【手続補正書】
【提出日】平成17年10月25日(2005.10.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
膵臓癌を処置するための医薬であって、該医薬が、ＲＮＡ干渉によってＫ−ｒａｓ遺伝子の発現を阻害するのに好適な２本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）を含み、ｄｓＲＮＡの鎖Ｓ１が、Ｋ−ｒａｓ遺伝子と少なくとも断片的に相補的な領域を有し、ｄｓＲＮＡが、鎖Ｓ１の３’末端に位置する末端のみに１本鎖のオーバーハングを有する、前記医薬。
【請求項２】
Ｋ−ｒａｓ遺伝子が、Ｋ−ｒａｓの恒常的な活性化をもたらすように変異している、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
Ｋ−ｒａｓ遺伝子が、コドン１２、１３または６１で変異している、請求項１または２に記載の医薬。
【請求項４】
Ｋ−ｒａｓ遺伝子において、コドン１２は、アルギニン、セリン、アラニン、バリン、システインまたはアスパラギン酸をコードし、コドン１３は、アスパラギン酸をコードし、または、コドン６１はヒスチジンまたはロイシンをコードする、請求項１〜３のいずれかに記載の医薬。
【請求項５】
少なくとも断片的に相補的な領域が、２５個より少ない連続したヌクレオチドからなる、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬。
【請求項６】
相補的な領域が、１９〜２４個のヌクレオチドを有する、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬。
【請求項７】
鎖Ｓ１が、３０個より少ないヌクレオチドを有する、請求項１〜６のいずれかに記載の医薬。
【請求項８】
１本鎖のオーバーハングが、１〜４個のヌクレオチドからなる、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬。
【請求項９】
ｄｓＲＮＡが、鎖Ｓ１に加えて鎖Ｓ２を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】
鎖Ｓ１が２３ヌクレオチド長であり、鎖Ｓ２が２１ヌクレオチド長であり、かつ、鎖Ｓ１の３’末端が２個のヌクレオチドで構成された１本鎖のオーバーハングを有するが、鎖Ｓ１の５’末端に位置するｄｓＲＮＡの末端は平滑である、請求項９に記載の医薬。
【請求項１１】
鎖Ｓ１が、Ｋ−ｒａｓ遺伝子の一次ＲＮＡ転写物またはプロセシングされたＲＮＡ転写物と相補的である、請求項１〜１０のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】
ｄｓＲＮＡが、添付の配列表に示すとおりの、配列番号１の配列を有する鎖Ｓ２と配列番号２の配列を有する鎖Ｓ１、または、配列番号３の配列を有する鎖Ｓ２と配列番号４の配列を有する鎖Ｓ１、または、配列番号５の配列を有する鎖Ｓ２と配列番号６の配列を有する鎖Ｓ１とからなる、請求項１〜１１のいずれかに記載の医薬。
【請求項１３】
医薬中のｄｓＲＮＡが、溶液中に、またはミセル構造、カプシド、カプソイドまたは高分子ナノもしくはマイクロカプセルに囲まれて、または高分子ナノもしくはマイクロカプセルに結合して存在する、請求項１〜１２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１４】
医薬が、吸入、経口摂取、注入または注射に好適な製剤である、請求項１〜１３のいずれかに記載の医薬。
【請求項１５】
製剤が、ｄｓＲＮＡと、生理学的に許容される溶媒または生理学的に許容されるバッファーとからなる、請求項１〜１４のいずれかに記載の医薬。
【請求項１６】
医薬が、１日体重１ｋｇあたり２５μｇ〜５ｍｇの最大用量を達成するのが可能な量でｄｓＲＮＡを含む、少なくとも１用量単位で存在する、請求項１〜１５のいずれかに記載の医薬。
【請求項１７】
ＲＮＡ干渉によってＫ−ｒａｓ遺伝子の発現を阻害するのに好適な２本鎖リボ核酸（ｄｓＲＮＡ）の、膵臓癌を処置するための医薬の製造への使用であって、該医薬は、ｄｓＲＮＡの鎖Ｓ１が、Ｋ−ｒａｓ遺伝子と少なくとも断片的に相補的な領域を有し、ｄｓＲＮＡが、鎖Ｓ１の３’末端に位置する末端のみに１本鎖のオーバーハングを有する、前記使用。
【請求項１８】
Ｋ−ｒａｓ遺伝子が、Ｋ−ｒａｓの恒常的な活性化をもたらすように変異している、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
Ｋ−ｒａｓ遺伝子が、コドン１２、１３または６１で変異している、請求項１７または１８に記載の使用。
【請求項２０】
Ｋ−ｒａｓ遺伝子において、コドン１２は、アルギニン、セリン、アラニン、バリン、システインまたはアスパラギン酸をコードし、コドン１３は、アスパラギン酸をコードし、または、コドン６１はヒスチジンまたはロイシンをコードする、請求項１７〜１９のいずれかに記載の使用。
【請求項２１】
少なくとも断片的に相補的な領域が、２５個より少ない連続したヌクレオチドからなる、請求項１７〜２０のいずれかに記載の使用。
【請求項２２】
相補的な領域が、１９〜２４個のヌクレオチドを有する、請求項１７〜２１のいずれかに記載の使用。
【請求項２３】
鎖Ｓ１が、３０個より少ないヌクレオチドを有する、請求項１７〜２２のいずれかに記載の使用。
【請求項２４】
１本鎖のオーバーハングが、１〜４個のヌクレオチドからなる、請求項１７〜２３のいずれかに記載の使用。
【請求項２５】
ｄｓＲＮＡが、鎖Ｓ１に加えて鎖Ｓ２を有する、請求項１７〜２４のいずれかに記載の使用。
【請求項２６】
鎖Ｓ１が２３ヌクレオチド長であり、鎖Ｓ２が２１ヌクレオチド長であり、かつ、鎖Ｓ１の３’末端が２個のヌクレオチドで構成された１本鎖のオーバーハングを有するが、鎖Ｓ１の５’末端に位置するｄｓＲＮＡの末端は平滑である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
鎖Ｓ１が、Ｋ−ｒａｓ遺伝子の一次ＲＮＡ転写物またはプロセシングされたＲＮＡ転写物と相補的である、請求項１７〜２６のいずれかに記載の使用。
【請求項２８】
ｄｓＲＮＡが、添付の配列表に示すとおりの、配列番号１の配列を有する鎖Ｓ２と配列番号２の配列を有する鎖Ｓ１、または、配列番号３の配列を有する鎖Ｓ２と配列番号４の配列を有する鎖Ｓ１、または、配列番号５の配列を有する鎖Ｓ２と配列番号６の配列を有する鎖Ｓ１とからなる、請求項１７〜２７のいずれかに記載の使用。
【請求項２９】
ｄｓＲＮＡが、溶液中に、またはミセル構造、カプシド、カプソイドまたは高分子ナノもしくはマイクロカプセルに囲まれて、または高分子ナノもしくはマイクロカプセルに結合して存在する、請求項１７〜２８のいずれかに記載の使用。
【請求項３０】
ｄｓＲＮＡが、吸入、経口摂取、注入または注射に好適な製剤中に存在する、請求項１７〜２９のいずれかに記載の使用。
【請求項３１】
製剤が、ｄｓＲＮＡと、生理学的に許容される溶媒または生理学的に許容されるバッファーとからなる、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
ｄｓＲＮＡが、経口的に、吸入、注入または注射によって投与される、請求項１７〜３１に記載の使用。
【請求項３３】
ｄｓＲＮＡが、１日体重１ｋｇあたり２５μｇ〜５ｍｇの最大用量で用いられる、請求項１７〜３２のいずれかに記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
相補的なｄｓＲＮＡ領域は、１９〜２４個、好ましくは２０〜２４個、特に好ましくは２１〜２３個、そして特に２２個または２３個のヌクレオチドを有することができる。この構造を有するｄｓＲＮＡは、Ｋ−ｒａｓ遺伝子を阻害するのに特に有効である。ｄｓＲＮＡの鎖Ｓ１は、３０個より少ない、好ましくは２５個より少ない、特に好ましくは２１〜２４個、そして特に２３個のヌクレオチドを有することができる。これらのヌクレオチドの数はまた、ｄｓＲＮＡにおける塩基対の可能な最大数でもある。かかるｄｓＲＮＡは、細胞内で特に安定である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
本医薬は、吸入、経口摂取、注入または注射、特に静脈内、腹腔内もしくは腫瘍内注入または注射に好適な製剤であることができる。吸入、注入または注射に好適な製剤は、最も単純には、ｄｓＲＮＡと、生理学的に許容される溶媒、好ましくは生理食塩水または生理学的に許容されるバッファー、特にリン酸緩衝生理食塩水とからなることができる。驚くべきことに、かかる溶媒またはバッファーに単純に溶解され、投与されたｄｓＲＮＡは、当該ｄｓＲＮＡが特殊なビヒクルに包まれる（be packaged）ことを要することなく、腫瘍細胞に取り込まれ、そしてＫ−ｒａｓ遺伝子の発現を阻害することが示された。