【手続補正書】
【提出日】平成18年8月25日(2006.8.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）アラビドプシスからのＡＨＡＳの小サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列、
ｂ）配列表の配列番号１に示される配列を含むＤＮＡ配列、
ｃ）配列表の配列番号３に示される配列を含むＤＮＡ配列、及び
ｄ）ストリンジェントな条件下で配列ｂ）又はｃ）にハイブリダイズするＤＮＡ配列
からなる群から選択される配列を含む単離ＤＮＡ配列。
【請求項２】
ａ）アラビドプシスからのＡＨＡＳの小サブユニットタンパク質のアミノ酸１６９〜４９１をコードするＤＮＡ配列、
ｂ）配列表の配列番号１に示される配列のヌクレオチド５４６〜１５１４を含むＤＮＡ配列、
ｃ）配列表の配列番号３に示される配列のヌクレオチド７９４〜４８９５を含むＤＮＡ配列、及び
ｄ）ストリンジェントな条件下で配列ｂ）又はｃ）にハイブリダイズするＤＮＡ配列
からなる群から選択される配列を含む単離ＤＮＡ配列。
【請求項３】
植物細胞で発現可能なプロモーターと、請求項１に記載のＤＮＡ配列とを含む植物発現ベクター。
【請求項４】
プロモーターは、高い発現レベルの植物プロモーターである請求項３の発現ベクター。
【請求項５】
プロモーターは、アラビドプシスのＡＨＡＳ小サブユニットプロモーターである請求項３の植物発現ベクター。
【請求項６】
ＤＮＡ配列は、アラビドプシスの小サブユニットタンパク質をコードする請求項３の植物発現ベクター。
【請求項７】
植物細胞で発現可能な第二のプロモーターと、真核生物ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とをさらに含む請求項３の植物発現ベクター。
【請求項８】
大サブユニットプロモーターと、真核生物ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、双子葉植物に由来する請求項７の植物発現ベクター。
【請求項９】
双子葉植物は、アラビドプシスである請求項８の植物発現ベクター。
【請求項１０】
ＤＮＡ配列は、除草剤に抵抗性である変異体ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードする請求項７の植物発現ベクター。
【請求項１１】
アラビドプシスＤＮＡ配列は、イミダゾリノン除草剤に抵抗性である変異体アラビドプシスのＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードする請求項１０の植物発現ベクター。
【請求項１２】
植物細胞で発現可能なプロモーターと、請求項２に記載のＤＮＡ配列とを含む植物発現ベクター。
【請求項１３】
プロモーターは、高い発現レベルの植物プロモーターである請求項１２の発現ベクター。
【請求項１４】
プロモーターは、アラビドプシスのＡＨＡＳ小サブユニットプロモーターである請求項１２の植物発現ベクター。
【請求項１５】
ＤＮＡ配列は、アラビドプシスの小サブユニットタンパク質をコードする請求項１２の植物発現ベクター。
【請求項１６】
植物細胞で発現可能な第二のプロモーターと、真核生物ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とをさらに含む請求項１２の植物発現ベクター。
【請求項１７】
大サブユニットプロモーターと、真核生物ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、双子葉植物に由来する請求項１６の植物発現ベクター。
【請求項１８】
双子葉植物は、アラビドプシスである請求項１７の植物発現ベクター。
【請求項１９】
ＤＮＡ配列は、除草剤に抵抗性である変異体ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードする請求項１６の植物発現ベクター。
【請求項２０】
アラビドプシスＤＮＡ配列は、イミダゾリノン除草剤に抵抗性である変異体アラビドプシスのＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードする請求項１９の植物発現ベクター。
【請求項２１】
プロモーターと、ＡＨＡＳタンパク質の大サブユニットおよび小サブユニットを含む融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列とを含んでなる、植物においてＡＨＡＳ遺伝子を発現させるための植物発現ベクター。
【請求項２２】
ＡＨＡＳタンパク質の小サブユニットをコードするＤＮＡ配列は、真核生物に由来する請求項２１の植物発現ベクター。
【請求項２３】
プロモーターおよびＤＮＡ配列は、アラビドプシスに由来する請求項２２の植物発現ベクター。
【請求項２４】
植物細胞で発現可能なプロモーターと、移行ＡＨＡＳ大サブユニットポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と、成熟ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、リンカーポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と、真核生物ＡＨＡＳ小サブニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、植物ターミネーター配列とを連続して含む植物発現ベクター。
【請求項２５】
植物細胞で発現可能なプロモーターと、移行ＡＨＡＳ小サブユニットポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と、ＡＨＡＳ小サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、リンカーポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と、ＡＨＡＳ大サブユニットポリペプチドをコードするＤＮＡ配列と、植物ターミネーターとを連続して含む植物発現ベクター。
【請求項２６】
プロモーターと、移行ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、成熟ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、双子葉植物に由来する請求項２４または２５の植物発現ベクター。
【請求項２７】
プロモーターと、移行ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、成熟ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、アラビドプシスに由来する請求項２４または２５の植物発現ベクター。
【請求項２８】
プロモーターと、移行ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、成熟ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、単子葉植物に由来する請求項２４または２５の植物発現ベクター。
【請求項２９】
プロモーターと、移行ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列と、成熟ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、コメまたはメイズに由来する請求項２４または２５の植物発現ベクター。
【請求項３０】
ａ）配列番号２に示される配列を含むアミノ酸配列、
ｂ）配列番号２に示される配列のアミノ酸１６９〜４９１を含むアミノ酸配列、及び
ｃ）ａ）又はｂ）の変異体又は変異型のアミノ酸配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む単離真核生物ＡＨＡＳ小サブユニットタンパク質。
【請求項３１】
請求項３０のタンパク質を含む組成物。
【請求項３２】
ａ）アラビドプシスからのＡＨＡＳの小サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列、
ｂ）配列表の配列番号１に示される配列を含むＤＮＡ配列、
ｃ）配列表の配列番号３に示される配列を含むＤＮＡ配列、及び
ｄ）ストリンジェントな条件下で配列ｂ）又はｃ）にハイブリダイズするＤＮＡ配列
からなる群から選択されるＤＮＡ配列を含む植物発現ベクターにより植物を形質転換することを含む、除草剤に抵抗性であるトランスジェニック植物を作成する方法。
【請求項３３】
発現ベクターは、高い発現レベルの植物プロモーターと、真核生物のＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とをさらに含む請求項３２の方法。
【請求項３４】
プロモーターは、真核生物のＡＨＡＳ小サブユニットプロモーターであり、大サブユニットＤＮＡ配列は、真核生物のＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質の除草剤抵抗性変異体をコードする請求項３３の方法。
【請求項３５】
プロモーターと、ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードするＤＮＡ配列とが、アラビドプシスに由来する請求項３４の方法。
【請求項３６】
植物細胞に除草剤抵抗性を付与する方法であって、第一の植物発現プロモーター、およびＡＨＡＳタンパク質の大サブユニットをコードするＤＮＡ配列を含む第一の植物発現ベクターと、第二の植物発現プロモーター、および真核生物ＡＨＡＳタンパク質の小サブユニットをコードするＤＮＡ配列を含む第二の植物発現ベクターとにより、植物細胞を同時形質転換することを含む方法。
【請求項３７】
請求項３６の方法により産生された植物細胞。
【請求項３８】
ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質をコードする遺伝子を発現するトランスジェニック植物の除草剤抵抗性を増強する方法であって、真核生物の小サブユニットＡＨＡＳタンパク質をコードするＤＮＡ配列によりトランスジェニック植物を形質転換することを含む方法。
【請求項３９】
請求項３８の方法により産生されたトランスジェニック植物。
【請求項４０】
請求項３８の方法により産生されたトランスジェニック植物であって、前記植物は、他のＡＨＡＳ阻害除草剤と比較してイミダゾリノン除草剤に高い抵抗性を示すトランスジェニック植物。
【請求項４１】
他のＡＨＡＳ阻害除草剤は、スルホニル尿素、トリアゾロピリミジン、ピリミジル−オキシ−安息香酸、スルファモイル尿素およびスルホニルカルボキシアミドからなる群から選択される請求項４０のトランスジェニック植物。
【請求項４２】
植物の子孫植物における除草剤抵抗性を増強する方法であって、前記植物と、遺伝的相補体が真核生物のＡＨＡＳタンパク質の大サブユニットの除草剤抵抗性変異体をコードする配列、および真核生物ＡＨＡＳタンパク質の小サブユニットをコードするＤＮＡ配列を含むトランスジェニック植物とを交雑させるステップと、除草剤抵抗性を示す子孫植物を選択するステップとを含む方法。
【請求項４３】
植物とトランスジェニック植物との交雑は、有性生殖により達成される請求項４２の方法。
【請求項４４】
請求項４２の方法により産生された子孫植物。
【請求項４５】
遺伝的相補体は、真核生物小サブユニットＡＨＡＳタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む請求項４２の子孫植物。
【請求項４６】
遺伝的相補体が、真核生物ＡＨＡＳタンパク質の大サブユニットの除草剤抵抗性変異体をコードするＤＮＡ配列と、真核生物ＡＨＡＳタンパク質の小サブユニットをコードするＤＮＡ配列とを含む請求項４４の植物の除草剤抵抗性派生的植物。
【請求項４７】
請求項４６の植物の派生物であり、イミダゾリノン除草剤に耐性を示す植物。
【請求項４８】
遺伝的相補体が、植物において発現するためのプロモーターと、真核生物のＡＨＡＳタンパク質の大サブユニットおよび小サブユニットを含む融合タンパク質をコードするＤＮＡ配列と、植物細胞で機能するターミネーター配列とを含む、植物において発現可能な遺伝子を含むトランスジェニック植物。
【請求項４９】
遺伝的相補体は、真核生物の小サブユニットＡＨＡＳタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む請求項４７の植物の植物派生物。
【請求項５０】
双子葉植物である請求項４４または４５のトランスジェニック植物。
【請求項５１】
単子葉植物である請求項４４または４５のトランスジェニック植物。
【請求項５２】
除草剤に抵抗性を付与する植物ＡＨＡＳ遺伝子の変異を同定する方法であって、ＡＨＡＳ小サブユニットタンパク質遺伝子を含む異種ベクターを有する生物を、除草化合物に曝露することを含む方法。
【請求項５３】
ベクターは、ＡＨＡＳ大サブユニットタンパク質遺伝子をさらに含む請求項５２の方法。
【請求項５４】
ＡＨＡＳ小サブユニット遺伝子は、アラビドプシスに由来するＤＮＡ配列を有する請求項５３の方法。
【請求項５５】
ＡＨＡＳ酵素活性に影響を及ぼす除草剤を同定するためのスクリーニング法であって、ＡＨＡＳ小サブユニットタンパク質遺伝子を含む異種発現ベクターを有する生物を、化合物に曝露するステップと、除草剤の効果を決定するステップとを含む方法。
【請求項５６】
ＡＨＡＳ酵素のアロステリックフィードバック阻害を変化させる変異を同定するためのスクリーニング方法であって、
ＡＨＡＳ酵素活性の欠損した微生物株を、変異植物ＡＨＡＳ小サブユニット遺伝子を含むプラスミド発現ベクターにより形質転換するステップと、
１または２つの分枝鎖アミノ酸の存在下で、最小培地中で微生物株をスクリーニングするステップと、
前記培地中で増殖する微生物株を同定するステップと
を含む方法。