【手続補正書】
【提出日】平成17年10月18日(2005.10.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
アナログが、
a)   ペプチドリンカーによりペプチド結合を介して結合されている、ヒトTNFαの少なくとも2つのモノマー単位の実質的なフラグメントを含み、
b)  ヒトTNFαとは異種である少なくとも1つのMHCクラスII結合アミノ酸配列を含み、かつ
c)  アナログをエンコードする発現ベクターをもつ細胞からの単一の発現産物として産生され得る、
ヒトTNFαの免疫原性アナログ。
【請求項２】
各々の実質的なフラグメントが、ヒトTNFαの一部分である場合に、対応するモノマー中に見出される本質的に全てのB細胞エピトープを表示する請求項1に記載の免疫原性アナログ。
【請求項３】
モノマー単位に由来するアミノ酸配列が、ヒトTNFαに比べてアナログの毒性を低減するように、および／またはMHCクラスII結合アミノ酸配列を導入するように、アミノ酸の挿入、置換、欠失または付加により修飾される請求項2に記載の免疫原性アナログ。
【請求項４】
各々の実質的なフラクションが、各モノマー単位の実質的に完全なアミノ酸配列を、連続した配列または挿入を含む配列のいずれかとして含む請求項1〜3のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項５】
ヒトTNFαの全てのモノマー単位のアミノ酸配列がアナログに表示される請求項1〜4のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項６】
ヒトTNFαを構成するモノマーの完全アミノ酸配列を、間断のない配列または挿入を含む配列のいずれかとして含む請求項5に記載の免疫原性アナログ。
【請求項７】
ペプチドリンカーが、アナログ中に、ヒトTNFαとは異種である少なくとも1つのMHCクラスII結合アミノ酸配列を含むかまたはその存在に寄与するか、あるいはペプチドリンカーが、ヒトにおいて、MHCクラスII結合アミノ酸配列を含まずかつその存在に寄与しない請求項1〜6のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項８】
少なくとも1つのMHCクラスII結合アミノ酸配列が、天然のT細胞エピトープおよび人工のMHC-II結合ペプチド配列から選択される請求項1〜7のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項９】
完全なヒトTNFαの三次元構造が本質的に保存される請求項1〜8のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項１０】
アナログが
−ペプチドリンカーにより末端と末端が連結されている、2または3の完全TNFαモノマー、ここで、少なくとも1つのペプチドリンカーは少なくとも1つのMHCクラスII結合アミノ酸配列を含む、
−不活性ペプチドリンカーにより末端と末端が連結されている、2または3の完全TNFαモノマー、ここで、モノマーの少なくとも1つは、少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列を含むか、または少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列は、任意に不活性リンカーを介してN-もしくはC-末端モノマーに融合されている、
からなる群より選択される請求項1〜9のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項１１】
アナログが少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列を含み、さらに
−フレキシブルループ3に少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が挿入されているかまたは内置換されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−TNFαモノマー三次元構造を安定化する、少なくとも1つのジスルフィドブリッジが導入されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−アミノ末端の1、2、3、4、5、6、7、8および9のいずれか1つのアミノ酸が欠失されたヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−イントロン部位のループ1に少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が挿入されているかまたは内置換されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が、ヒトTNFαのN-末端の人工の柄領域の一部分として導入されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が、トリマーの相互作用界面の疎水性を増加させることにより、モノマー構造を安定化するように導入されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−グリシン残基が側面に位置する少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が、TNFαアミノ酸配列に挿入されているかまたは内置換されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が、D-Eループに挿入されているかまたは内置換されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−少なくとも1つの外来MHCクラスII結合アミノ酸配列が、ヒトTNFαの2つの相同な配列の間に挿入されているかまたは内置換されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−ヒトTNFα中の少なくとも1つの塩橋が、ジスルフィドブリッジで強化されているかまたは置換されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−マウスTNFαの結晶構造を模倣した変異を導入することにより、溶解性および／またはタンパク質分解に対する安定性が増強されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、および／または
−少なくとも1つの点突然変異の導入により、潜在的な毒性が低減されているかまたは撤廃されているヒトTNFαモノマーまたは請求項1〜10のいずれか1つに記載のアナログ、
である特徴を有するヒトTNFαの免疫原性アナログ。
【請求項１２】
アナログのアミノ酸配列が、SEQ ID NO: 18、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、49、51、53、55、57および59、ならびにその保存アミノ酸の変更のみを含むいずれかのアミノ酸配列からなる群より選択される請求項10または11に記載の免疫原性アナログ。
【請求項１３】
細菌細胞から可溶性のタンパク質として発現され得る請求項1〜12のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項１４】
医薬として用いるための請求項1〜13のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか1つに記載の免疫原性アナログをエンコードする核酸断片、またはそれに相補的な核酸断片。
【請求項１６】
SEQ ID NO: 17、48、50、52、54、56および58からなる群より選択される核酸配列、またはそれらに相補的な核酸配列を含む請求項15に記載の核酸断片。
【請求項１７】
請求項1〜14のいずれか1つに記載の少なくとも1つの免疫原性アナログと任意にアジュバントとを含み、ヒト患者への該アナログの免疫学的有効量の提示をもたらす、患者において自己由来のhTNFαをダウンレギュレーションするための医薬組成物。
【請求項１８】
アジュバントが、免疫標的化アジュバント；免疫調節アジュバント；油処方成分；ポリマー；ミセル形成アジュバント；サポニン；免疫刺激複合マトリックス(ISCOMマトリックス)；粒子；DDA；アルミニウムアジュバント；DNAアジュバント；γ−イヌリン；およびカプセル化アジュバントからなる群より選択される請求項17に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
請求項15または16に記載の核酸断片を含み、アナログをエンコードする核酸を患者の細胞内に導入し、それにより、導入された核酸の細胞によるインビボ発現を得ることにより免疫系に前記核酸断片によりエンコードされるアナログの提示をもたらす、患者において自己由来のhTNFαをダウンレギュレーションするための医薬組成物。
【請求項２０】
導入された核酸が、裸のDNA、荷電または非荷電の脂質とともに処方されたDNA、リポソーム中に処方されたDNA、ウイルスベクターに包含されたDNA、トランスフェクション促進タンパク質またはポリペプチドとともに処方されたDNA、標的化タンパク質またはポリペプチドとともに処方されたDNA、カルシウム沈殿剤とともに処方されたDNA、不活性担体分子と結合したDNA、キチンまたはキトサン中に被包されたDNA、およびアジュバントと処方されたDNAから選択される請求項19に記載の方法。
【請求項２１】
請求項1〜13のいずれか1つに記載のアナログをエンコードしかつ発現する核酸断片をもつ非病原性微生物またはウイルスを含み、患者に該微生物またはウイルスを投与することにより、発現されるアナログの患者の免疫系への提示をもたらす、患者において自己由来のhTNFαをダウンレギュレーションするための医薬組成物。
【請求項２２】
ウイルスが非ビルレントポックスウイルスであるかまたは非病原性微生物が細菌である請求項21に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
−請求項1〜13のいずれか1つに記載の免疫原性アナログ、ならびに
−医薬上および免疫学上許容される担体および／または賦形剤および／またはアジュバント
を含むか、あるいは
−請求項15または16に記載の核酸断片、ならびに
−医薬上および免疫学上許容される担体および／または賦形剤および／またはアジュバント
を含むマルチマータンパク質に対する抗体の産生を誘導するための組成物。
【請求項２４】
アジュバントが、免疫標的化アジュバント；免疫調節アジュバント；油処方成分；ポリマー；ミセル形成アジュバント；サポニン；免疫刺激複合マトリックス(ISCOMマトリックス)；粒子；DDA；アルミニウムアジュバント；DNAアジュバント；γ−イヌリン；およびカプセル化アジュバントからなる群より選択される請求項23に記載の組成物。
【請求項２５】
請求項15または16に記載の核酸断片の発現を促進する条件下で、請求項15または16に記載の核酸断片で形質転換した宿主細胞を培養し、続いて培養物からのタンパク質発現産物としてアナログを回収することを含む請求項1〜13のいずれか1つに記載のアナログを製造する方法。
【請求項２６】
宿主細胞が細菌宿主細胞である請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
アナログが可溶性発現産物である請求項26に記載の方法。