(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
培地で菌を所定時間培養して得られた菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第１粒度分布を作成する第１粒度分布作成ステップと、
菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて所定時間培養した後に得られる抗生剤含有菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第２粒度分布を作成する第２粒度分布作成ステップと、
前記第１粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第１領域と、前記第２粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第２領域と、の各領域に共通する領域である共通領域を求めるステップと、
前記共通領域を前記第２領域から除いて判定領域を求めるステップと、
前記判定領域に含まれる粒子数が前記第２粒度分布に含まれる粒子数に対して占める割合である占有割合を算出するステップと、
前記抗生剤の有効性判断の基準となる基準割合と、前記占有割合とを比較するステップと、
前記比較に基づいて前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断ステップと、
を含む薬剤感受性試験方法。
【請求項２】
前記光学的情報とは散乱光強度と散乱光発光時間であり、前記粒度分布は前記散乱光強度と散乱光発光時間とをパラメータとした２次元スキャッタグラムとして作成されることを特徴とする、請求項１に記載の薬剤感受性試験方法。
【請求項３】
前記抗生剤は細胞壁合成阻害剤である、請求項１に記載の薬剤感受性試験方法。
【請求項４】
互いに相異なる２以上の濃度に設定された前記所定の抗生剤について、少なくとも１の濃度について有効と判断されるまで、前記第２粒度分布作成ステップ、前記比較ステップ及び前記判断ステップを繰り返す繰り返しステップと、
有効と判断された濃度のうち最小の濃度を最小発育阻止濃度（ＭＩＣ；Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）と決定する決定ステップと、
をさらに含む、請求項１に記載の薬剤感受性試験方法。
【請求項５】
培地で菌を所定時間培養して得られた菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第１粒度分布を作成する第１粒度分布作成手段と、
菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて前記所定時間培養した後に得られる抗生剤含有菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第２粒度分布を作成する第２粒度分布作成手段と、
前記第１粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第１領域と、前記第２粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第２領域と、の各領域に共通する領域である共通領域を求める手段と、
前記共通領域を前記第２領域から除いて判定領域を求める手段と、
前記判定領域に含まれる粒子数が前記第２粒度分布に含まれる粒子数に対して占める割合である占有割合を算出する手段と、
前記抗生剤の有効性判断の基準となる基準割合と、前記占有割合とを比較する手段と、
前記比較に基づいて前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断手段と、
を含む薬剤感受性試験装置。
【請求項６】
菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて所定時間培養した後に得られる抗生剤含有液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から粒度分布を作成する粒度分布作成ステップと、
前記粒度分布において所定の範囲の領域に含まれる粒子数である領域粒子数と、前記粒度分布の母集団の大きさである全粒子数と、に基づいて、前記全粒子数に占める前記領域粒子数の割合を算出する占有割合算出ステップと、
前記抗生剤の有効性を示す基準となる基準割合と、前記領域粒子数の割合とに基づいて、前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断ステップと、
を含む薬剤感受性試験方法。
【請求項７】
前記光学的情報とは散乱光強度と散乱光発光時間であり、前記粒度分布は前記散乱光強度と散乱光発光時間とをパラメータとした２次元スキャッタグラムとして作成されることを特徴とする、請求項６に記載の薬剤感受性試験方法。
【請求項８】
前記抗生剤は核酸代謝阻害剤もしくは蛋白合成阻害剤である、請求項６に記載の薬剤感受性試験方法。
【請求項９】
互いに相異なる２以上の濃度に設定された前記所定の抗生剤について、少なくとも１の濃度について有効と判断されるまで、前記粒度分布作成ステップ、前記占有割合算出ステップ及び前記判断ステップを繰り返す繰り返しステップと、
有効と判断された濃度のうち最小の濃度を最小発育阻止濃度（ＭＩＣ；Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）と決定する決定ステップと、
をさらに含む、請求項６に記載の薬剤感受性試験方法。
【請求項１０】
菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて所定時間培養した後に得られる抗生剤含有液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から粒度分布を作成する粒度分布作成手段と、
前記粒度分布において所定の範囲の領域に含まれる粒子数である領域粒子数と、前記粒度分布の母集団の大きさである全粒子数と、に基づいて、前記全粒子数に占める前記領域粒子数の割合を算出する占有割合算出手段と、
前記抗生剤の有効性を示す基準となる基準割合と、前記領域粒子数の割合とに基づいて、前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断手段と、
を有する薬剤感受性試験装置。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、菌に対する抗生剤の有効性と有効かつ最小の濃度とを調べる薬剤感受性試験方法及びその装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
感染症患者の治療に抗生剤を用いる場合、副作用を避けるため、抗生剤の投与量を菌に対して有効かつ最少である量に調節することが好ましい。そのため、患者から採取した菌に対していかなる抗生剤がいかなる濃度であれば有効であるか、を調べる試験として薬剤感受性試験が行われ、またここで最小発育阻止濃度（ＭＩＣ；Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）が決定される。
【０００３】
従来の薬剤感受性試験方法としては微量液体希釈法が標準的であり、それは例えば以下のような手順により行われる。１）菌を平板寒天培地で２４時間から４８時間程度培養する。２）培養により形成されたコロニーから釣菌し、液体培地や生理食塩水中で４時間から５時間程度培養して試験に必要な菌量を確保し、菌液を作成する。３）多穴のプレートなどを用いて、所定の濃度を有する抗生剤について抗生剤希釈系列を作成する。４）抗生剤希釈系列に菌液を接種して、１８時間から２４時間程度培養する。５）抗生剤希釈系列の濁度変化を目視により、あるいは比色計や分光光度計により判別して薬剤感受性の有無を判断し、ＭＩＣを決定する。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
前記方法では、釣菌後、２）にあるように４時間から５時間程度の培養を要する。これは試験に必要な菌量を確保するためである。また４）にあるように、抗生剤希釈系列に菌液を接種してからも１８時間から２４時間程度の培養を要する。これは濁度変化を判別することが可能になるまで菌を増殖させる必要があるためである。
【０００５】
このように薬剤感受性試験は長時間を要するものであるが、患者から菌を採取してからＭＩＣを決定し、患者に抗生剤を投与するまでの時間がもっと短ければ患者の命が助かったと思われるような場合もあり、薬剤感受性試験の迅速化が望まれている。
【０００６】
また、菌液の濁度変化を目視によって判別するにはある程度の熟練が必要であり、経験を充分に有しない者にはＭＩＣの決定が困難である。
上記の問題点に鑑み、本発明は、フローサイトメータを用いることにより、薬剤感受性の判断及びＭＩＣの決定を迅速かつ容易に行うことを可能にするものである。
【０００７】
なお、米国特許６，１６５，７４０号には、フローサイトメータを用いて細菌等の微生物を測定する方法及び装置が開示されているが、これは検体中に含まれる菌数の測定や、菌種の推定を目的としたものである。本発明は、フローサイトメータを用いた菌の検出において、さらに薬剤感受性試験やＭＩＣの決定を可能とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
前記課題を解決するため、本願第１発明は薬剤感受性試験方法を提供する。この方法は、以下のステップを含んでいる。
・培地で菌を所定時間培養して得られた菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第１粒度分布を作成する第１粒度分布作成ステップ、
・菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて所定時間培養した後に得られる抗生剤含有菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第２粒度分布を作成する第２粒度分布作成ステップ、
・前記第１粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第１領域と、前記第２粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第２領域と、の各領域に共通する領域である共通領域を求めるステップ、
・前記共通領域を前記第２領域から除いて判定領域を求めるステップ、
・前記判定領域に含まれる粒子数が前記第２粒度分布に含まれる粒子数に対して占める割合である占有割合を算出するステップ、
・前記抗生剤の有効性判断の基準となる基準割合と、前記占有割合とを比較するステップ、
・前記比較に基づいて前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断ステップ。
【０００９】
この方法を用いれば、第１粒度分布と第２粒度分布との比較により抗生剤の有効性の有無を判断できる。基準割合は抗生剤の種類や菌種により経験的に定められる。占有割合と基準割合とに基づいて薬剤感受性の有無が判断される。例えば、占有割合が基準割合以上であれば、その濃度のその抗生剤はその菌に有効であると判断される。従って、薬剤感受性試験を容易に行うことが可能である。
【００１０】
本願第２発明は、前記第１発明において、前記光学的情報とは散乱光強度と散乱光発光時間であり、前記粒度分布は前記散乱光強度と散乱光発光時間とをパラメータとした２次元スキャッタグラムとして作成されることを特徴とする薬剤感受性試験方法を提供する。
【００１１】
本願第３発明は、前記第１発明において、前記抗生剤は細胞壁合成阻害剤である薬剤感受性試験方法を提供する。
【００１２】
本願第４発明は、前記第１発明において、
・互いに相異なる２以上の濃度に設定された前記所定の抗生剤について、少なくとも１の濃度について有効と判断されるまで、前記第２粒度分布作成ステップ、前記比較ステップ及び前記判断ステップを繰り返す繰り返しステップと、
・有効と判断された濃度のうち最小の濃度を最小発育阻止濃度（ＭＩＣ；Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）と決定する決定ステップと、
をさらに含む薬剤感受性試験方法を提供する。
【００１３】
この方法では、複数の濃度について有効無効を判断することにより、有効かつ最小の濃度を決定する。
本願第５発明は、薬剤感受性試験装置を提供する。この装置は、以下の手段を有している。
・培地で菌を所定時間培養して得られた菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第１粒度分布を作成する第１粒度分布作成手段、
・菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて前記所定時間培養した後に得られる抗生剤含有菌液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から第２粒度分布を作成する第２粒度分布作成手段、
・前記第１粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第１領域と、前記第２粒度分布において粒子の分布する領域から求まる第２領域と、の各領域に共通する領域である共通領域を求める手段、
・前記共通領域を前記第２領域から除いて判定領域を求める手段、
・前記判定領域に含まれる粒子数が前記第２粒度分布に含まれる粒子数に対して占める割合である占有割合を算出する手段、
・前記抗生剤の有効性判断の基準となる基準割合と、前記占有割合とを比較する手段、
・前記比較に基づいて前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断手段。
【００１４】
この装置は、前記第１発明に係る試験方法を実行する。
本願第６発明は、薬剤感受性試験方法を提供する。この方法は、以下のステップを含んでいる。
・菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて所定時間培養した後に得られる抗生剤含有液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から粒度分布を作成する粒度分布作成ステップ、
・前記粒度分布において所定の範囲の領域に含まれる粒子数である領域粒子数と、前記粒度分布の母集団の大きさである全粒子数と、に基づいて、前記全粒子数に占める前記領域粒子数の割合を算出する占有割合算出ステップ、
・前記抗生剤の有効性を示す基準となる基準割合と、前記領域粒子数の割合とに基づいて、前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断ステップ。
【００１５】
本願第７発明は、前記第６発明において、前記光学的情報とは散乱光強度と散乱光発光時間であり、前記粒度分布は前記散乱光強度と散乱光発光時間とをパラメータとした２次元スキャッタグラムとして作成されることを特徴とする薬剤感受性試験方法を提供する。
【００１６】
本願第８発明は、前記第６発明において、前記抗生剤は核酸代謝阻害剤もしくは蛋白合成阻害剤である薬剤感受性試験方法を提供する。
本願第９発明は、前記第６発明において、
・互いに相異なる２以上の濃度に設定された前記所定の抗生剤について、少なくとも１の濃度について有効と判断されるまで、前記粒度分布作成ステップ、前記占有割合算出ステップ及び前記判断ステップを繰り返す繰り返しステップと、
・有効と判断された濃度のうち最小の濃度を最小発育阻止濃度（ＭＩＣ；Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）と決定する決定ステップと、
をさらに含む薬剤感受性試験方法を提供する。
【００１７】
複数の濃度について有効無効を判断することにより、有効かつ最小の濃度を決定することができる。
本願第１０発明は、薬剤感受性試験装置を提供する。この装置は、以下の手段を有している。
・菌を含む培地に所定の濃度を有する所定の抗生剤を加えて所定時間培養した後に得られる抗生剤含有液をフローサイトメータにより測定し、検出される光学的情報から粒度分布を作成する粒度分布作成手段、
・前記粒度分布において所定の範囲の領域に含まれる粒子数である領域粒子数と、前記粒度分布の母集団の大きさである全粒子数と、に基づいて、前記全粒子数に占める前記領域粒子数の割合を算出する占有割合算出手段、
・前記抗生剤の有効性を示す基準となる基準割合と、前記領域粒子数の割合とに基づいて、前記濃度の前記抗生剤が前記菌に有効か否かを判断する判断手段。
【００１８】
この装置は、前記第６発明に係る試験方法を実行する。
【００１９】
【発明の実施の形態】
以下、添付した図面を参照しつつ本発明の好ましい実施形態について説明する。
【００２０】
本実施形態において、培地には、微生物種類を特定しないのであれば一般細菌用培地を、微生物種類を特定するのであればその種類に適した培地を選択的に用いることができる。なお、菌を含む試料は液体試料として分注・希釈され、フローサイトメータによって測定されるので、前記培地は液体培地であることが好ましい。
【００２１】
培養処理とは、微生物を培養するための処理で、所定の温度（例えば３０〜３７℃）の恒温器に培養試料を入れ、微生物の培養を促進する処理を言う。
薬剤感受性とは、所定の濃度を有する所定の種類の抗生剤が所定の菌に対して有効であるか否かをいう。感受性有りとは、ある濃度の抗生剤がある菌に対して有効であることを言う。感受性なしとは、ある濃度の抗生剤がある菌に対して無効であることを言う。
【００２２】
＜実施形態例＞
図１は、本発明に係る薬剤感受性試験方法（以下、単に試験方法という）が適用される薬剤感受性試験システムの全体構成図である。このシステムは、フローサイトメータ１と、薬剤感受性試験装置（以下、試験装置という）２と、表示装置３とを含む。
【００２３】
フローサイトメータ１は、図２２に示すように、粒子を含む液体試料をシース液で包んで流すためのフローセル１１、シース液の流れるフローセル１１内に液体試料を吐出するサンプルノズル１２、試料流に光を照射するための光源部１３、粒子から発せられる光学的情報を検出して電気信号に変換する受光部１４からなる。光源部１３は、半導体レーザやアルゴンレーザなどの発光素子にレンズやミラー等の各種光学部品を組み合わせて構成することができる。受光部１４は、フォトダイオードやフォトマルチプライヤチューブ等の光電変換素子にレンズやミラー等の各種光学部品を組み合わせて構成することができる。本実施形態例で用いる液体試料は菌液、即ち培養液に菌を添加したものである。
【００２４】
試験装置２は、本発明に係る試験方法を実行する装置である。試験装置２はコンピュータを用いて実現され、粒度分布作成部２１、記憶部２２、判断部２３及び出力制御部２４を備えている。
【００２５】
粒度分布作成部２１は、フローサイトメータ１から粒子の光学的情報を示す電気信号を取得し、前方散乱光の発光時間（Ｆｓｃｗ；Ｆｏｒｗａｒｄ  ｓｃａｔｔｅｒ  ｐｕｌｓｅ  ｗｉｄｔｈ）、及び散乱光強度（Ｆｓｃ；Ｆｏｒｗａｒｄｓｃａｔｔｅｒ  ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ）に基づき粒度分布図を作成する。この粒度分布図は、ＦｓｃｗとＦｓｃを２つのパラメータとしたスキャッタグラムとして表現される。Ｆｓｃｗは粒子の幅を、Ｆｓｃは前記幅に直交する方向の粒子の大きさを反映するパラメータである。粒度分布作成部２１はプログラムであり、試験装置２を実現するコンピュータのＣＰＵで実行される。
【００２６】
記憶部２２は、抗生剤の種類、濃度、分かる場合は菌種、前記粒度分布図及び薬剤感受性の判断結果を対応付けて記憶する。
判断部２３は、記憶された粒度分布図に基づいて薬剤感受性の有無を判断する。また、判断部２３は抗生剤のＭＩＣを決定する。
【００２７】
出力制御部２４は、様々な濃度における抗生剤の薬剤感受性試験結果を表示装置３に出力する。
表示装置３はこの判断の結果を表示する。
【００２８】
＜処理の流れ＞
（１）ＭＩＣ決定処理
図２は、試験装置２が行うＭＩＣ決定処理の流れを示すフローチャートである。この処理は、１種類の抗生剤のＭＩＣを求める処理である。従って、抗生剤の種類が増えれば、各抗生剤の種類毎にこの処理を行い、ＭＩＣを求める。以下の説明において、抗生剤含有菌液とは、菌を含む液体培地に所定濃度を有する所定の抗生剤を添加し、所定時間培養して得られるものである。添加する抗生剤は、例えばＮＣＣＬＳ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ７−Ａ４に従って複数段階の濃度で準備される。これを抗生剤希釈系列と呼ぶ。また、コントロールとは、菌を含む液体培地を抗生剤の添加無しに所定時間培養して得られるものである。コントロールの培養時間は、抗生剤含有菌液の培養時間と同じである。また、培養前は、抗生剤添加前の抗生剤含有菌液とコントロールとの菌の濃度は同じに設定される。
【００２９】
ステップＳ１：粒度分布作成部２１は、フローサイトメータ１から抗生剤含有菌液の光学的情報を取得し、これに基づいて粒度分布図を作成する。
ステップＳ２：判断部２３は、前記粒度分布図に基づいて抗生剤の感受性を判断する。感受性有りと判断された場合、ステップＳ３へ移行する。感受性なしと判断された場合、ステップＳ５へ移行する。感受性有無の判断方法については、後述する。
【００３０】
ステップＳ３：記憶部２２は、抗生剤の種類、濃度、分かる場合は菌種と、前記粒度分布図と、抗生剤の有効／無効の判断結果とを対応づけて記憶する。
ステップＳ４：判断部２３は、全ての抗生剤含有菌液について前記ステップＳ１〜Ｓ３が行われたか否かを判断する。行われたと判断された場合、ステップＳ５へ移行する。そうでない場合、ステップＳ１へ戻る。
【００３１】
ステップＳ５：判断部２３は、記憶部２２を参照し、有効と判断された抗生剤の濃度のうち最小の濃度をＭＩＣとする。
（２）感受性有無の判断方法
感受性有無の判断方法としては、例えば以下の２つの方法がある。
【００３２】
（２−１）判断方法１
図３は、判断方法１の説明図である。判断方法１では下式が成立すれば感受性有りと判断する。
【００３３】
占有割合＞基準割合
占有割合＝（判定領域に含まれる菌数）×１００／（抗生剤含有菌液中の菌数）
ここで、基準割合は、菌の種類並びに抗生剤の種類及び濃度に依存し、経験的に定められる。判定領域とは次のようにして求められる。図３（ａ）は、コントロールをフローサイトメータで測定して得られる第１粒度分布図において粒子が存在する領域（以下、第１領域という）である。図３（ｂ）は、抗生剤含有菌液をフローサイトメータで測定して得られる第２粒度分布図において粒子が存在する領域（以下、第２領域という）である。図３（ｃ）は、第１粒度分布図と第２粒度分布図とを重ねた図である。第１領域と第２領域とが重複する領域を共通領域とすると、第２領域から共通領域を除いた図中斜線の領域が判定領域である。
【００３４】
図４（ａ）は、第１粒度分布図と第２粒度分布図とを重ねた結果、第１領域が第２領域に完全に含まれる場合を示す。この場合、共通領域は第１領域と等しくなる。判定領域は、第２領域から第１領域を除いた図中斜線の領域である。図４（ｂ）は、第１粒度分布図と第２粒度分布図とを重ねた結果、第１領域と第２領域とが全く重ならず共通領域が存在しない場合を示す。この場合、第２領域は判定領域と等しくなる。
【００３５】
尚、菌液に含まれる夾雑物の影響を薬剤感受性判断から除くため、次のようにして新たな第２領域及び判定領域を求めても良い。図５（ａ）は、新たな第２領域の求め方を示す。すなわち、第２粒度分布図における全粒子数を１００％としたとき、粒子数の密度の少ない領域を元の第２領域から除去することにより、例えば全粒子数の１０％を除去した新第２領域を形成する。図５（ｂ）は、得られた新第２領域と第１領域との共通領域を、新第２領域から除いて得られる判定領域を示す。
【００３６】
（２−２）判断方法２
図６は判断方法２の説明図である。判断方法２では、前記判断方法１と同様に下式が成立すれば感受性有りと判断する。
【００３７】
占有割合＞基準割合
占有割合＝（判定領域に含まれる菌数）×１００／（抗生剤含有菌液中の菌数）
ここで、基準割合は、菌の種類並びに抗生剤の種類及び濃度に依存し、経験的に定められるのは、前記判断方法１と同様である。ただし、判断方法２では判定領域を次のようにして求める。
【００３８】
図６は、判断方法２における判定領域の求め方を示す。判断方法２では、抗生剤含有菌液の粒度分布図において、散乱光強度が所定の範囲内にある領域と粒子が存在する領域との交わりを判定領域とする。図６（ａ）は、Ｙ１≦（散乱光強度）≦Ｙ２の領域と粒子が存在する領域との交わりを判定領域とする図である。図６（ｂ）は、Ｙ３≦（散乱光強度）≦Ｙ４の領域と粒子が存在する領域との交わりを判定領域とする図である。この例では、Ｙ３＝０である。Ｙ１，Ｙ２，Ｙ３，Ｙ４の値は、菌の種類並びに抗生剤の種類及び濃度に依存し、経験的に定められる。
【００３９】
（２−３）その他の判断方法
前記判断方法１は、第１粒度分布図において粒子が存在する領域（第１領域）と、第２粒度分布図において粒子が存在する領域（第２領域）との間に生じる位置関係上の変化に着目して薬剤感受性の有無を判断するものであるといえる。
【００４０】
前記判断方法１はさらにその一方法として、第１領域と第２領域との間に生じる位置関係上の変化の度合いを、判定領域における占有割合が基準割合を超えるか否か、という観点から捉えたものであるといえるが、他の観点から第１領域と第２領域との間に生じる位置関係上の変化の度合いを捉えることも可能である。
【００４１】
その例として、第１粒度分布図上に分布する粒子の重心位置（第１重心位置）と、第２粒度分布図上に分布する粒子の重心位置（第２重心位置）を算出し、第１重心位置と第２重心位置との距離を算出する方法が考えられる。この距離が所定の距離を越えた場合に、第１領域と第２領域との位置関係が大きく変化したとして、薬剤感受性有りと判断する。
【００４２】
［実施例］
本発明に係る試験方法を用い、実際に薬剤感受性の有無を判定してＭＩＣを求める実験を行ったので、これを説明する。
【００４３】
（１）本発明に係る試験方法の実施
（１−１）抗生剤希釈系列の作成
薬剤感受性試験を行う抗生剤は、Ｐｉｐｅｒａｃｉｌｌｉｎ  ｓｏｄｉｕｍ（ＰＩＰＣ）、Ｌｅｖｏｆｌｏｘａｃｉｎ（ＬＶＦＸ）、Ａｍｉｋａｃｉｎ  ｓｕｌｆａｔｅ（ＡＭＫ）及びＭｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ  ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＭＩＮＯ）の４種類を用いた。各抗生剤について、ＮＣＣＬＳ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ７−Ａ４に従い倍希釈６段階の濃度まで作成し、各抗生剤の希釈系列を得た。各抗生剤は表１に示す終濃度に調整し、２ｍｌ微量試験管に２００μｌ分注の後、使用まで−８０℃で保存した。
【００４４】
【表１】
0004083412.tif 000002
（１−２）コントロール及び抗生剤含有菌液の作成
薬剤感受性試験のために培養する菌種としては、グラム陰性桿菌であるＥ．ｃｏｌｉ、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ、Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ、Ｍ．ｍｏｒｇａｎｉｉ、Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ及びＰ．ｖｕｌｇａｒｉｓを選んだ。
【００４５】
まず、ＬＢ（Ｌｕｒｉａ−Ｂｅｒｔａｎｉ）寒天培地に菌を添加し一晩培養した。培養後前記寒天培地に現れたコロニーから各菌種を釣菌し、Ｍｕｅｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎ液体培地に混釈した。これを５分間振盪した。そして、フローサイトメータにて粒子数を測定し、６×１０５個／ｍｌ濃度の菌液を作成した。
【００４６】
前記（１−１）で準備した抗生剤を入れた２ｍｌ微量試験管のそれぞれに、作成した菌液を１ｍｌづつ分注し、３７℃で１２０分激しく振盪して培養し、抗生剤含有菌液を得た。
【００４７】
一方、作成した菌液を抗生剤なしで３７℃で１２０分激しく振盪して培養し、コントロールを得た。
以上のようにして、抗生剤含有菌液及びコントロールを、抗生剤の種別、濃度、菌種毎に３セットづつ準備した。
【００４８】
（１−３）スキャッタグラムの作成
以上のようにして得られたコントロール及び抗生剤含有菌液を、フローサイトメータ１で測定した。本実施例では、各粒子毎の前方散乱光の発光時間（Ｆｓｃｗ）、及び散乱光強度（Ｆｓｃ）を測定した。そして、粒度分布作成部２１においてＸ軸をＦｓｃｗ、Ｙ軸をＦｓｃとするスキャッタグラムを粒度分布図として作成した。このスキャッタグラムは、ＦｓｃｗをＸ軸、ＦｓｃをＹ軸とする２次元座標から構成されている。Ｘ・Ｙ各軸は２５６等分されており、０から２５６の区画に区分されている。図７及び図８は前記９種の各菌毎のコントロールをフローサイトメータで測定して得られたスキャッタグラムである。図９及び図１０は、濃度６４μｇ／ｍｌのＰＩＰＣを加えた抗生剤含有菌液に含まれる前記９種の各菌の粒度分布を示すスキャッタグラムの例である。図１１及び図１２は、濃度８μｇ／ｍｌのＬＶＦＸを加えた抗生剤含有菌液に含まれる前記９種の各菌の粒度分布を示すスキャッタグラムの例である。図１３及び図１４は、濃度３２μｇ／ｍｌのＡＭＫを加えた抗生剤含有菌液に含まれる前記９種の各菌の粒度分布を示すスキャッタグラムの例である。図１５及び図１６は、濃度１６μｇ／ｍｌのＭＩＮＯを加えた抗生剤含有菌液に含まれる前記９種の各菌の粒度分布を示すスキャッタグラムの例である。
【００４９】
各菌種において、コントロールのスキャッタグラムと抗生剤含有菌液のスキャッタグラムとを比較すると、粒度分布に違いが生じていることがわかる。ところで、抗生剤としてＰＩＰＣを加えた抗生剤含有菌液のスキャッタグラム（図９及び図１０）には、コントロールのスキャッタグラム（図７及び図８）と比べ粒子がｘ軸方向に広がって分布しているものが多い。これは、ＰＩＰＣが細胞壁合成阻害剤であるため、菌に作用した場合に膨化が生じるためだと予想される。
【００５０】
一方、抗生剤としてＬＶＦＸ、ＡＭＫ、ＭＩＮＯを加えた抗生剤含有菌液のスキャッタグラム（図１１から図１６）には、コントロールのスキャッタグラム（図７及び図８）と比べ粒子がｙ軸方向について縮小して分布しているものが多い。これは前記３種類の抗生剤が、核酸代謝阻害剤あるいは蛋白合成阻害剤であり、細胞核に作用して細胞が収縮するためだと予想される。
【００５１】
図１７は、９種のグラム陰性桿菌のうちＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを、４種の抗生剤のうちＰＩＰＣを例に取った場合の、抗生剤の濃度別スキャッタグラムである。図１８は、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ及びＬＶＦＸを例に取った場合の、抗生剤の濃度別スキャッタグラムである。抗生剤の濃度の変化により粒度分布が変化している。
【００５２】
（１−４）判定領域の決定
判断部２３において薬剤感受性の有無を判断するための判定領域は、以下の通りとした。
【００５３】
抗生剤がＰＩＰＣの場合、前述の判断方法１により判定領域を決定した。即ち、スキャッタグラム中、粒子密度の少ない区画を除くことにより全粒子数の１０％を除去し、残った区画からなる領域を前記新第２領域とした。また、コントロールのスキャッタグラムにおいて粒子が存在する区画からなる領域と前記新第２領域との共通領域を新第２領域から除き、判定領域とした。
【００５４】
抗生剤がＰＩＰＣ以外でありかつ菌種がＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ以外である場合、前記判断方法２により判定領域を決定した。より具体的には、抗生剤含有菌液のスキャッタグラムのうち粒子が存在する区画からなる領域と、０≦Ｆｓｃ≦２０で表される領域との交わりを、判定領域とした。
【００５５】
抗生剤がＰＩＰＣ以外でありかつ菌種がＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａである場合、前記判断方法２により判定領域を決定した。より具体的には、抗生剤含有菌液のスキャッタグラムのうち粒子が存在する区画からなる領域と、５≦Ｆｓｃ≦８で表される領域との交わりを、判定領域とした。
【００５６】
（１−５）薬剤感受性の有無の判断
また判断部２３では前記判断方法１及び２に従い、判定領域に基づいて各抗生剤含有菌液について占有割合を求め、薬剤感受性の有無の判断が行われる。判断基準として用いた基準割合を以下に示す。なお、基準割合は、抗生剤の種類や菌の種類に応じ、経験的に求められる。
【００５７】
（１−５−１）菌がＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ以外の場合
（ａ）抗生剤がＰＩＰＣの場合
（基準割合）＝６５％
（占有割合）≧６５％ならば薬剤感受性有り。
【００５８】
（ｂ）抗生剤がＬＶＦＸの場合
（基準割合）＝４０％
（占有割合）≧４０％ならば薬剤感受性有り。
【００５９】
（ｃ）抗生剤がＡＭＫの場合
（基準割合）＝４４％
（占有割合）≧４４％ならば薬剤感受性有り。
【００６０】
（ｄ）抗生剤がＭＩＮＯの場合
（基準割合）＝６７％
（占有割合）≧６７％ならば薬剤感受性有り。
【００６１】
（１−５−２）菌がＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの場合
（ｅ）抗生剤がＰＩＰＣの場合
（基準割合）＝８０％
（占有割合）≧８０％ならば薬剤感受性有り。
【００６２】
（ｆ）抗生剤がＬＶＦＸの場合
（基準割合）＝３０％
（占有割合）≧３０％ならば薬剤感受性有り。
【００６３】
（ｇ）抗生剤がＡＭＫの場合
（基準割合）＝６４％
（占有割合）≧６４％ならば薬剤感受性有り。
【００６４】
（ｈ）抗生剤がＭＩＮＯの場合
（基準割合）＝６１％
（占有割合）≧６１％ならば薬剤感受性有り。
【００６５】
図１９は、求めた占有割合のうち、一例としてＫ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅについて求めた占有割合を示す。例えばＰＩＰＣについての前記基準割合を図１９に適用すると、占有割合が６５％以上となるＰＩＰＣのＭＩＣは、１セット目については４μｇ／ｍｌである。同様にして、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの１セット目のＭＩＣを各抗生剤について前記基準割合に基づいて決定すると、ＬＶＦＸでは０．２５μｇ／ｍｌ、ＡＭＫでは１μｇ／ｍｌ、ＭＩＮＯでは０．５μｇ／ｍｌとなる。同様にして、他の菌についてもＭＩＣを求めた。
【００６６】
図２０及び図２１は、Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む抗生剤含有菌液中の粒子数の抗生剤濃度に対する変化を示している。図２０（ａ）は、ＰＩＰＣの濃度に対する判定領域中の粒子数の変化を示す。図２０（ｂ）〜（ｅ）は、各抗生剤の濃度に対する、抗生剤含有菌液中の全粒子数の変化を示す。図２１（ｆ）〜（ｉ）は、各抗生剤の濃度に対する、共通領域に含まれる粒子数の変化を示す。図２０及び図２１からは、抗生剤の濃度変化に応じて菌の発育が抑制されているものの、ＭＩＣをこの図から一意的に求めることは難しいことが分かる。
【００６７】
（２）微量液体希釈法によるＭＩＣの決定
本発明に係る試験方法との比較のため、前記（１）で述べた菌種及び抗生剤を用い、各菌種に対する各抗生剤のＭＩＣを微量液体希釈法により決定した。６段階の濃度の抗生剤希釈系列の作成は、前記（１−１）と同様、ＮＣＣＬＳ  Ｄｏｃｕｍｅｎｔ  Ｍ７−Ａ４に従って行った。表２は、微量液体希釈法で求めたＭＩＣを示す。
【００６８】
【表２】
0004083412.tif 000003
（３）本発明の試験方法と微量液体希釈法との比較
以上のようにして、本発明の試験方法及び微量液体希釈法を用い、１つの抗生剤について９種の菌に対するＭＩＣを３回づつ求めた。さらに、１つの抗生剤について各方法でそれぞれ得られた２７のＭＩＣを比較した。表３は、本発明の試験方法により得られたＭＩＣと、微量液体希釈法により得られたＭＩＣとの比較結果を、抗生剤ごとに示している。ここで、正の濃度レベル、例えば濃度レベル「＋１」は、本方法で求めたＭＩＣ（以下、本方法ＭＩＣ）が微量液体希釈法により求めたＭＩＣ（以下、従来ＭＩＣ）より前述の倍希釈６段階で１段階高いことを示す。また、負の濃度レベル、例えば濃度レベル「−１」は本方法ＭＩＣが従来ＭＩＣより前述の倍希釈６段階で１段階低いことを示す。さらに、濃度レベル「Ｓａｍｅ」は、本方法ＭＩＣと従来ＭＩＣとが一致したことを示す。表中の数字は、各濃度レベルに該当する本方法ＭＩＣの数を示している。例えば、ＰＩＰＣについては濃度レベル「Ｓａｍｅ」に該当するＭＩＣは２２、濃度レベル「−１」に該当するＭＩＣは５である。
【００６９】
【表３】
0004083412.tif 000004
この表から、ＰＩＰＣ、ＬＶＦＸ及びＡＭＫについては、本発明の試験方法と微量液体希釈法とがよく一致していることが分かる。ＭＩＮＯについては、判定領域を決定するためのＦｓｃの値の範囲や基準割合を変えることにより、本発明の試験方法と微量液体希釈法との結果がさらによく一致するようになると考えられる。
【００７０】
以上のように、フローサイトメータを用いて作成された粒度分布図に基づいて薬剤感受性の有無を判断し、ＭＩＣの決定を行う。
なお、抗生剤含有菌液及びコントロールの準備についても自動化することが可能であり、本発明の薬剤感受性試験方法が適用される薬剤感受性試験システムにおいて、フローサイトメータ１に前処理部を接続することにより実現できる。その構成例を図２３に示す。図２３においては、フローサイトメータ１に前処理部４が接続されており、前処理部４にて抗生剤含有菌液やコントロールが作成され、フローサイトメータ１に送液される。図２４はフローサイトメータ１及びそこに接続された前処理部４を示す。菌液プレート４１、抗生剤プレート４２、希釈液プレート４３、インキュベータ４４、分注装置４５、分注装置４５の定量吸引・吐出を司るシリンジ４６からなる。まず、菌液が入っている菌液プレート４１を、前処理部４の所定の位置にセットする。抗生剤プレート４２には各種抗生剤が入っており、希釈液プレート４３には菌液を所定の濃度に希釈するための希釈液が入っている。またインキュベータには微量試験管をセットする。
【００７１】
ここで分注装置４５により、菌液が菌液プレート４１から一定量採取され、インキュベータ４４にセットされた微量試験管に分注される。分注装置４５は、上下方向並びに図中のＸ方向及びＹ方向に移動可能である。また、菌液を所定の濃度に希釈するため、分注装置４５により希釈液が希釈液プレート４３から前記菌液が分注されたインキュベータ４４の微量試験管に分注される。この後、インキュベータ４４が動作して振盪撹拌することでコントロールが作成される。コントロールを試料としてフローサイトメータ１で測定すれば、第１粒度分布が得られる。
【００７２】
また、前記作成された菌液に希釈液および所定の抗生剤を添加して培養することで得られた抗生剤含有菌液をフローサイトメータ１で測定すれば、第２粒度分布が得られる。抗生剤を添加する際は、分注装置４５により抗生剤プレート４２から所定の抗生剤が一定量採取され、前記試料の入っている微量試験管に分注される。この後インキュベータ４４を動作させ、例えば温度を３７℃に保ちながら１２０分間振盪撹拌すれば培養が完了する。そして培養後の抗生剤含有菌液及びコントロールは、吸引装置４４によって吸引され、フローサイトメータ１へ送液されて測定が行われる。
【００７３】
コントロールや抗生剤含有菌液といった試料は、分注装置４５により試料チャンバー１６に移送され、フローセル１１へ送液される。またシリンジ１５の動作によってシース液がフローセル１１に送られる。そして光源部１３・受光部１４によってフローセル１１への光照射及び前方散乱光信号の検出がなされる。
【００７４】
＜その他の実施形態例＞
前記第１実施形態例において、抗生剤と菌との組み合わせに応じて基準割合を変えれば、さらに正確に薬剤感受性の有無を判断できると期待される。同様に、抗生剤と菌との組み合わせに応じて判定領域を決定するためのＦｓｃの値の範囲を変えることにより、さらに正確に薬剤感受性の有無を判断できると期待される。なお、前述した判定領域を決定するためのＦｓｃの値の範囲や基準割合は、本発明の試験方法を説明するための一例に過ぎず、今後の研究や抗生剤と菌種との組み合わせなどにより新たな値を適用可能である。
【００７５】
【発明の効果】
上記実験では、薬剤感受性試験を行ってＭＩＣを決定する際、コロニーからの釣菌の後、培養にかかった時間は１２０分であった。つまり、本発明ではフローサイトメータを用いて計測が可能になる程度まで菌を増殖させるだけでよい。従来の微量液体希釈法においては、釣菌後、試験に必要な菌量を確保するために４時間から５時間程度の培養を要した。加えて、菌液の濁度変化を目視、比色計あるいは分光光度計にて判別できる程度まで菌を増殖させるために８時間から２４時間程度の培養を要した。このような従来法と比べ、本発明の薬剤感受性試験方法ではＭＩＣを決定するまでの時間を大幅に短縮することができる。
【００７６】
また本発明の薬剤感受性試験方法及び装置によれば、スキャッタグラム上で所定の判断基準を用いるため、熟練を要することなく薬剤感受性の有無及びＭＩＣの決定を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】第１実施形態例に係る薬剤感受性試験システムの全体構成図。
【図２】ＭＩＣ決定処理の流れを示すフローチャート。
【図３】判断方法１における判定領域の説明図
（ａ）コントロールをフローサイトメータで測定して得られる第１粒度分布図において粒子が存在する領域（第１領域）を示す説明図。
（ｂ）抗生剤含有菌液をフローサイトメータで測定して得られる第２粒度分布図において粒子が存在する領域（第２領域）を示す説明図。
（ｃ）第１粒度分布図と第２粒度分布図とを重ねた状態を示す説明図。
【図４】判断方法１における判定領域の説明図
（ａ）第１粒度分布図と第２粒度分布図とを重ねた結果、第１領域が第２領域に完全に含まれる場合（共通領域＝第１領域）を示す説明図。
（ｂ）第１粒度分布図と第２粒度分布図とを重ねた結果、第１領域が第２領域に重ならない場合（共通領域なし）を示す説明図。
【図５】判断方法１における判定領域の説明図
（ａ）新第２領域の求め方を示す説明図。
（ｂ）新第２領域と第１領域との共通領域を、新第２領域から除いて得られる判定領域の説明図。
【図６】判断方法２における判定領域の説明図
（ａ）Ｙ１≦（散乱光強度）≦Ｙ２の領域と粒子が存在する領域との交わりを判定領域とする説明図。
（ｂ）０≦（散乱光強度）≦Ｙ４の領域と粒子が存在する領域との交わりを判定領域とする説明図。
【図７】コントロールに含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ａ）Ｅ．ｃｏｌｉ
（ｂ）Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
（ｃ）Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ
（ｄ）Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ
（ｅ）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
（ｆ）Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ
【図８】コントロールに含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ｇ）Ｍ．ｍｏｒｇａｎｉｉ
（ｈ）Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ
（ｉ）Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ
【図９】濃度６４μｇ／ｍｌのＰＩＰＣを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ａ）Ｅ．ｃｏｌｉ
（ｂ）Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
（ｃ）Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ
（ｄ）Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ
（ｅ）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
（ｆ）Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ
【図１０】濃度６４μｇ／ｍｌのＰＩＰＣを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ｇ）Ｍ．ｍｏｒｇａｎｉｉ
（ｈ）Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ
（ｉ）Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ
【図１１】濃度８μｇ／ｍｌのＬＶＦＸを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ａ）Ｅ．ｃｏｌｉ
（ｂ）Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
（ｃ）Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ
（ｄ）Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ
（ｅ）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
（ｆ）Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ
【図１２】濃度８μｇ／ｍｌのＬＶＦＸを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ｇ）Ｍ．ｍｏｒｇａｎｉｉ
（ｈ）Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ
（ｉ）Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ
【図１３】濃度３２μｇ／ｍｌのＡＭＫを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ａ）Ｅ．ｃｏｌｉ
（ｂ）Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
（ｃ）Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ
（ｄ）Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ
（ｅ）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
（ｆ）Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ
【図１４】濃度３２μｇ／ｍｌのＡＭＫを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ｇ）Ｍ．ｍｏｒｇａｎｉｉ
（ｈ）Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ
（ｉ）Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ
【図１５】濃度１６μｇ／ｍｌのＭＩＮＯを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ａ）Ｅ．ｃｏｌｉ
（ｂ）Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ
（ｃ）Ｓ．ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ
（ｄ）Ｃ．ｆｒｅｕｎｄｉｉ
（ｅ）Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ
（ｆ）Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ
【図１６】濃度１６μｇ／ｍｌのＭＩＮＯを加えた抗生剤含有菌液に含まれる各菌の粒度分布を示すスキャッタグラム。
（ｇ）Ｍ．ｍｏｒｇａｎｉｉ
（ｈ）Ｐ．ｍｉｒａｂｉｌｉｓ
（ｉ）Ｐ．ｖｕｌｇａｒｉｓ
【図１７】抗生剤（ＰＩＰＣ）の濃度別スキャッタグラム（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）。（ａ）ＰＩＰＣ６４μｇ／ｍｌ
（ｂ）ＰＩＰＣ３２μｇ／ｍｌ
（ｃ）ＰＩＰＣ１６μｇ／ｍｌ
（ｄ）ＰＩＰＣ  ８μｇ／ｍｌ
（ｅ）ＰＩＰＣ  ４μｇ／ｍｌ
（ｆ）ＰＩＰＣ  ２μｇ／ｍｌ
（ｇ）ＰＩＰＣ  ０μｇ／ｍｌ（コントロール）
【図１８】抗生剤（ＬＶＦＸ）の濃度別スキャッタグラム（Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）。（ａ）ＬＶＦＸ８μｇ／ｍｌ
（ｂ）ＬＶＦＸ４μｇ／ｍｌ
（ｃ）ＬＶＦＸ２μｇ／ｍｌ
（ｄ）ＬＶＦＸ１μｇ／ｍｌ
（ｅ）ＬＶＦＸ０．５μｇ／ｍｌ
（ｆ）ＬＶＦＸ０．２５μｇ／ｍｌ
（ｇ）ＬＶＦＸ０μｇ／ｍｌ（コントロール）
【図１９】Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅについて求めた占有割合を示す説明図。
【図２０】Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む抗生剤含有菌液中の粒子数の抗生剤濃度に対する変化を示す説明図。
（ａ）ＰＩＰＣの濃度に対する判定領域中の粒子数の変化を示す説明図。
（ｂ）ＰＩＰＣの濃度に対する、抗生剤含有菌液中の全粒子数の変化を示す説明図。
（ｃ）ＬＶＦＸの濃度に対する、抗生剤含有菌液中の全粒子数の変化を示す説明図。
（ｄ）ＡＭＫの濃度に対する、抗生剤含有菌液中の全粒子数の変化を示す説明図。
（ｅ）ＭＩＮＯの濃度に対する、抗生剤含有菌液中の全粒子数の変化を示す説明図。
【図２１】Ｋ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅを含む抗生剤含有菌液中の粒子数の抗生剤濃度に対する変化を示す説明図。
（ｆ）ＰＩＰＣの濃度に対する、共通領域に含まれる粒子数の変化を示す説明図。
（ｇ）ＬＶＦＸの濃度に対する、共通領域に含まれる粒子数の変化を示す説明図。
（ｈ）ＡＭＫの濃度に対する、共通領域に含まれる粒子数の変化を示す説明図。
（ｉ）ＭＩＮＯの濃度に対する、共通領域に含まれる粒子数の変化を示す説明図。
【図２２】フローサイトメータの構成図。
【図２３】薬剤感受性試験システムの他の構成を示すブロック図。
【図２４】フローサイトメータ及び前処理部の構成を示す説明図。
【符号の説明】
１：フローサイトメータ
２：薬剤感受性試験装置
３：表示装置
２１：粒度分布作成部
２２：記憶部
２３：判断部
２４：出力制御部
【図１】
0004083412.tif 000005
【図２】
0004083412.tif 000006
【図３】
0004083412.tif 000007
【図４】
0004083412.tif 000008
【図５】
0004083412.tif 000009
【図６】
0004083412.tif 000010
【図７】
0004083412.tif 000011
【図８】
0004083412.tif 000012
【図９】
0004083412.tif 000013
【図１０】
0004083412.tif 000014
【図１１】
0004083412.tif 000015
【図１２】
0004083412.tif 000016
【図１３】
0004083412.tif 000017
【図１４】
0004083412.tif 000018
【図１５】
0004083412.tif 000019
【図１６】
0004083412.tif 000020
【図１７】
0004083412.tif 000021
【図１８】
0004083412.tif 000022
【図１９】
0004083412.tif 000023
【図２０】
0004083412.tif 000024
【図２１】
0004083412.tif 000025
【図２２】
0004083412.tif 000026
【図２３】
0004083412.tif 000027
【図２４】
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