【手続補正書】
【提出日】平成17年7月6日(2005.7.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原であって、以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む免疫原。
【請求項２】  小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項１に記載の免疫原。
【請求項３】  ドメインＩｂの配列がドメインＩｂの２つのシステイン残基の間の前記非ネイティブエピトープを含むことを除く、ＰＥ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する請求項２に記載の免疫原。
【請求項４】  ５５３位のアミノ酸Ｇｌｕが欠失していることを除く、ＰＥ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する請求項２に記載の免疫原。
【請求項５】  前記細胞認識ドメインが、ＰＥのドメインＩａである、請求項１に記載の免疫原。
【請求項６】  前記細胞認識ドメインが、α２−マクログロブリンレセプター（「α２−ＭＲ」）、上皮増殖因子（「ＥＧＦ」）レセプター；ＩＬ−２レセプター；ＩＬ−６レセプター；ＨＩＶ感染細胞；ケモカインレセプター；白血球細胞表面レセプター；ＩｇＡレセプターのリガンド；またはレセプターを指向する抗体もしくは抗体フラグメントに結合する、請求項１に記載の免疫原。
【請求項７】  前記細胞認識ドメインが、増殖因子または抗体のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の免疫原。
【請求項８】  前記細胞認識ドメインが、前記ＥＲ保持ドメインに含まれる、請求項２に記載の免疫原。
【請求項９】  前記トランスロケーションドメインが、ＰＥのドメインＩＩのアミノ酸２８０〜３６４を含む、請求項１に記載の免疫原。
【請求項１０】  前記トランスロケーションドメインが、ＰＥのドメインＩＩである、請求項１に記載の免疫原。
【請求項１１】  前記非ネイティブエピトープドメインが、前記非ネイティブエピトープを含むシステイン−システインループを含む、請求項１に記載の免疫原。
【請求項１２】  前記非ネイティブエピトープドメインが、ＰＥのドメインＩｂの２つのシステイン残基の間に挿入された非ネイティブエピトープをコードするアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の免疫原。
【請求項１３】  前記非ネイティブエピトープドメインが、ＣＴＲＰＮＹＮＫＲＫ  ＲＩＨＩＧＰＧＲＡＦ  ＹＴＴＫＮＩＩＧＴＩ  ＲＱＡＨＣ（配列番号３）またはＣＴＲＰＳＮＮＴＲＴ  ＳＩＴＩＧＰＧＱＶＦ  ＹＲＴＧＤＩＩＧＤＩ  ＲＫＡＹＣ（配列番号４）から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の免疫原。
【請求項１４】  前記ＥＲ保持ドメインが、配列番号２の５５３位のアミノ酸Ｇｌｕが欠失していることを除いて、ＰＥのドメインＩＩＩである、請求項２に記載の免疫原。
【請求項１５】  前記ＥＲ保持配列が、ＲＥＤＬＫ（配列番号１１）、ＲＥＤＬ（配列番号１２）、またはＫＤＥＬ（配列番号１３）を含む、請求項２に記載の免疫原。
【請求項１６】  請求項２に記載の免疫原であって、以下：
アミノ酸３６１〜３８４が、アミノ酸配列：Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ｇｌｙ  Ｉｌｅ  Ｈｉｓ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｓｐ（配列番号７）で置換されていること、および５５３位のアミノ酸Ｇｌｕが欠失されていること（ｎｔＰＥ−Ｖ３ＭＮ１４）を除く、ＰＥ（配列番号２）、および
アミノ酸３６１〜３８４が、アミノ酸配列：Ｇｌｙ  Ａｌａ  Ａｌａ  Ａｓｎ  Ｌｅｕ  Ｈｉｓ  Ｃｙｓ  Ａｓｎ  Ｔｙｒ  Ａｓｎ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ｌｙｓ  Ａｒｇ  Ｉｌｅ  Ｈｉｓ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ｇｌｙ  Ａｒｇ  Ａｌａ  Ｐｈｅ  Ｔｙｒ  Ｔｈｒ  Ｔｈｒ  Ｌｙｓ  Ａｓｎ  Ｉｌｅ  Ｉｌｅ  Ｇｌｙ  Ｔｈｒ  Ｉｌｅ  Ｃｙｓ  Ｍｅｔ  Ｇｌｎ  Ｇｌｙ  Ｐｒｏ  Ａｌａ  Ａｓｐ（配列番号８）で置換されていること、および５５３位のアミノ酸Ｇｌｕを欠失していること（ｎｔＰＥ−Ｖ３ＭＮ２６）を除く、ＰＥ（配列番号２）、から選択されるアミノ酸配列を有する、免疫原。
【請求項１７】  前記非ネイティブエピトープが、ウイルス性病原体、細菌性病原体、または寄生性原虫病原体由来のエピトープである、請求項１に記載の免疫原。
【請求項１８】  前記非ネイティブエピトープが、ＨＩＶ−１のｇｐ１２０のＶ３ループのエピトープである、請求項１１に記載の免疫原。
【請求項１９】  前記非ネイティブエピトープが、レトロウイルスの主要な中和ループのエピトープである、請求項１１に記載の免疫原。
【請求項２０】  前記非ネイティブエピトープが、ＨＩＶ−２の主要中和ループ、またはＶ３ループの尖を含む少なくとも８アミノ酸のＨＩＶ−１のｇｐ１２０のＶ３ループのエピトープである、請求項１１に記載の免疫原。
【請求項２１】  無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原をコードするヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチドであって、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、組換えポリヌクレオチド。
【請求項２２】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項２１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項２３】  前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結される発現制御配列をさらに含む発現ベクターである、請求項２１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項２４】  前記ヌクレオチド配列が、ＰＥのアミノ酸配列をコードし、ここでＰＥのドメインＩｂが、ドメインＩｂの２つのシステイン残基の間の非ネイティブエピトープをさらに含む、請求項２１に記載の組換えポリヌクレオチド。
【請求項２５】  前記ヌクレオチド配列が、５５３位のアミノ酸Ｇｌｕが欠失されているＰＥのアミノ酸配列をコードする、請求項２１に記載の組換えポリヌクレオチド
【請求項２６】  組換え無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原クローニングプラットフォームであって、以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；ならびに
（４）トランスロケーションドメインをコードする配列と、小胞体（「ＥＲ」）保持ドメインをコードする配列との間のスプライス部位、
をコードするヌクレオチド配列を含む、組換え無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原クローニングプラットフォーム。
【請求項２７】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項２６に記載の組換えクローニングプラットフォーム。
【請求項２８】  前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結される発現制御配列をさらに含む発現ベクターである、請求項２６に記載の組換えクローニングプラットフォーム。
【請求項２９】  非ネイティブエピトープに対する抗体を産生するための方法であって、該非ネイティブエピトープはシステイン−システインループ内に天然に存在し、該方法は、無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原を動物に接種する工程を包含し、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）ループ内に非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含むシステイン−システインループを含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、方法。
【請求項３０】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】  前記システイン−システインループが、約３０アミノ酸以下を含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】  前記非ネイティブエピトープが、ＨＩＶ−１のＶ３ドメインのエピトープである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】  少なくとも１つの無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原を含むワクチンであって、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、ワクチン。
【請求項３４】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項３３に記載のワクチン。
【請求項３５】  複数のＰＥ様キメラ免疫原を含み、各免疫原が異なる非ネイティブエピトープを有する、請求項３３に記載のワクチン。
【請求項３６】  薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項３３に記載のワクチン。
【請求項３７】  免疫用量の形態である、請求項３３に記載のワクチンであって、前記免疫原が、ヒト被験体において前記非ネイティブエピトープに対する免疫応答を誘発するに有効な量で存在する、ワクチン。
【請求項３８】  前記異なる非ネイティブエピトープが、同じ病原体の異なる株のエピトープである、請求項３５に記載のワクチン。
【請求項３９】  前記非ネイティブエピトープが、ＨＩＶ−１のＶ３ループのエピトープであり、そして前記同じ病原体の異なる株が、ＨＩＶ−１  ＭＮおよびＨＩＶ−１  Ｔｈａｉ−Ｅである、請求項３８に記載のワクチン。
【請求項４０】  被験体において、非ネイティブエピトープに対する免疫応答を誘発するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、少なくとも１つの無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原を含むワクチンを含み、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、薬学的組成物。
【請求項４１】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】  前記非ネイティブエピトープが、前記被験体のＭＨＣクラスＩＩ分子の結合モチーフを含み、そして前記誘発される免疫応答は、ＭＨＣクラスＩＩ依存性免疫応答である、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】  前記非ネイティブエピトープが、前記被験体のＭＨＣクラスＩ分子の結合モチーフを含み、そして前記誘発される免疫応答は、ＭＨＣクラスＩ依存性免疫応答である、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４４】  前記非ネイティブエピトープが、ＨＩＶ−１のＶ３ドメインのエピトープである、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４５】  前記ワクチンが、前記非ネイティブエピトープを保有する因子によって媒介される疾患に対する予防的処置として投与される、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】  前記ワクチンが、前記非ネイティブエピトープを保有する因子によって媒介される疾患に対する治療的処置として投与される、請求項４０に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】  無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドワクチンであって、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、ポリヌクレオチドワクチン。
【請求項４８】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項４７に記載のポリヌクレオチドワクチン。
【請求項４９】  被験体において、非ネイティブエピトープに対する免疫応答を誘発するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも１つの組換えポリヌクレオチドを含むポリヌクレオチドワクチンを含み、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、薬学的組成物。
【請求項５０】  前記ＰＥさまキメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項４９に記載の薬学的組成物。
【請求項５１】  前記組換えポリヌクレオチドが、前記ヌクレオチド配列に作動可能に連結される発現制御配列を含む発現ベクターである、請求項４９に記載の薬学的組成物。
【請求項５２】  前記ヌクレオチド配列が、前記免疫原のアミノ末端に接続される哺乳動物分泌配列をさらにコードする、請求項４９に記載の薬学的組成物。
【請求項５３】  被験体において、非ネイティブエピトープに対する免疫応答を誘発するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、無毒性Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ体外毒素Ａ様（「ＰＥ様」）キメラ免疫原をコードするヌクレオチド配列を含む組換えポリヌクレオチドでトランスフェクトされた細胞を含み、該ＰＥ様キメラ免疫原は以下：
（１）細胞表面レセプターに結合する１０アミノ酸と１５００アミノ酸との間の細胞認識ドメイン；
（２）細胞サイトゾルへのトランスロケーションをもたらすのに十分なＰＥドメインＩＩの配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含むトランスロケーションドメイン；および
（３）非ネイティブエピトープをコードする５アミノ酸と１５００アミノ酸との間のアミノ酸配列を含む非ネイティブエピトープドメイン、
を含む、薬学的組成物。
【請求項５４】  前記ＰＥ様キメラ免疫原が、小胞体（「ＥＲ」）保持配列を含むＥＲ保持ドメインをコードするアミノ酸配列をさらに含む、請求項５３に記載の薬学的組成物。