【手続補正書】
【提出日】平成17年12月15日(2005.12.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項５０】
ペルオキシダーゼ酵素を、過酸化物及び少なくとも１種の化学式、
2005514396.tif 000001
（式中、イオウ原子の少なくとも１個が、各直近の環形成位置Ｒ4又はＲ11と相互に結合して、５〜７原子の環を形成し、イオウ原子のうち一つのみ環を形成した場合、Ｒ1は、１〜２０個の炭素原子を有するアルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、アリールアルキル及び置換されたアリールアルキル基から選択される基であり、Ｒ4〜Ｒ11はいずれも相互に無関係に、Ｃ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｐ、Ｓｉ及びハロゲン原子から選択される１〜５０個の原子を含有することのできる置換基であり、Ｒ3はアルキル、置換されたアルキル、ヘテロアルキル、置換されたヘテロアルキル、アリール、置換されたアリール、アリールアルキル及び置換されたアリールアルキル基から選択される基である）で表される化合物と反応させ化学ルミネセンスを発生することを包含する化学ルミネセンスの発生方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
化合物の性能を改良するため、又は、最終化合物の合成に便宜を供することを目的として、多量に、かつ、ヘテロ環における選ばれた環又は連鎖の位置に、置換基を含有させることができる。かかる性能とは、下記のものに限定するものではないが、化学ルミネセンス量子収率、酵素との反応速度、最大の光強度、発光の持続性、発光の波長及び反応媒体における溶解性である。基Ｒ4〜Ｒ11は、同一でも異なっていてもよく、いずれもＣ、Ｈ、Ｎ、Ｏ、Ｓ、Ｐ、Ｓｉ及びハロゲン原子から選択される１〜５０個の原子を含有することのできる置換基であり、発光することのできるものであり、下記の基に限定されるものではないが、アルキル、置換されたアルキル、アリール、置換されたアリール、アリールアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アリールオキシ基、ハロゲン原子、アミノ、置換されたアミノ基、カルボキシル、カルボアルコキシ、カルボキシアミド、シアノ、スルホネート及びホスフェート基であり得る。好ましくはＲ4〜Ｒ11は、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基、アミノ、又は１個或いは２個のアルキル又はアリール基で置換されたアミノ基から選択される基である。化合物の好ましい基は、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ9又はＲ10の１個が塩素原子であり、Ｒ4〜Ｒ11のうちの他のものが水素原子であるものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１５】
化合物１３の合成。 Ｎ−フェニルアクリダン−９−ジチオカルボキシレートを、１−ヨウ素化オクタンとの反応によってｎ−オクチルチオエステルに転化した。−７８℃で、ＴＨＦ（７０ｍＬ）中のＬＤＡ（４．４８ミリモル）溶液に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中のｎ−オクチルＮ−フェニルアクリダン−９−ジチオカルボキシレート（１．９０ｇ、４．２６ミリモル）を添加した。得られた混合物を−７８℃で１時間撹拌し、次に、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、１，３−プロパンサルトン（０．７８ｇ、６．３９ミリモル）を添加した。−７８℃で４５分後、反応物を室温まで加温し、更に３時間撹拌した。溶媒を除去して固体残渣を得、これを最小量のＣＨ2Ｃｌ2に溶解し、ヘキサンを用いて沈澱させた。溶液がＴＬＣプレート上で蛍光性成分を示さなくなるまで、この操作を繰返した。真空乾燥後、２．２７０ｇの１３を黄色粉末として得た。収率９３％。 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ０．８４（ｔ，３Ｈ），１．１３−１．４０（ｍ，１２Ｈ），２．０２（ｑ，２Ｈ），２．６８（ｔ，２Ｈ），２．７７（ｔ，２Ｈ），２．９０（ｔ，２Ｈ），６．４２（ｄｄ，２Ｈ），６．９４−７．０８（ｍ，４Ｈ），７．３４（ｄ，２Ｈ），７．５６（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｍ，２Ｈ），７．８６（ｄ，１Ｈ），７．９２（ｄ，１Ｈ）．
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
化合物３５の合成。 ＴＨＦ（８０ｍＬ）中、メチルＮ−フェニルアクリダン−９−ジチオカルボキシレート（１．７３５ｇ、５．００ミリモル）に、ＮａＨ（０．４６０ｇ、鉱油中６０％懸濁液、１１．５ミリモル）を添加した。得た混合物を室温で３時間撹拌し、次いで、ＴＨＦ（２０ｍＬ）中、１１−臭素化ウンデカン−１−オール（１．６３３ｇ、６．５０ミリモル）を添加した。一夜撹拌後、４ｍＬのＭｅＯＨを反応混合物に添加し、過剰のＮａＨを分解した。真空中で溶媒を除去し、得られた残渣をシリカゲル上でクロマトグラフィにかけ（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ ４：１）シロップ状液体として１１−ヒドロキシウンデシルケテンジチオアセタール誘導体２．５５０ｇを得た。収率９８％。1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ１．１９−１．６０（ｍ，１９Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．７０（ｔ，２Ｈ），３．６４（ｍ，２Ｈ），６．４６（ｔ，２Ｈ），７．０５（ｍ，４Ｈ），７．３５（ｄ，２Ｈ），７．５４（ｍ，１Ｈ），７．６４（ｍ，２Ｈ），７．８８（ｄｄ，１Ｈ），７．９５（ｄｄ，１Ｈ）ｐｐｍ．
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２０】
化合物３４、３６、及び３７を同様の方法で調製し、うち３６は、ウンデシルジチオエステルから出発した。
化合物３４ 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ１．７７（ｐ，２Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．８５（ｔ，２Ｈ），３．７９（ｑ，２Ｈ），６．３９（ｔ，２Ｈ），６．９４−７．０７（ｍ，４Ｈ），７．３２（ｄ，２Ｈ），７．５６（ｍ，１Ｈ），７．６７（ｍ，２Ｈ），７．８３（ｄｄ，１Ｈ），７．８９（ｄｄ，１Ｈ）
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２２】
化合物３７ 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ１．７５（ｍ，２Ｈ），２．２４（ｓ，３Ｈ），２．８９（ｔ，２Ｈ），３．８３（ｑ，２Ｈ），５．３５（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｄ，２Ｈ），７．０１（ｔ，２Ｈ），７．１５（ｍ，４Ｈ），７．２９（ｍ，３Ｈ），７．８８（ｍ，２Ｈ）．
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４７】
化合物４７． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ ．０３（２Ｈ，ｍ），２．８７（４Ｈ，ｍ），３．０８（２Ｈ，ｍ），３．６２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），４．００（１Ｈ，ｍ），５．２６（２Ｈ，ｓ），６．８１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），６．９４（２Ｈ，ｍ），７．０７（４Ｈ，ｍ），７．２１−７．２９（３Ｈ，ｍ），７．６５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）．
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４８】
化合物４８． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ １．８５（２Ｈ，ｍ），２．８４（２Ｈ，ｍ），３．０６（２Ｈ，ｍ），３．６３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），３．８７（２Ｈ，ｍ），３．９９（１Ｈ，ｍ），５．２１（２Ｈ，ｓ），６．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．９３（２Ｈ，ｍ），７．０５（４Ｈ，ｍ），７．１９−７．２７（３Ｈ，ｍ），７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）．Ｐ31ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：ｄ１０．２７（ｓ）．
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４９】
化合物４９． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ ２．９２（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），３．５１−３．６３（１６Ｈ，ｍ），５．２７（２Ｈ，ｓ），６．８５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ），７．０２（２Ｈ，ｍ），７．１１−７．１６（４Ｈ，ｍ），７．２５−７．３０（３Ｈ，ｍ），７．９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ）．
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５０】
化合物５０． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ ２．０３（ｍ，４Ｈ），２．８５（ｔ，２Ｈ），３．４８（ｔ，４Ｈ），４．１４（ｔ，２Ｈ），７．０２−７．１０（ｍ，４Ｈ），７．１８−７．３３（ｍ，６Ｈ），７．４５（ｄ，２Ｈ）．
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５４】
実施例１９、その他の化合物。
化合物５２． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ １．５９−１．７０（ｍ，４Ｈ），１．９５（ｍ，２Ｈ），２．７２−２．８３（ｍ，６Ｈ），３．１８（ｔ，２Ｈ），３．３４（ｔ，２Ｈ），３．４５（ｔ，２Ｈ），５．２９（ｓ，２Ｈ），６．９１−７．０２（ｍ，４Ｈ），７．０９−７．２５（ｍ，７Ｈ），７．８２（ｄ，１Ｈ），７．８８（ｄ，１Ｈ）ｐｐｍ．
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５５】
化合物５３． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ１．５４（ｐ，２Ｈ），１．９２（ｍ，２Ｈ），２．２１（ｓ，３Ｈ），２．７０−２．８２（ｍ，４Ｈ），３．１０（ｔ，２Ｈ），３．２９（ｔ，２Ｈ），５．３０（ｓ，２Ｈ），６．９０−７．０２（ｍ，４Ｈ），７．０８−７．２６（ｍ，７Ｈ），７．７８（ｄ，１Ｈ），７．８９（ｄ，１Ｈ）ｐｐｍ．
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５６】
化合物５６． 1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ3ＯＤ）：δ １．６０（ｐ，２Ｈ），１．９３（ｍ，２Ｈ），２．２７（ｓ，３Ｈ），２．７１−２．８２（ｍ，４Ｈ），３．１４（ｔ，２Ｈ），３．３２（ｔ，２Ｈ），６．４３（ｔ，２Ｈ），６．９８−７．１０（ｍ，４Ｈ），７．３２（ｄ，２Ｈ），７．５７（ｍ，１Ｈ），７．６９（ｍ，２Ｈ），７．８２（ｄ，１Ｈ）．７．９２（ｄ，１Ｈ）ｐｐｍ．