(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンニン類及びマンノース直鎖の鎖長が３０〜２００単位の範囲内に８０％以上分布するガラクトマンナンを含有する腸内有害物質生成抑制組成物。
【請求項２】
腸内有害物質が、アンモニア、ｐ−クレゾール、インドール、インディカンよりなる群より選ばれる１種又は２種以上である請求項１記載の腸内有害物質生成抑制組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、腸内有用菌増殖効果，腸内有害菌増殖抑制効果及びに腸内細菌の産生する有害物質の生成を抑制する効果を有する腸内環境改善組成物に関する。より詳しくは、ヒト又は動物の腸内細菌叢の改善，すなわち、腸内のビフィズス菌，乳酸菌等の有用菌の菌数を増加，クロストリジウム菌，大腸菌等の有害菌の菌数を低下及び腸内のアンモニア，腐敗産物，発癌関連酵素等の有害物質の生成量を減少させることによって、ヒト又は動物の健康の増進に有効な腸内環境改善組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、腸内の細菌を観察することは困難であった。しかし、近年の嫌気培養技術の著しい進歩により、糞便中の菌数が腸内の菌数を反映するようになり腸内細菌叢に関する研究が多く行われるようになった。その結果、腸内細菌が、ヒト又は動物の健康と深い関わりを有し、ヒト又は動物の生理状態に影響を及ぼしていることが明らかにされている。
【０００３】
また、これらの腸内細菌は食物や薬物に由来するさまざまな物質や内因性物質の代謝に関与していて、ヒト又は動物の栄養，生理機能，感染免疫，発癌，老化，薬効等に重要な役割を果たしている（光岡知足  ”腸内菌の世界”叢文社，１９８０年；Ｄ．Ｊ．Ｈｅｎｔｇｅｓ  ”Ｈｕｍａｎ  Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｍｉｃｒｏｆｌｏｒａ  ｉｎ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｄｉｓｅａｓｅ”  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８３）。
【０００４】
これらの腸内細菌の中には、ビフィズス菌や乳酸菌のようにヒト又は動物の病原菌，ウイルス等に対する感染防御，栄養，有害菌増殖抑制等の面で有利に働く有用菌や、クロストリジウム菌のように発癌，肝臓疾患，動脈硬化症，高血圧症，自発性感染症等に関係している有害菌がある。また、有害菌の中には、日和味感染を起こし、敗血症，心内膜炎，脳・肝・肺の腫瘍，膀胱炎，膣炎等，好ましからぬ状況をもたらすことが多い。（光岡知足  ”腸内細菌の話”岩波書店，１９７８年）。
【０００５】
このようなことから、ヒト又は動物の腸内で有用菌の定着、増殖の促進及び有害菌の増殖を抑制又は菌数を低下させることが最適な腸内細菌叢であると考えられている。このために、腸内の有用菌を増加させるために種々のビフィズス菌製剤や、ヨーグルトなどが開発されているが、ヒト又は動物の生体内での胃酸，胆汁酸などの上部消化管のバリヤーの通過，増殖部位としての下部消化管における増殖可能性といった生菌の定着ならびに増殖能力が大きな問題となっている。
【０００６】
一方、腸内における有用菌の増殖に必要な因子として最も重要なものは糖類であると考えられ、ラクチュロース，パラチノース，フラクトオリゴ糖，ラフィノース，スタキオース，キシロオリゴ糖などの種々の糖類が有用菌の増殖にとって有効であるとされており、これらを含有した飲食物も提案されているが、これらの糖類は、一部の大腸菌，クロストリジウム属細菌等の有害菌に対しても資化性があり、それらの増殖にも関与している。従って、上記糖類が有用菌に選択的に資化されるわけではなく、ヒト又は動物の腸内で有用菌の菌数のみが特異的には増加しないのが現状である。
【０００７】
また、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．４６，５８８−５９１（１９９２）においては、タンニン類である茶ポリフェノール類を１日当たり１．２ｇ摂取することにより腸内有害菌の菌数が特異的に低下することが記載されている。しかし、この腸内有害菌増殖抑制効果を期待するための量を摂取する場合、ポリフェノール化合物の有する苦みのため直接摂取すると摂取時にかなりの苦痛を感じる。また、その量を食品，飼料等に添加して用いる場合でも苦みをマスキングすることが非常に困難である。以上のことより、未だ満足のいく結果が得られていない。
【０００８】
さらに、平成４年度日本栄養食糧学会講演要旨集のｐ．３６では、グアーガムを酵素分解して得られた酵素分解物を摂取すると糞便のｐＨが低下し、それにより腸内環境が改善され、便通改善が期待できると記載されているが、上記記載の量を摂取した場合、ヒトによっては、腹部における多量のガスの発生等、好ましからない状態が生じる。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、腸内細菌のうちビフィズス菌，乳酸菌等の有用菌のみを選択的に増殖させ、クロストリジウム菌等の有害菌を選択的に抑制し、腸内のアンモニア，腐敗産物，発癌関連酵素等の腸内有害物質の生成量を減少させる腸内環境改善組成物を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ヒト又は動物の腸内の環境を効率よく改善する目的で鋭意研究を重ねた結果、我々が普段から飲用しているお茶・烏龍茶・紅茶の成分、すなわち、（＋）−カテキン，（＋）−ガロカテキン，（＋）−ガロカテキンガレート，（−）−エピカテキン，（−）−エピカテキンガレート，（−）−エピガロカテキン，（−）−エピガロカテキンガレート，遊離型テアフラビン，テアフラビンモノガレートＡ，テアフラビンモノガレートＢ，テアフラビンジガレート等のタンニン類及び水溶性食物繊維を含有する組成物が、腸内のビフィズス菌，乳酸菌等の有用菌の菌数を増加させ、クロストリジウム菌，大腸菌等の有害菌の菌数を低下し、及び腸内のアンモニア，腐敗産物，発癌関連酵素等の有害物質の生成量を減少させる、というヒト又は動物の健康の増進にとって有効な腸内環境改善に効果を発揮すること、及び、本発明の組成物は、タンニン類又は水溶性食物繊維を単独で用いた場合と異なり、少量で効果が期待できるため、タンニン類のもつ苦みのマスキング及び水溶性食物繊維摂取による腹部における多量のガスの発生が抑えられることを初めて見い出し、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
本発明における有用菌とは、病原菌，ウイルス等に対する感染防御，栄養，有害菌増殖抑制等により、ヒト又は動物の健康に有益な効果をもたらす腸内微生物のことであり、ビフィズス菌及び乳酸菌がその代表的なものである。また、有害菌とは、発癌，肝臓疾患，動脈硬化症，高血圧症，感染症等に関係し，ヒト又は動物の健康に有害な影響を与える腸内微生物のことであり、クロストリジウム菌，緑濃菌及び病原性大腸菌がその代表的なものである。
【００１２】
本発明に用いられるタンニン類は、緑茶，烏龍茶又は紅茶の水もしくはアルコール抽出物の限外濾過膜及び逆浸透膜処理、又は酢酸エチル可溶画分より得ることができるが、柿しぶなど他の原料起源のものあるいは化学合成品でも差し支えない。得られたこれらのタンニン類を本発明に用いる場合は単独で、もしくは２種以上の混合物として、さらにはタンニン類を含む粗抽出物でも使用できる。
【００１３】
本発明で使用する水溶性食物繊維は、例えば、グアーガム，ローカストビーンガム，タラガム、キャロブガム等より選ばれる１種又は２種以上の増殖多糖類をアスペルギルス属菌やリゾープス属菌等に由来するβ−マンナナーゼを用いて酵素的にマンノース直鎖のみを加水分解することによって得られた低分子化したグアーガム酵素分解物がその代表的なものであるが、他の天然のガム質等の酵素分解物でも良く、その原料及び酵素については特に限定されない。また、本発明に用いる水溶性食物繊維は酵素の反応時間を変えることにより分子量を変化させることができるが、本発明の腸内環境改善の目的では、例えばガラクトマンナンの場合、マンノース直鎖の鎖長が３０〜２００単位の範囲内に８０％以上分布するものが良く、さらに好ましくは５０〜１５０単位の範囲内に８０％以上分布していることが良い。
【００１４】
本発明における水溶性食物繊維の鎖長とは、グアーガム酵素分解物を一例として説明すると、グアーガム酵素分解物の主鎖はマンノースであり、その結合している数を指し、その測定法は特に限定するものではないが、たとえば分解された多糖類を水に溶解しＴＯＳＯ  ８０３Ｄ型の高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用い、水を移動相にしてＧ３０００ＰＷのカラムにてゲル濾過を行い、示差屈折計にて検出する。この際にグルコース数が既知の直鎖デキストリン（グルコース数３０，１００，２００）を指標物質として測定することにより図１のようなグラフが得られる。これから３０〜２００単位が占める割合を面積から算出できる。
【００１５】
マンノースの鎖長が３０単位より短い場合は、還元糖の含量が多くなるため腸内有用菌増殖効果が期待できず、一方、マンノース鎖長が２００単位以上であると、高分子量のため腸内有用菌の増殖効果が期待できない。
【００１６】
尚、腸内有用菌増殖効果を得るための有効量に関しては、タンニン類として、１日当り０．０００１ｇ〜０．０４ｇ／体重ｋｇが好ましく，さらに好ましくは０．００１ｇ〜０．０３ｇ／体重ｋｇが好ましい。０．０００１ｇ／体重ｋｇより少ない投与量では効果が弱く、０．０４ｇ／体重ｋｇより多い場合は腸内の有害菌の増殖抑制のみならず有用菌への影響も考えられることから好ましくない。また、水溶性食物繊維として、１日当たり０．０５〜０．８３ｇ／体重ｋｇが好ましく、さらに好ましくは０．０８ｇ／体重ｋｇ〜０．５０ｇ／体重ｋｇが好ましい。０．０５ｇ／体重ｋｇより少ない投与量では効果が弱く、０．８３ｇ／体重ｋｇより多い場合は腹部におけるガスの発生等、ヒト又は動物にとって好ましくない影響が生じる。さらに、タンニン類と水溶性食物繊維の混合比は、重量比で、１：６〜１：３０、さらに好ましくは、１：１５〜１：２０となるように含有させることが望ましい。混合比が１：６以上、すなわち、水溶性食物繊維に対するタンニン類の割合が多すぎると腸内環境改善効果及びタンニン類特有の苦みのマスキング効果が得られない。また、反対に１：３０以下、すなわち、タンニン類に対する水溶性食物繊維の割合が多すぎると、腸内環境改善効果及び水溶性食物繊維特有の腹部における大量のガスの発生が生じ、本発明の効果が期待できない。
【００１７】
本発明品は経口摂取により効果を発現する。その使用形態は錠剤，顆粒剤，カプセル剤，シロップ剤，ドリンク剤又は各種食品，飼料又はペットフードの形態が可能であり、その使用形態及び添加方法についても特に限定されない。
【００１８】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、これにより特に限定されるものではない。
【００１９】
【実施例】
実施例１
タンニン類として、茶の熱水抽出物の限外濾過膜処理画分を凍結乾燥した粉末を、水溶性食物繊維として、グアーガム粉末にアスペルギルス属菌由来のβ−マンナナーゼを４０〜４５℃で２４時間を作用させた後、噴霧乾燥した粉末を、それぞれ用いて、重量比で１：１７となるように混合し、本発明組成物を得た。得られた組成物のタンニン類の成分組成は、（＋）−カテキン３．５％，（＋）−ガロカテキン１４．８％，（＋）−ガロカテキンガレート１１．６％，（−）−エピカテキン７％，（−）−エピカテキンガレート４．６％，（−）−エピガロカテキン１５．０％及び（−）−エピガロカテキンガレート１８．０％であった。さらに、グアーガム酵素分解物の水溶性食物繊維含有量は、ＡＯＡＣ法で測定したところ、８０％以上であり、固定層として、カラムにＧ３０００ＰＷ（東ソー（株）製）を用いて高速液体クロマトグラフィーで測定した結果、該ガラクトマンナンの糖鎖の８０％以上はマンノースの鎖長が５０〜１５０単位の範囲内に包含されていた。このとき糖鎖単位の標準試薬として、グルコース数が既知の直鎖デキストリン（グルコース数５０，１００，１５０）を用いた。
【００２０】
実施例２
実施例１で得られた本発明品１００ｇにアップルフレーバー２ｇと水を加えて全容２リットルとし、滅菌済褐色ビン（１１０ｍｌ）に１００ｍｌずつ充填、アルミキャップで密封後、１２０℃，３０分間滅菌し、本発明品入りドリンク（Ａ）２０本を調製した。
【００２１】
試験例１
健康な成人９名を対象に通常の食生活をしているコントロールの期間中に２回糞便を採取し、その後、実施例２により得られたドリンク（Ａ）を毎食１本ずつ１２日間摂取させ、その５日目，７日目，１１日目，１３日目の４回糞便を採取した。その後、上記ドリンクの摂取を中止し、中止してから１３日目，１５日目の２回糞便を採取した。
【００２２】
以上合計８回の糞便採取時に、糞便中のビフィズス菌とクロストリジウム菌の菌数，ビフィズス菌の占有率，乳酸菌の検出率，糞便ｐＨ，アンモニア含量，インドール，ｐ−クレゾール含量，β−グルクロニダーゼ活性及び尿中インディカン含量を求めた。ビフィズス菌及びクロストリジウム菌の菌数については表１に、ビフィズス菌の占有率については表２に、乳酸菌の検出率については表３に、糞便ｐＨについては表４に、アンモニア含量，インドール及びｐ−クレゾール含量については表５に、β−グルクロニダーゼ活性については表６に、尿中インディカン含量については表７に、それぞれ結果を示した。
【００２３】
なお、表１〜表７は、本発明品の摂取前，摂取中−１（摂取開始５日目と７日目），摂取中−２（摂取開始１１日目と１３日目），摂取後の４つの期間に分けて結果が示されている。また、各期間において２回ずつ糞便の採取を行ったので、数値は合計１８の平均を示している。
【００２４】
【表１】
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【００２５】
表１に示したように本発明品を摂取することにより有用菌であるビフィズス菌の菌数の有意な増加が認められ、有害菌であるクロストリジウム菌の菌数が有意に低下した。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
表２に示したように本発明品を摂取することにより有用菌であるビフィズス菌の占有率の有意な増加が認められた。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
表３に示したように本発明品を摂取することにより有用菌である乳酸菌の検出率の有意な増加が認められた。
【００３０】
【表４】
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【００３１】
表４に示したように本発明品を摂取することにより便秘症の改善等に重要である糞便ｐＨが有意に減少した。
【００３２】
【表５】
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【００３３】
表５に示したように本発明品を摂取することにより肝機能改善等に重要であるアンモニア含量，インドール及びｐ−クレゾール含量が有意に減少した。
【００３４】
【表６】
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【００３５】
表６に示したように本発明品を摂取することにより大腸癌予防等に重要であるβ−グルクロニダーゼ活性が有意に低下した。
【００３６】
【表７】
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【００３７】
表７に示したように本発明品を摂取することによりインドール化合物の代謝産物であるインディカンの含量が有意に減少した。
【００３８】
試験例２
ビーグル犬４匹を各群１０匹とし、４群に分けた。飼料６００ｇに、実施例１で調製した本発明品を９ｇ（タンニン類０．５ｇ、水溶性食物繊維８．５ｇ）添加した群をＡ群とし、グアーガム酵素分解物のみを８．５ｇ添加した群をＢ群とし、さらにタンニン類のみを０．５ｇ添加した群をＣ群、３ｇ添加した群をＤ群とし、３０日間飼育した。試験終了後、各群のビーグル犬の糞便を採取し、糞便中のビフィズス菌及びクロストリジウム菌の菌数を測定した。その結果を表８に示した。
【００３９】
【表８】
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【００４０】
表８より明らかなように、飼料に本発明品を添加したＡ群は、有用菌である乳酸菌の菌数が有意に増加し、有害菌であるクロストリジウム菌の菌数が有意に減少した。それと比較してグアーガム酵素分解物のみを添加したＢ群とタンニン類のみを０．５ｇ添加した群をＣ群では、それぞれの菌数の有意な変化は認められなかった。また、タンニン類のみを３ｇ添加したＤ群について摂食阻害が生じ、試験不可能であった。
【００４１】
以上より明らかなように、本発明品は、ヒト又は動物の腸内環境を極めて効果的に改善することが認められた。
【００４２】
比較例１
タンニン類８ｇに代える以外は、実施例２と同様の方法でドリンク（Ｂ）を調製し、健康な成人９名を用いて試験例１と同様の試験を行った。そして、糞便中のビフィズス菌とクロストリジウム菌の菌数を測定した。その結果を表９に示した。
【００４３】
【表９】
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【００４４】
表９より明らかなように、タンニン類のみを摂取した場合、クロストリジウム菌の菌数のみを弱冠減少させた程度で、本発明品ほど効果的に腸内環境を改善しなかった。
【００４５】
比較例２
本発明品をグアーガム酵素分解物１４０ｇに代える以外は、実施例２と同様の方法でドリンク（Ｃ）を調製し、健康な成人９名を用いて試験例１と同様の試験を行った。そして、糞便中のビフィズス菌とクロストリジウム菌の菌数を測定した。その結果を表１０に示した。
【００４６】
【表１０】
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【００４７】
表１０より明らかなように、グアーガム酵素分解物のみを摂取した場合、ビフィズス菌の菌数のみを弱冠増加させた程度で、本発明品ほど効果的に腸内環境を改善しなかった。
【００４８】
【発明の効果】
本発明品は、ヒト又は動物の腸内のビフィズス菌，乳酸菌等の有用菌の菌数を増加、クロストリジウム菌，大腸菌等の有害菌の菌数を低下及び腸内のアンモニア，腐敗産物，発癌関連酵素等の生成量を減少させる、という極めて優れた腸内環境改善効果を有する組成物であり、さらに、抗う蝕効果，血中コレステロール上昇抑制効果，血中の脂質代謝改善効果等も有し、本発明はヒト又は動物の健康増進に貢献するところは多大であり、産業上非常に重要である。
【図面の簡単な説明】
【図１】示差屈折計にて検出したゲル濾過の溶出パターンの図である。
【図１】
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