【誤訳訂正書】
【提出日】平成17年11月21日(2005.11.21)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本発明は上皮細胞の分離方法および細胞の前条件付けの方法に関する。より詳細には皮膚組織または内臓組織をトリプシン／EDTA処理し、かつ同時に磁気撹拌する上皮細胞の分離方法、および生体(body)から分離された皮膚細胞の培養時に物理的な刺激を与えるインビトロでの細胞前条件付けの方法に関する。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
幹細胞は、皮膚表皮層以外にも全ての上皮細胞に存在する。角膜の幹細胞は、角膜縁の基底層に存在することが知られている。ヒトの内臓組織のうち食道と膣の場合にも、幹細胞は基底層に存在すると知られている。胃、小腸、大腸のように腺状構造を形成する粘膜上皮細胞は単一細胞層のように形成され、幹細胞は腺状構造の最も深い所に位置している。すなわち、全ての上皮組織の幹細胞は腺状構造の深部および露出されない「肝細胞ニッチ(niche)」と呼ばれる部分に存在する。したがって、幹細胞は他の細胞に比べて分離が容易ではないと予想される。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００５】
皮膚組織または内臓は、火傷、外傷、または潰瘍などによって部分的に損傷されうる。この場合に創傷組織の治癒のために、または成形外科のために、患者または他人の皮膚組織または内臓から上皮細胞（ケラチノサイト）を分離・培養して、これを損傷した皮膚または内臓に移植する方法が広く使われている。このために上皮細胞を効果的に分離する技術が要求される。さらに、培養環境中の細胞増殖率を高めるためおよび移植の成功を確実にするために、分離された細胞のうち幹細胞の比率が高くなければならない。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
本発明の4番目の目的は、前記方法で分離された上皮細胞、前記方法で前条件付けされた細胞またはその細胞を利用して調製されたバイオ人工真皮またはバイオ人工皮膚を火傷、外傷、または潰瘍によって損傷した皮膚または内臓に移植することによって損傷した皮膚組織または内臓組織を効果的に治療する方法を提供することである。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２２】
第1の目的を達成するために、本発明は皮膚組織または内臓組織をトリプシン／EDTA処理する際に同時に磁気撹拌する上皮細胞の分離方法を提供する。本発明の方法は、従来の「グリーン法」を変形したものであって、強い磁気的撹拌による物理的な力を加えながら、トリプシン／EDTA処理による酵素作用によって得られた単一細胞懸濁液を獲得する。皮膚組織または内臓は任意の動物の皮膚または組織から得られるものであってよい。皮膚組織は包皮、脇のした (axilla)、股関節(hip)、乳房、頭皮、角膜、陰毛(pubes)、または育児嚢(marsupium)から得ることが好ましく、内臓組織は口腔粘膜、食道粘膜、胃粘膜、腸粘膜、鼻腔粘膜、咽喉(gorge)、気管、腎臓、尿道、子宮粘膜、膀胱、または膣から得ることが好ましい。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３５】
また、4番目の目的は、本発明は本発明の細胞分離方法で分離された上皮細胞を単独もしくは真皮繊維芽細胞と共に動物の損傷した皮膚組織または内臓組織に移植して損傷した皮膚または内臓を治療する方法によって達成される。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
本発明の4番目の目的はさらに本発明の細胞分離方法で分離された上皮細胞および／または繊維芽細胞を人工真皮構築物に接種して作られたバイオ人工皮膚またはバイオ人工真皮を動物の損傷した皮膚組織または内臓組織に移植して損傷した皮膚または内臓を治療する方法を提供する。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
本発明において、損傷した皮膚組織は火傷、外傷、または潰瘍による皮膚損傷部位だけでなく、皮膚成形外科手術、組織伸張(tissue augmentation)および組織増強(tissue expansion)のための部位も含む。また、前記内臓組織は口腔粘膜、食道粘膜、胃粘膜、腸粘膜、鼻腔粘膜、咽喉、気管、腎臓、尿道、子宮粘膜、膀胱、または膣を含む。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５５】
本発明の4番目の目的を達成するために、前記の方法で調製されたバイオ人工真皮またはバイオ人工皮膚を移植して損傷した組織を治療する方法も提供する。または前記の細胞前条件付けの方法で前条件付けされたケラチノサイト、繊維芽細胞、またはVECを損傷した皮膚組織または内臓組織の移植部位に直接接種して損傷した組織を治療する方法を提供する。バイオ人工真皮、バイオ人工皮膚を移植する方法や、ケラチノサイト、繊維芽細胞、またはVECを接種する方法は、当業者に周知である。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】  皮膚組織または内臓組織をトリプシン処理またはトリプシン／EDTA処理すると同時に60rpm〜700rpmの速度で磁気撹拌する上皮細胞の分離方法。
【請求項2】  皮膚組織を、包皮、脇のした、股関節、乳房、頭皮、角膜、陰毛、腹部、育児嚢から得る、請求項1記載の方法。
【請求項3】  内臓組織を、口腔粘膜、食道粘膜、胃粘膜、腸粘膜、鼻腔粘膜、咽喉、腎臓、尿道、子宮粘膜、膀胱、または膣から得る、請求項1記載の方法。
【請求項4】  皮膚組織または内臓組織をトリプシン処理する場合は、トリプシン0.025％〜0.25％の量で添加し、皮膚組織または内臓組織をトリプシン／EDTA処理する場合は、トリプシン0.025〜0.25％およびEDTA0.005％〜0.02％の量で添加する、請求項1記載の方法。
【請求項5】  磁気撹拌は、10分間〜4時間撹拌する、請求項1記載の方法。
【請求項6】  請求項1〜5のいずれか一項記載の方法で分離された上皮細胞を単独または繊維芽細胞と共に、人工真皮構築物または脱表皮真皮（DED）に接種することによってバイオ人工皮膚を調製する方法。
【請求項7】  人工真皮構築物または脱表皮真皮（DED）に繊維芽細胞を接種して調製されたバイオ人工真皮に上皮細胞を接種する、請求項6記載の方法。
【請求項8】  上皮細胞をメラニン細胞を共に接種する請求項6または7記載の方法。
【請求項9】  上皮細胞を毛嚢細胞または真皮鞘を共に接種する請求項6または7記載の方法。
【請求項10】  上皮細胞を血管内皮細胞を共に接種する請求項6または7記載の方法。
【請求項11】  単独または繊維芽細胞と共に損傷した皮膚組織または内臓組織に移植して損傷した皮膚または内臓を治療するための、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法で分離された上皮細胞。
【請求項12】  損傷した皮膚組織または内臓組織に移植して損傷した皮膚または内臓を治療するための、請求項6〜10のいずれか一項記載の方法で調製されたバイオ人工皮膚。
【請求項13】  皮膚組織は、火傷、外傷、もしく潰瘍による皮膚損傷部位、または皮膚成形外科手術、組織伸張および組織増強もしくは角膜移植を必要とする皮膚部位である、請求項11記載の上皮細胞。
【請求項14】  内臓組織は、癌治療、または他の目的のために切開または放射性治療が行われた後に回復または再生を必要とする損傷した組織部位である、請求項11記載の上皮細胞。
【請求項15】  皮膚組織は、火傷、外傷、もしく潰瘍による皮膚損傷部位、または皮膚成形外科手術、組織伸張および組織増強もしくは角膜移植を必要とする皮膚部位である、請求項12記載のバイオ人工皮膚。
【請求項16】  内臓組織は、癌治療、または他の目的のために切開または放射性治療が行われた後に回復または再生を必要とする損傷した組織部位である、請求項12記載のバイオ人工皮膚。