【手続補正書】
【提出日】平成18年7月11日(2006.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、以下：
ａ．哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する工程；
ｂ．フロー特性を有する流体流を生成する工程；  
ｃ．該流体流のフロー特性を変化させて、流体流圧を調整する工程；
ｄ．該精子細胞を該流体流中に運び去る工程；
ｅ．精子細胞受精特性を該流体流圧の調整を介して制御する工程；および
ｆ．制御された精子細胞受精特性を有する精子細胞授精サンプルを生成する工程
を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載された精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、ここで、前記哺乳動物の種が、哺乳動物のウシ種、哺乳動物のウマ種、哺乳動物のヒツジ種、哺乳動物のイヌ種、哺乳動物のネコ種、哺乳動物のブタ種、哺乳動物の海洋動物種、哺乳動物のシカ種、哺乳動物の霊長類種、哺乳動物のヤギ種からなる群から選択される、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、ここで前記流体流が、シース流体流を含む、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記シース流体流が、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）を含むシース流体を含む、方法。
【請求項５】
請求項３に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、シース流体流が、クエン酸緩衝液を含有するシース流体を含む、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記クエン酸緩衝液が、約２．９％のクエン酸ナトリウムを含む、方法。
【請求項７】
請求項３に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記シース流体流が、ＨＥＰＥＳ緩衝液を含有しているシース流体を含む、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記流体流が、フローサイトメーターまたはセルソーター中で生成される、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該フロー特性を変化させて該流体流圧を１平方インチ当たり約２０ポンドと１平方インチ当たり約６０ポンドとの間に調整する工程を包含する、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流圧の調整を介して精子細胞受精特性を制御する前記工程が、該精液中の該ウシ精子細胞の該ウシ精子細胞受精特性と実質的に異ならない該流体流中に運び去られる前記ウシ精子細胞の前記ウシ精子細胞受精特性を確立する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流圧の調整を介して精子細胞受精特性を制御する前記工程が、該精液中の該ウシ精子細胞の該ウシ精子細胞受精特性と実質的に同等である該流体流中に運び去られる該ウシ精子細胞の該ウシ精子細胞受精特性を確立する工程を包含する、方法。
【請求項１２】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして制御された精子細胞受精特性を有する精子細胞授精サンプルを生成する前記工程が、該ウシ精液中の該ウシ精子細胞のウシ精子細胞受精特性と実質的に異ならない該ウシ精子細胞受精特性を有する該ウシ精子細胞授精サンプルを生成する工程を包含する、方法。
【請求項１３】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして制御された精子細胞受精特性を有する精子細胞授精サンプルを生成する前記工程が、該ウシ精液中の該ウシ精子細胞のウシ精子細胞受精特性と実質的に同等である該ウシ精子細胞受精特性を有する該ウシ精子細胞授精サンプルを生成する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該流体流の該フロー特性を調整して１平方インチ当たり約３０ポンドと１平方インチ当たり約５０ポンドとの間に流体流圧を調整する工程を包含する、方法。
【請求項１５】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該流体流の該フロー特性を調整して１平方インチ当たり約３０ポンドと１平方インチ当たり約４０ポンドとの間に流体流圧を調整する工程を包含する、方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウシ種の雄からウシ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該流体流の該フロー特性を調整して流体流圧を１平方インチ当たり約４０ポンドに調整する工程を包含する、方法。
【請求項１７】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流圧の調整を介して精子細胞受精特性を制御する前記工程が、該精液中の該ウマ精子細胞のウマ精子細胞受精特性と実質的に異ならない、該流体流中に運び去られる該ウマ精子細胞の該ウマ精子細胞受精特性を確立する工程を包含する、方法。
【請求項１８】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流圧の調整を介して精子細胞受精特性を制御する前記工程が、該精液中の該ウマ精子細胞のウマ精子細胞受精特性と実質的に同等である、該流体流中に運び去られる該ウマ精子細胞の該ウマ精子細胞受精特性を確立する工程を包含する、方法。
【請求項１９】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして制御された精子細胞受精特性を有する精子細胞授精サンプルを生成する前記工程が、該ウマ精液中の該ウマ精子細胞のウマ精子細胞受精特性と実質的に異ならない、該ウマ精子細胞受精特性を有するウマ精子細胞授精サンプルを生成する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして制御された精子細胞受精特性を有する精子細胞授精サンプルを生成する前記工程が、該ウマ精液中の該ウマ精子細胞のウマ精子細胞受精特性と実質的に同等である、ウマ精子細胞受精特性を有するウマ精子細胞授精サンプルを生成する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該流体流の該フロー特性を調整して１平方インチ当たり約３０ポンドと１平方インチ当たり約５０ポンドとの間に流体流圧を調整する工程を包含する、方法。
【請求項２２】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該流体流の該フロー特性を調整して１平方インチ当たり約３０ポンドと１平方インチ当たり約４０ポンドとの間に流体流圧を調整する工程を包含する、方法。
【請求項２３】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、哺乳動物の１種の雄から精液を獲得する前記工程が、哺乳動物のウマ種の雄からウマ精液を獲得する工程を包含し、そして前記流体流のフロー特性を変化させて流体流圧を調整する前記工程が、該流体流の該フロー特性を調整して１平方インチ当たり約４０ポンドに流体流圧を調整する工程を包含する、方法。
【請求項２４】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、該精子細胞受精特性の１つが、精子細胞運動性を含む、方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、ウシ精子細胞運動性を含む、方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、ウマ精子細胞運動性を含む、方法。
【請求項２７】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、精子細胞生存力を含む、方法。
【請求項２８】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、ウシ精子細胞生存力を含む、方法。
【請求項２９】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、ウマ精子細胞生存力を含む、方法。
【請求項３０】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有する該精子細胞授精サンプルで授精される哺乳動物の前記種の雌の妊娠率を含む、方法。
【請求項３１】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有するウシ精子細胞授精サンプルで授精される哺乳動物のウシ種の雌の妊娠率を含む、方法。
【請求項３２】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有するウマ精子細胞授精サンプルで授精される哺乳動物のウマ種の雌の妊娠率を含む、方法。
【請求項３３】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有する該精子細胞授精サンプルで受精される卵母細胞の卵割率を含む、方法。
【請求項３４】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有するウシ精子細胞授精サンプルで受精されるウシ卵母細胞の卵割率を含む、方法。
【請求項３５】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有するウマ精子細胞授精サンプルで受精されるウマ卵母細胞の卵割率を含む、方法。
【請求項３６】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有する精子細胞授精サンプルで受精される卵母細胞の胚盤胞率を含む、方法。
【請求項３７】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有するウシ精子細胞授精サンプルで受精されるウシ卵母細胞の胚盤胞率を含む、方法。
【請求項３８】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記受精特性が、制御された精子細胞受精特性を有するウマ精子細胞授精サンプルで受精されるウマ卵母細胞の胚盤胞率を含む、方法。
【請求項３９】
請求項３１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、制御された精子細胞受精特性を有する前記ウシ精子細胞授精サンプルが、約１×１０５個と２×１０７個との間のウシ精子細胞を含む、方法。
【請求項４０】
請求項３１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、制御された精子細胞受精特性を有する前記ウシ精子細胞授精サンプルが、約１×１０６個と３×１０６個との間のウシ精子細胞を含む、方法。
【請求項４１】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記精子細胞を染色する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４２】
請求項４１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記精子細胞を染色する前記工程が、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２で該精子細胞を染色する工程を包含する、方法。
【請求項４３】
請求項１に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記流体流中の液滴を生成する工程をさらに包含し、該液滴のいくらかが、前記精子細胞の各々１つを含む、方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、性形質に基づいて精子細胞を識別する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４５】
請求項４４に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、性形質に基づいて前記精子細胞を識別する前記工程が、ＤＮＡ含有量に基づいて該精子細胞を識別する工程を包含する、方法。
【請求項４６】
請求項４４に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、性形質に基づいて前記精子細胞を識別する前記工程が、精子頭部容積に基づいて該精子細胞を識別する工程を包含する、方法。
【請求項４７】
請求項４４に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記性形質に基づいて精子細胞を分離する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４８】
請求項４７に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、収集コンテナ中で制御された精子細胞受精特性を有する該精子細胞授精サンプルを収集する工程をさらに包含する、方法。
【請求項４９】
請求項４８に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、収集コンテナ中で制御された精子細胞受精特性を有する該精子細胞授精サンプルを収集する前記工程が、該収集コンテナ中に性選択された精子細胞授精サンプルを収集する工程を包含する、方法。
【請求項５０】
請求項４９に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記性選択された精子細胞授精サンプルが、人工授精の性別を選択された精子細胞授精サンプルを含む、方法。
【請求項５１】
請求項４９に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記性選択された精子細胞授精サンプルが、体外受精の性別を選択された精子細胞授精サンプルを含む、方法。
【請求項５２】
請求項４９に記載の精子細胞授精サンプルを生成する方法であって、前記性選択された精子細胞授精サンプルが、細胞質内で性別を選択された精子細胞注入サンプルを含む、方法。
【請求項５３】
性選択された精子細胞受精を評価する方法であって、以下：
ａ．哺乳動物の１種の雄から精子細胞を獲得する工程；
ｂ．第１の処理条件に曝された性別を選択されたＹ染色体を持つ精子細胞を提供する工程；  
ｃ．第２の処理条件に曝された性別を選択されたＸ染色体を持つ精子細胞を提供する工程；  
ｄ．該第１の処理条件に曝された性別を選択された該Ｙ染色体を持つ精子細胞と第２の処理条件に曝された性別を選択された該Ｘ染色体を持つ精子細胞の所定の比を有する授精サンプルを生成する工程；
ｅ．該第１の処理条件に曝された該Ｙ染色体を持つ精子細胞と第２の処理条件に曝された該Ｘ染色体を持つ精子細胞の該比を有する該授精サンプルで哺乳動物の該種の少なくとも１匹の雌を授精させる工程；
ｆ．哺乳動物の該種の少なくとも１の雌から子孫を産生する工程；
ｇ．哺乳動物の該種の少なくとも１の子孫の性比の該第１の処理条件に曝された該Ｙ染色体を持つ精子細胞と第２の処理条件に曝された該Ｘ染色体を持つ精子細胞の該比との比較により該性別を選択された精子細胞の受精を評価する工程
を包含する、方法。
【請求項５４】
請求項５３に記載の性別を選択された精子細胞受精を評価する方法であって、前記第１の処理条件に曝された前記Ｙ染色体を持つ精子細胞と第２の処理条件に曝された前記Ｘ染色体を持つ精子細胞の前記比が、該第１の処理条件に曝された該Ｙ染色体を持つ精子細胞と第２の処理条件に曝された該Ｘ染色体を持つ精子細胞の数が実質的に等しいことを含む、方法。
【請求項５５】
請求項５３に記載の性別を選択された精子細胞受精を評価する方法であって、哺乳動物の前記種の前記少なくとも１の雌の子孫の前記性比が、胚の性比を含む、方法。
【請求項５６】
請求項５３に記載の性別を選択された精子細胞受精を評価する方法であって、哺乳動物の前記種の前記少なくとも１の雌の子孫の前記性比が、胎児の性比を含む、方法。
【請求項５７】
請求項５３に記載の性別を選択された精子細胞受精を評価する方法であって、哺乳動物の前記種の前記少なくとも１の雌の子孫の前記性比が、産まれる子孫の性比を含む、方法。
【請求項５８】
請求項５３に記載の性別を選択された精子細胞受精を評価する方法であって、前記哺乳動物の前記種の前記少なくとも１の雌が、十分な数の子孫を産生し、子孫の該性比を確立する、該種の雌の十分な数を含む、方法。
【請求項５９】
哺乳動物の種の雄からの精子細胞の受精を評価する方法であって、以下：
ａ．哺乳動物の１種の少なくとも２の雄から精子細胞を獲得する工程；
ｂ．前記種の前記少なくとも２の雄の各々からの該精子細胞を実質的に同じフローサイトメトリー処理に曝す工程；  
ｃ．該実質的に同じフローサイトメトリー処理に曝される哺乳動物の該種の該少なくとも２の雄の各々からの実質的に等しい数の精子細胞混合物で哺乳動物の該種の少なくとも１の雌を授精する工程；  
ｄ．哺乳動物の該種の該少なくとも１の雌から胚を収集する工程；
ｅ．哺乳動物の該種の少なくとも２の雄のどちらが各々の胚を生み出したかを決定する工程；ならびに
ｆ．該少なくとも２の雄の各々により生み出される同等の数の胚に基づいて少なくとも哺乳動物の該種の雄に対する同等の受精をランク付けする工程
を包含する、方法。
【請求項６０】
請求項５９に記載の哺乳動物の種の雄から精子細胞の受精を評価する方法であって、前記フローサイトメトリー処理が、性形質に基づいて前記少なくとも２の雄から該精子細胞を分離する工程を包含する、方法。
【請求項６１】
請求項５９に記載の哺乳動物の種の雄から精子細胞の受精を評価する方法であって、前記フローサイトメトリー処理が、前記少なくとも２の雄からの精子細胞の性別を選択する工程を包含する、方法。
【請求項６２】
哺乳動物の種の雄からの精子細胞の受精を評価する方法であって、以下：
ａ．哺乳動物の１種の少なくとも２の雄から精子細胞を獲得する工程；
ｂ．前記種の前記少なくとも２の雄の各々からの該精子細胞を実質的に同じフローサイトメトリー処理に曝す工程；  
ｃ．該実質的に同じフローサイトメトリー処理に曝される哺乳動物の該種の該少なくとも２の雄の各々からの実質的に等しい数の精子細胞混合物で卵母細胞を体外受精する工程；
ｄ．該卵母細胞の該体外受精を介して生成される胚を収集する工程；
ｅ．哺乳動物の該種の少なくとも２の雄のどちらが各々の胚を生み出したかを決定する工程；ならびに
ｆ．該少なくとも２の雄の各々により生み出される同等の数の胚に基づいて少なくとも哺乳動物の該種の雄に対する同等の受精をランク付けする工程
を包含する、方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
既存の精子細胞性選択技術に伴う別の重大な問題は、性選択した精子細胞の受精能が、インビボ（例えば、人工受精手順に関連して）およびインビトロ（例えば、ＩＶＦ手順に関連して）で直接比較され得るアッセイがないことであり得る。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００９】
本発明に従って制御された精子細胞受精能を提供することは、多数かつ多様な哺乳動物の種（哺乳動物のウシ種、哺乳動物のウマ種、哺乳動物のヒツジ種、哺乳動物のイヌ種、哺乳動物のネコ種、哺乳動物のブタ種、哺乳動物の海洋動物種、哺乳動物のシカ種、哺乳動物の霊長類種、哺乳動物のヤギ種、あるいはＷｉｌｓｏｎ，Ｄ．ＥおよびＲｅｅｄｅｒ，Ｄ．Ｍ．、Ｍａｍｍａｌ  Ｓｐｅｃｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｗｏｒｌｄ、Ｓｍｉｔｈｓｏｎｉａｎ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ  Ｐｒｅｓｓ（１９９３）（本明細書中で参考として援用される）によって列挙される哺乳動物の種からなる群より選択される哺乳動物が挙げられるが、これらに限定されない）から得られる精子細胞を用いて達成され得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
凍結された、４頭の雄牛の４群からのフローソートした精子を融解し、群内での３頭の全ての組み合わせ（ＡＢＣ、ＡＢＤ、ＡＣＤ、ＢＣＤ）において発情期が始まって１２時間または２４時間後に、未経産牛に授精させた。同数の前進運動性の精子を、融解後の合計６００，０００の運動性精子を各雄牛から授精させた。各注入物の半分を、各子宮角に入れた。胚を、発情して１４．５日後〜２０日後に非外科的に回収した。回収により、３３２頭の未経産牛から１６５の伸長した胚を得た（４８％）。多型ＤＮＡマーカーを使用して胚を遺伝子型決定し、各胚の生検の種牛を決定した。遺伝子型決定後、１６５個の胚のうち、１１８個を、特定の種牛に割り当てることができた。各雄牛群をランク付けするための不均一精子指数を、最尤分析定理を使用して計算した。群内の各雄牛を、これらの指数に基づいてランク付けした（表１）。群１において、最も乏しい雄牛の受精能は、２つの他の雄牛よりも有意に低かった（Ｐ＜０．０５）。群２において、優性の雄牛は、最も高い指数を有した（Ｐ＜０．０５）。類似の区別は、群３および４において行うことができた。しかし、その群の３つにおいて、何頭かの雄牛の受精能は、明らかに高くも低くもなかった（Ｐ＞０．０５）。
（表１．群内の個々の雄牛の不均一精子指数±ＳＥ）