【手続補正書】
【提出日】平成17年7月26日(2005.7.26)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に未分化の状態のＥＳ細胞の導出をサポートするヒトフィーダー細胞層であって、前記フィーダー細胞層が、ヒト成人細胞、ヒト胎児細胞もしくはヒト胚細胞またはそれらの組み合わせを含む群から選択された細胞を含むヒトフィーダー細胞層。
【請求項２】
実質的に未分化の状態のＥＳ細胞の培養をサポートするヒトフィーダー細胞層であって、前記フィーダー細胞層が、ヒト成人細胞、ヒト胎児細胞もしくはヒト胚細胞またはそれらの組み合わせを含む群から選択された細胞を含むヒトフィーダー細胞層。
【請求項３】
前記ヒト成人細胞が、ヒト線維芽細胞、ヒト成人皮膚線維芽細胞、ヒト成人筋線維芽細胞および成人上皮細胞またはそれらの組み合わせを含む群から選択される請求項１または２に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項４】
前記ヒト成人細胞がヒト線維芽細胞である請求項３に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項５】
前記ヒト線維芽細胞がヒト成人卵管（ＨＡＦＴ）線維芽細胞である請求項３または４に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項６】
前記ヒト成人細胞がヒト皮膚細胞である請求項３に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項７】
前記ヒト成人細胞がヒト筋細胞である請求項３に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項８】
前記ヒト成人細胞がヒト成人上皮細胞である請求項３に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項９】
前記ヒト成人上皮細胞がヒト卵管上皮細胞である請求項３または８に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１０】
前記ヒト胎児細胞が、ヒト胎児筋（ＨＦＭ）細胞もしくはヒト胎児皮膚（ＨＦＳ）細胞またはそれらの組み合わせである請求項１または２に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１１】
前記ヒト胎児細胞がＨＦＭ細胞である請求項１０に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１２】
前記ヒト胎児細胞がＨＦＳ細胞である請求項１０に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１３】
前記ヒト胚細胞が、ヒト胚筋（ＨＥＭ）細胞もしくはヒト胚皮膚細胞またはそれらの組み合わせである請求項１または２に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１４】
前記ヒト胚細胞はＨＥＭ細胞である請求項１３に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１５】
前記ヒト胚細胞はヒト胚皮膚細胞である請求項１３に記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１６】
ＨＦＥ培地の存在下の初代培養中で初めて樹立された請求項１〜１５のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１７】
前記フィーダー層が、ＨＭ培地の存在下で増殖させられた請求項１または１６のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１８】
線維芽細胞株Detroit 551（アクセッション番号ATCC-CCL-110）を含む請求項１〜１７のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項１９】
アクセッション番号ATCC-X-55またはATCC-CCL-171を有する細胞株ＭＲＣ−５を含む請求項１〜１７のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層。
【請求項２０】
アクセッション番号ATCC-CCL-75またはATCC-CCL-75.1を有する細胞株ＷＩ−３８を含む請求項１〜１７のいずれかに記載のヒトフィーダー層。
【請求項２１】
実質的に未分化の状態の胚性幹（ＥＳ）細胞株をＥＳ細胞集団から導出する方法であって、前記方法が、
未分化のＥＳ細胞を含むＥＳ細胞集団を入手するステップと；
ヒトフィーダー細胞から導出された可溶性因子またはその同等物の存在下において細胞サポートマトリックス上で前記未分化のＥＳ細胞を培養するステップと
を含む方法。
【請求項２２】
ＥＳ細胞株を導出するステップが、ＥＳ細胞源からＥＳ細胞株を作成するステップであって、前記ＥＳ細胞は事前に培養されていない細胞であるステップと；ＥＳ細胞株の増殖もしくは培養時間を伸長させるステップであって、前記ＥＳ細胞株が樹立細胞株であるステップと；樹立ＥＳ細胞株を増殖させるステップとを含む群から選択される請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＥＳ細胞株を導出するステップが、ＥＳ細胞株を増殖させるステップを含む請求項２１または２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記ＥＳ細胞集団が、胚細胞、胚盤胞細胞、内部細胞塊（ＩＣＭ）細胞、および未分化ＥＳ細胞の培養物を含む群から選択された起源から導出される請求項２１〜２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記起源が胚盤胞細胞である請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記ヒトフィーダー細胞が、上述のようなＨＥＳ、ＫＯ、ＨＦ、ＨＥＳ−ＨＳ、ＫＯ−ＨＳ、およびＨＦ−ＨＳを含む群から選択された培地の存在下で培養される請求項２１〜２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
前記培地が、ＨＥＳ−ＨＳまたはＫＯ−ＨＳである請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記培地がＫＯ−ＨＳである請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記細胞サポートマトリックスが、コラーゲンＩ、コラーゲンＩＶ、ヒト細胞外マトリックスもしくはMatrigel（商標）またはそれらの組み合わせを含む群から選択された非細胞性細胞サポートマトリックスである請求項２１〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記細胞サポートマトリックスが、コラーゲンＩまたはタイプＩコラーゲンを含む請求項２１〜２９のいずれかに記載の方法。
【請求項３１】
前記細胞サポートマトリックスが、請求項１〜１９のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層を含む請求項２１〜２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記ＥＳ細胞が、上述のようなＨＥＳ、ＫＯ、ＨＥＳ−ＨＳ、ＫＯ−ＨＳ、およびＨＦ−ＨＳを含む群から選択された培地の存在下で培養される請求項２１〜３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記培地がＫＯ−ＨＳである請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記フィーダー細胞が、ＨＦＥ培地の存在下の初代培養中で初めて樹立される請求項２１〜３３のいずれかに記載の方法。
【請求項３５】
前記フィーダー細胞が、ＥＳ細胞と共に培養する前にＨＭ培地の存在下で増殖させられる請求項２１〜３４のいずれかに記載の方法。
【請求項３６】
前記可溶性因子が、請求項１〜２０のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層のヒトフィーダー細胞から導出される請求項２１〜３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
ＥＳ細胞株が、ＬＩＦの不在下で培養される請求項２１〜３６のいずれかに記載の方法。
【請求項３８】
実質的に未分化の状態のＥＳ細胞を導出および培養するための細胞培養系であって、前記培養系は、
細胞サポートマトリックスと；
ヒト成人細胞、ヒト胎児細胞またはヒト胚細胞を含む群から選択されるヒトフィーダー細胞から導出された可溶性因子を提供するための細胞培養培地と
を含む細胞培養系。
【請求項３９】
前記細胞サポートマトリックスが、コラーゲンＩもしくはマトリゲルまたはそれらの組み合わせを含む請求項３８に記載の細胞培養系。
【請求項４０】
前記細胞サポートマトリックスがコラーゲンＩを含む請求項３９に記載の細胞培養系。
【請求項４１】
前記細胞培養培地が、請求項１〜２０のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層から導出された可溶性因子を含む調整培地である請求項３８〜４０のいずれかに記載の細胞培養系。
【請求項４２】
前記細胞サポートマトリックスが、請求項１〜２０のいずれかに記載のヒトフィーダー細胞層を含む請求項３８〜４２のいずれかに記載の細胞培養系。
【請求項４３】
前記培養培地が、ＨＥＳ、ＫＯ、ＨＥＳ−ＨＳ、およびＫＯ−ＨＳを含む群から選択される請求項３８〜４２のいずれかに記載の細胞培養系。
【請求項４４】
前記培地はＫＯ−ＨＳである請求項４３に記載の細胞培養系。
【請求項４５】
実質的に未分化の状態のＥＳ細胞を導出および培養するための調整培地であって、前記培地は、
請求項１〜２０のいずれかに記載のフィーダー細胞層を入手するステップと；
ＨＥＳ、ＫＯ、ＨＥＳ−ＨＳ、ＫＯ−ＨＳ、ＨＦＥ、ＨＭ、ＨＦもしくはＨＦ−ＨＳを含む群から選択された培地の存在下で前記フィーダー細胞を培養するステップと；
前記細胞から前記培地を分離して、調整培地を入手するステップと
を含む方法によって調製される調整培地。
【請求項４６】
前記ヒトフィーダー細胞層が成人皮膚細胞を含む請求項４５に記載の調整培地。
【請求項４７】
前記ヒトフィーダー細胞層がＨＦＭ細胞を含む請求項４５に記載の調整培地。
【請求項４８】
前記培地がＫＯ−ＨＳを含む請求項４５〜４７のいずれかに記載の調整培地。