【事件の表示】
　昭和５６年特許願第４０５２９号「トリプトファン・プロモーター−オペレーターを用いる細菌によるポリペプチドの発現用ベクター」拒絶査定に対する審判事件〔（平成７年３月２２日出願公告、特公平７−２４５８２）、特許請求の範囲に記載された発明の数（１）〕について、次のとおり審決する。
【結論】
　原査定を取り消す。
　本願の発明は、特許をすべきものとする。
【理由】
１．手続の経緯及び本願発明
　本願は、昭和５６年３月２３日（パリ条約による「優先権主張」１９８０年３月２４日　米国）の出願あって、本願発明の要旨は、出願公告された明細書及び図面の記載からみて、その特許請求の範囲第１項に記載された次のとおりのものと認める。
「１．大腸菌において異種ポリペプチド生産物を製造するためのプラスミド発現ベクターであって、以下の要素：
　（ｉ）細菌のｔｒｐプロモーター‐オペレーター系；
　（ｉｉ）要素（ｉｖ）の翻訳のためのリボソーム結合部位を暗号化しているヌクレオチド；
　（ｉｉｉ）単要素（ｉｖ）の翻訳のための翻訳開始信号を暗号化しているヌクレオチド；及び
　（ｉｖ）異種ポリペプチドのアミノ酸配列を暗号化している構造遺伝子；
を暗号鎖の最初の５′末端から３′末端までの相内に含有しているが、ｔｒｐのアティニュエーション能及びｔｒｐＥのリボソーム結合部位を暗号化しているヌクレオチドを両者とも含有していない２本鎖ＤＮＡ配列を有するベクター。」
２．原査定の拒絶理由の概要
　原査定の拒絶理由となった特許異議の決定の理由の概要は、
「本願発明は特許異議申立人　高橋栄古が提出した
甲第１号証（Ｊｏｓｅｐｈ　Ａ．Ｍａｒｔｉａｌ，Ｒｏｂｅｒｔ　Ａ．Ｈａｌｌｅｗｅｌｌ，Ｊｏｈｎ　Ｄ．Ｂａｘｔｅｒ　ａｎｄ　Ｈｏｗａｒｄ　Ｍ．Ｇｏｏｄｍａｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０５（１０）（１９７９）ｐ．６０２−６０７、以下引用例１という。）及び
甲第２号証（Ｃ．Ｆ．Ｍｉｏｚｚａｒｉ　ａｎｄ　Ｃ．Ｙａｎｏｆｓｋｙ，Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１３３（３）（１９７８）ｐ．１４５７−１４６６、以下引用例２という。）
に記載された発明に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。」
というものである。
３．引用例記載の事項
［引用例１］
▲１▼ｐ．６０２　要約の欄
「ヒト成長ホルモンのｍＲＮＡに相補的なＤＮＡの核酸配列が純化された。この核酸配列は５′側の非翻訳領域に２９個の核酸、プレホルモンをコードしている６５１個の核酸及び全ての３′側非翻訳領域（１０８個の核酸）を含む。ここに報告するデータは、以前には未知であったヒト成長ホルモンのシグナルペプチドの配列を予測する。また、以前に配列が決定されているラット成長ホルモン及びヒトコリオトロピックソマトマンモトロピンの配列を比較することにより、これらの遺伝子は共通の先祖の配列からの複製によって進化したという仮説を強く支持する。ヒト成長ホルモン遺伝子配列をプラスミド媒体中の大腸菌のｔｒｐＤ遺伝子断片に相内で結合させた。融合蛋白がｔｒｐオペロンの制御領域の制御の下に高率（菌体蛋白質の約３％）に合成された。この融合蛋白（アミノ酸の７０％がヒト成長ホルモン遺伝子によってコードされている）はヒト成長ホルモンに対する抗体と特異的に反応し、菌体内で安定である。」
▲２▼Ｐ．６０４　Ｆｉｇ．５
ｔｒｐプロモーター‐オペレーター、Ｌａ、ｔｒｐＥ、ｔｒｐＤ融合　ｈＧＨ、Ｔｅｔの順に並ぶｐｔｒｐＥＤ５０−ｃｈＧＨ８００発現プラスミドの部分構造が図示されている。
▲３▼ｐ．６０５中欄下から４行〜同頁右欄１２行
「ｐｔｒｐＥＤ５−１を含む細胞は、通常ｔｒｐ遺伝子を少量しか合成しない。しかしながら、ｔｒｐオペロン転写は、３βインドリルアクリル酸添加によって抑制を解除され、ｔｒｐ遺伝子産物の合成が増加し、そのため３時間以内にｔｒｐ蛋白質は、全細胞蛋白質の約３０％を占める。我々はヒト成長ホルモン遺伝子配列をｔｒｐオペロンの制御下に置くことによってヒト成長ホルモン遺伝子を発現させるだけでなく、βラクタマーゼ遺伝子の制御下でラットの成長ホルモン遺伝子配列で得られた生産レベルより、高率なヒト成長ホルモンの生産レベルを達成し得ることを望んだ。」
▲４▼ｐ．６０５右欄下から２行〜ｐ．６０７左欄１２行
「細菌内での成長ホルモンの合成
　新規に構築された遺伝子が大量に新たな融合されたポリペプチドを直接合成し得るか否か、及び、その発現がｔｒｐプロモーターによって制御されるか否かを決定するために、発現プラスミドを含む細胞がｔｒｐ転写の抑制を解除され、蛋白質が１４Ｃ標識されたアミノ酸で５分ラベルされた。第６図は、ｔｒｐオペロン誘導後、０〜４時間ラベルされたこれらの蛋白質のＳＤＳポリアクリルアミドゲルのオートラジオグラムを示している。２つの蛋白質（５３，０００及び３２，０００ダルトン）は、インデューサーにより特異的に抑制を解除されたように思われる。高分子量の蛋白質は、ｔｒｐＥ遺伝子の産物である。・・・・
これら全ての証拠は、３２，０００ダルトンの蛋白質がｔｒｐＤ−ｈＧＨ融合蛋白質であることを示唆する。」
［引用例２］
▲１▼ｐ．１４５７　要約の欄
「大腸菌のｔｒｐオペロンが、リーダー領域の最初の部分とｔｒｐＥ遺伝子の遠位領域と融合する２つの欠失を有する場合には、新規融合ポリペプチドが生産される。この新規なポリペプチドはインビボおよびインビトロで効率的に合成され、その合成はｔｒｐレプレッサーの制御下にある。新規ポリペプチドのトリプシン及びキモトリプシン消化物のフィンガープリント分析によって、（その消化物は）共にｔｒｐＥポリペプチド配列を含むこと、新規ポリペプチドのサイズが異なるにもかかわらず、（その消化物は）同じＮ末端配列を有することが示された。
我々の結果は、新規ポリペプチドの合成がリーダー領域のＡＵＧを中心にしたリボソーム結合部位で開始され、相内でｔｒｐＥポリペプチドのＣ末端をコードしている領域に向かっていることを示唆する。」
▲２▼ｐ．１４５８　第１図説明文
「大腸菌のトリプトファンオペロンの最初の部分。図の下部はアテニュエーターの大体の位置と推定のリーダーペプチドをコードする配列を示すｔｒｐＰＯＬＥの略図である。ｔｒｐＬとｔｒｐＥは一定の比で描かれていない。リーダー領域の最初の部分から転写されるＲＮＡの核酸配列が図の上部に示されている。それはリボソーム結合部位と推定のリーダーペプチドのアミノ酸配列を示す。図の下部に示した黒塗の大腺は△ｔｒｐＬＥ１４１３と△ｔｒｐＬＥ１４１７の内部欠失の程度を示す。各欠失の左手の終点はリーダー領域の４９塩基対と５２塩基対の間にあることが決定されている。右手の欠失終点は既知のｔｒｐＥのポイントミューテーションを有する株を用いた遺伝的組換え分析によって位置が決定された。」
▲３▼Ｐ．１４５８　第１図
　欠失体発現ベクター△ｔｒｐＬＥ１４１３は、ｔｒｐプロモーター‐オペレーターは有するが、アテニュエーター及びｔｒｐＬからｔｒｐＥ構造遺伝子の前半の一部を欠いたものであることが図示されている。また、発現ベクター△ｔｒｐＬＥ１４１７は、ｔｒｐプロモーター‐オペレーターは有するが、アテニュエータ及びｔｒｐＬからｔｒｐＥ構造遺伝子の中間部分まで欠失したものであることが図示されている。
▲４▼ｐ．１４５８　第２図説明文
「ｔｒｐＰＯＬＥＤ″Ｃ″の位置とＥｃｏ　ＲＩとＨｐａ　Ｉの制限酵素による切断部位を示すｐＶＨ１５３プラスミドの地図。ｐＧＭＩとｐＧＭ３プラスミドはｔｒｐオペロンの内部欠失体［△ｔｒｐＬＥ１４１３（ｐＧＭＩ）と△ｔｒｐＬＥ１４１７（ｐＧＭ３）］を有する以外はｐＶＨ１５３と同一である。ｔｒｐ″Ｃ″の隣のジグザグ線はバクテリアのｔｒｐＤオペロン配列とファージＤＮＡ間の境界を表わしている。」
▲５▼Ｐ．１４５８　第２図
　ｔｒｐプロモーター−オペレーターにｔｒｐＥの一部、ｔｒｐＤ、ｔｒｐＣの一部を連結し、アテニュエーター能及びｔｒｐＥリボゾーム結合部位を除去した発現ベクター△ｔｒｐＬＥ１４１３（ｐＧＭＩ）と△ｔｒｐＬＥ１４１７（ｐＧＭ３）が記載されている。
▲６▼ｐ．１４５９　右欄１３〜４３行
「　ｔｒｐＬＥ欠失を有するファージ及びプラスミドの構築
Ｂｅｒｔｒａｎｄ等は、一方の末端をオペロンのリーダー領域及び他端を５構造遺伝子の一つとするｔｒｐオペロンの先端の欠失した変異体を単離したことを報告した。単離された突然変異体の中で、２つの株，Ｗ３１１０ΔｔｒｐＬＥ１４１３（Ｋ．Ｂｅｒｔｒａｎｄ　ａｎｄ　Ｃ．Ｙａｎｏｆｓｋｙ，未発表）及びΔｔｒｐＬＥ１４１７（１）は、推定されたリーダーペプチドをコードする領域内にその左側末端欠失、及び初めの主要構造遺伝子であるｔｒｐＥ内にその右側末端欠失を有していた（第１図）。両欠失の左側末端は、３２Ｐ標識されたオペレーター近傍のｔｒｐ　ｍＲＮＡのオリゴヌクレオチド分析によりリーダー領域の４９及び５２ｂｐの間であることが決定された。欠失株は、推定リーダーペプチドの７又は８コドンと共にリーダー領域のＡＵＧを中心に有するリボソーム結合部位を残していた。ｔｒｐリプレッサーの機能を欠いた場合、即ち、ｔｒｐＲアレルが導入された場合、同質遺伝型のｔｒｐＲｔｒｐ＋株でのレベルと比較して８−１０倍ｔｒｐＢ蛋白質のレベルが増加することが示された。遠位の遺伝子発現のこの増加は、オペロンのリーダー領域内の転写終結部位であるアテニュエーターの除去に起因するものである。」
▲７▼ｐ．１４６１　右欄本文第３〜
　ｔｒｐＬＥ欠失を有するｔｒｐオペロン領域のｉｎ　ｖｉｖｏ発現
　ＵＶを照射された大腸菌細胞は、△ｔｒｐＬＥ１４１３又は△ｔｒｐＬＥ１４１７欠失を有しλファージを変換したλ　ｃＩ８５７及びλ　ｔｒｐでトランスフェクションされる。ファージ感染後合成された蛋白質は、［３２Ｓ］メチオニンでラベルされ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析された。ＵＶ照射は、ＲＮＡ又は蛋白質合成機構に深刻な損傷を与えることなく宿主蛋白質合成を本質的に排除する（スロット３）（第６図）。もしも感染宿主が、λ　ｃＩ８５７（ｉｎｄ）溶原性株である場合は、感染したファージのλ遺伝子の発現は、阻止される（スロット４）。加えて、ｔｒｐプロモーターからの転写は、トリプトファンの存在下で機能的ｔｒｐレプレッサーを有する感染宿主によって抑制されうる（スロット５及び７）。
　λ　ｔｒｐＥＤ△ＬＥ１４１３又はλ　ｔｒｐＥＤ△ＬＥ１４１７によるｔｒｐＲ＋株及びｔｒｐＲλ溶原性株の感染は、ｔｒｐＲに存在するがｔｒｐＲ＋に見られない２つの蛋白質バンド、即ち、ｔｒｐＤポリペプチドバンド（分子量６５，０００）及び一つの付加的な大変強いポリペプチドのバンドを示す。付加的なバンドは、λ　ｔｒｐＥＤ△ＬＥ１４１３と記入された蛋白質では分子量１９，０００、λ　ｔｒｐＥＤ△ＬＥ１４１７と記入された蛋白質では３６，０００に一致する移動度を有する。それらは、ｉｎ　ｖｉｔｒｏで観察される推定ｔｒｐＬＥ融合蛋白質の大きさと一致する。
▲８▼ｐ．１４６２　右欄２２〜４１行
「大腸菌のｔｒｐオペロンにおける２つの初めの欠失体であるΔｔｒｐＬＥ１４１３及びΔｔｒｐＬＥ１４１７は、一端にオペロンのリーダー部位を有し他端にｔｒｐＥを有する。いずれの欠失体を有する株も、リーダーｍＲＮＡの始めに位置するＡＵＧを中心としたリボゾーム結合部位と共に、推定上のリーダーペプチドの最初の７〜８アミノ酸コドンに相当するＤＮＡセグメントを有する。２つの欠失体に含まれるｔｒｐオペロンは、ｉｎ　ｖｉｒｔｏ及びｉｎ　ｖｉｖｏの両方において、各々ｔｒｐリプレッサーによる抑制の対象物であり、且つ、野生型ｔｒｐオペロンによってコードされていない新たなポリペプチド合成を促進することが示された。両ポリペプチドは、ｔｒｐＥ配列を含みそして、外的な翻訳開始部位にｔｒｐＥの残った部位が同一相で融合した又はｔｒｐＥ内にある効率的翻訳再開部位の活性化のいずれかの結果として生じ得る。」
▲９▼ｐ．１４６３　左欄１２〜３３行
「（ｉｉ）予想されたＬＥ融合ポリペプチドが効率に合成される。△ｔｒｐＬＥ１４１３と△ｔｒｐＬＥ１４１７は共に、ナンセンスミューテーションが大きな極性効果を引き起こすことが示されているｔｒｐＥの領域に、右手側を欠失した末端を有するけれども、欠失体のいずれもがインビボにおいて遠位の遺伝子発現において極性効果を有しない。２つの欠失が存在するｔｒｐＲ株において観察された高レベルのｔｒｐＢ蛋白質（量）は、遠位のｔｒｐＥｍＲＮＡが両欠失オペロンの中で効率的に翻訳されているに違いないことを示唆する。この結論はインビトロにおけるＤＮＡ過剰の条件下では［３２Ｓ］メチオニンがｔｒｐＥ蛋白質に比べて６〜１０倍多く融合蛋白質に取り込まれるという観察によって確証される。この増加はアテニュエーション部位の除去と関連した遠位のｍＲＮＡの８〜１０倍の生産を密接に反映している。また、翻訳の開始が、野生型のｔｒｐＥ蛋白と同様に新規ポリペプチドに対して効率的に行われることを示す。」
４．対比
　引用例１記載の発明における「ヒト成長ホルモン」は、本願発明における「異種ポリペプチド生産物」に相当する。
　また、引用例１において、３２，０００ダルトンの蛋白質のｔｒｐＤ−ｈＧＨ融合蛋白質が発現している（引用例１摘記事項▲４▼）ことから、引用例１記載の発現プラスミドは蛋白質の発現に必須な「翻訳開始信号を暗号化しているヌクレオチド」「リボゾーム結合部位を暗号化しているヌクレオチド」を有していると認められる。
　そすると、本願発明と引用例１記載の発明は、「大腸菌において異種ポリペプチド生産物を製造するためのプラスミド発現ベクターであって、以下の要素：
　（ｉ）細菌のｔｒｐプロモーター‐オペレーター系；
　（ｉｉ）要素（ｉｖ）の翻訳のためのリボソーム結合部位を暗号化しているヌクレオチド；
　（ｉｉｉ）単要素（ｉｖ）の翻訳のための翻訳開始信号を暗号化しているヌクレオチド；及び
　（ｉｖ）異種ポリペプチドのアミノ酸配列を暗号化している構造遺伝子；
を暗号鎖の最初の５′末端から３′末端までの相内に含有している２本鎖ＤＮＡ配列を有するベクター。」である点で一致し、本願発明が、「ｔｒｐのアティニュエーション能及びｔｒｐＥのリボソーム結合部位を暗号化しているヌクレオチドを両者とも含有していない」のに対して、引用例１記載の発明は、これらヌクレオチドを両者とも含む点で相違する。
５．相違点の検討・判断
　引用例２には、ｔｒｐＥ構造遺伝子の前半の一部及びアテニュエータを欠いたｔｒｐプロモーター‐オペレーター系の発現ベクター△ｔｒｐＬＥ１４１３及び△ｔｒｐＬＥ１４１７が記載されている（引用例２摘記事項▲３▼）。ここで、ｔｒｐＥのリボゾーム結合部位がｔｒｐＬからｔｒｐＥの構造遺伝子の翻訳開始点の間に存在することは、ｔｒｐＥのリボゾーム結合部位が、ｔｒｐＥの翻訳を制御することからみて自明なことである。そうすると、引用例２には、「ｔｒｐのアティニュエーション能及びｔｒｐＥのリボソーム結合部位を暗号化しているヌクレオチドを両者とも含有していない」細菌のｔｒｐプロモー夕ー‐オペレーター系発現ベクターが記載されているものと認められる。
　そして、引用例２には、アテニュエーターを除去することにより高率な発現が起きる旨が記載されている。
　しかしながら、ここで、高率な発現が確認されたポリペプチドはｔｒｐ関連遺伝子由来のポリペプチド、即ち、同種ポリペプチドであるのに対して、本願発明は、異種ポリペプチドに関するものである。そして、本願発明は、明細書に記載されたように「ｐＨＧＨ１０７のｌａｃプロモーター−オペレーター系と比較したときのトリプトファン・プロモーター−オペレーター系のより強力な誘導のため大腸菌２９４株／ｐＨＧＨ１０７よりかなり多量にＨＧＨが生産される。」（公告公報第２２欄第３２〜３９行）という作用効果を奏するものである。
　そこで、引用例１に記載の発明に引用例２記載の事項を適用して本願発明の如く構成した場合、引用例１及び２記載の事項から本願発明の効果を当業者が予測し得たかを検討する。
（１）アテニュエーションが起きる機構について、引用例２記載の効果が異種ポリペプチドにおいても奏されるか否か判断し得る程度に当該機構が引用例２に記載されていない。そうすると同種ポリペプチド又はｔｒｐ関連遺伝子に特有な機構とも考えられ、引用例２記載の技術的事項を異種ポリペプチドにも適用し得るとは直ちにいえない。
（２）異種ポリペプチドは、宿主にとって異物である。このような異物が宿主内で高レベルに発現した場合のどのような現象が起きるか予測することは当業者にとって困難と認められる。
（３）引用例１記載の発明において、引用例２記載の技術的事項を適用してアテニュエーターを除去するということは、ｔｒｐプロモーターによる正の制御が残るのみで、３種ある負のｔｒｐ制御のすべてが無くなり制御不能になる状態になる。これは、宿主にとって著しく異常な状態であることを意味する。
　他方、引用例２記載のものにおいても、ｔｒｐプロモーターによる正の制御が残るのみで、３種ある負のｔｒｐ制御のすべてが無くなり制御不能状態となっているが、これは同種ポリペプチドを発現させるものであり、このような異常な状態で異種ポリペプチドがどのような挙動を示すかは予測し得ないと認められる。
　以上の（１）〜（３）の事項を考慮すると、引用例２に記載された同種ポリペプチドで観察された結果に基づいて、本願明細書記載の効果が奏されると予測することは当業者といえども困難であると認められる。また、引用例１に記載された事項から、本願明細書記載の効果を予測することが困難であることはいうまでもない。
　そうすると、本願発明は、相違点に記載された構成要件を具備することにより、引用例１及び２から当業者が予測し得ない作用効果が奏されるものと認められ、本願発明の上記効果を期待して、引用例１記載の発明に引用例２記載の技術的事項を採用して本願発明の如くなすことは、当業者といえども困難であったと認められる。
　したがって、本願発明を、引用例１及び２記載の発明に基づいて当業者が容易に発明することができたものであるとすることができない。
６．むすび
　以上のとおりであるから、本願については、原査定の拒絶理由によっては、拒絶すべきものとすることはできない。
　また、他に本願を拒絶すべき理由を発見しない。
　よって、結論のとおり審決する。