(57)【要約】      （修正有）【課題】抗腫瘍剤としての使用に適した新規な化合物、新規な抗腫瘍剤、及び活性酸素産生剤の提供。【解決手段】式（１）〜（３）のいずれかで表されるコマロビキノン化合物又はその薬理学的に許容される塩。2017149658.tif 000059（Ｒ１及びＲ２は各々独立にヒドロキシ基又はアセトキシ基；Ｒ３はトリアゾール環を有する特定の置換基等；Ｒ４及びＲ５は各々独立にＨ、メチル基又はアセチル基；Ｒ６はＨ又はオキソ基；ｎは、０〜２の整数）【選択図】図１
2017149658.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）〜（３）のいずれかで表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化１】
2017149658.tif 000054
（上記式（１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立にヒドロキシ基又はアセトキシ基であり、
上記式（２）中、Ｒ３は、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかで表される基であり、
【化２】
2017149658.tif 000055
上記式（３）中、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立に、水素原子、メチル基、又はアセチル基であり、Ｒ６は、水素原子又はオキソ基であり、ｎは、０〜２のいずれかの整数である。）
【請求項２】
前記化合物は、下記式（４）〜（７）のいずれかで表される化合物である、請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化３】
2017149658.tif 000056
【請求項３】
請求項１もしくは２に記載の化合物、もしくは下記式（８）〜（１９）のいずれかに記載の化合物、又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む、抗腫瘍剤。
【化４】
2017149658.tif 000057
【請求項４】
抗骨髄腫剤である、請求項３に記載の抗腫瘍剤。
【請求項５】
請求項１もしくは２に記載の化合物、もしくは下記式（８）〜（１９）のいずれかに記載の化合物、又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む、腫瘍細胞における活性酸素産生剤。
【化５】
2017149658.tif 000058
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化合物もしくはその薬理学的に許容される塩抗腫瘍剤、又は活性酸素産生剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
がんは、あらゆる病気のなかでも最も死亡率の高い病気であるため、様々な抗腫瘍剤の開発が従来から行われている。
【０００３】
例えば、非特許文献１には、多発性骨髄腫に対する抗腫瘍剤として、サリドマイド、ボルテゾミブが記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】「多発性骨髄腫とその治療薬」２０１５年５月  第５版  第１刷発行（発行・株式会社キューオーエル研究所）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、抗腫瘍剤としての使用に適した新規な化合物、新規な抗腫瘍剤、及び活性酸素産生促進剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、コマロビキノン誘導体が抗腫瘍効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。より具体的には、以下のようなものを提供する。
【０００７】
［１］  下記式（１）〜（３）のいずれかで表される化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化１】
2017149658.tif 000003
（上記式（１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立にヒドロキシ基又はアセトキシ基であり、
上記式（２）中、Ｒ３は、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかで表される基であり、
【化２】
2017149658.tif 000004
上記式（３）中、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立に、水素原子、メチル基、又はアセチル基であり、Ｒ６は、水素原子又はオキソ基であり、ｎは、０〜２のいずれかの整数である。）
【０００８】
［２］  前記化合物は、下記式（４）〜（７）のいずれかで表される化合物である、［１］に記載の化合物又はその薬理学的に許容される塩。
【化３】
2017149658.tif 000005
【０００９】
［３］  ［１］もしくは［２］に記載の化合物、もしくは下記式（８）〜（１９）のいずれかに記載の化合物、又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む、抗腫瘍剤。
【化４】
2017149658.tif 000006
【００１０】
［４］  抗骨髄腫剤である、［３］に記載の抗腫瘍剤。
【００１１】
［５］  ［１］もしくは［２］に記載の化合物、もしくは下記式（８）〜（１９）のいずれかに記載の化合物、又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む、腫瘍細胞における活性酸素産生剤。
【化５】
2017149658.tif 000007
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、抗腫瘍剤としての使用に適した新規な化合物、新規な抗腫瘍剤、及び活性酸素産生剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】化合物（１９）を１０ｍｇ／ｋｇ投与したマウスにおける体重の経時変化と腫瘍堆積の経時変化を示すグラフである。
【図２】化合物（１６）、（１８）、（１−１）又は（１−３）が投与されたＭＵＭ２４細胞の細胞数の経時変化を示すグラフである。
【図３】化合物（２−１）〜（２−４）、化合物（１−２）、化合物（１０）、化合物（１６）、化合物（１８）が投与されたＭＵＭ２４細胞の細胞生存率を示すグラフである。
【図４】化合物（１−１）又は化合物（１−３）が投与されたＭＵＭ２４細胞の細胞生存率を示すグラフである。
【図５】化合物（１０）又は化合物（１−１）が投与されたＭＵＭ２４細胞についてのフローサイトメトリーの図である。
【図６】化合物（１０）又は化合物（１−３）が投与されたＭＵＭ２４細胞についてのフローサイトメトリーの図である。
【図７】化合物（１−１）、化合物（１−３）又はＨ２Ｏ２が投与されたＭＵＭ２４細胞について、ＲＯＳ（活性酸素種）検出試薬を用いたときのフローサイトメトリーの図である。
【図８】化合物（１−１）、化合物（１−３）又はＨ２Ｏ２が投与されたＭＵＭ２４細胞について、抗酸化剤を添加し、ＲＯＳ（活性酸素種）検出試薬を用いたときのフローサイトメトリーの図である。
【図９】化合物（１９）又は化合物（１−１）が投与されたＭＵＭ２４細胞について、抗酸化剤を添加したときの細胞数の経時変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施形態について説明するが、本発明はこれに特に限定されない。
【００１５】
＜化合物＞
本発明の化合物は、下記式（１）〜（３）のいずれかで表される化合物又はその薬理学的に許容される塩である。
【００１６】
【化６】
2017149658.tif 000008
【００１７】
本発明の化合物は、上記式（１）〜（３）のうち、特に抗腫瘍効果に優れることから、式（１）で表される化合物であることが好ましい。
【００１８】
上記式（１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立にヒドロキシ基又はアセトキシ基である。抗腫瘍効果に優れることから、Ｒ１又はＲ２の少なくとも一方がヒドロキシ基であることが好ましく、より好ましくは、Ｒ１及びＲ２のいずれもヒドロキシ基であることがより好ましい。
【００１９】
上記式（２）中、Ｒ３は、下記式（Ｉ）〜（ＩＶ）のいずれかで表される基である。Ｒ３は、抗腫瘍効果に優れることから、下記式（Ｉ）、（ＩＩ）又は（ＩＶ）であることが好ましく、下記式（Ｉ）、（ＩＩ）であることより好ましい。なお、本明細書において、「Ａｃ」はアセチル基を意味する。
【００２０】
【化７】
2017149658.tif 000009
【００２１】
上記式（３）中、Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立に、水素原子、メチル基、又はアセチル基である。上記式（３）中、Ｒ６は、水素原子又はオキソ基である。抗腫瘍効果に優れる化合物を得られやすいことから、Ｒ４又はＲ５は、少なくとも一方が水素原子又はメチル基であることが好ましく、メチル基であることがより好ましい。また、Ｒ４及びＲ５の両方が水素原子又はメチル基であることが好ましく、メチル基であることがより好ましい。ｎは、０〜２のいずれかの整数であるが、抗腫瘍効果に優れる化合物を得られやすいことから、２であることが好ましい。上記式（３）である化合物は、より具体的には、抗腫瘍効果に優れることから、下記式（４）〜（７）のいずれかで表される化合物であることが好ましい。なお、本明細書において、「Ｐｈ」はフェニル基を意味する。
【００２２】
【化８】
2017149658.tif 000010
【００２３】
本発明の抗腫瘍剤や活性酸素産生剤は、後述するとおり、上記式（１）〜（３）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のうち１種以上を有効成分として含む。別の態様においては、本発明の抗腫瘍剤や活性酸素産生剤は、下記式（８）〜（１９）で表される化合物又はその薬理学的に許容される塩のうち１種以上を有効成分として含む。
【００２４】
【化９】
2017149658.tif 000011
【００２５】
本発明の化合物の薬理学的に許容される塩は、特に限定されないが、例えば、無機酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸等）との塩、有機酸（ギ酸、酢酸、プロピオン酸、クエン酸、酒石酸、フマル酸、酪酸、シュウ酸、コハク酸、マロン酸、マレイン酸、乳酸、リンゴ酸、炭酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等）との塩、アルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）との塩、アルカリ土類金属（カルシウム、マグネシウム等）との塩、金属（鉄、亜鉛等）との塩等が挙げられる。これらは、１種単独であってもよく、２種以上を併用してもよい。これらの薬学的に許容しうる塩は、常法に従って調製することができる。
【００２６】
本発明の化合物は、腫瘍細胞の増殖抑制及びアポトーシス誘導効果を有するため、抗腫瘍剤としての使用に適している。ここで、本発明の化合物は、腫瘍細胞において活性酸素を産生させることができる。本発明の化合物が腫瘍細胞の増殖抑制及びアポトーシス誘導効果を有するのは、このように、腫瘍細胞において活性酸素を産生させることによるものと推測される（図７、８、９）。また、本発明の化合物は、ヒト骨髄腫ｘｅｎｏｇｒａｆｔに投与した後の生体における腫瘍増殖抑制が観察されることから（図１）、がん患者に投与した場合、がんの対宿と共に患者の予後が改善することが期待される。さらに、がんによる症状の改善も期待できる。
【００２７】
＜化合物の製造方法＞
本発明の上記化合物の代表的な製造法を、以下に示す。
【００２８】
本発明の式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１及びＲ２がヒドロキシ基である場合（化合物（１−１）である場合）、例えば、コマロビキノンに酢酸エチルを加え、そこに１０％パラジウム／炭素を加え、水素風船を付けて撹拌してから濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを、以下に示す。
【００２９】
【化１０】
2017149658.tif 000012
【００３０】
本発明の式（１）で表される化合物のうち、Ｒ１及びＲ２がアセトキシ基である場合（化合物（１−２）である場合）、又は、Ｒ１がアセトキシ基であり、Ｒ２がヒドロキシ基である場合（化合物（１−３）である場合）、例えば、４ａ，６，９−トリヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オンをジクロロメタンに溶かし、そこにトリエチルアミン（０．７ｍＬ）、無水酢酸（０．１７ｍＬ）を加え、室温で撹拌し、１Ｍの硫酸水素カリウム水溶液で反応を停止し、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製を行うことにより製造することができる。その反応スキームを、以下に示す。
【００３１】
【化１１】
2017149658.tif 000013
【００３２】
本発明の式（２）で表される化合物のうち、Ｒ３が式（Ｉ）で表される基である場合（化合物（２−１）である場合）、例えば、２−イソプロピル−３−メトキシ−５−（（２−オキソ−３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンに酢酸エチルを加え、そこに１０％パラジウム／炭素を加え、水素風船を付けて室温で撹拌し、その後、トリエチルアミン、無水酢酸を加え、水素風船を付けたまま室温で撹拌してから、水を加えた後にエーテルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを、以下に示す。
【００３３】
【化１２】
2017149658.tif 000014
【００３４】
本発明の式（２）で表される化合物のうち、Ｒ３が式（ＩＩＩ）で表される基である場合（化合物（２−３）である場合）、例えば、５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンを酢酸エチルに溶かし、そこに１０％パラジウム／炭素を加え、水素風船を付けて撹拌し、その後、トリエチルアミンと無水酢酸を加え、水素風船を付けたまま室温で撹拌し、水を加えた後、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製を行うことで製造することができる。その反応スキームを、以下に示す。
【００３５】
【化１３】
2017149658.tif 000015
【００３６】
本発明の式（２）で表される化合物のうち、Ｒ３が式（ＩＶ）で表される基である場合（化合物（２−４）である場合）、例えば、５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンを酢酸エチルに溶かし、そこに１０％パラジウム／炭素を加え、水素風船を付けて室温で撹拌し、その後、トリエチルアミンと無水酢酸を加え、水素風船を付けたまま室温で撹拌して、水を加えた後、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを、以下に示す。
【００３７】
【化１４】
2017149658.tif 000016
【００３８】
本発明の式（３）で表される化合物のうち、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、ｎが０である場合（化合物（４）である場合）、例えば、以下のような手順で合成することができる。
【００３９】
まず、１−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｅｔｈａｎ−１−ｏｎｅと臭化メチルマグネシウムを反応させ、酸で後処理して、２−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−２−ｏｌを得る。２−（２，６−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−２−ｏｌをパラジウム／炭素を用いて接触水素化を行い、２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅを得る。２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，３−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅをＶｉｌｓｍｅｉｅｒ−Ｈａａｃｋ反応によりホルミル化することで、３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅを得る。３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅをＤａｋｉｎ反応により酸化することで、３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌを得る。３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌを炭酸カリウムと臭化アリルを用いてアリル化することで、１−（ａｌｌｙｌｏｘｙ）−３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅを得る。１−（ａｌｌｙｌｏｘｙ）−３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅのＣｌａｉｓｅｎ転位により６−ａｌｌｙｌ−３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌを得る。６−ａｌｌｙｌ−３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｏｌを炭酸カリウムとヨウ化メチルによりメチル化することで、１−ａｌｌｙｌ−４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅを得る。１−ａｌｌｙｌ−４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅを９−ＢＢＮ（９−ボラビシクロ［３．３．１］ノナン）と反応させ、塩基性条件下にて過酸化水素で処理することで、３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−１−ｏｌを得る。３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−１−ｏｌを酸化クロムを用いて酸化することで、３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを得る。３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎｏｉｃ  ａｃｉｄとＴｆ２Ｏ（無水トリフルオロメタンスルホン酸）を反応させることで、６−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−４，５，７−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｅｎ−１−ｏｎｅを得る。６−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−４，５，７−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｅｎ−１−ｏｎｅをＣＡＮ（硝酸セリウムアンモニウム）で酸化することで、６−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｅｎｅ−１，４，７−ｔｒｉｏｎｅを得る。６−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｅｎｅ−１，４，７−ｔｒｉｏｎｅをパラジウム／炭素を用いて接触水素化することで、４，７−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−６−��ｓｏｐｒｏｐｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｉｎｄｅｎ−１−ｏｎｅ（化合物（４））が得られる。その反応スキームを以下に示す。
【００４０】
【化１５】
2017149658.tif 000017
【００４１】
本発明の式（３）で表される化合物のうち、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、ｎが１である場合（化合物（５）である場合）、例えば、以下のような手順で合成することができる。
【００４２】
３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐａｎ−１−ｏｌをＭｓＣｌ（メシルクロリド）でメシル化することで、３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅを得る。３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅとシアン化物カリウムを反応させることで、４−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔａｎｅｎｉｔｒｉｌｅを得る。４−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔａｎｅｎｉｔｒｉｌｅを加水分解することで、４−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを得る。４−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｂｕｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄとＴｆ２Ｏ（無水トリフルオロメタンスルホン酸）を反応させることで、７−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−５，６，８−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−３，４−ｄｉｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎ−１（２Ｈ）−ｏｎｅを得る。７−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−５，６，８−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−３，４−ｄｉｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎ−１（２Ｈ）−ｏｎｅをＣＡＮ（硝酸セリウムアンモニウム）で酸化することで、３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２−ｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−１，４，５（６Ｈ）−ｔｒｉｏｎｅを得る。３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２−ｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎｅ−１，４，５（６Ｈ）−ｔｒｉｏｎｅをパラジウム／炭素を用いて接触水素化することで、５，８−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−７−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−６−ｍｅｔｈｏｘｙ−３，４−ｄｉｈｙｄｒｏｎａｐｈｔｈａｌｅｎ−１（２Ｈ）−ｏｎｅ（化合物（５））が得られる。その反応スキームを以下に示す。
【００４３】
【化１６】
2017149658.tif 000018
【００４４】
本発明の式（３）で表される化合物のうち、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６が水素原子であり、ｎが２である場合（化合物（６）である場合）、例えば、以下のような手順で合成することができる。
【００４５】
３−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｒｏｐｙｌ  ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅをマロン酸ジエステルと反応させた後に脱炭酸を行うことで、５−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｅｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを得る。５−（４−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，３，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｅｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄとＴｆ２Ｏ（無水トリフルオロメタンスルホン酸）を反応させることで、３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，２，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−６，７，８，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎ−５−ｏｎｅを得る。３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，２，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−６，７，８，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎ−５−ｏｎｅをＣＡＮ（硝酸セリウムアンモニウム）で酸化することで、３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２−ｍｅｔｈｏｘｙ−６，７，８，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−１，４，５−ｔｒｉｏｎｅを得る。３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２−ｍｅｔｈｏｘｙ−６，７，８，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−１，４，５−ｔｒｉｏｎｅをパラジウム／炭素を用いて接触水素化することで、１，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２−ｍｅｔｈｏｘｙ−６，７，８，９−ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎ−５−ｏｎｅ（化合物（６））が得られる。その反応スキームを以下に示す。
【００４６】
【化１７】
2017149658.tif 000019
【００４７】
本発明の式（３）で表される化合物のうち、Ｒ４及びＲ５が水素原子であり、Ｒ６がオキソ基であり、ｎが２である場合（化合物（７）である場合）、例えば、以下のような手順で合成することができる。
【００４８】
２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｅｎｅとｄｉｈｙｄｒｏ−２Ｈ−ｐｙｒａｎ−２，６（３Ｈ）−ｄｉｏｎｅのルイス酸を用いたＦｒｉｅｄｅｌ−Ｃｒａｆｔｓアシル化反応により５−（３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−５−ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄを得る。５−（３−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−２，４，５−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−５−ｏｘｏｐｅｎｔａｎｏｉｃ  ａｃｉｄとＴｆ２Ｏ（無水トリフルオロメタンスルホン酸）を反応させることで、２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−５，９（６Ｈ）−ｄｉｏｎｅを得る。２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−１，３，４−ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−５，９（６Ｈ）−ｄｉｏｎｅをＣＡＮ（硝酸セリウムアンモニウム）で酸化することで、２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−１，４，５，９（６Ｈ）−ｔｅｔｒａｏｎｅを得る。２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−１，４，５，９（６Ｈ）−ｔｅｔｒａｏｎｅをパラジウム／炭素を用いて接触水素化することで、１，４−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−２−ｉｓｏｐｒｏｐｙｌ−３−ｍｅｔｈｏｘｙ−７，８−ｄｉｈｙｄｒｏ−５Ｈ−ｂｅｎｚｏ［７］ａｎｎｕｌｅｎｅ−５，９（６Ｈ）−ｄｉｏｎｅ（化合物（７））が得られる。その反応スキームを以下に示す。
【００４９】
【化１８】
2017149658.tif 000020
【００５０】
本発明の式（８）で表される化合物（化合物（８））は、例えば、（２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）メチル）−６，６−ジメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イル）酢酸メチルエステルをメタノールと水に溶かし、そこに水酸化ナトリウムを加えて撹拌し、メタノールを減圧除去した後、硫酸水素カリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００５１】
【化１９】
2017149658.tif 000021
【００５２】
本発明の式（９）で表される化合物（化合物（９））は、例えば、（２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）メチル）−６，６−ジメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イル）酢酸メチルエステルを酢酸に溶かし、そこに濃塩酸を加え撹拌し、室温まで冷ました後、水を加え、ジエチルエーテルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００５３】
【化２０】
2017149658.tif 000022
【００５４】
本発明の式（１０）で表される化合物（化合物（１０））は、例えば、７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（１９５ｍｇ）とＮ−ヨードスクシンイミドの１，２−ジクロロエタン溶液にパラトルエンスルホン酸一水和物を加え、撹拌し、室温まで冷ました後、チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで、まず、７ａ−（２−ヨード−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オンを製造する。次いで、７ａ−（２−ヨード−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オンのジエチルエーテル溶液に、−４０℃でイソプロピルマグネシウムクロリド（例えば、２．０Ｍジエチルエーテル溶液）を加え、撹拌、塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００５５】
【化２１】
2017149658.tif 000023
【００５６】
本発明の式（１１）で表される化合物（化合物（１１））は、従来の公知の方法で製造することができる。例えば、４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−６，７，９−トリメトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オンのジオキサン溶液に酸化銀（II）と硝酸水溶液を加え、撹拌し、酸化銀（II）を加え、さらに二時間撹拌し、水を加えて、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００５７】
【化２２】
2017149658.tif 000024
【００５８】
本発明の式（１２）で表される化合物（化合物（１２））は、例えば、７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オンのジオキサン溶液に酸化銀（II）と硝酸水溶液を加え、撹拌し、酸化銀（II）を加え、さらに撹拌し、水を加えて、ジエチルエーテルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００５９】
【化２３】
2017149658.tif 000025
【００６０】
本発明の式（１３）で表される化合物（化合物（１３））は、例えば、１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンのＴＨＦ溶液を氷冷し、フェニルマグネシウムブロミド（例えば、１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液）を加え、室温に戻しながら撹拌し、１Ｍの塩酸水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで１−ベンジル−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンを得る。次いで、１−ベンジル−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンのアセトニトリル溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液を加え、撹拌し、水を加えて酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００６１】
【化２４】
2017149658.tif 000026
【００６２】
本発明の式（１４）で表される化合物（化合物（１４））は、例えば、１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンと２−プロパノールのＴＨＦ溶液を氷冷し、水素化ナトリウムとジメチルホルムアミドを加えて撹拌し、水を加え、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで１−（イソプロポキシメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンをまず得る。次いで、１−（イソプロポキシメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンのアセトニトリル溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液を加え、撹拌し、水を加えて酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００６３】
【化２５】
2017149658.tif 000027
【００６４】
本発明の式（１５）で表される化合物（化合物（１５））は、例えば、１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンにアンモニア・エタノール溶液を加えて撹拌、得られた反応溶液を濃縮し、水酸化ナトリウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮し、ジエチルエーテルを加えて氷冷したところに、ピリジンとシクロヘキサンカルボニルクロリドを加えて室温で撹拌する。その後、塩酸水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することでＮ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）シクロヘキサンカルボキシアミドをまず得る。次いで、Ｎ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）シクロヘキサンカルボキシアミドのアセトニトリル溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液を加え、撹拌し、水を加えて酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００６５】
【化２６】
2017149658.tif 000028
【００６６】
本発明の式（１６）で表される化合物（化合物（１６））は、例えば、１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エタン−１−オールのＴＨＦ溶液を氷冷したところに水素化ナトリウムを加え、氷冷下で撹拌した後、１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンのＴＨＦ溶液とジメチルホルムアミドを加えて、氷冷下で撹拌し、飽和塩化ナトリウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００６７】
【化２７】
2017149658.tif 000029
【００６８】
本発明の式（１７）で表される化合物（化合物（１７））は、例えば、１−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールのアセトニトリル溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液を加え、撹拌し、食塩水を加えて酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００６９】
【化２８】
2017149658.tif 000030
【００７０】
本発明の式（１８）で表される化合物（化合物（１８））は、例えば、１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼンのジエチルエーテル溶液を冷却したところに、イソプロピルマグネシウムクロリドジエチルエーテル溶液を加え、撹拌し、１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エタン−１−オンのＴＨＦ溶液を加え、−１０℃から室温に戻しつつ撹拌し、塩化アンモニウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００７１】
【化２９】
2017149658.tif 000031
【００７２】
本発明の式（１９）で表される化合物（化合物（１９））は、例えば、２−（２，４−ジフルオロフェニル）−１−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン−２−オールのアセトニトリル溶液を氷冷したところに、硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液を加え、撹拌し、塩化ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで３回抽出してから乾燥、濃縮、精製することで製造することができる。その反応スキームを以下に示す。
【００７３】
【化３０】
2017149658.tif 000032
【００７４】
＜抗腫瘍剤＞
本発明は、上述の化合物、又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む、抗腫瘍剤を包含する。なお、本発明において、「抗腫瘍」とは、腫瘍に対する治療又は予防に用いられることを指す。骨髄腫の進行には、腫瘍血管新生、サイトカイン産生亢進、破壊整骨病変の進行、免疫監視からの回避が関わるとされる。ヒト骨髄腫ｘｅｎｏｇｒａｆｔに投与した後の生体における腫瘍増殖抑制が観察されることから（図１）、上述の化合物による直接の「抗腫瘍」以外にも、「抗腫瘍血管新生作用」「サイトカイン産生の調節」「骨粗鬆症を含む骨病変の改善」「免疫調節作用」等がんの進行に関わる現象の抑制効果を有することも推測される。
【００７５】
（用途）
抗腫瘍剤の対象となる細胞は、特に限定されず、例えば、骨髄腫、悪性リンパ腫、急性・慢性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性腫瘍等の腫瘍細胞（造血器腫瘍）、肺がん、前立腺がん、乳がん、肝がん、胃がん、大腸がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫等の細胞（固形がん細胞）が挙げられる。これらのうち、本発明の抗腫瘍剤は、特に抗腫瘍効果が発揮されることから、血液がん細胞に対する抗腫瘍剤として用いることが好ましく、抗骨髄腫剤として用いることが特に好ましい。また、本発明の抗腫瘍剤は、血液がん細胞に基づく疾患のうち、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、急性又は慢性白血病、悪性リンパ腫に対する疾患の治療又は予防のための抗腫瘍剤として用いることがより好ましい。
上述の化合物はリンパ球由来の骨髄腫細胞に作用を及ぼすことから、正常のリンパ球等に作用し「免疫調節作用」を有することも期待できる。抗アレルギー・アナフィラキシー効果、造血幹細胞移植後の移植片対宿主病の抑制、あるいは逆に抗腫瘍免疫能の賦活化、造血幹細胞移植後の移植片対腫瘍効果の亢進等が含まれる。
【００７６】
本発明の抗腫瘍剤の剤形は、特に限定されず、例えば、注射剤（静脈内注射剤（点滴を含む）、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤、皮下注射剤等）、錠剤、カプセル剤、液剤、坐剤、軟膏剤等に製剤化し、注射用製剤の場合は単位投与量アンプル又は多投与量容器の状態で提供されてよい。
【００７７】
これらの各種製剤は、製剤上通常用いられる賦形剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、潤滑剤、界面活性剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、溶解補助剤、防腐剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤、等張化剤等を適宜用い、常法により製造することができる。本発明の抗腫瘍剤は、上記製剤化を目的として、有効成分以外の成分を有してもよいが、有さなくてもよい。
【００７８】
本発明の抗腫瘍剤の投与方法は、特に限定されず、経口投与又は非経口投与であってもよく、その剤形に応じて適宜選択できる。
【００７９】
＜活性酸素産生剤＞
本発明は、上述の化合物、又はそれらの薬理学的に許容される塩を有効成分として含む、腫瘍細胞をはじめ、あらゆる細胞における活性酸素産生剤を包含する。
【００８０】
上述のとおり、「活性酸素産生剤」とは、活性酸素の産生そのものを生じさせるために用いられる用途又は活性酸素の産生を促進させるために用いられる用途を指す。
【００８１】
活性酸素産生させる腫瘍細胞は、例えば、骨髄腫、悪性リンパ腫、急性・慢性白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性腫瘍等の腫瘍細胞（造血器腫瘍）、肺がん、前立腺がん、乳がん、肝がん、胃がん、大腸がん、甲状腺がん、腎臓がん、子宮がん、卵巣がん、骨肉腫、軟骨肉腫、横紋筋肉腫、平滑筋肉腫等の細胞（固形がん細胞）等が挙げられる。これらのうち、活性酸素産生させる腫瘍細胞は、血液がん細胞であることが好ましく、骨髄腫細胞であることがより好ましい。
【００８２】
本発明の活性酸素産生剤は、上述の抗腫瘍剤と同様の剤形とすることができる。また、本発明の活性酸素産生剤は、上述の抗腫瘍剤と同様の方法により投与できる。
【実施例】
【００８３】
＜合成例１＞
（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−１−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン−２−オール（化合物１８）の合成法）
【００８４】
【化３１】
2017149658.tif 000033
【００８５】
１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１．０ｇ）のジエチルエーテル（１６ｍＬ）溶液を−２０℃に冷却したところに、イソプロピルマグネシウムクロリドジエチルエーテル溶液（２．０Ｍ、３．３ｍＬ）を加え、−１０℃で終夜撹拌した。１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エタン−１−オンのＴＨＦ（１６ｍＬ）溶液を加え、−１０℃から徐々に室温に戻しつつ終夜撹拌した。塩化アンモニウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより２−（２，４−ジフルオロフェニル）−１−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン−２−オール（６３８ｍｇ，収率４３％，純度８２％）を得た。２−（２，４−ジフルオロフェニル）−１−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン−２−オールのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【００８６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ８．１２（ｓ，１Ｈ），７．７９（ｓ，１Ｈ），７．３６−７．２９（ｍ，１Ｈ），６．８０−６．６４（ｍ，２Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），４．７４（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．５３（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．６０（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２０（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），１．２２（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ），１．２１（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１６２．６４（ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ＝２４７．４Ｈｚ），１５８．８１（ｄｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ＝２４４．４Ｈｚ），１５４．７４，１５１．５４，１５１．０８，１４４．８８，１３０．７７，１３０．１０，１３０．０１（ｄｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），１２６．０４，１２５．５９（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ），１１１．２７（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｊ＝２０．３Ｈｚ），１０９．６７，１０３．８０（ｔ，Ｊ＝２６．８Ｈｚ），６０．９６，６０．５５，５５．７２，３９．５８，２５．１７，２１．１１，２１．１４
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３３９３，２９５８，１４９９，１２７３
ＨＲＭＳ
Ｃ２３Ｈ２７Ｆ２Ｎ３ＮａＯ４（Ｍ＋Ｎａ＋）計算値：４７０．１８６２，測定値：４７０．１８６３
【００８７】
＜合成例２＞
（５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（化合物１９）の合成法）
【００８８】
【化３２】
2017149658.tif 000034
【００８９】
２−（２，４−ジフルオロフェニル）−１−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロパン−２−オール（７２ｍｇ、純度８５％）のアセトニトリル（５．５ｍＬ）溶液を氷冷したところに、硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液（０．２Ｍ、１．５ｍＬ）を加え、そのままの温度で１時間撹拌した。塩化ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（４８ｍｇ，収率８４％）を得た。５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【００９０】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ８．０８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｓ，１Ｈ），７．４２−７．３５（ｍ，１Ｈ），６．８０−６．７２（ｍ，２Ｈ），６．４１（ｓ，１Ｈ），５．１３（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７１（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｄ，Ｊ＝１４．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．１６−３．０８（ｍ，２Ｈ），２．８６（ｄ，Ｊ＝１３．５Ｈｚ，１Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１８７．３６，１８５．１６，１６２．９６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６Ｈｚ，Ｊ＝２４８．６Ｈｚ），１５８．６１（ｄｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｊ＝２４５．０Ｈｚ），１５６．０８，１５１．８０，１４４．５３，１４１．００，１３８．４３，１３７．１１，１２９．８２（ｄｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），１２４．１２（ｄ，Ｊ＝１３．１Ｈｚ），１１１．７３（ｄ，Ｊ＝１７．９Ｈｚ），１０４．３６（ｔ，Ｊ＝２６．３Ｈｚ），７４．９７，６１．００，５７．３６，３７．４８，２４．６７，２０．５０，２０．４４
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）
３３９９，２９６３，１６５１，１６１６，１５９９，１５００，１２７３
ＨＲＭＳ
Ｃ２１Ｈ２１Ｆ２Ｎ３ＮａＯ４（Ｍ＋Ｎａ＋）計算値：４４０．１３９２，測定値：４４０．１３９９
【００９１】
＜合成例３＞
（１−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（化合物１６）の合成法）
【００９２】
【化３３】
2017149658.tif 000035
【００９３】
１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エタン−１−オールのＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を氷冷したところに水素化ナトリウム（６０％、３０ｍｇ）を加え、氷冷下で３０分撹拌した後、１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１５０ｍｇ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液とジメチルホルムアミド（１００μＬ）を加えて、氷冷下で１時間撹拌した。飽和塩化ナトリウム水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより１−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（２２４ｍｇ，収率９８％）を得た。１−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾールのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【００９４】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ８．１１（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．３９−７．３４（ｍ，１Ｈ），６．９０−６．７９（ｍ，２Ｈ），６．３３（ｓ，１Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），４．３８（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ），４．２３（ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，３Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ），３．４３（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１６４．０２（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），１６１．８７（ｄｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ＝４１．８Ｈｚ），１５９．７２（ｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），１５４．６７，１５１．６３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），１４５．４０，１４４．２１，１３０．９０，１２９．１５（ｄｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），１２７．５５，１２１．１２（ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），１１１．９２（ｄ，Ｊ＝１７．９Ｈｚ），１０７．１０，１０４．２６（ｔ，Ｊ＝２５．６Ｈｚ），７３．３２，６６．６１，６０．７７，６０．７４，５５．７５，５４．４１，２５．２２，２１．１４
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
２９６０，１５０２，１３８４，１２６３
ＨＲＭＳ
Ｃ２３Ｈ２７Ｆ２Ｎ３ＮａＯ４（Ｍ＋Ｎａ＋）計算値：４７０．１８６２，測定値：４７０．１８６６
【００９５】
＜合成例４＞
（５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（化合物１７）の合成方法）
【００９６】
【化３４】
2017149658.tif 000036
【００９７】
１−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）オキシ）エチル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール（１００ｍｇ）のアセトニトリル（９．０ｍＬ）溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液（０．２Ｍ、２．４ｍＬ）を加え、そのままの温度で１時間半撹拌した。食塩水を加えて酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製することにより５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（９４ｍｇ，収率１００％）を得た。５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【００９８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ８．０８（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｓ，１Ｈ），７．３１−７．２７（ｍ，１Ｈ），６．９１−６．８２（ｍ，２Ｈ），６．４７（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｊ＝１６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．８７（ｓ，３Ｈ），３．１８（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），１．１６（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１８７．５７，１８３．０８，１６３．３２（ｄｄ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｊ＝２５０Ｈｚ），１６０．７５（ｄｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ＝２４９Ｈｚ），１５５．９２，１５２．１９，１４４．２０，１４１．９１，１３８．２３，１３２．３３，１２８．８６（ｄｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｊ＝１０．８Ｈｚ），１２０．１６（ｄｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ），１１２．３２（ｄ，Ｊ＝２５．０Ｈｚ），１０４．６６（ｔ，Ｊ＝２５．１Ｈｚ），７４．４５，６４．７３，６１．０９，５４．０９，２４．７０，２０．５１
ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ−１）
２９４３，１６５５，１６０４，１５０８，１２７５
ＨＲＭＳ
Ｃ２１Ｈ２１Ｆ２Ｎ３ＮａＯ４（Ｍ＋Ｎａ＋）計算値：４４０．１３９２，測定値：４４０．１３８７
【００９９】
＜合成例５＞
（２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−６，６−ジメチルシクロヘサ−２−エン−１−イル）酢酸（化合物８）の合成方法）
【０１００】
【化３５】
2017149658.tif 000037
【０１０１】
（２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）メチル）−６，６−ジメチルシクロヘサ−２−エン−１−イル）酢酸メチルエステル（１．９ｇ）をメタノール（４０ｍＬ）と水（２ｍＬ）に溶かし、そこに水酸化ナトリウム（１．６ｇ）を加えて５０℃で２４時間撹拌した。メタノールを減圧除去した後、硫酸水素カリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過し濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−６，６−ジメチルシクロヘサ−２−エン−１−イル）酢酸（１．４４ｇ，収率９７％）を得た。２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−６，６−ジメチルシクロヘサ−２−エン−１−イル）酢酸のＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１０２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ６．４０（ｓ，１Ｈ），５．３０（ｓ，１Ｈ），３．７８（ｓ，３Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），３．２８−３．２５（ｍ，２Ｈ），２．４６（ｄｄ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｄｄ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２６−２．２２（ｍ，１Ｈ），２．０４−１．９７（ｍ，２Ｈ），１．４７−１．４０（ｍ，１Ｈ）１．３０（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），１．１９−１．１３（ｍ，１Ｈ），０．８９（ｓ，３Ｈ），０．８６（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ１８０．５１，１５４．３１，１５１．７２，１４５．６１，１３８．３７，１３０．５１，１２８．５７，１２２．８３，１０８．５４，６０．８１，６０．５１，５５．８０，４３．６８，３６．３０，３６．１２，３２．４３，３０．３８，２７．３２，２６．３３，２５．２０，２３．０４，２１．４４
【０１０３】
＜合成例６＞
（７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（化合物９）の合成方法）
【０１０４】
【化３６】
2017149658.tif 000038
【０１０５】
（２−（２−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシフェニル）メチル）−６，６−ジメチルシクロヘキサ−２−エン−１−イル）酢酸メチルエステル（８１ｍｇ）を酢酸（０．７５ｍＬ）に溶かし、そこに濃塩酸（０．２５ｍＬ）を加え７０℃で６時間撹拌した。室温まで冷ました後、水を加え、ジエチルエーテルで抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した後、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製することで７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（７３ｍｇ，収率９３％）を得た。７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１０６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ６．０１（ｓ，１Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．７６（ｓ，３Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．４７（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．３２（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９０（ｄ，Ｊ＝１４．３  Ｈｚ，１Ｈ），２．５０（ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１７．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．５  Ｈｚ，１７．３Ｈｚ，１Ｈ），２．１３（ｄｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１２．５Ｈｚ，１Ｈ），１．８９（ｄｔ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．６９−１．５３（ｍ，２Ｈ），１．４２−１．３２（ｍ，３Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ），１．１２（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ１７５．８６，１５４．２３，１５１．５５，１４６．１５，１２９．４３，１２６．９６，１０９．５４，８８．４６，６０．７９，６０．４９，５５．８４，４９．６１，３７．７０，３４．０９，３３．１３，３２．６２，３２．３７，３０．１６，２８．９６，２５．２１，２１．３５，１８．７２
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
２９５５，１７７３
ＨＲＭＳ
Ｃ２３Ｈ３５Ｏ５（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：３９１．２４７９，測定値：３９１．２４８０
【０１０７】
＜合成例７＞
（４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−６，７，９−トリメトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オン（化合物１０）の合成方法）
【０１０８】
【化３７】
2017149658.tif 000039
【０１０９】
７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（１９５ｍｇ）とＮ−ヨードスクシンイミド（１７０ｍｇ）の１，２−ジクロロエタン溶液（２．５ｍＬ）にパラトルエンスルホン酸一水和物（１５ｍｇ）を加え、４５℃で６時間撹拌した。室温まで冷ました後、チオ硫酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した後、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製することで７ａ−（２−ヨード−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（２２５ｍｇ，収率９２％）を得た。
【０１１０】
７ａ−（２−ヨード−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（１０３ｍｇ）のジエチルエーテル（１ｍＬ）溶液に、−４０℃でイソプロピルマグネシウムクロリド（２．０Ｍジエチルエーテル溶液，０．２５ｍＬ）を加え、そのままの温度で１０時間撹拌した。塩化アンモニウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過した後、濃縮した。カラムクロマトグラフィーにより精製することで４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−６，７，９−トリメトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オン（７５ｍｇ，収率９６％）を得た。４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−６，７，９−トリメトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オンのＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１１１】
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３４６８，２９３７，１６８６
ＨＲＭＳ
Ｃ２３Ｈ３５Ｏ５（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：３９１．２４７９，測定値：３９１．２４８１
【０１１２】
＜合成例８＞
（１０−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−４ａ，１０−エポキシジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジオン（化合物１１、別名コマロビキノン）の合成方法）
【０１１３】
【化３８】
2017149658.tif 000040
【０１１４】
４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−６，７，９−トリメトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オン（１９５ｍｇ）のジオキサン溶液（１０ｍＬ）に８℃で酸化銀（II）（２４８ｍｇ）と６Ｍの硝酸水溶液（５ｍＬ）を加え、そのままの温度で撹拌した。２時間後、酸化銀（II）（２４８ｍｇ）を加え、さらに二時間撹拌した。水を加えて、酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、濃縮しカラムクロマトグラフィーで精製することにより１０−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−４ａ，１０−エポキシジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジオン（１１８ｍｇ，収率６５％）を得た。１０−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−４ａ，１０−エポキシジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジオンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１１５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ５．９７（ｂｒｓ，１Ｈ），３．９７（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．５４（ｄ，Ｊ＝１９．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２８（ｄｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），２．２４（ｄ，Ｊ＝１９．０Ｈｚ，１Ｈ），２．０５−１．９７（ｍ，２Ｈ），１．９１−１．８２（ｍ，１Ｈ），１．７６−１．６８（ｍ，２Ｈ），１．６３−１．５４（ｍ，２Ｈ），１．２０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ），１．２０−１．１０（ｍ，１Ｈ），０．９４（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ１８９．２１，１８３．６７，１５６．１７，１４２．２５，１３９．０１，１３７．１５，１００．９６，７９．３９，６１．２６，５１．５５，４５．８３，３９．０９，３２．１０，３１．２８，３０．４１，２９．８７，２７．１６，２４．４２，２０．５２，２０．４８，１５．７３
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３４１２，２９４７，１６５１，１６０３，１４５８
ＨＲＭＳ
Ｃ２１Ｈ２９Ｏ５（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：３６１．２０１０，測定値：３６１．２０１８
【０１１６】
＜合成例９＞
（５−（（４，４−ジメチル−２−オキソヘキサヒドロベンゾフラン−７ａ（２Ｈ）−イル）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（化合物１２）の合成方法）
【０１１７】
【化３９】
2017149658.tif 000041
【０１１８】
７ａ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）−４，４−ジメチルヘキサヒドロベンゾフラン−２（３Ｈ）−オン（５０ｍｇ）のジオキサン溶液（２．６ｍＬ）に１０℃で酸化銀（II）（６３ｍｇ）と６Ｍの硝酸水溶液（１．３ｍＬ）を加え、そのままの温度で撹拌した。３時間後、酸化銀（II）（６３ｍｇ）を加え、さらに３時間撹拌した。水を加えて、ジエチルエーテルで抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後、濃縮しカラムクロマトグラフィーで精製することにより５−（（４，４−ジメチル−２−オキソヘキサヒドロベンゾフラン−７ａ（２Ｈ）−イル）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（４４ｍｇ，収率９５％）を得た。５−（（４，４−ジメチル−２−オキソヘキサヒドロベンゾフラン−７ａ（２Ｈ）−イル）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１１９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ６．６１（ｓ，１Ｈ），３．９１（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．７７（ｄ，Ｊ＝１４．０Ｈｚ，１Ｈ），２．５０−２．４５（ｍ，２Ｈ），２．１５（ｔ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，１Ｈ），１．８３−１．７７（ｍ，１Ｈ），１．６０−１．５３（ｍ，２Ｈ），１．４３−１．３３（ｍ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，３Ｈ），１．１１（ｓ，３Ｈ），０．９２（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ１８９．２１，１８３．６７，１５６．１７，１４２．２５，１３９．０１，１３７．１５，１００．９６，７９．３９，６１．２６，５１．５５，４５．８３，３９．０９，３２．１０，３１．２８，３０．４１，２９．８７，２７．１６，２４．４２，２０．５２，２０．４８，１５．７３
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３４１２，２９４７，１６５１，１６０３，１４５８
ＨＲＭＳ
Ｃ２１Ｈ２９Ｏ５（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：３６１．２０１０，測定値：３６１．２０１８
【０１２０】
＜合成例１０＞
（５−ベンジル−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（化合物１３）の合成方法）
【０１２１】
【化４０】
2017149658.tif 000042
【０１２２】
１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１５０ｍｇ）のＴＨＦ（０．５ｍＬ）溶液を氷冷し、フェニルマグネシウムブロミド（１．０Ｍ  ＴＨＦ溶液、１．０ｍＬ）を加え、徐々に室温に戻しながら終夜撹拌した。１Ｍの塩酸水溶液を加えて、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過し、ろ液を濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーで精製することにより１−ベンジル−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１２ｍｇ、収率８％）を得た。１−ベンジル−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１１ｍｇ）のアセトニトリル（１．５ｍＬ）溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液（０．２Ｍ，０．４４ｍＬ）を加え、そのままの温度で１時間撹拌した。水を加えて酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製することにより５−ベンジル−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（７ｍｇ、収率７４％）を得た。５−ベンジル−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１２３】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ７．３２（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），７．２７−７．２４（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），６．２１（ｓ，１Ｈ），３．９５（ｓ，３Ｈ），３．７０（ｓ，２Ｈ），３．１９（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１８８．２０，１８３．９９，１５６．２３，１４６．３８，１３７．８２，１３６．６９，１３３．８０，１２９．４４，１２８．９１，１２７．０３，６１．０９，３４．８１，２４．６３，２０．５６
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
２９６３，１６５３，１２７３
ＨＲＭＳ
Ｃ１９Ｈ２２ＮＯ３（Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ＋）計算値：３１２．１５９４，測定値３１２．１５９７
【０１２４】
＜合成例１１＞
（５−（イソプロポキシメチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（化合物１４）の合成方法）
【０１２５】
【化４１】
2017149658.tif 000043
【０１２６】
１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１５０ｍｇ）と２−プロパノール（１１５μＬ）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液を氷冷し、水素化ナトリウム（６０％、６０ｍｇ）とジメチルホルムアミド（２００μＬ）を加えて室温で２時間撹拌した。水を加え、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより１−（イソプロポキシメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１０９ｍｇ，収率７８％）を得た。１−（イソプロポキシメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（６１ｍｇ）のアセトニトリル（９．０ｍＬ）溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液（０．２Ｍ、２．６ｍＬ）を加え、そのままの温度で１時間半撹拌した。水を加えて酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製することにより５−（イソプロポキシメチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（３８ｍｇ、収率７８％）を得た。５−（イソプロポキシメチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオンのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１２７】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ６．６８（ｔ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝２．０Ｈｚ，２Ｈ），３．９３（ｓ，３Ｈ），３．６７（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．２２（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），１．２０（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１８８．１２，１８３．８３，１５６．０６，１４４．１８，１３８．０６，１３２．１２，７２．５６，６３．２１，６１．０７，２４．６６，２２．０８，２０．５７
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
２９７２，１６５３，１２６７
ＨＲＭＳ
Ｃ１６Ｈ２４ＮＯ４（Ｍ＋ＣＨ３ＣＮ＋Ｈ＋）計算値：２９４．１７００，測定値２９４．１６９８
【０１２８】
＜合成例１２＞
（Ｎ−（（４−イソプロピル−５−メトキシ−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキシアミド（化合物１５）の合成方法）
【０１２９】
【化４２】
2017149658.tif 000044
【０１３０】
１−（ブロモメチル）−４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンゼン（１５０ｍｇ）にアンモニア・エタノール溶液（２．０Ｍ、２．５ｍＬ）を加えて室温で４時間撹拌した。反応溶液を濃縮し、１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を加えて、酢酸エチルで３回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を濃縮し、ジエチルエーテル（２ｍＬ）を加えて氷冷したところに、ピリジン（１２０μＬ）とシクロヘキサンカルボニルクロリド（１３５μＬ）を加えて室温で撹拌した。１Ｍの塩酸水溶液を加えて、酢酸エチルで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥した後、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することによりＮ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）シクロヘキサンカルボキシアミド（３５ｍｇ，収率２０％）を得た。
Ｎ−（４−イソプロピル−２，３，５−トリメトキシベンジル）シクロヘキサンカルボキシアミド（２０ｍｇ）のアセトニトリル（２．９ｍＬ）溶液に、氷冷下にて硝酸二アンモニウムセリウム（ＣＡＮ）水溶液（０．２Ｍ、０．７１ｍＬ）を加え、そのままの温度で２時間半撹拌した。水を加えて酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過した。ろ液を濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製することによりＮ−（（４−イソプロピル−５−メトキシ−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキシアミド（１４ｍｇ、収率７４％）を得た。Ｎ−（（４−イソプロピル−５−メトキシ−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキシアミドのＮＭＲ、ＩＲ及びＨＲＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１３１】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ６．４３（ｔ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８４（ｂｒｓ，１Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ），３．９４（ｓ，３Ｈ），３．２０（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），２．１６−１．９９（ｍ，１Ｈ），１．９１−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．７０−１．６４（ｍ，１Ｈ），１．４８−１．３８（ｍ，２Ｈ），１．３２−１．２０（ｍ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１８７．７８，１８４．１７，１７６．３４，１５６．１０，１４２．３２，１３８．３７，１３２．６１，６１．１０，４５．４５，３７．５７，２９．７６，２５．７４，２４．７１，２０．５３
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３２９３，２９３２，１６５３，１６４７，１６３５，１２６９
ＨＲＭＳ
Ｃ１８Ｈ２５ＮＮａＯ４（Ｍ＋Ｎａ＋）計算値：３４２．１６７６，測定値３２０．１６７５
【０１３２】
＜合成例１３＞
（４ａ，６，９−トリヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オン（化合物（１−１））の合成方法）
【０１３３】
【化４３】
2017149658.tif 000045
【０１３４】
コマロビキノン（２２．７ｍｇ）に酢酸エチル（０．４ｍＬ）を加え、そこに１０％パラジウム／炭素（１．６ｍｇ）を加え、水素風船を付けて室温で２０時間撹拌した。ろ過後濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製することにより４ａ，６，９−トリヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オン（２２．８ｍｇ，収率１００％）を得た。４ａ，６，９−トリヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オンのＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１３５】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ１２．３０（ｓ，１Ｈ），５．２９（ｓ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），３．３７−３．１２（ｍ，２Ｈ），３．０２−２．９７（ｍ，１Ｈ），２．６７−２．６２（ｍ，２Ｈ），１．９１−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．７８−１．７５（ｍ，１Ｈ），１．５９−１．５１（ｍ，３Ｈ），１．４５−１．３７（ｍ，８Ｈ），１．２８（ｓ，１Ｈ），１．１６−１．１０（ｍ，１Ｈ），０．９９（ｓ，３Ｈ），０．８５（ｓ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ２１０．７３，１５７．２２，１５０．６７，１３９．６２，１２７．５４，１２１．１３，１１６．８３，７３．８５，６２．０８，４８．９８，４０．７５，４０．６１，４０．４８，３８．５６，３３．９６，３２．１９，２６．１８，２１．５７，２０．６８，２０．４５，１８．７８
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３３６８，１６０９
ＭＳ
Ｃ２１Ｈ３０Ｏ５（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：３６３，測定値：３６３
【０１３６】
＜合成例１４＞
（２−イソプロピル−３−メトキシ−５−（（２−オキソ−３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イル）メチル）−１，４−フェニレン  ジアセテート（化合物２−１）の合成方法）
【０１３７】
【化４４】
2017149658.tif 000046
【０１３８】
２−イソプロピル−３−メトキシ−５−（（２−オキソ−３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イル）メチル）シクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（１００ｍｇ）に酢酸エチル（１．５ｍＬ）を加え、そこに１０％パラジウム／炭素（１５．９ｍｇ）を加え、水素風船を付けて室温で３．５時間撹拌した。その後、トリエチルアミン（０．９ｍＬ）、無水酢酸（０．２８ｍＬ）を加え、水素風船を付けたまま室温で２時間撹拌した。水を加えた後にエーテルで３回抽出を行い、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過後濃縮した。カラムクロマトグラフィーで精製することにより２−イソプロピル−３−メトキシ−５−（（２−オキソ−３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イル）メチル）−１，４−フェニレン  ジアセテート（１４５ｍｇ，１００％）を得た。２−イソプロピル−３−メトキシ−５−（（２−オキソ−３，４−ジヒドロキノリン−１（２Ｈ）−イル）メチル）−１，４−フェニレン  ジアセテートのＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１３９】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ７．２０−７．１５（ｍ，２Ｈ），６．９８（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｓ，１Ｈ），４．９７（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），２．９４（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ），２．７５−２．７２（ｍ，２Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１７０．５９，１６９．１１，１６８．６１，１５０．９７，１４７．２４，１３９．９３，１３９．８３，１３３．３５，１２８．３９，１２７．９１，１２７．８３，１２６．４６，１２３．２４，１１７．２０，１１５．８１，６１．７６，４１．８８，３２．００，２９．８０，２５．９３，２５．５６，２１．４４，２１．２９，２０．６３
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
１７６３，１６７８
ＭＳ
Ｃ２４Ｈ２７ＮＯ６（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：４２６，測定値：４２６
【０１４０】
＜合成例１５＞
（４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジイル  ジアセテート（化合物１−２）及び４ａ，９−ジヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６−イル  アセテート（化合物１−３）の合成方法）
【０１４１】
【化４５】
2017149658.tif 000047
【０１４２】
４ａ，６，９−トリヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１，２，３，４，４ａ，５，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１０Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−１０−オン（３６２．５ｍｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かし、そこにトリエチルアミン（０．７ｍＬ）、無水酢酸（０．１７ｍＬ）を加え、室温で１０時間撹拌した。その後、１Ｍの硫酸水素カリウム水溶液で反応を停止し、酢酸エチルで３回抽出を行った。合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、ろ過後濃縮した。カラムクロマトグラフィーで精製することにより４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジイル  ジアセテート（３００ｍｇ，収率６７％）及び４ａ，９−ジヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６−イル  アセテート（１３２ｍｇ，３３％）を得た。４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジイル  ジアセテート及び４ａ，９−ジヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６−イル  アセテートのＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１４３】
４ａ−ヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６，９−ジイル  ジアセテート
ＩＲ  （ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３５０５，１７６５，１６８６
ＭＳ
Ｃ２５Ｈ３４Ｏ７（Ｍ＋Ｎａ＋）計算値：４６９，測定値：４６９
【０１４４】
４ａ，９−ジヒドロキシ−８−イソプロピル−７−メトキシ−１，１−ジメチル−１０−オキソ−２，３，４，４ａ，５，１０，１１，１１ａ−オクタヒドロ−１Ｈ−ジベンゾ［ａ，ｄ］［７］アヌレン−６−イル  アセテート
１Ｈ−ＮＭＲ（Ｃ６Ｄ６，５００ＭＨｚ）
δ３．５５（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４１（ｓ，３Ｈ），２．６８  （ｄ，Ｊ＝１４．４Ｈｚ，１Ｈ），２．６２−２．６０（ｍ，２Ｈ），２．２８（ｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ，１Ｈ），１．８５（ｓ，３Ｈ），１．７３−１．６９（ｍ，１Ｈ），１．４５−１．４０（ｍ，７Ｈ），１．３０−１．２１（ｍ，３Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，１Ｈ），０．８３（ｓ，３Ｈ），０．６７−０．５３（ｍ，２Ｈ），０．４２−０．３９（ｍ，４Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｃ６Ｄ６，１２５ＭＨｚ）
δ２０９．９８，１６８．２３，１６２．２２，１５５．８７，１３５．６４，１２９．８６，１２９．３２，１１６．３７，７２．７２，６１．００，４８．５５，４１．４９，４０．５１，４０．１９，３８．３４，３３．５９，３１．２２，２５．８９，２１．３１，２０．６０，２０．３３，１９．７８，１８．７４
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３５２４，１７７３，１６１８
ＭＳ
Ｃ２３Ｈ３２Ｏ６（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：４０５，測定値：４０５
【０１４５】
＜合成例１６＞
（５−（シクロヘキサンカルボキサミドメチル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテート（化合物２−２）の合成方法）
【０１４６】
【化４６】
2017149658.tif 000048
【０１４７】
Ｎ−（（４−イソプロピル−５−メトキシ−３，６−ジオキソシクロヘキサ−１，４−ジエン−１−イル）メチル）シクロヘキサンカルボキシアミド（１００ｍｇ）を酢酸エチル（１．６ｍＬ）に溶かし、そこに１０％パラジウム／炭素（１６ｍｇ）を加え、水素風船を付けて室温で５時間撹拌した。その後、トリエチルアミン（１．０ｍＬ）と無水酢酸（０．３ｍＬ）を加え、水素風船を付けたまま室温で一晩撹拌した。水を加えた後、ジエチルエーテルで３回抽出し、合わせた抽出溶媒を硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過後、濃縮しカラムクロマトグラフィーで精製することで５−（シクロヘキサンカルボキサミドメチル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテート（８７ｍｇ，収率６８％）を得た。５−（シクロヘキサンカルボキサミドメチル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテートのＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１４８】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ６．７４（ｓ，１Ｈ），５．６７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．２５（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），３．７３（ｓ，３Ｈ），３．２６（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），２．３３  （ｓ，３Ｈ），２．３１（ｓ，３Ｈ），２．０１（ｔｔ，Ｊ＝１１．７  Ｈｚ，Ｊ＝３．４  Ｈｚ，１Ｈ），１．８１−１．６１（ｍ，５Ｈ），１．４２−１．３４（ｍ，２Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，６Ｈ），１．１９−１．１５（ｍ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１７５．７５，１６９．５１，１５１．０２，１４７．１４，１４０．７７，１３４．３３，１２９．７２，１１９．９５，６１．７４，４５．５７，３８．３６，２９．６３，２５．９３，２５．７９，２１．４０，２１．２７，２０．７７
ＩＲ  （ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３３１６，１７６３，１６４５
ＭＳ
Ｃ２２Ｈ３１ＮＯ６（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：４０６，測定値：４０６
【０１４９】
＜合成例１７＞
（５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテート（化合物２−３）の合成方法）
【０１５０】
【化４７】
2017149658.tif 000049
【０１５１】
５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（１００ｍｇ）を酢酸エチル（１．２ｍＬ）に溶かし、そこに１０％パラジウム／炭素（１０．７ｍｇ）を加え、水素風船を付けて１８時間撹拌した。その後、トリエチルアミン（０．７５ｍＬ）と無水酢酸（０．２５ｍＬ）を加え、水素風船を付けたまま室温で５時間撹拌した。水を加えた後、酢酸エチルで３回抽出を行い、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥した。ろ過後濃縮し、カラムクロマトグラフィーで精製することにより５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテート（１２１ｍｇ，収率１００％）を得た。５−（（１−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）エトキシ）メチル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテートのＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１５２】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ８．１０（ｓ，１Ｈ），７．８８（ｓ，１Ｈ），７．３０−７．２５（ｍ，１Ｈ），６．８９−６．８１（ｍ，２Ｈ），６．５７（ｓ，１Ｈ），５．００（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２９（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，３Ｈ），３．２７（ｓｅｐｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），２．１２（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），１．２４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１６９．４１，１６８．５０，１６３．１１（ｄｄ，Ｊ＝２４９．２Ｈｚ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），１６０．７７（ｄｄ，Ｊ＝２４７．０Ｈｚ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），１５１．８６，１５０．７９，１４７．０７，１４４．３６，１４０．３２，１３４．６１，１２９．１９（ｄｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），１２８．３５，１２０．５６（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ），１１９．２８，１１２．０６（ｄ，Ｊ＝２０．３Ｈｚ），１０４．３９（ｔ，Ｊ＝２５．０Ｈｚ），７３．４４，６５．９７，６１．７１，５４．２９，２５．９１，２１．３９，２１．３５，２０．５２
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
１７６５，１６１８
ＭＳ
Ｃ２５Ｈ２７Ｆ２Ｎ３Ｏ６（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：５０４，測定値：５０４
【０１５３】
＜合成例１８＞
（５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテート（化合物２−４）の合成方法）
【０１５４】
【化４８】
2017149658.tif 000050
【０１５５】
５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシシクロヘキサ−２，５−ジエン−１，４−ジオン（２０９ｍｇ）を酢酸エチルに溶かし、そこに１０％パラジウム／炭素（２７ｍｇ）を加え、水素風船を付けて室温で２．５時間撹拌した。その後、トリエチルアミン（０．７ｍＬ）と無水酢酸（０．２４ｍＬ）を加え、水素風船を付けたまま室温で９時間撹拌した。水を加えた後、酢酸エチルで３回抽出し、合わせた抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させた。ろ過後濃縮し、カラムクロマトグラフィーにより精製することで５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテート（２１０ｍｇ，収率８３％）を得た。５−（２−（２，４−ジフルオロフェニル）−２−ヒドロキシ−３−（１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル）プロピル）−２−イソプロピル−３−メトキシ−１，４−フェニレン  ジアセテートのＮＭＲ，ＩＲ及びＭＳの分析結果を以下に示す。
【０１５６】
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，５００ＭＨｚ）
δ７．９２（ｓ，１Ｈ），７．７８（ｓ，１Ｈ），７．３６−７．３１（ｍ，１Ｈ），６．７８−６．７６（ｍ，３Ｈ），４．６３（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５４（ｓ，１Ｈ），３．８８（ｄ，Ｊ＝１４．３Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．２６（ｓｅｐｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．０５（ｓ，２Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ），２．２９（ｓ，３Ｈ），１．２５−１．２３（ｍ，６Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，１２５ＭＨｚ）
δ１６９．３２，１６８．９１，１６０．６６（ｄｄ，Ｊ＝２４９．２Ｈｚ，Ｊ＝１３．１  Ｈｚ），１５８．５６（ｄｄ，Ｊ＝２４４．４Ｈｚ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ），１５１．８６，１５０．６４，１４６．７２，１４４．２８，１４１．３４，１３３．６２，１３０．１９（ｄｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），１２６．５８，１２５．４１  （ｄｄ，Ｊ＝１１．９Ｈｚ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），１２２．１７，１１１．６３（ｄ，Ｊ＝２０．３Ｈｚ），１０４．００（ｔ，Ｊ＝２６．２Ｈｚ），７５．８５（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），６１．６７，５６．１６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），３７．９１，２５．８２，２１．４９，２１．４５，２１．２７，２０．６２
ＩＲ（ｎｅａｔ，ｃｍ−１）
３４１２，１７６７，１６１８
ＭＳ
Ｃ２５Ｈ２７Ｆ３Ｏ６（Ｍ＋Ｈ＋）計算値：５０３，測定値：５０３．
【０１５７】
＜試験１＞
Ｉｃｒマウス（５ｗ）について、Ｃｏｎｔｒｏｌの生理食塩水（１％ｔｗｅｅｎ８０，１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）  ｉｎ  生理食塩水）を投与するマウス（コントロールマウス、ｎ＝３）、化合物（１９）を１０ｍｇ／ｋｇ投与するマウス（化合物（１９）１０ｍｇ／ｋｇ投与マウス、ｎ＝３）、化合物（１９）を２０ｍｇ／ｋｇ投与するマウス（化合物（１９）２０ｍｇ／ｋｇ投与マウス、ｎ＝３）、化合物（１９）を４０ｍｇ／ｋｇ投与するマウス（化合物（１９）４０ｍｇ／ｋｇ投与マウス、ｎ＝３）に分けた。なお、それぞれの化合物（１９）は、Ｃｏｎｔｒｏｌの生理食塩水に配合された状態でマウスに投与した。
【０１５８】
投与開始より２週間、３日毎に体重増減を測定し、また、尾静脈血を用いて白血球数、好中球数をカウントした。白血球数、好中球数のカウントは、まず、ヘマトクリット毛細管を使用し尾静脈血１０μＬ採取し、チュルク液（溶血作用）を用いて、１０倍希釈（１００μｌ）した。その後、血球計算盤（Ｂｕｒｋｅｒ−Ｔｕｒｋ）を用いて、白血球数、好中球数をカウントした（ｎ＝３）。
【０１５９】
体重増減を測定した結果、化合物（１９）４０ｍｇ／ｋｇ投与マウス群においては、体重が減少したのに対し、化合物（１９）１０ｍｇ／ｋｇ投与マウス群、化合物（１９）２０ｍｇ／ｋｇ投与マウス群においては、体重の変化はみられなかった。また、白血球数、好中球数を測定した結果、全てのマウス群において、変化はみられなかった。
【０１６０】
また、化合物（１９）４０ｍｇ／ｋｇ投与マウス群は、空腸の肥大により腸閉塞（イレウス）となっていたのに対し、化合物（１９）１０ｍｇ／ｋｇ投与マウス群、化合物（１９）２０ｍｇ／ｋｇ投与マウス群においては、腸の異常はみられなかった。
【０１６１】
＜試験２＞
Ｉｃｒ／ＳＣＩＤマウス（５ｗ）について、Ｃｏｎｔｒｏｌの生理食塩水（１％ｔｗｅｅｎ８０，１０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）  ｉｎ  生理食塩水）を投与するマウス（コントロールマウス、ｎ＝３）、化合物（１９）を１０ｍｇ／ｋｇ投与するマウス（化合物（１９）１０ｍｇ／ｋｇ投与マウス、ｎ＝５）に分けた。なお、化合物（１９）は、Ｃｏｎｔｒｏｌの生理食塩水に配合された状態でマウスに投与した。
【０１６２】
マウスは、ハイリスクＭＭ細胞株であるＫＭＳ１１細胞（川崎医科大学  大槻剛巳教授より供与）を３．０×１０7  ｃｅｌｌｓ皮下注射し腫瘍を形成させたｘｅｎｏｇｒａｆｔモデルを用いた。腫瘍体積が１００ｍｍ３を超えたときをＤａｙ１とし、３日連続投与を行い、２週間マウスの体重と腫瘍径を測定した。その結果を図１に示す。
【０１６３】
図１に示すように、化合物（１９）１０ｍｇ／ｋｇをハイリスクＭＭ細胞株（ＫＭＳ１１）ｘｅｎｏｇｒａｆｔモデルに投与すると、体重は減少しない一方で、有意に腫瘍の増殖が抑制されることが確認された。
【０１６４】
＜試験３＞
（腫瘍細胞の増殖抑制の確認）
まず、初日、（Ｄａｙ０）に、骨髄腫細胞であるＭＵＭ２４細胞（服部豊らが樹立）を１．５×１０ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに調整し、１．９５ｍＬずつ培地（１０％ウシ胎児血清、１％ペニシリン・ストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ−１６４０培地）にまいた。その後、３７℃、ＣＯ２濃度５．０％でオーバーナイト、インキュベートした。Ｄａｙ１に、培地に溶媒（１０％ＤＭＳＯ、４０％ＥｔＯＨ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）に溶解した化合物（１０）、化合物（１６）、化合物（１８）、化合物（１−１）、化合物（１−２）、化合物（１−３）、化合物（２−１）、化合物（２−２）、化合物（２−３）又は化合物（２−４）を最終濃度０、０．５、５、２０、５０μＭになるように調節し、５０μＬずつまいた。さらに、培地中の溶媒濃度がいずれのｗｅｌｌも均一（最終濃度０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨ）になるように培地に溶媒を加えた。その後、３７℃、ＣＯ2濃度５．０％でインキュベートした。化合物（１６）、化合物（１８）、化合物（１−１）又は化合物（１−３）は、２４時間経過時（Ｄａｙ２）、４８時間経過時（Ｄａｙ３）、７２時間経過時（Ｄａｙ４）にセルカウントを行った。セルカウントはＴＣ２０全自動セルカウンターにより行った。各時間における細胞数を図２に示す。また、化合物（１０）、化合物（１６）、化合物（１８）、化合物（１−２）、化合物（２−１）、化合物（２−２）、化合物（２−３）又は化合物（２−４）の７２時間経過時（Ｄａｙ４）にセルカウントを行った。各濃度の細胞生存率を図３に示す。図２及び３中、「ｃｏｎｔｒｏｌ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地でインキュベートした結果を示す。なお、以下、細胞生存率は、細胞に対してトリパンブルー染色を行い、下式に基づき算出した。
細胞生存率（％）＝各化合物添加区における染色細胞数／ｃｏｎｔｒｏｌにおける染色細胞数×１００
【０１６５】
図２、図３に示すように、化合物（１０）、化合物（１６）、化合物（１８）、化合物（１−１）、化合物（１−２）、化合物（１−３）、化合物（２−１）、化合物（２−２）、化合物（２−３）又は化合物（２−４）が腫瘍細胞であるＭＵＭ２４細胞の増殖を抑制する効果が確認された。
【０１６６】
また、化合物（１−１）、化合物（１−３）についても、同様の試験を行った（ただし、資料最終濃度は０、２．５、５、１０、又は２０μＭとなるように試験を行った）。７２時間経過後の各濃度における細胞生存率を、図４に示す。図４中、「ｃｏｎｔｒｏｌ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地でインキュベートした結果を示す。
【０１６７】
図４から、化合物（１−１）又は化合物（１−３）が腫瘍細胞であるＭＵＭ２４細胞の増殖抑制効果が奏することが確認された。
【０１６８】
以上の結果から、化合物（１０）、化合物（１６）、化合物（１８）、化合物（１−１）〜（１−３）、化合物（２−１）〜（２−４）が、抗腫瘍剤として利用できることがわかった。
【０１６９】
以下の表１に、化合物（１０）、化合物（１６）、化合物（１８）、化合物（１−１）〜（１−３）、化合物（２−１）〜（２−４）のＩＣ５０を示す。なお、表１の「置換基」とは、各化合物が有する置換基のことを指す。
【０１７０】
【表１】
2017149658.tif 000051
【０１７１】
表１に示す結果から、化合物（１−１）〜（１−３）、化合物（２−１）〜（２−４）のスクリーニングにより、化合物（１−１）、化合物（１−３）がＭＵＭ２４に対して特に強い抗腫瘍作用を有することがわかった。また、化合物（１−１）〜（１−３）及び化合物（２−１）〜（２−４）は、置換基として−ＯＡｃ、−ＯＭｅ、−ＯＨ基のいずれかを有しているが、構造活性相関により、抗腫瘍作用が−ＯＡｃ＜−ＯＭｅ＜−ＯＨの順で強まる傾向にあることがわかった。以上のことから化合物（１０）、化合物（１−１）、化合物（１−３）は、これらの化合物それぞれが有する−ＯＡｃ基、−ＯＭｅ基、−ＯＨ基がベンゼン環に電子を供与することにより、電子を放出していると考えられる。そして、電子供与性の差から、抗腫瘍活性に差が出たと考えられる。
【０１７２】
＜試験４＞
（アポトーシス能の確認）
まず、初日（Ｄａｙ０）に、ＭＵＭ２４細胞をセルカウントし、細胞を１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに調製し、１．９５ｍＬずつまいた。その後、３７℃、オーバーナイト、ＣＯ２濃度５．０％でインキュベートした。その後（Ｄａｙ１）、培地に溶媒（１０％ＤＭＳＯ、４０％ＥｔＯＨ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）で溶解した化合物（１０）、化合物（１−１）、化合物（１−３）を試料最終濃度１０μＭ又は２０μＭになるよう調節し、５０μＬずつまいた。さらに、培地中の溶媒濃度がいずれのｗｅｌｌも均一（最終濃度０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨ）になるように培地に溶媒を加えた。次いで、３７℃、ＣＯ２濃度５．０％で４８時間又は７２時間インキュベートした。その後（Ｄａｙ３又はＤａｙ４）、ウェルから細胞を回収し、１３００ｒｐｍ、５ｍｉｎで遠心を行い、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回洗浄した。アスピレートを行った後、１×ｂｉｎｄｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（Ｂｉｏ  Ｖｉｓｉｏｎ社製）５００μＬを添加後、ＡｎｎｅｘｉｎＶ−ＦＩＴＣ（Ｂｉｏ  Ｖｉｓｉｏｎ社製）５μＬ、ＰＩ（Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ  Ｉｏｄｉｄｅ、Ｂｉｏ  Ｖｉｓｉｏｎ社製）５μＬを添加した後、フローサイトメトリーを行った。その結果を図５、６に示す。図５が、化合物（１０）、化合物（１−１）についてのフローサイトメトリーの結果である。図６が、化合物（１０）、化合物（１−３）についてのフローサイトメトリーの結果である。いずれも縦軸はＰＩ、横軸はＡｎｎｅｘｉｎＶ−ＦＩＴＣを示す。図５及び６中、「ｃｏｎｔｒｏｌ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地でインキュベートした結果を示す。
【０１７３】
図５、図６の結果から、化合物（１０）、化合物（１−１）、化合物（１−３）がアポトーシス誘導を引き起こすことがわかった。特に、化合物（１−１）が強くアポトーシス誘導を引き起こすことがわかった。
【０１７４】
＜試験５＞
まず、初日（Ｄａｙ０）に、ＭＵＭ２４細胞をセルカウントし、細胞を１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに調製し、１．９５ｍＬずつまいた。その後、３７℃、オーバーナイト、ＣＯ２濃度５．０％でインキュベートした。その後（Ｄａｙ１）、培地に溶媒（１０％ＤＭＳＯ、４０％ＥｔＯＨ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）で溶解した化合物（１−１）、化合物（１−３）を試料最終濃度１０μＭになるよう調節し（又は、Ｈ２Ｏ２を試料最終濃度１００μＭになるよう調節し）、５０μＬずつまいた。さらに、培地中の溶媒濃度がいずれのｗｅｌｌも均一（最終濃度０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨ）になるように培地に溶媒を加えた。次いで、３７℃、ＣＯ２濃度５．０％で２時間又は６時間インキュベートした。その後、ＲＯＳ（活性酸素種）検出試薬ＣＭ−Ｈ2ＤＣＦＤＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を３μＬずつ添加し、３０分インキュベートした。ウェルから細胞を回収し、１２００ｒｐｍで３分間遠心を行い、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回洗浄した。ＰＢＳで再溶解後、フローサイトメトリーによる解析を行った。その結果を図７に示す。縦軸は細胞数、横軸はＣＭ−Ｈ2ＤＣＦＤＡ（ＲＯＳの産生度）を示す。図７中、「ｃｏｎｔｒｏｌ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地でインキュベートした結果を示す。
【０１７５】
図７に示すように、化合物（１−１）、化合物（１−３）のいずれも、腫瘍細胞であるＭＵＭ２４細胞において活性酸素が発生したことがわかった。
【０１７６】
＜試験６＞
まず、初日（Ｄａｙ０）に、ＭＵＭ２４細胞をセルカウントし、細胞を１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに調製し、１．９ｍＬずつまいた。その後、３７℃、オーバーナイト、ＣＯ２濃度５．０％でインキュベートした。Ｄａｙ１に、ＮＡＣ（Ｎ−アセチルシステイン）、ＧＳＨ（グルタチオン）を３ｍＭに調節し、各ウェルに添加後、２時間インキュベートした。その後、培地に溶媒（１０％ＤＭＳＯ、４０％ＥｔＯＨ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）で溶解した化合物（１−１）、化合物（１−３）を試料最終濃度１０μＭになるよう調節し（又は、Ｈ２Ｏ２を試料最終濃度１００μＭになるよう調節し）、５０μＬずつまいた。さらに、培地中の溶媒濃度がいずれのｗｅｌｌも均一（最終濃度０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨ）になるように培地に溶媒を加えた。次いで、３７℃、ＣＯ２濃度５．０％で２時間インキュベートした。その後、ＲＯＳ（活性酸素種）検出試薬ＣＭ−Ｈ2ＤＣＦＤＡ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社製）を３μＬずつ添加し、３０分インキュベートした。ウェルから細胞を回収し、１２００ｒｐｍ、３分で遠心を行い、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回洗浄した。ＰＢＳで再溶解後、フローサイトメトリーによる解析を行った。その結果を図８に示す。縦軸は細胞数、横軸はＣＭ−Ｈ2ＤＣＦＤＡ（ＲＯＳの産生度）を示す。なお、ＮＡＣ及びＧＳＨは、いずれも抗酸化剤である。図８中、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地でインキュベートした結果を示す。「化合物（１−１）１０μＭ」又は「化合物（１−３）１０μＭ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地及び化合物（１−１）又は（１−３）の存在下でインキュベートした結果を示す。「化合物（１−１）／（１−３）＋ＮＡＣ３ｍＭ」又は「化合物（１−１）／（１−３）＋ＧＳＨ３ｍＭ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地、化合物（１−１）１０μＭ、化合物（１−３）１０μＭ、並びにＮＡＣ又はＧＳＨの存在下でインキュベートした結果を示す。「Ｈ２Ｏ２  １００μＭ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地及びＨ２Ｏ２の存在下でインキュベートした結果を示す。
【０１７７】
産生されたＲＯＳが、ＮＡＣ、ＧＳＨによって除去されたことが確認された。
【０１７８】
＜試験７＞
まず、初日（Ｄａｙ０）に、ＭＵＭ２４細胞をセルカウントし、細胞を１．５×１０５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに調製し、１．９５ｍＬずつまいた。その後、３７℃、オーバーナイト、ＣＯ２濃度５．０％でインキュベートした。その後（Ｄａｙ１）、ＮＡＣ（Ｎ−アセチルシステイン）、ＧＳＨ（グルタチオン）を３ｍＭに調節し、各ウェルに添加後、２時間インキュベートした。その後、培地に溶媒（１０％ＤＭＳＯ、４０％ＥｔＯＨ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｕｍ）で溶解した化合物（１９）、化合物（１−１）を試料最終濃度１０μＭになるよう調節し、５０μＬずつまいた。さらに、培地中の溶媒濃度がいずれのｗｅｌｌも均一（最終濃度０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨ）になるように培地に溶媒を加えた。次いで、３７℃、ＣＯ２濃度５．０％にインキュベートし、２４時間経過時（Ｄａｙ２）、４８時間経過時（Ｄａｙ３）、７２時間経過時（Ｄａｙ３）にセルカウントした。その結果を図９に示す。なお、ＮＡＣ及びＧＳＨは、いずれも抗酸化剤である。図９中、「ｃｏｎｔｒｏｌ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地でインキュベートした結果を示す。「ｃｏｎｔｒｏｌ＋ＮＡＣ３ｍＭ」又は「ｃｏｎｔｒｏｌ＋ＧＳＨ３ｍＭ」とは、０．２５％ＤＭＳＯ、１％ＥｔＯＨを含む培地及びＮＡＣ又はＧＳＨの存在下でインキュベートした結果を示す。
【０１７９】
化合物（１９）、化合物（１−１）は抗酸化剤の併用により腫瘍細胞の増殖が回復した。この結果より、化合物（１９）、化合物（１−１）が、ＲＯＳに依存した作用機序を有することが示唆された。
【０１８０】
＜試験８＞
（腫瘍細胞の増殖抑制の確認）
ＭＵＭ２４細胞以外の腫瘍細胞株ＫＭＭ１（川崎医科大学  大槻剛巳教授より供与）、ＫＭＳ１１（同  大槻教授より供与）、ＫＭＳ２１（同  大槻教授より供与）、ＫＭＳ２６（同  大槻教授より供与）、ＫＭＳ２７（同  大槻教授より供与）について、上記の試験３と同様に、化合物（１９）が増殖抑制能を有するか確認したところ、増殖抑制能が確認された。化合物（１９）のそれぞれの細胞に対するＩＣ５０を、以下の表２に示す。
【０１８１】
【表２】
2017149658.tif 000052
【０１８２】
ＭＵＭ２４細胞以外の腫瘍細胞株ＫＭＳ１１（同  大槻教授より供与）、ＫＭＳ２１、ＫＭＳ２６について、上記の試験３と同様に、化合物（１−１）、化合物（１−３）が増殖抑制能を有するか確認したところ、増殖抑制能が確認された。化合物（１−１）、化合物（１−３）及び化合物（１９）について、それぞれの細胞に対するＩＣ５０を、以下の表３に示す。
【０１８３】
【表３】
2017149658.tif 000053
【０１８４】
上記の結果より、化合物（１−１）、化合物（１−３）及び化合物（１９）は、ＭＵＭ２４細胞以外の腫瘍細胞株に対しても、抗腫瘍効果を有することがわかった。
【図１】
2017149658.tif 000060
【図２】
2017149658.tif 000061
【図３】
2017149658.tif 000062
【図４】
2017149658.tif 000063
【図５】
2017149658.tif 000064
【図６】
2017149658.tif 000065
【図７】
2017149658.tif 000066
【図８】
2017149658.tif 000067
【図９】
2017149658.tif 000068