【手続補正書】
【提出日】平成18年7月10日(2006.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１】
一般式（I）:
【化１】
2005538086.tif 000001
[式中、
R1 は、
ハロゲン、トリフロロ-メチル、ヒドロキシ、C1-6アルコキシ、C1-6チオアルキル、チオフェンまたはフェニルから選択される１〜3の置換基で任意に置換されていてもよいC1-6 アルキル；または
C3-7 シクロアルキル、チオフェン、ベンゾチオフェン、ピリジニル、フラニルまたはフェニルを表し；
該フェニル基は、ハロゲン原子、C1-6アルキル、C1-6アルコキシ、ヒドロキシ、メチレンジオキシ、フェノキシまたはベンジルオキシから選択される１〜3の置換基で任意に置換されていてもよく; 
R2およびR'2は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、C1-3アルコキシ、C1-3アルキル、C3-7シクロアルキル、OC(O)C1-6アルキル基を表すか、またはR2 およびR'2は一緒になってオキソ基を形成し；
R3は、水素原子、任意にヒドロキシもしくはC1-3アルコキシで置換されていてもよいC1-6アルキルを表し；
R4 および R5は、基R4 またはR5の少なくとも一方が基-C(X)R6を表すという条件で、それぞれ独立して、水素原子、C3-7シクロアルキルもしくはフェニルで任意に置換されていてもよいC1-7アルキル、；または
C3-7 シクロアルキル、フェニル、ナフチルまたは-C(X)R6を表し；
該C3-7シクロアルキルおよびフェニル基は、ハロゲン原子、ヒドロキシ、C1-3アルキル、C1-3アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、フェニル、フェノキシ、ベンジルオキシ、-CH2O-フェニル、-OCH2-ピリジニルから選択される１以上の基で任意に置換されていてもよく；
上記のベンジルオキシ基は、ハロゲン、トリフルオロメチル、メチルから選択される１〜3の基で任意に置換されていてもよく；
Xは酸素原子または硫黄原子を表し；
R6は、C1-6 アルコキシ基、ヒドロキシまたは基NR7R8を表し、
該C1-6 アルコキシ基はフェニルで任意に置換されていてもよく；
R7およびR8は、それぞれ独立して：
水素原子、任意にC3-7シクロアルキル、C3-7 シクロアルケニル、C1-3アルコキシ、フェニル、モルホリニルもしくはピリジニルで置換されていてもよいC1-6アルキル；またはC3-7 シクロアルキル、C1-6 アルコキシまたはフェニルを表すか；または
R7およびR8は、それらを有する窒素原子と共に、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジンもしくはモルホリン環を形成し；
該C3-7 シクロアルキルおよびフェニル基は、C1-3アルキル、ヒドロキシ、C1-3アルコキシもしくはハロゲン原子から選択される１または２の基で任意に置換されていてもよい]
で表され、塩基、酸との付加塩、水和物または溶媒和物の形態にある化合物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項２】
R1が、フッ素、トリフルオロメチル、ヒドロキシ、C1-4チオアルキル、チオフェンもしくはフェニルから選択される１〜3の置換基で任意に置換されていてもよいC1-5アルキル；またはC4-7シクロアルキル、フラニル、チオフェン、ベンゾチオフェン、ピリジニルもしくはフェニルを表し；該フェニルは、ハロゲン原子、ヒドロキシ、ベンジルオキシもしくはメチレンジオキシから選択される１〜3の置換基で任意に置換されていてもよく；
R2およびR'2は、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、ヒドロキシ、C1-3アルキル、C3-7シクロアルキル、C1-3アルコキシ、O-C(O)-C1-4アルキル基を表すか、あるいはR2およびR'2は一緒になってオキソ基を形成し；
R3 は、C1-3 アルコキシで任意に置換されていてもよい C1-4 アルキルを表し；
R4 およびR5は、基R4 またはR5の少なくとも一方が基-C(X)R6を表すという条件で、それぞれ独立して、
水素原子、任意にフェニルもしくはC3-7シクロアルキルで置換されていてもよいC1-7アルキルを表すか；または
C3-7 シクロアルキル、フェニル、ナフチルまたは-C(X)R6を表し；
該フェニルは、ハロゲン、C1-3アルキル、ヒドロキシ、C1-3 アルコキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、フェニル、フェノキシ、ベンジルオキシ、-CH2O-フェニル、OCH2ピリジニルから選択される、１または２の基で任意に置換されていてもよく；
上記のベンジルオキシ基は、ハロゲン、トリフルオロメチルまたはメチルから選択される基で任意に置換されていてもよく；
Xは酸素原子を表し；
R6は、C1-6 アルコキシ基、ヒドロキシまたは基NR7R8を表し；該C1-6アルコキシ基はフェニルで任意に置換されていてもよく；
R7およびR8は、それぞれ独立して、
水素原子、任意にC1-3アルコキシ、C3-7 シクロアルケニル、フェニル、モルホリニルもしくはピリジニルで置換されていてもよいC1-3アルキル基; C1-3 アルコキシ;またはC3-6シクロアルキルを表すか；あるいは
R7およびR8は、それらを有する窒素原子と共に、アゼチジン、ピペリジンまたはモルホリン環を形成し；上記のフェニル基は、１または２のC1-3アルコキシ基で任意に置換されていてもよい
ことを特徴とする、塩基、酸との付加塩、水和物または溶媒和物の形態にある、請求項１に記載の化合物。
【手続補正３】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項９】
β-アミロイドペプチド β-A4抑制剤が治療効果をもたらす疾患の治療のための、請求項８に記載の医薬組成物。
【手続補正４】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項１０】
老人性痴呆症、アルツハイマー病、ダウン症候群、パーキンソン病、アミロイド脈管障害および／または脳血管障害の治療のための、請求項８に記載の医薬組成物。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
R2およびR'2が、それぞれ独立して、水素原子、ハロゲン原子、好ましくはフッ素、ヒドロキシ、C1-3アルキル、好ましくはメチルもしくはエチル、C3-7シクロアルキル、好ましくはシクロヘキシル、C1-3アルコキシ、好ましくはメトキシ、O-C(O)-C1-4アルキル基、好ましくはO-C(O)-CH3を表すか、または
R2およびR'2が一緒になってオキソ基を形成し；そして／または
R3 が、任意にC1-3 アルコキシ、好ましくはメトキシで置換されていてもよい C1-4 アルキル、好ましくはメチル、エチル、プロピルもしくはブチルを表し；
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
Xが酸素原子または硫黄原子を表し；そして／または
R6 がC1-6 アルコキシ基、ヒドロキシまたは基NR7R8を表し；そして／または
R7およびR8が、それぞれ独立して、
水素原子、任意にC3-7 シクロアルキル、C3-7 シクロアルケニル、フェニルもしくはピリジニルで置換されていてもよいC1-6 アルキル基；または
C3-7 シクロアルキル、C1-6 アルコキシもしくはフェニルを表すか;あるいは
R7およびR8が、それらを有する窒素原子と共に、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジンまたはモルホリン環を形成し；
上記のC3-7シクロアルキルおよびフェニル基は、C1-3アルキル基、ヒドロキシ、C1-3アルコキシまたはハロゲン原子で任意に置換されていてもよい
化合物である。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
R4 およびR5が、基R4 またはR5の少なくとも一方が基-C(X)R6を表すという条件で、それぞれ独立して、
水素原子、任意にフェニルもしくはC3-7シクロアルキル、好ましくはシクロヘキシルで置換されていてもよいC1-7アルキル、好ましくはメチル、エチル、1-メチルエチル、n-プロピル、ブチル、2-メチルプロピル、tert-ブチル、3-メチルブチル、1-エチルプロピル、2,2-ジメチルプロピル、ヘキシル、5-メチルヘキシルを表すか；または
C3-7 シクロアルキル、好ましくはシクロプロピルもしくはシクロヘキシル；フェニル、ナフチルまたは-C(X)R6を表し；
該フェニルは、C1-3アルキル、好ましくは1-メチルエチル、ヒドロキシ、C1-3 アルコキシ、好ましくはメトキシもしくはエトキシ；フェノキシ、またはベンジルオキシから選択される、１または２の基で任意に置換されていてもよく；
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
スキーム４によれば、R6がフェニルで任意に置換されていてもよいC1-6アルコキシを表す式（XIII）のケトエステルをブロム化して式 (XII)の化合物を得、次いでA. Barton、Breukelman、Kaye (J.C.S. Perkin I, 1982, p. 159)により記載された方法を応用してチオウレアと反応させることにより、式（III）の化合物を得ることができる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５４】
実施例1：メチル 2-アミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
ジエチルエーテル400 ml中のイソブチルアルデヒド14.4 gの溶液を、0℃でメチルジクロロアセテート24.6 gと混合し、次いでナトリウムメトキシド(0.5M)のメタノール溶液400 mlに滴下する。0℃で1時間後、塩化ナトリウム飽和水溶液100 mlを加え、混合物をエーテルで抽出する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。エーテルのみを蒸発させ、メタノールを残し、チオウレア8 gを加えて、混合物を還流下に６時間加熱する。反応媒体を蒸発乾固し、残渣を酢酸エチル中に取り出し、水酸化アンモニウム10％水溶液、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。残渣をエーテル100 ml中に取り出し、フリットでろ過する。かくして、白色固形物18.6を得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 1.25 (d,6H); 3.35 (s,3H); 4.10 (m,1H); 5.50 (s,2H)
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
実施例２:エチル 2-アミノ-4-(2,2-ジメチルプロピル)チアゾール-5-カルボキシレート
無水テトラヒドロフラン100 ml中の4,4-ジメチルペンタノン4 gの溶液を60％水素化ナトリウム3 gと混合し、次いでジエチルカルボネート8.2 gを滴下する。反応媒体を還流下に５時間加熱する。それを冷却し、蒸留水50 mlで加水分解する。テトラヒドロフランを蒸発させる。残渣を酢酸エチルで抽出する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで蒸発させる。着色した油状物4.9 gを得る。
NMR 300 MHz δ ppm (CDCl3): 1.05 (s,9H); 1.28 (t,3H); 2.42 (s,2H); 3.40 (s,2H); 4.18 (q,4H)
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５６】
0℃の蒸留水75 ml中の、上記で得られたβ-ケトエステル4.9 gの懸濁液に、臭素1.4 mlを滴下して混合する。反応媒体を0℃で1時間攪拌し、次いで酢酸エチルで抽出する。有機相を塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥する。蒸発させてオレンジ色の油状物4.1 gを得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δ ppm: 1.00 (s,9H); 1.30 (t,3H); 2.60 (ms,2H); 4.25 (q,2H); 4.75 (s,1H)
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
エタノール60 ml中のブロモ-β-ケトエステル4.10 gの溶液をチオウレア1.1 gと混合する。反応媒体を還流下に６時間加熱し、次いで蒸発乾固する。残渣を酢酸エチル中に取り出し、水酸化アンモニウム10％水溶液、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。蒸発させた後、残渣を酢酸エチル/ペンタン混液から再結晶する。かくして、白色固形物2.1 gを得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 0.97 (s,9H); 1.21 (t,3H); 2.92 (s,2H); 4.25 (q,2H); 5.65 (s,2H)
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５８】
実施例3：メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]プロパノイルアミノ]-5-プロピルチアゾール-4-カルボキシレート(化合物２)
実施例 3.1: N-3,5-ジフルオロフェニルアセチル-(S)-アラニン
0℃のジメチルホルムアミド50 ml中の3,5-ジフルオロフェニル酢酸1.72 gの溶液を、N-メチルモルホリン1.01 g、PyBOP 5.72g、(S)-アラニンベンジルエステル塩酸塩2.15 gおよびN-メチルモルホリン1.01 gと混合する。混合物を室温に戻し、18時間攪拌する。反応媒体を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、硫酸水素カリウム (1M)溶液、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥する。残渣を、石油エーテル/酢酸エチル7:3（v/v）混液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフにかけて、白色固形物1.9 gを得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 1.40 (d,3H); 3.54 (s,2H); 4.62 (m,1H); 5.18 (m,2H); 6.10 (d,1H); 6.73 (t,2H); 6.80 (d,1H); 7.32 (m,5H)
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５９】
無水エタノール80 ml中のN-3,5-ジフルオロフェニルアセチル-(S)-アラニン ベンジル
エステル1.9ｇの溶液を、10％パラジウム炭素300 mgと混合する。反応媒体を、常圧、室温で８時間水素化する。反応媒体を紙でろ過し、無水エタノールで洗浄し、蒸発させる。かくして、白色固形物1.37 gを得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 1.36 (d,3H); 3.48 (s,2H); 3.70 (s,1H); 4.40 (m,1H); 6.65 (t,2H); 6.70 (d,1H); 6.95 (d,1H)
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
実施例3.2: メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]プロパノイルアミノ]-5-プロピルチアゾール-4-カルボキシレート
0℃のジメチルホルムアミド25 ml中の、実施例１に記載した方法により調製されたメチル2-アミノ-5-プロピルチアゾール-4-カルボキシレート0.24 gの溶液を、N-メチルモルホリン0.12ｇ、PyBOP 0.69ｇ、次いで実施例3の工程3.1で得られた化合物0.275ｇと混合する。反応物を室温に戻し、混合物を18時間攪拌する。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、水で1回、１N硫酸水素カリウム水溶液で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。残渣を石油エーテル/酢酸エチル1:1（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかけ、白色の粉体0.22 gを得る。
LC/MS: MH+ = 426
NMR 500 MHz (CDCl3) δppm: 0.91 (q,3H); 1.30 (d,3H); 1.61 (m,2H); 3.06 (t,2H); 3.53 (s,2H); 3.77 (s,3H); 4.38 (m,1H); 6.98 (m,2H); 7.08 (m,1H); 8.57 (d,1H); 12.49 (s,1H)
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
実施例4:メチル 2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]プロパノイルアミノ]-4-プロピルチアゾール-5-カルボキシレート (化合物 144)
0℃のジメチルホルムアミド30 ml中の、実施例２に記載の方法で調製されたメチル２-アミノ-４-プロピルチアゾール-5-カルボキシレート0.3 gの溶液を、N-メチルモルホリン0.101g、PyBOP 0.86 g、および実施例３の工程3.1で得られたN-3,5-ジフルオロフェニルアセチル-(S)-アラニン0.34 gと混合する。反応媒体を室温に戻し、次いで18時間攪拌する。溶媒を蒸発させた後、残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、水で2回、１M硫酸水素カリウム水溶液で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。残渣を酢酸エチル/石油エーテル3:7（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかけ、白色の粉体0.45 gを得る。
LC/MS: MH+ = 426
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.88 (t,3H); 1.32 (d,3H); 1.66 (m,2H); 2.95 (m,2H); 3.54 (s,2H); 3.76 (s,3H); 4.47 (m,2H); 6.97 および 7.10 (2m,3H); 8.63 (d,1H); 12.66 (s,1H)
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
実施例5: メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート(化合物 18)
実施例 5.1: メチル2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
０℃のジメチルホルムアミド100 ml中の、実施例１で得られたメチル2-アミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート2.3 gの溶液を、N-メチルモルホリン1.22 g、PyBOP 6.34 g、次いで(S)-Boc-ノルバリン2.65 gと混合する。反応媒体を室温に戻し、16時間攪拌する。蒸発させた後、残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、水で2回、1M硫酸水素カリウム水溶液で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。残渣を酢酸エチル/石油エーテル3:7（v/v）混液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフにかける。かくして、白色固形物3.5 gを得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 0.97 (t,3H); 1.37 (d,6H); 1.45 (s,9H); 1.67 (m,2H); 1.90 (m,2H); 3.90 (s,3H); 4.10 (m,1H); 4.38 (未解析コンプレックス、1H); 4.90 (未解析コンプレックス、1H)
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
上記で得られた生成物3.3 gのトリフルオロ酢酸溶液60 mlを室温で30分間攪拌し、次いで蒸発させる。残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸ナトリウム飽和水溶液で2回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで蒸発させて、白色固形物2 gを得る。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 0.97 (t,3H); 1.35 (d,6H); 1.40 〜1.60 (m,2H); 1.80 (m,2H); 3.60 (m,1H); 3.97 (s,3H); 4.12 (m,1H)
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６４】
実施例5.2: メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
0℃のジメチルホルムアミド30 ml中の、実施例５の工程5.1で得られたメチル2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート0.7 gの溶液を、N-メチルモルホリン0.255 g、PyBOP 1.30 g、次いで3,5-ジフルオロフェニル酢酸0.43 gと混合する。反応物を室温に戻し、混合物を18時間攪拌する。反応媒体を蒸発させる。残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、水で2回、1Ｍ硫酸水素カリウム水溶液で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。残渣を、石油エーテル/酢酸エチル1:1（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかけ、白色固形物0.7 gを得る。LC/MS: MH+ = 454
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.85 (t,3H); 1.26 (d,6H); 1.28〜1.65 (m,4H); 3.53 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.36 (m,1H); 6.96 (d,2H); 7.08 (m,1H); 8.49 (d,1H);12.52 (s,1H)
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
実施例 6:メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-4-(1-メチルエチル)チアゾール-5-カルボキシレート (化合物 146)
メチル2-アミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレートを、実施例２に記載の方法で調製されたメチル2-アミノ-4-(1-メチルエチル)チアゾール-5-カルボキシレートに置き換えて、実施例５の方法を繰り返す。
LC/MS: MH+ = 454
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.87 (t,3H); 1.27 (d,6H); 1.35 (m,2H); 1.64 (m,2H); 3.54 (s,2H); 3.77 (s,3H); 3.90 (m,1H); 4.45 (m,1H); 6.96-7.09 (m,3H); 8.53 (d,1H); 12.69 (s,1H)
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６７】
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.80 (t,3H); 1.18 (m,2H); 1.22 (d,6H); 1.68 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.43 (m,1H); 5.05 (d,1H); 6.55 (d,1H); 7.13 (m,3H); 8.24 (d,1H); 12.46 (s,1H)
αD20 = -53° (c = 1/MeOH)
(R,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 470
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.82 (t,3H); 1.26 (d,6H); 1.26 (m,2H); 1.68 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.40 (m,1H); 5.07 (d,1H); 6.42 (d,1H); 7.12 (m,3H); 8.27 (d,1H); 12.51 (s,1H)
αD20 = -83° (c = 1/MeOH)
【手続補正２２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
実施例8: メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシアセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-4-(1-メチルエチル)チアゾール-5-カルボキシレート (化合物 150および 151)
メチル2-(2-(S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレートを、実施例５の工程5.1に記載の方法で得られたメチル 2-(2-(S)-ペンタノイルアミノ)-4-(1-メチルエチル)チアゾール-5-カルボキシレートに置き換えて、実施例７の方法を繰り返す。
(S,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 471
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.81 (t,3H); 1.18 (d,6H); 1.22 (m,2H); 1.71 (m,2H); 3.77 (s,3H); 3.90 (m,1H); 4.50 (m,1H); 5.06 (s,1H); 6.54 (s,1H); 7.12 (m,3H); 8.30 (d,1H); 12.66 (s,1H)
αD20 = -73° (c = 1/MeOH)
(R,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 471 (純度95%)
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.83 (t,3H); 1.19 (d,6H); 1.22 (m,2H); 1.70 (m,2H); 3.77 (s,3H); 3.91 (m,1H); 4.48 (m,1H); 5.07 (s,1H); 6.42 (s,1H); 7.12 (m,3H); 8.34 (d,1H); 12.67 (s,1H)
αD20 = -104° (c = 1/MeOH)
【手続補正２３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
実施例 9: 2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド(化合物 26)
実施例9.1: 2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボン酸
テトラヒドロフラン150 ml中の、実施例１で得られたメチル2-アミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート4.4 gの溶液を、ジ-tert-ブチル ジカルボネート5.27gおよびジメチルアミノピリジン0.13 gと混合する。混合物を室温で16時間攪拌する。反応媒体を蒸発させる。残渣を酢酸エチル中に取り出し、0.5N塩酸水溶液で2回、水で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。かくして、固体形状の保護されたアミノチアゾール誘導体6.1gを得る。これを精製しないで、そのまま用いる。
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 1.25 (d,6H); 1.50 (s,9H); 3.85 (s,3H); 3.97 (m,1H)
LC/MS: MH+ = 301 (M-Boc)+ = 201
【手続補正２４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７０】
上記で得られた生成物6.10ｇのテトラヒドロフラン150 ml溶液を、水酸化リチウム1.68gの蒸留水80ml溶液と室温で混合する。テトラヒドロフラン反応混合物を還流下に16時間加熱し、次いで濃縮する。残渣を水中に取り出し、酢酸エチルで2回洗浄する。水相を1N塩酸溶液でおよそｐH~ 4の酸性にし、塩化ナトリウムを飽和させ、酢酸エチルで2回抽出する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。かくして、白色の固形物5.10 gを得る。
LC/MS: MH+ = 287
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 1.19 (d,6H); 1.45 (s,9H); 3.80 (s,3H); 3.90 (未解析コンプレックス s, 1H); 4.15 (m,1H)
【手続補正２５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
実施例 9.2: 2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド
ジメチルホルムアミド80 ml中の、工程９.1で得られた2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボン酸２ gの溶液を、ヒドロキシベンゾトリアゾール 水和物1.07 g 、（EDAC、HCl）1.33 g、次いでN,N-ジエチルアミン 塩酸塩0.57 gおよびN-メチルモルホリン0.77 gと混合する。反応媒体を室温で16時間攪拌し、次いで濃縮する。残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、1M硫酸水素カリウム水溶液で2回、水で1 回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮する。かくして、白色固形物1.45 gを得る。
LC/MS: MH+ = 314
NMR 300 MHz (CDCl3) δ ppm: 1.30 (d,6H); 1.53 (s,9H); 2.98 (s,3H); 3.09 (s,3H); 3.40 (m,1H); 8.00 (s,1H)
【手続補正２６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
実施例 9.3: 2-アミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド
工程9.2で得られた2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド1.4 gを、トリフルオロ酢酸30 mlと混合する。混合物を室温で30分間攪拌し、次いで濃縮する。残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸ナトリウム飽和水溶液で2回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。かくして、白色の固形物0.90 gを得る。
LC/MS: MH+ = 214
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 1.22 (d,6H); 3.00 (s,3H); 3.30 (m,1H); 4.90 (s,1H)
【手続補正２７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７３】
実施例 9.4: 2-((2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド
工程9.3で得られた2-アミノ-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド0.9 gを、実施例５の工程5.1に記載の方法で、(S)-Boc-ノルバリン1 gとカップリングさせる。酢酸エチルおよび石油エーテル1:1（v/v）混液で溶出するシリカクロマトグラフにより、室温で結晶化する粘性の油状物1.1 gを得る。
LC/MS: MH+ = 413
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 0.97 (t,3H); 1.30 (d,6H); 1.40 (s,9H); 1.65 (m,2H); 1.90 (m,2H); 2.95 (s,3H); 3.08 (s,3H); 3.48 (m,1H); 4.30 (m,1H); 5.25 (未解析コンプレックス、1H)
【手続補正２８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
上記で得られた化合物1.1 gを、工程9.3に記載の方法により、トリフルオロ酢酸20ml中で脱保護する。かくして、白色の固形物0.77 gを得る。
LC/MS: MH+ = 313
NMR 300 MHz (CDCl3) δppm: 0.98 (t,3H); 1.60 (d,6H); 1.30-1.95 (未解析コンプレックス、4H); 2.98 (s,3H); 3.08 (s,3H); 3.40 (m,1H); 3.58 (m,1H)
【手続補正２９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７５】
実施例 9.5: 2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド
0℃のジメチルホルムアミド15 ml中の、工程9.4で得られた2-((2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド0.23 gを、N-メチルモルホリン0.088 g、次いでPyBOP 0.416 gおよび3,5-ジフルオロフェニル酢酸0.138 gと混合する。反応媒体を16時間かけて室温に戻し、次いで濃縮する。残渣を酢酸エチル中に取り出し、0.5N塩酸水溶液で2回、水で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。酢酸エチルおよび石油エーテル1:1（v/v）混液で溶出するシリカクロマトグラフにより、白色の固形物0.26 gを得る。
LC/MS: MH+ = 467
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.87 (t,3H); 1.24 (d,6H); 1.29-1.67 (m,4H); 2.86 (s,3H); 2.95 (s,3H); 3.22 (m,1H); 3.54 (m,2H); 4.41 (m,1H); 6.98 (d,2H); 7.08 (m,1H); 8.49 (d,1H); 12.21 (s,1H).
αD20 = -74° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正３０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
実施例９の工程9.5に記載の方法により、実施例９工程9.4で得られた2-((2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-N,N-ジメチルカルボキシアミド0.77 gを、N-メチルモルホリン0.28 gおよびPyBOP 1.4 gの存在下に0℃で3,5-ジフルオロマンデル酸0.51 gとカップリングさせ、酢酸エチルおよび石油エーテル75:25（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかけ、白色の固形物0.80 gを得る。
LC/MS: MH+ = 483 (2 つのピーク: 2つの ジアステレオ異性体 (R,S) および(S,S))
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.72 (t,3H); 1.06 (m,1H); 1.16 (m,1H); 1.27 (d,6H); 1.58 (m,2H); 2.10 (s,3H); 3.78 (s,3H); 3.96 (m,1H); 4.37 (m,1H); 5.97 (s,1H); 7.34 および 7.47 (2m,5H); 8.62 (s,1H); 12.49 (s,1H)
αD20 = -67° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正３１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
この2つのジアステレオ異性体は、アセトニトリル/H2O 95:5（v/v） 〜 5:95のグラジエントのC18 カラム上でのプレパラティブHPLCにより、23分間で分離することができる。かくして、白色の固形物((S,S) 異性体) 0.1 gを得る。
LC/MS: MH+ = 483
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.80 (t,3H); 1.25 (d,6H); 1.28 (m,2H); 1.75 (m,2H); 2.80 (s,3H); 3.00 (s,3H); 3.25 (m,1H); 4.49 (m,1H); 5.08 (s,1H); 6.55 (幅広 s, 1H);7.13 (d,3H); 8.25 (d,1H); 12.15 (s,1H).
また、白色の固形物 0.17 g ((R,S) 異性体)を得る。
LC/MS: MH+ = 483
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.88 (t,3H); 1.22 (d,6H); 1.30 (m,2H); 1.68 (m,2H); 2.87 (s,3H); 2.98 (s,3H); 3.25 (m,1H); 4.45 (m,1H); 5.10 (s,1H); 6.42 (s,1H); 7.18 (m,5H); 8.30 (d,1H); 12.20 (s,1H)
【手続補正３２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.80 (t,3H); 1.16 (m,2H); 1.26 (s,9H); 1.68 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.43 (m,1H); 4.98 (d,1H); 6.31 (d,1H); 7.32 (m,5H); 8.14 (d,1H); 12.46 (s,1H)
αD20 = -51° (c = 1.0, MeOH)
(R,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 434
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.85 (t,3H); 1.28 (s,6H); 1.28 (m,2H); 1.68 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.44 (m,1H); 5.00 (d,1H); 6.17 (d,1H); 7.30 (m,5H); 8.17 (d,1H); 12.51 (s,1H)
αD20 = -110° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正３３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
実施例12：メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)-2-オキソアセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート (化合物75)
アミレンで安定化された無水ジクロロメタン40 ml中の、実施例7で得られたメチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシアセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート0.3 gの溶液を、デス-マーチンペリオジナン試薬0.55 g、tert-ブタノール0.09 gと混合する。反応混合物を室温で20時間攪拌し、次いで蒸発させる。残渣を（前処理しないで）石油エーテル/酢酸エチル8:2（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の粉末0.20 gを得る。
LC/MS: MH+ = 468 (純度100%)
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.97 (t,3H); 1.20 (d,6H); 1.40 (m,2H); 1.80 (m,2H); 3.87 (s,3H); 4.05 (m,1H); 4.60 (m,1H); 7.60 (m,2H); 7.80 (m,1H); 7.99 (m,2H); 9.30 (d,1H); 12.70 (s,1H)
【手続補正３４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８３】
実施例13:メチル 2-[2-[-2[-(3,5)-ジフルオロフェニル-2-ヒドロキシ-(2S)-アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-4-メチルチアゾール-5-カルボキシレート (化合物 165)
実施例７および８に記載の方法により標題の化合物を得ることができる。０℃のジメチルホルムアミド75 ml中の、実施例5.1に記載の方法で得られたメチル2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-4-(メチル)チアゾール-5-カルボキシレート0.90 gの溶液を、N-メチルモルホリン0.366 g、PyBOP 1.87 g、次いで3,5-ジフルオロマンデル酸0.677 gと混合する。反応媒体を室温に戻して16時間攪拌し、次いで濃縮する。残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、 水で2回、(1M)硫酸水素カリウム水溶液で1回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。残渣を石油エーテルおよび酢酸エチル8:2〜7:3（v/v）混液で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の粉末(S,S異性体)0.1gおよび(2つのジアステレオ異性体の混合物) 0.7 gを得る。
(S,S)異性体：
LC/MS: MH+ = 442
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.82 (t,3H); 1.26 (m,2H); 1.69 (m,2H); 2.63 (s,3H); 3.77 (s,3H); 4.50 (m,1H); 5.07 (d,1H); 6.55 (d,1H); 7.16 (m,3H); 8.31 (d,1H); 12.65(s,1H)
【手続補正３５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８４】
実施例14: メチル2-[2-[2-(3,5)-ジフルオロフェニル]-2-オキソアセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-4-メチルチアゾール-5-カルボキシレート (化合物 167)
アミレンで安定化された無水ジクロロメタン80 ml中の、実施例13で得られたメチル2-[2-[2-(3,5)-ジフルオロフェニル-2-ヒドロキシ-(2S)-アセチルアミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ]-4-メチルチアゾール-5-カルボキシレート0.7 gの溶液を、デス-マーチンピリオジナン試薬1.35 gおよびtert-ブタノール0.24 gと混合する。反応混合物を室温で20時間攪拌し、次いで蒸発させる。残渣を（前処理しないで）石油エーテル/酢酸エチル8:2（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の粉末0.68 gを得る。
LC/MS: MH+ = 440
αD20 = -87° (c=1, MeOH)
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.90 (t, 3H); 1.38 (m,2H); 1.75 (m,2H); 2.63 (s,3H); 3.78 (s,3H); 4.61 (m,1H); 7.69 (m,3H); 9.43 (d,1H)
【手続補正３６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８５】
実施例15: メチル2-[2-[2-ヒドロキシ-3,3-ジメチル-(2S)-ブチリルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)-チアゾール-4-カルボキシレート (化合物 97)
0℃のジメチルホルムアミド10 ｍl中の、実施例5の工程5.1で得られたメチル 2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート0.24 gの溶液を、N-メチルモルホリン97 μl、(S)-(-)-2-ヒドロキシ-3,3-ジメチル酪酸 0.116 g、次いでPyBOP 0.46 gと混合する。室温に戻した後、反応媒体を18時間攪拌し、次いで減圧下に濃縮する。残渣を酢酸エチル50 ml中に取り出し、KHSO4飽和水溶液50 ml、K2CO3飽和水溶液50 ml、NaCl飽和溶液、次いでH2O 50mlで連続的に洗浄する。有機相を乾燥し、蒸発させた後、残渣を石油エーテル100％〜石油エーテル/酢酸エチル30/70（v/v）混液のグラジエントで溶出するシリカカラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の結晶0.269 gを得る。
LC/MS: MH+ = 414
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.90 (t,3H); 0.93 (s,9H); 1.30 (d,6H); 1.32 (m,2H); 1.71 (m,2H); 3.58 (d,1H); 3.82 (s,3H); 4.02 (m,1H); 4.52 (m,1H); 5.60 (d,1H); 7.82 (d,1H); 12.45 (s,1H)
αD20 = -74° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正３７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.87 (t,3H); 1.22 (d,6H); 1.32 (m,2H); 1.70 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.98 (m,1H); 4.52 (m,1H); 5.90 および 6.00 (2s,1H); 7.44 (m,5H); 8.70 (d,1H); 12.55 (s,1H)
αD20 = -55° (c = 1.0, MeOH)
(R,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 436
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.90 (t,3H); 1.24 (m,2H); 1.30 (s,6H); 1.77 (m,2H); 3.85 (s,3H); 4.05 (m,1H); 4.48 (m,1H); 5.97 および 6.05 (2s,1H); 7.50 (m,5H); 8.80 (d,1H); 12.62 (s,1H)
αD20 = -71.3° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正３８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８９】
実施例 17.2: メチル 2-[2-[2-(3-クロロ)-2-ヒドロキシ-(2S)-アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
0℃のジメチルホルムアミド5 ml中の、実施例5の工程5.1で得られたメチル2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート0.072 gの溶液を、N-メチルモルホリン29 μl、(S)-3-クロロマンデル酸0.081 g、次いでPyBOP 0.137 gと混合する。室温に戻した後、反応媒体を40時間攪拌し、次いで減圧下に濃縮する。残渣を酢酸エチル50 ml中に取り出し、KHSO4飽和水溶液50 ml、K2CO3飽和水溶液50 ml、NaCl飽和溶液50 mlおよびH2O 50 mlで連続的に洗浄する。有機相を乾燥し、蒸発させた後、残渣を石油エーテル100％〜酢酸エチル100％のグラジエントで溶出するシリカ（40 g）カラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の結晶0.059 gを得る。
LC/MS: MH+ = 468
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.87 (t,3H); 1.20 (m,2H); 1.22 (d,6H); 1.70 (m,2H); 3.80 (s,3H); 4.00 (m,1H); 4.43 (m,1H); 5.02 (s,1H); 6.44 (s,1H); 7.30 (m,3H); 7.45 (s,1H); 8.20 (d,1H); 12.45 (s,1H)
【手続補正３９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９４】
(S,S)異性体:
LC/MS: MH+ = 428
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.86 (t,3H); 0.93 (m,6H); 1.24 (m,2H); 1.32 (d,6H); 1.38 (m,4H); 1.55 (m,1H); 1.72 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.98 (m,1H); 4.05 (m,1H); 4.55 (m,1H); 5.55 (d,1H); 7.92 (d,1H); 12.50 (s,1H)
αD20 = -53.9° (c = 1.0, MeOH)
(R,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 436
NMR 500 MHz (DMSO) δ ppm: 0.80 (t,3H); 0.90 (m,6H); 1.20 (m,2H); 1.30 (d,6H); 1.34 (m,4H); 1.55 (m,1H); 1.74 (m,2H); 3.86 (s,3H); 4.00 (m,2H); 4.53 (m,1H); 5.42 (d,1H); 8.00 (d,1H); 12.54 (s,1H)
αD20 = -26.9° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正４０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９７】
実施例 19.2: メチル2-[2-[3-(3,5-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-(2S)-プロピオニルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
０℃のジメチルホルムアミド10ml中の、実施例５の工程５.１で得られたメチル2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート0.897 gの溶液を、N-メチルモルホリン363 μl、3-(3,5-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシプロピオン酸0.666g、次いでPyBOP 1.72 gと混合する。室温に戻した後、反応媒体を17時間攪拌し、次いで減圧下に濃縮する。残渣を酢酸エチル50 ml中に取り出し、KHSO4 飽和水溶液50 ml、K2CO3飽和水溶液50 ml、NaCl飽和溶液50 ml、次いでH2O 50 mlで連続的に洗浄する。有機相を乾燥し、蒸発させた後、残渣を石油エーテル100％〜石油エーテル/酢酸エチル10/90（v/v）混液のグラジエントで溶出するシリカ（90 g）カラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の結晶0.43 gを得る。
LC/MS: MH+ = 484
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.82 (m,3H); 1.10 (m,2H); 1.27 (m,6H); 1.61 (m,2H); 2.83 および 2.95 (2m,1H); 3.77 (s,3H); 3.96 (m,1H); 4.21 (m,1H); 4.43 (m,1H); 5.68 および 5.81 (2d,1H); 6.93-7.01 (m,3H); 7.84 および 7.97 (2d,1H); 12.46 (s,1H)
αD20 = -32.8° (c = 1.0, MeOH)
【手続補正４１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１００
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１００】
実施例 20.2: メチル 2-[2-[2-(2-ベンジルオキシフェニル)-2-ヒドロキシアセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
0℃のジメチルホルムアミド50 ml中の、実施例5の工程5.1で得られたメチル2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート1.88 gの溶液を、N-メチルモルホリン760 μl、(2ベンジルオキシフェニル)ヒドロキシ酢酸13 g、次いでPyBOP 3.6 gと混合する。室温に戻した後、反応混合物を17時間攪拌し、次いで減圧下に濃縮する。残渣を酢酸エチル100 ml中に取り出し、KHSO4飽和水溶液100 ml、K2CO3飽和水溶液100 ml、NaCl飽和溶液100 ml、次いでH2O 100 mlで連続的に洗浄する。有機相を乾燥し、蒸発させた後、残渣を、石油エーテル100％〜石油エーテル/ 酢酸エチル30/70（v/v）混液のグラジエントで溶出するシリカ（90 g）カラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の泡状物質0.43 gを得る。
LC/MS: MH+ = 540.
αD20 = -87.0° (c = 1.0, MeOH)
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.85 (m,3H); 1.26 (m,2H); 1.28 (d,6H); 1.69 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.98 (m,1H); 4.47 (m,1H); 5.22 (s,2H); 5.33 (2d,1H); 6.07 および 6.11 (2d,1H); 6.90-7.50 (m,8H) 8.00 (m,1H); 12.48 (s,1H)
【手続補正４２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０１】
実施例 21: メチル2-[2-[2-ヒドロキシ-2-(2-ヒドロキシフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート (化合物 128)
窒素雰囲気下のエタノール10 ml中の、実施例20で得られたメチル2-[2-[2-(2-ベンジルオキシフェニル)-2-ヒドロキシアセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート1.187 gの溶液を、Pd/C（10％）144 mgと混合する。反応混合物をH2 雰囲気下で24時間攪拌する。触媒をろ去し、溶媒を減圧下に蒸発させる。残渣を、石油エーテル100%〜石油エーテル/ 酢酸エチル40/60（v/v）混液のグラジエントで溶出するシリカ（90 g）カラムクロマトグラフにかける。かくして、白色の結晶0.68 gを得る。
LC/MS: MH+ = 450
αD20 = -89.5° (c = 1.0, MeOH)
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.91 (m,3H); 1.28 (m,2H); 1.30 (d,6H); 1.80 (m,2H); 3.85 (s,3H); 4.07 (m,1H); 4.53 (m,1H); 5.31 および 5.35 (2s,1H); 6.87 (m,2H); 7.13 (m,1H); 7.27 (m,1H); 8.17 (m,1H); 9.66 (幅広 s, 1H); 12.49 (s,1H)
【手続補正４３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
(S,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 472
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 1.25 (d,6H); 3.23 (s,2H); 3.59 (m,1H); 3.61 (m,1H); 3.78 (s,3H); 3.96 (m,1H); 4.64 (m,1H); 5.09 (s,1H); 6.62 (s,1H); 7.13 (m,3H); 8.23 (d,1H); 12.53 (s,1H)
(R,S) 異性体:
LC/MS: MH+ = 472
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 1.26 (t,3H); 3.23 (s,2H); 3.62 (m,1H); 3.71 (m,1H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.00 (m,1H); 5.10 (s,1H); 6.56 (s,1H); 7.13 (m,3H); 8.26 (d,1H); 12.59 (s,1H)
【手続補正４４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０８】
実施例 23: メチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-(3-メトキシプロピオニル)アミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート (化合物 59)
０℃のジメチルホルムアミド30 ml中の、実施例22で得られたメチル2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)-2-ヒドロキシアセチルアミノ]-(2S)-(3-メトキシプロピオニル)アミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート0.21 gの溶液を、N-メチルモルホリン0.09 g、PyBOP 0.42 g、次いで3,5-ジフルオロフェニル酢酸0.14 gと混合する。反応物を室温に戻して18時間攪拌する。反応媒体を蒸発させる。残渣を酢酸エチル中に取り出し、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液で2回、水で2回、1M硫酸水素カリウム水溶液で１回、次いで塩化ナトリウム飽和水溶液で洗浄する。有機相を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで濃縮する。残渣を、石油エーテル/酢酸エチル1:1（v/v）混液で溶出するシリカカラムクロマトグラフにかけ、白色の固形物0.12 gを得る。
LC/MS: MH+ = 456
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 1.26 (t,3H); 3.28 (d,3H); 3.55 (s,2H); 3.57 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.97 (m,1H); 4.64 (m,1H); 6.98 (d,2H); 7.08 (m,1H); 8.57 (d,1H); 12.54(s,1H)
【手続補正４５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１０】
実施例 24.2: メチル 2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ブチリルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレート
N,N-ジメチルホルムアミド中の、工程24.1で得られたメチル2-[(2S)-2-アミノブチリルアミノ]-5-(1-メチルエチル)チアゾール-4-カルボキシレートを、3,5ジフルオロフェニル酢酸0.38 g、PyBOP 1.14 g および N-メチルモルホリン0.22g と、実施例5.2に記載の方法によりカップリングさせ、クロマトグラフにかけた後に、白色の粉末0.66 gを得る。
LC/MS: MH+ = 440
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.79 (t,3H); 1.26 (d,6H); 1.73 (m,2H); 3.78 (s,3H); 3.96 (m,1H); 4.36 (m,1H); 5.06 (s,1H); 6.56 (s,1H); 7.13 (m,3H); 8.22 (d,1H); 12.46(s,1H)
αD = -73° (c = 1, MeOH)
【手続補正４６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１７】
実施例 25.3: 2-[2-[2-(3,5-ジフルオロフェニル)アセチルアミノ]-(2S)-ペンタノイルアミノ]-4-メチルチアゾール-5-N-メチル-N-フェニルエチルカルボキシアミド
実施例5.2と同様の方法を行う。
N,N-ジメチルホルムアミド 50 ml中の、2-(2-アミノ-(2S)-ペンタノイルアミノ)-4-メチルチアゾール-5-N-メチル-N-フェニルエチルカルボキシアミド0.80 gを、PyBOP 1.19 g、N-メチルモルホリン0.23 gおよび3,5-ジフルオロフェニル酢酸0.40 g とカップリングさせ、酢酸エチル/石油エーテル1:1（v/v）混液で溶出するシリカゲルカラムで精製して、白色の粉末0.67 gを得る。
LC/MS: MH+ = 259
NMR 500 MHz (DMSO) δppm: 0.92 (t,3H); 1.38 (m,2H); 1.65 (m,2H); 2.14 (s,3H); 2.88 (m,2H); 2.97 (s,3H); 3.63 (s,2H); 3.67 (m,2H); 4.51 (m,1H); 7.04 (d,2H); 7.12 (t,1H); 7.24-7.30 (m,5H); 8.55 (d,1H); 12.46 (s,1H)
αD = -103° (c=1, MeOH)
【手続補正４７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６０】
結合ペプチドの量を、先端を切断されたペプチド、すなわち、後でアルカリンホスホターゼに結合しているストレプトアビジンにより検出される、ビオチンに結合しているペプチド1-28に応答する競合者の存在中に、間接的に割り出す。基質、p-ニトロフェニル ホスフェート (pNPP FAST pニトロフェニルホスフェート、シグマN2770)は、405 nmで読み取れる黄色の可溶反応生成物を生じる。0.1MのEDTA溶液で反応を止める。
【手続補正４８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１６１】
このために、ELISAプレート中でアミロイドペプチドを結合させた後、ビオチン化ペプチド1-28 50 μlを細胞上清液100 μlに加え、室温で30分間培養する。次いでELISAプレートを3回洗浄する。吸取紙上に伏せて置いて乾燥させ、ストレプトアビジン-アルカリンホスファターゼ100 μl（Interchim/Jackson ImmunoResearch Laboratories 016-050-084）を、ウェルごとに加え、室温で1時間培養する。プレートを再度洗浄し、次いでアルカリンホスファターゼ基質(pNPP 1 mg/ml)を１ウェル当り100 μl加える。室温で30分間培養後、0.1MのEDTAを、1ウェル当り100 μl加えて反応を止め、405 nmで測定する。