(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験物質を投与した非ヒト動物にストレスを負荷することにより生ずる、該動物の血液中のアラニン濃度の変化を測定することを特徴とした、被験物質の抗精神疲労活性の評価方法。
【請求項２】
ストレスを負荷した後の非ヒト動物に被験試料を投与することにより生ずる、該動物の血液中のアラニン濃度の変化を測定することを特徴とした、被験物質の精神疲労改善活性の評価方法。
【請求項３】
非ヒト動物がラットまたはマウスの何れかである、請求項１または請求項２に記載の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、簡便でかつ効率の良い、被験物質の抗精神疲労活性または精神疲労改善活性の評価方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
一般に、生体は肉体的運動によって局部的な筋肉疲労もしくは全身的な疲労を知覚するが、いわゆるストレスが生体に負荷された場合、肉体的運動を伴わなくても疲労を知覚することが経験的に認められる。このようなストレス負荷に起因して知覚される疲労は、一般に精神疲労と呼ばれる。
【０００３】
即ち、精神疲労とは、肉体的運動時に知覚される疲労とは異なり、生体が異常環境下に置かれたり、精神的に抑圧されまたは刺激されたりする際に知覚する疲労を意味するものである。異常環境としては、不快な高温又は低温などの温度異常、大音量や不快な騒音、極度の明暗、身体の痛み、身体の拘束等が、また精神的な抑圧または刺激には不安、興奮、緊張の持続等が挙げられる。
【０００４】
最近では、このような精神疲労の蓄積を、種々の生理学的要因を測ることにより客観的に認識する方法が開発されてきている。
【０００５】
例えば、筋肉中の乳酸、３−メチルヒスチジン及びコルチコステロンの濃度を測る方法や、筋肉中のリン酸化合物の動態を測る方法、さらには、味覚の変化に着目した疲労度の測定方法などがある（特開平９−７７６８８号公報）。
【０００６】
また、精神疲労の予防あるいは解消に利用し得るものとして、動植物由来の生薬、ビタミン類、アミノ酸類等が、飲食品や医薬品として使用されまたは提唱されている。これら精神疲労の予防に利用し得るもの（これを抗精神疲労活性物質とする）、あるいは精神疲労の解消に利用し得るもの（これを精神疲労改善物質とする）の探索は、現在もなお広く行われている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記の公知の精神疲労の測定方法は、いずれも手段が煩雑であったり技術の熟練が要求されることが多く、かつ測定で得られたデータの解釈も難しいものであった。そのため、多数の被験物質を短時間で処理する必要がある抗精神疲労活性あるいは精神疲労改善活性の評価、ひいては抗精神疲労活性物質あるいは精神疲労改善活性物質の探索には、満足できるものではなかった。また、従来の方法では、精神疲労の蓄積度合いを定量的に表現することについても、十分なものではなかった。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、より簡便でかつ定量性に優れる精神疲労に関する測定方法の開発を試みた。その過程において、生体にストレスが負荷されると、アミノ酸の一種であるアラニンの血液中の濃度が有意に変化することを見出し、かかる知見をもとに本発明を完成した。  すなわち本発明は、被験物質を投与した非ヒト動物にストレスを負荷することにより生ずる、該動物の血液中のアラニン濃度の変化を測定することを特徴とした、被験物質の抗精神疲労活性の評価方法である。
【０００９】
またもう一つの本発明は、ストレスを負荷した後の非ヒト動物に被験試料を投与することにより生ずる、該動物の血液中のアラニン濃度の変化を測定することを特徴とした、被験物質の精神疲労改善活性の評価方法である。
【００１０】
本発明者らは、マウスをモデル動物として、生体に精神疲労をもたらすストレスを持続的に負荷させる過程で、血液中に含まれるアミノ酸濃度にどのような変化が現れるかを調べた。その結果、血液中のアラニン濃度はストレス負荷直後において有意に低下し、さらにストレスを持続的に負荷させると血液中のアラニン濃度は徐々に減少していくことが明らかとなった。
【００１１】
このことは、ストレスが負荷されたモデル動物の血液中でのアラニン濃度を測定することにより、生体にストレスが負荷されたか否かまたは精神疲労がどの程度蓄積されているかを、客観的に調べることができることを意味する。
【００１２】
即ち、モデル動物の平常時の血液中に含まれるアラニン濃度を予めまたは同時に測定し、かかる平常時のアラニン濃度に比べてどの程度アラニン濃度が減じているかを確認することで、精神疲労の発生とその蓄積を調べることができる。
【００１３】
本発明は、上述の血液中のアラニン濃度の測定を利用したものである。本発明によれば、モデル動物に対して被験試料を投与した後にストレスを負荷し、その際のモデル動物の血液中のアラニン濃度の減少を測定することで、被験試料の有する抗精神疲労活性を評価し、または抗精神疲労活性物質を探索することができる。また、本発明によれば、モデル動物にストレスを負荷した後に被験試料を投与して、ストレスにより生じたアラニン濃度の減少が回復するか否かを調べることにより、被験物質の精神疲労改善活性を評価し、または精神疲労改善物質の探索を行うことができる。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明で使用することができる非ヒト動物としては、哺乳類動物であれば特に制限はないが、特に実験の利便性から動物実験に汎用されるウイスター（wister）系ラット、ＳＤ（Sprague-Dawley）系ラット、ｄｄＹ系マウス、ＩＣＲ系マウスが特に好ましい。
【００１５】
本発明において非ヒト動物に対してストレスを負荷する方法としては、非ヒト動物の身体を拘束して水に浸す方法（拘束水浸ストレス）や、コミュニケーションボックス、宙づり、拘束、条件付けストレス等が挙げられる。
【００１６】
本発明における血液中のアラニンの濃度の測定は、生体から採取された血液を遠心分離して調製される血清を測定試料とすることが好ましい。測定は、この試料をもとに高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）を用いて行うことができる。その際使用できるカラムは、アミノ酸の検出に使用できるカラムであればよく、例えば資生堂社製カプセルパックＵＧ１２０や、エイコム社製パックドカラムＭＡ−５０ＤＳ等が挙げられる。また、同様の測定は市販されているアミノ酸自動分析機を用いて行うこともできる。この測定方法は使用する機器の取扱説明書に従って処理すればよい。
【００１７】
その他、本発明においてはアミノ酸濃度を検出、測定できる方法であれば、その測定方法には特別な制限はない。
【００１８】
【発明の効果】
本発明により、再現性がよく、しかも、簡便な精神疲労の蓄積予防、解消または低減作用を有する抗精神疲労活性物質または精神疲労改善物質の評価、検出に使用できる。
【００１９】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
【００２０】
＜実施例＞
ウイスター系ラット（雄、６週齢）１４匹を用い、試験食として２０％カゼイン食を７日間投与して飼育した。その後ラットを２群に分け、一方の群にのみラットの体を網で縛り２６℃の水浴に１日当たり７時間浸水させる拘束水浸ストレスを負荷し、これ以外は両群のラットを同一の条件下でさらに７日間飼育して、拘束水浸ストレスを負荷する前、および負荷開始後１日後、３日後、７日後に各群のラットから血液を採取した。
【００２１】
採取した血液中のアミノ酸濃度は以下の操作により測定した。採取した血液から遠心分離操作（１，８００×ｇ、１０分間）で調製した血清に、３％スルホサリチル酸を血清と同量添加し、４℃で２４時間放置後、さらに遠心分離（１１，６００×ｇ、１０分間）し、得られた上澄を分取した。これを、０．４５μｍのメンブランフィルターで濾過し、濾液を日立製作所（株）製全自動アミノ酸自動分析機（Ｌ−８５００）を用いてアラニンの濃度を測定した。その結果を図１に示す。
【００２２】
拘束水浸ストレスを負荷しないラットでは、血液中のアラニン濃度に殆ど変化が認められない一方、拘束水浸ストレスを負荷した被験ラットでは、ストレス負荷開始直後から血液中のアラニン濃度は有意に低下し、このストレス負荷の回数に反比例して血液中のアラニン濃度が減少していくことが確認できた。
【図面の簡単な説明】
【図１】は、拘束水浸ストレスを負荷したラットと、同ストレスを負荷しないラットのそれぞれにおける、血液中のアラニン濃度の変化を示す。
【図１】
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