【手続補正書】
【提出日】平成18年10月10日(2006.10.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  配列番号２の天然グリコシル化ヒトレプチン（ｒＨｕ−レプチン１〜１４５）のものより大きいストークス半径を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項２】  ゲル濾過によって測定して、３０Å以上のストークス半径を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項３】  グリコシル化レプチン蛋白調製物であって、該製造物中の各グリコシル化レプチン蛋白分子が５以上のシアル酸部分を有するグリコシル化レプチン蛋白調製物。
【請求項４】  前記調製物中の各グリコシル化レプチン蛋白分子が８〜２０のシアル酸残基を有する請求項３に記載のグリコシル化レプチン蛋白調製物。
【請求項５】  １以上の別のグリコシル化部位を有するよう変更された配列番号１または２のヒトレプチンを含むグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項６】  下記のもの（「Ｔ／Ｓ」はトレオニンまたはセリンを示す）
（ａ）０１Ｖ→Ｎ  ０２Ｐ→Ｘ（Ｘはプロリン以外のアミノ酸である）  ０３Ｉ→Ｔ／Ｓ
（ｂ）０２Ｐ→Ｎ  ０３Ｉ  ０４Ｑ→Ｔ／Ｓ
（ｃ）２３Ｄ→Ｎ  ２４Ｉ  ２５Ｓ→Ｔ／Ｓ
（ｄ）４７Ｐ→Ｎ  ４８Ｉ  ４９Ｌ→Ｔ／Ｓ
（ｅ）４８Ｉ→Ｎ  ４９Ｌ  ５０Ｔ／Ｓ
（ｆ）６９Ｐ→Ｎ  ７０Ｓ  ７１Ｒ→Ｔ／Ｓ
（ｇ）９２Ｆ→Ｎ  ９３Ｓ  ９４Ｋ→Ｔ／Ｓ
（ｈ）１０１Ａ→Ｎ  １０２Ｓ  １０３Ｇ→Ｔ／Ｓ
（ｉ）１０２Ｓ→Ｎ  １０３Ｇ  １０４Ｌ→Ｔ／Ｓ
（ｊ）１０３Ｇ→Ｎ  １０４Ｌ  １０５Ｅ→Ｔ／Ｓ
から選択されるグリコシル化部位として１以上の配列変化を有する配列番号１を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項７】  （配列番号１の番号割り付けに関して）４、８、２３、４４、４７、４８、６９、７０、９２、９３、９７、１００、１０１、１０２、１０３、１１８および１４１から選択される位置にグリコシル化部位を有する配列番号１のアミノ酸１〜１４６を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項８】  ２つのグリコシル化部位を有し、その２つの部位が（配列番号１の番号割り付けに関して）
４７＋６９、
４８＋６９、
６９＋１０１、
６９＋１０２、
６９＋１０３、
６９＋１１８および
１００＋１０２
から選択されるものである配列番号１のアミノ酸１〜１４６を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項９】  ３つのグリコシル化部位を有し、その３つの部位が（配列番号１の番号割り付けに関して）
２＋４７＋６９、
２３＋４７＋６９、
４７＋６９＋１００、
４７＋６９＋１０２、
４８＋６９＋１１８、
６９＋１０２＋１１８および
６９＋１０３＋１１８
から選択されるものである配列番号１のアミノ酸１〜１４６を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項１０】  ４つのグリコシル化部位を有し、その４つの部位が（配列番号１の番号割り付けに関して）
２＋４７＋６９＋９２、
２＋４７＋６９＋１０２、
２３＋４７＋６９＋９２、
２３＋４７＋６９＋１０２および
４７＋６９＋１００＋１０２
から選択されるものである配列番号１のアミノ酸１〜１４６を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項１１】  ５つのグリコシル化部位を有し、その５つの部位が（配列番号１の番号割り付けに関して）
２＋２３＋４７＋６９＋９２、
２＋４７＋６９＋９２＋１０２、
２３＋４７＋６９＋９２＋１０２
から選択されるものである配列番号１のアミノ酸１〜１４６を有するグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項１２】  下記のアミノ酸配列（配列番号２６）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９。
【化１】
2002536018.tif 000001
【請求項１３】  下記のアミノ酸配列（配列番号２８）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９、９２。
【化２】
2002536018.tif 000002
【請求項１４】  下記のアミノ酸配列（配列番号３０）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９、１０２。
【化３】
2002536018.tif 000003
【請求項１５】  下記のアミノ酸配列（配列番号３２）を有するグリコシル化レプチン４７、６９、１０２。
【化４】
2002536018.tif 000004
【請求項１６】  下記のアミノ酸配列（配列番号３４）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９、９２、１０２。
【化５】
2002536018.tif 000005
【請求項１７】  下記のアミノ酸配列（配列番号３６）を有するグリコシル化レプチン４７、６９、９２、１０２。
【化６】
2002536018.tif 000006
【請求項１８】
−１位がセリン、アルギニン、プロリンまたはアラニン残基、
−１位がセリンおよび−２位がプロリン、
−１、−２および−３位がセリン−プロリン−セリン配列、
−１位がセリンおよび−２位がアルギニン、
−１位がセリン、−２位がアルギニンおよび−３位がセリン、
−１位がアルギニンおよび−２位がセリン、ならびに
−１位がアラニンおよび−２位がプロリン
から選択されるＮ−末端残基配列を有する請求項１ないし６のいずれかに記載のグリコシル化レプチン蛋白。
【請求項１９】  請求項１ないし６のいずれかに記載のグリコシル化レプチン蛋白をコードする核酸。
【請求項２０】  下記の核酸配列（配列番号２５）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９をコードする核酸。
【化７】
2002536018.tif 000007
【請求項２１】  下記の核酸配列（配列番号２７）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９、９２をコードする核酸。
【化８】
2002536018.tif 000008
【請求項２２】  下記の核酸配列（配列番号２９）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９、１０２をコードする核酸。
【化９】
2002536018.tif 000009
【請求項２３】  下記の核酸配列（配列番号３１）を有するグリコシル化レプチン４７、６９、１０２をコードする核酸。
【化１０】
2002536018.tif 000010
【請求項２４】  下記の核酸配列（配列番号３３）を有するグリコシル化レプチン２、４７、６９、１０２をコードする核酸。
【化１１】
2002536018.tif 000011
【請求項２５】  下記の核酸配列（配列番号３５）を有するグリコシル化レプチン４７、６９、９２、１０２をコードする核酸。
【化１２】
2002536018.tif 000012
【請求項２６】  請求項１９ないし２５のいずれかに記載のグリコシル化レプチン蛋白をコードする核酸を含むベクター。
【請求項２７】  発現ベクターである請求項２６に記載のベクター。
【請求項２８】  請求項１ないし６のいずれかに記載のグリコシル化レプチン蛋白をコードする核酸を含む宿主細胞。
【請求項２９】  原核細胞および真核細胞から選択される請求項２８に記載の宿主細胞。
【請求項３０】  細菌細胞である請求項２９に記載の原核宿主細胞。
【請求項３１】  哺乳動物細胞、酵母細胞および昆虫細胞から選択される請求項２９に記載の真核宿主細胞。
【請求項３２】  ヒト細胞、サル細胞、ＢＨＫ細胞およびＣＨＯ細胞から選択される請求項３１に記載の哺乳動物宿主細胞。
【請求項３３】
（ａ）発現に好適な条件下に前記グリコシル化レプチン蛋白をコードする核酸を含む細胞を培養する段階、ならびに
（ｂ）前記蛋白を得る段階を有してなる請求項１ないし６のいずれかに記載の蛋白の製造方法。
【請求項３４】  非経口注射、静脈注射、皮下注射、硬膜内投与、経鼻投与、肺投与および浸透圧ポンプ投与用の医薬組成物であって、医薬的に許容される担体中に請求項１ないし１８のいずれかに記載のグリコシル化蛋白を含む医薬組成物。
【請求項３５】  肥満、糖尿病および高血中脂質含有量効果から選択される状態に関してヒトを治療するための医薬組成物であって、
治療上有効量の請求項１ないし６のいずれかに記載のグリコシル化ヒトレプチンを含む、前記組成物。
【請求項３６】  肥満、糖尿病および高血中脂質含有量効果から選択される状態に関してヒトを、治療上有効量のグリコシル化ヒトレプチンを用いて治療するための医薬組成物であって、請求項１９ないし２５のいずれかに記載の核酸を含む、前記組成物。
【請求項３７】  請求項１ないし６のいずれかに記載のグリコシル化レプチン蛋白に対して選択的である選択的結合分子。
【請求項３８】  ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体および組換え抗体から選択される請求項３７に記載の選択的結合分子。
【請求項３９】  グリコシル化レプチン蛋白の製造方法において、
（ａ）発現に好適な条件下に、５’から３’の方向で（ｉ）信号ペプチドおよび（ｉｉ）グリコシル化レプチン蛋白をコードするＤＮＡをコードするＤＮＡ配列を有する宿主細胞を培養する段階、ならびに
（ｂ）前記グリコシル化レプチン蛋白を取得する段階
を有することを特徴とする方法。
【請求項４０】  前記信号ペプチドが
【化１３】
2002536018.tif 000013
から選択される請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】  前記信号ペプチドがエリトロポイエチン、因子ＶＩＩＩ、β−インターフェロン、血清アルブミン、インシュリン、フォンウィルブラント因子、ＣＤ１１α、ＩｇＧ、フォリスタチン、固有因子、Ｇ−ＣＳＦ、セルロプラスミンおよびＬＡＭＰ−１から選択される請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】  グリコシル化蛋白の改良された製造方法であって、
（ａ）発現およびグリコシル化に好適な条件下に、５’から３’の方向で（ｉ）信号ペプチドおよび（ｉｉ）グリコシル化蛋白をコードするＤＮＡをコードするＤＮＡ配列を有する宿主細胞を培養する段階、ならびに
（ｂ）前記グリコシル化蛋白を取得する段階を有し、
前記改良が、グリコシル化効率について至適化されたペプチダーゼ開裂部位を有する信号ペプチドの使用を含む方法。
【請求項４３】  前記ペプチダーゼ開裂部位がＳＰＳ、ＳＰ、ＳＮＳおよびＳＰＡから選択される請求項４２の改良された方法。
【請求項４４】  前駆配列の使用が含まれていても良い請求項３９または４２に記載の方法。
【請求項４５】  非天然ペプチダーゼ開裂部位を有する信号ペプチドをコードする核酸。
【請求項４６】  非天然ペプチダーゼ開裂部位を有する信号ペプチドをコードする核酸を含むベクター。
【請求項４７】  発現ベクターである請求項４６に記載のベクター。
【請求項４８】  非天然ペプチダーゼ開裂部位を有する信号ペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞。
【請求項４９】  原核細胞および真核細胞から選択される請求項４８に記載の宿主細胞。
【請求項５０】  細菌細胞である請求項４９の原核宿主細胞。
【請求項５１】  哺乳動物細胞、酵母細胞および昆虫細胞から選択される請求項４９に記載の真核宿主細胞。
【請求項５２】  ヒト細胞、サル細胞、ＢＨＫ細胞およびＣＨＯ細胞から選択される請求項５１に記載の哺乳動物宿主細胞。