【誤訳訂正書】
【提出日】平成18年7月12日(2006.7.12)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単離された、精製された、または組み換えタンパク質複合体であって以下：
（ｉ）ＭＫ２ポリペプチド；および
（ｉｉ）ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択されるＭＫ２相互作用タンパク質、を含む、複合体。
【請求項２】
ＭＫ２ポリペプチドおよび少なくとも１つのＭＫ２相互作用タンパク質を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項３】
前記ＭＫ２相互作用タンパク質が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される、請求項２に記載の複合体。
【請求項４】
ＭＫ２ポリペプチドおよび少なくとも２つのＭＫ２相互作用タンパク質を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項５】
前記ＭＫ２相互作用タンパク質が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される、請求項４に記載の複合体。
【請求項６】
前記ＭＫ２ポリペプチドが、融合タンパク質を含む、請求項１に記載の複合体。
【請求項７】
前記融合タンパク質が、該融合タンパク質を精製、単離、または検出するためのドメインを含む、請求項６に記載の複合体。
【請求項８】
前記融合タンパク質が、アフィニティータグ、放射性核種、酵素、およびフルオロフォアからなる群より選択されるドメインを含む、請求項６に記載の複合体。
【請求項９】
前記ドメインが、ポリヒスチジン、ＦＬＡＧ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プロテインＡ、プロテインＧ、および免疫グロブリン重鎖定常領域からなる群より選択される、請求項７に記載の複合体。
【請求項１０】
第１核酸および第２核酸を含む宿主細胞であって、該第１核酸は、組み換えＭＫ２ポリペプチドをコードし、かつ該第２核酸は、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択されるＭＫ２相互作用タンパク質をコードする、宿主細胞。
【請求項１１】
ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される第２のＭＫ２相互作用タンパク質をコードする第３核酸をさらに含む、請求項１０に記載の宿主細胞。
【請求項１２】
試験化合物が、タンパク質複合体の形成を阻害するかまたは促進するかを決定するアッセイであって：
（ａ）ＭＫ２ポリペプチド、少なくとも１つのＭＫ２相互作用タンパク質、および試験化合物を含む反応混合物を形成する工程；ならびに
（ｂ）ＭＫ２とＭＫ２相互作用タンパク質との間のタンパク質複合体の存在を検出する工程、
を包含し、ここで、該試験化合物の非存在下での複合体の量と比較した場合の、該試験化合物の存在下での該複合体の量の差は、該試験化合物が、複合体形成を阻害または促進することを示す、アッセイ。
【請求項１３】
前記試験化合物の存在下での前記複合体量の増加は、該試験化合物が、複合体形成を促進することを示している、請求項１２に記載のアッセイ。
【請求項１４】
前記試験化合物の存在下での前記複合体量の減少は、該試験化合物が、複合体形成を阻害することを示している、請求項１２に記載のアッセイ。
【請求項１５】
試験化合物が、ＭＫ２活性に影響を及ぼすか否かを決定する方法であって：
（ａ）ＭＫ２ポリペプチドおよびＭＫ相互作用タンパク質を含むタンパク質複合体を形成する工程；
（ｂ）該タンパク質複合体と試験化合物とを接触させる工程；および
（ｃ）ＭＫ２キナーゼ活性、該複合体中のＭＫ２の量、ＴＮＦ産生、およびＭＫ２の基質のリン酸化形態の量から選択される１つ以上の活性に対する該試験化合物の効果を決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項１６】
タンパク質複合体の形成を阻害または促進する化合物を同定するためのスクリーニングアッセイであって：
（ｉ）ＭＫ２ポリペプチドを含む第１融合タンパク質ならびにＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃのうちの１つ以上から選択されるポリペプチドを含む第２融合タンパク質を含むツーハイブリッドアッセイシステムを、これらの２つのタンパク質が、該ツーハイブリッドアッセイシステムにおいて相互作用する条件下で提供する工程；
（ｉｉ）試験化合物の存在下および非存在下で該融合タンパク質間の相互作用レベルを測定する工程；
（ｉｉｉ）該融合タンパク質の相互作用のレベルを比較する工程、
を包含し、ここで、該相互作用レベルにおける減少は、ＭＫ２ポリペプチドと、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃのうちの１つ以上から選択されるポリペプチドとの間の相互作用を阻害する化合物の指標である、アッセイ。
【請求項１７】
ＭＫ２ポリペプチド、ならびに、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択されるＭＫ２相互作用タンパク質を含む複合体における１つ以上のタンパク質と結合する抗体。
【請求項１８】
ＭＫ２と前記ＭＫ２相互作用タンパク質の相互作用を阻害する、請求項１７に記載の抗体。
【請求項１９】
少なくとも第１のタンパク質および第２のタンパク質を含む細胞におけるタンパク質複合体の形成を調節する方法であって、該第１タンパク質はＭＫ２ポリペプチドであり、該第２タンパク質はＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃのうちの１つ以上から選択され、該方法は、該複合体の形成を調節し得る化合物を該細胞に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２０】
複合体を生成する方法であって、ＭＫ２ポリペプチドならびにＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃの１つ以上から選択されるＭＫ２相互作用タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドで細胞をトランスフェクトする工程を包含し、これによって、該ポリペプチドが複合体を形成する、方法。
【請求項２１】
抗炎症薬を同定するための薬物スクリーニング方法であって：
ａ）ＭＫ２および少なくとも１つのＭＫ２相互作用タンパク質を提供する工程；
ｂ）ＭＫ２と該タンパク質とを相互作用させて複合体を形成させる工程；
ｃ）該複合体に、有効量の潜在的薬物を添加する工程；および
ｄ）該潜在的薬物が複合体形成を阻害するか否かを決定する工程、
を包含する、方法。
【請求項２２】
ＭＫ２および前記タンパク質が、インビボでの酵母ツーハイブリッドシステムにおいて相互作用する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＭＫ２および前記タンパク質が、インビボでの哺乳動物ツーハイブリッドシステムにおいて相互作用する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
ＭＫ２および前記タンパク質がインビトロで相互作用する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
前記タンパク質がＳＴＳである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記タンパク質がＳｈｃである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２７】
前記タンパク質がＨＰＨ２である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２８】
前記薬物が低分子である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
前記薬物がペプチドまたはタンパク質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
前記薬物が抗体である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３１】
前記薬物が化学因子である、請求項２１に記載の方法。
【請求項３２】
組織における炎症を調節するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ＭＫ２相互作用タンパク質をコードする核酸を含み、該組織に送達するために処方され、その結果、該核酸は該ＭＫ２相互作用タンパク質を発現し、それによって、該組織における炎症を調節する、薬学的組成物。
【請求項３３】
前記核酸が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択されるタンパク質を発現する、請求項３２に記載の薬学的組成物。
【請求項３４】
組織における炎症を処置または予防するための薬学的組成物であって、該組織に投与するために処方された治療有効量の少なくとも１つの因子を含み、該因子は、以下：
ａ）ＭＫ２とＭＫ２相互作用タンパク質との間の相互作用をブロックするか；または
ｂ）該相互作用を許容するが、ＭＫ２活性をブロックするか、
のいずれかである、薬学的組成物。
【請求項３５】
前記因子が抗体である、請求項３４に記載の薬学的組成物。
【請求項３６】
前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項３７】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３５に記載の薬学的組成物。
【請求項３８】
前記抗体がＭＫ２に結合する、請求項３５〜３７に記載の薬学的組成物。
【請求項３９】
前記抗体がＭＫ２相互作用タンパク質に結合する、請求項３５〜３７に記載の薬学的組成物。
【請求項４０】
前記因子が化学因子である、請求項３４に記載の薬学的組成物。
【請求項４１】
前記因子がペプチドまたはタンパク質である、請求項３４に記載の薬学的組成物。
【請求項４２】
前記因子が低分子である、請求項３４に記載の薬学的組成物。
【請求項４３】
組織における炎症を調節するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ＭＫ２に結合する少なくとも１つのタンパク質を含み、該組織と接触させるために処方され、その結果、該タンパク質は、該組織における炎症を調節する、薬学的組成物。
【請求項４４】
少なくとも１つの炎症状態を患っている患者を処置するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ＭＫ２またはＭＫ２複合体のうちの少なくとも１つと相互作用する化合物から選択される、治療有効量の少なくとも１つの化合物を含み、該化合物は、抗体、化学因子、低分子、タンパク質、およびペプチドから選択され、該化合物は、ＭＫ２またはＭＫ２複合体のうちの少なくとも１つと結合して炎症を調節する、薬学的組成物。
【請求項４５】
前記タンパク質またはペプチドが、ＭＫ２活性を刺激する野生型タンパク質またはペプチドの変異形態である、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項４６】
前記タンパク質が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項４７】
前記状態が、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、急性呼吸窮迫症候群、気腫、遅延型過敏症、ぜん息、全身性エリテマトーデス、および外傷または損傷に起因する炎症から選択される、請求項４４に記載の薬学的組成物。
【請求項４８】
細胞中で核酸を発現し炎症を阻害するための薬学的組成物であって、該薬学的組成物は、ＭＫ２またはＭＫ２複合体のうちの少なくとも１つと相互作用する化合物から選択される化合物をコードする少なくとも１つの核酸であって、該化合物は、抗体、化学因子、低分子、タンパク質、およびペプチドから選択される、少なくとも１つの核酸を含み、該細胞に投与するために処方され、それによって、該細胞は該化合物を発現させて炎症を阻害する、薬学的組成物。
【請求項４９】
前記核酸が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択されるタンパク質をコードする、請求項４８に記載の薬学的組成物。
【請求項５０】
サンプル中のＭＫ２の非存在、存在、および量のうちの少なくとも１つを検出する方法であって、サンプル中のＭＫ２の非存在、存在、もしくは量と、結合したタンパク質または化合物の非存在、存在、もしくは量とを関連付ける工程を包含し、ここで、該サンプルは、ＭＫ２またはＭＫ２複合体のうちの少なくとも１つと相互作用する少なくとも１つの化合物を投与され、該化合物は、抗体、化学因子、低分子、タンパク質、およびペプチドから選択される、方法。
【請求項５１】
前記タンパク質が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
ＭＫ２の定性的検出を可能にするキットであって：
ＭＫ２またはＭＫ２複合体のうちの少なくとも１つと相互作用する化合物であって、該化合物は、抗体、化学因子、低分子、タンパク質、およびペプチドから選択される、化合物；ならびに
以下から選択される少なくとも１つの他のキット要素：
ａ）緩衝液および溶液のうちの少なくとも１つ；
ｂ）少なくとも１つの構造的要素、
を含む、キット。
【請求項５３】
前記タンパク質または化合物に結合する因子をさらに含む、請求項５２に記載のキット。
【請求項５４】
前記因子が抗体である、請求項５３に記載のキット。
【請求項５５】
前記タンパク質が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される、請求項５２に記載のキット。
【請求項５６】
薬学的組成物であって：
ａ）ＭＫ２に結合する少なくとも１つのタンパク質、および
ｂ）少なくとも１つの薬学的に受容可能なキャリア、
を含む、組成物。
【請求項５７】
前記タンパク質が、ＳＴＳ、ＨＰＨ２、およびＳｈｃから選択される、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記ＭＫ２相互作用タンパク質が、配列番号１、２、および３から選択されるヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡ分子によりコードされる、請求項１に記載のタンパク質複合体。
【請求項５９】
前記ＭＫ２相互作用タンパク質が、配列番号１、２、および３のフラグメント；スプライス改変体；付加変異体、欠失変異体、および置換変異体；ならびにホモログから選択されるヌクレオチド配列を含むｃＤＮＡ分子によりコードされ、ここで該ＭＫ２相互作用タンパク質はＭＫ２に結合する、請求項１に記載のタンパク質複合体。
【請求項６０】
前記ＭＫ２相互作用タンパク質は、配列番号４、５、および６から選択されるアミノ酸配
列を含む、請求項１に記載のタンパク質複合体。
【請求項６１】
前記ＭＫ２相互作用タンパク質が、配列番号４、５、および６のフラグメント；スプライス改変体；付加変異体、欠失変異体、および置換変異体；ならびにホモログから選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、該ＭＫ２相互作用タンパク質は、ＭＫ２に結合する、請求項１に記載のタンパク質複合体。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３０】
しかし、特定の細菌感染（例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ感染）のような特定の状態の場合、増強されたＭＫ２活性を有することが望ましい。従って、治療的利益はまた、ＭＫ２活性を増強するかまたはＭＫ２とタンパク質との相互作用（ここで、この相互作用は、ＭＫ２活性を増強し、例えば、細菌感染に対する増加した耐性を生じる）を促進する因子の投与の前後に、このような感染に対する増加した耐性により決定され得る。
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
本明細書中で使用される場合、用語「ドメイン」は、いくつかの独特の物理的特長または役割（例えば、独立した構造または機能）を有するポリペプチドの領域（タンパク質を含む）を意味する。ドメインは、そのポリペプチドに対してネイティブまたは非ネイティブであり得るポリペプチドの部分をいう。ドメインは、独特の物理的特長を有するアミノ酸配列を含み得るか、またはその配列のフラグメントを含み得る。ドメインは、ポリペプチドまたはタンパク質内の他のドメインと相互作用し得る。本発明のいくつかの実施形態において、ＭＫ２ポリペプチドおよび／またはＭＫ２相互作用タンパク質は、アフィニティータグ、放射性核種、酵素、およびフルオロフォアから選択されるドメインを含む。このようなドメインは、ＭＫ２および相互作用タンパク質を含む複合体の単離または精製のため、またはこのドメインを含むタンパク質の単離のための使用され得る。ドメインの例としては、ポリヒスチジン、ＦＬＡＧ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、チオレドキシン、プロテインＡ、プロテインＧ、および免疫グロブリン重鎖定常領域が挙げられるがこれらに限定されない。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３３】
用語「融合タンパク質」は、第１供給源由来の第１アミノ酸配列が、第２供給源由来の第２アミノ酸配列に共有結合または非共有結合により連結されているタンパク質をいう。ここで、第１アミノ酸配列および第２アミノ酸配列は同じではない。同じではない第１供給源および第２供給源としては、２つの異なる生物学的実体、または同じ生物学的実体由来の２つの異なるタンパク質、または生物学的実体および非生物学的実体が挙げられる。融合タンパク質としては、例えば、少なくとも２つの異なる生物学的供給源由来のタンパク質が挙げられる。生物学的供給源としては、任意の非合成核酸またはアミノ酸配列が挙げられる（例えば、本明細書中にさらに記載されるように、上記いずれかのゲノム配列またはｃＤＮＡ配列、プラスミドベクターまたはウイルスベクター、ネイティブビリオンまたは変異体またはアナログ）。合成性供給源としては、生物学的系によってではなく、化学的に製造されたタンパク質配列または核酸配列が挙げられ得る（例えば、アミノ酸配列の固相合成）。融合タンパク質はまた、少なくとも２つの異なる合成性供給源由来のタンパク質または少なくとも１つの生物学的供給源および少なくとも１つの合成性供給源由来のタンパク質が挙げられる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３８】
ＨＰＨ２は、Ｙ２Ｈ系アッセイによってＭＫ２に結合することが以前から知られている（Ｂ．Ｎｅｕｆｉｅｌｄ，Ｎｅｕｅ  Ｉｎｔｅｒａｋｔｉｏｎｓｐａｒｔｎｅｒ  ｄｅｒ
ＭＡＰＫＡＰ−Ｋｉｎａｓｅｎ  ３ｐＫ  ｕｎｄ  ＭＫ２：ｄｉｅ  Ｐｏｌｙｃｏｍｂ−Ｐｒｏｔｅｉｎｅ  ＨＰＨ２  ｕｎｄ  Ｂｍｉ１  ｓｏｗｉｅ  ｄｅｒ  ｂａｓｉｓｃｈｅ  Ｈｅｌｉｘ−Ｌｏｏｐ−Ｈｅｌｉｘ−Ｔｒａｎｓｋｒｉｐｔｉｏｎｓｆａｋｔｏｒ
Ｅ４７（２０００）（未発行のＰｈ．Ｄ学術論文、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｕｚｂｕｒｇ）。この発見は、本発明において確認された（図２Ａおよび２Ｂ、図９Ｂおよび実施例５）。さらに、ＳＴＳ（図１Ａ〜１Ｂ、図９Ｂおよび実施例５）およびＳｈｃ（図３Ａおよび３Ｂ、図９Ｂおよび実施例５）は、本発明において、Ｙ２Ｈ系を用いてＭＫ２に結合することが示されている。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
ＭＫ２に結合するタンパク質は、種々の方法を用いて単離され得る。例えば、実施例７に例示されるように、同時免疫沈降法が使用され得る。Ｖ−５またはＨＡ−タグＭＫ２相互作用タンパク質、およびＭＹＣタグ−ＭＫ２が細胞中で同時発現される。細胞の溶解物を調製し、抗ＨＡ抗体または抗Ｖ５抗体を用いて免疫沈降した。免疫沈降物をＳＤＳ  ＰＡＧＥにより分離し、抗ＭＹＣ抗体を用いて免疫ブロットし、同時免疫沈降したＭＫ２を検出した。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４６】
ＭＫ２に結合するタンパク質がその活性に影響を及ぼすか否かを調査するため、ＭＫ２活性（例えば、ＭＫ２キナーゼ活性）に対する結合タンパク質の効果が決定され得る。例えば、ＨＡタグ−ＭＫ２相互作用タンパク質（例えば、Ｓｈｃ）およびＭｙｃタグ−ＭＫ２が、２９３Ｔ細胞において同時発現され得る。細胞溶解物が調製され、ＳＤＳ  ＰＡＧＥによって分離され得る。活性化ＭＫ２を検出するための抗体（例えば、抗ホスホＭＫ２スレオニン３３４）を用いたその後の免疫ブロッティングにより、ＭＫ２の活性化状態が決定される。あるいは、ＭＫ２キナーゼ活性に対するＭＫ２結合の効果は、ＭＫ２に対する既知の基質のリン酸化型の量を定量することによって決定され得る。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００４７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００４７】
さらに、実施例９に例示されるように、ＴＮＦ−α生合成に対するＭＫ２相互作用タンパク質の効果が決定され得る。ＨＡタグ−ＭＫ２相互作用タンパク質（例えば、Ｓｈｃ）およびＭＹＣタグ−ＭＫ２が、ＴＮＦルシフェラーゼレポーター遺伝子と共に、適切な細胞（例えば、ＲＡＷ）に同時トランスフェクトされ得る。細胞は、未刺激であるか、またはアニソマイシンにより刺激されるかのいずれかである。ＴＮＦ産生についてのアッセイのために培地が回収され、細胞溶解物が調製されて、ルシフェラーゼ活性が決定される。ＭＫ２結合タンパク質の存在下でのＴＮＦの生合成は、コントロールサンプルにおけるそれと比較される。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００９９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００９９】
（Ｊ．組織、器官、または生物においてＤＮＡを発現する方法）
ＭＫ２に結合するタンパク質（抗体を含む）をコードするＤＮＡ、ならびにＭＫ２複合体に結合することによりＭＫ２活性を調節するタンパク質、ペプチド、および抗体をコードするＤＮＡは、組織、器官、または生物内の細胞に導入され得る。次いで、ＤＮＡによりコードされるタンパク質、ペプチド、または抗体は、組織、器官、または生物の細胞において発現され得る。本発明の１つの実施形態において、タンパク質、ペプチド、または抗体をコードするＤＮＡは、組織、器官、または生物の細胞におけるサイトカインの産生または活性を変更するため、細胞に導入され得る。この方法は、組織、器官、または生物における炎症を低減するのに使用され得る。本発明は、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、慢性関節リウマチ、急性呼吸窮迫症候群、気腫、遅延型過敏症、ぜん息、全身性エリテマトーデス、および外傷または損傷に起因する炎症のような状態を処置するのに有用である。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１４】
ＭＫ２構築物で形質転換した酵母のコロニーを、２５０〜２７０ｒｐｍで振盪しながら、３０℃で一晩ＳＤ／−Ｔｒｐ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）培地中に接種した。次の日、ＯＤ６００が＞０．８であることを測定した。この細胞を、１０００×ｇ、５分間の遠心分離によりスピンダウンした。上清をデカントし、そして細胞ペレットを、ボルテックスにより残留液に再懸濁した。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１１８
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１１８】
ＳＤ／−Ｈｉｓ／−Ｌｅｕ／−Ｔｒｐ  Ｘ−α−Ｇａｌ培地を含むプレート上で増殖したコロニーを、ＳＤ／−Ｈｉｓ／−Ｌｅｕ／−Ｔｒｐ  Ｘ−α−Ｇａｌプレートに再度ストリークし、表現型を確認した。次に、クローンをＸ−α−ＧＡＬ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を含有するよりストリンジェントなＳＤ／−Ａｄｅ／−Ｈｉｓ／−Ｌｅｕ／−Ｔｒｐプレート上でスクリーニングした。ポジティブなコロニーを、グリッド式（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）に、ＳＤ／−Ａｄｅ／−Ｈｉｓ／−Ｌｅｕ／−Ｔｒｐ上に再度ストリークし、マスタープレートを作製した。酵母のＤＮＡプレップおよびグリセロールストックを、これらのマスタープレートから作製した。
【誤訳訂正１２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２０
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２０】
（実施例５：ポジティブクローンの分析）
独立した配列を、細菌（ＤＨ５α）に形質転換し、その後、その細菌からＤＮＡを単離した。次に、ＤＮＡを酵母株ＡＨ１０９に形質転換した。いくつかのベイト：ＭＫ２、触媒不活性ＭＫ２  Ｋ９３Ｒ、空ベクターｐＧＢＫＴ７、ＴＰＬ２、ｐ５３、およびＬａｍｉｎ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を、酵母株Ｙ１８７に形質転換した。ＡＨ１０９において形質転換した各々の独立した配列の株を、３つのベイトの各々で形質転換したＹ１８７酵母と接合した。ＳＤ／−Ａｄｅ／−Ｈｉｓ／−Ｌｅｕ／−Ｔｒｐ上での増殖およびＳＤ／−Ｌｅｕ／−  Ｔｒｐ  Ｘ−α−ＧＡＬ上での青色によりアッセイした場合に、ＭＫ２およびＭＫ２  Ｋ９３Ｒと相互作用したが、空ベクターｐＧＢＫＴ７、ＴＰＬ２、ｐ５３、またはＬａｍｉｎと相互作用しなかった独立クローンを、特定のＭＫ２相互作用タンパク質をコードするＤＮＡインサートを含むクローンとして同定した（図９Ａ）。ＭＫ２相互作用タンパク質は、野生型ＭＫ２およびＭＫ２  Ｋ９３Ｒと実質的に同じ親和性で結合した。このことは、ＭＫ２の結合が、キナーゼ不活性化変異体ＭＫ２  Ｋ９３Ｒの結果ではないことを示している。特徴付けられた独立ＤＮＡ配列によりコードされる１つのタンパク質は、「スムーセリン類似」（ＳＴＳ）であった。このタンパク質をコードするｃＤＮＡ配列を図１および配列番号１に提供し；そのアミノ酸配列を、図４および配列番号４に提供する。
【誤訳訂正１３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２３】
（実施例６：ＭＫ２相互作用ドメインの描写）
Ｓｈｃ  Ａ、ＨＰＨ２、およびＳＴＳとの相互作用に必要とされるＭＫ２ドメインを描写するために、いくつかのＭｋ２欠失変異体を使用した。試験したＭＫ２変異体は、ＭＫ２▽Ｎ（ＭＫ２アミノ酸４１〜４００）、ＭＫ２▽Ｃ（ＭＫ２アミノ酸１〜３７０）、およびＭＫ２Ｃａｔ（ＭＫ２触媒ドメインアミノ酸４１〜３３８）を含んだ。ＭＫ２▽Ｎは、プロリンリッチなＮ末端が欠失されており、ＭＫ２▽Ｃは、ＭＫ２核局在化シグナル（ＮＬＳ）およびｐ３８結合部位が欠失されており、そしてＭＫ２Ｃａｔは、Ｎ末端プロリンリッチドメインならびにＣ末端自己阻害ドメイン、核輸送シグナル（ＮＥＳ）、およびＮＬＳが欠失されていた。２ハイブリッド分析は、Ｓｈｃ  Ａが、全長ＭＫ２、ＭＫ２▽Ｃ、およびＭＫ２Ｃａｔと等しく十分に相互作用することを示した。しかし、ＭＫ２▽Ｎとの相互作用は、ほとんど検出できなかった。Ｓｈｃ  Ａとの相互作用プロフィールは、最低、Ｓｈｃ  ＡはＭＫ２触媒ドメインと相互作用すること、およびＭＫ２のＮ末端の欠失はコンホメーション変化を誘導し得、その結果Ｓｈｃ  ＡはＭＫ２と効果的に結合しなくなることを示している。
【誤訳訂正１４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０１２５
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０１２５】
スムーセリン類似は、酵母における増殖および着色アッセイによってアッセイした場合、Ｓｈｃ  ＡまたはＨＰＨ２のいずれよりも高い親和性でＭＫ２と結合する。さらに、スムーセリン類似は、ＭＫ２、ＭＫ２▽Ｎ、ＭＫ２▽Ｃ、およびＭＫ２Ｃａｔの各々と実質的に同じ親和性で結合する。これは、ＭＫ２における複数の部位がこのタンパク質と相互作用することを示している。