【手続補正書】
【提出日】平成18年7月10日(2006.7.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤及びその他製品として開発に適した化合物の選択における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項２】
薬剤及びその他製品として開発に適した化合物のデザインにおける、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項３】
薬剤及びその他製品の組織動態の決定における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項４】
毒性の研究における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項５】
疾態の病原に対するシトクロムＰ４５０の関与についての研究における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項６】
妊娠及び／又は胚発生におけるＰ４５０の関与の研究における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項７】
Ｐ４５０が役割を果たすホルモン機能及び／又はホルモンレベルの調整におけるシトクロムＰ４５０の関与及び他の内在性経路の研究における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項８】
基質代謝におけるシトクロムＰ４５０の関与の研究における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項９】
前記ホルモン／基質が、ステロイド、エストロゲン、アンドロゲン、プロスタサイクリン、コレステロール、糖質コルチコイド、アラキドン酸（ａｒａｃｈａｄｏｎｉｃ ａｃｉｄ）、トロンボキサン、プロスタグランジン、ビタミンＤ３、神経ステロイド、カテコール、胆汁酸、脂肪酸、またはレチノイン酸からなる群から選択される、請求項７又は８に記載の使用。
【請求項１０】
前記病態が、胆汁鬱滞、アテローム発生、ホルモンのアンバランス、神経疾患、変性疾患、皮膚疾患（ｓｋｉｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）、心血管疾患、癌、または緑内障からなる群から選択される、請求項５に記載の使用。
【請求項１１】
循環コレステロールレベルを減少させる製品の同定における、シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物の使用。
【請求項１２】
前記動物が、胚、新生児、幼若、若年、及び／又は成獣である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１３】
製品の発見、開発、及び／又は動態／毒性研究及び／又は合理化された薬物デザインにおける、インビトロスクリーニングとしてのシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた動物細胞の使用。
【請求項１４】
シトクロムｐ４５０が役割を果たす病態、妊娠、胚発生、及び／又はホルモン機能及び／又はホルモンレベルの調整及び／又は他の内因性経路および基質代謝の研究におけるインビトロスクリーニングとしてのシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた動物細胞の使用。
【請求項１５】
製品開発／発見及び／又は動態／毒性研究及び／又は合理化した薬物デザイン、シトクロムｐ４５０が役割を果たす病態、妊娠、または胚発生、及び／又はホルモン機能及び／又はホルモンレベルの調整及び／又は他の内因性経路および基質代謝の研究におけるインビトロスクリーニングとしてのフロックス化（ｆｌｏｘｅｄ）されたシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子座を有する動物細胞の使用。
【請求項１６】
前記細胞が組織の形態である、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１７】
前記動物または動物細胞が、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、ハムスター、ラット、またはマウスからなる群から選択される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１８】
前記動物がマウスであり、及び／又は動物細胞がマウスである、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
シトクロムＰ４５０レダクターゼを条件付きで欠失させた動物細胞または前記細胞を含む動物が、胚性幹細胞をシトクロムＰ４５０レダクターゼ（ＣＰＲ）ターゲティング構築物によりトランスフェクトするステップと、フロックス化ＣＰＲ遺伝子座に関してホモ接合性（ＣＰＲlox/lox）の動物を選択するステップと、前記動物をＣｒｅ発現が調節された系列と交配するステップとを含む方法によって産生されるか、またはその方法によって産生された動物の特徴を有する、請求項１〜１８のいずれか記載の使用。
【請求項２０】
Ｃｒｅ発現の調節を組織または細胞特異的プロモーターによって行うか、前記発現が構成性であるか、外因性薬剤の投与によって誘導可能／調節可能である、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
Ｃｒｅ発現が、タモキシフェンまたはテトラサイクリンの投与によって誘導可能である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記プロモーターが、ラットアルブミンプロモーター、ＣＭＶプロモーター、腸脂肪酸結合タンパク質プロモーター、またはウシケラチンＶＩプロモーター、または条件反応によって組織特異的様式で活性化される任意の他のプロモーターからなる群から選択される、請求項２０または２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記組織または細胞特異的プロモーターが、シトクロムＰ４５０プロモーター、別の薬物代謝酵素のプロモーター、または転写因子プロモーターからなる群から選択される、請求項２０に記載の使用。
【請求項２４】
前記シトクロムＰ４５０プロモーターが、ＣＹＰｌＡｌ、ＣＹＰ３Ａ、ＣＹＰ４Ａ、ＣＹＰ２Ｂ１、またはＣＹＰ２Ｂ６である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記転写因子プロモーターが、ＰＸＲまたはＮｒｆ２である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２６】
前記ＣＰＲターゲティング構築物がＣＰＲ遺伝子のエクソンを含み、前記構築物のエクソンが３〜１６個である、請求項１９〜２５のいずれかに記載の使用。
【請求項２７】
前記構築物が１２ｋｂのＳａｌＩフラグメントを含む、請求項２６に記載の使用。
【請求項２８】
前記構築物が同一方向のｌｏｘＰ部位に隣接し、プロモーターを含むカセット中に含まれ、任意選択的に選択マーカーをさらに含む、請求項２６または２７に記載の使用。
【請求項２９】
前記マーカーがネオマイシンである、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
前記プロモーターが、単純ヘルペスチミジンキナーゼ（ｈｓｖ−ｔｋ）プロモーターである、請求項２８または２９に記載の使用。
【請求項３１】
前記カセットがイントロン４に挿入される、請求項２７〜３０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３２】
シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む非ヒトトランスジェニック動物またはシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた動物細胞の産生における、請求項２６〜３１のいずれか１項に定義された構築物の使用。
【請求項３３】
シトクロムＰ４５０レダクターゼを条件付きで欠失させた動物細胞または前記細胞を含む動物が、胚性幹細胞を、Ｆｌｐ／ｆｔｒ、Ｃ３１／ａｔｔＢ、ａｔｔＰを含む群から選択される適切に修飾されたシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子に関して部位特異的組換え系標的または遺伝子トラップベクターリコンビナーゼ系によってトランスフェクトするステップと、前記欠失に関してホモ接合性の動物を選択するステップとを含む方法によって得られた動物またはその方法により産生された動物の特徴を有する、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３４】
シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を欠失または除去するか、その発現産物を減少／防止する方法が、遺伝子産物を特異的にターゲティングするｓｉＲＮＡテクノロジーを含み、それによってヌルまたは低形質表現型を得る、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３５】
任意の１つまたは複数の以下のパラメーター：
（ｉ）製品の動態または任意の他の有機低分子の動態におけるシトクロムＰ４５０またはシトクロムＰ４５０レダクターゼの役割、
（ｉｉ）製品動態経路、
（ｉｉｉ）第ＩＩ相薬物動態経路及び／又は親製品の毒性、
（ｉｖ）薬物取り込みにおける薬物輸送の役割、
（ｖ）化学的毒性経路におけるシトクロムＰ４５０またはＰ４５０レダクターゼの役割、
（ｖｉ）正常な代謝プロセス、ホメオスタシス、疾患モデル、または薬物／製品標的におけるＰ４５０の役割、または
（ｖｉｉ）病因または病原におけるＰ４５０系の役割
を決定するためのインビボスクリーニングとしての、シトクロムＰ４５０レダクターゼヌルまたはレダクターゼヌルヘテロ接合性動物の使用。
【請求項３６】
任意の１つまたは複数の以下のパラメーター：
（ｉ）最初に代謝される薬剤の薬理学的有効性、
（ｉｉ）肝外代謝の発生および速度、
（ｉｉｉ）製品の分布および薬物動態学の決定因子としての代謝クリアランス速度、
（ｉｖ）インビボ代謝パラメーターに基づくリード製品選択の評価、
（ｖ）薬理学的活性および治療結果に対する代謝効果を確立するための薬物発見モデルとの交配、
（ｖｉ）薬理学的に活性な代謝製品の妥当性および発生の評価、
（ｖｉｉ）代謝活性化または他の機構に起因する毒性の区別、
（ｖｉｉｉ）薬物／製品動態における律速段階としてのＰ４５０またはＰ４０レダクターゼの役割の確立、
（ｉｘ）製品解毒に対する胆汁流の役割、または
（ｘ）Ｐ４５０または薬物輸送効果のいずれかに起因する薬物／薬物相互作用の研究
を決定するためのインビボスクリーニングとしての、シトクロムＰ４５０レダクターゼヌルまたはレダクターゼヌルヘテロ接合性動物の使用。
【請求項３７】
任意の１つまたは複数の以下の使用：
（ｉ）薬理学的／毒物学的効果における代謝の役割を確立するための疾患モデルへとの交配、
（ｉｉ）化合物の生物学的利用能研究におけるＰ４５０およびＭｄｒの二重の役割を評価するための多剤応答タンパク質（Ｍｄｒ１およびＭｄｒ２）ヌルマウスとの交配、
（ｉｉｉ）応答におけるＰ４５０系またはＰ４５０レダクターゼの役割を確立するための毒物学的応答、製品誘導及び／又は薬理学的応答を研究するためのレポーター動物との交配、
（ｉｖ）Ｐ４５０レダクターゼ活性の無い細胞株の作製、または
（ｖ）化学的変異誘発におけるＰ４５０／Ｐ４５０レダクターゼの役割を評価するための新規のインビボ変異試験の作製、
におけるシトクロムＰ４５０レダクターゼヌルまたはレダクターゼヌルヘテロ接合性動物の使用。
【請求項３８】
前記動物が、肝臓レダクターゼヌルまたは肝臓レダクターゼヌルヘテロ接合体である、請求項２９〜３１のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３９】
任意の１つまたは複数の以下の事象／パラメーター：
（ｉ）化合物の取り込みおよび流出における輸送体の役割、
（ｉｉ）シトクロムＰ４５０系によって産生された化合物の代謝製品の同定、
（ｉｉｉ）Ｐ４５０基質としての候補化合物の評価、
（ｉｖ）Ｐ４５０効果に起因する薬物／薬物相互作用の評価、
（ｖ）薬物の生物学的利用能におけるＰ４５０およびＭｄｒの二重の役割を評価するための多剤耐性（Ｍｄｒ）ヌル動物との交配、
（ｖｉ）潜在的なＰ４５０が介在する製品の変異原性を決定するためのエームス試験におけるＳ９画分の使用、
（ｖｉｉ）肝毒性／発癌性におけるシトクロムＰ４５０系の関与の確立、
（ｖｉｉｉ）肝臓の製品代謝または他の器官に対する毒性に関与する任意の他のＰ４５０含有細胞の代謝のいずれであるかを確立すること、
（ｉｘ）化合物の代謝の肝臓または任意の他の細胞産生（すなわち、プロドラッグ活性化）が所与の候補製品の薬理学的活性／毒性に重要であるかどうかの確立、
（ｘ）親製品またはそのＰ４５０産生代謝製品が薬物代謝酵素、肝臓成長、または他の表現型効果の誘導を介在するかどうかの確立、
（ｘｉ）ペルオキシソーム増殖におけるＰ４５０系の役割の調査、
（ｘｉｉ）製品の動態、毒性、または代謝活性化におけるシトクロムＰ４５０レダクターゼの役割の調査、または
（ｘｉｉｉ）Ｐ４５０が介在する製品代謝に起因する任意の細胞型における毒性の非存在下における毒性の二次部位の存在の調査、
の研究のためのインビトロアッセイとしてシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた動物組織及び／又は細胞の使用。
【請求項４０】
シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞、組織及び／又は前記組織由来の細胞、またはシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させるために産生された動物細胞、ヒトＤＮＡシトクロムＰ４５０または薬物代謝に関与する別のタンパク質をコードするＤＮＡを含むか発現させるために修飾した動物細胞を含む、トランスジェニック非ヒト動物。
【請求項４１】
シトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させたヒト細胞を含む動物。
【請求項４２】
ヒトＰ４５０が介在する代謝を調査するためにシトクロムＰ４５０レダクターゼ遺伝子を条件付きで欠失させた細胞を含む免疫欠乏性のトランスジェニック動物に導入されたヒト細胞の使用。
【請求項４３】
前記ヒト細胞が肝細胞である、請求項４２に記載の使用。
【請求項４４】
前記免疫欠乏性トランスジェニック動物が、シトクロムＰ４５０レダクターゼヌルマウスと交配したＳＣＩＤマウスである、請求項４２または４３に記載の使用。
【請求項４５】
内因性活性Ｐ４５０発現に欠陥がある単数または複数の動物細胞にヒトシトクロムＰ４５０レダクターゼを導入する方法であって、ヒトＰ４５０レダクターゼ単独またはＰ４５０レダクターゼ融合タンパク質として導入するステップを含み、前記導入されたＰ４５０レダクターゼが特異的Ｐ４５０と結合していることを特徴とする、方法。
【請求項４６】
前記ヒトシトクロムＰ４５０レダクターゼが、ＣＹＰ３Ａ４またはＣＹＰ２Ｄ４のいずれかと融合している、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記Ｐ４５０発現を駆動するためのターゲティング配列をさらに含む、請求項４５または４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ターゲティング配列が、組織特異的プロモーター、Ｐ４５０プロモーター、または転写因子プロモーターである、請求項４７に記載の方法。