【手続補正書】
【提出日】平成18年7月27日(2006.7.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル中のエンドグリコシダーゼ酵素活性の測定方法であって、以下のステップ：
ｉ．エンドグリコシダーゼによって切断可能な基質を前記サンプルと接触させること、及び、
ｉｉ．未反応の基質の量の変化を測定すること、ここで、この基質の量の減少は、上記サンプル中のエンドグリコシダーゼ活性を表す、
を含み、上記基質が直接的又は間接的に第１のドナー化合物及び第２のアクセプター化合物で標識され、そして前記未反応の基質の量が上記アクセプター化合物により発せられたシグナルを測定することによって決定され、このシグナルが、上記ドナー及び上記アクセプター間がきわめて近接していることによる効果を介する移動により生じることに特徴を有する、前記測定方法。
【請求項２】
上記第１のドナー化合物及び上記第２のアクセプター化合物が蛍光化合物であって、上記きわめて近接した移動がエネルギー移動であって、そして発せられた上記シグナルが蛍光シグナルであることに特徴を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
エンドグリコシダーゼ酵素活性を変更することのできる化合物の検出方法であって、以下のステップ：
ｉ．試験化合物の存在下または非存在下で、エンドグリコシダーゼによって切断可能な基質をエンドグリコシダーゼと接触させること、
ｉｉ．未反応の基質の量の変化を測定すること、及び、
ｉｉｉ．上記試験化合物の非存在下で測定した基質量の変化を、試験化合物の存在下で測定した基質量の変化と比較すること、
を含み、上記基質が、直接的または間接的に、第１のドナー化合物及び第２のアクセプター化合物で標識され、そして上記未反応の基質量が上記アクセプター化合物により発せられたシグナルを測定することによって決定され、このシグナルが上記ドナー及び上記アクセプター間がきわめて近接していることによる効果を介する移動によって生じることに特徴を有する、前記方法。
【請求項４】
上記第１のドナー化合物及び上記第２のアクセプター化合物が蛍光化合物であり、上記きわめて近接した移動がエネルギー移動であり、そして発せられた上記シグナルが蛍光シグナルであることに特徴を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
上記エンドグリコシダーゼが、組み換えヘパラナーゼ、精製ヘパラナーゼ、非精製ヘパラナーゼおよびヘパリチナーゼから選ばれる、ヘパラナーゼタイプの酵素であることに特徴を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
上記基質が、へパラン硫酸プロテオグリカン及びそれらの誘導体、細胞外マトリックスに結合したヘパラン硫酸塩およびそれらの誘導体、ヘパリン、並びにヘパラン硫酸塩及びそれらの誘導体から選ばれ、以下の式：
【化１】
2005534312.tif 000001
｛式中、
Ｒ1及びＲ3は、以下の：Ｈ、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ3Ｈ‐から成る群から選ばれ、
Ｒ2は、ＳＯ3Ｈ、ＳＯ3Ｈ‐、C(O)CH3から成る群から選ばれ、
X1及びX2がH又はCOOHを表す。｝
により表される単位を１〜３０単位含むことに特徴を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
上記基質が、ドナー蛍光化合物及びアクセプター蛍光化合物に共有結合で結合されていることに特徴を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
上記基質が第１のリガンド−受容体対の要素及び第２のリガンド−受容体対の要素に共有結合で結合されており、そして上記ドナー蛍光化合物が上記第１のリガンド−受容体対の他の要素に共有結合で結合され、そして、上記ドナー蛍光化合物が上記第２のリガンド‐受容体対の他の要素に結合されていることに特徴を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
上記基質が上記ドナー蛍光化合物に共有結合で結合され、そしてリガンド−受容体対の要素に共有結合で結合されており、そして上記アクセプター蛍光化合物が前記リガンド−受容体対の他の要素に共有結合で結合されていることに特徴を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
上記基質が上記アクセプター蛍光化合物に共有結合で結合され、そしてリガンド−受容体対の要素に共有結合で結合されており、そして、上記ドナー蛍光化合物が前記リガンド−受容体対の他の要素に共有結合で結合されていることに特徴を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
上記第１の及び上記第２のリガンド−受容体対が異なり、そして以下の対：ハプテン／抗体、DNP／抗−DNP抗体、GST／抗−GST抗体、ビオチン／アビジン、６HIS／抗−６HIS抗体、Cmyc／抗−Cmyc抗体；FLAG（登録商標）／抗−FLAG（登録商標）抗体；HA／抗−HA抗体から選ばれることに特徴を有する、請求項８〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
上記ドナー化合物が希土類クリプテート又はキレートであり、そして上記アクセプター蛍光化合物がローダミン、シアニン、スクアレン、ボディピー色素、フルオレセイン、アロフィコシアニン及びそれらの誘導体から選ばれることに特徴を有する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記化合物が、抗ヘパラナーゼ抗体、天然物、合成物、コンビナトリアルケミストリーによって得られた化合物ライブラリーからの生成物、ペプチド及びタンパク質から選ばれることに特徴を有する、請求項３または４に記載のヘパラナーゼタイプの酵素活性を変更可能な化合物の検出方法。
【請求項１４】
ビオチン及びDNP基を含む複数のHSを含み、上記DNP／HSの最終モル比が０．３及び２の間、そして上記ビオチン／HSの最終モル比が０．５及び２の間であることに特徴を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法において使用可能な組成物。
【請求項１５】
前記DNP／HSの最終モル比が０．７に等しく、そして前記ビオチン/HSの最終モル比が１に等しいことに特徴を有する、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
ビオチン及びDNP基を含む複数のHSPGを含み、上記DNP／HSPGの最終モル比が６及び１５の間、そして上記ビオチン／HSPGの最終モル比が６及び１５の間であることに特徴を有する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法において使用可能な組成物。
【請求項１７】
前記DNP／HSPGの最終モル比が１０．８に等しく、そして前記ビオチン/HSPGの最終モル比が８に等しいことに特徴を有する、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
以下の要素：
ヘパラナーゼタイプの活性を有する酵素によって切断可能な基質、
前記基質に共有結合で結合された、又は間接的に結合することのできる、ドナー蛍光化合物、
前記基質に共有結合で結合された、又は間接的に結合することのできる、アクセプター化合物、
を含み、ここで、上記蛍光化合物が共有結合で前記基質に結合されていない場合、前記要素が同じボトル又は異なるボトル中にあることができる、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法を実施するためのキット。
【請求項１９】
以下の要素：
ビオチン及びDNPに共有結合で結合されたヘパラン硫酸、
抗−DNP抗体に共有結合で結合された希土類クリプテート、及び
ストレプトアビジンに結合された架橋アロフィコシアニン、
を含むことに特徴を有する、請求項１８に記載のキット。
【請求項２０】
以下の要素：
ビオチン及びDNPで標識されたヘパラン硫酸プロテオグリカン、
抗−DNP抗体に結合された希土類クリプテート、及び
ストレプトアビジンに結合された架橋アロフィコシアニン、
を含むことに特徴を有する、請求項１８に記載のキット。