【手続補正書】
【提出日】平成17年8月18日(2005.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  以下の段階：
ｉ．反応体Ｉ  −−−  検体'  −−−  反応体＊
(ａ．反応体＊および反応体Ｉは検体に生物特異性を示す、
ｂ．反応体＊は分析的に検出可能である、
ｃ.検体'は検体または検体関連反応体である)
からなる複合体の形成、続く
ii．複合体中の反応体＊由来の検出可能なシグナルの測定(サンプル値)、そして
iii.サンプル量と、各々標準量の検体に対応する１個またはそれ以上の量のキャリブレーター値との比較による、サンプル中の検体の量の獲得
を含み、キャリブレーター値の測定前に、（ｉ)キャリブレーターまたは(ii)キャリブレーター用結合剤がマトリックスに結合されており、キャリブレーター用結合剤がマトリックスに結合されている場合、キャリブレーターが添加されるか、マトリックスに予め保持(deposit)されたキャリブレーターがキャリブレーター値決定時に放出され、マトリックスが反応体＊のキャリブレーターへの結合が起こる液体媒体に不溶性であることを特徴とする、生物特異的親和性反応の利用を含む、サンプル中の検体の決定の段階のための方法。
【請求項２】  キャリブレーターがキャリブレーター値の決定前にマトリックスに結合していることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】  キャリブレーター用結合剤がキャリブレーター値の決定前にマトリックスに結合していることを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項４】  該キャリブレーター用結合剤が、特異的結合対のメンバーの一方であり、特異的結合対の他のメンバーがキャリブレーターに結合または接合していることを特徴とする、請求項１または３に記載の方法。
【請求項５】  キャリブレーターおよび検体が、同等な結合部位を介して反応体＊に生物特異的に結合できる能力を有することを特徴とする、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】  ａ．マトリックスが１個またはそれ以上のキャリブレーターゾーンを呈示するフローマトリックスである(ＣＺ１、ＣＺ２、ＣＺ３等)、
ｂ．(ｉ)各キャリブレーターゾーンが検体の標準量に対応する量でキャリブレーターを含む、または
(ii)各キャリブレーターゾーンがキャリブレーター結合剤を含み、キャリブレーター結合剤の量およびキャリブレーターの量は検体の標準量に対応する、そして
ｃ．反応体＊が、反応体＊がキャリブレーターゾーンを介して輸送されることによりキャリブレーターに結合する
ことを特徴とする、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】  フローマトリックスが横向きのフローマトリックスである、請求項６記載の方法。
【請求項８】  ａ．キャリブレーターまたはキャリブレーター用結合剤を含む２個またはそれ以上のゾーンＣＺ１、ＣＺ３、ＣＺ３等が同じプロセスフローに位置し、ゾーンの少なくとも二つが検体の異なる標準量に対応する、そして
ｂ．反応体＊のマトリックスキャリブレーターへの結合のための種々のＣＺへの輸送が、このプロセスフローを介して行われる
ことを特徴とする、請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】  ａ．別々のキャリブレーターゾーン(ＣＺ)が別々のプロセスフローに位置する、そして
ｂ．反応体＊のマトリックスキャリブレーターへの結合のための種々のＣＺへの輸送が、各々のプロセスフローを介して行われる
ことを特徴とする、請求項６または７に記載の方法。
【請求項１０】  プロセスフローおよび複数のプロセスフローが、各々、検出ゾーンを欠く、そして
ｂ．複合体が、キャリブレーターゾーンを欠き、キャリブレーターゾーンと同じタイプのマトリックスに存在するプロセスフローの検出ゾーンで形成される
ことを特徴とする、請求項８または９に記載の方法。
【請求項１１】  マトリックスがフローマトリックスであり、一つの同じプロセスフローに沿って
ａ．各々がマトリックスキャリブレーターまたはマトリックスキャリブレーター結合剤を呈示する１個またはそれ以上のキャリブレーターゾーン(ＣＺ)、
ｂ．いずれもキャリブレーターゾーンと同位置でなく、捕獲体が堅く固定され、それが反応体Ｉまたは反応体Ｉに生物特異的に直接的または間接的に結合できる生物特異的親和性反応体である、１個またはそれ以上の検出ゾーン、
ｃ．ＣＺおよびＤＺの上流に位置し、それに反応体＊が予め保持し得る反応体＊適用ゾーンＡＲ＊Ｚ、
ｄ．ｉ．検出ゾーンの上流または同位置
ii．ＡＲ＊Ｚの下流または上流または同位置(ＡＳＺ／ＡＲ＊Ｚ)
iii.キャリブレーターゾーンの上流、下流または同位置
に位置するサンプル適用ゾーン(ＡＳＺ)
が存在することを特徴とし、好ましくは、サンプル適用ゾーン(ＡＳＺ)は検出およびキャリブレーターゾーンの両方の上流に位置し、反応体＊が予め保持されていない場合、反応体＊がＡＲ＊Ｚに添加されるか、反応体＊が予め保持している場合、緩衝液がＡＲ＊Ｚに添加され、サンプルがＡＳＺに添加され、所望により、ＡＳＺおよびＡＲ＊Ｚが同一である場合、検体および反応体＊が同時にＤＺに到着するように、または検体がＤＺに反応体＊の前に到着するように予め混合されている、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】  キャリブレーターゾーンまたはゾーン群(ＫＺ)がキャリブレーター結合剤を呈示し、キャリブレーターがキャリブレーターゾーンまたはゾーン群の上流に予め保持されていることを特徴とする、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】  プロセスフローが２個またはそれ以上の該キャリブレーターゾーンを含むことを特徴とする、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１４】  プロセスフローが１個または２個の該キャリブレーターゾーンを含み、サンプル中の検体のレベルを：
ａ．１個またはそれ以上の別々に得られたキャリブレーター値への接近、そして
ｂ．該検出ゾーンと同じプロセスフローに位置するキャリブレーターゾーンのキャリブレーター値(陽性内部キャリブレーター＝PIC)の、１個またはそれ以上の別々に得たキャリブレーター値との比較、
ｃ．検出ゾーンからの測定シグナルの、別々のキャリブレーター値由来のＰＩＣの測定シグナルの偏差への適用、および、続く
ｄ．１個またはそれ以上の別々に得たキャリブレーター値との比較による、サンプル中の検体のレベルの獲得
(または段階ｃおよびｄに関して、何を適合させ、何を比較するかは逆であることものある)
により得ることを特徴とする、請求項１１または１２に記載の方法。
【請求項１５】  ａ．ＡＳＺは(ｉ)ＡＲ＊Ｚと共通である(＝ＡＳＺ／ＡＲ＊Ｚ)または(ii)ＡＲ＊Ｚの上流に位置する、そして
ｂ．（ｉ)の別法として、共通ゾーンＡＳＺ／ＡＲ＊Ｚに添加される前にサンプルが反応体＊と予め混合されている、またはサンプルを予備保持した反応体＊を含む共通ゾーンＡＳＺ／ＡＲ＊Ｚに適合させ、(ii)の別法として、サンプルをＡＲ＊Ｚの上流に位置し、それが予め保持した反応体＊を含むＡＳＺに添加する
ことを特徴とする、請求項１１から１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】  検出ゾーンが粒子を介してマトリックスに固定されている場合、反応体＊が分析的に検出可能な基および／またはキャリブレーターまたはキャリブレーター結合剤および／または捕獲体の粒子を有することを特徴とする、請求項６から１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】  検体が反応体Ｉまたは反応体＊に方向付けされた抗体であり、
ａ．検体が反応体Ｉに方向付けされた抗体である場合、反応体＊が検体に方向付けされた抗体であり、反応体Ｉが抗原／ハプテンである、そして
ｂ．検体が反応体＊に方向付けされた抗体である場合、反応体＊が抗原またはハプテンであり、反応体Ｉが検体に方向付けされた抗体である
ことを特徴とする、請求項１から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】  検体が抗原であり、反応体＊および反応体Ｉが検体に方向付けされた抗体であることを特徴とする、請求項１から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】  方法をアレルギーまたは自己免疫疾患の診断の一部として行うことを特徴とする、請求項１から１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】  キットが：
ａ  反応体＊の輸送のためのプロセスフローの領域があるフローマトリックス、そして該領域は
ｉ．マトリックスに堅く固定されたキャリブレーター、またはキャリブレーター用結合剤を含む１個またはそれ以上のキャリブレーターゾーン(ＣＺ１、ＣＺ２等)(キャリブレーターまたはキャリブレーター結合剤の量が各々少なくとも二つのキャリブレーターゾーンに関して異なり、キャリブレーターは、反応体＊がキャリブレーターゾーンを通って輸送されるとき、反応体＊が結合し得る結合部位を呈示する)
ii．該１個またはそれ以上のキャリブレーターゾーンの上流に位置する反応体＊の適用ゾーン(ＡＲ＊Ｚ)
を呈示することを特徴とする、サンプル中の検体の量に比例した量で反応体＊を含む複合体を形成させることによる、複合、分析的検出可能反応体(＝反応体＊)に関連する測定シグナル値を、サンプル中の検体の量の測定のために生物特異的親和性反応を用いる分析法の実施に関連して、サンプル中の検体の実際の量に変えるための装置。
【請求項２１】  キャリブレーター結合剤がマトリックスに堅く固定され、装置がキャリブレーターゾーンの上流、例えば、ＡＳＺに予め保持しているキャリブレーターを含むことを特徴とする、請求項２０記載の装置。
【請求項２２】  装置がＡＲ＊Ｚに予め保持された反応体＊を含むことを特徴とする、請求項２０または２１記載の装置。
【請求項２３】  プロセスフローがＡＲ＊Ｚの下流または同位置に位置する検出ゾーン(ＤＺ)、それを介して反応体＊がＤＺに結合できる堅く固定された捕獲体、および該ＤＺの上流または同位置に位置するサンプル適用ゾーンＡＳＺを含むことを特徴とする、請求項２０、２１または２２に記載の装置。
【請求項２４】  ＡＲ＊ＺがＡＳＺの上流または下流または同位置に位置し、上流または下流位置が好ましいことを特徴とする、請求項２３に記載の装置。
【請求項２５】  堅く固定された反応体(捕獲体)が検体または検体関連反応体に生物特異的親和性を有することを特徴とする、請求項２３から２４のいずれかに記載の装置。
【請求項２６】  堅く固定された反応体(捕獲体)が、検体または検体関連反応体に生物特異的親和性を有する第２反応体に生物特異的親和性を有することを特徴とする、請求項２３から２４のいずれかに記載の装置。
【請求項２７】  該１個またはそれ以上のキャリブレーターゾーンがＤＺの上流に位置することを特徴とする、請求項２３から２６のいずれかに記載の装置。
【請求項２８】  ＡＳＺが全てのキャリブレーターゾーンの上流に位置することを特徴とする、請求項２３から２７のいずれかに記載の装置。
【請求項２９】  請求項２０から２８のいずれかに記載の装置を含むことを特徴とする、キット。
【請求項３０】  キットが反応体＊を含むことを特徴とする、請求項２９記載のキット。
【請求項３１】  該装置がマトリックスに結合したキャリブレーター結合剤を有するとき、キットがキャリブレーターを含むことを特徴とする、請求項２９または３０記載のキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
プロセスフロー
流れの方向は、サンプルおよび／または反応体の適用ゾーンから、存在するキャリブレーターおよび検出ゾーン(各々ＣＺおよびＤＺ)に向かう。正確にプロセスフローがどのゾーンを通過するかは当該試験プロトコールにより決定される。プロセスフローは放射状に広がり、円形周辺の形の流れ先端の点またはその一部から出発し得る。プロセスフローはまたバンドの形のゾーンから出発し得、流れの方向に垂直の真直ぐな流れ先端を有し得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
フローマトリックスのキャリブレーターおよび検出ゾーン
好ましい態様で使用するフローマトリックスは、キャリブレーターを備えた１個またはそれ以上の別のゾーンを有する(キャリブレーターゾーン、ＣＺ１、ＣＺ２、ＣＺ３等)。各キャリブレーターゾーンは、流れが通過したときにゾーン内で検出する反応体＊からの測定シグナル(キャリブレーター値)が、サンプル中の一定量(標準量)に明白に対応するような量でマトリックスキャリブレーターに含まれる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
反応体Ｉが溶解形で存在する場合、検出ゾーンに堅く固定された捕獲体が存在するのと同時に、マトリックスはその適用ゾーンを有する。捕獲体が反応体Ｉと結合するために付加的な生物特的親和性反応体を必要とする場合(下記“技術分野”参照)、これらの反応体の適用ゾーンが存在する。捕獲体でないとき、反応体Ｉおよび他の付加的反応体の適用ゾーンは、反応体Ｉが検体'の前にまたは同時に検出ゾーンに到達するように位置しなければならない。反応体Ｉが可溶性形である場合、捕獲体は好ましくは特異的結合対の一つのメンバーであり、その他のメンバーは反応体Ｉに結合または接合している。例示的な特異的結合対は、抗原−抗体およびハプテン−抗体、ビオチン−アビジンまたは−ストレプトアビジン、レクチン−糖、ホルモン−ホルモンレセプター、核酸二本鎖のような免疫学的結合対である。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
関連試験プロトコール
本発明は、主に非競合的(非阻害)試験変法に適応されるが、複合体が反応体Ｉと反応体＊の間の検体関連反応体を形成させることを含む場合、競合的(阻害)試験変法にも適用し得る。プロトコールは同時または連続変法として流し得る。同時法は、反応体＊および検体'が、検出ゾーンに向かって少なくとも輸送の間の一部分同時輸送され、好ましくは後者に同時に到達することを意味する。連続法は、検体'が、検出ゾーンに向かう輸送の少なくとも一部分、反応体＊の前を移動し、好ましくは検出ゾーンに反応体＊の前に到着することを意味する。説明的例示は下記に示す。“−”は最初からのマトリックスへの堅い固定に関する。“−−−”は生物特異的親和性を介した結合に関する。反応体が利用する結合部位に関して単官能性であることが仮定される。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
実施例
実施例１：炭素粒子接合体およびマトリックスに結合したキャリブレーターによる樺(birch)特異的ＩｇＥの測定
方法および材料
フェニルデキストランのポリスチレン粒子への吸着：
フェニルデキストラン(置換度：５個のモノサッカライド単位当り１フェニル基＝２０％、Ｍｗデキストラン４０,０００、Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Sweden)をポリスチレン粒子(０.４９μｍ Bangs Laboratories, USA)に、脱イオン化水に、１)５mg／ml、１０％粒子懸濁液、RT  １ｈ、２)５mg／ml、５％粒子懸濁液、ＲＴ  １ｈ、３)２０mg／ml、１％粒子懸濁液、ＲＴ一晩、１５ｈで撹拌下溶解させたフェニルデキストランとインキュベーションすることにより吸着させた。粒子を続いて２回脱イオン水で洗浄した。粒子懸濁液を各インキュベーション間に遠心し、洗浄した(１２,１００×ｇ、２５分、Beckman, J-21, JA-20, 10,000rpm)。粒子懸濁液を最後に超音波処理した(超音波浴、Branson 5210, 5分)。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
ｔ３粒子の検出ゾーン内の膜への保持：ポリエステル裏打ちのあるニトロセルロースのシート(Whatman, ８μm、５cm幅)上に、４％の上記の結合粒子を、直線ゾーンとして１μl／ｓおよび１μl／cmの流れで、Linear Striper(IVEK Corporation)で適用した。シートを１時間、３０℃で乾燥させ、その上でシートをゾーンに対する適当な角度で、０.５cm切片に切断した(Matrix 1201 Membrane Cutter, Kinematics Automation)。