【手続補正書】
【提出日】平成17年11月25日(2005.11.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）感染性ウイルスを産生することができないフラビウイルスレプリコンをコードし、前記フラビウイルスレプリコンが１つまたは複数の変異フラビウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列と、
（ｉｉ）異種核酸の挿入部位と、
（ｉｉｉ）前記フラビウイルスレプリコンをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターと、
（ｉｖ）少なくとも１つの自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列と
を含む、発現ベクター。
【請求項２】
２つの自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列を含み、少なくとも２つの前記自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列の第１の配列が、前記挿入部位の５’に存在し、少なくとも２つの前記自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列の第２の配列が、前記挿入部位の３’に存在する、請求項１の発現ベクター。
【請求項３】
前記自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列が、それぞれ口蹄疫ウイルス２Ａ自己プロテアーゼをコードする、請求項１の発現ベクター。
【請求項４】
前記（ｉ）中の変異フラビウイルス非構造タンパク質が、
（ｉ）プロリン２５０のロイシンへの変異を有する非構造タンパク質ＮＳ１、
（ｉｉ）アラニン３０のプロリンの変異を有する非構造タンパク質ＮＳ２Ａ、
（ｉｉｉ）アスパラギン１０１のアスパラギン酸の変異を有する非構造タンパク質ＮＳ２Ａ、および
（ｉｖ）プロリン２７０のセリンへの変異を有する非構造タンパク質ＮＳ５
からなる群から選択される、請求項１の発現ベクター。
【請求項５】
Ｃタンパク質の最初の２０個のアミノ酸（Ｃ２０）およびＥタンパク質の最後の２２個のアミノ酸（Ｅ２２）をそれぞれコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１の発現ベクター。
【請求項６】
前記レプリコンが、ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、およびＮＳ５から選択される野生型非構造フラビウイルスタンパク質をそれぞれコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む、請求項１の発現ベクター。
【請求項７】
前記レプリコンがクンジンウイルスに由来する、請求項１の発現ベクター。
【請求項８】
ＳＰ６ＫＵＮｒｅｐ５またはｐＫＵＮｒｅｐ５である、請求項１の発現ベクター。
【請求項９】
ＳＰ６ＫＵＮｒｅｐ６またはｐＫＵＮｒｅｐ６である、請求項２の発現ベクター。
【請求項１０】
（ｉ）感染性ウイルスを産生することができないフラビウイルスレプリコンをコードし、前記フラビウイルスレプリコンが１つまたは複数の変異フラビウイルス非構造タンパク質をコードするヌクレオチド配列と、
（ｉｉ）異種核酸と、
（ｉｉｉ）前記フラビウイルスレプリコンをコードするヌクレオチド配列に作動可能に連結されたプロモーターと、
（ｉｖ）少なくとも１つの自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列と
を含む、発現構築物。
【請求項１１】
少なくとも２つの自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列を含み、少なくとも１つの前記自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列の第１の配列が、前記異種核酸の５’に存在し、少なくとも１つの前記自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列の第２の配列が、前記異種核酸の３’に存在する、請求項１０の発現構築物。
【請求項１２】
前記自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列が、それぞれ口蹄疫ウイルス２Ａ自己プロテアーゼをコードする、請求項１０の発現ベクター。
【請求項１３】
前記（ｉ）中の変異フラビウイルス非構造タンパク質が、
（ｉ）プロリン２５０のロイシンへの変異を有する非構造タンパク質ＮＳ１、
（ｉｉ）アラニン３０のプロリンの変異を有する非構造タンパク質ＮＳ２Ａ、
（ｉｉｉ）アスパラギン１０１のアスパラギン酸の変異を有する非構造タンパク質ＮＳ２Ａ、および
（ｉｖ）プロリン２７０のセリンへの変異を有する非構造タンパク質ＮＳ５からなる群から選択される、請求項１０の発現構築物。
【請求項１４】
Ｃタンパク質の最初の２０個のアミノ酸（Ｃ２０）およびＥタンパク質の最後の２２個のアミノ酸（Ｅ２２）をそれぞれコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１０の発現構築物。
【請求項１５】
ＮＳ１、ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、およびＮＳ５から選択されるフラビウイルス野生型非構造タンパク質をそれぞれコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１０の発現構築物。
【請求項１６】
前記フラビウイルスレプリコンがクンジンウイルスに由来する、請求項１５の発現構築物。
【請求項１７】
前記異種核酸が、免疫原性タンパク質をコードする、請求項１０の発現構築物。
【請求項１８】
前記免疫原が、１つまたは複数のエピトープ配列ＹＰＨＦＭＰＴＮＬ、ＲＰＱＡＳＧＶＹＭ、ＴＹＱＲＴＲＡＬＯＶ、ＳＹＩＰＳＡＥＫＩ、およびＳＩＩＮＦＥＫＬを有するマウスポリエピトープタンパク質である、請求項１７の発現構築物。
【請求項１９】
前記免疫原性タンパク質がＨＩＶｇａｇタンパク質である、請求項１７の発現構築物。
【請求項２０】
ＲＮＡ構築物である、請求項１０の発現構築物。
【請求項２１】
ＲＮＡＬｅｕＭｐｔ、ＲＮＡＰｒｏＭｐｔ、またはＫＵＮＲＮＡｇａｇである、請求項２０の発現構築物。
【請求項２２】
ＤＮＡ構築物である、請求項１０の発現構築物。
【請求項２３】
ＤＮＡＬｅｕＭｐｔ、ＤＮＡＰｒｏＭｐｔ、またはＫＵＮＤＮＡｇａｇである、請求項２２の発現構築物。
【請求項２４】
請求項１０の発現構築物を含む、宿主細胞。
【請求項２５】
（ｉ）請求項１０の発現構築物と、
（ｉｉ）前記発現構築物のフラビウイルスウイルス様粒子（ＶＬＰ）へのパッケージングを容易にする１つまたは複数のタンパク質を発現することができる少なくとも別の発現構築物と
を含む、発現系。
【請求項２６】
前記別の発現構築物が、セムリキ森林熱ウイルス（ＳＦＶ）またはシンドビスウイルス（ＳＩＮ）に由来する、請求項２５の発現系。
【請求項２７】
ＳＦＶに由来する、請求項２６の発現系。
【請求項２８】
ＳＦＶの変異ｎｓＰ２遺伝子をさらに含む、請求項２６の発現系。
【請求項２９】
前記ＳＦＶの変異ｎｓＰ２遺伝子がロイシン７１３のプロリンへの置換をコードする、請求項２８の発現系。
【請求項３０】
前記少なくとも別の発現構築物が、ＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐ／Ｎｅｏ、ｐＳＦＶ３Ｌ７１３ＰＬａｃＺＮｅｏ、またはＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐである、請求項２９の発現系。
【請求項３１】
ＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐ／Ｎｅｏ、ｐＳＦＶ３Ｌ７１３ＰＬａｃＺＮｅｏ、またはＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３から選択される少なくとも別の発現構築物を含む、宿主細胞。
【請求項３２】
ＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐ／ＮｅｏまたはｐＳＦＶ３Ｌ７１３ＰＬａｃＺＮｅｏによって安定にトランスフェクトされたＢＨＫ２１細胞である、請求項３１の宿主細胞。
【請求項３３】
請求項１０の発現構築物をさらに含む、請求項３１の宿主細胞。
【請求項３４】
異種免疫原性タンパク質をコードするＲＮＡを含む１つまたは複数のＶＬＰを産生する、請求項３３の宿主細胞。
【請求項３５】
ＤＮＡ発現構築物および薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤を含むワクチンであって、前記ＤＮＡ発現構築物からのＲＮＡは動物細胞で転写可能であり、前記転写可能なＲＮＡが、
（ｉ）感染性ウイルスを産生することができないフラビウイルスレプリコンと、
（ｉｉ）異種免疫原性タンパク質と
をコードする、動物に投与すると防御的Ｔ細胞応答を誘発することができるワクチン。
【請求項３６】
ＤＮＡ発現構築物から転写可能なＲＮＡおよび薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤、または賦形剤を含むワクチンであって、前記ＲＮＡが、
（ｉ）感染性ウイルスを産生することができないフラビウイルスレプリコンと、
（ｉｉ）異種免疫原性タンパク質と
をコードする、動物に投与すると防御的Ｔ細胞応答を誘発することができるワクチン。
【請求項３７】
前記ＤＮＡ発現構築物が、
（ｉ）感染性ウイルスを産生することができないフラビウイルスレプリコンをコードし、前記フラビウイルスレプリコンが１つまたは複数の変異フラビウイルス非構造タンパク質をコードするＤＮＡ配列と、
（ｉｉ）前記免疫原性タンパク質をコードする異種ＤＮＡと、
（ｉｉｉ）動物細胞中で作動可能であり、且つフラビウイルスレプリコンをコードするＤＮＡ配列に作動可能に連結されたプロモーターと、
（ｉｖ）少なくとも１つの自己プロテアーゼをコードするヌクレオチド配列と
を含む、請求項３５または３６のワクチン。
【請求項３８】
前記フラビウイルスレプリコンがクンジンウイルスレプリコンである、請求項３５または３６のワクチン。
【請求項３９】
前記Ｔ細胞応答がＣＴＬ応答である、請求項３５または３６のワクチン。
【請求項４０】
前記ＣＴＬ応答が、長期エフェクターＣＤ８＋Ｔ細胞応答によって特徴付けられる、請求項３９のワクチン。
【請求項４１】
前記免疫原性タンパク質がウイルスタンパク質である、請求項４０のワクチン。
【請求項４２】
前記ウイルスタンパク質がＨＩＶｇａｇである、請求項４１のワクチン。
【請求項４３】
前記動物が哺乳動物である、請求項３５または３６のワクチン。
【請求項４４】
前記哺乳動物がヒトである、請求項４３のワクチン。
【請求項４５】
動物に投与すると防御的Ｔ細胞応答を誘発することができ、請求項１６の発現系によって産生される１つまたは複数のＶＬＰを含むワクチンであって、前記ＶＬＰが異種免疫原性タンパク質をコードするＲＮＡを含むワクチン。
【請求項４６】
前記免疫原性タンパク質がウイルスタンパク質である、請求項４５のワクチン。
【請求項４７】
前記ウイルスタンパク質がＨＩＶｇａｇである、請求項４６のワクチン。
【請求項４８】
請求項３５、３６又は４５のワクチンを動物に投与し、それにより前記動物に免疫が誘導されるステップを含む、動物の免疫化方法。
【請求項４９】
前記免疫が抗体によって媒介される免疫である、請求項４８の方法。
【請求項５０】
前記Ｔ細胞免疫が、ＣＤ８＋細胞傷害性リンパ球（ＣＴＬ）応答によって特徴付けられる、請求項４８の方法。
【請求項５１】
前記Ｔ細胞免疫が、長期エフェクターＣＤ８＋ＣＴＬ応答の誘導によって特徴付けられる、請求項５０の方法。
【請求項５２】
前記Ｔ細胞免疫が、ＣＤ４＋Ｔ細胞応答によって特徴付けられる、請求項４８の方法。
【請求項５３】
ウイルス感染に対する免疫が動物で誘導される、請求項４８の方法。
【請求項５４】
前記動物で腫瘍免疫が誘導される、請求項４８の方法。
【請求項５５】
前記動物で黒色腫に対する免疫が誘導される、請求項５４の方法。
【請求項５６】
前記動物が哺乳動物である、請求項４８の方法。
【請求項５７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項５６の方法。
【請求項５８】
ＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐ／Ｎｅｏ、ｐＳＦＶ３Ｌ７１３ＰＬａｃＺＮｅｏ、またはＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐからなる群から選択されるパッケージング構築物。
【請求項５９】
請求項５８のパッケージング構築物を含む、宿主細胞。
【請求項６０】
ＳＦＶＭＥＣ／Ｌ７１３Ｐ／ＮｅｏまたはｐＳＦＶ３Ｌ７１３ＰＬａｃＺＮｅｏで安定にトランスフェクトされたＢＨＫ２１細胞である、請求項５９の宿主細胞。