【誤訳訂正書】
【提出日】平成17年12月7日(2005.12.7)
【誤訳訂正１】
【訂正対象書類名】特許請求の範囲
【訂正対象項目名】全文
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
感染細胞を高圧均質化し、ポックスウイルス含有ホモジネートを得る段階を含む感染細胞よりポックスウイルスを採取するための方法。
【請求項２】
前記ポックスウイルスが、オルトポックスウイルス、アビポックスウイルス、スイポックスウイルスおよびカプリポックスウイルスからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポックスウイルスが、ワクシニアウイルス、ヤギ痘（ヤギポックス）ウイルス、ヒツジ痘（ヒツジポックス）ウイルス、カナリア痘（カナリアポックス）ウイルスおよび鶏痘（ニワトリポックス）ウイルスからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１〜２のうちいずれかに記載の方法。
【請求項４】
前記ワクシニアウイルスが、Ｅｌｓｔｒｅｅまたは改変（修飾）ワクシニアウイルス株アンカラ（Ａｎｋａｒａ；ＭＶＡ）、特に、ＥＣＡＣＣ寄託番号第Ｖ０００８３００８号のＭＶＡ−ＢＮであることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記ポックスウイルスが、組換え体ポックスウイルスであることを特徴とする、請求項１〜４のうちいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記高圧均質化は、感染細胞を高圧チャンバー内に入れ、チャンバー内の圧力を増加させ、感染細胞をノズルを通して排出することによって実施されることを特徴とする、請求項１〜５のうちいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記チャンバー内の圧力を、２００〜１０００ｂａｒの範囲の値まで増加させることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ノズルが、０．１０〜０．６ｍｍの範囲の直径を有する、請求項６〜７のうちいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記ポックスウイルス含有ホモジネートを、少なくとも１つの精製段階にかけ、ポックスウイルスに富んだ画分を得ることを特徴とする、請求項１〜８のうちいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
少なくとも１つの精製段階の１つが、限外濾過段階であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記限外濾過が、クロス−フロー−濾過であることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記クロス−フロー−濾過段階において、５００ｋＤａより大きく、０．１μｍ以下の孔の大きさを有する膜を使用することを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記限外濾過に続き、少なくとも１つのカラムクロマトグラフィー段階を実施することを特徴とする、請求項１０〜１２のうちいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記ポックスウイルス含有ホモジネートまたはポックスウイルスに富んだ画分を凍結乾燥することを特徴とする、請求項１〜１３のうちいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のうちのいずれかに記載の方法によって得られたポックスウイルスに富んだ画分またはポックスウイルス含有ホモジネート。
【請求項１６】
ワクチンとしての、請求項１５に記載のポックスウイルスに富んだ画分またはポックスウイルス含有ホモジネート。
【請求項１７】
ワクチンの調製のための、請求項１５に記載のポックスウイルスに富んだ画分またはポックスウイルス含有ホモジネートの使用。
【請求項１８】
請求項１５に記載のポックスウイルスに富んだ画分またはポックスウイルス含有ホモジネート、または請求項１６に記載のワクチンを動物体に投与することによって特徴づけられる、接種が必要なヒトを包含する動物にワクチンを接種する方法。
【誤訳訂正２】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００１】
本発明は、ポックスウイルス、特に改変（修飾）ワクシニアウイルスアンカラ（ＭＶＡ）を感染細胞から採取する方法に関する。本発明によって、ポックスウイルス感染細胞を高圧均質化にかけ、ポックスウイルス含有ホモジネートを得る。ポックスウイルスに富んだ画分（a poxvirus-enriched fraction）を得るために、ポックスウイルス含有ホモジネートを少なくとも一回の精製工程にかけて良い。本発明はさらに、本発明による方法で得られる、ポックスウイルス含有画分およびポックスウイルス含有ホモジネートにも関する。
【背景技術】
【誤訳訂正３】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】０００４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【０００４】
鶏痘ウイルスはヒト細胞に感染するため、ヒトにおいて異種（非相同）遺伝子を発現させ、対応する免疫応答を誘導するためのベクターとしても利用できることが仮定される。ゲノム中にＨＩＶ遺伝子を含有する鶏痘ウイルスは、米国特許第５，７３６，３６８号および米国特許第６，０５１，４１０号に開示されている。
【誤訳訂正４】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１１】
本発明による方法によって無傷で感染性のポックスウイルスを採取することは予想していなかった。高圧均質化は、真核細胞および原核細胞からタンパク質または脂質を単離する目的で、細胞性および副細胞性の構造物を破壊するために一般的に利用される。米国特許第３，９８３，００８号に、高圧均質化を用いて微生物から有効成分を抽出する方法が開示されている。そこで抽出された成分は酵母のタンパク質、細菌の酵素、および酵母の脂質であった。第ＤＥ１９９１８６１９号に、酵母細胞からのＨｂｓＡｇの単離するための高圧均質化の利用が開示されている。米国特許第４，２２５，５２１号に、高圧均質化により、微生物細胞からグルコースイソメラーゼを抽出する手順が記載されている。高圧均質化はまた、組換えサッカロマイセス  セルビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）からウイルス様粒子（ＶＬＰ）を単離するため（Ｍｉｌｂｕｒｎ  ａｎｄ  Ｄｕｎｎｉｌｌ（１９９４年）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ４４巻、７３６〜７４４頁）、およびアデノウイルスベクターを生産および精製するため（米国特許第６，１９４，１９１号）にも利用されている。ＶＬＰｓおよびアデノウイルスはエンベロープ（外被）を持たず、より小さく単純なウイルスであり、そのため細胞性タンパク質構造物に似ている。ゆえに、細胞からのタンパク質単離に適すことが示された高圧均質化が、真核細胞からのアデノウイルスおよびＶＬＰｓの単離にも利用されることは驚くことではない。一方、細胞内成熟ポックスウイルスビリオン（ＩＭＶ、以下参照のこと、Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９９６、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＵＳＡ、ＩＳＢＮ  ０−７８１７−０２５３−４、８３章  ２６５４〜２６５５頁を参照のこと）は非常に複雑な組織形態をもち、それにはとりわけ脂質膜があげられる。ポックスウイルスＩＭＶの組織形態および物理的性質は、ある局面においてはエンベロープ（外被）を持たないウイルスの組織形態および物理的性質よりも、細胞の組織形態および物理的性質により綿密に関連する。したがって、高圧均質化による細胞破壊に用いた条件により、ポックスウイルスの破壊も導かれると期待できた。したがって、高圧均質化により、細胞が破壊されるがかなりの量のポックスウイルスが無傷のまま残り、さらに精製可能であったことは意外な結果であった。言い換えれば、高圧均質化を感染細胞からポックスウイルスを採取する方法に利用できることはだれも想定しなかった。実際、公知の感染細胞からポックスウイルスを採取する方法においては、均質化のより一般的な手段である超音波を均質化に用いる。
【誤訳訂正５】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００１７
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００１７】
本発明による均質化段階のための開始物質は、それぞれのポックスウイルスで感染した細胞である。本発明の均質化のための開始物質を定義するために使用した「感染細胞（ｉｎｆｅｃｔｅｄ  ｃｅｌｌ）」は、それぞれのウイルスが感染した無傷の細胞、それぞれのポックスウイルスが接着した感染細胞の部分および断片、または無傷の細胞と溶解／分解細胞の混合物を意味する。感染細胞の部分または断片の例は、それぞれのポックスウイルスが接着した、崩壊／溶解細胞の細胞膜である。開始物質はまた、細胞膜に接着しないか、細胞内に局在しない遊離ウイルス粒子を含みうる。
【誤訳訂正６】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３１
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３１】
均質化工程の結果は、好ましくは上記で定義した開始物質（初期物質）および均質化工程の後に得られた物質のウイルス力価（組織培養物感染用量（ＴＣＩＤ５０）またはプラーク形成ユニット（ｐｆｕ）のどちらかで測定した、感染性ウイルス粒子の数と等量）の測定により確認して良い。言い換えれば、高圧均質化の前後でウイルス力価を測定する。初期物質にはほぼ無傷の細胞が含まれ、細胞膜に付着したポックスウイルス粒子を含む集合体の割合が高い。そのような物質をウイルス力価の測定に用いた場合、得られる力価は実際の感染性粒子の数よりも低い。これは、ウイルス力価の測定に用いる試験系が、通常感染細胞の数またはプラーク数を計測するような細胞培養系（実施例２に開示したような系）であることによる。そのような系では、ただ一つのウイルス粒子による感染を示す陽性の結果と、例えば細胞膜に付着したウイルスの大きな集合体による感染を示す陽性の結果との区別ができない。高圧均質化後、ポックスウイルスが細胞膜から分離するようになり、および／または細胞膜−ウイルス集合体の大きさがかなり減少し、たくさんのより小さな集合体となる。この物質を力価の測定に用いた場合、たとえ実際の感染性ウイルス粒子の数が変わらなくても、得られる結果はより高くなる。  このように、均質化の結果は、好ましくは初期物質と比べて少なくとも等量またはより高いホモジネートのＴＣＩＤ５０／ｍｌ（「ＴＣＩＤ」は「組織培養物感染用量（ｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ｄｏｓｅ）」の略語である）に反映される。実施例項においてＴＣＩＤ５０／ｍｌ値がどのように測定されるかを示す。あるいは、高圧均質化の質および結果は電子顕微鏡により測定することができる。
【誤訳訂正７】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３２
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３２】
さらに精製するために、得られたホモジネートを少なくとも一回の精製工程にかけポックスウイルスに富んだ画分を得る。特に、前述のワクシニアウイルスのさらなる精製を企図している場合、これらの工程はワクシニアウイルス含有ホモジネートに対して行なうことができる。
【誤訳訂正８】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００３９
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００３９】
ＨＰＨ工程を含んだ、本発明による工程で得られるポックスウイルス含有ホモジネートおよび／またはポックスウイルスに富んだ画分は、遊離ＩＭＶポックスウイルスのＥＥＶポックスウイルスに対する比率が非常に高いことで特徴付けられる。「遊離ＩＭＶ（ｆｒｅｅ  ＩＭＶ）」という言葉は、感染細胞の破壊の後、前、または最中に細胞膜から分離され、そのためさらに精製可能なＩＭＶｓに対して用いる。ポックスウイルスの調製に関する全ての工業的工程において、初期物質は感染細胞と同様に培養物の上澄みを含む。したがって、初期物質には感染細胞に含まれるＩＭＶポックスウイルスと同様に、主に上澄みに見られるＥＥＶポックスウイルスも含まれる。細胞を破壊するための、および続く均質化のための公知の方法（例えば超音波を用いた）は、細胞の破壊および／または細胞性有機堆積物からのＩＭＶポックスウイルスの分離に関して、高圧均質化ほど効果的でない。言い換えれば、ほとんどのＩＭＶポックスウイルスが細胞膜および有機堆積物に付着したまま残る。したがって、遊離ＩＭＶのＥＥＶに対する比率は本発明による方法に比べ低い。超音波を用いた方法では、ＩＭＶｓが付着したままの細胞有機堆積物が通常取り除かれるので、さらなる精製工程の段階でもこの比率は変化しない。公知のポックスウイルス採取法と対照的に、本発明による採取法では、感染細胞は非常に効果的に破壊され、ＩＭＶｓは非常に効果的に細胞膜から分離される。したがって、さらに精製することができるような遊離ＩＭＶｓの総量は、従来の方法に比べ高く、その結果として遊離ＩＭＶのＥＥＶに対する比率も高い。
【誤訳訂正９】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００５４
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００５４】
前記ノズルの直径が０．１０〜０．６ｍｍであることを特徴とする上記の方法。
【誤訳訂正１０】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６３
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６３】
上記で定義したように、動物体内への、ポックスウイルス含有ホモジネートまたはポックスウイルスに富んだ画分またはワクチンの投与を特徴とする、ワクチン接種を必要とするヒトを含む動物のワクチン接種のための方法。
【誤訳訂正１１】
【訂正対象書類名】明細書
【訂正対象項目名】００６６
【訂正方法】変更
【訂正の内容】
【００６６】
Ｃｏｎｓｔａｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｌｏｗ  Ｍａｒｃｈ、Ｄａｖｅｎｔｒｙ、Ｎｏｒｔｈａｎｔｓ、ＮＮ１１４ＳＤ、Ｕｎｉｔｅｄ  Ｋｉｎｇｄｏｍ）のＢａｓｉｃ  Ｚ＋ホモジナイザーに、一回の運転ごと５０ｍｌの未精製ウイルス−細胞懸濁液をつめた。最適な均質化条件を確認するために、ノズルの直径を０．１８〜０．４０ｍｍ、圧力を２００〜１０００ｂａｒの範囲で試した。粗懸濁液を一回、二回、または三回高圧均質化にかけた。均質器は製造者の指示にしたがって使用した。実施例２に記載のように、力価を観測することにより、方法の評価を行なった。