【誤訳訂正書】
【提出日】平成17年11月18日(2005.11.18)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
改変（修飾）ワクシニアウイルスアンカラ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ａｎｋａｒａ；ＭＶＡ）は、特に安全であることが知られている。ＭＶＡは、ニワトリ胎児繊維芽細胞における、ワクシニアウイルス（ＣＶＡ）のアンカラ種の、長期連続継代によって産出されてきた（Ｍａｙｒ  Ａ．，Ｈｏｃｈｓｔｅｉｎ−Ｍｉｎｔｚｅｌ，Ｖ．ａｎｄ  Ｓｔｉｃｋｌ，Ｈ．［１９７５］  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ３，６−１４の概論；スイス特許第５６８，３９２号を参照）。ブタベスト条約（Ｂｕｄａｐｅｓｔ  Ｔｒｅａｔｙ）の要求に沿って寄託されたＭＶＡウイルス株の例は、寄託番号第ＥＣＡＣＣ  Ｖ９４０１２７０７号にて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ（ＵＫ）にて寄託されたＭＶＡ  ５７２、および寄託番号ＥＣＡＣＣ  Ｖ００１２０７０７にて寄託されたＭＶＡ５７５、および寄託番号ＥＣＡＣＣ  Ｖ０００８３００８号のＭＶＡ−ＢＮである。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
ワクシニアウイルスの他に、その他のポックスウイルスが、哺乳動物細胞内へ遺伝的情報を伝達するために、ベクターとして使用されてきた。これに関連して鶏痘（ホウル）ポックスウイルスのようなアビポックスウイルス類の参考文献が作成される。ゲノム内にＨＩＶ遺伝子を含むホウルポックスウイルスは、米国特許第５，７３６，３６８号および第６，０５１，４１０号にて開示されている。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００７】
ワクチンとして好適な調製物を含むポックスウイルスを調製するための工程は、当業者に公知である（例えば、Ｊｏｋｌｉｋ  Ｗ．Ｋ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（１９６２），１８，９−１８；Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｋ．Ｈ．，Ａｂｈａｎｄｌｕｎｇｅｎ  ａｕｓ  ｄｅｍ  Ｂｕｎｄｅｓｇｅｓｕｎｄｈｅｉｔｓａｍｔ（１９７０），９，５３−５７）。公知の精製により、溶液を含む水性のポックスウイルス、または沈殿物を含むポックスウイルスが得られる。これらの溶液および沈殿物内のポックスウイルスは安定しておらず、すなわちウイルスの感染性が急速に減少する。しかしながら、特にワクチンを、流通構造が限定されている熱帯領域にて輸送する必要がある場合に、ワクチンを安定した形態で保存し、分配可能であることが必要である。凍結乾燥生成物は、４℃〜２５℃の範囲での温度にて保存可能である。これは、−２０℃以下で保存する必要のある、液体調合物のための標準の保存条件と比較して、明らかな利点である（「低温保存と凍結乾燥プロトコール（Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｙｉｎｇ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ）」、Ｄａｙ  Ｊ，ＭｃＬｅｌｌａｎ  Ｍ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，３８，１９９５，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１３】
本発明は、ポックスウイルス含有調合物、特に水性ポックスウイルス含有調合物 を提供する。前記調合物 、特に水性調合物 は、前記ポックスウイルスの凍結乾燥に好適であり得る。さらに、本発明は、凍結乾燥、ポックスウイルス含有生成物を提供する。本発明による調合物、特に水性調合物は、ポックスウイルス、ジサッカライド、薬学的に許容可能なポリマーおよび任意にさらに緩衝液を含む。本発明による凍結乾燥調合物は、ペプトン、ゼラチン、ヘマセルのような動物由来の安定化添加物を含まず、（細胞培養系のような）ウイルスを増幅するために使用した系から由来した多量のタンパク質を含まないが、調合物内のウイルスは、驚くべきことに安定であり、すなわち凍結乾燥調製物中のポックスウイルスが、室温または３７℃のような高い保存温度においてでさえ、長期間感染性のままである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１５】
凍結乾燥すべきポックスウイルスは、オルトポックスウイルス類、パラポックスウイルス類、アビポックスウイルス類、カプリポックスウイルス類およびスイポックスウイルス類からなる群より選択した任意のポックスウイルスである。これらのウイルスは、ヒトまたは動物に対するワクチンとして有用であり得る（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，ｅｄ．ｉｎ  Ｃｈｉｅｆ：Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．）。とりわけ好ましいポックスウイルスは、オルトポックスウイルス属およびアビポックスウイルス属のウイルスである。アビポックスウイルスに属しているポックスウイルスの好ましい例は、カナリア痘（カナリポックス）ウイルスおよびホウルポックスウイルスである。オルトポックスウイルスファミリーに属している好ましい例は、牛痘（コウポックス）ウイルスおよびワクシニアウイルスである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
「弱毒化ウイルス（ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓ）」は、病原性ウイルスから由来するが、宿主生物の感染に際して、非弱毒化親ウイルスにくらべてより低い死亡率および／または疾病率を導くウイルスである。弱毒化ポックスウイルスの例は、当業者に公知である。もっとも好ましいのは、修飾ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）である。典型的なＭＶＡ株は、それぞれ寄託番号第ＥＣＡＣＣ  Ｖ００１２０７０７号および第ＥＣＡＣＣ  Ｖ９４０１２７０７号にて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓに寄託された、ＭＶＡ５７５およびＮＶＡ５７２である。もっとも好ましいのは、ＭＶＡ−ＢＮまたはその誘導体であり、国際特許第ＷＯ０２／４２４８０号（ＰＣＴ／ＥＰ０１／１３６２８）にて記述された。この明細書の内容は、本明細書に、参考文献にて含まれている。ＭＶＡ−ＢＮは、寄託番号第ＥＣＡＣＣ  Ｖ０００８３００８号にて、Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓにて寄託された。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
ポックスウイルスに、２つの異なる形態、感染細胞の細胞質内で、細胞膜に接着するポックスウイルス（細胞内成熟ビリオン（ＩＭＶ））、および外在したウイルス（細胞外エンベロープビリオン（ＥＥＶ））が存在することが知られている（Ｖａｎｄｅｒｐｌａｓｓｃｈｅｎ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９８）７９，８７７−８８７）。両方のウイルス形態が、本発明による調合物内で使用可能である。ＥＥＶは、遠心分離によって、上清みから簡単に得ることができ、またジサッカライドおよび薬学的に許容可能なポリマーを含む水性調合物中に直接懸濁しうる。しかしながら、ウイルス含有画分は、細胞残留物および他の混入物を含みうる。特にヒトのワクチン接種のために、ウイルスが本発明の調合物に含まれる前に、さらに精製されることが好ましい。ポックスウイルスの精製のための方法は、当業者に公知である。精製段階は、例えばバッチ式遠心分離（例えばスクロースクッションを使用する）、または連続フロー超遠心（スクロース勾配）、限外ろ過（例えば５００ｋＤａより大きいが０．１μｍ以下の孔径を持つ膜を用いるクロス−フロー濾過）、カラムクロマトグラフィー（例えばイオン交換、疎水性相互作用、サイズ排除または組み合わせ）、または上記のいくつかまたはすべての組み合わせでありうる（Ｍａｓｕｄａ  Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ（１９８１）１４７，１０９５−１１０４）。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２５】
ＩＭＶｓを得るために、細胞を、第一段階で回収し、第二段階で破砕しなければならない。感染細胞が、懸濁培養液中で培養できる場合、感染細胞は、遠心によって簡単に回収可能である。感染細胞が、ほぼ無傷な接着細胞の場合、細胞を破砕段階にかける前に、細胞を回収、すなわち培養バイアルより細胞を除去することが可能である。回収方法は、当業者に公知である。有用な技術は、機械的な方法（例えばゴム製細胞スクレーパーを使用することによる）、物理的方法（例えば１５℃以下に凍結し、培養容器を＋１５℃以上で融解する）、または生化学的方法（細胞を培養容器から脱離させるために、例えばトリプシンのような酵素で処理する）である。酵素をこの目的のために使用する場合、酵素がまた、長期間のインキュベーション時間の後に、ウイルスに障害を与える可能性があるので、インキュベーション時間を制御すべきである。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
細胞の破砕のための方法がまた、当業者に公知である。前述した凍結−融解方法により、すでに部分的な細胞の破砕ができている。細胞の破砕のための他の方法には、超音波の使用が含まれる。細胞の超音波処理により、ウイルス含有ホモジネートができる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２９】
以上で指摘したように、本発明の調合物による調合物中のポックスウイルスは、好ましくは精製された、または少なくとも部分的に精製したウイルスである。用語「精製された、または少なくとも部分的に精製されたウイルス」は、本発明による調合物中で使用したウイルスが、（米国特許第３，５７７，５２６号にて開示されたような）天然痘の撲滅まで使用されたワクチンで使用したような、未精製ウイルス（「丸ウイルス（ｇｒｏｕｎｄ  ｖｉｒｕｓ）」のものよりも高い純度を持つことを意味する。そのようなより高い純度は、例えば１つ以上の以下の方法、（例えばスクロースクッションを用いる）バッチ式遠心または連続−フロー超遠心（スクロース勾配）、限外ろ過（例えば５００ｋＤａより大きいが０．１μｍ以下の孔径を持つ膜を用いるクロス−フロー濾過）、カラムクロマトグラフィー（例えばイオン交換、疎水性相互作用、サイズ排除または組み合わせ）によって得ることが可能である。とりわけ好ましいのは、限外ろ過および／またはスクロースクッションを用いることによるバッチ遠心である。より一般的な用語にて、用語「精製された、または少なくとも部分的に精製されたウイルス」は、総タンパク質ｍｇあたり少なくとも１０６、好ましくは少なくとも１０７、より好ましくは少なくとも１０８、さらにより好ましくは５×１０８  ＴＣＩＤ５０のタイターを持つ、（ＭＶＡまたはＥｌｓｔｒｅｅを含む調製品のような）ウイルス調製品を意味する。株Ｅｌｓｔｒｅｅの典型的な調製品は、総タンパク質ｍｇあたり８×１０８  ＴＣＩＤ５０のタイターを持つ。ポックスウイルス含有調製品のタイターを決定する方法は、当業者に公知であり、これらの方法の１つを、実施例項にて概略する。総タンパク質含量は、好ましくはＫｊｅｌｄａｈｌ（Ｌｙｎｃｈ，Ｊ．Ｍ．ａｎｄ  Ｂａｒｂａｎｏ，Ｄ．Ｍ．，「日用品におけるタンパク質決定のための参照方法としての、Ｋｊｅｌｄａｈｌ窒素解析（Ｋｊｅｌｄａｈｌ  ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ａｓ  ａ  ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄａｉｒｙ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ．）」Ｊ  ＡＯＡＣ  Ｉｎｔ．１９９９  Ｎｏｖ−Ｄｅｃ；８２（６）：１３８９−９８、概略）の方法にしたがって決定される。総タンパク質含量は、ウイルスタンパク質および細胞タンパク質の合計であることを注意すべきである。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本発明による調合物、特に水性調合物 はさらに、薬学的に許容可能なポリマーを含む。ポリマーは、好ましくは、デキストランおよびポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）からなる群より選択される。使用するポリマーは、本発明による調合物内で可溶性であるべきである。デキストランを使用する場合、その分子量は、好ましくは２０，０００〜１００，０００の範囲、より好ましくは３０，０００〜７０，０００の範囲、もっとも好ましくは３６，０００〜４４，０００の範囲である。もっとも好ましいデキストランは、平均分子量４０，０００である。デキストランの濃度は、１〜５０ｇ／ｌの範囲、好ましくは２〜４０ｇ／ｌまたは３〜３０ｇ／ｌの範囲である。好ましいよい結果が、５〜５０ｇ／ｌ、５〜４０ｇ／ｌ、または５〜３０ｇ／ｌの範囲で観察された。またより好ましくは、８〜３０ｇ／ｌの範囲である。もっとも好ましい範囲は、１０〜２７ｇ／ｌである。好ましい濃度に関する例は、１８．９ｇ／ｌである。以上で示したようなデキストランの好ましい濃度および濃度範囲、とりわけ５〜５０ｇ／ｌの範囲および相当する副範囲は、調合物の崩壊温度が、比較的高いという特定の利点を持ち、工業規模で工程を実施することを可能にする。ＰＶＰを使用する場合、その分子量は、好ましくは、５０，０００〜４００，０００の範囲、より好ましくは７０，０００〜３６０，０００の範囲である。ＰＶＰの濃度は、５〜２００ｇ／ｌの範囲、より好ましくは５〜１００ｇ／ｌの範囲、もっとも好ましくは１０〜４０ｇ／ｌの範囲である。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
本発明による調合物、特に水性調合物は、さらに緩衝液を含みうる。以上で指摘したように、ポックスウイルスが凝集せず、乾燥に際して沈殿が起きない水性ポックスウイルス含有調合物を提供することが本発明の目的の１つであった。予期せず、そのような望まない効果が、水性調合物内のリン酸を含む緩衝液の存在と相関することが示されてきた。リン酸含有緩衝液の例は、ＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）およびリン酸緩衝液である。結果として、本発明の特定の目的は、リン酸緩衝液を含まない凍結乾燥のための水性調合物によって解決される。したがって、本発明による調合物内に含まれる緩衝液は、好ましくは、ＴＲＩＳ、ＴＢＳ、ＭＯＰＳ、ＨＥＰＥＳおよび（重）炭酸緩衝液からなる群より選択される。もっとも好ましい緩衝液は、ＴＲＩＳおよびＴＢＳである。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
緩衝液は、必要な緩衝能を与えるのに十分である濃度で使用する。ＴＲＩＳ緩衝液に関して、好ましい濃度範囲は、１〜５０ｍＭであり、もっとも好ましい濃度は１０ｍＭである。ｐＨは好ましくは、一方でヒトまたは動物における投与のために薬学的に許容可能であり、他方で、ウイルスに対して有害ではない値に調節する。したがって、ｐＨは、６．０〜９．０の範囲、より好ましくは７．２〜７．８の範囲であるべきである。もっとも好ましいｐＨは７．４である。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４２】
本発明による水性調合物は、凍結乾燥に好適である。投与のために、凍結乾燥品は、適切な溶媒によって再構成されなければならない。１つの実施様態にしたがって、化合物を水溶液に移すために、無菌水を凍結乾燥品に加える。好ましくは、加える水の量は、凍結乾燥の間に除去される水量とほぼ一致する。したがって、本実施様態にしたがって、再構成生成物の組成は、初期水性調合物とほぼ一致する。したがって、本発明による水性調合物 をワクチンとして使用することが、本発明の範囲内である。他の実施様態にしたがって、凍結乾燥品はまた、適切な量で使用しうる、任意の他の薬学的に許容可能な希釈液中で再構成しうる。本例の方法によって、希釈液は、フェノール、グリセロールおよび緩衝液から選択した１つ以上の化合物を含む水であり得る。再構成生成物中のフェノールの濃度は、例えば０．５％である。以上で指摘したように、緩衝液は好ましくは、リン酸緩衝液ではない。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
まとめると、本発明の本観点はとりわけ、以下の特に好ましい実施様態に関する。（Ｉ）オルトポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルスおよびスイポックスウイルスからなる群より選択した、精製した、または部分的に精製したポックスウイルス、ジサッカライド、薬学的に許容可能なポリマーおよび任意に緩衝液を含むか、またはからなる、調合物、特に水性調合物であり、この際 緩衝液は、好ましくはリン酸緩衝液ではない。好ましくは前記ポリマーは、好ましくは以上で特定したような量での、デキストランである。（ＩＩ）オルトポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルスおよびスイポックスウイルスからなる群より選択したポックスウイルス、ジサッカライド、薬学的に許容可能なポリマーおよび任意に緩衝液を含むか、またはからなる、調合物、特に水性調合物であり、この際 緩衝液は、好ましくはリン酸緩衝液でなく、ポックスウイルスが好ましくは精製した、または部分的に精製したウイルスである。好ましくは前記ポリマーは、好ましくは以上で特定したような量での、デキストランである。（ＩＩＩ）オルトポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルスおよびスイポックスウイルスからなる群より選択したポックスウイルス、ジサッカライド、薬学的に許容可能なポリマーおよび任意に緩衝液を含むか、またはからなる、調合物、特に水性調合物であり、この際 ポリマーは、以上で特定したような、例としては好ましくは５〜４０ｇ／ｌの範囲である量でのデキストランである。好ましくは緩衝液はリン酸緩衝液ではない。好ましくは、ポックスウイルスは精製された、または部分的に精製されたウイルスである。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
例として、本発明の特定の実施様態は、オルトポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルスおよびスイポックスウイルスからなる群より選択した、精製した、または部分的に精製したポックスウイルス、ジサッカライド、薬学的に許容可能なポリマーおよび緩衝液を含む水性調合物を含み、そこでジサッカライドは、以上で特定した量でのスクロースであり、前記ポリマーは、以上で定義した量のデキストランであり、前記緩衝液はリン酸緩衝液ではない。例として、本発明の他の特定の実施様態は、オルトポックスウイルス、パラポックスウイルス、アビポックスウイルス、カプリポックスウイルスおよびスイポックスウイルスからなる群より選択したポックスウイルス、ジサッカライド、薬学的に許容可能なポリマーおよび任意に緩衝液を含む水性調合物を含む。ポックスウイルスは好ましくは精製された、または部分的に精製されたポックスウイルスである。ジサッカライド、ポリマーおよび緩衝液の好ましい量および例は、以上で概略している。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
以上で使用したような用語「調合物（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）」は、他に言及しない限り、液体調合物、好ましくは水性調合物を意味する。濃度または濃度範囲は、「ｍＭ」、「ｇ／ｌ」で定義され、そこで、これは、それぞれの調合物が液体または水性調合物 であることの示唆である。用語「水性調合物」は、希釈液が水であるような調合物を意味する。しかしながら、本発明の目的はまた、液体を除去することによって、本発明の液体または水性調合物から得ることが可能な乾燥調合物 もカバーしており、前記除去のために使用した方法には関わらない。したがって、本発明は、凍結乾燥以外の方法によって得る乾燥調合物をカバーする。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
とりわけ、本発明はさらに、本発明の調合物、特に水性調合物 を凍結乾燥することを特徴とする、安定な、ポックスウイルス含有調製物を調製するための方法に関する。本発明の明細書にて、用語「安定な、ポックスウイルス含有調製物（ｓｔａｂｌｅ，ｐｏｘｖｉｒｕｓ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」および「凍結乾燥ポックスウイルス含有調製物（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ  ｐｏｘｖｉｒｕｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」は、他に言及しない限り、相互互換的に使用される。用語「安定な、ポックスウイルス含有調製物」は、２８日間の間、３７℃でのインキュベーション温度でのウイルスタイターの総欠損が、０．５ログ以下、好ましくは０．４ログ以下である、ポックスウイルス含有調製物を定義するために使用する。ウイルスタイターを測定するための詳細なプロトコール、したがって、ウイルスタイターの総欠損を実施例項で示す。しかしながら、ウイルスタイターを決定するための任意の他のプロトコールも使用可能である。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
凍結乾燥工程は通常、以下の段階からなり、さらに詳細に以下で説明する。
１．ワクチン調製
２．試料凍結
３．第一乾燥（昇華）
４．第二乾燥（脱離）
５．生成物密封および移動（removal）
６．ワクチン保存
７．再構成
ワクチン調製：ワクチンとして使用すべきポックスウイルスの産出および増幅は、以上で詳細に説明してきた。ポックスウイルスは任意に精製される。本発明による調合物は、以上で定義したジサッカライド、ポリマーおよび任意に緩衝液、Ｌ−グルタミン酸および任意にさらなる添加物を、ポックスウイルス調製品に加えることによって得る。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５１】
試料凍結：
試料の凍結は、溶液中で成分を固定化し、それによって、圧力を低下させた時の生成物の発泡を予防する。凍結は、水をまず核とし、続いて氷結晶が発達し、結果として氷と溶質濃縮物の混合物となる、二段階工程である。温度を減少させ、冷却した懸濁液を撹拌することによって氷核化が促進される。核化と対照的に、温度を上昇させ、それによって懸濁液粘度を減少させることによって、氷の発達が促進される。正確な凍結パターンにかかわらず、培地全体での氷の増殖により、結果として、溶質濃度が増加する。溶液中または懸濁液中のバイオポリマー類は、これらの溶質の濃度の増加への曝露によってダメージを受けるか、不活性化する。急速な冷却によって、生物生成物の濃縮物への曝露が最小化される。臨界温度（ガラス転移温度）以上で、重量粘度が、ガラスが軟化および歪曲するのに十分な程減少しうる。これを乾燥させ、バイアル内で、無型の粘着性残余物が形成される。歪曲化の温度は、崩壊温度と言われる。より特別には、崩壊温度は、マトリックスの間質領域中の水の移動度が顕著になる温度として定義される。歪曲化をさけるために、凍結温度は、水性調合物の崩壊温度より低くなるべきである。崩壊温度は、例えば異なる温度解析によってのような、当業者に公知の方法によって決定可能である（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，Ｔ．Ａ．，「凍結乾燥、紹介と基本的原理（Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ．）」Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｄｅｎｖｅｒ，ＣＯ，ＵＳ，１９９９，ＩＳＢＮ  １−５７４９１−０８１−７、ページ１３２−１３４）。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５３】
棚温度は、生成物マトリックス中の氷の昇華が起こるように増加し、生成物温度が、全第一乾燥工程を通して、完全にマトリックスが凍結されることを確実にし、崩壊なしの凍結乾燥を確実とするために、調合物の崩壊温度より有意に低い温度である。温度は、全第一乾燥工程の間、一定の間、そのままでありうる。あるいは、棚温度は、第一乾燥の間、一定に増加しうる。しかしながら、生成物の温度は、全第一乾燥工程の間、崩壊温度以下でなければならない。第一乾燥の終わりで、乾燥生成物は、まだ、５％以上の湿度（ｗ／ｗ）を含みうる。生物学的増殖または化学反応をもはやサポートしない湿度を持つ生成物を得るために、第二乾燥段階を実施する必要がある。
第二乾燥（脱離）：
第二乾燥の間、水蒸気を、第二乾燥の間に形成したケーキの表面より脱離させる。これは、水がケーキ表面より脱離するように、チャンバーがまだ定圧であるまま、温度をあげることによって達成される。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
第二乾燥工程は、望む湿度が達成されるまで継続する。生成物の湿度を決定するための方法は当業者に公知である。特に、電量Ｋａｒｌ−Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定を使用可能である（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，Ｔ．Ａ．，「凍結乾燥、紹介と基本的原理（Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ．）」Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｄｅｎｖｅｒ，ＣＯ，ＵＳ，１９９９，ＩＳＢＮ  １−５７４９１−０８１−７、４１５−４１８頁）。残存する湿度は好ましくは、５％以下、より好ましくは０．５〜４％の範囲、より好ましくは１〜３％の範囲である。
生成物密封および移動：
全ての生成物含有バイアルを、当業者に公知の方法にしたがって密封する。バイアルを非常に低圧（例えば０．０４〜２．５６ｍｂａｒ）にて、直接凍結乾燥器内で密封可能である。また、窒素またはヘリウムのような化学的に不活性な気体を使用することで、ほぼ通常の圧力でバイアルを密封することも可能である。典型的には、バイアルを、９００ｍｂａｒの圧力で、窒素大気下で密封してよい。バイアルを、好ましくはブチルゴムストッパーを用いてしめる。いったん生成物を密封したならば、系を大気圧に戻すことが可能であり、棚を開放可能である。その後、バイアルをさらに長期間の保存のために、アルミニウムキャップで密封してよい。
ワクチン保存：
凍結乾燥生成物を、室温（２５℃）にて保存可能であり、少なくとも１８週間、好ましくは少なくとも２０週間以上、好ましくは少なくとも２２週間、この温度で安定性を維持する。「特定の時間の間、特定の温度で安定である（ｓｔａｂｌｅ  ａｔ  ａ  ｃｅｒｔａｉｎ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ａ  ｃｅｒｔａｉｎ  ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  ｔｉｍｅ）」は、この時間の間、この温度でのウイルスタイターの欠損が０．５ログ以下であることを意味する。しかしながら、冷却が可能である場合、凍結乾燥生成物を４℃のようなより低温で保存することが好ましい。好ましくは、生成物を暗所で保存する。不可能な場合、保存のために、着色ガラスまたは任意の他のバイアルを使用することが好ましく、これにより光への不利益な曝露を避ける。
再構成：
凍結乾燥生成物の再構成のために、適切な量の溶媒を、凍結乾燥生成物に加え、結果として、薬学的に許容な調合物を、ヒトまたは動物に投与可能にする。溶媒は好ましくは水である。通常、溶媒を、凍結乾燥工程の間における溶媒欠損量に十分に相当する量で、調合物に加える。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５９】
【表１】
2005513109.tif 000001
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
図面の簡単な説明
図１は３１℃の温度での、ＭＶＡ含有凍結乾燥調合物の安定性を示している。試験した調合物はＧＴ２３（実施例項および表６を参照のこと）である。本発明による水性調合物におけるウイルスタイターを、凍結乾燥前に測定する。凍結乾燥は、ＧＴ２３に関して記述したように作製した（実施例および表６を参照のこと）。凍結乾燥後、調合物を３１℃にて保存した。示した時間点で、凍結乾燥調合物 を再構成し、ウイルスタイターを再び測定した。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
修飾ワクシニアウイルス株アンカラ（ＭＶＡ）を含む調合物の凍結乾燥
本実施例において、ＭＶＡを含む本発明による調合物を、異なる条件下で凍結乾燥した。凍結乾燥生成物を、異なる温度で保存した。調製におけるＭＶＡの安定性を、凍結乾燥品の再構成の後にＭＶＡのタイターを測定し、凍結乾燥前のＭＶＡタイターと比較することによって解析した。ウイルスタイターにおける異なる保存時間の影響を決定した。ＭＶＡ含有調合物のタイターの決定のためのプロトコールを実施例２で示す。
１．実験設定：
ワクチン調製／調合物
本発明による凍結乾燥工程を試験するために、いくつかのＭＶＡ調製品を使用した。凍結乾燥実験（表６中、ＧＴ１〜４、６〜１０、および１３〜１５の行）のために、修飾ワクシニアウイルス株アンカラ（ＭＶＡ）を使用した。ウイルスを、３６％および４０％スクロースクッション遠心、続いてｐＨ９での１ｍＭ  Ｔｒｉｓ−緩衝液中の再懸濁によって精製した。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
【表２】
2005513109.tif 000002
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
第一乾燥の間の昇華の原動力は、その温度差によって作り出される、生成物と凍結乾燥器のコンデンサーの間の圧力差である。自然の法則としては、水の温度が減少するときに、水上の圧力も減少するということである。特定の水温はいつも特定の圧力に関係している。コンデンサーを、−８３℃〜−８９℃の範囲に設定した。チャンバー内の圧力および棚温度は、生成物温度を調節する。このことは、コンデンサーの温度が固定されているので、第一乾燥の長さは、とりわけ簡単には短くできないことを示している。生成物温度の上昇に関して、調合物のＴｃが制限因子である。
第二乾燥
第二乾燥のための温度を、生成物の安定性によって決定した。また、調合物の残存する湿度は、生成物の要求に依存する。最適な生成物安定性を得るために、時折より高い湿度、また時折低い湿度が必要である。最適な残存する湿度ならびにそれに達するまでの時間は、実験的に測定しなければならない。第二乾燥を、生成物が０℃以上の温度に達した時に開始するので、第二乾燥は２段階で実施した。第一段階において、棚温度を、生成物温度が０℃以上（４〜６℃の範囲）である様式で、数時間（４〜７時間の範囲）調節した。そのような様式で、第一乾燥の後に残っている、すべての可能性のある存在する氷が融解した。第二乾燥を開始するために、そのような穏やかな条件を使用することによって、生成物に対するダメージが最小化されうる。その後、第二段階を、生成物温度を、２０〜３０時間、１８〜２１℃の範囲の値まで上昇させることによって開始した。第二段階のための時間は、凍結乾燥生成物の必要とする残存する湿度に非常に依存する。異なる残存する湿度を得るために、異なる時間を使用した。凍結乾燥物質の残存する湿度を測定するためのアッセイとして、電量分析Ｋａｒｌ−Ｆｉｓｃｈｅｒ滴定を使用した（Ｊｅｎｎｉｎｇｓ，Ｔ．Ａ．，「凍結乾燥、紹介と基本的原理Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ．）」Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｄｅｎｖｅｒ，ＣＯ，ＵＳ，１９９９，ＩＳＢＮ  １−５７４９１−０８１−７、４１５−４１８頁）。
生成物密封および移動
処理が進行する間に産出されたすべての生成物を、凍結乾燥器内で直接、非常に低圧（０．０４〜２．５６ｍｂａｒ）下で密封した。バイアルを、ブチルゴムストッパーを用いて閉じた。いったん生成物を密封し、系を室温に戻し、棚を開放した。その後、バイアルを、長期間保存のために、アルミニウムキャップで密封した。
ワクチン保存
調合物実施の重要な観点は、棚安定なワクチンを産出することである。安定性に影響を与える因子には、残存する湿度、密封環境組成、および温度、湿度および光を含む保存条件が含まれる。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
すべての試料を暗所で保存した。
再構成
凍結乾燥試料を、オートクレーブＭｉｌｌｉ−Ｑ水にて再構成した。より特別には、水（１．２ｍｌ）を、シリンジを用いて試料に添加した。懸濁液を、穏やかに撹拌して混合した。再構成はただ数秒間だけかかった。再構成生成物のウイルスタイターを測定し、凍結乾燥前のウイルスタイターと比較した。
加速安定性試験（加速された安定性試験）
調合物ＧＴ２３（表６を参照のこと）の安定性を、３１℃、３７℃および４５℃で査定した。ウイルスタイターを、定期的にモニタした。結果を図１〜３に示している。
２．結果と結論：
ＭＶＡを、異なる添加物を使用するか、使用せずに凍結乾燥した。添加物無しの調合物は、不安定であるということが示された（表６を参照のこと）。この文中において、試料は、タイターが０．５ログ以上落ちなかった場合に安定であると考えられる。したがって、用語「特定の時間間隔で、特定の温度において安定（ｓｔａｂｌｅ  ａｔ  ａ  ｃｅｒｔａｉｎ  ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｆｏｒ  ａ  ｃｅｒｔａｉｎ  ｐｅｒｉｏｄ  ｏｆ  ｔｉｍｅ）」は、この温度でのウイルスタイターの欠損が、この時間間隔で、０．５ログ以下であることを意味している。示唆した温度での示唆した時間間隔の、ウイルスタイターの欠損が０．５ログ以上である場合に、調合物は「不合格である（ｆａｉｌ）」。デキストランおよびグルコースを含む調合物は、室温で、非常に低い安定性を示した。異なる濃度のスクロースおよびデキストランを含む、本発明による調合物が安定であることが証明された。本発明による調合物内のＭＶＡの安定性は、４℃および室温にて少なくとも２５週間である。
それぞれの実験に関する詳細な情報は、表６に記載されている。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
希釈緩衝液１（ＤＳＧ）を、ほとんどの実験で使用した。この添加物での安定性は非常に良好である。スクロースの高いＴｃ（−３１℃）のために、本調合物において、崩壊は問題ではなかった。凍結乾燥物質の安定性は、常に良好であった（表６）。調合物 中の１６．７％、２０％、２３％、２８．６％、３０％および４０％（ｖ／ｖ）ＤＳＧの使用の間に大きな差はなかった。４℃および室温での安定性が、すべての６調合物に関して証明された。３０％および４０％ＤＳＧでの凍結乾燥生成物は、わずかにより安定性を持った。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
【表３】
2005513109.tif 000003
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
古い天然痘ワクチンに関して、ＷＨＯは、安定性の見積もりのための方法を推奨した。ワクチンが３７℃にて４週間以内に１ログ以下欠損した場合、４℃で保存した時に、少なくとも１年間安定であると仮定された（古いワクチンの使用に関する採用基準は、１ログ以下の欠損であった）。示したように、本発明による式ＧＴ２３はこの基準を充たしている。
【実施例２】
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８４】
細胞を、ワクシニアウイルス特異的抗体で、感染の５日後に染色する。特異的抗体の検出のために、セイヨウワサビ  ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識二次抗体を使用する。ＭＶＡ特異的抗体は、抗ワクシニアウイルス抗体、ウサギポリクローナル、ＩｇＧ画分（カルテット（Ｑｕａｒｔｅｔｔ）、Ｂｅｒｌｉｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ  ＃９５０３−２０５７）である。二次抗体は、抗ウサギＩｇＧ抗体、ＨＲＰ標識ヤギポリクローナル（プロメガ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ、＃Ｗ４０１１）である。呈色（着色）反応は、公知の技術にしたがって実施する。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８８】
ａ＝すべての８つのウェルがポジティブである最後のカラムの希釈因子（dilution factor）。
χａ＝カラムａ＋１における陽性ウェルの数
χｂ＝カラムａ＋２における陽性ウェルの数
χｃ＝カラムａ＋３における陽性ウェルの数
表６：異なる凍結乾燥処方中のポックスウイルスの安定性データ
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８９】
【表４】
2005513109.tif 000004
表6：異なる凍結乾燥処方中のポックスウイルスの安定性データ
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９１】
2005513109.tif 000005
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９２】
2005513109.tif 000006
【図面の簡単な説明】