【手続補正書】
【提出日】平成17年10月31日(2005.10.31)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式(XII)で表される化合物：
【化１】
2005515977.tif 000001
該一般式において、R7はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-CH2-C6H4OR14であり；
R8はH、アルキル、ヘテロアルキル、またはアリール基であり；
R9はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-C6H4OR15であり；
R10は-H、-CH3または-CH(CH3)2であり；かつ
R11、R14およびR15は夫々独立に酵素-離脱性基であり；
但し、R11、R14およびR15全てがアセチル基ではないことを条件とする。
【請求項２】
R7が、-CH2-C6H5、ナフチル、-CH2-C6H4OH、-CH2-C6H4F、または-CH2-C6H4OR14であり；R8が-CH2C6H5、-CH2C6H11、-CH2C5H9、または-(CH2)3NHC(=NH)NH2；およびR9がフェニル、インドリル、-C6H4OH、-C6H4NH2、-C6H4F、または-C6H4OR15である、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
R11、R14およびR15がエステルである、請求項1記載の化合物。
【請求項４】
R11がアセチル基であり、かつR14およびR15が夫々独立に、ブチリル、アセトキシメチル、プロパノイルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、またはピバロイルオキシメチル基である、請求項1記載の化合物。
【請求項５】
R11がブチリル、アセトキシメチル、プロパノイルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、またはピバロイルオキシメチル基であり、かつR14およびR15が夫々独立に、アセチル、ブチリル、アセトキシメチル、プロパノイルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、またはピバロイルオキシメチル基である、請求項1記載の化合物。
【請求項６】
以下の式(XIII)または(XIV)で表され：
【化２】
2005515977.tif 000002
ここで、R7はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-CH2-C6H4OR14であり；
R8はH、アルキル、ヘテロアルキル、またはアリール基であり；
R12およびR13は夫々独立に-H、-OH、アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたは-OR16であり；
nは0、1または2であり、かつ
R11、R14およびR16は夫々独立に酵素-離脱性基であることを特徴とする、化合物。
【請求項７】
R7が-CH2-C6H5、ナフチル、-CH2-C6H4OH、-CH2-C6H4F、または-CH2-C6H4OR14であり、かつR8が-CH2C6H5、-CH2C6H11、-CH2C5H9、または-(CH2)3NHC(=NH)NH2である、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
R11、R14およびR16がエステルである、請求項６記載の化合物。
【請求項９】
R11、R14およびR16が夫々独立に、アセチル、ブチリル、アセトキシメチル、プロパノイルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、またはピバロイルオキシメチル基である、請求項６記載の化合物。
【請求項１０】
nが1である、請求項６記載の化合物。
【請求項１１】
保護された発光団であって、変性されたセレンテラジンであり、
そのエノール基が酵素-離脱性基を含むエステルまたはエーテルに転化されており、該酵素-離脱性基の除去が、原セレンテラジンを与え、かつ
22℃における、F12媒体および10％牛胎児血清を含む混合物中の該変性セレンテラジンの濃度を、50％だけ低下するのに要する時間が、22℃における、F12媒体および10％牛胎児血清を含む混合物中の該原セレンテラジンの濃度を、50％だけ低下するのに要する時間よりも長いことを特徴とする、上記発光団。
【請求項１２】
発光性タンパク質の酵素学的活性を測定する方法であって、発光性タンパク質、脱保護用酵素および保護された発光団を溶液内で接触させて、組成物を生成し、および該組成物の発生する光を検出する諸工程を含むことを特徴とする、上記方法。
【請求項１３】
該発光性タンパク質が、レニラルシフェラーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
該保護された発光団が、以下の式(XII)で表される化合物である、請求項１２記載の方法：
【化３】
2005515977.tif 000003
ここで、R7はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-CH2-C6H4OR14であり；
R8はH、アルキル、ヘテロアルキル、またはアリール基であり；
R9はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-C6H4OR15であり；
R10は-H、-CH3または-CH(CH3)2であり；および
R11、R14およびR15は夫々独立に酵素-離脱性基を表す。
【請求項１５】
R7が-CH2-C6H5、ナフチル、-CH2-C6H4OH、-CH2-C6H4F、または-CH2-C6H4OR14であり、R8が-CH2C6H5、-CH2C6H11、-CH2C5H9、または-(CH2)3NHC(=NH)NH2であり、およびR9がフェニル、インドリル、-C6H4OH、-C6H4NH2、-C6H4F、または-C6H4OR15である、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
R11、R14およびR15がエステルである、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
R11、R14およびR15が夫々独立に、アセチル、ブチリル、アセトキシメチル、プロパノイルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、またはピバロイルオキシメチル基である、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
該保護された発光団が、以下の式(XIII)または(XIV)で表される化合物である請求項１２記載の方法：
【化４】
2005515977.tif 000004
ここで、R7はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-CH2-C6H4OR14であり；
R8はH、アルキル、ヘテロアルキル、またはアリール基であり；
R12およびR13は夫々独立に-H、-OH、アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたは-OR16であり；
nは0、1または2であり、かつ
R11、R14およびR16は夫々独立に酵素-離脱性基である。
【請求項１９】
R7が-CH2-C6H5、ナフチル、-CH2-C6H4OH、-CH2-C6H4F、または-CH2-C6H4OR14であり、かつR8が-CH2C6H5、-CH2C6H11、-CH2C5H9、または-(CH2)3NHC(=NH)NH2である、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
R11、R14およびR16がエステルである、請求項１８記載の方法。
【請求項２１】
R11、R14およびR16が夫々独立に、アセチル、ブチリル、アセトキシメチル、プロパノイルオキシメチル、ブチリルオキシメチル、またはピバロイルオキシメチル基である、請求項１８記載の方法。
【請求項２２】
nが1である、請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
該組成物が、上記脱保護酵素を含有する細胞を含む、請求項１２記載の方法。
【請求項２４】
該組成物の発生する光の検出が、細胞中の該脱保護酵素の位置を示す、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
該脱保護酵素がエステラーゼである、請求項１２記載の方法。
【請求項２６】
非-発光性酵素の酵素活性を測定する方法であって、非-発光性酵素と、発光性タンパク質および保護された発光団を含む液状混合物とを接触させて、組成物を生成する工程と、該組成物の発生する光を検出する工程とを含むことを特徴とする、上記方法。
【請求項２７】
該保護された発光団が、変性されたセレンテラジンであり、該エノール基が、該非-発光性酵素により離脱可能な基を含むエステルまたはエーテルに転化されている、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
該保護された発光団が、以下の式(XII)で表される化合物である、請求項２６記載の方法：
【化５】
2005515977.tif 000005
ここで、R7はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-CH2-C6H4OR14であり；
R8はH、アルキル、ヘテロアルキル、またはアリール基であり；
R9はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-C6H4OR15であり；
R10は-H、-CH3または-CH(CH3)2であり；かつ
R11、R14およびR15は夫々独立に該非-発光性酵素により脱離可能な、酵素-離脱性基を表す。
【請求項２９】
該保護された発光団が、以下の式(XIII)または(XIV)で表される化合物である請求項２６記載の方法：
【化６】
2005515977.tif 000006
ここで、R7はH、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、または-CH2-C6H4OR14であり；
R8はH、アルキル、ヘテロアルキル、またはアリール基であり；
R12およびR13は夫々独立に-H、-OH、アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたは-OR16であり；
nは0、1または2であり、かつ
R11、R14およびR16は夫々独立に該非-発光性酵素により脱離可能な、酵素-離脱性基である。
【請求項３０】
R11、R14およびR15が夫々独立に、炭素原子数1-20のアルキル基および炭素原子数1-20のヘテロアルキル基からなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３１】
R11、R14およびR15が夫々独立に、炭素原子数1-15のアルキル基および炭素原子数1-15のヘテロアルキル基からなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３２】
R11、R14およびR15が夫々独立に、1-20個の炭素原子を含み、かつエステル基およびエーテル基の少なくとも一方を含むヘテロアルキル基を表す、請求項１記載の化合物。
【請求項３３】
R11、R14およびR16が夫々独立に、炭素原子数1-20のアルキル基および炭素原子数1-20のヘテロアルキル基からなる群から選択される、請求項６記載の化合物。
【請求項３４】
R11、R14およびR16が、夫々独立に、1-20個の炭素原子を含み、かつエステル基およびエーテル基の少なくとも一方を含むヘテロアルキル基を表す、請求項６記載の化合物。
【請求項３５】
R11、R14およびR15が夫々独立に、炭素原子数1-20のアルキル基および炭素原子数1-20のヘテロアルキル基からなる群から選択される、請求項１４記載の方法。
【請求項３６】
R11、R14およびR15が夫々独立に、1-20個の炭素原子を含み、かつエステル基およびエーテル基の少なくとも一方を含むヘテロアルキル基を表す、請求項１４記載の方法。
【請求項３７】
R11、R14およびR16が夫々独立に、炭素原子数1-20のアルキル基および炭素原子数1-20のヘテロアルキル基からなる群から選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項３８】
R11、R14およびR16が夫々独立に、1-20個の炭素原子を含み、かつエステル基およびエーテル基の少なくとも一方を含むヘテロアルキル基を表す、請求項１８記載の方法。