【手続補正書】
【提出日】平成18年6月16日(2006.6.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  肝臓幹細胞および肝実質細胞を含む単離された肝臓細胞クラスター。
【請求項２】  前記肝臓細胞クラスターが細胞ダブレットである、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項３】  前記肝実質細胞および前記幹細胞がデスモソーム接合により接合している、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項４】  前記幹細胞が前卵円細胞である、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項５】  前記幹細胞がＯＶ６を発現する、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項６】  前記幹細胞が胆管細胞マーカーを発現する、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項７】  前記胆管細胞マーカーがサイトケラチンである、請求項６に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項８】  前記サイトケラチンがサイトケラチン１９である、請求項７に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項９】  前記幹細胞がデスモプラキンを発現する、請求項３に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１０】  前記幹細胞が、ラミニン、デスモプラキンＩ、細胞間接着分子（ＣＣＡＭ）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ジペプチジルペプチダーゼ−４、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ（γＧＴ）、活性化後超後期（ＶＬＡ）−２、ＶＬＡ−３、ＶＬＡ−５およびＶＬＡ−６からなる群より選択される抗原を発現することでさらに特徴付けられる、請求項６に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１１】  前記クラスターが成体肝組織由来である、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１２】  前記クラスターが胎児の肝臓または小児の肝臓に由来する、請求項１に記載のクラスター。
【請求項１３】  前記クラスターがヒト組織由来である、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１４】  前記クラスターがげっ歯類組織由来である、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１５】  前記幹細胞が成熟機能性肝実質細胞または胆管細胞に分化する、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１６】  前記幹細胞が治療用タンパク質をコードする異種ＤＮＡを含む、請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１７】  前記治療用タンパク質が、オルニチントランスカルバモイラーゼ、アルギノスクシネートシンテターゼ、グルタミンシンテターゼ、グリコーゲンシンテターゼ、グルコース−６−ホスファターゼ、コハク酸デヒドロゲナーゼ、グルコキナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、脂肪酸シンテターゼ、アラニンアミノトランスフェラーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、フェリチン、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）レセプター、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルブミン、トランスフェリン、補体成分Ｃ３、α２−マクログロブリン、フィブリノーゲン、第ＸＩＩＩ：Ｃ因子、第ＩＸ因子、またはα１−抗トリプシンからなる群より選択される、請求項１６に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項１８】  初代肝臓幹細胞であって該幹細胞が：
（ａ）正常肝臓組織から得られ、そして
（ｂ）肝実質細胞および該幹細胞を含む単離された肝臓細胞クラスターに由来する、幹細胞。
【請求項１９】  前記肝臓細胞クラスターが細胞ダブレットである、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項２０】  前記肝実質細胞および前記幹細胞がデスモソーム接合により接合している、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項２１】  前記幹細胞が前卵円細胞である、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項２２】  前記幹細胞がＯＶ６を発現する、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項２３】  前記幹細胞が胆管細胞マーカーを発現する、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項２４】  前記胆管細胞マーカーがサイトケラチンである、請求項２３に記載の幹細胞。
【請求項２５】  前記サイトケラチンがサイトケラチン１９である、請求項２４に記載の幹細胞。
【請求項２６】  前記幹細胞がデスモプラキンを発現する、請求項２０に記載の幹細胞。
【請求項２７】  前記細胞が、ラミニン、デスモプラキンＩ、ＣＣＡＭ、ＣＥＡ、ジペプチジルペプチダーゼ−４、γＧＴ、ＶＬＡ−２、ＶＬＡ−３、ＶＬＡ−５およびＶＬＡ−６からなる群より選択される抗原を発現することでさらに特徴付けられる、請求項２３に記載の幹細胞。
【請求項２８】  前記幹細胞が成体肝組織由来である、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項２９】  前記幹細胞が胎児の肝臓または小児の肝臓に由来する、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項３０】  前記幹細胞がヒト組織由来である、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項３１】  前記幹細胞がげっ歯類組織由来である、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項３２】  前記幹細胞が成熟機能性肝実質細胞または胆管細胞に分化する、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項３３】  前記幹細胞が治療用タンパク質をコードする異種ＤＮＡを含む、請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項３４】  前記治療用タンパク質が、オルニチントランスカルバモイラーゼ、アルギノスクシネートシンテターゼ、グルタミンシンテターゼ、グリコーゲンシンテターゼ、グルコース−６−ホスファターゼ、コハク酸デヒドロゲナーゼ、グルコキナーゼ、ピルビン酸キナーゼ、アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、脂肪酸シンテターゼ、アラニンアミノトランスフェラーゼ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ、フェリチン、ＬＤＬレセプター、アルコールデヒドロゲナーゼ、アルブミン、トランスフェリン、補体成分Ｃ３、α２−マクログロブリン、フィブリノーゲン、第ＸＩＩＩ：Ｃ因子、第ＩＸ因子、またはα１−抗トリプシンからなる群より選択される、請求項３３に記載の幹細胞。
【請求項３５】  単離された肝臓幹細胞のサンプルを得る方法であって、以下：
（ａ）正常肝臓組織から肝臓細胞クラスターを単離する工程であって、該クラスターは、肝実質細胞と会合する幹細胞を含む、工程；
（ｂ）該肝実質細胞から該幹細胞を解離する工程；および
（ｃ）ダブレットから該肝実質細胞を除去し、肝臓幹細胞のサンプルを得る工程、
を包含する、方法。
【請求項３６】  胆管樹と会合した門脈周囲の肝実質細胞を富化する工程を含む、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】  前記肝臓細胞クラスターが細胞ダブレットである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】  前記肝臓細胞クラスターが成体肝臓のヘーリング管に由来する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３９】  デスモプラキンの発現について選択する工程をさらに包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４０】  ＯＶ６の発現について選択する工程をさらに包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４１】  ラミニン、デスモプラキンＩ、ＣＣＡＭ、ＣＥＡ、ジペプチジルペプチダーゼ−４、γＧＴ、ＶＬＡ−２、ＶＬＡ−３、ＶＬＡ−５およびＶＬＡ−６からなる群より選択される抗原を発現する細胞について選択する工程をさらに包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項４２】  請求項３５に記載の方法により単離された、肝臓幹細胞。
【請求項４３】  請求項１に記載の肝臓細胞クラスターを含む体外肝臓補助デバイス。
【請求項４４】  請求項１８に記載の肝臓幹細胞を含む、体外肝臓補助デバイス。
【請求項４５】 哺乳動物への肝臓移植のための請求項１に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項４６】 哺乳動物への肝臓移植のための請求項１８に記載の幹細胞。
【請求項４７】 哺乳動物における遺伝性または後天性の遺伝性疾患または代謝性疾患を処置するための、該哺乳動物への移植に適した、請求項１６に記載の肝臓細胞クラスター。
【請求項４８】 哺乳動物における遺伝性または後天性の遺伝性疾患または代謝性疾患を処置するための、該哺乳動物への移植に適した、請求項３３に記載の幹細胞。