【手続補正書】
【提出日】平成18年7月21日(2006.7.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  構造式Ｉ：
【化１】
2002521484.tif 000001
（式中、Ｒ1 は、水素、ヒドロキシメチル又は１−ヒドロキシエチルであり、Ｒ2 は水素又はメチルであり、そしてＲ3 は、酸素−炭素間単結合又は窒素−炭素間単結合により分子の残りの部分に結合し、置換された又は置換されない次の基：アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、シクロアルコキシ、Ｎ−ヘテロシクリル、ヘテロシクリルオキシ、ヘテロシクリルカルボニルオキシ、ヘテロシクリルチオカルボニルオキシ、アシルオキシ、チオアシルオキシ、アルコキシカルボニルオキシ、カルバモイルオキシ、チオカルバモイルオキシ、ヘテロシクリルオキシカルボニルオキシ、ヘテロシクリルオキシチオカルボニルオキシ、Ｎ−ヘテロシクリルカルバモイルオキシ、Ｎ−ヘテロシクリルチオカルバモイルオキシ、ヘテロシクリルカルボニルアミノ、ヘテロシクリルチオカルボニルアミノ、ヘテロシクリルオキシカルボニルアミノ、アシルアミノ、アルコキシカルボニルアミノ、アルコキシチオカルボニルアミノ、チオアシクルアミノ、Ｎ−ヘテロシクリルカルバモイルアミノ、Ｎ−ヘテロシクリルチオカルバモイルアミノ、カルバモイルアミノ、チオカルバモイルアミノ、イミドイルアミノ、グアニジノ、Ｎ−ヘテロシクリル−アルコキシカルボニルアミノ、Ｎ−ヘテロシクリル−アルキルチオカルボニルアミノ及びＮ−スルホニルアミノを含む群から選択される医薬として許容される基であり、ここで先のアルキル、アルケニル、アルキニル、アシル、チオアシル又はイミドイル分子部分は１〜６の炭素原子を含みヘテロシクリル成分は一環又は二環であって、その１又は複数が酸素、硫黄及び窒素を含む群から選択される３〜１０の環原子を含み、ここで、先の基Ｒ3 の置換基は、アルキル、アシル、チオアシル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アミノアルコキシ、アミジノアルコキシ、グアニジノアルコキシ、アシルオキシ、ヘテロシクリルオキシ、アルキルヘテロシクリルオキシ、ヒドロキシアルキルヘテロシクリルオキシ、アミノアルキルヘテロシクリルオキシ、カルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、カルバモイルオキシ、アルキルカルバモイルオキシ、ジアルキルカルバモイルオキシ、チオカルバモイル、アルキルチオカルバモイル、ジアルキルチオカルバモイル、チオカルバモイルオキシ、アルキルチオカルバモイルオキシ、ジアルキルチオカルバモイルオキシ、メルカプト、アルキルチオ、ヒドロキシアルキルチオ、アミノアルキルチオ、モノアルキルアミノアルキルチオ、ジアルキルアミノアルキルチオ、アミジノアルキルチオ、アシルチオ、ヘテロシクリルチオ、アルキルヘテロシクリルチオ、ヒドロキシアルキルヘテロシクリルチオ、アミノアルキルヘテロシクリルチオ、カルバモイルチオ、モノアルキルカルバモイルチオ、ジアルキルカルバモイルチオ、チオカルバモイルチオ、アルキルチオカルバモイルチオ、ジアルキルカルバモイルチオ、アミノ、モノアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、オキソ、オキシミノ、又はアルキルイミノ、イミドイルアミノ、アルキルイミドイルアミノ、ジアルキルイミドイルアミノ、テトラアルキルアンモニウム���シクロアルキルアミノ、ヘテロシクリルアミノ、アルキルヘテロシクリルアミノ、ヘテロシクリルカルボニルアミノ、アルキルヘテロシクリルカルボニルアミノ、アシルアミノ、アミジノ、モノアルキルアミジノ、ジアルキルアミジノ、グアニジノ、アルキルグアニジノ、ジアルキルグアニジノ、カルバモイルアミノ、チオカルバモイルアミノ、アルキルカルバモイルアミノ、チオカルバモイルアミノ、アルキルチオカルバモイルアミノ、ニトロ、塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、アジド、シアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、スルホンアミド、スルファモイルオキシ、アルキルスルファモイルオキシ、アルキルスルホニルオキシ又はスルホ、スルホキシ、カルボキサミド、Ｎ−モノアルキルカルボキサミド、Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルボキサミド又はカルボキシであり得、ここで、その置換基は互いに独立して、１又は複数ヶ所にあり、それらのアルキル成分は１〜６の炭素原子を含み、ヘテロ環成分は一環又は二環であって、その１又は複数が酸素、硫黄及び窒素を含む群から選択される３〜１０の環原子を含む）の化合物又はその医薬として許容される塩、エステル及びアミド誘導体。
【請求項２】  Ｒ1 が水素、ヒドロキシメチル又は１−ヒドロキシエチルであり、Ｒ2 が水素又はメチルであり、そしてＲ3 が、置換された又は置換されていない次の基：アルコキシ、ヘテロシクリルオキシ、アシルオキシ、カルバモイルオキシ、Ｎ−ヘテロシクリル、アシルアミノ、カルバモイルアミノ、イミドイルアミノを含む群から選択され、ここで先のアルキル、アシル、チオアシル、又はイミドイル分子部分は１〜３の炭素原子を含み、ヘテロシクリル成分は一環であってその１又は複数が酸素、硫黄及び窒素を含む群から選択される３〜６の環原子を含み、ここで先の基Ｒ3 の置換基は、アルキル、アシル、チオアシル、ヘテロシクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、ヒドロキシアルコキシ、アミノアルコキシ、アミジノアルコキシ、グアニジノアルコキシ、アシルオキシ、ヘテロシクリルオキシ、アルキルヘテロシクリルオキシ、ヒドロキシアルキルヘテロシクリルオキシ、アミノアルキルヘテロシクリルオキシ、カルバモイル、アルキルカルバモイル、ジアルキルカルバモイル、カルバモイルオキシ、アルキルカルバモイルオキシ、ジアルキルカルバモイルオキシ、チオカルバモイル、アルキルチオカルバモイル、ジアルキルチオカルバモイル、チオカルバモイルオキシ、アルキルチオカルバモイルオキシ、ジアルキルチオカルバモイルオキシ、メルカプト、アルキルチオ、ヒドロキシアルキルチオ、アミノアルキルチオ、モノアルキルアミノアルキルチオ、ジアルキルアミノアルキルチオ、アミジノアルキルチオ、アシルチオ、ヘテロシクリルチオ、アルキルヘテロシクリルチオ、ヒドロキシアルキルヘテロシクリルチオ、アミノアルキルヘテロシクリルチオ、カルバモイルチオ、モノアルキルカルバモイルチオ、ジアルキルカルバモイルチオ、チオカルバモイルチオ、アルキルチオカルバモイルチオ、ジアルキルカルバモイルチオ、アミノ、モノアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルアミノ、アミノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、オキソ、オキシミノ、又はアルキルイミノ、イミドイルアミノ、アルキルイミドイルアミノ、ジアルキルイミドイルアミノ、テトラアルキルアンモニウム、シクロアルキルアミノ、ヘテロシクリルアミノ、アルキルヘテロシクリルアミノ、ヘテロシクリルカルボニルアミノ、アルキルヘテロシクリルカルボニルアミノ、アシルアミノ、アミジノ、モノアルキルアミジノ、ジアルキルアミジノ、グアニジノ、アルキルグアニジノ、ジアルキルグアニジノ、カルバモイルアミノ、チオカルバモイルアミノ、アルキルカルバモイルアミノ、チオカルバモイルアミノ、アルキルチオカルバモイルアミノ、ニトロ、塩素、臭素、フッ素、ヨウ素、アジド、シアノ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、スルホンアミド、スルファモイルオキシ、アルキルスルファモイルオキシ、アルキルスルホニルオキシ又はスルホ、スルホキシ、カルボキサミド、Ｎ−モノアルキルカルボキサミド、Ｎ，Ｎ−ジアルキルカルボキサミド又はカルボキシであり得、ここで、その置換基は互いに独立して、１又は複数ヶ所にあり、それらのアルキル成分は１〜６の炭素原子を含み、ヘテロ環成分は一環であって、その１又は複数が酸素、硫黄及び窒素を含む群から選択される３〜６��環原子を含むことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】  Ｒ1 が水素、ヒドロキシメチル又は１−ヒドロキシエチルであり、Ｒ2 が水素又はメチルであり、そしてＲ3 が、置換された次の基：アルコキシ、アシルアミノ、Ｎ−ヘテロシクリル及びイミドイルアミノを含む基から選択され、ここで先のアルキル、アシル又はイミドイル分子部分は１〜３の炭素原子を含み、ヘテロシクリル成分は一環であってその１又は複数が酸素、硫黄及び窒素を含む群から選択される３〜６の環原子を含み、ここで先のＲ3 の置換基は、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アミジノ及びグアニジノのような塩基性基であり、ここでアルキル、アミジノ及びイミドイル部分は１〜３の炭素原子を含むことを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項４】  Ｒ1 が１−ヒドロキシエチルであり、Ｒ2 がメチルであり、そしてＲ3 が、
【化２】
2002521484.tif 000002
を含む群から選択されることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項５】  抗細菌に有効な量の請求項１〜４のいずれか一に記載の少なくとも１の化合物と、医薬として許容される担体又は希釈剤と、を含む医薬組成物。
【請求項６】  請求項５に記載の組成物を調製するための方法であって、抗細菌に有効な量の請求項１〜４のいずれか一に記載の少なくとも１の化合物を医薬として許容される担体又は希釈剤に組み込むことを含む方法。
【請求項７】  有効量の請求項１〜４のいずれか一に記載の少なくとも１の化合物を含む、必要な患者において細菌を阻害するための医薬組成物であって、該患者に投与される、前記組成物。
【請求項８】  β−ラクタマーゼ阻害のための有効量の請求項１〜４のいずれか一に記載の少なくとも１の化合物と、慣用的なβ−ラクタム抗生物質と、医薬として許容される担体又は希釈剤と、を含む医薬組成物。
【請求項９】  請求項８に記載の組成物を調製するための方法であって、有効量の請求項１〜４のいずれか一に記載の少なくとも１の化合物及び慣用的なβ−ラクタム抗生物質を医薬として許容される担体又は希釈剤に組み込むことを含む方法。
【請求項１０】  有効量の請求項１〜４のいずれか一に記載の少なくとも１の化合物及び慣用的なβ−ラクタム抗生物質を含む、必要な患者においてβ−ラクタマーゼを阻害するための医薬組成物であって、該患者に投与される、前記組成物。
【請求項１１】  請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を調製するための方法であって、式：
【化３】
2002521484.tif 000003
（式中、Ｒ1 及びＲ2 は請求項１に定義される通りであり、Ｘは脱離基であり、そしてＹは慣用的なカルボキシ保護基である）の化合物に、式：
【化４】
2002521484.tif 000004
ＨＳ−ＣＨ2 −Ｒ3 
（式中、Ｒ3 は請求項１に定義される通りである）又はその有機もしくは無機塩を反応させることを含む方法。
【請求項１２】  請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を調製するための方法であって、式：
【化５】
2002521484.tif 000005
（式中、Ｒ1 ，Ｒ2 及びＲ3 は請求項１に定義される通りであり、そしてＹは慣用的なカルボキシ保護基である）の化合物に脱保護化剤を反応させることを含む方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
その混合物を室温で一晩、撹拌した。ろ過により不溶性材料を除去し、そのろ液を真空下でエバポレートしてオレンジ色の液体を残した。それを、短い経路の蒸留装置及び安全シールドを用いて高い真空（０．００３mbar）（０．００２mmHg）で蒸留した。純粋な（２−アジドエトキシ）メチルチオールアセテート、ｂ．ｐ．８０〜９０℃／０．００３ｍｂａｒ（０．００２mmHg）を６５％の収率でうすい黄色の液体として得た。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：２．３８（ｓ，３Ｈ），３．３６（ｍ，２Ｈ），３．６１（ｍ，２Ｈ），５．１０（ｓ，２Ｈ）ppm．
０℃の０．２０ＮのＮａＯＨ（１２１mL，２４．２mmol）水溶液に、テトラヒドロフラン（５mL）中の（２−アジドエトキシ）メチルチオールアセテート（８４８mg，４．８４mmol）を撹拌しながら滴下して加えた。その反応混合物を１５分、０℃で撹拌した。得られた溶液をエーテル（１００mL）で洗い、次に１．０Ｎ  ＨＣｌ水溶液（１９．４mL）でpH６に０℃で酸性にした。次にその水溶液をエーテルの部分（５０mL）で２回、抽出した。その組み合わせたエーテル層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空（１７mbar）（１３mmHg）下で除去した。得られた粗生成物をヘキサン−エーテル（９：１）を用いてシリカゲル（２００．６３μｍ，２３ｇ）でクロマトグラフィにかけて１７mbar（１３mmHg）で乾燥させた後、４７％収率で無色の標題化合物を供した。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：２．０（ｔ，２Ｈ，＝１０Hz），３．４（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Hz），３．７（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６Hz），４．８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０Hz）ppm．
実施例３
（２−アジド−１，１−ジメチルエトキシ）メタンチオール
乾燥テトラセドロフラン（５mL）中の水素化ナトリウム（３１０mg，１３mmol）の撹拌懸濁液に、０℃で、乾燥ＴＨＦ（２mL）中の１−アジド−２−メチル−２−プロパノール（１．１５ｇ，１０mmol）の溶液を加えた。水素発生が止まった時に、そのうすい黄色の溶液に、乾燥ヘキサメチル亜リン酸トリアミド（３mL）及びクロロメチルメチルエーテル（１．１４mL，１５mmol）を０℃で加え、その反応混合物を室温で一晩、撹拌した。その反応混合物を１０％ＮａＣｌ水溶液（４０mL）に注ぎ、２部のエーテル（１５０及び５０mL）で２回、抽出した。その組み合わせたエーテル層を１０％ＮａＣｌ（５０mL）で及び飽和ＮａＣｌ（５０mL）で２回洗った。そのエーテル層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、その溶媒を真空（１７mbar）（１３mmHg）で除去し、ホルムアルデヒド（Ｃ２−アジド−１，１−ジメチルエチル）メチルアセタール（１．４１ｇ，８９％）を生成した。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．２８（ｓ，６Ｈ），３．２２（ｓ，２Ｈ），３．３９（ｓ，３Ｈ），４．７４（ｓ，２Ｈ）ppm．
乾燥メチレンクロライド（５mL）中のホルムアルデヒド（Ｃ２−アジド−１，１−ジメチルエチル）メチルアセタール（１．３５ｇ，８．４７mmol）の撹拌溶液に、１Ｍ三塩化ホウ素溶液（３．６４mL，３．６４mmol）を０℃で加えた。その反応混合物を室温で３時間、撹拌して、（２−アジド−１，１−ジメチルエチル）クロロメチルエーテルの溶液を供した。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．３６（ｓ，６Ｈ），３．２４（ＡＢｑ，２Ｈ），５．６０（ｓ，２Ｈ）ppm．
乾燥メチレンクロライド（８mL）中の粉末化固体チオ酢酸カリウムの懸濁液に０℃で、上述の（２−アジド−１，１−ジメチルエチル）クロロメチルエーテル（１．２３ｇ，７．５３）を含む溶液（８．０mL）を撹拌しながら加え、得られた懸濁液を室温で一晩、撹拌した。得られた混合物をメチレンクロライド（８０mL）で希釈し、３部（各々３０mL）の水で３回、及び飽和ＮａＣｌ（３０mL）で１回、洗った。その有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を真空（１７mbar）（１３mmHg）で除去して粗（２−アジド−１，１−ジメチルエトキシ）メチルチオアセテート（１．３０ｇ，８５％）を供した。それを、ヘキサン−エーテル（４：１）を用いてシリカゲル（４０−６０μｍ）でのカラムクロマトグラフィーにより精製して無色の液体として純粋な（２−アジド−１，１−ジメチルエトキシ）メチルチオールアセテート（０．８１ｇ，５３％）を生成した。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．２８（ｓ，６Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），３．２１（ｓ，２Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ）．
水酸化ナトリウムの撹拌した０．１Ｎ溶液（２５mL，２．５mmol）に、０℃で、ＴＨＦ（０．５mL）に溶かした（２−アジド−１，１−ジメチルエトキシ）メチルチオールアセテート（１０２mg，０．５mmol）を加えた。その反応混合物を０℃で９０分、撹拌した。その溶液をエーテル（１５mL）で洗い、次に０℃で１Ｎ  ＨＣｌ（１．８mL，１．８mmol）でpH６〜７に酸性化した。その溶液を０℃で３０分撹拌し、次に分離じょうごに移した。３分振とうした後、その有機層を収集し、その水性層をエーテルの部分（８mL）で２回、再び抽出した。その組み合わせたエーテル層を硫酸マグネシウムで乾燥し、その溶媒を真空下で除去し（１７mbar）（１３mmHg）、うすい黄色の液体として標題化合物を生成した（６７mg，８３％）。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．２８（ｓ，６Ｈ），２．１８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０Hz），３．２３（ｓ，２Ｈ），４．７３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝１０Hz）ppm．
実施例４
Ｎ−（メルカプトメチル）−アセトアミド
Ｎ−（ヒドロキシメチル）−アセトアミド（１３．４ｇ，０．１５mol)及びチオール酢酸（１４．３ｇ，０．１８８mol)を３日間、４０℃に加熱した。得られた混合物を、トルエン−酢酸エチル４：１及び１：１でシリカゲル（６３〜２００μｍ，７００ｇ）でクロマトグラフィーにかけて、純粋な結晶性アセトアミドメチルチオアセテート（１４．２ｇ，６４％），ｍ．ｐ．９３〜９４℃を供した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
ＣＤＣｌ3 （４mL）中の粗２−アジド−Ｎ−（クロロメチル）−アセトアミド（７１５mg）の溶液に、チオ酢酸カリウム（５２０mg，４．６mmol）を０℃で加え、その懸濁液を室温で一晩、撹拌した。その混合物をクロロホルム（５０mL）で希釈し、次にその溶液を水の部分（１５mL）で及びブライン（１０mL）で２回、洗った。その有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、その溶媒を真空下でエバポレートして非結晶性の固体（５３０mg）を残した。それをトルエン−酢酸エチル（２：１）を用いてシリカゲル（６３〜２００μｍ）でクロマトグラフィーにかけて、４００mg（５６％）の純粋な（２−アジドアセトアミド）メチルチオールアセテートを供した。ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：２．４（ｓ，３Ｈ），４．０（ｓ，２Ｈ），４．７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），７．２（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，１Ｈ）ppm．
純粋な（２−アジドアセトアミド）メチルチオールアセテート（５６mg，０．２８mmol）を乾燥メタノール（０．６mL，１，１mmol）中の１．８Ｎ  ＨＣｌに溶かし、その溶液を乾燥メタノール中の２．２Ｎのナトリウムメトキシド（０．４６mL，１．０３mmol）で中和した（pH：６）。その沈殿した塩化ナトリウムをろ過により除去し、そのろ液をＤＭＦ−ｄ6 （０．７mL）で希釈し、次にメタノールを真空し（２０mbar）（１５mmHg）で除去し、そして最後に高い真空（０．００１３mbar）（０．００１mmHg）で除去した。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
ＤＭＦ−ｄ6 溶液を−８０℃に維持した。ＮＭＲスペクトル分析は、標題化合物（収率５６％、内部標準として１０μＬのベンゼンで測定）を示した。ＮＭＲスペクトル（ＤＭＦ−ｄ6 ）：２．９（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，１Ｈ），３．９５（ｓ，２Ｈ），４．３８（ｄｄ，２Ｈ），８．９（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，１Ｈ）ppm。
実施例６
１−エチル−４−（メルカプトメチル）−ピペラジン−２，３−ジオン
３０％（メタノール無含有）ホルムアルデヒド（１５mmol）中の１−エチルピペラジン−２，３−ジオン（２．１３ｇ，１５mmol）の溶液に、水酸化カリウム（１５０mg，２．７mmol）を加え、その混合物を５０℃で７日間撹拌した。それを５Ｎの塩酸水溶液（５０μＬ）でpH：７に中和した。その混合物を１５mmでエバポレートし、次に高い真空（０．００１３mbar）（０．００１mmHg）で乾燥させて１−エチル−４−（メドロキシメチル）−ピペラジン−２，３−ジオンを無色の固体として供した（１００％）。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．１５（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，１Ｈ），１．１５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），３．４７（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），３．５４（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｍ，２Ｈ），４．８８（ｓ，２Ｈ）ppm．
１−エチル−４−（ヒドロキシメチル）−ピペラジン−２，３−ジオン（１５６mg，０．９０６mmol）に、オキサリルクロライド（７８mL，０．９０６mmol）を−１０℃で加えた。その混合物を−１０℃で２時間、撹拌した。３０分後にガスの発生が止まった。その反応混合物を高い真空で乾燥させて１−（クロロメチル）−４−エチル−ピペラジン−２，３−ジオン（１００％）を供した。ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．１５（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），３．４７（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），３．６５（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，４Ｈ），５．３０（ｓ，２Ｈ）ppm．
ＣＤＣｌ3 （１mL）中の粗１−（クロロメチル）−４−エチル−ピペラジン−２，３−ジオン（１７０mg，０．９mmol）の溶液に、固体チオ酢酸カリウム（１２３mg，１．０８mmol）を０℃で撹拌しながら加えた。その反応混合物を室温で一晩、撹拌した。その混合物を遠心し、その上清溶液を収集した。その残留固体（ＫＣｌ）をＣＤＣｌ3 （２mL）で洗い、その有機溶液を組み合わせて、その溶媒を真空下で除去した。その残留物をクロロホルム−メタノール（１９：１）を用いてシリカゲル（６ｇ，６３〜２００μｍ）でのクロマトグラフィーにかけて１−（アセチルチオメチル）−４−エチル−ピペラジン−２，３−ジオンを白色固体として供した（全収率４４％）。ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．２２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），２．４４（ｓ，３Ｈ），３．４８（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），３．４−３．７（ｍ，４Ｈ），４．９５（ｓ，２Ｈ）ppm．
１−（アセチルチオメチル）−４−エチル−ピペラジン−２，４−ジオン（７４mg，０．３２mmol）をメタノール中の１．９５Ｎ  ＨＣｌ（０．５６mL，１．２mmol）に溶かし、その溶液を室温で６時間、撹拌した。その混合物を０℃で乾燥メタノール中の２．２４Ｎナトリウムメトキシド（０．５４mL，１．２mmol）でpH＝６に中和した。沈殿した塩化ナトリウムをろ過により除去し、そのろ液を真空でエバポレートして、その残留物を（０．００１３mbar）（０．００１mmHg）で乾燥させた。それをクロロホルム−メタノール（１９：１）を用いてシリカゲル（２．０ｇ，６３〜２００μｍ）でクロマトグラフィーにかけて標題化合物を無色の固体として供した（収率８０％）。ＮＭＲ−スペクトル（ＣＤＣｌ3 ）：１．２３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），２．４３（ｂｒｏａｄ  ｓｉｇｎａｌ，１Ｈ），３．５５（ｑ，２Ｈ，Ｊ＝７Hz），３．６７（ｂｒｏａｄ  ｓ，４Ｈ），４．６０（ｂｒｏａｄ  ｓ，２Ｈ）ppm．
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５７】
乾燥ジメチルホルムアミド（１５mL）中のｐ−ニトロベンジル（４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−３−（ジフェニルオキシホスフィノイルオキシ）−６−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボキシレート（８９２mg，１５mmol）の溶液に、−５０℃で、ＣＤＣｌ3 （３mL）中のメトキシメタンチオール（１５２mg，１．９５mmol）の溶液、及び次にジイソプロピルエチルアミン（３３４μＬ，１．９５mmol）を加えた。その反応混合物を０℃にさせた。０℃で２時間の後、その反応混合物を酢酸エチル（３００mL）で希釈し、その溶液を室温で５分、放置した。この溶液を次に１０％Ｋ2 ＣＯ3 水溶液（１２５mL）、３部の水（各々１００mL）及びブライン（１００mL）で洗った。その有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、その溶媒を真空下で除去した。その残留物トルエン：酢酸エチル（２：１）及び（１：１）を用いてシリカゲル（５０ｇ，６３〜２００μｍ）でクロマトグラフィーにかけて標題化合物を、うすい黄色の非結晶性固体として供した（収率７８％）。ＩＲスペクトル（ＣＨ2 Ｃｌ2 ）：３６００，３０５０，２９００，１７７０，１７１０，１６０５，１５２０，１３４５，１２１０，１１３５，１０８０cm-1．
カリウム（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−３−（メトキシメチルチオ）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボキシレート
酢酸エチル（３０mL）及び水（１２mL）中のＫＨＣＯ3 （８５mg，０．８５mmol）の２相混合物中で０℃で予め水素化した炭素上１０％パラジウム（７５０mg）に、酢酸エチル（１０mL）中のｐ−ニトロベンジル（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−６−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−３−（メトキシメチルチオ）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボキシレート（４７９mg，１．１３mmol）をシリンジにより加えた。次にその混合物を環境圧で０℃で水素化した。７０分後、水素の取込み（７０mL）は極めてゆっくりになった。更なる触媒（１５０mg）を加え、水素化を更に１００分続けた。更なる水素（５０mL）を消費した。その触媒をろ過により除去し、酢酸エチル（５mL）及び水（２mL）で洗い、そのろ液を分離じょうごに移した。その水性層を収集し、有機層を水（３mL）中のＫＨＣＯ3 （２８mg，０．２８mmol）の溶液で抽出した。その組み合わせた水溶液をエバポレートして残った酢酸エチルを除去し、次に高い真空（０．００１３mbar）（０．００１mmHg）下で−３０℃で凍結乾燥させて純粋な標題化合物を、白色粉末として供した（収率５０％）。ＵＶ−スペクトル（水中）λmax ＝２９２nm（ε＝８０００）．ＮＲＭスペクトル（Ｄ2 Ｏ）（ｉｎｔ．ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍｅ3 ＳｉＣＤ2 ＣＤ2 ＣＯＯＮａ）：１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），１．３１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６Hz），３．４３（ｓ，３Ｈ），３．４５（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｍ，１Ｈ），４．２−４．３（ｍ，２Ｈ），４．７６  ａｎｄ  ５．０３（ＡＢｑ，Ｊ＝８Hz，Ｓ−ＣＨ2 −Ｏ）ppm．
実施例８
（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３−（（２−アミノエトキシ）メチルチオ）−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（Ｉｂ）
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６１】
（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３−（（２−アミノエトキシ）メチルチオ）−６−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（双性イオン型）
炭素上１０％パラジウム（７００mg）を酢酸エチル（３０mL）及び水（１５mL）の２相混合物中で０℃で予め水素化し、酢酸エチル（１０mL）中のｐ−ニトロベンジル（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３−（（２−アジドエトキシ）メチルチオ）−６−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボキシレート（４２２mg，０．８８４mmol）を０℃でシリンジにより加えた。０℃及び環境圧での６５分の水素化分解の後、水素の摂取（７０mL）はゆっくりになった。更なる触媒（１００mg）を加え、水素化を更に７５分、０℃で続けた。更なる水素（３５mL）を吸収させた。その触媒をろ過により除去し、酢酸エチル（５mL）及び水（３mL）で洗い、そのろ液を分離じょうごに移した。その水性層を収集し、その有機層を冷水（３mL）で抽出した。その組み合わせた水溶液をエバポレートして残留酢酸エチルを除き、高真空（０．００１３mbar）（０．００１mmHg）下で−３０℃で凍結乾燥させて標題化合物を白色粉末として６８％収率で供した。ＵＶスペクトル（水中）：λmax ２９２nm（ε＝８０００）．ＮＭＲスペクトル（Ｄ2 Ｏ）（ｉｎｔｅｒｎａｌ  ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｍｅ3 ＳｉＣＤ2 ＣＤ2 ＣＯＯＮａ）：１．２１（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝７Hz），１．３０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６Hz），３．２３（ｍ，２Ｈ），３．４８（ｄｄ，１Ｈ），３．５５（ｍ，１Ｈ）３．７０  ａｎｄ  ３．９３（２ｍ，２Ｈ），４．２６（ｃｏｍｐｌｅｘ  ｓｉｇｎａｌ，２Ｈ），４．７８  ａｎｄ  ５．１７（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１１Hz，Ｓ−ＣＨ2 −Ｏ）ppm．
実施例９
（４Ｒ，５Ｓ，６Ｓ）−３−（（２−（ホルムイミドイルアミノ）エトキシ）メチルチオ）−（（１′Ｒ）−ヒドロキシエチル）−４−メチル−７−オキソ−１−アザビシクロ［３．２．０］ヘプト−２−エン−２−カルボン酸（Ｉｃ）（双性イオン型）