【手続補正書】
【提出日】平成17年12月9日(2005.12.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の領域：
配列番号１の塩基１−４４５に実質的に類似するＧＢＶ−Ｂ  ５’ＵＴＲ；
前記ＧＢＶ−Ｂ  ５’ＵＴＲに機能的に連結した選択又はレポーター配列；
内部リボソーム結合部位；
前記内部リボソーム結合部位とＡＵＧ翻訳開始コドンに機能的に連結した配列番号１の塩基１９３８−７７０９に実質的に類似するＮＳ３−ＮＳ５Ｂ配列；及び
配列番号１の塩基７７１０−８０６９に実質的に類似するＧＢＶ−Ｂ  ３’ＵＴＲを含み細胞中で複製することが可能であるＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項２】
ＧＢＶ−Ｂ構造領域を更に含み、前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域が前記ＧＢＶ−Ｂ  ５’ＵＴＲに機能的に連結されている請求項１に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項３】
前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域が配列番号１の塩基４４６−５１１、配列番号１の塩基４４６−４８７、配列番号１の塩基４４６−４６９、配列番号２の塩基４４６−２６４１のＲＮＡ型、及び配列番号２の塩基４４６−３２６５のＲＮＡ型からなる群から選択される配列に実質的に類似する配列を含む請求項２に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項４】
前記レプリコンが前記ＧＢＶ−Ｂ  ５’ＵＴＲ；前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域；前記選択又はレポーター配列；前記内部リボソーム結合部位；前記ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ配列；及び前記ＧＢＶ−Ｂ  ３’ＵＴＲから構成される請求項３に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項５】
前記内部リボソーム結合部位が配列番号１の塩基１３２４−１９３４の配列をもち；
前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域が配列番号１の塩基４４６−５１１、配列番号１の塩基４４６−４８７、配列番号１の塩基４４６−４６９、配列番号２の塩基４４６−２６４２のＲＮＡ型及び配列番号２の塩基４４６−３２６５のＲＮＡ型からなる群から選択される配列から構成され；
前記ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域が配列番号１の塩基１９３５−７７０９から構成されるＭｅｔ−ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域であり；
前記ＧＢＶ−Ｂ  ３’ＵＴＲが配列番号１の塩基７７１０−８０６９である請求項４に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項６】
前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域が配列番号２の塩基４４６−２６４２のＲＮＡ型又は配列番号２の塩基４４６−３２６５のＲＮＡ型から構成される請求項５に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項７】
前記レプリコンが配列番号１から構成される請求項１に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項８】
前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域が配列番号１の塩基４４６−５１１、配列番号１の塩基４４６−４８７、配列番号１の塩基４４６−４６９、及び配列番号２の塩基４４６−２６４１のＲＮＡ型からなる群から選択される配列に実質的に類似する配列を含む請求項２に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項９】
前記レプリコンが前記ＧＢＶ−Ｂ  ５’ＵＴＲ；前記選択又はレポーター配列；前記内部リボソーム結合部位；前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域；前記ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域の５’末端に結合した配列番号２の塩基２６４２−３２６５のＲＮＡ型に実質的に類似するＮＳ２領域を含むＮＳ２−ＮＳ５Ｂ領域；及び前記ＧＢＶ−Ｂ  ３’ＵＴＲからなる請求項３に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項１０】
前記内部リボソーム結合部位が配列番号１の１３２４−１９３４の配列をもち；
前記ＧＢＶ−Ｂ構造領域が配列番号１の塩基４４６−５１１、配列番号１の塩基４４６−４８７、配列番号１の塩基４４６−４６９、及び配列番号２の塩基４４６−２６４１のＲＮＡ型からなる群から選択される配列を含み；
前記ＮＳ２−ＮＳ５Ｂが前記５’ＡＵＧ翻訳開始コドン、前記ＮＳ２領域、及び前記ＮＳ３−ＮＳ５Ｂ領域から構成されるＭｅｔ−ＮＳ２−ＮＳ５Ｂ領域であり、前記ＮＳ２領域は配列番号２の塩基２６４２−３２６５のＲＮＡ型から構成され、前記ＮＳ３−ＮＳ５Ｂは配列番号１の塩基１９３８−７７０９から構成され；
前記ＧＢＶ−Ｂ  ３’ＵＴＲが配列番号１の塩基７７１０−８０６９である請求項９に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項１１】
前記レプリコンが感染性ビリオンを産生する請求項１０に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコンをコードするヌクレオチド配列に転写可能に結合したプロモーターを含む発現ベクター。
【請求項１３】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のレプリコンを細胞にトランスフェクトする段階と、前記レプリコンを単離する段階を含む方法により作製されたＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項１４】
前記細胞がＨｕｈ７細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７細胞由来、又はＨｅｐ３Ｂ細胞由来である請求項１３に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコン。
【請求項１５】
第１のＧＢＶ−Ｂレプリコンから第２のＧＢＶ−Ｂレプリコンを作製する方法であって、
ａ）請求項１から１１のいずれか一項に記載のレプリコンである第１のレプリコンを細胞にトランスフェクトする段階と、
ｂ）前記トランスフェクト細胞からレプリコンを単離する段階と、
ｃ）前記トランスフェクト細胞からの前記レプリコンのヌクレオチド配列を決定する段階と、
ｄ）前記トランスフェクト細胞からの前記レプリコンに対応する１カ所以上の変異を第１のレプリコン配列に加えた第２のレプリコンを作製する段階を含む前記方法。
【請求項１６】
前記細胞がＨｕｈ７細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７細胞由来、又はＨｅｐ３Ｂ細胞由来である請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
化合物がＧＢＶ−Ｂレプリコン活性を変化させる能力の測定方法であって、
ａ）請求項１から１１のいずれか一項に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコンを含む細胞に前記化合物を添加する段階と、
ｂ）ＧＢＶ−Ｂレプリコン活性に及ぼす効果の指標として前記化合物が１種以上のレプリコン活性を変化させる能力を測定する段階を含む前記方法。
【請求項１８】
前記細胞がヒト肝癌細胞である請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記細胞がＨｕｈ７細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７細胞由来、又はＨｅｐ３Ｂ細胞由来である請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
エレクトロポレーション法により配列番号１のＧＢＶ−Ｂレプリコンをトランスフェクトした場合に少なくとも２５％の維持及び活性効率をもつＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞。
【請求項２１】
前記細胞がヒト肝癌細胞に由来する請求項２０に記載の細胞。
【請求項２２】
前記細胞がＨｕｈ７細胞又はＨｅｐ３Ｂ細胞に由来する請求項２１に記載の細胞。
【請求項２３】
前記細胞がそのレプリコンを除去したＢ７６．１／Ｈｕｈ７細胞（ＡＢＣ寄託番号ＰＤ０２００２）である請求項２０に記載の細胞。
【請求項２４】
ＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞の作製方法であって、
ａ）請求項１から１１のいずれか一項に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコンを細胞に導入及び維持する段階と、
ｂ）前記細胞から前記ＧＢＶ−Ｂレプリコンを除去して前記レプリコン強化細胞を作製する段階を含む前記方法。
【請求項２５】
ｃ）ゲノムレプリコンである第２のＧＢＶ−Ｂレプリコンを前記レプリコン強化細胞に導入及び維持する段階と、
ｄ）段階（ｃ）で作製された前記細胞から前記ゲノムレプリコンを除去する段階を更に含む請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記細胞がＨｕｈ７細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７細胞由来、又はＨｅｐ３Ｂ細胞由来である請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
機能的ＧＢＶ−Ｂレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞の作製方法であって、
ａ）請求項１から１１のいずれか一項に記載のレプリコンである第１のＧＢＶ−Ｂレプリコンを細胞に導入及び維持する段階と、
ｂ）前記細胞から前記第１のレプリコンを除去して除去細胞を作製する段階と、
ｃ）前記第１のＧＢＶ−Ｂレプリコンと同一でも異なっていてもよい第２のＧＢＶ−Ｂレプリコンを前記除去細胞に導入及び維持する段階を含む前記方法。
【請求項２８】
前記細胞がＨｕｈ７細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７細胞由来、又はＨｅｐ３Ｂ細胞由来である請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第１及び第２のＧＢＶ−ＢレプリコンにおけるＧＢＶ−Ｂコーディング配列が同一である請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記第２のレプリコンが配列番号２のＲＮＡ型から構成される全長レプリコンである請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記第２のレプリコンが第１のシストロンと第２のシストロンから構成されるレプリコンであり、前記第１のシストロンがＧＢＶ−Ｂ  ５’ＵＴＲと配列番号２の塩基４４６−２６４２のＲＮＡ型又は配列番号２の塩基４４６−３２６５のＲＮＡ型を含み；前記第２のシストロンが配列番号１の塩基１９３５−７７０９に機能的に連結した内部リボソーム結合部位を含む請求項２８に記載の方法。
【請求項３２】
請求項２４に記載の方法により作製されたＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞。
【請求項３３】
ＧＢＶ−Ｂレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞であって、請求項２０から２２のいずれか一項に記載の細胞と、請求項１から１１のいずれか一項に記載のレプリコン又は全長モノシストロンＧＢＶ−Ｂレプリコンを含む前記細胞。
【請求項３４】
請求項３３に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞であって、前記レプリコンが請求項１から１１のいずれか一項に記載のレプリコンである前記細胞。
【請求項３５】
請求項３３に記載のＧＢＶ−Ｂレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞であって、前記レプリコンが前記全長モノシストロンＧＢＶ−Ｂレプリコンであり、前記全長ＧＢＶ−Ｂレプリコンが配列番号２のＲＮＡ型から構成される前記細胞。
【請求項３６】
請求項２７に記載の方法により作製されたＧＢＶ−Ｂレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞。
【請求項３７】
化合物がＧＢＶ−Ｂ活性を変化させる能力の測定方法であって、
ａ）請求項３３に記載のレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞に前記化合物を添加する段階と、
ｂ）ＧＢＶ−Ｂ活性に及ぼす効果の指標として前記化合物が１種以上のレプリコン活性を変化させる能力を測定する段階を含む前記方法。
【請求項３８】
前記段階（ｂ）がＧＢＶ−Ｂ蛋白質産生を測定する請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記段階（ｂ）がＲＮＡ転写産物の産生を測定する請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
化合物がＧＢＶ−Ｂ活性を変化させる能力の測定方法であって、
ａ）請求項３６に記載のレプリコンを含むＧＢＶ−Ｂレプリコン強化細胞に前記化合物を添加する段階と、
ｂ）ＧＢＶ−Ｂ活性に及ぼす効果の指標として前記化合物が１種以上のレプリコン活性を変化させる能力を測定する段階を含む前記方法。
【請求項４１】
感染性ＧＢＶ−Ｂビリオンの作製方法であって、前記ＧＢＶ−Ｂビリオンを作製するのに適した条件下で請求項３３に記載のレプリコンを含むレプリコン強化細胞を培養する段階を含み、前記レプリコンが前記全長モノシストロンＧＢＶ−Ｂレプリコンである前記方法。
【請求項４２】
非ヒト動物にＧＢＶ−Ｂビリオンを感染させる方法であって、（ａ）請求項４１に記載の方法を使用して前記ビリオンを作製する段階と；（ｂ）前記ビリオンを前記非ヒト動物に投与する段階を含む前記方法。
【請求項４３】
前記非ヒト動物がタマリン又はヨザル（Ａｏｔｕｓ種）である請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
感染性ＧＢＶ−Ｂビリオンの作製方法であって、請求項３６に記載のレプリコンを含むレプリコン強化細胞を培養して前記ＧＢＶ−Ｂビリオンを作製する段階を含み、前記第２のレプリコンが全長ＧＢＶ−Ｂレプリコンである前記方法。
【請求項４５】
非ヒト動物にＧＢＶ−Ｂビリオンを感染させる方法であって、（ａ）請求項４４に記載の方法を使用して前記ビリオンを作製する段階と；（ｂ）前記ビリオンを前記非ヒト動物に投与する段階を含む前記方法。
【請求項４６】
前記非ヒト動物がタマリン又はヨザル（Ａｏｔｕｓ種）である請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のレプリコンに存在する１個以上のＧＢＶ−Ｂ領域又はその一部をＨＣＶに由来する対応領域で置換する段階を含むキメラＧＢＶ−Ｂ／ＨＣＶレプリコンの作製方法。