【事件の表示】
　特願２０００−５１２９２７「繊毛虫（原生動物）の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質を生産する発酵法」拒絶査定不服審判事件〔平成１１年　４月　１日国際公開、ＷＯ９９／１５６３４、平成１３年１０月　９日国内公表、特表２００１−５１７４２９〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯
　この出願（以下、「本願」という。）は、１９９８年９月１０日を国際出願日（優先権主張　１９９７年９月１９日　ドイツ）とする出願であって、以降の手続の経緯は以下のとおりである。
　
平成２０年１０月３日付け　　拒絶理由通知
平成２１年４月７日　　　　　意見書、手続補正書
平成２２年３月１６日付け　　拒絶理由通知
平成２２年７月５日　　　　　意見書、手続補正書
平成２２年８月１７日付け　　拒絶査定
平成２２年１２月１７日　　　審判請求書
　
　
第２　本願発明について
　本願の請求項１〜１２に係る発明は、平成２２年７月５日付け手続補正書の特許請求の範囲の請求項１〜１２に記載された事項により特定されるとおりのものであり、そのうち、本願の請求項１に係る発明（以下「本願発明」という。）は以下のとおりのものである。（なお、本願の明細書を、以下「本願明細書」という。）
　
「生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを生産するための連続発酵法であって、
（ｉ）生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを製造するために、複合無菌水性培地において繊毛虫を連続的に培養すること；
（ｉｉ）一日あたり前記培地の体積の０．１〜１２倍の抽出率で、生産されたバイオマスを含む前記培地を採取すること；
（ｉｉｉ）連続発酵培養を維持するために、バイオマスを含む採取された培地を複合無菌水性培地で置き換えること；
を含み、前記繊毛虫が、テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）、パラメシウム（Ｐａｒａｍｅｃｉｕｍ）、コルポーダ（Ｃｏｌｐｏｄａ）、グラウコマ（Ｇｌａｕｃｏｍａ）、パラウロネマ（Ｐａｒａｕｒｏｎｅｍａ）、エンゲルマニエラ（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎｉｅｌｌａ）、スチロニチア（Ｓｔｙｌｏｎｉｃｈｉａ）、ユープロテス（Ｅｕｐｌｏｔｅｓ）及びコルピディウム（Ｃｏｌｐｉｄｉｕｍ）の目に属する野生株、及びこれらの株の突然変異体及び／又は組換え体から選択され、テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）目の繊毛虫が、テトラヒメナ・ピリフォーミス（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ・ｐｙｒｉｆｏｒｍｉｓ）又はテトラヒメナ・サーモフィラ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ・ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）である前記発酵法。」
　
第４　原査定の理由の概要
　原査定における拒絶の理由の概要は、本願発明は、その出願前に頒布された以下の引用文献１〜６に記載された発明に基づいて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができないとするものである。
　
１.特開平０８−２２８７６３号公報
２.特開平０８−２３８０９７号公報
３.特開平０９−０２３７８５号公報
４.Protoplasma,1986,132(1-2),p.99-106
５.Protoplasma,1985,125(3),p.214-8
６.Compt.Rend.Trav.Lab.Carlsberg,1975,40(17),p.205-13
　
　
第５　刊行物に記載された事項
１　刊行物１に記載された事項
　本願の出願前である１９９６年９月１０日に頒布された刊行物である特開平８−２２８７６３号公報（上記「引用文献１」と同じ。以下、「刊行物１」という。）には、以下の事項が記載されている。
　
（１ａ）「【請求項１】  脂質依存性テトラヒメニド（脂質要求種）の培養方法において、脂質依存性テトラヒメニドを、
５〜１００ｇ／リットルの脱脂粉乳または綿実粕粉末、
１〜２０ｇ／リットルの酵母エキス、
０.０３ｇ／リットルの錯体鉄イオンの形態での鉄、および０〜１００ｇ／リットルのグルコースを含有する培地上で培養することからなる方法。
・・・
【請求項７】  培養は細胞を膜によって保持しながら、連続的に実施する請求項１〜６の一項に記載の方法。
【請求項８】  脂質依存性テトラヒメニドはTetrahymena setosaである請求項１〜７の一項に記載の方法。
【請求項９】  Tetrahymena setosa ATCC 30782、その突然変異体または変異体を脂質依存性テトラヒメニドとして用いる請求項８に記載の方法。
【請求項１０】  脂質依存性テトラヒメニドはTetrahymena rostrataである請求項１〜７の一項に記載の方法。
【請求項１１】  脂質依存性のテトラヒメニドはTetrahymena rostrata ATCC 30770である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】  脂質依存性のテトラヒメニドはTetrahymena patulaである請求項１〜７の一項に記載の方法。
【請求項１３】  脂質依存性テトラヒメニドはTetrahymena patula CCAP 1630/2である請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】  脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）から有用な生物産生産物を製造する方法において、脂質依存性のテトラヒメニドを請求項１〜１３の一項に記載の方法によって培養し、既知の方法を用いて有用な生物産生産物を単離することからなる方法。」（【特許請求の範囲】）
　
（１ｂ）「【発明の属する技術分野】本発明は脂質依存性のテトラヒメニド、いわゆる脂質要求種または選好性種、とくにTetrahymena setosaの培養方法、ならびに脂質依存性テトラヒメニドからの有用な生物産生産物（biogenic products）とくに脂質依存性テトラヒメニドによって周辺培地中に分泌される酵素、細胞内酵素および多不飽和脂肪酸の製造方法に関する。」（段落【０００１】）
　
（１ｃ）「すでに１９７２年には、繊毛虫類綱全毛類亜綱のTetrahymena pyriformisがリソソーム酵素、β−Ｎ−アセチルヘキソースアミニダーゼ、酸ホスファターゼ、α−およびβ−グルコシダーゼ、アミラーゼ、プロテイナーゼ、デオキシリボヌクレアーゼおよびリボヌクレアーゼを周辺の培地中に分泌することが証明された（M. Mueller，1972, J. Cell. Biol., 52, 478）。Blum（J.J. Blum, 1975, J.Cell Physiol., 86, 131）はα−マンノシダーゼ、β−フコシダーゼおよびβ−ガラクトシダーゼも分泌されることを証明し得た。T. thermophila（以前にT.pyriformisの交配型１とされ、したがってきわめて類似している）はβ−Ｎ−アセチルヘキソースアミニダーゼ、酸ホスファターゼ、α−およびβ−グルコシダーゼ、α−マンノシダーゼ、プロテアーゼおよびリホスホジエステラーゼＩを分泌することが証明され（T. Kiy  A. Tiedtke, 1991, Appl. Microbiol. Biotechnol., 35, 18; T. Kiy,  A. Tiedtke, 1993, BioEng., 5, 22）、またホスホリパーゼＣおよびホスホリパーゼＡ1もT. thermophilaによって分泌される酵素として同定された（J.Florin-Christensen等, 1986, Comp. Biochem. Physiol.,85B, 149；J. Florin-Christensen等, 1986, Comp. Biochem. Physiol., 85B,143）。
　上記種が産生するこれらの酵素には多くの利用可能性がある。すなわち、β−ガラクトシダーゼは、たとえば、ラクトースの切断に、またβ−ガラクトシダーゼ触媒グリコシド転移においてたとえばβ−ガラクトピラノシド、アラビノピラノシドおよびフコピラノシドの製造に使用できる。ホスファターゼは、たとえば、食品中のリン酸塩含量の減量に使用できる。β−グルコシダーゼはグルコ糖の合成に使用できる。プロテアーゼはアセチルトランスフェラーゼ反応を利用するペプチド合成に使用できる。
　細胞内酵素およびこれらの種によって周辺培地に分泌される酵素に加えて、これらの繊毛虫類の培養により、商業的に価値のあるその他の産物が培養上清またはそれらの細胞自体から得られる。すなわちγ−リノレン酸がT. thermophila細胞から単離されているし、またメラニン前駆体がT. thermophila色素突然変異体の培養上清から単離されている（T. Kiy  A. Tiedtke, 1993, BioEng., 5, 22）。
　最初に挙げた２つの種は、いわゆるTetrahymena pyriformis群（complex）に属し、単純な、安価な栄養培地上で比較的容易に培養される．この理由から、pyriformis群の種の大量培養にも単純な無菌培地が適当である（K. Keenanら, 1978, J. Protozool., 25, 385）。水１００mlあたり０.３ｇのビール酵母、１mgの大豆レシチンおよび０.１mgの脱脂粉乳からなる、いわゆるＴＧＭＭ−２培地（K. Keenanら, 1978, J. Protozool., 25, 385）、ならびに最近では、脱脂粉乳、酵母エキスおよびグルコースからなるいわゆる脱脂粉乳培地（T. Kiy  A. Tiedtke, 1992, Appl. Microbiol. Biotechnol., 37, 576）がこれらの代表的なpyriformis群の大量培養のための培養培地としてとくに提案されている。」（段落【０００２】〜【０００５】）
　
（１ｄ）「しかしながら、脂質依存性テトラヒメニド、いわゆる「脂質要求種」もしくは「選好性種」の群からの繊毛虫類（たとえば、T. setosa、T. rostrata、T.paravoraxおよびT. patulaがとくに挙げられる）の比較的長時間の大量培養はこれまで成功していない。これらの繊毛虫類は、それらの増殖における栄養条件がきわめて繁雑で特殊な栄養要求性を有する。これらの理由により、それらの可能性はほとんど研究されていない（K. Keenanら，1978, J. Protozool., 25, 385）。その結果、有用な物質たとえば酵素の存在の可能性は検討されていなかった。
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の目的は、分泌性もしくは細胞内の有用な生物産生産物とくに酵素および不飽和脂肪酸を得ることができる脂質依存性テトラヒメニド（脂質要求種）を、高細胞濃度で比較的長時間にわたり大量に単純な培地上に維持するのに適当な、脂質依存性テトラヒメニド（脂質要求種）の培養方法を提供することにある。」（段落【０００８】〜【０００９】）
　
（１ｅ）「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）は好気的に、すなわち、たとえば振盪フラスコまたはファーメンター中で振盪または攪拌しながら、必要に応じて空気または酸素を通じて、深部培養によって培養される。さらに、ｐＨを調整することもできる。培養は１８〜３７℃の温度範囲で行うことができるが、２３〜３３℃の温度が好ましい。T．setosaは上述の条件下に、培養液中に酵素が蓄積するまで培養する。別法として、発酵は既にT．thermophilaを用いて証明されているように（T．Kiy  A．Tiedtke，1992，Appl．Microbiol．Biotechnol., 38,141）、連続的に実施することもできる。この場合、生成物を含有する培養培地は連続的に収穫される。」（段落【００２９】）
　
（１ｆ）「培養を、細胞保持法を用いてたとえば膜バイオリアクター中で連続的に行う場合には、単位液量あたりの活性を５０倍まで上昇させることが可能である。」（段落【００３８】）
　
２　刊行物２に記載された事項
　本願の出願前である１９８６年に頒布された刊行物であるJ. Larsen and J. R. Nilsson，A new principle of continuous flow cell cultivation，Protoplasma，1986，132(1-2)，p.99-106（上記「引用文献４」と同じ。以下、「刊行物２」という。）には、以下の事項が記載されている。
　
（２ａ）「A completely liquid-filled culture chamber with gas exchange across a synthetic membrane (Larsen and Nilsson 1985) was incorporated into an automatic continuous flow system. The absence of an airliquid interface in the system permits removal of cell samples, and addition of fresh medium, under strictly sterile conditions. In this system,Tetrahymena pyriformis can be kept under optimal growth conditions in a rich nutrient medium and any defined cell density may be maintained for extended periods of time by varying the dilution rate of the culture. 」（第９９頁左欄第２〜１０行）
（当審訳：合成の膜によりガス交換を行うことのできる完全に液体で充満される培養槽（LarsenとNilsson 1985）は、自動制御された連続フローシステムに導入されている。システムにおいて気相界面が不要となったことは、厳格な培養条件の下での、細胞サンプルの除去や、新鮮な培地の添加を可能とするものである。このシステムにおいて、Tetrahymena pyriformis（テトラヒメナ・ピリフォーミス）を、栄養リッチな培地で最適成長条件の下で培養することができ、一定の細胞密度を、培養液の希釈率を変えることで、長期間維持することができた。）
　
（２ｂ）「Incorporation of this culture chamber into an automatic continuous flow system is shown in Fig.2. At one end, the chamber is connected to a mixing syringe which mixes the contents before removal of a cell sample through a modified Cornwall valve. After removal of a sample, an identical volume of fresh, preheated mediumu is introduced through a nomal Cornwall B-D filling outfit valve(Becton Dickinson andd Company, U.S.A)which connects the chamber to a reservoir tank containing up to 900ml medium 」（第１００頁左欄下から１４〜７行）
（当審訳：この培養槽を自動制御された連続フローシステムに導入したものは図２に示されている。培養槽の一方には、改良されたコーンウォール・バルブを介して、細胞のサンプルを除く前に培養物を混合するための混合シリンジが接続されている。サンプルを除いた後に、一定量の新鮮な予め加温した培地が、培養槽と９００ｍｌ以下の容量の貯蔵タンクとを接続する通常のコーンウォールＢ−Ｄの注入用バルブ一式（ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー、アメリカ合衆国）を介して、導入される。）
　
（２ｃ）「
Fig.5 Steady-state cell densities as function of the dilution rate in the semi-continuous flow system, without withdrawal of cell samples (●), and withdrawals every 90 minutes (○)(for clarity only every 4th point is plotted), withdrawals every 70 minutes(■)(every 6th point shown), and withdrawals every 57 minutes（□）(every 10th point shown). Each point is the mean of three experiments; SD of the mean less than 12%」（第１０２頁右欄）
（当審訳：半連続的フローシステムにおける、希釈率との関係における定常状態の細胞密度、細胞サンプルの回収なし（●）、９０分毎の回収（明確にするために、４回おきのみでプロットしたものである）、７０分毎の回収（■）（６回おきのポイントを示す）、５７分毎の回収（□）（１０回おきのポイントを示す）。どの時点も、３回の実験の結果であり、標準偏差は１２％以下である。）
（２ｄ）「As shown in Fig.5, a small change in the slope of the growth curve can be seen at a cell density of about 160,000 cells/ml. This is not easily demonstrated in batch cultures but become evident in the continuous flow system when 4ml cell samples were withdrawn every 57 minutes from the 20ml cell culture. With this dillution rate, the cell density increased slowly from 60,000 cells/ml to about 160,000 cells/ml. At a density of about 160,000 cells/ml, there was an increase in the generation time and steady state was reached at a generation time of 178 minutes. Another change in the growth curve was found at a density of about 310,000 cells/ml. Here steady state with a generation time 217 minutes was achieved by changing the interval between the samplings from 57 to 70 minutes. A further prolongation of the generation time was noticed at a cell density of about 430,000 cells/ml, where a steady state was obtained with a generation time of 270 minutes.」
（当審訳：図５に示すように、成長曲線の勾配の小さな変化は、約１６０，０００ｃｅｌｌｓ／ｍｌの細胞密度の時点でみることができる。これは、バッチ培養では容易に観察できないものであるが、４ｍｌの細胞サンプルを５７分毎に２０ｍｌの細胞培養物から回収したときに明確になる。この希釈率では、細胞密度は、約６０，０００ｃｅｌｌｓ／ｍｌから約１６０，０００ｃｅｌｌｓ／ｍｌになるまで、ゆっくりと増加する。約１６０，０００ｃｅｌｌｓ／ｍｌになったときに世代時間が増加し、世代時間が１７８分のときに一定の状態に達する。成長曲線の他の変化は、細胞密度が約３１０，０００ｃｅｌｌｓ／ｍｌとなったときに見られる。ここでは、５７分から７０分へとサンプリングの時間を変化させることにより、世代時間が２１７分のときに安定した状態に達するようになる。世代時間をさらに長くすると、細胞密度が約４３０，０００となり、２７０分の世代時間で安定な状態となる。）
　
　
第６　当審の判断
１　刊行物１に記載された発明
　刊行物１の上記摘記事項（１ａ）には、請求項１４として、「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）から有用な生物産生産物を製造する方法において、脂質依存性のテトラヒメニドを請求項１〜１３の一項に記載の方法によって培養し、既知の方法を用いて有用な生物産生産物を単離することからなる方法」の発明が記載されているところ、請求項１４には請求項１を引用しているから、
「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）から有用な生物産を製造する方法において、脂質依存性のテトラヒメニドを、
５〜１００ｇ／リットルの脱脂粉乳または綿実粕粉末、
１〜２０ｇ／リットルの酵母エキス、
０.０３ｇ／リットルの錯体鉄イオンの形態での鉄、および０〜１００ｇ／リットルのグルコースを含有する培地上で培養し、既知の方法を用いて有用な生物産生産物を単離することからなる方法。」の発明（以下「引用発明」という。）が記載されているといえる。
　
２　本願発明と引用発明との対比・判断
（１）対比
　本願発明と引用発明とを対比すると、引用発明の「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）」は、刊行物１の上記摘記事項（１ａ）の請求項８〜１３の記載からみて、「テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）」に属するといえるから、本願発明の「テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）、パラメシウム（Ｐａｒａｍｅｃｉｕｍ）、コルポーダ（Ｃｏｌｐｏｄａ）、グラウコマ（Ｇｌａｕｃｏｍａ）、パラウロネマ（Ｐａｒａｕｒｏｎｅｍａ）、エンゲルマニエラ（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎｉｅｌｌａ）、スチロニチア（Ｓｔｙｌｏｎｉｃｈｉａ）、ユープロテス（Ｅｕｐｌｏｔｅｓ）及びコルピディウム（Ｃｏｌｐｉｄｉｕｍ）の目に属する野生株、及びこれらの株の突然変異体及び／又は組換え体から選択される」「繊毛虫」に相当するといえる。
　
　本願発明の「生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを生産するための連続発酵法」について、本願明細書の段落【０００１】には「本発明は、所望の生物由来の貴重物質を含有するバイオマスが連続（永続）細胞抽出により得られる、繊毛虫（原生動物）の連続大量培養を用いた生物由来の貴重物質（ｖａｌｕａｂｌｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）を産生する発酵法に関する」と、段落【０００２】には「細胞に付着している生物由来の貴重物質を得るためには、細胞全体、いわゆるバイオマスを採取することが必要である。この目的のためには、一般には（即ち貴重物質の生産者としての細菌又は真菌を用いた発酵法として一般に知られている）いわゆるバッチ発酵が実施されるが、ここでは発酵槽に播種し、最大のバイオマス又は生成物濃度に達するまで細胞を培養し、次いでバイオマスが採取される。」と、段落【０００４】には「貴重物質の生産者としての細菌又は酵母を用いた発酵技術としては、バッチ発酵法だけでなく、「連続発酵法」も知られている。この方法では、ある細胞密度に達するまで細胞が発酵槽で培養され、次いで連続細胞抽出によって発酵槽から採取されるが、この間新鮮な培養基が同時に同量追加される」と記載されており、本願発明の「生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを生産するための連続発酵法」とは、「繊毛虫（原生動物）の連続大量培養」することにより「生物由来の貴重物質（ｖａｌｕａｂｌｅ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ）」を得るためのものであり、「バイオマス」とは「繊毛虫（原生動物）の連続大量培養」することにより得られる「細胞全体」を含む培養液であり、「連続発酵法」とは「ある細胞密度に達するまで細胞が発酵槽で培養され、次いで連続細胞抽出によって発酵槽から採取されるが、この間新鮮な培養基が同時に同量追加される」方法であるといえる。
　他方、引用発明の「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）から有用な生物産を製造する方法において、脂質依存性のテトラヒメニドを・・・培養し、既知の方法を用いて有用な生物産生産物を単離することからなる方法」は、本願発明と同様に、「繊毛虫細胞」である「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）」を培養して「有用な生物産生産物を製造」するものであり、「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）」を培養することにより「バイオマス」も生産されるといえるから、本願発明の「生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを生産するための連続発酵法」とは、「生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを生産する発酵法」である点で共通する。
　
　なお、引用発明は、「脂質依存性のテトラヒメニド」を培養するための「培地」の組成について、「５〜１００ｇ／リットルの脱脂粉乳または綿実粕粉末、１〜２０ｇ／リットルの酵母エキス、０.０３ｇ／リットルの錯体鉄イオンの形態での鉄、および０〜１００ｇ／リットルのグルコースを含有する培地」と特定するものであり、本願発明は培地の組成を特定するものではないが、本願明細書の段落【００１９】〜【００２１】には「炭素源として、好ましくは以下に挙げる物質の少なくとも１つが使用される：グルコース、・・・。炭素源の濃度は、培養基に対して０．２〜２０重量％の範囲とすべきである。
　窒素源として、好ましくは以下に挙げる物質の少なくとも１つが使用される：・・・、酵母抽出物、・・・、脱脂粉乳、・・・。窒素源の濃度は、培養基に対して０．１〜１０重量％の範囲とすべきである。
　本発明による方法の変形では、・・・。それとは別に又はさらに加えて、問題にしている繊毛虫の成長及び増殖速度をさらに最適化するために、・・・鉄、・・・微量元素及び増殖因子を追加することも可能である」と記載されているから、本願発明の「発酵法」で用いる培地は、引用発明の組成の培地を包含するものであるといえる。
　
　したがって、両者は、
「生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを生産する発酵法であって、前記繊毛虫が、テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）、パラメシウム（Ｐａｒａｍｅｃｉｕｍ）、コルポーダ（Ｃｏｌｐｏｄａ）、グラウコマ（Ｇｌａｕｃｏｍａ）、パラウロネマ（Ｐａｒａｕｒｏｎｅｍａ）、エンゲルマニエラ（Ｅｎｇｅｌｍａｎｎｉｅｌｌａ）、スチロニチア（Ｓｔｙｌｏｎｉｃｈｉａ）、ユープロテス（Ｅｕｐｌｏｔｅｓ）及びコルピディウム（Ｃｏｌｐｉｄｉｕｍ）の目に属する野生株、及びこれらの株の突然変異体及び／又は組換え体から選択される前記発酵法。」
という点で一致するが、以下の点で相違する。
　
相違点１：発酵の対象が、「テトラヒメナ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ）」の目に属する「繊毛虫細胞」のうち、本願発明では、「テトラヒメナ・ピリフォーミス（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ・ｐｙｒｉｆｏｒｍｉｓ）又はテトラヒメナ・サーモフィラ（Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ・ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ）」であるのに対し、引用発明では、「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）」である点。
　
相違点２：「繊毛虫細胞」の培養方法について、本願発明では、「バイオマスを生産するための連続培養方法」であって、「（ｉ）生物由来の物質を含有する繊毛虫細胞のバイオマスを製造するために、複合無菌水性培地において繊毛虫を連続的に培養すること；（ｉｉ）一日あたり前記培地の体積の０．１〜１２倍の抽出率で、生産されたバイオマスを含む前記培地を採取すること；（ｉｉｉ）連続発酵培養を維持するために、バイオマスを含む採取された培地を複合無菌水性培地で置き換えること」を含むものであるのに対し、引用発明では、そのような具体的な培養方法が特定されていない点。
　
（２）判断
（ア）相違点１について
　刊行物１の上記摘記事項（１ｃ）及び（１ｄ）の記載からみて、「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）及び「T. thermophila」（テトラヒメナ・サーモフィラ）を大量培養することにより有用な物質を得ること、「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）及び「T. thermophila」（テトラヒメナ・サーモフィラ）は「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）」に比べて比較的容易に大量培養できることは、本願の優先日前から知られていたといえる。
　そうすると、引用発明において、必要とされる「有用な物質」に応じて、大量培養による有用な物質の生産を、「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）」に代えて、より容易に培養できる「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）及び「T. thermophila」（テトラヒメナ・サーモフィラ）により行うことは当業者が容易に想到し得たことといえる。
　
（イ）相違点２について
　本願発明の「（ｉ）・・・複合無菌水性培地において繊毛虫を連続的に培養すること；（ｉｉ）・・・；（ｉｉｉ）・・・バイオマスを含む採取された培地を複合無菌水性培地で置き換えること」の「複合無菌水性培地」について、本願明細書の段落【００１０】及び【００１１】には、「本発明の目的にとって、複合培地とは、微生物を培養して得られる天然の生成物又は抽出物が水性溶液に溶けた栄養培地である。本発明の目的にとって、無菌培地とは、飼料及び餌生物（いわゆる食用生物）を含まない栄養培地である」と記載されており、本願発明の「複合無菌水性培地」とは「微生物を培養して得られる天然の生成物又は抽出物が水性溶液に溶けた」ものであって、「飼料及び餌生物（いわゆる食用生物）を含まない栄養培地」であるといえる。　一方、引用発明の「培地」も、「微生物を培養して得られる天然の生成物又は抽出物」である「酵母エキス」を含むものであり、その組成からみて、「飼料及び餌生物（いわゆる食用生物）」を含んでいないといえるから、本願発明の「複合無菌水性培地」に相当するといえる。
　
　刊行物１の上記摘記事項（１ａ）の請求項７、（１ｅ）、（１ｆ）には、引用発明の「脂質依存性のテトラヒメニド（脂質要求種）から有用な生物産を製造する方法」を、膜バイオリアクターを用いるものであるが、連続的に実施、生成物を含有する培養培地を連続的に収穫することが記載されており、上記刊行物２の上記摘記事項（２ａ）〜（２ｄ）には、「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）の、５７〜９０分毎に「細胞サンプル」を回収し、「新鮮な予め加温した培地」を添加する、半連続発酵法に関するものであるが、一定時間経過すると細胞密度が安定することが記載されている。
　また、有用物質を回収するために、「Tetrahymena」（テトラヒメナ）の細胞全体を含むバイオマスを採取することも本願の優先日前から知られていたことといえる（刊行物１には、上記摘記事項（１ｃ）の「これらの繊毛虫類の培養により、商業的に価値のあるその他の産物が培養上清またはそれらの細胞自体から得られる。すなわちγ−リノレン酸がT. thermophila細胞から単離されているし、・・・」との記載からみて、「細胞自体」を含む培養液、すなわち「バイオマス」から「商業的に価値のある・・・産物」を回収することが開示されているといえる。また、本願明細書の段落【０００２】にも、バッチ発酵法によるものであるが、細胞全体、いわゆるバイオマスを採取することが記載されている。）。
　さらに、一般に、微生物を培養する方法として、「（ｉ）バイオマスを製造するために、培地において連続的に培養すること；（ｉｉ）生産されたバイオマスを含む培地を採取すること；（ｉｉｉ）連続発酵培養を維持するために、バイオマスを含む採取された培地を培地で置き換える」ことを含む「連続培養方法」は周知の培養方法であるといえる（この点について、ＷＯ９７／０６２４８号公報の第２頁下から第６行〜第３頁上から５行（当該箇所の翻訳の参考として、特表平１１−５１０３９２号公報の第６頁下から第５行〜第７頁第１行）、特表平７−５０６７２１号公報の左上欄第２〜１２行、特開昭６２−２８９１７７号公報の特に実験例１及び実験例３、特開昭５６−１５８９２号公報の特に実施例３を参照）。
　
　そうすると、引用発明において、培養する「繊毛虫細胞」を「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）とするとともに（上記（ア）を参照）、バイオマスを回収するための培養方法として、「（ｉ）・・・バイオマスを製造するために、複合無菌水性培地において連続的に培養すること；（ｉｉ）生産されたバイオマスを含む前記培地を採取すること；（ｉｉｉ）連続発酵培養を維持するために、バイオマスを含む採取された培地を複合無菌水性培地で置き換える」ことを含む「連続培養方法」を採用することは当業者が容易に想到し得たことといえる。
　
　そして、「生産されたバイオマスを含む培地を採取」する割合である抽出率について、上記刊行物２の（２ｃ）及び（２ｄ）に記載されている、培地２０ｍｌにつき５７〜９０分毎に４ｍｌの培養液を回収することは、本願発明の「一日あたり培地の体積の０．１〜１２倍」の範囲内で培養液を回収・採取することになるから、引用発明において、連続培養方法を採用した際に、「一日あたり培地の体積の０．１〜１２倍」の範囲で抽出率を設定することも、当業者が適宜になし得たことといえる。
　
（ウ）本願発明の効果について
　本願発明の効果について、本願明細書の段落【０００８】には「上記の欠点を回避し、特に工業使用に非常に適している、細胞抽出を用いた繊毛虫の連続発酵法を提供することが本発明の目的である」と、段落【００２５】には「この発酵法の結果を図１に図式的に示す。そこに示されたプロットから、細胞を連続的に抽出しても、繊毛虫は希釈されずに永続的かつ連続的に増殖することが明らかである。換言すれば、比較的高い細胞抽出（Ｄ＝２．４）でも、培養物は細胞抽出と細胞増殖との動的平衡状態にあった」との記載からみて、「工業使用に非常に適している、細胞抽出を用いた繊毛虫の連続発酵法を提供すること」、より具体的には、「比較的高い細胞抽出（・・・）でも、培養物は細胞抽出と細胞増殖との動的平衡状態」である連続発酵方法を提供することであるといえる。
　上記（イ）で検討したように、上記刊行物２の上記摘記事項（２ｃ）及び（２ｄ）には、「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）の半連続発酵法に関するものであるが、５７〜９０分毎に「細胞サンプル」を回収し、「新鮮な予め加温した培地」を添加しても、一定時間経過すると細胞密度が安定すること、すなわち、「細胞抽出と細胞増殖との動的平衡状態」になることが記載されているから、本願発明の上記効果は、刊行物１〜２及び周知技術から、当業者が予測できる範囲内のものといえる。
　
３　請求人の主張
　平成２２年１２月１７日付け審判請求書において、請求人は、「引用文献４では、サンプル取りだしおよび新たな培地の添加に関連して適切な攪拌をいかに行うかが問題であることが指摘されております（引用文献４、左欄、下から１０行〜右欄１１行）。本発明と引用発明の相違点である連続的なサンプル取りだしおよび新たな培地の添加は、本発明により解決される技術的な課題の一つに相当しますが、引用文献４には、この技術的な課題の解決について何ら具体的な記載も示唆も含まれておりません。したがって引用文献４の記載参酌した当業者が、引用文献４の方法を連続培養法に適用することは考えられません。一方、本明細書は、本発明の連続発酵法により繊毛虫細胞のバイオマスの生産が可能であることを初めて開示するものであり、その点については本明細書の実施例１〜４および図１〜３において十分に裏付けられております。本明細書の当該記載に開示される本発明の効果は引用文献４の記載から想到できるものではありません。」と主張している。
　しかしながら、確かに引用文献４は、「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）の半連続的フローシステムによる半連続発酵法に関するものであるが、上記２（イ）で検討したように、「連続的なサンプル取りだしおよび新たな培地の添加」を行う「連続発酵法」自体は、本願の優先日当時周知の発酵法であったといえるから、引用発明において、培養する「繊毛虫細胞」を「Tetrahymena pyriformis」（テトラヒメナ・ピリフォーミス）とするとともに、バイオマスを回収するための培養方法として、「連続培養方法」を採用することは当業者が容易に想到し得たことといえる。
　さらに、請求人は、「引用文献４では、サンプル取りだしおよび新たな培地の添加に関連して適切な攪拌をいかに行うかが問題である」ことを指摘しているが、本願発明の「連続培養方法」においても、本願明細書の【００１７】の「本発明による方法の好ましい態様では、発酵は撹拌又は泡沫カラム、又はエアリフト発酵槽において実行される」との記載からみて、培養の際に撹拌を行うことも意図しているといえるから、請求人のこの主張を採用することはできない。
　
　
第７　むすび
　以上のとおり、本願発明は、刊行物１〜２に記載された発明及び周知技術に基づいて、その出願前にその発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、その余のことについて検討するまでもなく、本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。