(57)【要約】【課題】遠心分離を円板状の回転体内部で行う方法において、視認性の向上のために十分な平坦性と接合の均一性を確保する。また、遠心分離後に特定の分画を簡便かつ高い純度で回収する方法を実現させる。併せて、遠心分離の機能に寄与しない無駄な構造をできる限り排除する。【解決手段】遠心分離の機能に必要な最小限の構成を小型平板状の分離チップとして形成することにより、面積が大幅に削減され、平坦性と接合の均一性が容易に得られる。また、分離チップを円板状の支持体に固定して回転させることにより、目的に応じて使用および廃棄される部分を最小限に抑制できる。さらに、分離チップ内の分離槽の側壁を弾性体で形成し、吸引針を当該側壁に穿刺して特定の分画を吸引することにより、簡便かつ高い純度で回収できる。【選択図】図１
2017205709.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
平板状に形成された小型チップの内部に形成された空間を分離槽とし、当該小型チップを回転させることにより当該分離槽内で遠心分離を行うことを特徴とする細胞等の粒子状成分の分離方法。
【請求項２】
前記小型チップは厚さが２〜５ミリメートルである、請求項１に記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項３】
前記小型チップは、少なくとも観察および／または照明を実施する部位が、ガラス、樹脂、またはゴムのいずれかの透明材料で形成されている、請求項１または２に記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項４】
前記小型チップは、分離槽および少なくとも１つの比重液槽を内部に有し、当該小型チップを回転させて遠心力を印加することにより、当該比重液槽と当該分離槽を接続する流路を通して比重液が当該分離槽へ流入することを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項５】
前記比重液槽が複数存在し、当該比重液槽の形状および／または回転軸からの距離の違いにより生じる遠心力の差により、各比重液槽からの流出量が時間の経過とともに変化することを利用して、前記分離槽内に比重が連続的に変化する状態が生成されることを特徴とする、請求項４に記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項６】
前記小型チップは、分離槽と少なくとも１つの比重液槽と試料液槽を内部に有し、まず第一に、当該比重液槽から当該分離槽への比重液の流出が発生し、かつ、当該試料液槽から当該分離槽への試料液体の流出は発生しない速度で当該小型チップを回転させることにより、当該比重液の当該分離槽への流出を完了させた後に、回転速度を大きくすることにより、試料液体の当該分離槽への流出が実施されることを特徴とする、請求項４または５に記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項７】
前記小型チップは、分離槽と少なくとも１つの比重液槽と試料液槽を内部に有し、当該試料液槽から当該分離槽への流路が、当該各比重液槽から当該分離槽への流路に比して長距離である、および／または、断面積が小さいことにより、各比重液の当該分離槽への流出が完了した後に試料液体の当該分離槽への流出が実施されることを特徴とする、請求項４または５に記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項８】
前記小型チップを少なくとも１つ収容し、少なくとも２か所以上の突起物により当該小型チップを押さえて回転させるチップ固定板を有する小型チップ回転装置において、当該突起物を変位させずに当該分離チップを着脱できる位置が存在し、かつ、回転中の遠心力により当該分離チップが押さえつけられた位置においては、当該突起物により当該小型チップの回転面の法線方向への移動が不可能になることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項９】
前記小型チップ内部の分離槽の側壁が弾性体によって形成されていることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項１０】
前記側壁を形成する弾性体がシリコンゴムであり、当該弾性体がガラスまたはシリカ膜を塗布された樹脂に接合されて前記分離槽が形成されることを特徴とする、請求項９に記載の粒子状成分の分離方法。
【請求項１１】
前記弾性体によって形成されている小型チップの側面に、前記分離槽内で同一の比重を形成する方向に吸引針を穿刺することにより特定の比重範囲の成分を吸引採取することを特徴とする、請求項９または１０に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【請求項１２】
前記吸引針の内部断面積と前記分離槽への進入距離の積を進入容積とし、当該進入容積が発生する間に、当該吸引針が接続された吸引用のシリンジの内部に発生する空間の容積を吸引容積とするとき、吸引容積が進入容積の１〜３倍になるように制御を行い、当該吸引容積の発生により生じる陰圧力で分離槽内の特定の比重範囲の成分を吸引採取することを特徴とする、請求項１１に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【請求項１３】
前記吸引針が接続されたシリンジの内部に陰圧を発生させるためのプランジャーを固定し、シリンジ外筒およびこれに接続された吸引針を前記分離槽に進入させることにより、当該吸引針の分離槽への進入距離と、当該プランジャーが相対的に後退することにより当該シリンジの内部に発生する空間の長さが同一となることを特徴とする、請求項１２に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【請求項１４】
前記吸引針の内部断面積に対する前記シリンジの内部断面積の大きさが、１．０〜３．０倍の範囲である、請求項１３に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【請求項１５】
前記吸引針を穿刺する位置を、ディスプレイに表示された前記分離槽を撮影した画像に対して指定できることを特徴とする、請求項１１〜１４のいずれかに記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【請求項１６】
あらかじめ設置された吸引針にシリンジを移動させて接続するステップと、当該吸引針に付けられた保護キャップのみに作用する突起により当該保護キャップを取り外すステップと、前記分離槽内の特定の比重成分の位置に当該吸引針の位置を合わせるステップとを有する請求項１１〜１５のいずれかに記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粒子や懸濁物質、血液や培養細胞等の各種粒子状成分を分離および回収する手法、装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、細胞等の各種粒子を遠心分離等の方法により分離し、特定の分画を回収するという手法が広く利用されている。回収された粒子は別途測定器、顕微鏡、実験装置等を用いて評価、精製され、目的に応じて利用される。例えば血液等の生体試料を遠心分離し、その中に含まれる特定の白血球などの分画を回収し、その数をカウントして検査および診断に利用する、培養液を用いて研究目的で細胞を増殖させるといったことが日常的に行われている。
とくに生命科学研究の目的においては、より信頼性の高いデータを得るために、個々の細胞レベルで情報を取得したり、培養を行いたいという要求が急速に強まっている。
【０００３】
個々の細胞レベルで情報を取得する方法として最も一般的なものは、フローサイトメトリーを利用する方法である。この方法ではまず、多数の細胞が含まれる生体試料を非常に狭い流れに絞り、個々の細胞にレーザー光が照射できるようになっている。レーザーの照射結果から、細胞の大きさ、形状、細胞に吸着した物質の蛍光情報等の多数の情報が得られる。さらに最近では、取得した情報に基づき、特定の条件を満たす細胞のみを回収するセルソータ―機能を有するものも普及している。ただし装置としては非常に高価であり、幅広い研究あるいは医療の現場で、誰もが日常的に利用できる状況にはなっていない。
【０００４】
一方、遠心分離機については非常に小型で安価なものも普及しており、幅広く日常的に利用することが可能になっている。ただし、分離の経過をリアルタイムで確認することができない、遠心分離後のチューブから特定の細胞を回収するためには吸引チップを上方から挿入しなければならず目的外の細胞が混入しやすい、といった問題があり、個々の細胞レベルで精度の高い情報を得る、または純度の高い細胞分画を回収するためには、結局はフローサイトメトリー等の方法と併用しなければならないのが現状である。
【０００５】
発明者らは特開２０１６−０５７３０３において、これらの遠心分離法の問題点を解決すべく、円板状の回転体に遠心分離を行うための槽を形成し、これを回転させる際に回転同期照明を用いることにより、リアルタイムに遠心分離の様子を確認できる方法を実現させた。この方法によれば、分離槽は樹脂透明平板に挟まれた構造であるため分離した分画の視認性もよく、特定の分画の位置にレーザー等により穿孔し、再度回転させることにより、他の成分が混入することなく回収することも可能である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１６−０５７３０３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
前記の通り、円板状の回転体に分離槽を形成することにより、視認性の向上および純度の高い分画回収といった利点が得られるが、この方法には解決すべき課題が残されている。
まず第一に、円板状の面積の大きな樹脂ディスクを形成すると、十分な平坦性を保つことおよび接合の均一性を得ることが難しくなる。とくに、分離した細胞を高倍率の光学系で撮影し計数を行うような場合には平坦性が重要である。
第二に、特定の分画を回収するためにレーザー穿孔を利用するためには、分離槽の一部をレーザー穿孔できるフィルム等でカバーし、穿孔により抽出される分画をディスク内に収容するための槽も必要になるため、ディスクは多層構造で複雑なものにならざるを得ない。この場合、ディスク表層はレーザー光を透過させ、内部の穿孔フィルムにレーザーを集光させなければならず、光学系も高い精度を求められる。また、分離後に一旦回転を停止し、レーザー穿孔を行った後、再度回転させなければ抽出ができないため、手間が大きい。
第三に、遠心分離による分画を回収したい場合には、回転分離後に分離槽が鉛直下方に位置するように停止させなければ分離状態が崩れてしまう。したがって、円板状の形状のうち、実際に利用できる分離槽の位置は一箇所に限定されることになり、大部分は遠心分離の機能に寄与しない無駄が生じてしまう。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
第一の課題を解決するべく、本発明では分離槽を円板状のディスクに形成するのではなく、必要な分離を行うための最小限の構造を小型平板状の遠心分離チップとして形成し、これを円板状の支持体に装着して回転させる構成とする。支持体は精密金属加工により高い形状精度を得られ、分離チップも小面積であることから形状精度に優れたものになる。したがって、高倍率の光学系で観察および撮影を行う際にも、必要な位置精度を容易に実現できる。
この構成は第三の課題の解決にも有用であり、単に遠心分離の様子を確認するだけでよい場合には分離チップを支持体に複数装着して回転させ、分離した分画を回収したい場合には分離チップを１つのみ装着して鉛直下方で停止させればよい。支持体は繰り返し利用できるものであるから、使用後に廃棄される部分（分離チップ）は最小限に抑えられる。
【０００９】
さらに第二の課題については、本発明ではレーザー穿孔を利用せず、分離チップの側面に針を穿刺して吸引する方法を用いることで解決する。すなわち、少なくとも分離槽の側面部分（側壁）をシリコンゴム等の弾性体で形成し、金属針や樹脂チップ等で穿刺できるようにする。分画の位置はルーペ等により拡大して観察確認するか、あるいは撮影した画像をディスプレイに表示して確認できる。回収したい分画の位置の真横に針を穿刺し、必要量を吸引しつつ分画の長辺方向に平行に針を進行させることにより、他の分画に接触することが回避され、目的とする成分を高い純度で回収することが可能になる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の細胞等の粒子状成分の分離方法およ０１び回収方法によれば、非常に簡便な構成で目的とする成分を確実に分離し、かつ高い純度で回収することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】遠心分離チップの形状の一例を示す図である。
【図２】遠心分離チップの形状の一例を示す図である。
【図３】連続密度勾配生成機能を有する遠心分離チップの形状の一例を示す図である。
【図４】連続密度勾配生成機能を有する遠心分離チップの形状の一例を示す図である。
【図５】遠心分離チップを保持する円板状支持体の一例を示す図である。
【図６】遠心分離チップを固定する方法の一例を示す図である。
【図７】遠心分離チップを固定する方法の一例を示す図である。
【図８】遠心分離した分画を回収する方法の一例を示す図である。
【図９】遠心分離チップの形状の一例を示す図である。
【図１０】遠心分離した分画を回収する装置の機能の一例を示す図である。
【図１１】遠心分離した分画を回収する装置の機能の一例を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
（定義）
以下、本発明を具体的に説明するにあたり、重要な表現について以下に定義しておく。
本発明における「遠心分離チップ」とは、内部に遠心分離を実施するための空間（これを以下、「分離槽」と呼ぶ）を有する小型平板状のチップを意味する。ここでいう「小型」とは、遠心分離チップの外形を成す最長の一辺が１５０ミリメートル以下であることを意味する。また、ここでいう「平板状」とは、当該最長の一辺を含む面を底面としたとき、高さ（厚さ）が当該最長の一辺に対して２０パーセント以下であることを意味する。以上が形状に関する表現の定義である。
次に、本発明における「回転軸」とは、上記の遠心分離チップを用いて遠心分離を実行する際の回転中心軸を意味する。本発明においては遠心分離チップを固定板に固定して遠心分離を実行するため、回転軸は遠心分離チップの内部には存在せず、固定板の回転中心軸となる。また、本発明における分離槽の「側面」とは、分離槽を形成する各面のうち、回転中に遠心力が作用する方向と遠心分離チップの厚さ方向とが成す面、あるいはこの面と成す角度が最も小さくなる面を指す。なお、「側壁」は当該側面を形成する部分のことを指す。また、本発明における「正面」とは、遠心分離チップの厚さ方向の成分を含まない面、あるいは当該成分が最小となる面のうち、分離状態の視認および撮影を行う面を指す。以上が遠心分離に関する表現の定義である。
【００１３】
以下、本発明を実施するための具体的構成について、図を用いて詳細に説明する。
【実施例１】
【００１４】
図１は、本発明で使用する遠心分離チップの形状の一例を示す図である。図１（a）は遠心分離チップを正面から見た図であるが、外形は小型平板状であり、チップ形成体１０１の内部に分離槽１０２の空間が設けられている。チップ形成体１０１の材質はガラス、樹脂、シリコン等の透明材であるが、とくに蛍光観察が重要な用途においては自家蛍光の少ないガラス、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、シクロオレフィンポリマー（ＣＯＰ）といった材質が優先的に選定される。ただし、正面（分離状態を視認または撮影する面）から確認のために必要な照明を行う場合、その対向面は黒色などで着色されている方が望ましいため、必ずしもチップ形成体全体が透明である必要はない。遠心分離チップの外形の短辺方向（幅）Ｗは１０〜３０ミリメートル程度、長辺方向Ｈは１５〜５０ミリメートル程度とすることが望ましいが、これに限定されるものではない。重要なことは、遠心分離を実施するために必要最小限の構造をチップ化することにより小型化し、大面積のディスクでは難しい平坦性および接合の均一性を確保するということである。なお、回転分離中の様子をリアルタイムに確認する必要がない場合には、後述する専用の遠心分離装置を用いなくとも、広く普及している遠心分離用チューブに本発明の遠心分離チップを挿入し、一般的な遠心分離機にセットして行えばよい。一般的な容量１５ミリリットルのチューブであれば遠心分離チップの幅は１３〜１４ミリメートル程度、容量５０ミリリットルのチューブであれば分離チップの幅は２５〜２７ミリメートル程度とすればよい。一般的な遠心分離機にセットするための専用部材を用意する場合には、これらの幅である必要はない。
【００１５】
また、図１（b）は遠心分離チップをA‐A’（分離槽の長辺方向）で切断した断面図である。遠心分離チップの厚さＴは２〜５ミリメートルとし、分離槽１０２の厚さは遠心分離チップの厚さＴ−１ミリメートル以下とするのが視認および撮影には好都合である。ただし、蛍光細胞を高倍率の光学系で撮影し、個々に計数したいような場合には、撮影レンズの被写界深度に応じて０．１〜０．５ミリメートル程度まで分離槽を薄くする必要がある。蛍光撮影用には、分離槽１０２のみではなく、チップ全体が薄くなる方が自家蛍光も少なく利点があるため、例えば分離槽を形成する樹脂フィルムの両面を、透明フィルムで挟んで接合することで形成すれば、厚さが０．５ミリメートル以下の分離チップを作製することも可能である。
【００１６】
分離用の比重液は必要であれば開口部１０３から注入され、さらに分離したい細胞等の粒子を含む液体を同じくこの開口部１０３から注入される。なお、遠心分離チップが縦方向、すなわち遠心力が作用する方向が鉛直下方になるように設置される場合には開口部１０３は分離槽１０２の上方（遠心力と反対の方向）に設ければよいが、分離チップが横方向（平板状の遠心分離チップを水平に寝かせる方向）に設置される場合には、このような形状では液体が漏洩してしまう。分離状態を回転停止後も保持する必要がなく、回転中の様子を確認できればよいという用途であれば、遠心分離チップを水平に複数設置する方が効率が良いため、この場合には図２に示すように、分離槽２０２から正面方向に開口部２０３を設ける。
【００１７】
いずれにせよ、本発明で使用する分離チップは小型の平板状の形態になっていることが特徴であり、これにより視認性が向上し、分離の状態を視認や撮影により確認しやすくなる。これを、本発明の第１の発明として、以下のように記述する。
（第１の発明）
平板状に形成された小型チップの内部に形成された空間を分離槽とし、当該小型チップを回転させることにより当該分離槽内で遠心分離を行うことを特徴とする細胞等の粒子状成分の分離方法。
（第２の発明）
前記小型チップは厚さが２〜５ミリメートルである、第１の発明に記載の粒子状成分の分離方法。
（第３の発明）
前記小型チップは、少なくとも観察および／または照明を実施する部位が、ガラス、樹脂、またはゴムのいずれかの透明材料で形成されている、第１または第２の発明に記載の粒子状成分の分離方法。  
【００１８】
なお、発明者らは、特開２０１６−０５７３０３において、極めて容易に円板状回転体内部に連続密度勾配を形成し、精密な遠心分離を行う方法を実現させた。この構成を、本発明の細胞等の粒子状成分の分離方法および回収方法に適用することも可能である。この場合の構成を図３に示す。チップ形成体３０１の内部に空間状に分離槽３０２を設けることは前記の例と同じであるが、さらに比重液槽Ａ３０３、比重液槽Ｂ３０６が設けられる。これらの槽には比重液Ａ３０４を導入するための開口部Ａ３０５および比重液Ｂ３０７を導入するための開口部Ｂ３０７が設けられる。さらにこれら２槽は微細流路３０９により、分離槽３０２に接続される。微細流路３０９はＹ字形状を成し、分離槽３０２へ比重液が流入する前に混合されるようになっていることが基本形式であるが、粘性の高い液を用いる場合や、２液に著しい比重差がある場合には適切に混合されない場合があるため、微細流路３０９はそれぞれ独立に比重液槽Ａと分離槽、比重液槽Ｂと分離槽を接続する形状であってもよい。微細流路の幅および深さはいずれも１０〜５００マイクロメートルの範囲から選択されるが、細胞の分離用途では主に１００〜３００マイクロメートルとすることが好ましい。脱気孔３１０は液体を導入するためのものではなく、比重液槽から比重液を導入するために必要な脱気を行うためのものである。連続密度勾配を利用して分離を行いたい試料液体は、連続密度勾配形成後に一旦回転を停止させ、開口部Ａ３０５または開口部Ｂ３０７から導入すればよい。
【００１９】
図３の構成で重要なことは、複数の比重液槽の形状を異なるものにする、および／または、複数の比重液槽の回転軸からの距離を異なるものにすることにより、各比重液槽内の液体に作用する遠心力が時間に応じてそれぞれ変化するため、結果として各比重液槽から流出する比重液の比率が時間に応じて変化するという現象を利用し、分離槽に連続密度勾配が形成されるということである。実際には比重液が受ける遠心力は回転軸からの影響だけでなく、比重液自体の質量の影響も受けるため、分離目的に応じて比重液の組み合わせと比重液槽の形状が選択されることになる。なお、連続密度勾配を形成する必要がなく、１種類の比重液のみで分離を行う場合でも、比重液槽の一方または両方に同一の比重液を入れればよい。また、一方を比重液、もう一方を分離を行いたい試料液体としてもよい。
【００２０】
以上の構成を、本発明の第４〜５の発明として、以下に記述する。
（第４の発明）
前記小型チップは、分離槽および少なくとも１つの比重液槽を内部に有し、当該小型チップを回転させて遠心力を印加することにより、当該比重液槽と当該分離槽を接続する流路を通して比重液が当該分離槽へ流入することを特徴とする、第１〜３のいずれかの発明に記載の粒子状成分の分離方法。
（第５の発明）
前記比重液槽が複数存在し、当該比重液槽の形状および／または回転軸からの距離の違いにより生じる遠心力の差により、各比重液槽からの流出量が時間の経過とともに変化することを利用して、前記分離槽内に比重が連続的に変化する状態が生成されることを特徴とする、第４の発明に記載の粒子状成分の分離方法。
【００２１】
図３の構成では連続密度勾配が容易に形成されるものの、これを用いて実際に分離を行いたい試料液体は一旦回転を停止させた後に加え、再度回転を行わなければならない。この手間を排除しさらに簡便にするためには、遠心分離チップ内に比重液だけでなく、あらかじめ試料液体も導入したうえで回転を開始させる必要がある。これが可能になれば、連続密度勾配形成後に回転を停止させて分離チップを鉛直下方に保持する必要がなくなるため、遠心分離チップを複数同時に使用することができる。ただし、試料液体が適切に分離されるためには、先に連続密度勾配が形成された後に試料液体が分離槽へ流入するような設計になっていなければならない。このような動作を実現させるための構成の一例を図４に示す。
【００２２】
図４の構成では、図３と同様にチップ形成体４０１の内部に分離槽４０２、比重液槽Ａ４０３、比重液槽Ｂ４０４が形成され、微細流路４０５によりこれらが接続されていることは同様である。さらに、試料液槽４０６も形成され、連続密度勾配形成の前段階から試料液体を導入しておくことが可能である。試料液槽４０６からも微細流路４０５へ通じており、分離槽４０２へ試料液体を導入することが可能である。問題は、先に各比重液槽から分離槽への比重液の導入が完了した後に、試料液体の分離槽への導入が実行されるための方法をどのように実現させるかである。
【００２３】
このような動作を実現させる第一の方法は、回転速度を途中で変化させることである。微小流路に液体が導入されるためには、その導入口で発生する液体の表面張力よりも強い遠心力が必要である。一般的には、遠心分離を行うための比重液よりも試料液体の方が粘性が高い場合が多いため、同一の断面積の流路に導入する場合でも、試料液体の方がより強い遠心力、すなわち回転速度を必要とする場合が多い。したがって、まず２種類の比重液が微小流路に導入され、かつ、試料液体は微小流路に導入されない回転速度で分離チップを回転させ、連続密度勾配形成後に回転速度を高めることにより、後から試料液体を分離槽へ導入すればよい。とくに図４に示すように試料液槽４０６を各比重液槽よりも回転軸に近い位置に設けることにより、試料液体に作用する遠心力は比重液に作用する遠心力よりも小さくなるため、導入に必要な回転数の差を大きくすることができ、動作を安定させやすくなる。それでも十分な動作ができない場合には、試料液槽４０６に接続される微小流路の断面積を比重液槽に接続される微小流路の断面積よりも小さくすることにより、試料液槽４０６の接続口の表面張力を高める方法を採用してもよい。
【００２４】
各比重液槽から分離槽への比重液の導入が完了した後に、試料液体の分離槽への導入が実行されるための第二の方法は、図４に示すように、各比重液槽から分離槽への距離に比して、試料液槽から分離槽への距離を長くする方法である。これにより、試料液槽から分離槽への到達時間が長くなり、それまでに比重液の移動および密度勾配の形成が完了するため、目的の動作を達成することができる。なお、この方法により有効な結果を得るためには、試料液槽から分離槽までの流路の容積と各比重液から分離槽までの流路の総容積の容積差分が、各比重液の容量を上回ることが理想的ではあるが、実際には試料液槽が回転軸に近いため遠心力が相対的に小さくなること、試料液体の粘性抵抗の影響があることにより、容積差分はそこまで大きく確保する必要はない。必要に応じて試料液槽から分離槽までの流路を細くし、流路の抵抗を増加させることにより、到達時間を遅らせることも可能である。
【００２５】
以上、図４を用いて説明した内容は、本発明の第６〜第７の発明として次のように記載することができる。
（第６の発明）
前記小型チップは、分離槽と少なくとも１つの比重液槽と試料液槽を内部に有し、まず第一に、当該比重液槽から当該分離槽への比重液の流出が発生し、かつ、当該試料液槽から当該分離槽への試料液体の流出は発生しない速度で当該小型チップを回転させることにより、当該比重液の当該分離槽への流出を完了させた後に、回転速度を大きくすることにより、試料液体の当該分離槽への流出が実施されることを特徴とする、第４または５の発明に記載の粒子状成分の分離方法。
（第７の発明）
前記小型チップは、分離槽と少なくとも１つの比重液槽と試料液槽を内部に有し、当該試料液槽から当該分離槽への流路が、当該各比重液槽から当該分離槽への流路に比して長距離である、および／または、断面積が小さいことにより、各比重液の当該分離槽への流出が完了した後に試料液体の当該分離槽への流出が実施されることを特徴とする、第４または５の発明に記載の粒子状成分の分離方法。
【００２６】
次に、遠心分離チップを固定し、必要な回転を実施するためのチップホルダーについて図５を用いて説明する。チップホルダーは主にチップ固定板５０１、背面板５０４、スピンドル５０５から構成される。固定板５０１にはチップ保持穴５０２が設けられており、ここに遠心分離チップを固定する。連続密度勾配形成後、あるいは遠心分離後の状態を維持しつつ回転を停止させなければならない用途以外では、遠心分離チップを鉛直下方の位置に保持する必要はなく、遠心分離チップを複数同時に使用することも可能であるため、チップ保持穴５０２も複数設けられている。チップ保持穴５０２には突起状のストッパー５０３が設けられている。これは遠心分離チップが回転中に外れないようにするための構造であるが、後に図を用いて説明する。固定板５０１の背面には透明背板５０４が貼り付け、あるいはねじ留め等により固定されている。透明材質を用いるのはカメラ等による撮影または光照射を行うためであり、これらの目的に必要な大きさの穴が開いていれば必ずしも透明でなくてもよい。ただし、後述する細胞採取の目的のため、遠心分離チップをシリコンゴム等の弾性体で形成する場合には、遠心分離中の遠心力の作用により分離槽が変形することは好ましくない。したがって、分離槽の変形防止のために硬質材料で押さえるという目的と、観察または光照射という目的を両立させるためには、透明樹脂やガラス等の透明硬質材で透明背板５０４を形成する必要がある。さらにこれらの背面中心にはスピンドル５０５が接続されている。スピンドル５０５の中心の穴にモーター軸を連結させることにより、遠心分離に必要な回転を実施することができる。
【００２７】
固定板５０１への遠心分離チップの固定方法について、図６を用いてさらに詳細に説明する。図６（a）において、遠心分離チップ６０１の側面には固定リブ６０２が設けられている。これまでの分離チップの説明では固定リブ６０２については記述していないが、これは分離機能自体には直接関係がないためであり、基本的にはいずれの遠心分離チップにも適用可能な構成である。固定リブ６０２には、少なくとも固定板のストッパー６０５を回避してチップ保持穴６０４に遠心分離チップ６０１を収容できるように、切り欠き６０３が設けられている。図６（b）は、図６（a）の矢印の方向と位置関係により遠心分離チップ６０１をチップ保持穴６０４に収容した状態を示している。この状態ではまだ固定リブ６０２とストッパー６０５は噛み合っていないため、正面方向に力を加えれば分離チップを取り外すことができる。さらに、図６（b）の矢印の方向に分離チップ６０１をスライドさせると、固定リブ６０２とストッパー６０５が噛み合うため、図６（a）の矢印と逆方向に力を加えても分離チップ６０１は動かない状態になる。この状態で固定板を回転させると遠心力は図６（b）の矢印の方向に強く作用するため、固定リブ６０２とストッパー６０５が噛み合った状態が解除されることはなく、分離チップ６０１が正面方向に飛び出してしまうことを回避できる。
【００２８】
図７（a）は図６（a）の状態を正面から見た状態であり、図７（b）は図６（c）の状態を正面から見た状態である。図７（b）の状態では遠心分離チップの固定リブ７０１と固定板のストッパー７０２が噛み合っている。このように、回転中に作用する遠心力による押し付けを利用することにより、非常に簡素な構造で遠心分離チップを固定することができる。固定リブ７０１とストッパー７０２が噛み合う点は４点程度あることが望ましいが、遠心力により分離チップが押し付けられる面に固定リブを設けるような構造でも問題はなく、この形状に限定されるものではない。重要なことは、本発明の第８の発明として記述される、次のような特徴を満たすことである。
（第８の発明）
前記小型チップを少なくとも１つ収容し、少なくとも２か所以上の突起物により当該小型チップを押さえて回転させるチップ固定板を有する小型チップ回転装置において、当該突起物を変位させずに当該分離チップを着脱できる位置が存在し、かつ、回転中の遠心力により当該分離チップが押さえつけられた位置においては、当該突起物により当該小型チップの回転面の法線方向への移動が不可能になることを特徴とする、第１〜７のいずれかの発明に記載の粒子状成分の分離方法。
【実施例２】
【００２９】
次に、本発明の第二の実施例として、遠心分離した細胞等の分画を回収する方法について説明する。一般的に遠心分離法が利用される場合、その分離状態を目視で確認することは難しく、また、分離状態を確認するだけでは比重情報しか得られず情報としても不十分であるため、ほとんどの場合は分離後の特定の分画を回収することになる。既に述べた通り、一般的に行われている吸引チップを挿入して分画を吸引する方法では試料液体が攪拌されてしまうため望ましくない成分が混入しやすく、発明者らが特開２０１６−０５７３０３において示したディスク遠心分離とレーザー穿孔を利用する方法でもまだ煩雑である。理想の形態は、回転停止後に再回転を要することなく、特定の分画を回収できることである。
【００３０】
本発明はこの課題を解決すべくなされたものであり、その大きな特徴は目的とする分画に平行に直接針を穿刺して吸引回収することである。それぞれの分画は同一の比重を有する粒子が形成しているものであるから、ここでいう「平行」とは、分離槽内で同一の比重を成している方向を意味する。この特徴を実現させるため、本発明では遠心分離チップとして図８に示すような構造のものを使用する。なお、遠心分離チップの形状としては図１のタイプを例として作図しているが、図２、図３、図４、図６および図７として記載したタイプの形態にも全く同様に適用できるものである。
【００３１】
図８に示す分離チップ８０１においても、平板状の外形の内部に分離槽８０２を有する基本構造に変わりはない。ただし、分離槽８０２の少なくとも穿刺する側壁８０３を、シリコンゴム等の弾性体で形成するということが特徴である。実際には穿刺する側壁のみを弾性体で形成することは製造上難しいため、図８のＢ−Ｂ’断面図に示すように、分離槽８０２を形成する層全体を弾性体で形成し、これを正面プレート８０４と背面プレート８０５で挟み込んで接合する形態が好ましい。正面プレート８０４と背面プレート８０５は透明ガラスまたは透明樹脂で形成するのがよく、これらが透明であれば視認性は確保されるため、分離槽８０２を形成する層は有色であっても問題ない。とくに、分離槽８０２を形成する層をシリコンゴムで形成する場合には、正面プレート８０４と背面プレート８０５をガラス、あるいはシリカ膜を塗布した樹脂で形成すれば、これらを放電改質処理するだけで容易かつ強固に接合できるため理想的である。なお、両プレートを硬質材料で形成するのは遠心分離中に分離槽が変形することを回避するためであるが、図５に示した構造のように、これらの面が硬い面に押さえられる構造になっている場合には、片面のみ硬質材料にするか、あるいは遠心分離チップ全体を弾性体で形成することも可能である。
【００３２】
このような分離チップを使用し、実際に遠心分離を行うと、例えば低比重分画８０６と高比重分画８０７に分離することができる。このうち、高比重分画８０７の方を回収したい場合、一般的なチューブを利用した遠心分離法では上方、すなわち低比重側のみが開放されているため、上方から吸引チップを挿入して吸引回収するしかなく、低比重分画８０６の一部が混入してしまう。低比重側の液体を全て吸引排除した上で高比重分画８０７を吸引することも不可能ではないが、非常に煩雑な操作が必要である。これに比べて本発明の方法では、まず遠心分離チップが平板状であるため分離状態を明確に観察あるいは撮影することができ、目的とする分画の位置と幅を高精度で認識することが可能である。さらに、分離槽８０２の側壁が弾性体で形成されていることにより、側面から吸引針８０８を穿刺して目的の分画を直接吸引することができるため、混入が生じる可能性もない。以上の構成を本発明の第９〜１１の発明として以下にまとめるが、これにより非常に簡便かつ高い純度で目的とする分画を回収することができる。
（第９の発明）
前記小型チップ内部の分離槽の側壁が弾性体によって形成されていることを特徴とする、第１〜８の発明に記載の粒子状成分の分離方法。
（第１０の発明）
前記側壁を形成する弾性体がシリコンゴムであり、当該弾性体がガラスまたはシリカ膜を塗布された樹脂に接合されて前記分離槽が形成されることを特徴とする、第９の発明に記載の粒子状成分の分離方法。
（第１１の発明）
前記弾性体によって形成されている小型チップの側面に、前記分離槽内で同一の比重を形成する方向に吸引針を穿刺することにより特定の比重範囲の成分を吸引採取することを特徴とする、第９〜１０の発明に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【００３３】
なお、上記のように分離槽の側面から吸引針を穿刺して吸引する場合、吸引針が長くなると破損しやすくなる問題や平行に穿刺進行していくことが難しくなる問題が発生する。そのため、分離槽の側壁は遠心力による変形が生じない範囲でできる限り薄い方がよく、好ましくは３ミリメートル以下にする。しかしながら、図４のように複数の分離槽および試料液槽も有する構成となると、分離槽よりも遥かに大きい幅が必要となり、遠心分離チップを平板状直方体の形状で製作することは難しくなる。そのため、図９に示すように直方体ではなく、分離槽９０１の側壁９０２を薄くするために、分離槽部分の幅が他の槽の位置の幅よりも小さくなるような形状とすることもありうる。
【００３４】
以上により遠心分離後の分画を回収することは可能になるが、実際に図８のような方法を利用しようとすると、まだ難しい点がある。例えば吸引針８０８の穿刺距離に対し、吸引針８０８から吸引する量が過剰であると、比重の異なる層からの流入も生じるため、結局は目的の分画以外からの混入が発生してしまう。反対に、吸引量が過小になってしまうと、針は進行しているにも関わらず分画は十分に吸引されないという状況が生じてしまう。吸引針８０８の内部断面積と分離槽穿刺距離の積を進入容積とし、吸引針８０８を装着したシリンジ等の吸引用具の内部断面積と吸引距離の積を吸引容積とした場合、理論的には進入容積と吸引容積が等しくなるように操作すれば、ほぼ吸引針８０８が進入した領域のみの液体を回収することができる。すなわち、目的の分画がこの領域に含まれていれば、高純度かつ高効率で回収できることになる。しかしながら、このような操作を手動で行うことはほぼ不可能であるため、進入容積と吸引容積が等しくなるように吸引用のシリンジおよびプランジャーを変位させる機能を有する回収装置を使用する必要がある。なお、シリンジと吸引針の間にシリコンチューブ等の弾性体が介在する場合には、吸引によりこの弾性体の容積も減少するため、吸引容積の一部は進入容積分の吸引に寄与しない結果となる。したがって、吸引容積は進入容積よりも最大で３倍大きくする必要がある。このような構成を、本発明の第１２の発明として併記しておく。
（第１２の発明）
前記吸引針の内部断面積と前記分離槽への進入距離の積を進入容積とし、当該進入容積が発生する間に、当該吸引針が接続された吸引用のシリンジの内部に発生する空間の容積を吸引容積とするとき、吸引容積が進入容積の１〜３倍になるように制御を行い、当該吸引容積の発生により生じる陰圧力で分離槽内の特定の比重範囲の成分を吸引採取することを特徴とする、第１１の発明に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【００３５】
このような方法を装置として実現させる場合でも、吸引針８０８の進入距離Ｘと、これを装着したシリンジの吸引距離Ｙは全く別のものであるから、制御としては複雑である。Ｘ＝kＹとなるような弾性定数kをもつようなばねをシリンジ側に取り付けることで特別な制御を行わずとも適切な吸引を行うことは理論的には可能であるが、必要な精度を確保することは容易ではない。より簡便な構成で必要な吸引動作を行うためには、吸引針８０８と同等の内部断面積を有するシリンジを使用すればよい。このような構成を図１０を用いて説明する。
【００３６】
図１０において（a）は、目的とする分画を回収するためにシリンジ類をセットした状態の模式図である。回収に使用される吸引針１００１は、分画の厚み（比重分布方向の幅）が状況によって変化することを考えると、一般的に使用される内径が選択可能な注射用の針とするのがよい。通常であれば、吸引針１００１にはコネクタ１００２が穿刺側とは反対側に接着されており、これを用いてシリンジの外筒１００３と連結される。本発明の目的においては吸引量が１０マイクロリットル程度である（分離槽の幅が１０ミリメートル、厚さが１ミリメートル、分画の厚みが１ミリメートルの場合）ため、使用されるシリンジの容量は一般的な採血に用いられるものよりも遥かに小さいものでなければならない。このような容量を扱うために使用されるシリンジは一般的にマイクロシリンジと呼ばれ、その内部断面積は吸引針１００１の内部断面積と同程度であるため、本発明の目的には好都合である。図１０（a）の状態ではシリンジのプランジャー１００４は最前位置にしておく。本発明の粒子状成分の回収方法の構成では、シリンジの外筒１００３は粒子状成分回収装置のシリンジ固定具１００６に固定されており、シリンジ固定具１００６を手動または自動で移動させることによりシリンジの位置を移動させることができるようになっている。また、粒子状成分回収装置にはプランジャースリット１００７が備えられている。これはプランジャー１００４の主要部の外径よりは大きく、プランジャー１００４の末端鍔１００５の径よりは小さい幅のスリットが施された部品であり、シリンジと針をセットした状態ではプランジャー１００４の主要部もこのスリットに挟まるようになっている。プランジャースリット１００７は一連の回収動作の中で移動させる必要がないため、粒子状成分回収装置の適切な位置に固定されている。なお、後述するようにシリンジの位置は目的とする分画の位置に応じて上下方向（分離チップの分離槽の比重分布が変化する方向）に移動させる必要があるため、スリットの長さはこの方向に十分可動できる大きさになっている。
【００３７】
一方、分離チップとしては図８を用いて説明した、分離槽の側壁が弾性体で形成されており、針による穿刺が可能なものを使用する。分離チップを回転させ遠心分離を行う機構と、ここで説明している分画回収機構が装置として一体化されていてもよいし、一旦遠心分離を行った後に、分画回収機構を有する装置に分離チップを移してもよい。図１０（a）は回収の開始のためにセットされた状態であり、分離チップの側壁１００８が吸引針１００１の先端側に位置するようにセットされている。回収したい分画１００９は試料液体の性質や比重液の組み合わせにより位置が変化するため、分画回収機構を有する装置としては、分画の位置が確認できるようにカメラによる画像を表示するか、拡大レンズにより観察できるようにしておくことが望ましい。使用者はまず、これらの手段を用いて目的の分画１００９の位置に吸引針１００１が来るように調整を行う。シリンジ固定具１００６が位置制御可能なシステムに連結されている場合は、ディスプレイに表示された画像上で使用者が回収を希望する分画位置を指定すると、その位置情報を位置制御システムに送信し、シリンジ固定具１００６を適切な位置まで自動的に移動させて調整することも可能である。
【００３８】
図１０（a）のように目的の分画に対してシリンジおよび吸引針１００１の位置を調整する行程が完了すれば、次にシリンジを穿刺方向に前進させ、穿刺を開始する。このような前進操作も、シリンジ固定具１００６を移動させることにより実施する。図１０（b）は、吸引針１００１の先端が分離チップの側壁１００８に進入し、分離槽内に到達した状態を示している。装置としては、この状態でプランジャーの末端鍔１００５がプランジャースリット１００７に接触するように設計されている。上方向に関しては分画の位置に応じて変化するが、水平方向（分離槽内で比重分布が変化しない方向、すなわち遠心力に対して垂直な方向）に関しては分離チップの形状と吸引針およびシリンジの大きさで位置が決定されるため、このような設計が可能である。
【００３９】
図１０（b）の状態からさらにシリンジを進行させると、吸引針１００１は分離槽内に進入し、分画１００９に接触する。図１０（b）の状態以降は末端鍔１００５がプランジャースリット１００７に引っ掛かるため、プランジャー１００４は穿刺方向に進行することができない。したがって、シリンジ内部に空間１０１０が発生し、シリンジ内の圧力が低下するため、吸引針１００１による分画１００９の吸引が開始される。分画１００９が空間１０１０に相当する量を吸引されると、原理的にはシリンジ内の陰圧状態が解消され、吸引も停止することになるため、過剰な吸引により目的の分画以外の成分が混入してしまうという現象は発生しない。この状態を示しているのが図１０（c）である。ここからさらにシリンジを進行させると、空間１０１０が拡大されて再びシリンジ内が陰圧状態になるため、分画１００９の吸引が実施される。実際には吸引針１００１およびコネクタ１００２の内部空間の存在により、空間１０１０の発生による陰圧状態は弱められてしまうため、適切な時間内に吸引操作を完了させるためには、シリンジの内部断面積Ｓが吸引針の内部断面積Ｓ’よりも大きいものにした方がよい。その程度は内部の余剰空間の大きさ、比重液の粘性、吸引針の進行速度等にもよるが、概ねＳ／Ｓ’比を１．０〜３．０の範囲で調整すれば、吸引針１００１を進行させながら目的の分画を吸引回収するという操作が実現できる。なお、吸引針１００１の進行速度は１〜１０ミリメートル／秒の範囲を想定しているが、これに限定されるものではない。
【００４０】
以上の内容を本発明の第１３〜１５の発明として、以下に記述する。
（第１３の発明）
前記吸引針が接続されたシリンジの内部に陰圧を発生させるためのプランジャーを固定し、シリンジ外筒およびこれに接続された吸引針を前記分離槽に進入させることにより、当該吸引針の分離槽への進入距離と、当該プランジャーが相対的に後退することにより当該シリンジの内部に発生する空間の長さが同一となることを特徴とする、第１１の発明に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
（第１４の発明）
前記吸引針の内部断面積に対する前記シリンジの内部断面積の大きさが、１．０〜３．０倍の範囲である、第１３の発明に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
（第１５の発明）
前記吸引針を穿刺する位置を、ディスプレイに表示された前記分離槽を撮影した画像に対して指定できることを特徴とする、第１１〜１４の発明に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【００４１】
注射用の針を用いて分画の回収を行う場合、一般的には保護キャップがついており、使用者が誤って自らに穿刺してしまうことが防止できるようになっている。したがって、本発明の方法においても、使用者が針を操作する際には、できる限り保護キャップをつけた状態で操作できることが望ましい。これを可能にする構成を、図１１を用いて説明する。まず、図１１（a）のように、本発明で使用する分画回収装置には、吸引針ホルダー１１０１を備えておき、使用者はここに吸引針１１０２を保護キャップ１１０３を付けたまま設置するようにする。シリンジの外筒１１０４はシリンジ固定具１１０５に固定されていることは既に述べたとおりであるが、原則として試料液体が付着するのは吸引針１１０２のみであるため、シリンジを使用のたびに交換する必要はない。さらに、シリンジのプランジャー１１０６はプランジャースリット１１０７に挿入された状態になっていることも既に述べたとおりである。
【００４２】
図１１（a）の状態から矢印の方向（上方）にシリンジを移動させると、プランジャースリット１１０７のスリットは上方末端まで切られているため、プランジャー１１０６がプランジャースリット１１０７から解放された状態になる。これが図１１（b）の状態である。さらに図１１（b）の矢印のように、必要であれば一旦シリンジを後方に移動させ、吸引針ホルダー１１０１とシリンジの外筒１１０４が接触することを回避した上で、これらの高さが一致するようにシリンジを移動させ、さらにシリンジを前進させることにより、シリンジの外筒１１０４に吸引針１１０２を装着することができる。これが図１１（c）の状態である。ここで、図１１（c）の矢印のように、後方にシリンジを移動させるのであるが、吸引針ホルダー１１０１には突起１１０８があり、保護キャップ１１０３の根元の鍔が引っ掛かるようになっている。したがって、シリンジを後方に移動させると、保護キャップ１１０３は外れた状態になる。シリンジを後方に移動させる距離は、吸引針の先端が、この後下方に移動させても保護キャップ１１０３あるいは吸引針ホルダー１１０１に接触しない程度に設定する必要がある。これが図１１（d）の状態である。さらにここから下方に移動させ、シリンジを前進させても吸引針あるいはシリンジが、吸引針ホルダー１１０１あるいはプランジャースリット１１０７に接触しない高さにした上で、シリンジを前進させる。これが図１１（e）の状態である。最後に、ここから下方にシリンジを移動させ、回収したい分画の位置に吸引針１１０２の高さを合わせれば、吸引の準備は完了する。
【００４３】
以上の準備動作の後、シリンジを前進させて図１０に示した一連の分画回収動作を行う。吸引針が穿刺側の側壁の対向側の側壁に到達すれば吸引は完了するが、その状態からシリンジを後退させても、構造的にプランジャーの末端鍔１１０９はプランジャースリット１１０７からの力を受けないため、プランジャーがシリンジ外筒に対して相対的に前進することはなく、吸引針１１０２内に回収された成分はそのまま残存している。したがって、図１１の（f）、（e）、（d）、（c）の移動を逆に実行することにより、吸引針１１０２の内部に目的の分画が回収され、さらに保護キャップ１１０３を装着した状態にすることができるので、回収後の吸引針の取り出しも安全に行うことができる。
【００４４】
以上の内容を本発明の第１６の発明として、以下に記述する。
（第１６の発明）
あらかじめ設置された吸引針にシリンジを移動させて接続するステップと、当該吸引針に付けられた保護キャップのみに作用する突起により当該保護キャップを取り外すステップと、前記分離槽内の特定の比重成分の位置に当該吸引針の位置を合わせるステップとを有する第１１〜１５の発明に記載の粒子状成分の分離方法および回収方法。
【００４５】
以上のように、本発明の細胞等の粒子状成分の分離方法および回収方法を用いれば、非常に簡便な操作により、高い精度かつ高い純度をもつ目的粒子成分を分離回収することが可能である。なお、実施例として記述した内容は本発明の実施形態の一例であるため、状況に応じてこれらの内容を省略あるいは変更することができる。
例えば、分画の吸引の際に必要な動作精度を有する吸引ポンプを用いることができるのであれば、これに吸引針を装着することにより、マイクロシリンジを利用せずとも目的の分画を回収することは可能である。吸引ポンプでなくとも、あらかじめ一定の陰圧を発生させた空間に吸引針を接続することにより、吸引力を得てもよい。
また、分離チップを遠心分離用のチューブに収容できる形状にするか、別途ホルダーを作製することにより、分離チップを一般的な遠心分離機で回転させることができるのであれば、分離操作自体はそちらで実施し、図８〜図１０を用いて説明した機能のみを有する分画回収装置に分離チップを移して回収することも可能である。回収後の取り出しについても、実施例２としては吸引針内に分画を回収した状態で取り出す形態にしているが、装置内で別の回収容器に分画を吐出してもよい。この場合、同じ試料液体であれば、吸引針を交換せずに繰り返し回収操作を行うことにより、回収量を増加させることも可能である。また、回収の際にカメラで撮影して目的とする分画の位置を確認することができるが、このときに個々の粒子を識別できる解像度があれば、粒子数を計数してデータを取得し、血液検査等の目的に応用することも可能である。
【産業上の利用可能性】
【００４６】
本発明の細胞等の粒子状成分の分離方法および回収方法は、粒子や懸濁物質、血液や培養細胞等の各種粒子状成分を分離および回収する目的に使用することができる。
【符号の説明】
【００４７】
１０１  チップ形成体
１０２  分離槽
１０３  開口部
２０２  分離槽
２０３  開口部
３０１  チップ形成体
３０２  分離槽
３０３  比重液槽Ａ
３０４  比重液Ａ
３０５  開口部Ａ
３０６  比重液槽Ｂ
３０７  比重液Ｂ
３０８  開口部Ｂ
３０９  微細流路
３１０  脱気孔
４０１  チップ形成体
４０２  分離槽
４０３  比重液槽Ａ
４０４  比重液槽Ｂ
４０５  微細流路
４０６  試料液槽
５０１  チップ固定板
５０２  チップ保持穴
５０３  ストッパー
５０４  透明背板
５０５  回転軸
６０１  分離チップ
６０２  固定リブ
６０３  切り欠き
６０４  チップ保持穴
６０５  ストッパー
７０１  固定リブ
７０２  ストッパー
８０１  分離チップ
８０２  分離槽
８０３  側壁
８０４  正面プレート
８０５  背面プレート
８０６  低比重分画
８０７  高比重分画
８０８  吸引針
９０１  分離槽
９０２  側壁
１００１  吸引針
１００２  コネクタ
１００３  外筒
１００４  プランジャー
１００５  末端鍔
１００６  シリンジ固定具
１００７  プランジャースリット
１００８  側壁
１００９  分画
１１０１  吸引針ホルダー
１１０２  吸引針
１１０３  保護キャップ
１１０４  外筒
１１０５  シリンジ固定具
１１０６  プランジャー
１１０７  プランジャースリット
１１０８  突起
１１０９  末端鍔
【図１】
2017205709.tif 000003
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2017205709.tif 000011
【図１０】
2017205709.tif 000012
【図１１】
2017205709.tif 000013