【手続補正書】
【提出日】平成18年8月14日(2006.8.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物eNOSポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなる、重症肢虚血(CLI)の治療のための医薬組成物。
【請求項２】
前記eNOSポリペプチドがヒトeNOSポリペプチドである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前期ヒトeNOSポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号:１である請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記eNOSポリペプチドが哺乳動物細胞内でリン酸化されているヒトeNOSの一アミノ酸残基に対応する位置に少なくとも1つの変異を含む請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記eNOSポリペプチドが配列番号:1のアミノ酸残基495に対応する位置に変異を含む請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記eNOSポリペプチドが配列番号:1のアミノ酸残基1177に対応する位置に変異を含む請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記eNOSポリペプチドが配列番号:1のアミノ酸残基495に対応する位置に第１変異を、またアミノ酸残基1177に対応する位置に第２変異を、それぞれ含む請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記eNOSポリペプチドが配列番号:1のアミノ酸残基495に対応する位置に第１変異を、アミノ酸残基1177に対応する位置に第２変異を、またアミノ酸残基２に対応する位置に第３変異を、それぞれ含む請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項９】
アミノ酸残基495に対応する位置の変異がAla、Val、LeuまたはIleへのアミノ酸置換である請求項６、７または８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
アミノ酸残基1177に対応する位置の変異がAspへのアミノ酸置換である請求項６、７または８に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
アミノ酸残基２に対応する位置の変異がAlaへのアミノ酸置換である請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記eNOSポリペプチドのリン酸化の度合いが基準ポリペプチドに比して加減されている請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記eNOSポリペプチドが基準ポリペプチドに比してカルモジュリンに対する結合アフィニティーを高めている請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記eNOSポリペプチドのCa++-カルモジュリン仲介刺激でCa++依存性が基準eNOSポリペプチドに比して低下している請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記eNOSポリペプチドが基準eNOSポリペプチドに比して、より高いeNOS活性を有する請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記活性がNOの生成である請求項15に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記活性が還元酵素活性である請求項15に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記基準ポリペプチドのアミノ酸配列がヒトeNOSのアミノ酸配列であるか、またはヒトeNOSのアミノ酸配列に由来する請求項12、13、14、15、16または17に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記基準ポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号:１であるか、または配列番号:１に由来する請求項18に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記eNOSポリペプチドのアミノ酸配列がヒトeNOSのアミノ酸配列と実質的に相同である請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記eNOSポリペプチドのアミノ酸配列が配列番号:１のアミノ酸配列と95〜99%の配列相同性を有する請求項20に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記ポリヌクレオチドがeNOSポリペプチドをコードする核酸配列を含む組換えベクターであり、該核酸配列は該eNOSが細胞中で発現するように、少なくとも1つの調節配列に作用可能に連結されている請求項１または４に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記核酸配列がプロモーターに作用可能に連結されている請求項22に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記組換えベクターがウイルスベクターである請求項23に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記ウイルスベクターがアデノウイルスベクターである請求項24に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記治療が患者細胞中のeNOS活性を調節するステップを含む請求項１または４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
細胞が内皮細胞である請求項26に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
細胞が骨髄由来細胞である請求項26に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
患者へのポリヌクレオチドの投与前、投与中または投与後に、１つまたは複数の血管新生因子を投与するステップをさらに含む請求項１または４に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記血管新生因子がHGF、VEGF、FGF、内皮成長因子、上皮成長因子、血小板由来成長因子、TGF-アルファ、TGF-ベータ、PDGF、TNA-アルファまたはIGF、Del-1からなる血管新生因子群より選択される請求項29に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
投与が患者細胞へのポリヌクレオチドのex vivo導入を含む請求項１または４に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
投与が患者の病変組織へのポリヌクレオチドのデリバリーを含む請求項１または４に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
投与が患者の末梢血管系へのポリヌクレオチドのデリバリーを含む請求項１または４に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
患者肢筋への筋内注射または動脈内注射用である請求項33に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
eNOSポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなる血管新生の治療のための医薬組成物であって、該eNOSポリペプチドが哺乳動物細胞内でリン酸化されている哺乳動物eNOSの一アミノ酸残基に対応する位置に少なくとも1つの変異を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３６】
eNOSポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなる微小血管機能障害の治療のための医薬組成物であって、該eNOSポリペプチドが哺乳動物細胞内でリン酸化されている哺乳動物eNOSの一アミノ酸残基に対応する位置に少なくとも1つの変異を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３７】
eNOSポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでなる重症肢虚血(CLI)の治療のための医薬組成物であって、該eNOSポリペプチドが哺乳動物細胞内でリン酸化されている哺乳動物eNOSの一アミノ酸残基に対応する位置に少なくとも1つの変異を含むことを特徴とする医薬組成物。
【請求項３８】
前記eNOSポリペプチドが配列番号:1のアミノ酸残基495に対応する位置に変異を含み、また該変異はAla、Val、LeuまたはIleへのアミノ酸置換である請求項35、36または37に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記eNOSポリペプチドが配列番号:1のアミノ酸残基1177に対応する位置に変異を含み、また該変異はAspへのアミノ酸置換である請求項35、36または37に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記eNOSポリペプチドが、
(i) アミノ酸残基495に対応する位置に、Ala、Val、LeuまたはIleへのアミノ酸置換である第１変異を、また
(ii) 配列番号:1のアミノ酸残基1177に対応する位置に、Aspへのアミノ酸置換である第２変異を、
それぞれ含む請求項1、35、36または37に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記eNOSポリペプチドが、
(i) アミノ酸残基495に対応する位置に、Ala、Val、LeuまたはIleへのアミノ酸置換である第１変異を、
(ii) 配列番号:1のアミノ酸残基1177に対応する位置に、Aspへのアミノ酸置換である第２変異を、また
(iii) 配列番号:1のアミノ酸残基2に対応する位置に、Alaへのアミノ酸置換である第３変異を、
それぞれ含む請求項1、35、36または37に記載の医薬組成物。