【手続補正書】
【提出日】平成17年8月5日(2005.8.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
作動可能に結合した、目的のペプチドをコードする異種ＤＮＡ配列と、その５’末端から上流および該コード配列の３’末端から下流に位置する調節配列とを含む、標的植物の葉緑体ゲノムにおいて該コード配列の発現を与えるための発現カセットと、該発現カセットの各々の側のフランキングを含むベクターであって、フランキングＤＮＡ配列は標的葉緑体ゲノムのスペーサー配列と相同性であって、その配列は異なる植物種の葉緑体ゲノムに保存されており、それにより、フランキング配列と標的葉緑体ゲノムの相同配列との相同的組換を介して該異種コード配列の標的植物の葉緑体ゲノムへの安定な組込が促進されることを特徴とする異なる植物種の葉緑体ゲノムを安定に形質転換する能力を有する万能葉緑体組込および発現ベクター。
【請求項２】
選択可能な表現型をコードする異種塩基配列を含む請求項１記載のベクター。
【請求項３】
フランキング配列が、各々、葉緑体ゲノムのｔＲＮＡＩｌｅ遺伝子と、ｔＲＮＡＡｌａ遺伝子との間の遺伝子間スペーサー２領域部分を含み、それにより、標的葉緑体ゲノムにおける保存スペーサー２領域との二重相同的組換が促進される請求項２記載のベクター。
【請求項４】
フランキング配列が、各々、該スペーサー領域部分に加え、各々、ｔＲＮＡＩｌｅ遺伝子およびｔＲＮＡＡｌａ遺伝子の一部または全部を含む請求項３記載のベクター。
【請求項５】
フランキング配列が、各々、スペーサー領域部分に加え、１６Ｓおよび／または２３ＳｒＲＮＡ遺伝子配列の一部または全部を含む請求項４記載のベクター。
【請求項６】
スペーサー領域が、葉緑体ゲノムの逆方向反復に位置する請求項３記載のベクター。
【請求項７】
フランキング配列のＤＮＡが、標的植物の植物種以外の植物種から由来する請求項３記載のベクター。
【請求項８】
請求項３記載のベクターで安定に形質転換された葉緑体を含む安定に形質転換された植物またはその子孫。
【請求項９】
単子葉植物である請求項８記載の安定に形質転換された植物。
【請求項１０】
双子葉植物である請求項８記載の安定に形質転換された植物。
【請求項１１】
トウモロコシ、米、グラス（grass）、ライ麦、大麦、燕麦または小麦である請求項９記載の安定に形質転換された植物。
【請求項１２】
大豆、落花生、ブドウ、ジャガイモ、サツマイモ、エンドウ、カノーラ（canola）、タバコ、トマトまたは綿である請求項１０記載の安定に形質転換された植物。
【請求項１３】
組込および発現万能ベクターを標的植物の葉緑体ゲノムに導入し、形質転換された植物を成長させることを含む標的植物種を安定に形質転換する方法であって、該ベクターが、異なる植物種の葉緑体を安定に形質転換する能力を有し、作動可能に結合した、目的のペプチドをコードする異種ＤＮＡ配列と、その５’末端から上流および該コード配列の３’末端から下流に位置する調節配列とを含む、標的植物の葉緑体ゲノムにおいて該コード配列の発現を与えるための発現カセットと、選択可能な表現型をコードする異種配列と、該発現カセットの各々の側のフランキングを含むベクターであって、フランキングＤＮＡ配列は、各々、葉緑体ゲノムのｔＲＮＡＩｌｅおよびＲＮＡＡｌａ遺伝子の間の遺伝子間スペーサー２領域部分を含み、標的葉緑体ゲノムのスペーサー配列と相同性であり、その配列は異なる植物種の葉緑体ゲノムに保存されており、それにより、フランキング配列と標的葉緑体ゲノムの相同配列との相同的組換を介して該異種コード配列の標的植物の葉緑体ゲノムへの安定な組込が促進されることを特徴とする異なった植物種の葉緑体ゲノムを安定に形質転換する能力を有する万能葉緑体組込および発現ベクターである標的植物種を安定に形質転換する方法。
【請求項１４】
形質転換植物が、単子葉植物である請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
形質転換植物が、双子葉植物である請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
形質転換植物が、つぎの単子葉植物：トウモロコシ、米、グラス、ライ麦、大麦、燕麦または小麦の１種である請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
形質転換植物が、つぎの双子葉植物：大豆、落花生、ブドウ、サツマイモ、エンドウ、カノーラ、タバコ、トマトまたは綿の１種である請求項１５記載の方法。
【請求項１８】
目的のペプチドを単離する請求項１３記載の方法。
【請求項１９】
ポリペプチドが、合成蛋白ベースポリマー（ＰＢＰ）である請求項１３記載の方法。
【請求項２０】
ＰＢＰが、反復ペンタマー配列（ＧＶＧＶＰ）ｎ［ここに、ｎは１〜２５０の整数、Ｇはグリシン、Ｖはバリン、Ｐはプロリンである］を有する請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
目的の発現されたポリペプチドがインスリンである請求項１３記載の方法。
【請求項２２】
インスリンを単離する請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
インスリンがプロインスリンの形である請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
プロインスリンがＰＢＰと融合している請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
形質転換植物が、タバコである請求項２１記載の方法。
【請求項２６】
目的とするポリペプチドが、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）である請求項１３記載の方法。
【請求項２７】
形質転換植物が、タバコである請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
目的とするペプチドが生物学的に活性な分子である請求項３記載のベクター。
【請求項２９】
生物学的に活性な分子を含む請求項２８記載のベクターで安定に形質転換された葉緑体ゲノムを含む安定に形質転換された植物。
【請求項３０】
異なる植物種の葉緑体を安定に形質転換する能力を有する組込および発現万能ベクターで安定に形質転換された葉緑体を含む安定に形質転換された除草剤耐性標的植物種であって、該ベクターが、標的植物種の葉緑体ゲノム中の異種ＤＮＡ配列によって発現される目的とする異種蛋白を含む発現カセットと、該除草剤に対する耐性以外の選択した表現型と、該発現カセットの各々の側のフランキングを含むベクターであって、そのフランキングＤＮＡ配列が、各々、葉緑体ゲノムのｔＲＮＡＩｌｅおよびＲＮＡＡｌａ遺伝子の間の遺伝子間スペーサー２領域部分を含み、標的葉緑体ゲノムのスペーサー配列と相同性であり、その配列は異なる植物種の葉緑体ゲノムに保存されており、それにより、フランキング配列と標的葉緑体ゲノムの相同配列との相同的組換を介して該異種蛋白の標的植物の葉緑体ゲノムへの安定な組込が促進された安定に形質転換された除草剤耐性標的植物種またはその子孫。
【請求項３１】  除草剤が、グリホサート（glyphosate）である請求項３０記載の除草剤耐性標的植物。
【請求項３２】
トウモロコシ、米、グラス、ライ麦、大麦、燕麦、小麦、大豆、落花生、ブドウ、ジャガイモ、サツマイモ、エンドウ、カノーラ、タバコまたは綿である請求項３０記載の除草剤耐性標的植物。
【請求項３３】
異なる植物種の葉緑体を安定に形質転換する能力を有する組込および発現万能ベクターを植物に導入し、該ベクターによって安定に形質転換することを含む標的植物種に除草剤耐性を付与する方法であって、該ベクターが、作動可能に結合した、除草剤耐性を付与する目的の蛋白をコードする異種ＤＮＡ配列と、その５’末端から上流および該コード配列の３’末端から下流に位置する調節配列とを含む、標的植物の葉緑体ゲノムにおいて該コード配列の発現を与えるための発現カセットと、該除草剤に対する耐性以外の選択可能な表現型をコードする異種配列と、該発現カセットの各々の側のフランキングを含むベクターであり、フランキング配列は、各々、葉緑体ゲノムのｔＲＮＡＩｌｅおよびＲＮＡＡｌａ遺伝子の間の遺伝子間スペーサー２領域部分を含み、標的葉緑体ゲノムのスペーサー配列と相同性であり、その配列は異なる植物種の葉緑体ゲノムに保存されており、それにより、フランキング配列と標的葉緑体ゲノムの相同配列との相同的組換を介して該異種コード配列の標的植物の葉緑体ゲノムへの安定な組込を促進させ、該形質転換植物を成長させることを特徴とする標的植物種に除草剤耐性を付与する方法。
【請求項３４】
目的とする蛋白が、天然の酵素よりも除草剤に対する結合性が減少している酵素の変異形である請求項３３記載の方法。
【請求項３５】
酵素が、ＥＰＳＰシンターゼであり、除草剤が、グリホサートである請求項３４記載の方法。
【請求項３６】
成長した形質転換植物が、該選択可能な表現型と、それに加えてもう１つ別の特性を発現する標的植物種の表現型を安定に形質転換するための請求項３３記載の方法。
【請求項３７】
選択した表現型が、ハイグロマイシンβ−ホスホトランスフェラーゼ遺伝子と、除草剤グリホサートに対する耐性を付与するさらなる特性の発現によって付与される請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
異なる植物種の葉緑体を安定に形質転換する能力を有する組込および発現万能ベクターを植物に導入することを含む植物の形質転換による標的植物種の選択した除草剤に対する耐性獲得に基づく標的植物種葉緑体形質転換および標的特性の発現の決定方法であって、該ベクターが、作動可能に結合した、所望の標的特性をコードする異種ＤＮＡ配列と、その５’末端から上流および該コード配列の３’末端から下流に位置する調節配列とを含む、標的植物の葉緑体ゲノムにおいて該コード配列の発現を与えるための発現カセットと、選択可能な表現型をコードする異種配列と、該発現カセットの各々の側のフランキングを含むベクターであり、フランキングＤＮＡ配列は各々、葉緑体ゲノムのｔＲＮＡＩｌｅおよびＲＮＡＡｌａ遺伝子の間の遺伝子間スペーサー２領域部分を含み、標的葉緑体ゲノムのスペーサー配列と相同性であり、その配列は異なる植物種の葉緑体ゲノムに保存されており、それにより、フランキング配列と標的葉緑体ゲノムの相同配列との相同的組換を介して該異種コード配列の標的植物の葉緑体ゲノムへの安定な組込を促進させ、ベクターが導入された植物を該除草剤の致死濃度に曝して死なない植物を選択し、それにより所望の標的特性を発現している形質転換植物を選択することを特徴とする植物の形質転換による標的植物種の選択した除草剤耐性獲得に基づく標的植物種葉緑体形質転換および標的特性の発現の決定方法。
【請求項３９】
異なる植物種の葉緑体を安定に形質転換する能力を有する組込および発現万能ベクターで安定に形質転換された葉緑体ゲノムを含む安定に形質転換された昆虫耐性標的植物種であって、該ベクターが、標的植物種の葉緑体ゲノムにおいて、標的昆虫に対する耐性を付与する標的蛋白を発現する異種ＤＮＡ配列を含む発現カセットと、標的昆虫に対する耐性以外の選択した表現型と、該発現カセットの各々の側のフランキングを含むベクターであり、フランキングＤＮＡ配列は、各々、葉緑体ゲノムのｔＲＮＡＩｌｅおよびＲＮＡＡｌａ遺伝子の間の遺伝子間スペーサー２領域部分を含み、標的葉緑体ゲノムのスペーサー配列と相同性であり、その配列は異なる植物種の葉緑体ゲノムに保存されており、それにより、フランキング配列と標的葉緑体ゲノムの相同配列との相同的組換を介して該異種蛋白の標的植物の葉緑体ゲノムへの安定な組込が促進され、ここに、異種蛋白がcryＩＩＡ遺伝子により発現されたＣｒｙＩＩＡ蛋白トキシンであって、昆虫に対する耐性を付与する、安定に形質転換された昆虫耐性標的植物種またはその子孫
【請求項４０】
異種ＤＮＡ配列によりコードされ、標的植物の葉緑体ゲノム中の調節配列により発現される目的とする異種分子を含む発現カセットを含み、該カセットは各々の側に、相同的組換により標的葉緑体ゲノムへの安定なＤＮＡの組込を促進させる植物のＤＮＡ配列であるフランキングを含み、そのＤＮＡが嬢細胞における細胞小器官複製を介して受け継がれる、異種ＤＮＡ配列の安定な組込能力を有する、安定に形質転換された標的植物の転写／翻訳活性葉緑体ゲノム。