【手続補正書】
【提出日】平成18年11月10日(2006.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンパ様組織特異的細胞をインビトロで生成する方法であって：
ある量の造血前駆細胞およびある量のリンパ網内性基質細胞を、造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞がマトリックス全体に成長するのに十分な孔の大きさの相互接続した孔を有する多孔質固体マトリックス中に導入すること、ここでリンパ網内性基質細胞の量は、造血前駆細胞の成長および分化を支持するのに十分である、及び
造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞を同時培養すること
を含む、前記方法。
【請求項２】
同時培養が、少なくとも、
（ａ）リンパ様組織起源細胞の数の１０倍の増加、
（ｂ）リンパ様組織起源細胞の数の２０倍の増加、
（ｃ）リンパ様組織起源細胞の数の５０倍の増加、
（ｄ）リンパ様組織起源細胞の数の１００倍の増加、
（ｅ）リンパ様組織起源細胞の数の２００倍の増加、または、
（ｆ）リンパ様組織起源細胞の数の４００倍の増加
を得るのに十分な条件下で行われる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
造血前駆細胞が、
（ａ）多能性幹細胞、多能性前駆細胞および特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞から成る群から選択される、または、
（ｂ）骨髄、末梢血、臍帯血、胎盤血、リンパ様柔軟組織、胎児肝臓、胚細胞および大動脈−生殖腺−中腎由来細胞から成る群から選択された組織に由来する、
請求項１記載の方法。
【請求項４】
（ａ）特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞が、Ｔ細胞リネージ、Ｂ細胞リネージ、樹状細胞リネージ、ランゲルハンス細胞リネージおよびリンパ様組織特異的マクロファージ細胞リネージから成る群から選択されたリネージに方向づけられる、
（ｂ）リンパ様柔軟組織が、胸腺、脾臓、肝臓、リンパ節、皮膚、扁桃およびパイエル板から成る群から選択される、または
（ｃ）リンパ網内性基質細胞が、胸腺基質細胞であり、特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞が、Ｔ細胞リネージに方向づけられる、
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
造血前駆細胞が、
（ａ）遺伝子的に変化した造血前駆細胞である、
（ｂ）ヒト起源であり、リンパ網内性基質細胞がヒト起源である、または、
（ｃ）ヒト起源であり、リンパ網内性基質細胞が非ヒト起源である、
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
リンパ網内性基質細胞が、
（ａ）胸腺、脾臓、肝臓、リンパ節、皮膚、扁桃およびパイエル板並びにこれらの組合せから成る群から選択された少なくとも１種のリンパ様柔軟組織に由来する、
（ｂ）遺伝子的に変化したリンパ網内性基質細胞である、
（ｃ）造血前駆細胞を接種する前に播種される、または、
（ｄ）造血前駆細胞と同時に播種される、
請求項１に記載の方法。
【請求項７】
非ヒト起源リンパ網内性基質細胞が、マウス起源である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
多孔質固体マトリックスが、少なくとも７５％の百分率開放空間を有する開放セル多孔質マトリックスである、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞が、
（ａ）血清以外の造血細胞の維持、拡張および分化を促進する基質細胞条件化培地および外因的に加えられた造血成長因子を含まない環境において、または
（ｂ）基質細胞条件化培地、並びに造血細胞の維持、拡張、分化を促進し、細胞局所化に影響する造血成長因子から成る群から選択された外因的に加えられた剤と共に、
培養される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
造血細胞の維持、拡張および分化を促進する造血成長因子が、インターロイキン３、インターロイキン６、インターロイキン１１、ＳＣＦ、ＦＬＴ／ＦＬＫリガンド成長因子から成る群から選択された剤である、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
造血細胞の維持、拡張、分化を促進し、細胞局所化に影響する造血成長因子が、インターロイキン３、インターロイキン６、インターロイキン７、インターロイキン１１、インターロイキン１２、幹細胞因子、ＦＬＫ−２リガンド、ＦＬＴ−２リガンド、Ｅｐｏ、Ｔｐｏ、ＧＭＣＳＦ、ＧＣＳＦ、オンコスタチンＭおよびＭＣＳＦから成る群から選択された剤である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
さらに、
同時培養段階の後に、リンパ様組織起源細胞が収穫されること
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
造血前駆細胞のインビボでの維持、拡張および／または分化のための方法であって：
対象中に、造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞を播種した多孔質固体マトリックスを移植することを含み、
該多孔質固体マトリックスが、少なくとも７５％の百分率開放空間を有する開放セル多孔質マトリックスである、
前記方法。
【請求項１４】
造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞を：
ある量の造血前駆細胞およびある量のリンパ網内性基質細胞を、多孔質固体マトリックス中にインビトロで導入すること、
該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞を、血清以外の造血細胞の維持、拡張および／または分化を促進する基質細胞条件化培地および外因的に加えられた造血成長因子を含まない環境において同時培養すること、
の各工程により播種した多孔質固体マトリックスをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
同時培養が、少なくとも１０倍と４００倍の間でリンパ様組織起源細胞の数の増大を生じるのに十分な条件下で行われる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
造血前駆細胞が、多能性幹細胞、多能性前駆細胞および特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞から成る群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１７】
特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞が、Ｔ細胞リネージ、Ｂ細胞リネージ、樹状細胞リネージ、ランゲルハンス細胞リネージおよびリンパ様組織特異的マクロファージ細胞リネージから成る群から選択されたリネージに方向づけられる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
リンパ網内性基質細胞が、胸腺基質細胞であり、特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞が、Ｔ細胞リネージに方向づけられる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
多孔質固体マトリックスが、平均で１５０μｍより小さい中点における直径を有する相互接続する靭帯により規定された孔を有する、請求項８または１３に記載の方法。
【請求項２０】
多孔質固体マトリックスが、炭素含有物質の金属被覆網状開放セルフォームである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
金属が、
（ａ）タンタル、チタン、白金、ニオブ、ハフニウム、タングステンおよびこれらの組合せから成る群から選択されており、該金属が、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、インテグリン、血管形成因子、抗炎症因子、グリコサミノグリカン、ビトロゲン、抗体およびこれらのフラグメント並びにこれらの組合せから成る群から選択された生物学的薬剤で被覆されている、または、
（ｂ）タンタルである、
請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞を播種した多孔質固体マトリックスが、マトリックスの孔を占有するゼラチン状薬剤で含浸されている、請求項１３〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
Ｔ細胞アネルギーを誘発する方法であって：
ある量の造血前駆細胞、ある量の抗原提示細胞およびある量のリンパ網内性基質細胞を、該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞がマトリックス全体に成長するのに十分な孔の大きさの相互接続した孔を有する多孔質固体マトリックス中に導入すること、
該造血前駆細胞、該抗原提示細胞および該リンパ網内性基質細胞を、Ｔ細胞および／またはＴ細胞前駆体の形成を誘発し、生成した細胞の活性化を阻害するのに十分な条件下で少なくとも１種の抗原の存在下で同時培養すること
を含む、
前記方法。
【請求項２４】
Ｔ細胞反応性を誘発する方法であって：
ある量の造血前駆細胞、ある量の抗原提示細胞およびある量のリンパ網内性基質細胞を、該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞がマトリックス全体に成長するのに十分な孔の大きさの相互接続した孔を有する多孔質固体マトリックス中に導入すること、及び
該造血前駆細胞、該抗原提示細胞および該リンパ網内性基質細胞を、該造血前駆細胞から、Ｔ細胞および／または前記少なくとも１つの抗原に対する特異性を有するＴ細胞前駆体の形成を誘発するのに十分な条件下で、少なくとも１種の抗原の存在下で同時培養すること
を含む、
前記方法。
【請求項２５】
造血前駆細胞が、多能性幹細胞、多能性前駆細胞および特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞から成る群から選択される、請求項２３または２４に記載の方法。
【請求項２６】
リンパ網内性基質細胞が胸腺基質細胞であり、特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞がＴ細胞リネージに方向づけられる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
抗原提示細胞が、
（ａ）樹状細胞、単球／マクロファージ、ランゲルハンス細胞、クッペル細胞、ミクログリア、肺胞マクロファージおよびＢ細胞から成る群から選択された細胞である、または、
（ｂ）インビトロで造血前駆細胞から由来する、
請求項２４に記載の方法。
【請求項２８】
さらに同時刺激分子を同時培養に投与することを含む、請求項２４に記載の方法。
【請求項２９】
同時刺激分子が、リンパ球機能関連抗原３（ＬＦＡ−３）、ＣＤ２、ＣＤ４０、ＣＤ８０／Ｂ７−１、ＣＤ８６／Ｂ７−２、ＯＸ−２、ＣＤ７０およびＣＤ８２から成る群から選択されている、請求項５１に記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも７５％の百分率開放空間および細胞をマトリックスを通じて成長させるのに十分な孔の大きさの孔を有する多孔質固体マトリックス、
該固体マトリックスに付着したある量のリンパ網内性基質細胞、ここで該量は、造血前駆細胞の成長および分化を支持するのに十分である、および
マトリックスに付着したある量の造血前駆細胞
を含む、組成物。
【請求項３１】
造血前駆細胞が、リンパ網内性基質細胞に付着している、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
多孔質固体マトリックスが、平均で１５０μｍより小さい中点における直径を有する相互接続する靭帯により規定された孔を有する、請求項３０または３１に記載の組成物。
【請求項３３】
多孔質固体マトリックスが、炭素含有物質の金属被覆網状開放セルフォームである、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
金属が、
（ａ）タンタル、チタン、白金、ニオブ、ハフニウム、タングステンおよびこれらの組合せから成る群から選択されており、ここで該金属は、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、インテグリン、血管形成因子、抗炎症因子、グリコサミノグリカン、ビトロゲン、抗体およびこれらのフラグメント並びにこれらの組合せから成る群から選択された生物学的剤で被覆されている、または、
（ｂ）タンタルである、
請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞を播種した多孔質固体マトリックスが、マトリックスの孔を占有するゼラチン状薬剤で含浸されている、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３６】
造血前駆細胞が、多能性幹細胞、多能性前駆細胞および特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞から成る群から選択される、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３７】
特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞が、Ｔ細胞リネージ、Ｂ細胞リネージ、樹状細胞リネージ、ランゲルハンス細胞リネージおよびリンパ様組織特異的マクロファージ細胞リネージから成る群から選択されたリネージに方向づけられる、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３８】
リンパ網内性基質細胞が胸腺基質細胞であり、特異的な造血リネージに方向づけられた前駆細胞がＴ細胞リネージに方向づけられる、請求項３６に記載の組成物。
【請求項３９】
造血細胞の発育に影響することが疑われる剤を同定する方法であって：
ある量の造血前駆細胞およびある量のリンパ網内性基質細胞を、該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞がマトリックス全体に成長するのに十分な孔の大きさの相互接続した孔を有する多孔質固体マトリックス中に導入すること、
試験同時培養において、該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞を、造血細胞の発育に影響することが疑われる少なくとも１種の候補薬剤の存在下で同時培養すること、及び
試験同時培養造血細胞の発育を対照の同時培養と比較することにより、該少なくとも１種の候補薬剤が、該試験同時培養における造血細胞の発育に影響しているか否かを決定し、これにより、造血前駆細胞およびリンパ網内性基質細胞を、該少なくとも１種の候補薬剤の不存在下で同時培養すること、
ここで該多孔質固体マトリックスは、少なくとも７５％の百分率開放空間を有する開放セル多孔質マトリックスである、
を含む、前記方法。
【請求項４０】
細胞培養から造血細胞の発育に影響することが疑われる剤を単離する方法であって、
ある量の造血前駆細胞およびある量のリンパ網内性基質細胞を、該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞がマトリックス全体に成長するのに十分な孔の大きさの相互接続した孔を有する多孔質固体マトリックス中に導入すること、
該造血前駆細胞および該リンパ網内性基質細胞を同時培養すること、
該同時培養から試験上清液を得ること、
該試験上清液を対照上清液と比較すること、
該対照上清液から欠けている造血細胞の発育に影響することが疑われる剤を含む該試験上清液のサブフラクションを得ること
を含み、
ここで該多孔質固体マトリックスは、少なくとも７５％の百分率開放空間を有する開放セル多孔質マトリックスである、
前記方法。
【請求項４１】
剤が、
（ａ）対照上清液中に存在し、試験上清液中には存在しない、
（ｂ）試験上清液中に存在し、対照上清液中の薬剤とは異なる、または、
（ｃ）さらに、試験上清液の他のサブフラクションを調製することにより単離される、
請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
造血前駆細胞の発育が、
（ａ）造血前駆細胞の維持、
（ｂ）造血前駆細胞の拡張、
（ｃ）特異的細胞リネージへの造血前駆細胞の分化、または、
（ｄ）造血前駆細胞の死
を含む、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４３】
リンパ網内性基質細胞が、胸腺基質細胞である、請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４４】
多孔質固体マトリックスが、
（ａ）平均で１５０μｍより小さい中点における直径を有する相互接続する靭帯により規定された孔を有する、または、
（ｂ）炭素含有物質の金属被覆網状開放セルフォームである、
請求項３９または４０に記載の方法。
【請求項４５】
金属が、
（ａ）タンタル、チタン、白金、ニオブ、ハフニウム、タングステンおよびこれらの組合せから成る群から選択されており、該金属が、コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニン、インテグリン、血管形成因子、抗炎症因子、グリコサミノグリカン、ビトロゲン、抗体およびこれらのフラグメント並びにこれらの組合せから成る群から選択された生物学的剤で被覆されている、または、
（ｂ）タンタルである、
請求項８３に記載の方法。