【手続補正書】
【提出日】平成17年9月21日(2005.9.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】 不対スプライスドナー配列に機能的に連結された転写調節配列と、１つまたは複数の増幅可能なマーカーとから実質的になるベクター構築物。
【請求項２】 分泌シグナル配列、不対スプライスドナー部位、および翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列から実質的になるベクター構築物。
【請求項３】 エピトープ標識、不対スプライスドナー部位、および翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列から実質的になるベクター構築物。
【請求項４】 分泌シグナル配列と、エピトープ標識と、不対スプライスドナー部位、および翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列を含むベクター構築物。
【請求項５】 分泌シグナル配列、エピトープ標識、配列特異的プロテアーゼ部位、不対スプライスドナー部位、および翻訳開始コドンに機能的に連結された転写調節配列を含むベクター構築物。
【請求項６】 前記構築物は、ポリシストロン性メッセージを産生するための内部のリボソーム進入部位をさらに含む、請求項２から５のいずれか１項に記載のベクター構築物。
【請求項７】 前記構築物は１つまたは複数の増幅可能なマーカーをさらに含む、請求項２から５のいずれか１項に記載のベクター構築物。
【請求項８】 前記構築物は１つまたは複数の増幅可能なマーカーをさらに含む、請求項６に記載のベクター構築物。
【請求項９】 前記転写調節配列はプロモーターである、請求項１から５のいずれか１項に記載のベクター構築物。
【請求項１０】 前記プロモーターはウイルスプロモーターである、請求項９に記載のベクター構築物。
【請求項１１】 前記ウイルスプロモーターはサイトメガロウイルス前初期プロモーターである、請求項１０に記載のベクター構築物。
【請求項１２】 前記プロモーターは非ウイルスプロモーターである、請求項９に記載のベクター構築物。
【請求項１３】 前記プロモーターは誘導性プロモーターである、請求項９に記載のベクター構築物。
【請求項１４】 前記転写調節配列はエンハンサーである、請求項１から５のいずれか１項に記載のベクター構築物。
【請求項１５】 前記エンハンサーはウイルスエンハンサーである、請求項１４に記載のベクター構築物。
【請求項１６】 前記ウイルスエンハンサーはサイトメガロウイルス前初期エンハンサーである、請求項１５に記載のベクター構築物。
【請求項１７】 前記エンハンサーは非ウイルスエンハンサーである、請求項１４に記載のベクター構築物。
【請求項１８】 請求項１から５のいずれか１項に記載のベクター構築物を含む細胞。
【請求項１９】 前記ベクター構築物は細胞ゲノムに組み込まれている、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２０】 内因性遺伝子が、前記ベクター構築物での前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーション(ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）によって前記細胞において過剰発現される、請求項１９に記載の細胞。
【請求項２１】 前記細胞は単離された細胞である、請求項１８に記載の細胞。
【請求項２２】 組換え細胞を作製するための方法であって、請求項１から５のいずれか１項に記載の構築物を細胞に導入することを含む方法。
【請求項２３】 内因性遺伝子を細胞において過剰発現させるための方法であって、
（ａ）請求項１から５のいずれか１項に記載の構築物を細胞に導入することと、
（ｂ）前記構築物を非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
を含む方法。
【請求項２４】 前記過剰発現はインビトロで行われる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】 前記過剰発現はインビボで行われる、請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】 内在性細胞遺伝子の単離された発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）請求項２３に記載の方法に従って内因性遺伝子を細胞において過剰発現させること（ここで、前記内因性遺伝子の発現産物は前記細胞によって産生される）と、
（ｂ）前記細胞から前記発現産物を単離することと、
を含む方法。
【請求項２７】 請求項１から５のいずれか１項に記載の構築物で形質転換された細胞集団を含む細胞ライブラリーであって、前記構築物は、非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込まれている細胞ライブラリー。
【請求項２８】 過剰発現された遺伝子産物を細胞ライブラリーから得る方法であって、請求項２７に記載のライブラリーを前記遺伝子産物についてスクリーニングすることと、前記遺伝子産物を過剰発現する細胞を前記ライブラリーから選択することと、前記の選択細胞から前記遺伝子産物を得ることとを含む方法。
【請求項２９】 内在性細胞遺伝子の単離された発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
（ｆ）前記発現産物を単離することと、
を含む方法。
【請求項３０】 内在性細胞遺伝子の発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）非レトロウイルスの転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることとと、
（ｅ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
を含む方法。
【請求項３１】 内在性細胞遺伝子の発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）分泌シグナル配列に機能的に連結された転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
を含む方法。
【請求項３２】 内在性細胞遺伝子の発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）分泌シグナル配列に機能的に連結された非レトロウイルスの転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
を含む方法。
【請求項３３】 内在性細胞遺伝子の発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）不対スプライスドナー配列に機能的に連結された転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
を含む方法。
【請求項３４】 前記発現産物を単離することをさらに含む、請求項３０から３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】 内因性遺伝子をインビボの細胞で過剰発現させるための方法であって、
（ａ）転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記の単離およびクローニングされた細胞をインビボの前記細胞による前記内因性遺伝子の過剰発現に好ましい条件のもとで動物に導入することと、
を含む方法。
【請求項３６】 内因性細胞遺伝子の発現産物をインビボで製造するための方法であって、
（ａ）不対スプライスドナー配列に機能的に連結された転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記の単離およびクローニングされた細胞をインビボでの前記細胞による前記内因性遺伝子の過剰発現に好ましい条件のもとで動物に導入することと、
を含む方法。
【請求項３７】 内在性細胞遺伝子の発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）転写調節配列および１つまたは複数の増幅可能なマーカーを含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記ベクターおよび前記内因性遺伝子が前記細胞で増幅される条件のもとで前記細胞を培養することと、
（ｆ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
を含む方法。
【請求項３８】 前記発現産物を単離することをさらに含む、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】 内因性遺伝子をインビボの細胞で過剰発現させるための方法であって、
（ａ）転写調節配列および１つまたは複数の増幅可能なマーカーを含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記の単離およびクローニングされた細胞をインビボの前記細胞による前記内因性遺伝子の過剰発現に好ましい条件のもとで動物に導入することと、
を含む方法。
【請求項４０】 前記転写調節配列はプロモーターである、請求項２６、２８から３３、３５から３７または３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】 前記プロモーターはウイルスプロモーターである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】 前記ウイルスプロモーターはサイトメガロウイルス前初期プロモーターである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】 前記プロモーターは非ウイルスプロモーターである、請求項４０に記載の方法。
【請求項４４】 前記プロモーターは誘導性である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４５】 前記転写調節配列はエンハンサーである、請求項２６、２８から３３、３５から３７または３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４６】 前記エンハンサーはウイルスエンハンサーである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】 前記ウイルスエンハンサーはサイトメガロウイルス前初期エンハンサーである、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】 前記エンハンサーは非ウイルスエンハンサーである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】 前記ベクターの組み込みの前またはその組み込みと同時に、前記細胞のゲノムＤＮＡに二本鎖の破壊を導入することをさらに含む、請求項２６、２８から３３、３５から３７または３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５０】 請求項２６、２８から３３、３５から３７または３９のいずれか１項に記載の方法によって作製される細胞。
【請求項５１】 前記ベクターは線状である、請求項２９から３３、３５から３７または３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５２】 内因性遺伝子を細胞において過剰発現させるための方法であって、（ａ）転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることとと、
（ｅ）無血清培地で前記細胞を培養することと、
を含む方法。
【請求項５３】 内在性細胞遺伝子の発現産物を製造するための方法であって、
（ａ）転写調節配列を含むベクターを細胞に導入することと、
（ｂ）前記ベクターを非相同組換えにより前記細胞のゲノムに組み込ませることと、
（ｃ）前記転写調節配列による前記遺伝子のアップレギュレーションによって内因性遺伝子を前記細胞において過剰発現させることと、
（ｄ）前記内因性遺伝子の過剰発現について前記細胞をスクリーニングすることと、
（ｅ）前記細胞による前記内因性遺伝子の発現産物の製造に好ましい条件のもとで前記細胞を培養することと、
（ｆ）１０4細胞／ｍｌで１０リットルに等しい細胞量から前記発現産物を単離することと、
を含む方法。