(57)【要約】【課題】副作用のないアレルギー性鼻炎治療薬物を提供する。【解決手段】アレルギー性鼻炎治療薬物の製造において、卵黄油またはベンゾピレン除去の卵黄油を使用する。本発明は、研究を通じて卵黄油を局部的に鼻腔に塗りつけてアレルギー性鼻炎症状を顕著に改善したことを見出し、更に卵黄油による局部的治療によりアレルギー性鼻炎をもつマウスのリンパ細胞の炎症因子IL-4とIgE抗体レベルが低下したことを発見した。これに基づき、本発明は、卵黄油をアレルギー性鼻炎治療薬物とする新規用途を提供する。また、加熱法で抽出した卵黄油に、癌を誘発するおそれのあるベンゾピレンが残留するのを避けるために、本発明はベンゾピレン除去の卵黄油をアレルギー性鼻炎治療薬物の製造において使用する方法を提供する。  【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アレルギー性鼻炎治療薬物の製造において卵黄油を使用する方法。
【請求項２】
アレルギー性鼻炎治療薬物の製造においてベンゾピレンを除去した卵黄油を使用する方法。
【請求項３】
前記製造されたアレルギー性鼻炎治療薬物を鼻腔に塗りつけることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記製造されたアレルギー性鼻炎治療薬物を鼻腔に塗りつけることを特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項５】
前記卵黄油は、煮えた卵から卵黄を取り出し、その卵黄を８０〜１１０℃で乾燥させて卵黄粉を得、得られた卵黄粉を２１０〜２６０℃で焙ることによって抽出されることを特徴とする請求項１記載の方法。
【請求項６】
（１）煮えた卵から卵黄を取り出し、前記取り出した卵黄を８０〜１１０℃で乾燥させて卵黄粉を得、前記得られた卵黄粉を２１０〜２６０℃で焙ることで卵黄油を抽出し、その後、
（２）前記抽出した卵黄油の質量の１．５％に相当する活性炭を秤量し、
（３）前記活性炭を、ガーゼで濾過した前記卵黄油と混合させ、７０℃で２〜３時間攪拌した後、濾布及び濾紙を用いて吸引濾過することにより、前記ベンゾピレン除去の卵黄油を抽出すること、
を特徴とする請求項２記載の方法。
【請求項７】
卵黄油からなるアレルギー性鼻炎治療薬物。
【請求項８】
ベンゾピレン除去の卵黄油からなるアレルギー性鼻炎治療薬物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵黄油の応用、特に卵黄油またはベンゾピレン除去の卵黄油の、アレルギー性鼻炎治療薬物の製造における応用に関し、生物医薬技術分野に属する。
【背景技術】
【０００２】
アレルギー性鼻炎は、世界規模で一般的な病気であり、その症状としては、発作性のくしゃみ、水性の鼻水、鼻づまりと鼻痒み、更に臭覚減少などがあり、患者に相当の苦痛を与える。現在、アレルギー性鼻炎の治療に使用されている薬物として、抗ヒスタミン剤（antihistamines）、糖質コルチコイド（glucocorticoids）、抗ロイコトリエン薬（antileukotriene）、鼻内用充血緩和剤等がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、上記薬物は、何れも所定の副作用を持ち、かつ、繰り返し給薬して症状を制御しなければならない。
【０００４】
本発明の発明者は、研究により、卵黄油を局部的に鼻腔に塗りつけることがアレルギー性鼻炎に対し顕著な治療効果を有することを見出し、アレルギー性鼻炎があるマウスの鼻炎症状を著しく改善することに成功した。また、卵黄油は動物由来の天然的なものであるため、副作用がない。これらに基づき、本発明は、新規なアレルギー性鼻炎治療薬物と、その使用方法を提出し、即ち、局部的に鼻腔に卵黄油を塗りつけることによりアレルギー性鼻炎を治療する目的を達する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記した目的を達成するために、本発明に係る方法は、アレルギー性鼻炎治療薬物の製造において卵黄油を使用することを特徴とする。
【図面の簡単な説明】
【０００６】
【図１】卵黄油及びベンゾピレン除去の卵黄油が、アレルギー性鼻炎のあるマウスのリンパ細胞炎症因子IL-4のレベルを低下させたことを示す棒グラフであり、図中、**はP<0.01 vs 空白対照組を示し、##はP<0.01 vs 鼻腔敏感誘発組を示す。
【図２】卵黄油及びベンゾピレン除去の卵黄油がアレルギー性鼻炎のあるマウスのリンパ細胞IgE抗体水平を減少させたことを示す棒グラフであり、図中、**はP<0.01 vs 空白対照組を示し、#はP<0.05 vs 鼻腔敏感誘発組を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
以下、具体的な実施例に沿って本発明を詳細に説明し、本発明の利点と特徴を明らかにする。ただし、これらの実施例は例示的なものに過ぎず、本発明の範囲はその実施例に限定されることはない。本発明の要旨を逸脱しない範囲において、本発明の細部の構成や形式に対する修正又は置き換え等があっても、それらが本発明に含まれることは勿論である。
【実施例】
【０００８】
本発明の実施例における卵黄油は以下の方法によって製造される。
煮えた卵から卵黄を取り出し、その卵黄を８０〜１１０℃で乾燥させて卵黄粉を得、得られた卵黄粉を２１０〜２６０℃で焙って卵黄油を得る。
【０００９】
また、本発明の実施例におけるベンゾピレン除去の卵黄油は以下の方法によって製造される。
（１）煮えた卵から卵黄を取り出し、その卵黄を８０〜１１０℃で乾燥させて卵黄粉を得、得られた卵黄粉を２１０〜２６０℃で焙って卵黄油を得、
（２）得られた卵黄油の質量の１．５％に相当する活性炭を秤量し、
（３）活性炭とガーゼで濾過した卵黄油とを混合させ、７０℃で２〜３時間攪拌した後、濾布と濾紙とで吸引濾過してベンゾピレン除去の卵黄油を得る。
【００１０】
（動物及び実験試薬）
BALB/c メスマウス（品種系: BALB/c 、北京京維通利華実験動物技術有限公司で購入）、卵アルブミン (Sigma-aldrich社）。
【００１１】
（実験方法）
２０匹のマウスをランダムに選び、かつマウスをランダムに４匹ずつ５組（空白対照組、卵アルブミン（ＯＶＡ）組、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組+卵黄油組、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組＋ベンゾピレン除去の卵黄油組）に分ける。ＯＶＡ組、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組＋卵黄油組、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組＋ベンゾピレン除去の卵黄油組のマウス全てに対し、第０日目と第７日目に腹腔に卵アルブミン（１０μｇのＯＶＡを、ＰＢＳ０．５ｍｌ中に２ｍｇのAl(OH)3が分散している乳化液の中に入れたもの）の混合溶液を注射した。
【００１２】
また、ＯＶＡ組のマウスに対しては、それぞれ第１４、１５、１６、２１、２２、２３、２８、２９、３０日目に、鼻孔に微量ピペットで１０μｌのＰＢＳ及び以下の治療薬物と同一容量の薬物溶剤を滴下した。
【００１３】
ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組のマウスに対しては、それぞれ第１４、１５、１６、２１、２２、２３、２８、２９、３０日目に、鼻孔に微量ピペットで１０μｌのＯＶＡ（１ｍｇ／ｍｌ）（この場合、Al(OH)3の添加は不要）及び以下の治療薬物と同一容量の薬物溶剤を滴下した。
【００１４】
ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組＋卵黄油組と、ＯＶＡ＋鼻腔敏感誘発組＋ベンゾピレン除去の卵黄油組のマウスに対しては、それぞれ第１４、１５、１６、２１、２２、２３、２８、２９、３０日目に、鼻孔に微量ピペットで１０μｌのＯＶＡ（１ｍｇ／ｍｌ）を滴下し、かつＯＶＡの滴下と同時に５μｌの治療薬物（卵黄油又はベンゾピレン除去の卵黄油）を滴下した。
【００１５】
第３１日目、即ち、最後の給薬から２４時間後に、１２匹のマウスを殺した。実験材料として、マウスの上顎と共に鼻粘膜（nasal palate containing the nasal mucosa）を採取し、迅速に凍結保存した。また、マウスの首部リンパ節を取り、かつ１００-μｍのセルストレーナ（Cell Strainer）で単細胞浮遊液（１×１０６／ｍｌ）を製造した。製造した細胞浮遊液を、５％ＦＣＳ、ゲンタマイシン、β−メルカプトエタノールを含有した無血清細胞凍結培地（ＲＰＭＩ）で培養し、１０μｇ／ｍｌのＯＶＡを使用して更に４日間刺激を加えた後、上清液を採集した。
【００１６】
ＥＬＩＳＡ方法により、リンパ節培養の上清液中におけるIL-4、IgEの含有量を測定した。
【００１７】
（結果）
卵黄油またはベンゾピレン除去の卵黄油により、アレルギー性鼻炎をもつマウスの炎症因子IL-4レベルが低下した。
【００１８】
即ち、マウスの首部リンパ節を取り、かつ１００−μｍのセルストレーナで単細胞浮遊液（１＊１０６／ｍｌ）を製造した。細胞浮遊液を、５%ＦＣＳ、ゲンタマイシン、β-メルカプトエタノールを含有した無血清細胞凍結培地（ＲＰＭＩ）で培養し、かつ、１０μｇ／ｍｌのＯＶＡを使用して４日間刺激を加えた後、上清液を採集した。ＥＬＩＳＡ方法によってリンパ節培養の上清液中におけるIL-4の含有量を測定した。
【００１９】
その結果、局部的に鼻腔に卵黄油またはベンゾピレン除去の卵黄油を塗りつけた方が、アレルギー性鼻炎をもつマウスのリンパ細胞のIL-4レベルを低下させることができるのを見出した（図１を参照）。
【００２０】
卵黄油またはベンゾピレン除去の卵黄油により、アレルギー性鼻炎をもつマウスのIgE抗体レベルが低下した。
【００２１】
即ち、マウスの首部リンパ節を取り、かつ１００−μｍのセルストレーナで単細胞浮遊液（１＊１０６／ｍｌ）を製造した。浮遊液を、５%ＦＣＳ、ゲンタマイシン、β-メルカプトエタノールを含有した無血清細胞凍結培地（ＲＰＭＩ）で培養し、かつ、１０μｇ／ｍｌのＯＶＡを使用して４日間刺激を加えた後、上清液を採集した。ＥＬＩＳＡ方法によってリンパ節培養の上清液中におけるIgE抗体の含有量を測定した。
【００２２】
その結果、局部的に鼻腔に卵黄油またはベンゾピレン除去の卵黄油を塗りつけた方が、アレルギー性鼻炎をもつマウスのIgE抗体の生成を低下させることができることを見出した（図２を参照）。
【００２３】
以上の如く、本発明に係る方法は、アレルギー性鼻炎治療の新規薬物とその製造における方法を提供する。
本発明は以下の技術手段を採用する。
【００２４】
アレルギー性鼻炎治療薬物の製造において卵黄油を使用する方法。
【００２５】
アレルギー性鼻炎治療薬物の製造においてベンゾピレンを除去した卵黄油を使用する方法。
【００２６】
製造されたアレルギー性鼻炎治療薬物（卵黄油）は、局部的に鼻腔に塗りつけることが好ましい。
【００２７】
製造されたアレルギー性鼻炎治療薬物（ベンゾピレン除去の卵黄油）は、局部的に鼻腔に塗りつけることが好ましい。
【００２８】
前記卵黄油は下記の方法により製造して得ることが好ましい。
煮えた卵から卵黄を取り出し、その卵黄を８０〜１１０℃で乾燥させて卵黄粉を得、得られた卵黄粉を２１０〜２６０℃で焙って卵黄油を得る。
【００２９】
前記ベンゾピレン除去の卵黄油は下記の方法により製造して得ることが好ましい。
（１）煮えた卵から卵黄を取り出し、その卵黄を８０〜１１０℃で乾燥させて卵黄粉を得、得られた卵黄粉を２１０〜２６０℃で焙って卵黄油を得：
（２）得られた卵黄油の質量の１．５％に相当する活性炭を秤量し、
（３）活性炭とガーゼで濾過した卵黄油とを混合させ、７０℃で２〜３時間攪拌した後、濾布と濾紙とで吸引濾過してベンゾピレン除去の卵黄油を得る。
【００３０】
本発明は、腹腔に卵アルブミン（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ）を注射し、かつ鼻腔に卵アルブミンを滴下してアレルギー性鼻炎模型（アレルギー性鼻炎をもつマウス）を作り、鼻腔に卵アルブミンを滴下すると同時に卵黄油を滴下することによって治療を行う。その結果、卵黄油を局部的に鼻腔に滴下することでアレルギー性鼻炎に対し顕著な治療効果を有することを発見した。即ち、アレルギー性鼻炎をもつマウスの鼻炎症状を著しく改善し、アレルギー性鼻炎をもつマウス模型のリンパ細胞の炎症因子であるIL-4とIgE抗体レベルを低下させることができる。
【００３１】
上記により、本発明は、アレルギー性鼻炎治療薬物の製造において卵黄油を使用する方法を提供する。
【００３２】
更に、加熱法によって抽出された卵黄油にベンゾピレンが残留する（ベンゾピレンは癌を誘発する可能性がある）ことを避けるために、本発明は、アレルギー性鼻炎治療薬物の製造においてベンゾピレンを除去した卵黄油を使用する方法を提供し、残留のベンゾピレンが癌を誘発することを避ける。
【図１】
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【図２】
2017008022.tif 000004