(57)【要約】【課題】従来の１００℃以下の熱水による熱水抽出により得られたアマチャ抽出物に比べ、単位量あたりの抽出物が多く、糖吸収抑制機能、抗糖化機能等に優れたアマチャ抽出物を得ることを目的とする。【解決手段】アマチャを原料とし、抽出溶媒に水を用いて、温度１２０〜１６０℃、各温度の飽和蒸気圧以上の圧力で行う亜臨界処理で得られ、糖吸収抑制機能及び糖化抑制機能を有するアマチャ抽出物及び製造方法に関する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アマチャを原料とし、抽出溶媒に水を用いて、温度１２０〜１６０℃、各温度の飽和蒸気圧以上の圧力で行う亜臨界処理で得られ、糖吸収抑制機能及び糖化抑制機能を有するアマチャ抽出物。
【請求項２】
前記亜臨界処理の処理時間が５〜６０分である請求項１に記載のアマチャ抽出物。
【請求項３】
アマチャを原料とし、抽出溶媒に水を用いて、温度１２０〜１６０℃、各温度の飽和蒸気圧以上の圧力で亜臨界処理する亜臨界処理工程を含む糖吸収抑制及び糖化抑制機能を有するアマチャ抽出物の製造方法。
【請求項４】
前記亜臨界処理工程後、固液分離工程を行う請求項３に記載のアマチャ抽出物の製造方法。
【請求項５】
前記亜臨界処理の処理時間が５〜６０分である請求項３に記載のアマチャ抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はアマチャ抽出物及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、アマチャ及びアマチャ抽出物が糖の吸収を抑制することや蛋白質の糖化を抑制することなどの優れた機能性を有することが知られている。特に糖吸収抑制機能や糖化抑制機能などによる糖尿病予防機能・治療機能、老化防止機能が注目されている。
【０００３】
特許文献１にはアマチャを水等の溶媒を用いて、常温もしくは常圧下での溶媒の沸点の範囲で行う、つまり、水であれば、１００℃以下の熱水抽出により得られたアマチャ抽出物をα−グルコシダーゼ阻害剤として用いることが記載されている。また、特許文献２には水やエタノール等の溶媒により６０℃でアマチャより抽出したアマチャ抽出物をメイラード反応の阻害剤として用いることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−１０４８９１号公報
【特許文献２】特開２００７−２５４３４４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従来技術である特許許文献１及び特許文献２には、１００℃以下の熱水による熱水抽出により得られるアマチャ抽出物が記載されている。従来技術には、アマチャ抽出物の抽出効率がよくないという問題がある。つまり、アマチャ抽出物の抽出効率を向上させることが望まれている。また、アマチャ抽出物が総合的に糖化を抑制することが望まれている。具体的には、糖吸収抑制機能（α−グルコシダーゼ阻害活性）及び、血液中蛋白質の糖化抑制機能（ＣＭＬ生成阻害活性）をさらに優れたアマチャ抽出物を得ることも望まれている。
【０００６】
本発明は、従来の１００℃以下の熱水による熱水抽出により得られたアマチャ抽出物に比べ、単位量あたりの抽出物が多く、糖吸収抑制機能、抗糖化機能等に優れたアマチャ抽出物を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、アマチャを原料とし、抽出溶媒に水を用いて、温度１２０〜１６０℃、各温度の飽和蒸気圧以上の圧力で行う亜臨界処理で得られ、糖吸収抑制及び血液中蛋白質の糖化抑制機能を有するアマチャ抽出物並びに製造方法に関する。
【０００８】
亜臨界処理工程後、固液分離工程を行うことが好ましい。
【０００９】
亜臨界処理の処理時間が５〜６０分であることが望ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のアマチャ抽出物は、１００℃以下の熱水による熱水抽出により得られたアマチャ抽出物に比べ、抽出物単位量あたりの糖吸収抑制機能及び血液中蛋白質の糖化抑制機能に優れたアマチャ抽出物である。また、本発明のアマチャ抽出物の製造方法によれば、熱水抽出により得られたアマチャ抽出物に比べて、抽出物単位量あたりの糖吸収抑制機能及び血液中蛋白質の糖化抑制機能に優れたアマチャ抽出物を製造することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例及び比較例のＣＭＬ生成阻害活性を示すグラフである。
【図２】実施例及び比較例のα−グルコシダーゼ阻害活性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のアマチャ抽出物は、原料となるアマチャを所定の条件で亜臨界処理する亜臨界処理工程を含む製造方法により製造されたアマチャ抽出物である。
【００１３】
原料
本発明のアマチャ抽出物の原料となるアマチャとは、ユキノシタ科（Ｓａｘｉｆｒａｇａｃｅａｅ）アジサイ属（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ）のアマチャ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｓｅｒｒａｔａ  ｖａｒ．  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ（＝Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａ  ｖａｒ．  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ  Ｍａｋｉｎｏ））である。本発明においては、花、花穂、果皮、果実、茎、葉、枝、枝葉、幹、樹皮、根茎、根皮、根、種子または全草を原料として用いることができるが、葉及び／または枝先を用いることが好ましい。
【００１４】
後述の抽出工程に供するアマチャの状態などは特に限定されず、生の状態のものや乾燥、粉末化したものなどが好適に用いられる。抽出効率に優れるという理由からは、乾燥後、粒径が１〜３ｍｍになるまでミキサー等により粉砕した乾燥粉砕物を用いることが好ましい。なお、原料を使用する際には、抽出工程の前に土などの汚れを洗浄することが好ましい。
【００１５】
製造方法
本発明のアマチャ抽出物は、原料であるアマチャを所定の条件で亜臨界処理する亜臨界処理工程を経て得られたアマチャ抽出物である。
【００１６】
抽出工程
抽出工程は、アマチャ原料を亜臨界処理することで亜臨界処理物を得る工程である。亜臨界処理とは、所定温度及び圧力の条件下で亜臨界状態にした抽出溶媒としての亜臨界流体と抽出対象の原料（本発明ではアマチャ）とを接触させることにより、抽出原料から所定の成分を抽出するものである。例えば、水は、圧力２２．１２ＭＰａ、温度３７４．１５℃まで上げると液体でも気体でもない状態を示す。この点を水の臨界点といい、臨界点より低い温度及び圧力の熱水を亜臨界水という。この亜臨界水は、誘電率低下とイオン積の向上により、優れた成分抽出作用と加水分解作用を有する。
【００１７】
本発明の亜臨界処理では、抽出溶媒として安全性の観点から水を用いる。亜臨界処理に用いる抽出溶媒として水を用いる場合、高温の水処理であれば液体状態でも気体状態でも利用することができる。即ち、亜臨界処理の処理槽へは、水蒸気を供給してもよく、水を供給してもよく、あるいはその両者を供給してもよい。水または水蒸気の温度は望ましくは１００℃以上であり、望まれる反応場としては気体よりも液体状態の方が反応は進みやすいので、密閉に近い容器で強制的に液体の状態にした、いわゆる亜臨界の状態の水の使用が好ましい。より具体的には、金属やセラミックスなどの耐圧容器にアマチャと抽出溶媒である水を入れて、密閉状態に近い状態にし、水の亜臨界状態で、両者の接触を一定時間以上行うことで得られる抽出物を亜臨界処理物とすることができる。
【００１８】
亜臨界処理温度は、機能性成分を多く含有するアマチャ抽出物が得られるという理由から１２０〜１６０℃の間が好ましく、１２５〜１５５℃の間がより好ましい。亜臨界処理の温度が１２０℃未満の場合は、抽出が不十分となり、抽出物の機能性が向上しにくい傾向がある。また、亜臨界処理の温度が１６０℃を超える場合は、過分解してしまい、機能性成分の効果が低下する傾向がある。
【００１９】
亜臨界処理圧力は、各温度の飽和蒸気圧以上で行うことが好ましい。各温度での飽和蒸気圧は、日本機械学会蒸気表（１９６８年）を参照するなどして決定することができる。１２０〜１６０℃間の１０℃間隔における飽和蒸気圧を例示すると、１２０℃：０．２０ＭＰａ（２．０２ａｔ）、１３０℃：０．２７ＭＰａ（２．７５ａｔ）、１４０℃：０．３６ＭＰａ（３．６９ａｔ）、１５０℃：０．４８ＭＰａ（４．８５ａｔ）、１６０℃：０．６２ＭＰａ（６．３０ａｔ）である。この飽和蒸気圧以上の圧力にすることにより、アマチャの機能性成分が効率的に得られやすくなる。なお、亜臨界処理の圧力の上限は特に定められないが、高圧装置の仕様上、２０〜３０ＭＰａあたりに抑えることが好ましい。
【００２０】
亜臨界処理時間は、５〜６０分の間で行うことが好ましく、１０〜３０分の間で行うことがより好ましい。この処理時間の範囲にすることにより、アマチャの機能性成分が効率的に得られやすくなる。亜臨界処理時間が５分未満の場合は、得られる抽出物が不十分となる傾向がある。また、亜臨界処理時間が６０分を超える場合は、抽出物が過分解してしまい、機能性成分の効果が低下する傾向がある。
【００２１】
すなわち、抽出溶媒を水とした場合におけるアマチャの亜臨界処理による抽出条件は、処理温度は１２０〜１６０℃、処理圧力は各温度の飽和蒸気圧以上、処理時間は５〜６０分である。この条件で行うことにより、アマチャの機能性成分を効率的に抽出することができる。
【００２２】
固液分離工程及び乾燥工程
固液分離工程は、亜臨界処理物を抽出液と原料残渣（固体物）とに分離する工程である。具体的な固液分離工程としては、ろ紙を用いたろ過、遠心分離、デカンテーション、スクリュープレス、ローラープレス、ロータリードラムスクリーン、ベルトスクリーン、振動スクリーン、多重板振動フィルター、真空脱水、加圧脱水、ベルトプレス、遠心濃縮脱水、多重円板脱水などが挙げられる。なかでも、操作が簡便であり、分離効率に優れるという理由から、ろ過が好ましい。
【００２３】
固液分離工程により得られた抽出液はアマチャの機能性成分を含有するアマチャ抽出液としてそのまま、もしくは濃縮された状態で目的の使用に供することもできるが、より取り扱い性、保存性を高めるために乾燥させることが望ましい。抽出液を乾燥させることにより固形状のアマチャ抽出物が得られる。乾燥方法としては一般的な乾燥方法を用いることができ、自然放置はもちろんのこと、加熱系である箱型乾燥や噴霧乾燥などの伝熱乾燥、マイクロ波乾燥などの内部発熱乾燥、非加熱系である凍結乾燥、真空乾燥、吸引乾燥、加圧乾燥、超音波乾燥等が可能である。一般的で簡便なオーブン、恒温槽を用いて乾燥することももちろん許容される。
【００２４】
また、適宜、活性炭、イオン交換樹脂等の吸着剤を用いた不純物除去工程を乾燥工程の前に行ってもよい。このようにして得られたアマチャ抽出物はそのまま目的の使用に供することもできるし、他の成分を処方、配合して粉末、カプセル、錠剤の形態に加工してもよく、水、アルコールなどの可溶性溶媒に溶解させて液体の形態で使用してもよいのはもちろんのことである。
【００２５】
また、機能性の高い成分を選択的に得るために固液分離工程及び乾燥工程を経た抽出物に対し有機溶剤（アルコール類、ケトン類、アセトン類等）による抽出を行ってもよい。なかでも、人体への影響が少なく、食品及び化粧品への使用が容易であるという理由からエタノールが好ましい。
【００２６】
アマチャ抽出物における糖吸収抑制の評価方法としてはα−グルコシダーゼ阻害評価が、糖化抑制の評価方法としてはＣＭＬ（カルボキシメチルリジン）生成阻害評価が挙げられる。
【００２７】
α−グルコシダーゼ阻害評価は、抽出物における糖吸収抑制を評価するものであり、α−グルコシダーゼは糖のα−１，４−グルコシド結合を加水分解する反応を触媒する酵素であり、糖類の消化の過程で二糖類を単糖類へと分解する役目がある。小腸では、酵素により分解された単糖類を吸収しており、この吸収により体内の血糖値が上昇する。この酵素の役目を阻害することにより、二糖類を単糖類へと分解されにくくなるので、小腸での単糖類の吸収する度合いが低下し、体内の血糖値が上昇されにくくなり、その結果として、食後の急激な血糖値の上昇抑制を期待される。α−グルコシダーゼ阻害評価は、α−グルコシダーゼ阻害率（％）を算出し、ＩＣ５０値（終濃度）としてｍｇ／ｍｌで表される。このとき、ＩＣ５０値が、小さいほど糖吸収抑制の機能に優れるということとなる。
【００２８】
ＣＭＬ生成阻害評価は、ＡＧＥｓ（糖化最終生成物）の１種に非蛍光性のＣＭＬ（カルボキシメチルリジン）があり、アマドリ化合物の酸化的開裂により生成される。具体的には、脂質の過酸化などから生じるグリオキサール、あるいは次亜塩素酸とセリンから生じるグリコールアルデヒドとリジン残基の反応により生成される。ＡＧＥｓの１種であるＣＭＬの生成をアマチャ抽出物が阻害すると、糖化反応を抑制することができ、肌の衰えや動脈硬化などの糖化リスクを防ぐことが期待される。ＣＭＬ生成阻害評価は、ＣＭＬ生成阻害率（％）を算出し、ＩＣ５０値（終濃度）としてｍｇ／ｍｌで表される。このとき、ＩＣ５０値が小さいほど糖化反応抑制の機能に優れるということとなる。
【００２９】
アマチャ抽出物
本発明のアマチャ抽出物は、糖吸収抑制機能（α−グルコシダーゼ阻害活性）及び血液中蛋白質の糖化抑制機能（ＣＭＬ生成阻害活性）に優れた機能性を有する。よって、本発明のアマチャ抽出物は、第一段階として、糖吸収抑制機能によって食物中の糖類の分解をしにくくし、体内の血液中に入る糖を減らすことにより糖と体内の蛋白質の反応を減らすことができ、第二段階として、体内において糖化抑制機能によって糖と蛋白質の反応であるＡＧＥｓ（糖化最終生成物）の１種のＣＭＬの生成自体も抑制されると推定される。このように二段階で糖化抑制に作用することができる。
【００３０】
本発明のアマチャ抽出物は、熱水抽出により得られたアマチャ抽出物に比べ、単位量あたりの糖吸収抑制機能及び血液中蛋白質の糖化抑制機能に優れたアマチャ抽出物であることから、糖尿病予防剤、糖尿病治療剤、痩身剤、老化予防剤などに好適に用いることができる。
【実施例】
【００３１】
本発明を実施例に基づいて説明するが、本発明は実施例のみに限定されるものではない。
【００３２】
＜アマチャ抽出物の調製＞
実施例及び比較例のアマチャ抽出物の調製工程を説明する。
【００３３】
アマチャの乾燥粉砕物の調製
インドネシア産のアマチャ（Ｈｙｄｒａｎｇｅａ  ｓｅｒｒａｔａ  ｖａｒ．  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）の葉部分を水で洗浄後、オーブンにて絶乾状態としたものをミキサー（象印マホービン株式会社製のＢＭ−ＲＳ０８）にて粒子径が１〜３ｍｍとなるまで粉砕し、アマチャの乾燥粉砕物を得た。
【００３４】
実施例１（亜臨界処理、１２５℃）
容積２Ｌの耐圧容器に、アマチャの乾燥粉砕物を４０ｇ入れ、処理温度１２５℃、処理圧力０．２ＭＰａ、処理時間３０分（昇温時間３分含む）で亜臨界処理を行った。亜臨界処理の終了後、上記排気バルブを操作して５分間で大気圧まで戻し、処理缶内の処理物（スラリー）を回収した。回収されたスラリーをセルロース製ろ紙（孔径：１μｍ、ＡＤＶＡＮＴＥＣ製の５Ｃ）で吸引ろ過し、ろ液（亜臨界抽出液）を得た。そして、亜臨界抽出液を凍結乾燥機（東京理化器械株式会社製のＦＤＵ−２２００）により乾燥させて粉末状態の亜臨界抽出物を１６．２ｇ得た。
【００３５】
実施例２（亜臨界処理、１５５℃）
亜臨界処理条件を、処理温度１５５℃、処理圧力０．５ＭＰａ、処理時間３０分としたこと以外は、実施例１と同様に亜臨界処理、固液分離及び凍結乾燥を行い、粉末状態の亜臨界抽出物を２０．３ｇ得た。
【００３６】
比較例１（亜臨界処理、１６５℃）
亜臨界処理条件を、処理温度１６５℃、処理圧力０．７ＭＰａ、処理時間３０分としたこと以外は、実施例１と同様に亜臨界処理、固液分離及び凍結乾燥を行い、粉末状態の亜臨界抽出物を２０．１ｇ得た。
【００３７】
比較例２（亜臨界処理、１７５℃）
亜臨界処理条件を、処理温度１７５℃、処理圧力０．９ＭＰａ、処理時間３０分としたこと以外は、実施例１と同様に亜臨界処理、固液分離及び凍結乾燥を行い、粉末状態の亜臨界抽出物を２１．４ｇ得た。
【００３８】
比較例３（亜臨界処理、１９５℃）
亜臨界処理条件を、処理温度１９５℃、処理圧力１．４ＭＰａ、処理時間３０分としたこと以外は、実施例１と同様に亜臨界処理、固液分離及び凍結乾燥を行い、粉末状態の亜臨界抽出物を２４．８ｇ得た。
【００３９】
比較例４（熱水処理）
２Ｌ容のビーカーに、アマチャの乾燥粉砕物を４０ｇ及び水を１０００ｍｌ入れ、処理温度９０℃、大気圧下、処理時間１２０分で熱水処理を行い、熱水処理物を得た。熱水処理時間後、セルロース製ろ紙（孔径：１μｍ、ＡＤＶＡＮＴＥＣ製の５Ｃ）で吸引ろ過し、ろ液（熱水抽出液）を得た。そして、熱水抽出液を凍結乾燥機（東京理化器械株式会社製のＦＤＵ−２２００）により乾燥させて粉末状態の熱水抽出物１７．２ｇを得た。
【００４０】
＜評価＞
各実施例及び比較例で調製した抽出物について、下記の評価を行った。
【００４１】
アマチャ抽出量
アマチャ抽出量として乾燥粉砕物１ｇあたりのアマチャ抽出物量（ｍｇ）で算出した。
【００４２】
ＣＭＬ生成阻害活性試験
各抽出物の濃度が１００ｍｇ／ｍｌとなるように蒸留水に溶解させ、０．２０μｍメンブランフィルターによりろ過した溶液を適宜蒸留水にて希釈した溶液１００μＬ、８ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）２００μＬ、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５００μＬ、蒸留水１００μＬ及び２Ｍグルトース溶液１００μＬを混合し、全量１ｍＬに調整した。その後、それらの混合液を温度６０℃、４０時間インキュベートしたもの［サンプル（Ｓ）］を糖化反応物のサンプル溶液としてＣＭＬ生成阻害活性試験に用いた。
対照としては、２Ｍグルコース溶液の替わりに同量の蒸留水を添加したもの［サンプルブランク（ＳＢ）］、サンプルの代わりに同量の蒸留水を添加したもの［コントロール（Ｃ）］、サンプル及び２Ｍグルコース溶液の替わりに同量の蒸留水を添加したもの［コントロールブランク（ＣＢ）］も同じ条件で反応させた。
【００４３】
特開２０１３−２５３０７２号公報などに記載された、測定キット：ＣｉｒｃｕＬｅｘ  ＣＭＬ／Ｎε−（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）ｌｙｓｉｎｅ ＥＬＩＳＡ ＫＩＴ（株式会社サイクレックス）を用いて各実施例及び比較例のＣＭＬ生成阻害活性（蛋白質の糖化抑制機能）を測定した。
次の試薬を調製し使用した。
洗浄液：測定キットに付属の１０×Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒを精製水で１０倍に希釈したもの
第一次抗体溶液：測定キットに付属のＰｒｉｍａｒｙ  Ａｎｔｉｂｏｄｙに精製水１．２５ｍｌを加えて良く混合し、混合液４００μｌをキットに付属のＳａｍｐｌｅ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒにて３０倍に希釈したもの
標準液１〜７及びブランク：検量線の作成に使用、キットに付属のＣＭＬ−ＨＳＡ  Ｓｔａｎｄａｒｄを希釈したもの（標準液１：７．０μｇ／ｍｌ、標準液２：３．５μｇ／ｍｌ、標準液３：１．７５μｇ／ｍｌ、標準液４：０．８７５μｇ／ｍｌ、標準液５：０．４３８μｇ／ｍｌ、標準液６：０．２１９μｇ／ｍｌ、標準液７：０．１０９μｇ／ｍｌ、ブランク：０μｇ／ｍｌ）
【００４４】
マイクロプレートの各ウェルに、Ｓａｍｐｌｅ  Ｄｉｌｕｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒで４倍に希釈したサンプル溶液を６０μｌ、及び第一次抗体溶液を６０μｌ入れて混合した。得られた混合液を抗原固相プレートの各ウェルに１００μｌずつ分注し、プレートシールで密封後、６０ｒｐｍで振盪させながら２５℃で１時間反応させた。反応終了後、各ウェルの反応液を除去し、洗浄液による洗浄を４回行った後、完全に乾燥させない程度に水分を取り除いた。その後、各ウェルにキットに付属の第二次抗体溶液（ＨＰＲ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）を１００μｌずつ分注し、プレートシールで密封後、６０ｒｐｍで振盪させながら２５℃で１時間反応させた。反応後、各ウェルの反応液を除去し、洗浄液による洗浄を４回行った後、完全に乾燥させない程度に水分を取り除いた。そして、キットに付属の発色剤（Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ）を１００μｌずつ分注して、混合し、アルミホイルで遮光し、２５℃で２０分間静置させた。静置後反応停止液を、発色剤を入れた順に加えて反応を停止させた。反応停止後、３０分以内にマイクロプレートリーダー（サーモフィッシャーサイエンティフィック株式会社製のマルチスキャンＪＸ）により、測定波長４５０ｎｍ／参照波長５４０ｎｍの吸光度を測定し、標準液の検量線からＣＭＬ量を算出した。
［ＣＭＬ生成阻害率とＩＣ５０値の算出］
各ＣＭＬ量測定結果を用いて、下記の式により各アマチャ抽出物のＣＭＬ生成阻害率（％）を算出し、ＩＣ５０値（終濃度）を求めた。ｎ＝３で測定した値の平均値を結果とし、表１及び図１に示す。なお、図中のエラーバーは３回の測定の標準偏差を示す。
式：（（Ｃ−ＣＢ）−（Ｓ−ＳＢ））／（Ｃ−ＣＢ）×１００
【００４５】
α−グルコシダーゼ阻害活性試験
下記の方法により各実施例及び比較例の糖吸収抑制機能（α−グルコシダーゼ阻害活性）を測定した。
次の試薬を調製し使用した。なお、全てのリン酸緩衝液はｐＨ＝７．０、０.１Ｍの同じものを使用した。
アルブミン溶液：ウシ血清由来アルブミンを０．２質量％含有する１０ｍＭリン酸緩衝液
酵素溶液：α−グルコシダーゼ（和光純薬製）を０．２５ｕｎｉｔ／ｍｌ含有するアルブミン溶液
基質溶液：１ｍＭのｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−グルコシド（和光純薬製）を含有するリン酸緩衝液
反応停止液：０．２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液
サンプル溶液：各抽出物の濃度が１００ｍｇ／ｍｌとなるように蒸留水に溶解させ、０．２０μｍメンブランフィルターによりろ過した溶液を適宜蒸留水にて希釈した溶液
［サンプル（Ｓ）］
マイクロプレートの各ウェルに２５μｌの各サンプル溶液、２５μｌの基質溶液及び２５μｌのリン酸緩衝液を順に入れた。さらに、２５μｌの酵素溶液を加え、３７℃で１５分間静置させた後、２００μｌの反応停止液を加えた。その後、吸光プレートリーダーマルチスキャンＪＸ（サーモフィッシャーサイエンティフィック（株））使用し、４０５ｎｍの吸光度（Ｓ）を測定した。
［コントロール（Ｃ）］
２５μｌのサンプル溶液に替えて２５μｌの蒸留水を使用したこと以外は（Ｓ）と同じ条件で反応させ、吸光度（Ｃ）を測定した。
［サンプルブランク（ＳＢ）］
２５μｌの酵素溶液に替えて２５μｌのリン酸緩衝液を使用したこと以外は（Ｓ）と同じ条件で反応させ、吸光度（ＳＢ）を測定した。
［コントロールブランク（ＣＢ）］
２５μｌのサンプル溶液に替えて２５μｌの蒸留水を使用したこと、及び２５μｌの酵素溶液に替えて２５μｌのリン酸緩衝液を使用したこと以外は（Ｓ）と同じ条件で反応させ、吸光度（ＣＢ）を測定した。
［α−グルコシダーゼ阻害率とＩＣ５０値の算出］
各吸光度測定結果を用いて、下記の式により各アマチャ抽出物のα−グルコシダーゼ阻害率（％）を算出し、ＩＣ５０値（終濃度）を求めた。ｎ＝３で測定した値の平均値を結果とし、表１及び図２に示す。なお、図中のエラーバーは３回の測定の標準偏差を示す。
式：（（Ｃ−ＣＢ）−（Ｓ−ＳＢ））／（Ｃ−ＣＢ）×１００
【００４６】
【表１】
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【００４７】
表１並びに図１及び図２の結果より、本発明のアマチャ抽出物は、熱水抽出により得られたアマチャ抽出物に比べ、単位量あたりの糖吸収抑制機能及び血液中蛋白質の糖化抑制機能に優れたアマチャ抽出物であることがわかる。なお、抽出量と機能性評価との相関はなく、抽出量が多くても、糖吸収抑制機能及び血液中蛋白質の糖化抑制機能への寄与には影響がないことが確認された。
【図１】
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【図２】
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