【手続補正書】
【提出日】平成18年5月24日(2006.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物幹細胞の分化をモジュレートする方法であって、該幹細胞の分化に適切な条件下で該幹細胞とＪＮＫ又はＭＫＫ活性をモジュレートする化合物とを接触させるステップを含む、上記方法。
【請求項２】
化合物がＪＮＫ又はＭＫＫ活性を阻害する、請求項１記載の方法。
【請求項３】
哺乳動物幹細胞の順化方法であって、該幹細胞とＪＮＫ又はＭＫＫ活性をモジュレートする化合物とを接触させるステップを含む、上記方法。
【請求項４】
化合物がＪＮＫ又はＭＫＫ活性を阻害する、請求項３記載の方法。
【請求項５】
哺乳動物幹細胞又は前駆細胞が順化の前に凍結解凍されたものである、請求項３記載の方法。
【請求項６】
必要とする患者へ哺乳動物幹細胞又は前駆細胞を移植するための医薬の製造におけるＪＮＫ活性を阻害する化合物の使用であって、該医薬は処理された幹細胞又は前駆細胞を含み、該哺乳動物幹細胞又は前駆細胞とＪＮＫ活性を阻害する化合物とを接触させて、該処理幹細胞又は前駆細胞が生成されるものである、上記使用。
【請求項７】
医薬が、処理幹細胞と併せて未処理細胞を含む、請求項６記載の使用。
【請求項８】
未処理細胞が、胚幹細胞、胎盤幹細胞、成体幹細胞、臍帯血細胞、骨髄細胞及び末梢血細胞からなる群より選択されるものである、請求項７記載の使用。
【請求項９】
哺乳動物幹細胞が接触の前に凍結解凍されたものである、請求項７記載の使用。
【請求項１０】
造血細胞の作製方法であって、幹細胞の分化に適切な条件下で哺乳動物幹細胞とＪＮＫ又はＭＫＫ活性を阻害する化合物とを接触させるステップを含み、該分化により造血細胞が生じるものである、上記方法。
【請求項１１】
幹細胞が、胚幹細胞、胎盤幹細胞、成体幹細胞、臍帯血細胞、末梢血細胞及び骨髄細胞からなる群より選択されるものである、請求項１、３、６又は１０記載の方法。
【請求項１２】
幹細胞がヒト幹細胞である、請求項１、３、６又は１０記載の方法。
【請求項１３】
化合物が、インダゾール、アニリノピリミジン、イソチアゾロアントロン、イソキサゾロアントロン、イソインドールアントロン又はピラゾロアントロンである、請求項１、３、６又は１０記載の方法。
【請求項１４】
接触ステップがｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて行われる、請求項１、３、６又は１０記載の方法。
【請求項１５】
化合物の濃度が０．００５μｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌである、請求項１、３、６又は１０記載の方法。
【請求項１６】
化合物の濃度が１μｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌである、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
造血細胞が造血前駆細胞である、請求項１０記載の方法。
【請求項１８】
哺乳動物幹細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、該幹細胞が、幹細胞の分化又は増殖をモジュレートするのに十分な時間にわたりＪＮＫ又はＭＫＫ活性を阻害する化合物と接触させたものである、上記医薬組成物。
【請求項１９】
哺乳動物前駆細胞及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物であって、該幹細胞が、前駆細胞の分化又は増殖をモジュレートするのに十分な時間にわたりＪＮＫ又はＭＫＫ活性を阻害する化合物と接触させたものである、上記医薬組成物。
【請求項２０】
幹細胞が、胚幹細胞、成体細胞、臍帯血細胞、胎盤幹細胞又は末梢血幹細胞からなる群より選択されるものである、請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２１】
化合物がイミド又はアミドである、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２２】
接触ステップが細胞培養物において行われる、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２３】
化合物の濃度が約０．００５μｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌである、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２４】
化合物の濃度が約１μｇ／ｍｌ〜約２ｍｇ／ｍｌである、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２５】
幹細胞がヒト幹細胞である、請求項１８記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前駆細胞がヒト前駆細胞である、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前駆細胞が造血前駆細胞である、請求項１９記載の医薬組成物。
【請求項２８】
分化が造血細胞への分化である、請求項１８又は１９記載の医薬組成物。
【請求項２９】
造血細胞がＣＤ３４＋又はＣＤ３８＋である、請求項２８記載の医薬組成物。
【請求項３０】
造血細胞がＣＤ１１ｂ＋である、請求項２８記載の医薬組成物。
【請求項３１】
薬学的に許容される担体中に単離された臍帯血細胞と単離された白血球集団とを含む医薬組成物であって、前記白血球が、適切な条件下及びＪＮＫ活性又はＭＫＫ活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップと、それによって分化した前記白血球を単離するステップとを含む方法によって生成されるものである、上記医薬組成物。
【請求項３２】
単離された臍帯血細胞と単離された白血球集団とを含む医薬組成物であって、前記白血球が、適切な条件下及びＪＮＫ活性又はＭＫＫ活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップと、それによって分化した前記白血球を単離するステップとを含む方法によって生成されるものである、上記医薬組成物。
【請求項３３】
分化ステップが細胞培養物において行われる、請求項３１又は３２記載の医薬組成物。
【請求項３４】
化合物の濃度が０．００５μｇ／ｍｌ〜５ｍｇ／ｍｌである、請求項３１又は３２記載の医薬組成物。
【請求項３５】
化合物の濃度が１μｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌである、請求項３１又は３２記載の医薬組成物。
【請求項３６】
幹細胞がヒト幹細胞である、請求項３１記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前駆細胞が造血前駆細胞である、請求項３２記載の医薬組成物。
【請求項３８】
白血球を必要とする哺乳動物被験体を治療するための医薬の製造におけるＪＮＫ活性又はＭＫＫ活性を阻害する化合物の使用であって、該医薬が治療上有効な量の白血球を含み、該白血球が、幹細胞又は前駆細胞を、適切な条件下及びＪＮＫ活性又はＭＫＫ活性を阻害する化合物の存在下で幹細胞を分化させるステップと、それによって分化した前記白血球を単離するステップとを含む方法によって生成されるものである、上記使用。
【請求項３９】
幹細胞又は前駆細胞をｉｎ  ｖｉｔｒｏで分化させる、請求項３８記載の使用。
【請求項４０】
幹細胞又は前駆細胞を灌流を行った分娩後胎盤中で分化させる、請求項３８記載の使用。
【請求項４１】
白血球を含む医薬が、赤血球を実質的に含まない細胞調製物の形態でレシピエント哺乳動物被験体に投与される、請求項３８記載の使用。
【請求項４２】
白血球を含む医薬が、臍帯血細胞を含む細胞調製物の形態でレシピエント哺乳動物被験体に投与される、請求項３８記載の使用。
【請求項４３】
白血球を含む医薬が担体と組み合わせてレシピエント哺乳動物被験体に投与される、請求項３８記載の使用。
【請求項４４】
白血球を含む医薬が静脈内投与される、請求項３８記載の使用。
【請求項４５】
白血球が、組み込まれた目的の遺伝物質を発現する、請求項３８記載の使用。
【請求項４６】
哺乳動物被験体がヒトである、請求項３８記載の使用。
【請求項４７】
必要のある患者に骨髄移植するための医薬の製造におけるＪＮＫ又はＭＫＫ活性の阻害剤の使用であって、該医薬が、臍帯血、臍帯血から得られる幹細胞、末梢血、又は末梢血から得られる幹細胞を含み、該臍帯血、臍帯血から得られる幹細胞、末梢血、又は幹細胞は、ＪＮＫ又はＭＫＫ活性の阻害剤と、該幹細胞の分化又は増殖のモジュレーションが生じるのに十分な時間にわたり接触させたものである、上記使用。
【請求項４８】
ＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤が以下の構造（Ｉ）の化合物：
【化１】
2005528105.tif 000001
（式中、
Ａは、直接結合、−（ＣＨ２）ａ−、−（ＣＨ２）ｂＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｃ−、又は−（ＣＨ２）ｂＣＨ≡ＣＨ（ＣＨ２）ｃ−であり；
Ｒ１は、アリール、ヘテロアリール、又はフェニルと縮合した複素環であり、各々はＲ３から独立に選択される１〜４個の置換基で任意に置換されていてもよく；
Ｒ２は、−Ｒ３、−Ｒ４、−（ＣＨ２）ｂＣ（＝Ｏ）Ｒ５、−（ＣＨ２）ｂＣ（＝Ｏ）ＯＲ５、−（ＣＨ２）ｂＣ（＝Ｏ）ＮＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｂＣ（＝Ｏ）ＮＲ５（ＣＨ２）ｃＣ（＝Ｏ）Ｒ６、−（ＣＨ２）ｂＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）Ｒ６、−（ＣＨ２）ｂＮＲ５Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、−（ＣＨ２）ｂＮＲ５Ｒ６、−（ＣＨ２）ｂＯＲ５、−（ＣＨ２）ｂＳＯｄＲ５、又は−（ＣＨ２）ｂＳＯ２Ｒ５Ｒ６であり；
ａは、１、２、３、４、５又は６であり；
ｂ及びｃは、同じ又は異なるものであって、それぞれが０、１、２、３又は４から独立に選択され；
ｄは、それぞれが０、１又は２であり；
Ｒ３は、それぞれが独立に、ハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アシルオキシ、チオアルキル、スルフィニルアルキル、スルホニルアルキル、ヒドロキシアルキル、アリール、アリールアルキル、複素環、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ８、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８ＯＲ９、−ＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８ＳＯ２Ｒ９、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｂＯＲ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｂＲ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｂＮＲ８Ｒ９、−Ｏ（ＣＨ２）ｂＮＲ８Ｒ９、又はフェニルと縮合した複素環であり；
Ｒ４は、アルキル、アリール、アリールアルキル、複素環又はヘテロシクロアルキルであり、各々はＲ３から独立に選択される１〜４個の置換基で任意に置換されていてもよく、あるいは、Ｒ４はハロゲン又はヒドロキシであり；
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、同じ又は異なるものであって、それぞれが独立に、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、複素環又はヘテロシクロアルキルであり、ここで、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７の各々は、Ｒ３から独立に選択される１〜４個の置換基で任意に置換されていてもよく；
Ｒ８及びＲ９は、同じ又は異なるものであって、それぞれが独立に、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、複素環、又はヘテロシクロアルキルであり、あるいは、Ｒ８及びＲ９は、それらが結合する原子（１若しくは複数）と一緒に複素環を形成し、ここで、Ｒ８、Ｒ９の各々、並びに一緒になって複素環を形成するＲ８及びＲ９は、Ｒ３から独立に選択される１〜４個の置換基で任意に置換されていてもよい）
である、請求項１、３、６、１０、３８又は４７記載の方法。
【請求項４９】
ＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤が以下の構造（ＩＩ）の化合物：
【化２】
2005528105.tif 000002
（式中、
Ｒ１は、Ｒ７から独立に選択される１〜４個の置換基で任意に置換されていてもよいアリール又はヘテロアリールであり；
Ｒ２は、水素であり；
Ｒ３は、水素又は低級アルキルであり；
Ｒ４は、１〜４個の任意の置換基を示すが、各置換基は、同じ又は異なるものであり、ハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル及び低級アルコキシから独立に選択され；
Ｒ５及びＲ６は、同じ又は異なるものであって、独立に、−Ｒ８、−（ＣＨ２）ａＣ（＝Ｏ）Ｒ９、−（ＣＨ２）ａＣ（＝Ｏ）ＯＲ９、−（ＣＨ２）ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−（ＣＨ２）ａＣ（＝Ｏ）ＮＲ９（ＣＨ２）ｂＣ（＝Ｏ）Ｒ１０、−（ＣＨ２）ａＮＲ９Ｃ（＝Ｏ）Ｒ１０、（ＣＨ２）ａＮＲ１１Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０、−（ＣＨ２）ａＮＲ９Ｒ１０、−（ＣＨ２）ａＯＲ９、−（ＣＨ２）ａＳＯｃＲ９、又は−（ＣＨ２）ａＳＯ２ＮＲ９Ｒ１０であり；
あるいは、Ｒ５及びＲ６は、それらが結合する窒素原子と一緒に複素環又は置換された複素環を形成し；
Ｒ７は、それぞれが独立に、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、カルボキシ、アルキル、アルコキシ、ハロアルキル、アシルオキシ、チオアルキル、スルフィニルアルキル、スルホニルアルキル、ヒドロキシアルキル、アリール、アリールアルキル、複素環、置換された複素環、ヘテロシクロアルキル、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ８、−ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８Ｒ９、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ８ＯＲ９、−ＳＯｃＲ８、−ＳＯｃＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８ＳＯｃＲ９、−ＮＲ８Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）Ｒ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｂＯＲ９、−ＮＲ８Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ２）ｂＲ９、−Ｏ（ＣＨ２）ｂＮＲ８Ｒ９、又はフェニルと縮合した複素環であり；
Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は、同じ又は異なるものであって、それぞれが独立に、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、複素環、ヘテロシクロアルキルであり；
あるいは、Ｒ８及びＲ９は、それらが結合する原子（１若しくは複数）と一緒に複素環を形成し；
ａ及びｂは、同じ又は異なるものであって、それぞれが０、１、２、３又は４から独立に選択され；
ｃは、それぞれが０、１又は２である）
である、請求項１、３、６、１０、３８又は４７記載の方法。
【請求項５０】
ＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤が以下の構造（ＩＩＩ）の化合物：
【化３】
2005528105.tif 000003
（式中、Ｒ０は、−Ｏ−，−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、ＮＨ又は−ＣＨ２−である）
であり、
構造（ＩＩＩ）の化合物は、（ｉ）非置換、（ｉｉ）一置換で、第１置換基を有する、又は（ｉｉｉ）二置換で、第１置換基及び第２置換基を有し；
第１又は第２置換基は、それらが存在する場合には、３、４、５、７、８、９又は１０位にあり、その際、第１及び第２置換基は、それらが存在する場合には、独立に、アルキル、ヒドロキシ、ハロゲン、ニトロ、トリフルオロメチル、スルホニル、カルボキシル、アルコキシカルボニル、アルコキシ、アリール、アリールオキシ、アリールアルキルオキシ、アリールアルキル、シクロアルキルアルキルオキシ、シクロアルキルオキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アミノアルコキシ、モノ−アルキルアミノアルコキシ、ジ−アルキルアミノアルコキシ、又は構造（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）若しくは（ｆ）で表される基である：
【化４】
2005528105.tif 000004
（式中、Ｒ３及びＲ４は、一緒になって、アルキリデン、又はヘテロ原子含有環状アルキリデンであるか、あるいは、Ｒ３及びＲ４は、独立に、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、アリールオキシアルキル、アルコキシアルキル、アミノアルキル、モノ−アルキルアミノアルキル、又はジ−アルキルアミノアルキルであり；
Ｒ５は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキルアルキル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノ、モノ−アルキルアミノ、ジ−アルキルアミノ、アリールアミノ、アリールアルキルアミノ、シクロアルキルアミノ、シクロアルキルアルキルアミノ、アミノアルキル、モノ−アルキルアミノアルキル、又はジ−アルキルアミノアルキルである）、
請求項１、３、６、３８又は４７記載の方法。
【請求項５１】
有効量のＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤を含む、骨髄増殖性疾患の治療又は予防のための医薬組成物。
【請求項５２】
骨髄増殖性疾患が、真性一次性赤血球増加、原発性血小板増加、慢性骨髄性白血病、急性若しくは慢性顆粒球性白血病、急性若しくは慢性骨髄単球性白血病、骨髄線維−赤白血病、又は原因不明骨髄様化生である、請求項５１記載の医薬組成物。
【請求項５３】
有効量のＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤を含む、骨髄増殖性疾患の症状又はそれに関連する異常を治療又は予防するための医薬組成物。
【請求項５４】
異常が、血液の１以上の形成成分の過剰産生を伴う多能性造血前駆細胞のクローン増殖、フィラデルフィア染色体若しくはｂｃｒ−ａｂ１遺伝子の存在、末梢血液スミア上の涙滴変形赤血球症、白赤芽球症血液像、巨大異常血小板、網状若しくはコラーゲン線維症を伴う過細胞骨髄、又は低比率の前骨髄球及び芽細胞を含む顕著な左方移動骨髄系である、請求項５３記載の医薬組成物。
【請求項５５】
有効量のＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤を含む、骨髄異形成症候群の治療又は予防のための医薬組成物。
【請求項５６】
骨髄異形成症候群が、不応性貧血、翼状シデロブラスト（winged sideroblast）を伴う不応性貧血、過剰芽細胞を伴う不応性貧血、形質転換中の過剰芽細胞を伴う不応性貧血、前白血病又は慢性骨髄単球性白血病である、請求項５５記載の医薬組成物。
【請求項５７】
有効量のＪＮＫ阻害剤又はＭＫＫ阻害剤を含む、骨髄異形成症候群の症状を治療又は予防するための医薬組成物。
【請求項５８】
症状が、貧血、血小板減少、好中球減少、二重血球減少（bicytopenia）又は汎血球減少である、請求項５７記載の医薬組成物。