【手続補正書】
【提出日】平成18年1月25日(2006.1.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された細胞組成物を産生する方法であって該組成物は、異なる型の非造血細胞を形成する潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含むまたは本質的に含む組成物であって、該方法は以下：
（ａ）造血細胞を獲得する工程；
（ｂ）ポジティブセレクションまたはネガティブセレクションによって、造血幹細胞および造血前駆細胞について造血細胞を富化し、富化された造血細胞調製物を獲得する工程；および
（ｃ）増殖条件下で富化された造血幹細胞および造血前駆細胞を培養し、その結果、調製中の細胞が、潜在力または増強された潜在力を発揮し異なる型の非造血細胞を形成する工程、
を包含する方法。
【請求項２】
工程（ａ）における前記造血細胞が、臍帯血から得られる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程（ｃ）における前記増殖条件が、前記富化された造血細胞調製物中の細胞が細胞周期を十分に完了するのに十分な時間の間、一つ以上のポジティブな増殖因子の存在下で該細胞を培養し、非造血細胞および非造血組織を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を獲得する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ポジティブな増殖因子が、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーのメンバーであり、該ファミリーは、ＦＧＦ−４およびＦＧＦ−２、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、幹細胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、ＦＬＴ−３リガンド、インターロイキン−３（Ｉｌ−３）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、神経増殖因子（ＮＧＦ）、ＶＥＧＦ、顆粒球マクロファージ増殖因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、ＨＧＦまたはＮｏｔｃｈを含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ポジティブな増殖因子が、一つ以上のＦＧＦ−４、ＦＧＦ−２、ＩＬ−３、ＳＣＦ、ＦＬＴ３リガンド、ＴＰＯ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＮＧＦである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
工程（ｃ）における前記増殖条件が、前記富化される造血細胞調製物中の細胞が細胞周期を十分に完了するのに十分な時間の間、以下、
（ｉ）ＦＧＦ−２もしくはＦＧＦ−４、ＦＬＴ３リガンドおよびＳＣＦ；
（ｉｉ）ＴＰＯ、ＦＬＴ−３リガンドおよびＳＣＦ；または、
（ｉｉｉ）ＮＧＦ、ＳＣＦおよびＦＬＴ−３リガンド、
の存在下で該細胞を培養し、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を獲得する工程を包含する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記富化された造血細胞調製物が、ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋細胞を本質的に含み、該調製物が、好ましくは、ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋Ｌｉｎ−細胞を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記非造血細胞が、内皮細胞、破骨細胞、骨芽細胞、脂肪細胞、筋細胞、星状細胞、腎細胞、膵細胞、肝細胞、網膜細胞、角膜細胞、結合組織細胞または神経細胞である、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
インビトロまたはインビボにおいて、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を誘導し、非造血細胞系統の細胞および非造血組織系統の組織へ分化する工程をさらに包含する、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかの方法によって産生された細胞性組成物。
【請求項１１】
細胞性組成物における前記細胞が、非造血細胞の形態学的特徴、生理学的特徴および／または免疫学的特徴を表す細胞へ分化する潜在力を有する、請求項１０に記載の細胞性組成物。
【請求項１２】
細胞性組成物における前記細胞が、胚性組織マーカーまたは初期非造血組織マーカーを発現する、請求項１０または１１に記載の細胞性組成物。
【請求項１３】
単離および精製された細胞性組成物であって、以下：
（ａ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋；
（ｂ）造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得ること；
（ｃ）一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上または六つ以上の異なる非造血細胞型へ分化し得ること；
（ｄ）丸型および非接着性の増殖必要条件；ならびに
（ｅ）幹細胞因子レセプター（ＫＩＴ）＋、
によって特徴付けられる細胞を含む、細胞性組成物。
【請求項１４】
単離および精製された細胞性組成物であって、以下：
（ａ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋；
（ｂ）造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得ること；
（ｃ）一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上または六つ以上の異なる非造血細胞型へ分化し得ること；
（ｄ）丸型および非接着性の増殖必要条件；
（ｅ）幹細胞因子レセプター（ＫＩＴ）＋
（ｆ）ＦＬＴ３リガンドレセプター＋；
（ｇ）ＦＧＦレセプター＋；
（ｈ）胚性幹細胞タンパク質の発現；
（ｉ）ＨｏｘＢ４＋；
（ｊ）Ｆｌｋ−１＋；
（ｋ）ＣＤ３４±；
（ｌ）非腫瘍形成性；
（ｍ）ＣＤ３８±；ならびに
（ｎ）臍帯血に由来すること、
によって特徴付けられる細胞を含む、細胞性組成物。
【請求項１５】
細胞性組成物における前記細胞が、遺伝的に改変されている、請求項１〜１４のいずれかの細胞性組成物。
【請求項１６】
外傷、年齢、代謝もしくは毒性損傷、疾患または特発性喪失に起因して損失したまたは損傷された体組織、器官、構成要素または構造を置換するための、請求項１〜１５のいずれかに記載の細胞性組成物を含有する、薬学的組成物。
【請求項１７】
非造血細胞に関係する障害および疾患の緩和を目的とする細胞治療および遺伝子治療において使用するための、請求項１〜１６のいずれかに記載の細胞性組成物を含有する、薬学的組成物。
【請求項１８】
造血細胞または免疫系細胞を含む障害および疾患の緩和に指向される細胞治療および遺伝子治療において使用するための、請求項１〜１７のいずれかに記載の細胞性組成物を含有する、薬学的組成物。
【請求項１９】
非造血細胞に関係する状態を有する患者を処置する薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、請求項１〜１８のいずれかの細胞性組成物を含有し、該細胞性組成物は、患者内に非造血細胞を形成するための潜在力を有する細胞を含み、ここで、該細胞が非造血細胞へ分化する、薬学的組成物。
【請求項２０】
請求項１〜１９のいずれかに記載の細胞性組成物を使用し、非造血細胞を形成するための潜在力を有する細胞または該細胞から分化した細胞の発生または活性を調節する可能性のある治療法をスクリーンする方法。
【請求項２１】
請求項１〜２０のいずれかの細胞性組成物を使用し、疾患のモデル系を調製するか、または増殖因子もしくはホルモンを産生する方法。
【請求項２２】
臍帯血から造血幹細胞および造血前駆細胞を増殖する方法であって、該方法は、以下（ａ）臍帯血から造血幹細胞および造血前駆細胞を獲得する工程；（ｂ）増殖条件下で造血幹細胞および造血前駆細胞を培養する工程；ならびに（ｃ）増大数の造血幹細胞および造血前駆細胞を単離する工程、を包含する、方法。
【請求項２３】
造血幹細胞および造血前駆細胞の数が、少なくとも約２倍増加される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
造血幹細胞および造血前駆細胞が、ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋であり、該細胞が好ましくはＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋Ｌｉｎ−である、請求項２２または請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
（ｂ）において生じる培養細胞は、以下：
（ａ）ＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋；
（ｂ）造血細胞または造血前駆細胞へ分化し得ること；
（ｃ）一つ以上、二つ以上、三つ以上、四つ以上、五つ以上または六つ以上の異なる非造血細胞型へ分化し得ること；
（ｄ）丸型および非接着性の増殖必要条件；ならびに
（ｅ）幹細胞因子レセプター（ＫＩＴ）＋
、で特徴づけられる、請求項２２、請求項２３または請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
造血細胞もしくは免疫系細胞に関係する障害または疾患を緩和するための薬学的組成物であって、患者に投与するために処方された、請求項２２、請求項２３、請求項２４または請求項２５に記載の方法によって産生された増殖された造血幹細胞および造血前駆細胞を含有する、薬学的組成物。
【請求項２７】
混合された細胞集団において、請求項１３に記載の細胞性組成物の細胞の存在を同定する方法であって、該方法は、以下：請求項１３に記載のマーカー（ａ）またはマーカー（ｅ）に対して、免疫遺伝学的に特異的な抗体またはそのフラグメントに該細胞集団を曝露する工程であって、該マーカーの存在が、該細胞集団における該細胞の存在を示す工程、を包含する、方法。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれかの細胞性組成物を含む薬学的組成物であって、薬学的に受容可能なキャリア、賦形剤または希釈剤を含む薬学的組成物。
【請求項２９】
患者自身の造血細胞から自家移植のための非造血細胞を獲得するためのシステムであって、該システムは、以下（ａ）該患者から造血細胞を含むサンプルを獲得するための手段；（ｂ）富化された細胞調製物を分離するための手段であって該細胞調製物は、造血幹細胞および造血前駆細胞、好ましくはＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋細胞、さらに好ましくはＣＤ４５＋ＨＬＡ−ＡＢＣ＋Ｌｉｎ−細胞を含む、手段；（ｃ）潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む細胞性組成物を産生するための増殖条件下で、該細胞を培養し、非造血細胞を形成するための手段、を備える、システム。
【請求項３０】
試験物質の活性をアッセイする方法であって、該方法は以下：
（ａ）増殖条件下で造血幹細胞および造血前駆細胞を含む富化された造血細胞調製物において細胞を培養し、細胞性組成物を獲得する工程であって、該組成物は、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む、工程；
（ｂ）必要に応じて、インビトロの分化条件下において、該非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を培養する工程；
（ｃ）工程（ａ）または工程（ｂ）において培養された該細胞を試験物質に曝露する工程；ならびに
（ｄ）該細胞の生存あるいは該細胞の形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および／もしくは分子生物学的特性に対する該試験物質の効果の存在または非存在を検出し、ここで該細胞の細胞生存特性、形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および／もしくは分子生物学的特性を変える効果が、該試験物質の活性を表す、工程、
を包含する、方法。
【請求項３１】
非造血細胞に関係する障害を処置する可能性をもつ新しい薬物をスクリーンするための方法であって、該方法は、以下：
（ａ）非造血細胞に関係する障害を有する患者由来のサンプルから造血細胞を獲得する工程；
（ｂ）該造血細胞から造血幹細胞および造血前駆細胞を含む富化された造血細胞調製物を調製する工程；
（ｃ）増殖条件下で該富化された造血細胞調製物を培養し、細胞性組成物を獲得する工程であって、該組成物は、非造血細胞を形成するための潜在力または増強された潜在力を有する細胞を含む、工程；
（ｄ）必要に応じて、インビトロの分化条件下で、非造血細胞を形成する潜在力または増強された潜在力を有する細胞を培養する工程；
（ｅ）（ｃ）または（ｄ）において培養された該細胞を、可能性をもつ新しい薬剤に曝露する工程；ならびに
（ｆ）該細胞の生存あるいは該細胞の形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および／もしくは分子生物学的特性に対する該可能性をもつ新しい薬剤の効果の存在または非存在を検出し、ここで該細胞の細胞生存特性、形態学的特性、機能的特性または生理学的特性および／もしくは分子生物学的特性を変える効果は、該可能性をもつ新しい薬剤の活性を表す工程、
を包含する、方法。
【請求項３２】
前記細胞性組成物が、請求項１３または請求項１４に規定される、請求項３０または請求項３１に記載される方法。
【請求項３３】
請求項１０〜１９、２６および２８のいずれかに記載される細胞性組成物を産生するキット、または請求項１〜９、２０〜２５、２７、および３０〜３２のいずれかの方法を実施するキット。
【請求項３４】
前記細胞性組成物が、請求項１３または請求項１４に規定される、請求項２９に記載されるシステム。