(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式(I)
【化１】
0004068843.tif 000026
｛式中、
R1は、−R4−R5又は−N(R7)N(R7)R9（但し、R7とR9が同時に水素である場合を除く）であり；
R2は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、OR7、NO2、アルキル、ヘテロアリールを含むアリール、ホルミル、アシル、C(O)NR7R10、C(O)OR7、NR7R10、N=C(R7)(R10)、SR7、SO2NH2、SO2アルキル及びSO2アリールからなる群から選択され；
mは、0、1又は2であり；
R3は、R7、OR7（但し、OR7がOC12H25の場合を除く）、N(R7)(R10)、N=C(R7)(R10)、N(R7)N(R7)(R10)、N(R7)N=C(R7)(R10)及びCH(R7)C(O)R8からなる群から選択され；そして
Xは、ハロゲン化物イオン、酢酸イオン、過塩素酸イオン、スルホン酸イオン、シュウ酸イオン、クエン酸イオン、トシラート（tosylate）イオン、マレイン酸イオン、メシラート（mesylate）イオン、炭酸イオン、亜硫酸イオン、リン酸水素イオン、ホスホン酸イオン、リン酸イオン、BF4−及びPF6−からなる群から選択され；
ここで、
R4は、-NH-アルキル（メチルを除く）-O-、-N（アルキル）−アルキル（メチルを除く）-O-、-N（ヘテロアリールを含むアリール）-アルキル（メチルを除く）-O-及び-O-アルキル（メチルを除く）-からなる群から選択され、
R5は、-COH、-CO-アルキル及び-CO-（ヘテロアリールを含むアリール）からなる群から選択され、
R7は、水素、アルキル又はヘテロアリールを含むアリールからなる群から選択され、
R8は、基R7、OR7及びNR7R10から選択され、
R9は、水素、アルキル、ヘテロアリールを含むアリール、−C(O)R10、−SO2R10、−C(S)NHR10、−C(NH)NH(R10)及び−C(O)NHR10からなる群から選択され、
R10は、水素、アルキル又はヘテロアリールを含むアリールからなる群から選択され、各場合において、R10は置換基R7と同一でも異なっていてもよく、そしてR10のヘテロアリール環に窒素が存在する場合、その窒素は、X−CH2C(O)−R3などの化合物によって4級化されていてもよい；
但し、
(i)２つのアルキル基が同一の炭素又は窒素上に存在するとき、それらは一緒に結合して環状構造を形成してもよく；そして
(ii)４−カルボキシ−１−（カルボキシメチル）ピリジニウム  クロライド，４−（２−クロロアセチルヒドラジン）を除く。｝
で示されるピリジニウム系化合物、及びその医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】
−C(O)R1基が3位又は4位に存在することを特徴とする、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
−C(O)R1基の位置が3位であることを特徴とする、請求項1又は2に記載の化合物。
【請求項４】
mが0又は1であることを特徴とする、請求項1、2又は3に記載の化合物。
【請求項５】
mが0であることを特徴とする、請求項1又は4に記載の化合物。
【請求項６】
Xがハロゲン化物イオンであることを特徴とする、請求項1又は2に記載の化合物。
【請求項７】
下記化合物からなる群から選択されることを特徴とする請求項1に記載の化合物：
(a)N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(b)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(c)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(d)N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−フェニル−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(f)1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(g)N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(h)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(i)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(j)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(k)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−2−クロロ−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(l)1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−4−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(m)1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(n)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(2−(アセトキシ)エトキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(o)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルオキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
【請求項８】
一般式（Ａ）
【化２】
0004068843.tif 000027
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びｍは、請求項１で定義した通りである）で示されるピリジン誘導体を製造し、次いでこのピリジン誘導体を、一般式（Ｂ）
【化３】
0004068843.tif 000028
（式中、Ｒ３及びＸは、請求項１で定義した通りである）で示される化合物と共に、アルコール性溶媒及び／又は高沸点溶媒中で還流することを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載のピリジニウム系化合物の製造方法。
【請求項９】
薬物の製造における、請求項1で定義された一般式(I)の化合物の使用。
【請求項１０】
該化合物が
(a)N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(b)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(c)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(d)N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−フェニル−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(f)1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(g)N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(h)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(i)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(j)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(k)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−2−クロロ−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(l)1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−4−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(m)1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(n)1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(2−(アセトキシ)エトキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
(o)1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルオキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド又はその医薬的に許容可能な塩
からなる群から選択されることを特徴とする、請求項9に記載の使用。
【請求項１１】
医薬的に許容可能なキャリア、希釈剤、溶媒又は賦形剤と混合された、請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式（Ｉ）で示される化合物及び医薬的に許容可能なそれらの塩（類）からなる群から選択される一種以上の医薬的有効量を含む医薬組成物。
【請求項１２】
経口剤形の形態であることを特徴とする、請求項11に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該医薬的に許容可能なキャリアが、澱粉、乳糖、ポリビニルピロリドン（K-30）、タルク及びステアリン酸マグネシウムの1種以上の化合物から選択されることを特徴とする、請求項12に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
非経口投与剤形の形態であることを特徴とする、請求項11に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
請求項1〜７のいずれか１項に記載の一般式(I)で示される有効成分をポリエチレングリコール400に溶解し、得られた溶液を等張溶液又は水で希釈して所望の濃度とすることを含む、請求項14に記載の非経口剤形の製造方法。
【請求項１６】
ローション、口内リンス及び歯磨き剤の形態であることを特徴とする、請求項11に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式（Ｉ）で示される化合物の有効量を含む、生体内にすでに形成されているAGEを破壊するための薬剤。
【請求項１８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式（Ｉ）で示される化合物の有効量を含む、口腔の非酵素的褐変による歯の着色を逆進させるための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規な分類のピリジニウム系化合物類及び糖尿病及び関連する病気の治療におけるそれらの使用に関する。より詳細には、本発明は、この系の化合物、それらの製造方法、これらの化合物を含む医薬組成物及び真性糖尿病の合併症の治療におけるそれらの使用に関する。この系の化合物は、AGE分解活性（AGE breaking activity）を示し、そしてそれは、腎臓疾患、神経損傷、アテローム性動脈硬化症、網膜症及び皮膚科学的症状を含む糖尿病及び老化関連合併症の治療にとって極めて重要（essential）である。本発明は、すでに形成されている進行したグリコシル化架橋（glycosylation crosslinks）を逆進させる（reverse）のに有効な量の投与を含む、口腔の非酵素的褐変の結果である歯の変色の逆進（reversing）方法にも及ぶ。
【０００２】
【発明の背景】
メイルラード（Maillard）は、1912年に、還元糖類（例えば、グルコース及びリボース）がタンパク質類と反応して褐色色素を形成することを見出した。さらなる研究によって、これが不可逆的な非酵素的反応であり、貯蔵食料品を含む幾つかの自然のシステムで起きることが示された。メイルラード反応は、初期及び進行時の二段階で起きる。最初に、タンパク質類がグルコースと反応して安定なアマドリ（Amadori）生成物を形成し、それが続いて架橋し進行型の（advanced）グリコシル化最終生成物（AGE）を形成する。殆どの場合、AGEの形成は、タンパク質類の褐変及び蛍光の増加をも伴う。
【０００３】
正常よりも血糖値が顕著に高い糖尿病では、グルコースと幾つかのタンパク質類（例えば、ヘモグロビン、レンズクリスタリン及びコラーゲン）との反応は、AGEの形成を起こさせ、それは次には、糖尿病に関係する合併症（例えば、腎障害、微小欠陥障害、内皮機能障害及び他の臓器機能障害）の原因となる。さらに、幾つかの成長因子（例えば、塩基性線維芽細胞成長因子）の活性をも弱める。AGE生成物は、組織中の正常タンパク質類とは異なり、よりゆっくりした速度で代謝回転し、補充される。AGE生成物は、事実RAGE（進行型グリコシル化最終生成物に対するレセプター）レセプター類及び完全には定義されていない幾つかの免疫学的工程の活性化に関係する複雑な免疫学的反応を誘発し得ることが報告されている。微小血管障害及び巨大血管障害（macroangiopathy）の証拠を有する糖尿病は、その機構は明らかにされていないが、酸化的ストレスの証拠をも示すことが実証されている。
【０００４】
in vitroでのAGE形成は、還元糖類（例えばリボース又はグルコース）をウシ血清アルブミンと共にインキュベートすることによって研究室で研究できる。AGE形成は、蛍光の増加又は抗AGE抗体との交叉反応性の増加によって検出できる。蛍光の増加は、AGE特異的抗原性エピトープの形成に先行するように見える。この蛍光の増加を用いて、in vitroでの増加したAGE形成をモニターする（Brownlee Mら, Science 1986; 232:1629-1632）。蛍光の増加に加えて、in vitroでのAGE形成の最も重要な特徴の１つは、AGEに特異的であり、自然のタンパク質類には特異的でない抗原性エピトープの形成である。従って、あるタンパク質の進行型グリコシル化最終生成物に対する抗体を生成すること及びそれらを用いて他のタンパク質類でのAGE形成を検出することが可能である。これは、AGE研究の重要な分析ツールとして役立った。
【０００５】
AGE形成の臨床的重要性故に、生体でのAGE形成の診断、予防、又は逆進（revert）のために多くのアプローチが用いられている。AGE形成は、標的タンパク質とグルコースとの間の本来の反応から得られる初期グリコシル化生成物との反応によって阻害することができた。この阻害は、阻害剤と、グリコシル化されたタンパク質と追加的なタンパク質材料との続く反応を中断すると思われる初期グリコシル化生成物との間の反応として起き、架橋した後期段階の生成物を形成すると信じられていた。アミノグアニジンのような化合物類は、そのような機構によってAGE形成を阻害するように作用する。
【０００６】
長命のタンパク質類に関するAGE形成は、これらのタンパク質類の架橋にも関係する。AGE誘導タンパク質架橋は、AGE誘導タンパク質架橋と反応し、共有結合を開裂する、臭化N−フェナシルチアゾリウム（PTB）のような化合物類によって開裂されることが示されている（Vasanら, Nature 1996; 382:275-278；米国特許第5,853,703号明細書、特許日：1998年12月29日）。組織中のAGE含有量を低減する機構は、そのごく自然な作用機構によってゆっくりと作用するアミノグアニジンとは対照的に、比較的迅速に起きると予想されている。本明細書は、PTBのようなすでに形成されているAGEをある場合にはPTBによるよりもさらに効果的に分解するピリジニウム類の化合物に関する。
【０００７】
【発明の概要】
本発明の主たる目的は、糖尿病及び老化関連血管合併症の管理、特に真性糖尿病の合併症及び腎疾患、神経損傷、アテローム性動脈硬化症、網膜症及び皮膚科学的症状を含む他の老化関連症状の治療に有用な新規な分類のピリジニウム系化合物を提供することである。本発明は、すでに形成されている進行型グリコシル化架橋などを逆進するのに有効な量の投与を含む、口腔における非酵素的褐変からもたらされる歯の変色を逆進する方法にも及ぶ。
【０００８】
本発明の別の目的は、AGE分解活性を示すピリジニウム系化合物を提供することである。
【０００９】
本発明のさらに別の目的は、AGE分解活性を示すピリジニウム系化合物の製造方法を提供することである。
【００１０】
本発明のさらに別の目的は、好適なキャリア類、溶媒類、賦形剤類、希釈剤類及びそのような組成物の製造に通常用いられる他の媒体と組み合わされた、本発明による新規な分類のピリジニウム系化合物類及びそれらの医薬的に許容可能な塩類による医薬組成物を提供することである。
【００１１】
本発明のさらに別の目的は、単独又は抗糖尿病治療薬との組み合わせのいずれかによる、目的に対して適切であり得る医薬的に許容可能な希釈剤、溶媒、賦形剤類、キャリア類又は他の媒体と混合された必要な投薬形態の、本発明の化合物若しくはその医薬的に許容可能な塩類の投与による糖尿病患者の治療方法を提供することである。
【００１２】
【発明の詳細な説明】
本発明は、一般式(I)で示される新規な分類のAGE分解剤（AGE breaker）を提供する。
【００１３】
【化３】
0004068843.tif 000002
【００１４】
｛式中、
R1は、−R4−R5又は−N(R7)N(R7)R9（但し、R7とR9が同時に水素である場合を除く）であり；
R2は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、OR7、NO2、アルキル、ヘテロアリールを含むアリール、ホルミル、アシル、C(O)NR7R10、C(O)OR7、NR7R10、N=C(R7)(R10)、SR7、SO2NH2、SO2アルキル及びSO2アリールからなる群から選択され；
mは、0、1又は2であり；
R3は、R7、OR7（但し、OR7がOC12H25の場合を除く）、N(R7)(R10)、N=C(R7)(R10)、N(R7)N(R7)(R10)、N(R7)N=C(R7)(R10)及びCH(R7)C(O)R8からなる群から選択され；そして
Xは、ハロゲン化物イオン、酢酸イオン、過塩素酸イオン、スルホン酸イオン、シュウ酸イオン、クエン酸イオン、トシラート（tosylate）イオン、マレイン酸イオン、メシラート（mesylate）イオン、炭酸イオン、亜硫酸イオン、リン酸水素イオン、ホスホン酸イオン、リン酸イオン、BF4−及びPF6−
【００１６】
からなる群から選択され；
ここで、
R4は、-NH-アルキル（メチルを除く）-O-、-N（アルキル）−アルキル（メチルを除く）-O-、-N（ヘテロアリールを含むアリール）-アルキル（メチルを除く）-O-及び-O-アルキル（メチルを除く）-からなる群から選択され、
R5は、-COH、-CO-アルキル及び-CO-（ヘテロアリールを含むアリール）からなる群から選択され、
R7は、水素、アルキル又はヘテロアリールを含むアリールからなる群から選択され、
R8は、基R7、OR7及びNR7R10から選択され、
R9は、水素、アルキル、ヘテロアリールを含むアリール、−C(O)R10、−SO2R10、−C(S)NHR10、−C(NH)NH(R10)及び−C(O)NHR10からなる群から選択され、
R10は、水素、アルキル又はヘテロアリールを含むアリールからなる群から選択され、各場合において、R10は置換基R7と同一でも異なっていてもよく、そしてR10のヘテロアリール環に窒素が存在する場合、その窒素は、X−CH2C(O)−R3などの化合物によって4級化されていてもよい；
【００１７】
但し、
(i)２つのアルキル基が同一の炭素又は窒素上に存在するとき、それらは一緒に結合して環状構造を形成してもよく；そして
(ii)４−カルボキシ−１−（カルボキシメチル）ピリジニウム  クロライド，４−（２−クロロアセチルヒドラジン）を除く。｝
【００１８】
ここで用いる「アルキル」とは、炭素−炭素単結合によって結合され、1〜8個の一緒に結合された炭素原子を有する任意に置換された炭化水素基をいう。アルキル炭化水素基は、直線状、分岐状若しくは環状で、飽和又は不飽和であり得る。置換基は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、窒素、硫黄、酸素及びアリールから選択される。3個未満の置換基が存在しているのが好ましい。
【００１９】
ここで用いる「アリール」とは、pi電子系と共役しており、2つまでの共役又は融合環系を含む、少なくとも１つの環を有する任意に置換された芳香族基をいう。アリールとしては、炭素環状アリール、ヘテロ環状アリール及びビアリール基が挙げられ、それらは全て、任意に置換されていてもよい。置換基は、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素、窒素、硫黄、酸素及び直鎖又は分岐C1−C6炭化水素から選択される。
【００２０】
mが0であり、3位に−COR1を有する一般式(I)で示される本発明の新規化合物を表1A（［表１］）に列挙し、mが0であり、4位に−COR1を有する一般式(I)で示される本発明の新規化合物を表1B（［表２］）に列挙する。下記の化合物は、上記定義の一般式(I)の代表的な化合物の例としての目的のみで提示されるものであり、本発明を何ら限定するものではない。
【００２１】
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物1）：
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物2）：
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物3）：
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物4）：
【００２２】
1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物5）：
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル）ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物6）：
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物7）：
1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物8）：
【００２３】
1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物9）：
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物10）：
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物12）：
【００２４】
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物13）：
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物14）：
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−2−クロロ−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物15）：
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(2−(アセトキシ)エチルオキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物16）：
【００２５】
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルオキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物17）：
1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−4−(2−(ベンゾイルオキシ）エチルアミノカルボニル）ピリジニウム  ブロマイド（化合物18）：
【００２６】
【表１】
0004068843.tif 000003
【００２７】
【化５】
0004068843.tif 000004
【００２８】
【表２】
0004068843.tif 000005
【００２９】
本発明の実施態様によれば、本化合物は、糖尿病合併症、並びに腎臓疾患、神経損傷、アテローム性動脈硬化症、網膜症、皮膚科学的症状及びすでに形成されている高濃度のAGEによって起きる歯の着色を含む老化関連合併症の治療に有用である。すでに形成されているAGE濃度の増加は、本発明で述べる化合物を用いてAGE生成物を分解することによって正常に制御できる。
【００３０】
本発明は、ピリジニウム系の新規化合物の製造方法をも提供する。
【００３１】
化合物1の製造方法は、イソプロパノール中の臭化フェナシル溶液をメタノールに溶解したN,N'−ビス−(ニコチニル)ヒドラジンに添加し、6時間還流し、冷却し、沈殿した固体を濾別し、この固体を暖かい酢酸エチルで洗浄し、最後にこの固体を20 mlのメタノール：酢酸エチル（3:1）で精製して所望の化合物を得ることを含む。
【００３２】
一般式(I)で示される他の新規化合物も同様に、下記一般式（Ａ）
【化１】
0004068843.tif 000006
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びｍは、前記定義の通りである）で示されるピリジン誘導体を製造し、次いでこのピリジン誘導体を、下記一般式（Ｂ）
【化２】
0004068843.tif 000007
（式中、Ｒ３及びＸは、前記定義の通りである）で示される化合物と共に、アルコール性溶媒及び／又は高沸点溶媒中で６〜４８時間還流することによって所望の一般式（Ｉ）で表される化合物を得ることができる。
【００３３】
in vitroでのAGE形成は、溶液の褐変及び蛍光の増加をもたらす、還元糖リボースをタンパク質ウシ血清アルブミンと共にインキュベートすることによって研究室で研究された。蛍光は、AGE形成の増加をモニターするための判定基準として用いた。
【００３４】
【実施例】
実施例1
AGE分解剤活性を下記のようにモニターするスクリーニング工程によって確認した：
【００３５】
材料：
ウシ血清アルブミン（画分V）（BSA）
リボース、分析級（analytical grade）
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）
【００３６】
装置：
マイクロプレートELISAリーダー−Spectramax Plus（Molecular Devices社製、USA）
マイクロプレート洗浄機（Bio-Tec Instruments社製、USA）
pHメーター
【００３７】
実験の方法：
160 mg/mlのタンパク質、ウシ血清アルブミン、BSA及び1.6 Mグルコース糖をリン酸緩衝生理食塩水、PBS中に溶解した。防腐剤として、アジ化ナトリウムを0.02％の濃度で添加した。この溶液を0.22μMのフィルターによって躊躇無く（asceptically）濾過し、37℃で16週間老化（aging）のために保持した。16週間後、この溶液をPBSに対して透析し、分割して、−20℃で貯蔵した。
【００３８】
AGE分解活性を測定するために、10μg/ml及び100μg/mlの16週間AGE−BSAを、異なる濃度の被験化合物と共に、37℃で24時間インキュベートし、被験化合物のAGE分解活性をELISAによって測定した。
【００３９】
ELISAは下記のように実施した：
1.異なる濃度の16週間AGE−BSAを、標準としてマイクロタイタープレート上にコーティングした。各濃度で3つづつ被覆した。
2.ウエル当たり5 ng〜20 ngの濃度で、3つづつ被験試料をマイクロタイタープレート上にコーティングした。
3.プレートを37℃で1時間インキュベートした。
4.インキュベート後、プレートをPBST（0.05％ Tween 20を含むPBS）で洗浄した。
【００４０】
5.37℃で1時間、PBS中の5％脱脂粉乳によってブロッキングを行った。
6.プレートをPBSTで洗浄した。
7.AGE−BSAに対する一次抗体を添加し、プレートを37℃で1時間インキュベートした。
8.プレートをPBSTで洗浄した。
9.二次抗体抗ウサギHRPO（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）コンジュゲートを添加し、プレートを37℃で1時間インキュベートした。
【００４１】
10.プレートをPBSTで洗浄した。
11.OPD（オルトフェニレンジアミン二塩酸塩）及び過酸化水素による着色を行った。
12.37℃で15分間インキュベート後、マイクロプレートELISAリーダーによって、（450 nm読み取り（reading）〜620 nm読み取り）でのOD（光学密度）を測定した。
【００４２】
化合物の分解剤活性を下記式によって決定した：
【００４３】
【数１】
0004068843.tif 000008
OD450-620対照＝被験化合物無しで37℃で24時間インキュベート後の20 ng AGE−BSAの吸光度
OD450-620被験＝必要な濃度の被験化合物と共に37℃で24時間インキュベート後の20 ng AGE−BSAの吸光度
【００４４】
特定の実施例を用いて、％AGE分解活性を算出し、表2（［表３］）に記録した。
【００４５】
【表３】
0004068843.tif 000009
【００４６】
このように、化合物6は有意なAGE分解活性、すなわち、PTBに対して比較上非常に優れた能力を有している。
【００４７】
下記実施例は、表1（［表１］及び［表２］）に記載の本発明の特定の新規化合物の製造方法を示す。下記化合物は、例示の目的でのみ提示されており、本発明を何ら限定するものではない。
【００４８】
実施例2
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−フェニル−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物1）の製造：
メタノール（20 ml）中N,N'−ビス−(ニコチニル)ヒドラジン（1.21 g、0.005モル）の沸騰溶液に、イソプロパノール（10 ml）中臭化フェナシル（1.99 g、0.01モル）の溶液を添加し、反応混合物を6時間還流した。反応混合物を減圧下に濃縮し（〜10 ml）、濾過した。得られた残渣を暖かい酢酸エチルで洗浄し、次いで、単離された固体を粉末化した。それを、メタノール及び酢酸エチル（3:1、20 ml）の混合物から再結晶し、淡黄色の固体を得た。
【００４９】
収率：60％
融点：260〜262℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：1696及び1680
【００５０】
【化６】
0004068843.tif 000010
質量分析（m/z）：479、480
【００５１】
上記工程によれば、下記化合物類は、対応するピリジン誘導体類を適当な試薬と反応させ、メタノール、エタノール、プロパノール、トルエン又はキシレン中で6〜48時間還流して所望の化合物を得ることによって合成される：
【００５２】
実施例3
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物2）：
収率：47％
融点：180〜182℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：1744、1664
【００５３】
【化７】
0004068843.tif 000011
質量分析（m/z）：415、416
【００５４】
実施例4
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物3）：
収率：24％
融点：225〜227℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：1702、1666
【００５５】
【化８】
0004068843.tif 000012
質量分析（m/z）：615、617、618、620
【００５６】
実施例5
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物4）：
収率：16％
融点：210〜212℃
IR（KBr、cm-1）：3140、3005、1732及び1690
【００５７】
【化９】
0004068843.tif 000013
質量分析（m/z）：301、302
【００５８】
実施例6
1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物5）：
収率：30％
融点：199〜200℃
IR（KBr、cm-1）：1714、1673
【００５９】
【化１０】
0004068843.tif 000014
質量分析（m/z）：340、341、342
【００６０】
実施例７
N,N'−ビス[3−カルボニル−1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)ピリジニウム]ヒドラジン  ジブロマイド（化合物６）：
収率：33％
融点：259〜261℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：3330、1702、1674、1655及び1626
【００６１】
【化１１】
0004068843.tif 000015
質量分析（m/z）：491、492
【００６２】
実施例8
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物7）：
収率：85％
融点：132〜134℃
IR（KBr、cm-1）：3210、3067、1726、1687、1656
【００６３】
【化１２】
0004068843.tif 000016
質量分析（m/z）：357、358、359
【００６４】
実施例9
1−(2−(2,4−ジクロロフェニル)−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物8）：
収率：75％
融点：102〜104℃
IR（KBr、cm-1）：1703、1685、1675
【００６５】
【化１３】
0004068843.tif 000017
質量分析（m/z）：457、458、459、460、461、462
【００６６】
実施例10
1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物9）：
収率：10％
融点：212〜214℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：1685、1649
【００６７】
【化１４】
0004068843.tif 000018
質量分析（m/z）：339、340、341
【００６８】
実施例11
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(2−(2−ピリジル)ヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物10）：
収率：4％
融点：190℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：1683、1670、1648
【００６９】
【化１５】
0004068843.tif 000019
質量分析（m/z）：333、334、335
【００７２】
実施例13
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物12）：
収率：35％
融点：227〜228℃
IR（KBr、cm-1）：1710、1702
【００７３】
【化１７】
0004068843.tif 000020
質量分析（m/z）：334、335
【００７４】
実施例14
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(メタンスルホニルヒドラジノカルボニル）ピリジニウム  ブロマイド（化合物13）：
収率：38％
融点：75〜76℃
IR（KBr、cm-1）：1739、1697
【００７５】
【化１８】
0004068843.tif 000021
質量分析（m/z）：301、302、303
【００７６】
実施例15
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物14）：
収率：28％
【００７８】
実施例16
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−2−クロロ−3−(フェニルスルホニルヒドラジノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物15）：
収率：23％
融点：247〜250℃（分解）
IR（KBr、cm-1）：1685、1679
【００７９】
【化１】
0004068843.tif 000022
【００８０】
実施例1７
1−(2−フェニル−2−オキソエチル)−3−(2−(アセトキシ)エチルオキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物16）：
収率：40％
【００８１】
【化２１】
0004068843.tif 000023
質量分析（m/z）：328、329
【００８２】
実施例18
1−(2−エトキシ−2−オキソエチル)−3−(2−(ベンゾイルオキシ)エトキシカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物17）：
収率：35％
融点：142〜143℃
【００８３】
【化２２】
0004068843.tif 000024
質量分析（m/z）：358、359、360
【００８４】
実施例19
1−(2−チエン−2'−イル−2−オキソエチル)−4−(2−(ベンゾイルオキシ)エチルアミノカルボニル)ピリジニウム  ブロマイド（化合物18）：
融点：210〜211℃
IR（KBr、cm-1）：1723、1680、1668
【００８５】
【化２３】
0004068843.tif 000025
質量分析（m/z）：395、396
【００８６】
医薬組成物
医薬組成物は、一般式(I)で示される個々の化合物又は化合物の組み合わせの医薬的有効量によって製造できる。下記医薬製剤類（formulations）は、例としての目的のみで提示されるものであり、それらが用いられ得る形態を何ら限定するものではない。
【００８７】
経口剤形
経口剤形は、固体状投薬形態（例えば、ペレット、粉末、サシェット（sachets）又は錠剤若しくはカプセルなどの個々の単位）として投与され得る。他の経口的に投与される製剤類（pharmaceutical preparations）としては、直ぐに使用できる形態若しくは再構成に好適な形態（例えば、混合物、シロップ、懸濁液又は乳剤）のいずれかの単相及び2相の液状投与形態が挙げられる。さらに製剤は、希釈剤類、分散剤類、バッファー類、安定化剤類、可溶化剤類、界面活性剤類、保存剤類、キレート剤類及び／又は他の医薬用添加剤を含むことができる。水性若しくは非水性担体又はそれらの組み合わせを用いることができ、所望ならば、適当な甘味料、調味剤又は類似の物質類を含むことができる。懸濁液又は乳剤の場合には、適当な増粘剤又は懸濁化剤又は乳化剤をさらに存在させることができる。あるいは、化合物を、他の添加剤と関係しない、それらの純粋な形態（例えば、カプセル又はサシェット）として投与することができる。それは、担体と共に投与することもできる。製剤は、マトリックス又は拡散制御システムによって、ゆっくりと、遅延されて又は制御されて有効成分を放出させることができる。
【００８８】
本発明の化合物若しくはその塩類又は適当な複合物（complexes）が、錠剤のような個々の単位の投薬形態として提供される場合、それはさらに当業界で用いられる医学的に不活性な賦形剤類を含むことができる。澱粉、乳糖、リン酸二カルシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロースのような重合性物質、脂肪酸類及び誘導体類、澱粉グリコール酸ナトリウム（sodium starch glycollate）などの希釈剤類を用いることもできる。
【００８９】
実施例20
経口投与形態の製剤：
典型的な錠剤は下記の組成を有する：
式(I)で示される有効成分                          上記のとおり
乳糖                                                135 mg
澱粉                                                 76 mg
ポリビニルピロリドン（K-30）                          2 mg
タルク                                              1.5 mg
ステアリン酸マグネシウム                            1.0 mg
【００９０】
非経口剤形
非経口投与については、化合物類若しくはそれらの塩類又はそれらの適当な複合物類を、水性若しくは非水性担体又はそれらの組み合わせであり得る滅菌担体中に存在させることができる。担体類の例は、水、オレイン酸エチル、オイル類及びポリオール類、グリコール類及びそれらの誘導体類の誘導体類である。それは、安定化剤類、可溶化剤類、pH調整剤類（pH modifiers）、バッファー類、抗酸化剤類、助溶媒類（cosolvents）、錯化剤類、張性調整剤類（tonicity modifiers）などのような注射製剤に共通の添加剤を含むことができる。
【００９１】
幾つかの好適な添加剤は、例えば、酒石酸バッファー、クエン酸バッファー若しくは類似のバッファー類、アルコール、塩化ナトリウム、デキストロース及び高分子量ポリマー類である。もう１つの代わりに使用できるものは、滅菌粉末再構成である。化合物は、1日1回より多い投与のための注射又は静脈内注入／点滴若しくは適当なデポ製剤の形態で投与できる。
【００９２】
実施例21
非経口投与に適した製剤は下記組成を有する：
式(I)で示される有効成分                            上記のとおり
ポリエチレングリコール（400）                          0.75 ml
メタ重亜硫酸ナトリウム                                  0.01％
等張生理食塩水／WFI                                    必要量
【００９３】
他の剤形
皮膚科学的適用及び歯の着色については、推奨される剤形は、一般式(I)で示される化合物の適量を含むローション、口内リンス（oral rinse）及び歯磨き粉である。
【００９４】
上記実施例は、説明の目的でのみ提示されており、本発明の範囲を何ら限定するものではない。