【手続補正書】
【提出日】平成17年10月11日(2005.10.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリマーとグリコシル化または非−グリコシル化ペプチドとの間に共有結合物を形成する方法であって、ここで、該ポリマーが、間に挿入され、そして該ペプチドと該ポリマーの両方を共有結合により連結する完全なグリコシル連結基を介して該ペプチドに結合している該方法において：
該ペプチドを、該ポリマーに共有結合しているヌクレオチド糖および該ヌクレオチド糖が基質であるグリコシルトランスフェラーゼを含んでなる混合物と、該結合物を形成するために十分な条件下で接触させる、ことを含んでなる上記方法。
【請求項２】
上記ポリマーが水溶性ポリマーである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
上記グリコシル連結基が、上記ペプチドに共有結合したグリコシル残基に共有結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
上記グリコシル連結基が該ペプチドのアミノ酸残基に共有結合する、請求項１に記載
の方法。
【請求項５】
上記ポリマーがポリアルキレンオキシドおよびポリペプチドからなる群から選択される一員を含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
上記ポリアルキレンオキシドがポリ（エチレングリコール）である、請求項５に記載
の方法。
【請求項７】
上記ポリ（エチレングリコール）が約１〜約２０，０００の重合度を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
上記ポリエチレングリコールが約１〜約５，０００の重合度を有する、請求項７に記
載の方法。
【請求項９】
上記ポリエチレングリコールが約１〜約１，０００の重合度を有する、請求項８に記
載の方法。
【請求項１０】
上記グリコシルトランスフェラーゼが、シアリルトランスフェラーゼ、ガラクトシルトランスフェラーゼ、グルコシルトランスフェラーゼ、ＧａｌＮＡｃトランスフェラーゼ、ＧｌｃＮＡｃトランスフェラーゼ、フコシルトランスフェラーゼおよびマンノシルトランスフェラーゼからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
上記グルコシルトランスフェラーゼが組換え的に生産される請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
上記グルコシルトランスフェラーゼが組換え原核酵素である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
上記グルコシルトランスフェラーゼが組換え真核酵素である請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
上記ヌクレオチド糖がＵＤＰ−グリコシド、ＣＭＰ−グリコシドおよびＧＤＰ−グリコシドからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
上記ヌクレオチド糖が、ＵＤＰ−ガラクトース、ＵＤＰ−ガラクトサミン、ＵＤＰ−グルコース、ＵＤＰ−グルコサミン、ＵＤＰ−Ｎ−アセチルガラクトサミン、ＵＤＰ−Ｎ−アセチルグルコサミン、ＧＤＰ−マンノース、ＧＤＰ−フコース、ＣＭＰ−シアル酸、ＣＭＰ−ＮｅｕＡｃからなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
上記ペプチドが治療薬である請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
上記グリコシル化ペプチドが該接触前に部分的に脱グリコシル化されている、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
上記の完全なグリコシル連結基がシアル酸残基である請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
上記方法が無細胞環境下で行われる請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
上記の共有結合物が単離されている請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
上記の共有結合物が膜濾過により単離されている請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
上記ペプチドが顆粒球コロニー刺激因子、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、濾胞刺激ホルモン、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベータータンパク質、インターロイキン−２、第ＶＩＩＩ因子、キメラ腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼ、キメラ抗−糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、キメラ抗−ＨＥＲ２抗体、キメラ抗−呼吸合胞体ウイルス抗体、キメラ抗−ＣＤ２０抗体、ＤＮａｓｅ、キメラ抗−腫瘍壊死因子抗体、ヒトインスリン、Ｂ型肝炎ｓＡｇおよびヒト成長ホルモンからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法で形成されるペプチド結合物。
【請求項２４】
式：
【化１】
2005521635.tif 000001
式中、
ＡＡはペプチドの末端または内部アミノ酸残基であり；
Ｘ1−Ｘ2は該ＡＡに共有結合したサッカリドであり、ここで
Ｘ1は第１グリコシル残基であり；そして
Ｘ2はＸ1に共有結合した第２グリコシル残基であり、ここでＸ1およびＸ2は単糖およびオリゴ糖残基から選択される、
を有するペプチドの無細胞のインビトロ改造方法であって；
（ａ）式Ｉのペプチドについて；
（ｉ）Ｘ2またはその糖サブユニットを該ペプチドから除去し、これにより短縮化グリカンを形成し；そして
（ｉｉ）該短縮化グリカンを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラーゼおよび修飾基を含む少なくとも１つのグリコシル供与体と、該修飾基を含む少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンへ転移させるために適する条件下で接触させ、これにより該ペプチドを改造するか、または
（ｂ）式ＩＩのペプチドについて；
（ｉ）該ペプチドを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラーゼおよび修飾基を含む少なくとも１つのグリコシル供与体と、該修飾基を含む少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンへ転移させるために適する条件下で接触させる、ことを含んでなる上記方法。
【請求項２５】
ペプチドが式：
【化２】
2005521635.tif 000002
式中、
ＺはＯ、Ｓ、ＮＨおよびクロスリンカーから選択される一員である、
を有する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
上記ペプチドが式：
【化５】
2005521635.tif 000003
式中、
Ｘ9およびＸ10は、単糖またはオリゴ糖残基から独立して選択され；そして
ｍ、ｎおよびｆは０および１から選択される整数である、
を有する請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
上記ペプチドが式：
【化６】
2005521635.tif 000004
式中、
Ｘ11およびＸ12は、独立して選択されるグリコシル部分であり；そして
ｒおよびｘは０および１から独立して選択される整数である、
を有する請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
Ｘ11およびＸ12が（マンノース）qであり、ここでｑは１から２０の間の整数から選択され、そしてｑが３以上である時、（マンノース）qは直鎖および分岐構造から選択される、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
上記ペプチドが式：
【化７】
2005521635.tif 000005
式中、
Ｘ13、Ｘ14およびＸ15は、独立して選択されるグリコシル残基であり；そして
ｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋおよびｐは整数０および１から独立して選択されるが、ただし少なくとも１つのｇ、ｈ、ｉ、ｊ、ｋおよびｐは１である、
を有する請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
Ｘ14およびＸ15がＧｌｃＮＡｃおよびＳｉａから独立して選択される一員であり；そしてｉおよびｋが整数０および１から独立して選択されるが、ただし少なくとも１つのｉおよびｋは１であり、そしてｋが１ならばｇ、ｈおよびｊは０である、
請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
上記ペプチドが式：
【化８】
2005521635.tif 000006
式中、
Ｘ16は
【化９】
2005521635.tif 000007
ここでｓ、ｕおよびｉは整数０および１から独立して選択される、
から選択される一員である、
を有する請求項２４に記載の方法。
【請求項３２】
上記の除去がグリコシダーゼを利用する請求項２４に記載の方法。
【請求項３３】
上記の修飾基が水溶性ポリマー、治療薬部分、検出可能な標識、反応性リンカー基および標的部分からなる群から選択される一員である、請求項２４に記載の方法。
【請求項３４】
上記の修飾基が水溶性ポリマーである請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
上記の水溶性ポリマーがポリ（エチレングリコール）を含んでなる請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
上記ポリ（エチレングリコール）が本質的に単分散である分子量分布を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
上記ペプチドが顆粒球コロニー刺激因子、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、濾胞刺激ホルモン、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベータータンパク質、インターロイキン−２、第ＶＩＩＩ因子、キメラ腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼ、キメラ抗−糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、キメラ抗−ＨＥＲ２抗体、キメラ抗−呼吸合胞体ウイルス抗体、キメラ抗−ＣＤ２０抗体、ＤＮａｓｅ、キメラ抗−腫瘍壊死因子抗体、ヒトインスリン、Ｂ型肝炎ｓＡｇおよびヒト成長ホルモンからなる群から選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項３８】
請求項２４に記載の方法により形成されるペプチド結合物。
【請求項３９】
式：
【化３】
2005521635.tif 000008
式中、
Ｘ3、Ｘ4、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7およびＸ17は、単糖またはオリゴ糖残基から独立して選択され；そして
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘは、整数０、１および２から独立して選択されるが、ただしａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅおよびｘから選択される少なくとも１つの一員は１または２である、
を有するペプチドの無細胞のインビトロ改造方法であって；
（ａ）少なくとも１つのＸ3、Ｘ4、Ｘ5、Ｘ6、Ｘ7またはＸ17、またはその糖サブユニットを該ペプチドから除去し、これにより短縮化グリカンを形成し；そして
（ｂ）該短縮化グリカンを、少なくとも１つのグリコシルトランスフェラーゼおよび少なくとも１つのグリコシル供与体と、該少なくとも１つのグリコシル供与体を該短縮化グリカンヘ転移させるために適する条件下で接触させ、これにより該ペプチドを改造する、
ことを含んでなる上記方法。
【請求項４０】
上記ペプチドが、式：
【化４】
2005521635.tif 000009
式中、
ｒ、ｓおよびｔは、０および１から独立して選択される整数である、
で表される請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
工程（ａ）の上記除去が、ａ、ｂ、ｃ、ｅおよびｘがそれぞれ０である短縮化グリカンを生成する請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
Ｘ3、Ｘ5およびＸ7が（マンノース）zおよび（マンノース）z−（Ｘ8）yから成る群から選択され、かつ、
上式中、
Ｘ8は単−およびオリゴ−糖から選択されるグリコシル部分であり；
ｙは０および１から選択される整数であり；そして
ｚは１から２０の間の整数であり、ここで
Ｚは３以上である時、（マンノース）zは直鎖および分岐構造から選択される、
請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
Ｘ4がＧｌｃＮＡｃおよびキシロースからなる群から選択される請求項３９に記載の方法。
【請求項４４】
Ｘ3、Ｘ5およびＸ7が（マンノース）uであり、ここでｕが１から２０の間の整数から選択され、そしてｕが３以上である時、（マンノース）uは直鎖および分岐構造から選択される請求項３９に記載の方法。
【請求項４５】
少なくとも１つの該グリコシル供与体が修飾基を含んでなる請求項３９に記載の方法。
【請求項４６】
上記の修飾基が水溶性ポリマー、治療薬部分、検出可能な標識、反応性リンカー基および標的部分からなる群から選択される一員である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
上記の水溶性ポリマーがポリ（エチレングリコール）を含んでなる請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
上記ポリ（エチレングリコール）が本質的に単分散である分子量分布を有する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
上記ペプチドが顆粒球コロニー刺激因子、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、濾胞刺激ホルモン、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベータータンパク質、インターロイキン−２、第ＶＩＩＩ因子、キメラ腫瘍壊死因子受容体、ウロキナーゼ、キメラ抗−糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａ抗体、キメラ抗−ＨＥＲ２抗体、キメラ抗−呼吸合胞体ウイルス抗体、キメラ抗−ＣＤ２０抗体、ＤＮａｓｅ、キメラ抗−腫瘍壊死因子抗体、ヒトインスリン、Ｂ型肝炎ｓＡｇおよびヒト成長ホルモンからなる群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項５０】
ペプチドと該ペプチドの特性を改変する修飾基との間の共有結合物であって、該修飾基が完全なグリコシル連結基を介して該ペプチドの予め選択されたグリコシルまたはアミノ酸残基で該ペプチドに共有結合しており、かつ、上記修飾基がポリ（エチレングリコール）である、上記の共有結合物。
【請求項５１】
上記の修飾基および完全なグリコシル連結基前駆体が、共有結合した単位として酵素の作用を介して該ペプチドに結合し、該酵素は該前駆体を該完全なグリコシル連結基に転換し、これにより該結合物を形成する、請求項５０に記載の共有結合物。
【請求項５２】
請求項５０に記載の共有結合物および製薬学的に許容され得る希釈剤を含んでなる製薬学的製剤。
【請求項５３】
請求項３９に記載の方法により形成されるペプチド結合物。
【請求項５４】
顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）およびインターロイキン−２（ＩＬ−２）から選ばれるペプチドと修飾基との間に結合物を形成する方法であって、該修飾基が完全なグリコシル連結基を介して該ペプチドに共有結合し、該ペプチドが式：
【化１４】
2005521635.tif 000010
式中、
ａ、ｂ、ｃおよびｅは、０および１から独立して選択される一員であり；
ｄは０であり；そして
Ｒは修飾基から選択される、
を有するグリコシル残基を含んでなり、かつ、
（ａ）該ペプチドを、グリコシルトランスフェラーゼおよび該修飾基に共有結合した該グリコシルトランスフェラーゼの基質であるグリコシル部分を含む修飾されたグリコシル供与体と、該完全なグリコシル連結基の形成に適する条件下で接触させることを含んでなる上記方法。
【請求項５５】
さらに：
（ｂ）工程（ａ）の前に、上記ペプチドをシアリダーゼと、該ペプチドからシアル酸を除去するために適する条件下で接触させることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
さらに：
（ｃ）工程（ａ）の前に、上記ペプチドをガラクトシルトランスフェラーゼおよびガラクトース供与体と、該ガラクトースを該ペプチドへ転移させるために適する条件下で接触させることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５７】
さらに：
（ｄ）工程（ａ）の生成物を上記修飾基に反応する部分と接触させ、これにより上記の完全なグリコシル連結基と該部分との間に結合物を形成することを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５８】
さらに：
（ｅ）工程（ａ）の前に、上記ペプチドをＮ−アセチルガラクトサミントランスフェラーゼおよびＧａｌＮＡｃ供与体と、ＧａｌＮＡｃを該Ｇ−ＣＳＦペプチドへ転移させるために適する条件下で接触させることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項５９】
さらに：
（ｆ）工程（ａ）の前に、上記ペプチドを、合成的に作用するエンド−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼおよびＧａｌＮＡｃ供与体と、ＧａｌＮＡｃを該ペプチドへ転移させるために適する条件下で接触させることを含んでなる、請求項５４に記載の方法。
【請求項６０】
上記修飾基がポリマー、トキシン、放射性同位体、治療薬部分および複合糖質から選択される一員である、請求項５４に記載の方法。
【請求項６１】
請求項５４に記載の方法で形成されるペプチド結合物。
【請求項６２】
ペプチドと修飾基との間に結合物を形成する方法であって、
該修飾基が完全なグリコシル連結基を介して該ペプチドに共有結合し、該ペプチドがインターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼ、抗腫瘍壊死因子アルファ、組換えＤＮａｓｅ、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、キメラ抗ＨＥＲ２、抗ＲＳＶＦ、および抗ＣＤ−２０から選択される一員であり、該ペプチドが下記から選択される一員であるグリコシル部分を含んでなり：
【化１５】
2005521635.tif 000011
ここで
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｉ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕおよびｚは、０および１から独立して選択される一員であり；
Ｒは修飾基、マンノースまたはオリゴマンノースから選択される一員であり、
Ｒ'はＨ、グリコシル残基、修飾基または複合糖質から選択される一員であり、
（ｉ）該ペプチドがインターフェロン−ベータ、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、ウロキナーゼ、および組換えＤＮａｓｅから選択される一員である場合には、該グリコシル部分は式１に記載の構造を有し、
該ペプチドが濾胞刺激ホルモンである場合には、該グリコシル部分は式２に記載の構造を有し、
該ペプチドが組織プラスミノーゲンアクチベーターである場合には、該グリコシル部分は式３に記載の構造を有し、
ｅ，ｆ，ｇおよびｈは０から６の整数から独立して選択される員であり；
（ｉｉ）該ペプチドが抗ＣＤ−２０およびキメラ抗ＨＥＲ２から選択される一員である場合には、該グリコシル部分は式１に記載の構造を有し、
該ペプチドが腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチドおよび抗ＲＳＶＦである場合には、該グリコシル部分は式４に記載の構造を有し、
ｅ，ｆ，ｇおよびｈは、０から４の整数から独立に選択される員であり；
（ｉｉｉ）該ペプチドがインターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼおよび組換えＤＮａｓｅから選択される一員である場合には、ｊ，ｋ，ｌおよびｍは０から１００の整数から独立して選択され；
（ｉｖ）該ペプチドが腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチドである場合には、ｊ，ｋ，ｌおよびｍは０および１から独立して選択される員であり；
（ｖ）該ペプチドがキメラ抗ＨＥＲ２である場合には、ｊ，ｋおよびｌは０および１の整数から独立して選択される員であり、ｍは０から２０の整数から独立して選択され；
（ｖｉ）該ペプチドが抗腫瘍壊死因子アルファである場合には、ｊ，ｋ，ｌおよびｍは０から２０の整数から独立して選択される員であり；
（ｖｉｉ）該ペプチドがインターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、キメラ抗ＨＥＲ２、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、抗ＲＳＶＦ、抗ＣＤ−２０，ウロキナーゼ抗腫瘍壊死因子アルファおよび組換えＤＮａｓｅから選択される一員である場合には、ｎ，ｖ，ｗ，ｘおよびｙは０であり；
（ｖｉｉｉ）該ペプチドが組織プラスミノーゲンアクチベーターである場合には、ｖ，ｗ，ｘおよびｙは０および１の整数から独立して選択され；かつ、
（ａ）該ペプチドが濾胞刺激ホルモン、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、ウロキナーゼ、抗腫瘍壊死因子アルファ、組換えＤＮａｓｅ、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、キメラ抗ＨＥＲ２、抗ＲＳＶＦ、および抗ＣＤ−２０から選択される一員である場合には、該ペプチドを、グリコシルトランスフェラーゼおよび該グリコシルトランセフェラーゼに対する基質であるグリコシル部分に共有結合する修飾基を含む修飾されたグリコシル供与体から選択される一員と、該完全なグリコシル連結基の形成に適する条件下で接触させる工程；または
該ペプチドがインターロイキン−ベータである場合には、該ペプチドを、グリコシルトランスフェラーゼおよびトランスシアリダーゼから選択される一員；および該ガグリコシルトランセフェラーゼに対する基質であるグリコシル部分に共有結合する修飾基を含む修飾されたグリコシル供与体と、該完全なグリコシル連結基の形成に適する条件下で接触させる工程；または
該ペプチドがインターフェロン−ガンマである場合には、該ペプチドを、ガラクトシルトランスフェラーゼおよび合成的に操作されているガラクトシダーゼから選択される一員；および該グリコシルトランセフェラーゼに対する基質であるグリコシル部分に共有結合する修飾基を含む修飾されたグリコシル供与体と、該完全なグリコシル連結基の形成に適する条件下で接触させる工程；または
該ペプチドが組織プラスミノーゲンアクチベーターである場合には、該ペプチドを、ガラクトシルトランスフェラーゼおよび合成的に操作されているグリコシダーゼから選択される一員；および該グリコシルトランセフェラーゼに対する基質であるグリコシル部分に共有結合する修飾基を含む修飾されたグリコシル供与体と、該完全なグリコシル連結基の形成に適する条件下で接触させる工程、
を含んでなる上記方法。
【請求項６３】
さらに：
（ｂ）工程（ａ）の前に、インターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼ、抗腫瘍壊死因子アルファ、組換えＤＮａｓｅ、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、キメラ抗ＨＥＲ２、抗ＲＳＶＦ、および抗ＣＤ−２０から選択される一員である上記ペプチドをシアリダーゼと、該ペプチドからシアル酸を除去するために適する条件下で接触させることを含んでなる、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
さらに：
（ｃ）工程（ａ）のインターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼ、抗腫瘍壊死因子アルファ、組換えＤＮａｓｅおよび腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、から選択される一員である生成物を、上記修飾基と反応する部分と接触し、こうして該完全グリコシル連結基と該部分との間で結合を形成する工程、を含んでなる請求項６２に記載の方法。
【請求項６５】
さらに：
（ｄ）工程（ａ）の前に、インターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼおよび組換えＤＮａｓｅおよび腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、から選択される一員である上記ペプチドを、グリコシダーゼとシアリダーゼの組合せ物と接触させる工程、を含んでなる請求項６２記載の方法。
【請求項６６】
さらに：
（ｅ）工程（ａ）の前に、インターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−バンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、キメラ抗ＨＥＲ２、抗ＲＳＶＦ、抗腫瘍壊死因子アルファ、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、ウロキナーゼ、および組換えＤＮａｓｅから選択される一員である上記ペプチドをエンドグリカナーゼと、該ペプチドからグリコシル部分が開裂するのに適する条件下で接触させる工程、を含んでなる請求項６２に記載の方法。
【請求項６７】
上記ペプチドがインターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ウロキナーゼおよび組換えＤＮａｓｅから選択される一員であり、
さらに：
（ｆ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをＮ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼおよびＧｌｃＮＡｃ供与体と、該ペプチドにＧｌｃＮＡｃが転移させるのに適する条件下で接触させる工程、を含んでなる請求項６２記載の方法。
【請求項６８】
上記ペプチドがインターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、ベータ−グルコシダーゼ、抗ＣＤ−２０、抗ＲＳＶＦ、抗ＨＥＲ２、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、抗腫瘍壊死因子アルファ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼおよび組換えＤＮａｓｅから選択される一員であり、
さらに：
（ｇ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをガラクトシルトランスフェラーゼおよびガラクトース供与体と、該ペプチドにガラクトースが転移するのに適した条件下で接触させる工程、を含んでなる請求項６２記載の方法。
【請求項６９】
さらに：
（ｈ）工程（ｂ）の前に、インターフェロン−ベータ、濾胞刺激ホルモン、インターフェロン−ガンマ、アルファ−１−プロテアーゼインヒビター、ベータ−グルコシダーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼ、抗腫瘍壊死因子アルファ、組換えＤＮａｓｅ、腫瘍壊死因子／ＩｇＧ融合ペプチド、キメラ抗ＨＥＲ２，抗ＲＳＶＦおよび抗ＣＤ−２０から選択される一員であるペプチドをエンドグカナーゼと、該ペプチドからグリコシル部分が開裂するために適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項６２記載の方法。
【請求項７０】
上記ペプチドがインターフェロン−アルファ、インターフェロン−ガンマ、抗ＣＤ−２０およびアルファ−１−プロテアーゼインヒビターから選択される一員であり、
さらに：
（ｉ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをマンノシダーゼと、該ペプチドからマンノースを開裂するために適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項６２に記載の方法。
【請求項７１】
上記ペプチドがインターフェロン−ベータ、インターフェロン−γ、濾胞刺激ホルモン、組織プラスミノーゲンアクチベーター、ウロキナーゼおよび組換えＤＮａｓｅから選択される一員であり、
さらに：
（ｊ）工程（ａ）の生産物をシアリルトランスフェラーゼおよびシアリル酸供与体と、該生産物にアリル酸を転移するために適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項６２に記載の方法。
【請求項７２】
上記ペプチドが組織プラスミノーゲンアクチベーターおよびアルファ−１−プロテアーゼインヒビターから選択される一員であり、
さらに：
（ｋ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをマンノシダーゼ、キシラーゼ、ヘキソサミニダーゼ、およびそれらの組合せ物から選択される一員と、該ペプチドからグリコシル残基が除去される条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項６２記載の方法。
【請求項７３】
請求項６２に記載の方法により形成されるペプチド結合物。
【請求項７４】
修飾基がポリマー、トキシン、放射性同位体、治療薬部分および複合糖質から選択される一員である、請求項６２に記載の方法。
【請求項７５】
ペプチドと修飾基との間に結合物を形成する方法であって、
該修飾基が完全なグリコシル連結基を介して該ペプチドに共有結合し、該ペプチドがインターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、インスリン、Ｂ型肝炎表面抗原、ヒト成長ホルモンから選択される一員であり、該ペプチドが下記から選択される一員であるグリコシル部分を含んでなり：
【化１８】
2005521635.tif 000012
【化１９】
2005521635.tif 000013
ここで
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｉ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、ｕ、ａａ、ｂｂ、ｃｃ、ｄｄ、ｅｅ、ｆｆおよびｇｇは、０および１の整数から独立して選択される員であり；
ｖ、ｗ、ｘ、ｙおよびｚは０であり；
（ｉ）該ペプチドがインターフェロン−アルファである場合には、該グリコシル部分は式１に記載の構造を有し；
（ｉｉ）該ペプチドが第ＶＩＩａ因子である場合には、該グリコシル部分は式２に記載の構造を有し；
（ｉｉｉ）該ペプチドが第ＩＸ因子およびエリトロポエチンから選択される一員である場合には、該グリコシル部分は式３に記載の構造を有し；
（ｉｖ）該ペプチドが抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、インスリンおよびヒト成長ホルモンから選択される一員である場合には、該グリコシル部分は式４に記載の構造を有し；そして
（ｖ）該ペプチドが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子およびＢ型肝炎表面抗原から選択される一員である場合には、該グリコシル部分は式５に記載の構造を有し、
該ペプチドがインターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子およびＢ型肝炎表面抗原から選択される一員である場合には、ｅ，ｆ，ｇおよびｈは０から６の整数から独立して選択される員であり、そして
該ペプチドがエリトロポエチン、インスリン、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体およびヒト成長ホルモンから選択される一員である場合には、ｅ，ｆ，ｇおよびｈは０から４の整数から独立して選択される員であり；
該ペプチドがインターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、第ＶＩＩＩ因子、インスリンおよびヒト成長ホルモンから選択される一員である場合には、ｊ，ｋ，ｌおよびｍは０から２０の整数から独立して選択される員であり；
該ペプチドが、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびＢ型肝炎表面抗原から選択される場合には、ｊ，ｋ，ｌおよびｍは０から１００の整数から独立して選択される員であり；
該ペプチドが抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体である場合には、ｊ，ｋ，ｌおよびｍは整数０および１の整数から独立して選択され；
Ｒ’はＨ、グリコシル残基、修飾基およびグリコ結合物から選択される一員であり、
Ｒは修飾基、マンノースもしくはオリゴマンノースから選択される一員であり、そして
該ペプチドが第ＶＩＩａ因子である場合には、Ｒはマンノースもしくはオリゴマンノース、シアリルイス酸xおよびシアリルルイス酸aから選択される一員であり；かつ、
（ａ）該ペプチドが第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、インスリン、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員である場合には、該ペプチドを、グリコシルトランスフェラーゼおよび該グリコシルトランセフェラーゼに対する基質であるグリコシル部分に共有結合する修飾基を含む修飾されたグリコシル供与体員と、該完全なグリコシル連結基を形成するために適する条件下で接触させる工程；または
該ペプチドがインターフェロン−アルファである場合には、該ペプチドを、グリコシルトランスフェラーゼ、合成的に操作されているエンドアセチルガラクトさミナーゼおよびトランスシアリダーゼから選択される一員；および該ガグリコシルトランセフェラーゼに対する基質であるグリコシル部分に共有結合する修飾基を含む修飾されたグリコシル供与体と、該完全なグリコシル連結基を形成するために適する条件下で接触させる工程；、
を含んでなる上記方法。
【請求項７６】
さらに：
（ｂ）工程（ａ）の前に、インターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、インスリン、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員である上記ペプチドをシアリダーゼと、該ペプチドからシアル酸を除去するために適する条件下で接触させることを含んでなる、請求項７５に記載の方法。
【請求項７７】
さらに：
（ｃ）インターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員である工程（ａ）の生成物を、上記修飾基と反応する部分と接触し、こうして該完全グリコシル連結基と該部分との間で結合を形成する工程、を含んでなる請求項７５に記載の方法。
【請求項７８】
さらに：
（ｄ）工程（ａ）の前に、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびインターフェロン−アルファから選択される一員である上記ペプチドを、グリコシダーゼとシアリダーゼの組合せ物と接触させる工程、を含んでなる請求項７５記載の方法。
【請求項７９】
さらに：
（ｅ）工程（ａ）の前に、インターフェロン−アルファ、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員である上記ペプチドをエンドグリカナーゼと、該ペプチドからグリコシル部分が開裂するのに適する条件下で接触させる工程、を含んでなる請求項７５に記載の方法。
【請求項８０】
上記ペプチドが、エリトロポエチン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、Ｂ型肝炎表面抗原、インターフェロン−アルファおよびインスリンから選択される一員であり、
さらに：
（ｆ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをＮ−アセチルグルコサミントランスフェラーゼおよびＧｌｃＮＡｃ供与体と、該ペプチドにＧｌｃＮＡｃが転移させるのに適する条件下で接触させる工程、を含んでなる請求項７５記載の方法。
【請求項８１】
上記ペプチドがインターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員であり、
さらに：
（ｇ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをガラクトシルトランスフェラーゼおよびガラクトース供与体と、該ペプチドにガラクトースが転移するのに適した条件下で接触させる工程、を含んでなる請求項７５記載の方法。
【請求項８２】
さらに：
（ｈ）工程（ｇ）に続き、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリトロポエチン、Ｂ型肝炎表面抗原および抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体から選択される一員であるペプチドをＳＴ３Ｇａｌ３およびシアル酸供与体と、該ペプチドにシアル酸部分を転移するのに適した条件下で接触させる程を含んでなる、請求項７５記載の方法。
【請求項８３】
上記ペプチドが顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、第ＶＩＩＩ因子、Ｂ型肝炎表面抗原およびインターフェロン−アルファから選択される一員であり、
さらに：
（ｉ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをマンノシダーゼと、該ペプチドからマンノースを開裂するために適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項７５に記載の方法。
【請求項８４】
上記ペプチドが第ＶＩＩａ因子、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員であり、
さらに：
（ｊ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをガラクトシダーゼと、該ペプチドからガラクトースを除去するのに適する条件下接触させる工程を含んでなる、請求項７５に記載の方法。
【請求項８５】
上記ペプチドがインターフェロン−アルファ、第ＶＩＩａ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、エリトロポエチン、抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体、インスリン、Ｂ型肝炎表面抗原およびヒト成長ホルモンから選択される一員であり、
さらに：
（ｋ）工程（ａ）の生産物をシアリルトランスフェラーゼおよびシアル酸供与体と、該生産物にシアル酸を転移するのに適した条件下で接触する工程を含んでなる、請求項７５記載の方法。
【請求項８６】
上記ペプチドがエリトロポエチンおよび抗糖蛋白質ＩＩｂ／ＩＩＩａモノクローナル抗体から選択される一員であり、
さらに：
（ｌ）工程（ａ）の前に、該ペプチドを合成的に操作されているガラクトシダーゼと、該ペプチドにガラクトースを付加するのに適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項７５に記載の方法。
【請求項８７】
上記ペプチドがインスリンであり、
さらに：
（ｍ）工程（ａ）の前に、該ペプチドをＥｎｄｏ−Ｈと、該ペプチドからグリコシル部分を開裂するのに適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項７５に記載の方法。
【請求項８８】
上記ペプチドがヒト成長ホルモンであり、
さらに：
（ｎ）工程（ａ）の前に、該グリコペプチドをガ楽とシダーゼと、該グリコペプチドからグリコシル残基を開裂するのに適する条件下で接触させる工程を含んでなる、請求項７５に記載の方法。
【請求項８９】
上記修飾基がポリマー、トキシン、放射性同位体、治療薬部分および複合糖質から選択される一員である、請求項７５に記載の方法。
【請求項９０】
請求項７５に記載の方法で形成されるペプチド結合物。