【手続補正書】
【提出日】平成18年2月20日(2006.2.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞または組織をDARPP-21の生物活性をモジュレートする薬剤と接触させて、シグナル伝達経路をモジュレートすることを含んでなる、細胞または組織内でDARPP-21の生物活性をモジュレートする方法。
【請求項２】
前記薬剤がDARPP-21のリン酸化状態を変化させるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記薬剤がDARPP-21/カルモジュリン複合体の形成を変化させるものである、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ドーパミン関連疾患を予防、治療、またはその症状を改善するための医薬の製造における、DARPP-21の生物活性をモジュレートする薬剤の使用。
【請求項５】
前記薬剤がDARPP-21のリン酸化状態を変化させるものである、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記薬剤がDARPP-21/カルモジュリン複合体の形成を変化させるものである、請求項４に記載の使用。
【請求項７】
細胞または組織におけるカルシウムシグナル伝達をモジュレートする活性について薬剤をスクリーニングする方法であって：
(a) 細胞または組織の第1のサンプルにおけるDARPP-21の第1のリン酸化レベルを測定すること；
(b) 細胞または組織の第2のサンプルを、カルシウムシグナル伝達を調節する能力について試験すべき薬剤と接触させること；
(c) 該細胞または組織におけるDARPP-21の第2のリン酸化レベルを測定すること；および
(d) 第1および第2のリン酸化レベルを比較するが、ここでそれらのレベルの差は、該薬剤がDARPP-21リン酸化をモジュレートし、ひいてはカルシウムシグナル伝達をモジュレートすることを示すこと、
を含んでなる前記方法。
【請求項８】
細胞または組織におけるカルシウムシグナル伝達をモジュレートする活性について薬剤をスクリーニングする方法であって：
(a) 細胞または組織のサンプルを、カルシウムシグナル伝達を調節する能力について試験すべき薬剤と接触させること；
(c) (a)の細胞または組織中におけるDARPP-21のリン酸化レベルを測定すること；および
(d) (c)で測定したレベルを、該薬剤と接触させなかった対応する細胞または組織の対照サンプルでのレベルと比較するが、ここでそれらのレベルの差は、該薬剤 がDARPP-21リン酸化をモジュレートし、ひいてはカルシウムシグナル伝達をモジュレートすることを示すこと、
を含んでなる前記方法。
【請求項９】
該細胞または組織が脳の細胞または組織である、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
カルモジュリン依存性キナーゼI(CaMKI)またはプロテインホスファターゼ2B(カルシニューリン)の生物活性をモジュレートする能力について、同定された薬剤を試験することをさらに含む、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１１】
細胞または組織におけるカルシウムシグナル伝達をモジュレートする能力について試験すべき薬剤を同定する方法であって：
(a) DARPP-21と薬剤を、DARPP-21と結合させるのに十分な時間にわたり接触させること；
(b) 結合していない薬剤を洗って除去すること；および
(c) DARPP-21に結合した薬剤の存在をアッセイし、ここで該薬剤がDARPP-21と結合するならば、次にカルシウムシグナル伝達をモジュレートする能力について試験すべき薬剤が同定されること、
を含んでなる前記方法。
【請求項１２】
同定された薬剤を、DARPP-21、カルモジュリン依存性キナーゼI(CaMKI)、またはプロテインホスファターゼ2B(カルシニューリン)の生物活性をモジュレートする能力について試験することをさらに含んでなる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
細胞内カルシウムシグナル伝達をモジュレートする活性について薬剤をスクリーニングする方法であって：
(a) 薬剤の不在下でDARPP-21とカルモジュリンを含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(b) 薬剤の存在下でDARPP-21とカルモジュリンを含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(c) ステップ(a)でのDARPP-21とカルモジュリンの結合のレベルをステップ(b)での同レベルと比較するが、ここでその結合レベルの差は、該薬剤が細胞内カルシウムシグナル伝達をモジュレートすることを示すこと、
を含んでなる前記方法。
【請求項１４】
細胞内カルシウムシグナル伝達をモジュレートする活性について薬剤をスクリーニングする方法であって：
(a) 薬剤の存在下でDARPP-21とカルモジュリンを含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(b) ステップ(a)でのDARPP-21とカルモジュリンの結合のレベルを測定すること；および
(c) (ｂ)におけるそのレベルを、該薬剤の不在下で行った対応する対照のタンパク質-タンパク質結合アッセイでの結合のレベルと比較し、ここでその結合レベルの差は該薬剤が細胞内カルシウムシグナル伝達をモジュレートすることを示すこと、
を含んでなる前記方法。
【請求項１５】
同定された薬剤をカルモジュリン依存性キナーゼI(CaMKI)またはプロテインホスファターゼ2B(カルシニューリン)の生物活性をモジュレートする能力について試験することをさらに含んでなる、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
DARPP-21との結合がカルモジュリンによって阻害または増強される候補DARPP-21結合タンパク質をスクリーニングする方法であって：
(a) カルモジュリンの不在下でDARPP-21と候補タンパク質を含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(b) カルモジュリンの存在下でDARPP-21と候補ポリペプチドを含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(c) ステップ(a)でのDARPP-21と候補ポリペプチドの結合をステップ(b)での結合と比較することによって、カルモジュリンがそのタンパク質-タンパク質結合を阻害するか増強するかを決定すること、
を含んでなる前記方法。
【請求項１７】
カルモジュリンとのその結合がDARPP-21によって阻害または増強される候補カルモジュリン結合タンパク質をスクリーニングする方法であって：
(a) DARPP-21の不在下でカルモジュリンと候補タンパク質を含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(b) DARPP-21の存在下でカルモジュリンと候補ポリペプチドを含んだタンパク質-タンパク質結合アッセイを行うこと；
(c) ステップ(a)でのカルモジュリンと候補ポリペプチドの結合をステップ(b)でのそれらの結合と比較することによって、DARPP-21がタンパク質-タンパク質結合を阻害するか増強するかを決定すること、
を含んでなる前記方法。
【請求項１８】
同定された薬剤を、カルモジュリン依存性キナーゼI(CaMKI)またはプロテインホスファターゼ2B(カルシニューリン)の生物活性をモジュレートする能力について試験することをさらに含む、請求項１６または１７に記載の方法。
【請求項１９】
DARPP-21がアミノ酸55位に負電荷を含む、請求項７〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
DARPP-21がリン酸化されていない、請求項７〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
DARPP-21がリン酸化されている、請求項７〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
タンパク質-タンパク質結合アッセイが、酵母における2-ハイブリッドアッセイまたは大腸菌/BCCP 双方向システムを含む、請求項７〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
タンパク質-タンパク質結合アッセイが、免疫共沈または固定化タンパク質-タンパク質結合アッセイを含む、請求項７〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
請求項７〜１８のいずれか１項に記載の方法によって同定される、細胞または組織におけるニューロンのカルシウムシグナル伝達をモジュレートするための組成物。
【請求項２５】
同定された薬剤を、カルモジュリン依存性タンパク質の生物活性をモジュレートする能力についてさらに試験することを含む、請求項７、８、１１、１３、または１４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
カルモジュリン依存性タンパク質が酵素である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記酵素がホスホジエステラーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、またはアデニル酸シクラーゼである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
ドーパミン関連疾患が、てんかん、統合失調症、パーキンソン病、注意欠陥多動障害、うつ病、薬物乱用、疼痛、癌、卒中もしくはアルツハイマー病、ハンチントン病、またはトゥーレット症候群である、請求項４に記載の使用。