【手続補正書】
【提出日】平成18年11月10日(2006.11.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
改変グルテニンポリペプチドをコードする配列を含む核酸であって、ここで、ジスルフィド架橋を介する分子間架橋を担う一つ以上のシステイン残基をコードする該配列は、該コード配列の読取り枠を修正することなく、かつグルテニン遺伝子の天然の配列の残存構造に影響を与えることなく欠失しているか、もしくは、他のアミノ酸をコードする配列によって置換されている、核酸。
【請求項２】
請求項１に記載の核酸であって、該核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡである、核酸。
【請求項３】
請求項１または請求項２のいずれか１項に記載の核酸であって、ここで、前記グルテニンコード配列は、配列番号９で示される配列と少なくとも７５％の相同性を有する配列である、核酸。
【請求項４】
請求項１〜請求項３のいずれかに記載の核酸であって、ここで、該核酸は、ドメインＩにおけるシステイン残基および／もしくはドメインＩＶにおけるシステイン残基が、欠失しているか、または別のアミノ酸によって置換されているポリペプチドをコードする、核酸。
【請求項５】
請求項１〜請求項４のいずれかに記載の核酸であって、ここで、該改変グルテニンポリペプチドは、ジスルフィド結合形成が可能な状態で、２００  ｋＤａ未満、好ましくは１００  ｋＤａ未満の大きさのモノマーとして維持される、核酸。
【請求項６】
請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の核酸であって、ここで、該核酸は、配列番号１０で示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸。
【請求項７】
請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の核酸を含むベクター。
【請求項８】
請求項７に記載のベクターであって、前記グルテニンポリペプチドの発現を調節するための配列をさらに含む、ベクター。
【請求項９】
請求項７または請求項８に記載のベクターであって、ここで、前記グルテニンポリペプチドの発現を調節する前記配列が、プロモーターおよびターミネーター配列を含む、ベクター。
【請求項１０】
請求項７から請求項９のいずれか１項に記載のベクターであって、ここで、前記プロモーターは誘導プロモーターである、ベクター。
【請求項１１】
請求項７から請求項９のいずれか１項に記載のベクターであって、ここで、前記プロモーターは構成プロ−モーターである、ベクター。
【請求項１２】
請求項７から請求項１１のいずれか１項に記載のベクターであって、ここで、前記プロモーターは、微細菌のプロモーターまたは酵母のプロモーターである、ベクター。
【請求項１３】
請求項７から請求項１２のいずれか１項に記載のベクターであって、ここで該ベクターが、前記グルテニンのタンパク質の分泌を指向し得るシグナル配列をさらに含む、ベクター。
【請求項１４】
請求項７から請求項１３のいずれか１項に記載のベクターであって、ここで該ベクターが、未改変ＬＭＷグルテニンポリペプチドおよび／または未改変ＨＭＷグルテニンポリペプチドをコードする遺伝子をさらに含む、ベクター。
【請求項１５】
請求項１から請求項１４のいずれか１項に記載の核酸によってコードされるポリペプチド。
【請求項１６】
請求項１５に記載のポリペプチドであって、配列番号１０において示される配列を含む、ポリペプチド。
【請求項１７】
改変グルテニンポリペプチドをコードする配列を含む核酸によりコードされたポリペプチドの使用であって、ここで、ジスルフィド架橋を介して分子間架橋を担う一つ以上のシステイン残基をコードする該配列が、グリアジン置換体としてのコード配列の読取り枠を修正することなく欠失しているか、もしくは他のアミノ酸をコードする配列によって置換されている使用。
【請求項１８】
前記ポリペプチドが請求項１５または請求項１６に記載のポリペプチドである、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
請求項１７または請求項１８に記載の使用であって、該使用は、改変グルテニンポリペプチドと未改変ＬＭＷおよび／または未改変ＨＭＷグルテニンポリペプチドとの組み合わせた使用を包含し、ここで、ジスルフィド架橋を介して分子間架橋を担う一つ以上のシステイン残基をコードする前記配列が、欠失しているか、もしくは置換されている、使用。
【請求項２０】
請求項１７から請求項１９のいずれか１項に記載の使用であって、ここで、前記ポリペプチドが、小麦粉、パン生地、生地、ペストリー、クッキー、麺類、ワッフル、パン、および／または菓子類のような食品の調製、または錠剤のような医薬品の調製のために使用される、使用。
【請求項２１】
請求項１９または請求項２０のいずれか１項に記載の使用であって、ここで、前記食品が、かなり減少した量のグリアジンタンパク質を含むか、もしくはグリアジンタンパク質を含まない、使用。
【請求項２２】
請求項８〜請求項１４のいずれか１項に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２３】
請求項２２に記載の宿主細胞であって、ここで、該細胞が細菌細胞または酵母細胞である、宿主細胞。
【請求項２４】
請求項２３に記載の宿主細胞であって、該細胞が、酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、酵母Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ、または細菌Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉである、宿主細胞。
【請求項２５】
核酸を調製する方法であって、以下の工程：
（ａ）グルテニンポリペプチドをコードする核酸が同定される工程；
（ｂ）ジスルフィド架橋を介するグルテニンポリペプチドの分子間架橋を担うシステイン残基をコードする（ａ）の該核酸内の配列が、同定される工程；および
（ｃ）（ａ）の該核酸が、（ｂ）において同定されるシステイン残基をコードする該配列を、該コード配列の読取り枠を変化することなく異なるアミノ酸をコードする配列に変化するために改変される工程；
を包含する、方法。
【請求項２６】
改変したＬＭＷグルテニンポリペプチドを調製する方法であって、ここで、以下：
（ａ）微生物が、請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載の核酸、もしくは請求項２５の記載に従って調製された核酸でトランスフェクトされる工程；および
（ｂ）該ポリペプチドが、培地の上清または該微生物から単離される工程；
を含む、方法。
【請求項２７】
請求項１５または請求項１６に記載の改変ＬＭＷグルテニンポリペプチド、もしくは請求項２６の記載に従って調製された改変ＬＭＷグルテニンポリペプチドを使用した、小麦粉の調製物を含む食品を調製する方法。
【請求項２８】
請求項２７に記載の組み換え的に発現されたポリペプチドから食品を調製する方法であって、ここで、前記改変ＬＭＷグルテニンポリペプチドが、小麦粉および小麦以外の粉を補強するために、粉の調製のために使用される、方法。
【請求項２９】
請求項２７または請求項２８に記載の組み換え的に発現されたポリペプチドから食品を調製する方法であって、ここで、前記小麦粉は、パン生地、生地、ペストリー、クッキー、麺類、ワッフル、パンおよび／または菓子類の調製について使用される、方法。
【請求項３０】
請求項１５または請求項１６に記載のポリペプチドを含むか、もしくは、請求項２７〜請求項２９のいずれか１項に記載の方法によって得られ得る食品であって、ここで、該食品は、好ましくはパン生地、生地、ペストリー、クッキー、麺類、ワッフル、パンおよび／または菓子類である、食品。
【請求項３１】
０．０１重量％未満のグリアジンタンパク質を含む、請求項３０に記載の食品。
【請求項３２】
請求項１５または請求項１６に記載の改変ＬＭＷグルテニンポリペプチドを使用した錠剤の調製、もしくは請求項２６の記載に従って調製される改変ＬＭＷグルテニンポリペプチドを使用した錠剤の調製を包含する、薬学的組成物を調製する方法。
【請求項３３】
請求項３２の記載の方法であって、ここで、前記改変ＬＭＷグルテニンポリペプチドが錠剤上にコーティングされている、方法。
【請求項３４】
請求項１５または請求項１６に記載のポリペプチドを含み、もしくは請求項３２または請求項３３に記載の方法によって得られ得る、錠剤。