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　特願２００７−１９８２０２「異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物」拒絶査定不服審判事件〔平成１９年１２月２７日出願公開、特開２００７−３３２１５２〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１．手続の経緯 
　
　本願は，１９９６年（平成８年）１０月１０日（パリ条約による優先権主張１９９５年１０月１０日，米国）に国際出願された特願平９−５１５２８５号の一部を，平成１９年７月３０日に新たな特許出願としたものであって，平成２１年２月９日付で拒絶査定がなされ，これに対し，平成２１年５月１８日に拒絶査定不服審判が請求されたが，平成２２年１２月２２日付で当審による拒絶理由が通知され，平成２３年７月４日付で意見書及び手続補正書が提出されたものである。
　
２．本願発明
　
　本願の請求項１〜４に係る発明は，平成２３年７月４日付で手続補正された特許請求の範囲の請求項１〜４に記載された事項により特定されるものであり，そのうち請求項１に係る発明（以下，「本願発明１」という。）は，以下のとおりのものである。
　
「【請求項１】
トランスジェニックマウスであって，
　機能的に破壊された内因性重鎖対立遺伝子のホモ接合の一対，機能的に破壊された内因性軽鎖対立遺伝子のホモ接合の一対，ヒト免疫グロブリンκ軽鎖トランスジーン，およびヒト免疫グロブリン重鎖トランスジーンを含み，
　
ここで，該ヒト免疫グロブリン重鎖トランスジーンはＨＣ２トランスジーンであり，
　ａ）プラスミドｐＫＣ１Ｂの精製されたＤＮＡ挿入物；
　ｂ）プラスミドｐＫＶ４の精製されたＤＮＡ挿入物；および，
　ｃ）精製されたＹＡＣ４×１７Ｅ１　ＤＮＡ，
をマウス胚の前核中に，同時マイクロインジェクションすることによって，作製され，
　ここで，該マウス胚の前核は，該トランスジェニックマウスに発育し，そして，ここで，該ＫＣｏ５トランスジーンは，５つのヒト軽鎖Ｖκセグメントを発現し，該５つのヒト軽鎖Ｖκセグメントは，Ｌ１５，Ｌ１８，Ｌ２４，Ａ１０およびＡ２７であり，
　ここで，該トランスジェニックマウス中のプロＢ細胞，プレＢ細胞，および，Ｂ細胞の集団は，プラスミドｐＫＣ１ＢおよびプラスミドｐＫＶ４のＤＮＡ挿入物のみからなるヒト免疫グロブリンκ軽鎖トランスジーンを有するトランスジェニックＫＣｏ４マウス中のプロＢ細胞，プレＢ細胞，および，Ｂ細胞の集団よりも多く，
　ここで，該トランスジェニックマウスは，
ＣＤ４，ＣＤ８，ＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲからなる群から選択される
トランスジェニックマウス。」　
　　
３．当審による拒絶理由の概要
　
　当審による拒絶理由の１つは，任意のヒト抗原について，親和性定数が２．３×１０９Ｍ−１よりも優れた免疫グロブリンを過度の実験を要することなく取得できる蓋然性が高いとは認められないから，本願は，本願発明１について，特許法第３６条第４項及び第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていないというものである。
　
４．特許法第３６条第４項及び第３６条第６項第１号について
　
（１）本願明細書の記載
（ア）「実施例39
  この実施例は，高親和性の抗原特異的なヒトIgGモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマクローンを分離するために，実施例38のKCo5トランスジェニックマウスの好結果の使用を説明する。
免疫化
　二重欠失／二重トランスジェニックマウス（KCo5−9272/HC2-2550/JHD/JKD，＃12657）を，８週間１週おきに，腹腔内に，４〜10ｘ106照射T4D3細胞，ヒトCD4を発現するネズミＴ細胞系（ドクタージェインパーンズ，スタンフォード大学）で免疫し，次いで２週間後，不完全フロイントアジュバント（シグマ）中の20 mgの可溶な組換えヒトCD4（sCD4；イントラセル）を腹腔内に１回注入した。このマウスを，20 mgのsCD4と融合するに先立って３日間に１度，静脈内に追加した。
ハイブリドーマ融合
　免疫したマウスからの脾臓リンパ球の単一細胞懸濁液を，１/６の数のP3X63-Ag8.653非分泌マウスミエローマ細胞(ATCC CRL 1580)に，50％PEG（シグマ）を用いて融合した。・・・
ELISAによるハイブリドーマのスクリーニング
　抗CD4 mAbを検出するために，ミクロ滴定プレート  （ファルコン）を，PBS中2.5mg／mlのsCD4 50mlで，４℃にて１晩被覆し，PBS中５％のチキン血清100 mLで１時間室温にてブロックし，次いで室温にて１時間インキュベートした。インキュベーションはそれぞれ，ハイブリドーマからの上清の希釈１:４，セイヨウワサビペルオキシダーゼ(HRPO)結合ヤギ抗ヒトIgG（ジャクソン）のF(ab')2フラグメントの1,1000希釈または，HRPO結合ヤギ抗ヒトIgK抗体（シグマ）プラス１％通常のマウス血清の１：250希釈で行い，および最後に，0.0024％H2O2を有する，0.1Mのクエン酸燐酸緩衝液(pH4)中0.22mg／ml ABTSを用いて行った。・・・
フローサイトメトリーアッセイによるハイブリドーマスクリーニング
　自生種細胞の表面CD4と反応性のmAbをさらにスクリーニングするために，５ｘ105のSupT1細胞（ATCC CRL 1942）を，融合プレートからの使われた上清の１:２希釈を用いて氷上で30分間インキュベートし，冷染色緩衝液（0.1％BSA，0.02％NaN3，PBS中）で２回洗浄し，FITC結合ヤギ抗ヒトFcg(FITC−GaHuIgG;ジャクソン)のF(ab')2フラグメント1.5mg／mlで15分間インキュベートし，１回洗浄し，そしてFACScan（ベクトン−ディッキンソン）で直ちに分析した。
CD4反応性ハイブリドーマ
　上記したELISAおよびフローサイトメトリー技術を用いて，自生種ヒトCD4と特異的に反応するヒトIgGを分泌する12のハイブリドーマクローンを同定した。これら12のクローンのうちの10をさらにサブクローン化した。これらサブクローンのうちの８つをヒトIgG1k分泌ハイブリドーマとして同定した。・・・８つの完全なヒトクローンのためのペアレントウェルは，1E11，2E4，4D1，6C1，6G5，7G2，10C5および1G1であった。完全なヒトIgGkサブクローンのうちの３つ（4D1.4，6G5.1および10C5.6）の結合のフローサイトメトリーアッセイを図104に示す。・・・
クローン化されたハイブリドーマによるヒト抗体分泌の分析
　mAbの成長および分泌レベルを比べるために，サブクローンを複製培養物（2x105細胞／mlの初期密度で，24のウェルプレート中，HT培地中）に入れた。７日間毎日，各サブクローンについての複製培養物の１つを取り，細胞数，細胞生存度（トリパンブルー排除による）および上清中のmAbの量（全ヒトγについて定量的ELISAによる）を測定した。・・・
ヒトmAbの精製
　個々のハイブリドーマクローンをHTおよびオリジェンなしの培地中で成長させ，FCSを徐々に減らして，最終１リットル培地中で約２〜３％までにした。ハイブリドーマの生存度が約30％より下に落ちたら，上清を取った。・・・そして５mlのプロテインＡ（ファルマシア）カラムに載せた。カラム体積の３〜５倍のPBSで洗浄した後，ヒトIgGk mAbを，0.1HCl，150 mM NaCl，pH2.8で溶出し，そして直ちに1Mトリス塩基で中和した。・・・次に，OD280を測定し，1.4の吸収係数(absorbtivitycoefficient)を使用して，ヒトIgGの蛋白質濃度を計算した。流れの中にmAbは検出されず，％回収率は93〜100％の範囲であった。３〜６mgの各精製mAbが得られ，純度＞90％であった。
クローン化されたハイブリドーマからのモノクローナル抗体の分析
　mAbの結合の特異性を調べるために，ヒトPBMCをフィコール上で分離し，以下のように染色した。・・・３つの抗体すべてが，ヒトPBMCのCD4画分に特異的に結合することが見出された。・・・３つの抗体のどれも，RPA−T4とエピトープを共にしないが，6G5.1および10C5.6は，Leu3aによって認識されたのと同じ（または隣接する）エピトープを認識するようである。
速度および平衡定数の測定
　ヒトsCD4(2500〜4200RU)を，製品の指示に従って，センサーチップ表面に，アミン基を介して共有結合によって固定した。抗体希釈物を，平衡に到達するまで，抗原結合センサーチップの上を流し，次いで緩衝液のみを流れるようにした。反応，結合および解離の各相について，結合した抗体の画分を時間に対してプロットした。・・・ｋ会合をｋ解離で除して，Kaを誘導した。KCo5／HC2二重トランスジェニック／二重欠失マウスから誘導された５つの異なる精製モノクローナル抗体および，市販の供給源（ベクトンディッキンソン，サン ジョゼ，CA）から得られた１つの精製抗体について測定した速度および親和性定数データを表17に示す。
混合リンパ球反応(MLR)
　KCo5トランスジェニックマウスから誘導されたヒトモノクローナル抗体10C5.6のインビトロでの効力を，マウス抗体Leu3aと比較するために，MLRアッセイを行った。・・・図106に示されたこの実験の結果は，ヒトIgG1k抗体10C5.6は，このアッセイにおいて，ヒトPBMC CD4細胞の機能を妨げることにおいて，少なくともLeu3aと同様に有効であることを示す。」（２３４頁６行〜２４０頁１３行。なお，頁及び行は請求人がイメージデータとして提出したものの中にある数字に基づく。以下同様。）
　
（イ）「実施例40
ヒトIgGカッパ抗CD4モノクローナル抗体の結合特性
　この実施例は，ヒトCD4で免疫したHC2/KCo5/JHD/JCKDトランスジェニックマウスから得たハイブリドーマクローンから誘導されたヒトIgGkモノクローナル抗体の結合特性を提供する。このモノクローナル抗体は，組換えおよび天然ヒトCD4に対して高い結合力および親和性(avidity and affinity)を有することが示された。
  ヒトCD4と反応性のヒトIgGカッパモノクローナル抗体(mAb)を分泌する，10の個々のハイブリドーマ細胞系（1E11，1G2，6G5，10C5，1G1，6C1，2E4，7G2，1F8および4D1）からの細胞を，JHD/JCKD/HC2/KCo5トランスジェニックマウスから誘導した。・・・  　上記した結合力および親和性の測定は，組換えCD4（rCD4）を用いて行った。野生種CD4（nCD4）についてのヒトモノクローナル抗体の結合力を測定するために，変性されるべき抗体を必要としない，追加の結合アッセイを使用した。特異的に，抗体の連続希釈物を，SupT1細胞と共に，６時間氷上でインキュベートし，洗浄し，FITCヤギ抗ヒトFcγと結合したどの抗体をも検出した。Kaを，最大蛍光の１／２を与える抗体の濃度から測定した(４つのパラメータフィットを使用した)。その結果は，10のヒトモノクローナル抗体すべてが，Ka値＞109M-1で，nCD4に非常によく結合したことを証明する(表21)。ほとんどの抗体（キメラLeu3aを含む）が，rCD4よりもnCD4に，あまりよく結合しなかった。このことは，抗原の密度の差ならびに２つの抗原の間の差異に帰することができた。
・・・」（２４０頁１４行〜２４４頁３行）
　
（ウ）「本発明のトランスジェニックマウスを，下記の表Ｂ及ひＣから選択されたひト抗原により免疫する。トランスジェニックマウスは前記ヒト抗原に結合するヒト抗体を生産する。・・・
                             　　　
 表Ｂ
　　　　　　　　　　　　　ヒトＣＤ抗原
 
   標示  
             認識される膜成分            
　　CO4           ClassII／HIVレセプタ，gp59
　　・・・
    　CO8           クラス１レセプタ，gp32．αα又はαβダイマー
    　・・・
  上記表Ｂは不発明のトランスジェニックマウスを免疫し，そしてヒト抗原に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを発生させるためのヒトの分化のクラスター（cluste「of differentiation)（ＣＤ）の例のリストである。  ・・・
  不発明のトランスジェニックマウスを表Ｄから選択されたヒト−病原体又は抗原により免疫する。・・・
                       　　　
 表Ｄ
  　ＥＧＦレセプタ
　　・・・
  　ＰＧＤＦレセプタ
　　・・・
  上記表Ｄは，本発明のトランスジェニックマウスを免疫し，そしてヒト病原体に対するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを発生せしめるための，ヒト病原体及びその抗原の例のリストである。」（２６７頁６行〜２７４頁５行）
　
（２）当審の判断  
　本願発明１は，ヒト免疫グロブリン重鎖トランスジーン及び軽鎖トランスジーンとして，ＨＣ２トランスジーン及びＫＣｏ５トランスジーンを含み，「ＣＤ４，ＣＤ８，ＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲからなる群から選択されるヒト抗原で免疫化後に抗体応答を行い，該抗体応答は，１．１×１０９Ｍ−１の結合力定数（Ｋａ）でヒト抗原に結合する免疫グロブリンを包含する」トランスジェニックマウスに関するものである。
　しかし，本願の発明の詳細な説明には，トランスジェニックマウス（ＨＣ２／ＫＣｏ５）にＣＤ４を免疫して，１．１×１０９Ｍ−１の結合力定数（Ｋａ）で結合するヒトモノクローナル抗体（２Ｅ４．２）を作製したことは記載されている（上記記載事項（イ），表２１）が，ＣＤ４以外のＣＤ８，ＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲを免疫して，同等の親和性定数で結合する免疫グロブリンを作製したことは何ら具体的に記載されていない。
　そして，本願出願時の技術常識を考慮すると，抗原毎に免疫原性は異なるから，トランスジェニックマウス（ＨＣ２／ＫＣｏ５）に，ＣＤ４以外のＣＤ８，ＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲを免疫しても，免疫寛容によって，免疫グロブリンが作製できるとは限らないものである。
　また，仮に免疫グロブリンが作製できたとしても，どのような結合力定数を有するものが得られるかは実際に作製してみなければわからないことであり，作製後，その結合力定数を任意に調節できる技術もないから，同程度以上に高い結合力定数を有する免疫グロブリンが得られるかどうかはわからないものである。さらに，本願発明１は，１．１×１０９Ｍ−１という特定の結合力定数を有する免疫グロブリンに関するものであるから，このような特定の結合力定数を有する免疫グロブリンを作製することは，なおさら困難である。
　したがって，本願の発明の詳細な説明は，本願発明１について，当業者が実施をすることができる程度に明確かつ十分に記載されていないし，その課題を解決できるようにも記載されていない。
　よって，本願は，本願発明１について，特許法第３６条第４項及び第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていない。
　
（３）請求人の主張
　平成２３年７月４日付の意見書において，請求人は，本願明細書に記載された抗原はほんの一例に過ぎず，同様な方法によりＣＤ４以外でも抗原が何であれヒト抗体を作製することが可能であり，そのことをサポートする証拠として，平成２１年６月１７日付手続補正書で，参考資料１及び２を提出した旨を主張している。
　しかし，参考資料１及び２の内容はいずれも，本願出願後に明らかにされたものであり，本願出願日における技術常識を構成するものではないし，出願当初の明細書等に記載された事項でもないから，上記主張をサポートする証拠にはならない。
　さらにいえば，参考資料１及び２で用いられた重鎖トランスジーンはいずれもＨＣｏ７であり，本願発明１の重鎖トランスジーンはＨＣ２であるから，両者の重鎖は異なっている。そして，重鎖は抗体の結合特性を決める重要な要素であるから，異なる重鎖を用いて，同程度の親和性定数を有する免疫グロブリンが作製できるかどうかは不明である。
　また，参考資料１及び２で明らかにされているヒトＣＤ４以外の抗原は，せいぜいＩＬ−８，ＩＲＴＡ−５及びＰＤ−１であり，ＣＤ８，ＥＧＦＲ及びＰＤＧＦＲについては明らかにされておらず，これらに対して所定の免疫グロブリンが作製できるかどうかは不明である。
　したがって，請求人の主張を採用することができない。　
　　　
５．むすび
　
　以上のとおりであるから，本願は，請求項１に係る発明について，特許法第３６条第４項及び第３６条第６項第１号に規定する要件を満たしていないから，特許を受けることができない。そして，他の請求項に係る発明については検討するまでもなく，本願は拒絶をすべきものである。
　
　よって，結論のとおり審決する。