【手続補正書】
【提出日】平成18年6月7日(2006.6.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１、１０４−１０５、および１０８−１０９からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む単離された短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド。
【請求項２】
配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む請求項１記載の短い干渉ＲＮＡポリヌクレオチドおよびその相補的ポリヌクレオチド。
【請求項３】
Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるようなアミノ酸配列を含んでなるＰＴＰ１Ｂポリペプチドの発現を干渉することができる請求項１または請求項２のいずれかの項に記載の短い干渉ＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項４】
前記ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置、または１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における１、２、３または４個のヌクレオチドが異なる請求項１または請求項２のいずれかの項に記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項５】
前記ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置、または１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における少なくとも２、３または４個のヌクレオチドが異なる請求項１または請求項２のいずれかの項に記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項６】
配列番号８３によるヌクレオチド配列を含む単離されたｓｉＲＮＡポリヌクレオチドまたはその相補体。
【請求項７】
配列番号８８によるヌクレオチド配列を含む単離されたｓｉＲＮＡポリヌクレオチドまたはその相補体。
【請求項８】
配列番号９３によるヌクレオチド配列を含む単離されたｓｉＲＮＡポリヌクレオチドまたはその相補体。
【請求項９】
配列番号９８によるヌクレオチド配列を含む単離されたｓｉＲＮＡポリヌクレオチドまたはその相補体。
【請求項１０】
配列番号１０４または１０５によるヌクレオチド配列を含む単離されたｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１１】
配列番号１０８または１０９によるヌクレオチド配列を含む単離されたｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１２】
ポリヌクレオチドが天然に発生するヌクレオチドの少なくとも１つの合成ヌクレオチドアナログを含む請求項１または請求項２に記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１３】
ポリヌクレオチドが検出可能標識に結合される請求項１または請求項２に記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１４】
前記検出可能標識がレポーター分子である請求項１３記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１５】
前記レポーター分子が、色素、放射性核種、発光基、蛍光基およびビオチンからなる群から選択される請求項１４記載のｓｉＲＮＡ。
【請求項１６】
前記蛍光基がフルオレセインイソチオシアネートである請求項１５記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１７】
前記検出可能標識が磁気粒子である、請求項１３記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチド。
【請求項１８】
請求項１または請求項２のいずれかの項に記載のｓｉＲＮＡポリヌクレオチドおよび生理学的に容認される担体を含む薬学的組成物。
【請求項１９】
前記担体がリポソームを含む、請求項１８記載の薬学的組成物。
【請求項２０】
短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を転写させることができるポリヌクレオチドを含む組換え核酸構築物であって、該ポリヌクレオチドは
（ｉ）第一のプロモータ；（ｉｉ）第二のプロモータ；および（ｉｉｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのＤＮＡポリヌクレオチドセグメントまたはその相補体を含み、各ＤＮＡポリヌクレオチドセグメントおよびその相補体は第一および第二プロモータの少なくとも１つに作動可能に結合し、前記プロモータ類はＤＮＡポリヌクレオチドセグメントおよびその逆相補体を転写させるように方向づける
組換え核酸構築物。
【請求項２１】
短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を転写させることができるポリヌクレオチドを含む組換え核酸構築物であって、該ポリヌクレオチドは、配列番号１０２、１０３、１０６および１０７からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのＤＮＡポリヌクレオチドセグメントに作動可能に結合するプロモータを含む
組換え核酸構築物。
【請求項２２】
前記第一プロモータに作動可能に結合する第一エンハンサーおよび前記第二プロモータに作動可能に結合する第二エンハンサーから選択される少なくとも１つのエンハンサーを含む請求項２０または請求項２１のいずれかの項に記載の組換え核酸構築物。
【請求項２３】
（ｉ）構築物中に位置し、前記第一プロモータによる転写を停止させる第一転写ターミネータおよび（ｉｉ）構築物中に位置し、前記第二プロモータによる転写を停止させる第二転写ターミネータから選択される少なくとも１つの転写ターミネータを含む請求項２０に記載の組換え核酸構築物。
【請求項２４】
前記ｓｉＲＮＡがＰＴＰ１Ｂポリペプチドの発現を干渉することができ、該ＰＴＰ１ＢポリペプチドがＧｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるアミノ酸配列を含む請求項２０または請求項２１のいずれかの項に記載の組換え核酸構築物。
【請求項２５】
短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を転写させることができるポリヌクレオチドを含む組換え核酸構築物であって、該ポリヌクレオチドは少なくとも１つのプロモータとＤＮＡポリヌクレオチドセグメントとを含み、該ＤＮＡポリヌクレオチドセグメントは該プロモータに作動可能に結合し、該ＤＮＡポリヌクレオチドセグメントは（ｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含む少なくとも１つのＤＮＡポリヌクレオチドまたはその相補体；（ｉｉ）（ｉ）のＤＮＡポリヌクレオチドに作動可能に結合する少なくとも４つのヌクレオチドを含むスペーサ配列；および（ｉｉｉ）該スペーサ配列に作動可能に結合する（ｉ）のＤＮＡポリヌクレオチドの逆相補体を含む、組換え核酸構築物。
【請求項２６】
前記ｓｉＲＮＡが少なくとも１個かつ４個以下のヌクレオチドのオーバーハングを含み、前記オーバーハングは（ｉｉｉ）の３’直前に位置する請求項２５記載の組換え核酸構築物。
【請求項２７】
前記スペーサ配列が少なくとも９個のヌクレオチドを含む請求項２５記載の組換え核酸構築物。
【請求項２８】
前記スペーサ配列が（ｉｉｉ）と隣接する２個のウリジンヌクレオチドを含む請求項２５記載の組換え核酸構築物。
【請求項２９】
前記ＤＮＡポリヌクレオチドセグメントに作動可能に結合する少なくとも１個の転写ターミネータを含む請求項２５記載の組換え核酸構築物。
【請求項３０】
請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の組換え核酸構築物で形質転換された、またはトランスフェクトされた宿主細胞。
【請求項３１】
ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドおよび生理学的に容認される担体を含む薬学的組成物であって、該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドが
（ｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１、１０４−１０５、および１０８−１０９からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチドおよびその相補的ポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）前記ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における１、２、または３個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド、ならびに
（ｉｖ）前記ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における２、３または４個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド
からなる群から選択される
薬学的組成物。
【請求項３２】
前記担体がリポソームを含む請求項３１記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを含むＰＴＰ１Ｂポリペプチドまたはその変異体の発現を干渉するための組成物であって、
（ａ）該ＰＴＰ１ＢポリペプチドはＧｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、ＮＭ＿０１１２０１、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドは
（ｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１、１０４−１０５および１０８−１０９からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、およびその相補的ポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における１、２、または３つのヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド、ならびに
（ｉｖ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における２、３または４つのヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド
からなる群から選択される
組成物。
【請求項３４】
Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるアミノ酸配列を含むＰＴＰ１Ｂポリペプチドまたは前記ＰＴＰ１Ｂポリペプチドの変異体の発現を干渉する組成物であって、請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の組換え核酸構築物を含む組成物。
【請求項３５】
ＰＴＰ１Ｂシグナル導入経路の成分を確認する方法であって：
Ａ．ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドと、ＰＴＰ１Ｂポリペプチドまたは前記ＰＴＰ１Ｂポリペプチドの変異体を発現することができる少なくとも１つの細胞を含む第一の生物学的サンプルとを、該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドが存在しない場合のＰＴＰ１Ｂ発現のために十分な条件下で、十分な時間接触させ、
（１）該ＰＴＰ１ＢポリペプチドはＧｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるアミノ酸配列を含み、
（２）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドは
（ｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１、１０４−１０５および１０８−１０９からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、およびその相補的ポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における１、２、または３個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド、ならびに
（ｉｖ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における２、３または４個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド
からなる群から選択され；そして
Ｂ．前記細胞においてリン酸化され得る少なくとも１種類のタンパク質のリン酸化レベルを該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドと接触しなかった対照サンプル中の該タンパク質のリン酸化レベルと比較する
ことを含み、
該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドが存在しない場合のタンパク質のリン酸化レベルに比較して該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドの存在下におけるタンパク質の変化したリン酸化レベルは、該タンパク質がＰＴＰ１Ｂシグナル導入経路の成分であることを示唆する
方法。
【請求項３６】
前記シグナル導入経路がＪａｋ２キナーゼを含む請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを含む細胞内のインスリンレセプタータンパク質リン酸化状態を調整する組成物であって、
（ａ）ＰＴＰ１ＢポリペプチドがＧｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、ＮＭ＿０１１２０１、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるアミノ酸配列を含み、そして
（ｂ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドは
（ｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１またはそれらの相補体ならびに配列番号１０４、１０５、１０８および１０９からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、およびその相補的ポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における１、２、または３個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｖ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における２、３または４個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド
からなる群から選択される、
組成物。
【請求項３８】
ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドを含む細胞内のＪａｋ２タンパク質リン酸化状態を変える組成物であって、
（ａ）ＰＴＰ１ＢポリペプチドはＧｅｎｂａｎｋ登録番号Ｍ３１７２４、ＮＭ＿００２８２７、ＮＭ＿０１１２０１、およびＭ３３６８９からなる群から選択される配列に示されるアミノ酸配列を含み、
（ｂ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドは、
（ｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、および９８−１０１またはそれらの相補体、ならびに配列番号１０４、１０５、１０８および１０９からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｉ）配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６、および９８−１０１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチド、ならびにその相補的ポリヌクレオチド、
（ｉｉｉ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における１、２、または３個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド、
（ｉｖ）該ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列番号８３−８６、８８−９１、９３−９６および９８−１０１に示される諸配列からなる群から選択される配列の位置１−１９のいずれかの位置における、または配列番号１０４、１０５、１０８および１０９に示される諸配列からなる群から選択される配列の任意の位置における２、３または４個のヌクレオチドが異なる、（ｉ）または（ｉｉ）によるＲＮＡポリヌクレオチド
からなる群から選択され；そして
（ｃ）該Ｊａｋ２タンパク質が、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号ＮＭ＿００４９７２またはＧｅｎｂａｎｋ登録番号ＡＦ０５８９２５に示されるアミノ酸配列から選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはその変異体を含む
組成物。
【請求項３９】
被験体に投与するために適切な請求項３１に記載の薬学的組成物を含むＪａｋ２関連性疾患を治療する組成物であって、前記ｓｉＲＮＡポリヌクレオチドがＰＴＰ１Ｂポリペプチドまたはその変異体の発現を抑制する組成物。
【請求項４０】
前記Ｊａｋ２関連性疾患が糖尿病、肥満、高血糖性アポトーシス、炎症、および神経変性疾患からなる群から選択される請求項３９記載の組成物。
【請求項４１】
配列番号１８−２１、３３−３６、４３−４６、５３−５６および５８−６１からなる群から選択される少なくとも１つのヌクレオチド配列を含むＲＮＡポリヌクレオチドを含む単離された短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）ポリヌクレオチド。