【手続補正書】
【提出日】平成18年3月29日(2006.3.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
未分化ＥＳ細胞から脈管形成性の始原細胞を調製するための方法であって、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性の始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、（ｂ）脈管形成性の始原細胞である５０μｍより小さい前記細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
を含む方法。
【請求項２】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項１記載の方法。
【請求項３】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記ろ過が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項３記載の方法。
【請求項５】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項１記載の方法。
【請求項６】
未分化ＥＳ細胞から上皮始原細胞を調製するための方法であって、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性の始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、（ｂ）上皮始原細胞である５０μｍより大きい前記細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
を含む方法。
【請求項７】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項６記載の方法。
【請求項８】
５０μｍより大きい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項６記載の方法。
【請求項９】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項８記載の方法。
【請求項１０】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項６記載の方法。
【請求項１１】
体細胞を脈管形成性始原細胞の集団から調製する方法であって、
（ａ）脈管形成性始原細胞の集団を得ること、および、
（ｂ）体細胞の分化を誘導するために好適な少なくとも１つの増殖因子の存在下で脈管形成性始原細胞の集団を培養し、それにより、体細胞を調製すること、
を含む方法。
【請求項１２】
工程（ａ）が、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性の始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、（ｂ）脈管形成性の始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
によって行われる請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項１１記載の方法。
【請求項１７】
前記成長因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンギオポエチン（Ａｎｇ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、エフリン（Ｅｐｈ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、腫瘍増殖因子（ＴＧＦ）、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、サイトカイン、エリスロポエチン、トロンボポエチン、トランスフェリン、インスリン、幹細胞因子（ＳＣＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される請求項１１記載の方法。
【請求項１８】
血管組織を調製する方法であって、
（ａ）脈管形成性始原細胞の集団を得ること、および、
（ｂ）血管組織の分化を誘導するために好適な条件のもと、少なくとも１つの脈管形成性増殖因子および／または血管形成性増殖因子の存在下で脈管形成性始原細胞の前記集団を培養すること、
を含む方法。
【請求項１９】
工程（ａ）が、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性の始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、（ｂ）脈管形成性の始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
によって行われる請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項１９記載の方法。
【請求項２２】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項１９記載の方法。
【請求項２４】
脈管形成性始原細胞の前記集団が半固体の脈管化促進培地で培養される請求項１８記載の方法。
【請求項２５】
脈管形成性始原細胞の前記集団が３次元の足場において培養される請求項１８記載の方法。
【請求項２６】
前記脈管形成性増殖因子および／または血管形成性増殖因子は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンギオポエチン（Ａｎｇ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、エフリン（Ｅｐｈ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、腫瘍増殖因子（ＴＧＦ）および胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）からなる群から選択される請求項１８記載の方法。
【請求項２７】
血管の発達、成長および／または変化に対する因子の影響を明らかにする方法であって、
（ａ）脈管形成性始原細胞の集団を得ること、
（ｂ）脈管形成性始原細胞の前記集団を因子にさらすこと、および、
（ｃ）脈管形成性始原細胞の前記集団に対する因子の影響を明らかにし、それにより、血管の発達に対するその影響を明らかにすること、
を含む方法。
【請求項２８】
工程（ａ）が、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性の始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、（ｂ）脈管形成性の始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
によって行われる請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項２８記載の方法。
【請求項３１】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項２８記載の方法。
【請求項３３】
因子が物質および／または環境因子である請求項２７記載の方法。
【請求項３４】
因子が、血管形成および／または脈管形成の推定される下方調節因子（ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｏｒ）であり、前記方法はさらに、工程（ｂ）の前に血管形成および／または脈管形成を促進するために好適な条件のもとで脈管形成性始原細胞の前記集団を培養することを含む請求項２７記載の方法。
【請求項３５】
因子が、血管形成および／または脈管形成の推定される上方調節因子（ｕｐｒｅｇｕｌａｔｏｒ）であり、前記方法はさらに、工程（ｂ）の前に血管形成および／または脈管形成を制限する条件のもとで脈管形成性始原細胞の前記集団を培養することを含む請求項２７記載の方法。
【請求項３６】
脈管形成性始原細胞の集団を含む細胞培養物であって、脈管形成性始原細胞の集団は少なくとも１４日間にわたって増殖状態で維持することができ、かつ、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アンギオポエチン（Ａｎｇ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、エフリン（Ｅｐｈ）、繊維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、腫瘍増殖因子（ＴＧＦ）、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、サイトカイン、エリスロポエチン、トロンボポエチン、トランスフェリン、インスリン、幹細胞因子（ＳＣＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）からなる群から選択される少なくとも１つの増殖因子にさらされたとき、平滑筋細胞、内皮細胞および／または造血細胞への分化が可能である細胞培養物。
【請求項３７】
脈管形成性始原細胞の前記集団は少なくとも１つの外因性ポリペプチドを発現することができる請求項３６記載の細胞培養物。
【請求項３８】
前記外因性ポリペプチドは、細胞表面マーカー、細胞表面抗原、血管形成因子、脈管形成因子および造血因子からなる群から選択される請求項３７記載の細胞培養物。
【請求項３９】
前記外因性ポリペプチドが誘導可能な様式で発現する請求項３７記載の細胞培養物。
【請求項４０】
基質と、脈管形成性始原細胞の集団とを含む組成物であって、
前記の脈管形成性始原細胞は、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得る工程、および、
（ｂ）脈管形成性始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離する工程、
を含む方法によって未分化ＥＳ細胞から調製される組成物。
【請求項４１】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項４０記載の組成物。
【請求項４２】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項４１記載の組成物。
【請求項４３】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項４２記載の組成物。
【請求項４４】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項４０記載の組成物。
【請求項４５】
前記基質は、マトリゲル、コラーゲンゲルおよびポリマー足場からなる群から選択される請求項４０記載の組成物。
【請求項４６】
前記脈管形成性始原細胞が、前記基質内における血管の発達を誘導するような様式で前記基質と接触させられる請求項４０記載の組成物。
【請求項４７】
哺乳動物対象における血管の疾患または状態を緩和または防止する方法であって、
（ａ）脈管形成性始原細胞の集団を得ること、および、
（ｂ）前記脈管形成性始原細胞が内皮細胞および平滑筋細胞に分化することを刺激するために好適な条件のもとで、前記脈管形成性始原細胞を対象に投与し、それにより前記血管の疾患または状態を緩和すること、
を含む方法。
【請求項４８】
脈管形成性始原細胞の前記集団を得ることが、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、
（ｂ）脈管形成性始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
によって行われる請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項４８記載の方法。
【請求項５０】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項５０記載の方法。
【請求項５２】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項４７記載の方法。
【請求項５３】
前記血管の疾患または状態は、先天性の血管障害、後天的な血管障害、および虚血／再灌流傷害からなる群から選択される請求項４７記載の方法。
【請求項５４】
哺乳動物組織を脈管化させる方法であって、
（ａ）脈管形成性始原細胞の集団を得ること、および、
（ｂ）前記脈管形成性始原細胞が内皮細胞および平滑筋細胞に分化することを刺激するために好適な条件のもとで、前記脈管形成性始原細胞を前記哺乳動物組織と接触させ、それにより、組織の血管分布を高めること、
を含む方法。
【請求項５５】
脈管形成性始原細胞の前記集団を得ることが、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、
（ｂ）脈管形成性始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
によって行われる請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項５７記載の方法。
【請求項５９】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項５４記載の方法。
【請求項６０】
前記哺乳動物組織が脈管化を必要とする操作された非血管組織である請求項５４記載の方法。
【請求項６１】
前記哺乳動物組織が胚組織である請求項５４記載の方法。
【請求項６２】
工程（ｂ）がインビトロで行われる請求項５４記載の方法。
【請求項６３】
工程（ｂ）がインビボで行われる請求項５４記載の方法。
【請求項６４】
哺乳動物対象における血液学的な疾患または状態を緩和または防止する方法であって、
（ａ）脈管形成性始原細胞の集団を得ること、および、
（ｂ）前記脈管形成性始原細胞が内皮細胞および血液細胞に分化することを刺激するために好適な条件のもとで、前記脈管形成性始原細胞を対象に投与し、それにより前記血液学的な疾患または状態を緩和すること、
を含む方法。
【請求項６５】
工程（ａ）が、
（ａ）個々の未分化ＥＳ細胞を、未分化ＥＳ細胞が脈管形成性の始原細胞に分化することを誘導するために好適な様式で培養し、それにより、混合細胞集団を得ること、および、（ｂ）脈管形成性の始原細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
によって行われる請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
工程（ａ）が、ＥＳ細胞の凝集を避けること、コラーゲン上での成長、２Ｘ１０４細胞／ｃｍ２〜１Ｘ１０５細胞／ｃｍ２の細胞接種濃度、および分化培地の存在からなる群から選択される少なくとも１つの条件に未分化ＥＳ細胞を供することによって行われる請求項６５記載の方法。
【請求項６７】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
前記未分化ＥＳ細胞がヒトＥＳ細胞である請求項６４記載の方法。
【請求項７０】
前記血液学的な疾患または状態は、先天性の血液障害、後天的な血液障害、凝固障害および新生物疾患からなる群から選択される請求項６４記載の方法。
【請求項７１】
内皮細胞を血管組織から調製する方法であって、
（ａ）血管組織から細胞を解離するために設計された条件に血管組織を供し、それにより、解離された細胞の混合集団を得ること、および、
（ｂ）内皮細胞である５０μｍより小さい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
を含む方法。
【請求項７２】
５０μｍより小さい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項７１記載の方法。
【請求項７３】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
前記血管組織がヒト血管組織である請求項７１記載の方法。
【請求項７５】
上皮細胞を血管組織から調製する方法であって、
（ａ）血管組織から細胞を解離するために設計された条件に血管組織を供し、それにより、解離された細胞の混合集団を得て、それにより、個々の細胞の混合集団を得ること、および、
（ｂ）上皮細胞である５０μｍより大きい細胞を前記混合細胞集団から単離すること、
を含む方法。
【請求項７６】
５０μｍより大きい前記細胞が、ろ過、形態計測および／またはデンシトメトリーによって単離される請求項７５記載の方法。
【請求項７７】
ろ過による前記単離が５０μｍより小さい細孔サイズを有するフィルターによって行われる請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
前記血管組織がヒト血管組織である請求項７５記載の方法。