【手続補正書】
【提出日】平成18年4月24日(2006.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含み、該核酸配列が、配列番号：９〜２８のいずれかを含むことを特徴とする単離されたまたは組み換え型のポリヌクレオチド。
【請求項２】
ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含み、該核酸配列が、配列番号：９〜２８からなる群から選択されることを特徴とする単離されたまたは組み換え型のポリヌクレオチド。
【請求項３】
ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含み、配列番号：９〜２８の核酸配列を含むことを特徴とする単離されたまたは組み換え型のポリヌクレオチドのライブラリ。
【請求項４】
請求項１に記載のストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含むことを特徴とする発現カセット。
【請求項５】
請求項１に記載のストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含むことを特徴とするキット。
【請求項６】
少なくとも３つの転写ターミネーターと、いずれか２つの転写ターミネーター間に位置する少なくとも１つのクローニングサイトとを含むことを特徴とするＤＮＡコンストラクト。
【請求項７】
各ＤＮＡコンストラクトが、少なくとも３つの転写ターミネーターと、いずれか２つの転写ターミネーター間に位置する少なくとも１つのクローニングサイトとを含むことを特徴とするＤＮＡコンストラクトのライブラリ。
【請求項８】
ａ）配列番号：３０からなるｐＳＹＣＯ１０９ｍｃｓプラスミド、
ｂ）配列番号：３１からなる短い１．５ＧＩプロモーター用のＤＮＡコンストラクト、
ｃ）配列番号：３２からなる短い１．２０ＧＩプロモーター用のＤＮＡコンストラクト、
ｄ）配列番号：７０からなるｐＡＨ１０５プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｅ）配列番号：７１からなるｐＳＹＣＯ１０１プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｆ）配列番号：７２からなるｐＳＹＣＯ１０３プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｇ）配列番号：７３からなるｐＳＹＣＯ１０６プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｈ）配列番号：７４からなるｐＳＹＣＯ１０９プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｉ）配列番号：７８からなるｐＳＣＹＯ１０６ｍｃｓプラスミド用のＤＮＡコンストラクト、および
ｊ）配列番号：７９からなるｐＲＪ５０プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
からなる群から選択されるＤＮＡコンストラクト。
【請求項９】
制限エンドヌクレアーゼＡｓｃＩ、ＮｈｅＩ、ＰａｃＩ、ＲｓｒＩＩ、ＮｓｉＩ、ＳａｃＩＩ、ＭｌｕＩ、ＡｇｅＩ、ＳａｐＩ、およびＳｎａＢＩに特異的な制限認識部位配列を含有するマルチクローニングサイトを有するベクター。
【請求項１０】
請求項１または請求項８に記載の、ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含むことを特徴とする形質転換された宿主細胞。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１５９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１５９】
上で述べた培地を用いて、１５Ｌの攪拌されるタンク発酵槽を準備した。温度を３４℃に制御し、アンモニア水溶液（２０〜２８重量％）を用いてｐＨを６．８に制御した。溶解酸素（ＤＯ）コントロールを、１０％に設定し、背圧を、０．５バールに制御した。あまり例のない逸脱以外は、グルコースを、６７％（重量）供給で、１０ｇ／Ｌと２５ｇ／Ｌの間に維持した。１０時間の発酵時間の経過後、１０ｍｇ  ビタミンＢ１２を加え、１時間後に同時供給（０．０１６７ｍｇ／ｍＬ溶液の２．６４ｍｇ／時）を開始した。６４時間後、９９ｇ／Ｌのタイターの１，３−プロパンジオールが得られた。
以下に、本発明の好ましい態様を示す。
１．  ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含み、該核酸配列が、配列番号：９〜２８のいずれかを含むことを特徴とする単離されたまたは組み換え型のポリヌクレオチド。
２．  ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含み、該核酸配列が、配列番号：９〜２８からなる群から選択されることを特徴とする単離されたまたは組み換え型のポリヌクレオチド。
３．  ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含み、配列番号：９〜２８の核酸配列を含むことを特徴とする単離されたまたは組み換え型のポリヌクレオチドのライブラリ。
４．  １．に記載のストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含むことを特徴とする発現カセット。
５．  １．に記載のストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードする核酸配列を含むポリヌクレオチドを含むことを特徴とするキット。
６．  少なくとも３つの転写ターミネーターと、いずれか２つの転写ターミネーター間に位置する少なくとも１つのクローニングサイトとを含むことを特徴とするＤＮＡコンストラクト。
７．  転写ターミネーターが、ｔｏｎＢ、ｔｈｒＡ、またはａｓｐＡであり、クローニングサイトが、ＡｖｒＩＩ、ＮｈｅＩ、ＢｆａＩ、Ｃａｃ８Ｉ、ＢｓａＪＩ、およびＳｔｙＩからなる群から選択されることを特徴とする６．に記載のＤＮＡコンストラクト。
８．  各ＤＮＡコンストラクトが、少なくとも３つの転写ターミネーターと、いずれか２つの転写ターミネーター間に位置する少なくとも１つのクローニングサイトとを含むことを特徴とするＤＮＡコンストラクトのライブラリ。
９．  ａ）配列番号：３０からなるｐＳＹＣＯ１０９ｍｃｓプラスミド、
ｂ）配列番号：３１からなる短い１．５ＧＩプロモーター用のＤＮＡコンストラクト、
ｃ）配列番号：３２からなる短い１．２０ＧＩプロモーター用のＤＮＡコンストラクト、
ｄ）配列番号：７０からなるｐＡＨ１０５プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｅ）配列番号：７１からなるｐＳＹＣＯ１０１プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｆ）配列番号：７２からなるｐＳＹＣＯ１０３プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｇ）配列番号：７３からなるｐＳＹＣＯ１０６プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｈ）配列番号：７４からなるｐＳＹＣＯ１０９プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
ｉ）配列番号：７８からなるｐＳＣＹＯ１０６ｍｃｓプラスミド用のＤＮＡコンストラクト、および
ｊ）配列番号：７９からなるｐＲＪ５０プラスミド用のＤＮＡコンストラクト、
からなる群から選択されるＤＮＡコンストラクト。
１０．  制限エンドヌクレアーゼＡｓｃＩ、ＮｈｅＩ、ＰａｃＩ、ＲｓｒＩＩ、ＮｓｉＩ、ＳａｃＩＩ、ＭｌｕＩ、ＡｇｅＩ、ＳａｐＩ、およびＳｎａＢＩに特異的な制限認識部位配列を含有するマルチクローニングサイトを有するベクター。
１１．  マルチクローニングサイトが、配列番号：７７のヌクレオチド配列を有することを特徴とする１０．に記載のベクター。
１２．  １．または９．に記載の、ストレプトマイセスリビディンスグルコースイソメラーゼ変異体をコードするポリヌクレオチドを含むことを特徴とする形質転換された宿主細胞。
１３．  宿主細胞が、ＲＪ８ｎであることを特徴とする１２．に記載の形質転換された宿主細胞。