【手続補正書】
【提出日】平成18年5月12日(2006.5.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粒子複合体の製造方法であって、
(ａ)水および水混和性有機溶媒からなる単相組成物中、粒子形成成分(“ＰＦＣ”)と核酸様成分(“ＮＡＣ”)とを組合わせて混合物を形成する工程(ただし、ＰＦＣおよびＮＡＣは独立して分子として、またはミセルとして水性／有機溶媒系に可溶である)；および
(ｂ)該混合物中の有機溶媒量を減少させ、それによってＮＡＣおよびＰＦＣの微粒子複合体を形成させる工程；
を含む方法。
【請求項２】
ＰＦＣおよびＮＡＣを、水および有機溶媒と、その混合物の凝固点より高く、沸点よりも低い温度で組合わせる、請求項１記載の方法。
【請求項３】
ＰＦＣがカチオン性脂質を含んでなる請求項１記載の方法。
【請求項４】
水性ＮＡＣ組成物と接触させる前に、該カチオン性脂質を水と有機溶媒の混合物に溶解する請求項３記載の方法。
【請求項５】
カチオン性脂質、水、および有機溶媒の混合物を約４０〜６０℃に加熱する請求項４記載の方法。
【請求項６】
得られる複合体が粒子の形態であって、略球形であり、約６０ｎｍないし約３５０ｎｍの範囲のサイズである請求項４記載の方法。
【請求項７】
該有機溶媒がアルコールまたはエーテルである請求項１記載の方法。
【請求項８】
ＰＦＣがカチオン性脂質を含んでなり、工程(ａ)の均一な液状組成物はさらに中性脂質と接触させてさらなる均一な組成物を形成させ、そこから有機溶媒を除去してカチオン性脂質、中性脂質、および核酸の複合体を粒子として形成させる請求項７記載の方法。
【請求項９】
得られる粒子が略球形であり、約６０ｎｍないし約３５０ｎｍの範囲のサイズである請求項８記載の方法。
【請求項１０】
ＰＦＣがカチオン性脂質を含んでなる乾燥固体である請求項１記載の方法。
【請求項１１】
微粒子複合体を水性組成物から分離する請求項１記載の方法。
【請求項１２】
得られる複合体が粒子の形態であって、略球形であり、約４０ｎｍないし約１５００ｎｍの範囲のサイズである請求項１記載の方法。
【請求項１３】
得られる複合体が粒子の形態であって、スクロース密度勾配法により測定したとき、約１.０２５ｇ／ｃｍ３ないし約１.０６ｇ／ｃｍ３の浮遊密度を示すものである請求項１記載の方法。
【請求項１４】
該有機溶媒が約１０容量％ないし約６０容量％の単相組成物を含んでなる請求項１記載の方法。
【請求項１５】
該混合物の温度が約３０℃ないし約７０℃である請求項１記載の方法。
【請求項１６】
工程(ｃ)として、リガンドを該微粒子複合体に取込む工程を含んでなる請求項１記載の方法。
【請求項１７】
該リガンドが親水性ポリマーリンカーを介して親油性アンカーに接合する請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
組合せ工程(ａ)または減少工程(ｂ)において両親媒性脂質を該混合物と混合する請求項１記載の方法。
【請求項１９】
該両親媒性脂質が親水性ポリマー脂質接合体(conjugate)である請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
該親水性ポリマーが分子量約２５０ないし約２０,０００のポリ(エチレングリコール)であり、該脂質がリン脂質、スフィンゴ脂質、ジアシルグリセロール、またはステロールである請求項１９記載の方法。
【請求項２１】
該両親媒性脂質が約５.０モル％未満の量で存在する請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
該両親媒性脂質が脂肪アルコールのポリオキシエチレンエーテル、脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、または脂肪アルコールもしくは脂肪酸により誘導化したポリオールのポリエチレンエーテルである請求項１８記載の方法。
【請求項２３】
略球形の粒子を形成する核酸様成分に複合体形成した粒子形成成分(“ＰＦＣ”)を含んでなる微粒子複合体であって、該粒子形成成分が核酸様成分含有粒子内部を包み込み、そのように包み込まれた内部容積が遊離水含有容積の約５０％未満である複合体。
【請求項２４】
粒子形成成分がカチオン性脂質を含んでなる請求項２３記載の複合体。
【請求項２５】
該粒子が約４０ｎｍないし約１５００ｎｍのサイズ範囲である請求項２３記載の複合体。
【請求項２６】
該粒子が約６０ｎｍないし約３５０ｎｍのサイズ範囲である請求項２５記載の複合体。
【請求項２７】
脂質に取込まれた内部容積が遊離水含有容積の２０％未満である請求項２３記載の複合体。
【請求項２８】
スクロース密度勾配法により測定した粒子の浮遊密度が、約１.０２５ｇ／ｃｍ３ないし約１.０６ｇ／ｃｍ３である請求項２３記載の複合体。
【請求項２９】
該複合体にリガンドが接合する請求項２３記載の微粒子複合体。
【請求項３０】
該リガンドが親水性ポリマーリンカーを介して親油性アンカーに接合する請求項２９記載の微粒子複合体。
【請求項３１】
両親媒性脂質がＰＦＣと組み合わさった請求項２３記載の複合体。
【請求項３２】
該両親媒性脂質が親水性ポリマー−脂質接合体である請求項３１記載の複合体。
【請求項３３】
該親水性ポリマーが分子量約２５０ないし約２０,０００のポリ(エチレングリコール)であり、該脂質がリン脂質、スフィンゴ脂質、ジアシルグリセロール、またはステロールである請求項３２記載の複合体。
【請求項３４】
該両親媒性脂質が約５.０モル％未満の量で存在する請求項３３記載の複合体。
【請求項３５】
該両親媒性脂質が脂肪アルコールのポリオキシエチレンエーテル、脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、または脂肪アルコールもしくは脂肪酸により誘導化したポリオールのポリオキシエチレンエーテルである請求項３１記載の複合体。
【請求項３６】
水および微粒子複合体の粒子を含んでなる組成物であって、該複合体が略球形の粒子を形成する核酸様成分に複合体形成した粒子形成成分(“ＰＦＣ”)を含んでなり、該粒子形成成分が核酸様成分含有粒子内部容積を取込み、そのように取込まれた内部容積が遊離水含有容積の約５０％未満である組成物。
【請求項３７】
該粒子形成成分がカチオン性脂質を含んでなる請求項３６記載の組成物。
【請求項３８】
該粒子が約４０ｎｍないし約１５００ｎｍのサイズ範囲である請求項３６記載の組成物。
【請求項３９】
該粒子が約６０ｎｍないし約３５０ｎｍのサイズ範囲である請求項３８記載の組成物。
【請求項４０】
取込まれた内部容積が遊離水含有容積の２０％未満である請求項３６記載の組成物。
【請求項４１】
スクロース密度勾配法により測定した粒子の浮遊密度が、約１.０２５ｇ／ｃｍ３ないし約１.０６ｇ／ｃｍ３である請求項３６記載の組成物。
【請求項４２】
さらに両親媒性脂質を含んでなる請求項３６記載の組成物。
【請求項４３】
該両親媒性脂質が親水性ポリマー−脂質接合体である請求項４２記載の組成物。
【請求項４４】
該親水性ポリマーが分子量約２５０ないし約２０,０００のポリ(エチレングリコール)であり、該脂質がリン脂質、スフィンゴ脂質、ジアシルグリセロール、またはステロールである請求項４３記載の組成物。
【請求項４５】
該両親媒性脂質が約５.０モル％未満の量で存在する請求項４４記載の組成物。
【請求項４６】
該両親媒性脂質が脂肪アルコールのポリオキシエチレンエーテル、脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、または脂肪アルコールもしくは脂肪酸により誘導化したポリオールのポリオキシエチレンエーテルである請求項３６記載の組成物。
【請求項４７】
核酸様成分を細胞に送達する方法であって、
(ａ)水と微粒子複合体を含んでなる組成物と該細胞を接触させる工程(ただし、その複合体は略球形の粒子を形成する核酸様成分(“ＮＡＣ”)に複合体形成させた粒子形成成分(“ＰＦＣ”)を含み、その場合に核酸に基づく部分を含む粒子の取込まれた内部は遊離水含有容積の約５０％未満である)；および
(ｂ)核酸に基づく部分を細胞へ侵入させるのに十分な時間、接触を維持する工程；
を含む方法。
【請求項４８】
該粒子形成成分がカチオン性脂質を含んでなる請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
該粒子が約４０ｎｍないし約１５００ｎｍのサイズ範囲である請求項４７記載の方法。
【請求項５０】
該粒子が約６０ｎｍないし約３５０ｎｍのサイズ範囲である請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
取込まれた内部容積が遊離水含有容積の２０％未満である請求項４７記載の方法。
【請求項５２】
スクロース密度勾配法により測定した粒子の浮遊密度が、約１.０２５ｇ／ｃｍ３ないし約１.０６ｇ／ｃｍ３である請求項４７記載の方法。
【請求項５３】
該組成物がさらに両親媒性脂質を含んでなる請求項４７記載の方法。
【請求項５４】
該両親媒性脂質が親水性ポリマー−脂質接合体である請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
該親水性ポリマーが分子量約２５０ないし約２０,０００のポリ(エチレングリコール)であり、該脂質がリン脂質、スフィンゴ脂質、ジアシルグリセロール、またはステロールである請求項５４記載の方法。
【請求項５６】
該両親媒性脂質が約５.０モル％未満の量で存在する請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
該両親媒性脂質が脂肪アルコールのポリオキシエチレンエーテル、脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、または脂肪アルコールもしくは脂肪酸により誘導化したポリオールのポリオキシエチレンエーテルである請求項４７記載の方法。
【請求項５８】
治療用核酸様成分を、それを必要とする患者に送達する方法であって、水と微粒子複合体を含んでなる組成物を投与することを含み、該複合体が略球形の粒子を形成する核酸様成分に複合体形成させた粒子形成成分(“ＰＦＣ”)を含んでなり、その場合に粒子の取込まれた内部が核酸様成分を含み、また粒子の取込まれた内部が遊離水含有容積の約５０％未満である、方法。
【請求項５９】
該粒子形成成分がカチオン性脂質を含んでなる請求項５８記載の方法。
【請求項６０】
該粒子が約４０ｎｍないし約１５００ｎｍのサイズ範囲である請求項５８記載の方法。
【請求項６１】
該粒子が約６０ｎｍないし約３５０ｎｍのサイズ範囲である請求項６０記載の方法。
【請求項６２】
取込まれた内部容積が遊離水含有容積の２０％未満である請求項５８記載の方法。
【請求項６３】
スクロース密度勾配法により測定した浮遊密度が、約１.０２５ｇ／ｃｍ３ないし約１.０６ｇ／ｃｍ３である請求項５８記載の方法。
【請求項６４】
該水性組成物を非経口注射する請求項５８記載の方法。
【請求項６５】
該組成物がさらに両親媒性脂質を含んでなる請求項５８記載の方法。
【請求項６６】
該両親媒性脂質が親水性ポリマー−脂質接合体である請求項６５記載の方法。
【請求項６７】
該親水性ポリマーが分子量約２５０ないし約２０,０００のポリ(エチレングリコール)であり、該脂質がリン脂質、スフィンゴ脂質、ジアシルグリセロール、またはステロールである請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
該両親媒性脂質が約５.０モル％未満の量で存在する請求項６７記載の方法。
【請求項６９】
該両親媒性脂質が脂肪アルコールのポリオキシエチレンエーテルまたは脂肪酸のポリオキシエチレンエステルである請求項５８記載の方法。
【請求項７０】
(ａ)水および微粒子複合体の粒子を含んでなる組成物であって、該複合体が略球形の粒子を形成する核酸様成分(“ＮＡＣ”)に複合体形成した粒子形成成分(“ＰＦＣ”)を含んでなり、各粒子の取込まれた内部容積がＮＡＣ成分を含み、かつ遊離水含有容積の約５０％未満を有する組成物；および
(ｂ)治療投与または細胞形質導入に関する説明書；
を含んでなる製品。
【請求項７１】
該粒子形成成分がカチオン性脂質を含んでなる請求項７０記載の製品。
【請求項７２】
該粒子が約４０ｎｍないし約１５００ｎｍのサイズ範囲である請求項７０記載の製品。
【請求項７３】
該粒子が約６０ｎｍないし約３５０ｎｍのサイズ範囲である請求項７２記載の製品。
【請求項７４】
取込まれた内部容積が遊離水含有容積の２０％未満である請求項７０記載の製品。
【請求項７５】
スクロース密度勾配法により測定した粒子の浮遊密度が、約１.０２５ｇ／ｃｍ３ないし約１.０６ｇ／ｃｍ３である請求項７０記載の製品。
【請求項７６】
式：Ａ−Ｘ−Ｂ
(ただし、式中、
Ｘは生理学的または生物過程環境における因子に反応する際に不可逆的に解離し得る化学結合を表す；
Ａは結合Ｘの解離によりイオン荷電産物を生成する分子部分を表す；
Ｂは結合Ｘの解離により、該組成物から分離して、Ａ−Ｘ−Ｂそれ自体よりもより陽性の残余イオン荷電産物を脱離する分子部分を表す)
で示される電荷変更組成物。
【請求項７７】
該因子がｐＨである請求項７６記載の組成物。
【請求項７８】
該因子が結合Ｘに対する酵素の作用である請求項７６記載の組成物。
【請求項７９】
該因子が結合Ｘの加水分解の原因となる請求項７６記載の組成物。
【請求項８０】
Ｘが共有結合である請求項７６記載の組成物。
【請求項８１】
ＮＡＣを水性／有機溶媒単相中で正味のＰＦＣと接触させる請求項１記載の方法。
【請求項８２】
水性／有機溶媒中のＮＡＣ単相溶液を、ＮＡＣ単相溶液と同じ水性／有機溶媒含量の水性／有機溶媒中ＰＦＣ単相溶液と混合する請求項１記載の方法。
【請求項８３】
有機溶媒量を減少させる温度がＮＡＣおよびＰＦＣを水／有機溶媒と組合わせる際の温度と略同じである請求項１記載の方法。
【請求項８４】
該有機溶媒を約０.０１容量％未満の量に減少させる請求項１記載の方法。
【請求項８５】
形質導入増強成分を微粒子複合体に取込ませる請求項１記載の方法。
【請求項８６】
得られる微粒子複合体をさらに乾燥する請求項１記載の方法。
【請求項８７】
乾燥を凍結乾燥により実施する請求項８６記載の方法。
【請求項８８】
該凍結乾燥を凍結保存剤の存在下に行う請求項８７記載の方法。
【請求項８９】
該乾燥した微粒子複合体をさらに医薬的に許容し得る媒体と組合わせる請求項８６記載の方法。
【請求項９０】
ＰＦＣおよびＮＡＣそれぞれを同じ含量の別個の水性／有機溶媒組成物に溶解してＰＦＣ溶液およびＮＡＣ溶液を形成し、次いで、得られる２つの溶液を組合わせて単一の単相溶液を形成する請求項１記載の方法。
【請求項９１】
ＰＦＣが電荷変更脂質を含んでなる請求項１記載の方法。
【請求項９２】
該電荷変更脂質がｐＨ約３〜１０の範囲内でそのイオン電荷を変化させる滴定可能な脂質である請求項９１記載の方法。
【請求項９３】
ＰＦＣがケージ電荷変更脂質またはケージ電荷変更ポリマーを含んでなる請求項１記載の方法。
【請求項９４】
ＰＦＣがＮＡＣの不存在下に水性媒体中で離液凝縮相を形成する請求項１記載の方法。