【手続補正書】
【提出日】平成17年9月26日(2005.9.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
候補薬剤をその細胞成長誘導活性または細胞分化誘導活性について評価する方法であって、
（ａ）細胞接着抵抗性（ＣＡＲ）材料で被覆された支持体表面を形成し、それに少なくとも１種類の生物活性薬剤を結合させ、少なくとも１個の露出されたＣＡＲ材料領域と少なくとも１個の露出された生物活性薬剤領域とを生じさせる工程であって、前記ＣＡＲ材料、前記少なくとも１種類の生物活性薬剤または両者の組合せが候補薬剤である工程；
（ｂ）前記支持体表面に、細胞が前記各領域の各々と接触するように細胞を添加する工程；および
（ｃ）前記各領域の各々の上での細胞成長および／または分化を検出または測定する工程
を含み、領域上の細胞成長または分化の存在が、前記領域中に存在する前記候補誘導薬剤が成長誘導活性または分化誘導活性を有することの指標となることを特徴とする評価方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのＣＡＲ領域は、（ａ）ポリエチレングリコール、（ｂ）グライム、（ｃ）グライム誘導体、（ｄ）ポリ−ＨＥＭＡ、（ｅ）ポリイソプロピルアクリルアミド、（ｆ）ヒアルロン酸、（ｇ）アルギン酸および（ｈ）（ａ）〜（ｇ）の任意の組合せからなる群から選択されるＣＡＲ材料を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記少なくとも１つの生物活性領域は、細胞外マトリックス分子または成長因子である生物活性薬剤を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記生物活性薬剤は、ラミニン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、エラスチン、Ｉ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、ＶＩ型コラーゲン、エンタクチン、プロテオグリカン、またＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）からなる群から選択される細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記生物活性薬剤は細胞外マトリックス分子または他の細胞接着分子の接着ドメインであることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記検出または測定する工程は前記細胞への抗体の結合を視覚化することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１つのＣＡＲ領域は組織培養処理した表面に結合されたＣＡＲ材料を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１つのＣＡＲ材料は、前記表面へ直接結合された中間層を介して表面へ結合されることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記中間層は、ポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリ−Ｄ−リジン、ポリ−Ｌ−オルニチン、ポリ−Ｄ−オルニチン、ポリ（ビニルアミン）またはポリ（アリルアミン）を含むことを特徴とする請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記生物活性薬剤を添加するのに先立って前記ＣＡＲ材料を穏やかな酸化剤で酸化することを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
前記酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムであることを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記生物活性領域は成長因子を含むことを特徴とする請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの生物活性領域は複数のスポットの形態であり、各スポットがその上に堆積された少なくとも１つのタイプの生物活性分子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記少なくとも１つの生物活性領域は複数のスポットの形態であり、各スポットが異なる濃度の、１つのタイプの生物活性分子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記少なくとも１つの生物活性領域は前記表面上のグリッドパターン状のスポットの形態であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記複数のスポットは前記表面上のグリッドパターン中にあることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
前記複数のスポットは前記表面上のグリッドパターン中にあることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
前記生物活性分子は細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
前記生物活性分子は細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
前記少なくとも１つの生物活性領域は複数のウェルの形態であり、各ウェルがその上に堆積された少なくとも１つのタイプの生物活性分子を含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
前記生物活性分子は細胞外のマトリックス分子であることを特徴とする請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記細胞は幹細胞であることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
前記幹細胞は多能性幹細胞であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記幹細胞は始原幹細胞であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記幹細胞は胚性幹細胞であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記幹細胞は造血幹細胞であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記幹細胞は骨髄由来幹細胞であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記幹細胞は骨形成幹細胞であることを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項２９】
前記幹細胞は神経始原細胞に分化することを特徴とする請求項２２に記載の方法。
【請求項３０】
（ａ）１または複数の細胞接着抵抗性（ＣＡＲ）薬剤および神経始原細胞への幹細胞分化を誘導する１または複数の生物活性薬剤で被覆された表面を有する培養容器中で幹細胞を接触させる工程；および
（ｂ）前記幹細胞を、これらが神経始原細胞に分化することが可能になるのに十分な時間の間、培養する工程
を含むことを特徴とする神経始原細胞への幹細胞の分化を誘導または促進する方法。
【請求項３１】
（ｃ）前記分化を検出する工程をさらに含むことを特徴とする請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記生物活性薬剤は細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記生物活性薬剤はポリカチオン性ポリアミノ酸および細胞外マトリックス分子の組合せであることを特徴とする請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記組合せは（ａ）ポリ−オルニチンとラミニン；（ｂ）ポリ−オルニチンとフィブロネクチン；（ｃ）ポリ−オルニチンとＶＩ型コラーゲン；（ｄ）ポリ−オルニチンとビトロネクチン；（ｅ）ポリ−リジンとＶＩ型コラーゲン；（ｆ）ポリ−リジンとビトロネクチン；および（ｇ）ポリ−オルニチンとポリ−リジンからなる群から選択されることを特徴とする請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
（ａ）表面を有する培養容器中で、幹細胞を異なる生物活性薬剤または異なる濃度の生物活性薬剤の並置領域の組み合わせと接触させる工程であって、この組み合わせが神経始原細胞への幹細胞分化を誘導することができる工程；および
（ｂ）前記細胞を、これらが神経始原細胞に分化することが可能になるのに十分な時間の間、培養する工程
を含むことを特徴とする神経始原細胞への幹細胞の分化を誘導または促進する方法。
【請求項３６】
（ｃ）前記分化を検出する工程をさらに含むことを特徴とする請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記生物活性薬剤は細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
（ａ）請求項３０に従って幹細胞の神経始原細胞への分化を誘導または促進して前記神経始原細胞を産生する工程；
（ｂ）必要に応じて、前記分化を検出する工程；および
（ｃ）前記神経始原細胞を富化または単離する工程
を含むことを特徴とする幹細胞から神経始原細胞の単離または富化された集団を産生する方法。
【請求項３９】
前記生物活性薬剤は細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項２８に記載の方法。
【請求項４０】
（ａ）請求項３５に従って幹細胞の神経始原細胞への分化を誘導または促進して前記神経始原細胞を産生する工程；
（ｂ）必要に応じて、前記分化を検出する工程；および
（ｃ）前記神経始原細胞を富化または単離する工程
を含むことを特徴とする神経始原細胞の単離または富化された集団を産生する方法。
【請求項４１】
前記生物活性薬剤は細胞外マトリックス分子であることを特徴とする請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
ＣＡＲ材料は（ａ）ポリエチレングリコール、（ｂ）グライム、（ｃ）、グライム誘導体、（ｄ）ポリ−ＨＥＭＡ、（ｅ）ポリイソプロピルアクリルアミド、（ｆ）ヒアルロン酸、（ｇ）アルギン酸および（ｈ）（ａ）〜（ｇ）の任意の組合せからなる群から選択されることを特徴とする請求項３０、３５、３８または４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４３】
前記ＣＡＲ材料はヒアルロン酸であることを特徴とする請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記ＣＡＲ材料は前記表面に結合された中間層に結合されることを特徴とする請求項３０、３５、３８または４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
前記中間層はポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリ−Ｄリジン、ポリ（ビニルアミン）およびポリ（アリルアミン）からなる群から選択されることを特徴とする請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記幹細胞は骨髄幹細胞であることを特徴とする請求項３０、３５、３８または４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４７】
前記幹細胞は多能性幹細胞であることを特徴とする請求項３０、３５、３８または４０のいずれかに記載の方法。
【請求項４８】
前記検出工程は、神経始原細胞へ分化した細胞中またはその細胞上のネスチンを検出または測定する工程を含むことを特徴とする請求項３１または３６に記載の方法。
【請求項４９】
ネスチンはネスチンに対して特異的な抗体を使用して検出または測定されることを特徴とする請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
候補薬剤をその細胞成長誘導活性または細胞分化誘導活性について評価するのに有用な物品であって、
（ａ）少なくとも１種類の生物活性薬剤を結合しているＣＡＲ材料で被覆された支持体表面を含み、これにより、得られた表面が少なくとも１個の露出されたＣＡＰ材料領域および少なくとも１個の露出された生物活性領域とを含み、ここで、ＣＡＲ材料、少なくとも１種類の生物活性薬剤または両者の組合せが候補薬剤である物品。
【請求項５１】
前記少なくとも１種のＣＡＲ材料は（ａ）ポリエチレングリコール、（ｂ）グライム、（ｃ）グライム誘導体、（ｄ）ポリ−ＨＥＭＡ、（ｅ）ポリイソプロピルアクリルアミド、（ｆ）ヒアルロン酸、（ｇ）アルギン酸および（ｈ）（ａ）〜（ｇ）の任意の組合せからなる群から選択されることを特徴とする請求項５０に記載の物品。
【請求項５２】
前記少なくとも１個のＣＡＲ領域は前記ＣＡＲ材料が結合された組織培養処理表面を含むことを特徴とする請求項５０に記載の物品。
【請求項５３】
前記少なくとも１つの生物活性領域は細胞外マトリックス分子または成長因子である生物活性薬剤を含むことを特徴とする請求項５０に記載の物品。
【請求項５４】
前記少なくとも１つの生物活性領域は、ラミニン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、エラスチン、Ｉ型コラーゲン、ＩＩＩ型コラーゲン、ＩＶ型コラーゲン、ＶＩ型コラーゲン、エンタクチン、プロテオグリカン、またはＭａｔｒｉｇｅｌ（商標）からなる群から選択される細胞外マトリックス分子を含むことを特徴とする請求項５２に記載の物品。
【請求項５５】
前記少なくとも１つのＣＡＲ領域は前記表面へ直接結合された中間層を介して表面に結合されることを特徴とする請求項５０に記載の物品。
【請求項５６】
前記中間層はポリエチレンイミン、ポリ−Ｌ−リジン、ポリ−Ｄリジン、ポリ（ビニルアミン）またはポリ（アリルアミン）を含むことを特徴とする請求項５５に記載の物品。
【請求項５７】
前記生物活性領域は、骨形態形成タンパク質、表皮成長因子、エリスロポエチン、ヘパリン結合因子、肝細胞成長因子、インシュリン、インシュリン様成長因子ＩまたはＩＩ、インターロイキン、筋肉形態形成タンパク質、神経成長因子、血小板由来成長因子およびトランスフォーミング増殖因子αまたはβからなる群から選択される成長因子を含むことを特徴とする請求項５３に記載の物品。
【請求項５８】
前記少なくとも１つの生物活性領域は複数のスポットの形態であり、各スポットがその上に堆積された少なくとも１種類の生物活性分子を含むことを特徴とする請求項５０に記載の物品。
【請求項５９】
前記少なくとも１つの生物活性領域は複数のスポットの形態であり、各スポットは１種類の生物活性分子を異なる濃度で含むことを特徴とする請求項５０に記載の物品。
【請求項６０】
前記複数のスポットは、前記表面上のグリッドパターンとして配列されていることを特徴とする請求項５８または５９に記載の物品。