【手続補正書】
【提出日】平成18年6月19日(2006.6.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
白血球が富化された細胞集団を調製するための、平行流濾過デバイスであって、以下：
クロスフローチャンバ、濾液チャンバおよびこれらの間に配置されたフィルタを有する除去器ユニットを備え、該フィルタは、該クロスフローチャンバおよび該濾液チャンバと流体連通しており；
該クロスフローチャンバは、入口および出口を有し、該入口は、白血球を含有する血液構成成分のサンプルを、該クロスフローチャンバに導入するように、かつ該フィルタの表面に対して平行に配置され；そして該出口は、該クロスフローチャンバの、該フィルタ表面に対向する部分で中心に配置され；
該フィルタは、約１〜約１０ミクロンの範囲の平均孔サイズを有し；その結果、該サンプルの、該フィルタを横切る流れが、該血液構成成分のサンプルの白血球を富化する、デバイス。
【請求項２】
さらに、以下：
予め決定された投入速度の前記サンプルを、前記クロスフローチャンバの前記入口に提供するための手段；
該フィルタを通って前記濾液チャンバ内への、濾液の濾過速度を制御するための手段、
を備え；そして
該濾過速度を制御する手段が、該濾過速度を、該フィルタについての対向しない濾過速度より低く制限する、請求項１に記載のデバイス。
【請求項３】
さらに、以下：
入口および出口を備える回収ユニットを備え、前記クロスフローチャンバおよび該回収ユニットが、ループの形態で相互接続されており、該クロスフローチャンバの入口は、該回収ユニットの出口と流体連通しており、そして該クロスフローチャンバの出口は、該回収ユニットの入口と流体連通している、請求項１または請求項２に記載のデバイス。
【請求項４】
前記回収ユニットが、サンプル入口および洗浄液入口をさらに備える、請求項３に記載のデバイス。
【請求項５】
前記洗浄液入口と流体連通した置換液体の源をさらに備える、請求項４に記載のデバイス。
【請求項６】
前記置換液体が、等張性緩衝液または組織培養培地である、請求項５に記載のデバイス。
【請求項７】
前記クロスフローチャンバが、円筒形であり、そして前記出口が、前記フィルタの中心に対向し、そして前記フィルタの表面に対して垂直に位置する、請求項１〜６のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項８】
前記除去器ユニットと流体連通した細胞処理装置をさらに備える、請求項１〜７のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項９】
前記細胞処理装置が、ビーズを備える、請求項８に記載のデバイス。
【請求項１０】
前記細胞処理装置が、白血球が富化された前記細胞集団を培養するための手段を備える、請求項８又は９に記載のデバイス。
【請求項１１】
前記培養するための手段が、以下：
第一のポートおよび第二のポートを有する容器；
単球樹状細胞前駆体接着基材であって、該第一のポートおよび該第二のポートと流体連通している、基材；
該基材を該容器内に保持するためのスクリーンであって、単球樹状細胞前駆体および樹状細胞の通過を可能にする孔サイズを有する、スクリーン；
該第一のポートと流体連通する排液ライン；ならびに
該第一のポートと流体連通する収集ライン、
を備える、請求項１０に記載のデバイス。
【請求項１２】
前記第一のポートまたは前記第二のポートと流体連通する、複数の流体源をさらに備える、請求項１１に記載のデバイス。
【請求項１３】
前記単球樹状細胞前駆体を無菌状態で受け取るように適合された、密封可能な組織培養容器をさらに備える、請求項１１又は１２に記載のデバイス。
【請求項１４】
前記密封可能な組織培養容器が、組織培養バッグ、フラスコまたはバイオリアクターである、請求項１３に記載のデバイス。
【請求項１５】
前記流体源が、結合媒体、洗浄緩衝液、および溶出緩衝液を含む、請求項１２〜１４のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１６】
前記複数の流体源および前記第一のポートと流体連通するポンプをさらに備える、請求項１２〜１５のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１７】
前記基材を予め決定された温度に維持するための温度制御手段をさらに備える、請求項１〜１６のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項１８】
前記温度制御手段が、ヒータである、請求項１７に記載のデバイス。
【請求項１９】
前記フィルタの孔サイズが約３ミクロン〜約７ミクロン、又は約３〜約５．５ミクロンである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項２０】
前記クロスフローチャンバの入口と流体連通している血液構成成分の供給源を更に備えている、請求項１〜１９のいずれか１項に記載のデバイス。
【請求項２１】
血液構成成分の供給源が白血球搬出(leukopheresis)デバイスである、請求項２０に記載のデバイス。
【請求項２２】
血液構成成分のサンプルの白血球を富化するための、平行流デバイスであって、以下：
フィルタ（５）によって分離されたクロスフローチャンバ（３）および濾液チャンバ（４）を備える、除去器ユニットであって、該クロスフローチャンバ（３）は、入口（６）および出口（７）を有し、該出口は、該チャンバの上部に中心に配置され、そして該入口は、該フィルタの上方に配置され、そして流体を、該クロスフローチャンバに、該フィルタに対して実質的に平行に導入する、除去器ユニット；
該クロスフローチャンバの入口を通る、該サンプルの予め決定された投入速度（１４）を提供するための手段；ならびに
該フィルタを通る濾過速度（１５）を減少させるための手段、
を備え；
該フィルタが、約３ミクロン〜約７ミクロンの孔サイズを有し；そして
これによって、該サンプルが、該クロスフローチャンバ内の濃縮物中の白血球を富化される、デバイス。
【請求項２３】
予め決定された濾過速度が、予め決定された投入速度の約５分の１〜約１００分の１であり、
サンプル中の血液細胞の予め決定された濃度を提供するための手段を更に備え、予め決定された濃度が、１ミリリットルあたり約１０７個〜約１０１０個の細胞である、請求項２２に記載のデバイス。
【請求項２４】
被験体由来の血液構成成分のサンプルから白血球を分離するための方法であって、該サンプルは、白血球を含有し、以下：
（１）該サンプルを、除去器ユニットの入口を介して該除去器ユニットに導入する工程；
（２）該サンプルを、約１〜約１０ミクロンの孔サイズを有するフィルタに対して実質的に平行なクロスフローに供する工程；
（３）該流体を、該フィルタを通す濾過に供する工程；および
（４）非白血球血液構成成分を該サンプルから選択的に除去して、白血球が富化された細胞集団を形成する工程、
を包含する、方法。
【請求項２５】
前記除去器ユニットへの導入のために、前記サンプルを、前記被験体から、白血球搬出法、密度遠心分離、鑑別溶解、濾過、またはバフィコートの調製によって調製する工程をさらに包含する、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記非白血球血液構成成分が、血漿、血小板、赤血球及び／又は単球を含有する、請求項２４又は２５に記載の方法。
【請求項２７】
工程（１）、（２）および（３）を少なくとも２回繰り返して、白血球が富化された細胞集団を形成する工程をさらに包含する、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記富化された細胞集団が、少なくとも約２０％、又は少なくとも約６０％の白血球を含有する、請求項２４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
前記クロスフローチャンバ内で、前記サンプルの渦運動を誘導する工程をさらに包含する、請求項２４〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記白血球が富化された細胞集団を、洗浄溶液で洗浄する工程をさらに包含する、請求項２４〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記白血球が富化された細胞集団から、単球樹状細胞を調製する工程をさらに包含する、請求項２４〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記単球樹状細胞前駆体の単離が、以下：
単球樹状細胞前駆体接着基材を、前記白血球が富化された細胞集団と接触させる工程；
該細胞集団中の単球樹状細胞前駆体を、該基材への可逆的に接着させ、単球樹状細胞前駆体および基材を含む複合体を形成する工程；
該複合体を、接着していない白血球から分離して、単球樹状細胞前駆体を含む複合体を得る工程；ならびに
該単球樹状細胞前駆体を培養して、該前駆体を分化させ、未熟樹状細胞または成熟樹状細胞を形成する工程、
を包含する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記単球樹状細胞前駆体が、培養の前に、前記基材から溶出されるか、又は前記基材上で培養される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記基材が、ガラス、ポリスチレン、プラスチック、またはガラスをコーティングされたポリスチレンマイクロビーズを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
血液構成成分のサンプルの白血球を富化するための方法であって、以下：
（１）該サンプルを、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の平行流濾過（ＴＦＦ）デバイスに導入する工程；
（２）該サンプルを、予め決定された投入速度および予め決定された濾過速度で、該ＴＦＦユニットを通して再循環させる工程であって、該予め決定された投入速度が、該予め決定された濾過速度の少なくとも５倍であり、該予め決定された濾過速度が、該フィルタについての対向しない濾過速度より低い、工程；ならびに
（３）白血球が富化された細胞集団を単離する工程、
を包含する、方法。
【請求項３６】
前記富化された細胞集団が、非白血球血液構成成分を実質的に含まない、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
血液を被験体から収集し、そして前記サンプルを、該血液から、白血球搬出、密度遠心分離、鑑別溶解、濾過、またはバフィコートの調製によって調製する工程をさらに包含する、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記非白血球血液構成成分が、血漿、血小板、赤血球及び／又は単球を含有する、請求項３５〜３７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３９】
前記富化された細胞集団が、少なくとも約２０％、又は少なくとも約６０％の白血球を含有する、請求項３５〜３８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４０】
前記クロスフローチャンバ内で、前記サンプルの渦運動を誘導する工程をさらに包含する、請求項３５〜３９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４１】
前記白血球が富化された細胞集団を、洗浄溶液で洗浄する工程をさらに包含する、請求項３５〜４０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４２】
前記白血球が富化された細胞集団から、単球樹状細胞を調製する工程をさらに包含する、請求項３５〜４１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４３】
前記樹状細胞が、以下：
単球樹状細胞前駆体接着基材を、前記富化された細胞集団と接触させる工程；
該富化された細胞集団中の単球樹状細胞集団を、該基材に可逆的に接着させて、単球樹状細胞前駆体および基材を含む複合体を形成する工程；
該複合体を、接着していない白血球から分離して、単球樹状細胞前駆体を含む複合体を得る工程；ならびに
該単球樹状細胞前駆体を培養して、該前駆体を分化させ、未熟樹状細胞または成熟樹状細胞を形成する工程、
によって調製される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記基材が、ガラス、ポリスチレン、プラスチック、またはガラスをコーティングされたポリスチレンマイクロビーズを含む、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記未熟樹状細胞または成熟樹状細胞を単離する工程をさらに包含する、請求項４３又は４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記単球が、樹状細胞への単球の分化を促進するサイトカインと共に培養される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４７】
前記サイトカインが、ＧＭ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記樹状細胞が、成熟樹状細胞まで成熟される、請求項４６又は４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記樹状細胞が、抗原と共に、該抗原のプロセシングを誘導する条件下で培養されて、抗原を取り込んだ樹状細胞を形成する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
前記フィルタが、約３〜約５．５ミクロンの孔サイズを有する、請求項３５〜４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記白血球が、ＣＤ３４＋細胞を含む、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記血液構成成分のサンプルが、少なくとも１つの幹細胞動員剤で処理されたドナー由来である、請求項５０又は５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記幹細胞動員剤が、Ｇ−ＣＳＦまたはシクロホスファミドである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記白血球のＣＤ３４＋細胞を富化する工程をさらに包含する、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５５】
前記白血球のＣＤ３４＋細胞の富化が、磁気ビーズに結合した抗ＣＤ３４抗体の使用を包含する、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
前記ＣＤ３４＋細胞をエキソビボで増殖させる工程をさらに包含する、請求項５０〜５５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５７】
単球由来の多能性幹細胞を、前記白血球が富化された細胞集団から調製する工程をさらに包含する、請求項５０〜５３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５８】
先祖細胞または幹細胞の分化を誘導する工程をさらに包含する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
分化された細胞の分化形質転換を誘導する工程をさらに包含する、請求項５０に記載の方法。