(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式７で表されるエポチロン誘導体。
0004183099.tif 000008
（式中、ＲはＨ、Ｃ1-4アルキルであり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4はＨ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アシル、ベンゾイル、Ｃ1-4トリアルキルシリル、ベンジル、フェニル、またはそれぞれＣ1-6アルコキシ、Ｃ6アルキル、ヒドロキシによってもしくはハロゲンによって置換されたベンジルもしくはフェニルであり；前記基に含まれるアルキルおよびアシル基は直鎖基または枝分かれ基であり；ならびにＹおよびＺは各々一緒になってエポキシ基のＯ原子もしくはＣ＝Ｃ二重結合のＣ−Ｃ結合の１つを形成する。）
【請求項２】
エポチロンＡ、エポチロンＢ、エポチロンＣ又はエポチロンＤを
（ａ）酵素的に加水分解するか、または
（ｂ）アルカリ性媒質中で加水分解し、そして
式７のエポチロン誘導体を生成し、分離することを特徴とする請求項１記載の式７のエポチロン誘導体の製造方法。
0004183099.tif 000009
（式中、ＲはＨ、Ｃ1-4アルキルであり、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4はＨ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アシル、ベンゾイル、Ｃ1-4トリアルキルシリル、ベンジル、フェニル、またはそれぞれＣ1-6アルコキシ、Ｃ6アルキル、ヒドロキシによってもしくはハロゲンによって置換されたベンジルもしくはフェニルであり；前記基に含まれるアルキルおよびアシル基は直鎖基または枝分かれ基であり；ならびにＹおよびＺは各々一緒になってエポキシ基のＯ原子もしくはＣ＝Ｃ二重結合のＣ−Ｃ結合の１つを形成する。）
【請求項３】
エステラーゼまたはリパーゼで加水分解して、式７のエポチロン誘導体を生成し、分離することを特徴とする請求項２記載のエポチロン誘導体の製造方法。
【請求項４】
メタノール／水混合物中、水酸化ナトリウムで加水分解して、式７のエポチロン誘導体を生成し、分離することを特徴とする請求項２記載のエポチロン誘導体の製造方法。
【請求項５】
請求項１記載の前記式７で表されるエポチロン誘導体または請求項２〜４のいずれか１項に記載の製造方法による生成物の形でのエポチロン誘導体を、
（ａ）ヤマグチ法によって、または
（ｂ）コリー法によって、または
（ｃ）ケログ法によって
変換して下記式１のエポチロン誘導体を生成させ、そしてその変換生成物を分離することを特徴とする下記式１のエポチロン誘導体の製造方法。
0004183099.tif 000010
（式中、ＲはＨ、Ｃ1-4アルキルであり；Ｒ1、Ｒ2はＨ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ1-6アシル、ベンゾイル、Ｃ1-4トリアルキルシリル、ベンジル、フェニル、またはそれぞれＣ1-6アルコキシ、Ｃ6アルキル、ヒドロキシによってもしくはハロゲンによって置換されたベンジルもしくはフェニルであり；かつ前記基に含まれるアルキルおよびアシル基は直鎖基または枝分かれ基であり、ならびにＹおよびＺは各々一緒になってエポキシ基のＯ原子もしくはＣ＝Ｃ二重結合のＣ−Ｃ結合の１つを形成する。）
【発明の詳細な説明】
本発明は、一般的にはエポチロン誘導体および医薬の製造におけるそれらの用途に関するものである。本発明は特に、以下に示す一般式１〜７のエポチロン誘導体の製造法、ならびに治療学的組成物および植物保護用組成物の製造におけるそれらの用途に関する。
0004183099.tif 000002
0004183099.tif 000003
0004183099.tif 000004
前記式１〜７において、
ＲはＨ、Ｃ1-4アルキルであり、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5はＨ、Ｃ1-6アルキル、
Ｃ1-6アシル−ベンゾイル、
Ｃ1-4トリアルキルシリル、
ベンジル、
フェニル、
それぞれＣ1-6アルコキシ、Ｃ6アルキル、ヒドロキシルによってもしくはハロゲンによって置換されたベンジルもしくはフェニルであり、
基Ｒ1〜Ｒ5の２つが一緒になって基−（ＣＨ2）n−を形成することもでき、ここでｎは１〜６であり、またそれらの基に含まれるアルキルおよびアシル基は直鎖基または枝分かれ基であり、
ＹおよびＺは同じであっても異なっていてもよく、各々水素、例えばＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩなどのハロゲン、例えば−ＮＣＯ、−ＮＣＳまたは−Ｎ3などのプソイドハロゲン、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ1-6）アシル、Ｏ−（Ｃ1-6）アルキル、Ｏ−ベンゾイルを表わす。エポチロンＡおよびＢには特許を請求するものではないが、ＹおよびＺはエポキシ基のＯ原子であってもよく、またはＣ＝Ｃ二重結合を形成するＣ−Ｃ結合の１つであってもよい。
式３において、Ｘは一般的には−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ（Ｏ）−、−ＣＲ1Ｒ2−（Ｒ1およびＲ2は前記定義と同義である。）、または−ＳｉＲ2−（Ｒは前記定義と同義である。）を表わす。
式４において、Ｘは酸素、ＮＯＲ3、Ｎ-ＮＲ4Ｒ5またはＮ-ＮＨＣＯＮＲ4Ｒ5をあらわし、ここで基Ｒ3〜Ｒ5は前記定義と同義である。
式５において、Ｘは水素、Ｃ1-18アルキル、Ｃ1-18アシル、ベンジル、ベンゾイルまたはシンナモイルを表わす。
エポチロンＡおよびＢについてはＤＥ−Ａ−４１３８０４２を参照されたい。
一般式１にかかる化合物は、エポチロンＡおよびＢから、ならびにそれらの３−Ｏ−および／または７−Ｏ−保護誘導体から出発して、１２，１３−エポキシ基を開裂することによって得ることができる。もしもその目的で好ましくは非水性溶媒中でハロゲン化水素酸（hydrohalic acids）を用いる場合、ハロヒドリンＸ＝Ｈａｌ、Ｙ＝ＯＨおよびＹ＝ＯＨ、Ｙ＝Ｈａｌが得られる。例えばトルエンスルホン酸およびトリフルオロ酢酸などのプロトン酸は、水の存在下で１２，１３−ジオール類を生じ、それらはその後、標準的方法によりアシル化（例えばカルボン酸無水物およびピリジンまたはトリエチルアミン／ＤＭＡＰにより）、またはアルキル化（アルキルハライドおよび酸化銀）される。その目的で、３−および７−ヒドロキシル基はホルメート（ＮＨ3／ＭｅＯＨで除去）またはｐ−メトキシベンジルエーテル（ＤＤＱで除去）の形で一時的に保護されてもよい。
一般式２にかかる化合物は、エポチロンＡおよびＢから、ならびにそれらの３−Ｏ−および／または７−Ｏ−保護誘導体からも、例えばメタノール中でＮａＢＨ4による還元によって得ることができる。もしも３−ＯＨおよび／または７−ＯＨが可逆的に保護される場合は、アシル化またはアルキル化し、それらの保護基を除去した後に、一般式２の５−Ｏ−一置換誘導体または３，５−もしくは５，７−Ｏ−二置換誘導体を得ることができる。
エポチロンＡおよびＢと二官能性求電子試薬、例えば（チオ）ホスゲン、（チオ）カルボニルジイミダゾール、塩化チオニルまたは二塩化ジアルキルシリルまたはビストリフレートとの反応は、一般式３の化合物を与える。ピリジン、トリアルキルアミン類は任意にＤＭＡＰまたは２，６−ルチジンとともに非プロトン性溶媒中で、そのプロセスにおける補助塩基として作用する。一般式３の３，７−アセタール類は、例えばジメチルアセタールの酸触媒存在下でのアセタール交換反応によって生成される。
一般式４にかかる化合物はエポチロンＡおよびＢから、またはそれらの３−Ｏ−および／または７−Ｏ−保護誘導体から、オゾン分解および例えばジメチルスルフィドによる還元処理によって得られる。そのＣ−１６−ケトン類はその後、当該技術分野の当業者に公知の標準的方法によってオキシム類、ヒドラゾン類またはセミカルバゾン類に変換することができる。それらはさらにウィッチヒ（Wittig）、ウィッチヒ−ホーナー（Horner）、ジュリア（Julia）またはペタセン（Petersen）によるオレフィン化法によってＣ−１６−／Ｃ−１７−オレフィン類に変換される。
一般式５にかかる１６−ヒドロキシ誘導体はＣ−１６−ケト基を例えば水素化アルミニウムまたは水素化ホウ素アルミニウムなどで還元することによって得ることができる。もしも３−ＯＨおよび７−ＯＨに適当な保護基が準備されれば、１６−ヒドロキシ誘導体をアシル化またはアルキル化することができる。３−ＯＨおよび７−ＯＨ基は、例えば、Ｏ−ホルミルの場合はＮＨ3／ＭｅＯＨによって、またＯ−ｐ−メトキシベンジルの場合はＤＤＱによって遊離する。
一般式６の化合物は、７−ＯＨ基がアシル基またはエーテル基で保護されているエポチロンＡおよびＢの誘導体から、３−ＯＨ基を例えばホルミル化、メシル化またはトシル化し、その後それを塩基処理、例えばＤＢＵ処理によって除去することによって得られる。７−ＯＨ基は上記のようにして遊離させることができる。
一般式７の化合物は、エポチロンＡおよびＢから、またはそれらの３−ＯＨ−および７−ＯＨ−保護誘導体から、例えばＭｅＯＨ中またはＭｅＯＨ／水中におけるＮａＯＨによる塩基性加水分解によって得られる。好適には一般式７の化合物は、エポチロンＡまたはＢから、またはそれらの３−ＯＨ−または７−ＯＨ−保護誘導体から、酵素加水分解、特にエステラーゼまたはリパーゼによる加水分解によって得られる。そのカルボキシ基は、１９−ＯＨ基をアルキル化によって保護した後、ジアゾアルカンでエステルに変換できる。
その上、式７の化合物は、ヤマグチ（塩化トリクロロベンゾイル／ＤＭＡＰ）、コリー（アルドリチオール／トリフェニルホスフィン）またはケログ（オメガ−臭素酸／炭酸セシウム）の方法によるラクトン化によって式１の化合物に変換することができる。有効な処理法は、イナナガらのBull.Chem.Soc.Japan、５２巻（１９７９）１９８９ページ；コリーおよびニコラウのJ.Am.Chem.Soc.、９６巻（１９７４）５６１４ページ；およびクルージンガおよびケログのJ.Am.Chem.Soc．１０３巻（１９８１）５１８３ページに見い出すことができる。
本発明にかかる化合物を調製するために、エポチロンＣまたはＤから出発してもよく、その場合、誘導体化のためには前述の誘導体化法を参照されたい。１２，１３−二重結合は、例えば触媒的にまたはジイミンによって選択的に水素化してもよく、または例えばジメチルジオキシランまたは過酸によってエポキシド化してもよく、またはジハライド、ジプソイドハライドまたはジアジドに変換してもよい。
本発明は、前記のエポチロン誘導体の１つ以上からなる、または前記エポチロン誘導体の１つ以上と通常の担体（１つまたは複数）および／または希釈剤（１つまたは複数）との組み合わせからなる、農業、林業および／または園芸学における植物保護のための組成物にも関する。
最後に、本発明は、前記化合物の１つ以上からなる、または前記化合物の１つ以上と、通常の担体（１つまたは複数）および／または希釈剤（１つまたは複数）との組み合わせからなる治療学的組成物に関する。これらの組成物は、特に細胞毒活性をあらわし、および／または免疫抑制を生じ、および／または悪性腫瘍を克服するために用いることができ、細胞増殖抑制剤（cytostatic agents）として特に好ましい。
本発明を、以下、多数の選択された実施態様の記述によってより詳細に示し、説明する。
例
例１
化合物１ａ
エポチロンＡ２０ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）をアセトン１ｍｌに溶解し、トリフルオロ酢酸５０μｌ（０．６４９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を５０℃で一晩撹拌する。反応混合物に１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７を加えて反応を仕上げ、水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーによって精製する（溶出液：ジクロロメタン／アセトン、８５：１５）。
収量：異性体Ｉ  ４ｍｇ（１９％）
異性体II  ４ｍｇ（１９％）
異性体Ｉ
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、８５：１５）：０．４６
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４４０（ｍ，ｂ，ｓｈ）、２９４６（ｓ，ｓｈ）、１７３４（ｖｓ）、１６８６（ｍ）、１４５６（ｍ）、１３７５（ｗ）、１２５６（ｓ，ｓｈ）、１１９０（ｗ，ｂ，ｓｈ）、１０７１（ｍ，ｓｈ）、８８４（ｗ）、７３５（ｗ）ｃｍ-1。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝４９３（４３［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+）、３９４（４７）、３０６（３２）、２０６（３０）、１８１（４０）、１６６（７２）、１３９（１００）、１１３（１９）、７１（１９）、５７（２４）、４３（２４）
微量分析：Ｃ26Ｈ39Ｏ6ＮＳ  理論値：［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+として
４９３．２４９８
分析値：４９３．２４７８
異性体II
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、８５：１５）：０．２２
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４８４（ｓ，ｂ，ｓｈ）、２９４２（ｖｓ，ｓｈ）、１７２７（ｖｓ）、１５７０（ｗ）、１４５６（ｍ）、１３８０（ｍ）、１２６５（ｓ）、１１９０（ｗ）、１０６９（ｍ）、９７５（ｗ）ｃｍ-1。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝４９３（２１［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+）、３９４（１２）、３０６（４６）、２０６（３７）、１８１（６３）、１６６（９９）、１３９（１００）、１１３（２１）、７１（２３）、５７（３３）、４３（２８）。
微量分析：Ｃ26Ｈ39Ｏ6ＮＳ  理論値：［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+として
４９３．２４９８
分析値：４９３．２４７５
例２
化合物１ｂ
エポチロンＡ５５ｍｇ（０．１１１ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン０．５ｍｌに溶解し、１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。それから１Ｎリン酸塩緩衝液ｐＨ７を加え、水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーによって精製する（溶出液：ジクロロメタン／メタノール、９０：１０）。
収量：１９ｍｇ（３２％）。
Ｒｆ（ジクロロメタン／メタノール、９０：１０）：０．４６
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４４１（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、２９４８（ｓ，ｓｈ）、１７２５（ｖｓ，ｓｈ）、１４６２（ｍ）、１３８１（ｗ）、１２６５（ｍ）、１１５４（ｗ）、９７２（ｍ，ｂｒ，ｓｈ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１０（４．２９）、２４８（４．１１）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５２９（１３［Ｍ+］），４９４（１０）、３４２（３８）、３０６（２３）、１９４（３２）、１６４（１００）、１４０（３１）、１１３（１５）、５７（１６）。
微量分析：Ｃ26Ｈ40Ｏ6ＣｌＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
５２９．２２６５
分析値：５２９．２２８０
例３
化合物１ｃ
１２−クロロ−１３−ヒドロキシ−エポチロンＡ（１ｂ）２５ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍｌに溶解し、ジメチルアミノピリジン２９ｍｇ（０．２３５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１５１μｌ（１．０８１ｍｍｏｌ）および９８％ギ酸２０μｌ（０．５１７ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を氷／塩で冷やす。−１５℃に達したとき、無水酢酸４０μｌ（０．４２３ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、これを−１５℃で７０分間撹拌する。薄層クロマトグラフィーにより反応が完了していないことがわかったので、さらにジメチルアミノピリジン６ｍｇ（０．０４７ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン７μｌ（０．０４７ｍｍｏｌ）、９８％ギ酸２μｌ（０．０４７ｍｍｏｌ）および無水酢酸４μｌ（０．０４７ｍｍｏｌ）を反応混合物に加え、これを６０分間撹拌する。その反応混合物を室温まで加熱して反応を仕上げ、１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７を加え、水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーで精製する（溶出液：ジクロロメタン／アセトン、９０／１０）。収量：５ｍｇ（１８％）。
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、９０：１０）：０．６７
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４９７（ｗ，ｂ，ｓｈ）、２９４０（ｓ，ｂ，ｓｈ）１７２５（ｖｓ）、１４６８（ｍ，ｂ，ｓｈ）、１３７９（ｍ）、１２６５（ｓ）、１２５３（ｓ）、１１７５（ｖｓ）、９７２（ｍ，ｂ，ｓｈ）、７３７（ｓ）ｃｍ-1。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝６１３（９［Ｍ+］）５６７（４３）、４７２（６３）、３８２（２３）、３５２（２１）、１６４（１００）、１５１（３３）、９６（３１）、６９（１７）、４４（２６）。
微量分析：Ｃ29Ｈ40Ｏ9ＮＳＣｌ  理論値：［Ｍ+］として
６１３．２１１２
分析値：６１３．２１３１
例４
化合物１ｄ
エポチロンＢ１０ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン０．５ｍｌに溶解し、１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え、反応混合物を室温で３０分間撹拌する。それから１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７を加え、水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーで精製する（溶出液：ジクロロメタン／アセトン、８５：１５）。
収量：１ｍｇ（９％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、８５：１５）：０．３８
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５４３（３［Ｍ+］），５０７（１４）、３２０（１９）、２３４（９）、１９４（１７）、１８２（２３）、１６４（１００）、１４０（２２）、１１３（１４）、７１（１３）。
微量分析：Ｃ27Ｈ42Ｏ6ＮＳＣｌ  理論値：［Ｍ+］として
５４３．２４２１
分析値：５４３．２４０５
例５
化合物２ａ
エポチロンＡ１００ｍｇ（０．２０３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン／１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７（１：１）４ｍｌに溶解し、水素化ホウ素ナトリウム（１５０ｍｇ＝３．９６５ｍｍｏｌ）を、出発原料が完全に反応したことが薄層クロマトグラフィーによって示されるまで加える。その後１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７で希釈し、水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。粗生成物をシリカクロマトグラフィーで精製する（溶出液：ジクロロメタン／アセトン、９５：５、からジクロロメタン／アセトン、８５：１５、までの勾配）。
収量：（２０％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、７５：２５）：０．２７
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４１３（ｓ，ｂ，ｓｈ）、２９６５（ｖｓ，ｓｈ）、１７３４（ｖｓ）、１４５８（ｍ，ｂ，ｓｈ）、１３８３（ｍ，ｓｈ）、１２６４（ｓ，ｂ，ｓｈ）、１１８４（ｍ，ｂ，ｓｈ）、１０５９（ｓ，ｓｈ）、９６６（ｓ）、８８５（ｗ）、７３７（ｍ）ｃｍ-1。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝４９５（６［Ｍ+］）、４７７（８）、４５２（１２）、３９４（９）、３６４（１６）、３０６（４９）、１９４（１９）、１７８（３５）、１６４（１００）、１４０（４０）、８３（２１）、５５（２７）。
微量分析：Ｃ26Ｈ41Ｏ6ＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
４９５．２６５５
分析値：４９５．２６２３
例６
化合物３ａ〜ｄ（ａ〜ｄは立体異性体である）
エポチロン１００ｍｇ（０．２０３ｍｍｏｌ）をピリジン３ｍｌに溶解し、塩化チオニル５０μｌ（０．６８６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１５分間撹拌する。１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７をその後加えて、水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。粗生成物を精製し、４種類の立体異性体３ａ〜ｄを分取層クロマトグラフィーによって分離する（溶出液：トルエン／メタノール、９０：１０）。
化合物３ａ
収量：４ｍｇ（１２％）
Ｒｆ（トルエン／メタノール、９０：１０）：０．５０
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝２９６１（ｍ，ｂ，ｓｈ）、１７４２（ｖｓ）、１７０１（ｖｓ）、１４６５（ｍ，ｓｈ）、１３８９（ｍ，ｓｈ）、１２３８（ｓ，ｓｈ）、１２１０（ｖｓ，ｓｈ）、１０１１（ｓ，ｓｈ）、９５７（ｓ，ｂ，ｓｈ）、８０８（ｍ，ｓｈ）、７６８（ｓ，ｓｈ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１０（４．５０）、２４８（４．３５）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５３９（４０［Ｍ+］）、４５７（２２）、３６２（１６）、３１６（２７）、２２２（３０）、１７８（３０）、１６４（１００）、１５１（４３）、９６（３８）、６９（２９）、５５（２８）、４３（２０）。
微量分析：Ｃ26Ｈ37Ｏ7ＮＳ2  理論値：［Ｍ+］として５３９．２０１１
化合物３ｂ
収量：１４ｍｇ（１３％）
Ｒｆ（トルエン／メタノール、９０：１０）：０．４４
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝２９６３（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１７４０（ｖｓ）、１７０３（ｓ）、１５１０（ｗ）、１４６４（ｍ，ｂｒ，ｓｈ）、１３８９（ｍ，ｓｈ）、１２４０（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１１４２（ｍ）、１０７６（ｗ）、１０３７（ｗ）、１００３（ｍ）、９４５（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、８０６（ｍ，ｓｈ）、７７５（ｓ）、７３７（ｍ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）；ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１１（４．１６）、２５０（４．０８）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５３９（２７［Ｍ+］）、４７５（１７）、３２２（４１）、３０６（６７）、２２２（１６）、２０６（１７）、１９４（１９）、１７８（３２）、１６４（１００）、１５１（３３）、１２５（１８）、１１３（１５）、９６（３９）、８１（２３）、６４（５８）、５７（４２）、４１（１９）。
微量分析：Ｃ26Ｈ37Ｏ7ＮＳ2  理論値：［Ｍ+］として
５３９．２０１１
分析値：５３９．１９９８
化合物３ｃ
収量：４ｍｇ（４％）
Ｒｆ（トルエン／メタノール、９０：１０）：０．３８
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５３９（５１［Ｍ+］）、３２２（２２）、３０６（５３）、２２２（３６）、１７８（３１）、１６４（１００）、１５１（４１）、９６（２５）、８１（２０）、６９（２６）、５５（２５）、４１（２５）。
微量分析：Ｃ26Ｈ37Ｏ7ＮＳ2  理論値：［Ｍ+］として
５３９．２０１１
分析値：５３９．２００１
化合物３ｄ
収量：１ｍｇ（１％）
Ｒｆ（トルエン／メタノール、９０：１０）：０．３３
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５３９（６９［Ｍ+］）、３２２（３５）、３０６（５１）、２２２（４１）、１７８（３１）、１６４（１００）、１５１（４６）、９６（３１）、８１（２６）、６９（３４）、５５（３３）、４１（３５）。
微量分析：Ｃ26Ｈ37Ｏ7ＮＳ2  理論値：［Ｍ+］として
５３９．２０１１
分析値：５３９．１９９７
例７
化合物４ａ
エポチロンＡ１０ｍｇ（０．０２０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２ｍｌに溶解し、−７０℃にまで冷却し、それから５分間、微かに青く色がつくまでオゾンで処理する。続いて、生成した反応混合物にジメチルスルフィド０．５ｍｌを加え、それを室温まで加熱する。反応混合物の溶媒を除去して反応を仕上げ、最後に分取層クロマトグラフィーを行う（溶出液：ジクロロメタン／アセトン／メタノール、８５：１０：５）。
収量：５ｍｇ（６４％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン／メタノール、８５：１０：５）：０．６１
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４６８（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、２９４７（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１７３４（ｖｓ、ｓｈ）、１４５８（ｗ）、１３８０（ｗ）、１２６７（ｗ）、１１５７（ｗ）、１０８０（ｗ）、９８２（ｗ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２０２（３．５３）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝３９８（２［Ｍ+］）、３８０（４）、２６７（１４）、２４９（１７）、２１１（２０）、１９３（２６）、１７１（３４）、１３９（３４）、１１１（４０）、９６（１００）、７１（４８）、４３（５０）。
微量分析：Ｃ21Ｈ34Ｏ7  理論値：［Ｍ+］として
３９８．２３０５
分析値：３９８．２２９５
例８
化合物６ａ
３，７−ジ−Ｏ−ホルミル−エポチロンＡ１０ｍｇ（０．０１８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍｌに溶解し、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ-７−エン（ＤＢＵ）２７μｌ（０．１８０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で６０分間撹拌する。反応混合物に１Ｍリン酸塩二水素ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５を加えて仕上げ、その水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。溶媒を除去した後、生成した粗生成物をメタノール１ｍｌに溶解し、アンモニア性メタノール溶液２００μｌ（２ｍｍｏｌＮＨ3／ｍｌメタノール）を加え、その混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を真空下で除去して分離する。
収量：４ｍｇ（２２％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、８５：１５）：０．４６
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４４５（ｗ，ｂｒ，ｓｈ）、２９５０（ｖｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１７１７（ｖｓ，ｓｈ）、１６４４（ｗ）、１４６６（ｍ，ｓｈ）、１３７０（ｍ，ｓｈ）、１２６７（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１１７９（ｓ，ｓｈ）、９８４（ｓ，ｓｈ）、８６０（ｗ）、７３３（ｍ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１０（４．１６）ｎｍ
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝４７５（２８［Ｍ+］）、３８０（２１）、３２２（３７）、３１８（４０）、３０４（６６）、１７８（３１）、１６６（１００）、１５１（２９）、１４０（１９）、９６（３８）、８１（２０）、５７（２６）。
微量分析：Ｃ26Ｈ37Ｏ5ＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
４７５．２３９２
分析値：４７５．２３８４
例９
化合物６ｂ
３，７−ジ−Ｏ−ホルミル−エポチロンＡ５０ｍｇ（０．０９１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン１ｍｌに溶解し、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ-７−エン（ＤＢＵ）２ｍｌ（０．０１３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を９０℃で１２時間撹拌する。反応混合物に１Ｍリン酸塩二水素ナトリウム緩衝液ｐＨ４．５を加えて仕上げ、その水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。２種類の化合物からなる粗生成物を分取層クロマトグラフィーによって精製する（溶出液：ジクロロメタン／アセトン、９０：１０）。
収量：７ｍｇ（１５％）
物質コード
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、９０：１０）：０．６２
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝２９５１（ｍ，ｂｒ，ｓｈ）、１７２３（ｖｓ）、１６４４（ｗ，ｂｒ，ｓｈ）、１４６８（ｗ）、１３７７（w）、１２７１（m、ｂｒ，ｓｈ）、１１７９（ｓ）、９８７（ｍ，ｂｒ，ｓｈ）、７３５（ｗ，ｂｒ，ｓｈ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１０（４．４４）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５０３（６８［Ｍ+］）、４０８（５８）、３９０（３２）、３３４（２５）、３１６（３４）、２２０（２１）、２０６（２７）、１９４（２０）、１８１（３３）、１６４（１００）、１５１（３４）、１３９（２８）、１１３（２０）、９６（８２）、８１（３３）、６７（２４）、５５（２６）、４３（２２）。
微量分析：Ｃ27Ｈ37Ｏ6ＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
５０３．２３４２
分析値：５０３．２３０３
例１０
化合物６ｃ
３，７−ジ−Ｏ−アセチル−エポチロン５ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）をメタノール１ｍｌに溶解し、アンモニア性メタノール溶液（２ｍｍｏｌＮＨ3／ｍｌメタノール）１５０μｌを加え、反応混合物を５０℃で一晩撹拌する。
分離のために溶媒を真空下で除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーによって精製する（溶出液：トルエン／メタノール、９０：１０）。
収量：３ｍｇ（６７％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／アセトン、９０：１０）：０．５５
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝２９３４（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１７１９（ｖｓ，ｂ，ｓｈ）、１６４１（ｍ）、１４６０（ｍ，ｓｈ）、１３７２（ｓ，ｓｈ）、１２３７（ｖｓ，ｂ，ｓｈ）、１１７９（ｓ，ｓｈ）、１０２０（ｓ）、９６３（ｓ，ｓｈ）、７３７（ｖｓ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１０（４．３３）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５１７（５７［Ｍ+］）、４２２（５８）、３１８（３１）、１９４（２０）、１８１（３４）、１６６（１００）、１５１（３１）、９６（９６）、８１（３２）、６９（２７）、５５（２９）、４３（６９）。
微量分析：Ｃ28Ｈ39Ｏ6ＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
５１７．２４９８
分析値：５１７．２４９２
例１１
化合物７ａ
エポチロン２０ｍｇ（０．０４１ｍｍｏｌ）をメタノール０．５ｍｌに溶解し、１Ｎ水酸化ナトリウム溶液０．５mlを加え、反応混合物を室温で５分間撹拌する。
反応混合物に１Ｍリン酸塩緩衝液ｐＨ７を加えて仕上げ、その水相を酢酸エチルで４回抽出する。合わせて一つにした有機相を飽和塩化ナトリウム溶液で洗い、硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーで精製する（溶出液：ジクロロメタン／メタノール、８５：１５）。
収量：１１ｍｇ（５２％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／メタノール、８５：１５）：０．９２
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４３８（ｓ，ｂｒ，ｓｈ）、２９７１（ｖｓ，ｂｒ，ｓｈ）、１７０３（ｖｓ）、１５０７（ｍ）、１４６０（ｓ，ｓｈ）、１３８３（ｍ，ｓｈ）、１２５４（ｗ）、１１９０（ｗ，ｂｒ，ｓｈ）、１０１１（ｗ，ｂｒ，ｓｈ）、８６６（ｗ，ｂｒ）、７２９（ｓ）ｃｍ-1。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝４２３（０．１［Ｍ+］）、３２３（４）、１６８（８９）、１４０（１００）、８５（３１）、５７（６７）。
微量分析：Ｃ23Ｈ37Ｏ4ＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
４２３．２４４３
分析値：４２３．２４１０
例１２
化合物７ｂ
７−Ｏ−アセチル−エポチロン５ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）をメタノール１ｍｌに溶解し、アンモニア性メタノール溶液（２ｍｍｏｌＮＨ3／ｍｌメタノール）２００μｌを加え、反応混合物を５０℃で２日間撹拌する。分離のためにその溶媒を真空下で除去する。粗生成物を分取層クロマトグラフィーによって精製する（溶出液：トルエン／メタノール、９０：１０）。
収量：３ｍｇ（５９％）
Ｒｆ（ジクロロメタン／メタノール、９０：１０）：０．６３
ＩＲ（フィルム）：ｎｙ＝３４４１（ｍ，ｂｒ，ｓｈ）、２９４６（ｓ，ｓｈ）、１７３２（ｖｓ）、１６００（ｗ）、１４５１（ｍ）、１３７５（ｍ）、１２４６（ｓ，ｂ，ｓｈ）、１０１３（ｍ，ｂ，ｓｈ）ｃｍ-1。
ＵＶ（メタノール）：ラムダmax（１ｇイプシロン）＝２１１（３．７５）、２４７（３．５９）ｎｍ。
ＭＳ（２０／７０ｅＶ）：ｍ／ｅ（％）＝５６７（１［Ｍ+］）、４６５（４）、４２２（７）、３８８（５）、１９４（５）、１８２（７）、１６８（６５）、１６４（１７）、１４０（１００）、９７（１０）、７１（２２）、４３（２７）。
微量分析：Ｃ29Ｈ45Ｏ8ＮＳ  理論値：［Ｍ+］として
５６７．２８６６
分析値：５６７．２８４９
例１３
エポチロンＡ５０ｍｇをジメチルスルホキシド２０μｌに溶解し、リン酸塩緩衝液（ｐＨ７．１、３０ｍＭ）３０ｍｌで希釈する。ブタ肝エステラーゼ（ベーリンガー・マンハイム）５ｍｇを添加後、混合物を３０℃で２日間撹拌する。混合物を２ＮＨＣｌでｐＨ５まで酸性にし、エポチロン酸７を酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、真空下で蒸発乾固する。収量：４８ｍｇ（９６％）。
例１４
４８ｍｇのエポチロン酸７を無水ＴＨＦ６ｍｌに溶解し、撹拌しながらトリエチルアミン４０μｌおよび２，４，６−トリクロロベンゾイルクロリド１６μｌを加える。１５分後、沈殿をろ過して除去し、無水トルエン２００ｍｌ中の４−ジメチルアミノピリジン２０ｍｇの沸騰溶液に、激しく撹拌しながらろ液を１５分以内に滴下する。さらに１０分後、その混合物を真空下で蒸発濃縮し、残渣を酢酸エチル／クエン酸塩緩衝液（ｐＨ４）間に分配した。分取ＨＰＬＣによる分離後、有機相の蒸発残渣はエポチロンＡ１５ｍｇを与える。
例１５
出発原料としてのエポチロンＣおよびＤ
Ａ．エポチロンの基本特許に対応する産生菌株および培養条件。
Ｂ．ＤＳＭ６７７３を用いる産生
培養物７５リットルを基本特許に記載のように増殖させ、これを用いて、産生培地７００リットルを含む産生発酵槽に接種する。産生培地は、０．８％澱粉、０．２％グルコース、０．２％大豆粉、０．２％酵母抽出物、０．１％ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、０．１％ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、８ｍｇ／リットルのＦｅ−ＥＤＴＡ、ｐＨ＝７．４および任意に１５リットルのアンバーライトＸＡＤ−１６吸着樹脂からなる。発酵は３０℃で、１時間に２ｍ3の空気を通気しながら７〜１０日間行われる。ｐＯ2は回転速度の調節によって３０％に維持される。
Ｃ．分離
吸着樹脂を、０．７ｍ2の１００−メッシュ−プロセスフィルターを用いて培養物から分離し、３ベッド容量の水／メタノール２：１で洗って極性不純物を除去する。４ベッド容量のメタノールで溶出すると、粗抽出物が得られ、それを真空下で濃縮し、水相があらわれるまで蒸発させる。その後それを同容量の酢酸エチルで３回抽出する。有機相の蒸発による濃縮は生の抽出物２４０ｇを与える。それをメタノールとヘプタンの間に分配し、親油性不純物を分離除去する。メタノール相から真空蒸発によって１８０ｇの分離物が得られる。これはセファデックスＬＨ−２０（２０×１００ｃｍカラム、２０ｍｌ／ｍｉｎのメタノール）で３部分に分画化される。エポチロンが含まれる留分は２４０〜３００分の滞留時間で溶出され、その留分は総計７２ｇを含む。エポチロン類を分離するために、リクロソルブ（Lichrosorb）ＲＰ−１８の３部分でクロマトグラフィーを行う（１５μｍ、１０×４０ｃｍカラム、溶出液１８０ｍｌ／ｍｉｎメタノール／水６５：３５）。エポチロンＡおよびＢの後に、Ｒｆ＝９０〜９５分でエポチロンＣが、Ｒｆ＝１００〜１１０分でエポチロンＤが溶出し、それらは真空下で蒸発後、それぞれ無色の油状物として０．３ｇの収量で得られる。
Ｄ．物理的特性
0004183099.tif 000005
エポチロンＣ  Ｒ＝Ｈ
エポチロンＤ  Ｒ＝ＣＨ3
エポチロンＣ
Ｃ26Ｈ39ＮＯ5Ｓ［４７７］
ＥＳＩ−ＭＳ：（正イオン）：［Ｍ＋Ｈ］+として４７８．５
１Ｈおよび１３Ｃ、ＮＭＲ表を参照されたい。
ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）：Ｒｆ＝０．８２
ＴＬＣアルミニウムホイル６０Ｆ２５４メルク、溶出液：ジクロロメタン／メタノール＝９：１
検出：２５４ｎｍにおけるＵＶ吸光度。ワニリン／硫酸試薬を噴霧、１２０℃に加熱すると青灰色が発色。
ＨＰＬＣ：Ｒｆ＝１１．５分
カラム：ヌクレオシル１００Ｃ−１８  ７μｍ、１２５×４ｍｍ
溶離液：メタノール／水＝６５：３５
流速：１ｍｌ／分
検出：ダイオードアレイ
エポチロンＤ
Ｃ27Ｈ41ＮＯ5Ｓ［４９１］
ＥＳＩ−ＭＳ：（正イオン）：［Ｍ＋Ｈ］+として４９２．５
１Ｈおよび１３Ｃ、ＮＭＲ表を参照されたい。
ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．８２
ＴＬＣアルミニウムホイル６０Ｆ２５４メルク、溶出液：ジクロロメタン／メタノール＝９：１
検出：２５４ｎｍにおけるＵＶ吸光度。バニリン／硫酸試薬を噴霧、１２０℃に加熱すると青灰色が発色。
ＨＰＬＣ：Ｒｆ＝１５．３分
カラム：ヌクレオシル１００Ｃ−１８  ７μｍ、１２５×４ｍｍ
溶出液：メタノール／水＝６５：３５
流速：１ｍｌ／分
検出：ダイオードアレイ
0004183099.tif 000006
例１６
エポチロンＣからエポチロンＡおよび１２，１３−ビスエピ−エポチロンＡ
エポチロンＣ５０ｍｇをアセトン１．５ｍｌに溶解し、アセトン中のジメチルジオキシランの０．０７Ｍ溶液１．５ｍｌを加える。室温で６時間静置後、真空下で蒸発して濃縮し、シリカゲル上の分取ＨＰＬＣによって分離する（溶出液：メチルtert-ブチルエーテル／石油エーテル／メタノール  ３３：６６：１）。
収量：
エポチロンＡ２５ｍｇ、Ｒｆ＝３．５分（分析ＨＰＬＣ、７μｍ、４×２５０ｍｍカラム、溶出液は上記参照、流速１．５ｍｌ／分）および
１２，１３−ビスエピ−エポチロンＡ２０ｍｇ、Ｒｆ＝３．７分、ＥＳＩ−ＭＳ（正イオン）、ｍ／ｚ＝４９４［Ｍ＋Ｈ］+、［Ｄ4］メタノール中の1Ｈ−ＮＭＲ、選択シグナル：デルタ＝４．３２（３-Ｈ）、３．７９（７-Ｈ）、３．０６（１２-Ｈ）、３．１６（１３-Ｈ）、５．５４（１５-Ｈ）、６．６９（１７-Ｈ）、１．２０（２２-Ｈ）、１．４５（２３-Ｈ）
0004183099.tif 000007
１２，１３−ビスエピ−エポチロンＡ    Ｒ＝Ｈ