【手続補正書】
【提出日】平成18年8月2日(2006.8.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ヒトＴＮＦ−αのＳｅｒ１００からＧｌｕ１１６までの領域あるいはマウスＴＮＦ−αのＳｅｒ９９からＧｌｕ１１５までの領域に由来する７個ないし１７個の連続したアミノ酸の鎖を含むペプチドを含む、浮腫治療用医薬組成物。
【請求項２】  ペプチドが１１個ないし１６個の連続したアミノ酸の鎖を含む請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】  ペプチドが１３個ないし１５個の連続したアミノ酸の鎖を含む請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】  ペプチドが１４個の連続したアミノ酸の鎖を含む請求項１記載の医薬組成物。
【請求項５】  該１４個の連続したアミノ酸の鎖が、連続したアミノ酸配列ＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹおよびＰＫＤＴＰＥＧＡＥＬＫＰＷＹからなる群より選択される請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】  ペプチドが環化したものである請求項１ないし５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】  ＮＨ２−およびＣＯＯＨ−末端アミノ酸をシステインにより置換してこれらのシステイン間にジスルフィド結合を形成させることによりペプチドが環化されたものである請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】  環状ペプチドが、環状ペプチドＣＧＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＣおよびＣＧＰＫＤＴＰＥＧＡＥＬＫＰＷＹＣからなる群より選択される請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】  浮腫が肺浮腫である請求項１ないし８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１０】  請求項１ないし９のいずれかに記載のペプチドの、浮腫治療用医薬の製造のための使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明は、ヒトＴＮＦ−αのＳｅｒ１００からＧｌｕ１１６までの領域あるいはマウスＴＮＦ−αのＳｅｒ９９からＧｌｕ１１５までの領域に由来する７個ないし１７個、好ましくは１１個ないし１６個、より好ましくは１３個ないし１５個、最も好ましくは１４個の連続したアミノ酸の鎖を含むペプチドの、浮腫治療用医薬の製造のための使用に関する。より詳細には、本発明は、該１４個のアミノ酸の鎖が、Lucas et al (1994)により記載された連続したアミノ酸の配列ＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹ（配列番号１）およびＰＫＤＴＰＥＧＡＥＬＫＰＷＹ（配列番号２）からなる群より選択される上記ペプチドの使用に関する。これらの配列は、よく知られたアミノ酸の１文字表記による（３文字表記も時々使用する）。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
用語「ペプチド」は、Lucas et al., (1994)により記載された、レクチン様アフィニティーを有するトリパノソーマ溶解性ＴＮＦドメイン由来のアミノ酸（ａａ）のポリマーをいう。そのうえ、該用語は、ヒトＴＮＦ−αのＳｅｒ１００からＧｌｕ１１６までの領域あるいはマウスＴＮＦ−αのＳｅｒ９９からＧｌｕ１１５までの領域に由来する７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６または１７個の連続したアミノ酸のポリマーに関する。該ＴＮＦ領域は、Webb and Goeddel, eds. (1987)中の１７２頁、Pennica および Goeddel 著の部分の図５に示された領域もいう。しかしながら、ヒトＴＮＦ−αのＳｅｒ１００からＧｌｕ１１６までの領域がWebb and Goeddel, eds. (1987)中の１７２頁、Pennica および Goeddel 著の部分の図５に示されたヒトＴＮＦ−αのＳｅｒ９９からＧｌｕ１１６と同じであること、ならびにマウスＴＮＦ−αのＳｅｒ９９からＧｌｕ１１５までの領域がWebb and Goeddel, eds. (1987)中の１７２頁、Pennica および Goeddel 著の部分の図５に示されたマウスＴＮＦ−αのＳｅｒ９８からＧｌｕ１１５と同じであることが明らかなはずである。より詳細には、用語「ペプチド」は、該ＴＮＦ領域のヘキサマーＴＰＥＧＡＥ（配列番号３）を含むペプチド、あるいはLucas et al., (1994)により３個の重要アミノ酸であることが示された該ヘキサマーの対応アミノ酸Ｔ、ＥおよびＥを含むいずれかのペプチドについていう。本発明が該ＴＮＦ領域に由来するいずれのペプチドにも関するものであり、糖鎖付加、アセチル化、リン酸化、脂肪酸での修飾等のごときペプチドの翻訳後修飾体を排除するものではないことが明らかなはずである。例えば、本発明は、１個またはそれ以上のａａ（アミノ酸）アナログ（非天然ａａも含む）を含むペプチド、置換結合を有するペプチド、ペプチドの変異バージョンもしくは天然の配列変異体、システイン残基間のジスルフィド結合を含むペプチド、ならびに当該分野において知られた他の修飾体を包含する。本発明のペプチドは機能的にも定義され、すなわち、本発明は、浮腫の治療に使用できる、あるいは浮腫治療用医薬の製造に使用できるいずれのペプチドにも関する。本質的には、本発明は、Lucas et al., (1994)により定義されたトリパノソーマ溶解性ペプチドと同じまたは非常に類似の特徴を有する分子であって、当該分野において知られたいずれかの方法により得ることのできる分子に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
さらにそのうえ、本発明は、環化された上記ペプチドの使用にも関する。より詳細には、本発明は、ＮＨ２−末端およびＣＯＯＨ−末端アミノ酸をシステインに置換してこれらのシステイン間にジスルフィド結合を形成させることにより環化された上記ペプチドの使用に関する。この点において、本発明は、Lucas et al., (1994)に記載された環化ペプチドＣＧＱＲＥＴＰＥＧＡＥＡＫＰＷＹＣ（配列番号４）およびＣＧＰＫＤＴＰＥＧＡＥＬＫＰＷＹＣ（配列番号５）からなる群より選択される上記環化ペプチドの使用に関する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
ＴＮＦおよびペプチド
記載されたようにして（Lucas et al., 1997）、E. coli由来の組み換えネズミＴＮＦ（以下、ＴＮＦという）およびE. coli由来の組み換え（Ｔ１０４Ａ−Ｅ１０６Ａ−Ｅ１０９Ａ）三重変異ＴＮＦ変異体（ｍｕｔＴＮＦ）を合成した。Ｆｍｏｃ−ａ−アミノ基保護（Fields et al., 1990）を用いてＴＮＦ由来のペプチドを合成し、Ｃ１８逆相高品質液体クロマトグラフィーカラムを用いて精製した。
下記のＴＮＦ由来ペプチドを合成した：
長い先端ペプチド９９−１１５（LTip）        GG-CGPKDTPEGAELKPWYC（配列番号６）
変異した先端ペプチド９９−１１５（mutTip）  GG-CGPKDAPAGAALKPWYC（配列番号７）
スクランブルされた先端ペプチド（scamblTip）  GG-CGTKPWELGPDEKPAYC（配列番号８）
短い先端ペプチド（STip）                      CTPEGAEC（配列番号９）
可能なかぎり元のＴＮＦコンホーメーションを理論的に保持させるように、Ｌｔｉｐ、ＭｕｔＴｉｐおよびＳｃａｍｂｌＴｉｐペプチドを環化させた。ＴＮＦ配列のＳｅｒ９９をＣｙｓにより置換し、Ｃｙｓ１００をＧｌｙにより置換して、ペプチド中のＣｙｓ９９とＣｙｓ１１５との間にジスルフィド結合を形成させることができた。ＳＴｉｐペプチドは環化できなかった。ペプチドをＮＨ２−ビオチン化した。