【手続補正書】
【提出日】平成17年12月5日(2005.12.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  N末端アミノ酸およびC末端アミノ酸を有する単離されたタンパク質であって、
(a)    少なくとも１つの疎水性成分を付加されたN末端システインを有するタンパク質、
(b)    少なくとも１つの疎水性成分を付加されたシステインではないN末端アミノ酸を有するタンパク質、および
(c)    N末端アミノ酸を置換する少なくとも１つの疎水性成分を有するタンパク質、ただし、前記単離されたタンパク質がヘッジホッグポリペプチドの天然発生断片である場合、前記疎水性成分が該ポリペプチドのN末端においてパルミトイル基以外である、
からなる群より選択されることを特徴とするタンパク質。
【請求項２】  前記疎水性成分が、少なくとも１つの疎水性アミノ酸を有するペプチドであることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項３】  前記疎水性成分が、脂質であることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項４】  前記タンパク質がさらに、前記C末端アミノ酸を置換する、または該C末端アミノ酸に付加される疎水性成分を有することを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項５】  前記タンパク質が、細胞外シグナルタンパク質であることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項６】  前記N末端アミノ酸が、システインの機能性誘導体であることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項７】  前記タンパク質が、前記N末端アミノ酸および前記C末端アミノ酸の両方において修飾されることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項８】  前記タンパク質が、前記N末端アミノ酸および前記C末端アミノ酸の間のアミノ酸の少なくとも１つを置換する、またはそのアミノ酸に付加される疎水性成分を有することを特徴とする請求項４または７記載のタンパク質。
【請求項９】  前記タンパク質が、前記N末端アミノ酸および前記C末端アミノ酸の間のアミノ酸の少なくとも１つを置換する、またはそのアミノ酸に付加される疎水性成分を有することを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項１０】  前記脂質成分が、２から２４までの範囲の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪酸から選択される脂肪酸であることを特徴とする請求項３記載のタンパク質。
【請求項１１】  前記タンパク質が、脊椎動物源から得られるヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項１２】  前記ヘッジホッグが、ヒトまたはラットから得られることを特徴とする請求項１１記載のタンパク質。
【請求項１３】  前記脊椎動物ヘッジホッグが、ソニック、インディアン、およびデザートヘッジホッグからなる群より選択されることを特徴とする請求項１１記載のタンパク質。
【請求項１４】  前記疎水性成分と接触する小胞をさらに有することを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項１５】  前記小胞が、細胞膜、ミセル、およびリポソームからなる群より選択されることを特徴とする請求項１４記載のタンパク質。
【請求項１６】  前記ヘッジホッグタンパク質が、配列番号１から４までのいずれか１つによるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項１１記載のタンパク質。
【請求項１７】  前記ヘッジホッグタンパク質が、野生型ヘッジホッグタンパク質と比較するとその前記C末端から１から約１０までの範囲のアミノ酸を欠失していることを特徴とする請求項１３記載のタンパク質。
【請求項１８】  前記タンパク質が、ソニック、インディアンまたはデザートヘッジホッグに対する少なくとも６０％のアミノ酸同一性を有することを特徴とする請求項１６記載のタンパク質。
【請求項１９】  化学式：A-Cys-[SP]-B-[SP]-Xの形態にある単離されたタンパク質であって、
Aは疎水性成分であり、
Cysはシステインまたはその機能的等価物であり、
[SP]は必要に応じてのスペーサーペプチド配列であり、
Bは複数のアミノ酸、および必要に応じて他のスペーサーペプチド配列を有するタンパク質であり、
Xは前記タンパク質Bのアミノ酸に結合する必要に応じての別の疎水性成分である、ただし、前記単離されたタンパク質がヘッジホッグポリペプチドの天然発生断片である場合、前記疎水性成分が該ポリペプチドのN末端においてパルミトイル基以外である、
ことを特徴とするタンパク質。
【請求項２０】  前記単離されたタンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項１９記載の単離されたタンパク質。
【請求項２１】  前記Xが存在する場合はコレステロールであることを特徴とする請求項２０記載の単離されたタンパク質。
【請求項２２】  前記タンパク質Bが、少なくとも１つの疎水性成分を有する少なくとも１つの他のアミノ酸で修飾されることを特徴とする請求項１９記載の単離されたタンパク質。
【請求項２３】  前記A-Cys結合が、システインのアミノ基によるものであることを特徴とする請求項１９記載の単離されたタンパク質。
【請求項２４】  接触する小胞をさらに有することを特徴とする請求項１９記載の単離されたタンパク質。
【請求項２５】  前記接触する小胞が、細胞膜、ミセルおよびリポソームからなる群より選択されることを特徴とする請求項２４記載の単離されたタンパク質。
【請求項２６】  複数の分子が付加された小胞であって、該複数の分子の内の少なくとも２つが請求項１９の形態を有することを特徴とする小胞。
【請求項２７】  前記小胞が、細胞膜、リポソームおよびミセルからなる群より選択されることを特徴とする請求項２６記載の小胞。
【請求項２８】  C末端アミノ酸、およびアルデヒドをタンパク質のN末端システインと反応させることにより形成されるN末端チオプロリン基を有する単離されたタンパク質。
【請求項２９】  C末端アミノ酸、および脂肪酸チオエステルをタンパク質のN末端システインと反応させることにより形成されるN末端アミド基を有する単離されたタンパク質。
【請求項３０】  C末端アミノ酸、およびマレイミド基をタンパク質のN末端システインと反応させることにより形成されるN末端マレイミド基を有する単離されたタンパク質。
【請求項３１】  前記タンパク質のC末端アミノ酸が疎水性成分により修飾されることを特徴とする請求項２８、２９または３０記載の単離されたタンパク質。
【請求項３２】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項３１記載の単離されたタンパク質。
【請求項３３】  前記C末端疎水性成分がコレステロールであることを特徴とする請求項３２記載の単離されたタンパク質。
【請求項３４】  小胞の存在化で、前記タンパク質のN末端システイン、またはN末端システインの機能的等価物に疎水性成分を結合する工程を含む、多価タンパク質複合体を産生する方法。
【請求項３５】  前記結合の工程が、２から２４までの範囲の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪酸から選択される脂質成分の結合を含むことを特徴とする請求項３４記載の方法。
【請求項３６】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項３４記載の方法。
【請求項３７】  前記ヘッジホッグが、ソニック、インディアンおよびデザートヘッジホッグからなる群より選択されることを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項３８】  前記ヘッジホッグが、配列番号１から４までのいずれか１つによるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項３６記載の方法。
【請求項３９】  前記結合の工程が、細胞膜、リポソームおよびミセルからなる群より選択される小胞との結合を含むことを特徴とする請求項３４記載の方法。
【請求項４０】  少なくとも１つの疎水性成分をタンパク質のN末端システインまたはN末端システインの機能的等価物に導入する工程を含む、タンパク質の物理化学的特性を変化させる方法。
【請求項４１】  さらに疎水性成分を小胞と接触させる工程を含むことを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４２】  前記疎水性成分が、２から２４までの範囲の炭素原子を有する飽和および不飽和脂肪酸から選択される脂質成分または疎水性タンパク質のいずれかであることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４３】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項４０記載の方法。
【請求項４４】  前記ヘッジホッグタンパク質が、ソニック、インディアンおよびデザートヘッジホッグからなる群より選択されることを特徴とする請求項４３記載の方法。
【請求項４５】  前記ヘッジホッグが、配列番号１から４までのいずれか１つによるアミノ酸配列を有することを特徴とする請求項４３記載の方法。
【請求項４６】  前記接触の工程が、細胞膜、リポソームおよびミセルからなる群より選択される小胞との接触を含むことを特徴とする請求項４１記載の方法。
【請求項４７】  請求項３４の方法により産生されるタンパク質複合体。
【請求項４８】  請求項４０の方法により産生される修飾されたタンパク質。
【請求項４９】  前記タンパク質が、ゲルソリン；インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、単球コロニー刺激因子、顆粒球コロニー刺激因子、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子、エリトロポイエチン、血小板由来成長因子、成長ホルモン、およびインシュリンからなる群より選択されることを特徴とする請求項４７記載の複合体。
【請求項５０】  生物学的活性を有しN末端システインを含有するタンパク質を修飾する方法であって、前記N末端システインを脂肪酸チオエステルと反応させてアミドを形成する工程を含み、そのような修飾がタンパク質の生物学的活性を高めることを特徴とする方法。
【請求項５１】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項５０記載の方法。
【請求項５２】  前記ヘッジホッグタンパク質が、ソニック、インディアン、デザートヘッジホッグ、およびその機能的等価物からなる群より選択されることを特徴とする請求項５１記載の方法。
【請求項５３】  生物学的活性を有しN末端システインを含有するタンパク質を修飾する方法であって、前記N末端システインをマレイミド基と反応させる工程を含み、そのような修飾がタンパク質の生物学的活性を高めることを特徴とする方法。
【請求項５４】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項５３記載の方法。
【請求項５５】  前記ヘッジホッグタンパク質が、ソニック、インディアン、デザートヘッジホッグ、およびその機能等価物からなる群より選択されることを特徴とする請求項５４記載の方法。
【請求項５６】  タンパク質に疎水性ペプチドを付加する工程を含む、生物学的活性を有するタンパク質を修飾する方法。
【請求項５７】  前記疎水性ペプチドが、N末端アミノ酸、C末端アミノ酸、N末端アミノ酸とC末端アミノ酸との間のアミノ酸、および前記のものの組合せからなる群より選択されるタンパク質のアミノ酸に付加されることを特徴とする請求項５６記載の方法。
【請求項５８】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項５７記載の方法。
【請求項５９】  前記ヘッジホッグタンパク質が、ソニック、インディアンおよびデザートヘッジホッグからなる群より選択されることを特徴とする請求項５８記載の方法。
【請求項６０】  前記タンパク質の被験者への投与を含む、請求項１または２０記載のタンパク質の治療上の使用方法。
【請求項６１】  請求項１または２０記載のタンパク質の患者への投与を含む、患者の神経学的障害を治療する方法。
【請求項６２】  前記タンパク質が細胞外シグナルタンパク質であることを特徴とする請求項１記載のタンパク質。
【請求項６３】  前記付加の工程が、少なくとも１つの疎水性アミノ酸によるタンパク質の少なくとも１つのN末端アミノ酸の置換を含むことを特徴とする請求項５７記載の方法。
【請求項６４】  前記少なくとも１つの疎水性アミノ酸が、複数のイソロイシン残基であることを特徴とする請求項６３記載の方法。
【請求項６５】  さらに少なくとも１つのイソロイシン残基における化学的修飾を含むことを特徴とする請求項６３記載の方法。
【請求項６６】  C末端アミノ酸、および置換されたアセトアミドをタンパク質のN末端システインと反応させることにより形成されるN末端アセトアミド基を有する単離されたタンパク質。
【請求項６７】  C末端アミノ酸、およびハロケトン基をタンパク質のN末端システインと反応させることにより形成されるN末端チオモルホリン基を有する単離されたタンパク質。
【請求項６８】  生物学的活性を有しN末端システインを含有するタンパク質を修飾する方法であって、前記N末端システインを置換されたアセトアミド基と反応させる工程を含み、そのような修飾がタンパク質の生物学的活性を高めることを特徴とする方法。
【請求項６９】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項６８記載の方法。
【請求項７０】  前記ヘッジホッグタンパク質が、ソニック、インディアン、デザートヘッジホッグ、およびその機能的等価物からなる群より選択されることを特徴とする請求項６９記載の方法。
【請求項７１】  生物学的活性を有しN末端システインを含有するタンパク質を修飾する方法であって、前記N末端システインをハロケトン基と反応させる工程を含み、そのような修飾がタンパク質の生物学的活性を高めることを特徴とする方法。
【請求項７２】  前記タンパク質がヘッジホッグタンパク質であることを特徴とする請求項７１記載の方法。
【請求項７３】  前記ヘッジホッグタンパク質が、ソニック、インディアン、デザートヘッジホッグ、およびその機能的等価物からなる群より選択されることを特徴とする請求項７２記載の方法。
【請求項７４】  １つ以上の脂肪親和性成分で修飾されたヘッジホッグポリペプチドであって、前記ヘッジホッグポリペプチドがヘッジホッグタンパク質の成熟N末端タンパク質分解断片である場合、前記脂肪親和性成分がC末端残基においてステロール以外であり、前記ヘッジホッグポリペプチドが前記ヘッジホッグポリペプチドの天然発生断片である場合、前記脂肪親和性成分が前記N末端残基においてパルミトイル基以外である、ことを特徴とするヘッジホッグポリペプチド。
【請求項７５】  内部アミノ酸残基において１つ以上の脂肪親和性成分で修飾されたヘッジホッグポリペプチド。
【請求項７６】  １つ以上の脂肪親和性芳香族炭化水素で修飾されたヘッジホッグポリペプチド。
【請求項７７】  前記ポリペプチドが精製されたタンパク質製剤として提供されることを特徴とする請求項７４から７６いずれか１項記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項７８】  前記ポリペプチドが精製された薬剤として提供されることを特徴とする請求項７４から７６いずれか１項記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項７９】  前記脂肪親和性成分が、脂肪酸、脂質、エステル、アルコール、かご構造、および芳香族炭化水素からなる群より選択されることを特徴とする請求項７４または７５記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８０】  前記芳香族炭化水素が、ベンゼン、ペリレン、フェナントレン、アントラセン、ナフタリン、ピレン、クリセン、およびナフタセンからなる群より選択されることを特徴とする請求項７６または７９記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８１】  前記芳香族炭化水素が、ピレンであることを特徴とする請求項８０記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８２】  前記脂肪親和性成分が、イソプレノイド、テルペンおよび多脂環式炭化水素からなる群より選択されることを特徴とする請求項７４または７５記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８３】  前記脂肪親和性成分が、アダマンタン、バックミンスターフラーレン、ビタミン、ポリエチレングリコール、オリゴエチレングリコール、(C1-C18)-アルキルリン酸ジエステル、-O-CH2-CH(OH)-O-(C12-C18)-アルキルからなる群より選択されることを特徴とする請求項８２記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８４】  前記脂肪親和性成分が、  1-または2-アダマンチルアセチル、3-メチルアダマント-1-イルアセチル、3-メチル-3-ブロモ-1-アダマンチルアセチル、1-デカリンアセチル、ショウノウアセチル、カンファンアセチル、ノルアダマンチルアセチル、ノルボルナンアセチル、ビシクロ[2.2.2.]-オクト-5-エンアセチル、1-メトキシビシクロ[2.2.2.]-オクト-5-エン-2-カルボニル、シス-5-ノルボルネン(norbornene)-エンド-2,3-ジカルボニル、5-ノルボルネン-2-イルアセチル、(1R)-(-)-ミルテンテーンアセチル(myrtentaneasetyl)、2-ノルボルナンアセチル、アンチ-3-オキソ-トリシクロ[2.2.1.0<2,6>]-ヘプタン-7-カルボニル、デカノイル、ドデカノイル、ドデシノイル、テトラデカジエノイル、デシノイルおよびドデシノイルからなる群より選択されることを特徴とする請求項８３記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８５】  前記脂肪親和性成分が、前記修飾されたヘッジホッグポリペプチドに関して前記ポリペプチドの生物学的活性を高めることを特徴とする請求項７４から７６いずれか１項記載のヘッジホッグポリペプチド。
【請求項８６】  細胞を請求項７４から７６いずれか１項記載の疎水性修飾されたヘッジホッグポリペプチドと接触させる工程を含む、ヘッジホッグシグナルに反応しやすい細胞の増殖状態を変化させる方法。
【請求項８７】  N末端アミノ酸およびC末端アミノ酸を有する合成または組換えタンパク質であって、該タンパク質が、
(a)  少なくとも１つの疎水性成分を付加されたN末端システインを有するタンパク質、
(b)  少なくとも１つの疎水性成分を付加されたシステインではないN末端アミノ酸を有するタンパク質、および
(c)  N末端アミノ酸を置換する少なくとも１つの疎水性成分を有するタンパク質、
からなる群より選択されることを特徴とするタンパク質。
【請求項８８】  化学式：A-Cys-[Sp]-B-[Sp]-Xの形態の合成または組換えタンパク質であって、
Aは疎水性成分であり、
Cysはシステインまたはその機能的等価物であり、
[Sp]は必要に応じてスペーサーペプチド配列であり、
Bは複数のアミノ酸、および必要に応じて他のスペーサーペプチド配列を有するタンパク質であり、
Xは前記タンパク質Bのアミノ酸に結合する必要に応じての別の疎水性成分である、
ことを特徴とするタンパク質。
【請求項８９】  １つ以上の脂肪親和性成分で修飾されたヘッジホッグポリペプチドであって、前記ヘッジホッグポリペプチドがヘッジホッグタンパク質の成熟N末端タンパク質分解断片である場合、前記脂肪親和性成分がC末端残基においてステロール以外であることを特徴とするヘッジホッグポリペプチド。