【手続補正書】
【提出日】平成17年6月21日(2005.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料を調製する方法であって、以下の工程を含む方法：
哺乳類から筋肉組織試料を得る工程；
試料をホモジナイズし、これによりホモジネートを作製する工程；
ホモジネートと、ホモジネート中のPrPScと結合する複合体形成剤とを接触させ、PrPScまたは複合体形成剤のいずれか単独の比重と比較してより高い比重を有する複合体を形成させる工程；および
重力の適用により複合体を濃縮する工程。
【請求項２】
試料が、筋肉が得られた哺乳類における任意の他の筋肉と比較してより高濃度のプリオンを有する筋肉から得られる、請求項1記載の方法。
【請求項３】
筋肉組織試料がウシの後肢筋から得られ、重力による濃縮が遠心分離により増強される、請求項1記載の方法。
【請求項４】
複合体形成剤が、ヘテロポリ酸およびその塩から選択される、請求項1記載の方法。
【請求項５】
複合体形成剤が、リンタングステン酸ナトリウムである、請求項1記載の方法。
【請求項６】
筋肉内のPrPScの存在を決定する方法であって、以下の工程を含む方法：
筋肉組織が摘出された哺乳類種における他の筋肉組織よりも高い濃度のプリオンを含む筋肉組織から摘出された、ホモジナイズされた（ヒト、ウシ、シカ、およびヒツジから選択される哺乳類から摘出された）筋肉組織と、PrPScと結合する複合体形成剤とを接触させ、PrPScの比重と比較してより高い比重を有する複合体を形成させる工程；
遠心分離に由来する力を使用して、濃縮試料中の複合体を濃縮する工程；ならびに
濃縮試料を分析してPrPScの存在を決定する工程。
【請求項７】
以下の工程を含む、アッセイ法：
第一の高次構造および第二の疾患関連高次構造を呈するPrPタンパク質を含むことが疑われる筋肉組織試料を提供する工程；
試料中に存在するプリオンを濃縮する様式で試料を濃縮し、これにより濃縮試料を提供する工程；
濃縮試料を、第一の部分および第二の部分に分ける工程；
第二の疾患関連高次構造をとるPrPタンパク質に結合するよりも高い親和性で第一の高次構造をとるPrPタンパク質に結合する標識抗体と、第一の部分を接触させる工程；
第二の疾患関連高次構造をとる任意のPrPタンパク質が、（第二の疾患関連高次構造をとるPrPタンパク質に対する親和性と比較して、標識抗体に対してより高度の親和性を有する）異なる高次構造を呈することを引き起こす様式で、第二の部分を処理する工程；
第二の部分と、標識抗体とを接触させる工程；
標識抗体の、第一の部分中のPrPタンパク質への結合レベルを決定する工程；
標識抗体の、第二の部分中のPrPタンパク質への結合レベルを決定する工程；ならびに
第一の部分中のPrPタンパク質への標識抗体の結合レベルと第二の部分中のレベルとを比較し、これにより筋肉試料が疾患に関連した第二の高次構造をとるPrPタンパク質を含むかどうかを判定する工程
を含むアッセイ法。
【請求項８】
筋肉組織試料がウシの後肢筋から得られ、かつ濃縮工程が試料と複合体形成剤とを接触させる工程および試料を遠心分離に供する工程を含む、請求項7記載の方法。
【請求項９】
標識抗体のPrPタンパク質への結合レベルが、時間分解型かつ解離増強型の蛍光を用いて決定される、請求項7記載の方法。
【請求項１０】
以下の工程を含むアッセイ法：
第一の高次構造および第二の疾患関連高次構造を呈するPrPタンパク質を含むことが疑われる筋肉組織試料を提供する工程；
試料を、試料中に存在するプリオンを濃縮する様式で濃縮し、これにより濃縮試料を提供する工程；
第二の疾患関連高次構造をとるPrPタンパク質が、その高次構造を、標識抗体の第二の疾患関連高次構造への結合レベルよりも、標識抗体への結合親和性がより高い異なる高次構造へ変更させるのを引き起こすような様式で、濃縮試料を処理する工程；
第二の疾患関連高次構造をとるPrPタンパク質への結合よりも高い親和性で第一の高次構造および異なる高次構造をとるPrPタンパク質に結合する標識抗体と、濃縮され処理試料とを接触させる工程；
標識抗体の試料中の、PrPタンパク質への結合レベルを決定する工程；
試料中の標識された結合レベルと、以前に確立された、処理された標準物質への結合標準レベルとを比較する工程であって、処理前に処理された標準物質が、(i)第一の高次構造および(ii)第二の疾患関連高次構造をとるPrPタンパク質を既知量含んでいる工程；ならびに
上記比較を基に、筋肉試料が第二の疾患関連高次構造をとるPrPタンパク質を含有する可能性を決定する工程。
【請求項１１】
筋肉組織試料がウシの後肢筋から得られ、かつ標識抗体のPrPタンパク質への結合レベルが、フローサイトメトリーを用いて決定される、請求項10記載の方法。
【請求項１２】
標準が、正常な罹患していない個体に由来する同等の筋肉試料中のPrPタンパク質レベルの先の測定から得られる、請求項10記載の方法。
【請求項１３】
標準が、第二の疾患関連高次構造関連疾患を有すると診断された個体に由来する、同等の筋肉試料中のPrPタンパク質レベルの以前の測定値から得られる、請求項10記載の方法。
【請求項１４】
筋肉組織試料と、PrPタンパク質に結合する複合体形成剤とを接触させる工程；
試料中のPrPタンパク質が複合体形成剤に結合して、PrPタンパク質単独または複合体形成剤単独のいずれかの密度を上回る密度を有する複合体を生成するような期間および条件下で、複合体形成剤と筋肉試料とを接触させ続ける工程；
試料を、複合体形成剤に結合したPrPタンパク質の複合体を分離するのに十分な速度および期間で遠心分離し、試料濃縮物を提供する工程
を含む方法。
【請求項１５】
複合体のPrPタンパク質を分析して特徴を決定する工程
をさらに含む、請求項14記載の方法。
【請求項１６】
特徴が、溶解度、三次元構造、および感染性からなる群より選択される、請求項15記載の方法。
【請求項１７】
PrPタンパク質の特徴と、筋肉が摘出された動物と同じ動物の脳組織から摘出されたPrPタンパク質の疾患高次構造の同じ特徴とを比較する工程
をさらに含む、請求項16記載の方法。
【請求項１８】
濃縮試料の第一の部分と、第一の高次構造に対して第二の病原性高次構造に対するよりも高い親和性を有する結合パートナーとを接触させ、第一の部分における結合パートナー／タンパク質複合体の第一の濃度を決定する工程；
試料濃縮物の第二の部分を処理し、結合パートナーに対する第二の高次構造のタンパク質の結合親和性を増大させる工程；
処理試料の第二の部分と結合パートナーとを接触させ、第二の処理した部分における結合パートナー／タンパク質複合体の第二の濃度を決定する工程；
第二の濃度を調節し、処理から得られる結合パートナーに対する、第一の高次構造をとるタンパク質の増大した親和性を調整補正する、調節された濃度を提供する工程；ならびに
第一の濃度と調節された濃度とを比較し、第二の病原性高次構造をとるタンパク質の存在を決定する工程
をさらに含む、請求項14記載の方法。
【請求項１９】
第一の濃度および第二の濃度が、時間分解型かつ解離増強型の蛍光を用いて決定され、
タンパク質の第二の病原性高次構造が、1×103粒子/mlまたはそれ未満の濃度で試料中に存在し、かつ
第二の病原性高次構造をとる任意のタンパク質の少なくとも2％を、結合パートナーに対する結合親和性が増大した高次構造へ転換するのに十分な、熱、圧力、および化学変性からなる群より選択される処理を用いて、試料の第二の部分が処理される、
請求項18記載の方法。
【請求項２０】
試料濃縮物を処理して、タンパク質の第二の高次構造を、第二の高次構造よりも結合パートナーに対する親和性が高い結合高次構造へと転換する工程；
処理試料と結合パートナーとを接触させ、試料中の結合パートナー／タンパク質複合体の濃度を決定する工程；
濃度を調節し、タンパク質の第一の高次構造の、処理に起因する結合パートナーに対する増大した親和性を補正する調節された濃度を提供する工程；ならびに
調節された濃度と、対照濃度および予め決定された標準濃度からなる群より選択される既知の濃度とを比較し、試料中の第二の高次構造をとるタンパク質の存在を決定する工程
をさらに含む、請求項14記載の方法。
【請求項２１】
結合パートナーが標識抗体を含み、複合体形成剤がリンタングステン酸の金属塩を含み、かつ濃度がフローサイトメトリーを用いて決定される、請求項20記載の方法。
【請求項２２】
調節された濃度が、処理された非感染対照試料から決定された既知の濃度と比較される、請求項20記載の方法。
【請求項２３】
調節された濃度が、ヒト、ウシ、およびヒツジからなる群より選択される哺乳類の非感染集団由来の処理試料に由来から決定された既知の濃度と比較される、請求項20記載の方法。