【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年1月31日(2006.1.31)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  上皮細胞の成長及び／又は増殖を誘導する方法であって、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４受容体を発現する正常な上皮細胞を、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４受容体、又はそれらの組合せを活性化する単離された有効量のリガンドに接触させることを含むことを特徴とする方法。
【請求項２】  活性化リガンドが、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４受容体に結合することができる、ヘレグリン（ＨＲＧ）ポリペプチド、ＨＲＧ変異体、ＨＲＧアゴニスト抗体、又はそれらのフラグメントである、請求項１記載の方法。
【請求項３】  活性化リガンドが、ヒトＨＲＧ又はそのフラグメントである、請求項２記載の方法。
【請求項４】  活性化リガンドが、ＨＲＧ−α、−β１、−β２、−β２様及び−β３及びそれらのフラグメントよりなる群から選ばれる、請求項２記載の方法。
【請求項５】  活性化リガンドが、γ−ＨＲＧ又はそのフラグメントである、請求項２記載の方法。
【請求項６】  活性化リガンドが、組換えヒトＨＲＧ、又はそのフラグメントである、請求項２記載の方法。
【請求項７】  活性化リガンドが、感覚性及び運動性ニューロン由来因子（ＳＭＤＦ）、又はそのフラグメントである、請求項２記載の方法。
【請求項８】  活性化リガンドを、約１μg/kg〜１００mg/kgの１日用量で投与する、請求項１記載の方法。
【請求項９】  活性化リガンドが、アゴニスト抗体である、請求項２記載の方法。
【請求項１０】  接触が、それを必要とする患者への投与による、請求項１記載の方法。
【請求項１１】  ＨＲＧが、ｒＨＲＧ−β１−１７７〜２４４である、請求項６記載の方法。
【請求項１２】  上皮細胞が肺細胞である、請求項１記載の方法。
【請求項１３】  上皮細胞が、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２／ＨＥＲ４、ＨＥＲ３／ＨＥＲ４、ＨＥＲ３又はＨＥＲ４を発現する、請求項１記載の方法。
【請求項１４】  肺界面活性剤プロテインＡを増加させる方法であって、単離された有効量のＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４活性化リガンドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１５】  活性化リガンドが、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４受容体に結合することができる、ヘレグリン（ＨＲＧ）ポリペプチド、ＨＲＧ変異体、ＨＲＧアゴニスト抗体、又はそれらのフラグメントである、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】  慢性閉塞性肺疾患を処置する方法であって、単離された有効量のＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４活性化リガンドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１７】  活性化リガンドが、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４受容体に結合することができる、ヘレグリン（ＨＲＧ）ポリペプチド、ＨＲＧ変異体、ＨＲＧアゴニスト抗体、又はそれらのフラグメントである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】  呼吸困難又は肺気腫を処置する方法であって、単離された有効量のＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４活性化リガンドを、それを必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項１９】  活性化リガンドが、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４受容体に結合することができる、ヘレグリン（ＨＲＧ）ポリペプチド、ＨＲＧ変異体、ＨＲＧアゴニスト抗体、又はそれらのフラグメントである、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】  （ａ）哺乳動物から正常な上皮細胞サンプルを得る工程と；
（ｂ）該サンプルを、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４受容体、又はそれらの組合せを活性化し、サンプル中の上皮細胞の成長及び／又は増殖を誘導するリガンドに接触させ、そして拡大されたサンプルを得る工程及び；
（ｃ）該拡大されたサンプルを哺乳動物に再導入する工程
を含む方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００２１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００２１】
新規タンパク質の構造と機能との関係は、利用できる様々な突然変異分析手法のいずれを用いても調べることができる。そのような手法の例は、アラニン走査突然変異誘発、及びファージミドディスプレイを包含する。アラニン走査は、タンパク質又はタンパク質ドメイン中の活性残基（すなわち、タンパク質の機能に有意な効果を有する残基）を特定するのに用いることができる。例えば、Cunningham及びWellsは、アラニン走査を用いて、ヒト成長ホルモン中の、その受容体と結合するのに重要である残基を特定した〔Cunningham & Wells, Science 244:1081-1085 (1989)〕。アラニン走査では、走査しようとするタンパク質又はドメインをコードする遺伝子を発現ベクターに挿入し、連続する残基がアラニンに変換されるタンパク質又はドメインをコードする、一連のベクターを生成するよう突然変異誘発を実施する。コードされるタンパク質又はドメインは、これらのベクターから発現され、そうして、アラニン置換変種の活性を試験して、変化した活性を有するものを特定する。活性の変化は、アラニン置換の位置の残基が活性残基であることを示す。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
一般的には、本発明は、上皮細胞、特に管上皮や繊毛上皮の細胞の成長及び増殖を刺激することによって、上皮細胞の傷害を再生及び／又は修復する方法である。上皮細胞は、多くの種類の外傷、例えば外科的切開又は切除、化学物質又は煙の吸入若しくは吸引による傷害、化学的又は生化学的な潰瘍形成、ウイルス又は細菌の感染等々によって損傷され得る。本発明の方法によって影響され得る上皮細胞は、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４を発現するいかなる上皮細胞も包含するが；適切な細胞は、例えば肺、胃粘膜、子宮内膜、輸卵管、乳腺、膵臓、唾液腺等々に位置する。本発明の方法は、上皮細胞の成長及び増殖を刺激して、器官の細胞障壁を修復かつ再確立し、影響された組織が正常な生理学的機能を一層速やかに発達させるのを可能にする。例えば、肺上皮細胞は、煙の吸入によって損傷されて、肺気腫を招く。本発明の方法による肺細胞の処置は、肺上皮細胞の障壁層を再生し、酸素付加を向上させ、感染に対する障壁の発達を加速する。同様に、胃酸の吸引による細胞損傷は、本発明の方法によって、上皮細胞の再生を促進するよう処置することができる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３６】
ヘレグリンポリペプチドは、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３及び／又はＨＥＲ４受容体に様々な親和力で結合する。一般的には、ＨＥＲ３及びＨＥＲ４受容体が、高い親和力で結合する。ＨＥＲ２とＨＥＲ３、及びＨＥＲ２とＨＥＲ４のヘテロ二量体化が、その後の、上記の受容体交差リン酸化とともに生じることも、公知である。本発明では、ヘレグリンタンパク質が、個々の受容体分子又は受容体二量体と作用し合い、かつ結合する結果、受容体リン酸化が誘導されるときに、上皮細胞の成長及び／又は増殖が誘導される。したがって、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４、又はそれらの組合せの結合及び活性化は、受容体の活性化及び生物学的機能に必要な、単量体の受容体、及び二量体の受容体の形態を包含するいかなる形態の受容体の活性化も包含するものとする。二量体の受容体の形態は、下記に、例えば、ＨＥＲ２／ＨＥＲ３、ＨＥＲ２／ＨＥＲ４及びＨＥＲ３／ＨＥＲ４と称されることがある。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
用語「正常な」上皮細胞は、形質転換されていない、すなわち癌性でないか、及び／又は不死化されていない上皮細胞を意味する。更に、正常な上皮細胞は、好ましくは、異数体ではない。異数性は、細胞の核が染色体の半数体の正確な倍数を含まずに、一本以上の染色体が、残りより大きいか、又は小さい数で存在するときに存在する。本発明の対象範囲外に属する、形質転換された細胞の代表的な特性は、免疫欠損させたマウス（ヌードマウス）に移植したとき、腫瘍を形成できる能力、懸濁液、又は寒天のような半固形培地中で増殖できる能力、コロニー又はフォーカスへと細胞の積み重なりを可能にする、接触阻害の喪失、増殖因子又は血清への依存性の喪失、細胞が増殖を阻害されたときの細胞死、及びアクチン繊維の崩壊を包含する。本発明に具体的に包含されるのは、マウスに腫瘍を形成せず、プラスチック又はガラスに付着して増殖せず（足場依存性である）、接触阻害を示し、ホルモン及び増殖因子を含有する血清を必要とし、血清の欠如によって増殖が停止された場合に生存可能に存続し、充分に組織化されたアクチン繊維を有するような、正常な上皮細胞である。正常な上皮細胞は、好ましくは、培養された細胞ではないが、哺乳動物組織から単離された、形質転換されていない、不死化されていない上皮細胞も、本発明に適する。これらの上皮細胞は、単離された上皮細胞サンプルの成長及び／又は増殖を誘導するために、すなわちサンプルを拡大するために、ヘレグリンの存在下で数世代（約１０又は５０世代までさえ）培養してよい。そうして、拡大されたサンプルを、上皮細胞組織を再増殖する目的で、哺乳動物に再導入することができる（再上皮化）。これは、組織傷害又は損傷を修復するのに特に役立つ。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２２８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２２８】
さらにもう１つの実施形態においては、当該技術分野において周知の技術（生検など）を用いて正常な上皮細胞標本を得るため、哺乳動物組織から上皮細胞を得るか又は分離することができる。この標本は、このとき、標本中での上皮細胞の成長及び／又は増殖を誘発し、それにより初代上皮細胞の個体群を拡大させる目的でヘレグリンタンパク質で処置され得る。標準的には、ヘレグリンは、 in vitro 上皮細胞培養に対し、約０.１〜約１００nM好ましくは１〜５０nMの濃度で添加されることになる。所望する場合には、初代上皮細胞は、上皮細胞個体群を充分に拡大させる目的で数世代にわたり、 in vitro で培養されうる。上皮細胞は、以上で論述したとおり、哺乳動物の細胞培養に適した条件下で培養される。拡大後、拡大した標本は、哺乳動物組織を再度上皮形成させる目的で、哺乳動物の体内に再導入される。例えば、損傷を受けた肺組織をより迅速に再上皮形成させかくして肺機能を再度確立するために、気腫又は慢性閉塞性肺疾患を患う患者から分離した肺上皮細胞を獲得し、拡大させ、肺の中に再導入することが可能である。拡大された細胞は、当該技術分野において周知の方法を用いて吸引又は挿管により肺の中に再導入することができる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０２６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０２６３】
実施例５  ｒＨＲＧβ１177-244の調製
ＥＧＦ様ドメイン断片ＨＲＧ-β1  177-244を、ベクターｐＨＬ８９（Holmes et al., Science 256: 1205-1210(1992) に記載）から、突出末端を含むＮｓｉＩ／ＸｂａＩを有するプライマーで、ＰＣＲによって増幅した。断片を、ファージミド提示ベクターｐａｍ−ｇ３に、ｐＨＲＧ２−ｇ３（１７７−２２４）構築物を作製するのと同じ部位の制限切断−結合により、挿入した。ｐａｍ−ｇ３は、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）のファージ提示のために設計され、Lowman et al., Biochemistry 30: 10832-10838(1991) に記載された、ｐｈＧＨａｍ−ｇ３の誘導体である。ｐａｍ−ｇ３は、ｐｈＧＨａｍ−ｇ３に存在するｈＧＨ遺伝子を除去し、クローニングに用いる制限部位で切断する空間を提供する、詰め込み断片と置換することにより産生する。ＨＲＧ−β１断片をｐIIIの残基２４７位に接着した。