(57)【要約】【課題】疎水性が高く、ウイルス皮膜の糖鎖形成阻害作用による効果的な抗Ｂ型肝炎ウイルス作用を有する治療剤を提供する。【解決手段】本発明のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤は、下記一般式（１）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とする。［化１］2017149669.tif 000016（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ５は水素原子、水酸基又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｚは一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される基である。）［化２］2017149669.tif 000017【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とするＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤。
【化１】
2017149669.tif 000014
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ５は水素原子、水酸基又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｚは一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される基である。）
【化２】
2017149669.tif 000015
（式中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ３１は水素原子又はハロゲン原子であり、Ｒ３２は水素原子又は炭素数１〜１０のアルコシキ基であり、Ｒ４１はハロゲン原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、ｎ４１は０〜７の整数であり、ｎ４１が２以上である場合、複数個のＲ４１は互いに同一でも異なっていてもよい。式中、アスタリスクは結合部位を示す。）
【請求項２】
前記一般式（１）中、Ｚがｐ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル基である請求項１に記載のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤。
【請求項３】
前記一般式（１）で表される化合物が、１−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙ−３−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−２−ｏｌ又は１−［３−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ］−２，２，６，６−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｏｌである請求項１又は２に記載のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一項に記載のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含むことを特徴とするＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症治療剤及びＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、日本国におけるＢ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖｉｒｕｓ；ＨＢＶ）感染者は全人口の１．５％程度と推定される。ＨＢＶに感染すると、高率に慢性化し、年余の経過を経て、肝硬変又は肝細胞癌に至る。現状の慢性Ｂ型肝炎におけるウイルス除去率は満足するものではないが、これはウイルス感染後の宿主の免疫応答及び持続感染のメカニズムが十分に明らかでないためである。そのため、慢性Ｂ型肝炎の安全で有効な薬剤の開発が急務である。
【０００３】
慢性Ｂ型肝炎の治療法としては、例えば、ＨＢＶの複製を阻害する逆転写酵素阻害剤である核酸アナログ製剤を投与する方法と、直接ウイルスを殺すのでなく、ウイルス増殖を阻害する酵素を合成し、抗ウイルス作用を発揮させるインターフェロン（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ；ＩＦＮ）療法が挙げられる。大まかには、ＩＦＮ療法は一般に年齢が３５歳程度までの若年者で、肝炎の程度の軽い（肝硬変になっていない）患者に対して適用され、核酸アナログ製剤を投与する方法は ３５才以上の非若年者、３５才未満であっても肝炎の進行した患者に対して適用される。
【０００４】
ＨＢＶはＤＮＡウイルスであり、宿主の核内でｃｃｃＤＮＡと呼ばれる中間複製体を形成する。核酸アナログ製剤は、ウイルスがｃｃｃＤＮＡをもとにｐｒｏｇｅｎｏｍｉｃ  ＲＮＡ（プレゲノムＲＮＡ）に転写され、その後逆転写酵素によってウイルスＤＮＡに転写されるポイントを阻害する（例えば、非特許文献１参照。）。
【０００５】
一方、ＩＦＮ療法は、ＩＦＮによって自己免疫力を強めて、激しい肝炎を起こしやすいＨＢｅ抗原陽性のＨＢＶを、比較的おとなしいＨＢｅ抗体陽性のＨＢＶに変えることが治療の主な目的である。ＨＢｅ抗原とは、ＨＢＶの外殻の内部に存在し、ＨＢＶを構成するタンパク質の一つであるＨＢｃ抗原の一部が切り離されてできた抗原であり、宿主の肝細胞から血管中へ放出される可溶化タンパク質である。また、ＨＢｅ抗体とは、ＨＢｅ抗原に対する抗体であって、ＨＢＶの感染を防御する働きはなく、ウイルス量と増殖が落ち着いている状態で、感染力が弱いことを示す指標となる。
【０００６】
ＩＦＮ療法では、治療終了後のＨＢｅ抗原セロコンバージョンやＨＢｓ抗原量の低下又は消失が期待できることから、治療中のＨＢＶ  ＤＮＡ量低下という目標を設定せず、一定期間（２４〜４８週）の治療を完遂することが望ましい（例えば、非特許文献２参照。）。セロコンバージョン（Ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ；Ｓｅｒｏ＝血清、ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ＝転換又は変更）とは、ＨＢｅ抗原がマイナスであって、ＨＢｅ抗体がプラスになった状態であり、Ｂ型肝炎ウイルスの活動が抑え込まれた状態を意味する。また、ＨＢｓ抗原とは、ＨＢＶの外殻を構成するタンパク質の一つであって、ＨＢＶ感染の有無を判定する際に調べられる抗原である。
【０００７】
また、ＨＢｓ抗原は宿主の肝細胞内において、核から小胞体（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ；ＥＲ）に移行する際に、α−グルコシダーゼにより糖鎖を付加することが知られている。インフルエンザやＣ型肝炎の治療では、このポイントを阻害するα−グルコシダーゼ阻害剤（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；αＧＩ）の開発が注目されていた（例えば、非特許文献３及び４参照。）。また、αＧＩは、糖尿病薬として広く用いられており、小腸粘膜で糖の過剰な吸収を抑制することを目的としている（例えば、非特許文献５参照。）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Levrero M., et al., “Control of cccDNA function in hepatitis B virus infection” , J. Hepatol., 51(3), 581-592, 2009.
【非特許文献２】日本肝臓学会  肝炎診療ガイドライン作成委員会、「Ｂ型肝炎治療ガイドライン」、２０１４年。
【非特許文献３】Chapel C., et al., “Reduction of the infectivity of hepatitis C virus pseudoparticles by incorporation of misfolded glycoproteins induced by glucosidase inhibitors”, J. Gen. Virol., 88, 1133-1143, 2007.
【非特許文献４】Saito T., et al., “Effect of Glycosylation and Glucose Trimming Inhibitors on the Influenza A Virus Glycoproteins”, Virology, 62(6), 575-581, 2000.
【非特許文献５】日本糖尿病対策推進会議、「糖尿病治療のエッセンス」、２０１２年。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
核酸アナログ製剤は、ウイルス複製抑制効果は高いが、核内の中間複製体に対する影響がないため、核酸アナログ製剤による単独療法では、治療中断後に再発率が高くなる傾向がある。そのため、核酸アナログ製剤の長期投与が余儀なくされる。
また、ＩＦＮ療法では、ＨＢＶが増殖せず肝炎が沈静化する症例もあるが、ＩＦＮが効かずにＨＢｅ抗原が陰性化しない症例、ＩＦＮを中止するとＨＢＶが再度増えて肝炎が再燃する症例も多く、ＩＦＮ療法の奏功率は３０〜４０％と低い。
【００１０】
また、インフルエンザやＣ型肝炎の治療では、αＧＩよりもウイルスタンパク質分解阻害剤やウイルスＲＮＡ合成酵素阻害剤等が臨床的に奏功するため、αＧＩの開発が進まなかった。さらに、従来のαＧＩは、糖尿病において、小腸粘膜で薬剤が作用しやすくなるように親水性の構造をとっているため、ＨＢＶの治療では細胞内へ薬剤が移行しにくい。
【００１１】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、疎水性が高く、ウイルス皮膜の糖鎖形成阻害作用による効果的な抗Ｂ型肝炎ウイルス作用を有する治療剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、疎水性が高く、α−グルコシダーゼ阻害作用を有する低分子化合物を見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、以下の態様を含む。
［１］下記一般式（１）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有することを特徴とするＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤。
【００１４】
【化１】
2017149669.tif 000002
【００１５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ５は水素原子、水酸基又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｚは一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される基である。）
【００１６】
【化２】
2017149669.tif 000003
【００１７】
（式中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ３１は水素原子又はハロゲン原子であり、Ｒ３２は水素原子又は炭素数１〜１０のアルコシキ基であり、Ｒ４１はハロゲン原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、ｎ４１は０〜７の整数であり、ｎ４１が２以上である場合、複数個のＲ４１は互いに同一でも異なっていてもよい。式中、アスタリスクは結合部位を示す。）
［２］前記一般式（１）中、Ｚがｐ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル基である［１］に記載のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤。
［３］前記一般式（１）で表される化合物が、１−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙ−３−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−２−ｏｌ又は１−［３−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ］−２，２，６，６−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｏｌである［１］又は［２］に記載のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤。
［４ ］［１］〜［３］のいずれか一つに記載のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含むことを特徴とするＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤によれば、ＨＢＶを効率よく排除し、慢性Ｂ型肝炎を安全かつ効果的に治療することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖｉｒｕｓ；ＨＢＶ）の複製機序を示す概略図である。
【図２】（Ａ）実施例１におけるαＧＩ５のα−グルコシダーゼへのドッキング構造をシミュレーションした模式図である。（Ｂ）実施例１におけるαＧＩ５のα−グルコシダーゼへの結合サイトを分子表面で表示したドッキング構造をシミュレーションした模式図である。
【図３】（Ａ）実施例１におけるαＧＩ６のα−グルコシダーゼへのドッキング構造をシミュレーションした模式図である。（Ｂ）実施例１におけるαＧＩ６のα−グルコシダーゼへの結合サイトを分子表面で表示したドッキング構造をシミュレーションした模式図である。
【図４】（Ａ）実施例１におけるαＧＩ７のα−グルコシダーゼへのドッキング構造をシミュレーションした模式図である。（Ｂ）実施例１におけるαＧＩ７のα−グルコシダーゼへの結合サイトを分子表面で表示したドッキング構造をシミュレーションした模式図である。
【図５】（Ａ）実施例１におけるαＧＩ１３のα−グルコシダーゼへのドッキング構造をシミュレーションした模式図である。（Ｂ）実施例１におけるαＧＩ１３のα−グルコシダーゼへの結合サイトを分子表面で表示したドッキング構造をシミュレーションした模式図である。
【図６】（Ａ）実施例１におけるαＧＩ１４のα−グルコシダーゼへのドッキング構造をシミュレーションした模式図である。（Ｂ）実施例１におけるαＧＩ１４のα−グルコシダーゼへの結合サイトを分子表面で表示したドッキング構造をシミュレーションした模式図である。
【図７】（Ａ）〜（Ｅ）実施例１における各αＧＩを投与したＰＸＢ細胞でのＨＢＶ  ＤＮＡを定量した結果を示すグラフである。
【図８】（Ａ）〜（Ｅ）実施例１における各αＧＩを投与したＰＸＢ細胞でのｃｃｃＤＮＡを定量した結果を示すグラフである。
【図９】（Ａ）〜（Ｅ）実施例１における各αＧＩを投与したＰＸＢ細胞でのＨＢｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）を定量した結果を示すグラフである。
【図１０】（Ａ）比較例１における糖尿病薬として用いられているαＧＩを投与したＰＸＢ細胞でのＨＢＶ  ＤＮＡを定量した結果を示すグラフである。（Ｂ）比較例１における糖尿病薬として用いられているαＧＩを投与したＰＸＢ細胞の各培養日数での細胞毒性を評価した結果を示す表である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
＜＜Ｂ型肝炎ウイルス感染症治療剤＞＞
一実施形態において、本発明は、下記一般式（１）で表される化合物、又はその薬学的に許容できる塩を有効成分として含有するＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤を提供する。
【００２１】
【化３】
2017149669.tif 000004
【００２２】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ５は水素原子、水酸基又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｚは一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される基である。）
【００２３】
【化４】
2017149669.tif 000005
【００２４】
（式中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ３１は水素原子又はハロゲン原子であり、Ｒ３２は水素原子又は炭素数１〜１０のアルコシキ基であり、Ｒ４１はハロゲン原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、ｎ４１は０〜７の整数であり、ｎ４１が２以上である場合、複数個のＲ４１は互いに同一でも異なっていてもよい。式中、アスタリスクは結合部位を示す。）
【００２５】
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤によれば、ＨＢＶを効率よく排除し、慢性Ｂ型肝炎を安全かつ効果的に治療することができる。
【００２６】
本明細書において、「Ｂ型肝炎ウイルス（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｂ  Ｖｉｒｕｓ；ＨＢＶ）」とは、ヘパドナウイルス科オルソヘパドナウイルス属に属するＤＮＡウイルスであって、Ｂ型肝炎の原因ウイルスを意味する。図１は、ＨＢＶの複製機序を示す概略図である。ＨＢＶは細胞に感染するとまず、自分のＤＮＡを宿主細胞の核に送り込む。そこで、プラス鎖のＤＮＡを修復して完全な二重鎖のスーパーコイルＤＮＡ（以下、ｃｃｃＤＮＡと略記することがある。）になるとこれを鋳型として宿主細胞由来のＲＮＡポリメラーゼを使ってｐｒｏｇｅｎｏｍｉｃ  ＲＮＡ（プレゲノムＲＮＡ）を合成する。そこから、ウイルスＤＮＡポリメラーゼにある逆転写酵素活性を用いて、このプレゲノムＲＮＡからマイナス鎖のＤＮＡを合成する。この過程ではＲＮＡのプライマーが次々に転移し、全長のマイナス鎖ＤＮＡを完成させる。その後、ＤＮＡポリメラーゼにより、プラス鎖が合成されるが、合成が全て終わる前に小胞体内腔に出芽したウイルス外殻を構成するタンパク質の一つであるＨＢｓに覆われ、細胞外に放出される。
【００２７】
本発明者らは、従来の核酸アナログ製剤と異なるウイルスの複製ポイントを阻害する薬剤の開発を目指し、ウイルス外殻表面の糖鎖形成が小胞体（ｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ  ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ；ＥＲ）で行われることに着目した。この糖鎖形成ステップを阻害するｎｅｕｔｒａｌ  α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ＡＢ  ｉｓｏｆｏｒｍ（ＧＡＮＡＢ）の三次元構造解析を元に、ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（イン・シリコ・スクリーニング）によって、α−グルコシダーゼ阻害剤（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；αＧＩ）候補を低分子化合物ライブラリーより探索し、疎水性の高い低分子化合物をピックアップした。ピックアップした低分子化合物について、後述の実施例に示す通り、ＨＢＶを感染させた肝細胞を用いた評価系により、下記一般式（１）で表される化合物（以下、「化合物（１）」と略記することがある。）が優れた抗ＨＢＶ効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００２８】
＜化合物（１）＞
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤は、化合物（１）を有効成分として含有する。
【００２９】
【化５】
2017149669.tif 000006
【００３０】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ５は水素原子、水酸基又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｚは一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される基である。）
【００３１】
【化６】
2017149669.tif 000007
【００３２】
（式中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ３１は水素原子又はハロゲン原子であり、Ｒ３２は水素原子又は炭素数１〜１０のアルコシキ基であり、Ｒ４１はハロゲン原子又は炭素数１〜１０のアルキル基であり、ｎ４１は０〜７の整数であり、ｎ４１が２以上である場合、複数個のＲ４１は互いに同一でも異なっていてもよい。式中、アスタリスクは結合部位を示す。）
【００３３】
化合物（１）は、ピペリジン骨格を有する化合物である。また、化合物（１）は疎水性が高い化合物である。
【００３４】
一般式（１）中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４は、水素原子又は炭素数１〜１０のアルキル基である。
炭素数１〜１０のアルキル基は、直鎖状のものでも分岐鎖状のものでもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ−ペンチル基、１−メチルブチル基、ｎ−ヘキシル基、２−メチルペンチル基、３−メチルペンチル基、２，２−ジメチルブチル基、２，３−ジメチルブチル基、ｎ−ヘプチル基、２−メチルヘキシル基、３−メチルヘキシル基、２，２−ジメチルペンチル基、２，３−ジメチルペンチル基、２，４−ジメチルペンチル基、３，３−ジメチルペンチル基、３−エチルペンチル基、２，２，３−トリメチルブチル基、ｎ−オクチル基、イソオクチル基、２−エチルヘキシル基、ノニル基、デシル基等が挙げられる。
Ｒ１及びＲ２のうち少なくともいずれか一つが炭素数１〜１０のアルキル基であることが好ましく、炭素数１〜６のアルキル基であることがより好ましく、炭素数１〜３のアルキル基であることが特に好ましく、メチル基であることが最も好ましい。
同様に、Ｒ３及びＲ４のうち少なくともいずれか一つが炭素数１〜１０のアルキル基であることが好ましく、炭素数１〜６のアルキル基であることがより好ましく、炭素数１〜３のアルキル基であることが特に好ましく、メチル基であることが最も好ましい。
【００３５】
一般式（１）中、Ｒ５は水素原子、水酸基又は炭素数１〜１０のアルキル基である。
Ｒ１又はＲ２が炭素数１〜１０のアルキル基であり、Ｒ３又はＲ４が炭素数１〜１０のアルキル基である場合は、Ｒ５は水素原子であることが好ましい。
また、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が炭素数１〜１０のアルキル基である場合は、Ｒ５は水酸基であることが好ましい。
また、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素原子である場合は、Ｒ５は炭素数１〜１０のアルキル基であることが好ましい。
Ｒ５が炭素数１〜１０のアルキル基である場合、炭素数１〜６のアルキル基がより好ましく、炭素数１〜３のアルキル基が特に好ましく、メチル基が最も好ましい。
【００３６】
一般式（１）中、Ｚは疎水性の高い基であって、一般式（２）、一般式（３）又は一般式（４）で表される基（以下、基（２）、基（３）及び基（４）と略記することがある。）である。
すなわち、化合物（１）は、下記一般式（１−Ａ）で表される化合物（以下、化合物（１−Ａ）と略記することがある。）、下記一般式（１−Ｂ）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｂ）と略記することがある。）及び下記一般式（１−Ｃ）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｃ）と略記することがある。）に分類される。
【００３７】
【化７】
2017149669.tif 000008
【００３８】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ２１、Ｒ３１、Ｒ３２、Ｒ４１及びｎ４１は、いずれも上記と同じである。）
【００３９】
前記基（２）において、アスタリスクを付した結合は、Ｚ中のシクロヘキサンのＲ２１が結合している炭素原子のパラ位に位置する炭素原子と、Ｚの結合先である酸素原子と、の間で形成されている。
前記基（３）において、アスタリスクを付した結合は、Ｚ中のベンゼン環のＲ３１が結合している炭素原子と隣り合い、且つ、Ｒ３２が結合している炭素原子とメタ位にある炭素原子と、Ｚの結合先である酸素原子と、の間で形成されている。
前記基（４）において、アスタリスクを付した結合は、Ｚ中のナフタレン環のβ位の炭素原子と、Ｚの結合先である酸素原子と、の間で形成されている。
【００４０】
一般式（２）中、Ｒ２１は炭素数１〜１０のアルキル基である。
Ｒ２１における前記アルキル基は、直鎖状又は分岐鎖状でもよく、分岐鎖状が好ましい。Ｒ２１における前記アルキル基は、炭素数３〜８のアルキル基であることがより好ましく、炭素数３〜５のアルキル基であることが特に好ましく、ｔｅｒｔ−ブチル基が最も好ましい。
【００４１】
一般式（３）中、Ｒ３１は水素原子又はハロゲン原子である。
Ｒ３１における前記ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられ、塩素原子、臭素原子又はヨウ素原子が好ましく、塩素原子がより好ましい。
【００４２】
一般式（３）中、Ｒ３２は水素原子又は炭素数１〜１０のアルコシキ基である。Ｒ３２における前記アルコキシ基は、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜１０のアルキル基が酸素原子に結合した構造であればよく、直鎖状のものが好ましい。具体的には、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペントキシ基、イソペントキシ基、ネオペントキシ基、ｔｅｒｔ−ペントキシ基、１−メチルブトキシ基、ｎ−ヘキトキシ基、２−メチルペントキシ基、３−メチルペントキシ基、２，２−ジメチルブトキシ基、２，３−ジメチルブトキシ基、ｎ−ヘプトキシ基、２−メチルヘキトキシ基、３−メチルヘキトキシ基、２，２−ジメチルペントキシ基、２，３−ジメチルペントキシ基、２，４−ジメチルペントキシ基、３，３−ジメチルペントキシ基、３−エチルペントキシ基、２，２，３−トリメチルブトキシ基、ｎ−オクトキシ基、イソオクトキシ基、２−エチルヘキトキシ基、ノニノキシ基、デシロキシ基等が挙げられる。
前記アルコキシ基の炭素数は、１〜８であることが好ましく、１〜５であることがより好ましい。
【００４３】
また、Ｒ３１が水素原子である場合、Ｒ３２は炭素数１〜５のアルコキシ基であることが好ましく、Ｒ３１が塩素原子である場合、Ｒ３２は水素原子であることが好ましい。
【００４４】
一般式（４）中、Ｒ４１はハロゲン原子又は炭素数１〜１０のアルキル基である。
Ｒ４１における前記ハロゲン原子としては、Ｒ３１における前記ハロゲン原子と同様のものが挙げられる。Ｒ４１における前記アルキル基としては、Ｒ２１における前記アルキル基と同様のものが挙げられる。
Ｒ４１における前記アルキル基は、直鎖状であることが好ましく、炭素数１〜５の直鎖状のアルキル基であることが好ましい。
【００４５】
一般式（４）中、ｎ４１は０〜７の整数である。
ｎ４１は、化合物（１−Ｃ）における（より具体的にはナフタレン環）におけるＲ４１の結合数である。
ｎ４１が１〜７の整数である場合、化合物（１）（より具体的には化合物（１−Ｃ））において、Ｒ４１は、ナフタレン環を構成している７個の炭素原子のいずれかに結合している。
【００４６】
化合物（１）において、ｎ４１が２以上の整数である場合、複数個のＲ４１は互いに同一でも異なっていてもよい。すなわち、Ｒ４１はすべて同一であってもよいし、すべて異なっていてもよく、一部のみ同一であってもよい。そして、これら複数個のＲ４１の組み合わせは、特に限定されない。
【００４７】
ｎ４１は、０〜３の整数であることが好ましく、０〜２の整数であることがより好ましく、０又は１であることが特に好ましい。
【００４８】
化合物（１）のうち、化合物（１−Ａ）で好ましいものとしては、例えば、下記一般式（１−Ａ−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ａ−１）と略記することがある）等が挙げられる。
化合物（１）のうち、化合物（１−Ｂ）で好ましいものとしては、例えば、下記一般式（１−Ｂ−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｂ−１）と略記することがある）、下記一般式（１−Ｂ−２）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｂ−２）と略記することがある）等が挙げられる。
化合物（１）のうち、化合物（１−Ｃ）で好ましいものとしては、例えば、下記一般式（１−Ｃ−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｃ−１）と略記することがある）等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（１）の一例に過ぎず、好ましい化合物（１）はこれらに限定されない。
【００４９】
【化８】
2017149669.tif 000009
【００５０】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、いずれも上記と同じである。）
【００５１】
化合物（１−Ａ−１）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ１及びＲ２のうち少なくともいずれか一つがメチル基であり、Ｒ３及びＲ４のうち少なくともいずれか一つがメチル基であり、Ｒ５が水素原子又は水酸基であるもの等が挙げられる。
化合物（１−Ａ−１）でより好ましいものとしては、例えば、Ｒ１又はＲ２がメチル基であり、Ｒ３又はＲ４がメチル基であり、Ｒ５が水素原子であるもの等が挙げられる。
化合物（１−Ａ−１）でより好ましいものとしては、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４がメチル基であり、Ｒ５が水酸基であるもの等も挙げられる。
【００５２】
化合物（１−Ｂ−１）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ１及びＲ２のうち少なくともいずれか一つがメチル基であり、Ｒ３及びＲ４のうち少なくともいずれか一つがメチル基であり、Ｒ５が水素原子又は水酸基であるもの等が挙げられる。
化合物（１−Ｂ−１）でより好ましいものとしては、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４がメチル基であり、Ｒ５が水酸基であるもの等も挙げられる。
【００５３】
化合物（１−Ｂ−２）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ１及びＲ２のうち少なくともいずれか一つがメチル基であり、Ｒ３及びＲ４のうち少なくともいずれか一つがメチル基であり、Ｒ５が水素原子又は水酸基であるもの等が挙げられる。
化合物（１−Ｂ−２）でより好ましいものとしては、例えば、Ｒ１又はＲ２がメチル基であり、Ｒ３又はＲ４がメチル基であり、Ｒ５が水素原子であるもの等が挙げられる。
【００５４】
化合物（１−Ｃ−１）で好ましいものとしては、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素原子又はメチル基であり、Ｒ５がメチル基であるもの等が挙げられる。
化合物（１−Ｃ−１）でより好ましいものとしては、例えば、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４が水素原子であり、Ｒ５がメチル基であるもの等が挙げられる。
【００５５】
化合物（１）のうち、化合物（１−Ａ−１）で好ましいものとしては、例えば、下記一般式（１−Ａ−１−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ａ−１−１）と略記することがある）等が挙げられる。
化合物（１）のうち、化合物（１−Ｂ）で好ましいものとしては、例えば、下記一般式（１−Ｂ−１−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｂ−１−１）と略記することがある）、下記一般式（１−Ｂ−２−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｂ−２−１）と略記することがある）等が挙げられる。
化合物（１）のうち、化合物（１−Ｃ）で好ましいものとしては、例えば、下記一般式（１−Ｃ−１−１）で表される化合物（以下、化合物（１−Ｃ−１−１）と略記することがある）等が挙げられる。
なお、これら化合物は、好ましい化合物（１）の一例に過ぎず、好ましい化合物（１）はこれらに限定されない。
【００５６】
【化９】
2017149669.tif 000010
【００５７】
化合物（１）は、Ｚが基（２）であるもの、すなわち化合物（１−Ａ）であることが好ましい。化合物（１−Ａ）の中でも、Ｚがｐ−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル基であるもの、すなわち化合物（１−Ａ−１）であることが好ましい。化合物（１−Ａ−１）の中でも、１−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙ−３−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−１−ｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−２−ｏｌ、すなわち化合物（１−Ａ−１−１）、又は１−［３−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙ−２−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｐｙｌ］−２，２，６，６−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｉｐｅｒｉｄｉｎ−４−ｏｌ、すなわち化合物（１−Ａ−１−２）であることが好ましい。
【００５８】
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤は、化合物（１）の薬学的に許容できる塩を含んでいてもよい。
【００５９】
本明細書において、「薬学的に許容できる」とは、被検動物に適切に投与された場合に、概して、副作用を起こさない程度を意味する。
塩としては、薬学的に許容できる酸付加塩又は塩基性塩が好ましい。
酸付加塩としては、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸等の無機酸との塩；酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸等の有機酸との塩が挙げられる。
塩基性塩としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム等の無機塩基との塩；カフェイン、ピペリジン、トリメチルアミン、ピリジン等の有機塩基との塩が挙げられる。
【００６０】
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤は、他の成分として、ＰＢＳ、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ等の緩衝液、アジ化ナトリウム、グリセロール等の添加剤を含んでいてもよい。
【００６１】
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤を用いて、Ｂ型肝炎（特に、慢性Ｂ型肝炎）の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、ヒトが好ましい。
【００６２】
＜＜化合物（１）の製造方法＞＞
化合物（１）は、例えば、Ｚの種類に応じて、原料となるピペリジン骨格を有する化合物に対して、公知の反応を行って形成することで製造することができる。また、化合物（１）は、市販のものを用いてもよく、例えば、ドイツのＡＫｏｓ社が製造したものを安価に入手することができる。
【００６３】
また、化合物（１）の塩は、無機酸化合物、有機酸化合物、アルカリ金属化合物、アルカリ土類金属化合物、遷移金属化合物、アンモニウム化合物等を化合物（１）に接触させることによって調製することができる。
いずれの反応においても、反応終了後は、有機合成化学における通常の後処理操作、および、必要に応じて従来公知の分離精製手段を施すことによって、目的物を効率よく単離することができる。
目的物の構造は、１Ｈ−ＮＭＲスペクトル、ＩＲスペクトル、マススペクトルの測定や、元素分析等によって、同定及び確認することができる。
【００６４】
＜＜Ｂ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物＞＞
一実施形態において、本発明は、上述のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤、並びに薬学的に許容できる担体及び希釈剤のうち少なくともいずれかを含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物を提供する。
【００６５】
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物によれば、ＨＢＶを効率よく排除し、慢性Ｂ型肝炎を安全かつ効果的に治療することができる。
【００６６】
許容できる担体及び希釈剤としては、賦形剤、稀釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味料、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤、添加剤等が挙げられる。これら担体及び希釈剤の１種以上を用いることにより、注射剤、液剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、又はシロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。
【００６７】
被検動物（ヒト又はヒト以外の哺乳動物、好ましくはヒト）への、本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物の投与は、例えば、動脈内注射、静脈内注射、皮下注射等のほか、鼻腔内的、経気管支的、筋内的、経皮的、又は経口的に当業者に公知の方法により行い得る。
投与量は、被検動物の体重や年齢、投与方法などにより変動するが、当業者であれば適当な投与量を適宜選択することが可能である。
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物の投与量は、症状により差異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、１日あたり約０．１から１００ｍｇ、好ましくは約１．０から５０ｍｇ、より好ましくは約１．０から２０ｍｇであると考えられる。
非経口的に投与する場合は、その１回の投与量は症状、投与方法によっても異なるが、例えば注射剤の形では通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、通常、１日当り約０．０１から３０ｍｇ、好ましくは約０．１から２０ｍｇ、より好ましくは約０．１から１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であると考えられる。
投与回数としては、１日平均当たり、１回〜数回投与することが好ましい。
注射剤は、非水性の希釈剤（例えば、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油、エタノール等のアルコール類等）、懸濁剤、又は乳濁剤として調製することもできる。このような注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤等の配合により行うことができる。注射剤は、用事調製の形態として製造することができる。即ち、凍結乾燥法等によって、無菌の固体組成物とし、使用前に注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。
本実施形態のＢ型肝炎ウイルス感染症用の医薬組成物を、被検動物に予防的に投与してもよいし、被検動物にＢ型肝炎ウイルス感染症の症状が表れたときに投与してもよい。
【００６８】
また、本発明の一側面は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療のための前記一般式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容できる塩を提供する。
また、本発明の一側面は、Ｂ型肝炎ウイルス感染症治療剤を製造するための前記一般式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容できる塩の使用を提供する。
また、本発明の一側面は、前記一般式（１）で表される化合物又はその薬学的に許容できる塩の治療的有効量を、治療を必要とする患者に投与することを含む、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の治療方法を提供する。
Ｂ型肝炎ウイルス感染症の症状としては、全身倦怠感、食欲不振、悪心、嘔吐、褐色尿、黄疸等が挙げられる。
本明細書において、Ｂ型肝炎ウイルス感染症の「治療」とは、Ｂ型肝炎ウイルス感染症患者に対して、Ｂ型肝炎ウイルス感染症治療剤を投与することにより、ＨＢＶにおける外殻の糖鎖の形成を阻害し、ＨＢＶの感染により引き起こされる肝炎及び上述の症状を抑制することを意味する。好ましくは、かかる治療によれば、ＨＢＶにおける外殻の糖鎖の形成を阻害し、ＨＢＶの感染により引き起こされる肝炎及び上述の症状を緩和することができる。さらに好ましくは、かかる治療によれば、Ｂ型肝炎ウイルス感染症（特に、慢性Ｂ型肝炎）を根本的に改善することができる。
【実施例】
【００６９】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００７０】
［実施例１］
（１）ｉｎ  ｓｉｌｉｃｏ  ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ（イン・シリコ・スクリーニング）によるα−グルコシダーゼ阻害剤（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；αＧＩ）候補の選択
ウイルス外殻表面の糖鎖形成ステップを阻害するｎｅｕｔｒａｌ  α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ＡＢ  ｉｓｏｆｏｒｍ（ＧＡＮＡＢ）の三次元構造は、現時点では解明されていない。そこでＧＡＮＡＢの三次元立体構造はホモロジーモデリング法により構築することにした。ＧＡＮＡＢのアミノ酸配列はＮＣＢIに登録されているＱ１４６９７．３を用い、その配列に対してＦＡＭＳＤによりホモロジー検索を行った。ホモロジー検索の結果から、ＰＤＢに登録されている３Ｌ４ＵのＡ鎖（以下３Ｌ４Ｕ＿Ａと表示）を鋳型として用いることにした。ＧＡＮＡＢと３Ｌ４Ｕ＿Ａとの相同性は２４．５％であるので十分な精度の立体構造モデルが構築することができる。ＧＡＮＡＢの三次元立体モデルは、鋳型である３Ｌ４Ｕ＿Ａ並びにそれと９５％以上ホモロジーがある（９５％ＮＲの）ＰＤＢの中で複合体として登録されている９種のリガンド（３Ｌ４ｕ＿Ａ＿ＤＳＫ（ＰＤＢ  ＩＤ  ３Ｌ４ｕに含まれるリガンドＤＳＫの意味）、２ＱＭＪ＿Ａ＿ＡＣＲ、３Ｌ４Ｖ＿Ａ＿ＫＴＬ、３Ｌ４Ｗ＿Ａ＿ＭＩＧ、３Ｌ４Ｘ＿Ａ＿ＮＲ３、３Ｌ４Ｙ＿Ａ＿ＮＲ４、３Ｌ４Ｚ＿Ａ＿ＳＳＤ、３Ｌ４Ｚ＿Ａ＿ＳＳＤ、３Ｌ４Ｔ＿Ａ＿ＢＪ１）をすべて含めて構築した。スクリーニングにかけるα−グルコシダーゼ阻害剤（α−ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；αＧＩ）候補化合物はドイツのＡＫｏｓ社の低分子化合物ライブラリーから、ＰＤＢに含まれる阻害リガンド９種、並びにＣｈＥＭＢＬに登録されているα−グルコシダーゼに結合することが報告されている阻害剤（ＣｈＥＭＢＬ３０７４２９、ＣｈＥＭＢＬ３０７４２９、ＣｈＥＭＢＬ３０７４２９、ＣｈＥＭＢＬ４２１０４０）の化学構造と類似性が高い低分子化合物をＴａｎｉｍｏｔｏ係数により探索し、３０８９個の低分子化合物を候補に選択した。ここで用いるイン・シリコ・スクリーニングｃｈｏｏｓｅＬＤは独自のものであり、ＦｉｎｇｅｒＰｒｉｎｔに指定したリガンドの化合物指紋と候補化合物の化合物指紋がなるべく一致するように、ボンドローテーション（回転可能な結合のねじれ角の回転）とシミュレーティドアニーリング（焼きなまし）の手法により構造変化させ、候補化合物のドッキング構造を推定するアルゴリズムからなるスクリーニングシステムである。続いて、ＣｈＥＭＢＬから得たα−グルコシダーゼを阻害する４つの化合物のＧＡＮＡＢモデルへのドッキング構造は、ＧＡＮＡＢモデルに含まれる９種のリガンドをＦｉｎｇｅｒＰｒｉｎｔに指定してｃｈｏｏｓｅＬＤスクリーニングを行い、ＦＰＡｓｃｏｒｅ（ＦＰＡスコア）を参考にして目視により最適のドッキング構造と思われる１つを選んだ。ＦＰＡスコアは、３次元座標空間を含むＦｉｎｇｅｒＰｒｉｎｔリガンドの化合物指紋と候補化合物の化合物指紋の一致度と、候補化合物の標的タンパク質ＧＡＮＡＢとの接触度ならびに衝突具合が含まれる関数で、数値が大きいほどＦｉｎｇｅｒＰｒｉｎｔリガンド化合物に似たドッキング構造になる関数である３０８９低分子化合物のｃｈｏｏｓｅＬＤイン・シリコ・スクリーニングは、ＧＡＮＡＢモデルに含まれる９種のリガンドとＣｈＥＭＢＬからの４種のリガンド、計１３リガンドをＦｉｎｇｅｒＰｒｉｎｔに指定した系と、��ｉｎｇｅｒＰｒｉｎｔをＣｈＥＭＢＬからの４種のリガンドだけにした系の２通りについて、それぞれ３回行った。続いて、それぞれの系においてα−グルコシダーゼとの結合度が高いと予測できる候補低分子化合物を、３回のスクリーニングにおける、ＦＰＡｓｃｏｒｅ（ＦＰＡスコア）の平均値が高いものから順にランキング化した。さらに、前者の系ではランク上位１２８位まで候補の低分子化合物を、構造的類似性を考慮して２０個のクラスターに分類した。後者の系でもランク１３９位までの候補化合物を、構造的類似性を考慮して１７個のクラスターに分類した。それらの各クラスターの中からＦＰＡスコアランキングが高い１１種類の候補低分子化合物を選択し、ＡＫｏｓ社より購入した。その中でα−グルコシダーゼ阻害活性を有する５種類の低分子化合物について、詳細を表１に示す。
【００７１】
【表１】
2017149669.tif 000011
【００７２】
また、上記５種類の低分子化合物について、各低分子化合物とα−グルコシダーゼとの結合シミュレーションを図２〜６に示す。図２〜６において、（Ａ）は各αＧＩのα−グルコシダーゼへのドッキング構造であり、（Ｂ）はαＧＩのα−グルコシダーゼへの結合サイトを分子表面で表示したものである。いずれの低分子化合物においても、分子表面に衝突することなく、よくα−グルコシダーゼにフィットしていることが確かめられた。
【００７３】
（２）αＧＩの抗ＨＢＶ効果の評価
（２−１）ＰＸＢ細胞の培養
まず、４８ウェルプレートに１．６×１０５ｃｅｌｌｓ／ウェルとなるようにｄＨＣＧＭ培地（参考文献；J. Hepatol. 44:749-757. 2006）に懸濁したヒト初代培養肝細胞であるＰＸＢ細胞を播種した。
【００７４】
（２−２）ＨＢＶの感染
続いて、ヒトＨＢＶ感染症患者の血清から得られた２０ＧＥｑのＨＢＶ  ＤＮＡを４％ＰＥＧ８０００（ＭＰ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）を含むｄＨＣＧＭ培地と混合し、播種したＰＸＢ細胞に加えて培養した。感染から２、４、５日後に培地を交換し、その後５日置きに培地を交換した。
【００７５】
（２−３）αＧＩ候補低分子化合物の投与
感染から１２日後に各αＧＩを１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭの濃度となるようにｄＨＣＧＭ培地に混合し、ＰＸＢ細胞に加えて培養した。また、ポジティブコントロールとして、ＨＢＶ感染症において臨床で主に使用されている核酸アナログ製剤であるエンテカビル（Ｅｎｔｅｃａｖｉｒ；ＥＴＶ、商品名：バラクルード）を３．５ｎＭとなるようにｄＨＣＧＭ培地に混合し、ＰＸＢ細胞に加えて培養した。また、ネガティブコントロールとして、何も投与せずに培養を続けるサンプルも用意した。
【００７６】
（２−４）ＨＢＶ  ＤＮＡの定量
感染から１２日後、２２日後に細胞上清１００μＬを回収し、ＳＭＩ  ＴＥＳＴ  ＥＸＲ＆Ｄ（Ｍｅｄｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用いて、ＨＢＶ  ＤＮＡを抽出した。続いて、抽出されたＨＢＶ  ＤＮＡを５０μＬの精製水に溶解し、リアルタイムＰＣＲによりＨＢＶ  ＤＮＡを定量した。なお、ＨＢＶ  ＤＮＡを含むプラスミドであるＨＢＶ／Ｃ１．２４（名古屋市立大学の田中教授より貰い受けたサンプル）を用いて検量線を作成した。使用したフォワードプライマー及びリバースプライマー、並びにプローブの塩基配列を表２に示す。また、各αＧＩ候補低分子化合物におけるＰＣＲの定量結果を図７に示す。図７中、ＮＴ（Ｎｏｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）は、何も投与していないネガティブコントロールを示し、ＥＴＶはＥＴＶを投与したポジティブコントロールを示す。
【００７７】
【表２】
2017149669.tif 000012
【００７８】
図７から、５種類のαＧＩ候補低分子化合物全てにおいて、ＥＴＶと同等の抗ＨＢＶ効果が認められた。特に、αＧＩ７及びαＧＩ１４では、１００μＭで細胞毒性を示したが、１０μＭにてＥＴＶと同等の抗ＨＢＶ効果が認められた。添加濃度を１０ｎＭまで低下した際の各αＧＩ候補低分子化合物の抗ＨＢＶ効果を調べたところ、αＧＩ１４はＩＣ５０が２９５．９３ｎＭ程度で作用することが明らかとなった。
【００７９】
（２−５）ＨＢＶのｃｃｃＤＮＡの定量
感染から２２日後に細胞上清１００μＬを回収し、ＳＭＩ  ＴＥＳＴ  ＥＸＲ＆Ｄ（Ｍｅｄｉｃａｌ  ＆  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）を用いて、ＨＢＶ  ＤＮＡを抽出した。続いて、抽出されたＨＢＶ  ＤＮＡを５０μＬの精製水に溶解し、リアルタイムＰＣＲによりｃｃｃＤＮＡを定量した。なお、ｃｃｃＤＮＡを含むプラスミドを用いて検量線を作成した。使用したフォワードプライマー及びリバースプライマー、並びにプローブの塩基配列を表３に示す。また、結果を図８に示す。
【００８０】
【表３】
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【００８１】
図８から、ｃｃｃＤＮＡはαＧＩ１４でわずかに濃度依存的に低下していたが、ほぼ変化が見られなかった。これは、ＨＢＶの複製機序における各αＧＩ候補低分子化合物の作用ポイントが、宿主細胞の核内でのｃｃｃＤＮＡの合成ポイントではないためであると推察される。
【００８２】
（２−６）ＨＢＶのＨＢｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）の定量
感染から２２日後に細胞上清１００μＬを回収し、Ｍｙｃｅｌｌ  ＩＩ  ＨＢｓＡｇ検出キット（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ社製）を用いて、常法に則り、ＨＢｓＡｇを定量した。結果を図９に示す。
【００８３】
図９から、ＨＢＶ  ＤＮＡの定量の結果と同様に、５種類のαＧＩ候補低分子化合物全てにおいて、各αＧＩ候補低分子化合物の濃度依存的にＨＢｓＡｇが低下することが認められた。これは、ＨＢＶの複製機序における各αＧＩ候補低分子化合物の作用ポイントが、ＨＢｓＡｇへの糖鎖形成ポイントであるためであると推察される。
【００８４】
［比較例１］
（１）ＰＸＢ細胞の培養
実施例１の（２−１）と同様の方法を用いて、４８ウェルプレートにヒト初代培養肝細胞であるＰＸＢ細胞を播種した。
【００８５】
（２）ＨＢＶの感染
続いて、実施例１の（２−２）と同様の方法を用いて、ＰＸＢ細胞にＨＢＶを感染させた。
【００８６】
（３）従来のαＧＩの投与
感染から７日後に現在糖尿病薬として臨床で使用されているアカルボース（１０μＭ）、ミグリトール（１５μＭ）、ボグリボース（４０ｎＭ）の３種を、ｄＨＣＧＭ培地に混合し、ＰＸＢ細胞に加えて培養した。
【００８７】
（４）ＨＢＶ  ＤＮＡの定量
続いて、実施例１の（２−４）と同様の方法を用いて、ＨＢＶ  ＤＮＡを定量した。結果を図１０（Ａ）に示す。また、３種のαＧＩの各培養日数での細胞毒性を評価した結果を図１０（Ｂ）に示す。○は細胞毒性が認められることを示し、×は細胞毒性が認められないことを示す。
【００８８】
図１０（Ａ）から、現在糖尿病薬として臨床で使用されている３種のαＧＩを投与したＰＸＢ細胞では、抗ＨＢＶ効果を認められなかった。上記３種のαＧＩは親水性が高く、ＰＸＢ細胞内にうまく導入されなかったためであると、推察される。また、３種のαＧＩにおいて、いずれの培養日数においても、細胞毒性が認められた。
【００８９】
以上のことから、本発明の低分子化合物は、優れた抗ＨＢＶ効果を有することが確かめられた。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
本発明のＢ型肝炎ウイルス感染症治療剤によれば、ＨＢＶを効率よく排除し、慢性Ｂ型肝炎を安全かつ効果的に治療することができる。
【符号の説明】
【００９１】
１…αＧＩ５、２…フィンガープリント、３…α−グルコシダーゼ、４…αＧＩ６、５…αＧＩ７、６…αＧＩ１３、７…αＧＩ１４。
【図１】
2017149669.tif 000018
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2017149669.tif 000026
【図１０】
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【配列表】
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