(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアのいずれかまたは両方からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、
抽出液を濃縮した液にトルエンを投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる析出工程と、
析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、
吸着媒に吸着させたカンプトテシンをトルエン又はメタノールのいずれか、又はトルエンとメタノールの混合液を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、
を含むカンプトテシンの製造方法。
【請求項２】
抽出工程において、メタノール又は含水メタノールを用いてカンプトテシンを抽出する請求項１に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項３】
更に、粗カンプトテシンを再結晶により精製する工程を含む請求項１又は２に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項４】
吸着媒が、セライト、シリカゲル、またはその混合物である請求項１から３のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項５】
更に、活性炭を用いてろ過する工程を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項６】
トルエンとメタノールの混合液に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、１：９から８：２である請求項１から５のいずれかに記載のカンプトテシンの製造方法。
【請求項７】
トルエンとメタノールの混合液に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、２：８から５：５である請求項１から５のいずれかに記載のカンプトテシンの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、癌の治療に有用な医薬品の原料となるカンプトテシンを、これを含有する植物原料から効果的に抽出精製する方法及びこれによるカンプトテシンの製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
１９６６年にウオール（Ｗａｌｌ）らによって、喜樹から下記式１で表されるカンプトテシンが単離された[M. E. Wall, M. C. Wani, C. E. Cook, K. H. Palmer, A. T. McPhail, and G. A. Sim, J. Am. Chem. Soc., 94, 388 (1966)]。その後、カンプトテシンは、米国のNational Cancer Institute（国立癌研究所）において制癌効果のある薬物として薬理研究が行われた。
【０００３】
【化１】
0004087589.tif 000002
【０００４】
カンプトテシンは、抗腫瘍活性、すなわちＤＮＡ関連酵素阻害メカニズム（ＤＮＡトポイソメラーゼのＩ型を阻害するメカニズム）を有する事が発見され、新制癌剤への応用の期待が高まった。しかしながら、カンプトテシンは、高い骨髄抑制という毒性を有していた。
その後、カンプトテシンは化学修飾が加えられ、毒性が低減された。1994年1月には、カンプトテシン誘導体である下記式２で表されるＣＰＴ−１１（塩酸イリノテカン）が臨床試験を経て旧厚生省より認可を受けた。このようにして、カンプトテシン誘導体は日本で医薬品として認められることとなった。
【０００５】
【化２】
0004087589.tif 000003
【０００６】
癌治療に有用な塩酸イリノテカンの原料となるカンプトテシンは、世界の亜熱帯圏に広く分布する数種類の植物に含まれており、これら植物原料から抽出することにより製造されている。又、カンプトテシンは、化学合成によっても製造されている（例えば、米国特許４，８９４，４５６号等）。
【０００７】
カンプトテシンをクサミズキ植物原料から製造する場合、植物原料からカンプトテシンを抽出し、できるだけ純度の高いカンプトテシンを収率良く得る必要がある。
従来、カンプトテシン抽出用に伐採された植物原料は殆どが成木の幹部分であり、そこに含まれる樹脂等の不純物の量は少なかった。近年、環境保全の観点から、植物原料の栽培も行われるようになり、若年木も抽出に供されるようになってきた。若年の植物原料は皮部分が厚く、葉緑素を多く含むとともに、樹脂が多量に含まれる。したがって、このような若い植物原料を用いてカンプトテシンを抽出した場合、葉緑素や樹脂が不純物として混入する割合が多くなり、これらをカンプトテシンから取り除くのが困難であり、その結果、クサミズキの成木の幹部分を用いて抽出した場合と同程度のカンプトテシンの純度を達成することが難しいという問題があった。
【０００８】
カンプトテシンを植物原料から抽出する方法としては、カンプトテシンを含有する植物（例えば、クサミズキなど）からメタノール等の水溶性溶媒を用いて抽出する方法や、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【０００９】
さらに、カンプトテシンは、一般の有機溶媒にとけにくい性質を有するためカンプトテシンをジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤に溶解させる方法が知られている（例えば、特公平５−３３９５５号公報）。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
例えば、クサミズキからメタノールを用いてカンプトテシンを抽出した場合、一定のカンプトテシン濃度をもったカンプトテシン抽出液を得ることができる。しかしながら、メタノールを用いた抽出工程だけでは高純度のカンプトテシンを単離することができないという問題があった。
また、水酸化ナトリウム水溶液などのアルカリ溶液にカンプトテシンを溶解させた場合、カンプトテシンはアルカリ溶液に容易に溶解するが、カンプトテシンのラクトン環が開裂するといった問題があった。
また、ジメチルスルホキシドのような溶解力の強い水溶性溶剤を用いれば、メタノール抽出液のカンプトテシン吸着媒から目的とするカンプトテシンを効率よく抽出する事が可能であるが、葉緑素や樹脂等を同時に溶解し抽出してしまう為、その後の分離精製が困難であるという問題があった。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
上記課題は、以下の発明によって解決される。
すなわち、
（１）カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアのいずれかまたは両方からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、
抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる析出工程と、
析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、
吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、
を含むカンプトテシンの製造方法、
（２）抽出工程において、メタノールまたは含水メタノールを用いてカンプトテシンを抽出する（１）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（３）更に、粗カンプトテシンを再結晶により精製する工程を含む（１）又は（２）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（４）第１の非水溶性溶媒がトルエンである（１）から（３）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（５）吸着媒が、セライト、シリカゲル、またはその混合物である（１）から（４）のいずれかに記載のカンプトテシンの製造方法、
（６）更に、活性炭を用いてろ過する工程を含む、（１）から（５）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（７）溶解抽出工程において、第２の非水溶性溶媒が、トルエンまたは、メタノールのいずれか又は両方を含む液である（１）から（６）のいずれかに１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（８）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、１：９から８：２である（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（９）第２の非水溶性溶媒に含まれるメタノール対トルエンの容量割合が、２：８から５：５である上記（７）に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１０）第１の非水溶性溶媒または第２の非水溶性溶媒のいずれかまたは両方が、石油系炭化水素である（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
（１１）第１の非水溶性溶媒または第２の非水溶性溶媒のいずれかまたは両方が、トルエンである（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法。
（１２）第２の非水溶性溶媒が、ハロゲン化アルキルである上記（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１３）第２の非水溶性溶媒が、メチレンクロライドである上記（１）から（６）のいずれか１項に記載のカンプトテシンの製造方法、
（１４）カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアから非水溶性溶媒を用いてカンプトテシンを抽出する工程を含むカンプトテシンの製造方法、
によって解決される。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の実施態様のひとつであるカンプトテシンの製造方法のひとつは、原料を破砕した後、カンプトテシンを含むクサミズキまたはエルバタミアのいずれかまたは両方からカンプトテシンを抽出する抽出工程と、抽出液を濃縮した液に第１の非水溶性溶媒を投入し樹脂及び葉緑素を溶解すると共にカンプトテシンを析出させる析出工程と、析出したカンプトテシンを吸着媒に吸着させる吸着工程と、吸着媒に吸着させたカンプトテシンを第２の非水溶性溶媒を用いて溶解抽出し、粗カンプトテシンを得る溶解抽出工程と、当該工程により得られた粗カンプトテシンを再結晶することにより精製するカンプトテシン精製工程とを含むカンプトテシンの製造方法が挙げられる。
【００１３】
［カンプトテシンの原料］
カンプトテシンの原料としては、例えば、クサミズキ（Nothapodytes foetida）又は、エルバタミア(Mappia foetide Miers)等のカンプトテシンを含む植物が挙げられるが、カンプトテシンを含むものであれば限定されない。カンプトテシンを含む植物としては、クサミズキが特に好ましい。
【００１４】
本発明は、カンプトテシンを含む植物原料のうちでも比較的若い時期に伐採したクサミズキからカンプトテシンを製造する場合に特に好適に用いられる。例えば、本発明は、成長したクサミズキなどは勿論のこと、発芽してから１年以上３年以内のクサミズキなどに好適に用いることができる。若木のクサミズキは、樹脂や葉緑素を比較的多く含んでいるが、このような場合に本発明は特に有効に用いられるのである。
【００１５】
カンプトテシンは、カンプトテシンの塩として製造されてもよい。カンプトテシンの塩としては、カンプトテシンのナトリウム塩、カリウム塩やカンプトテシンのテトラアルキルアンモニウム塩が含まれる（例えば、特許１８８８４０４号）。
【００１６】
原料を伐採し、そのままカンプトテシンを抽出してもよいが、抽出効率を上げるため、原料は細かく破砕されていることが好ましい。
【００１７】
例えば、破砕された原料は、溶液中でカンプトテシンが抽出される。この際に用いられる溶液としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールなどのアルコール類、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、クメンなどの芳香族炭化水素類、フェノール、ベンジルアルコールなどの芳香族アルコール、メチレンクロライドなどのハロゲン化アルキルが挙げられるが、カンプトテシンを溶解するものであれば限定されない。当該溶液としてトルエンやメチレンクロライドなどの非水溶性溶媒を用いてもよい。これらは、単独で用いられてもよいし、２種類以上を混合して用いてもよい。これらのうちで、メタノール、トルエン、メチレンクロライドが入手容易であり、しかもカンプトテシンをよく溶解するため好ましい。原料からカンプトテシンを抽出する際は、不純物が比較的多く含まれるため、入手容易かつ安価なメタノールが特に好ましい。
【００１８】
トルエンは、常温において、カンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液に投入することによってカンプトテシンを析出させ、これをセライトに吸着させる働きがある。反対に、メタノールと混合した沸騰状態でのトルエンはカンプトテシンが吸着したセライトからカンプトテシン溶解し分離する働きがある。
トルエンは、常温で単独で使用した場合は、葉緑素及び樹脂を溶解したままカンプトテシンを析出させるためカンプトテシンの分離に好ましく用いられ、メタノールとトルエンの混合溶媒はその沸点においてカンプトテシンを極めて良く溶解するので、カンプトテシンの抽出又は再結晶の溶解に好ましく用いられる。
一方、メチレンクロライドは常温においてもカンプトテシンを溶解するので、トルエンの場合の様に、メチレンクロライドを用いてカンプトテシンを含むメタノール抽出液の濃縮液からカンプトテシンを析出させることはできない。
【００１９】
表１に、トルエン、キシレン、ヘキサン、メチレンクロライドの樹脂溶解性、それぞれに対するカンプトテシン（ＣＰＴ）溶解度、それぞれのメタノールとの混合能、およびそれぞれの沸点を示す。表１から、メタノール以外の溶液としては、トルエンとメチレンクロライドが好ましいことがわかる。さらに、メチレンクロライドは、樹脂を溶解させずに、カンプトテシンを溶解するという優れた効果を有することがわかる。
【００２０】
【表１】
0004087589.tif 000004
【００２１】
植物原料からカンプトテシンを抽出する際の温度としては、抽出に用いられる溶液にもよるが、例えばメタノールを用いた場合は、１０℃から６０℃が好ましく、３０℃から５５℃であれば更に好ましい。その理由は、低温で抽出を行うとカンプトテシンの溶解量がすくなく、高温で行うと、樹脂等のカンプトテシン以外の不純物を多く抽出する。
更に、植物原料に予め水分を持たせることにより、結果的に抽出工程におけるメタノールの含水量が１０から３０容量％の範囲内にあるのが好ましい。
【００２２】
原料からカンプトテシンを抽出した後、これをろ過することが好ましい。ろ液にはカンプトテシンが溶解している。この際、ろ過ケークにもカンプトテシンが残されているので、ろ過ケークから再度カンプトテシンを抽出し、ろ液を集めることも本発明の好ましい実施の態様である。
【００２３】
カンプトテシン抽出液は、液温を高める、減圧するなどして溶媒を蒸発させ、カンプトテシンの濃度を上昇させることが好ましい。カンプトテシンの濃度が高まると、カンプトテシンの微細結晶が析出してくる。同時に葉緑素及び樹脂も析出してくるので、その際に、カンプトテシンは溶解せず、葉緑素及び樹脂を溶解する石油系炭化水素を投入するのが良い。
この目的には、ノルマルヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン等の非水溶性溶媒が使用できるが、沸点、作業環境の問題、更にその後の工程での使用を考えると、トルエンが好ましい。トルエンの投入により、その後、吸着媒を混入することによって、カンプトテシンを吸着媒に選択的に吸着させることが可能となる。
この場合、メチレンクロライド等のハロゲン化アルキルはトルエンと同様に非水溶性溶媒ではあるが、常温でカンプトテシンを溶解するので、カンプトテシンを析出させる溶媒としては必ずしも適さない。
【００２４】
カンプトテシンを抽出した濃縮液に混入される吸着媒としては、カンプトテシンを選択的に吸着するものが好ましく、例えば、シリカゲル、活性炭、活性白土、ゼオライト、吸着クロマトグラフィー、セライトを好適に用いることができるが、カンプトテシンを吸着することができるものであれば限定されない。これらのなかでも、セライトは特に好ましい吸着媒である。
【００２５】
吸着媒に吸着したカンプトテシンは、吸着媒ごと非水溶性溶媒に入れることにより再び溶液中に溶出する。吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる非水溶性溶媒としては、カンプトテシンを溶出することができる溶液であれば限定されず、先に掲げた溶液を用いることができる。これらの中では、メチレンクロライド、沸騰時のトルエン、及びこれらとメタノールの混合溶液などを好適に用いることができる。
【００２６】
［吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液］
特に若い時期に伐採したクサミズキは、樹脂の含有量が多く、メタノールのみを用いてカンプトテシンを抽出した場合、当該樹脂が多く溶解するため、得られるカンプトテシンの純度が低くなる。このため吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる第２の非水溶性溶媒としては、メタノール単独だけではなく、メチレンクロライド又は沸騰時のトルエン並びにこれらとメタノールの混同溶液が好適に用いられるのである。ただし、メチレンクロライドは、いわゆる環境ホルモンとして特定され、その排水中の規制限度値は０．２ｍｇ／Ｌ以下という厳しい規定が設けられている。このため、メチレンクロライドを用いると、特別な廃液処理を施さなくてはならないため必ずしも低コストが実現できない。したがって、沸騰時のトルエン又は沸騰時のトルエンとメタノールの混合溶液が、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として最も好ましい。
【００２７】
トルエンはメタノールと任意の割合で溶解し、トルエン自体又はメタノール自体とは異なった性質を示す。特に、カンプトテシンを溶解する能力はそれぞれ単独の場合と、混合した場合とで顕著に変化する。表２に、２０℃(実線)と７０℃(破線)における、トルエンとメタノールの重量比と溶解するカンプトテシンの量を示す。
【００２８】
【表２】
0004087589.tif 000005
【００２９】
表２に示すとおり、カンプトテシンの溶解度はメタノールとトルエンの混合の比率によって、大きく変化するが、メタノールとトルエンの混合液に含まれるメタノールの量は、特に限定されるものではなく、メタノール対トルエンの容積割合としては、１：９から８：２であることが好ましく、２：８から５：５であれば更に好ましく、３：７であれば特に好ましい。メタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合液では、常温（２０℃）と沸騰時（７０℃）とでカンプトテシンの溶解度に、２倍の差がある。例えば、この系の７０℃におけるカンプトテシン溶解度は、メチレンクロライドを用いた場合よりも高い。すなわち、吸着媒に吸着したカンプトテシンを溶出させるために用いられる溶液として沸騰時のメタノールとトルエンの混合液が特に好ましいことがわかる。
【００３０】
吸着媒に吸着したカンプトテシンをメタノールとトルエンの混合液で溶出させた後は、ろ過を施し、放置冷却や撹拌冷却することによりカンプトテシンを晶析させることが好ましい。ろ液中のメタノールを蒸発させ、ろ液を濃縮した後にカンプトテシンを晶析させることは本発明の好ましい実施の態様である。この場合、メタノールの濃縮割合は、メタノール対トルエンの容積割合が１：９程度とすることが好ましい。
このようにして得られた粗カンプトテシンとしては、カンプトテシン含有量が８５重量％以上のものであることが好ましい。カンプトテシン含有量が８５重量％より少なければ、その後の再結晶による工程で結晶を精製しても好ましいカンプトテシンを製造することが困難になるからである。
【００３１】
［精製（再結晶）工程］
得られた粗カンプトテシンは、例えば再結晶を施すことによって精製されることが好ましい。再結晶に用いられる溶液としては、カンプトテシンを溶解し、温度によってカンプトテシンの溶解量が変化するものであれば限定されない。熱時はカンプトテシンを良く溶解し、冷時はカンプトテシンを析出させるが樹脂や不純物を依然として溶解しているような溶媒組成が特に好ましい。このような観点から、再結晶に用いられる溶液としては、メタノールとトルエンの混合溶液が好ましい。
【００３２】
粗カンプトテシンに含まれる不純物のうち、樹脂は常温のトルエンで溶解される。しかしながら、カンプトテシン類縁化合物は、常温のトルエンに溶解しにくい。一方、これらカンプトテシン類縁化合物はメタノールとトルエンの混合溶液には溶解する。樹脂やカンプトテシン類縁化合物を除去するためには、一度、樹脂や、カンプトテシン類縁化合物を好ましくはメタノール対トルエンの容積割合が３：７の混合溶液にカンプトテシンとともに熱時溶解させた後、ろ過して得たろ過液を濃縮し、メタノールを溜去してカンプトテシンを析出させ分離するが、その際に、ある程度のメタノールが残っており、樹脂及びカンプトテシン類縁化合物が溶液に溶解した状態であることが望ましい。
【００３３】
カンプトテシン類縁化合物は、その種類によるが、カンプトテシンのように限定された割合でのメタノールとトルエンの混合液ではなく、メタノール又はトルエン単独の溶液に近い割合の場合に、常温で比較的よく溶解する。したがって、カンプトテシン類縁化合物を除去しつつ、カンプトテシンの回収率を上げるためには、表２からわかるように、カンプトテシン析出時の溶液ができるだけメタノール又はトルエンの単独溶媒に近い状態となっていることが好ましい。メタノール又はトルエンは沸点や溶解する物質の量が異なっているので、これらの容積割合を蒸発等で制御することによって、効果的にカンプトテシンを回収することができる。
【００３４】
カンプトテシンを析出する際に含まれるべきメタノールの量は、粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の種類に依存し、その量に比例すると考えられる。例えば、クサミズキを植物原料とする粗カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の量がx容量％のときには、カンプトテシン析出終了時のメタノールとトルエン溶液中のメタノールの量としては、ｘ容量％から１０ｘ容量％が好ましく、２ｘ容量％から５x容量％であればより好ましく、２．５x容量％から４x容量％であれば更に好ましい。このように、最終濃縮液に含まれるメタノールの割合を制御することによって、カンプトテシンに含まれるカンプトテシン類縁化合物の含有量を低下させることができる。
【００３５】
なお、粗カンプトテシンに含まれる他の不純物としては、糖質がある。糖質はトルエンに比較的溶解しにくいため、粗ＣＰＴに糖質が多量に含まれている場合等は、再結晶における粗カンプトテシン溶解時等において、これらの不純物を吸着する吸着媒を再結晶工程の熱時溶解溶液に添加すればよい。このような吸着媒としては、活性炭が好ましい。
【００３６】
再結晶工程及び／又はろ過工程が繰り返し行われることは、本発明の好ましい別の実施態様である。このように再結晶工程及び／又はろ過工程を繰り返すことで、精製されるカンプトテシンの純度が高まり、より好ましいカンプトテシン結晶を得ることが可能となる。
【００３７】
【実施例】
以下実施例をあげて本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されない。
【００３８】
［実施例１］
（工程１）
１,３００Ｋｇのクサミズキ(NPF)の原木を、５〜７mmφのスクリーンを装着した破砕機で破砕し、得られたNPF破砕物に水を５００Ｌ添加して一夜放置後ステンレス製８，０００Ｌ抽出槽に投入し、水分が２０容量％以下の６，５００Ｌのメタノールを投入し、５０℃に加温しつつ６０分間抽出を行った。 得られたメタノール抽出液をろ過し、1次抽出液を分離した。その後、新たに水分が２０容量％以下のメタノールを４，５００Ｌ投入し、再び同様に操作して２次抽出液を得た。全てのメタノール抽出液を、ステンレス製のメタノール濃縮装置を用いて、−０．０６５ＭＰａの減圧下で加温した。これにより、メタノールを抽出液から留去させ、メタノール抽出液を濃縮した。この濃縮液に１１Ｋｇのセライトを加え、更に２００Ｌのトルエンを投入し、３０分間攪拌したのち、遠心分離してカンプトテシンが吸着したセライトを分離した。
【００３９】
（工程２）
上記工程１で得られたカンプトテシンが吸着したセライトを、１，５００Ｌのメチレンクロライド中に投入し、加熱しながら攪拌した。1時間後、加圧ろ過し、抽出液からセライトを分離した。得られた抽出液を蒸留機で濃縮した後、冷却槽に移して２０℃にまで冷却し、析出した粗カンプトテシンをろ過し、２０Ｌのメチレンクロライドで洗浄した。洗浄した粗カンプトテシンを6時間減圧し、メチレンクロライドを蒸発させ乾燥し、カンプトテシン含量８５％以上の粗カンプトテシンを２．４Ｋｇを得た。
【００４０】
（工程３）
ステンレス製の攪拌溶解槽にメチレンクロライド-メタノール混合液(容量比４：１)を１，２００Ｌ加え、攪拌しつつ、先に得られた２．４Ｋｇの粗カンプトテシンを投入した。この粗カンプトテシン溶解液に、セライトを１Ｋｇ添加し、ろ過し、不溶物を分離した。得られたろ液をグラスライニング製の蒸留器に移し、メチレンクロライド-メタノールを留去して濃縮した後、メタノールを１６０Ｌ投入して濃縮を繰り返し、液が３２０Ｌ（液温５８℃）となるまで濃縮した。この濃縮液を１０℃で１時間冷却して得られた析出物をろ集した。この再結晶工程で得られた精製結晶(一回晶)を、２０Ｌのメタノールで洗浄後、再び１，０００Ｌのメチレンクロライド-メタノール混合液(容量比４：１)に攪拌下投入し、溶解・ろ過した液を濃縮し、メタノール１６０Ｌの投入を繰り返して液温が５８℃になるまで濃縮した。析出物をろ集し、２０Ｌのメタノールを用いて析出物を洗浄し、減圧乾燥して精製結晶(二回晶)を１．２Ｋｇ得た。得られた二回晶の品質はカンプトテシン含量が９８．２重量％以上であった。
【００４１】
［実施例２］
（工程１）
実施例１の工程１と同様の方法で得たカンプトテシン吸着セライトをカンプトテシン抽出機に投入し、これに３５０Ｌのトルエンと１６０Ｌのメタノールを投入し、攪拌しつつ加熱した。抽出液をろ紙を引いたろ過器に投入し、加温しつつ減圧ろ過した。 得られたろ液をカンプトテシン濃縮機へ投入し、加熱して、メタノールを留去し放冷した。カンプトテシン濃縮機内に析出した結晶（粗カンプトテシン）を、減圧ろ過器でろ過により回収し、メタノール３０Ｌを投入して粗カンプトテシンを洗浄した。この様にして得た粗カンプトテシンを減圧乾燥器で乾燥した。同様の作業を繰り返し、粗カンプトテシンを３回製造した。これらの粗カンプトテシンのカンプトテシン含量(重量％)を表３に示す。得られた粗カンプトテシンのカンプトテシン（ＣＰＴ）含有量は、８５重量％以上であり、精製カンプトテシンを得る上で純度の高い中間体が得られた。
【００４２】
【表３】
0004087589.tif 000006
【００４３】
（工程２）
上記工程１で、得られた粗カンプトテシンと、活性炭を容量が６００Ｌのグラスライニング溶解機に投入し、更に５００Ｌのメタノールとトルエンの混合液(容量比３：７)を投入し、加熱して粗カンプトテシンを溶解させた。粗カンプトテシンが溶解した後、ろ過器を減圧にし、溶液を加温しつつ、ろ過した。得られたろ液を容量が６００Ｌのグラスライニング濃縮機に投入し、加熱しつつ攪拌してメタノールを留去した。得られた濃縮液を１２時間放冷し、遠心分離機を用いて、析出した結晶をろ過し、回収した。得られた結晶を、２０Ｌのメタノールで洗浄し減圧乾燥し精製結晶を得た。このようにして得られた精製結晶の分析結果を表４に示す。表４中、％は、重量％を意味する。表４から、精製結晶は、いずれもカンプトテシン（ＣＰＴ）が、９８重量％以上含有されており、品質の高いカンプトテシンが得られたことがわかる。また、得られた精製結晶には、不純物であるカンプトテシン類縁化合物が、いずれも僅かであり、不純物の少ないカンプトテシンが得られたことがわかる。
【００４４】
【表４】
0004087589.tif 000007
【００４５】
［実施例３］
実施例２の工程１で得られた粗カンプトテシン２．０ｇを５００ｍＬのメタノールとトルエンの混合液(容量割合３：７)に投入し加熱して溶解させた後、ろ過した。ろ過液を１００ｍＬまで濃縮し、メタノール４００ｍＬに注入後、放置し析出した結晶をろ過により回収した。得られた結晶を８０℃で乾燥し、１．４ｇのカンプトテシンを得た。この結晶について定量試験を行った結果、カンプトテシンが９８．５重量%、カンプトテシン類縁化合物が１．４重量%含まれていた。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば、若いクサミズキなど、樹脂や葉緑素の多い原料を用いた場合であっても、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることが可能となる。
【００４７】
本発明によれば、メタノールとトルエンの混合溶液を用いてカンプトテシンを抽出した場合は、メチレンクロライドに見られるような環境上の問題もないので、環境保全のための特段の工程を必要とするといった不都合も無く、効果的にカンプトテシンを得ることができる。また、本発明によれば、メタノールとトルエンの混合溶液の容量割合を制御することによってカンプトテシン類縁化合物等のカンプトテシン製造時に含まれる不純物を容易に除去することが可能となる。
【００４８】
トルエンを含んだ溶液を用いてカンプトテシンを抽出することで、カンプトテシンを含む植物原料の葉からも効果的にカンプトテシンを得ることが可能となる。
【００４９】
活性炭等の吸着媒を用いてろ過を施すことで、粗カンプトテシンに含まれる糖質を効果的に除去し、純度の高いカンプトテシンを高収量で得ることができる。