【手続補正書】
【提出日】平成18年6月30日(2006.6.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ある物質が、細胞の増殖もしくは生残に必要な遺伝子産物の機能を選択的に抑制することにより作用する細胞増殖インヒビターであるか又はそのような細胞増殖インヒビターを含有するかどうかを試験するための方法であって、
（Ａ）該遺伝子産物の発現を妨げるＲＮＡ断片を発現しうる組換え細胞を提供し、
（Ｂ）（ｉ）該ＲＮＡ断片の発現、および該遺伝子産物の合成のダウンレギュレーション、ならびに（ｉｉ）該ＲＮＡ断片を発現する能力の該細胞による喪失を引き起こす条件下で試験物質の存在下に、栄養培地内で該組換え細胞を増殖させ、
（Ｃ）生じた細胞増殖を分析することを含んでなり、ここで、
（１）該細胞の全て又は実質的に全ての死により細胞増殖が実質的に無い場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的には抑制しない増殖インヒビターであるか又はそのような増殖インヒビターを含有し、
（２）該細胞の全て又は実質的に全ての生残および増殖により細胞増殖の抑制が実質的に無い場合には、該試験物質は増殖インヒビターではないか又は増殖インヒビターを含有せず、あるいは
（３）該ＲＮＡ断片を発現する能力を有さない復帰細胞の生残および増殖と共に、細胞の相当な部分の死により増殖抑制が有る場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的に抑制する増殖インヒビターであるか又はそのような増殖インヒビターを含有する、方法。
【請求項２】
工程Ａにおいて該細胞により発現されるＲＮＡ断片がアンチセンスＲＮＡを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
該アンチセンスＲＮＡが、該組換え細胞内に含有されるプラスミドにコードされる、請求項２記載の方法。
【請求項４】
該アンチセンスＲＮＡが該組換え細胞のゲノム内のＤＮＡにコードされる、請求項２記載の方法。
【請求項５】
該組換え細胞が、細菌株および真菌株よりなる群から選ばれる、請求項１記載の方法。
【請求項６】
該細胞が細菌の株であり、該物質が、該細菌の増殖もしくは生残に必要な遺伝子産物の機能を選択的に抑制することにより作用する抗細菌剤であるか又はそのような抗細菌剤を含有するかどうかを判定するために、該物質を試験する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
工程Ｂにおいて該組換え細胞を増殖させる栄養培地が、該試験物質を接種した半固形培地であり、工程Ｃが、生じた細胞増殖を分析することを含み、ここで、
（１）該半固形培地が、該細胞の全て又は実質的に全ての死により、実質的に非増殖を示す透明域を示す場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的には抑制しない増殖インヒビターであるか又はそのような増殖インヒビターを含有し、
（２）該半固形培地が、該細胞の全て又は実質的に全ての生残および増殖により、非増殖域を示さない場合には、該試験物質は増殖インヒビターではないか又は増殖インヒビターを含有せず、あるいは
（３）該半固形培地が非増殖域を示すが、例外として該区域内に、該ＲＮＡ断片を発現する能力を有さない復帰細胞の生残および増殖による１以上の小さな細胞コロニーを示す場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的に抑制する増殖インヒビターであるか又はそのような増殖インヒビターを含有する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
工程Ａにおいて該細胞により発現されうるＲＮＡ断片が、第１プラスミドにコードされるアンチセンスＲＮＡを含み、該第１プラスミドが、該細胞のゲノム内に組込まれた又は第２プラスミド内に含有されるレポーター遺伝子を調節するリプレッサー遺伝子をもコードし、
工程Ｂにおける栄養培地が液体培地であり、
工程Ｂにおける該ＲＮＡ断片を発現する能力の該細胞による喪失が、該レポーター遺伝子を該リプレッサーが調節する能力の喪失を伴い、
工程Ｃにおける細胞増殖の分析において、
（１）該細胞の全て又は実質的に全ての死により細胞増殖が実質的に無い場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的には抑制しない増殖インヒビターであるか又はそのような増殖インヒビターを含有し、
（２）該細胞（該細胞は該レポーター遺伝子の発現を示さない）の全て又は実質的に全ての生残および増殖により細胞増殖の抑制が実質的に無い場合には、該試験物質は増殖インヒビターではないか又は増殖インヒビターを含有せず、あるいは
（３）該ＲＮＡ断片を発現する能力を有さないが該レポーター遺伝子の発現を示す復帰細胞の生残および増殖と共に、液体培地内の細胞の相当な部分の死により増殖抑制が有る場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的に抑制する増殖インヒビターであるか又はそのような増殖インヒビターを含有する、請求項１記載の方法。
【請求項９】
ある物質が、細菌の株の増殖もしくは生残に必要な遺伝子産物の機能を選択的に抑制することにより作用する抗細菌剤であるか又はそのような抗細菌剤を含有するかどうかを試験するための方法であって、
（Ａ）該遺伝子産物の発現を妨げるアンチセンスＲＮＡを発現しうるプラスミドを含有する細菌株の組換え細胞を提供し、
（Ｂ）（ｉ）該アンチセンスＲＮＡの発現、および該遺伝子産物の合成のダウンレギュレーション、ならびに（ｉｉ）該アンチセンスＲＮＡを発現する能力の該細胞による喪失を引き起こす条件下で試験物質の存在下に、寒天プレート上で該組換え細胞を増殖させ、
（Ｃ）生じた細胞増殖を分析することを含んでなり、ここで、
（１）該寒天プレートが、該細胞の全て又は実質的に全ての死により、実質的に非増殖を示す透明域を示す場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的には抑制しない抗細菌剤であるか又はそのような抗細菌剤を含有し、
（２）該寒天プレートが、該細胞の全て又は実質的に全ての生残および増殖により、非増殖域を示さない場合には、該試験物質は抗細菌剤ではないか又は抗細菌剤を含有せず、あるいは
（３）該寒天プレートが非増殖域を示すが、例外として該区域内に、該ＲＮＡ断片を発現する能力を有さない復帰細胞の生残および増殖による１以上の小さな細胞コロニーを示す場合には、該試験物質は、該標的遺伝子産物を選択的に抑制する抗細菌剤であるか又はそのような抗細菌剤を含有する、方法。
【請求項１０】
該プラスミドが、アンチセンスＲＮＡを発現するよう誘導され抗生物質に対する耐性をコードするプラスミドである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
工程Ｂにおいて、（ｉ）該アンチセンスＲＮＡの発現、および該遺伝子産物の合成のダウンレギュレーションが、有効量のアンチセンスＲＮＡ誘導物質の存在下で該細胞を増殖させることにより得られ、（ｉｉ）該アンチセンスＲＮＡを発現する能力の該細胞による喪失が、該プラスミドが耐性である抗生物質の非存在下で該細胞を増殖させることにより得られる、請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
該アンチセンスＲＮＡが、脂肪酸シンターゼ、アミノアシル−ｔＲＮＡシンテターゼ、タンパク質セクレターゼ、ペプチジルトランスフェラーゼ、トランスグリコシラーゼ、トランスペプチダーゼまたはリボソーム関連タンパク質を発現する遺伝子の発現を妨げうるキシロース誘導性アンチセンスＲＮＡである、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
該アンチセンスＲＮＡが、ｆａｂＦ、ｐｈｅＴ、ｍｕｒＡ、ｓｅｃＡ、ｄｎａＣ、ｉｌｅＳ、ｆｔｓＺ、ｓｅｃＩ、ｐｏｌＣ、ｄｎａＥ、ｇｙｒＥ、ｇｙｒＡ、ｍｕｒＢ、ｒｐｌ、ｐａｒＥおよびｐａｒＣよりなる群から選ばれる遺伝子の発現を妨げうるキシロース誘導性アンチセンスＲＮＡである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
該細菌がスタヒロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）である、請求項１３記載の方法。