(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）（ａ）フィチン酸塩含有食料１００重量部と、（ｂ）水と２０〜１００℃の沸点を有する水非混和性有機溶剤２０〜８５重量％とから成る溶剤混合物６０〜１，０００重量部と、（ｃ）フィターゼとから成るスラリーを、機械的に混合する工程と；（ｉｉ）前記食料を乾燥して、前記有機溶剤を除去する工程とから成ることを特徴とする、食料中のフィチン酸塩を無機リン酸塩に変換する方法。
【請求項２】
前記水非混和性有機溶剤が、溶剤混合物に対し４０〜７５重量％の割合で含有される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記スラリーが、更に、アルカリ土類金属カチオンのキレート化剤を含む請求項１又は請求項２に記載の方法。
【請求項４】
スラリーに添加される前記フィチン酸塩含有食料が、粉砕脂肪種子を水非混和性有機溶剤と混合して前記脂肪種子から油分を抽出し、溶剤により不純化された粉砕脂肪種子を油分含有溶剤から分離することにより得られる請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
粉砕脂肪種子１０〜８０重量％を、有機溶剤９０〜２０重量％と混合する請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記溶剤不純化粉砕脂肪種子が、溶剤１５〜６５重量％と、粉砕脂肪種子８５〜３５重量％とから成る請求項４又は請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記スラリーが、共存溶剤を除いた重量で前記溶剤不純化粉砕脂肪種子１００重量部と、粉砕脂肪種子１ｋｇ当たり１０〜１０，０００酵素単位のフィターゼと、水３０〜３５０重量部と、必要に応じて、有機溶剤合計量が３０〜８５０重量部の範囲となるように添加される更なる有機溶剤とを混合することにより形成される請求項４〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記スラリーが、更に、アルカリ土類金属カチオンのキレート化剤０．０５〜１０重量部を含む請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記キレート化剤が、アスコルビン酸、フタル酸、クエン酸またはＥＤＴＡである請求項３又は請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記脂肪種子が、大豆、ヒマワリ種子、アブラナ種子、キャノーラ種子、米、米ぬか、トウモロコシ、綿実、落花生、ベニバナ種子、ココナッツ、ヤシナッツ、クルミ又はヘイゼルナッツである請求項４〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記混合工程（ｉ）が、混合機中で、１０〜７０℃の温度および２．０〜８．０のｐＨ値において、５分〜２時間行われる請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記有機溶剤が、ペンタン、ヘキサン又はヘプタンである請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記スラリーが、更に、穀類、穀物粉、脂肪類、ビタミン及びアミノ酸類の１種以上、又は１種以上の酵素を含む請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記１種以上の酵素が、プロテアーゼ、カルボキシペプチダーゼ、セルラーゼ、キシナーゼ、マンナナーゼ、アミラーゼ、α−ガラクトシダーゼ、ペクチナーゼ、β−グルカナーゼ及びエステラーゼから成る群より選択される請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれかに記載の方法により、食料中のフィチン酸塩を、無機リン酸塩に変換する工程と；得られた無機リン酸塩リッチ化食料を、１種以上の更なる栄養物と混合する工程；とから成ることを特徴とする、動物飼料または食品を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、フィチン酸塩を無機リン酸塩へ変換する方法に関し、より詳しくは、脂肪種子から油分を抽出する従来工程に付随して使用可能な方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
フィチン酸塩［ミオイノシトール１，２，３，４，５，６−ヘキサキス（リン酸二水素塩）］は、程度の差こそあれ、リンの主たる貯蔵形態として全ての植物中に存在することが知られている。植物中の全リン量の６０〜８０％は、フィチン酸塩の形態である。植物中のフィチン酸塩は、度々、カルシウム、マグネシウム又はカリウム等のカチオンとの錯体の形で存在する。前記錯体は、フィチンと称される場合がある。本明細書においては、用語「フィチン酸塩」は、かかるフィチン錯体を包含する。
【０００３】
フィチン酸塩は、単胃腔動物による消化が難く、この結果、フィチン酸塩リッチ飼料を与えられた単胃腔動物は、なおリン欠乏に起因する疾病を患う可能性がある。この理由は、フィチン酸塩中のリン元素が、生物学的利用能に劣り、単胃腔動物により消費される飼料フィチン酸塩の大半が、その胃腸管を通過して糞便中に排出されるためである。この様な糞便の排出は、過剰量の燐リッチ堆肥が環境的弊害を生じる集中家畜生産地域では、特に関心が高い。
【０００４】
食料中のフィチン酸塩の存在に伴う更なる問題は、当該フィチン酸塩が、多価金属カチオンと錯体を形成するということである。この錯体形成は、かかるカチオンの動物およびヒトへの生物学的利用能を妨げる。このため、特に菜食主義者、老人および幼児の場合、金属欠乏障害または不適切な骨鉱質化を起こす可能性がある。
【０００５】
フィチン酸塩は、また、ペプシン及びトリプシン等の胃腸管内の種々の酵素の作用を妨げるという欠点を有する。更に、フィチン酸塩は、タンパクと錯体を形成して、これらタンパクの消化を妨げる。このため、飼料中にフィチン酸塩が存在すると、共存するタンパクの消化性が低下して実際には栄養欠乏を起こす。
【０００６】
上記問題を解決するため、従来、フィチン酸塩を無機リン酸塩に変換する方法が提案されている。無機リン酸塩中のリン元素は、単胃腔動物に対する生物学的利用能を有する。この変換によって、糞便中のリン含有量が減少し、これまでフィチン酸塩と錯体を形成していたカチオンを遊離させ、タンパク消化を促進させ、フィチン酸塩による胃腸管酵素作用の妨害を防止する。上記変換は、生体外または生体内のいずれかで、フィチン酸塩を、フィターゼと称されるホスファターゼ酵素で処理することにより行われることが知られている。この変換の反応生成物は、ミオイノシトール及びオルトリン酸塩であり、後者は、本明細書中では、無機リン酸塩と称する。
【０００７】
生体内変換は、フィターゼを、フィチン酸塩含有食料に添加することにより行われる。この結果、フィチン酸塩とフィターゼの両方が、胃腸管内に共存し、少なくとも理論的には、フィターゼが、フィチン酸塩を無機リン酸塩に変換することができる。しかしながら、この方法は、単に部分的にしか効果がないことが判明しており、フィチン酸塩中のリン元素の高々５５％以下、通常は極く僅量が、無機リン酸塩に変換されるだけである。このような不完全変換の理由は、主に、胃腸管内の条件が、フィターゼ活性の最適条件とは極めて異なるためである。即ち、被消化物の温度、ｐＨ、湿気および鉱物含量は、胃腸管通過中に、フィターゼを胃腸管内で単に部分的にのみ有効とする程度のものでしかない。
【０００８】
第２の解決策は、フィターゼによりフィチン酸塩含有食料を生体外加水分解する方法であり、上記した生体内変換よりも効果的であることが判明している。この理由は、生体外反応条件が、フィターゼが最適活性を示すように調整可能であるためである。ヨーロッパ公開特許第０，３８０，３４３号には、かかる工程の一例が記載され、大豆タンパク単離体中に存在するフィチン酸塩が、無機リン酸塩に変化されている。この変換は、細菌性フィターゼを使用して、ｐＨ値２〜６、温度２０〜６０℃の条件下に水溶液中で行われる。
【０００９】
しかしながら、上記生体外変換処理は依然不十分であることが判明している。第１に、これら処理では、得られるスラリーを乾燥させて、多量の含有水を除去する必要がある。この乾燥は、比較的簡単な工程であるにもかかわらず、従来使用される水が多量であるため比較的コスト高となる。かかる多量の水は、先ず、フィターゼの触媒活性に要求される水性環境を形成するのに必要であり、第２に、比較的粘性の高い塊状物を形成しやすいスラリーの混合を容易にするのに必要である。この乾燥に関する問題のため、上記生体外工程も、商業的には使用が限られたものとなる。第２の問題は、生体外工程におけるフィチン酸塩の無機リン酸塩への変換が、（比較的高価な）フィターゼを極めて高濃度で使用しない限り、依然不十分なことである。
【００１０】
【発明の開示】
本発明者らは、この問題が、フィチン酸塩が二つの形態、即ちフィターゼ感受性形態およびミネラル結合型の抗フィターゼ形態で存在することに起因していることを見いだした。また、上記抗フィターゼ形態は、Ｍｇ2+及びＣａ2+等のアルカリ土類金属との錯体形状のフィチン酸塩であることが判明した。
【００１１】
従って、本発明の第１の目的は、食料中のフィチン酸塩を無機リン酸塩に生体外変換する商業的に有用な方法を提供することにある。
【００１２】
本発明の第２の目的は、フィチン酸塩の５０％以上を無機リン酸塩に変換しえる商業的に有用な方法を提供することにある。
【００１３】
本発明の第３の目的は、上記の方法を、脂肪種子から油分を抽出する従来法に付随的に適用して、副生物として、動物飼料および一般食品への添加に適した無機リン酸塩リッチ化食物を提供することにある。
【００１４】
本発明の第１の要旨は、（ｉ）（ａ）フィチン酸塩含有食料１００重量部と、（ｂ）水と２０〜１００℃の沸点を有する水非混和性有機溶剤２０〜８５重量％とから成る溶剤混合物６０〜１，０００重量部と、（ｃ）フィターゼとから成るスラリーを機械的に混合する工程と；（ｉｉ）前記食料を乾燥して、前記有機溶剤を除去する工程とから成る、食料中のフィチン酸塩を無機リン酸塩に変換する方法に存する。
【００１５】
上記方法において、スラリーは好ましくは溶剤混合物を１５０〜７５０重量部、より好ましくは２５０〜６００重量部、最も好ましくは３２５〜４７５重量部の割合で含有する。
【００１６】
【発明の実施形態】
上記方法は、従来の生体外処理法に比して低コストかつ高収率で、食料中に存在するフィチン酸塩を、無機リン酸塩に変換することができる。フィターゼがフィチン酸塩の無機リン酸塩への変換に対し効果的に触媒作用を発揮するためには、フィターゼを充分な量の溶剤と共存させることが必要である。従来技術では、使用溶剤は、専ら水に限ると考えられていたが、本発明者らは、驚くべきことに、フィチン酸塩の無機リン酸塩への変換を触媒するフターゼ活性に悪影響を及ぼすことなく、水の相当量を、水非混和性有機溶剤で置き換えることができることを見いだした。かかる水非混和性有機溶剤を、好ましくは２０〜８５重量％、より好ましくは４０〜７５重量％、最も好ましくは５０〜７０重量％の量で含む溶剤系を使用することによって、フィターゼ活性を保持し得る一方、全量が水から成る溶剤を使用するスラリーの乾燥に比して、フィターゼ触媒変換反応に続く、２０重量％未満の許容水分量までのスラリー乾燥が、実質的により低コストで行うことができるという利点が得られる。この理由は、本発明で使用される溶剤混合物をスラリーから蒸発させるのに要するエネルギー投入量が、より少ないためである。
【００１７】
機械的に混合されるスラリーは、好ましくは、更に、アルカリ土類金属カチオンのキレート化剤を含む。このキレート化剤は、フィチン酸塩と競合して、無機カチオン、特に、Ｃａ2+及びＭｇ2+等のアルカリ土類金属カチオンを取り込む。このキレート化剤による無機カチオンの取り込みの結果、抗フィターゼ・フィチン酸塩が、フィターゼ感受性フィチン酸塩に変換され、次いで共存するフィターゼによってフィターゼ感受性フィチン酸塩が無機リン酸塩に変換される。
【００１８】
本発明により処理される食料としては、いかなるフィチン酸塩含有食料でもよい。このような食料としては、代表的には植物から誘導された食料が挙げられる。本発明の特に好ましい実施形態によれば、上記食料は、粉砕脂肪種子を有機溶剤と混合して前記脂肪種子から油分を抽出し、溶剤により不純化された粉砕脂肪種子を油分含有溶剤から分離することにより得られる。上記工程は、例えば、大豆、ヒマワリ種子、アブラナ種子、キャノーラ種子、米、米ぬか、トウモロコシ、綿実、落花生、ベニバナ種子、ココナッツ、ヤシナッツ、クルミ又はヘイゼルナッツ、若しくは脱脂大豆等のこれら種子の処理誘導体から、油分を抽出するために使用される代表的工程である。処理可能な他のフィチン酸塩含有原料としては、コムギ、オオムギ、パンコムギ、ライムギ、モロコシ、オートムギ等の穀類が挙げられる。
【００１９】
上記の種子から油分を抽出する場合、粉砕脂肪種子１０〜８０重量％（より好ましくは３５〜６０重量％）を、有機溶剤９０〜２０重量％（より好ましくは６５〜４０重量％）と混合する。有機溶剤としては、代表的には、ｎ-ヘキサンが使用されるが、２０〜１００℃の沸点を有する他の水非混和性有機溶剤を使用することもできる。よく混合した後、粉砕脂肪種子から抽出された油分は、ヘキサン中に移行し、次いで、油分リッチ化ヘキサンを、ヘキサン溶剤が残存する粉砕脂肪種子から分離する。溶剤不純化粉砕脂肪種子は、代表的には、溶剤１５〜６５重量％及び粉砕脂肪種子８５〜３５重量％、より好ましくは溶剤２５〜５０重量％及び粉砕脂肪種子７５〜５０重量％、最も好ましくは溶剤３５〜４５重量％及び粉砕脂肪種子６５〜５５重量％から成る。溶剤不純化粉砕脂肪種子は、従来技術では、搾りかす又はホワイトフレークと称される場合がある。
【００２０】
脂肪種子から油分を抽出する代表的従来法では、溶剤不純化粉砕脂肪種子を、この段階で乾燥して、全残存有機溶剤を除去する。これに対し、本発明では、上記溶剤不純化粉砕脂肪種子を即座に処理して、含有フィチン酸塩を無機リン酸塩に変換する。具体的には、有機溶剤により不純化された粉砕脂肪種子１００重量部（溶剤を除く）を、粉砕脂肪種子１ｋｇ当たり１０〜１０，０００酵素単位のフィターゼ、水３０〜３５０重量部（より好ましくは１００〜２５０重量部、最も好ましくは１２０〜１８０重量部）及び、必要に応じて、２０〜１００℃の沸点を有する更なる水非混和性有機溶剤（油分抽出工程で使用された有機溶剤と同一でも異なっていてもよい）と混合することにより、スラリーを形成する。この場合、任意の更なる水非混和性有機溶剤は、有機溶剤合計量が３０〜８５０重量部（より好ましくは１２５〜５００重量部、最も好ましくは２００〜３００重量部）の範囲となるように添加される。得られたスラリーは、例えば、ホバルト（ｈｏｂｂａｒｔ）ミキサーを使用して機械的に混合する。この混合中に、フィターゼの作用によって、粉砕脂肪種子中に存在するフィチン酸塩が、無機リン酸塩に変換される。
【００２１】
上記スラリーは、更に、キレート化剤０．０５〜１０重量部を含んでいてもよい。上記したように、このキレート化剤は、フィチン酸塩と競合して、無機カチオンを取り込み、抗フィターゼ・フィチン酸塩を、フィターゼ感受性フィチン酸塩に変換する。キレート化剤としては、アルカリ土類金属カチオンをキレート化可能ないかなる材料を使用してもよい。かかるキレート化剤の代表例としては、アスコルビン酸、フタル酸、クエン酸、ＥＤＴＡ等のジ−、トリ−又はテトラカルボン酸が挙げられる。
【００２２】
より好ましくは、この工程で、脂肪種子１００重量部（溶剤を除く）を、キレート化剤０．５〜５重量部および粉砕脂肪種子１ｋｇ当たり１００〜１，０００酵素単位のフィターゼと混合する。
【００２３】
上記スラリーは、好ましくは、ミキサー中で反応させて、フィターゼの触媒作用により、好ましくは１０〜７０℃、より好ましくは２０〜６５℃、最も好ましくは４０〜６０℃の温度において５分〜２時間、より好ましくは１５〜９０分、最も好ましくは３０〜７５分間、フィチン酸塩を無機リン酸塩に変換する。スラリーのｐＨ値は、好ましくは２〜８、より好ましくは３〜６、最も好ましくは４．５〜５．５である。スラリーの酸性は、酸キレート化剤の存在に起因するが、ＨＣｌ又はＨ3ＰＯ4等の鉱酸を、別に又は付加的に添加して、スラリーのｐＨ値を、フィターゼ活性に最適な値に調節してもよい。２０〜１００℃の沸点を有する限り、いかなる水非混和性有機溶剤を使用してもよい。より沸点の高い溶剤は、スラリーからの蒸発または煮沸が困難であり好ましくない。当然ながら、使用される有機溶剤は、フィチン酸塩を無機リン酸塩に変換する温度よりも高い沸点を有する必要がある。所望の沸点を有する代表的な有機溶剤としては、少なくとも５つの炭素原子を有する脂肪族溶剤が挙げられ、これらの内、ペンタン、ヘキサン及びヘプタン、これらの構造異性体、並びにイソオクタンが、好ましい。
【００２４】
本発明の好ましい実施形態によれば、スラリーは、更に、穀類、穀物粉、脂肪類、ビタミン類及びアミノ酸類の１種以上、又は１種以上の酵素を含む。穀類および穀物粉は、フィチン酸塩を含み、このフィチン酸塩は、フィターゼによる処理によって、同様に、無機リン酸塩に好適に変換されると考えられる。また、本発明では、プロテアーゼ、カルボキシペプチダーゼ、セルラーゼ、キシラナーゼ、マンナナーゼ、アミラーゼ、α-ガラクトシダーゼ、ペクチナーゼ、β-グルカナーゼ及びエステラーゼ等の１種以上の酵素を存在させることが好ましい。この理由は、かかる酵素が、植物体からのフィチン酸塩の遊離を助長してフィチン酸塩をよりフィターゼ感受性とし、及び／又は食料の他の成分に作用して消化性を改良するためである。
【００２５】
以降の工程で、食料を乾燥させ、少なくとも有機溶剤と、水性溶剤の少なくとも一部を除去する。この工程は、例えば、加熱またはスプレー乾燥により、食料を脱溶剤処理することによって実施可能である。得られた乾燥製品は、好ましくは０．１重量％未満、より好ましくは０．０４重量％未満の有機溶剤と、好ましくは２０重量％未満、より好ましくは１５重量％未満の水分を含有する。
【００２６】
得られた無機リン酸塩リッチ化食料は、必要に応じて、更なる栄養物質と混合の上、動物飼料又はヒト食品に加工することができる。
【００２７】
得られた無機リン酸塩リッチ化食料は、出発食料に比して、ヒト及び全ての生産動物に対して実質的により高い価値を有する。特に、得られた無機リン酸塩リッチ化食料は、鶏類、七面鳥類、豚類、ウシ類、魚類、ヒツジ類等の生産動物の飼料に添加されることができる。また、得られた食料は、フィチン酸塩含有量が比較的低いか又は無視しえる程度であるため、この食料を含む食品または飼料のミネラル及びタンパクの生物学的利用能を向上させるという利点を有する。特に、キレート化剤と錯体を形成するカチオンは、得られる塩が水溶性であるため、生物学的利用能が良好と考えられる。また、タンパクを捕捉してタンパク−フィチン酸塩錯体を形成するフィチン酸塩が最早存在しないため、食料中のタンパクの生物学的利用能が向上する。
【００２８】
本発明で使用されるフィターゼは、アスペルギルスｓｐｐ．、リゾパスｓｐｐ．、又はある種のイースト菌類等の種々の微生物によって製造される。フィターゼは、また、種々の植物種子、例えばコムギにおいて、その発芽中に製造される。好ましいフィターゼとしては、ＢＡＳＦ社（ドイツ）製の「ナチュホス（Ｎａｔｕｐｈｏｓ：登録商標）」、ノボノルディスク（Ｎｏｖｏ  Ｎｏｒｄｉｓｋ）社製の「フィターゼノボ」、アルコ（Ａｌｋｏ）社製の「フィナーゼ（Ｆｉｎａｓｅ：登録商標）Ｓ」等が挙げられる。
【００２９】
フィターゼの使用量は、使用される調剤、食料のフィチン酸塩含有量および反応条件に依存する。適切なフィターゼ投与量は、当業者に容易に予測可能である。フィターゼ活性は、基質として、１％フィチン酸ナトリウム（シグマ社（セント・ルイス、ミズリー州）製）を使用することにより求めることができる。酵素反応は、ｐＨ値５．５、温度４０℃で行われる。フィターゼは、フィチン酸塩からリン酸基を遊離させる。遊離無機リンは、ホスホモリブデン酸塩錯体の減少により生じる色変化に基づいて定量される。
【００３０】
有機溶剤を水と共存させることにより、スラリーの乾燥を容易にすると共に、スラリーの全体粘度を実質的に減少させるという利点が得られる。有機溶剤の不存在下では、食料中に存在する水溶性タンパクが、スラリーの粘性を高め、相当過剰量の水を添加しないと、必要な機械的混合が実質的に妨げられる。
【００３１】
【実施例】
以下、本発明を、実施例により更に詳細に説明する。この実施例では、アブラナ種子から油分を抽出するための代表的工程に本発明の方法を適用した例を示す。しかしながら、この実施例は、本発明の範囲を限定するものではない。
【００３２】
実施例：アブラナ種子の処理
【００３３】
アブラナ種子は、細胞中に小さな油分を含有し、この油分を生産するために、主に商業的に栽培される。収穫されたアブラナ種子を、公知の方法で清浄、乾燥および予備調整した。次いで、アブラナ種子を、フレーク状にロール粉砕して、外皮を開裂させた。具体的には、アブラナ種子を、異なる速度で回転する一対の平滑ローラー間のニップを通過させた。これらローラーの作用により、脂肪細胞を粉砕しながら、種子をフレーク状に剪断した。
【００３４】
次いで、フレークを、温度約８０℃で約１時間熱的状態調節して、残存脂肪細胞を開裂させた。また、この工程により、得られた食料のタンパク生物学的利用能が向上した。調整フレークは、油分約４２重量％及び水分約８重量％を含有していた。次いで、この調整フレークを、一連の低圧連続スクリュープレスに供給して、中程度の圧力にて圧搾した。この工程では、アブラナ種子から、入手可能なナタネ油の約半分を抽出した。
【００３５】
次いで、スクリュープレスから得られた圧搾ケーキを、ロトセル（Ｒｏｔｏｃｅｌｌ）溶剤抽出器に搬送し、キャノーラ油を、市販のｎ−ヘキサンで抽出した。具体的には、 前記圧搾ケーキを、気密ユニットを通じて溶剤抽出器に導入し、バスケット内に堆積させた。次いで、ｎ−ヘキサンを、重力により圧搾ケーキ床を通じて浸透させ、圧搾ケーキに拡散・飽和させた。その後、ナタネ油を有機溶剤に移行させ、得られた油分含有溶剤をケーキ支持スクリーンを通じてバスケット底部に流出・分離させた。
【００３６】
ｎ−ヘキサンの適正な蒸気圧は、溶剤抽出器の実際作動温度を約５５℃に制限することにより得られる。作動温度をより高くすると、回収すべき溶剤量が、極めて多くなる。更に、ケーキ温度が、溶剤の沸点またはその付近の場合、ケーキと溶剤間の界面に気相が形成され、液体拡散を効果的に防止する。このように、抽出器では、キャノーラ油およびｎ−ヘキサンを含有する実質的液相と、ｎ−ヘキサンで不純化された油分抽出済アブラナ種子から成る”固”相が、形成された。
【００３７】
従来のアブラナ種子加工においては、ｎ−ヘキサン不純化アブラナ種子は、次工程で脱溶剤処理を行う必要があったが、これに対し、本発明では、前記アブラナ種子を、即座にフィターゼ処理し、種子内のフィチン酸塩を無機リン酸塩に変換した。
【００３８】
ｎ−ヘキサン０．３リットルで不純化されたフィチン酸塩の形のリン酸塩を合計量で０．３８モル含有する粉砕油分抽出済アブラナ種子１ｋｇを、ＢＡＳＦ社（ドイツ）製フィターゼ「ナチュホス（Ｎａｔｕｐｈｏｓ：登録商標）」７５０酵素単位、水１リットル及び更なるｎ−ヘキサン１．１リットルと混合し、スラリーを形成した。油分抽出済アブラナ種子中に存在するフィチン酸塩量は、「穀物化学（Ｃｅｒｅａｌ  Ｃｈｅｍ．）」、５８、２２６〜２２８頁に記載されるＴａｎｇｋｏｎｇｃｈｉｔｒ等の方法に従って定量された。次いで、得られたスラリーを、水浴中でのインキュベーションにより５０℃に保持されたプレキシガラス製容器内に密封し、ダウフック混合システムを使用して１時間連続して混合した。インキュベーション終了時、得られた食物（サンプル１）は、出発フィチン酸塩の４５モル％の変換量に相当する０．１７モルの無機リン酸塩を含有していた。無機リン酸塩の定量法としては、Ｐｏｎｓ及びＧｕｔｈｒｉｅの方法（「工業エンジニアリング化学分析（Ｉｎｄ．  Ｅｎｇ．  Ｃｈｅｍ．  Ａｎａｌ．）」、１８、１８４〜１８６頁）等の幾つかの方法が知られている。
【００３９】
比較ため、粉砕アブラナ種子１ｋｇを、フィターゼを使用しない以外は前記と同様に処理した。得られた食物（サンプル２）は、油分抽出済アブラナ種子の出発フィチン酸塩含量に対し単に５モル％の変換率に相当する僅か０．０１９モルの無機リン酸塩を含有していた。
【００４０】
キレート化剤として、クエン酸を、スラリー中の最終濃度が０．５重量％となるようにスラリーに添加した以外は、サンプル１と同様にして、更なる油分抽出済アブラナ種子１ｋｇを処理した。クエン酸の添加により、混合物（スラリー）のｐＨ値は、５．０に減少した。この処理によって得られた食物（サンプル３）は、出発フィチン酸塩の８５モル％の変換量に相当する０．３２モルの無機リン酸塩を含有していた。サンプル３は、有機溶剤とキレート化剤の両方を使用した組合わせ処理の利点を示している。また、ＥＤＴＡ又はフタル酸等の別のキレート化剤を使用した場合にも、同様のフィチン酸塩の高い変換率が達成可能であった。
【００４１】
次いで、サンプル１及び３で得られた無機リン酸塩リッチ化食物を、脱溶剤化・加熱処理して、当該食物から水分とともにｎ−ヘキサンを蒸発・除去した。除去したｎ−ヘキサンは、油分抽出工程に循環し再利用した。得られた乾燥食物は、直接、動物飼料用またはヒト食品用の高たんぱく・高無機リン酸塩含有補助栄養剤として使用した。