【手続補正書】
【提出日】平成18年8月24日(2006.8.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  実質的に純粋なヘパリナーゼであって：
改変された生成物プロフィールを有する改変されたヘパリナーゼＩＩを含み、ここで該改変されたヘパリナーゼＩＩの該改変された生成物プロフィールが、ネイティブなヘパリナーゼＩＩのネイティブ生成物プロフィールとは少なくとも１０％異なる、ヘパリナーゼ。
【請求項２】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、ネイティブなヘパリナーゼＩＩのネイティブ生成物プロフィールとは少なくとも５０％異なる改変された生成物プロフィールを有する、請求項１に記載のヘパリナーゼ。
【請求項３】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、ネイティブなヘパリナーゼＩＩのネイティブ生成物プロフィールとは少なくとも２０％異なる改変された生成物プロフィールを有する、請求項１に記載のヘパリナーゼ。
【請求項４】  前記改変された生成物プロフィールがヘパリンに関して改変されている、請求項１に記載のヘパリナーゼ。
【請求項５】  前記改変された生成物プロフィールがヘパラン硫酸に関して改変されている、請求項１に記載のヘパリナーゼ。
【請求項６】  請求項１に記載の実質的に純粋なヘパリナーゼの滅菌処方物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的調製物。
【請求項７】  固定化された実質的に純粋な改変されたヘパリナーゼＩＩであって：
請求項１に記載の改変されたヘパリナーゼＩＩ、および
固体支持体膜、とを含み、ここで該改変されたヘパリナーゼＩＩが、該固体支持体膜上に固定化されている、ヘパリナーゼＩＩ。
【請求項８】  実質的に純粋なヘパリナーゼであって：
改変されたヘパリナーゼＩＩｋcat値を有する、グリコサミノグリカン基質を切断し得る改変されたヘパリナーゼＩＩを含み、ここで該改変されたヘパリナーゼＩＩｋcat値は、ネイティブなヘパリナーゼＩＩｋcat値とは少なくとも１０％異なる、ヘパリナーゼ。
【請求項９】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩｋcat値がネイティブなヘパリナーゼＩＩｋcat値とは少なくとも２０％異なる、請求項８に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１０】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩｋcat値がネイティブなヘパリナーゼＩＩｋcat値とは少なくとも５０％異なる、請求項８に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１１】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、ヘパリンに関して減少した酵素活性を有する、請求項８に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１２】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、ヘパラン硫酸に関して減少した酵素活性を有する、請求項８に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１３】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが配列番号２に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されており、そして該置換が以下：（ａ）配列番号２の３４８位に対応するシステイン残基の、アラニン、セリン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基での置換；（ｂ）配列番号２の２３８位、４４０位、４５１位、および５７９位の少なくとも１つに対応するヒスチジン残基の、アラニン、セリン、チロシン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基での置換；ならびに（ｃ）配列番号２の４４６位〜４５１位に対応するヘパリン結合配列の保存性置換、からなる群より選択される、請求項８に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１４】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、配列番号２に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、配列番号２の３４８位に対応するシステイン残基が、アラニン、セリン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基で置換された、請求項１３に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１５】  前記システイン残基がアラニンで置換されている、請求項１４に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１６】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、配列番号２に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、配列番号２の４４０位に対応するヒスチジン残基が、アラニン、セリン、チロシン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基で置換された、請求項１３に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１７】  前記ヒスチジン残基がアラニンで置換されている、請求項１６に記載のヘパリナーゼ。
【請求項１８】  請求項８に記載の実質的に純粋なヘパリナーゼの滅菌処方物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的調製物。
【請求項１９】  固定化された実質的に純粋な改変されたヘパリナーゼＩＩであって：
請求項８に記載の改変されたヘパリナーゼＩＩ、および
固体支持体膜、とを含み、ここで該改変されたヘパリナーゼＩＩが、該固体支持体膜上に固定化されている、ヘパリナーゼＩＩ。
【請求項２０】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、ヘパラン硫酸に関してネイティブなヘパリナーゼと実質的に同じ酵素活性を有する、請求項１１に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２１】  前記改変されたヘパリナーゼＩＩが、ヘパリンに関してネイティブなヘパリナーゼと実質的に同じ酵素活性を有する、請求項１２に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２２】  実質的に純粋なヘパリナーゼであって：
改変されたヘパリナーゼＩを含み、ここで該改変されたヘパリナーゼＩは、カルシウムの存在に依存しない酵素活性を有する、ヘパリナーゼ。
【請求項２３】  前記改変されたヘパリナーゼＩが、ネイティブなヘパリナーゼＩｋcat値とは少なくとも１０％異なる、改変されたヘパリナーゼＩｋcat値を有する、請求項２２に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２４】  前記改変されたヘパリナーゼＩが、ネイティブなヘパリナーゼＩｋcat値とは少なくとも２０％異なる、改変されたヘパリナーゼＩｋcat値を有する、請求項２２に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２５】  前記改変されたヘパリナーゼＩが、ネイティブなヘパリナーゼＩｋcat値とは少なくとも５０％異なる、改変されたヘパリナーゼＩｋcat値を有する、請求項２２に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２６】  前記改変されたヘパリナーゼＩが、配列番号４に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、少なくとも１つのアミノ酸残基が改変されており、そして該置換が、配列番号４の３７７位に対応するセリン残基の、アラニン、セリン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基での置換である、請求項２２に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２７】  前記セリン残基がアラニンで置換されている、請求項２６に記載のヘパリナーゼ。
【請求項２８】  請求項２２に記載の実質的に純粋なヘパリナーゼの滅菌処方物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的調製物。
【請求項２９】  固定化された実質的に純粋な改変されたヘパリナーゼＩであって：
請求項２２に記載の改変されたヘパリナーゼＩ、および
固体支持体膜、とを含み、ここで該改変されたヘパリナーゼＩが、該固体支持体膜上に固定化されている、ヘパリナーゼＩ。
【請求項３０】  実質的に純粋なヘパリナーゼであって：
配列番号２の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有する改変されたヘパリナーゼＩＩ、
を含み、ここで少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されており、そして該置換は、４８位、１６４位、１８９位、２０２位、２３８位、２４９位、２５２位、３４７位、３４８位、４０６位、４０８位、４４０位、４７３位、５７９位、６８２位、または残基４４６〜４５１のうちの１つに対応する残基の置換である、実質的に純粋なヘパリナーゼ。
【請求項３１】  実質的に純粋なヘパリナーゼであって：
配列番号４の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有する改変されたヘパリナーゼＩ、
を含み、ここで少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されており、そして該置換は、１３５位、または残基１９６〜２２１もしくは残基３７２〜３８４のうちの１つに対応する残基の置換である、実質的に純粋なヘパリナーゼＩ。
【請求項３２】  ヘパリン様グリコサミノグリカンを特異的に切断するための組成物であって、請求項１、８、２２、３０または３１のいずれか１項に記載のヘパリナーゼを含み、ここで該組成物は、ヘパリン様グリコサミノグリカンとの接触に適している、組成物。
【請求項３３】  前記ヘパリン様グリコサミノグリカンは、改変されたヘパリナーゼＩＩとの接触に適しており、ここで該改変されたヘパリナーゼＩＩが、配列番号２に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、配列番号２の４４０位に対応するヒスチジン残基が、ヘパリン様グリコサミノグリカンを特異的に切断するように、アラニン、セリン、チロシン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基で置換されている、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】  前記ヘパリン様グリコサミノグリカンは、改変されたヘパリナーゼＩとの接触に適しており、ここで該改変されたヘパリナーゼＩが、配列番号４に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、ここで少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されており、そして該置換が、配列番号４の３７７位に対応するセリン残基の、アラニン、セリン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基での置換である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】  前記組成物が、ヘパリン含有液から活性ヘパリンを取り除くための組成物である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】  前記ヘパリナーゼが固体支持体上に固定化される、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】  前記組成物が、血管形成を阻害するための組成物であり、そして前記ヘパリナーゼの血管形成を阻害するために有効な量が、その処置を必要とする被験体への投与に適している、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３８】  前記ヘパリナーゼが腫瘍への投与に適している、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】  前記ヘパリナーゼが、生分解可能な生体適合性ポリマー送達デバイス中での投与に適している、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】  前記ヘパリナーゼが、注射のための薬学的に受容可能なビヒクル中での投与に適している、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】  前記ヘパリナーゼが、腫瘍の中に成長している血管の数を減少させるための有効量での投与に適している、請求項３９または４０のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項４２】  前記ヘパリナーゼが、眼への局所適用のための薬学的に受容可能なビヒクル中での投与に適している、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４３】  前記ヘパリナーゼが、異常な新生血管形成によって特徴付けられる眼の疾患の症状を減少させるための有効量での投与に適している、請求項４２に記載の組成物。
【請求項４４】  前記ヘパリナーゼが、局所適用のために適切な薬学的ビヒクル中での投与に適している、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４５】  前記ヘパリナーゼが、乾癬の症状を減少させるために有効な量での投与に適している、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】  血管形成を阻害するために有効な量が、約１μｇと４μｇとの間のヘパリナーゼ、または１０ｎＭと１００ｎＭとの間のヘパリナーゼの濃度である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４７】  前記組成物がヘパリンを配列決定するための組成物である、請求項３２に記載の組成物。
【請求項４８】  ヘパラン硫酸様グリコサミノグリカンを特異的に切断するための組成物であって：
請求項１、８、３０または３１のいずれか１項に記載のヘパリナーゼを含み、ここで該組成物は、ヘパラン硫酸含有液との接触に適している、組成物。
【請求項４９】  前記組成物が、ヘパラン硫酸含有液から活性なヘパラン硫酸を取り除くための組成物である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】  前記ヘパリナーゼが固体支持体に固定化されている、請求項４９に記載の組成物。
【請求項５１】  前記ヘパラン硫酸様グリコサミノグリカンは、実質的に純粋な改変されたヘパリナーゼＩＩとの接触に適しており、ここで該改変されたヘパリナーゼＩＩが、配列番号２に記載の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有し、ここで配列番号２の３４８位に対応するシステイン残基が、ヘパリン硫酸様グリコサミノグリカンを特異的に切断するように、アラニン、セリン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基で置換されている、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５２】  前記組成物が細胞増殖を阻害するための組成物である、請求項５１に記載の組成物。
【請求項５３】  前記組成物がヘパラン硫酸を配列決定するための組成物である、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５４】  実質的に純粋なヘパリナーゼであって：
配列番号２の成熟ペプチドのアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、ここで少なくとも１つのアミノ酸残基が置換されており、そして該置換が以下：（ａ）配列番号２の３４８位に対応するシステイン残基の、アラニン、セリン、チロシン、ヒスチジン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基での置換；（ｂ）配列番号２の４４０位に対応するヒスチジン残基の、アラニン、セリン、チロシン、スレオニン、およびリジンからなる群より選択される残基での置換；ならびに（ｃ）配列番号２の４４６位〜４５１位に対応するヘパリン結合配列からなる保存性置換、からなる群より選択される、ヘパリナーゼ。
【請求項５５】  請求項５４に記載のヘパリナーゼの滅菌処方物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的調製物。
【請求項５６】  固定化された実質的に純粋な改変されたヘパリナーゼＩＩであって：
請求項５４に記載のヘパリナーゼ、および
固体支持体膜、とを含み、ここで該ヘパリナーゼが、該固体支持体膜上に固定化されている、ヘパリナーゼＩＩ。
【請求項５７】  単離された核酸であって、
（ａ）請求項５４に記載の実質的に純粋なヘパリナーゼをコードする、単離された核酸；
（ｂ）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で配列番号１に記載の核酸もしくは配列番号１に記載の核酸の相補物に対してハイブリダイズし、かつ請求項５４に記載の改変されたヘパリナーゼをコードするように改変される、核酸；および
（ｃ）遺伝コードの縮重に起因して、コドン配列において（ｂ）の核酸とは異なる、核酸、
を含む、核酸。
【請求項５８】  請求項５７に記載される単離された核酸を含む、組換え宿主細胞。
【請求項５９】  請求項５７に記載される単離された核酸を含む、発現ベクター。