【手続補正書】
【提出日】平成17年8月1日(2005.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】 ペルオキシダーゼ酵素と、過酸化物及び式Ｉ
【化１】
2001516589.tif 000001
［式中、
Ｘは、１−２０炭素原子の置換した又は未置換のアルキル、置換した又は未置換のアリール、置換した又は未置換のアラルキル基、１−２０炭素原子を有する置換した又は未置換のアルキル又はアリールカルボキシル基、トリ（Ｃ1−Ｃ8アルキル）シリル基、ＳＯ3-基、グリコシル基及び式−ＰＯ（ＯＲ′）（ＯＲ”）（式中Ｒ′とＲ”は、１−２０炭素原子の置換した又は未置換のアルキル、置換した又は未置換のアリール及び置換した又は未置換のアラルキル基、トリアルキルシリル基、アルカリ金属カチオン及びアルカリ土類カチオンから独立して選択される）のホスホリル基から選択され、
Ｚ1とＺ2は、ＯとＳ原子から独立して選択され、
Ｒ1は、化学ルミネセンス及び式Ａ1Ａ2Ｃ＝Ｏ★（式中，Ａ1とＡ2は、少なくとも一つが水素ではなく且つＡ1とＡ2が共に水素原子でない場合にヘテロサイクリック又はカルボサイクロック環で一緒に結合できるという条件で、水素、アルキル、置換したアルキル、アリール、置換したアリール、アラルキル、置換したアラルキル、ヘテロアリール、置換したヘテロアリール、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリールオキシ、及びアルキルチオ基から独立して選択される）を有する電子励起状態化合物を生じるためのＣ，Ｎ，Ｏ，Ｓ，Ｐ，Ｓｉ及びハロゲン原子から選択される１から５０までの非水素原子を有する有機基である］の少なくとも１の化合物
とを反応させることを含む、化学ルミネセンス生成方法。
【請求項２】 式Ｉの化合物が、式ＩＩ
【化２】
2001516589.tif 000002
［Ａ1とＡ2が、Ｎ，Ｏ及びＳ原子から選択される少なくとも１のヘテロ原子を含む、少なくとも１の５又は６員環を含むヘテロサイクリック環基Ｈｅｔを形成するように一緒に結合される］
の化合物から選択される請求項１記載の方法。
【請求項３】 式ＩＩの化合物が、式ＩＩＩの化合物と式ＩＶの化合物：
【化３】
2001516589.tif 000003
【化４】
2001516589.tif 000004
［式中、Ｑは、ＮＲ6、Ｏ及びＳ原子から選択され、Ｒ2からＲ5のそれぞれは、生成すべき化学ルミネセンスを与えるＣ，Ｈ，Ｎ，Ｏ，Ｓ，Ｐ及びハロゲン原子から選択される１から５０までの原子を含む置換基であり、且つ隣接した基の対は少なくとも１の５又は６員環を含むカルボサイクリック又はヘテロサイクリック環系を形成するために一緒に結合でき、且つＲ6はＣ，Ｎ，Ｏ，Ｓ，Ｐ，Ｓｉ及びハロゲン原子から選択される１から５０までの非水素原子を含む有機基である］
から選択される請求項２記載の方法。
【請求項４】 式ＩＩＩの化合物において、ＱがＮＲ6基であり、Ｚ2がＯ原子と式Ｖ：
【化５】
2001516589.tif 000005
［式中、Ｒ7からＲ14は、Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｏ，Ｓ，Ｐ，Ｓｉ及びハロゲン原子から選択される１から５０までの原子を含むことができ且つ生成すべき化学ルミネセンスを与える独立的な置換基である］
を有する請求項３記載の方法。
【請求項５】 Ｒ7からＲ14の少なくとも１つがハロゲン又はアルコキシ基であり、Ｒ7からＲ14の残りが水素である請求項４記載の方法。
【請求項６】 Ｒ6が、置換した又は未置換のＣ1−Ｃ4アルキル、置換した又は未置換のベンジル、アルコキシアルキル及びカルボキシアルキル基から選択される請求項４記載の方法。
【請求項７】 式Ｖの化合物が、式：
【化６】
2001516589.tif 000006
［式中、Ｒ′とＲ”は、１−２０炭素原子の置換した又は未置換のアルキル、置換した又は未置換のアリール、置換した又は未置換のアラルキル基、トリアルキルシリル基、アルカリ金属カチオンとアルカリ土類カチオンから独立して選択される］
を有する請求項４から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】 Ｒ′とＲ”がアルカリ金属カチオンである請求項７記載の方法。
【請求項９】 式Ｖの化合物が、
【化７】
2001516589.tif 000007
【化８】
2001516589.tif 000008
【化９】
2001516589.tif 000009
【化１０】
2001516589.tif 000010
から選択される請求項４記載の方法。
【請求項１０】 式Ｖの化合物が、式：
【化１１】
2001516589.tif 000011
［式中、Ｒ15は１−２０炭素原子を有する置換した又は未置換のアルキル又は置換した又は未置換のアリール基である］
を有する請求項４記載の方法。
【請求項１１】 Ｒ7からＲ14のそれぞれが水素原子である請求項１０記載の方法。
【請求項１２】 式ＩＩＩの化合物において、ＱがＳ原子であり、Ｚ2がＯ原子であり、Ｒ1がフェニル基であり且つＸがホスホリル基であり且つ式：
【化１２】
2001516589.tif 000012
［式中、Ｒ′とＲ”は、１−２０炭素原子の置換した又は未置換のアルキル、置換した又は未置換のアリール、置換した又は未置換のアラルキル基、トリアルキルシリル基、アルカリ金属カチオンとアルカリ土類カチオンから独立して選択される］
を有する請求項３記載の方法。
【請求項１３】 Ａ1とＡ2の一方が置換した又は未置換のアリール基であり、他方が水素、置換した又は未置換のアルキル、アルコキシ、アルキルチオ及びアリール基から選択される請求項１記載の方法。
【請求項１４】 Ａ1とＡ2の少なくとも１つが、１−４縮合カルボサイクリック又はヘテロサイクリック５又は６員環を含むアリール基である請求項１記載の方法。
【請求項１５】 前記アリール基が、非水素置換体によって置換できるフェニル、ナフチル、アントリル及びピレニル基から選択される請求項１４記載の方法。
【請求項１６】 前記非水素置換体が、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ及びＯＹ１（ここでＹ１は水素又はアルカリ金属イオンである）から選択される請求項１５記載の方法。
【請求項１７】 式１の化合物が、構造
【化１３】
2001516589.tif 000013
又は
【化１４】
2001516589.tif 000014
［式中、Ｙは、水素、アルカリ金属イオン又は置換した又は未置換のアルキル、置換した又は未置換のアリール、置換した又は未置換のアラルキル及びトリアルキルシリル基から選択され、Ｙ′は水素、アルカリ金属イオン、アルキルカルボキシエステル、アリールカルボキシエステル、置換した又は未置換のアルキル、置換した又は未置換のアリール、置換した又は未置換のアラルキル基及びトリアルキルシリル基から選択され且つＹ”が水素とハロゲンから選択される］
を有する請求項１４から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】Ｙが水素又はアルカリ金属イオンである請求項１７記載の方法。
【請求項１９】Ｙ”がクロリンである請求項１７または１８記載の方法。
【請求項２０】 ペルオキシダーゼ酵素が、ラクトペルオキシダーゼ、ミクロペルオキシダーゼ、ミエロペルオキシダーゼ、ハロペルオキシダーゼ、バナジウムブロモペルオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、真菌ペルオキシダーゼ、ダイズペルオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ模擬化合物及びペルオキシダーゼ接合体から選択される請求項１から１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】ペルオキシダーゼ酵素がホースラディッシュペルオキシダーゼである請求項２０の方法。
【請求項２２】 ペルオキシダーゼ接合体が、ハプテン、抗体、タンパク質、核酸及びオリゴヌクレオチドからなる群から選択される生物学的分子に結合したペルオキシダーゼを含む請求項２０または２１記載の方法。
【請求項２３】 過酸化物が、過酸化水素、尿素過酸化物、ペルオキソホウ酸塩及びアルキルヒドロペルオキシドから選択される請求項１から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】 化学ルミネセンスを増大する有効量で少なくとも１のエンハンサー化合物を更に含み、エンハンサー化合物が、好ましくは、フェノール化合物、芳香族アミン及びアリールホウ酸化合物から選択される請求項１から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】 非イオン性又はカチオン性界面活性剤を更に含む請求項１から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】 ルミネセントエネルギー転移剤を更に含む請求項１から２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】（ａ）過酸化物及びペルオキシダーゼ酵素と、少なくとも１つの請求項１から１９のいずれかに記載の式Ｉの化合物とを反応させること；及び
（ｂ）過酸化物又はペルオキシダーゼのいずれか一方である分析物の存在又は量に、生成した化学ルミネセンスの量を関係付けること、
を含む、請求項１に記載の化学ルミネセンス反応による測定方法中の分析物の存在又は量の検出方法。
【請求項２８】 分析物が過酸化物またはペルオキシダーゼ酵素である請求項２７記載の方法。
【請求項２９】（ａ）過酸化物及び特異的結合パートナーに結合したペルオキシダーゼ酵素を含むペルオキシダーゼ接合体と、少なくとも１つの請求項１から１９のいずれかに記載の式Ｉの化合物とを反応させること；及び
（ｂ）過酸化物又はペルオキシダーゼのいずれか一方である分析物の存在又は量に、生成した化学ルミネセンスの量を関係付けること、
を含む、請求項１に記載の化学ルミネセンス反応による測定方法中の分析物の存在又は量の検出方法。
【請求項３０】 特異的結合パートナーが、ハプテン、抗原、抗体、核酸及びオリゴヌクレオチドからなる群から選択される請求項２９記載の方法。
【請求項３１】 ペルオキシダーゼ接合体が分析物または第２の特異的結合パートナーに結合し且つ該第２の特異的結合パートナーが分析物に結合する請求項２９記載の方法。
【請求項３２】 好ましくは、サンドイッチアッセイ、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ、ウェスタンブロットアッセイ、サザンブロットアッセイ、及び、ノーザンブロットアッセイからなる群から選択される免疫アッセイで用いられる請求項２９記載の方法。
【請求項３３】  前記サンドイッチアッセイが競合アッセイである、請求項３２記載の方法。
【請求項３４】（ａ）オキシダーゼ酵素とそれによって過酸化水素を生成するための基質とを反応させること；
（ｂ）該過酸化水素と、ペルオキシダーゼ酵素及び請求項１から１５のいずれかに記載の式Ｉの化合物とを反応させること；及び
（ｃ）分析物の存在又は量に生成した化学ルミネセンスの量を関係付けること、
を含む、請求項１に記載の化学ルミネセント反応による測定法におけるオキシダーゼ酵素又は該オキシダーゼ酵素の基質から選択される分析物の測定方法。
【請求項３５】 水溶液中に：
ａ）請求項１から１９のいずれかに記載の式Ｉの化合物、及び
ｂ）過酸化物、
を含む、ペルオキシダーゼ酵素の存在中で請求項１に記載の化学ルミネセンスを生じる試薬組成物。
【請求項３６】フェノール化合物、芳香族アミン及びアリールホウ酸化合物から選択される少なくとも１のエンハンサーを、化学ルミネセンスを増大するための有効量で更に含む請求項３５記載の組成物。
【請求項３７】 少なくとも１のエンハンサーが、ｐ−フェニルフェノール、ｐ−ヨードフェノール、ｐ−ブロモフェノール、ｐ−ヒドロキシケイ皮酸、ｐ−イミダゾリルフェノール、アセトアミノフェン、２，４−ジクロロフェノール、２−ナフトール及び６−ブロモ−２−ナフトールから選択される請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】 ポリオキシエチレン化アルキルフェノール、ポリオキシエチレン化アルコール、ポリオキシエチレン化エーテル及びポリオキシエチレン化ソルビトールエステルから選択される少なくとも１の非イオン性界面活性剤を更に含む請求項３６記載の組成物。
【請求項３９】 カチオン性界面活性剤を更に含む請求項３６から３８のいずれかに記載の組成物。
【請求項４０】 ルミネセンスエネルギー転移剤を更に含む請求項３６から３９のいずれかに記載の組成物。