【手続補正書】
【提出日】平成18年5月24日(2006.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
真核標的細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで活性化する方法であって、
ａ．それらの標的細胞中で異種刺激依存性イオンチャンネルを発現させることによって標的細胞を感作するステップ、及び
ｂ．前記感作した標的細胞に刺激を与えてイオンチャンネルを誘発し、それによって前記標的細胞を活性化させて前記イオンチャンネルの誘発後に前記標的細胞の前記イオンチャンネルの誘発とは異なる応答を誘導するステップであって、活性化は、標的細胞が神経細胞では、分極又は脱分極となり、あるいは、標的細胞からの分泌の開始又は停止となり、標的細胞が筋肉又は他の収縮細胞では、収縮又は弛緩となり、標的細胞が感覚レセプターでは、細胞内Ｃａ２＋濃度の上昇となる、ステップ、
を含む方法。
【請求項２】
前記刺激依存性イオンチャンネルがリガンド依存性イオンチャンネルである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記イオンチャンネルを作動させるリガンドに前記標的細を曝露することによって前記刺激を前記リガンド依存性イオンチャンネルに与える、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記刺激依存性イオンチャンネルが、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＭ８およびＰ２Ｘ２からなる群から選択される、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
前記リガンドが最初は感光性ケージ化リガンドの形であり、前記感光性ケージ化リガンドの光への曝露後に前記刺激を前記リガンド依存性イオンチャンネルに与える、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
定義した細胞型内でのみ起こるように前記異種刺激依存性イオンチャンネルの前記発現を制御する、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
誘導性又は抑制性プロモーター、好ましくは、抗生物質、４−ＯＨタモキシフェン、又は重金属に応答するプロモーターのうちから選択されるプロモーターによって、
細胞型特異的プロモーターによって、または
二次的細胞型特異的調節要素、好ましくは、前記異種刺激依存性イオンチャンネルをコードする遺伝子配列とその配列に関連するプロモーターの間に配置されたｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ配列、並びに細菌Ｃｒｅタンパク質をコードする遺伝子配列の制御発現に関連する細胞型特異的プロモーターを含む、二次的細胞型特異的調節要素によって、
前記発現を制御する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記標的細胞が、ニューロン細胞、分泌細胞、収縮細胞及び感覚細胞からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
ケージ種との結合がない場合に刺激依存性イオンチャンネルを誘発するのに有効なリガンドと感光性結合によって結合したケージ種を含む光活性性ケージ化リガンドであって、前記リガンドがカプサイシン、メントール及びイシリンからなる群から選択される、光活性性ケージ化リガンド。
【請求項１０】
前記ケージ種が、ＤＭＮＢ及びＤＭＮＰＥからなる群から選択される、請求項９に記載のリガンド。
【請求項１１】
機能的刺激依存性イオンチャンネルをコードする配列；真核標的細胞中のイオンチャンネルの発現をもたらすのに有効なプロモーター；及び前記プロモーターと同一又は異なっていてよい細胞型特異的発現調節要素を含む発現ユニット。
【請求項１２】
前記刺激依存性イオンチャンネルを発現している細胞の追跡又は選択に役立つタンパク質をコードするヌクレオチド配列、好ましくは、ＧＦＰ、ＥＧＦＰ、ＧＡＰ４３−ＥＧＦＰ、ＤｓＲｅｄ、ＤｓＲｅｄ２、ｓｙｎａｐｔｏ−ｐＨｌｕｏｒｉｎ、ｃａｍｅｌｅｏｎ、ｃａｍｇａｒｏｏ、ｐｅｒｉｃａｍ、Ｇ−ＣａＭＰ、ｃｌｏｍｅｌｅｏｎ、ｌａｃＺ、βラクタマーゼ、アミノグリコシドホスホトランスフェラーゼ、グルタミンシンセターゼ、及びジヒドロ葉酸レダクターゼからなる群から選択されるヌクレオチド配列、をさらに含む、請求項１１に記載の発現ユニット。
【請求項１３】
刺激依存性イオンチャンネルをコードする前記ヌクレオチド配列と細胞の追跡に役立つタンパク質をコードする前記ヌクレオチド配列とをリボソーム内部進入部位によって分離している、請求項１１または１２に記載の発現ユニット。
【請求項１４】
前記刺激依存性イオンチャンネルがリガンド依存性イオンチャンネルである、請求項１１から１３のいずれかに記載の発現ユニット。
【請求項１５】
前記刺激依存性イオンチャンネルが、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＭ８、及びＰ２Ｘ２からなる群から選択される、請求項１１から１４のいずれかに記載の発現ユニット。
【請求項１６】
前記プロモーターが、ステロイド、抗生物質、４−ＯＨタモキシフェン、重金属に応答するプロモーターなどの誘導性又は抑制性プロモーター；細胞型特異的プロモーター；および前記異種刺激依存性イオンチャンネルをコードするヌクレオチド配列と前記プロモーターの間に配置されたｌｏｘＰ−ｓｔｏｐ−ｌｏｘＰ配列を含む二次的細胞型特異的調節要素などの二次的細胞型特異的調節要素からなる群から選択される、請求項１１から１５のいずれかに記載の発現ユニット。
【請求項１７】
異種刺激依存性イオンチャンネルを発現している感作細胞であって、前記異種刺激依存性イオンチャンネルに関連したプロモーターと同一又は異なっていてよい発現調節要素によって前記異種刺激依存性イオンチャンネルの発現が制御されており、前記細胞の環境へのヒト介入がない場合に存在しない刺激に前記イオンチャンネルが応答し、前記イオンチャンネルの誘発によって前記感作細胞から前記イオンチャンネルの前記誘発とは異なる応答が誘導される、感作細胞。
【請求項１８】
前記感作細胞が神経細胞、分泌細胞、収縮細胞または感覚細胞である、請求項１７に記載の感作細胞。
【請求項１９】
前記刺激依存性イオンチャンネルがリガンド依存性イオンチャンネルである、請求項１７または１８に記載の感作細胞。
【請求項２０】
前記刺激依存性イオンチャンネルが、ＴＲＰＶ１、ＴＲＰＭ８、及びＰ２Ｘ２からなる群から選択される、請求項１７から２０に記載の感作細胞。
【請求項２１】
前記細胞が、請求項１０から１５のいずれかに記載の発現ユニットを含む、請求項１７から２０のいずれかに記載の感作細胞。
【請求項２２】
請求項１７から２１のいずれかの感作細胞を含む、非ヒト生存生物。
【請求項２３】
ニューロン及び神経内分泌経路をマッピングする方法であって、
（ａ）請求項１から８のいずれかに記載の、標的細胞を感作するステップ、及び
（ｂ）下流にあると想定される細胞の前記感作細胞の活性化に対する前記応答をモニタリングするステップ（下流の細胞の応答が観察されることによって、実際にこれらの細胞がニューロン又は神経内分泌経路の感作細胞の下流にあることを示す）
を含む方法。
【請求項２４】
特定の細胞型の細胞を評価して、前記細胞が疾患又は症状に関連する表現型をもたらすのに関与しているかどうか判定する方法であって、
（ａ）請求項１から８のいずれかに記載の、標的細胞を感作するステップ、及び
（ｂ）前記イオンチャンネルの誘発の効果があれば、それを観察するステップ（前記表現型の出現又は低減に対応する効果が前記細胞型の前記疾患又は症状への関与を示唆する）
を含む方法。
【請求項２５】
特定の細胞型の細胞を特定して、前記細胞が疾患又は症状に関連する表現型をもたらすのに関与しているかどうか判定する方法であって、
（ａ）請求項１から８のいずれかに記載の、標的細胞を感作するステップ、及び
（ｂ）前記イオンチャンネルの誘発の効果があれば、それを観察するステップ（前記表現型の出現又は低減に対応する効果が前記細胞型の前記疾患又は症状への関与を示唆する）
を含む方法。
【請求項２６】
細胞型に対する効果について候補分子をスクリーニングする方法であって、
（ａ）請求項１７から２１のいずれかに記載の細胞型の感作細胞と候補分子を接触させるステップ、及び
（ｂ）前記接触に対して前記細胞において変化が存在する場合、それを検出するために前記感作細胞をモニタリングするステップ
を含む方法。
【請求項２７】
前記異種イオンチャンネルを誘発するために前記細胞に刺激を与えるステップ、及び前記接触に対して前記刺激された細胞において変化が存在する場合、それを検出するステップをさらに含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
１種又は複数の細胞型に対する効果について候補分子をスクリーニングする方法であって、
（ａ）請求項１７から２１のいずれかに記載の感作細胞を含む生物で表現型を誘発するステップ、
（ｂ）前記生物に前記候補分子を投与するステップ、及び
（ｃ）前記候補分子を投与していない生物と比較して、前記分子を投与した生物における前記疾患又は症状に関連する前記表現型の変化を検出するために前記生物をモニタリングするステップ
を含む方法。
【請求項２９】
細胞型に対する効果について候補分子をスクリーニングする方法であって、
（ａ）請求項１から８のいずれかに記載の方法によりスクリーニング細胞のグループを活性化し、それによって前記細胞からの前記応答があれば、それを観察するステップ（効果が観察される細胞を選択する）、
（ｂ）前記異種刺激依存性イオンチャンネルを含まない前記選択した細胞と同じタイプのスクリーニング細胞を単離するステップ、
（ｃ）前記分子を前記単離したスクリーニング細胞に接触させるステップ、及び
（ｄ）前記接触に対して前記細胞において変化が存在する場合、それを検出するために前記単離したスクリーニング細胞をモニタリングするステップ
を含む方法。