【手続補正書】
【提出日】平成17年8月8日(2005.8.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脊椎動物の前癌細胞および／または癌細胞から体液中に放出された可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項２】
約50から54 kdの分子量を有することを特徴とする請求項１記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項３】
約20から30 kdの分子量を有することを特徴とする請求項１記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項４】
American Type Culture Collection (ATCC)に寄託番号HB11128として寄託されたハイブリドーマVU-M75から分泌されるM75モノクローナル抗体が特異的に結合することを特徴とする請求項１記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項５】
前記脊椎動物の細胞が、ヒト細胞であることを特徴とする請求項１記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項６】
前記体液が、血液、血清、血漿、精液、乳房分泌物、唾液、涙液、痰、粘液、尿、胃分泌物、糞便懸濁液、胆汁、リンパ液、細胞質ゾル、腹水、胸水、羊水、膀胱洗液、気管支肺胞洗浄液および脳脊髄液より成る群から選択されることを特徴とする請求項１記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項７】
MN/CA IX抗原のプロテオグリカン様(PG)ドメインおよび炭酸脱水酵素 (CA)ドメインを含むことを特徴とする請求項２記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項８】
MN/CA IX抗原の炭酸脱水酵素 (CA)ドメイン、または該CAドメインの一部を含むことを特徴とする請求項３記載の可溶型MN/CA IX抗原。
【請求項９】
脊椎動物体液中の可溶型MN/CA IX抗原を検出または検出および定量する方法であって、
(a)前記脊椎動物体液の試料に、MN/CA IX抗原に特異的に結合する１以上の抗体および／またはMN/CA IX抗原に特異的に結合する１以上の抗体断片を接触させ；
(b)前記試料における前記１以上の抗体および／または前記１以上の抗体断片の結合を検出または検出および定量する；工程を含む方法。
【請求項１０】
前記１以上の抗体および／または抗体断片が標識されていることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１１】
ウェスタンブロット、酵素結合免疫吸着法（ELISA）、ラジオイムノアッセイ、競合イムノアッセイ、二抗体サンドイッチ法、免疫組織化学染色法、凝集法、および蛍光イムノアッセイより成る群から選択される様式で実施されることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１２】
前記１以上の抗体および／または抗体断片が、脊椎動物の前癌細胞および／または癌細胞から体液中に放出された可溶型MN/CA IX抗原に特異的に結合することを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１３】
前記１以上の抗体がモノクローナル抗体であることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１４】
前記モノクローナル抗体が、米国バージニア州マナッサスのAmerican Type Culture Collection (ATCC)に寄託番号HB11128として寄託されたハイブリドーマVU-M75から分泌されるM75モノクローナル抗体、およびM75エピトープに対する抗体ではないモノクローナル抗体より成る群から選択されることを特徴とする請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
乳房、尿路、腎臓、卵巣,子宮、膀胱、子宮頸部、子宮内膜、膣、口蓋垂、前立腺、肝臓、肺、皮膚、甲状腺、膵臓、精巣、脳、頭部および頸部、消化管、ならびに中胚葉の前癌性および癌性疾患より成る群から選択されるMN/CA IX抗原の異常発現に関連する前癌性および／または癌性疾患の診断および／または予後診断の方法であることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１６】
腎細胞癌、尿路前癌性および癌性疾患、乳癌、乳前癌、結腸直腸癌および結腸直腸前癌より成る群から選択される前癌性および／または癌性疾患の診断および／または予後診断の方法であることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１７】
サンドイッチイムノアッセイを用いて、前記可溶型MN/CA IX抗原を検出または検出および定量することを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項１８】
前記抗体がモノクローナル抗体であり、前記サンドイッチアッセイに用いる１つのモノクローナル抗体がMN/CA IX抗原の炭酸脱水酵素 (CA)ドメインに対する抗体であり、かつ前記サンドイッチアッセイに用いる他のモノクローナル抗体がMN/CA IX抗原のプロテオグリカン様(PG)ドメインに対するものであることを特徴とする請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記CAドメインに対する抗体が、ブダペスト条約に基づき、ベルギーのヘント（Gent）にあるUniverseit GentのLaboratorium voor Moleculaire Biologie-Plasmidencollectie (LMBP)における Belgian Coordianted Collections of Microorganisms (BCCM)  の国際寄託機関(IDA)に寄託番号LMBP 6009CBとして寄託されたハイブリドーマ細胞株V/10-VUから分泌されるV/10モノクローナル抗体であり、かつ前記PGドメインに対する抗体が、米国バージニア州マナッサスのAmerican Type Culture Collection(ATCC)に、ATCC番号HB11128として寄託されたハイブリドーマ細胞株VU-M75によって分泌されるM75モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記１以上の抗体および／または抗体断片が、MN/CA IX欠損マウスで作製されたMN/CA IX特異的モノクローナル抗体、MN/CA IX欠損マウスで作製されたMN/CA IX特異的モノクローナル抗体の断片、MN/CA IX抗原の炭酸脱水酵素(CA)ドメインに特異的な抗体および抗体断片、MN/CA IX抗原の非免疫優性エピトープに特異的な抗体および抗体断片、ならびに、MN/CA IX抗原のプロテオグリカン様(PG)ドメインに特異的な抗体および抗体断片より成る群から選択されることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項２１】
HER-2外部ドメインに対して特異的な抗体および／または抗体断片を用いて、前記体液中のHER-2外部ドメインを検出または検出および定量する工程をさらに含むことを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項２２】
前記体液が、HER-2タンパク質／ポリペプチドに特異的なモノクローナル抗体または抗体断片を用いた治療に対する反応が不十分である癌患者由来のものであることを特徴とする請求項９記載の方法。
【請求項２３】
前記体液が癌患者由来のものであり、可溶型MN/CA IX抗原およびHER-2外部ドメインの両方が前記体液中に存在するか否かに基づいて治療方法を決定する工程をさらに含むことを特徴とする請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
MN/CA IX-欠損哺乳動物から作製された、MN/CA IX抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体。
【請求項２５】
前記MN/CA IX-欠損哺乳動物が、Car9に完全欠失突然変異を有することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項２６】
炭酸脱水酵素(CA)ドメイン、プロテオグリカン様(PG)ドメイン、膜貫通(TM)ドメインおよび細胞内(IC)ドメインより成る群から選択されるMN/CA IX抗原のドメインに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項２７】
炭酸脱水酵素(CA)ドメインおよびプロテオグリカン様(PG)ドメインより成る群から選択されるMN/CA IX抗原のドメインに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項２８】
MN/CA IX抗原の炭酸脱水酵素(CA)ドメインに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項２９】
モノクローナル抗体のエピトープが、配列番号９のアミノ酸配列内、配列番号１０１のアミノ酸配列内、あるいは配列番号９または１０１のアミノ酸配列に実質的に相同なアミノ酸配列内にあることを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３０】
モノクローナル抗体のエピトープが配列番号６７のアミノ酸配列付近にあるか、あるいは該モノクローナル抗体が、配列番号６９のアミノ酸配列内または配列番号６９のアミノ酸配列に実質的に相同なアミノ酸配列内にあるエピトープに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３１】
MN/CA IXタンパク質のプロテオグリカン様(PG)ドメインに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３２】
モノクローナル抗体のエピトープが、配列番号８のアミノ酸配列、配列番号９８のアミノ酸配列、および配列番号８または９８のアミノ酸配列に実質的に相同なアミノ酸配列；よりなる群から選択されるアミノ酸配列内にあることを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３３】
配列番号６のアミノ酸配列または配列番号６のアミノ酸配列に実質的に相同なアミノ酸配列を有するMN/CA IXタンパク質の膜貫通ドメインに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３４】
配列番号７のアミノ酸配列または配列番号７の配列と実質的に相同なアミノ酸配列を有するMN/CA IXタンパク質の細胞内ドメインに特異的に結合することを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３５】
配列番号68のアミノ酸配列から成るエピトープに結合することを特徴とする請求項３４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３６】
ベルギー、ヘント（Gent）のBCCM（商標）/LMBPに寄託番号LMBP 6009CBとして寄託されたハイブリドーマVU-V/10によって産生されることを特徴とする請求項２８記載のモノクローナル抗体。
【請求項３７】
MN/CA IX抗原結合領域を含む抗原結合断片より成る群から選択されることを特徴とする請求項２４記載のモノクローナル抗体。
【請求項３８】
前記断片が、ペプチド結合VHおよびVLドメインを含む一本鎖分子であることを特徴とする請求項３７記載のモノクローナル抗体。
【請求項３９】
前記断片が二量体化されていることを特徴とする請求項３８記載のモノクローナル抗体。
【請求項４０】
モノクローナル抗体V/10を産生し、ベルギー、ヘント（Gent）のBCCM（商標）/LMBPに寄託番号LMBP 6009CBとして寄託されているハイブリドーマVU-V/10。
【請求項４１】
MN/CA IX抗原の免疫優性エピトープに対する抗体ではないことを特徴とする、MN/CA IX抗原に特異的なモノクローナル抗体または抗体断片。
【請求項４２】
ヒト化抗体であることを特徴とする請求項２４、２８、３７、または４１記載のモノクローナル抗体または抗体断片。
【請求項４３】
放射性同位体、化学療法薬、毒素、または炭酸脱水酵素阻害剤と結合していることを特徴とする請求項２４、２８、３７、４１、または４２記載のモノクローナル抗体または抗体断片。
【請求項４４】
請求項２４、２５、２８、３７、４１、４２または４３記載の１以上のモノクローナル抗体または抗体断片を含有する、MN/CA IX抗原の異常発現に関連する前癌性および／または癌性疾患を治療するための組成物。
【請求項４５】
化学療法薬、炭酸脱水酵素阻害剤、サイトカイン、MN/CA IX抗原の免疫優性エピトープに対する抗体、MN/CA IX抗原以外の癌関連抗原に対する抗体、および／または放射性同位体と共に、請求項２４記載のモノクローナル抗体を含有することを特徴とする、前癌性および／または癌性疾患を治療するための組成物。
【請求項４６】
MN/CA IX抗原に特異的に結合するモノクローナル抗体を含有する、体液中に検出可能な可溶型MN/CA IX抗原およびHER-2外部ドメインの両方を含む患者を治療するための組成物。
【請求項４７】
炭酸脱水酵素阻害剤を含有する、体液中に検出可能な可溶型MN/CA IX抗原およびHER-2外部ドメインの両方を含む患者を治療するための組成物。
【請求項４８】
MN/CA IX抗原を発現する細胞にターゲッティング輸送するためのプラスミド／ベクターと結合した請求項２８記載の抗体を含有する、MN/CA IX抗原の異常発現に関連する前癌性および／または癌性疾患を遺伝子治療するための組成物。
【請求項４９】
請求項２４または４１記載のモノクローナル抗体のイディオタイプ抗体に対する抗イディオタイプ抗体。
【請求項５０】
請求項４９記載の抗イディオタイプ抗体を含有する、前癌性および／または癌性疾患を遺伝子治療するためのワクチン組成物。
【請求項５１】
請求項２４または４１記載のモノクローナル抗体、および必要に応じてMN/CA IX抗原の免疫優性エピトープに対するモノクローナル抗体を用いることを特徴とする、MN/CA IX抗原の欠失変異体を検出する方法。
【請求項５２】
請求項２４−３５、３７−３９、４１および４２いずれか１項記載のモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
主なCA IX免疫優性エピトープはM75mabに対するものである。M75モノクローナル抗体は、CA IXのN末端のプロテオグリカン様(PG)領域中の免疫優性エピトープに対すると考えられている。M75のエピトープはアミノ酸配列PGEEDLP(配列番号11)と同定されており、これはCA IXのN末端PG領域中で4回同一に反復されている（Zavada et al.(2000)）。M75mabもまた結合し得る近縁のエピトープは、免疫優性エピトープの典型でもあり、たとえば、予測CA IXアミノ酸配列を示す図1A-1Cのアミノ酸(aa)61-96(配列番号12)に見出すことができる免疫優性6回タンデムリピートを含む。PGドメイン内の免疫優性タンデムリピートエピトープの変化は、GEEDLP(配列番号13)(aa61-66、aa79-84、aa85-90、およびaa91-96)、EEDL(配列番号14)(aa62-65、aa80-83、aa86-89、aa92-95)、EEDLP(配列番号15)(aa62-66、aa80-84、aa86-90、aa92-96)、EDLPSE(配列番号16)(aa63-68)、EEDLPSE(配列番号17)(aa62-68)、DLPGEE(配列番号18)(aa82-87、aa88-93)、EEDLPS(配列番号19)(aa62-67)、およびGEDDPL(配列番号20)(aa55-60)を含む。他の免疫優性エピトープは、たとえば、aa68-91(配列番号22)を含んでいてよい。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４４】
ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、ここでは当該分野でストリンジェントな条件とされている標準的なハイブリダイゼーション条件に準じると考えられる。たとえば、ストリンジェントな条件は、NaCl 0.02Mから0.15M、温度50℃から70℃によって与えられるような相対的な低塩濃度および／または高温条件を包含すると一般的に理解されている。塩濃度0.15Mから0.9Mで温度が20℃から55℃までの範囲といった、よりストリンジェントでない条件は、高温のようにハイブリッド二重らせんを不安定化する役割を果たす増加する量のホルムアルデヒドを添加することによってよりストリンジェントにすることができる。 
典型的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は、Sambrook et al., Molecular Cloning : A Laboratory Manual, pages 1.91 and 9.47- 9.51 (Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, NY;1989) ; Maniatis et al., Molecular Cloning : A Laboratory Manual, pages 387-389 (Cold Spring Harbor Laboratory; Cold Spring Harbor, NY; 1982); Tsuchiya et al., Oral Surgery, Oral Medicine. Oral Pathology, 71 (6): 721-725 (June 1991）に記載されている。 
MNゲノム配列(配列番号3)を含むプラスミド--A4aクローンならびにXE1およびXE3サブクローン--は、American Type Culture Collection (ATCC)に1995年6月6日にそれぞれATCC寄託番号97199、97200、および97198として寄託された。 
完全なMNゲノム領域のエキソン-イントロン構造
重複するクローンの完全な配列は10,898bpを含む(配列番号3）。図3はヒトMN遺伝子の構成を描き、11個すべてのエキソンならびに上流の2個およびイントロンの6個のAlu反復配列の位置を示す。すべてのエキソンは小さく、27から191bpの範囲であり、445bpである第一のエキソンは例外である。イントロンの大きさは89から1400bpまでの範囲である。CAドメインはエキソン2〜8によってコードされる一方、エキソン1、10、および11はそれぞれMN/CA IXタンパク質のプロテオグリカン様ドメイン、膜貫通アンカー、および細胞質尾部に対応する。下記の表1は、AG-GTモチーフを含む共通スプライス配列に従うスプライスドナーおよびアクセプター配列を列記する（Mount, Nucleic Acids Res. 10: 459-472 (1982)）。 
【表１】
2005535601.tif 000001
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６２】
実施例１
CA IX-欠損マウスの作製
材料および方法
マウスCar9cDNAのクローニング
マウスcDNAは、RT-PCRによって、ヒトCar9cDNA(EMBL登録番号X66839;配列番号70）に由来するプライマーを用いて得た。テンプレート総RNAは、C57BL/6Jマウス胃から、酸グアニジウムチオシアネート-フェノール/クロロホルム単離によって調製した（Siebert et al. (1993)）。第一鎖合成は、標準的条件下でSuperScriptII逆転写酵素(Life Technologies, ドイツ）を用いて実施した。ヒトプライマーの組は下記の通りであった:センス ATC CAC GTG GTT CAC CTC AG (配列番号71)およびアンチセンス CTT TGG TTC CCC TTC TGT GC(配列番号72);図1A-1CのヒトcDNA断片760-1345（配列番号73）に対応。PCR反応は30サイクルで実施した(94℃、30秒、55℃、40秒、および72℃、60秒）。オープンリーディングフレーム、3'-および5'-非翻訳領域を含む全体のcDNAは、3'および5'RACE(cDNA末端迅速増幅）によって得た。3'および5'RACEキット(Life Technologies)は取扱説明書通りに使用した。２種類の遺伝子-特異的プライマーを3'RACEに使用した:センスS1-CAG GAG AGC CCA GAAGAA AA (配列番号74);センスS2-TGA AGG GTC TCT GAC CAC AC (配列番号75）。３種類の遺伝子特異的プライマーを5'RACEに使用した:アンチセンス A1-AGC TGT AGG AGGAAG GCG AT (配列番号76);アンチセンス A2-TGA CAGCAA AGAGAA GGC CA (配列番号77);アンチセンス A3-CAG GGA AGGAAG CCT CAA TC （配列番号78）。結果として得られたすべての増幅産物は、TAクローニング（登録商標）キット(Invitrogen、オランダ)を用いてクローニングし、アプライド・バイオシステムズ自動シークエンサーを用いて配列決定した。cDNA配列はEMBLに寄託された（受託番号AJ245857;配列番号79）。 
マウスCar9遺伝子のクローニング 
マウス胚性幹(ES)細胞129/SvBACライブラリー(Genome Systems, 米国)を、完全長Car9cDNAを用いてスクリーニングした。BAC DNAはさまざまな制限エンドヌクレアーゼを用いて分析し、マウスCar9cDNAとハイブリダイズした。 
EcoRI(6.5kb)およびKpnI(1.4kb)消化の結果得られた、選択された陽性クローンを、pBluescript KSにサブクローニングし、自動配列決定によって解析した。ゲノム配列はGenBankに寄託した（受託番号AY049077;配列番号80）。 
Car9欠損マウスの作製 
サブクローニングされたゲノムEcoRI断片に由来しCar9遺伝子の最初の6個のエキソンを含むEcoRI-HindIII断片(5.9kb)を、pCar9-neoターゲッティングベクターの構築に使用した。pCar9-neoベクターは、標準的な組み換え技術によって、BamHI制限部位を欠いたpBluescriptKSで構築した。EcoRI-BamHI制限断片(1.5kb)を、プロモーターと第一のエキソンの一部とを含む5'ゲノム腕として使用した。BamHI-HindIII制限断片(4.5kb)を、第一のエキソンの終わりからエキソン6まで伸びる3'ゲノム腕として使用した。この手法を用いて、２つのBamHI部位の間に位置する14bp領域の配列を第一のエキソンから除去し、ホスホグリセリン酸キナーゼ-ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ(pgk-neo)カセットで置換した。 
直線化ターゲッティングベクターをE14ES129/Ola細胞株にエレクトロポレーションによって導入した。標的となったES細胞クローンを、G418(400pg/ml)を用いた選択によって濃縮し、EcoRI-XbaI断片を外部5'プローブに、およびHindIII-EcoRI断片を外部3'プローブとして用いたサザンブロット分析によって検出した（図8を参照）。 
クローニングしたES細胞株をC57BL/6J胚盤胞に注入し、C57BL/6J-129/Olaキメラマウスを作製した。キメラは相同組み換えによって挿入されたpCar9-neoを有する２種類の異なるESクローンから作製した。成熟したキメラ子における129/Olaの寄与は被毛色によって判定した。上記のプローブを用いたサザンブロッティングを使用して、標的対立遺伝子を有するマウスを識別した。動物実験は政府機関LAGETSI（ベルリン）によって許可番号G0224/00として承認された。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６５】
結果 
Car9cDNAの同定
マウスCA IXをコードするcDNAおよび遺伝子のクローニングおよび特徴づけは、CA IX-欠損マウスの作製に向けた第一段階であった。マウスCar9cDNA断片を、RT-PCRによって、ヒトcDNA由来のプライマー（Pastorek et al. (1994)）およびC57BL/6Jマウスの胃から単離したテンプレートRNAを用いて単離した。完全長cDNAは、5'/3'方向の両方でのcDNA末端迅速増幅によって得られた。それは32bpの5'非翻訳領域、1311bpのオープンリーディングフレーム、および622bpの3'非翻訳配列から構成される1965bpを包含する(EMBLデータベースに登録番号AJ245857として寄託;配列番号79）。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６６】
Car9cDNAは437アミノ酸タンパク質のコード容量を有し(EMBLデータベースに登録番号CAC80975(Q8VDE4)として寄託;配列番号90)、理論分子量は47.3kDaである。そのマウスタンパク質はそのヒトホモログと69.5%の配列同一性を示し、同様の予想ドメイン配置を有する（Opavsky et al.(1996)）。アミノ酸(aa)1-31(配列番号91)はシグナルペプチドに相当する。成熟タンパク質のN末端細胞外領域(aa32-389)(配列番号92)は、プロテオグリカン様領域(aa48-107)(配列番号93）、および炭酸脱水酵素ドメイン(aa112-369)(配列番号94）から構成される。C末端領域(aa390-437)(配列番号95)は、膜貫通アンカー(aa390-411)(配列番号96)および短い細胞質尾部(aa412-437)(配列番号97）から成る。マウスとヒトCA IXの間の配列の差の大部分はプロテオグリカン様(PG)領域内で見つかった一方、CAドメインは最高の保存を示した。しかし、酵素活性部位に関与する５個の重要なアミノ酸(His94、His96、Glu106、His119、Thr199)のうち（Christianson and Cox (1999)）、全部がヒトCA IXで保存されているが、マウスアイソザイムでは１個が変化している(Thr199→Ser）。この置換にもかかわらず、マウスCA IXはスルホンアミドアガロースに結合し、マウスCA IXが酵素活性を有することを示唆した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６８】
ゲノム配列(GenBank登録番号AY049077;配列番号80)の分析は、Car9遺伝子がマウスゲノムの8.7kbにわたり、11個のエキソンおよび10個のイントロンから成ることを明らかにした。イントロンの分布およびエキソン対タンパク質ドメインの関係はヒトの対応物と同様である（Opavsky et al. (1996)）。サザンハイブリダイゼーションパターンは、Car9が１コピー遺伝子であることを示した。5.9kbを包含しプロモーター領域およびエキソン1〜6にわたるEcoRI-HindIII断片を、ターゲッティングベクターの構築に用いた。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６４】
同様に、V/10 モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株V/10-VUは、2003年2月19日にブダペスト条約に基づき、Universeit Gent, K. L. Ledeganckstraat 35, B-9000 Gent, BelgiumのLaboratorium voor Moleculaire Biologie-Plasmidencollectie (LMBP)のBelgian Coordianted Collections of Microorganisms (BCCM) （BCCM/LMBP）  の国際寄託機関(IDA)に寄託番号LMBP 6009CBとして寄託した。 
本発明の前記実施形態の詳細な説明は例証および説明の目的で示されている。それらは網羅的であることまたは本発明を開示された正確な形に制限することを意図せず、また明らかに上記の教示に照らして多くの改変および変化が可能である。それらの実施形態は、本発明の原理および実際的応用を説明し、それによって他の当業者に本発明をさまざまな実施形態で、および意図される特定用途に適したさまざまな改変を伴って使用可能にするために選択され説明された。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】発明の名称
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の名称】可溶型の炭酸脱水酵素IX(s-CA IX)、s-CA IXを検出するためのアッセイ、CA IXとHER-2/neu/c-erbB-2の同時発現、非免疫優性エピトープに対するCA IX特異的モノクローナル抗体
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2005535601000001.app