(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピオニル］−７−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピン又はその塩を、有効成分として含有してなる制癌剤耐性克服剤。
【請求項２】
制癌剤が、白金錯体、植物由来抗腫瘍性物質又は抗腫瘍性抗生物質である請求項１に記載の制癌剤耐性克服剤。
【請求項３】
制癌剤が、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、アドリアマイシン又はタキソールである請求項１に記載の制癌剤耐性克服剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、１，４−ベンゾチアゼピン誘導体を含有してなる、ヒトを含む哺乳動物に対する制癌剤耐性克服剤及び制癌剤効果増強剤に関する。また本発明は、癌の治療、特に制癌剤に対して耐性化した癌の治療に有用な医薬組成物、及び癌治療用医薬キットに関する。
【０００２】
【従来の技術】
制癌剤を癌患者に投与すると、投与するにつれて効果が減少することがよく知られている。生体内で制癌剤に対して耐性の癌細胞が出現するため、癌の化学療法を困難なものにしている。このような薬剤耐性は自然耐性と獲得耐性に分けられる。制癌剤により癌を治療すると、感受性の高い細胞は消失し、感受性の低い細胞が残存する。一つの癌であっても制癌剤高感受性及び低感受性の細胞が混在している。制癌剤高感受性の癌細胞が制癌剤と接触することにより、獲得耐性を持つ。臨床的にみても制癌剤感受性の比較的高い小細胞癌、卵巣癌、乳癌などと、制癌剤感受性の低い非小細胞癌、胃癌、大腸癌などに分けることができる。
【０００３】
制癌剤耐性細胞では、
▲１▼  細胞膜変化による薬剤の取り込みの低下、
▲２▼  Ｐ糖蛋白質や多剤耐性関連蛋白（ＭＲＰ）などによる薬剤排出の亢進、
▲３▼  Ｐ−４５０などの薬物活性化酵素の活性低下、
▲４▼  グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＳＨ−Ｐｘ）、ＤＴ−ジアホラーゼ、ＵＤＰ−グルクロノシルトランスフェラーゼ、メタロチオネイン等の解毒酵素の活性上昇、
▲５▼  多くの制癌剤の解毒に関与する還元型グルタチオン（ＧＳＨ）濃度の上昇、
▲６▼  ＤＮＡ修復活性（トポイソメラーゼ）の上昇などが認められている。
【０００４】
制癌剤耐性細胞のうち、ある制癌剤に対して耐性を獲得した細胞の中には、他の薬剤に対しても耐性を示すことがある。これを多剤耐性（multidrug resistance；ＭＤＲ）という。多剤耐性を獲得した細胞では、分子量１７０ｋＤのＰ糖蛋白質を高発現していることが知られている。Ｐ糖蛋白質は多くの正常細胞にも存在し、排泄機構に関与している。制癌剤に対しては、Ｐ糖蛋白質はＡＴＰのエネルギーを利用して種々の制癌剤を細胞外に排出するポンプ機能を持ち、制癌剤の細胞内濃度を低下させて細胞を制癌剤に対し耐性化させる。Ｐ糖蛋白質の排出機能は制癌剤に対して選択性が低く、数種類の制癌剤が細胞外に排出される。そのため、Ｐ糖蛋白質を過剰発現した細胞は、多剤耐性を獲得すると考えられている。癌種によっては、Ｐ糖蛋白質の発現の亢進している大腸癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌や再発とともにＰ糖蛋白質の発現が亢進してくる急性白血病、悪性リンパ腫、神経芽細胞腫等があり、またＰ糖蛋白質の発現の少ない乳癌、頭頸部癌、肺癌、膀胱癌、前立腺癌、黒色腫等が知られている。
【０００５】
１９８１年にカルシウム拮抗剤であるベラパミルが多剤耐性を克服することが見出された〔Cancer Res.,41, 1967-1972, (1981)〕。その後、いくつかのカルシウム拮抗薬やカルモジュリン拮抗薬などにも耐性克服作用があることが明らかになった。また、免疫抑制剤であるシクロスポリンＡにも耐性克服作用があることが明らかになった。ベラパミルやシクロスポリンＡはＰ糖蛋白質の制癌剤結合部位に競合的に阻害して耐性を克服すると推察されている。また、シクロスポリンＡはチトクロームＰ−４５０に代表される薬物代謝酵素に影響して効果を上げている可能性も示唆されている。シクロスポリンＡとエトポシドを併用する効果が臨床的に確認されており、またシクロスポリンＡと標準の化学療法剤との併用で急性骨髄性白血病と骨髄腫で優れた結果が報告されている。しかしこれらのカルシウム拮抗剤や免疫抑制剤はその薬剤が本来的に有するカルシウム拮抗作用や免疫抑制作用が副作用として重篤であるため、臨床に使用するには問題があった。
【０００６】
また、カルシウム拮抗作用の弱い多剤耐性克服剤として、ＭＳ−２０９
【０００７】
【化７】
0004041642.tif 000002
【０００８】
が知られている〔Cancer Chemother. Pharmacol., 35, 271-277 (1995)、Cancer Chemother. Pharmacol., 36, 361-367 (1995)〕。ＭＳ−２０９はＰ糖蛋白質と直接結合して、Ｐ糖蛋白質への制癌剤の結合を阻害することにより耐性を克服していると考えられている。
【０００９】
また、ホルモン剤のタモキシフェンは、大量に使用するとプロテインキナーゼＣを抑えることによるＰ糖蛋白質の機能の抑制に働くとされ、またタモキシフェンとトレミフェンも耐性調整剤として検討されている。これらは癌細胞のエストロゲン受容体の有無には関係なく抗癌剤の種類に依存しており、ビンブラスチン、アドリアマイシン、エトポシドには有効であるが、シスプラチン、メルファランには無効であると報告されている。
【００１０】
一方、Ｐ糖蛋白質の過剰発現がみられず、ビンカアルカロイドをはじめとする制癌剤に多剤耐性を示す細胞株が見出された。１９９２年、コール（Cole）らはＰ糖蛋白質が発現していない肺小細胞癌細胞株Ｈ６９のドキソルビシン耐性株Ｈ６９ＡＲにおいて、過剰発現しているｍＲＮＡに対応するｃＤＮＡを分離した。そして、それにコードされる１，５３１個のアミノ酸からなる蛋白質を見出し、ＭＲＰ（Multidrug Resistance-associated Protein）と提唱した〔Science,258, 1650-1654, (1992)〕。ＭＲＰは１９０ｋＤの膜蛋白質で、ＡＢＣ（ATP binding cassette）スーパーファミリーに属し、Ｐ糖蛋白質と同様に制癌剤を排出するポンプとして機能している。ＭＲＰは非小細胞肺癌、甲状腺癌、グリオーマ、神経芽細胞腫等の細胞株において高発現している。これらの癌では化学療法に対する反応が悪いことが指摘されている。また、慢性リンパ性白血病でＭＲＰの高発現が高頻度で見られるとの報告もある。ＭＲＰはＰ糖蛋白質と同様に構造の類似性のない多くの制癌剤を排出するが、細胞内のグルタチオン濃度を低下させると耐性度が低下する。また、ロイコトリエンなど、グルタチオン抱合体がＭＲＰによって輸送されることから、制癌剤も代謝、修飾を受けた後、親水性化合物として排出されている可能性がある。ＭＲＰはグルタチオン抱合体のほかにも、グルクロン酸、硫酸抱合体も基質として認識する。また、多価負電荷を持つ基質や、同様な修飾を受けた重金属も輸送すると考えられている。ベラパミルやシクロスポリンＡなど、Ｐ糖蛋白質の関与する多剤耐性を克服した薬剤が、ＭＲＰの関与する多剤耐性を部分的に克服した報告があるが、現在ＭＲＰの関与する多剤耐性に特異的な薬剤はない。
【００１１】
最近、ＭＲＰ以外のグルタチオン抱合体排出ポンプが見出されている。ヒト鼻咽腔細胞癌ＫＢ細胞から単離されたシスプラチン耐性細胞ＫＣＰ−４細胞は、シスプラチンに対して約６３倍耐性を示した。ＫＣＰ−４細胞内のシスプラチン濃度は低下しており、ＡＴＰ依存性のシスプラチン排出ポンプを発現していた〔Jpn. J. Cancer Res.,85, 423-433, (1994)〕。この細胞内のグルタチオン濃度は親株細胞に比べて４．７倍高く、グルタチオン合成酵素阻害剤を用いてグルタチオン濃度を親株細胞の濃度以下まで低下させると、シスプラチンに対する耐性度は約半分まで低下した。ＫＣＰ−４細胞では、ＭＲＰは蛋白、ｍＲＮＡともに発現していないことなどから、ＭＲＰとは異なるグルタチオン抱合体排出ポンプが存在すると考えられた〔BBRC, 226, 158-165, (1996)〕。ＫＣＰ−４細胞から単離されたｃＭＯＡＴ遺伝子がＭＲＰと相同性を有し、ＫＣＰ−４、ＰＣ５、Ｔ２４の３種類のシスプラチン耐性細胞で親株細胞に比較してそれぞれｃＭＯＡＴのｍＲＮＡ発現が４〜６倍高いことから、ｃＭＯＡＴがシスプラチン耐性に関与する蛋白質であると考えられている。
【００１２】
制癌剤の解毒による耐性機構も知られている。グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（glutathione S-transferase；ＧＳＴ）は薬物の解毒酵素の一つで、肝臓に多く存在するがその他の臓器にも広く分布し、主として細胞質に二量体として存在する。多数の分子種が知られており、グルタチオン（ＧＳＨ）抱合活性（ＧＳＴ活性）のほかに、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＳＨ−Ｐｘ）活性や、ロイコトリエン、プロスタグランジンの代謝に関与する分子種も知られている。ナイトロジェンマスタード等のアルキル化剤は、ＧＳＨ抱合（ＧＳＨ conjugation）を受け、解毒されるものが多い。また、シスプラチンはＧＳＨによりキレートされ、ＶＰ−１６はＧＳＨ抱合され、ともに解毒される〔Biochem. Soc. Transact.,15, 728-730, (1987)〕。
【００１３】
また、メタロチオネインによる薬剤耐性も知られている。メタロチオネインは馬の腎臓中からカドミウム結合蛋白質として見出された分子量６０００の比較的小さな蛋白質で、構成アミノ酸の約３分の１をシステインが占め、しかもＳ−Ｓ結合を一つも持たないという特徴的な構造を有している。１９８１年にバッカ（Bakka）らは高濃度のメタロチオネインを含有するカドミウム耐性細胞がシスプラチンに対しても耐性を示すことを見出し、メタロチオネインがシスプラチンの細胞毒性に対して耐性因子として働く可能性を示した〔Toxicol. Appl. Pharmacol.,61, 215-226, (1981)〕。また、メタロチオネイン遺伝子を欠損させたマウスが作製され、このマウスから単離された細胞はシスプラチンに対する感受性が高いことも明らかにされている〔Cancer Res.,55, 2021-2023, (1995)〕。担癌マウスを用いた検討で、亜鉛を投与して癌組織中のメタロチオネイン濃度を約２倍に上昇させると、シスプラチンのみならずアドリアマイシン、ブレオマイシン、シクロフォスファミド及びメルファランの抗癌効果も有意に低下することが確認された。メタロチオネイン濃度の上昇によって複数の制癌剤に対する耐性が獲得される可能性も考えられている。メタロチオネインの合成を阻害するアミノ酸誘導体プロパルギルグリシンが検討されているが、毒性が強く臨床に用いるには問題がある。
【００１４】
また、トポイソメラーゼはＤＮＡのトポロジー変化に働く酵素で、Ｉ型とII型が知られ、アドリアマイシン、エトポシドがトポII型を阻害し、またカンプトテシンがトポＩ型を阻害する。カンプトテシンに耐性化した癌細胞ではトポイソメラーゼの構造が点変異を受けていることが明らかとなっている。
【００１５】
薬剤耐性克服剤としては特開平８-９２２１８号公報に一般式
【００１６】
【化８】
0004041642.tif 000003
【００１７】
（Ｘ、Ｙは水素原子又はハロゲン原子を表し、ｎは１〜４の整数を表し、Ｒ1はハロゲン原子、炭素数１〜４のアルキル基、炭素数１〜４のアルキルオキシ基、ニトロ基で置換されてもよい窒素原子を含むことも可能な単環又は二環の芳香環を表す。)で示される化合物が記載されている。
【００１８】
又、特表平８−５０９２２３号公報（国際公開ＷＯ９４／２４１０７号明細書、米国特許５６４３９０９号明細書、米国特許５６５４３０４号明細書、ヨーロッパ特許６９５２９３号明細書）に一般式
【００１９】
【化９】
0004041642.tif 000004
【００２０】
〔Ａは−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ2−ＣＨＲa−ＣＨ2−、又は−ＣＨ2−ＣＨＲa−ＣＨＲb−ＣＨ2−（Ｒa又はＲbの一つはＨ、ＯＨ、低級アルキルオキシであり、もう一つはＨである。）であり、Ｒ1、Ｒ2はＨ、Ｆ、Ｃｌ又はＢｒであり、Ｒ3はヘテロアリール又は所望によりＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ3、ＣＮ、ＮＯ2及びＯＣＨＦ2から選択される置換基で置換されたフェニルである。〕で示される化合物が記載されており、特開平１０−７６６０号公報（米国特許５７００８２６号明細書、ヨーロッパ特許８１２８２９号明細書）に一般式
【００２１】
【化１０】
0004041642.tif 000005
【００２２】
（Ｒ1は置換アルキル、置換アルケニル等、Ｒ2、Ｒ3はアリール等、Ｒ4は水素、置換アルキル、置換アルケニル等を表す。)で示される化合物が記載されているが、いずれにも本願発明に係る１，４−ベンゾチアゼピン誘導体は記載されていない。
【００２３】
本願発明に係る化合物としては、特開平４−２３０６８１号公報（国際公開ＷＯ９２／１２１４８号、ヨーロッパ特許５６５７２１号、米国特許５４１６０６６号）に、一般式
【００２４】
【化１１】
0004041642.tif 000006
【００２５】
〔式中、Ｒは水素原子又は炭素数１〜３の低級アルコキシ基を表し、Ｒ1は水素原子、炭素数１〜３の低級アルコキシ基、置換フェニル基（ここで、置換基は水酸基又は炭素数１〜３の低級アルコキシ基である。）、
【００２６】
【化１２】
0004041642.tif 000007
【００２７】
（ここで、Ｒ2は炭素数１〜３のアシル基である。）を表し、Ｘは酸素原子又はＨ2を表し、ｎは１又は２を表し、Phはフェニル基を表す。〕で示される１，４−ベンゾチアゼピン誘導体又はその薬学的に許容される塩が記載されており、又これらの化合物の製造方法も記載されている。
【００２８】
特開平４−２３０６８１号公報によれば、心筋梗塞患者の心筋に二種類の壊死形態〔Static cell death（ＳＤ）及びKinetic cell death（ＫＤ）〕があり、ヒトの心筋梗塞の主体をなす細胞死はＫＤであることが記載されている。当該発明化合物はＫＤ抑制作用を有するため、心筋梗塞の予防及び治療剤として有用である旨の記載がある。しかし、制癌剤の耐性克服に関しては何らの記載もない。
【００２９】
又、本願発明の発明者の一人である金子は、化合物
【００３０】
【化１３】
0004041642.tif 000008
【００３１】
が細胞内カルシウム遮断作用を有すること〔Drug Dev. Res., 33, 429-438 (1994)〕、及びカルシウムイオンチャンネル活性阻害剤として有効であること〔J. Mol. Biol.,274, 16-20 (1997)〕を報告しているが、該文献で本発明の主題である制癌剤耐性克服作用については何ら言及していない。
【００３２】
従来から知られているベラパミル等のカルシウム拮抗薬は、Ｐ糖蛋白質を阻害することが知られている〔Cancer Res.,49, 5002-5006 (1989)〕。一方、Ｂ１６細胞のメラニン欠乏性細胞であるＢ１６ａ細胞及びそのシスプラチン耐性変異株Ｂ１６ａ−Ｐｔ細胞を用いた実験で、カルシウム拮抗剤であるニフェジピンがシスプラチンの抗腫瘍効果を増強するものの、ベラパミル、ジルチアゼム、ニモジピンやニカルジピン、またカルモジュリン拮抗薬であるトリフルオペラジン（trifluoperazine）及びカルミダゾリウム（calmidazilium）には有意な抗腫瘍効果の増強は見られないという報告がある〔Cancer Res.,49, 2844-2850 (1989)〕。また、ヒト神経膠芽腫細胞であるＧＢ−１細胞とＵ８７−ＧＭ細胞を用いた実験でもベラパミル、ジルチアゼム、ニモジピン、ニカルジピン、ベニジピン（benidipine）、ニルバジピン（nilvadipine）やニソルジピン（nisoldipine）には有意なシスプラチンの抗腫瘍効果の増強は見られないという報告がある〔J. Neurosurg.,82, 4469-474 (1995)〕。
【００３３】
Drug Dev. Res., 33, 429-438 (1994)には、ジルチアゼムは１，５−ベンゾチアゼピン化合物であり、化合物
【００３４】
【化１４】
0004041642.tif 000009
【００３５】
は１，４−ベンゾチアゼピンであるが、似ているという記載があることや、ジルチアゼムには有意なシスプラチンの抗腫瘍効果の増強は見られないという上記文献の報告から、本願発明に係る化合物にはシスプラチンの耐性克服作用は見られないことが推定される。しかしながら、本願発明に係る一般式〔Ｉ〕で表される化合物は後述の実施例からも明らかなように、シスプラチンをはじめとする白金錯体に極めて強い耐性克服作用を有する。
【００３６】
シスプラチン等の白金錯体に対して、腫瘍細胞は細胞内への白金錯体の蓄積低下、グルタチオンやメタロチオネイン等による解毒、傷害を受けたＤＮＡの修復能の亢進などの機構で耐性化している〔Jpn. J. Cancer Res.,79, 301-304 (1988)、J. Biol. Chem., 265, 4296-4301 (1990)、Jpn. J. Cancer Res.,81, 527-535 (1990)、Br. J. Cancer,67, 1171-1176 (1993)、Cancer Res.,53, 5225-5232 (1993)、Cancer Res.,53, 3694-3699 (1993)、Pharmacol. Ther., 52, 385-406 (1991)〕。従って、Ｐ糖蛋白質の阻害のみではシスプラチンの耐性克服は困難であると考えられる。それ故、本発明に係る一般式〔Ｉ〕で表される化合物は、詳しい機構は今のところ不明だが、従来のカルシウム拮抗薬とは異なった機構で耐性を克服しているものと推定される。又、本発明に係る一般式〔Ｉ〕で表される化合物は、驚くべきことにタキソールやアドリアマイシン等の制癌剤にも強い耐性克服作用を有する。
【００３７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ヒトをはじめとする哺乳動物に対する制癌剤耐性克服剤及び制癌剤効果増強剤を提供することを目的とする。また本発明は、ヒトを含む哺乳動物における癌の治療に有用な医薬組成物及び医薬キットを提供することを目的とする。特に本発明は、制癌剤に対して耐性化した癌の治療に有用な制癌剤耐性克服剤、制癌剤効果増強剤、医薬組成物及び医薬キットを提供することを目的とする。
【００３８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、驚くべきことに下記一般式〔Ｉ〕で表される化合物が優れた制癌剤耐性克服作用及び制癌剤効果増強作用を有し、しかも低毒性であることを見い出して、本発明を完成した。
【００３９】
従来の耐性克服剤はＰ糖蛋白質や、多剤耐性関連蛋白（ＭＲＰ）が関与する、いわゆるＭＤＲに対する耐性克服剤であった。カルシウム拮抗剤については、ベラパミルでの耐性克服もＭＤＲに関連しているといわれ、シスプラチン耐性には動物実験で無効であったと報告されている。また、ＭＤＲに対する小児での臨床試験が組まれたが、血圧低下（徐脈）のため治験は中止となったとの報告もある。シスプラチンによる耐性のメカニズムはＭＤＲとは異なると考えられており、下記一般式〔Ｉ〕で示される本願発明に係る化合物がシスプラチン耐性を克服し得ることは初めての知見であり、驚くべきことである。
【００４０】
本発明は、下記一般式〔Ｉ〕で示される化合物を有効成分とする制癌剤耐性克服剤又は制癌剤効果増強剤に関する。より詳しくは、下記（１）乃至（１４）に示す通りである。
【００４１】
（１）  一般式〔Ｉ〕
【００４２】
【化１５】
0004041642.tif 000010
【００４３】
〔式中、Ｒ1は水素原子又は低級アルコキシ基を表し、Ｒ2は水素原子、低級アルコキシ基、フェニル基（該フェニル基は水酸基及び低級アルコキシ基からなる群より選ばれる１乃至３個の置換基で置換されてもよい。）、
【００４４】
【化１６】
0004041642.tif 000011
【００４５】
（ここで、Ｒ3はアシル基を表す。）を表し、Ｘは−ＣＯ−又は−ＣＨ2−を表し、ｎは１又は２を表す。〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグを含有してなる制癌剤耐性克服剤。
【００４６】
（２）  該化合物が４−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピオニル］−７−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピンである上記（１）に記載の制癌剤耐性克服剤。
【００４７】
（３）  制癌剤が白金錯体、植物由来抗腫瘍性物質又は抗腫瘍性抗生物質である上記（１）又は（２）に記載の制癌剤耐性克服剤。
【００４８】
（４）  制癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、アドリアマイシン又はタキソールである上記（３）に記載の制癌剤耐性克服剤。
【００４９】
（５）  上記一般式〔Ｉ〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグを含有してなる制癌剤効果増強剤。
【００５０】
（６）  該化合物が４−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピオニル］−７−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピンである上記（５）に記載の制癌剤効果増強剤。
【００５１】
（７）  制癌剤が白金錯体、植物由来抗腫瘍性物質又は抗腫瘍性抗生物質である上記（５）又は（６）に記載の制癌剤効果増強剤。
（８）  制癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、アドリアマイシン又はタキソールである上記（７）に記載の制癌剤効果増強剤。
【００５２】
（９）  上記一般式〔Ｉ〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグと、制癌剤とを含有する医薬組成物。
【００５３】
（１０）  該化合物が４−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピオニル］−７−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピンである上記（９）に記載の医薬組成物。
【００５４】
（１１）  制癌剤が白金錯体、植物由来抗腫瘍性物質又は抗腫瘍性抗生物質である上記（９）又は（１０）に記載の医薬組成物。
【００５５】
（１２）  制癌剤がシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、アドリアマイシン又はタキソールである上記（１１）に記載の医薬組成物。
【００５６】
（１３）  ２種類の薬剤を含んでなる癌治療用医薬キットであって、第一の薬剤が上記（１）に記載の制癌剤耐性克服剤であり、第二の薬剤が制癌剤である癌治療用医薬キット。
【００５７】
（１４）  ２種類の薬剤を含んでなる癌治療用医薬キットであって、第一の薬剤が上記（５）に記載の制癌剤効果増強剤であり、第二の薬剤が制癌剤である癌治療用医薬キット。
【００５８】
本発明を説明するために本明細書において使用する用語の定義は次の通りである。
【００５９】
「制癌剤耐性克服剤」とは、それ自体に制癌活性はないものの、制癌剤に対する癌細胞の耐性を低下させる作用を有する薬剤を意味する。すなわち、制癌剤耐性を獲得した癌細胞の制癌剤に対する感受性を増加させる作用を有する薬剤を意味する。この場合、感受性の増加とは、制癌剤耐性細胞に対する制癌剤の効果レベルを制癌剤感受性細胞に対する効果レベル以上に上昇させるのみならず、制癌剤耐性細胞に対する制癌剤の効果レベルを制癌剤感受性細胞に対する効果レベルとほぼ同等まで上昇させることも含む。また、「耐性克服」と同義語として「耐性抑制」、「耐性解除」、「抵抗性解除」、「感受性増強」等を挙げることができる。
【００６０】
「制癌剤効果増強剤」とは、それ自体に制癌活性はないものの、制癌剤と併用することによって制癌剤の活性、言い換えれば制癌剤それ自体が有する制癌効果を増強する薬剤である。この場合、増強とは制癌剤耐性細胞に対する制癌剤の効果レベルを制癌剤感受性細胞に対する効果レベル以上に上昇させるのみならず、未だ耐性化していない癌細胞の制癌剤に対する感受性を高めることも意味する。
【００６１】
したがって、本発明に係る制癌剤耐性克服剤、制癌剤効果増強剤を用いれば、耐性を獲得した癌細胞の制癌剤に対する感受性を増加させることができるばかりでなく、制癌剤の投与量を低減したり、あるいは、制癌剤の投与間隔を延長したりすることが可能となる。
【００６２】
「低級アルコキシ基」とは、炭素数１乃至６個の直鎖又は分枝鎖アルコキシ基を意味し、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ｔｅｒｔ−ペンチルオキシ基又はヘキシルオキシ基等であり、好ましくは炭素数１乃至３個のメトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基又はイソプロポキシ基であり、特に好ましくはメトキシ基である。
【００６３】
「アシル基」とは、炭素数１のホルミル基；炭素数２乃至６個のアルカノイル基であるアセチル基、プロピオニル基、ブチリル基若しくはピバロイル基等；又は、アリール基上に一乃至三個の置換基を有してもよいベンゾイル基等のアロイル基である。好ましくはホルミル基、アセチル基、ピバロイル基又はベンゾイル基である。
【００６４】
一般式〔Ｉ〕で示される化合物の「塩」とは、医薬的に許容されうる塩であり、好適には医薬的に許容されうる酸付加塩であり、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩又は硝酸塩等の無機酸付加塩；酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、グリコール酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマール酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩又はアスコルビン酸塩等の有機酸付加塩；アスパラギン酸塩又はグルタミン酸塩等のアミノ酸付加塩が含まれるが、これらに限定されるものではない。又、場合によっては含水物あるいは水和物であってもよい。
【００６５】
一般式〔Ｉ〕で示される化合物の「プロドラッグ」とは、化学的又は代謝的に分解し得る基を有し、加水分解や加溶媒分解によって、又は生理的条件下で分解することによって医薬的に活性を示す本発明化合物の誘導体である。
【００６６】
「制癌剤」とは、ブスルファン、カルボコン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、ナイトロジェンマスタード、チオテパ、ウラシルマスタード、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、塩酸ニムスチン（ＡＣＮＵ）、リン酸エストラムスチン等のアルキル化剤；アザチオプリン、アンシタビン、カルモフール、ドキシフルリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、メルカプトプリン（６−ＭＰ）、チオイノシン、テガフール、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、メトトレキサート（ＭＴＸ）、ヒドロキシカルバミド、シタラビンオクホスファート、ペントスタチン等の代謝拮抗剤；ダクチノマイシン、マイトマイシンＣ（ＭＭＣ）、ブレオマイシン（ＢＬＭ）、ダウノルビシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン）、ネオカルチノスタチン（ＮＣＳ）、塩酸イダルビシン等の抗腫瘍性抗生物質；エトポシド（ＶＰ−１６）、テニポシド、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール（パクリタキセル）、塩酸イリノテカン等の植物由来抗腫瘍性物質；シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン（ＣＢＤＣＡ）、ネダプラチン（ＮＤＰ）等の白金錯体；プレドニゾン、プレドニゾロン、テストステロン、エストラムスチン、ノルエチステロン、酢酸ゴセレリン、酢酸リュープロレリン、クエン酸トレミフェン、塩酸ファドロゾール、タモキシフェン等のホルモン剤、ミトキサントロン（ＭＸＴ）等のアントラサイクリン系化合物等が挙げられるが、これらに限定されるものではない。好ましい制癌剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン等の白金錯体；ダクチノマイシン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダウノルビシン、アドリアマイシン、ネオカルチノスタチン、塩酸イダルビシン等の抗腫瘍性抗生物質；エトポシド、テニポシド、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、タキソール、塩酸イリノテカン等の植物由来抗腫瘍性物質等である。より好ましくはシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、アドリアマイシン、タキソール等であり、特に好ましくはシスプラチンである。
制癌剤のカテゴリーとしては白金錯体が最も好ましく、次いで植物由来抗腫瘍性物質が好ましい。
【００６７】
【発明の実施の形態】
本発明に係る一般式〔Ｉ〕で示される化合物において、Ｒ1として好ましくは炭素数１乃至３の低級アルコキシ基であり、特に好ましくはメトキシ基である。Ｒ2として好ましくは炭素数１乃至３の低級アルコキシ基又は水素原子であり、特に好ましくは水素原子である。Ｘとして好ましくは−ＣＯ−である。ｎとして好ましくは２である。
【００６８】
本発明の制癌剤耐性克服剤、制癌剤効果増強剤及び医薬組成物における有効成分としては、好ましくは、一般式〔Ｉ〕で示される化合物又はその塩が用いられる。
【００６９】
本発明に係る一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、特開平４−２３０６８１号公報（国際公開ＷＯ９２／１２１４８号、ヨーロッパ特許５６５７２１号、米国特許５４１６０６６号）に記載された方法に従って、製造することができる。
【００７０】
本発明に係る一般式〔Ｉ〕で示される化合物は優れた制癌剤耐性克服作用及び制癌剤効果増強作用を有する。すなわち、本発明の制癌剤耐性克服剤あるいは制癌剤効果増強剤を制癌剤と併用投与することにより、耐性化した癌に対しても制癌剤の制癌作用が発揮される。本発明化合物を制癌剤耐性克服剤あるいは制癌剤効果増強剤として用いる場合、通常全身的、あるいは局所的に、経口又は非経口で投与される。非経口投与としては、静脈内投与（点滴静注を含む）、動脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、腹腔内投与、胸腔内投与、膀胱内投与、髄腔内投与、経皮投与、経粘膜投与、直腸内投与、腫瘍内投与などが挙げられる。本発明の制癌剤耐性克服剤あるいは制癌剤効果増強剤は、制癌剤と同時に投与してもよく、又は制癌剤の投与前若しくは投与後に投与してもよいし、あるいは制癌剤の休薬期間中に投与してもよい。制癌剤耐性克服剤又は制癌剤効果増強剤と制癌剤との投与経路は同じであっても、異なっていてもよい。
【００７１】
本発明の制癌剤耐性克服剤又は制癌剤効果増強剤は、制癌剤と併用投与することにより、ヒトを含む哺乳動物における肺癌（非小細胞肺癌、小細胞肺癌）、大腸癌（直腸癌、結腸癌）、小腸癌、胃癌、食道癌、肝臓癌、膵臓癌、悪性黒色腫、腎臓癌、膀胱癌、子宮癌（子宮頸癌、子宮体癌）、卵巣癌、乳癌、骨肉腫、悪性リンパ腫、前立腺癌、白血病（急性白血病、慢性白血病）、骨髄腫、神経芽細胞腫、頭頸部癌、皮膚癌、睾丸腫瘍等の癌（悪性腫瘍）の治療に使用することできる。
【００７２】
本発明において、「併用投与」とは、２種類の薬剤を同時に、連続して、又は時間間隔をおいて投与することを意味する。２種類の薬剤は、混合物として投与してもよく、または別々の製剤として投与してもよい。別々の製剤として投与する場合、それぞれの投与経路は同じであっても異なっていてもよい。
【００７３】
一般式〔Ｉ〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグの投与量は、年齢、体重、症状、治療効果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常成人一人当たり０．０１ｍｇ乃至１ｇの範囲で、一日一回から数回経口あるいは非経口投与される。
【００７４】
併用投与する制癌剤の投与量は、通常の癌の治療に使用される投与量、又はそれより少ない投与量でよい。また併用投与する制癌剤の投与経路は、通常の癌の治療で用いられる投与経路と同じであってよい。
【００７５】
また、一般式〔Ｉ〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグと、制癌剤とを含有する医薬組成物として投与することもできる。組成物中における一般式〔Ｉ〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグと、制癌剤との重量比は、１：１００〜１００：１の範囲であってよいが、この範囲に限定されるわけではない。
【００７６】
本発明によれば、２種類の薬剤を含んでなる癌治療用医薬キットが提供される。本発明の癌治療用医薬キットにおいて、第一の薬剤は一般式〔Ｉ〕で示される化合物、又はその塩若しくはそのプロドラッグを含有する制癌剤耐性克服剤あるいは制癌剤効果増強剤であり、第二の薬剤は制癌剤である。これら２種類の薬剤を併用投与することによって、癌の治療、特に制癌剤に対して耐性化した癌の治療に使用することができる。制癌剤耐性克服剤あるいは制癌剤効果増強剤は、制癌剤と同時に投与してもよく、又は制癌剤の投与前若しくは投与後に投与してもよいし、場合によっては、制癌剤の休薬期間中に投与してもよい。これら制癌剤耐性克服剤あるいは制癌剤効果増強剤の投与経路は、制癌剤の投与経路と同じであっても、異なっていてもよい。
【００７７】
本発明化合物を経口投与のための固体組成物にする場合、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤等の剤形が可能である。このような固体組成物においては、一つ又はそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤、分散剤又は吸着剤等、例えば乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微晶性セルロース、澱粉、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム又は無水ケイ酸末等と混合される。又、組成物は常法に従って、希釈剤以外の添加剤を混合させてもよい。
【００７８】
錠剤又は丸剤に調製する場合は、必要により白糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース又はヒドロキシメチルセルロースフタレート等の胃溶性あるいは腸溶性物質のフィルムで皮膜してもよいし、二以上の層で皮膜してもよい。さらに、ゼラチン又はエチルセルロースのような物質のカプセルにしてもよい。
【００７９】
経口投与のための液体組成物にする場合は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶解剤、懸濁剤、シロップ剤又はエリキシル剤等の剤形が可能である。用いる希釈剤としては、例えば精製水、エタノール、植物油又は乳化剤等がある。又、この組成物は希釈剤以外に浸潤剤、懸濁剤、甘味剤、風味剤、芳香剤又は防腐剤等のような補助剤を混合させてもよい。
【００８０】
非経口のための注射剤に調製する場合は、無菌の水性若しくは非水性の溶液剤、可溶化剤、懸濁剤または乳化剤を用いる。水性の溶液剤、可溶化剤、懸濁剤としては、例えば注射用水、注射用蒸留水、生理食塩水、シクロデキストリン及びその誘導体、トリエタノールアミン、ジエタノールアミン、モノエタノールアミン、トリエチルアミン等の有機アミン類あるいは無機アルカリ溶液等がある。
【００８１】
水溶性の溶液剤にする場合、例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコールあるいはオリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類等を用いてもよい。又、可溶化剤として、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、蔗糖脂肪酸エステル等の界面活性剤（混合ミセル形成）、又はレシチンあるいは水添レシチン（リポソーム形成）等も用いられる。又、植物油等の非水溶性の溶解剤と、レシチン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油又はポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール等からなるエマルジョン製剤にすることもできる。
【００８２】
非経口投与のためのその他の組成物としては、一つ又はそれ以上の活性物質を含み、それ自体公知の方法により処方される外用液剤、軟膏のような塗布剤、座剤又はペッサリー等にしてもよい。
【００８３】
【実施例】
次に、本発明化合物の製剤例について具体的に説明する。
なお、製剤化合物として４−［３−（４−ベンジルピペリジン−１−イル）プロピオニル］−７−メトキシ−２，３，４，５−テトラヒドロ−１，４−ベンゾチアゼピン
【００８４】
【化１７】
0004041642.tif 000012
【００８５】
（以下、化合物１という。）を用いた。
【００８６】
実施例１
注射製剤
化合物１              １０ｍｇ
Ｄ−ソルビトール  １０００ｍｇ
クエン酸              １０ｍｇ
水酸化ナトリウム  適量
注射用水を加えて２０．０ｍｌとする。
【００８７】
Ｄ−ソルビトール及びクエン酸を充分量の注射用水に溶解した。得られた溶液に化合物１を溶解させ、水酸化ナトリウムでｐＨを３．２〜３．３に調節した。攪拌しつつ、残りの注射用水を加えた。この溶液を濾過し、２０．０ｍｌアンプルに詰めて封入した。次いでアンプルの内容物をオートクレーブにかけて滅菌した。
【００８８】
実施例２
次の２種類の薬剤を含んでなる癌治療用医薬キットを製造する。
第一の薬剤  実施例１で製造した注射製剤
第二の薬剤  シスプラチン注射製剤  ２０．０ｍｌ（０．５ｍｇ／ｍｌ）
【００８９】
次に、本発明化合物の制癌剤耐性克服効果について具体的に説明する。なお、被験化合物として化合物１を用いた。
【００９０】
実施例３
シスプラチン耐性非小細胞肺癌細胞株における被験化合物の制癌剤感受性増強作用
ヒト非小細胞肺癌株であるＰＣ−１４及びそのシスプラチン耐性細胞株ＰＣ−１４／ＣＤＤＰを用いてシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン及びタキソールに対する耐性克服作用を検討した。ＲＰＭＩ  １６４０培地中でＰＣ−１４及びＰＣ−１４／ＣＤＤＰをトリプシン処理により又はセルスクレイパーを用いてシングル細胞とし、１５μｌ当たり１００個の細胞浮遊液を調製した。これに化合物１をジメチルスルホキシドに溶解させて、最終濃度１０μＭとなるように加え、これを９６穴プレートに１ウェル当たり１５０μｌづつ入れた。制癌剤を滅菌蒸留水に溶解させて一列目より１５０μｌ加え、二列目以降に１５０μｌづつ移していき２倍希釈列を作った。陰性対照として細胞を加えない群を、又陽性対照として制癌剤及び化合物１を加えない群を調製した。３７℃、５％二酸化炭素濃度、飽和水蒸気の条件下で９６時間培養した後、Ｄ−ＰＢＳ（−）に５ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解させたＭＴＴ〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide〕試薬を２０μｌ加えて、３７℃で更に４時間培養した。培養終了後、プレートごと遠心し、上清を捨てた。２００μｌのジメチルスルホキシドを加えて、細胞内のミトコンドリアの酵素活性により生成したホルマザン結晶を溶解させ、５６２〜６３０ｎｍの吸光度をマルチプレートリーダーを用いて測定した。陰性対照の平均発育率を０％、陽性対照の平均発育率を１００％として用量発育曲線を描き、５０％細胞発育抑制濃度（ＩＣ50）を算出した。これを表１に示す。
【００９１】
【表１】
0004041642.tif 000013
【００９２】
上記の結果から明らかなように、化合物１はシスプラチン耐性肺癌細胞株（ＰＣ−１４／ＣＤＤＰ）のシスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン及びタキソールに対する耐性を低下させ、これらの制癌剤に対する感受性を増加させる作用を示した。
【００９３】
実施例４
アドリアマイシン耐性ヒト白血病細胞株における被験化合物の制癌剤感受性増強作用
ヒト前骨髄性白血病細胞株であるＫ５６２及びそのアドリアマイシン耐性細胞株Ｋ５６２／ＡＤＭを用いてアドリアマイシンに対する耐性克服作用を検討した。方法は、癌細胞としてＫ５６２及びＫ５６２／ＡＤＭ、制癌剤としてアドリアマイシンを用いたこと以外は実施例３と同様の方法を行い、５０％細胞発育抑制濃度（ＩＣ50）を算出した。これを表２に示す。
【００９４】
【表２】
0004041642.tif 000014
【００９５】
上記の結果から明らかなように、化合物１はアドリアマイシン耐性白血病細胞株（Ｋ５６２／ＡＤＭ）のアドリアマイシンに対する耐性を低下させ、アドリアマイシンに対する感受性を増加させる作用を示した。
【００９６】
実施例５
ヌードマウス担癌モデルにおけるシスプラチンの腫瘍発育抑制効果に対する増強作用
雌性ヌードマウスBALB/c nu/nu（６週齢)に２×１０7個のＰＣ−１４／ＣＤＤＰ細胞と親株であるＰＣ−１４細胞を生理食塩水浮遊液とし、背部皮下に植え込んで生着の経過を観察した。移植後７日目に腫瘍の状態を確認して試験可能な個体を選出し、偏りが生じないように各個体のランダマイズを行って、コントロール群と被験群に分けた。各々の腫瘍体積を（腫瘍短径）2×（腫瘍長径）で決定後、第７日目より薬剤投与を開始した。
【００９７】
被験化合物として化合物１を用い、その１．２ｍｇを０．０５ｍｌのジメチルスルホキシドに溶解させ、０．９５ｍｌの５％ソルビトール−０．２％クエン酸１水和物溶液（ｐＨ３．３）を加えて均一な溶液とした。
【００９８】
また、制癌剤としてシスプラチンを用い、蒸留水にて１．６ｍｇ／ｍｌの溶液を調製した。
【００９９】
投与法は、腫瘍移植後７日目、１１日目、１５日目に、一日一回、被験化合物溶液０．０５ｍｌ及び制癌剤溶液０．０５ｍｌを同時に静注投与した。なお、コントロール群には生理食塩水を０．１ｍｌ静注投与し、制癌剤単独投与群には制癌剤溶液０．０５ｍｌ及び生理食塩水０．０５ｍｌを静注投与した。被験化合物の用量は一回３ｍｇ／ｋｇ、制癌剤の用量は一回４ｍｇ／ｋｇであった。薬剤投与中にマウスの全身状態の観察、体重及び腫瘍の長短径を測定した。腫瘍発育率（ＧＲ）及び抗腫瘍効果（lowestＴ／Ｃ）をそれぞれ以下の計算式により算出した。これらを表３に示す。
【０１００】
【数１】
0004041642.tif 000015
【０１０１】
【表３】
0004041642.tif 000016
【０１０２】
ヌードマウス担癌モデルにおける実験においても、化合物１をシスプラチンと併用することによって、シスプラチン耐性癌細胞株（ＰＣ−１４／ＣＤＤＰ）に対して腫瘍発育を抑制する効果を示した。これは、化合物１がシスプラチンに対する癌細胞の耐性を低下させ、シスプラチンに対する感受性を増加させる作用を有することを示す。
【０１０３】
【発明の効果】
本発明に係る一般式〔Ｉ〕で示される化合物は、上記実施例からも明らかな通り、種々の制癌剤の耐性を克服する作用を有するだけでなく、制癌剤感受性細胞に対する各種制癌剤の効果を増強する作用を有する。従って、耐性化した細胞は勿論、感受性細胞に対しても優れた効果を有し、特に、制癌剤に対して耐性化した癌の治療において、極めて有効な薬剤となることが期待される。このように、一般式〔Ｉ〕で示される化合物と制癌剤とを含有する本発明の医薬組成物は、癌の治療、特に制癌剤に対して耐性化した癌の治療に有効である。また、本発明の医薬キットは、制癌剤耐性克服剤又は制癌剤効果増強剤と制癌剤との併用投与に適しており、制癌剤に対して耐性化した癌の治療に特に有用である。