【手続補正書】
【提出日】平成18年2月23日(2006.2.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有する第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチドまたはそのフラグメントをコードする単離ポリヌクレオチドであって、該ポリペプチドまたはそのフラグメントがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】  配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有する第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチドをコードする、請求項１記載の単離ポリヌクレオチドであって、該ポリペプチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項３】  該ポリヌクレオチドが、第２のポリペプチドと少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドをコードする、請求項１または２記載のポリヌクレオチド。
【請求項４】  配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有するポリペプチドまたはそのフラグメントに結合特性を有する抗体を産生できる、第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、該ポリペプチドまたはそのフラグメントが、グループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項５】  配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有するポリペプチドに結合特性を有する抗体を産生できる、第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有するポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドであって、該ポリペプチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリヌクレオチド。
【請求項６】  請求項１または２のポリヌクレオチドに相補的である、単離ポリヌクレオチド。
【請求項７】  請求項４または５のポリヌクレオチドに相補的である、単離ポリヌクレオチド。
【請求項８】  該ポリヌクレオチドがDNAである、請求項１または２記載のポリヌクレオチド。
【請求項９】  該ポリヌクレオチドがDNAである、請求項４または５記載のポリヌクレオチド。
【請求項１０】  該ポリヌクレオチドがRNAである、請求項１または２記載のポリヌクレオチド。
【請求項１１】  該ポリヌクレオチドがRNAである、請求項４または５記載のポリヌクレオチド。
【請求項１２】  配列番号３７、配列番号４２および配列番号４３からなる群から選択される配列を有する第２のポリヌクレオチドまたはそのフラグメントと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドが第２のポリヌクレオチドと少なくとも７０％の同一性を有し、かつ該ポリヌクレオチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持するポリペプチドまたはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１３】  配列番号３７、配列番号４２および配列番号４３からなる群から選択される配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドが第２のポリヌクレオチドと少なくとも７０％の同一性を有し、かつ該ポリヌクレオチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持するポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１４】  配列番号３７、配列番号４２および配列番号４３からなる群から選択される配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリヌクレオチドであって、該ポリヌクレオチドが第２のポリヌクレオチドと少なくとも９５％の同一性を有し、かつ該ポリヌクレオチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持するポリペプチドまたはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド。
【請求項１５】  配列番号３７の配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、請求項１４記載のポリヌクレオチド。
【請求項１６】  配列番号４２の配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、請求項１４記載のポリヌクレオチド。
【請求項１７】  配列番号４３の配列を有する第２のポリヌクレオチドと、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする、請求項１４記載のポリヌクレオチド。
【請求項１８】  該ポリヌクレオチドが、第２のポリヌクレオチドに少なくとも９５％の相補性を有する、請求項１２記載のポリヌクレオチド。
【請求項１９】  請求項１または２記載のポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドが発現制御領域に操作可能に結合している、ベクター。
【請求項２０】  請求項４または５記載のポリヌクレオチドを含み、該ポリヌクレオチドが発現制御領域に操作可能に結合している、ベクター。
【請求項２１】  請求項１９記載のベクターでトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項２２】  請求項２０記載のベクターでトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項２３】  請求項２１記載の宿主細胞を、該ポリペプチドの発現に適当な条件下で培養することを含む、ポリペプチドの産生法。
【請求項２４】  請求項２２記載の宿主細胞を、該ポリペプチドの発現に適当な条件下で培養することを含む、ポリペプチドの産生法。
【請求項２５】  配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有する第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有する単離ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、該ポリペプチドまたはそのフラグメントがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリペプチド。
【請求項２６】  配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有する第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有する単離ポリヌクレオチドであって、該ポリペプチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリペプチド。
【請求項２７】  配列番号３９に記載の配列を有する、請求項２５または２６記載の単離ポリペプチド。
【請求項２８】  配列番号４４に記載の配列を有する、請求項２５または２６記載の単離ポリペプチド。
【請求項２９】  第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有し、かつ配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有するポリペプチドまたはそのフラグメントに結合特性を有する抗体を産生できる単離ポリペプチドであって、該ポリペプチドまたはそのフラグメントがグループＢ連鎖球菌に対して免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリペプチド。
【請求項３０】  第２のポリペプチドと少なくとも７０％の同一性を有し、かつ配列番号３９および配列番号４４からなる群から選択される配列を有するポリペプチドに結合特性を有する抗体を産生できる単離ポリペプチドであって、該ポリペプチドがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリペプチド。
【請求項３１】  配列番号３９に記載の配列を有する、請求項２９または３０記載の単離ポリペプチド。
【請求項３２】  配列番号４４に記載の配列を有する、請求項２９または３０記載の単離ポリペプチド。
【請求項３３】  配列番号３９またはそのフラグメントからなる群から選択されるアミノ酸配列を有する単離ポリペプチドであって、該ポリペプチドまたはそのフラグメントがグループＢ連鎖球菌に特異的な免疫応答を誘発する能力を保持する、単離ポリペプチド。
【請求項３４】  Ｎ−末端Met残基が除かれている、請求項３３記載の単離ポリペプチド。
【請求項３５】  分泌性アミノ酸配列が除かれている、請求項３３記載の単離ポリペプチド。
【請求項３６】  請求項２５から３３のいずれかに記載のポリペプチドと薬学的に許容される担体、希釈剤またはアジュバントを含む、ワクチン組成物。
【請求項３７】  請求項３４に記載のポリペプチドと薬学的に許容される担体、希釈剤またはアジュバントを含む、ワクチン組成物。
【請求項３８】  請求項３５に記載のポリペプチドと薬学的に許容される担体、希釈剤またはアジュバントを含む、ワクチン組成物。
【請求項３９】  グループＢ連鎖球菌感染に罹病性である動物のグループＢ連鎖球菌細菌感染の治療的または予防的処置用ワクチンの製造のための請求項２５から３３のいずれかに記載のポリペプチドの使用。
【請求項４０】  グループＢ連鎖球菌感染に罹病性である動物のグループＢ連鎖球菌細菌感染の治療的または予防的処置用ワクチンの製造のための請求項３４記載のポリペプチドの使用。
【請求項４１】  グループＢ連鎖球菌感染に罹病性である動物のグループＢ連鎖球菌細菌感染の治療的または予防的処置用ワクチンの製造のための請求項３５記載のポリペプチドの使用。
【請求項４２】  動物がウシである、請求項３９から４１のいずれかに記載の使用。
【請求項４３】  動物がヒトである、請求項３９から４１のいずれかに記載の使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本発明の“フラグメント”、“誘導体”または“アナログ”なる用語は、またポリペプチドが免疫応答を誘発する能力を保持する限り、アミノ酸の付加、欠失、置換により修飾されたポリペプチドを含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３２】
適当なアジュバントは、油、即ち、フロインド完全または不完全アジュバント；塩、即ちAlK(SO４)２、AlNa(SO４)２、AlNH4(SO４)２、Al(OH)３、AlPO４、シリカ、カオリン；サポニン誘導体、炭素ポリヌクレオチド、即ち、ポリICおよびポリＡＵおよびまた粘膜免疫性の誘発のための無毒化コレラ毒素(CTB)およびE. coli加熱不安定毒素を含む。好ましいアジュバントは、QuilA(登録商標)、Alhydrogel(登録商標)およびAjduphos(登録商標)を含む。本発明のワクチンは、注射、急速点滴、鼻咽腔吸収、皮膚吸収により非経腸的に、またはバッカルまたは経口で投与し得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
両方の群の残りの６匹のマウスを次いで１週間後に使用して、この抗原性調製物が、血清学的に異なるカプセルを産生する株HCS246(II/R)に対する交差防御を付与するかを確かめた。この第２GBS株で感染したマウスで生存したものはなかった。後者の結果は、ホルムアルデヒド死滅株C388/90により誘発された保護的免疫応答のほとんどが本カプセル状ポリサッカライドに対するものであり、特定の抗原型の株に限定されることを示す。これらの結果は、感染の特定のモデルが、ワクチン化により付与される保護の実験に効率的に使用できることを示す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
この特定のウサギ高度免疫血清の、GBS致死感染に対する受動保護の能力をまた評価した。マウスへの１５または２５μLの高度免疫ウサギ血清の攻撃１８時間前の腹腔注射は、感染に対し５匹中４匹(８０％)のマウスを攻撃から保護した。比較して、PBSまたは髄膜炎菌外膜調製物で免疫化したウサギ由来の血清を注射したマウスで、２０％以下の生存率が記録された。この結果は、他の動物種の死滅GBS細胞での免疫化が、マウスを受動的に保護できる抗体の産生を誘発できることを明らかに示す。この試薬はまたクローンの特徴づけにも使用する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８０】
ELISA力価の増加を、融合タンパク質の各注射後に記録し、各第２回および第３回投与後に特異的な体液性免疫応答の良好な初期応答および追加免疫が示された。免疫化期間の最後に、相互的ELISA力価は、E. coli内の可溶性フラクションから得たタンパク質で免疫化したマウスの群の２９０,１３３と比較して、封入体から得た２０μgの融合タンパク質に関して４５６,１４５であった。後者の結果は、封入体から得たタンパク質が、可溶性タンパク質よりも免疫原性であることを示す。プレートをコートするために親和性精製チオレドキシン−Hisタグを使用したELISAにおけるマウス血清の分析は、無視できる抗体力価が、融合タンパク質のチオレドキシン−Hisタグ部分に対して産生されることを示した。組換え誘導タンパク質を注射したマウスからの血清の反応性をまたGBS株C388/90のホルムアルデヒド死滅全細胞に対するELISAにより試験した。組換え誘導タンパク質での免疫化により誘発した抗体はまたGBS細胞上のその特異的エピトープを認識し、その立体配置が交差反応性抗体を誘発するために天然連鎖球菌タンパク質と十分近いことを示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
免疫化により誘発された免疫応答が、GBS感染に対して保護するかを確認するために、マウスを３.５×１０５cfuのGBS株C338/90(Ia/c)および１.２×１０５cfuの株NSC345(II/R)で攻撃し、その結果を表３および４に各々記載する。コントロールチオレドキシン−Hisタグで免疫化したマウスは、いずれのGBS株の攻撃に対しても保護されなかったが、ホルムアルデヒド死滅C388/90全細胞での免疫化は、同種攻撃に対してのみ保護を提供した。本発明のチオレドキシン−Hisタグ−GBS誘導タンパク質は両方のGBS株の攻撃からマウスを保護した。これらのマウスの血液および脾臓培養はGBSの存在を示さなかった。