【手続補正書】
【提出日】平成17年9月15日(2005.9.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
野生型ＴＮＦ−アルファ配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む非天然産生変異型ＴＮＦ−アルファタンパク質であって、該変異型ＴＮＦ−アルファタンパク質が野生型ＴＮＦ−アルファと相互作用して、受容体のシグナル伝達を活性化できない混合三量体を形成するものである、非天然産生変異型ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項２】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質が、野生型ＴＮＦ−アルファ配列と比較して２ないし５のアミノ酸置換を有する、請求項１に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項３】
該野生型ＴＮＦ−アルファ配列と比較した少なくとも１つの置換が、ラージドメイン、スモールドメイン、ＤＥループ、三量体接触面およびそれらの組合せから選択される群において為されている、請求項１に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項４】
少なくとも１つの置換が、該ラージドメインにおいて為されており、その位置が、２１、３０、３１、３２、３３、３５、６５、６６、６７、１１１、１１２、１１５、１４０、１４３、１４４、１４５、１４６および１４７からなる群から選択される、請求項３に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項５】
少なくとも１つの置換が、該スモールドメインにおいて為されており、その位置が、７５および９７からなる群から選択される、請求項３または請求項４に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項６】
少なくとも１つの置換が、該ＤＥループにおいて為されており、その位置が、８４、８６、８７および９１からなる群から選択される、請求項３ないし請求項５のいずれかに記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項７】
少なくとも１つの置換が、該三量体接触面において為されており、その位置が、３４、９１および５７からなる群から選択される、請求項３ないし請求項６のいずれかに記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項８】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質の置換位置が、２１、２３、３０、３１、３２、３３、３４、３５、５７、６５、６６、６７、７５、８４、８６、８７、９１、９７、１１１、１１２、１１５、１４０、１４３、１４４、１４５、１４６および１４７からなる群から選択される、請求項１に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項９】
２つの置換がある、請求項８に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項１０】
３つの置換がある、請求項８に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項１１】
該２つの置換が、５７、７５、８６、８７、９７、１１５、１４３、１４５および１４６からなる群から選択される、請求項９に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項１２】
該置換が、Ｑ２１Ｃ、Ｑ２１Ｒ、Ｅ２３Ｃ、Ｎ３４Ｅ、Ｖ９１Ｅ、Ｑ２１Ｒ、Ｎ３０Ｄ、Ｒ３１Ｃ、Ｒ３１Ｉ、Ｒ３１Ｄ、Ｒ３１Ｅ、Ｒ３２Ｄ、Ｒ３２Ｅ、Ｒ３２Ｓ、Ａ３３Ｅ、Ｎ３４Ｅ、Ｎ３４Ｖ、Ａ３５Ｓ、Ｄ４５Ｃ、Ｌ５７Ｆ、Ｌ５７Ｗ、Ｌ５７Ｙ、Ｋ６５Ｄ、Ｋ６５Ｅ、Ｋ６５Ｉ、Ｋ６５Ｍ、Ｋ６５Ｎ、Ｋ６５Ｑ、Ｋ６５Ｔ、Ｋ６５Ｓ、Ｋ６５Ｖ、Ｋ６５Ｗ、Ｇ６６Ｋ、Ｇ６６Ｑ、Ｑ６７Ｄ、Ｑ６７Ｋ、Ｑ６７Ｒ、Ｑ６７Ｓ、Ｑ６７Ｗ、Ｑ６７Ｙ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ７５Ｋ、Ｌ７５Ｑ、Ａ８４Ｖ、Ｓ８６Ｑ、Ｓ８６Ｒ、Ｙ８７Ｈ、Ｙ８７Ｒ、Ｖ９１Ｅ、Ｉ９７Ｒ、Ｉ９７Ｔ、Ａ１１１Ｒ、Ａ１１１Ｅ、Ｋ１１２Ｄ、Ｋ１１２Ｅ、Ｙ１１５Ｄ、Ｙ１１５Ｅ、Ｙ１１５Ｆ、Ｙ１１５Ｈ、Ｙ１１５Ｉ、Ｙ１１５Ｋ、Ｙ１１５Ｌ、Ｙ１１５Ｍ、Ｙ１１５Ｎ、Ｙ１１５Ｑ、Ｙ１１５Ｒ、Ｙ１１５Ｓ、Ｙ１１５Ｔ、Ｙ１１５Ｗ、Ｄ１４０Ｋ、Ｄ１４０Ｒ、Ｄ１４３Ｅ、Ｄ１４３Ｋ、Ｄ１４３Ｌ、Ｄ１４３Ｒ、Ｄ１４３Ｎ、Ｄ１４３Ｑ、Ｄ１４３Ｒ、Ｄ１４３Ｓ、Ｆ１４４Ｎ、Ａ１４５Ｄ、Ａ１４５Ｅ、Ａ１４５Ｆ、Ａ１４５Ｈ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５Ｍ、Ａ１４５Ｎ、Ａ１４５Ｑ、Ａ１４５Ｒ、Ａ１４５Ｓ、Ａ１４５Ｔ、Ａ１４５Ｙ、Ｅ１４６Ｋ、Ｅ１４６Ｌ、Ｅ１４６Ｍ、Ｅ１４６Ｎ、Ｅ１４６Ｒ、Ｅ１４６ＳおよびＳ１４７Ｒからなる置換の群から選択される、請求項８に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項１３】
該置換が、Ｌ５７Ｆ、Ｌ５７ＷまたはＬ５７Ｙ、およびＬ８７Ｙ、Ｙ１１５Ｉ、Ｙ１１５Ｑ、Ｙ１１５Ｔ、Ｄ１４３Ｋ、Ｄ１４３Ｒ、Ｄ１４３Ｅ、Ａ１４５Ｅ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｒからなる群からのものを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項１４】
該置換が、Ｖ９１ＥおよびＮ３４Ｅを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項１５】
該置換が、さらにＹ１１５Ｉ、Ｙ１１５Ｔ、Ｄ１４３Ｋ、Ｄ１４３Ｒ、Ｄ１４３Ｅ、Ａ１４５Ｅ、Ａ１４５Ｒ、Ｅ１４６ＫおよびＥ１４６Ｒからなる群からの置換を含む、請求項１４に記載の変異型タンパク質。
【請求項１６】
該置換が、Ｖ９１Ｅ、Ｎ３４ＥおよびＡ１４５ＲまたはＡ１４５Ｅのいずれかを含む、請求項１５に記載の変異型タンパク質。
【請求項１７】
該置換が、Ｙ１１５Ｉ、Ｙ１１５Ｑ、Ｙ１１５Ｍ、Ｙ１１５Ｔ、Ｅ１４３Ｎ、Ｅ１４３Ｑ、Ａ１４５Ｅ、Ａ１４５ＫまたはＡ１４５Ｒの少なくとも２つを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項１８】
該置換が、Ｙ１１５ＩまたはＹ１１５Ｔ、およびＡ１４５ＥまたはＡ１４５Ｒのいずれかを含む、請求項１７に記載の変異型タンパク質。
【請求項１９】
該置換が、Ｙ１１５ＭまたはＹ１１５Ｑのいずれか、およびＬ５７Ｉ、Ｌ５７Ｗ、Ｌ５７Ｙ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ７５Ｑ、Ｓ８６Ｑ、Ｙ８７Ｈ、Ｙ８７Ｒ、Ｉ９７Ｒ、Ｉ９７Ｔ、Ｅ１４３Ｎ、Ｅ１４３Ｑ、Ａ１４５Ｋ、Ａ１４５ＲまたはＥ１４６Ｋの少なくとも１つを含む、請求項１３に記載の変異型タンパク質。
【請求項２０】
該置換が、Ａ１４５Ｒ、およびＬ５７Ｆ、Ｌ７５Ｅ、Ｌ７５Ｑ、Ｙ８７Ｈ、またはＩ９７Ｔの少なくとも１つを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項２１】
該置換がＡ１４５ＲおよびＹ８７Ｈを含む、請求項２０に記載の変異体。
【請求項２２】
該置換がＬ５７ＦおよびＡ１４５Ｅを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項２３】
該置換が、Ｋ６５ＤまたはＫ６５Ｅ、およびＤ１４３ＫまたはＤ１４３Ｒのいずれかを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項２４】
該置換が、Ｙ８７Ｈ、およびＬ７５ＥまたはＬ７５Ｋのいずれか、およびＹ１１５ＱまたはＡ１４５Ｒの少なくとも１つを含む、請求項１１に記載の変異型タンパク質。
【請求項２５】
野生型ＴＮＦ−アルファ配列と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、少なくとも単量体形態の非天然産生変異型ＴＮＦ−アルファタンパク質であって、該変異型ＴＮＦ−アルファタンパク質が、受容体結合部位で受容体接触面と相互作用して、該受容体が受容体シグナル伝達を活性化できないようにするものである、非天然産生変異型ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項２６】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質が単量体である、請求項２５に記載の変異型タンパク質。
【請求項２７】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質が二量体である、請求項２５に記載の変異型タンパク質。
【請求項２８】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質が、野生型ＴＮＦ−アルファ配列と比較して１ないし約２５のアミノ酸置換を有する、請求項２５に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項２９】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質の置換位置が、６、７、８、９、１０、１１、１３、１５、３３、３４、３６、５３、５４、５５、５７、５９、６１、６３、６９、７２、７３、７５、８２、８７、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０６、１０７、１０９、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５１、１５５、１５６および１５７からなる群から選択される、請求項２５に記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項３０】
該非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質が受容体結合部位を遮断するものである、請求項２５ないし請求項２９のいずれかに記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質。
【請求項３１】
該タンパク質がＰＥＧ化されている、請求項１ないし請求項３０のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項３２】
該タンパク質が、１０、２１、２３、２４、２５、２７、３１、４２、４４、４５、４６、８６、８７、８８、９０、１０７、１０８、１２８、１１０、１４０および１４５からなる群から選択される位置でＰＥＧ化されている、請求項３１に記載の変異型タンパク質。
【請求項３３】
該タンパク質が、２１、２３、３１および４５からなる群から選択される位置でＰＥＧ化されている、請求項３２に記載の変異型タンパク質。
【請求項３４】
該タンパク質がＮ末端でＰＥＧ化されている、請求項３３に記載の変異型タンパク質。
【請求項３５】
該ＰＥＧ化タンパク質が、受容体結合を乱すものである、請求項３１ないし請求項３４のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項３６】
Ｎ末端、Ｃ末端またはＮおよびＣ末端の両方からの約１ないし約５５のアミノ酸が欠失している、請求項１に記載の変異型タンパク質。
【請求項３７】
Ｎ末端の残基が、残基１０を超えて欠失している、請求項３６に記載の変異型タンパク質。
【請求項３８】
最初の４７のＮ末端アミノ酸が欠失している、請求項３７に記載の変異型タンパク質。
【請求項３９】
Ｃ末端のロイシンが欠失している、請求項３６に記載の変異型タンパク質。
【請求項４０】
該タンパク質が、環状に変更されているか、または環状化されている、請求項１ないし請求項３９のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項４１】
２つまたはそれ以上の修飾ドメインが、ジスルフィド結合を介して共有結合により連結されている、請求項１ないし請求項４０のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項４２】
２つまたはそれ以上の修飾ドメインが、化学的クロスリンクを介して共有結合により連結されている、請求項１ないし請求項４１のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項４３】
２つまたはそれ以上のＴＮＦ−アルファ変異型タンパク質が、リンカーペプチドを介して共有結合により連結されている、請求項１ないし請求項４２のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項４４】
該リンカーペプチドが、少なくとも１つの、かつ、約３０を超えないアミノ酸残基の配列のものである、請求項４３に記載の変異型タンパク質。
【請求項４５】
該リンカーペプチドが、少なくとも５つの、かつ、約２０を超えないアミノ酸残基の配列である、請求項４４に記載の変異型タンパク質。
【請求項４６】
該リンカーペプチドが、少なくとも１０の、かつ、約１５を超えないアミノ酸残基の配列である、請求項４５に記載の変異型タンパク質。
【請求項４７】
リンカーペプチドが、次のアミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＴｈｒの、１つまたはそれ以上を含む、請求項４４ないし請求項４６のいずれかに記載の変異型タンパク質。
【請求項４８】
請求項１ないし請求項４７のいずれかに記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質をコードする組換え核酸。
【請求項４９】
請求項４８に記載の組換え核酸を含む発現ベクター。
【請求項５０】
請求項４８に記載の組換え核酸を含む宿主細胞。
【請求項５１】
請求項４９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項５２】
請求項５０に記載の宿主細胞を、該核酸の発現に適する条件で培養することを含む、非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質の産生方法。
【請求項５３】
該ＴＮＦ−アルファタンパク質を回収することをさらに含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
請求項１ないし請求項４７のいずれかに記載の非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質および医薬担体を含む、医薬組成物。
【請求項５５】
処置を必要とする患者に、非天然産生ＴＮＦ−アルファタンパク質を投与することを含む、ＴＮＦ−アルファ関連障害の処置方法。
【請求項５６】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が自己免疫疾患である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が脊椎関節炎である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が炎症性腸疾患である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が乾癬である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６１】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が血液悪性腫瘍である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６２】
該ＴＮＦ−アルファ関連障害が多発性骨髄腫（ＭＭ）、骨髄異形性症候群（ＭＤＳ）または急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６３】
該症状がリウマチ性関節炎である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６４】
該障害がクローン病である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６５】
該障害が敗血症または敗血症ショックである、請求項５５に記載の方法。
【請求項６６】
該障害が末梢神経損傷である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６７】
該障害が慢性狭窄性損傷（Chronic Constriction Injury）である、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
該障害が脱髄性疾患である、請求項４６に記載の方法。
【請求項６９】
該障害がギランバレー症候群である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７０】
該障害が多発性硬化症である、請求項６８に記載の方法。
【請求項７１】
該障害が癌である、請求項４６に記載の方法。