【手続補正書】
【提出日】平成18年11月2日(2006.11.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
他の態様において、本発明は、Ａβ分泌が関連する病理学的状態を処置、予防または軽減する方法であり、それを必要とする対象に、有効量の表１に記載のものからなる群から選択される何れか一つまたはそれ以上のタンパク質の一つまたはそれ以上のモジュレーターを投与することを含み、該モジュレーターが、例えば、該対象における該タンパク質の活性を阻害するかまたは該タンパク質の遺伝子の発現を阻害する、方法に関する。さらなる実施態様において、モジュレーターは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、三重らせんＤＮＡ、リボザイム、ＲＮＡアプタマー、ｓｉＲＮＡおよび二本鎖または一本鎖ＲＮＡからなる群から選択される何れか一つまたはそれ以上の物質を含み、該物質が、表１に記載のものからなる群から選択される何れか一つまたはそれ以上のタンパク質の遺伝子発現を阻害することが意図されている。さらなる実施態様において、モジュレーターは、表１に記載のものからなる群から選択される何れか一つまたはそれ以上のタンパク質に対する抗体、またはそのフラグメントを含み、該抗体が、例えば、酵素活性または他のタンパク質活性を阻害できる。本明細書では、一つまたはそれ以上の該タンパク質の一つまたはそれ以上のモジュレーターが投与可能であることを意図する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１３】
さらに別の態様において、Ａβ分泌が関連する病理学的状態を処置し、予防し、または軽減する方法であり：(ａ)対象を、表１に記載のものからなる群から選択されるタンパク質のｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルについてアッセイし；そして(ｂ)ｍＲＮＡおよび／またはタンパク質レベルがコントロールと比較して上昇した対象に、何れか一つまたはそれ以上の該タンパク質のモジュレーターを、該病理学的状態を処置または軽減するのに十分な量で投与することを含む、方法を提供する。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２１】
本明細書で使用する“アンチセンス”は、特異的ＤＮＡまたはＲＮＡ配列に相補的なヌクレオチド配列を意味する。用語“アンチセンス鎖”は、“センス”鎖に相補的な核酸鎖に対して使用する。アンチセンス分子は、相補鎖の合成を可能にするウイルスプロモーターに、逆配向で目的の遺伝子をライゲーションにより合成することを含む、任意の方法で製造し得る。細胞内に挿入されたら、この転写鎖と細胞により産生された天然配列を組み合わせて、二本鎖を形成する。次いでこれらの二本鎖のさらなる転写または翻訳をブロックする。 “ネガティブ”という表示は、時に、アンチセンス鎖に対して使用し、そして“ポジティブ”は、時に、センス鎖に対して使用する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２９】
このように、一つの態様において本発明は、アルツハイマー病を含むが、これに限定されない、Ａβ分泌が関連する病理学的状態を処置し、予防し、または軽減するのに有用なモジュレーターの同定法であり：ａ)候補モジュレーターが、表１に記載のものからなる群から選択される何れか一つまたはそれ以上のタンパク質の活性を阻害するおよび／または該タンパク質の何れか一つまたはそれ以上をコードする遺伝子の発現をインビトロまたはインビボで阻害する候補モジュレーターの能力をアッセイすることを含み、さらに、ｂ)同定した阻害性モジュレーターが、該状態の動物モデルにおいておよび／または該状態の何れか一つまたはそれ以上の対象での臨床試験において観察される病理学的影響を改善する特異的阻害性モジュレーターの能力をアッセイすることを含み得る、方法に関する。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００４８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００４８】
検出の容易さのために特に好ましいのはサンドイッチアッセイであり、それには多くの変法が存在し、その全てを本発明に包含することを意図する。例えば、典型的な前向きアッセイにおいて、非標識抗体を固体支持体上に固定化し、試験すべきサンプルをその結合分子と接触させる。抗体−抗原二元複合体の形成を可能にするのに十分な時間である、適当なインキュベーション時間の後、検出可能なシグナルを誘発できるレポーター分子で標識した第２の抗体を添加し、抗体−抗原−標識抗体の三元複合体の形成を可能にするのに十分な時間インキュベートする。全ての未反応物質を洗い流し、抗原の存在をシグナルの観察により測定するか、既知の量の抗原を含むコントロールサンプルとの比較により定量し得る。前向きアッセイの変法は、サンプルと抗体の両方を同時に結合抗体に添加する、同時アッセイを含み、または、標識抗体と検出するサンプルを最初に結合させ、インキュベートし、非標識表面結合抗体に添加する、逆向きアッセイを含む。これらの技術は当業者に既知であり、わずかな改変の可能性は容易に明らかとなるであろう。本明細書で使用する“サンドイッチアッセイ”は、基本的な二面技術における全ての改変を含むことを意図する。本発明の免疫アッセイに関して、唯一の限定因子は、標識抗体が、修飾因子ポリペプチドまたはそのフラグメントに特異的な抗体であることである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５３】
酵素的ＲＮＡ分子であるリボザイムを使用し、ＲＮＡの特異的開裂を触媒することにより、遺伝子発現を阻害することがまた可能である。リボザイム作用の機構は、リボザイム分子の相補的標的ＲＮＡへの配列−特異的ハイブリダイゼーション、続くヌクレオチド鎖切断的開裂を含む。使用し得る例は、遺伝子配列のヌクレオチド鎖切断的開裂を特異的にかつ効率的に触媒することを意図し得る、加工された“ハンマーヘッド”または“ヘアピン”モチーフリボザイム分子である。何れか可能性のあるＲＮＡ標的中の特異的リボザイム開裂部位を、最初に、標的分子を以下の配列を含むリボザイム開裂部位に関して走査することにより同定する：ＧＵＡ、ＧＵＵおよびＧＵＣ。同定されたら、開裂部位を含む標的遺伝子の領域に対応する、１５から２０リボヌクレオチドの間の短ＲＮＡ配列を、オリゴヌクレオチドを操作不可能にする可能性がある二次構造の特徴に関して評価し得る。候補標的の適合性は、また、リボヌクレアーゼ保護アッセイを使用した、相補的オリゴヌクレオチドでのハイブリダイゼーションの到達性の試験により評価し得る。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５５】
リボザイムは、リボザイム配列内に挿入されＲＮＡオリゴヌクレオチドの形で細胞に直接送達されるか、または、所望のリボザイム分をコードする発現ベクターとして細胞内に挿入される。リボザイムは、ｍＲＮＡを開裂するのに触媒的に有効であり、それにより、細胞中のｍＲＮＡ存在量を修飾する、十分な数インビボで慣用的に発現できる(Cotten et al., 1989 EMBO J. 8: 3861-3866)。特に、慣用の、既知の規則にしたがい設計され、例えば、標準ホスホラミダイト化学により合成された、リボザイムをコードするＤＮＡ配列を、ｔＲＮＡをコードする遺伝子のアンチコドン幹およびループにおける制限酵素部位にライゲートでき、それを次いで当分野で慣用の方法により目的の細胞内に形質転換し、発現できる。好ましくは、誘導性プロモーター(例えば、グルココルチコイドまたはテトラサイクリン反応エレメント)もこの構築物に挿入し、リボザイム発現を選択的に制御できるようにする。飽和使用のために、高度にかつ構造的に活性のプロモーターを使用できる。ｔＤＮＡ遺伝子(すなわち、ｔＲＮＡをコードする遺伝子)が、その小さいサイズ、高い割合の転写および異なる種類の組織中の遍在的発現のために、この適用で有用である。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６０】
本発明のアンチセンス分子、三重らせんＤＮＡ、ＲＮＡアプタマー、ｄｓＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ、ｓｉＲＮＡおよびリボザイムは、核酸分子の合成に関する当分野で既知の何れかの方法により製造し得る。これらの方法は、固相ホスホラミダイト化学合成のような、オリゴヌクレオチドの化学合成の技術を含む。あるいは、ＲＮＡ分子を、本明細書に記載のポリペプチドの遺伝子をコードするＤＮＡ配列のインビトロおよびインビボ転写により産生し得る。このようなＤＮＡ配列を、Ｔ７またはＳＰ６のような適当なＲＮＡポリメラーゼプロモーターにより、広範囲のベクターに挿入し得る。あるいは、アンチセンスＲＮＡを構造的にまたは誘導性に合成するｃＤＮＡ構築物を、細胞系、細胞、または組織に挿入できる。
【手続補正９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
加えて、本明細書で同定した修飾因子のｃＤＮＡおよび／またはタンパク質を、これらの修飾因子により組織においてインビボで修飾される他のタンパク質、例えばレセプターの同定に使用できる。このようにして同定したタンパク質を、Ａβ分泌が関連する病理学的状態を処置するための薬剤スクリーニングに使用できる。修飾因子の下流のものを含むこれらの遺伝子を同定するために、例えば、該病理学的状態の一つまたはそれ以上の慣用のインビボモデルの動物を、修飾因子の特異的阻害剤で処置し、動物を殺し、組織サンプルを摘出し、組織から総ＲＮＡを単離し、かつ、コントロール動物(阻害剤を投与されていない動物)と比較して変化しているメッセージレベルを同定するための標準マイクロアレイアッセイ技術を用いる、慣用法を使用することを意図する。
【手続補正１０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６３】
慣用のインビトロまたはインビボアッセイを、本明細書で同定した修飾因子の過剰発現をもたらす可能性のある遺伝子の同定に使用し得る。このようにして同定された遺伝子を使用して、Ａβ分泌が関連する病理学的状態の処置のための強力な治療剤かもしれない薬剤をスクリーニングするために使用できる。例えば、慣用のレポーター遺伝子アッセイを使用し、その中で、修飾因子遺伝子のプロモーター領域を、レポーター遺伝子の上流に配置し、構築物を適当な細胞(例えば、ＨｅＬａ、ＣＨＯまたはＨＥＫ２９３のような腫瘍細胞系またはヒト２倍体線維芽細胞、内皮または軟骨細胞のような一次細胞)にトランスフェクトし、細胞を、慣用の技術を使用して、レポーター遺伝子の発現の検出により、修飾因子プロモーターの活性化をもたらす上流遺伝子に関してアッセイする。
【手続補正１１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
Ａβ分泌が関連する病理学的状態の処置、予防および／または軽減に有用な、本明細書に記載の医薬組成物は患者に治療的有効量で投与すべきである。治療的有効量は、該状態の何れか一つまたはそれ以上の処置、予防、または軽減をするのに十分な化合物の量を意味し、医師またはこの分野の通常の技術を有する他の者により決定できる。
【手続補正１２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６８】
経口投与のために、医薬組成物は、例えば、結合剤(例えば、ゼラチン化前のメイズ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース)；充填剤(例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム)；滑剤(例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ)；崩壊剤(例えば、ジャガイモ澱粉またはグリコール酸ナトリウム澱粉)；または湿潤剤(例えば、ラウリル硫酸ナトリウム)のような薬学的に許容される賦形剤と共に慣用の手段で製造される、錠剤またはカプセルの形をとり得る。錠剤は、当分野で既知の方法によりコーティングし得る。経口投与のための液体製剤は、例えば、溶液、シロップまたは懸濁液の形をとり得、または、使用前に水または他の適当な媒体で構築するための乾燥製品として存在し得る。このような液体製剤は、懸濁剤(例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化可食脂肪)；乳化剤(例えば、レシチンまたはアカシア)；非水性媒体(例えば、アーモンド油、油性エステル、エチルアルコールまたは分画植物油)；および防腐剤(例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸)のような薬学的に許容される添加剤と共に、慣用の手段で製剤し得る。製剤はまた緩衝塩、香味剤、着色剤および甘味剤を、適当な場合、含み得る。
【手続補正１３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
化合物はまた、例えば、カカオ脂または他のグリセリドのような慣用の坐薬基剤を含む、坐薬または留置エネマ(retention enemas)のような直腸組成物に製剤し得る。
【手続補正１４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
２２６８遺伝子再配置の構築
２２６８遺伝子再配置を、２０,７２０遺伝子を、アノテーションに基づいて、最良の可能性がある薬剤標的と考えられる遺伝子の小サブセットまで濃縮するために産生する。この機能に基づく再配置は、キーワード“キナーゼ”、“ホスファターゼ”、“プロテアーゼ”、“アポトーシス”、“エイコサノイド代謝”、“スフィンゴ脂質代謝”、“ポリアミン代謝”、“ホスホリパーゼ”または“ケモカイン”と一致する遺伝子アノテーションの同定により作る。これらの検索から、全ての冗長クローンを除去し、得られた遺伝子のセットを、再配置中に残す。
【手続補正１５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８７】
再配置中の他の遺伝子のセットは、いわゆるＣＧＵＦ、または未知機能の(シー・エレガンス、およびキイロショウジョウバエに対する)保存遺伝子である。この遺伝子のリストは、割り当てられた機能を有しない、ハエおよび虫(worms)とオーソロジーな、６１３の予期されたヒト遺伝子のCeleraデータベースに由来する。オーソロジーの定義は、二つの配列が、互いにブラスト検索で最高のヒット(１ｅ−１０のＰ値)である場合である。６１３のCelera遺伝子を、次いで、Blastn(Altschul, SF et al. Nucleic Acids Res. 1997 25: 3389-3402)を使用して、クローンコレクションに対してブラスト検索する。クローンを、LifeSeqGold(Incyte Pharmaceuticals, Palo Alto, CA)と比較し、これは、実験に由来する転写物およびスプライス変異体を代表し得る集合ＥＳＴ配列を含む。元の６１３のうち５２９が、我々の私有のクローンコレクションで発見され、各５２９遺伝子の２から３遺伝子が、完全コード領域を得る機会を増やすための２２６８再配置に集められる。キナーゼを、さらに、ＲＥＦＳｅｑデータベース(NCBI, Bethesda, MD)に対して、コード領域の５'末端が、ＲＥＦＳｅｑエントリーと、５０塩基対にわたり９５％の同一性であるという要求で、キーワード検索によりフィルターをかける。Ｅ２を、ＧｅｎＢａｎｋデータベースに対するクローンのtBlastnを使用してフィルターをかける。＜１ｅ−１０のスコアのヒットを、再配置に加える。この再配置を、一つのではなく６つの３８４ウェルプレートを使用して、ＤＮＡミニプレップを調製するために細菌を増殖させる以外、４７９再配置と同じ形式で調製する。
【手続補正１６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００９８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００９８】
脳の８つの異なる部位(小脳、大脳皮質、髄質、脊髄、後頭極、前頭葉、側頭葉、および被殻)を含む脳特異的標準化多組織ノーザン・ブロット(MTN, Clontech Cat#7755-1, Palo Alto, CA)を、Ｐ３２標識シクロフィリンＦ  ｃＤＮＡでプローブする。全てのインキュベーションおよび洗浄段階は、ＭＴＮ使用説明書にしたがう。ブロットをＸ線フィルム(Amersham Cat# RPN 3114k)に−７０℃で２４、４８および７２時間暴露し、その後発色させる。ブロットを製造者の指示にしたがい切片にして、サランラップ中で−２０℃で貯蔵する。
【手続補正１７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０３
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０３】
慣用法を使用して、ウサギポリクローナル抗血清８１８を、β−セクレターゼであるＢＡＣＥ５０１のペプチド４８４−５０１に対応する合成抗原に対して惹起させる。抗血清８１８を、対応する共有結合ペプチドを有する市販の試薬を使用して精製する(Bodendorf, U., Fischer, F., Bodian, D., Multhaup, G., Paganetti, P. 2001 J. Biol. Chem. 276: 12019 12023)。全ての抗血清は、ＢＡＣＥ５０１に対して等しく十分に反応する。モノクローナル抗体β１を以前に記載のように惹起し(Fischer, F., Paganetti, P. Brain Res. 1996. 716: 91-100.))、そしてＡβのＮ−末端(残基１−１６)と反応させる。マウスモノクローナル抗体６Ｅ１０をSignet, Dedham, MAから得、Ａβのアミノ末端における１から１６残基の間に位置するエピトープと反応させる。ＡＰＰＣ８抗体を、ＡＰＰのＣ−末端(アミノ酸６７６−６９５)に対して惹起し、それはＡＰＰおよびそのＣ−末端フラグメントの全てを認識する(Fischer, F., Paganetti, P. Brain Res. 1996. 716: 91-100.)。野生型ｓＡＰＰβ(抗血清８７９)のカルボキシ−末端に特異的なネオペプチド・ウサギ抗血清を、合成ペプチド(Ｃｙｓ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ)に対して惹起する(Bodendord, U., et al. 2002. J Neurochem. 80(5): 799-806)。
【手続補正１８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０４】
細胞抽出法およびウェスタン・ブロット分析
培養したＨＥＫ２９３細胞を、トランスフェクション後２４時間または４８時間に、プロテアーゼ阻害剤(Complete(登録商標)Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN)を含むＲＩＰＡ緩衝液(１０mM  Tris、ｐＨ  ７.５、１５０mM  塩化ナトリウム、１mM  ＥＤＴＡ、１％Nonidet P-40、０.５％ナトリウム−デオキシコレート、１％ＳＤＳ)中、抽出し、４℃で１０分、１０,０００×ｇで遠心する。上清を回収し、ペレットを廃棄する。続いて、細胞抽出物をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離し、ＰＶＤＦ  Ｉｍｍｏｂｉｌｏｎ−Ｐ(登録商標)膜(Millipore, Bedford, MA)に移し、一次抗体でプローブする。上清を１６％Tricineゲル(Invitrogen Novex, Carlsbad, CA)上で分離し、代謝物ｓＡＰＰβおよびｓＡＰＰαを試験する。慣用法を使用して、細胞抽出物をまた１６％Tricineゲル(Invitrogen Novex, Carlsbad, CA)上で分離し、カルボキシ−末端代謝物Ｃ９９、Ｃ８９、Ｃ８３、ＡＰＰ、およびＢＡＣＥを試験する。Ａβを、細胞上清中で、１８％Tris−Tricineゲル(BioRad Criterion, Hercules, CA)上、慣用法にしたがい検出する。膜を５％(ｗ／ｖ)低脂肪乳粉末のリン酸緩衝化生理食塩水、０.０５％Ｔｗｅｅｎ−２０(ＰＢＳＴ)の溶液でブロックし、一晩４℃で一次抗体希釈剤と共にインキュベートする。結合抗体を、ＰＢＳＴで希釈したホースラディッシュ・ペルオキシダーゼに接合したヤギ抗−マウスまたは抗−ウサギＩｇＧ(Chemicon, Temecula, CA)で検出する。免疫学的検出をＥＣＬ検出系(Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ)で、先に記載のように行う(Manni, M., et al., 1998. FEBS. 427: 367-370)。
【手続補正１９】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１０８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１０８】
我々は、染色体１０ｑからの４７９遺伝子セットを、最初にＡＤに対する連鎖解析に基づきスクリーニングした。FUGENE 6(Roche Biochemicals, Indianapolis, IN)トランスフェクション試薬を使用して、対数相ＣＨＯ  Ｋ１細胞を、〜２００ngの各ｃＤＮＡと共に９６ウェルプレートにトランスフェクトする。我々は、すでに２４時間が、ＥＬＩＳＡによるＡβレベルの測定に最適な時点であることを決定していた(データは示していない)。簡単に言うと、ＣＨＯ  Ｋ１細胞を、製造者のプロトコールを使用してトランスフェクトし、Ａβレベルを経時的に上清から測定した；２４時間、４８時間、および７２時間。検出の直線範囲は、２４時間であることが判明した。トランスフェクション２４時間後、我々は細胞から上清を回収し、その媒体を抗体でコートしたＥＬＩＳＡプレートに撒いた。ＢＡＣＥ酵素のトランスフェクションをポジティブコントロールとして使用し、ベクター単独をネガティブコントロールとして使用する。Ａβ４０およびＡβ４２に関するＥＬＩＳＡ読出しを繰り返し、Ａβ４０および４２レベルがＢＡＣＥトランスフェクト細胞よりも各々４倍および２倍高いことが示唆された。我々は、変異状態よりむしろ野生型状態におけるこれらの遺伝子の影響を観察することを望んでいたため、ＡＰＰｓｗｅ変異体よりむしろＡＰＰｗｔを使用した。我々は、ＡβをＡＰＰｗｔにおいて増加させる遺伝子が、家族性疾患症例の小集団でのみ現れるＡＰＰｓｗｅよりもＡＤの遅い発症に病理学的に関連していると予測する。
【手続補正２０】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１１４】
ＭＴＥブロットも、体中ならびにＭＴＮブロットで示されていない脳の領域のどこでシクロフィリンＦが発現されているかを決定するために試験した。７２時間暴露からのデータは、シクロフィリンＦが側頭葉、小脳、被殻および脊髄で発現することを示す(データは示していない)。ＭＴＮブロットで示されていないいくつかの別の組織：中心傍回、橋、脳梁、扁桃、尾状核、海馬、および視床もシクロフィリンＦ  ｍＲＮＡを含むことが判明した。脳ではないが、全ブロットで最高の発現をすると考えられた組織は、甲状腺であった。これらの結果は、シクロフィリンＦが、ＡＤにより影響を受けることが知られている脳の領域：側頭葉、海馬、および扁桃で発現されることを示唆するため、興味をそそる(Citron, M., Diehl, T.S., Capell, A., Haass, C., Teplow, D.B., Selkoe, D. Neuron. 1996. 17: 171-179.)。脳のこれらの領域におけるシクロフィリンＦの過剰発現が、増加したＡβレベルによるＡＤの誘発に何らかの方法で関与している可能性は、十分にある。シクロフィリンＦがこれらの領域で過剰発現されるならば、アミロイドプラーク形成の増加をもたらすＡβ産生が増加することはありそうである。
【手続補正２１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０１２４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０１２４】
ＡＰＰおよびＣＴＦ代謝を変えると思われる数個のヒット：カルボキシペプチダーゼＺ(ＣＰＺ)、プロテアーゼＥ、ＣＰＢＰ、ＴＯＢ３(８Ｉ２１)および未知(１０Ｍ１３)があり、ＡＰＰｗｔとコトランスフェクトした場合、全て総ＡＰＰおよび総ＣＴＦレベルを低下させる。ＴＯＢ３、カルモジュリン２、カルボキシペプチダーゼＺ、シクロフィリンＦ、およびＴＮＦＲアミノペプチダーゼ(８Ｃ８)は、ＡＰＰｓｗｅとコトランスフェクトした場合、ＡＰＰおよびＣＴＦレベルの両方を低下させる。遺伝子ＣＴＲＢ１、ＡＮＧ２およびＴＮＦＲは、ＡＰＰｗｔとコトランスフェクトした場合、ＡＰＰまたはＣＴＦレベルに影響しない。この広範囲の効果にもかかわらず、ＡＰＰおよびＣＴＦレベルのモジュレーションは、これらの遺伝子の過剰発現が、Ａβ分泌を増加させるＡＰＰの開裂に直接影響することを明らかに示す。