【手続補正書】
【提出日】平成17年11月17日(2005.11.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【書類名】明細書
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の式１または式２を満たし、IP＋SC点が4または4を越えるインビボ生物活性をもつ化合物：
【化１】
2002504529.tif 000001
式１において、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または芳香環の炭素原子であり、Xは水素またはハロゲンのいずれかであり、Yは一重結合または二重結合であり、Rは炭素または窒素であり、R1は水素または脂肪族の基であり、R2はRに対してメタまたはパラのいずれかであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は1個から約30個の炭素原子を含み、かつR3はRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、少なくともA、BまたはXが水素以外の場合は、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、A、BまたはXが水素の場合は、水素およびハロゲンからなる群より選択される化合物であり、A、BおよびXが水素でありR2がRに対してパラ位にあるアミノのときは、R3はヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選択される；
【化２】
2002504529.tif 000002
式２において、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または両方とも芳香環の炭素原子であり、Xは水素またはハロゲンのいずれかであり、Yは一重結合または二重結合のいずれかであり、Rは炭素または窒素のいずれかであり、R1は水素または約1個から約30個の炭素原子を有する脂肪族の基であり、R2はRに対してメタまたはパラであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は約1〜30個の炭素原子を含み、かつR3はRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される化合物である。
【請求項２】
IP＋SC点が10または10を越える、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
IP＋SC点が16または16を越える、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
式１に関して、AおよびBの両方が水素であり、Yが一重結合であり、かつR1が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
R2が約3個から約16個の炭素原子を含む脂肪族の基、約3個から約16個の炭素原子を含む脂肪族アルコール、約3個から約16個の炭素原子を含む脂肪族アミド、約3個から約16個の炭素原子を含む脂肪族エステル、約3個から約16個の炭素原子を含む脂肪族ケトン、およびホスホン酸エステルからなる群より選択される、請求項４記載の化合物。
【請求項６】
R2がRに対してパラである、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
R2がRに対してパラであって、低級アルキルエステル、アダマンチルエステル、アダマンチルアルキルエステル、アダマンチルアミノ、アダマンチルアルキルアミノ、低級アルキルアルコール、低級ハロアルキルアルコール、低級アルキルアミド、低級アルキルケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択される、請求項４記載の化合物。
【請求項８】
R2がアダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択される、請求項４記載の化合物。
【請求項９】
4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-アダマンチルメチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、5'-クロロ-4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-(トリフルオロメチルエタノール)-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-フェニルホスホネート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-5-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-クロロ-5'-メチルベンゾエート-1'-N-3-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、5'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-5-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-t-ブチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-ジイソプロピルベンズアミド-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、および1'-アセトフェノン-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミンからなる群より選択される、請求項４記載の化合物。
【請求項１０】
下記の構造式を有する、請求項４記載の化合物。
【化３】
2002504529.tif 000003
【請求項１１】
下記の構造式を有する、請求項４記載の化合物。
【化４】
2002504529.tif 000004
【請求項１２】
式１に関してAおよびBが芳香環の炭素原子である、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
下記の構造式を有する、請求項１２記載の化合物。
【化５】
2002504529.tif 000005
【請求項１４】
式２に関して、AおよびBの両方が水素であり、Yが一重結合であり、かつR1が水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
R2がアミノ、約3個から約30個の炭素原子を有する脂肪族アミノ、約3〜30個の炭素原子を有する脂肪族の基、低級アルキルエステル、アダマンチルエステルおよびアダマンチルからなる群より選択される、請求項１４記載の化合物。
【請求項１６】
R2が分岐鎖低級アルキルエステル、アダマンチルエステル、またはアダマンチルアルキルエステルからなる群より選択される、請求項１４記載の化合物。
【請求項１７】
R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステルおよびt-ブチルエステルからなる群より選択される、請求項１４記載の化合物。
【請求項１８】
3'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン、4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン、4'-t-ブチルベンゾエート-1'-N-3-ブロモ-p-キノン-2-メチルアミン、3'-クロロ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミンおよび3'-クロロ-4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミンからなる群より選択される、請求項１４記載の化合物。
【請求項１９】
式２に関して、AおよびBが芳香環の炭素原子である、請求項１記載の化合物。
【請求項２０】
下記の構造式を有する、請求項１９記載の化合物。
【化６】
2002504529.tif 000006
【請求項２１】
下記の式１または式２で表される化合物：
【化７】
2002504529.tif 000007
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または芳香環の炭素原子であり、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合または二重結合であり、Rが炭素または窒素であり、R1が水素または脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラのいずれかであって、インビボ生物活性を維持するのに十分な大きさであり、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は1個から約30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、少なくともA、BまたはXの１つが水素以外の場合は、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、A、BまたはXが水素の場合は、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、A、BおよびXが水素でありR2がRに対してパラ位にあるアミノのときは、R3はヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選択される；
【化８】
2002504529.tif 000008
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または両方とも芳香環の炭素原子であり、Xは水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合または二重結合のいずれかであり、Rが炭素または窒素のいずれかであり、R1が水素または約1個から約30個の炭素原子を有する脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は約1〜30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【請求項２２】
式１に関して、R2がカルボニルを含み、かつインビボ加水分解を実質的に防ぐのに十分な立体的障害である、請求項２１記載の化合物。
【請求項２３】
式１に関して、R2がカルボニルを含み、かつカルボニルカーボン隣接の十分な立体的即時障害を含む、請求項２１記載の化合物。
【請求項２４】
R2が、カルボニルから１個または２個以下の原子が除去された該カルボニルに関連する位置で立体的障害である、請求項２３記載の化合物。
【請求項２５】
下記の式１または式２で表される化合物：
【化９】
2002504529.tif 000009
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または芳香環の炭素原子であり、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合または二重結合であり、Rが炭素または窒素であり、R1が水素または脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラのいずれかであって、インビボ生物活性を維持するのに十分な大きさであり、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし、R2がアミノである場合R2はRに対してメタであり、脂肪族の基は1個から約30個の炭素原子を含み、かつR3が水素であり、
【化１０】
2002504529.tif 000010
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または両方とも芳香環の炭素原子であり、Xは水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合または二重結合のいずれかであり、Rが炭素または窒素のいずれかであり、R1が水素または約1個から約30個の炭素原子を有する脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は約1〜30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【請求項２６】
IP＋SC点が10または10を越える、請求項２５記載の化合物。
【請求項２７】
IP＋SC点が16または16を越える、請求項２５記載の化合物。
【請求項２８】
下記の式１または式２で表される化合物：
【化１１】
2002504529.tif 000011
式１において、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xは水素またはハロゲンのいずれかであり、Yは一重結合であり、Rは窒素であり、R1は水素であり、R2はRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択され、かつR3はRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される化合物であり、
【化１２】
2002504529.tif 000012
式２において、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xは水素またはハロゲン原子のいずれかであり、Yは一重結合であり、Rは窒素であり、R1は水素であり、R2はRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステルおよびt-ブチルエステルからなる群より選択され、かつR3はRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される化合物である。
【請求項２９】
下記の式１または式２を満たし、IP＋SC点が4または4を越えるインビボ生物活性をもつ化合物の有効な量を含む組成物：
【化１３】
2002504529.tif 000013
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または芳香環の炭素原子であり、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合または二重結合であり、Rが炭素または窒素であり、R1が水素または脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラのいずれかであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は1個から約30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、
【化１４】
2002504529.tif 000014
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または両方とも芳香環の炭素原子であり、Xがハロゲン原子であり、Yが一重結合または二重結合のいずれかであり、Rが炭素または窒素のいずれかであり、R1が水素または約1個から約30個の炭素原子を有する脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は約1〜30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【請求項３０】
式１の化合物および／または式２の化合物の有効な量を含む、請求項２９記載の組成物であって、
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合であり、Rが窒素であり、R1が水素であり、R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択され、かつR3がRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xが水素またはハロゲン原子のいずれかであり、Yが一重結合であり、Rが窒素であり、R1が水素であり、R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステルおよびt-ブチルエステルからなる群より選択され、かつR3がRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される組成物。
【請求項３１】
化合物が4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-アダマンチルメチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、5'-クロロ-4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、5'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-(トリフルオロメチルエタノール)-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-フェニルホスホネート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-5-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-クロロ-5'-メチルベンゾエート-1'-N-3-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、5'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-5-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-t-ブチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、4'-ジイソプロピルベンズアミド-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、1'-アセトフェノン-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン、3'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン、4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン、4'-t-ブチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン、3'-クロロ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン、3'-クロロ-4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミンおよびその混合物からなる群より選択される、請求項２９記載の組成物。
【請求項３２】
不活性担体、賦形剤、診断法、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、滑沢剤、他の活性成分、薬学的組成物の製剤において通常用いられる他の物質、およびその混合物をさらに含む、請求項２９記載の組成物。
【請求項３３】
生細胞増殖を阻害するための薬学的組成物であって、構造式１および／または２を有する化合物の有効な量を含む組成物。
【化１５】
2002504529.tif 000015
【化１６】
2002504529.tif 000016
【請求項３４】
不活性担体、賦形剤、診断法、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、滑沢剤、他の活性成分、薬学的組成物の製剤において通常用いられる他の物質、およびその混合物をさらに含む、請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】
下記の式１もしくは式２を満たし、IP＋SC点が4または4を越えるインビボ生物活性をもつ化合物を有効成分として含有する、生細胞増殖阻害剤：
【化１７】
2002504529.tif 000017
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または芳香環の炭素原子であり、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合または二重結合であり、Rが炭素または窒素であり、R1が水素または脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラのいずれかであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は1個から約30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、
【化１８】
2002504529.tif 000018
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または両方とも芳香環の炭素原子であり、Xがハロゲン原子であり、Yが一重結合または二重結合のいずれかであり、Rが炭素または窒素のいずれかであり、R1が水素または約1個から約30個の炭素原子を有する脂肪族の基であり、R2がRに対してメタまたはパラであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は約1〜30個の炭素原子を含み、かつR3がRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【請求項３６】
化合物が式１または式２を満たす、請求項３５記載の生細胞増殖阻害剤：
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合であり、Rが窒素であり、R1が水素であり、R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択され、かつR3がRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xが水素またはハロゲン原子のいずれかであり、Yが一重結合であり、Rが窒素であり、R1が水素であり、R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステルおよびt-ブチルエステルからなる群より選択され、かつR3がRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される方法。
【請求項３７】
前記生細胞増殖阻害剤が、局所、経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、腹腔内、病巣内または静脈内投与用である、請求項３５記載の生細胞増殖阻害剤。
【請求項３８】
有効な量が化合物の約0.1グラムから約3.0グラムを含む、請求項３５記載の生細胞増殖阻害剤。
【請求項３９】
有効な量が、１回の投与につき被験者の体重1kgあたり約30mgから１回の投与につき被験者の体重1kgあたり約50mgを含む、請求項３５記載の生細胞増殖阻害剤。
【請求項４０】
化合物が下記の構造式を有する、請求項３５記載の生細胞増殖阻害剤。
【化１９】
2002504529.tif 000019
【請求項４１】
化合物が下記の構造式を有する、請求項３５記載の生細胞増殖阻害剤。
【化２０】
2002504529.tif 000020
【請求項４２】
下記の式１もしくは式２を有する化合物を、約0.1グラムから約3.0グラム含有するように製剤化した、局所、経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、腹腔内、病巣内または静脈内投与用の生細胞増殖阻害剤：
【化２１】
2002504529.tif 000021
式１において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xが水素またはハロゲンのいずれかであり、Yが一重結合であり、Rが窒素であり、R1が水素であり、R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択され、かつR3がRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択され、
【化２２】
2002504529.tif 000022
式２において、化合物はAおよびBが水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され、Xが水素またはハロゲン原子のいずれかであり、Yが一重結合であり、Rが窒素であり、R1が水素であり、R2がRに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステルおよびt-ブチルエステルからなる群より選択され、かつR3がRに対してオルトまたはメタのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【請求項４３】
化合物が下記の構造式を有する、請求項４２記載の生細胞増殖阻害剤。
【化２３】
2002504529.tif 000023
【請求項４４】
化合物が下記の構造式を有する、請求項４２記載の生細胞増殖阻害剤。
【化２４】
2002504529.tif 000024
【請求項４５】
１回の投与につき被験者の体重1kgあたり約30mgから１回の投与につき被験者の体重1kgあたり約50mgの化合物が被験者に投与される、請求項３８記載の生細胞増殖阻害剤。
【請求項４６】
前記生細胞増殖阻害剤が、抗腫瘍剤である、請求項３５〜４５のいずれかに記載の生細胞増殖阻害剤。
【請求項４７】  前記腫瘍が、白血病、黒色腫、肺癌、結腸癌、腎臓癌、乳癌、卵巣癌、脳腫瘍、前立腺癌または中枢神経系癌である、請求項４６に記載の生細胞増殖阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
発明の分野
本発明は、プロテインキナーゼ阻害剤、特にラベンダスティンAの二置換類似体、これらの阻害剤を含む薬学的組成物、ならびにこれらの類似体および組成物を用いて被験者を治療する方法に関する。
【０００２】
発明の背景
細胞の増殖は、プロモーターおよびサプレッサー遺伝子（癌遺伝子）の蛋白質産物の対立する作用を通して平衡状態に保たれる（細胞分裂停止）と考えられている。プロモーターまたはサプレッサー遺伝子の変異によって、正常な増殖促進または増殖低下機能を遂行することができない、変異した蛋白質産物が産生されることになる。これらの蛋白質はそれ自体では活性がない。代わりに、これらの蛋白質は、（1）ATPもしくはGTPなどのヌクレオシド三リン酸および蛋白質チロシンキナーゼなどのいくつかのキナーゼの一つによるリン酸化、または（2）自己リン酸化、すなわち蛋白質自体によって触媒的に仲介されるリン酸化により、活性化される。これらのリン酸化は一般に、蛋白質のチロシン、セリンまたはトレオニン残基の水酸基で起こる。変異遺伝子のリン酸化された蛋白質産物は、その正常な機能を遂行することができない。これら変異蛋白質のリン酸化を阻害することは、細胞増殖の制御の一助となると考えられる。
【０００３】
蛋白質チロシンキナーゼ（PTK）は、細胞の活性化、分化および有糸分裂誘発に関連する重要なシグナリング事象を仲介する。例えば、Smythら「蛋白質-チロシンキナーゼ阻害剤としてのラベンダスティンAの非アミン型類似体」、J. Med. Chem.、36：3010〜3014、3010（1993）；およびGazitら「チロホスティン。2。EGF受容体およびErb2/neuチロシンキナーゼの強力な阻害剤としての複素環α-置換ベンジリデンマロノニトリルチロホスティン」、J. Med. Chem.、34：1896〜1907、1896（1991）を参照されたい。異常発現された、または脱制御された蛋白質チロシンキナーゼからのマイトジェンシグナルの生成が、腫瘍化に関連する増殖制御の欠如において重要な役割を果たしていると考えられている。Traxlerら「スルホニルベンゾイル-ニトロスチレン：EGF-受容体チロシン蛋白質キナーゼの二基質型阻害剤」、J. Med. Chem.、34：2328〜2337、2328（1991）。
【０００４】
PTK阻害剤は、抗増殖治療法として、ならびにチロシンリン酸化が果たす生化学的役割の薬学的プローブとして有用である。J. Med. Chem.、36、上記、p.3010。PTK阻害剤はまた、慢性骨髄性白血病（CML）を治療するためにも有用であると考えられる。CML患者は、第9染色体と第22染色体との間の相互転座が原因の細胞遺伝学的異常を有することが多い。Kaurら、「チロホスティンによる増殖阻害：K562慢性骨髄性白血病におけるp210bcr-abl自己キナーゼ活性に対する作用との相関」、Anti-Cancer Drugs、5：213〜222、213（1994）。転座により、c-abl非受容体蛋白質チロシンキナーゼの始原癌遺伝子が、第9染色体上のその正常な位置から第22染色体上のbcr遺伝子へと移される。同上。bcr-abl融合遺伝子の8kbのmRNA転写物が、構成性蛋白質チロシンキナーゼ活性を示す210kDaのキメラbcr-abl融合蛋白質（p210bcr-abl）に翻訳される。正常で、転座していないc-abl始原癌遺伝子産物は、p210bcr-ablに比べて構成性蛋白質チロシンキナーゼ（PTK）活性がかなり低い。同上。これにより、p210bcr-ablに特異的なPTK阻害剤がCML患者にとって有用となる可能性が高まる。
【０００５】
合成チロシンキナーゼ阻害剤である特定のチロホスティンが、抗増殖メカニズムを有している。例えば、AG957は、p210bcr-ablとその関連するシグナリング分子を含む共有結合付加物の生成を誘導するようである。Kaur G.およびSausville E.、「チロホスティンAG957で処理したK562細胞におけるp210bcr-ablの物理的状態の変化」、Anti-Cancer Drugs、7：815〜824、816（1996）。AG957はまた、T細胞、抗原によるシグナルトランスダクション、およびJurkat T-ALL（急性リンパ性白血病）細胞における細胞増殖の有効な阻害剤でもある。AG957は明らかに、MAPキナーゼの活性化およびp210cbl始原癌遺伝子のリン酸化を阻害することによって、チロシンキナーゼのシグナリングに影響している。チロホスティンには少なくとも次の四つのクラスがある。すなわち、（1）ベンゼンマロニトリル化合物；（2）S-アリールベンゼンマロニトリル化合物；（3）二基質キノリン化合物；および（4）ラベンダスティン-A様化合物である。同上。ラベンダスティンA、すなわち5-[(2,5-ジヒドロキシ-ベンジル)-(2-ヒドロキシ-ベンジル)-アミノ]-2-ヒドロキシ-安息香酸を、化合物１として下記に示す。
【化２５】
2002504529.tif 000025
三置換アミンであるラベンダスティンAは、上皮増殖因子受容体（EGFR）PTKの天然に産する阻害剤で、ストレプトミセス・グリセオラベンダス（Streptomyces griseolavendus）から最初に単離された強力な蛋白質チロシンキナーゼ阻害剤である。Devrajら「ラベンダスティンAおよび特定の生物活性類似体の多用途固相合成」、J. Org. Chem.、61：26（1996）。ラベンダスティンAの活性薬物体は、より単純化されたベンジルアミンである化合物２からなる。
【化２６】
2002504529.tif 000026
化合物２は、エルブスタチン（化合物３）の2,5-ジヒドロキシフェニル環とピセアタノール（化合物４）のジアリール型を含み、これらの化合物も共に天然のPTK阻害剤である。
【化２７】
2002504529.tif 000027
【化２８】
2002504529.tif 000028
【０００６】
ヒドロキシル化された2-(5'サリチル)ナフタレンの蛋白質チロシンキナーゼ阻害剤としての可能性が調査されている。Smythら「蛋白質チロシンキナーゼ阻害剤としてのヒドロキシル化2-(5'サリチル)ナフタレン」、J. Med. Chem.、36：3015〜3020（1993）。化合物５はSmythらによって製造されたヒドロキシル化2-(5'サリチル)ナフタレンの一例である。
【化２９】
2002504529.tif 000029
しかし、Smythらは、「得られたサリチル含有二環式化合物は、免疫沈降させたp56lckPTK製剤の自己リン酸化に対して試験したところ、極度に低い阻害能を示した」と結論付けた。同上、要旨、p.3017、7〜9行目。
【０００７】
PTK阻害剤の新規な設計は、PTKや、これら阻害剤と酵素との相互作用に関する三次元情報の不足によって妨げられている。Burke T.、「蛋白質チロシンキナーゼ：抗癌剤開発の標的としての可能性」、Stem Cells、12：1〜6、1（1994）。Burkeは、抗増殖活性のメカニズムが良く理解されていないことが主な原因となって、この分野の研究者らはPTK阻害剤型抗増殖剤の開発において大きな困難に直面していると結論付けた。同上、p.4。これにより、新しいPTK阻害剤型抗増殖剤の開発が妨げられている。その結果、CMLなどの疾患を治療するために有用な新規PTK阻害剤型抗増殖剤がいまだ必要とされている。
【０００８】
概要
本発明の二置換ラベンダスティンA類似体は、抗増殖活性を有するPTK阻害剤である。本発明の好ましい化合物は、下記の式１または式２のいずれかを満たすものであるが、これらに限定されることはない。
【化３０】
2002504529.tif 000030
【化３１】
2002504529.tif 000031
【０００９】
式１に関して、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または芳香環の炭素原子であり；Xは水素またはハロゲンのいずれかであり；Yは一重結合または二重結合であり；Rは炭素または窒素であり；R1は水素または脂肪族の基であり；R2はRに対してメタまたはパラのいずれかであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され；かつR3はRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択されるが、これらに限定されることはない。式１を満たす好ましい化合物は、Rに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択されるR2を有する。現在好ましい化合物は、インビボ生物活性に基づき、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミンおよび4'-アダマンチルメチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミンである。
【００１０】
式２に関して、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、または両方とも芳香環の炭素原子であり；Xは水素またはハロゲンであり；Yは一重結合または二重結合のいずれかであり；Rは炭素または窒素のいずれかであり；R1は水素または脂肪族の基であり；R2はRに対してメタまたはパラであって、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択されるが、やはりこれらに限定されることはない。式２を満たし、Rに対してパラであって、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、およびt-ブチルエステルからなる群より選択されるR2を有する化合物で、良好な生物学的結果が観察されている。
【００１１】
本発明はまた、二置換ラベンダスティンA類似体の有効な量または二置換ラベンダスティンA類似体の混合物の有効な量を含む薬学的組成物も提供する。このような組成物はまた、他の活性成分、薬学的組成物の製剤において通常用いられる他の物質、およびその混合物も含むことができる。
【００１２】
本発明の化合物および組成物は、被験者を治療するために用いて、例えば増殖性疾患の治療において生細胞の増殖を阻害することができる。この方法の好ましい態様は、式１または式２を満たす一つもしくは複数の化合物、または一つもしくは複数の化合物を含む組成物をまず提供することを含むが、これに限定されることはない。次いで、化合物、化合物の混合物、または一つもしくは複数の化合物を含む組成物の有効な量を、被験者に、好ましくは経口または静脈内投与する。
【００１３】
詳細な説明
I.  化合物
本発明の化合物は下記の式１または式２のいずれかを満たす。当業者であれば、式２が式１のキノン誘導体であることを理解すると思われる。
【化３２】
2002504529.tif 000032
【化３３】
2002504529.tif 000033
【００１４】
式１に関して、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、もしくは両方とも芳香環、好ましくはベンゼン環の炭素原子であり、またはAおよびBの一つもしくは両方が複素環の酸素もしくは窒素である。AおよびBは好ましくは両方とも水素、またはベンゼン環の炭素原子のいずれかである。Xは水素または臭素もしくは塩素などのハロゲンのいずれかである。Yは一重結合または二重結合であり、好ましくは一重結合である。Rは炭素または窒素のいずれかであり、好ましくは窒素である。R1は水素または脂肪族の基であり、好ましくは低級アルキル基である。本明細書で用いられる「低級」とは、10個以下の炭素原子を有する炭素鎖を意味する。「低級アルキル」とは、10個以下の炭素原子を有する炭素鎖を意味し、直鎖、分岐鎖、およびすべての立体異性体も含む。R2は典型的にはRに対して3または4位、すなわちRに対してメタまたはパラであって、好ましくはパラであり、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトン、カルボキシル、およびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は1個から約30個の炭素原子、好ましくは約3個から約30個の炭素原子、より好ましくは約3個から約16個の炭素原子を含む。R2は好ましくは、低級アルキルエステル、アダマンチルエステル、アダマンチルメチルエステルなどのアダマンチルアルキルエステル、アダマンチルアミノ、アダマンチルアルキルアミノ、低級アルキルおよびハロアルキルアルコール、低級アルキルアミド、低級アルキルケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択される。R3はRに対してオルト、メタまたはパラのいずれかであって、好ましくはメタまたはパラ、より好ましくはメタであり、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【００１５】
式１を満たす化合物で、良好な生物学的結果が観察されている。特定の代表的化合物が表１に列挙されており、表中、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択され；Xは水素またはハロゲンであり；Yは一重結合であり；Rは窒素であり；R1は水素であり；R2はアダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステル、t-ブチルエステル、ジイソプロピルアミド、トリフルオロメチルイソプロピルアルコール、ホスホン酸エステルおよびメチルケトンからなる群より選択され；かつR3は水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。式１を満たす化合物の特定の例には、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物６）、4'-アダマンチルメチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物７）、5'-クロロ-4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物８）、5'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物９）、4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-5-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１０）、4'-フェニルホスホネート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１１）、5'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-5-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１２）、4'-クロロ-5'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-3-ブロモ-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１３）、4'-t-ブチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１４）、4'-(1-トリフルオロエタノール)-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１５）、4'-ジイソプロピルベンズアミド-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１６）、および1'-アセトフェノン-1'-N-1,4-ジヒドロキシベンジルアミン（化合物１７）が含まれる。
【００１６】
【表１】
2002504529.tif 000034
【００１７】
化合物１８（4'-メチルベンゾエート-1'-N-1,4-ジヒドロキシナフチル-2-メチルアミン）および１９（4'-メチルベンゾエート)-1'-N-1,4-メチルナフトキノンアミン）は、式１を満たす化合物で、AおよびBが芳香環の炭素原子である化合物の例である。
【化３４】
2002504529.tif 000035
【化３５】
2002504529.tif 000036
【００１８】
式２に関して、AおよびBは水素およびハロゲンからなる群より個別に選択されるか、もしくは両方とも芳香環の炭素原子であり、またはAおよびBの一つもしくは両方が複素環の酸素もしくは窒素である。Xは水素または臭素もしくは塩素などのハロゲンである。Yは一重結合または二重結合のいずれかであり、好ましくは一重結合である。Rは炭素または窒素のいずれかであり、好ましくは窒素である。R1は水素または低級脂肪族の基であり、好ましくは低級アルキル基である。R2は典型的にはRの位置に対して3または4位、すなわちRに対してメタまたはパラであって、好ましくはRに関してパラであり、アミノ、脂肪族アミン、脂肪族アルコール、脂肪族アミド、脂肪族エステル、脂肪族ケトンおよびホスホン酸エステルからなる群より選択され、ただし脂肪族の基は好ましくは約1〜30個の炭素原子、好ましくは約3個から約30個の炭素原子、より好ましくは約3個から約16個の炭素原子を含む。R2は好ましくは、アダマンチルエステル、-CH2アダマンチルエステルなどのアルキルアダマンチルエステル、イソプロピルエステル、メチルエステルおよびt-ブチルエステルからなる群より選択される。R3はRに対して2、3または4位、すなわちRに対してオルト、メタまたはパラであってもよく、好ましくはRに対してメタであり、水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。
【００１９】
式２を満たす化合物で、良好な生物学的結果が観察されている。特定の代表的化合物が表２に列挙されており、表中、AおよびBは水素であり；Xは水素またはハロゲンであり；Yは一重結合であり；Rは窒素であり；R1は水素であり；R2は脂肪族エステルからなる群より選択され；かつR3は水素、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群より選択される。式２を満たす特定の化合物は、3'-ヒドロキシ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン（化合物２０）、4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン（化合物２１）、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン（化合物２２）、4'-アダマンチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン（化合物２３）、4'-t-ブチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン（化合物２４）、3'-クロロ-4'-メチルベンゾエート-1'-N-2-ブロモ-p-キノン-3-メチルアミン（化合物２５）および3'-クロロ-4'-イソプロピルベンゾエート-1'-N-p-キノン-2-メチルアミン（化合物２６）からなる群より選択することができるが、これらに限定されることはない。
【００２０】
【表２】
2002504529.tif 000037
【００２１】
式１および２を満たすとして上に列挙した化合物は、窒素原子であるRを有している。Rが炭素原子である化合物も製造されており、代表的化合物が表３に列挙されている。
【００２２】
【表３】
2002504529.tif 000038
【００２３】
II.  化合物の合成
式１および２を満たす化合物は一般に、結合Yを形成することによって分子の半分と半分を連結することにより合成することができる。例えば、式１および２のR＝Nの場合、Y結合は2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（化合物２７）を所望の置換基、例えばエステルを有するフェニルアミン（化合物２８）と縮合させることによって形成することができる。これは、2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒドをNaHCO3を含むエタノールに溶解し、これをほぼ等モル量の所望のフェニルアミンと反応させることによって達成され、イミン（化合物２９）を生成した。次いで、このイミンを接触水素添加（H2/Pd/C）してアミン（化合物３０）を生成した。下記のスキーム１および実施例１を参照されたい。
【化３６】
2002504529.tif 000039
したがって、4-ヒドロキシフェノールまたはキノン誘導体を、結合Yの形成を通してアリールアミノ脂肪族エステル、アリールアミノ脂肪族アルコール、アリールアミノ脂肪族ケトン、アリールアミノ脂肪族アミドなどに結合し、式１および２を満たす化合物を生成することができる。
【００２４】
式１および２のR＝Cの場合、Y結合は適当なホスホン酸（対応するハロゲン化ベンジルから生成される）と所望のアリールアルデヒド誘導体とのエモンズ縮合によって形成することができる。スキーム２に関して、保護ジヒドロキシベンジルクロリド（化合物３１）をホスホン酸エステルと反応させ、ホスホン酸（化合物３２）を得る。このホスホン酸をエモンズ縮合によってアルデヒド（化合物３３）と結合させる。縮合反応および後処理によって安息香酸エステルも切断され、カルボン酸（化合物３４）が得られる。次いで、カルボン酸の水酸基を脱保護し、カルボン酸ポリオール（化合物３５）が得られる。所望の基との、例えばエステル化またはアミド生成によって、Yが二重結合で、Rが炭素である、本発明の化合物が得られる。
【００２５】
Yが一重結合である化合物も、この方法に従って製造することができる。保護されたカルボン酸（化合物３４）またはカルボン酸ポリオール（化合物３５）を水素添加してアルケンを飽和させる。続いて脱保護することにより、カルボン酸ポリオール（化合物３６）が得られる。
【化３７】
2002504529.tif 000040
【００２６】
前述のものと類似の化合物を生成するための方法に関するさらなる詳細は、例えば（1）Gazit Aら「チロホスティン I：蛋白質チロシンキナーゼ阻害剤の合成と生物活性」、J. Med. Chem.、1989、32：2344〜2352（1989）、および（2）Gazit Aら、「チロホスティン2  EGF受容体およびErbB1/neuチロシンキナーゼの強力な阻害剤としての複素環α-置換ベンジリデンマロノニトリルチロホスティン」、J. Med. Chem.、34：1897〜1907（1991）によって提供されている。これらの引用文献は参照として本明細書に組み入れられる。
【００２７】
天然産物ラベンダスティンAの固相合成が報告されている。Devrajら「ラベンダスティンAおよび特定の生物活性類似体の多用途固相合成」、J. Org. Chem.、61、No. 26（1996）、この引用文献は参照として本明細書に組み入れられる。この固相合成法を式１および２を満たす化合物を合成するために改変して適合させることができる。
【００２８】
表１〜３に挙げたいくつかの代表的化合物の合成に関するさらなる詳細は、実施例２〜９において提供される。
【００２９】
III.  組成物
本明細書に記載の化合物を、例えば生細胞の増殖を阻害するために、ヒトおよび動物に投与するための組成物に調合することができる。そのような化合物は、前述の化合物の「有効な量」を含み、不活性担体、賦形剤、診断法、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、滑沢剤、他の活性成分、薬学的組成物の製剤において通常用いられる他の物質、およびその混合物をさらに含むことができる。
【００３０】
本発明の方法は、化合物、化合物の混合物、または化合物もしくは化合物の混合物の「有効な量」を含む組成物の「有効な量」をヒトまたは動物に投与する段階を含む。当業者であれば「有効な量」が変動することを理解すると思われる。現在のところ、「有効な量を投与すること」は、対象者に治療ごとの化合物総量として本発明の一つもしくは複数の化合物、または化合物を含む組成物を約0.3グラムから約3グラム、好ましくは約0.5グラムから約1グラム投与することを含むと考えられている。マウスを用いたインビボ試験により、約30mg/kg/投与から約50mg/kg/投与の用量も「有効な量」を提供することが示されている。さらに、一般には、化合物、または化合物を含む組成物の投与を受ける対象者の投与に対する耐容能力に応じて、対象者にとって可能な限り高い用量を提供することが望ましい。
【００３１】
ほぼ60の異なる癌細胞株を用いて実施した試験（下記の実施例参照）により、本発明の化合物の細胞毒性は、抗腫瘍剤として有用な他の薬剤と特定の類似点を共有していることが明らかにされている。したがって、このような化合物を対象者への投与に適した薬学的不活性担体、賦形剤などに、このような既知の抗腫瘍剤製剤の調製に用いられるのと同様の様式で加えることは、医薬品製剤を調製する分野の技術者の範囲内であると考えられる。本発明の化合物は、他の抗腫瘍剤で用いられるプロトコルと実質的に同様の投与プロトコルを用いて対象者に投与することができる。
【００３２】
化合物または組成物は、局所、経口、筋肉内、鼻腔内、皮下、腹腔内、病巣内または静脈内を含むいくつの方法によっても投与することができるが、これらに限定されることはない。現在のところ、経口および静脈内投与が本発明の化合物および組成物を投与するために好ましい方法であると考えられている。
【００３３】
IV.  生物学的結果
式１および２を満たす化合物を製造し、生物活性を評価するために様々な試験に供した。例えば、細胞培養および細胞増殖アッセイ法、ならびに免疫複合体キナーゼアッセイ法におけるp210bcr-ablのインビトロ自己リン酸化の阻害を実施した。これらの生物学的アッセイ法のための実験法を下記の実施例１０〜１１に示す。式１および２を満たす代表的化合物に関するこれらのアッセイ法の結果を下記の表４に示す。50マイクロモル以下のIC50値を有効と考える。
【００３４】
【表４】
2002504529.tif 000041
【００３５】
本発明の化合物を、抗癌効果を有する可能性のある薬物のスクリーニングのために米国立癌研究所によって採用されている薬物スクリーニング法にも供した。このスクリーニング法は、疾患特異的サブパネルに系統化された約60の異なるヒト腫瘍細胞株からなる、異なる疾患指向パネルを用いる。本発明の化合物を、パネルを含む細胞株に対する細胞毒性および増殖阻害効果について、広範囲にわたる濃度で試験した。8つのサブパネルは異なる組織学に相当していた（白血病、黒色腫、ならびに肺、結腸、腎、乳房、卵巣、および脳腫瘍）。
【００３６】
本発明の化合物を2日間にわたって試験した。この期間中、細胞を様々な濃度の試験化合物に連続的に曝露した。この試験により、各細胞株ごとに1つ（すなわち、各例ごとに1つ）の個別の用量-反応が得られ、データを用量-反応曲線に開示した。例えば図１（ａ）〜１（ｉ）。これらの用量反応曲線によって得られたデータを、平均グラフフォーマットを用いてまとめた。例えば図２。
【００３７】
平均グラフフォーマットのためのデータを出すために、標的レベルの反応を示した化合物濃度を各細胞株について計算した。3つの異なる反応パラメーターを評価した。第一の反応パラメーターは、増殖阻害（「GI50」）であった。GI50は、インキュベーション期間終了時に、適当な対照（本発明の化合物に曝露されていない）に対して腫瘍細胞数の見かけ上50％の低下をきたす、本発明に従って製造された化合物の濃度である。
【００３８】
第二の反応パラメーターは、全増殖阻害（「TGI」）であった。TGIは、インキュベーション期間終了時に残存している腫瘍細胞の数が、インキュベーション期間開始時に存在する腫瘍細胞の数と実質的に等しくなる濃度である。
【００３９】
第三の反応パラメーターは、致死濃度（「LC50」）であった。LC50は、インキュベーション期間開始時に、適当な対照（本発明の化合物に曝露されていない）に対して腫瘍細胞数の見かけ上50％の低下をきたす、本発明に従って製造された化合物の濃度である。
【００４０】
典型的なGI50平均グラフ（例えば、図２の左図）において、水平の濃度軸にそった垂直の基準線の相対的位置を、化合物に対して試験した全細胞株についての負のlog10GI50値を平均することによって得た。次いで、垂直の基準線に対して各細胞株の個々の負のlog10GI50値について水平バーをプロットした。このようにしてGI50グラフから化合物の特徴的なフィンガープリントが得られ、平均に比べて比例的に感受性が高い（基準線の右側に伸びているバー）または平均に比べて比例的に感受性が低い（基準線の左側に伸びているバー）個々の細胞株が示される。バーの長さは、個々の細胞株で得られたlog10GI50値と平均値（垂直の規準線で表される）との間の差に比例する。
【００４１】
TGIおよびLC50反応パラメーターについて、同様の平均グラフを図２に示す（それぞれ中央図と右図）。
【００４２】
比較のために、既知の化合物AG-957についての癌細胞株データを図１〜２に示す。本発明の7つの化合物の代表的癌細胞株データを図３〜１６に示す。図３〜１６に示された結果より、本発明の化合物が試験した癌細胞株の多くに対して抗増殖効果を有することが明らかにされている。
【００４３】
式１および２を満たす化合物を、中空糸アッセイ法でインビボ活性についても試験した。インビボ試験で用いた方法については、下記の実施例１２を参照されたい。各試験化合物を、最低12のヒト癌細胞株に対して試験した。データを各細胞株に対する2段階の化合物用量それぞれについて％T/C（すなわち、対照マウスよりも少ない生存マウスのパーセンテージ）で報告しており、腹腔内および皮下試料について別々に計算した値を示し、％T/Cの標的値は約50未満である。
【００４４】
いくつかの中空糸アッセイ法の基準に基づき、標準的な皮下異種移植モデルにおいてさらにインビボ試験を行うために、化合物を選択した。これらの基準には次のものが含まれる：（1）48の可能な試験の組み合わせ（12細胞株×2部位×2化合物用量）のうちの10の試験で％T/Cが50以下；（2）24の可能な組み合わせの少なくとも4つの試験で離れた部位（腹腔内薬物/皮下培養）での活性；および／または（3）いずれかの移植部位で一つまたは複数の細胞株の正味の細胞死滅。評価を単純化するために、化合物活性の迅速な査定を可能にするポイントシステムを採用した。生存細胞塊の50％以上の減少をきたす各化合物用量に2点を割り当てる。基準（1）および（2）が評価できるように、腹腔内および皮下試料を別々に採点した。IP＋SCの合計点≧20、SC点≧8、または一つもしくは複数の細胞株の正味の細胞死滅を示す化合物を、異種移植試験にまわした。これらの基準は、中空糸アッセイ法および異種移植試験における80を超える無作為に選択した化合物の活性結果を比較することにより、統計学的に有効性が確認されている。
【００４５】
これらの基準を適用することによって、本発明の化合物は抗癌剤として有望であることが証明された。特に有望であるのは、下記のアダマンチルエステル誘導体の化合物６および７である。
【化３８】
2002504529.tif 000042
【化３９】
2002504529.tif 000043
下記の表５〜７に示しているのは、IP＋SC点16とSC点8を有する化合物６のインビボ試験結果である。
【００４６】
【表５】
2002504529.tif 000044
【００４７】
【表６】
2002504529.tif 000045
【００４８】
【表７】
2002504529.tif 000046
【００４９】
同様のインビボでの結果が化合物７でも得られており、本化合物のIP＋SC点は20、SC点は8であった。本発明の代表的化合物が示す生物活性をまとめた下記の表８〜１０を参照されたい。表９および上付文字（a）〜（b）に関して：（a）＝値は4つ以上の実験の平均＋S.E.。（b）免疫複合体キナーゼアッセイ法。値は3つの実験の平均＋S.E.。（c）AG-957。（d）個々のIPおよびSC点と合計点を示す。（e）3細胞株が死滅した。
【００５０】
【表８】  カルボン酸の修飾
2002504529.tif 000047
【００５１】
【表９】  フェノール環の修飾
2002504529.tif 000048
a.  値は4つ以上の実験の平均±S.E.。
b.  免疫複合体キナーゼアッセイ。値は3つの実験の平均±S.E.。
c.  IPおよびSC点と合計点を示す。
【００５２】
【表１０】  リンカーの修飾
2002504529.tif 000049
a.  値は4つ以上の実験の平均±S.E.。
b.  免疫複合体キナーゼアッセイ。値は3つの実験の平均±S.E.。
c.  個々の点と合計点を示す。
【００５３】
V.  実施例
下記の実施例は本発明の特定の特徴を例示するために提供される。本発明が例示された個々の特徴に限定されることはない。
【００５４】
実施例１
この実施例は、Yが二重結合または一重結合のいずれかであり、Rが窒素である、式１を満たす化合物を合成するための一般法について述べる。10mmolの2,5-ジヒドロベンズアルデヒド、1mgのNaHCO3、および15mlのエタノールを含むエタノール溶液を作製する。次いで4-アミノアダマンチルベンゾエートをこの溶液に加える。固体が生成し、これを残りの溶液から分離し、ヘキサン（10ml）で洗浄し、減圧乾燥してイミンを得る。
【００５５】
4.29mmolのイミンを、50mgの5％Pd/Cを含む約100ミリリットルのエタノールなどに懸濁させた懸濁液を作製する。この懸濁液を、Parr水素添加装置を用いて2.5時間、または反応が完了するまで水素添加させる。次いで、反応混合物をセライト濾過し、パッドをエタノールで洗浄する。濾液と洗浄液を合わせ、減圧濃縮して固体を得る。この固体をエタノールに再度溶解して濾過し、洗浄液と濾液を再度減圧濃縮する。固体をエタノールに再度溶解し、ヘキサンと混合して固形物を分離する。固形物を濾過によって集め、ヘキサンで洗浄し減圧濾過して純粋なアミンを得る。
【００５６】
実施例２
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４０】
2002504529.tif 000050
【００５７】
1-アダマンタノール（15.2g、0.1mol）のピリジン（25mL）を含むTHF（100mL）溶液を0〜5℃に冷却した。この溶液に塩化4-ニトロベンゾイル（18.55g、0.1mol）を少量ずつ（15分かけて）加えた。得られたスラリーを5℃で1時間、次いで室温で16時間撹拌した。次の日、反応混合物を濾過して澄明な液とし、固体を集めた。この固体をEtOAc（3×20mL）で洗浄した。合わせた濾液と洗浄液を減圧濃縮して油状残渣を得た。この残渣を温水（45℃）（250mL）で粉砕し、十分に振盪し、上清の水層をデカンテーションによって除去した。これを2回繰り返して白色固体を生成し、これを水性懸濁液から分離した。この白色固体を濾過し、水で洗浄して乾燥した。この固体をCH2Cl2(200mL）に溶解し、溶液をシリカゲルパッド（4"×3"）に吸着させ、CH2Cl2（10×200mL）で溶出した。TLCによって示された純粋な生成物を含む分画を減圧濃縮し、固体を得た（19g）。この固体を沸騰EtOAc（200mL）から再結晶させて、13g（43％）の純粋な生成物を得た。
【００５８】
1-アダマンチル-4-ニトロベンゾエート（6.1g、20.2mmol）の5％Pd/C（300mg）を含むEtOH（100mL）懸濁液（半溶液）を、Parr水素添加装置を用い、30psiで3時間水素添加させた。反応混合物をセライトパッドで濾過して透明な液とし、パッドをEtOH（3×25mL）で洗浄した。澄明無色の濾液を減圧濃縮して、白色固体残渣5.3g（96％）を純粋な生成物として得た。
【００５９】
1-アダマンチル-4-アミノベンゾエート（5g、18.4mmol）のNaHCO3（1mg）を含むEtOH（150mL）溶液に、2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（2.54g、18.4mmol）を加え、得られた溶液を室温で20時間撹拌した。次の日、反応混合物を減圧濃縮して約50mLのEtOHを除去した。残存スラリーをヘキサン（10mL）で希釈し、分離した黄色固体を濾過して集め、ヘキサンで洗浄し、乾燥して6.25g（86％）の純粋な生成物を黄色固体で得た。
【００６０】
安息香酸、4-[[2,5-ジヒドロキシフェニル)メチレン]アミノ-1-アダマンチルエステル（3.27g、8.35mmol）の5％Pd/C（400mg）を含むEtOH（200mL）懸濁液（半溶液）を、Parr水素添加装置を用い、19psiで1時間45分間水素添加させた。反応混合物をセライトパッドで濾過して透明な液とし、パッドをEtOH（3×20mL）で洗浄した。合わせた濾液と洗浄液を減圧濃縮して、3gの泡状の固体を得た。この固体をCH2Cl2（30mL）に溶解し、撹拌するとただちに生成物が結晶化した。結晶生成物を濾過し、ヘキサン（5×10mL）で洗浄し、減圧乾燥して2.95gの純粋な生成物を淡灰色（ベージュ）固体として得た。mp＝113〜115℃。
【００６１】
この実施例２に記載のものと実質的に類似の様式で、1-アダマンタノールの代わりに1-アダマンタンメタノール（例えば、アルドリッチケミカル社から市販されている）を用いることによって化合物７を製造することができる。
【００６２】
実施例３
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４１】
2002504529.tif 000051
【００６３】
ジイソプロピルアミン（20g、0.2mol）のTHF（20mL）溶液に、0℃で塩化4-ニトロベンゾイル（9.27g、0.05gmol）を加え、反応混合物を約5℃で10分間撹拌した。冷却浴を除去し、反応混合物を室温で2時間撹拌した。反応混合物を水（100mL）で希釈し、溶媒であるTHFを減圧除去した。残存スラリーを濾過し、固体をH2O（10×20mL）、ヘキサン（5×20mL）で順次洗浄し、熱ランプ（約40℃）下で乾燥して、11.8g（94％）の生成物（I）を黄色結晶固体として得た。
【００６４】
（I）（11g、43.9mmol）の10％Pd/C（1g）を含むEtOH（100mL）半溶液を、Parr振盪機を用い、40psiで1時間30分間水素添加させた。触媒をセライトパッドで濾過して除き、透明な無色の濾液を減圧濃縮して、白色固体残渣を得た。この固体をCH2Cl2溶液とし、ヘキサンを加えることによって、溶液から再沈殿させた。固体を濾過して集め、ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥して9.2g（98％）の生成物（II）を白色固体として得た。
【００６５】
（II）（3.19g、14.4mmol）および2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（2g、14.4mmol）のNaHCO3（10mg）を含むEtOH（40mL）溶液を、Ar下、室温で16時間撹拌した。次の日、反応混合物から約20mLのEtOHを減圧除去し、残存スラリーをヘキサン（50mL）で希釈し、黄色固体を濾過して集め、ヘキサン（5×10mL）で洗浄し、減圧乾燥して4.8g（97％）の生成物（III）を黄色固体で得た。
【００６６】
（III）（2g、5.87mmol）のMeOH（100mL）およびTHF（10mL）の冷たい（約10℃）混合溶液にNaBH4（0.6g、16mmol）を加え、混合物を10℃で最初の黄色溶液が無色に変わるまで撹拌した。反応混合物を脱気した水（20mL）で希釈し、揮発性物質を減圧除去した。残存スラリー（約20mL）を水（50mL）で希釈し、激しく撹拌した。固体を濾過して集め、水（5×10mL）と続いてヘキサン（5×10mL）で洗浄し、減圧乾燥して1.53g（76％）の生成物（III）を得た。これをEtOAc（5mL）およびMeOH（5mL）の混合物に溶解し、溶液をシリカゲルパッド（5×10cm）に吸着させ、CH2Cl2（1L）で溶出した。適当な分画を合わせ、溶媒を減圧除去して固体残渣を得、これをCH2Cl2（20mL）から再結晶させて750mgの純粋な生成物（IV）を白色固体で得た。mp＝168〜170℃。
【００６７】
実施例４
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４２】
2002504529.tif 000052
【００６８】
撹拌中のt-ブタノール（室温、アルゴン）（50mL）にη-BuLi（ヘキサン中2.5M、14mL、0.035mol）の溶液を、内部の温度が25〜30℃に維持されるような速度で滴下した。滴下完了後、反応混合物をさらに30分間撹拌した。この反応混合物に塩化4-ニトロベンゾイル（6.50g、0.035mol）のEt2O（50mL）溶液を、内部温度を30℃に保ちながら1時間かけて滴下した。滴下完了後、反応混合物を室温で2時間撹拌し、次いで氷冷したH2O（20mL）で希釈した。有機相を分離し、水相をEt2O（2×100mL）で抽出した。有機相を合わせて、飽和NaCl水溶液で洗浄し、乾燥し（MgSO4）、減圧濃縮して固体（7.5g）を得た。この固体をEt2O（40mL）から再結晶させ（2回）、さらなる変換に適した精製物質2.4g（31％）を得た。追加の反応を実施し、同様の生成物を合計5g得た。
【００６９】
t-ブチル-4-ニトロベンゾエート（2.30g、0.0103mol）の5％Pd/C（300mg）を含むMeOH（100mL）溶液を、30psi、室温で3時間水素添加させた。触媒をろ過（セライトパッド）によって除き、濾液を減圧濃縮して、さらなる変換に適した所望の生成物1.9g（90％）を得た。追加の反応を実施し、同様の物質を合計約4.2g得た。
【００７０】
2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（1.38g、0.01mol）および化合物t-ブチル-4-アミノベンゾエート（1.90g、0.01mol）をEtOH（25mL）中に含む反応混合物を、24時間撹拌（室温、アルゴン）した。反応混合物をヘキサン（20mL）で希釈し、15分間撹拌した。明るい橙色の沈殿を濾過して集め、フィルター上でヘキサンで洗浄し、室温で減圧乾燥して、さらなる変換に適した所望の生成物1.6g（52％）を得た。追加の反応を実施し、同様の物質を合計2.5g得た。
【００７１】
安息香酸4-[[2,5-ジヒドロキシフェニル)メチレン)アミノ]-t-ブチルエステル（1.50g、0.0048mol）の5％Pd/C（400mg）を含むEtOH（100mL）溶液を、10psi、室温で3時間水素添加させた。触媒を濾過（セライトパッド）によって除き、濾液を減圧濃縮して、1.5g（100％）の粗生成物を暗色固体で得た。この固体をEt2O（15mL）に溶解し、溶液をヘキサン（50mL）で希釈した。得られた懸濁液を室温で30分間撹拌した。分離した固体を濾過して集め、フィルター上でヘキサンで洗浄し、減圧乾燥して、部分精製された生成物1.3g（87％）を得た。この物質をシリカゲル（50g）カラムに吸着させ、ヘキサン：EtOAc（5：3）で溶出した。適当な（TLC評価による）分画を合わせ、溶媒を減圧除去して、950mg（63％）の精製された生成物をベージュの固体で得た。mp＝158〜160℃。追加の反応を実施し、同様の物質を合計2.1g得た。
【００７２】
4-[[2,5-ジヒドロキシ-フェニル)メチル)アミノ]-t-ブチルエステル（1g、3.17mmol）のサルコミン水和物（300mg）を含むMeOH（100mL）溶液に空気を2時間バブリングさせた。反応混合物を減圧濃縮して暗色の固体を得た。この固体をEtOAc（250mL）にとり、濾過して透明な液とした。濾液をH2O、食塩水で順次洗浄し、乾燥し(MgSO4）、減圧濃縮して暗色の固体（1g）を得た。これをEtOAc溶液から1gのシリカにあらかじめ吸着させ、これをシリカゲルカラムにのせ、このカラムをEtOAc/ヘキサン（3：5）で溶出した。TLCによって示された純粋な生成物を含む分画を合わせて減圧濃縮し、赤色の残渣を得た（557mg）。この残渣をCH2Cl2（5mL）に溶解し、溶液をヘキサン（70mL）で希釈した。得られた懸濁液を20分間撹拌し、固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥して、438mg（43％）の純粋な生成物を赤色の固体で得た。mp＝125〜127℃。
【００７３】
実施例５
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４３】
2002504529.tif 000053
【００７４】
1,4-ナフトキノン（40.0g、0.253mol）および10％Pd/C（0.4g）の混合物を、H2（50psig）下で6時間振盪した。触媒を濾過によって除去し、フィルターパッドを脱気MeOH（2×25mL）で洗浄した。濾液を減圧下でスピン蒸発させて固体とし、次いで機械ポンプを用いてさらに乾燥し、さらなる変換に適した生成物40.5g（100％）を得た。
【００７５】
脱気CH2Cl2（960mL）中、1,4-ジヒドロキシナフタレン（40.5g、0.253mol）、3,4-ジヒドロ-2H-ピラン（106.7g、1.268mol）、およびp-トルエンスルホン酸1水和物（0.48g）の混合物を、25℃で16時間撹拌した。この混合物をEt2O（1.2L）で希釈し、飽和NaHCO3水溶液（400mL）、H2O（400mL）、食塩水（400mL）で順次洗浄し、MgSO4で乾燥し、減圧下でスピン蒸発させてオイルとした。このオイルを、CH2Cl2（20.0L）で充填および溶出するシリカゲルカラム（2.0kg）クロマトグラフィにかけた。TLCで評価した適当な分画を合わせ、減圧下でスピン蒸発させて、31.5g（37.9％）の生成物を粘稠なオイルで得た。追加の反応を実施し、さらなる変換に適した生成物を合計81.0g得た。
【００７６】
撹拌し、アルゴンで覆った、η-BuLi（ヘキサン中1.6M）（94.5mL、151.2mmol）、Et2O（180mL）およびヘキサン（280mL）の混合物に、1,4-ビス(テトラヒドロピラニロキシ)ナフタレン（31.5g、95.9mmol）のEt2O（220mL）溶液を20分かけて滴下（迅速に）した。得られた混合物を25℃で1.5時間撹拌し、次いで加熱して1時間還流させた。混合物を冷却し（25℃）、DMF（11.7mL、151.2mmol）を滴下（迅速に）した。得られた混合物を25℃で2時間撹拌し、次いで氷/H2O（500mL）で反応停止させた。2層を分離し、水層をEt2O（3×200mL）で抽出した。合わせた有機層を食塩水（200mL）で洗浄し、MgSO4で乾燥し、減圧濃縮してスラリーとした。このスラリーをヘキサン（100mL）で希釈した。固体を濾過して集め、減圧下で一定重量になるまで乾燥して、22.4g（65.5％）の純粋な生成物を得た。追加の反応を実施し、さらなる変換に適した物質を合計35.8g得た。
【００７７】
HOAc（100mL）、THF（50mL）、H2O（25mL）および1,4-ビス(テトラヒドロピラニロキシ)-2-ナフトアルデヒド（5.0g、14.0mmol）の脱気混合物を、アルゴン雰囲気下、45℃で3時間加温した。混合物を脱気H2O（1.0L）中に注いだ。得られた沈殿を濾過して集め、H2O（2×100mL）およびヘキサン（2×100mL）で洗浄し、次いで減圧下で一定重量になるまで乾燥して、さらなる変換に適した生成物を2.4g（92.3％）得た。
【００７８】
アルゴンで覆った、EtOH（150mL）中、1,4-ジヒドロキシ-ナフトアルデヒド（2.3g、12.2mmol）、Na2CO3（約3mg）、およびメチル4-アミノベンゾエート（1.9g、12.3mmol）の混合物を、25℃で72時間撹拌した。得られた懸濁液をヘキサン（15
0mL）で希釈し、15分間撹拌した。沈殿を濾過して集め、ヘキサン（2×25mL）で洗浄し、減圧下で一定重量になるまで乾燥して、さらなる変換に適した生成物を1.3g（33.3％）得た。
【００７９】
冷たい（0℃）、アルゴンで覆った、MeOH（30mL）中、安息香酸、4-[[2-(1,4-ジヒドロキシナフタレニル)メチレン]-アミノ-、メチルエステル（1g、3.1mmol）の懸濁液に、NaBH4（300mg、7.9mmol）を一度に加えた。混合物を15分間撹拌し、次いで脱気H2O（60mL）で希釈し、濃HCl（（約1mL）で酸性化した。混合物を次いで、飽和NaHCO3水溶液（約10nL）でpH約6.5に中和した。得られた沈殿を濾過して集め、脱気H2O（3×20mL）で洗浄し、減圧下、40℃で、一定重量になるまで乾燥して、874mg（87％）の純粋な生成物（VI）を黄褐色固体で得た。mp＝135〜137℃（分解）。
【００８０】
実施例６
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４４】
2002504529.tif 000054
【００８１】
1-アダマンタノール（15.2g、0.1mol）のピリジン（25mL）を含むTHF（100mL）溶液を0〜5℃で冷却した。この溶液に塩化4-ニトロベンゾイル（18.55g、0.1mol）を分割して加えた（15分かけて）。得られたスラリーを5℃で1時間、次いで室温で16時間撹拌した。次の日、反応混合物を濾過して透明な液とし、固体を集めてEtOAc（3×20mL）で洗浄した。合わせた濾液および洗浄液を減圧濃縮して、油状残渣を得た。この残渣を温水（45℃）（250mL）で粉砕し、十分に振盪し、上清の水層をデカンテーションによって除去した。これを繰り返し、白色固体を水性懸濁液から分離した。この固体を濾過し、水で洗浄して乾燥した。この固体をCH2Cl2(200mL）に溶解し、溶液をシリカゲルパッド（4"×3"）に吸着させ、CH2Cl2（10×200mL）で溶出した。TLCによって示された純粋な生成物を含む分画を減圧濃縮し、固体を得た（19g）。この固体を沸騰EtOAc（200mL）から再結晶させて、13g（43％）の純粋な生成物を得た。
【００８２】
アダマンチル-4-ニトロベンゾエート（6.1g、20.2mmol）の5％Pd/C（300mg）を含むEtOH（100mL）懸濁液（半溶液）を、Parr水素添加装置を用い、30psiで3時間水素添加させた。反応混合物をセライトパッドで濾過して透明な液とし、パッドをEtOH（3×25mL）で洗浄した。透明無色の濾液を減圧濃縮して、白色固体残渣5.3g（96％）を純粋な生成物として得た。
【００８３】
撹拌中の2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（2.00g、14.5mmol）のCHCl3（90mL）溶液に、室温、アルゴン雰囲気下でBr2（2.31g、14.5mmol）のCHCl3（60mL）溶液を1時間かけて滴下した。滴下完了後、反応混合物を1時間撹拌し、次いでCH2Cl2（350mL）で希釈した。得られた溶液を飽和NaHCO3水溶液と20分間撹拌することによって洗浄し、乾燥し（MgSO4）、減圧濃縮して、さらなる変換に適した明るい黄色の固体2.5g（79％）を得た。
【００８４】
1-アダマンチル-4-アミノベンゾエート（1.25g、4.61mmol）のNaHCO3（1mg）を含むEtOH（10mL）溶液に、2-ブロモ-3,6-ジヒドロキシベンズアルデヒド（1.0g、4.61mmol）を加え、得られた溶液を室温で20時間撹拌した。次の日、反応混合物をヘキサン（30mL）で希釈し、橙色の固体をろ過して集め、ヘキサンで洗浄し、乾燥して1.0gの純粋な生成物を固体で得た。濾液を濃縮してさらに550mgの物質を得た。
【００８５】
安息香酸、4-[[2-ブロモ-3,6-ジヒドロキシフェニル)メチレン]-アミノ]-1-アダマンチルエステル（1.2g、2.55mmol）のMeOH（100mL）半溶液に、10℃でNaBH4（0.5g、13.2mmol）を10分かけて加えた。反応混合物は赤色から無色に変わった。反応混合物を30分間撹拌し、脱気H2O（50mL）で希釈した。反応混合物を減圧濃縮して、ほとんどのメタノールを除去した。残存スラリー（約50mL）をCH2Cl2（110mL）およびEtOAc（50mL）で抽出した。合わせた有機抽出液を食塩水（50mL）で洗浄し、乾燥し（Na2SO4）、減圧濃縮してくすんだ桃色の固体残渣1.2gを得た。これをそれ以上精製せずに次の反応に用いた。
【００８６】
撹拌中の安息香酸、4-[[2-ブロモ-3,6-ジヒドロキシフェニル)メチル]-アミノ]-1-アダマンチルエステル（1.2g、2.55mmol）のMeOH（100mL）溶液に、サルコミン水和物（300mg）存在下、室温で2時間、空気をバブリングさせた。反応混合物を減圧濃縮し、暗紫色の固体を得た。この固体をCH2Cl2（25mL）に溶解し、溶液をシリカゲルカラム（2×20cm）に吸着させ、カラムをCH2Cl2（2L）で溶出した。適当な分画を合わせ、溶媒を減圧除去して、精製された物質830mgを得た。この物質をCH2Cl2（5mL）で粉砕し、ヘキサン（20mL）で希釈した。分離した紫色の固体を濾過し、ヘキサンで洗浄し、約40℃で減圧乾燥して、710mgの純粋な生成物（VI）を赤色結晶粉末として得た。mp＝156〜158℃（分解）。
【００８７】
実施例７
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４５】
2002504529.tif 000055
【００８８】
EtOH（40mL）中、2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（1.50g、10.9mmol）、4-アミノアセトフェノン（1.47g、10.9mmol）、およびNaHCO3（約10mg）を含む混合物を、室温、アルゴン雰囲気下で18時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮して2.7g（97％）の生成物（I）を黄色固体で得、それ以上精製せずに次の段階に用いた。
【００８９】
化合物アセトフェノン、4'-[[ジヒドロキシ-フェニル)メチレン]-アミノ（0.50g、1.96mmol）のEtOH（150mL）溶液を、触媒である5％Pd/BaCO3（250mg）存在下、15psi、室温で2時間水素添加させた。触媒を濾過して除去し、廃棄した。濾液を減圧濃縮して体積約10mLとし、ヘキサン（250mL）で希釈した。得られた懸濁液を室温で20分間撹拌し、沈殿を濾過して集め、ヘキサンで洗浄し、室温で減圧乾燥して、470mg（93％）の生成物を得た。mp＝194℃（分解）；197〜199℃融解。
【００９０】
実施例８
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４６】
2002504529.tif 000056
【００９１】
撹拌中の、4-ニトロベンズアルデヒド（6.3g、41.7mmol）およびトリメチル(トリフルオロメチル)シラン（THF中0.5M）（100mL、50mmol）の混合物に、フッ化テトラブチルアンモニウム（THF中1.0M）（316μL、0.316mmol）を加えた。得られた混合物を25℃で1時間撹拌した。反応混合物に1.0M HCl（300mL）を加え、反応混合物を3時間撹拌した。反応混合物をEt2O（2×500mL）で抽出し、合わせたエーテル抽出物を乾燥し（MgSO4）、減圧濃縮して9.2g（100％）の生成物を固体残渣で得た。
【００９２】
ベンゼンメタノール、4-ニトロ-α-(トリフルオロメチル)（1.5g、6.78mmol）の5％Pd/C（300mg）を含むEtOH（50mL）溶液を、Parr装置を用いて22psiで2時間水素添加させた。触媒を濾過（セライトパッド）によって除き、透明な濾液を減圧濃縮して、固体残渣を得た。この固体をCH2Cl2（10mL）に溶解し、ヘキサン（100mL）を撹拌しながら加えた。沈殿した固体を濾過して集め、減圧乾燥して1.2gの生成物（II）を得た。
【００９３】
ベンゼンメタノール、4-アミノ-α-(トリフルオロメチル)（1g、5.23mmol）および2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（0.73g、5.23mmol）のNaHCO3（5mg）を含むエタノール（10mL）溶液を、室温で16時間撹拌した。得られた暗赤色の反応混合物を減圧濃縮して体積約3mLとし、激しく撹拌しながらヘキサン（50mL）で希釈した。15分後、沈殿した固体を濾過して集め、ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥して1.6gの生成物を得た。
【００９４】
ベンゼンメタノール、4-[[2,5-ジヒドロキシフェニル)メチレン]-アミノ-α-(トリフルオロメチル)（1.5g、4.82mmol）の10％Pd/C（200mg）を含むエタノール（70mL）溶液を、Parr装置を用いて20psiで1.5時間水素添加させた。触媒を濾過（セライトパッド）によって除き、透明な濾液を減圧濃縮して、ゴム状の褐色固体を得た。この固体をEtOH（1.5mL）で粉砕し、CH2Cl2（100mL）を加えた。この溶液にヘキサン（10mL）を加え、得られた溶液を約5℃で減圧濃縮し、体積約35mLとした。分離した結晶性固体を濾過して集め、ヘキサンで洗浄し、減圧乾燥して、1.17g（78％）の純粋な生成物をベージュの固体で得た。mp＝118〜120℃。
【００９５】
実施例９
この実施例は、下記の化合物の合成について述べる。
【化４７】
2002504529.tif 000057
【００９６】
撹拌中の4-ヨードアニリン（10.0g、0.46mmol）の亜リン酸トリメチル（250mL、263g、2.12mol）溶液を、アルゴン下、0℃で20時間照射した。反応混合物を減圧濃縮して粗生成物をオイルで得た（17.5g）。このオイルをEtOAcで充填および溶出する500gのシリカゲルカラムで精製した。適当な分画を合わせ、溶媒を減圧除去して、3.0gの生成物を半固体で得た。この物質は亜リン酸トリメチルを不純物として含んでいた（1H NMRにより30％）。この物質をそれ以上精製せずに次の段階に用いた。
【００９７】
EtOH（40mL）中、2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（0.96g、6.96mmol）およびフェニルホスホン酸、4-[[2,5-ジヒドロキシフェニル)メチレン]-アミノ]-、ジメチルエステル（70％のもの2.0g、6.96mmol）の混合物をアルゴン下、室温で20時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮して体積約10mLとした。残渣をヘキサン（200mL）で希釈し、得られた懸濁液を15分間撹拌し、橙色の沈殿を濾過して集め、ヘキサンで洗浄し、一定重量になるまで減圧乾燥して2.2g（100％）の生成物を得た。
【００９８】
2,5-ジヒドロキシベンズアルデヒド（0.96g、6.96mmol）およびフェニルホスホン酸、4-[[2,5-ジヒドロキシフェニル)メチレン]-アミノ]（2.0g、6.2mmol）の5％Pd/C（400mg）を含むEtOH（200mL）溶液を、15psiで2時間水素添加させた。触媒を濾過によって除き、濾液を減圧濃縮してオイルを得、室温で放置するとすぐに結晶化した（1.5g）。この物質をEtOAc（10mL）およびMeOH（2mL）の混合物に溶解した。得られた溶液をヘキサン（150mL）で希釈し、15分間撹拌した。生成した沈殿をろ過して単離し、ヘキサンで洗浄し、一定重量になるまで減圧乾燥して1.35gの純粋な生成物を得た。mp＝140〜142℃。
【００９９】
実施例１０
この実施例は、細胞培養および増殖アッセイ法に用いる方法について述べる。ヒト白血病、フィラデルフィア染色体陽性CML細胞株K562をATCC（メリーランド州ロックビル）から入手した。細胞を、10％ウシ胎仔血清、2mMグルタミン、100ユニット/mlのペニシリンおよび100μg/mlのストレプトマイシンを含むRPMI培地中で培養した。96穴プレート中で、本発明の化合物の濃度を漸増させてDMSOに溶解し、最終量200μlとしたものと共に、細胞（2×103細胞/ウェル）をインキュベートした。対照細胞を、同じ濃度のDMSO溶媒を含む培地と共にインキュベートした。6日後に、生細胞が黄色色素3-(4,5-ジメチルチアゾリル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド（MTT）を還元して青色のホルマザン生成物に変える能力によって、K562細胞の増殖を定量した。この方法に関する詳細な情報は、Mossman T.、「細胞増殖および生存についての迅速な比色分析：増殖および細胞毒性アッセイ法への応用」、J. Immunol. Methods 1983、65：55〜63に記載されており、これは参照として本明細書に組み入れられる。
【０１００】
実施例１１
免疫複合体キナーゼアッセイ法におけるp210bcr-ablのインビトロ自己リン酸化の阻害を下記のとおりに実施した。K562細胞株の細胞をリン酸緩衝化食塩水中で2回洗浄した。洗浄した細胞をPLC溶解緩衝液［50mM HEPES（pH7.5）、150mM NaCl、10％（v/v）グリセロール、1％（v/v）トリトンX-100、1.5mM MgCl2、1mM EGTA、10μg/mlロイペプチン、10μg/mlアプロチニン、1mMオルトバナジン酸ナトリウム、10mMピロリン酸ナトリウム、100mMフッ化ナトリウムおよび1mMフェニルメチルスルホニルフッ化物］中で溶解した。細胞溶解産物を100,000gで15分間遠心分離し、上清を集めた。透明な上清の蛋白質濃度を、ブラッドフォード蛋白質アッセイ法（Bradford Protein Assay）によって定量し、同じ量の蛋白質を対照（賦形剤処理）および薬物処理した細胞から免疫沈降させた。細胞溶解産物を抗体と共に4℃で4時間終夜インキュベートし、緩やかに振盪した。プロテインA-セファロースビーズ（ファルマシア、ニュージャ−ジー州ピスカタウェイ）と共にインキュベートすることによって免疫複合体を集め、これ（ビーズ）をHNTG緩衝液［20mM HEPES（pH7.5）、10％グリセロール、0.1％トリトンX-100、150mM NaClおよび1mMオルトバナジン酸ナトリウム］で3回洗浄して、結合していない物質を除去した。結合した蛋白質を、SDS-PAGEの前に2×SDS試料緩衝液（63mMトリス-HCl、pH6.8；10％グリセロール；2％SDS；0.0025％ブロモフェノールブルー；および0.72mM 2メルカプトエタノール）中で5分間煮沸した。蛋白質を、Novex Experimental Technology（カリフォルニア州サンディエゴ）から入手した4〜20％グラジエントのミニゲル上で分離した。
【０１０１】
SDS-PAGEの後、蛋白質を、2×トリス-グリシントランスファー緩衝液（50mMトリス、グリシン）、20％メタノールおよび0.1％SDSを用いて250mA、4℃で4時間、Immobilonポリフッ化ビニリデン（PVDF）メンブレン上に電気泳動的に移した。メンブレン上に残存する結合部位を、3％BSAを含むTTS（20mMトリスpH7.4、0.9％ NaClおよび0.05％トゥイーン20）中、4℃で終夜、または室温で4時間インキュベートすることによりブロックした。ブロットを、1μg/mlのマウス抗P-Tyr、2μg/mlのマウス抗Grb2または1μg/mlのウサギ抗Shc抗体と共に、0.3％BSAを含むTTSを用いて1〜1.5時間インキュベートした。ブロットを、0.3％BSAを含むTTSを用いて6分間ずつ3回洗浄し、ウサギ抗マウス抗体の1：1000希釈液をプローブに用いて、またはブロッキング溶液中[125I]プロテインA（アマーシャム、イリノイ州アーリントンハイツ）で直接調べた。蛋白質をオートラジオグラフィ（-70℃で1〜2日曝露）によって可視化した。
【０１０２】
p210bcr-abl蛋白質免疫降物を、HTNG緩衝液で2回洗浄した。免疫沈降物を50mMトリス（pH7.0）で1回洗浄し、20μlの20mM PIPES［ピペリジン-N,N'-ビス(エタンスルホン酸)］（pH7.0）-20mM MnCl2中の各反応物に分配した。次いで、保存液から20mM PIPEs（pH7.0）-20mM MnCl2中で調製した所望の濃度の本発明の化合物10μlを、各反応チューブに加えた。[γ-32P]ATP（1試料につき10μCi、3000Ci/mmol：アマーシャム）10μlを加えて反応を開始させ、30℃で20分間インキュベートし、5×SDS試料緩衝液10μlを加え、100℃で5分間加熱して反応停止させ、4〜20％SDS-PAGEおよびオートラジオグラフィで分析した。
【０１０３】
免疫複合体中のp210bcr-ablの状態にインビトロで加えた薬物の効果を評価するために、K562細胞を32Pで標識してPLC緩衝液中で溶解し、32P標識されたp210bcr-ablを含む免疫複合体を蛋白質セファロースビーズ上で集め、ビーズをHNTG緩衝液で4回洗浄した。免疫複合体をいくつかのチューブに分けて、本明細書に記載のとおりに製造された化合物存在下、30μlのPLC緩衝液に加えた。
【０１０４】
実施例１２
この実施例は、マウスのインビボ試験に用いる方法について述べる。ヒト癌細胞をポリフッ化ビニリデン（PVDF）中空糸中で培養した。各癌細胞株の試料を、マウスの腹腔内および皮下に移植した。各マウスに、3つの異なる癌細胞株について、腹腔内に3つと皮下に3つの合計6つの中空糸移植を行った。3匹のマウスを本発明の化合物の2とおりの試験用量それぞれで、腹腔内に1日1回×4の処置スケジュールを用いて処置した。賦形剤対照群は化合物希釈剤だけを投与した6匹のマウスで構成された。中空糸培養物を最終処置の翌日に回収した。各細胞株についてホルマザン色素（MTT）変換アッセイ法を用いて生存細胞塊を定量することにより、抗癌効果を評価した。これにより、化合物で処置した試料の平均光学密度を賦形剤対照群の平均光学密度で除した値を用いて、％T/Cを計算した。さらに、マウスへの移植日に生存細胞塊について中空糸培養物の試料を評価したため、細胞塊の正味の増加を各試料について定量した。これにより、これら化合物の細胞増殖抑制および細胞破壊能力を評価することができた。
【０１０５】
実施例１３
この実施例は、本発明の化合物によってヒトを治療する方法について述べる。式１および／または２を満たす化合物を得る。次いで、これらの化合物をヒトに１回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから１回の投与につき対象者の体重1kgあたり約50mgの用量で、または対象者に治療ごとに一つまたは複数の化合物の合計約0.1グラムから約3グラムの量を提供するように、経口または静脈内投与する。
【０１０６】
あるいは、式１または２を満たす一つまたは複数の化合物と、不活性担体、賦形剤、診断法、直接圧縮結合剤、緩衝剤、安定剤、充填剤、崩壊剤、着香剤、着色剤、滑沢剤、他の活性成分、薬学的組成物の製剤において通常用いられる他の物質、またはその混合物からなる群より選択される少なくとも一つの物質とを含む組成物を、ヒトに経口または静脈内投与する。この組成物を対象者に、一つまたは複数の化合物の合計が１回の投与につき対象者の体重1kgあたり約30mgから１回の投与につき対象者の体重1kgあたり約50mgの量を提供するように、または1回の投与につき一つまたは複数の化合物の合計約0.1グラムから約3グラムの量を提供するように投与する。
【０１０７】
本発明を特定の好ましい態様について述べてきたが、記載された個々の特徴に限定されるべきではない。代わりに、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によって定義されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】  図１（Ａ）〜１（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、既知のPTK阻害剤であるAG957の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図２】  図２は、図１Ａ〜１Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図３】  図３（Ａ）〜３（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図４】  図４は、図３Ａ〜３Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図５】  図５（Ａ）〜５（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図６】  図６は、図５Ａ〜５Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図７】  図７（Ａ）〜７（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図８】  図８は、図７Ａ〜７Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図９】  図９（Ａ）〜９（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図１０】  図１０は、図１０Ａ〜１０Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図１１】  図１１（Ａ）〜１１（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図１２】  図１２は、図１１Ａ〜１１Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図１３】  図１３（Ａ）〜１３（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図１４】  図１４は、図１３Ａ〜１３Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。
【図１５】  図１５（Ａ）〜１５（Ｉ）は、培養中の様々な癌細胞株に対する、本発明に従って製造された化合物の効果を示す、用量-反応曲線の図である。
【図１６】  図１６は、図１３Ａ〜１３Ｉからのデータの平均プロットを示す図で、左側の平均プロットはGI50データのもので、中央の平均プロットはTGIデータ、右側の平均プロットはLC50データのものである。