(57)【要約】【課題】毛の成長を維持する効果を有する優れた育毛組成物を提供する。特に、室温保存下、及び、エタノール存在下でも配合成分が分離しにくく安定性の高い製剤を提供する。【解決手段】線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ−５）に対する阻害活性を有し、成長期から退行期への移行を遅延させて毛の成長期間を延長させる効果を有することができるフィチン酸を０．００５〜５質量％配合した、最大６０重量％のエタノール水溶液に於いて、アミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤を０．００１〜１．０％、および、親エタノール性セルロース誘導体を０．００１〜１．５％含有した育毛組成物は、配合成分が分離しにくく安定性の高いものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フィチン酸を有効成分とすることを特徴とする育毛活性剤。
【請求項２】
線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ−５）の作用を阻害する活性を有することを特徴とする請求項１に記載の育毛活性剤。
【請求項３】
ＦＧＦ−５により減退した毛乳頭細胞のＡＬＰ活性を回復させる効果を有することを特徴とする請求項２に記載の育毛活性剤。
【請求項４】
毛周期における成長期から退行期への移行を遅延させることで、毛の成長期間を延長させることを特徴とする請求項３に記載の育毛活性剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の育毛活性剤を、０．００５〜５重量％含有することを特徴とする育毛剤組成物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の育毛活性剤を、０．１〜１重量％含有することを特徴とする育毛剤組成物。
【請求項７】
エタノールを３０〜６０重量％配合し、かつ、アミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤、および、親エタノール性セルロース誘導体を含有することを特徴とする請求項５〜６の何れかに記載の育毛剤組成物。
【請求項８】
アミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤としてジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウムを０．００１〜１．０重量％含有する請求項７に記載の育毛剤組成物。
【請求項９】
親エタノール性セルロース誘導体としてヒドロキシエチルセルロースを０．００１〜１．５重量％含有する請求項７に記載の育毛剤組成物。
【請求項１０】
ワレモコウエキス、エイジツエキス、ビタミンＥアセテート、パントテニルエチルエーテル、ニンジンエキス、イチョウエキス、センブリエキス、ビワ葉エキス、グリチルレチン酸およびグリチルリチン酸ジカリウムから成る群より選ばれる成分の１種または２種以上を含有する請求項５〜９の何れかに記載の育毛組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、線維芽細胞増殖因子５作用を阻害するフィチン酸を含有する育毛剤組成物に関し、更に詳細には、高いエタノール濃度でありながら、室温保存時においてもフィチン酸の分離等の問題の生じない育毛組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】  従来、開発されてきた育毛・養毛剤の多くは、発毛を阻害する過剰皮脂分泌を抑制したり、頭皮などの血行不良を解消したり、あるいは男性ホルモンの作用を抑制することにより発毛を促すことを狙いとしている。商業的には医薬品として既に医薬品として、ミノキシジル、フィナステリド、塩化カプロニウムが実用化されている。また、アデノシン、イチョウエキス、センブリエキス等が医薬部外品、化粧品分野での育毛成分として利用されている。他方、マツエキスに見られるように古来より植物由来の発育毛剤が存在しており、その育毛作用の実体は詳らかでないが、民間療法として用いられてきた。しかしながら、このように多数の育毛・養毛剤が存在しているが、薄毛・脱毛に対して普遍的に効果を示すものは今のところ存在せず、薄毛・脱毛の種類による効果の個人差も大きい。  このような現状から、高齢化と多ストレスの社会を反映して薄毛・脱毛に対し、普遍的に効果を発揮する育毛・養毛剤のニーズは、依然として、また今後とも高いと言える。【０００３】  毛は一定の速さで絶えず成長するのではなく、成長期と休止期を繰返しながら成長する。成長期から休止期までの毛の成長と脱毛のサイクル（毛周期）は、身体部位および人間の場合には毛１本ごとに異なる繊細な生体機構であり、さまざまな遺伝子およびその産物によって制御されている。毛包器官の毛周期に影響を与える物質の一つとして、トランスフォーミング成長因子β（ＴＧＦβ）は、毛周期を成長期から退行期、休止期へ移行させる作用を示す。その作用を抑制するアンタゴニストとしてフラバノノールが見出され育毛成分として使用されている（特許文献１）。【０００４】  さらに、上記ＴＧＦβとは異なるサイトカイン、線維芽細胞増殖因子５（以下、「ＦＧＦ−５」とも言う）の生物活性にも毛周期の制御があることを見出された。ＦＧＦ−５タンパク質は、多彩な生理作用を示す線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）ファミリーに属する。本発明者らの研究により、ＦＧＦ−５は、毛の成長を阻害し、毛周期を成長期から退行期へ移行させる作用を有していることが明らかとなった。成長期の毛胞に大量に発現するＦＧＦ−５の短鎖形分子であるＦＧＦ−５Ｓは、ＦＧＦ−５に対しアンタゴニスト活性を示すことにより、成長期から退行期への移行を遅らせ、毛成長を促進することも明らかとなった（非特許文献１〜４参照）。
加えて、ワレモコウエキス、エイジツエキス、褐藻エキス、ビワ葉エキスにＦＧＦ−５タンパク質とその受容体であるＦＧＦＲ１との結合を特異的に阻害することを見出し、そのうち、ワレモコウエキスは脱毛を改善することが示された（非特許文献５）。【０００５】フィチン酸は、米ぬか・小麦のふすま等から得られるリン酸化合物である。フィチン酸は、キレート剤、ｐＨ調節剤、あるいは、酸化防止剤として食品添加物、あるいは、化粧品・医薬部外品の原料として使用されている。さらに、フィチン酸は、別名としてイノシトール６リン酸（略してＩＰ６、或いは、化学名としてｍｙｏ−Ｉｎｏｓｉｔｏｌ  Ｈｅｘａｋｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ）と称し、抗腫瘍活性が期待できる成分（非特許文献６）として健康食品にも配合されている。【０００６】  フィチン酸を配合する育毛剤は特許文献２に記載されている。しかしながら、当文献では育毛効果を動物、および、ヒトで評価しているが、試験検体はフィチン酸を配合したヘアケア用製剤であり、フィチン酸以外にも複数の成分が配合されており、それら複数成分の相乗作用であることも否定できず、その意味で厳密にフィチン酸の効果が証明されたとは言い難い。加えて、フィチン酸の作用機序に関する評価試験は一切実施されておらず、その面でも効果の証明としては完全とは言い難い。【０００７】  一般に、フィチン酸を配合する製剤では、その機能性を現出せしめる目的で、０．００５〜２重量％程度の濃度のフィチン酸を添加している。一般的にフィチン酸は水溶性のため、９５％以上の水より構成されるフィチン酸製剤は、容易に調製可能であった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−２６８１２公報
【特許文献２】特開平３−７４３１８号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】Ｏｚａｗａ  Ｋ，Ｓｕｚｕｋｉ  Ｓ，Ａｓａｄａ  Ｍら  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２９２６２−２９２７１（１９９８）
【非特許文献２】Ｓｕｚｕｋｉ  Ｓ，Ｋａｔｏ  Ｔ，Ｔａｋｉｍｏｔｏ  Ｈら  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１１：９６３−９７２（１９９８）
【非特許文献３】Ｓｕｚｕｋｉ  Ｓ，Ｏｔａ  Ｙ，Ｏｚａｗａ  Ｋ，Ｉｍａｍｕｒａ  Ｔ  Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１４：４５６−４６３（２０００）
【非特許文献４】Ｏｔａ  Ｙ，Ｓａｉｔｏｈ  Ｙ，Ｓｕｚｕｋｉ  Ｓら  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２９０：１６９−１７６（２００２）
【非特許文献５】前田、山本、石川、伊藤、荒瀬  西日本皮膚  ６９巻１号：８１−８６（２００７）
【非特許文献６】Ｖｕｃｅｎｉｋ，Ｉ．ＡＮＤ  Ｓｈａｍｓｕｄｄｉｎ  Ａ．Ｍ．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｇａｉｎｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  ｂｙ  Ｄｉｅｔａｒｙ  ＩＰ６  ＡＮＤ  Ｉｎｏｓｉｔｏｌ．Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  ＡＮＤ  Ｃａｎｃｅｒ，Ｖｏｌｕｍｅ  ５５，ｐｐ１０９−１２５（２００６）．
【非特許文献７】Ｏｚａｗａ  Ｋ，Ｓｕｚｕｋｉ  Ｓ，Ａｓａｄａ  Ｍ  ら  Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２７３：２９２６２−２９２７１（１９９８）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】  本発明者らは、ＦＧＦ−５作用の研究過程で、この作用を阻害する活性を持つ物質が優れた効果を発揮する育毛剤として利用できるとの着想を得て、毛成長に抑制的に働くＦＧＦ−５作用に対し、阻害作用を有するか、またはアンタゴニストとなる物質を見出すべく、鋭意研究を進めた。その結果、本発明者らは特定の植物由来有機化合物、すなわち、フィチン酸がその目的に合致することを見出した。【００１１】  さらに、フィチン酸を配合した育毛組成物の品質保存性を考慮するとき、水溶液製剤は防腐が問題となる。なぜなら、フィチン酸を配合する製剤では、その機能性を現出せしめる目的で、０．００５〜３重量％程度の濃度のフィチン酸を添加するが、フィチン酸は水溶性のため、一般的には９０％以上の水より構成されるからである。この際、一般的には、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン等の抗菌防腐剤を添加するが、昨今の消費者の嗜好を考慮すると防腐剤無添加が望ましい。そこで解決策としてアルコール類が配合される。エタノールの場合は３０重量％以上添加することが望ましい。加えて、育毛剤においては、使用される有効成分の多くが疎水性であり、これら有効成分が効果を示す濃度まで可溶化する目的で上限５０〜６０重量％のエタノールを添加して製剤化することが一般的である。さらに、エタノールは経皮吸収促進剤としての効果を有しており育毛剤製剤の基礎成分として配合することが好ましい。しかしながら、フィチン酸は高濃度のエタノール水溶液には溶けず、とくに室温保存下で分離してしまうという現象が生じることを見出した。そこで、有効量のフィチン酸を可溶化させながら、防腐状態を保ち、製剤中の成分が不溶化して分離することのないフィチン酸製剤の提供が求められ、本発明はこのような製剤の提供を課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】  本発明は、ＦＧＦ−５による毛周期制御機構に基づく優れた育毛・養毛効果を発揮し、しかも使用感、および、物理的安定性に優れた育毛剤を提供することを目的とする。本発明において、フィチン酸はＦＧＦ−５作用を阻害する活性があることが示され、さらに、毛周期における成長期から退行期へ移行を遅延させて、成長期を延長させることを示した。その後、フィチン酸製剤の溶剤組成等について、鋭意研究を行った結果、特定濃度のアミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤、および、親エタノール性セルロース誘導体を配合することにより、有効量のフィチン酸および３０〜６０重量％のエタノールを配合した水溶液製剤においてもフィチン酸またはその他の成分が不溶化して分離することなく長期間安定であり、かつ、使用感も良好であることを見出し、本発明を完成した。
【発明の効果】
【００１３】  本発明により、育毛効果が確実に期待できるフィチン酸を有効成分として含有する外用育毛剤を提供することができる。特に、エタノールを配合していながら沈殿が生成せずに物理的に安定で、かつ、使用感も良好な外用育毛剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、ＦＲ−Ｂａ／Ｆ３培養細胞のＦＧＦ−５依存的、ならびにＩＬ−３依存的な増殖に及ぼすフィチン酸の阻害作用を示すグラフである。縦軸は、ＦＧＦ−５依存的増殖、ならびに、ＩＬ−３依存的増殖それぞれについて、フィチン酸無添加時細胞増殖を１００としたときの指数である。（実施例１）
【図２】図２は、ヒト毛乳頭培養細胞のＦＧＦ−５依存的なアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性の低下に及ぼすフィチン酸の抑制作用を示すグラフである。縦軸は、フィチン酸無添加時、及び、フィチン酸添加時のそれぞれの濃度における、ＦＧＦ−５無添加区の細胞当りＡＬＰ活性を１００としたときの指数である。（実施例２）
【図３】図３は、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験における１８、２０、及び、２２日目のマウス背部の皮膚切片写真である。上からベヒクルのみ、０．０３％、０．１％、０．３％、１％、そして、３％のフィチン酸ナトリウムをベヒクルに溶解した試験液をそれぞれ塗布した。（実施例３）
【図４】図４は、図３に示したそれぞれの皮膚切片について、毛周期中のどの時期かを診断した図である。Ａは成長期（Ａｎａｇｅｎ）、Ｃは退行期（Ｃａｔａｇｅｎ）、Ｔは休止期（Ｔｅｌｏｇｅｎ）を示す。（実施例３）
【発明を実施するための形態】
【００１５】  本発明の育毛組成物において、有効成分であるフィチン酸は、０．００５〜５重量％（以下、単に「％」で示す）の範囲で配合することが好ましい。本発明で使用されるフィチン酸は、５０％濃度で供給されるフィチン酸水溶液を最終的に中和して配合しても良いしフィチン酸ナトリウム等の塩を配合しても良く、製剤中で溶解している状態であれば良い。例示的には築野食品工業株式会社の販売しているフィチン酸５０％水溶液（ＩＰ６）、シグマアルドリッチ社の供給するフィチン酸ナトリウム塩水和物が好ましい。
【００１６】  育毛効果を検討するには、培養細胞などを用いるｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、毛の成長器官である毛包を単離培養して評価するｅｘ  ｖｉｖｏ試験、生体での評価を行うｉｎ  ｖｉｖｏ試験、さらに、被験者を募り、実際に試してみる臨床試験がある。これら全てを行うことが理想であるが、諸事情に鑑みて、被検物質の本質に沿った必要十分な試験を実施するのが通例である。本発明では、下記の通り、２つのｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験、及び、１つのｉｎ  ｖｉｖｏ試験を実施した。
【００１７】（線維芽細胞増殖因子５（ＦＧＦ−５）の阻害）
ＦＧＦ−５は、毛の成長を阻害し、毛周期を成長期から退行期へ移行させる作用を有していることが明らかとなっている。一方、毛包の根元にある毛乳頭は、毛母細胞の増殖や分化を調節することにより毛の成長を制御している。退行期になると毛母細胞は消失してしまうが、毛乳頭細胞は活動が低下するもののその数は減らない。次の成長期には、毛乳頭細胞が再び活性化し、その作用によって毛母細胞が新たに増殖・分化し始める。毛乳頭細胞そのものは変わっていないため、前の成長期と同じ太さの毛を作ることができる。したがって、成長期から退行期・休止期に移る引き金の役割を担っているＦＧＦ−５の作用を何らかの方法で抑制すれば、成長期だけが延長される。よって、成長期をこのように長くする物質は、優れた育毛・養毛効果を発揮すると期待される。
【００１８】  実際、成長期の毛胞に大量に発現するＦＧＦ−５の短鎖形分子であるＦＧＦ−５Ｓは、ＦＧＦ−５に対しアンタゴニスト活性を示すことにより、成長期から退行期への移行を遅らせ、毛成長を促進することが報告されている（非特許文献７）。本発明において、フィチン酸がＦＧＦ−５作用を阻害する活性を有することを見出した。後述するように、その抽出物による阻害作用は、ＦＧＦ−５タンパク質の受容体であるＦＧＦＲ１を発現するＢａＦ３培養細胞  （ＦＲ−Ｂａ／Ｆ３細胞）を用いて、ＦＧＦ−５による細胞増殖促進作用への影響を、陰性対象としてインターロイキン３（ＩＬ−３）による細胞増殖促進作用と比較することによって確認された。
【００１９】（毛乳頭細胞に対する影響）
毛乳頭は毛包の毛球部の最奥部に存在し、その周囲にある毛母細胞を活性化し増殖させ、毛繊維を形成していくと考えられている。毛乳頭は成長期においてＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）を発現することが報告されている。毛乳頭におけるＡＬＰの機能はまだ解明されていないが、毛形成能と密接に関連するとされる。毛乳頭の二次元培養細胞において、Ｗｎｔ経路が活性化されるとＡＬＰ発現が顕著となることが知られている。発明者らはこのＷｎｔ経路の活性化された毛乳頭培養細胞にＦＧＦ−５を添加することで、ＡＬＰ活性が低下することを見出した。これはＦＧＦ−５が毛の成長期を終了させる事象を反映しているものと考えられる。
本発明では、上述した条件下、ＦＧＦ−５によりＡＬＰ活性が低下した毛乳頭培養細胞に、さらに、フィチン酸を添加して培養したところ、フィチン酸無添加の時に低下していたＡＬＰ活性が回復した。これにより、フィチン酸がＦＧＦ−５の作用を阻害した結果、ＦＧＦ−５によるＡＬＰ活性の低下が防がれることが確認された。
【００２０】  （ｉｎ  ｖｉｖｏ試験）
上記２試験は培養細胞を用いた試験であり、実際にフィチン酸の育毛作用を最終的に判断するには、ｉｎ  ｖｉｖｏ試験によって確認する必要がある。通常はマウスまたはラットの体毛による評価を実施する。ヒトの頭皮のように毛一本一本の毛周期がばらばらな場合と異なり、マウスまたはラットの体毛は比較的毛周期が揃っており、その成長度合いを統計的に把握しやすい。さらに、休止期にある体毛において、抜毛することにより同調的に成長期を誘導できることが知られており、毛周期のより揃った実験条件が獲得できる。抜毛の方法には剃毛、手による引き抜き、脱毛クリーム、脱毛テープ等の手法がある。このうち、適度かつ適正に皮膚に刺激を与え確実に成長期を誘導するという意味で、剃毛、脱毛テープが好ましい。本発明では、脱毛テープによる抜毛により成長期を同調的に誘導し、毛包組織内にＦＧＦ−５の発現が増加する成長期後半にあたると目される抜毛後７日後から同マウス背部にフィチン酸を１日１回塗布した。マウスの毛周期が成長期から退行期へと移行する時期において、塗布部位の皮膚を採取し、光学顕微鏡下にて皮膚切片像を観察した。その結果、フィチン酸塗布群では、ベヒクルを塗布した対照群と比べると、毛包の成長期から退行期への移行が遅れることが示された。
【００２１】  上記３試験の結果から、総合的に判断して、フィチン酸は、ＦＧＦ−５の作用による成長期から退行期へ移行する時期を遅延して、結果的に成長期を延長させることで育毛活性を示すことが確認された。
【００２２】（育毛剤組成物）
発毛・育毛の生理メカニズムを担う毛包の機能とこれを制御する分子の作用に立脚する育毛物質を有効成分に含む育毛・養毛剤でなければ、満足すべき発育毛効果を得られない。かかる観点から完成された本発明の育毛剤組成物は、ＦＧＦ−５の作用を阻害するフィチン酸を有効成分として含有する。本発明の育毛剤組成物は、含有するフィチン酸の作用が毛成長、特に、毛周期における成長期から退行期への移行に関する分子的機作に裏づけられているという特徴を有している。
【００２３】  本発明の育毛剤組成物は、有効成分であるフィチン酸とともに、通常、毛髪用化粧品組成物または育毛用組成物に使用される原料を所定量、常法に従って混合などの操作を施すことにより製造することができる。
育毛剤全量に対するフィチン酸の添加量は０．００５〜５重量％の範囲で他の成分との相溶性も考慮して使用して良いが、育毛効果をより期待できるという観点から０．００３〜３重量％が好ましく、育毛効果を確実に期待できるという観点から０．１〜１重量％がより好ましい。０．００５％未満では所期の発育毛促進効果が得られず、逆に５％を超えると、その効果は頭打ちであるにもかかわらず、コストが上昇するだけである。
【００２４】  このフィチン酸を溶解するための溶剤は、水、あるいは、エタノールおよび水から成る混合溶媒である。この溶剤は、水が４０〜１００％、エタノールが０〜６０％存在することが好ましく、水が４０〜７０％、エタノールが３０〜６０％存在することが好ましい。エタノールは多過ぎるとフィチン酸が溶解せず分離する恐れが生ずる他、製剤の使用感が低下することが懸念され、逆に、エタノールが少な過ぎると防腐効果が低下する他、フィチン酸以外の育毛成分の可溶化力が低下する。
【００２５】  本発明中の育毛剤製剤では、上記のフィチン酸溶液に一種以上のアミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤を０．００１〜１．０％を配合する。上記製剤において使用されるアミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤としては、ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウムを使用することができ、商品としてはペリセアＬ−３０（旭化成ケミカルズ社）が好ましく、０．０２〜０．５％で配合することが特に好ましい。
【００２６】  更に、本発明中の育毛剤製剤では、上記のフィチン酸溶液に一種以上の親エタノール性セルロース誘導体を０．００１〜１．５％配合する。上記製剤において使用される親エタノール性セルロース誘導体としては、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースを使用することができるが、特にヒドロキシエチルセルロースが好ましく、商品としてはＨＥＣ−ＳＥ−９００（ダイセルファインケム社）が好ましく、０．０１〜０．７５％で配合することが特に好ましい。
【００２７】  更に、本発明の育毛組成物に添加、配合することが好ましい薬効成分としては、ワレモコウエキス、エイジツエキス、ビタミンＥアセテート、パントテニルエチルエーテル、ニンジンエキス、イチョウエキス、センブリエキス、ビワ葉エキス、グリチルレチン酸およびグリチルリチン酸ジカリウムから成る群より選ばれた成分が挙げられる。これら薬効成分は１成分でも複数成分を添加しても良い。これら選択成分の添加量は、特に制約はなく、使用感やフィチン酸の安定性あるいは溶剤系組成等を考慮しながら実験的に定めることができる。例えば、ワレモコウエキスは、最終組成物中で０．５〜５％程度となるよう配合することが好ましい。
【００２８】  本発明の育毛組成物は、水１００％に、あるいは、エタノールを含む水溶液中にアミノ酸系２鎖３親水基型界面活性剤および親エタノール性セルロース誘導体を配合した製剤に、有効性を示す濃度のフィチン酸を加え、更に、他に必要な育毛活性成分や補助成分を加え、常法により攪拌、混合することにより調製されるが、その場合、ｐＨを４．５〜６．２の範囲に維持することが必要である。すなわち、フィチン酸を単に水系溶剤中に加えた場合の液性は、強度の酸性を示すが、その状態で製剤化した場合、皮膚に対して著しい刺激を与え使用に耐えなくなる。したがって、弱酸性である皮膚のｐＨ（約５．３）付近に調整することが好ましい。一方、製剤をアルカリ性とした場合は、エタノールとの相溶性が急激に低下するため、フィチン酸の不溶化、分離が促進する恐れが生じる他、皮膚に対する刺激性が高まるという問題も生ずる。
【００２９】  本発明の育毛組成物のｐＨ調整は常法に従っておこなわれ、ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等を使用することが好ましい。このうち、エタノールの可溶性が良好の理由から水酸化カリウムが特に好ましい。  さらに、植物抽出液等の液性が不安定な成分を配合する際は、クエン酸緩衝液、乳酸緩衝液、リン酸緩衝液等を添加しても良い。
【００３０】  本発明の育毛剤組成物においては、上記した成分の他、一般の外用剤に使用される種々の活性成分や補助成分、例えば、血管拡張剤（ニコチン酸ベンジル、センブリ抽出液、オタネニンジンエキス、トウガラシチンキなど）、抗炎症剤（グアイアズレンなど）、角質溶解剤（尿素、サリチル酸など）、殺菌剤（グルコン酸クロルヘキシジン、イソプロピルメチルフェノール、第４級アンモニウム塩、ピロクトンオラミンなど）、保湿剤（ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸など）、各種動植物（イチイ、ボタンピ、カンゾウ、オトギリソウ、附子、カワラヨモギ、コンフリー、アシタバ、サフラン、サンシシ、ローズマリー、セージ、モッコウ、セイモッコウ、ホップ、プラセンタ等）の抽出物、ビタミン類、抗酸化剤（ジブチルヒドロキシトルエン、ピロ亜硫酸ナトリウム、トコフェロール、エデト酸ナトリウム、アスコルビン酸、イソプロピルガレートなど）、溶解補助剤（アジピン酸ジイソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、各種植物油、各種動物油、アルキルグリセリルエーテル、炭化水素類など）、代謝賦活剤（パンテノールなど）、増粘剤（水溶性高分子など）、粘着剤、香料、清涼化剤（メントール、ハッカ油、カンフルなど）などの通常使用される成分を本発明の効果を損なわない範囲で配合することができる。
【００３１】  本発明に係る育毛剤組成物は、液剤状、乳剤状、ゲル状、クリーム状、軟膏状、フォーム状、ミスト状、ジェル状など、種々の剤型をとり得る。具体的にはヘアトニック、ヘアジェル、ヘアクリーム、ヘアトリーメントローション、ヘアフォーム、ヘアミスト、ヘアシャンプー、ヘアリンスなどの形態で提供される。
【００３２】  以下、本発明について図面とともに実施例を挙げてさらに説明を加えるが、本発明がこのような実施例にのみに限定されるものではない。なお特にことわらない限り、％での表示は重量％である。また、実施例１および実施例２で使用された主な試薬の製造先は下記の通りである。
【００３３】・ＦＧＦ−５：オリエンタル酵母（委託）
・ＩＬ−３：ペプロテック
・フィチン酸ナトリウム：シグマ―アルドリッチ
・ヘパリン：シグマ―アルドリッチ
・Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔ  Ｋｉｔ８：同仁化学研究所
・ＧＳＫ３  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＩＸ：カルビオケム
・ＮＰ−４０：和光純薬
・Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ：和光純薬
・ＭｇＣｌ２（六水和物）：関東化学
・ＮＡＤＰ：エンゾライフサイエンス
・リン酸ナトリウム：和光純薬
・ＩＮＴ：同仁化学研究所
・Ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ（ＮＡＤＨ）：旭化成ファーマ
・ＡＤＨ：オリエンタル酵母
【実施例１】
【００３４】（フィチン酸のＦＧＦ−５阻害効果）
ＦＧＦ−５およびインターロイキン−３（ＩＬ−３）に応答性のあるＦＲ−Ｂａ／Ｆ３細胞を、１０％ウシ胎児血清、抗生物質を含む培養液中で培養した。ＩＬ−３は、ＦＧＦ−５非依存的にＦＲ−Ｂａ／Ｆ３細胞の増殖を促進するサイトカインである。なお、本実施例ではフィチン酸ナトリウムを使用した。９６穴培養用プレートに、最終濃度が３．７５ｍｇ／ｍＬから５段階の３倍連続希釈となるようにフィチン酸濃度区を設定した。そこに最終濃度７５ｎｇ／ｍＬのＦＧＦ−５および５μｇ／ｍＬのヘパリン、または、最終濃度２ｎｇ／ｍＬのＩＬ−３をそれぞれ添加した。最後に、すべてのウェルにＦＲ−Ｂａ／Ｆ３細胞を最終濃度２．５ｘ１０５細胞／ｍＬとなるように播種し、１０％ウシ胎児血清、抗生物質を含む培地中、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で３日間培養した。その後、各ウェルにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔ  Ｋｉｔ８を１０μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で２時間培養して発色後、マイクロプレートリーダー（４５０ｎｍ）を用いて吸光度を測定し細胞増殖を調べた。【００３５】  その結果を図１に示す。フィチン酸は、ＦＲ−Ｂａ／Ｆ３細胞におけるＩＬ−３依存的な増殖に比べて比較して、ＦＧＦ−５依存的な増殖を低濃度で阻害した。その濃度差は５０％増殖阻害において２３倍であった。これらの結果からフィチン酸は選択的にＦＧＦ−５を阻害する活性を持つことが示された。
【実施例２】
【００３６】（毛乳頭培養細胞におけるフィチン酸の効果）
本発明で用いられた毛乳頭培養細胞は３５歳の健常人の頭皮から採取した毛乳頭を培養して得られた。また、本実施例でもフィチン酸ナトリウムを使用した。９６穴の細胞培養用プレートに、最終濃度が０．０２５ｍｇ／ｍＬ、０．０７５ｍｇ／ｍＬ、０．２５ｍｇ／ｍＬ、０．７５ｍｇ／ｍＬとなるようにフィチン酸濃度区を設定した。それぞれのフィチン酸濃度区について、最終濃度が１０００ｎｇ／ｍＬから０．１ｎｇ／ｍＬまで９段階の３倍連続希釈となるようにＦＧＦ−５を添加した。ＦＧＦ−５を添加したウェルには同時に最終濃度５μｇ／ｍＬのヘパリン、及び、最終濃度５００ｎｇ／ｍｌのＧＳＫ３  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＩＸを添加した。最後に、すべてのウェルに上記の毛乳頭培養細胞を最終濃度５ｘ１０４細胞／ｍＬとなるように播種し、１０％ウシ胎児血清、抗生物質を含む培地中、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で３日間培養した。【００３７】  その後、各ウェルにＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔ  Ｋｉｔ８を１０μＬ添加し、３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で１時間培養して発色後、マイクロプレートリーダー（４５０ｎｍ）を用いて吸光度を測定し細胞増殖を調べた。次に、９６穴プレートを生理食塩水により洗浄した後、アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）の計測を行った。すなわち、各ウェルにＮＰ−４０の１％水溶液を２７．５μＬ、０．５ＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．８）に溶解した１０ｍＭのＭｇＣｌ２溶液を７．５μＬ、１ｍＭのＮＡＤＰ水溶液を１５μＬを添加した。３７℃で３０分間静置後、０．５Ｍのリン酸ナトリウム水溶液（ｐＨ８．８）を７．５μＬ添加した。さらに、２．５ｍｇ／ｍＬのＩＮＴ（予め１２％エタノール水溶液に溶解しておく）溶液を７０μＬ、０．０８ｍｇ／ｍＬのＤｉａｐｈｏｒａｓｅ（ＮＡＤＨ）水溶液を１５μＬ、１．０ｍｇ／ｍＬのＡＤＨ（予め５０％グリセリン水溶液に溶解しておく）溶液を７．５μＬ添加した。３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で５分間発色後、マイクロプレートリーダー（４９０ｎｍ）で吸光度を測定しＡＬＰの活性を調べた。測定されたＡＬＰ活性を細胞増殖測定値で割って補正し、細胞当りのＡＬＰ活性とした。【００３８】  結果を図２に示す。グラフ中、最も左にプロットした値は、毛乳頭細胞を培養する際、Ｗｎｔ経路活性剤であるＧＳＫ３  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＩＸ、および、ＦＧＦ−５を添加しなかった場合である。これに比較してＧＳＫ３  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ＩＸを添加した場合（かつ、ＦＧＦ−５が０ｎｇ／ｍＬの場合）、細胞当りのＡＬＰ活性は飛躍的に向上した。フィチン酸を０．０２５ｍｇ／ｍＬ〜０．２５ｍｇ／ｍＬ添加した場合、フィチン酸無添加の場合と同様に、ＦＧＦ−５が増加するにつれて細胞当りのＡＬＰ活性は低下した。これに対してフィチン酸を０．７５ｍｇ／ｍＬ添加するとＦＧＦ−５による細胞当りのＡＬＰ活性低下が抑えられてＦＧＦ−５無添加時の値をほぼ維持した。これらの結果から、フィチン酸はＦＧＦ−５によって低下するＡＬＰ活性を回復させることが示された。
【実施例３】
【００３９】（ｉｎ  ｖｉｖｏ試験）
毛周期が休止期にある８週齢のＢＬＣ６マウス♂（日本ＳＬＣ社より購入）の背部（２ｘ６ｃｍ）を、抜毛テープで局所的に抜毛し成長期を誘導した。動物を各試験群はベヒクル単独、および、フィチン酸塗布群として０．０３％群、０．１％群、０．３％群、１．０％群、３．０％群を設定した。抜毛日を０日として７日目から、ベヒクル（エタノール：プロピレングリコール：水＝１：１：８）に所定量を溶解したフィチン酸ナトリウム（シグマ−アルドリッチ）を１日１回外用塗布した。外用塗布量は１匹１回当たり７０μＬであった。各試験群において１８、２０、２２日目に動物を頸椎脱臼によりサクリファイスして塗布部位の皮膚皮下組織を採取した。採取した皮膚皮下組織は、ＯＣＴコンパウンドに埋入し、液体窒素で凍結させた。クリオスタット（マイクロ・エッヂ・インスツルメント社製）を用いて、毛包が毛根部から毛幹先端まで完全に見える方向（長軸方向）に厚さ８μｍで薄切し、スライドグラス（マツナミ社製）に貼り付けた。４％パラホルムアルデヒドで固定後、ＨＥ染色を行ない、封入後、光学顕微鏡下にて皮膚切片像を観察した。【００４０】  図３に示すように写真撮影を行なった。さらに、図３写真から個々の毛周期を成長期（Ａｎａｇｅｎ）、退行期（Ｃａｔａｇｅｎ）、休止期（Ｔｅｌｏｇｅｎ）に分類した。図３、図４から明らかなように、フィチン酸塗布によって、毛成長は成長期から退行期・休止期への移行が遅延した。特に０．１％〜１．０％で成長期から退行期への移行の遅延が顕著であり、その中でも０．１％塗布群において最も顕著であった。
【実施例４】
【００４１】  下記組成のフィチン酸配合液を常法により製造した。
【表１】
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【００４２】  エタノールを４０％配合する製剤でフィチン酸の溶解性を検討した。表１で示すようにフィチン酸を全体の０．０１％配合する製剤（処方１）は、たとえエタノールを４０％配合しても安定な水溶液製剤が得られた。これに対して０．５％、或いは、２％配合する製剤（処方４、５）は沈殿が生じてしまい、このままの製剤としては不適当と言えた。また、０．１％、或いは、０．３％配合する製剤（処方２、３）では製造直後に透明ではあるが、２日後には白濁が生じておりこのままの製剤としては不適当であった。
【実施例５】
【００４３】  下記組成の育毛剤（処方６）を常法により製造した。
フィチン酸５０％水溶液  ０．２ｇ
トウガラシチンキ  ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール  ３．０ｇ
エタノール  ４０．０ｇ
ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウム  ０．２ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム  ０．０５ｇ
ヒドロキシエチルセルロース  ０．３ｇ
クエン酸  ０．０１７ｇ
水酸化カリウム  ０．０６ｇ
精製水  残部（全量を１００ｇとする）【００４４】  本発明品を、室温の状態で６か月間保存して安定性を調べた。製剤の溶液を目視にて外観検査したところ、製造時と同様に沈殿の生じていない透明な溶液であった。従って本発明品は安定な製剤であると考えられた。更に手の皮膚、及び、頭皮に塗布したところ、製剤は良く皮膚に馴染み浸透感も良好であった。
【実施例６】
【００４５】  下記組成の育毛ローション（処方７）を常法により製造した。
フィチン酸５０％水溶液  ０．６ｇ
センブリエキス  ０．１ｇ
エイジツエキス  ０．５ｇ
１，３−ブチレングリコール  ３．０ｇ
エタノール  ５７．０ｇ
酢酸トコフェロール  ０．０８ｇ
ニンジンエキス  ０．１ｇ
ジラウロイルグルタミン酸リシンナトリウム  ０．０７ｇ
イチョウ葉エキス  ０．５ｇ
パントテニルエチルエーテル  ０．２５ｇ
ヒドロキシエチルセルロース  ０．３ｇ
ワレモコウエキス  ０．５ｇ
ビワ葉エキス  ０．５ｇ
クエン酸  ０．０２３ｇ
水酸化カリウム  ０．１８ｇ
精製水  残部（全量を１００ｇとする）【００４６】  実施例５と同様に、本発明品を、室温の状態で６か月間保存して安定性を調べた。製剤の溶液を目視にて外観検査したところ、製造時と同様に沈殿の生じていない透明な溶液であった。従って本発明品は安定な製剤であると考えられた。更に、実施例２と同様に、手の皮膚、及び、頭皮に塗布したところ、製剤は良く皮膚に馴染み浸透感も良好であった。
【産業上の利用可能性】
【００４７】  本発明のフィチン酸を含有する育毛剤組成物は、毛包に直接的に作用する成分を含有するために、優れた育毛・養毛効果および脱毛予防効果を発揮する。フィチン酸は植物から抽出される天然物であり、食品添加物としても使用されており、安全に使用することができる。さらに、本発明により、フィチン酸を有効成分として含有する、エタノールを配合していながら沈殿が生成せずに物理的に安定で、かつ、使用感も良好な外用育毛剤を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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