(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、溶離液の塩濃度をベースラインが変動しない程度に一致させ、ｐＨの変化だけでヘモグロビン類の溶出力を制御するヘモグロビン類の測定方法であって、ヘモグロビンＡ０成分を溶出するための溶離液として、カラムに流入する際のｐＨが８．０〜１３．５の溶離液を用いることを特徴とするヘモグロビン類の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
糖化ヘモグロビン、特にヘモグロビンＡ１ｃ（以下、ＨｂＡ１ｃという）は糖尿病診断の指標として広く利用されている。ＨｂＡ１ｃとは血液中の糖が赤血球に入った後に、ヘモグロビンと不可逆的に結合して生成したものであり、過去１〜２カ月間の血液中の平均的な糖濃度を反映する。
【０００３】
このＨｂＡ１ｃの測定方法としては、一般に液体クロマトグラフィー法や免疫法が用いられている。
【０００４】
液体クロマトグラフィー法によるＨｂＡ１ｃの測定は、主にカチオン交換液体クロマトグラフィー法により行われている（特公平８−７１９８号公報など）。溶血液試料をカチオン交換液体クロマトグラフィーにより分離すると、通常、ヘモグロビンＡ１ａ（以下、ＨｂＡ１ａという）及びヘモグロビンＡ１ｂ（以下、ＨｂＡ１ｂという）、ヘモグロビンＦ（以下、ＨｂＦという）、不安定型ＨｂＡ１ｃ、安定型ＨｂＡ１ｃ並びにヘモグロビンＡ０（以下、ＨｂＡ０という）などのピークが出現する。なお、糖尿病の診断の指標として使用されているＨｂＡ１ｃは、最近では、上記のうちの安定型ＨｂＡ１ｃであり、全ヘモグロビンピークの面積に対する安定型ＨｂＡ１ｃピークの面積の比率（％）として求められている。
【０００５】
このような、カチオン交換液体クロマトグラフィーによりＨｂＡ１ｃ測定を行う場合、一般に、ＨｂＡ１ｃを溶出させたあとに、ＨｂＡ０を溶出させるが、測定毎に完全に溶出されないＨｂＡ０成分等のヘモグロビンや他の蛋白質が充填剤に吸着していき、カラム内に残ると、カラム劣化の原因になるという問題があった。また、ＨｂＡ０は全ヘモグロビンの９０％以上を占めるため、そのピーク幅を狭めることが測定時間短縮の問題となっていた。
このため、溶離液の塩濃度とｐＨを変化させることによりＨｂＡ０を溶出させている。しかし、塩濃度によって溶出力を変化させた場合は、塩濃度変化に起因する光の屈折率の変化によってベースラインが変動するため測定値の再現性が悪くなる場合があり、問題となっていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、上記ヘモグロビン類の測定方法の問題を解決するためのものであり、従来より測定値の再現性のよいヘモグロビン類の測定方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載の発明は、カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、溶離液の塩濃度をベースラインが変動しない程度に一致させ、ｐＨの変化だけでヘモグロビン類の溶出力を制御することを特徴とするヘモグロビン類の測定方法である。
【０００８】
請求項１記載の発明は、ヘモグロビンＡ０成分を溶出するための溶離液として、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点よりアルカリ側になるようにｐＨを設定した溶離液を用いることを特徴とするヘモグロビン類の測定方法である。
【０００９】
以下、本発明の詳細を説明する。
本発明で用いられる溶離液としては、例えば、リン酸、ホウ酸、炭酸等の無機酸又は、その塩；カルボン酸、ジカルボン酸、カルボン酸誘導体、ヒドロキシカルボン酸、カコジル酸、ピロリン酸などの有機酸又は、その塩；アミノ酸、アニリン又はアニリン誘導体、アミン、イミダゾール、ピリジン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、グリシルグリシンなどの有機物；からなる緩衝液が挙げられる。その他、２−（Ｎ−モリホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓｔｒｉｓ）、Ｔｒｉｓ等の一般にグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液といわれるものも使用できる。
【００１０】
上記カルボン酸としては、例えば、酢酸、プロピオン酸などが挙げられる。上記ジカルボン酸としては、例えば、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、アジピン酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸などが挙げられる。上記カルボン酸誘導体としては、例えば、β、β−ジメチルグルタル酸、バルビツール酸、アミノ酪酸などが挙げられる。上記ヒドロキシカルボン酸としては、例えば、クエン酸、酒石酸、乳酸などが挙げられる。上記アミノ酸としては、例えば、アスパラギン酸、アスパラギン、グリシンなどが挙げられる。上記アニリン誘導体としては、例えば、ジメチルアニリンが挙げられる。上記アミンとしては、例えば、エチレンジアミン、トリエタノールアミンなどが挙げられる。上記イミダゾールとしては、例えば、イミダゾール、５（４）−メチルイミダゾール、２，５（４）−ジメチルイミダゾールなどが挙げられる。
【００１１】
上記無機酸又は有機酸の塩としては、公知のものでよく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などが挙げられる。
【００１２】
また、無機酸；有機酸；無機酸又は有機酸の塩；有機物は、複数混合して用いても良く、また、有機酸、無機酸及び有機物を混合しても良い。
【００１３】
ＨｂＡ０成分より前の成分（ヘモグロビンＡ１ａ及びｂ、ＨｂＦ、ＨｂＡ１ｃ）を分離するための溶離液のｐＨは、４．０〜６．８が好ましく、４．５〜５．８がより好ましい。溶離液のｐＨが４未満であると、ヘモグロビンが変性する可能性があり、ｐＨが６．８をこえると、ヘモグロビンのプラス荷電が減少し、カチオン交換樹脂に保持されにくくなり、ヘモグロビン類の分離が悪くなる恐れがある。
【００１４】
ＨｂＡ０成分を溶出するための溶離液は、カラム耐久性の向上と測定時間短縮のため、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点（ヘモグロビンの等電点については、理化学事典（第４版、１９８７年９月、岩波書店、久保亮五ら編集）、１１７８頁に記載あるように、ｐＨ６．８〜７．０である）よりアルカリ側になるようにｐＨを設定した緩衝液を用いるのが好ましい。その溶離液のｐＨは８．０以上である。溶離液のｐＨが６．８以下になるとＨｂＡ０成分の溶出が不十分となり易く、ｐＨが１０より高いと充填剤の分解が考えられる。
また、充填剤の分解が測定に影響ない場合は、溶離液のｐＨを１０以上にするのが好ましい。より好ましくは、１０〜１３．５が好ましい。但し、溶離液のｐＨを１０以上にした時、充填剤の分解が測定に影響する場合であっても、溶離液を流す時間を短くすることにより、充填剤の分解を最小限に抑えることができる。
【００１５】
ＨｂＡ０の溶出に好適に用いられる、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点（ｐＨ６．８〜７．０）よりアルカリ側になるようにｐＨを設定した溶離液としては、例えば、リン酸、ホウ酸、炭酸などの無機酸又は、その塩；クエン酸などのヒドロキシカルボン酸、β、β−ジメチルグルタル酸などのカルボン酸誘導体、マレイン酸などのジカルボン酸、カコジル酸、などの有機酸又は、その塩からなる緩衝液が挙げられる。その他、２−（Ｎ−モリホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ビス（２−ヒドロキシエチル）イミノトリス−（ヒドロキシメチル）メタン（Ｂｉｓｔｒｉｓ）、Ｔｒｉｓ等の一般にグッド（Ｇｏｏｄ）の緩衝液といわれるものも使用できる。また、イミダゾール等のイミダゾール類；ジエタノールアミン、トリエタノールアミンなどのアミン類；グリシンなどのアミノ酸類；などの有機物も使用できる。また、無機酸；有機酸；無機酸又は有機酸の塩；有機物は、複数混合して用いても良く、また、有機酸、無機酸及び有機物を混合しても良い。
【００１６】
上記緩衝液の濃度は、水溶液状態で緩衝作用があれば良く、１〜１０００ｍＭが好ましく、１０〜５００ｍＭがより好ましい。
【００１７】
上記溶離液には、以下の物質を添加してもよい。
（１）無機塩類（塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、リン酸ナトリウムなど）を添加してもよい。これらの塩類の濃度は、特に限定されないが、好ましくは１〜１５００ｍＭである。
（２）カオトロピックイオンを添加してもよい。
カオトロピックイオンとは、水溶液に溶けると解離して生じたイオンにより、水の構造が破壊され、疎水性物質と水が接触したときに起こる、水のエントロピー減少を抑制するもので、具体的には、陰イオンとして、トリブロモ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、チオシアン酸イオン、ヨウ化物イオン、過塩素酸イオン、ジクロロ酢酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン、塩化物イオン、酢酸イオン等が挙げられる。また、陽イオンとしては、バリウムイオン、カルシウムイオン、リチウムイオン、セシウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、グアニジンイオン等が挙げられる。
ヘモグロビン類の分離能を良くするためには、陰イオンとして、トリブロモ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、チオシアン酸イオン、ヨウ化物イオン、過塩素酸イオン、ジクロロ酢酸イオン、硝酸イオン、臭化物イオン等を、陽イオンとして、バリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、リチウムイオン、セシウムイオン、グアニジンイオン等を用いるのが好ましい。さらに、より好ましくは、トリブロモ酢酸イオン、トリクロロ酢酸イオン、チオシアン酸イオン、ヨウ化物イオン、過塩素酸イオン、ジクロロ酢酸イオン、硝酸イオン、グアニジンイオン等を用いる。
カオトロピックイオンは、測定サンプルと接触する液、例えば、溶血液（溶血試薬）、サンプル希釈液などにも添加してもよい。
【００１８】
（３）ｐＨ調節剤として、公知の酸、塩基を加えてもよい。酸としては、例えば、塩酸、リン酸、硝酸、硫酸等が、塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化バリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化ストロンチウム、水酸化セシウム、水酸化ニッケル、水酸化アルミニウム、水酸化カドミウム等が挙げられる。これらの酸、塩基の濃度は、特に限定されないが、好ましくは、０．００１〜５００ｍＭである。
（４）メタノール、エタノール、アセトニトリル、アセトンなどの水溶性有機溶媒と混合してもよい。これらの有機溶媒の濃度は、特に限定されないが、好ましくは０〜８０％（ｖ／ｖ）であり、無機酸、有機酸、これらの塩、無機塩類、カオトロピックイオン、ｐＨ調節剤などが析出しない程度で用いるのが好ましい。
【００１９】
（５）アジ化ナトリウムなど防腐剤を添加してもよい。
（６）ヘモグロビンの安定剤として、公知の安定剤、例えば、ＥＤＴＡ等のキレート剤、グルタチオン、アジ化ナトリウムなどの還元剤・酸化防止剤などを添加してもよい。
（７）また、ＨｂＡ０の溶出液には、アンチカオトロピックイオン、例えば、硫酸イオン、フッ素イオンを添加しても良い。
【００２０】
本発明における溶離法としては、グラディエント溶出法、ステップアップグラディエント溶出法のどちらを用いてもよい。
【００２１】
本発明の測定方法において、溶離液は少なくとも２液以上が用いられるが、それらの溶離液の塩濃度をベースラインが変動しない程度に一致させることが必要である。
そして、それぞれの溶離液のｐＨを変化させることによりヘモグロビン類の溶出力を制御する。上記のベースラインが変動しない程度とは、ベースライン変動が測定値に影響を与えない程度ということを意味する。ベースライン変動が測定値に影響を与えない溶離液の塩濃度差は、例えば、リン酸などの無機酸では、１００ｍＭ、より好ましくは５０ｍＭ、特に好ましくは１０ｍＭである。コハク酸、マレイン酸などの有機酸では、５０ｍＭ、より好ましくは２０ｍＭ、特に好ましくは５ｍＭである。また、チオシアン酸ナトリウム、過塩素酸ナトリウムなどのカオトロピックイオンを生成する化学物質では、４００ｍＭ、より好ましくは３００ｍＭ、特に好ましくは２００ｍＭである。
【００２２】
上記カチオン交換液体クロマトグラフィーにおいて、充填剤は、少なくとも１種以上のカチオン交換基を有している粒子よりなるものであり、例えば、高分子粒子にカチオン交換基を導入することで得られる。
【００２３】
該カチオン交換基は、公知のものでよく特に制限はない。例えば、カルボキシル基、スルホン酸基、リン酸基などのカチオン交換基等が挙げられる。また、このカチオン交換基は、複数種導入しても良い。
【００２４】
上記粒子の直径は、好ましくは０．５〜２０μｍ、より好ましくは１〜１０μｍである。
また、粒度分布は、変動係数値（ＣＶ値）（粒径の標準偏差÷平均直径×１００）として、好ましくは２０％以下、より好ましくは１５％以下である。
【００２５】
上記高分子粒子としては、例えば、シリカ、ジルコニアなどの無機系粒子；セルロース、ポリアミノ酸、キトサンなどの天然高分子粒子；ポリスチレン、ポリアクリル酸エステルなどの合成高分子粒子などが挙げられる。
上記高分子粒子は、導入されるイオン交換基以外の構成成分は、より親水性であることが好ましい。また耐圧性・耐膨潤性の点から架橋度の高いものが好ましい。
【００２６】
上記高分子粒子へのカチオン交換基の導入は、公知の方法により行うことができるが、例えば、高分子粒子を調製後、粒子が有する官能基（水酸基、アミノ基、カルボキシル基、エポキシ基など）に、化学反応でカチオン交換基を粒子に導入させる方法により行うことができる。
また、カチオン交換基を有する単量体を重合して高分子粒子を調製する方法によってもカチオン交換充填剤を調製できる。例えば、カチオン交換基含有単量体と架橋性単量体等とを混合し、重合開始剤の存在下に重合する方法などが挙げられる。
また、（メタ）アクリル酸メチル、（メタ）アクリル酸エチルなどの重合性カチオン交換基含有エステルを架橋性単量体などと混合し、重合開始剤存在下で重合した後、得られた粒子を加水分解処理し、エステルをカチオン交換基に変換させてもよい。
更に、特公平８−７１９７号公報に記載のように、架橋重合体粒子を調製した後、カチオン交換基を有する単量体を添加して、重合体粒子の表面付近に、該単量体を重合させても良い。
【００２７】
上記充填剤はカラムに充填されて本発明の液体クロマトグラフィー測定に用いられる。上記カラムは公知のステンレス製、ガラス製、樹脂製など、特に限定されない。カラムサイズとしては、内径０．１〜５０ｍｍ、長さ１〜３００ｍｍのものが好ましく、内径０．２〜３０ｍｍ、長さ５〜２００ｍｍのものがより好ましい。充填剤のカラムへの充填方法は、公知の任意の方法が使用できるがスラリー充填法がより好ましい。具体的には、例えば、充填剤粒子を溶離液などの緩衝液に分散させたスラリーを送液ポンプなどによりカラムに圧入することにより行う。
【００２８】
本発明の測定に使用される液体クロマトグラフは、公知のものでよく、例えば、送液ポンプ、試料注入装置（サンプラ）、カラム、検出器などから構成される。また、他の付属装置（カラム恒温槽や溶離液の脱気装置など）が適宜付属されてもよい。
【００２９】
上記測定方法における、他の測定条件としては、公知の条件でよく、溶離液の流速は、好ましくは０．０５〜５ｍｌ／分、より好ましくは０．２〜３ｍｌ／分である。ヘモグロビン類の検出は、４１５ｎｍの可視光が好ましいが、特にこれのみに限定されるわけではない。測定試料は、通常、界面活性剤など溶血活性を有する物質を含む溶液により溶血された溶血液（溶血試薬）を希釈したものを用いる。液体クロマトグラフへの試料注入量は、希釈倍率により異なるが、好ましくは０．１〜１００μｌ程度である。
【００３０】
【作用】
請求項１記載の本発明では、カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、それぞれの溶離液の塩濃度をベースラインが変動しない程度（ベースライン変動が測定値に影響を与えない程度）に一致させ、ｐＨの変化だけでヘモグロビン類の溶出力を制御するので、溶離液の塩濃度変化に起因する光の屈折率の変動はなく、ベースラインが安定するため測定値の再現性が優れる。
また、請求項１記載の本発明では、ヘモグロビンＡ０の溶出に、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点よりアルカリ側になるようにｐＨを設定した溶離液を用いるので、充填剤官能基とヘモグロビンの電荷の反発力でヘモグロビンＡ０が溶出する。そのため、カラム劣化を抑え、カラム耐久性を向上できる。また、ヘモグロビンＡ０ピーク幅も狭くなり測定時間の短縮にも寄与できる。
【００３１】
【発明の実施の形態】
次に、実施例、比較例を挙げて本発明を詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例にのみ限定されるものではない。
【００３２】
（実施例１）
〔充填剤の調製〕
テトラエチレングリコールジメタクリレート（新中村化学社製）４００ｇ及び２−アクリルアミド−２−メチルプロパンスルホン酸１５０ｇの混合物に過酸化ベンゾイル（和光純薬社製）１．５ｇを溶解した。これを４重量％ポリビニルアルコール（日本合成化学社製）水溶液２５００ｍｌに分散させ、撹拌しながら窒素雰囲気下で７５℃に昇温し、８時間重合した。重合後、洗浄し乾燥した後、分級して平均粒径６μｍの粒子を得た。
【００３３】
〔カラムの充填〕
得られた粒子をカラムに以下のようにして充填した。粒子０．７ｇを、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ５．８）３０ｍｌに分散し、５分間超音波処理した後、よく撹拌した。全量をステンレス製の空カラム（４．６φ×３０ｍｍ）を接続したパッカー（梅谷精機社製）に注入した。パッカーに送液ポンプ（サヌキ工業社製）を接続し、圧力３００ｋｇ／ｃｍ2 で定圧充填した。
【００３４】
〔ヘモグロビン類の測定〕
得られたカラムを用いて、以下の測定条件でヘモグロビン類の測定を行った。
（測定条件）
0004109395.tif 000002
【００３５】
（測定試料）
健常人血を採血し、抗血液凝固剤としてフッ化ナトリウムを１０ｍｇ／ｍｌとなるよう添加した。これに、１５０倍量の溶血試薬（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコールモノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ−１００、東京化成社製）のリン酸緩衝液溶液（ｐＨ７．０））を添加して溶血し、測定試料とした。
【００３６】
（測定結果）
上記測定条件により、試料を測定して得られたクロマトグラムを図１に示す。ピーク１はＨｂＡ１ａ及びｂ、ピーク２はＨｂＦ、ピーク３は不安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク４は安定型ＨｂＡ１ｃ、ピーク５はＨｂＡ０を示す。
また、実施例１のクロマトグラムのベースラインを図２に示した。
また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）（標準偏差÷平均値×１００）を表１に示した。
【００３７】
（実施例２）
実施例１における溶離液を以下の通りとしたことの他は、実施例１と同様に操作してヘモグロビン類の測定を行った。得られたクロマトグラムのベースラインは図２と同様であった。また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）を表１に示した。
0004109395.tif 000003
【００３８】
（実施例３）
実施例１における溶離液を以下の通りとしたことの他は、実施例１と同様に操作してヘモグロビン類の測定を行った。得られたクロマトグラムのベースラインは図２と同様であった。また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）を表１に示した。
0004109395.tif 000004
【００３９】
（実施例４）
実施例１における溶離液を以下の通りとしたことの他は、実施例１と同様に操作してヘモグロビン類の測定を行った。得られたクロマトグラムのベースラインは図２と同様であった。また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）を表１に示した。
0004109395.tif 000005
【００４０】
（実施例５）
実施例１における溶離液を以下の通りとしたことの他は、実施例１と同様に操作してヘモグロビン類の測定を行った。得られたクロマトグラムのベースラインは図２と同様であった。また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）を表１に示した。
0004109395.tif 000006
【００４１】
（実施例６）
実施例１における溶離液を以下の通りとしたことの他は、実施例１と同様に操作してヘモグロビン類の測定を行った。得られたクロマトグラムのベースラインは図２と同様であった。また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）を表１に示した。
0004109395.tif 000007
【００４２】
（比較例１）
実施例１における溶離液を以下の通りとしたことの他は、実施例１と同様に操作してヘモグロビン類の測定を行った。得られたクロマトグラムを図３に示す。また、得られたクロマトグラムのベースラインを図４に示した。また、同一測定試料を１０回繰り返し測定した時の安定型ＨｂＡ１ｃの測定値、その平均値、標準偏差、変動係数値（ＣＶ値）を表１に示した。
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【００４３】
【表１】
0004109395.tif 000009
【００４４】
実施例１〜６、比較例１において得られたクロマトグラムは、ほぼ同等であったが、ＨｂＡ０溶出時間は実施例１〜６に比較して比較例１の方では長くなった。
実施例１〜６のベースラインは安定しているが、比較例１のベースラインは溶離液の切り換えによる屈折率の変動により不安定である。
実施例１〜６の方が、比較例１よりも再現性がよい。
【００４５】
【発明の効果】
請求項１記載の本発明では、カチオン交換液体クロマトグラフィーによるヘモグロビン類の測定方法において、それぞれの溶離液の塩濃度をベースラインが変動しない程度（ベースライン変動が測定値に影響を与えない程度）に一致させ、ｐＨの変化だけでヘモグロビン類の溶出力を制御するので、ヘモグロビン類測定値の再現性が優れる。
また、請求項１記載の本発明では、ヘモグロビンＡ０の溶出に、カラムに流入する際のｐＨがヘモグロビンの等電点よりアルカリ側になるようにｐＨを設定した溶離液を用いるので、カラム耐久性が向上し、さらにヘモグロビン類の短時間測定が可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１の測定条件により、ヘモグロビン類の測定を行った際に得られたクロマトグラムを示す図。
【図２】実施例１の測定条件によるベースラインを示す図。
【図３】比較例１の測定条件により、ヘモグロビン類の測定を行った際に得られたクロマトグラムを示す図。
【図４】比較例１の測定条件によるベースラインを示す図。
【符号の説明】
１  ＨｂＡ１ａ及びｂのピーク
２  ＨｂＦのピーク
３  不安定型ＨｂＡ１ｃのピーク
４  安定型ＨｂＡ１ｃのピーク
５  ＨｂＡ０のピーク
【図１】
0004109395.tif 000010
【図２】
0004109395.tif 000011
【図３】
0004109395.tif 000012
【図４】
0004109395.tif 000013