【手続補正書】
【提出日】平成18年4月17日(2006.4.17)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
１以上のオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド・アナログに共有結合するフルオロフォアを含む蛍光物質であって、該蛍光物質がフルオロフォア上又はオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド・アナログのうちの１上に導入されるか又は作成される少なくとも１の官能基を含むことを特徴とする前記物質。但し、上記フルオロフォアは、希土類金属クリプテートではない。
【請求項２】
前記オリゴヌクレオチド又は前記オリゴヌクレオチド・アナログが、２〜６０個のヌクレオチド・ユニットを含むことを特徴とする、請求項１に記載の物質。
【請求項３】
前記官能基が、スペーサー腕を介して前記物質に結合されうることを特徴とする、請求項１又は２に記載の物質。
【請求項４】
前記フルオロフォアが、１以上の芳香環を含み、そして２００００より大きい、好ましくは５００００より大きい、高い分子吸光係数を有することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の物質。
【請求項５】
前記フルオロフォアが、ローダミン、サイアニン、スクアライン、ボディピー、フルオロセイン、及びそれらの誘導体から選ばれることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の物質。
【請求項６】
前記官能基が以下の群：マレイミド、カルボン酸、ハロアセトアミド、アルキル・ハライド、アジド、ヒドラジド、アルデヒド、ケトン、アミノ、スルフヒドリル、イソチオシアネート、イソシアネート、モノクロロトリアジン、 ジクロロトリアジン、 アジリジン、 スルホニル ・ハライド、酸ハライド、ヒドロキシスクシンイミド・エステル、ヒドロキシスルホスクシンイミド・エステル、イミド・エステル、ヒドラジド、アジドニトロフェニル、アジドフェニル、アジド、３-(２-ピリジルジチオ)プロプリオンアミド、及びグリオキサール、及びより特異的に以下の式：
【化１】
2005529219.tif 000001
｛式中、ｎは０〜８の範囲であり、かつｐは０又は１と等しく、そしてＡｒは１〜３個のヘテロ原子を含む５-又は６-員の複素環であって、場合によりハロゲン原子で置換される複素環である。｝
で表される基から選ばれることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の物質。
【請求項７】
以下の式(Ｉ)：
【化２】
2005529219.tif 000002
[式中、
-  Ａは、以下の基：
【化３】
2005529219.tif 000003
｛基中、
-  点線は、各々１〜３個の融合環を形成するために必要とされる炭素原子を表し、Ｒ3基は、該環に結合し；
-  Ｘ及びＹは、各々Ｎ、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、Ｓ、又はＣ(ＣＨ3)2を表し、
-  ｍは、１、２、３、又は４の値を有し；
-  ｑは、１、２、又は３の値を有し；
-  (Ｒ3)qは、ｑ個のＲ3基を表し、該Ｒ3は同一であるか又は異なってもよく；
-  Ｒ1、Ｒ2、及びＲ3基は、同一であるか又は異なり、そして水素；-(ＣＨ2)s-Ｚ基(基中、ｓは０〜４の範囲であり、かつＺは、ＣＨ3、ＳＯ3Ｈ、ＯＨ、又はＮ+Ｒ1Ｒ2Ｒ3を表し、ここでＲ1、Ｒ2、及びＲ3は、上で定義される通りである)、請求項６において定義される官能基；並びに場合により請求項６において定義される官能基を含むオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチド・アナログから選ばれる｝から選ばれる基を表し；
-  Ｒ4は、Ｈ；ＯＨ；ＣＨ3；Ｃｌ；及び以下の式：
【化４】
2005529219.tif 000004
で表される基から選ばれ、アリル位における置換基Ｒ4は、ポリエチレン鎖と共に、４〜１４個の原子を含む１〜３の融合環を形成し、該環は、飽和されるか又は不飽和であり、該環は１以上のＯ、Ｎ、及びＳ原子を含むことがあり、そして場合によりオキソ基で置換されうる]
で表される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光物質。
【請求項８】
以下の式(ＩＩ)又は式(ＩＩＩ)：
【化５】
2005529219.tif 000005
｛式中、
-  点線は、１〜３個の融合環を形成するために必要とされる炭素原子を表し、Ｒ3基は、該環に結合する；
-  Ｘは、Ｎ、Ｃ＝Ｏ、Ｏ、Ｓ、又はＣ(ＣＨ3)2を表し、
-  ｍは、１、２、３、又は４の値を有し；
-  ｑは、１、２、又は３の値を有し；
-  (Ｒ3)2は、ｑ個のＲ3基を表し、該Ｒ3は同一であるか又は異なってもよく；
-  Ｒ1及びＲ3基は、同一であるか又は異なってもよく、そして水素；-(ＣＨ2)s-Ｚ基(基中、ｓは０〜４の範囲であり、かつＺは、ＣＨ3、ＳＯ3Ｈ、ＯＨ、又はＮ+Ｒ1Ｒ2Ｒ3を表し、ここでＲ1、Ｒ2、及びＲ3は、上で定義される通りである)；請求項６において定義される官能基；並びに場合により請求項６において定義される官能基を含むオリゴヌクレオチド、又はオリゴヌクレオチド・アナログから選ばれる｝で表される基から選ばれ；
-  Ｒ4は、Ｈ；ＯＨ；ＣＨ3；Ｃｌ；及び以下の式：
【化６】
2005529219.tif 000006
で表される基から選ばれ、アリル位における置換基Ｒ4は、ポリエチレン鎖と共に、４〜１４個の原子を含む１〜３の融合環を形成し、該環は、飽和されるか又は不飽和であり、該環は１以上のＯ、Ｎ、及びＳ原子を含むことがあり、そして場合によりオキソ基で置換されうる]
で表される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光物質。
【請求項９】
以下の式(ＩＶ)、(Ｖ)、(ＶＩ)、又は(ＶＩＩ)：
【化７】
2005529219.tif 000007
【化８】
2005529219.tif 000008
｛式中、
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ5は、同一であるか又は異なり、そして、水素；-(ＣＨ2)s-Ｚ基(基中、ｓは０〜４の範囲であり、かつＺは、ＣＨ3、ＳＯ3Ｈ、ＯＨ、又はＮ+Ｒ1Ｒ2Ｒ3を表し、ここでＲ1、Ｒ2、及びＲ3は、上で定義される通りである)；請求項６において定義される官能基、並びに請求項６において定義される官能基を場合により含むオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド・アナログから選ばれ；
ｑは、１、２、又は３の値を有する｝で表される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光物質。
【請求項１０】
以下の式(ＶＩＩＩ)：
【化９】
2005529219.tif 000009
｛式中、
置換基Ｒ6〜Ｒ12は、水素；ハロゲン；アルキル；シクロアルキル；アリール;アリールアルキル;アシル;スルホ；請求項６において定義される官能基；及び請求項６において記載される基から選ばれる官能基を場合により含むオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド・アナログから選ばれる。｝で表される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の蛍光物質。
【請求項１１】
以下の式(ＩＸ)：
【化１０】
2005529219.tif 000010
｛式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｘ、Ｙ、ｍ、及びｑは、上で定義された通りである｝で表される、請求項７に記載の物質。
【請求項１２】
Ｘ及びＹの各々が、Ｃ(ＣＨ3)2基を表す、請求項１１に記載の物質。
【請求項１３】
-  Ｒ1及びＲ2が、１〜４個の炭素原子を含むアルキルを表すか、又は以下の式の基を表し、少なくとも１のＲ1及びＲ2基は、以下の式：
【化１１】
2005529219.tif 000011
で表される基を表し、
-  Ｒ4が水素を表し、
-  ｑ＝１、ｍ＝２であり、
-  Ｒ3が水素；-(ＣＨ2)s-Ｚ基(基中、ｓは０〜４の範囲であり、かつＺは、ＣＨ3、ＳＯ3Ｈ、ＯＨ、又はＮ+Ｒ1Ｒ2Ｒ3基を表し、ここでＲ1、Ｒ2、及びＲ3は、上で定義される通りである)；請求項６で定義される官能基；請求項６で定義される官能基を場合により含むオリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド・アナログを表し；
-  Ｒ4が、Ｈ；ＯＨ；ＣＨ3；Ｃｌ；及び以下の式：
【化１２】
2005529219.tif 000012
で表される基から選ばれ、アリル位における置換基Ｒ4が、ポリエチレン鎖と共に、４〜１４個の原子を含む１〜３の融合環を形成し、該環は、飽和されるか又は不飽和であり、該環は１以上のＯ、Ｎ、及びＳ原子を含むことがあり、そして場合によりオキソ基で置換されうる、請求項１１に記載の物質。
【請求項１４】
前記フルオロフォアが、オリゴヌクレオチドに直接又はスペーサー腕を介して共有結合することを特徴とする、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の物質。
【請求項１５】
前記フルオロフォアが、場合により１以上の二重結合若しくは三重結合を含み、及び/又は場合により１以上のヘテロ原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、リンを含み、或いは１以上のカルバモイル若しくはカルボキサミド基を含む直鎖又は分枝鎖Ｃ1〜Ｃ20アルキレン基；Ｃ5〜Ｃ8シクロアルキレン基；並びにＣ6〜Ｃ14アリーレン基から選ばれる二価有機ラジカルからなるスペーサー腕を介してオリゴヌクレオチドに結合し、ここで、上記アルキレン、シクロアルキレン、又はアリーレン基が、場合によりアルキル、アリール、又はスルホネート基で置換されることを特徴とする、請求項１４に記載の物質。
【請求項１６】
前記スペーサー腕が、以下の基：
【化１３】
2005529219.tif 000013
｛基中、ｎ1及びｎ2が２〜６の間である)
で表される基から選ばれることを特徴とする、請求項１５に記載の物質。
【請求項１７】
前記オリゴヌクレオチドが、５〜６０、特に５〜２０、好ましくは５〜１５個のヌクレオチド・ユニットを含むことを特徴とする、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の物質。
【請求項１８】
前記オリゴヌクレオチドが、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドのユニットであって、ホスホジエステル型の結合を介して互いに結合するユニットの列からなることを特徴とする、請求項１７に記載の物質。
【請求項１９】
前記オリゴヌクレオチドが、リボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチド・ユニット、又は糖若しくは塩基上で改変されるヌクレオチドアナログ・ユニットの列からなり、これらのユニットは、ホスホジエステル型の天然ヌクレオチド間結合によって、互いに結合され、ここで該ヌクレオチド間結合の幾つかは、場合によりホスホネート、ホスホラミド、又はホスホロチオエート結合で置換されることを特徴とする、請求項１７に記載の物質。
【請求項２０】
前記オリゴヌクレオチドが、ホスホジエステル型の結合により互いに結合するリボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチドユニット、並びにアミド結合により互いに結合するヌクレオシドアナログユニットの両者を含む列からなることを特徴とする、請求項１７に記載の物質。
【請求項２１】
前記オリゴヌクレオチドが、ホスホジエステル型の結合により互いに結合するリボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチド・ユニット、並びにアミド結合により互いに結合するヌクレオシド・アナログ・ユニットの列からなり、ここで、上記オリゴヌクレオチドが、フルオロフォアに結合するための末端で、少なくとも５個のホスホジエステル型のヌクレオチド間結合を含む、請求項１７に記載の物質。
【請求項２２】
前記官能基が、オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド・アナログのヌクレオチドユニットのアミン官能基であるか、或いは、オリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド・アナログのヌクレオチド・ユニットの遊離アミン官能基を、エステル、カルボン酸、イソチオシアネート、アルデヒド、カルボニル、スルホニル・ハライド、アルキル・ハライド、アジド、ヒドラジド、ジクロロトリアジン、無水物、ハロアセトアミド、マレイミド、及びスルフヒドリル基から選ばれる基と反応させることから得られることを特徴とする、請求項１〜２１のいずれか1項に記載の物質。
【請求項２３】
前記官能基が、オリゴヌクレオチド若しくはオリゴヌクレオチド・アナログのヌクレオチドユニットの遊離アミン官能基を、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミジル・エステルと反応させることから得られることを特徴とする、請求項１〜２２のいずれか１項において記載される物質。
【請求項２４】
前記官能基が、場合により１以上の二重結合若しくは三重結合を含み、及び/又は場合により１以上のヘテロ原子、例えば、酸素、窒素、硫黄、リンを含み、或いは１以上のカルバモイル若しくはカルボキサミド基を含む直鎖又は分枝鎖Ｃ1〜Ｃ20アルキレン基；Ｃ5〜Ｃ8シクロアルキレン基；並びにＣ6〜Ｃ14アリーレン基から選ばれる二価有機ラジカルからなるスペーサー腕により、フルオロフォア及び/又はオリゴヌクレオチドに結合し、ここで、上記アルキレン、シクロアルキレン、又はアリーレン基が、場合によりアルキル、アリール、又はスルホネート基で置換されることを特徴とする、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の物質。
【請求項２５】
前記スペーサー腕が、以下の基：
【化１４】
2005529219.tif 000014
｛式中、ｎ1及びｎ2が、２〜６の間である｝
で表される基から選ばれることを特徴とする、請求項２４に記載の物質。
【請求項２６】
担体分子に共有結合する請求項１〜２５のいずれか１項に記載の物質からなる、蛍光抱合体。
【請求項２７】
前記蛍光物質のフルオロフォアが、サイアニン-５であり、前記物質のオリゴヌクレオチドが、Ａ15配列を有し、そして前記担体分子がｃＡＭＰであることを特徴とする、請求項２６に記載の抱合体。
【請求項２８】
終モル比が、０より大きく１００未満、好ましくは０より大きく２０未満であることを特徴とする、請求項２６及び２７のいずれかに記載の抱合体。
【請求項２９】
前記担体分子が、抗体、抗原、細胞内メッセンジャー、細胞間メッセンジャー、タンパク質、ペプチド、ハプテン、レクチン、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、トキシン、炭水化物、オリゴ糖、多糖、核酸、ホルモン、ビタミン、薬用製品、ポリマー、ポリマー製粒子、ガラス、ガラス粒子、又はガラス若しくはポリマーから作られた表面であるということを特徴とする、請求項２６〜２８のいずれか１項に記載の蛍光抱合体。
【請求項３０】
前記担体分子が、抗体又はストレプトアビジンであるということを特徴とする、請求項２９に記載の蛍光抱合体。
【請求項３１】
蛍光トレーサーとしての、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の蛍光物質又は請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の蛍光抱合体の使用。
【請求項３２】
分析物を含むと疑われる媒体中で当該分析物を、蛍光により検出及び/又は測定するための、請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
生体分子間の相互作用を測定し；或いは生理活性、例えば酵素活性、膜結合受容体の活性化、遺伝子転写、膜輸送、又は膜分極の変化を測定するための、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
薬用製品をスクリーニングする方法における、請求項３１〜３３に記載の使用。
【請求項３５】
請求項２６〜３０のいずれか１項に記載される蛍光抱合体が、ドナー蛍光化合物の存在下において受容体蛍光化合物として使用される、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
請求項２６〜３０のいずれか１項に記載される蛍光抱合体が、受容体蛍光化合物の存在下においてドナー蛍光化合物として使用される、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、蛍光偏光、又は蛍光相関における、請求項３５に記載の使用。
【請求項３８】
in vivoにおける光学イメージングのためのコントラスト剤として、請求項２６〜３０のいずれか１項に記載の抱合体の使用。
【請求項３９】
担体分子に結合するフルオロフォアの蛍光強度を高める方法であって、請求項１〜２５のいずれか１項において記載される蛍光物質が、フルオロフォアとして使用されることを特徴とする、前記方法。
【請求項４０】
フルオロフォアへ結合する担体分子の表面における凝集現象を低減する方法であって、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の蛍光物質が、上記フルオロフォアの代わりに使用されることを特徴とする、前記方法。
【請求項４１】
担体分子に結合するフルオロフォアの量子収量を増大させる方法であって、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の蛍光物質を、フルオロフォアとして使用することを特徴とする、前記方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４３】
本発明に従った蛍光抱合体は、特に蛍光顕微鏡、フローサイトメトリー、蛍光偏光、又は蛍光相関において蛍光化合物のドナーの存在下で蛍光化合物の受容体として使用されうるか、蛍光化合物の受容体の存在下で蛍光化合物のドナーとして使用されうる。