【手続補正書】
【提出日】平成17年4月27日(2005.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カロチノイドの供給源における遊離のカロチノイドの画分を増大するための方法であって、ここでこのカロチノイドの少なくともいくつかが、脂肪酸エステル化カロチノイドである方法であって、脂肪酸エステル化カロチノイドを脱エステル化するのに有効な条件下で、このカロチノイドの供給源と有効量のエステラーゼとを接触させ、これによって、このカロチノイドの供給源における遊離のカロチノイドの画分を増大する工程を包含する方法であって、脂肪酸エステル化カロチノイドを脱エステル化するのに有効な前記条件が、以下の群より選択される少なくとも１つの添加物の添加を特徴とする方法：
セルロース分解酵素；
タンパク質分解酵素；
ペクチン分解酵素；
乳化剤；および
少なくとも１つの金属イオン。
【請求項２】
カロチノイドの前記供給源は、カロチノイドの前記供給源におけるカロチノイドの大部分が前記脂肪酸エステル化カロチノイドである請求項１の方法。
【請求項３】
カロチノイドの前記供給源は、トウガラシである請求項１の方法。
【請求項４】
カロチノイドの前記供給源は、トウガラシ粉末である請求項１の方法。
【請求項５】
カロチノイドの前記供給源は、パプリカである請求項１の方法。
【請求項６】
カロチノイドの前記供給源は、トウガラシオイル抽出物である請求項１の方法。
【請求項７】
カロチノイドの前記供給源は、トウガラシオレオレジンである請求項１の方法。
【請求項８】
カロチノイドの前記供給源は、リンゴ、アンズ、アボガド、ブラッドオレンジ、シマホオズキ、カランボラ、チリ、クレメンタイン、キンカン、ビワ、マンゴー、ミネオーラ、ネクタリン、オレンジ、パパイア、桃、カキ、プラム、ジャガイモ、カボチャ、タンジェリンおよびズッキーニからなる群より選択される請求項１の方法。
【請求項９】
前記エステラーゼは、リパーゼ、カルボキシルエステルエステラーゼ、およびクロロフィラーゼからなる群より選択される請求項１の方法。
【請求項１０】
前記エステラーゼは、リパーゼである請求項１の方法。
【請求項１１】
前記リパーゼは、細菌のリパーゼ、酵母のリパーゼ、カビのリパーゼ、および動物のリパーゼからなる群より選択される請求項１０の方法。
【請求項１２】
前記エステラーゼは固定される請求項１の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの金属イオンは、Ｃａ＋＋、およびＮａ＋からなる群より選択される請求項１の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの金属イオンの添加は、前記金属イオンの少なくとも１つの塩の添加による請求項１の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの塩は、ＣａＣｌ２およびＮａＣｌからなる群より選択される請求項１４の方法。
【請求項１６】
前記セルロース分解酵素は、Ｃ１型β−１，４グルカナーゼ、エキソ−β−１，４グルカナーゼ、エンド−β−１，４−グルカナーゼ、およびβグルコシダーゼからなる群より選択される請求項１の方法。
【請求項１７】
前記タンパク質分解酵素は、トリプシン、パパイン、キモトリプシン、フィシン、ブロメリン、カテプシン、およびレンニンからなる群より選択される請求項１の方法。
【請求項１８】
前記ペクチン分解酵素は、ペクチンステラーゼ、ペクチン酸リアーゼ、およびポリガラクトロナーゼからなる群より選択される請求項１の方法。
【請求項１９】
前記乳化剤は、非エステル乳化剤である請求項１の方法。
【請求項２０】
前記乳化剤は、レシチンである請求項１９の方法。
【請求項２１】
前記乳化剤は、デオキシコール酸塩である請求項１９の方法。
【請求項２２】
前記乳化剤は、非イオン性界面活性剤である請求項１９の方法。
【請求項２３】
前記乳化剤は、胆汁、アラビアゴム、または遊離脂肪酸の塩に由来する請求項１９の方法。
【請求項２４】
カロチノイドの供給源から遊離のカロチノイドを抽出する工程をさらに包含する請求項１の方法。
【請求項２５】
遊離のカロチノイドの増大した画分を有し、かつ請求項１の方法によって生成されるカロチノイドの供給源。
【請求項２６】
請求項２５のカロチノイドの供給源を含む食品添加物。
【請求項２７】
請求項２５のカロチノイドの供給源を含む飼料添加物。
【請求項２８】
トウガラシオレオレジンを抽出する方法であって：
水中のトウガラシの実をジュースにホモジナイズする工程；
ペレットを得るためにこのジュースを遠心分離する工程；
このペレットをエタノールおよび酢酸エチルと混合する工程；
このペレットをエタノールおよび酢酸エチルとホモジナイズする工程；
乾燥材料を除去する工程；ならびに
トウガラシオレオレジンを得るために溶媒をエバポレートする工程
を包含する方法。
【請求項２９】
前記トウガラシの実と前記水との間の重量比は、水２０〜６０部に対して実が８０〜１２０部である請求項２８の方法。
【請求項３０】
前記トウガラシの実は凍結される請求項２８の方法。
【請求項３１】
前記トウガラシの実は新鮮である請求項２８の方法。
【請求項３２】
前記ジュースは、２０，０００〜３０，０００ｇで１０〜３０分間、遠心分離される請求項２８の方法。
【請求項３３】
前記ペレットは、前記エタノールの１〜３部、および前記酢酸エチルの５〜１５部と混合される請求項２８の方法。
【請求項３４】
前記乾燥材料を除去する工程は、遠心分離による請求項２８の方法。
【請求項３５】
前記溶媒をエバポレートする工程は、４０〜５０℃である請求項２８の方法。
【請求項３６】
前記溶媒をエバポレートする工程は、４０〜５０℃であり、かつ減圧下である請求項２８の方法。
【請求項３７】
前記溶媒をエバポレートする工程は、減圧下である請求項２８の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
総カロチノイドのほとんどは、集光性複合体ＩＩに位置する［Ｂａｓｓｉ  Ｒ、Ｐｉｎｅａｗ  Ｂ、Ｄａｉｎｅｓｅ  Ｐ、およびＭａｒｑｕａｒｔｔ  Ｊ（１９９３）Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  ｐｈｏｔｏｓｙｓｔｅｍ  ＩＩ．Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ２１２：２９７〜３０２］。光合成的に活性なカロチノイドタンパク質の同定および集光系におけるそれらの正確な位置は未知である。好熱性藍色細菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．の光合成的に活性なクロロフィル−タンパク質複合体におけるカロチノイドを、指向性サンプルの線形二色性分光法によって検討した［以下を参照のこと：Ｂｒｅｔｏｎ  Ｊ、およびＫａｔｏ  Ｓ（１９８７）Ｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｉｇｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｐｈｏｔｏｓｙｓｔｅｍ  ＩＩ：ｌｏｗ−ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ  ｌｉｎｅａｒ−ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ｃｏｒｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ａｎｄ  ｏｆ  ｉｔｓ  ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｕｂｕｎｉｔｓ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ［８９２］：［９９〜１０７］］。これらの複合体は、主に、膜の面に対して密接に方向付けられる、βカロチンプール（約５０５および４７０ｎｍを吸収する）を含んだ。光合成的に不活性なクロロフィル−タンパク質複合体において、βカロチンは、約４９５ｎｍ、および４６５ｎｍを吸収し、そしてこの分子は膜平面に垂直に方向付けられる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
カロチノイドが、藍色細菌光化学系（ＰＳ）ＩＩに関連するという証拠が記載されている［以下を参照のこと：Ｓｕｚｕｋｉ  Ｒ、およびＦｕｊｉｔａ  Ｙ（１９７７）Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  ｐｈｏｔｏｂｌｅａｃｈｉｎｇ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｅｎｔｅｒ  ＩＩ：ＤＣＭＵ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ．Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １８：６２５〜６３１；ならびに，Ｎｅｗｍａｎ  ＰＪ、およびＳｈｅｒｍａｎ  ＬＡ（１９７８）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｈｏｔｏｓｙｓｔｅｍ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｂｌｕｅ−ｇｒｅｅｎ  ａｌｇａ  Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｅｄｒｏｒｕｍ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ５０３：３４３〜３６１］。ＰＳ  ＩＩの反応中心コアには２つのβカロチン分子が存在する［以下を参照のこと：Ｏｈｎｏ  Ｔ、Ｓａｔｏｈ  Ｋ、およびＫａｔｏｈ  Ｓ（１９８６）Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ｏｘｙｇｅｎ−ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃ  ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ８５２：１〜８；Ｇｏｕｎａｒｉｓ  Ｋ，Ｃｈａｐｍａｎ  ＤＪ  ａｎｄ  Ｂａｒｂｅｒ  Ｊ（１９８９）Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｄ１／Ｄ２／ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ  ｂ−５５９  ｃｏｍｐｌｅｘ  ｆｒｏｍ  Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ  ＰＣＣ６８０３．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ９７３：２９６〜３０１；および、Ｎｅｗｅｌｌ  ＲＷ，ｖａｎ  Ａｍｅｒｏｎｇｅｎ  Ｈ，Ｂａｒｂｅｒ  Ｊ、およびｖａｎ  Ｇｒｏｎｄｅｌｌｅ  Ｒ（１９９３）Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｅｎｔｅｒ  ｏｆ  ｐｈｏｔｏｓｙｓｔｅｍ  ＩＩ  ｕｓｉｎｇ  ｐｏｌａｒｉｚｅｄ  ｌｉｇｈｔ：Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  β−ｃａｒｏｔｅｎｅ  ｅｘｃｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ＰＳ  ＩＩ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｅｎｔｅｒｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  １０５７：２３２〜２３８］。このＰＳＩＩの反応中心コアの正確な機能は、依然として不明確である［これは、以下によって概説されている：Ｓａｔｏｈ  Ｋ（１９９２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＰＳ  ＩＩ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｅｎｔｅｒ．、Ｍｕｒａｔａ  Ｎ（編）Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｉｎ  Ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２巻，３〜１２頁．Ｋｌｕｗｅｒ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ］。これらの２つのカップリングしたβカロチン分子は、単離されたＰＳ  ＩＩ反応中心における光損傷からクロロフィルＰ６８０を保護することが実証されており［以下を参照のこと：Ｄｅ  Ｌａｓ  Ｒｉｖａｓ  Ｊ、Ｔｅｌｆｅｒ  Ａ、およびＢａｒｂｅｒ  Ｊ（１９９３）２−ｃｏｕｐｌｅｄ  β−ｃａｒｏｔｅｎｅ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｐｒｏｔｅｃｔ  Ｐ６８０  ｆｒｏｍ  ｐｈｏｔｏｄａｍａｇｅ  ｉｎ  ｉｓｏｌａｔｅｄ  ＰＳ  ＩＩ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｃｅｎｔｅｒｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１４２：１５５〜１６４］、そしてこのことは、ＰＳ  ＩＩのＤ１サブユニットの分解に対する保護に関連し得る［以下を参照のこと：Ｓａｎｄｍａｎｎ  Ｇ（１９９３）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  ｅｎｚｙｍｅｓ  ｉｎｖｏｌｖｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｄｅｓａｔｕｒａｔｉｏｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｆｒｏｍ  ｐｈｙｔｏｅｎｅ  ｔｏ  ｌｙｃｏｐｅｎｅ．（抄録），第１０回国際カロチノイドシンポジウム、トロンヘイム  ＣＬ１−２］。高度に精製された、好熱性藍色細菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｕｓ  ｓｐ．の酸素発生ＰＳＩＩ複合体の集光性色素は、５０個のクロロフィルａおよび７個のβカロチン分子からなるのであって、キサントフィル分子からなるのではない［以下を参照のこと：Ｏｈｎｏ  Ｔ、Ｓａｔｏｈ  Ｋ、およびＫａｔｏｈ  Ｓ（１９８６）Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ｏｘｙｇｅｎ−ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃ  ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．Ｂｉｏｃｈｉｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ８５２：１〜８］。βカロチンは、緑藻類における活性なＰＳ  ＩＩの構築において役割を果たすことが示されている［以下を参照のこと：Ｈｕｍｂｅｃｋ  Ｋ、Ｒｏｍｅｒ  Ｓ、およびＳｅｎｇｅｒ  Ｈ（１９８９）Ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ａｓｓｅｍｂｌｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｃｔｉｖｅ  ＰＳ  ＩＩ．Ｐｌａｎｔａ  １７９：２４２〜２５０］。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
結腸癌：
結腸癌は、癌の３番目に最も一般的な形態であり、世界中の１年間の新しい症例の全体的推定は、全ての新しい癌症例の約１０％に相当する。この疾患は、イスラエルを含む西洋人の国で最も頻度が多い。疫学的研究によって、結腸癌の疫学における食餌の主な役割が強調された。疫学的研究および実験的研究において病原体または保護因子を同定する試みによって、いくつかの矛盾がもたらされた。それにもかかわらず、結腸直腸癌コントロールのための展望は、明るく、多数の可能性のあるアプローチが有意義であることが証明されている。Ｂｒａｓら（１９９９）は近年、家族性腺腫様ポリポーシス患者において、結腸直腸癌を高度に発症しやすい集団は、酸化促進状態／抗酸化状態の不均衡を示すことを実証した。さらに、アスコルビン酸塩およびトコフェノールのレベルは、この集団ではかなり低かった。Ｃｏｌｌｉｎｓら（１９９８）は、異なる欧州の５カ国からの集団において、リンパ球ＤＮＡにおける平均８−オキソデオキシグアノシン（８−オキソ−ｄＧ）濃度が、結腸直腸癌と有意な正の相関を示したことを示した。慢性の癌を有する患者は、健康な被験体に比べてそれらの抗酸化の余裕の有意な減少があることが理解される。これらの研究によって、結腸直腸癌における保護因子を同定するためのアプローチの１つは、平衡のとれた酸化状態を提供するか、または抗酸化仮説をあてはめるアプローチであるという概念が支持される。この仮説によって、果実および野菜に存在するビタミンＣ、ビタミンＥ、およびカロチノイドは、脂質およびＤＮＡに対する酸化的損傷を防止することによって癌に対する保護を提供するということが提唱される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２８】
実施例１
材料および実験の手順
材料：
パプリカ粉末およびオレオレジンパプリカは、Ｔａｖｌｉｎｅｉ−Ｈａｎｅｇｅｖ，Ａｖｓｈａｌｏｍから購入した。リン酸ナトリウム、クエン酸、ＴＷＥＥＮ−２０（ポリオキシエチレンソルビタンノモラウレート）、および水酸化カリウムは、Ｍｅｒｃｋ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。デオキシコール酸（ナトリウム塩）、ＢＨＴ（ブチル化ヒドロキシトルエン）、ブタ由来の膵臓リパーゼを、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ）から入手した。酵素、リパーゼＡ「Ａｍａｎｏ  ６」、リパーゼＦ−ＡＰ１５、およびリパーゼＡＹ「Ａｍａｎｏ  ３０」（ヒトでの使用に承認された）は、天野製薬株式会社（Ａｍａｎｏ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏ．ＬＴＤ（錦、日本）Ｎｉｓｈｉｋｉ，Ｊａｐａｎ）から入手した。ペクチナーゼ／セルラーゼ、Ｒｏｈａｍｅｕｔ  Ｍａｘ、およびプロテアーゼ（Ｃｏｒａｌａｓｅ  ＰＮ−Ｌ）を、Ｒｏｈｍ  Ｅｎｚｙｍｅ  ｇｍｂｈ（Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）から入手した。ＨＰＬＣ等級のエタノールおよびヘキサンをＢｉｏｌａｂ（Ｉｓｒａｅｌ）から、そしてＨＰＬＣ用アセトンをＢａｋｅｒ（Ｄｅｖｅｎｔｅｒ，Ｈｏｌｌａｎｄ）から入手した。