【手続補正書】
【提出日】平成18年3月20日(2006.3.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
P-Rex1、又はP-Rex1活性を保持するその誘導体のアミノ酸配列を含む、実質的に単離された形態のタンパク質。
【請求項２】
Rac-GEF活性を保持するP-Rex1誘導体のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項３】
ヒトP-Rex1のアミノ酸配列（配列番号１）を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項４】
配列番号２〜８のうちの１以上のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のタンパク質。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質をコードする配列を含む、実質的に単離された形態の核酸。
【請求項６】
ストリンジェントな条件下で、請求項５に記載の核酸、又は請求項５に記載の核酸に相補的な核酸にハイブリダイズすることのできる、実質的に単離された形態の核酸。
【請求項７】
請求項５に記載の核酸に相補的な、請求項６に記載の核酸。
【請求項８】
請求項５〜７のいずれか１項に記載の核酸を含む、ベクター。
【請求項９】
発現ベクターである、請求項８に記載のベクター。
【請求項１０】
請求項８又は９に記載のベクターを含む、宿主細胞。
【請求項１１】
細菌細胞、哺乳動物細胞、酵母細胞、植物細胞、又は昆虫細胞である、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質の製造方法であって、上記タンパク質の発現のための条件下で、上記タンパク質の発現を導くことのできるベクターを含む宿主細胞を培養することを含む、前記方法。
【請求項１３】
P-Rex1を発現させる方法であって、P-Rex1の発現が挿入されたプロモーターの制御下にあるように、P-Rex1をコードする染色体DNAの上流に挿入することのできるプロモーターを含むベクターで、P-Rex1をコードする染色体DNAを含む宿主細胞を形質転換することを含む、前記方法。
【請求項１４】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質に結合することのできる抗体。
【請求項１５】
上記タンパク質に特異的なエピトープを認識する、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１６】
請求項５〜７のいずれか１項に記載の核酸を増幅するための、オリゴヌクレオチドプライマー。
【請求項１７】
P-Rex1活性に拮抗することのできるP-Rex1の断片又は誘導体。
【請求項１８】
P-Rex1の発現を阻害することのできる、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項１９】
P-Rex1活性、P-Rex1の結合パートナーとの結合、又はP-Rex1発現の阻害物質。
【請求項２０】
P-Rex1遺伝子の核酸との相同性組み換えを受けることのできる核酸を含み、それによって該遺伝子からのP-Rex1の発現を阻害する、ベクター。
【請求項２１】
破壊されたP-Rex1遺伝子に対しヘテロ接合性又はホモ接合性である、非ヒト組み換え動物。
【請求項２２】
P-Rex1遺伝子ノックアウトマウス、又はP-Rex1遺伝子ノックインマウス。
【請求項２３】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質であって、該タンパク質のアフィニティー精製を可能とする精製タグをさらに含む、前記タンパク質。
【請求項２４】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質であって、該タンパク質の検出を可能とする標識を含む、前記タンパク質。
【請求項２５】
上記標識が蛍光物質又は放射性標識である、請求項２４に記載のタンパク質。
【請求項２６】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質を含む、融合タンパク質。
【請求項２７】
緑色蛍光タンパク質（GFP）、或いは蛍光活性を有するGFPの異形又は誘導体を含む、請求項２６に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
上記融合タンパク質のアフィニティー精製を可能とする精製タグをさらに含む、請求項２６又は２７に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
薬物発見の標的としての、請求項１〜４、及び２３〜２８のいずれか１項に記載のタンパク質の使用。
【請求項３０】
炎症、転移、敗血症ショック、神経変性、又はアテローム性動脈硬化を減少又は阻害することのできる薬物の発見のための、請求項２９に記載の使用。
【請求項３１】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質、P-Rex1活性の調節物質、又はP-Rex1発現の調節物質を同定するためのスクリーニングアッセイにおける、請求項１〜４、２３〜２８のいずれか１項に記載のタンパク質、又は請求項５〜７のいずれか１項に記載の核酸の使用。
【請求項３２】
P-Rex1活性の調節物質を同定する方法であって、請求項１〜４及び２３〜２８のいずれか１項に記載のタンパク質と、調節物質候補を接触させること、及び上記タンパク質の活性が上記調節物質候補によって調節されるか否かを決定することを含む、前記方法。
【請求項３３】
上記調節物質候補によって上記タンパク質の活性が調節されることが見出された場合、上記調節物質候補を同定することをさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質を同定するための方法であって、以下のステップ：
調節物質候補の存在下及び非存在下で、請求項１〜４、及び２３〜２８のいずれか１項に記載のタンパク質を、結合パートナーと接触させること；及び
上記タンパク質と上記結合パートナーとの結合が、上記調節物質候補によって調節されるか否かを決定すること；
を含む、前記方法。
【請求項３５】
上記結合パートナーが、PIP3、Gβγ−サブユニット、Rac、PIP3含有固定化膜、蛍光標識されたGroP-Ins(3,4,5)P4又はPIP3、蛍光標識されたGβγ−サブユニット、蛍光標識されたRac,或いは上記タンパク質に結合可能なそれらの誘導体のうちの１以上である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
上記タンパク質が結合パートナーとしてのRac-GDP、及びGTP又は加水分解不可能なGTPのアナログと接触させられる、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
上記タンパク質の結合パートナーへの結合が、調節物質候補によって調節されることが見出された場合に、該調節物質候補を同定することをさらに含む、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３８】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質、P-Rex1活性の調節物質、又はP-Rex1発現の調節物質を同定するための、細胞に基づくアッセイの使用。
【請求項３９】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質、又はP-Rex1活性の調節物質を同定するための、細胞に基づくアッセイであって、以下のステップ：
調節物質候補の存在下及び非存在下において、P-Rex1と結合パートナーとの結合のための刺激物質又はP-Rex1の活性化のための刺激物質で細胞を刺激すること；及び
上記調節物質候補がP-Rex1と上記結合パートナーとの結合又はP-Rex1の活性を調節するか否かを決定すること；
を含む、前記アッセイ。
【請求項４０】
上記細胞が、野生型の細胞、又は上記細胞中でP-Rex1の発現を導く外因性の核酸を含む細胞である、請求項３９に記載のアッセイ。
【請求項４１】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質又はP-Rex1活性の調節物質を同定するための、細胞に基づくアッセイであって、以下のステップ：
請求項２４、２５及び２７のいずれか1項に記載のタンパク質、又は内因性のP-Rex1から識別可能な、P-Rex1活性を有するP-Rex1の異形を提供すること；
調節物質候補の存在下及び非存在下で、P-Rex1と結合パートナーとの結合のための刺激物質又はP-Rex1の活性化のための刺激物質で上記細胞を刺激すること；及び
上記調節物質候補が、P-Rex1と結合パートナーとの結合又はP-Rex1の活性を調節するか否かを決定すること；
を含む、前記アッセイ。
【請求項４２】
上記調節物質候補が上記結合又はP-Rex1の活性を調節することが見出された場合に、上記調節物質候補を同定することをさらに含む、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載のアッセイ。
【請求項４３】
P-Rex1の上記結合又は活性が、スーパーオキサイド形成、化学走性によって、又はリポーター遺伝子の発現、蛍光の使用、１の細胞内位置若しくはコンパートメントから他へのタンパク質の移動の測定によって、或いはラメリポディア形成を調べることによって、決定される、請求項３９〜４２のいずれか１項に記載のアッセイ。
【請求項４４】
上記刺激物質がスーパーオキサイド形成、化学走性、又はラメリポディア形成を刺激する、請求項３９〜４３のいずれか１項に記載のアッセイ。
【請求項４５】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質又はP-Rex1の活性の調節物質を同定するための、細胞に基づくアッセイであって、以下のステップ：
調節物質候補の存在下及び非存在下において、細胞中でP-Rex1を過剰発現させること；及び
ラメリポディア形成が、上記調節物質候補によって変化させられたか否かを決定すること；
を含む、前記アッセイ。
【請求項４６】
請求項３２〜４５のいずれか１項に記載の方法又はアッセイにおける、請求項１〜４、及び２３〜２８のいずれか１項に記載のタンパク質の使用。
【請求項４７】
P-Rex1の不活性突然変異体。
【請求項４８】
請求項４７に記載の突然変異体をコードする核酸。
【請求項４９】
野生型P-Rex１よりも高い親和性をもって、請求項４７に記載の突然変異体を結合することのできる抗体。
【請求項５０】
組み換えP-Rex1陰性細胞。
【請求項５１】
細胞であって、該細胞中でP-Rex1の発現を阻害する阻害物質を含む、前記細胞。
【請求項５２】
上記阻害物質がP-Rex1アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項５１に記載の細胞。
【請求項５３】
請求項５０〜５２のいずれか１項に記載の細胞からの抽出物。
【請求項５４】
請求項４７〜５３のいずれか１項に記載の突然変異体、核酸、抗体、細胞、又は抽出物の、スクリーニングアッセイにおける使用。
【請求項５５】
P-Rex1と結合パートナーとの結合の調節物質、又はP-Rex1活性の調節物質を同定するためのスクリーニングアッセイにおける、対照としての、請求項４７、５０〜５３のいずれか１項に記載の突然変異体、細胞、又は抽出物の使用。
【請求項５６】
エピトープタグを付与された、請求項１〜４のいずれか１項に記載のタンパク質。
【請求項５７】
P-Rex1の結合パートナーへの結合の調節物質の同定のための酵母２−ハイブリッド（又は３−ハイブリッド）システムの使用。
【請求項５８】
P-Rex1依存性の情報伝達経路の調節物質を同定するための、インビトロの、又は細胞に基づくアッセイの使用。
【請求項５９】
P-Rex1トランスジェニックマウス。
【請求項６０】
炎症、転移、敗血症ショック、神経変性、又はアテローム性動脈硬化を減少又は阻害する薬物候補の活性をテストするための、請求項２１に記載の非ヒト動物、或いは請求項２２に記載のP-Rex1遺伝子ノックアウト若しくはノックインマウス、又は請求項５９に記載のP-Rex1トランスジェニックマウスの使用。
【請求項６１】
請求項５〜７のいずれか１項に記載の核酸で安定的にトランスフェクトされた細胞。
【請求項６２】
PtdIns(3,4,5)P3感受性及び／又はGβγサブユニット感受性Rac-GEF活性を有するタンパク質。
【請求項６３】
P-Rex1のスプライスバリアント。
【請求項６４】
請求項６３に記載のスプライスバリアントをコードする核酸。
【請求項６５】
ストリンジェントな条件下で、P-Rex1遺伝子のゲノム配列鎖のいずれかにハイブリダイズすることのできる、実質的に単離された形態の核酸。
【請求項６６】
P-Rex1の発現を阻害することのできる干渉RNA（dsRNAi）。
【請求項６７】
ターゲティングベクターであって、該ターゲティングベクターの核酸がP-Rex1遺伝子をコードするゲノムDNAとの相同性組み換えを受ける場合に、選択マーカーをコードする核酸が上記ゲノムDNAに取り込まれ、そしてP-Rex1遺伝子の発現が妨害又は減少されるように、上記ゲノムDNAとの相同性組み換えを受けることのできる核酸、及び上記選択マーカーを含む、前記ターゲティングベクター。
【請求項６８】
請求項６７に記載のターゲティングベクターを含むマウスES細胞。
【請求項６９】
その中で、P-Rex1遺伝子の発現が妨害又は減少された、組み換えマウスES細胞。
【請求項７０】
その中で、染色体対のうちの１におけるP-Rex1遺伝子の発現が妨害又は減少された、組み換えヘテロ接合性マウス。