【手続補正書】
【提出日】平成18年8月7日(2006.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
安定化試薬組成物であって：
（ａ）多種のホルムアルデヒド−アンモニウム複合体を生成する反応物；
（ｂ）少なくとも１つのホスファターゼ酵素活性阻害剤；及び
（ｃ）少なくとも１つのプロテアーゼ酵素活性阻害剤、
を含んで成る組成物。
【請求項２】
血液試料が前記組成物で処理されてから少なくとも２４時間当該血液試料中の血小板上でのＣＤ６２ｐの発現を安定化させる能力を特徴とする、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項３】
前記血液試料が更に抗凝固剤又は凝固経路阻害剤を含む、請求項２に記載の試薬組成物。
【請求項４】
前記抗凝固剤又は阻害剤が、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸塩、ヘパリン、フッ化ナトリウム及びヒルジン、並びにそれらの混合物から成る群から選択される、請求項３に記載の試薬組成物。
【請求項５】
前記複合体が、（ａ）ヘキサメチレンテトラミン、（ｂ）メチレンイミン、（ｃ）メチロール；（ｄ）ヘミヘキサミン、（ｅ）メチレンが架橋したアミノ、アミド及びグアニジル基を含むシクロトリメチレントリアミン；並びに（ｅ）細胞表面上のポリペプチド鎖又はタンパク質をメチレン架橋で架橋する複合体、並びに（ｆ）（ａ）〜（ｅ）の組み合わせ、から成る群から選択される、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項６】
前記反応物が１〜４個の炭素原子の脂肪族アルデヒド及びアンモニウム塩溶液を含んで成る、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記反応物がホルムアルデヒド又はパラホルムアルデヒド及びアンモニウム塩溶液を含んで成る、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記反応物が、加水分解時にホルムアルデヒドを生成させる化合物及びアンモニウム塩溶液を含んで成る、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記化合物がエチレンオキシド又はプロピレンオキシドから成る群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記アンモニウム塩が、二塩基性のクエン酸アンモニウム、塩化アンモニウム、フッ化アンモニウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、過硫酸アンモニウム、スルファミン酸アンモニウム、酢酸アンモニウム、カルバミン酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、乳酸アンモニウム、シュウ酸アンモニウム、酒石酸アンモニウム、チオシアン酸アンモニウム、水酸化アンモニウム、及び前記アンモニウム塩のうちのいずれかの組み合わせ、から成る群から選択される、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項１１】
前記プロテアーゼ阻害剤が、フェニルメタンスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）、フッ化４−（２−アミノエチル）ベンジンスルホニル塩酸塩（ＡＥＢＳＦ）、抗トロンビン血漿タンパク質、ＡＰＭＳＦ、４−アミジノフェニルメタンスルホニル−フルオリド−ＨＣｌ（ＡＰＭＳＦ）、アプロチニン、ジイソプロピルホスホロフルオリダート（ＤＦＰ）、α−トルエンスルホニルフルオリド、アンチパイン、キモスタチン、ロイペプチン、Ｌ−１−クロロ−３−［４−トシル−アミド］−７−アミノ−２−ヘプタノン−ＨＣｌ（ＴＬＣＫ）、Ｌ−１−クロロ−３−［４−トシルアミド］−４−フェニル−２−ブタノン−ＨＣｌ（ＴＰＣＫ）、Ｅ−６４、アマスタチン、ベスタチン、ジプロチン、ＥＤＴＡ、ペプスタチン、及びそれらの組み合わせ、から成る群から選択される、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項１２】
前記ホスファターゼ阻害剤が、ピロリン酸塩、マイクロシスチンＬＡ、マイクロシスチンＬＲ、テトラミソール、Ｌ−４−ブロモテトラミソール、タウトマイシン(tautomycin)、オカダ酸、カリクリン、スリシフェリル−２３−アセテート、カンタリジン、バナジウム塩、オルトバナジン酸ナトリウム、酒石酸塩、フロリジン、モリブデン酸塩、イミダゾール、及びそれらの組み合わせ、から成る群から選択される、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項１３】
ｐＨ４．５〜８．０内に前記組成物のｐＨ範囲を調節するために無機性又は有機性塩基性塩を更に含んで成る、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項１４】
０．０１〜１Ｍの間のモル濃度を特徴とする、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項１５】
リン酸緩衝液、等張食塩水、トリス緩衝液、Ｎ−（２−アセトアミド）−２−イミノ二酢酸、ピロリン酸緩衝液、酢酸緩衝液、コハク酸緩衝液、マレイン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、イミダゾール緩衝液、炭酸緩衝液、ＭＥＳ緩衝液、ＭＯＰＳ緩衝液、ＨＥＰＥＳ緩衝液、及びそれらの組み合わせ、から成る群から選択される緩衝液を更に含んで成る、請求項１に記載の試薬組成物。
【請求項１６】
２４時間後の前記安定化試料中の血小板上でのＣＤ６２ｐの前記の安定化された発現が、前記組成物の不在下で身体から回収された直後に測定される場合に前記血液試料中で見られるであろうＣＤ６２ｐポジティブ血小板数の±２０％である、請求項５に記載の試薬組成物。
【請求項１７】
前記試料が、前記処理後少なくとも２４時間前記試料中の血小板上でのＣＤ６２ｐの安定化された発現を特徴とし、前記の処理された試料が、前記試料が身体からの回収直後に処理無しで測定される場合に前記血液試料中で見られるであろうＣＤ６２ｐポジティブ血小板数の±２０％を維持する、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の組成物で処理された血小板含有安定化血液試料。
【請求項１８】
血小板含有血液試料中の血液細胞を安定化する方法であって：
前記試料を請求項１〜１６のいずれか１項に記載の試薬組成物と接触させる段階を含んで成り；前記試料中の細胞が、前記処理後少なくとも２４時間の、前記試料中の血小板上でのＣＤ６２ｐの安定化された発現を特徴とし、前記の処理された試料が、前記試料が身体から回収された直後に処理無しで測定される場合に前記血液試料中で見られるであろうＣＤ６２ｐポジティブ血小板数の±２０％を維持する、方法。
【請求項１９】
前記接触段階前にカルシウムキレート化抗凝固剤又は凝固経路阻害剤中に血液試料を引き込む段階を更に含んでなる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記試料と、血小板の物理的及び／又は酵素的変化並びにＣＤ６２ｐ発現の関連した増大を引き起こすことにより細胞応答を活性化させることが知られている活性化材料と接触させることにより血小板の活性化能を測定する段階；
前記試料を２０〜２５℃で７２時間貯蔵する段階；及び
前記試料中の血小板上でのＣＤ６２ｐの発現の変化を、前記試薬組成物で処理されていない試料中の血小板上でのＣＤ６２ｐの発現と比較して決定する段階、を更に含んで成り、前記の試薬で処理された試料中のＣＤ６２ｐ抗原を発現している血小板のパーセンテージが、同じ期間貯蔵された未処理試料中のパーセンテージより低い、請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記活性化材料がホルボール１２−ミリスチン酸１３−酢酸（ＰＭＡ）溶液である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
前記ＰＭＡが前記試料中０．００１〜５μＭの終濃度へと添加される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
安定化を示すＣＤ６２ｐ血小板のパーセンテージの前記変化が、フローサイトメトリーにより、式：
（パラメーターＣ−パラメーターＡ）＞（パラメーターＤ−パラメーターＢ）
に従い測定され、
ここで、パラメーターＡは、安定化試薬組成物を含まない、抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージであり；
パラメーターＢは、安定化試薬組成物と一緒に１時間インキュベートされた、抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージであり；
パラメーターＣは、前記ＰＭＡが０．００１μＭ〜５μＭの濃度へと添加され、且つ最大１時間インキュベートされている、安定化試薬組成物を含まない抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージであり；そして
パラメーターＤは、前記ＰＭＡが０．００１μＭ〜５μＭの濃度へと添加され、且つ最大１時間インキュベートされている、安定化試薬を含む抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
安定化試薬を含む血液中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージが、前記ＰＭＡの添加から最初の１時間２０％超変化しない、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
（ａ）第一の別個の成分として、液体又は粉末形態の１〜４個の炭素原子の脂肪族アルデヒド又は加水分解時にホルムアルデヒドを生成させる反応物；
（ｂ）第二の別個の成分として、アンモニウム塩溶液を含んで成る溶液、ここで、前記成分は、前記組成物の安定化機能に有害に作用しない生理学的ｐＨを有する；
（ｃ）少なくとも１つのホスファターゼ酵素活性阻害剤；
（ｄ）少なくとも１つのプロテアーゼ酵素活性阻害剤；及び
（ｅ）身体から回収してすぐの血小板含有血液試料と前記混合物を接触させる前に、前記成分（ａ）〜（ｄ）を混合するための説明書、
を含んで成るキット。
【請求項２６】
前記阻害剤（ｃ）又は（ｄ）が（ｂ）のアンモニウム塩溶液の一部として提供される、請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記阻害剤（ｃ）又は（ｄ）が、成分（ａ）、（ｂ）及び（ｄ）と異なる別個の成分として提供される、請求項２５に記載のキット。
【請求項２８】
前記阻害剤（ｃ）及び（ｄ）が、成分（ａ）及び（ｂ）と異なる別個の成分の組み合わせで提供される、請求項２５に記載のキット。
【請求項２９】
前記成分（ａ）が１％ホルムアルデヒド水溶液である、請求項２５に記載のキット。
【請求項３０】
前記成分（ｂ）が緩衝液を含む、請求項２５に記載のキット。
【請求項３１】
血小板モノクローナル抗体−色素接合体を更に含んで成る、請求項２５に記載のキット。
【請求項３２】
血液細胞安定化試薬の有効性を評価するための方法であって：
（ａ）細胞安定化試薬組成物で処理した血液試料を、血小板の物理的／酵素的変化を引き起こすことによって細胞応答を活性化する活性化材料と接触させることにより血小板の活性化を測定する段階；
（ｂ）前記試料を２０〜２５℃で７２時間貯蔵する段階；及び
（ｃ）前記試料中の血小板上のＣＤ６２ｐ発現の変化を、前記安定化試薬組成物で処理されてない試料中の血小板上のＣＤ６２ｐの発現と比較して決定する段階、を含んで成り、前記の試薬で処理された試料中のＣＤ６２ｐ抗原を発現する血小板のパーセンテージが、同じ期間貯蔵された未処理試料中のパーセンテージより低い、方法。
【請求項３３】
前記細胞安定化試薬組成物が：
（ａ）多種のホルムアルデヒド−アンモニウム複合体を生成させる反応物；
（ｂ）少なくとも１つのホスファターゼ酵素活性阻害剤；及び
（ｃ）少なくとも１つのプロテアーゼ酵素活性阻害剤、
を含んで成る、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記活性化材料がホルボール１２−ミリスチン酸１３−酢酸（ＰＭＡ）溶液である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記ＰＭＡが前記試料中０．００１〜５μＭの終濃度へと添加される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記血液試料が抗凝固剤又は凝固経路阻害剤で処理される、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
安定化を示すＣＤ６２ｐ血小板のパーセンテージの前記変化が、フローサイトメトリーにより、式：
（パラメーターＣ−パラメーターＡ）＞（パラメーターＤ−パラメーターＢ）
に従い測定され、
ここで、パラメーターＡは、安定化試薬組成物を含まない、抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージであり；
パラメーターＢは、安定化試薬組成物と一緒に１時間インキュベートされた、抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージであり；
パラメーターＣは、前記ＰＭＡが０．００１μＭ〜５μＭの濃度へと添加され、且つ最大１時間インキュベートされている、安定化試薬組成物を含まない抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージであり；そして
パラメーターＤは、前記ＰＭＡが０．００１μＭ〜５μＭの濃度へと添加され、且つ最大１時間インキュベートされている、安定化試薬を含む抗凝固処理された血液試料中のＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
ＣＤ６２ｐポジティブ血小板のパーセンテージの差異が、式パラメーターＤ−パラメーターＢによって表される場合に、前記ＰＭＡの添加から最初の１時間以内に決定したその値の２０％未満である、請求項３７に記載の方法。