【手続補正書】
【提出日】平成17年9月8日(2005.9.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
電気化学発光標識と、電気化学発光共反応物と、ｐＨ緩衝剤と、を含む組成物の存在下で、電気化学発光を誘導する、電気化学発光を誘導する方法。
【請求項２】
前記ｐＨ緩衝剤が電気化学発光アッセイ緩衝剤バックグラウンド低減剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｐＨ緩衝剤がグリシルグリシン、トリス［ヒドロキシメチル］−アミノメタン又はそれらの組合せからなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、無機リン酸塩を実質的に含まない、請求項１〜３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
前記電気化学発光共反応物が第三級アミンである、請求項１〜４の何れかに記載の方法。
【請求項６】
前記電気化学発光標識がルテニウム又はオスミウムの有機金属錯体である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記方法がさらに、
（ａ）前記組成物を電気化学エネルギーに曝し、前記電気化学発光組成物を誘導して電磁放射を放出させるステップと、
（ｂ）放出された電磁放射を検出するステップと、
を含む、請求項１〜６の何れかに記載の方法。
【請求項８】
電極に酸化電位を印加することによって前記電気化学エネルギーを発生させる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記電気化学発光標識が前記電極に付着している、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記電極が元素状炭素を含む、請求項８又は９に記載の方法。
【請求項１１】
電気化学発光標識を含む組成物を、電気化学発光共反応物と非リン酸塩ベースのｐＨ緩衝剤とを含み、かつ、リン酸塩を含まない試薬と混合するステップと、
電気化学発光を誘導するステップと、
放出された電気化学発光を検出するステップと、
を含む、電気化学発光を発生させる方法であって、
前記電気化学発光共反応物が第三級アミンである、
電気化学発光を発生させる方法。
【請求項１２】
電気化学発光標識を電気化学発光共反応物と接触させることを含む、電気化学発光を誘導する方法であって、
前記電気化学発光共反応物が親水性官能基を含む第三級アミンであり、前記電気化学発光標識が作用電極に付着している、電気化学発光を誘導する方法。
【請求項１３】
電気化学発光アッセイを実施する方法であって、
（ａ）電気化学発光標識と、少なくとも１つの電気化学発光共反応物と、を含む組成物を形成させるステップであって、前記電気化学発光共反応物は親水性官能基を含む第三級アミンであり、前記電気化学発光標識は作用電極に付着しているステップと、
（ｂ）前記電気化学発光標識を誘導して電気化学発光を放出させるのに有効な電気化学エネルギーを与えるステップと、
（ｃ）放出された電気化学発光を検出するステップと、を含む方法。
【請求項１４】
電気化学発光アッセイを実施する方法であって、
（ａ）電気化学発光標識と、少なくとも１つの電気化学発光共反応物とを含む組成物を形成させるステップであって、前記電気化学発光共反応物が親水性官能基を含む第三級アミンであり、前記電気化学発光標識の第１の部分が作用電極に付着しており、前記電気化学発光標識の第２の部分が溶液中にあるステップと、
（ｂ）前記電気化学発光標識の第１の部分を誘導して電気化学発光を放出させるのに有効な電気化学エネルギーを与えるステップと、
（ｃ）前記電気化学発光標識の第１の部分から放出された電気化学発光を選択的に検出するステップと、を含む方法。
【請求項１５】
試料中の目的分析物又は活性のアッセイを実施する方法であって、
（ａ）試料を含む組成物と、電気化学発光標識を含むアッセイ試薬と、電極とを形成させるステップであって、前記試料中に前記分析物又は活性が存在することによって前記電極からの前記アッセイ試薬の付着又は解離がもたらされるステップと、
（ｂ）電気化学発光共反応物を含む電気化学発光アッセイ緩衝剤と前記電極を接触させるステップであって、前記電気化学発光共反応物が親水性官能基を含む第三級アミンであるステップと、
（ｃ）前記電極上の電気化学発光標識を誘導して電気化学発光を誘導するのに適切な条件下で前記電極に電気化学エネルギーを与えるステップと、
（ｄ）放出された電気化学発光を測定するステップと、を含む方法。
【請求項１６】
結合現象を測定する方法であって、
（ａ）電極上に固定された結合試薬を、電気化学発光標識を含むアッセイ試薬と接触させるステップであって、前記結合試薬が前記アッセイ試薬に特異的に結合するステップと、
（ｂ）前記アッセイ試薬を前記結合試薬に結合させて前記電気化学発光標識を前記電極に付着させるステップと、
（ｃ）前記電極を、電気化学発光共反応物を含む電気化学発光アッセイ緩衝剤と接触させるステップであって、前記電気化学発光共反応物が親水性官能基を含む第三級アミンであるステップと、
（ｄ）前記電極上の電気化学発光標識を誘導して電気化学発光を放出するのに適切な条件下で前記電極に電気化学エネルギーを与えるステップと、
（ｅ）放出された電気化学発光を測定するステップと、を含む方法。
【請求項１７】
前記電気化学発光共反応物がアミンラジカルカチオン及び／又はラジカル還元剤を形成し、前記アミンラジカルカチオン及び／又はラジカル還元剤の拡散距離が１００ｎｍ未満である、請求項１１から１６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
前記方法が洗浄ステップなしで実施される、請求項１１から１７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記電気化学発光共反応物をＴＰＡで置換することによって、溶液中の電気化学発光標識に対する電極に付着している電気化学発光標識からの電気化学発光誘導の選択性が少なくとも２倍低下する、請求項１２に記載の方法。
【請求項２０】
前記電気化学発光共反応物がＰＩＰＥＳである、請求項１１から１８までのいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記電気化学発光共反応物が以下の式を有し、ｉ）Ｘが−（ＣＨ２）−又はヘテロ原子であり、ｉｉ）Ｒ及びＲ１が２つ以上の炭素を含むアルキル基であり、ｉｉｉ）ｎ及びｍが各々１以上であり、ｉｖ）Ｒが親水性官能基を含み、ｖ）Ｒ１が親水性官能基を含んでもよく、請求項１１から１６までのいずれか一項に記載の方法。
【化１】
2005522671.tif 000001
【請求項２２】
前記電気化学発光共反応物が、３−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−プロパンスルホン酸、４−（ジ−ｎ−プロピルアミノ）−ブタンスルホン酸、４−［ビス−（２−ヒドロキシエタン）−アミノ］−ブタンスルホン酸、ピペリジン−Ｎ−（３−プロパンスルホン酸）、アゼパン−Ｎ−（３−プロパンスルホン酸）、ピペリジン−Ｎ−（３−プロピオン酸）（ＰＰＡ）、３−モルフォリノ−２−ヒドロキシプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳＯ）、３−モルホリンプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−３−プロパンスルホン酸（ＥＰＰＳ）、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−３−エタンスルホン酸（ＢＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）（ＰＩＰＥＳ）、トリエタノールアミン、Ｎ−２−ヒドロキシピペラジン−Ｎ−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス−４−ブタンスルホン酸、ホモピペリジン−Ｎ−３−プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス−３−プロパンスルホン酸、ピペリジン−Ｎ−３−プロパンスルホン酸、ピペラジン−Ｎ−２−ヒドロキシエタン−Ｎ’−３−メチルプロパノエート、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス−３−メチルプロパノエート、１，６−ジアミノへキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸、Ｎ，Ｎ−ビスプロピル−Ｎ−４−アミノブタンスルホン酸、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（ＴＥＳ）、１，３−ビス［トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミノ］プロパン（ビス−Ｔｒｉｓプロパン）、３−ジメチルアミノ−１−プロパノール、３−ジメチルアミノ−２−プロパノール、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラプロピルプロパン−１，３−ジアミン（ＴＰＡ２量体）、ピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−ヒドロキシプロパン）スルホン酸（ＰＯＰＳＯ）及び２−ヒドロキシ−３−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］プロパン−１−スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）からなる群から選択される、請求項１１から１６までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記電極が元素状炭素を含む、請求項１１〜２２の何れかに記載の方法。
【請求項２４】
前記電気化学発光標識を少なくとも１つのフェニルエーテル含有洗浄剤とも接触させる、請求項１１から２３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記電気化学発光共反応物が第三級アミンであり、前記電気化学発光標識がルテニウム又はオスミウムの有機金属錯体であり、前記組成物は無機リン酸塩を実質的に含まない、請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
電気化学発光標識を含む組成物を、電気化学発光共反応物と非リン酸塩ベースのｐＨ緩衝剤とを含み、かつ、リン酸塩を含まない試薬と混合するステップと、
電気化学発光を誘導するステップと、
放出された電気化学発光を検出するステップと、
を含む、電気化学発光を発生させる方法であって、
前記電気化学発光共反応物が第三級アミンであり、
前記非リン酸塩ベースのｐＨ緩衝剤が、トリス［ヒドロキシメチル］アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、オリゴ(グリシン)又はそれらの組合せからなる群から選択される、
電気化学発光を発生させる方法。
【請求項２７】
前記非リン酸塩ベースのｐＨ緩衝剤がグリシル−グリシン（Ｇｌｙ−Ｇｌｙ）である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
さらに界面活性剤を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記電気化学発光標識がルテニウム又はオスミウムの有機金属錯体である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記方法がさらに、
（ａ）前記組成物を電気化学エネルギーに曝し、前記電気化学発光組成物を誘導して電磁放射を放出させるステップと、
（ｂ）放出された電磁放射を検出するステップと、
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
電極に酸化電位を印加することによって前記電気化学エネルギーを発生させる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記電極が元素状炭素を含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記電気化学発光標識が前記電極に付着している、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
（ａ）水と、
（ｂ）濃度が５０ｍＭ〜１０００ｍＭのトリプロピルアミンと、
（ｃ）トリス［ヒドロキシメチル］−アミノメタン、及び、グリシルグリシンからなる群から選択されるｐＨ緩衝剤を含む電解質であって、前記ｐＨ緩衝剤の濃度が５０ｍＭ〜１２００ｍＭである電解質と、
を含む、水性試薬組成物であって、
前記水性試薬組成物が６．５〜８．５のｐＨを有する、
水性試薬組成物。
【請求項３５】
更に、界面活性剤を含む、請求項３４に記載の水性試薬組成物。
【請求項３６】
更に、保存剤を含む、請求項３４又は３５に記載の水性試薬組成物。
【請求項３７】
界面活性剤が含まれる、請求項３４、３５又は３６に記載の水性試薬組成物。
【請求項３８】
前記界面活性剤が、０．０５％〜０．５％の濃度の非イオン界面活性剤である、請求項３７に記載の水性試薬組成物。
【請求項３９】
前記界面活性剤が、フェニルエーテル含有界面活性剤である、請求項３８に記載の水性試薬組成物。
【請求項４０】
前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００及びＮＰ−４０からなる群から選択される、請求項３９に記載の水性試薬組成物。
【請求項４１】
前記トリプロピルアミン濃度が、５０〜２００ｍＭである、請求項３４、３５又は３６に記載の水性試薬組成物。
【請求項４２】
前記電解質が、更に、カリウムイオン及び／又は塩素イオンを含む、請求項３４、３５又は３６に記載の水性試薬組成物。
【請求項４３】
（ａ）水と、
（ｂ）濃度が１０ｍＭ〜２００ｍＭのピペラジン−Ｎ，Ｎ’−ビス（２−エタンスルホン酸）と、
（ｃ）トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、グリシルグリシン、及び、リン酸塩からなる群から選択されるｐＨ緩衝剤を含む電解質であって、前記ｐＨ緩衝剤の濃度が４０ｍＭ〜１０００ｍＭである電解質と、
（ｄ）フェニルエーテル含有界面活性剤と、
を含む、水性試薬組成物であって、
前記水性試薬組成物が６．５〜８．５のｐＨを有する、
水性試薬組成物。
【請求項４４】
更に、保存剤を含む、請求項４３に記載の水性試薬組成物。
【請求項４５】
前記電解質が、更に、カリウムイオン及び／又は塩素イオンを含む、請求項４３又は４４に記載の水性試薬組成物。
【請求項４６】
（ａ）  前記ｐＨ緩衝剤が４００ｍＭ未満の濃度のリン酸塩であり、
（ｂ）  前記界面活性剤が０．０５％〜０．５％の濃度である、
請求項４３又は４４に記載の水性試薬組成物。
【請求項４７】
前記界面活性剤が、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００及びＮＰ−４０からなる群から選択される、請求項４６に記載の水性試薬組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３０】
５．１  電気化学発光共反応物
すべてではないにしてもほとんどの現行の市販電気化学発光技術の適用例には、共反応物としてのトリ−ｎ−プロピルアミン（ＴＰＡ）及びｐＨ緩衝剤としてのリン酸塩を含有する電気化学発光アッセイ緩衝剤の存在下における電気化学発光標識（及び、特に、ルテニウムの有機金属錯体）の測定が含まれている。これらの電気化学発光アッセイ緩衝剤は、結合アッセイの固相として金属（一般に、白金）電極表面に収集された磁気粒子を使用する市販の電気化学発光計測手段に対して最適化され、優れた性能を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
本発明の別の好ましい実施形態は、ＴＰＡ以外の共反応物、好ましくは（共反応物の項に記載したように）親水性官能基を有するトリアルキルアミンを含む電気化学発光アッセイ緩衝剤に関する。好ましくは、この共反応物はＰＰＡ又はＰＩＰＥＳであり、最も好ましくはＰＩＰＥＳである。この共反応物の濃度は、好ましくは１０〜８００ｍＭ、最も好ましくは１０〜２００ｍＭ、最も好ましくは２０〜５０ｍＭである。電気化学発光アッセイ緩衝剤は、ｐＨ緩衝剤、好ましくは、リン酸塩、Ｔｒｉｓ又はＧｌｙ−Ｇｌｙも含むことが好ましい。ｐＨ緩衝剤の濃度は、好ましくは０〜８００ｍＭ、より好ましくは０〜４００ｍＭ、さらにより好ましくは２０〜２００ｍＭ、最も好ましくは７５〜１５０ｍＭである。本組成物のｐＨは、好ましくは６〜９、より好ましくは７〜８、さらにより好ましくは７．２〜７．８、最も好ましくは約７．５である。電気化学発光アッセイ緩衝剤は、フェニルエーテル成分及び／又は洗浄剤、好ましくは非イオン洗浄剤、さらにより好ましくはフェニルエーテル含有洗浄剤、最も好ましくはＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を含む物質も含むことが好ましい。洗浄剤濃度は、好ましくは０．０２％よりも高く、より好ましくは０．０５％よりも高く、最も好ましくは０．０５〜０．５％である。