(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルコール濃度１０〜８０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出し、得られた抽出物を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよい水溶液として合成吸着剤と接触させて抽出物中の抗酸化剤成分を合成吸着剤に吸着させ、次いで該合成吸着剤を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよいｐＨ７．５以上の水で洗浄したのち、該合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分をアルコール濃度が２０体積％以上の低級アルコール水溶液で脱着させて回収することを特徴とする抗酸化剤の製造方法。
【請求項２】
抗酸化剤成分を吸着した合成吸着剤を、低級アルコールを５〜１２体積％の濃度で含有しているｐＨ８〜１２の水で洗浄することを特徴とする請求項１記載の抗酸化剤の製造方法。
【請求項３】
アルコール濃度が１０〜８０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出し、得られた抽出物を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよいｐＨ６．５以上の水溶液として合成吸着剤と接触させて抽出物中の抗酸化剤成分を合成吸着剤に吸着させ、次いで該合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分を、アルコール濃度が２０体積％以上の低級アルコール水溶液で脱着させて回収することを特徴とする抗酸化剤の製造方法。
【請求項４】
シソ科植物がローズマリーであることを特徴とする請求項１ないし３のいずれかに記載の抗酸化剤の製造方法。
【請求項５】
アルコール濃度３０〜６０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出することを特徴とする請求項１ないし４のいずれかに記載の抗酸化剤の製造方法。
【請求項６】
合成吸着剤がスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂であることを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記載の抗酸化剤の製造方法。
【請求項７】
合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分をアルコール濃度が３０〜６０体積％の低級アルコール水溶液で脱着することを特徴とする請求項１ないし６のいずれかに記載の抗酸化剤の製造方法。
【請求項８】
下記条件でＨＰＬＣ分析した場合、分子量が４７８の成分のピークの面積％が、２０％以上であることを特徴とするローズマリー抽出物からなる抗酸化剤。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム      ：Inertsil ODS 80A(５μｍ  ４．６mm I.D.×250mm, GL Sciences Inc.)
カラム温度  ：４０℃
移動相      ：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量        ：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器      ：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量      ：２５μＬ
分析時間    ：３５分
Gradient条件：０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０                体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）。
【請求項９】
分子量が４７８の成分が下記式で表される化合物であることを特徴とする請求項８記載の抗酸化剤。
0004061877.tif 000004
（式中、Ｒ1とＲ2のいずれか一方がメチル基、他方が糖（（Ｃ6Ｈ11Ｏ5）を表す。）
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、高活性の抗酸化剤の製造方法に関する。更に詳しくは、ローズマリー等のシソ科植物の抽出物を精製し、高活性の抗酸化成分を高濃度で含む天然抗酸化剤を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ローズマリー等のシソ科植物が、抗酸化成分を含有することは既知であり、また、その抽出物が高い抗酸化能を持つことはよく知られている。さらに、該抽出物は抗酸化能以外にも皮膚の美白効果（特開平７−１８７９８９号公報）、抗潰瘍効果（特開２０００−７２６８５）等の機能を有することが開示されており、食品、化粧品、医薬等の分野での有効利用が期待される。
【０００３】
該抽出物の抗酸化成分の精製方法に関しては、種々検討されており、例えば、活性炭、珪藻土、酸性白色土等の吸着剤を用いた精製処理（特開昭５５−１８４３５、特開昭５５−１０２５０８号公報、特開昭５７−２０３４４５号公報等）が知られている。
また、特開２０００−２５６３４５には、植物原料を低温で水抽出した残さをアルカリで再抽出した抽出液と、先の低温水抽出液を吸着剤処理した液とから、抗酸化作用のあるポリフェノール類を高純度で得る方法が開示されている。さらに特開２０００−７２６８５には、吸着剤処理することにより、ローズマリー中のロスマリン酸成分を高含有する画分を得る方法が開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらの精製方法で得られた抗酸化剤の活性は、十分満足できるものではなく、更なる改良が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、シソ科植物を低級アルコール水溶液で抽出して得た抽出物を水溶液として吸着剤処理するに際し、吸着剤と接触させる溶液のｐＨおよび組成を調整することで、高活性の抗酸化成分を選択的に高濃度で回収できることを見出し、本発明に到達した。即ち本発明の要旨は、アルコール濃度１０〜８０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出し、得られた抽出物を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよい水溶液として合成吸着剤と接触させて抽出物中の抗酸化剤成分を合成吸着剤に吸着させ、次いで該合成吸着剤を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよいｐＨ７．５以上の水で洗浄したのち、該合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分をアルコール濃度が２０体積％以上の低級アルコール水溶液で脱着させて回収することを特徴とする抗酸化剤の製造方法に存する。
【０００６】
別の要旨は、アルコール濃度１０〜８０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出し、得られた抽出物を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよいｐＨ６．５以上の水溶液として合成吸着剤と接触させて抽出物中の抗酸化剤成分を合成吸着剤に吸着させ、次いで該合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分を、アルコール濃度が２０体積％以上の低級アルコール水溶液で脱着させて回収することを特徴とする抗酸化剤の製造方法に存する。
【０００７】
更に別の要旨は、下記条件でＨＰＬＣ分析した場合、分子量が４７８の成分のピークの面積％が、２０％以上であることを特徴とするローズマリー抽出物からなる抗酸化剤に存する。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム      ：Inertsil ODS 80A(５μｍ  ４．６mm I.D.×250mm, GL Sciences Inc.)
カラム温度  ：４０℃
移動相      ：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量        ：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器      ：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量      ：２５μＬ
分析時間    ：３５分
Gradient条件：０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０                体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の抗酸化剤の製造方法を、詳細に説明する。
次に、この抗酸化剤の製造方法を説明する。この製造方法は、シソ科植物抽出物に含まれる成分のうち、高活性な抗酸化成分（メトキシルテオリン配糖体と推定）を選択的に高濃度で回収する方法である。
［製造方法１］
本方法は、低級アルコール濃度１５体積％以下のシソ科植物抽出物水溶液を、合成吸着剤と接触させて、抗酸化成分を合成吸着剤に吸着させ（第１工程）、
次いで、該合成吸着剤を、ｐＨ７．５以上の水、またはｐＨ７．５以上かつ低級アルコール濃度１５体積％以下の低級アルコール水溶液で洗浄し（第２工程）、
その後、抗酸化成分を、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液により、合成吸着剤より脱着させる（第３工程）。
（１）第１工程
▲１▼シソ科植物抽出液の調製
本発明に用いられるシソ科植物原料は、特に限定されるものではなく、例えばシソ、アオジソ、チリメンジソ、ローズマリー（マンネンロウ）等が挙げられるが、なかでもローズマリーが好ましい。
【０００９】
抽出物の抽出に用いられる植物原料の形態としては、全草、各植物部位または該部位の２種以上を混合したものを用いることができるが、好ましくは葉もしくは全草が用いられる。これら植物原料は、生でも乾燥物でもよいが、好ましくは乾燥物である。粉砕程度は特に制限されないが、例えば粗切り状態が好ましい。上記植物原料から抗酸化成分を抽出するに際し、抽出溶媒としては、水、低級アルコール、または低級アルコール水溶液が用いられるが、好ましくは低級アルコール水溶液である。尚、本明細書において、低級アルコールとは、炭素数１〜４のアルコールを意味する。低級アルコールとしては、直鎖状、分岐鎖状のいずれのも用いることができる。具体的には、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノール等が挙げられ、これらの中でも、メタノール、エタノールが好ましい。アルコール水溶液のアルコール濃度は、通常１０〜８０重量％、好ましくは３０〜６０重量％、更に好ましくは４０〜６０重量％である。抽出溶媒の量は、植物原料の重量に対して、通常１〜１００倍量、好ましくは２〜１０倍量使用される。抽出溶液中の固形分濃度が、０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量％の範囲となるように抽出溶媒の量を調節すると、抽出効率が高く好ましい。
【００１０】
抽出時の温度は、植物原料の種類等にもよるが、通常室温〜９０℃、好ましくは５０〜８０℃の範囲である。更に好ましくは、常圧にてアルコール水溶液が還流する程度の温度である。このとき、抽出器は解放系でも閉鎖系でもよい。抽出時間は、原料及び抽出温度等にもよるが、通常０．５〜１０時間、好ましくは１〜４時間である。
【００１１】
抽出処理の後、抽出溶液と植物原料残渣を分ける手段は、濾過等の公知の方法が用いられる。抽出処理後の植物原料残渣に対し、更に抽出操作を１〜３回、好ましくは２回程度行ない、最初の抽出溶液と合わせて用いてもよい。
▲２▼シソ科植物抽出液の前処理
上記方法で得られた抽出液中の低級アルコール濃度が１５体積％を越える場合には、吸着剤処理の前に、抽出液中の低級アルコールの濃度を１５体積％以下に下げる必要がある。低級アルコール濃度が１５体積％を越えると、抗酸化剤成分が、吸着剤に十分吸着しないので好ましくない。低級アルコール濃度は低い方がよく、好ましくは１０体積％以下であり、更に好ましくは５体積％以下であり、０であることが最も好ましい。
【００１２】
アルコール濃度を下げる方法としては、蒸留等によるアルコール留去や水添加、あるいはそれらの組み合わせ等が考えられる。あるいは、アルコールと共に水も完全に留去し、固体状の抽出物を得た後、水またはアルコール濃度１５体積％以下のアルコール水溶液に溶解しても良い。
このアルコール濃度を下げる操作において、アルコール濃度の低下に伴い、沈殿物が析出することがある。以後の合成吸着剤処理工程への負荷を小さくするために、該沈殿物は濾過等の手段により分離した方が望ましい。なお、この沈殿物には油溶性の抗酸化成分が多く含有されているので、油脂の酸化防止等へ利用できる。
▲３▼抽出物水溶液を合成吸着剤と接触
低級アルコール濃度１５体積％以下の抽出物水溶液を合成吸着剤に接触させ、抽出物中の抗酸化成分を合成吸着剤に吸着させる。
【００１３】
本発明で用いられる合成吸着剤としては、特に限定されないが、例えば、比表面積が３００〜１５００ｍ2／ｇ程度、細孔容積が０．３〜２．５ｍＬ／ｇ程度、最頻度半径が２０〜７００Å程度が好ましい。このような合成樹脂の具体例としては、ダイヤイオンTMＨＰ２０ＳＳ、ＨＰ２０、ＨＰ２１等のＨＰ樹脂、セパビーズTMＳＰ８２５、ＳＰ８５０、ＳＰ２０７等のＳＰ樹脂（以上、三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６（以上、ロームアンドハース社製）等のスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂；ダイアイオンTMＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ−７、ＸＡＤ−８（以上、ロームアンドハース社製）等のアクリル系樹脂等が挙げられる。
【００１４】
合成吸着剤は、通常カラムに充填される。カラムの形状は特に制限無いが、通常円筒型のカラムが用いられる。合成吸着剤は、カラムに充填後、通常、エタノール、水で順次洗浄してから、抽出物の分画に使用される。合成吸着剤に抽出物溶液を通液して、抽出物中の抗酸化成分を吸着剤に吸着させる。吸着剤処理に供する１回あたりの抽出物溶液量は任意だが、用いる合成吸着剤量に対して抽出物溶液量が少ないと１回あたりの処理量が少なくなり、非効率的であるし、多すぎると抽出物中の抗酸化成分の合成吸着剤への吸着が飽和し、吸着できない分が生じ、目的抗酸化成分のロスが大きくなる。よって、抽出物溶液中の目的抗酸化成分の樹脂への吸着が完全に飽和しない程度の量の抽出物溶液を処理するのが効率的で好ましい。例えば、合成吸着剤１００ｍＬに対し、乾燥重量で１〜１０重量％の抽出物を含む水溶液５０〜５０００ｍＬを通液させる。
（２）第２工程
合成吸着剤に、ｐＨ７．５以上の水またはｐＨ７．５以上かつ低級アルコール濃度１５体積％以下の低級アルコール水溶液（以下、「アルカリ洗浄液」という）を、洗浄液として通液して、合成吸着剤を洗浄する。
【００１５】
このアルカリ洗浄液で合成吸着剤を洗浄することにより、合成吸着剤に吸着されていた成分のうち、不活性成分または／及び低活性成分は脱着し除去される。これに対し、本発明で回収を目的とする高活性成分は脱着しない。洗浄液のｐＨは８以上が好ましく、９以上が更に好ましく、通常１２以下である。１２を越えると、抗酸化成分が分解する可能性がある。
【００１６】
水または低級アルコール水溶液のｐＨ調整剤としては、特に制限はないが、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リン酸水素２ナトリウム、リン酸水素２カリウム、珪酸ナトリウム、炭酸ナトリウム等があげられるが、中でもリン酸水素２ナトリウムが好ましい。また、一般的に知られる緩衝液すなわちリン酸緩衝液、トリス緩衝液、Ｍａｃｌｌｖａｉｎ氏緩衝液等を利用してｐＨを調整してもよい。
【００１７】
アルカリ洗浄液中のアルコール濃度は、１５体積％を越えると、高活性成分も脱着するので好ましくなく、好ましくは１２体積％以下であり、通常５体積％以上である。
アルカリ洗浄液は、合成吸着剤１００ｍＬに対し、通常５０〜５００ｍＬ、好ましくは１００〜３００ｍＬ使用する。
アルカリ洗浄液で洗浄後、水、または低級アルコール濃度２０体積％未満の低級アルコール水溶液（以下、「洗浄用アルコール水溶液」という）で、合成吸着剤を洗浄し、ｐＨ調節剤を除去することが好ましい。この洗浄用アルコール水溶液中の低級アルコール濃度が２０％以上になると、目的とする高活性成分が脱着し、収率が低下し好ましくない。低級アルコール濃度は、好ましくは１７〜１９体積％、更に好ましくは１５〜１８体積％である。洗浄用アルコール水溶液は、通常、合成吸着剤１００ｍＬに対し５０〜３００ｍＬ、好ましくは１００〜２００ｍＬ使用する。
（３）第３工程
洗浄後の合成吸着剤に、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液を通液し、高活性成分を脱着させる。脱着液中の低級アルコール濃度は、２５体積％以上であることが好ましく、３０体積％以上であることが更に好ましい。脱着液の低級アルコール濃度は、通常６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下である。６０体積％を越えると不活性成分または／及び低活性成分が脱着してきて好ましくない。脱着液は、通常、合成樹脂１００ｍＬに対し、１００〜５００ｍＬ通液する。
【００１８】
尚、上記第１工程〜第３工程における、カラムの通液速度としては、通常、ＳＶ（１時間当たりの通液量／樹脂の見掛け体積）で０．１〜２０、好ましくは０．５〜１０、更に好ましくは１〜５の範囲である。また、その際の温度としては、通常５〜４０℃で実施される。
［製造方法２］
本方法は、ｐＨ６．５以上かつ低級アルコール濃度１５体積％以下のシソ科植物抽出物水溶液を、合成吸着剤と接触させて、抗酸化成分を合成吸着剤に吸着させ（第１工程）、
次いで、抗酸化成分を、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液で、合成吸着剤より脱着させる（第２工程）。
【００１９】
本方法は、製造方法１における第１工程と第２工程を、１つの工程にまとめて簡略化したものである。即ち、製造方法１では、第１工程で、抽出物中に不活性成分または／及び低活性成分、高活性成分を一旦合成吸着剤に吸着させたのち、第２工程で、不活性成分または／及び低活性成分をアルカリ洗浄液で除去している。しかし、本方法では、第１工程では、不活性成分または／及び低活性成分を、最初から合成吸着剤に吸着させず、高活性成分のみ吸着させている。本方法は、製造方法１の方法と比較し、処理方法が簡略化されているので、製造上好ましい。
（１）第１工程
▲１▼前処理
製造方法１と同様の方法で、シソ科植物抽出液を製造した後、抽出液中の低級アルコール濃度を１５体積％以下に調整すると共に、ｐＨを６．５以上に調整する。ｐＨの調整は、製造方法１の第２工程で使用したｐＨ調節方法が使用できる。ｐＨは７以上が好ましく、通常１１以下である。１１を越えると、抗酸化成分が分解する可能性がある。
【００２０】
製造方法２では抽出液のｐＨを６．５以上に調整するのに対し、製造方法１のアルカリ洗浄液のｐＨを７．５以上に調整している。この理由は、本発明で除去したい不活性成分または／及び低活性成分が、本来アルコール濃度１５体積％以下では、ｐＨ６．５以上で吸着剤から脱着するものであり、また製造方法１では、吸着剤に接触させる抽出物溶液は通常ｐＨ４〜５の酸性なので、それを中和する分が必要になるからと考えられる。
低級アルコール濃度を１５体積％以下にする方法、好ましい低級アルコール濃度は製造方法１の第１工程の前処理と同様である。
▲２▼抽出物水溶液を合成吸着剤と接触
製造方法１と同様に、合成吸着剤をカラムに充填し、前述の前処理をした抽出物水溶液を、合成吸着剤に通液する。例えば、合成吸着剤１００ｍＬに対し、乾燥重量で１〜１０重量％の抽出物を含む抽出液を５０〜５０００ｍＬを通液させる。
【００２１】
この後、水、または低級アルコール濃度２０％未満の低級アルコール水溶液（洗浄用アルコール水溶液）で、合成吸着剤を洗浄し、ｐＨ調節剤を除去することが好ましい。この洗浄用アルコール水溶液中の低級アルコール濃度が２０％以上になると、目的とする高活性成分が脱着し、収率が低下し好ましくない。低級アルコール濃度は、好ましくは１７〜１９体積％、更に好ましくは１５〜１８体積％である。洗浄用アルコール水溶液は、合成吸着剤１００ｍＬに対し、通常５０〜３００ｍＬ、好ましくは１００〜２００ｍＬである。
（３）第２工程
製造方法１の第３工程と同様に、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液を通液し、高活性成分を脱着させる。脱着液中の低級アルコール濃度は、３０体積％以上であることが好ましい。脱着液の低級アルコール濃度は、通常６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下である。６０体積％を越えると不活性成分が脱着してきて好ましくない。脱着液は、通常、合成樹脂１００ｍＬに対し、１００〜５００ｍＬ通液する。
【００２２】
尚、製造方法２の第１工程及び第２工程のカラムの通液速度、カラム処理時の温度は、製造方法１と同様である。又、製造方法１及び製造方法２において、低級アルコールとして、エタノールを使用することが特に好ましい。
製造方法１及び製造方法２で得られる回収液は、溶媒を一部濃縮して使用してもよいし、溶媒の全部を除去して固体として使用してもよい。
また、上述では、合成吸着剤をカラムに充填して精製する方法を例にとり説明したが、本発明の製造方法１及び製造方法２はこれに限定されるものではなく、合成吸着剤をカラムに充填せずに、バッチ式で精製してもよい。例えば、製造方法１では、シソ科植物抽出物水溶液と合成吸着剤を混合したのち溶液をろ過し、次いで合成吸着剤とアルカリ洗浄液を混合したのち溶液をろ過し、次いで合成吸着剤と脱着液を混合し、ろ過して濾液を回収してもよい。同様に、製造方法２では、ｐＨ調整した抽出液を合成吸着剤とを混合し、溶液をろ過し、次いで合成吸着剤と脱着液を混合し、ろ過して濾液を回収してもよい。
【００２３】
本発明の製造方法により、下記条件でＨＰＬＣ分析した場合、分子量が４７８の成分のピークの面積％が、２０％以上の抗酸化剤を製造することができる。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム      ：Inertsil ODS 80A(５μｍ  ４．６mm I.D.×250mm, GL Sciences Inc.)
カラム温度  ：４０℃
移動相      ：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量        ：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器      ：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量      ：２５μＬ
分析時間    ：３５分
Gradient条件：０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０                体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）
該分子量４７８成分、Ｃ22Ｈ22Ｏ12の化学式で表わされる化合物である。その構造は、フラボンの一種であるルテオリンと類似した構造の物質で、フラボン骨格のＢ環の４’位と５’位およびＡ環の５位にＯＨ基を有し、Ａ環の６位と７位のいずれか一方に酸素原子を介した単糖を、他方にメトキシ基を有する構造（本明細書では、「メトキシルテオリン配糖体」と称する）と推定される。その構造式を下記に示す。ただし、糖の構造は、現時点で不明である。このものは上記の分析条件下では、ロスマリン酸のリテンションタイムを基準にして−２．６±１分のリテンションタイムを有する。
【００２４】
【化１】
0004061877.tif 000002
（上記式中、Ｒ1とＲ2のいずれか一方がメチル基、他方が糖（Ｃ6Ｈ11Ｏ5）を表す。）
抗酸化剤中の該分子量４７８成分の含有量は高い方が好ましく、好ましくは、上記分析条件において、該ピーク面積％が３０％以上であることが好ましく、４０％以上であることが好ましい。
【００２５】
本発明の製造方法で得られる抗酸化剤は、メトキシルテオリン配糖体の含有量が高く、かつ、従来の精製方法により得られた抗酸化剤より高活性であること、およびメトキシルテオリン配糖体は抗酸化成分として知られているルテオリン配糖体の誘導体であることから、このメトキシルテオリン配糖体こそが、非常に高活性な抗酸化成分であると考えられる。
【００２６】
本製造方法で得られる抗酸化剤は、高い抗酸化活性を有し、そのまま飲食品や化粧品などの抗酸化剤として使用できる。また、該抗酸化剤は、特に活性酸素消去能に優れるため、体内に取り込まれる飲食品、医薬品、医薬部外品に使用した場合、体内の活性酸素除去効果が期待される。また、皮膚や毛髪用の化粧品に使用された場合、皮膚や毛髪の活性酸素除去効果が期待される。
【００２７】
【実施例】
以下に実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、下記の実施例及び比較例において、抗酸化能評価及びＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析は次の通り行った。
＜抗酸化能評価＞
抗酸化能評価は、ＳＯＤ様活性をＳＯＤテストワコー（和光純約工業株式会社製）により測定し、活性酸素消去能を相対比較することにより行った。具体的な測定方法は以下の通りである。
【００２８】
各抗酸化成分を濃度０．０２５重量％となるように水に溶解し、これをＳＯＤ様活性測定用原液とした。各ＳＯＤ様活性測定用原液０．１ｍＬと酵素液（酵素原液を酵素希釈液と混合したもの。キサンチンオキシダーゼ０．０４９単位／ｍＬ）１ｍＬと発色試薬１ｍＬを混合後、３７Ｃで２０分間インキュベートし反応させた。２０分後、反応停止液２ｍＬを添加、混合して反応を停止させた。そして、反応停止後の液の５６０ｎｍにおける吸光度（ＥS）を測定した。さらに、ＳＯＤ様活性測定用原液の代わりに水０．１を用いて同様に反応、反応停止させた液の吸光度（ＥBL）、および、酵素液の代わりにブランク液１ｍＬを用いて同様に反応、反応停止させた液の吸光度（ＥS-BL）、および、ＳＯＤ様活性測定用原液の代わり水０．１ｍＬを用い、かつ酵素液の代わりにブランク液１ｍＬを用いて同様に反応、反応停止させた液の吸光度（ＥBL-BL）を測定し、次式より阻害率％を求めた。阻害率％が高いものほどＳＯＤ様活性が高いと言える。
【００２９】
【数１】
阻害率％＝｛（ＥBL−ＥBL-BL）−（ＥS−ＥS-BL）｝／（ＥBL−ＥBL-BL）×100
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Inertsil  ODS  80A（５μｍ  ４．６mm I．D．×250mm，GL  Sciences  Inc.）
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量：２５μＬ
分析時間：３５分
Gradient条件：
０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）
実施例１
ローズマリー乾燥葉（粗切り）１００ｇに４５体積％エタノール水溶液を１０００ｍＬ加えて３時間７０℃にて還流し、その後ろ紙でろ過して抽出液を得た。ろ紙上のローズマリー抽出残さを、さらに１０００ｍＬの４５体積％エタノール水溶液にて上記と同様に、抽出操作を更に２回繰り返して抽出液を得た。これらの抽出液を合わせ約２７００ｍＬのローズマリー抽出液を得た。これを、エバポレータを用いて減圧下（約５０ｍｍＨｇ）、約５５℃にて溶媒留去し、水添加することにより、沈殿物を含むエタノール含有量１重量％以下の濃縮抽出液５００ｍＬを得た。これを、平均孔径１．６μｍのガラス繊維フィルターでろ過して  ろ液と沈殿物とに分けた。
【００３０】
得られたろ液より、エバポレータを用いてさらに溶媒を完全留去し、２２ｇの抗酸化成分を含む固形分を得た。この固形分を抗酸化剤原体として、以下の合成吸着剤による分画に供した。
この５重量％の抗酸化剤原体水溶液６０ｍＬをガラス製カラム（径１２．５ｍｍφ）にスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂（三菱化学社製：ダイヤイオンTMＨＰ２０ＳＳ）を３０ｍＬ込んだ装置に、ＳＶ＝約３の通液速度で通液し、続いてｐＨ調整剤として０．５重量％のリン酸水素２ナトリウムを添加した１０体積％エタノール水溶液（ｐＨ９．５）からなる洗浄液を６０ｍＬ通液し、その後さらに６０ｍＬの１８％エタノール水溶液（ｐＨ調整剤無添加）を通液し、合成吸着剤を洗浄した。その後、脱着液として３０体積％エタノール水溶液を９０ｍＬ通液して、カラム出口で抗酸化成分を含む脱着液９０ｍＬを回収した。この抗酸化成分を含む脱着液よりエバポレータにて溶媒を完全に留去し、０．２ｇの固体の抗酸化剤Ａを得た。該抗酸化剤の０．０２５重量％水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にＨＰＬＣ分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
【００３１】
ＳＯＤ様活性測定とＨＰＬＣ分析結果を表−１に示した。
実施例２
実施例１で得た抗酸化剤原体を、ｐＨ調整剤として１重量％のリン酸水素２ナトリウムを含む１０体積％エタノール水溶液に５重量％になるように溶解した。該溶解液のｐＨは７．０であった。該溶解液６０ｍＬをガラス製カラム（径１２．５ｍｍφ）にスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂（三菱化学社製：ダイヤイオンTMＨＰ２０）を３０ｍＬ込んだ装置に、ＳＶ＝約３の通液速度で通液した。続いて６０ｍＬの１８％エタノール水溶液を通液し、合成吸着剤を洗浄した。その後、脱着液として３０体積％エタノール水溶液を９０ｍＬ通液して、カラム出口で抗酸化成分を含む脱着液９０ｍＬを回収した。この抗酸化成分を含む脱着液よりエバポレータにて溶媒を完全に留去し、約０．２ｇの固体状の抗酸化剤Ｂを得た。該抗酸化剤の０．０２５重量％水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にＨＰＬＣ分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
【００３２】
ＳＯＤ様活性測定とＨＰＬＣ分析結果を表−１に示した。
比較例１
実施例１で得た抗酸化剤原体の０．０２５重量％の水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にHPLC分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
比較例２
実施例１で得た抗酸化剤原体の５重量％水溶液６０ｍＬをガラス製カラム（径１２．５ｍｍφ）にスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂（三菱化学社製：ダイヤイオンTMＨＰ２０ＳＳ）を３０ｍＬ込んだ装置に、ＳＶ＝約３の通液速度で通液し、続いてｐＨ調整剤として０．５重量％のリン酸を添加した１０体積％エタノール水溶液（ｐＨ２．３）からなる洗浄液を６０ｍＬ通液し、その後さらに６０ｍＬの１８％エタノール水溶液を通液し、合成吸着剤を洗浄した。その後、脱着液として３０体積％エタノール水溶液を９０ｍＬ通液して、カラム出口で抗酸化成分を含む脱着液９０ｍＬを回収した。この抗酸化成分を含む脱着液よりエバポレータにて溶媒を完全に留去し、約０．４ｇの固体状の抗酸化剤Ｃを得た。該抗酸化剤の０．０２５重量％水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にＨＰＬＣ分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
【００３３】
ＳＯＤ様活性測定とＨＰＬＣ分析結果を表−１に示した。
【００３４】
【表１】
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【００３５】
【本発明の効果】
本発明の製造方法によれば、高活性抗酸化成分を高濃度に含有する抗酸化剤を製造することができる。この抗酸化剤は、食品、化粧品等の分野に特に有用であり、特に肌の美白効果が期待される。