(57)【要約】      （修正有）【課題】生体適合性に優れた被覆膜を、基材に対して良好な密着状態で形成する為に有用な高分子化合物及びこれを用いて形成した成形体の提供。【解決手段】式（１）で示す構造を含む高分子鎖を有し、かつ高分子鎖が分岐型ポリマー構造を含む分岐型高分子化合物で、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算で算出した分岐型高分子化合物の重量平均分子量（Ｍｗ）と、数平均分子量（Ｍｎ）との比（Ｍｗ／Ｍｎ）が、３以上１４以下である分岐型高分子化合物。2017149918.tif 000012（Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は夫々独立に共重合して得られた状態の重合性原子団、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−；Ｒ１１又はＲ１２は夫々独立にＨ又は分岐型ポリマー構造；Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は夫々独立にフェニル基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−；ａ、ｂ、ｌ及びｍは夫々独立に２以上の整数；ｎは１以上の整数；ｃは０以上の整数）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で示される構造を含む高分子鎖を有し、かつ前記高分子鎖が分岐型ポリマー構造を含む分岐型高分子化合物であって、
ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算で算出した当該分岐型高分子化合物の重量平均分子量（Ｍｗ）と、数平均分子量（Ｍｎ）との比（Ｍｗ／Ｍｎ）が、３以上１４以下である、分岐型高分子化合物。
【化１】
2017149918.tif 000010
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は、互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−である。Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または前記分岐型ポリマー構造であって、前記高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６において、Ｒ１１またはＲ１２が前記分岐型ポリマー構造である。Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は、互いに独立して、置換基を有していてもよいフェニル基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、および−Ｓ−からなる群より選択された基である。Ｒ５は、置換基を有していてもよいフェニル基、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｏ−からなる群より選択された基である。ｌ及びｍは、互いに独立した２以上の整数である。ｎは、１以上の整数である。ａ及びｂは、互いに独立した２以上の数である。ｃは、０以上の数である。Ｒ１を含む構造単位と、Ｒ３を含む構造単位と、Ｒ６を含む構造単位は、それぞれランダムな順序で結合している、またはブロック状態で結合している。）
【請求項２】
当該分岐型高分子化合物の重量平均分子量（Ｍｗ）が、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算で、４０００以上１００００００以下である、請求項１に記載の分岐型高分子化合物。
【請求項３】
前記一般式（１）において、ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ）が、０．３以上０．９９５以下である、請求項１または２に記載の分岐型高分子化合物。
【請求項４】
前記一般式（１）において、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）が、０．００５以上０．２以下である、請求項１乃至３のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物。
【請求項５】
前記一般式（１）において、ｃ／（ａ＋ｂ＋ｃ）が、０以上０．５以下である、請求項１乃至４のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物。
【請求項６】
前記分岐型ポリマー構造が、２官能以上の（メタ）アクリレート化合物に由来した構造である、請求項１乃至５のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物。
【請求項７】
前記高分子鎖が下記一般式（２）で表される構造を有する、請求項１乃至６のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物。
【化２】
2017149918.tif 000011
（上記一般式（２）において、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−である。Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または前記分岐型ポリマー構造であって、前記高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６において、Ｒ１１またはＲ１２が前記分岐型ポリマー構造である。ａ及びｂは、互いに独立した２以上の数である。ｃは、０以上の数である。ｎは、１以上１０以下の整数である。Ｒ１を含む構造単位と、Ｒ３を含む構造単位と、Ｒ６を含む構造単位は、それぞれランダムな順序で結合している、またはブロック状態で結合している。）
【請求項８】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物を含む、コーティング材。
【請求項９】
基材と、
前記基材の表面を覆うように形成された、請求項１乃至７のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物を含むコーティング材からなる被覆部と、
を有する成形体。
【請求項１０】
当該成形体が生化学容器である、請求項９に記載の成形体。
【請求項１１】
当該成形体における前記被覆部側の表面の水に対する接触角が、１０°以上４０°以下である、請求項９または１０に記載の成形体。
【請求項１２】
請求項９乃至１１のいずれか一項に記載の成形体により構成された細胞培養容器。
【請求項１３】
請求項１乃至７のいずれか一項に記載の分岐型高分子化合物を溶剤に溶解乃至分散させたコーティング材を調製する工程と、
前記コーティング材を基材に塗布する工程と、
を含み、
前記塗布する工程において、前記コーティング材を前記基材の表面を覆うように塗布する、成形体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、分岐型高分子化合物、コーティング材、成形体、細胞培養容器および成形体の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞凝集塊の作製に用いる従来の培養容器（以下、細胞培養容器という。）には、培養細胞が当該容器表面に付着することを防ぐ目的で、親水性の生体適合性ポリマーを用いた表面処理が施されている。近年、上述した表面処理に使用可能な生体適合性ポリマーについては、これまでに種々の提案がなされている。
【０００３】
たとえば、特許文献１には、特定のホスホリルコリン類似基含有単量体と、多環式芳香族基含有ビニル単量体という疎水性単量体とを共重合して得られた重合体を用いて基材の表面処理を行い、細胞培養容器を作製する技術が記載されている。
【０００４】
また、特許文献２および３には、ホスホリルコリン基を含む側鎖と、アジド基を含む側鎖とを有するポリマーを用いて基材の表面処理を行い、細胞培養容器を作製する技術が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００８−２８０３９８号公報
【特許文献２】特開２０１０−０５９３４６号公報
【特許文献３】特開２０１０−０５９３６７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、本発明者らは、従来の細胞培養容器について、目的の細胞凝集塊を安定的に作製できない場合があることを知見した。そこで、本発明者らは、従来の細胞培養容器を用いて安定的に細胞凝集塊を作製できない要因について鋭意検討した結果、従来の細胞培養容器では、生体適合性ポリマーを用いて形成した被覆膜が基材から剥離してしまっている等の不都合が生じる可能性があることを見出した。つまり、本発明者らは、従来の生体適合性ポリマーを用いて形成した被覆膜における基材と密着させる側の面と、基材との密着性という観点において、改善の余地があることを見出した。
【０００７】
そこで、本発明は、生体適合性に優れた被覆膜を、基材に対して良好な密着状態で形成するために有用な高分子化合物、およびこれを用いて形成した成形体に係る技術を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明によれば、下記一般式（１）で示される構造を含む高分子鎖を有し、かつ前記高分子鎖が分岐型ポリマー構造を含んでおり、
ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算で算出した当該分岐型高分子化合物の重量平均分子量（Ｍｗ）と、数平均分子量（Ｍｎ）との比（Ｍｗ／Ｍｎ）が、３以上１４以下である、分岐型高分子化合物が提供される。
【０００９】
【化１】
2017149918.tif 000002
【００１０】
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は、互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−である。Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または前記分岐型ポリマー構造であって、前記高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６において、Ｒ１１またはＲ１２が前記分岐型ポリマー構造である。Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は、互いに独立して、置換基を有していてもよいフェニル基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、および−Ｓ−からなる群より選択された基である。Ｒ５は、置換基を有していてもよいフェニル基、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｏ−からなる群より選択された基である。ｌ及びｍは、互いに独立した２以上の整数である。ｎは、１以上の整数である。ａ及びｂは、互いに独立した２以上の数である。ｃは、０以上の数である。Ｒ１を含む構造単位と、Ｒ３を含む構造単位と、Ｒ６を含む構造単位は、それぞれランダムな順序で結合している、またはブロック状態で結合している。）
【００１１】
さらに、本発明によれば、上記分岐型高分子化合物を含む、コーティング材が提供される。
【００１２】
さらに、本発明によれば、基材と、
前記基材表面を覆うように形成された、上記分岐型高分子化合物を含むコーティング材からなる被覆部と、
を有する成形体が提供される。
【００１３】
さらに、本発明によれば、上記成形体により構成された細胞培養容器が提供される。
【００１４】
さらに、本発明によれば、上記分岐型高分子化合物を溶剤に溶解乃至分散させたコーティング材を調製する工程と、
前記コーティング材を基材に塗布する工程と、
を含み、
前記塗布する工程において、前記コーティング材を前記基材の表面を覆うように塗布する、成形体の製造方法が提供される。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、生体適合性に優れた被覆膜を、基材に対して良好な密着状態で形成するために有用な高分子化合物、およびこれを用いて形成した成形体に係る技術を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】本実施形態に係る細胞培養容器の一例を示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の実施の形態について、図面を用いて説明する。尚、すべての図面において、同様な構成要素には同様の符号を付し、適宜説明を省略する。
【００１８】
＜分岐型高分子化合物＞
本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、下記一般式（１）で示される構造を有する高分子鎖を含み、かつ高分子鎖が分岐型ポリマー構造を有するものである。そして、本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算で算出した当該高分子化合物の重量平均分子量（Ｍｗ）と、数平均分子量（Ｍｎ）との比（Ｍｗ／Ｍｎ）が、３以上１４以下となるものである。
【００１９】
【化２】
2017149918.tif 000003
【００２０】
（上記一般式（１）において、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は、互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−である。Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または前記分岐型ポリマー構造であって、前記高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６において、Ｒ１１またはＲ１２が前記分岐型ポリマー構造である。Ｒ２、Ｒ４及びＲ７は、互いに独立して、置換基を有していてもよいフェニル基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、および−Ｓ−からなる群より選択された基である。Ｒ５は、置換基を有していてもよいフェニル基、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｏ−からなる群より選択された基である。ｌ及びｍは、互いに独立した２以上の整数である。ｎは、１以上の整数である。ａ及びｂは、互いに独立した２以上の数である。ｃは、０以上の数である。Ｒ１を含む構造単位と、Ｒ３を含む構造単位と、Ｒ６を含む構造単位は、それぞれランダムな順序で結合している、またはブロック状態で結合している。）
【００２１】
まず、上記発明が解決しようとする課題の項で述べたとおり、本発明者らは、従来の細胞培養容器では安定的に細胞凝集塊を作製できない要因について鋭意検討した結果、従来の生体適合性ポリマーにより形成された被覆膜が基材から剥離してしまっている等の不都合が生じる可能性があることを見出した。つまり、本発明者らは、従来の生体適合性ポリマーにより形成された被覆膜に関し、生物資源とともに用いられる構造体の表面との相互作用の強さ（基材との密着性）という観点において改善の余地があることを見出した。
ここで、生体適合性ポリマーは、上述した細胞培養容器等のような生物資源の保管に用いられる構造体の表面を覆う用途で使用されることが多い。そのため、生体適合性ポリマーには、上述した生体資源との親和性（生体適合性）の他に、上記構造体の表面と強く相互作用して密着できることが要求されている。
【００２２】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、たとえば、細胞凝集塊の作製に用いる培養容器、すなわち、生物資源を取り扱う構造体の表面を覆うために用いることを想定したポリマーである。このポリマーは、上記一般式（１）に示した通り、少なくとも、親水性のホスホリルコリン基を含む(メタ)アクリレートモノマーと、疎水性基を含む(メタ)アクリレートモノマーと、フェニルアジド基と不飽和結合とを側鎖に含む(メタ)アクリレートモノマーとからなる３種のモノマーを共重合させてなる高分子鎖を含み、かつ該高分子鎖が分岐型ポリマー構造を有するものである。本実施形態に係る分岐型高分子化合物によれば、ポリマーの分子構造中に含まれている親水性基と疎水性基とのバランスを、従来のポリマーと比べて高度に制御することができる。そのため、本実施形態に係る分岐型高分子化合物によれば、目的の細胞凝集塊を安定的に作製できる程度に優れた生体適合性と、塗布対象物である基材の表面に対する優れた密着性と、を両立した塗膜を形成することができる。
【００２３】
そして、本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、上述したように、親水性のホスホリルコリン基を含む(メタ)アクリレートモノマーに由来する構造単位を含む（上記一般式（１）における、Ｒ１を含む構造単位に該当）。ここで、上記ホスホリルコリン基は、生体膜における脂質二重層を構成する代表的なリン脂質として知られているホスファチジルコリンが有する極性基である。このことから、生物資源の表面、すなわち、生体膜中には数多くのホスホリルコリン基が存在しているといえる。本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、生体膜と同じホスホリルコリン基を極性基として有するものであるが故に、生体資源との親和性に優れている。
【００２４】
以下、本実施形態に係る分岐型高分子化合物について、詳細に説明する。
【００２５】
本実施形態に係る高分子鎖は、上記一般式（１）に示すように、親水性のホスホリルコリン基を含む構造単位を、Ｒ１を含む構造単位として含む。具体的に、上記Ｒ１としては、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−が挙げられる。ここで、Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または後述する分岐型ポリマー構造である。
【００２６】
また、上記一般式（１）に示すＲ１を含む構造単位中のＲ２は、二価の結合基である。具体的には、Ｒ２としては、置換基を有していてもよいフェニレン基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、および−Ｓ−が挙げられ、これらの中から選択できる。また、上述した置換基としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子；メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の炭素数１以上５以下の低級アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等の炭素数１以上５以下の低級アルコキシ基などが挙げられる。
【００２７】
また、上記一般式（１）に示すＲ１を含む構造単位中のｌは、２以上の整数であるが、好ましくは、２以上１０以下である。言い換えれば、Ｒ１を含む構造単位中には、炭素数２以上の炭化水素基（アルキレン基）を含み、炭素数２以上１０以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むと好ましく、炭素数２以上５以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むとより好ましい。かかるアルキレン基の具体例としては、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基、 ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基等の直鎖アルキレン基；イソプロピレン基、イソブチレン基、２−メチルプロピレン基等の分岐鎖アルキレン基等が挙げられる。中でも、高分子化合物の生体適合性を向上させる観点から、エチレン基が好ましい。
【００２８】
本実施形態に係る高分子鎖は、上記一般式（１）に示すように、フェニルアジド基と不飽和結合とを側鎖に含む構造単位を、Ｒ３を含む構造単位として含む。具体的に、上記Ｒ３としては、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−が挙げられる。ここで、Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または後述する分岐型ポリマー構造である。
【００２９】
また、上記一般式（１）に示すＲ３を含む構造単位中のＲ４は、二価の結合基である。具体的には、Ｒ４としては、置換基を有していてもよいフェニレン基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、および−Ｓ−が挙げられ、これらの中から選択できる。また、上述した置換基としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子；メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の炭素数１以上５以下の低級アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等の炭素数１以上５以下の低級アルコキシ基などが挙げられる。
【００３０】
また、上記一般式（１）に示すＲ３を含む構造単位中のＲ５は、二価の結合基である。具体的には、Ｒ５としては、置換基を有していてもよいフェニレン基、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、および−Ｏ−が挙げられ、これらの中から選択できる。また、上述した置換基としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子；メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の炭素数１以上５以下の低級アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等の炭素数１以上５以下の低級アルコキシ基などが挙げられる。
【００３１】
また、上記一般式（１）に示すＲ３を含む構造単位中のｍは、２以上の整数であるが、好ましくは、２以上１０以下である。言い換えれば、Ｒ３を含む構造単位中には、炭素数２以上の炭化水素基（アルキレン基）を含み、炭素数２以上１０以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むと好ましく、炭素数２以上５以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むとより好ましい。かかるアルキレン基の具体例としては、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基、 ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基等の直鎖アルキレン基；イソプロピレン基、イソブチレン基、２−メチルプロピレン基等の分岐鎖アルキレン基等が挙げられる。中でも、生体適合性と、対象物である基材の表面に対する優れた密着性と、を両立できる高分子化合物を実現する観点から、エチレン基が好ましい。
【００３２】
本実施形態に係る高分子鎖は、上記一般式（１）に示すように、Ｒ６を含む構造単位を含む。具体的に、上記Ｒ６としては、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−が挙げられる。ここで、Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または後述する分岐型ポリマー構造である。
【００３３】
また、上記一般式（１）に示すＲ６を含む構造単位中のＲ７は、二価の結合基である。具体的には、Ｒ７としては、置換基を有していてもよいフェニレン基、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−、および−Ｓ−が挙げられ、これらの中から選択できる。また、上述した置換基としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子；メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基等の炭素数１以上５以下の低級アルキル基；メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基等の炭素数１以上５以下の低級アルコキシ基などが挙げられる。
【００３４】
また、上記一般式（１）に示すＲ６を含む構造単位中のｎは、１以上の整数であるが、好ましくは、１以上１０以下である。言い換えれば、Ｒ６を含む構造単位中には、炭素数１以上の炭化水素基（アルキレン基）を含み、炭素数１以上１０以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むと好ましく、炭素数１以上５以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むとより好ましい。かかるアルキレン基の具体例としては、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基、 ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基等の直鎖アルキレン基；イソプロピレン基、イソブチレン基、２−メチルプロピレン基等の分岐鎖アルキレン基等が挙げられる。中でも、生体適合性と、対象物である基材の表面に対する優れた密着性と、を両立できる高分子化合物を実現する観点から、プロピレン基が好ましい。
【００３５】
また、本実施形態に係る高分子鎖は、上記一般式（１）で表される構造を有していれば、ランダム共重合体であっても、ブロック共重合体であってもよいが、当該高分子化合物を用いて作製した塗膜全域において均一な生体適合性を付与する観点から、ランダム共重合体であることが好ましい。
【００３６】
そして、上記一般式（１）で表される構造は、下記一般式（２）で表される構造であることが好ましい。言い換えれば、本実施形態に係る高分子鎖は、下記一般式（２）で示される構造を有することが好ましい。すなわち、本実施形態に係る高分子鎖は、側鎖にホスホリルコリン基を含む構造単位と、アジドシンナモイル基を含む構造単位と、アルキレート基を含む構造単位とからなる下記一般式（２）で表される分子構造であることが好ましい。こうすることで、本実施形態に係る分岐型高分子化合物によれば、細胞が付着しにくいという細胞付着防止性に優れる一方で、塗布対象物との間における化学的相互作用をより強固なものとした塗膜を実現することができる。
【００３７】
【化３】
2017149918.tif 000004
【００３８】
（上記一般式（２）において、Ｒ１、Ｒ３及びＲ６は互いに独立して、共重合して得られた状態の重合性原子団を表わし、−ＣＲ１１−ＣＨＲ１２−又は−ＣＨＲ１１−Ｃ（ＣＨ３）−である。Ｒ１１及びＲ１２は、互いに独立して、水素原子または前記分岐型ポリマー構造であって、前記高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６において、Ｒ１１またはＲ１２が前記分岐型ポリマー構造である。ａ及びｂは、互いに独立した２以上の数である。ｃは、０以上の数である。ｎは、１以上１０以下の整数である。Ｒ１を含む構造単位と、Ｒ３を含む構造単位と、Ｒ６を含む構造単位は、それぞれランダムな順序で結合している、またはブロック状態で結合している。）
【００３９】
上記一般式（２）におけるＲ１、Ｒ３及びＲ６は、上記一般式（１）におけるＲ１、Ｒ３及びＲ６と同じである。
【００４０】
また、上記一般式（２）に示すＲ６を含む構造単位中のｎは、１以上の整数であるが、好ましくは、１以上１０以下である。言い換えれば、Ｒ６を含む構造単位中には、炭素数１以上の炭化水素基（アルキレン基）を含み、炭素数１以上１０以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むと好ましく、炭素数１以上５以下の炭化水素基（アルキレン基）を含むとより好ましい。かかるアルキレン基の具体例としては、メチレン基、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基、ヘキサメチレン基、 ヘプタメチレン基、オクタメチレン基、ノナメチレン基、デカメチレン基等の直鎖アルキレン基；イソプロピレン基、イソブチレン基、２−メチルプロピレン基等の分岐鎖アルキレン基等が挙げられる。中でも、生体適合性と、対象物である基材の表面に対する優れた密着性と、を両立できる高分子化合物を実現する観点から、プロピレン基が好ましい。
【００４１】
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、上述した高分子鎖が分岐型ポリマー構造を有するものである。この分岐型ポリマー構造は、２官能以上の（メタ）アクリレート化合物に由来した構造であることが好ましい。以下、上記分岐型ポリマー構造について、２官能の（メタ）アクリレート化合物に由来した構造を例に挙げて説明する。
【００４２】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する分岐型ポリマー構造としては、下記一般式（３）で表される構造が好ましい。
【００４３】
【化４】
2017149918.tif 000005
【００４４】
（上記一般式（３）において、Ｒ８は−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−で中断されてもよい炭素数１〜２０の炭化水素鎖、Ｒ９、Ｒ１０はＨ、ＣＨ３、または炭素数２〜５の炭化水素鎖を示す。ｐはモノマーユニット数を示す。）
【００４５】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖は、上記一般式（３）で表される分岐型ポリマー構造を１または２以上含む。ただし、上記一般式（３）で表される分岐型ポリマー構造は、上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６中の炭素原子に連結している。ここで、本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖に対して、上記一般式（３）で表される分岐型ポリマー構造が２以上連結している場合、かかる分岐型ポリマー構造は、本実施形態に係る分岐型高分子化合物中に１の該分岐型ポリマー構造が単独で存在していてもよいし、複数の該分岐型ポリマー構造が連結した状態で存在していてもよい。
また、上記一般式（３）で表される分岐型ポリマー構造は、１の該分岐型ポリマー構造が単独で上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖と結合していても、複数の該分岐型ポリマー構造が連結した状態で上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖と結合していてもよい。
【００４６】
上記一般式（３）において、Ｒ８は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−で中断されてもよい炭素数１〜２０の炭化水素鎖を示し、例えば下記のものを挙げることができる。下記式中、ｅ、ｆは１から５の整数を表し、ｇは１から１０の整数を表す。
【００４７】
【化５】
2017149918.tif 000006
【００４８】
Ｒ９、Ｒ１０は、それぞれ同一であっても異なっていてもよく、Ｈ、ＣＨ3、または炭素数２〜５の炭化水素鎖を示し、例えば下記のものを挙げることができる。下記式中、ｈは１から４の整数を表す。
【００４９】
【化６】
2017149918.tif 000007
【００５０】
本実施形態に係る分岐型ポリマー構造としては、エチレングリコールジメタクリレートに由来した下記一般式（４）で表される構造が好適である。
【００５１】
【化７】
2017149918.tif 000008
【００５２】
（上記一般式（４）において、ｐは、モノマーユニット数を示す。）
【００５３】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖は、上記一般式（４）で表される分岐型ポリマー構造を１または２以上含む。ただし、上記一般式（４）で表される分岐型ポリマー構造は、上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖中の少なくとも１以上のＲ１、Ｒ３またはＲ６中の炭素原子に連結している。ここで、本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖に対して、上記一般式（４）で表される分岐型ポリマー構造が２以上連結している場合、かかる分岐型ポリマー構造は、本実施形態に係る分岐型高分子化合物中に１の該分岐型ポリマー構造が単独で存在していてもよいし、複数の該分岐型ポリマー構造が連結した状態で存在していてもよい。
また、上記一般式（４）で表される分岐型ポリマー構造は、１の該分岐型ポリマー構造が単独で上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖と結合していても、複数の該分岐型ポリマー構造が連結した状態で上記一般式（１）または一般式（２）で表される高分子鎖と結合していてもよい。
【００５４】
次に、本実施形態に係る分岐型高分子化合物について、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）と、数平均分子量（Ｍｎ）とから算出される分散比（Ｍｗ／Ｍｎ）は、３以上１４以下であり、好ましくは、４以上１３以下であり、より好ましくは、４以上１０以下である。こうすることで、当該高分子化合物をコーティング材として用いた場合に塗工ムラが生じることを抑制しつつ、優れた生体適合性を発現する塗膜を実現することができる。
【００５５】
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物について、ゲルパーミエーションクロマトグラフィーによるポリオキシエチレン換算の重量平均分子量（Ｍｗ）は、好ましくは、４０００以上１００００００以下であり、さらに好ましくは、８０００以上８０００００以下であり、より好ましくは、１００００以上５０００００以下であり、最も好ましくは、３００００以上２０００００以下である。こうすることで、生体適合性と、優れた生体適合性を維持しつつ、対象物の表面に対する密着性をより一層向上させることができる。
【００５６】
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または上記一般式（２）で表される構造において、ａ／（ａ＋ｂ＋ｃ）は、好ましくは、０．３以上０．９９５以下であり、さらに好ましくは、０．４以上０．９以下である。こうすることで、高分子化合物の有する生体適合性をより一層優れたものとすることが可能となり、結果として、目的の細胞凝集塊を安定的に作製できる細胞培養容器を実現することができる。
【００５７】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または上記一般式（２）で表される構造において、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）は、好ましくは、０．００５以上０．２以下であり、さらに好ましくは、０．０１以上０．１７以下であり、最も好ましくは、０．０２以上０．１以下である。こうすることで、かかる高分子化合物を塗布する対象物表面との間に生じる相互作用をより一層強固なものとすることができる。そのため、ｂ／（ａ＋ｂ＋ｃ）の値が上記数値範囲内となるように分子設計を行った場合には、上記発明が解決しようとする課題の項で述べた不都合が生じることを効果的に抑制することができる。
【００５８】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有する上記一般式（１）または上記一般式（２）で表される構造において、ｃ／（ａ＋ｂ＋ｃ）は、好ましくは、０以上０．５以下であり、さらに好ましくは、０．０１以上０．４以下である。こうすることで、かかる高分子化合物に関する親水性と疎水性とのバランスを高度に制御することができる。
【００５９】
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、ポリマーが有する親水性基と疎水性基とのバランスを調整すべく、上述したＲ１を含む構造単位、Ｒ３を含む構造単位、およびＲ６を含む構造単位のいずれとも異なる構造単位を有していてもよい。また、上記異なる構造単位の合計含有量は、本実施形態に係る分岐型高分子化合物全量に対し、好ましくは、３０ｍｏｌ％以下であり、さらに好ましくは、２０ｍｏｌ％以下であり、より好ましくは、１０ｍｏｌ％以下である。ただし、本実施形態に係る分岐型高分子化合物における高分子鎖は、上述したＲ１を含む構造単位、Ｒ３を含む構造単位、Ｒ６を含む構造単位からなる構成であることが好ましい。
【００６０】
次に、本実施形態に係る分岐型高分子化合物の製造方法について説明する。
本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、分岐剤存在下、たとえば、溶液重合、塊状重合、乳化重合、懸濁重合等の公知の方法を用いたラジカル重合反応により製造することができる。かかる分岐剤の具体例としては、（１）ポリオールのジ（メタ）アクリル酸エステル類またはトリ（メタ）アクリル酸エステル類、例えば、ポリオールがエチレングリコール、プロピレングリコール、トリメチロールプロパン、グリセリン、ポリオキシエチレングリコール、ポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリン等であるもの、（２）上記（１）において、不飽和酸が（メタ）アクリル酸以外のもの、例えばマレイン酸、フマル酸などであるもの、（３）ビスアクリルアミド類、例えばＮ，Ｎ'−メチレンビスアクリルアミドなど、（４）ポリエポキシドと（メタ）アクリル酸を反応させて得られるジまたはトリ（メタ）アクリル酸エステル類、（５）ポリイソシアネートと（メタ）アクリル酸ヒドロキシエステルを反応させて得られるジ（メタ）アクリル酸カルバミルエステル類、例えばポリイソシアネートがトリレンジイソシアネート、ヘキサメチレンジイソシアネートなどであるもの、（６）多価アリル化合物、例えばアリル化デンプン、アリル化セルロース、ジアリルフタレート、テトラアリロキシエタン、ペンタエリストールトリアリルエーテル、トリメチロールプロパントリアリルエーテル、ジエチレングリコールジアリルエーテル、トリアリルトリメリテート等が挙げられる。中でも、上記（１）に示したポリオールのジ（メタ）アクリル酸エステル類またはトリ（メタ）アクリル酸エステル類が好ましく、エチレングリコールジ（メタ）アクリレート、プロピレングリコールジ（メタ）アクリレート、Ｎ，Ｎ'−メチレンビス（メタ）アクリルアミド等の２官能以上の（メタ）アクリレート化合物がより好ましい。
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物の製造に用いる各種モノマーは、公知の方法で作製したものを用いてもよいし、市販のモノマーを使用してもよい。
【００６１】
本実施形態に係る分岐型高分子化合物を上述した公知の方法で製造する際には、溶媒を反応媒体として用いることができる。かかる溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロパノール、ｔ−ブタノール、ベンゼン、トルエン、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、クロロホルム、およびこれらの混合溶媒等が挙げられる。
【００６２】
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物をラジカル重合反応により製造する際には、反応開始剤を用いる必要がある。かかる反応開始剤としては、２，２'−アゾビス（２−アミジノプロパン）二塩酸塩、４，４'−アゾビス（４−シアノ吉草酸）、２，２'−アゾビス（２−（５−メチル−２−イミダゾリン−２−イル）プロパン）二塩酸塩、２，２'−アゾビス（２−（２−イミダゾリン−２−イル）プロパン）二塩酸塩、２，２'−アゾビスイソブチルアミド二水和物、過硫酸アンモニウム（ＡＰＳ）、過硫酸カリウム、過酸化ベンゾイル、ジイソプロピルペルオキシジカーボネート、ｔ−ブチルペルオキシ−２−エチルヘキサノエート、ｔ−ブチルペルオキシピバレート、ｔ−ブチルペルオキシジイソブチレート、過酸化ラウロイル、２，２′−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）、２，２'−アゾビス（２，４−ジメチルバレロニトリル）、アゾビスマレノニトリルなどの脂肪酸アゾ化合物、ｔ−ブチルパーオキシネオデカノエート、およびこれらの混合物等が挙げられる。
【００６３】
また、本実施形態に係る分岐型高分子化合物を製造する際には、必要に応じて、たとえば、窒素ガスやアルゴンガス等により反応空間をガス置換してもよい。
【００６４】
＜コーティング材＞
本実施形態に係るコーティング材は、上述した本実施形態に係る分岐型高分子化合物を含むものである。上述した通り、本実施形態に係る分岐型高分子化合物は、優れた生体適合性と、塗布対象物の表面に対する優れた密着性と、を両立したものである。そのため、本実施形態に係るコーティング材によれば、優れた生体適合性を発現しつつ、塗布対象物の表面に対して強固な結合を形成可能な塗膜を作製することができる。
【００６５】
また、本実施形態に係るコーティング材は、塗膜に要求される性能に応じて、溶剤、硬化剤、触媒、増感剤、カップリング剤、充填材等を含んでいてもよい。かかる溶剤の具体例としては、メタノール、エタノール、イソプロプルアルコール等のアルコール系溶媒、酢酸エチル等のエステル系溶媒、アセトン等のケトン系溶媒を含む極性溶媒、水、またはこれらの混合溶媒等が挙げられる。中でも、本実施形態に係る分岐型高分子化合物の溶解性に優れる観点から、水−エタノールの混合溶媒が好適に使用できる。
【００６６】
＜成形体＞
本実施形態に係る成形体は、基材と、基材表面を覆うように形成された上記コーティング材からなる被覆部と、を有している。かかる被覆部は、上記基材表面の全域を覆うように形成されていることが好ましい。上記成形体は、たとえば、遠沈管、試験管、保存用のボトル、チューブ、バッグ、免疫分析用容器等の生化学容器や、上記背景技術の項で述べた細胞培養容器等の用途で使用することができる。ここで、上記細胞培養容器は、細胞を容器内部で培養できるものであればよく、その具体例としては、各種シャーレ、マルチウェルプレート、培養フラスコ、培養バッグ等が挙げられる。なお、細胞培養容器の具体的な形状については、後述する。
【００６７】
また、本実施形態に係る成形体における被覆部側の表面の水に対する接触角は、好ましくは、１０°以上４０°以下であり、さらに好ましくは、１２°以上３９°以下であり、より好ましくは、２４°以上３８°以下であり、最も好ましくは、２４°以上３３°以下である。このように、本実施形態に係る成形体における被覆部側の表面、すなわち、細胞と接する側の表面は、水に対する濡れ性に優れたものであることが好ましい。こうすることで、本実施形態に係る成形体によれば、培養細胞が被覆部表面に吸着してしまうことを抑制することができるため、結果として、良質な細胞凝集塊を安定して作製することが可能となる。
【００６８】
本実施形態に係る成形体が有する基材を構成する材料としては、形状設計の自由度に優れている観点から、樹脂材料を好適に用いることができる。かかる樹脂材料の具体例としては、ポリプロピレン樹脂、ポリエチレン樹脂、エチレン-プロピレン共重合体等のポリオレフィン系樹脂または環状ポリオレフィン系樹脂、ポリスチレン、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン系樹脂等のポリスチレン系樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、ポリメチルメタクリレート樹脂等のメタクリル系樹脂、塩化ビニル樹脂、ポリブチレンテレフタレート樹脂、ポリアリレート樹脂、ポリサルホン樹脂、ポリエーテルサルホン樹脂、ポリエーテルエーテルケトン樹脂、ポリエーテルイミド樹脂、ポリテトラフルオロエチレン等のフッ素系樹脂、ポリメチルペンテン樹脂、ポリアクリロニトリル等のアクリル系樹脂、プロピオネート樹脂等の繊維素系樹脂等が挙げられる。中でも、成形性および滅菌性の観点から、ポリスチレン樹脂が好ましい。
なお、本実施形態に係る成形体が有する基材は、射出成形品であっても、ブロー成型品であっても、インジェクションブロー成形品であってもよい。
【００６９】
＜成形体の製造方法＞
本実施形態に係る成形体の製造方法は、上記高分子化合物を溶剤に溶解乃至分散させた上記コーティング材を調製する工程と、コーティング材を基材に塗布する工程と、を含み、かかる塗布する工程において、コーティング材を基材の表面を覆うように塗布するものである。
【００７０】
上記コーティング材を基材に塗布する方法としては、ピペット、ディスペンサー等により、手動または、自動化ロボットでスポット状に塗布する方法、コーティング溶液に浸漬させて塗布する方法、ロールなどで塗布する方法等が挙げられる。また、塗布したコーティング材は溶剤を含むため、かかる溶剤を飛ばす目的で、乾燥させる必要がある。この方法としては、自然乾燥のほかに、通常の乾燥機中で乾燥させる方法、減圧乾燥機中で乾燥させる方法、熱板上で乾燥させる方法等がある。
【００７１】
そして、上述したスポット状に塗布する方法を採用する場合には、事前に基材の表面に対して低温プラズマ処理、コロナ放電処理や放射線照射処理を施すことにより、改質（酸化）しておくことが好ましい。こうすることで、コーティング材中に含まれている高分子化合物の基材に対する濡れ性を向上することができる。
【００７２】
コーティング材を基材の表面を覆うように塗布した後、塗布面に対して、たとえばＵＶ等を用いて光照射する。こうすることで、コーティング材を硬化させることができる。
上記光照射の条件は、好ましくは、１０ｍＪ／ｃｍ２以上１０００ｍＪ／ｃｍ２以下であり、さらに好ましくは、５０ｍＪ／ｃｍ２以上８００ｍＪ／ｃｍ２以下であり、最も好ましくは、１００ｍＪ／ｃｍ２以上６００ｍＪ／ｃｍ２以下である。こうすることで、上記本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有するＲ３を含む構造単位中のアジド基に由来するナイトレンを発生させることが可能であり、かかるナイトレンと基材との間における相互作用を強めることができる。また、上記本実施形態に係る分岐型高分子化合物が有するビニル基と該ナイトレンが側鎖間で架橋構造を形成することもできる。これにより、成形体の表面から上記高分子化合物を含む塗膜が脱離することを抑制することができる。
【００７３】
＜細胞培養容器＞
本実施形態に係る細胞培養容器の構成について、図１を参照して説明する。また、かかる細胞培養容器は、上述した成形体からなることを前提としたものである。ここで、図１は、本実施形態に係る細胞培養容器の一例を示す断面図である。
本実施形態に係る細胞培養容器（ウェル１）は、図１に示すように、底面が、半球状または円錐状であり、かつ側面が底面に向かって縮径した形状のものである。こうすることで、増殖した細胞が自重により当該容器の底面に向けて容易に移動することが可能となるため、安定して細胞凝集塊を作製することができる。また、本実施形態に係る細胞培養容器（ウェル１）は、その内表面が上述した高分子化合物を含む膜でコーティングされていることが、優れた生体適合性と、該膜の基材に対する優れた密着性とのバランスを向上させる観点から好ましい。
【００７４】
また、本実施形態に係る細胞培養容器（ウェル１）における細胞培養領域の底部内面は、その曲率半径Ｒ'が、２．６ｍｍ以下であること好ましく、２．０ｍｍ以下であるとさらに好ましい。こうすることで、細胞同士が十分な密度で集まるため、より質の高い細胞凝集塊を形成することが可能となる。さらに、曲率半径Ｒ'が上記上限値以下である場合、ウェル１形状を底部２に向けて細くすることができるため、底部２から同じ高さで培地を吸引した場合の培地交換効率（培地全体量に対する吸引除去する培地量の割合）を向上させることもできる。
一方、ウェル１の底部内面の曲率半径Ｒ'は、１．０ｍｍ以上であることが好ましい。こうすることで、培養時に死滅した細胞が、ウェル１底面に対して高密度に凝集することを抑制できるため、結果として、倒立顕微鏡による顕鏡性を向上させることが可能であるため、ウェル１内の細胞または胚様体の観察を正確に行うことができる。
【００７５】
また、ウェル１の開口部３の直径は、マルチディスペンサーを使用する場合の操作性を確保する観点から、４．０ｍｍ以上とすることが好ましい。
【００７６】
ウェル１の容量は、好ましくは、８０μＬ以上５００μＬ以下であり、より好ましくは、８０μＬ以上２００μＬ以下である。こうすることで、細胞凝集塊を作製するために用いる培地量を必要十分量に抑えることができる。
【００７７】
ここで、ウェル１の形状は、以下の構造であることが好ましい。
図１に示すように、ウェル１の側面の稜線を上記ウェルの底部２を越えて延長した直線ａと、上記開口部３の中心から垂直に上記ウェルの底部２を越えて延長した直線ｂと、が交差する角度θは、３°以上、３０°以下であることが好ましい。こうすることで、培地中の細胞がより底部２に集まりやすくなり、更に培地交換の際のディスペンサーチップ操作も容易となる。
また、かかる交差する角度θは、５°以上、１５°以下であるとさらに好ましい。こうすることで略Ｕ字形状の底部２と側面がよりなだらかにつながる形状となり培地中の細胞が更に集まりやすくなり、より良好な形状の細胞凝集塊を作製することができる。
【００７８】
以上、本発明の実施形態について述べたが、これらは本発明の例示であり、上記以外の様々な構成を採用することもできる。
【実施例】
【００７９】
以下、本発明を実施例および比較例により説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８０】
＜モノマーの合成＞
まず、テフロン（登録商標）製撹拌機、ジムロート冷却機、温度計および滴下漏斗を取り付けた四つ口フラスコ（以下、反応器とも示す。）を十分に乾燥した。この反応器内に、４−アジド桂皮酸１８．９ｇ（０．１０ｍｏｌ）と、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド１３０ｍｌとを仕込んだ後、乾燥窒素を流しながら室温下、４−アジド桂皮酸が完全に溶けるまで撹拌した。その後、反応器を０℃付近まで冷却し、滴下漏斗を用いて塩化チオニル１３．７５ｇ（０．１１５ｍｏｌ）を１時間かけて滴下した。全ての塩化チオニルを滴下した後、反応器を６５℃まで加熱して４時間反応を継続させた。次に、約４０℃でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドを減圧留去し、容器を移して室温で一昼夜、真空乾燥することで１９．８ｇの４−アジド桂皮酸クロライドを得た。
【００８１】
得られた４−アジド桂皮酸クロライド１０ｇ（０．０４８ｍｏｌ）をテフロン（登録商標）製撹拌機、ジムロート冷却器、温度計および滴下漏斗を取り付けた四つ口フラスコ内に、トルエン１９０ｍｌ、２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）７．０ｇ（０．０５４ｍｏｌ）と一緒に仕込み、撹拌しながら５０℃に加熱した。次に、反応容器内に、トリエチルアミン１３ｇとトルエン１９０ｍｌの混合液を、滴下漏斗を用いて一時間かけて滴下混合した。滴下終了後、さらに４時間反応を継続させた。反応終了後、塩酸塩を濾紙で濾捌後、得られた濾液を５％ＨＣｌ水溶液で抽出して分液ロート下層のＨＥＭＡ水溶液を除いた。その後、上層のトルエン溶液に対して無水硫酸ナトリウムを加えて脱水し、トルエンをエバポレートして除去してから、真空乾燥機で一昼夜乾燥して１４．６ｇのモノマー（メタクリロイルオキシエチル−４−アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ））を得た。得られたＭＥＣＡｚを、以下の実施例に用いた。
【００８２】
＜高分子化合物の合成＞
（実施例１）
１．４ｇ（４．７５ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．０９６ｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のメタクリロイルオキシエチル４−アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）と、０．１９１ｇ（１．３４ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）と、調製しておいたエチレングリコールジメタクリレート（ＥＧＤＭ）２０ｗｔ％エタノール溶液０．０４ｇ（０．０４ｍｍｏｌ）をエタノール５．３ｇ（６．７ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を三方コックをした枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．０１３１ｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝６：３：１混合溶媒３２０ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール１００ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液１５．７ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は１０．１ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＭＥＣＡｚと、ＢＭＡと、ＥＧＤＭとを、モル比で７３．５：５．０：２０．９：０．６の仕込み比率で重合させたところ、９３．７％の収率で目的のポリマー粉末が得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＭＥＣＡｚおよびＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、７４．６：２．３：２３．１であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークが表れていることから、得られたポリマーがＥＧＤＭに由来した分岐型ポリマー構造を有していることが分かった。
【００８３】
（実施例２）
１．４ｇ（４．７５ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．０９６ｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のメタクリロイルオキシエチル４−アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）と、０．１９１ｇ（１．３４ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）と調製しておいたエチレングリコールジメタクリレート２０ｗｔ％エタノール溶液０．０７ｇ（０．０７ｍｍｏｌ）をエタノール５．３ｇ（６．７ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を三方コックをした枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．０１３１ｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝６：３：１混合溶媒３２０ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール１００ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液１５．７ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は１１．２ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＭＥＣＡｚと、ＢＭＡと、ＥＧＤＭとを、モル比で７３．２：４．９：２０．８：１．１の仕込み比率で重合させたところ、９７．０％の収率で目的のポリマー粉末が得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＭＥＣＡｚおよびＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、７３．５：１．９：２４．６であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークが表れていることから、得られたポリマーがＥＧＤＭに由来した分岐型ポリマー構造を有していることが分かった。
【００８４】
（実施例３）
１．４ｇ（４．７５ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．０９６ｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のメタクリロイルオキシエチル４−アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）と、０．１９１ｇ（１．３４ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）とエチレングリコールジメタクリレート０．０１４ｇ（０．０７２ｍｍｏｌ）をエタノール５．３ｇ（６．７ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を三方コックをした枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．０１３１ｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝６：３：１混合溶媒３２０ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール１００ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液１０．３ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は１５．８ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＭＥＣＡｚと、ＢＭＡと、ＥＧＤＭとを、モル比で７３．２：４．９：２０．８：１．１の仕込み比率で重合させたところ、ほぼ１００％の収率で目的のポリマー粉末が得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＭＥＣＡｚおよびＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、７４．９：２．３：２２．８であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークが表れていることから、得られたポリマーがＥＧＤＭに由来した分岐型ポリマー構造を有していることが分かった。
【００８５】
（実施例４）
１．４ｇ（４．７５ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．０９６ｇ（０．３２ｍｍｏｌ）のメタクリロイルオキシエチル４−アジド桂皮酸エステル（ＭＥＣＡｚ）と、０．１９１ｇ（１．３４ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）とエチレングリコールジメタクリレート０．１７４ｇ（０．０８８ｍｍｏｌ）をエタノール５．３ｇ（６．７ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を三方コックをした枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．０１３１ｇ（０．０８ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝６：３：１混合溶媒３２０ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール１００ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液１３．６ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は１１．４ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＭＥＣＡｚと、ＢＭＡと、ＥＧＤＭとを、モル比で７３．０：４．９：２０．７：１．４の仕込み比率で重合させたところ、ほぼ１００％の収率で目的のポリマー粉末が得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＭＥＣＡｚおよびＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、７６．０：２．５：２１．５であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークが表れていることから、得られたポリマーがＥＧＤＭに由来した分岐型ポリマー構造を有していることが分かった。
【００８６】
（比較例１）
１．４２ｇ（４．８ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．１７１ｇ（１．２ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）とをエタノール３．０ｇ（３．８ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を三方コックをした枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．００８２ｇ（０．０５ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝７：２：１混合溶媒中２００ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール５０ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液１４ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は９．３ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＢＭＡとを、モル比で８０：２０の仕込み比率で重合させたところ、８１．８％の収率で目的のポリマーが得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、７６．５：２３．５であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークは表れていなかった。このことから、得られたポリマーは、分岐型ポリマー構造を有していないと考えられる。
【００８７】
（比較例２）
０．８９ｇ（３．０ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．４２７ｇ（３．０ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）とをエタノール３．１ｇ（３．９ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を三方コックをした枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．００８２ｇ（０．０５ｍｍｏｌ）の２，２'−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝７：２：１混合溶媒２００ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール５０ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液１０．２ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は７．９ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＢＭＡとを、モル比で５０：５０の仕込み比率で重合させたところ、６０．７％の収率で目的のポリマーが得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、４６．０：５４．０であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークは表れていなかった。このことから、得られたポリマーは、分岐型ポリマー構造を有していないと考えられる。
【００８８】
（比較例３）
０．５３ｇ（１．８ｍｍｏｌ）の２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン（ＭＰＣ）と、０．５９８ｇ（４．２ｍｍｏｌ）のブチルメタクリレート（ＢＭＡ）とをエタノール３．２ｇ（４ｍＬ）に溶解させた後、得られた溶解液を、三方コックを具備した枝付き反応容器内に導入した。次に、反応容器内に０．００８２ｇ（０．０５ｍｍｏｌ）の２，２′−アゾビスイソブチロニトリルを導入し、１０分間アルゴンガスを吹き込んだ後密閉し、６０℃で２０時間反応させた。
得られたポリマー溶液を１０ｍｌのエタノール溶液で希釈し、ヘキサン：アセトン：エタノール＝７：２：１混合溶媒２００ｍｌ中にかき混ぜながら徐々に滴下し、滴下終了後１時間撹拌した。その後、溶媒除去し残ったポリマーをエタノール５０ｍｌで再溶解してろ過し、ろ液をエバポレーターにて濃縮してポリマーエタノール溶液４ｇを得た。得られたポリマー溶液を一部サンプル瓶に移して４８時間真空乾燥させて重量測定してポリマー溶液濃度を算出したところポリマー溶液濃度は８．７ｗｔ％であった。
つまり、ＭＰＣと、ＢＭＡとを、モル比で３０：７０の仕込み比率で重合させたところ、３０．９％の収率で目的のポリマーが得られた。
得られたポリマーにおけるＭＰＣ、ＢＭＡの含有割合は、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果より、２４．５：７５．５であることが分かった。
また、１Ｈ−ＮＭＲの測定結果において、１．２〜１．３ｐｐｍにピークは表れていなかった。このことから、得られたポリマーは、分岐型ポリマー構造を有していないと考えられる。
【００８９】
＜コーティング材の調製＞
上述した方法で得られた各実施例および各比較例のポリマー粉末をそれぞれ、溶媒（エタノール）に溶解させ、該ポリマー粉末の含有量が１．０重量％のコーティング材を調製した。
【００９０】
＜細胞培養容器の作製＞
基材として、ポリスチレン製の９６穴ウェルプレート成形品（住友ベークライト社製、９０９６Ｕ）を準備した。次に、この基材表面に対し、ＢＲＡＮＳＯＮ／ＩＰＣ社製のプラズマ装置（ＳＥＲＩＥＳ７０００）を用いて５分間の酸素プラズマ処理を実施した。
次いで、上記基材に対して、１ウェルにつき２５０μＬのコーティング材を注入し５分間浸漬した状態で放置した後、コーティング材をピペットで除去し、該基材を裏返した。その後、２５℃で１２時間乾燥させた後、基材のウェル内部に対してＵＶランプを用いて光照射することで、コーティング材中の高分子化合物を硬化させた。このときの光照射条件は、波長２５０ｎｍのＵＶ光を２０ｍＷ／ｃｍ2で３０秒間照射する条件に設定した。
次に、ウェルの内部を、超純水で３回繰り返し洗浄してから乾燥させた。次いで、ウェルの内部に対して、γ線照射装置を用いて吸収線量が６ｋＧｙとなるようにγ線を照射（ラジエ工業社にて実施）した。こうすることで、実施例及び比較例に係る滅菌済みの細胞培養容器を得た。
【００９１】
上述した方法で得られた高分子化合物および細胞培養容器について、下記に示す測定及び評価を行った。
【００９２】
・重量平均分子量（Ｍｗ）、数平均分子量（Ｍｎ）：各実施例および各比較例に係る高分子化合物の重量平均分子量（Ｍｗ）、および数平均分子量（Ｍｎ）は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）測定により得られる標準ポリオキシエチレンの検量線から求めた、ポリオキシエチレン換算値を用いた。測定条件は、以下の通りである。
装置：ゲルパーミエーションクロマトグラフィー装置（日本分光株式会社製、ＬＣ−２０００Ｐｌｕｓシリーズ）
カラム：東ソー社製、ＴＳＫ−ＧＥＬＡＬＰＨＡ−Ｍ、ＡＬＰＨＡ−２５００
検出器：液体クロマトグラム用ＲＩ検出器
測定温度：４０℃
溶媒：メタノール／水＝７／３(ｖｏｌ／ｖｏｌ)混合溶媒
試料濃度：０．０５ｗｔ％
【００９３】
・被覆膜表面の水に対する接触角：プラズマ処理済みのポリスチレン容器に対し、含有ポリマー濃度が０．３ｗｔ％となるように調製したポリマー溶液を入れて５分間静置後、該溶液を除去した。次いで、かかるポリスチレン容器の内部を乾燥させてからＵＶ照射した後に、水洗乾燥することによりポリマー被覆膜を持つ容器を得た。
次に協和界面化学社製のＣＡ−Ｖ型接触角計を用いて被覆膜表面の水に対する接触角を測定した。接触角の値は、超純水２．０μＬ液滴を測定する被覆膜表面に接触させてから８５秒後の状態のものを測定した。
【００９４】
ＨｅｐＧ２細胞（ヒト肝癌由来細胞）を用いた細胞凝集塊作製：まず、あらかじめ９０ｍｍφの培養シャーレで培養し増殖させたＨｅｐＧ２細胞を培養液（ダルベッコ改変ＭＥＭ＋１０％ウシ胎児血清）に対して、１０，０００ｃｅｌｌｓ／ｍＬの濃度で分散させることにより細胞懸濁液を調製した。次いで、この細胞懸濁液を、細胞培養容器に１００μＬ／ウェルずつ分注し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下にて３日間培養した。
３日後各ウェルの細胞凝集塊が形成されていることを顕微鏡下で確認し、細胞凝集塊の状態を以下の基準で評価した。
◎：良好な１つの細胞凝集塊が形成された。
○：良好な細胞凝集塊とともに、小さな細胞凝集塊が複数形成された。
×：細胞凝集塊は形成されず、細胞間接着が確認された。
【００９５】
【表１】
2017149918.tif 000009
【００９６】
表１からも分かるように、実施例の細胞培養容器は、いずれも、良好な細胞凝集塊を形成することができるものであった。このことから、実施例の細胞培養容器における被覆膜は、いずれも、基材から剥離することのない良好な密着状態で形成しているといえる。
【符号の説明】
【００９７】
１  ウェル
２  底部
３  開口部
ａ  直線
ｂ  直線
θ  交差する角度
Ｒ'  曲率半径
【図１】
2017149918.tif 000013