【手続補正書】
【提出日】平成18年10月23日(2006.10.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  被験者における疾患の検出方法であって、
被験者からの体液の試料中のリゾホスホリピドを第１酵素で消化して、基質を得て；
該基質を酵素サイクリング反応において第２酵素と反応させて、検出可能な産物を得て；
該検出可能な産物を測定することによって、該リゾホスホリピドの濃度を測定し；そして、
該リゾホスホリピドの正常な濃度と比較することによって、該リゾホスホリピドの濃度を疾患と相関させる、
ことを含む、該方法。
【請求項２】  第１酵素は、ホスホリパーゼＢ、ホスホリパーゼＤ、リゾホスホリパーゼ、ホスホリパーゼＡ１、またはホスホリパーゼＡ２である、請求項１記載の方法。
【請求項３】  第２酵素は、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、グリセロール−３−リン酸オキシダーゼ、グリセロホスホリルコリンホスホジエステラーゼ、コリンオキシダーゼ、セリンデヒドロゲナーゼ、セリンデアミナーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、エタノールアミンデアミナーゼ、グリセロキナーゼ、またはグリセロールデヒドロゲナーゼである、請求項１記載の方法。
【請求項４】  基質はグリセロール−３−リン酸である、請求項１記載の方法。
【請求項５】  検出可能な産物は過酸化水素である、請求項１記載の方法。
【請求項６】  検出可能な産物を測定することによるリゾホスホリピドの濃度を測定する工程は、比色定量による過酸化水素の増加を測定することを含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】  検出可能な産物はＮＡＤＨである、請求項１記載の方法。
【請求項８】  検出可能な産物を測定することによるリゾホスホリピドの濃度を測定する工程は、ＮＡＤＨの酸化を測定することを含む、請求項７記載の方法。
【請求項９】  酵素サイクリング反応において基質を反応させる工程は、Ｇ-３-Ｐを、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼおよびグリセロール−３−リン酸オキシダーゼと反応させることを含む、請求項１記載の方法。
【請求項１０】  第１酵素はホスホリパーゼＢまたはリゾホスホリパーゼであり、そして検出するリゾホスホリピドはＬｙｓｏＰＡである、請求項１記載の方法。
【請求項１１】  体液の試料は、血漿、血清、尿、唾液、腹水、脳脊髄液、または胸膜液である、請求項１記載の方法。
【請求項１２】  更に、体液の試料から脂質を抽出する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１３】  更に、リゾホスホリピドの濃度を同じ被験者からの初期濃度と比較する工程を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１４】  正常な被験者の場合と比べたリゾホスホリピドの濃度の増減は疾患の存在を示す、請求項１記載の方法。
【請求項１５】  疾患は、婦人科の癌または卵巣癌である、請求項１記載の方法。
【請求項１６】  疾患は卵巣癌であり、そしてリゾホスホリピドはＬｙｓｏＰＡである、請求項１記載の方法。
【請求項１７】  疾患は乳癌である、請求項１記載の方法。
【請求項１８】  疾患は、リゾホスホリピドのレベルの変化に関係する血液障害である、請求項１記載の方法。
【請求項１９】  リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）を測定することによる、疾患の検出方法であって、
体液の試料中のリゾホスファチジン酸を第１酵素で消化して、グリセロール−３−リン酸を得て；
該グリセロール−３−リン酸を酵素サイクリング反応において反応させ；
ＮＡＤＨの酸化または過酸化水素の蓄積を測定することによって、リゾホスファチジン酸の濃度を測定し；そして、
ＮＡＤＨの酸化または過酸化水素の蓄積の測定と疾患の存在とを相関させる、
ことを含む、該方法。
【請求項２０】  リゾホスファチジン酸を消化する第１酵素は、ホスホリパーゼＢおよびリゾホスホリパーゼからなる群から選ばれる、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】  酵素サイクリング反応は、Ｇ-３-Ｐを、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼおよびグリセロール−３−リン酸オキシダーゼと反応させることを含む、請求項１９記載の方法。
【請求項２２】  疾患は婦人科の癌である、請求項１９記載の方法。
【請求項２３】  婦人科の癌は卵巣癌である、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】  ホスファチジルコリンを測定することによる、疾患の検出方法であって、
体液の試料を第１酵素で消化して、グリセロホスホリルコリンおよびリゾホスファチジルコリンを得て；
該グリセロホスホリルコリンを第２酵素で消化して、基質を得て；
該基質を酵素サイクリング反応において反応させて、検出可能な産物を得て；
該検出可能な産物を測定することによって、リゾホスファチジルコリンの濃度を測定し；そして、
該リゾホスファチジルコリンの濃度を疾患と相関させる、
ことを含む、該方法。
【請求項２５】  第１酵素は、リゾホスホリパーゼおよびホスホリパーゼＢからなる群から選ばれる、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】  第２酵素は、グリセロホスホリルコリンホスホジエステラーゼである、請求項２５記載の方法。
【請求項２７】  体液の試料は、血漿、血清、尿、唾液、腹水、脳脊髄液、および胸膜液からなる群から選ばれる、請求項２４記載の方法。
【請求項２８】  疾患は乳癌である、請求項２４記載の方法。
【請求項２９】  疾患は血液障害である、請求項２４記載の方法。
【請求項３０】  被験者における疾患の検出方法であって、
被験者からの体液の試料中のホスファチジルコリンまたは少なくとも１つのリゾホスホリピドを少なくとも１つの酵素で消化して、基質を得て；
該基質を酵素サイクリング反応において第２酵素と反応させて、検出可能な産物を得て；
該検出可能な産物を測定することによって、ホスファチジルコリンおよび少なくとも１つのリゾホスホリピドの濃度を測定し；そして、
該ホスファチジルコリンおよび少なくとも１つのリゾホスホリピドの濃度を疾患と相関させる、
ことを含む、該方法。
【請求項３１】  少なくとも１つの酵素は、ホスホリパーゼＢ、ホスホリパーゼＣ、ホスホリパーゼＤ、リゾホスホリパーゼ、ホスホリパーゼＡ１、およびホスホリパーゼＡ２からなる群から選ばれる、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】  第２酵素は、グリセロール−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、グリセロール−３−リン酸オキシダーゼ、グリセロホスホリルコリンホスホジエステラーゼ、コリンオキシダーゼ、セリンデヒドロゲナーゼ、セリンデアミナーゼ、アルデヒドデヒドロゲナーゼ、エタノールアミンデアミナーゼ、グリセロキナーゼ、およびグリセロールデヒドロゲナーゼからなる群から選ばれる、請求項３０記載の方法。
【請求項３３】  基質はグリセロール−３−リン酸である、請求項３０記載の方法。
【請求項３４】  検出可能な産物は過酸化水素である、請求項３０記載の方法。
【請求項３５】  第１酵素はホスホリパーゼＢまたはリゾホスホリパーゼでである、請求項３０記載の方法。
【請求項３６】  体液の試料は、血漿、血清、尿、唾液、腹水、脳脊髄液、および胸膜液からなる群から選ばれる、請求項３０記載の方法。
【請求項３７】  更に、体液の試料から脂質を抽出する工程を含む、請求項３０記載の方法。
【請求項３８】  試験被験者から採取した体液の試料中のリゾホスホリピドの濃度を検出するための診断用キットであって、該キットは、
ａ）リゾホスホリピドまたはホスファチジルコリンを消化して第２酵素反応のための基質を与える、第１酵素；および、
ｂ）該第１酵素を用いたリゾホスホリピドまたはホスファチジルコリンの消化によって得られる基質を消化するための、第２酵素
を含む、診断用キット。
【請求項３９】  ホスファチジルコリンを消化する第１酵素は、リゾホスホリパーゼまたはホスホリパーゼＢである、請求項３８記載の診断用キット。
【請求項４０】  リゾホスホリピドを消化する第１酵素は、ホスホリパーゼＡ１、ホスホリパーゼＡ２、レシチナーゼＢ、およびリゾレシチナーゼからなる群から選ばれる、請求項３８記載の診断用キット。
【請求項４１】  第２酵素はグリセロホスホリルコリンホスホジエステラーゼである、請求項３８記載の診断用キット。
【請求項４２】  更に、運搬または保存の間での試料中のリゾホスホリピドの産生または加水分解を阻害する試薬を含む、請求項３８記載の診断用キット。
【請求項４３】  更に、ホスファチジルコリンを消化するための試薬を含む、請求項３８記載の診断用キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
これらリゾホスホリピド濃度の変化に関連する病気は、炎症性の病気（すなわち血小板の活性化に関係する病気）を含むが、これに限定しない。ホスホリピドの代謝の変化については、多数の疾患で報告されており（総説として、Gregor Cevc（編）による, Phospholipids Handbook, 28章; GuptaによるPhospholipids in Disease. pp. 895-908 (1993)を参照）、これら疾患により、生物学的液体中のリゾホスホリピド濃度およびホスホリピド濃度の変化を生じ得る。これらの疾患としては、鎌状赤血球貧血、糖尿病、筋ジストロフィー、虚血、肝臓疾患、肺疾患、心臓疾患、マラリア、アルツハイマー病、パーキンソン病、婦人科の癌（例えば、卵巣癌、乳癌を含む）、および多数の他の癌を含むが、これらに限定しない。これらの病気の場合では、細胞機能の欠損により、直接的にまたは間接的にホスホリピドの定常濃度の変化を生じる。他の疾患としては、出血障害または血液障害（これは結果的に凝固障害となる、異常な血小板機能に関係する障害を含む）を含む。