【手続補正書】
【提出日】平成17年10月27日(2005.10.27)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  ＳＭ２２α遺伝子発現が誘導される条件下で、神経堤細胞を培養する工程を含むことを特徴とする血管平滑筋細胞の分化を刺激する方法。
【請求項２】  前記神経堤細胞が不死化細胞であることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項３】  前記神経堤細胞が平滑筋細胞分化培地中で培養されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】  前記平滑筋細胞分化培地が、１０％ウシ胎仔血清、ペニシリン（１００ユニット／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）、および２５ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ７．４）で補充された、表１に列挙される培地成分を含むことを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項５】  前記不死化神経堤細胞が、完全培地中で最初に培養されることを特徴とする請求項３記載の方法。
【請求項６】  前記完全培地が、ヒヨコ胚抽出物で補充されたＬ−１５  ＣＯ２−ベースの培地を含むことを特徴とする請求項５記載の方法。
【請求項７】  （ｉ）神経堤細胞が平滑筋細胞に分化し始めるのに十分な時間、ＳＭ２２α遺伝子発現が誘導される培養条件下で、該神経堤細胞を培養する工程；および
（ｉｉ）該培養条件下で上方制御または下方制御される遺伝子を同定する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖または移動を制御する遺伝子を同定する方法。
【請求項８】  前記上方制御または下方制御される遺伝子を同定する工程が、非平滑筋細胞由来のｍＲＮＡを有する培養細胞からのｍＲＮＡのディファレンシャルディスプレイを含むことを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項９】  前記培養条件下で上方制御または下方制御される１つ以上の遺伝子がクローン化されることを特徴とする請求項７記載の方法。
【請求項１０】  （ａ）ＳＭ２２α遺伝子の発現が、神経堤細胞が平滑筋細胞に分化し始めるのに十分な時間誘導される培養条件で、神経堤細胞を培養することを含む、血管平滑筋細胞の分化を刺激する工程；
（ｂ）該細胞を試験因子と接触させる工程；および
（ｃ）該試験因子が神経堤細胞の平滑筋細胞への分化を阻害する能力について、測定する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖または移動を制御する調節因子を同定する方法。
【請求項１１】  前記神経堤細胞の平滑筋細胞への分化を阻害する前記因子の能力を、平滑筋細胞マーカーの存在または非存在を検出することによって測定することを特徴とする請求項１０記載の方法。
【請求項１２】  （ｉ）神経堤細胞の平滑筋細胞への分化の間に上方制御または下方制御される遺伝子産物を同定する工程；および
（ｉｉ）該遺伝子産物の活性を阻害または増強する因子を同定する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖または移動を調節する因子を同定する方法。
【請求項１３】  前記遺伝子産物が、潜伏ＴＧＦβ結合タンパク質、インテグリン−連結キナーゼ、大動脈カルボキシペプチダーゼ、Ｔｏｒｓｉｎ、ｃｃｔζ、プロチモシン、Ｌｉｍｋ２、Ｃｃａ（コンフルエント３Ｙ１細胞結合型）、インターフェロン活性化タンパク質、インターネキシン、カスパーゼ、ＡＨＮＡＫ、デスモイオキン、ＴＳＣ−３６（ＴＧＦ誘導性タンパク質）、トランスコバラミン、ｆｏｓ−関連抗原、精巣上体分泌性タンパク質Ｅ１前駆体（ＨＥ１）、ユビキチンカルボキシル末端加水分解酵素、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、およびデコリン、よりなる群から選択されることを特徴とする請求項１２記載の方法。
【請求項１４】  （ｉ）神経堤細胞の平滑筋細胞への分化の間に上方制御される、平滑筋細胞の増殖および／または移動に必要な生物学的活性を有する遺伝子産物を同定する工程；および
（ｉｉ）該遺伝子産物の該生物学的活性を阻害する因子を同定する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖および／または移動を阻害する因子を同定する方法。
【請求項１５】  （ｉ）潜伏ＴＧＦβ結合タンパク質（ＬＴＢＰ）の生物学的活性を変化させる因子を同定する工程、および
（ｉｉ）該因子が平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する能力について、評価する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する因子を同定する方法。
【請求項１６】  前記因子が、ＬＴＢＰのＴＧＦβ複合体との相互作用を阻害するものであることを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１７】  前記因子が、ＬＴＢＰのタンパク質分解性切断を阻害するものであることを特徴とする請求項１４記載の方法。
【請求項１８】  （ｉ）インテグリン連結キナーゼのキナーゼ活性を阻害する因子を同定する工程、および
（ｉｉ）該因子が平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する能力について、評価する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する因子を同定する方法。
【請求項１９】  前記因子が、インテグリンサブユニットのリン酸化を阻害するものであることを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項２０】  （ｉ）ＬＥＦ−１／β−カテニンシグナル伝達経路の活性化を阻害する因子を同定する工程、および
（ｉｉ）該因子が平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する能力について、評価する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する因子を同定する方法。
【請求項２１】  平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節することが出来るものとして同定された１つ以上の因子を含む、薬学的調節物を処方する工程をさらに含むことを特徴とする請求項１０、１２、１４、１５、１８、または２０のいずれか１項記載の方法。
【請求項２２】  平滑筋細胞と、請求項１０、１２、１４、１５、１８、または２０のいずれか１項記載の方法によって平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節することが出来るものとして同定された因子とを、インビトロで接触させる工程を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する方法。
【請求項２３】  請求項１０、１２、１４、１５、１８、または２０のいずれか１項記載の方法によって平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節することが出来るものとして同定された因子を含有する、平滑筋細胞の所望でない増殖を処置または予防するための組成物。
【請求項２４】  再狭窄を処置または予防するために動物に投与されることを特徴とする請求項２３記載の組成物。
【請求項２５】  動脈硬化症を処置または予防するために動物に投与されることを特徴とする請求項２３記載の組成物。
【請求項２６】  血管形成または他の脈管外傷に続く拡張した管腔容量を維持するために動物に投与されることを特徴とする請求項２３記載の組成物。
【請求項２７】  平滑筋細胞の所望でない増殖を処置または予防するための組成物であって、神経堤細胞の平滑筋細胞への分化の間に上方制御される、平滑筋細胞の増殖および／または移動に必要な生物学的活性を有する遺伝子産物の、該生物学的活性を阻害する因子、または該遺伝子産物の発現を阻害する因子を含有することを特徴とする組成物。
【請求項２８】  平滑筋細胞の、異常な、病理学的、または不適切な増殖を処置または予防するための組成物であって、神経堤細胞の平滑筋細胞への分化の間に上方制御される、平滑筋細胞の増殖および／または移動に必要な生物学的活性を有する遺伝子産物の、該生物学的活性を阻害する因子または該遺伝子産物の発現を阻害する因子を含有することを特徴とする組成物。
【請求項２９】  （ｉ）神経堤細胞の平滑筋細胞への分化の間に上方制御される、平滑筋細胞の増殖および／または移動に必要な生物学的活性を有する遺伝子産物の、該生物学的活性を阻害する因子を同定する工程：および
（ｉｉ）前記因子またはそのアナログが平滑筋細胞の増殖および／または移動を調節する能力について、評価する工程、を含むことを特徴とする平滑筋細胞の増殖を阻害する因子を同定する方法。