【手続補正書】
【提出日】平成17年7月13日(2005.7.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】  固有又は反復ペプチドモチーフで構成されていること、及び
細胞内への浸透、そして必要であれば注目の物質の細胞内に至る輸送を司るアミノ酸配列を含むこと、
を特徴とするポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】  固有又は反復ペプチドモチーフで構成されていること、
１又は数種の異なる抗体フラグメントで構成されたアミノ酸配列を含んで成ること、及び
細胞内に浸透する能力をもつこと、
を特徴とするポリペプチド。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
より特定的に言うと、本発明は、完全抗体から細胞浸透活性をもつ制限された領域を識別することが可能であるということを発明人が発見した結果もたらされたものである。本発明はさらに、完全抗体、特にこれらの抗体の一本鎖から、細胞浸透活性を備えたペプチド又はポリペプチドを分離することが可能であるという発見からも導かれている。本発明は、抗体の一本鎖のフラグメントが細胞内に有効に浸透できるということを初めて実証したものである。本発明は同様に、かかるフラグメントが有利な形で、注目の物質を前記細胞内に移送する能力をさらに有し、好ましい形で抗ウイルス活性を呈することができるということを初めて実証するものでもある。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
従って本発明の第１の目的は、より特定的に言うと、固有又は反復ペプチドモチーフで構成されていること、及び細胞内への浸透、そして必要であれば注目の物質の細胞内に至る輸送を司るアミノ酸配列を含むこと、を特徴とするポリペプチドにある。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明は、この点において、固有又は反復ペプチドモチーフで構成されていること、１又は数種の異なる抗体フラグメントで構成されたアミノ酸配列を含んで成ること、及び細胞内に浸透する能力をもつこと、を特徴とするポリペプチドに関する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
抗体の各重鎖は、約４５０のアミノ酸で構成され、定常ドメイン（Ｃ），可変ドメイン（Ｖ）及び接合ドメイン（Ｄ及びＪ）と呼称される異なるドメインを含む。可変ドメインの内部には、配列のアラインメントによって容易に位置を特定できるＣＤＲ（「相補的決定領域」）と呼ばれる特殊なモチーフが存在する（C. Janeway及び P.Travers １９９６，Immunobiology, Academic Press,「標準的抗体分子の構造」）。同様に、可変領域の配列の分析については、T.T. Wu 及び E.Kabat（J.Exp. Med.,１９７０，第１３２巻，ｐ２１１−２５０）を参照することができる。ＣＤＲモチーフはそれ自体、超可変領域を有している。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本出願は、抗体構造から、非常に有利な物性を有する単純な構造をもちサイズが制限された領域を得ることが可能であることを明らかにした結果もたらされたものである。かくして複雑（会合された４つの鎖）で大きいサイズ（１５０, ０００Kd）の分子から出発して、出願人は、細胞内に浸透しそこで注目の物質のビヒクルとして作用する能力をもつ、一本鎖のポリペプチドを構築することに成功した。本発明のポリペプチドの物性は、その配列が抗体の鎖のうち一つ鎖のみの１又は複数のフラグメントの配列に対応し、従って活性となるために重鎖及び軽鎖に由来する定常領域を必要としないことからなおさら注目すべきである。化学的合成によって得られる本発明に従ったポリペプチドは、同じ物性を有する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１６】
この点で、本発明のポリペプチドは、合成コンビナトリアルライブラリーといったような核酸又はペプチドのライブラリーから産生することができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
「固有ペプチドモチーフ」という語は、例えば抗体又はＦab又はＦ（ab')2タイプの抗体フラグメントとは異なり、本発明のポリペプチドが一本のアミノ酸鎖しか有していないことを意味する。「反復ペプチドモチーフ」という語は、本発明のポリペプチドが一本鎖を形成するように、場合によっては化学的方法により互いに組立てられている異なるペプチドブロックを含みうることを意味する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
従って、より好ましくは、本発明のポリペプチドは、抗体の重鎖の少なくとも１つのフラグメントを含む固有鎖で構成されている。さらに一層好ましくは、これらのポリペプチドは、抗体の重鎖の可変領域の少なくとも１つのフラグメントを含む。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
この方法に対する１つの代替案は、出発材料としての１又は複数の核酸又はペプチドのライブラリーの利用にある。かくして、１つの抗体の配列から出発するのではなくむしろ、例えばコンビナトリアル化学により、抗体のＣＤＲ２又はＣＤＲ３領域の機能的相同体を提示するペプチドをコードするペプチド又は核酸ライブラリーを構築することが可能である。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４４】
その後、これらのライブラリーのペプチド或いは、ペプチドの組合せ又は核酸の組合せを上述の方法のｃ）〜ｅ）の段階に従って調製し、場合によって修飾しそれらの活性についてテストする。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
本発明に従ったポリペプチドは、有利には、生きた細胞の内部に浸透する能力をもつ巨大分子又はペプチドで構成され、より特定的には、特許出願Ｗ０９７/ ０２８４０内で記述されているような抗体のペプチド誘導体又は抗体フラグメントから、又は抗体の単数又は複数の超可変部分を含むその他のペプチド、或いは又例えば細胞内浸透基準に基づくペプチドライブラリーのスクリーニングによって得ることができる、抗体タイプの構造に直接関係していない合成分子から構成される。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
従って、本発明に従った特定のポリペプチドは、固有又は反復ペプチドモチーフで構成され、細胞内に浸透し、そこに注目の物質を移送するのを司るアミノ酸配列を含んで成り、このアミノ酸配列は、細胞内浸透についてペプチドライブラリーをスクリーニングすることによって得ることができる。かかるライブラリーのスクリーニング条件については、以上で記述した。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
本発明に従ったもう１つの特定のポリペプチドは、固有又は反復ペプチドモチーフで構成され、細胞内に浸透し、そこに注目の物質を移送するのを司るアミノ酸配列を含んで成り、この配列は、単数又は複数の抗体超可変部分を含むペプチドで構成されている。