(57)【要約】【課題】受精卵等の個別管理が必要な細胞を取り扱う細胞取扱容器において、複数種のカテゴリーに分類される細胞を収容し、且つ顕微鏡の視野内で容易に区別可能な複数個の収容区画を有する細胞取扱容器を提供する。【解決手段】本発明は、容器底部と容器側壁部とを有する細胞取扱容器であって、容器底部に、収容区画底部と収容区画側壁部とを有する3個以上の収容区画が配置されており、該3個以上の収容区画が、1個以上の収容区画を含む3種以上の収容区画群を構成し、該3種以上の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画における収容区画側壁部の特性が、他の収容区画群との間で互いに異なっており、該収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さ、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、細胞取扱容器に関する。【選択図】図１Ａ
2017123801.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
容器底部と容器側壁部とを有する細胞取扱容器であって、
容器底部に、収容区画底部と収容区画側壁部とを有する3個以上の収容区画が配置されており、
該3個以上の収容区画が、1個以上の収容区画を含む3種以上の収容区画群を構成し、
該3種以上の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画における収容区画側壁部の特性が、他の収容区画群との間で互いに異なっており、
該収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さ、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、
細胞取扱容器。
【請求項２】
3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さである、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項３】
3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の高さである、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項４】
3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の空隙率である、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項５】
3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせである、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項６】
3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の表面粗さである、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項７】
3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さからなる群より選択される2種以上の組み合わせである、請求項1に記載の細胞取扱容器。
【請求項８】
収容区画底部に、細胞を収容するための1個以上の窪み部が形成されている、請求項1〜7のいずれか1項に記載の細胞取扱容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、受精卵等の個別管理が必要な細胞を取り扱うのに適した細胞取扱容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
培養系で精子と卵子とを体外受精させて受精卵（接合子）を作製して、さらに受精卵を卵割、桑実胚、胚盤胞の段階を経て、透明帯から孵化した脱出胚盤胞の段階まで培養することが可能となった。このため、卵割から胚盤胞の段階にある受精卵を子宮に移植して産子を得る補助的生殖技術（ART）が、家畜領域のみならずヒトの不妊医療でも確立されてきた。
【０００３】
しかしながら、体外受精による妊娠成功率は必ずしも高くはない。例えば、ヒトにおいては、その妊娠成功率は、依然として25〜35％程度に留まっている。その原因の一つとして、培養において、子宮への移植に適した良質な受精卵を得られる確率が高くないことを挙げることができる。培養された受精卵は、専門家が顕微鏡で個別に観察することにより、子宮への移植に適した良質な受精卵であるか否か判別されている。従って、その判別にはコスト及び時間がかかるという問題があった。そこで、子宮への移植に適した良質な受精卵を、低コスト且つ短時間で判別する技術が求められている。
【０００４】
さらに近年では、細胞治療・再生医療の研究開発が進み、細胞培養中の無菌環境の維持、細胞の品質確保、並びに／又は大量の細胞の迅速な培養及び判別手段に対するニーズが高まっている。そこで、複数の受精卵を1個の細胞取扱容器内で並行して培養等することが求められている。
【０００５】
例えば、特許文献1は、個別管理が必要とされる細胞を培養するための、底壁と側壁とを有する培養容器であって、底壁に、凹部を有する細胞収容部が配置されており、凹部が4個以上近接しており、凹部の開口部が円形であり、凹部の壁面が、凹部の最も低い位置から凹部の外縁に進むに従って高くなるような傾斜面を有し、かつ円錐状又は円錐台状の部分を有し、近接する凹部間のピッチが1 mm以下であり、傾斜面の表面粗さについて、最大高さRyが1.0 μm未満である、前記培養容器を記載する。
【０００６】
特許文献2は、底部と側壁とを有し、内部に既定の容量の培養系収容区画が設けられてなる細胞培養用容器であって、該培養系収容区画は均一な厚みを有する底面と、壁面と、該底面及び壁面を接続するなだらかな曲面とから構成されてなり、該培養系収容区画の壁面は底面の鉛直方向に対して5〜20°外側に傾斜した状態で配置されてなることを特徴とする細胞培養用容器を記載する。当該文献は、培養系収容区画が複数個配置されていてもよいことを記載する。また、当該文献は、複数個の培養系収容区画に、それぞれの区画を認識するための識別記号が表示されていてもよいことを記載する。
【０００７】
特許文献3は、上方が開口した細胞培養容器であって、底部に、細胞及び培養液を収容するための凹部、及び凹部の開口端から外縁に進むに従って高くなるように形成された壁部からなる培養液収容部、を有し、凹部の側面が、凹部の底面から外縁に進むに従って高くなるように形成されており、凹部の底面と側面とのなす角度θ1が、培養液収容部の壁面と凹部の底面とのなす角度θ2より大きく、θ1が75°以下である、前記細胞培養容器を記載する。当該文献は、細胞及び培養液を収容する凹部に加えて、複数の培養液保持部を有する実施形態を記載する。
【０００８】
特許文献1〜3に記載の容器は、細胞を収容するための区画を複数個有し得ることから、培養細胞を発育状態等の基準に基づき複数種のカテゴリーに分類し、それぞれのカテゴリーに属する培養細胞を個別管理しながら並行して培養する場合に好適である。例えば、「発育が良好」のカテゴリーに分類される細胞をある収容区画に収容して培養し、「発育が不良」のカテゴリーに分類される細胞を別の収容区画に収容して並行して培養することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特許第4724854号公報
【特許文献２】特開2006-280298号公報
【特許文献３】特開2014-207897号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
前記の通り、複数種のカテゴリーに分類される培養細胞を個別管理しながら並行して培養することができる培養容器等の細胞取扱容器が知られている。しかしながら、従来の細胞取扱容器には改良の余地が存在した。例えば、特許文献1に記載の培養容器の場合、複数の細胞収容部は実質的に同一の形状である。観察者が、顕微鏡を用いて特許文献1に記載の培養容器の細胞収容部内部に収容された細胞を観察する場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、顕微鏡の視野内でどの細胞収容部を観察しているのかを判断することが困難であった。このため、どの細胞収容部を観察しているのかを判断するため、観察者は一旦顕微鏡から視野を外して肉眼で培養容器を観察するか、又は顕微鏡の焦点倍率を低くして広範囲の視野で培養容器を観察する必要があった。このような作業は、観察者の作業効率を低下させる可能性があるだけでなく、ミスを発生させる可能性もある。
【００１１】
特許文献2に記載の細胞培養用容器の場合、複数個の培養系収容区画のそれぞれに識別記号を表示することで、培養系収容区画を互いに区別することができる。しかしながら、識別記号の印刷又は刻印工程を実施するために、細胞培養用容器の製造コストが上昇する可能性がある。また、細胞培養用容器の底部等に表示された識別記号を確認するため、観察者は顕微鏡の焦点倍率を低くして広範囲の視野で細胞培養用容器の底部等を観察する必要があった。
【００１２】
特許文献3に記載の細胞培養容器の場合、中央に配置された凹部とその周囲に配置された複数の培養液保持部とは互いに異なる形状を有するものの、複数の培養液保持部は実質的に同一の形状である。このため、特許文献1に記載の培養容器の場合と同様に、観察者が顕微鏡を用いて複数の培養液保持部内部の細胞を観察する場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、顕微鏡の視野内でどの複数の培養液保持部を観察しているのかを判断することが困難であった。この問題は、培養細胞を詳細な基準に基づき3種以上のカテゴリーに分類し、異なるカテゴリーに分類される細胞を複数の培養液保持部に収容して個別管理しながら並行して培養する場合により重要となる。
【００１３】
それ故、本発明は、受精卵等の個別管理が必要な細胞を取り扱う細胞取扱容器において、複数種のカテゴリーに分類される細胞を収容し、且つ顕微鏡の視野内で容易に区別可能な複数個の収容区画を有する細胞取扱容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは、前記課題を解決するための手段を種々検討した。本発明者らは、細胞及び培養液を収容するための複数個の収容区画を有する細胞取扱容器において、各収容区画を形成する収容区画底部及び収容区画側壁部のうち、収容区画側壁部が互いに異なる特性を有することにより、顕微鏡の視野内であってもどの収容区画を観察しているのか容易に判別できることを見出した。本発明者らは、前記知見に基づき本発明を完成した。
【００１５】
すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
（1）  容器底部と容器側壁部とを有する細胞取扱容器であって、
容器底部に、収容区画底部と収容区画側壁部とを有する3個以上の収容区画が配置されており、
該3個以上の収容区画が、1個以上の収容区画を含む3種以上の収容区画群を構成し、
該3種以上の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画における収容区画側壁部の特性が、他の収容区画群との間で互いに異なっており、
該収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さ、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される、
細胞取扱容器。
（2）  3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さである、前記（1）に記載の細胞取扱容器。
（3）  3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の高さである、前記（1）に記載の細胞取扱容器。
（4）  3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の空隙率である、前記（1）に記載の細胞取扱容器。
（5）  3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせである、前記（1）に記載の細胞取扱容器。
（6）  3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の表面粗さである、前記（1）に記載の細胞取扱容器。
（7）  3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性が、収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さからなる群より選択される2種以上の組み合わせである、前記（1）に記載の細胞取扱容器。
（8）  収容区画底部に、細胞を収容するための1個以上の窪み部が形成されている、前記（1）〜（7）のいずれかに記載の細胞取扱容器。
【発明の効果】
【００１６】
本発明により、受精卵等の個別管理が必要な細胞を取り扱う細胞取扱容器において、複数種のカテゴリーに分類される細胞を収容し、且つ顕微鏡の視野内で容易に区別可能な複数個の収容区画を有する細胞取扱容器を提供することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１Ａ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態の上面模式図である。
【図１Ｂ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態の上面模式図である。
【図１Ｃ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態の上面模式図である。
【図１Ｄ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態の上面模式図である。
【図１Ｅ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態の上面模式図である。
【図１Ｆ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態の上面模式図である。
【図２】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1AにおけるI-I’に沿った垂直断面模式図である。
【図３】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。
【図４】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。
【図５】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。
【図６Ａ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1EにおけるIII-III’に沿った垂直断面模式図である。
【図６Ｂ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1FにおけるIV-IV’に沿った垂直断面模式図である。
【図６Ｃ】本発明の細胞取扱容器の一実施形態において図1FにおけるIV-IV’に沿った垂直断面模式図である。
【図７】本発明の細胞取扱容器を用いたマイクロドロップ法の実施形態を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本明細書では、適宜図面を参照して本発明の特徴を説明する。図面では、明確化のために各部の寸法及び形状を誇張しており、実際の寸法及び形状を正確に描写してはいない。それ故、本発明の技術的範囲は、これら図面に表された各部の寸法及び形状に限定されるものではない。
【００１９】
本発明の細胞取扱容器は、例えば、図1A〜Fに示すように、容器底部11と容器側壁部12とを有する細胞取扱容器1であって、容器底部11に、収容区画底部21と収容区画側壁部22とを有する3個以上の収容区画20が配置されており、該3個以上の収容区画20が、1個以上の収容区画20を含む3種以上の収容区画群を構成し、該3種以上の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画20における収容区画側壁部22の特性が、他の収容区画群との間で互いに異なっていることが必要である。このような特徴を有することにより、文字、記号又は図形等の特別な識別指標を設けることなく、収容区画側壁部の特性を識別指標として、3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。
【００２０】
本発明の細胞取扱容器1は、容器底部11と、容器底部11の周縁に立設された容器側壁部12とを有する。本発明の細胞取扱容器1は、細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器底部11の表面（以下、「細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器底部11の内表面」、「容器底部11の内表面」又は「容器内底面」とも記載する）、並びに細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器側壁部12の表面（以下、「細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器側壁部12の内表面」、「容器側壁部12の内表面」又は「容器内壁面」とも記載する）によって形成される上方に開口した有底形状の内部空間10を有する。内部空間10は、細胞及び／又は培養液を配置する空間となる。本発明の細胞取扱容器1は、通常は、細胞取扱容器1の外部空間側に向く容器底部11の表面（以下、「細胞取扱容器1の外部空間側に向く容器底部11の外表面」、「容器底部11の外表面」又は「容器外底面」とも記載する）が水平となる状態で配置されて使用される。本発明において、前記のような本発明の細胞取扱容器の配置を、「使用時の配置」と記載する場合がある。本発明において、「上下方向」は、使用時の配置において容器外底面に垂直な方向を意味する。この場合、容器外底面から容器側壁部の周縁によって形成される開口部に向かう方向を上方、開口部から容器外底面に向かう方向を下方と記載する場合がある。本発明において、「高さ」は、使用時の配置において、本発明の細胞取扱容器の各部位の上下方向の長さを意味する。また、本発明において、「水平方向」は、使用時の配置において容器外底面に平行な方向を意味する。
【００２１】
本発明の細胞取扱容器1の形状及び寸法は、内部空間10の内部に細胞及び培養液を収容可能な3個以上の収容区画20を配置できれば、特に限定されない。細胞取扱容器1の形状としては、例えば、使用時の配置において細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器底部11の内表面を水平面に投影したときにその周縁によって形成される図形が、円形（真円形及び楕円形を含む）、又は三角形、四角形、五角形、六角形若しくは八角形等の多角形である形状を挙げることができる。使用時の配置において細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器底部11の内表面を水平面に投影したときにその周縁によって形成される図形が、円形であることが好ましい。この場合、本発明の細胞取扱容器1は、当該技術分野で通常使用される円形シャーレの形状となる。細胞取扱容器1の寸法は、使用時の配置における上面視において、容器側壁部12の開口部の開口幅が通常は30〜60 mmの範囲であり、典型的には約35 mmである。本発明において、「開口部の開口幅」は、開口部の外縁が形成する図形の最長径の長さを意味する。例えば、開口部の外縁が円形である場合、開口部の寸法は、該円形の直径に相当する。また、容器側壁部12の高さは、通常は5〜20 mmの範囲であり、典型的には7〜15 mmの範囲である。特に好適な細胞取扱容器1は、使用時の配置における上面視において、容器側壁部12の開口部の開口幅が好ましくは30〜60 mmの範囲、より好ましくは約35 mmであり、容器側壁部12の高さが好ましくは5〜20 mmの範囲であり、より好ましくは7〜15 mmの範囲であり、容器底部11が円形の形状である。このような寸法及び形状を有する細胞取扱容器1は、細胞培養分野で受精卵等の培養に通常使用される円形シャーレと同様の形状及び寸法である。それ故、前記形状及び寸法を有する本発明の細胞取扱容器は、細胞培養分野で通常使用される各種の培養装置等に容易に適合させることができる。
【００２２】
容器底部11の形状は特に限定されない。細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器底部11の内表面は、使用時の配置において略全面が水平面となるように形成されていてよく、使用時の配置において中心から外縁に進むに従って上下方向に高くなる傾斜面となるように形成されていてもよい。当該技術分野で公知の細胞培養容器等の細胞取扱容器の容器底部の様々な形状を、容器底部11の形状に適用することができる。
【００２３】
同様に、容器側壁部12の形状は特に限定されない。細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器側壁部12の内表面、並びに／又は細胞取扱容器1の外部空間側に向く容器側壁部12の表面（以下、「細胞取扱容器1の外部空間側に向く容器側壁部12の外表面」又は「容器側壁部12の外表面」とも記載する）は、使用時の配置において略全面が垂直面となるように形成されていてもよく、使用時の配置において容器底部11との接続部から上方の周縁部に進むに従って垂直面に対して容器側壁部12の内部方向に傾斜している傾斜面となるように形成されていてもよい。当該技術分野で公知の細胞培養容器等の細胞取扱容器の容器側壁部の様々な形状を、容器側壁部12の形状に適用することができる。本発明の細胞取扱容器1がプラスチック材料を含む材質で構成されており、射出成形のような慣用の成形法を用いて製造される場合、細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器側壁部12の内表面、並びに／又は細胞取扱容器1の外部空間側に向く容器側壁部12の外表面が前記のように傾斜面となるように形成されていると、抜き勾配として機能し効率的に離型できることから有利である。
【００２４】
本発明の細胞取扱容器1は、所望により蓋を有することができる。蓋を有することにより、内部空間10の通気性を確保しつつ、内部空間10への異物の侵入を実質的に防止し得るように容器側壁部12の開口部を閉鎖することができる。
【００２５】
本発明の細胞取扱容器において、容器底部に、3個以上の収容区画が配置される。容器底部における3個以上の収容区画の位置は特に限定されず、任意の位置に配置することができる。例えば、図1A〜1Cに示すように、収容区画20, 20’, 20’’, 20’’’は、使用時の配置において細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く容器底部11の内表面を水平面に投影したときにその周縁によって形成される図形において、該図形に内接する多角形（例えば、三角形、四角形、五角形又は六角形等）のそれぞれの角に相当する領域にそれぞれ配置することができる。或いは、図1D及びEに示すように、収容区画20, 20’, 20’’は、前記と同一の領域に加えて、それ以外の領域（例えば、前記図形の重心に相当する領域）にもさらに1個以上配置することもできる。
【００２６】
収容区画20は、収容区画底部21と、収容区画底部21の周縁に立設された収容区画側壁部22とを有する。収容区画20は、細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画底部21の表面（以下、「細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画底部21の内表面」又は「収容区画底部21の内表面」とも記載する）、並びに細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画側壁部22の表面（以下、「細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画側壁部22の内表面」又は「収容区画側壁部22の内表面」とも記載する）によって形成される上方に開口した有底形状である。
【００２７】
収容区画20の形状及び寸法は、収容区画側壁部22が以下において説明する要件を満足できれば、特に限定されない。収容区画20の形状としては、例えば、使用時の配置において細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画底部21の内表面を水平面に投影したときにその周縁によって形成される図形が、円形（真円形及び楕円形を含む）、又は三角形、四角形、五角形、六角形若しくは八角形等の多角形である形状を挙げることができる。使用時の配置において細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画底部21の内表面を水平面に投影したときにその周縁によって形成される図形が、円形であることが好ましい。収容区画20の寸法は、使用時の配置における上面視において、収容区画側壁部22の開口部の開口幅が0.25 mm以上であることが好ましく、5 mm以上であることがより好ましく、また30 mm以下であることが好ましく、15 mm以下であることがより好ましく、14 mm以下であることがさらに好ましく、12 mm以下であることが特に好ましい。例えば、使用時の配置における上面視において、容器側壁部12の開口部の開口幅が約35 mmであり、容器底部11が円形の形状である細胞取扱容器1の場合、3個の収容区画20の収容区画側壁部22の開口部の開口幅がいずれも約14 mm以下であり、収容区画側壁部22の厚さがいずれも約1 mmであると、収容区画20を互いに接触又は離間するように配置することができる。3個の収容区画20を互いに離間するように配置することができることから、収容区画側壁部22の開口部の開口幅は、いずれも約14 mm未満であることが好ましい。或いは、3個の収容区画20の収容区画側壁部22の開口部の開口幅が互いに異なる場合、2個の収容区画20の収容区画側壁部22の開口部の開口幅が0.25 mm以上であり、1個の収容区画20の収容区画側壁部22の開口部の開口幅が30 mm以下であり、収容区画側壁部22の厚さがいずれも約1 mmであると、収容区画20を互いに接触又は離間するように配置することができる。このような実施形態の場合、1個の収容区画20の内部空間から培養液が漏出しても、別の収容区画20の内部空間に該培養液が侵入することを回避できる。また、収容区画側壁部22の高さは、0.5 mm以上であることが好ましく、2 mm以上であることがより好ましく、また5 mm以下であることが好ましく、3 mm以下であることがより好ましい。例えば、収容区画20の内部に複数個の細胞が収容される実施形態、例えば、以下において説明するように、収容区画20の内部に複数個の窪み部が配置される実施形態の場合、収容区画20の寸法は、使用時の配置における上面視において、収容区画側壁部22の開口部の開口幅が0.25〜15 mmの範囲であることが好ましく、5〜14 mmの範囲であることがより好ましい。例えば、収容区画20の内部に1個の細胞が収容される実施形態の場合、収容区画20の内部空間には細胞1個分の作業スペースが有ればいいので、収容区画20の寸法は、使用時の配置における上面視において、収容区画側壁部22の開口部の開口幅が1.5〜12 mmの範囲であることが好ましい。また、収容区画20の内部空間が広すぎると細胞を探しづらく、狭すぎるとピペット等による細胞の取扱いが困難となるため、5〜10 mmの範囲であることがより好ましい。収容区画20が前記形状であり、且つ収容区画20の寸法が前記範囲の場合、収容区画20の内部に、マイクロドロップ法による細胞培養に通常使用される小容量の培養液、例えば10〜100 μLの培養液のドロップを収容することにより、通常は0.35 mm以上、例えば0.5 mm以上の高さの当該培養液のドロップを収容区画20の内部に形成し、且つ当該ドロップによって収容区画底部21の略全面を被覆することができる。それ故、収容区画20が前記形状及び寸法を有する本発明の細胞取扱容器は、マイクロドロップ法による細胞培養に有利に使用することができる。
【００２８】
収容区画底部21の形状は特に限定されない。細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画底部21の内表面は、使用時の配置において略全面が水平面となるように形成されていてよく、使用時の配置において中心から外縁に進むに従って上下方向に高くなる傾斜面となるように形成されていてもよい。当該技術分野で公知の細胞培養容器等の細胞取扱容器における細胞及び培養液を収容するための区画の様々な形状を、収容区画底部21の形状に適用することができる。
【００２９】
本発明の細胞取扱容器1は、通常は、顕微鏡を用いてその内部に収容された細胞を観察するために使用される。ここで、細胞取扱容器1の容器底部11及び細胞を収容するための収容区画底部21の表面粗さが大きい値の場合、表面の凹凸に起因して鮮明な像が得られない可能性がある。このため、細胞取扱容器1の容器底部11及び収容区画底部21の表面は、表面粗さの値が可能な限り小さい、平滑な表面であることが好ましい。具体的には、容器底部11及び収容区画底部21の表面は、最大高さRyが1.0 μm未満であることが好ましく、0.5 μm未満であることがより好ましい。本発明において、最大高さRyは、粗さ曲線からその平均線の方向に基準長さだけを抜き取り、この抜き取り部分における山頂線と谷底線との間隔を意味する。容器底部11及び収容区画底部21の表面の表面粗さは、本発明の細胞取扱容器1の鋳型を作製する際に磨き処理を施す等して、鋳型の加工精度を高めることにより小さくすることができる。また、表面粗さの計測は、通常の断面形状計測装置を用いて行うことができる。計測条件としては、例えばダブルスキャン高精度レーザ測定器（キーエンス社製、LT-9010M）及び高精度形状測定システム（キーエンス社製、KS-1100）を用い、5 μmの測定間隔で計測することができる。
【００３０】
収容区画側壁部22の形状は、以下において説明する要件を満足できれば特に限定されない。細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画側壁部22の内表面、並びに／又は収容区画20の外部空間側に向く収容区画側壁部22の表面（以下、「収容区画20の外部空間側に向く収容区画側壁部22の外表面」又は「収容区画側壁部22の外表面」とも記載する）は、使用時の配置において略全面が垂直面となるように形成されていてもよく、使用時の配置において収容区画底部21との接続部から上方の周縁部に進むに従って垂直面に対して収容区画側壁部22の内部方向に傾斜している傾斜面となるように形成されていてもよい。以下において説明する要件を満足できれば、当該技術分野で公知の細胞培養容器等の細胞取扱容器における細胞及び培養液を収容するための区画側壁部の様々な形状を、収容区画側壁部22の形状に適用することができる。本発明の細胞取扱容器1がプラスチック材料を含む材質で構成されており、射出成形のような慣用の成形法を用いて製造される場合、細胞及び／又は培養液を配置する空間側に向く収容区画側壁部22の内表面及び／又は収容区画20の外部空間側に向く収容区画側壁部22の外表面が前記のように傾斜面となるように形成されていると、抜き勾配として機能し効率的に離型できることから有利である。
【００３１】
本発明の細胞取扱容器1において、収容区画20は、細胞取扱容器1と一体的に形成されていてよく、細胞取扱容器1とは別個の部材として形成されていてもよい。後者の実施形態の場合、別個の部材として形成される収容区画20は、細胞取扱容器1と同一の材質で形成されていてよく、細胞取扱容器1とは別個の材質で形成されていてもよい。
【００３２】
本発明の細胞取扱容器において、3個以上の収容区画が、3種以上の収容区画群を構成する。収容区画群の種類は、3種以上であればよく、その上限は特に限定されない。本発明の細胞取扱容器の寸法及び形状、観察対象の細胞の種類、並びに分類すべき細胞のカテゴリー数等に基づき、収容区画群の種類の上限を適宜設定することができる。例えば、図1A、B、D、E及びFに示すように、本発明の細胞取扱容器1は、収容区画20から構成される第1の収容区画群、収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群を有することができる。或いは、図1Cに示すように、本発明の細胞取扱容器1は、収容区画20から構成される第1の収容区画群、収容区画20’から構成される第2の収容区画群、収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群、並びに収容区画20’’’から構成される第4の収容区画群からなる4種類の収容区画群を有することもできる。
【００３３】
それぞれの収容区画群は、互いに独立して1個以上の収容区画を含む。それぞれの収容区画群を構成する収容区画の数は、1個であってもよく、2個以上であってもよい。また、収容区画群を構成する収容区画の数は、互いに同一又は異なっていることができる。例えば、図1A及びBに示すように、第1の収容区画群が1個の収容区画20から構成され、第2の収容区画群が1個の収容区画20’から構成され、第3の収容区画群が1個の収容区画20’’から構成されることができる。或いは、図1Cに示すように、第1の収容区画群が1個の収容区画20から構成され、第2の収容区画群が1個の収容区画20’から構成され、第3の収容区画群が1個の収容区画20’’から構成され、第4の収容区画群が1個の収容区画20’’’から構成されることもできる。或いは、図1Dに示すように、第1の収容区画群が1個の収容区画20から構成され、第2の収容区画群が1個の収容区画20’から構成され、第3の収容区画群が5個の収容区画20’’から構成されることもできる。或いは、図1Eに示すように、第1の収容区画群が1個の収容区画20から構成され、第2の収容区画群が2個の収容区画20’から構成され、第3の収容区画群が2個の収容区画20’’から構成されることもできる。或いは、図1Fに示すように、第1の収容区画群が1個の収容区画20から構成され、第2の収容区画群が1個の収容区画20’から構成され、第3の収容区画群が4個の収容区画20’’から構成されることもできる。
【００３４】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画における収容区画側壁部の特性は、他の収容区画群との間で互いに異なっていることが必要である。すなわち、3種以上の収容区画群において、ある収容区画群を構成する収容区画における収容区画側壁部は、他の収容区画群を構成する収容区画における収容区画側壁部と比較して異なる特性を有する。本発明において、収容区画底部及び／又は収容区画側壁部の特性は、収容区画底部及び／又は収容区画側壁部の形状、寸法、構造、光学特性及び表面特性等に基づく1種以上の特性を意味する。例えば、収容区画側壁部の寸法に基づく収容区画側壁部の特性としては、収容区画側壁部の厚さ及び高さを、収容区画側壁部の構造に基づく収容区画側壁部の特性としては、収容区画側壁部の空隙率を、収容区画側壁部の光学特性に基づく収容区画側壁部の特性としては、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせを、収容区画側壁部の表面特性に基づく収容区画側壁部の特性としては、収容区画側壁部の表面粗さを、それぞれ挙げることができる。3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さ、並びにそれらの組み合わせからなる群より選択される。収容区画側壁部の特性が3種以上の収容区画群の間で互いに異なっていることにより、収容区画側壁部の特性を識別指標として、3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。前記のような収容区画側壁部の特性は、顕微鏡で観察される収容区画側壁部の像に大きな影響を与え得る。それ故、顕微鏡を用いて対象となる細胞を観察する場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。
【００３５】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の厚さであることが好ましい。本実施形態を図2（a）に示す。図2（a）は、図1AにおけるI-I’に沿った垂直断面模式図である。本発明において、収容区画側壁部の厚さは、本発明の細胞取扱容器の垂直断面模式図における該収容区画側壁部の幅、すなわち該収容区画側壁部の内表面及び外表面の間の距離を意味する。例えば、容器側壁部の内表面及び外表面の略全面が使用時の配置において垂直面となるように形成されている場合には、垂直断面模式図における該収容区画側壁部の幅は一定であるので、任意の位置の幅を採用することができる。他方、容器側壁部の内表面及び／又は外表面が傾斜面となるように形成されている場合には、垂直断面模式図における該収容区画側壁部の幅の最大値を採用すればよい。本発明の細胞取扱容器において、収容区画側壁部の厚さは、0.25 mm以上であることが好ましく、1 mm以上であることがより好ましく、また5 mm以下であることが好ましく、2 mm以下であることがより好ましい。例えば、通常の光学顕微鏡を用いて本発明の細胞取扱容器1に収容された細胞を観察する場合、観察対象の細胞の大きさが約200 μmであるので、通常は、総合倍率M＝200倍で細胞を観察する。この場合、収容区画側壁部の厚さが2 mmを超えると、総合倍率M＝200倍の光学観察系では顕微鏡の視野いっぱいに収容区画側壁部が表示される。同様に、収容区画側壁部の厚さが5 mmを超えると、総合倍率M＝40倍の光学観察系では顕微鏡の視野いっぱいに収容区画側壁部が表示される。光学顕微鏡を用いる場合、通常は、低倍率でまず観察対象の位置を確認してから高倍率に変更する。それ故、収容区画側壁部の厚さが前記で説明した好ましい範囲である場合、顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。本実施形態の場合、収容区画側壁部の厚さは、前記で説明した好ましい範囲から適宜設定することができる。
【００３６】
例えば図2（a）に示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、1個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに1個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画側壁部22の厚さd1、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’の厚さd2、並びに第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の収容区画側壁部22’’の厚さd3は、互いに異なる値を有する。本実施形態において、本発明の細胞取扱容器がn種類（nは3以上の整数である）の収容区画群を有する場合、第nの収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の厚さdnと第n-1の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の厚さdn-1との差dn-dn-1（但し、n及びdnは、dn＞dn-1＞dn-2…＞dn-（ｎ-1）を満たす）は、20 μm以上であることが好ましく、100 μm以上であることがより好ましく、500 μm以上であることがさらに好ましく、また、1000 μm以下であることが好ましく、800 μm以下であることがより好ましく、600 μm以下であることがさらに好ましい。観察対象の細胞は、通常は約200 μmの大きさであり、観察者は、細胞と同程度の大きさの物体は見慣れているため、前記範囲の収容区画の収容区画側壁部の厚さの差を認識しやすい。例えば、通常の光学顕微鏡を用いて本発明の細胞取扱容器1に収容された細胞を観察する場合、通常は、使用時の配置において垂直方向に対物レンズの光軸の方向が一致するように光学顕微鏡を設置して、収容区画20に収容された観察対象の細胞に光学系の焦点を合わせる。例えば、開口数NA＝0.40の20倍の対物レンズ、及び10倍の接眼レンズを用いて総合倍率M＝200倍の観察光学系を備える光学顕微鏡を使用する場合、200 μm程度の物体を観察するのに適していることから、差dn-dn-1は、20 μm以上であることが好ましい。同様に、総合倍率M＝40倍の観察光学系を備える光学顕微鏡を使用する場合、1 mm程度の物体を観察するのに適していることから、差dn-dn-1は、100 μm以上であることが好ましい。総合倍率M＝8倍の観察光学系を備える光学顕微鏡を使用する場合、5 mm程度の物体を観察するのに適していることから、差dn-dn-1は、500 μm以上であることが好ましい。3種以上の収容区画群の間で収容区画側壁部22の厚さが前記のように異なっている場合、観察者は顕微鏡の視野内で収容区画側壁部22の厚さの差を直ちに視認することができる。それ故、本実施形態の場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。
【００３７】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の高さであることが好ましい。本実施形態を図3（a）に示す。図3（a）は、図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。本発明において、収容区画側壁部の高さは、本発明の細胞取扱容器の垂直断面模式図において、収容区画側壁部と収容区画底部との接続部から収容区画側壁部の上端部までの上下方向の長さを意味する。本実施形態の場合、収容区画側壁部の高さは、前記で説明した好ましい範囲から適宜設定することができる。
【００３８】
例えば図3（a）に示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、1個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに1個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画側壁部22の高さh1、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’の高さh2、並びに第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の収容区画側壁部22’’の高さh3は、互いに異なる値を有する。本実施形態において、本発明の細胞取扱容器がn種類（nは3以上の整数である）の収容区画群を有する場合、第nの収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の高さhnと第n-1の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の高さhn-1との差hn-hn-1（但し、n及びhnは、hn＞hn-1＞hn-2…＞hn-（ｎ-1）を満たす）は、200 μm以上であることが好ましく、300 μm以上であることがより好ましく、500 μm以上であることがさらに好ましく、また、1000 μm以下であることが好ましく、800 μm以下であることがより好ましく、600 μm以下であることがさらに好ましい。観察対象の細胞は、通常は約200 μmの大きさであり、観察者は、細胞と同程度の大きさの物体は見慣れているため、前記範囲の収容区画の収容区画側壁部の高さの差を認識しやすい。例えば、通常の光学顕微鏡を用いて本発明の細胞取扱容器に収容された細胞を観察する場合、光学系の焦点が合う範囲は、焦点深度によって表すことができる。本発明において、「焦点深度」は、JIS Z8120に規定されるのと同様に、「顕微鏡では、鮮明に見える物体空間での光軸方向における範囲」を意味する。具体的には、観察光学系の物体側焦点を観察対象物に合わせたときの前記観察対象物の光軸上の位置（合焦位置）から、前記観察対象物を対物レンズに対して光軸方向に相対移動させても焦点が合っていると見做すことができる光軸上の範囲を意味する。例えば、観察光学系の焦点深度がDである場合、物体空間において合焦位置から光軸に沿って距離がD離れた位置までの範囲で焦点が合っていると見做すことができる。換言すれば、物体空間において光軸方向に沿って合焦位置を中心とした2Dの範囲で焦点が合っていると見做すことができる。
【００３９】
焦点深度の値は、観察光学系の方式及び観察手段等に応じて定まる値である。例えば、対物レンズ及び接眼レンズを含む光学顕微鏡を用いて、人間の眼で観察する場合の焦点深度は、下記のBerekの式によって算出することができる。
D=n×[(ω×250000)/(NA×M)+λ/(2×NA2)] (μm)
式中、nは観察対象物と対物レンズとの間の媒質の屈折率であり、ωは人間の眼の分解能であり、NAは対物レンズの開口数であり、Mは総合倍率、すなわち対物レンズの倍率と接眼レンズの倍率との積であり、λは観察光の波長（単位：μm）である。
【００４０】
前記Berekの式において、観察対象物と対物レンズとの間の媒質が空気である場合はn＝1であり、人間の眼の視角を5分とした場合はω＝0.0014であり、緑の可視光で観察する場合はλ＝0.55（μm）とそれぞれ仮定できる。この仮定のもとでは、開口数NA＝0.25の10倍の対物レンズと、10倍の接眼レンズとを含む総合倍率M＝100倍の観察光学系の焦点深度Dは、約18.4 μmと算出できる。また、開口数NA＝0.40の20倍の対物レンズと、10倍の接眼レンズを含む総合倍率M＝200倍の観察光学系の焦点深度Dは、約6.1 μmと算出できる。
【００４１】
例えば、焦点深度Dが約0.41 μm（開口数NA＝1.35の100倍の対物レンズ、及び10倍の接眼レンズを用いて総合倍率M＝1000倍）の観察光学系を備える光学顕微鏡を使用する場合、光軸方向に沿って合焦位置を中心とした約0.8 μmの範囲で焦点が合っていることから、差hn-hn-1は、0.8 μm以上であることが好ましい。焦点深度Dが約6.1 μm（開口数NA＝0.40の20倍の対物レンズ、及び10倍の接眼レンズを用いて総合倍率M＝200倍）の観察光学系を備える光学顕微鏡を使用する場合、光軸方向に沿って合焦位置を中心とした約12 μmの範囲で焦点が合っていることから、差hn-hn-1は、12 μm以上であることが好ましい。同様に、焦点深度Dが約18.4 μm（開口数NA＝0.25の10倍の対物レンズ、及び10倍の接眼レンズを用いて総合倍率M＝100倍）の観察光学系を備える光学顕微鏡を使用する場合、光軸方向に沿って合焦位置を中心とした約36 μmの範囲で焦点が合っていることから、差hn-hn-1は、36 μm以上であることが好ましい。3種以上の収容区画群の間で収容区画側壁部22の高さが前記のように異なっている場合、観察者は顕微鏡の視野内で収容区画側壁部22の高さの差を直ちに視認することができる。それ故、本実施形態の場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。
【００４２】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の空隙率であることが好ましい。本実施形態を図4（a）に示す。図4（a）は、図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。本発明の細胞取扱容器1において、収容区画側壁部の内部は、通常は、図2（a）及び3（a）に示すように、収容区画側壁部を構成する材料によって略完全に充填されていることができる。しかしながら、収容区画側壁部は、図4（a）に示すように、場合によりその内部に空隙部を有することもできる。本発明において、収容区画側壁部の空隙率は、収容区画側壁部の総体積に対する収容区画側壁部の空隙部の体積の百分率（体積％）を意味する。例えば、収容区画20’の場合、収容区画側壁部22’の空隙率（体積％）は、
収容区画側壁部22’の空隙率＝（空隙部23’の体積）／（収容区画側壁部22’の総体積）×100
によって算出される。本実施形態の場合、収容区画側壁部の空隙率は、10体積％以上であることが好ましく、20体積％以上であることがより好ましく、30体積％以上であることがさらに好ましく、また50体積％以下であることが好ましく、40体積％以下であることがより好ましく、35体積％以下であることがさらに好ましい。
【００４３】
例えば図4（a）に示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、1個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに1個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画側壁部22の空隙率p1、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’の空隙率p2、並びに第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の収容区画側壁部22’’の空隙率p3は、互いに異なる値を有する。本実施形態において、本発明の細胞取扱容器がn種類（nは3以上の整数である）の収容区画群を有する場合、第nの収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の空隙率pnと第n-1の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の空隙率pn-1との差pn-pn-1（但し、n及びpnは、pn＞pn-1＞pn-2…＞pn-（ｎ-1）を満たす）は、5体積％以上であることが好ましく、10体積％以上であることがより好ましく、15体積％以上であることがさらに好ましく、また30体積％以下であることが好ましく、25体積％以下であることがより好ましく、20体積％以下であることがさらに好ましい。観察対象の細胞は、通常は約200 μmの大きさであり、観察者は、細胞と同程度の大きさの物体は見慣れている。ここで、収容区画側壁部の空隙率の差が5体積％以上の場合、観察者が容易に認識できる200 μｍ程度の縞模様を収容区画側壁部の表面に観察することができる。例えば、通常の光学顕微鏡を用いて本発明の細胞取扱容器1に収容された細胞を観察する場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態で空隙率の異なる収容区画側壁部22を観察すると、空隙率に応じて収容区画側壁部22の像の明度に差が生じ得る。このため、3種以上の収容区画群の間で収容区画側壁部22の空隙率が前記のように異なっている場合、観察者は顕微鏡の視野内で収容区画側壁部22の空隙率の差を直ちに視認することができる。それ故、本実施形態の場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。また、収容区画側壁部22の内部に空隙部23を有することにより、収容区画側壁部22を構成する材料を空隙率に応じて削減することができる。これにより、本発明の細胞取扱容器1の製造コストを削減することができる。
【００４４】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせであることが好ましい。本実施形態を図5（a）に示す。図5（a）は、図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。本発明の細胞取扱容器1は、通常は、顕微鏡を用いてその内部に収容された細胞を観察するために使用される。このため、細胞取扱容器1の容器底部11及び細胞を収容するための細胞収容区画底部21は、通常は、顕微鏡による観察を実質的に阻害しない光学特性、例えば、実質的に透明且つ無色の光学特性を有する。しかしながら、収容区画側壁部22は、図5（a）に示すように、場合により収容区画底部21とは異なる透明度及び色の組み合わせのような異なる光学特性を有することもできる。収容区画側壁部22は、観察対象の細胞と対物レンズとを結ぶ光軸上に位置しないので、収容区画側壁部22の光学特性が顕微鏡による観察を阻害し得る光学特性であっても、細胞の観察に実質的な影響を生じることはない。収容区画側壁部22の透明度及び色の組み合わせのような光学特性は、本発明の細胞取扱容器1又は収容区画20を作製するとき又は作製した後に、付与することができる。例えば、本発明の細胞取扱容器1及び収容区画20がプラスチックを含む材料によって構成されており、射出成形によって一体的に作製される場合、ダイカラードライ（大日精化）のような添加剤を添加することによって所望の透明度及び色の組み合わせを付与することができる。
【００４５】
例えば図5（a）に示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、1個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに1個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画側壁部22の透明度及び色の組み合わせ、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’の透明度及び色の組み合わせ、並びに第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の収容区画側壁部22’’の透明度及び色の組み合わせは、互いに異なる。例えば、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画側壁部22は、収容区画底部21と同様に実質的に透明且つ無色であり、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’は、不透明且つ無色であり、第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の収容区画側壁部22’’は、実質的に透明且つ有色であることができる。例えば、通常の光学顕微鏡を用いて本発明の細胞取扱容器1に収容された細胞を観察する場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態で光学特性の異なる収容区画側壁部22を観察すると、焦点が合わず不鮮明な像であるものの透明度及び色の組み合わせの差は容易に視認し得る。このため、3種以上の収容区画群の間で収容区画側壁部22の光学特性が前記のように異なっている場合、観察者は顕微鏡の視野内で収容区画側壁部22の光学特性の差を直ちに視認することができる。それ故、本実施形態の場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。
【００４６】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の表面粗さであることが好ましい。本実施形態を図5（a）に示す。図5（a）は、図1BにおけるII-II’に沿った垂直断面模式図である。すでに説明したように、本発明の細胞取扱容器1において、細胞取扱容器の容器底部11及び細胞収容区画底部21の表面は、表面粗さの値が可能な限り小さい、平滑な表面であることが好ましい。しかしながら、収容区画側壁部22は、観察対象の細胞と対物レンズとを結ぶ光軸上に位置しないので、収容区画側壁部22の表面粗さが顕微鏡による観察を阻害し得る値であっても、細胞の観察に実質的な影響を生じることはない。それ故、図5（a）に示すように、収容区画側壁部22は、場合により収容区画底部21とは異なる表面粗さを有することもできる。本実施形態の場合、収容区画側壁部の表面粗さは、前記で説明した本発明の細胞取扱容器の最大高さRyの好ましい範囲から適宜設定することができる。収容区画側壁部の表面粗さは、前記で説明した方法によって調整することができる。
【００４７】
例えば図5（a）に示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、1個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに1個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画側壁部22の表面粗さ、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’の表面粗さ、並びに第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の収容区画側壁部22’’の表面粗さは、互いに異なる値を有する。本実施形態において、本発明の細胞取扱容器がn種類（nは3以上の整数である）の収容区画群を有する場合、第nの収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の最大高さRynと第n-1の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の最大高さRyn-1との差Ryn-Ryn-1（但し、n及びRynは、Ryn＞Ryn-1＞Ryn-2…＞Ryn-（ｎ-1）を満たす）は、200 μm以上であることが好ましく、300 μm以上であることがより好ましく、500 μm以上であることがさらに好ましく、また1000 μm以下であることが好ましく、800 μm以下であることがより好ましく、600 μm以下であることがさらに好ましい。収容区画側壁部の最大高さRyの差が1 mm以下の範囲の場合、収容区画側壁部の上部の表面に、高さ1 mmの凸部を少なくとも1個形成することができる。例えば、通常の光学顕微鏡を用いて本発明の細胞取扱容器1に収容された細胞を観察する場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態で表面粗さの異なる収容区画側壁部22を観察すると、表面粗さに応じて収容区画側壁部22の像の明度に差が生じ得る。このため、3種以上の収容区画群の間で収容区画側壁部22の表面粗さが前記のように異なっている場合、観察者は顕微鏡の視野内で収容区画側壁部22の表面粗さの差を直ちに視認することができる。それ故、本実施形態の場合、観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画20を容易に区別することができる。
【００４８】
本発明の細胞取扱容器において、3種以上の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、前記で説明した収容区画側壁部の厚さ、収容区画側壁部の高さ、収容区画側壁部の空隙率、収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、及び収容区画側壁部の表面粗さからなる群より選択される2種以上の組み合わせであってもよい。例えば、容器底部に、第1の収容区画群、第2の収容区画群及び第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置される実施形態において、第1の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の厚さ及び第2の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の厚さが互いに同一であるが第3の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の厚さとは異なっており、さらに第1の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせ、並びに第2の収容区画群を構成する収容区画の収容区画側壁部の透明度及び色の組み合わせが互いに異なっていることができる。本実施形態の場合、1種類の特性を識別指標とする実施形態と比較して、3種以上の収容区画群を構成する収容区画をより容易に区別することができる。
【００４９】
本発明の細胞取扱容器において、3個以上の収容区画は、収容区画側壁部が前記で説明した特性を備える限り、他の要件は特に限定されない。例えば、3個以上の収容区画の開口部の開口幅は、互いに同一であってもよく、異なっていてもよい。それぞれの収容区画の開口部の開口幅は、前記で説明した収容区画の開口部の開口幅の好ましい範囲で任意に設定することができる。3個以上の収容区画の開口部の開口幅が互いに異なっている実施形態を図6Aに示す。図6Aは、図1EにおけるIII-III’に沿った垂直断面模式図である。例えば、図1E及び6Aに示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、2個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに2個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の開口部の開口幅r1、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の開口部の開口幅r2、並びに第3の収容区画群を構成する収容区画20’’の開口部の開口幅r3は、互いに異なっていることができる。そして、第1〜3の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画における収容区画側壁部は、他の収容区画群を構成する収容区画における収容区画側壁部との間で前記で説明した1種以上の特性が互いに異なっている。例えば、図6Aに示すように、第1〜3の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の厚さであることができる。本実施形態の場合、例えばより大きい開口部の開口幅を有する収容区画20から構成される第1の収容区画群を主要な培養を行う区画として使用し、小さい開口部の開口幅を有する収容区画20’から構成される第2の収容区画群及び収容区画20’’から構成される第3の収容区画群を、第1の収容区画群から取り出した細胞を収容して並行して培養を行う区画として使用することができる。本実施形態の場合、第1の収容区画群に収容された観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で第2の収容区画群を構成する収容区画と第3の収容区画群を構成する収容区画とを容易に区別することができる。
【００５０】
本発明の細胞取扱容器において、収容区画の内部に、別の収容区画を配置することができる。本実施形態を図6B及び6Cに示す。図6B及び6Cは、図1FにおけるIV-IV’に沿った垂直断面模式図である。例えば、図1F、6B及び6Cに示すように、容器底部11には、1個の収容区画20から構成される第1の収容区画群、1個の収容区画20’から構成される第2の収容区画群、並びに4個の収容区画20’’から構成される第3の収容区画群からなる3種類の収容区画群が配置されることができる。この場合において、第1の収容区画群を構成する収容区画20の内部の収容区画底部21には、第2の収容区画群を構成する1個の収容区画20’が配置されることができる。そして、第1〜3の収容区画群のそれぞれを構成する収容区画における収容区画側壁部の前記特性は、他の収容区画群との間で互いに異なっている。例えば、図6Bに示すように、第1〜3の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の厚さであることができる。或いは、図6Cに示すように、第1〜3の収容区画群の間で互いに異なっている収容区画側壁部の特性は、収容区画側壁部の厚さ及び高さであることもできる。これらの実施形態の場合、例えば第1の収容区画群を構成する収容区画20の内部に配置された第2の収容区画群を主要な培養を行う区画として使用し、第2の収容区画群を構成する収容区画20’の収容区画側壁部22’と、第1の収容区画群を構成する収容区画20の収容区画底部21と収容区画側壁部22とによって形成される第1の収容区画20を細胞の洗浄を行う区画として使用し、第1の収容区画群を構成する収容区画20の外側に配置された収容区画20’’から構成される第3の収容区画群を、第1の収容区画群から取り出した細胞を収容して並行して培養を行う区画として使用することができる。本実施形態の場合、第2の収容区画群に収容された観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で第1の収容区画群を構成する収容区画と第3の収容区画群を構成する収容区画とを容易に区別することができる。
【００５１】
図2〜5の（b）に示すように、収容区画底部21には、細胞を収容するための1個以上の窪み部30が形成されていることが好ましい。窪み部の内部に細胞を配置することにより、細胞の移動を抑制することができる。これにより、1個の収容区画20に複数個の細胞を収容する場合であっても、それぞれの細胞を区別しながら特定の細胞について評価又は判定を行うことができる。本実施形態において、窪み部30の形状は特に限定されない。窪み部30は、開口部の周縁が円形であり、底部及び側壁部の内表面が、使用時の配置において上下方向に最も低い位置から上方の開口部の周縁に進むに従って高くなるように連続的に傾斜した曲面を有することが好ましい。底部及び側壁部の内表面は、一緒になって円錐状又は円錐台状の部分を含む形状を形成することが好ましい。この場合、円錐状又は円錐台状の部分は、細胞取扱容器の容器底部側（すなわち、使用時の配置において下方側）に、円錐の頂点又は円錐台の上面及び下面のうち面積の狭い方の面が配向するように形成される。本実施形態において、円錐状は、円錐及び楕円錐だけでなく、円錐又は楕円錐の頂点が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、並びに円錐面が内側に凹んでいる形状等のこれらに類似の形状も含む。また、円錐台状は、円錐台及び楕円錐台だけでなく、円錐台又は楕円錐台の上面若しくは下面と円錐面との接合部が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状等のこれらに類似の形状も含む。また、窪み部30の底部及び側壁部の内表面は、前記形状に限定されず、多角錐状又は多角錐台状のような他の形状を形成することもできる。
【００５２】
窪み部30の寸法は、その内部に少なくとも1個の細胞を収容可能な寸法であれば特に限定されない。本発明において、「窪み部の寸法」は、窪み部の開口部の周縁が形成する図形の最長径の長さを意味する。例えば、窪み部30の開口部の周縁が円形である場合、その直径は、収容される細胞の最大寸法と同一又はそれより大きい値であればよい。例えば、本発明の細胞取扱容器1を用いて受精卵を培養する場合、通常は、胚盤胞の段階まで培養する。この場合、窪み部30の円形の開口部の直径は、胚盤胞の段階の細胞の最大寸法より大きい値であることが好ましい。胚盤胞の段階の細胞の最大寸法は、通常は、100 μm〜280 μmであることから、窪み部30の円形の開口部の直径は、通常は、100 μm以上である。
【００５３】
例えば、本発明の細胞取扱容器1を用いてヒト受精卵を培養する場合、窪み部30の開口部の直径は、通常は、100 μm以上であり、200 μm以上であることが好ましく、250 μm以上であることがより好ましく、また通常は、1000 μm以下であり、900 μm以下であることが好ましく、800 μm以下であることがより好ましい。或いは、窪み部30の開口部の直径は、X＋α（ここで、Xは細胞の最大寸法を表す）と規定することもできる。ここで、αは、好ましくは0.01 mm以上であり、さらに好ましくは0.02 mm以上である。
【００５４】
本発明の細胞取扱容器の材質は、特に限定されない。細胞取扱容器及び細胞収容区画の材質としては、例えば、金属、ガラス及びシリコン等の無機材料、並びにプラスチック（例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ABS樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂及び塩化ビニル樹脂）で代表される有機材料を挙げることができる。細胞取扱容器及び細胞収容区画の材質は、前記で例示した1種以上のプラスチック材料を含むことが好ましく、前記で例示した1種以上のプラスチック材料からなることがより好ましい。前記プラスチック材料は、ダイカラードライ（大日精化）のような添加剤を添加することによって所望の透明度及び色の組み合わせを付与することができる。それ故、本発明の細胞取扱容器及び細胞収容区画が前記の材質で構成されることにより、光学顕微鏡を用いて細胞収容区画に収容された細胞を観察する場合に、鮮明な像を得ることができる。
【００５５】
本発明の細胞取扱容器は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、本発明の細胞取扱容器の材質が前記で例示した1種以上のプラスチック材料を含む場合、射出成形のような慣用の成形法を用いて本発明の細胞取扱容器を製造することができる。
【００５６】
本発明の細胞取扱容器は、その表面に受精卵の発育を促進するような表面処理又は表面コートが施されていてもよい。例えば、受精卵の発育を促進するために、他の器官の細胞（例えば、子宮内膜細胞又は卵管上皮細胞）と共培養をする場合、これらの共培養される細胞を予め細胞取扱容器の表面に接着させる必要がある。このような場合、細胞取扱容器の表面、例えば容器底部の内表面及び／又は収容区画底部の内表面に、細胞接着性の材料をコートすることが有利である。細胞接着性の材料としては、例えば特開2008-220320号公報及び特開2008-263863号公報等に記載の温度応答性ポリマー等の、所定の条件で細胞接着性を変化させることのできる環境応答性ポリマーを挙げることができる。前記の表面処理又は表面コートを施すことにより、共培養における培養効率を向上させることができる。
【００５７】
本発明の細胞取扱容器を用いて培養し且つ／又は観察する細胞の種類は、特に限定されない。前記細胞としては、例えば、受精卵、卵細胞、ES細胞（胚性幹細胞）及びiPS細胞（人工多能性幹細胞）を挙げることができる。本発明において、「卵細胞」は、未受精の卵細胞を意味し、未成熟卵母細胞及び成熟卵母細胞を包含する。受精卵は、受精後、卵割により2細胞期、4細胞期、8細胞期と細胞数が増えていき、桑実胚を経て、胚盤胞へと発生する。受精卵は、2細胞胚、4細胞胚及び8細胞胚等の初期胚、桑実胚、並びに胚盤胞（初期胚盤胞、拡張胚盤胞及び脱出胚盤胞を含む）を包含する。胚盤胞は、胎盤を形成する潜在能力がある外部細胞と胚を形成する潜在能力がある内部細胞塊とからなる胚を意味する。ES細胞は、胚盤胞の内部細胞塊から得られる未分化な多能性又は全能性細胞を意味する。iPS細胞は、体細胞（主に線維芽細胞）へ数種類の遺伝子（転写因子）を導入することにより、ES細胞に類似の分化万能性を付与した細胞を意味する。すなわち、本発明の細胞取扱容器において対象となる細胞は、単細胞だけでなく、受精卵及び胚盤胞のように複数の細胞の集合体も包含する。本発明の細胞取扱容器は、哺乳動物及び鳥類の細胞、特に哺乳動物の細胞の培養に好適である。哺乳動物は、温血脊椎動物を意味し、例えば、ヒト及びサル等の霊長類、マウス、ラット及びウサギ等の齧歯類、イヌ及びネコ等の愛玩動物、並びにウシ、ウマ及びブタ等の家畜を挙げることができる。
【００５８】
本発明の細胞取扱容器は、マイクロドロップ法による前記細胞の細胞培養に有利に使用することができる。本発明の細胞取扱容器を用いたマイクロドロップ法の実施形態を図7に示す。図7に示すように、通常、収容区画20, 20’, 20’’に培養液Mを添加した後、培養液Mを覆うようにオイルOを添加し、さらに培養液中に細胞Aを添加する。これらの作業は、通常はピペット又はガラスキャピラリー等の器具を用いて実施される。本発明の細胞取扱容器1は、上方の開口が大きいので、これらの操作を比較的容易に実施できる。
【００５９】
例えば、本発明の細胞取扱容器を用いて前記細胞の細胞培養を実施する場合、細胞培養は、通常は、本発明の細胞取扱容器を、培養細胞の発育及び維持に必要なガスを含む環境雰囲気及び一定の環境温度をもたらすインキュベーターに入れることにより実施される。本実施形態の場合、必要なガスとしては、例えば、水蒸気、遊離酸素（O2）及び二酸化炭素（CO2）を挙げることができる。環境温度及びCO2含有量を適切な範囲に調節することにより、培養液のpHを一定時間内に安定させることができる。画像比較プログラムにより、培養中の細胞の画像を予め保存された画像と比較することにより、培養の際の温度、ガス及び培地等の培養条件を調節することもできる。
【００６０】
例えば、本発明の細胞取扱容器を用いて受精卵を培養する場合、通常は、培養後に、子宮への移植に適した良質な受精卵であるか否かが判別される。本実施形態の場合、判別は自動で行ってもよいし、光学顕微鏡等により手動で行ってもよい。培養細胞の自動判別を実施する場合、光学顕微鏡により取得された収容区画の内部の細胞の画像をCCDカメラ等の検出装置を用いて撮像し、得られた画像を輪郭抽出処理に付して画像中の細胞に該当する部分を抽出し、抽出された細胞の画像を画像解析装置で解析することにより、細胞（例えば受精卵）の品質を判別することができる。画像の輪郭抽出処理としては、例えば、特開2006-337110号公報に記載された手段を採用することができる。
【００６１】
以上、詳細に説明したように、本発明の細胞取扱容器は、収容区画に収容された観察対象の細胞に焦点を合わせた状態のまま、焦点倍率を変更することなく顕微鏡の視野内で3種以上の収容区画群を構成する収容区画を容易に区別することができる。それ故、本発明の細胞取扱容器は、マイクロドロップ法等を用いて受精卵等の個別管理が必要な細胞を取り扱う場合に有利に使用することができる。
【符号の説明】
【００６２】
1…細胞取扱容器
10…容器の内部空間
11…容器底部
12…容器側壁部
20, 20’, 20’’, 20’’’…収容区画
21…収容区画底部
22, 22’, 22’’…収容区画側壁部
30…窪み部
d1, d2, d3…収容区画側壁部の厚さ
h1, h2, h3…収容区画側壁部の高さ
23, 23’, 23’’…収容区画空隙部
r1, r2, r3…収容区画の開口部の開口幅
A…細胞
M…培養液のドロップ
O…ミネラルオイル
【図１Ａ】
2017123801.tif 000003
【図１Ｂ】
2017123801.tif 000004
【図１Ｃ】
2017123801.tif 000005
【図１Ｄ】
2017123801.tif 000006
【図１Ｅ】
2017123801.tif 000007
【図１Ｆ】
2017123801.tif 000008
【図２】
2017123801.tif 000009
【図３】
2017123801.tif 000010
【図４】
2017123801.tif 000011
【図５】
2017123801.tif 000012
【図６Ａ】
2017123801.tif 000013
【図６Ｂ】
2017123801.tif 000014
【図６Ｃ】
2017123801.tif 000015
【図７】
2017123801.tif 000016