(57)【要約】      （修正有）【課題】病原微生物由来抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化することができるペプチドの提供。【解決手段】マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質のアミノ酸配列において第６１〜７０番目のアミノ酸を含む９〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチド。更に抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを含有する抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１に記載のアミノ酸配列の第６１〜７０番目のアミノ酸を含む９〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチド。
【請求項２】
請求項１に記載のペプチド及び薬学的に許容される担体を含有する、抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
【請求項３】
抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを更に含有する、請求項２に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
【請求項４】
抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞を活性化する前記ペプチドが、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第２４１〜２５５番目のアミノ酸を含む１５〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドである、請求項３に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
【請求項５】
結核ワクチンである、請求項２〜４のいずれか一項に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
【請求項６】
非結核性抗酸菌症ワクチンである、請求項２〜５のいずれか一項に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
【請求項７】
ハンセン病ワクチンである、請求項２〜６のいずれか一項に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
【請求項８】
ＭＨＣ遺伝子座がヘテロ接合性である非ヒト動物にワクチンを投与する工程と、
前記非ヒト動物におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞又はＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化を評価する工程と、を備える、前記ワクチンの評価方法。
【請求項９】
前記非ヒト動物が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとＢＡＬＢ／ｃマウスとの雑種第１代マウスである、請求項８に記載のワクチンの評価方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ペプチド及びその使用に関する。より具体的には、ペプチド、抗酸菌症ペプチドワクチン組成物、及びワクチンの評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
結核や非結核性抗酸菌症は、抗酸菌を原因菌とする感染症である。結核は、古代から現代に至るまで人類の健康を脅かしている。また、近年、非結核性抗酸菌症患者が世界的に増加し問題となっている。現在、結核ワクチンとしては、カルメット・ゲラン桿菌（ＢＣＧ）ワクチンが広く用いられている。しかしながら、ＢＣＧワクチンは、乳幼児結核と結核性髄膜炎の予防効果は認められているものの、成人の肺結核予防効果に関しては否定的な見解が存在する（例えば、非特許文献１を参照）。また、非結核性抗酸菌症を予防する有効なワクチンは存在しないのが実情である。このため、結核をはじめとする抗酸菌症に対するより効果的なワクチンが求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Andersen P., Tuberculosis vaccines - an update., Nat. Rev. Microbiol., 5(7), 484-7, 2007.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
例えば結核菌のような細胞内寄生菌に対する感染防御には、細胞性免疫が重要である。これに対し、発明者らは、ＢＣＧワクチンによる免疫によって活性化される抗原特異的Ｔ細胞は、主にＣＤ４陽性Ｔ細胞（ヘルパーＴ細胞）であり、細胞性免疫に重要なＣＤ８陽性Ｔ細胞（細胞傷害性Ｔ細胞）はほとんど活性化されないことを見出した。
【０００５】
そこで、本発明は、病原微生物由来抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化することができるペプチドを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は以下の通りである。
（１）配列番号１に記載のアミノ酸配列の第６１〜７０番目のアミノ酸を含む９〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチド。
（２）（１）に記載のペプチド及び薬学的に許容される担体を含有する、抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
（３）抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを更に含有する、（２）に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
（４）抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞を活性化する前記ペプチドが、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第２４１〜２５５番目のアミノ酸を含む９〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドである、（３）に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
（５）結核ワクチンである、（２）〜（４）のいずれか一項に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
（６）非結核性抗酸菌症ワクチンである、（２）〜（５）のいずれか一項に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
（７）ハンセン病ワクチンである、請求項２〜６のいずれか一項に記載の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物。
（８）ＭＨＣ遺伝子座がヘテロ接合性である非ヒト動物にワクチンを投与する工程と、前記非ヒト動物におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞又はＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化を評価する工程と、を備える、前記ワクチンの評価方法。
（９）前記非ヒト動物が、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとＢＡＬＢ／ｃマウスとの雑種第１代マウスである、（８）に記載のワクチンの評価方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、病原微生物由来抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化することができるペプチドを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】実験例１におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。
【図２】（ａ）は、実験例１において、各サイトカインを産生するＣＤ４陽性Ｔ細胞の存在割合を示すグラフである。（ｂ）は、実験例１において、各サイトカインを産生するＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在割合を示すグラフである。
【図３】（ａ）は、実験例１において、各サイトカインを産生するＣＤ４陽性Ｔ細胞を更に詳細に解析した結果を示すグラフである。（ｂ）は、（ａ）の結果を円グラフにしたものである。
【図４】（ａ）〜（ｄ）は、実験例３におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。
【図５】（ａ）及び（ｂ）は、実験例４におけるＢＡＬＢ／ｃマウスのＴ細胞エピトープマッピングの結果をまとめたグラフである。（ｃ）及び（ｄ）は、実験例４におけるＣ５７ＢＬ／６ＪマウスのＴ細胞エピトープマッピングの結果をまとめたグラフである。
【図６】実験例４におけるＢＡＬＢ／ｃマウスのＴ細胞エピトープマッピングの結果をまとめたグラフである。
【図７】実験例５におけるフローサイトメトリーの結果を示すグラフである。
【図８】実験例６において、ＣＤ８陽性Ｔ細胞における多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合を示すグラフである。
【図９】実験例７において、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａ／ｂ陽性Ｔ細胞の割合を示すグラフである。
【図１０】実験例８において、各ペプチドで抗原刺激した脾臓細胞中の、ＣＤ８陽性Ｔ細胞に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
［ペプチド］
１実施形態において、本発明は、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第６１〜７０番目のアミノ酸を含む９〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを提供する。
【００１０】
配列番号１に記載のアミノ酸配列は、抗酸菌の一種であるマイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質のアミノ酸配列である。実施例において後述するように、本実施形態のペプチドは、Ｔ細胞エピトープペプチドであり、抗酸菌由来抗原に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有する。
【００１１】
本実施形態のペプチドにおいて、１若しくは数個は、例えば１〜４個であってもよく、例えば１〜３個であってもよく、例えば１〜２個であってもよい。また、本実施形態のペプチドの長さは、９〜５０アミノ酸であり、９〜４０アミノ酸であってもよく、９〜３０アミノ酸であってもよく、９〜２０アミノ酸であってもよく、９〜１０アミノ酸であってもよい。本実施形態のペプチドのより具体的な例としては、配列番号３〜５、７〜１０に記載のアミノ酸配列からなるペプチドが挙げられる。実施例において後述するように、これらのペプチドは、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を誘導することが確認されている。本実施形態のペプチドは、例えば化学合成により合成することができる。
【００１２】
本明細書において、多能性（多機能性）のＴ細胞とは、１個の細胞が複数のサイトカインを産生する能力を有する細胞を意味する。サイトカインとしては、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−α、インターフェロン（ＩＦＮ）−γ、インターロイキン（ＩＬ）−２、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１α等が挙げられる。
【００１３】
また、本明細書において、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能とは、生体に投与した場合、又は生体由来の血球細胞に接触させた場合に、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を誘導する活性を意味する。多能性のＴ細胞は感染防御能に優れているため、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化することにより、高い感染防御能を付与することができる。
【００１４】
［抗酸菌症ペプチドワクチン組成物］
１実施形態において、本発明は、上述したペプチド及び薬学的に許容される担体を含有する、抗酸菌症ペプチドワクチン組成物を提供する。
【００１５】
薬学的に許容される担体としては、通常ワクチン組成物に添加されるものであれば特に制限されず、例えばアジュバント、注射剤用溶媒、安定剤、ｐＨ調整剤等が挙げられる。アジュバントとしては、例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、塩化アルミニウム、乳化した軽質流動パラフィン等が挙げられる。また、注射剤用溶媒としては、例えば、水、エタノール、グリセリン等が挙げられる。また、安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラヒドロキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール等のアルコール類；フェノール、クレゾール等のフェノール類が挙げられる。また、ｐＨ調整剤としては、例えば、フタル酸、リン酸、クエン酸、コハク酸、酢酸、フマル酸、リンゴ酸、炭酸、又はこれらのカリウム塩、ナトリウム塩若しくはアンモニウム塩；水酸化ナトリウム等が挙げられる。
【００１６】
実施例において後述するように、本実施形態の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物を生体に投与することにより、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を誘導し、抗酸菌症の感染を効果的に予防することができる。
【００１７】
ヒトにおける抗酸菌症ペプチドワクチン組成物の投与量は、例えば、投与単位形態あたり０．０５〜０．１ｍｇの有効成分（上述したペプチド）を含有する量であってもよい。また、抗酸菌症ペプチドワクチン組成物は、皮下注射、筋肉注射等により投与されることが好ましい。
【００１８】
抗酸菌症としては、抗酸菌が原因菌である感染症が挙げられる。例えば、マイコバクテリウム・ツベルクローシスが原因菌であるヒトの結核、マイコバクテリウム・ボビスが原因菌であるウシの結核、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・イントラセルラーエ、マイコバクテリウム・カンサシイ等が原因菌である非結核性抗酸菌症、マイコバクテリウム・レプラエが原因菌であるハンセン病等が挙げられる。本明細書では、マイコバクテリウム・ツベルクローシス及びマイコバクテリウム・レプラエ以外の抗酸菌が原因菌である感染症を総称して非結核性抗酸菌症という場合がある。
【００１９】
本実施形態の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物は、結核ワクチンであってもよい。あるいは、本実施形態の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物は、非結核性抗酸菌症ワクチンであってもよい。あるいは、本実施形態の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物は、ハンセン病ワクチンであってもよい。
【００２０】
実施例において後述するように、本実施形態の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物は、結核菌であるマイコバクテリウム・ツベルクローシスだけでなく、非結核性抗酸菌症の原因菌である、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・カンサシイ、ハンセン病の原因菌であるマイコバクテリウム・レプラエ（らい菌）等に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を誘導することができる。
【００２１】
本実施形態の抗酸菌症ペプチドワクチン組成物は、抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを更に含有していてもよい。
【００２２】
実施例において後述するように、上述した多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドペプチドに加えて、抗酸菌に対する（抗酸菌由来抗原に対する）ＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを更に含有するワクチン組成物を生体に投与することにより、抗酸菌に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞をより強力に誘導することができる。したがって、このようなワクチン組成物を生体に投与することにより、抗酸菌症の感染を非常に効果的に予防することができる。
【００２３】
上記の抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞を活性化するペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列の第２４１〜２５５番目のアミノ酸を含む１５〜５０アミノ酸からなるペプチド、又は、前記ペプチドにおいて１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドであってもよい。ここで、１若しくは数個は、例えば１〜４個であってもよく、例えば１〜３個であってもよく、例えば１〜２個であってもよい。また、本実施形態のペプチドの長さは、１５〜５０アミノ酸であってもよく、１５〜４０アミノ酸であってもよく、１５〜３０アミノ酸であってもよく、１５〜２０アミノ酸であってもよく、１５アミノ酸であってもよい。
【００２４】
抗酸菌に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞を活性化するペプチドのより具体的な例としては、例えば、配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるペプチド等が挙げられる。実施例において後述するように、配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるペプチドは、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞を誘導することが確認されている。
【００２５】
このようなワクチン組成物、すなわち、病原微生物由来抗原に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチド、及び病原微生物由来抗原に対するＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを含有するワクチン組成物は、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を強力に誘導することができる。これは、抗酸菌に限られず、あらゆる病原微生物にも適用可能である。
【００２６】
すなわち、病原微生物由来抗原に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチド、及び病原微生物由来抗原に対するＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを含有するワクチン組成物は、病原微生物に対する感染予防効果が非常に高い有効なワクチンとなる。
【００２７】
ここで、病原微生物は、効果的なワクチンを得ることが困難とされる病原微生物であってもよく、例えば、ヒトの結核の原因菌であるマイコバクテリウム・ツベルクローシス；非結核性抗酸菌症の原因菌である、マイコバクテリウム・アビウム、マイコバクテリウム・イントラセルラーエ、マイコバクテリウム・カンサシイ；ハンセン病の原因菌であるマイコバクテリウム・レプラエ；エボラ出血熱の原因ウイルスであるエボラ出血熱ウイルス；クリミア・コンゴ熱の原因ウイルスであるクリミア・コンゴウイルス；南米出血熱の原因ウイルスであるフニンウイルス、サビアウイルス、ガナリトウイルス、マチュポウイルス等のアレナウイルス科のウイルス；マールブルグ病の原因ウイルスであるマールブルグウイルス；マラリアの原因微生物であるマラリア原虫、及び、例えば弱毒株等の、上記の病原微生物の類縁微生物等が挙げられる。
【００２８】
標的とする病原微生物由来抗原に対するＣＤ４陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチド、及び標的とする病原微生物由来抗原に対するＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化能を有するペプチドを含有するワクチン組成物により、標的とする病原微生物由来抗原に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を強力に誘導し、感染症の予防効果を発揮することができる。
【００２９】
ワクチン組成物はペプチドワクチン組成物であってもよく、抗原提示細胞におけるプロセッシングにより上記のペプチドを生成するタンパク質を含有するワクチン組成物であってもよい。
【００３０】
［ワクチンの評価方法］
１実施形態において、本発明は、ＭＨＣ遺伝子座がヘテロ接合性である非ヒト動物にワクチンを投与する工程と、前記非ヒト動物におけるＣＤ４陽性Ｔ細胞又はＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化を評価する工程と、を備える、前記ワクチンの評価方法を提供する。
【００３１】
ＣＤ４陽性Ｔ細胞又はＣＤ８陽性Ｔ細胞の活性化を評価する工程は、例えば、ワクチンを投与した非ヒト動物からリンパ球を採取し、当該リンパ球にワクチン（抗原）を再び接触させ、ＣＤ４陽性Ｔ細胞又はＣＤ８陽性Ｔ細胞の増殖を測定すること等により評価することができる。ここで、例えば、ＣＤ４陽性Ｔ細胞又はＣＤ８陽性Ｔ細胞が産生するサイトカインを測定し、多能性のＴ細胞の割合を測定してもよい。
【００３２】
マウス等の実験動物は遺伝的に純化されているため、ＭＨＣ遺伝子座はホモ接合性であることが一般的である。しかしながら、ヒトのＭＨＣ（ＨＬＡ）はヘテロ接合性であることが通常である。したがって、ＭＨＣ遺伝子座がヘテロ接合性である非ヒト動物を用いてワクチンの評価を行うことにより、よりヒトに投与した場合の結果に近いワクチンの評価結果を得ることができる。
【００３３】
本実施形態のワクチンの評価方法において、上記の非ヒト動物は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとＢＡＬＢ／ｃマウスとの雑種第１代マウス（以下、「ＣＢ６Ｆ１マウス」という場合がある。）であってもよい。実施例において後述するように、ＣＢ６Ｆ１マウスを用いてワクチンの評価を行うことにより、Ｃ５７ＢＬ／６マウスともＢＡＬＢ／ｃマウスとも異なる結果が得られることが明らかとなった。
【実施例】
【００３４】
次に実験例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実験例に限定されるものではない。
【００３５】
［実験例１］
マウスをＢＣＧ菌で免疫し、抗原特異的なＣＤ８陽性Ｔ細胞が誘導されるか否かを検討した。
【００３６】
（免疫）
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャールス・リバー社）に、２×１０６ＣＦＵ／匹のＢＣＧ菌を皮内投与した。免疫から３週間後に解剖して検討を行った。
【００３７】
（細胞内サイトカイン解析）
上記の免疫マウスから脾臓細胞を分離し、ウシ胎児血清１０ｖ／ｖ％、２−メルカプトエタノール、ＤＮａｓｅ  １Ｕ／ｍＬ、ペニシリン及びストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で６時間抗原刺激した。抗原としては、１０μｇ／ｍＬのＰＰＤ（ｐｕｒｉｆｉｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ、ツベルクリン液）を使用した。
【００３８】
続いて細胞を回収し、ＡＰＣ標識抗ＣＤ３抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＰＥ−ｃｙ７標識抗ＣＤ４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）、ＰｅｒＣＰ  ｃｙ５．５標識抗ＣＤ８抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）で細胞表面を染色した。更に、ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ  Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  （ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて細胞を処理し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識抗ＴＮＦ−α抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＰＥ標識抗インターフェロン−γ抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＡＰＣ−Ｃｙ７標識抗インターロイキン−２抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）、Ｖ５００標識抗ＭＩＰ−１α抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）で細胞内サイトカインを染色した。染色した細胞はＦＡＣＳｖｅｒｓｅソフトウエア（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）及びＦｌｏｗＪｏソフトウエア（ＴｒｅｅＳｔａｒ社）を用いて解析した。
【００３９】
図１は、フローサイトメトリーの結果を示すグラフである。その結果、ＢＣＧ菌でマウスを免疫することにより、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞を誘導することができることが明らかとなった。しかしながら、ＢＣＧ菌によるマウスの免疫では、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００４０】
図２（ａ）は、各サイトカインを産生するＣＤ４陽性Ｔ細胞の存在割合を示すグラフである。ＰＰＤの代わりにリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で刺激した細胞を陰性対照として使用した。その結果、ＢＣＧ菌による免疫によって、各サイトカインを産生するＣＤ４陽性Ｔ細胞が誘導されたことが明らかとなった。
【００４１】
図２（ｂ）は、各サイトカインを産生するＣＤ８陽性Ｔ細胞の存在割合を示すグラフである。ＰＰＤの代わりにリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で刺激した細胞を陰性対照として使用した。その結果、ＢＣＧ菌による免疫では、各サイトカインを産生するＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００４２】
図３（ａ）は、各サイトカインを産生するＣＤ４陽性Ｔ細胞を更に詳細に解析した結果を示すグラフである。図中、Ｌはインターロイキン−２を表し、Ｇはインターフェロン−γを表し、ＭはＭＩＰ−１αを表し、ＴはＴＮＦ−αを表す。また、「＋」は陽性であることを表し、「−」は陰性であることを表す。また、図３（ｂ）は、図３（ａ）の結果を円グラフにしたものである。その結果、１個のＣＤ４陽性Ｔ細胞が、１〜４種類のサイトカインを産生していることが明らかとなった。すなわち、ＢＣＧ菌による免疫によって多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞が誘導されたことが明らかとなった。
【００４３】
以上の結果から、ＢＣＧ菌による免疫によって、ＣＤ４陽性Ｔ細胞が誘導されるものの、ＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。また、誘導されたＣＤ４陽性Ｔ細胞は多能性であることが明らかとなった。
【００４４】
［実験例２］
マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質（配列番号１にアミノ酸配列を示す。）の発現ベクターを作製した。また、マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質を発現する組換えＢＣＧ菌を作製した。
【００４５】
（ｐ３ＨＡ８５Ｂベクター）
ＢＣＧ菌及び哺乳動物細胞の双方でＡｇ８５Ｂタンパク質を発現することが可能な発現ベクターであるｐ３ＨＡ８５Ｂを作製した。ｐ３ＨＡ８５Ｂは、マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質をコードする遺伝子（配列番号２）の上流に、ＢＣＧ菌で作動可能であるｐＡＬ５０００プロモーターを有しており、ｐＡＬ５０００プロモーターの上流に、哺乳動物細胞で作動可能であるサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターとＨＴＬＶ−１プロモーターを有していた。
【００４６】
（組換えＢＣＧ菌の作製）
発現ベクターｐ３ＨＡ８５ＢをＢＣＧ菌に導入し、マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質を発現させた組換えＢＣＧ菌を作製した。また、ウエスタンブロッティングにより組換えＢＣＧ菌がＡｇ８５Ｂタンパク質を発現することを確認した。
【００４７】
（ｐＤＮＡ８５Ｂベクター）
哺乳動物細胞でマイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質を発現することが可能な発現ベクターである、ｐＤＮＡ８５Ｂを作製した。ｐＤＮＡ８５Ｂは、Ａｇ８５Ｂタンパク質をコードする遺伝子（配列番号２）の上流に、哺乳動物細胞で作動可能であるサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターを有していた。発現ベクターｐＤＮＡ８５Ｂを、ヒト胎児由来腎臓上皮細胞である２９３Ｔ細胞に導入し、ウエスタンブロッティングにより、Ａｇ８５Ｂタンパク質が発現されることを確認した。
【００４８】
［実験例３］
発現ベクターｐ３ＨＡ８５Ｂを導入したＢＣＧ菌で初回免疫を行い、ｐＤＮＡ８５Ｂベクター（ＤＮＡワクチン）で追加免疫を行うプライムブーストワクチンにより、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス及びＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫し、多機能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞及び多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の誘導を検討した。
【００４９】
（免疫）
Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（日本チャールス・リバー社）及びＢＡＬＢ／ｃマウス（日本チャールス・リバー社）に、発現ベクターｐ３ＨＡ８５Ｂを導入したＢＣＧ菌を、それぞれ１頭あたり２×１０６ＣＦＵずつ皮内投与して初回免疫を行った。続いて、３週間後にｐＤＮＡ８５Ｂベクターを１頭あたり１００μｇずつ筋肉注射して１回目の追加免疫を行い、更に３週間後にｐＤＮＡ８５Ｂベクターを１頭あたり１００μｇずつ筋肉注射して２回目の追加免疫を行い、更に２週間後にｐＤＮＡ８５Ｂベクターを１頭あたり１００μｇずつ筋肉注射して３回目の追加免疫を行った。３回目の追加免疫から２週間後に解剖して検討を行った。
【００５０】
（細胞内サイトカイン解析）
上記の免疫マウスから脾臓細胞を分離し、ウシ胎児血清１０ｖ／ｖ％、２−メルカプトエタノール、ＤＮａｓｅ  １Ｕ／ｍＬ、ペニシリン及びストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で６時間抗原刺激した。抗原としては、下記表１に示す、マイコバクテリウム・ツベルクローシスのＡｇ８５Ｂタンパク質（配列番号１２にアミノ酸配列を示す。）の１５ｍｅｒずつのペプチドからなるプールペプチド（プール１〜プール６）をそれぞれ使用した。抗原刺激にあたり、プールペプチドは２．５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。また、陰性対照として、抗原刺激を行わない細胞を使用した。
【００５１】
【表１】
2017210427.tif 000002
【００５２】
続いて細胞を回収し、ＡＰＣ標識抗ＣＤ３抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）、ＰＥ−ｃｙ７標識抗ＣＤ４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ社）、ＰｅｒＣＰ  ｃｙ５．５標識抗ＣＤ８抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）で細胞表面を染色した。更に、ＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ  Ｆｉｘａｔｉｏｎ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｋｉｔ  （ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて細胞を処理し、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８標識抗ＴＮＦ−α抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）及びＰＥ標識抗インターフェロン−γ抗体（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）で細胞内サイトカインを染色した。染色した細胞はＦＡＣＳｖｅｒｓｅソフトウエア（ＢＤ  ｂｉｏｃｉｅｎｃｅｓ社）及びＦｌｏｗＪｏソフトウエア（ＴｒｅｅＳｔａｒ社）を用いて解析した。
【００５３】
図４（ａ）〜（ｄ）は、フローサイトメトリーの代表的な結果を示すグラフである。図４（ａ）は、上記表１に示すペプチドプール５で刺激したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの脾臓細胞中のＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示し、図４（ｂ）は、上記表１に示すペプチドプール２で刺激したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの脾臓細胞中のＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示す。フローサイトメトリー解析の結果、プライムブーストワクチンでＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを免疫することにより、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞を誘導することができることが明らかとなった。しかしながら、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００５４】
また、図４（ｃ）は、上記表１に示すペプチドプール５で刺激したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞中のＣＤ４陽性Ｔ細胞の結果を示し、図４（ｄ）は、上記表１に示すペプチドプール２で刺激したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞中のＣＤ８陽性Ｔ細胞の結果を示す。フローサイトメトリー解析の結果、プライムブーストワクチンでＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫することにより、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を誘導することができることが明らかとなった。しかしながら、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００５５】
Ｃ５７ＢＬ／６ＪマウスのクラスＩ  ＭＨＣ遺伝子座のハプロタイプはＨ−２Ｋｂ、Ｈ−２Ｄｂ、Ｈ−２Ｌｎｕｌｌである。また、ＢＡＬＢ／ｃマウスのクラスＩ  ＭＨＣ遺伝子座のハプロタイプはＨ−２Ｋｄ、Ｈ−２Ｄｄ、Ｈ−２Ｌｄである。マウスの系統により、誘導される多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞及び多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のパターンが異なるのは、ＭＨＣ遺伝子座のハプロタイプの違いによるものである可能性が考えられた。
【００５６】
［実験例４］
実験例３と同様にして、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス及びＢＡＬＢ／ｃマウスをプライムブーストワクチンで免疫した。続いて、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープ及びＢＡＬＢ／ｃマウスの多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープをエピトープマッピングにより特定した。
【００５７】
具体的には、各免疫マウスから脾臓細胞を分離し、ウシ胎児血清１０ｖ／ｖ％、２−メルカプトエタノール、ＤＮａｓｅ  １Ｕ／ｍＬ、ペニシリン及びストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で２４時間抗原刺激した。抗原としては、まず、上記表１に示すプールペプチド（プール１〜プール６）をそれぞれ使用した。抗原刺激にあたり、プールペプチドは２．５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。また、陰性対照として、抗原刺激を行わない細胞を使用した。続いて細胞を回収し、実験例３と同様にしてフローサイトメトリーにより細胞内サイトカイン解析を行った。
【００５８】
図５（ａ）は、ＢＡＬＢ／ｃマウスの解析結果をまとめたグラフである。その結果、免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞において、ペプチドプール２で抗原刺激を行った場合に、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞が誘導されることが明らかとなった。この結果は、ペプチドプール２の中に、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープが含まれていることを示す。
【００５９】
また、図５（ｃ）は、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスの解析結果をまとめたグラフである。その結果、免疫したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの脾臓細胞において、ペプチドプール２、５、６で抗原刺激を行った場合に、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞が誘導されることが明らかとなった。この結果から、ペプチドプール２、５、６の中に、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープが含まれていることが明らかとなった。
【００６０】
続いて、免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞において、抗原刺激に用いるペプチドを、ペプチドプール２を構成するＨ１１１〜Ｈ１２０ペプチドに変更した点以外は上記と同様のアッセイを行なった。図５（ｂ）は、解析結果をまとめたグラフである。その結果、免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞において、Ｈ１１２、Ｈ１１３、Ｈ１１４ペプチドで抗原刺激を行った場合に、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞が誘導されることが明らかとなった。この結果から、Ｈ１１２、Ｈ１１３、Ｈ１１４ペプチドの中に、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープが含まれていることが明らかとなった。
【００６１】
また、免疫したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの脾臓細胞において、抗原刺激に用いるペプチドを、ペプチドプール５、６を構成するＨ１４３〜Ｈ１５４ペプチドに変更した点以外は上記と同様のアッセイを行なった。図５（ｄ）は、解析結果をまとめたグラフである。その結果、免疫したＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスの脾臓細胞において、Ｈ１４９、Ｈ１５３、Ｈ１５４ペプチドで抗原刺激を行った場合に、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞が誘導されることが明らかとなった。この結果から、Ｈ１４９、Ｈ１５３、Ｈ１５４ペプチドの中に、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープが含まれていることが明らかとなった。
【００６２】
続いて、免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞において、抗原刺激に用いるペプチドを、下記表２に示す９ｍｅｒずつのペプチド（Ｐ１〜Ｐ２５ペプチド）に変更した点以外は上記と同様のアッセイを行ない、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の誘導を検討した。
【００６３】
図６は、解析結果をまとめたグラフである。その結果、免疫したＢＡＬＢ／ｃマウスの脾臓細胞において、Ｐ８、Ｐ９ペプチドで抗原刺激を行った場合に、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞が誘導されることが明らかとなった。この結果から、Ｐ８、Ｐ９ペプチドが、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープであることが明らかとなった。
【００６４】
【表２】
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【００６５】
［実験例５］
ＭＨＣ遺伝子座がヘテロ接合性であるマウスを用いて、組換えＢＣＧ菌によるワクチンの効果を検討した。具体的には、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス及びＢＡＬＢ／ｃマウスを交配して得られる雑種第１代マウス（以下、「ＣＢ６Ｆ１マウス」という場合がある。）（日本エスエルシー社）を用いて実験を行った。ＣＢ６Ｆ１マウスのクラスＩ  ＭＨＣ遺伝子座のハプロタイプはＨ−２Ｋｂ／ｄ、Ｈ−２Ｄｂ／ｄ、Ｈ−２Ｌｎｕｌｌ／ｄである。
【００６６】
続いて、実験例３と同様にして、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス、ＢＡＬＢ／ｃマウス及びＣＢ６Ｆ１マウスをプライムブーストワクチンで免疫した。続いて、各免疫マウスから脾臓細胞を分離し、ウシ胎児血清１０ｖ／ｖ％、２−メルカプトエタノール、ＤＮａｓｅ  １Ｕ／ｍＬ、ペニシリン及びストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で２４時間抗原刺激した。抗原としては、上記表１に示すＨ１４９ペプチド又は上記表２に示すＰ９ペプチドを２．５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。なお、実験例４における検討により、Ｈ１４９ペプチドが多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープを含むことが明らかとなっている。また、Ｐ８ペプチド及びＰ９ペプチドが、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープであることが明らかとなっている。続いて、細胞を回収し、実験例３と同様にしてフローサイトメトリーにより細胞内サイトカイン解析を行った。
【００６７】
図７は、フローサイトメトリーの結果を示すグラフである。その結果、プライムブーストワクチンでＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスを免疫することにより、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞を誘導することができることが明らかとなった。しかしながら、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００６８】
また、プライムブーストワクチンでＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫することにより、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞を誘導することができることが明らかとなった。しかしながら、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００６９】
また、プライムブーストワクチンでＣＢ６Ｆ１マウスを免疫することにより、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を顕著に誘導することができることが明らかとなった。ＣＢ６Ｆ１マウスにおいて誘導された多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合は非常に高く、驚くべき結果であった。また、プライムブーストワクチンでＣＢ６Ｆ１マウスを免疫することにより、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞も誘導されることが明らかとなった。
【００７０】
また、以上の結果から、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープペプチドを含むペプチドワクチン又は多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープペプチドを含むペプチドワクチンのいずれか単独を投与するのではなく、多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープペプチド及び多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープペプチドの双方を含むペプチドワクチンを投与することによって（多能性のＣＤ４陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープペプチド及び多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープペプチドの双方で同時に免疫することによって）、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞をより強力に活性化できることが明らかとなった。
【００７１】
［実験例６］
実験例４における検討により、Ｐ８ペプチド及びＰ９ペプチドが、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞のＴ細胞エピトープであることが明らかとなった。そこで、Ｐ８ペプチド及びＰ９ペプチドのＭＨＣへの親和性を検討した。具体的には、まず、実験例３と同様にして、ＢＡＬＢ／ｃマウスをプライムブーストワクチンで免疫した。続いて、免疫マウスから脾臓細胞を分離し、ウシ胎児血清１０ｖ／ｖ％、２−メルカプトエタノール、ＤＮａｓｅ  １Ｕ／ｍＬ、ペニシリン及びストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で２４時間抗原刺激した。抗原としては、上記表２に示すＰ８ペプチド又はＰ９ペプチドを段階希釈して使用した。続いて、細胞を回収し、実験例３と同様にしてフローサイトメトリーにより細胞内サイトカイン解析を行った。
【００７２】
図８は、ＣＤ８陽性Ｔ細胞における多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合を示すグラフである。その結果、Ｐ８ペプチドの５０％刺激濃度は４×１０−９Ｍ以下であり、Ｐ９ペプチドの５０％刺激濃度は４×１０−７Ｍであることが明らかとなった。
【００７３】
［実験例７］
多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞における、細胞傷害活性を検討した。具体的には、まず、実験例３と同様にして、ＢＡＬＢ／ｃマウスをプライムブーストワクチンで免疫した。続いて、免疫マウスから脾臓細胞を分離し、ウシ胎児血清１０ｖ／ｖ％、２−メルカプトエタノール、ＤＮａｓｅ  １Ｕ／ｍＬ、ペニシリン及びストレプトマイシンを添加したＲＰＭＩ−１６４０培地中で２４時間抗原刺激した。抗原としては、上記表２に示すＰ９ペプチドを２．５μｇ／ｍＬの濃度で使用した。また、対照として、抗原の代わりにホルボール１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）（２５ｎｇ／ｍＬ）及びイオノマイシン（１μｇ／ｍＬ）を混合したもので刺激した細胞を用いた。続いて、細胞を回収し、フローサイトメトリーにより解析した。ＣＤ８陽性Ｔ細胞の細胞傷害活性は、ＣＤ１０７ａ／ｂの発現により評価した。また、ＣＤ８陽性Ｔ細胞の多能性（複数のサイトカインの産生）は、実験例３と同様にして解析した。
【００７４】
図９は、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞におけるＣＤ１０７ａ／ｂ陽性Ｔ細胞及びＣＤ１０７ａ／ｂ陰性Ｔ細胞の割合を示すグラフである。その結果、Ｐ９ペプチド刺激により、細胞傷害活性を有する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞が誘導されることが確認された。一方、ＰＭＡ（２５ｎｇ／ｍＬ）及びイオノマイシン（１μｇ／ｍＬ）による刺激では、細胞傷害活性を有する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞はほとんど誘導されないことが明らかとなった。
【００７５】
［実験例８］
実験例３と同様にして免疫したＢＡＬＢ／ｃマウス又はＣＢ６Ｆ１マウス由来の脾臓細胞を、様々な抗酸菌に由来するペプチドで抗原刺激し、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の誘導を検討した。抗酸菌由来のペプチドとしては、下記表３に示すものを使用した。
【００７６】
表３中、Ｐ８ペプチド及びＰ９ペプチドは、上記表２に記載のペプチドと同一であり、マイコバクテリウム・ツベルクローシスのＡｇ８５Ｂタンパク質由来のペプチドである。また、表３中、「Ｍｔｂ８５Ａ（Ｐ８）」は、マイコバクテリウム・ツベルクローシスのＡｇ８５Ａタンパク質由来のＰ８ペプチドに対応するペプチドであることを意味する。また、「Ｍｔｂ８５Ａ（Ｐ９）」は、マイコバクテリウム・ツベルクローシスのＡｇ８５Ａタンパク質由来のＰ９ペプチドに対応するペプチドであることを意味する。また、「Ｍｋａｎ８５Ｂ（Ｐ８）」は、マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質由来のＰ８ペプチドに対応するペプチドであることを意味する。また、「Ｍｋａｎ８５Ｂ（Ｐ９）」は、マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質由来のＰ９ペプチドに対応するペプチドであることを意味する。また、「Ｍｌｅ８５Ｂ（Ｐ８）」は、マイコバクテリウム・レプラエのＡｇ８５Ｂタンパク質由来のＰ８ペプチドに対応するペプチドであることを意味する。また、「Ｍｌｅ８５Ｂ（Ｐ９）」は、マイコバクテリウム・レプラエのＡｇ８５Ｂタンパク質由来のＰ９ペプチドに対応するペプチドであることを意味する。
【００７７】
【表３】
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【００７８】
多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の誘導は、実験例３と同様にしてフローサイトメトリーにより解析した。図１０は、各ペプチドで抗原刺激した脾臓細胞中の、ＣＤ８陽性Ｔ細胞に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞の割合を示すグラフである。その結果、表３に示すペプチドのうち、配列番号６のペプチド以外のペプチドでは、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞が誘導されることが明らかとなった。
【００７９】
この結果から、マイコバクテリウム・カンサシイのＡｇ８５Ｂタンパク質を発現させた組換えＢＣＧ菌で免疫することにより、結核菌であるマイコバクテリウム・ツベルクローシスだけでなく、非結核性抗酸菌症の原因菌であるマイコバクテリウム・カンサシイ、ハンセン病の原因菌であるマイコバクテリウム・レプラエ（らい菌）等に対する多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞も誘導できることが明らかとなった。すなわち、本実験例で使用したワクチンは、結核ワクチンとして有効であるだけでなく、非結核性抗酸菌症ワクチン及びハンセン病ワクチンとしても有効であることが明らかとなった。
【００８０】
また、配列番号６のペプチドの結果から、Ｐ９ペプチドの第１番目の「Ｙ（チロシン）」を「Ｄ（アスパラギン酸）」に変異させることにより、多能性のＣＤ８陽性Ｔ細胞を誘導する活性が特異的に消失することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明によれば、病原微生物由来抗原特異的ＣＤ８陽性Ｔ細胞を活性化することができるペプチドを提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2017210427.tif 000013
【図１０】
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【配列表】
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