【手続補正書】
【提出日】平成18年2月16日(2006.2.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2005523282.tif 000001
の４−（４−メチルピペラジン−１−イルメチル）−Ｎ−［４−メチル−３−（４−ピリジン−３−イル）ピリミジン−２−イルアミノ）フェニル］−ベンズアミド（化合物Ｉ）、またはその医薬的に許容される塩を有効成分とする、精上皮腫(seminoma)処置剤。
【請求項２】
精上皮腫が、化合物Ｉに感受性のあるｃ−Ｋｉｔ変異と関連するものである、請求項１に記載の精上皮腫処置剤。
【請求項３】
精上皮腫が、ｃ−Ｋｉｔチロシンキナーゼ中のＹ８２３Ｄ、Ｎ８２２Ｋ、またはＤ８１６Ｈ変異と関連するものである、請求項１に記載の精上皮腫処置剤。
【請求項４】
化合物Ｉがモノメタンスルホン酸塩である、請求項１〜３のいずれかに記載の精上皮腫処置剤。
【請求項５】
１日用量２００から６００ｍｇを成人に投与するものである、請求項４に記載の精上皮腫処置剤。
【請求項６】
３ヶ月を超える期間１日１回ヒト対象に投与するものである、請求項１〜５のいずれかに記載の精上皮腫処置剤。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００２】
精巣の生殖細胞性腫瘍は、北米男性の悪性腫瘍の１％から２％しか占めない、希な新生物である。しかしながらそれは、２０〜３４歳の男性で最も一般的な悪性腫瘍であり、そして疫学研究は過去３０年間で発生率が倍増していることを示した。生殖細胞性腫瘍のうち約４５％が精上皮腫であり、患者の大部分が臨床上ステージＩの疾病である。患者のうち１５％から２０％のみが、横隔膜下リンパ節への転移（ステージＩＩの疾病）を有し、そして５％未満の患者が、遠位転移性疾病となる。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
ステージＩの精上皮腫（腫瘍が精巣に限られ、かつリンパ管造影図が陰性である）のための標準的処置は、精巣摘除術の後、傍大動脈および骨盤のリンパ節の同側照射を含む。ステージＩＩの精上皮腫（腫瘍が横隔膜下のリンパ節に広がっている）の処置は、関連部位へ広げた照射処置を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
本発明は特に、化合物Ｉに感受性のあるｃ−Ｋｉｔ変異と関連する精上皮腫を処置するための医薬品の製造のための化合物Ｉの使用に関する。
本発明はとりわけ、ｃ−Ｋｉｔチロシンキナーゼ中のＹ８２３Ｄ、Ｎ８２２Ｋ、またはＤ８１６Ｈ変異と関連する精上皮腫を処置するための医薬品の製造のための、化合物Ｉの使用に関する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
用語「化合物Ｉ感受性のＫｉｔ変異と関連する精上皮腫」によって、本発明者は、生殖細胞性腫瘍が１以上の変異を有するｃ−Ｋｉｔ（このｃ−Ｋｉｔ変異は、化合物Ｉによるチロシンキナーゼ活性の阻害に、試験管内で、約１０ｎＭから５０μＭ、好ましくは１０ｎＭから１０μＭ、最も好ましくは１０ｎＭから１μＭのＩＣ５０で感受性である）を含有する精上皮腫を示す。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
用語「ｃ−Ｋｉｔチロシンキナーゼ中のＹ８２３Ｄ、Ｎ８２２Ｋ、および／またはＤ８１６Ｈ変異と関連する精上皮腫」によって、本発明者は、次の変異Ｙ８２３Ｄ、Ｎ８２２Ｋ、またはＤ８１６Ｈのうち１つ以上を有するヒトｃ−Ｋｉｔチロシンキナーゼを含有する、精上皮腫を示す。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１５】
本明細書で用いられる用語「処置」は、治療的処置および予防的処置を意味している。
本明細書で用いられる用語「治療」は、精上皮腫の進行中の症状を処置するのに有効であることを意味している。
用語「予防」は、精上皮腫の発病または再発を防ぐことを意味している。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
本発明は、精上皮腫を有するヒト対象に、化合物Ｉまたはその医薬的に許容される塩を投与する方法にも関し、これは、医薬的有効量の化合物Ｉまたはその医薬的に許容される塩をヒト対象に投与することを含む。好ましくは、３ヶ月を超えて、１日１回投与される。本発明は、１日用量の化合物Ｉのメシル酸塩２００から６００ｍｇ、特に４００から６００ｍｇ、好ましくは４００ｍｇが投与される、方法に特に関する。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
Ｋｉｔプロトオンコジーンは、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦＲ）、単球コロニー刺激因子受容体（ｃ−ｆｍｓ）、およびｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）と密接に関連する、１４５ｋＤの膜貫通型チロシンキナーゼ（ＴＫ）をコード化する。これは、造血幹細胞、肥満細胞、メラノサイト、カハールの間質細胞、上皮内リンパ球、および生殖細胞で発現される。天然に存在するＫｉｔ欠損症のマウスモデルの研究により、Ｋｉｔが、子宮内での生殖細胞の生存に必要であることが示された。出生後、Ｋｉｔは、ライジヒ細胞、精原細胞、および円形精子細胞により発現される。精上皮腫および精細管内生殖細胞新生物（intratubular germ cell neoplasia）（ＩＴＧＣＮ）は、たいてい膜結合Ｋｉｔを発現する（免疫組織化学により示される）。対照的に、非精上皮腫の生殖細胞性腫瘍（ＧＣＴ）の少数のみが、細胞質Ｋｉｔを発現するが、膜Ｋｉｔを発現しない。混合型ＧＣＴにおいて、膜Ｋｉｔ発現は精上皮腫成分に限られる。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
混合型卵巣未分化胚細胞腫／卵黄嚢腫瘍の場合、変異は両腫瘍成分で検出された。しかしながら、膜Ｋｉｔの免疫反応性は、未分化胚細胞腫成分に限られ、卵黄嚢成分では、細胞質Ｋｉｔの弱い染色のみであった。該結果は、変異、または自己分泌／傍分泌Ｋｉｔ活性がＩＴＧＣＮおよび精上皮腫／未分化胚細胞腫の発生で働くが、該細胞での正常Ｋｉｔシグナルのダウンレギュレーションまたは低下が、非精上皮腫ＧＣＴへの進行と関連することを示した。
ゆえに、本発明者は、精上皮腫腫瘍と関連する、構造的に活性化されたＫｉｔキナーゼアイソフォームの阻害における化合物Ｉの有効性を研究することを決意した。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
ゲノムＤＮＡのＰＣＲは、次に挙げるプライマー対（５’−３’表記）を用いて、既に記載されている通り（Rader A et al.）行われた：エクソン９Ｆ  ＡＴＧＣＴＣＴＧＣＴＴＣＴＧＴＡＣＴＧＣＣ；エクソン９Ｒ  ＡＧＡＧＣＣＴＡＡＡＣＡＴＣＣＣＣＴＴＡ；エクソン１１Ｆ  ＣＣＡＧＡＧＴＧＣＴＣＴＡＡＴＧＡＣＴＧ；エクソン１１Ｒ  ＡＣＣＣＡＡＡＡＡＧＧＴＧＡＣＡＴＧＧＡ；エクソン１３Ｆ  ＣＡＴＣＡＧＴＴＴＧＣＣＡＧＴＴＧＴＧＣ；エクソン１３Ｒ  ＡＣＡＣＧＧＣＴＴＴＡＣＣＴＣＣＡＡＴＧ；エクソン１７Ｆ  ＴＧＴＡＴＴＣＡＣＡＧＡＧＡＣＴＴＧＧＣ；エクソン１７Ｒ  ＧＧＡＴＴＴＡＣＡＴＴＡＴＧＡＡＡＧＴＣＡＣＡＧＧ。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２８】
試験管内研究：変異型Ｋｉｔ  ｃＤＮＡコード化プラスミドは、野生型ｃＤＮＡの部位特異的変異誘発により生成された。全変異は、双方向の配列決定により確認された。ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞株は、American Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）から入手され、Bold G等（［公開された誤植は、J Med Chem 2000 Aug 10;43(16):3200で明らかである］Journal of Medicinal Chemistry 2000;  43:2310-2323）により既に記載された方法で維持された。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
細胞は、製造元のプロトコールに従い、リポフェクタミンプラス（Invitrogen Life Technologies）を用いて、野生型または変異型Ｋｉｔタンパク質のｃＤＮＡコード化プラスミドで、一過性にトランスフェクションされた。トランスフェクションの２４時間後、該細胞は、対照培地、または色々な濃度の化合物Ｉのメシル酸塩含有培地で、９０分間処理された。続いて、該細胞が回収され、タンパク質可溶化物が調製され、既に記載の通りに（Lux ML, et al.）Ｋｉｔ活性について解析された。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
結果
実施例１：純粋な精上皮腫でのＫｉｔ変異の範囲および頻度
精上皮腫で生じるＫｉｔ変異のタイプおよび頻度をさらに調べるために、我々は４３個の保管ケースを分析した。全腫瘍が純粋な精上皮腫であった；重度のリンパ球浸潤を有する場合、レーザーキャプチャー顕微解剖を行い、腫瘍ＤＮＡを富化させた。ＰＣＲ増幅を、変性ＨＰＬＣ（Transgenomic WAVE system）によりスクリーニングし、そして検出した変異を直接的ＤＮＡ配列決定により確認した。Ｄ８１６Ｈ変異のある場合を含む場合のいくつかが、エクソン１７にインフレームの点変異を含有していた。興味深いことに、変異の大部分はＤ８１６Ｖであったが、Ｎ８２２ＫおよびＹ８２３Ｄの例も見出された（概要についての表を参照）。Ｄ８１６Ｖ、Ｎ８２２Ｋ、およびＹ８２３Ｄ変異が、精上皮腫で明らかにされたことは無かった。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
化合物Ｉのメシル酸塩が、精上皮腫腫瘍と関係するある構造的活性化Ｋｉｔキナーゼアイソフォームを阻害する。
化合物Ｉのメシル酸塩の選択性は、ＡＢＬ、Ｋｉｔ、およびＰＤＧＦＲのＡＴＢ結合ポケットとは可逆的に結合するが、他のチロシンキナーゼとは結合しない能力と関連する。Ｋｉｔの変異がキナーゼ活性を導くことによる分子機序は完全に解明されているわけではないが、ある変異は、ＡＴＰ結合ポケットと化合物Ｉのメシル酸塩の相互作用を阻害することが可能であろう。該可能性を調べるために、代表的な精上皮腫由来の構造的活性化Ｋｉｔ腫瘍性タンパク質を、ＣＨＯ細胞への一過性トランスフェクションにより発現させ、化合物Ｉのメシル酸塩による、阻害に対する感受性について調べた。上記の残基８２２または８２３のアミノ酸置換を有する変異型Ｋｉｔアイソフォームが、化合物Ｉのメシル酸塩に対して感受性が高く、これは試験管内で、約１００〜２００ｎＭのＩＣ５０であった。対照的に、ヒト精上皮腫と一般的に関連するＤ８１６Ｖ変異は、５〜１０μＭ濃度を用いたときでさえ、化合物Ｉのメシル酸塩に対して抵抗性である。Ｄ８１６Ｈ変異体アイソフォームのキナーゼ活性は、化合物Ｉのメシル酸塩によって野生型Ｋｉｔのものより阻害されなかった。試験管内ＩＣ５０は、約１μＭであった。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
さらなる発展としては、ステージＩ疾病の患者での補助療法として、その後の照射または化学療法処置の必要性を減少し、そして結果として生じる可能性のある不妊を減少する試みでの化合物Ｉの使用である。