【手続補正書】
【提出日】平成17年7月5日(2005.7.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
イオンチャネル機能不全に関連する障害に対して素因がある被験体を同定する方法であって、前記被験体におけるイオンチャネルサブユニットをコードする遺伝子の少なくとも１つが、変異事象を被り、その結果、前記被験体由来のｃＤＮＡが、配列番号１〜１３４のうちの１つに示される配列を有するか否かを確認する工程を包含する方法。
【請求項２】
配列番号１〜１３４に示されるヌクレオチド配列のいずれか１つを含む単離された核酸分子。
【請求項３】
配列番号１〜１３４に示されるヌクレオチド配列のいずれか１つからなる単離された核酸分子。
【請求項４】
配列番号１３５〜１７３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項５】
配列番号１３５〜１７３のいずれか１つに示されるアミノ酸配列からなる単離されたポリペプチド。
【請求項６】
請求項４または５に規定されるポリペプチドを含むイオンチャネルサブユニットを含有する組み立てられた哺乳動物のイオンチャネルである単離されたポリペプチド複合体。
【請求項７】
請求項２または３に規定される核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項８】
請求項７に規定される少なくとも一つの発現ベクターで形質転換された細胞。
【請求項９】
請求項４または５に記載の単離されたポリペプチドと、または請求項６に記載の単離されたポリペプチド複合体と免疫学的に反応性である抗体。
【請求項１０】
候補薬剤のスクリーニングのための請求項２または３記載の核酸分子の使用。
【請求項１１】
候補薬剤のスクリーニングのための請求項４または５に記載のポリペプチドまたは請求項６に記載のポリペプチド複合体の使用。
【請求項１２】
候補薬剤のスクリーニングのための請求項８に記載の細胞の使用。
【請求項１３】
請求項２または３に規定される単離された核酸分子を用いて形質転換された遺伝的に改変された非ヒト動物。
【請求項１４】
てんかんの診断のための請求項２または３に記載の単離された核酸分子の使用。
【請求項１５】
イオンチャネル機能不全に関連した障害（以下を包含するが、それに限定されない：高カリウム血症性周期性四肢麻痺、または低カリウム血症性周期性四肢麻痺、筋緊張症、悪性高熱症、筋無力症、心不整脈、突発性運動失調、片頭痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症（精神分裂病）、ビックリ病、不安、抑うつ、恐怖強迫性症候群、神経因性疼痛、炎症性疼痛、慢性疼痛／急性疼痛、バーター症候群、多発性嚢胞腎、デント病、乳幼児高インスリン血症性低血糖症、嚢胞性繊維症、先天性停在夜盲症、または全色盲）を診断するための請求項２または３に記載の単離された核酸分子の使用。
【請求項１６】
てんかんの診断のための請求項４または５に記載のポリペプチドまたは請求項６に記載のポリペプチド複合体の使用。
【請求項１７】
イオンチャネル機能不全に関連した障害（以下を包含するが、それに限定されない：高カリウム血症性周期性四肢麻痺、または低カリウム血症性周期性四肢麻痺、筋緊張症、悪性高熱症、筋無力症、心不整脈、突発性運動失調、片頭痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症（精神分裂病）、ビックリ病、不安、抑うつ、恐怖強迫性症候群、神経因性疼痛、炎症性疼痛、慢性疼痛／急性疼痛、バーター症候群、多発性嚢胞腎、デント病、乳幼児高インスリン血症性低血糖症、嚢胞性繊維症、先天性停在夜盲症、または全色盲）を診断するための請求項４または５に記載のポリペプチドまたは請求項６に記載のポリペプチド複合体の使用。
【請求項１８】
てんかんの診断のための請求項９に記載の抗体の使用。
【請求項１９】
イオンチャネル機能不全に関連した障害（以下を包含するが、それに限定されない：高カリウム血症性周期性四肢麻痺、または低カリウム血症性周期性四肢麻痺、筋緊張症、悪性高熱症、筋無力症、心不整脈、突発性運動失調、片頭痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症（精神分裂病）、ビックリ病、不安、抑うつ、恐怖強迫性症候群、神経因性疼痛、炎症性疼痛、慢性疼痛／急性疼痛、バーター症候群、多発性嚢胞腎、デント病、乳幼児高インスリン血症性低血糖症、嚢胞性繊維症、先天性停在夜盲症、または全色盲）を診断するための請求項９に記載の抗体の使用。
【請求項２０】
以下の工程を包含するてんかんの診断方法：
（１）被検体からＤＮＡを得る；そして
（２）前記被検体からのイオンチャネルの一以上のサブユニットのＤＮＡを対応する天然のサブユニットのＤＮＡと比較する；
ここで、請求項２または３に記載の一以上のＤＮＡ分子の特定はてんかんまたはそれに対する素因の徴候である。
【請求項２１】
以下の工程を包含するイオンチャネル機能不全に関連した障害（以下を包含するが、それに限定されない：高カリウム血症性周期性四肢麻痺、または低カリウム血症性周期性四肢麻痺、筋緊張症、悪性高熱症、筋無力症、心不整脈、突発性運動失調、片頭痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症（精神分裂病）、ビックリ病、不安、抑うつ、恐怖強迫性症候群、神経因性疼痛、炎症性疼痛、慢性疼痛／急性疼痛、バーター症候群、多発性嚢胞腎、デント病、乳幼児高インスリン血症性低血糖症、嚢胞性繊維症、先天性停在夜盲症、または全色盲）の診断方法：
（１）被検体からＤＮＡを得る；そして
（２）前記被検体からのイオンチャネルの一以上のサブユニットのＤＮＡを対応する天然のサブユニットのＤＮＡと比較する；
ここで、請求項２または３に記載の一以上のＤＮＡ分子の特定は前記障害またはそれに対する素因の徴候である。
【請求項２２】
哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプター（ｎＡｃｈＲ）の変異サブユニットをコードする単離された核酸分子であって、ここで点変異、欠失、挿入、および再配列からなる群より選択される変異事象が、てんかん表現型を生じるように、この哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプターのサブユニットのＭ２ドメインの外側のヌクレオチドにおいて生じた単離された核酸分子。
【請求項２３】
哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプター（ｎＡｃｈＲ）の変異サブユニットをコードする単離された核酸分子であって、ここで点変異、欠失、挿入、および再配列からなる群より選択される変異事象がイオンチャネル機能不全に関連した障害（以下を包含するが、それに限定されない：高カリウム血症性周期性四肢麻痺、または低カリウム血症性周期性四肢麻痺、筋緊張症、悪性高熱症、筋無力症、心不整脈、突発性運動失調、片頭痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症（精神分裂病）、ビックリ病、不安、抑うつ、恐怖強迫性症候群、神経因性疼痛、炎症性疼痛、慢性疼痛／急性疼痛、バーター症候群、多発性嚢胞腎、デント病、乳幼児高インスリン血症性低血糖症、嚢胞性繊維症、先天性停在夜盲症、または全色盲）を生じるように、この哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプターのサブユニットのＭ２ドメインの外側のヌクレオチドにおいて生じた単離された核酸分子。
【請求項２４】
哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプター（ｎＡｃｈＲ）の変異サブユニットである単離されたポリペプチドであって、ここで置換、欠失、挿入、および再配列からなる群より選択される変異事象が、てんかん表現型を生じるように、この哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプターのサブユニットのＭ２ドメインの外側のヌクレオチドにおいて生じた単離されたポリペプチド。
【請求項２５】
哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプター（ｎＡｃｈＲ）の変異サブユニットである単離されたポリペプチドであって、ここで置換、欠失、挿入、および再配列からなる群より選択される変異事象がイオンチャネル機能不全に関連した障害（以下を包含するが、それに限定されない：高カリウム血症性周期性四肢麻痺、または低カリウム血症性周期性四肢麻痺、筋緊張症、悪性高熱症、筋無力症、心不整脈、突発性運動失調、片頭痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、統合失調症（精神分裂病）、ビックリ病、不安、抑うつ、恐怖強迫性症候群、神経因性疼痛、炎症性疼痛、慢性疼痛／急性疼痛、バーター症候群、多発性嚢胞腎、デント病、乳幼児高インスリン血症性低血糖症、嚢胞性繊維症、先天性停在夜盲症、または全色盲）を生じるように、この哺乳動物のニコチン性アセチルコリンレセプターのサブユニットのＭ２ドメインの外側のヌクレオチドにおいて生じた単離されたポリペプチド。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
複雑な遺伝を有する障害における連鎖研究には、陰性の結果、および陽性の知見を再現できないことがつきまとっていた。複合性の障害の遺伝学において、現在の文献には、欲求不満の感覚が広がっている。注意深く実施された大規模な研究（多発性硬化症および糖尿病を含む障害の数百の兄弟姉妹対（ｓｉｂｐａｉｒ）を含む）は、本質的に陰性であった（Ｂｅｌｌ、およびＬａｔｈｒｏｐ，１９９６；Ｌｅｒｎｍａｒｋ、およびＯｔｔ，１９９８）。新しい観点は、このような障害が、効果の小さい多くの遺伝子の合計に起因するというもの、およびこれらの遺伝子の同定は、非常に大規模の関連研究でのみ可能であり得るというものである。ゲノム全体に基づくこのような研究は現在、マーカーセットが不完全であること、および計算上の限界に起因して、現在のところ不可能である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
製造業者の説明書に従ってＱＩＡａｍｐ  ＤＮＡ  Ｂｌｏｏｄ  Ｍａｘｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いるか、またはＷｙｍａｎおよびＷｈｉｔｅ（１９８０）に適合された手順によって、収集した血液からＤＮＡを抽出した。ストックしたＤＮＡサンプルは、１μｇ／μｌの濃度で保管した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１８０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１８０】
Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞発現
成熟した雌性Ｘｅｎｏｐｕｓから採取した卵母細胞を単離して、標準的な方法（Ｂｅｒｔｒａｎｄ，１９９１）に従って調製した。解離の翌日、卵母細胞の核に２ｎｇのｃＤＮＡ発現ベクターを注射した。ｃＤＮＡの混合物を等量注射した。汚染（混入）の機会を低下させるため、各々の卵母細胞を、９６ウェルマイクロタイタープレート（ＮＵＮＣ）の別々のウェルに１８℃で保持した。インキュベーション時間の間に、卵母細胞をＢＡＲＴＨ溶液に保持したが、この溶液には以下を含んだ：８８ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＫＣ１、２．４ｍＭ  ＮａＨＣＯ３、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．８２ｍＭ  ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ、０．３３ｍＭ  Ｃａ（ＮＯ３）２・４Ｈ２Ｏ、０．４１ｍＭ  ＣａＣ１２・６Ｈ２Ｏ、ｐＨ７．４（ＮａＯＨで調整）、および１００単位／ｍｌペニシリン。