【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年10月18日(2006.10.18)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】 
ターゲットとしての病原性タンパク質沈着に対して、 プローブとしての病原性タンパク質沈着の基礎構造及び／又は病原性タンパク質沈着を形成する構造の会合を測定することによる病原性タンパク質沈着の検出方法であって、 前記ターゲットが液相中で検出され、該液相はアルツハイマー病の場合、体液から得られるか、又はそれ自体が体液であり、 但し、前記プローブの自己凝集が優勢になる前に、前記ターゲットに対する前記プローブの会合を測定することを特徴とする前記検出方法。
【請求項２】 
病原性タンパク質沈着の基礎構造、病原性タンパク質沈着を形成する構造及び／又は病原性タンパク質沈着が、少なくとも一つの検出可能な性質を有する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも一つの検出可能な性質が、基礎構造に固有であるか、あるいは後に導入されるか、のいずれかである請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記少なくとも一つの検出可能な性質が、大きさ、すなわち寸法、分子量、構造、円偏光二色性、光学的性質、吸収、又は放射性である請求項２に記載の方法。
【請求項５】
光学的性質がルミネッセンスである請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ルミネッセンスが蛍光性である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも一つの検出可能な性質の測定が、分光法で行われる請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも一つの検出可能な性質の測定が、適切な評価法を用いた蛍光法により行われる請求項２に記載の方法。
【請求項９】
蛍光法が同焦点蛍光分光法、蛍光相関分光法（ＦＣＳ）、又は相互相関と組合せたＦＣＳである請求項８に記載の方法。
【請求項１０】 
並進拡散率、回転拡散率、励起状態の寿命、放射性分極、エネルギー伝達、量子収量、粒子の数もしくは濃度、又は強度差が、前記検出可能な性質から定められる請求項２に記載の方法。
【請求項１１】 
プローブとしての病原性タンパク質沈着の基礎構造及び／又は病原性タンパク質沈着を形成する構造が、病原性タンパク質沈着のモノマー若しくはオリゴマー単位であるか、又は病原性タンパク質沈着のモノマー又はオリゴマー単位と相同的な配列を有する組み換えタンパク質、タンパク質の断片、もしくはペプチドである請求項1から１０のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１２】
前記プローブ及びターゲットが、同型又は異型の病原性タンパク質沈着から誘導される請求項１から１１のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１３】 
前記基礎構造が、超音波、温度変化の作用異なるイオン強度の溶液での処理、カオロピックイオン溶液での処理、又は洗浄剤及び／もしくは酵素での処理を用いて病原性タンパク質沈着を処理することにより得られる請求項１から１２のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１４】
酵素がプロテアーゼである請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】 
前記ターゲットと相互作用する他の物質が、診断検出の特異性又は選択性を増大させるために使用される請求項１から１４のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１６】 
病原性タンパク質沈着が、神経系に由来し、かつ、神経萎縮症に関連するニューロフィブリラフィラメント（ＮＦＴ）及び／又はアミロイドプラークである請求項１から１５のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１７】
神経萎縮症がアルツハイマー病、伝染性海綿状脳障害、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、遺伝性脳アミロイドアンギオパシーからなる群から選択される請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】 
前記病原性タンパク質沈着が、アミロイドプラークであり、かつ、原発性全身性アミロイドーシス（ＡＬアミロイドーシス）、反応性全身性アミロイドーシス（ＡＡアミロイドーシス）、家族性アミロイド多発性ニューロパシー、II型糖尿病、注射限局性アミロイドーシス、甲状腺髄様癌、β−２ミクログロブリンアミロイドーシス、遺伝性非神経障害アミロイドーシス、および先天性遺伝性家族性アミロイドーシスからなる群から選択される疾患に関連する請求項１から１７のいずれか1項に記載の方法。
【請求項１９】 
前記プローブが、アミロイドプラーク及び／又はニューロフィブリラフィラメントに相同的な配列を有する組換え体タンパク質、タンパク質の断片、又はペプチドである請求項１から１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
体液、分泌液、又は組織から採取された検体を、前記プローブと接触させてインキュベートし、かつ、ターゲットに対する前記プローブの会合が測定される請求項１から１９のいずれか1項に記載の方法。
【請求項２１】
体液が脳脊髄液、血液、リンパ液、又は尿であり、分泌液が唾液である請求項２０に記載の方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
前記構造又は会合の前記少なくとも一つの検出可能な性質を測定する方法として、それぞれ適切な評価法を用いた、同焦点蛍光分光法、蛍光相関分光法（ＦＣＳ）、相互相関と組合せたＦＣＳのような蛍光法が好ましくは用いられる。参照として、DE 44 38 341及びWO-A-96/13744, WO-A-94/16313及びEP-A-96 116 373及びEP-A-97 109 353を含める。特に、ＦＣＳ相互相関の使用が、この方法により方法の特異性を向上させることができるため有利である。生物媒体中の凝集体の不正確な陽性検出は、異なる基礎構造をプローブとして用いること、又は特異的抗体のような病原性タンパク質沈着のための他のプローブと共に組み合わせで用いることにより、抑制できる。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
検出の感度を増大させ、かつ分析の速度を増大させるために、測定溶液を通して動く共焦容量要素(confocal volume element)を介して測定溶液を「スクリーニング」する方法を繰り返すことが好ましいことがある。
相互相関が用いられる場合、異なる蛍光性を有する2つの種がそれぞれ観測される。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
検出可能な性質は、例えば、低分子量基であることも、高分子量であることもできる蛍光性標識により生成される。したがって、ターゲットと結合した標識化抗体は後に標識されることができる。次いで、プローブの結合は適切に測定できる。異なるプローブは異なる色に標識され、そのため次に相互相関が行われる。低分子量蛍光リガンド及び／又は相当する標識コンジュゲートである適当な標識を有するプローブを提供することもできる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
可溶性Aβ(1-42)は、0.2％のSDSを含有するpH7.0の10mM燐酸ナトリウムバッファー中で安定化され得た。前記色素Cy2（Amersham）もまた、Aβの蛍光標識化のために使用された。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７０】
凝集工程の後、続いて、二色相互相関FCS機器(ConfoCorprototype、Zeiss)を用いて、自己相関及び相互相関曲線を繰り返し記録した。相関曲線は、拡散パラメーターτrgが相互相関曲線に使用される3次元拡散モデルにより描かれた。適合は、球体分子モデルを用いて行われた。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７１】
SDS濃度の減少は、赤及び緑の標識PrPが両方とも組み込まれている粒子濃度に比例した相互相関幅(amplitude)の急激な増加を引き起こす。0.2％ SDS存在下では、相互相関生成物は検出されなかった。数分で、オリゴマー濃度はプラトーまで増加し、その後、さらに高次元の凝集体の形成が起こるにつれて減少する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７２】
図9(左)は、PBS中c(rPrP) = 50 nM、c(rPrP-Cy5)、c(rPrP-OrG) = 2 nMの濃度で、25℃ 、0.01％ SDS存在下における蛍光標識されたrPrP(90-231)の相互相関を示す。曲線は、以下の意味を現す：a)小さい点：インキュべーション時間 1分； b) 短いダッシュ： 6分； ｃ)大きい点：20分； ｄ)点線： 30分； ｅ) 実線： 130分； ｆ) 小さい点： 参照検体、0.2％ SDS。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７３】
図9(右)は、凝集過程における相互相関幅(四角)のグラフを示している。赤及び緑のフルオロフォア(fluorophores)の両方が組み込まれている粒子の形成は、二次反応により説明することができる：Ai + Bj → Abij，k = 5・105 M-1。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７４】
実施例8
励起rPrP凝集体へのrPrPプローブの会合
濃度が0.2から20 ng/μlである予め凝集されたrPrPは、実施例7の凝集バッチに添加された。rPrP凝集体は、rPrPを0.01％SDS濃度で1時間、25℃(c(rPrP) = 100 ng/ml)のインキュベーションにより生成された。会合工程の後、続けて自己相関及び相互相関曲線の連続した記録が行われた。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７５】
標識されたrPrPの凝集体への会合は、数分という時間範囲内で観察することができた。この工程は生のシグナルにおける大きな蛍光ピークの発生により特徴づけられた。相互相関曲線では、長い拡散時間(> 5 ms)を有する成分が優性であった。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７６】
実施例9
2つのプローブの相互相関によるrPrP凝集体の認識；モノクローナル抗体(mAB) + rPrP
プリオンタンパク質の特異的認識のために、その特異性及び結合強度により識別することができる様々なモノクローナル抗体が入手可能である。CJD患者サンプル中の病原性PrPの認識に特に適当なのは、病原性形態プリオンタンパク質に特異的に結合するB. Oesch(Korthら, Nature, 1997.11.6、390(6655): 74-7)に開発された抗体である。PrPプローブの共同凝集(coaggregation)に結合する特異的な抗体の組み合せは、病原性凝集体の単一標識と比較して増加した特異性を提供する。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７７】
モノクローナル抗体IgM 15b3は、PrPプローブとの類似性により、アミノ基(function)において蛍光染料により標識された。標識された抗体は、最終濃度20nMで使用された。rPrPと抗体プローブを混合して用いるためには、結合条件は両方のプローブに適するように設定することが好ましい。SDS濃度0.01％では、rPrPプローブの凝集と抗体結合の両方を観察することができる。標識された凝集体が焦点へ入ると、蛍光ピークが発生する。適するサイズでは、ピークシグナルは相互相関曲線において優勢である。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００７８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００７８】
図10は、rPrPプローブとmABのrPrP凝集体への会合を示す。上段：相互相関蛍光シグナルの掃引(sweep)。下段：二色相互相関曲線。曲線の軌跡において、掃引の最初から大きな凝集体が優性である。濃度はc(rPrP) = 50 nM、 c(rPrP-Cy2) = 2 nM、 c(mAB-Cy5) = 20 nMであった。