【誤訳訂正書】
【提出日】平成17年6月17日(2005.6.17)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００２】
ポキシウイルス科は、脊椎および無脊椎細胞の細胞質中で複製する、複雑なＤＮＡウイルスの大きなファミリーを含んでいる。ポキシウイルス科のファミリーは、コルドポキシウイルス（脊椎動物ポキシウイルス）亜科およびエントモポキシウイルス（昆虫ポキシウイルス）亜科のサブファミリーに分けることが可能である（Ｆｅｉｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ／ｅｄｓ．：Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．，  Ｋｎｉｐｅ，Ｄ．Ｍ．，Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．Ｍ．；３ｒｄ  eｄ／ＩＳＢＮ  ０−７８１７−０２５３−４／とりわけ８３章を参照のこと）。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００３】
コルドポキシウイルス亜科は、ラクダポキシ−ウイルス類、ヒツジポキシ−ウイルス類、ヤギポキシ−ウイルス類またはアビポキシウイルス類（Ａｖｉｐｏｘｖｉｒｕｓｅｓ）、とりわけニワトリポキシウイルス類、および痘瘡ウイルスおよびワクシニアウイルスのようなヒトに関連するポキシウイルス類のような、（異なる属で分類される）多くの動物ポキシウイルスを含む。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
ポキシ−ウイルス、とりわけコルドポキシウイルス亜科は、ヒトおよび動物における重要な病原体である。またポキシ−ウイルス感染に対するワクチン接種に関して、長い歴史がある。ほぼ２世紀前、ヒトに、天然痘に対して免疫化するために、牛痘が予防的に接種された。その後免疫がワクシニアウイルスで実施された。しかしながら、ワクシニアウイルスでの天然痘ワクチン接種により、時折、種痘後脳炎、汎発性痘疹、接触感染のような、重度の合併症となった。そこで、これらの合併症を示さない新規ワクチンがＡｎｔｏｎ  Ｍａｙｒによって開発された。ポキシワクチンは、ポキシウイルス改変ワクシニアウイルスアンカラ（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｖａｃｃｉｎｉａ  Ｖｉｒｕｓ  Ａｎｋａｒａ；ＭＶＡ）からなり、ワクチンに関連した任意の合併症を引き起こすことのない、約１５００００ワクチン接種での、天然痘に対するワクチン接種のために使用された。免疫不全の子供でさえ、重度な副作用を示さなかった。ＭＶＡは、ニワトリ胚繊維芽細胞培養における５７５回の継代後、元々の痘瘡ウイルスアンカラの変異および選別によって得られた。このＭＶＡの安全性は、生物学的、化学的および生理学的特徴により反映される。ＭＶＡは、分子量が小さく、ゲノム中で６つの欠失があり、哺乳動物細胞に対して非常に弱毒化される、すなわち、ＤＮＡおよびタンパク質は合成されるが、実質的にはウイルス粒子は産生されない。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
天然痘の撲滅とともに、ヒトにおけるポキシウイルス感染の顕著な原因が取り除かれた。しかしながら、いくつかの非ヒトポキシウイルスは、宿主特異性が減少しており、すなわち、これらは、その典型的な宿主（たとえばウシ牛痘の場合のウシ）のみでなく、他の動物（たとえばラットおよびネコ）への感染を引き起こす。ヒトも、この経路にて感染しうる。人口のある部分が、もはや天然痘に対して免疫を持たないので、動物種のポキシウイルス感染が、これらに関して危険であり得る。家庭動物が、ヒトに対する感染の主な源である。したがって、家庭動物のポキシウイルスに対するワクチン接種が、その重要度を増している。さらに、ポキシウイルスは、たとえば、ワクチンとしての使用、または遺伝子治療のための、すなわち核酸配列を、それが発現される場所の標的細胞内に伝達するための、外来遺伝子の発現のための重要なベクターである。よって、ポキシウイルスの効率的で、費用効果的な産生法が必要である。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１４】
本明細書で使用するところの語句「ポキシウイルス（ｐｏｘｖｉｒｕｓ）」は、好ましくは、サブファミリーコルドポキシウイルス（脊椎動物ポキシウイルス）亜科のポキシウイルスを意味する（Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ／ｅｄｓ．：Ｆｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．，Ｋｎｉｐｅ，Ｄ．Ｍ．，Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．Ｍ．，；３ｒｄ  ｅｄ／ＩＳＢＮ  ０−７８１７−０２５３−４／特に８３章を参照のこと）。語句「コルドポキシウイルス（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｕｓｅｓ）」、「コルドポキシウイルス亜科（Ｃｈｏｒｄｏｐｏｘｖｉｒｉｎａｅ）」および「脊椎動物ポキシウイルス（ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ  ｐｏｘｖｉｒｕｓｅｓ）」は、本明細書にて、同義で使用される。好ましいコルドポキシウイルスはオルトポキシウイルス属（Ｏｒｔｈｏｐｏｘｖｉｒｕｓ）、パラポキシウイルス属（Ｐａｒａｐｏｘｖｉｒｕｓ）、アビポキシウイルス属（Ａｖｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）、カプリポキシウイルス属（Ｃａｐｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）、レプリポキシウイルス属（Ｌｅｐｒｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）、スイポキシウイルス属（Ｓｕｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）、モルスシポキシウイルス属（Ｍｏｌｌｕｓｃｉｐｏｘｖｉｒｕｓ）およびヤタポキシウイルス属（Ｙａｔａｐｏｘｖｉｒｕｓ）のポキシウイルスである。もっとも好ましいのは、オルトポキシウイルス属およびアビポキシウイルス属のポキシウイルスである。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
「弱毒化ウイルス（ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ  ｖｉｒｕｓ）」は、病原性ウイルスが起源であるが、しかし宿主生物に感染するときに、非弱毒化ウイルスと比較して、より低い死亡率および／または疾病率を導くウイルスである。弱毒化ポキシウイルスの例は、当業者によく知られている。弱毒化ワクシニアウイルスに対する例は、株ＭＶＡ、とりわけＶ０００８３００８の寄託番号で、ＥＣＡＣＣに寄託された株である。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本発明にしたがって調製されたウイルスは、好ましくは、ワクチンとして、または遺伝子治療プロトコールで使用される組成物を調製するために、好ましく使用される。ポキシウイルスのそのような適用は、本技術分野でよく確立されている。
図面の簡単な説明
図１において、実験１からの単一の値を、二重に示している（ドットとして表した）。棒は平均値を表している。単一の値を表１と比較している。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４９】
前記ウイルスが、ワクシニアウイルスであることを特徴とする、上記の方法。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５０】
前記ウイルスが、改変ワクシニアウイルスアンカラ（Ａｎｋａｒａ）（ＭＶＡ）、好ましくは、第Ｖ０００８３００８号にてＥＣＡＣＣに寄託されたようなＭＶＡ−ＢＮ、またはその誘導体であることを特徴とする、上記の方法。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６２】
ＭＶＡの増幅における温度の影響
細胞培養条件
初代ＣＥＦ−細胞を、２×１０７ＣＥＦ細胞／１８５ｃｍ２の細胞濃度で、固定フラスコ内に蒔いた。細胞は、ＶＰ−ＳＦＭ＋４ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１％  抗生物質／抗かび剤内で蒔いた。播種の４日後の時点で、５×１０７ＣＥＦ−細胞／１８５ｃｍ２の細胞濃度が確認された。この細胞に、ＲＰＭＩ  ｗ／ｏ  ＦＣＳを用いて、０．１ＴＣＩＤ５０／細胞  ＭＶＡ−ＢＮ（寄託番号第Ｖ０００８３００８号にてＥＣＡＣＣに寄託されている）を感染させた。感染、および続く７２時間のインキュベーションは、３０℃および３７℃（２つの異なるＣＥＦ調製物による実験１および２）、３０、３３、３５および３７℃（実験３）、および２６、２８、３０および３３℃（実験４）にて実施した。実験は、各温度で二重に行った。ウイルス複製を、培地中の細胞をこすり取ること、および−２０℃での培地と細胞一緒での凍結によって停止させた。この混合液を、さらに２回、凍結／融解して、機械的にウイルスを細胞から放出させた。４つの異なる感染温度での実験に関して、ウイルス複製は、−２０℃で固定フラスコを凍結させることで停止させた。この混合液を、さらに３回凍結／融解させて、機械的にウイルスを細胞から放出させた。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
各固定フラスコからのウイルスタイターを、免疫組織化学的アッセイを用いて決定した。ワクシニアウイルス特異的抗体で感染細胞を染色した。次に、ワクシニアウイルス抗体に結合する、ＨＲＰ−結合抗体を添加した。基質の添加の後、感染細胞は青色または茶色で現れる。アッセイの評価は、ＳｐｅａｒｍａｎおよびＫａｅｒｂｅｒの式を用いて行い、ＴＣＩＤ５０／ｍｌ（組織培養感染用量）を決定した。実験は二重に実施した。滴定結果のための受容基準として、公知のタイターでのＭＶＡ−ＢＮ標準を、各滴定実験に対して内部標準として使用した。実験からの結果は、ＭＶＡ−ＢＮ標準からの値が、総平均より±０．５ログ以上異ならなかった場合にのみ採用した。
（結果）
初代ＣＥＦ細胞の可能な増殖変化を含めるために、実験は、３０℃と３７℃の感染温度を比較する時に、２つの異なる細胞調製物で実施した。２つの独立した感染実験からの結果を、表１−２および図１−２で示している。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
【表２】
2004535203.tif 000001
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
固定フラスコでの次の実験において、３０℃よりも低い温度を試験して、３０℃がＣＥＦ細胞中でのＭＶＡの増殖に関して、最適な温度であるかを見た。したがって、２６、２８、３０および３３℃を使用した。この実験からの結果を表４および図４で示している。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
本実験でのもっとも高い収量は、３０℃での感染後のインキュベーション温度にて見られた。以前の実験（３０℃と３７℃の間の４温度）からのデータと、本実験のデータを比較すると、固定フラスコ内でのＣＥＦ細胞におけるＭＶＡの増幅に対する、感染の後のインキュベーションに対する最適温度が、３０℃であることが同定された。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
ワクシニアウイルス株エルストリー（Ｅｌｓｔｒｅｅ）の増殖における温度の影響
他のアプローチにおいて、ワクシニアウイルス株エルストリー（Ｅｌｓｔｒｅｅ）を、温度依存性に関して、ＭＶＡ−ＢＮとともに試験した。ＭＶＡ−ＢＮおよびＥｌｓｔｒｅｅを、ＣＥＦ細胞上で増殖させた。実験に関して、初代ＣＥＦ−細胞を、２Ｅ＋０７ＣＥＦ細胞／１７５ｃｍ２の細胞濃度で、固定フラスコ内に蒔いた。細胞を、培養培地＋４ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１％抗生物質／抗かび剤中で蒔いた。播種の４日後の時点で、５Ｅ＋０７  ＣＥＦ−細胞／１７５ｃｍ２の細胞濃度が確認された。この細胞に、ＲＰＭＩ  ｗ／ｏ  ＦＣＳを用いて０．１ＴＣＩＤ５０／細胞  ＭＶＡ−ＢＮ、およびエルストリーをそれぞれ感染させた。感染、および続く７２時間のインキュベーションは、３０℃および３７℃にて実施した。実験は、各温度で三重で行った。ウイルス複製を、−２０℃で固定フラスを凍結によって停止させた。この混合液を、さらに３回、凍結／融解して、機械的にウイルスを細胞から放出させた。各固定フラスコからのウイルスタイターは、ＳＯＰ／ＭＶＡ／０４にしたがった滴定によって測定した。滴定結果のための受入基準として、公知のタイターでのＭＶＡ  Ｆ６標準を、各滴定実験に対して内部標準として使用した。実験からの結果は、ＭＶＡ  Ｆ６標準からの値が、±０．５ログ以上異ならなかった場合にのみ採用した。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
【表５】
2004535203.tif 000002