【手続補正書】
【提出日】平成18年10月20日(2006.10.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
真核細胞内での所望のタンパク質の、安定なトランスフェクションおよび発現のための遺伝子ベクターであって、以下（ａ）〜（ｄ）：
（ａ）真核生物遺伝子座の遠位５’隣接配列；
（ｂ）真核生物遺伝子座の近位５’調節配列；
（ｃ）第一の異種コード配列に対する、少なくとも第一の挿入部位；および
（ｄ）真核生物遺伝子座の転写終結に対して効果的な、近位３’調節配列；
を含み、
ここで該配列は、隣接する配列の間に必要に応じてリンカー配列を用いて、５’から３’の配向で（ａ）〜（ｄ）の順番に作動可能に連結され；そして
（１）該遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、少なくとも１００塩基の配列を含むか；または
（２）該近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、少なくとも２０塩基の配列を含む、
遺伝子ベクター。
【請求項２】
真核細胞内での所望のタンパク質の、安定なトランスフェクションおよび発現のための遺伝子ベクターであって、以下（ａ）〜（ｄ）：
（ａ）真核生物遺伝子座の遠位５’隣接配列；
（ｂ）真核生物遺伝子座の近位５’調節配列；
（ｃ）該所望のタンパク質をコードする、少なくとも第一の異種コード配列；および
（ｄ）真核生物遺伝子座の転写終結に対して効果的な、近位３’調節配列；
を含み、
ここで該配列は、隣接する配列の間に必要に応じてリンカー配列を用いて、５’から３’の配向で（ａ）〜（ｄ）の順番に作動可能に連結され；そして
（１）該遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、少なくとも１００塩基の配列を含むか；または
（２）該近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、少なくとも２０塩基の配列を含む、
遺伝子ベクター。
【請求項３】
前記遠位５’隣接配列がフェリチン重鎖遺伝子座から誘導される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項４】
前記近位５’調節配列がフェリチン重鎖遺伝子座から誘導される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項５】
前記近位５’調節配列および前記遠位５’隣接配列がフェリチン重鎖遺伝子座から誘導される、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項６】
前記近位３’調節配列がフェリチン重鎖遺伝子座から誘導される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項７】
フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３’隣接配列をさらに含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項８】
異種配列に対する前記挿入部位が、少なくとも一つの制限エンドヌクレアーゼ部位を含む、請求項１および３〜７のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項９】
異種配列に対する前記挿入部位が、少なくとも二つの制限エンドヌクレアーゼ部位を含むポリリンカー部位である、請求項８に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１０】
前記近位５’調節配列が、真核生物イントロン配列を含む、請求項１〜９のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１１】
前記真核生物イントロン配列が、フェリチン重鎖遺伝子のイントロン１から誘導される、請求項１０に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１２】
前記近位５’調節配列が、非翻訳エキソン配列を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１３】
前記遠位５’隣接配列および前記近位５’調節配列が、１，０００塩基と１０，０００塩基との間の全長を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１４】
前記近位３’調節配列および任意の遠位３’隣接配列が、１，０００塩基と１０，０００塩基との間の全長を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１５】
前記遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１６】
前記遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１７】
前記遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して１００％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１８】
前記遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも５００塩基の配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項１９】
前記遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも１，０００塩基の配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２０】
前記近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２１】
前記近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２２】
前記近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して１００％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２３】
前記近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも５００塩基の配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２４】
前記近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも１，０００塩基の配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２５】
前記第一の挿入部位の長さが、０塩基対、１塩基対、２塩基対または３塩基対である、請求項１に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２６】
前記第一の挿入部位の長さが、４塩基対である、請求項１に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２７】
前記第一の挿入部位の長さが、１，０００塩基対である、請求項１に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２８】
前記第一の挿入部位の長さが、５，０００塩基対である、請求項１に記載の遺伝子ベクター。
【請求項２９】
前記近位３’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の近位３'調節配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３０】
前記近位３’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の近位３'調節配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３１】
前記近位３’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の近位３'調節配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３２】
前記近位３’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の近位３'調節配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して１００％の同一性を有する配列を含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３３】
前記近位３’調節配列が、少なくとも１０ヌクレオチドを含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３４】
前記近位３’調節配列が、少なくとも１，０００ヌクレオチドを含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３５】
前記近位３’調節配列が、ポリアデニル化シグナルを含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３６】
フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３'隣接配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも１００塩基の配列を含む真核生物遺伝子座の遠位３’隣接配列をさらに含む、請求項１〜２のいずれか一項に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３７】
前記遠位３’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３'隣接配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも８０％の同一性を有する配列を含む、請求項３６に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３８】
前記遠位３’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３'隣接配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも９０％の同一性を有する配列を含む、請求項３６に記載の遺伝子ベクター。
【請求項３９】
前記遠位３’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３'隣接配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して１００％の同一性を有する配列を含む、請求項３６に記載の遺伝子ベクター。
【請求項４０】
前記遠位３’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３'隣接配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも５００塩基の配列を含む、請求項３６に記載の遺伝子ベクター。
【請求項４１】
前記遠位３’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の遠位３'隣接配列の中で見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する少なくとも１，０００塩基の配列を含む、請求項３６に記載の遺伝子ベクター。
【請求項４２】
遺伝子ベクターｐＦｅｒＸ８。
【請求項４３】
遺伝子ベクターｐＦｅｒＸ１１。
【請求項４４】
請求項１〜４３のいずれか一項に記載のベクターでトランスフェクトされた、真核細胞。
【請求項４５】
請求項４４に記載の真核細胞であって、前記ベクターが該細胞の染色体の中へ安定に組み込まれた、真核細胞。
【請求項４６】
請求項４４〜４５のいずれか一項に記載の真核細胞であって、前記第一コード配列が該細胞で発現される、真核細胞。
【請求項４７】
真核細胞であって、以下（ａ）〜（ｄ）：
（ａ）真核生物遺伝子座の遠位５’隣接配列；
（ｂ）真核生物遺伝子座の近位５’調節配列；
（ｃ）少なくとも第一のコード配列；および
（ｄ）真核生物遺伝子座の転写終結に対して効果的な、近位３’調節配列；
を含み、
ここで該配列は、隣接する配列の間に必要に応じてリンカー配列を用いて、５’から３’の配向で（ａ）〜（ｄ）の順番に作動可能に連結され；そして
（１）該遠位５’隣接配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の転写開始部位の２０塩基対５’側の位置と１００，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、少なくとも１００塩基の外因性配列を含むか；または
（２）該近位５’調節配列が、フェリチン重鎖遺伝子座の翻訳開始コドンの１塩基対５’側の位置と１０，０００塩基対５’側の位置との間に見出されるヌクレオチド配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する、少なくとも２０塩基の外因性配列を含む、
真核細胞。
【請求項４８】
真核細胞であって：
コード配列へ作動可能に連結されるフェリチン重鎖遺伝子座から誘導される外因性５’遠位隣接配列を含む、
真核細胞。
【請求項４９】
真核細胞中で所望のタンパク質を産生する方法であって、以下：
（ａ）請求項４４〜４８のいずれか一項に記載の少なくとも一つの細胞、またはそれらの子孫を提供する工程；
（ｂ）該所望のタンパク質の高発現を可能にする条件下において、培養物中で該細胞を維持する工程；および
（ｃ）該培養物から該所望のタンパク質を単離する工程、
を包含する、方法。