(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
キチンオリゴ糖を有効成分として含有することを特徴とする肝機能障害予防改善剤。
【請求項２】
前記キチンオリゴ糖が、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、及びＮ−アセチルキトヘプタオースから選ばれた少なくとも１種を含む請求項１記載の肝機能障害予防改善剤。
【請求項３】
肝炎の予防改善に用いられる請求項１又は２記載の肝機能障害予防改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、キチンオリゴ糖を有効成分とする肝機能障害予防改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、我国では高齢化や食生活の西洋化に伴い、各種の成人病の発生率が高くなってきている。中でも肝機能障害は、定期検診の生化学的検査においてGOT 、GPT 等の指標によりその程度が把握できることから、障害の発見が容易になされるようになってきている。
【０００３】
肝臓は生体内で解毒作用、糖質、蛋白質、脂質の代謝や貯蔵、ホルモン調節等の重要な役割を果たしており、その機能障害は生体にとって致命的な結果を招くことも少なくない。肝炎に代表される肝機能障害の原因は、アルコール飲料の過剰摂取、暴飲、暴食や不規則な生活、ストレス等の生活習慣に基づくものもあるが、肝炎ウイルスに因るものも多いことが判ってきた。特にウイルス性肝炎は、慢性化すると肝硬変を経て肝癌に移行することが多く、予防改善法の確立が切望されている。
【０００４】
肝炎の予防改善剤としては、従来から多くのものが提案されているが、一般に化学合成品は効果は高いものの副作用もあり、長期の投薬には問題があり、天然抽出物は逆に安全性が高いものの充分な効果を示さないものが多かった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記従来技術の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は安全性が高く、充分な効果をもつ肝機能障害予防改善剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、キチン由来のオリゴ糖をマウスに投与すると、肝機能障害を効果的に改善できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明の肝機能障害予防改善剤は、キチンオリゴ糖を有効成分として含むことを特徴とする。本願発明においては、前記キチンオリゴ糖が、Ｎ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、及びＮ−アセチルキトヘプタオースから選ばれた少なくとも１種を含むことが好ましい。また、肝炎の予防改善に用いられることが好ましい。
【０００８】
本発明の肝機能障害予防改善剤は、後述する試験例に示されるように、マウスに対して人為的に誘発させた肝炎に対し、その症状を軽減させる顕著な予防改善効果を発揮することが認められた。したがって、人間を含めた動物に対して、肝炎等に伴う肝機能障害予防改善効果をもたらすことが期待される。
【０００９】
また、本発明の肝機能障害予防改善剤は、天然に豊富に存在する多糖類を原料として得られるキチンオリゴ糖を有効成分としているため、安全性が高く、しかも比較的簡単な工程で製造できるので、コスト的にも有利である。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明において、キチンオリゴ糖は、カニ、エビ等の甲殻類の殻等から常法によって調製されるキチンを、化学的又は生化学的に処理することによって得られる。
【００１１】
すなわち、キチンオリゴ糖は、キチンを酸又は酵素によって部分加水分解し、必要に応じてその分解物からカラムクロマトグラフィーや溶剤分画等の方法によって所望の重合度のものを分画、精製することにより得られる。酸分解による方法としては、例えば本出願人による特公平５−８６３９９号公報に示される方法が好ましく採用できる。
【００１２】
キチンオリゴ糖の重合度は、通常２〜７糖程度のもの、すなわちＮ−アセチルキトビオース、Ｎ−アセチルキトトリオース、Ｎ−アセチルキトテトラオース、Ｎ−アセチルキトペンタオース、Ｎ−アセチルキトヘキサオース、Ｎ−アセチルキトヘプタオースが好ましく、この中の１種又は２種以上の混合物が好ましく用いられる。
【００１３】
なお、キチンオリゴ糖又はその混合物は、各社から市販されており、例えば「NA-COS-Y」（商品名、焼津水産化学工業株式会社製）などを用いることができる。
【００１４】
本発明の肝機能障害予防改善剤は、キチンオリゴ糖を有効成分として含んでいればよく、キチンオリゴ糖として直接摂取又は投与することもでき、また、食品、医薬品、飼料、餌料等に添加、配合して用いることもできる。例えば医薬品として用いる場合、その投与方法も、経口、静注、筋注等の各種の投与方法を採用することができる。なお、キチンオリゴ糖は容易に水に溶解するので、添加、配合が容易である。
【００１５】
また、キチンオリゴ糖の動物に対する投与量は動物の種類、投与期間、配合する食品、医薬品、飼料、餌料等の種類により異なるが、キチンオリゴ糖として、体重1kg 当たり、経口の場合0.1 〜1,000mg 、静注の場合0.01〜100mg 、筋注の場合0.01〜100mg が好ましい。また、食品、飼料、餌料への配合量としては0.01〜10重量％程度が好ましい。
【００１６】
なお、キチンオリゴ糖の安全性については、既に確認されているところであるが、念のためラットにおける経口投与での急性毒性試験結果を記載すると、両者ともＬＤ50＞5g／kg以上であった。
【００１７】
【実施例】
実施例１（キチンオリゴ糖混合物の製造）
カニ殻を起源とするキチン1000g に、12N 塩酸4000mlを加え、45℃湯浴中で3 時間撹拌した後、水4000mlを加えて反応を終了させた。25% 苛性ソーダでpH6.0 に中和後、活性炭脱色、濾過、電気透析により脱塩を行い、イオン交換樹脂処理による精製後、噴霧乾燥してキチンオリゴ糖混合物420gを得た。
【００１８】
このキチンオリゴ糖混合物の組成は、Ｎ−アセチルグルコサミン35重量％、Ｎ−アセチルキトビオース19重量％、Ｎ−アセチルキトトリオース15重量％、Ｎ−アセチルキトテトラオース12重量％、Ｎ−アセチルキトペンタオース 8重量％、Ｎ−アセチルキトヘキサオース 6重量％、Ｎ−アセチルキトヘプタオース 5重量％であった。
【００１９】
参考例１（キトサンオリゴ糖混合物の製造）
カニ殻を起源とするキトサン100gに、12N 塩酸400ml を加え、70℃湯浴中で2 時間撹拌した後、水400ml を加えて反応を終了させ、フィルター濾過により不要物を除去した。次に活性炭10g を添加して1 時間撹拌した後、フィルター濾過して活性炭を除去し、分離脱色液700ml を得た。この分離脱色液を塩酸を溜去させながら減圧濃縮し、得られたシラップ状濃縮液にメタノール300ml を加え、更にアセトン900 mlを添加して結晶状沈殿物を析出させた。この沈殿物をフィルター濾過により回収し、真空乾燥してキトサンオリゴ糖混合物120gを得た。
【００２０】
このキトサンオリゴ糖混合物の組成は、Ｄ−グルコサミン32重量％、キトビオース20重量％、キトトリオース14重量％、キトテトラオース14重量％、キトペンタオース10重量％、キトヘキサオース 4重量％、キトヘプタオース 4重量％、キトオクタオース 2重量％であった。
【００２１】
参考例２（キトサンオリゴ糖酢酸塩混合物の製造）
カニ殻を起源とするキトサン250gに水5Lと氷酢酸90g を加え、一晩撹拌して粘調な溶液を得た。このキトサン溶液にバチラス・パミラス（Bacillus pumilus）起源のキトサナーゼ（明治製菓株式会社製）50mgを添加し、40℃湯浴中で18時間撹拌した。反応終了後、80℃で10分間加熱して酵素を失活させて、キトサンオリゴ糖溶液を得た。次いでキトサンオリゴ糖溶液を噴霧乾燥してキトサンオリゴ糖酢酸塩混合物210gを得た。
【００２２】
このキトサンオリゴ糖酢酸塩混合物の組成は、キトビオース酢酸塩25重量％、キトトリオース酢酸塩24重量％、キトテトラオース酢酸塩19重量％、キトペンタオース酢酸塩16重量％、キトヘキサオース酢酸塩 8重量％、キトヘプタオース酢酸塩 5重量％、キトオクタオース酢酸塩 3重量％であった。
【００２３】
試験例１（マウスの肝炎誘発に関する予備実験）
8 週齢のマウス（ＢＤＦ１）にコリネバクテリウム・パルバム（Corynebacterium parvum）菌体を一匹当たり0.5mg 静脈内に投与し、７日後に大腸菌より抽出されたリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を0.1 mg、1 mg、10mgの量で静注投与した後、それぞれの群について２１日まで観察して屠殺し、肝炎の程度を調べた。結果は表１の通りであった。
【００２４】
【表１】
0004105779.tif 000002
【００２５】
なお、コリネバクテリウム菌体を静注投与し、１週間後にＬＰＳを静注投与すると、肝細胞の壊死が起こり、肝炎が誘発される。これは、マクロファージがコリネバクテリウムによりプライミングされた状態（刺激に対して反応しやすい状態）になるためと考えられており、この方法は肝障害モデルとして古くから確立されている。また、マウス（ＢＤＦ１）は、Ｃ５７ＢＬ／マウスの雌と、ＤＢＡ／２マウスの雄を掛け合せて生じた交雑第１代のマウスである。
【００２６】
試験例２（実験的急性肝炎に対するキチンオリゴ糖、キトサンオリゴ糖投与の影響）
試験例１の結果から、ＬＰＳ0.1mg をマウスに投与して急性肝炎を誘発し、その後一週間目（実験開始の日から１４日目）より、実施例１で得られたキチンオリゴ糖混合物及び参考例２で得られたキトサンオリゴ糖酢酸塩混合物を、各0.5mg ／mlの量で飲用水に混ぜてマウスに自由摂取させた。２８日目にマウスを屠殺処分して肝臓の一部を取り出し、病理組織学的検査を行った。すなわち、リンパ球の集簇を一つの病変部分（ユニット）と考え、そのユニットが肝臓の一切片中に何個あるか、またその１ユニット中のリンパ球の集簇数で病変の規模を評価した。この実験結果を表２に示した。
【００２７】
【表２】
0004105779.tif 000003
【００２８】
表２には、各マウス毎に肝切片上に観察された病変の数と最大の病変の中に見出されるリンパ球の数を示した。水のみを与えた対照群に比較してキチンオリゴ糖混合物投与群、キトサンオリゴ糖酢酸塩混合物投与群とも病変の数は低下しており、肝炎の改善効果が認められた。
【００２９】
また、各群の代表的な肝切片を、光学顕微鏡（商品名「Olympus Vanox 」、オリンパス光学工業製）を用いて撮影した組織像例を示す顕微鏡写真を、図１〜３に示した。
【００３０】
図１は対照群を示し、（ａ）は１００倍の顕微鏡写真、（ｂ）は４００倍の顕微鏡写真、図２はキチンオリゴ糖混合物投与群（実施例１）を示し、（ａ）は１００倍の顕微鏡写真、（ｂ）は４００倍の顕微鏡写真、図３はキトサンオリゴ糖酢酸塩投与群（参考例２）を示し、（ａ）は１００倍の顕微鏡写真、（ｂ）は４００倍の顕微鏡写真である。
【００３１】
これらの写真からも、水のみを与えた対照群に比較してキチンオリゴ糖混合物投与群、キトサンオリゴ糖酢酸塩混合物投与群とも病変の数は低下しており、肝炎の改善効果が認められた。
【００３２】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の肝機能障害予防改善剤によれば、肝炎等に伴う肝機能障害を軽減し、改善する効果が期待でき、天然の多糖類であるキチンから調製されたものなので、人体に安全であり、飲食品等に添加して日常生活の中で気軽に摂取することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  マウスを用いた肝炎誘発実験における対照群のマウスの肝臓組織を示す顕微鏡写真であり、（ａ）は１００倍の顕微鏡写真、（ｂ）は４００倍の顕微鏡写真である。
【図２】  マウスを用いた肝炎誘発実験におけるキチンオリゴ糖混合物投与群のマウスの肝臓組織を示す顕微鏡写真であり、（ａ）は１００倍の顕微鏡写真、（ｂ）は４００倍の顕微鏡写真である。
【図３】  マウスを用いた肝炎誘発実験におけるキトサンオリゴ糖酢酸塩混合物投与群のマウスの肝臓組織を示す顕微鏡写真であり、（ａ）は１００倍の顕微鏡写真、（ｂ）は４００倍の顕微鏡写真である。
【図１】
0004105779.tif 000004
【図２】
0004105779.tif 000005
【図３】
0004105779.tif 000006