(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）滅菌しようとする、温度感受性物質を収納する容器を処置チャンバーに導入し、
（ｂ）処置チャンバーの圧を下げて１００〜８００ミリトルとし、
（ｃ）過酸化水素を導入し、
（ｄ）減圧を更新して４００〜５００ミリトルの真空を復元し、
（ｅ）プラズマを生成し、
（ｆ）通気する
工程を含む、チャンバー温度が全体を通して３９℃未満であり、温度感受性製品が顕著な活性の低下または分解を示すことなく温度感受性製品を収納する容器が効果的に滅菌される、過酸化水素プラズマ滅菌方法。
【請求項２】
製品温度が滅菌プロセス中に４０℃より上昇しない、請求項１に記載の過酸化水素プラズマ滅菌方法。
【請求項３】
温度感受性製品が生物学的物質を含む、請求項１または２に記載の過酸化水素プラズマ滅菌方法。
【請求項４】
温度感受性製品が蛋白質、ペプチド、核酸、脂質、または細胞物質である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の過酸化水素プラズマ滅菌方法。
【請求項５】
温度感受性製品がフィブリノゲン含有溶液で、凝固能を有するフィブリノゲンの含有量が顕著には低下せず、さらに前記フィブリノゲンが粘度またはゲル生成において顕著な増加を示さない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
温度感受性製品が第XIII因子含有溶液である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
温度感受性製品がトロンビン含有溶液である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
温度感受性製品が組織膠質の成分を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
温度感受性製品がフィブリン膠質の成分を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
容器が、少なくとも部分的に過酸化水素透過性である物質で１回包まれている請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
容器が、少なくとも部分的に過酸化水素透過性である物質で２回以上包まれている請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は過酸化水素プラズマ滅菌法に関し、本方法では、チャンバー温度は全体を通して３９℃未満に設定され、温度感受性製品を収納する容器を効果的に滅菌することができ、前記温度感受性製品は顕著な活性の低下または分解を示さない。
【０００２】
温度の影響または照射に対して不安定な製品を収納する医薬品容器の外部滅菌は、未だに満足な解決が得られていない普遍的な問題である。
オートクレーブは、もっとも安定した製品であっても通常はオートクレーブの温度ストレスに耐えられないので生物学的製品に対しては実際上常に不適切である。
【０００３】
エチレンオキシドを使用する工業的に用いられる滅菌は、通常約４０〜５０℃の温度を、典型的には合計２４〜４８時間の間（特に残留エチレンオキシドを可能なかぎり完全に取り除くために）必要とする。しかしながら、このような状態は、温度感受性製品にとってもしばしば許容できない。また別の重要な事柄は、包装物中の残留可能量のエチレンオキシドまたはその反応生成物は、エチレンオキシドの発癌性および毒性のためにこの方法の欠点の代表的なものであるということである。
【０００４】
γ線または電子ビームによる照射というまた別の方法もまた、不安定な製品、特に液体状態の製品にとって通常は不適切である。なぜならばそのような方法は、例えば活性の低下および／または生成物の分解を伴うからである。
１９８０年代には、ガス相の過酸化水素による減圧下（＜１トル）での滅菌を目標とした滅菌法がEP-A 0 302 420に開示された。  室温での前記方法についても記載されたが、その滅菌効果は、前記方法から発展させることができる日常的使用のための信頼に足る方法としては不適切である。前記方法の効果は温度を少なくとも４０℃に上昇させることによってのみ高められる。
【０００５】
過酸化水素およびガスプラズマの生成を利用する滅菌方法では、チャンバー温度は４５℃または４０〜４５℃が通常であるが（T.C.V. Penna, C.A.M. Ferraz & M.A. Cassola, Infection Control and Hospital Epidemiology 20: 465-472(1999); R.F. Morrissey, Biomedical Instrumentation & Technology 30: 404-406(1996))、米国特許4,643,876号またはEP 207,417号によれば、前記方法はそれ自体滅菌物質を温めることになるので、実際のところ滅菌されるべき物質中では５７℃の温度が測定されている。前記方法は低温法または低温プラズマとして記載されているが、使用温度または到達温度は非常に高温で、この温度に曝されたとき不安定な製品は少なくとも部分的に損傷を受ける。
【０００６】
過酸化水素プラズマ滅菌法は、１９９０年代初期以来主に医療機器を滅菌するためにヨーロッパおよびアメリカでステラッド（ＳＴＥＲＲＡＤ（登録商標)）法という名称で用いられてきた。したがって、該当する機器の大半は病院部門で見出される。一方、エチレンオキシドまたはγ照射が適合性という理由から禁止されている場合、例えば医療で使用される製品、器具または使い捨て物品についてある程度の利用がある。したがって、これらの製品はしばしば、機能を損なうことなく過酸化水素プラズマ滅菌法に固有の温度、約４５℃のチャンバー温度で滅菌することができる。
【０００７】
ステラッド（登録商標）法は今日までチャンバー温度が４５℃（ＳＴＥＲＲＡＤ（登録商標）１００）または＞３９℃（ＳＴＥＲＲＡＤ（登録商標）ＧＭＰ １００）に制限されていた。なぜならば、これまでに知られている結果（例えばEP-A 0 302 420）を基に、効果的な滅菌は３９℃以上の温度でのみ達成できるということを確認する必要があったからである。従来技術にしたがって穏やかであると考えられる条件下で生物学的製品について標準的な４５℃のチャンバー温度で過酸化水素プラズマ滅菌法を用いた出願人らの検査では、不安定な生物学的物質は活性の顕著な低下または完全な低下を被ることが示された（実施例１を参照されたい）。したがって、生物学的製品をステラッド（登録商標）法の既知の条件下で滅菌することは不可能である。
【０００８】
本発明は不安定な生物学的製品および治療用製品を固体または液体の状態でその最終容器（一次包装物）のまま外部から滅菌することを可能にする方法を目的としている。さらにまた本発明の目的は、本方法が製品に悪影響を及ぼさないことを最終容器の選択によって担保することである。さらに別の目的は２つの外側包装（二次包装）で包まれた製品を滅菌することを可能にすることである。
フィブリン膠質の温度感受性成分を例にとれば、前記の目的は、不安定な製品を収納する最終容器を、（たとえ外側の包装に包まれていたとしても）迅速で穏やかな態様で外部から効果的に滅菌することを可能にする、さらに低い温度での改変過酸化水素プラズマ滅菌法を開発することが可能となって達成された。
【０００９】
温度感受性製品を収納する容器は、これまで必然的に用いられてきた温度またはこの滅菌中に発生する通常の温度を用いることなく、改変条件下で過酸化水素／プラズマで効果的に滅菌できることが見出された。３９℃以下のチャンバー温度で、製品の安定性および無菌性の両方を達成することができる。チャンバー温度が２０〜３９℃、特に約２５〜３５℃では、製品を非常に穏やかに滅菌することが可能である。したがって、この低温改変の導入によって、溶液中の不安定な生成物（例えば蛋白質、ペプチドなど）を収納する最終容器を効果的に滅菌することができる。この場合、低い製品温度のために極めて重要なことは、低チャンバー温度および（例えば過酸化水素の注入時およびプラズマ形成時において）過剰なエネルギー投入の回避の両方である。
【００１０】
滅菌を実施する前に、場合によっては、EP 707 186号に記載されたように水分を除去するために、または製品温度をチャンバー温度にさらに順応させるために前記製品をプレプラズマに暴露させてもよい。
適用される滅菌サイクルで、いわゆる注入時間および拡散時間（場合によっては同時通気とともに）の長さは（好ましくは約１から６０分の間で）変動させることができる。拡散時間中の通気はまた、場合によっては（特に滅菌されるべき製品の形態が単純な場合）免除される。
【００１１】
ガス相中の適切な過酸化水素含有量を達成し、したがって殺菌速度を高めるために過酸化水素溶液の注入はまた、（特にチャンバーが完全に満たされる場合は）１回または２回以上反復することができる。必要ならば、全サイクルまたはその一部分を１回または２回以上反復することができるが、ただしチャンバー温度は昇温を制限するために請求の範囲の方法にしたがって＜３９℃に設定する必要がある。
通気を含む拡散時間が省略される場合、注入時間、適切な真空およびプラズマの復元に続いてハーフサイクルの注入、真空およびプラズマを実施することができる。これは、製品の形態が単純な場合サイクルの短縮を可能にする。
【００１２】
本方法は、不安定な生物学的製品（例えば蛋白質またはペプチド）の最終容器を短いサイクルで低温で滅菌することを可能にする。血漿蛋白質の場合に明らかであったので、最終容器に収納された製品の温和な滅菌は本方法を用いて可能である。そのような製品は滅菌操作が必要とされる場合はいつでも用いることができる。
【００１３】
一方、前述の方法は、原則として他の不安定な生物学的製品（例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、脂質、細胞生成物など）に対しても用いることができる。短時間の低い温度ストレスのために前記製品について予想される顕著な損失はない。
本方法は、しかしながら、温度感受性非生物学的製品を収納する最終容器の滅菌にもまた一般的に用いることができる。その可能な例は、治療に用いることができるが、温度感受性のために通常の方法では部分的または完全に不活化されるかまたは破壊される化合物または製品である。
【００１４】
最終容器（すなわち一次包装）の選択に際しては、移動可能な閉鎖手段（例えば栓、プランジャシールまたはキャップ）は真空下で一次包装に開口および漏れが生じないように固定される。前記開口および漏れは、前記閉鎖手段の直接的固定によるか、または、漏れが生じないようなまたは栓もしくはプランジャシールの移動が生じないような適当な二次包装によるかを問わず、例えば適当な装置によって予防される（図面を参照されたい）。
【００１５】
低温での本発明の典型的な半サイクル方法は以下の成分から成る：
準備（必要な場合に実施される）：
- 処置チャンバーの圧を、好ましくは約１００から８００ミリトル、極めて好ましくは約３００から６００ミリトルに下げる、
- プレプラズマを好ましくは約１から３０分、極めて好ましくは約２から１５分適用する、
- 好ましくは５分未満、極めて好ましくは１分未満通気する。
【００１６】
チャンバー温度を＜３９℃、好ましくは約２０〜３５℃に設定した半サイクルのための方法：
- 処置チャンバーの圧を約１００から８００ミリトル、極めて好ましくは約３００から６００ミリトルに下げ、
- 過酸化水素を、通常は真空中で１回または２回以上溶液を直接蒸発させ、続いてチャンバー内に、好ましくは２０分以内、極めて好ましくは１５分以内分布させて（注入）導入し、
- 場合によっては、滅菌される製品について必要に応じて、（場合によってはチャンバーの通気とともに）過酸化水素拡散時間を、好ましくは１から３０分、極めて好ましくは３から１５分追加し、
- 減圧を更新して適切な真空を回復し、
- プラズマを好ましくは０.５から１０分、極めて好ましくは１から５分発生させ、
- 通気する。
【００１７】
完全な滅菌サイクルは、通常２回のハーフサイクルを含む。この分割は方法の有効化のために実施される。そのようなハーフサイクルでモデル微生物（例えばバチルス＝ステアロテルモフィルス（Bac. stearothermophilus）の芽胞）で達成される減少係数がｌｏｇ10ＣＦＵ≧６である場合、本方法は適切な確実性で有効であると言える。
【００１８】
真空工程もまた用いられる滅菌のための一次および二次包装の例を図１に示す。
表示の模式図は一次包装材としてのカートリッジを示し、これはシールおよびキャップの他にプランジャーストッパーで閉じられて、操作中に（この操作中に真空工程がまた適用される）プランジャーストッパーが移動しないように、前記カートリッジおよびプランジャーストッパーは、二次包装（例えばタイベック（登録商標）の蓋が付いている硬質ブリスター）内のスペーサーで固定される。第一の二次包装の他に、ガス透過材で製造された更に別のパウチを用いてもよい。
図面において、
Ａ：カートリッジの長さ、Ｂ：プランジャーストッパーとカートリッジ端との間の距離、Ｘ1およびＸ2：プランジャーの固定用スペーサーの長さ、プランジャーと二次包装との間の距離に長さが調節される。
【００１９】
本発明に関する方法は本質的に請求の範囲に記載される。実施例２〜６は、温度感受性蛋白質（例えばフィブリン膠質の成分）を収納する一次包装に対する改変滅菌方法を基に、前記蛋白質成分の特性に悪影響を及ぼすことなく低温で有効な滅菌が可能なことを示している。
【００２０】
実施例１は、従来技術にしたがい標準的な温度条件下で実施した過酸化水素プラズマ滅菌の結果を示す。以下の実施例（２〜６）は低温での本改変方法の原理を説明しようとするものである。
【００２１】
比較実施例１
種々の蛋白質溶液（それぞれの本質的成分は蛋白質溶液１：フィブリノゲン、蛋白質溶液２：第XIII因子、蛋白質溶液３：トロンビン）をガラスのカルピュールに分注し、タイベック（Tyvek）シートおよび透明なプラスチックシートから成るバッグに封入した。続いて前記のバッグをバスケットに重ねて入れ、ステラッド（登録商標）ＧＭＰ １００滅菌装置（製造業者：Johnson & Johnson Medical GmbH, 22844 Norderstedt, Germany）で、以下のパラメーターにしたがい過酸化水素プラズマ滅菌法により処理した。実施例に用いた蛋白質溶液の正確な組成は重要ではない。溶液自体は当業者に知られたもので、治療に用いられる天然またはリコンビナント由来の生物学的蛋白質を含む。
【００２２】
準備：
チャンバー温度を４５℃に設定。チャンバーの積載：製品収納一次包装物の入ったバッグを満載したバスケット。
１回目のハーフサイクルのための手順：
真空：約４００ミリトル
注入：約６分（５９％のＨ2Ｏ2 １８００μl）
拡散：１０分（通気を含む）
真空：約４００〜５００ミリトル
プラズマ：２分
２回目、３回目および４回目のハーフサイクル（１回目のハーフサイクルと一致）を１回目のハーフサイクルに続いて直ちに実施する。
【００２３】
実施例１の滅菌操作の結果：
調査した蛋白質溶液の安定性：
【表１】
0004102077.tif 000002
【００２４】
実施例１の表から明らかなように、温度依存凝集または分解または変性が蛋白質溶液１（フィブリノゲン含有）および蛋白質溶液３（トロンビン含有）で発生した。これは、両製品は、従来の過酸化水素プラズマ滅菌法により目的の用途について使用不能となったことを示している。
【００２５】
実施例２
種々の蛋白質溶液（それぞれの蛋白質溶液の本質的成分は、蛋白質溶液１：フィブリノゲン、蛋白質溶液２：第XIII因子、蛋白質溶液３：トロンビン）をガラスのカルピュールに分注し、タイベック（Tyvek）シートおよび透明なプラスチックシートから成るバッグに封入した。続いて前記のバッグをバスケットに重ねて入れ、ステラッド（登録商標）ＧＭＰ １００滅菌装置で、以下のパラメーターにしたがい過酸化水素プラズマ滅菌法により処理した。
【００２６】
準備
チャンバー温度：３０℃に設定。
チャンバーの積載：下部のバスケットは水を満たした一次包装物を収納した前述のバッグを密に詰めたもの、上部のバスケットには製品を入れたバッグを満載し、さらに温度センサーを加える。
【００２７】
積載に続いて“プレプラズマ”を実施：
真空：約４００ミリトル
プレプラズマ：５分
通気（短時間）
１回目のハーフサイクルのための手順：
真空：約４００ミリトル
注入：約１２分（５９％のＨ2Ｏ2１８００μl）
拡散：５分（通気を含む）
真空：約４００〜５００ミリトル
プラズマ：２分
真空（短時間）および通気（サンプルを取り出すため）
２回目のハーフサイクル（１回目のハーフサイクルと一致）を１回目のハーフサイクルに続いて直ちに実施する。
【００２８】
実施例２の滅菌操作の結果：
調査した蛋白質溶液の安定性：
【表２】
0004102077.tif 000003
【００２９】
実施例３
種々の蛋白質溶液（それぞれの蛋白質溶液の本質的成分は、蛋白質溶液１：フィブリノゲン、蛋白質溶液２：第XIII因子、蛋白質溶液３：トロンビン）をガラスのカルピュールに分注し、タイベック（Tyvek）シートおよび透明なプラスチックシートから成るバッグに封入した。続いて前記のバッグをバスケットに重ねて入れ、ステラッド（登録商標）ＧＭＰ １００滅菌装置で、以下のパラメーターにしたがい過酸化水素プラズマ滅菌法により処理した。
【００３０】
準備
チャンバー温度：３０℃に設定。
チャンバーの積載：下部のバスケットは水を満たした一次包装物を収納した前述のバッグを密に詰めたもの、上部のバスケットには製品を入れたバッグを満載し、さらに温度センサーを加える。
【００３１】
積載に続いて“プレプラズマ”を実施：
真空：約４００〜５００ミリトル
プレプラズマ：５分
通気（短時間）
１回目のハーフサイクルのための手順：
真空：約４００ミリトル
注入：約１７分（５９％のＨ2Ｏ2 １８００μl）
真空：約４００〜５００ミリトル
プラズマ：２分
真空（短時間）および通気（サンプルを取り出すため）
２回目のハーフサイクル（１回目のハーフサイクルと一致）を１回目のハーフサイクルに続いて直ちに実施する。
【００３２】
実施例３の滅菌操作の結果：
調査した蛋白質溶液の安定性：
【表３】
0004102077.tif 000004
【００３３】
実施例４
種々の蛋白質溶液（それぞれの蛋白質溶液の本質的成分は、蛋白質溶液１：フィブリノゲン、蛋白質溶液２：第XIII因子、蛋白質溶液３：トロンビン）をガラスのカルピュールに分注し、タイベック（Tyvek）シートおよび透明なプラスチックシートから成るバッグに封入した。続いて前記のバッグをバスケットに重ねて入れ、ステラッド（登録商標）ＧＭＰ １００滅菌装置で、以下のパラメーターにしたがい過酸化水素プラズマ滅菌法により処理した。
製品を満載した一次包装物の他に、滅菌効率をチェックするために、カルピュールおよびテスト生物（バチルス＝ステアロテルモフィルス）の芽胞を含む細片をタイベックバッグ中に二重に封入した。
【００３４】
準備
チャンバー温度：３５℃に設定。
チャンバーの積載：下部のバスケットは水を満たした一次包装物を収納した前述のバッグを密に詰めたもの、上部のバスケットには製品を入れたバッグ、芽胞付着細片および一次包装を含むバッグおよび温度センサーが収納された。
チャンバー積載後に“プレプラズマ”を実施する：
真空：約４００〜５００ミリトル
プレプラズマ：５分
通気（短時間）
【００３５】
１回目のハーフサイクルのための手順：
真空：約４００ミリトル
注入：約１２分（５９％のＨ2Ｏ2１８００μl）
拡散：５分（通気を含む）
真空：約４００〜５００ミリトル
プラズマ：２分
真空（短時間）および通気（サンプルを取り出すため）
２回目のハーフサイクル（１回目のハーフサイクルと一致）を１回目のハーフサイクルに続いて直ちに実施する。
【００３６】
実施例４の滅菌操作の結果：
調査した蛋白質溶液の安定性：
【表４】
0004102077.tif 000005
【００３７】
８枚のハーフサイクル処理芽胞細片の滅菌度評価：
【表５】
0004102077.tif 000006
【００３８】
実施例５
種々の蛋白質溶液（それぞれの蛋白質溶液の本質的成分は、蛋白質溶液１：フィブリノゲン、蛋白質溶液２：第XIII因子、蛋白質溶液３：トロンビン）をガラスのカルピュールに分注し、タイベック（Tyvek）シートおよび透明なプラスチックシートから成るバッグに封入した。続いて前記のバッグをバスケットに重ねて入れ、ステラッド（登録商標）ＧＭＰ１００滅菌装置で、以下のパラメーターにしたがい過酸化水素プラズマ滅菌法により処理した。
【００３９】
準備
チャンバー温度：３５℃に設定。
チャンバーの積載：下部のバスケットは水を満たした一次包装物を収納した前述のバッグを密に詰めたもの、上部のバスケットには製品を入れたバッグを満載し、さらに温度センサーを加える。
【００４０】
積載に続いて“プレプラズマ”を実施：
真空：約４００〜５００ミリトル
プレプラズマ：５分
通気（短時間）
１回目のハーフサイクルのための手順：
真空：約４００ミリトル
１回目の注入：約２分（５９％のＨ2Ｏ2 １８００μl）
２回目の注入：約１０分（５９％のＨ2Ｏ2 １８００μl）
拡散：５分（通気を含む）
真空：約４００〜５００ミリトル
プラズマ：２分
真空（短時間）さらに次のハーフサイクルを開始、または通気（サンプルを取り出すため）
２回目、３回目および４回目のハーフサイクル（１回目のハーフサイクルと一致）を１回目のハーフサイクルに続いて直ちに実施する。
【００４１】
実施例５の滅菌操作の結果：
調査した蛋白質溶液の安定性：
【表６】
0004102077.tif 000007
【００４２】
実施例６
最大限に市販の包装材を積載したチャンバーにおける本方法の滅菌効率を調べるために、水を充填したガラスのカルピュールを硬質ＰＥＴブリスターから成る外側包装に封入し、タイベック（Tyvek）ペーパーさらにタイベックペーパーと透明なプラスチックシートから成るバッグで包んだ。続いて包装物をバスケットに密に重ね、ステラッド（登録商標）ＧＭＰ１００滅菌装置で、以下のパラメーターにしたがい過酸化水素プラズマ滅菌法により処理した。
滅菌効率をチェックするために、テスト生物（バチルス＝ステアロテルモフィルス）の芽胞をもつ細片を二重包装に導入し、バスケット内の異なる場所に分散された８つのブリスターパックのもっともアクセスしにくい位置に封入した。
【００４３】
準備
チャンバー温度：３２℃に設定。
チャンバーの積載：下部および上部のバスケットに水を満たした一次包装物を含む前述の包装物（１７２個）を密に詰めた。８つの包装物はまた、一次包装物の他に芽胞細片（カルピュールと硬質ブリスターの間、またはカルピュール端と栓の固定装置との間）を含み、バスケット内に計画にしたがって分布させた。
【００４４】
“プレプラズマ”のための手順：
真空：約４００〜５００ミリトル
プレプラズマ：５分
ハーフサイクルのための手順：
真空：約４００〜５００ミリトル
３回の注入：それぞれ約３、６および６分持続（各々５９％のＨ2Ｏ2 １８００μl）
拡散：５分（通気を含む）
真空：約４００〜５００ミリトル
プラズマ：２分
真空（短時間）および通気（サンプルを取り出すため）
【００４５】
実施例６の滅菌操作の結果：
ハーフサイクルで処理した８つの芽胞細片の滅菌度評価：
用いた芽胞細片の全てが（もっともアクセスしにくい場所の細片すら）完全に不活化された。すなわち、本方法は１回のハーフサイクルで効率的に１０6以上の芽胞を滅菌することを可能にした。
【００４６】
【表７】
0004102077.tif 000008
【図面の簡単な説明】
【図１】真空工程もまた用いられる滅菌のための一次および二次包装の例を示す。
【符号の説明】
Ａ：カートリッジの長さ
Ｂ：プランジャーストッパーとカートリッジ端との間の距離
Ｘ1，Ｘ2：プランジャーの固定用スペーサーの長さ
【図１】
0004102077.tif 000009