【手続補正書】
【提出日】平成18年6月23日(2006.6.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）第１のプロモーターの３’側の核酸配列が、配列番号１３に示すコザック配列を含み、該コザック配列がトランスポザーゼ遺伝子の少なくとも最初のコドンを含むように位置している、第１のプロモーターに操作可能に連結された改変トランスポザーゼ遺伝子、および  
ｂ）１個またはそれ以上の所定の遺伝子およびそれらの操作可能に連結されたプロモーターが、トランスポザーゼにより認識されるトランスポザーゼ挿入配列に隣接している、１個またはそれ以上のさらなるプロモーターに操作可能に連結された１個またはそれ以上の所定の遺伝子
をコードする核酸配列を含む、ベクター。
【請求項２】
前記トランスポザーゼ遺伝子の最初の２０個のコドンの少なくとも一つが、該コドンによりコードされるアミノ酸を改変することなく、該コドンの三番目の塩基位置にあるヌクレオチドを、アデニンまたはチミンに変更することにより改変される、請求項１に記載のベクター。
【請求項３】
前記トランスポザーゼ遺伝子が、その最初の１０個のコドンで改変される、請求項２に記載のベクター。
【請求項４】
前記トランスポザーゼが、Ｔｎ１０トランスポザーゼである、請求項１〜３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項５】
前記第１のプロモーターが、構成性プロモーターである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項６】
前記第１のプロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項１〜４のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項７】
前記誘導性プロモーターが、オボアルブミンプロモーター、コンアルブミンプロモーター、またはビテロゲニンプロモーターである、請求項６に記載のベクター。
【請求項８】
１個の所定の遺伝子が、第２のプロモーターに操作可能に連結された、請求項１〜７のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項９】
前記第２のプロモーターが、構成性プロモーターである、請求項８に記載のベクター。
【請求項１０】
前記第２のプロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項８に記載のベクター。
【請求項１１】
前記誘導性プロモーターが、オボアルブミンプロモーター、コンアルブミンプロモーター、またはビテロゲニンプロモーターである、請求項１０に記載のベクター。
【請求項１２】
前記トランスポザーゼ遺伝子に操作可能に連結されたポリＡ配列をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１３】
前記ポリＡ配列が、コンアルブミンポリＡ配列である、請求項１２に記載のベクター。
【請求項１４】
前記トランスポザーゼ遺伝子に操作可能に連結された２個の終止コドンをさらに含む、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１５】
第１の所定の遺伝子が、第２のプロモーターに操作可能に連結され、第２の所定の遺伝子が、第３のプロモーターに操作可能に連結された、請求項１〜７のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１６】
第１および第２の所定の遺伝子が、第２のプロモーターに操作可能に連結された、請求項１〜７のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１７】
前記１個またはそれ以上の所定の遺伝子に操作可能に連結されたエンハンサーをさらに含む、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項１８】
前記エンハンサーが、オボアルブミンエンハンサーの機能領域を含む、請求項１７に記載のベクター。
【請求項１９】
前記１個またはそれ以上の所定の遺伝子に操作可能に連結された卵誘導性配列をさらに含む、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のベクター。
【請求項２０】
前記卵誘導性配列が、オボアルブミンシグナル配列またはオボムコイドシグナル配列である、請求項１９に記載のベクター。
【請求項２１】
前記卵誘導性配列が、ビテロゲニン標的配列である、請求項１９に記載のベクター。
【請求項２２】
非ヒトトランスジェニック動物を産生する方法であって、
ａ）第１のプロモーターの３’側の核酸配列が、配列番号１３に示すコザック配列を含み、該コザック配列がトランスポザーゼ遺伝子の少なくとも最初のコドンを含むように位置している、第１のプロモーターに操作可能に連結された改変トランスポザーゼ遺伝子、および
ｂ）１個またはそれ以上の所定の遺伝子およびそれらの操作可能に連結されたプロモーターが、トランスポザーゼにより認識されるトランスポザーゼ挿入配列に隣接している、１個またはそれ以上のさらなるプロモーターに操作可能に連結された１個またはそれ以上
の所定の遺伝子
をコードする核酸配列を含むベクターを動物（ヒトを除く）に投与することを含む、
方法。
【請求項２３】
前記トランスポザーゼ遺伝子の最初の２０個のコドンの少なくとも一つが、該コドンによりコードされるアミノ酸を改変することなく、該コドンの三番目の塩基位置にあるヌクレオチドを、アデニンまたはチミンに変更することにより改変される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記トランスポザーゼ遺伝子が、その最初の１０個のコドンで改変される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ベクターが、精巣内、動脈内、卵管内または胎芽内経路により投与される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記トランスポザーゼが、Ｔｎ１０トランスポザーゼである、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記第１のプロモーターが、構成性プロモーターである、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記第１のプロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記誘導性プロモーターが、オボアルブミンプロモーター、コンアルブミンプロモーター、オボムコイドプロモーターおよびビテロゲニンプロモーターからなる群から選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
１個の所定の遺伝子が、第２のプロモーターに操作可能に連結された、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記第２のプロモーターが、誘導性プロモーターである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記誘導性プロモーターが、オボアルブミンプロモーター、コンアルブミンプロモーター、またはビテロゲニンプロモーターである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記ベクターが、前記トランスポザーゼ遺伝子に操作可能に連結されたポリＡ配列をさらに含む、請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
前記ポリＡ配列が、コンアルブミンポリＡ配列である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ベクターが、前記トランスポザーゼ遺伝子に操作可能に連結された２個の終止コドンをさらに含む、請求項２２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３６】
第１の所定の遺伝子が、第２のプロモーターに操作可能に連結され、第２の所定の遺伝子が、第３のプロモーターに操作可能に連結された、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３７】
第１および第２の所定の遺伝子が、第２のプロモーターに操作可能に連結された、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
前記１個またはそれ以上の所定の遺伝子に操作可能に連結されたエンハンサーをさらに含む、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記エンハンサーが、オボアルブミンエンハンサーの機能領域を含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記動物が、鳥類動物である、請求項２２〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記鳥類動物が、ニワトリまたはウズラである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
請求項４０又は４１に記載の方法により産生される鳥類動物により産生される卵であって、前記１個またはそれ以上の所定の遺伝子によりコードされる１個またはそれ以上の所望のタンパク質を含有する卵。
【請求項４３】
請求項２２〜４１のいずれか１項に記載の方法により産生される動物により産生されるトランスジェニック精子。
【請求項４４】
所望のタンパク質を産生する方法であって、
ａ）第１のプロモーターの３’側の核酸配列が、配列番号１３に示すコザック配列を含み、該コザック配列がトランスポザーゼ遺伝子の少なくとも最初のコドンを含むように位置している、第１のプロモーターに操作可能に連結された改変トランスポザーゼ遺伝子、および第２のプロモーターに操作可能に連結された前記所望のタンパク質をコードする所定の遺伝子をコードする核酸配列を含むベクターを動物（ヒトを除く）に投与すること、および
ｂ）前記動物で産生される前記所望のタンパク質を単離すること
を含み、
ｃ）前記所定の遺伝子および該遺伝子が操作可能に連結されたプロモーターが、前記トランスポザーゼにより認識されるトランスポザーゼ挿入配列に隣接している、方法。
【請求項４５】
前記トランスポザーゼ遺伝子の最初の２０個のコドンの少なくとも一つが、該コドンによりコードされるアミノ酸を改変することなく、該コドンの三番目の塩基位置にあるヌクレオチドを、アデニンまたはチミンに変更することにより改変される、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記動物が、卵生動物であり、前記所望のタンパク質が、卵白から単離される、請求項４４又は４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ベクターが、ＴＡＧ配列をさらに含み、前記所望のタンパク質が、前記ＴＡＧ配列を用いて精製される、請求項４４〜４６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＴＡＧ配列が、ｇｐ４１タンパク質の抗原性部分をコードするポリヌクレオチド配列、エンテロキナーゼ切断部位、およびスペーサーポリヌクレオチド配列を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＴＡＧ配列が、配列番号２２で示されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記所望のタンパク質が、溶解性タンパク質である、請求項４４〜４９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５１】
前記ベクターが、第３のプロモーターに操作可能に連結された第２の所定の遺伝子をさらに含み、前記所定の遺伝子が、抗体ポリペプチドをコードする、請求項４４〜５０のいずれか１項に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１０】
本発明のトランスポゾンベースのベクターは、第１のプロモーターに操作可能に連結されたトランスポザーゼ、および第２のプロモーターに操作可能に連結された所定のタンパク質またはペプチドに関するコード配列を含み、ここで所定のタンパク質またはペプチドに関するコード配列およびその操作可能に連結されたプロモーターは、トランスポザーゼにより認識されるトランスポザーゼ挿入配列に隣接される。トランスポゾンベースのベクターはまた、以下の特徴を含む：ａ）トランスポザーゼの発現を高めるための、第１のプロモーターの３’にＡＣＣＡＴＧ（配列番号１３）を含む１個またはそれ以上の改変コザック配列、ｂ）トランスポザーゼの最初の幾つかのＮ末端アミノ酸に関するコドンの改変（ここでは、各コドンの三番目の塩基位置にあるヌクレオチドが、相当するアミノ酸を変更させることなく、ＡまたはＴに変更された）、ｃ）トランスポザーゼ合成の終結を高めるための、１個またはそれ以上の終止コドンの付加、および／またはｄ）トランスポザーゼ遺伝子の発現をさらに高めるための、トランスポザーゼに操作可能に連結された有効なポリＡ配列の付加。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
本発明のトランスポゾンベースのベクターは、第１のプロモーターに操作可能に連結されたトランスポザーゼ遺伝子、および第２のプロモーターに操作可能に連結された所望のタンパク質またはペプチドに関するコード配列を含み、ここで所望のタンパク質またはペプチドに関するコード配列、およびその操作可能に連結されたプロモーターは、トランスポザーゼにより認識されるトランスポザーゼ挿入配列に隣接される。トランスポゾンベースのベクターはまた、以下の１つまたはそれ以上の特徴を含む：ａ）トランスポザーゼの発現を高めるための、第１のプロモーターの３’にＡＣＣＡＴＧ（配列番号１３）を含む１個またはそれ以上の改変コザック配列、ｂ）トランスポザーゼの最初の幾つかのＮ末端アミノ酸に関するコドンの改変（ここでは、各コドンの三番目の塩基位置にあるヌクレオチドが、相当するアミノ酸を変更させることなく、ＡまたはＴに変更された）、ｃ）トランスポザーゼ合成の終結を高めるための、１個またはそれ以上の終止コドンの付加、およびｄ）トランスポザーゼ遺伝子の発現をさらに高めるための、トランスポザーゼに操作可能に連結された有効なポリＡ配列の付加。図１は、トランスポゾンベースのベクターの幾つかの成分の略図を示す。本発明はさらに、１個よりも多い所定の遺伝子を含有するベクターを包含し、ここでは第２の所定の遺伝子または続く所定の遺伝子は、第２のプロモーターまたは異なるプロモーターに操作可能に連結される。また、図に示されるトランスポゾンベースのベクターは本発明の描写であり、ベクター要素の順序は、図で示されるのと異なってもよく、要素は、様々な配向で存在してもよく、ベクターは、図に示されないさらなる要素を含有してもよいことが理解されよう。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
トランスポザーゼおよび挿入配列
本発明のさらなる実施形態では、トランスポザーゼベースのベクターに見出されるトランスポザーゼは、変更標的部位（ＡＴＳ）トランスポザーゼであり、挿入配列は、ＡＴＳトランスポザーゼにより認識される配列である。しかしながら、トランスポザーゼベースのベクターに位置するトランスポザーゼは、改変ＡＴＳトランスポザーゼに限定されず、任意のトランスポザーゼに由来し得る。従来技術で既知のトランスポザーゼとしては、ＡＣ７、Ｔｎ５ＳＥＱ１、Ｔｎ９１６、Ｔｎ９５１、Ｔｎ１７２１、Ｔｎ２４１０、Ｔｎ１６８１、Ｔｎ１、Ｔｎ２、Ｔｎ３、Ｔｎ４、Ｔｎ５、Ｔｎ６、Ｔｎ９、Ｔｎ１０、Ｔｎ３０、Ｔｎ１０１、Ｔｎ９０３、Ｔｎ５０１、Ｔｎ１０００（γδ）、Ｔｎ１６８１、Ｔｎ２９０１、ＡＣトランスポゾン、Ｍｐトランスポゾン、Ｓｐｍトランスポゾン、Ｅｎトランスポゾン、Ｄｏｔｔｅｄトランスポゾン、Ｍｕトランスポゾン、Ｄｓトランスポゾン、ｄＳｐｍトランスポゾンおよびＩトランスポゾンに見出されるものが挙げられる。本発明によれば、これらのトランスポザーゼおよびそれらの調節配列は、以下の通りに機能の改善のために改変される：ａ）トランスポザーゼに操作可能に連結されたプロモーターの３’にＡＣＣＡＴＧ（配列番号１３）を含む１個またはそれ以上の改変コザック配列の付加、ｂ）トランスポザーゼの最初の幾つかのＮ末端アミノ酸に関するコドンの変更（ここでは、各コドンの三番目の塩基位置にあるヌクレオチドが、相当するアミノ酸を変更させることなく、ＡまたはＴに変更された）、ｃ）トランスポザーゼ合成の終結を高めるための、１個またはそれ以上の終止コドンの付加、および／またはｄ）トランスポザーゼ遺伝子の発現をさらに高めるための、トランスポザーゼに操作可能に連結された有効なポリＡ配列の付加。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９６】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、トランスポザーゼｍＲＮＡ安定性に関して、およびタンパク質の発現に関してコドンを最適化することにより、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。より具体的には、トランスポザーゼの最初の１０個のアミノ酸に関するコドンのそれぞれにおいて、かかる置換が、コードされるアミノ酸を変更させない場合に、ＧまたはＣをＡまたはＴに変更させた。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２１９】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、上述のコドンを最適化することにより、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２４５】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、上述のコドンを最適化することにより、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２７５】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、上述のコドンを最適化することにより、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２９】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３５０】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３７１】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３９２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３９２】
塩基対１７８０〜１７８５は配列番号１３のコザック配列であり、塩基対１７８３〜２９８７は、Ｔｎ１０(GenBank受託番号Ｊ０１８２９）から改変させたトランスポザーゼに関するコード配列である。