【事件の表示】
　特願２０００−５４０２６９「Ｔ細胞刺激タンパク質断片の同定方法」拒絶査定不服審判事件〔平成１１年７月２２日国際公開、ＷＯ９９／３６５６８、平成１４年３月２６日国内公表、特表２００２−５０９２４１〕について、次のとおり審決する。
【結　論】
　本件審判の請求は、成り立たない。
【理　由】
１　手続の経緯・本願発明
　本願は、平成１１年１月１５日（パリ条約による優先権主張　平成１０年１月１９日　平成１０年７月２８日　ドイツ）を国際出願日とする出願であって、その請求項１ないし８に係る発明は、平成２３年６月１０日付けの手続補正書により補正された特許請求の範囲の請求項１ないし８に記載された事項により特定されるとおりのものと認められ、その請求項１に係る発明は次のとおりのものである。
　
 「【請求項１】以下の工程
　ａ）タンパク質またはペプチドである抗原のアミノ酸配列を確立する工程；
　ｂ）検出された該抗原のアミノ酸配列をタンパク質断片群に細分化する工程；
　ｃ）アミノ酸８〜３０個の長さを有する少なくとも１つのタンパク質断片を合成するか、あるいは該抗原のアミノ酸配列を、アミノ酸８〜３０個の長さを有する少なくとも１つのタンパク質断片に開裂させる工程、ここに該タンパク質断片は該抗原の確立されたアミノ酸配列のサブ配列である；
　ｄ）種々の実験において、Ｔ細胞を含む懸濁液をタンパク質断片または断片群とインキュベートする工程；
　ｅ）（ｉ）タンパク質断片または断片群によって誘導され、Ｔ細胞内で合成されて細胞内に維持されているか、あるいは細胞膜に結合している、少なくとも１つのＴ細胞サイトカインを同定する工程；および／または、
　　　（ii）タンパク質断片または断片群によって誘導されるか、あるいは発現を高められ、Ｔ細胞内で発現されるタンパク質断片または断片群によるＴ細胞刺激のために発現され、または発現を高められた、細胞内に存在するか、あるいは細胞表面に発現されている、少なくとも１つの活性化マーカーを同定する工程；
　ここに、該Ｔ細胞サイトカインまたはサイトカイン群または活性化マーカーはフローサイトメトリーによって同定される；および、
　ｆ）Ｔ細胞が刺激されており、その刺激が１つまたはそれ以上のＴ細胞サイトカインおよび／または１つまたはそれ以上の活性化マーカーを同定することによって認識された実験の結果を、Ｔ細胞とインキュベートされた該タンパク質断片のアミノ酸配列または配列群に割り当てる工程；
を含むＴ細胞刺激タンパク質断片の同定方法であって、インキュベーション時間は充分に長く、その結果、タンパク質断片または断片群が細胞表面に存在するＭＨＣ分子により十分に捉えられ、上記捕捉は刺激されたＴ細胞の不明瞭でない同定が可能である場合に十分であること；および
タンパク質断片または断片群と共にＴ細胞を含む懸濁液のインキュベーション時間は、充分に短く、その結果、選択および増殖が起こらない、ことに特徴がある方法。」（以下、「本願発明」という。）
　
２　引用刊行物とその記載事項
　当審における拒絶の理由に引用され、本願優先日前に頒布された刊行物１ないし３には以下の事項がそれぞれ記載されている。以下、下線は当審で付加した。
　
（１）刊行物１：Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９７，Ｖｏｌ．１５９，Ｐ．１０１２−１０１８、日本語抄訳
「Ｃ型肝炎ウイルスコア−特異的末梢血Ｔ細胞におけるＣＤ３０発現とサイトカインのプロファイル」と題する論文であって
（１ａ）「ペプチド
ペプチドは・・・合成された。・・・ＨＣＶ−１型から単離されたものに相当する、
コア領域ａａ１−１９２にまたがる７つのペプチド
ａａ１−２５（コントロール）、ａａ２０−４４（Ｃ．Ｔ１）、ａａ７９−１０３（Ｃ．Ｔ２）、ａａ１１８−１４２、ａａ１２８−１５２（Ｃ．Ｔ３）、ａａ１４８−１７２（Ｃ．Ｔ４）、ａａ１６８−１９２（コントロール）
　
（１ｂ）「細胞と細胞培養
　
ＰＢＭＣ
ＰＢＭＣ
合成ＨＣＶペプチドの存在下
４０時間インキュベートされた
　
（１ｃ）「サイトカインの細胞質内染色による３重染色フローサイトメトリ−
表面マーカーＣＤ３とＣＤ３０
サイトカイン
培養細胞は
表面マ−カーＣＤ３とＣＤ３０に対する染色が行われ
ＰＦＡ含有氷冷ＨＢＳＳ中で５分間固定
サイトカイン特異的抗体
添加され
第二抗体とともに
インキュベートされ
　
表面マーカーとサイトカインのフローサイトメトリック分析
３重染色免疫蛍光サイトメーター
非刺激のコントロールの少なくとも３倍のＣＤ３０
＋
及び／またはサイトカイン発現がＴ細胞にあった場合に有意な刺激と推定した
　
（１ｄ）「図１．ＨＣＶコアの主要抗原決定基により発現したＤ３０。４つの主要な免疫増殖性Ｔ細胞エピトープに相当する合成した２５アミノ酸残基のペプチド（１０μｇ／ｍｌ）である
Ｃ．Ｔ１、Ｃ．Ｔ２、Ｃ．Ｔ３、Ｃ．Ｔ４、及び非増殖性コントロールペプチドＣＰ１、ＣＰ２でＰＢＭＣ（１０
６
／ｍｌ）を刺激した後のＴ細胞上に発現したＣＤ３０の比率が、棒グラフで示される
　
（１ｅ）「図３．
ＣＤ３０
＋
Ｔリンパ球によるＩＬ−１０とＩＦＮ−γの同時生産
Ｃ．Ｔ１ペプチドによるＣＤ３
＋
／ＣＤ３０
＋
Ｔリンパ球の刺激試験
４０時間インキュベート
　
（２）刊行物２：国際公開第９７／４５７３５号、対応日本語公報である特表２０００−５１２００８号公報による日本語抄訳
（２ａ）「１．抗原反応性Ｔ細胞を含む疑いのある生物学的試料中の該Ｔ細胞を検出するための方法であって、該方法は以下の工程：
  (a)該生物学的試料中の該Ｔ細胞を、Ｔ細胞増殖を可能にするのに十分な第１の期間、該抗原で刺激する工程；
  (b)該Ｔ細胞を、可溶性因子の分泌を誘導するのに有効な第２の期間、該抗原と抗原提示細胞との組合せの有効量で再刺激する工程；
  (c)固体支持体上で該可溶性因子を捕捉することにより該可溶性因子の存在を検出する工程；および
  (d)該固体支持体上での該可溶性因子の存在を、該抗原反応性Ｔ細胞の存在と関連付ける工程、
を包含する、方法。
２．工程(a)における前記期間が、少なくとも４日間である、請求項１に記載の方法。
・・・
１０．前記可溶性因子が噛乳動物リンホカインであり、そしてこれがIFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β、またはGM-CSFである、請求項１に記載の方法。
・・・
１６．前記抗原が、ヒトミエリン塩基性タンパク質またはそれらに由来するペプチドである、請求項１に記載の方法。
・・・
３５．患者の生物学的試料において
Ｔ細胞を刺激する抗原を同定する方法
  (a)該生物学的試料を、Ｔ細胞増殖を可能にするのに十分な期間、疑わしい抗原へ曝露する工程；
  (b)必要に応じて、単数または複数のサイトカインおよび／または増殖因子を添加して、継続したＴ細胞増殖を促進する工程；
  (c)該Ｔ細胞を、前記抗原と抗原提示細胞との組合せの有効量で、アッセイされる可溶性因子の分泌を誘導するのに有効な第２の期間、再刺激する工程；
  (d)固体支持体上で該可溶性因子を捕捉することにより、該可溶性因子の存在を検出する工程；および
  (e)アッセイされる該可溶性因子の存在を、該Ｔ細胞を刺激する該抗原の能力と関連付ける工程、
を包含する、方法。
・・・
３８．疾患または症状に関連した
免疫優性Ｔ細胞エピトープを同定するための方法
  (a)第１の複数の個体由来のＴ細胞の抗原に対する反応性を決定する工程であって、ここで該個体が、該疾患または症状と診断される、工程；
  (b)第２の複数の個体由来のＴ細胞の抗原に対する反応性を決定する工程であって、ここで該個体が、該疾患または症状とは診断されない、工程；
  (c)該第１の複数の個体由来のＴ細胞の反応性を、該第２の複数の個体由来のＴ細胞の反応性と比較する工程；および
  (d)該第２の複数の個体と比較しての、第１の複数の個体における該抗原に対する反応性のレベルの増加を、該疾患または症状に関連するＴ細胞エピトープの該抗原の存在と関連付ける工程、
を包含し、ここで、工程(a)および(b)における該抗原に対する反応性を決定する工程は、請求項１に記載のアッセイを用いて行われる、方法。
・・・
４１．前記
抗原が
自己抗原のペプチドフラグメントであ
　
（２ｂ）「本明細書中に開示される方法を用いて、稀なＴ細胞、特に、自己抗原に反応性のＴ細胞および１０5個のＰＢＭＣあたり１個のＴ細胞ほどの低頻度で生じるＴ細胞を検出し得る。本発明の関連する局面は、アッセイを確認するための内部コントロールとして、凍結されたＴ細胞を用いる。
  以下の目的のための方法も提供される。
  (1)患者の生物学的試料における
Ｔ細胞を刺激する抗原の同定
  (2)自己抗原に反応性のＴ細胞を有する患者の同定、
  (3)Ｔ細胞の枯渇または不応答を誘導し得る推定薬物のスクリーニング、
  (4)抗原特異的クローンの作製における使用のための潜在的な血液ドナーのスクリーニング、
  (5)Ｔ細胞エピトープの同定、
  (6)免疫抑制の全身状態を誘導し得る薬物／処置の、安全性または効力についてのモニタリング、および
  (7)単数または複数の抗原に対する経時的な免疫応答のモニタリング。」（第３頁２４行〜第４頁６行）
　
（２ｃ）「 生物学的試料は、例えば、全血、血清、血漿、鼻分泌物、痰、尿、汗、唾液、経皮浸出液、咽頭浸出液、気管支肺胞洗浄液、気管吸引物、脳脊髄液、滑液、関節由来液、硝子体液、膣分泌物または尿道分泌物などの生物学的液体であり得るが、それらに限定されない。本明細書中において、例えば、毛髪、皮膚、滑膜組織、組織生検、および爪あかのような脱凝集した細胞性組織もまた、生物学的試料とみなされる。」（第７頁２２〜３１行）
　
（２ｄ）「そのような状況では、
重複ペプチドの完全なセット
を使用することによって、PBMCは自己抗原由来の種々のペプチドで刺激さ
このようなペプチドは、その配列が既知であるかもしくはペプチドフラグメントが化学的消化または酵素的消化、当業者に公知のすべての方法によって自己抗原から調製され得る場合、固相ペプチド合成法によって調製され得る
　
（３）刊行物３：Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖｏｌ．９９，Ｎｏ．７，１９９７，Ｐ．１７３９−１７５０、日本語抄訳
「抗原特異的記憶／エフェクターＣＤ４＋のＴ細胞のフローサイトメーターによる頻度の検出」と題する論文であって、
（３ａ）「高度に制御された、ＣＤ４＋Ｔ細胞によるサイトカインの放出は、サイトメガロウイルスのような病原体に対する免疫防御において重大な役割を果たす。ここで、我々は、
健常とＨＩＶ＋の対象中のサイトメガロウイルス−特異的ＣＤ４＋記憶／エフェクターＴ細胞の頻度と機能的特性を、短時間（６時間）のインビトロ刺激の後、細胞内サイトカインの速い蓄積を検出する、新規であり、効果の高い、多パラメータフローサイトメトリック分析により直接比較する
　
（３ｂ）「ＨＩＶ感染患者のＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＡＩＤＳの最初の記述以来、広範囲な実験的調査を受けてきたが、これらの大半の研究に採用された技術は、正確な、機能的に明確な、病原体特異的ＣＤ４＋記憶／エフェクター細胞の定量的情報の提供の可能性において限界があった。特定の病原体または抗体（Ａｇ）に応答性の記憶／エフェクターＴ細胞のクローンまたはクローン群は、ＣＤ４＋Ｔ細胞系統の基礎的機能ユニットを構成し、ＨＩＶ病の進行の間のこの「ユニット」の運命の決定は、ＨＩＶと免疫システムとの複雑な関係についてのまた、日和見感染の発生に関してのこの関係の因果関係についての新しい洞察を提供すると我々は感じた。
　この目的のために、前例のない明確さをもって、これらの細胞を定量及び定性する、抗原特異的Ｔ細胞の評価に対する新しいやり方を進展させた。このやり方は、
速い（６時間）手順
　
（３ｃ）「細胞調製および抗原刺激。ＨＩＶ−またはＨＩＶ＋の患者サンプルから得られた
末梢血単核球(ＰＢＭＣ)
　抗原特異的サイトカイニン反応のために、１×１０６ＰＢＭＣは、１００Ｕ／ｍｌペニシリン(Gibco BRL)、１００ｍｇ／ｍｌのストレプトマイシン(Gibco BRL)および２ｍＭＬ−グルタミン(Gibco BRL)、適切に希釈された
抗原調製物
最後の５時間は最終濃度１０μｇ／ｍｌのブレフェルジンＡ(比較的無毒であるが有力な、生成されたサイトカインの分泌を防ぐ、細胞内輸送の抑制剤；10)含み、合計６時間、湿った５%ＣＯ
２
雰囲気中で３７℃、５度の傾斜でインキュベートされた
　
（３ｄ）「免疫蛍光染色。上記のように凍結された細胞調整物は、急速に37℃の水浴中で溶かされ、次に、冷たいｄＰＢＳで洗浄され、暗中、室温で１０６個の細胞／500μｌで、固定化／透過性上昇溶液(ベクトン・ディキンソンImmunocytometryシステム、サンホセ(CA))(BDIS)中に再懸濁され、１０分間、室温、暗中でインキュベートされた。これらの細胞(あるいは細胞表面イムノフェノタイピング用の新鮮なPBMC)は、ＢＳＡとアジ化ナトリウム含有ｄＰＢＳで２度洗われ、次に、30分間、氷上で光から保護され、直接結合したモノクローナル抗体と共にインキュベートされた。いくつかの実験(例えば、CO45RA又はCO45RO染色を含む実験)では、
凍結ステップは省略された、採取したての細胞は、抗原による活性化の後に、最初に細胞表面染色され、固定化／透過性上昇/洗浄さら、次に、細胞質内の抗原に対して染色された。染色後、細胞は洗浄され、ｄＰＢＳの中の1%のパラホルムアルデヒド中で再固定化され、次に、分析中、４℃で光から保護させられフローサイトメーターで分析された
　
（３ｅ）「ＣＭＶ抗原；流行性耳下腺炎ウイルス抗原、麻疹ウイルス抗原、一致したコントロール抗原、これらのウィルスは、バイオウィッタカー(ウォーカーズヴィルとMD)から得た。」（第１７４０頁右欄４１〜４４行）
　
（３ｆ）「最初に、この分析は、抗原応答性ＣＤ４＋記憶／エフェクターＴ細胞を、それらの最も基本的な−本当に決定的な−機能、エフェクターサイトカインの合成（Ｔ細胞サイトカインのいかなる組合せも含む可能性がある）により、同定し定量し、そして、この分析は、
活性化誘発アポトーシスの開始に大いに先んじた期間でなされる
多くの記憶／エフェクターＴ細胞は、抗原に対してエフェクター応答（例えば、サイトカイン放出、ＣＤ８＋細胞の場合、細胞毒性）という形で応答し、それから、増殖性の応答に先立つ活性化誘発アポトーシスにより死ぬ、ということが、今や十分に立証される(20,21
。したがって、インビトロのインキュベーションに拡張されることを要求される技術は（ＤＮＡ鎖破壊により測定される活性化誘発アポトーシスは、少なくとも１２−１８時間で開始することができる；22）、全応答細胞を低く見積もるだろう
　
（３ｇ）「フローサイトメトリック分析の増加した感度は、以下の要因の組合せによる（ａ）・・・（ｄ）
比較的短時間（６時間）の刺激時間は、上記のとおり、活性化誘発アポトーシスの潜在的なネガティブな効果を軽減する
　
３　対比・判断
　刊行物１の記載事項（特に上記(1a)(1b)(1c)(1e)）から、刊行物１には、
「ＨＣＶ−１型コア領域のａａ１−１９２にまたがる２５アミノ酸からなるペプチドであって、隣接した１５アミノ酸が重複した、ａａ１−２５（コントロール）、ａａ２０−４４（Ｃ．Ｔ１）、ａａ７９−１０３（Ｃ．Ｔ２）、ａａ１２８−１５２（Ｃ．Ｔ３）、ａａ１４８−１７２（Ｃ．Ｔ４）、ａａ１６８−１９２（コントロール）の６つの合成ＨＣＶペプチドの存在下に、ＰＢＭＣ懸濁液を４０時間インキュベートし、Ｔリンパ球の細胞表面に発現した表面マーカーＣＤ３とＣＤ３０、及びＣＤ３、ＣＤ３０発現Ｔ細胞が生産するサイトカインであるＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０を３重染色免疫蛍光サイトメーターを用いてフローサイトメトリー分析し、各合成ＨＣＶペプチの刺激により、非刺激のコントロールの少なくとも３倍の表面マーカー及び／またはサイトカイン発現がＴ細胞にあった場合に有意な刺激と推定する、各合成ＨＣＶペプチドが、Ｔ細胞を刺激する程度を調べる方法」の発明（以下、「刊行物１発明」という。）が記載されていると認められる。
　
　そこで、本願発明と刊行物１発明とを比較する。
（ア）刊行物１発明の「ＰＢＭＣ」は、「末梢血単核細胞」の略称であり、本願発明の「Ｔ細胞」を含んでいることは技術常識であるから、刊行物１発明の「ＰＢＭＣ懸濁液」は、本願補正発明の「Ｔ細胞を含む懸濁液」に相当する。
（イ）刊行物１発明の「ＨＣＶ−１型コア領域のａａ１−１９２にまたがる２５アミン酸からなるペプチドであって、隣接した１５アミノ酸が重複した、ａａ１−２５（コントロール）、ａａ２０−４４（Ｃ．Ｔ１）、ａａ７９−１０３（Ｃ．Ｔ２）、ａａ１２８−１５２（Ｃ．Ｔ３）、ａａ１４８−１７２（Ｃ．Ｔ４）、ａａ１６８−１９２（コントロール）の６つの合成ペプチド」は、アミノ酸配列が確立されいることは合成ペプチドであることからも明らかであり、それぞれ２５個のアミン酸からなるサブ配列である６つの合成ペプチド群であるから、本願発明の「ａ）タンパク質またはペプチドである抗原のアミノ酸配列を確立する工程；ｂ）検出された該抗原のアミノ酸配列をタンパク質断片群に細分化する工程；ｃ）アミノ酸８〜３０個の長さを有する少なくとも１つのタンパク質断片を合成するか、あるいは該抗原のアミノ酸配列を、アミノ酸８〜３０個の長さを有する少なくとも１つのタンパク質断片に開裂させる工程、ここに該タンパク質断片は該抗原の確立されたアミノ酸配列のサブ配列である」で調製されたタンパク質断片群に相当する。
（ウ）刊行物１発明の「Ｔ細胞の細胞表面に発現した表面マーカーＣＤ３とＣＤ３０」及び「ＣＤ３、ＣＤ３０発現細胞が生産するサイトカインであるＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０」は、それぞれ本願発明の「タンパク質断片または断片群によって誘導されるか、あるいは発現を高められ、Ｔ細胞内で発現されるタンパク質断片または断片群によるＴ細胞刺激のために発現され、または発現を高められた、細胞内に存在するか、あるいは細胞表面に発現されている、少なくとも１つの活性化マーカー」及び「タンパク質断片または断片群によって誘導され、Ｔ細胞内で合成されて細胞内に維持されているか、あるいは細胞膜に結合している、少なくとも１つのＴ細胞サイトカイン」に相当する。
（エ）刊行物１発明の「表面マーカーＣＤ３とＣＤ３０」及び「サイトカインであるＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０」を「３重染色免疫蛍光サイトメーターを用いてフローサイトメトリー分析する」ことは、各表面マーカー及びサイトカインは、それぞれ異なった蛍光染料で区別して染め分けられ、フローサイトメーターで区別して同定されることは、フロ−サイトメトリー分析の技術常識であるから、本願発明の「Ｔ細胞サイトカインまたはサイトカイン群または活性化マーカーはフローサイトメトリーによって同定される」ことに相当する。
（オ）刊行物１発明の、「各合成ＨＣＶペプチの刺激により、非刺激のコントロールの少なくとも３倍の表面マーカー及び／またはサイトカイン発現がＴ細胞にあった場合に有意な刺激と推定する」ことは、有意な刺激と推定する際に、各合成ＨＣＶペプチドの刺激を、それにより発現する表面マーカー及び／またはサイトカインを同定することにより認識し、当該ペプチドの刺激性と同定した表面マーカーとを対応付けしているといえるから、本願発明の「Ｔ細胞が刺激されており、その刺激が１つまたはそれ以上のＴ細胞サイトカインおよび／または１つまたはそれ以上の活性化マーカーを同定することによって認識された実験の結果を、Ｔ細胞とインキュベートされた該タンパク質断片のアミノ酸配列または配列群に割り当てる工程」に相当する。
（カ）刊行物１発明の「各合成ＨＣＶペプチドが、Ｔ細胞を刺激する程度を調べる方法」と、本願発明「Ｔ細胞刺激タンパク質断片の同定方法」とは、Ｔ細胞刺激タンパク質断片の分析方法である点で共通する。
（キ）刊行物１発明の「６つの合成ＨＣＶペプチドの存在下に、ＰＢＭＣの懸濁液を４０時間インキュベート」することは、刊行物１発明が、Ｔ細胞の細胞表面に表面マーカーＣＤ３、ＣＤ３０が発現し、ＣＤ３、ＣＤ３０発現Ｔリンパ球がサイトカインであるＩＦＮ−γ及びＩＬ−１０を発現する程度を調べることからみて、これらの発現に充分な時間のインキュベートであることは明らかである。そして、Ｔ細胞がこのような発現をするに先立ち、末梢血単核細胞の一種であり、ＰＢＭＣの懸濁液中に含有されていることが明らかである単球表面のＭＨＣ分子が、抗原であるペプチドをＴ細胞に提示することは、本願優先日前のこの分野における技術常識である（例えば、Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．７６，１９９４，ｐ．２８７−２９９）。
　そうすると、刊行物１発明の「６つの合成ＨＣＶペプチドの存在下に、ＰＢＭＣの懸濁液を４０時間インキュベート」することと、本願発明の「インキュベーション時間は充分に長く、その結果、タンパク質断片または断片群が細胞表面に存在するＭＨＣ分子により十分に捉えられ、上記捕捉は刺激されたＴ細胞の不明瞭でない同定が可能である場合に十分であること；およびタンパク質断片または断片群と共にＴ細胞を含む懸濁液のインキュベーション時間は、充分に短く、その結果、選択および増殖が起こらない、こと」とは、インキュベーション時間は充分に長く、その結果、タンパク質断片または断片群が細胞表面に存在するＭＨＣ分子により十分に捉えられ、上記捕捉は刺激されたＴ細胞の不明瞭でない同定が可能である場合に十分であるインキュベーションである点で共通する。
　
　したがって、両者の間には、以下の一致点及び相違点がある。
（一致点）
　以下の工程
　ａ）タンパク質またはペプチドである抗原のアミノ酸配列を確立する工程；
　ｂ）検出された該抗原のアミノ酸配列をタンパク質断片群に細分化する工程；
　ｃ）アミノ酸８〜３０個の長さを有する少なくとも１つのタンパク質断片を合成するか、あるいは該抗原のアミノ酸配列を、アミノ酸８〜３０個の長さを有する少なくとも１つのタンパク質断片に開裂させる工程、ここに該タンパク質断片は該抗原の確立されたアミノ酸配列のサブ配列である；
　ｄ）種々の実験において、Ｔ細胞を含む懸濁液をタンパク質断片または断片群とインキュベートする工程；
　ｅ）（ｉ）タンパク質断片または断片群によって誘導され、Ｔ細胞内で合成されて細胞内に維持されているか、あるいは細胞膜に結合している、少なくとも１つのＴ細胞サイトカインを同定する工程；および／または、
　　　（ii）タンパク質断片または断片群によって誘導されるか、あるいは発現を高められ、Ｔ細胞内で発現されるタンパク質断片または断片群によるＴ細胞刺激のために発現され、または発現を高められた、細胞内に存在するか、あるいは細胞表面に発現されている、少なくとも１つの活性化マーカーを同定する工程；
　ここに、該Ｔ細胞サイトカインまたはサイトカイン群または活性化マーカーはフローサイトメトリーによって同定される；および、
　ｆ）Ｔ細胞が刺激されており、その刺激が１つまたはそれ以上のＴ細胞サイトカインおよび／または１つまたはそれ以上の活性化マーカーを同定することによって認識された実験の結果を、Ｔ細胞とインキュベートされた該タンパク質断片のアミノ酸配列または配列群に割り当てる工程；
を含むＴ細胞刺激タンパク質断片の分析方法であって、インキュベーション時間は充分に長く、その結果、タンパク質断片または断片群が細胞表面に存在するＭＨＣ分子により十分に捉えられ、上記捕捉は刺激されたＴ細胞の不明瞭でない同定が可能である場合に十分である方法である点。
　
（相違点１）
　Ｔ細胞刺激タンパク質断片の分析方法が、本願発明では、Ｔ細胞刺激タンパク質断片の同定方法であるのに対して、刊行物１発明では、６つの合成ＨＣＶペプチドのうち、非刺激のコントロールの少なくとも３倍の表面マーカー及び／またはサイトカイン発現がＴ細胞にあった場合に有意な刺激と推定する、各合成ＨＣＶペプチドが、Ｔ細胞を刺激する程度を調べる方法である点。
　
（相違点２）
　充分に長いインキュベーション時間が、本願発明では、充分に短く、その結果、選択および増殖が起こらないものであるのに対して、刊行物１発明では、４０時間である点。
　
　そこで、上記各相違点について検討する。
（相違点１について）
　刊行物２（上記(2a)(2b)(2d））には、アミノ酸配列が既知のペプチド抗原でＴ細胞を刺激し、発現したインターフェロン等の可溶性因子を検出してＴ細胞を刺激する抗原を同定する方法及び抗原のＴ細胞エピトープを同定する方法が記載されている。さらに、特開平６−１９９８９４号公報（【０００６】、【０００８】、【００１６】）、特開平５−２１３９９５号公報（第３頁左欄１８〜２８行）、特開平８−３３３３９１号公報（【００３０】、【００３２】）にも記載されるように、ペプチドをワクチン等に利用するために、アミノ酸配列が既知のペプチドでＴ細胞を刺激して、刺激性を同定、つまりＴ細胞刺激蛋白質断片の同定をすることは、例えば、特開平６−１９９８９４号公報（【０００８】、実施例）、特開平５−２１３９９５号公報（実施例）、特開平８−３３３３９１号公報（【００３０】）にも記載されるように、本願優先日前の周知技術である。
　そして、刊行物１発明は、各合成ＨＣＶペプチの刺激により、非刺激のコントロールの少なくとも３倍の表面マーカー及び／またはサイトカイン発現がＴ細胞にあった場合に有意な刺激と推定することからみて、合成ペプチドのＴ細胞に対する刺激性を評価しているといえるから、上記周知技術を知っている当業者であれば、刊行物１発明において、Ｔ細胞を刺激するかどうか不明で、アミノ酸配列が既知のペプチド用いて、その刺激性を同定することは容易になし得たことといえる。
　
（相違点２について）
　本願明細書中で従来技術として引用されている刊行物である、刊行物３には、ＰＢＭＣとＣＭＶ抗原等の抗原とを、合計６時間インキュベートし、その後、表面マーカーや細胞内サイトカインを免疫染色して、フローサイトメーターで分析することが記載されている（上記(3c)）。さらに、Ｔ細胞を６時間という短い刺激時間で抗原による刺激を行うことで、増殖性の応答に先立つ活性化誘発アポトーシスによりＴ細胞が死ぬという、活性化誘発アポトーシスの潜在的なネガティブな効果を軽減することが記載されており（上記(3f)(3g)）、刺激時間を６時間と、充分に短くすることで、刺激されたＴ細胞の死と死に先立つ増殖を軽減できることが示されているといえる。さらに、分析時間を短縮することは一般に求められるところであり、細胞のインキュベーション時間を、表面マーカーやサイトカインが測定に充分な量発現する範囲内できるだけ短くして、分析効率を上げることは考慮されるべきであることも考え合わせると、刊行物１発明において、４０時間のインキュベーション時間を、刊行物３に記載されるように、選択および増殖が起こらない充分に短い時間とすることは、当業者が容易になし得たことといえる。
　
（本願発明の効果について）
　そして、本願発明の効果は刊行物１ないし３の記載事項、及び周知技術から予測し得たものであり、格別顕著なものとはいえない。　
　
４　むすび
　以上のとおり、本願請求項１に係る発明は、刊行物１ないし３に記載された発明及び周知技術に基づいて当業者が容易に発明をすることができたものであるから、特許法第２９条第２項の規定により特許を受けることができない。
　したがって、その他の請求項に係る発明についての判断を示すまでもなく本願は拒絶すべきものである。
　よって、結論のとおり審決する。