【手続補正書】
【提出日】平成18年10月6日(2006.10.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）活性ＰＥＰ−グルコースリン酸転移酵素系タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ホスホエノールピルベート−グルコースリン酸転移酵素系、
ｂ）活性ガラクトース−プロトン同伴輸送体をコードするアップレギュレートされた内在性ｇａｌＰ遺伝子、
ｃ）活性グルコキナーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｇｌｋ遺伝子、および
ｄ）活性グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼをコードするダウンレギュレートされた内在性ｇａｐＡ遺伝子
を含むことを特徴とする大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株。
【請求項２】
適切な条件下で、請求項１に記載の大腸菌株を適切な炭素基材と接触させるステップを含むことを特徴とする１，３−プロパンジオールの生物生産方法。
【請求項３】
ａ）活性ＰＥＰ−グルコースリン酸転移酵素系タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ホスホエノールピルベート−グルコースリン酸転移酵素系、
ｂ）活性ガラクトース−プロトン同伴輸送体をコードするアップレギュレートされた内在性ｇａｌＰ遺伝子、
ｃ）活性グルコキナーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｇｌｋ遺伝子、
ｄ）活性グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼをコードするダウンレギュレートされた内在性ｇａｐＡ遺伝子、
ｅ）活性有気呼吸制御タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ａｒｃＡ遺伝子、
ｆ）活性ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｐｐｃ遺伝子、
ｇ）活性ｃｏｂ（Ｉ）アラミンアデノシルトランスフェラーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｂｔｕＲ遺伝子、
ｈ）活性アルコールデヒドロゲナーゼをコードするアップレギュレートされたｙｑｈＤ遺伝子、
ｉ）活性メチルグリオキサールシンターゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｍｇｓＡ遺伝子、
ｊ）活性酢酸キナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ａｃｋＡ遺伝子、
ｋ）活性ホスホトランスアセチラーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｐｔａ遺伝子、
ｌ）活性アルデヒドデヒドロゲナーゼＡの発現を妨げる撹乱された内在性ａｌｄＡ遺伝子、
ｍ）活性アルデヒドデヒドロゲナーゼＢの発現を妨げる撹乱された内在性ａｌｄＢ遺伝子、
ｎ）活性ホスホグルコン酸デヒドラターゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｅｄｄ遺伝子、
ｏ）活性グリセロールキナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｇｌｐＫ遺伝子、
ｐ）活性ＮＡＤＨ−依存性グリセロールデヒドロゲナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｇｌｄＡ遺伝子、および
ｑ）ｐＳＹＣＯコンストラクト配列番号：６５、６６、６７、または６８のヌクレオチド配列のいずれか１つ
を含むことを特徴とする大腸菌株。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４８】
（実施例１７Ｂ）
（菌株ＴＴ／ｐＳＹＣＯ１０９によるグリセロール生産）
一般方法で述べたようにして、以下の異なる発酵槽の調節パラメータで、１４Ｌ発酵槽中でグリセロール生産を判定した。５０ｍｇ／Ｌのスペクチノマイシン添加ＬＢプレート上のＴＴ／ｐＳＹＣＯ１０９の単一コロニーを２５０ｍＬフラスコ内の１００ｍｇ／Ｌスペクチノマイシン添加３０ｍＬのＬＢに移した。ＯＤ５５０がほぼ１  ＡＵになったとき、１０．８ｍＬの培養を使用して上述のように調製した発酵槽を接種した。発酵槽にビタミンＢ１２は添加しなかった。典型的発酵からは、モル収率１３７％で３０２ｇ／Ｌのグリセロールの生産がもたらされた。
本発明は、特許請求の範囲に記載の発明を含め、以下の発明を包含する。
（１）  ａ）活性ＰＥＰ−グルコースリン酸転移酵素系タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ホスホエノールピルベート−グルコースリン酸転移酵素系、
ｂ）活性ガラクトース−プロトン同伴輸送体をコードするアップレギュレートされた内在性ｇａｌＰ遺伝子、
ｃ）活性グルコキナーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｇｌｋ遺伝子、および
ｄ）活性グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼをコードするダウンレギュレートされた内在性ｇａｐＡ遺伝子
を含むことを特徴とする大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株。
（２）  前記撹乱された内在性ホスホエノールピルベート−グルコースリン酸転移酵素系が、
ｉ）活性ホスホキャリアタンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ｐｔｓＨ遺伝子、
ｉｉ）活性ホスホエノールピルベート−タンパクリン酸転移酵素の発現を妨げる撹乱された内在性ｐｔｓＩ遺伝子、および
ｉｉｉ）活性グルコース−特異的ＩＩＡ構成要素の発現を妨げる撹乱された内在性ｃｒｒ遺伝子
の１つまたは複数を含むことを特徴とする（１）に記載の大腸菌株。
（３）  ｅ）活性有気呼吸制御タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ａｒｃＡ遺伝子、
ｆ）活性ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｐｐｃ遺伝子、
ｇ）活性ｃｏｂ（Ｉ）アラミンアデノシルトランスフェラーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｂｔｕＲ遺伝子、および
ｈ）活性アルコールデヒドロゲナーゼをコードするアップレギュレートされたｙｑｈＤ遺伝子
の１つまたは複数をさらに含むことを特徴とする（１）または（２）に記載の大腸菌株。
（４）  ｉ）活性メチルグリオキサールシンターゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｍｇｓＡ遺伝子、
ｊ）活性酢酸キナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ａｃｋＡ遺伝子、
ｋ）活性ホスホトランスアセチラーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｐｔａ遺伝子、
ｌ）活性アルデヒドデヒドロゲナーゼＡの発現を妨げる撹乱された内在性ａｌｄＡ遺伝子、および
ｍ）活性アルデヒドデヒドロゲナーゼＢの発現を妨げる撹乱された内在性ａｌｄＢ遺伝子
の１つまたは複数をさらに含むことを特徴とする（１）、（２）、または（３）に記載の大腸菌株。
（５）  ｎ）活性ホスホグルコン酸デヒドラターゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｅｄｄ遺伝子、
ｏ）活性グリセロールキナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｇｌｐＫ遺伝子、および
ｐ）活性ＮＡＤＨ−依存性グリセロールデヒドロゲナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｇｌｄＡ遺伝子
の１つまたは複数をさらに含むことを特徴とする（１）、（２）、（３）、または（４）に記載の大腸菌株。
（６）  適切な条件下で、（１）、（２）、（３）、（４）または（５）に記載の大腸菌株を適切な炭素基材と接触させるステップを含むことを特徴とする１，３−プロパンジオールの生物生産方法。
（７）  前記大腸菌株が
（ｉ）グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、
（ｉｉ）グリセロール−３−ホスファターゼ、
（ｉｉｉ）デヒドラターゼ、および
（ｉｖ）デヒドラターゼ再活性化因子
をさらに含むことを特徴とする（６）に記載の方法。
（８）  ａ）活性ＰＥＰ−グルコースリン酸転移酵素系タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ホスホエノールピルベート−グルコースリン酸転移酵素系、
ｂ）活性ガラクトース−プロトン同伴輸送体をコードするアップレギュレートされた内在性ｇａｌＰ遺伝子、
ｃ）活性グルコキナーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｇｌｋ遺伝子、
ｄ）活性グリセルアルデヒド３−リン酸デヒドロゲナーゼをコードするダウンレギュレートされた内在性ｇａｐＡ遺伝子、
ｅ）活性有気呼吸制御タンパクの発現を妨げる撹乱された内在性ａｒｃＡ遺伝子、
ｆ）活性ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｐｐｃ遺伝子、
ｇ）活性ｃｏｂ（Ｉ）アラミンアデノシルトランスフェラーゼをコードするアップレギュレートされた内在性ｂｔｕＲ遺伝子、
ｈ）活性アルコールデヒドロゲナーゼをコードするアップレギュレートされたｙｑｈＤ遺伝子、
ｉ）活性メチルグリオキサールシンターゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｍｇｓＡ遺伝子、
ｊ）活性酢酸キナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ａｃｋＡ遺伝子、
ｋ）活性ホスホトランスアセチラーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｐｔａ遺伝子、
ｌ）活性アルデヒドデヒドロゲナーゼＡの発現を妨げる撹乱された内在性ａｌｄＡ遺伝子、
ｍ）活性アルデヒドデヒドロゲナーゼＢの発現を妨げる撹乱された内在性ａｌｄＢ遺伝子、
ｎ）活性ホスホグルコン酸デヒドラターゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｅｄｄ遺伝子、
ｏ）活性グリセロールキナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｇｌｐＫ遺伝子、
ｐ）活性ＮＡＤＨ−依存性グリセロールデヒドロゲナーゼの発現を妨げる撹乱された内在性ｇｌｄＡ遺伝子、および
ｑ）ｐＳＹＣＯコンストラクト配列番号：６５、６６、６７、または６８のヌクレオチド配列のいずれか１つ
を含むことを特徴とする大腸菌株。