【手続補正書】
【提出日】平成18年6月14日(2006.6.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
(発明の背景)
寄生疾患、特に、原生動物(マラリア、病原体：マラリア原虫のような)または吸虫(Schistosoma haematobiumのような住血吸虫により引き起こされる住血吸虫症、例えば、泌尿器住血吸虫症)によりもたらされるものは、特に、発展途上国で疾病のかなりの割合を占めている。アノフェレス蚊により媒介され、Plasmodium属の原虫により引き起こされるマラリアは、毎年約１００,０００,０００人が発症し、約１,０００,０００人が死亡する疾病である。Malaria tropica(Plasmodium falciparumにより引き起こされる)、Malaria tertiana(Plasmodium vivaxまたはPlasmodium ovaleにより引き起こされる)およびMalaria quartana(Plasmodium malariaeにより引き起こされる)の間で区別されている。Malaria tropicaはこの疾病の中で最も重篤である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
カルボキシのような陰性に荷電した基の存在下で、塩はまた塩基と形成され得、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムまたはカルシウム塩、またはアンモニアまたは３級モノアミン、例えば、トリエチルアミンまたはトリ(２−ヒドロキシエチル)アミンのような適当な有機アミンのような金属またはアンモニウム塩、またはヘテロ環式塩基、例えば、Ｎ−エチル−ピペリジンまたはＮ，Ｎ'−ジメチルピペラジンである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
本発明はまた式Ｉの化合物またはその塩と、１個またはそれ以上の他の薬学的活性物質との、特に、１個またはそれ以上の抗原虫活性を示す他の化合物、例えば、キニン、キノリンメタノール(メフロキン＝Lariam(登録商標)のような)、ハロファントリンのようなフェナンスレンメタノール、クロロキンまたはアモジアキンのような４−アミノキノリン、パマキンまたはプリマキンのような８−アミノキノリン、キナクリジンのようなアクリジン、ジヒドロプテロイン酸またはジヒドロ葉酸のようなピリミジン、ピリメタミンまたはトリメトプリムのようなピリメタミン誘導体、スルファドキシン(＝Fanasil)のようなスルホンアミド、クロログアニドのようなビグアニド、シクログアニルのようなジヒドロトリアジン、ダプソン(ＤＤＳ)のようなスルホン、ベンフルメトールまたはその誘導体、または特にアルテミシンまたは特にアルテメーテル(＝[３Ｒ−(３α,５αβ,６β,８αβ,９α,１０α,１２β−１２ａＲ)]−デカヒドロ−１０−メトキシ−３,６,９−トリメチル−３,１２−エポキシ−１２Ｈ−ピラノ[４,３ｊ]−１,２−ベンゾジオキセピン)のようなアルテミシン誘導体；またはいずれの場合も、少なくとも１個の塩形成基が存在する限り、その塩との組合わせにも関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
更なる工程手段
立体異性体混合物、例えば、ジアステレオマーの混合物は、その対応する異性体にそれ自体既知の方法で、適当な分離法により分離できる。例えば、ジアステレオ混合物は、個々のジアステレオマーに分画結晶、クロマトグラフィーおよび／または溶媒分配の方法で分離し得る。この分離は、出発化合物の一つのレベルでまたは式Ｉの化合物それ自体で行い得る。エナンチオマーはジアステレオマー塩の形成を介して、例えば、エナンチオマー純粋なキラル酸との塩形成により、またはキラルリガンドのクロマトグラフィー支持体を使用したクロマトグラフィーの手段により、例えば、ＨＰＬＣにより分離し得る。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
方法の記載において特記しない限り、例えば、水、低級アルキル低級アルカノエート、例えば酢酸ジエチルのようなエステル、環状エーテル、例えばテトラヒドロフラン、メタノール、エタノールまたは１−または２−プロパノールのようなアルコール、アセトニトリルのようなニトリル、ジメチルホルムアミドのような酸アミド、ヘテロ環式窒素元気、例えばピリジンのような塩基、またはこれらの溶媒の混合物、例えば、水性溶液を含むものから該反応に適した溶媒を選択し得る。このような溶媒混合物は、例えば、クロマトグラフィーまたは分散を介した処理にも使用し得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
医薬組成物は約１％から約９５％の活性成分を含み、一回投与形態は、好ましい態様において約１０％から約９０％の活性成分を含み、１回投与タイプ以外の形は、好ましい態様において約５％から約２０％の活性成分を含む。単位投与形は、例えば、非被覆錠剤、アンプル、バイアル、坐薬またはカプセルである。更なる投与形は、例えば、軟膏、クリーム、発泡剤、チンキ、リップスティック、ドロップ、スプレー、分散剤などである。例は、約０.０５ｇから約１.０ｇの活性成分を含むカプセルである。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
実施例
以下の実施例は本発明をその範囲を限定することなく説明するために提供する。
出発物質４(表１参照)：
Ａ)２−メチルアミノ−１−(２,７−ジクロロ−９Ｈ−フルオレン−４−イル)エタノール(４ａ)
５.０ｇの２,７−ジクロロ−９Ｈ−フルオレン−４−オキシラン(１)、２５ｇのメチルアミン(エタノール中３３％溶液)および２０mlのエタノールを２日間還流する。反応混合物を室温に冷却し、濾過する。濾過ケーキをエタノールで洗浄し、真空で乾燥させ、４ａとビス−[２−(２,７−ジクロロ−９Ｈ−フルオレン−４−イル)−２−ヒドロキシ]エチルメチルアミンの混合物を得る：1H-NMR(300mHz, CDCl3): 2.4および2.55(二つのシングレット, N-CH3, いずれの場合も4aとビス-[2-(2,7-ジクロロ-9H-フルオレン-4-イル)-2-ヒドロキシ]エチルメチルアミン); 2.6-3.0(m, CH2-N); 3.8および3.9(二つのシングレット, フルオレニル基のC-9-H); 5.4および5.5(二つのダブルダブレット, CH-O); 7.1-7.7(m, 芳香族プロトン)。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
実施例４：２−[２−(２−ヒドロキシ)エトキシ]エチルアミノ−１−[２,７−ジクロロ−９−(４−クロロベンジリデン)−９Ｈ−フルオレン−４−イル]エタノール(５ｆ)
製造は実施例２と同様にして４ｂの代わりに４ｆを使用；標題物(シリカゲル、溶離剤トルエン／エタノール９：１、ｖ／ｖの後に得る)：
【表９】
2002518467.tif 000001
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
実施例６：ベンフルメトール(２−(ジ−ｎ−ブチルアミノ)−１−[２,７−ジクロロ−９−(４−クロロベンジリデン)−９Ｈ−フルオレン−４−イル]エタノールおよび２−アルキルアミノ−１−[２,７−ジクロロ−９−(４−クロロベンジリデン]−９Ｈ−フルオレン−４−イル)エタノールの、インビトロでのPlasmodium falciparumに対する効果の比較
実験は、ミャンマーに近いタイの北西部のMae Sot州で行う。実験に使用する単離したPlasmodium falciparumは、臨床的に明白なマラリアであり、診断および処置のためにMae SotのVBC Unit Malaria Clinicに係っている患者からである。効果のための試験は、指の穿孔により得た血液で行う(WHO Standard Microtest Method for studying the inhibition of schizont maturationに従う、Wernsdorfer, W. H.およびPayne, D. (1988), Drug Sensitivity Test. In: Wernsdorfer, W. H.およびMcGregor, I. A. (編集者), Malaria: Principles and practice of malariology; Churchill Livingstone, Edinburgh参照)。試験を、平行してベンフルメトールおよび２−アルキルアミノ−１−[２,７−ジクロロ−９−(４−クロロベンジリデン]−９Ｈ−フルオレン−４−イル)エタノールで、血液媒体混合物(ＢＭＭ)中、３から３０００nmol／ｌの濃度で、Institute of Specific Prophylaxis and Tropical Medicine, University of Vienna, Austriaの研究室で調製したマイクロタイタープレート以外WHO Regional Office for the Western Pacific, Manilaから供給されたWHO Standard Test Kitからの材料を使用して行う。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
インキュベーション前の寄生虫血症の測定はWHO Standard Method (WHO (1991), Basic malaria microscopy. Part I; WHO, Geneva)に従う。シゾント力価をWernsdoferおよびPayne (1988)に記載のように測定する(上記参照)。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
データの統計学的分析をログ濃度／応答プロビット分析に従って行った(Litchfield & Wilcoxon (1949), J. Exp. Pharmacol. 89, 99-113)。この方法は、最小二乗法に基づき、用量応答実験の分析に関して最も広く許容されている方法である。本方法のコンピューター適合法(Wernsdorfer & Wernsdorfer, Mitteilungen der Oesterreichischen Gesellshaft Fuer Tropenmedizin und Parasitologie 17, 221-228)をデータ処理に使用する。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
結果：
実施例６.１：ベンフルメトールおよびＮ−デスブチルベンフルメトール(５ｂ、２−(ｎ−ブチルアミノ)−１−[２,７−ジクロロ−９−(４−クロロベンジリデン)−９Ｈ−フルオレン−４−イル]エタノール)の効果の比較：
実験した５８個のPlasmodium falciparum分離株は、いずれも３００nmol／ｌを超えるベンフルメトールの濃度でシゾント成熟を示さず、分離株の大多数(９７％)は３００nmol／ｌのベンフルメトールで完全に阻害される。分離株の一つもシゾントの成熟を３００nmol／ｌのＮ−デスブチルベンフルメトールで示さず、大多数の分離株は１００nml／ｌのＮ−デスブチルベンフルメトールでさえ完全に阻害される。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９２】
５８個のＥＣ５０ペアを補正のために試験する。０.７３０８の補正係数で、結果は非常に有意である(ｐ＜０.０００００３)。これはまた５８個のＥＣ９０ペアでも当て嵌まる(補正係数０.６７６８、ｐ＜０.００００１)。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９５】
実施例６.２および６.３：
実施例６.２および６.３において、３４個のPlasmodium falciparum分離株を試験する。実験した３４個のPlasmodium falciparum分離株は、いずれも３０００nmol／ｌを超えるベンフルメトールの濃度でシゾント成熟を示さず、分離株の大多数(９６％)は３００nmol／ｌのベンフルメトールで完全に阻害される。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
表５：Plasmodium falciparumにおけるインビトロのベンフルメトールの濃度依存的阻害効果(３４分離株試験シリーズ、実施例６.２および６.３)：
【表１４】
2002518467.tif 000002
ＥＣ５０：平均値＝２７.９７１５(９５％信頼限界：下部１３.３８０２；上部４２.５６７８)
ＥＣ９９：平均値＝５２０.７６５１(９５％信頼限界：下部２４８.７６７８；上部１０９０.１５８１)
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０１】
３４個のＥＣ５０ペアを補正のために試験する。０.６４３０の補正係数で、結果は非常に有意である。これはまた３４個のＥＣ９０ペアでも補正係数０.７６９７で当て嵌まる。