(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
0004105258.tif 000008
で表わされるコレスタノール化合物。
【請求項２】
請求項１記載のコレスタノール化合物を有効成分とする医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、抗癌剤等の医薬として有用なコレスタノール化合物及びこれを有効成分とする医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、生命発生の過程に見られる発生・分化において糖鎖が重要な役割を果していることが明らかになるに伴い、糖鎖の生理的意義について多くの研究者の注目を集めている。一方、コレステロールは動物細胞の形質膜、リソゾーム膜、ゴルジ膜などの主要構成脂質の１つである他に、ステロイドホルモン、ビタミンＤ、胆汁酸の前駆体としても重要な役割を担っている。
【０００３】
従って、糖鎖とコレステロールを結合させた化合物は医薬等への応用が期待される。
糖鎖とコレステロールとを結合させた化合物としては、シアル酸誘導体としてコレステロールを用いた例（特開昭６１−２４３０９６号公報）、シアロシルコレステロール（特開昭６３−６３６９７号公報）、シアロシルラクトシルコレステロール等のシアロシルコレステロールのアナログ体（特開平３−１６１４９６号公報）などが提案されている。糖鎖とコレステロールとを結合させた化合物は多彩な薬理作用を有するものであり、例えばシアロコレステロールを含有する神経障害疾患治療剤（特開昭６２−２６５２２９号公報）、シアロコレステロールを含有する脱髄性疾患治療剤（特開平１−９３５２９号公報）、シアロコレステロールを含有する抗痴呆薬（特開平３−８１２８７号公報）などが提案されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明の目的は、医薬等として有用な新規なコレステロール化合物を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
このような実情において、本発明者らは鋭意研究を重ねた結果、コレステロールのＢ環の二重結合が飽和されたコレスタノールに糖鎖を結合させた下記一般式（１）で表わされる化合物が癌細胞の増殖を抑制することを見出し本発明を完成した。
【０００６】
すなわち本発明は、次の一般式（１）
【０００７】
【化２】
0004105258.tif 000002
【０００８】
で表わされるコレスタノール化合物及びこれを有効成分とする医薬を提供するものである。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明のコレスタノール化合物（１）のうち、（Ｇ−１）の基をもつ３−β−コレスタニル  ３−Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１−１）は、例えば次の反応式に従って製造することができる。
【００１０】
【化３】
0004105258.tif 000003
【００１１】
【化４】
0004105258.tif 000004
【００１２】
〔式中、Ａｃはアセチル基、Ｂｎはベンジル基、Ｐｈはフェニル基を示し、Ｃｈｏｌは、次の式（７）
【００１３】
【化５】
0004105258.tif 000005
【００１４】
で表わされる基を示す〕
【００１５】
すなわち、メチル  β−Ｄ−ガラクトピラノシド（２）を原料とし、この水酸基の一つをベンジル基で保護して化合物（３）とし、更に残りの水酸基をアセチル基で保護して化合物（４）とした後、メトキシ基をアセチルオキシ基とし（５）、このアセチルオキシ基をハロゲン原子と置換して化合物（６）とし、これにβ−コレスタノール（７）を反応せしめて化合物（８）を得、このベンジル基を脱離することにより、化合物（９）を得ることができる。一方、２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノース（１０）の水酸基をフェニルカルバモイルオキシ基とし（１１）、これに前記化合物（９）を反応させ化合物（１２）を得、この水酸基の保護基を脱離することにより、目的とする化合物（１−１）を得ることができる。なお、水酸基の保護基は、アセチル基以外のアシル基であってもよく、ベンジル基以外のアラルキル基であってもよい。
【００１６】
また、本発明化合物（１）のうち、（Ｇ−２）の基をもつ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−｛３−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−β−Ｄ−グルコピラノシド（１−２）は、例えば次の反応式に従って製造することができる。
【００１７】
【化６】
0004105258.tif 000006
【００１８】
【化７】
0004105258.tif 000007
【００１９】
〔式中、Ａｃ、Ｂｎ及びＣｈｏｌは前記と同じものを示し、ＡｇＯＴｆはトリフルオロメタンスルホン酸銀を示し、ＴＢＡＩはヨウ化テトラブチルアンモニウムを示し、ＭｅＯＴｆは、メチルトリフラートを示す〕
【００２０】
すなわち、４−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース（１４）を原料とし、これにβ−コレスタノールを反応せしめて、化合物（１５）とし、化合物（１５）のガラクトピラノシル基の３位にベンジル基を導入し、ベンジルオキシ基とし化合物（１６）を得、化合物（１６）のベンジルオキシ基を脱離し、水酸基とすれば化合物（１７）を得ることができる。次いで、化合物（１７）にエチル  ３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１８）を反応せしめ、化合物（１９）を得、化合物（１９）の保護基を変換することにより化合物（２０）とし、最後にアセチル基を脱離することにより目的とする化合物（１−２）を得ることができる。
【００２１】
前記反応式において、ベンジル基の導入反応は、例えば糖類にヨウ化テトラｎ−ブチルアンモニウム等の第４級アンモニウム塩の存在下、ベンジルブロミド等を反応させることにより行なわれる。また、Ｏ−アセチル化反応は、糖類にピリジン等の塩基の存在下、無水酢酸を反応させることにより行なわれる。また、Ｏ−フェニルカルバモイル化反応は、糖類に塩基の存在下にイソシアン酸フェニルを反応させることにより行なわれる。また、ブロミドの導入反応は、糖類に酢酸及び臭化水素を反応させることにより行なわれる。また、コレスタノール基（７）の導入反応は、糖類にモレキュラーシーブ、テトラメチル尿素の存在下にコレスタノールを加えて、次いでトリフルオロメタンスルホン酸銀で処理することにより行なわれる。
【００２２】
また、アセチル基の脱離反応は、ナトリウムアルコキシド、炭酸アルカリ、水酸化アルカリ等の塩基の存在下に加水分解することにより行なわれる。また、ベンジル基の脱離反応は、接触還元、例えばパラジウム−炭素等の存在下に水素添加することにより行なわれる。
【００２３】
このようにして得られる化合物（１）は癌細胞増殖抑制効果を有し、しかも安全性が高いので、抗癌剤等の医薬の成分として有用である。
【００２４】
化合物（１）は、常法に従って薬学的に許容される担体とともに種々の剤型の医薬組成物とすることができる。また投与形態も特に限定されず治療目的に応じて適宜選択でき、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等のいずれでも良く、これらの投与形態は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。
経口用固形製剤を調製する場合は、化合物（１）に賦形剤、必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。そのような添加剤としては、当該分野で一般的に使用されるものでよく、例えば、賦形剤としては、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸等を、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等を、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等を、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコール等を、矯味剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等を例示できる。
【００２５】
経口用液体製剤を調製する場合は、化合物（１）に矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。この場合矯味剤としては上記に挙げられたもので良く、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム等が、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２６】
注射剤を調製する場合は、化合物（１）にpH調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。この場合のpH調節剤及び緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等が挙げられる。安定化剤としてはピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等が挙げられる。局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカイン等が挙げられる。等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖等が例示できる。
坐剤を調製する場合は、化合物（１）に当業界において公知の製剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセライド等を、更に必要に応じてツイーン（登録商標）のような界面活性剤等を加えた後、常法により製造することができる。
軟膏剤を調製する場合は、化合物（１）に通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。基剤としては、流動パラフィン、白色ワセリン、サラシミツロウ、オクチルドデシルアルコール、パラフィン等が挙げられる。保存剤としては、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル等が挙げられる。
貼付剤を製造する場合は、通常の支持体に前記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すれば良い。支持体としては、綿、スフ、化学繊維からなる織布、不織布や軟質塩化ビニル、ポリエチレン、ポリウレタン等のフィルムあるいは発泡体シートが適当である。
本発明の化合物（１）の投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり、一概には決定できないが、通常成人１日あたり本発明化合物（１）として約０．０１〜２００mg／kg、好ましくは約０．１〜５０mg／kgとすれば良く、これを１日１回又は２〜４回程度に分けて投与するのが好ましい。
【００２７】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれに何ら限定されるものではない。
【００２８】
実施例１
化合物（１−１）の合成：
１．  メチル  ３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（３）の合成：メチル  β−Ｄ−ガラクトピラノシド（２）２０．０ｇにベンゼン７００ml及びジ−ｎ−ブチルすずオキシド２８．２ｇを加えて、１１０℃で加熱還流した。３日後、ヨウ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム４１．９ｇ及びベンジルブロミド２８．３mlを加えて、再度１００℃で４時間加熱還流した。反応液を室温に戻してから減圧濃縮し、水３００ml及びフッ化カリウム３０．０ｇを加えて、室温で１時間攪拌した。これに酢酸エチル２００ml及びフッ化カリウム２０．０ｇを加えて、酢酸エチル抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  ２：１，８０φ−３１５mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（３）が粗精製物として３５．１ｇ得られた。
【００２９】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
7.39-7.26,m,aromatic-H; 4.75,m,2H,benzyl-H;
4.20,d,1H,gal-1,J1,2=7.8; 4.04,bt,1H,gal-4,J3,4=3.5;
3.97,m,1H,gal-6a; 3.85,m,1H,gal-6b;
3.79,m,1H,gal-2,J1,2=7.8,J2,3=9.5;3.57,s,3H,-OMe;
3.51,dd,1H,gal-5; 3.45,dd,1H,gal-3,J2,3=9.5,J3,4=3.5
【００３０】
２．  メチル  ２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（４）の合成：
化合物（３）の粗精製物３５．１ｇをピリジン３００mlに溶かし、氷冷下３０分間攪拌した。これに無水酢酸２００mlを加えて、室温で４時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、更にトルエンを加えて、酢酸臭がなくなるまで減圧濃縮を繰り返した。得られた残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  ２０：１，８０φ−３３０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（４）が２１．５ｇ得られた。
【００３１】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
7.35-7.15,m,aromatic-H; 5.51,t,1H,gal-4,J3,4=2.6,J4,5=1.5;
5.11,dd,1H,gal-2,J1,2=8.3,J2,3=10.1;
4.70,d,1H,benzyl-H,J=12.2; 4.40,d,1H,benzyl-H,J=12.2;
4.30,d,1H,gal-1,J1,2=8.3; 4.18,d,2H,gal-6a,gal-6b;
3.80,m,1H,gal-5,J4,5=1.5; 3.54,dd,1H,gal-3,J2,3=10.1,J3,4=2.6;
3.48,s,3H,-OMe; 2.15,s,-OAc; 2.08,s,-OAc; 2.03,s,-OAc
【００３２】
３．  １，２，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノース（５）の合成：
化合物（４）２１．５ｇを無水酢酸３００mlに溶かし、氷冷下３０分間攪拌した。これに硫酸３．０mlを加えて、室温で１６時間攪拌した。反応液を減圧濃縮後、水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  ２０：１，５０φ−３２５mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（５）が１２．２ｇ得られた。
【００３３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
7.35-7.14,m,aromatic-H; 6.35,d,1H,gal-1,J1,2=3.8;
5.62,dd,1H,gal-4,J3,4=3.5; 5.26,dd,1H,gal-2,J1,2=3.8,J2,3=10.7;
4.73,d,1H,benzyl-H,J=11.6; 4.47,d,1H,benzyl-H,J=11.6;
4.26,m,1H,gal-5; 4.15,dd,1H,gal-6a;
4.07,dd,1H,gal-6b; 3.92,dd,1H,gal-3,J2,3=10.7,J3,4=3.5;
2.13,s,-OAc; 2.10,s,-OAc; 2.06,s,-OAc; 2.01,s,-OAc
【００３４】
４．  ３−β−コレスタニル  ２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（８）の合成：
化合物（５）２．０６ｇに酢酸４．０ml及び３０％臭化水素酢酸溶液４．０mlを加えて遮光条件下室温で４５分間攪拌した。反応液を水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮すると残渣が得られ、これを単離、精製することなく化合物（６）として次の反応へ用いた。この残渣にβ−コレスタノール（７）１．８３ｇ及びモレキュラシーブス３Ａ１．５ｇを加えて３時間減圧乾燥した後、塩化メチレン１００ml及びテトラメチル尿素６７６μｌを加えて、アルゴン雰囲気中−２０℃で遮光条件下３０分間攪拌した。これにトリフルオロメタンスルホン酸銀１．４５ｇを加えて、室温で１８時間攪拌した。反応液を水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  ４０：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（８）が４３４mg得られた。
【００３５】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
7.34-7.13,m,aromatic-H; 5.49,d,1H,gal-4;
5.08,dd,1H,gal-2,J1,2=7.9; 4.69,d,1H,benzyl-H,J=12.3;
4.44,d,1H,gal-1,J1,2=7.9; 4.39,d,1H,benzyl-H,J=12.3;
4.16,m,2H,gal-6a,gal-6b; 3.77,dd,1H,gal-5;
3.51,m,2H,gal-3,cholestanol-H; 2.14,s,-OAc; 2.06,s,-OAc;
2.02,s,-OAc; 1.97-0.59,m,cholestanol-H
【００３６】
５．  ３−β−コレスタニル  ２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（９）の合成：
化合物（８）７．３５ｇをメタノール２００ml、酢酸エチル５０ml、ギ酸５０mlの混合液に溶かし、アルゴン雰囲気中１０％パラジウム−炭素６．５０ｇを加えて、室温で５時間攪拌した。反応液をフィルター濾過後、濾液を減圧濃縮すると残渣が得られた。この残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  １０：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（９）が１．９７ｇ得られた。
【００３７】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
5.31,d,1H,gal-4; 4.93,dd,1H,gal-2,J1,2=7.9;
4.51,d,1H,gal-1,J1,2=7.9; 4.14,d,2H,gal-6a,gal-6b;
3.82,m,2H,gal-3,gal-5; 3.55,m,1H,cholestanol-H;
2.17,s,-OAc; 2.12,s,-OAc; 2.05,s,-OAc;
1.97-0.60,m,cholestanol-H
【００３８】
６．  ２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−フェニルカルバモイル−β−Ｌ−フコピラノース（１１）の合成：
２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノース（１０）４．００ｇを塩化メチレン１００mlに溶かし、イソシアン酸フェニル１．２１ml、４−ジメチルアミノピリジン２２５mgを加えて、アルゴン雰囲気中室温で２時間攪拌した。反応液を水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  ２０：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（１１）が２．９７ｇ得られた。
【００３９】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
7.39-7.06,m,20H,aromatic-H; 6.44,s,1H,-NH-;
5.56,d,1H,fuc-1,J1,2=8.1; 5.01-4.69,m,6H,benzyl-H;
3.96,dd,1H,fuc-2,J1,2=8.1; 3.63,m,3H,fuc-3,fuc-4,fuc-5;
1.19,d,3H,fuc-Me
【００４０】
７．  ３−β−コレスタニル  ３−Ｏ−（２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル）−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１２）の合成：
化合物（１１）９８１mgと化合物（９）１．００ｇを塩化メチレン１００mlに溶かし、モレキュラシーブス３Ａ２．００ｇを加えて、アルゴン雰囲気中室温で１０分間攪拌した。これにトリメチルシリルトリフラート４００μｌを加えて、室温で４５分間攪拌した。反応液を水中にあけて炭酸水素ナトリウムで中和し、クロロホルム抽出を行なった。抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  ２０：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（１２）が９７５mg得られた。
【００４１】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
7.36-7.23,m,aromatic-H; 5.26,d,1H,gal-4;
5.21,dd,1H,gal-2,J1,2=7.9; 5.00,d,1H,fuc-1,J1,2=3.7;
4.95-4.60,m,benzyl-H; 4.46,d,1H,gal-1,J1,2=7.9;
4.10,m,2H,saccharide-H; 4.00,dd,1H,fuc-2,J1,2=3.7;
3.94,dd,1H,fuc-5; 3.86-3.78,m,3H,gal-3,fuc-3,saccharide-H;
3.63,bs,1H,saccharide-H; 3.51,m,1H,cholestanol-H;
2.06,s,-OAc; 2.04,s,-OAc,; 1.97-0.59,m,-OAc,fuc-Me,cholestanol-H
【００４２】
８．  ３−β−コレスタニル  ３−Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル）−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１３）の合成：
化合物（１２）９７５mgをメタノール３０ml、酢酸エチル１０ml、ギ酸１０mlの混合液に溶かし、アルゴン雰囲気中１０％パラジウム−炭素１．００ｇを加えて、室温で４時間攪拌した。反応液をフィルター濾過後、濾液を減圧濃縮すると残渣が得られた。この残渣をワコーゲルＣ−３００（トルエン：アセトン  １：１，３５φ−２９０mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製し、更にエタノールで再結晶すると化合物（１３）が２９８mg得られた。
【００４３】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ＴＭＳ）：
5.32,d,1H,gal-4; 5.15,dd,1H,gal-2,J1,2=7.5; 4.91,d,1H,fuc-1;
4.52,d,1H,gal-1,J1,2=7.5; 4.13,d,saccharide-H; 4.08,dd,fuc-5;
3.85,m,gal-3,saccharide-H; 3.77,bs,fuc-4; 3.72,dd,fuc-2;
3.56,m,2H,fuc-3,cholestanol-H; 2.15,s,-OAc; 2.10,s,-OAc;
2.06,s,-OAc; 1.97-0.58,m,fuc-Me,cholestanol-H
【００４４】
９．  ３−β−コレスタニル  ３−Ｏ−（α−Ｌ−フコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（１−１）
化合物（１３）４１２mgをメタノール２０ml、クロロホルム２０mlの混合液に溶かし、ナトリウムメトキシド１０８mgを加えて、室温で２時間攪拌した。反応液を酸性イオン交換樹脂アンバーリスト１５で中和し、濾過後、濾液を減圧濃縮すると結晶が得られた。この結晶をワコーゲルＣ−３００（クロロホルム：メタノール＝１０：１，２２φ−２６５mm）を用いるカラムクロマトグラフィーで精製すると化合物（１−１）が２７５mg得られた。
【００４５】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6／ＴＭＳ）：
4.92,d,1H,fuc-1,J1,2=4.3; 4.27,d,1H,gal-1,J1,2=7.4;
4.08,dd,1H,fuc-5; 3.80,s,1H,saccharide-H;
3.65,dd,1H,saccharide-H; 3.57-3.34,m,saccharide-H,cholestanol-H;
1.94-0.63,m,fuc-Me,cholestanol-H
【００４６】
化合物（１−２）の合成：
１．  ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１５）
４−Ｏ−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−１，２，３，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノース（１４）８．６４ｇを酢酸５ml及び無水酢酸５mlの混合液に溶かし、３０％臭化水素酢酸溶液１５mlを加えて室温で１．５時間攪拌した。反応液を水にあけ、炭酸水素ナトリウムで中和後クロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムを加えて乾燥した。固形分を濾去後減圧濃縮し、コレスタノール５．９４ｇ、モレキュラーシーブＡＷ−３００  ５ｇ、塩化メチレン１００ml及びテトラメチル尿素１．２２mlを加えて室温で１０分攪拌した。これをドライアイス−アセトニトリル浴に浸して充分攪拌した後、トリフルオロメタンスルホン酸銀３．９３ｇを加えて反応液を室温にもどし１夜攪拌した。反応液を水にあけ炭酸水素ナトリウムで中和後クロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムを加えて乾燥した後固形分を濾去し減圧濃縮した。残渣をワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝１０：１，３５φ−２６０mm）で精製し、化合物（１５）を３．３９ｇ得た。
【００４７】
２．  ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−３−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１６）
【００４８】
化合物（１５）３．３９ｇをメタノール２００mlに溶かし、ナトリウムメトキシド１．２７ｇを加えて室温で４時間攪拌した。反応液を酸性イオン交換樹脂アンバーリスト１５で中和後、固形分を濾去し減圧濃縮した。残渣にジブチル錫オキシド１．０７ｇ及びメタノール１５０mlを加えて、２夜加熱還流した。反応液を減圧濃縮後ベンゼン１５０ml、ベンジルブロミド０．８０ml及びヨウ化テトラブチルアンモニウム１．８７ｇを加えて１夜加熱還流した。反応液を減圧濃縮後残渣にピリジン９０ml及び無水酢酸６０mlを加えて、室温で４時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、トルエンを加えて酢酸臭が無くなるまで繰り返し減圧濃縮した。残渣を、ワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝１９：１，３５φ−２６０mm）で精製し化合物（１６）を２．２２ｇ得た。
【００４９】
３．  ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−（２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１７）
【００５０】
化合物（１６）２．２２ｇにメタノール２００ml、ギ酸２０ml及び１０％パラジウム炭素４ｇを加えて、室温で１時間攪拌した。固形分を濾去後減圧濃縮し、残渣をワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝４：１，３５φ−２６０mm）で精製し、化合物（１７）を１．０２ｇ得た。
【００５１】
４．  ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−｛３−Ｏ−（３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（１９）
【００５２】
エチル  ３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１８）１．２５ｇ及び化合物（１７）０．９６７ｇを塩化メチレン３０mlに溶かし、モレキュラーシーブＡＷ−３００１ｇを加えて室温で１０分攪拌した。次いで反応容器を氷水浴に浸けて充分攪拌した後、メチルトリフラート１．１３mlを加えて室温にもどし、更に１時間攪拌した。反応液を水にあけ炭酸水素ナトリウムで中和後クロロホルムで抽出し、硫酸マグネシウムを加えて乾燥した後、固形分を濾去し減圧濃縮した。残渣をワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝２０：１，３５φ−２８０mm）で精製し、化合物（１９）を０．７０９ｇ得た。
【００５３】
５．  ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−｛３−Ｏ−（２−アセトアミド３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−２，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−２，３，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（２０）
【００５４】
化合物（１９）７００mgをメタノール７５mlに溶かし、ギ酸７．５ml及び１０％パラジウム炭素１ｇを加えて室温で１時間攪拌した。固形分を濾去し減圧濃縮後、残渣にエタノール１００ml及びヒドラジン１水和物５mlを加えて１．５時間加熱還流した。反応液を減圧濃縮し、残渣にピリジン６０ml及び無水酢酸４０mlを加えて室温で３時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、トルエンを加えて酢酸臭が無くなるまで繰り返し減圧濃縮した。残渣を、ワコーゲルＣ−３００を用いるカラムクロマトグラフィー（ベンゼン：アセトン＝５：１，２２φ−２６０mm）で精製し、化合物（２０）を２９８mg得た。
【００５５】
６．  ３−β−コレスタニル  ４−Ｏ−｛３−Ｏ−（２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル｝−β−Ｄ−グルコピラノシド（１−２）
【００５６】
化合物（２０）２９８mgをメタノール１００mlに溶かし、ナトリウムメトキシド１２０mgを加えて室温で３０分攪拌した。反応液を酸性イオン交換樹脂アンバーリスト１５で中和した後、固形分を濾去後減圧濃縮し、化合物（１−２）を２００mg得た。
【００５７】
試験例１
合成糖脂質による細胞増殖抑制：
（細胞培養）
肺腺癌細胞株“Ａ５４９”は１０％ＦＣＳ添加ダルベッコのモディファイドイーグル培地（Ｄ−ＭＥＭ）で培養した。胃腺癌細胞株“ＭＫＮ４５”、食道扁平上皮癌細胞株“ＥＳ−２”は、１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した。無血清培地は“ＳＦ−０２”（三光純薬株式会社）を用いた。無血清培養には、それぞれの培養培地への添加ＦＣＳ量を１０％→５％→１％と段階的に減少させ３継代目より無血清培地“ＳＦ−０２”へ交換した。更に、３継代の培養を行ない増殖抑制、形態変化のない事を確認しアッセイに用いた。
細胞の継代は５日毎に行ない、０．０５％トリプシン，１mM  ＥＤＴＡ  ４Ｎａ  ｉｎ  ＰＢＳ（Ｃａフリー）を用いて剥がし、ＦＣＳ添加培地で一度洗浄後２×１０5個／mlの濃度で蒔いた。
【００５８】
（合成糖脂質の細胞への処理）
培養細胞を、培地を用いて２×１０5個／mlに調整し、９６ウエル平底プレートに１００μｌ／well蒔いた。更に培地８０μｌを加え３７℃  ５％ＣＯ2インキュベーターで一晩培養した。
化合物（１−１）、（１−２）とそのアグリコンを１００％ＥｔＯＨを用いて、任意の濃度（２０．０，１０．０，６．０，３．０，２．０，１．０，０．６，０．３mM）に調整し、その２０μｌを最終濃度２００、１００、６０、３０、２０、１０、６、３μＭになるように各ウエル（ｎ＝３）に添加した。また、２０μｌの１００％ＥｔＯＨ（最終ＥｔＯＨ濃度１％）を添加したものを対照（０μＭ）として示した。３７℃  ５％ＣＯ2インキュベーターで３日間培養後ＭＴＴアッセイを行なった。
【００５９】
（ＭＴＴアッセイ）
３−（４，５−ジメチル−２−チアゾリル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）を培地で２．５mg／mlとなるように超音波洗浄槽中で溶解、０．４５μｍのメンブランフィルターを通しＭＴＴ試薬とした。
化合物（１−１）、（１−２）を添加後３日間培養した９６ウエルプレートを５００×ｇで１０分間遠心し、その上清１００μｌを静かに除いた。ＭＴＴ試薬２０μｌを加え３７℃  ５％ＣＯ2インキュベーターで２時間培養した。更に、２０％ＳＤＳ  ０．０１Ｎ  ＨＣｌを１００μｌ添加し、３７℃で一晩インキュベートした。
プレートリーダーを用い６９０nmをｒｅｆｅｒｅｎｃｅとして５７０nmの吸光度を測定した。結果を図１〜６に示す。
【図面の簡単な説明】
【図１】Ａ５４９細胞をＳＦ−０２培地で培養した場合の結果を示す図である。
【図２】Ａ５４９細胞を１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した場合の結果を示す図である。
【図３】ＭＫＮ４５細胞をＳＦ−０２培地で培養した場合の結果を示す図である。
【図４】ＭＫＮ４５細胞を１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した場合の結果を示す図である。
【図５】ＥＳ−２細胞をＳＦ−０２培地で培養した場合の結果を示す図である。
【図６】ＥＳ−２細胞を１０％ＦＣＳ添加ＲＰＭＩ−１６４０培地で培養した場合の結果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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