【手続補正書】
【提出日】平成18年1月17日(2006.1.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（i）試験化合物をＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体をコードする組換え核酸を含む遺伝的に修飾された前駆脂肪細胞の集団と接触させ、（ii）前記細胞の脂肪細胞分化を測定または決定し、そして（iii）好ましくは、前記分化を前記試験化合物の不在下で前記の同一の前駆脂肪細胞の脂肪細胞分化と比較する、脂肪細胞分化を調節することのできる化合物を同定するための方法。
【請求項２】
前記試験化合物を脂肪細胞分化プロセスに関与する受容体の少なくとも１つのアクチベータの存在下でＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体を過剰発現する細胞と接触させる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記脂肪細胞分化プロセスに関与する受容体のアクチベータが、ＰＰＡＲ  ＧＡＭＭＡ受容体のアクチベータである、請求項２記載の方法。
【請求項４】
前記脂肪細胞分化プロセスに関与する受容体のアクチベータが、詳細には、ロシグリタゾン、トログリタゾン、エングリタゾン、シグリタゾン、ピオグリタゾン、またはＫＲＰ−２９７等のチアゾリジンジオン、Ｎ−（２−ベンゾイルフェニル）−Ｌ−チロシンおよび１５−デオキシ−δ−１２，１４−プロスタグランジンＪ２からなる群から選択される、請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記試験化合物を脂肪細胞分化プロセスに関与する遺伝子の少なくとも１つのアクチベータの存在下で遺伝的に修飾された前駆脂肪細胞と接触させる、請求項１記載の方法。
【請求項６】
前記脂肪細胞分化プロセスに関与する遺伝子のアクチベータが、ＰＰＡＲγ遺伝子のアクチベータである、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記ＰＰＡＲγ遺伝子のアクチベータが、Ｃ／ＥＢＰβ、Ｃ／ＥＢＰδおよびＡＤＤ１（ＳＲＥＢＰ１ｃ）を含む群から選択される、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体が配列番号４の配列またはそのフラグメントまたはその機能的変異体を含む、請求項１〜７のいずれか一項記載の方法。
【請求項９】
前記組換え核酸が、配列番号３の配列またはそのフラグメントを含む、請求項１〜８のいずれか一項記載の方法。
【請求項１０】
前記組換え核酸が、配列番号１の配列、または配列番号２の配列を含むそのフラグメントをさらに含む、請求項１〜９のいずれか一項記載の方法。
【請求項１１】
前記組換え核酸が、プラスミドベクター内に組み込まれている、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１２】
前記組換え核酸が、ウイルスベクター内に組み込まれている、請求項１〜１０のいずれか一項記載の方法。
【請求項１３】
前記組換え核酸が、細胞ゲノム内に統合されている、請求項１〜１２のいずれか一項記載の方法。
【請求項１４】
前記脂肪細胞分化が、（i）好ましくはオイルレッドＯおよびスーダンブラックからなる群から選択される染色液を用いて分化細胞を染色することによって、（ii）脂肪酸輸送または合成を決定することによって、および／または（iii）好ましくはａＰ２、アジプシンおよびレプチンからなる群から選択されたマーカーである、分化脂肪細胞に特異的な少なくとも１つのマーカーの発現を決定することによって測定される、請求項１〜１３のいずれか一項記載の方法。
【請求項１５】
（i）ＰＰＡＲ  ＧＡＭＭＡ受容体の存在下で、試験化合物と配列番号１、好ましくは配列番号２の配列、またはそれらの機能的等価物を含む核酸とを接触させること、（ii）前記核酸へのＰＰＡＲ  ＧＡＭＭＡ受容体の結合性を検証すること、および場合により（iii）前記結合性を試験化合物の不在下で観察される結合性と比較することを含み、ＰＰＡＲ  ＧＡＭＭＡ受容体の前記結合性を調節する試験化合物が脂肪細胞分化を調節する化合物である、脂肪細胞分化を調節することのできる化合物を同定する方法。
【請求項１６】
試験化合物およびＰＰＡＲ  ＧＡＭＭＡ受容体を（i）配列番号１の配列、好ましくは配列番号２の配列またはそれらの機能的変異体の１つ以上のコピーを含む転写プロモータ、および（ii）レポーター遺伝子を含むレポーター系と接触させ、ＰＰＡＲ  ＧＡＭＭＡ受容体によって誘導されたレポーター遺伝子発現への試験化合物の作用を測定することによって試験化合物の活性を評価することを含む、脂肪細胞分化を調節することのできる化合物を同定する方法。
【請求項１７】
代謝疾患の予防的または治癒的処置のための薬剤を調製するための、請求項１〜１６のいずれか一項記載の方法によって同定された化合物、またはそのアナログの使用。
【請求項１８】
糖尿病、肥満症、インスリン抵抗性またはＸ症候群の予防的または治癒的処置のための薬剤を調製するための、請求項１〜１６のいずれか一項記載の方法によって同定された化合物、またはそのアナログの使用。
【請求項１９】
ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体をコードする組換え核酸を含み、前記組換え核酸が、配列番号１の配列または配列番号２の配列を含むそのフラグメントをさらに含む、遺伝的に修飾された前駆脂肪細胞。
【請求項２０】
前記ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体が、配列番号４の配列またはそのフラグメントまたはその機能的変異体を含む、請求項１９記載の細胞。
【請求項２１】
組換え核酸が、配列番号３の配列またはそのフラグメントを含む、請求項１９または２０記載の細胞。
【請求項２２】
前記組換え核酸が、プラスミドベクター内に組み込まれている、請求項１９〜２１のいずれか一項記載の細胞。
【請求項２３】
前記組換え核酸が、ウイルスベクター内に組み込まれている、請求項１９〜２１のいずれか一項記載の細胞。
【請求項２４】
前記組換え核酸が、細胞ゲノム内に統合されている、請求項１９〜２３のいずれか一項記載の細胞。
【請求項２５】
ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体をコードする組換え核酸を含み、前記組換え核酸が、ウイルスベクター内に組み込まれている、遺伝的に修飾された前駆脂肪細胞。
【請求項２６】
ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体をコードする組換え核酸を含み、前記組換え核酸が、細胞ゲノム内に統合されている、遺伝的に修飾された前駆脂肪細胞。
【請求項２７】
前記ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体が、配列番号４の配列またはそのフラグメントまたはその機能的変異体を含む、請求項２５または２６記載の細胞。
【請求項２８】
前記組換え核酸が、配列番号３の配列またはそのフラグメントを含む、請求項２５〜２７のいずれか一項記載の細胞。
【請求項２９】
前記組換え核酸が、配列番号１の配列、または配列番号２の配列を含むそのフラグメントをさらに含む、請求項２５〜２８のいずれか一項記載の細胞。
【請求項３０】
ＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体をコードする組換え核酸が、前駆脂肪細胞内に導入されている、請求項１９〜２９のいずれか一項記載の前駆脂肪細胞を調製するための方法。
【請求項３１】
前記前駆脂肪細胞が、細胞株３Ｔ３−Ｌ１、３Ｔ３−Ｆ４４２Ａ、ｏｂ１７およびｏｂ１７７１の中から選択される、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記核酸が、プラスミドベクターを用いたトランスフェクションによって導入される、請求項３０または３１のいずれか一項記載の方法。
【請求項３３】
前記組換え核酸を含むプラスミドベクターおよび抗生物質耐性遺伝子を含むプラスミドベクターを用いて細胞を同時トランスフェクションすることを含み、前記細胞が、前記抗生物質に対するそれらの耐性および前記組換え核酸のそれらの発現について選択される、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】
前記核酸が、抗生物質耐性遺伝子をさらに含むプラスミドベクターを用いたトランスフェクションによって導入され、前記細胞が、前記抗生物質に対するそれらの耐性および前記組換え核酸のそれらの発現について選択される、請求項３２記載の方法。
【請求項３５】
前記核酸が、抗生物質耐性遺伝子および真核生物複製起点をさらに含むプラスミドベクターを用いたトランスフェクションによって導入され、細胞が、前記抗生物質に対するそれらの耐性および前記組換え核酸のそれらの発現について選択される、請求項３２記載の方法。
【請求項３６】
前記核酸が、ウイルスベクターを用いた感染によって導入される、請求項３０または３１記載の方法。
【請求項３７】
前記感染が、組換えアデノウイルスまたはレトロウイルスによって実現される、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記組換え核酸が、配列番号３の配列またはそのフラグメントを含む、請求項３０〜３７のいずれか一項記載の方法。
【請求項３９】
組換え核酸が、１つ以上の転写調節領域、典型的には、転写プロモータおよび／またはターミネータをさらに含む、請求項３０〜３８のいずれか一項記載の方法。
【請求項４０】
組換え核酸が、配列番号１の配列、または配列番号２の配列を含むそのフラグメントを含む、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
感染またはトランスフェクション後に、培養中の安定な前駆脂肪細胞株を選択する、請求項３０〜４０のいずれか一項記載の方法。
【請求項４２】
ゲノム内にＲＥＶ−ＥＲＢ  ＡＬＰＨＡ受容体をコードする核酸を含む、欠陥組換えウイルス、好ましくは欠陥組換えアデノウイルスまたはレトロウイルス。