【手続補正書】
【提出日】平成18年5月9日(2006.5.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトおよびマウスのオーロラ−Ａキナーゼを特異的に認識し、以下の特性：
前記ヒトまたはマウスのオーロラ−Ａタンパク質を含有するメンブレン上に固定することができる、
免疫沈降により前記ヒトおよびマウスのオーロラ−Ａタンパク質の検出、適切な場合には精製を可能にする、
前記オーロラ−Ａタンパク質が分泌される生物組織の染色を可能にする、および
前記ヒトおよびマウスのオーロラ−Ａタンパク質の酵素活性を阻害しない、
を有する抗オーロラ−Ａモノクローナル抗体であって、
該モノクローナル抗体が、以下の工程：
−ゲノム中にオーロラ−ＡをコードするヒトｃＤＮＡが挿入された細菌発現ベクターにより形質転換されたE.coli細菌により産生された組み換えオーロラ−Ａタンパク質キナーゼを１５日間にわたってマウスに５回注射し、前記マウスを犠牲死させ、これらのマウスの脾臓細胞と培養において不死化されたハムスター細胞とを融合させてハイブリドーマを得る工程、
−前の工程中で前記マウスの免疫感作に用いられた前記組み換えタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生するハイブリドーマをスクリーニングし、この第１のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養ヒトＨｅＬａ細胞の抽出物由来の内因性オーロラ−Ａタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する、前の工程で回収された前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第２のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養ヒト細胞の中心体および紡錘体極を間接免疫蛍光法で認識することができる抗体を産生する、前の工程で回収された前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第３のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養マウス細胞の抽出物由来のマウスの内因性オーロラ−Ａタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する、前の工程で回収された前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第４のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養マウス細胞の中心体および紡錘体極を間接免疫蛍光法で認識することができる抗体を産生する、前の工程で回収した前記ハイブリドーマをスクリーニングする工程、
−前のスクリーニング工程後に陽性のハイブリドーマをクローニングすることにより回収および精製し、先に定義した特性をすべて有するモノクローナル抗体を産生する工程、
により得られる、前記抗オーロラ−Ａモノクローナル抗体。
【請求項２】
パスツール研究所のCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（ＣＮＣＭ）に番号Ｉ−３０５０で寄託されているハイブリドーマにより分泌され、３５Ｃ１抗体とも呼ばれる、請求項１に記載のモノクローナル抗体。
【請求項３】
ヒトまたは動物での癌のインビトロ診断法または予後法を行うための、請求項１または２に記載のモノクローナル抗体の使用。
【請求項４】
乳癌、胃癌、および結腸直腸癌などの充実性腫瘍のインビトロ診断法または予後法を行うための、請求項３項に記載のモノクローナル抗体の使用。
【請求項５】
ＰＣＮＡタンパク質のマーカーなどの細胞増殖マーカーを併用する、請求項３または４に記載の使用。
【請求項６】
ヒトまたは動物での、請求項４に記載の癌のインビトロ診断法または予後法であって、以下の工程：
−個体から採取した生物試料の存在下に請求項１または２に記載のモノクローナル抗体を置く工程（該抗体は、適切な場合には固体支持体上に固定される）、
−前の工程中に前記モノクローナル抗体と前記生物試料中に存在し得る前記オーロラ−Ａタンパク質とで形成された複合体中の前記オーロラ−Ａタンパク質に結合した前記モノクローナル抗体または前記モノクローナル抗体に結合した前記オーロラ−Ａタンパク質のいずれかを認識する、標識化された試薬、特に標識化された抗体を用いて、前記生物試料中に存在し得る前記オーロラ−Ａタンパク質を検出し、適切な場合には定量化する工程（これは必要な場合には前記固体支持体を適当にリンスした後に行う）、
を含むことを特徴とする、前記方法。
【請求項７】
前記生物試料中の、正常な生理学的値より低いまたは高いオーロラ−Ａタンパク質の量の決定が、診断される癌に対してそれぞれ良好なまたは劣悪な予後を示すことを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
以下：
請求項１または２に記載の抗オーロラ−Ａモノクローナル抗体、
適切な場合には、ＰＣＮＡタンパク質のマーカー、特に抗ＰＣＮＡ抗体などの細胞増殖マーカー、
を含むことを特徴とする、請求項６または７に記載の診断方法を行うためのキット。
【請求項９】
乳癌、結腸直腸癌、および胃癌などの癌の処置を意図する医薬の調製のための、請求項１または２に記載の抗体の使用。
【請求項１０】
請求項１または２に記載の抗体を薬学的に許容し得るベクターと併せて含有する医薬組成物。
【請求項１１】
オーロラ−Ａキナーゼ活性の低下を前記抗体を用いて測定するオーロラ−Ａキナーゼの阻害剤のスクリーニング方法を行うための、請求項１または２に記載の抗オーロラ−Ａモノクローナル抗体の使用。
【請求項１２】
以下の工程：
種々の癌に由来する系などの細胞を試験された阻害剤により処置する工程、
請求項１または２に記載の抗体を用いて前記オーロラ−Ａタンパク質キナーゼを免疫沈降し、前記キナーゼの活性を測定する工程、
を含むことを特徴とする、オーロラ−Ａキナーゼの阻害剤のスクリーニング方法。
【請求項１３】
以下の工程：
−ゲノム中にオーロラ−ＡをコードするヒトｃＤＮＡが挿入された細菌発現ベクターにより形質転換されたE.coli細菌により産生された組み換えオーロラ−Ａタンパク質キナーゼを１５日間にわたってマウスに５回注射し、前記マウスを犠牲死させ、これらのマウスの脾臓細胞と培養において不死化されたハムスター細胞とを融合させてハイブリドーマを得る工程、
−前の工程中で前記マウスの免疫感作に用いられた前記組み換えタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第１のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養ヒトＨｅＬａ細胞の抽出物由来の内因性オーロラ−Ａタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する、前の工程で回収された前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第２のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養ヒト細胞の中心体および紡錘体極を間接免疫蛍光法で認識することができる抗体を産生する、前の工程で回収された前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第３のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養マウス細胞の抽出物由来のマウスの内因性オーロラ−Ａタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する、前の工程で回収された前記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第４のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養マウス細胞の中心体および紡錘体極を間接免疫蛍光法で認識することができる抗体を産生する、前の工程で回収した前記ハイブリドーマをスクリーニングする工程、
−前のスクリーニング工程後に陽性のハイブリドーマをクローニングすることにより回収および精製し、請求項１に記載の特性をすべて有するモノクローナル抗体を産生する工程、
を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の抗オーロラ−Ａモノクローナル抗体の調製方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明は、ヒトおよびマウスのオーロラ−Ａキナーゼを特異的に認識し、以下の特性：
上記ヒトまたはマウスのオーロラ−Ａタンパク質を含有するメンブレン上に固定することができる、
免疫沈降により上記ヒトおよびマウスのオーロラ−Ａタンパク質の検出、適切な場合には精製を可能にする、
上記オーロラ−Ａタンパク質が分泌される生物組織の染色を可能にする、および
上記ヒトおよびマウスのオーロラ−Ａタンパク質の酵素活性を阻害しない、
を有する抗オーロラ−Ａモノクローナル抗体であって、
該モノクローナル抗体が、以下の工程：
−ゲノム中にオーロラ−ＡをコードするヒトｃＤＮＡが挿入された細菌発現ベクターにより形質転換されたE.coli細菌により産生された組み換えオーロラ−Ａタンパク質キナーゼを１５日間にわたってマウスに５回注射し、上記マウスを犠牲死させ、これらのマウスの脾臓細胞と培養物中で不死化されたハムスター細胞とを融合させてハイブリドーマを得る工程、
−前の工程中で上記マウスの免疫感作に用いられた上記組み換えタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する上記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第１のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養ヒトＨｅＬａ細胞の抽出物由来の内因性（endogenous）オーロラ−Ａタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する、前の工程で回収された上記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第２のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養ヒト細胞の中心体および紡錘体極を間接免疫蛍光法で認識することができる抗体を産生する、前の工程で回収された上記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第３のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養マウス細胞の抽出物由来のマウスの内因性オーロラ−Ａタンパク質を免疫沈降することができる抗体を産生する、前の工程で回収された上記ハイブリドーマをスクリーニングし、この第４のスクリーニング後に陽性のハイブリドーマを回収する工程、
−培養マウス細胞の中心体および紡錘体極を間接免疫蛍光法で認識することができる抗体を産生する、前の工程で回収した上記ハイブリドーマをスクリーニングする工程、
−前のスクリーニング工程後に陽性のハイブリドーマをクローニングすることにより回収および精製し、先に定義した特性をすべて有するモノクローナル抗体を産生する工程、
により得られるモノクローナル抗体に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１２】
したがって、本発明の対象は、より具体的には、３５Ｃ１抗体とも呼ばれる先に記載のモノクローナル抗体であり、該抗体は、２００３年６月１２日にパスツール研究所のCollection Nationale de Cultures de Microorganismes（ＣＮＣＭ）に番号Ｉ−３０５０として寄託されたハイブリドーマにより分泌される。