【手続補正書】
【提出日】平成18年5月24日(2006.5.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、疎水性アミノ酸の一部残基を、親水性または極性アミノ酸に、化学修飾または遺伝子工学的手法により置き換えた成熟型骨形成タンパク質に関する。本発明の成熟型タンパク質は、骨形成タンパク質に対するアンタゴニスト活性を示し、異所性骨形成（ectopic osteogenesis）および異所性石灰沈着（ectopic calcification）又は石灰沈着を伴う骨代謝性疾患（metabolic bone disease with calcification）、例えば、神経性骨化症（neurotic osteosis）、手術侵襲による異所性骨化（ectopic ossification caused by stress of operation）、外傷性骨化性筋炎（traumatic myositis ossificans）、酸素供給不足による骨化（ossification by defect of oxygen supply）、骨原性腫瘤（osteogenic tumor）、後縦靭帯骨化症（ossification of the posterior longitudinal ligament）、動脈硬化（arterial sclerosis）の症状を抑える医薬品として利用することができる。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
タンパク質のアミノ酸組成において一般的にトリプトファンとメチオニンは含有率が最も低く選択的な化学修飾に適していること、および、推定されたヒトMP52の立体構造モデルから、MP５２単量体に存在する４つのメチオニン残基のうち３つ（30番目、71番目、74番目）が推定された受容体結合部位に存在することおよび成熟型ヒトMP52単量体に2つ存在するトリプトファン残基の両方（32番目、35番目）が推定された受容体結合部位に存在することから、これら２つのアミノ酸残基に化学修飾を施したタンパク質を作製した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
【配列表】
配列番号：1
配列の長さ：119
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
生物名：ヒト（Homo sapiens）
組織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
存在位置：
他の情報：成熟型MP52の配列
配列：
Pro Leu Ala Thr Arg Gln Gly Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys Ala 
1               5                   10                  15
Arg Cys Ser Arg Lys Ala Leu His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly Trp 
20                  25                  30       
Asp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys Glu 
35                  40                  45              
Gly Leu Cys Glu Phe Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His 
50                  55                  60                 
Ala Val Ile Gln Thr Leu Met Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr Pro 
65                  70                  75                  80
Pro Thr Cys Cys Val Pro Thr Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Phe 
85                  90                  95     
Ile Asp Ser Ala Asn Asn Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val 
100                 105                 110        
Val Glu Ser Cys Gly Cys Arg
115 
配列番号：2
配列の長さ：114
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
物名：ヒト（Homo sapiens）
織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
在位置：
の情報：成熟型BMP-2の配列
配列：
Gln Ala Lys His Lys Gln Arg Lys Arg Leu Lys Ser Ser Cys Lys Arg 
1               5                   10                  15     
His Pro Leu Tyr Val Asp Phe Ser Asp Val Gly Trp Asn Asp Trp Ile 
20                  25                  30
Val Ala Pro Pro Gly Tyr His Ala Phe Tyr Cys His Gly Glu Cys Pro 
35                  40                  45            
Phe Pro Leu Ala Asp His Leu Asn Ser Thr Asn His Ala Ile Val Gln 
50                  55                  60                 
Thr Leu Val Asn Ser Val Asn Ser Lys Ile Pro Lys Ala Cys Cys Val 
65                  70                  75                  80
Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser Met Leu Tyr Leu Asp Glu Asn Glu
85                  90                  95    
Lys Val Val Leu Lys Asn Tyr Gln Asp Met Val Val Glu Gly Cys Gly 
100                 105                 110         
Cys Arg
配列番号：3
配列の長さ：116
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
生物名：ヒト（Homo sapiens）
組織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
存在位置：
他の情報：成熟型BMP-4の配列
配列：
Ser Pro Lys His His Ser Gln Arg Ala Arg Lys Lys Asn Lys Asn Cys
1               5                   10                  15    
Arg Arg His Ser Leu Tyr Val Asp Phe Ser Asp Val Gly Trp Asn Asp
20                  25                  30      
Trp Ile Val Ala Pro Pro Gly Tyr Gln Ala Phe Tyr Cys His Gly Asp
35                  40                  45
Cys Pro Phe Pro Leu Ala Asp His Leu Asn Ser Thr Asn His Ala Ile
50                  55                  60
Val Gln Thr Leu Val Asn Ser Val Asn Ser Ser Ile Pro Lys Ala Cys
65                  70                  75                  80
Cys Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala Ile Ser Met Leu Tyr Leu Asp Glu
85                  90                  95
Tyr Asp Lys Val Val Leu Lys Asn Tyr Gln Glu Met Val Val Glu Gly
100                 105                 110          
Cys Gly Cys Arg
115
配列番号：4
配列の長さ：139
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
生物名：ヒト（Homo sapiens）
組織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
存在位置：
他の情報：成熟型BMP-7
配列：
Ser Thr Gly Ser Lys Gln Arg Ser Gln Asn Arg Ser Lys Thr Pro Lys 
1               5                   10                  15
Asn Gln Glu Ala Leu Arg Met Ala Asn Val Ala Glu Asn Ser Ser Ser 
20                  25                  30
Asp Gln Arg Gln Ala Cys Lys Lys His Glu Leu Tyr Val Ser Phe Arg 
35                  40                  45
Asp Leu Gly Trp Gln Asp Trp Ile Ile Ala Pro Glu Gly Tyr Ala Ala 
50                  55                  60                  
Tyr Tyr Cys Glu Gly Glu Cys Ala Phe Pro Leu Asn Ser Tyr Met Asn 
65                  70                  75                  80
Ala Thr Asn His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val His Phe Ile Asn Pro 
85                  90                  95
Glu Thr Val Pro Lys Pro Cys Cys Ala Pro Thr Gln Leu Asn Ala Ile 
100                 105                 110
Ser Val Leu Tyr Phe Asp Asp Ser Ser Asn Val Ile Leu Lys Lys Tyr 
115                 120                 125
Arg Asn Met Val Val Arg Ala Cys Gly Cys His
130                 135
配列番号：5
配列の長さ：119
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
生物名：ヒト（Homo sapiens）
組織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
存在位置：
他の情報：成熟型MP52の配列の30番目、71番目、74番目および111番目のメチオニンが修飾されてメチオニンスルフォキシドに変換している。
配列：
Pro Leu Ala Thr Arg Gln Gly Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys Ala 
1               5                   10                  15
Arg Cys Ser Arg Lys Ala Leu His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly Trp 
20                  25                  30
Asp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys Glu 
35                  40                  45
Gly Leu Cys Glu Phe Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His 
50                  55                  60
Ala Val Ile Gln Thr Leu Met Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr Pro 
65                  70                  75                  80
Pro Thr Cys Cys Val Pro Thr Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Phe 
85                  90                  95
Ile Asp Ser Ala Asn Asn Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val 
100                 105                 110
Val Glu Ser Cys Gly Cys Arg
115
配列番号：6
配列の長さ：119
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
生物名：ヒト（Homo sapiens）
組織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
存在位置：
他の情報：成熟型MP52の配列の30番目、および/または、71番目、および/または、74番目、および/または、111番目のメチオニンが修飾されてS-カルボキシメチルメチオニンに変換している。
配列：
Pro Leu Ala Thr Arg Gln Gly Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys Ala 
1               5                   10                  15
Arg Cys Ser Arg Lys Ala Leu His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly Trp 
20                  25                  30
Asp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys Glu 
35                  40                  45            
Gly Leu Cys Glu Phe Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His 
50                  55                  60                 
Ala Val Ile Gln Thr Leu Met Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr Pro 
65                  70                  75                  80
Pro Thr Cys Cys Val Pro Thr Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Phe 
85                  90                  95
Ile Asp Ser Ala Asn Asn Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val 
100                 105                 110         
Val Glu Ser Cys Gly Cys Arg
115
配列番号：7
配列の長さ：119
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直鎖状
配列の種類：ペプチド
フラグメント型：N末端フラグメント
起源：
生物名：ヒト（Homo sapiens）
組織の種類：ヒト胎児
配列の特徴：
存在位置：
他の情報：成熟型MP52の配列の32番目および35番目のトリプトファンが修飾されてアリールスルフェニルトリプトファンに変換している。
配列：
Pro Leu Ala Thr Arg Gln Gly Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys Ala 
1               5                   10                  15
Arg Cys Ser Arg Lys Ala Leu His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly Trp 
20                  25                  30
Asp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys Glu 
35                  40                  45
Gly Leu Cys Glu Phe Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His 
50                  55                  60
Ala Val Ile Gln Thr Leu Met Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr Pro 
65                  70                  75                  80
Pro Thr Cys Cys Val Pro Thr Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Phe 
85                  90                  95
Ile Asp Ser Ala Asn Asn Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val 
100                 105                 110
Val Glu Ser Cys Gly Cys Arg
115