【手続補正書】
【提出日】平成18年5月19日(2006.5.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に純粋なΔ４，５不飽和グリクロニダーゼ。
【請求項２】
前記グリクロニダーゼが組換え生成されたグリクロニダーゼである、請求項１に記載のグリクロニダーゼ。
【請求項３】
前記グリクロニダーゼが、合成グリクロニダーゼである、請求項１に記載のグリクロニダーゼ。
【請求項４】
前記グリクロニダーゼが、配列番号１のアミノ酸を有するペプチド、またはその機能的改変体である、請求項１に記載のグリクロニダーゼ。
【請求項５】
単離されたポリペプチドであって、
配列番号１のアミノ酸配列を有するΔ４，５不飽和グリクロニダーゼ、またはその機能的改変体を含む、単離されたポリペプチド。
【請求項６】
前記グリクロニダーゼが、配列番号１のアミノ酸配列を有する、請求項５に記載の単離されたポリペプチド。
【請求項７】
ネイティブのΔ４，５グリクロニダーゼより高い比活性を有する単離されたΔ４，５不飽和グリクロニダーゼを含む、組成物。
【請求項８】
前記グリクロニダーゼが、グリクロニダーゼ１ピコモルあたり、１分内に、少なくとも約６０ピコモルの加水分解された基質の比活性を有する、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記Δ４，５不飽和グリクロニダーゼが、ネイティブのグリクロニダーゼよりも少なくとも約２倍高い比活性を有する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１０】
前記Δ４，５不飽和グリクロニダーゼが、ネイティブのグリクロニダーゼよりも少なくとも約３倍高い比活性を有する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
前記Δ４，５不飽和グリクロニダーゼが、ネイティブのグリクロニダーゼよりも少なくとも約４倍高い比活性を有する、請求項７に記載の組成物。
【請求項１２】
単離された核酸分子であって、以下：
（ａ）ストリンジェントな条件下で、配列番号２で記載されるヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズし、かつ配列番号１として記載されるアミノ酸配列を有するΔ４，５不飽和グリクロニダーゼをコードする、核酸分子；
（ｂ）遺伝コードの縮重に起因して、コドン配列が該（ａ）の核酸分子とは異なる核酸分子、および
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の相補体、
からなる群から選択される、単離された核酸分子。
【請求項１３】
前記単離された核酸分子が、配列番号１をコードする、請求項１２に記載の単離された核酸分子。
【請求項１４】
前記単離された核酸分子が、配列番号２で記載されるヌクレオチド配列を含む、請求項１２に記載の単離された核酸分子。
【請求項１５】
プロモーターに作動可能に連結された請求項１０に記載の単離された核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項１６】
請求項１５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１７】
プロモーターに作動可能に連結された請求項１４に記載の単離された核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項１８】
請求項１７に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１９】
薬学的調製物であって、以下：
請求項１〜１５のいずれか１項に記載の組成物またはベクターおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む、調製物。
【請求項２０】
グリコサミノグリカンを切断する方法であって、以下：
グリコサミノグリカンを、該グリコサミノグリカンを切断するのに有効な量で、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のグリクロニダーゼと接触させる、工程、
を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法に従って調製されたグリコサミノグリカン。
【請求項２２】
ヘパリン含有流体からヘパリンを取り出す工程であって、以下：
ヘパリン含有流体を、該ヘパリン含有流体からヘパリンを取り出すのに十分な量で、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のグリクロニダーゼと接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項２３】
前記グリクロニダーゼが、固体支持体に固定される、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
ヘパリナーゼもまた、前記固体支持体に固定される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
グリコサミノグリカンを分析する方法であって、以下：
グリコサミノグリカンを、該グリコサミノグリカンを分析するのに有効な量で、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のグリクロニダーゼと接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項２６】
前記方法が、サンプル中の特定のグリコサミノグリカンの存在を同定するための方法である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記方法が、サンプル中のグリコサミノグリカンの純度を決定するための方法である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記方法が、サンプル中のグリコサミノグリカンの組成を決定するための方法である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記方法が、グリコサミノグリカンのサッカリド単位の配列を決定するための方法である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
質量分光法、ＮＭＲ分光法、ゲル電気泳動、キャピラリー電気泳動およびＨＰＬＣからなる群から選択されるさらなる分析技術をさらに含む、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
少なくとも１つのジサッカリド単位から構成されるグリコサミノグリカンを切断する方法であって、以下：
少なくとも１つのジサッカリド単位から構成されるグリコサミノグリカンを、該グリコサミノグリカンを切断するのに有効な量で、請求項１〜１１のいずれか１項に記載のグリクロニダーゼと接触させる工程、
を包含する、方法。
【請求項３２】
前記グリコサミノグリカンが、ΔＵＨＮＡｃジサッカリド単位から構成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記グリコサミノグリカンが、ΔＵＨＮＡｃ，６Ｓジサッカリド単位から構成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記グリコサミノグリカンが、ΔＵＨＮＳ，６Ｓジサッカリド単位から構成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記グリコサミノグリカンが、ΔＵＨＮＳジサッカリド単位から構成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記グリコサミノグリカンの長さが、２サッカリド単位を越える、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記グリコサミノグリカンが、２−Ｏ硫酸化ウロニデートを含まない、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
前記グリコサミノグリカンが、６−Ｏ硫酸化されている、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
前記グリコサミノグリカンが、Ｎ非置換グリコサミンを含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
新脈管形成を阻害するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、新脈管形成を阻害するために有効な量の請求項１９に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項４１】
癌を処置するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、癌を処置するために有効な量の請求項１９に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項４２】
細胞増殖を阻害するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、細胞増殖を阻害するために有効な量の請求項１９に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項４３】
凝固障害を処置するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、該凝固障害を処置するのに有効な量の請求項１９に記載の組成物を含有する、薬学的調製物。
【請求項４４】
前記方法が、別の酵素の使用をさらに包含する、請求項２０、２２、２５または３１に記載の方法。
【請求項４５】
前記別の酵素が、ヘパリナーゼ、グリクロニダーゼまたはイズロニダーゼである、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記グリクロニダーゼの使用が、ヘパリナーゼを用いる処置と同時であるか、またはその後である、請求項２０、２２、２５または３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４７】
薬学的調製物であって、請求項２１に記載のグリコサミノグリカンおよび薬学的に受容可能なキャリアを含む、調製物。
【請求項４８】
新脈管形成を阻害するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、新脈管形成を阻害するのに有効な量の請求項４７に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項４９】
癌を処置するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、癌を処置するのに有効な量の請求項４７に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項５０】
細胞増殖を阻害するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、細胞増殖を阻害するのに有効な量の請求項４７に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項５１】
凝固障害を処置するための薬学的調製物であって、該薬学的調製物は、該凝固障害を処置するのに有効な量の請求項４７に記載の薬学的調製物を含有する、薬学的調製物。
【請求項５２】
単離された核酸分子であって、該核酸分子は、配列番号２または配列番号４に記載されるヌクレオチド配列に対して少なくとも６０％同一であるヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項５３】
単離された核酸分子であって、該核酸分子は、配列番号１または配列番号３に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
【請求項５４】
前記グルコサミノグリカンが、テトラサッカリドである、請求項３１に記載の方法。
【請求項５５】
前記ジサッカリド単位が、ΔＵＨＮＨ２，６Ｓである、請求項３１に記載の方法。
【請求項５６】
前記グリコサミノグリカンが、ヘパリン、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）、またはヘパラン硫酸である、請求項３１に記載の方法。
【請求項５７】
ＬＭＷＨが生成される、請求項３１に記載の方法。
【請求項５８】
前記へパリナーゼが、ヘパリナーゼＩ、ヘパリナーゼＩＩまたはヘパリナーゼＩＩＩである、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項５９】
前記Δ４，５不飽和グリクロニダーゼが、固体支持体に固定されている、請求項１に記載の方法。
【請求項６０】
前記Δ４，５不飽和グリクロニダーゼおよび前記ヘパリナーゼが、固体支持体に固定されている、請求項４６に記載の方法。
【請求項６１】
グリコサミノグリカンを切断する方法であって、該方法は：
該グリコサミノグリカンをΔ４，５不飽和グリクロニダーゼならびにヘパリナーゼＩ、ＩＩ、およびＩＩＩと接触させる工程、およびΔＵ２ＳＨＮＳ，６Ｓ；ΔＵ２ＳＨＮＳ；ΔＵＨＮＳ，６Ｓ；ΔＵ２ＳＨＮＡｃ，６Ｓ；ΔＵＨＮＳ；ΔＵ２ＳＨＮＡｃ；ΔＵＨＮＡｃ，６Ｓおよびテトラサッカリドを生成する工程を包含する、方法。
【請求項６２】
請求項６１に記載の方法であって、前記Δ４，５不飽和グリクロニダーゼが、以下：
（ａ）ストリジェントな条件下で、配列番号２に記載されるヌクレオチド配列を有する核酸分子にハイブリダイズする、核酸分子、
（ｂ）遺伝コードの縮重に起因して、コドン配列が（ａ）の核酸分子とは異なる核酸分子、および
（ｃ）（ａ）または（ｂ）の相補体、
からなる群より選択される単離された核酸分子を発現することによって生成される、方法。
【請求項６３】
前記グリコサミノグリカンが、少なくとも１つのジサッカリド単位を含む、請求項２５に記載の方法。
【請求項６４】
前記グリコサミノグリカンが、２−Ｏ硫酸化ウロニデートを含まない、請求項２５に記載の方法。
【請求項６５】
前記グリコサミノグリカンが、６−Ｏ硫酸化されている、請求項２５に記載の方法。
【請求項６６】
前記グリコサミノグリカンが、Ｎ非置換グリコサミンを含まない、請求項２５に記載の方法。
【請求項６７】
前記ジサッカリド単位が、ΔＵＨＮＡｃである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
前記ジサッカリド単位が、ΔＵＨＮＡｃ，６Ｓである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６９】
前記ジサッカリド単位が、ΔＵＨＮＳ，６Ｓである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７０】
前記ジサッカリド単位が、ΔＵＨＮＳである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７１】
前記ジサッカリド単位が、ΔＵＨＮＨ２，６Ｓである、請求項６６に記載の方法。
【請求項７２】
前記グルコサミノグリカンが、ヘパリン、低分子量ヘパリン（ＬＭＷＨ）またはヘパラン硫酸である、請求項２５に記載の方法。
【請求項７３】
前記グルコサミノグリカンが、ＬＭＷＨである、請求項７２に記載の方法。
【請求項７４】
コンドロイチンまたはヒアルロン酸ジサッカリドを加水分解する方法であって、該方法は：
コンドロイチンまたはヒアルロン酸ジサッカリドをΔ４，５不飽和グリクロニダーゼと反応させる工程、
を包含する、方法。
【請求項７５】
前記コンドロイチンまたはヒアルロン酸ジサッカリドが、ΔＵＧａｌＮａｃ，６Ｓである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７６】
前記コンドロイチンまたはヒアルロン酸ジサッカリドが、ΔＵＧａｌＮａｃである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７７】
前記コンドロイチンまたはヒアルロン酸ジサッカリドが、ΔＵＨである、請求項７４に記載の方法。
【請求項７８】
前記反応させる工程が、１２時間を越えて行われる、請求項７４に記載の方法。
【請求項７９】
前記反応させる工程が、１８時間行われる、請求項７４に記載の方法。