【手続補正書】
【提出日】平成17年7月1日(2005.7.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項６】 ＣｐＧジヌクレオチドの５'側に隣接した位置に２'置換ヌクレオシドを含み、少なくとも一つのヌクレオシドが２'−Ｏ−メチルリボヌクレオシドではなく、ヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的ではない、免疫刺激作用の低減したＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１６】  Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、ＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激作用を増大させる方法であって、該オリゴヌクレオチド中のＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを導入することを含む方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１８】  免疫刺激作用の増大したＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドであって、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを含むことを特徴とするオリゴヌクレオチド。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】請求項２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２２】  哺乳動物において免疫応答を誘発する方法であって、哺乳動物にＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを投与することを含み、その際、該オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを含み、Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではないことを特徴とする、方法。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
さらに最近では、何人かの研究者が疾患の治療に対するアンチセンス法の有効性を示している。Crooke（Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 8: vii-viii）は、サイトメガロウイルスによって誘発されたヒトの網膜炎の治療に対するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの市場売買の承認が得られたことを開示している。残念なことに、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの使用は当初予想されていたよりも複雑なものとなってきた。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドによって引き起こされるある種の作用は、予想されるアンチセンスのメカニズムでは説明できなかった。たとえば、McIntyreら（Antisense Res. Dev. 3: 309-322 (1993)）は、「センス」のホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが特定の免疫刺激を引き起こすことを教示している。この副作用や他の副作用は、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの概念を複雑なものにしている。Zhaoら（Biochemical Pharmacology 51: 173-182 (1996)）は、２つのＣｐＧ含有オリゴヌクレオチド［一つはＨＩＶ−１からのｇａｇ遺伝子に相補的なものであり（
【化１】
2003526628.tif 000001
（配列番号１））、他はＨＩＶ−１のｒｅｖ遺伝子に相補的なものである（
【化２】
2003526628.tif 000002
（配列番号２））］によって媒体される免疫刺激を開示している。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
第四の側面において、本発明は、Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではないＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激作用を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面による方法は、オリゴヌクレオチド中のＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを導入することを含む。ある好ましい態様において、該オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。別の態様では該オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドであってよい。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
第五の側面において、本発明は、免疫刺激作用の増大したＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを提供する。該オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを含み、Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。ある好ましい態様において、該オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
第六の側面において、本発明は、哺乳動物において免疫応答を誘発する方法を提供する。該方法は、哺乳動物にＣｐＧ含有オリゴヌクレオチドを投与することを含み、その際、該オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを含み、Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではないことを特徴とする。ある好ましい態様において、該オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
第四の側面において、本発明は、Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではない、免疫刺激モチーフ（たとえば、ＣｐＧ）含有オリゴヌクレオチドの免疫刺激作用を増大させる方法を提供する。本発明のこの側面による方法は、オリゴヌクレオチド中のＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを導入することを含む。ある好ましい態様において、該オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
本発明のこの側面による方法は、合成プロセスでＣｐＧジヌクレオチドの導入直後のサイクルに適当な２'置換モノマーシンソンを用いさえすれば、よく知られた合成法のいずれにおいても都合よく行うことができる。好ましいモノマーとしては、ホスホルアミダイト、ホスホトリエステルおよびＨ−ホスホネートが挙げられる。それゆえ、本発明の目的のためには、「オリゴヌクレオチド中のＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを導入する」とは、単にそのような位置に２'置換ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドを合成することを意味する。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
第五の側面において、本発明は、免疫刺激作用の増大した免疫刺激モチーフ（たとえば、ＣｐＧ）含有オリゴヌクレオチドを提供する。該オリゴヌクレオチドは、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の１番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の２番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの５'側の６番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の２つのヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の３番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の４番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の５番目のヌクレオシド、ＣｐＧジヌクレオチドの３'側の６番目のヌクレオシド、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれた位置にて２'置換ヌクレオシドを含み、Ｈａ−ｒａｓまたはヒト免疫不全ウイルス１型のｇａｇまたはｒｅｖ遺伝子に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。ある好ましい態様において、該オリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドではない。本発明の第四、第五および第六の側面による好ましいオリゴヌクレオチドは、長さが約６〜約５０ヌクレオチドであり、安定性を向上させるため修飾したヌクレオチド間結合、修飾した塩基または修飾した糖をさらに含んでいてよい。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
下記実施例は本発明のある種の好ましい態様をさらに説明することを意図するものであって、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。
実施例１
インビトロでの免疫刺激作用の変調
ＣｐＧモチーフを含有するＰＳ−オリゴの化学修飾の位置の影響を調べるため、本発明者らは２つのオリゴヌクレオチドを選んだ。オリゴ１は一つのＣｐＧモチーフを含み、オリゴ１５は２つのＣｐＧモチーフを含む。これら２つのオリゴはいずれも以前に調べられており、免疫刺激性であることが示されている。本試験においてオリゴヌクレオチドの免疫刺激活性を評価するため、本発明者らはマウスの脾臓細胞増殖アッセイを用いた。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
表１：オリゴデオキシヌクレオチドホスホロチオエートおよび修飾部位
【表１】
2003526628.tif 000003