(57)【要約】【課題】マスト細胞や好塩基球細胞の感作状態を解消してＩ型アレルギーの発症を抑制することができる抗Ｉ型アレルギー抑制剤および当該抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法を提供する。【解決手段】感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤、および、イチジク、ビワ、ルイボス、センナから抽出溶媒によって、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対してＩｇＥ抗体を解離させる抗体解離組成物を抽出し、Ｉ型アレルギー症状を緩和・抑制・予防するため有効量の抗体解離組成物を含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤。
【請求項２】
前記抗体解離組成物が、イチジク、ビワ、ルイボス、センナから、水、熱水、アルコールまたは含水アルコールの何れかの抽出溶媒によって抽出した抽出成分である請求項１に記載の抗Ｉ型アレルギー抑制剤。
【請求項３】
前記抗体解離組成物が二糖類を含有する請求項１または２に記載の抗Ｉ型アレルギー抑制剤。
【請求項４】
前記抗体解離組成物が、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の少なくとも何れかを含有する請求項１〜３の何れか一項に記載の抗Ｉ型アレルギー抑制剤。
【請求項５】
前記抗体解離組成物が、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物を含有する請求項４に記載の抗Ｉ型アレルギー抑制剤。
【請求項６】
前記抗体解離組成物がイソマルトースを含有する請求項１または３に記載の抗Ｉ型アレルギー抑制剤。
【請求項７】
感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー予防食品。
【請求項８】
イチジク、ビワ、ルイボス、センナから抽出溶媒によって、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対してＩｇＥ抗体を解離させる抗体解離組成物を抽出し、Ｉ型アレルギー症状を緩和・抑制・予防するため有効量の前記抗体解離組成物を含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物体から抽出した抽出成分を抗アレルギー有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤および当該抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、花粉症・アレルギー性鼻炎・食物アレルギー・接触性皮膚炎・アトピー性皮膚炎・気管支喘息等のアレルギー症状を示す人が増えており、社会的にも大きな問題になっている。アレルギーは、過剰な免疫反応の一例であり、Ｉ〜ＩＶ型に分類される。社会的に注目度の高い花粉症やアトピー性皮膚炎などのアレルギー性疾患は、Ｉ型アレルギーである。
【０００３】
Ｉ型アレルギーは、以下の過程で発症する。
（１）生体内に抗原となる花粉・カビなどのアレルゲンが侵入すると、これに対応するＩｇＥ（免疫グロブリンＥ）型抗体がＢ細胞から過剰に産生される。
（２）産生されたＩｇＥ抗体が肥満細胞（マスト細胞とも呼ばれる）や好塩基球細胞の表面に発現した高親和性ＩｇＥ受容体（ＦｃεＲＩ）と結合すること（感作）で、アレルギー反応の準備状態（感作状態）となる。
（３）再度アレルゲンが侵入し、感作状態にある細胞表面のＩｇＥ抗体同士を架橋する（抗原抗体反応）。
（４）その刺激によってヒスタミンやロイコトリエンと言ったケミカルメディエータの放出（脱顆粒）が起こる。
（５）ケミカルメディエータによって周囲の組織に炎症、血管透過性の亢進などのアレルギー症状が惹起される。
【０００４】
このようなＩ型アレルギーを発症した患者に対しては、通常、抗ヒスタミン剤やステロイド剤などの薬剤が投与される。これらの薬剤は効果が高い反面、眠気・口渇・胃腸障害などの副作用が問題となっている。また、アレルギー症状の改善には長期間の投薬を要するため、副作用の虞がある薬剤ではなく、安全性が高く継続的に使用できる抗アレルギー剤が望ましい。天然由来の抗アレルギー剤であれば、上記薬剤に比べて安全性は高いと考えられる。例えば特許文献１〜６には、植物由来の抗アレルギー剤が報告されている。
【０００５】
特許文献１には、ヘリクリサム属植物の抽出物が、インターロイキン４シグナリングの阻害活性（ＩｇＥクラススイッチの阻害活性）、ＦｃεＲＩ発現の低下活性、およびヒスタミン放出の阻害活性といった抗アレルギー作用を有することが記載してある。
特許文献２には、モモタマナあるいは月桃の植物体、もしくは植物体から水又は有機溶媒単独、又はそれらの混合物で抽出処理して得たエキスを有効成分とする抗アレルギー剤が記載してある。
特許文献３には、シトルラス属植物から低級脂肪族アルコールもしくはその含水物による抽出によって得られる抽出液または抽出エキスを有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー性組成物が記載してある。
特許文献４には、イネ由来ポリフェノールを有効成分として含むことを特徴とする抗アレルギー剤が記載してある。
特許文献５には、植物体のバラやバラの抽出物、および、これらを発酵培養して得られた発酵物のうちの少なくとも１種と、α−シクロデキストリンとを含有することを特徴とする抗アレルギー剤が記載してある。
特許文献６には、スベリヒユの有効成分を含有することを特徴とする抗アレルギー剤が記載してある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−９６７６１号公報
【特許文献２】特開２００６−１１７５６２号公報
【特許文献３】特開２００６−２０６５２０号公報
【特許文献４】特開２００７−４５７５５号公報
【特許文献５】特開２００７−１７６７９７号公報
【特許文献６】特開２００８−２４７７７９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献１〜６には、ヘリクリサム属植物、モモタマナ、月桃、シトルラス属植物、イネ、バラ属植物、スベリヒユといった種々の植物から抗アレルギー剤が作製されている。Ｉ型アレルギーに限らず、アレルギー症状の予防や治療を行なうに際して、安全性が高く、継続的に使用できる抗アレルギー剤を作製できる植物の種類は、できるだけ多いほうが望ましい。さらに、このような植物由来の抗アレルギー剤は、摂取者の嗜好に対応できるように、飲用・食用・塗布用などに調製して、できるだけ多様な態様で手軽に摂取できるのが望ましい。
植物の葉からアレルギーに有効な成分を抽出するには、例えば当該植物の葉を製茶し、溶媒で抽出する。このとき得られた抽出液を飲用に供することで、アレルギーに有効な成分を含む抗アレルギー剤とすることができる。
【０００８】
飲用では茶の木以外の樹木の葉が利用されることは少ない。例えばイチジクは、果実を食する以外では、ごく一部の地域でイチジク葉を飲用茶に加工されるのみである。そのため、果実以外の部位は殆ど破棄されており、有効利用されていないのが現状である。イチジク葉には、ポリフェノールなどの機能性成分が含まれていることが知られているが、当該イチジク葉は殆ど破棄されていたために研究が進んでおらず、未だに多くの未同定成分が含まれていると考えられる。
【０００９】
上述したように、Ｂ細胞によって侵入したアレルゲンに特異的なＩｇＥ抗体が産生されると、当該ＩｇＥ抗体は血流に乗り、マスト細胞や好塩基球細胞が発現するＦｃεＲＩに結合し、これらの細胞を感作する。
マスト細胞や好塩基球細胞におけるアレルゲンを介したＩｇＥ抗体同士の架橋は、Ｉ型アレルギーの惹起に対して重要な役割を担っている。即ち、単量体のＩｇＥ抗体がＦｃεＲＩに結合する（感作状態）のみでは全身性のＩ型アレルギー症状を引き起こすほどの応答を誘導することができないと考えられている。
【００１０】
そのため、例えばアレルギー反応の準備状態（感作状態）となった段階で、マスト細胞や好塩基球細胞の感作状態を解消できれば、Ｉ型アレルギーの発症を抑制することができると考えられる。
【００１１】
従って、本発明の目的は、マスト細胞や好塩基球細胞の感作状態を解消してＩ型アレルギーの発症を抑制することができる抗Ｉ型アレルギー抑制剤および当該抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を達成するための本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤の第一特徴構成は、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する点にある。
【００１３】
一般に、Ｉ型アレルギーを抑制するには（１）抗体の過剰産生を抑制する、（２）感作を抑制する、（３）脱顆粒反応を抑制する、（４）脱顆粒後のアレルギー症状すなわち炎症や浮腫などを抑制する、といった手段が考えられる。これらのうち既存の抗アレルギー技術は（３），（４）とされている。また、（２）のように感作状態を抑制することでＩ型アレルギーを抑制することも考えられている。しかし、本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤は、感作を抑制するのではなく、感作状態にあるマスト細胞や好塩基球細胞の感作状態を解消してＩ型アレルギーの発症を抑制するものである。
【００１４】
即ち、アレルゲンが侵入して感作状態にあるマスト細胞や好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤を接触させると、マスト細胞や好塩基球細胞の表面に結合したＩｇＥ抗体が解離し、マスト細胞や好塩基球細胞を感作する前の状態に戻すことができる。この状態で再度アレルゲンが侵入したとしても、感作状態ではないマスト細胞や好塩基球細胞において抗原抗体反応は起きないため、ケミカルメディエータの放出といった一連の反応が生じないため、アレルギー症状を呈するのを未然に防止することができる。
【００１５】
そのため、本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤であれば、Ｉ型アレルギーの予防や治療に非常に有効であると考えられる。
【００１６】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤の第二特徴構成は、前記抗体解離組成物を、イチジク、ビワ、ルイボス、センナから、水、熱水、アルコールまたは含水アルコールの何れかの抽出溶媒によって抽出した抽出成分とした点にある。
【００１７】
本発明者らは、鋭意研究の結果、イチジク、ビワ、ルイボス、センナに抗体解離組成物が含有されていることを新たに見出した。本構成の抗Ｉ型アレルギー抑制剤であれば、植物由来の成分を抗アレルギー有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤として供することができるため、安全性が高く、継続的に使用できる。
【００１８】
また、抗体解離組成物を含む植物抽出組成物を得るために、イチジク葉やビワ葉など、果実以外の部位をも利用することができる。果実以外の部位は殆ど破棄されている現状を鑑みると、イチジクやビワ等の植物体を有効利用することができる。
抽出溶媒を水および熱水とした場合では、一般的な茶抽出液の調製に準じた手法で抗Ｉ型アレルギー抑制剤を得ることができる。また、抽出溶媒をアルコールまたは含水アルコールとした場合では、入手の容易な有機溶媒を抽出溶媒として利用できる。
よって、本構成によれば、簡便に抗Ｉ型アレルギー抑制剤を得ることができる。
【００１９】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤の第三特徴構成は、前記抗体解離組成物が二糖類を含有する点にある。
【００２０】
後述の実施例において、ＩｇＥ抗体解離作用については、二糖類であるスクロース、ツラノース、イソマルトースおよびジフルクトース無水物等において効果が示されている。従って、抗体解離組成物は二糖類を含有すると認められる。
【００２１】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤の第四特徴構成は、前記抗体解離組成物が、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の少なくとも何れかを含有する点にある。
【００２２】
後述の実施例において、ＩｇＥ抗体解離作用については、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の少なくとも何れかを含有する場合において、ＩｇＥ抗体解離作用を有することが示されている。従って、抗体解離組成物はスクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の少なくとも何れかを含有すると認められる。
【００２３】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤の第五特徴構成は、前記抗体解離組成物が、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物を含有する点にある。
【００２４】
後述の実施例において、ＩｇＥ抗体解離作用については、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の三種併用の場合において、イチジク茶と同等のＩｇＥ抗体解離作用を有することが示されている。従って、抗体解離組成物はスクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物を含有すると認められる。
【００２５】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤の第六特徴構成は、前記抗体解離組成物がイソマルトースを含有する点にある。
【００２６】
後述の実施例において、ＩｇＥ抗体解離作用については、スクロース、ツラノース、ジフルクトース無水物のほか、イソマルトースについても効果が示されている。従って、抗体解離組成物はイソマルトースを含有すると認められる。
【００２７】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー予防食品の特徴構成は、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する点にある。
【００２８】
本構成によれば、イチジクやビワ、センナ、ルイボスより抽出した抗体解離組成物を含んだ抗Ｉ型アレルギー予防食品として、アレルギー症状を緩和・抑制・予防するために利用することができる。当該飲食品は、健康食品・機能性食品・飼料として飲食物の態様で供することが可能であるため、摂取者の多様な嗜好に対応できる状態で抗体解離組成物を容易に摂取することができる。
【００２９】
本発明に係る抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法の特徴構成は、イチジク、ビワ、ルイボス、センナから抽出溶媒によって、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対してＩｇＥ抗体を解離させる抗体解離組成物を抽出し、Ｉ型アレルギー症状を緩和・抑制・予防するため有効量の前記抗体解離組成物を含有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する点にある。
【００３０】
本構成で使用する抗体解離組成物は、イチジク、ビワ、ルイボス、センナ由来の天然成分であり安全性が高く、継続的に使用することができるため、治療上効果のある量の抗体解離組成物を長期に亘って服用したとしても、副作用の虞は殆どない状態でＩ型アレルギー症状を緩和・抑制・予防することができる。
【図面の簡単な説明】
【００３１】
【図１】抗体解離組成物を熱水で抽出する場合の処理工程の概略を示す図である。
【図２】細胞表面のＩｇＥ抗体結合量を測定した結果を示したグラフである。
【図３】イムノブロット法による結果を示した図である。
【図４】解離したＩｇＥ抗体量の相対強度を求めた結果を示したグラフである。
【図５】イチジク、ビワ、センナ、ルイボスから抽出した抽出液における抗アレルギー作用の評価結果を示したグラフである。
【図６】イチジク、ビワ、センナ、ルイボスから抽出した抽出液のそれぞれを感作細胞に添加し、当該感作細胞からＩｇＥ抗体が解離する量を測定した結果を示したグラフである。
【図７】動物実験により、イチジク葉から抽出した抽出液がアレルギー性の炎症反応に及ぼす影響を調べた結果を示したグラフである。
【図８】種々の温度で保存したイチジク茶抽出液におけるＩ型アレルギー抑制効果の評価結果を示したグラフである。
【図９】陽イオン検出モードの全イオン電流クロマトグラムの結果を示したグラフである。
【図１０】ジフルクトース無水物III（ＤＦＡIII）の構造式を示した図である。
【図１１】ＤＦＡの選択イオン電流クロマトグラム（陽イオン検出）の結果を示したグラフである。
【図１２】イヌリンの熱分解をＬＣ−ＱＴｏｆ−ＭＳで分析した結果を示したグラフである。
【図１３】スクロースの構造式を示した図である。
【図１４】ツラノースの構造式を示した図である。
【図１５】イソマルトースの構造式を示した図である。
【図１６】トレハロースの構造式を示した図である。
【図１７】セロビオースの構造式を示した図である。
【図１８】メリビオースの構造式を示した図である。
【図１９】パラチノースの構造式を示した図である。
【図２０】７種類の二糖類をＬＣ−ＱＴｏｆ−ＭＳで分析した結果を示したグラフである。
【図２１】７種類の二糖類のＩ型アレルギー抑制効果の評価結果を示したグラフである。
【図２２】Ｉ型アレルギー抑制効果に対するスクロース、ツラノースおよびＤＦＡIIIの併用効果について調べた結果を示したグラフである。
【図２３】イムノブロット法による結果を示した図である。
【図２４】培地中のＩｇＥ抗体量の結果を示したグラフである。
【図２５】イソマルトースとＤＦＡのＩ型アレルギー抑制効果の評価結果を示したグラフである。
【図２６】イムノブロット法による結果を示した図である。
【図２７】培地中のＩｇＥ抗体量の結果を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３２】
以下、本発明の実施形態を図面に基づいて説明する。
本発明は、アレルギー症状を緩和・抑制・予防することができる天然由来、特に植物由来の抽出成分を有する抗Ｉ型アレルギー抑制剤およびその製造方法である。
アレルギーは過剰な免疫反応の一例であり、植物由来の抽出成分に抗アレルギー作用が認められている。本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤は、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する。
本発明は、Ｉ〜ＩＶ型アレルギーのうち、特に花粉症やアトピー性皮膚炎といったＩ型アレルギーに適用できるが、Ｉ型アレルギーはこれに限られるものではない。
【００３３】
抗体解離組成物は、植物体、例えばイチジク、ビワ、ルイボス、センナから、水、熱水、アルコールまたは含水アルコールの何れかの抽出溶媒によって抽出した抽出成分である。
【００３４】
イチジクは、クワ科イチジク属の植物であり、本実施形態ではイチジクＦｉｃｕｓ  ｃａｒｉｃａ  Ｌ．を使用した場合について説明する。イチジクは、例えば日本国内の主要栽培品種である桝井ドーフィン（Masui Dauphine）、テマリイチジク、ダルマティー、プレコス・ロンデ・ド・ボルドー、ネグローネが好ましいが、これらに限定されるものではない。
【００３５】
本発明で用いるイチジクの植物体は、植物体の根から葉の先端までの全てである全草を利用することができるが、好ましくは葉を利用するとよい。葉のうち、特に新梢先端部の若葉を利用するのが好ましい。
【００３６】
新梢とは、新しく伸びた枝のことで、当年枝（とうねんし）とも呼ばれる。
若葉とは、生えたばかりの葉のことを指す。例えば、イチジクの場合、出葉した後１４日程度までの葉で、新梢先端部から第５節程度までの葉を使用するのがよい。新梢先端部の若葉を利用した場合、抽出溶媒による抽出が容易であり、抗体解離組成物を効率よく取得することができる。
植物体は、生でも乾燥物でもよい。抗酸化物を抽出する際に使用する植物体の大きさ（粉砕程度）は特に制限されないが、例えば粉末状態〜粗切り状態が好ましい。
【００３７】
ビワはバラ科の植物であり、例えば日本国内の主要栽培品種である茂木や田中が好ましいが、これらに限定されるものではない。ビワは好ましくは葉を利用するとよい。
ルイボスは、マメ亜科のアスパラトゥス属の一種であり、例えばアスパラサス・リネアリスが好ましいが、これらに限定されるものではない。ルイボスは好ましくは葉を利用するとよい。
センナは、マメ科の植物であり、例えばチンネベリー・センナまたはアレキサンドリア・センナが好ましいが、これらに限定されるものではない。センナは好ましくは茎を利用するとよい。
【００３８】
本明細書では、例えばイチジク、ビワ、ルイボス、センナの全草或いはその一部を「植物体」と称する。
【００３９】
抽出溶媒は、水、熱水および有機溶媒を使用するとよい。熱水は、例えば１気圧で８０〜１００℃の温度にするとよい。熱水で抽出する場合は、以下の方法により製造することができる。
即ち、イチジク属植物を蒸煮する加熱処理Ａ、加熱処理を行った植物体を揉念する揉念処理Ｂ、揉念処理を行った植物体を乾燥する乾燥処理Ｃ、乾燥した植物体に抽出溶媒である熱水を添加し、抗体解離組成物を含有する抽出組成物を取得する抽出処理Ｄ、を行なう（図１）。
【００４０】
加熱処理は、熱により植物体の酵素を失活させる処理であり、例えば植物体を１００℃の水蒸気に曝すことにより行なう。加熱温度は、当該酵素が失活する温度であればよいため、１００℃に限定されるものではなく、例えば８０〜１００℃、好ましくは９５〜１００℃の範囲で行なえばよい。加熱処理時間は、確実に酵素活性を失活させる時間を設定すればよく、例えば０．５〜１０分程度とする。加熱処理は、回転可能な筒胴や蒸し器などで行なうが、これに限られるものではない。
【００４１】
揉念処理は、均一に乾燥するように水分を移動させるため、ならびに植物体から抗体解離組成物を抽出しやすくするために行う処理である。揉念処理は、例えば茶葉温が３５〜６０℃となる状態で２５〜４０分間揉む処理を行う。揉念処理により、植物体の含水率は１３〜３０％程度になっていると考えられる。
【００４２】
乾燥処理は、植物体の保存性を高めるために行う。好ましくは、含水率が４〜５％になるように植物体を乾燥させる。乾燥処理は、例えば５５〜６５℃で２〜５時間乾燥させる処理を行う。
【００４３】
上述した抗体解離組成物を得るに際して、採取した直後の植物体を利用するか、或いは、所定の条件で保管した植物体を利用するとよい。当該保管は、例えば、植物体を樹脂フィルム袋で包装し、低温で所定期間保管する低温貯蔵処理を行うとよい。樹脂フィルム袋は、例えば厚さ０．０２〜０．０４ｍｍ程度の低密度ポリエチレン袋とし、温度条件は例えば０〜８℃程度とし、所定期間は例えば１０日以上とする。
【００４４】
抽出溶媒として使用できる有機溶媒は、アルコールまたは含水アルコールの何れかがよい。アルコールは、炭素数１〜８、好ましくは炭素数１〜４の直鎖状又は分岐鎖状の飽和アルコールを使用するとよい。具体的には、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノール等が挙げられ、これらの中でも、メタノール、エタノールが好ましい。
含水アルコールのアルコール濃度は、２０〜８０重量％、好ましくは５０〜７５重量％とする。尚、例えばアルコール濃度５０重量％の含水アルコールとは、アルコール５０重量部と水５０重量部を別々に量った後、一つの容器に両者を入れて良く混合したものを言う。
【００４５】
アルコールまたは含水アルコールの何れかを使用した場合の抽出時の温度としては、通常室温〜９０℃、好ましくは５０〜８０℃の範囲である。更に好ましくは、常圧にて含水アルコールが還流する程度の温度である。このとき、抽出器は解放系でも閉鎖系でもよい。抽出時間は、原料及び抽出温度等にもよるが、通常０．５〜１０時間、好ましくは１〜４時間である。
【００４６】
例えば含水アルコールで抽出する場合は、以下の方法により製造することができる。
即ち、イチジク属植物の場合は、イチジク属植物を粉砕する粉砕処理、含水アルコールを添加する溶媒添加処理、溶媒を添加したのち振盪する振盪処理、振盪処理後に遠心分離して上清を回収する回収処理、を行う。
【００４７】
粉砕処理は凍結乾燥したイチジク葉を粉砕処理できる粉砕機を使用して行う。溶媒添加処理は粉砕したイチジク葉に抽出溶媒である含水アルコールを適量添加する。振盪処理は、例えば室温で３時間、毎分１２０回転で円運動にて振盪する。回収処理は、例えば毎分１２０００回転で１０分間遠心することによって上清を回収する。上清を回収した後の残渣に対して、必要に応じて、溶媒添加処理、振盪処理、回収処理を繰り返し行ってもよい。
【００４８】
抽出溶媒として使用する水やアルコールは、各種の酸やアルカリあるいは塩等を含有する緩衝液の態様で使用してもよい。
【００４９】
上述したように、熱水や有機溶媒を使用して抗体解離組成物を抽出し、例えば、不溶物が混在する状態でそのまま、あるいは、不溶物を除去した状態で例えば濃縮若しくは希釈・乾燥などの適当な処理を施すことが可能である。
【００５０】
当該抗体解離組成物は、二糖類を含有する。当該二糖類として、例えば、スクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の少なくとも何れかを含有するのが好ましく、これらスクロース、ツラノースおよびジフルクトース無水物の全てを含むのがより好ましい。さらに、二糖類として、イソマルトース、トレハロース、セロビオース、メリビオース、パラチノースの何れかを含んでもよい。
【００５１】
ジフルクトース無水物（ＤＦＡ：Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/20" \o "20ノ意味" 20Ｏ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/10" \o "10ノ意味" 10：分子量３２４．２８）は、イヌリンから生成される難消化性二糖である。
スクロース（Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ22Ｏ11：分子量３４２．２９）は、グルコース（ブドウ糖）とフルクトース（果糖）がα−１，２−グリコシド結合した糖であり、二糖類の一種である。
ツラノース（Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ22Ｏ11）はグルコースとフルクトースがα１−６結合で結合した、二糖の一種である。
イソマルトース（Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ22Ｏ11）は、グルコース２分子がα１−６結合で結合した、二糖の一種である。
トレハロース（Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ22Ｏ11）は、グルコースが１，１−グリコシド結合してできた二糖の一種である。
セロビオース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）は、グルコース２分子がβ１−４結合でつながった二糖の一種である。
メリビオース（Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ22Ｏ11）は、ガラクトースとグルコースがα１−６結合で連なった二糖の一種である。
パラチノース（Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ22Ｏ11）は、グルコースおよびフルクトースからなる二糖の一種の一種である
【００５２】
本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤は、抗体解離組成物を含有するものを意味する。即ち、当該抗Ｉ型アレルギー抑制剤は、固形製剤または液体製剤などの医薬品の形態で使用する、或いは、飲食品の態様で使用することができる。医薬品の形態で使用する場合、医薬的に許容される医薬品添加物を有効成分に添加するとよい。飲食品の態様で使用する場合、当該飲食品は、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる作用を有する抗体解離組成物を有効成分として含有する抗Ｉ型アレルギー予防食品となる。
【００５３】
錠剤・散剤・顆粒剤のような固形製剤を製造する場合、医薬品添加物としては、賦形剤（例えば糖類・デンプン類・セルロース類・メタケイ酸アルミン酸マグネシウム・リン酸カルシウムなど）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム・タルク・ポリエチレングリコールなど）、結合剤（例えばマンニトール・糖類・結晶セルロース・ポリビニルピロリドン・ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、崩壊剤（例えばデンプン類・セルロース類・架橋ポリビニルピロリドンなど）、着色剤、矯味矯臭剤などを用いることができる。
【００５４】
液体製剤は、例えば水性または油性の懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態などで供することができる。液体製剤を製造する場合の医薬品添加物としては、溶剤（例えば油性溶剤・親水性溶剤など）、溶解補助剤（例えばポリエチレングリコール・コレステロールなど）、乳化剤（例えば界面活性剤など）、懸濁化剤（ポリビニル系化合物・親水性高分子・界面活性剤など）、保存剤（例えばパラベン・ソルビン酸など）、着色剤、矯味矯臭剤などを用いることができる。
【００５５】
本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤を医薬品の形態で使用する場合、Ｉ型アレルギー症状を緩和・抑制・予防するため、有効量の抗体解離組成物を含有するように構成する。このようにして調製された抗Ｉ型アレルギー抑制剤は、アレルギー症状の緩和・抑制・予防する対象であるヒト・動物に投与する。投与は、例えば、散剤・細粒剤・顆粒剤・錠剤・カプセル剤・懸濁液・エマルジョン剤・シロップ剤・エキス剤・丸剤等の経口剤を使用した経口投与や、注射剤・外用液剤・軟膏剤・坐剤・点眼薬などの非経口剤を使用した非経口投与によって行なうことができる。
【００５６】
経口剤は、抗体解離組成物以外に、例えばアルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を含有させることが可能である。即ち、当該経口剤は、抗体解離組成物を含有した抗Ｉ型アレルギー抑制剤である。
【００５７】
また、非経口剤は、抗体解離組成物以外に、例えば生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤などを含有させることが可能である。即ち、当該非経口剤は、抗体解離組成物を含有した抗Ｉ型アレルギー抑制剤である。
【００５８】
飲食品の態様で使用する場合、健康食品（好ましくは機能性食品）や飼料として飲食物の態様で供することが可能である。当該飲食品としては、菓子類・清涼飲料・お茶類・栄養飲料・スープ等の形態が挙げられる。これらの飲食品の製造工程において、あるいは最終製品に、抗体解離組成物を混合・塗布・噴霧などにより添加して、健康食品とすることができる。飲食品の態様で使用する場合も、アレルギー症状を緩和・抑制・予防するため、有効量の抗体解離組成物を含有させるとよい。
【００５９】
即ち、本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤を医薬品の形態で使用する場合、あるいは、飲食品の態様で使用する場合の何れにおいても、感作状態にあるマスト細胞あるいは好塩基球細胞に対して、ＩｇＥ抗体を解離させる抗体解離組成物を添加して、マスト細胞あるいは好塩基球細胞から前記ＩｇＥ抗体を解離させる解離工程を有することにより、Ｉ型アレルギーを予防（抑制）するＩ型アレルギー予防（抑制）方法を供することができる。
【００６０】
本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤を用いる場合の投与量（有効摂取量、一日当たりの最大摂取量）は、アレルギーの種類、投与対象の年齢・性別・体重・症状の程度、投与方法などに応じて適宜決定することができる。
【００６１】
本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤は、例えばイチジク属植物から抽出した抗体解離組成物だけでなく、ビワ、ルイボス、センナなどの他の植物から抽出した抗体解離組成物を含んでもよい。
【００６２】
本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤であれば、植物由来の成分を抗アレルギー有効成分として含有する抗アレルギー性組成物として供することができるため、安全性が高く、医薬品および飲食品として継続的に使用できる。
【実施例】
【００６３】
〔実施例１〕
イチジク葉から抽出した抽出液（イチジク茶）が抗体解離作用を有しているかを、培養細胞を用いた実験で調べた。イチジク葉として、市販のイチジク茶「凜雫」（諏訪園製造、川西市商工会販売）を用いた。当該イチジク茶の原料品種は桝井ドーフィンである。
茶葉の作製および茶抽出液の調製方法は、上述した加熱処理・揉念処理・乾燥処理・抽出処理に準じて行った。抽出処理では、それぞれの茶葉１ｇ当たり１００ｍＬの超純水（温度８０℃）を加え、３分間静置した後、０．４５μｍメンブレンフィルターで濾過して茶抽出液を調製した。
【００６４】
培養細胞は好塩基球性白血病ラットの末梢血由来肥満細胞株RBL-2H3（JCRB0023）を使用した。培養液はEarle's minimal essential medium培地（ＭＥＭ培地：１０％子ウシ血清（ＦＢＳ），１００ｕｎｉｔ／ｍＬペニシリン，１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン含有）を使用し、培養条件は、温度３７℃、ＣＯ2濃度５％の条件で静置培養とした。
【００６５】
２４ウェル培養プレートに４００μＬの培養液に懸濁した細胞（最終濃度４×１０5cells/well）を播種し、温度３７℃、ＣＯ2濃度５％で１時間静置培養した後、１／１０量の茶抽出液（最終濃度茶葉換算で１ｍｇ／ｍＬ）を添加した。また、陰性対象（コントロール）として、リン酸緩衝生理食塩水（塩化カルシウムと塩化マグネシウムは含まない。以後、ＰＢＳ（−）と称する）を添加した。
ついで、マウスモノクローナル抗ＤＮＰ−ＩｇＥ抗体を最終濃度０．４５μｇ／ｍＬで加え、２４時間、３７℃、ＣＯ2濃度５％、静置条件で培養し細胞を感作させた。その後、培養液を除去し、ＰＢＳ（−）溶液で洗浄後、１６０μＬの反応緩衝液（１３７ｍＭ  ＮａＣｌ、２．７ｍＭ  ＫＣｌ、１．８ｍＭ  ＣａＣｌ2、１ｍＭ  ＭｇＣｌ2、５．６ｍＭ  グルコース、２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１％  ＢＳＡ、ｐＨ６．８）を添加した。従って、これ以降の工程には茶抽出液は含まれていないことになる。
【００６６】
細胞表面に結合したＩｇＥ抗体を測定するため、ＩｇＥ抗体に特異的な蛍光標識抗体を用いて、細胞表面に結合しているＩｇＥ抗体を蛍光標識した。具体的には、ビオチンを結合した抗ＩｇＥ抗体（ベックマンコールター社製）を常法によって細胞表面に結合しているＩｇＥ抗体に結合させ、その後ストレプトアビジンを結合した蛍光物質（ベックマンコールター社製）を添加し、ビオチンとストレプトアビジンの特異的な結合により、ＩｇＥ抗体を蛍光標識した。フローサイトメトリー（ＢＤバイオサイエンス社製）を使用して各細胞の蛍光強度を測定した。その蛍光量を指標に、ＩｇＥ抗体結合量を測定した。結果を図２に示した。
【００６７】
平均蛍光値（ＭＦＩ）は、コントロールでは４２４であり、イチジク茶処理細胞群では２０６であった。これより、イチジク茶を添加した細胞における蛍光量が半減しており、細胞表面に結合しているＩｇＥ抗体量が減少していることが判明した。従って、イチジク茶は、ＩｇＥ抗体と細胞表面受容体との結合に作用し、Ｉ型アレルギー抑制効果を示すことが認められた。
【００６８】
〔実施例２〕
イチジク茶を感作細胞に添加し、当該感作細胞からＩｇＥ抗体が解離する量を測定した。具体的には、実施例１における感作後の細胞（ＩｇＥ抗体が結合した状態）を、イチジク茶を添加したＭＥＭ培地中で一定時間（２４時間あるいは６時間）３７℃で培養した後、ＭＥＭ培地のみを回収した。ＭＥＭ培地中に含まれているＩｇＥ抗体を免疫沈降法により選択的に回収し、当該ＩｇＥ抗体の量をＩｇＥ特異的抗体によるイムノブロット法により検出した。免疫沈降法ではビオチンを結合した抗ＩｇＥ抗体およびストレプトアビジン担体（ＧＥヘルスケア・ジャパン社製）を使用してＩｇＥ抗体と複合体を形成させ、回収した。イムノブロット法による結果を図３に示した。また、この結果求められた相対強度（コントロールを１とする）の結果を図４に示した。
【００６９】
図３におけるＣＢＢ染色ではＭＥＭ培地中に含まれる全てのタンパク質が染色された状態となっているが、ＩｇＥ特異的抗体によるイムノブロット法による検出では、レーン２（２４時間処理），レーン３（６時間処理）において、レーン５のＩｇＥ抗体のバンドの位置と同じ位置に、ＩｇＥ抗体と考えられるバンドが認められた。レーン１のコントロールおよびレーン４のＩｇＥ抗体無処理のサンプルからはこのようなバンドは認められなかった。
【００７０】
このバンドの相対強度（コントロールを１とする）を求めたところ、レーン２（２４時間処理）の相対強度は約３．９となり、レーン２（６時間処理）の相対強度は約１．６となり、イチジク茶の添加により、培地中に含まれるＩｇＥ抗体量が増加することが認められた。即ち、イチジク茶がＩｇＥ抗体解離作用を有していることが認められた。また、イチジク茶による感作細胞の処理時間が長いほど、抗体解離作用が強化されるものと認められた。よって、イチジク茶による感作細胞の処理時間を長くすれば、Ｉ型アレルギーを抑制する可能性が高まるものと認められた。
尚、本実施例でイチジク茶「凜雫」を使用したが、他のイチジク茶であっても同様の効果・作用機構が認められた（データは示さない）。
【００７１】
〔実施例３〕
上述した実施例は、イチジク茶が抗体解離作用を有していることを確認した。本実施例では、イチジク以外の植物としてビワ、ルイボス、センナを使用し、これら植物体から抽出した抽出液が抗体解離作用を有しているかを調べた。
【００７２】
ビワはビワ茶（野草茶房）を使用し、ルイボスはルイボスティー（まるも(株)）を使用し、センナはセンナ茶（本草製薬）を使用した。それぞれの茶葉１ｇ当たり１００ｍＬの超純水（温度８０℃）を加え、３分間静置した後、０．４５μｍメンブレンフィルターで濾過して茶抽出液を調製した。
【００７３】
これら３種の茶抽出液および実施例１で調製したイチジク茶を使用して、これらの抗体解離作用について培養細胞を用いた実験で調べた。使用した培養細胞や、細胞の感作についての手法は実施例１に準じて行った。
細胞の脱顆粒時に炎症物質ヒスタミンと同時に放出されるβ-ヘキソサミニダーゼ（β−Ｈｅｘ）量を測定し、脱顆粒の指標とした。
感作状態の細胞に対して、抗原であるＤＮＰ−ＢＳＡを最終濃度１０μｇ／ｍＬとなるように添加し、３０分間、３７℃で抗原抗体反応を行い、脱顆粒を惹起させた。プレートを氷上に１０分間静置して反応を停止させた後、バッファーの上清５０μＬを９６穴プレートに回収し、β―Ｈｅｘの基質溶液（０．１Ｍ  クエン酸緩衝液  ｐＨ４．５に溶解させた１ｍＭｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド）を等量添加して、１時間、３７℃で反応させた。
０．１Ｍ炭酸−重炭酸緩衝液（ｐＨ１０．４）を加え酵素反応の停止と呈色反応を行い、４０５ｎｍの吸光度を測定した。
【００７４】
抗アレルギー作用の評価結果を図５に示した。
コントロールであるＰＢＳ（−）を添加した細胞株におけるβ−Ｈｅｘの放出量を１００％としたとき、イチジク茶を感作時に添加した時のβ−Ｈｅｘ放出量は約３９％、ビワ茶を感作時に添加した時のβ−Ｈｅｘ放出量は約４０％、センナ茶を感作時に添加した時のβ−Ｈｅｘ放出量は約４０％、ルイボスティーを感作時に添加した時のβ−Ｈｅｘ放出量は約４５％となった。このように、イチジク茶、ビワ茶、センナ茶およびルイボスティーを添加した細胞株では、β−Ｈｅｘ放出量が４割程度に抑制されたことから、脱顆粒時に放出される炎症物質ヒスタミンの放出量も同等に抑制されたものと認められた。従って、ビワ茶、センナ茶およびルイボスティーは、イチジク茶と同等の抗Ｉ型アレルギー作用を有していることが判明した。
【００７５】
〔実施例４〕
実施例３における４種類の茶抽出液のそれぞれを感作細胞に添加し、当該感作細胞からＩｇＥ抗体が解離する量を測定した。測定は実施例２に準じて行った。ＩｇＥ抗体が解離する量は、コントロールを１としたときの相対値を算出した。結果を図６に示した。
【００７６】
この結果、イチジク茶の相対ＩｇＥ抗体解離量は約３．９となり、ビワ茶の相対ＩｇＥ抗体解離量は約３．２となり、センナ茶の相対ＩｇＥ抗体解離量は約２．５となり、ルイボスティーの相対ＩｇＥ抗体解離量は約２．６となった。従って、実施例３における４種類の茶抽出液のうち、最も抗体解離作用が強いのはイチジク茶であると認められた。
【００７７】
〔実施例５〕
動物実験により、イチジク葉から抽出した抽出液（イチジク茶）がアレルギー性の炎症反応に及ぼす影響を調べた。
【００７８】
具体的には、マウス（ＢＡＬＢ／ｃ系統  雌  ７週齢）の両耳介部に抗ＤＮＰマウスＩｇＥ抗体液を皮内投与し、２４時間後にＤＮＰ−ＢＳＡ抗原液を尾静脈内投与することでＩ型アレルギー病態である耳介部の浮腫を人為的に発症させた。抗原投与１時間後に、耳介部の肥厚量を測定し、イチジク茶の効果を評価した。
【００７９】
経口投与群では、蒸留水を投与したコントロール群、茶葉１ｇ/１００ｍＬとしたイチジク葉の熱水抽出物を投与した低用量群、茶葉１０ｇ/１００ｍＬとしたイチジク葉の熱水抽出物を投与した高用量群を使用した。経皮投与群では、親水軟膏を適用したコントロール群、軟膏１００ｍｇあたりイチジク葉の茶葉１０ｍｇとした軟膏を適用した高用量群を使用した。何れも群も８個体のマウスを使用した。尚、経口投与で有効成分が腸管から吸収されなかった場合を想定し、経皮投与での実施を検討した。従って、経皮投与は高用量群のみの実施である。
【００８０】
イチジク葉の熱水抽出物は、実施例１に準じて作製した。イチジク茶含有軟膏は、高用量濃度の茶液１００ｍＬを凍結乾燥した得た乾固物に、親水軟膏（丸石製薬株式会社）１００ｇを添加・混和して作製した。
【００８１】
投与期間は、馴化終了日から試験終了日までの１０日間とし、１日１回の頻度で経口あるいは経皮投与した。経皮投与では、蒸留水あるいはイチジク茶を１０ｍＬ/ｋｇの用量で強制経口投与した。経皮投与群では、２０ｍｇの親水軟膏あるいはイチジク茶を練りこんだ親水軟膏をマウス耳介部に塗布投与した。馴化期間終了後、イソフルラン麻酔下でマウスの左右両耳介に０．５μｇ/ｍＬの抗ＤＮＰマウスＩｇＥ抗体液（シグマアルドリッチジャパン合同会社）を２０μＬ/耳介の用量で皮内投与し感作させた。感作処理の約２４時間後に、イソフルラン麻酔下でマウスの尾静脈内に０．５ｍｇ/ｍＬ  ＤＮＰ−ＢＳＡ抗原液（Bioresearch Technologies社製）を１００μＬ投与して病態惹起を行った。病態惹起前および抗原投与１時間後に、イソフルラン麻酔下でマウスの両耳介部厚を測定し、病態を評価した。測定には、Ｒ−１型アップライトゲージ（ＰＥＡＣＯＣＫ）を使用した。
【００８２】
結果を図７に示した。グラフでは、各投与群の平均値および標準偏差を示した。統計処理は、Studentのt検定により平均値の差を検定した。
【００８３】
抗原投与１時間後の耳介部厚増大値を比較したところ、いずれの投与方法においても、コントロール群に対して約７２〜７６％まで耳介部厚の増大平均値が減少しており、アレルギー性炎症症状の緩和傾向が確認された。経口投与における高用量群では統計学的に有意な差が認められたが、低用量群では有意差が認められなかった。当該高用量群と同程度の効果であった低用量群において有意差が認められなかった原因として、マウス個体間のばらつきが大きかったことが考えられる。高用量群では充分量が投与されたため、安定してアレルギー性炎症症状の緩和効果が表れてばらつきが小さくなったと推察された。
【００８４】
〔実施例６〕
実施例１で調製したイチジク茶を使用して、調製した茶抽出液を、−２０、４、３０、５０℃の温度条件で１〜８週間保存した。これら茶抽出液のＩ型アレルギー抑制効果について培養細胞を用いた実験で調べた。使用した培養細胞や、細胞の感作についての手法は実施例１に準じて行った。細胞の脱顆粒時に炎症物質ヒスタミンと同時に放出されるβ−Ｈｅｘ量を測定し、脱顆粒の指標とした。
【００８５】
結果を図８に示した。コントロールであるＰＢＳ（−）を添加した細胞株におけるβ−Ｈｅｘの放出量を１００％としたときの、イチジク茶を感作時に添加した時のβ−Ｈｅｘ放出量を示した。例えば８週間保存の場合では、−２０℃保存ではβ−Ｈｅｘの放出量は約３０％、４℃保存ではβ−Ｈｅｘの放出量は約５０％、３０℃保存ではβ−Ｈｅｘの放出量は約５０％、５０℃保存ではβ−Ｈｅｘの放出量は２１９％となった。この結果、茶抽出液の保存温度が高くなるに従い、Ｉ型アレルギー抑制強度の低下（劣化）が促進されるものと認められた。尚、最も強いＩ型アレルギー抑制効果を示したのは、４℃で１週間の保存を行った場合であった。
【００８６】
〔実施例７〕
実施例６において、Ｉ型アレルギー抑制効果について、大きな差が見られた茶抽出液（４℃／１週間、５０℃／１週間、５０℃／２週間）の成分を液体クロマトグラフ−ハイブリッド型質量分析計（ＬＣ−ＱＴｏｆ−ＭＳ、ＬＣ部：島津製作所社製、ＱＴｏｆ−ＭＳ部：ブルカーダルトニクス社製）で分析し、データを比較した。結果を図９に示した。図９は陽イオン検出モードの全イオン電流クロマトグラムの結果を示した。
【００８７】
この結果、強いＩ型アレルギー抑制効果を示す４℃／１週間の茶抽出液には、分子量３２４の成分が多く含まれているものと認められた。該当するピークに含まれる分子量ＭＳフラグメント、および、そのＭＳフラグメントから生成されるＭＳ/ＭＳフラグメントを基に、ライプニッツ植物生化学研究所（ドイツ）が公開しているMet Fragデータベースを用いたノンターゲット分析により成分を推定した。その結果、当該成分は、ジフルクトース無水物（ＤＦＡ）（分子量３２４．２８：図１０）であると推定された。
【００８８】
〔実施例８〕
実施例７より、Ｉ型アレルギー抑制効果に関与する成分として、ジフルクトース無水物（ＤＦＡ：Ｃ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/12" \o "12ノ意味" 12Ｈ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/20" \o "20ノ意味" 20Ｏ HYPERLINK "http://www.weblio.jp/content/10" \o "10ノ意味" 10）が推定された。ジフルクトース無水物は、イヌリンから生成される難消化性二糖である。そこで、ジフルクトース無水物の標準試薬を用いてイチジク茶での含有量を定量した。定量は、標準試料および茶抽出液において、選択イオン電流クロマトグラムによって行った。
【００８９】
ＤＦＡは多数存在する構造異性体の１種であるＤＦＡIII（ＣＡＳ：８１１２９−７３−９；和光純薬社製:図１０）を超純水に溶解して１０ｍＭ  ＤＦＡIII水溶液（標準試薬）を調製し、分子量３２５の選択イオン電流クロマトグラム（陽イオン検出）を行った。
【００９０】
図１１にＤＦＡの結果を示した。その結果、標準試料と茶抽出液において、ＤＦＡは、構造異性体の１種ＤＦＡIIIと質量分析結果は一致したが、保持時間で差が認められた。この結果から、イチジク茶抽出液に含まれるＤＦＡは、ＤＦＡIIIではなく、他の異性体であると推定された。
【００９１】
尚、定量性に優れた液体クロマトグラフ-トリプル四重極型質量分析計（ＬＣ−ＱＱＱ−ＭＳ：アジレント・テクノロジー社製）で、各成分の茶抽出液における含量を定量したところ、ＤＦＡ異性体（ＤＦＡIII換算）は３００μＭ程度含まれていること見積もられた（データは示さない）。
【００９２】
〔実施例９〕
多糖類であるイヌリンの熱分解によりＤＦＡの合成を試みた。
まず、フルクトースの重合体であるイヌリン（ＣＡＳ：９００５−８０−５；和光純薬社製）１．９７ｇを３０ｍＬの超純水に溶解し、イヌリン水溶液を調整した。
イヌリン水溶液にクエン酸終濃度１．５％になるようクエン酸水溶液を添加し混合した。混合液を−８０℃、一晩で凍結させた後、凍結乾燥機を用いて１．５％クエン酸含有イヌリン乾燥粉末を得た。
ガラス管に取得した乾燥粉末１０ｍｇを測り採り、ガラス管の口を溶封した。
溶封した試料を１６０℃、１２０分間加熱し熱分解させた後、冷却させ超純水１ｍＬに熱分解物を溶解させた。
熱分解物をＬＣ−ＱＴｏｆ−ＭＳで分析した。結果を図１２に示した。
【００９３】
その結果、イヌリン熱分解物には、ＤＦＡIIIおよび茶抽出液と一致するピーク（２〜３分の間）が検出された。この結果から、茶抽出液の有効成分は、イヌリン分解物でありＤＦＡ異性体であると同定された。
【００９４】
また、センナ茶も同様にＤＦＡ異性体が存在する結果が得られた（データは示さない）。
【００９５】
〔実施例１０〕
上述した実施例６〜９より、イチジク茶抽出液に含まれるＩ型アレルギー抑制効果に関与する成分として、ＤＦＡ（異性体）が同定された。ＤＦＡは二糖類であるが、他の二糖類についてＩ型アレルギー抑制効果に関与する成分が存在するかどうかを調べた。
【００９６】
本実施例では、スクロース（図１３）、ツラノース（図１４）、イソマルトース（図１５）、トレハロース（図１６）、セロビオース（図１７）、メリビオース（図１８）およびパラチノース（図１９）について調べた。
【００９７】
これらの標準試薬は、スクロース（ＣＡＳ：５７−５０−１；和光純薬社製）、ツラノース（ＣＡＳ：５４７−２５−１；東京化成工業株式会社製）、イソマルトース（ＣＡＳ：４９９−４０−１；MP Biomedical社製）、トレハロース（ＣＡＳ：９９−２０−７；東京化成工業株式会社製）、セロビオース（ＣＡＳ：５２８−５０−７；東京化成工業株式会社製）、メリビオース（ＣＡＳ：５８５−９９−９；和光純薬社製）、パラチノース（ＣＡＳ：１３７１８−９４−０；東京化成工業株式会社製）を使用し、それぞれを超純水に溶解させ、１００ｍＭ溶液を調製した。
【００９８】
上記で調製した各溶液を１ｍＭになるよう、７５％アセトニトリルで希釈した。また、実施例１で調製したイチジク茶の茶抽出液を７５％アセトニトリルで１０倍希釈し、ＬＣ−ＱＴｏｆ−ＭＳによる定性分析を実施した（分子量３４１の選択イオン電流クロマトグラム（陰イオン検出））。結果を図２０に示した。
【００９９】
この結果、スクロースあるいはツラノースは、イチジク茶の茶抽出液と同等の保持時間で、ピークが検出された。スクロースとツラノースは異性体であり、本実施例の分離条件では分離できていない。従って、イチジク茶には、スクロースかツラノース、あるいはその両方が含まれていると示唆された。
【０１００】
上記で使用した７種類の二糖類を使用して、Ｉ型アレルギー抑制効果の評価を実施した。使用した培養細胞や、細胞の感作についての手法は実施例１に準じて行った。細胞の脱顆粒時に炎症物質ヒスタミンと同時に放出されるβ−Ｈｅｘ量を測定し、脱顆粒の指標とした。
【０１０１】
コントロールとして茶抽出液を使用し、さらに、各二糖類の添加後の濃度が１２０μＭとなるように設定した水溶液を使用して、放出されるβ−Ｈｅｘ量を測定した。結果を図２１に示した。図２１では、陰性対照区（ＰＢＳ添加区）のβ−Ｈｅｘ放出率を１００％とした相対値を示している。
【０１０２】
その結果、各二糖類単独では、Ｉ型アレルギー抑制効果は、茶抽出液には及ばなかった。
【０１０３】
〔実施例１１〕
実施例１０で示唆されたように、茶抽出液に含まれていると考えられるスクロースおよびツラノースのＩ型アレルギー抑制効果に対する併用効果について調べた。本実施例では、実施例７で茶抽出液に含まれていると推定されたＤＦＡとの併用効果についても調べた。使用した培養細胞や、細胞の感作についての手法は実施例１に準じて行った。細胞の脱顆粒時に炎症物質ヒスタミンと同時に放出されるβ−Ｈｅｘ量を測定し、脱顆粒の指標とした。
【０１０４】
コントロールとして茶抽出液を使用し、さらに、スクロース（添加量１２０，５００，１２００μＭ）、ツラノース（添加量１２０，５００，１２００μＭ）、ＤＦＡIII（添加量３０，１００，３００μＭ）を使用した。ＤＦＡについては入手が容易なＤＦＡIII（ＣＡＳ：８１１２９−７３−９；和光純薬社製）を使用した（以下の実施例についても同様とした）。
【０１０５】
また、スクロースおよびツラノースの併用は、６０μＭずつとし、併せて１２０μＭになるよう調整した。スクロースおよびツラノースに対してＤＦＡIIIを併用したときは、スクロースおよびツラノースの１２０μＭに３０μＭを添加した。結果を図２２に示した。
【０１０６】
その結果、イチジク茶の有効成分と考えられるスクロースおよびツラノース、スクロースおよびＤＦＡ（ＤＦＡIII）、ツラノースおよびＤＦＡの二種併用では、相加効果も確認されず、各試料の単独処理時と同等であった。しかし、スクロース、ツラノース、ＤＦＡの三種を併用することで、茶抽出液に匹敵する効果が確認された。従って、イチジク茶のＩ型アレルギー抑制効果は、スクロース、ツラノースおよびＤＦＡの三成分の混合によるものと推測された。
【０１０７】
〔実施例１２〕
イチジク茶の有効成分と考えられるスクロース、ツラノースおよびＤＦＡ（ＤＦＡIII）のＩｇＥ抗体解離作用について調べた。
【０１０８】
イチジク茶、スクロース、ツラノースおよびＤＦＡをそれぞれ感作細胞に添加し、当該感作細胞からＩｇＥ抗体が解離する量を測定した。感作後の細胞（ＩｇＥ抗体が結合した状態）を、イチジク茶、スクロース、ツラノースおよびＤＦＡを添加したＭＥＭ培地中で一定時間（２４時間あるいは６時間）３７℃で培養した後、ＭＥＭ培地のみを回収した。ＭＥＭ培地中に含まれているＩｇＥ抗体を免疫沈降法により選択的に回収し、当該ＩｇＥ抗体の量をＩｇＥ特異的抗体によるイムノブロット法により検出した。抽出タンパク質の定量は、ＤＣプロテインアッセイキット（バイオラッド）により定量した。結果を図２３に示した。また、培地中のＩｇＥ抗体量（コントロール（ＰＢＳ）を１とする）の結果を図２４に示した。
【０１０９】
この結果、レーンＣ〜Ｆにおいて、ＩｇＥ抗体と認められるバンドが確認された。バンドの濃さから、レーンＣのイチジク茶およびレーンＦの三種併用（スクロース、ツラノースおよびＤＦＡ）は、同等のＩｇＥ抗体解離作用を有すると認められた。レーンＤのスクロース、および、レーンＥのツラノース単体では、バンドの濃さからイチジク茶より少し弱いＩｇＥ抗体解離作用を有すると認められた。以上より、イチジク茶では、スクロース、ツラノースおよびＤＦＡの３物質が組合わさることで、強いＩｇＥ抗体解離作用を示し、Ｉ型アレルギーを抑制することが示唆された。
【０１１０】
〔実施例１３〕
本実施例では、二糖類であるイソマルトースとＤＦＡのＩ型アレルギー抑制効果および抑制機構について調査した。イソマルトースおよびＤＦＡについては、上記実施例で使用した標品を使用した。
【０１１１】
使用した培養細胞や、細胞の感作についての手法は実施例１に準じて行った。細胞の脱顆粒時に炎症物質ヒスタミンと同時に放出されるβ−Ｈｅｘ量を測定し、脱顆粒の指標とした。
【０１１２】
イソマルトース水溶液（濃度１０，５０，１２０μＭ）、および、ＤＦＡIII水溶液（濃度１０，３０，５０，１００μＭ）を調製した。
【０１１３】
コントロールとしてイチジク茶抽出液を使用し、さらに、イソマルトースおよびＤＦＡIIIを混合した水溶液を使用して、放出されるβ−Ｈｅｘ量を測定した。各物質の培養細胞への添加量は、茶抽出液含有量を基に算出した。結果を図２５に示した。
【０１１４】
この結果、イソマルトース（添加量１２０μＭ）、ＤＦＡIII（添加量３０，５０μＭ）共にＩ型アレルギー抑制効果が確認された。また、イソマルトース（添加量１２０μＭ）の方がＤＦＡIIIより強い効果を示したが、イチジク茶抽出液には及ばなかった。
イソマルトースは濃度依存的に抑制強度が高まり、１２０μＭ処理区のβ−Ｈｅｘ放出量は、陰性対照区（ＰＢＳ：データは示さない）の半分であった。一方、ＤＦＡIIIは、３０−５０μＭ処理区でのβ−Ｈｅｘ放出量が最も低く、陰性対照区の６０％程度であった。また、高濃度のＤＦＡIIIでは抑制強度の低下が見られたことから、ＤＦＡIIIにおいては処理濃度５０μＭ程度が至適であることが示唆された。両物質ともイチジク茶抽出液より効果は弱く、併用による増加効果も確認されなかった。
【０１１５】
〔実施例１４〕
イソマルトースおよびＤＦＡのＩｇＥ抗体解離作用について調べた。
【０１１６】
イチジク茶、ＤＦＡIII、イソマルトース等をそれぞれ感作細胞に添加し、当該感作細胞からＩｇＥ抗体が解離する量を測定した。感作後の細胞（ＩｇＥ抗体が結合した状態）を、イチジク茶、ＤＦＡIII、イソマルトース等を添加したＭＥＭ培地中で一定時間（２４時間あるいは６時間）３７℃で培養した後、ＭＥＭ培地のみを回収した。ＭＥＭ培地中に含まれているＩｇＥ抗体を免疫沈降法により選択的に回収し、当該ＩｇＥ抗体の量をＩｇＥ特異的抗体によるイムノブロット法により検出した。抽出タンパク質の定量は、ＤＣプロテインアッセイキット（バイオラッド）により定量した。結果を図２６に示した。また、培地中のＩｇＥ抗体量（コントロール（ＰＢＳ）を１とする）の結果を図２７に示した。
【０１１７】
この結果、レーンｂ〜eにおいて、ＩｇＥ抗体と認められるバンドが確認された。バンドの濃さから、レーンｂのイチジク茶およびレーンdのイソマルトースは、同等のＩｇＥ抗体解離作用を有すると認められた。レーンｃのＤＦＡIIIは、イチジク茶より少し弱いＩｇＥ抗体解離作用を有すると認められた。レーンｅのイソマルトースおよびＤＦＡIIIの併用による増加効果は確認されなかった。
【０１１８】
即ち、ＩｇＥ抗体解離作用については、イソマルトースでイチジク茶抽出液と同等の効果が確認され、ＤＦＡIIIにおいても茶抽出液には劣るが作用が確認された。一方、両物質の併用では、相加・相乗効果は確認されなかった。以上の結果から、両物質がＩｇＥ抗体解離作用を有していることも明らかとなった。即ち、抗体解離組成物は、イソマルトースを含み、さらにＤＦＡを含むことが示唆された。
【産業上の利用可能性】
【０１１９】
本発明の抗Ｉ型アレルギー抑制剤および当該抗Ｉ型アレルギー抑制剤を使用する方法は、Ｉ型アレルギー症状を緩和・抑制・予防するために利用することができる。
【図１】
2017039720.tif 000002
【図２】
2017039720.tif 000003
【図４】
2017039720.tif 000004
【図５】
2017039720.tif 000005
【図６】
2017039720.tif 000006
【図７】
2017039720.tif 000007
【図８】
2017039720.tif 000008
【図９】
2017039720.tif 000009
【図１０】
2017039720.tif 000010
【図１１】
2017039720.tif 000011
【図１２】
2017039720.tif 000012
【図１３】
2017039720.tif 000013
【図１４】
2017039720.tif 000014
【図１５】
2017039720.tif 000015
【図１６】
2017039720.tif 000016
【図１７】
2017039720.tif 000017
【図１８】
2017039720.tif 000018
【図１９】
2017039720.tif 000019
【図２０】
2017039720.tif 000020
【図２１】
2017039720.tif 000021
【図２２】
2017039720.tif 000022
【図２４】
2017039720.tif 000023
【図２５】
2017039720.tif 000024
【図２７】
2017039720.tif 000025
【図３】
2017039720.tif 000026
【図２３】
2017039720.tif 000027
【図２６】
2017039720.tif 000028
【手続補正書】
【提出日】平成28年9月13日(2016.9.13)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５１】
ジフルクトース無水物（ＤＦＡ：Ｃ12Ｈ20Ｏ10：分子量３２４．２８）は、イヌリンから生成される難消化性二糖である。
スクロース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11：分子量３４２．２９）は、グルコース（ブドウ糖）とフルクトース（果糖）がα−１，２−グリコシド結合した糖であり、二糖類の一種である。
ツラノース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）はグルコースとフルクトースがα１−６結合で結合した、二糖の一種である。
イソマルトース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）は、グルコース２分子がα１−６結合で結合した、二糖の一種である。
トレハロース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）は、グルコースが１，１−グリコシド結合してできた二糖の一種である。
セロビオース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）は、グルコース２分子がβ１−４結合でつながった二糖の一種である。
メリビオース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）は、ガラクトースとグルコースがα１−６結合で連なった二糖の一種である。
パラチノース（Ｃ12Ｈ22Ｏ11）は、グルコースおよびフルクトースからなる二糖の一種である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８８】
〔実施例８〕  実施例７より、Ｉ型アレルギー抑制効果に関与する成分として、ジフルクトース無水物（ＤＦＡ：Ｃ12Ｈ20Ｏ10）が推定された。ジフルクトース無水物は、イヌリンから生成される難消化性二糖である。そこで、ジフルクトース無水物の標準試薬を用いてイチジク茶での含有量を定量した。定量は、標準試料および茶抽出液において、選択イオン電流クロマトグラムによって行った。