(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血清中のコロイド粒子の粒径分布を温状態下と冷状態下で測定し、冷状態下での粒径分布パターンと温状態下での粒径分布パターンとを比較して冷状態にのみ現われる１０〜１万ｎｍの粒径範囲のサーモコロイドの有無を識別するＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法であって、冷状態のサーモコロイド凝集ピーク（１０〜１万ｎｍ）は
（１）病態が重篤かつ急性期であるほどピーク強度が大きくなること、
（２）肝ガンではピーク粒径が大きくなること、
に基づいて前記１０〜１万ｎｍの粒径範囲のピークの強度及び／または形状からＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の病態を識別することを特徴とするＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
【請求項２】
温状態が３０〜４０℃の範囲であり、冷状態が０〜２０℃の範囲である請求項１記載のＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
【請求項３】
１０〜５０００ｎｍの粒径範囲のピークの測定及び比較を行なう請求項１または２に記載のＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
【請求項４】
測定セル内の血清試料のコロイド粒子の粒径を測定する手段を含む粒径分布測定装置において、温状態試料と冷状態試料の１０〜１万ｎｍの範囲の粒径分布を測定して前記粒径範囲内に冷状態でのみ現われるサーモコロイドの有無を識別するＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査装置であって、冷状態のサーモコロイド凝集ピーク（１０〜１万ｎｍ）は
（１）病態が重篤かつ急性期であるほどピーク強度が大きくなること、
（２）肝ガンではピーク粒径が大きくなること、
に基づいて前記１０〜１万ｎｍの粒径範囲のピークの強度及び／または形状からＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の病態を識別することを特微とするＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査装置。
【請求項５】
冷状態下での粒径分布から温状態下での粒径分布を差し引き、その結果に基づいて１０〜１万ｎｍの粒径範囲に有意のピークが存在するか否かを判断する機構をさらに備えている請求項４記載のＣ型肝炎ウイルス開連肝疾患の検査装置。
【請求項６】
（１）測定セル内の血清試料のコロイド粒子の粒径を測定する手段を含む粒径分布測定装置において、温状態試料と冷状態試料の１０〜１万ｎｍの範囲の粒径分布を測定して前記粒径範囲内に冷状態でのみ現われるサーモコロイドの有無を識別するＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査装置、または
（２）冷状態下での粒径分布から温状態下での粒径分布を差し引き、その結果に基づいて１０〜１万ｎｍの粒径範囲に有意のピークが存在するか否かを判断する機構をさらに備えている前記（１）記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス開連肝疾患の検査装置に加え、
Ｂ型またはＣ型肝炎血清における粒径分布データベースを有するか、またはかかるデータべ−スにアクセス可能であり、前記粒径分布測定装置により測定されたサーモコロイドの粒径分布パターンデータと比較してＣ型肝炎の病態を判断する機構をさらに備えていることを特徴とするＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査システム。
【請求項７】
前記パターンデータが、前記粒径分布測定装置により測定されたサーモコロイドのピークの位置、ピーク強度及び／または形状を含む請求項６記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査システム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】  本発明は、肝炎ウイルス関連肝疾患（肝炎、肝硬変、肝ガン等）の検査方法及び検査装置に関する。より具体的に言えば、血清中のコロイド粒子の粒径分布を温状態下と冷状態下で測定し、冷状態にのみ現われる特定粒径範囲の温度依存性コロイド粒子（サーモコロイド）の有無によりＢ型またはＣ型（以下、Ｂ型／Ｃ型と略記する。両型の同時感染も含まれる。）肝炎ウイルス関連肝疾患の存否を識別するＢ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法及び検査装置に関する。
【背景技術】  ヒトにおける肝炎、特にウイルス性肝炎（Ａ〜Ｅ型肝炎等）のうちＢ型／Ｃ型肝炎は大きな割合を占めており、我が国におけるＢ型、Ｃ型肝炎患者はそれぞれ１００万人以上に達している。未発症のキャリアについても、Ｂ型肝炎ウイルスのキャリアの場合、約１０〜１５％が慢性肝炎を発症する。さらに、Ｃ型肝炎ウイルスキャリアの慢性Ｃ型肝炎発症率は４０歳以上で６５〜７０％と高く、いずれも適切な治療が行われないまま放置されると数十年後には肝硬変や肝癌に進行する。このため、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス感染の有無を早期に検査することが望ましい。
近年、ＰＣＲを利用する検査技術である競合的ＲＴ−ＰＣＲ法（ＣＲＴ−ＰＣＲ）およびマルチサイクリック−ＰＣＲ法が開発され、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルスの実際的な検査方法として用いられている。ＰＣＲ法による肝炎ウイルスＲＮＡの定量的検出には、血液１ｍｌ中にウイルス粒子が５０個以上必要である。しかし、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルスキャリアであっても、血液中の肝炎ウイルスの存在量は非常に僅かであるため、その検査は容易ではない。ＰＣＲを利用しない検査方法として分岐ＤＮＡプローブ法が開発、使用されているが、これらの検査方法は、高価な測定装置が必要な上に、検査操作が煩雑であること、検査結果が判明するまでに長時間を必要とすること、全自動化が難しいこと等の問題があり、実用検査技術として、充分満足できるレベルにはなかった。
また、現在、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）の治療法としては、インターフェロン療法、インターフェロンと副腎皮質ステロイドホルモンの併用療法、ラミブジン内服等の抗ウイルス療法、プロパゲルニウム製剤内服等の免疫療法、さらに、グリチルリチン製剤の静注、胆汁酸製剤の内服等の肝庇護療法がある。また、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の治療法としてはインターフェロンとリパビリンの併用が主流になっている。いずれにせよ、これらの治療は、肝臓の状態や全身状態を的確に把握した上で、副作用などにも注意して慎重に行なう必要がある。インターフェロンの投与は費用の面からも病態の最も効果的な時期に使用する必要がある。しかし、ＡＬＴやＡＳＴといった肝酵素値（従来、ＧＰＴ、ＧＯＴと呼ばれていたもの）、ウイルスＲＮＡ量やコア抗原量、抗体価のいずれも必ずしも病態を反映していない。このため、Ｂ型／Ｃ型肝炎患者についてその病態を的確に反映する病態マーカーが求められている。
本発明者らは、クリオグロブリン（低温で血清から沈澱するタンパク質）とＣ型肝炎との間の関係に着目し、ゲル状プレートに血清試料を点着した後、これを冷却して、該血清試料中に存在するＣ型肝炎ウイルス及びその免疫複合体をリング状に凝集させるクリオグロブリンによるＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法を先に提案した（特開２００３−４３０４７）。この方法で得られるクリオグロブリンの沈澱リングは極めて明確であり、特にＣ型肝炎におけるクリオグロブリンの分析に有効である。
また、本発明者らは、Ｃ型肝炎患者のＩｇＭが健常者のＩｇＭとは異なる変性ＩｇＭであり、ある種の糖タンパク質と結合して免疫複合体を形成し低温で凝集すること等を見出し、前記の沈澱リング法のレクチン−糖タンパク質固定化担体を組み合わせて用いて変性ＩｇＭ量を定量するＣ型肝炎ウイルスの罹患検査方法も提案した（特開２００４−１７７１５８）。
これらの方法は、ＰＣＲを利用した従来法に比べ簡便で結果の判断も容易であるが、依然として複数の試薬を用いた多段階の操作であり、処理操作及び結果の判断にある程度の熟練を要する。また、上記の各方法は、病態の識別まで可能にするものではなかった。
【発明の開示】
従って、本発明は、被験者がＢ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連肝疾患に罹患しているか否かを簡単に検査でき、その病態の識別が可能な検査技術の提供を課題とする。
すなわち、本発明は下記のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法、その検査方法を用いる装置及びシステムを提供する。
１．血清中のコロイド粒子の粒径分布を温状態下と冷状態下で測定し、冷状態下での粒径分布パターンと温状態下での粒径分布パターンとを比較して冷状態にのみ現われる１０〜１万ｎｍの粒径範囲のサーモコロイドの有無を識別することを特徴とするＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
２．温状態が３０〜４０℃の範囲であり、冷状態が０〜２０℃の範囲である前記１記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
３．前記１０〜１万ｎｍの粒径範囲のピークの強度及び／または形状からＢ型またはＣ型肝炎の病態を識別する前記１記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
４．１０〜５０００ｎｍの粒径範囲のピークの測定及び比較を行なう前記１〜３のいずれかに記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査方法。
５．測定セル内の血清試料のコロイド粒子の粒径を測定する手段を含む粒径分布測定装置において、温状態試料と冷状態試料の１０〜１万ｎｍの範囲の粒径分布を測定して前記粒径範囲内に冷状態でのみ現われるサーモコロイドの有無を識別することを特徴とするＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査装置。
６．冷状態下での粒径分布から温状態下での粒径分布を差し引き、その結果に基づいて１０〜１万ｎｍの粒径範囲に有意のピークが存在するか否かを判断する機構をさらに備えている前記５記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査装置。
７．前記５または６の検査装置に加え、Ｂ型またはＣ型肝炎血清における粒径分布データベースを有するか、またはかかるデータベースにアクセス可能であり、前記粒径分布測定装置により測定されたサーモコロイドの粒径分布パターンデータと比較してＢ型またはＣ型肝炎の病態を判断する機構をさらに備えていることを特徴とするＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査システム。
８．前記パターンデータが、前記粒径分布測定装置により測定されたサーモコロイドのピークの位置、ピーク強度及び／または形状を含む前記７記載のＢ型またはＣ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査システム。
発明の効果
簡便な方法によりＢ型／Ｃ型肝炎ウイルスへの感染及び／またはＢ型／Ｃ型肝炎罹患を判定でき、さらにＢ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患（肝炎、肝硬変、肝ガン等）の病態を分析することが可能である。
【図面の簡単な説明】  図１は、健常者血清のコロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで比較した際の典型的パターンを示すグラフである。
図２は、Ｃ型肝炎患者血清のコロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで比較した際の典型的パターンを示すグラフである。
図３は、慢性関節リウマチのコロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで比較した際の典型的パターンを示すグラフである。
図４は、Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患と血清中コロイド粒子の粒径分布パターンとの関係を模式的に示した図である。
図５は、本発明で用いられるコロイド粒子の粒径分布測定装置の一例を示す模式図である。
図６は、健常者の血清中コロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで対比して示した度数分布図である。
図７は、Ｃ型肝炎患者の血清中コロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで対比して示した度数分布図である。
図８は、Ｃ型肝炎起源肝ガン患者の血清中コロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで対比して示した度数分布図である。
図９は、肝ガン切除被験者の血清中コロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで対比して示した度数分布図である。
図１０は、Ｂ型肝炎患者の血清中コロイド粒子粒径分布を温状態（Ａ）と冷状態（Ｂ）とで対比して示した度数分布図である。
【発明を実施するための最良の形態】  本発明は、基本的には、血清中のコロイド粒子の粒径分布を温状態下と冷状態下で測定し、冷状態下での粒径分布パターンと温状態下での粒径分布パターンを比較するものである。具体的には、冷状態下での粒径分布パターンに温状態下での粒径分布パターンに見られない１０〜１万ｎｍの粒径範囲のサーモコロイドが存在する場合に、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連肝疾患と判断する。Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連肝疾患には、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルスに起因する肝炎、肝硬変、肝ガンが含まれる。
ここでいうサーモコロイドとは、血清中に含まれる主としてタンパク質からなる物質で低温にて凝集沈澱するコロイド粒子をいう。サーモコロイドはクリオグロブリンの一種であるが肉眼で凝集が確認される必要はない。また、クリオグロブリンは一般に冷却により可逆的な沈降性を示すが、本発明の操作から理解されるように、本発明では凝集は可逆的である場合だけでなく不可逆的な場合も含む。クリオグロブリンは、骨髄腫やリンパ増殖性疾患、自己免疫疾患及び感染性疾患等の広範な疾患において顕著に検出されるがその実体は様々である。本発明におけるサーモコロイドは、ＨＣＶ抗原、変性ＩｇＭ、Ｃ１インヒビター（補体系タンパク質の１種）の免疫複合体を含むものと考えられるが、具体的成分はこれ以外のものでもよい。
［検査方法］
本発明の検査方法は、上記の通り極めて簡便なものである。すなわち、被験者から血液を採取して、通常の方法（例えば、静置、遠心分離）により血清を分離し、冷状態下での粒径分布パターンと温状態下での粒径分布パターンとを比較して１０〜１万ｎｍの粒径範囲のサーモコロイドの有無を識別する。
温状態と冷状態とは、後者が前者よりも低温でかつ凍結温度以上である相対的な関係を全て含むが、通常、温状態は体温程度の温度であり、冷状態はこれより低い温度である。典型的には、温状態は３０〜４０℃、好ましくは３３〜３８℃、より好ましくは３７℃近傍であり、冷状態は０〜２０℃、好ましくは４〜１０℃の範囲である。
温状態と冷状態とで粒径分布パターンを測定するためには、（１）血清試料を２分してそれぞれ温状態下と冷状態下に置き、それぞれコロイド粒子の粒径分布パターンを測定するか、（２）はじめに血清試料をいずれか一方の状態で測定し、次いで、他方の状態で測定する。後者（１試料を順次測定する場合）では、通常、温状態次いで冷状態の順番で測定を行なうが、サーモコロイドの凝集の可逆性が確認されている場合は冷状態次いで温状態の順番で測定を行なってもよい。
サーモコロイドの凝集を十分に進行させるためは、各試料を一定時間、測定温度条件下に保持した後、測定を行なうことが好ましい。温状態試料は採取後直ちに測定を行なっても通常問題はないが、検査の正確を期するために冷状態試料と同じ時間所定の温度に保持してから検査することが好ましい。保持時間は通常６時間以上、好ましくは８時間以上である。過度に長く保持しても凝集状態に変わりはなく、却って試料の劣化及び検査効率の低下を招くため、一般には２日未満であり、通常は一夜（１０〜１４時間程度）保持すれば十分である。
血液中のコロイド粒子の測定は、１０〜１万ｎｍ程度の粒径範囲の測定ができる方法であれば特に限定されない。このような方法には、光学的方法、電気化学的方法、生物学的方法その他の方法がある。光学的方法の例としては、動的光散乱法、レーザー回折法、光学顕微鏡観察（二次元イメージセンサー等による自動計測を含む）等が挙げられる。１万ｎｍ以下、より好ましくは５万ｎｍ以下程度の粒径範囲の測定ができる方法が好ましい。もっとも、１０〜１万ｎｍ、さらに限定すれば１０〜５０００ｎｍの粒径範囲のピークの測定及び比較ができれば十分な結果を得ることができるため、本発明で用いられる粒径測定方法にはこれらの範囲での粒径測定が可能な任意の方法が含まれる。従って、例えば、何らかの物理的方法（例えば、膜や粒子への吸着、多孔膜や粒子間の透過性、媒体中での可動性、可視光以外の電磁波を用いた電磁気的方法等が挙げられるがこれらに限定されない。）、化学的方法による測定等でもよい。
本発明による検査方法は、１０〜１万ｎｍの粒径範囲のコロイド粒子の粒径分布パターン、特に冷状態におけるサーモコロイド凝集ピークの存在により判断する。このことを説明するために、図１〜３に、健常者、Ｃ型肝炎患者、リューマチ患者のそれぞれについて１０〜５０００ｎｍの粒径範囲のコロイド粒子の粒径分布パターンを示す。各図とも（Ａ）が温状態、（Ｂ）が冷状態を表わしている。
まず、Ｂ型／Ｃ型肝炎に罹患していない健常者の場合、コロイド粒子の粒径分布パターンは図１のように３００ｎｍ以下に２つのピークが存在する。健常者の場合、コロイド粒子の粒径分布パターンは温状態でも冷状態でもほとんど変わらない。
一方、Ｂ型肝炎に罹患している場合は、冷状態では、温状態ピークの大粒径側にほぼ５００ｎｍから１万ｎｍにシフトしたショルダーを生じる（図示していない）。他方、Ｃ型肝炎に罹患している場合は、温状態で３００ｎｍ以下（通常、１００〜２００ｎｍ）に大きなピークが生じる傾向がある（図２（Ａ））。また、冷状態では１００〜１万ｎｍの粒径範囲のサーモコロイド凝集ピークが現われる（図２（Ｂ））。このピークは極めて明瞭であり、かつ、Ｃ型肝炎患者に必ず現われることが確認された。
また、一般に、血中にクリオグロブリンが現われる疾病としては、伝染性単核球症、白血病、リンパ腫、マクログロブリン血症（原発性）、多発性骨髄腫、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等が知られているが、いずれにおいても、Ｂ型肝炎に見られるショルダーや図２のようなパターン変化は現われない。例えば、リューマチ（慢性関節リウマチ）患者血清のコロイド粒子の粒径分布パターンの例を図３に示す。この例では３００ｎｍ以上に大きなピークが現われるが、１００〜１万ｎｍの粒径分布パターンは温状態でも冷状態でもほとんど変わらない。
従って、温状態でのコロイド粒子の粒径分布と冷状態でのコロイド粒子の粒径分布とを比較することにより、特に冷状態での１０〜１万ｎｍの粒径範囲のサーモコロイド凝集ピークの有無により、Ｂ型／Ｃ型肝炎罹患の有無を容易に判定できる。
上述の通り、本発明におけるサーモコロイドは、ＨＢＶ／ＨＣＶ抗原、変性ＩｇＭ、Ｃ１インヒビター（補体系タンパク質の１種）の免疫複合体を含むものと考えられるが、本発明者らは、このことから、サーモコロイド凝集ピークがＢ型／Ｃ型肝炎ウイルスの検査のみならず、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患の病態マーカー、特にＣ型肝炎ウイルス関連疾患の病態マーカーとして有用なのではないかと考え、種々のＣ型肝炎患者について血清中コロイド粒子の粒径分布パターンを分析した。その結果を、図４に模式的に示す。ここで、ピーク１は、Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患罹患者の血清に共通して現われるピークであり、Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患罹患者では、ピーク１に加え、より大粒径側のピークが現われる。具体的にはピーク１＋２は、初期のＣ型慢性肝炎患者に、ピーク１＋３、ピーク１＋４はＣ型肝炎由来肝ガン患者に典型的に見られるパターンである。このように、本発明者らは冷状態のサーモコロイド凝集ピーク（１０〜１万ｎｍ）は
（１）病態が重篤かつ急性期であるほどピーク強度が大きくなること、
（２）肝ガンではピーク粒径が大きくなること、
また、Ｂ型肝炎でも上記（１）及び（２）と同様の現象が生じるが、その移動幅は小さいことを見出した。
従って、この検査手法を用いれば、Ｂ型／Ｃ型肝炎患者について、病態を識別することが可能である。例えば、現在行なわれているＢ型／Ｃ型肝炎治療法におけるインターフェロンと他剤の併用療法において、前記ピーク強度の経時的な変化を見ることで治療効果を評価し、次に薬剤を投与すべき時期を決定することができる。また、肝ガン患者について術前術後での前記ピークの位置及び強度を見ることにより、ガン切除後に肝ガン／肝炎部位が残存しているか等を判定することができる。さらに、若年層におけるＢ型／Ｃ型肝炎ウイルス感染の有無、Ｂ型／Ｃ型肝炎寛解後のモニタリング等にも有用である。
［検査装置／システム］
上述のように、本発明の検査方法は、１０〜１万ｎｍの粒径分布測定が可能な装置を用いて行なわれる。従って、本発明は、測定セル内の血清試料のコロイド粒子の粒径を測定する手段を含む粒径分布測定装置において、温状態試料と冷状態試料の１０〜１万ｎｍの範囲の粒径分布を測定して前記粒径範囲内に冷状態でのみ現われ得るサーモコロイドの有無を識別するＢ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連肝疾患の検査装置をも含む。
コロイド粒子の粒径測定装置には、例えば、光学的方法、電気化学的方法、生物学的方法等による各種装置が含まれる。具体的な装置構成は測定原理によって変わるが、一般的には何らかのプローブ手段（例えば、可視光レーザー等の電磁波）、測定セル、測定セルからの応答を検出する手段、プローブ手段や応答を誘導する手段を含み、好ましくは応答検出手段で得たデータを解析する手段を含む。好ましくは測定セルを０〜４０℃を含む範囲の温度に制御する手段を備えたものである。
例として動的光散乱法を用いた測定装置の一例を図５に示す。この粒径測定装置は、光源１、測定セル２、測定セル２を保持するホルダーまたはステージ３、検知手段４及び光学系（５，６）を含む。光源１は、例えば、Ａｒレーザー、Ｈｅ−Ｎｅレーザー等のレーザー光源である。光源から入射経路の光学系５を経て測定セル２に入射したレーザービームは、測定セル２内のコロイド粒子１０により散乱され互いに干渉する。この干渉された散乱光を受光経路の光学系６を経て検出手段４で受光する。ホルダーまたはステージ３は一般には回転可能であり、その回転によって任意の方向の散乱光を検出できる。また、本発明装置は温度制御手段を含む。検出手段４で得た信号は処理手段７でデータ処理される。
セル内の粒子はブラウン運動によりその位置が絶えず変動しているため、散乱光の干渉による強度分布も絶えず変動する。すなわち、小粒子の散乱光の変動は激しく、大粒子では相対的に緩慢である。例えば、光子相関法により自己相関関数を求め、慣用の方法（例えば、キュムラント法および度数分布図法解析）を用いることにより、ブラウン運動速度を示す拡散係数、さらに粒径や粒径分布が求められる。
測定セルはレーザービームの透過性が高い材料からなり、数十μｌ〜数ｍｌ程度の内容量を有する。散乱光を検知する手段は好ましくは光電子倍増管である。光学系は、例えば、入射経路ではシャッター５ａ、フィルター５ｂ及び５ｅ、鏡５ｄ、集光レンズ５ｆ等を、受光経路では偏光素子６ａ、集光レンズ６ｂ、ピンホール６ｃ及び６ｄ等を含む（これらは例示であり、これ以外の光学素子を含んでもよいし、図中の配置とは異なる様々な配置が可能である。）。
なお、動的光散乱法によるコロイド粒子の粒径分布測定の原理は当業者によく知られており、そのような装置は市販されている（例えば、大塚電子「ダイナミック光散乱光度計」、堀場製作所「動的光散乱式粒径分布測定装置」、日機装「ナノトラック粒度分布測定装置」、シスメックス株式会社「ゼータサイザーナノシリーズ」等）。本発明の検査装置はこのような装置に（必要であれば）０〜４０℃を含む範囲での温度制御手段を組み込んで構成できる。また、動的光散乱法以外の装置（例えば、レーザー回折装置）を用いても、本願の開示を参照すれば当業者であれば同様の効果を有する装置を構成することができ、本願はそうした装置を全て含む。
本発明の装置は、さらに、冷状態下での粒径分布から温状態下での粒径分布を差し引き、その結果に基づいて１０〜１万ｎｍの粒径範囲に有意のピークが存在するか否かを判断する機構を備えることにより、Ｂ型／Ｃ型肝炎の自動検査が可能になる。
また、本発明は、これらの検査装置に加え、Ｂ型／Ｃ型肝炎血清における粒径分布データベースを有するか、またはかかるデータベースにアクセス可能であり、前記ピークの位置、ピーク強度及び／または形状をデータベース中のパターンデータと比較してＢ型／Ｃ型肝炎の病態を判断する機構をさらに備えたＢ型／Ｃ型肝炎の自動検査システムを含む。ここで、パターンデータとは、通常、前記粒径分布測定装置により測定された１０〜１万ｎｍの粒径範囲内の粒径分布測定値であり、これらの粒径範囲におけるサーモコロイドのピークの位置、ピーク強度及び／または形状を含む。詳細な検査を行なうためにはさらに大粒径側の粒径分布の形状を把握することが好ましい。この目的のために、より広い範囲（好ましくは１０〜３万ｎｍ、より好ましくは１０〜５万ｎｍ）の測定データを含めてもよい。
【実施例】  以下、本発明を実施例、比較例によってより詳細に説明する。なお、以下の実施例では大塚電子「ダイナミック光散乱光度計」ＤＬＳ−７０００シリーズを用いてコロイド粒子の粒径分布の測定を行なった。
参考例１：健常者（Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス非感染者）の分析例
ＲＴ−ＰＣＲ法等の既知の検査法によりＢ型／Ｃ型肝炎ウイルスに感染していないことが確認されている被験者（５２歳・男性）前腕から５ｍｌ採血し、静置により血清を分離した。得られた血清（２．５ｍｌ）をほぼ２分して１ｍｌずつとし、それぞれ恒温槽と冷蔵庫中で３７℃と１０℃に１晩維持した。
これを前記の粒径分布の測定装置において、それぞれ３７℃と１０℃で測定した。得られた結果を図６（Ａ）、（Ｂ）に示す。図に示すように、温条件下と冷条件下で分布パターンに実質的な変化は見られない。
実施例１：Ｃ型肝炎患者の分析例
Ｃ型肝炎患者（５３歳・男性）を被験者としたほかは参考例１と同様に血清を採取分析した。結果を図７（Ａ）、（Ｂ）に示す。図に示すように、冷条件下では温条件下では見られなかったピーク値約５００ｎｍのサーモコロイド凝集ピークが出現し、これに対応して小粒径側のピーク形状が変化している。
実施例２：肝ガン患者の分析例
Ｃ型肝炎から肝ガンに移行した患者（８０歳・男性）を被験者としたほかは参考例１と同様に血清を採取分析した。結果を図８（Ａ）、（Ｂ）に示す。図に示すように、冷条件下では温条件下では見られなかったピーク値３０００〜４０００ｎｍのサーモコロイド凝集ピークが出現しており、図７の肝炎に比較してピーク位置が大粒径側にシフトしている。
実施例３：肝ガン切除後の分析例
肝ガン切除後に慢性肝炎の残存が確認された患者（６９歳・男性）を被験者としたほかは参考例１と同様に血清を採取分析した。結果を図９（Ａ）、（Ｂ）に示す。図に示すように、冷条件下では温条件下では見られないピーク値３０００〜４０００ｎｍのサーモコロイド凝集ピークが出現している。このピーク強度は図７〜８に比較して小さいが、ピーク位置は図７とほぼ同様であり、慢性肝炎の残存が疑われる。実際、病理学的検査から慢性肝炎の残存が確認された。
実施例４：Ｂ型肝炎患者の分析例
Ｂ型肝炎患者（６３歳・男性）を被験者としたほかは参考例１と同様に血清を採取分析した。結果を図１０（Ａ）、（Ｂ）に示す。図に示すように、冷条件下ではピークの大粒径側のショルダーが特徴的に現われているが、新たなピークは出現していない。
【産業上の利用可能性】  本発明によれば、極めて簡単な方法によりＢ型／Ｃ型肝炎ウイルスへの感染及び／またはＢ型／Ｃ型肝炎罹患を判定できる。このため、従来は、簡便な検査法がなく部分的にしか実施されていなかったＢ型／Ｃ型肝炎ウイルス感染の早期検査をより広範囲に実施することが可能であり、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患の予防に有効である。また、本発明によれば、Ｂ型／Ｃ型肝炎ウイルス関連疾患（肝炎、肝硬変、肝ガン等）の病態を分析することが可能となり、経時的な変化を見ることで治療効果を評価し、適時での薬剤投与が可能になる。さらに、Ｂ型／Ｃ型肝炎寛解後のモニタリング等にも有用である。
【図１】
0004068123.tif 000002
【図２】
0004068123.tif 000003
【図３】
0004068123.tif 000004
【図４】
0004068123.tif 000005
【図５】
0004068123.tif 000006
【図６】
0004068123.tif 000007
【図７】
0004068123.tif 000008
【図８】
0004068123.tif 000009
【図９】
0004068123.tif 000010
【図１０】
0004068123.tif 000011