【手続補正書】
【提出日】平成18年8月18日(2006.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９１】
【表６】
2006516020.tif 000001
但し、Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１１＝（Ａｒｇ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．１６＝（Ｇｉｎ又はＬｅｕ）；Ｘａａ．  ａｔ  ｒｅｓ．１９＝（Ｉｌｅ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２３＝（Ｇｌｕ又はＧｌｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．２６＝（Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３５＝（Ａｌａ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．３９＝（Ａｓｎ又はＡｓｐ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．４１＝（Ｔｙｒ又はＣｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５０＝（Ｖａｌ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５２＝（Ｓｅｒ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５６＝（Ｐｈｅ又はＬｅｕ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５７＝（Ｉｌｅ又はＭｅｔ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．５８＝（Ａｓｎ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６０＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６１＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ又はＶａｌ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．６５＝（Ｐｒｏ又はＡｌａ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７１＝（Ｇｌｎ又はＬｙｓ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７３＝（Ａｓｎ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．７５＝（Ｉｌｅ又はＴｈｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８０＝（Ｐｈｅ又はＴｙｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８２＝（Ａｓｐ又はＳｅｒ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８４＝（Ｓｅｒ又はＡｓｎ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．８９＝（Ｌｙｓ又はＡｒｇ）；Ｘａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９１＝（Ｔｙｒ又はＨｉｓ）；及びＸａａ  ａｔ  ｒｅｓ．９６＝（Ａｒｇ又はＬｙｓ）。
下記特許又は発行物又は特許出願公開はモルフォゲン又は有用な／活性なモルフォゲンの式を開示し、その全ての内容をここで資料として使用する：欧州特許番号６０１１０６、及び米国特許出願０８／９３７７５５（１９９７年９月２５日出願）。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６０】
Ｒ3及びＲ4は独立して水素、低級アルキル、低級アルキルチオ、−（ＣＨ2）nＳＨ、及びハロ置換された低級アルキルから選ばれ；
Ｘ1、Ｘ2及びＸ3は独立して低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、環状アルキル、ハロ置換された低級アルキル、ヒドロキシ置換された低級アルキルから選ばれ；
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２６７】
【化８０】
2006516020.tif 000002
ｍは０、１又は２であり；
ｎは、１，２又は３であり；
ｐ及びｑはそれぞれ１又は２であるが両方は同時に２ではない。
上記式中のアスタリスクは非対称な環の中心を示す。プロリンの場合、即ちｐ及びｑが両方共１である場合、この中心はＬ−配置であり、ピペコリン酸の場合、即ちｐ及びｑの一つが２である場合、この中心はＤ、Ｌ又はＬ−配置である。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２８０】
ＡＣＥ阻害薬は又好ましくは下記に示される：アシルメルカプト及びメルカプトアルカノイルプロリン（米国特許番号４０４６８８９）（カプトプリル（１−［（２Ｓ）−３−メルカプト−２−メチルプロピオニル］−Ｌ−プロリン）（米国特許番号４１０５７７６）等）及びエーテル又はチオエーテルメルカプトアシルプロリン（ゾフェノプリル（米国特許番号４３１６９０６）等）；カルボキシアルキルジペプチド（エナラプリル（Ｎ−（１−エトキシカルボニル−３−フェニルプロピル）−Ｌ−アナニル−Ｌ−プロリン）（米国特許番号４３７４８２９）、リジノプリル（米国特許番号４３７４８２９）、キナプリル（米国特許番号４３４４９４９）、及びラミプリル（米国特許番号４５０８７２９）等）；カルボキシアルキルジペプチドミミック（シラザプリル（米国特許番号４５１２９２４）及びベナザプリル（米国特許番号４４１０５２０）等）；ホスフィニルアルカノイルプロリン（米国特許番号４１６８２６７）（フォシノプリル（米国特許番号４３３７２０１）及びトランドロプリル等）；ホスホンアミデート置換されたアミノ又はイミノ酸（米国特許番号４４３２９７１）；ホスホナート置換されたアミノ又はイミノ酸及びその塩（セロナプリル（（Ｓ）−１−［６−アミノ−２−［［ヒドロキシ（４−フェニルブチル）ホスフィニル］オキシ］−１−オキソヘキシル］−Ｌ−プロリン）（米国特許番号４４５２７９０）等）；ビーチャムのＢＲＬ３６３７８（欧州特許番号８０８２２及び６０６６８）；中外製薬のＭＣ−８３８（ＣＡ１０２：７２５８８ｖ及びＪａｐ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：３７３（１９８６）に開示）；チバガイギーのＣＧＳ１４８２４（３−（［１−エトキシカルボニル−３−フェニル−（１Ｓ）−プロピル］−アミノ）−２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１−（３Ｓ）−ベンズアゼピン−１酢酸ＨＣＬ）（英国特許番号２１０３６１４）及びＣＧＳ１６６１７（３（Ｓ）−［［（１Ｓ）−５−アミノ−１−カルボキシペンチル］アミノ］２，３，４，５−テトラヒドロ−２−オキソ−１Ｈ−１−ベンズアゼピン−１−エタン酸）（米国特許番号４４７３５７５）；セタプリル（アラセプリル、大日本製薬株式会社製）（Ｅｕｒ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｒｅｓ．３９：６７１（１９８６）；４０：５４３（１９８６））；Ｒｕ４４５７０（ヘキスト社製）（Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ３５：１２５４（１９８５））；シラザプリル（ホフマン−ラロッシュ社製）（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．９：３９（１９８７）；Ｒｏ３１−２２０１（ホフマン−ラロッシュ社製）（ＦＥＢＳＬｅｔｔ．１６５：２０１（１９８４）；リジノプリル（メルク）（Ｃｕｒｒ．Ｔｈｅｒａｐ．Ｒｅｓ．３７：３４２（１９８５）及び欧州特許出願番号１２−４０１）；インダラプリル（デラプリル）（米国特許番号４３８５０５１）；レンチアプリル（フェンチアプリル、サンテン社製）（Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１０：１３１（１９８３）；インドラプリル（シェーリング社製）（Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：６４３、６５５（１９８３））；スピラプリル（シェーリング社製）（Ａｃｔａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．５９（Ｓｕｐｐ．５）：１７３（１９８６）；ペリンドプリル（セルヴィエ社製）（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３１：５１９（１９８７）；キナプリル（ワーナー−ランバート社製）（米国特許番号４３４４９４９）；ＣＩ９２５（ワーナー−ランバート社製）（［３Ｓ−［２［Ｒ（*）Ｒ（*）］］３Ｒ（*）］−２−［２−［［１−（エトキシ−カルボニル）−３−フェニルプロピル］アミノ［−１−オキソプロピル］−１，２，３，４−テトラヒドロ−６，７−ジメトキシ−３−イソキノリンカルボン酸ＨＣＬ）（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｓｔ２６：２４３、２６６（１９８４））；ＷＹ−４４２２１（ワイエス社製）（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２６：３９４（１９８３））；メルカプト含有化合物（ピボプリル及びＹＳ９８０（米国特許番号６１２７３７０）等）；オマパトリラト（ドラッグスＲ．Ｄ．１９９９１（４）：３５０−１）（米国特許番号６３００５０３）；アラセプリル（日本特許出願番号７８／８２８０９）；モベルトプリル；キナプリラート；モエキシプリル；ペリノドプリル（Ｓ−９４９０）（薬剤データ年次報告７、９９（１９８５））；ペントプリル；アンコベニン（薬剤データ年次報告６、２０（１９８４））；フェナセイン（薬剤データ年次報告７、２０（１９８５））；及びニコチアナミン（西独特許番号ＤＤ２２６８８０。上記引用特許、出願公開、及び発行物の内容をここで資料として使用する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３７０】
実施例５、骨形態発生蛋白質−７（ＢＭＰ−７）、糖尿病性腎障害の新規な効果的治療；
概略；
長期間の糖尿病性腎障害のストレプトゾトシンモデルを試験に使用し、ＢＭＰ−７の治療効果をエナラプリルのそれと比較した。研究デザインは、糸球体肥大及び蛋白尿が確立される時である第１６週に開始される治療プロトコルであった。ＢＭＰ−７（１０、３０、又は１００μｇ／ｋｇ静脈内注射(iv)、ｂｗ）での治療の効能を、極量のエナラプリル（２０ｍｇ／ｋｇ）及び賦形剤コントロールと比較した。最大量のＢＭＰ−７及びエナラプリルは腎臓肥大を同様に部分的に逆転させた。ＢＭＰ−７、１００μｇ／ｋｇで治療した糖尿病性ラットで３２週のＧＦＲは、賦形剤治療した糖尿病性ラットより顕著に高かった、０．７＋０．０８に対し０．３４＋０．０２ｍｌ／分／１００ｇ（ＢＷ）（Ｐ＜０．０５）。３２週エナラプリル治療した糖尿病性ラットのＧＦＲは０．５８＋０．０６（賦形剤治療及び擬似注入されたラット０．５５＋０．０２に比べて顕著ではない）であった。蛋白尿はＢＭＰ−７により、投与量依存態様で標準まで逆転した。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３８３】
Ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリダイゼーション：35Ｓ−ＵＰＴ標識化センス及びアンチセンス構成体を公知技術に従い調製した（１５）。しばらくの間凍結した断面（４〜６ミクロン）をＰＢＡ中の４％ホルムアルデヒド中に、２０分室温で固定した。断面をＰＢＳ中の３倍の標準濃度の塩で１回洗浄した。次に断面をＰＢＳ中で５分、水中で２分、更に１回、０．１Ｍトリエタノールアミン（ｐＨ８．０）で１０分の計３回洗浄した。１０分で、０．１Ｍトリエタノールアミン溶液中の０．２５％無水酢酸（ｐＨ８．０）、及び２回のクエン酸ナトリウム中、２分、スタンダードで、追加的な洗浄を実施した。断面を次に、徐々に（濃度を）変化させたエタノールにより水和し、次に５分間空気乾燥した。更にこの後、１時間、室温で真空乾燥を行った。それぞれのスライドを次に下記条件でハイブリダイズした：１８時間、６０℃、１０6カウント／分の33Ｐ放射性標識化「ｒｉｂｏｐｒｏｂｅ」、８０μｌのハイブリダイゼーション混合物中（５０％ホルムアミド；２％デンハルト液；１０％デキストランサルフェート；０．３ＭＮａＣｌ；１０ｍＭトリス、ｐＨ＝８．０；２ｍＭＥＤＴＡ、０．２５ｇ／ｍｌｔＲＮＡ）。ＢＭＰ−７用センス及びアンチセンスプローブは、Ｋｕｂｅｒ  Ｓａｍｐａｔｈ氏から寄贈された。Ｗｎｔ４用センス及びアンチセンスプローブは、公知である（１５）。次にスライドを下記の通り処理した：２０分、４×ＳＳＣ中、室温で；４×ＳＳＣ、５分、室温で；「ＲｎａｓｅＡ」（２０μｇ／ｍｌ）、３０分、３７℃、０．５ｍＮａＣｌ中、０．０１Ｍトリス、ｐＨ＝８．０及び１ｍＭＥＤＴＡ；２回２×ＳＳＣ、５分間、室温；１×ＳＳＣ、１０分間、室温；０．５×ＳＳＣ、１０分間、室温；及び０．１×ＳＳＣ、３０分間、６０℃。次に断面を、増加するエタノール濃度を使用して水和し、更に真空乾燥を３０分行った。スライドを液体写真用乳液（ＫｏｄａｋＮＴＢ２）中に浸し、１週間、４℃で現像した。発生後、スライドをヘマトキシリン及びエオシンで対比染色した。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０４０６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０４０６】
【図１Ａ】長期間ストレプトゾトシン誘発された糖尿病性腎障害モデルを示す。ＤＭを週０で投与し、ラットを観察した。１６週で、ＤＭでは腎臓重量は標準値に比べ１．８倍増加した（１．４２±０．０２対０．８１±０．０２ｇ、ｐ＜０．０１）。賦形剤治療１６週後、腎臓重量は顕著に変化しなかった。
【図１Ｂ】図１Ａと同様にラットを観察した。ＤＭではＧＦＲも又標準値に比べ３．２倍増加した（１．５６±０．２７対０．４９±０．０４ｍｌ／ｍｉｍ／１００ｇ体重、ｐ＜０．０１）。賦形剤治療のＧＦＲは３２週で標準値よりも７５％以下に減少した（０．３４±０．０２対０．５５±０．０２）。
【図２】ＤＭ誘発された腎肥大でのＢＭＰ−７及びエナラプリル治療効果を示す。ＤＭを週０で投与した。ＢＭＰ−７、若しくはエナラプリル、又は賦形剤治療を週１６に開始し週３２で終了した。１６週で、ＤＭでは腎臓重量は標準値に比べ１．４２に増加した。賦形剤治療の１６週後、腎臓重量はまだ上昇した（１．４４±０．０４ｇ）。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療群の腎臓重量は、ＤＭ賦形剤治療されたものに比べ、ＢＭＰ−７多量投与群で１．１０±０．０３、エナラプリル治療群で１．０９±０．０４、ｐ＜０．０１顕著に減少した。
【図３】ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療のＧＦＲでの効能を示す。１６週で、ＤＭラットではＧＦＲが標準値に比べ３．２倍増加した（１．５６±０．２７対０．４９±０．０４ｍｌ／ｍｉｍ／１００ｇ体重、ｐ＜０．０１）。しかし３２週で賦形剤治療中のＧＦＲは標準値よりも低くなるまで減少した（０．３４±０．０２対０．５５±０．０２）。ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療はＧＦＲを標準値又はその僅か上まで回復させた。ＢＭＰ−７多量投与動物のＧＦＲはＤＭ群（賦形剤治療された）のＧＦＲより顕著に大きかった（０．７０±０．０８対０．３４±０．０２、ｐ＜０．０５）。ＢＭＰ−７治療群のＧＦＲには投与量依存機構があった（それぞれ、０．５９±０．０７、０．６２±０．０９、及び０．７０±０．０８）。
【図４】ＤＭでの尿蛋白質排泄へのＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。ＤＭを週０で投与した。ＢＭＰ−７、若しくはエナラプリル、又は賦形剤治療を週１６に開始し週３２で終了した。糖尿病性ラットは、非糖尿病性ラットに比べて、１６週（３５．６３±１３．３５対３．７６±０．３９ｍｇ／日）及び３２週（１７４．４±５２．５０対８．２４±１．２８、ｐ＜０．０１）の両方においてアルブミン排泄速度の明白な増大を示した。この反応は著しくＢＭＰ−７及びエナラプリル治療によりにより減少された（ｐ＜０．０１、ＤＭ対ＢＭＰ１０；ｐ＜０．００１、ＤＭ対ＢＭＰ３０、ＢＭＰ１００及びエナラプリル）。低量から多量投与までのＢＭＰ−７治療群での尿蛋白質レベルのオーダーとは逆転する投与量依存があった（それぞれ５９．４６±２１．８４、３３．０２±９．１１、及び１４．２７±３．５０）。エナラプリル治療群は同様な中間量の投与ＢＭＰ−７群と同様な尿蛋白質排泄レベルであった。
【図５】基底膜及びメサンギウムマトリックスを強調するために過ヨウ素酸シッフ試薬で染色した腎臓の冠状切断を示す。パネルＡは、１６週標準的な動物の腎臓の断面である。Ｂは１６週糖尿病性動物の腎臓の断面である。糸球体肥大及びメサンギウムマトリックスの初期の増加が存在する。糸球体の（矢印頭部）及び尿細管（矢印）基底膜が密集していることが確認できる。Ｃは３２週賦形剤治療された糖尿病性動物の腎臓の断面である。１つの糸球体が硬化性であり、両方共肥大化している。つぶれた糸球体の房状分岐（タフト）の分節とまばらな標準細胞成分がある。ＤはＢＭＰ−７を３０μｇ／ｋｇ体重静脈内注射(IV)で週２回治療された動物の腎臓の断面である。ＥはＢＭＰ−７を１００μｇ／ｋｇ体重(IV)で週２回治療された動物の腎臓の断面である。Ｆはエナラプリル１００ｍｇ／ｌ飲料水で治療された動物の腎臓の断面である。３つのＢＭＰ−７投与薬及びエナラプリルの全ての治療で糸球体硬化症が減少したが、エナラプリル治療は更にメサンギウムマトリックス蓄積を示した。
【図６】コラーゲンをゴモリ三色染色した腎臓の冠状切断を示す。この染色で、コラーゲン原線維は青に染色され、細胞は赤に染色される。Ａ及びＢは動物施設内で糖尿病性動物と共に３２週飼育された２匹の標準的なコントロール動物の腎臓の断面である。Ｃは賦形剤治療された糖尿病性動物のものの断面である。矢印は初期の間質性マトリックス蓄積を示す。糸球体は肥大し１個は分節性硬化症である。Ｄ、Ｅ、及びＦは、それぞれＢＭＰ−７を１０、３０、及び１００μｇ／ｋｇ体重(IV)週２回治療された動物の腎臓の断面である。１０μｇ／ｋｇ体重投与動物の腎臓は、糸球体肥大残存以外は標準とほとんど同じであった２つの高投与よりも大きなメサンギウムマトリックス蓄積を示した。
【図７Ａ】ＤＭラットの糸球体及び間隙（間質）面積におけるＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。糸球体面積；糖尿病性ラットはコントロールラットよりも顕著に大きい糸球体面積標準値を有していた（１．２８±０．０３対０．９０±０．０２×１０4μｍ2、ｐ＜０．００１）。全ての治療群は部分的に糸球体肥大（ｐ＜０．００１）を改善した。
【図７Ｂ】ＤＭラットの糸球体及び間隙面積におけるＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。間隙面積；皮質性間隙面積はＤＭラットで非糖尿病性ラット腎臓の９．０±０．６％断面から１３．１±０．７％まで増加した。ＢＭＰ−７多量投与及びエナラプリル治療は、賦形剤治療されたＤＭに比べて間隙面積（それぞれ１０．７±０．３％、ｐ＜０．０５；１０．３±０．４％、ｐ＜０．０１）が顕著に減少した。
【図８】糸球体硬化症におけるＢＭＰ−７及びエナラプリル治療の効能を示す。糖尿病性ラットは非糖尿病性ラットに比べて３２週の硬化性糸球体罹患率の顕著な増大を示した（１０．７±４．０％対０．７±０．２％、ｐ＜０．００１）。この反応は、ＢＭＰ−７及びエナラプリル治療により著しく減少された。ＢＭＰ−７治療群のオーダーには投与量依存があった（それぞれ４．１±１．４％、ｐ＜０．０５；３．５±０．８％、ｐ＜０．０１；及び２．１±０．３％、ｐ＜０．００１）。多量投与ＢＭＰ−７の効能は、エナラプリルのそれよりも良かった。
【図９】糖尿病性ラットの収縮血圧におけるエナラプリル及びＢＭＰ−７治療の効能を示す。血圧は動脈カフ方法により測定した。１６週で糖尿病性動物は顕著に高血圧性を示した。高血圧は賦形剤治療されたラットでは、収縮血圧が再度増加し始める週２８まで安定していた。２月間のエナラプリル療法は、血圧を標準値に回復した。ＢＭＰ−７療法は治療最後の第４週まで血圧に影響しなかった。
【図１０Ａ−１】図１０は下記治療による糖尿病ＢＭＰ−７腎臓の発現及び修復の損失を示す。図１０Ａ−１は、標準的な（ＮＯＲＭＡＬ）ラット腎臓中でＢＭＰ−７は髄質部、皮質性集合管及び糸球体の有足突起中に発現することを示す。
【図１０Ａ−２】３２週賦形剤治療された糖尿病性腎臓は、ＢＭＰ−７指標の完全な喪失を示した。
【図１０Ａ−３】ＢＭＰ−７治療は、ＢＭＰ−７発現の標準分布を回復した。ＢＭＰ−７治療した腎臓中のＢＭＰ−７メッセージレベルは、標準的な動物よりも高いことが明らかになった。
【図１０Ａ−４】エナラプリル治療は、ＢＭＰ−７発現の標準分布を回復した。エナラプリル治療した腎臓中のＢＭＰ−７メッセージレベルは、標準的な動物よりも高いことが明らかになった。
【図１０Ｂ】ＢＭＰ−７治療中のＢＭＰ−７の糸球体の発現を示す；明るい及び暗い区域は、ＢＭＰ−７治療された動物の糸球体中の顕著なＢＭＰ−７発現を示す。これら結果は、異なる腎臓を含む３つの別々の実施例で一致した。
【図１１−１】図１１は糖尿病によるＷｎｔ４発現の誘起、及びエナラプリル及びＢＭＰ−７療法の効能を示す。結果は、異なる腎臓を含む３つの別々の実施例で一致した。図１１−１はＷｎｔ４は標準的な腎臓中では発現しないことを示す。
【図１１−２】賦形剤治療された糖尿病性ラット中ではＷｎｔ４の腎臓全体での発現があったことを示す。発現は尿細管上皮細胞及び糸球の両方であった。
【図１１−３】ＢＭＰ−７治療はＷｎｔ４発現に効果がなかったことを示す。
【図１１−４】エナラプリル治療はＷｎｔ４発現に効果がなかったことを示す。
【図１２】５／６腎臓摘出手術（５／６ＮＰＸ）慢性腎不全（ＣＲＦ）損傷モデルの概略図である。
【図１３】ＯＰ−１は慢性腎不全の５／６腎臓摘出手術モデル中の血圧レベルを劇的に下げなかった。
【図１４】ＯＰ−１は慢性腎不全の５／６腎臓摘出手術モデル中の蛋白尿レベルを顕著に減少させた。
【図１５】モルフォゲン（ＯＰ−１）及びＡＣＥ阻害薬（エナラプリル）を共投与した動物中では、ＡＣＥ阻害薬（エナラプリル）単独治療された動物に比べて腎臓摘出された動物の血圧を標準的レベルまで減少させる追加的な効果は無かった。
【図１６】モルフォゲン（ＯＰ−１）及びＡＣＥＩ（エナラプリル）の共投与はＡＣＥＩ治療単独よりも更に腎臓摘出された動物中の蛋白尿レベル減少に有効である。
【図１７】片側尿管閉塞症（ＵＵＯ）腎繊維症モデルの概略図である。
【図１８】モルフォゲンＯＰ−１／ＢＭＰ−７は、片側尿管閉塞症モデルでの腎繊維症を防止する。
【図１９】モルフォゲン（ＯＰ−１）誘発された腎臓の保護の機構は、尿細管萎縮症の予防、ＡＣＥＩエナラプリルとは共有されない効能を伴う。
【図２０】モルフォゲン及びＡＣＥＩの両方は、ＧＦＲにより測定される腎臓機能を改良する。しかし、モルフォゲンＯＰ−１はＡＣＥＩエナラプリルよりも片側尿管閉塞症モデルでのイヌリンクリアランス値により測定される糸球体ろ過値の改良において更に有効である。
【図２１】ＡＣＥ阻害薬でないモルフォゲン（ＯＰ−１）は、片側尿管閉塞症モデルの腎臓中の骨髄性組織の喪失を減少させた。
【図２２】糖尿病性腎障害のストレプトゾトシン誘発されたラットモデルの概略図である。
【図２３】ＡＣＥＩエナラプリルではなくモルフォゲン（ＯＰ−１）は、糖尿病性腎障害のストレプトゾトシン誘発されたラットモデルで糸球体ろ過値（ＧＦＲ）を顕著に増加させた。
【図２４】モルフォゲン（ＯＰ−１）単独投与、ＡＣＥＩエナラプリル単独投与、又はモルフォゲン及びＡＣＥＩ共投与は、糖尿病性腎障害のストレプトゾトシン誘発されたラットモデルで蛋白尿レベルを顕著に減少させた。
【図２５】糖尿病性腎障害のアロキサン誘発されたラットモデルの概略図である。
【図２６】モルフォゲンＯＰ−１は、糖尿病性腎障害のアロキサン誘発されたラットモデル中で、血清クレアチニン濃度を劇的に減少させる一方、ＡＣＥＩエナラプリルはより少なく血清クレアチニン濃度を減少させる。
【図２７】モルフォゲンＯＰ−１及びＡＣＥＩエナラプリル両方は、糖尿病性腎障害のアロキサン誘発されたラットモデル中で蛋白尿レベルを減少させるが、モルフォゲン及びＡＣＥＩの共投与は、蛋白尿レベルを相乗的効果で減少させる。
【図２８】ＴＧＦ−βスーパーファミリー蛋白質の各種代表的メンバーのＣ−末端７システイン骨格中の、ＯＰ−１をレファレンス配列として使用した、アミノ酸配列ホモロジー／共通性割合と同一性割合との比較。図中に表された相同性割合はＭｅｇａ  Ａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡ  Ｓｔａｒ社製）を使用して配列された配列に基づく。
【図２９】配列表である。
【図３０】配列表である。
【図３１】配列表である。
【図３２】配列表である。
【図３３】配列表である。
【図３４】配列表である。
【図３５】配列表である。
【図３６】配列表である。
【図３７】配列表である。
【図３８】配列表である。
【図３９】配列表である。
【図４０】配列表である。
【図４１】配列表である。
【図４２】配列表である。
【図４３】配列表である。
【図４４】配列表である。
【図４５】配列表である。
【図４６】配列表である。
【図４７】配列表である。
【図４８】配列表である。
【図４９】配列表である。
【図５０】配列表である。
【図５１】配列表である。
【図５２】配列表である。
【図５３】配列表である。
【図５４】配列表である。
【図５５】配列表である。
【図５６】配列表である。
【図５７】配列表である。
【図５８】配列表である。
【図５９】配列表である。
【図６０】配列表である。
【図６１】配列表である。
【図６２】配列表である。
【図６３】配列表である。
【図６４】配列表である。
【図６５】配列表である。
【図６６】配列表である。
【図６７】配列表である。
【図６８】配列表である。
【図６９】配列表である。
【図７０】配列表である。
【図７１】配列表である。
【図７２】配列表である。
【図７３】配列表である。
【図７４】配列表である。
【図７５】配列表である。
【図７６】配列表である。
【図７７】配列表である。
【図７８】配列表である。
【図７９】配列表である。
【図８０】配列表である。
【図８１】配列表である。
【図８２】配列表である。
【図８３】配列表である。
【図８４】配列表である。
【図８５】配列表である。
【図８６】配列表である。
【図８７】配列表である。
【図８８】配列表である。
【図８９】配列表である。
【図９０】配列表である。
【図９１】配列表である。
【図９２】配列表である。
【図９３】配列表である。
【図９４】配列表である。
【図９５】配列表である。
【図９６】配列表である。
【図９７】配列表である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図７０】
2006516020.tif 000003