【手続補正書】
【提出日】平成17年9月27日(2005.9.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  配列番号：３の核酸を含む単離されたＤＮＡまたはその相補体。
【請求項２】  突然変異を含む配列番号：４のポリペプチドをコードする単離されたＤＮＡであって、ここに、該突然変異が該単離されたＤＮＡに：ａ）コドン７４にてロイシン、ｂ）コドン７６にてアスパラギン、ｃ）コドン２８にてロイシン、ｄ）コドン３２にてヒスチジン、ｅ）コドン９８にてトリプトファン、ｆ）コドン１２７にてアラニン、またはｇ）コドン１２７にてトレオニンをコードさせる該単離されたＤＮＡ。
【請求項３】  該ＤＮＡが：ａ）配列番号：３の塩基４１８にてＡ、ｂ）配列番号：３の塩基４１３にてＴ、ｃ）配列番号：３の塩基２７５にてＴ、ｄ）配列番号：３の塩基２８７にてＡ、ｅ）配列番号：３の塩基４８４にてＴ、ｆ）配列番号：３の塩基５７１にてＧ、およびｇ）配列番号：３の塩基５７１にてＡよりなる群から選択される突然変異を含む請求項１記載の単離されたＤＮＡ。
【請求項４】  ストリンジェント・ハイブリダイゼーション条件下で請求項２または３記載のＤＮＡに特異的にハイブリダイズする核酸プローブであって、ここに、該ストリンジェント・ハイブリダイゼーション条件は、該核酸プローブが配列番号：３のＤＮＡにハイブリダイズすることを妨げる該核酸プローブ。
【請求項５】  ＱＴ延長症候群を引起す多型性を診断する方法であって、該プローブの該多型性を含む核酸へのハイブリダイゼーションを許容するが、該プローブの配列番号：３の核酸へのハイブリダイゼーションは妨ぐストリンジェント条件下で請求項４記載のプローブを患者試料のＤＮＡまたはＲＮＡにハイブリダイズすることを含み、ここに、当該ハイブリダイゼーション信号の存在が該多型性の存在を示す該方法。
【請求項６】  該患者のＤＮＡまたはＲＮＡが増幅されており、該増幅されたＤＮＡまたはＲＮＡがハイブリダイズされる請求項５記載の方法。
【請求項７】  ハイブリダイゼーションがイン・サイチュで行われる請求項６記載の方法。
【請求項８】  ＱＴ延長症候群を引起すヒトＫＣＮＥ１における多型性の存在を診断する方法であって、該方法は該多型性の存在を確認する手段によって実行され、ここに、該多型性は改変したアミノ酸を持つ配列番号：４のＫＣＮＥ１ポリペプチドの存在を生じるものであって、該改変したアミノ酸はａ）残基７４にてＬｅｕ、ｂ）残基７６にてＡｓｎ、ｃ）残基２８にてＬｅｕ、ｄ）残基３２にてＨｉｓ、ｅ）残基９８にてＴｒｐ、ｆ）残基１２７にてＡｌａ、およびｇ）残基１２７にてＴｈｒよりなる群から選択される該方法。
【請求項９】  該多型性が：ａ）該コーディング領域の塩基２２１にてＴ、ｂ）該コーディング領域の塩基２２６にてＡ、ｃ）該コーディング領域の塩基８３にてＴ、ｄ）該コーディング領域の塩基９５にてＡ、ｅ）該コーディング領域の塩基２９２にてＴ、ｆ）該コーディング領域の塩基３７９にてＧ、およびｇ）該コーディング領域の塩基３７９にてＡよりなる群から選択される請求項８記載の方法。
【請求項１０】  該手段が一本鎖コンホメーション多型性技術を用いて該多型性につきアッセイすることを含む請求項８または９記載の方法。
【請求項１１】  該手段がヒトＫＣＮＥ１を配列決定することを含む請求項８または９記載の方法。
【請求項１２】  該手段がＲＮＡｓｅアッセイを実行することを含む請求項８または９記載の方法。
【請求項１３】  突然変異ＫＣＮＥ１ポリペプチドには結合するが、野生型ＫＣＮＥ１ポリペプチドには結合しない抗体であって、ここに、該突然変異ＫＣＮＥ１ポリペプチドが、
ａ）残基７４にＬｅｕ、
ｂ）残基７６にＡｓｎ、
ｃ）残基２８にＬｅｕ、
ｄ）残基３２にＨｉｓ、
ｅ）残基９８にＴｒｐ、
ｆ）残基１２７にＡｌａ、または
ｇ）残基１２７にＴｈｒ
を含む配列番号：４である該抗体。
【請求項１４】  ＱＴ延長症候群を診断する方法であって、患者の試料と請求項１３記載の抗体とを反応させることによる患者における突然変異ＫＣＮＥ１ポリペプチドの存在についてのアッセイからなり、ここに、陽性反応の存在がＱＴ延長症候群を示す該方法。
【請求項１５】  ＱＴ延長症候群を引起す突然変異を含む単離されたＫＣＮＥ１ポリペプチドであって、ここに、該突然変異が：
ａ）残基７４にてＬｅｕ、
ｂ）残基７６にてＡｓｎ、
ｃ）残基２８にてＬｅｕ、
ｄ）残基３２にてＨｉｓ、
ｅ）残基９８にてＴｒｐ、
ｆ）残基１２７にてＡｌａ、または
ｇ）残基１２７にてＴｈｒ
である該単離されたＫＣＮＥ１ポリペプチド。
【請求項１６】  配列番号：１０１、配列番号：１０２、配列番号：１０３、配列番号：１０４、配列番号：１０５および配列番号：１０６よりなる群から選択される単離された核酸。
【請求項１７】  当該プライマーが：
ａ）配列番号：１０１および１０２；
ｂ）配列番号：１０３および１０４；または
ｃ）配列番号：１０５および１０６
である核酸プライマーの対。
【請求項１８】  ＫＣＮＥ１のエキソンを増幅するための請求項１７記載の核酸プライマーの対の使用。
【請求項１９】  請求項１ないし３いずれか１記載のＤＮＡでトランスフェクトされた細胞。
【請求項２０】  請求項１ないし３いずれか１記載の単離されたＤＮＡを含むベクター。
【請求項２１】  請求項２０記載のベクターでトランスフェクトされた細胞。
【請求項２２】  請求項１ないし３いずれか１記載のＤＮＡを含む非ヒト・トランスジェニック動物。
【請求項２３】  請求項２０記載のベクターを含む非ヒト・トランスジェニック動物。
【請求項２４】  ＫＣＮＥ１に突然変異を持つ人を治療するのに有用な薬物をスクリーンする方法であって、
ａ）突然変異を持つＫＣＮＥ１を発現する第１の細胞セットを第１の誘導Ｋ＋電流を測定するための浴液に入れ；
ｂ）該第１の誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｃ）野生型ＫＣＮＥ１を発現する第２の細胞セットを第２の誘導Ｋ＋電流を測定するための浴液に入れ；
ｄ）該第２の誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｅ）薬物を工程（ａ)の浴液に添加し；
ｆ）工程（ｅ）における細胞の第３の誘導Ｋ＋電流を測定し；次いで
ｇ）該第３の誘導Ｋ＋電流が該第１の誘導Ｋ＋電流によりも該第２の誘導Ｋ＋電流に近いかどうかを決定し、該第１の誘導Ｋ＋電流によりも該第２の誘導Ｋ＋電流により近い第３の誘導Ｋ＋電流を生じる薬物が該人の治療に有用であって、ここに、該突然変異は：ａ）残基７４にＬｅｕ、ｂ）残基７６にＡｓｎ、ｃ）残基２８にＬｅｕ、ｄ）残基３２にＨｉｓ、ｅ）残基９８にＴｒｐ、ｆ）残基１２７にＡｌａ、またはｇ）残基１２７にＴｈｒを生じる突然変異よりなる群から選択されることを含む該方法。
【請求項２５】  該第１の細胞セット、該第２の細胞セットまたは両方の細胞セットをトランスジェニック動物から得るか、またはヒトＫＣＮＥ１ ＲＮＡでトランスフェクトする請求項２４記載の方法。
【請求項２６】  該第１の細胞セットおよび該第２の細胞セットがさらに野生型ＫＶＬＱＴ１を発現する請求項２４記載の方法。
【請求項２７】  ＱＴ延長症候群の治療または予防に有用な薬物をスクリーンする方法であって：
ａ）野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１を発現する細胞を電流を測定するための浴液に入れ；
ｂ）工程（ａ）の細胞における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｃ）突然変異ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１を発現する細胞を電流を測定するための浴液に入れ；
ｄ）工程（ｃ）の細胞における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｅ）薬物を工程（ｃ）の浴液に添加し；
ｆ）工程（ｅ）の細胞における誘導Ｋ＋電流を測定し；次いで
ｇ）該薬物が、野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１を発現する細胞で観測される誘導Ｋ＋電流に、該薬物不存在下で突然変異ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１を発現する細胞で観測される電流と比較して、より近いもしくはより近くない誘導Ｋ＋電流を生じたかどうかを決定し、ここに、野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１を発現する細胞で観測される電流により近い電流を生じる薬物はＱＴ延長症候群の治療または予防に有用であって、該突然変異ＫＶＬＱＴ１は、（配列番号：１に基づき）：塩基６６２〜６６４の欠失、塩基６９４にＣ、塩基７２７にＡ、塩基７３１にＡ、塩基９２２にＡ、塩基９７９にＴ、塩基１０７８にＡ、塩基１０９７にＴ、塩基１１８４にＡ、塩基１１８４にＴ、塩基１１９６にＡ、塩基６６４にＡ，塩基１１０２にＡ、塩基１１０６にＧ、塩基１１１６にＣ、塩基１２２０にＣ、および塩基１２５８にＴよりなる群から選択される突然変異を含むことを含む該方法。
【請求項２８】  ＱＴ延長症候群の治療または予防に有用な薬物をスクリーンする方法であって、
ａ）野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされたトランスジェニック動物を調製し；
ｂ）工程（ａ）のトランスジェニック動物における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｃ）野生型ＫＶＬＱＴ１および突然変異ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされたトランスジェニック動物を調製し；
ｄ）工程（ｃ）のトランスジェニック動物における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｅ）工程（ｃ）のトランスジェニック動物に薬物を投与し；
ｆ）工程（ｅ）の薬物処理された動物における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｇ）該薬物が、野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされた動物で観測される誘導Ｋ＋電流に、該薬物不存在下で突然変異ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされた動物で観測される電流と比較して、より近いもしくはより近くない誘導Ｋ＋電流を生じたかどうかを決定し、ここに、野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされた動物で観測される電流により近い電流を生じる薬物はＱＴ延長症候群の治療または予防に有用であって、該突然変異ヒトＫＣＮＥ１は：ａ）残基７４にＬｅｕ、ｂ）残基７６にＡｓｎ、ｃ）残基２８にＬｅｕ、ｄ）残基３２にＨｉｓ、ｅ）残基９８にＴｒｐ、ｆ）残基１２７にＡｌａ、またはｇ）残基１２７にＴｈｒをコードすることを含む該方法。
【請求項２９】  ＱＴ延長症候群の治療または予防に有用な薬物をスクリーンする方法であって、
ａ）野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされたトランスジェニック動物を調製し；
ｂ）工程（ａ）のトランスジェニック動物における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｃ）突然変異ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされたトランスジェニック動物を調製し；
ｄ）工程（ｃ）のトランスジェニック動物における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｅ）工程（ｃ）のトランスジェニック動物に薬物を投与し；
ｆ）工程（ｅ）の薬物治療された動物における誘導Ｋ＋電流を測定し；
ｇ）該薬物が、野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされた動物で観測される誘導Ｋ＋電流に、該薬物不在下で突然変異ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされた動物で観測される電流と比較して、より近いかより近くない誘導Ｋ＋電流を生じたかどうかを決定し、ここに、野生型ＫＶＬＱＴ１および野生型ＫＣＮＥ１で共トランスフェクトされた動物で観測される電流により近い電流を生じる薬物はＱＴ延長症候群の治療または予防に有用であって、該突然変異ＫＶＬＱＴ１は、（配列番号：１に基づき）：塩基６６２〜６６４の欠失、塩基６９４にＣ、塩基７２７にＡ、塩基７３１にＡ、塩基９２２にＡ、塩基９７９にＴ、塩基１０７８にＡ、塩基１０９７にＴ、塩基１１８４にＡ、塩基１１８４にＴ、塩基１１９６にＡ、塩基６６４にＡ，塩基１１０２にＡ、塩基１１０６にＧ、塩基１１１６にＣ、塩基１２２０にＣ、および塩基１２５８にＴよりなる群から選択される突然変異を含むことを含む該方法。
【請求項３０】  ａ）配列番号：３のヌクレオチド１ないし１９２またはその相補体、ｂ）配列番号：３の塩基１ないし１９２のいずれかの１５個の連続したヌクレオチドまたはその相補体、ｃ）配列番号：３の塩基１ないし１９２のいずれかの１２個の連続したヌクレオチドまたはその相補体、ｄ）配列番号：３のヌクレオチド５８３ないし１７０２またはその相補体、ｅ）配列番号：３の塩基５８３ないし１７０２のいずれかの１５個の連続したヌクレオチドまたはその相補体、またはｆ）配列番号：３の塩基５８３ないし１７０２のいずれかの１２個の連続したヌクレオチドまたはその相補体よりなる群から選択される単離された核酸またはその相補体。
【請求項３１】  配列番号：４のポリペプチドをコードする核酸でトランスフェクトされた細胞であって、該ポリペプチドが：
ａ）残基７４にてＳｅｒではなくてＬｅｕ、
ｂ）残基７６にてＡｓｐでなくてＡｓｎ、
ｃ）残基２８にてＳｅｒではなくてＬｅｕ、
ｄ）残基３２にてＡｒｇではなくてＨｉｓ、
ｅ）残基９８にてＡｒｇではなくてＴｒｐ、
ｆ）残基１２７にてＰｒｏではなくてＡｌａ、または
ｇ）残基１２７にてＰｒｏではなくてＴｈｒ
を含む該細胞。
【請求項３２】  配列番号：４のポリペプチドをコードする核酸および配列番号：２のポリペプチドをコードする核酸で共トランスフェクトされた細胞であって、配列番号：４のポリペプチドが突然変異を含むか、配列番号：２のポリペプチドが突然変異を含むか、または配列番号：４のポリペプチドおよび配列番号：２のポリペプチドの両方が突然変異を含む該細胞。
【請求項３３】  非ヒト・トランスジェニック動物であって、野生型ヒトＫＣＮＥ１および突然変異ヒトＫＶＬＱＴ１を含む該動物。
【請求項３４】  非ヒト・トランスジェニック動物であって、突然変異ヒトＫＣＮＥ１および野生型ヒトＫＶＬＱＴ１を含む該動物。