【手続補正書】
【提出日】平成17年7月12日(2005.7.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
インスリン非依存型糖尿病(ＮＩＤＤＭ)において重要なインスリン抵抗性には、インスリン受容体そのものにおける構造的欠陥というよりはむしろ、インスリンシグナル変換における初期過程での欠陥が関与するらしい。（Ｊ. Ｍ. Ｏlefsky，Ｗ. Ｔ. Ｇarvey，Ｒ. Ｒ. Ｈenry，Ｄ. Ｂrillon，Ｓ. Ｍatthai，およびＧ. Ｒ. Ｆreidenberg，Ｇ. Ｒ.（１９８８）。）インスリン非依存型(II型)糖尿病におけるインスリン抵抗性の細胞機構。（Ａm. Ｊ. Ｍed. ８５：Ｓuppl. ５Ａ，８６−１０５。）インスリン感受性を改良した薬物は、インスリン抵抗性を軽減しないが、その代わり、インスリン分泌を増大させることにより補償する、スルホニル尿素を使用するＮＩＤＤＭの伝統的な療法を超える幾つかの利点を有するであろう。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
ヒトゲノムは、５００ものＰＴＰ酵素をコードすると推定されている（Ｔ. Ｈunter（１９９５）Ｐrotein kinases and phosphatases：Ｔhe Ｙin and Ｙang of protein phosphorylation and signalling．Ｃell ８０：２２５−２３６。）が、同定されているのは１００に足りず、４つのサブファミリーに分類グループ化されている（Ｅ. Ａ. ＦaumanおよびＭ. Ａ. Ｓaper（１９９６）Ｓtructure and function of the protein tyrosine phosphatases．Ｔrends Ｂiochem. Ｓci. ２１：４１３−４１７。）チロシンに特異的なＰＴＰサブファミリーのメンバーは、典型的には、大きな可変細胞外ドメイン、１つのトランスメンブランスパニング領域、および２つの細胞内ホスファターゼ触媒ドメイン有する(ＣＤ４５およびＬＡＲといったような)受容体ＰＴＰアーゼ、並びに非受容体ＰＴＰアーゼにさらに分けられる。この後者のグループには、ＰＴＰ１に似ているＰＴＰが含まれる。（Ｄ. Ａ. ＰotおよびＪ. Ｅ. Ｄixon（１９９２）Ａ thousand and two protein tyrosine phosphatases．Ｂiochim. Ｂiophys. Ａcta １１３６：３５−４３。）インスリン受容体ＰＴＰアーゼはＰＴＰ１様であり得るという主張を裏付けるデータがある。例えば、ＰＴＰのインスリン受容体とのインスリン依存型会合が記載されている。（Ｄ. Ｂandyopadhyay，Ａ. Ｋursari，Ｋ. Ａ. Ｋenner，Ｆ. Ｌiu，Ｊ. Ｃhernoff，Ｔ. Ａ. Ｇustafson，Ｊ. Ｋusari（１９９７）Ｐrotein-tyrosine phosphatase 1Ｂ complexes with the insulin receptor in vivo and is tyrosine-phosphorylated in the presence of insulin．Ｊ. Ｂiol. Ｃhem. ２７２：１６３９−１６４５；およびＬ. Ｓeelyら（１９９６）Ｐrotein-tyrosine phosphatase 1Ｂ interacts with the activated insulin receptor．Ｄiabetes ４５：１３７９。）さらにまた、ＰＴＰ１は、精製されたインスリン受容体をインビボで観察される順に(すなわち、Ｔyr１１５０＝Ｔyr１１５１＞Ｔyr１１４６)連続的に脱リン酸化して（Ｃ. Ｒamachandran，Ｒ. Ａebersold，Ｎ. Ｔonks，およびＤ. Ａ. Ｐot（１９９２）Ｓequential dephosphorylation of a multiply phosphorylated insulin receptor peptide by protein tyrosine phosphtases．Ｂiochemistry ３１：４２３２−４２３８。）、インスリンは、肝腫瘍細胞においてＰＴＰ１ mＲＮＡを急に増大させる。（Ｎ. ＨashimotoおよびＢ. Ｊ. Ｇoldstein（１９９２）Ｄifferential regulation of mＲＮＡs encoding three protein-tyrosine phosphatases by insulin and activation of protein kinase Ｃ．Ｂiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃommun. １８８：１３０５−１３１１。）インスリン抵抗性がラット１の線維芽細胞において高いグルコース(２７mＭ)で誘発されるより前に、インスリン増感剤であるパイオグリタゾンでブロックされる細胞質ゾルのＰＴＰ１活性がおおよそ倍増する。（Ｈ. Ｍaegawa，Ｒ. Ｉde，Ｍ. Ｈasegawa，Ｓ. Ｕgi，Ｋ. Ｅgawa，Ｍ. Ｉwanishi，Ｒ. Ｋikkawa，Ｙ. Ｓhigeta，およびＡ. Ｋashiwagi（１９９５）Ｔhiazolidinedione derivatives ameliorate high glucose-induced insulin resistance via the normalization of protein tyrosine phosphatase activities．Ｊ. Ｂiol. Ｃhem. ２７０：７７２４−７７３０。）従って、ＰＴＰ１の特異的な阻害剤を使用して、インスリン作用を増強することができるであろう。ＰＴＰ１を特異的に阻害する小さな分子は知られていないが、ＰＴＰ１b(ラットＰＴＰ１のヒト相同物)に対する中和抗体による肝腫瘍細胞への浸透圧負荷は、インスリン受容体の自己リン酸化およびインスリンに応答するＩＲＳ−１のリン酸化の増大をもたらすことが見���された。（Ｆ. Ａhmad，Ｐ. Ｍ. Ｌi，Ｊ. Ｍeyerovitch，およびＢ. Ｊ. Ｇoldstein（１９９５）Ｏsmotic loading of neutralizing antibodies demonstrates a role for ＰＴＰase 1Ｂ in negative regulation of the insulin signalling pathway．Ｄiabetes ４４：Ｓuppl. １１０４Ａ。）（Ｂ. Ｊ. Ｇoldstein（１９９３）Ｒegulation of insulin receptor signaling by protein-tyrosine dephosphorylation．Ｒeceptor ３：１−１５もまた参照。）
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
Ｒ５がＨ以外である場合、その化合物は、それ自体活性を有するとは思われないが、非特異的なエステラーゼにより対応するカルボン酸へと加水分解した後では、インビボでの活性を有すると思われる。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
本発明における化合物を経口投与する場合、有効量は、１日あたり約０.１mg〜１００mg／kg(体重)である。固体または液体の投与形態をいずれも、経口投与用に製造することができる。圧縮錠剤のような固体組成物は、本発明の化合物を、タルク、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、硫酸カルシウム、デンプン、ラクトース、アラビアゴム、メチセルロース、または機能的に似通った医薬希釈剤および担体といったような従来の成分と混合することにより製造する。カプセル剤は、本発明の化合物を不活性医薬希釈剤と混合して、その混合物を適当なサイズの硬ゼラチンカプセルに入れることにより製造する。軟ゼラチンカプセルは、本発明の化合物の、植物油または軽液状ペトロラタムといったような許容され得る不活性油とのスラリーの機械カプセル充填により製造する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
シロップは、本発明の化合物を水性ビヒクルに溶解して、糖、芳香族香味料、および保存剤を加えることにより製造する。エリキシルは、エタノールのような水性アルコールビヒクル、糖またはサッカリンといったような適当な甘味料、および芳香族香味料を使用して製造する。懸濁液剤は、水性ビヒクル、およびアラビアゴム、トラガガント、またはメチルセルロースといったような沈殿防止剤を用いて製造する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
本発明の化合物を非経腸投与する場合、それらを注射により、または静脈内注入により与えることができる。有効量は、１日あたり約０.１mg〜１００mg／kg(体重)である。非経腸溶液剤は、本発明の化合物を水性ビヒクルに溶解して、その溶液をフィルター滅菌した後、適当な密閉可能のバイアルまたはアンプルに入れることにより製造する。非経腸懸濁液剤は、無菌懸濁液ビヒクルを使用して、本発明の化合物をエチレンオキシドまたは適当なガスで滅菌した後、それをビヒクルに懸濁させることを除き、実質的には同じ方法で製造する。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
実施例３：(Ｓ)−[４−[２−[(３−カルボキシ−１−オキソプロピル)−
アミノ]３−オキソ−３−(ペンチルアミノ)プロピル]−
フェノキシ]プロパン二酸(製剤例Ｉ−３、チャートＩ)
粗製のＩ−２(約０.２９mmol)を酢酸エチルに溶解し、減圧下に３回濃縮して、微量のトリフルオロ酢酸を取り除く。次いで、残留物をメタノール(１０ml)に溶解して、３サイクルの真空排気および窒素パージに０℃でかけた後、１０％ Ｐd／Ｃ(２０mg)を取り入れる。次いで、その混合物を１気圧で１.５時間水素化する。その混合物をセライトに通して濾過して、減圧下に濃縮する。粗製のガラス状物質を塩化メチレン(４０ml)にとって、それが全て懸濁するまで音波処理する。濾過により、分析的に純粋である脆い白色の非晶質固体(１１６mg)(融点 １１７−１２０℃、分解)を得る。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１１】
Ｊ−３の製造：アセトン(５０ml)中のＥ−２(２.０ｇ)の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３(１.５７ｇ)を周囲温度で加える。その結果得られる不均一な混合物にブロモマロン酸ジベンジル(２.８９ｇ)を加えて、その混合物を周囲温度で一晩撹拌する。その結果得られる褐色の懸濁液をＨ２Ｏ(１００ml)で希釈して、ＥtＯＡc(２×１００ml)で抽出する。合わせた有機層をＭgＳＯ４で乾燥させて、溶媒を減圧下に除去する。残留物をＳiＯ２フラッシュクロマトグラフィー(溶離液 ２：１のＥtＯＡc：ヘキサン)によって精製して、標記化合物１.２６ｇを白色の固体として得る。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１３】
Ｊ−４の製造：周囲温度でのＨＯＡc(２５ml)中のＪ−３(２.８５ｇ)の撹拌溶液に、１.５Ｎ ＨＣl／ＨＯＡc(２０ml)を加えて、その結果得られる溶液を周囲温度で２時間撹拌する。溶媒を３０mlまで蒸発させて、Ｅt２Ｏ(４００ml)でトリチュレートする。その結果得られる濁った懸濁液を周囲温度で３０分間撹拌し、音波処理し、濾過して、標記化合物２.５０ｇを白色の固体として得る。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１４２】
Ｋ−３の製造：周囲温度でのアセトン(１７５ml)中のＫ−２(３.５５ｇ)の撹拌溶液に、Ｋ２ＣＯ３(２.２９ｇ)を加える。ブロモマロン酸ジベンジル(３.３１ｇ)を加えて、その混合物を周囲温度で一晩撹拌する。溶媒を減圧下に除去して、残留物をＥtＯＡc／Ｈ２Ｏ(各々、１００ml)に懸濁させる。その層を振盪し、有機層を分離し、Ｎa２ＳＯ４で乾燥させて、溶媒を除去する。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、標記化合物１.７２ｇを黄色の油状物質として得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl３）δ １.３９、２.４９、２.６８、３.００、４.６６、５.１１、５.２３、５.２４、６.０５、６.８２、７.０３、７.３３；
ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ ７０９(Ｍ＋)、３６８、３１２、１０８、１０７、９１、７９、７７、５７、５６、５５；
分析による実測値 ： Ｃ ６９.２１； Ｈ ６.１５； Ｎ ２.０３。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５６】
Ｍ−３の製造：周囲温度でのアセトン(３０ml)中のＭ−２(０.３０ｇ)の撹拌溶液に、クロロマロン酸ジエチル(０.１４９ｇ)およびＫ２ＣＯ３(０.１９４ｇ)を加える。その結果得られる混合物を１６時間撹拌して、溶媒を減圧下に除去する。残留物をＥtＯＡc／Ｈ２Ｏ(各々、１００ml)に懸濁させ、その層を振盪し、有機層を分離し、Ｎa２ＳＯ４で乾燥させて、溶媒を減圧下に除去する。残留物をヘキサンに懸濁させ、音波処理し、濾過して、標記化合物０.２９５ｇを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ ０.８３、１.１５、１.５０、２.６８、２.９５、４.２１、４.９２、５.６１、６.８３、７.２６、７.４９、７.９１；
ＩＲ（ペースト状）３２８６、１７４７、１６９６、１６７４、１６４３、１５３８、１５１０、１３３４、１２９６、１２９０、１２６０、１２２５、１１８６、１０２８、６９８cm−１；
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ ５８６(ＭＨ＋)、５８６、５６９、４３４、３８４、３０５、２６５、１７６、９２、９１、８６；
分析による実測値 ： Ｃ ６１.０９； Ｈ ６.５６； Ｎ ７.０３。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６４】
Ｎ−２の製造：４−ホルミルケイ皮酸(Ｎ−１、０.５０ｇ)およびマロン酸ジベンジル(０.８０６ｇ)の撹拌懸濁液に、ピペリジン(０.２９０ｇ)および酢酸(３滴)を加える。その混合物を１６時間還流し、周囲温度まで冷却して、溶媒をＥtＯＡc(５０ml)で希釈する。有機物を１０％ ＨＣl／Ｈ２Ｏ(２×５０ml)で洗浄し、溶媒をＮa２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させて、標記化合物０.４８５ｇを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ ５.２５、５.２７、６.５４、７.３５、７.５０、７.７５；
ＩＲ（ペースト状）１７２４、１６９６、１６８０、１６２８、１４４２、１４２６、１４１４、１３１５、１２６０、１２２４、１２１５、１２０２、１１８５、６９９、６９４cm−１；
ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ ４４２(Ｍ＋)、４４２、２４６、２４５、２２７、１２７、１１４、９２、９１、７７、６５；
分析による実測値 ： Ｃ ７０.７７； Ｈ ４.８７。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６５】
Ｎ−３の製造：０℃でのＮ−２(０.１９４ｇ)およびＪ−４(０.２５ｇ)の撹拌懸濁液に、トリエチルアミン(０.０４５ｇ)およびＥＤＣ(０.０８５ｇ)を加える。その混合物を１６時間撹拌して、その溶液を周囲温度まで温める。その混合物をＣＨ２Ｃl２(５０ml)で希釈して、１０％ ＨＣl／Ｈ２Ｏ(２×５０ml)で洗浄する。有機層をＮa２ＳＯ４で乾燥させて、蒸発乾固する。残留物をフラッシュカラムクロマトグラフィー(溶離液 １：１のＥtＯＡc／ヘキサン)によって精製して、標記化合物０.０３８ｇを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl３）δ ０.８４、１.２５、３.００、３.２０、４.６２、５.２１、５.２５、５.２７、５.２８、５.５１、６.３８、６.８７、７.１３、７.３２、７.５４、７.７３；
ＭＳ（ＥＳ＋）９５７。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１９５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１９５】
Ｂ−５の製造：０℃でのＣＨ２Ｃl２(１ml)中のスクシンアミド酸(４０mg)の懸濁液に、ＥＤＣ(６５mg)およびＨＯＢＴ(４６mg)を加えて、その混合物を数分間撹拌する。Ｂ−４(１５０mg)およびトリエチルアミン(４８ml)を加え、その混合物を室温まで温めて、一晩撹拌する。その混合物をＥtＯＡcと１Ｍ ＨＣlとの間で分配する。有機相を飽和ＮaＨＣＯ３、飽和ＮaＣlで洗浄して、乾燥させる(ＭgＳＯ４)。溶媒を減圧下に除去した後、残留物をフラッシュクロマトグラフィー(ＳiＯ２ １１ｇ、６％ ＭeＯＨ／ＣＨ２Ｃl２)により精製して、白色の固体７２mgを得る。ＴＨＦ(３ml)およびＭeＯＨ(１ml)に溶解した固体の溶液に、Ｈ２Ｏ(１ml)中のＬiＯＨ Ｈ２Ｏ(３０mg)の溶液を加える。その混合物を室温で２.５時間撹拌する。その混合物を１Ｍ ＨＣlで中和して、ＥtＯＡc(３×)で抽出する。合わせた有機相を飽和ＮaＣlで洗浄して、乾燥させる(ＭgＳＯ４)。溶媒を減圧下に除去して、Ｂ−５ ２７mgを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ ８.０５、７.８５、７.２７、１.１２、６.７９、６.７５、５.２６、４.３０、２.８９−３.０３、２.８９−３.０３、２.６０−２.７１、２.１２−２.３２、１.１１−１.３８、０.８３；
ＭＳ（ＥＳ−）４５０；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）実測値 ４５２.２０５１。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０４】
実施例５６：[２(Ｓ)]−[４−[２−[(３−カルボキシ−１−オキソプロピル)            −アミノ]−３−オキソ−３−(ペンチルアミノ)プロピル]−
フェノキシ]ブタン二酸(チャートＥ、Ｅ−８)
ＴＨＦ(０.３ml)中のＥ−４(５０mg)およびトリエチルアミン(１８ml)の懸濁液に、ＴＨＦ(０.２ml)中のジカルボン酸ジベンジルアセチレン(３５mg)の溶液を加える。その反応混合物を５０℃で２０時間加熱する。その混合物をＥt２Ｏで希釈して、１Ｍ ＨＣlおよび飽和ＮaＣlで洗浄する。有機相を乾燥させて(Ｎa２ＳＯ４)、溶媒を減圧下に除去する。残留物をフラッシュクロマトグラフィー(ＳiＯ２ ９ｇ、６０％ ＥtＯＡc／ヘキサン)により精製して、Ｅ−６ ４８mgを１：１の異性体混合物として得る。ＭeＯＨ(２ml)中のＥ−６(４８mg)および１０％ Ｐd／Ｃ(５mg)の混合物を水素雰囲気下(バルーン)に１時間撹拌する。その混合物をセライトに通して濾過し、濃縮して、Ｅ−８ ２７mgをガラス状物質として得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ ８.０２、７.７８、７.０８、６.７６、４.９２、４.３２、２.６−３.０、２.２５−３.３５、１.１−１.４、０.８３；
ＭＳ（ＦＡＢ）ｍ／ｚ ４６７(ＭＨ＋)、４８９、４６８、４６７、３４９、２５２、１３６、１０７、８８、８６、４３；
ＨＲＭＳ（ＦＡＢ）実測値 ４６７.２０４０。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０７】
Ｑ−２の製造：ジオキサン(１００ml)、Ｈ２Ｏ(５０ml)、および１Ｍ ＮaＯＨ水溶液(５０ml)中の３−ヨード−Ｌ−チロシン(１０.０ｇ)の撹拌混合物に、ジ炭酸ジ−t−ブチル(７.８ｇ)を０℃で加える。その混合物を２時間撹拌して、その溶液を周囲温度まで温めた後、ＥtＯＡc(２×５０ml)で洗浄する。水層を分離して、破砕機中、４Ｍ ＮaＨＳＯ４・Ｈ２Ｏで注意して酸性にした後、ＥtＯＡc(２×１００ml)で抽出する。有機層を乾燥させ(ＮaＳＯ４)、濃縮して、粗製の酸１５.１ｇを黄色の油状物質として得る。その酸をＣＨ２Ｃl２(２００ml)に懸濁させて、氷で０℃まで冷却する。１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド 塩酸塩(ＥＤＣ、６.２ｇ)を加えて、その混合物を０℃で１０分間撹拌する。１−ペンチルアミン(３.８ml)を加え、その混合物を１６時間撹拌して、その溶液を周囲温度まで温める。その混合物を１０％ ＨＣl水溶液(２×１００ml)で洗浄し、有機層を乾燥させて(ＭgＳＯ４)、濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー(ＳiＯ２、ＥtＯＡc)により精製して、Ｑ−２ １０.０ｇを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ ４００ＭＨz（ＣＤＣl３）δ ０.８７、１.２１、１.３０、１.４１、１.４３、２.９３、３.０９−３.２０、４.１７、５.２０、６.００、６.８５、７.０５、７.５０；
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣl３）１３.９５、２２.２８、２８.２６、２８.８９、２９.０４、３７.３４、３９.５４、５４.８０、８０.３７、８５.２４、１１５.０４、１３０.４７、１３０.８６、１３９.００、１５４.２７、１５５.５２、１７１.０１；
分析による実測値 ： Ｃ ４７.５； Ｈ ６.１。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０８】
Ｑ−３の製造：ＤＭＦ／ＭeＯＨ ４：１(５ml)中のＱ−２(１.０５ｇ)、酢酸パラジウム(II)(１４mg)、および１,１−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(ＤＰＰＦ、７３mg)の撹拌懸濁液に、トリエチルアミン(０.６１ml)を加える。その混合物をＣＯ(１気圧)で飽和して、７０℃で１６時間撹拌する。その混合物をＥtＯＡc(５ml)で抽出し、有機層を１０％ ＨＣl水溶液(２×２ml)で洗浄し、乾燥させて(ＭgＳＯ４)、濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー(ＳiＯ２、ＥtＯＡc／n−ヘキサン １：２)により精製して、Ｑ−３ ０.５４ｇを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ ５００ＭＨz（ＣＤＣl３）δ ０.８６、１.１７、１.２５、１.３６、１.４１、２.９７、３.１２−３.２１、３.９２、４.２１、５.１１、５.８１、６.９１、７.３０、７.６７；
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣl３）１３.８６、２２.２４、２８.２６、２８.９０、２９.０５、３７.７７、３９.４７、５２.２３、５４.６９、８０.３７、１１２.２５、１１７.８２、１２７.５４、１３０.３４、１３６.７６、１６０.５６、１７０.３２、１７０.７４；
分析による実測値 ： Ｃ ６１.６； Ｈ ７.７。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２０９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２０９】
Ｑ−４の製造：Ｑ−３(２５９mg)、ブロモ酢酸メチル(６６ml)、および新たに摩砕したＫ２ＣＯ３(９６mg)の混合物をアセトン(５ml)に懸濁させる。周囲温度で２４時間撹拌した後、ＴＬＣ(ＥtＯＡc／n−ヘキサン １：１)は、出発物質が全て消費されたというわけではないことを示したので、ブロモ酢酸メチル(６０ml、０.６３mmol)をさらに加える。２４時間撹拌した後、Ｈ２Ｏ(２ml)を加えて、その混合物をＥtＯＡc(３ml)で抽出する。有機層を乾燥させて(ＭgＳＯ４)、濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー(ＳiＯ２、ＥtＯＡc／n−ヘキサン １：１)により精製して、Ｑ−４ １６３mgを白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ ５００ＭＨz（ＣＤＣl３）δ ０.８７、１.２１、１.２８、１.３８、１.４１、３.００、３.１６、３.７９、３.８８、４.２３、４.７０、５.１０、６.８１、７.２９、７.６６；
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣl３）１３.８６、２２.２１、２８.２２、２８.８８、２９.０２、３７.５１、３９.４６、５２.０４、５２.２０、５５.８７、６６.６８、８０.１９、１１４.６１、１２１.２１、１３０.３５、１３２.５９、１３４.２４、１５４.２５、１５６.４４、１６５.９７、１６８.９５、１７０.６９；
分析による実測値 ： Ｃ ６０.６； Ｈ ７.５。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０２５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０２５９】
Ｓ−２の製造：アセトン(３ml)中のＮ−(tert−ブトキシカルボニル)チラミン(Ｓ−１、０.２０ｇ、０.８４mmol)およびＫ２ＣＯ３(０.２３ｇ、１.７mmol)の縣濁液に、クロロマロン酸ジエチル(０.２７ml、１.７mmol)を加えた。その混合物を室温で２４時間激しく撹拌した。その混合物をＥtＯＡcとＨ２Ｏとの間で分配した。有機相を飽和ＮaＣlで洗浄して、乾燥させた(ＭgＳＯ４)。溶媒を除去した後、残留物をフラッシュクロマトグラフィー(ＳiＯ２ ４５ｇ、３％ ＥtＯＡc／ＣＨ２Ｃl２)により精製して、Ｓ−２ ０.２４ｇを無色の油状物質として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣl３）δ ７.１１(ｄ，２Ｈ)、６.９０(ｄ，２Ｈ)、５.１６(ｓ，１Ｈ)、４.５１(br ｓ，１Ｈ)、４.３２(ｍ，４Ｈ)、３.３３(ｑ，２Ｈ)、２.７３(ｔ，２Ｈ)、１.４２(ｓ，９Ｈ)、１.３０(ｔ，６Ｈ)；
Ｃ２０Ｈ２９ＮＯ７に関するＭＳ（ＥＳＩ−）ｍ／ｚ ３９４(Ｍ−Ｈ)−。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０２】
Ｔ−４の製造：Ｈeckバイアル中、トルエン中のＴ−３(０.４５ｇ、０.７５mmol)の懸濁液に、アジ化トリメチルシリル(０.３０ml、２.２５mmol)および酸化ジブチルスズ(１９mg、０.０７５mmol)を加えた。その混合物に窒素を流し、しっかりと密閉して、１１０℃で１６時間撹拌した。その反応混合物を室温まで冷却して、揮発性物質を減圧下に蒸発させた。残留物をカラムクロマトグラフィー(ＳiＯ２、ＥtＯＡc)により精製して、Ｔ−４ ９０mg(１９％)を白色の固体として得た。
融点 ＝ １８９.５−１９２.８℃；
１Ｈ ＮＭＲ ４００ＭＨz（ＭeＯＨ）δ ０.８５(ｔ，３Ｈ，Ｊ＝６.９，１４.１)、１.１６−１.４１(ｍ，６Ｈ)、１.３３(ｓ，９Ｈ)、２.６９(dd，１Ｈ，Ｊ＝９.４，１３.７)、２.９５−３.１７(ｍ，５Ｈ)、３.７９(ｓ，３Ｈ)、４.２２(dｄ，１Ｈ，Ｊ＝４.９，９.４)、４.５８(ｍ，１Ｈ)、４.９９(ｓ，２Ｈ)、７.０９−７.２４(ｍ，６Ｈ)、７.４２(ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.７，６.９)、８.０９(ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１.７)。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３０５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３０５】
Ｕ−１の製造：ＤＭＦ(１５ml)中のＱ−２(２.９７ｇ、６.２３mmol)、酢酸パラジウム(II)(４.２mg、０.１９mmol)、および１,１'−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン(ＤＰＰＦ、２０７mg、０.３７mmol)の撹拌懸濁液に、トリエチルアミン(１.７１ml、１２.５mmol)およびベンジルアルコール(６.４５ml、６２mmol)を加える。その混合物をＣＯ(１気圧)で飽和して、７０℃で１６時間撹拌する。その混合物を室温とし、ＥtＯＡc(４０ml)で抽出し、有機層を１０％ ＨＣl水溶液(２０ml)およびブライン(２０ml)で洗浄し、乾燥させて(Ｎa２ＳＯ４)、濃縮する。残留物をカラムクロマトグラフィー(ＳiＯ２、ＥtＯＡc／n−ヘキサン １：２)により精製して、黄色の油状物質５.７ｇを得る。この粗製の物質はまだ、ベンジルアルコールを幾分含む。ＥtＯＡc／n−ヘキサン中での結晶化により、純粋なＵ−１ ０.８２ｇ(２７％)を白色の固体として得る。
１Ｈ ＮＭＲ ４００ＭＨz（ＣＤＣl３）δ ０.８４(ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７.１，１４.４)、１.１３(ｍ，２Ｈ)、１.２３(ｍ，２Ｈ)、１.３５(ｍ，２Ｈ)、１.３９(ｓ，９Ｈ)、２.９５(ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６.７)、３.１１(ｍ，２Ｈ)、４.１８(ｍ，１Ｈ)、５.０７(br ｍ，１Ｈ)、５.３７(ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１.７)、５.７７(br ｍ，１Ｈ)、６.９１(ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８.５)、７.３０(dd，１Ｈ，Ｊ＝２.２，８.５)、７.３５−７.４７(ｍ，５Ｈ)、７.６９(ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２.２)、１０.６９。
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２７】
Ｗ−６の製造：ＴＨＦ(２ml)中のＷ−５(８８mg、１３７μmol)の撹拌溶液に、ＬiＯＨ水溶液(２.５Ｍ、４００μl、７.３当量)を加えた。３時間後、その反応混合物を１０％ ＨＣl水溶液でpＨ ５まで酸性にした。乳状の懸濁液を温かい酢酸エチル(３×１５ml)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させて(Ｎa２ＳＯ４)、減圧下に蒸発させると、白色の固体(６４mg、７６％)が残った。少量の部分をアセトニトリルから再結晶化させて、白色のフレークスを得た。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ ０.９１(ｔ，３Ｈ)、１.２０−１.４２(ｍ，１５Ｈ)、２.０１(ｍ，１Ｈ)、２.７９(dd，２Ｈ)、２.９０−３.１４(ｍ，３Ｈ)、４.１７(ｓ，４Ｈ)、４.２６(dd，１Ｈ)、４.４６(ｍ，１Ｈ)、６.５３(ｄ，２Ｈ)、７.０５(ｄ，２Ｈ)、７.２０−７.３０(ｍ，５Ｈ)；
ＭＳ（イオンスプレー、[Ｍ−Ｈ]＋）ｍ／ｚ ６１１.０；
Ｃ３２Ｈ４６Ｎ４Ｏ９・Ｈ２Ｏに関する分析の計算値（実測値）：
Ｃ ６０.９（６０.８）％；Ｈ ７.４（７.１）％；Ｎ ８.９（９.０）％。
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３２９】
Ｘ−１の製造：３−ヨード−Ｌ−チロシン(５.０ｇ、１６.３mmol)をベンジルアルコール(１００ml)に懸濁させて、０℃にて、塩化チオニル(２０ml)を２０分間かけて滴加した。温度を８０℃まで上昇させると、ＨＣl(ｇ)が発生し始めた。その反応混合物は、濁った黄色となって、３０分後には無色透明に変わった。８時間加熱した後、その混合物を周囲温度で一晩撹拌した。無水ジエチルエーテル(１５０ml)を加えて、フラスコを−１０℃で一晩保存した。白色の生成物を半融ガラス漏斗に集めて、乾燥させた(１.９１ｇ)。i−ヘキサンの添加および−１０℃での保存後、２.６５ｇ量(生成物／出発物質 ３：１)をさらに得た。合わせた物質を５％ ＮaＨＣＯ３(２００ml)にとって、酢酸エチル(３×１５０ml)で抽出した。合わせた有機層を乾燥させて(Ｎa２ＳＯ４)、減圧下に蒸発させると、粗製の黄色の油状物質(４.００ｇ；６４％)が残った。
１Ｈ ＮＭＲ（ＨＣl塩、ＣＤ３ＯＤ）δ ３.０２(ｄ，Ｊ＝６.８３，２Ｈ)、４.２２(ｔ，Ｊ＝６.８３，１Ｈ)、５.１５(？，Ｊ＝３.９３，２Ｈ)、６.６８(ｄ，Ｊ＝８.２８，１Ｈ)、６.９１(dd，Ｊ１＝８.２８，Ｊ２＝２.１８，１Ｈ)、７.２３−７.３１(ｍ，５Ｈ)、７.５１(ｄ，Ｊ＝２.１８，１Ｈ)。
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０３４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０３４３】
Ｚ−２の製造：０.５Ｍ ＮaＯＨ(１９ml)中の商業的に入手できる３−フルオロ−ＤＬ−チロシン(１.５８ｇ；７.９３mmol)の懸濁液に、ＴＨＦ(１９ml)中のジ炭酸ジ−tert−ブチル(２.１２ｇ；９.７２mmol)を加えた。室温で２６時間後、ジ炭酸ジ−tert−ブチル１.５ｇをさらに加えて、その反応物をさらに２時間撹拌した。その反応物を減圧下に濃縮し、ＴＨＦを除去して、残留物をＥt２Ｏで洗浄した。水相を１Ｍ クエン酸で酸性にし、ＣＨＣl３で抽出し、乾燥させて(Ｎa２ＳＯ４)、Ｚ−２ ２.０５ｇ(８６％)を白色の泡状物質として得た。
ＵＶ λｍａｘ ２２３（８０００、９５％ ＥtＯＨ）；
１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨz、ＤＭＳＯ−ｄ６）δ ７.０４(ｄ，Ｊ＝８Ｈz，１Ｈ)、６.９８(ｄ，Ｊ＝１３Ｈz，１Ｈ)、６.８２−６.７８(ｍ，２Ｈ)、３.９９(ddd，Ｊ＝５.１０，１４Ｈz，１Ｈ)、２.８８(dd，Ｊ＝５，１４Ｈz，１Ｈ)、２.６８(dd，Ｊ＝１０，１４Ｈz，１Ｈ)、１.３０(ｓ，９Ｈ)。