【手続補正書】
【提出日】平成18年4月17日(2006.4.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも次の工程：
(1) ヒト以外の少なくとも1つの動物に、適切な放射性同位体を用いて各分子が予め標識された分子のライブラリを投与し、
(2) 前記動物の少なくとも1つを犠牲にし、そしてサンプルが採取される組織または器官の切片を用い、適切なイメージング装置により、投与される分子の放射性の生体内分布を分析し、
(3) 放射性シグナルが検出される組織または器官の切片を選択し、
(4) 工程(3)で選択される組織または器官の切片から、抽出および／またはクロマトグラフィー技術のような適切な技術により放射性画分を単離し、そして
(5) 工程(4)で得られる放射性画分を用いて、クロマトグラフィーおよび／または質量分析法のような適切な分析技術により該分子を特徴付ける
を含むことを特徴とする、分子のライブラリをスクリーニングする方法。
【請求項２】
少なくとも次の工程：
(1) ヒト以外の少なくとも1つの動物に、適切な放射性同位体を用いて各分子が予め標識された分子のライブラリを投与し、
(2) 細胞および組織または器官の切片からなる群から予め抽出され、選択された生物学
的サンプルを用いて、インビトロで適切なイメージング装置により、投与される分子の放射性の生体内分布を分析し、
(3) 放射性シグナルが検出される細胞または組織もしくは器官の切片を選択し、
(4) 工程(3)で選択される該細胞または組織もしくは器官の切片から、抽出および／またはクロマトグラフィー技術のような適切な技術により放射性画分を単離し、そして
(5) 工程(4)で得られる放射性画分を用いて、クロマトグラフィーおよび／または質量分析法のような適切な分析技術により該分子を特徴付ける
を含むことを特徴とする、分子のライブラリをスクリーニングする方法。
【請求項３】
(1) ヒト以外の少なくとも1つの動物に、適切な放射性同位体を用いて各分子が予め標識された分子のライブラリを投与し、
(2) 前記動物の少なくとも1つを犠牲にし、そして前記動物の種々の組織の切片のサンプルを採取して、適切なイメージング装置を用いてこれらを分析することにより、投与される分子の放射性の生体内分布を分析し、
(3) 放射能が検出される組織または器官の切片を選択し、
(4) 工程(3)で選択される該組織または器官の切片から、抽出および／またはクロマトグラフィー技術のような適切な技術により放射性画分を単離し、
(5) 工程(4)で得られる放射性画分を用いて、クロマトグラフィーおよび／または質量分析法のような適切な分析技術により分子を特徴付け、
(6) 工程(4)で単離される分子とターゲット分子との間の結合を許容する条件の下で、工程(5)で得られる分子を、工程(2)に従って選択され、採取される組織または器官のサンプルと接触させて複合体を形成し、そして
(7) 該複合体から該ターゲット分子を単離する
ことを含む、分子のライブラリを用いて器官または組織で選択的に発現するターゲット分子を同定し、研究する方法。
【請求項４】
(1) ヒト以外の少なくとも1つの動物に、分子中に存在する原子をその放射性同位体の1つで置換することにより各分子が予め標識された分子のライブラリを投与し、
(2) 細胞および組織または器官の切片からなる群より予め抽出され、選択された生物学的サンプルを用いて、インビトロで適切なイメージング装置により、投与される分子の放射性の生体内分布を分析し、
(3) 放射能が検出される細胞または組織もしくは器官の切片を選択し、
(4) 工程(3)で選択される該細胞または組織もしくは器官の切片から、抽出および／またはクロマトグラフィー技術のような適切な技術により放射性画分を単離し、
(5) 工程(4)で得られる放射性画分を用いて、クロマトグラフィーおよび／または質量分析法のような適切な分析技術により分子を特徴付け、
(6) 工程(4)で単離される分子とターゲット分子との間の結合を許容する条件の下で、工程(5)で得られる分子を、工程(2)に従って選択され、採取される細胞または組織もしくは器官のサンプルと接触させて複合体を形成し、そして
(7) 該複合体から該ターゲット分子を単離する
ことを含む、分子のライブラリを用いて器官または組織で選択的に発現するターゲット分子(または受容体)を同定し、研究する方法。
【請求項５】
工程(1)中に、放射性分子のライブラリが、好ましくは腹腔内(I.P.)または静脈内(I.V.)で動物に注入されることを特徴とする請求項1〜4のいずれか1つに記載の方法。
【請求項６】
方法が、工程(2)に先立って、前記動物の少なくとも1つを、特に、選択された放射性同位体により放射される粒子の種類を検出するのに適するカメラを組み込んだ検出装置を用いる外部イメージングに付すことにより、投与される分子の放射性の生体内分布を分析するための工程(1')を含むことを特徴とする、請求項1〜5のいずれか1つに記載の方法。
【請求項７】
放射性同位体が、トリチウム(3H)、カーボン14 (14C)、カーボン11 (11C)、ヨウ素131 (131I)、ヨウ素125 (125I)、ヨウ素124 (124I)、ヨウ素123 (123I)、リン32 (32P)、フッ素18 (18F)、硫黄35 (35S)、テクネチウム99 (99mTc)、インジウム113 (113In)、銅64 (64Cu)、臭素76 (76Br)、窒素13 (13N)および酸素15 (15O)からなる群より選択されることを特徴とする、請求項1〜6のいずれか1つに記載の方法。
【請求項８】
工程(2)において、放射性の生体内分布が、選択された放射性同位体により放射される粒子の種類を検出するのに適するイメージング装置を組み込んだ検出装置により視覚化されることを特徴とする、請求項1〜7のいずれか1つに記載の方法。
【請求項９】
放射性分子が混合物の形態で注入されることを特徴とする、請求項1〜8のいずれか1つに記載の方法。
【請求項１０】
工程(1)に先立って、標識分子のライブラリが：
−化学的または酵素による経路を介する該分子の混合物の合成、および
−放射性同位体を用いる該分子の標識
により調製されることを特徴とする、請求項1〜9のいずれか1つに記載の方法。
【請求項１１】
工程(1)〜(5)が、工程(1)で投与される量が異なり、工程(2)による分子の放射性の分布の分析が動物により異なる時間で行われるいくつかの前記動物に対して一斉に行われることを特徴とする、請求項1〜10のいずれか1つに記載の方法。
【請求項１２】
工程(4)による器官と会合する放射性分子の単離が、次の工程：
−放射性が検出された組織または器官を取り出し、
−適切な緩衝液中で該組織または器官を粉砕し、
−各粉砕された物質を遠心分離して溶液を回収し、
−溶液をろ過し、
−pHを調整し、そして
−分画により分離して放射性画分を回収する
に従って行われることを特徴とする、請求項1〜11のいずれか1つに記載の方法。
【請求項１３】
工程(5)において、質量分析法による分析が、タンデム質量分析(MS/MS)と組み合わさることを特徴とする、請求項1〜12のいずれか1つに記載の方法。
【請求項１４】
工程(1)によるライブラリの分子が、次の一般式：
プロピル-3H-NH-Yaa-(R,S)Phe(PO2-CH2)(R,S)Leu-Yaa'-NH2
(式中、YaaおよびYaa'は、20の天然アミノ酸が存在する位置を表す)
を有することを特徴とする、請求項1〜13のいずれか1つに記載の方法。
【請求項１５】
−適切な放射性同位体で各分子が予め標識された分子の少なくとも1つのライブラリ、
−放射性標識物質を検出する手段、および
−検出された放射性標識物質を分析する手段
を含むことを特徴とする、請求項1〜14のいずれか1つに記載の方法を行うためのキット。
【請求項１６】
次の式：
プロピル-NH-Arg-Phe(PO2-CH2)Leu-Ala-NH2
を有するペプチドに相当することを特徴とする、請求項1または請求項2に記載の方法を用いて得ることができる物質。
【請求項１７】
放射性同位体で標識されることを特徴とする、請求項16に記載のペプチド。
【請求項１８】
請求項1〜14のいずれか1つに記載の分子のライブラリをスクリーニングする方法を用いて選択される分子を含み、この分子の特定部位への生体内分布が該方法を用いて同定されていることを特徴とする、興味のある分子を特定部位にターゲッティングさせるベクター。
【請求項１９】
分子が、請求項16によるペプチド：プロピル-NH-Arg-Phe(PO2-CH2)Leu-Ala-NH2であることを特徴とする、請求項18に記載のターゲッティングベクター。
【請求項２０】
(i) 部位に特異的な分子に結合した、該部位を標的とする興味のある分子であって、この生体内分布が請求項1〜14のいずれか1つに記載の分子のライブラリをスクリーニングする方法を用いて同定された分子、および(ii) 少なくとも1つの医薬的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする部位特異的組成物。
【請求項２１】
部位に特異的な分子が、請求項16によるペプチド：プロピル-NH-Arg-Phe(PO2-CH2)Leu-Ala-NH2であることを特徴とする、請求項20に記載の組成物。
【請求項２２】
医療用イメージングで用いることを意図する組成物を製造するための、請求項1〜14のいずれか1つに記載の分子のライブラリをスクリーニングする方法を用いて選択される標識分子の使用。
【請求項２３】
標識分子が請求項17に記載のペプチドであることを特徴とする、請求項22に記載の使用。
【請求項２４】
標識分子が適切な造影剤と結合することを特徴とする、請求項22または請求項23に記載の使用。
【請求項２５】
少なくとも：
(1) 興味のある分子を、放射性コンジュゲートを得るように、請求項1〜14のいずれか1つに記載の分子のライブラリをスクリーニングする方法を用いて選択される、ターゲットに特異的な放射性標識分子と結合させ、
(2) ヒト以外の少なくとも1つの動物に、工程(1)で得られるコンジュゲートを投与し、そして
(3) 生物学的サンプルを用いて、該生物学的サンプルの少なくとも1つのターゲットと、該放射性標識分子と結合した興味のある分子との結合をインビトロで分析する
を含むことを特徴とする、興味のある分子について少なくとも1つのターゲットを同定する方法。
【請求項２６】
標識分子が請求項17に記載のペプチドであることを特徴とする、請求項25に記載の方法。
【請求項２７】
(1) 請求項1〜14のいずれか1つに記載の分子のライブラリをスクリーニングする方法を用いてその生体内分布が同定された標識分子を、ヒト以外の少なくとも1つの動物に投与し、
(2) 前記動物の少なくとも1つを、特に、選択された放射性同位体により放射される粒子の種類を検出するのに適するカメラを組み込んだ検出装置を用いる外部イメージングに付すことにより、工程(1)で投与される放射性分子の生体内分布の第一の分析を行い、
(3) 未標識分子のライブラリを投与し、
(4) 前記動物の少なくとも1つを、特に、選択された放射性同位体により放射される粒子の種類を検出するのに適するカメラを組み込んだ検出装置を用いる外部イメージングに付すことにより、放射性分子の生体内分布の第二の分析を行い、
(5) 放射性標識分子の分布の第一の分析との比較によって、少なくとも1つの未標識分子による標識分子の置換の動態を確立し、そして
(6) 反復分画とクロマトグラフィーおよび／または質量分析のような適切な分析技術による該分子の特徴づけとにより、放射性標識分子の動態を変えた少なくとも1つの未標識分子を検出する
を含むことを特徴とする、競合による、未標識分子のインビボスクリーニング方法。
【請求項２８】
(1) 請求項1〜14のいずれか1つに記載の分子のライブラリをスクリーニングする方法を用いてその生体内分布が同定された標識分子を、ヒト以外の少なくとも1つの動物に投与し、
(2) 細胞および組織または器官の切片からなる群より予め抽出され、選択された生物学的サンプルを用いて、インビトロで適切なイメージング装置により、工程(1)で投与される放射性分子の生体内分布の第一の分析を行い、
(3) 未標識分子のライブラリを投与し、
(4) 細胞および組織または器官の切片からなる群より予め抽出され、選択された生物学的サンプルを用いて、インビトロで適切なイメージング装置により、放射性分子の生体内分布の第二の分析を行い、
(5) 放射性標識分子の分布の第一の分析との比較によって、少なくとも1つの未標識分子による標識分子の置換の動態を確立し、そして
(6) 反復分画とクロマトグラフィーおよび／または質量分析のような適切な分析技術による該分子の特徴づけとにより、放射性標識分子の動態を変えた少なくとも1つの未標識分子を検出する
を含むことを特徴とする、競合による、未標識分子のインビボスクリーニング方法。
【請求項２９】
工程(1)による標識分子が、請求項17に記載のペプチドであることを特徴とする、請求項27または請求項28に記載の方法。
【請求項３０】
少なくとも請求項16によるペプチド：プロピル-NH-Arg-Phe(PO2-CH2)Leu-Ala-NH2、および少なくとも1つの医薬的に許容される賦形剤を含むことを特徴とする医薬品。
【請求項３１】
抗高血圧医薬品を製造するための、請求項16によるペプチド：プロピル-NH-Arg-Phe(PO2-CH2)Leu-Ala-NH2の使用。