【手続補正書】
【提出日】平成18年10月24日(2006.10.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  式：
（Ｘ１）ａ−Ｆ１−（Ｘ２）ｂ
［式中、Ｆ１はＦｃドメインであり、
Ｘ１及びＸ２は、各々独立に−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１、−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２、−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２−（Ｌ３）ｅ−Ｐ３、及び−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２−（Ｌ３）ｅ−Ｐ３−（Ｌ４）ｆ−Ｐ４から選択され、
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３及びＰ４は各々独立にランダム化されたＩＬ−１拮抗物質ペプチドの配列であり、
Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々独立にリンカーであり、そして
ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ及びｆは、ａとｂの少なくとも一方が１であることを条件として、各々独立に０又は１であり、ペプチドは２〜４０アミノ酸の分子を指し、Ｘ１もＸ２も天然タンパク質ではない］
の物質及びその多量体の組成物。
【請求項２】  式：
Ｘ１−Ｆ１
又は
Ｆ１−Ｘ２
の請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項３】  式：
Ｆ１−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１
の請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項４】  式：
Ｆ１−（Ｌ１）ｃ−Ｐ１−（Ｌ２）ｄ−Ｐ２
の請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項５】  Ｆ１がＩｇＧ  Ｆｃドメインである、請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項６】  Ｆ１がＩｇＧ１  Ｆｃドメインである、請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項７】  Ｆ１が配列番号２の配列を含む、請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項８】  ＩＬ−１拮抗物質ペプチド配列が配列番号２１３から２７１、６７１から９０６、９１１から９１６、及び９１８から１０２３までから選択される、請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項９】  ＩＬ−１拮抗物質ペプチド配列が表４から選択される、請求項１に記載の物質の組成物。
【請求項１０】  ｃが１である、請求項１に記載の物質の組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４５】
図２３Ａ及び２３Ｂは、下記の実施例６で述べるＦｃ−ＶＥＧＦ拮抗物質融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６３及び１０６４）を示す。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】
図１は、本発明の例示的方法の概要図を示す。この好ましい方法では、ビヒクルはＦｃドメインであり、それがＦｃドメインとペプチドの両方をコードするＤＮＡ構築物からの発現によってペプチドに共有結合する。図１に示すように、Ｆｃドメインはこの方法において自発的に二量体を形成する。
【図２Ａ】
ＩｇＧ１抗体から誘導しうる例示的Ｆｃ二量体を示す。図中の「Ｆｃ」は、ここでの「Ｆｃドメイン」の意味するものの範囲内の何らかのＦｃ変異体を表わす。「Ｘ１」及び「Ｘ２」は、下記で定義されるようなペプチド又はリンカー−ペプチドの組合せを表わす。特定の二量体は次のとおりである：
一重ジスルフィド結合二量体。ＩｇＧ１抗体は、典型的には定常領域と可変領域の間のちょうつがい部位に２個のジスルフィド結合を持つ。図２Ａと２ＤにおけるＦｃドメインは、２個のジスルフィド結合部位間の切断によって、若しくは非反応性残基（例えばアラニル）によるシステイニル残基の置換によって形成されうる。Ｆｃドメインはペプチドのアミノ末端で結合している。
【図２Ｂ】
ＩｇＧ１抗体から誘導しうる例示的Ｆｃ二量体を示す。図中の「Ｆｃ」は、ここでの「Ｆｃドメイン」の意味するものの範囲内の何らかのＦｃ変異体を表わす。「Ｘ１」及び「Ｘ２」は、下記で定義されるようなペプチド又はリンカー−ペプチドの組合せを表わす。特定の二量体は次のとおりである：
二重ジスルフィド結合二量体。このＦｃドメインは、Ｆｃドメイン鎖中の両方のシステイニル残基を保持するように親抗体を切断することによって、若しくはそのようなＦｃドメインをコードする配列を含む構築物からの発現によって形成されうる。Ｆｃドメインはペプチドのアミノ末端で結合している。
【図２Ｃ】
ＩｇＧ１抗体から誘導しうる例示的Ｆｃ二量体を示す。図中の「Ｆｃ」は、ここでの「Ｆｃドメイン」の意味するものの範囲内の何らかのＦｃ変異体を表わす。「Ｘ１」及び「Ｘ２」は、下記で定義されるようなペプチド又はリンカー−ペプチドの組合せを表わす。特定の二量体は次のとおりである：
非共有結合二量体。このＦｃドメインは、切断又は置換によるシステイニル残基の除去によって形成されうる。当該システイニル残基と宿主細胞中に存在する他のタンパク質のシステイニル残基の反応によって不純物が形成されるのを避けるため、システイニル残基を除去することが所望される場合がある。Ｆｃドメインの非共有結合は二量体を結びつけるのに十分である。異なる種類の抗体（例えばＩｇＧ２、ＩｇＭ）から誘導したＦｃドメインを使用することにより、他の二量体を形成することができる。
【図２Ｄ】
ＩｇＧ１抗体から誘導しうる例示的Ｆｃ二量体を示す。図中の「Ｆｃ」は、ここでの「Ｆｃドメイン」の意味するものの範囲内の何らかのＦｃ変異体を表わす。「Ｘ１」及び「Ｘ２」は、下記で定義されるようなペプチド又はリンカー−ペプチドの組合せを表わす。特定の二量体は次のとおりである：
一重ジスルフィド結合二量体。ＩｇＧ１抗体は、典型的には定常領域と可変領域の間のちょうつがい部位に２個のジスルフィド結合を持つ。図２Ａと２ＤにおけるＦｃドメインは、２個のジスルフィド結合部位間の切断によって、若しくは非反応性残基（例えばアラニル）によるシステイニル残基の置換によって形成されうる。Ｆｃドメインはカルボキシル末端で結合している。
【図２Ｅ】
ＩｇＧ１抗体から誘導しうる例示的Ｆｃ二量体を示す。図中の「Ｆｃ」は、ここでの「Ｆｃドメイン」の意味するものの範囲内の何らかのＦｃ変異体を表わす。「Ｘ１」及び「Ｘ２」は、下記で定義されるようなペプチド又はリンカー−ペプチドの組合せを表わす。特定の二量体は次のとおりである：
二重ジスルフィド結合二量体。このＦｃドメインは、Ｆｃドメイン鎖中の両方のシステイニル残基を保持するように親抗体を切断することによって、若しくはそのようなＦｃドメインをコードする配列を含む構築物からの発現によって形成されうる。Ｆｃドメインはカルボキシル末端で結合している。
【図２Ｆ】
ＩｇＧ１抗体から誘導しうる例示的Ｆｃ二量体を示す。図中の「Ｆｃ」は、ここでの「Ｆｃドメイン」の意味するものの範囲内の何らかのＦｃ変異体を表わす。「Ｘ１」及び「Ｘ２」は、下記で定義されるようなペプチド又はリンカー−ペプチドの組合せを表わす。特定の二量体は次のとおりである：
非共有結合二量体。このＦｃドメインは、切断又は置換によるシステイニル残基の除去によって形成されうる。当該システイニル残基と宿主細胞中に存在する他のタンパク質のシステイニル残基の反応によって不純物が形成されるのを避けるため、システイニル残基を除去することが所望される場合がある。Ｆｃドメインの非共有結合は二量体を結びつけるのに十分である。異なる種類の抗体（例えばＩｇＧ２、ＩｇＭ）から誘導したＦｃドメインを使用することにより、他の二量体を形成することができる。
【図３Ａ】
薬理学的に活性なペプチドのタンデムリピートを特徴とする、本発明の好ましい化合物の構造を示す。本図面は、一本鎖の分子を示し、またかかる分子に関するＤＮＡ構築物も表わしうる。
【図３Ｂ】
薬理学的に活性なペプチドのタンデムリピートを特徴とする、本発明の好ましい化合物の構造を示す。本図面は、リンカー−ペプチド部分が二量体の１本の鎖にだけ存在する二量体を示す。
【図３Ｃ】
薬理学的に活性なペプチドのタンデムリピートを特徴とする、本発明の好ましい化合物の構造を示す。本図面は、両方の鎖上にペプチド部分を持つ二量体を示す。本図面の二量体は、図３Ａに示す一本鎖をコードするＤＮＡ構築物の発現の際に一部の宿主細胞において自発的に形成される。他の宿主細胞では、細胞を二量体の形成を促進する条件下に置くか、若しくは二量体をインビトロで形成することができる。
【図４】
図４は、本発明において使用しうるヒトＩｇＧ１  Ｆｃの例示的核酸及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号１及び２）を示す。
【図５】
図５は、ＰＥＧ化ペプチド１９（配列番号３）の製造のための合成概要図を示す。
【図６】
図６は、ＰＥＧ化ペプチド２０（配列番号４）の製造のための合成概要図を示す。
【図７】
図７は、下記の実施例２において「Ｆｃ−ＴＭＰ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号５及び６）を示す。
【図８】
図８は、下記の実施例２において「Ｆｃ−ＴＭＰ−ＴＭＰ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号７及び８）を示す。
【図９】
図９は、下記の実施例２において「ＴＭＰ−ＴＭＰ−Ｆｃ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号９及び１０）を示す。
【図１０】
図１０は、下記の実施例２において「ＴＭＰ−Ｆｃ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号１１及び１２）を示す。
【図１１】
図１１は、次のように定義される条件下で、種々の化合物の１００μｇ／ｋｇの単回ボーラス注射によって処置した正常雌性ＢＤＦ１マウスにおいてインビボで生成される血小板数を示す。
ＰＥＧ−ＭＧＤＦ：大腸菌において発現される（従ってグリコシル化されていない）、還元的アミノ化によって天然ヒトＴＰＯのアミノ酸１−１６３のＮ末端アミノ基に連結した平均分子量２０ｋＤのＰＥＧ、
ＴＭＰ：アミノ酸配列、ＩＥＧＰＴＬＲＱＷＬＡＡＲＡ（配列番号１３）を持つＴＰＯ擬似ペプチド、
ＴＭＰ−ＴＭＰ：アミノ酸配列、ＩＥＧＰＴＬＲＱＷＬＡＡＲＡ−ＧＧＧＧＧＧＧＧ−ＩＥＧＰＴＬＲＱＷＬＡＡＲＡ（配列番号１４）を持つＴＰＯ擬似ペプチド、
ＰＥＧ−ＴＭＰ−ＴＭＰ：ＰＥＧ基が図６に示すような平均分子量５ｋＤのＰＥＧである、配列番号１４のペプチド、
Ｆｃ−ＴＭＰ−ＴＭＰ：同一の第二モノマーで二量体化された（すなわち、図２に示すように、Ｃｙｓ残基７と１０が第二モノマー中の対応するＣｙｓ残基に結合して二量体を形成する）配列番号８（図８）の化合物、そして
ＴＭＰ−ＴＭＰ−Ｆｃは、ＦｃドメインがＴＭＰ−ＴＭＰペプチドのＮ末端ではなくＣ末端で結合していることを除いて、ＴＭＰ−ＴＭＰ−Ｆｃと同じように二量体化された配列番号１０（図９）の化合物である。
【図１２】
図１２は、移植した浸透圧ポンプを通して送達される種々の化合物で７日間にわたって処置した正常ＢＤＦ１マウスにおいて、インビボで生成された血小板の数を示す。化合物は図７について定義されたとおりである。
【図１３】
図１３は、下記の実施例３において「Ｆｃ−ＥＭＰ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号１５及び１６）を示す。
【図１４】
図１４は、下記の実施例３において「ＥＭＰ−Ｆｃ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号１７及び１８）を示す。
【図１５】
図１５は、下記の実施例３において「ＥＭＰ−ＥＭＰ−Ｆｃ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号１９及び２０）を示す。
【図１６】
図１６は、下記の実施例３において「Ｆｃ−ＥＭＰ−ＥＭＰ」として同定される分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（それぞれ配列番号２１及び２２）を示す。
【図１７Ａ】
発現プラスミドｐＡＭＧ２１（ＡＴＣＣアクセス番号９８１１３）を形成するためにユニークＡａｔＩＩ（ｐＣＦＭ１６５６中４３６４位）とＳａｃＩＩ（ｐＣＦＭ１６５６中４５８５位）制限部位の間に挿入されるＤＮＡ配列（配列番号２３）を示す。
【図１７Ｂ】
発現プラスミドｐＡＭＧ２１（ＡＴＣＣアクセス番号９８１１３）を形成するためにユニークＡａｔＩＩ（ｐＣＦＭ１６５６中４３６４位）とＳａｃＩＩ（ｐＣＦＭ１６５６中４５８５位）制限部位の間に挿入されるＤＮＡ配列（配列番号２３）を示す。
【図１８Ａ−１】
種々の化合物の１００μｇ／ｋｇの単回ボーラス注射によって処置した正常雌性ＢＤＦ１マウスにおいてインビボで生成されるヘモグロビンを示す。
【図１８Ａ−２】
種々の化合物の１００μｇ／ｋｇの単回ボーラス注射によって処置した正常雌性ＢＤＦ１マウスにおいてインビボで生成される赤血球を示す。
【図１８Ａ−３】
種々の化合物の１００μｇ／ｋｇの単回ボーラス注射によって処置した正常雌性ＢＤＦ１マウスにおいてインビボで生成されるヘマトクリットを示す。
【図１８Ｂ−１】
図１８Ｂは、ＥＭＰに関しては１００μｇ／ｋｇ、ｒｈＥＰＯに関しては３０Ｕ／マウスで送達される微小浸透圧ポンプにより７日間にわたって１００μｇ／ｋｇ／日で処置したマウスについてのヘモグロビンを示す。
【図１８Ｂ−２】
図１８Ｂは、ＥＭＰに関しては１００μｇ／ｋｇ、ｒｈＥＰＯに関しては３０Ｕ／マウスで送達される微小浸透圧ポンプにより７日間にわたって１００μｇ／ｋｇ／日で処置したマウスについての赤血球を示す。
【図１８Ｂ−３】
図１８Ｂは、ＥＭＰに関しては１００μｇ／ｋｇ、ｒｈＥＰＯに関しては３０Ｕ／マウスで送達される微小浸透圧ポンプにより７日間にわたって１００μｇ／ｋｇ／日で処置したマウスについてのヘマトクリットを示す。
【図１９Ａ】
下記の実施例４で述べるＦｃ−ＴＮＦ−α阻害因子融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０５５及び１０５６）を示す。
【図１９Ｂ】
下記の実施例４で述べるＦｃ−ＴＮＦ−α阻害因子融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０５５及び１０５６）を示す。
【図２０Ａ】
下記の実施例４で述べるＴＮＦ−α阻害因子−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０５７及び１０５８）を示す。
【図２０Ｂ】
下記の実施例４で述べるＴＮＦ−α阻害因子−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０５７及び１０５８）を示す。
【図２１Ａ】
下記の実施例５で述べるＦｃ−ＩＬ−１拮抗物質融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０５９及び１０６０）を示す。
【図２１Ｂ】
下記の実施例５で述べるＦｃ−ＩＬ−１拮抗物質融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０５９及び１０６０）を示す。
【図２２Ａ】
下記の実施例５で述べるＩＬ−１拮抗物質−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６１及び１０６２）を示す。
【図２２Ｂ】
下記の実施例５で述べるＩＬ−１拮抗物質−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６１及び１０６２）を示す。
【図２３Ａ】
下記の実施例６で述べるＦｃ−ＶＥＧＦ拮抗物質融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６３及び１０６４）を示す。
【図２３Ｂ】
下記の実施例６で述べるＦｃ−ＶＥＧＦ拮抗物質融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６３及び１０６４）を示す。
【図２４Ａ】
下記の実施例６で述べるＶＥＧＦ拮抗物質−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６５及び１０６６）を示す。
【図２４Ｂ】
下記の実施例６で述べるＶＥＧＦ拮抗物質−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６５及び１０６６）を示す。
【図２５Ａ】
下記の実施例７で述べるＦｃ−ＭＭＰ阻害因子融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６７及び１０６８）を示す。
【図２５Ｂ】
下記の実施例７で述べるＦｃ−ＭＭＰ阻害因子融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６７及び１０６８）を示す。
【図２６Ａ】
下記の実施例７で述べるＭＭＰ阻害因子−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６９及び１０７０）を示す。
【図２６Ｂ】
下記の実施例７で述べるＭＭＰ阻害因子−Ｆｃ融合分子のヌクレオチド及びアミノ酸配列（配列番号１０６９及び１０７０）を示す。
【手続補正４】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１８Ａ−１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１８Ａ−１】
2003512011.tif 000001
【手続補正５】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１８Ａ−２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１８Ａ−２】
2003512011.tif 000002
【手続補正６】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１８Ａ−３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１８Ａ−３】
2003512011.tif 000003
【手続補正７】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１８Ｂ−１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１８Ｂ−１】
2003512011.tif 000004
【手続補正８】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１８Ｂ−２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１８Ｂ−２】
2003512011.tif 000005
【手続補正９】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図１８Ｂ−３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１８Ｂ−３】
2003512011.tif 000006