【手続補正書】
【提出日】平成18年9月7日(2006.9.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ウイルスタンパク質分子が単一のウイルスタンパク質またはその一部の配列変異体であることを特徴とする、ウイルスタンパク質分子の混合物を含むタンパク質ワクチンであって、該混合物が、ヌクレオチド位置のバリエーションゆえに、ランダムに分散した配列組合せを含む、プラスミド−ＤＮＡ混合物の発現によって得られる１０２個以上の配列変異体を含む、タンパク質ワクチン。
【請求項２】  混合物が１０３個以上、好ましくは１０４個以上の配列変異体を含むことを特徴とする請求項１記載のタンパク質ワクチン。
【請求項３】  Ｖ２ループおよび／またはＶ３ループの領域におけるアミノ酸配列が各ケースにおいて互いに相異する、ＨＩＶのＧＰ１２０タンパク質の混合物を含むことを特徴とする請求項１または２に記載のタンパク質ワクチン。
【請求項４】  ワクチンがウイルスＤＮＡ分子またはその一部の配列変異体の混合物を含むことを特徴とする、構造的に相異するウイルスタンパク質の混合物をコードするＤＮＡワクチンであって、該混合物が、ヌクレオチド位置のバリエーションゆえに、ランダムに分散した配列組合せを含む、核酸配列が互いに相異する１０２個以上の配列変異体を含むＤＮＡワクチン。
ここで、混合物は、
【請求項５】  ウイルスタンパク質またはその一部の配列変異体をコードするＤＮＡ分子の混合物を含むことを特徴とする請求項４記載のＤＮＡワクチン。
【請求項６】  混合物が、核酸配列が互いに相異する１０３個以上、好ましくは１０４個以上のＤＮＡ分子を含むことを特徴とする請求項４または５記載のＤＮＡワクチン。
【請求項７】  ＨＩＶの構造的に相異するＧＰ１２０タンパク質をコードすることを特徴とする請求項４〜６のいずれか１つに記載のＤＮＡワクチンであって、その核酸配列が、Ｖ２ループをコードする領域および／またはＶ３ループをコードする領域において互いに相異するＤＮＡ分子の混合物を含むＤＮＡワクチン。
【請求項８】  Ｖ２ループおよび／またはＶ３ループにおいて互いに相異するアミノ酸配列を含むＧＰ１２０の混合物をコードするように、その核酸配列において互いに相異するＤＮＡ分子の混合物を含むことを特徴とする請求項７記載のＤＮＡワクチン。
【請求項９】  Ｖ２およびＶ３領域の特異的交換を可能にする一価の制限サイトを含むように修飾されることを特徴とする、配列番号：１で表されるｅｎｖ配列またはそのフラグメントから誘導される核酸配列。
【請求項１０】  約１５０塩基対の間隔で１０個の一価の制限切断サイトを含むように修飾されることを特徴とする、配列番号：１で表されるｅｎｖ配列またはそのフラグメントから誘導される核酸配列。
【請求項１１】  配列がサイレント突然変異の導入によって修飾されることを特徴とする請求項９または１０記載の核酸配列。
【請求項１２】  配列番号：９の配列を含むことを特徴とする請求項９〜１１記載の核酸配列。
【請求項１３】  配列番号：１１の配列を含むことを特徴とする核酸配列。
【請求項１４】  配列番号：１２の配列を含むことを特徴とする核酸配列。
【請求項１５】  Ｖ３ループにおいて、２４７ｂｐ長さのＢｇ１ＩＩ−ＸｂａＩフラグメントまたは２８３ｂｐ長さのＢｇ１ＩＩ−ＮｈｅＩフラグメントが、修飾されたフラグメントと交換されており、Ｖ２ループにおいて、１３９ｂｐ長さのＰｓｔＩ−Ｂｃ１Ｉフラグメントまたは３３９ｂｐ長さのＰｓｔＩ−ＥｃｏＲＩフラグメントが、修飾されたフラグメントと交換されており、各ケースにおけるフラグメントが、少なくとも６個の位置においてイノシン、核酸交換または突然変異を含むことを特徴とする、ＧＰ１２０のＶ３ループをコードする領域および／またはＶ２ループをコードする領域を含む一本鎖核酸配列。
【請求項１６】  Ｖ３ループにおいて、２４７ｂｐ長さのＢｇ１ＩＩ−ＸｂａＩフラグメントまたは２８３ｂｐ長さのＢｇ１ＩＩ−ＮｈｅＩフラグメントが、修飾されたフラグメントと交換されており、Ｖ２ループにおいて、１３９ｂｐ長さのＰｓｔＩ−Ｂｃ１Ｉフラグメントまたは３３９ｂｐ長さのＰｓｔＩ−ＥｃｏＲＩフラグメントが、修飾されたフラグメントと交換されており、各ケースにおけるフラグメントが、少なくとも６個の位置においてイノシン、核酸交換または突然変異を含み、核酸配列が請求項１４の核酸配列に相補的であることを特徴とする、ＧＰ１２０のＶ２ループをコードする領域および／またはＶ３ループをコードする領域を含む一本鎖核酸配列。
【請求項１７】  フラグメントが、９〜２０個の位置においてイノシン、核酸交換または突然変異を含むことを特徴とする請求項１５または１６記載の核酸配列。
【請求項１８】  請求項１５または１７記載の一本鎖核酸配列および請求項１６または１７記載の一本鎖核酸配列のハイブリッドを含む二本鎖ＤＮＡ。
【請求項１９】  核酸配列が、Ｖ２ループをコードする領域および／またはＶ３ループをコードする領域において互いに相異すること特徴とする、その核酸配列が、配列番号：１または配列番号：１１のｅｎｖ配列もしくはそのフラグメントから誘導される二本鎖ＤＮＡを含む核酸混合物。
【請求項２０】  核酸配列が、各ケースにおいて、Ｖ２ループおよび／またはＶ３ループにおいて互いに相異するアミノ酸配列を含むタンパク質混合物をコードするように、互いに相異することを特徴とする請求項１９記載の核酸混合物。
【請求項２１】  １０２個以上の配列変異体を含むことを特徴とする請求項２０記載の核酸混合物。
【請求項２２】  １０３個以上、好ましくは１０４個以上の配列変異体を含むことを特徴とする請求項２１記載の核酸混合物。
【請求項２３】  各ケースにおいて、Ｖ２ループおよび／またはＶ３ループにおいて互いに相異するアミノ酸配列を含むタンパク質混合物であることを特徴とする、ＧＰ１２０タンパク質の配列変異体を含むタンパク質混合物であって、該混合物が、ヌクレオチド位置のバリエーションゆえに、ランダムに分散した配列組合せを含む、タンパク質混合物。
【請求項２４】  １０２個以上の配列変異体を含むことを特徴とする請求項２３記載のタンパク質混合物。
【請求項２５】  １０３個以上、好ましくは１０４個以上の配列変異体を含むことを特徴とする請求項２４記載のタンパク質混合物。
【請求項２６】  挿入された請求項１８記載の二本鎖ＤＮＡを含むプラスミド。
【請求項２７】  挿入された請求項９〜１４記載の核酸配列を含むことを特徴とする発現ベクター。
【請求項２８】  配列番号：１０の配列を含むことを特徴とする請求項２７記載の発現ベクター。
【請求項２９】  ＤＳＭ１２６１２に対応することを特徴とする発現ベクター。
【請求項３０】  プラスミドの核酸配列が、各ケースにおいて、Ｖ２ループをコードする領域および／またはＶ３ループをコードする領域において互いに相異することを特徴とする、請求項２６記載のプラスミドの混合物を含むベクター混合物であって、該プラスミドの混合物が、ヌクレオチド位置のバリエーションゆえに、ランダムに分散した配列組合せを含む、ベクター混合物。
【請求項３１】  核酸配列において互いに相異する１０２個以上のプラスミドを含むことを特徴とする請求項３０記載のベクター混合物。
【請求項３２】  核酸配列において互いに相異する１０３個以上、好ましくは１０４個以上のプラスミドを含むことを特徴とする請求項３１記載のベクター混合物。
【請求項３３】  プラスミドが、宿主細胞として、大腸菌において発現しうる請求項３０〜３２のいずれか１つに記載のベクター混合物。
【請求項３４】  プラスミドが、宿主細胞として、真核細胞、好ましくはＣｏｓ、ＣＨＯまたはＢＨＫ細胞において発現しうる請求項３０〜３２のいずれか１つに記載のベクター混合物。
【請求項３５】  請求項３３記載のベクター混合物でトランスフェクトされた大腸菌宿主細胞。
【請求項３６】  請求項３４記載のベクター混合物でトランスフェクトされた真核宿主細胞。
【請求項３７】  Ｃｏｓ、ＢＨＫまたはＣＨＯ細胞からなるグループからの宿主細胞であることを特徴とする請求項３６記載の真核宿主細胞。
【請求項３８】  ウイルスタンパク質をコードする核酸配列に、非常に多くのサイレント突然変異が導入されるので、得られる核酸がＶ２およびＶ３領域の交換を可能にする一価の制限サイトを含むことを特徴とする、請求項１０記載の核酸配列の製造方法。
【請求項３９】  ウイルスタンパク質をコードする核酸配列に、非常に多くのサイレント突然変異が導入されるので、得られる核酸が約１５０塩基対の間隔で１０個の一価の制限サイトを含むことを特徴とする、請求項１０記載の核酸配列の製造方法。
【請求項４０】  ウイルスタンパク質をコードする核酸配列が、配列番号：１または配列番号：１１の配列もしくはそのフラグメントであることを特徴とする請求項３８または３９記載の製造方法。
【請求項４１】  各ケースにおける種々のヌクレオチド位置における塩基のランダム分散を介して、各ケースにおけるＶ２ループをコードする領域および／またはＶ３ループをコードする領域において核酸配列が互いに相異するプラスミドが、宿主細胞において発現しうるベクターにライゲートされることを特徴とする請求項３３および３４記載のベクター混合物の製造方法。
【請求項４２】  宿主細胞が、大腸菌、Ｃｏｓ、ＣＨＯまたはＢＨＫ細胞である請求項４１記載の方法。
【請求項４３】  宿主細胞が、請求項３０〜３２記載のベクター混合物で形質転換されることを特徴とする請求項３５または３６記載の宿主細胞の製造方法。
【請求項４４】  宿主細胞が、ウイルスタンパク質配列変異体の混合物が発現されうるような条件下で、請求項３５〜３７のいずれか１つにしたがって培養されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１つに記載のタンパク質ワクチンの製造方法。
【請求項４５】  方法が、請求項４０にしたがって実行され、本発明のプラスミドが、ワクチン接種される有機体の宿主細胞において発現されうるベクターにライゲートされることを特徴とする、請求項４〜８のいずれか１つに記載のＤＮＡワクチンの製造方法。
【請求項４６】  ヒトにおけるウイルス感染の予防および／または治療用ワクチンの製造ための、ウイルスタンパク質またはその一部の配列変異体である構造的に相異するウイルスタンパク質の混合物の使用。
【請求項４７】  ヒトにおけるＨＩＶ感染の予防および／または治療用ワクチンの製造ための、請求項２３〜２５のいずれか１つに記載のタンパク質混合物の使用。
【請求項４８】  ヒトにおけるウイルス感染の予防および／または治療用ワクチンの製造ための、ウイルスタンパク質またはその一部の配列変異体をコードするＤＮＡ分子の混合物の使用。
【請求項４９】  ヒトにおけるウイルス感染の予防および／または治療用ワクチンの製造ための、請求項１９〜２２記載の核酸混合物の使用。
【請求項５０】  大腸菌、Ｃｏｓ、ＣＨＯまたはＢＨＫ細胞からなるグループから選ばれる宿主細胞において発現されうる請求項３０〜３２記載のベクター混合物の製造のための、請求項１９〜２２のいずれか１つに記載の核酸混合物の使用。
【請求項５１】  請求項２３〜２５のいずれか１つに記載のタンパク質混合物の発現のための、請求項３０〜３２のいずれか１つに記載のベクター混合物の使用。
【請求項５２】  請求項２３〜２５のいずれか１つに記載のタンパク質混合物の製造のための、請求項３５〜３７のいずれか１つに記載の宿主細胞の使用。
【請求項５３】  ウイルスタンパク質またはその一部の配列変異体を含むタンパク質混合物およびウイルスタンパク質の配列変異体またはその一部をコードするＤＮＡ分子を含む核酸混合物を含むことを特徴とする、ウイルス感染の予防および／または治療用医薬組成物。
【請求項５４】  請求項２３〜２５記載のタンパク質混合物および請求項１９〜２２記載の核酸混合物を含むことを特徴とする請求項５３記載の医薬組成物。