【手続補正書】
【提出日】平成18年6月14日(2006.6.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の段階を含む、酵母におけるフィターゼの製造法：
フィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドをコードしている異種遺伝子を提供する段階；および
該遺伝子を酵母菌株において発現させる段階。
【請求項２】
シグナルペプチドによって導かれるタンパク質またはポリペプチドが、細胞によって増殖培地中に分泌されるか、または細胞内に発現されるのみである、請求項１記載の方法。
【請求項３】
タンパク質またはポリペプチドが、増殖培地中に分泌され、かつ濃度300ユニット／ml以上を有する、請求項２記載の方法。
【請求項４】
フィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドをコードしている異種遺伝子が、転写エンハンサーエレメントによりインフレームでスプライシングされる、請求項１記載の方法。
【請求項５】
異種遺伝子が安定したベクターに保持されている、請求項１記載の方法。
【請求項６】
異種遺伝子が人工染色体に保持されている、請求項１記載の方法。
【請求項７】
異種遺伝子が酵母菌株の染色体に組込まれている、請求項１記載の方法。
【請求項８】
異種遺伝子が植物細胞から単離される、請求項１記載の方法。
【請求項９】
異種遺伝子が菌類細胞から単離される、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
異種遺伝子がアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）のphyA遺伝子である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
酵母菌株がサッカロマイセス（Saccharomyces）、クリュイベロマイセス（Kluyveromyces）、トルラスポラ（Torulaspora）、およびシゾサッカロマイセス（Schizosaccharomyces）からなる群より選択される、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
酵母菌株がメタノール資化酵母菌株である、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
メタノール資化酵母菌株がピキア・パストリス（Pichia pastoris）である、請求項９記載の方法。
【請求項１５】
異種遺伝子が細菌細胞から単離される、請求項１記載の方法。
【請求項１６】
異種遺伝子が大腸菌のappA遺伝子である、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
酵母菌株がサッカロマイセス（Saccharomyces）、クリュイベロマイセス（Kluyveromyces）、トルラスポラ（Torulaspora）、およびシゾサッカロマイセス（Schizosaccharomyces）からなる群より選択される、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
酵母菌株がメタノール資化酵母菌株である、請求項１５記載の方法。
【請求項２０】
メタノール資化酵母菌株がピキア・パストリス（Pichia pastoris）である、請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
請求項１記載の方法により製造されるタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２２】
シグナルペプチドを含む、請求項２１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２３】
異種遺伝子がアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）のphyA遺伝子である、請求項２１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２４】
異種遺伝子が大腸菌のappA遺伝子である、請求項２１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２５】
温度範囲57〜65℃、pH2.5〜3.5または5〜5.5で最適活性を示すフィターゼ活性を有する、請求項２１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２６】
最適活性のための温度範囲が58〜62℃である、請求項２５記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２７】
タンパク質を90℃で15分間加熱した後、タンパク質が少なくとも40%の活性を保持するフィターゼ活性を有する、請求項２１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２８】
タンパク質を90℃で15分間加熱した後、タンパク質が40%〜60%の間の活性を保持する、請求項２７記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項２９】
タンパク質を60℃で15分間加熱した後、タンパク質が少なくとも60%の活性を保持するフィターゼ活性を有する、請求項２１記載のタンパク質またはポリペプチド。
【請求項３０】
フィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドをコードしており、かつ酵母においてフィターゼを発現することが可能なプロモーターに機能的に連結される異種遺伝子を含む酵母菌株。
【請求項３１】
異種遺伝子がアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）のphyA遺伝子である、請求項３０記載の酵母菌株。
【請求項３２】
酵母菌株がサッカロマイセス（Saccharomyces）、クリュイベロマイセス（Kluyveromyces）、トルラスポラ（Torulaspora）、およびシゾサッカロマイセス（Schizosaccharomyces）からなる群より選択される、請求項３１記載の酵母菌株。
【請求項３３】
酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である、請求項３２記載の酵母菌株。
【請求項３４】
酵母菌株がメタノール資化酵母菌株である、請求項３１記載の酵母菌株。
【請求項３５】
メタノール資化酵母菌株がピキア・パストリス（Pichia pastoris）である、請求項３４記載の酵母菌株。
【請求項３６】
異種遺伝子が大腸菌のappA遺伝子である、請求項３０記載の酵母菌株。
【請求項３７】
酵母菌株がサッカロマイセス（Saccharomyces）、クリュイベロマイセス（Kluyveromyces）、トルラスポラ（Torulaspora）、およびシゾサッカロマイセス（Schizosaccharomyces）からなる群より選択される、請求項３６記載の酵母菌株。
【請求項３８】
酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である、請求項３７記載の酵母菌株。
【請求項３９】
酵母菌株がメタノール資化酵母菌株である、請求項３６記載の酵母菌株。
【請求項４０】
メタノール資化酵母菌株がピキア・パストリス（Pichia pastoris）である、請求項３９記載の酵母菌株。
【請求項４１】
下記を含むベクター：
フィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドをコードしている酵母以外の生物の遺伝子；
フィターゼ活性を有するペプチドをコードしている遺伝子に機能的に連結された、酵母において転写を開始することが可能なプロモーター；および
酵母におけるベクターの維持が可能である複製起点。
【請求項４２】
選択マーカーをさらに含む、請求項４１記載のベクター。
【請求項４３】
選択マーカーが、URA3、LEU2、TRP1、HIS3、HIS4、ARG4、および抗生物質耐性遺伝子からなる群より選択される、請求項４２記載のベクター。
【請求項４４】
細菌細胞における複製が可能である複製起点をさらに含む、請求項４１記載のベクター。
【請求項４５】
複製起点が、ColE1、Ori、およびoriTからなる群より選択される、請求項４４記載のベクター。
【請求項４６】
異種遺伝子が細菌細胞から単離される、請求項４１記載のベクター。
【請求項４７】
異種遺伝子がアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）のphyA遺伝子である、請求項４６記載のベクター。
【請求項４８】
異種遺伝子が大腸菌のappA遺伝子である、請求項４６記載のベクター。
【請求項４９】
下記の段階を含む、フィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドの製造法：
フィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドをコードしている単離appA遺伝子を提供する段階、および
該遺伝子を宿主細胞において発現させる段階。
【請求項５０】
appA遺伝子が大腸菌から単離される、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
宿主細胞が酵母菌株または糸状菌である、請求項４９記載の方法。
【請求項５２】
糸状菌がアスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）である、請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
酵母菌株がサッカロマイセス（Saccharomyces）、クリュイベロマイセス（Kluyveromyces）、トルラスポラ（Torulaspora）、およびシゾサッカロマイセス（Schizosaccharomyces）からなる群より選択される、請求項５１記載の方法。
【請求項５４】
酵母菌株がサッカロマイセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）である、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
シグナルペプチドによって導かれるタンパク質またはポリペプチドが、細胞によって増殖培地中に分泌されるか、または細胞内に発現されるのみである、請求項４９記載の方法。
【請求項５６】
下記の段階を含む、フィテート（phytate）をイノシトールおよび無機リンに転換する方法：
appA遺伝子を提供する段階；
宿主細胞において該遺伝子からのフィターゼ活性を有するタンパク質またはポリペプチドを発現する段階；および
タンパク質またはポリペプチドをフィテートと接触させ、フィテートのイノシトールおよび無機リンへの転換を触媒する段階。
【請求項５７】
フィテートが食品または飼料に含まれる、請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
appA遺伝子が大腸菌から単離される、請求項５６記載の方法。