【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年10月13日(2006.10.13)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】特許請求の範囲
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  配列番号：１−１１０のいずれかの配列をもつヌクレオチド結合領域を含む単離および精製されたジンクフィンガーヌクレオチド結合ポリペプチド。
【請求項２】  前記ヌクレオチド結合領域が配列番号：１−１６のいずれかの配列をもつ、請求項１に記載の単離および精製されたジンクフィンガーヌクレオチド結合ポリペプチド。
【請求項３】  請求項１又は２のポリペプチドを２つから１２含むポリペプチド組成物。
【請求項４】  ２つから６つの請求項１又は２に記載のポリペプチドを含む請求項３のポリペプチド組成物。
【請求項５】  前記ポリペプチドが機能的に連結された請求項３または４のポリペプチド組成物。
【請求項６】  前記ポリペプチドが配列番号１１１の配列をもつリンカーによって連結された請求項３から５のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項７】  前記ポリペプチドの各々が異なるヌクレオチド配列と結合する請求項３から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項８】  配列５'−（ＧＮＮ）n−３'（式中各ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴであるが、ただし全てのＮがＣであることはなく、ｎは２から６である）を含むヌクレオチドと結合する請求項３から６のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項９】  さらに１つまたは２つ以上の転写調節因子と機能的に連結された請求項１又は２のポリペプチド。
【請求項１０】  さらに１つまたは２つ以上の転写調節因子と機能的に連結された請求項３から８のいずれかに記載のポリペプチド組成物。
【請求項１１】  請求項１又は２のポリペプチドをコードする単離および精製されたポリヌクレオチド。
【請求項１２】  請求項３から８のいずれかに記載のポリペプチド組成物をコードする単離および精製されたポリヌクレオチド。
【請求項１３】  請求項１１のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１４】  請求項１２のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１５】  配列５'−（ＧＮＮ）n−３'（式中ｎは１から６の整数）を含むヌクレオチド配列を調節する方法であって、前記方法が請求項３から８のいずれかに記載のポリペプチド組成物の有効量に前記ヌクレオチド配列を暴露することを含む前記ヌクレオチド配列の調節方法。
【請求項１６】  配列５'−（ＧＮＮ）n−３'が前記ヌクレオチド配列の転写領域に位置する請求項１５の方法。
【請求項１７】  配列５'−（ＧＮＮ）n−３'が前記ヌクレオチド配列のプロモーター領域に位置する請求項１５の方法。
【請求項１８】  配列５'−（ＧＮＮ）n−３'が発現配列タグ内に位置する請求項１５の方法。
【請求項１９】  前記ポリペプチド組成物が１つまたは２つ以上の転写調節因子と機能的に連結されている請求項１５の方法。
【請求項２０】  請求項３から８のいずれかに記載のポリペプチド組成物を含む医薬。
【請求項２１】  人間を治療する医薬の製造を目的とする請求項３から８のいずれかに記載のポリペプチド組成物の使用。
【請求項２２】  癌を治療する医薬の製造を目的とする請求項３から８のいずれかに記載のポリペプチド組成物の使用。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００９】
発明が解決しようとする課題
本発明の特徴の１つでは、配列番号：１−１１０のいずれかのアミノ酸残基配列を含む、単離および精製したジンクフィンガーヌクレオチド結合ポリペプチドが提供される。関連する特徴では、本発明はさらに２つから約１２のそのようなジンクフィンガーヌクレオチド結合ポリペプチドを含む組成物を提供する。本組成物は好ましくは２つから約６つのポリペプチドを含む。好ましい実施態様では、ジンクフィンガーヌクレオチド結合ポリペプチドは、好ましくは配列番号：１１１の配列を有するアミノ酸残基によって機能的に連結されている。本発明の組成物は、５'−（ＧＮＮ）n−３'なる配列を含むヌクレオチド標的と特異的に結合する。ここで各ＮはＡ、Ｃ、ＧまたはＴであるが、ただし全てのＮがＣであることはないということを条件とし、ｎは好ましくは２から６である。ポリペプチドまたは組成物は、さらに１つまたは２つ以上の転写調節因子、例えば転写アクチベーターまたは転写サプレッサーもしくはリプレッサーに機能的に連結されていてもよい。本発明はまた、本発明のポリペプチドまたは組成物をコードする単離および精製ポリヌクレオチド並びにそのようなポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
その標的に対する前記蛋白質の各々の親和性を電気泳動移動性シフトアッセイによって測定した。これらの実験は、ジンクフィンガーペプチドは、Ｚｉｆ２６８および他の天然の転写因子に匹敵する親和性（３から７０ｎＭの範囲のＫd値）を有することを示した。ここでＺｉｆ２６８のそのオペレーターに対するＫd値は１０ｎＭであることが見出された。説明できない理由で、１グループが天然のＺｉｆ２６８蛋白質のＫd値を６ｎＭから１０ｐＭの範囲（６００倍の変動）であると報告したことは特記する必要がある（N.P. Pavletich & C.O. Pabo, Science 252:809-17(1991); H.A. Greisman & C.O. Pabo, Science 275:657-661(1997)）。ほとんどの実験ではＺｉｆ２６８−ＤＮＡ相互反応のＫd値は３から１０ｎＭと報告された（Y. Choo & A. Klug, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:11163-11167(1994); T.B. Hamilton, F. Borel & P.J. Romaniuk, Biochemistry 37:2051-2058(1998))。したがって、ここで報告した結果を別の場所で報告された結果と比較するために、相対Ｋdｓ、（変異体Ｋd）／（Ｚｉｆ２６８Ｋd）を比較するべきである（前式では両方の値が同じ報告に由来する）。本データは、ファージディスプレーを用いて調製された新規な３フィンガー蛋白質についての他の研究（この場合Ｚｉｆ２６８より１０から２００倍低い親和性が報告されている（H.A. Greisman & C.O. Pabo, Science 275:657-661; Y. Choo, I. Sanchez-Garcia & A. Klug, Nature 372:642-5(1994)）と適切に比較できる。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６９】
実施例２：マルチ標的特異性アッセイ
ジンクフィンガーコード配列を含むｐＣｏｍｂ３Ｈ
2002527097.tif 000001
ファージミドＲＦＤＮＡのフラグメントを改造ｐＭＡＬ−ｃ２（New England Biolabs)細菌発現ベクターでサブクローニングし、ＸＬ１−ブルー（Stratagene）を形質転換した。過剰発現したマルトース結合蛋白質−ジンクフィンガー融合蛋白質を含む凍結／融解抽出物をＩＰＴＧ誘発培養から蛋白質融合精製系（New England Biolabs)を用いて調製した。９６穴（ウェル）のＥＬＩＳＡプレートで０．２μｇのストレプトアビジン（Pierce）を各ウェルに３７℃で１時間適用し、続いて水で２回洗浄した。ビオチン付加標的オリゴヌクレオチド（０．０２５μｇ）を同様に適用した。ＺＢＡ／３％ＢＳＡを封鎖に用いたが、ウェルは保温のあと洗浄しなかった。その後の全ての保温は室温で実施した。２倍段階希釈した８つの抽出物を１×結合緩衝液（ＺＢＡ／１＆ＢＳＡ／５ＭｍのＤＴＴ／０．１２μｇ／μｌのせん断ニシン精子ＤＮＡ）中に適用した。サンプルを１時間保温し、続いて水で１０回洗浄した。ＺＢＡ／１％ＢＳＡ中のマウスの抗マルトース結合蛋白質ｍＡｂ（Sigma)をウェルに３０分適用し、続いて水で１０回洗浄した。アルカリホスファターゼと共役させたヤギ抗マウスＩｇＧｍＡｂ（Sigma)をウェルに３０分適用し、続いて水で１０回洗浄した。アルカリホスファターゼ基質（Sigma)を適用し、ＯＤ405をＳＯＦＴｍａｘ２．３５（Molecular Devices）で定量した。