(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１又は２に示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含有する、心筋梗塞予防治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒト成人Ｔ細胞白血病由来因子（以下「ヒトＡＤＦ」という）活性を有するポリペプチドを有効成分として含有する心筋梗塞予防治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、我国においては、人口の高齢化や食生活の変化等により、心筋梗塞が急増していることから、これらの原因の究明と、心筋梗塞の予防及び治療が重大な問題となっている。
心筋梗塞は、心臓の拍動を司る心筋への血流を構成する冠状動脈が、何らかの原因により血行障害を起こし、心筋が壊死等に陥ることにより発症するとされる。このような血行障害は、血栓が冠状動脈内に発生して急速に血流が遮断される場合、冠状動脈狭窄により緩やかに血流が遮断される場合等に惹起される。
【０００３】
心筋梗塞の原因については種々の研究が行れている。現在では、冠状動脈に粥状硬化が起こり、内腔が狭くなったところに血栓形成が生じること、冠状動脈の狭窄が徐々にしかも高度に進行して心筋の虚血が発生して心筋壊死に至ること、等により発症することが判っている。
このような粥状硬化の原因については、遺伝的体質、高血圧、高コレステロール血症、糖尿病、喫煙、ストレス、運動不足等が考えられている。また、女子よりも男子の発症比率が高いことから、女性ホルモンが何らかの防御作用を有していることが示唆されている。
【０００４】
しかしながら心筋梗塞の原因療法については、上のような現状から根本的な治療方法が確立されているわけではない。現在では、より対症的な方法により種々の薬物の投与が行われている。例えば、血栓溶解剤として、ｔ−ＰＡ、ｐｒｏ−ＵＫ等が使用されているが、これらは再潅流時に不整脈や出血等の副作用が起こり適応及び使用に充分な配慮が必要となる。
そこで、再潅流時に良好な血流を確保し、副作用が生じない薬物の開発が求められていた。
【０００５】
ところで、ヒトＡＤＦは、最初、インターロイキン２レセプターの発現を誘導する物質として発見され、ヒト成人型Ｔ白血病患者より樹立したＴ白血病細胞株の培養液上清中に存在することが見いだされたものである（特公平５−５５５１９号公報）。このヒトＡＤＦは、その後の種々の研究により、ポリペプチドであることが判明し、そのアミノ酸配列も明細書末尾に明記する配列表のように決定された。
【０００６】
現在では、このヒトＡＤＦとともにヒトＡＤＦと同様の活性を有する他のポリペプチドも、「ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチド」として知られており、本明細書においては、これらヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドも、ヒトＡＤＦと同等に取り扱うこととする。
【０００７】
ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドについては、その薬理作用について種々の研究が行われている。特開平３−２０４８１８号公報には、放射線防護剤を初め、抗炎症剤、リウマチ治療剤、自己免疫疾患治療剤、虚血性臓器障害治療剤、薬物中毒治療剤、動脈硬化治療剤等が開示されている。しかしながら、これらの作用機作は、放射線による生体障害に起因するフリーラジカルが生体構成物質を攻撃して損傷を与えることを前提としているので、放射線照射とは無関係な疾患への適用が明らかにされているわけではない。
【０００８】
特開平５−１３９９９２号公報には、ヒトＡＤＦを、臓器移植時等における移植臓器の損傷軽減、虚血再潅流臓器障害を伴う心臓、脳、消化器等を活性酸素から保護する臓器保護等に使用する技術が開示されている。しかしながら、これらの作用機作は、活性酸素から保護することを目的とするものに限定されていた。
【０００９】
特開平６−９４３３号公報には、ヒトＡＤＦを有するポリペプチドを、膵炎の予防治療に用いる技術が開示されている。しかしながら、この場合の作用機作もフリーラジカル生成酵素であるキサンチンオキシダーゼ等の不活性化を目的とするものであった。
【００１０】
心筋梗塞の原因については、上述したように種々の可能性が示唆されてはいるが、平行して研究されている疫学的検討によっても、その本質的病因は、いまだ解明されておらず、むしろ、精神的ストレス、運動不足、高コレステロール食等が複雑に絡み合ってその病因となっている可能性が高い。
【００１１】
ところで、急性心筋梗塞にあっては、発作が起こった後の数十分以内の措置により予後が全く異なることが知られ、初期治療の重要性が明白となっている。急性心筋梗塞においては、種々の要因により一旦冠動脈が閉塞することから、その閉塞後の再潅流時において良好な血流と正常状態の復帰が早期に行れることが、急性心筋梗塞の治療には欠かせない事項となっている。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
上記現状に鑑み、本発明は、急性及び慢性の心筋梗塞を効果的に予防し、発作時の応急措置として高い信頼性を有する治療効果をも有する心筋梗塞予防治療剤を提供することを目的とするものである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明の要旨は、心筋梗塞予防治療剤を、ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを有効成分として含有するものとするところに存する。
以下に本発明を詳述する。
【００１４】
本発明で使用されるヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドとしては、ヒトＡＤＦ活性を有するものであれば特に限定されず、例えば、Ｎ末端にメチオニン残基が付加されたポリペプチド；化学修飾、塩基置換法等によりアミノ酸配列に置換が加えられたポリペプチド；アミノ酸配列の一部に欠損があるポリペプチド；アミノ酸残基の挿入が加えられたポリペプチド；側鎖に糖鎖等が付加されたポリペプチド等を挙げることができる。
【００１５】
好ましくは、下記配列表の配列番号１に示すＮ末端バリンから始まる１０４個のアミノ酸からなるポリペプチド、下記配列表の配列番号２に示すメチオニンがＮ末端に付加された１０５個のアミノ酸からなるポリペプチド等を挙げることができる。
【００１６】
上記ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドの製造方法としては特に限定されず、例えば、▲１▼ＡＴＬ−２細胞等のヒト由来細胞株を培養し、上記培養で得られる培養液又は細胞抽出液から塩析、ゲル濾過クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、逆相クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー等、一般的に用いられる手法により精製して得る方法、▲２▼遺伝子組換え法により、ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドのｃＤＮＡ又はゲノム遺伝子を大腸菌、枯草菌、酵母、高等動物細胞、植物細胞等の宿主細胞に導入し、宿主細胞内で組換えヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを発現させ、その後▲１▼の手法等を用いて精製する方法、▲３▼ペプチド化学合成法により合成する方法等を挙げることができる。
【００１７】
上記遺伝子組換え法で使用されるヒトＡＤＦ遺伝子としては、例えば、上記ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドをコードするものであれば特に限定されず、例えば、塩基置換、塩基挿入、塩基欠損等を有するものであってもよい。好ましくは、下記配列表の配列番号１に示すＮ末端バリンから始まる１０４個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードするもの、下記配列表の配列番号２に示すメチオニンがＮ末端に付加された１０５個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードするもの等である。
【００１８】
本発明の心筋梗塞予防治療剤は、上記ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを有効成分として含有するものである。
上記ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドの剤型としては特に限定されず、例えば、静注用剤型であってもよく、非注射用剤型であってもよい。好ましくは、静注用剤型であり、より好ましくは、等張性水溶液、懸濁液等である。上記ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドは、蒸留水又は緩衝液に溶解した後、使用されてもよく、凍結乾燥処理された後、使用されてもよい。
【００１９】
本発明の心筋梗塞予防治療剤を医薬として投与する場合、活性成分をそのまま又は活性成分を医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば、０．１〜９９．９％、好ましくは、１．０〜９９．０％含有する医薬組成物とし、それを単位投与剤型に製して投与される。上記医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体としては特に限定されず、例えば、マンニトール、シクロデキストリン等を挙げることができる。
【００２０】
本発明の心筋梗塞予防治療剤は、殺菌された後、例えば、防腐剤、安定剤、膨潤剤等の補助剤；乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調整する塩；緩衝剤；上記ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチド以外の別の効能を有する薬剤等が、例えば、混合、溶解、凍結乾燥等により含有されたものであってもよい。
【００２１】
本発明の心筋梗塞予防治療剤の投与量は、患者の年齢、体重、投与経路、病気の種類や程度等を考慮した上で設定することが望ましく、成人に対して通常０．１μｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは１．０μｇ／ｋｇ／日〜１．０ｍｇ／ｋｇ／日が使用される。
【００２２】
本発明で使用されるヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドは、ヒト由来の蛋白質であるので、人体に投与しても異物とは認識されず、毒性は、非常に低い。
【００２３】
【実施例】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。
【００２４】
試験例
雄性家兎をケタラール及びセラクタールで麻酔した後、開胸し、冠状動脈の左回施枝に縫合糸をかけて皮下に留置した。３日後、縫合糸をゾンデを通して引き、血流を遮断して虚血した後、２０分後に糸を緩めて再潅流を行った。
ヒトＡＤＦを、上記の虚血１５分後に１５ｍｇ／ｋｇ静注し、再潅流直後に、同量を静注した。
上記試験中、虚血前、虚血中、再潅流直後、麻酔下にて心電図をとり、ＳＴ上昇の程度を評価した。また、虚血前、再潅流の３０分、４５分、６０分及び７５分後にそれぞれ採血し、ＣＰＫ（クリアチン・ホスフォ・キナーゼ）量を測定して虚血前値からの上昇を比較した。対照として、ヒトＡＤＦを投与しない群を、同時に測定した。心電図上ＳＴの結果を図１に、ＣＰＫの変化量の結果を図１及び図２に示した。
【００２５】
血中のＣＰＫの量は、血管障害の存在により上昇することが判っているので、血中ＣＰＫ量の測定により、血管障害の有無を測定することが有効である。
【００２６】
心電図上ＳＴは、再潅流により更に上昇したが、ヒトＡＤＦを投与することにより、低下することが判った。また、血中ＣＰＫは、再潅流の４５分後において、５％の危険率で有意差が認められ、再潅流により上昇した血中ＣＰＫが、ヒトＡＤＦ投与により有意に低下することが判った。
ヒトＡＤＦが、心筋細胞の障害を軽減することが明らかである。
【００２７】
【発明の効果】
本願発明のヒトＡＤＦは、心筋の虚血再潅流時において有効な薬理作用を有することが明白であり、心筋梗塞予防治療剤として有用である。
【００２８】
【配列表】
【００２９】
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【００３０】
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【図面の簡単な説明】
【図１】実施例における心電図上ＳＴの測定結果を示す図。縦軸は、ＳＴ上昇値（ｍＶ）を表す。横軸中、左は、虚血中の測定を表し、右は、再潅流直後の測定を表す。
【図２】実施例における血中ＣＰＫの測定結果を示す図。縦軸は、ＣＰＫ量（ＩＵ／Ｌ）を表す。横軸は、再潅流後の時間（分）を表す。図中、△は、ヒトＡＤＦ活性を有するポリペプチドを投与した群を表し、○は、対照群を表す。
【図１】
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【図２】
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