【手続補正書】
【提出日】平成18年6月5日(2006.6.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  試料中の分析物の電気化学的検出法であって、
ａ）試料中の検出すべき所望の分析物を結合することができるレセプターを固定化または吸着した導電性ポリマーコーティングを有する検出電極を得、
ｂ）該所望の分析物が該固定化または吸着レセプターに結合するように試料を含む被検溶液と検出電極を接触させ、
ｃ）固定化または吸着レセプターと結合する部位から空間的に離れた部位で該分析物と結合することができる、荷電標識と結合した第二レセプターを含む溶液と検出電極を接触させ、
ｄ）処理した検出電極と参照電極の両方を電解液中に浸漬したときの、それらの間の電位差をモニターし、
ｅ）一定ｐＨにおける電解液のイオン強度の変化に伴う検出電極と参照電極間の電位差をモニターする工程を含む方法。
【請求項２】  試料中の分析物の電気化学的検出法であって、
ａ）レセプター試料中の検出すべき所望の分析物と結合することができるレセプターを固定化または吸着した導電性ポリマーコーティングを有する検出電極を得、
ｂ）該分析物が該固定化または吸着レセプターに結合するように試料を含む被検溶液と検出電極を接触させ、
ｃ）該固定化または吸着レセプターと結合することができる、荷電標識と結合した競合分子を含む溶液と検出電極を接触させ、
ｄ）処理した検出電極と参照電極の両方を電解液中に浸漬したときの、それらの間の電位差をモニターし、
ｅ）一定ｐＨにおける電解液のイオン強度の変化に伴う検出電極と参照電極間の電位差をモニターする工程を含む方法。
【請求項３】  荷電標識が以下の特性を有する請求項１または２に記載の方法：
（ｉ）パートｄ）の電解液のｐＨで正味の荷電を保持し、
（ii）この荷電の大きさが一定ｐＨでの電解液のイオン強度の変化に応じて変化する。
【請求項４】  荷電標識が１静電単位より大きい電解液のｐＨで正味の荷電を有する請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】  荷電標識がフェロセン（ferrocene）、ラテックスミクロスフェア、または金である請求項３または４記載の方法。
【請求項６】  検出電極を、荷電標識と結合した第二レセプターまたは競合分子を添加した被検溶液と接触させることにより工程（ｂ）および（ｃ）を同時に行う請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】  試料中の分析物の電気化学的検出法であって、
ａ）レセプター試料中の検出すべき所望の分析物と結合することができるレセプターを固定化または吸着した導電性ポリマーコーティングを有する検出電極を得、
ｂ）該分析物が該固定化または吸着レセプターと結合するように試料を含む被検溶液と検出電極を接触させ、
ｃ）固定化または吸着レセプターと結合する部位から空間的に離れた部位で該分析物と結合することができる、酵素と結合した第二レセプターを含む溶液と検出電極を接触させ、
ｄ）処理した検出電極と参照電極の両方を電解液中に浸漬したときの、それらの間の電位差をモニターし、
ｅ）該酵素の基質を含む電解液に曝露した後の検出電極と参照電極間の電位差をモニターする工程を含む方法。
【請求項８】  試料中の分析物の電気化学的検出法であって、
ａ）レセプター試料中の検出すべき所望の分析物を結合することができるレセプターを固定化または吸着した導電性ポリマーコーティングを有する検出電極を得、
ｂ）該所望の分析物が該固定化または吸着レセプターに結合するように試料を含む被検溶液と検出電極を接触させ、
ｃ）該固定化または吸着レセプターと結合することができる、酵素と結合した競合分子を含む溶液と検出電極を接触させ、
ｄ）処理した検出電極と参照電極の両方を電解液中に浸漬したときの、それらの間の電位差をモニターし、
ｅ）該酵素の基質を含む電解液に曝露した後の検出電極と参照電極間の電位差をモニターする工程を含む方法。
【請求項９】  該酵素が、検出電極の導電性ポリマーコーティングの酸化還元組成に対して検出可能な効果を持たない基質を、該導電性ポリマーコーティングの酸化還元組成に直接または間接的に影響を及ぼすことができる生成物に変換することができる請求項７または８記載の方法。
【請求項１０】  該酵素がパーオキシダーゼである請求項９記載の方法。
【請求項１１】  該導電性ポリマー膜の酸化還元組成に間接的に影響を及ぼすことができる生成物がパート（ｅ）の電解液のｐＨを変化させる請求項９記載の方法。
【請求項１２】  該酵素がウレアーゼである請求項１１記載の方法。
【請求項１３】  該酵素が、検出電極の導電性ポリマーコーティングの酸化還元組成に対する検出可能な効果を持たない基質を、第二酵素の基質である生成物に変換することができる請求項７または８記載の方法（ここで、第二酵素の作用により検出電極の導電性ポリマーコーティングの酸化還元組成に直接または間接的に影響を及ぼす第二生成物が生じる）。
【請求項１４】  該酵素が、検出電極の導電性ポリマーコーティングの酸化還元組成に直接影響する基質を、該導電性ポリマーコーティングの酸化還元組成に対する検出可能な効果を持たない生成物に変換することができる請求項７または８記載の方法。
【請求項１５】  レセプター分子が、細菌、植物もしくは動物細胞の断片、タンパク質（ハプテン）と結合した化合物、レクチン、糖タンパク質、または炭水化物、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片、抗体擬似物、キメラ抗体ウイルス溶解物、組換えタンパク質、合成ペプチド、ホルモン、ホルモンレセプター、一本鎖核酸、低分子である請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】  該検出電極の導電性ポリマーコーティングにドーパントアニオンが添加されている請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】  該ドーパントアニオンがドデシルサルフェートまたはデキストランサルフェートである請求項１６記載の方法。
【請求項１８】  該検出電極を、酵素標識と結合した第二レセプターまたは競合分子を加えた被検溶液と接触させることにより工程（ｂ）および（ｃ）が同時に行われる請求項７〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】  該検出電極がその導電性ポリマーコーティングに固定化されるか吸着されたアダプター分子を含み、検出すべき分析物と結合することができるレセプターが該アダプター分子と結合する請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】  導電性ポリマー層に固定化されるか吸着されたアダプター分子を有する検出電極を、荷電標識または酵素と結合した第二レセプターまたは競合分子およびレセプターを加えた被検溶液と接触させることにより検出電極とレセプターを接触させる工程とともに、工程（ｂ）および（ｃ）を同時に行う請求項１９記載の方法。
【請求項２１】  アダプター分子が、該分析物と結合することができる少なくとも1のクラスのレセプター分子と結合することができる分子である請求項１９または２０記載の方法。
【請求項２２】  検出すべき分析物と結合することができるレセプターがビオチン化されており、アダプター分子がアビジンまたはストレプトアビジンであり、該レセプターが、ビオチン／アビジンまたはビオチン／ストレプトアビジン結合相互作用によりそれと結合する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２３】  検出すべき分析物と結合することができるレセプターが、抗体であり、アダプター分子がプロテインＡまたはプロテインＧであり、該抗体がプロテインＡ／抗体またはプロテインＧ／抗体結合相互作用によりそれと結合する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２４】  検出すべき分析物と結合することができるレセプターが、糖部分を含んでおり、アダプター分子がレクチンであり、該レセプターがレクチン／糖結合相互作用によりそれと結合する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２５】  検出すべき分析物と結合することができるレセプターが、ＦＩＴＣで標識されており、アダプター分子が抗ＦＩＴＣ抗体であり、該レセプターがＦＩＴＣ／抗ＦＩＴＣ結合相互作用によりそれと結合する、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２６】  生物学的液体、例えば、全血、血清、リンパ液、尿、唾液、脳脊髄液、または精液を被検溶液として用いる請求項１〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】  少なくとも工程（ｄ）および（ｅ）が測定用フロースルーセル中で行われる請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】  導電性ポリマーコーティングに固定化されたアダプター分子を有する検出電極を得る工程が、
ａ）導電性ポリマーのモノマー単位とアダプター分子を含む電気化学的重合溶液を調製し、
ｂ）導電性電極を該電気化学的重合溶液に浸漬し、
ｃ）該電極と電気化学的重合溶液間の周期的電位を適用して該溶液からポリマーを電気化学的に合成することにより電極をコートする（ここで、周期的電位は少なくとも１完全周期を適用する）工程、を含む方法を用いて該電極を製造することを含む、請求項１９〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】  導電性ポリマーコーティングに吸着したアダプター分子を有する検出電極を得る工程が、
ａ）導電性ポリマーのモノマー単位を含む電気化学的重合溶液を調製し、
ｂ）導電性電極を該電気化学的重合溶液に浸漬し、
ｃ）該電極と電気化学的重合溶液間の周期的電位を適用して該溶液からポリマーを電気化学的に合成することにより電極をコートし（ここで、周期的電位は少なくとも１完全周期で適用する）、
ｄ）該アダプター分子が該電極をコーティングする導電性ポリマー上に吸着するようなアダプター分子を含む溶液と、該コートされた電極を接触させる工程を含む方法を用いて該電極を製造することを含む、請求項１９〜２７のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】  該アダプター分子が、少なくとも1のクラスのレセプター分子と特異的に結合することができる分子、アビジン、ストレプトアビジン、および抗ＦＩＴＣ抗体からなる群から選ばれる、請求項２８または２９記載の方法。
【請求項３１】  導電性ポリマーのモノマー単位がアニリン、チオフェン、フラン、またはピロールである請求項２８〜３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】  ドーパント塩を電気化学的重合溶液に添加する請求項２８〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】  該塩がドデシル硫酸ナトリウムまたはデキストラン硫酸ナトリウムである請求項３２記載の方法。
【請求項３４】  周期的電位がノコギリ歯の形をしている請求項２８〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】  周期的電位が少なくとも２周期で適用される請求項２８〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】  周期的電位が、＋２ボルトに等しいかまたはそれ以下の、電極に適用される最高値を有する請求項２８〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】  試料中の分析物の電気化学的検出法であって、
（ａ）導電性ポリマーに固定化または吸着したアビジンまたはストレプトアビジン分子を含む導電性ポリマー層でコートした導電性電極を含む検出電極を得（ここで、該アビジンまたはストレプトアビジン分子は、ビオチン／アビジンまたはビオチン／ストレプトアビジン結合相互作用により、検出すべき分析物を結合することができるレセプター分子と結合する）、
（ｂ）該所望の分析物が該固定化または吸着レセプター分子と結合するように試料を含む被検溶液と検出電極を接触させ、
（ｃ）検出電極と参照電極の両方を電解液に浸漬したときの参照電極に対する検出電極電位をモニターし、
（ｄ）一定ｐＨでの電解液のイオン強度または組成の変化に伴う参照電極に対する検出電極電位差をモニターする工程を含む方法。
【請求項３８】  検出すべき分析物が核酸であり、レセプター分子がオリゴヌクレオチドである請求項３７記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
多くの論文［４、５］が報告しているように、溶液に浸漬した電導性(導電性)ポリマーについてイオン平衡が達成される速度およびイオン交換が生じる容易さは、本質的に、電気沈殿段階で導入されるドーパントアニオンのサイズに依存し、ドーパントアニオンのイオン半径がより大きければ、より急速なイオン交換が生じ、より急速に平衡状態に達する。これは、溶液のイオン組成の変動に応じた「金属電極−電導性ポリマー」の電位が変化する速度と値に直接結びついている［６］。
電導性ポリマー膜は、いずれも検出電極表面へのレセプターの結合と、緩衝溶液組成の変動に対して検出電極を敏感にするのを助ける二重の機能を果たす。特に、電導性ポリマーの酸化還元組成に影響を及ぼす緩衝溶液の組成変化は、検出電極の定常状態における電位に、対応する変化を生じる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
上記方法のある態様において、第二レセプターまたは競合分子と結合した酵素は、検出電極の電導性ポリマーコーティングの酸化還元組成に直接影響を及ぼす基質を、電導性ポリマーコーティングの酸化還元組成に対する検出可能な効果を持たない生成物に変換することができる。
別の態様において、第二レセプターまたは競合分子と結合した酵素は、検出電極の電導性ポリマーコーティングの酸化還元組成に対する検出可能な効果を持たない基質を、電導性ポリマーコーティングの酸化還元組成に直接または間接的に影響を及ぼすことができる生成物に変換することができる。そのような酵素の例はホースラディッシュパーオキシダーゼである。酵素反応の生成物が電導性ポリマーの酸化還元組成に間接的影響を及ぼし得る１つの方法は、電解液のｐＨを変化させることである（この態様において、電解液のｐＨは緩衝されない）。そのような生成物を生じる酵素の例はウレアーゼである。
さらなる態様において、第二レセプターまたは競合分子と結合した酵素は、検出電極の電導性ポリマーコーティングの酸化還元組成に対する検出可能な効果を持たない生成物を、第二酵素の基質である生成物に変換することができる（ここで、第二酵素の作用により電導性ポリマーの酸化還元組成に直接または間接的に影響を及ぼす第二生成物が生じる）。