【手続補正書】
【提出日】平成18年3月28日(2006.3.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  抗原に非共有結合で結合された改変型熱ショックタンパク質を含む精製された分子複合体であって、(a)前記改変型熱ショックタンパク質が、(i)それを組換えにより発現する細胞から分泌され、(ii)改変されていない熱ショックタンパク質中には存在する小胞体残留配列を欠失しており、かつ(iii)特異的結合パートナーにより認識されるペプチドタグを含み、(b)前記抗原がタンパク質またはペプチドであり、かつ(c)前記分子複合体が細胞から分泌されたものである、前記分子複合体。
【請求項２】  前記改変型熱ショックタンパク質がヒトgp96であり、前記ペプチドタグが免疫グロブリンG1の定常領域のCH2およびCH3ドメインを含む、請求項１に記載の分子複合体。
【請求項３】  前記熱ショックタンパク質が、ERp72、ERp61、hsp 60、hsp 70、hsp 90、gp96、BiPまたはジスルフィドイソメラーゼである、請求項１に記載の分子複合体。
【請求項４】  前記細胞が哺乳動物のものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項５】  前記細胞がヒトのものである、請求項１〜４のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項６】  前記小胞体残留配列がXDELをコードするものであり、ここでXは任意のアミノ酸である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項７】  前記小胞体残留配列がKDELまたはHDELである、請求項６に記載の分子複合体。
【請求項８】  前記小胞体残留配列が、シグナルとして機能しないペプチドで置換されている、請求項１〜７のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項９】  前記ペプチドタグが、免疫グロブリン定常領域、ポリヒスチジン配列、グルタチオンSトランスフェラーゼ、大腸菌のマルトース結合タンパク質、セルロース結合ドメイン、CD8の細胞外ドメイン、またはCD28の細胞外ドメインである、請求項１および３〜８のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１０】  前記ペプチドタグがエピトープである、請求項１および３〜８のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１１】  前記ペプチドタグがFLAGエピトープ、mycタンパク質の408〜439位のアミノ酸におけるエピトープ、またはインフルエンザウイルスヘマグルチニン(HA)エピトープである、請求項１０に記載の分子複合体。
【請求項１２】  前記ペプチドタグが、免疫グロブリン分子の重鎖の定常領域のCH2ドメインおよびCH3ドメインを含む前記免疫グロブリン分子の不変部分である、請求項１および３〜８のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１３】  前記ペプチドタグが、IgGサブタイプ1、IgGサブタイプ2、IgGサブタイプ3、IgGサブタイプ4、IgA、IgE、IgDまたはIgM、から得られる鎖間ジスルフィド結合部位を含有する免疫グロブリンの部分である、請求項１および３〜８のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１４】  前記免疫グロブリンがヒト由来のものである、請求項１３に記載の分子複合体。
【請求項１５】  前記免疫グロブリンがマウス由来のものである、請求項１３に記載の分子複合体。
【請求項１６】  前記複合体を個体に投与することが、腫瘍細胞または病原体に感染した細胞に対する特異的な免疫を誘発する、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１７】  前記抗原が、感染細胞由来のものである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１８】  前記抗原が、感染性病原体によってコードされるペプチドを含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項１９】  前記抗原が、ウイルスによってコードされる抗原を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２０】  前記抗原が、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、インフルエンザ、水痘、アデノウイルス、I型単純ヘルペス（HSV-I）、II型単純ヘルペス（HSV-II）、牛疫、ライノウイルス、ECHOウイルス、ロタウイルス、RSウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス、サイトメガロウイルス、エキノウイルス、アルボウイルス、ハンタウイルス、コクサッキーウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、風疹ウイルス、ポリオウイルス、I型ヒト免疫不全ウイルス（HIV-I）、またはII型ヒト免疫不全ウイルス(HIV-II)由来のエピトープを含む、請求項１９に記載の分子複合体。
【請求項２１】  前記抗原が、細菌、原生動物、または寄生虫によってコードされる抗原を含む、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２２】  前記抗原が、リーシュマニア、kokzidioa、トリパノソーマ、クラミジアまたはリケッチアによってコードされる抗原を含む、請求項２１に記載の分子複合体。
【請求項２３】  前記細胞が、病原体または感染性病原体に感染した組換え細胞である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２４】  前記病原体が、ウイルス、細菌、真菌、または寄生虫である、請求項２３に記載の分子複合体。
【請求項２５】  前記細胞が、突然変異誘発物質または発癌剤に曝露された組換え細胞である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２６】  前記抗原が、癌細胞によりコードされるペプチドを含むものである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２７】  前記抗原が、KS 1/4万能癌抗原;卵巣癌抗原;前立腺酸性フォスファターゼ抗原;前立腺特異的抗原;黒色腫関連抗原p97;黒色腫抗原gp75;高分子量黒色腫抗原または前立腺特異的膜抗原を含むものである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２８】  前記細胞が、組換え癌細胞または組換え前腫瘍細胞である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項２９】  前記細胞が、肉腫、癌腫または白血病細胞である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項３０】  前記細胞が、繊維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、脊椎腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、内皮腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、包嚢腺癌、髄様癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽喉腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠細胞腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽腫、網膜芽腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレームマクログロブリン血症、およびH鎖病の細胞からなる群より選択された癌のものである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項３１】  前記細胞が、結腸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腎細胞癌、子宮頸癌、精巣癌、肺癌、黒色腫、白血病およびリンパ腫から成る群より選択される癌のものである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の分子複合体。
【請求項３２】  請求項１〜３１のいずれか１項に記載の分子複合体および製薬上許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項３３】  請求項１〜３１のいずれか１項に記載の分子複合体を活性成分として含有する医薬。
【請求項３４】  癌を治療するための医薬の製造における、請求項１〜１６および２５〜３１のいずれか１項に記載の分子複合体を含有する組成物の使用。
【請求項３５】  癌を予防するための医薬の製造における、請求項１〜１６および２５〜３１のいずれか１項に記載の分子複合体を含有する組成物の使用。
【請求項３６】  感染性の疾患を治療するための医薬の製造における、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の分子複合体を含有する組成物の使用。
【請求項３７】  感染性の疾患を予防するための医薬の製造における、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の分子複合体を含有する組成物の使用。
【請求項３８】  キットであって、(a)容器内に請求項１〜３１のいずれか１項に記載の分子複合体、または請求項３２に記載の医薬組成物、または請求項３３に記載の医薬を含み、かつ(b)それぞれに対応して、前記分子複合体または医薬組成物または医薬を投与するための説明書を含む、前記キット。
【請求項３９】  抗原に非共有結合で結合された改変型熱ショックタンパク質を含む精製された分子複合体の調製方法であって、
(a) 宿主細胞内で該改変型熱ショックタンパク質遺伝子の発現を制御する少なくとも１つの調節領域に機能的に結合された該改変型熱ショックタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含有する組換え細胞を、該改変型熱ショックタンパク質が組換え細胞内で産生される条件下で、細胞培養培地で培養すること、ここで、該改変型熱ショックタンパク質は、(i)それを発現する細胞から分泌され、(ii)改変されていない熱ショックタンパク質中には存在する小胞体残留配列を欠失しており、かつ(iii)特異的結合パートナーにより認識されるペプチドタグを含むものである、
(b) 該宿主細胞由来のペプチドに非共有結合で結合した改変型熱ショックタンパク質の複合体を細胞培養培地から精製すること、
を含んでなる上記方法。
【請求項４０】  抗原に非共有結合で結合された改変型熱ショックタンパク質を含む精製された分子複合体の調製方法であって、
(a)改変型熱ショックタンパク質をコードするように熱ショックタンパク質遺伝子配列を改変することであって、ここで前記改変型熱ショックタンパク質は、(i)それを発現する細胞から分泌され、(ii)改変されていない熱ショックタンパク質中には存在する小胞体残留配列を欠失しており、かつ(iii)特異的結合パートナーにより認識されるペプチドタグを含むものであり、
(b)前記改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列が、宿主細胞内で前記改変型熱ショックタンパク質の発現を制御する少なくとも１つの調節領域に機能的に結合されるように、前記改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列を発現構築物に連結すること、
(c)前記改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列を宿主細胞に導入すること、
(d)前記改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列によりコードされる前記改変型熱ショックタンパク質が宿主細胞において発現するように、前記宿主細胞を細胞培養培地で培養すること、
(e)宿主細胞由来のペプチドと非共有結合で結合された改変型熱ショックタンパク質の複合体を細胞培養培地から精製すること、
を含んでなる上記方法。
【請求項４１】  前記精製工程が、アフィニティークロマトグラフィーを含む、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４２】  請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の方法により調製された、精製された複合体。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
一実施形態において、本発明は、改変型hspをコードするヌクレオチド配列(「改変型hsp遺伝子配列」)を含む核酸、ならびにこのような核酸を含むクローニングベクター、発現ベクター、および宿主細胞を提供する。一般に、本発明の方法には、改変型熱ショックタンパク質をコードするヌクレオチド配列を構築することと、発現ベクター中に改変型hsp遺伝子配列をクローン化することと、宿主細胞中に発現遺伝子構築物を導入することと、改変型hspが発現されるように宿主細胞を培養することと、改変型hspおよび／または改変型hsp-ペプチド複合体を精製することと、が含まれる。
一例として、本発明の改変型熱ショックタンパク質を調製する方法は、
(a) 熱ショックタンパク質の遺伝子配列が、(i)それを発現する細胞から分泌され、(ii)改変されていない熱ショックタンパク質中には存在する小胞体残留配列を欠失しており、かつ(iii)ペプチドタグを含む改変型熱ショックタンパク質をコードするように熱ショックタンパク質の遺伝子配列を改変すること、
(b) 該改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列が宿主細胞内で該改変型熱ショックタンパク質の発現を制御する少なくとも１つの調節領域に機能的に結合されるような発現構築物中に該改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列を連結すること、
(c) 宿主細胞に該改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列を導入すること、
(d) 該宿主細胞を培養して、該改変型熱ショックタンパク質の遺伝子配列によりコードされる該改変型熱ショックタンパク質を該宿主細胞において発現させること、
(e) 該改変型熱ショックタンパク質を細胞培養培地から回収すること、
を含んでなる。