【手続補正書】
【提出日】平成18年8月22日(2006.8.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
表面結合タンパク質を有するポリマー粒子の製造方法であって、
Ａ）下記（１）〜（３）を含んで成る細胞を用意するステップ、
（１）ポリマーシンターゼをコードする少なくとも１つの遺伝子、ここで当該ポリマーシンターゼはポリマー粒子結合ドメインを含んで成る；又は
（２）融合タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子、ここで当該融合タンパク質はポリマーセンターゼと下記（ａ）〜（ｃ）を含んで成る：
（ａ）１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせと結合することのできる少なくとも１つの結合ドメイン、又は
（ｂ）少なくとも１つの生物学的に活性な物質、又は
（ｃ）それらの組み合わせ、
ここで当該融合タンパク質のポリマーシンターゼはポリマー粒子結合ドメインを含んで成る；及び
（３）任意的に
（ａ）ポリマー粒子の形成に関係するタンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子、ここで当該タンパク質はポリマー粒子結合ドメインを含んで成る、又は
（ｂ）追加の融合タンパク質をコードする少なくとも１つの遺伝子、ここで当該追加の融合タンパク質は下記の(i)〜(iii)を含んで成る：
(i)ポリマー粒子結合ドメイン、ポリマー粒子結合ドメインを含んで成り、ポリマー粒子の形成に関係するタンパク質、もしくはそれらの組み合わせ、及び
(ii) 少なくとも１つの生物学的に活性なタンパク質、又は１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせと結合することのできる少なくとも１つの結合ドメイン、又は
(iii) 少なくとも１つの生物学的に活性なタンパク質と、１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせと結合することのできる少なくとも１つの結合ドメイン；又は
（ｃ）それらの組み合わせ；
Ｂ）前記細胞を培養培地の中で培養して、当該細胞に前記少なくとも１つの遺伝子由来の発現生成物及びポリマー粒子を産生させるステップ、ここで当該発現生成物のポリマー粒子結合ドメインはポリマー粒子に結合している；そして
Ｃ）当該培養した細胞から当該ポリマー粒子を分離して、表面結合タンパク質を有するポリマー粒子を含んで成る組成物を生成するステップ
を含んで成る方法。
【請求項２】
前記培養培地がメチル基、アルキル基、ヒドロキシル基、フェニル基、スルフヒドリル基、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、アルデヒド基、ケト基、エーテル基、カルボキシル基、O-エステル基、チオエステル基、カルボン酸アミド基、ヘミアセタール基、アセタール基、リン酸モノエステル基及びリン酸ジエステル基、又はそれらの１以上の組み合わせから選択される側部官能基を有する少なくとも１つの脂肪酸を含んで成る、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記培養培地に前記ポリマー粒子のサイズを確実に制御するのに十分な量で物質を添加する、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記ポリマー粒子の表面に位置する脂質層が前記ポリマー粒子から分離し、異なる組成の脂質層で置換されている、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
少なくとも１つの生物学的に活性な物質もしくは少なくとも１つの染料又はそれらの組み合わせを前記培養培地に添加して前記粒子に組み込む、請求項１〜４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
表面結合タンパク質を有するポリマー粒子を試験管内で製造する方法であって、
Ａ）少なくとも１つの基質を含んでいてポリマー粒子の形成に適した溶液を用意するステップ；
Ｂ）前記溶液の中に下記の（１）〜（３）を導入することによりポリマー粒子を形成するステップ：
（１）ポリマー粒子結合ドメインを含んで成るポリマーシンターゼ；又は
（２）融合タンパク質、ここで当該融合タンパク質はポリマーセンターゼと下記（ａ）〜（ｃ）を含んで成る：
（ａ）１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせと結合することのできる少なくとも１つの結合ドメイン、又は
（ｂ）少なくとも１つの生物学的に活性な物質、又は
（ｃ）それらの組み合わせ、
ここで当該融合タンパク質のポリマーシンターゼはポリマー粒子結合ドメインを含んで成る；及び
（３）任意的に
（ａ）ポリマー粒子の形成に関係する少なくとも１つタンパク質、ここで当該タンパク質はポリマー粒子結合ドメインを含んで成る、又は
（ｂ）追加の融合タンパク質、ここで当該追加の融合タンパク質は下記の(i)〜(iii)を含んで成る：
(i)ポリマー粒子結合ドメイン、ポリマー粒子結合ドメインを含んで成り、ポリマー粒子の形成に関係するタンパク質、もしくはそれらの組み合わせ、及び
(ii) 少なくとも１つの生物学的に活性なタンパク質、又は１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせと結合することのできる少なくとも１つの結合ドメイン、又は
(iii) 少なくとも１つの生物学的に活性なタンパク質と、１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせと結合することのできる少なくとも１つの結合ドメイン；又は
（ｃ）それらの組み合わせ；
Ｃ）当該溶液から当該ポリマー粒子を分離して、表面結合タンパク質を有するポリマー粒子を含んで成る組成物を生成するステップ；
を含んで成る方法。
【請求項７】
前記溶液にポリマーシンターゼ又はポリマーシンターゼを含んで成る融合タンパク質を前記ポリマー粒子のサイズを確実に制御するのに十分な量で添加する、請求項６記載の方法。
【請求項８】
前記溶液がメチル基、アルキル基、ヒドロキシル基、フェニル基、スルフヒドリル基、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、アルデヒド基、ケト基、エーテル基、カルボキシル基、O-エステル基、チオエステル基、カルボン酸アミド基、ヘミアセタール基、アセタール基、リン酸モノエステル基及びリン酸ジエステル基、又はそれらの１以上の組み合わせから選択される側部官能基を有する少なくとも１つの脂肪酸を含んで成る、請求項６又は７記載の方法。
【請求項９】
少なくとも１つの生物学的に活性な物質もしくは少なくとも１つの染料又はそれらの組み合わせを前記溶液に添加する、請求項６又は７記載の方法。
【請求項１０】
前記ポリマー粒子の形成に関係するタンパク質がphaAチオラーゼ、phaBケトアシルレダクターゼ、ポリマーデポリメラーゼ、ポリマー調節因子、ポリマーシンターゼ及び粒子サイズ制御タンパク質、又はそれらの組み合わせから成る群から選択される、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
前記ポリマー粒子結合ドメインがポリマーデポリメラーゼ、ポリマー調節因子、ポリマーシンターゼ及び粒子サイズ制御タンパク質から成る群から選択されるタンパク質の粒子結合ドメインを含んで成る、請求項１〜９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリマー粒子が１０ｎｍ〜３μｍの直径を有する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１３】
前記ポリマー粒子が１０ｎｍ〜９００ｎｍの直径を有する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
前記ポリマー粒子が１０ｎｍ〜１００ｎｍの直径を有する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
前記ポリマー粒子が５０ｎｍ〜５００ｎｍの直径を有する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリマー粒子が１５０ｎｍ〜２５０ｎｍの直径を有する、請求項１〜１１のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
前記少なくとも１つの結合ドメインが１もしくは複数のオリゴペプチド、１もしくは複数の酵素、１もしくは複数のアブザイム、１もしくは複数の非触媒タンパク質、１もしくは複数のＦＬＡＧタンパク質及び１もしくは複数のシステイン残基からなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
Ａ）前記結合ドメインにカップリング試薬を結合させる、又は
Ｂ）前記結合ドメインにカップリング試薬を結合させ、そして当該カップリング試薬に生物学的に活性な物質を結合させる、又は
Ｃ）前記結合ドメインに生物学的に活性な物質を結合させる、又は
Ｄ）前記タンパク質をカップリング試薬と接触させることにより前記ポリマー粒子の形成に関係するタンパク質を化学修飾して、少なくとも１つの結合ドメインを形成する、
ステップを更に含んで成る、請求項１〜１７のいずれか１項記載の方法。
【請求項１９】
前記生物学的に活性な物質が別の生物学的に活性な物質に結合することができる、請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２０】
前記生物学的に活性な物質が医薬的に活性な物質である、請求項１〜１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
前記生物学的に活性な物質が
Ａ）ジデオキシイノシン、フロクスウリジン、6-メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、1-ダルビシン、シスプラチン、メトトレキセート、タキソール、抗生物質、抗血液凝固薬、殺菌薬、抗不整脈薬、これら活性成分の前駆体もしくは誘導体;又は
Ｂ）インスリン、カルシトニン、ACTH、グルカゴン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、エリスロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、天然には存在しないアヘン製剤、スーパーオキシドディスムターゼ、抗体、インターフェロン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、リボヌクレアーゼ、トリプシン、キモトリプシンもしくはペプシン；
から選択される、請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】
前記生物学的に活性な物質が、インスリン、カルシトニン、ACTH、グルカゴン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、エリスロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、天然には存在しないアヘン製剤、スーパーオキシドディスムターゼ、抗体、インターフェロン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、リボヌクレアーゼ、トリプシン、キモトリプシン、ペプシンから選択される、請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２３】
前記生物学的に活性な物質が抗体又は抗体フラグメントである、請求項１〜１８のいずれか１項記載の方法。
【請求項２４】
前記カップリング試薬が、ビス(2-オキソ-3-オキサゾリジニル)ホスホニッククロリド（BOP-Cl）、ブロモトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸（PyBroP）、ベンゾトリアゾール-1-イル-オキシ-トリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸（PyBOP）、n-ヒドロキシスクシンイミドビオチン、2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸（HBTU）、ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジスクシンイミジル炭酸、1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド（EDC）、ビス(2-オキソ-3-オキサゾリジニル)ホスフィン、ジイソプロピルカルボジイミド（DIPC）、2-(1H-ベンゾトリオキサゾリル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸（TBTU）、2-(5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸（TNTU）、パラニトロフェニルクロロギ酸、O-(n-スクシンイミジル)-1,1,3,3-テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸（TSTU）からなる群から選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項２５】
前記１又は複数の表面結合タンパク質を前記ポリマー粒子から除去する、請求項１〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
前記組成物が表面結合タンパク質を有するポリマー粒子から本質的に成る、請求項１〜２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２７】
表面結合タンパク質を有するポリマー粒子から本質的に成る組成物であって、当該粒子はポリマーコア及び１もしくは複数の表面結合タンパク質を含んで成り、ここで当該表面結合タンパク質は
Ａ）ポリマー粒子結合ドメインを含んで成る、ポリマー粒子の形成に関係する１もしくは複数のタンパク質；又は
Ｂ）(i)ポリマー粒子結合ドメインと、(ii)１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせに結合することのできる少なくとも１つの結合ドメインを含んで成る１もしくは複数の融合タンパク質；又は
Ｃ）(i)ポリマー粒子結合ドメインと、(ii) 少なくとも１つ生物学的に活性なタンパク質とを含んで成る、１もしくは複数の融合タンパク質；又は
Ｄ）(i)ポリマー粒子結合ドメインを含んで成る、ポリマー粒子の形成に関係する１もしくは複数のタンパク質と、(ii)１もしくは複数の生物学的に活性な物質もしくは１もしくは複数のカップリング試薬もしくはそれらの組み合わせに結合することのできる少なくとも１つの結合ドメインとを含んで成る、１もしくは複数の融合タンパク質；又は
Ｅ）(i)ポリマー粒子結合ドメインを含んで成る、ポリマー粒子の形成に関係する１もしくは複数のタンパク質と、(ii) 少なくとも１つ生物学的に活性なタンパク質とを含んで成る、１もしくは複数の融合タンパク質；又は
Ｆ）Ａ）〜Ｅ）の２以上の組み合わせ；
を含んで成る、組成物。
【請求項２８】
ポリマー粒子の形成に関係する１もしくは複数のタンパク質がポリマーデポリメラーゼ、ポリマー調節因子、ポリマーシンターゼ及び粒子サイズ制御タンパク質から成る群から選択される、請求項２７記載の組成物。
【請求項２９】
前記ポリマー粒子結合ドメインがポリマーデポリメラーゼ、ポリマー調節因子、ポリマーシンターゼ及び粒子サイズ制御タンパク質から成る群から選択されるタンパク質の粒子結合ドメインを含んで成る、請求項２７記載の組成物。
【請求項３０】
前記ポリマーがメチル基、アルキル基、ヒドロキシル基、フェニル基、スルフヒドリル基、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、アルデヒド基、ケト基、エーテル基、カルボキシル基、O-エステル基、チオエステル基、カルボン酸アミド基、ヘミアセタール基、アセタール基、リン酸モノエステル基及びリン酸ジエステル基、又はそれらの１以上の組み合わせから選択される側部官能基を有する脂肪酸モノマーを含んで成る、請求項２７〜２９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３１】
前記ポリマー粒子が
Ａ）１０ｎｍ〜３μｍ；
Ｂ）１０ｎｍ〜９００ｎｍ；
Ｃ）１０ｎｍ〜１００ｎｍ；
Ｄ）５０ｎｍ〜５００ｎｍ；又は
Ｅ）１５０ｎｍ〜２５０ｎｍ
の平均直径を有する、請求項２７〜３０のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３２】
前記コアが（ａ）少なくとも１つの生物学的に活性な物質、（ｂ）少なくとも１つの染料、又は（ｃ）少なくとも１つの生物学的に活性な物質と少なくとも１つの染料、を更に含んで成る、請求項２７〜３１のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３３】
前記少なくとも１つの結合ドメインが１もしくは複数のオリゴペプチド、１もしくは複数の酵素、１もしくは複数のアブザイム、１もしくは複数の非触媒タンパク質、１もしくは複数のＦＬＡＧタンパク質及び１もしくは複数のシステイン残基からなる群から選択される、請求項２７〜３２のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３４】
Ａ）カップリング試薬が前記結合ドメインに結合している；又は
Ｂ）カップリング試薬が前記結合ドメインに結合しており、生物学的に活性な物質が当該カップリング試薬に結合している；又は
Ｃ）生物学的に活性な物質が前記結合ドメインに結合している；又は
Ｄ）ポリマー粒子の形成に関係しているタンパク質が当該タンパク質に結合したカップリング試薬を含んで成る少なくとも１つの結合ドメインを含んで成る、
請求項２７〜３３のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３５】
前記生物学的に活性な物質が、存在しているなら、別の生物学的に活性な物質に結合できる、請求項２７〜３４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３６】
前記生物学的に活性な物質が医薬的に活性な物質である、請求項２７〜３４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３７】
前記生物学的に活性な物質が
Ａ）ジデオキシイノシン、フロクスウリジン、6-メルカプトプリン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、1-ダルビシン、シスプラチン、メトトレキセート、タキソール、抗生物質、抗血液凝固薬、殺菌薬、抗不整脈薬、これら活性成分の前駆体もしくは誘導体；又は
Ｂ）インスリン、カルシトニン、ACTH、グルカゴン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、エリスロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、天然には存在しないアヘン製剤、スーパーオキシドディスムターゼ、抗体、インターフェロン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、リボヌクレアーゼ、トリプシン、キモトリプシンもしくはペプシン；
から選択される、請求項２７〜３４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３８】
前記生物学的に活性な物質が、インスリン、カルシトニン、ACTH、グルカゴン、ソマトスタチン、ソマトトロピン、ソマトメジン、副甲状腺ホルモン、エリスロポエチン、視床下部放出因子、プロラクチン、甲状腺刺激ホルモン、エンドルフィン、エンケファリン、バソプレッシン、天然には存在しないアヘン製剤、スーパーオキシドディスムターゼ、抗体、インターフェロン、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、リボヌクレアーゼ、トリプシン、キモトリプシンもしくはペプシンから選択される、請求項２７〜３４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項３９】
前記生物学的に活性な物質が抗体又は抗体フラグメントである、請求項２７〜３４のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４０】
前記表面結合タンパク質がＡ）〜Ｅ）の２以上を含んで成る、請求項２７〜３９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４１】
前記表面結合タンパク質がＡ）〜Ｅ）のいずれかを２以上を含んで成る、請求項２７〜３９のいずれか１項記載の組成物。
【請求項４２】
請求項１〜２６のいずれか１項記載の方法により調製された組成物。
【請求項４３】
請求項１〜２６のいずれか１項記載の方法により調製されたポリマー粒子の組成物又は請求項２７〜４２のいずれか１項記載のポリマー粒子の組成物を含んで成る、医薬製剤、殺虫剤又は除草剤。
【請求項４４】
第二の生物学的に活性な物質を結合させる方法であって：
Ａ）請求項１〜２６のいずれか１項記載の方法により調製されたポリマー粒子の組成物又は請求項２７〜４２のいずれか１項記載のポリマー粒子の組成物を用意し、ここで結合ドメインが存在している場合には任意的に結合ドメインにカップリング試薬が結合しており；そして
Ｂ）当該組成物を、前記組成物を第二の生物学的に活性な物質を含んで成るサンプルと接触させ、当該結合ドメイン又は生物学的に活性なタンパク質又はカップリング試薬を当該第二の生物学的に活性な物質に結合させる、
ことを含んで成る方法。
【請求項４５】
前記第二の生物学的に活性な物質がオリゴペプチド、酵素、アブザイム、非触媒タンパク質又は抗体である、請求項４４記載の方法。