【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年8月16日(2006.8.16)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
ＮＯ受容体ｓＧＣは、２つのサブユニットαおよびβからなり、それらは酵素的に活性のあるヘテロダイマーを形成する。種は異なるが、サブユニットαの３つの異なるアイソフォーム、およびサブユニットβの３つの異なるアイソフォームが文献に記載されている。最もよく研究されているアイソフォームである、ウシα１／β１アイソフォームおよびラットα１／β１アイソフォームは、心血管系の研究において特に重要である。最近まで、ウシおよびラットのｓＧＣのヒト相同体（例えば、ｓＧＣα１／ｓＧＣβ１ヘテロダイマー類）は知られていなかった。ｃＤＮＡの塩基配列は、ヒトｓＧＣα３およびβ３アイソフォームに対応すると記載されている（Giuiliら, 1992）。ｓＧＣβ３は、ｓＧＣβ１（ウシ／ラット）に高い相同性を示したが、ｓＧＣα３の塩基配列は、ｓＧＣα１（ウシ／ラット）との相同性のない２つの制限領域を含んでいた。ここではＳ１、Ｓ２と表す（図２）。さらに、ｓＧＣα３およびｓＧＣβ３が機能的なｓＧＣヘテロダイマーを形成し得るかどうか、またＳ１およびＳ２のどちらの領域が機能を有するのかは不明であった。さらに、ヒトｓＧＣサブユニットで蛋白質として発現したものはこれまでなかった。最近、ｈｓＧＣα１を示す配列がジーンバンク（受け入れ番号 U58855）に記載されたが、それによれば、Ｓ１およびＳ２領域においてウシおよびラット組織からのｓＧＣα１との塩基配列の違いはない。さらに、交互にスプライスされたｈｓＧＣβ３産物が最近ジーンバンク（受け入れ番号AF020340）に記載され、著者らにより交互にスプライスされたｈｓＧＣβ１の型として指定されている。このｈｓＧＣβ１／３のスプライス変異型の生理学的意義は知られていない。したがって、これらのアイソフォームのいずれが、いかなる種類の細胞において、いかなる生理学的機能を担っているのかについては疑問である。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１６】
３）本発明のｓＧＣに対するペプチド抗体を使用することによって、ヒト組織におけるｓＧＣの発現の証明ならびに機能不全状態（ｓＧＣの発現が高すぎないか、低すぎないか、または欠けていないか）の診断が可能となる。さらに本発明は、ｈｓＧＣの転写および翻訳の制御をさらに解明するために必要な技術的前提条件を提供する。本発明のペプチド抗体は、単一特異性であり、ヒトの配列を目的としている点、ならびにヒト組織を用いたイムノブロットに好適であることが証明されている点で有利である。他のペプチド抗体は、これらの特徴の一部しか示さない。HarteneckらおよびGuthmannらは、グアニリルシクラーゼ中に比較的高度に保存されているペプチド配列（ＶＹＫＶＥＴＶＧＤＫＹＭＴＶＳＧＬＰ）を用いた。したがって、粒状のグアニリルシクラーゼ（例えば、ＧＣ−Ｃ）の交叉反応が予測される。さらにGuthmannらは、ｈｓＧＣβ１と同一のペプチド配列（ＹＧＰＥＶＷＥＤＩＫＫＥＡ）、および２アミノ酸が置換されていること以外はｈｓＧＣα１と同一のペプチド配列（ＫＫＤＶＥＥＡＮＡＮＦＬＧＫＡＳＧＩＤ）を使用した。しかし、イムノブロッティングでのこれらの抗体の機能は、ヒト血小板からの濃縮ｈｓＧＣに見られただけであった。さらに、ｈｓＧＣα１に対するこれらの抗体は、第２の非特異的産物を認識した。HumbertらおよびKoeslingらは、部分的（アミノ酸１−１０）に、ｈｓＧＣβ１のためにここで使用されるペプチド（アミノ酸１３−２２）と一致するウシｓＧＣβ１のペプチド配列（ＳＲＫＮＴＧＴＥＥＴＥＱＤＥＮ）を使用したが、そのＣ末端（アミノ酸１１−１５）は、ヒト配列のそれとは著明に異なっていた。しかし、このペプチドに対する抗血清は、ヒト蛋白質については試験されておらず、ウシｓＧＣの免疫沈降反応に使用されただけであった。
本発明の、ウサギでのｈｓＧＣα１またはｈｓＧＣβ１に対する抗体の作製としては、図２２および２３に示したペプチドおよびそれらのイムノジェニック断片の他に、ｈｓＧＣα１／β１蛋白質全体またはその分解産物に対するモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体の作製が可能である。これらの抗体を作製するには多様な動物種（好ましくは、マウス、ラット、ウサギ）が使用可能である。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２７】
ヒト組織でのｓＧＣα１およびｓＧＣβ１  ｍＲＮＡの発現をＰＣＲによって確かめた（図４）。ＰＣＲプライマー対（５’−ＡＡＡＡＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＡＣＧＧＡＴＴＴＧＴＧＡＡＴ−３’＝制限部位を付加したｈｓＧＣβ１  ｃＤＮＡ塩基配列、ヌクレオチド８９−１０６；５’−ＡＴＧＣＧＴＧＡＴＴＣＣＴＧＧＧＴＡＣＣ−３’＝ｈｓＧＣβ１  ｃＤＮＡ塩基配列、ヌクレオチド６９２−７１１）による、５４℃のアニーリング温度でのｈｓＧＣβ１断片の増幅によって、脳、心臓、腎臓、肺、膵臓および骨格筋からのｃＤＮＡライブラリーにそれぞれ１つの特異的なバンドがあらわれた。前記増幅した断片の同定は、シーケンシングによって確認された。ｈｓＧＣα１断片のＰＣＲプライマー対（５’−ＡＡＡＡＧＧＡＴＣＣＡＴＧＴＴＣＴＧＣＡＣＧＡＡＧＣＴＣ−３’ ＝制限部位を付加したｈｓＧＣα１  ｃＤＮＡシーケンスのヌクレオチド５２４−５４１；５’−ＡＴＴＡＴＧＧＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＧ−３’＝ｈｓＧＣα１  ｃＤＮＡの塩基配列の１２４９−１２３２）による、５４℃のアニーリング温度での増幅によって、心臓（図４Ａ）および肺（図示せず）からのｃＤＮＡライブラリーのそれぞれに１つの特異的なバンドがあらわれた。それぞれの場合、断片のシーケンシングは、修正されたｈｓＧＣα１配列となった；また、Giuiliらによって報告されたｈｓＧＣα３の配列は見られなかった。したがって、ヒトにおいては、ｈｓＧＣα１／β１だけが存在すること、潜在的なｈｓＧＣα３／β３は、シーケンス誤差の結果であることが判明した。この結果、心血管系の研究において、どのｓＧＣアイソフォームが薬理学的スクリーニングの標的蛋白質となるべきかについて明らかにされた。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
組換えｈｓＧＣα１およびｈｓＧＣβ１バキュロウイルスを作製するために、バキュロウイルス転写ベクター（ｐＶＬ１３９３−ｈｓＧＣα１、ｐＡｃＧ２Ｔ−ｈｓＧＣα１、ｐＶＬ１３９３−ｈｓＧＣβ１、ｐＡｃＧ２Ｔ−ｈｓＧＣβ１）をそれぞれバキュロウイルスＤＮＡ(Baculo Gold；Pharmingen, San Diego. California USA）で、Ｓｆ９細胞培養体の単層に共形質転換した。このために、細胞を、１０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ウシ胎児血清（Biochrom）、４％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）トリプトース−フォスフェート−ブロス（tryptose-phosphate-broth）（Gibco）、１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）プリュノリック（Pluronic）Ｆ６８（Gibco）、０．５％アンホテリシンＢ（Gibco）、８０μｇ／ｍｌゲンタマイシンサルフェート（Gibco）、および０．５ｍＭ  δ−アミノレブリン酸(Merck)を添加したＩＰＬ−４１培地（Gibco）において２７℃で培養した。この培養培地から、プラーク精製によって、組換えｈｓＧＣα１およびｈｓＧＣβ１バキュロウイルスクローンを得た。高力価のウイルス保存液を作るために、Ｓｆ９の振とうした培溶液（０．５×１０6細胞／ｍｌ）を、０．１ｐｆｕ／細胞のＭ．Ｏ．Ｉ（感染多重度）で感染させ、感染６日目に回収した。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
例３  Ｓｆ９細胞中の組換えｈｓＧＣα１およびｈｓＧＣβ１の作製
各１０個の組換えｈｓＧＣα１およびｈｓＧＣβ１バキュロウイルスクローンについて、Ｓｆ９中に組換え蛋白質を発現しているかどうかを調べた。このために、Ｓｆ９単層細胞培溶液を、プラーク精製した組換えｈｓＧＣα１またはｈｓＧＣβ１バキュロウイルスで感染させ、２７℃で５日間インキュベートし、細胞スクレーパーでかき集め、０．５ｍｌ溶解緩衝液（２５ｍＭ  ＴＥＡ、ｐＨ７．８、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、５ｍＭ  ＤＴＴ、１μＭロイペプチン、０．５ｍｇ／ｌ  トリプシン阻害剤）中に再懸濁させ、超音波処理によってホモジナイズした（‘Sonifier 250’および‘standard’-lip；Branson; １５倍；‘使用率’（‘duty cycle’）；１５％、強度：１）。ホモジネートを２０，０００×ｇで遠心分離処理した後、上澄みとペレットをＳＤＳ−ＰＡＧＥで分析した。ｈｓＧＣβ１バキュロウイルスクローンのうちの３つおよびｈｓＧＣα１バキュロウイルスクローンのうちの２つが、クーマシーブリリアントブルーＲ２５０で染色することによって不溶画分中で視覚可能な量で組換え蛋白質を産生した。組換えヒトｓＧＣαおよびｓＧＣβ（ｒｈｓＧＣαおよびｒｈｓＧＣβ）を見かけ分子量７９．５（ｈｓＧＣα１）および６８．５ｋＤａ（ｈｓＧＣβ１）でマイグレーションした。それはアミノ酸配列から推定した予測分子量に非常に近似していた（それぞれ、７７．５および７０．５ｋＤａ）（図９にクローンを表す）。イムノブロットにおいて、組換え蛋白質の最も高い発現を示したバキュロウイルスクローンを機能的なヘテロダイマーｈｓＧＣの発現に使用した（図４〜７参照）。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
ｃＧＭＰ含有量を測定するために、培養培地を１ｍＭ  ＩＢＭＸをさらに含有するクレブス−リンガー緩衝液（ＫＲＢ；１１９ｍＭ  ＮａＣｌ；４．７４ｍＭ  ＫＣｌ；２．５４ｍＭ  ＣａＣｌ2；１．１９ｍＭ  ＭｇＳＯ4；１．１９ｍＭ  ＫＨ2ＰＯ4；２５ｍＭ  ＮａＨＣＯ3；１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ：ｐＨ７．４；０．１％ＢＳＡ）で置換した。その細胞を２７℃で1時間インキュベートした。その後、その細胞を氷冷ＫＲＰで洗浄し、１ｍｌ氷冷エタノール（８０％）中に細胞スクレーパーを用いてかき集めた。その細胞を超音波処理によってホモジナイズし（例３参照）、２０，０００×ｇで２０分間遠心分離処理した。上澄みを高速バック(speed-vac)で乾燥させ、残留物を２５ｍＭ  ＴＥＡ、ｐＨ７．８中に再懸濁させた。ｃＧＭＰ含有量をＲＩＡ（Biotrend)によって測定した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
例５  昆虫細胞抽出物中の組換えヒトｓＧＣは、ＮＯによって活性化および賦活される
組換えｈｓＧＣ（上記した組換えバキュロウイルスを用いた発現後）の活性をＳｆ９無傷細胞中のみならず、Ｓｆ９細胞抽出物中でも測定した。そのような抽出物を作製するために、Ｓｆ９振とう培養液〔２×１０6細胞／皿；添加物については例２参照〕を、各ウイルス（ｈｓＧＣα１およびｈｓＧＣβ１；ともにＧＳＴタグを持たない）をＭ．Ｏ．Ｉ（感染多重度）１ｐｆｕ／細胞で共感染させ、２７℃でインキュベートした。感染の０、２４、４８、７２、９６および１１８時間後にサンプルを取り出し（４ｍｌ）、その細胞を、１ｍｌの溶解緩衝液中に沈降させ、再懸濁させ、超音波処理によりホモジナイズした（例３参照）。そのホモジネートを２０，０００×ｇで１５分間遠心分離処理し、不溶性ペレットを溶解緩衝液中に再懸濁させた。そのサンプルを５０％グリセリン（ｖｏｌ／ｖｏｌ）に調整し、−２０℃で保存した。その蛋白質濃度を分光測光法で、Bradford標準法(Bradford,1976)によって測定した。〔α32Ｐ〕ＧＴＰから〔32Ｐ〕ｃＧＭＰを形成することによってｓＧＣ活性を測定した（Schultzおよび Bohme、1984）。その反応物は、５０ｍＭ  ＴＥＡ（ｐＨ７．４）、３ｍＭ  ＭｇＣｌ2、３ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  ＩＢＭＸ、１ｍＭ  ｃＧＭＰ、５ｍＭ  クレアチンリン酸、０．２５ｍｇ／ｍｌのクレアチンキナーゼおよび５００ｍＭ  ＧＴＰを総体積１００μｌ中に含有していた。３７℃で１０分間インキュベートした後、細胞抽出物とｓＧＣ活性剤ＳＮＰ、ＣＯまたはＹＧ−１を同時に添加して反応を開始した。得られた〔32Ｐ〕ｃＧＭＰを上記のように測定した（Schultzおよび Bohme、1984）。基礎的ｒｈｓＧＣ活性（即ち、ＮＯや他の活性剤の添加による酵素の活性化を行わずにｒｓｈＧＣによりｃＧＭＰを形成）は、おもに可溶性Ｓｆ９細胞画分において認められ（図１１Ａ）、細胞の感染７２時間後に最高に達し、１００μＭ  ＳＮＰを用いることによって５倍に増加した（図１１Ａ）。ペレット画分は、測定可能な基礎的ｓＧＣ活性をどの点においても含んでいなかったが、ＳＮＰを存在させた場合、低度のｓＧＣ活性が認められた（図１１Ｂ）。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
例７  精製されたヒト可溶性グアニリルシクラーゼα１／β１（ｈｓＧＣα１／β１）の抽出
Ｓｆ９細胞からの組換えヒトｈｓＧＣα１／β１を精製するために、組換えバキュロウイルス[例２参照]を用い、ｈｓＧＣα１および付着したＧＳＴ〔いわゆるＧＳＴ−タグ。ＧＳＴ−タグ＝日本住血吸虫由来のグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ；例２参照〕からなる融合蛋白質を作製した。グルタチオンと高親和力で結合しているこのＧＳＴタグを用いることによって、グルタチオンセファローズ４Ｂ(Pharmacia, Freiburg, Germany)上で特異的なアフィニティークロマトグラフィーを行うことができる。ｈｓＧＣα１バキュロウイルス（ＧＳＴタグをもつ）およびｈｓＧＣβ１バキュロウイルス（ＧＳＴタグを持たない）で共感染したＳｆ９細胞を、２５ｍＭのトリエタノールアミンｐＨ７．８／１ｍＭ  ＥＤＴＡ／５ｍＭ  ＤＴＴ／１μＭ  ロイペプチン／０．５μｇ／ｍｌ  トリプシン阻害剤／０．２  ｍＭ  ＰＭＳＦ（４℃で３０分、低張溶解）に溶解させた。ＮａＣｌ（最終濃度７５ｍＭ）を添加した後、そのホモジネートを４℃で１時間、７５，０００×ｇで遠心分離処理した。上澄みをＧＳＨセファローズ４Ｂと室温で１時間混合した。前記グルタチオンセファローズ４Ｂを、次に５００×ｇで５分間遠心分離してペレット化し、上澄みを取り出した。１０倍体積の５０ｍＭ  トリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）／１５０  ｍＭ  ＮａＣｌ／２．５ｍＭ  ＣａＣｌ2／０．１％  ２−メルカプトエタノールをグルタチオンセファローズ４Ｂに添加し、１分間混合させた。得られた混合物を５００×ｇで５分間再び遠心分離処理した。上澄みを取り出し、グルタチオンセファローズ４Ｂを再び同様にして洗浄した。セファローズから溶出するために、ｈｓＧＣα１蛋白質（ｈｓＧＣβ１と結合）をトロンビンを用いて、特異的な開裂部位において、まだグルタチオンセファローズ４Ｂと結合したままのＧＳＴ−タグから分離した。トロンビンを用いた消化は、緩衝液１ｍｌあたり０．２５〜１単位のトロンビンを含有する、５０ｍＭトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）／１５０ｍＭ  ＮａＣｌ／２．５ｍＭ  ＣａＣｌ2／０．１％  ２−メルカプトエタノール中で、１または３時間室温で行った。グルタチオンセファローズ４Ｂ（ＧＳＴ−タグを持つ）を５００×ｇで５分間遠心分離して再びペレット化し、ｈｓＧＣα１／β１を含有する上澄みを取り出した。５０ｍＭのトリスＨＣｌ（ｐＨ８．０）／５ｍＭ還元グルタチオンを添加することによって、別の溶出方法を行い、室温で３０分混合した。この方法で、ＧＳＴタグが結合したｈｓＧＣα１／β１をグルタチオンセファローズ４Ｂから取り出した。５００×ｇで５分間遠心分離処理した後、溶解したＧＳＴ−ｈｓＧＣα１／β１を含有する上澄みを取り出した。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
例９  イムノブロッティングによる様々なヒト組織におけるｈｓＧＣα１およびｈｓＧＣβ１の検出
切除した肺の無腫瘍領域からヒト肺組織を得た。ヒト大脳皮質および小脳は通常の剖検で得た。全ての組織は、液体窒素中で即時凍結し、−７０℃で保存した。凍結組織を乳鉢でホモジナイズし、濃度を２倍にした、高温ＳＤＳストップ緩衝液（stop buffer)（１３０ｍＭ  トリスＨＣｌ、ｐＨ６．８／１６％〔ｖ／ｖ〕グリセロール／４％〔ｖ／ｖ〕ＳＤＳ／０．０２５％〔ｗ／ｖ〕ブロムフェノールブルー／６．５％〔ｖ／ｖ〕２−メルカプトエタノール）を粒状体に添加した。これを９５℃で１０分間インキュベートし、その後２０，０００×ｇで２０分間遠心分離処理した。上澄みを用いてイムノブロッティングを行った（使用した抗体については上記を参照）。
両サブユニット（α１およびβ１）の発現が３つ全ての組織で検出された（図１３）。一方、腎臓、肝臓、および膵臓では発現は検出されなかった（データは示していない）。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
例１２  ｈｓＧＣアデノウイルスＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１およびＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１で共感染後のＥＣＶ３０４およびＡ１０細胞におけるｃＧＭＰ形成の検出
‘ＥＣＶ３０４’細胞を入れた１０ｃｍ細胞培養皿３枚を、各１０9〜５×１０10ｐｆｕ（プラーク形成単位）のＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１およびＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１でそれぞれ共感染した。７２時間後、ＰＢＳ緩衝液（リン酸塩緩衝生理食塩水）さらに低張溶解緩衝液で２回洗浄して、細胞を回収し、その後さらに例１１に記載の処理を行った。前記サンプルを保存し、例５に記載のように、その活性（ｃＧＭＰ含有量、ｐｍｏｌ／ｍｇ／分）を測定した。有意な基礎的活性（ＳＮＰなし）および有意な最大活性（１００μＭ  ＳＮＰをアッセイに添加）は、Ａｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１およびＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１（それぞれ５×１０10ｐｆｕ）の遺伝子転写後にのみ検出された（図２６）。Ａｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１およびＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１を含まない対照実験においては、ＳＮＰによるｃＧＭＰ形成は有意に上昇しなかった。‘Ａ１０’血管平滑筋細胞においても、これらの細胞を１０9〜５×１０10ｐｆｕのＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１およびＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１で共感染した場合、質的に類似の結果が得られた。ここでも、有意な基礎的活性（ＳＮＰなし）および有意な最大活性（１００μＭ  ＳＮＰをアッセイに添加）は、Ａｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１およびＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１（それぞれ５×１０10ｐｆｕ）の遺伝子転写後にのみ検出された（図２６）。Ａｄ５ＣＭＶｈｓＧＣα１またはＡｄ５ＣＭＶｈｓＧＣβ１を含まない対照実験においては、またＳＮＰによるｃＧＭＰ形成は有意に上昇しなかった（図２８）。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】図１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１４】
イムノブロットにおける、ＧＳＴ−タグ＝日本住血吸虫由来のグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼｃＤＮＡをもつｈｓＧＣα１  ｃＤＮＡ、およびｈｓＧＣβ１  ｃＤＮＡ（ＧＳＴ−タグをもたない）を含有する、遺伝子的に修飾されたバキュロウイルスで共感染したＳｆ９細胞からのｈｓＧＣα１（ｈｓＧＣα１／ｈｓＧＣβ１二量体として）の精製を示す図である。細胞溶解物をグルタチオンセファローズ４Ｂとともにインキュベートし、結合後、上澄みを載せた（結合後上澄み）。そのセファローズを２回洗浄し、洗浄したそれぞれの上澄みを載せた（１および２、洗浄）。次に、ｈｓＧＣα１蛋白質をトロンビンを用いてＧＳＴタグから切断することによって溶出を行い、一部を載せた（‘トロンビンで溶出’）。その後、グルタチオンセファローズ４ＢにＳＤＳストップ緩衝液を添加し、一部を載せた（溶出後のＧＳＨセファローズ）。さらに、ＳＤＳ緩衝液を添加した従来のトロンビン溶出を行わずにｈｓＧＣ１を結合させたグルタチオンセファローズ４Ｂを載せた(溶出前のＧＳＨセファローズ)。ここに記載したｈｓＧＣα１のＣ末端に対するアフィニティー精製されたペプチド抗体を用いてイムノブロットを行った。右の点の矢印は、ＧＳＴタグをもつｈｓＧＣα１（ＧＳＴ−ｈｓＧＣα１）およびＧＳＴタグをもたないｈｓＧＣα１（ｈｓＧＣα１）の特異的なバンドを示す。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】図１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１５】
ＧＳＴ−タグ＝日本住血吸虫由来のグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼｃＤＮＡをもつｈｓＧＣα１ｃＤＮＡ、およびＧＳＴ−タグをもたないｈｓＧＣβ１ｃＤＮＡを含有する、遺伝子的に修飾されたバキュロウイルスで共感染したＳｆ９細胞からのｈｓＧＣα１／β１のクーマシーブリリアントブルーＲ２５０で染色したＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルでの精製を示す図である。これらの感染したＳｆ９細胞（溶解物）の細胞溶解物をグルタチオンセファローズ４Ｂとともインキュベートし、結合させた後、上澄みを載せた（結合後上澄み）。グルタチオンセファローズ４Ｂを２回洗浄し、この洗浄緩衝液のそれぞれの上澄みを載せた（１および２、洗浄）。１つのサンプルにおいては、その結合ＧＳＴ−ｈｓＧＣα１／β１を還元グルタチオンとともにインキュベートすることにより溶出し、載せた（グルタチオンで溶出）。他のサンプルにおいては、グルタチオンセファローズをトロンビン切断のための緩衝液（トロンビンなし）で洗浄し、その緩衝液の上澄みを載せた（３、洗浄）。その後、ｓＧＣα１／β１二量体を異なる量のトロンビンを用いてインキュベートして溶出し、その溶解物を載せた（０．２５−１Ｕ／ｍｌのトロンビンを用いた溶出）[Ｕ＝単位]。各サンプルの相対量は同一とした。異なる溶出方法によって視覚可能なバンドを右に示す：ＧＳＴ−ｈｓＧＣα１＝ＧＳＴタグをもつｈｓＧＣα１；ｈｓＧＣα１＝ＧＳＴタグをもたないｈｓＧＣα１；ｈｓＧＣβ１＝ＧＳＴをもたないｈｓＧＣ。左にゲルに載せた分子量の標準を示し、その大きさ（ｋＤａ）をさらに左に示す。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】図面
【訂正対象項目名】図１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【図１】
2002522083.tif 000001