【手続補正書】
【提出日】平成17年10月3日(2005.10.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】  Ｑ基質結合ドメイン内に少なくとも１つの変異を含むＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ここで該変異は、非変異型チミジンキナーゼと比較して、該チミジンキナーゼの生物学的活性を増大させる、核酸分子。
【請求項２】  少なくとも３つの変異を含むＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、該変異のうちの少なくとも２つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１、２、または３アミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、そして該変異のうちの少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に、４または５アミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、ここで、該変異は、非変異型チミジンキナーゼと比較して、該チミジンキナーゼの生物学的活性を増大させる、核酸分子。
【請求項３】  請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ＤＲＨヌクレオシド結合部位内のアミノ酸置換である少なくとも１つの変異をさらに含む、核酸分子。
【請求項４】  請求項１に記載の単離された核酸分子であって、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に、４、５、または６アミノ酸に位置するアミノ酸置換である少なくとも１つの変異をさらに含む、核酸分子。
【請求項５】  請求項１に記載のチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１〜７アミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードする少なくとも１つの変異をさらに含む、核酸分子。
【請求項６】  請求項１〜５のいずれか１項に記載のチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ここで該チミジンキナーゼは、単純ヘルペスウイルス１型チミジンキナーゼ、および単純ヘルペスウイルス２型チミジンキナーゼからなる群から選択される、核酸分子。
【請求項７】  請求項１または２に記載のチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ここで該酵素は、短縮型であるか、またはインフレーム欠失を含む、核酸分子。
【請求項８】  請求項１または２に記載のチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ここで該チミジンキナーゼ酵素は、野性型チミジンキナーゼ酵素による前記ヌクレオシドアナログのリン酸化の少なくとも１倍でヌクレオシドアナログをリン酸化し得る、核酸分子。
【請求項９】  請求項８に記載の単離された核酸分子であって、ここで該ヌクレオシドアナログは、ガンシクロビル、アシクロビル、トリフルオロチミジン、１−［２−デオキシ、２−フルオロ、β−Ｄ−アラビノフラノシル］−５−ヨードウラシル、ａｒａ−Ａ、ａｒａＴ  １−β−Ｄ−アラビノフラノキシルチミン、５−エチル−２’−デオキシウリジン、５−ヨード−５’−アミノ−２，５’−ジデオキシウリジン、イドクスウリジン、ＡＺＴ、ＡＩＵ，ジデオキシシチジン、およびＡｒａＣからなる群より選択される、核酸分子。
【請求項１０】  請求項１または２に記載のチミジンキナーゼ酵素をコードする単離された核酸分子であって、ここで該チミジンキナーゼ酵素は、ヌクレオシドアナログをリン酸化し得、そして以下：
【数１】
2002516061.tif 000001
であり、
ここでＴＫmＮＡpは、チミジンキナーゼ変異体によるヌクレオシドアナログのリン酸化の速度であり、ＴＫmＴpは、チミジンキナーゼ変異体によるチミジンのリン酸化の速度であり、ＴＫwtＮＡpは、非変異型チミジンキナーゼ酵素によるヌクレオシドアナログのリン酸化の速度であり、ＴＫwtＴpは、非変異型チミジンキナーゼ酵素によるチミジンキナーゼ酵素のリン酸化の速度であり、そしてｚは、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、および５からなる群より選択される、
核酸分子。
【請求項１１】  請求項１０に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記ヌクレオシドアナログは、ガンシクロビル、アシクロビル、トリフルオロチミジン、１−［２−デオキシ、２−フルオロ、β−Ｄ−アラビノフラノシル］−５−ヨードウラシル、ａｒａ−Ａ、ａｒａＴ  １−β−Ｄ−アラビノフラノキシルチミン、５−エチル−２’−デオキシウリジン、５−ヨード−５’−アミノ−２，５’−ジデオキシウリジン、イドクスウリジン、ＡＺＴ、ＡＩＵ、ジデオキシシチジン、およびＡｒａＣからなる群より選択される、核酸分子。
【請求項１２】  請求項１〜１１のいずれか１項に記載の核酸分子に作動可能に連結されるプロモーターを含む、発現ベクター。
【請求項１３】  請求項１２に記載の発現ベクターであって、ここで前記プロモーターは、ＭｏＭＬＶ  ＬＴＲ、サイトメガロウイルス前初期プロモーター、およびサイトメガロウイルス前後期プロモーターからなる群より選択される、ベクター。
【請求項１４】  前記プロモーターが組織特異的プロモーターである、請求項１３に記載の発現ベクター。
【請求項１５】  請求項１４に記載の発現ベクターであって、ここで前記組織特異的プロモーターが、チロシンヒドロキシラーゼプロモーター、脂肪細胞Ｐ２プロモーター、ＰＥＰＣＫプロモーター、αフェトプロテインプロモーター、乳清酸性プロモーター、およびカゼインプロモーターからなる群より選択される、ベクター。
【請求項１６】  グアニル酸キナーゼ部分およびチミジンキナーゼ部分を含む融合タンパク質をコードする単離された核酸分子であって、ここで該融合タンパク質は、グアニル酸キナーゼの生物学的活性およびチミジンキナーゼの生物学的活性を有し、ここで該チミジンキナーゼ部分は、非変異型チミジンキナーゼと比較して、増加した生物学的活性を有するＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼまたは変異Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼのいずれかである、核酸分子。
【請求項１７】  前記グアニル酸キナーゼ部分および前記チミジンキナーゼ部分のうちの少なくとも１つが短縮型である、請求項１６に記載の単離された核酸分子。
【請求項１８】  前記グアニル酸キナーゼ部分が哺乳動物グアニル酸キナーゼである、請求項１６に記載の単離された核酸分子。
【請求項１９】  前記哺乳動物グアニル酸キナーゼ部分が、マウスグアニル酸キナーゼまたはヒトグアニル酸キナーゼである、請求項１８に記載の単離された核酸分子。
【請求項２０】  請求項１６に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に位置するアミノ酸置換をコードする、核酸分子。
【請求項２１】  請求項１６に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位内のアミノ酸置換である、核酸分子。
【請求項２２】  請求項１６に記載の単離された核酸分子であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、少なくとも３つの変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも２つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１、２、または３のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、そして該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に４または５のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードする、核酸分子。
【請求項２３】  前記変異チミジンキナーゼが、Ｑ基質結合ドメイン中に少なくとも１つの変異を含む酵素である、請求項２０に記載の単離された核酸分子。
【請求項２４】  前記チミジンキナーゼが、単純ヘルペスウイルス１型チミジンキナーゼおよび単純ヘルペスウイルス２型チミジンキナーゼからなる群より選択される、請求項１６に記載の単離された核酸分子。
【請求項２５】  請求項１６に記載の単離された核酸分子を含む、発現ベクター。
【請求項２６】  前記核酸分子に作動可能に連結されるプロモーターをさらに含む、請求項２５に記載の発現ベクター。
【請求項２７】  請求項１〜１１、および１６のいずれか１項に記載の核酸分子の発現を指向し得る、ウイルスベクター。
【請求項２８】  請求項２７に記載のウイルスベクターであって、ここで該ベクターが、単純ヘルペスウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス随伴ウイルスベクター、およびレトロウイルスベクターからなる群から選択される、ベクター。
【請求項２９】  請求項２７に記載のベクターを有する、宿主細胞。
【請求項３０】  請求項２９に記載の宿主細胞であって、ここで該細胞が、ヒト細胞、イヌ細胞、サル細胞、ラット細胞、およびマウス細胞からなる群から選択される、宿主細胞。
【請求項３１】  少なくとも３つの変異を含む単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、該変異のうちの少なくとも２つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１、２、または３アミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、そして該変異のうちの少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に４または５アミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、ここで、該変異は、非変異型チミジンキナーゼと比較して、該チミジンキナーゼの生物学的活性を増大させる、酵素。
【請求項３２】  Ｑ基質結合ドメイン中に少なくとも１つの変異を含む単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで該変異は、非変異型チミジンキナーゼと比較して、該チミジンキナーゼの生物学的活性を増大する、酵素。
【請求項３３】  請求項３２に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ＤＲＨヌクレオシド結合部位内のアミノ酸置換である少なくとも１つの変異をさらに含む、酵素。
【請求項３４】  請求項３２に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に４、５、または６アミノ酸に位置するアミノ酸置換である少なくとも１つの変異をさらに含む、酵素。
【請求項３５】  請求項３２に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１〜７アミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードする少なくとも１つの変異をさらに含む、酵素。
【請求項３６】  請求項３１〜３５のいずれか１項に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで該チミジンキナーゼは、単純ヘルペスウイルス１型チミジンキナーゼ、および単純ヘルペスウイルス２型チミジンキナーゼからなる群より選択される、酵素。
【請求項３７】  請求項３１または３２に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで該酵素は、短縮型であるか、またはインフレーム欠失を含む、酵素。
【請求項３８】  請求項３１または３２に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで該チミジンキナーゼ酵素は、野性型チミジンキナーゼ酵素による前記ヌクレオシドアナログのリン酸化の少なくとも１倍でヌクレオシドアナログをリン酸化し得る、酵素。
【請求項３９】  請求項３８に記載の単離されたＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで該ヌクレオシドアナログは、ガンシクロビル、アシクロビル、トリフルオロチミジン、１−［２−デオキシ、２−フルオロ、β−Ｄ−アラビノフラノシル］−５−ヨードウラシル、ａｒａ−Ａ、ａｒａＴ  １−β−Ｄ−アラビノフラノキシルチミン、５−エチル−２’−デオキシウリジン、５−ヨード−５’−アミノ−２，５’−ジデオキシウリジン、イドクスウリジン、ＡＺＴ、ＡＩＵ，ジデオキシシチジン、およびＡｒａＣからなる群より選択される、酵素。
【請求項４０】  請求項３１または３２に記載のＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで該チミジンキナーゼ酵素は、ヌクレオシドアナログをリン酸化し得、そして以下：
【数２】
2002516061.tif 000002
であり、
ここでＴＫmＮＡpは、チミジンキナーゼ変異体によるヌクレオシドアナログのリン酸化の速度であり、ＴＫmＴpは、チミジンキナーゼ変異体によるチミジンのリン酸化の速度であり、ＴＫwtＮＡpは、非変異型チミジンキナーゼ酵素によるヌクレオシドアナログのリン酸化の速度であり、ＴＫwtＴPは、非変異型チミジンキナーゼ酵素によるチミジンキナーゼ酵素のリン酸化の速度であり、そしてｚは、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、および５からなる群より選択される、酵素。
【請求項４１】  請求項４０に記載のＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素であって、ここで前記ヌクレオシドアナログは、ガンシクロビル、アシクロビル、トリフルオロチミジン、１−［２−デオキシ、２−フルオロ、β−Ｄ−アラビノフラノシル］−５−ヨードウラシル、ａｒａ−Ａ、ａｒａＴ  １−β−Ｄ−アラビノフラノキシルチミン、５−エチル−２’−デオキシウリジン、５−ヨード−５’−アミノ−２，５’−ジデオキシウリジン、イドクスウリジン、ＡＺＴ、ＡＩＵ、ジデオキシシチジン、およびＡｒａＣからなる群より選択される、酵素。
【請求項４２】  グアニル酸キナーゼ部分およびチミジンキナーゼ部分を含む融合タンパク質であって、ここで該融合タンパク質は、該グアニル酸キナーゼの生物学的活性および該チミジンキナーゼの生物学的活性を有し、ここで該チミジンキナーゼ部分は、非変異型チミジンキナーゼと比較して、増加した生物学的活性を有するＨｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼまたは変異Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼのいずれかである、タンパク質。
【請求項４３】  前記グアニル酸キナーゼ部分および前記チミジンキナーゼ部分のうちの少なくとも１つが短縮型である、請求項４２に記載の融合タンパク質。
【請求項４４】  前記グアニル酸キナーゼ部分が哺乳動物グアニル酸キナーゼである、請求項４２に記載の融合タンパク質。
【請求項４５】  前記哺乳動物グアニル酸キナーゼ部分が、マウスグアニル酸キナーゼまたはヒトグアニル酸キナーゼである、請求項４４に記載の融合タンパク質。
【請求項４６】  請求項４２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に位置するアミノ酸置換をコードする、タンパク質。
【請求項４７】  請求項４２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、１つ以上の変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位内のアミノ酸置換である、タンパク質。
【請求項４８】  請求項４２に記載の融合タンパク質であって、ここで前記変異チミジンキナーゼは、少なくとも３つの変異を含む酵素であり、該変異の少なくとも２つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＮ末端方向に１、２、または３のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードし、そして該変異の少なくとも１つは、ＤＲＨヌクレオシド結合部位からＣ末端方向に４または５のアミノ酸に位置するアミノ酸置換をコードする、タンパク質。
【請求項４９】  前記変異チミジンキナーゼが、Ｑ基質結合ドメイン中に少なくとも１つの変異を含む酵素である、請求項４６に記載の融合タンパク質。
【請求項５０】  前記チミジンキナーゼが、単純ヘルペスウイルス１型チミジンキナーゼおよび単純ヘルペスウイルス２型チミジンキナーゼからなる群より選択される、請求項４２に記載の融合タンパク質。
【請求項５１】  非ヒト温血動物における病原性因子を阻害する方法であって、該病原性因子が阻害されるように、請求項２７に記載のベクターを温血動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項５２】  前記ベクターがインビボで投与される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】  前記病原性因子が、ウイルス、細菌、および寄生虫からなる群より選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】  前記病原性因子が腫瘍細胞である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】  前記病原性因子が自己反応性免疫細胞である、請求項５１に記載の方法。
【請求項５６】  ヌクレオシドアナログを投与する工程をさらに包含する、請求項５１〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】  請求項５６に記載の方法であって、ここで前記ヌクレオシドアナログは、ガンシクロビル、アシクロビル、トリフルオロチミジン、１−［２−デオキシ、２−フルオロ、β−Ｄ−アラビノフラノシル］−５−ヨードウラシル、ａｒａ−Ａ、ａｒａＴ  １−β−Ｄ−アラビノフラノキシルチミン、５−エチル−２’−デオキシウリジン、５−ヨード−５’−アミノ−２，５’−ジデオキシウリジン、イドクスウリジン、ＡＺＴ、ＡＩＵ，ジデオキシシチジン、およびＡｒａＣからなる群より選択される、方法。
【請求項５８】  請求項２７に記載のベクター、および薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項５９】  薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤とともに、請求項２９に記載の宿主細胞を含む、薬学的組成物。
【請求項６０】  ベクターを受けた被験体における遺伝子治療の進行をモニタリングするための方法であって、該ベクターは、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅチミジンキナーゼ酵素をコードする請求項１または請求項２のいずれかに記載の核酸分子および該チミジンキナーゼについての基質である放射標識した抗ウイルス性薬物を含み、該方法は、該放射標識された抗ウイルス性薬物の存在について該被験体を調べる工程を包含する、方法。
【請求項６１】  温血動物における病原性因子を阻害するための組成物であって、請求項２７に記載のベクターを含有する、組成物。
【請求項６２】  前記ベクターがインビボで投与される、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６３】  前記病原性因子が、ウイルス、細菌、および寄生虫からなる群より選択される、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６４】  前記病原性因子が腫瘍細胞である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６５】  前記病原性因子が自己反応性免疫細胞である、請求項６１に記載の組成物。
【請求項６６】  ヌクレオシドアナログをさらに含有する、請求項６１〜６５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６７】  請求項６６に記載の組成物であって、ここで前記ヌクレオシドアナログは、ガンシクロビル、アシクロビル、トリフルオロチミジン、１−［２−デオキシ、２−フルオロ、β−Ｄ−アラビノフラノシル］−５−ヨードウラシル、ａｒａ−Ａ、ａｒａＴ  １−β−Ｄ−アラビノフラノキシルチミン、５−エチル−２’−デオキシウリジン、５−ヨード−５’−アミノ−２，５’−ジデオキシウリジン、イドクスウリジン、ＡＺＴ、ＡＩＵ，ジデオキシシチジン、およびＡｒａＣからなる群より選択される、組成物。