【手続補正書】
【提出日】平成17年9月14日(2005.9.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
CD49c、CD90およびテロメラーゼを共発現する実質的に相同な細胞集団。
【請求項２】
テロメラーゼの発現が、106個の18srRNAの転写産物当たり約１個のテロメラーゼの転写産物〜106個の18s rRNAの転写産物当たり約10個のテロメラーゼの転写産物よりも多い相対的発現である請求項１記載の細胞集団。 
【請求項３】
CD49cおよびCD90を共発現し、CD34および／またはCD45を発現しない実質的に相同な細胞集団。
【請求項４】
CD49c、CD90、ならびにBDNF、IL-6、NGFおよびMCP-1からなる群より選ばれる少なくとも１つの栄養因子を共発現する実質的に相同な細胞集団。
【請求項５】
CD49cおよびCD90を共発現するが、骨シアロタンパク質を発現しない実質的に相同な細胞集団。
【請求項６】
細胞がまたテロメラーゼを発現する請求項５記載の細胞集団。
【請求項７】
細胞が約144時間未満、約72時間未満または約48時間未満の倍加時間を有してなる請求項１または５記載の細胞集団。 
【請求項８】
細胞が予め選択された表現型に分化する潜在力を有してなる請求項１または５記載の細胞集団。
【請求項９】
予め選択された表現型が、軟骨細胞、星状細胞、稀突起膠細胞、ニューロン、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、心筋細胞、膵島細胞、骨格筋、平滑筋、肝細胞および網膜神経節細胞からなる群より選ばれる請求項８記載の細胞集団。
【請求項１０】
約20〜約50集団の細胞の倍加後にP21またはP53の発現をさらに含み、P53の発現が、106個の18srRNAの転写産物当たり約3000個のP53の転写産物までの相対的発現であり、P21の発現が、106個の18s rRNAの転写産物当たり約20,000個のP21の転写産物までの相対的発現である請求項１または５記載の細胞集団。
【請求項１１】
細胞が骨髄、皮膚、脂肪、臍帯血、筋肉および胎盤供給源からなる群より選ばれる供給源に由来する請求項１または５記載の細胞集団。
【請求項１２】
細胞が骨髄に由来する請求項１または５記載の細胞集団。
【請求項１３】
骨髄細胞がヒト骨髄細胞である請求項１２記載の細胞集団。
【請求項１４】
細胞集団がCD34および／またはCD45を発現しない請求項１または５記載の細胞集団。
【請求項１５】
BDNF、IL-6、NGFおよびMCP-1からなる群より選ばれる少なくとも１つの栄養因子を発現する請求項１または５記載の細胞集団。
【請求項１６】
ａ）低酸素条件下で約100細胞/cm2未満、約50細胞/cm2未満または約30細胞/cm2未満の播種密度で細胞集団の供給源を培養する工程；および
ｂ）培養した細胞集団の供給源からCD49cおよびCD90を共発現する細胞を選択する工程
を含む、CD49cおよびCD90を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。 
【請求項１７】
低酸素条件が約15％未満、約10％未満または約５％の酸素である請求項１６記載の方法。 
【請求項１８】
培養した供給源から選ばれた細胞がBDNF、IL-6、NGFおよびMCP-1からなる群より選ばれる少なくとも１つの栄養因子を発現する請求項１６記載の方法。
【請求項１９】
ａ）低酸化ストレス条件下で約100細胞/cm2未満、約50細胞/cm2未満または約30細胞/cm2未満の播種密度で細胞集団の供給源を培養する工程；および
ｂ）培養した細胞集団の供給源からCD49cおよびCD90を共発現する細胞を選択する工程
を含む、CD49cおよびCD90を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。 
【請求項２０】
ａ）低酸化ストレス条件下で約75,000細胞/cm2未満の播種密度で細胞集団の供給源を培養し、接着細胞集団を生成する工程；
ｂ）低酸化ストレス条件下で約100細胞/cm2未満の播種密度で接着細胞集団を培養する工程；および
ｃ）培養した接着細胞集団からCD49cおよびCD90を共発現する細胞を選択する工程
を含む、CD49cおよびCD90を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。 
【請求項２１】
ａ）低酸素条件下で約75,000細胞/cm2未満の播種密度で細胞集団の供給源を培養し、接着細胞集団を生成する工程；
ｂ）低酸素条件下で約100細胞/cm2未満の播種密度で接着細胞集団を培養する工程；および
ｃ）培養した接着細胞集団からCD49cおよびCD90を共発現する細胞を選択する工程
を含む、CD49cおよびCD90を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。
【請求項２２】
細胞集団の供給源が骨髄である請求項１６、１９または２１記載の方法。
【請求項２３】
骨髄がヒト骨髄である請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
低酸素条件が約５％の酸素である請求項２１記載の方法。
【請求項２５】
骨髄を培養する前に骨髄を溶解すること、または骨髄を分画することをさらに含む請求項１６または２１記載の方法。 
【請求項２６】
骨髄が、密度勾配を通過することにより、NH2Cl溶解により、蛍光活性化分類により、または磁性分類により分画される請求項２５記載の方法。 
【請求項２７】
CD49cおよびCD90を共発現する細胞がCD34および／またはCD45を発現しない請求項１６または２１記載の方法。
【請求項２８】
培養した供給源から選択された細胞がBDNF、IL-6およびMCP-1からなる群より選ばれる少なくとも１つの栄養因子を発現する請求項１６または２１記載の方法。 
【請求項２９】
ａ）細胞集団の供給源を培養する工程；
ｂ）培養した細胞集団の供給源からCD49cおよびCD90を共発現する細胞を選択する工程；および
ｃ）CD49cおよびCD90を共発現する細胞を改変して運命づけられた前駆細胞にする工程
を含む、運命づけられた前駆細胞の作製方法。
【請求項３０】
CD49cおよびCD90を共発現する細胞が、低酸素条件により培養した細胞集団の供給源から選択される請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
低酸素条件が約５％酸素である請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
細胞集団の供給源が骨髄である請求項２９記載の方法。
【請求項３３】
骨髄がヒト骨髄である請求項３２記載の方法。 
【請求項３４】
CD49cおよびCD90を共発現する実質的に相同な細胞集団を含有してなる医薬組成物。
【請求項３５】
CD49cおよびCD90を共発現する実質的に相同な細胞集団が少なくとも約105個または少なくとも約106個の細胞を有してなる請求項３４記載の医薬組成物。 
【請求項３６】
細胞集団がCD34および／またはCD45を発現しない請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３７】
細胞集団がBDNF、IL-6、NGFおよびMCP-1からなる群より選ばれる少なくとも１つの栄養因子を発現する請求項３４記載の医薬組成物。
【請求項３８】
CD49c、CD90およびテロメラーゼを共発現する実質的に相同な細胞集団を含有してなる医薬組成物。 
【請求項３９】
CD49c、CD90および少なくとも１つの心臓関連転写因子を共発現する実質的に相同な細胞集団。
【請求項４０】
テロメラーゼの共発現をさらに含む請求項３９記載の実質的に相同な細胞集団。
【請求項４１】
細胞がヒト骨髄細胞に由来する請求項３９記載の実質的に相同な細胞集団。 
【請求項４２】
標識をさらに含有してなる請求項３９記載の実質的に相同な細胞集団。
【請求項４３】
細胞集団が心筋細胞に分化する請求項３９記載の実質的に相同な細胞集団。
【請求項４４】
細胞がIL-6、VEGF、MCP1およびBDNFからなる群より選ばれる少なくとも１つの栄養因子を発現する請求項３９記載の実質的に相同な細胞集団。
【請求項４５】
CD49c、CD90、および少なくとも１つの心臓関連転写因子を共発現するが、骨シアロタンパク質を発現しない実質的に相同な細胞集団。
【請求項４６】
心臓関連転写因子がGATA4、Irx4およびNkx2.5からなる群より選ばれる請求項３９または４５記載の実質的に相同な細胞集団。
【請求項４７】
CD49c、CD90、GATA4、Irx4およびNkx2.5を共発現する実質的に相同な細胞集団。
【請求項４８】
CD49c、CD90、テロメラーゼ、GATA4、Irx4およびNkx2.5を共発現する実質的に相同な細胞集団。
【請求項４９】
ａ）低酸素条件下で細胞集団の供給源を培養する工程；および
ｂ）培養した細胞集団の供給源をプロテインキナーゼＣインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処置する工程
を含む、CD49c、CD90および少なくとも心臓関連転写因子を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。 
【請求項５０】
処理した細胞集団がGATA4、Irx4およびNkx2.5からなる群より選ばれる心臓関連転写因子を共発現する請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
ａ）低酸素条件下で細胞集団の供給源を培養する工程；および
ｂ）培養した細胞集団の供給源をプロテインキナーゼＣインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処理する工程
を含むCD49c、CD90、テロメラーゼおよび少なくとも１つの心臓関連転写因子を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。
【請求項５２】
ａ）低酸素条件下で細胞集団の供給源を培養する工程；および
ｂ）培養した細胞集団の供給源をプロテインキナーゼＣインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処理する工程
を含むCD49c、CD90、テロメラーゼ、GATA4、Irx4およびNkx2.5を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。
【請求項５３】
細胞集団の供給源が骨髄供給源を含む請求項４９または５２記載の方法。
【請求項５４】
プロテインキナーゼＣインヒビターがセレリチリンである請求項４９または５２記載の方法。
【請求項５５】
DNAメチル化インヒビターが5-アザシチジンである請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
ａ）低酸素条件下で細胞集団の供給源を培養する工程；および
ｂ）培養した細胞集団の供給源をプロテインキナーゼＡインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処理する工程
を含む、CD49c、CD90、GATA4、Irx4およびNkx2.5を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。
【請求項５７】
CD49cおよびCD90を共発現する細胞集団をプロテインキナーゼＣインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処理する工程を含む、CD49c、CD90および少なくとも１つの候補関連転写因子を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。
【請求項５８】
CD49c、CD90およびテロメラーゼを共発現する細胞集団をプロテインキナーゼＣインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処理する工程を含む、CD49c、CD90、テロメラーゼおよび少なくとも１つの心臓関連転写因子を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。
【請求項５９】
CD49c、CD90およびテロメラーゼを共発現する細胞集団をプロテインキナーゼＣインヒビターおよびDNAメチル化インヒビターで処理する工程を含む、CD49c、CD90、テロメラーゼ、GATA4、Irx4およびNkx2.5を共発現する実質的に相同な細胞集団の作製方法。 
【請求項６０】
CD49cおよびCD90を共発現する細胞の実質的に相同な集団と少なくとも１つの運命づけられた前駆細胞型を含む細胞の集団とを合わせる工程を含む、運命づけられた前駆細胞型の形成方法。
【請求項６１】
前記細胞の集団が、神経細胞の集団および心筋細胞の集団からなる群より選ばれる請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
細胞の集団がテロメラーゼを発現する請求項６０記載の方法。
【請求項６３】
CD49c、CD90を共発現し、低酸素条件下で培養した場合、約144時間未満、約72時間未満、約65時間未満、約48時間未満または約35時間未満の倍加時間を有してなる実質的に相同な細胞集団。 
【請求項６４】
低酸素条件が約５％未満の酸素である請求項６３記載の実質的に相同な細胞集団。
【請求項６５】
CD49c、CD90を共発現し、低酸素条件下で培養した場合、約144時間未満の倍加時間を有してなり、低酸素条件下で約100細胞/cm2の播種密度で細胞集団供給源を培養する工程を含む方法により形成される、実質的に相同な細胞集団。
【請求項６６】
請求項３９、４０、４７または４８記載の細胞集団を含有してなる医薬組成物。