【手続補正書】
【提出日】平成18年5月23日(2006.5.23)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
アリールはたとえば６〜１０個の環炭素原子を含む単環式または縮合二環式芳香環構造を意味する。たとえば、アリールはナフチル、フェニル、または所望により置換されていてもよいフェニル、好ましくは式（ｋ）：
【化４】
2005527612.tif 000001
［式中、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５は各々独立にＨ；ハロゲン；１以上のハロゲン、ヒドロキシ、またはＣ１−４アルコキシにより所望により置換されていてもよい、または１個のオキシもしくは１以上の酸素原子が任意に挿入されていてもよいＣ１−８アルキル；Ｃ１−８アルコキシ；Ｃ２−８アルケニル；Ｃ２−８アルキニル；Ｃ１−８アルキルチオ；Ｃ１−８アルキルスルホニル；Ｃ１−８アルキルスルフィニル；フェニルＣ１−６アルキル；フェニルＣ１−６アルコキシ；ハロゲン、ＣＦ３、Ｃ１−４アルキルおよび／またはＣ１−４アルコキシにより所望により置換されていてもよいフェニルである。環Ａが一置換されている場合、その置換基は好ましくはパラ位にある。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
式Ｉの化合物は遊離形態または塩形態、たとえば無機酸付加塩（たとえば塩酸塩、臭化水素酸塩または硫酸塩など）、有機酸との塩（酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、クエン酸、リンゴ酸塩、メタンスルホン酸塩またはベンゼンスルホン酸塩など）で存在してよく、（ｈ）基が存在し、Ｒ９またはＲ１０が−ＯＨであるとき、（ｈ）基も塩形態、たとえばアンモニウム塩、またはナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛もしくはマグネシウムなどの金属との塩、またはその混合物として存在してもよい。水和物または溶媒和物形態の、式Ｉの化合物およびそれらの塩も本発明の一部である。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１７】
式ＩＩの化合物のヒドロキシおよびアミノ保護基、ならびに／またはＲ’４またはＲ’５基の除去は便宜には、たとえば水酸化バリウムなどの水酸化物を用い、たとえば塩基性媒体中、たとえば加水分解によるなど、当技術分野で公知の方法にしたがって行うことができる。これはまた、たとえばJ. Org. Chem., 1998, 63, 2375-2377に開示されているように、たとえばＰｅａｒｌｍａｎの触媒の存在下、水素化分解により行うこともできる。式ＩＩの化合物が遊離型の式（ｈ’）の残基である場合、そのヒドロキシおよびアミノ保護基の除去は酸性媒体中で行ってもよい。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４１】
実施例５：１−［４’−（３−アミノ−４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブチル）−ビフェニル−４イル］−エタノン−Ｏ−アリル−オキシム
【化２７】
2005527612.tif 000002
ステップＡ：２−アセチルアミノ−２−（２−ビフェニル−４−イル−２−オキソ−エチル）−マロン酸ジエチルエステル
無水エタノール（５０ｍＬ）に水素化ナトリウム（１５ｍｍｏｌ）を加える。この得られたナトリウムエトキシド溶液に２−アセチルアミノマロン酸ジエチルエステル（１５ｍｍｏｌ）を一度に加える。得られた混合物を室温で３０分間攪拌する。次に、エタノール（１０ｍＬ）中、４’−フェニル−２−ブロモアセトフェノン（１０ｍｍｏｌ）の溶液を加え、得られた混合物を室温で１２時間攪拌する。減圧下で濃縮した後、残渣をＥｔＯＡｃおよび水に溶解する。有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。溶媒を除去した後、粗物質を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／３）を用いるカラムクロマトグラフィーにより精製すると、目的生成物が白色固体として得られる。1H NMR （400 MHz, CDCl3） d 8.03 （d, J =8.6 Hz, 2H）, 7.68 （d, J =8.6 Hz, 2H）, 7.61 （d, J =8.5 Hz, 2H）, 7.45 （m, 3H）, 7.13 （s, 1H）, 4.28 （m, 6H）, 1.98 （s, 2H）, 1.26 （t, J =7.1 Hz, 6H）; MS: （ES+）: 412.2 （M+1）+
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
実施例４０：２−アミノ−２−｛２−［４’−（５−プロピル−イソキサゾール−３−イル）−ビフェニル−４−イル］−エチル｝−プロパン−１，３−ジオール
【化２９】
2005527612.tif 000003
ステップＡ：４−［２−（４−ブロモフェニル）ビニル］−４−（ｔ−ブチルジメチルシラニルオキシメチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロオキサゾール
乾燥ＴＨＦ（２５ｍＬ）中、（４−ブロモベンジル）トリフェニル−ホスホニウムブロミド（６ｍｍｏｌ）の懸濁液にＮａＨ（６ｍｍｏｌ）を少量ずつ加える。室温で３０分間攪拌した後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中、４−（ｔ−ブチルジメチルシラニルオキシメチル）−２−メチル−４，５−ジヒドロオキサゾール−４−カルバルデヒド（当技術分野で周知の化学法を用い、スキーム３にしたがって製造）（５ｍｍｏｌ）を一度に加える。この混合物を室温で１２時間攪拌する。濃縮後、残渣をＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／５）（１００ｍＬ）で処理し、固体を濾過する。濾液をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させる。濃縮後、粗生成物を、ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（１／５）によるカラムクロマトグラフィーにより精製すると、目的生成物が無色のオイルとして得られる。ＭＳ：
（ＥＳ＋）：  ４１０．１  （Ｍ＋１）＋．
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
Ａ．インビトロ：個々のヒトＳ１Ｐ受容体に対する式Ｉの化合物の結合親和性は以下のアッセイで測定できる。
ヒトＳ１Ｐ受容体の、ＨＥＫ２９３細胞への一時的トランスフェクション
ＥＤＧ受容体およびＧｉタンパク質をクローニングし、等量の、ＥＤＧ受容体の４種のｃＤＮＡ、Ｇｉ−α、Ｇｉ−βおよびＧｉ−γを混合し、これを用い、リン酸カルシウム沈殿法を用いて単層のＨＥＫ２９３細胞をトランスフェクトする（M. Wigler et al., Cell. 1977; 11; 223およびDS. Im et al., Mol. Pharmacol. 2000; 57; 753）。要するに、２５μｇのＤＮＡと０．２５ＭのＣａＣｌを含むＤＮＡ混合物をＨＥＰＥＳで緩衝させた２ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４に加える。密集前の単層ＨＥＫ２９３細胞を２５ｍＭクロロキンで阻害した後、この細胞にＤＮＡ沈殿物を適用する。４時間後、この単層をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、再び培地に置く（９０％  １：１ダルベッコの改変必須培地（ＤＭＥＭ）：Ｆ−１２＋１０％ウシ胎児血清）。ＤＮＡを添加してから４８〜７２時間後、細胞を、氷上、１０％スクロースを含むＨＭＥバッファー（２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）中で剥ぎ取ることで回収し、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザーを用いて粉砕する。８００×ｇで遠心分離した後、上清を、スクロース不含有ＨＭＥで希釈し、１００，０００×ｇで１時間遠心分離する。得られたペレットを再びホモジナイズし、１００，０００×ｇでさらに１時間遠心分離する。この粗膜ペレットをスクロース含有ＨＭＥに再懸濁させ、アリコートに分け、液体窒素に浸漬することにより急速凍結させる。この膜を７０℃で保存する。タンパク質濃度はブラッドフォールドタンパク質アッセイにより分光光度的に測定する。
【表１０】
2005527612.tif 000004
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９９】
タンパク質または脂質ホスファターゼの活性をターゲッティングするか、低下させるか、または阻害する化合物は、たとえば、ホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、ＰＴＥＮまたはＣＤＣ２５の阻害剤、たとえば、オカダ酸またはその誘導体である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０７】
以上のことを踏まえ、本発明はさらに以下のような、さらなる態様を提供する。
５．治療上有効で無毒な量の式Ｉの化合物および少なくとも一種の第二の薬物、たとえば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症薬または化学療法薬、たとえば上記で示されたものを、たとえば同時に、または逐次に共に投与することを含む、上記で定義される方法。
６．ａ）遊離形態または医薬上許容される塩の形態の本明細書で開示される式Ｉの化合物である第一の薬剤と、ｂ）少なくとも一種の共働薬、たとえば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症薬または化学療法薬、たとえば上記で開示されたものを含む医薬組合せ剤、たとえばキット。このキットは投与に関する使用説明書を含んでもよい。