【手続補正書】
【提出日】平成18年8月28日(2006.8.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、エリスロポエチンミメティックペプチド（ＥＭＰ１）および可溶性毒素受容体またはそれらのアナログからなる群から選択される治療タンパク質またはペプチドに融合されたトランスフェリン（Ｔｆ）タンパク質を含む融合タンパク質。
【請求項２】
治療タンパク質の血清半減期が非融合状態の治療タンパク質の血清半減期よりも増大している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３】
Ｔｆタンパク質が完全にグリコシル化されたＴｆタンパク質に比べて低下したグリコシル化を示す、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項４】
Ｔｆタンパク質がグリコシル化を妨げる変異を少なくとも１つ含む、請求項３に記載の融合タンパク質。
【請求項５】
変異が配列Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔを含むＮ結合型グリコシル化部位にある、請求項４に記載の融合タンパク質。
【請求項６】
配列Ｎ−Ｘ−Ｓ／Ｔが配列番号３のＮ４１３又はＮ６１１に対応するアミノ酸で始まる配列である、請求項５に記載の融合タンパク質。
【請求項７】
Ｎ、Ｘ、ＳまたはＴがプロリンに変化している、請求項６に記載の融合タンパク質。
【請求項８】
Ｔｆタンパク質がグリコシル化を示さないように改変されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項９】
Ｔｆタンパク質がＮ結合型グリコシル化を欠いている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１０】
Ｔｆタンパク質が野生型のＴｆタンパク質に比べてトランスフェリン受容体（ＴｆＲ）に対する低下した親和性を有するようにさらに改変されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１１】
Ｔｆタンパク質がＴｆＲに対する結合を有しないように改変されている、請求項１０に記載の融合タンパク質。
【請求項１２】
Ｔｆタンパク質が野生型のＴｆタンパク質に比べて鉄に対する低下した親和性を有するようにさらに改変されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１３】
Ｔｆタンパク質が鉄に対する親和性を有しないように改変されている、請求項１２に記載の融合タンパク質。
【請求項１４】
融合タンパク質がさらにリンカーを含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１５】
リンカーが治療タンパク質またはペプチドをＴｆタンパク質に連結する、請求項１４に記載の融合タンパク質。
【請求項１６】
Ｔｆタンパク質がラクトフェリンまたはメラノトランスフェリンである、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１７】
融合タンパク質がツニカマイシンの存在下で発現される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１８】
Ｔｆタンパク質がＴｆタンパク質のＮドメインの一部、架橋ペプチド、およびＴｆタンパク質のＣドメインの一部を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項１９】
Ｔｆタンパク質がヒトタンパク質である、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２０】
Ｔｆタンパク質が配列番号３を含む、請求項１９に記載の融合タンパク質。
【請求項２１】
治療タンパク質またはペプチドがＴｆタンパク質のＮ末端またはＣ末端に融合される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２２】
治療タンパク質またはペプチドがＴｆタンパク質のＮ末端およびＣ末端に融合される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２３】
治療タンパク質またはペプチドがＴｆタンパク質の１以上のループの中に挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２４】
治療タンパク質またはペプチドがＴｆタンパク質のＮドメインとＣドメインとの間に挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２５】
治療タンパク質またはペプチドによりＴｆの少なくとも１つのループが置き換えられる、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２６】
治療タンパク質またはペプチドが、Ａｓｐ３３、Ａｓｎ５５、Ａｓｎ７５、Ａｓｐ９０、Ｇｌｙ２５７、Ｌｙｓ２８０、Ｈｉｓ２８９、Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ１０５、Ｇｌｕ１４１、Ａｓｐ１６６、Ｇｌｎ１８４、ａｓｐ１９７、Ｌｙｓ２１７、Ｔｈｒ２３１およびＣｙｓ２４１からなる群から選択される配列番号３内の１以上の部位において、トランスフェリンタンパク質のＮドメインの中に挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２７】
治療タンパク質またはペプチドが、Ａｓｐ３３、Ａｓｎ５５、Ａｓｎ７５、Ａｓｐ９０、Ｇｌｙ２５７、Ｌｙｓ２８０、Ｈｉｓ２８９、Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ１０５、Ｇｌｕ１４１、Ａｓｐ１６６、Ｇｌｎ１８４、ａｓｐ１９７、Ｌｙｓ２１７、Ｔｈｒ２３１およびＣｙｓ２４１からなる群から選択される配列番号３内の１以上の部位において、トランスフェリンタンパク質のＣドメインの中に挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２８】
Ｔｆタンパク質が少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失または付加をヒンジ領域に含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項２９】
ヒンジ領域が、配列番号３の９４残基目付近〜９６残基目付近、配列番号３の２４５残基目付近〜２４７残基目付近、配列番号３の３１６残基目付近〜３１８残基目付近、配列番号３の４２５残基目付近〜４２７残基目付近、配列番号３の５８１残基目付近〜５８２残基目付近、および配列番号３の６５２残基目付近〜６５８残基目付近からなる群から選択される、請求項２８に記載の融合タンパク質。
【請求項３０】
Ｔｆタンパク質が、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８およびＧｌｙ４５９からなる群から選択される配列番号３内の位置における、少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失または付加を有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３１】
Ｔｆタンパク質が、Ａｓｐ６３、Ｇｌｙ６５、Ｔｙｒ９５、Ｔｙｒ１８８、Ｌｙｓ２０６、Ｈｉｓ２０７、Ｈｉｓ２４９、Ａｓｐ３９２、Ｔｙｒ４２６、Ｔｙｒ５１４、Ｔｙｒ５１７、Ｈｉｓ５８５、Ｔｈｒ１２０、Ａｒｇ１２４、Ａｌａ１２６、Ｇｌｙ１２７、Ｔｈｒ４５２、Ａｒｇ４５６、Ａｌａ４５８およびＧｌｙ４５９からなる群から選択される配列番号３内のアミノ酸に対応するアミノ酸残基において、少なくとも１つのアミノ酸の置換、欠失または付加を含む、請求項１０または１１に記載の融合タンパク質。
【請求項３２】
Ｔｆタンパク質がプロリン残基の欠失によってＣ末端において改変されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３３】
Ｔｆタンパク質がプロリン残基に隣接するアルギニン−アルギニン残基の欠失によってさらに改変されている、請求項３２に記載の融合タンパク質。
【請求項３４】
Ｔｆタンパク質がシステインループ構造の欠失によってＣ末端において改変されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３５】
Ｔｆタンパク質が配列番号３のアミノ酸Ｃｙｓ４０２とＣｙｓ６７４との間のジスルフィド結合を除くように改変されている、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３６】
ジスルフィド結合が配列番号３のＣｙｓ４０２およびＣｙｓ６７４をＧｌｙ残基に変異させることによって除かれる、請求項３５に記載の融合タンパク質。
【請求項３７】
Ｔｆタンパク質が配列番号３のＣｙｓ４０２およびＣｙｓ６７４をＧｌｙ残基に変異させることによってさらに改変されている、請求項８２に記載の融合タンパク質。
【請求項３８】
治療タンパク質またはペプチドが、Ｎ１（２８６〜２９２）、Ｎ２（１６２〜１７０）、Ｃ１（４８９〜４９５）およびＣ２（６２３〜６２８）からなる群から選択される配列番号３内の１以上のループに挿入される、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項３９】
治療タンパク質またはペプチドがグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）である、請求項１−３８いずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項４０】
ＧＬＰ−１ペプチドがＧＬＰ−１（７−３６）またはＧＬＰ−１（７−３７）である、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４１】
ＧＬＰ−１ペプチドが、配列番号６からなるＧＬＰ−１（７−３７）または配列番号６のアミノ酸残基１−３０からなるＧＬＰ−１（７−３６）である、請求項４０に記載の融合タンパク質。
【請求項４２】
ＧＬＰ−１ペプチドが配列：
Ｈｉｓ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ
からなる、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４３】
ＧＬＰ−１ペプチドがＡｌａ８（配列番号６の２残基目のＡｌａ）を変異させることによって改変されている、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４４】
Ａｌａ８（配列番号６の２残基目のＡｌａ）がＧｌｙ、ＳｅｒまたはＶａｌに変異している、請求項４３に記載の融合タンパク質。
【請求項４５】
ＧＬＰ−１ペプチドがＬｙｓ３４（配列番号６の２８残基目のＬｙｓ）を変異させることによって改変されている、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４６】
Ｌｙｓ３４（配列番号６の２８残基目のＬｙｓ）がＡｌａ、ＡｓｎまたはＧｌｎに変異している、請求項４５に記載の融合タンパク質。
【請求項４７】
ＧＬＰ−１ペプチドがＡｌａ８（配列番号６の２残基目のＡｌａ）をＧｌｙに、Ｌｙｓ３４（配列番号６の２８残基目のＬｙｓ）をＡｌａに変異させることによって改変されている、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４８】
ＧＬＰ−１が、ジペプチジルペプチダーゼ切断を妨げるように改変されている、請求項３９に記載の融合タンパク質。
【請求項４９】
ＧＬＰ−１がＮ末端で改変されている、請求項４８に記載の融合タンパク質。
【請求項５０】
ＧＬＰ−１がＮ末端で化学修飾されている、請求項４９に記載の融合タンパク質。
【請求項５１】
ＧＬＰ−１のＮ末端のＨｉｓが化学修飾されている、請求項５０に記載の融合タンパク質。
【請求項５２】
ＧＬＰ−１ペプチドがＴｆタンパク質のＮ末端に融合している、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項５３】
請求項３９−５２いずれか一項に記載の融合タンパク質および担体を含む医薬組成物。
【請求項５４】
請求項３９に記載の融合タンパク質を含む、疾病の治療剤。
【請求項５５】
疾病が代謝性疾患である、請求項５４に記載の治療剤。
【請求項５６】
代謝性疾患が糖尿病または肥満である、請求項５５に記載の治療剤。
【請求項５７】
代謝性疾患がＩＩ型糖尿病である、請求項５５に記載の治療剤。
【請求項５８】
疾病が鬱血性心不全である、請求項５４に記載の治療剤。
【請求項５９】
疾病が炎症性腸疾患である、請求項５４に記載の治療剤。
【請求項６０】
健常者と比較してグルコースレベルが上昇した患者のための、請求項５４に記載の治療剤。
【請求項６１】
グルコースレベルの上昇が糖尿病と関連する、請求項６０に記載の治療剤。
【請求項６２】
糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項５５に記載の治療剤。
【請求項６３】
治療タンパク質またはペプチドがエリスロポエチンミメティックペプチド（ＥＭＰ１）である、請求項１−３８いずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項６４】
ＥＭＰ１が、配列番号３のＨｉｓ２８９およびＡｓｐ１６６からなる群から選択される１以上の部位においてＴｆタンパク質のＮドメインの中に挿入される、請求項６３に記載の融合タンパク質。
【請求項６５】
ＥＭＰ１が、配列番号３のＨｉｓ２８９およびＡｓｐ１６６からなる群から選択される１以上の部位においてＴｆタンパク質のＣドメインの中に挿入される、請求項６３に記載の融合タンパク質。
【請求項６６】
ＥＭＰ１が、配列番号３のＨｉｓ２８９およびＡｓｐ１６６からなる群から選択される１以上の部位においてＴｆタンパク質のＣドメインの中にさらに挿入される、請求項６４に記載の融合タンパク質。
【請求項６７】
請求項６３−６６いずれか一項に記載の融合タンパク質および担体を含む医薬組成物。
【請求項６８】
請求項６３に記載の融合タンパク質を含む、疾病の治療剤。
【請求項６９】
健常者と比較して低赤血球産生または不完全な赤血球産生が認められる患者のための、請求項６８に記載の治療剤。
【請求項７０】
低赤血球産生または不完全な赤血球産生が、貧血、β−サラセミア、妊娠障害、月経障害、関節リウマチ、ＡＩＤＳおよびガンに関連する、請求項６９に記載の治療剤。
【請求項７１】
治療タンパク質またはペプチドが可溶性毒素受容体である、請求項１−３８いずれか一項に記載の融合タンパク質。
【請求項７２】
可溶性毒素受容体がシナプトタグミンＩである、請求項７１に記載の融合タンパク質。
【請求項７３】
シナプトタグミンＩがシナプトタグミンＩのアミノ酸１〜５３（配列番号４）である、請求項７２に記載の融合タンパク質。
【請求項７４】
可溶性毒素受容体が、炭疽菌毒素受容体、ボツリヌス毒素受容体およびジフテリア毒素受容体からなる群から選択される、請求項７１に記載の融合タンパク質。
【請求項７５】
可溶性毒素受容体が毒素に特異的に結合する、請求項７１に記載の融合タンパク質。
【請求項７６】
請求項７１−７５いずれか一項に記載の融合タンパク質および担体を含む医薬組成物。
【請求項７７】
請求項７１に記載の融合タンパク質を含む、疾病の治療剤。
【請求項７８】
Ｔｆタンパク質がＮ末端ドメインをタンパク質の各末端に有する、請求項１に記載の融合タンパク質。
【請求項７９】
治療タンパク質またはペプチドが、Ｔｆタンパク質の各Ｎ末端ドメインに融合されている、請求項７８に記載の融合タンパク質。
【請求項８０】
請求項１に記載の融合タンパク質をコードする核酸分子。
【請求項８１】
請求項８０に記載の核酸分子を含むベクター。
【請求項８２】
請求項８１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８３】
請求項８０に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
【請求項８４】
融合タンパク質を発現させる条件のもとで、請求項８２または８３に記載の宿主細胞を培養することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を発現させる方法。
【請求項８５】
原核生物または真核生物である、請求項８２または８３に記載の宿主細胞。
【請求項８６】
細胞が酵母細胞である、請求項８５に記載の宿主細胞。
【請求項８７】
請求項８０に記載の核酸分子を含む遺伝子組換え動物。
【請求項８８】
請求項８７に記載の遺伝子組換え動物から融合タンパク質を単離することを含む、Ｔｆ融合タンパク質を製造する方法。
【請求項８９】
融合タンパク質が遺伝子組換え動物から得られる生物学的液体から単離される、請求項８８に記載の方法。
【請求項９０】
液体が血清または乳汁である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
請求項１に記載の融合タンパク質を含む、疾病の治療剤。
【請求項９２】
請求項１に記載の融合タンパク質および担体を含む医薬組成物。