【手続補正書】
【提出日】平成18年6月15日(2006.6.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者においてウイルスを不活性化するための薬学的組成物であって、有効量の修飾siRNAを含む、薬学的組成物。
【請求項２】
修飾siRNAが2'修飾siRNAである、請求項1記載の薬学的組成物。
【請求項３】
修飾がsiRNAの少なくとも1つのリボヌクレオチドの2'位に存在する、請求項2記載の薬学的組成物。
【請求項４】
修飾が、フルオロ-、メチル-、メトキシエチル-、およびプロピル-修飾からなる群より選択される、請求項1、2または3記載の薬学的組成物。
【請求項５】
フルオロ-修飾が、2'-フルオロ-修飾または2',2'-フルオロ-修飾である、請求項4記載の薬学的組成物。
【請求項６】
siRNAのピリミジンが修飾され、かつ該ピリミジンがシトシン、シトシン誘導体、ウラシル、ウラシル誘導体、またはそれらの組み合わせである、請求項1〜5のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項７】
siRNAの両方の鎖が少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含む、請求項1〜6のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項８】
ウイルスが、C型肝炎ウイルス(HCV)、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、ロタウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、ポリオウイルス、ヒトパピローマウイルス(HPV)、メタニューモウイルス、およびコロナウイルスからなる群より選択される、請求項1〜7のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項９】
ウイルスがC型肝炎ウイルスである、請求項1〜8のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１０】
siRNAが以下の段階により調製される、請求項1〜9のいずれか一項記載の薬学的組成物：
(a)低分子干渉RNA(siRNA)を設計するためにHCVゲノムにおいて標的ヌクレオチド配列を同定する段階；および
(b)少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含むように修飾されたsiRNAを作製する段階。
【請求項１１】
siRNAが以下の段階により調製される、請求項1〜9のいずれか一項記載の薬学的組成物：
(a)低分子干渉RNA(siRNA)を設計するためにウイルスゲノムにおいて標的ヌクレオチド配列を同定する段階；および
(b)少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含むように修飾されたsiRNAを作製する段階。
【請求項１２】
標的ヌクレオチド配列が、5'-非翻訳領域(5'-UTR)、3'-非翻訳領域(3'-UTR)、コア、およびNS3ヘリカーゼからなる群より選択される、請求項10記載の薬学的組成物。
【請求項１３】
siRNAが、siRNA5、siRNAC1、siRNAC2、siRNA5B1、siRNA5B2、またはsiRNA5B4である、請求項1〜12のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項１４】
siRNAがリボヌクレアーゼに耐性であり、かつウイルス複製を阻害する能力を保持する、修飾リボヌクレオチドを含むsiRNA。
【請求項１５】
修飾siRNAが2'修飾siRNAである、請求項14記載のsiRNA。
【請求項１６】
修飾がsiRNAの少なくとも1つのリボヌクレオチドの2'位に存在する、請求項15記載のsiRNA。
【請求項１７】
修飾が、フルオロ-、メチル-、メトキシエチル-、およびプロピル-修飾からなる群より選択される、請求項14〜16のいずれか一項記載のsiRNA。
【請求項１８】
フルオロ-修飾が、2'-フルオロ-修飾または2',2'-フルオロ-修飾である、請求項17記載のsiRNA。
【請求項１９】
siRNAのピリミジンが修飾され、かつ該ピリミジンがシトシン、シトシン誘導体、ウラシル、ウラシル誘導体、またはそれらの組み合わせである、請求項14〜18のいずれか一項記載のsiRNA。
【請求項２０】
siRNAの両方の鎖が修飾ヌクレオチドを含む、請求項14〜19のいずれか一項記載のsiRNA。
【請求項２１】
siRNAがウイルスゲノムにおける標的ヌクレオチド配列と相互作用する、請求項14〜20のいずれか一項記載のsiRNA。
【請求項２２】
ウイルスが、C型肝炎ウイルス(HCV)、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、ロタウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、ポリオウイルス、ヒトパピローマウイルス(HPV)、メタニューモウイルス、およびコロナウイルスからなる群より選択される、請求項21記載のsiRNA。
【請求項２３】
ウイルスがC型肝炎ウイルス(HCV)である、請求項22記載のsiRNA。
【請求項２４】
以下の段階を含む、ウイルスにおける核酸配列を標的にする修飾siRNAを作製する方法：
(a)標的因子のゲノムに及ぶ少なくとも1つの鎖において少なくとも1つの修飾リボヌクレオチドを含む修飾二本鎖RNA(dsRNA)断片を調製する段階；および
(b)該修飾dsRNA断片を組換えヒトダイサー(Dicer)で切断し、1つより多い修飾siRNAを生じる段階。
【請求項２５】
以下の段階をさらに含む、請求項24記載の方法：
(c)修飾siRNAを単離する段階。
【請求項２６】
標的因子がウイルスである、請求項24または25記載の方法。
【請求項２７】
ウイルスが、C型肝炎ウイルス(HCV)、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、ロタウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、ポリオウイルス、ヒトパピローマウイルス(HPV)、メタニューモウイルス、およびコロナウイルスからなる群より選択される、請求項26記載の方法。
【請求項２８】
患者においてウイルスを不活性化するための薬学的組成物であって、有効量の約10〜約30リボヌクレオチドからなる修飾siRNAを含む薬学的組成物。
【請求項２９】
修飾siRNAが約19〜約23リボヌクレオチドからなる、請求項28記載の薬学的組成物。
【請求項３０】
修飾siRNAが2'修飾siRNAである、請求項28または29記載の薬学的組成物。
【請求項３１】
修飾がsiRNAの少なくとも1つのリボヌクレオチドの2'位に存在する、請求項28〜30のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３２】
修飾が、フルオロ-、メチル-、メトキシエチル-、およびプロピル-修飾からなる群より選択される、請求項28〜31のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
フルオロ-修飾が、2'-フルオロ-修飾または2',2'-フルオロ-修飾である、請求項32記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
siRNAのピリミジンが修飾され、かつ該ピリミジンがシトシン、シトシン誘導体、ウラシル、ウラシル誘導体、またはそれらの組み合わせである、請求項28〜33のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３５】
siRNAの両方の鎖が修飾ヌクレオチドを含む、請求項28〜34のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
ウイルスが、C型肝炎ウイルス(HCV)、A型肝炎ウイルス、B型肝炎ウイルス、D型肝炎ウイルス、E型肝炎ウイルス、エボラウイルス、インフルエンザウイルス、ロタウイルス、レオウイルス、レトロウイルス、ポリオウイルス、ヒトパピローマウイルス(HPV)、メタニューモウイルス、およびコロナウイルスからなる群より選択される、請求項28〜35のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
ウイルスがC型肝炎ウイルス(HCV)である、請求項28〜36のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
siRNAが以下の段階により調製される、請求項28〜37のいずれか一項記載の薬学的組成物：
(a)低分子干渉RNA(siRNA)を設計するためにHCVゲノムにおいて標的ヌクレオチド配列を同定する段階；および
(b)少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含むように修飾されたsiRNAを作製する段階。
【請求項３９】
siRNAが以下の段階により調製される、請求項28〜37のいずれか一項記載の薬学的組成物：
(a)低分子干渉RNA(siRNA)を設計するためにウイルスゲノムにおいて標的ヌクレオチド配列を同定する段階；および
(b)少なくとも1つの修飾ヌクレオチドを含むように修飾されたsiRNAを作製する段階。
【請求項４０】
標的ヌクレオチド配列がHCV複製に必要な保存ヌクレオチド配列を含む、請求項38記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
保存ヌクレオチド配列が、5'-非翻訳領域(5'-UTR)、3'-非翻訳領域(3'-UTR)、コア、およびNS3ヘリカーゼからなる群より選択される、請求項40記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
siRNAが、siRNA5、siRNAC1、siRNAC2、siRNA5B1、siRNA5B2、またはsiRNA5B4である、請求項28〜41のいずれか一項記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
C型肝炎ウイルス(HCV)の複製を阻害する約10ヌクレオチドから約30ヌクレオチドまでの二本鎖RNA分子。
【請求項４４】
siRNA5、siRNAC1、siRNAC2、siRNA5B1、siRNA5B2、またはsiRNA5B4のヌクレオチド配列と少なくとも80%同一のヌクレオチド配列を含む、請求項43記載の二本鎖RNA分子。
【請求項４５】
請求項43または44記載の二本鎖RNA分子を含む薬学的組成物であって、該二本鎖RNA分子のヌクレオチド配列がHCVヌクレオチド配列に対応し、肝細胞においてHCVに対して標的化RNA干渉を誘導する、薬学的組成物。
【請求項４６】
請求項43または44記載の二本鎖RNA分子を含む薬学的組成物であって、C型肝炎ウイルス(HCV)に感染した細胞においてHCVの複製を阻害する、薬学的組成物。
【請求項４７】
請求項43または44記載のRNA分子をコードするDNAセグメントを含むベクター。
【請求項４８】
二本鎖RNA分子のセンス鎖が第一プロモーターに機能的に連結され、かつ二本鎖RNA分子のアンチセンス鎖が第二プロモーターに機能的に連結される、請求項47記載のベクター。
【請求項４９】
第一および第二プロモーターがU6およびH1からなる群より選択される、請求項48記載のベクター。
【請求項５０】
第一および第二プロモーターが同一である、請求項48または49記載のベクター。
【請求項５１】
RNA分子のセンス鎖およびアンチセンス鎖が単一のプロモーターの制御下にある、請求項47記載のベクター。
【請求項５２】
単一のプロモーターがU6およびH1からなる群より選択される、請求項51記載のベクター。
【請求項５３】
請求項47〜52のいずれか一項記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５４】
請求項47〜52のいずれか一項記載のベクターで細胞をトランスフェクションする段階を含む、C型肝炎ウイルス(HCV)を保有する細胞においてHCVの複製を阻害する方法。
【請求項５５】
被検体においてC型肝炎を治療するための薬学的組成物であって、請求項43または44記載のRNA分子を含む薬学的組成物。
【請求項５６】
被検体においてC型肝炎を治療するための薬学的組成物であって、請求項47〜52のいずれか一項記載のベクターを含む、薬学的組成物。
【請求項５７】
標的因子またはウイルスに対してRNA干渉を仲介し、かつ少なくとも1つの受容体結合リガンドに連結されている、約10ヌクレオチド長から約30ヌクレオチド長までの二本鎖RNA分子を含む修飾siRNA分子。
【請求項５８】
受容体結合リガンドがsiRNA分子の5'末端または3'末端に付着する、請求項57記載の修飾siRNA分子。
【請求項５９】
受容体結合リガンドがsiRNA分子の複数の末端に付着する、請求項57または58の修飾siRNA分子。
【請求項６０】
受容体結合リガンドが、コレステロール、HBV表面抗原、低密度リポタンパク質、HIV-1表面抗原、インフルエンザウイルス表面抗原、RSV表面抗原、HPV表面抗原、およびポリオウイルス表面抗原からなる群より選択される、請求項57〜59のいずれか一項記載の修飾siRNA分子。
【請求項６１】
受容体結合リガンドがコレステロールである、請求項57〜60のいずれか一項記載の修飾siRNA分子。
【請求項６２】
少なくとも1つのリボヌクレオチドの2'位において修飾をさらに含む、請求項57〜61のいずれか一項記載の修飾siRNA分子であって、少なくとも1つのリボヌクレオチドの2'位における修飾が該siRNAを分解に対して耐性にする、修飾siRNA分子。
【請求項６３】
少なくとも1つのリボヌクレオチドの2'位における修飾が、2'-フルオロ-修飾または2',2'-フルオロ-修飾である、請求項62記載の修飾siRNA分子。
【請求項６４】
患者において標的化RNA干渉を誘導する薬学的組成物であって、有効量の請求項57〜63のいずれか一項記載のsiRNAを含む、薬学的組成物。
【請求項６５】
有効量の請求項61記載のsiRNAを含む、請求項64記載の薬学的組成物。
【請求項６６】
有効量の請求項63記載のsiRNAを含む、請求項64記載の薬学的組成物。