材料中の該イソフラボングルコンがイソフラボンアグルコンに転換するのに十分な時間接触させる工程、及び
更に、イソフラボンアグルコンをスラリーから分離する工程
からなることを特徴とする方法。
【請求項２】
植物性タンパク質材料中のイソフラボン複合体をイソフラボングルコンに転換し、該イソフラボングルコンを該植物性タンパク質材料から取り除き、ついで該イソフラボングルコンをイソフラボンアグルコンに転換する方法であって、
イソフラボン複合体を含む植物性タンパク質材料の水性のスラリーを形成する工程、
該スラリーを、ｐＨ約１１〜約１３．５かつ温度約５℃〜約５０℃で、約１５分〜約４５分間処理する工程、
該イソフラボングルコンを該植物性タンパク質材料中から分離する工程、
該イソフラボングルコン及び水からなる混合物を形成する工程、および
イソフラボンのグルコシド結合を切断することができる酵素と該混合物中のイソフラボングルコンとを、ｐＨ約３〜約９かつ温度約５℃〜約７５℃で、該イソフラボングルコンがイソフラボンアグルコンに転換するのに十分な時間接触させる工程、
からなることを特徴とする方法。
【請求項３】
植物性タンパク質材料から分離するイソフラボングルコンが、イソフラボン複合体からの転換により形成したイソフラボングルコン、及びイソフラボン複合体をイソフラボングルコンに転換する前に植物性タンパク質材料中に存在していたイソフラボングルコンを含む請求項２記載の方法。
【請求項４】
混合物中での酵素とイソフラボングルコンとの接触が、イソフラボングルコンのイソフラボングルコシド結合を切断するのに効果的な量の追加の酵素を添加することを含む請求項２記載の方法。
【請求項５】
追加の酵素が１，４−グルコシド結合を切断することができるサッカライダーゼ酵素を含む請求項４記載の方法。
【請求項６】
追加の酵素が、α―ガラクトシダーゼ酵素、β−ガラクトシダーゼ酵素、グルコ−アミラーゼ酵素、ペクチナーゼ酵素及びそれらの組合わせからなる群より選ばれる請求項５記載の方法。
【請求項７】
追加の酵素を、混合物中へ、乾燥重量基準で、植物性タンパク質材料中に約０．１重量％〜約１０重量％の濃度で添加する請求項４記載の方法。
【請求項８】
イソフラボン複合体及びイソフラボングルコンを植物性タンパク質材料から取り除き、該イソフラボン複合体及びイソフラボングルコンをイソフラボンアグルコンに転換する方法であって、
イソフラボン複合体及びイソフラボングルコンを、イソフラボン複合体及びイソフラボングルコンを含む植物性タンパク質材料から浸出させる工程、
該イソフラボン複合体、該イソフラボングルコン及び水からなる混合物を形成する工程、
該混合物を、ｐＨ約１１〜約１３．５かつ温度約５℃〜約５０℃で、約１５分〜約４５分間処理する工程、及び
イソフラボンのグルコシド結合を切断することができる酵素と該混合物中のイソフラボングルコンとを、ｐＨ約３〜約９かつ温度約５℃〜約７５℃で、該イソフラボングルコンが該イソフラボンアグルコンに転換するのに十分な時間接触させる工程、
からなることを特徴とする方法。
【請求項９】
浸出をｐＨ約４〜約１１で行う請求項８記載の方法。
【請求項１０】
浸出をｐＨ約７で行う請求項８記載の方法。
【請求項１１】
酵素とイソフラボングルコンとの接触が、該イソフラボングルコンのイソフラボンのグルコシド結合を切断するのに効果的な量の追加の酵素の添加を含む請求項８記載の方法。
【請求項１２】
追加の酵素が１，４−グルコシド結合を切断することができるサッカライダーゼ酵素である請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
追加の酵素が、α−ガラクトシダーゼ酵素、β−ガラクトシダーゼ酵素、グルコ−アミラーゼ酵素、ペクチナーゼ酵素及びそれらの組合わせからなる群より選ばれる請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
追加の酵素を、混合物中へ、乾燥重量基準で植物性タンパク質材料中に約０．１重量％〜約１０重量％の濃度で添加する請求項１１記載の方法。
【請求項１５】
更に、イソフラボンアグルコンを混合物中から分離することを含む請求項８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、植物性タンパク質材料中のイソフラボン複合体（isoflavone conjugate）をイソフラボンアグルコンに転換するための２工程の方法に関する。更に本発明は、イソフラボンを含む得られた生成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
イソフラボン類は、植物性タンパク質材料を含む種々のマメ科植物、例えばダイズに存在する。これらの化合物には、ダイジン、６" −ＯＡｃダイジン、６" −ＯＭａｌダイジン、ダイゼイン、ゲニスチン、６" −ＯＡｃゲニスチン、６" −ＯＭａｌゲニスチン、ゲニステイン、グリシチン（glycitin）、６" −ＯＡｃ−グリシチン、６" −ＯＭａｌグリシチン、グリシテイン（glycitein ）、ビオカニンＡ、ホルムオノネンチン（formononentin ）及びクメストロール（coumestrol）が含まれる。これらの化合物は典型的に、ダイズに固有の苦みある風味と関係している。例えば単離物（isolate ）及び濃縮物等の商業製品の製造においては、焦点はこれらの材料を除去することであった。例えば、ダイズ薄片を水性のアルカリ性媒体を用いて抽出するダイズタンパク質単離物の通常の製造方法においては、多量のイソフラボンは抽出物中に可溶化され、単離物を生成するためのタンパク質の酸沈殿（acid precipitation）に続いて、抽出物中で可溶化したまま通常は廃棄される。酸沈殿したタンパク質単離物中に残された残りのイソフラボンは、通常単離物の徹底的な洗浄により除去される。
【０００３】
最近、以下に示す文献に記載されているように、例えばダイズ等の植物性タンパク質に含まれるイソフラボンは、ヒトの癌細胞、例えば乳癌細胞及び前立腺癌細胞等の増殖を阻害するかもしれないということが認識されてきている。“Genistein Inhibition of the Growth of Human Breast Cancer Cells, Independence from Estrogen Receptors and the Multi-Drug Resistance Gene" 、Peterson及びBarnes、Biochemical and Biophysical Research Communications 、１７９巻、No. 1 、６６１〜６６７頁、１９９１年８月３０日；“Genistein and Biochanin A Inhibit the Growth of Human Prostate Cancer Cells but not Epidermal Growth Factor Receptor Tyrosine Autophosphorylation"、Peterson及びBarnes、The Prostate、２２巻、３３５〜３４５頁（１１９３）；“Soybeans Inhibit Mammary Tumors in Models of Breast Cancer" 、Barnesら、Mutagens and Carcinogens in the Diet、２３９〜２５３頁（１９９０）参照。
【０００４】
前記のイソフラボンの中で、幾つかのものはグルコース分子と結合したグルコシド又はグルコンとして存在する。例えば６" −ＯＡｃゲニスチン又は６" −ＯＭａｌゲニスチン等の幾つかのグルコンは、グルコース分子の６番目の部位に付着したアセテート基（acetate group ）又はマロニル基をそれぞれ含む。このタイプの化合物、すなわちグルコース部分に付着した追加の部分を有する化合物は一般的に“複合体（conjugate ）" と呼ばれる。グルコシドを含む全てのイソフラボンは医学的評価において興味深いものであるが、最も興味深い特定のイソフラボンは、グルコース部分が付着していないアグルコンである。アグルコンは以下に示す一般式を有する。
【０００５】
【化１】
0004098385.tif 000002
式中、Ｒ1 、Ｒ2 、Ｒ3 及びＲ4 は、Ｈ、ＯＨ及びＯＣＨ3 からなる群より選ばれてよい。それゆえ、本発明はアグルコン及びこれらの材料を有する植物性タンパク質材料の濃縮に関するものである。
当該技術分野において既知の、グルコンイソフラボンをアグルコンイソフラボンに転換するその他の方法としては、例えばObata らによる日本特許出願第２５８，６６９号がある。この方法は中程度の転換を達成しているだけであり、大規模な商業的実施に対しては望ましくない。更に、前記出願に記載された方法は、タンパク質材料からのイソフラボンの除去については教示しているが、どのようにしてアグルコンイソフラボンに富む植物性タンパク質材料を調製するかについては記載していない。
特定のアグルコンイソフラボンに富む植物性タンパク質誘導体、例えばタンパク質抽出物、タンパク質乳清及びタンパク質濃縮生成物等を、イソフラボンアグルコンのイソフラボンアグルコンへの転換により製造する方法は既知であり、本出願の譲受人に帰する特許出願である、現在継続している公開された特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９４／１０６９７、ＰＣＴ／ＵＳ９４／１０６９９及びＰＣＴ／ＵＳ９４／１０６９６に記載されている。したがって、イソフラボン複合体の少なくとも大部分、好ましくは実質的に全てをアグルコンイソフラボンに転換する方法及びアグルコンイソフラボンに富む植物性タンパク質材料を製造する方法に対する必要性が存在する。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、アグルコンイソフラボンに富む材料及び、イソフラボン複合体を含む植物性タンパク質材料からアグルコンイソフラボン製造する方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決しようとする手段】
本発明はイソフラボン複合体をイソフラボンアグルコンへ転換する方法を提供する。イソフラボン複合体及び水を含む混合物を形成し、ついでｐＨ約６〜約１３．５かつ温度約２℃〜約１２１℃で処理し、イソフラボン複合体の大部分をイソフラボングルコンへ転換する。イソフラボン複合体から転換した又は混合物中に最初から存在していたイソフラボングルコンを、イソフラボンのグルコシド結合を切断することができる酵素と、ｐＨ約３〜約９かつ温度約５℃〜約７５℃で接触させ、混合物中のイソフラボングルコンをイソフラボンアグルコンへ転換する。本発明は、植物性タンパク質材料中に存在するイソフラボン複合体、イソフラボングルコン又はイソフラボンアグルコンのそれぞれを、２工程の転換方法の前、その間又はその後に植物材料から除去することからなる変形の方法を含む。
【０００８】
【発明の実施の形態】
新規な方法は、イソフラボン複合体の少なくとも大部分をイソフラボンアグルコンに転換する２工程の方法である。好ましくは、イソフラボン複合体は植物性タンパク質又は植物材料中に存在する。この方法は、イソフラボン複合体及びイソフラボングルコンのイソフラボンアグルコンへの実質的に完全な転換を保証することが見出されている。第一工程は、イソフラボン複合体の、本明細書においてはイソフラボングルコンと呼ぶイソフラボングルコシドへの転換を含む。第二工程は、第一工程で製造した又は植物材料中に最初から存在していたイソフラボングルコンのイソフラボンアグルコンへの転換を含む。ある植物性タンパク質材料、特に大豆タンパク質材料においては、植物性タンパク質材料中の全イソフラボン内容物の実質的な部分がイソフラボン複合体の形態で存在する。それゆえ、イソフラボングルコンをイソフラボンアグルコンへ転換する前に、イソフラボン複合体をイソフラボングルコンへ転換することは、植物性タンパク質材料から得ることができるイソフラボンアグルコンの量を大幅に増加させることができる。
【０００９】
好ましい態様にある方法における出発材料は、イソフラボン複合体を含むあらゆる植物性タンパク質又は植物材料である。好ましい態様にある方法は、ダイズの生成物について記載されるが、本発明の方法はダイズの他のタンパク質材料又はダイズ材料の広範囲に一般的に適用することができる。更に、本明細書において使用する“ダイズ材料" という用語は、ダイズ又はダイズの変種のあらゆる型のことを意味する。
本発明の方法の幾つかの異なる態様が存在する。第一の態様においては、イソフラボン化合物を植物性タンパク質材料中に残したまま、イソフラボン複合体をイソフラボンアグルコン形態へ転換する。それゆえ、生成したイソフラボンアグルコンは植物性タンパク質材料中に残ったままであってもよく、適宜取り除いてもよい。イソフラボンのアグルコン形態は一般的に溶媒、非水性の浸出（leaching）又は抽出方法により取り除くことができるだろう。この操作に適した溶媒には、アセトン、エタノール及びその他の類似した有機溶媒が含まれるが、これらに限定されない。系のｐＨが、アグルコン形態が容易に系に溶解するような十分な塩基性であるならば、ある適用においては、水性抽出法（aqueous extraction method ）を使用することが予期される。
【００１０】
第二の態様においては、植物性タンパク質材料中でイソフラボン複合体をイソフラボングルコンに転換する。ついでイソフラボングルコンを植物性タンパク質材料中から、水性浸出（aqueous leaching）又は抽出方法により取り除く。水性リーチングは、植物材料を浸漬するか、さもなくば植物材料を水又は例えばエタノールもしくはその他のアルコール等の水に適合する溶媒の混合物中に晒すか又は浸すことで比較的可溶性のイソフラボングルコンを浸出させることにより行われるだろう。得られた水系のｐＨは、約４〜約１１であり、特に好ましくは約７である。取り除いた後、イソフラボングルコンをイソフラボンアグルコン形態に転換する。
第三の態様においては、あらゆる転換操作を行う前に、イソフラボン複合体を植物性タンパク質材料中から取り除く。イソフラボンの複合体形態は比較的水溶性であるので、前記したように、イソフラボン複合体を植物性タンパク質材料から、水性浸出又は抽出法により取り除くことができるだろう。取り除いた後、イソフラボン複合体をグルコン形態に転換し、ついでアグルコン形態に転換する。
【００１１】
イソフラボン複合体を含む植物材料の型に依存して、ある場合においては、植物材料を細かく砕かれた形態に加工することが必要になるかもしれない。このことは、植物材料中に含まれるイソフラボン化合物を、以下に詳細に述べる第一工程及び第二工程の両者又はいずれかにおいて利用する試薬に接触しやすくするために望ましいだろう。材料を、当該技術分野において既知の通常の方法によりすりつぶす（ground）、破砕又はその他の加工を施してもよい。もし植物材料が、植物材料中のイソフラボン化合物が外部の試薬又は反応物に容易に接触する状態にある、例えばある植物における小さな葉の部分等であるならば、植物材料を前記の加工に付する必要はないだろう。
第一の転換工程又は操作においては、植物性タンパク質材料中のイソフラボン複合体は、化学反応によりイソフラボングルコシドに転換される。この反応は、ｐＨ及び温度範囲の特定の組合わせにおいて、特に急速かつ効率的になることが見出されている。好ましくは、植物性タンパク質材料を十分量の水と共に反応容器又はその他の適当な容器（container ）に導入する。植物性タンパク質材料の比較的均一な混合物又は分散液が形成される限り、水量は重要ではない。第一の転換工程に好ましいｐＨ範囲は約６〜約１３．５である。イソフラボン複合体のイソフラボングルコンへの転換は塩基により触媒されることが見出されており、そのため急速な転換を達成するためには高ｐＨを利用することが最も好ましい。第一工程に最も好ましいｐＨは約１１である。ｐＨを、系のｐＨを上昇させる、あらゆる適当な塩基、苛性試薬又は塩基性試薬、例えば水酸化ナトリウムの添加により調節してもよい。
【００１２】
第一工程に好ましい温度は約２℃〜約１２１℃である。最も好ましい温度はｐＨに依存する。本発明者らは、ｐＨが比較的高いとき、転換が低い温度で急速に起こることを見出している。ｐＨが約９の場合、温度約４５℃〜約７５℃の範囲で反応は効率的に起こり、約７３℃が最も好ましい。ｐＨが約１１のとき、好ましい温度は約５℃〜約５０℃であり、３５℃が特に好ましい。ｐＨが比較的低いとき、転換は高い温度で起こることができる。例えば、ｐＨが約６のとき、転換は温度約８０℃〜約１２１℃の範囲内で起こることができる。
イソフラボン複合体からイソフラボングルコンへの転換の全期間を通じて、混合物を比較的一定の温度に維持することが好ましい。しかしながら、ある場合においては、第一工程の転換の間、温度を上昇又は低下させることが望ましいだろう。
【００１３】
第一工程におけるイソフラボン複合体のイソフラボングルコンへの転換に必要な時間は、利用するｐＨ及び温度に主に依存する。典型的には、その様な時間は約１５分間〜数時間又はそれ以上である。転換は高ｐＨかつ高温ではより急速に起こることができる。ｐＨが約９のとき、転換は、約７３℃で約４〜約６時間で実質的に完了する。特に好ましい態様においては、第一工程の転換のための方法パラメーターの特定の組み合わせを利用する。このパラメーターでは、ｐＨが約１１、温度が約５℃〜約５０℃であり、転換時間は約１５分間〜約４５分間である。
第一のイソフラボン転換工程は著しく効率的であるので、イソフラボン複合体の少なくとも大部分、好ましくは実質的に全てがイソフラボングルコンに転換する。第一工程におけるイソフラボン複合体のイソフラボングルコンへの転換の程度は、典型的には少なくとも約８０％〜約１００％である。前記の好ましい反応パラメーターを使用することにより、９５％又はそれ以上の転換を達成することが可能である。これらの高い転換率は、大規模な商業的操作にとって特に魅力的である。
【００１４】
本発明者らは、第一工程を水系中で行うことが最も好ましいことを見出した。系中には、その他の水に適合する成分、例えばある種のアルコール、例えばメタノールが存在していてもよい。一般的には、第一の転換工程は頻繁な混合及び特定の制約を要求しない。水以外の成分が系中に存在する場合には、それらの成分を除去するか又は追加量の水をシステムに導入することにより十分に希釈する必要があるかもしれない。理由は、ある成分が以下に詳細に説明する第二の転換工程に悪影響を及ぼすかもしれないからである。
第二の転換工程は、混合物中の、第一の転換工程よりも前に植物性タンパク質材料中に最初から存在していたイソフラボングルコン及び第一の転換工程において生成したイソフラボングルコンの全てをイソフラボンアグルコンへ転換することを含む。転換は、混合物中のイソフラボングルコンとイソフラボンのグルコシド結合を切断することができる酵素とを、転換を行うのに十分な温度、ｐＨ及び時間で接触させることにより達成される。
【００１５】
転換は混合物中に存在する酵素の濃度及びその性質に主に依存する。これらの酵素は植物性タンパク質材料中に天然に存在するものであってもよく、材料中の微生物の増殖に由来するものであってもよく、植物性タンパク質材料に添加されるものであってもよい。植物又はダイズ材料中に天然に存在する酵素及び微生物の増殖に由来する酵素を、本明細書では“残留性（residual）酵素”と呼ぶ。添加される酵素を、本明細書では“追加（supplemental）の酵素”と呼ぶ。一般的には、植物性タンパク質材料材中の残留性酵素の濃度がグルコン形態のイソフラボンの少なくとも大部分、好ましくは実質的に全てをアグルコン形態に転換するには不十分である場合には、追加の酵素を添加すべきである。
第二工程における転換を行うために必要な酵素量は、存在する酵素のタイプ、酵素濃度の分布、系のｐＨ、存在する酵素の活性及び系の温度を含む種々の因子に依存する。酵素を添加する場合には、存在する酵素の全濃度が乾燥重量基準で植物性タンパク質材料の約０．１重量％〜約１０重量％になる量が、典型的に好ましい酵素量である。残留性酵素、追加の酵素又は両者を経て、十分な濃度の酵素が系中に存在するならば、イソフラボングルコンを、混合物中のイソフラボングルコンの少なくとも大部分、好ましくは実質的に全てをイソフラボンアグルコン形態に転換するのに十分な温度、ｐＨ及び時間で接触させる。
【００１６】
好ましい追加の酵素は、混合物の環境のｐＨに基づいて選択され、ほぼ全てのサッカライダーゼ（saccharidase）、すなわち１，４−グルコシド結合を切断することができる酵素のほぼ全てを含む。その様な酵素は、例えばAspergillus Niger 、Aspergillus Oryzae、Kluyveromyces Lactis及びKluyveromyces Fragilisに由来する酵素であることができる。好ましい追加の酵素は商業的に入手することができるα−及びβ−ガラクトシダーゼ酵素並びにペクチナーゼ酵素である。特に好ましい商業的に入手できる酵素は、Biopectinase 100L （ｐＨ約３〜約６の範囲で好ましく用いられる）、Biopectinase 300L （最適ｐＨ範囲約３〜約６）、Biopectinase OK 70L(最適ｐＨ範囲約３〜約６) 、Biolactase 30,000 （最適ｐＨ範囲約３〜約６）、Neutral Lactase(最適ｐＨ範囲約６〜約８) （これらの全ての酵素は、Quest International,1833 57th Street,Post Office Box 3917,Sarasota, Florida 34243 から入手できる）である。又、特に好ましいのは、Lactase F （ｐＨ範囲約４〜約６で好ましく用いられる）、Lactase 50,000（最適ｐＨ範囲約４〜約６）（両者とも、Amano International Enzyme Co., Inc., Post Office Box 1000, Troy, Virginia 22974から入手できる）である。その他の特に好ましい酵素には、Lactozyme 3000L （ｐＨ範囲約６〜約８で好ましく用いられる）、alpha-Gal 600L（ｐＨ範囲約４〜約６．５で好ましく用いられる）（Novo Nordisk Bioindustrials, Inc., 33 Turner Road, Danbury, Connecticut 06813 から入手できる）、Maxilact L2000（ｐＨ範囲約４〜約６で好ましく用いられる）（Gist Brocades Food Ingredients, Inc., King of Prussia, Pennsylvania, 19406から入手できる）、Neutral Lactase （ｐＨ範囲約６〜約８で好ましく用いられる）（ Pfizer Food Science Group, 205 East 42nd Street, New York, New York 10017から入手できる）、Enzeco Fungal Lactase Concentrate （ｐＨ範囲約４〜約６で好ましく用いられる）（Enzyme Development Corporation, 2 Penn Plaza, Suite 2439, New York 10121より入手できる）が含まれる。
【００１７】
又、ある種のグルコ−アミラーゼ酵素（gluco-amylase enzyme）を、前記の酵素の代わり、又はそれに追加して使用することができることが発見されている。適当なグルコ−アミラーゼの例としては、G-Zyme G990 （ｐＨ範囲約４〜約６で好ましく用いられる）（Enzyme Development Corporationより入手できる）が挙げられる。
第二の転換工程を始める前に、第一の転換工程において生成した系をを異なる容器又は反応容器に移す必要はない。更に、面倒、時間のかかる、又は高価な分離又は加工操作を、反応混合物又はそれのあらゆる部分に対してする必要はない。代わりに、第一の転換工程より得た生成物を、第二の転換工程に対するフィード材料（feed material ）として直接使用してもよい。調節又は監視する必要のある唯一のパラメーターはｐＨ及び温度である。
【００１８】
第二の転換工程はｐＨ約３〜約９で行ってもよい。第二の転換工程に好ましいｐＨ範囲は約３〜約８である。利用するｐＨは、使用する酵素のタイプに主に依存し、それにしたがって選択されるべきである。ほとんどの場合においては、ｐＨを、第一工程の比較的高い又は塩基性ｐＨから、種々の方法、例えば酢酸、硫酸、リン酸、塩酸又はその他の適当な試薬等の１種以上の適当な試薬を添加することにより調節してもよい。多くの例においては、食品グレード（food grade）にある酸性試薬又は酸を使用することが好ましいことが予期される。
第二の転換工程を温度約５℃〜約７５℃で行っていもよい。第二の転換工程に好ましい温度は約５℃〜約６０℃である。特に好ましい温度は約３５℃〜約５５℃である。イソフラボングルコンからイソフラボンアグルコンへの転換の全期間を通じて、反応系を比較的一定の温度を維持することが好ましい。しかしながら、ある場合においては、第二の転換工程の期間、温度を上昇、低下又は変化させることが望まれることが想像される。
【００１９】
第二の転換工程に必要な時間は、種々の酵素に関係した因子並びに系の温度及びｐＨに主に依存する。ほとんどの場合において、２４時間以内に実質的な転換を達成することができる。第二の転換工程を行うために必要な時間は、追加の酵素を添加することにより著しく減少させることができ、約１時間〜約３時間にまで短縮されるだろう。
第二の転換工程は、混合物中のイソフラボングルコンの少なくとも大部分をイソフラボンアグルコンに転換することができる。第二工程の間のイソフラボングルコンのイソフラボンアグルコンへの転換の程度は、典型的には少なくとも約８０％〜１００％であり、好ましくは約９０％〜約１００％である。前記の好ましい反応パラメーターを使用することにより、約９５％又はそれ以上の転換を達成することができる。信頼できる根拠（Dependable basis）のある高い転換速度は注目すべきことであり、商業的な応用に望ましい。
【００２０】
第二の転換工程の完了時に、比較的不溶性のイソフラボンアグルコンを系より、好ましくは遠心分離又はろ過により取り除く。一度取り除いた後、アグルコンを、あらゆる粒子又はその他の固体材料から、適当な溶媒を用いた抽出により更に分離してもよい。その様な溶媒としては、アセトン及び／又はアルコール例えばエタノール等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。１種以上の凝結剤を系又は混合物中に、第二の転換工程の前、その間又はその後に添加することにより、イソフラボンアグルコンの沈殿を促進してもよい。
以下に示す実施例は特定のものであって、本発明の態様を制限するものではない。
【００２１】
【実施例】
本発明を、植物材料としてダイズ材料を使用した以下に示す実施例により、より詳細に説明する。実施例は説明を意図したものであって、ともかく本発明の範囲を制限するものでもなく、限定するものでもないものとして解釈されるべきである。
植物性タンパク質材料、例えばダイズタンパク質単離物、濃縮物又は粉末等は、対応する複合体、グルコン及びアグルコンメンバーを有するイソフラボンのゲニステイン、ダイゼイン及びグリシテインの「ファミリー」を含む。ゲニステインファミリーは、複合体６" −ＯＭａｌゲニスチン、６" −ＯＡｃゲニスチン、グルコンゲニスチン及びアグルコンゲニスチンを含む。ダイゼインファミリーは、複合体６" −ＯＭａｌダイジン、６" −ＯＡｃダイジン、グルコンダイジン及びアグルコンダイジンを含む。グリシテインファミリーは、複合体６" −ＯＭａｌグリシチン、グルコングリシチン及びアグルコングリシチンを含む。以下に示す実施例においては、イソフラボンの相対的な濃度を、イソフラボンファミリーの濃度の百分率として測定した。例えば、ゲニステインファミリーにおいては、６" −ＯＭａｌゲニスチン（％）＋６" −ＯＡｃゲニスチン（％）＋ゲニスチン（％）＋ゲニステイン（％）＝１００％である。複合体のグルコンへの転換の程度及びグルコンのアグルコンへの転換の程度は、イソフラボンファミリー中の各種化合物の百分率を比較することによって決定することができる。
【００２２】
実施例１
植物性タンパク質材料を含むサンプルを、最初の（primary ）ダイズ乳清の水性混合物を形成することによって調製した。実験の第一のシリーズにおいては、第一の転換工程を、全てのサンプルのｐＨを９．０に調節し、７２．５℃で３．５時間インキュベートすることにより行った。サンプルを冷却し、ｐＨを７．０に調節した後、第二の転換工程を行う前に、サンプルの３つのグループを形成した。第一のグループでは、ｐＨを７．０のままにした。第二のグループでは、ｐＨを８．０に調節した。第三のグループでは、ｐＨを９．０に調節した。次いで各グループを２つのクラスに分割し、４５℃又は５５℃での第二のインキュベーションに付した。全てのサンプルを２４時間インキュベートし、０、２、４、６及び２４時間後に定期的な分析を行った。
以下に示す表１〜表６は、本明細書に記載した方法の適用による、ダイズ材料中のイソフラボン複合体のイソフラボンアグルコンへの転換の百分率を示している。
【００２３】
【表１】
表１−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
pH7.0、 45 ℃                                               (%)
0 時間後         86      5               0               9
2 時間後         85      6               0               9
4 時間後         86      5               0               9
6 時間後         87      5               0               9
24時間後          0      1               0              99    
表１−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
pH7.0、 45 ℃                                               (%)
0 時間後         79      4               0              18
2 時間後         78      4               0              18
4 時間後         78      4               0              18
6 時間後         79      3               0              18
24時間後          0      2               0              98    
表１−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
pH7.0、 45 ℃                                 (%)
0 時間後         100     0                 0
2 時間後         100     0                 0
4 時間後         100     0                 0
6 時間後         100     0                 0
24時間後           0     0               100    
【００２４】
【表２】
表２−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
pH8.0、 45 ℃                                               (%)
0 時間後         86      5               0               9
2 時間後         87      4               0               9
4 時間後         88      4               0               9
6 時間後         89      3               0               8
24時間後          0      3               0              97    
表２−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
pH8.0、 45 ℃                                               (%)
0 時間後         79      4               0              18
2 時間後         79      3               0              18
4 時間後         79      3               0              18
6 時間後         80      2               0              18
24時間後          0      3               0              97    
表２−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
pH8.0、 45 ℃                                 (%)
0 時間後         100     0                 0
2 時間後         100     0                 0
4 時間後         100     0                 0
6 時間後         100     0                 0
24時間後           0     0               100    
【００２５】
【表３】
表３−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
pH9.0、 45 ℃                                               (%)
0 時間後         86      5               0                9
2 時間後         89      2               0                9
4 時間後         92      1               0                8
6 時間後         93      0               0                7
24時間後          0      0               0              100   
表３−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
pH9.0、 45 ℃                                               (%)
0 時間後         79      4               0               18
2 時間後         81      1               0               18
4 時間後         82      0               0               18
6 時間後         82      0               0               18
24時間後          0      0               0              100   
表３−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
pH9.0、 45 ℃                                 (%)
0 時間後         100     0                 0
2 時間後         100     0                 0
4 時間後         100     0                 0
6 時間後         100     0                 0
24時間後           0     0               100    
【００２６】
【表４】
表４−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
pH7.0、 55 ℃                                               (%)
0 時間後         86      5               0               9
2 時間後         86      5               0               9
4 時間後         87      5               0               8
6 時間後         88      4               0               8
24時間後          0      1               0              99    
表４−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
pH7.0、 55 ℃                                               (%)
0 時間後         79      4               0              18
2 時間後         78      4               0              18
4 時間後         79      3               0              18
6 時間後         80      3               0              18
24時間後          0      2               0              98    
表４−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
pH7.0、 55 ℃                                 (%)
0 時間後         100     0                 0
2 時間後         100     0                 0
4 時間後         100     0                 0
6 時間後         100     0                 0
24時間後           0     0               100    
【００２７】
【表５】
表５−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
pH8.0、 55 ℃                                               (%)
0 時間後         86      5               0                9
2 時間後         87      4               0                9
4 時間後         89      3               0                8
6 時間後         91      2               0                7
24時間後          0      0               0              100   
表５−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
pH8.0、 55 ℃                                               (%)
0 時間後         79      4               0              18
2 時間後         79      3               0              18
4 時間後         80      2               0              18
6 時間後         81      1               0              17
24時間後          0      1               0              99    
表５−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
pH8.0、 55 ℃                                 (%)
0 時間後         100     0                 0
2 時間後         100     0                 0
4 時間後         100     0                 0
6 時間後         100     0                 0
24時間後           0     0               100    
【００２８】
【表６】
表６−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
pH9.0、 55 ℃                                               (%)
0 時間後         86      5               0                9
2 時間後         91      1               0                8
4 時間後         93      0               0                7
6 時間後         95      0               0                5
24時間後          0      0               0              100   
表６−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
pH9.0、 55 ℃                                               (%)
0 時間後         79      4               0               18
2 時間後         82      0               0               17
4 時間後         83      0               0               17
6 時間後         83      0               0               17
24時間後          0      0               0              100   
表６−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
pH9.0、 55 ℃                                 (%)
0 時間後         100     0                 0
2 時間後         100     0                 0
4 時間後         100     0                 0
6 時間後         100     0                 0
24時間後           0     0               100    
【００２９】
イソフラボン複合体のアグルコンへの完全な又は実質的に完全な転換が、全てのｐＨ条件、４５℃及び５５℃での６〜２４時間のインキュベーションで起こった。あらゆる特定の理論に結び付けることを望まないけれども、アグルコン形態への転換の前に生じ、かつ前記データから見られる遅延期間（lag period）は、生合成、すなわち残留性のダイズ酵素又は微生物酵素の形成が起こるための時間に由来するものと信じられる。遅延期間は、反応における第二の参加者（participant ）、別の酵素基質の枯渇及び／又は酵素及び／又は基質の結合に由来するのかもしれない。
【００３０】
実施例２
第二の実験のシリーズにおいては、第一の転換工程を、全てのサンプルのｐＨを１１．０に調節し、５０℃で１時間加熱することによって行った。ついでサンプルを冷却し、ｐＨを４．０又は４．５のいずれかに調節した。第一のグループにおいては、Biopectinase 100L の有効量を添加し、第二のグループにはLactase F を添加した。ついでサンプルを５０℃又は６０℃のいずれかで１時間インキュベートした。
以下に示す表７〜表１５は、本明細書に記載した方法の適用による、ダイズ材料中のイソフラボン複合体のイソフラボンアグルコンへの転換の百分率を示している。
【００３１】
【表７】
表７−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第一工程の転換                                             (%)
転換前           25.9    61.6            0              12.5
転換後           89.5     0.0            0              10.5
表７−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第一工程の転換                                             (%)
転換前           28.4    58.2            2.9            10.5
転換後           89.7     0.0            0.0            10.3  
表７−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第一工程の転換                               (%)
転換前            37.9   55.4            6.7
転換後           100.0    0.0            0.0    
【００３２】
【表８】
表８−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.5、 50 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3               9.9    0               0              90.1
4.4              20.4    0               0              79.6
2.2              43.1    0               0              56.9
1.1              62.4    0               0              37.6
0.5              75.4    0               0              24.6  
表８−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.5、 50 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3               7.9    0               0              92.1
4.4              18.6    0               0              81.4
2.2              42.2    0               0              57.8
1.1              62.0    0               0              38.0
0.5              75.1    0               0              24.9  
表８−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.5、 50 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                             (%) 
5.3               74.8   0               25.2
4.4               75.2   0               24.8
2.2               77.8   0               22.2
1.1              100.0   0                0.0
0.5              100.0   0                0.0   
【００３３】
【表９】
表９−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.5、 50 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
11.1             0.0     0               0              100.0
8.9             0.0     0               0              100.0
4.4             0.0     0               0              100.0
2.2             0.0     0               0              100.0
1.1             0.0     0               0              100.0
0.6             4.2     0               0               95.8 
表９−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.5、 50 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
11.1             0       0.0             0              100.0
8.9             0       0.0             0              100.0
4.4             0       2.4             0               97.6
2.2             0       2.1             0               97.9
1.1             0       2.1             0               97.9
0.6             0       2.2             0               97.8 
表９−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.5、 50 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                             (%) 
11.1              0.0    0               100.0
8.9              0.0    0               100.0
4.4              0.0    0               100.0
2.2              0.0    0               100.0
1.1              0.0    0               100.0
0.6             15.9    0                84.1  
【００３４】
【表１０】
表１０−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.5、 60 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3               5.5    0               0              94.5
4.4              12.9    0               0              87.1
2.2              70.9    0               0              29.1
1.1              55.0    0               0              45.0
0.6              70.9    0               0              29.1  
表１０−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.5、 60 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3               5.0    0               0              95.0
4.4              12.5    0               0              87.5
2.2              34.6    0               0              65.4
1.1              55.9    0               0              44.1
0.6              72.2    0               0              27.8  
表１０−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.5、 60 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                             (%) 
5.3               71.0   0               29.0
4.4              100.0   0                0.0
2.2               75.5   0               24.5
1.1               78.5   0               21.5
0.6              100.0   0                0.0   
【００３５】
【表１１】
表１１−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.5、 60 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
11.1             0.0     0               0              100.0
8.9             0.0     0               0              100.0
4.4             0.0     0               0              100.0
2.2             0.0     0               0              100.0
1.1             0.0     0               0              100.0
0.6             5.2     0               0               94.8 
表１１−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.5、 60 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
11.1             0.0     0.0             0              100.0
8.9             0.0     2.3             0               97.7
4.4             0.0     2.2             0               97.8
2.2             0.0     2.1             0               97.9
1.1             0.0     2.1             0               97.9
0.6             4.0     2.2             0               93.8 
表１１−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.5、 60 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                             (%) 
11.1              0      0               100.0
8.9              0      0               100.0
4.4              0      0               100.0
2.2              0      0               100.0
1.1              0      0               100.0
0.6             29 9    0                71.0  
【００３６】
【表１２】
表１２−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.0、 50 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3              13.4    0               0              86.6
4.4              23.0    0               0              77.0
2.2              65.3    0               0              34.7
1.1              66.4    0               0              33.6
0.5              77.9    0               0              22.1  
表１２−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.0、 50 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3              12.5    0               0              87.5
4.4              22.5    0               0              77.5
2.2              66.0    0               0              34.0
1.1              67.0    0               0              33.0
0.5              77.7    0               0              23.3  
表１２−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.0、 50 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                             (%) 
5.3               75.8   0               24.2
4.4               76.6   0               23.4
2.2              100.0   0                0.0
1.1              100.0   0                0.0
0.5              100.0   0                0.0   
【００３７】
【表１３】
表１３−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.0、 50 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
4.4             0       0               0              100.0
2.2             0       0               0              100.0
1.1             0       0               0              100.0
0.6             0       0               0              100.0 
表１３−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.0、 50 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
4.4             0       2.2             0               97.8
2.2             0       2.1             0               97.9
1.1             0       2.2             0               97.8
0.6             0       2.4             0               97.6 
表１３−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.0、 50 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                             (%) 
4.4              0.0    0               100.0
2.2              0.0    0               100.0
1.1             24.9    0                75.1
0.6             44.2    0                55.8  
【００３８】
【表１４】
表１４−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.0、 60 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3              10.1    0               0              89.9
4.4              21.4    0               0              78.6
2.2              45.1    0               0              54.9
1.1              65.6    0               0              34.4
0.5              73.5    0               0              26.5  
表１４−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.0、 60 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                                            (%)
5.3              10.4    0               0              89.6
4.4              22.6    0               0              77.4
2.2              46.7    0               0              53.3
1.1              67.2    0               0              32.8
0.5              75.1    0               0              25.5  
表１４−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.0、 60 ℃、1時間
Biopectinase100L
(%)(固形物基準)                             (%) 
5.3               72.8   0               27.2
4.4               74.2   0               25.8
2.2               77.9   0               22.1
1.1              100.0   0                0.0
0.5              100.0   0                0.0   
【００３９】
【表１５】
表１５−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換
pH4.0、 60 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
4.4              0.0    0               0              100.0
2.2              2.1    0               0               97.9
1.1             14.6    0               0               85.4
0.6             41.3    0               0               58.7 
表１５−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換
pH4.0、 60 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                                            (%)
4.4              0.0    2.2             0               97.8
2.2              0.0    2.1             0               97.9
1.1             19.4    0.0             0               80.6
0.6             47.9    0.0             0               52.1 
表１５−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換
pH4.0、 60 ℃、1時間
Lactase F
(%)(固形物基準)                             (%) 
4.4             30.9    0                69.2
2.2             54.0    0                46.0
1.1             67.1    0                32.9
0.6             74.3    0                25.7  
【００４０】
実施例３
第三の実験のシリーズにおいては、第一の転換工程を、全てのサンプルのｐＨを１１．０に調節し、２０℃で１時間加熱することによって行った。ついでサンプルを冷却し、３つのグループを作製し、ｐＨを４．０、４．５及び５．０に調節した。Biopectinase 100L を各サンプルに最初の乳清１００ｇ当たり０．０４ｇの濃度で添加した。ついで全てのサンプルを５０℃で１時間インキュベートした。
以下に示す表１６〜表１９は、本明細書に記載した方法の適用による、ダイズ材料中のイソフラボン複合体のイソフラボンアグルコンへの転換の百分率を示している。
【００４１】
【表１６】
表１６−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第一工程の転換                                             (%)
転換前           18.6    32.8            0              48.5
転換後           52.3     2.5            0              45.2
表１６−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第一工程の転換                                             (%)
転換前           32.2    32.8            0              34.9
転換後           63.5     1.8            0              34.7  
表１６−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第一工程の転換                               (%)
転換前            33.6   28.0            38.4
転換後            60.1    0.0            39.9   
【００４２】
【表１７】
表１７−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換                                             (%)
pH5.0                                                         
0 時間後         51.0    2.5             0              46.5
0.5 時間後       39.4    2.5             0              58.1
1.0 時間後       30.6    2.4             0              66.9
1.5 時間後       23.0    2.4             0              74.6
2.0 時間後       18.2    2.2             0              79.6
3.0 時間後       11.9    2.1             0              86.0  
表１７−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換                                             (%)
pH5.0                                                         
0 時間後         62.2    1.8             0              36.0
0.5 時間後       47.9    1.8             0              50.3
1.0 時間後       37.6    1.8             0              60.6
1.5 時間後       28.6    1.6             0              69.8
2.0 時間後       22.5    1.6             0              75.9
3.0 時間後       14.6    1.6             0              83.8  
表１７−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換                              (%)
pH5.0                                           
0 時間後         59.1    0               40.8
0.5 時間後       57.1    0               42.9
1.0 時間後       55.6    0               44.4
1.5 時間後       54.9    0               45.1
2.0 時間後       53.4    0               46.6
3.0 時間後       51.4    0               58.6   
【００４３】
【表１８】
表１８−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換                                             (%)
pH4.5                                                         
0 時間後         50.4    2.5             0              47.1
0.5 時間後       35.0    2.4             0              62.6
1.0 時間後       24.8    2.3             0              72.9
1.5 時間後       16.3    2.1             0              81.6
2.0 時間後       12.1    2.1             0              85.8
3.0 時間後        6.7    1.8             0              91.5  
表１８−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換                                             (%)
pH4.5                                                         
0 時間後         61.1    1.8             0              37.1
0.5 時間後       43.6    1.6             0              54.8
1.0 時間後       31.1    1.8             0              67.2
1.5 時間後       20.2    1.4             0              78.4
2.0 時間後       15.4    1.4             0              83.1
3.0 時間後        8.5    1.3             0              90.2  
表１８−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換                              (%)
pH5.0                                           
0 時間後         60.1    0                39.9
0.5 時間後       56.5    0                43.5
1.0 時間後       54.3    0                54.7
1.5 時間後       53.3    0                46.7
2.0 時間後       50.9    0                49.1
3.0 時間後        0.0    0               100.0  
【００４４】
【表１９】
表１９−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
第二工程の転換                                             (%)
pH4.0                                                         
0 時間後         50.0    2.5             0              47.5
0.5 時間後       34.4    2.4             0              63.3
1.0 時間後       24.3    2.3             0              73.4
1.5 時間後       16.3    2.1             0              81.6
2.0 時間後       12.1    2.1             0              85.8
3.0 時間後        6.4    1.7             0              91.9  
表１９−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
第二工程の転換                                             (%)
pH4.0                                                         
0 時間後         60.1    1.9             0              38.1
0.5 時間後       42.2    1.8             0              56.1
1.0 時間後       30.0    1.6             0              68.4
1.5 時間後       20.2    1.4             0              78.4
2.0 時間後       15.4    1.6             0              83.1
3.0 時間後        7.5    1.2             0              91.3  
表１９−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
第二工程の転換                              (%)
pH4.0                                           
0 時間後         59.5    0               40.5
0.5 時間後       55.0    0               45.0
1.0 時間後       55.0    0               45.0
1.5 時間後       53.3    0               46.7
2.0 時間後       51.9    0               48.1
3.0 時間後       49.3    0               50.7   
【００４５】
実施例４
第四の実験のシリーズにおいては、第一の転換工程を、全てのサンプルのｐＨを８．０に調節し、温度７２．５℃で２４時間維持することによって行った。サンプルを２４時間にわたって回収した。
以下に示す表２０は、本明細書に記載した方法の第一工程の適用による、ダイズ材料中のイソフラボン複合体のイソフラボンアグルコンへの転換の百分率を示している。
【００４６】
【表２０】
表２０−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
(%)
pH8.0                                                         
0 時間後         27      52              0              21
2 時間後         53      30              0              17
4 時間後         66      19              0              15
6 時間後         73      13              0              14
9 時間後         81       7              0              12
24時間後         79       1              0              20    
表２０−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
(%)
pH8.0                                                         
0 時間後         28      52              2              18
2 時間後         52      29              1              18
4 時間後         64      17              1              18
6 時間後         71      11              1              17
9 時間後         77       6              0              17
24時間後         79       0              0              21    
表２０−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
(%)
pH8.0                                           
0 時間後         41      43              16
2 時間後         58      26              16
4 時間後         70      15              15
6 時間後         72      11              17
9 時間後         78       6              16
24時間後         80       0              20     
【００４７】
実施例５
第五の実験のシリーズにおいては、第二の転換工程を、商業的に入手することができる種々のβ−ガラクトシダーゼ酵素を利用することによって行った。ダイズ材料より得た最初の乳清を水を用いてスラリーにし、固形分５％にした。ｐＨを１１に調節し、温度２５℃で４５分間維持し、イソフラボン複合体をイソフラボングルコンに転換した。ついでサンプルを、酵素濃度２％及び１０％、温度５０℃、ｐＨ４．５及び７．０での転換を決定した。転換の程度を０、１及び４時間後に測定した。
以下に示す表２１〜表３０は、転換の百分率及び得られたイソフラボンの分布を示している。
【００４８】
【表２１】
表２１−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
2% Novo Lactozyme 3000L                                    (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         78      8               0              14
4 時間後         77      8               0              15
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         72      8               0              20
4 時間後         68      8               0              24    
表２１−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
2% Novo Lactozyme 3000L                                    (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         80      7               0              13
4 時間後         80      7               0              13
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         77      7               0              16
4 時間後         74      7               0              19    
表２１−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
2% Novo Lactozyme 3000L                      (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         86      0               14
4 時間後         84      0               16
pH7.0 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         72      0               28
4 時間後         61      0               39     
【００４９】
【表２２】
表２２−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Novo Lactozyme 3000L                                   (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         78      8               0              14
4 時間後         78      8               0              14
pH7.0 
0 時間後         78       7              0              15
1 時間後         53       9              0              38
4 時間後         32      10              0              58    
表２２−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Novo Lactozyme 3000L                                   (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         80      7               0              13
4 時間後         80      7               0              13
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         66      8               0              26
4 時間後         50      8               0              42    
表２２−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
2% Novo Lactozyme 3000L                      (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         84      0               16
4 時間後         82      0               18
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         25      0                75
4 時間後          0      0               100    
【００５０】
【表２３】
表２３−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
2% Maxilact L2000                                          (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         78      7               0              15
4 時間後         76      7               0              17
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         71      7               0              22
4 時間後         65      7               0              28    
表２３−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
2% Maxilact L2000                                          (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         77      7               0              16
4 時間後         76      7               0              17
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         73      6               0              21
4 時間後         69      5               0              26    
表２３−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
2% Maxilact L2000                            (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         75      6               19
4 時間後         73      6               21
pH7.0 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         56      7               37
4 時間後         52      0               48     
【００５１】
【表２４】
表２４−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Maxilact L2000                                         (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         78      7               0              15
4 時間後         77      6               0              17
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         49      7               0              44
4 時間後         25      8               0              67    
表２４−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Maxilact L2000                                       (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         78      6               0              16
4 時間後         77      6               0              17
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         59      5               0              36
4 時間後         39      6               0              55    
表２４−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
10% Maxilact L2000                         (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         75      6               19
4 時間後         77      0               23
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         17      7                76
4 時間後          0      0               100    
【００５２】
【表２５】
表２５−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
2% Pfizer Neutral Lactase                                  (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         77      7               0              16
4 時間後         77      7               0              16
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         70      7               0              23
4 時間後         55      7               0              38    
表２５−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
2% Pfizer Neutral Lactase                                  (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         77      6               0              17
4 時間後         77      6               0              17
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         72      5               0              23
4 時間後         60      6               0              34    
表２５−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
2% Pfizer Neutral Lactase                    (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         73      7               20
4 時間後         76      0               24
pH7.0 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         70      6               24
4 時間後         66      0               34     
【００５３】
【表２６】
表２６−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Pfizer Neutral Lactase                                 (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         78      6               0              16
4 時間後         78      6               0              16
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         35      8               0              57
4 時間後          2      8               0              90    
表２６−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Pfizer Neutral Lactase                               (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         78      5               0              17
4 時間後         77      6               0              17
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         46      6               0              48
4 時間後          4      6               0              90    
表２６−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
10% Pfizer Neutral Lactase                 (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6               19
1 時間後         73      7               20
4 時間後         76      0               24
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         51      0                49
4 時間後          0      0               100    
【００５４】
【表２７】
表２７−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
2% Quest Biolactase 30,000                                 (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後          0      6               0              94
4 時間後          0      4               0              96
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後          2      7               0              91
4 時間後          0      7               0              93    
表２７−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
2% Quest Biolactase 30,000                                 (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後          0      6               0              94
4 時間後          0      5               0              95
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後          3      7               0              90
4 時間後          0      6               0              94    
表２７−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
2% Quest Biolactase 30,000                   (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6                19
1 時間後          0      0               100
4 時間後          0      0               100
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         29      0                71
4 時間後          0      0               100    
【００５５】
【表２８】
表２８−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Quest Biolactase 30,000                                (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後          0      4               0              96
4 時間後          0      2               0              98
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後          0      7               0              93
4 時間後          0      7               0              93    
表２８−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Quest Biolactase 30,000                                (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後          0      4               0              96
4 時間後          0      3               0              97
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後          0      7               0              93
4 時間後          0      6               0              94    
表２８−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
10% Quest Biolactase 30,000                  (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6                19
1 時間後          0      0               100
4 時間後          0      0               100
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後          0      0               100
4 時間後          0      0               100    
【００５６】
【表２９】
表２９−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
2% Quest Neutral Lactase                                   (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         73      6               0              21
4 時間後         73      6               0              21
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後          2      7               0              91
4 時間後          0      7               0              93    
表２９−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
2% Quest Neutral Lactase                                  (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         76      5               0              19
4 時間後         76      5               0              19
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後          7      4               0              89
4 時間後          0      4               0              96    
表２９−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
2% Quest Neutral Lactase                     (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         79      0                21
4 時間後         76      0                24
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         15      0                85
4 時間後          0      0               100    
【００５７】
【表３０】
表３０−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Quest Neutral Lactase                                  (%)
pH4.5 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         73      6               0              21
4 時間後         72      6               0              22
pH7.0 
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後          0      7               0              93
4 時間後          0      7               0              93    
表３０−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Quest Neutral Lactase                                   (%)
pH4.5 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         76      5               0              19
4 時間後         75      5               0              20
pH7.0 
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後          0      4               0              96
4 時間後          0      4               0              96    
表３０−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
10% Quest Neutral Lactase                    (%)
pH4.5 
0 時間後         75      6                19
1 時間後         79      0                21
4 時間後         77      0                23
pH7.0 
0 時間後         75      6                19
1 時間後          0      0               100
4 時間後          0      0               100    
【００５８】
実施例６
第六の実験のシリーズにおいては、第二の転換工程を、前記第五の実験シリーズにおいて生成した材料について行った。第二の転換工程を、酵素濃度５％及び１０％のBiopectinase 100L 及びLactase F を５０℃、ｐＨ３．０で用いて行った。
以下に示す表３１〜表３４はこれらの酵素を利用することによって得られた転換の百分率を示している。
【００５９】
【表３１】
表３１−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
5% Biopectinase 100L          (%)
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         30      5               0              65
4 時間後         27      4               0              69
7 時間後         11      3               0              86    
表３１−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
5% Biopectinase 100L          (%)
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         30      5               0              65
4 時間後         27      4               0              69
7 時間後         10      3               0              87    
表３１−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
5% Biopectinase 100L          (%)
0 時間後         75      6               19
1 時間後         67      0               33
4 時間後         61      0               39
7 時間後         52      0               48     
【００６０】
【表３２】
表３２−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Biopectinase 100L                                      (%)
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         27      4               0              79
4 時間後          9      2               0              89
7 時間後          8      1               0              91    
表３２−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Biopectinase 100L                                      (%)
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         27      4               0              69
4 時間後          9      1               0              90
7 時間後          8      1               0              91    
表３２−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
10% Biopectinase 100L                        (%)
0 時間後         75      6               19
1 時間後         61      0               39
4 時間後         41      0               59
7 時間後         34      0               51     
【００６１】
【表３３】
表３３−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
5% Lactase F                  (%)
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         68      7               0              25
4 時間後         68      6               0              26
7 時間後         68      6               0              26    
表３３−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
5% Lactase F          (%)
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         71      6               0              23
4 時間後         71      6               0              23
7 時間後         71      6               0              23    
表３３−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
5% Lactase F                  (%)
0 時間後         75      6               19
1 時間後         80      0               20
4 時間後         80      0               20
7 時間後         79      0               21     
【００６２】
【表３４】
表３４−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
10% Lactase F   (%)
0 時間後         78      7               0              15
1 時間後         65      7               0              28
4 時間後         64      6               0              29
7 時間後         64      6               0              30    
表３４−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
10% Lactase F   (%)
0 時間後         77      7               0              16
1 時間後         68      6               0              26
4 時間後         67      6               0              27
7 時間後         67      5               0              28    
表３４−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン
10% Lactase F   (%)
0 時間後         75      6               19
1 時間後         79      0               21
4 時間後         78      0               22
7 時間後         78      0               22     
【００６３】
実施例７
実験の別のシリーズにおいては、第一の転換工程を、噴霧乾燥した最初の乳清の１０％懸濁液を含む水性サンプルのｐＨを１１に調節し、３５℃に加熱し、３０分間維持することにより行った。得られたグルコシドに富むサンプルについて、ｐＨを４．５に調節し、１５０ｇのサンプルに分割した。ついで、商業的に入手することができる３つの異なる酵素、Alpha-Gal 600L、G-Zyme 990及びBiolactase 30,000 をサンプルに添加した。１種類の酵素０．１５ｇを各サンプルに添加した。ついてサンプルを５０℃で４時間インキュベートした。イソフラボングルコシドからイソフラボンアグルコンへの転換の程度の測定を、酵素添加後０、１、２、３及び４時間後のインキュベート中のサンプルより採取して行った。
以下に示す表３５〜表３７は、特定の酵素を利用することによって得られた転換の百分率を示している。
【００６４】
【表３５】
表３５−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      83      0               0               17
Alpha-Gal 600L                                                
0 時間後         66      1               0               33
1 時間後          4      0               0               96
2 時間後          1      0               0               99
3 時間後          0      0               0              100
4 時間後          0      0               0              100   
表３５−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      83      0               0               17
Alpha-Gal 600L                                                
0 時間後         63      0               0               37
1 時間後          2      0               0               98
2 時間後          0      0               0              100
3 時間後          0      0               0              100
4 時間後          0      0               0              100   
表３５−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      81       5              13
Alpha-Gal 600L                                  
0 時間後         80       0              20
1 時間後         23       0              77
2 時間後         10      14              76
3 時間後          6       0              94
4 時間後          8      14              78     
【００６５】
【表３６】
表３６−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      83      0               0              17
G-Zyme 990                                                    
0 時間後         63      1               0              37
1 時間後         49      1               0              51
2 時間後         30      1               0              69
3 時間後         18      0               0              82
4 時間後         11      1               0              88    
表３６−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      83      0               0              17
G-Zyme 990                                                    
0 時間後         60      0               0              40
1 時間後         41      0               0              59
2 時間後         21      0               0              79
3 時間後         11      0               0              89
4 時間後          5      0               0              95    
表３６−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      81       5              13
G-Zyme 990                                      
0 時間後         79       0              21
1 時間後         82       0              18
2 時間後         79       0              21
3 時間後         69      11              19
4 時間後         67      12              21     
【００６６】
【表３７】
表３７−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      83      0               0               17
Biolactase 30,000                                             
0 時間後         56      1               0               43
1 時間後          1      0               0               99
2 時間後          0      1               0               99
3 時間後          0      0               0              100
4 時間後          0      0               0              100   
表３７−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      83      0               0               17
Biolactase 30,000                                             
0 時間後         57      0               0               43
1 時間後          0      0               0              100
2 時間後          0      0               0              100
3 時間後          0      0               0              100
4 時間後          0      0               0              100   
表３７−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
グルコシドに富む
最初の乳清である
出発材料(%)      81       5              13
Biolactase 30,000                               
0 時間後         70       0              30
1 時間後         11       0              89
2 時間後          9       0              91
3 時間後          8      14              78
4 時間後          8      15              78     
【００６７】
実施例８
第八の実験のシリーズにおいては、出発材料である最初の乳清中のイソフラボン複合体をイソフラボングルコシドに、方法のパラメーターの種々の組み合わせを利用することにより転換した。第一工程の転換を、温度１２１℃かつｐＨ６、７．１及び７．５；温度８０℃かつｐＨ値６、７．１及び７．５；温度２０℃かつｐＨ値１１．５、１２、１３及び１３．７で達成した。第一工程の転換を、６℃という比較的低い温度で達成した。以下に示す表３８〜表４３は、前記のｐＨ及び温度条件により達成された百分率を提供する。イソフラボン複合体の対応するイソフラボングルコシド形態への９０％又はそれより高い転換は、長時間の転換時間を利用することによって達成することができた。
【００６８】
【表３８】
表３８−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0              21
121 ℃（水酸化ナトリウムを用いたｐＨ調節） 
pH 6.0           81       0              0              19
pH 7.1           75       9              0              16
pH 7.5           78       7              0              15    
表３８−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2              20
121 ℃（水酸化ナトリウムを用いたｐＨ調節） 
pH 6.0           71       3              8              18
pH 7.1           70       8              6              17
pH 7.5           72       7              6              16    
表３８−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)    29      46              25     
121 ℃（水酸化ナトリウムを用いたｐＨ調節） 
pH 6.0           54      10              36
pH 7.1           61       6              34
pH 7.5           64       4              31     
【００６９】
【表３９】
表３９−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0              21
121 ℃（水酸化カルシウムを用いたｐＨ調節） 
pH 6.0           72      13              0              15
pH 7.1           77       8              0              15
pH 7.5           84       4              0              12    
表３９−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2              20
121 ℃（水酸化カルシウムを用いたｐＨ調節） 
pH 6.0           64      12              7              16
pH 7.1           71       7              6              17
pH 7.5           77       3              4              15    
表３９−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)    29      46              25     
121 ℃（水酸化カルシウムを用いたｐＨ調節） 
pH 6.0           56       9              35
pH 7.1           62       5              33
pH 7.5           72       0              28     
【００７０】
【表４０】
表４０−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0              21      
サンプルを８０℃で５時間維持（水酸化ナトリウムを用いたｐＨ調節）
pH 6.0           59      27              0              14
pH 7.1           70      19              0              12
pH 7.5           73      16              0              11      
表４０−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2              20      
サンプルを８０℃で５時間維持（水酸化ナトリウムを用いたｐＨ調節）
pH 6.0           55      26              3              16
pH 7.1           65      18              2              16
pH 7.5           67      15              2              16      
表４０−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)    29      46              25                     
サンプルを８０℃で５時間維持（水酸化ナトリウムを用いたｐＨ調節）
pH 6.0           62      18              20
pH 7.1           68      14              18
pH 7.5           70      12              18                     
【００７１】
【表４１】
表４１−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0              21      
サンプルを８０℃で５時間維持（水酸化カルシウムを用いたｐＨ調節）
pH 6.0           61      26              0              13
pH 7.1           72      17              0              12
pH 7.5           80      10              0              10      
表４１−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン   
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2              20      
サンプルを８０℃で５時間維持（水酸化カルシウムを用いたｐＨ調節）
pH 6.0           56      26              3              15
pH 7.1           65      16              2              16
pH 7.5           73       9              2              16      
表４１−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)    29      46              25                     
サンプルを８０℃で５時間維持（水酸化カルシウムを用いたｐＨ調節）
pH 6.0           61      18              21
pH 7.1           67      13              20
pH 7.5           74       8              18                     
【００７２】
【表４２】
表４２−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0              21    
サンプルを６℃で１７．５時間維持
pH 9.5           73      14              0              13    
表４２−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2              20    
サンプルを６℃で１７．５時間維持
pH 9.5           72      13              0              15    
表４２−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)    29      46              25     
サンプルを６℃で１７．５時間維持
pH 9.5           91       0               9     
【００７３】
【表４３】
表４３−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0              21    
サンプルを２０℃で１５分間維持 
pH 11.5          82       2              0              15
pH 12.0          85       0              0              15
pH 13.0          91       0              0               9
pH 13.7          84       0              0              16    
表４３−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2              20    
サンプルを２０℃で１５分間維持 
pH 11.5          82       2              0              16
pH 12.0          84       0              0              16
pH 13.0          84       0              0              16
pH 13.7          89       0              0              11    
表４３−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)     29     46              25     
サンプルを２０℃で１５分間維持 
pH 6.0            93      0               7
93      0               7
pH 7.1            93      0               7
pH 7.5           100      0               0     
【００７４】
実施例９
別の実験のシリーズにおいては、最初の乳清混合物中のイソフラボン複合体のイソフラボングルコシドへの第一工程の転換を、温度２℃及び６℃、ｐＨ１１及び１２．３で行った。試験の結果を以下の表４４〜表４５に示す。
【００７５】
【表４４】
表４４−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
２℃（氷浴）での複合体のグルコシドへの転換（％） 
0 時間          17       62              0              21
pH11.0, 1 時間  40       39              0              21
pH12.3, 1 時間  81        0              0              19    
表４４−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
２℃（氷浴）での複合体のグルコシドへの転換（％） 
0 時間          10       68              3              20
pH11.0, 1 時間  40       38              4              17
pH12.3, 1 時間  83        0              0              17    
表４４−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
２℃（氷浴）での複合体のグルコシドへの転換（％）
0 時間           29      46              25
pH11.0, 1 時間   15      73              12
pH12.3, 1 時間  100       0               0     
【００７６】
【表４５】
表４５−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
６℃（冷蔵庫）での複合体のグルコシドへの転換（％） 
0 時間          17       62              0              21
pH11.0, 1 時間  80        0              0              20
pH12.3, 1 時間  81        0              0              19    
表４５−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
６℃（冷蔵庫）での複合体のグルコシドへの転換（％） 
0 時間          10       68              3              20
pH11.0, 1 時間  83        0              0              17
pH12.3, 1 時間  77        0              0              23    
表４５−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
６℃（冷蔵庫）での複合体のグルコシドへの転換（％）
0 時間           29      46              25
pH11.0, 1 時間  100       0               0
pH12.3, 1 時間  100       0               0       
【００７７】
実施例１０
第十の実験のシリーズにおいては、イソフラボングルコシドのイソフラボンアグルコンへの第二工程の転換を、温度８℃、ｐＨ４．５及び７で、Amano Lactase 50,000及びQuest Neutral Lactase 酵素をそれぞれ使用することにより行った。グルコシドに富む乳清混合物を、最初の乳清をｐＨ１１、温度３５℃で４５分間の第一工程の転換に付することによって形成した。グルコシドに富む混合物を形成した後、第二工程の転換を行った。
以下に示す表４６〜表４７は、示したｐＨ及び温度条件により得られた転換の百分率を示している。
【００７８】
【表４６】
表４６−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン 
Quest Neutral Lactase を用いたグルコシドのアグルコンへの転換（％）
pH 7.0, 8 ℃で23時間 
0 時間後          71      9              0              20
23時間後(5% 酵素) 12     10              0              78
23時間後(10%酵素)  0     11              0              89        
表４６−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン   
Quest Neutral Lactase を用いたグルコシドのアグルコンへの転換（％）
pH 7.0, 8 ℃で23時間 
0 時間後          74      8              0              19
23時間後(5% 酵素) 26      9              0              65
23時間後(10%酵素)  0     10              0              90        
表４６−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
Quest Neutral Lactase を用いたグルコシドのアグルコンへの転換（％）
pH 7.0, 8 ℃で23時間 
0 時間後         100     0                 0
23時間後(5% 酵素) 49     0                51
23時間後(10%酵素)  0     0               100                      
【００７９】
【表４７】
表４７−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン 
Amano Lactase 50,000を用いたグルコシドのアグルコンへの転換（％）
pH 4.5, 8 ℃で23時間 
0 時間後          71      9              0              20
23時間後(5% 酵素)  0     10              0              90
23時間後(10%酵素)  0     10              0              90      
表４７−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン   
Amano Lactase 50,000を用いたグルコシドのアグルコンへの転換（％）
pH 4.5, 8 ℃で23時間 
0 時間後          74     8               0              19
23時間後(5% 酵素)  0     9               0              91
23時間後(10%酵素)  0     9               0              91      
表４７−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
Amano Lactase 50,000を用いたグルコシドのアグルコンへの転換（％）
pH 4.5, 8 ℃で23時間 
0 時間後         100     0                 0
23時間後(5% 酵素)  0     0               100
23時間後(10%酵素)  0     0               100                    
【００８０】
実施例１１
第十一の実験のシリーズにおいては、イソフラボングルコシドをアグルコンに転換する第二の転換工程を、温度３５℃かつｐＨ４．０及び４．５で行った。イソフラボン複合体を含む最初の乳清サンプルの最初のロット（lot ）を、ｐＨ１１かつ温度３５℃での第一の工程の転換に付した。ついで得られたグルコシドに富む混合物を、５％BiopectinaseをｐＨ４、温度３５℃で利用した第二工程の転換に付した。最初の乳清サンプルの第二のロットを、前記のようにグルコシドに富むサンプルに転換し、その後２％Lactase F をｐＨ４かつ温度３５℃で使用した。
以下に示す表４８〜表４９は、得られた転換の百分率を示している。
【００８１】
【表４８】
表４８−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0               21   
ロットＡ（5% Biopectinase 100L） 
工程１：pH11、35℃での複合体のグルコシドへの転換 
45分間後         82       0              0               18
60分間後         84  0         0        16   
工程２：pH4.0 、35℃でのグルコシドのアグルコンへの転換 
1 時間後          5       0              0               95
1.5 時間後        0       0              0              100
2.0 時間後        0       0              0              100   
表４８−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2               20   
ロットＡ（5% Biopectinase 100L） 
工程１：pH11、35℃での複合体のグルコシドへの転換 
45分間後         76       0              0               24
60分間後         77  0         0        23   
工程２：pH4.0 、35℃でのグルコシドのアグルコンへの転換 
1 時間後         12       0              0               88
1.5 時間後        0      12              0               88
2.0 時間後        0      12              0               81   
表４８−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)     29     46              25           
ロットＡ（5% Biopectinase 100L） 
工程１：pH11、35℃での複合体のグルコシドへの転換 
45分間後         100      0               0
60分間後         100 0          0           
工程２：pH4.0 、35℃でのグルコシドのアグルコンへの転換
1 時間後          44      0              56
1.5 時間後        37      0              63
2.0 時間後        32      0              68           
【００８２】
【表４９】
表４９−１
サン            ゲニス   6"-OMALゲニス  6"-OACゲニス    ゲニス
プル            チン チン         チン            テイン
出発材料である
最初の乳清(%)    17      62              0               21   
ロットＢ（2% Lactase F） 
工程１：pH11、35℃での複合体のグルコシドへの転換 
45分間後         83       0              0               17
60分間後         82  0         0        18   
工程２：pH4.0 、35℃でのグルコシドのアグルコンへの転換 
1 時間後          4       0              0               96
1.5 時間後        0       0              0              100
2.0 時間後        0       0              0              100   
表４９−２
サン            ダイ    6"-OMAL ダイ    6"-OACダイ      ダイゼ
プル            ジン ジン         ジン           イン  
出発材料である
最初の乳清(%)    10      68              2               20   
ロットＢ（2% Lactase F） 
工程１：pH11、35℃での複合体のグルコシドへの転換 
45分間後         77       0              0               23
60分間後         77  0         0        23   
工程２：pH4.0 、35℃でのグルコシドのアグルコンへの転換 
1 時間後          0       0              0              100
1.5 時間後        0       0              0              100
2.0 時間後        0       0              0              100   
表４９−３
サン            グリシ  6"-OMAL グリシ  グリシ
プル           チン   チン           テイン 
出発材料である
最初の乳清(%)     29     46              25           
ロットＢ（2% Lactase F） 
工程１：pH11、35℃での複合体のグルコシドへの転換 
45分間後         100      0               0
60分間後         100 0          0           
工程２：pH4.0 、35℃でのグルコシドのアグルコンへの転換
1 時間後          45      0              55
1.5 時間後        39      0              61
2.0 時間後        34      0              66           
【００８３】
６" −ＯＭａＬゲニスチン、６" −ＯＡＣゲニスチン、６" −ＯＭＡＬダイジン、６" −ＯＡＣダイジン、グリシチン、６" −ＯＭＡＬグリシチン及びグリシテインについて示した全ての百分率は計算値である。酵素濃度ついての百分率は、各サンプルにおいて、固形物１００ｇ当たりの商業的な酵素調製物のｇより計算した。
以下は、ダイズ製品中のイソフラボンを定量する方法についての記載である。イソフラボンを、サンプル０．７５ｇ（噴霧乾燥又は細かく挽いた粉末）を８０／２０  メタノール／  溶媒とを混合することにより、ダイズ製品から抽出した。混合物を、オービタルシェイカー（orbital shaker）を用いて室温下で２時間振盪した。２時間後、残った不溶性の材料を、Whatnam No.42 filter paperを用いたろ過により取り除いた。濾液５ｍｌを、水４ｍｌ及びメタノール１ｍｌを用いて希釈した。
【００８４】
抽出したイソフラボンを、Hewlett Packard C18 Hypersil reverse phase column を用いたＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）により分離した。イソフラボンをカラムに注入し、８８％メタノール、１０％水及び２％氷酢酸で開始し、９８％メタノール及び２％氷酢酸で終了する溶媒勾配を用いて溶離した。流速０．４ｍｌ／分で、全てのイソフラボンである、ゲニスチン、６" −Ｏ−アセチルゲニスチン、６" −Ｏ−マロニルダイジン、ダイジン、グリシチン及びその誘導体並びにグリシテインが明瞭に分離された。ピークの検出を２６０ｍｍにおけるＵＶ吸光度で行った。ピークの同定をＨＰＬＣ−質量分析計により行った。
純粋な標準（ゲニスチン、ゲニステイン、ダイジン及びダイゼイン）（Indofine Chemical Company,Sommerville,NJより入手）を用いて定量を行った。反応因子（積分面積／濃度）を前記の各化合物について計算し、未知のサンプルの定量に使用した。純粋な標準が入手できない共役形態については、応答因子を、親化合物の応答因子として推定したが、分子量の差異については補正しなかった。グリシチンに対する応答因子を分子量の差異について補正したゲニスチンの応答因子として推定した。
【００８５】
この方法は個々のイソフラボンの定量化を提供する。便宜のために、全ゲニステイン、全ダイゼイン及び全グリシテインを計算し、全ての複合形態がそれぞれの非複合形態に転換するするならば、この値はこれらの化合物が凝集したときの重量を表している。酸加水分解を用いて複合体形態に転換することにより、総量を直接測定することもできる
前記の記載は単に本発明の好ましい態様である。種々の変化及び改変を、添付した請求の範囲に示した精神及びその広い面から離れることなく行うことができ、これは均等論を含む特許法の主物に従い解釈される。