【手続補正書】
【提出日】平成18年10月4日(2006.10.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2006503871.tif 000001
〔式中、
ｒは０から２であり、
ｎは０から２であり、
ｍは０から４であり、
Ｒ１およびＲ２は(ｉ)低級アルキルであるか、または
(ii)一緒になって下位式Ｉ＊
【化２】
2006503871.tif 000002
の架橋を形成し、結合は二つの末端炭素原子を介して達成されるか、または、
(iii)一緒になって下位式Ｉ＊＊
【化３】
2006503871.tif 000003
(式中、１個または２個の環員Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は窒素であり、残りはいずれの場合もＣＨである)
の架橋を形成し、結合はＴ１とＴ４を介して達成され；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは、互いに独立してＮまたはＣＨであるが、ただし、これらのラジカルの２個以上がＮではなく；
Ｇは低級アルキレン、アシルオキシもしくはヒドロキシにより置換された低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)またはイミノ(−ＮＨ−)であり；
Ｑは低級アルキルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
Ｘはイミノ、オキサまたはチアであり；
Ｙは非置換もしくは置換アリール、ピリジルまたは非置換もしくは置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノール、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルキルスルフィニルまたはアルキルフェニルスルフィニルであり、置換基Ｚは、２個以上のラジカルＺが存在する場合、互いに同一または異なり；
そして波線により特徴付けられる結合は、存在する場合、一重結合または二重結合である。〕
の化合物、または、１個またはそれ以上のＮ原子が酸素原子を持つ場合、該化合物のＮ−オキシド、または少なくとも一つの塩形成基を有するこのような化合物の塩を；ＡＭＬの処置に有効な従来の化合物または化合物の混合物と、かつ所望により少なくとも一つの薬学的に許容される担体と共に、または組み合わせて含む、温血動物における急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)の処置剤。
【請求項２】
式Ｉの化合物がＰＴＫ７８７である、請求項１記載の処置剤。
【請求項３】
ＡＭＬの処置に有用な従来の化合物がトポイソメラーゼII阻害剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質またはこのような化合物の混合物である、請求項１記載の処置剤。
【請求項４】
ＡＭＬの処置に有用な従来化合物が、アムサクリン、エトポシド、テニポシド、シタラビン、メトトレキサート、メルカプトプリン、ミトキサントロン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ホモハリントニン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、シクロホスファミド、ゲムツマブ、他のＣＤ３３モノクローナル抗体、イフォスファミド、メスナ、プレドニゾン、トポテカン、ビンクリスチンおよびこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１記載の処置剤。
【請求項５】
ＡＭＬが従来の化学療法に耐性である、請求項１から４のいずれかに記載の処置剤。
【請求項６】
温血動物がヒトである、請求項１から５のいずれかに記載の処置剤。
【請求項７】
ヒトが年少者である、請求項６記載の処置剤。
【請求項８】
請求項１に記載の式Ｉの化合物とＡＭＬの処置に有用な従来の化合物を含む組み合わせ医薬製剤であり、活性成分が組み合わせ医薬製剤の各々遊離形または薬学的に許容される塩の形で一定量ずつ存在し、所望により、少なくとも一つの薬学的に許容される担体が存在する、同時、別々または連続使用のための製剤。
【請求項９】
請求項１に記載の式Ｉの化合物がＰＴＫ７８７である、請求項８記載の組み合わせ医薬製剤。
【請求項１０】
請求項１に記載の式Ｉの化合物とＡＭＬの処置に有用な従来の化合物を、所望により薬学的担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項１１】
式Ｉの化合物と、ＡＭＬの処置に有用な従来の化合物を、併用でＡＭＬに対して有効な量で含む、請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１に記載の式Ｉの化合物がＰＴＫ７８７である、請求項１０または１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
ＡＭＬの処置のための、請求項１０記載の医薬組成物の使用。
【請求項１４】
請求項１に記載の式Ｉの化合物と、ＡＭＬの処置に有効な従来の化合物を、ＡＭＬの処置においてそれらを同時に、別々にまたは連続して使用するための指示書と共に含む、商品包装。
【請求項１５】
請求項１に記載の式Ｉの化合物とＡＭＬの処置に有効な従来の化合物の、ＡＭＬの処置用医薬の製造における、使用。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
したがって、第一の態様において、本発明は急性骨髄性白血病(ＡＭＬ)、特に、従来の化学療法に耐性の急性骨髄性白血病の処置法であって、それを必要とする温血動物、好ましくはヒトに、治療的有効量のＡＭＬの処置に有効な従来の化合物と、式Ｉ
【化１】
2006503871.tif 000004
〔式中、
ｒは０から２であり、
ｎは０から２であり、
ｍは０から４であり、
Ｒ１およびＲ２は(ｉ)低級アルキルであるか、または
(ii)一緒になって下位式Ｉ＊
【化２】
2006503871.tif 000005
の架橋を形成し、結合は二つの末端炭素原子を介して達成されるか、または、
(iii)一緒になって下位式Ｉ＊＊
【化３】
2006503871.tif 000006
(式中、１個または２個の環員Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３およびＴ４は窒素であり、残りはいずれの場合もＣＨである)
の架橋を形成し、結合はＴ１とＴ４を介して達成され；
Ａ、Ｂ、ＤおよびＥは、互いに独立してＮまたはＣＨであるが、ただし、これらのラジカルの２個以上がＮではなく；
Ｇは低級アルキレン、アシルオキシもしくはヒドロキシにより置換された低級アルキレン、−ＣＨ２−Ｏ−、−ＣＨ２−Ｓ−、−ＣＨ２−ＮＨ−、オキサ(−Ｏ−)、チア(−Ｓ−)またはイミノ(−ＮＨ−)であり；
Ｑは低級アルキルであり；
ＲはＨまたは低級アルキルであり；
Ｘはイミノ、オキサまたはチアであり；
Ｙは非置換もしくは置換アリール、ピリジルまたは非置換もしくは置換シクロアルキルであり；そして
Ｚはアミノ、モノ−またはジ−置換アミノ、ハロゲン、アルキル、置換アルキル、ヒドロキシ、エーテル化またはエステル化ヒドロキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、エステル化カルボキシ、アルカノール、カルバモイル、Ｎ−モノ−またはＮ,Ｎ−ジ置換カルバモイル、アミジノ、グアニジノ、メルカプト、スルホ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルキルスルフィニルまたはアルキルフェニルスルフィニルであり、置換基Ｚは、２個以上のラジカルＺが存在する場合、互いに同一または異なり；
そして波線により特徴付けられる結合は、存在する場合、一重結合または二重結合である。〕
の化合物、または、１個またはそれ以上のＮ原子が酸素原子を持つ場合、該化合物のＮ−オキシド、または少なくとも一つの塩形成基を有するこのような化合物の塩を一緒にまたは組み合わせて投与することを含む、方法に関する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３１】
インフォームドコンセントの後、骨髄および末梢血細胞を、０−１８歳の６名の小児ＡＭＬから診断時に得た。診断は、ＦＡＢ分類および免疫表現型を使用した細胞形態学により評価する(Bennett JM et al., Br. J. Haematol. 33: 451-458,1976)。単核細胞(ＭＮＣ)は、Lymphoprep(Nycomed, Oslo, Norway)密度勾配により分離し、使用するまで液体窒素中で凍結保存する。凍結保存したＡＭＬ細胞を、Dokter WH et al., Leukemia 9: 425-432, 1995により記載されたように３７℃で急速に融解し、５倍用量の正常ウシ血清(ＮＣＳ)で希釈する。残ったペレットを、ヒツジ赤血球細胞によりＴ細胞枯渇し、Lymphoprep密度勾配で分離する。残った幹細胞集団は９５％以上のＡＭＬ細胞を含み、以後、ＡＭＬ細胞と呼び、ペニシリン／ストレプトマイシンおよび１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０で培養する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３４】
ＲＮＡ抽出およびＲＴ−ＰＣＲ：
総ＲＮＡを、Trizol法により、製造者(Life Technologies, Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)の記載にしたがって抽出する。ｃＤＮＡを、３７℃で、少なくとも１時間、２μｇの総ＲＮＡ、ランダム・ヘキサマー(Pharmacia)、５×一本鎖緩衝剤、ＲＮａｓｉｎおよび１μＬ逆転写酵素(Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)を含む２０μL反応混合物中での逆転写により調製する。ｃＤＮＡをプライマー、１０×緩衝剤、１.５mM  ＭｇＣｌ２、ｄＮＴＰおよびＴａｑ(Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)の存在下に増幅する。混合物をPerkin Elmer装置で、試験するＰＣＲに特異的なＰＣＲサイクルで増幅させる。ＰＣＲ生成物を、１.５％アガロースゲル中の電気泳動により分析する。ゲルを臭化エチジウムで染色し、撮影する。β２−ミクログロブリンの特異的プライマーは、センス(CCA GCA GAG AAT GGA AAG TC)およびアンチセンス(GAT GCT GCT TAC ATG TCT CG)、ＰＣＲ生成物：２６０bp、２２サイクル(cycli)、Ｔａｎｎ  ５５℃である。ＶＥＧＦに関して：センス(GAG TGT GTG CCC ACT GAG GAG TCC AAC)およびアンチセンス(CTC CTG CCC GGC TCA CCG CCT CGG CTT)、ＰＣＲ生成物：１７７、３１２、３８４bp、３０サイクル、Ｔａｎｎ  ６０℃を使用する。ＶＥＧＦのためのプライマーは、スプライスジャンクションに広がり、電気親和性で(electrophorically)分離すべき各スプライスバリアントの増幅生成物を可能にする。ＶＥＧＦＲ−１の特異的プライマー：センス(GAG TCC TTT ATC CTG GAT GC)およびアンチセンス(ACA GAG CCC TTC TGG TTG GT)、ＰＣＲ生成物：７５０bp、３５サイクル、Ｔａｎｎ  ５７℃。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３９】
統計的分析：
相関を、スピアマンの順位相関係数(ｒｈｏ)を使用して計算する。対サンプルノンパラメトリック検定(ウィルコキソンの符号付き順位検定)を使用して、対の生存細胞（ＶＥＧＦ有りまたは無し、ならびにＰＴＫ７８７有りまたは無し)を分析する。有意差は、Ｐ−値が＜０.０５として定義する。