【手続補正書】
【提出日】平成17年9月12日(2005.9.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリヌクレオチドを宿主細胞ゲノム内にランダムに組込むための、ベクターからの遊離５’および３’末端を持つ上記直鎖ポリヌクレオチドの宿主細胞への調製による方法であって、上記方法は、
ａ）上記宿主細胞内に、遊離５’および３’末端を持たず、そして上記ポリヌクレオチドを含むベクターを導入することであって、上記ベクターは、宿主細胞ゲノム内に５未満のコピーが見られる少なくとも１の開裂部位を含み、
ｂ）上記宿主細胞において上記部位を開裂させ、それによって上記宿主細胞内に上記ベクターから遊離５’および３’末端を持つ上記ポリヌクレオチドを直鎖形で作成または放出すること、ならびに、
ｃ）上記放出されたポリヌクレオチドの上記宿主細胞ゲノム内へのランダム組込みを行うのに十分な条件下で、十分な期間にわたって宿主細胞を維持すること、
を含む方法。
【請求項２】
上記方法が、更に、工程（ｂ）の前に、上記宿主細胞内に開裂剤または上記開裂剤をコードする核酸を含むベクターを導入する追加の工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
上記方法が、更に、工程（ｂ）の前に、上記宿主細胞内に開裂剤を導入する追加の工程を含む、請求項２記載の方法。
【請求項４】
上記開裂部位が、宿主細胞ゲノム内に２未満のコピーで見られる、請求項１〜３記載の方法。
【請求項５】
上記開裂部位が、宿主細胞ゲノム内に見られない、請求項４記載の方法。
【請求項６】
上記ポリヌクレオチドが、少なくとも１の開裂部位と隣接している、請求項１〜５記載の方法。
【請求項７】
上記ポリヌクレオチドが、２の開裂部位と隣接している、請求項６記載の方法。
【請求項８】
上記開裂部位が、エンドヌクレアーゼ部位であり、そして上記開裂剤が、対応するエンドヌクレアーゼである、請求項１〜７記載の方法。
【請求項９】
上記エンドヌクレアーゼが、少なくとも１２ヌクレオチドの認識部位を持つ、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
上記エンドヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
上記メガヌクレアーゼが、
【表１】
2005503161.tif 000001
から成る群より選択される、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
上記メガヌクレアーゼが、Ｉ−Ｃｅｕ  Ｉ、Ｉ−Ｃｒｅ  Ｉ、Ｉ−Ｓｃｅ  Ｉから成る群より選択される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
上記エンドヌクレアーゼが、合成物である、請求項９記載の方法。
【請求項１４】
上記ポリヌクレオチドが、宿主細胞ゲノムとの相同組換えを受けることができない、請求項１〜１３記載の方法。
【請求項１５】
上記ポリヌクレオチドの５’および３’配列が、宿主細胞ゲノム配列との相同性を持たない、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
上記ベクターが、プラスミドである、請求項１〜１５記載の方法。
【請求項１７】
上記宿主細胞が、幹細胞、体細胞、配偶子、割球、および卵から成る群より選択される、請求項１〜１６記載の方法。
【請求項１８】
上記宿主細胞が、幹細胞である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
上記宿主細胞が、体細胞である、請求項１７記載の方法。
【請求項２０】
上記宿主細胞が、卵である、請求項１７記載の方法。
【請求項２１】
上記ポリヌクレオチド配列が、ポリペプチドもしくはアンチセンスをコードする配列、調節配列、または分子の認識配列である、請求項１〜１８記載の方法。
【請求項２２】
上記宿主細胞が、魚類、鳥類、非ヒト哺乳類、昆虫、両生類、爬虫類に由来する、請求項１７記載の方法。
【請求項２３】
上記宿主細胞が、メダカ、ゼブラフィッシュ、トゲウオ、アスティアナックス、マウス、ニワトリ、アフリカツメガエル、ヒツジ、雌ウシ、ウサギに由来する、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
請求項１〜２３のいずれか一項記載の方法から生じる細胞。
【請求項２５】
請求項２４記載の細胞を含む、非ヒト遺伝子導入動物。
【請求項２６】
請求項１〜２１のいずれか一項記載の方法から生じる細胞を含む、遺伝子導入植物。
【請求項２７】
タンパク質、生体分子、生体材料、またはワクチンの生成のための、請求項２５に記載の遺伝子導入動物または請求項２６に記載の植物の、請求項２４に記載の細胞の使用。
【請求項２８】
個体における状態または障害の処置または予防のための、請求項２４記載の細胞の使用。
【請求項２９】
非ヒト遺伝子導入動物を作成する方法であって、胚幹細胞が、請求項１〜２３記載の方法によって形質移入され、細胞が、形質移入細胞を組込むことができる期に胚に注入され、次に胚が、代理母に再移植され、そしてキメラ個体が妊娠期間の終わりに得られ、そしてキメラ個体においては生殖細胞系の胚幹細胞によるコロニー形成が観測され、キメラ個体が遺伝子導入動物を得るために交配される、方法。
【請求項３０】
非ヒト遺伝子導入動物を作成する方法であって、受精卵が、請求項１〜２３記載の方法によって形質移入され、卵が、代理母に再移植され、そして遺伝子導入個体が、妊娠期間の終わりに得られる、方法。
【請求項３１】
非ヒト遺伝子導入動物を作成する方法であって、受精卵が、請求項１〜２３記載の方法によって形質移入され、卵が、上記遺伝子導入動物を発生させるために適切な条件でインキュベーションされる方法。
【請求項３２】
形質転換のための組成物であって、
１）５’および３’遊離末端を持たず、そして組込まれる導入遺伝子を含むベクターであって、宿主細胞ゲノム内に５未満のコピーが見られる少なくとも１の開裂部位を含む上記ベクターと、ならびに
２）開裂剤または上記開裂剤をコードする核酸を含むベクターと、
を含む組成物。
【請求項３３】
上記ポリヌクレオチドが、少なくとも１の開裂部位と隣接している、請求項３２記載の組成物。
【請求項３４】
上記ポリヌクレオチドが、２の開裂部位と隣接している、請求項３３記載の組成物。
【請求項３５】
上記開裂部位が、エンドヌクレアーゼ部位であり、そして上記開裂剤が、対応するエンドヌクレアーゼである、請求項３２〜３４記載の組成物。
【請求項３６】
上記エンドヌクレアーゼが、少なくとも１２のヌクレオチドの認識部位を持つ、請求項３５記載の組成物。
【請求項３７】
上記エンドヌクレアーゼが、メガヌクレアーゼである、請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】
上記メガヌクレアーゼが、
【表２】
2005503161.tif 000002
から成る群より選択される、請求項３７記載の組成物。
【請求項３９】
上記メガヌクレアーゼが、Ｉ−Ｃｅｕ  Ｉ、Ｉ−Ｃｒｅ  Ｉ、Ｉ−Ｓｃｅ  Ｉから成る群より選択される、請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
上記エンドヌクレアーゼが、合成物である、請求項３７記載の組成物。
【請求項４１】
上記ベクターが、プラスミドである、請求項３２〜４０記載の組成物。
【請求項４２】
直鎖化される上記ポリヌクレオチド配列を含む上記ベクターが、更に上記開裂剤をコードする上記核酸を含む、請求項３２〜４１記載の組成物。
【請求項４３】
上記ポリヌクレオチドが、宿主細胞ゲノムとの相同組換えを受けることができない、請求項３２〜４２記載の組成物。
【請求項４４】
上記ポリヌクレオチドの５’および３’配列が、宿主細胞ゲノム配列との相同性を持たない、請求項４３記載の組成物。