【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年8月4日(2006.8.4)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列および／または組成が異なる複数のオリゴヌクレオチド種から、細胞中のタンパク質凝集体の凝集を防止するのに効果的なそれらのオリゴヌクレオチド種を同定する方法であって、
異なる配列および／または組成の複数のオリゴヌクレオチド種の各々を、タンパク質凝集体が凝集しているかまたは該凝集が発生する可能性のある細胞に別々に導入して、該凝集を阻止、減少、または防止する上で効果的な複数のオリゴヌクレオチド種の１つ以上を同定する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
前記タンパク質凝集体が、ハンチンチン、Ａβ、タウ、αシヌクレイン、アトロピン−１、アタキシン−１、アタキシン−２、アタキシン−３、アタキシン−７、α１Ａ、ＰｒＰＳｃ、トランスサイレチン、スーパーオキシドジスムターゼ、アミリン、ＩｇＧ軽鎖、プロカルシトニン、β２−マイクログロブリン、心房性ナトリウム利尿因子、血清アミロイドＡ、アポＡ１、およびゲルソリンからなる群から選択される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記オリゴヌクレオチド種の各々が少なくとも６ｎｔ長である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記オリゴヌクレオチド種の各々が少なくとも２５ｎｔ長である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
少なくとも複数の前記オリゴヌクレオチド種が、少なくとも１個のホスホロチオエート結合を含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
少なくとも複数の前記オリゴヌクレオチド種が、各末端に少なくとも１個のホスホロチオエート結合を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記オリゴヌクレオチドが、前記細胞にインビトロで導入される、請求項１記載の方法。
【請求項８】
前記タンパク質凝集体が検出可能に標識される、請求項１記載の方法。
【請求項９】
前記標識が、前記凝集体に組み換え的に融合される、請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記標識が、ＧＦＰ様発色団を含むポリペプチドである、請求項１２記載の方法。
【請求項１１】
タンパク質凝集体の凝集により引き起こされる疾患を有する被験体を処置するための組成物であって、
薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤と必要に応じて混合して、該タンパク質の凝集を阻止、遅延、または防止するための少なくとも１個のオリゴヌクレオチド種を含む、組成物。
【請求項１２】
前記疾患が、アルツハイマー病、嚢胞性線維症、筋萎縮性側索硬化症、パーキンソン病、脊髄延髄筋萎縮症、脊髄小脳性運動失調１型、脊髄小脳性運動失調２型、脊髄小脳性運動失調３型、脊髄小脳性運動失調６型、および脊髄小脳性運動失調７型、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症、プリオン病、スクラピー、ウシ海綿状脳症、ＣＪＤ、新変異型ＣＪＤ、ピック病、ＩＩ型糖尿病、多発性骨髄腫−形質細胞異形成、甲状腺髄様癌、慢性腎不全、うっ血性心不全、慢性炎症、アテローム性動脈硬化症（アポＡ１）、ならびに家族性アミロイドーシスからなる群から選択される、請求項１１記載の組成物。
【請求項１３】
前記少なくとも１個のオリゴヌクレオチド種が少なくとも６ｎｔ長である、請求項１１記載の組成物。
【請求項１４】
前記少なくとも１個のオリゴヌクレオチド種が少なくとも２５ｎｔ長であることを特徴とする請求項１３記載の組成物。
【請求項１５】
前記少なくとも１個のオリゴヌクレオチド種が少なくとも１個の末端修飾を含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１６】
前記少なくとも１個の末端修飾が、ホスホロチオエート結合および２’−ＯＭｅアナログからなる群より選択される、請求項１５記載の組成物。
【請求項１７】
前記末端修飾が少なくとも１個のホスホロチオエート結合である、請求項１６記載の組成物。
【請求項１８】
前記組成物が、配列、長さ、または組成の１つ以上が異なる少なくとも２個のオリゴヌクレオチド種を含む、請求項１１記載の組成物。
【請求項１９】
前記組成物が、静脈内注射または髄腔内注射による投与に適している、請求項１１記載の組成物。
【請求項２０】
前記組成物が、前記被験体由来の細胞をエキソビボでトランスフェクションした後、該トランスフェクション細胞を該被験体に再導入することによる投与に適している、請求項１１記載の組成物。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
ハンチントン舞踏病は、脊髄延髄の筋萎縮、脊髄小脳性運動失調１型、２型、３型、６型、および７型、ならびに歯状核赤核−淡蒼球ルイ体萎縮を含む神経変性疾患のファミリーに属しており、多くの場合、優性遺伝し、ＣＡＧトリヌクレオチド配列が伸長して、異常な長いポリグルタミン路（トラクト）を持つタンパク質の翻訳を引き起こす突然変異によって、特徴づけられる。例えば、Ｃａｒｍｉｃｈａｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９７：９７０１−９７０５（２０００）を参照せよ。また、上記疾患が異なる位置で神経変性を結果としてもたらすにもかかわらず、これらの疾患はすべて同一の基本的病理学的原因を共有する。すなわち、脆弱な神経内で細胞内タンパク質凝集体が形成され、神経機能喪失が生ずる。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００６】
細胞内タンパク質の凝集は、直接、ユビキチン−プロテアソーム系の機能を弱めることが最近示された。このユビキチン−プロテアソーム系は、細胞内で毒性の凝集体を潜在的に形成しうる誤って折り畳まれ、アセンブルしていない、もしくは損傷を受けたタンパク質を分解させる役割を果たす。Ｂｅｎｃｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９２：１５５２−５５（２００１）。そのような機能障害は、陽性のフィードバック機構を生成することが可能であり、それによって、濃度が増加した凝集タンパク質が、それらのタンパク質の分解に関与したまさにその系を阻害し、多くの神経変性疾患に特有の細胞機能の急峻な損失を結果としてもたらすことができる。この点と矛盾することなく、プロテアーゼ活性を直接阻害することで、アグレソーム様封入体内に変異体ハンチンチンフラグメントの蓄積をもたらす。Ｗａｅｌｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ，１２：１３９３−１４０７（２００１）。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
プリオン病も、特定のタンパク質の誤った折り畳みと凝集とから生じると考えられる。ＰｒＰｃは、プリオン・タンパク質の正常型であって、哺乳類では単一コピー遺伝子によってコードされる。Ｂａｓｌｅｒ  ｅｔ  ａｔ，Ｃｅｌｌ，４６：４１７−２８（１９８６）。発現されると、このタンパク質は通常、神経細胞表面で見つかる。プリオン病は、プリオン・タンパク質の正常なＰｒＰｃ型から不溶性で疾患を生ずる形態であるＰｒＰＳｃへの変換をもたらすと考えられている。２つの形状のアミノ酸配列順序が同一であるにもかかわらず、タンパク質の高次構造が異なるようである。Ｐａｎ  ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：１０９６２−６６（１９９３）。ＰｒＰＳｃは、プリオン病の伝染およびその病原性に関係していると思われる。上記したように、プリオン病は羊および山羊のスクレーピー；畜牛の牛海綿状脳症；ならびにクールー、クロイツフェルト−ヤコブ病、ゲルストマン−シュトロイスラー−シェインカー症、およびヒト致死性家族性不眠症が挙げられる。Ｐｒｕｓｉｎｅｒ他、米国特許第６，２１４，３６６号を見よ。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
多くの他の疾患は、タンパク質の誤った折り畳み、ミスアセンブリおよび／または凝集を含むと考えられる。そのような疾患（および関係するタンパク質）として以下のものが挙げられる。すなわち、筋萎縮性側索硬化症（スーパーオキシドジスムターゼ）、狭窄性心嚢炎（ピック小体のタウ蛋白）、ＩＩ型糖尿病（アミリン）、多発性骨髄腫−形質細胞異形成（免疫グロブリンＧ軽鎖）、甲状腺（プロカルシトニン）の髄様癌、慢性腎不全（β２−ミクログロブリン）、うっ血性心不全（心房ナトリウム利尿因子）、慢性炎症（血清アミロイドＡ）、アテローム性動脈硬化（アポＡ１）、および家族性アミロイドーシス（ゲルソリン）。Ｐｒｕｓｉｎｅｒ他、米国特許第６，２１４，３６６号を参照せよ。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
トランスグルタミナーゼ阻害剤（例えばシスタミンおよびモノダンシルカダベリン）を用いて、伸張ポリグルタミン・セグメントを含有するタンパク質を発現する培養細胞での凝集体形成およびアポトーシス細胞死の抑制がおこなわれた。Ｔｓｕｊｉ，米国特許第６，３５５，６９０号。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１８】
フザリン酸およびピコリン酸が、亜鉛依存型重合およびβＡ１−４０アミロイドペプチドの原線維形成の抑制に用いられている。Ｄｏｕｇｌａｓ他、米国特許公開番号ＵＳ  ２００２／００３７９０８  Ａ１。これら同一薬剤もまた、死後のアルツハイマー病患者の脳切片からβ−アミロイド・タンパク質の放出を引き起こす。同上。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１９】
上記の知見は、タンパク質凝集体の形成を阻害するか、すでに形成された凝集体の構造を崩壊させることが可能な薬剤がタンパク質ミスアセンブリおよび凝集に起因する疾患を処置することに役立つ可能性があることを示している。米国特許第６，４２０，１２２号では、細胞でタンパク質凝集体の破損をもたらすことに有用な追加薬剤を同定するインビトロ方法が記載されている。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２３】
該方法は、異なる配列の複数のオリゴヌクレオチド種のそれぞれを、タンパク質凝集体を有するか、または発生する可能性のある細胞に別々に導入して、配列が異なる複数のオリゴヌクレオチド種から、細胞中のタンパク質凝集体の凝集を阻止、減少、または破壊するために効果的なそれらのオリゴヌクレオチド種を同定すること、ならびに凝集を阻止、減少、または破壊する上で、かつ／あるいは細胞生存を増加させる上で効果的なオリゴヌクレオチド種を同定すること、を含む。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２４】
該タンパク質凝集体は、特に、ハンチンチン（ｈｔｔ）、Ａβ、タウ、αシヌクレイン、アトロピン−１、アタキシン−１、アタキシン−２、アタキシン−３、アタキシン−７、α１Ａ、ＰｒＰＳｃ、トランスサイレチン、スーパーオキシドジスムターゼ、アミリン、ＩｇＧ軽鎖、プロカルシトニン、β２−マイクログロブリン、心房性ナトリウム利尿因子、血清アミロイドＡ、アポＡ１、およびゲルソリンからなる群から選択されうる。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４０】
修飾オリゴヌクレオチド骨格鎖として、例えば、ホスホロチオエート、キラル・ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、メチルおよび他のアルキルホスホネート（３'−アルキレンホスホネートおよびキラル・ホスホネート含む）、ホスフィナート、ホスホラミデート（例えば、３’−アミノホスホラミデートおよびアミノアルキルホスホラミデート）、チオノホスホラミデート、チオノアルキルホスホナート、チオノアルキルホスホトリエステル、および正常３’−５’結合を持つボラノホスフェート、さらにそれらの２’−５’結合類似体、さらに逆転極性を持つものが挙げられ、ヌクレオシド単位の隣接対は、結合３’−５’ないし５’−３’もしくは２’ー５’ないし５’−２’に結合したヌクレオシドの塩基対である。上記のリン含有結合の調製を教示する代表的な米国特許として、限定されるものではないが、米国特許第３，６８７，８０８号、第４，４６９，８６３号、第４，４７６，３０１号、第５，０２３，２４３号、第５，１７７，１９６号、第５，１８８，８９７号、第５，２６４，４２３号、第５，２７６，０１９号、第５，２７８，３０２号、第５，２８６，７１７号、第５，３２１，１３１号、第５，３９９，６７６号、第５，４０５，９３９号、第５，４５３，４９６号、第５，４５５，２３３号、第５，４６６，６７７号、第５，４７６，９２５号、第５，５１９，１２６号、第５，５３６，８２１号、第５，５４１，３０６号、第５，５５０，１１１号、第５，５６３，２５３号、第５，５７１，７９９号、第５，５８７，３６１号、および第５，６２５，０５０号が挙げられ、これらの開示をそのまま本明細書で援用する。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４１】
本発明のオリゴヌクレオチドで有用な他の修飾オリゴヌクレオチド骨格鎖として、リン原子を欠いたものが挙げられ、例えば短鎖アルキルまたはシクロアルキル・ヌクレオシド間結合、混合ヘテロ原子およびアルキルまたはシクロアルキル・ヌクレオシドによって形成される骨格鎖、あるいは１つ以上の短鎖ヘテロ原子またはヘテロ環ヌクレオシド間結合が挙げられる。これらは、モルホリノ結合（一部はヌクレオシドの糖部分から作られる）；シロキサン骨格鎖；硫化、スルホキシド、およびスルホン骨格鎖；ギ酸アセチルおよびチオ・ギ酸アセチル骨格鎖；メチレン基ギ酸アセチルおよびチオ・ギ酸アセチル骨格鎖；骨格鎖を含んでいるアルケン；スルファミド酸エステル骨格鎖；メチレンイミノおよびメチレンヒドラジノ骨格鎖；スルホン酸エステルおよびスルホンアミド骨格鎖；アミド骨格鎖；混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、およびＣＨ２成分部分を含む他のものが挙げられる。上記の骨格鎖の調製を教示する代表的な米国特許として、限定されるものではないが、米国特許第５，０３４，５０６号、第５，１６６，３１５号、第５，１８５，４４４号、第５，２１４，１３４号、第５，２１６，１４１号、第５，２３５，０３３号、第５，２６４，５６２号、第５，２６４，５６４号、第５，４０５，９３８号、第５，４３４，２５７号、第５，４６６，６７７号、第５，４７０，９６７号、第５，４８９，６７７号、第５，５４１，３０７号、第５，５６１，２２５号、第５，５９６，０８６号、第５，６０２，２４０号、第５，６１０，２８９号、第５，６０２，２４０号、第５，６０８，０４６号、第５，６１０，２８９号、第５，６１８，７０４号、第５，６２３，０７０号、第５，６６３，３１２号、第５，６３３，３６０号、第５，６７７，４３７号、および第５，６７７，４３９号が挙げられる。これらの開示をそのまま本明細書で援用する。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４３】
したがって、本発明のオリゴヌクレオチドは、既知のプリンおよびピリミジン・ヘテロ環として知られている核酸塩基、さらにそれらのヘテロ環類似体および互変異体を含むものであってもよい。核酸塩基の典型的な例は、アデニン、グアニン、チミン、シトシン、ウラシル、プリン、キサンチン、ジアミノプリン、８−オキソ−Ｎ６−メチルアデニン、７−デアザキサンチン、７−デアザグアニン、Ｎ４，Ｎ４−エタノシトシン、Ｎ６，Ｎ６−エタノ−２，６−ジアミノプリン、５−メチルシトシン、５−（Ｃ３−Ｃ６）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、偽性イソシトシン、２−ヒドロキシ−Ｓ−メチル−４−トリアゾロピリジン、イソシトシン、イソグアニン、イノシン、ならびに米国特許第５，４３２，２７２号に開示された「非天然型（ｎｏｎ−ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ）」核酸塩基が挙げられ、これらをそのまま本明細書で援用する。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５８】
オリゴヌクレオチドもまた、二次標識または精製に有用な３’および／または５’基、例えばビオチン、ジニトロフェニル、またはジゴキシゲニンが挙げられる。
【誤訳訂正１５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６０】
望ましい配列が決定されていない場合、本発明のオリゴヌクレオチドを組み合わせて有用に合成することで、全ての可能な配列のオリゴヌクレオチドをオリゴヌクレオチドのいかなる望ましい長さにでも提供することができ、そこから、望ましい配列をその後選択することができる。
【誤訳訂正１６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６１】
そのような組み合わせ方法は、当該技術分野で知られている。最も単純であるそのような方法では、全ての可能な核酸塩基モノマーが、各合成サイクルで使われる。このアプローチの欠点は、異種の配列のオリゴヌクレオチドが混合物中に存在するということである。他の方法は、配列が異なるオリゴヌクレオチドが分離されるハイスループット・パラレル合成ができるようにする。例えば、Ｃｈｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，”Ｈｉｇｈ  ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｐａｒａｌｌｅｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ｗｉｔｈ  １５３６−ｃｈａｎｎｅｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ，”  Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３０（１８）：ｅ９３（２００２）を見よ。
【誤訳訂正１７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６４】
試験すべきオリゴヌクレオチドは、配列が異なる。これらのオリゴヌクレオチドは、任意にさらに組成に違いがあり、例えば、長さ、非天然ヌクレオシド間結合の存在、位置、および数、非天然ヌクレオシド結合の存在、位置、および数、非天然核酸塩基の存在、位置、数、および化学的性質、ならびに末端修飾の存在、位置、および数が挙げられる。
【誤訳訂正１８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６８】
同様に、オリゴヌクレオチドがＡβ（アミロイド・プラークのβ二次構造）の凝集を減少または妨げるのに必要である場合、選択された細胞はＡβの凝集を示すか、または該凝集を進展させる。α−シヌクレインの凝集を減少または妨げる場合、選択された細胞がα−シヌクレインの凝集を示したり、阻害する。本発明のアッセイで有用な他のタンパク質凝集体として、例えば、アトロピン１、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、α１Ａ、タウ・タンパク質、ＰｒＰＳｃ、およびトランスサイレチンが挙げられる。
【誤訳訂正１９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
ここで用いられるように、「ＧＦＰ様発色団」とは、中心αへリックスを持つ１１鎖βバレル（β−ｃａｎ）から構成される内部蛍光タンパク質部分を意味するもので、該中心αへリックスは、２つの芳香族環系とそれらを橋渡しするブリッジとを含む結合π共鳴系を有する。「内部蛍光（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃａｌｌｙ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ）」とは、ＧＦＰ様発色団が全体的にアミノ酸配列によってコードされ、補因子または基質を必要とすることなく蛍光を発することができる。例えば、実施例１に記載したＰＣ１２神経細胞系は、以下に示すように、ＨＤ遺伝子エクソン１を含み、該エクソン１は、交互かつ繰り返しのコドン、すなわち、．．．ＣＡＡ  ＣＡＧ  ＣＡＧ  ＣＡＡ  ＣＡＧ  ＣＡＡ．．．を含み、強化ＧＦＰ（緑色蛍光タンパク質）遺伝子に融合している。
【誤訳訂正２０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００８７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００８７】
標識は、組み換え的にタンパク質凝集体に対して融合する必要はない。例えば、タンパク質凝集体は、その後の染色によって標識され得る。
【誤訳訂正２１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９０】
一般に、オリゴヌクレオチドを標識すると、タンパク質凝集体も標識される。なぜなら、オリゴヌクレオチドおよびタンパク質凝集体の細胞内分布は異なり得、相補的な情報を提供し得るからである。
【誤訳訂正２２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９５】
長さが短いオリゴヌクレオチドを考えると、該オリゴヌクレオチドを受動的に、例えば、エンドサイトーシス機構によって、さらに簡易化する必要はなく、導入し得る。
【誤訳訂正２３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９７】
化学的トランスフェクションについて、ＤＮＡをリン酸カルシウムとともに共沈させ、リポソームまたは非リポソーム型脂質系試薬を用いて導入する。リン酸カルシウム・トランスフェクション用の市販のキットを利用することができる（ＣａｌＰｈｏｓＴＭ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ，Ｃｌｏｎｔｅｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，ＣＡ，ＵＳＡ）。また、脂質媒介トランスフェクションも、市販の試薬（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥＴＭ  ２０００、  ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥＴＭ  Ｒｅａｇｅｎｔ、ＣＥＬＬＦＥＣＴＩＮ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ、およびＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ，ＵＳＡ）、  ＤＯＴＡＰ  Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ  Ｒｅａｇｅｎｔ、ＦｕＧＥＮＥ  ６、Ｘ−ｔｒｅｍｅＧＥＮＥ  Ｑ２、ＤＯＳＰＥＲ（Ｒｏｃｈｅ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ  ＵＳＡ）、Ｅｆｆｅｃｔｅｎｅ（登録商標）、  ＰｏｌｙＦｅｃｔ（登録商標）、  Ｓｕｐｅｒｆｅｃｔ（登録商標）（Ｑｉａｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ，ＵＳＡ））を用いておこなうことができる。他のタイプのポリカチオン、カチオン性脂質、リポソーム、およびポリエチレンイミン（ＰＥＩ）が知られており、また使用することが可能である。
【誤訳訂正２４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１２】
【表１】
2006509726.tif 000001
【誤訳訂正２５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１３８】
標的ＨＤ遺伝子に配列相補性を持たない一本鎖ＤＮＡ分子を、ＨＤ遺伝子エキソン１−ＧＦＰ融合遺伝子を保持するＰＣ１２細胞に添加する。配列相補性を持たないため、オリゴヌクレオチドは、ハンチンチン・タンパク質またはその補体をコードするＤＮＡまたはＲＮＡに認めうるほどにはハイブリダイズしない。オリゴヌクレオチドを下記に記載するように修飾する。
【誤訳訂正２６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４２】
Ｚｅｉｓｓ  ５１０  ＬＳＭ共焦点顕微鏡ならびにＣｏｈｅｒｅｎｔ  Ｋｒｙｐｔｏｎ
ＡｒｇｏｎレーザーおよびＨｅｌｉｕｍ  Ｎｅｏｎレーザーを備えたＺｅｉｓｓ倒立１００Ｍ  Ａｘｉｏｓｋｏｐ上でデータを得る。改良イメージングのためのＬａｂ−Ｔｅｋ
ＩＩチャンバー・カバー・ガラス系に試料を載せる。７つの独立した実験で、対物レンズの視野内のハンチンチン−ＧＦＰ凝集の数を計数する。「ピンポイント凝集体（ｐｉｎｐｏｉｎｔ  ａｇｇｒｅｇａｔｅ）」を計数する上での観察者バイアスを抑制するために、複数の科学者は、対照および処理細胞集団に由来する種々の領域で、ハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体のバイアスのない計数をおこなうことを要請される。
【誤訳訂正２７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４３】
オリゴヌクレオチドの不在下で、プロモーターの活性化は、高レベルのハンチンチン−ＧＦＰ融合遺伝子発現に至り、その後、図２Ａおよび３Ａで見ることができるハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体（明るい小さな点）の出現に至る。
【誤訳訂正２８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４４】
ハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体の存在の可視の減少は、ＨＤ遺伝子に認めうるほどにはハイブリダイズしないオリゴヌクレオチド（「非特異的（ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」または「ＨＤ非特異的（ＨＤ  ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）」）の存在下で観察される。「Ｋａｎ  ｕＤ３Ｔ／２５Ｇ」と命名されるオリゴヌクレオチドは、以下の配列および構造を有する。すなわち、
【誤訳訂正２９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１４６】
ここで、アステリスクは、ホスホロチオエート結合を示す。図２Ｂは、誘導はされるがトランスフェクションされない細胞（図２Ａ）と比べて、Ｋａｎ  ｕＤ３Ｔ／２５Ｇの投与がハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体の減少を生じることを示す。
【誤訳訂正３０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１５３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１５３】
ハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体形成の減少は、Ｋａｎ  ｕＲＤ３／２５Ｇでも観察される。すなわち、
【誤訳訂正３１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６１】
特定の実験では、ハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体形成効果の上記の減少は、ＨＤ遺伝子に特異的ではない過剰量（＞２５μｇ）のオリゴヌクレオチドがトランスフェクションされるときのみに観察される。ハンチンチン−ＧＦＰ融合タンパク質凝集体形成を減少するために要するＨＤ非特異的オリゴヌクレオチドの最適量は、異なってもよく、容易に決定することができる。
【誤訳訂正３２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１６９】
ハンチンチン−ＧＦＰタンパク質凝集体の出現の可視の減少は、ｋｌｏ１７ＬＮＡの存在下で観察されない。実際に、この実施例で上記に示すＬＮＡ残基を含むオリゴヌクレオチドのうち、ハンチンチン−ＧＦＰタンパク質凝集体形成を減少するものはない。Ｋａｎ  ｕＤ１２Ｔ／２５Ｇは、これらの細胞に毒性効果を及ぼす（すなわち、より多くの細胞死を引き起こす）。図４Ａを参照せよ。
【誤訳訂正３３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１８２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１８２】
画像分析を改良し、定量を可能にするＬａｂ−Ｔｅｋ  ＩＩチャンバー・カバー・ガラス素子に試料を載せる。Ｃｏｈｅｒｅｎｔ  Ｋｒｙｐｔｏｎ  ＡｒｇｏｎおよびＨｅｌｉｕｍ  Ｎｅｏｎレーザーを用いて、Ｚｅｉｓｓ倒立１００Ｍ  Ａｘｉｏｓｋｏｐ共焦点顕微鏡（５１０ＬＳＭ）中で細胞を見ることによって、タンパク質凝集の阻害を測定する。それぞれが約５００個の細胞を含有する３個の無作為に選択した視野中で計器だけで封入体を計数する。
【誤訳訂正３４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０３】
（実施例４）
ハンチンチン凝集体の脱凝集を検出するための細胞生存アッセイ
ｅＧＦＰ（強化ＧＦＰ）遺伝子（Ｄｒ.Ｅｒｉｋ  Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ，ＵＣＬＡの
寄贈物）に融合される１０３個のポリグルタミン・リピート（各Ｑは、ＣＡＡまたはＣＡＧのどちらかにコードされる。本質的に交互のＣＡＡＣＡＧ）を含むハンチンチンの第１のエキソンを含有する細胞系ＰＣ１２／ｐＢＷＮ：ｈｔｔｅｘを用いる。この細胞系は、ポリＱ領域をコードする本質的に交互のＣＡＡＣＡＧを持つコンストラクトを組み込んでいた（Ｓｃｈｗｅｉｔｚｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ.Ｃｅｌｌ.Ｓｃｉｅｎｃｅ  ９６:３７５−３８１(１９９０）を参照せよ。その開示を本明細書に援用する）。ハンチンチン−ＧＦＰ融合の発現を導くプロモーターは、エクジソン・アナログによって調節される。
【誤訳訂正３５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０４】
これらの細胞は、誘導後にハンチンチン凝集体形成が圧倒的であり、最終的に該細胞が死ぬため有用である。したがって、ハンチンチン凝集体形成の破壊は、持続される緑色蛍光によって示されるように、最終的に、細胞生存および増殖を延長する。細胞生存を延長する綿密な測定をおこなう。
【誤訳訂正３６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０８】
したがって、一本鎖ＤＮＡ分子でこれらの細胞を処理すると、ハンチンチン凝集体の脱凝集を引き起こし、これらの細胞の生存を増加させる。
【誤訳訂正３７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２０９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２０９】
したがって、ＨＤ遺伝子に非特異的な一本鎖ＤＮＡ分子は、これらの細胞でハンチンチン・タンパク質凝集体の脱凝集を引き起こし、該脱凝集は、これらの細胞で細胞生存として表される。
【誤訳訂正３８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１８】
(実施例６）
凝集の阻害のためのインビトロアッセイ
インビトロ変異ハンチンチン凝集アッセイで、２個の無作為に選択されたＰＣＲプライマーを含む複数のオリゴヌクレオチドをそれのら阻害効果について試験する。
【誤訳訂正３９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２１９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２１９】
本質的に、Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｏｍａｔ.Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ.Ｇｅｎｅｔ.２
４（４）：２１７−３３(１９９８）（その開示全体を本明細書に援用する）に記載され
るように、該アッセイを実行する。要約すると、５８個のグルタミン残基を含有する変異ハンチンチンＮ末端フラグメントをＧＳＴ融合として細菌中で発現させる。精製した融合タンパク質をプロテアーゼで処理して、２４時間以内に完全に凝集体を形成するＮ末端ｈｔｔフラグメントを放出させる。実験試料は、オリゴヌクレオチド４０μＭを含む。凝集体形成が終了した後、適当な孔径を有する酢酸セルロース膜上で該凝集体を捕捉して、定量する。
【誤訳訂正４０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２０】
図９Ａおよび９Ｂは、ハンチンチン凝集体の形成への試験したオリゴヌクレオチドの効果を示す。
【誤訳訂正４１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２４】
その結果から、該オリゴヌクレオチドと変異ハンチンチンのポリＱ領域との直接的な相互作用が示唆される。
【誤訳訂正４２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２７】
第２に、ＲＮＡは、ＤＮＡよりさらに効果的である。インビトロアッセイのｐＨ約８．０では、付加的なリボースヒドロキシル基が容易に利用可能であり、水素結合を形成する。このようなＲＮＡオリゴヌクレオチドのより大きい効果から、付加的な水素結合が、恐らくオリゴヌクレオチドとポリＱ領域中のグルタミン残基との水素結合の形成を介して、凝集体の阻害に直接関与し、この相互作用がハンチンチン・フラグメント自体の間の相互作用を阻止し、今度は凝集体の形成を阻止することが示唆される。
【誤訳訂正４３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２８】
実施例７
ハンチンチン凝集体を破壊する上で効果的な４塩基一本鎖オリゴヌクレオチドの同定
多数のオリゴヌクレオチドを、ハンチンチン凝集体を破壊する能力についてスクリーニングするために、２５６個の考えられる４塩基一本鎖オリゴヌクレオチド全てを合成する。
【誤訳訂正４４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３０】
実施例１、２、および３でそれぞれ記載したアッセイの１つまたは両方にしたがって、これらの４ｍｅｒオリゴヌクレオチドを、ハンチンチン・タンパク質凝集体の脱凝集を引き起こすそれらの能力について濃度範囲の全域で個々に試験し、最も効果的な４ｍｅｒオリゴヌクレオチドを同定する。
【誤訳訂正４５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３１】
（実施例８）
ＨＤのトランスジェニック動物モデル系への一本鎖オリゴヌクレオチドの投与がハンチンチン・タンパク質凝集体の減少を引き起こす
ハンチントン病に対する動物モデル系を得る。
【誤訳訂正４６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３３】
例えば、ポリＱ領域をコードするエキソン１のＣＡＧリピート・セグメント中、例えば、少なくとも３６個のＣＡＧリピート（または、ＣＡＧリピートのうち任意の数がＣＡＡでよい）を持つヒト・ハンチンチン・タンパク質、その部分、あるいはヒト・ハンチンチン・タンパク質またはその部分を含む融合タンパク質を発現するトランスジェニック・マウスである。
【誤訳訂正４７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３４】
このようなトランスジェニック・マウス系統の例としては、Ｒ６／２系（Ｍａｎｇｉａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ８７:４９３−５０６(１９９６）、その開示全体を本明細書に援用する）がある。Ｒ６／２マウスは、ヒトＨＤ遺伝子のエキソン１を過剰発現（内在性プロモーターの制御下で）するトランスジェニック・ハンチントン病マウスである。Ｒ６／２ヒトＨＤ遺伝子のエキソン１は、拡張されたＣＡＧ／ポリグルタミン・リピート長を有する（平均で１５０個のＣＡＧリピート）。これらのマウスは、ヒト・ハンチントン病の多くの特徴を持つ進行性の最終的に死に至る神経疾患を発症する。ハンチンチンのＮ末端部分（ＨＤエキソン１にコードされる）によって部分的に構成される異常凝集体は、Ｒ６／２マウス中で、細胞の細胞質および核両方で認められる（Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９０:５３７−５４８(１９９７）、その開示を本明細書に援用する）。好ましくは、トランスジェニック動物中のヒト・ハンチンチン・タンパク質は、少なくとも５５個のＣＡＧリピートを有し、より好ましくは、約１５０個のＣＡＧリピートを有する。これらのトランスジェニック動物は、ハンチントン病様表現型を発症する。
【誤訳訂正４８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３５】
これらのトランスジェニック・マウスは、低減された体重増加と、寿命と、誕生後８ないし１０週からの異常歩行、安静時振戦、後肢屈曲、および機能亢進に特徴づけられる運動障害とに特徴づけられる（例えば、Ｒ６／２系統；Ｍａｎｇｉａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ８７:４９３−５０６(１９９６）を参照せよ）。表現型は、運動低下に向かって進行性に悪化する。これらのトランスジェニック・マウスの脳は、神経伝達物質受容体（グルタミン、ドーパミン作用性）での変化、Ｎ−アセチルアスパルテート（神経完全性のマーカー）の濃度の減少、ならびに線条および脳寸法の減少等の神経化学的および組織学的異常も示す。さらに、ヒト・ハンチンチン・タンパク質の完全長またはトランスジェニック部分を含有する異常凝集体は、これらの動物の脳組織に存在する。該Ｒ６／２系統は、そのようなトランスジェニック・マウス系統の一例である。Ｍａｎｇｉａｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  ８７:４９３−５０６(１９９６）、Ｄａｖｉｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｅｌｌ  ９０:５３７−５４８(１９９７）、Ｂｒｏｕｉｌｌｅｔ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １５（４）:２３９−２５１(２０００）、およびＣｈａ
ｅｔ  ａｌ，Ｐｒｏｃ.Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡ  ９５:６４８０−６４８５(１９９８）を参照せよ。
【誤訳訂正４９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２３７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２３７】
その後、該動物を屠殺して、脳切片を得る。その後、トランスジェニック・ヒト・ハンチンチン・タンパク質、その部分、あるいはヒト・ハンチンチン・タンパク質またはその部分を含む融合タンパク質を含有する凝集体の存在について該脳切片を分析する。この分析には、例えば、抗ハンチンチン抗体を用いて脳組織の切片を染色して、抗ハンチンチン抗体を認識するＦＩＴＣと複合した２次抗体を添加すること（例えば、抗ハンチンチン抗体は、マウス抗ヒト抗体であり、２次抗体は、ヒト抗体に特異的である）と、蛍光顕微鏡法によってタンパク質凝集体を可視化することとが含まれる。または、抗ハンチンチン抗体をＦＩＴＣと直接複合することができる。その後、ハンチンチン・タンパク質凝集体の量を蛍光顕微鏡法によって可視化する。
【誤訳訂正５０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５１】
実施例１０
ＨＤのショウジョウバエ・モデル系への一本鎖オリゴヌクレオチドの投与がハンチンチン・タンパク質凝集体の減少を引き起こす
ハンチントン病に対するキイロショウジョウバエ・モデル系を得る。例えば、Ｓｔｅｆｆａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１３:７３９−７４３(２００１）およびＭａｒｓｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｕｍａｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ９:１３−２５(２０００）（それらのそれぞれの開示を本明細書に援用する）を参照せよ。例えば
、ポリＱ領域をコードするエキソン１のＣＡＧリピート・セグメント中、例えば、少なくとも３６個のＣＡＧリピート（好ましくは、５１個以上のリピート）（または、ＣＡＧリピートのうち任意の数がＣＡＡでよい）を持つヒト・ハンチンチン・タンパク質、その部分（エキソン１等の）、あるいはヒト・ハンチンチン・タンパク質またはその部分を含む融合タンパク質を発現するトランスジェニック・ショウジョウバエである。これらのトランスジェニック・ハエを操作して、ヒト・ハンチンチン・タンパク質、その部分（エキソン１等の）、あるいはヒト・ハンチンチン・タンパク質またはその部分を含む融合タンパク質をニューロンで発現させる。
【誤訳訂正５１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５５】
第１の付加的なアッセイでは、これらのハエでのハンチンチン・タンパク質凝集体の脱凝集またはハンチンチン・タンパク質凝集体形成の減少をモニタリングする。
【誤訳訂正５２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５７】
ヒト・ハンチンチン・タンパク質、その部分（エキソン１等の）、あるいはヒト・ハンチンチン・タンパク質またはその部分を含む融合タンパク質の発現による神経変性は、各ショウジョウバエ個眼の光受容体ニューロンにより産生される７個の可視の感桿分体（細胞下集光構造）の一定の台形配置で構成されるハエ複眼中で容易に観察される。ヒト・ハンチンチン・タンパク質、その部分（エキソン１等の）、あるいはヒト・ハンチンチン・タンパク質またはその部分を含む融合タンパク質の発現は、感桿分体の進行性損失に至る。
【誤訳訂正５３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２５９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２５９】
（実施例１１）
ＨＤのインビトロモデル系への一本鎖オリゴヌクレオチドの投与がハンチンチン・タンパク質凝集体の減少を引き起こす
ポリグルタミン凝集体に対するマイクロタイター・プレート・アッセイを得る。Ｂｅｒｔｈｅｌｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎａｌ.Ｂｉｏｃｈｅｍ，２９５：２２７−２３６(２００１）（その開示を本明細書に援用する）を参照せよ。
【誤訳訂正５４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６３】
２つのＳ．セレビシエ（Ｓ.ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌株が提供される。すなわち、好ましくはＧＦＰに融合される２３個のＱリピート（ＣＡＧ（ＣＡＧリピートの任意のものがＣＡＡでよい））または７５個のＱリピートのどちらかを持つヒトＨＤの最初の１７０個のコドンを含有するＷ３０３−１ａ（ＭＡＴ  ａ、Ａｄｅ  ２−１、ｔｒｐ  １−１、ｃａｎ  １−１００、ｌｅｕ  ２−３、１１２  ｈｉｓ  ３−１１、１５  ｕｒａ  ３−１）である。これらの菌株のそれぞれは、誘導性プロモーター（Ｇａｌ  １，１０）または構成性プロモーター（ＧＰＤ−１）の制御下で、好ましくはＮＬＳ（核局在化シグナル）を持つインサートＨＤ遺伝子を保持する。ハンチンチンの部分は、核に局在し、これらの細胞中でタンパク質凝集体がけ形成する。Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ.Ｎａｔｌ.Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡ  ９８:１３２０１−１３２０６(２００１）（その開示を本明細書に援用する）を参照せよ。
【誤訳訂正５５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６６】
１ウェル当たり１０３個の細胞を含有する９６ウェル・プレート中での酵母の希釈によって、タンパク質ミスアセンブリの阻害を実行する。Ｚｅｉｓｓ  Ａｘｉｏｖｅｒｔ共焦点顕微鏡を用いて、ハンチンチン・タンパク質凝集体形成をモニタリングし（Ｈｕｇｈｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ.Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ.Ｓｃｉ.ＵＳＡ  ９８:１３２０１−１３２０６(２００１）を参照せよ）、タンパク質凝集を破壊または阻害する最大の効果を有するオリゴヌクレオチドを同定する。
【誤訳訂正５６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６８】
【図１−１】図１Ａは、本発明にもとづいてタンパク質凝集体の凝集を崩壊または予防する能力について、インビトロで培養された細胞内のオリゴヌクレオチドをアッセイするための実験的プロトコルを示すフロー・チャートである。図１Ｂは、本発明にもとづいてタンパク質凝集体の凝集を崩壊または予防する能力について、インビトロで培養された細胞内のオリゴヌクレオチドをアッセイするための実験的プロトコルをより詳細に示すフロー・チャートである。図１Ｃは、本発明にもとづいてタンパク質凝集体の凝集を崩壊または予防する能力について、細胞の生存にもとづいて、インビトロで培養された細胞内のオリゴヌクレオチドをアッセイするための実験的プロトコルを模式的に示すフロー・チャートである。
【図１−２】図１−２は、図１−１のつづきである。
【図２】図２Ａ〜図２Ｃは、ハンチンチンＧＦＰ融合タンパク質の凝集体が明暗背景に対する光のように見える、ＰＣ１２細胞培養の蛍光顕微鏡写真であり、図２Ａは対照培養を示し、図２Ｂは本発明にもとづいてオリゴヌクレオチドＫａｎ  ｕＤ３Ｔ／２５Ｇによるトランスフェクション後の凝集形成の減少を示し、さらに図２Ｃは本発明にもとづいてオリゴヌクレオチドＫａｎ  ｕＤ１２Ｔ／２５Ｇによるトランスフェクション後の凝集形成の同様の減少の程度を示している（しかし、顕微鏡写真の倍率は異なる）。
【図３】図３Ａないし図３Ｃは、ハンチンチンＧＦＰ融合タンパク質の凝集体が明暗背景に対する光のように見える、ＰＣ１２細胞培養の蛍光顕微鏡写真であり、図３Ａは対照培養を示し、図３Ｂは本発明にもとづいてオリゴヌクレオチドＫａｎ  ｕＲＤ３／２５Ｇによるトランスフェクション後の凝集形成の減少を示し、さらに図３Ｃは本発明にもとづいてオリゴヌクレオチドＫａｎ  ｕＲ／２５Ｇによるトランスフェクション後の凝集形成の同様の減少の程度を示している。
【図４】図４Ａないし図４Ｅは、ハンチンチンＧＦＰ融合タンパク質の凝集体が明暗背景に対する光のように見えるＰＣ１２培養の蛍光顕微鏡写真であり、図４Ｄおよび図４Ｅは、トランスフェクトされなかった対照培養を示し、また図４Ａないし図４Ｃは、図に示すように、本発明にもとづく３通りの異なるオリゴヌクレオチドによってトランスフェクトされた培養を示す。
【図５】図５は、図１Ｂのプロトコルに本質的にもとづく提示オリゴヌクレオチド、オッズ比にもとづいてスコアリングされた目に見える凝集体（括弧で報告される凝集体を含んでいる細胞の平均率）、さらに４つの独立した実験の平均値から計算した標準偏差を示す誤差棒で、細胞をベースとしたアッセイでの凝集体形成を定量化するチャートである。
【図６】図６は、図１Ｂのプロトコルに本質的にもとづいて提示オリゴヌクレオチド、オッズ比にもとづいてスコアリングされた目に見える凝集体（括弧で報告される凝集体を含んでいる細胞の平均率）、さらに４つの独立した実験の平均値から計算した標準偏差を示す誤差棒で、細胞をベースとしたアッセイでの凝集体形成を定量化するチャートである。
【図７】図７は、図１Ｃに図示したプロトコルにもとづいて、オリゴヌクレオチドＨＤＳ−９の存在および非存在下、突然変異ハンチンチン産生物の導入後の細胞生存を示す。
【図８】図８は、本発明の細胞生存アッセイでフラスコ面に付着した生存細胞の手早い視覚化を示す顕微鏡写真である。
【図９】図９Ａは、本発明にもとづいて、指示オリゴヌクレオチドまたは化合物とのインキュベーションの後で酢酸セルロース・フィルタ上に捕捉された組み換え突然変異ハンチンチンＮ末端凝集体を示す。図９Ｂでは、負の対照で観察された凝集体の比率として凝集体の量が表にまとめられている。