【手続補正書】
【提出日】平成18年4月18日(2006.4.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
別のポリペプチドに融合した、ニューレグリンヘパリン結合ドメインポリペプチド（Ｎ−ＨＢＤ）を含むハイブリッド融合ポリペプチドをコードするハイブリッド核酸分子であって、該分子は、以下：
（ａ）約１００ヌクレオチドより長くない第一の核酸配列であって、該第一の核酸配列は、動物Ｎ−ＨＢＤポリペプチドまたは該ポリペプチドのヘパリン結合誘導体もしくはヘパリン結合ホモログをコードし、該Ｎ−ＨＢＤポリペプチドまたは誘導体は、以下：
（ｉ）免疫グロブリンスーパーファミリーのＣ２サブファミリーのメンバーであるが、同じ動物種由来の免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖のＣ２ドメインに対して約４０％未満の配列同一性を有し；そして
（ｉｉ）従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンおよびヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する
ことを特徴とする、第一の核酸；
（ｂ）必要に応じて、該第一の核酸配列とインフレームで融合された、リンカーペプチドをコードするリンカー核酸配列；ならびに
（ｃ）（ｉ）該第一の核酸配列または該リンカー核酸配列にインフレームで連結しており、そして（ｉｉ）第二のポリペプチドＰｔｒｇをコードする第二の核酸配列、
を含む、ハイブリッド核酸分子。
【請求項２】
別のポリペプチドに融合した、ニューレグリンヘパリン結合ドメインポリペプチド（Ｎ−ＨＢＤ）を含むハイブリッド融合ポリペプチドをコードするハイブリッド核酸分子であって、該分子は、以下：
（ａ）以下：
（ｉ）ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ；
（ｉｉ）ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＥＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ；
（ｉｉｉ）以下の配列：
ｇｇｔ  ｃａｇ  ａａｇ  ｃｔａ  ｇｔｇ  ｃｔａ  ａｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｃｔ  ｔｃａ  ｇａｇ  ｔａｃ  ｃｃｔ  ｇｃｇ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａａ  ｔｇｇ  ｔｔａ  ａａｇ  ａａｃ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｇａａ  ａｔａ  ａｃｇ  ａａａ  ａａａ  ａａｃ  ａｇａ  ｃｃｃ  ｇａａ  ａａｔ  ｇｔｃ  ａａｇ  ａｔｃ  ｃｃｃ  ａａａ  ａａｇ  ｃａａ  ａａｇ  ａａａ  ｔａｃ  ｔｃｔ  ｇａｇ  ｃｔｔ  ｃａｔ  ａｔｔ  ｔａｔ  ａｇａ  ｇｃｃ  ａｃｇ  ｔｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｃ  ｇｃｔ  ｇｇｇ  ｇａａ  ｔａｃ  ｇｃａ  ｔｇｃ  ａｇａ  ｇｔｇ  ａｇｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｇｇ
によってコードされるポリペプチド；
（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）のいずれか１つのヘパリン結合誘導体もしくはヘパリン結合ホモログ
から選択される第一のポリペプチドをコードする、第１の核酸配列；
（ｂ）必要に応じて、該第一の核酸配列とインフレームで融合された、リンカーペプチドをコードするリンカー核酸配列；および
（ｃ）（ｉ）該第一の核酸配列または該リンカー核酸配列にインフレームで連結しており、そして、（ｉｉ）第二のポリペプチドＰｔｒｇをコードする第二の核酸配列、
を含む、ハイブリッド核酸分子。
【請求項３】
前記第一の核酸配列が、以下の配列：
ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ
を有する第一のポリペプチドをコードする、請求項２に記載のハイブリッド核酸分子。
【請求項４】
前記第一の核酸（ａ）が、以下の配列：
（ａ）ｇｇｔ  ｔｃｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｔｃ  ｃｔｔ  ｃｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｇｔ  ｔｃｔ  ｇａａ  ｔａｃ  ｔｃｃ  ｔｃｔ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａｇ  ｔｇｇ  ｔｔｃ  ａａｇ  ａａｔ  ｇｇｇ  ａａｔ  ｇａａ  ｔｔｇ  ａａｔ  ｃｇａ  ａａａ  ａａｃ  ａａａ  ｃｃａ  ｃａａ  ａａｔ  ａｔｃ  ａａｇ  ａｔａ  ｃａａ  ａａａ  ａａｇ  ｃｃａ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｔｃａ  ｇａａ  ｃｔｔ  ｃｇｃ  ａｔｔ  ａａｃ  ａａａ  ｇｃａ  ｔｃａ  ｃｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｔ  ｔｃｔ  ｇｇａ  ｇａｇ  ｔａｔ  ａｔｇ  ｔｇｃ  ａａａ  ｇｔｇ  ａｔｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｔｔａ  ｇｇａ；
（ｂ）以下のポリペプチド：
ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＥＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ
をコードする核酸配列；
（ｃ）ｇｇｔ  ｃａｇ  ａａｇ  ｃｔａ  ｇｔｇ  ｃｔａ  ａｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｃｔ  ｔｃａ  ｇａｇ  ｔａｃ  ｃｃｔ  ｇｃｇ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａａ  ｔｇｇ  ｔｔａ  ａａｇ  ａａｃ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｇａａ  ａｔａ  ａｃｇ  ａａａ  ａａａ  ａａｃ  ａｇａ  ｃｃｃ  ｇａａ  ａａｔ  ｇｔｃ  ａａｇ  ａｔｃ  ｃｃｃ  ａａａ  ａａｇ  ｃａａ  ａａｇ  ａａａ  ｔａｃ  ｔｃｔ  ｇａｇ  ｃｔｔ  ｃａｔ  ａｔｔ  ｔａｔ  ａｇａ  ｇｃｃ  ａｃｇ  ｔｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｃ  ｇｃｔ  ｇｇｇ  ｇａａ  ｔａｃ  ｇｃａ  ｔｇｃ  ａｇａ  ｇｔｇ  ａｇｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｇｇ
のうちの１つから選択される、請求項２に記載のハイブリッド核酸分子。
【請求項５】
前記第一の核酸が、以下：
ｇｇｔ  ｔｃｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｔｃ  ｃｔｔ  ｃｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｇｔ  ｔｃｔ  ｇａａ  ｔａｃ  ｔｃｃ  ｔｃｔ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａｇ  ｔｇｇ  ｔｔｃ  ａａｇ  ａａｔ  ｇｇｇ  ａａｔ  ｇａａ  ｔｔｇ  ａａｔ  ｃｇａ  ａａａ  ａａｃ  ａａａ  ｃｃａ  ｃａａ  ａａｔ  ａｔｃ  ａａｇ  ａｔａ  ｃａａ  ａａａ  ａａｇ  ｃｃａ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｔｃａ  ｇａａ  ｃｔｔ  ｃｇｃ  ａｔｔ  ａａｃ  ａａａ  ｇｃａ  ｔｃａ  ｃｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｔ  ｔｃｔ  ｇｇａ  ｇａｇ  ｔａｔ  ａｔｇ  ｔｇｃ  ａａａ  ｇｔｇ  ａｔｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｔｔａ  ｇｇａ
である、請求項４に記載のハイブリッド核酸分子。
【請求項６】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で、請求項１〜５のいずれかに記載の第一の核酸分子とハイブリダイズする、約１００ヌクレオチドより長くない、単離された核酸分子。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の核酸分子であって、前記第二のポリペプチドＰｔｒｇは、
（ａ）可溶性形態の細胞表面レセプターであって、該細胞表面レセプターが、前記融合ポリペプチドの一部として、該レセプターに対するリガンドに結合することにより、該レセプターのリガンド活性化に対するアンタゴニストとして作用する能力を有する、細胞表面レセプター；または
（ｂ）細胞表面レセプターに対するリガンドであって、該リガンドが、該融合ポリペプチドの一部として、該レセプターに結合することより、該レセプターでのアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとして作用する能力を有する、リガンド、
である、核酸分子。
【請求項８】
前記レセプターが、チロシンキナーゼレセプター、Ｇタンパク質共役レセプターまたは抗体である、請求項７に記載の核酸分子。
【請求項９】
前記レセプターがチロシンキナーゼレセプターである、請求項８に記載の核酸分子。
【請求項１０】
前記チロシンキナーゼレセプターが、上皮増殖因子レセプターである、請求項９に記載の核酸分子。
【請求項１１】
前記リガンドが、サイトカインまたは増殖因子である、請求項７〜９のいずれかに記載の核酸分子。
【請求項１２】
前記リガンドが、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子、神経栄養因子、血管内皮増殖因子、トランスフォーミング増殖因子、ネトリン（ｎｅｔｒｉｎ）またはエフリン（ｅｐｈｒｉｎ）である、請求項１１に記載の核酸分子。
【請求項１３】
前記リガンドが上皮増殖因子である、請求項１２に記載の核酸分子。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の核酸を含む発現ベクターであって、該核酸が、以下：
（ａ）プロモーター、および
（ｂ）必要に応じて、真核生物細胞における該核酸の発現を調節する、さらなる調節配列、
に作動可能に連結されており、該ベクターが、細胞へのインビトロまたはインビボでの送達の後に、該細胞中で発現され得る、発現ベクター。
【請求項１５】
プラスミドである、請求項１４に記載の発現ベクター。
【請求項１６】
ウイルスベクターである、請求項１４に記載の発現ベクター。
【請求項１７】
請求項１〜１３のいずれかに記載の核酸分子で形質転換またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１８】
請求項１４〜１６のいずれかに記載の発現ベクターで形質転換またはトランスフェクトされた細胞。
【請求項１９】
哺乳動物細胞である、請求項１７または１８に記載の細胞。
【請求項２０】
ヒト細胞である、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】
単離された哺乳動物細胞であって、該単離された哺乳動物細胞は、別のポリペプチドに融合された、哺乳動物ニューレグリンヘパリン結合ドメインポリペプチド（Ｎ−ＨＢＤ）を含むハイブリッド融合ポリペプチドが、該細胞により発現されるように、該ハイブリッド融合ポリペプチドをコードする外因性の核酸分子でトランスフェクトされており、該ハイブリッド融合ポリペプチドのＮ−ＨＢＤポリペプチドは、
（ａ）免疫グロブリンスーパーファミリーのＣ２サブファミリーのメンバーであるが、同じ動物種由来の免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖のＣ２ドメインに対して約４０％未満の配列同一性を有し；そして
（ｂ）従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンおよびヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する、細胞。
【請求項２２】
前記外因性核酸分子が、
（ａ）ｇｇｔ  ｔｃｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｔｃ  ｃｔｔ  ｃｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｇｔ  ｔｃｔ  ｇａａ  ｔａｃ  ｔｃｃ  ｔｃｔ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａｇ  ｔｇｇ  ｔｔｃ  ａａｇ  ａａｔ  ｇｇｇ  ａａｔ  ｇａａ  ｔｔｇ  ａａｔ  ｃｇａ  ａａａ  ａａｃ  ａａａ  ｃｃａ  ｃａａ  ａａｔ  ａｔｃ  ａａｇ  ａｔａ  ｃａａ  ａａａ  ａａｇ  ｃｃａ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｔｃａ  ｇａａ  ｃｔｔ  ｃｇｃ  ａｔｔ  ａａｃ  ａａａ  ｇｃａ  ｔｃａ  ｃｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｔ  ｔｃｔ  ｇｇａ  ｇａｇ  ｔａｔ  ａｔｇ  ｔｇｃ  ａａａ  ｇｔｇ  ａｔｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｔｔａ  ｇｇａ；
（ｂ）以下のポリペプチド：
ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＥＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ
をコードする核酸配列；または
（ｃ）ｇｇｔ  ｃａｇ  ａａｇ  ｃｔａ  ｇｔｇ  ｃｔａ  ａｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｃｔ  ｔｃａ  ｇａｇ  ｔａｃ  ｃｃｔ  ｇｃｇ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａａ  ｔｇｇ  ｔｔａ  ａａｇ  ａａｃ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｇａａ  ａｔａ  ａｃｇ  ａａａ  ａａａ  ａａｃ  ａｇａ  ｃｃｃ  ｇａａ  ａａｔ  ｇｔｃ  ａａｇ  ａｔｃ  ｃｃｃ  ａａａ  ａａｇ  ｃａａ  ａａｇ  ａａａ  ｔａｃ  ｔｃｔ  ｇａｇ  ｃｔｔ  ｃａｔ  ａｔｔ  ｔａｔ  ａｇａ  ｇｃｃ  ａｃｇ  ｔｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｃ  ｇｃｔ  ｇｇｇ  ｇａａ  ｔａｃ  ｇｃａ  ｔｇｃ  ａｇａ  ｇｔｇ  ａｇｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｇｇ
から選択される配列、またはヘパリン結合ポリペプチドをコードする、それらのホモログもしくは誘導体を含む、請求項２１に記載の細胞。
【請求項２３】
前記外因性核酸分子が、以下：
ｇｇｔ  ｔｃｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｔｃ  ｃｔｔ  ｃｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｇｔ  ｔｃｔ  ｇａａ  ｔａｃ  ｔｃｃ  ｔｃｔ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａｇ  ｔｇｇ  ｔｔｃ  ａａｇ  ａａｔ  ｇｇｇ  ａａｔ  ｇａａ  ｔｔｇ  ａａｔ  ｃｇａ  ａａａ  ａａｃ  ａａａ  ｃｃａ  ｃａａ  ａａｔ  ａｔｃ  ａａｇ  ａｔａ  ｃａａ  ａａａ  ａａｇ  ｃｃａ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｔｃａ  ｇａａ  ｃｔｔ  ｃｇｃ  ａｔｔ  ａａｃ  ａａａ  ｇｃａ  ｔｃａ  ｃｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｔ  ｔｃｔ  ｇｇａ  ｇａｇ  ｔａｔ  ａｔｇ  ｔｇｃ  ａａａ  ｇｔｇ  ａｔｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｔｔａ  ｇｇａ
を含む、請求項２２に記載の細胞。
【請求項２４】
別のポリペプチドに融合されたヘパリン結合ドメインポリペプチドを含む、ハイブリッド融合ポリペプチドであって、該ハイブリッド融合ポリペプチドは、以下：
（ａ）第一の標的化ポリペプチドであって、該第一の標的化ポリペプチドは、該融合ポリペプチドが細胞または組織に接触し得る場合に、ヘパラン硫酸を結合することより、該ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織の表面に、該融合ポリペプチドを局在化し、
ここで、該ハイブリッド融合ポリペプチドは、従来のヘパリン結合アッセイまたはヘパラン硫酸結合アッセイにおいて測定される場合、１０−５Ｍ以下のＫｄでヘパリンまたはヘパラン硫酸のプロテオグリカンに結合する、
第一の標的化ポリペプチド；ならびに
（ｂ）該ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織の表面に標的化または局在化されるべき、第二の標的化されるポリペプチドＰｔｒｇ；を含み、
ここで、該ハイブリッド融合ポリペプチドは、該Ｐｔｒｇの作用を介して、標的レセプターの刺激またはブロックにおいて、ネイティブのＰｔｒｇまたは該標的化ポリペプチドに融合されていないＰｔｒｇと比較して増強された生物学的活性を有する、
ハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項２５】
請求項２４に記載のハイブリッド融合ポリペプチドであって、ここで、前記第一の標的化ポリペプチドが、ニューレグリンヘパリン結合ドメイン（Ｎ−ＨＢＤ）またはＮ−ＨＢＤのヘパリン結合ホモログまたはヘパリン結合誘導体の全てまたは一部を含み、ここで、
（ｉ）前記第一のポリペプチドが、前記第二のポリペプチドに直接的に融合されているか、または
（ｉｉ）必要に応じて、該第一のポリペプチドが、該第二のポリペプチドに融合されたリンカーペプチド配列に融合されている、
ハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項２６】
請求項１〜１３のいずれかに記載の核酸分子、または該核酸分子のフラグメント、もしくはホモログによりコードされる、請求項２４または請求項２５に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項２７】
請求項１４〜１６のいずれかに記載の発現ベクターの組換え発現により産生される、請求項２４または２５に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項２８】
請求項２４〜２７のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチドであって、ここで、前記第一のポリペプチドのアミノ酸配列が、以下：
（ａ）ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ；
（ｂ）ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＥＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ；
（ｃ）以下の配列：
ｇｇｔ  ｃａｇ  ａａｇ  ｃｔａ  ｇｔｇ  ｃｔａ  ａｇｇ  ｔｇｔ  ｇａａ  ａｃｃ  ａｃｔ  ｔｃａ  ｇａｇ  ｔａｃ  ｃｃｔ  ｇｃｇ  ｃｔｃ  ａｇａ  ｔｔｃ  ａａａ  ｔｇｇ  ｔｔａ  ａａｇ  ａａｃ  ｇｇｇ  ａａｇ  ｇａａ  ａｔａ  ａｃｇ  ａａａ  ａａａ  ａａｃ  ａｇａ  ｃｃｃ  ｇａａ  ａａｔ  ｇｔｃ  ａａｇ  ａｔｃ  ｃｃｃ  ａａａ  ａａｇ  ｃａａ  ａａｇ  ａａａ  ｔａｃ  ｔｃｔ  ｇａｇ  ｃｔｔ  ｃａｔ  ａｔｔ  ｔａｔ  ａｇａ  ｇｃｃ  ａｃｇ  ｔｔｇ  ｇｃｔ  ｇａｃ  ｇｃｔ  ｇｇｇ  ｇａａ  ｔａｃ  ｇｃａ  ｔｇｃ  ａｇａ  ｇｔｇ  ａｇｃ  ａｇｃ  ａａａ  ｃｔａ  ｇｇｇ
によりコードされるポリペプチド；または
（ｄ）（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のヘパリン結合ホモログもしくはヘパリン結合誘導体の配列、
から選択される、ハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項２９】
前記第一のポリペプチドのアミノ酸配列が、以下：
ＧＳＫＬＶＬＲＣＥＴ  ＳＳＥＹＳＳＬＲＦＫ  ＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲ  ＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱ  ＫＫＰＧＫＳＥＬＲＩ  ＮＫＡＳＬＡＤＳＧＥ  ＹＭＣＫＶＩＳＫＬＧ
である、請求項２８に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３０】
前記（ｄ）のホモログもしくは誘導体が、以下の配列：
ＫＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲＫＮＫＰＱＮＩＫＩＱＫＫＰＧＫ；
ＫＷＦＫＮＧＮＥＬＮＲＫＮＫＰＥＮＩＫＩＱＫＫＰＧＫ；または
ＫＷＬＫＮＧＫＥＩＴＫＫＮＲＰＥＮＶＫＩＰＫＫＱＫＫ
を有する、請求項２８に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３１】
請求項２５に記載のハイブリッド融合ポリペプチドであって、ここで、前記（ｄ）のホモログまたは誘導体が、以下の配列：
Ｋ−ｘ−ｘ−Ｋ−ｘ−ｘ−ｘ−ｘ−ｘ−ｘ−Ｒ−Ｋ−ｘ−Ｋ−ｘ−ｘ−ｘ−ｘ−Ｋ−ｘ−ｘ−Ｋ−Ｋ−ｘ−ｘ−Ｋ
であって、ここで、ｘが任意のアミノ酸である、配列、または少なくとも６つのＬｙｓ残基またはＡｒｇ残基を有する該配列のフラグメントを有する、ハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３２】
前記リンカーを含み、該リンカーが、プロテアーゼにより切断可能である、請求項２５〜３１のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３３】
前記リンカーが、配列ＶＰＲＧＳＤまたは配列ＤＤＫＤＷＨを含むペプチドである、請求項３２に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３４】
直線状多量体であって、前記第一の標的化ポリペプチドの２つ以上の単量体リピートを含み、該単量体リピートは、（ｉ）直接、または（ｉｉ）該単量体リピートの間に存在するリンカー配列によって端と端をあわせて結合している、請求項２４〜３１のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３５】
請求項２４〜３３のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチドの、タンデムに連結された二量体または三量体。
【請求項３６】
請求項２４〜３５のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチドであって、ここで、前記第二のポリペプチドＰｔｒｇは：
（ａ）可溶性形態の細胞表面レセプターであって、該融合ポリペプチドの一部として、前記レセプターに対するリガンドに結合し、それにより該レセプターのリガンド活性化に対するアンタゴニストとして作用する能力を有する、レセプター；または
（ｂ）細胞表面レセプターに対するリガンドであって、該融合ポリペプチドの一部として、該レセプターに結合し、それにより、該レセプターでのアゴニストまたはアンタゴニストのいずれかとして作用する能力を有する、リガンド、
である、ハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３７】
前記レセプターが、チロシンキナーゼレセプター、Ｇタンパク質共役レセプターまたは抗体である、請求項３６に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３８】
前記チロシンキナーゼレセプターが、上皮増殖因子レセプターである、請求項３７に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項３９】
前記リガンドが、サイトカインまたは増殖因子である、請求項３６または請求項３７に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項４０】
前記リガンドが、上皮増殖因子、線維芽細胞増殖因子、神経栄養因子、血管内皮増殖因子、トランスフォーミング増殖因子、ネトリンまたはエフリンである、請求項３９に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項４１】
前記神経栄養因子が、脳由来の神経栄養因子、神経膠由来の神経栄養因子、ニューロトロフィン３、ニューロトロフィン４、および神経増殖因子からなる群より選択される、請求項４０に記載のハイブリッド融合ポリペプチド。
【請求項４２】
標的化されるポリペプチドを細胞または組織の表面に送達するためおよび該標的化されるポリペプチドの生物学的活性を増強するために有用な薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、以下：
（ａ）請求項２４〜４１のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチド；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項４３】
哺乳動物細胞であって、請求項２４〜４１のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチドをその表面上で発現するかまたは分泌する、哺乳動物細胞。
【請求項４４】
ヒト細胞である、請求項４３に記載の哺乳動物細胞。
【請求項４５】
標的化されるポリペプチドを、細胞または組織の表面に送達するのに有用である薬学的組成物であって、該ポリペプチドは、組換え細胞の表面上で発現される形態であるか、または組換え細胞により分泌される形態であり、該組成物は、以下：
（ａ）請求項１７〜２３、４３または４４のいずれかに記載の細胞；および
（ｂ）薬学的に受容可能な賦形剤またはキャリア、
を含む、薬学的組成物。
【請求項４６】
ヘパラン硫酸に富んだ細胞または組織の表面に、標的化されるポリペプチドを局在化し、それにより該表面でのその生物学的活性を増強するためのインビトロの方法であって、該方法は、請求項２４〜４１のいずれかに記載のハイブリッド融合ポリペプチドを該表面に提供する工程を包含し、それにより該融合ポリペプチドのＰｔｒｇは、該表面に局在化され、その結果、該Ｐｔｒｇの生物学的活性が、ネイティブのＰｔｒｇまたは該標的化ポリペプチドに融合されていないＰｔｒｇの活性と比較して増加する、方法。
【請求項４７】
Ｐｔｒｇの作用により処置可能である被験体における疾患または状態を処置するための組成物の製造のための、請求項２４〜４１のいずれか１項に記載のハイブリッド融合ポリペプチドの使用であって、該組成物により、前記融合ポリペプチドのＰｔｒｇの生物学的活性が、ネイティブのＰｔｒｇまたは該標的化ポリペプチドに融合されていないＰｔｒｇの活性と比較して増加し、そして、該疾患または状態が、腫瘍、癌または神経学的障害である、使用。
【請求項４８】
Ｐｔｒｇの作用により処置可能である被験体における疾患または状態を処置するための組成物の製造のための、請求項１７〜２３、４３または４４のいずれか１項に記載の細胞の使用であって、それにより、Ｐｔｒｇを有するかもしくはＰｔｒｇを分泌する細胞が、該細胞または組織の表面において利用可能となり、そして、前記融合ポリペプチドのＰｔｒｇの生物学的活性が、ネイティブのＰｔｒｇまたは該標的化ポリペプチドに融合されていないＰｔｒｇの活性と比較して増加し、そして、該疾患または状態が、腫瘍、癌または神経学的障害である、使用。
【請求項４９】
前記神経学的障害が、神経変性障害、多発性硬化症、発作、癲癇または外傷性脳傷害、外傷性脊髄傷害もしくは外傷性末梢神経傷害である、請求項４７または４８に記載の使用。
【請求項５０】
前記神経学的障害が、アルツハイマー病、パーキンソン病、および筋萎縮性側索硬化症から選択される神経変性疾患である、請求項４９に記載の使用。
【請求項５１】
実施例に記載の、ハイブリッド融合ポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２４】
（実施例Ｖ）
（他のタンパク質へのＨＢＤの付加はその活性を増加させる）
図８Ａで図解的に示した、ｅｒｂＢ４（ＥＧＦのチロシンキナーゼレセプター）の細胞外ドメインと融合したＮ−ＨＢＤの融合タンパク質を、標準的な組換えＤＮＡ方法によって産生した。この産物は「ＨＢＤＢ４ＨＡ」と呼ばれ、そして市販で入手可能なエピトープタグ（血球凝集素、「ＨＡ」）を含む。この構築物を、ｅｒｂＢ４のＴｙｒのＮＲＧ誘導リン酸化を阻害するその能力に関して試験した。コントロールアンタゴニストは、ｅｒｂＢ４の細胞外ドメインおよびＨＡタグの融合物であった。タグは、精製中の転換の簡便さのために含まれた。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２５】
これらのアンタゴニストを、２つのＮＲＧ形態：ＨＢＤを含むＩＧ−ＥＧＦ、およびそれを含まないＥＧＦドメインによって誘導されたアゴニスト誘導チロシンリン酸化を阻害するその能力に関して試験した。アゴニストまたはアゴニストおよびアンタゴニストの混合物を、Ｌ６筋細胞と共に４０分間インキュベートし、その後細胞を溶解し、そして、溶解物を５％のＳＤＳゲルに流した。ゲルを市販の抗リン酸化Ｔｙｒ抗体で染色した。これは実施例ＩおよびＩＩで記載される。実施例ＩＩで述べたように、ｅｒｂＢレセプター複合体は、リン酸化チロシンウェスタンブロットで、ｅｒｂＢ２、ｅｒｂＢ３、およびｅｒｂＢ４のリン酸化形態を含む、「ｐ１８５」と呼ばれる約１８５ｋＤａの拡散したバンドとして現れた。そのウェスタンブロットを図８Ｃで示し、そしてリン酸化Ｔｙｒの相対量を、図８Ｂのグラフで示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２２６】
その結果は、ＨＢＤの融合物は、ＨＢＤを欠く構築物（Ｂ４ＨＡ）と比較して、ＮＲＧにより誘導されるｅｒｂＢレセプターのチロシンリン酸化の阻害において、ｅｒｂＢ４タンパク質（ＨＢＤＢ４ＨＡグループ）に、増加したアンタゴニスト活性を与えることを示す。これは、２つの形態のＮＲＧ：ＨＢＤを含むもの（「ＩＧ−ＥＧＦ」）およびＨＢＤを含まないもの（ＥＧＦ）を用いて観察された。従って、Ｎ−ＨＢＤを他のタンパク質と組み合せることによって、そのタンパク質の結合活性および生物学的効果を増加させることが可能である。