【事件の表示】
　特願２００３−１４１７４８「無細胞系タンパク質合成方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１６年１２月　９日出願公開、特開２００４−３４４０１４〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
第１　手続の経緯 
　本願は，平成１５年５月２０日の出願であって，平成２０年４月２８日付けで拒絶理由通知書が出され，同年７月１４日に意見書及び手続補正書が提出され，同年８月８日付けで拒絶査定がなされ，これに対して，同年９月１８日に拒絶査定不服審判の請求がなされ，同年１０月１７日に手続補正書が提出され，同年１２月３日に審判請求の理由を補正する手続補正書（方式）が提出されたものである。
　その後，平成２３年２月７日に審尋がなされ，同年４月１日に回答書が提出がされた。
　
第２　平成２０年１０月１７日付けの手続補正について
［補正却下の決定の結論］
　　平成２０年１０月１７日付けの手続補正（以下，「本件補正」という。）を却下する。
　
［理由］
１　補正事項
ア　特許請求の範囲に関する補正事項
　本件補正により，特許請求の範囲は，補正前
「【請求項１】　
節足動物由来の抽出物を含有する無細胞系タンパク質合成用抽出液に，節足動物由来の培養細胞から抽出されたｔＲＮＡを添加した反応液を用いて，無細胞系でタンパク質を製造する方法。
【請求項２】
節足動物由来の抽出物が昆虫組織から抽出されたものである，請求項１に記載の方法。
【請求項３】
昆虫組織がカイコ組織である，請求項２に記載の方法。
【請求項４】
カイコ組織がカイコ幼虫の後部絹糸腺を少なくとも含有する，請求項３に記載の方法。
【請求項５】 
節足動物由来の培養細胞から抽出されたｔＲＮＡが昆虫培養細胞から抽出されたものである，請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
昆虫培養細胞がＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ卵細胞由来の培養細胞である，請求項５に記載の方法。
【請求項７】
酸性フェノール法を行った後，塩化リチウム法を行うことによって節足動物由来の培養細胞からｔＲＮＡを抽出する，請求項１〜６のいずれかに記載の，無細胞系でタンパク質を製造する方法。」
とあったのを，
「【請求項１】　
節足動物由来の抽出物を含有する無細胞系タンパク質合成用抽出液に，昆虫培養細胞から抽出されたｔＲＮＡを添加した反応液を用いて，無細胞系でタンパク質を製造する方法。
【請求項２】
節足動物由来の抽出物が昆虫組織から抽出されたものである，請求項１に記載の方法。
【請求項３】
昆虫組織がカイコ組織である，請求項２に記載の方法。
【請求項４】
カイコ組織がカイコ幼虫の後部絹糸腺を少なくとも含有する，請求項３に記載の方法。
【請求項５】
昆虫培養細胞がＴｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉ卵細胞由来の培養細胞である，請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
酸性フェノール法を行った後，塩化リチウム法を行うことによって昆虫培養細胞からｔＲＮＡを抽出する，請求項１〜５のいずれかに記載の，無細胞系でタンパク質を製造する方法。」
　と補正された。
　
イ　発明の詳細な説明に関する補正事項
　本件補正により補正された特許請求の範囲にあわせて，発明の詳細な説明の記載事項が補正された。
　
２　補正の目的
　本件特許請求の範囲に関する補正事項は，補正前の請求項１を削除し，補正前の請求項５を新たに請求項１とし，それに合わせて請求項の項番の引用を整理したものであって，平成１８年法律第５５号改正附則第３条第１項によりなお従前の例によるとされる同法による改正前（以下，「平成１８年改正」という。）の特許法第１７条の２第４項第１号に規定する請求項の削除に該当する。
　また，発明の詳細な説明に関する補正事項は，本件補正により特許請求の範囲が補正されたことにともない，不明りょうとなった発明の詳細な説明の記載を整合するように補正するものであって，平成１８年改正前の特許法第１７条の２第４項第４項に規定する明りょうでない記載の釈明に該当する。
　
　以上のことから，本件補正は，平成１８年改正前の特許法第１７条の２第４項に規定する要件を満たすものであるから，適法な補正といえる。
　
第３　本願発明
　以上のように，本件補正は適法な補正であるから，本願請求項１〜６に係る発明は，本件補正により補正された特許請求の範囲の請求項１〜６に記載された事項により特定される発明であると認める。
　そして，その請求項１に係る発明（以下，「本願発明」という。）は，次の事項により特定される発明である。
「【請求項１】　
節足動物由来の抽出物を含有する無細胞系タンパク質合成用抽出液に，昆虫培養細胞から抽出されたｔＲＮＡを添加した反応液を用いて，無細胞系でタンパク質を製造する方法。」
　
第４　引用刊行物記載の発明
　原査定の拒絶理由に引用され，本願出願前に頒布された刊行物である特開２０００−３２５０７６号公報（以下，「刊行物１」という。），Yasuaki Kawarasaki et al.,Anal. Biochem.,  vol.226, no.2,1995年4月,pp.320-324(以下，「刊行物２」という。），Kairat Madin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA,  vol.97, no.2, 2000年1月,pp.559-564(以下，「刊行物３」という。），特開２０００−２２４９９０号公報（以下，「刊行物４」という。）には，次の事項が記載されている。
　なお，下線は当審にて付記したものである。また，翻訳は当審によるものである。
　
１　刊行物１記載の事項　
（刊１−１）「【要約】
【課題】  翻訳活性，糖修飾活性を有する細胞抽出液の調製を提供する。
【解決手段】  昆虫細胞をミニボンベ内に収容し，ミニボンベ内に窒素ガスを供給し，加圧する。この圧力を一気に排出し，細胞を破砕し，細胞抽出液を得る。この方法は従来のホモジナイザーを用いた細胞破砕方法によりも緩和な方法であることから，翻訳因子だけでなく，糖鎖修飾活性を担持する因子をも回収可能となり，これにより，翻訳から翻訳後の糖鎖修飾まで行い得るインビトロ糖蛋白質合成系を製造することができる。」
　
（刊１−２）「【請求項５】  
蛋白質合成活性と合成された蛋白質に糖鎖を付加する糖鎖修飾活性とを有する細胞を破砕して調製され，鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液であって，前記細胞が有する蛋白質合成活性と糖修飾活性とが保存されるように不活性ガスの雰囲気中，加圧下の前記細胞を減圧させて，前記細胞が破砕されることを特徴とする無細胞抽出液
【請求項６】  
前記細胞が昆虫由来であることを特徴とする請求項５に記載の無細胞抽出液
　
（刊１−３）「【００１９】また，本発明の無細胞抽出液は，蛋白質合成活性と合成された蛋白質に糖鎖を付加する糖鎖修飾活性とを有する細胞を破砕して調製され，鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液であって，前記細胞が有する蛋白質合成活性と糖修飾活性とが保存されるように不活性ガスの雰囲気中，加圧下の前記細胞を減圧させて，前記細胞が破砕されることを特徴とする。
【００２０】
このように本発明によれば，蛋白質合成（翻訳）活性と糖鎖修飾活性とを有する細胞をこれら両活性を破壊しないような圧力変化により破砕させることにより両活性を保持した細胞抽出液が調製される。これにより，従来，別に調製されていた無細胞翻訳系と糖鎖修飾系とを合わせ持つ系として作り出すことができ，この系を利用することにより，蛋白質合成と糖鎖修飾とを一つの細胞抽出液で実行させることが可能となる
　
（刊１−４）「【００２１】さらに，本発明は無細胞糖蛋白質合成用組成物を提供する。この無細胞糖蛋白質合成用組成物は，蛋白質合成活性を有する細胞抽出液に上記糖鎖修飾活性を有する細胞抽出液を添加して構成される。このように糖鎖修飾活性を有する細胞抽出液を，それ自身では蛋白質合成活性のみを有する細胞抽出液に添加することにより，糖鎖修飾活性を補足して，蛋白質合成活性とともに糖鎖修飾活性をも有する組成物を構成させることができる。」
　
（刊１−５）【００３８】最終的に，細胞破砕後の抽出液を回収することにより無細胞抽出液が調製される。この無細胞抽出液とは，主として，生存細胞内の細胞液と区別する意味で用いられ，上記破砕後の細胞残渣の混在の有無は問わない。従って，上記の破砕後の細胞抽出液は，残渣が存在する状態として，又，必要に応じて破砕された細胞の残さを遠心分離などにより除去した上で，無細胞抽出液とすることができる。
　
（刊１−６）「【００６１】
【実施例】以下，実施例により本発明を具体的に説明するが，本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００６２】[実施例１]  発現ベクターの調製
糖鎖修飾されることが知られている蛋白質として，ＨＩＶ（ヒト免疫不全症ウイルス）のＧＰ１２０を用い，この糖蛋白質のインビトロの合成を試みた。
・・・（略）・・・
【００６７】（１）細胞数の影響
細胞抽出液の調製には，昆虫細胞Sf21細胞
を用いて行った。
　
（刊１−７）「【００９０】これら結果を総合して，以下に示す実施例においては細胞抽出液を次の組成に調製して，２５℃にて翻訳反応を行った。
【００９１】
虫細胞抽出液　　　　　　　A260=３０．４
HEPES-KOH（pH７．９５） 　終濃度１０．６mM
酢酸マグネシウム　　　　　終濃度１．３mM
酢酸カリウム　　　　　　　終濃度１００mM
DTT　　　　　　　　　　　 終濃度２．５mM
スペルミジン　　　　　　　終濃度０．２５mM
クレアチンキナーゼ　　　　終濃度４４４μg／ml
リン酸クレアチン　　　　　終濃度８．０mM
ATP　　　　　　　　　 　　終濃度１．２mM
GTP　　　　　　　　　　 　終濃度０．２５mM
アミノ酸混液　　　　　　　終濃度２５μM
mRNA　　　　　　　　　　　終濃度２００μg／ml
[実施例４]  昆虫細胞抽出液を利用した翻訳産物の同定
ＨＩＶ患者抗血清を用いたウエスタンブロッティングにより，
上記昆虫細胞抽出液を用いて合成された翻訳産物ＧＰ１２０を解析した。
【００９２】図１４に示すように，ＧＰ１２０は，SDS-PAGE上で90kDaと56kDaに相当する位置に検出された（レーン２，３）。一方，バキュロウイルス−昆虫細胞系でＳｆ21細胞により発現したＧＲ１２０は糖蛋白質で，90kDaの位置に非常に強いバンドとして検出される（レーン５，６）。このことはＳｆ細胞抽出液を用いて合成された翻訳産物に糖鎖が付加されている可能性を示唆する。
【００９３】一方，ウサギ網状赤血球と小麦胚芽から調製したコントロールの細胞抽出液において，得られた翻訳産物は56kDaの位置に強くバンドが検出され（図１５，レーン４，６），昆虫細胞抽出液（レーン２）を用いて合成された翻訳産物のように90kDaの位置に相当するバンドは検出されなかった。このことは，昆虫細胞抽出液で合成されたGP120においてのみ糖鎖付加などの翻訳後修飾が行われた可能性が強く示唆された。」
　
（刊１−８）「【０１１５】
【発明の効果】以上の通り，本発明により，新たな細胞抽出液の調製が提供され，これにより細胞から翻訳及び糖修飾能を有する無細胞抽出液を簡便に回収することが可能となった。また，本発明の無細胞抽出液を使用することにより，例えば組み換え体蛋白質に，生物界に存在する所望の糖鎖を付加することが可能となる。」
　
（刊１−９）「【００３２】
上記無細胞抽出液の調製に使用できる細胞は
培養細胞であってもよい
　
（刊１−１０）「【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は，細胞抽出液を用いて細胞外で蛋白質を合成させるインビトロ翻訳系に関し，特に，細胞抽出液により蛋白質合成とその後の糖鎖修飾とを共に実行させ糖蛋白質を合成し得る系に関する
　
３　刊行物２記載の事項
（刊２−１）「Several reaction conditions of cell-free protein synthesis such as temperatures, buffers, tRNAs, and creatine phosphate were intensively investigated and optimized to prolong protein synthesis and make it more efficiently in a batch system.　As a result of these modifications, the protein synthesis reaction continued for 10 h so that about 30 μg of dihydrofolate reductase (DHFR) protein derived from Escherichia coli was synthesized in 1 ml of reaction mixture.　In this improved system, translational reactions of other mRNAs such as rabbitβ-globin, Xenopusβ-globin, and tobacco mosaic virus RNA also continued for about 10 h.　In addition, protein synthesis directed by uncapped dhfr mRNA containing a viral cap-independent translation initiation-mediating sequence continued for 10 h, resulting in the synthesis of 18 μg of DHFR protein per milliliter of reaction mixture.」（３２０頁左欄１〜１７行）
（翻訳）
「温度，バッファー，
tRNA
無細胞タンパク質合成のいくつかの反応条件は，タンパク質合成を延長し，かつバッチシステムの中でそれをより効率的に行うために集中的に調査され最適化された
　
（刊２−２）「Cell-Free Protein Synthesis　
　Wheat germ extract for cell-free translation was prepared as described previously (3). A typical reaction mixture consisted of 60 mM  Hepes-tetramethylamine buffer (pH 7.6), 1 mM ATP, 0.1 mM GTP, 30 or 40 mM creatine phosphate dipotassium salt, 300μM spermidine, 4 mM dithiothreitol, 40μg/ml creatine kinase, 160μM each amino acid, 1000 U/ml RNase inhibitor (Toyobo), 7.6 μg/ml capped TEV-dhfr mRNA,100μg/ml wheat germ tRNA, and 20% (v/v) wheat germ extract.」（３２１頁左欄３２〜４１行）
(翻訳）
「無細胞タンパク質合成
(3)に前述されているように，
無細胞の翻訳のためのコムギ胚芽抽出物
100μg/mlのコムギ胚芽tRNA
コムギ胚芽抽出物
　
（刊２−３）「Figure 2 shows the effects of the addition of tRNA in a cell-free protein synthesis. The initial synthesis rates with and without supplementary tRNA were the same.However, the synthesis rate without supplementary tRNA declined quickly after only 2 h of incubation, whereas the rate with supplemental tRNA decreased gradually over a period of 10 h.The addition of supplemental tRNA had an obvious effect on the duration rather than on the initial rate of the reaction.This is possibly because tRNA is gradually degraded by ribonuclease(s), which would be critical in such a long reaction period.
　It clearly indicates that supplemental tRNA is also indispensable to the longevity of protein synthesis as well as the energy source for ATP regeneration.」（３２１頁右欄下から６行〜３２２頁左欄９行）
（翻訳）
「図2は，
無細胞タンパク質合成におけるtRNAの添加の影響を示す。初期合成速度はtRNAの追加の有り又は無しでも同じであった。しかしながら，追加のtRNAのない場合の合成速度は，インキュベーションのわずか２時間後に急速に低下したが，追加のtRNAを添加した場合の速度は，１０時間の期間中徐々に減少した。追加のtRNAの添加は，反応の初速度よりむしろ持続に明白な効果があった。これは，おそらくtRNAがリボヌクレアーゼによって徐々に分解されることが，このような長い反応時間を決定づけるためであろう
　
それは，さらに，追加のtRNAがATP再生のためのエネルギー源にとってもタンパク質合成の長期間化にとっても不可欠であることを明白に示す
　
（刊２−４）「
FIG.2. Effect of the addition on tRNA on protein synthesis. The amount of synthesized DHFR activity was determined spectrophotometrically. ● and ○ indicate reaction mixture with and without supplemental tRNA (100μg/ml),respectively. Concentration of KOAc and Mg(OAc)2 were 0 and 2.5mM,respectively.」（３２２頁図２）
（翻訳）
「図２　タンパク質合成系にtRNAを添加する効果。合成されたDHFR活性の量は，分光光度法で決定された。●と○は，それぞれ追加のtRNA（100μg/ml）を添加するものと添加しないものを示す。ＫＯＡｃとＭｇ（ＯＡｃ）２の濃度は，それぞれ０及び２．５ｍＭである。」
　
３　刊行物３記載の事項
（刊３−１）「A highly efficient and robust cell-free protein synthesis system prepared from wheat embryos:Plants apparently contain a suicide system directed at ribosomes」（タイトル）
（翻訳）
「
小麦の胚から調製した非常に効率的で堅牢な無細胞タンパク質合成システム
　
（刊３−２）「Cell-Free Translation.In the batch system, 50 μl of reaction mixture contained 12.5 μl of extract (thus 24%);final concentrations of the various ingredients are 24 mM Hepes/KOH (pH 7.8), 1.2 mM ATP, 0.25 mM GTP, 16 mM creatine phosphate, 0.45 mg/ml creatine kinase, 2 mM DTT, 0.4 mM spermidine, 0.3 mM of each of the 20 amino acids including [14C]leucine (2 μCi/ml), 2.5 mM magnesium acetate, 100 mM potassium acetate, 50 μg/ml of deacylated tRNA prepared from wheat embryos,0.05% Nonidet P-40, 1 μM  E-64 as proteinase inhibitor, 0.005% NaN3, and 7.2 μg (0.02 nmol) of dihydrofolate reductase (DHFR) mRNA.」（５６０頁右欄１〜１１行）
（翻訳）
「無細胞翻訳。バッチシステムでは，反応混合物の50μlが，抽出の12.5μL（したがって，24％）含まれていた。；種々の成分の最終濃度は，24 mMのHEPES / KOH（pH7.8），1.2mMのATP，0.25mMのGTP，16 mMのクレアチンリン酸，0.45 mg / mlのクレアチンキナーゼ，2mMのDTT，0.4 mMのスペルミジン，[14C]ロイシン（2μCiの/ ml）を含むそれぞれ0.3 mMの２０種類のアミノ酸，2.5 mMの酢酸マグネシウム，100mMの酢酸カリウム，
50μg/ mlの小麦の胚から調製した脱アシルtRNA
　
４　刊行物４記載の事項
（刊４−１）「【００１２】タンパク質の合成は以下の反応液中，26℃で４時間行った。60mM Hepes-テトラメチルアミン(tetramethylamine) pH7.6,1mM ATP,0.1mM GTP,40mM クレアチンホスフェート(creatine phosphate),0.3mM スペルミジン(spermidine),4mM ジチオスレイトール(dithiothreitol),40μg/ml クレアチンキナーゼ(creatine kinase),160μM の各アミノ酸,1000U/ml RNase 阻害剤,
100μg/ml小麦胚芽(wheat germ) tRNA
20%(v/v)小麦胚芽抽出液
　
第５　刊行物１記載の発明
　摘記（刊１−２）記載の特許請求の範囲の請求項５を引用する請求項６を請求項の引用を解消すべく整理すると，請求項６は，
「蛋白質合成活性と合成された蛋白質に糖鎖を付加する糖鎖修飾活性とを有する昆虫細胞を破砕して調製され，鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液であって，
前記昆虫細胞が有する蛋白質合成活性と糖修飾活性とが保存されるように不活性ガスの雰囲気中，加圧下の前記昆虫細胞を減圧させて，前記昆虫細胞が破砕されることを特徴とする無細胞抽出液。」と整理できる。
　前記請求項６に記載のものは，「鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る」とあるように，糖蛋白質を合成するのに使用できることは明白であるである。　さらに，摘記（刊１−１０）に「【発明の属する技術分野】本発明は，細胞抽出液を用いて細胞外で蛋白質を合成させるインビトロ翻訳系に関し，特に，細胞抽出液により蛋白質合成とその後の糖鎖修飾とを共に実行させ糖蛋白質を合成し得る系に関する。」と記載されており，「蛋白質合成とその後の糖鎖修飾とを共に実行させ糖蛋白質を合成し得る」とあるのであるから，前記請求項６に係る発明は，糖蛋白質の合成に利用する方法に使えることは明らかである。
　そうすると，刊行物１には，前記請求項６に係る無細胞抽出液を，「糖蛋白質の合成に利用する方法」が実質的に記載されているといえる。
　以上のことを総合すると，刊行物１には，次の発明（以下，「刊行物１発明」という。）が記載されていると認められる。
「蛋白質合成活性と合成された蛋白質に糖鎖を付加する糖鎖修飾活性とを有する昆虫細胞を破砕して調製され，鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液であって，
　前記昆虫細胞が有する蛋白質合成活性と糖修飾活性とが保存されるように不活性ガスの雰囲気中，加圧下の前記昆虫細胞を減圧させて，前記昆虫細胞が破砕されることを特徴とする無細胞抽出液を，糖蛋白質の合成に利用する方法。」　
　
第６　対比
　本願発明と刊行物１発明を対比する。
１　無細胞系タンパク質合成用抽出液について
　刊行物１発明の「蛋白質合成活性と合成された蛋白質に糖鎖を付加する糖鎖修飾活性とを有する昆虫細胞を破砕して調製され，鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液」は，昆虫細胞を破砕し得られたものである。また，ここに「糖蛋白質を合成し得る」とあるから，「無細胞抽出液」は，タンパク質合成の用途を有しているといえる。
　また，刊行物1発明の「昆虫」は，本願発明の「節足動物」に包含される。
　そして，刊行物１発明の「昆虫細胞を破砕して調製され」た「無細胞抽出液」は，昆虫細胞由来の無細胞抽出液ということができる。
　以上を総合すると，刊行物１発明の「蛋白質合成活性と合成された蛋白質に糖鎖を付加する糖鎖修飾活性とを有する昆虫細胞を破砕して調製され，鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液」は，由来する動物の種類，機能及び用途からみて，本願発明の「節足動物由来の抽出物を含有する無細胞系タンパク質合成用抽出液」に相当する。
　
２　反応液について
　刊行物１発明の無細胞抽出液には，ｔＲＮＡは加えられていない。
　刊行物１発明の「鋳型核酸から糖蛋白質を合成し得る無細胞抽出液」は，糖タンパク質を合成する反応液ということもできるから，本願発明の「無細胞系タンパク質合成用抽出液に，昆虫培養細胞から抽出されたｔＲＮＡを添加した反応液」とは，「無細胞系タンパク質合成用抽出液を成分に含む反応液」という点で共通する。
　
３　無細胞系でタンパク質を製造する方法について
　本願明細書の段落【０００９】において「また本明細書でいう『タンパク質』は，糖鎖修飾されてなる糖タンパク質も含む。」と用語が定義されているから，糖タンパク質も本願発明でいうタンパク質に包含される。
　よって，刊行物１発明の「無細胞抽出液を，糖蛋白質の合成に利用する方法」は，本願発明の「無細胞系でタンパク質を製造する方法」に相当する。
　
４　小括
　以上のことから，両発明は，次の（一致点）及び（相違点）を有する。
（一致点）
「節足動物由来の抽出物を含有する無細胞系タンパク質合成用抽出液を含む反応液を用いて，無細胞系でタンパク質を製造する方法。」
　
（相違点）
　無細胞系タンパク質合成用抽出液を含む反応液が，本願発明では「無細胞系タンパク質合成用抽出液に，昆虫培養細胞から抽出されたｔＲＮＡを添加した反応液」であるのに対して，刊行物１発明ではｔＲＮＡは添加されておらず，無細胞抽出液のみからなる反応液である点。
　
第７　判断
１　相違点についての検討
　刊行物１の摘記（刊１−９）に「
上記無細胞抽出液の調製に使用できる細胞は
培養細胞であってもよい
細胞抽出液の調製には，昆虫細胞Sf21細胞
を用いて行った
　したがって，刊行物１発明は，無細胞抽出液の材料である「昆虫細胞」として，培養細胞である昆虫細胞Sf21細胞を使用することを包含していることは明白である。
　
　他方，無細胞タンパク質合成において，ｔＲＮＡを添加することは，刊行物２〜４に記載されているように，本願出願前から普通に行われている事項である。
　そして，その添加の目的について，刊行物２の摘記（刊２−３）に「図2は，無細胞タンパク質合成におけるtRNAの添加の影響を示す。初期合成速度はtRNAの追加の有り又は無しでも同じであった。しかしながら，追加のtRNAのない場合の合成速度は，インキュベーションのわずか２時間後に急速に低下したが，追加のtRNAを添加した場合の速度は，１０時間の期間中徐々に減少した。追加のtRNAの添加は，反応の初速度よりむしろ持続に明白な効果があった。これは，おそらくtRNAがリボヌクレアーゼによって徐々に分解されることが，このような長い反応時間を決定づけるためであろう。
　それは，さらに，追加のtRNAがATP再生のためのエネルギー源にとってもタンパク質合成の長期間化にとっても不可欠であることを明白に示す。」と記載されている。
　このことから，ｔＲＮＡは，リボヌクレアーゼによって分解され，無細胞タンパク質合成において，ｔＲＮＡを別途添加しないと長時間反応させる場合，反応速度が低下することが理解される。
　
　刊行物１発明において，前記摘記（刊１−６）の実施例のごとく無細胞抽出液の材料として昆虫細胞Sf21細胞を使用し，反応速度の低下を防ぐために刊行物２記載の技術的事項を適用してｔＲＮＡを添加する場合，次の（理由１）〜（理由３）により，添加するｔＲＮＡとして，昆虫細胞Sf21細胞から抽出されたｔＲＮＡを使用することは，当業者が容易になし得たこといえる。
　
（理由１）
　「無細胞抽出液」は「昆虫細胞を破砕して調製され」たものであるから，昆虫細胞Sf21細胞由来のｔＲＮＡが「無細胞抽出液」に含まれていることは明白である。
　刊行物１発明において刊行物２記載の技術的事項に従いｔＲＮＡを添加する場合，リボヌクレアーゼによって分解されるｔＲＮＡの補充が目的であるから，分解されたｔＲＮＡと同じ刊行物１発明の「無細胞抽出液」に含まれているｔＲＮＡ，すなわち，昆虫細胞Sf21細胞から抽出されたｔＲＮＡを選択するのが自然である。
　
（理由２）
　刊行物１発明の「昆虫細胞を破砕して調製され」た「無細胞抽出液」は，ｔＲＮＡを含み，そして，タンパク質を合成する主体であるｒＲＮＡを含むものである。ｔＲＮＡとｒＲＮＡのセットは，互いに作用してタンパク質を合成するものであり，昆虫，コムギ，酵母といった生物の種類毎にそれぞれ独自に進化したものであるものであることは技術常識といえる。（下記刊行物Ａ参照。）
　したがって，「昆虫細胞」由来の「無細胞抽出液」と生物的に同種のｔＲＮＡを選ぶ組合せが，自然状態で観察される組合せであり，進化からみて，最も適合していることが予想される。
　前記技術常識に照らしてｒＲＮＡとｔＲＮＡを生物学的に同種のものとすべく構成するに際し，刊行物１発明の「昆虫細胞を破砕して調製され」た「無細胞抽出液」には，昆虫細胞Sf21細胞のｒＲＮＡが含まれており，これと生物学的に同種の昆虫細胞を別途を探すまでもなく，生物学的に同種の細胞は昆虫細胞Sf21細胞が入手済みなのであるから，当業者であれば当該昆虫細胞Sf21細胞から抽出されたｔＲＮＡを選択するのが自然である。
　
（理由３）
　生物の種類によりｔＲＮＡの配列は微妙に異なることは技術常識である。（下記刊行物Ａ参照。）刊行物１発明において，昆虫細胞と由来の異なるｔＲＮＡを添加した場合，無細胞抽出液中に由来，すなわち，配列が異なるｔＲＮＡが添加されることとなる。それにより，２種類のｔＲＮＡが混在することとなり，そのような場合，タンパク質合成に影響を及ぼす可能性を否定できない。よって，上記技術常識を知った当業者であれば，刊行物１発明において，刊行物２記載の技術的事項に従いｔＲＮＡを添加する場合，２種類のｔＲＮＡが混在することがないよう「無細胞抽出液」に含まれるｔＲＮＡと同じ昆虫細胞Sf21細胞のｔＲＮＡをまず最初に思いつくといえる。
　
（小括）
　培養細胞である昆虫細胞Sf21細胞は，大量に培養できるから入手がきわめて容易であり，昆虫細胞Sf21細胞からｔＲＮＡを得ることを妨げるような事情はない。
　以上のことを総合すると，刊行物１発明において，刊行物１記載の実施例のとおり無細胞抽出液の材料として培養細胞である昆虫細胞Sf21細胞を使用し，ｔＲＮＡの分解を補うため刊行物２記載の技術事項に従いｔＲＮＡを添加するに際し，添加するｔＲＮＡを無細胞抽出液に含まれるｔＲＮＡと同じものとするため昆虫細胞Sf21細胞のｔＲＮＡを使用することで，本願発明のごとく構成することは当業者が容易になし得たことといえる。
　
刊行物Ａ：特開平８−２６６２９９号公報　
  【００１５】ｔＲＮＡ遺伝子およびｔＲＮＡと同様に，先行技術は，生物およびｔＲＮＡ遺伝子配列の遺伝子解析，進化および分類学的研究におけるｔＲＮＡおよびｔＲＮＡ遺伝子のハイブリダイゼーションの利用を開示している。遺伝子解析としては例えば，種々の生物におけるｔＲＮＡ遺伝子数の決定，細胞中に存在する多数のｔＲＮＡ遺伝子間の類似性の決定，細胞中におけるｔＲＮＡの合成の速度および程度並びにそれらをコントロールする要素・因子の決定がある。
進化および分類学的研究では，近縁関係の生物および非常に異なる生物に由来するｔＲＮＡ遺伝子の塩基配列を比較する
【００１６】またｔＲＮＡ遺伝子の塩基配列と同様に，個々のｔＲＮＡ遺伝子の塩基配列は異なる生物においても少くとも部分的に類似していることが知られている。全ｔＲＮＡはこれと同じタイプの関係を示し，或る種の生物に由来する全ｔＲＮＡは，遠い関係の生物のｔＲＮＡ遺伝子とかなりの程度ハイブリダイズする。ラットミトコンドリアのロイシル−ｔＲＮＡは，ニワトリおよび酵母のミトコンドリアＤＮＡと有意にハイブリダイズした（Biochemistry(1975)14，＃10，p.2037）。またｔＲＮＡ遺伝子は，Enterobacteriaceae科の生物間で高度に保存されていることも示されている。大腸菌から得た全ｔＲＮＡ遺伝子は，異なる遺伝子をもつ種から単離したｔＲＮＡとよくハイブリダイズする（J.Bacteriology(1977)129,＃３，p.1435−1439）。
このように他の種にハイブリダイズする大腸菌ｔＲＮＡ／遺伝子の割合は，生物の近縁性の程度によって変わる。大腸菌ｔＲＮＡ遺伝子配列が近い関係に由来するｔＲＮＡとハイブリダイズする割合は大きいが，遠い関係の種に由来するｔＲＮＡとはずっと少なくしかハイブリダイズしない
【００１７】進化の過程におけるｔＲＮＡ遺伝子配列の保存程度は，ｒＲＮＡ遺伝子配列の保存程度ほど大きくはない。それにもかかわらず，ｔＲＮＡ遺伝子配列は細胞中に存在する膨大な数のＤＮＡ配列よりずっと高度に保存されている。
　
２　本願発明の効果についての検討
（１）図３から読み取れる効果について
【図３】
　本願明細書の段落【００８７】〜【００８９】の記載からみて，図３には，「実験例５」として昆虫培養細胞Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）由来のｔＲＮＡを５０μｇ／ｍＬ含有する反応液が●で，「比較実験例３」として酵母由来のｔＲＮＡ（ロシュ・ダイアグノスティックス社製）を２００μｇ／ｍＬ含有する反応液が■で，「比較実験例２」として，ｔＲＮＡを含有させない反応液が▲で示されたデータが記載されている。
　この図３からは，昆虫培養細胞Ｈｉｇｈ  Ｆｉｖｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）由来のｔＲＮＡが最もルシフェラーゼ相対合成量が高く，次いで，酵母ｔＲＮＡ，ｔＲＮＡを含有させないものの順となっている。
　
ア　本願発明に係る昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡと酵母ｔＲＮＡとの効果の違いについて
　そこで，検討するに，上記図３で比較例として使用されたｔＲＮＡの由来となった酵母は真核生物の中でも原始的なものであり，本願発明のｔＲＮＡの由来となる昆虫とは，生物学的に遠い類縁関係にあるといえる。上記「第７　１　相違点についての検討」で言及したように，ｔＲＮＡとｒＲＮＡのセットは，互いに作用してタンパク質を合成するものであり，昆虫，コムギ，酵母といった生物の種類毎にそれぞれ独自に進化したものである。進化は最適となるように進む現象であるから，刊行物１発明の「昆虫細胞が破砕され」て得られる「無細胞抽出液」に含まれるｒＲＮＡは昆虫由来であるから，酵母のように遠い類縁関係の生物由来のｔＲＮＡを添加したときより，昆虫のｔＲＮＡの方がタンパク質合成に適しているであろうことは当業者が予測し得ることといえる。
　
イ　本願発明に係る昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡとｔＲＮＡを含有させない場合での効果の違いについて
　刊行物２には，摘記（刊２−３）に「初期合成速度はtRNAの追加の有り又は無しでも同じであった。しかしながら，追加のtRNAのない場合の合成速度は，インキュベーションのわずか２時間後に急速に低下したが，追加のtRNAを添加した場合の速度は，１０時間の期間中徐々に減少した。追加のtRNAの添加は，反応の初速度よりむしろ持続に明白な効果があった。これは，おそらくtRNAがリボヌクレアーゼによって徐々に分解されることが，このような長い反応時間を決定づけるためであろう。」と記載されている。ここに記載のように，本願の図３でも６０分後あたりの初期合成速度は，ｔＲＮＡの追加の有りと無しで同じであることが理解される。その後，本願発明に係る昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡを添加したものの方が上回るようになる。この現象は，まさに摘記（刊２−３）に記載されているとおりのものであり，上記図３に記載の効果は，当業者が刊行物２から予測し得るものといえる。
　
３　請求人の主張について
　請求人は，平成２０年１２月３日提出の手続補正書（方式）の３頁３２〜３７行において「本願の図２に開示されるように，カイコ組織由来のｔＲＮＡを添加する場合は，実験例１の１００μｇ／ｍｌの添加を行う場合が最も合成量が大きくなっているのに対し，昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡを添加する場合は，図４に開示されるように実験例５の５０μｇ／ｍｌの添加を行なう場合が最も合成量が大きくなっているように，昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡを採用した場合には，少量の添加で十分効果が得られることが理解できます。」と主張する。
　そこで，図２と図４を精査する。
【図２】
　
【図４】
　本願明細書の【図面の簡単な説明】に「【図２】
反応開始６時間後
反応開始４時間後
　ここで，比較実験例２とは，本願明細書の段落【００８１】に「比較実験例２　実施例１で調製したカイコ幼虫の脂肪体由来ｔＲＮＡを含有させずに反応液を調製した以外は実験例１と同様に行い，無細胞系タンパク質合成反応を行った。」とあるように，ｔＲＮＡを何も加えない場合の実験である。
　
　その具体的データを整理すると，次のようになる。
　カイコ組織由来のｔＲＮＡを添加した図２のものでは５０μｇ／ｍｌでは約１０５％（当審注：数値は，図２のグラフから導いた数値であって正確なものではない。以下，同様である。）であり，１００μｇ／ｍｌでは約１３０％であり，１５０μｇ／ｍｌでは約１１０であり，２００μｇ／ｍｌでは約１００％となっている。昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡを添加した図４のものでは，５０μｇ／ｍｌの添加で約１１２％であり，１００μｇ／ｍｌでは約１００％であり，１５０μｇ／ｍｌでは約７０％となっている。
　
　しかしながら，この記載事項からわかるように，両図は，反応開始からの経過時間が異なっており，直ちに対比することができないものである。　
　この図からせいぜい分かるのは，昆虫培養細胞のｔＲＮＡを添加した図４のものでは，反応開始４時間後の時点で，ｔＲＮＡを何も加えていない比較実験２のものを上回るのは，５０μｇ／ｍｌの添加の約１１２％のみである。追加のｔＲＮＡを加えることで，反応が高まることが刊行物２から予想され，数値がグラフから概算されたことを考慮しても予想を超えて格別顕著な効果とはいえない。
　
　他方，図１及び図３には，次の実験が結果が記載されている。
　
【図１】
　
【図３】
　図１で▲で表されるのは，本願明細書の段落【００７８】からみて，カイコ幼虫の脂肪体由来のｔＲＮＡを１００μｇ／ｍｌ含むものであり，２４０分後，すなわち，４時間後に１２６％のデータが示されている。
　これに対して，図３で▲で表されるのは，本願明細書の段落【００８７】からみて，昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡを５０μｇ／ｍＬ含むものであり，２４０分後，すなわち，４時間後に約１１２％のデータが示されている。
　このデータからみて，反応開始４時間後の時点で，昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡは，カイコ幼虫の脂肪体由来のｔＲＮＡより劣っており，昆虫培養細胞が優れた効果を奏するものとはいえない。
　そして，図３（カイコ幼虫の脂肪体由来のｔＲＮＡ）には，３６０分後，すなわち，６時間後に，１３０％に到達しているデータが示されている。図４（昆虫培養細胞由来のｔＲＮＡ）で示されるデータは，４時間後のデータまでしか示されていないが，グラフの傾きは徐々に小さく上限に達しつつあり，仮に，反応開始６時間後までデータ取得したとしても，図３で示される１３０％を超えることはないと推定される。
　以上のことから，昆虫培養細胞が特段優れた効果を奏するものとはいえないから，請求人の主張は失当である。
　
第８　結語
　以上のとおり，本願発明は，刊行物１及び刊行物２に記載された発明並びに周知の技術的事項に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから，特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって，本願は，他の請求項に係る発明について検討するまでもなく拒絶すべきものである。
　よって，結論のとおり審決する。