【手続補正書】
【提出日】平成17年7月28日(2005.7.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  野生型では遺伝性感覚障害に関連したポリペプチドをコードする突然変異化配列に対応するヌクレオチドの鎖を有する精製ポリヌクレオチドであって、前記突然変異化精製ポリヌクレオチドが少なくとも１つのヌクレオチドの特異的欠失から成る群から選択される言語習得前非症候性難聴に関与する突然変異を表し、前記特異的欠失が染色体13q11 〜12のコネキシン２６をコードする領域に位置する精製ポリヌクレオチド。
【請求項２】  特異的欠失がヌクレオチド２７で、好ましくはヌクレオチド３０で開始してヌクレオチド３２またはヌクレオチド３５に延びる（位置１は開始コドンの最初の塩基である）富グアノシン領域に位置する請求項１に記載の精製ポリヌクレオチド。
【請求項３】  特異的欠失ポリヌクレオチドが切頭型ポリペプチドをコードする請求項１〜２のいずれか１項に記載の精製ポリヌクレオチド。
【請求項４】  特異的欠失が位置３０でのグアノシン欠失である請求項１または２に記載の精製ポリヌクレオチド。
【請求項５】  特異的欠失が位置３０で開始する38bp欠失である請求項１または２に記載の精製ポリヌクレオチド。
【請求項６】  緊縮条件下で請求項１〜５のいずれかのポリヌクレオチドとハイブリダイズする精製ポリヌクレオチド。
【請求項７】  請求項６のポリヌクレオチドの１５〜５０連続ヌクレオチドから成るプライマーとしてまたはプローブとして有用なオリゴヌクレオチド。
【請求項８】  以下の配列：
5'-TCTTTTCCAGAGCAAACCGCC（配列番号：１）-3'
5'-TGAGCACGGGTTGCCTCATC （配列番号：２）-3'
から成る請求項７の一対のオリゴヌクレオチド。
【請求項９】  5'-AGACGATCCTGGGGGTGTGAACAAA（配列番号：５）-3'
5'-ATCCTGGGGGTGTGA（配列番号：６）-3'
5'-AGACGATCCTGGGGGCTCACCGTCCTC（配列番号：７）-3'
から成る群から選択される配列を有する請求項７のオリゴヌクレオチド。
【請求項１０】  5'-CTAGTGATTCCTGTGTTGTGTGC（配列番号：９）-3'
5'-ATAATGCGAAAAATGAAGAGGA （配列番号：１０）-3'
である請求項７記載の一対のオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】  5'-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCCTAGTGATTCCTGTGTTGTGTGC（配列番号：１４）-3'
5'- ATAATGCGAAAAATGAAGAGGA（配列番号：１０）-3'
である請求項７記載の一対のオリゴヌクレオチド。
【請求項１２】  DNA を含有する生物試料における同型接合および異型接合個体に関する遺伝的感覚障害、即ち常染色体性言語習得前非症候性難聴の検出のための方法であって、
ａ）生物試料を請求項８〜１１のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドプライマーと接触させて、試料中に含入されるDNA が、ハイブリダイゼーションのために、そして生物試料中に含有されるDNA とのプライマーのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、任意に利用可能にされ；
ｂ）DNA を増幅し；
ｃ）増幅生成物を明示し；そして
ｄ）適切な方法により突然変異を検出する；
工程を含んで成る方法。
【請求項１３】  工程ｄ）において、以下の技法：
−一本鎖高次構造多型（SSCP）、または
−変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（DGGE）、または
−シーケンシング、または
−温度勾配ゲル電気泳動（TGGE）
のうちの１つにより突然変異が検出される請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】  工程ｃ）が、請求項８、９または１０のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドプローブを用いた増幅生成物の検出を包含する請求項１２または１３に記載の方法。
【請求項１５】  ＤＮＡを含有する生物試料における同型接合および異型接合個体に関する遺伝的感覚障害、即ち常染色体性言語習得前非症候性難聴の検出のための方法であって、
ａ）生物試料を請求項７〜１１のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチドプローブと接触させ、試料中に含入されるＤＮＡは、任意にハイブリダイゼーションに利用可能にしておき、プライマーのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で、DNA は生物試料中に含入される；そして、
ｂ）オリゴヌクレオチドプローブと生物試料中に含入されるDNA との間に形成されるハイブリッドを検出する；
工程を含んで成る方法。
【請求項１６】  工程ａ）の前に、生物試料中に含有されるDNA が一対のプライマーを用いて増幅される請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】  工程ｄ）が：
ａ）正常Cx26配列および30delG突然変異体配列の両方とハイブリダイズする標識検出プローブ、および前記正常Cx26配列とハイブリダイズするが前記３０ｄｅｌＧ突然変異体配列とはハイブリダイズしない一次捕捉プローブとともに増幅生成物をインキュベートし；
ｂ）前記標識化検出プローブ、および前記30delG突然変異体配列とハイブリダイズするが前記正常Ｃｘ２６配列とはハイブリダイズしない二次捕捉プローブとともに増幅生成物をインキュベートし；
ｃ）前記検出プローブと、ならびに前記一次または二次捕捉プローブと増幅生成物をハイブリダイズし；そして
ｄ）前記一次捕捉プローブから得られるハイブリダイゼーションシグナルを前記二次捕捉プローブから得られるハイブリダイゼーションシグナルと比較する；
工程をさらに含んで成る請求項１２〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】  工程ａ）において、生物試料を請求項１２記載のオリゴヌクレオチドプライマー対と接触させる請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】  前記一次捕捉プローブが 5'-AAAAAAAATCCTGGGGGGTGTG（配列番号：１１）-3' であり、前記二次捕捉プローブが 5'-AAAAAAAATCCTGGGGGTGTGA（配列番号：１２）-3' である請求項１７または１８に記載の方法。
【請求項２０】  前記検出プローブが 5'-CAGCATTGGAAAGATCTGGCTCA （配列番号：１３）-3' である請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】  前記検出プローブが非放射性標識される請求項１７〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】  前記検出プローブがビオチンで標識される請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】  前記一次および二次捕捉プローブがマイクロプレートに結合される請求項１７〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】  工程ａ）において、生物試料を請求項１２のオリゴヌクレオチドプライマー対と接触させる請求項１２に記載の方法。
【請求項２５】  工程ｂ）と工程ｃ）の間に、
既知の正常同型接合Cx26試料からの一次ヌクレオチド配列または既知の突然変異体Cx26試料からの二次ヌクレオチド配列とともに増幅ＤＮＡをインキュベートし；そして
増幅DNA を前記一次ヌクレオチド配列または前記二次ヌクレオチド配列とハイブリダイズさせる工程をさらに含んで成る請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】  工程ｄ）が正常同型接合Cx26個体からのDNA と突然変異体同型接合Cx26個体からのDNA を区別するためにハイブリダイズしたDNA を分析することを包含する請求項２４または２５に記載の方法。
【請求項２７】  同型接合および異型接合個体に関する遺伝的感覚障害、即ち常染色体性言語習得前非症候性難聴の検出のためのキットであって、
ａ）請求項７、８、９、１０または１１のいずれか１項に記載のオリゴヌクレオチド；
ｂ）ＤＮＡ増幅の実行に必要な試薬；および
ｃ）増幅断片の長さの確定を可能にし、または突然変異の検出を可能にする構成成分；
を含んで成るキット。
【請求項２８】  同型接合又は異型接合個体における常染色体性言語習得前非症候性難聴に関連した突然変異の検出方法であって、個体の染色体13q11−12のコネキシン26をコードする領域における配列番号１又は配列番号２のヌクレオチド27−35内の突然変異を、前記個体からのDNA含有生物試料において検出することを含んで成る方法。
【請求項２９】  前記突然変異が、欠失である請求項28記載の方法。
【請求項３０】  染色体13q11−12のコネキシン26をコードする領域における配列番号１又は配列番号２のヌクレオチド27−35内の突然変異に関連する常染色体性言語習得前非症候性難聴の不在を、同型接合又は異型接合個体において検出するための方法であって、個体の染色体13q11−12のコネキシン26をコードする領域における配列番号１又は配列番号２のヌクレオチド27−35内の突然変異の存在を、前記個体からのDNA含有生物試料において検出することを含んで成る方法。
【請求項３１】  前記突然変異が、欠失である請求項30記載の方法。
【請求項３２】  ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在の検出方法であって、
ａ）ヒトからのDNA含有生物試料と、コネキシン26遺伝子における興味ある領域を増幅できる1対のオリゴヌクレオチドプライマーとを、前記生物試料に含まれるDNAと、前記１対のオリゴヌクレオチドプライマーとのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触させ；
ｂ）前記コネキシン26遺伝子における前記興味ある領域を増幅し、それにより、増幅されたDNAを生成し；そして
ｃ）前記増幅されたDNAにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在を検出し、それにより、ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在を検出することを含んで成る方法。
【請求項３３】  工程ｃ）において、コネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在が、一本鎖高次構造多型（SSCP）、変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（DGGE）、又はシーケンシングにより検出される請求項32記載の方法。
【請求項３４】  工程ｃ）において、コネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在が、
（ｉ）コネキシン26遺伝子の突然変異を含むヌクレオチド配列を含んで成る第２ポリヌクレオチドと、緊縮条件下でハイブリダイズする、第１ポリヌクレオチドの15〜50個の連続ヌクレオチドから成るオリゴヌクレオチド、ここで前記突然変異はコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失であり；
（ii）次の配列：
5’-TCTTTTCCAGAGCAAACCGCC-3’（配列番号１）；
5’-TGAGCACGGGTTGCCTCATC-3’（配列番号２）：
を有する１対のオリゴヌクレオチド；及び
（iii）下記配列：
5’-AGACGATCCTGGGGGTGTGAACAAA-3’（配列番号５）；
5’-ATCCTGGGGGTGTGA-3’（配列番号６）；及び
5’-AGACGATCCTGGGGGCTCACCGTCCTC-3’（配列番号７）
から成る群から選択されたオリゴヌクレオチド；から成る群から選択されたオリゴヌクレオチドにより検出される請求項32記載の方法。
【請求項３５】  ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在の検出方法であって、
ａ）ヒトからのDNA含有生物の試料と、
（ｉ）コネキシン26遺伝子の突然変異を含むヌクレオチド配列を含んで成る第２ポリヌクレオチドと、緊縮条件下でハイブリダイズする、第１ポリヌクレオチドの15〜50個の連続ヌクレオチドから成るオリゴヌクレオチド、ここで前記突然変異はコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失であり；
（ii）次の配列：
5’-TCTTTTCCAGAGCAAACCGCC-3’（配列番号１）；
5’-TGAGCACGGGTTGCCTCATC-3’（配列番号２）：
を有する１対のオリゴヌクレオチド；及び
（iii）下記配列：
5’-AGACGATCCTGGGGGTGTGAACAAA-3’（配列番号５）；
5’-ATCCTGGGGGTGTGA-3’（配列番号６）；及び
5’-AGACGATCCTGGGGGCTCACCGTCCTC-3’（配列番号７）
から成る群から選択されたオリゴヌクレオチド；から成る群から選択されたオリゴヌクレオチドとを、前記生物試料に含まれるDNAと、前記オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触し；そして
ｂ）DNA含有試料におけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在を検出し、それにより、ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在を検出することを含んで成る方法。
【請求項３６】  工程ａ）の前に、前記生物試料に含まれるDNAが１対のプライマーを用いて増幅される請求項32記載の方法。
【請求項３７】  工程ａ）の前に、前記生物試料に含まれるDNAが１対のプライマーを用いて増幅される請求項35記載の方法。
【請求項３８】  工程ｃ）が、
ｄ）野生型コネキシン26配列及び30delG変異体配列の両者とハイブリダイズする標識検出プローブ、及び前記野生型コネキシン26配列とハイブリダイズするが、しかし前記30delG変異体配列とはハイブリダイズしない一次捕捉プローブと共に、前記増幅されたDNAをインキュベートし；
ｅ）前記標識検出プローブ、及び前記変異体30delG配列とハイブリダイズするが、しかし前記野生型コネキシン26配列とはハイブリダイズしない二次捕捉プローブと共に、前記増幅されたDNAをインキュベートし；そして
ｆ）ハイブリダイゼーションを検出することを含んで成り；ここで前記増幅されたDNAが前記二次捕捉プローブとハイブリダイズする場合、コネキシン遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在がヒトにおいて検出され、そして前記増幅されたDNAが前記一次捕捉プローブとハイブリダイズする場合、コネキシン遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在がヒトにおいて検出される請求項32記載の方法。
【請求項３９】  工程a)において、前記生物試料が、下記配列：
5’-CTAGTGATTCCTGTGTTGTGTGC-3’（配列番号９）；及び
5’-ATAATGCGAAAAATGAAGAGGA-3’（配列番号10）
をそれぞれ含んで成る１対のオリゴヌクレオチドプライマーと接触せしめられる請求項38記載の方法。
【請求項４０】  前記一次捕捉プローブが、
5’-AAAAAAAATCCTGGGGGGTGTG-3’（配列番号11）であり、そして
前記二次捕捉プローブが、
5’-AAAAAAAATCCTGGGGGTGTGA-3’（配列番号12）である請求項39記載の方法。
【請求項４１】  前記検出プローブが、
5’-CAGCATTGGAAAGATCTGGCTCA-3’（配列番号13）である請求項40記載の方法。
【請求項４２】  前記検出プローブが、非放射性標識される請求項41記載の方法。
【請求項４３】  前記検出プローブが、ビオチンにより標識される請求項42記載の方法。
【請求項４４】  前記一次及び二次捕捉プローブが、マイクロプレートに結合される請求項38記載の方法。
【請求項４５】  工程ｃ）において、コネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在又は不在が、温度勾配ゲル電気泳動（TGGE）により検出される請求項32記載の方法。
【請求項４６】  工程a)において、前記生物試料が、下記配列：
5’-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCCCTAGTGATTCCTGTGTTGTGTGC-3’（配列番号14）；及び
5’-ATAATGCGAAAAATGAAGAGGA-3’（配列番号10）
をそれぞれ含んで成る１対のオリゴヌクレオチドプライマーと接触せしめられる請求項45記載の方法。
【請求項４７】  工程ｃ）が、
ｄ）既知の正常同型接合コネキシン26試料と共に、前記増幅されたDNAを、ハイブリダイゼーションを可能にする条件下でインキュベートし；
ｅ）既知の30delG変異体同型接合コネキシン26試料と共に、前記増幅されたDNAを、ハイブリダイゼーションを可能にする条件下でインキュベートし；そして
ｆ）増幅されたDNAと既知試料との間での異型重複体を検出することを含んで成り、ここで増幅されたDNAが正常同型コネキシン26遺伝子を含む試料に由来する場合、それは既知の30delG変異体同型接合試料と共に異型重複体を形成し、それによりコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の不在を検出し、そして増幅されたDNAが、30delG突然変異に対して同型接合性であるコネキシン26遺伝子を含む試料に由来する場合、それは、既知の正常同型接合試料と異型重複体を形成し、それによりコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在を検出する請求項32記載の方法。
【請求項４８】  前記1対のオリゴヌクレオチドプライマーが、それぞれ、下記配列：
5’- TCTTTTCCAGAGCAAACCGCC−3’（配列番号１）；及び
5’- TGAGCACGGGTTGCCTCATC -3’（配列番号２）
を含んで成る請求項32記載の方法。
【請求項４９】  ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在に関連する難聴の検出方法であって、
ａ）ヒトからのDNA含有生物試料と、コネキシン26遺伝子における興味ある領域を増幅できる1対のオリゴヌクレオチドプライマーとを、前記生物試料に含まれるDNAと、前記１対のオリゴヌクレオチドプライマーとのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触させ；
ｂ）前記コネキシン26遺伝子における前記興味ある領域を増幅し、それにより、増幅されたDNAを生成し；
ｃ）野生型コネキシン26配列及び30delG変異体配列の両者とハイブリダイズする標識検出プローブ、及び前記野生型コネキシン26配列とハイブリダイズするが、しかし前記30delG配列とはハイブリダイズしない一次捕捉プローブと共に、前記増幅されたDNAをインキュベートし；
ｄ）前記標識検出プローブ、及び前記変異体30delG配列とハイブリダイズするが、しかし前記野生型コネキシン26配列とはハイブリダイズしない二次捕捉プローブと共に、前記増幅されたDNAをインキュベートし；
ｅ）一次捕捉プローブとの検出プローブのハイブリダイゼーションからの第１シグナル、及び二次捕捉プローブとの検出プローブのハイブリダイゼーションからの第２シグナルを検出し；そして
ｆ）第１シグナル第シグナルとの間の比率を計算し、ここで少なくとも２の比率は、生物試料が正常コネキシン26遺伝子に対して同型接合性であるDNAを含むことを示し、0.5以下の比率は、生物試料がコネキシン26遺伝子の30delG配列に対して同型接合性であるDNAを含むことを示し、そして0.5〜2.0の比率は、生物試料がコネキシン26遺伝子の30delG配列に対して異型接合性であるDNAを含むことを示し；
ここで正常コネキシン26遺伝子に対して同型接合性か又は異型接合性のDNAが、ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在に関連する難聴の不在を示し、そしてコネキシン26遺伝子の30delG配列に対して同型接合性のDNAが、ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在に関連する難聴の診断を示すことを特徴とする方法。
【請求項５０】  ヒトからのDNA含有生物試料におけるコネキシン26遺伝における、ヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失を含んで成る突然変異の存在又は不在の検出方法であって、
ａ）コネキシン26遺伝子のヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失を含むヌクレオチド配列を含んで成る第２の精製されたポリヌクレオチドと、緊縮条件下で特異的にハイブリダイズし、そして野生型コネキシン26遺伝子とはハイブリダイズしない第１の精製されたポリヌクレオチドの１〜50個の連続ヌクレオチドから成るオリゴヌクレオチドと、前記生物試料とを、生物試料に含まれるDNAとプライマーとのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触せしめ；
ｂ）前記DNAを増幅し；
ｃ）前記増幅生成物を検出し；そして
ｄ）適切な技法により、前記増幅生成物における突然変異の存在又は不在を検出することを含んで成る方法。
【請求項５１】  工程ｄ）において、以下の技法：
一本鎖高次構造多型（SSCP）；又は
変性剤濃度勾配ゲル電気泳動（DGGE）；又は
シーケンシング；又は
濃度勾配ゲル電気泳動（TGGE）
のうちの１つにより突然変異が検出される請求項12記載の方法。
【請求項５２】  コネキシン26遺伝子におけるヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失の存在又は不在の検出方法であって、
ａ）コネキシン26遺伝子のヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失を含むヌクレオチド配列を含んで成る第２の精製されたポリヌクレオチドと、緊縮条件下で特異的にハイブリダイズし、そして野生型コネキシン26遺伝子とはハイブリダイズしない第１の精製されたポリヌクレオチドの１〜50個の連続ヌクレオチドから成るオリゴヌクレオチドと、ヒトからのDNA含有生物試料とを、生物試料に含まれるDNAとオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触せしめ；そして
ｂ）前記オリゴヌクレオチドと、生物試料に含まれるDNAとの間で形成されるハイブリッドの存在又は不在を検出し、それにより、ヒトのコネキシン26遺伝子におけるヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失のそれぞれの存在又は不在を示すことを特徴とする方法。
【請求項５３】  工程ａ）の前、前記生物試料に含まれるDNAが、１対のプライマーを用いて増幅される請求項50記載の方法。
【請求項５４】  コネキシン26遺伝子のヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失の存在に関連する、ヒトにおける難聴の診断方法であって、
ａ）コネキシン26遺伝子のヌクレオチド30〜32のヌクレオチドの欠失を含むヌクレオチド配列を含んで成る第２の精製されたポリヌクレオチドと、緊縮条件下で特異的にハイブリダイズし、そして野生型コネキシン26遺伝子とはハイブリダイズしない第１の精製されたポリヌクレオチドの１〜50個の連続ヌクレオチドから成るオリゴヌクレオチドと、ヒトからのDNA含有生物試料とを、生物試料に含まれるDNAとオリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションを可能にする条件下で接触せしめ；
ｂ）前記DNAを増幅し；
ｃ）前記増幅生成物を検出し；
ｄ）正常コネキシン26配列及び30delG変異体配列の両者とハイブリダイズする、標識された検出プローブ、及び前記正常コネキシン26配列とハイブリダイズするが、しかし前記30delGの変異体配列とはハイブリダイズしない一次捕捉プローブと共に、前記増幅生成物を、ハイブリダイゼーションのための条件下でインキュベートし；
ｅ）前記標識された検出プローブ、及び前記変異体30delG配列とハイブリダイズするが、しかし前記正常コネキシン26配列とはハイブリダイズしない二次捕捉プローブと共に、前記増幅生成物を、ハイブリダイゼーションのための条件下でインキュベートし；そして
ｆ）前記一次捕捉プローブから得られるハイブリダイゼーションシグナルと、前記二次捕捉プローブから得られるハイブリダイゼーションシグナルとを比較し、ここで少なくとも２の比率は、生物試料が正常コネキシン26遺伝子に対して同型接合性であるDNAを含むことを示し、0.5以下の比率は、生物試料がコネキシン26遺伝子の30delG配列に対して同型接合性であるDNAを含むことを示し、そして0.5〜2.0の比率は、生物試料がコネキシン26遺伝子の30delG配列に対して異型接合性であるDNAを含むことを示し；
ここで正常コネキシン26遺伝子に対して同型接合性か又は異型接合性のDNAが、ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在に関連する難聴の不在を示し、そしてコネキシン26遺伝子の30delG配列に対して同型接合性のDNAが、ヒトにおけるコネキシン26遺伝子の位置30でのグアノシンの欠失の存在に関連する難聴の診断を示すことを特徴とする方法。
【請求項５５】  前記検出プローブが、非放射性標識される請求項41記載の方法。
【請求項５６】  前記検出プローブが、ビオチンにより標識される請求項55記載の方法。
【請求項５７】  前記一次及び二次捕捉プローブが、マイクロプレートに結合される請求項54記載の方法。