【手続補正書】
【提出日】平成18年6月6日(2006.6.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（ｉ）および（ii）を含んでなる、ポリペプチド：
（ｉ）次の（ａ）および（ｂ）を含んでなる、リーダー配列：
（ａ）分泌プレ配列、および
（ｂ）以下のモチーフ：
−Ｘ１−Ｘ２−Ｘ３−Ｘ４−Ｘ５−
（式中、
Ｘ１はフェニルアラニン、トリプトファンまたはチロシンであり、
Ｘ２はイソロイシン、ロイシン、バリン、アラニンまたはメチオニンであり、
Ｘ３はロイシン、バリン、アラニンまたはメチオニンであり、
Ｘ４はセリンまたはトレオニンであり、かつ、
Ｘ５はイソロイシン、バリン、アラニンまたはメチオニンである）、および
（ii）そのリーダー配列に対して異種の目的タンパク質。
【請求項２】
Ｘ１がフェニルアラニンであり、および／または
Ｘ２がイソロイシンであり、および／または
Ｘ３がバリンであり、および／または
Ｘ５がイソロイシンである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項３】
モチーフのアミノ酸を天然アミノ酸の代用としてポリペプチド中に含む、請求項１または２に記載のポリペプチド。
【請求項４】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ５、の少なくとも２つが、請求項２で定義されている通りのものである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項５】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ５、の少なくとも３つが、請求項２で定義されている通りのものである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項６】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ５が、請求項２で定義されている通りのものである、請求項１に記載のポリペプチド。
【請求項７】
モチーフが−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−である、請求項１〜６のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項８】
分泌プレ配列がアルブミン分泌プレ配列またはその変異体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項９】
Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５がそれぞれ−２０、−１９、−１８、−１７および−１６位に、それらの位置の天然アミノ酸の代わりに存在し、そのナンバリングが天然のアルブミン分泌プロ配列のＣ末端アミノ酸を−１番残基とするものであり、かつ、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、Ｘ４およびＸ５が請求項１〜７のいずれか一項により定義されるアミノ酸である、請求項８に記載のポリペプチド。
【請求項１０】
アルブミン分泌プレ配列またはその変異体がヒトアルブミン分泌プレ配列またはその変異体である、請求項８または９に記載のポリペプチド。
【請求項１１】
分泌プレ配列ＭＫＷＶＦＩＶＳＩＬＦＬＦＳＳＡＹＳを含んでなる、請求項１０に記載のポリペプチド。
【請求項１２】
リーダー配列が分泌プロ配列を含んでなる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項１３】
アルブミン分泌プレ配列またはその変異体が、そのＣ末端において分泌プロ配列またはその変異体のＮ末端アミノ酸とペプチド結合により融合され、それにより、プレ−プロ配列を形成する、請求項１２に記載のポリペプチド。
【請求項１４】
分泌プロ配列がアルブミン分泌プロ配列またはその変異体である、請求項１２または１３に記載のポリペプチド。
【請求項１５】
アルブミン分泌プロ配列がヒト血清アルブミン分泌プロ配列またはその変異体である、請求項１４に記載のポリペプチド。
【請求項１６】
分泌プロ配列モチーフが酵母ＭＦα−１分泌プロ配列またはその変異体である、請求項１４または１５に記載のポリペプチド。
【請求項１７】
下記配列、またはその変異体を含んでなる、請求項１２に記載のポリペプチド：
【化１】
2006501818.tif 000001
（式中、
Ｙ１がＧｌｙまたはＳｅｒであり、
Ｙ２がＶａｌまたはＬｅｕであり、
Ｙ３がＰｈｅまたはＡｓｐであり、
Ｙ４がＡｒｇまたはＬｙｓであり、かつ、
Ｙ５がＡｒｇまたはＬｙｓである）。
【請求項１８】
Ｙ１がＧｌｙであり、Ｙ２がＶａｌであり、かつ、Ｙ３がＰｈｅであるか、または
Ｙ１がＳｅｒであり、Ｙ２がＬｅｕであり、かつ、Ｙ３がＡｓｐである、請求項１７に記載のポリペプチド。
【請求項１９】
Ｙ４がＡｒｇであり、かつ、Ｙ５がＡｒｇであるか、
Ｙ４がＬｙｓであり、かつ、Ｙ５がＡｒｇであるか、
Ｙ４がＬｙｓであり、かつ、Ｙ５がＬｙｓであるか、または、
Ｙ４がＡｒｇであり、かつ、Ｙ５がＬｙｓである、請求項１７または１８に記載のポリペプチド。
【請求項２０】
該モチーフの少なくとも一部が分泌プレ−配列中に存在する、請求項１〜７のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２１】
目的タンパク質の配列がそのＮ末端においてリーダー配列のＣ末端アミノ酸と融合される、請求項１〜２０のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２２】
目的タンパク質がアルブミンまたはその変異体、断片もしくは融合物である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２３】
アルブミンがヒトアルブミンである、請求項２２に記載のポリペプチド。
【請求項２４】
成熟ポリペプチドがトランスフェリンまたはその変異体、断片もしくは融合物である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載のポリペプチド。
【請求項２５】
トランスフェリンがヒトトランスフェリンである、請求項２４に記載のポリペプチド。
【請求項２６】
請求項１〜２５のいずれか一項に記載モチーフをコードする配列を含んでなる、単離ポリヌクレオチド。
【請求項２７】
配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号３４の配列を含んでなる、請求項２６に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２８】
配列番号２４の配列を含む、配列番号１８または３４の配列を含んでなる、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項２９】
配列番号２５の配列、またはその変異体を含んでなる、請求項２８に記載のポリヌクレオチドであって、
該変異体が、配列番号２４のリーダー配列を有し、かつ、配列番号２５によりコードされるアルブミンの変異体もしくは断片をコードするものである、ポリヌクレオチド。
【請求項３０】
配列番号２７の配列を含む、配列番号１８または３４の配列を含んでなる、請求項２７に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３１】
配列番号２１の配列、またはその変異体を含んでなる、請求項３０に記載のポリヌクレオチドであって、
該変異体が、配列番号２７のリーダー配列を有し、かつ、配列番号２１によりコードされるアルブミンの変異体もしくは断片をコードするものである、ポリヌクレオチド。
【請求項３２】
配列番号２１の配列またはその断片を含んでなる、ポリヌクレオチド。
【請求項３３】
ポリヌクレオチドが、異種タンパク質をコードしているＤＮＡ配列と、配列番号２５のＤＮＡ配列または配列番号２１のＤＮＡ配列のいずれかとの、連続したまたは不連続な融合物であるＤＮＡ配列を含んでなる、請求項２９、３１または３２のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３４】
請求項２６〜３３のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドの相補鎖である、ポリヌクレオチド。
【請求項３５】
作動可能なように連結された転写調節領域を含んでなる、請求項２６〜３４のいずれか一項に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３６】
転写調節領域が転写プロモーターを含んでなる、請求項３５に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３７】
請求項２６〜３６のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含んでなる、自己複製可能なポリヌクレオチド配列。
【請求項３８】
請求項２６〜３７のいずれか一項に記載のポリヌクレオチドを含んでなる、細胞。
【請求項３９】
真核生物細胞である、請求項３８に記載の細胞。
【請求項４０】
真菌細胞である、請求項３９に記載の細胞。
【請求項４１】
アスペルギルス属の細胞である、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４２】
酵母細胞である、請求項４０に記載の細胞。
【請求項４３】
サッカロミセス属、クルイベロミセス属、シゾサッカロミセス属またはピキア属の細胞である、請求項４２に記載の細胞。
【請求項４４】
請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の細胞および培養培地を含んでなる、細胞培養物。
【請求項４５】
その培地が、請求項１〜２２のいずれか一項に記載のポリペプチドの産生の結果として、成熟した目的タンパク質を含有する、請求項４４に記載の細胞培養物。
【請求項４６】
成熟した目的タンパク質を作製する方法であって、
（１）請求項３８〜４３のいずれか一項に記載の細胞を培養培地で培養し、ここで、その細胞が請求項１〜２５のいずれか一項に記載のポリペプチドの産生の結果として、成熟した目的タンパク質を培養培地中に分泌し、かつ
（２）分泌された成熟タンパク質を含有する培養培地を細胞から分離する
ことを含んでなる、方法。
【請求項４７】
成熟した目的タンパク質を培地から分離し、必要に応じて、成熟した目的タンパク質をさらに精製する工程をさらに含んでなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
このようにして分離および／または精製された、成熟した目的タンパク質を、治療上許容されうる担体または希釈剤とともに製剤し、それにより、ヒトまたは動物への投与に好適な治療用製品を生産する工程をさらに含んでなる、請求項４７に記載の方法。