【手続補正書】
【提出日】平成18年4月13日(2006.4.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された二本鎖ＲＮＡ分子であって、各ＲＮＡ鎖が１９〜２５塩基長を有し、少なくとも１つの鎖が１〜５塩基からなる３’突出部を有するものであり、該ＲＮＡ分子は標的特異的な核酸改変が可能なものである、上記ＲＮＡ分子。
【請求項２】
標的特異的ＲＮＡ干渉および／またはＤＮＡメチル化が可能である、請求項１に記載のＲＮＡ分子。
【請求項３】
各鎖が、１９〜２３、特に２０〜２２塩基長を有する、請求項１または２に記載のＲＮＡ分子。
【請求項４】
３’突出部が１〜３塩基からなる、請求項１〜３のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子。
【請求項５】
３’突出部が分解に対して安定化されている、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子。
【請求項６】
少なくとも１つの修飾されたヌクレオチド類似体を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子。
【請求項７】
修飾ヌクレオチド類似体が、糖または骨格鎖修飾リボヌクレオチドから選択される、請求項６に記載のＲＮＡ分子。
【請求項８】
ヌクレオチド類似体が、糖修飾リボヌクレオチドであり、２’−ＯＨ基は、Ｈ、ＯＲ、Ｒ、ハロ、ＳＨ、ＳＲ１、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＣＮから選択される基で置換され、Ｒは、Ｃ１−Ｃ６アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである、請求項６または７に記載のＲＮＡ分子。
【請求項９】
ヌクレオチド類似体が、ホスホチオエート基を含む骨格鎖修飾リボヌクレオチドである、請求項６または７に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１０】
予め決定したｍＲＮＡ標的分子に対して、少なくとも５０％の同一性を有する配列を有する、請求項１〜９のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１１】
同一性が少なくとも７０％である、請求項１０に記載のＲＮＡ分子。
【請求項１２】
下記のステップを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の二本鎖ＲＮＡ分子の作製方法：
（ａ）各々が１９〜２５塩基長を有する２本のＲＮＡ鎖を合成するステップであって、このＲＮＡ鎖は二本鎖ＲＮＡ分子を形成することができるものである、上記ステップ、
（ｂ）二本鎖ＲＮＡ分子が形成される条件下で合成ＲＮＡ鎖を結合させるステップであって、得られる二本鎖ＲＮＡ分子は標的特異的な核酸改変が可能なものである、上記ステップ。
【請求項１３】
ＲＮＡ鎖が化学的に合成される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＲＮＡ鎖が酵素により合成される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
下記のステップを含む、細胞または生物において標的特異的な核酸改変を媒介する方法：
（ａ）標的特異的な核酸改変が起こりうる条件下で、上記細胞または生物を請求項１〜１１のいずれか１項に記載の二本鎖ＲＮＡ分子と接触させるステップ、
（ｂ）上記二本鎖ＲＮＡと実質的に対応する配列部分を有する標的核酸に対する、上記二本鎖ＲＮＡにより引き起こされる標的特異的な核酸改変を媒介するステップ。
【請求項１６】
核酸改変がＲＮＡ干渉および／またはＤＮＡメチル化である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
接触ステップが、二本鎖ＲＮＡ分子を標的細胞に導入し、そこで標的特異的な核酸改変を起こさせうるステップを含む、請求項１５および１６に記載の方法。
【請求項１８】
導入ステップが、キャリア媒介による送達または注射を含む、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
細胞または生物における遺伝子の機能を決定するための、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項２０】
細胞または生物における遺伝子の機能を調節するための、請求項１５〜１８のいずれか１項に記載の方法の使用。
【請求項２１】
遺伝子が病理的状態と関連する、請求項１９または２０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２２】
遺伝子が病原体関連遺伝子である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
遺伝子がウイルス遺伝子である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
遺伝子が腫瘍関連遺伝子である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２５】
遺伝子が自己免疫疾患関連遺伝子である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２６】
有効物質としての請求項１〜１１のいずれか１項に記載の少なくとも１つの二本鎖ＲＮＡ分子と、薬学的キャリアを含む、医薬組成物。
【請求項２７】
診断用途に用いる請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
治療用途に用いる請求項２６に記載の組成物。
【請求項２９】
請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＲＮＡ分子でトランスフェクトされた真核細胞又はヒト以外の真核生物。
【請求項３０】
標的遺伝子特異的ノックアウト表現型を示す真核細胞またはヒト以外の真核生物であって、この細胞または生物が、内因性標的遺伝子の発現を阻害しうる少なくとも１つの二本鎖ＲＮＡ分子、または少なくとも１つの内因性標的遺伝子の発現を阻害しうる少なくとも１つの二本鎖ＲＮＡ分子をコードするＤＮＡでトランスフェクトされているものであり、該二本鎖ＲＮＡ分子は、各ＲＮＡ鎖が１９〜２５塩基長を有し、少なくとも１つの鎖が１〜５塩基からなる３’突出部を有するものである、該上記細胞または生物。
【請求項３１】
哺乳動物細胞である、請求項２９または３０に記載の細胞または生物。
【請求項３２】
ヒト細胞である、請求項３１に記載の細胞または生物。
【請求項３３】
標的タンパク質、または該標的タンパク質の変異体もしくは突然変異形態をコードする少なくとも１つの外因性標的核酸でさらにトランスフェクトされた、請求項２９〜３２のいずれか１項に記載の細胞または生物であって、この外因性標的核酸は、二本鎖ＲＮＡ分子による該外因性標的核酸の発現の阻害が、内因性標的遺伝子の発現より実質的に低いという点で、該内因性標的遺伝子とは核酸レベルで異なるものである、上記細胞または生物。
【請求項３４】
外因性標的核酸が、検出可能なペプチドまたはポリペプチドをコードするさらに別の核酸配列と融合される、請求項３３に記載の細胞または生物。
【請求項３５】
分析手法のための、請求項２９〜３４のいずれか１項に記載の細胞または生物の使用。
【請求項３６】
遺伝子発現プロフィールを分析するための、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
プロテオーム分析のための、請求項３５に記載の使用。
【請求項３８】
外因性標的核酸によってコードされる標識タンパク質の変異体または突然変異形態の分析が実施される、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３９】
標的タンパク質の機能ドメインを同定するための、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
下記のものから選択される少なくとも２つの細胞または生物の比較を実施する、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の使用：
（ｉ）標的遺伝子阻害を含まない対照細胞または対照生物、
（ｉｉ）標的遺伝子阻害を含む細胞または生物、および
（ｉｉｉ）標的遺伝子阻害と、外因性標的核酸による標的遺伝子の相補を含む細胞または生物。
【請求項４１】
分析が、機能および／または表現型の分析を含む、請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４２】
調製手法のための、請求項２９〜３４のいずれか１項に記載の細胞または生物の使用。
【請求項４３】
真核細胞からタンパク質またはタンパク質複合体を単離するための、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
場合によっては核酸を含んでいてもよい高分子量タンパク質複合体を単離するための、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
薬理学的物質を同定および／または特性決定する手法における、請求項３５〜４４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４６】
下記の（ａ）〜（ｃ）を含む、少なくとも１つの標的タンパク質に作用する薬理学的物質の同定および／または特性決定システム：
（ａ）少なくとも１つの標的タンパク質をコードする少なくとも１つの標的遺伝子を発現することができる、真核細胞またはヒト以外の真核生物、
（ｂ）上記少なくとも１つの内因性標的遺伝子の発現を阻害することができる、少なくとも１つの二本鎖ＲＮＡ分子であって、該二本鎖ＲＮＡ分子は、各ＲＮＡ鎖が１９〜２５塩基長を有し、少なくとも１つの鎖は１〜５塩基からなる３’突出部を有するものである、上記ＲＮＡ分子、および
（ｃ）薬理学的特性を同定および／または特性決定しようとする、試験物質または試験物質のコレクション。
【請求項４７】
さらに下記の（ｄ）を含む、請求項４６に記載のシステム：
（ｄ）上記標的タンパク質または該標的タンパク質の変異体もしくは突然変異形態をコードする少なくとも１つの外因性標的核酸であって、この外因性標的核酸は、二本鎖ＲＮＡ分子による発現の阻害が、上記内因性標的遺伝子の発現より実質的に低いという点で、該内因性標的遺伝子とは核酸レベルで異なるものである、上記外因性標的核酸。