(57)【要約】【課題】がん細胞に対して細胞死を誘導、細胞増殖を抑制する。【解決手段】ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含む；又はＧＳＴ−πを抑制する薬物と、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として含む。【選択図】図１
2017226626.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含む；又はＧＳＴ−πを抑制する薬物と、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として含む、がん細胞の細胞死誘導剤。
【請求項２】
ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含む；又はＧＳＴ−πを抑制する薬物と、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として含む、がん細胞の細胞増殖抑制剤。
【請求項３】
上記薬物が、ＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらのうち少なくとも１種を発現するベクターからなる群から選択される物質であることを特徴とする請求項１又は２記載の剤。
【請求項４】
上記ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物が、当該ＭＲＰＬ１７に作用する化合物であることを特徴とする請求項１又は２記載の剤。
【請求項５】
アポトーシスを誘導することを特徴とする請求項１記載の剤。
【請求項６】
上記がん細胞は、ＧＳＴ−πを高発現するがん細胞であることを特徴とする請求項１又は２記載の剤。
【請求項７】
請求項１乃至６いずれか一項記載の剤を含む、細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物。
【請求項８】
ＧＳＴ−πを抑制する薬物と組み合わせて投与されることを特徴とする、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含有する、細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物。
【請求項９】
ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物と組み合わせて投与されることを特徴とする、ＧＳＴ−πを抑制する薬物を有効成分として含有する、細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物。
【請求項１０】
上記疾患ががんであることを特徴とする請求項７乃至９いずれか一項記載の医薬組成物。
【請求項１１】
上記がんはＧＳＴ−πを高発現するがんであることを特徴とする請求項１０記載の医薬組成物。
【請求項１２】
ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を選択することを含む、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項１３】
がん細胞に対して被検物質を接触させる工程と、上記細胞におけるＭＲＰＬ１７の発現量を測定する工程と、被検物質の非存在下において測定した場合と比較して、当該発現量が低下した場合にＭＲＰＬ１７を抑制する薬物として選択する工程とを含む請求項１２記載のスクリーニング方法。
【請求項１４】
ＧＳＴ−πを抑制する薬物を選択することを含む、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項１５】
がん細胞に対して被検物質を接触させる工程と、上記細胞におけるＧＳＴ−πの発現量を測定する工程と、被検物質の非存在下において測定した場合と比較して、当該発現量が低下した場合にＧＳＴ−πを抑制する薬物として選択する工程とを含む請求項１４記載のスクリーニング方法。
【請求項１６】
ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を選択することを含む、細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法。
【請求項１７】
がん細胞に対して被検物質を接触させる工程と、上記細胞におけるＧＳＴ−πの発現量及びＭＲＰＬ１７の発現量を測定する工程と、被検物質の非存在下において測定した場合と比較して、ＧＳＴ−πの発現量及びＭＲＰＬ１７の発現量がともに低下した場合にＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物として選択する工程とを含む請求項１６記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、がん細胞に対する細胞死誘導剤、細胞増殖抑制剤、細胞増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物に関し、更に細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤をスクリーニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞増殖の異常に起因する疾患としては、典型的な例としてがんを挙げることができる。がんは、遺伝子の突然変異やエピジェネティックな異常などにより、細胞が無制御に増殖する疾患である。がんにおける遺伝子異常としてはすでに数多くのものが報告されており（例えば、非特許文献１など）、その多くが、細胞の増殖、分化、生存に関するシグナル伝達に何らかの関連を有していると考えられている。また、かかる遺伝子異常により、正常な分子で構成される細胞内のシグナル伝達が異常を来し、これが特定のシグナルカスケードの活性化や不活性化をもたらし、最終的に細胞の異常増殖を引き起す一因となることもある。
【０００３】
初期のがん治療は、細胞増殖自体の抑制に主眼がおかれていたが、かかる治療は生理的に正常細胞の増殖をも抑制してしまうため、脱毛、消化器障害、骨髄抑制などの副作用を伴っていた。そこで、かかる副作用を抑えるため、がん特有の遺伝子異常や、シグナル伝達の異常を標的とした分子標的薬などの新たな発想に基づくがん治療薬の開発が進められている。
【０００４】
がんは、様々ながん遺伝子、がん抑制遺伝子、ＤＮＡ修復酵素遺伝子等の異常が同一細胞に蓄積することにより発生すると考えられている。がん遺伝子としては、ＲＡＳ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＭＹＣ遺伝子及びＢＣＬ−２遺伝子等が知られている。がんに特有の遺伝子異常のなかでも、膵臓がんの約９５％、大腸がんの約４５％、その他、多くのがんにおいて高頻度でＫＲＡＳ遺伝子に変異が見られる。ＫＲＡＳタンパク質は、細胞膜の内側に局在しているＧタンパク質である。ＫＲＡＳ等のＲＡＳは、Ｃ−ＲＡＦやＢ−ＲＡＦ等のＲＡＦを活性化し、ＲＡＦは引き続きＭＥＫを、ＭＥＫはＭＡＰＫを活性化するというカスケードを形成している。ＫＲＡＳに点突然変異が起こると、ＧＴＰａｓｅ活性が低下し、ＧＴＰが結合した活性型を維持することで下流へのシグナルが恒常的に持続する結果、細胞増殖に異常が生じる。ＫＲＡＳ遺伝子に代表されるように、がん遺伝子により細胞増殖に異常が生じることで細胞のがん化、そして、疾患としてのがんへと進行する。
【０００５】
ところで、グルタチオン包含を触媒する酵素の１つであるグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）は、薬剤等の物質をグルタチオン（ＧＳＨ）と共役させ、水溶性の物質とする酵素として知られている。ＧＳＴは、アミノ酸配列に基づいて、代表的なものとして、α、μ、ω、π、θ及びζの６種類のアイソザイムに分類される。なかでも、特にＧＳＴ−π（glutathione S-transferase pi、ＧＳＴＰ１ともいう）の発現が、種々のがん細胞において増大しており、これが一部の抗がん剤に対する耐性の一因となっている可能性が指摘されている。実際、ＧＳＴ−πを過剰発現しており、薬物耐性を示すがん細胞系に、ＧＳＴ−πに対するアンチセンスＤＮＡやＧＳＴ−π阻害剤を作用させると、薬剤耐性が抑制されることが知られている（非特許文献２〜４）。さらに、最近の報告では、ＧＳＴ−πを過剰発現するアンドロゲン非依存性前立腺がん細胞系にＧＳＴ−πに対するｓｉＲＮＡを作用させるとその増殖が抑制され、アポトーシスが増大することが報告されている（非特許文献５）。
【０００６】
また、ＧＳＴ−πについては、ｃ−Ｊｕｎ  Ｎ末端キナーゼ（ＪＮＫ）と複合体を形成し、ＪＮＫ活性を阻害することが知られている（非特許文献６）。さらに、ＧＳＴ−πについては、細胞のストレス応答に関連するタンパク質のS-グルタチオン化に関与することが知られている（非特許文献７）。さらにまた、ＧＳＴ−πについては、活性酸素種（ＲＯＳ）によって誘導される細胞死に対する保護作用に寄与することが知られている（非特許文献８）。このように、ＧＳＴのなかでもＧＳＴ−πは、様々な特徴・機能を有していることが理解できる。
【０００７】
ＫＲＡＳに変異を有するがん細胞系にＧＳＴ−πに対するｓｉＲＮＡを作用させると、Ａｋｔの活性化が抑制され、オートファジーが増大するが、アポトーシスの誘導は中程度となることが報告されている（非特許文献９）。特許文献１には、ＧＳＴ−πを抑制する薬物と、３−メチルアデニン等のオートファジー阻害剤とを活性成分とすることで、がん細胞のアポトーシスを誘導できることが開示されている。さらに、特許文献２には、ＧＳＴ−πとＡｋｔ等の発現を同時に阻害すると、細胞増殖が抑制され、細胞死が誘導されること、ＧＳＴ−πの発現阻害により誘導されたオートファジーが、Ａｋｔ等の発現を同時に阻害することにより顕著に抑制されることが開示されている。
【０００８】
しかしながら、がん細胞において、ＧＳＴ−πの発現と細胞増殖或いは細胞死との関係や、シグナル伝達に関するＧＳＴ−πの役割等について十分に解明されたとは言えない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】WO2012/176282
【特許文献２】WO2014/098210
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Futreal et al., Nat Rev Cancer. 2004;4(3):177-83
【非特許文献２】Takahashi and Niitsu, Gan To Kagaku Ryoho. 1994;21(7):945-51
【非特許文献３】Ban et al., Cancer Res. 1996;56(15):3577-82
【非特許文献４】Nakajima et al., J Pharmacol Exp Ther. 2003;306(3):861-9
【非特許文献５】Hokaiwado et al., Carcinogenesis. 2008;29(6):1134-8
【非特許文献６】Adler et.al, EMBO J. 1999, 18, 1321-1334
【非特許文献７】Townsend, et.al, J. Biol. Chem. 2009, 284, 436-445
【非特許文献８】Yin et.al, Cancer Res. 2000 60, 4053-4057
【非特許文献９】Nishita et al., AACR 102nd Annual Meeting, Abstract No. 1065
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
そこで、本発明は、がん細胞に対して、細胞死誘導作用及び/又は細胞増殖抑制作用を有する剤を提供し、細胞増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物を提供し、細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤をスクリーニングする方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上述した目的に鑑み、本発明者らが鋭意検討した結果、がん細胞において、ＧＳＴ−πを抑制するとともに、ＭＲＰＬ１７を抑制すると、いずれか一方を抑制した場合と比較して、細胞死をより強く誘導すること、細胞増殖がより強力に抑制されることを見いだし、本発明を完成するに至った。本発明は以下を包含する。
【００１３】
（１）ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含む；又はＧＳＴ−πを抑制する薬物と、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として含む、がん細胞の細胞死誘導剤。
（２）ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含む；又はＧＳＴ−πを抑制する薬物と、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として含む、がん細胞の細胞増殖抑制剤。
（３）上記薬物が、ＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらのうち少なくとも１種を発現するベクターからなる群から選択される物質であることを特徴とする（１）又は（２）記載の剤。
（４）上記ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物が、当該ＭＲＰＬ１７に作用する化合物であることを特徴とする（１）又は（２）記載の剤。
（５）アポトーシスを誘導することを特徴とする（１）記載の剤。
（６）上記がん細胞は、ＧＳＴ−πを高発現するがん細胞であることを特徴とする（１）又は（２）記載の剤。
（７）上記（１）〜（６）のいずれかに記載の剤を含む、細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物。
（８）ＧＳＴ−πを抑制する薬物と組み合わせて投与されることを特徴とする、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含有する、細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物。
（９）ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物と組み合わせて投与されることを特徴とする、ＧＳＴ−πを抑制する薬物を有効成分として含有する、細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用医薬組成物。
（１０）上記疾患ががんであることを特徴とする（７）乃至（９）いずれか記載の医薬組成物。
（１１）上記がんはＧＳＴ−πを高発現するがんであることを特徴とする（１０）記載の医薬組成物。
（１２）ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を選択することを含む、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法。
（１３）がん細胞に対して被検物質を接触させる工程と、上記細胞におけるＭＲＰＬ１７の発現量を測定する工程と、被検物質の非存在下において測定した場合と比較して、当該発現量が低下した場合にＭＲＰＬ１７を抑制する薬物として選択する工程とを含む（１２）記載のスクリーニング方法。
（１４）ＧＳＴ−πを抑制する薬物を選択することを含む、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法。
（１５）がん細胞に対して被検物質を接触させる工程と、上記細胞におけるＧＳＴ−πの発現量を測定する工程と、被検物質の非存在下において測定した場合と比較して、当該発現量が低下した場合にＧＳＴ−πを抑制する薬物として選択する工程とを含む（１４）記載のスクリーニング方法。
（１６）ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を選択することを含む、細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤のスクリーニング方法。
（１７）がん細胞に対して被検物質を接触させる工程と、上記細胞におけるＧＳＴ−πの発現量及びＭＲＰＬ１７の発現量を測定する工程と、被検物質の非存在下において測定した場合と比較して、ＧＳＴ−πの発現量及びＭＲＰＬ１７の発現量がともに低下した場合にＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物として選択する工程とを含む（１６）記載のスクリーニング方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明に係る細胞死誘導剤によれば、がん細胞に対して非常に強力に細胞死を誘導することができる。よって、本発明に係る細胞死誘導剤は、がん細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用の医薬組成物として非常に高い薬効を奏することが可能となる。
【００１５】
また、本発明に係る細胞増殖抑制剤によれば、がん細胞に対して非常に強力に細胞増殖を抑制することができる。よって、本発明に係る細胞増殖抑制剤は、がん細胞の増殖異常に起因する疾患の治療用の医薬組成物として非常に高い薬効を奏することが可能となる。
【００１６】
さらに、本発明に係るスクリーニング方法によれば、がん細胞に対して非常に強力に細胞死を誘導する及び/又は細胞増殖を抑制する薬剤を選択することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】ＧＳＴ−πの発現を抑制するｓｉＲＮＡ及び/又はＭＲＰＬ１７の発現を抑制するｓｉＲＮＡを作用させたときの、変異型ＫＲＡＳを発現する細胞における相対生存率を比較した結果を示す特性図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明に係る細胞死誘導剤及び細胞増殖抑制剤は、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を有効成分として含む、又は、ＧＳＴ−πを抑制する薬物と、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として含む。本発明に係る細胞死誘導剤及び細胞増殖抑制剤は、がん細胞に対して細胞死誘導効果及び細胞増殖抑制効果を示すものである。ここで、がん細胞とは、遺伝子（がん関連遺伝子）に起因して増殖異常を示す細胞である。
【００１９】
例えば、がん関連遺伝子のうち、がん遺伝子としては、ＫＲＡＳ遺伝子、ＦＯＳ遺伝子、ＭＹＣ遺伝子、ＢＣＬ−２遺伝子及びＳＩＳ遺伝子等を挙げることができる。また、がん関連遺伝子のうち、がん抑制遺伝子としては、ＲＢ遺伝子、ｐ５３遺伝子、ＢＲＣＡ１遺伝子、ＮＦ１遺伝子及びｐ７３遺伝子等を挙げることができる。ただし、がん細胞としては、これら具体的ながん関連遺伝子が関与したがん細胞に限定されるものではなく、広く細胞増殖異常を示す細胞に適用することができる。
【００２０】
特に、本発明に係る細胞死誘導剤及び細胞増殖抑制剤は、がん細胞のうちＧＳＴ−πを高発現するがん細胞に適用することが好ましい。ここで、ＧＳＴ−πを高発現するがん細胞とは、細胞増殖異常を示す細胞（いわゆるがん細胞）のうち、ＧＳＴ−πの発現量が正常細胞と比較して有意に高い細胞を意味する。なおＧＳＴ−πの発現量は、ＲＴ−ＰＣＲやマイクロアレイ等、定法に従って測定することができる。
【００２１】
多くの場合、ＧＳＴ−πを高発現するがん細胞とは、一例としては変異型ＫＲＡＳを発現するがん細胞を挙げることができる。すなわち、本発明に係る細胞死誘導剤及び細胞増殖抑制剤は、変異型ＫＲＡＳを発現するがん細胞に適用することが好ましい。
【００２２】
変異型ＫＲＡＳとは、野生型ＫＲＡＳのアミノ酸配列に欠失、置換、付加、挿入といった変異が導入されたアミノ酸配列を有するタンパク質を意味する。なお、ここで、変異型ＫＲＡＳにおける変異は、いわゆる機能獲得性変異（gain of function）である。すなわち、変異型ＫＲＡＳを発現する細胞は、これら変異に起因して、例えばＧＴＰａｓｅ活性が低下し、ＧＴＰが結合した活性型を維持することで下流へのシグナルが恒常的に持続する結果、野生型ＫＲＡＳを発現する細胞と比較して細胞増殖に異常が生じる。変異型ＫＲＡＳをコードする遺伝子としては、野生型ＫＲＡＳ遺伝子におけるコドン１２、コドン１３及びコドン６１のうち少なくとも１箇所に変異を有する遺伝子が挙げられる。特に、変異型ＫＲＡＳとしては、コドン１２及び１３の変異が好ましい。具体的には、ＫＲＡＳ遺伝子のコドン１２がコードするグリシンがセリン、アスパラギン酸、バリン、システイン、アラニン又はアルギニンに置換する変異、ＫＲＡＳ遺伝子のコドン１３がコードするグリシンがアスパラギン酸に変わる変異が挙げられる。
【００２３】
本明細書で用いる場合、ＧＳＴ−πは、ＧＳＴＰ１遺伝子によりコードされる、グルタチオン抱合を触媒する酵素を指す。ＧＳＴ−πはヒトを含む種々の動物に存在し、その配列情報も公知である（例えば、ヒト：NM_000852（NP_000843）、ラット：NM_012577（NP_036709）、マウス：NM_013541（NP_038569）など。番号はＮＣＢＩデータベースのアクセッション番号を示し、括弧外は塩基配列、括弧内はアミノ酸配列の番号である）。一例として、データベースに登録されているヒトＧＳＴ−π遺伝子のコーディング領域の塩基配列を配列番号１に示し、当該ヒトＧＳＴ−π遺伝子がコードするヒトＧＳＴ−πタンパク質のアミノ酸配列を配列番号２に示す。
【００２４】
ＭＲＰＬ１７は、ミトコンドリアリボソームタンパク質Ｌ１７であり、ミトコンドリアにおけるタンパク質合成に関与している。ミトコンドリアのリボソームは、小28Sサブユニットと大39Sサブユニットから構成される。ＭＲＰＬ１７は大39Sサブユニットに相当している。
【００２５】
ＭＲＰＬ１７は、ヒトを含む種々の動物に存在し、その配列情報も公知である（例えば、ヒト：NM_022061.3（NP_071344.1）など。番号はＮＣＢＩデータベースのアクセッション番号を示し、括弧外は塩基配列、括弧内はアミノ酸配列の番号である）。一例として、NM_022061.3としてデータベースに登録されているヒトＭＲＰＬ１７遺伝子の塩基配列を配列番号３に示し、当該ヒトＭＲＰＬ１７遺伝子がコードするヒトＭＲＰＬ１７タンパク質のアミノ酸配列を配列番号４に示す。なお、本明細書において、ＭＲＰＬ１７は、配列番号３の塩基配列によりコードされる配列番号４のアミノ酸配列からなるタンパク質に限定されるものではない。
【００２６】
なお、以上のように、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７について、具体的な塩基配列及びアミノ酸配列により特定できるが、生物個体間において塩基配列やアミノ酸配列の変異が生じる可能性（多型を含む）を考慮しなければならない。
【００２７】
すなわち、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７は、データベースに登録されたアミノ酸配列と同一の配列を有するタンパク質に限定されず、同配列に対し１個又は２個以上、典型的には１個又は数個、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個又は１０個のアミノ酸が相違する配列を有し、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７と同等の機能を有するものも含む。
【００２８】
また、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７は、上述した具体的な塩基配列に対して７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上又は９７％以上の同一性を有する塩基配列からなり、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７と同等の機能を有するタンパク質をコードするものも含む。なお、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７の具体的機能については、上述のとおりである。
【００２９】
なお、本明細書において、「本明細書で用いる場合」、「本明細書で用いる」、「本明細書において」、「本明細書に記載される」等の句は、特に別記しない限り、これに引続く記載が本明細書に記載された全ての発明に適用されることを意味するものとする。また、他に定義されない限り、本明細書で用いる全ての技術用語及び科学用語は、当業者が通常理解しているものと同じ意味を有する。本明細書中で参照する全ての特許、公報及び他の出版物は、その全体を本明細書に援用する。
【００３０】
本明細書で用いる「ＧＳＴ−πを抑制する薬物」には、限定されずに、例えば、ＧＳＴ−πの産生及び/又は活性を抑制する薬物や、ＧＳＴ−πの分解及び/又は不活性化を促進する薬物などが含まれる。ＧＳＴ−πの産生を抑制する薬物としては、これに限定するものではないが、例えばＧＳＴ−πをコードするＤＮＡに対するＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらを発現するベクター等が挙げられる。
【００３１】
また、ＧＳＴ−πを抑制する薬物としては、ＧＳＴ−πに対して作用する如何なる化合物であっても使用することができる。このような化合物としては、有機化合物（アミノ酸、ポリペプチド又はその誘導体、低分子化合物、糖、高分子化合物等）、無機化合物等を使用することができる。また、このような化合物は、天然物質及び非天然物質のいずれであってもよい。ポリペプチドの誘導体としては、修飾基を付加して得られた修飾ポリペプチド、アミノ酸残基を改変することにより得られたバリアントポリペプチド等が挙げられる。さらに、このような化合物は、単一化合物であってもよいが、化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等であってもよい。すなわち、「ＧＳＴ−πを抑制する薬物」には、ＲＮＡｉ分子等の核酸に限定されず、如何なる化合物も含まれる。
【００３２】
具体的には、ＧＳＴ−πの活性を抑制する薬物としては、これに限定するものではないが、例えば、ＧＳＴ−πに結合する物質、例えば、グルタチオン、グルタチオンアナログ（例えば、WO 95/08563、WO 96/40205、WO 99/54346、非特許文献４等に記載のもの）、ケトプロフェン（非特許文献２）、インドメタシン（Hall et al., Cancer Res. 1989;49(22):6265-8）、エタクリン酸、ピロプロスト（Tew et al., Cancer Res. 1988;48(13):3622-5）、抗ＧＳＴ−π抗体、ＧＳＴ−πのドミナントネガティブ変異体等が挙げられる。これらの薬物は市販されているか、公知の技術に基づいて適宜製造することができる。
【００３３】
ＧＳＴ−πの産生又は活性を抑制する薬物としては、特異性の高さや、副作用の可能性の低さから、ＧＳＴ−πをコードするＤＮＡに対するＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらを発現するベクターが好ましい。
【００３４】
ＧＳＴ−πの抑制は、ＧＳＴ−π抑制剤を作用させなかった場合に比べ、細胞においてＧＳＴ−πの発現や活性が抑制されていることにより決定することができる。ＧＳＴ−πの発現は、既知の任意の手法、限定されずに、例えば、抗ＧＳＴ−π抗体を利用した免疫沈降法、ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ、ＩＲＡ、ＩＲＭＡ、ウェスタンブロッティング法、免疫組織化学法、免疫細胞化学法、フローサイトメトリー法、ＧＳＴ−πをコードする核酸もしくはそのユニークな断片又は該核酸の転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）もしくはスプライシング産物に特異的にハイブリダイズする核酸を利用した、種々のハイブリダイゼーション法、ノーザンブロット法、サザンブロット法、種々のＰＣＲ法などにより評価することができる。
【００３５】
また、ＧＳＴ−πの活性は、ＧＳＴ−πの既知の活性、限定されずに、例えば、Ｒａｆ−１（特にリン酸化Ｒａｆ−１）や、ＥＧＦＲ（特にリン酸化ＥＧＦＲ）などのタンパク質との結合性などを、既知の任意の方法、例えば、免疫沈降法、ウェスタンブロッティング法、質量分析法、プルダウン法、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法などにより解析することによって評価することができる。
【００３６】
本明細書で用いる「ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物」には、限定されずに、例えば、ＭＲＰＬ１７の産生及び/又は活性を抑制する薬物や、ＭＲＰＬ１７の分解及び/又は不活性化を促進する薬物などが含まれる。ＭＲＰＬ１７の産生を抑制する薬物としては、これに限定するものではないが、例えば、ＭＲＰＬ１７をコードするＤＮＡに対するＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらを発現するベクター等が挙げられる。また、ＭＲＰＬ１７の活性を抑制する薬物、ＭＲＰＬ１７の分解及び/又は不活性化を促進する薬物としては、ＭＲＰＬ１７に対して作用する如何なる化合物であっても使用することができる。このような化合物としては、有機化合物（アミノ酸、ポリペプチド又はその誘導体、低分子化合物、糖、高分子化合物等）、無機化合物等を使用することができる。また、このような化合物は、天然物質及び非天然物質のいずれであってもよい。ポリペプチドの誘導体としては、修飾基を付加して得られた修飾ポリペプチド、アミノ酸残基を改変することにより得られたバリアントポリペプチド等が挙げられる。さらに、このような化合物は、単一化合物であってもよいが、化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等であってもよい。すなわち、「ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物」には、ＲＮＡｉ分子等の核酸に限定されず、如何なる化合物も含まれる。
【００３７】
より具体的に、ＭＲＰＬ１７の活性を抑制する薬物としては、これに限定するものではないが、例えば、ＭＲＰＬ１７をコードするＤＮＡに対するＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド、及びこれらを発現するベクター、抗ＭＲＰＬ１７抗体、ＭＲＰＬ１７のドミナントネガティブ変異体等が挙げられる。これらの薬物は市販されているか、公知の技術に基づいて適宜製造することができる。
【００３８】
特に、ＭＲＰＬ１７の産生又は活性を抑制する薬物としては、特異性の高さや、副作用の可能性の低さから、ＭＲＰＬ１７をコードするＤＮＡに対するＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらを発現するベクターが好ましい。
【００３９】
ＭＲＰＬ１７の抑制は、ＭＲＰＬ１７に対する抑制剤を作用させなかった場合に比べ、細胞においてＭＲＰＬ１７の発現や活性が抑制されていることにより決定することができる。ＭＲＰＬ１７の発現は、既知の任意の手法、限定されずに、例えば、抗体を利用した免疫沈降法、ＥＩＡ、ＥＬＩＳＡ、ＩＲＡ、ＩＲＭＡ、ウェスタンブロッティング法、免疫組織化学法、免疫細胞化学法、フローサイトメトリー法、当該タンパク質をコードする核酸若しくはそのユニークな断片又は該核酸の転写産物（例えば、ｍＲＮＡ）若しくはスプライシング産物に特異的にハイブリダイズする核酸を利用した、種々のハイブリダイゼーション法、ノーザンブロット法、サザンブロット法、種々のＰＣＲ法などにより評価することができる。
【００４０】
また、ＭＲＰＬ１７の活性は、ＭＲＰＬ１７の既知の活性、限定されずに、例えば、ミトコンドリアのリボソームを構成する小28Sサブユニットとの結合性などを、既知の任意の方法、例えば、免疫沈降法、ウェスタンブロッティング法、質量分析法、プルダウン法、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）法などにより解析することによって評価することができる。
【００４１】
ところで、「ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物」には、限定されずに、例えば、ＧＳＴ−πの産生及び/又は活性と、ＭＲＰＬ１７の産生及び/又は活性とを共に抑制する薬物や、ＧＳＴ−πの分解及び/又は不活性化とＭＲＰＬ１７の分解及び/又は不活性化とを共に促進する薬物などが含まれる。ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７の産生を抑制する薬物としては、これに限定するものではないが、例えば、ＧＳＴ−πをコードするＤＮＡ及びＭＲＰＬ１７をコードするＤＮＡに対するＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチド及びこれらを発現するベクター等が挙げられる。また、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７の活性を抑制する薬物、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７の分解及び/又は不活性化を促進する薬物としては、ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７に対して作用する如何なる化合物であっても使用することができる。このような化合物としては、有機化合物（アミノ酸、ポリペプチド又はその誘導体、低分子化合物、糖、高分子化合物等）、無機化合物等を使用することができる。また、このような化合物は、天然物質及び非天然物質のいずれであってもよい。ポリペプチドの誘導体としては、修飾基を付加して得られた修飾ポリペプチド、アミノ酸残基を改変することにより得られたバリアントポリペプチド等が挙げられる。さらに、このような化合物は、単一化合物であってもよいが、化合物ライブラリー、遺伝子ライブラリーの発現産物、細胞抽出物、細胞培養上清、発酵微生物産生物、海洋生物抽出物、植物抽出物等であってもよい。すなわち、「ＧＳＴ−π及びＭＲＰＬ１７を抑制する薬物」には、ＲＮＡｉ分子等の核酸に限定されず、如何なる化合物も含まれる。
【００４２】
本明細書で用いる場合、ＲＮＡｉ分子は、ＲＮＡ干渉をもたらす任意の分子を指し、限定されずに、ｓｉＲＮＡ（small interfering RNA）、ｍｉＲＮＡ（micro RNA)、ｓｈＲ
ＮＡ（short hairpin RNA）、ｄｄＲＮＡ（DNA-directed RNA）、ｐｉＲＮＡ（Piwi-interacting RNA）、ｒａｓｉＲＮＡ（repeat associated siRNA）などの二重鎖ＲＮＡ及びこれらの改変体などを含む。これらのＲＮＡｉ分子は市販されているか、公知の配列情報、すなわち、配列番号１乃至４に示した塩基配列及び/又はアミノ酸配列に基づいて設計、作製することが可能である。
【００４３】
また、本明細書で用いる場合、アンチセンス核酸は、ＲＮＡ、ＤＮＡ、ＰＮＡ、又はこれらの複合物を含む。
【００４４】
本明細書で用いる場合、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチドは、限定されずに、例えば、特開2003-219893に記載の、標的遺伝子の発現を阻害するＤＮＡとＲＮＡとからなる２本鎖ポリヌクレオチドを含む。
【００４５】
ＧＳＴ−πを抑制する薬物とＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とは、単一の製剤に含まれていてもよいし、２個以上の製剤に別々に含まれていてもよい。後者の場合、各製剤は同時に投与されてもよいし、時間間隔をあけて投与されてもよい。時間間隔をあけて投与される場合、ＧＳＴ−πを抑制する薬物を含む製剤を、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を含む製剤の前に投与してもよいし、後に投与してもよい。
【００４６】
ところで、ＭＲＰＬ１７は、ＧＳＴ−πとともに抑制されるとがん細胞に対して合成致死性を示す。よって、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物は、ＧＳＴ−πを抑制する薬物による細胞死誘導及び/又は細胞増殖抑制を増強する剤又は組成物（以下、「細胞死誘導増強剤」、「細胞増殖抑制増強剤」、「細胞死誘導増強用組成物」又は「細胞増殖抑制増強用組成物」ともいう）の有効成分となる。言い換えると、有効量のＭＲＰＬ１７を抑制する薬物を投与することによって、ＧＳＴ−πを抑制する薬物を投与することによる細胞死の誘導及び/又は細胞増殖の抑制を増強することができる。
【００４７】
ここで、合成致死性とは、synthetic lethalityと称され、単独遺伝子欠損では細胞や個体に対する致死性を示さない或いは致死性が低いのに、複数の遺伝子の欠損が共存すると致死性を発揮する或いは致死性が有意に高まる現象を意味する。特に、本明細書において、合成致死性とは、がん細胞に対する致死性を意味する。
【００４８】
本発明の剤又は組成物における有効成分の配合量は、剤又は組成物が投与された場合に、アポトーシスといった細胞死が誘導及び/又は細胞増殖が抑制される量であってもよい。また、投与による利益を超える悪影響が生じない量が好ましい。かかる量は公知であるか、培養細胞などを用いたin vitro試験や、マウス、ラット、イヌ又はブタなどのモデル動物における試験により適宜決定することができ、このような試験法は当業者によく知られている。アポトーシスの誘導は、種々の既知の手法、例えば、ＤＮＡ断片化、アネキシンＶの細胞膜への結合、ミトコンドリア膜電位の変化、カスパーゼの活性化などのアポトーシス特有の現象の検出や、ＴＵＮＥＬ染色などにより評価することができる。また、細胞増殖の抑制は、種々の既知の手法、例えば、経時的な生細胞数の計数、腫瘍のサイズ、体積又は重量の測定、ＤＮＡ合成量の測定、ＷＳＴ−１法、ＢｒｄＵ（ブロモデオキシウリジン）法、３Ｈチミジン取込み法、などにより評価することができる。活性成分の配合量は、剤や組成物の投薬態様によって変化し得る。例えば、１回の投与に複数の単位の組成物を用いる場合、組成物１単位に配合する有効成分の量は、１回の投与に必要な有効成分の量の複数分の１とすることができる。かかる配合量の調整は当業者が適宜行うことができる。
【００４９】
また、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として配合することで、細胞死誘導剤、細胞増殖抑制剤、細胞死誘導組成物又は細胞増殖抑制組成物を製造することができる。
【００５０】
さらに、細胞死誘導又は細胞増殖抑制に使用する、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とＭＲＰＬ１７を抑制する薬物との組み合わせを提供することができる。さらにまた、有効量のＧＳＴ−πを抑制する薬物とＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを投与することを含む、細胞死の誘導方法又は細胞増殖の抑制方法を提供することができる。
【００５１】
なお、上述したアポトーシス等の細胞死誘導又は細胞増殖抑制方法はいずれも、in vitroの方法であっても、in vivoの方法であってもよい。また、当該方法における薬物については既に上述したとおりであり、薬物の有効量は、投与した細胞において細胞死が誘導される、又は細胞増殖が抑制される量であってもよい。また、投与による利益を超える悪影響が生じない量が好ましい。かかる量は公知であるか、培養細胞などを用いたin vitro試験などにより適宜決定することができ、このような試験法は当業者によく知られている。細胞死の誘導又は細胞増殖の抑制は、上述のものを含む種々の既知の手法により評価することができる。上記有効量は、薬物を所定のがん細胞集団に投与した場合に、必ずしも同細胞集団の全ての細胞に細胞死又は増殖抑制をもたらすものでなくともよい。例えば、上記有効量は、当該細胞集団における細胞の１％以上、２％以上、３％以上、４％以上、５％以上、６％以上、８％以上、１０％以上、１２％以上、１５％以上、２０％以上、さらには２５％以上などにアポトーシス又は増殖抑制をもたらす量であってよい。
【００５２】
本発明の細胞死誘導剤又は細胞増殖抑制剤は、がん細胞においても効果的に細胞死を誘導でき又は細胞増殖を抑制できるため、細胞の増殖異常に起因する疾患に対する医薬組成物の成分として有効である。また、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とを有効成分として配合することで、細胞の増殖異常に起因する疾患に対する医薬組成物を製造することができる。さらに、製造された医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、細胞の増殖異常に起因する疾患を処置・治療することができる。
【００５３】
当該医薬組成物は、細胞の増殖異常に起因する疾患の処置、特に、変異型ＫＲＡＳを発現することで細胞死又は細胞増殖に異常を有する疾患を処置するのに有効である。
【００５４】
変異型ＫＲＡＳを発現する細胞に起因する疾患としては、限定されずに、例えば、良性又は悪性腫瘍（がん、悪性新生物ともいう）、過形成症、ケロイド、クッシング症候群、原発性アルドステロン症、紅板症、真性多血症、白板症、過形成瘢痕、扁平苔癬及び黒子症などを含む。
【００５５】
本発明におけるがんとしては、例えばがん、ＧＳＴ−πを高発現するがん、変異型ＫＲＡＳを発現する細胞に起因するがん（単に、ＫＲＡＳがんと称する場合もある）などが挙げられ、多くの場合ＫＲＡＳがんは、ＧＳＴ−πを高発現するがんに包含される。これらとしては、限定されずに、例えば、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫などの肉腫、脳腫瘍、頭頚部癌、乳癌、肺癌、食道癌、胃癌、十二指腸癌、虫垂癌、大腸癌、直腸癌、肝癌、膵癌、胆嚢癌、胆管癌、肛門癌、腎癌、尿管癌、膀胱癌、前立腺癌、陰茎癌、精巣癌、子宮癌、卵巣癌、外陰癌、膣癌、皮膚癌などの癌腫、さらには白血病や悪性リンパ腫などが挙げられる。なお、本発明では、「がん」は、上皮性悪性腫瘍及び非上皮性悪性腫瘍を含む。本発明におけるがんは、身体の任意の部位、例えば、脳、頭頚部、胸部、四肢、肺、心臓、胸腺、食道、胃、小腸（十二指腸、空腸、回腸）、大腸（結腸、盲腸、虫垂、直腸）、肝臓、膵臓、胆嚢、肛門、腎、尿管、膀胱、前立腺、陰茎、精巣、子宮、卵巣、外陰、膣、皮膚、横紋筋、平滑筋、滑膜、軟骨、骨、甲状腺、副腎、腹膜、腸間膜、骨髄、血液、血管系、リンパ節等のリンパ系、リンパ液などに存在し得る。
【００５６】
医薬組成物としては、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とＭＲＰＬ１７を抑制する薬物以外に、他の有効成分と併用してもよい。ここで、併用するとは、例えば、他の有効成分を別々の製剤として投与すること、及び、他の有効成分を、少なくとも１種の他の薬剤との合剤として投与することなどを含む。別々の製剤として投与する場合には、他の有効成分を含む製剤を、他の製剤より前、他の製剤と同時、又は、他の製剤より後に投与してもよい。
【００５７】
かかる他の有効成分としては、対象となる疾患の処置に有効なものが挙げられる。例えば、処置する疾患ががんである場合は、抗がん剤を併用することができる。抗がん剤の例としては、例えば、イホスファミド、塩酸ニムスチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、メルファラン、ラニムスチン等のアルキル化剤、塩酸ゲムシタビン、エノシタビン、シタラビン・オクホスファート、シタラビン製剤、テガフール・ウラシル、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム配合剤（例えば、ＴＳ−１）、ドキシフルリジン、ヒドロキシカルバミド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン等の代謝拮抗剤、塩酸イダルビシン、塩酸エピルビシン、塩酸ダウノルビシン、クエン酸ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、塩酸ピラルビシン、塩酸ブレオマイシン、硫酸ペプロマイシ
ン、塩酸ミトキサントロン、マイトマイシンＣ等の抗腫瘍性抗生物質、エトポシド、塩酸イリノテカン、酒石酸ビノレルビン、ドセタキセル水和物、パクリタキセル、硫酸ビンクリスチン、硫酸ビンデシン、硫酸ビンブラスチン等のアルカロイド、アナストロゾール、クエン酸タモキシフェン、クエン酸トレミフェン、ビカルタミド、フルタミド、リン酸エストラムスチン等のホルモン療法剤、カルボプラチン、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、ネダプラチン等の白金錯体、サリドマイド、ネオバスタット、ベバシズマブ等の血管新生阻害剤、Ｌ−アスパラギナーゼなどを挙げることができる。
【００５８】
本明細書に記載される本発明の各種の剤や組成物、処置方法等における活性成分が核酸、例えば、ＲＮＡｉ分子、リボザイム、アンチセンス核酸、ＤＮＡ／ＲＮＡキメラポリヌクレオチドなどである場合、これらは、裸の核酸としてそのまま利用することもできるが、種々のベクターに担持させることもできる。ベクターとしては、プラスミドベクター、ファージベクター、ファージミドベクター、コスミドベクター、ウイルスベクター等の公知の任意のものを利用することができる。ベクターは、担持する核酸の発現を増強するプロモーターを少なくとも含んでいることが好ましく、この場合、該核酸は、かかるプロモーターと作動可能に連結されていることが好ましい。核酸がプロモーターに作動可能に連結されているとは、プロモーターの作用により、該核酸のコードするタンパク質が適切に産生されるように、該核酸とプロモーターとが配置されていることを意味する。ベクターは、宿主細胞内で複製可能であってもなくてもよく、また、遺伝子の転写は宿主細胞の核外で行われても、核内で行われてもよい。後者の場合、核酸は宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよい。
【００５９】
また、有効成分は、種々の非ウイルス性脂質又はタンパク質担体に担持させることもできる。かかる担体としては、限定されずに、例えば、コレステロール、リポソーム、抗体プロトマー、シクロデキストリンナノ粒子、融合ペプチド、アプタマー、生分解性ポリ乳酸コポリマー、ポリマーなどが挙げられ、細胞内への取込み効率を高めることができる（例えば、Pirollo and Chang, Cancer Res. 2008;68(5):1247-50などを参照）。特に、カチオン性リポソームやポリマー（例えば、ポリエチレンイミンなど）が有用である。かかる担体として有用なポリマーのさらなる例としては、例えば、US 2008/0207553、US 2008/0312174等に記載のものなどが挙げられる。
【００６０】
本明細書に記載される本発明の各種医薬組成物においては、活性成分の効果を妨げない限り、活性成分を他の任意成分と組み合わせてもよい。そのような任意成分としては、例えば、他の化学治療剤、薬理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤等が挙げられる。また、投与経路や薬物放出様式などに応じて、上記組成物を、適切な材料、例えば、腸溶性のコーティングや、時限崩壊性の材料で被覆してもよく、また、適切な薬物放出システムに組み込んでもよい。
【００６１】
本明細書に記載される本発明の各種剤及び組成物（各種医薬組成物を含む）は、経口及び非経口の両方を包含する種々の経路、例えば、限定することなく、経口、静脈内、筋肉内、皮下、局所、腫瘍内、直腸、動脈内、門脈内、心室内、経粘膜、経皮、鼻内、腹腔内、肺内及び子宮内等の経路で投与してもよく、各投与経路に適した剤形に製剤してもよい。かかる剤形及び製剤方法は任意の公知のものを適宜採用することができる（例えば、標準薬剤学、渡辺喜照ら編、南江堂、２００３年などを参照）。
【００６２】
例えば、経口投与に適した剤形としては、限定することなく、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳剤、ゲル剤、シロップ剤などが挙げられ、また非経口投与に適した剤形としては、溶液性注射剤、懸濁性注射剤、乳濁性注射剤、用時調製型注射剤などの注射剤が挙げられる。非経口投与用製剤は、水性又は非水性の等張性無菌溶液又は懸濁液の形態であることができる。
【００６３】
本明細書に記載される本発明の各種剤又は組成物（各種医薬組成物を含む）は、特定の組織や細胞に標的化されていてもよい。標的化は、既知の任意の手法により達成することができる。がんへの送達を企図する場合は、限定されずに、例えば、製剤をＥＰＲ（enhanced permeability and retention）効果の発現に好適な直径５０〜２００μｍ、特に７５〜１５０μｍなどのサイズにすることによるパッシブターゲティングや、ＣＤ１９、ＨＥＲ２、トランスフェリン受容体、葉酸受容体、ＶＩＰ受容体、ＥＧＦＲ（Torchilin, AAPS J. 2007;9(2):E128-47）、ＲＡＡＧ１０（特表２００５−５３２０５０）、ＰＩＰＡ（特表２００６−５０６０７１）、ＫＩＤ３（特表２００７−５２９１９７）などのリガンドや、ＲＧＤモチーフやＮＧＲモチーフを有するペプチド、Ｆ３、ＬｙＰ−１（Ruoslahti et al., J Cell Biol. 2010;188(6):759-68）などを標的化剤として利用するアクティブターゲティングなどの手法を用いることができる。また、レチノイド又はその誘導体ががん細胞への標的化剤として有用であることも知られているため（WO 2008/120815）、レチノイドを標的化剤として含む担体を利用することもできる。かかる担体は、上記文献のほか、WO 2009/036368、WO 2010/014117、WO 2012/170952などに記載されている。
【００６４】
本明細書に記載される本発明の各種剤又は組成物（各種医薬組成物を含む）はいずれの形態で供給されてもよいが、保存安定性の観点から、用時調製可能な形態、例えば、医療の現場あるいはその近傍において、医師及び／又は薬剤師、看護士、もしくはその他のパラメディカルなどによって調製され得る形態で提供してもよい。かかる形態は、本発明の剤又は組成物が、脂質やタンパク質、核酸などの安定した保存が難しい成分を含むときに特に有用である。この場合、本発明の剤又は組成物は、これらに必須の構成要素の少なくとも１つを含む１個又は２個以上の容器として提供され、使用の前、例えば、２４時間前以内、好ましくは３時間前以内、そしてより好ましくは使用の直前に調製される。調製に際しては、調製する場所において通常入手可能な試薬、溶媒、調剤器具などを適宜使用することができる。
【００６５】
したがって、本発明は、本発明の各種剤又は組成物に含まれ得る活性成分を、単独でもしくは組み合わせて含む１個又は２個以上の容器を含む組成物の調製キット、ならびに、そのようなキットの形で提供される各種剤又は組成物の必要構成要素にも関する。本発明のキットは、上記のほか、本発明の各種剤又は組成物の調製方法や投与方法などが記載された指示、例えば説明書や、ＣＤ、ＤＶＤ等の電子記録媒体等を含んでいてもよい。また、本発明のキットは、本発明の各種剤又は組成物を完成するための構成要素の全てを含んでいてもよいが、必ずしも全ての構成要素を含んでいなくてもよい。したがって、本発明のキットは、医療現場や、実験施設などで通常入手可能な試薬や溶媒、例えば、無菌水や、生理食塩水、ブドウ糖溶液などを含んでいなくてもよい。
【００６６】
本明細書に記載される本発明の各種処置方法における有効量とは、例えば、疾患の症状を低減し、又は疾患の進行を遅延もしくは停止する量であり、好ましくは、疾患を抑制し、又は治癒する量である。また、投与による利益を超える悪影響が生じない量が好ましい。かかる量は、培養細胞などを用いたin vitro試験や、マウス、ラット、イヌ又はブタなどのモデル動物における試験により適宜決定することができ、このような試験法は当業者によく知られている。また、本発明の処置方法に用いる薬物の用量は当業者に公知であるか、又は、上記の試験等により適宜決定することができる。
【００６７】
本明細書に記載される本発明の処置方法において投与する活性成分の具体的な用量は、処置を要する対象に関する種々の条件、例えば、症状の重篤度、対象の一般健康状態、年齢、体重、対象の性別、食事、投与の時期及び頻度、併用している医薬、治療への反応性、剤形、及び治療に対するコンプライアンスなどを考慮して決定され得る。
【００６８】
投与経路としては、経口及び非経口の両方を包含する種々の経路、例えば、経口、静脈内、筋肉内、皮下、局所、腫瘍内、直腸、動脈内、門脈内、心室内、経粘膜、経皮、鼻内、腹腔内、肺内及び子宮内等の経路が含まれる。
【００６９】
投与頻度は、用いる剤や組成物の性状や、上記のものを含む対象の条件によって異なるが、例えば、１日多数回（すなわち１日２、３、４回又は５回以上）、１日１回、数日毎（すなわち２、３、４、５、６、７日毎など）、１週間毎、数週間毎（すなわち２、３、４週間毎など）であってもよい。
【００７０】
本明細書で用いる場合、用語「対象」は、任意の生物個体を意味し、好ましくは動物、さらに好ましくは哺乳動物、さらに好ましくはヒトの個体である。本発明において、対象は健常であっても、何らかの疾患に罹患していてもよいものとするが、特定の疾患の処置が企図される場合には、典型的にはかかる疾患に罹患しているか、罹患するリスクを有する対象を意味する。
【００７１】
また、用語「処置」は、本明細書で用いる場合、疾患の治癒、一時的寛解又は予防などを目的とする医学的に許容される全ての種類の予防的及び／又は治療的介入を包含するものとする。例えば、「処置」の用語は、疾患の進行の遅延又は停止、病変の退縮又は消失、発症の予防又は再発の防止などを含む、種々の目的の医学的に許容される介入を包含する。
【００７２】
ところで、上述のように、ＭＲＰＬ１７は、ＧＳＴ−πとともに抑制されるとがん細胞に対して合成致死性を示すタンパク質である。したがって、ＭＲＰＬ１７に対する抑制を指標として、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤をスクリーニングすることができる。すなわち、ＭＲＰＬ１７を抑制できる物質は、ＧＳＴ−πを抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤の候補物質となる。
【００７３】
例えば、がん細胞の一例として、変異型ＫＲＡＳを発現する細胞に対して被検物質を接触させ、当該細胞における、ＧＳＴ−πとともに抑制されると変異型ＫＲＡＳを発現する細胞に対して合成致死性を示すＭＲＰＬ１７の発現量を測定する。被検物質の非存在下において測定した発現量と比較して、被検物質を接触させたときの発現量が低下した場合、当該被検物質を上記ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物の候補物質として選択することができる。
【００７４】
一方、ＧＳＴ−πを抑制する薬物は、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬剤とともに抑制されると、がん細胞に対して合成致死性を示すタンパク質である。したがって、ＧＳＴ−πに対する抑制を指標として、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬剤とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤をスクリーニングすることができる。すなわち、ＧＳＴ−πを抑制できる物質は、ＭＲＰＬ１７を抑制する薬物とともに使用される、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤の候補物質となる。
【００７５】
例えば、がん細胞の一例として、変異型ＫＲＡＳを発現する細胞に対して被検物質を接触させ、当該細胞における、ＧＳＴ−πの発現量を測定する。被検物質の非存在下において測定した発現量と比較して、被検物質を接触させたときの発現量が低下した場合、当該被検物質をＧＳＴ−πを抑制する薬物の候補物質として選択することができる。
【００７６】
同様に、ＧＳＴ−πに対する抑制及びＭＲＰＬ１７に対する抑制をともに指標として、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤をスクリーニングすることができる。すなわち、ＧＳＴ−πを抑制でき、且つ、ＭＲＰＬ１７を抑制できる物質は、がん細胞の細胞死誘導剤及び/又は細胞増殖抑制剤の候補物質となる。
【００７７】
例えば、がん細胞の一例として、変異型ＫＲＡＳを発現する細胞に対して被検物質を接触させ、当該細胞における、ＧＳＴ−πの発現量及びＭＲＰＬ１７の発現量を測定する。被検物質の非存在下において測定した各発現量と比較して、被検物質を接触させたときの各発現量がともに低下した場合、当該被検物質をＧＳＴ−πを抑制し、且つＭＲＰＬ１７を抑制する薬物の候補物質として選択することができる。
【００７８】
ここで、被検物質としては、何ら限定されず、如何なる物質であってもよい。被検物質としては、単独の物質であってもよいし、複数の構成成分からなる混合物であってもよい。被検物質としては、例えば微生物若しくは培養液からの抽出物のように未同定の物質を含むような構成であってもよいし、既知の組成物を所定の組成比で含むような構成であってもよい。また、被検物質としては、タンパク質、核酸、脂質、多糖類、有機化合物及び無機化合物のいずれでもよい。
【実施例】
【００７９】
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００８０】
[実験] siRNAによるGST-π及びMRPL17のノックダウン
がん細胞の例として、0.5×105個のA549細胞（KRAS変異ヒト肺がん細胞）を6cmシャーレに播種し、10%ウシ胎児血清(Fetal bovine serum、FBS）と1%L-グルタミン及び1% L-Glutamine-Penicillin streptomycin(Sigma社)を添加したDulbecco’s modified Eagle’s medium（DMEM、Sigma社）で18時間培養した。培養条件は、特に別記しない限り37℃、5%CO2で行った。
【００８１】
本実験では、先ず、20〜30%コンフルエントになったA549細胞にLipofectamine RNAiMAX（Life Technologies社）を用いて、GST-π siRNA及び/又はMRPL17 siRNAを以下のようにトランスフェクションした。
【００８２】
トランスフェクション用のLipofectamine/siRNA混合溶液は以下のように作製した。まず、6μLのLipofectamine RNAiMAXと244μLのOPTI-MEM（Sigma社）とを混合したLipofectamine溶液を調製した。次に、所定量の50μM siRNAをOPTI-MEMで250μLにメスアップしたsiRNA溶液を調製し（例えば、終濃度40nMのsiRNA溶液を作製する場合、4.4μLの50μM siRNAと245.6μLのOPTI-MEMを混合した）、これを上記のlipofectamine溶液と混合し、15分間室温で静置した。この間に、A549細胞を培養している6cmシャーレから培地を吸引し、5mLのOpti-MEMに置換した。ここに500μLの上記siRNA/lipofectamine混合溶液を添加した。なお、siRNAは以下のものを使用した。なお、下記記載において、大文字はRNA、小文字はDNAをそれぞれ意味する。
【００８３】
GST-π siRNA：
センス鎖：CCUUUUGAGACCCUGCUGUtt（配列番号５）
アンチセンス鎖：ACAGCAGGGUCUCAAAAGGct（配列番号６）
MRPL17 siRNA：
センス鎖：UGGCAGUGAUCGAGUAUAAtt（配列番号７）
アンチセンス鎖：UUAUACUCGAUCACUGCCAtt（配列番号８）
Control siRNA：
センス鎖：ACGUGACACGUUCGGAGAAtt（配列番号９）
アンチセンス鎖：UUCUCCGAACGUGUCACGUtt（配列番号１０）
【００８４】
GST-π siRNA及びMRPL17 siRNAをそれぞれ1.25、2.5、5、10、20又は40nMの終濃度で、GST-π siRNA又はMRPL17 siRNAを1.25、2.5、5、10、20又は40nMの終濃度で（共にControl siRNAを終濃度1.25、2.5、5、10、20又は40nMで添加）A549細胞を含むシャーレにそれぞれ添加し、5時間37℃、5%CO2条件下で培養した。コントロールとして、Control siRNAを2.5、5、10、20、40又は80nMの終濃度で添加したものを使用した。5時間後、シャーレのOpti-MEMを吸引し、10%ウシ胎児血清(Fetal bovine serum、FBS）と1%L-グルタミン及び1% L-Glutamine-Penicillin streptomycin(Sigma社)を添加したDulbecco’s modified Eagle’s medium（DMEM、Sigma社）を添加した。３日後、シャーレ中の培地を吸引し、PBSで細胞表面を洗浄した後、トリプシンでシャーレに付着した細胞をはがして、DMEMで細胞懸濁液を調製した。この細胞懸濁液をC-CHIP(Digital Bio社)上に滴下し、顕微鏡像にて総細胞数を数えた。
【００８５】
結果を図１に示す。図１に示すように、total siRNA濃度が40nM 以下の条件では、GST-π siRNAとMRPL17 siRNAを併用した場合、それぞれ単独使用の場合よりも強くA549細胞の増殖を抑制した。すなわち、図１に示した結果から、GST-πを抑制する薬剤とMRPL17を抑制する薬剤とをそれぞれ単独でがん細胞に作用させたときの細胞増殖抑制効果と比較して、GST-πを抑制する薬剤とMRPL17を抑制する薬剤とを共にがん細胞に作用させることで、細胞増殖を非常に強く抑制できることが明らかとなった。
【図１】
2017226626.tif 000003
【配列表】
2017226626000001.app