【手続補正書】
【提出日】平成17年8月29日(2005.8.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）５’アルファウイルス複製認識配列をコードする第一の核酸配列と、
（ii）アルファウイルス非構造タンパク質ｎｓｐ１、ｎｓｐ２およびｎｓｐ３をコードする第二の核酸と、
（iii）転写プロモーターと、
（iv）少なくとも１つの目的の異種性遺伝子をコードする核酸と、
（ｖ）ＩＲＥＳと、
（vi）アルファウイルス非構造タンパク質ｎｓｐ４をコードする第三の核酸と、
（vii）３’アルファウイルス複製認識配列をコードする第四の核酸と、
を順番に含む組換え核酸分子。
【請求項２】
（ｉ）５’アルファウイルス複製認識配列をコードする第一の核酸配列と、
（ii）アルファウイルス非構造タンパク質ｎｓｐ１、ｎｓｐ２およびｎｓｐ３をコードする第二の核酸と、
（iii）ＩＲＥＳと、
（iv）少なくとも１つの目的の異種性遺伝子をコードする核酸と、
（ｖ）ＩＲＥＳと、
（vi）アルファウイルス非構造タンパク質ｎｓｐ４をコードする第三の核酸と、
（vii）３’アルファウイルス複製認識配列をコードする第四の核酸と
を順番に含む組換え核酸。
【請求項３】
核酸が、ＲＮＡである請求項１に記載の組換え核酸。
【請求項４】
核酸が、ＲＮＡである請求項２に記載の組換え核酸。
【請求項５】
第一、第二、第三および第四の核酸が、ＶＥＥウイルス、セミリキ森林ウイルス、またはシンドビスウイルスに由来する請求項１または２に記載の組換え核酸。
【請求項６】
請求項３に記載のＲＮＡのｃＤＮＡに作動可能なように連結された５’プロモーターを含むアルファウイルスベクター構築物。
【請求項７】
請求項４に記載のＲＮＡのｃＤＮＡに作動可能なように連結された５’プロモーターを含むアルファウイルスベクター構築物。
【請求項８】
感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子の集団を含む組成物であって、各粒子は、請求項３に記載の核酸を含むアルファウイルスレプリコンＲＮＡを含有し、集団は、細胞培養における継代による測定により検出可能な複製コンピテントウイルスを有さない組成物。
【請求項９】
感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子の集団を含む組成物であって、各粒子は、請求項４に記載の核酸を含むアルファウイルスレプリコンＲＮＡを含有し、集団は、細胞培養における継代による測定により検出可能な複製コンピテントウイルスを有さない組成物。
【請求項１０】
転写プロモーターが、アルファウイルス２６Ｓサブゲノムプロモーターである請求項１に記載の組換え核酸。
【請求項１１】
完全なアルファウイルス構造ポリタンパク質コード配列をコードするＤＮＡ配列（ただし、ＤＮＡ配列は、アルファウイルス５’もしくは３’複製認識配列またはアルファウイルスサブゲノムプロモーターをコードしない）に作動可能なように連結されたＤＮＡ配列からのＲＮＡの転写を志向するためのプロモーターを含む、アルファウイルス構造タンパク質を発現するための組換えＤＮＡ分子。
【請求項１２】
アルファウイルス構造タンパク質が、ＶＥＥ、シンドビス、Ｓ．Ａ．ＡＲ８６、セミリキ森林ウイルスおよびロスリバーウイルス構造タンパク質からなる群から選択される、請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子。
【請求項１３】
アルファウイルス構造ポリタンパク質コード配列が、１つまたはそれ以上の弱毒変異を含む、請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子。
【請求項１４】
アルファウイルス許容細胞中に
（ｉ）請求項１１に記載の組換え核酸分子と；
（ii）少なくとも１つの異種性ＲＮＡをコードするアルファウイルスレプリコンＲＮＡと；
を含む、感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子を産生するためのヘルパー細胞。
【請求項１５】
前記細胞が、２９３、ＢＨＫ、ベロ、ＣＨＯ、ＣＥＦおよびＤＦ−１(ATCC寄託番号CRL-12203)細胞からなる群から選択される、請求項１４に記載のヘルパー細胞。
【請求項１６】
アルファウイルス構造タンパク質が、ＶＥＥ、シンドビス、Ｓ．Ａ．ＡＲ８６、セミリキ森林ウイルスおよびロスリバーウイルス構造タンパク質からなる群から選択される、請求項１４に記載のヘルパー細胞。
【請求項１７】
アルファウイルス構造ポリタンパク質コード配列が、１つまたはそれ以上の弱毒変異を含む、請求項１４に記載のヘルパー細胞。
【請求項１８】
（ｉ）請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子と、（ii）少なくとも１つの異種性ＲＮＡをコードするアルファウイルスレプリコンＲＮＡとを、アルファウイルス構造ポリタンパク質コード配列が前記ＤＮＡ分子から一過的に発現し、アルファウイルス構造タンパク質を産生して感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子が生成される条件下で、細胞の集団に導入するステップを含む、感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子を生成する方法。
【請求項１９】
前記組換えＤＮＡ分子が、前記細胞の集団にエレクトロポレーションにより導入される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
（ｉ）少なくとも１つのアルファウイルス構造タンパク質コード配列をコードするＤＮＡ配列（ただし、当該ＤＮＡ配列は、アルファウイルス５’もしくは３’複製認識配列またはアルファウイルスサブゲノムプロモーターをコードしない）に作動可能なように連結されたＤＮＡ配列からのＲＮＡの転写を志向するための構成性プロモーターを含む、アルファウイルス構造タンパク質を一過的に発現するための第一の組換えＤＮＡ分子と、
（ii）前記第一の組換えＤＮＡ分子のアルファウイルス構造タンパク質コード配列中に存在しない少なくとも１つのアルファウイルス構造タンパク質コード配列をコードするＤＮＡ配列（ただし、当該ＤＮＡ配列は、アルファウイルス５’もしくは３’複製認識配列またはアルファウイルスサブゲノムプロモーターをコードせず、前記第一および第二の組換えＤＮＡ分子が、全体として、全てのアルファウイルス構造タンパク質をコードする）に作動可能なように連結されたＤＮＡ配列からのＲＮＡの転写を志向するための構成性プロモーターを含む、アルファウイルス構造タンパク質を一過的に発現するための第二の組換えＤＮＡ分子と、
（iii）少なくとも１つの異種性ＲＮＡをコードするアルファウイルスレプリコンＲＮＡと
を、前記第一および第二の組換えＤＮＡ分子が自律的プラスミドから発現し、前記アルファウイルス構造タンパク質コード配列が前記第一および第二の組換えＤＮＡ分子から一過的に発現し、アルファウイルス構造タンパク質を産生して感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子が生成される条件下で、細胞の集団に導入するステップであって、前記第一および第二の組換えＤＮＡ分子が、エレクトロポレーションによって細胞の集団に導入される、ステップを含む、感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子を生成する方法。
【請求項２１】
前記細胞の集団が、２９３、ＢＨＫ、ベロ、ＣＨＯ、ＣＥＦおよびＤＦ−１(ATCC寄託番号CRL-12203)細胞からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記第一の組換えＤＮＡ分子の前記アルファウイルス構造タンパク質が、ＶＥＥ、シンドビス、Ｓ．Ａ．ＡＲ８６、セミリキ森林ウイルスおよびロスリバーウイルス構造タンパク質からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記第二の組換えＤＮＡ分子の前記アルファウイルス構造タンパク質が、ＶＥＥ、シンドビス、Ｓ．Ａ．ＡＲ８６、セミリキ森林ウイルスおよびロスリバーウイルス構造タンパク質からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
少なくとも前記第一の組換えＤＮＡ分子もしくは前記第二の組換えＤＮＡ分子、または前記第一および第二の組換えＤＮＡ分子の双方の前記アルファウイルス構造タンパク質コード配列が、１つまたはそれ以上の弱毒変異を含む、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
前記細胞の集団が、２９３、ＢＨＫ、ベロ、ＣＨＯ、ＣＥＦおよびＤＦ−１(ATCC寄託番号CRL-12203)細胞からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記アルファウイルス構造タンパク質が、ＶＥＥ、シンドビス、Ｓ．Ａ．ＡＲ８６、セミリキ森林ウイルスおよびロスリバーウイルス構造タンパク質からなる群から選択される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２７】
前記アルファウイルス構造タンパク質コード配列が、１つまたはそれ以上の弱毒変異を含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２８】
請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子を有するベクター。
【請求項２９】
請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子を有する細胞。
【請求項３０】
請求項２８に記載のベクターを有する細胞。
【請求項３１】
（ｉ）請求項１１に記載の組換えＤＮＡ分子と、（ii）少なくとも１つの異種性ＲＮＡをコードするアルファウイルスレプリコンＲＮＡとを、アルファウイルス構造ポリタンパク質コード配列が前記ＤＮＡ分子から一過的に発現し、アルファウイルス構造タンパク質を産生し、感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子の集団が生成される条件下で、細胞の集団に導入するステップを含む、感染性の欠損アルファウイルスレプリコン粒子の集団を生成する方法。
【請求項３２】
前記細胞の集団が、２９３、ＢＨＫ、ベロ、ＣＨＯ、ＣＥＦおよびＤＦ−１(ATCC寄託番号CRL-12203)細胞からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記アルファウイルス構造タンパク質が、ＶＥＥ、シンドビス、Ｓ．Ａ．ＡＲ８６、セミリキ森林ウイルスおよびロスリバーウイルス構造タンパク質からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記アルファウイルス構造ポリタンパク質コード配列が、１つまたはそれ以上の弱毒変異を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記組換えＤＮＡ分子が、前記細胞の集団にエレクトロポレーションにより導入される、請求項３１に記載の方法。