【手続補正書】
【提出日】平成17年8月1日(2005.8.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
非一本鎖抗原結合ユニットであって、以下の：
（ａ）フレーム内で第一ヘテロ二量体化配列に融合している軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる軽（Ｌ）鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）フレーム内で第二ヘテロ二量体化配列に融合している重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる重（Ｈ）鎖ポリペプチド
を含んでなり、ここで、
前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドは、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項２】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列の両方が、生理学的緩衝条件下及び生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、請求項１に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項３】
非一本鎖抗原結合ユニットであって、以下の：
（ａ）フレーム内で第一ヘテロ二量体化配列に融合している軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる軽（Ｌ）鎖ポリペプチド；及び、
（ｂ）フレーム内で第二ヘテロ二量体化配列に融合している重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる重（Ｈ）鎖ポリペプチド
を含んでなり、ここで、
前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドは、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列がヘテロ二量体性受容体のヘテロ二量体化を仲介するヘテロ二量体性受容体配列を含む、前記非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項４】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列が、コイルドコイル二量体を形成する、請求項１又は３に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項５】
前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドが、前記２つのヘテロ二量体化配列の非共有結合性の対による親和性を介して二量体化する、請求項１又は３に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項６】
前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の両方が、少なくとも一つのシステイン残基に連結している、請求項４に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項７】
多価である、請求項４に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項８】
多重特異性である、請求項４に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項９】
前記Ｌ鎖ポリペプチドが、ヒト軽鎖由来の配列を含む、請求項４に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１０】
前記Ｈ鎖ポリペプチドが、ヒト重鎖由来の配列を含む、請求項４に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１１】
化学的機能性部分に結合している、請求項４に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１２】
前記部分が、以下の：シグナルペプチド、免疫学的反応性を高める物質、固体支持体へのカップリングを容易にする物質、ワクチンキャリア、生物反応修飾物質、トキシン、検出可能な標識、常磁性標識及び薬物からなる群から選択されたものである、請求項１１に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１３】
一本鎖結合ユニットであって、軽（Ｌ）鎖可変領域と重（Ｈ）鎖可変領域とを含み、前記軽（Ｌ）鎖可変領域と前記重（Ｈ）鎖可変領域が、前記領域の一方のＣ末端と前記他の領域のＮ末端の間の距離をまたがった第一ヘテロ二量体化配列と第二ヘテロ二量体化配列により接続されており、前記２つの領域が、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して分子内二量体を形成し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１４】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列の両方が、生理学的緩衝条件下及び生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、請求項１３に記載の一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１５】
一本鎖抗原結合ユニットであって、軽（Ｌ）鎖可変領域と重（Ｈ）鎖可変領域とを含み、前記軽（Ｌ）鎖可変領域と前記重（Ｈ）鎖可変領域が、前記領域の一方のＣ末端と前記他の領域のＮ末端の間の距離をまたがった第一ヘテロ二量体化配列と第二ヘテロ二量体化配列により接続されており、前記２つの領域が、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して分子内二量体を形成し、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列がヘテロ二量体性受容体のヘテロ二量体化を仲介するヘテロ二量体性受容体配列を含む、前記一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１６】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列が、コイルドコイル二量体を形成する、請求項１３又は１５に記載の一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１７】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列が、非共有結合性の対による親和性を介して二量体化している、請求項１３又は１５に記載の一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１８】
化学的機能性部分に結合している、請求項１６に記載の一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項１９】
前記Ｌ鎖可変領域が、ヒト軽鎖由来の配列を含む、請求項１６に記載の一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項２０】
前記Ｈ鎖可変領域が、ヒト重鎖由来の配列を含む、請求項１６に記載の一本鎖抗原結合ユニット。
【請求項２１】
請求項１又は３に記載のＬ鎖ポリペプチドをコードするコード配列を含む、組み換えポリヌクレオチド。
【請求項２２】
請求項１又は３に記載のＨ鎖ポリペプチドをコードするコード配列を含む、組み換えポリヌクレオチド。
【請求項２３】
請求項１３に記載の一本鎖抗原結合ユニットをコードするコード配列を含む、組み換えポリヌクレオチド。
【請求項２４】
請求項１５に記載の一本鎖抗原結合ユニットをコードするコード配列を含む、組み換えポリヌクレオチド。
【請求項２５】
請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の組み換えポリヌクレオチドを含む、ベクター。
【請求項２６】
請求項２５に記載のベクターを１以上含む、抗原結合ユニットのレパートリーをコードしている、発現ベクターの選択可能なライブラリー。
【請求項２７】
請求項２１〜２４のいずれか１項に記載の組み換えポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
【請求項２８】
非一本鎖抗原結合ユニットの製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）フレーム内で第一ヘテロ二量体化配列に融合した軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる、軽（Ｌ）鎖ポリペプチドをコードしている第一組み換えポリヌクレオチドと、フレーム内で第二ヘテロ二量体化配列に融合した重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる、重（Ｈ）鎖ポリペプチドをコードしている第二組み換えポリヌクレオチドとを、宿主細胞内で発現させるステップであって、ここで、前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドが、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記ステップ；及び場合により、
（ｂ）前記宿主細胞において発現された前記抗原結合ユニットを分離するステップ
を含む、前記方法。
【請求項２９】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列の両方が、生理学的緩衝条件下及び生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
非一本鎖抗原結合ユニットの製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）第一ヘテロ二量体化配列に融合した軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる、軽（Ｌ）鎖ポリペプチドをコードしている第一組み換えポリヌクレオチドと、第二ヘテロ二量体化配列に融合した重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる、重（Ｈ）鎖ポリペプチドをコードしている第二組み換えポリヌクレオチドとを、宿主細胞内で発現させるステップであって、前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドが、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列が、前記受容体のヘテロ二量体化を仲介するヘテロ二量体性受容体配列を含む、前記ステップ；及び、場合により、
（ｂ）前記宿主細胞において発現された前記抗原結合ユニットを分離するステップ
を含む、前記方法。
【請求項３１】
非一本鎖抗原結合ユニットの製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）フレーム内で第一ヘテロ二量体化配列に融合した軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる、軽（Ｌ）鎖ポリペプチドをコードしている第一組み換えポリヌクレオチドと、フレーム内で第二ヘテロ二量体化配列に融合した重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる、重（Ｈ）鎖ポリペプチドをコードしている第二組み換えポリヌクレオチドとを調製するステップであって、ここで、前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドが、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記ステップ；及び
（ｂ）前記第一ポリペプチド及び前記第二ポリペプチドを、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化させるステップ
を含む、前記方法。
【請求項３２】
一本鎖抗原結合ユニットの製造方法であって、以下のステップ：
（ａ）請求項１３又は１５に記載の前記一本鎖抗原結合ユニットをコードしているコード配列を含むポリヌクレオチドを宿主細胞において発現させるステップ；及び場合により、
（ｂ）前記宿主細胞において発現された前記一本鎖抗原結合ユニットを分離するステップ
を含む、前記方法。
【請求項３３】
宿主細胞の表面上に少なくとも２つのポリペプチドを含むキメラヘテロ多量体をディスプレイする方法であって、以下のステップ：
前記宿主細胞において、
（ａ）フレーム内において第一ヘテロ二量体化配列及び表面提示配列に融合している、第一ポリペプチドをコードしている第一組み換えポリヌクレオチド；
（ｂ）フレーム内において第二ヘテロ二量体化配列に融合している第二ポリペプチドをコードしている第二組み換えポリヌクレオチド
を発現させるステップを含み、ここで、
前記第一ポリペプチドと前記第二ポリペプチドが、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記方法。
【請求項３４】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列の両方が、生理学的緩衝条件下及び生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列が、コイルドコイル二量体を形成する、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記第一ポリヌクレオチド及び前記第二ポリヌクレオチドが、単一のファージディスプレイベクターにより発現される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３７】
前記第一ポリヌクレオチド及び前記第二ポリヌクレオチドが、別々のファージディスプレイベクターにより発現される、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
所望の抗原と免疫反応性である非一本鎖抗原結合ユニットを同定する方法であって、以下のステップ：
（ａ）抗原結合ユニットの遺伝学的に多様なレパートリーを調製するステップであって、前記レパートリーが請求項１又は３に記載の抗原結合ユニットを１以上含む、前記ステップ；
（ｂ）抗原結合ユニットの前記レパートリーを前記所望の抗原と接触させるステップ；及び
（ｃ）抗原結合ユニットと前記抗原との間の特異的結合を検出することにより、前記所望の抗原と免疫反応性である前記抗原結合ユニットを同定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項３９】
所望の抗原と免疫反応性である一本鎖抗原結合ユニットを同定する方法であって、以下のステップ：
（ａ）一本鎖抗原結合ユニットの遺伝学的に多様なレパートリーを調製するステップであって、前記レパートリーが請求項１３又は１５に記載の抗原結合ユニットを少なくとも一つ含む、前記ステップ；及び
（ｂ）抗原結合ユニットの前記レパートリーを前記所望の抗原と接触させるステップ；及び
（ｃ）抗原結合ユニットと前記抗原との間の特異的結合を検出することにより、前記所望の抗原と免疫反応性である前記一本鎖抗原結合ユニットを同定するステップ
を含む、前記方法。
【請求項４０】
好適なパッケージングに請求項２５に記載のベクターを含むキット。
【請求項４１】
前記第一ヘテロ二量体化配列及び前記第二ヘテロ二量体化配列が、等モル混合したときにホモ二量体を基本的に形成できない、請求項１に記載の非一本鎖抗原結合ユニット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２２】
本発明のさらに別の態様によれば、非一本鎖抗原結合ユニットの製造方法が提供される。この方法は、以下のステップ：（ａ）第一ヘテロ二量体化配列に融合した軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる、軽（Ｌ）鎖ポリペプチドをコードしている第一組み換えポリヌクレオチドと、第二ヘテロ二量体化配列に融合した重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる、重（Ｈ）鎖ポリペプチドをコードしている第二組み換えポリヌクレオチドとを、宿主細胞で発現するステップであって、前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドは、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記ステップと；そして、場合により（ｂ）前記宿主細胞において発現された抗原結合ユニットを分離するステップを含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２４】
本発明のさらに別の実施態様によれば、非一本鎖抗原結合ユニットの製造方法が提供される。この方法には、以下のステップ：（ａ）第一ヘテロ二量体化配列に融合した軽（Ｌ）鎖可変領域を含んでいる、軽（Ｌ）鎖ポリペプチドをコードしている第一組み換えポリヌクレオチドと、第二ヘテロ二量体化配列に融合した重（Ｈ）鎖可変領域を含んでいる、重（Ｈ）鎖ポリペプチドをコードしている第二組み換えポリヌクレオチドとを調製するステップであって、前記Ｌ鎖ポリペプチドと前記Ｈ鎖ポリペプチドは、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化し、且つ前記ヘテロ二量体化配列の少なくとも一方が、生理学的緩衝条件下及び/又は生理学的体温でホモ二量体を基本的に形成できない、前記ステップと；そして、（ｂ）前記第一ポリペプチド及び前記第二ポリペプチドを、前記第一ヘテロ二量体化配列と前記第二ヘテロ二量体化配列の対による親和性を介して二量体化させるステップ、を含む。二量体化のステップは、生体外でおこなってもよいし、生体内でおこなってもよい。