【手続補正書】
【提出日】平成18年2月20日(2006.2.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
N-末端からC-末端の方向に第一のドメインおよび第二のドメインを含み、該第一および第二のドメインが2つの異なる当初のドデカペプチドに由来し、かつハイブリッドメガヌクレアーゼがDNA切断を起こし得る、ハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項２】
第一のドメインが第一のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、かつ第二のドメインが第二のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、該第一および第二のドメインが適切なリンカーにより結合している、請求項1に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項３】
第一のドメインがモノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、かつ第二のドメインがジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、該第一および第二のドメインが適切なリンカーにより結合している、請求項1に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項４】
第一のドメインがジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、かつ第二のドメインがモノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、該第一および第二のドメインが適切なリンカーにより結合している、請求項1に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項５】
第一のドメインがモノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、かつ第二のドメインが別のモノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、該第一および第二のドメインが適切なリンカーにより結合している、請求項1に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項６】
第一のドメインが第一のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのN-末端ドメインに由来し、かつ第二のドメインが第二のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのC-末端ドメインに由来する、請求項2に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項７】
第一のドメインが第一のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのN-末端ドメインに由来し、かつ第二のドメインが第二のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのN-末端ドメインに由来する、請求項2に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項８】
第一のドメインが第一のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのC-末端ドメインに由来し、かつ第二のドメインが第二のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのC-末端ドメインに由来する、請求項2に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項９】
第一のドメインが第一のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのC-末端ドメインに由来し、かつ第二のドメインが第二のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのN-末端ドメインに由来する、請求項2に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１０】
第二のドメインが、ジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのN-末端ドメインに由来する、請求項3に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１１】
第二のドメインが、ジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのC-末端ドメインに由来する、請求項3に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１２】
第一のドメインが、ジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのN-末端ドメインに由来する、請求項4に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１３】
第一のドメインが、ジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼのC-末端ドメインに由来する、請求項4に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１４】
適切なリンカーが、ジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来するループを含む、請求項1〜13のいずれか1つに記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１５】
適切なリンカーが、第一のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来するループまたはその部分を含む、請求項2、4、6、7および12のいずれか1つに記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１６】
適切なリンカーが、第二のジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来するループまたはその部分を含む、請求項2、3、6、8および11のいずれか1つに記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１７】
ドデカペプチドメガヌクレアーゼが、I-Sce I、I-Chu I、I-Dmo I、I-Cre I、I-Csm I、PI-Sce I、PI-Tli I、PI-Mtu I、I-Ceu I、I-Sce II、I-Sce III、HO、PI-Civ I、PI-Ctr I、PI-Aae I、PI-Bsu I、PI-Dha I、PI-Dra I、PI-Mav I、PI-Mch I、PI-Mfu I、PI-Mfl I、PI-Mga I、PI-Mgo I、PI-Min I、PI-Mka I、PI-Mle I、PI-Mma I、PI-Msh I、PI-Msm I、PI-Mth I、PI-Mtu I、PI-Mxe I、PI-Npu I、PI-Pfu I、PI-Rma I、PI-Spb I、PI-Ssp I、PI-Fac I、PI-Mja I、PI-Pho I、PI-Tag I、PI-Thy I、PI-Tko IおよびPI-Tsp I；好ましくはI-Sce I、I-Chu I、I-Dmo I、I-Cre I、I-Csm I、PI-Pfu I、PI-Sce I、PI-Tli I、PI-Mtu I、I-Ceu I、I-Sce II、I-Sce IIIおよびHOからなる群より選択される、請求項1〜16のいずれか1つに記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１８】
ドデカペプチドメガヌクレアーゼが、I-Sce I、I-Chu I、I-Dmo I、I-Cre I、I-Csm I、PI-Sce I、PI-Pfu I、PI-Tli I、PI-Mtu IおよびI-Ceu Iからなる群より選択される、請求項17に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項１９】
ジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼがI-Dmo Iであり、かつモノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼがI-Cre Iである、請求項4または12に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項２０】
ハイブリッドメガヌクレアーゼが、配列番号4の配列を含む、請求項19に記載のハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項２１】
N-末端からC-末端の方向に該第一のドメインおよび該第二のドメインを含み、各ドメインが同じジ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、かつ第一のドメインがC-末端ドメインに由来し、第二のドメインがN-末端ドメインに由来し、ハイブリッドメガヌクレアーゼがDNA切断を起こし得る、ハイブリッドメガヌクレアーゼ。
【請求項２２】
N-末端からC-末端の方向に該第一および第二のドメインを含み、第一および第二のドメインが同じモノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼに由来し、単鎖メガヌクレアーゼがDNA切断を起こし得る、単鎖メガヌクレアーゼ。
【請求項２３】
モノ-ドデカペプチドメガヌクレアーゼがI-Creである、請求項22に記載の単鎖メガヌクレアーゼ。
【請求項２４】
単鎖メガヌクレアーゼが、配列番号6の配列を含む、請求項23に記載の単鎖メガヌクレアーゼ。
【請求項２５】
請求項1〜24のいずれか1つに記載のメガヌクレアーゼをエンコードする精製または組換えポリヌクレオチド。
【請求項２６】
請求項1〜24のいずれか1項に記載のメガヌクレアーゼについてのハイブリッド標的部位および切断部位を含む、精製または組換えポリヌクレオチド。
【請求項２７】
部位が、当初のドデカペプチドメガヌクレアーゼの2つの半分の部位を含む、請求項26に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
請求項25〜27のいずれか1つに記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項２９】
請求項25〜27のいずれか1つに記載のポリヌクレオチド、請求項28に記載のベクターまたは請求項1〜24のいずれか1つに記載のメガヌクレアーゼを含む宿主細胞。
【請求項３０】
分子生物学的道具としての、請求項25〜27のいずれか1つに記載のポリヌクレオチド、請求項28に記載のベクターまたは請求項1〜24のいずれか1つに記載のメガヌクレアーゼの使用。
【請求項３１】
遺伝子工学のための、請求項25〜27のいずれか1つに記載のポリヌクレオチド、請求項28に記載のベクターまたは請求項1〜24のいずれか1つに記載のメガヌクレアーゼの使用。
【請求項３２】
遺伝子治療のための、請求項25〜27のいずれか1つに記載のポリヌクレオチド、請求項28に記載のベクターまたは請求項1〜24のいずれか1つに記載のメガヌクレアーゼの使用。
【請求項３３】
1) 請求項1〜24のいずれか1つに記載の対応するメガヌクレアーゼを用いて、ハイブリッド標的部位を含む標的遺伝子座に二本鎖切断を導入し；そして
2) 標的遺伝子座に、相同配列を側面に有し、導入する配列を含む標的構築物を提供する工程を含む、遺伝子工学の方法。
【請求項３４】
標的遺伝子座がゲノム遺伝子座である、請求項33に記載の方法。
【請求項３５】
メガヌクレアーゼが、請求項25に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターによるか、または該メガヌクレアーゼ自身のいずれかにより提供される、請求項33〜34のいずれか1つに記載の方法。
【請求項３６】
ウイルスゲノムの二本鎖切断が、請求項1〜24のいずれか1つに記載のメガヌクレアーゼにより誘導され、かつ該二本鎖切断が、ウイルスゲノムまたはその部分の欠失に導く組換え事象を誘導する、ウイルスゲノムまたはその部分を欠失する方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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