(57)【要約】【課題】ＬＯＣ１００２９２６８０の発現量を指標とした、皮膚老化抑制素材をスクリーニングする新たな方法を提供することを課題とする。【解決手段】加齢に伴い発現量が減少するＬＯＣ１００２９２６８０の発現量が、被験物質を添加しなかった細胞におけるＬＯＣ１００２９２６８０の発現量と、被験物質を添加した細胞におけるＬＯＣ１００２９２６８０の発現量を比較して、発現量が増加した被験物質を選択するステップ、を含む、皮膚老化抑制素材のスクリーニング方法により課題を解決する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＬＯＣ１００２９２６８０の発現量が、被験物質を添加しなかった細胞におけるＬＯＣ１００２９２６８０の発現量と、被験物質を添加した細胞におけるＬＯＣ１００２９２６８０の発現量を比較して、発現量が増加した被験物質を選択するステップ、を含む、皮膚老化抑制素材のスクリーニング方法。
【請求項２】
被験物質を添加することにより添加しない場合に比べ、ＬＯＣ１００２９２６８０の発現量が１３％を超えた場合、老化改善効果を有すると判断することを特徴とする、皮膚老化抑制素材のスクリーニング方法。
【請求項３】
前記皮膚老化抑制素材が、シワ防止、たるみ防止、ハリの低下防止、弾力性の低下防止、きめの喪失の防止及び、くすみ防止からなる群から選択される１種以上の効果を有することを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚老化抑制素材をスクリーニングする方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
生物を構成する細胞は加齢により老化する。細胞は、生体反応を担っており、生命活動を担う組織・器官を形成・維持しており、細胞の老化は個体の老化にも繋がる。
また、老化した細胞は周囲の細胞に対しても老化細胞様の反応を惹起させる因子を放出し、組織・器官の老化を加速させる。このため、老化細胞を取り除くと個体や組織の老化を遅らすことができ、既に生じた老化症状を改善できることが示唆されている（例えば、非特許文献１参照）。
【０００３】
従って、老化細胞は抗老化のターゲットとして期待されている（例えば、非特許文献２参照）。しかしながら、非侵襲的に老化細胞を取り除くことは実施が難しいという課題があった。
【０００４】
一方、近年、細胞老化をコントロールする生体成分として、タンパク質をコードしていないＲＮＡであるノンコーディングＲＮＡ（ｎｃＲＮＡ）が報告されている（例えば、非特許文献３参照）。このｎｃＲＮＡの中には塩基数２００ｎｔ以上のＲＮＡであるＬｎｃＲＮＡが知られており、ＬｎｃＲＮＡは８２００種ほど存在すると推測されている（例えば、非特許文献４参照）。ＬｎｃＲＮＡに関して、近年、若齢および老齢ドナーから皮膚を採取し、発現量が比較され、いくつかのＬｎｃＲＮＡの量が加齢により変化していることが報告されている（例えば、非特許文献５参照）。
【０００５】
加齢により発現が増加するＮＥＳＰＡＳ、ＦＬＪ４６９０６、ＨＯＴＡＩＲのＬｎｃＲＮＡと、加齢により発現が減少するＳＮＨＧ５、ＬＯＣ１００２９２６８０、ＩＰＷのＬｎｃＲＮＡが、特に細胞老化の抑制効果を判断するのに有力な指標であり、該ＬｎｃＲＮＡを指標として皮膚老化を抑制する効果を有する素材を選別できることが報告されている（例えば、特許文献1参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１５−１３０８５７号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Baker DJ. et al., Nature. (2011), 479, 232-236
【非特許文献２】Naylor RM. et al., Clin Pharmacol Ther. (2013) 93, 105-116
【非特許文献３】Abdelmohsen K. et al., Wiley Interdiscip Rev RNA. (2015) 6, 615-629
【非特許文献４】Cabili MN. et al., Genes Dev. (2011), 25, 1915-1927
【非特許文献５】Chang ALS. et al., J Invest Dermatol. (2012), 133, 394-402
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明では、ＬｎｃＲＮＡの一つであるＬＯＣ１００２９２６８０を用いて、皮膚老化抑制素材をスクリーニングする新たな方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らはＬｎｃＲＮＡについて研究を進め、加齢に伴い発現量が減少するＬｎｃＲＮＡの一つであるＬＯＣ１００２９２６８０が特に細胞老化の抑制効果を判断するのに有力な指標となることを見出し、ＬＯＣ１００２９２６８０の亢進を指標に老化を抑制する効果を有する素材をスクリーニングできることに想到した。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、ＬＯＣ１００２９２６８０を指標とした、新たな皮膚老化抑制素材のスクリーニング法が提供できる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ＬＯＣ１００２９２６８０が老化を抑制するＬｎｃＲＮＡであることを示す図
【図２】ＬＯＣ１００２９２６８０の減少が細胞の老化を引き起こすことを示す図
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明について、具体的に行った実験を示して説明するが、本発明が具体的な実施態様にのみ限定されないことはいうまでもない。
【００１３】
＜実験１：ＬＯＣ１００２９２６８０の老化メカニズム抑制効果の確認＞
【００１４】
老化していない細胞として１８歳のドナー由来の真皮線維芽細胞を用い、老化状態の指標として、老化のメカニズムとして有名なｐ２１をコードする遺伝子（ＣＤＫＮ１Ａ）を評価した。加齢により発現が減少するが機能は解明されていないＬｎｃＲＮＡである、ＳＮＨＧ５、ＬＯＣ１００２９２６８０、ＩＰＷの３種を比較した。ＳＮＨＧ５、ＬＯＣ１００２９２６８０、ＩＰＷの量を減少させた細胞のＣＤＫＮ１Ａ発現量が、ＳＮＨＧ５、ＬＯＣ１００２９２６８０、ＩＰＷのいずれの量も減少させなかった細胞におけるＣＤＫＮ１Ａの発現量と比較して増加を示した場合には、そのＬｎｃＲＮＡが老化を抑制していたと判断できる。
【００１５】
細胞を２４ウェルプレートに３０，０００個／ウェルになる様に播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で培養した。細胞がプレートに接着した後、ＳＮＨＧ５に対するｓｉＲＮＡ（キアゲン社  ＳＩ０２８２４７６６）、ＬＯＣ１００２９２６８０に対するｓｉＲＮＡ（キアゲン社  ＳＩ０５３９５５０２）、ＩＰＷに対するｓｉＲＮＡ（キアゲン社  ＳＩ０４９１５５４７）をそれぞれ細胞に導入してそれぞれのＲＮＡ量を減少させ、さらに７２時間培養した。培養終了時に、ＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（キアゲン社）を用いて総ＲＮＡを回収し、Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  ＶＩＬＯ  ＤＮＡ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｋｉｔ（キアゲン社）による逆転写を行った。ＣＤＫＮ１Ａの特異的プライマー（Ｆｏｒｗａｒｄプライマー；  ５’‐ＡＧＡＧＧＡＧＧＣＧＣＣＡＴＧＴＣＡ‐３’、Ｒｅｖｅｒｓｅプライマー；  ５’‐ＴＧＧＴＧＴＣＴＣＧＧＴＧＡＣＡＡＡＧＴ‐３’、インヴィトロジェン社）を用いた定量的リアルタイムＰＣＲ法によりＣＤＫＮ１Ａの発現量を解析し、ＲＮＡ発現に影響の無いＮｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｉＲＮＡ（キアゲン社  １０２７２８０）を用いて同じ作業を行ったコントロールにおける発現量を１００％としたときの割合を求め、ＣＤＫＮ１Ａが増加を示すかどうかを解析することで、細胞老化を評価した。
【００１６】
ＳＮＨＧ５、ＬＯＣ１００２９２６８０、ＩＰＷの評価結果を図１に示す。ＬＯＣ１００２９２６８０を減少させた細胞で、細胞老化のメカニズム指標であるＣＤＫＮ１Ａが有意に増加した（図１）。
従って、図１の結果からＬＯＣ１００２９２６８０が細胞老化を抑制していたと判断できる。
【００１７】
＜実験２：ＬＯＣ１００２９２６８０の減少による老化状態の確認＞
【００１８】
実験１と同様にＬＯＣ１００２９２６８０を減少させた真皮線維芽細胞に対して、１週間毎に細胞の継代を繰り返し、1継代後、２継代後及び７継代後の細胞について、Ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社  Ｋ３２０−２５０）を用いて、細胞の老化表現形であるＳｅｎｅｓｃｅｎｃｅ−Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  Ｂｅｔａ−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ（ＳＡ−β−Ｇａｌ）陽性細胞を染色し、全細胞数に対するＳＡ−β−Ｇａｌ陽性細胞数の割合（ＳＡ−β−Ｇａｌ陽性細胞率）を算出した。
Ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｓｉＲＮＡ（キアゲン社  １０２７２８０）を用いて、ＬＯＣ１００２９２６８０の量を減少させずに同じ評価を行った真皮線維芽細胞をコントロールとし、コントロールにおけるＳＡ−β−Ｇａｌ陽性細胞率を１としたときの、ＬＯＣ１００２９２６８０を減少させた細胞におけるＳＡ−β−Ｇａｌ陽性細胞率相対倍率を求め、細胞老化の状態を評価した。
【００１９】
継代を繰り返した細胞における細胞老化表現形の評価による検証結果を図２に示す。ＬＯＣ１００２９２６８０を減少させた細胞では、1継代後、２継代後及び７継代後のいずれも細胞老化の表現形であるＳＡ−β−Ｇａｌ陽性細胞が増加した。
従って、ＬＯＣ１００２９２６８０を減少させた細胞で認められる老化表現形は一時的な反応ではなく、ＬＯＣ１００２９２６８０の減少が細胞の老化を引き起こしていることが明らかとなった。
【００２０】
実験１及び実験２の両方の評価により細胞のＬＯＣ１００２９２６８０が減少することで細胞が老化することが明らかとなった。従って、ＬＯＣ１００２９２６８０を増加させることで細胞老化を防ぐことができることがわかる。
【００２１】
本実施態様に係るスクリーニング法は、被験物質を添加した細胞でのＬＯＣ１００２９２６８０の発現量が、被験物質を添加しなかった細胞におけるＬＯＣ１００２９２６８０の発現量と比較して亢進した被験物質を選択するステップを有する。
当業者は、上記実験１、２の結果、及び実験１に準じた実験の結果に基づき、発現量の変化がＬＯＣ１００２９２６８０の発現亢進効果を有するか判断できる。
具体的に例示すると、ＬＯＣ１００２９２６８０の発現量が被検物質を添加しなかった細胞に対して増加する場合には、上記ステップにおける老化抑制効果を有する物質と判断できる。
【００２２】
本発明のスクリーニング方法が対象とする被験物質は、純物質、動植物由来の抽出物、又はそれらの混合物等のいずれであってもよい。
動植物由来の抽出物は、動物又は植物由来の抽出物自体のみならず、抽出物の画分、精製した画分、抽出物乃至は画分、精製物の溶媒除去物の総称を意味するものとし、植物由来の抽出物は、自生若しくは生育された植物、漢方生薬原料等として販売されるものを用いた抽出物、市販されている抽出物等が挙げられる。
抽出操作は、植物部位の全草を用いるほか、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾等の部位を使用することできるが、予めこれらを粉砕あるいは細切して抽出効率を向上させることが好ましい。抽出溶媒としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノールなどのアルコール類、１，３−ブタンジオール、ポリプロピレングリコールなどの多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル類等の極性溶媒から選択される１種乃至は２種以上が好適なものとして例示することができる。具体的な抽出方法としては、例えば、植物体等の抽出に用いる部位乃至はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬し、室温まで冷却し後、所望により不溶物及び／又は溶媒除去し、カラムクロマトグラフィー等で分画精製する方法が挙げられる。
【００２３】
本発明のスクリーニング方法によりスクリーニングした皮膚老化抑制素材は、シワ防止効果、たるみ防止効果、ハリの低下防止効果、弾力性の低下防止効果、きめの喪失の防止効果、くすみ防止効果から選択される１種以上の効果を奏し、後述するように皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品、食品などに配合されることで、アンチエージング効果を奏する。
【００２４】
皮膚老化抑制素材の含有量（配合量）は、通常、０．００００１質量％以上、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上であり、通常８０質量％以下、好ましくは３０質量％以下、より好ましくは１０質量％である。上記範囲とすることで、好適にアンチエージング効果を奏する皮膚老化防止組成物とすることができる。
また、皮膚老化防止組成物に含有させる皮膚老化抑制素材の種類は、１種類のみでなく２種類以上であってもよい。
【００２５】
皮膚老化抑制素材を化粧料に配合し適用する場合、通常化粧料に使用される成分を広く配合することが可能であり、また、その剤形や用途についても、何ら限定されない。以下、化粧料に適用される場合、化粧料中に含有させることができる成分について説明する。
【００２６】
有効成分としては、美白成分、シワ改善成分、抗炎症成分、動植物由来の抽出物等が挙げられる。なお、上記説明した本発明の実施態様に係る皮膚老化抑制素材と重複して配合してもよい。
美白成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、アスコルビン酸グルコシド、３−О−エチルアスコルビン酸、トラネキサム酸、アルブチン、１−トリフェニルメチルピペリジン、１−トリフェニルメチルピロリジン、２−（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２−（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２−（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン及びアミノジフェニルメタン、Ｎ−（ｏ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（ｍ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（p−トルイル）システイン酸、Ｎ−（p−メトキシベンゾイル）システイン酸等が挙げられる。更にその他の美白成分として、Ｎ−ベンゾイル−セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−エチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン、Ｎ−（４−フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  エチルエステル、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−ベンゾイル−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−アセチルセリン、Ｎ−（２−ナフトイル）−Ｏ−メチルセリン等があげられる。
これらの美白成分は、既に市販されているものもあれば、合成により入手することもできる。例えば、３−О−エチルアスコルビン酸は、特開平８−１３４０５５号公報に記載の公知の方法で合成することが出来る。市販品（日本精化製「ＶＣエチル」）もあるので、これらを入手して使用することが可能である。１−トリフェニルメチルピペリジン、１−トリフェニルメチルピロリジン、２−（トリフェニルメチルオキシ）エタノール、２−（トリフェニルメチルアミノ）エタノール、２−（トリフェニルメチルオキシ）エチルアミン、トリフェニルメチルアミン、トリフェニルメタノール、トリフェニルメタン、アミノジフェニルメタンは特許文献ＷＯ２０１０―０７４０５２号パンフレットに、Ｎ−（ｏ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（ｍ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−トルイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）システイン酸、Ｎ−（４−フェニルベンゾイル）システイン酸、Ｎ−（ｐ−トルオイル）ホモシステイン酸、はＷＯ２０１１−０５８７３０号パンフレットに、Ｎ−ベンゾイル−セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−エチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メトキシベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−フルオロベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−トリフルオロメチルベンゾイル）セリン、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン、Ｎ−（４−フェニルベンゾイル）セリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）セリン  エチルエステル、Ｎ−（２−ナフトイル）セリン  メチルエステル、Ｎ−ベンゾイル−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−メチルセリン、Ｎ−（ｐ−メチルベンゾイル）−Ｏ−アセチルセリン、Ｎ−（２−ナフトイル）−Ｏ−メチルセリン等はＷＯ２０１１／０７４６４３号パンフレットに、それぞれその合成方法が公開されているので、該開示に従い合成することができる。
化粧料における美白成分の含有量は、通常０．０００１〜３０質量％であり、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい。
【００２７】
シワ改善成分としては、一般的に化粧料に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、ビタミンＡ又はその誘導体が、レチノール、レチナール、レチノイン酸、トレチノイン、イソトレチノイン、レチノイン酸トコフェロール、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノールやウルソール酸ベンジルエステル、ウルソール酸リン酸エステル、ベツリン酸ベンジルエステル、ベンジル酸リン酸エステルが挙げられる。化粧料におけるシワ改善成分の含有量は、通常通常０．０００１〜３０質量％であり、０．００１〜１０質量％が好ましく、０．０１〜５質量％がより好ましい。
【００２８】
動植物由来の抽出物としては、一般的に医薬品、化粧料、食品等に用いられているものであれば特に限定はない。例えば、アケビエキス、アスナロエキス、アスパラガスエキス、アボガドエキス、アマチャエキス、アーモンドエキス、アルニカエキス、アロニアエキス、アンズエキス、イチョウエキス、インドキノエキス、ウイキョウエキス、ウドエキス、エゾウコギエキス、エンメイソウエキス、オウバクエキス、オタネニンジンエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オレンジエキス、カキョクエキス、カッコンエキス、カモミラエキス、カロットエキス、カワラヨモギエキス、カンゾウエキス、キウイエキス、キューカンバーエキス、グアバエキス、クジンエキス、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ケイケットウエキス、ゲットウヨウエキス、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメエキス、コメ発酵エキス、コメヌカ発酵エキス、コメ胚芽油、コケモモエキス、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンシャエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソエキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウキョウエキス、ショウブ根エキス、スギナエキス、ステビアエキス、ステビア発酵物、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、セージエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソウハクヒエキス、ダイオウエキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、タンポポエキス、茶エキス、チョウジエキス、チンピエキス、甜茶エキス、トウガラシエキス、トウキエキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、ドクダミエキス、トマトエキス、納豆エキス、ニンジンエキス、ニンニクエキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、ハスエキス、パセリエキス、バーチエキス、ハマメリスエキス、ヒキオコシエキス、ヒノキエキス、ビワエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブドウエキス、ブドウ種子エキス、ヘチマエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ホップエキス、マツエキス、ミズバショウエキス、メリッサエキス、モズクエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユズエキス、ユリエキス、ヨクイニンエキス、ヨモギエキス、ラベンダーエキス、緑茶エキス、リンゴエキス、ルイボス茶エキス、レイシエキス、レタスエキス、レモンエキス、レンギョウエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローズマリーエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス、ワレモコウエキス等のエキスが好ましいものとして挙げられる。
化粧料中における動植物由来抽出物の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、０．３〜３質量％がより好ましい。
食品中における動植物抽出物の含有量は、通常０．０１〜８０質量％であり、０．１〜５０質量％が好ましく、１〜３０質量％がより好ましい。
【００２９】
抗炎症成分としては、クラリノン、グラブリジン、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸、パントテニルアルコール等が挙げられ、好ましくは、グリチルリチン酸及びその塩、グリチルレチン酸アルキル及びその塩、並びに、グリチルレチン酸及びその塩である。
化粧料中における抗炎症成分の含有量は、通常０．０１〜３０質量％であり、０．１〜１０質量％が好ましく、１〜５質量％がより好ましい。
【００３０】
油性成分としては、極性油、揮発性炭化水素油等が挙げられる。
極性油としては、合成エステル油として、ミリスチン酸イソプロピル、オクタン酸セチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸デシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、酢酸ラノリン、ステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソセチル、１２−ヒドロキシステアリル酸コレステリル、ジ−２−エチルヘキシル酸エチレングリコール、ジペンタエリスリトール脂肪酸エステル、モノイソステアリン酸Ｎ−アルキルグリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキシル酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキシル酸ペンタンエリスリトール、トリ−２−エチルヘキシル酸グリセリン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパンを挙げることができる。
【００３１】
さらに、セチル２−エチルヘキサノエート、２−エチルヘキシルパルミテート、トリミリスチン酸グリセリン、トリ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセライド、ヒマシ油脂肪酸メチルエステル、オレイン酸オイル、セトステアリルアルコール、アセトグリセライド、パルミチン酸２−ヘプチルウンデシル、アジピン酸ジイソブチル、Ｎ−ラウロイル−Ｌ−グルタミン酸−２−オクチルドデシルエステル、アジピン酸ジ−２−ヘプチルウンデシル、エチルラウレート、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、ミリスチン酸２−ヘキシルデシル、パルミチン酸２−ヘキシルデシル、アジピン酸２−ヘキシルデシル、セバチン酸ジイソプロピル、コハク酸２−エチルヘキシル、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸アミル、クエン酸トリエチル、オクチル  メトキシシンナメート等も挙げられる。
【００３２】
また、天然油として、アボガド油、ツバキ油、タートル油、マカデミアナッツ油、トウモロコシ油、ミンク油、オリーブ油、ナタネ油、卵黄油、ゴマ油、パーシック油、小麦胚芽油、サザンカ油、ヒマシ油、アマニ油、サフラワー油、綿実油、エノ油、大豆油、落花生油、茶実油、カヤ油、コメヌカ油、シナギリ油、日本キリ油、ホホバ油、胚芽油、トリグリセリン、トリオクタン酸グリセリン、トリイソパルミチン酸グリセリン等が挙げられる。
【００３３】
揮発性炭化水素油としては、イソドデカン、イソヘキサデカン等が挙げられる。
【００３４】
界面活性剤としては、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等） 、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等） 、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、等が挙げられる。
【００３５】
アルコールとしては、エタノール、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等が挙げられる。
【００３６】
増粘剤としては、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸，キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アルキル変性カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ベントナイト等が挙げられる。
【００３７】
粉体類としては、表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、が挙げられる。
【００３８】
紫外線吸収剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２'−ヒドロキシ−５'−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４'−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類等が挙げられる。
【００３９】
また、化粧料として適用される場合の剤型は、通常知られているローション剤形、乳液剤形、エッセンス剤形、クリーム剤形、粉体含有剤形の何れをも取ることが出来る。
【００４０】
また、食品として適用される場合の剤型は、通常知られている錠剤、カプセル剤、粉末剤の何れをも取ることが出来る。
【実施例】
【００４１】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は、その要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。
【００４２】
＜実施例１：ＬＯＣ１００２９２６８０を増加する植物抽出物のスクリーニング＞
【００４３】
本技術分野における市場の製品にて、当該業者が老化改善を期待して配合していると推測された植物抽出物を被験物質として、老化した線維芽細胞のＬＯＣ１００２９２６８０に対する作用を評価した。
【００４４】
老化した細胞として６８歳白人由来の真皮線維芽細胞を用いた。１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地でＰＤＬ２４以上になるまで継代培養した線維芽細胞を、９６ウェルプレートに７０００個／ウェルになる様に播種し、２４時間培養した。その後、植物抽出物を０．５％含む培地に交換し、さらに２４時間培養した。また、対照として各抽出物の溶媒を０．５％含む培地で同様に培養した。培養終了時に、ＦａｓｔＬａｎｅ  Ｃｅｌｌ  ＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｋｉｔ（キアゲン社  ２１６２１３）とＬＯＣ１００２９２６８０特異的プライマー（キアゲン社  Ｈｓ＿ＬＩＮＣ００９４２＿１＿ＳＧ）を用いた定量的リアルタイムＰＣＲ法によりＬＯＣ１００２９２６８０の発現量を解析し、対照での発現量を１として相対量を求めた。
【００４５】
被験物質添加前のＬＯＣ１００２９２６８０発現量を上回った抽出物の結果を表１に示す。
表1より、アロエ、エイジツ、オウゴン、オウレン、キイチゴ、ゲンノショウコ、シラカバ、セイヨウキズタ、ツボクサ、トウヒ、ブッチャーブルーム、ボタン、マンダリンオレンジ果実、ユキノシタの１４種の植物の抽出物をそれぞれ添加することによって、ＬＯＣ１００２９２６８０をコントロールに対し１０％以上増加させることが明らかとなった。
特に、アロエ、エイジツ、オウゴン、オウレン、キイチゴ、セイヨウキズタ、ツボクサ、トウヒ、ブッチャーブルーム、ボタン、マンダリンオレンジ果実、ユキノシタの１２種では有意なＬＯＣ１００２９２６８０の増加が認められ、細胞老化の改善効果が期待された。
この１２種のうち、最もＬＯＣ１００２９２６８０増加効果の弱かったマンダリンオレンジ果実は、ＬＯＣ１００２９２６８０の発現量を１７％増加させ、ＬＯＣ１００２９２６８０の平均値を増加させたものの、有意な増加が認められなかったゲンノショウコでは１３％の増加であったことから、この１３％を超えるＬＯＣ１００２９２６８０増加が認められる場合、老化改善可能な被験物質を選択することができる。
【００４６】
【表１】
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【００４７】
従って、本発明のＬＯＣ１００２９２６８０を指標としたスクリーニングにより、新たな皮膚老化抑制素材を探索することが出来る。
【産業上の利用可能性】
【００４８】
本発明により、ＬＯＣ１００２９２６８０を指標として、新たな皮膚老化抑制素材のスクリーニング方法を提供できる。
【図１】
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【図２】
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