【手続補正書】
【提出日】平成18年10月13日(2006.10.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪蓄積による体重異常の処置に有効な薬剤を同定する方法であって、
ｉ）Ｓ６キナーゼと化合物をインキュベートする工程；
ｉｉ）Ｓ６キナーゼ活性を検出する工程；および
ｉｉｉ）Ｓ６キナーゼ活性における化合物の誘発するモジュレーションを当該化合物が存在しない場合と比較して判定する工程であって、ここで、該化合物の存在下におけるＳ６キナーゼ活性が変化した場合、当該化合物が脂肪蓄積による体重異常の処置に有効な薬剤であり得るとする工程；
を含む方法。
【請求項２】
当該モジュレーションがＳ６キナーゼ１活性の阻害であり、当該体重異常が肥満または過体重状態である請求項１記載の方法。
【請求項３】
当該モジュレーションがＳ６キナーゼ１活性の活性化であり、当該体重異常が不十分な脂肪蓄積を原因とする低体重状態である請求項１記載の方法。
【請求項４】
Ｓ６を基質として用いてＳ６キナーゼ活性を判定することを含む、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ペプチド基質を用いてＳ６キナーゼ活性を判定することを含む、請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
体重異常の処置に有効な薬剤のスクリーニング方法であって、（ａ）少なくとも１つの化合物の存在下にて、プロモーター配列に操作可能に連結するＳ６キナーゼ遺伝子をエンコードするか、またはレポーター遺伝子に操作可能に連結するＳ６キナーゼプロモーター配列をエンコードする核酸と転写活性細胞成分を接触させること；および（ｂ）Ｓ６キナーゼ発現またはＳ６キナーゼプロモーター活性における当該化合物の作用を検出することであって、ここで、Ｓ６キナーゼ発現またはプロモーター活性に増減ありと検出した場合、当該化合物が脂肪蓄積による体重異常の処置に有効な薬剤であり得るとすることを含む方法。
【請求項７】
当該転写活性細胞成分および当該核酸が細胞に存在するものである、請求項６記載の方法。
【請求項８】
当該Ｓ６キナーゼがＳ６キナーゼ１である請求項６または７記載の方法。
【請求項９】
脂肪蓄積、脂肪代謝または脂肪細胞サイズに対する当該薬剤による作用を検出することをさらに含む、請求項１〜８のいずれか１項記載の方法。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれか１項記載の方法により同定される薬剤。
【請求項１１】
脂肪細胞サイズを減少させる方法であって、Ｓ６キナーゼ２と比較してＳ６キナーゼ１活性を優先的に低下させるインヒビターの有効量と脂肪細胞を接触させることを含む方法。
【請求項１２】
脂肪蓄積による体重異常を処置または予防する方法であって、医薬上有効量のＳ６キナーゼモジュレーターを被験者に投与することを含む方法。
【請求項１３】
当該Ｓ６モジュレーターが、Ｓ６キナーゼ２と比較してＳ６キナーゼ１活性を優先的に低下させるインヒビターであり、当該体重異常が肥満または過体重状態である請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
当該インヒビターがＳ６キナーゼ１のＡＴＰ結合部位に結合するものである、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
当該インヒビターがＳ６キナーゼ１の触媒ドメインに結合するものである、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
当該インヒビターがＳ６キナーゼ１に特異的な抗体または抗体フラグメントである、請求項１３記載の方法。
【請求項１７】
当該インヒビターがＳ６キナーゼ２と比較してＳ６キナーゼ１の発現を優先的に減少させるアンチセンス、リボザイムまたはsiＲＮＡである、請求項１３記載の方法。
【請求項１８】
脂肪蓄積による体重異常を処置または予防的に処置するための医薬の製造におけるＳ６キナーゼモジュレーターの使用。
【請求項１９】
脂肪蓄積または肥満による過体重状態を処置または予防的に処置するための医薬の製造における、Ｓ６キナーゼ２と比較してＳ６キナーゼ１活性を優先的に阻害する薬剤の使用。
【請求項２０】
過体重または肥満の個体の癌腫症状を処置または予防的に処置するための医薬の製造における、Ｓ６キナーゼ２と比較してＳ６キナーゼ１活性を優先的に阻害する薬剤の使用。
【請求項２１】
当該薬剤がアンチセンス分子、リボザイム、siＲＮＡ、抗体または抗体フラグメントである、請求項１９または２０に記載の使用。
【請求項２２】
医薬として使用する AGUGUUUGACAUAGACCUG（配列番号：１）または AAGGGGGCUAUGGAAAGGUUU（配列番号：２）の核酸配列を含んでなる少なくとも一部が二本鎖であるＲＮＡ。
【請求項２３】
脂肪蓄積による体重異常の素因の診断方法であって、
個体からサンプルを採取すること；
当該サンプル中のＳ６キナーゼ活性レベルを検出すること；および
正常対照値または値の変動幅と比較した場合のＳ６キナーゼ活性の変化を、脂肪蓄積による体重異常の素因と相関させること；
を含む方法。
【請求項２４】
当該Ｓ６キナーゼ活性がＳ６キナーゼ１活性である、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
当該変化が、正常対照値または値の変動幅と比較した場合のＳ６キナーゼ１活性の増加であり、当該体重異常が過体重状態または肥満である請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも１つの脂肪細胞、およびＳ６キナーゼ活性を検出するための手段を含んでなるキット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明のスクリーニングアッセイは、好ましくは脂肪蓄積、脂肪代謝または脂肪細胞サイズに対する当該化合物による作用を検出する工程を含む。
さらに、本発明方法により同定される薬剤をも包含する。
さらなる側面においては、脂肪細胞サイズを減少させる方法であって、脂肪細胞を有効量のＳ６キナーゼ１インヒビター（Ｓ６キナーゼ２と比較してＳ６キナーゼ１活性を優先的に低下させるインヒビター）と接触させることを含む方法が提供される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
従って、本発明はＳ６キナーゼ活性、特にＳ６キナーゼ１活性のモジュレーションに基づき、肥満のような脂肪蓄積による体重異常の処置に有効な薬剤の同定方法を提供する。典型的には、かかる方法は、Ｓ６キナーゼ（またはその機能的等価物もしくは誘導体）を化合物とインキュベートする工程；Ｓ６キナーゼ活性を検出する工程；および該化合物が誘発するＳ６キナーゼ活性のモジュレーションを該化合物の存在しない場合と比較して判定する工程を含む。該化合物の存在下でのＳ６キナーゼ活性の変化は、該化合物が体重異常の処置に有効な薬剤であり得ることを示唆する。該化合物不存在下での対照アッセイは並行して実施し得る。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
一般的に言って、かかる変異体は野生型または本明細書に特定した他の配列に実質的に相同である、すなわち、それとの配列類似性または同一性を共有する。類似性または同一性とは、ヌクレオチド配列および／またはエンコードされたアミノ酸配列レベルであり、また好ましくは少なくとも約５０％、６０％、または７０％あるいは８０％であり、最も好ましくは、少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％である。配列比較はＦＡＳＴＡおよびＦＡＳＴＰを使用して実施し得る（参照：Pearson & Lipman, 1988, Methods in Enzymology 183: 63-98）。パラメータは、好ましくはデフォルトマトリックスを用い、以下のように設定する：ガポペン（ギャップにおける最初の残基に対するペナルティ）：タンパク質について−１２／ＤＮＡについて−１６；ギャペックスト（ギャップにおけるさらなる残基に対するペナルティ）：タンパク質について−２／ＤＮＡについて−４；ＫＴＵＰワードの長さ：タンパク質について２／ＤＮＡについて６。類似性解析も、ハイブリッド形成を用いて実施し得る。特定の配列相同性の核酸分子間のハイブリッド形成達成のために必要なストリンジェントな条件を計算するための一つの共通する式は以下のとおりである：
Ｔｍ＝８１.５℃＋１６.６Ｌog［Ｎａ＋］＋０.４１（％Ｇ＋Ｃ）−０.６３（％ホルムアミド）−６００／＃ｂｐ（２回繰返し）（Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 2nd edition, Sambrook et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press）。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７１】
本発明による化合物は、本明細書にすでに記載した技法を用いるスクリーニングで同定可能であり、確立された手法に従い、天然または遺伝子的に修飾した起源から抽出することにより、または特に低分子量化合物の場合には合成により、調製し得る。タンパク質性の化合物は、組換え発現系、例えば、バキュロウイルス系にて、またはバクテリア系での発現により調製し得る。タンパク質性化合物はシグナル伝達経路の機能の研究に主として有用であるが、治療用、例えば、Ｓ６キナーゼ１に対するヒト化阻害性抗体などに適用し得る。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
両遺伝子型のマウスはＮＣＤよりもＨＦＤで摂食量がすくなかったが、恐らくＮＣＤに比べてＨＦＤがより高カロリー密度であることによる。一定の期間に、Ｓ６Ｋ１-/-マウスは野生型マウスと同量の食餌を消費するが、体重に対して標準化すると当該マウスは４４％より多い食餌を消費する。従って、Ｓ６Ｋ１マウスがより摂食するとしても、当該マウスが野生型マウスと同程度まで脂肪を増やすことはない。