【誤訳訂正書】
【提出日】平成17年10月12日(2005.10.12)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  Renilla mulleriルシフェラーゼ、GaussiaルシフェラーゼまたはPleuromammaルシフェラーゼをコードするヌクレオチドの配列を含む、単離核酸フラグメント。
【請求項２】  Gaussiaがprinceps種のメンバーである、請求項１記載の単離核酸フラグメント。
【請求項３】  核酸がＤＮＡである、請求項１記載の単離核酸フラグメント。
【請求項４】  核酸がＲＮＡである、請求項１記載の単離核酸フラグメント。
【請求項５】  配列番号１７、配列番号１９または配列番号２８に示すヌクレオチドの配列；
配列番号１８、配列番号２０または配列番号２９に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列；および
配列番号１７、配列番号１９または配列番号２８に示すヌクレオチドの配列と高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするヌクレオチドの配列
からなる群から選択されるヌクレオチドの配列を含む、請求項１記載の単離核酸フラグメント。
【請求項６】  配列番号１７、１９または２８のコード部分に示すヌクレオチド配列から選択される少なくとも１４連続配列を含む、核酸プローブまたはプライマー。
【請求項７】  配列番号１７、１９または２８のコード部分に示すヌクレオチド配列から選択される少なくとも１６連続ヌクレオチドを含む、請求項６記載の核酸プローブまたはプライマー。
【請求項８】  配列番号１７、１９または２８のコード部分に示すヌクレオチド配列から選択される少なくとも３０連続ヌクレオチドを含む、請求項６記載の核酸プローブまたはプライマー。
【請求項９】  請求項１記載の核酸フラグメントを含む、プラスミド。
【請求項１０】  発現ベクターである、請求項９記載のプラスミド。
【請求項１１】  プロモーター領域；
Gaussia、PleuromammaまたはRenilla mulleriルシフェラーゼ；および
選択可能マーカー：
をコードするヌクレオチドの配列を含み、ルシフェラーゼをコードするヌクレオチドの配列はプロモーターと操作的にリンクし、それによりルシフェラーゼが発現される、請求項１０記載のプラスミド。
【請求項１２】  緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードするヌクレオチドの配列を更に含む、請求項１０記載のプラスミド。
【請求項１３】  請求項１０記載のプラスミドを含む、組換え宿主細胞。
【請求項１４】  細胞が細菌細胞、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞および動物細胞からなる群から選択される、請求項１３記載の細胞。
【請求項１５】  請求項１３記載の組換え宿主細胞の生育を含み、ルシフェラーゼを細胞により発現させ、発現されたルシフェラーゼタンパク質を回収する、Gaussia、Renilla mulleriまたはPleuromammaルシフェラーゼタンパク質の製造法。
【請求項１６】  単離された実質的に純粋なGaussia、Renilla mulleriまたはPleuromammaルシフェラーゼタンパク質。
【請求項１７】  タンパク質が配列番号１８、２０または２９に示すアミノ酸の配列を有する、請求項１６記載の単離タンパク質。
【請求項１８】  製造品；および
組合わせを新規品目とする生物発光生成システムを含み、生物蛍光生成システムが請求項５記載の核酸によりコードされるルシフェラーゼを含む、組合わせ。
【請求項１９】  更にルシフェリンを含む、請求項１８記載の組合わせ。
【請求項２０】  更に緑色蛍光タンパク質(GFP)を含む、請求項１８記載の組合わせ。
【請求項２１】  GFPがRenilla GFPまたはPtilosarcus GFPである、請求項２０記載の組合わせ。
【請求項２２】  製造品が玩具、化粧品、噴水、パーソナル・ケア・アイテム、フェアリー・ダスト、飲料、ソフトドリンク、食物、織物製品、泡、風船、パーソナル・アイテム、磨歯剤、石鹸、ボディーペイント、泡ぶろ、インクおよび紙製品から選択される、請求項１８記載の組合わせ。
【請求項２３】  玩具の銃である、請求項２２記載の組合わせ。
【請求項２４】  食物である、請求項２２記載の組合わせ。
【請求項２５】  飲料である、請求項２２記載の組合わせ。
【請求項２６】  化粧品である、請求項２２記載の組合わせ。
【請求項２７】  製造品が水鉄砲、空気銃、フィンガーペイント、フット・バッグ、グリーティングカード、粘液性玩具、衣類、泡形成玩具、入浴剤、化粧品、ボディーローション、ゲル、ボディーパウダー、ボディークリーム、練り歯みがき、含嗽剤、石鹸、ボディーペイント、泡ぶろ、インク、包装紙、ゼラチン、アイシング、フロスティング、グリーティングカード、ビール、ワイン、シャンペン、ソフトドリンク、角氷、氷、ドライアイスおよび噴水から選択される、請求項１８記載の組合わせ。
【請求項２８】  玩具の銃である、請求項２７記載の組合わせ。
【請求項２９】  食物である、請求項２７記載の組合わせ。
【請求項３０】  飲料である、請求項２７記載の組合わせ。
【請求項３１】  化粧品である、請求項２２記載の組合わせ。
【請求項３２】  Renilla緑色蛍光タンパク質(GFP)またはPtilosarcis緑色蛍光タンパク質をコードするヌクレオチドの配列を含む、単離核酸フラグメント。
【請求項３３】  Renilla種がRenilla reniformis、Renilla kollokeriおよびRenilla mulleriからなる群から選択される、請求項３２記載の単離核酸フラグメント。
【請求項３４】  核酸がＤＮＡである、請求項３２記載の単離核酸フラグメント。
【請求項３５】  核酸がＲＮＡである、請求項３２記載の単離核酸フラグメント。
【請求項３６】  配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１に示すヌクレオチドの配列；
配列番号１６または配列番号３２に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列；および
配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１に示すヌクレオチドの配列と高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするヌクレオチドの配列
からなる群から選択されるヌクレオチドの配列を含む、緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする単離核酸フラグメント。
【請求項３７】  配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１４連続配列を含む、核酸プローブまたはプライマー。
【請求項３８】  配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１のヌクレオチド配列から選択される少なくとも１６連続ヌクレオチドを含む、請求項３７記載の核酸プローブまたはプライマー。
【請求項３９】  配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１のヌクレオチド配列から選択される少なくとも３０連続ヌクレオチドを含む、請求項３７記載の核酸プローブまたはプライマー。
【請求項４０】  請求項３２記載のヌクレオチドの配列を含む、プラスミド。
【請求項４１】  請求項４０記載のプラスミド；
プロモーターエレメント；
核酸挿入のための複数個のクローニング部位；および
選択可能マーカー：
を含み、複数個のクローニング部位をコードする核酸はプロモーターエレメントと緑色蛍光タンパク質をコードする核酸の間に位置し、緑色蛍光タンパク質をコードする核酸はプロモーターエレメントに操作的に結合している、発現ベクター。
【請求項４２】  プロモーターエレメント；
選択可能マーカー
をコードするヌクレオチドの配列を更に含み、緑色蛍光タンパク質をコードするヌクレオチドの配列がプロモーターエレメントと操作的に結合し、それにより緑色蛍光タンパク質が発現させる、請求項４０記載のプラスミド。
【請求項４３】  更にルシフェラーゼをコードするヌクレオチドの配列を含む、請求項４２記載のプラスミド。
【請求項４４】  請求項４０記載のプラスミドを含む、組換え宿主細胞。
【請求項４５】  細胞が細菌細胞、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞および動物細胞からなる群から選択される、請求項４４記載の細胞。
【請求項４６】  単離された実質的に純粋なRenilla mulleri緑色蛍光タンパク質(GFP)またはPtolisarcus GFP。
【請求項４７】  請求項４６記載の緑色蛍光タンパク質を含む、組成物。
【請求項４８】  更に生物発光生成システムの少なくとも一つの成分を含む、請求項４７記載の組成物。
【請求項４９】  生物発光生成システムが：昆虫システム、腔腸動物システム、有櫛動物システム、細菌システム、軟体動物システム、甲殻綱システム、魚システム、環形動物システムおよびアースワームシステム単離されたものから選択される、請求項４８記載の組成物。
【請求項５０】  生物発光生成システムが：ホタル、Mnemiopsis、Beroe ovata、Aequorea、Obelia、Vargula、Pelagia、Renilla、Pholas Aristostomias、Pachystomias、Porichys、Cypridina、Aristostomia、このようなPachystomias、Malacosteus、Gonadostomias、Gaussia、Watensia、Halisturia、Vampire squid、Glyphus、Mycotophids、Vinciguerria、Howella、Florenciella、Chaudiodus、Melanocostus、ウミエラ、Chiroteuthis、Eucleoteuthis、Onychoteuthis、Watasenia、イカ、Sepiolina、Oplophorus、Acanthophyra、Sergestes、Gnathophausia、Argyropelecus、Yarella、Diaphus、GonadostomiasおよびNeoscopelusから単離されたものから選択される、請求項４８記載の組成物。
【請求項５１】  生物発光生成システムがAequorea、Obelia、VargulaおよびRenillaから単離されたものから選択される、請求項５０記載の組成物。
【請求項５２】  製造品；および
請求項３６記載の核酸によりコードされるRenillaまたはPtilosarcus緑色蛍光タンパク質(GFP)を含む、組合わせ。
【請求項５３】  更に本組合わせを新規品目とする、少なくとも一つの生物発光生成システムの成分を含む、請求項５２記載の組合わせ。
【請求項５４】  組合わせがルシフェラーゼを含む、請求項５３記載の組合わせ。
【請求項５５】  組合わせがルシフェリンを含む、請求項５３記載の組合わせ。
【請求項５６】  組合わせがルシフェリンおよびルシフェラーゼを含む、請求項５３記載の組合わせ。
【請求項５７】  製造品が玩具、噴水、パーソナル・ケア・アイテム、化粧品、フェアリー・ダスト、飲料、ソフトドリンク、食物、織物製品、泡、風船、パーソナル・アイテム、磨歯剤、石鹸、ボディーペイント、泡ぶろ、インクおよび紙製品から選択される、請求項５２記載の組合わせ。
【請求項５８】  玩具の銃である、請求項５７記載の組合わせ。
【請求項５９】  食物である、請求項５７記載の組合わせ。
【請求項６０】  化粧品である、請求項５７記載の組合わせ。
【請求項６１】  飲料である、請求項５７記載の組合わせ。
【請求項６２】  製造品が水鉄砲、空気銃、フィンガーペイント、フット・バッグ、粘液性玩具、衣類、泡形成玩具、入浴剤、ボディーローション、ゲル、ボディーパウダー、ボディークリーム、練り歯みがき、含嗽剤、石鹸、ボディーペイント、泡ぶろ、インク、包装紙、ゼラチン、アイシング、フロスティング、ビール、ワイン、シャンペン、ソフトドリンク、角氷、氷、ドライアイスおよび噴水から選択される、請求項５２記載の組合わせ。
【請求項６３】  玩具の銃である、請求項６２記載の組合わせ。
【請求項６４】  食物である、請求項６２記載の組合わせ。
【請求項６５】  化粧品である、請求項６２記載の組合わせ。
【請求項６６】  飲料である、請求項６２記載の組合わせ。
【請求項６７】  Renilla mulleriルシフェラーゼ、GaussiaルシフェラーゼまたはPleuromammaルシフェラーゼと免疫特異的に結合する抗体または、結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体。
【請求項６８】  モノクローナル抗体である、請求項６７記載の抗体。
【請求項６９】  Renilla緑色蛍光タンパク質(GFP)またはPtilosarcus GFPと免疫特異的に結合する抗体または、結合ドメインを含む該抗体のフラグメントまたは誘導体。
【請求項７０】  Renilla GFPがRenilla reniformis、Renilla kollokeriまたはRenilla mulleri GFPである、請求項６９記載の抗体。
【請求項７１】  モノクローナル抗体である、請求項６９記載の抗体。
【請求項７２】  ルシフェラーゼをコードするヌクレオチド配列およびPtilosarcus緑色蛍光タンパク質(GFP)またはRenilla緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードするヌクレオチド配列を含む、核酸構築物。
【請求項７３】  ルシフェラーゼがRenilla mulleriルシフェラーゼ、GaussiaルシフェラーゼまたはPleuromammaルシフェラーゼである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項７４】  GaussiaルシフェラーゼがGaussia princepesルシフェラーゼである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項７５】  ルシフェラーゼが：
配列番号１７、配列番号１９または配列番号２８に示すヌクレオチドの配列；
配列番号１８、配列番号２０または配列番号２９に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列；および
配列番号１７、配列番号１９または配列番号２８に示すヌクレオチドの配列と高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするヌクレオチドの配列：
によりコードされる、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項７６】  GFPがRenilla mulleri GFPである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項７７】  Renilla GFPがRenilla reniformis、Renilla kollokeriまたはRenilla mulleri GFPである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項７８】  GFPが：
配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１に示すヌクレオチドの配列；
配列番号１６または配列番号３２に示すアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列；および
配列番号１５、配列番号３０または配列番号３１に示すヌクレオチドの配列と高ストリンジェンシー下でハイブリダイズするヌクレオチドの配列
によりコードされる、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項７９】  ルシフェラーゼおよびGFPがRenilla由来のものである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項８０】  RenillaルシフェラーゼおよびGFPがRenilla mulleri由来のものである、請求項７９記載の核酸構築物。
【請求項８１】  ルシフェラーゼおよびGFPをコードするヌクレオチド配列が隣接して結合している、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項８２】  ＤＮＡである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項８３】  ＲＮＡである、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項８４】  請求項７２記載の核酸を含む、プラスミド。
【請求項８５】  プロモーターエレメント；
選択可能マーカー；
をコードするヌクレオチドの配列を更に含み、ルシフェラーゼおよびGFPをコードする核酸はプロモーターエレメントに操作的に結合しており、それによりルシフェラーゼおよびGFPが発現される、請求項８４記載のプラスミド。
【請求項８６】  請求項８４記載のプラスミドを含む、組換え宿主細胞。
【請求項８７】  細胞が細菌細胞、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、昆虫細胞および動物細胞からなる群から選択される、請求項８６記載の細胞。
【請求項８８】  単離された実質的に純粋なルシフェラーゼおよびGFP融合タンパク質。
【請求項８９】  ルシフェラーゼおよびGFPがRenilla由来である、請求項８８記載の融合タンパク質。
【請求項９０】  RenillaルシフェラーゼおよびGFPがRenilla mulleri由来である、請求項８９記載の融合タンパク質。
【請求項９１】  請求項８８記載の融合タンパク質を含む、組成物。
【請求項９２】  更に生物発光生成システムの少なくとも一つの成分を含む、請求項９１記載の組成物。
【請求項９３】  生物発光生成システムの成分がルシフェリンである、請求項９２記載の組成物。
【請求項９４】  ルシフェラーゼおよびGFPをコードするヌクレオチド配列が隣接していない、請求項７２記載の核酸構築物。
【請求項９５】  標的タンパク質のリガンド結合ドメインをコードするヌクレオチドの配列を含む、請求項９４記載の核酸構築物。
【請求項９６】  配列番号１６に示すアミノ酸５１から６８、８２から９８および１９８から２０８、配列番号２４に示すアミノ酸配列、配列番号２５に示すアミノ酸９−２０または配列番号２７に示すアミノ酸３９−５３に基づいて、少なくとも１４ヌクレオチド、好ましくは１６から３０ヌクレオチドを含む、核酸プローブまたはプライマー。
【請求項９７】  配列番号１６記載のアミノ酸の配列をコードする請求項１５記載の核酸配列を含む、請求項９６記載のプローブまたはプライマー。
【請求項９８】  請求項９６記載の一つのプローブまたは複数のプローブでのRenilla核酸ライブラリーのスクリーニング；および
GFPをコードする核酸の同定および単離
を含む、Renilla緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする核酸の単離法。
【請求項９９】  請求項９６記載の一つのプライマーまたは複数のプライマーでのRenilla核酸ライブラリーの増幅；および
増幅核酸の単離し、それによりGFPをコードする核酸を同定および単離する
ことを含む、Renilla緑色蛍光タンパク質(GFP)をコードする核酸の単離法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００８】
生物発光を使用するアッセイ
過去２０年間、研究および医学界において使用される高感度の生化学アッセイは、放射性同位元素よりも発光および蛍光発光をますます使用してきた。この変化は、部分的には放射性同位元素の処理費用の上昇により、および部分的には迅速かつ便利なアッセイ方法を発見する必要性により余儀なくされた。最近では、生細胞および全動物においてイン シトゥで生化学アッセイを行う必要があるので、研究者はタンパク質に基づく発光および蛍光発光を使用する。ＡＴＰアッセイのためにホタルルシフェラーゼ、カルシウムリポータとしてエクオリンおよびオベリン（obelin）、神経生理学的指示薬としてVargulaルシフェラーゼおよび、タンパク質追跡子およびｐＨ指示薬としてAequoreaグリーン蛍光タンパク質を使用することは、研究所における生物発光に基づく方法の可能性を示している。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
さらに、精製A. victoria ＧＦＰの結晶構造が特定された（参照、例えばOrmoe (1996) Science 273:1392-1395)。タンパク質の優性な構造的特徴は、修飾ｐ−ヒドロキシベンリデンイマダキソリジノン発色団を含有する単一の中央α螺旋を包むほぼ完全な円柱を形成する１１−鎖βバレルである。発色団はバレル構造内の中央に位置し、バルク溶媒への露出から完全に保護されている。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
これらの理由により、様々な新規ルシフェラーゼおよび蛍光タンパク質、特にA.victoria ＧＦＰのムテインを使用するよりも利用可能なRenilla ＧＦＰを有することが望ましい。しかしながら、いかなるRenilla ＧＦＰをもコードする遺伝子をクローン化することは不可能であった。特定の適用のためのシステムを効果的にし、現在の方法を改善するために利用可能な種々のＧＦＰおよびルシフェラーゼを有することも望ましい。従って、本明細書における目的は、これまで利用不可能なルシフェラーゼをコードする単離された核酸とそれによりコードされるタンパク質を提供することである。本明細書の目的はまた、他の種からRenilla ＧＦＰ、ＧＦＰをコードする単離された核酸、様々な種からのルシフェラーゼおよびそれによりコードされるタンパク質を提供することである。本明細書の目的はまた、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびＧＦＰを含む生物発光を発生するシステムを提供することである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２６】
（ルシフェラーゼ）
本発明は、Renilla mulleri ルシフェラーゼをコードする異種核酸を含有する組換え宿主細胞、およびこの核酸を提供する。好ましい実施態様において、異種核酸は、配列番号１８のアミノ酸配列をコードする。さらに好ましい実施態様において、異種核酸は配列番号１７のアミノ酸配列をコードする。本発明は、機能的に等価の核酸、例えば、配列番号１７のヌクレオチド配列に高度なストリジェンシイ条件でハイブリドする核酸分子を提供する。特に、本発明で提供されるプローブを用いるときに、提供する。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
本発明は、Gaussia ルシフェラーゼをコードする異種核酸含有の組換え細胞も提供する。精製された Gaussia ルシフェラーゼ、および Gaussia ルシフェラーゼのみまたは Renilla 緑色蛍光タンパク質などの生物発光生成システムの他の成分と組み合せた Gaussia ルシフェラーゼを含有する組成物を提供する。この Gaussia ルシフェラーゼは、例えば、新規の物品の蛍光源を提供するのに使用でき、または新形成組織などの組織の検出や視覚化の方法、均質免疫アッセイなどの免疫アッセイ、および多ウエルアッセイ機器でのインビトロ蛍光スクリーニングアッセイを用いる感染の検出方法に使用でき、または上記の方法のいずれかを実施するキットにおいて提供する。特に、Gaussia ルシフェラーゼは、本発明で提供するアッセイにおいて適当な蛍光タンパク質と共に使用できる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３４】
本発明は、Gaussia または Pleuromamma のルシフェラーゼをコードする異種核酸を含有の組換え宿主細胞を提供する。ある実施態様において、ルシフェラーゼをコードする異種 DNA 含有の組換え細胞は、ルシフェラーゼをコードする DNA での遺伝子移入により、またはこのタンパク質をコードする DNA の RNA 転写体導入によりつくる。 DNA は、直線 DNA 断片として導入でき、またはコード DNA の安定的または一時的な発現のための発現ベクターに組み込むことができる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
本発明は、ルシフェラーゼを含有する第１組成物と生物発光生成システムの１以上の他の成分を含有する第２組成物を含み、製造品と共に新規の物品をつくるのに使用される組合わせを提供する。この新規物品は、娯楽や気晴らし、アミューズメント用に設計され、限定でないが、次のものを含む：玩具、特に、水鉄砲、玩具のシガレット、玩具のハロウィーン卵、フットバッグ、ボード／カードゲーム；フィンガー・ペイントおよび他のペイント、粘液性玩具；織物、特に衣類、例えば、シャツ、帽子、スポーツ用衣服、糸、織糸；泡を作る玩具および他の泡を産生する玩具における泡；風船；小像；人体用の物品、例えば、化粧品、浴槽用粉末、ボディ用のローション、ゲル、粉末、クリーム、爪光沢剤、メークアップ剤、歯磨きなどの歯科用剤、石鹸、ボディペイント、泡沫浴；インクや紙などの物品；ゼラチン、アイシング、フロスティングなどの食品；ルシフェリンおよびトランスジェニック魚、特にルシフェラーゼを発現するトランスジェニック魚を含有する魚食品；ルシフェリンまたはルシフェラーゼを含有する植物食品、特にルシフェラーゼを発現するトランスジェニック植物と用いるルシフェリン；飲物、例えば、ビール、ぶどう酒、シャンペン、ソフトドリンク、立体状などの形態のアイス；噴出物、例えば、液体花火、ジェット、スプレー、エアゾルなどの組成物（溶液、混合液、懸濁液、粉末、ペースト、粒状物などの適当な形態にある）。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４５】
Ptilosarcus GFP をコードする核酸を配列番号３０および３１に表示する。コード GFP を配列番号３２に表示する。本発明は、配列番号２８、３０、３１のヌクレオチド配列に中程度または高度なストリジェンシイ条件でハイブリドする核酸分子を提供する。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４８】
本発明は、Ptilosarcus GFP、Renilla GFP、Renilla mulleri ルシフェラーゼ、Gaussia ルシフェラーゼ、Pleuromamma ルシフェラーゼをコードする異種核酸含有の組換え細胞も提供する。精製の Renilla mulleri GFP、Renilla reniformis GFP ペプチド、および Renilla GFP および GFP ペプチドをこれらのみ、または Renilla mulleri ルシフェラーゼなどの生物発光生成システムの少なくとも１つの成分と共に含有する組成物を提供する。Renilla GFP および GFP ペプチドの組成物を、例えば、新規の物品の蛍光源を提供するのに使用でき、または新形成組織などの組織の検出や視覚化の方法、均質免疫アッセイなどの免疫アッセイ、および多ウエルアッセイ機器でのインビトロ蛍光スクリーニングアッセイを用いる感染の検出方法に使用でき、または上記の方法のいずれかを実施するキットにおいて提供する。特に、これらのタンパク質は、FP（蛍光極性化）アッセイ、FET（蛍光エネルギー移行）アッセイ、FRET（蛍光共鳴エネルギー移行）アッセイ、HTRF（均質時間分解蛍光）アッセイ、さらにBRETアッセイおよびセンサーで使用できる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
本発明は、Renilla または Ptilosarcus のGFP をコードする異種核酸含有の組換え宿主細胞を提供する。ある実施態様において、 Renilla または Ptilosarcus のGFP をコードする異種 DNA 含有の組換え細胞は、Renilla または Ptilosarcus のGFP をコードする DNA での遺伝子移入により、または Renilla または Ptilosarcus のGFP をコードする DNA の RNA 転写体導入によりつくる。DNA は、直線 DNA 断片として導入でき、またはコード DNA の安定的または一時的な発現のための発現ベクターに組み込むことができる。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
ある実施態様において、細胞は、Renilla mulleri GFP または Ptilosarcus GFP（特に、P.gurneyi 以外の種に由来） をコードし、組換えRenilla mulleri GFP または Ptilosarcus ペプチドを発現する DNA または RNA を含有する。好ましくは、細胞の選択を、蛍光能を保持し、宿主に毒性のない機能的 GFP を発現するように行う。ある実施態様において、細胞は、生物発光生成システムの成分、好ましくはホトタンパク質やルシフェラーゼをコードする異種の核酸を含み得る。好ましい実施態様において、生物発光生成システム成分をコードする核酸は、Aequorea、Vargula、Pleuromamma、Ptilosarcusma または Renilla種 から単離する。さらに好ましい実施態様において、生物発光生成システム成分は、配列番号１８のアミノ酸配列を含む Renilla mulleri ルシフェラーゼ、配列番号２８の Pleuromamma ルシフェラーゼ、配列番号１９の Gaussia ルシフェラーゼである。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５６】
本発明の GFP は、適当な生物発光生成システムと組み合せて使用できる。好ましい組合せは、Renilla または Aequorea、Pleuromamma または Gaussia のルシフェラーゼとである。
本発明は、精製したRenilla ＧＦＰ、特にRenilla mulleri ＧＦＰおよび精製したRenilla reniformis ＧＦＰペプチドを提供する。本発明の組成物における使用に、現在好ましいRenilla reniformis ＧＦＰは、配列番号１９−２３に記載のアミノ酸配列から選択されるＧＦＰペプチドを含むものである。
Renilla ＧＦＰ、ＧＦＰペプチドおよびルシフェラーゼは、天然源から単離でき、または、Renilla ＧＦＰおよび／またはルシフェラーゼタンパク質をコードする核酸でトランスフェクトした原核細胞または真核細胞から単離できる。
RenillaまたはPtilosarcus ＧＦＰをコードする核酸、特にＤＮＡと、ルシフェラーゼをコードするＤＮＡの融合体も提供する。
細胞は、単独でまたは生物発光産生システムと組合せて、本明細書に記載のような、細胞ベースのアッセイおよびスクリーニング法に使用し得る機能的ルシフェラーゼおよび／またはＧＦＰを発現する。
ＧＦＰおよびルシフェラーゼを発現するための現在好ましい宿主細胞は、細菌、酵母、真菌、植物細胞、昆虫細胞および動物細胞である。
ルシフェラーゼおよびＧＦＰ、または、それらを発現する細胞もまた、細菌汚染物をスクリーニングするための方法および金属汚染物をするクリーニングするための方法に使用し得る。細菌汚染物をスクリーニングするために、ルシフェラーゼおよび／またはＧＦＰを発現する細菌細胞を、オートクレーブに、または、試験が意図される他の領域に入れる。処置または該領域の使用の後、該領域を、発光細菌の存在に関して試験する。このような細菌の存在が、他の細菌の根絶の失敗の指標である。重金属および他の環境汚染物のスクリーニングは、発現が、特定の重金属または汚染物に依存するシステムに連結しているとき、本明細書に記載の核酸を含む細胞で行うことができる。
本明細書に記載のシステムおよび細胞を、高スループットスクリーニング法、細胞内アッセイ、医学診断的アッセイ、環境試験(例えば浄水における細菌の追跡に、重金属を検出するための酵素と共に)、病院内オートクレーブ、食物および産業用オートクレーブを試験するために胞子に使用できる。同システムを含む非病原性細菌を動物の餌に含ませ、動物製品および肉における細菌汚染を検出できる。
RenillaまたはPtilosarcus ＧＦＰを含む組成物を提供する。本組成物は、意図される使用法に依存して、多くの形のいずれかを取り得る。ある態様において、例えば、Renilla ＧＦＰまたはＧＦＰペプチド、好ましくはRenilla mulleri ＧＦＰまたはRenilla reniformis ＧＦＰペプチドを含む組成物を、発光新規物品、免疫アッセイ、FET（蛍光エネルギー移行）アッセイ、FRET（蛍光共鳴エネルギー移行）アッセイ、HTRF（均質時間分解蛍光）アッセイに、または、本明細書に記載のような内蔵光検出器を含む多ウェルアッセイ装置と組み合わせて使用できる。他の例において、ＧＦＰは飲料、食物または化粧品に使用する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
本発明は、Renilla mulleri GFPまたはPtilosarcus GFPあるいはそれらの混合物を含有する第１組成物と、生物発光生成システムを含有する第２組成物を含み、無生物による新規物品製造に使用される組成物の組合わせを提供する。これらの新規物品は製品として、気晴らしやアミューズメント、娯楽用に設計され、限定ではないが、次の物品を含む：玩具、特に水鉄砲、玩具のシガレット、玩具のハロウィーン卵、フットバッグ、ボード/カードゲーム；フィンガー・ペイントおよび他のペイント、粘液性玩具；織物、特に衣類、例えば、シャツ、帽子、スポーツ用衣服、糸、織糸；泡を作る玩具および他の泡を産生する玩具における泡、風船；小像；人体用の物品、例えば、浴槽用粉末、ボディ用のローション、ゲル、パウダーおよびクリーム、爪光沢剤、メークアップ剤を含む化粧品、歯磨きおよび他の歯科用剤、石鹸、化粧品、ボディペイント、泡沫浴剤、非合成洗剤(特に、アルブミンその他の無毒性タンパク質)を原料とする泡沫浴剤；釣り具用のルアー、特に、これらの製品は、蛍光タンパク質および/または生物発光生成システム組成物含有のポリアクリルアミド架橋結合体が使用され、水中で発光する；インクや紙などの物品；ゼラチン、アイシング、フロスティングなどの食品；ルシフェリンおよびトランスジェニック魚、特に、ルシフェラーゼを発現するトランスジェニック魚を含む魚食品、ルシフェリンまたはルシフェラーゼ、特に、ルシフェラーゼを発現するトランスジェニック植物を用いるルシフェラーゼを含有する植物食品；飲み物、例えば、ビール、ぶどう酒、シャンペン、ソフトドリンク、アイスキューブおよび他の形態のアイス；噴出物、例えば、液体花火、ジェット、スプレー、エアゾルなどの組成物(これらは溶液、混合液、懸濁液、粉末、ペースト、粒状物などの適当な形態を呈する)。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６５】
１つの実施態様において、このチップは、X-Yアレイのようなアレイを有する光検出器の統合的回路を使用してつくる。この回路の表面を処理して、例えば、抗体のような連結分子の誘導化によって、意図したチップについての診断アッセイの状態に対し表面が不活性化であるようにする。細菌抗原に特異的な抗体のような選択抗体または抗体パネルを、光検出器ごとの上にあるチップの表面に添付する。そのチップを、サンプルと接触させた後に、RenillaまたはPluromamm GFPと連結した第２抗体、キメラ抗体−Renilla GFP融合タンパク質、あるいはルシフェラーゼまたはルシフェリンのような生物発光生成システム成分と連結した抗体と接触させる。これらのものは抗原に特異的である。生物発光生成反応の残余成分を加え、生物発光生成システムの成分と連結した抗体がチップ上にあれば、光が発生し、隣接する光検出器で探知される。光検出器をコンピューターに操作的に繋げ、連結抗体を同定する情報をプログラム化し、事象を記録し、それによってサンプル中に存在する抗原を同定する。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
本発明は、キメラ GFP融合タンパク質生成の方法を提供する。その方法には、所望の遺伝子またはその一部分をコードするDNAを、それと同一の翻訳解読枠における GFPコード領域をコードする DNAに連結することが含まれる。所望のコード領域は、GFPのアミノ末端またはカルボキシル末端と枠内で連結する。次いで、キメラ・タンパク質をコードする DNAを、適当な発現ベクターのプロモーター・エレメントと操作的連結で結合させる。あるいは、プロモーター・エレメントを、所望の標的遺伝子から直接的に得ることができ、キメラ GFPタンパク質をつくるためにGFPコード配列の上流とプロモーター含有断片を連結する。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６７】
本発明は、所望の遺伝子のプロモーター・エレメントの制御の下にGFPコードの異種DNAを発現する遺伝子組換え細胞を使用して、化合物の同定方法を提供する。遺伝子組換え細胞は、GFP媒介の蛍光度を測定することによって、所望のプロモーターからの転写体のレベルを調節する新規の化合物またはリガンドを同定するために使用できる。キメラRenilla または Ptilosarcus GFPを発現する遺伝子組換え細胞は、また、遺伝子組換え細胞の内での GFP媒介蛍光の局所化領域の同定によって、遺伝子発現あるいはタンパク質交換のモニターのために、または、標的タンパク質の細胞内局在化の輸送のために使用し得る。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
本発明は、本明細書中で記述している方法も含む方法で使用されるGFP含有するキットを提供する。１つの実施態様において、製造品および生物発光を生成させるような適当な試薬を含むキットを提供する。本発明は、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびGFPを含む、好ましくは中程度のPh [5〜8]の生物発光生成物を含有する石鹸組成物などを含有するキットを提供する。これらのキットは、例えば、泡を吹いたり、泡を作り出す玩具に使用できる。これらのキットはまた、詰換えあるいは交換用カートリッジを備え、または食物といっしょに使用できる。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
上述の通り、本発明は、本発明が提供するルシフェラーゼおよび/または GFPをコードする核酸と別のルシフェラーゼおよびGFPとの融合を提供する。RenillaルシフェラーゼおよびRenilla GFP(またはRenilla GFPのホモダイマーあるいは別の複合体)のような一対のルシフェラーゼとGFPとをコードする融合が特に関心をひく。ルシフェラーゼとGFPとは、結合して蛍光発光を生じる。その発光は、ルシフェリンが存在する場合、GFPの存在しない場合のルシフェラーゼと比較して、赤方偏移する。これらの融合は、GFPおよびルシフェラーゼがペプチドなどの標的によって連結されており、リンカーとの相互作用のすべてを検査する手段として使用できる。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７５】
本発明は、本発明が提供する核酸でコードされたタンパク質のすべてと特異的に結合する抗体、ポリクローナルおよびモノクローナルの抗体も提供する。これらのポリクローナルおよびモノクローナルの抗体は共に、当業者に既知の標準的技法を採用して製造できる。本発明は特に、本発明が提供するルシフェラーゼまたは GFPまたはそのエピトープ含有断片の実質的に純粋な製造物でもって免疫化した動物の血清から得た免疫グロブリンまたは抗体を提供する。本発明はまた、モノクローナル抗体も提供する。生成された免疫グロブリンは、それが有するいろいろな特性のなかで、生物学的サンプルまたはそのような生物学的サンプル由来の溶液中に存在し得る、GFPまたはルシフェラーゼ、特にRenilla またはPtsilocarpus のGFPまたは Pleuromamma、GaussiaまたはRenilla mulleriのルシフェラーゼと特異的または優先的に結合し、および／または免疫沈降反応を起す効力を有する。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
（発明の詳細）
目次
Ａ.定義
Ｂ．生物発光発生系
１．例示的な生物発光発生系
ａ．一般的説明
１）ルシフェラーゼ
２）ルシフェリン
３）活性化物質
４）反応
ｂ.有櫛動物系
１）エクオリン
a）エクオリンおよび関連の生物発光タンパク質
b）ルシフェリン
２）Renilla系
ｃ．甲殻類、特にCypidina系
１）Vargula ルシフェラーゼ
a）Cypidinaからの精製
b）組換え方法による調製
２）Vargula ルシフェリン
３）反応
ｄ．ホタル、コメツキムシおよび他の昆虫系を含む昆虫の生物発光系
１）ルシフェラーゼ
２）ルシフェリン
３）反応
ｅ．微生物系
１)ルシフェラーゼ
２)ルシフェリン
３)反応
ｆ．他の系
１）渦鞭毛虫生物発光を生じる系
２）軟体動物類、例えばLatiasおよびニオガイ
３）ミミズおよび他の環形動物
４）ツチボタル
５）海洋性多毛類蠕虫類（Marine polycheate worm）系
６）南アメリカのレイル・ウェイ・ビートル（railway beetle）
７）魚
ｇ．蛍光性タンパク質
１）緑および青色蛍光性タンパク質
２）フィコビリンタンパク質
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７９】
Ｅ．タンパク質の組換による発現
Gaussia
１．Gaussiata タンパク質をコードするDNA
２．Gaussiata タンパク質を組み換えにより製造するためのDNA構築物
３．Gaussiata タンパク質を組み換えにより製造するための宿主生物体
４．Gaussiata タンパク質を組み換えにより製造するための方法
Renilla
１．Renilla タンパク質をコードするDNA
２．Renilla タンパク質を組み換えにより製造するためのDNA構築物
３．Renilla タンパク質を組み換えにより製造するための宿主生物体
４．Renilla タンパク質を組み換えにより製造するための方法
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８０】
Ｆ．ルシフェラーゼおよびGFPをコードする異種核酸を発現する組換え細胞
Gaussia
Renlliaの緑色蛍光タンパク質および／またはルシフェラーゼおよびGFPをコードする異種核酸を発現する組換え細胞
Ｇ．ルシフェラーゼ
Ｈ．RenillaおよびPtilosarcus GFP
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８１】
Ｉ．組成物
１．Gaussiaルシフェラーゼ組成物
２．Renlliaのルシフェラーゼ組成物
３．RenlliaのGFP組成物
４．接合体
ａ）リンカー
ｂ）標的剤
抗腫瘍抗原抗体
接合体の調製
５．以下において使用するための組成物の調製
ａ．第一組成物：接合（共役）診断系の調製
ｂ．第二組成物
ｃ．標的剤との組合せにおける反応の実施
Ｊ．組合わせ
Ｋ．使用方法
１．新生物および他の組織の診断方法
２．疾病を診断するための方法
３．キメラRenillaまたはPtilosarcus ＧＦＰ、Renilla mulleriルシフェラーゼ、PleuromammaルシフェラーゼおよびGaussiaルシフェラーゼ融合タンパク質を発生させる方法
４．化合物を確認する細胞基準アッセイ
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８２】
Ｌ．  キット
１．ＧＦＰおよび生物発光システム成分との組合わせを分配し且つ包装する装置
２．カプセル、ペレット、リポソーム、エンドソーム、液胞、微小化粒子
ａ．一般的カプセル充てん溶剤
ｂ．カプセル充てん溶剤−リポソーム
ｃ．カプセル充てん溶剤−ゼラチンおよび高分子溶剤
ｄ．エンドソームおよび液胞
ｅ．微小化粒子
３．固定化システム
ａ．マトリックス材料
ｂ．固定化および活性化
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９２】
よって、例えば、“Gaussiaルシフェラーゼ”というのは、Gaussia属のメンバーから単離される酵素または他の関連するとう脚類のような他の起源から得られるかまたは合成的に作成される同等の分子を意味する。これは、活性を実質的に変えない保存的なアミノ酸置換を持つGaussiaルシフェラーゼを包括することを意図している。適切な保存的なアミノ酸置換は当業者に公知であり、且つ、得られる分子の生物活性を変えることなく一般的に作成できる。当業者は、一般的には、ポリペプチドの非必須領域における単一のアミノ酸置換は生物活性を実質的に変えないことを認識している(例えば、Watson et al. Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Bejacmin/Cummings Pub. Co., p. 224を参照)。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９３】
“Renilla ＧＦＰ”とは、Renilla属およびそれの突然変異体または変異体からのＧＦＰを意味する。これは、活性を実質的に変えない保存的なアミノ酸置換を持つRenilla ＧＦＰを包括することを意図している。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９４】
そのような置換は下記の表１に表記する置換に従って行うのが好ましい。
【表１】
2002507410.tif 000001
他の置換もまた許容され経験的にまたは公知の保存的置換に従って決定され得る。
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９５】
ルシフェラーゼおよびルシフェリン並びにそれらのアクチベーターとは、生物発光を発生させる試薬または成分をいう。典型的には、これらの試薬の一部の組が供給されるかまたは製造用品と組合わせられるであろう。この組合わせに残りの試薬を接触させると生物発光が生成されるであろう。よって、ここで用いる限りでは、成分のルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびＯ２、Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋の如き他の因子は、また生物発光を発生させる試薬[または試剤または成分]という。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１０３】
ここで用いる限りでは、ＢＲＥＴシステムとは、共鳴エネルギー移動のためのＦＰとルシフェラーゼとの組合わせをいい、そして、ＢＲＥＴとは、そこでルシフェラーゼがそのとき非放射性的にＦＰへと変換するルシフェリンと反応して光を発生するのに用いられるところの方法をいう。このエネルギーはＦＰ，特にＧＦＰ，に移動し、これはエネルギーを集中させシフトさせて、別の波長でそれを放出する。好ましい形態においては、ＢＲＥＴシステムは、生物発光発生システムおよびこのシステムでルシフェラーゼと同じ起源からのＧＦＰを含む。好ましい一対はRenillaルシフェラーゼとRenilla ＧＦＰであり、これらは特異的に相互に作用する。結合における変更は、ルシフェラーゼにより生成する光の発光スペクトルの変化に反映されるであろう。その結果、この一対は外部イベントのセンサーとして機能する。
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１７】
ここで用いる限りでは、治療とは、体調、機能障害または病気の症状を改善するかまたは、他の方法で、有益に変える方法を意味する。治療はここでの組成物の製薬的使用もまた包括する。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２０】
ここで用いる限りでは、前駆薬剤は、インビボ投与において、この化合物の生物的に、製薬的にまたは治療的に活性な形に代謝されるか、他の方法で、変換されるところの化合物である。前駆薬剤を製造するためには、製薬的に活性な化合物を修飾してその活性な化合物が代謝過程によって再生されるようにする。前駆薬剤は、薬剤の代謝安定性または伝達特性を変えるように、副作用または毒性をマスクするように、薬剤の風味を改善するように、若しくは、薬剤の他の特性または性質を変えるようにデザインしてもよい。インビボにおける薬動学的な過程および薬剤代謝の知識のお陰で、当業者は、一旦製薬的に活性な化合物が公知になると、その化合物の前駆薬剤をデザインすることができる(例えば、Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392を参照)。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２５】
ここで用いる限りでは、腫瘍性の病気は、腫瘍性の細胞がこの病気に悩まされている個人に存在するところの病気である。このような病気はガンとして特徴付けられるあらゆる病気を含む。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３３】
ここで用いる限りでは、外科的観察とは、動物の体を切開する操作を言う。そのような操作は、腹腔鏡検査法および関節鏡検査操作等の慣習的な手術および診断的操作を含む。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３８】
ここで用いる限りでは、核酸の二つの配列を言うとき、同等とは、問題の二つの配列がアミノ酸または同等なタンパク質の同じ配列をコード化することを意味する。“同等”が二つのタンパク質またはペプチドを指して使われるときには、これは、二つのタンパク質またはペプチドが、タンパク質またはペプチドの活性および機能を実質的に変えない保存的なアミノ酸置換[例えば、上の表１を参照]だけを持つ実質的に同じアミノ酸配列を有することを意味する。“同等”が性質をいうときには、その性質が同じ程度に存在することは必要ではないが[例えば、二つのペプチドは同じタイプの酵素活性を異なる速度で表すことができる]、その活性は好ましくは実質的に同一である。“相補的”とは、二つのヌクレオチド配列を指すときには、ヌクレオチドの二つの配列が向かい合ったヌクレオチドの間で、好ましくは２５％以下で、更に好ましくは１５％以下で、より更に好ましくは５％以下で、最も好ましくは何も無いミスマッチをもってハイブリッド形成を可能にすることを意味する。好ましくは、二つの分子は高度な緊縮性の条件下でハイブリッド形成するであろう。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
ここで用いる限りでは、組合わせとは二つの間またはより多くの品目の間におけるいろんな結合をいう。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５１】
1．代表的な生物発光発生システム
生物発光発生システムとは生物発光を発生させるために必要で十分である成分をいう。これらはルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびいろんな必要な補因子または条件を含む。当業者に公知である実際上どんな生物発光システムでも、ここで供給される装置、システム、組合わせおよび方法において容易に使用できるであろう。生物発光発生システムを選択する際に考慮すべき要素は次のものを含むがこれらに限定されない：生物発光と組み合わせて使用する目標試剤；反応を行う培地；温度またはｐＨ感受性のような成分の安定性；成分の有効期限；一定または間欠的であれ、光放射の継続性；成分の入手の容易さ；要求される光強度；光の色；およびその他のそのような要素。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５３】
生物発光発生システムの生物体および供給源は数多くあって、生物発光を現わす幾らかの代表的な属および種を以下の表に表示する[部分的にHastings in (1995) Cell Physiology: Source Book, N. Sperelakis (ed.). Academic Press, pp 665-681から転記]：
【表２】
2002507410.tif 000002
【表３】
2002507410.tif 000003
【表４】
2002507410.tif 000004
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５７】
表２やここの何処かに表示されまたは当業者に公知である生物発光発生システムは、合成であれまたは天然起源からの単離であれ、ここで提供される組合わせ、システムおよび方法においての使用を意図している。オキシゲナーゼ[ルシフェラーゼ]に頼らない生物発光システムそれ自体はここでは包括されない。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６５】
［３］活性化剤
生物発光を発生する系はまた本明細書で検討するものおよび当技術分野における熟練者に知られている他の成分を必要とする。生物発光反応は全て溶解酸素または結合酸素の型における分子状酸素を必要とする。そこで、水に溶解した、または空気中の、または発光プロテインに結合した、分子状酸素は生物発光反応に対する活性化剤である。これらに限定されるものではないが、その他の活性化剤には反応の構成の型に依存して次のようなものを包含する：ＡＴＰ（ホタルルシフェラーゼ）、ＦＭＮからＦＭＮＨ2を再生するフラビン還元酵素［細菌系］、およびＣａ2+またはその他の適当な金属イオン［エクオリン］。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８５】
（ａ）エクオリンおよび関連発光プロテイン
発光プロテインであるエクオリンはクラゲである Aequorea から単離されたものでＣａ2+またはその他の適当な金属イオンを添加すると光を放射する。エクオリン発光プロテインは結合ルシフェリンおよびＣａ2+によって放出される結合酸素を含有し、溶解酸素を必要としない。冷光放射はカルシウムによって触発されるが、後者は酸素とルシフェリン基質を放出してアポエクオリンを生成する。
生物発光フォトプロテインであるエクオリンは多種のクラゲ Aequorea から単離される。これは分子量２２キロダルトン（ｋＤ）の複合ペプタイドである［たとえば、Shimomura et al.（1962） J.Cellular and Comp. Physiol. 59：233-238；Shimomura et al.（1969） Biochemistry 8：3991-3997；Kohama et al. （1971） Biochemistry 10：4149-4152；およびShimomura et al.（1972） Biochemistry 11：1602-1608参照］。在来型のタンパク質は酸素を含み、ヘテロ環状化合物であってルシフェリンの一種であるセレンテラジンがこれと非共有結合的に結合している［下記参照］。このタンパク質はカルシウム結合部位３箇所を有する。痕跡量のＣａ2+［またはたとえばストロンチウムのようなその他の適当な金属イオン］を発光プロテインに添加すると立体配座が変化し、これがタンパク質に結合している酸素を利用して結合セレンテラジンの酸化を触媒する。この酸化のエレルギーは４６９nmに中心を持つ青色光のフラッシュとして放射される。カルシウムイオンの濃度は１０-6Mまでの低さであってもこの酸化反応を触発するためには十分である。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１９１】
アポエクオリンまたはその変種をコードするＤＮＡは多量のアポタンパク質を組換え生産するために有用である。この発光プロテインはルシフェルリンであるセレンテラジン、好ましくはその硫酸塩誘導体またはその類似体、および分子状酸素を添加して再構築される［たとえば米国特許第5023181号参照］。このアポタンパク質およびその他の発光プロテインおよび生物発光生成反応の構成成分は適当な条件下に発光プロテインを再生し、同時に発光プロテインに発光させるために混合することができる。再構築にはたとえばメルカプトエタノールのような還元剤の存在が必要であるが、以下に検討する通りに還元剤が不要なように設計された修正型ではこの点は当てはまらない［たとえば米国特許第5093240号参照］。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０２】
重要なことに、コエレンテレートルシフェリンの硫酸誘導体[ラウリルルシフェリン]は、特に水に安定であり、そのため、コエレンテレート様-生物発光性システムに用いられる。このシステムでは、アデノシン二リン酸(ＡＤＰ)およびサルファキナーゼを用い、コエレンテラジンを硫酸型に変換する。次いで、スルファターゼを用い、ラウリルルシフェリンを天然コエレンテラジンに再変換する。そのため、更に安定なラウリルルシフェリンを、照射すべきアイテムに用い、スルファターゼを合せたルシフェラーゼを、照射を望むときに、ルシフェリン混合物に加える。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０３】
そのため、Aequoreaの生物発光性システムは、特に本明細書中の方法の使用に適する。特定の量および成分が提供される方法は、視覚化される腫瘍形成または特定組織の型に依存する。このシステムは、凍結乾燥され、Ｃａ２＋の添加により輝き出す。マイクロビーズのような微小担体に結合させ、溶液または懸濁液のような組成物として、好ましくは反応の誘発を防ぐ重要なキレート化剤の存在下、カプセル化し得る。エクオリン発光タンパク質の濃度は変化し、経験的に決定される。典型的濃度、少なくとも０．１ｍｇ／ｌ、より好ましくは少なくとも１ｍｇ／ｌおよびそれ以上、を選択する。ある実施態様では、ルシフェラーゼ１００ｍｇあたり１-１０ｍｇルシフェリンを、選択した体積で使用し、望ましい濃度で用いる。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０５】
Vargula生物発光性システムのような、システムは、特に本明細書において好ましい。当該成分は、乾燥し、粉末状となっても室温で安定であり、そして汚染されているときでさえも、反応は継続する。更に、生物発光性反応は、１：４０ｐｐｂから１：１００ｐｐｂぐらい低い濃度のルシフェリン／ルシフェラーゼ成分のみを必要とし、水および分子状酸素が生ずる。排出システムはルシフェリンの添加により回復する。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１３】
(３)反応
酸素との反応におけるルシフェリンは、ジオキシエタノン中間体(ホタル環状ペルオキシド分子中間体に類似する環状ペルオキシドを含む)を形成する。生物発光性反応の最終段階では、ペルオキシドは、崩壊し、ＣＯ２および励起カルボニルを生ずる。次いで、励起分子は、青色から青-緑の光を発する。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１７】
野生型ルシフェラーゼに加えて、修飾した昆虫ルシフェラーゼが調製された。例えば、ルシフェラーゼを生ずる熱安定性ルシフェラーゼ変異体、ＤＮＡコード化変異体、ベクターおよび形質転換細胞が利用できる。Photinus pyralis、Luciola mingrelica、L. cruciata または L. lateralisからのルシフェラーゼと６０％アミノ酸配列相同性を有し、ルシフェラーゼ活性を有するタンパク質が利用される[例えば、国際PCT出願番号WO 95/25798参照]。それは、３０℃を超える温度で、天然で生ずる昆虫ルシフェラーゼよりも安定であり、また３７℃またはそれ以上で、高い収量で、産生される。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２０】
これら変異体ルシフェラーゼおよび野生型ルシフェラーゼを、特に、例えば、種々の色彩が望まれるとき、または高温での安定性が望まれるとき、本明細書のＧＦＰと組合せて用いることができる。
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２６】
ＡＴＰおよびルシフェリンを、用い尽くされる反応に添加することにより、更なる光の放射が生ずる。そのため、一旦確立すると、当該システムは、比較的、容易に維持される。そのため、発光の維持が望まれる本明細書の実施態様での使用に相当適する。
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３７】
生物発光性細菌により生ずる光の色は、生物発光反応におけるタンパク質青-蛍光タンパク質[ＢＦＰ]の関与の結果でもある。よく知られたこのタンパク質[例えば、Lee et al. (1978) Methods in Enzymology LVII:226-234参照]はまた、色彩のシフトの要因となるため、細菌性生物発光性反応に加えられる。
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３８】
ｆ．他のシステム
(１) 渦鞭毛藻類の、生物発光を生ずるシステム
渦鞭毛藻類では、生物発光は、シンチロン(scintillon)と名付けられたオルガネラで生ずる。これらオルガネラにより、細胞質から細胞液胞中へ膨出する。シンチロンは、渦鞭毛藻類のルシフェラーゼおよびルシフェリン[その結合タンパク質を伴う]のみを含み、他の細胞質成分はある程度除かれる。渦鞭毛藻類のルシフェリンは、クロロフィル：
【化９】
2002507410.tif 000005
またはその類似体に関係するテトラピロールである。
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３９】
ルシフェリンは、ｐＨ６．５で活性があるが、ｐＨ８では不活性である１３５ｋＤ単一鎖タンパク質である[例えば、Hastings (1981) Bioluminescence and Chemiluminescence, DeLuca et al., eds. Academic Press, NY, pp.343-360参照]。発光活性は、ｐＨ８で生成した抽出物において、ｐＨを８から６に単にシフトすることにより、得られる。これは、可溶化中および微粒子画分中で生ずる。未処理シンチロン内では、発光性のフラッシュは、〜１００ミリ秒生じ、インビボでのフラッシュ時間である。溶液中では、その動力学は、すべての酵素性反応と同様、希釈に依存する。ｐＨ８では、ルシフェリンは、ルシフェリンとルシフェラーゼとの反応を防止するタンパク質[ルシフェリン結合タンパク質]に結合する。しかし、ｐＨ６では、ルシフェリンは、放出され、自由に酵素と反応する。
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４０】
(２)LatiaおよびPholasのような軟体動物類由来のシステム
軟体動物Latia neritoidesおよびPholas種は、生物発光性動物である。ルシフェリンは、構造：
【化１０】
2002507410.tif 000006
を有し、合成される[例えば、 Shimomura et al. (1968) Biochemistry 7:1734-1738; Shimomura et al. (1972) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 69:2086-2089参照]。ルシフェラーゼおよびルシフェリンの他に、当該反応は、第３の成分、“パープルプロテイン(purple protein)”を有する。外来性還元剤により開始され得る当該反応は、以下の概要により表される：
【化１１】
2002507410.tif 000007
ＸＨ２は還元剤である。
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２４９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２４９】
ｇ．蛍光タンパク質
AequoreaおよびウミシイタケRenilla reniformisのＧＦＰは同じ発色団を共有し、また、エクオレア(Aequorea)ＧＦＰは３９５ｎｍおよび４７５ｎｍの２つの吸収ピークを有するが、RenillaＧＦＰは、４９８ｎｍの単一の吸収ピークを有し、エクオレアタンパク質の主要３９５ｎｍピークよりも約５．５倍大きなモノマーの消衰係数である[Ward, W. W. in Biohtminescence and Chemiluminescence (eds. DeLuca, M. A. & McElroy, W. D.) 235-242 (Academic Press, New York, 1981)]。中性ｐＨでの単離発色団および変性タンパク質のスペクトルは、何れかの天然タンパク質とも一致しない[Cody, C. W. et al. (1993) Biochemistry 32:1212-1218 ]。
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５１】
ＧＦＰは、青色の光により活性化され、緑色の光を放射し、そのため、本明細書に記載のように、ルシフェラーゼ非存在下、および新規アイテムで、外的光源と共に、使用され得る。同様に、Vibrio fischeri、Vibrio harveyi または Photobacterium phosphoreum由来のもののような青色の蛍光タンパク質(ＢＦＰ)もまた、青色の光を生ずる適当な波長の外的光源と共に使用され得る(例えば、Karatani, et al., "A blue fluorescent protein from a yellow-emitting luminous bacterium," Photochem. Photobiol. 55(2):293-299 (1992); Lee, et al., "Purification of a blue-fluorescent protein from the bioluminescent bacterium Photobacterium phosphoreum" Methods Enzymol. (Biolumin. Chemilumin.) 57:226-234 (1978); および Gast, et al. "Separation of a blue fluorescence protein from bacterial luciferase" Biochem. Biophys. Res. Commun. 80(1):14-21 (1978)参照、本明細書で引用するそれぞれの参考文献としてを引用によりこの文書に加える)。特に、ＧＦＰおよび／またはＢＦＰまたは他のその蛍光タンパク質を、本明細書で提供の飲料および／または食物の組合せに使用し、蛍光タンパク質から蛍光を生ずる適当な波長の光で空間を照らす。
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６０】
青色または緑色の光をより長い波長の光、すなわち、赤色または近赤外に変換することは、本明細書に記載のように、腹腔鏡またはコンピューター断層画像化システムを用いる新生物または特に組織の可視化に特に好ましい。
【誤訳訂正５７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６２】
Ｃ．ルシフェラーゼおよびＧＦＰをコードする核酸の単離および同定
２つの新規緑色蛍光タンパク質(ＧＦＰ)および３つのコエレンテラジン使用のルシフェラーゼを含む核酸生物発光タンパク質を提供する。多くの提供、好ましくは分析適用におけるコエレンテラジン使用のルシフェラーゼの利点は、光放射ルシフェリンおよび分子状酸素を必要とし、ＡＴＰまたはＣａ＋＋のような補因子は必要とされないことである。
【誤訳訂正５８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６５】
クローニングしたＤＮＡフラグメントは、細菌性細胞、好ましくはE. coli中で複製可能である。好ましいＤＮＡフラグメントはまた、細菌性複製起点を含み、細菌の世代から世代へＤＮＡフラグメントを維持する。この方法では、多量のＤＮＡフラグメントが細菌中で複製により生じ得る。好ましい細菌の複製起点は、f1-ori および col E1複製起点が含まれるが、これらに限らない。好ましい宿主には、lacUVプロモーターのような誘導プロモーターに操作しやすいように連結したＴ７ＲＮＡポリメラーゼをコードするＤＮＡの染色体コピーを含む(米国特許番号4,952,496参照)。その宿主には、溶原菌E. coli 株 HMS174(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysS、HMS174(DE3)およびBL21(DE3)が含まれるが、これらに限らない。株BL21(DE3)が好ましい。pLys株は、低レベルのＴ７リソチーム、天然のＴ７ＲＮＡポリメラーゼインヒビターを提供する。温度感受性ムテインのようなムテイン(mutuein)の発現および製造のために、真核性細胞、とりわけSaccharomyces のような酵母細胞が好ましい。
【誤訳訂正５９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２７０】
Guassia および Pleuromamma ルシフェラーゼは、クローン化された最初の２つのカイアシ類のルシフェラーゼである；両方とも排出され、そして、分泌タンパク質の効果的マーカーとなる。Guassia ルシフェラーゼは、これまでに見つけられた最も小さなルシフェラーゼである(MW 19,900)。全てのルシフェラーゼは、コエレンテラジンを使用するルシフェラーゼの典型的出力スペクトルを示す。全て、陽イオン濃度に強力に依存するが、二価陽イオンを必要としない(データ示さず)。当該ルシフェラーゼでは、他の種から単離されるルシフェラーゼとは有意な相同性が全くない。
【誤訳訂正６０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０４】
Ｄ．他の種からのルシフェラーゼおよびＧＦＰを暗号化している核酸を単離およびクローニングするための核酸プローブおよび方法
Gaussiaのルシフェラーゼを暗号化している本書中に例示した核酸は、その他のGaussia種からルシフェラーゼを単離するためのプローブ源として使用することができる。例示したヌクレオチド配列に基づく任意の適当なプローブを、任意の方法で使用できる。このようなプローブは、少なくとも低いストリンジェンシー、より好ましくは中度のストリンジェンシー、最も好ましくは高いストリンジェンシー条件下において、適当なGaussiaのライブラリー中の関連核酸とハイブリダイズするものでなければならない。
【誤訳訂正６１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３０８】
他のRenilla種からのＧＦＰを暗号化している核酸を単離するための核酸プローブおよびクローニング法
Renilla mulleriのＧＦＰを暗号化している本書中に例示した核酸は、その他のRenilla種からＧＦＰ類を単離するためのプローブ源として使用することができる。例示したヌクレオチド配列に基づく任意の適当なプローブを、任意の方法で使用できる。このようなプローブは、低いストリンジェンシー条件下において、適当なRenillaのライブラリー中の関連核酸とハイブリダイズするものでなければならない。
【誤訳訂正６２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１６】
Ｅ．蛋白質の組換えによる発現
Gaussia
１．Gaussiaの蛋白質を暗号化しているＤＮＡ
上記のように、Gaussiaのルシフェラーゼを暗号化しているＤＮＡは、天然源から単離すること、本書中に記載したGaussiaの核酸配列に基づいて合成すること、または数多くの組換えＤＮＡクローニングおよび増幅技術、例えばポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を使用することにより調製することができる。
【誤訳訂正６３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３１８】
２．Gaussia蛋白質の組換えによる生産のためのＤＮＡ構築物
ＤＮＡを、所望の宿主中の発現用プラスミドに導入する。好ましい実施態様において、宿主は細菌性宿主である。プロモーターおよびオペレーターのような調節領域であるプラスミド中のヌクレオチド配列は、Gaussiaルシフェラーゼを暗号化しているヌクレオチド配列の転写のために互いに動作上の関連性をもつ。また、Gaussiaのルシフェラーゼを暗号化しているヌクレオチド配列は、分泌シグナルを暗号化しているＤＮＡを含み、それにより生成するペプチドがGaussiaのルシフェラーゼの前駆体となる。
【誤訳訂正６４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２１】
３．Gaussia蛋白質の組換えによる生産のための宿主生物
宿主生物は、細菌（例えば、E. coli）、酵母（例えば、Saccharomyces cerevisiaeおよびPichia pastoris）、真菌、バキュロウイルス／昆虫系、両生類細胞、哺乳類細胞、植物細胞および昆虫細胞のような、異種蛋白質の組換え体生産が行われた生物を含むが、これらに限定されるものではない。現在好ましい宿主生物は、細菌または酵母の株である。最も好ましい宿主生物は、E. coli株およびSaccharomyces cerevisiaeである。
【誤訳訂正６５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３２２】
４．Gaussia蛋白質の組換えによる生産法
Gaussiaのルシフェラーゼを暗号化しているＤＮＡを、選択した宿主生物中におけるポリペプチド発現のための適当なプロモーターと動作的に結合してプラスミドに導入する。Gaussiaのルシフェラーゼを暗号化しているＤＮＡ断片は、成熟たんぱく質をペリプラズムまたは培地中を指向するように選択した宿主中で機能する蛋白質分泌シグナルをも含むことができる。生成するルシフェラーゼは、本書で実施例中に記載した方法を含めて、当業界で日常的に使用される精製法により精製することができる。
【誤訳訂正６６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０３５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０３５８】
２．レニラルシフェラーゼ組成物
レニラ・ムレリルシフェラーゼをコードするＤＮＡを用いて、コードされるルシフェラーゼを産生させるが、これは本明細書に記載される、例えば飲料中の、生物発光系の成分として使用されるとともに、腫瘍形成の診断法および本明細書に記載される診断チップにおいてなど、診断における用途を有する。これらの方法および産物にはルシフェラーゼが使用される当業者に公知のいずれのものも含まれ、限定されるものではないが、米国出願出願番号０８／７５７，０４６、０８／５９７，２７４および０８／９９０，１０３、米国特許第５，６２５，０４８号；国際特許出願公報第ＷＯ９５／２１１９１号；第ＷＯ９６／２３８１０号；第ＷＯ９６／２７６７５号；第ＷＯ９７／２６３３３号；第ＷＯ９７／２８２６１号；第ＷＯ９７／４１２２８号；および第ＷＯ９８／０２５７１号が含まれる。
【誤訳訂正６７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４１５】
Ｊ．組合せ
さらに、前記プルロマムマ、ガウシアもしくはレニラルシフェラーゼおよび／またはレニラおよびプチロサルカスＧＦＰを製品と組み合わせて使用して新規な製品を製造する。かかる製品および調製法は同時係属出願の米国出願出願番号８／５９７，２７４および０８／７５７，０４６に詳細に記載されている。同時係属出願にて提供される方法および製品において本明細書で提供されるルシフェラーゼおよび／またはＧＦＰを使用してもよい。これら新規な製品は工業製品であり、エンターテインメント、レクリエーションおよび娯楽に向けて設計されている。これらには限定されるものではないが、玩具、特に水鉄砲、玩具のシガレット、玩具の「ハロウィーン」卵、フットバッグおよびボード／カードゲーム；フィンガーペイントおよび他のペイント、粘液性玩具；布地、特にシャツ、帽子およびスポーツ用具服のような衣類、糸およびヤーン；泡作製玩具および泡を発生させる他の玩具における泡；風船；小像；バスパウダー、ボディローション、ゲル、パウダーおよびクリーム、ネイルポリッシュ、メーキャップ用品を含む化粧品、練り歯磨きおよび他の磨歯剤、石鹸、ボディーペイント、および泡立て溶剤のような身辺アイテム；インク、紙のような製品；ゼラチン、アイシングおよびフロスティングのような食べ物；ルシフェリンおよびトランスジェニック魚類、特にルシフェラーゼを発現するトランスジェニック魚類を含む魚料理；ルシフェリンまたはルシフェラーゼ、好ましくはルシフェラーゼを発現するトランスジェニック植物を使用するためのルシフェリンを含む植物料理；および飲料、例えばビール、ワイン、シャンパン、ソフトドリンク、および角氷ならびに他の形態の氷；液体「花火」および液剤、混合物、懸濁液、粉剤、ペースト剤、粒剤または他の適当な形の組成物の他のかかる噴射剤、スプレー剤またはエアゾル剤を含む噴水器が挙げられる。
【誤訳訂正６８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４７５】
ルシフェラーゼおよび蛍光蛋白は、蛋白標識および転写レポーターとして、数多くの良く開発され且つ貴重な用途を持っている；BRETは、これらの適用の感度および範囲を増大させる可能性を持っている。GFPは、量子収量を上げることにより、ルシフェラーゼレポーターの感度を増大させる。幾つかのスペクトル上別個のGFPに融合させた単一のルシフェラーゼは、単一のルシフェリンの添加により活性化された多数のルシフェラーゼレポーターの同時使用を可能にする。同一のルシフェラーゼに融合させた異なる放射波長を有するGFPをそれぞれ含有する、2種の融合蛋白を製造することにより、2またはそれ以上のレポーターを、単一の基質の添加と共に使用することができる。したがって、単一の試薬の添加を用いて、多数の事象を監視、または多数の検定を実行することができる。ルシフェリンの分布が均一または再生産可能であるならば、このようなレポーター系は、自己供給性である。
【誤訳訂正６９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０４９１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０４９１】
実施例１
Ｉ．毒物学
１．コエレンテラジンの溶解性
コエレンテラジンは非刺激性媒体に溶ける。コエレンテラジンは約０．８％（ｗ／ｖ）ＮａＣｌを含む２％（ｗ／ｖ）ＰＥＧ４００の溶液に少なくとも２００マイクログラム／ｍＬの濃度まで可溶である。この溶液はわずかに高張であるが、媒体を目的とする場合には刺激性ではない。
２．コエレンテラジンの毒物学
【誤訳訂正７０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５１５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５１５】
単一のアンピシリン抵抗性コロニーは１００μｇ／ｍｌアンピシリン補填ＬＢ培地にて、細胞増殖が中間対数期に達するまで、連続的な振盪により外気温にて増殖させた（すなわち、細胞培養がＯＤ６００ｎｍ＝０．６〜０．８単位に達する）。ｌａｃプロモーターからの転写を１ｍＭのＩＰＴＧ添加により誘発し、細胞培養物をさらに８時間、外気温にて振盪した。
【誤訳訂正７１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５４４】
１）ｐBluescript ＳＫ−（ｒ）におけるレニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ（４１４７ｂｐ）
ｌａｃＺ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼコーディングドメイン配列（ＣＤＳ）融合体を、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ−（ｒ）（ストラタジーン）へクローン化した。このよく知られた市販ベクターは、特に細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（アンピシリン）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、Ｔ３プライマー配列、Ｔ３ ２０量体配列、ＮＩＨオリゴ０４９５配列、Ｔ３プロモーター、ＳＫプライマー配列、Ｔ７プロモーター、ＫＳプライマー配列、Ｔ７プライマー配列、Ｔ７ ２２量体配列、ＮＩＨオリゴ０４３６配列、ファージ−プラスミドＰＣＲ１配列、ファージ−プラスミドＰＣＲ２配列、ファージ−プラスミドＰＣＲ２（ｂ）配列および様々な制限クローニング部位を含む。ｌａｃＺ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ融合タンパク質の発現は、ｌａｃＺプロモーターの制御下にある。
【誤訳訂正７２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５４５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５４５】
２）ｐBluescript ＳＫにおけるレニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ（４１４７ｂｐ）
ｌａｃＺ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼコーディングドメイン配列（ＣＤＳ）融合体を、特に細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（アンピシリン）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、Ｔ３プライマー配列、Ｔ３プロモーター、ＳＫプライマー配列、Ｔ７プロモーター、ＫＳプライマー配列、Ｔ７プライマー配列および様々な制限クローニング部位を含むｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＳＫ−（ｒ）（ストラタジーン）へクローン化した。ｌａｃＺ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ融合タンパク質の発現は、ｌａｃＺ−プロモーターの制御下にある。
【誤訳訂正７３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５４７】
１）ｐｃＤＮＡ３.１（＋）におけるレニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ（６１２２ｂｐ）
レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ ＣＤＳを、特に細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ａｍｐ）、哺乳類選択マーカー（Ｎｅｏ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ウイルス性複製起点（ＳＶ４０起点）および様々な制限クローニング部位を含む、ｐｃＤＮＡ３.１（＋）（インビトロゲン、サンディエゴ）へクローン化した。レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰの発現は、ＣＭＶプロモーターの制御下にある。
【誤訳訂正７４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５４８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５４８】
２）ｐｃＤＮＡ３.１（＋）におけるレニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ（６３４１ｂｐ）
レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ａｍｐ）、哺乳類選択マーカー（Ｎｅｏ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ウイルス性複製起点（ＳＶ４０起点）および様々な制限クローニング部位を含むｐｃＤＮＡ３.１（＋）（インビトロゲン、サンディエゴ）へクローン化した。レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼの発現は、ＣＭＶプロモーターに制御されている。
【誤訳訂正７５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５０】
１）ｐＹＥＳ２におけるレニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ（６５４７ｂｐ）
レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ ＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ａｍｐ）、酵母複製起点（２ミクロン起点）、酵母選択マーカー（ＵＲＡ３）、ファージ複製起点（ｆ１起点）および様々な制限クローニング部位を含む酵母発現プラスミドｐＹＥＳ２（インビトロゲン、サンディエゴ）にクローン化した。レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰの発現は、酵母ＧＡＬ１の制御下に置かれている。このベクターは、サッカロマイシス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）細胞での発現用に設計されている。
【誤訳訂正７６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５１】
２）ｐＹＥＳ２におけるレニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ（６７６６ｂｐ）
レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ａｍｐ）、酵母複製起点（２ミクロン起点）、酵母選択マーカー（ＵＲＡ３）、ファージ複製起点（ｆ１起点）および様々な制限クローニング部位を含む、ｐＹＥＳ２（インビトロゲン）にクローン化した。レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼの発現は、酵母ＧＡＬ１の制御下に置かれている。
【誤訳訂正７７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５３】
１）ｐＥＴ−３４における天然プティロサルクス（Ptilosarcus）ＧＦＰ ＣＤＳ（６０１４ｂｐ）
プティロサルクス（Ptilosarcus）ＧＦＰ ＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、リボソーム結合配列（ｒｂｓ）、ＬＩＣ（連結反応非依存的クローニング）部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーターおよび様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。プティロサルクス（Ptilosarcus）ＧＦＰの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正７８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５４】
２）ｐＥＴ−３４における天然レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ（６０１４ｂｐ）
レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ ＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーターおよび様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正７９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５５】
３）ｐＥＴ−３４における天然ガウシア（Gaussia）ルシフェラーゼ（５８５５ｂｐ）
ガウシア（Gaussia）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーターおよび様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。ガウシア（Gaussia）ルシフェラーゼの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５６】
４）ｐＥＴ−３４における天然プレウロマンマ（Pleuromamma）ルシフェラーゼ（５８９４ｂｐ）
プレウロマンマ（Pleuromamma）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーターおよび様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。プレウロマンマ（Pleuromamma）ルシフェラーゼの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５７】
５）ｐＥＴ−３４における天然レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ（６２３３ｂｐ）
レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーターおよび様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５５９】
１）ｐＥＴ−３４におけるＣＢＤ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼ（６８２４ｂｐ）
ＣＢＤ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーター、トロンビン開裂部位、リボヌクレアーゼ−Ｓ−ペプチド標識（Ｓ標識）ＣＤＳ配列、ＥＫ開裂部位および様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。ＣＢＤ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ルシフェラーゼの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６０】
２）ｐＥＴ−３４におけるＣＢＤ−ガウシア（Gaussia）ルシフェラーゼ（６４４６ｂｐ）
ＣＢＤ−ガウシア（Gaussia）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーター、トロンビン開裂部位、Ｓ標識ＣＤＳ配列、ＥＫ開裂部位および様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。ＣＢＤ−ガウシア（Gaussia）ルシフェラーゼの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６１】
３）ｐＥＴ−３４におけるＣＢＤ−プレウロマンマ（Pleuromamma）ルシフェラーゼ（６４８５ｂｐ）
ＣＢＤ−プレウロマンマ（Pleuromamma）ルシフェラーゼＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ配列、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーター、トロンビン開裂部位、Ｓ標識ＣＤＳ配列、ＥＫ開裂部位および様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。ＣＢＤ−プレウロマンマ（Pleuromamma）ルシフェラーゼの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６２】
４）ｐＥＴ−３４におけるＣＢＤ−プティロサルクス（Ptilosarcus）ＧＦＰ（６６０５ｂｐ）
ＣＢＤ−プティロサルクス（Ptilosarcus）ＧＦＰ ＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ配列、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーター、トロンビン開裂部位、Ｓ標識ＣＤＳ配列、ＥＫ開裂部位および様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。ＣＢＤ−プティロサルクス（Ptilosarcus）ＧＦＰの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。
【誤訳訂正８６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０５６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０５６３】
５）ｐＥＴ−３４におけるＣＢＤ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ（６６０５ｂｐ）
ＣＢＤ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰ ＣＤＳを、特に、細菌性複製起点（ＣｏｌＥ１起点）、細菌性選択マーカー（Ｋａｎ）、ファージ複製起点（ｆ１起点）、ｌａｃＩ配列、Ｔ７プロモーター、ｌａｃオペレーター、ｒｂｓ配列、ＬＩＣ部位、３'ＬＩＣオーバーラップ配列、Ｈｉｓ標識ＣＤＳ、Ｈｉｓ標識配列、Ｔ７ターミネーター、トロンビン開裂部位、Ｓ標識ＣＤＳ配列、ＥＫ開裂部位および様々な制限クローニング部位を含むｐＥＴ−３４（ノヴァゲン）にクローン化した。ＣＢＤ−レニラ・ムレリ（Renilla mulleri）ＧＦＰの発現は、ｌａｃオペレーターおよびＴ７プロモーターの同時制御下にあり、ＩＰＴＧにより誘導され得る。