【手続補正書】
【提出日】平成18年3月15日(2006.3.15)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項1】  フォスファトニン活性および、SDS-PAGEで測定された際、60kDaの概算分子量をもつポリペプチドの単離された、または本質的に純粋な型。
【請求項2】  pH7でビス-トリスSDS-PAGEで測定すると約200kDaの分子量をもつ請求項1記載ポリペプチド。
【請求項3】  グリコシル化された、および／またはリン酸化されている、請求項1または2記載のポリペプチド。
【請求項4】  Saos-2細胞（寄託番号.ECACC 89050205）から精製によって得ることのできる請求項1〜3のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項5】  請求項1〜4のいずれか一項記載のポリペプチドまたはその免疫学的および／もしくは生物学的に活性な断片であって、以下の(a)〜(j)からなる群より選択されるポリペプチドによりコードされるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは断片：
（a）配列番号：2（図8）に示したアミノ酸配列を含むポリペプチドの、少なくとも成熟した型をコードするポリヌクレオチド；
（b）少なくともペプチドの成熟型をコードしており、配列番号：1（図8）に示すコード配列を含むポリヌクレオチド；
（c）（a）または（b）のポリヌクレオチドにコードされるアミノ酸配列の1つまたはいくつかのアミノ酸の置換、欠失及び／または付加によって、(a)または(b)のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド由来のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（d）（a）〜（c）のいずれか一つのポリヌクレオチドとハイブリダイズする相補鎖を含むポリヌクレオチド；
（e）（a）〜（d）のいずれか一つのポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドのアミノ酸配列と60％以上の同一性を有するポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド；
（f）（a）〜（e）のいずれか一つのポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドの断片または抗原決定基含有部分を含み、リン酸代謝を調節することのできるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（g）配列番号：2（図8）のおよそ1〜40位、141〜180位及び／または401〜429位のアミノ酸残基を含むフォスファトニンポリペプチドの抗原決定基含有部分をコードするポリヌクレオチド；
（h）（a）〜（g）のいずれか一つのポリヌクレオチドの少なくとも15個のヌクレオチドを含み、且つリン酸代謝を調節できるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（i）（a）〜（h）のいずれか一つのポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドの細胞及び／またはグリコサミノグリカン結合モチーフ及び／または骨ミネラルモチーフを含み、リン酸代謝を調節できるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド；
（j）（a）〜（i）いずれかのポリヌクレオチドのヌクレオチド配列に遺伝コードした結果、ヌクレオチド配列が縮重したポリヌクレオチド。
【請求項6】  リン酸代謝を調節することのできる、請求項1〜5のいずれか一項記載のポリペプチド。
【請求項7】  請求項1〜6のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチド。
【請求項8】  RNAまたはDNAを含む請求項7記載のポリヌクレオチド。
【請求項9】  C末端またはN末端のいずれかからの連続ヌクレオチドの欠失を含む、請求項7または8記載のポリヌクレオチド。
【請求項10】  請求項7〜9のいずれか一項記載のポリヌクレオチドとハイブリダイズし、かつ請求項1〜6のいずれか一項記載のポリペプチドの少なくともフォスファトニン活性の一部を失った変異体をコードするポリヌクレオチド。
【請求項11】  請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
【請求項12】  請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチドもしくは請求項11のベクターで遺伝子操作された宿主細胞、または請求項1〜6のいずれか一項記載のポリペプチドをコードする遺伝子の発現を仲介する宿主細胞へ発現調節配列を導入することにより製造された宿主細胞。
【請求項13】  以下の段階を含むフォスファトニンの単離方法：
（a）腫瘍馴化培地または骨肉腫細胞を、血清添加培養液（DMEMイーグル液/10％FCS/グルタミン/抗真菌剤（DMFCS））中にてコンフルエンスになるまで培養する段階；
（b）無血清培地DMEMイーグル液/グルタミン/抗真菌剤、抗生物質（DM）中にて一日おきに細胞を最長5時間培養する段階；
（c）細胞から無血清馴化培地を採取し、馴化培地をpH7.2の0.06Mのリン酸ナトリウムおよび0.5Mの塩化ナトリウム（PBS）に平衡化する段階；
（d）（c）で得られた培養液を、平衡化したコンカナバリンAセファロースのカラムに供する段階；
（e）カラムをPBSでよく洗浄する段階；
（f）コンカナバリンAのカラムを、0.5Mのα-メチル-D-グルコピラノシドを加えたPBSで溶出する段階；
（g）（f）で溶離された物質を、陽イオン交換クロマトグラフィーに供する段階；
（h）0.5Mの塩化ナトリウムで、断片を含むフォスファトニンポリペプチドを溶離する段階。
【請求項14】  請求項12記載の宿主細胞を培養する段階と、培養物から得られるポリヌクレオチドにコードされるポリペプチドを回収する段階とを含む、フォスファトニンの生物学的活性及び／または免疫学的活性をもつポリペプチドの製造方法。
【請求項15】  請求項13もしくは14記載の方法または請求項1〜6いずれか一項記載のフォスファトニンポリペプチドのタンパク質分解により得られる、またはPHEXメタロペプチダーゼによって請求項13もしくは14記載の方法により得られるポリペプチド。
【請求項16】  請求項1〜6または請求項15のいずれか一項記載のポリペプチドであって、以下の活性のうち少なくとも1つの活性をもつポリペプチド：
（a）ナトリウム依存性リン酸共輸送のダウンレギュレーションができる；
（b）腎25‐ヒドロキシビタミンD3-24-ヒドロキシラーゼのアップレギュレーションができる；および／または
（c）腎25-ヒドロキシD-1-α-ヒドロキシラーゼのダウンレギュレーションができる。
【請求項17】  請求項1〜6または請求項15のいずれか一項記載のポリペプチドであって、以下の活性のうち少なくとも1つの活性をもつポリペプチド：
（a）ナトリウム依存性リン酸共輸送のアップレギュレーションができる；
（b）腎25-ヒドロキシビタミンD3-24-ヒドロキシラーゼのダウンレギュレーションができる；および／または
（c）腎25-ヒドロキシD-1-α-ヒドロキシラーゼのアップレギュレーションができる。
【請求項18】  請求項15記載のポリペプチドであって、請求項16または17に示した活性のうち少なくとも1つを失ったポリペプチド。
【請求項19】  請求項1〜6または15〜18のいずれか一項記載の単離ポリペプチドに特異的に結合する単離された抗体。
【請求項20】  請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチドまたはそれらの相補鎖と特異的にハイブリダイズする、長さが少なくとも14ヌクレオチドである核酸分子。
【請求項21】  請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチドを含む核酸分子の発現を調節するプロモーターの、単離された調節配列。
【請求項22】  請求項21記載の調節配列を含む組換えDNA分子。
【請求項23】  治療的に有効な量の、請求項1〜6もしくは15〜18のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、請求項10記載のベクター、または請求項19記載の抗体を、哺乳類被験者に投与することを含む、リン酸代謝不全に関する医学的症状を治療する方法。
【請求項24】  以下の段階を含む、リン酸代謝不全に関する被験者の病理学的症状または病理学症状への罹病性を診断する方法：
（a）請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチドの変異体の有無を決定する段階；および
（b）該変異体の有無に基づく病理学的症状または病理学的症状への罹病性を診断する段階。
【請求項25】  以下の段階を含む、リン酸代謝不全に関する被験者の病理学的症状または病理学的症状への罹病性を診断する方法：
（a）生物試料において、請求項1〜6または15〜18のいずれか一項記載のポリペプチドの存在、またはその発現量を決定する段階；および
（b）ポリペプチドの存在またはその発現量に基づく病理学的症状または病理学的症状への罹病性を診断する段階。
【請求項26】  以下の段階を含む、フォスファトニンポリペプチドの結合パートナーを同定する方法：
（a）請求項1〜6または15〜18のいずれか一項記載のポリペプチドとスクリーニングに用いる化合物とを接触させる段階；および
（b）化合物がポリペプチドの活性に影響を及ぼすか否かを決定する段階。
【請求項27】  以下の段階を含む、リン酸代謝不全の治療のための薬物候補を同定しそれを得る方法：
（a）リン酸摂取に反応して検出可能なシグナルを提供することのできる成分の存在下で、請求項15〜18のいずれか一項記載のポリペプチドまたは該ポリペプチドを発現する細胞を、リン酸代謝が可能な条件下でスクリーニングされる薬物候補と接触させる段階；
（b）リン酸代謝によって生成されるシグナルの有無またはシグナルの増加を検出する段階であって、該シグナルの存在または増加は、推定される薬剤であることを示す段階。
【請求項28】  請求項25〜27のいずれか一項記載の方法の段階および以下の段階を含む、治療薬の製造方法：
（i）段階（b）で得られたもしくは同定された化合物またはその類似体もしくは誘導体を、被験者に治療的に有効な量で該薬剤を提供するのに十分な量合成する段階；および／または
（ii）段階（b）で得られたもしくは同定された化合物またはその類似体もしくは誘導体を、薬学的に許容される担体と組み合わせる段階。
【請求項29】  請求項25〜27のいずれか一項記載の方法により得られたリン酸代謝の活性剤／作用薬もしくは抑制剤／拮抗薬、またはフォスファトニンの結合パートナー。
【請求項30】  請求項1〜6または15〜18のいずれか一項記載のポリペプチド、請求項7〜10のいずれか一項記載のポリヌクレオチド、請求項11記載のベクター、請求項19記載の抗体、請求項20記載の核酸分子、または請求項29記載の活性剤／作用薬、抑制剤／拮抗薬、もしくは結合パートナーを含む組成物。
【請求項31】  薬学的組成物であり、薬学的に許容される賦形剤、希釈剤、または担体をさらに含む、請求項30記載の組成物。
【請求項32】  診断用組成物であり、検出のための手段をさらに含む、請求項31記載の組成物。
【請求項33】  リン酸代謝不全を治療する医薬品の調製を目的とする、請求項1〜6もしくは15〜18のいずれか一項記載のポリペプチド、該ポリペプチドをコードし発現可能なDNA、請求項29記載の活性剤／作用薬、結合パートナー、または請求項19記載の抗体の使用。
【請求項34】  高リン酸血症を治療する医薬品の調製を目的とする、請求項1〜6、15、16、もしくは18のいずれか一項記載のポリペプチド、該ポリペプチドをコードし発現可能なDNA、請求項29記載の活性剤／作用薬、結合パートナー、または請求項19記載の抗体の使用。
【請求項35】  腎性骨形成異常、腎透析／腎透析前における高リン酸血症、二次的上皮小体機能亢進症、または嚢胞性線維性骨炎を治療する医薬品の調製を目的とする、請求項1〜6、15、16、もしくは18のいずれか一項記載のポリペプチド、該ポリペプチドをコードし発現可能なDNA、請求項29記載の活性剤／作用薬、結合パートナー、または請求項19記載の抗体の使用。
【請求項36】  低リン酸血症を治療する医薬品の調製を目的とする、請求項1〜6、15、17、もしくは18のいずれか一項記載のポリペプチド、該ポリペプチドをコードし発現可能なDNA、請求項19記載の抗体、請求項20記載の核酸分子、または請求項29記載の抑制剤／拮抗薬の使用。
【請求項37】  X染色体性低リン酸血性くる病、高カルシウム尿症（HHRH）を伴う遺伝性低リン酸血性くる病、低ミネラル化による骨傷害、幼年期における成長障害、腫瘍性低リン酸血性骨軟化症、腎性リン酸漏出、腎性骨形成不全、骨粗鬆症、ビタミンD抵抗性くる病、末端組織抵抗、腎性ファンコーニ症候群、常染色体性くる病、パジェット病、腎不全、尿細管アシドーシス、嚢胞性線維症、またはスプルーを治療するための医薬品の調製を目的とする、請求項1〜6、15、17、もしくは18のいずれか一項記載のポリペプチド、該ポリペプチドをコードし発現可能なDNA、請求項19記載の抗体、請求項20記載の核酸分子、または請求項29記載の抑制剤／拮抗薬の使用。
【請求項38】  骨ミネラル減少不全を治療するための医薬品の製造を目的とする、請求項1〜6、15、17、もしくは18のいずれか一項記載のポリペプチド、該ポリペプチドをコードし発現可能なDNA、請求項19記載の抗体、請求項20記載の核酸分子、または請求項29記載の抑制剤／拮抗薬の使用。
【請求項39】  リン酸代謝不全の治療と同時に、別々に、または連続して用いるための組み合わせ調製物の製造を目的とする、請求項1〜6、15、17、もしくは18のいずれか一項記載のポリペプチドとPHEXメタロペプチダーゼとの使用。
【請求項40】  フォスファトニンの製造を目的とする、フォスファトニンの過剰発現が可能な形質転換された骨芽細胞または骨細胞株の使用。