【手続補正書】
【提出日】平成18年4月19日(2006.4.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素１５にて、脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、ここに、該ポリヌクレオチドは：
（ａ）配列番号：３、配列番号：５または配列番号：３４のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４または配列番号：  ３３の核酸配列を含むヌクレオチド；
（ｃ）５Ｘ  ＳＳＣ、５０％ホルムアミドおよび４２℃の条件下で、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４または配列番号：３３のうちの１またはそれ以上にハイブリダイズするポリヌクレオチド、またはその相補体；および
（ｄ）アミノ酸モチーフ: TrpIleLeuAlaHisGluCysGlyHisGlyAlaSerPhe (WILAHECGHGASF) （配列番号：６）；  LeuAlaHisGluCysGlyHis (LAHECGH) （配列番号：７）；  HisSerPheLeuLeuValProTyrPheSerTrpLys (HSFLLVPYFSWK) （配列番号：８）；  LeuLeuValProTyrPheSerTrpLys (LLVPYFSWK) （配列番号：９）；  His(His/Ala)ArgHisHisArg(Phe/Tyr)ThrThr (H(H/A)RHHR(F/Y)TT) （配列番号：１０，  配列番号：１９，  配列番号：２０，  または配列番号：２１）；  TrpValHisHisTrpLeuValAlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThrHis (WVHHWLVAITYL(H/Q)HTH) （配列番号：１１）；  AlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThr (AITYL(H/Q)HT) （配列番号：１２）；  GlyAlaLeuAlaThrValAspArg (GALATVDR) （配列番号：１３）  またはHisValValHisHisLeuPheXaaArgIleProPheTyr (HVVHHLFXRIPFY) （配列番号：１４または配列番号：２２)のちの少なくとも１つを有するポリペプチドをコードする真菌ポリヌクレオチドよりなる群から選択される単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】
該ポリヌクレオチドが、接合菌（ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａ）、担子菌類（ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）、および子嚢菌（ａｓｃｏｍｙｃｏｔ）よりなる群から選択される門からのものである請求項１記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項３】
該ポリヌクレオチドが、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＢｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａよりなる群から選択される種からのものである請求項１記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４】
該ポリヌクレオチドが、アミノ酸モチーフ:  TrpIleLeuAlaHisGluCysGlyHisGlyAlaSerPhe (WILAHECGHGASF) （配列番号：６）；  LeuAlaHisGluCysGlyHis (LAHECGH) （配列番号：７）；  HisSerPheLeuLeuValProTyrPheSerTrpLys (HSFLLVPYFSWK) （配列番号：８）；  LeuLeuValProTyrPheSerTrpLys (LLVPYFSWK) （配列番号：９）；  His(His/Ala)ArgHisHisArg(Phe/Tyr)ThrThr (H(H/A)RHHR(F/Y)TT) （配列番号：１０，  配列番号：１９，  配列番号：２０，  または配列番号：２１）；  TrpValHisHisTrpLeuValAlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThrHis (WVHHWLVAITYL(H/Q)HTH) （配列番号：１１）；  AlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThr (AITYL(H/Q)HT) （配列番号：１２）；  GlyAlaLeuAlaThrValAspArg (GALATVDR) （配列番号：１３）  またはHisValValHisHisLeuPheXaaArgIleProPheTyr (HVVHHLFXRIPFY) （配列番号：１４または配列番号：２２）のうちの少なくとも１つを有するポリペプチドをコードする請求項１記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項５】
該ポリヌクレオチドが、配列番号：３、配列番号：５または配列番号：３４のポリペプチドをコードする請求項１記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項６】
該ポリヌクレオチドが、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４または配列番号：３３の核酸配列を含む請求項１記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項７】
該ポリヌクレオチドが、５Ｘ  ＳＳＣ、５０％ホルムアミドおよび４２℃の条件下で、配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４または配列番号：３３のうち１またはそれ以上にハイブリダイズする請求項１記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項８】
請求項１記載の単離されたポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
【請求項９】
さらに：
（ａ）ポリヌクレオチドに操作可能に連結する制御配列；
（ｂ）ポリヌクレオチドに操作可能に連結する選択マーカー；
（ｃ）ポリヌクレオチドに操作可能に連結するマーカー配列；
（ｄ）ポリヌクレオチドに操作可能に連結する精製部位；および
（ｅ）ポリヌクレオチドに操作可能に連結する標的配列よりなる群から選択された少なくとも１つのさらなる配列を含む請求項８記載の組換えベクター。
【請求項１０】
さらに、該単離されたポリヌクレオチドに操作可能に連結するプロモーターを含む請求項８記載の組換えベクター。
【請求項１１】
該プロモーターが発生的に調節された、オルガネラ特異的、組織特異的、構成的または細胞特異的プロモーターである請求項１０記載の組換えベクター。
【請求項１２】
該プロモーターが、３５Ｓ  ＣａＭＶ、３４Ｓ  ＦＭＶ、Ｎａｐｉｎ、  ７Ｓ、Ｇｌｏｂ、およびＬｅｃよりなる群から選択される請求項１０記載の組換えベクター。
【請求項１３】
単離された発現カセットである請求項８記載の組換えベクター。
【請求項１４】
さらに、炭素６にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列および／または炭素１２にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む請求項８記載の組換えベクター。
【請求項１５】
炭素１２にて、脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドは：
（ａ）配列番号：３２または配列番号：４０のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（ｂ）配列番号：３１または配列番号：３９の核酸配列を含むポリヌクレオチド；および
（ｃ）５Ｘ  ＳＳＣ、５０％  ホルムアミドおよび４２℃の条件下で、配列番号：３１または配列番号：３９の一方または両方、あるいはその相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチドよりなる群から選択される単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１６】
該ポリヌクレオチドが、接合菌（ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａ）、担子菌類（ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ）、および子嚢菌（ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ）よりなる群から選択される門からのものである請求項１５記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１７】
該ポリヌクレオチドが、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａおよびＢｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａよりなる群から選択される種からのものである請求項１５記載の単離されたポリヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１５記載の単離されたポリヌクレオチドを含む組換えベクター。
【請求項１９】
さらに、炭素６にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列および／または炭素１５にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列を含む請求項１８記載の組換えベクター。
【請求項２０】
炭素１５にて脂肪酸分子を不飽和化し、アミノ酸モチーフ:TrpIleLeuAlaHisGluCysGlyHisGlyAlaSerPhe (WILAHECGHGASF)（配列番号：６）；  LeuAlaHisGluCysGlyHis (LAHECGH) （配列番号：７）；  HisSerPheLeuLeuValProTyrPheSerTrpLys (HSFLLVPYFSWK) （配列番号：８）；  LeuLeuValProTyrPheSerTrpLys (LLVPYFSWK) （配列番号：９）；  His(His/Ala)ArgHisHisArg(Phe/Tyr)ThrThr (H(H/A)RHHR(F/Y)TT) （配列番号：１０，  配列番号：１９，  配列番号：２０，  または配列番号：２１）；  TrpValHisHisTrpLeuValAlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThrHis (WVHHWLVAITYL(H/Q)HTH) （配列番号：１１）；  AlaIleThrTyrLeu(His/Gln)HisThr (AITYL(H/Q)HT) （配列番号：１２）；  GlyAlaLeuAlaThrValAspArg (GALATVDR) （配列番号：１３）またはHisValValHisHisLeuPheXaaArgIleProPheTyr (HVVHHLFXRIPFY) （配列番号：１４または配列番号：２２）のうちの少なくとも１つを含む不飽和化酵素活性を有する真菌ポリペプチドまたはその断片。
【請求項２１】
さらに、該アミノ酸モチーフの全てを含む請求項２０記載の真菌ポリペプチド。
【請求項２２】
配列番号：３、配列番号：５または配列番号：３４のアミノ酸配列を含む真菌ポリペプチド；または炭素１５にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するその断片。
【請求項２３】
配列番号：３２または配列番号：４０のアミノ酸配列を含む真菌ポリペプチド；または炭素１２にて、脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するその断片。
【請求項２４】
請求項８記載の組換えベクターで形質転換されたトランスジェニック植物。
【請求項２５】
さらに、炭素６にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列で形質転換された請求項２４記載のトランスジェニック植物。
【請求項２６】
請求項８記載の組換えベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項２７】
該宿主細胞が、該ベクターでコードされた蛋白質を発現する請求項２６記載の宿主細胞。
【請求項２８】
該細胞が、該細胞の先祖から、該組換えベクターを受け継いだ請求項２６記載の宿主細胞。
【請求項２９】
該細胞が、該組換えベクターで形質転換された請求項２６記載の宿主細胞。
【請求項３０】
該宿主細胞が植物細胞である請求項２６記載の宿主細胞。
【請求項３１】
請求項１５記載の組換えベクターで形質転換されたトランスジェニック植物。
【請求項３２】
さらに、炭素６にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列および／または炭素１５にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列で形質転換された請求項３１記載のトランスジェニック植物。
【請求項３３】
請求項１５記載の組換えベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項３４】
該宿主細胞が、該ベクターによってコードされた蛋白質を発現する請求項３３記載の宿主細胞。
【請求項３５】
該細胞が、該細胞の先祖から、該組換えベクターを受け継いだ請求項３３記載の宿主細胞。
【請求項３６】
該細胞が、該組換えベクターで形質転換された請求項３３記載の宿主細胞。
【請求項３７】
該宿主細胞が植物細胞である請求項３３記載の宿主細胞。
【請求項３８】
（ａ）請求項２４記載の植物の種子を入手し；次いで
（ｂ）該種子から油を抽出する工程を含む植物種子からオメガ−３脂肪酸を含有する種子油を生産する方法。
【請求項３９】
請求項８記載の組換えベクターを、油生産植物に導入することを特徴とする、改変されたレベルのオメガ−３脂肪酸を含有する種子油を含む植物を生産する方法。
【請求項４０】
組換えベクターの導入が植物を育種することを含む請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
組換えベクターの導入が：
（ａ）植物細胞を、請求項８記載の組換えベクターで形質転換し；次いで
（ｂ）植物細胞から該植物を再生させる工程を含み、ここに植物が改変されたレベルのオメガ−３脂肪酸を有する請求項３９記載の方法。
【請求項４２】
該植物が、シロイヌナズナ、アブラナ脂肪種子、アブラナ、ヒマワリ、ベニバナ、キャノーラ、トウモロコシ、大豆、綿、亜麻、ホホバ、南京黄櫨、タバコ、ココア、落花生、果物植物、柑橘植物、およびナッツおよびベリーを生産する植物よりなる群から選択される植物である請求項３９記載の方法。
【請求項４３】
さらに、該植物が、炭素６にて脂肪酸分子を不飽和化する不飽和化酵素活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列で形質転換される請求項３９記載の方法。
【請求項４４】
ステアリドン酸が増加される請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
さらに、請求項８記載の組換えベクターを複数の油生産植物に導入し、オメガ−３脂肪酸の所望のプロファイルを有する植物につき、組換えベクターを受け継いだ該植物またはその子孫をスクリーニングすることを含む請求項３９記載の方法。
【請求項４６】
請求項１５記載の組換えベクターを油生産植物に導入することを特徴とする改変されたレベルのオメガ−３脂肪酸を含有する種子油を含む食物を生産する方法。
【請求項４７】
組換えベクターの導入が植物を育種することを含む請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
組換えベクターの導入が：
（ａ）植物細胞を、請求項１５記載の組換えベクターで形質転換し；次いで
（ｂ）植物細胞から該植物を再生させる工程を含み、ここに植物が改変されたレベルのオメガ−３脂肪酸を有する請求項４６記載の方法。
【請求項４９】
該植物が、シロイヌナズナ、アブラナ脂肪種子、アブラナ、ヒマワリ、ベニバナ、キャノーラ、トウモロコシ、大豆、綿、亜麻、ホホバ、南京黄櫨、タバコ、ココア、落花生、果物植物、柑橘植物、およびナッツおよびベリーを生産する植物よりなる群から選択される植物である請求項４６記載の方法。
【請求項５０】
約８％ないし約２７％のステアリドン酸含有量および約４０％ないし約７０％のオレイン酸含有量を有する内因性キャノーラ種子油。
【請求項５１】
さらに、アルファ−リノール酸、リノール酸およびガンマ−リノール酸を合わせて１０％未満含む請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５２】
さらに、ステアリドン酸含有量が、約１０％ないし約２０％である請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５３】
さらに、ステアリドン酸含有量が、約１２％ないし約１７％である請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５４】
さらに、オレイン酸含有量が、約４５％ないし約６５％である請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５５】
さらに、オレイン酸含有量が、約５５％ないし約６５％である請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５６】
さらに、ステアリドン酸含有量が約１２％ないし約１７％であり、オレイン酸含有量が、さらに、約５５％ないし約６５％である請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５７】
さらに、Ｂｒａｓｓｉｃａ  ｎａｐｕｓ種子からのものである請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５８】
さらに、カブ種子からのものである請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項５９】
油中のオメガ−６対オメガ−３脂肪酸の割合が、約１：１ないし約１：４である請求項５０記載のキャノーラ種子油。
【請求項６０】
さらに、油中のオメガ−６対オメガ−３脂肪酸の割合が、約１：２ないし約１：４である請求項５９記載のキャノーラ種子油。
【請求項６１】
請求項５０記載のキャノーラ種子油を食用産物に添加することを特徴とするヒトまたは動物消費用の食用産物の栄養価を増加させる方法。
【請求項６２】
食用産物がヒト食物である請求項６１記載の方法。
【請求項６３】
食用産物が動物餌である請求項６１記載の方法。
【請求項６４】
食用産物が、食物サプリメントである請求項６１記載の方法。
【請求項６５】
キャノーラ種子油が、食用産物のステアリドン酸含有量を増加させる請求項６１記載の方法。
【請求項６６】
キャノーラ種子油が、食用産物のオメガ−６対オメガ−３脂肪酸の割合を減少させる請求項６１記載の方法。
【請求項６７】
キャノーラ種子油添加前に、食用産物がステアリドン酸を欠乏している請求項６１記載の方法。
【請求項６８】
出発食物または餌成分に、請求項５０記載のキャノーラ種子油を添加して、食物または餌を生成することを特徴とする食物または餌の製法。
【請求項６９】
さらに、食物の製法である請求項６８記載の方法。
【請求項７０】
さらに、餌の製法である請求項６８記載の方法。
【請求項７１】
請求項６８記載の方法によって作られた食物または餌。
【請求項７２】
請求項５０記載のキャノーラ種子油を含む、ステアリドン酸をヒトまたは動物に提供するための食用組成物。
【請求項７３】
食物または餌である請求項７２記載の食用組成物。
【請求項７４】
食物が、飲料、注入食物、ソース、調味料、サラダドレッシング、フルーツジュース、シロップ、デザート、糖衣および詰め物、ソフトフローズン生成物、菓子または中間食品を含む請求項７３記載の食用組成物。
【請求項７５】
実質的に液体である請求項７２記載の食用組成物。
【請求項７６】
実質的に固体である請求項７２記載の食用組成物。
【請求項７７】
食物サプリメントである請求項７２記載の食用組成物。
【請求項７８】
栄養補助食品である請求項７２記載の食用組成物。
【請求項７９】
ヒトに投与される請求項７２記載の食用組成物。
【請求項８０】
動物に投与される請求項７２記載の食用組成物。
【請求項８１】
家畜または家禽に投与される請求項８０記載の食用組成物。
【請求項８２】
Δ６−不飽和化酵素およびΔ１５−不飽和化酵素をコードするポリヌクレオチドで形質転換されるトランスジェニックトウモロコシ植物であって、ステアリドン酸（１８：４、ｎ−３）を含有する種子油を生成する該植物。
【請求項８３】
Δ１５−不飽和化酵素が、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓおよびＢｏｔｒｙｔｉｓ  ｃｉｎｅｒｅａよりなる群から選択される種からのものである請求項８２記載のトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項８４】
Δ１５−不飽和化酵素が、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ  ｃｒａｓｓａからのものである請求項８３記載のトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項８５】
Δ１５−不飽和化酵素が、配列番号：３のポリペプチド配列を含む請求項８３記載のトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項８６】
Δ１５−不飽和化酵素が、配列番号：５のポリペプチド配列を含む請求項８３記載のトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項８７】
Δ１５−不飽和化酵素をコードするポリヌクレオチドが、さらに、
（ａ）配列番号：１、配列番号：２、配列番号：４に示されたポリヌクレオチドまたはその相補体；
（ｂ）（ａ）のいずれか１つのポリヌクレオチドと少なくとも９０％の配列の同一性を有するポリヌクレオチド；
（ｃ）５ＸＳＳＣ、５０％ホルムアミドおよび４２℃の条件下で（ａ）のいずれかのポリヌクレオチドにハイブリダイズし、（ａ）のいずれか１つのポリヌクレオチドと同一の生物学的機能を有する蛋白質をコードするポリヌクレオチド；
（ｄ）（ａ）のいずれかのポリヌクレオチドと同一アミノ酸配列をコードするが、遺伝子コードの縮重による通常の縮重を示すポリヌクレオチド；
（ｅ）（ｂ）と同一アミノ酸配列のいずれか１つをコードするが、遺伝子コードの縮重による通常の縮重を示すポリヌクレオチド；および
（ｆ）（ｃ）と同一アミノ酸配列のいずれか１つをコードするが、遺伝子コードの縮重による通常の縮重を示すポリヌクレオチド
よりなる群から選択される配列を含むものとして規定される請求項８２記載のトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項８８】
種子油が、増加したα−リノレン酸（１８：３、ｎ−３）を含む請求項８２記載のトランスジェニックトウモロコシ植物。
【請求項８９】
（ａ）トウモロコシ植物細胞をΔ６−不飽和化酵素  Δ１５−不飽和化酵素をコードするポリヌクレオチドで形質転換し；次いで
（ｂ）該植物細胞から、増加したα−リノレン酸および／またはステアリドン酸含有量を持つトウモロコシ植物を再生することを特徴とする増加したα−リノレン酸（１８：３、ｎ−３）および／またはステアリドン酸（１８：４、ｎ−３）レベルを持つトウモロコシ植物を生産する方法。
【請求項９０】
（ａ）請求項８２に記載の植物を得；
（ｂ）該植物から生成された種子を粉砕し；次いで
（ｃ）該種子からのトウモロコシ油を抽出する工程を含む、トウモロコシ種子からのオメガ−３脂肪酸を含有するトウモロコシ油を生産する方法。
【請求項９１】
請求項９０記載の方法により生産された油。
【請求項９２】
請求項９１記載の油を含む食物を含む食用組成物。
【請求項９３】
食物が、飲料、注入食物、ソース、調味料、サラダドレッシング、フルーツジュース、シロップ、デザート、糖衣および詰め物、ソフトフローズン生成物、菓子または中間食品を含む請求項９２記載の食用組成物。
【請求項９４】
実質的に液体である請求項９２記載の食用組成物。
【請求項９５】
実質的に固体である請求項９２記載の食用組成物。