(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−７−パクリタクセル。
0004153660.tif 000029
【請求項２】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−７−パクリタクセル。
0004153660.tif 000030
【請求項３】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−パクリタクセル。
0004153660.tif 000031
【請求項４】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−パクリタクセル。
0004153660.tif 000032
【請求項５】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−７−ドセタクセル。
0004153660.tif 000033
【請求項６】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−７−ドセタクセル。
0004153660.tif 000034
【請求項７】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−ドセタクセル。
0004153660.tif 000035
【請求項８】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−ドセタクセル。
0004153660.tif 000036
【請求項９】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−７−バッカチンIII 。
0004153660.tif 000037
【請求項１０】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−７−バッカチンIII 。
0004153660.tif 000038
【請求項１１】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−バッカチンIII 。
0004153660.tif 000039
【請求項１２】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−バッカチンIII 。
0004153660.tif 000040
【請求項１３】
パクリタクセルまたはドセタクセルの２’位の水酸基をクロロトリエチルシランで保護した後、下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシガラクトシドと反応させ、次いで脱ベンジルおよび脱トリエチルシリル反応を行なうことを特徴とする請求項１または５記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000041
【請求項１４】
パクリタクセルまたはドセタクセルの２’位の水酸基をクロロトリエチルシランで保護した後、下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシマンノシドと反応させ、次いで脱ベンジルおよび脱トリエチルシリル反応を行なうことを特徴とする請求項２または６記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000042
【請求項１５】
１０−デアセチル−パクリタクセルまたはドセタクセルの２’位および７位の水酸基をクロロトリエチルシランで保護した後、下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシガラクトシドと反応させ、次いで脱ベンジルおよび脱トリエチルシリル反応を行なうことを特徴とする請求項３または７記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000043
【請求項１６】
１０−デアセチル−パクリタクセルまたはドセタクセルの２’位および７位の水酸基をクロロトリエチルシランで保護した後、下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシマンノシドと反応させ、次いで脱ベンジルおよび脱トリエチルシリル反応を行なうことを特徴とする請求項４または８記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000044
【請求項１７】
１０−デアセチル−バッカチンIII の７位の水酸基をクロロトリエチルシランで保護した後、下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシガラクトシドと反応させ、次いで脱ベンジルおよび脱トリエチルシリル反応を行なうことを特徴とする請求項１１記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000045
【請求項１８】
１０−デアセチル−バッカチンIII の７位の水酸基をクロロトリエチルシランで保護した後、下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシマンノシドと反応させ、次いで脱ベンジルおよび脱トリエチルシリル反応を行なうことを特徴とする請求項１２記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000046
【請求項１９】
１０−デアセチル−バッカチンIII と下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシガラクトシドと反応させ、次いで脱ベンジル反応を行なうことを特徴とする請求項９記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000047
【請求項２０】
１０−デアセチル−バッカチンIII と下記の式で表されるテトラベンジル酢酸オキシマンノシドと反応させ、次いで脱ベンジル反応を行なうことを特徴とする請求項１０記載のタキソイド誘導体の製造方法。
0004153660.tif 000048
【請求項２１】
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−ドセタクセルを有効成分として含有する抗腫瘍剤。
0004153660.tif 000049
【請求項２２】
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−ドセタクセルを有効成分として含有する抗腫瘍剤。
0004153660.tif 000050
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、タキソイド誘導体およびその製造方法に関し、詳しくはパクリタクセル、ドセタクセルおよび１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩのいずれかにスペーサーを介してガラクトースまたはマンノースを結合して、生理活性、水に対する溶解性を改善したタキソイド誘導体およびその製造方法に関するものである。
背景技術
パクリタクセル（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）は、北米産イチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）の樹皮から単離されたジテルペン化合物［Ｍ．Ｃ．Ｗａｎｉ  ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９３，２３２５（１９７１）］で、従来の化学治療では治癒しない癌に対しても改善効果を持つ強力な抗癌剤である。タキソールの癌を抑制するメカニズムは特異的であり、多くの抗癌剤が有糸分裂装置である紡錘体の主成分の微小管の形成を抑えるのに対し、微小管の過剰形成を引き起こし有糸分裂を抑制するものである。
パクリタクセルは有力な抗癌剤であるが、水に対する溶解性が低いため、実際の治療薬としての利用が限られる。そのため、可溶化剤の使用や誘導体として溶解性を改善するための研究が活発に行なわれているが、未だ十分な解決作策は見出されていない。例えば、現在パクリタクセルは可溶化剤「クレモフォア」を用いて投与されているが、２週間毎に６時間かけて１Ｌ投与し、これを４クール実施するという、患者に大きな負担を与えるもの［Ｅｒｉｃ  Ｋ．Ｒｏｗｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．：ＣＡＮＣＥＲ  ＲＥＳＥＡＲＣＨ  ４９，４６４０（１９８９）］である上に、可溶化剤の副作用が問題となっている。
また、溶解性が改善されたパクリタクセル誘導体としてドセタクセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）が開発されたが、ドセタクセルの水に対する溶解度は、タキソールの３５倍に過ぎず［Ｉ，Ｒｉｎｇｅｌ  ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．，８３，２８８（１９９１）］、さほど改善されそはいない。
パクリタクセルの溶解性を改善するために、タキソールの側鎖や母核に色々な官能基を導入しているが、それらの誘導体のうち、いくつかの化合物には溶解性の改善が認められるものの、生理活性が増強されたものは未だ報告されていない。
また、パクリタクセルの糖誘導体に関する報告はなく、天然にキシロースがエーテル結合している化合物の存在のみが報告されているだけである［Ｈ．Ｌａｔａｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，４０９０（１９８４）］。
化学的なグルコシル化には、例えば「日本化学会編  第４版  実験化学講座２６  有機合成ＶＩＩＩ  第３章」に記載されているように、多くの方法が知られているが、いずれの方法も重金属もしくは強力なルイス酸を用いる必要がある。しかし、パクリタクセルおよびドセタクセルは酸に不安定なオキセタン骨格、立体障害の大きい基本骨格を有しているため、従来の化学的グリコシル化法は効率的に進行しない。一方、酵素によるグリコシル化は、パクリタクセルおよびドセタクセルが極めて水溶性が低いため、目的物が得られない。
さらに、パクリタクセルと同じく北米産イチイから抽出される１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩはドセタクセルの前駆体であり、本物質を用いて親水性タキソイド誘導体を製造する方法の開発が期待される。
発明の開示
本発明は、上記の事情に鑑み、溶解性と生理活性を共に向上したパクリタクセル等の誘導体を開発し、患者の負担を軽減し、且つ効果的な癌治療薬を提供することを目的とする。
本発明者らは、パクリタクセルの誘導体を開発すべく鋭意検討した結果、パクリタクセルにスペーサーを介してエステル結合によりガラクトースまたはマンノースを結合したパクリタクセル誘導体が得られること、誘導体は水に対する溶解性および生理活性の向上が認められることを知見し、本発明を完成させたのである。また、上述のドセタクセルおよび１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩについても、同様にしてエステル結合にてガラクトースまたはマンノースを結合したタキソイド誘導体を得る方法を確立した。
すなわち本発明は、パクリタクセル、ドセタクセルおよび１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩのいずれかにスペーサーを介してガラクトースまたはマンノースを結合してなるタキソイド誘導体、その製造方法並びにその用途に関する。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明について説明する。
本発明のタキソイド誘導体の具体例を以下に示す。
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−７−パクリタクセル（以下、７−ＧＡＧ−ＰＴと略す。）、
0004153660.tif 000002
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−７−パクリタクセル。（以下、７−ＭＡＧ−ＰＴと略す。）、
0004153660.tif 000003
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−パクリタクセル（以下、７−ＧＡＧ−ＰＴと略す。）、
0004153660.tif 000004
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−パクリタクセル（以下、１０−ＭＡＧ−ＰＴと略す。）、
0004153660.tif 000005
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−７−ドセタクセル（以下、７−ＧＡＧ−ＤＴと略す。）、
0004153660.tif 000006
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−７−ドセタクセル（以下、７−ＭＡＧ−ＤＴと略す。）、
0004153660.tif 000007
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−ドセタクセル（以下、１０−ＧＡＧ−ＤＴと略す。）、
0004153660.tif 000008
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−ドセタクセル（以下、１０−ＭＡＧ−ＤＴと略す。）、
0004153660.tif 000009
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−７−バッカチンＩＩＩ（以下、７−ＧＡＧ，１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩと略す。）、
0004153660.tif 000010
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−７−バッカチンＩＩＩ（以下、７−ＭＡＧ，１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩと略す。）、
0004153660.tif 000011
下記の式で表されるガラクトシルオキシアセチル−１０−バッカチンＩＩＩ（以下、１０−ＧＡＧ−バッカチンＩＩＩと略す。）、
0004153660.tif 000012
下記の式で表されるマンノシルオキシアセチル−１０−バッカチンＩＩＩ（以下、１０−ＭＡＧ−バッカチンＩＩＩと略す。）、
0004153660.tif 000013
本発明のタキソイド誘導体は、上記したように、パクリタクセル、ドセタクセルおよび１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩのいずれかにスペーサーを介してガラクトースまたはマンノースを結合してなるものである。
パクリタクセルは、Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｇ．Ｉ．：Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，５２，１（１９９２）に記載された方法により、北米産イチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）の樹皮から単離することにより得られる他、化学合成されたもの（Ｒ．Ａ．Ｈｏｌｔｏｎ：Ｅｕｒｏｐｉａｎ  Ｐａｔｅｎｔ−Ａ  ４００９７１，１９９０）なども用いられる。また、ドセタクセルは、Ｇｒｅｅｎ，Ａ．Ｅ．ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５９，１２３８（１９９４）に記載されている方法により、１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩから誘導される。１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩは、前記したように、北米産イチイから抽出される天然物である。
パクリタクセル、ドセタクセルおよび１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩのいずれかにスペーサーを介してガラクトースまたはマンノースを結合する反応は、テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドまたはテトラベンジル酢酸オキシマンノシドを用いて行なわれる。このテトラベンジル酢酸オキシガラクトシドまたはテトラベンジル酢酸オキシマンノシドは、それぞれガラクトースまたはマンノースを出発物質として常法により得られるテトラベンジルガラクトースまたはテトラベンジルマンノースにスペーサーとしてエチルグリコレートなどのグリコレートを結合させてエステル化合物とした後、脱エチル化してカルボン酸化合物としたもので、下記の２つの式で表される。
0004153660.tif 000014
次に、テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの製造方法の１例をに示す。
0004153660.tif 000015
常法により得られたテトラベンジルガラクトース（１）にエチルグリコレートをｐ−トルエンスルホン酸と共にベンゼン中で０〜１５０℃、好ましくは１１０℃にて０．５〜５０時間、好ましくは８時間反応させてエチルグリコレートを１位に結合させ、エチルエステル化合物（２）を得る。この後、該化合物（２）をアルカリ（例えば６Ｎ  ＮａＯＨ）メタノール−ジオキサン溶液中で室温〜１００℃にて０．５〜５０時間、好ましくは３時間処理した後、塩酸（例えば１Ｎ  ＨＣｌ）酸性に移して脱エチル化することにより、カルボン酸化合物（３）を得る。この物質が、テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドである。
次に、テトラベンジル酢酸オキシマンノシドの製造方法の１例を以下に示す。
0004153660.tif 000016
常法により得られたテトラベンジルマンノース（４）にエチルグリコレートをｐ−トルエンスルホン酸と共にベンゼン中で０〜１５０℃、好ましくは１１０℃にて０．５〜５０時間、好ましくは８時間反応させてエチルグリコレートを１位に結合させ、エチルエステル化合物（５）を得る。この後、該化合物（５）をアルカリ（例えば６Ｎ  ＮａＯＨ）メタノール−ジオキサン溶液中で室温〜１００℃にて０．５〜５０時間、好ましくは３時間処理した後、塩酸（例えば１Ｎ  ＨＣｌ）酸性に移して脱エチル化することにより、カルボン酸化合物（６）を得る。この物質が、テトラベンジル酢酸オキシマンノシドである。
本発明では、糖供与体のスペーサーとしてエチルグリコレートなどのグリコレートを用いているが、この物質のアルキル鎖長を変えることでスペーサーの長さを容易に調節することができる。例えば、３−ヒドロキシ酪酸等をスペーサーとして用いることも可能である。
本発明のタキソイド誘導体は、上述のパクリタクセル、ドセタクセルおよび１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩのいずれかとテトラベンジル酢酸オキシガラクトシドまたはテトラベンジル酢酸オキシマンノシドを反応させて製造することができる。タキソイド誘導体の製造法の具体例としては、下記の反応工程（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）に示した方法がある。
反応工程（Ｉ）
0004153660.tif 000017
反応工程（ＩＩ）
0004153660.tif 000018
反応工程（ＩＩＩ）
0004153660.tif 000019
反応工程（ＩＶ）
0004153660.tif 000020
反応工程（Ｖ）
0004153660.tif 000021
反応工程（Ｉ）に示した方法は、１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（７）とテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）を反応させた後、脱ベンジル化するもので、この方法により前記の式で表される７−ＧＡＧ−バッカチンＩＩＩ（９）が得られる。
すなわち、１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（７）とテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）を、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）等の塩基、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）等の縮合剤、塩化メチレン等の溶剤をアルゴン下、室温で０．５〜１００時間、好ましくは３時間反応させ、配糖化した化合物（８）を得る。
次に、この化合物（８）をパラジウムブラック等の触媒、酢酸等の酸と共に水素下、室温で激しく撹拌しながら０．５〜１００時間、好ましくは１５時間反応し、脱ベンジル化を行なって、７−ＧＡＧ，１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（９）を得る。
なお、テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりにテトラベンジル酢酸オキシマンノシドを用いた場合も同様の反応によって、前記式で表される７−ＭＡＧ，１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩを得ることができる。
また、反応工程（ＩＩ）に示した方法は、ドセタクセルの２’位または２’位と７位をクロロトリエチルシリル基を用いて保護した後にテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）と反応させ、その後、脱ベンジル化および脱トリエチルシリル化するもので、この方法により前記の式で表される７−ＧＡＧ−ＤＴ（１５）または１０−ＧＡＧ−ＤＴ（１６）が得られる。
すなわち、ドセタクセル（１０）とクロロトリエチルシラン（ＴＥＳＣ１）等の保護剤、イミダゾール等の塩基、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）等の溶剤をアルゴン下、室温で０．５〜５０時間、好ましくは３時間反応してドセタクセルの２’位または２’位と７位をトリエチルシリル基で保護し、化合物（１１）または化合物（１２）を得る。
次に、得られた化合物（１１）または化合物（１２）とテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）、ＤＭＡＰ等の塩基、ＤＣＣ等の縮合剤、塩化メチレン等の溶剤をアルゴン下、室温で０．５〜１００時間、好ましくは３時間反応し、配糖化した化合物（１３）または化合物（１４）を得る。
その後、化合物（１３）または化合物（１４）を、パラジウムブラック等の触媒、酢酸等の酸と共に水素下、室温で激しく撹拌しながら０．５〜１００時間、好ましくは１５時間反応させ、さらにテトラヒドロフラン（ＴＨＥ）等の溶剤と水を加え、室温で０．５〜５０時間、好ましくは１５時間反応させて目的とする化合物（１５）または化合物（１６）を得る。この化合物（１５）が前記式で表される７−ＧＡＧ−ＤＴであり、化合物（１６）が前記式で表される１０−ＧＡＧ−ＤＴである。
なお、テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりにテトラベンジル酢酸オキシマンノシドを用いた場合も同様の反応によって、前記式で表される７−ＭＡＧ−ＤＴおよび１０−ＭＡＧ−ＤＴを得ることができる。
また、ドセタクセルの代わりに１０−デアセチル−パクリタクセル（１７）を用いた場合は、反応工程（ＩＩＩ）に従い、２’位と７位を保護した化合物（１８）とテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）を反応させて得られた化合物（１９）を経て、前記式で表される１０−ＧＡＧ−ＰＴ（２０）を得ることができる。同様に、テトラベンジル酢酸オキシマンノシドを用いた場合は、前記式で表される１０−ＭＡＧ−ＰＴを得ることができる。
同様に、ドセタクセルの代わりにパクリタクセル（２１）を用いた場合は、反応工程（ＩＶ）に従い、２’位を保護した化合物（２２）とテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）を反応させて得られた化合物（２３）を経て、前記式で表される７−ＧＡＧ−ＰＴ（２４）を得ることができる。同様に、テトラベンジル酢酸オキシマンノシドを用いた場合は、前記式で表される７−ＭＡＧ−ＰＴを得ることができる。
更に、ドセタクセルの代わりに１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（７）を用いた場合は、反応工程（Ｖ）に従い、７位を保護した化合物（２５）とテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）を反応させて得られた化合物（２６）を経て、前記式で表される１０−ＧＡＧ−バッカチンＩＩＩ（２７）を得ることができる。同様に、テトラベンジル酢酸オキシマンノシドを用いた場合は、前記式で表される１０−ＭＡＧ−バッカチンＩＩＩを得ることができる。
本発明のタキソイド誘導体は、ＯＤＳなどのシリカゲルを母体とする担体を用いた液体クロマトグラフィーを適用することにより、容易にアノマーを分離することができ、医薬品としても利用できる精製標品が得られる。
これらのタキソイド誘導体はいずれも水に対する溶解度が向上しており、パクリタクセルの溶解度が０．４μｇ／ｍｌであるのに対し、例えば７−ＧＡＧ−ＰＴは６７．８μｇ／ｍｌ（１６９倍）、７−ＭＡＧ−ＰＴは１０３．０μｇ／ｍｌ（２５７倍）、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）は４８１．７μｇ／ｍｌ（１２０４倍）、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（β−アノマー）は３０１．４μｇ／ｍｌ（７５３倍）、１０−ＭＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）は１０３８．６μｇ／ｍｌ（２５９６倍）である。また、これらのタキソイド誘導体は、アルコールに対する溶解性も改善されている。
これらのタキソイド誘導体をｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＰ３８８白血病細胞を移植したマウスに投与したところ、パクリタクセルと比較して１０−ＭＡＧ−ＤＴではほぼ同等、１０−ＧＡＧ−ＤＴでは１．２倍の延命効果があった。また、そのときのマウスの体重は、パクリタクセルを投与した場合、急激に体重が減少したが、これらのタキソイド誘導体では、全く体重の減少は見られなかったことより、安全性についても優れているという結果が得られた。このように、各タキソイド誘導体の生理活性はパクリタクセルと同等かそれ以上であり、また安全性についても優れていることから、本発明のタキソイド誘導体を抗癌剤として用いることが可能である。また、ガラクトースやマンノースは生体内、特に肝細胞と親和性があるため、肝臓癌の治療に有効である。
次に、本発明を実施例により詳しく説明するが、本発明はこれらにより制限されるものではない。
製造例１
常法により得られたテトラベンジルガラクトース（１）１０ｍｍｏｌ、エチルグリコレート３０ｍｍｏｌ、ｐ−トルエンスルホン酸１ｍｍｏｌ、ベンゼン１０ｍｌを１１０℃で８時間反応させ、化合物（２）（Ｃ３８Ｈ４２Ｏ８、分子量６２６．７４）を得た。
次いで、この化合物３ｍｍｏｌを６Ｎ  ＮａＯＨ  １０ｍｌ、メタノール１０ｍｌ、ジオキサン１５ｍｌと共に室温〜１００℃で３時間反応させた後、１Ｎ  ＨＣｌ  ８０ｍｌ中に移して脱エチル化することにより、化合物（３）、すなわちカルボン酸化合物（Ｃ３６Ｈ３８Ｏ８、分子量５９８．６９）を得た。
製造例２
常法により得られたテトラベンジルマンノース（４）１０ｍｍｏｌ、エチルグリコレート３０ｍｍｏｌ、ｐ−トルエンスルホン酸１ｍｍｏｌ、ベンゼン１０ｍｌを１１０℃で８時間反応させ、化合物（５）（Ｃ３８Ｈ４２Ｏ８、分子量６２６．７４）を得た。
次いで、この化合物３ｍｍｏｌを６Ｎ  ＮａＯＨ  １０ｍｌ、メタノール１０ｍｌ、ジオキサン１５ｍｌと共に室温〜１００℃で３時間反応させた後、１Ｎ  ＨＣｌ  ８０ｍｌ中に移して脱エチル化することにより、化合物（６）、すなわちカルボン酸化合物（Ｃ３６Ｈ３８Ｏ８、分子量５９８．６９）を得た。
実施例１
１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（７）０．３ｍｍｏｌ、製造例１で得たテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）０．６ｍｍｏｌ、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）１ｍｍｏｌ、シシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１ｍｍｏｌおよび塩化メチレン５ｍｌをアルゴン下、室温で３時間反応し、７位に配糖化した化合物（８）（Ｃ６５Ｈ７２Ｏ１７、分子量１１２５．２７）を得た。
この化合物（８）０．２ｍｍｏｌをパラジウムブラック１００ｍｇおよび酢酸３ｍｌと水素下、室温で激しく撹拌しながら１５時間反応して脱ベンジル化を行ない、７−ＧＡＧ，１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（９）（Ｃ３７Ｈ４８Ｏ１７、分子量７６４．７８）を得た。この化合物は、反応工程（Ｉ）により製造される。
実施例２
テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりに、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）を用いて、前記実施例１と同様にして１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩと反応させて化合物（２８）を得た後、ベンジル基を外して７−ＭＡＧ，１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（２９）（Ｃ３７Ｈ４８Ｏ１７、分子量７６４．７８）を得た。この化合物は、下記の反応工程（ＶＩ）により製造される。
反応工程（ＶＩ）
0004153660.tif 000022
実施例３
ドセタクセル（１０）０．５ｍｍｏｌとクロロトリエチルシラン（ＴＥＳＣ１）１ｍｍｏｌ、イミダゾール１ｍｍｏｌおよびジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）５ｍｌをアルゴン下、室温で３時間反応し、ドセタクセルの２’位または２’位と７位をトリエチルシリル基（ＴＥＳ）で保護し、化合物（１１）および（１２）を得た。
これらの化合物（１１）および（１２）０．３ｍｍｏｌと製造例１で得たテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）０．６ｍｍｏｌ、ＤＭＡＰ  １ｍｍｏｌ、ＤＣＣ  １ｍｍｏｌおよび塩化メチレン５ｍｌをアルゴン下、室温で３時間反応し、配糖化した化合物（１３）および（１４）を得た。
得られた化合物（１３）および（１４）０．２ｍｍｏｌ、パラジウムブラック１００ｍｇおよび酢酸３ｍｌを水素下、室温で激しく撹拌しながら１５時間反応した。さらに、テトラヒドロフラン（ＴＨＥ）１ｍｌと水１ｍｌを加え、室温で１５時間反応して７−ＧＡＧ−ＤＴ（１５）（Ｃ５１Ｈ６５ＮＯ２１、分子量１０２８．０７）と１０−ＧＡＧ−ＤＴ（１６）（Ｃ５１Ｈ６５ＮＯ２１、分子量１０２８．０７）を得た。
次に、シリカゲル（商品名：ＯＤＳ、ワイエムシィ社製）を充填したカラム（φ２０ｍｍ×２５０ｍｍ）を用い、メタノールを移動相として７−ＧＡＧ−ＤＴおよび１０−ＧＡＧ−ＤＴをそれぞれアノマー毎に精製した。この化合物は、反応工程（ＩＩ）により製造される。
実施例４
テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりに、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）を用いて、前記実施例３と同様にして配糖体を得ることができる。
すなわち、ドセタクセルの２’または２’位と７位をＴＢＳで保護した化合物（１１）と（１２）を得た後、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）と反応させて化合物（３０）および（３１）を得た。その後、これらの化合物（３０）および（３１）からベンジル基とＴＢＳを外して７−ＭＡＧ−ＤＴ（３２）（Ｃ５１Ｈ６５ＮＯ２１、分子量１０２８．０７）および１０−ＭＡＧ−ＤＴ（３３）（Ｃ５１Ｈ６５ＮＯ２１、分子量１０２８．０７）を得た。
次に、カラムにて７−ＭＡＧ−ＤＴおよび１０−ＭＡＧ−ＤＴをそれぞれ精製した。この化合物は、下記の反応工程（ＶＩＩ）により製造される。
反応工程（ＶＩＩ）
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実施例５
ドセタクセルの代わりに１０−デアセチル−パクリタクセル（１７）を用いて、前記実施例３と同様にして１０−デアセチル−パクリタクセルの２’位と７位をＴＢＳ基で保護した化合物（１８）を得た後、製造例１で得たテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）と反応させて化合物（１９）を得た。その後、この化合物（１９）からベンジル基とＴＢＳ基を外して１０−ＧＡＧ−ＰＴ（２０）（Ｃ５３Ｈ６１ＮＯ２０、分子量１０３２．０６）を得た。この化合物は、反応工程（ＩＩＩ）により製造される。
実施例６
テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりに、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）を用いて、前記実施例５と同様にして配糖体を得ることができる。
すなわち、１０−デアセチル−パクリタクセルの２’位と７位をＴＢＳ基で保護した化合物（１８）を得た後、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）と反応させて化合物（３４）を得た。その後、この化合物（３４）からベンジル基とＴＢＳ基を外して１０−ＭＡＧ−ＰＴ（３５）（Ｃ５３Ｈ６１ＮＯ２０、分子量１０３２．０６）を得た。この化合物は、下記の反応工程（ＶＩＩＩ）により製造される。
反応工程（ＶＩＩＩ）
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実施例７
ドセタクセルの代わりにパクリタクセル（２１）を用いて、前記実施例３と同様にしてパクリタクセルの２’位をＴＢＳ基で保護した化合物（２２）を得た後、製造例１で得たテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）と反応させて化合物（２３）を得た。その後、この化合物（２３）からベンジル基とＴＢＳ基を外して７−ＧＡＧ−ＰＴ（２４）（Ｃ５５Ｈ６３ＮＯ２１、分子量１０７４．１０）を得た。この化合物は、反応工程（ＩＶ）により製造される。
実施例８
テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりに、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）を用いて、前記実施例７と同様にして配糖体を得ることができる。
すなわち、パクリタクセルの２’位をＴＢＳ基で保護した化合物（２２）を得た後、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）と反応させて化合物（３６）を得た。その後、この化合物（３６）からベンジル基とＴＥＳ基を外して７−ＭＡＧ−ＰＴ（３７）（Ｃ５５Ｈ６３ＮＯ２１、分子量１０７４．１０）を得た。この化合物は、下記の反応工程（ＩＸ）により製造される。
反応工程（ＩＸ）
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実施例９
ドセタクセルの代わりに、１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩ（７）を用い、前記実施例３と同様にして１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩの７位をＴＢＳ基で保護した化合物（２５）を得た後、製造例１で得たテトラベンジル酢酸オキシガラクトシド（３）と反応させて化合物（２６）を得た。その後、この化合物（２６）からベンジル基とＴＢＳ基を外して１０−ＧＡＧ−バッカチンＩＩＩ（２７）（Ｃ３７Ｈ４８ＮＯ１７、分子量７６４．７８）を得た。この化合物は、反応工程（Ｖ）により製造される。
実施例１０
テトラベンジル酢酸オキシガラクトシドの代わりに、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）を用いて、前記実施例９と同様にして配糖体を得ることができる。
すなわち、１０−デアセチル−バッカチンＩＩＩの７位をＴＥＳ基で保護した化合物（２５）を得た後、製造例２で得たテトラベンジル酢酸オキシマンノシド（６）と反応させて化合物（３８）を得た。その後、この化合物（３８）からベンジル基とＴＢＳ基を外して１０−ＭＡＧ−バッカチンＩＩＩ（３９）（Ｃ３７Ｈ４８ＮＯ１７、分子量７６４．７８）を得た。この化合物は、下記の反応工程（Ｘ）により製造される。
反応工程（Ｘ）
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実施例１１
パクリタクセル、７−ＧＡＧ−ＰＴ、７−ＭＡＧ−ＰＴ、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（β−アノマー）、１０−ＭＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）をそれぞれ１０ｍｇ秤取し、水５ｍｌを加えて１８時間撹拌した。撹拌終了後、上清をメンブレンフィルター（０．４５μｍ）にて濾過し、濾液をＨＰＬＣにて分析した。その結果、各化合物の水に対する溶解度は第１表に示す通りであった。なお、ＨＰＬＣの分析条件は以下の通りである。
カラム：Ｍｅｔａｃｈｅｍ製Ｔａｘｉｌ  ５μ（４．６×２５０ｍｍ）
溶  媒：ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８０／２０）
流  速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：フォトダイオードアレイ検出器（２３０ｎｍ）
注入量：２０μｌ
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表から明らかなように、パクリタクセルと比較して、タキソイド誘導体の溶解度は飛躍的に向上している。また、水溶液中でも分解は受けず、安定であった。
実施例１２
パクリタクセル、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（β−アノマー）、１０−ＭＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）についてＰ３８８白血病細胞を移植したマウスを用いて、抗腫瘍試験を行なった。
マウスは、７週齢のＣＤＦＴマウス（雄性）を用いた。Ｐ３８８白血病細胞は、ＤＢＡ／２マウス腹腔内で継代したものを、マウスあたり１０６個腹腔内に注入した。サンプルは、パクリタクセルの場合、エタノール：クレモフォア＝１：１の溶液に６ｍｇ／ｍｌになるように溶解した後、生理食塩液で３倍希釈したものを１回あたりマウス１０ｇにつき０．１ｍｌを腹腔内投与した。タキソイド誘導体は、エタノール：クレモフォア＝１：１の溶液に６０ｍｇ／ｍｌになるように溶解した後、生理食塩液で３０倍希釈したものを１回あたりマウス１０ｇにつき０．１ｍｌを腹腔内投与した。
試験は、Ｐ３８８白血病細胞を腹腔内注入した翌日より、サンプルを５日間連続で腹腔内投与し、その生存日数と体重変化について観察した。
生存日数の結果を第２表に、体重変化の結果を図１に示す。
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表より、コントロール群では生存中央値が７日に対して、パクリタクセル群では１０日、１０−ＭＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）群では９日、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（α−アノマー）群では１２日、１０−ＧＡＧ−ＤＴ（β−アノマー）群では１２日であった。このことより、これらタキソイド誘導体は、パクリタクセルとほぼ同等かそれ以上の抗腫瘍活性があることが分かった。特に、１０−ＧＡＧ−ＤＴは優れた抗腫瘍活性を有していた。
また、図より明らかなように、パクリタクセル群では薬剤を投与後、急激に体重が減少しているが、これらタキソイド誘導体ではほとんど体重の増減は見られず、安全性の面においても優れていることが示された。
産業上の利用可能性
本発明により、水に対する溶解度が向上し、かつ生理活性も改善されたタキソイド誘導体と、その製造方法が提供される。このタキソイド誘導体は、患者の負担を軽減し、かつ効果的な癌治療薬としての利用が期待できる。
【図面の簡単な説明】
図１は、Ｐ３８８白血病細胞移植マウスの体重に及ぼすタキソイド誘導体の影響を示すグラフである。
【図１】
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