【手続補正書】
【提出日】平成18年8月14日(2006.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  プロピオネート部分のβ位でタンパク質に直接的に結合体化したＮ−プロピオネート化ポリサッカリドまたはＮ−プロピオネート化オリゴサッカリドを含む、ポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項２】  前記タンパク質が少なくとも１つのリジン残基またはシステイン残基を含む、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項３】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、細菌、酵母、癌細胞由来であるか、または化学的に合成される、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項４】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、髄膜炎菌、肺炎双球菌、連鎖球菌、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ由来である、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項５】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、Ｂ群連鎖球菌血清型Ｉａ、Ｂ群連鎖球菌血清型Ｉｂ、Ｂ群連鎖球菌血清型ＩＩ、Ｂ群連鎖球菌血清型ＩＩＩ、Ｂ群連鎖球菌血清型Ｖ、およびＢ群連鎖球菌血清型ＶＩＩＩの少なくとも１つに由来する、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項６】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、Ｂ群、Ｃ群、Ｙ群、Ｗ１３５群、およびそれらの組み合わせから選択される髄膜炎菌群由来である、請求項４に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項７】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ１、Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ９２、肺炎双球菌４型、肺炎双球菌１４型、連鎖球菌Ａ群、連鎖球菌Ｃ群、またはそれらの組み合わせ由来である、請求項４に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項８】  前記タンパク質が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソシド、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質、ニューモリソイド、Ｂ群連鎖球菌からのＣ−βタンパク質およびＢ群連鎖球菌からの非ＩｇＡ結合Ｃ−βタンパク質から選択される、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項９】  前記タンパク質が、組換えにより産生される、請求項８に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１０】  前記タンパク質が、組換え体Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ外膜タンパク質である、請求項９に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１１】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、グリコサミノグリカンを含む、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１２】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、少なくとも１つの遊離アミノ基またはＮ−アシル基を有する、構造的に反復する単位のグリコシル残基を含む、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１３】  前記グリコシル残基が、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミン、フコサミンおよびシアル酸から選択される、請求項１２に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１４】  前記Ｎ−プロピオネート化ポリサッカリドまたはＮ−プロピオネート化オリゴサッカリドが、前記タンパク質のリジン残基のε遊離アミノ基またはシステイン残基のチオール基に直接的に結合体化している、請求項１に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１５】  Ｎ−プロピオネート化肺炎双球菌１４型ポリサッカリド−破傷風トキソイド結合体、Ｎ−プロピオネート化Ｂ群連鎖球菌ＩＩＩ型ポリサッカリド−破傷風トキソイド結合体、Ｎ−プロピオネート化Ｂ群連鎖球菌ＩＩ型ポリサッカリド−破傷風トキソイド結合体、Ｎ−プロピオネート化Ｅ．ｃｏｌｉ  Ｋ１ポリサッカリド−タンパク質結合体、またはＮ−プロピオネート化髄膜炎菌Ｃ  ポリサッカリド−破傷風トキソイド結合体を含む、ポリサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１６】  Ａ）脱Ｎ−アセチル化試薬を用いて単離されたポリサッカリドまたはオリゴサッカリドを脱Ｎ−アセチル化し、脱Ｎ−アセチル化ポリサッカリドまたは脱Ｎ−アセチル化オリゴサッカリドを形成する工程、
Ｂ）該脱Ｎ−アセチル化ポリサッカリドまたは脱Ｎ−アセチル化オリゴサッカリドを、アクリロイル化試薬でＮ−アクリロイル化し、Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドまたはＮ−アクリロイル化オリゴサッカリドを形成する工程、および
Ｃ）該Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドまたはＮ−アクリロイル化オリゴサッカリドをタンパク質に直接的に結合体化し、ポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体を形成する工程、
を包含する方法によって産生される、ポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１７】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、細菌、酵母、癌細胞由来であるか、または化学的に合成される、請求項１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１８】  前記結合体化が約７．０のｐＨで実施される、請求項１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項１９】  前記結合体化が９を超えるｐＨで実施される、請求項１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項２０】  前記結合体化が、リン酸緩衝液、炭酸／重炭酸緩衝液およびホウ酸緩衝液から選択される試薬中で実施される、請求項１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項２１】  前記脱Ｎ−アセチル化試薬が塩基または酵素であり、そして前記アクリロイル化試薬がＮ−アクリロイルクロリド、アクリロイル無水物、アクリル酸および脱水剤から選択される、請求項１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体。
【請求項２２】  細菌感染、酵母感染に対する免疫原およびワクチンとして、ならびに、癌の治療剤としての、請求項１または１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体、および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的組成物。
【請求項２３】  アジュバントをさらに含む、請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】  前記アジュバントが、ミョウバンまたはステアリルチロシンから選択される、請求項２３に記載の薬学的組成物。
【請求項２５】  第２の成分をさらに含み、該第２の成分が、ＤＴＰ、ＤＴａＰ、Ｔｄ、ＤＴａＰ−Ｈｉｂ、ＤＴａＰ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項２２に記載の薬学的組成物。
【請求項２６】  請求項１または１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体を含む免疫原であって、ポリサッカリド特異的免疫応答またはオリゴサッカリド特異的免疫応答を惹起する、免疫原。
【請求項２７】  前記免疫応答が、ポリサッカリド特異的またはオリゴサッカリド特異的免疫グロブリンの生成である、請求項２６に記載の免疫原。
【請求項２８】  前記免疫グロブリンがＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡまたはそれらの組み合わせである、請求項２７に記載の免疫原。
【請求項２９】  β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体またはβ−プロピオンアミド連結オリゴサッカリド−タンパク質結合体を作製する方法であって：
Ａ）脱Ｎ−アセチル化試薬を用いてポリサッカリドまたはオリゴサッカリドを脱Ｎ−アセチル化し、脱Ｎ−アセチル化ポリサッカリドまたは脱Ｎ−アセチル化オリゴサッカリドを形成する工程、
Ｂ）該脱Ｎ−アセチル化ポリサッカリドまたは脱Ｎ−アセチル化オリゴサッカリドを、アクリロイル化試薬でＮ−アクリロイル化し、Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドまたはＮ−アクリロイル化オリゴサッカリドを形成する工程、および
Ｃ）該Ｎ−アクリロイル化ポリサッカリドまたはＮ−アクリロイル化オリゴサッカリドをタンパク質に直接的に結合体化し、β−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体またはβ−プロピオンアミド連結オリゴサッカリド−タンパク質結合体を形成する工程、
を包含する、方法。
【請求項３０】  前記脱Ｎ−アセチル化試薬が塩基または酵素である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】  前記脱Ｎ−アセチル化試薬が、ＮａＯＨ、ＫＯＨおよびＬｉＯＨから選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】  前記アクリロイル化試薬がアクリロイルクロリド、アクリロイル無水物、アクリル酸および脱水剤から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３３】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、細菌，酵母、癌細胞由来であるか、または化学的に合成される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３４】  前記ポリサッカリドまたはオリゴサッカリドが、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、髄膜炎菌、肺炎双球菌、連鎖球菌、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ由来である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３５】  前記タンパク質が、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソシド、ナイセリア外膜タンパク質、ニューモリソイド、およびＢ群連鎖球菌からのＣ−βタンパク質およびＢ群連鎖球菌からの非ＩｇＡ結合Ｃ−βタンパク質から選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３６】  前記タンパク質が、組換えにより産生される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】  請求項１または１６に記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体を含むワクチンであって、疾患を引き起こす生物または細胞に対する保護免疫を提供する、ワクチン。
【請求項３８】  前記疾患を引き起こす生物または細胞が、細菌、酵母および癌細胞から選択される、請求項３７に記載のワクチン。
【請求項３９】  前記細菌が、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、髄膜炎菌、肺炎双球菌、連鎖球菌、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓである、請求項３８に記載のワクチン。
【請求項４０】  前記ポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体と組み合わせた第２の免疫原をさらに含み、該第２の免疫原が、ＤＴＰ、ＤＴａＰ、Ｔｄ、ＤＴａＰ、Ｈｉｂ、ＤＴａＰ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ、およびそれらの組み合わせから選択される、請求項３７に記載のワクチン。
【請求項４１】  免疫化する量の請求項３７に記載のワクチンをヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含する、疾患を引き起こす生物または疾患を引き起こす細胞に対してヒト以外の哺乳動物を免疫化する方法。
【請求項４２】  免疫化する量の請求項３７に記載のワクチンをヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含する、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対してヒト以外の哺乳動物を免疫化する方法。
【請求項４３】  免疫化する量の請求項３７に記載のワクチンをヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含する、Ｂ群連鎖球菌に対してヒト以外の哺乳動物を免疫化する方法。
【請求項４４】  免疫化する量の請求項３７に記載のワクチンをヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含する、Ｂ群Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対してヒト以外の哺乳動物を免疫化する方法。
【請求項４５】  免疫化する量の請求項３７に記載のワクチンをヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含する、Ｃ群Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対してヒト以外の哺乳動物を免疫化する方法。
【請求項４６】  免疫化する量の請求項３７に記載のワクチンをヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含する、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  Ｂ型に対してヒト以外の哺乳動物を免疫化する方法。
【請求項４７】  有効量の、請求項１または１６のいずれかに記載のポリサッカリド−タンパク質結合体またはオリゴサッカリド−タンパク質結合体を投与する工程を包含する、ヒト以外の哺乳動物においてポリサッカリドまたはオリゴサッカリドに対する抗体応答を惹起する方法。
【請求項４８】  請求項４７に記載の方法によって産生された、免疫グロブリンまたはその抗原結合フラグメント。
【請求項４９】  ＩｇＧ抗体、ＩｇＭ抗体、ＩｇＡ抗体およびそれらの組み合わせから選択される、請求項４８に記載の免疫グロブリン。
【請求項５０】  前記抗体が単離されたＩｇＧである、請求項４９に記載の免疫グロブリン。
【請求項５１】  請求項１または１６に記載のβ−プロピオンアミド連結ポリサッカリド−タンパク質結合体またはβ−プロピオンアミド連結オリゴサッカリド−タンパク質結合体に応答して惹起される、単離された抗体またはその抗原結合フラグメントであって、Ｎ−プロピオネート化ポリサッカリドまたはＮ−プロピオネート化オリゴサッカリドと特異的に免疫反応性であり、かつ該β−プロピオネート化ポリサッカリドまたはβ−プロピオネート化オリゴサッカリドが由来するネイティブのＮ−アセチル化ポリサッカリドと免疫反応性である、抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５２】  前記ネイティブのＮ−アセチル化ポリサッカリドが、細菌、酵母または癌細胞の成分である、請求項５１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５３】  前記ポリサッカリドがＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、髄膜炎菌、肺炎双球菌、連鎖球菌、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、またはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ由来である、請求項５２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５４】  前記抗体が組換えにより産生される、請求項５１に記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５５】  疾患を引き起こす生物または疾患を引き起こす細胞に対して受動免疫化する方法であって、有効量の、請求項４８または５１に記載の免疫グロブリンまたは抗体をヒト以外の哺乳動物に投与する工程を包含し、該量が、疾患を引き起こす生物または疾患を引き起こす細胞を阻害または殺傷するに十分である、方法。
【請求項５６】  前記免疫グロブリンが、単離されたＩｇＧ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項５５に記載の受動免疫化する方法。
【請求項５７】  前記免疫グロブリンが、単離されたＩｇＭ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項５５に記載の受動免疫化する方法。
【請求項５８】  前記免疫グロブリンが、単離されたＩｇＡ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項５５に記載の受動免疫化する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
オプソニン食菌アッセイ（ＯＰ）：マウス抗血清の、連鎖球菌Ｂ（ＧＢＳ）結合体および肺炎双球菌結合体に対するオプソニン活性を、ヒト前骨髄球性白血病ＨＬ−６０細胞株（ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＣＣＬ  ２４０）を使用する、インビトロオプソニン食菌殺傷アッセイにおいて試験した。簡潔には、２００ｃｆｕのＧＢＳ  ＩＩＩ型株Ｍ７８１細胞または肺炎双球菌１４型株を、血清抗体と等容量で混合し、そして５％  ＣＯ2インキュベーター中で３５℃にて１５分、振盪下でインキュベートした。９０ｍＭ  ＤＭＦの存在下で５日間培養した仔ウサギ補体およびＨＬ−６０細胞（５×１０5）をこの混合物に添加し、そして３７℃にて１時間、振盪下でインキュベートした。アリコートを、定量培養のために取り出した。力価を、５０％の生細菌に対応する抗体希釈物を外插することによって決定した。これらのアッセイの結果を、肺炎双球菌１４型結合体については表５に、そしてＧＢＳ  ＩＩＩ型結合体については表６に示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
【表５】
2004505885.tif 000001
コントロールワクチンは、還元的アミノ化によって調製した１４型ポリサッカリド−破傷風トキソイド結合体であった。Ｐｎ１４−ＴＴ結合体は、Ｎ−アクリロイル化１４型肺炎双球菌ポリサッカリドと破傷風トキソイドとの間の直接的な結合の産物であった。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
この研究のために、６〜８週齢の１０ＣＤ１マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の群に、２．０μｇの結合体化ポリサッカリドを用いて、０日目、２８日目および３８日目に皮下的に注射した。この動物から、０日目、２８日目および３８日目に採血し、そしてこの動物を５９日目に瀉血した。ＥＬＩＳＡを、還元的アミノ化によって調製したＰｎ１４ポリサッカリド−ＨＳＡ結合体を使用して実施した。表５において報告されるＥＬＩＳＡ力価は、全てのＩｇＧを表す。報告されたＯＰ力価は、肺炎双球菌１４型株に対してである。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
【表８】
2004505885.tif 000002
ＧＣＭＰ−Ｓ−ｒＰｏｒＢは、Ｎ−アクリロイル化Ｃ群髄膜炎菌ポリサッカリド（ＧＣＭＰ）とチオール化ｒＰｏｒＢとの間の直接的な結合の産物であった。これらの動物の研究のために、ＨＳＤからの１０匹の異系交配Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｓｔｅｒ雌性マウス（６〜８週齢）の群に、０日目および２８日目に用量あたり２μｇの結合体化ポリサッカリドをｓ．ｃ．注射した。動物を、３８日目に瀉血した。Ｃ群ポリサッカリドに対するＥＬＩＳＡ力価を、ヒト血清アルブミンに結合したＧＣＭＰを使用して測定した。血清殺菌性力価を、髄膜炎菌Ｃ１１参照株を使用して得る。