【手続補正書】
【提出日】平成18年10月27日(2006.10.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
一つの態様において、非ＣｐＧ治療は、インターフェロンアルファを含む。関連する態様において、インターフェロンアルファは、インターフェロンアルファ−２ｂ、インターフェロン−アルファ−２ａまたはコンセンサスインターフェロンアルファである。別の態様において、非ＣｐＧ治療は、インターフェロンアルファおよびリバビリン、またはインターフェロンアルファおよびリバビリンおよびアマンタジンを含む。いくつかの重要な態様において、非ＣｐＧ治療は、ペグ化インターフェロンアルファおよびリバビリンなどの抗ウィルス薬を含む。
一つの態様において、ＣｐＧ免疫刺激性核酸は、ＡクラスＣｐＧ免疫刺激性核酸である。別の態様において、ＣｐＧ免疫刺激性核酸は、ＢクラスＣｐＧ免疫刺激性核酸である。
さらなる態様において、ＣｐＧ免疫刺激性核酸は、ＣクラスＣｐＧ免疫刺激性核酸である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１８】
さらに別の側面において、本発明は、慢性のＣ型肝炎ウィルス感染の処置に有用なＣｐＧ免疫刺激性核酸をスクリーニングする方法を提供する。本方法は、慢性のＣ型肝炎ウィルス感染を有する対象からの末梢血単核細胞を、ＣｐＧ免疫刺激性核酸に接触させること、および曝露後の前記血液単核細胞の試験反応を測定することを伴う。採取する末梢血単核細胞の対象は治療を使用した処置に成功しなかった。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
健康なヒトのＰＢＭＣを刺激するのに有効であることが見出された少なくとも３つの基本的なクラスのＣｐＧ  ＯＤＮがある（表２）。これらは、ＣｐＧ  ＯＤＮが免疫細胞を刺激することが可能なできる異なる方法に関連しそうな差動区別できる効果を有する。
ＢクラスのＣｐＧ  ＯＤＮは、ヌクレアーゼ耐性チオリン酸ホスホロチオエート骨格と共に合成され、一般的に良好なＢ細胞およびＤＣの活性化を特徴とし、ＩＬ−１２および抗体の産生へと至らしめるが、限られたＮＫ細胞の活性化は限定的でしかないのみである。ＣｐＧ（このクラスの一員）（配列番号：２）を市販の肝炎Ｂワクチンに対する補助剤アジュバントとして、市販の肝炎Ｂワクチンに試験する第Ｉ／ＩＩ相臨床試験において既に実証されているように、このクラスのＯＤＮは、ワクチン補助剤アジュバントとして良好に機能する（６０）。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
表２：３つの異なるクラスのＣｐＧ  ＯＤＮにより誘導されたin vitro免疫活性化のパターン
【表２】
2006515277.tif 000001
１Ｓ−ＯＤＮは、チオリン酸ホスホロチオエート骨格から作られる。
２ＳＯＳ−ＯＤＮは、キメラ骨格から作られ、ここで中心ＣｐＧ含有の領域は、ホスホジエステル連鎖を有し、ＯＤＮの３’および５’末端は、チオリン酸ホスホロチオエート連鎖から作られる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
一般的にこのドメインは、少なくとも３つのＣおよびＧを有し、より好ましくはそれぞれ４つ、および最も好ましくは、それぞれ５または６以上である。このドメインにおけるＣおよびＧの数は、同一である必要はない。ＣおよびＧは、自己相補的二重らせん、またはＣＣＧＣＧＣＧＧなどのパリンドロームを形成することができるよう、配置列されるのが好ましい。これは、ＡまたはＴにより中断されてもよいが、好ましい自己相補性は、少なくとも部分的に例えばモチーフＣＧＡＣＧＴＴＣＧＴＣＧ（配列番号：２７）またはＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ（配列番号：２８）として保たれる。相補性が保たれないとき、非相補的塩基対は、ＴＧが好ましい。好ましい態様において、パリンドロームの一部ではない３つ以内の連続した塩基があり、好ましくは２つ以内、およびもっとの好ましくはたった１つである。いくつかの態様において、ＧＣ含量が高いパリンドロームは、少なくとも１つのＣＧＧ三量体、少なくとも１つのＣＣＧ三量体、または少なくとも１つのＣＧＣＧ四量体を含む。他の態様において、ＧＣ含量が高いパリンドロームは、ＣＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧＧ（配列番号：２９）またはＧＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣＣ（配列番号：３０）、ＣＣＣＣＣＧＧＧＧＧ（配列番号：３１）またはＧＧＧＧＧＣＣＣＣＣ（配列番号：３２）ではない。
ＧＣ含量が高い領域のＧの少なくとも１つは、イノシン（I）で置換してもよい。いくつかの態様において、Ｐは、Ｉを２つ以上含む。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
セミソフトなオリゴヌクレオチドの前述の特性は一般的に、内部ＹＺジヌクレオチドを伴うホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド連鎖の「用量」の増加に伴って増加すると信じられている。したがって、例えば、一般的に、５つの内部ＹＺジヌクレオチドを有するあるオリゴヌクレオチド配列について、５つの内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖を有するオリゴヌクレオチドは、４つの内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖を有するオリゴヌクレオチドよりも免疫刺激性があり、同様に、３つの内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖を有するオリゴヌクレオチドよりも免疫刺激性があり、同様に、２つの内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖を有するオリゴヌクレオチドよりも免疫刺激性があり、同様に、１つの内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖を有するオリゴヌクレオチドよりも免疫刺激性があると信じられている。重要なことに、１つの内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖の含有でさえも、内部ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ＹＺインターヌクレオチド連鎖が無いより有利であると信じられている。ホスホジエステルまたはホスホジエステル様インターヌクレオチド連鎖の数に加えて、核酸全長での位置もまた、効力に影響を与え得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２３】
ヌクレオチドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋は、デホスホ架橋によって置換することができ（デホスホ架橋は、例えば、Uhlmann E and Peyman A in "Methods in Molecular Biology", Vol. 20, "Protocols for Oligonucleotide and Analogs", S. Agrawal、Ed., Humana Press, Totowa 1993, Chapter 16, pp. 355 ffに記載がある）、ここで、デホスホ架橋は、例えばデホスホ架橋ホルムアセタール、３’−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム、メチレンジメチル−ヒドラゾ、ジメチレンスルホンおよび／またはシリル基から選択される。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８０】
実験で使用したＯＤＮを以下の表に示す：
表３：実験で使用したオリゴの配列
【表４】
2006515277.tif 000002
＊オリゴヌクレオチド骨格内でチオリン酸ホスホロチオエート結合を置き換えるホスホジエステル結合を、（−）により示す
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８９】
これらのＯＤＳのソフトおよびセミソフトの変化交代の効果もまた、分析した。分子の中心領域に１列のホスホジエステル結合を有するソフトな分子を合成した。ＣｐＧモチーフのシトシンおよびグアニンヌクレオチド間にある１または２以上の個々のホスホジエステル結合を有するセミソフトな分子を合成した。ソフト（図３）およびセミソフト（図４）なＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮの両方は、最初のＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮと同様の方法で、正常なまたはＨＣＶのＰＢＭＣからのＩＦＮ−α分泌を刺激することができた。いくつかのセミソフトなＣクラスＣｐＧ  ＯＤＮは、普通のＣクラスＣｐＧ配列番号４よりもさらに強力だった（図４）。これは、分子は、最大の免疫刺激を有するのにまだ十分に安定であり、ＣｐＧモチーフの中心のホスホジエステルは、その活性を増加させるからであろう。