【手続補正書】
【提出日】平成17年8月18日(2005.8.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  １つまたはそれ以上の生物特異的親和性反応物を輸送フローに用いることにより、フローマトリックスにおけるサンプル中の試験対象物を決定する方法であって、その反応物のうち少なくとも１つが分析学的に検出可能であり(反応物*)、１つが確実にマトリックス中に固定され(反応物Ｉ)、そして、フローマトリックスは、
Ａ)緩衝液およびサンプルおよび所望により１つまたはそれ以上の反応物を含む(しかし、反応物Ｉは含まず)、液体の適用ゾーン(ＬＺ)、
Ｂ)確実に固定した反応物(反応物Ｉ)を有するＬＺの下流に位置する検出ゾーン(ＤＺ)、および
Ｃ)所望により、任意の反応物が事前に保持する１つまたはそれ以上のゾーン
[ここで、(ｉ)検出ゾーンへの流れは、検出ゾーンへの試験対象物および反応物の輸送用の適用ゾーンＬＺＳにおいてサンプルと共に液体を加えることにより、開始され、そして、(ii)ＤＺに結合する反応物*の量を検出する{検出量はサンプル中の試験対象物の量に関係する}]を含み、
Ｉ．フローマトリックスが、相互に実質的に隣接して配置される少なくとも２つの液体の適用ゾーン：
ＬＺｍ  ．  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．  ．ＬＺｌ          ＤＺ
--------------------------------------------------------＞
{式中、
ａ)ＬＺｎは液体の適用ゾーンであり、ｎは適用ゾーンＬＺｎの位置である。
ｂ)ｍは、流れが開始する適用ゾーンの総数である(ｍ＞２)。
ｃ)１つのＬＺｎはサンプル用の適用ゾーン(ＬＺｎ’Ｓ)用であり、１つのＬＺｎは反応物*(ＬＺｎ''Ｒ*)用であり、ｎ''＞ｎ'である。
ｄ)-------------＞は流れの方向である。そして、
ｅ)ＤＺは検出ゾーンである。}
を含み、そして、
II．適用ゾーンＬＺｎ＋１に加えた液体ｎ＋１が、直近の下流適用ゾーンＬＺｎに加えた液体ｎの直後のマトリックスを介して輸送されるような方法で、液体を各ゾーンＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌに加えることにより、流れが開始される
ことを特徴とする方法。
【請求項２】  ｎ''＞ｎ'(試験対象物および反応物*について連続的変形型)であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】  ｎ''＝ｎ'(試験対象物および反応物*について同時変形型)であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項４】  反応物*が適用ゾーン(ＬＺｎ''Ｒ*)において事前に保持することを特徴とする、請求項１-３の何れかに記載の方法。
【請求項５】  液体ｎをＬＺｎに加える前または実質的に同時に、液体ｎ＋１をＬＺｎ＋１に加えることを特徴とする(ただし、ゾーンがゾーンＬＺｎ＋１を欠くｎ＝ｍを除く)、請求項１-４の何れかに記載の方法。
【請求項６】  ＬＺｎから開始し、ＬＺｎ＋１で終了することを特徴とする(ただし、ゾーンがゾーンＬＺｎ＋１を欠くｎ＝ｍを除く)、請求項１-５の何れかに記載の方法。
【請求項７】  液体の適用を、すべてのＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌにおいて実質的に同時に行うことを特徴とする、請求項１-６の何れかに記載の方法。
【請求項８】  ｍ＜６；ｎ'は１、２または３である；ｎ''＞ｎ'；ＬＺｎ'＋１、ＬＺｎ'＋２、ＬＺｎ'＋３、ＬＺｎ'-１およびＬＺｎ'-２は、反応物*または他の反応物またはｍ、ｎ''およびｎ'が許す限り反応物のない緩衝液の輸送を目的とする液体の適用ゾーンであることを特徴とする、請求項１-７の何れかに記載の方法。
【請求項９】  少なくとも１つのゾーンＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌが、フローマトリックスに適用するパッドまたは物質層を含むことを特徴とする、請求項１-８の何れかに記載の方法。
【請求項１０】  ゾーンＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌが相互間でゾーンスペーサー有することを特徴とする、請求項１-８の何れかに記載の方法。
【請求項１１】  適用ゾーンＬＺｎからの輸送された成分の組成が、流れが開始する直近の隣接適用ゾーンＬＺ(ゾーンがそれぞれＬＺｎ＋１およびＬＺｎ-１を欠くｎ＝ｍおよびｎ＝１を除く、ＬＺｎ＋１およびＬＺｎ-１)とは同じにはならないことを特徴とする、請求項１-１０の何れかに記載の方法。
【請求項１２】  少なくとも１つの反応物、反応物*以外の反応物が、反応物の輸送を目的とした液体の適用ゾーンＬＺｎ'''Ｒにおいて事前に保持することを特徴とする、請求項１-１１の何れかに記載の方法。
【請求項１３】  ｍ＜６であり、サンプルの適用ゾーン(ＬＺｎ'Ｓ)のｎ'が１、２または３であることを特徴とする、請求項１-１２の何れかに記載の方法。
【請求項１４】  反応物*が試験対象物に生物特異的親和性を有し、そのため、反応物*は、サンプル中の試験対象体の量に関係する量の検出ゾーンにおける複合体反応物'---試験対象物---反応物*に組込まれ、その複合体反応物'が、試験対象物に生物特異的親和性を有し、かつ
(ａ)反応物Ｉ、または
(ｂ)反応物Ｉは、生物特異的親和性を示し、ＬＺｎ'ＳからまたはＬＺｎ'Ｓの適用ゾーンの下流から輸送される、反応物
であることを特徴とする、請求項１-１３の何れかに記載の方法。
【請求項１５】  マトリックスは少なくとも１つのキャリブレーターゾーン(ＣＺ)を有し、そのキャリブレーターはマトリックスに結合するか、または事前にマトリックスに結合していることを特徴とする、請求項１-１４の何れかに記載の方法。
【請求項１６】  キャリブレーターゾーンまたはゾーン群(ＣＺ)はマトリックスに確実に固定化されているキャリブレーター用の結合剤を有し、そのキャリブレーターは、キャリブレーターゾーンまたはゾーン群のマトリックス上流において所望により事前に保持することを特徴とする、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】  ａ．試験対象物を一般的な抗原から選択し、そして
ｂ．その方法は、アレルギーまたは自己免疫疾患の診断の一部として実施する
ことを特徴とする、請求項１-１６の何れかに記載の方法。
【請求項１８】  １つまたはそれ以上の生物特異的親和性反応物を輸送フローに用いることにより、フローマトリックスにおけるサンプル中の試験対象物を決定し、その反応物のうち少なくとも１つが分析学的に検出可能であり(反応物*)、１つが確実にマトリックス中に固定され(反応物Ｉ)、そして、フローマトリックスには、
Ａ)緩衝液およびサンプルおよび所望により１つまたはそれ以上の反応物を含む(しかし、反応物Ｉは含まず)、液体の適用ゾーン(ＬＺ)、
Ｂ)確実に固定した反応物(反応物Ｉ)を有するＬＺの下流に位置する検出ゾーン(ＤＺ)、および
Ｃ)所望により、任意の反応物が事前に保持する１つまたはそれ以上のゾーン
が含まれる装置であって、
フローマトリックスが、相互に実質的に隣接して配置される少なくとも２つの液体の適用ゾーン：
ＬＺｍ  ．  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．  ．ＬＺｌ          ＤＺ
--------------------------------------------------------＞
[式中、
ａ)ＬＺｎは液体の適用ゾーンであり、ｎは適用ゾーンＬＺｎの位置である。
ｂ)ｍは、流れが開始する適用ゾーンの総数である(ｍ＞２)。
ｃ)１つのＬＺｎはサンプル用の適用ゾーンであり(ＬＺｎ、Ｓ)、１つのＬＺｎはｎ''＞ｎ'である反応物*(ＬＺｎ''Ｒ*)用である。
ｄ)-------------＞は流れの方向である。そして、
ｅ)ＤＺは検出ゾーンである。]
を含むことを特徴とする装置。
【請求項１９】  ｎ''＞ｎ'であり、そして装置が試験対象物および反応物*の連続的輸送を目的とすることを特徴とする、請求項１８に記載の装置。
【請求項２０】  ｎ''＝ｎ'であり、そして装置が試験対象物および反応物*の同時輸送を目的とすることを特徴とする、請求項１８に記載の装置。
【請求項２１】  反応物*が適用ゾーン(ＬＺｎ''Ｒ*)において事前に保持することを特徴とする、請求項１８-２０の何れかに記載の装置。
【請求項２２】  ＬＺｎから開始し、ＬＺｎ＋１で終了することを特徴とする(ただし、ゾーンがゾーンＬＺｎ＋１を欠くｎ＝ｍを除く)、請求項１８-２１の何れかに記載の装置。
【請求項２３】  ｍ＜６；ｎ'は１、２または３である；ｎ''＞ｎ'；ＬＺｎ'＋１、ＬＺｎ'＋２、ＬＺｎ'＋３、ＬＺｎ'-１およびＬＺｎ'-２は、反応物*または他の反応物またはｍ、ｎ''およびｎ'が許す限り反応物のない緩衝液の輸送を目的とする液体の適用ゾーンであることを特徴とする、請求項１８-２２の何れかに記載の装置。
【請求項２４】  ゾーンＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌが相互間でゾーンスペーサーを有することを特徴とする、請求項１８-２６の何れかに記載の装置。
【請求項２５】  少なくとも１つのゾーンＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌが、フローマトリックスに適用するパッドまたは物質層を含むことを特徴とする、請求項１８-２３の何れかに記載の装置。
【請求項２６】  少なくとも１つの反応物、反応物*以外の反応物が、反応物の輸送を目的とした液体の適用ゾーンＬＺｎ'''Ｒにおいて事前に保持することを特徴とする、請求項１８-２５の何れかに記載の装置。
【請求項２７】  ｍ＜６であり、サンプルの適用ゾーン(ＬＺｎ'Ｓ)のｎ'が１、２または３であることを特徴とする、請求項１８-２６の何れかに記載の装置。
【請求項２８】  検出ゾーンＤＺは、確実に固定した反応物Ｉを含み、反応物Ｉが生物特異的親和性を示す反応物がＬＺｎ'ＳにおいてまたはＬＺｎ'Ｓの上流の適用ゾーンにおいて所望により事前に保持することを特徴とする、請求項１８-２７の何れかに記載の装置。
【請求項２９】  マトリックスは少なくとも１つのキャリブレーターゾーン(ＣＺ)を有し、そのキャリブレーターまたはキャリブレーターの結合剤はマトリックスに確実に固定されていることを特徴とする、請求項１８-２８の何れかに記載の装置。
【請求項３０】  キャリブレーターゾーンまたはゾーン群(ＣＺ)はマトリックスに確実に固定化されているキャリブレーター用の結合剤を有し、そのキャリブレーターは、キャリブレーターゾーンまたはゾーン群のマトリックス上流において所望により事前に保持することを特徴とする、請求項２９に記載の装置。
【請求項３１】  当該装置が、アレルギーまたは自己免疫疾患の診断を目的とすることを特徴とする、請求項１８-３０の何れかに記載の装置。
【請求項３２】  キットが、(ｉ)請求項１８-２９の何れかに記載の装置、および(ii)反応物*を含むことを特徴とする、試験キット。
【請求項３３】  当該キットが、(iii)キャリブレーター用の結合剤をマトリックスに確実に固定する際にキャリブレーターを更に含むことを特徴とする、請求項３２に記載の試験キット。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００１】
技術分野
本発明は、サンプル中の試験対象物(analyte)を、生物特異的親和性反応物(反応物１、反応物２など)を使用することにより、決定する方法に関係し、その反応物の１つは分析学的に検出可能(反応物*)であり、１つは輸送フローマトリックス中の検出ゾーン中に確実に固定する(反応物Ｉ)。サンプル(試験対象物)を、試験対象物(サンプル)および／または緩衝液を含む液体の適用ゾーン(ＬＺＳ)から、反応物Ｉを確実に固定化する検出ゾーン(ＤＺ)へ、マトリックス中の流れによって輸送する。サンプルをマトリックス中において輸送すると同時に、反応物*を含む可溶性反応物をもまた輸送する。検出ゾーンにおいて、サンプル中に存在する試験対象物の量と相関する量の反応物*を捕捉する。これを達成するため、反応物*が、反応物Ｉに直接か、または１つまたはそれ以上の添加された生物特異的親和性反応物(試験対象物を含む)を介して間接的に、生物特異的に結合するように、反応物*を選択する。次いで、試験対象物の量を、検出ゾーンにおいて結合する反応物*の量より決定する。輸送フローは、様々な生物特異的親和性反応物(例えば、反応物*、しかし試験対象物ではない)を溶解しそして検出ゾーンに向うフローと共に輸送するために事前に適用(事前に保持(predeposit))する、ゾーンを含む。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００３】
当該試験方法のタイプは、従来、生物特異的親和性反応物に主として用いられ、特に、いわゆる免疫化学的決定方法と関連して、少なくとも使用反応物対の一方はタンパク質構造を有していた。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
当該技術は既知であり、しばしばいわゆる試験ストリップ(test strip)に適用されている。そのストリップはフローマトリックスとして機能する。フローは、サンプルを加えるゾーン(ＬＺＳ)において始まる。フローはしばしば横向きであり、すなわち、マトリックスの表面に平行であるか、または他のタイプ、例えばマトリックスの深部に行く。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
この文書では、ある反応物(特に試験対象物および反応物*)に関する同時および連続方法(プロトコール)についてしばしば記載する。同時変形型では、試験対象物(サンプル)および関連反応物、例えば反応物*を同時に検出ゾーンに輸送する。サンプルを反応物*とプレインキュベーション／混合するならば、または反応物*をサンプル適用ゾーンかサンプル適用ゾーンのゾーン下流(しかし、検出ゾーンの前)に事前に保持するならば、同時変形型が得られる。連続変形型では、試験対象物(サンプル)を、反応物、例えば反応物*の前に、検出ゾーン中に輸送する。サンプル(試験対象物)をゾーンの外に輸送した後、関連する反応物、例えば反応物*をサンプルと同様の適用ゾーンに加えるならば、連続変形型が得られる。連続的方法の変形型についてはUS 4,855,240(Becton & Dickinson)において考察されている。同じ輸送フロー中の“トレイサー”(＝反応物*)の前に輸送されるサンプル(試験対象物)の代わりとして、US 4,855,240では、分離した輸送フローについて記載されており、サンプル(試験対象物)が“トレイサー”(反応物*)の前に検出ゾーンに到達するように輸送の時間を調節する。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
本発明の最初の態様は、最初に記載した分析方法に関係し、
Ａ．フローマトリックスは、相互に実質的に隣接して配置される少なくとも２つの液体の適用ゾーンを有し：
ＬＺｍ  ．  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．  ．ＬＺｌ          ＤＺ
--------------------------------------------------------＞
[式中、
ａ)ＬＺｎは液体の適用ゾーンである{式中、ｎは適用ゾーンＬＺｎの位置である(ｎは２＜ｎ＜ｍの整数である)}。
ｂ)ｍは、流れが開始する適用ゾーンの総数である。
ｃ)１つのＬＺｎはサンプル用の適用ゾーンであり(ＬＺｎ’Ｓ)、１つのＬＺｎは反応物*用の適用ゾーンであり(ＬＺｎ''Ｒ*)、ｎ''＞ｎ'である。
ｄ)-------------＞は流れの方向である。そして、
ｅ)ＤＺは検出ゾーンである。]
Ｂ．適用ゾーンＬＺｎ＋１に加えた液体ｎ＋１が、直近の下流の適用ゾーンＬＺｎに加えた液体ｎの後のマトリックスを介して輸送されるような方法で、液体を各ゾーンＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌに加えることにより、流れが開始される
ことを特徴とする。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
最も通常の場合、上記には、液体ｎをＬＺｎに加える前または主として同時に、液体ｎ＋１をＬＺｎ＋１に加えることが含まれる。ｎ＝ｍの場合、ＬＺｎ＋１を欠き、そのため、当該ゾーンでは任意の液体をＬＺｍ＋１に加えることができない。添加がすべてのＬＺｍ  ．  ．ＬＺｎ  ．  ．ＬＺｌに主として同時に実施されるならば、実施での利点に到達する。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
連続変形型：
ｍ＝２：ＬＺ２Ｒ*  ＬＺ１／ＲIII／Ｓ  ＤＺ
ｍ＝３、４および５：プロトコールＡの類似として製造される。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３８】
マトリックス
マトリックスは、流れが輸送される空間を規定する。マトリックスは、単一のフローチャンネル(simple flow channel)(例えば、キャピラリー)の内部表面であり、多孔性マトリックスの内部表面はフローチャンネルなどのシステム(多孔性マトリックス)を有し、広がっている。単純化の目的のため、本発明の変形型において有用のマトリックスをフローマトリックス群と呼ぶ。多孔性マトリックス群は、モノリス、シート、カラム、膜、キャピラリー大の単一のフローチャンネル、またはそのフローチャンネルを集合したシステムの形で存在する。それらはまた、カラムケーシングにパックした粒子、繊維形に加圧した形で存在する。マトリックスの内部表面、すなわち、フローチャンネルの表面は、水性媒体(通常、水)がマトリックスを介して吸収または輸送されるように、親水性とすべきである。フローチャンネルの最も小さい内のり寸法は、用いる反応物のマトリックスを通して輸送できるような十分な大きさにすべきである。その目安は、マトリックスがフローチャンネルを相互に通じるシステムを示すならば、範囲０.４-１０００μｍ、好ましくは０．４-１００μｍである最も小さい内のり寸法(しばしば、丸チャンネルの直径とする)を有するフローチャンネルを有するもののなかから適当なマトリックス群を選択する。範囲０．４-１０００μｍの上側部分の最も小さな内のり寸法を有するフローチャンネルは、単一のアンブランチ・チャンネルに適し、その流れは外からの加圧または吸引により実施する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４２】
分析学的に検出可能な反応物(反応物*)
本発明では、反応物*は試験対象物とはなり得ない。通常の分析的検出性は、天然の反応物、例えば抗体または抗原またはハプテンが分析学的に検出可能な基を備えているため、得られる。熟知され、しばしば用いられる基の例は、酵素学的に活性な基(酵素、補因子、補酵素、酵素基質など)、蛍光発生性、発色性、化学ルミネセンス性、放射活性基などである。生物特異的親和性反応物の方法より検出される基は、通常、このカテゴリー、例えば、ビオチン、ハプテン、免疫グロブリン中のクラス-、サブクラス-および種-特異的決定基などについても言及される。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
好ましい標識基は、蛍光発生性基または発色性基(色をつけた粒子)のような上記の任意の検出可能基を所望により含む基である。有用な粒子は、しばしば、範囲０．００１-５μｍの大きさである。粒子は、いわゆるゾルと呼ばれるコロイドの大きさを有する(通常、範囲０．００１-１μｍの大きさを有する球状および単分散である)。特に金属粒子(例えば、金ゾル)、非金属粒子(例えば、ＳｉＯ２、炭素、ラテックスおよび死滅した赤血球および細菌)について記載する。非コロイドの大きさで、非保持能に焦点をおいた粒子が用いられる。これらは多かれ少なかれ不規則であり、多かれ少なかれ多分散である(炭素粒子＜１μｍ；Pharmacia AB, WO 96/22532)。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
炭素粒子連結物(反応物*)：
これを、WO96/22532(Pharmacia AB)により炭素粒子(sp100、＜１μｍ、Degussa、Germany)に吸着する抗-ｈＩｇＥにより調製した。最終溶液をｍｌあたり炭素粒子４００μｇを含むフローマトリックスに使用した。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
緩衝液、サンプルおよび炭素粒子連結物の適用用ゾーン：
ゾーンから離れたウェルは保持した物質を含み、幅１ｍｍの４つのInplastor strip(一端に接着剤のついているMylar, Gelman)をゾーンに平行に、そして相互に平行にし、相互から５ｍｍ離した(ゾーンスペーサー)。そのため、Inplastor stripは５ｍｍの幅の４つのゾーンを決定した。シートを、保持物質を含むゾーンに対し垂直に切断し、幅０．５ｃｍ(ストリップの長さは５ｃｍとなった)で剥がした(Singulator: Matrix 1201 membrane cutter, Kinematic automation)。最終ストリップにより、ゾーンスペーサーとしてInplastor stripにより別けられた(適用ゾーン)４つの平行ゾーンが見られ、そして、保持した抗-ｈＩｇＥ抗体(検出ゾーン)により分離ゾーンが見られた。比較として、ゾーンスペーサーがなく、すなわち、分離した適用ゾーンのないストリップを製造した。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
試験方法：
分離した適用ゾーンを有するストリップを平面ホルダー上にマウントした。ストリップの上(０.５ｃｍ)において(直近ゾーンのように検出ゾーンと共に)、吸収膜を置いた(Whatman, 17 Chr, 幅３ｃｍ)。４つのサブゾーンへの試薬の同時適用の場合、４チャンネルMultipipette(Labsystems)を用いた。マルチピペットを使用して、血清サンプル(３０μｌ)を、それぞれの上流適用ゾーンに緩衝液(３０μｌ)、炭素粒子連結物(３０μｌ)および緩衝液(３０＋３０μｌ)の順序で検出ゾーンに直近の適用ゾーン中に適用した。ゾーンスペーサーを使用しないストリップに対する連続適用の場合、サンプル３０μｌを、ストリップの下端に最初に適用した。サンプル体積の吸収の後、緩衝液(３０μｌ)、炭素粒子連結(３０μｌ)および緩衝液(３０＋３０μｌ)を吸収後連続的に加えた。炭素粒子連結を上記の通り調製し、緩衝液中に懸濁した。緩衝液はＮａＰＯ４０．１Ｍ、ＢＳＡ３％、ＮａＮ３０．０５％、シュクロース３％、塩化ナトリウム０．２％、フェニルデキストラン０．０５％、ウシガンマグロブリン０．０５％、ｐＨ７．５であった。炭素粒子連結による検出ゾーンへの連結を、吸収の測定により定量した(Ultroscan XL, Enhanced Laser Densitometer, LKB)。血漿環境中において標準濃度を有するＩｇＥ(０；０．５；２；１０；５０および２００ＫＵ／Ｌ)をサンプルとして用いた。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７７】
膜および適用ゾーンにおける抗-ｈＩｇＥ結合粒子の保持：
実施例１の通り行った。ただし、Inplastor stripの代わりに粘着テープを用いた(片面に接着剤のついている透明なポリエステルArcare ２ミル)。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
緩衝液、サンプルおよび検出粒子連結の適用のためのゾーン：
５つの１ｍｍ幅の粘着テープ(片面に接着剤のついている透明なポリエステルArcare ２ミル)を、保持物質を含むゾーンから離れたウェルに、相互に５ｍｍ離れたゾーンに平行に置く。それによって、テープストリップは５種の５ｍｍ幅のゾーンを決めた。シートを、幅０．５ｃｍのストリップに保持物質を含むゾーンに垂直に切断した(ストリップの長さは５ｃｍとなった)(Singulator: Matrix 1201 membrane cutter, Kinematic automation)。最終ステップは、ゾーンスペーサーとしてテープストリップにより分離した５つのゾーン(適用ゾーン)および保持したシラカンバ花粉を伴う分離ゾーン(検出ゾーン)を示す。ゾーンスペーサーのない、すなわち、分離した適用ゾーンのないストリップを比較として調製した。