【手続補正書】
【提出日】平成18年4月27日(2006.4.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
悪性腫瘍および／または癌を含む疾病に関連する分子標識分画化を伴う細胞を検出するための方法であって、
ａ）複数の細胞（１）を有する細胞サンプルを取得し、複数の細胞を溶液に懸濁するステップ（１００）と、
ｂ）必要な場合は、細胞サンプルの複数の細胞を固定するステップ（１０２）と、
ｃ）複数の細胞における少なくとも１つの分子標識を標識分子プローブまたは染色剤で標示するステップ（１０３）と、
ｄ）複数の細胞の少なくとも１つの細胞（１）を少なくとも１つの光の点源で照明するステップ（１０４）と、
ｅ）デジタル・アレイ検出器により、少なくとも１つの細胞（１）全体の少なくとも２つの異なる投射像を取得するステップ（１０５）と、
ｆ）少なくとも２つの投射像を照明のばらつきに対して補償するステップ（１０６）と、
ｇ）少なくとも２つの投射像を解析して、密度および位置特徴を有する少なくとも１つの標示分子標識を検出するステップ（１０７）と、
ｈ）少なくとも１つの細胞（１）内の少なくとも１つの分子標識の位置を解析するステップ（１０８）と、
ｉ）密度および位置特徴を用いることによって、少なくとも１つの標示分子標識の分画化を測定するステップ（１０９）と、
ｊ）悪性腫瘍および／または疾病関連分子標識分画化を検出するために、少なくとも１つの選別器により少なくとも１つの標示分子標識の分画化を解析するステップ（１１０）とを含む方法。
【請求項２】
少なくとも２つの異なる投射像を取得するステップ（１０５）は、光トモグラフィ・システムを動作して、少なくとも２つの異なる投射像を取得する処理をさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項３】
光トモグラフィ・システムは、流動光トモグラフィ・システムを含む請求項２に記載の方法。
【請求項４】
細胞サンプルは、痰、気管支胞洗浄液、頬切屑、尿、頸切屑および分泌物、乳頭吸引液、乳頭洗浄液、便、ならびに目標器官および血液からの微細針よりなる群から選択される少なくとも１つの単離検体を含む請求項１に記載の方法。
【請求項５】
複数の細胞（１）から細胞質（１８）を分離するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
癌は、肺癌、膀胱癌、子宮頸癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、卵巣癌および血液細胞癌よりなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項７】
分子プローブは、抗体、特異的結合タンパク質、レクチン、発色団で標識された核酸プローブ、蛍光体、発色団を生成できる酵素、および蛍光体を生成できる酵素よりなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項８】
少なくとも１つの標示分子標識は、ｐＲｂ、ｐ５３／５３ＢＰ１、Ｅ２Ｆ、ＰＴＥＮ、ＳＡＭ６８、ＢＲＣＡ１、ｃ−ｍｙｃおよびメチルＣｐＧよりなる群から選択される請求項１に記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの標示分子標識は、癌を有する個人から採取した細胞（１）または細胞核（１９）と癌を有さない個人から採取した細胞（１）または細胞核（１９）との間で異なる分画化を示す請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
画像解析を用いて、少なくとも１つの標示分子標識がその中で生じる少なくとも１つの細胞分画（１８、１９、３６）の境界面（１２、１３）を復元するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
分画化を測定するステップは、少なくとも２つの投射像内に位置する一致した境界面（１２、１３）内に位置する少なくとも１つの標示分子標識によって形成された密度特徴の構造を解析するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
少なくとも２つの投射像内の境界面（１２、１３）を比較して、少なくとも２つの投射像の間の一組の一致した境界面（１２、１３）を確認するステップをさらに含む請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
分画化を測定するステップ（１０９）は、復元された三次元空間における少なくとも２つの標示標識の共存を確認するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
分画化を測定するステップ（１０９）は、二次元空間における少なくとも２つの標示標識の共存を確認するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
分画化を測定するステップ（１０９）は、互いに関係する少なくとも２つの標示標識の密度特徴の構造を解析するステップをさらに含む請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
密度特徴の構造は、光学密度（ＯＤ）変動、ＯＤ歪み、ＯＤレンジ、ＯＤ平均値、ＯＤ最大値、光点の密度、高平均距離、中／高平均距離、相関性、均一性、エントロピ、フラクタル寸法、窪み、最近接解析、接続成分、最近接解析および空間密度周波数空間における高調波よりなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
分画化を測定するステップ（１０９）は、メチルＣｐＧと、メチルＣｐＧ結合タンパク質および核酸プローブで標示される目標遺伝子のプロモータ領域に対して特異的なＤＮＡ配列とを共存させることによって、腫瘍抑圧遺伝子のプロモータ領域におけるメチル化ＣｐＧアイランドを検出するステップをさらに含む請求項１３に記載の方法。
【請求項１８】
分画化を測定するステップ（１０９）は、メチルＣｐＧと、メチルＣｐＧ結合タンパク質および核酸プローブで標示される目標遺伝子のプロモータ領域に対して特異的なＤＮＡ配列とを共存させることによって、腫瘍抑圧遺伝子のプロモータ領域におけるメチル化ＣｐＧアイランドを検出するステップをさらに含む請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
悪性腫瘍および癌を含む疾病に関連する分子標識分画化を伴う細胞を検出するための方法であって、
ａ）複数の細胞を有する細胞サンプルを取得し、複数の細胞を溶液に懸濁するステップ（１００）と、
ｂ）必要な場合は、細胞サンプルの複数の細胞を固定するステップ（１０２）と、
ｃ）複数の細胞における少なくとも１つの分子標識を標識分子プローブまたは染色剤で標示するステップ（１０３）と、
ｄ）複数の細胞の少なくとも１つの細胞を少なくとも１つの光の点源で照明するステップ（１０４）と、
ｅ）デジタル・アレイ検出器により少なくとも１つの細胞（１）全体の少なくとも１つの投射像を取得するステップ（１０５）と、
ｆ）照明のばらつきに対して少なくとも１つの投射像を補償するステップ（１０６）と、
ｇ）少なくとも１つの投射像を解析して、少なくとも１つの標示分子標識を検出するステップ（１０７）と、
ｈ）少なくとも１つの細胞（１）内の二次元（２Ｄ）空間における少なくとも１つの分子標識の位置を解析するステップ（１０８）と、
ｉ）密度および位置特徴を用いることによって、少なくとも１つの標示分子標識の分画化を測定するステップ（１０９）と、
ｊ）悪性腫瘍および／または疾病関連分子標識分画化を検出するために、少なくとも１つの選別器により少なくとも１つの標示分子標識の分画化を解析するステップ（１１０）とを含む方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの投射像を取得するステップ（１０５）は、光トモグラフィ・システムを動作して、少なくとも２つの投射像を取得する処理をさらに含む請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
光トモグラフィ・システムは、流動光トモグラフィ・システムを含む請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
細胞サンプルは、痰、気管支胞洗浄液、頬切屑、尿、頸切屑および分泌物、乳頭吸引液、乳頭洗浄液、便、ならびに目標器官および血液からの微細針よりなる群から選択される少なくとも１つの単離検体を含む請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
複数の細胞（１）から細胞質（１８）を分離するステップをさらに含む請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
癌は、肺癌、膀胱癌、子宮頸癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、卵巣癌および血液細胞癌よりなる群から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
分子プローブは、抗体、特異的結合タンパク質、レクチン、発色団で標識された核酸プローブ、蛍光体、発色団を生成できる酵素、および蛍光体を生成できる酵素よりなる群から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも１つの標示分子標識は、ｐＲｂ、ｐ５３／５３ＢＰ１、Ｅ２Ｆ、ＰＴＥＮ、ＳＡＭ６８、ＢＲＣＡ１、ｃ−ｍｙｃおよびメチルＣｐＧよりなる群から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１つの標示分子標識は、癌を有する個人から採取した細胞（１）または細胞核（１９）と癌を有さない個人から採取した細胞（１）または細胞核（１９）との間で異なる分画化を示す請求項１９に記載の方法。
【請求項２８】
画像解析を用いて、少なくとも１つの標示分子標識がその中で生じる少なくとも１つの細胞分画（１８、１９、３６）の境界面（１２、１３）を復元するステップをさらに含む請求項１９に記載の方法。
【請求項２９】
分画化を測定するステップ（１０９）は、二次元空間における少なくとも２つの標示標識の共存を確認するステップをさらに含む請求項１９に記載の方法。
【請求項３０】
分画化を測定するステップ（１０９）は、互いに関係する少なくとも２つの標示標識の密度特徴の構造を解析するステップをさらに含む請求項１９に記載の方法。
【請求項３１】
構造解析の構造は、光学密度（ＯＤ）変動、ＯＤ歪み、ＯＤレンジ、ＯＤ平均値、ＯＤ最大値、光点の密度、高平均距離、中／高平均距離、相関性、均一性、エントロピ、フラクタル寸法、窪み、最近接解析、接続成分、最近接解析および空間密度周波数空間における高調波を含むが、それらに限定されない請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
分画化を測定するステップ（１０９）は、メチルＣｐＧと、メチルＣｐＧ結合タンパク質および核酸プローブで標示される目標遺伝子のプロモータ領域に対して特異的なＤＮＡ配列とを共存させることによって、腫瘍抑圧遺伝子のプロモータ領域におけるメチル化ＣｐＧアイランドを検出するステップをさらに含む請求項３１に記載の方法。