【手続補正書】
【提出日】平成18年9月7日(2006.9.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
放射線を発することのできる１種以上の発光レポーターを含み、１種以上の発光レポーターが、少なくとも１細胞周期相の指標となり得る第一の発光レポーターを含む、細胞周期相データの決定方法であって、
自動分類法を使用して個々の細胞を異なる細胞周期相に分類するための分類規則であって、第一の発光レポーターの強度に関する測定値について、異なる細胞相を識別することができる閾値を含む分類規則を記憶させる段階と、
１種以上の発光レポーターによって発せられた放射線の検出によって作成された画像データを受け取る段階と、
画像データを分析して、個々の細胞に対応する画像データ中の対象区域を同定する段階と、
画像データを、同定された対象区域を基盤として分析して、選択した細胞について、その細胞の１種以上の細胞質成分に関連する第一の発光レポーターの強度に関する測定値を含む、１以上の測定値を決定する段階と、
細胞の１種以上の細胞質成分に関連する第一の発光レポーターの強度に関する測定値に対して上記閾値を適用することを含めて、分類規則を測定値に適用して、選択した細胞を、異なる細胞周期相にある細胞を各亜集団が有する複数の細胞亜集団のうちの選択された１亜集団に分類する段階と
を含む方法。
【請求項２】
画像データを分析し、分類規則を、選択した複数の細胞それぞれに適用する段階と、選択した複数の細胞について、選択した細胞中の複数の亜集団の相対的なサイズの指標となる細胞周期相集団データを作成する段階とを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
細胞を含む複数のウェルからの画像データで方法を実施する段階を含み、複数のウェルが異なる試験化合物を含んでいる、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
１種以上の発光レポーターが、細胞中の細胞下成分の位置の指標となる第二の発光レポーターをさらに含み、
画像データを受け取る段階が、
ａ）第一の発光レポーターによって発せられた放射線の検出によって作成された第一の画像データの受け取りと、
ｂ）第二の発光レポーターによって発せられた放射線の検出によって作成された第二の画像データを受け取り
とを含み、
画像データを分析して対象区域を同定する段階が、第二の画像データの分析を含み、
画像データを分析して１以上の測定値を決定する段階が、第一の画像データの分析を含む、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
対象区域が、選択した細胞毎に、第一の型の対象区域と第二の型の対象区域とを含み、１以上の測定値が、第一の型の対象区域を使用して決定された第一の測定値と、第二の型の対象区域を使用して決定された第二の測定値とを含む、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
第一の型の対象区域を、主に細胞の核区域が選択されるように準備された方法を使用して同定する、請求項５記載の方法。
【請求項７】
第二の型の対象区域を、主に細胞の細胞質区域が選択されるように準備された方法を使用して同定する、請求項５又は請求項６記載の方法。
【請求項８】
分類規則が、選択した細胞を複数の細胞亜集団のうちの第一の選択された亜集団に分類する第一の分類規則を含み、第一の分類規則が、第一の測定値及び第二の測定値の両方を考慮に入れるものである、請求項５乃至請求項７のいずれか１項記載の方法。
【請求項９】
分類規則が、選択した細胞を複数の細胞亜集団のうちの第二の選択された亜集団に分類する第二の分類規則を含み、第二の分類規則が、第一の測定値及び第二の測定値の両方を考慮に入れるものである、請求項５乃至請求項８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
１以上の測定値が、一般に、選択した細胞の細胞質成分に相当する区域を考慮に入れた細胞質発光シグナル強度の測定値を含む、請求項１乃至請求項９のいずれか１項記載の方法。
【請求項１１】
１以上の測定値が、一般に、選択した細胞の核成分に相当する区域を考慮に入れた核発光シグナル強度の測定値を含む、請求項１乃至請求項１０のいずれか１項記載の方法。
【請求項１２】
分類規則が、選択された、比較的弱い核発光シグナル強度及び比較的弱い細胞質発光シグナル強度を有する細胞を第１の細胞周期相亜集団に分類する効果を有する規則を含む、請求項１０又は請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
分類規則が、選択された、比較的弱い核発光シグナル強度及び比較的強い細胞質発光シグナル強度を有する細胞を第２の細胞周期相亜集団に分類する効果を有する規則を含む、請求項１０乃至請求項１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
分類規則が、選択された、比較的強い核発光シグナル強度及び比較的小さい核対細胞質発光シグナル強度比を有する細胞を第３の細胞周期相亜集団に分類する効果を有する規則を含む、請求項１０乃至請求項１３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
分類規則が、選択された、比較的強い核発光シグナル強度及び比較的大きい核対細胞質発光シグナル強度比を有する細胞を第４の細胞周期相亜集団に分類する効果を有する規則を含む、請求項１０乃至請求項１４のいずれか１項記載の方法。
【請求項１６】
分類規則が、測定値から得た第一のパラメーターを考慮に入れたものであり、測定値から得た第二のパラメーターと合同で、異なる４細胞周期相亜集団の各亜集団を特有の形で同定する、請求項１０乃至請求項１５のいずれか１項記載の方法。
【請求項１７】
画像データを受け取る段階が、第一の発光レポーターによって発せられた放射線の検出によって作成された第一の画像データの受け取りを含み、
画像データを分析して１以上の測定値を決定する段階が、第一の画像データの分析を含む、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項１８】
画像データを分析して対象区域を同定する段階が、第一の画像データの分析を含む、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
対象区域を、細胞の核区域及び細胞質区域の両方を含む区域が選択されるように準備された方法を使用して同定する、請求項１７又は請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
１以上の測定値が、選択した細胞毎に、同定された対象区域を使用して決定された第一の測定値と、同定された対象区域を使用して決定された第二の測定値とを含む、請求項１７乃至請求項１９のいずれか１項記載の方法。
【請求項２１】
第一及び第二の測定値を、同定された同じ対象区域を使用して決定する、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
分類規則が、選択した細胞を複数の細胞亜集団のうちの選択された第一の亜集団に分類する分類規則を含み、分類規則が、第一の測定値及び第二の測定値の両方を考慮に入れたものである、請求項２０又は請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
１以上の測定値が、同定された対象区域を考慮に入れた発光シグナル強度の測定値を含む、請求項１７乃至請求項２２のいずれか１項記載の方法。
【請求項２４】
１以上の測定値が、
同定された対象区域内の平均シグナル強度に関するパラメーター、
同定された対象区域内の平均シグナル強度から、所与の量を超えて逸脱した分の画素に関するパラメーター、
同定された対象区域内の、シグナル強度が所与の閾値を下回っている画素数に関するパラメーター、
同定された対象区域に相当する楕円形の輪郭の主軸と副軸の比に関するパラメーター、
同定された対象区域の最大幅に関するパラメーター、
同定された対象区域の平均幅に関するパラメーター、
同定された区域内のシグナル基調に関するパラメーター、
同定された対象区域の縁取りに関するパラメーター
からなる群から選択された１以上の測定値を含む、請求項１７乃至請求項２３のいずれか１項記載の方法。
【請求項２５】
細胞が、
ｉ）少なくとも１細胞周期相に特異的な発現制御要素、及び
ｉｉ）破壊制御要素
に操作可能に連結され、かつこれらの制御下にある検出可能な生細胞レポーター分子をコードしている核酸配列を含む核酸レポーター構築物、好ましくはＤＮＡ構築物を含む、請求項１乃至請求項２４のいずれか１項記載の方法。
【請求項２６】
請求項１乃至請求項２５のいずれか１項記載の方法を実施するために準備された装置。
【請求項２７】
請求項１乃至請求項２５のいずれか１項記載の方法を実施するために準備されたコンピュータソフトウェア。
【請求項２８】
請求項２７のコンピュータソフトウェアを記憶するデータキャリヤ。