(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
全ステロール含量が７０重量％以上であり、Δ７型ステロール含量比率が１３重量％以上であり、且つ、全ステロールにおけるフリー体の比率が９０重量％以上であるステロール組成物をから成るコレステロール低減化剤。
【請求項２】
全ステロール含量が８０重量％以上であり、かつΔ７型ステロール含有比率が２５重量％以上である、請求項１記載のコレステロール低減化剤。
【請求項３】
全ステロールにおけるフリー体の比率が９５重量％以上である、請求項１又は２記載のコレステロール低減化剤。
【請求項４】
全ステロール含量が１．０重量％以上であり、全ステロールに占めるΔ７型ステロール含量比率が１３重量％以上であり、且つ、全ステロールに含まれるフリー体の比率が９０重量％以上である油脂組成物（但し、ステロールを添加することなく大豆原料から抽出して得られる油脂組成物を除く）から成る血清コレステロール低減化剤。
【請求項５】
全ステロール含量が好ましくは１．５重量％以上である請求項４に記載の血清コレステロール低減化剤。
【請求項６】
全ステロールに占めるΔ７型ステロール含有比率が２５重量％以上である、請求項４又は５に記載の血清コレステロール低減化剤。
【請求項７】
全ステロール中に含まれるフリー体の比率が９５重量％以上である、請求項４〜６のいずれか一項に記載の血清コレステロール低減化剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のコレステロール低減化剤を含有する調理用油。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか一項に記載のコレステロール低減化剤を含有する食品。
【請求項１０】
Δ７型ステロールの総和量として０．１重量％以上含む、請求項９記載の食品。
【請求項１１】
Δ７型ステロールの総和量として０．１５重量％以上含む、請求項１０記載の食品。
【請求項１２】
食品がマーガリン、スプレッド、マヨネーズ、ドレッシング、ベーカリーミックス、ドリンク、デザート、アイスクリーム、スナック、加工畜肉製品、パン、ケーキ、クッキー、ソース、冷凍食品、又はチルド食品である請求項９〜１１のいずれか一項に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、日常生活で通常の油脂や油脂組成物からなる食品と同様に摂取することにより、コレステロール低減化効果能が優れるステロール成分を多く含有するステロール組成物、油脂組成物、及び食品に関するものである。
背景技術
血中コレステロール低減化効果に有効な基剤の一つとして植物ステロールがある。これは、一般的な植物種子中に多く含まれ、通常の食用植物油脂にも０．１〜１．５重量％程度含有されている。
この植物ステロールは一般的には植物油脂の精製過程である脱臭工程での溜出物を抽出・精製して得られる。その代表的な成分としてβ−シトステロール、カンペステロールやスティグマステロールなどの存在が知られている。
これら植物ステロールのコレステロール低減化効果については、これまでに様々な報告がなされているが、その作用機構の中心がコレステロールの吸収抑制効果にあるとされている。従って、この効用を向上させるために、植物ステロール添加量を増加させ、食品等に利用する試みが行われているが、この植物ステロールの油脂への溶解度は、１〜２重量％程度であることから、これ以上の添加は、油脂組成物を含めた食品としての安定性や商品性に支障をきたしたり、効用面でも結晶化した不溶化状態のステロールは、コレステロールの吸収過程に関連する体内での腸管ミセルへの溶解性が劣ることから効用が低下するといった問題点が指摘されている。
ところで、上記のように、植物ステロールがコレステロールと競合して小腸におけるコレステロール吸収を阻害するという機構を考えた場合に、ステロールエステルがその生物学的有効性を充分に発揮するには、フリーステロール（フリー体）と脂肪酸に分解されていることが必須である（Ｍａｔｔｓｏｎ，ＦＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｕｔｒ，１０７：１１３９−１１４６（１９９７））。しかしながら、ステロールエステルの酵素的な加水分解は可逆反応なので、フリーエステルと脂肪酸に１００％分解されることはない。
従って、ステロールエステルよりもそのフリー体のほうがコレステロール吸収を抑制する効果において優れている。又、ステロールの二重結合の場所に拘わらずに酵素がステロールエステルに作用して加水分解する位置は一定であるので、技術的常識から判断して、このようなフリー体のエステル体に対する優位性は全ての種類のステロールに共通して見出される傾向にあると考えるのが妥当である。このように、ステロールエステルよりもそのフリー体のほうがコレステロール吸収を抑制する効果において優れていることを示す一例として、ヒトにおける試験例がＭａｔｔｓｏｎ，ＦＨ，ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ３５  Ａｐｒｉｌ  ６９７−７００（１９８２）に記載されている。
ところが、食品などへの応用を考えた場合には、ステロールのフリー体は油脂への溶解性が低い為、最終的にその有用性が低減してしまう。
そこで、従来、その効用を向上させる為の方法・技術手段として（１）国際特許出願公開ＷＯ９２−１９６４０号（Ｒａｉｓｏｎ  Ｍａｒｇａｎｉｉｎｉｏｙ）や特開平−２３７０３１号（Ｕｎｉｌｅｖｅｒ）には植物ステロールを改質・加工することにより脂溶性を高める発明が記載されており、又、（２）特開平１１−１４６７５７号（Ｕｎｉｌｅｖｅｒ）及び、特開２０００−１０２３６１号（Ｍｃｎｅｉｌ−ＰＰＣ，Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）には、乳化組成物として分散、可溶化を図る発明が記載されており、更に（３）特開平１０−１７９０８６号（理研ビタミン）、特開２０００−３００１９１号（日清製油）には他の成分との相加・相乗効果を図る発明が記載されている。
しかしながら、（１）については改質・加工プロセスの必要性とコスト上の問題や改質されたものがステロールエステル体の場合、上記のように、実際の低減作用がフリー体に比べ劣るといった効用面から添加量を更に増やさなければならないといった点、（２）及び（３）については、油脂のみで構成されるフライ油などの加熱使用やマヨネーズ、ソースといったＯ／Ｗ乳化物では乳化が不安定となり用途が制約されるなどの欠点があげられている。
更に、上記従来技術に関連したステロール資源及び原料は、大豆・菜種などの食用油糧種子やパルプ加工の副産物として得られる植物ステロールがベースにされており、β−シトステロール、カンペステロール及びスティグマステロールなどの植物ステロール以外の他のステロール成分に着目した検討はなされていなかった。
従って、本発明の課題は、β−シトステロールを主成分とする市販の植物ステロールよりもコレステロール低減化効果の高いステロール成分を有する、ステロール組成物、油脂組成物及び食品を提供することである。
更に、本発明の課題は、従来、植物ステロール、特にそのフリー体の利用時の問題点とされていた多量使用時における結晶析出の問題や乳化組成物の不安定化、改質・加工の際におけるプロセスの煩雑さやコストの問題などを解決し、効用・用途面でも非常に優れた油脂組成物及びそれを含有する食品を提供することにある。
本発明者は、上記課題を達成するために鋭意検討を重ねた結果、ステロール骨格の７位の位置に二重結合を有するΔ７型ステロールが、高いコレステロール低減化効果を有し、全ステロール含量におけるこのΔ７型ステロール比率が増加するにつれて、血中及び／又は肝臓中のコレステロール値の低減化効果が高まること、更に、Δ７型ステロールの高いコレステロール低減化効果の要因の一つとして市販の植物ステロール結晶と比較して油脂への溶解性が高いことを見出し、本発明の完成に至った。
発明の開示
すなわち本発明は、全ステロール含量が７０重量％以上、好ましくは８０重量％以上であり、かつΔ７型ステロール含量比率が１３重量％以上、好ましくは２５重量％以上であるステロール組成物に係る。本発明のステロール組成物において、ステロールはフリー体及びエステル体の両者を含むが、コレステロール低減化効果の点からは、全ステロールにおけるフリー体比率は好ましくは７５重量％以上、より好ましくは９０重量％以上、更に好ましくは９５重量％以上、最も好ましくは９９重量％以上である。
更に、本発明は、全ステロール含量が１．０重量％以上、好ましくは１．５重量％以上であり、かつ全ステロールに占めるΔ７型ステロール含有比率が１３重量％以上、好ましくは２５重量％以上である油脂組成物に係わる。本発明の油脂組成物においてもステロール組成物と同様に、フリー体比率は好ましくは７５重量％以上、より好ましくは９０重量％以上、更に好ましくは９５重量％以上、最も好ましくは９９重量％以上である。但し、本発明の油脂組成物からは、ステロールを添加することなく大豆原料から抽出して得られる油脂組成物は除かれるものとする。
本明細書中の実施例に示されるように、本発明のステロール組成物を含む油脂組成物は優れた血清中及び／又は肝臓中のコレステロール低減化効果を有するものである。従って、本発明は、該ステロール組成物又は該油脂組成物を含有するコレステロール低減化剤、特に血清コレステロール低減化剤にも係わる。本発明のコレステロール低減化剤には、活性成分であるΔ７型ステロール総和量として、好ましくは、０．１重量％以上、より好ましくは０．１５重量％以上が含まれている。尚、血清コレステロール低減化剤中には、本発明の各組成物以外に、当業者に公知のその他の任意成分、例えば、各種補助剤、キャリア等が適宜含有されていても良い。
本発明は、更に、上記油脂組成物からなる調理用油及び上記油脂組成物を含有する食品に係わる。特に、Δ７型ステロールの総和量として０．１重量％以上、好ましくは０．１５重量％以上含む食品及び調理用油に係わる。
発明を実施するための最良の形態
一般的に大部分の植物ステロールは、炭素数２７〜２９の化合物であり、３位に水酸基を１７位に炭素数８〜１１の側鎖を持ち、１〜３個の２重結合を有している。ここで、本発明における「全ステロール」とは、一般的な油糧種子中に含まれる植物ステロール成分であり、具体的には、以下に挙げるステロール成分の総和と定義する。
即ち、ブラシカステロール（Δ５）、カンペステロール（Δ５）、スティグマステロール（Δ５）、β−シトステロール（Δ５）、アベナステロール（Δ５）、Δ７−アベナステロール（Δ７）、スピナステロール（Δ７）、Δ７−スティグマステノール（Δ７）、グラミステロール（Δ７）、シトロスタジエノール（Δ７）の各成分の総和量を全ステロール含量とする。
更に本発明における「Δ７型ステロール」とは、この構造の７位の位置に二重結合を有するステロールと定義する。これらに類する具体的なΔ７型ステロール成分としては、Δ７−アベナステロール（Δ７）、スピナステロール（Δ７）、Δ７−スティグマステノール（Δ７）、グラミステロール（Δ７）、シトロスタジエノール（Δ７）等の成分である。
因みに、これらのΔ７型ステロールは、一般に市販されている大豆油を主体とした油脂精製溜出物から得られる植物ステロール製品には、ほとんど含まれていないものである。
一方、コレステロールは、この分類上からすると、Δ５型のステロールに含まれる。又、コレステロールの吸収阻害を示す植物ステロールとしてその所在が広く知られており、多くの油糧種子等に含まれているβ−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール等はΔ５型に区分けされる。
Δ７型ステロールの定量については、他のステロール成分と同様に日本油化学協会が設定している基準油脂分析法やＩＵＰＡＣ（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｕｒｅ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）などのＧＬＣを用いた公定法を使用する。各成分の同定指標となるＲＲＴ（ｒｅｌａｔｉｖｅ  ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｔｉｍｅ）等を含めたデータを掲載した文献としては、油化学  Ｖｏｌ．３３  Ｎｏ．８  ｐ４６〜５０．１９８４などが参考にできる。
又、全ステロールにおけるフリー体の比率は、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ，４４：２１４９（１９９６）に記載の方法に準じて分析した。具体的には、以下の条件で実施した。
カラム    ：ＬｉＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂｕ  Ｄｉｏｌ  ５μｍ（４．０ｍｍφｘ
１２５ｍｍ）Ｍｅｒｃｋ社製；
カラム温度：４０℃；
検出器    ：ＥＬＳＤ（Ｅｖａｐｏｒａｔｉｖｅ  Ｌｉｇｈｔ  Ｓｃａｔｔｅｒ
ｉｎｇ  Ｄｅｔｅｃｔｏｒ）；
流量      ：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；
溶媒      ：（Ａ）ヘキサン／酢酸＝１０００／ｌ（Ｖ／Ｖ）；（Ｂ）２−プロ
パノール；
溶出プログラム：０分から８分（Ａ：Ｂ＝１００：０で一定）、８分から１０分（Ａ：Ｂ＝１００：０からＡ：Ｂ＝９９：１迄のリニアグラジエント）、１０分から３０分（Ａ：Ｂ＝９９：１で一定）、３０分から３１分（Ａ：Ｂ＝９９：１からＡ：Ｂ＝１００：０迄のリニアグラジエント）；
内部標準：フリー体（コレステロール（Ｓｉｇｍａ社製９８％以上）、エステル体（コレステロールリノレート（Ｓｉｇｍａ社製９８％以上）；
全ステロールにおけるフリー体の比率：（ステロールフリー体ピークの総和量）／（全ステロールピークの総和量）。
本発明のΔ７型ステロール比率に富むステロール組成物及び油脂組成物は、当業者に公知の任意の手段を用いて容易に調製することができる。例えば、これらの成分を比較的多く含む大豆、菜種、パーム、サフラワー、米、ごま、ひまわり、つばき、ウリ、茶、及び小麦胚芽等の油糧種子やこれらの種子中で目的とするステロール成分を多く含んでいる胚芽や種皮等の組織や分画物を適宜原料として用いて調製することができる。
又、これらの油糧種子から得られた油脂を精製する工程、特に脱臭工程により産出されるステロールを豊富に含む脱臭溜出物などを原料資源として用いて、本発明のステロール組成物及び油脂組成物を調製することが出来る。
本発明のステロール組成物の製造法については、特に限定されるものではなく、一般的に知られている方法により調製ができる。例えば、脱臭溜出物を原料とする場合は、これに苛性ソーダ、苛性カリ等のアルカリを添加し、ケン化処理を行って得られる不ケン化物を有機溶剤、例えばエーテル、ｎ−ヘキサン等で抽出し、蒸留乾固後メタノールもしくはエタノールに溶解し、冷却することにより結晶化して分離・精製することにより目的とする植物ステロールを製造することができる。また、その他の方法としては、酵素反応や合成法によるトリテルペン類、飽和型ステロール、Δ５型ステロール等からΔ７型ステロールへの転換や分離膜等を使用したΔ７型ステロール成分の分離・濃縮法なども使用できる。
ここで、油糧種子やその分画組織などを原料ベースに本発明の油脂組成物を製造する場合は、そこに含まれているステロール及び油脂を常法により一緒に抽出または搾油し、この油脂を精製工程にかけ、得られた油脂中のステロール濃度及びΔ７型ステロール比率が本発明の油脂組成物における所定の範囲に入っているときは、この油脂を本発明の油脂組成物や食品等としてそのまま使用できる。一方、得られた油脂中のステロール濃度やΔ７型ステロール比率が諸条件を満たさない場合や脱臭溜出物を原料ベースにする場合は、一般的に使用されている濃縮・分離等の処理を施し所定のステロール濃度及びΔ７型ステロール比率を満たす本発明の油脂組成物等を調製することが出来る。
あるいは、本発明の油脂組成物は、Δ７型ステロール比率の高いステロール組成物、例えば、本発明のステロール組成物を別の油脂と混合することによっても調製することが出来る。例えば、油脂を８０〜１００℃に加温し、そこにΔ７型ステロールを豊富に含むステロール組成物を添加し、溶解させ、常温に冷却させることで本発明の油脂組成物を得ることが出きる。尚、この際に、ステロール組成物を調製する際に使用する油脂とステロール組成物と混合する油脂は、同一の植物由来でも良いし、互いに異なる植物に由来するものでも良い。
本発明で使用される上記油脂には、食用として利用可能な一般的油脂が含まれる。例えば、大豆油、菜種油、綿実油、コーン油、サフラワー油、ひまわり油、ごま油、オリーブ油、パーム油、パーム核油、ヤシ油、カカオ脂、ラード、牛脂、魚油、シソ油、亜麻仁油、桐油、ひまし油等の液体油及び固体脂、これらの配合油、水素添加油、分別油、エステル交換油等の加工油脂、加水分解脂肪酸及びそのエステルなどが使用できる。
更に本発明は、上記油脂組成物から成る調理用油に係わるものであるが、ここで「調理用油」とは、揚げ物、炒め物、焼き物、サラダ用、油づけ用、風味づけ用等に用いる油をいい、その具体的な例としてサラダ油、天ぷら油、ショートニングなどを挙げことが出来る。
本発明は、又、上記油脂組成物を含有する食品に係わるものである。該油脂組成物を油脂原料として含有する非限定的な例としては、マーガリン、スプレッド、マヨネーズ、ドレッシング、ベーカリーミックス、ドリンク、デザート、アイスクリーム、スナック、加工畜肉製品、パン、ケーキ、クッキー、ソース、冷凍食品、及びチルド食品等を挙げることが出来る。該食品に含まれる本発明の油脂組成物の量は食品の種類等に応じて当業者が適宜決めることが出来るが、Δ７型ステロール成分の有用な効果が充分に発揮される為には、Δ７型ステロールの総和量としては、好ましくは０．１重量％以上、より好ましくは０．１５重量％以上となるようにその食品に添加されることが望ましい。
実施例
以下、実施例によって本発明をより詳細に説明する。尚、これらの実施例は本発明の技術範囲を何ら限定するものではない。
以下の実施例において、各油脂成分の分析は、日本油化学協会編、基準油脂分析試験法に従って実施した。
実施例１
（大豆胚芽油由来のステロール組成物の調製）
精選丸大豆を８０℃で３０分予備加熱し、ゴムローラを装着した装置で粗砕、脱皮を行った。その後風力分級機を利用して大豆の胚芽部を濃縮分離した。この胚芽濃縮物の大豆胚芽比率は、凡そ７０％であり、その他は、子葉である実部が大半を占めた。この胚芽７０％濃度の大豆原料（１５０ｋｇ）を６０℃に加温し、圧扁機にかけてフレークとし、ｎ−ヘキサンを用いて、油脂を抽出した。得られた粗原油を一般的に使用されている食用油の精製工程、すなわち、脱ガム、脱酸、脱色、脱臭処理を施すことにより大豆胚芽油（１５ｋｇ）を得ることが出来た。尚、大豆胚芽は学術的には「大豆胚軸」と称せられるが、本明細書中では「胚芽」と慣用的に使用する。
こうして得られた大豆胚芽油（１０ｋｇ）をケン化処理し、エチルエーテル及び水を加えて液液抽出を行い、エチルエーテル中に抽出される不ケン化物（３３０ｇ）を蒸発乾固させた。更に、この蒸発乾固物にエタノールを加え、冷却して再結晶させ本発明のステロール組成物（純度８５．４重量％、Δ７型ステロール含量２５．８重量％、フリー体比率９９重量％）を得た。このステロール組成物の分析値を表１に示す。
0004190893.tif 000002
実施例２
（大豆胚芽油由来のステロール組成物の油脂への溶解性の比較）
実施例１で調製した本発明のステロール組成物を、油脂（大豆白絞油）に対して、ステロール比率で２．０重量％となるように正確に添加して充分に攪拌した。３７±２℃にて時々攪拌しながら、２時間、５時間、及び７時間加熱した。加熱の終了後に、３７±２℃に調温した恒温槽にて濾過を行い、未溶解の結晶を分離した。その濾液中のステロール濃度を所定の方法で測定した。尚、対照として、市販の植物ステロール（エーザイ（社）製  フィトステロールＦ（純度８６．６重量％、Δ７型ステロール比率０．０％、フリー体比率９７重量％）を使用した。その組成比を以下の表２に示す。
0004190893.tif 000003
以下の表３に示した溶解性比較実験で得られた結果から明らかなように、大豆胚芽油由来の本発明のステロール組成物は、対照として使用した市販の植物ステロールよりも、油脂への溶解性が明らかに高いことが判明した。
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実施例３
（ヒマワリ油由来のステロール組成物の調製）
実施例１と同様にして、ヒマワリ油脱臭溜出物（１０ｋｇ）をケン化処理し、エチルエーテル及び水を加えて液液抽出を行い、エチルエーテル中に抽出される不ケン化物（３３０ｇ）を蒸発乾固させた。更に、この蒸発乾固物にエタノールを加え、冷却して再結晶させ本発明のステロール組成物（純度７３．１重量％、Δ７型ステロール含量１３．５重量％、フリー体比率９９重量％）を得た。このステロール組成物の分析値を表４に示す。
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実施例４
（動物実験概要）
このステロール組成物を試験油とし、同時に市販の植物ステロール（エーザイ（社）製  フィトステロールＦ）を同重量濃度となるように添加した食餌を調製し、以下の動物試験プロトコールに従い、血清中、肝臓中、及び糞中のコレステロール濃度の低減化効果を比較した。
（動物試験プロトコール）
実験動物はＳＤ系雄性ラット（１９０〜２００ｇ）を用い、各群１０匹で１匹／ケージで飼育した。飼育期間は２週間とし、飼料は自由摂取させた。
（試験飼料）
食餌を以下の様に調製した。カゼイン２０．０重量％、セルロース４．０重量％、ミネラル混合４．０重量％、ビタミン混合１．０重量％、コレステロール０．５重量％、コール酸ナトリウム０．２５重量％、塩化コリン０．２０重量％、実施例３で調製したヒマワリ油由来のステロール組成物（本発明ステロール組成物）又は市販植物ステロール「フィトステロールＦ」０．５０重量％（ステロール換算）、大豆油はそれ自体に含まれる植物ステロール量を除いて中性脂質として１０．０重量％とし、最後に全体が１００％となる様にショ糖にて調整した。
（生体分析）
飼育終了後にエーテル麻酔下、鎖骨下静脈から採血し、肝臓を摘出した。血液は３，０００ｒｐｍで１５分間遠心処理を行い、血清を得た。血清総コレステロールの定量は、酵素法を用いて行った。又、肝臓コレステロールはＦｏｌｃｈ，Ｊ．ＬｅｅＭ．＆  Ｓｌｏａｎｅ−Ｓｔａｎｌｅｙ，ＧＨＡ  １９５７  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２２６：４９７−５０９の方法に従って脂質を抽出し、酵素法にて定量した。糞は剖検前３日間採取し、凍結乾燥後に粉砕した。粉砕した糞に内部標準として５α−コレスタンを加え、アルカリ水溶液でケン化分解後、ｎ−ヘキサンにて抽出し、ＴＭＳ化してからガスクロマトグラフィにて定量した。
（動物実験結果）
表５に示すように、試験区は対照区と比較して血清中のコレステロール値は低下傾向にあった。肝臓コレステロールは試験区の方が対照区よりも有意に低下しており肝臓での蓄積が少なかったことを示している。又、糞中のコレステロールは試験区の方が対照区よりも多く、コレステロールの排出量が多いことを示している。従って、以上の結果から、Δ７型ステロールのコレステロール低減化効果が通常の植物ステロールよりも高いことが判明した。
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実施例５
実施例４で使用したヒマワリ油由来のステロール組成物の代わりに、実施例１で調製した大豆胚芽油由来のステロール組成物（本発明ステロール組成物）を０．１５重量％及び０．５０重量％の濃度で使用して、実施例４と同様に動物実験を実施した。但し、飼育期間は４週間とした。得られた結果を以下の表６に示す。
0004190893.tif 000007
（動物実験結果）
表６に示されたように、試験区Ｎｏ．１〜２は、同濃度の対照区Ｎｏ．３〜４と比較していずれの濃度においても血清中のコレステロール値は有意に低下した。更に、肝臓コレステロールは試験区Ｎｏ．２の方が対照区Ｎｏ．４よりも有意な低値となる一方で、糞中のコレステロールは試験区Ｎｏ．２の方が対照区Ｎｏ．４よりも有意な高値を示した。これらの結果から、Δ７型ステロールのコレステロール低減化効果が市販の植物ステロールよりも高いことが判明した。また、この結果は、Δ７型ステロール含有油脂組成物の有効性のみならず、これを含有する食品としての有効性を示すものである。
実施例６
大豆胚芽油由来植物ステロールの有効性評価
（動物実験）
実施例１で調製した大豆胚芽油由来ステロール組成物と同時に市販の植物ステロールを同重量濃度となるように添加した食餌を調製した。但し、飼料にコレステロール吸収促進剤であるコール酸ナトリウムは添加しないで評価する事とした。この系では、血清コレステロール濃度は殆ど変化しないが、肝臓、糞中のコレステロールを測定する事により、コレステロールの生体への出納については評価しやすい。動物試験プロトコールに従い、肝臓コレステロール濃度、糞中コレステロール濃度（コプロスタノールを含む）を比較した。コプロスタノールはコレステロールの腸内細菌変換物であり、排泄されたコレステロールとして考える。なお、対照には実施例３と同様に市販植物ステロール（エーザイ・製フィトステロールＦ）を用いた。
（動物試験プロトコール）
実験動物はＳＤ系雄性ラット（１９０〜２００ｇ）を用い、各群８匹で１匹／ケージで飼育した。飼育期間は４週間とし、飼料は自由摂取させた。
（試験飼料）
以下を基本として調整した。カゼイン２０．０重量％、セルロース４．０重量％、ミネラル混合４．０重量％、ビタミン混合１．０重量％、コレステロール０．５重量％、塩化コリン０．２０重量％、大豆胚芽油由来植物ステロール（ステロール換算）０．３５重量％、油脂は大豆油を用い大豆油自体に含有された植物ステロール量を除いて中性脂質として１０．０重量％とし、最後に全体が１００％となる様にショ糖にて調整した。
（生体分析）
飼育終了後にエーテル麻酔下、鎖骨下静脈から採血し、肝臓を摘出した。肝臓コレステロールはＦｏｌｃｈらの方法にて脂質を抽出し、酵素法を用いて分析を行った。糞は剖検前３日間採取し凍結乾燥後粉砕した。粉砕した糞に内部標準として５α−コレスタンを加え、アルカリ水溶液でケン化分解後、ヘキサンにて抽出し、ＴＭＳ化してから、ガスクロマトグラフィーにて定量した。
（動物実験結果）
0004190893.tif 000008
表７に示すように、試験区Ｎｏ．１は、同濃度の対照区Ｎｏ．２と比較して、肝臓コレステロール値は低値を示し、糞中コレステロール値は有意に高値を示した。これより、Δ７型ステロールのコレステロール吸収阻害効果が通常の植物ステロールよりも高いことが判明した。
また、この結果は、Δ７型ステロール含有油脂組成物の有効性のみならず、これを含有する食品としての有効性を示すものである。
産業上の利用可能性
本発明のΔ７型ステロール成分を特徴とするステロール組成物及び油脂組成物はステロール低減化剤としての効果があることが確認された。該組成物を含む食品は、日常生活で通常の油脂や油脂組成物からなる食品と同様に摂取することができ、より少量で血清中及び／又は肝臓中のコレステロール値を効果的に低減することが可能となるため、食品製造上の諸課題や商品保存性の改善更には加工・改質プロセスの省略化とともにコスト低減化も図ることができ、幅広い用途に応用が可能となった。
更に、これまで一般的に血清中のコレステロールを低減させる目的で使用されてきた市販の植物ステロールに対して、本発明に係るステロール組成物又は油脂組成物では同様の効果を得るために添加使用量が少なくて済むという点でもメリットは大きく、植物ステロールの使用量が増加してくると問題とされる品質上の問題やコスト面での欠点を大幅に改善できる点においても利用価値が高い。