【手続補正書】
【提出日】平成17年6月21日(2005.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にあるヌクレオチドを同定するための組成物であって、前記組成物は、非従来型ヌクレオチドに対する識別が減少したファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼと、第１のプライマーとを含み、前記第１のプライマーは前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの３’に隣接してアニールすることを特徴とする組成物。
【請求項２】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは、ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、配列番号：２の配列を有し、さらに、Ｄ１４１，Ｅ１４３，Ａ４８５，Ｌ４０８またはＰ４１０における１つ以上のアミノ酸変異をさらに含むことを特徴とする請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、Ｄ１４１ＡまたはＤ１４１Ｔ、Ｅ１４３Ａ、Ｌ４０８ＨまたはＬ４０８Ｆ、Ａ４８５Ｔ、及びＰ４１０Ｌからなる群より選ばれる１つ以上のアミノ酸変異を有することを特徴とする請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、Ｄ１４１Ａ，Ｅ１４３Ａ，Ｐ４１０Ｌ及びＡ４８５Ｔに４つのアミノ酸変異を含むことを特徴とする請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは、３’から５’へのエキソヌクレアーゼ活性を欠失していることを特徴とする請求項１〜５に記載の組成物。
【請求項７】
少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログをさらに含み、前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼによって鋳型依存的に前記第１のプライマー中へ取り込まれることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、第１の検出可能なラベルで標識されていることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
１つより多い連鎖終結用ヌクレオチドアナログが標識されており、各連鎖終結用ヌクレオチドアナログは異なる第１の検出ラベルによって標識されていることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、ジデオキシヌクレオチドであることを特徴とする請求項７に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ジデオキシヌクレオチドは、ｄｄＡＴＰ，ｄｄＴＴＰ，ｄｄＣＴＰ及びｄｄＧＴＰからなる群より選択されることを特徴とする請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記第１のプライマーは、第２の検出可能なラベルによって標識されていることを特徴とする請求項８に記載の組成物。
【請求項１３】
第１及び第２の検出可能なラベルは、鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドを同定するためのシグナルを発生することを特徴とする請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
第２のプライマーをさらに含むことを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記第１のプライマーは第２の検出可能なラベルで標識されており、前記第２のプライマーは第３の検出可能なラベルで標識されており、前記第２及び第３の検出可能なラベルは、鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドを同定するためのシグナルを発生することを特徴とする請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記第２のプライマーは、前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの５’に隣接してアニールすることを特徴とする請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
ＤＮＡリガーゼをさらに含むことを特徴とする請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼのための反応バッファをさらに含む請求項１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記鋳型ＤＮＡ分子は、ポリメラーゼ連鎖反応の産物またはプラスミドＤＮＡであることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記第１または第２または第３の検出可能なラベルは、蛍光ラベル、放射性同位体、化学発光ラベル、量子ドットラベル、抗原、またはアフィニティ分子からなる群から選ばれる１つであることを特徴とする請求項８，１２または１５に記載の組成物。
【請求項２１】
前記第１の検出可能なラベルは、ローダミンラベルまたはシアニンラベルであることを特徴とする請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にあるヌクレオチドを同定するためのキットであって、前記キットは、非従来型ヌクレオチドに対する識別が減少したファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼと、第１のプライマーとを含み、前記第１のプライマーは前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの３’に隣接してアニールすることを特徴とするキット。
【請求項２３】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは、ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼであることを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項２４】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、配列番号：２の配列を有し、さらに、Ｄ１４１，Ｅ１４３，Ａ４８５，Ｌ４０８またはＰ４１０における１つ以上のアミノ酸変異をさらに含むことを特徴とする請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、Ｄ１４１ＡまたはＤ１４１Ｔ、Ｅ１４３Ａ、Ｌ４０８ＨまたはＬ４０８Ｆ、Ａ４８５Ｔ、及びＰ４１０Ｌからなる群より選ばれる１つ以上のアミノ酸変異を有することを特徴とする請求項２４に記載のキット。
【請求項２６】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、Ｄ１４１Ａ，Ｅ１４３Ａ，Ｐ４１０Ｌ及びＡ４８５Ｔに４つのアミノ酸変異を含むことを特徴とする請求項２５に記載のキット。
【請求項２７】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは、３’から５’へのエキソヌクレアーゼ活性を欠失していることを特徴とする請求項２２〜２６に記載のキット。
【請求項２８】
少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログをさらに含み、前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼによって鋳型依存的に前記第１のプライマー中へ取り込まれることを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項２９】
少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、第１の検出可能なラベルで標識されていることを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項３０】
１つより多い連鎖終結用ヌクレオチドアナログが標識されており、各連鎖終結用ヌクレオチドアナログは異なる第１の検出ラベルによって標識されていることを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項３１】
前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、ジデオキシヌクレオチドであることを特徴とする請求項２８に記載のキット。
【請求項３２】
前記ジデオキシヌクレオチドは、ｄｄＡＴＰ，ｄｄＴＴＰ，ｄｄＣＴＰ及びｄｄＧＴＰからなる群より選択されることを特徴とする請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記第１のプライマーは、第２の検出可能なラベルによって標識されていることを特徴とする請求項２９に記載のキット。
【請求項３４】
第１及び第２の検出可能なラベルは、鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドを同定するためのシグナルを発生することを特徴とする請求項３３に記載のキット。
【請求項３５】
第２のプライマーをさらに含むことを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項３６】
前記第１のプライマーは第２の検出可能なラベルで標識されており、前記第２のプライマーは第３の検出可能なラベルで標識されており、前記第２及び第３の検出可能なラベルは、鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドを同定するためのシグナルを発生することを特徴とする請求項３５に記載のキット。
【請求項３７】
前記第２のプライマーは、前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの５’に隣接してアニールすることを特徴とする請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
ＤＮＡリガーゼをさらに含むことを特徴とする請求項３７に記載のキット。
【請求項３９】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼのための反応バッファをさらに含む請求項２２に記載のキット。
【請求項４０】
前記鋳型ＤＮＡ分子は、ポリメラーゼ連鎖反応の産物またはプラスミドＤＮＡであることを特徴とする請求項２２に記載のキット。
【請求項４１】
前記第１または第２または第３の検出可能なラベルは、蛍光ラベル、放射性同位体、化学発光ラベル、量子ドットラベル、抗原、またはアフィニティ分子からなる群から選ばれる１つであることを特徴とする請求項２９，３３または３６に記載のキット。
【請求項４２】
前記第１の検出可能なラベルは、ローダミンラベルまたはシアニンラベルであることを特徴とする請求項４１に記載のキット。
【請求項４３】
対照鋳型及び／または少なくとも１つの対照プライマーをさらに含む請求項２２，２８または３９に記載のキット。
【請求項４４】
対照鋳型及び４つの対照プライマーを含む請求項４３に記載のキット。
【請求項４５】
試料中の鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にあるヌクレオチドを同定する方法であって、前記方法は、
（ａ）第１のプライマーを前記鋳型ＤＮＡに接触させる工程であって、前記接触によって前記第１のプライマーは、前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの３’に隣接してアニールすることができ、これにより前記第１のプライマーと前記鋳型ＤＮＡとの間で二本鎖が形成される工程と、
（ｂ）工程（ａ）からの前記二本鎖を、ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼ及び少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログの存在下でインキュベートする工程であって、非従来型ヌクレオチドと前記ターミネータに対する識別が減少した前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは第１の検出可能なラベルで標識されており、前記インキュベーション工程によって、ＤＮＡポリメラーゼによる標識された連鎖終結用ヌクレオチドアナログの前記第１のプライマーへの鋳型依存的取り込みが可能になるインキュベーション工程と、
（ｃ）工程（ｂ）からの前記二本鎖の有無または正体を、前記第１の検出可能なラベルによって発生されるシグナルによって判定する工程とを含む方法。
【請求項４６】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは、ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼであることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、配列番号：２の配列を有し、さらに、Ｄ１４１，Ｅ１４３，Ａ４８５，Ｌ４０８またはＰ４１０における１つ以上のアミノ酸変異をさらに含むことを特徴とする請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、Ｄ１４１ＡまたはＤ１４１Ｔ、Ｅ１４３Ａ、Ｌ４０８ＨまたはＬ４０８Ｆ、Ａ４８５Ｔ、及びＰ４１０Ｌからなる群より選ばれる１つ以上のアミノ酸変異を有することを特徴とする請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼは、Ｄ１４１Ａ，Ｅ１４３Ａ，Ｐ４１０Ｌ及びＡ４８５Ｔに４つのアミノ酸変異を含むことを特徴とする請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記ファミリーＢのＤＮＡポリメラーゼは、３’から５’へのエキソヌクレアーゼ活性を欠失していることを特徴とする請求項４５〜４９に記載の方法。
【請求項５１】
少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログが第１の検出可能なラベルによって標識されていることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項５２】
１つより多い連鎖終結用ヌクレオチドアナログが標識されており、各連鎖終結用ヌクレオチドアナログは異なる第１の検出ラベルによって標識されていることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項５３】
前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、ジデオキシヌクレオチドであることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項５４】
前記ジデオキシヌクレオチドは、ｄｄＡＴＰ，ｄｄＴＴＰ，ｄｄＣＴＰ及びｄｄＧＴＰからなる群より選択されることを特徴とする請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記第１のプライマーは、第２の検出可能なラベルによって標識されていることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
第１及び第２の検出可能なラベルは、鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドを同定するためのシグナルを発生することを特徴とする請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記鋳型ＤＮＡ分子は、ポリメラーゼ連鎖反応の産物またはプラスミドであることを特徴とする請求項４５に記載の方法。
【請求項５８】
工程（ａ）の前に、ＰＣＲ産物からＰＣＲプライマー及びｄＮＴＰを除去する工程をさらに含む請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
試料中の鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にあるヌクレオチドを同定する方法であって、前記方法は、
（ａ）第１のプライマーと第２のプライマーを、前記鋳型ＤＮＡ分子に接触させる工程であって、前記接触によって前記第１のプライマーは、前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの３’に隣接してアニールすることができ、前記第２のプライマーは、前記鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にある前記ヌクレオチドの５’に隣接してアニールすることができ、これにより前記鋳型ＤＮＡ分子と前記第１のプライマー及び前記第２のプライマーの間で複合体が形成され、前記第１のプライマーは第２の検出可能なラベルで標識されており、前記第２のプライマーは第３の検出可能なラベルで標識されている工程と、
（ｂ）工程（ａ）からの前記複合体を、ＤＮＡリガーゼ及び配列番号：２の配列を有し、さらに、前記配列番号：２の配列のＰ４１０及びＡ４８５の各位置におけるアミノ酸変異をさらに含むＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼの存在下でインキュベートする工程であって、該インキュベーション工程によって、単一の分子を形成するように前記第１及び第２のプライマー間のライゲーションが可能になる工程と、
（ｃ）工程（ｂ）からの単一の分子の有無または正体を、前記第２及び第３の検出可能なラベルによって発生されるシグナルによって判定する工程とを含む方法。
【請求項６０】
前記第１または第２または第３の検出可能なラベルは、放射性ラベル、蛍光ラベル、化学発光ラベル、比色ラベル、及び酵素ラベルからなる群より選択される１つであることを特徴とする請求項４５，５５または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記第１の検出可能なラベルは、ローダミンラベルまたはシアニンラベルであることを特徴とする請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
配列番号：２の配列を有し、さらに、前記配列番号：２の配列のＰ４１０及びＡ４８５における各位置にアミノ酸変異をさらに含むことを特徴とするＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６３】
位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であることを特徴とする請求項６２に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６４】
位置Ａ４８５における前記変異がＡ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項６２に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６５】
位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であり、位置Ａ４８５における前記変異がＡ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項６２に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６６】
配列番号：２の配列内のＤ１４１及びＥ１４３における一つ又は二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項６２に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６７】
前記Ｄ１４１及びＥ１４３における一つ又は二つの変異はＤ１４１Ａ及びＥ１４３Ａであることを特徴とする請求項６６に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６８】
Ｄ１４１Ａ及びＥ１４３Ａの二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項６５に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項６９】
配列番号：２の配列及び前記配列番号：２の配列のＰ４１０及びＡ４８５の各位置におけるアミノ酸変異を含むＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼを含有する組成物。
【請求項７０】
前記配列番号：２の位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であることを特徴とする請求項６９に記載の組成物。
【請求項７１】
前記配列番号：２の位置Ａ４８５における前記変異がＰ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項６９に記載の組成物。
【請求項７２】
前記配列番号：２の位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であり、前記配列番号：２の位置Ａ４８５における前記変異がＰ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項６９に記載の組成物。
【請求項７３】
Ｄ１４１Ａ及びＥ１４３Ａの二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項７２に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項７４】
第１のプライマー及び少なくとも一つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログをさらに含むことを特徴とする請求項６９に記載の組成物。
【請求項７５】
二つ、三つ、四つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログをさらに含むことを特徴とする請求項７４に記載の組成物。
【請求項７６】
少なくとも一つの前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログが第１の検出可能なラベルで標識されていることを特徴とする請求項７５に記載の組成物。
【請求項７７】
前記第１のプライマーが第２の検出可能なラベルで標識されていることを特徴とする請求項７６に記載の組成物。
【請求項７８】
前記第１または第２の検出可能なラベルは、蛍光ラベル、放射性同位体、化学発光ラベル、量子ドットラベル、抗原、またはアフィニティ分子からなる群から選ばれる１つであることを特徴とする請求項７６または７７に記載の組成物。
【請求項７９】
前記検出可能なラベルは、ローダミンラベルまたはシアニンラベルであることを特徴とする請求項７８に記載の組成物。
【請求項８０】
配列番号：２の配列と、前記配列番号：２の配列のＰ４１０及びＡ４８５における各位置にアミノ酸変異とを含み、それにより材料をパッケージする、ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼを含有することを特徴とするキット。
【請求項８１】
位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であることを特徴とする請求項８０に記載のキット。
【請求項８２】
位置Ａ４８５における前記変異がＡ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項８０に記載のキット。
【請求項８３】
位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であり、位置Ａ４８５における前記変異がＡ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項８０に記載のキット。
【請求項８４】
前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼがＤ１４１Ａ及びＥ１４３Ａの二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項８３に記載のキット。
【請求項８５】
鋳型ＤＮＡをアニールする第１のプライマーをさらに含むことを特徴とする請求項８４に記載のキット。
【請求項８６】
少なくとも１つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログをさらに含み、前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログは、前記ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼによって鋳型依存的に前記第１のプライマー中へ取り込まれることを特徴とする請求項８５に記載のキット。
【請求項８７】
二つ、三つ、四つの連鎖終結用ヌクレオチドアナログをさらに含むことを特徴とする請求項８６に記載のキット。
【請求項８８】
前記少なくとも一つの前記連鎖終結用ヌクレオチドアナログが第１の検出可能なラベルで標識されていることを特徴とする請求項８６に記載のキット。
【請求項８９】
前記第１のプライマーが第２の検出可能なラベルで標識されていることを特徴とする請求項８８に記載のキット。
【請求項９０】
第１及び第２の検出可能なラベルは、鋳型ＤＮＡ分子の所定位置にあるヌクレオチドを同定するためのシグナルを発生することを特徴とする請求項８９に記載のキット。
【請求項９１】
前記第１または第２の検出可能なラベルは、蛍光ラベル、放射性同位体、化学発光ラベル、量子ドットラベル、抗原、またはアフィニティ分子からなる群から選ばれる１つであることを特徴とする請求項８８に記載のキット。
【請求項９２】
前記検出可能なラベルは、ローダミンラベルまたはシアニンラベルであることを特徴とする請求項９１に記載のキット。
【請求項９３】
配列番号：２の配列を有し、さらに、前記配列番号：２の配列のＰ４１０及びＡ４８５の各位置にアミノ酸変異を含む変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼをエンコードするポリヌクレオチドを発現することによって生産されることを特徴とするＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項９４】
配列番号：２の配列内のＤ１４１及びＥ１４３における一つ又は二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項９３に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項９５】
（ａ）野生型ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼをエンコードするポリヌクレオチド内に変異を導入して、配列番号：２のＰ４１０及びＡ４８５の各位置におけるアミノ酸変異を含む変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼをエンコードする変異ポリヌクレオチドを生産し；及び、
（ｂ）前記変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼを生産する前記変異ポリヌクレオチドを発現する；
ステップにより生産されることを特徴とするＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項９６】
配列番号：２の配列内のＤ１４１及びＥ１４３における一つ又は二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項９５に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項９７】
配列番号：２の位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であることを特徴とする請求項９３または９５に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項９８】
配列番号：２の位置Ａ４８５における前記変異がＡ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項９３または９５に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項９９】
配列番号：２の位置Ｐ４１０における前記変異がＰ４１０Ｌ変異であり、位置Ａ４８５における前記変異がＡ４８５Ｔ変異であることを特徴とする請求項９３または９５に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項１００】
前記Ｄ１４１及びＥ１４３における一つ又は二つの変異がＤ１４１Ａ及びＥ１４３Ａであることを特徴とする請求項９４または９６に記載のＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼ。
【請求項１０１】
配列番号：２の配列を有し、さらに、前記配列番号：２の配列のＰ４１０及びＡ４８５の各位置にアミノ酸変異を含む変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼをエンコードするポリヌクレオチドを発現することによって生産されるＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１０２】
（ａ）野生型ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼをエンコードするポリヌクレオチド内に変異を導入して、配列番号：２のＰ４１０及びＡ４８５の各位置におけるアミノ酸変異を含む変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼをエンコードする変異ポリヌクレオチドを生産し；及び、
（ｂ）前記変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼを含む組成物を生産する前記変異ポリヌクレオチドを発現する；
ステップにより生産されることを特徴とするＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼを含むことを特徴とする組成物。
【請求項１０３】
前記変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼが位置Ｐ４１０におけるＰ４１０Ｌ変異を含むことを特徴とする請求項１０１または１０２に記載の組成物。
【請求項１０４】
前記変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼが位置Ａ４８５におけるＡ４８５Ｔ変異を含むことを特徴とする請求項１０１または１０２に記載の組成物。
【請求項１０５】
前記変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼが位置Ｐ４１０におけるＰ４１０Ｌ変異と、位置Ａ４８５におけるＡ４８５Ｔ変異を含むことを特徴とする請求項１０１または１０２に記載の組成物。
【請求項１０６】
前記変異ＪＤＦ−３ＤＮＡポリメラーゼが配列番号：２の配列内のＤ１４１Ａ及びＥ１４３Ａの二つの変異をさらに含むことを特徴とする請求項１０５に記載の組成物。