【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年8月31日(2006.8.31)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
略語の表
Ａ５４９：ヒト肺上皮腫瘍細胞系統
ＡｃＮＰＶ：Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス
ＢＭＤＣ：骨髄由来樹状細胞
ＢＶ４２２：ＣＣＬ２１発現組み換えバキュロウイルス
ＢＶ７６２：Ｒａｆ発現組み換えバキュロウイルス
ＣＣＬ２１：Ｃ−Ｃモチーフリガンド２１ケモカイン；二次リンパ球様組織ケモカイン
ＣＤ８６：樹状細胞成熟に関するマーカー
ＣＲ：完全応答
ＣＴＬ：細胞毒性Ｔ溶解
ＤＣ：樹状細胞
ＦＡＣＳ：蛍光活性化細胞ソーティング
ＧＭ−ＣＳＦ：顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子
ＧＶ：顆粒症ウイルス
ＨＩＶ：ヒト免疫不全ウイルス
ｉ．ｔ．：腫瘍内
ｍＣＣＬ２１：マウスＣＣＬ２１
ＭＨＣ：主要組織適合性複合体
ＭＨＣＩＩ：ＭＨＣクラスＩＩ
ＭＬＡ−ＤＲ：ＭＨＣクラスＩ抗原
ＭＯＩ：感染の多重度
ＮＰＶ：核多角体病ウイルス
ＰＢＭＣ：末梢血単核細胞
ＰＦＵ：プラーク形成単位
ｑｄ：Ｑｕａｑｕｅ  Ｄｉｅ（毎日投与）
ｒｈＣＣＬ２１：組み換えヒトＣＣＬ２１
ｓ．ｃ．：皮下
Ｓｆ（Ｓｆ９）：Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ
Ｔｎ（Ｔｎ５）：Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ  ｎｉ
ＵＶ：紫外線
ＶＬＰ：ウイルス様粒子。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
上記した進歩にもかかわらず、免疫学的方法の成功は、（１）治療が特定の癌の型に限定される腫瘍特異的抗原性、（２）腫瘍細胞による抗原提示の乏しさ、および（３）免疫サーベイランスを回避するために免疫抑制因子を生産する腫瘍細胞の能力により、限界があった。即ち効果的で広範に適用可能な癌治療法の必要性が当該分野においてなお存在している。この必要性を満足するために、本発明は癌の治療および予防のための新しい免疫刺激方法を提供する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
即ち、本発明は特に、対象への非病原性ウイルスの投与を介した、癌の生育の抑制、癌の転移の抑制および癌の耐性を含む抗癌療法の必要な対象の治療方法を提供する。本明細書に開示した癌の免疫療法は腫瘍特異的抗原の発見に依存していない点に意義がある。むしろ、非病原性ウイルスの投与が広範に適用され、複数の腫瘍型において効果的である。実施例２〜６を参照できる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
特定の作用機序に限定されることは意図しないが、本発明者等は非病原性ウイルスの抗癌活性は少なくとも部分的にはその免疫刺激特性に起因すると考える。例えば、バキュロウイルスはインビボおよびインビトロの両方で樹状細胞の成熟および細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の応答を活性化する。実施例９〜１０を参照できる。また、Ｇｒｏｎｏｗｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９９）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ．７３：９９４４−５１も参照できる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
「ウイルス粒子」という用語は、構成されるか、またはそのネイティブな形態から修飾され、これによって天然の宿主細胞中では複製できないウイルスを指す。ウイルス粒子を調製する方法は当該分野で知られている。ウイルス様粒子の構造および機能的な一体性は電子顕微鏡観察、免疫原性分析および標準的なプラーク試験により評価することができる。例えばＨａｍａｋｕｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＷＯ０２／０６３０５は摘出バキュロウイルス様粒子の発生を論じている。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
「ウイルス閉鎖体」という用語はウイルスコード蛋白性結晶内に包埋された複数のウイルス粒子を含む構造を指す。蛋白結晶が溶解すると、複数のウイルス粒子は放出され、各ウイルス粒子はその後、宿主細胞に感染できるようになる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
バキュロウイルス生産の代表的な方法は例えば実施例１に記載するとおりであり、これはＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（Ｓｆ）を使用する。別の代表的な宿主細胞および増幅方法は米国特許５，４０５，７７０号（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ  ｓｕｂｆｌｅｘａ細胞系統）および６，３７９，９５８（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞系統、これは進歩したバキュロウイルス生産を示す）に記載されている。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４４】
インキュベーションの後、このようにして生産されたウイルス剤を当該分野で知られた手法、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）沈殿、超遠心分離およびクロマトグラフィー精製、例えばイオン交換樹脂の使用、サイズエクスクルージョンクロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーまたはこれらの組み合わせにより回収する。米国特許出願２００２／００１５９４５（クロマトグラフィー精製）；米国特許６，１９４，１９２（硫酸化フコース含有多糖類へのウイルス吸着）を参照できる。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
非病原性ウイルス、例えばバキュロウイルスはまた哺乳類宿主細胞中で転写的にサイレントであることができる。即ち、一部の実施形態においては、非病原性ウイルスは、異種性遺伝子も発現されないことから、現在の遺伝子療法から特に排除されるウイルスのある型であることができる。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
「非病原性」という用語は更にそのネイティブな形態で病原性であり、そして修飾されて非病原性とされているウイルスも包含する。このような修飾は遺伝子的修飾（例えばバキュロウイルスｇｐ６４遺伝子に関して上記したウイルスの複製に必須な遺伝子の破壊；および／または宿主生物種において転写的に不活性とするためのウイルスプロモーターの破壊）を包含する。例えば、バキュロウイルスの生物種特異的な病原性は部分的には鱗翅目以外の生物種においてバキュロウイルスプロモーターがサイレントであるためである。異種性プロモーターをバキュロウイルスのゲノムに挿入した場合、修飾されたウイルスは非鱗翅目細胞系統、例えば種々の哺乳類細胞系統において遺伝子発現が可能となる。Ｂｏｙｃｅ＆Ｂｕｃｈｅｒ（１９９６）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ９３：２３４８−５２；Ｃａｒｂｏｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，（１９８５）Ｊ  Ｖｉｒｏｌ
５６：１５３−６０；Ｃａｒｂｏｎｅｌｌ  ＆  Ｍｉｌｌｅｒ  （１９８７）Ａｐｐｌ
Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ５３：１４１２−７；Ｈｏｆｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，（１９９５）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ９２：１００９９−１０３参照。哺乳類細胞で当初は活性であるウイルスプロモーターを同様に逆の結果となるように修飾し、これにより哺乳類種においてはもはや病原性とならないようにする。塩基対の変更、欠失または小規模の挿入を行うための部位特異的突然変異誘発の方法は当該分野で知られており、例えば上記した参考文献に記載されている。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
一部の実施形態においては、非病原性ウイルスは後に記載するとおり不活性化される。抗癌性を示す非病原性ウイルスを種々の不活性化方法の何れか１つに付すことによりウイルスがそのネイティブの宿主細胞に感染できないようにすることができる。本明細書に記載した試験を用いて当業者はウイルスの抗癌活性を温存する不活性化方法を選択することができる。一部の実施形態においては、不活性化方法はウイルスの宿主細胞への進入を可能とし、そしてウイルスゲノムの転写および／または複製を妨害する。一部の実施形態においては、ウイルスが細胞内へは進入できるが正常な転写および／または複製は行えないようにこれを遺伝子的に修飾することができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
特定の作用機序に限定されることは意図しないが、本発明者等は非病原性ウイルスの抗感染性疾患活性は少なくとも部分的にはその免疫刺激特性に起因すると考える。例えば、バキュロウイルスはインビボおよびインビトロの両方で樹状細胞の成熟および細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）の応答を活性化する。実施例９〜１０を参照できる。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
「癌」という用語は一般的に原発および転移腫瘍を含む腫瘍を指す。一部の実施形態においては腫瘍は固形腫瘍である。「腫瘍」という用語は対象における何れかの組織の固形腫瘍および癌腫を包含し、例えば、乳房、結腸、直腸、肺、口腔陰頭部、下咽頭、食道、胃、膵臓、肝臓、胆嚢、胆管、小腸、尿管、例えば腎臓、膀胱および尿路上皮、女性器管、例えば頚部、子宮、卵巣（例えば絨毛癌および妊娠栄養膜疾患）、男性器管、例えば前立腺、精嚢、抗癌および生殖細胞腫瘍、内分泌線、例えば甲状腺、副腎および下垂体、皮膚（例えば血管腫および黒色腫）、骨および軟組織、血管（例えばカポジ肉腫）、脳、神経、眼および髄膜（例えば星状細胞腫、神経膠腫、神経膠芽細胞腫、網膜芽細胞腫、神経腫、神経芽細胞腫、神経鞘腫および髄膜腫）が挙げられる。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８８】
「全身免疫応答」という用語は本明細書においては免疫系のＢリンパ球のような細胞が発生するリンパ節、脾臓または腸に関連するリンパ様組織における免疫応答を指す。例えば、全身免疫応答は血清免疫グロブリン（ＩｇＧ）の生産を含む。更にまた全身免疫応答は血流中を循環している抗原特異的抗体および脾臓およびリンパ節のような全身性のコンパートメント中のリンパ様組織中の抗原特異的細胞を指す。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９２】
本発明はまたヒトを含む哺乳類対象における細胞傷害性Ｔ細胞媒介応答を誘発するために有用な方法および組成物に関する。一部の実施形態においては、本発明は細胞傷害性Ｔ細胞媒介応答を誘導するための非病原性ウイルスの使用に関する。即ち本発明は、非病原性ウイルスおよび抗原を含む抗原製剤の製造方法を提供する。「抗原」という用語はＴ細胞またはＢ細胞の受容体と相互作用することによりリンパ球を活性化（陽性または陰性に）する物質を指す。陽性の活性化は免疫応答性をもたらし、陰性の活性化は免疫耐容性をもたらす。抗原は蛋白、炭水化物、脂質、核酸またはその組み合わせを含むことができる。抗原は異種性（例えば宿主対象中に典型的には存在しない抗原）または自系の抗原（自己抗原）を含むことができる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０２】
（Ｃ１．ウイルス不活性化）
一部の実施形態においては、本発明の方法において使用される、生存する非病原性ウイルスは対象への投与の前に不活性化される。非病原性ウイルスは上記において定義したとおり、哺乳類宿主内で複製することができない。ウイルスをそのネイティブの宿主細胞において非複製性とする不活性化は別の安全性対策として実施できる。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０３】
ウイルス不活性化は何れかの適当な手段、例えばウイルス外皮の脂質または蛋白の成分の破壊、ウイルスが標的細胞を認識できなくなるような修飾、ウイルス核酸の破壊、および／またはウイルスを複製不可能とすることにより達成することができる。ウイルス不活性化の代表的な方法は、例えば界面活性剤（例えばＴｒｉｔｏｎ−Ｘ１００（登録商標））処理、第２エチレンイミン（ＢＥＩ）によるアルキル化、光化学不活性化、ＵＶ光不活性化、放射線照射、物理的破壊（例えば超音波処理、電子線）、遺伝子的不活性化およびこれらの組み合わせを包含する。Ｒｕｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：７２６−３４およびＨｅｎｚｌｅｒ＆Ｋａｉｓｅｒ（１９９８）Ｎａｔ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １６：１０７７−９を参照できる。一部の実施形態においては、不活性化はウイルスの抗原性および／または活性を大きく低下させない。ウイルスの不活性はウイルスの感染性を測定する標準的な方法を用いて試験する。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０６】
ウイルスが不活性化のために十分な熱処理を耐えうることができれば、低温殺菌法が不活性化のための単純な方法である。一部の実施形態においては、加熱はウイルス蛋白の損傷を最小限にするために最低限十分な時間行う。場合により、ウイルスの損傷は安定化剤およびクエン酸ナトリウム、サッカロースおよび／またはグリシンを使用することにより最小限にできる。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０７】
或は、化学的不活性化、例えば低いｐＨ値における穏やかなペプシン処理または界面活性剤への曝露を用いて脂質２層を破壊することができ、従ってこれらは、バキュロウイルスを含むエンベロープを有するウイルスの不活性のために用いることができる。米国特許４，８２０，８０５号および４，７６４，３６９号を参照できる。アジリジン第２エチレンイミンは蛋白ではなく核酸の求核基（ｎｕｃｌｅｏｐｈｙｌｉｃ  ｇｒｏｕｐ）と選択的に相互作用することによりウイルスを不活性化する強力なアルキル化剤である。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１０】
別の光増感剤はハロゲン化ソラレン、アンゲリシン、ケリンおよびクマリンを包含し、これらは各々、ハロゲン置換基および水溶性部分、例えば第４アンモニウムイオンまたはホスホニウムイオンを有する。ソラレン分子上でハロゲン原子、特に臭素原子で置換されていることは、臭素の疎水性のため、ＤＮＡへの増感剤の結合定数を増加させる。一部の実施形態においては、臭素化増感剤を活性化するためには光量子わずか１個のみしか必要ではないが、非臭素化ソラレンを用いてＤＮＡの架橋を起こすには光量子２個が必要であることから、臭素化光増感剤が使用されている。例えば米国特許５，４１８，１３０号を参照できる。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２０】
担体は治療の必要のある部位への非病原性ウイルスの持続的な生体利用性を可能にするように選択できる。「持続的な生体利用性」という用語は、担体からの非病原性ウイルスの長時間の放出、非病原性ウイルスの代謝安定性、非病原性ウイルスを含む組成物の全身輸送、および、非病原性ウイルスの効果的な投与を含むが、これらに限定されない要因を包含する。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２４】
本発明の非病原性ウイルスは腫瘍内、腫瘍周囲、全身、非経腸（例えば静脈内注射、筋肉内注射、動脈内注射および注入法）、経口、経皮（局所）、鼻内（吸入）および粘膜内で対象に投与できる。デリバリー方法は担体またはベクターの種類、組成物の治療効果、標的領域の位置および治療すべき状態のような検討事項に基づいて選択する。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２７】
癌が非新生物性の生育である一部の実施形態においては、非病原性ウイルスは患部または患部周囲部位に投与する。「患部周囲部位」という用語は、非新生物性の生育の外縁部から約１５ｃｍ未満、非新生物性の生育の外縁部から約１０ｃｍ未満、非新生物性の生育の外縁部から約５ｃｍ未満、非新生物性の生育の外縁部から約１ｃｍ未満または非新生物性の生育の外縁部から約０．１ｃｍ未満の部位を指す。本発明の非病原性ウイルスは患部および／または患部周囲部位の１つ以上にデリバリーすることができる。一部の実施形態においては、本発明の非病原性ウイルスは非新生物性の生育の内部および／または非新生物性の生育の周囲の複数の部位に投与する。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３５】
一部の実施形態においては、「有効量」を決定するために組成物をインビトロまたはインビボで試験する。例えば細胞死を誘発するための本明細書に記載した方法においては、適当な試験は、例えばインビトロ細胞生存性試験、例えばＴＵＮＥＬ試験または他の蛍光系の試験、例えばＣｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｂｌｕｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ）；ＤＮＡフラグメント化をモニタリングする試験；およびチトクロームＣ放出試験、軟質寒天生育試験、接触抑制試験、および、ヌードマウスにおける腫瘍生育；試験動物に腫瘍を注射し、本発明の組成物の投与後に癌の減衰をモニタリングすることを含む試験、およびトランスジェニックマウスが腫瘍を有し、癌の減衰をモニタリングするトランスジェニックマウス試験；本明細書に開示したインビボ試験；マトリゲル障壁のような障壁を経由した細胞の移動を測定するインビトロの方法（例えばＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００３  Ａｕｇ  １：６３（１５）：４６３２−４０；Ａｍ  Ｊ  Ｃｈｉｎ  Ｍｅｄ．２００３；３１（２）：２３５−４６参照）；Ｙａｎｇ等の報告したインビトロ侵襲性およびインビボ転移の試験（Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１，５２８４−５２８８，Ｊｕｌｙ  １，２００１）を包含する。
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３８】
国際特許出願ＷＯ９８/５００７１はウイルス様粒子（ＶＬＰ）と共に投与される抗原の免疫応答を増強するためのアジュバントとしてのＶＬＰの使用を記載している。Ｓ．Ｃｌａｉｒ等は体液性および細胞性の応答を増強するための蛋白結晶の使用を記載している（Ｓｔ．Ｃｌａｉｒ，Ｎ．ｅｔ  ａｌ．，Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｌ．Ｓｃｉ．，９６：９４６９−９４７４，１９９９）。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４０】
慣例に従い、物質の数は１つ以上でありえる。「約」という表現は本明細書においては、測定可能な数値を指す場合、例えば腫瘍周囲または患部周囲の距離の場合は、特定の量からの±２０％または±１０％、±５％、±１％または±０．１％の変動を包含するものとし、そのような変動は開示した方法を行ったり、その他本発明を実施する場合に適切である。いくつかの実施形態において、「約」は、特定の量から±１０％の変動を含むことを意味される。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４１】
（Ｄ１．インビボ活性の予測）
インビボの抗腫瘍活性を予測することは困難で信頼性の低い場合が多い。本発明はインビボの抗腫瘍活性を予測するための方法を提供する。一部の実施形態においては、方法は腫瘍細胞および末梢血単核細胞に化合物を接触させること、および、腫瘍細胞の細胞死を測定することを含む。一部の実施形態においては、化合物は非病原性ウイルスまたは非病原性昆虫特異的ウイルスである。例えばアポトーシス、壊死、細胞生存性等の測定を含む何れかの方法を用いて細胞死を測定できる。使用できる腫瘍細胞は例えば、肺癌細胞（例えばＡ５４９細胞、３ＬＬ−ＨＭ細胞）、乳癌細胞（例えば４Ｔ１細胞；ＭＴ９０１細胞；ＭＡＴ  ＢＩＩＩ細胞）、前立腺癌細胞、結腸癌細胞、皮膚癌細胞（例えばＢ１６黒色種細胞）、膵臓癌細胞、肝癌細胞、脳癌細胞、骨癌細胞（例えばＭＧ−６３細胞）、胃癌細胞、または食道癌細胞等である。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４３】
本発明は販売のための抗癌組成物および抗感染性疾患組成物の製造のためのプロセスを提供する。一部の実施形態においては、組成物は非病原性ウイルス１つ以上を含む。一部の実施形態においては、非病原性ウイルスはＡｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルスである。一部の実施形態においては、非病原性ウイルスは不活性化ウイルス、ウイルス粒子、ビロソーム、ウイルス様粒子、ウイルス閉鎖体またはウイルス成分を含む。一部の実施形態においては、プロセスは組成物の安全性、毒性および薬効が所定のガイドラインに合致していることを確認するために組成物に対して販売試験を実施することを含む。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４５】
一部の実施形態においては、プロセスは更に安全性、薬効または毒性の１つ以上の分析のための組成物の任意の部分を収集することを更に含む。一部の実施形態においては、任意の部分の安全性および/または薬効および/または薬効を第２の抗癌または抗感染性疾患組成物の安全性および/または薬効および/または薬効と比較する。比較データは販売の前の検討のために作成される。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４８】
（実施例１．組み換えバキュロウイルスの調製）
ヒトＣＣＬ２１をコードする完全長配列（ゲンバンクアクセッション番号ＮＭ００２９８９）をバキュロウイルス転移ベクターｐＶＬ１３９２（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｆｏｒｎｉａ）にクローニングし、そして、入手元の推奨する方法を用いてＢＡＣＵＬＯＧＯＬＤ（登録商標）ＷＴゲノムＤＮＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｆｏｒｎｉａ）と同時トランスフェクトした。この操作法により得られた組み換えバキュロウイルスをＳｆ９昆虫細胞上のプラーク精製によりサブクローニングし、ヒトＣＣＬ２１を発現する数種の単離体を得た。クローンを元のウイルスと比較した場合の例外的な発現特性があるものを選択した。このバキュロウイルス単離体の増幅を低多重度の感染（ＭＯＩ）において実施し、高力価少継代の蛋白生産用保存株を得た。ヒトＣＣＬ２１を発現するバキュロウイルスはＢＶ４２２と命名した。追加の組み換えバキュロウイルスも同様に作成した。例えば細胞内Ｒａｆ蛋白を発現するバキュロウイルスを作成し、ＢＶ７６２と命名した。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５０】
（実施例２．肺癌の動物モデルにおける腫瘍生育の抑制）
９〜１１週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを最低７日間馴化させた後に腫瘍細胞を接種した。マウスには右脇腹皮下に２ｘ１０５個の早期継代（１０継代未満）の３ＬＬ−ＨＭ腫瘍細胞を接種した。腫瘍の大きさは週当たり２回計測した。腫瘍が５０〜１００ｍｍ３に達した時点（典型的には腫瘍接種後７日間）で、マウスを無作為に群分けした。バキュロウイルス発現ＣＣＬ２１は腫瘍保有マウスに対し腫瘍内投与した。用量および投与の用法は腫瘍の抑制を最適化するために変動させた。何れかの群の腫瘍体積が３０００ｍｍ３（典型的には対照群のマウスにおける接種の３３〜３５日後）に達した時点で、マウスを屠殺した。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５１】
図１に示すとおり、バキュロウイルス発現ＣＣＬ２１の腫瘍内投与により３ＬＬ腫瘍の生育遅延が起こった。ＣＣＬ２１の用量は腫瘍生育の完全な抑制が達成されるように最適化した。比較的高用量で２または３回注射する投与方法は、比較的低用量で６回注射する投与方法と比較して同様の薬効を示した。一部の腫瘍抑制は単回用量を用いた場合にも観察された。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５２】
（実施例３．乳癌の動物モデルにおける腫瘍生育の抑制）
９〜１１週齢のＢａｌｂ／ｃマウスを最低７日間馴化させた後に腫瘍細胞を接種した。マウスには右脇腹皮下に２ｘ１０５個の４Ｔ１細胞を接種した。腫瘍の大きさは週当たり２回計測した。腫瘍が５０〜１００ｍｍ３に達した時点（典型的には腫瘍接種後７日間）で、マウスを無作為に群分けした。バキュロウイルスは腫瘍保有マウスに対し腫瘍内投与した。用量は最適有効用量を決定するために変動させた。何れかの群の腫瘍体積が３０００ｍｍ３（典型的には対照群のマウスにおける接種の３３〜３５日後）に達した時点で、マウスを屠殺した。図２に示すとおり、ＣＣＬ２１の腫瘍内投与により４Ｔ１腫瘍の生育遅延が起こった。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５５】
（実施例５．腫瘍再攻撃への耐性）
上記した通り腫瘍を保有するマウスを作成してバキュロウイルスを投与した。完全な腫瘍の減衰を示したマウスまたは完全な腫瘍の減衰を示さなかったマウスは、その腫瘍をバキュロウイルス最終投与の２日後に外科的に摘出し、腫瘍再攻撃に付した。マウスを２００μｌのケタミン/キシラジン混合物（リン酸緩衝化食塩水中１０倍希釈した４：１ケタミン：キシラジン）の腹腔内投与により麻酔し、腫瘍を摘出し、創傷をホチキスで閉鎖した。腫瘍摘出の１〜４日後、元の腫瘍の部位以外の部位において２ｘ１０５個の４Ｔ１細胞を皮下投与することによりマウスを再攻撃した。再攻撃腫瘍体積を週当たり２回計測した。完全な腫瘍減衰を示したマウスでは、マウスを均等に２群に再分割した。１つの群は同じ腫瘍細胞で腹部の逆側をマウス当り１ｘ１０５個で再攻撃した。もう１つの群は異なる同系の腫瘍細胞（Ｂ１６Ｆ１０）で左側の腹部をマウス当り１ｘ１０５個で攻撃した。再攻撃部位における腫瘍の生育をモニタリングした。バキュロウイルスを投与したマウスは３ＬＬ−ＨＭ腫瘍細胞による再攻撃に耐性を示すことができたが、異なる同系の腫瘍細胞に対しては耐性ではなかった。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６４】
（実施例９．バキュロウイルスによる樹状細胞成熟の活性化）
野生型バキュロウイルスを樹状細胞（ＤＣ）の培養物に添加したところ、活性化マーカーの細胞表面発現が増大したことにより明らかな通り、成熟が誘導された。図１１Ａおよび１１Ｂに示す通り、バキュロウイルスはマウス骨髄由来ＤＣおよびヒト単球由来ＤＣを活性化する。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
マウスＤＣは定法に従って骨髄から調製した。慨すれば、骨髄を雌性６〜８週齢のＢａｌｂ／ｃまたはＣ５７Ｂｌ／６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｏｌｉｓｔｅｒ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から単離し、１０％細胞培養等級ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加した熱不活性化ウシ胎児血清中、２ｘ１０７個/ｍｌの濃度で凍結（−８０℃）した。凍結した細胞を小分けにしたものを急速に解凍し、洗浄してＤＭＳＯを除去した。細胞を２００Ｕ／ｍｌネズミＧＭ−ＣＳＦ（ＰｒｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｒｏｃｋｙ  Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ）を含有する２０ｍｌ配合ＲＰＭＩ培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）２０ｍｌの入った１５０ｍｍの懸濁液培養ディッシュ中に入れた。培養第３日に、細胞に再度、ネズミＧＭ−ＣＳＦを添加し、第５日に培養容量の半分を遠心分離してＧＭ−ＣＳＦを含有する新鮮培地に交換した。ＢＭＤＣは穏やかにピペッティングすることにより採取した。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６８】
（実施例１０．バキュロウイルスによるインビボＣＴＬ誘導の活性化）
バキュロウイルスおよび可溶性蛋白抗原（ＨＩＶｐ２４）によるマウスの免疫化により頑健な抗原特異的ＣＴＬ応答が誘導された。免疫化されたマウスの脾臓を第３回目の免疫化の２週間後に採取した。脾臓５個が各試料中に含まれるように個々の脾臓をあわせた。免疫化マウスの脾細胞をウェルあたり５ｘ１０６個の密度で２４ウェルのディッシュ中で培養した。これらの細胞のうち、１ｘ１０６個の細胞を（１）合成ｐ７ｇペプチド、即ちＨＩＶ−１ＳＦ２ｐ２４ｇａｇのアミノ酸１９９〜２０８に相当するＨ−２Ｋｄ制限ＣＴＬエピトープ；および（２）ｐＧａｇｂペプチド、即ちＨＩＶ−１ＳＦ２ｐ５５ｇａｇのアミノ酸３９０〜３９８に相当するＨ−２Ｄｂ制限ＣＴＬエピトープで感作した。ペプチドは３７℃で１時間１０μＭの濃度で使用した。次に脾細胞を洗浄し、残りの４ｘ１０６個の未投与細胞と共に培養した。脾細胞は、脾細胞培地として：ＲＰＭＩ１６４０およびα−Ｍｅｍ（１：１）（１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｌｏｇａｎ，Ｕｔａｈ：３０分間５６℃水浴中で不活性化）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１０μｇ／ｍｌストレプトマイシン、１０ｍｌ／Ｌの１００ｍＭピルビン酸ナトリウムおよび５０μＭ  ２−メルカプトエタノールを添加した）（ＲＰＭＩ１６４０（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）は、１００ｍＭ  Ｌ−グルタミン（Ｇｉｂｏｃｏ，Ｇｒａｎｄ  Ｉｓｌａｎｄ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）を補充され、α−ＭｅｍはＬ−グルタミン、デオキシリボヌクレオシドまたはリボヌクレオシドを補充された最小必須培地Ａｌｐｈａ  Ｍｅｄｉｕｍ）の２ｍｌ中で塊状培養物として刺激した。更に、５％ラットＴ−ＳｔｉｍＩＬ２（ラットＴ−Ｓｔｉｍ：Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）をＩＬ２原料として使用し、細胞を培養する直前に培地に添加した。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８５】
（初期試料調製および移行プレート中の連続希釈）
（初期スクリーニング試験）
ＰＢＭＣ細胞毒性の誘導物質を検出する機会を向上させるために、試料をまず比較的高濃度に調製した。試料濃度は試料の活性に応じてその後の試験では低下させた。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９１】
（標的細胞（試験）プレートへの試料希釈物の移行）
希釈プレートの内容物を試験（細胞）プレートに移行させた。最終試料濃度は元の希釈プレートの１／２であった。プレートからプレートへの移行のプログラムのプロペットを移行に用いた。試験プレートはＰＢＭＣを準備しながらインキュベートした。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９２】
（標的細胞に対する試験試料の直接の細胞毒性に関する毒性対照プレート）
２個の同一の移行（希釈）プレートを樹立し、２細胞プレートに培地を移行させた。プレート１にはＰＢＭＣ調製物５０μｌを添加して誘導細胞毒性測定を行った。２枚目のプレートには５０μｌのＰＢＭＣ調製培地を添加して試験試料の直接細胞毒性を測定した。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９３】
（ヒト末梢血からの末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）の単離）
漂白剤の１：１０希釈物（３リットル）を調製した。血液に接触した全ての試験管およびピペットを一夜漂白した。ビーカーの水気を切り、全ての物品を鋭利物品または生物学的有害物質用の容器に廃棄した。５０ｍｌ試験からキャップを除去した後に血液を取り扱った（血液によるキャップの汚染を防止するため）。血液は２５０ｍｌ容の使い捨てポリカーボネートフラスコに添加し、等量のＨＢＳＳで希釈した。５０ｍｌ容のポリスチレン試験管当りフィコールプラーク溶液約１７ｍｌを添加し、３０分後に血液を添加した。血液はフィコール層を撹乱することなくフィコールプラーク溶液の上面に重層させた。４ｍｌの血液／ＨＢＳＳを各３ｍｌのフィコールプラークに対して添加した（即ち５０ｍｌ容の試験管当り１７ｍｌフィコールおよび２３ｍｌ血液／ＨＢＳＳとした）。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９４】
試験管を室温で３０分間１８００ＲＰＭ（４００ｘｇ）で遠心分離した（Ｓｏｒｖａｌ  ＧＬＣ−２Ｂ遠心分離機）。可能な限り大量の上層を２５ｍｌ容の血清学的ピペットを用いて吸引し、第２の層の上部約５ｍｌを残存させた。５ｍｌ容の血清学的ピペットを用いて第１の層の残余を除去した。ＢおよびＴリンパ球を含有する第２の層は滅菌された５ｍｌ容の血清学的ピペットを用いて収集し、新しい５０ｍｌ容の試験管に入れた。収集物は添加剤を含まないＲＰＭＩの３倍容量で希釈した。得られた溶液を１５〜２０分間９００ｒｐｍ（１００ｘｇ）で遠心分離した（洗浄１）。上澄みを血清学的ピペットで除去し、細胞を４０ｍｌのＲＰＭＩに再懸濁し、遠心分離を９００ｒｐｍで反復した（洗浄２）。上澄みを血清学的ピペットで除去し、細胞を４０ｍｌのＰＢＭＣ調製培地（０．５％ＢＳＡ添加ＲＰＭＩ）に再懸濁した。再懸濁細胞の総容量を厳密に記録した。細胞をコールターカウンターで計数して細胞密度を求め、ＰＢＭＣ調製培地中の細胞濃縮物の１：５希釈物を計数に用いた。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９５】
適切な細胞密度を得るために必要な再懸濁液の容量を求めた。細胞毒性試験のためには所望の密度は２ｘ１０６個／ｍｌであり、ＰＢＭＣの凍結のためには所望の密度は１０ｘ１０６個／ｍｌであった。最終再懸濁液容量は細胞密度と総容量を掛け合わせ、次にその積を最終の所望の細胞密度（２または１０ｘ１０６個／ｍｌ）で割ることにより計算した。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２００
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２００】
次に適切な細胞密度を得るために必要とされる再懸濁液の容量を求めた。細胞毒性試験のためには所望の密度は２ｘ１０６個／ｍｌであった。最終再懸濁液容量は細胞密度と総容量を掛け合わせ、次にその積を最終の所望の細胞密度（２または１０ｘ１０６個／ｍｌ）で割ることにより計算した。再懸濁細胞の残余を用いて９００ｒｐｍで遠心分離を反復した。上澄みを除去し、細胞を最終再懸濁容量中に再懸濁した。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２０】
振とうしながら懸濁液中でＢＶをＰＢＭＣに投与し、その後遠心分離洗浄を行うことは、ＭＧ−６３標的細胞に対する細胞毒性応答の有意な非特異的（０％ＢＶ投与細胞のウェル）刺激をもたらすが、Ａ５４９細胞ではこれとは異なると考えられた。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３０】
【図１】図１は肺癌の３ＬＬマウスモデルにおいてバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１が腫瘍生育を抑制し完全な腫瘍の減衰を誘導することを示す折れ線グラフである。実施例２に示すとおり、ＣＣＬ２１の投与には記載した濃度におけるＣＣＬ２１の腫瘍内注射６回が含まれる。注射あたりの用量を増大させると腫瘍の抑制および完全応答の頻度も増大した。一元ＡＮＯＶＡ分析を第２４日に収集したデータを用いて実施した。アルブミン対投与群、ｐ＜０．００１；２５μｇｍＣＣＬ２１対６μｇ／ＡｌｂｍＣＣＬ２１、Ｐ＜０．０１；２５μｇｍＣＣＬ２１対２５μｇｒｈＣＣＬ２１、Ｐ＞０．０５．ｍＣＣＬ２１、マウスＣＣＬ２１；ｒｈＣＣＬ２１、組み換えヒトＣＣＬ２１；Ｂ  Ｇｏｌｄ、バキュロウイルスから発現された組み換えマウスＣＣＬ２１を比較対照ロット（Ｇｏｌｄ標準）として使用；Ａｌｂ、アルブミン；ｑｄ、Ｑｕａｑｕｅ  Ｄｉｅ（毎日投与）、ＣＲ、完全応答とする。
【図２】図２は実施例３に記載したバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１の投与後の乳癌の４Ｔ１マウスモデルにおける腫瘍成育の抑制を示す折れ線グラフである。ｒｈＣＣＬ２１は組み換えヒトＣＣＬ２１；ｑｄは、Ｑｕａｑｕｅ  Ｄｉｅ（毎日投与）である。
【図３】図３は実施例６に示すバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１の投与後の自発的４Ｔ１肺転移の抑制を示す棒グラフである。黒は腫瘍の外科的切除を受けていない動物；斜線はＣＣＬ２１の最終投与の１日後に腫瘍を外科的に切除した動物（Ｓｕｒｇ）である。
【図４】図４は実施例５に示すとおり、バキュロウイルス発現ＣＣＬ２１の投与が腫瘍の再攻撃に対する耐性を付与することを示す折れ線グラフである。慨すれば、４Ｔ１腫瘍をＢａｌｂ／ｃマウスにおいて樹立し、そして宿主マウスのサブセットにバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１を腫瘍内投与により投与した。ＣＣＬ２１の最終投与の１日後、腫瘍を外科的に切除した。腫瘍切除の１日後、マウスの元の腫瘍とは逆側に４Ｔ１細胞を皮下注射することにより再攻撃した。Ｎａｉｖｅは以前に腫瘍を保有したことがなくＣＣＬ２１投与を受けたことがないマウスであり；Ａｌｂ＋Ｓｕｒｇ＋Ｒｅ−ｃｈｌｇは４Ｔ１腫瘍を以前に保有したことがありアルブミン投与を受けているマウス；ｈＣＣＬ２１＋Ｓｕｒｇ＋Ｒｅ−ｃｈｌｇは以前に４Ｔ１腫瘍を保有したことがありＣＣＬ２１投与を受けているマウスである。Ａｌｂ＋Ｓｕｒｇ＋Ｒｅ−ｃｈｌｇ群においては、１０匹中１匹のマウスが腫瘍の成育に対して完全な耐性を示した。ｈＣＣＬ２１＋Ｓｕｒｇ＋Ｒｅ−ｃｈｇにおいては、１０匹中６匹のマウスが腫瘍成育への完全な耐性を示した。
【図５】図５Ａ〜５Ｂは腫瘍再攻撃に対するバキュロウイルス誘導耐性を示す。３ＬＬ腫瘍モデルにおいて、バキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１で良好に治療できた動物は長期間にわたり同じ腫瘍による再攻撃に対して耐性である。図５Ａはバキュロウイルス誘導マウス組み換えＣＣＬ２１の投与後に腫瘍の完全な減衰を示し（例えば図１参照）、そしてバキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１の最終投与の後６０、７０および８０日において同じ腫瘍で逆側の腹部を再攻撃した動物を用いた実験を総括したものである。動物は少なくとも７０日間再攻撃に耐性であった。図５ＢはバキュロウイルスＣＣＬ２１投与終了および完全な減衰の誘導の後３０日後に接種（「腫瘍ブースト」）され、そしてバキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１の最終投与後８０、１２０、１６０および２００日に同じ腫瘍で逆側の腹部を再攻撃した動物を用いた実験を総括したものである。これらの結果は腫瘍ブーストを用いることにより少なくとも２００日まで腫瘍再攻撃への耐性を延長できることを示している。
【図６】図６は酵母またはＥ．ｃｏｌｉにおいて生産されたＣＣＬ２１が肺癌の３ＬＬ腫瘍モデルにおける腫瘍の減衰をもたらさないことを示す折れ線グラフである。ｈＣＣＬ２１−Ｂ（ＨＢＰＧ１）はバキュロウイルスロット番号ＨＢＰＧ１において発現された組み換えヒトＣＣＬ２１；ｈＣＣＬ２１−Ｂ１／２（ＨＢＰＧ１）はバキュロウイルスロット番号ＨＢＰＧ１において発現された組み換えヒトＣＣＬ２１をｈＣＣＬ２１（ＨＢＰＧ１）」の濃度の二分の一に希釈したものであり；ｈＣＣＬ２１−Ｂｃｏｎｃ（ＨＢＰＧ１）は濃縮された（１０ｍｇ／ｍｌ）溶液から誘導されたバキュロウイルスロット番号ＨＢＰＧ１において発現された組み換えヒトＣＣＬ２１；ｈＣＣＬ２１−Ｙ（ＨＹＰＧ４）は酵母ロット番号ＨＹＰＧ４において発現された組み換えヒトＣＣＬ２１；ｈＣＣＬ２１−Ｅ（ＨＥＤＳ４）はＥ．ｃｏｌｉロット番号ＨＥＤＳ４において発現された組み換えヒトＣＣＬ２１；ｑｄ、Ｑｕａｑｕｅ  Ｄｉｅ（毎日投与）である。ｈＣＣＬ２１−ＢまたはｈＣＣＬ２１−Ｂ新規を投与されたマウスと比較した場合のアルブミン投与マウスにおける腫瘍生育の抑制、ｐ＜０．０１；ｈＣＣＬ２１−ＢｃｏｎｃまたはｈＣＣＬ２１−Ｂ１／２を投与されたマウスにおける腫瘍生育の抑制、Ｐ＜０．０５。
【図７】図７はインビボでは不活性であるバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１調製物のインビトロの化学走性活性を示す折れ線グラフである。化学走性試験は本質的にＰＣＴ国際出願ＷＯ００／３８７０６号に記載の通り実施することができる。インビボ活性は実施例２〜６に記載の通り試験した。ＨＢＤＳ２．ｐはバキュロウイルスロット番号ＨＢＤＳ２．ｐから誘導された組み換えヒトＣＣＬ２１であり；ＭＢＤＳ２．ｃはバキュロウイルスロット番号ＭＢＤＳ２．ｃから誘導された組み換えマウスＣＣＬ２１であり；ＨＢＰＧ１はバキュロウイルスロット番号ＨＢＰＧ１から誘導された組み換えヒトＣＣＬ２１であり；ＨＢＰＧ１＋ＨＢＤＳ２．ｖｐはビニルピリジンを投与された等モル比のＨＢＤＳ２と混合されたＨＢＰＧ１であり；ＨＹＰＧ４は酵母ロット番号ＨＹＰＧ４から誘導された組み換えヒトＣＣＬ２１であり；ＨＥＤＳ４はＥ．ｃｏｌｉロット番号ＨＥＤＳ４から誘導された組み換えヒトＣＣＬ２１である。
【図８】図８は記載した試料を用いて調製し、そして次に抗ｇｐ６４抗体を用いてプローブしたウエスタンブロットを示す。レーン１は精製されたバキュロウイルス；レーン２は未感染のＴｎ５細胞培養物からえたコンディショニングされた培地；レーン３は野生型バキュロウイルスに感染させたＴｎ５細胞からえたコンディショニングされた培地；レーン４は組み換えヒトＣＣＬ２１をコードするＢＶ４２２に感染させたＴｎ５細胞培養物からえたコンディショニングされた培地；レーン５は感染させていないＴｎ５細胞ペレット；レーン６は野生型バキュロウイルスに感染させたＴｎ５培養物からえた細胞ペレット；レーン７はＢＶ４２２に感染させたＴｎ５培養物からえた細胞ペレット；レーン８は５０ｋＤａ超の夾雑物を除去した後の濾液であるバキュロウイルスロット番号ＨＢＰＧ１から誘導したヒト組み換えＣＣＬ２１；レーン９は５０ｋＤａ超の夾雑物を含有するレーン８における試料の残存物（蛋白５μｇ）；レーン１０は５０ｋＤａ超の夾雑物を含有するレーン８における試料の残存物（蛋白１０μｇ）；レーン１１は未濾過の組み換えヒトバキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１ロット番号ＨＢＰＧ１の５μｇ；レーン１２は未濾過の組み換えヒトバキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１ロット番号ＨＢＰＤＳ４の５μｇ；レーン１３は未濾過の組み換えヒトバキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１ロット番号ＨＢＭＣ１の５μｇ；レーン１４は未濾過の組み換えヒトバキュロウイルス誘導ＣＣＬ２１ロット番号ＨＢＤＳ１の５μｇである。
【図９】図９は調製物から高分子量の夾雑物を除去するための濾過によりバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１の抗腫瘍活性が除去されることを示す折れ線グラフである。精製されたバキュロウイルス、ＣＣＬ２１調製物の夾雑物（図８）はバキュロウイルス発現ＣＣＬ２１調製物と同様に効果的に腫瘍生育を抑制する。
【図１０Ａ】図１０Ａは実施例８に示すとおり、記載した組成物に曝露した場合のインビトロの腫瘍細胞のＰＢＭＣ媒介毒性を示す折れ線グラフである。細胞ペレット試料は上澄み試料よりも大きい細胞毒性応答を誘導した。ＣＣＬ２１発現バキュロウイルスまたは対照バキュロウイルスＢＶ７６２の何れかを感染させた細胞は顕著な細胞毒性を示した。ＧＡＭは細胞培養によりコンディショニングされていない生育試験培地（対照）；ＢＶ４２２はＣＣＬ２１発現バキュロウイルス；ＢＶ７６２はＲａｆ発現バキュロウイルスである。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは実施例８に記載するとおり、０．２μｍのフィルターを通した濾過の後の記載した組成物に曝露した場合のインビトロの腫瘍細胞のＰＢＭＣ媒介毒性を示す折れ線グラフである。濾過による高分子量の物質の除去により細胞毒性は顕著に低下した。細胞ペレット試料は残存する軽度〜中等度の細胞毒性を示していた。
【図１１Ａ】図１１Ａは記載した刺激物質に応答したＣＤ８６およびＭＨＣＩＩの樹状細胞発現における変化を示す棒グラフである。マウス骨髄誘導樹状細胞を調製し、実施例９に記載するとおり分析した。ＨＩＶｇａｇ蛋白を発現するワクシニアウイルス（ＶＬＰ）を陽性対照として使用した。ＶＬＰと同様、生存バキュロウイルスもＣＤ８６およびＭＨＣＩＩの発現を誘導し、ＤＣ成熟を示していた。黒はＣＤ８６の発現；灰色はＭＨＣＩＩの発現を示す。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは記載した刺激物質に応答したＣＤ８６およびＭＨＣＩＩの樹状細胞発現における変化を示す棒グラフである。ヒト単球誘導樹状細胞を調製し、実施例９に記載するとおり分析した。ＨＩＶｇａｇ蛋白を発現するワクシニアウイルス（ｐ５５ＶＬＰ）を陽性対照として使用した。ｐ５５ＶＬＰと同様、生存バキュロウイルスもＤＣ成熟を誘導した。黒はＣＤ８６の発現；灰色はＨＬＡ−ＤＲの発現を示す。
【図１２】図１２は実施例１０に記載したとおり実施したクロム放出試験の結果を示す。ＨＩＶｇａｇ蛋白を発現するワクシニアウイルス（ＶＬＰ）を陽性対照として使用した。ＶＬＰと同様、生存バキュロウイルスも細胞毒性Ｔ細胞溶解を誘導する強力なアジュバントとして作用する。
【図１３】図１３は実施例８に示すとおり、記載した組成物に曝露した場合のインビトロの腫瘍細胞のＰＢＭＣ媒介毒性を示す。
【図１４】図１４はインビボの抗腫瘍活性とのＰＢＭＣ細胞毒性試験の相関性を示す。
【図１５】図１５は抗ｇｐ６４モノクローナル抗体によるバキュロウイルス腫瘍細胞殺傷のブロックを示す。実施例１３参照。
【図１６】図１６は不活性化されたバキュロウイルスにより誘導されたインビトロのＰＢＭＣ誘導腫瘍細胞殺傷を示す。実施例１４参照。
【図１７】図１７は腫瘍細胞がバキュロウイルスに対する第１の標的であることを示す。実施例１５参照。
【図１８】図１８はバキュロウイルスを用いた肺癌の動物モデルにおける腫瘍生育の抑制を示す。実施例１６参照。
【図１９】図１９はインビボおよびインビトロの病原性ウイルス攻撃からのバキュロウイルス誘導保護を示す。水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を用いてインビトロおよびインビボで細胞を攻撃した。実施例１７参照。
【図２０】図２０はバイスタンダー効果を示す。最大殺傷効果はバキュロウイルスに腫瘍細胞の集団の僅か２０％しか暴露しなかった場合でも達成される。