(57)【要約】【課題】食材としての汎用性が高く、優れた抗肥満性を有する抗肥満食品、及び優れた抗肥満性を有する抗肥満食品を提供しうるカロブパウダーの使用方法を提供する。【解決手段】カロブパウダーを有効成分として含有する抗肥満食品である。カロブパウダーを食品に配合して、この食品に抗肥満作用を付与する。カロブパウダーとしては、例えば、未焙煎のカロブパウダーを所定の条件で焙煎して得られた焙煎カロブパウダーを使用する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
カロブパウダーを有効成分として含有する抗肥満食品。
【請求項２】
前記カロブパウダーが、焙煎カロブパウダーである請求項１に記載の抗肥満食品。
【請求項３】
カロブパウダーを食品に配合して、前記食品に抗肥満作用を付与するカロブパウダーの使用方法。
【請求項４】
前記カロブパウダーが、焙煎カロブパウダーである請求項３に記載のカロブパウダーの使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗肥満食品、及びカロブパウダーの使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、特に先進国において、肥満人口の増加が深刻な社会問題となっている。肥満は、生活習慣病であるとともに、高脂血症や糖尿病等の生活習慣病を引き起こす要因ともなりうる。このため、肥満人口の増加によって生活習慣病の患者も増加する傾向にある。また、健康上の理由だけでなく、美容上の理由からも肥満の解消が強く要望されている。
【０００３】
肥満とは、体脂肪が体内に過剰に蓄積した状態をいう。体内の体脂肪を減少させるための方法としては、食事療法や運動療法等を挙げることができる。但し、食事療法は厳格に実施する必要があり、過度の食事制限等はかえって健康を害する可能性がある。また、運動療法は長期間にわたって継続的に実施する必要がある。このため、多忙な現代社会においては継続的に実施することが困難な場合が多く、必ずしも容易な方法であるとは言えない。
【０００４】
そこで、手軽で安全に摂取可能な、肥満を抑制しうる天然物質を見出すことが近年要望されている。例えば、真珠層を有する貝殻の粉末やカエデ属に属する植物の抽出物等を用いた抗肥満食品が提案されている（特許文献１及び２）。
【０００５】
ところで、機能性を有する天然の食材として、カロブパウダーが知られている。カロブパウダーは、主として地中海付近で栽培されるカロブビーン（イナゴマメ）の鞘（果肉）を乾燥させ、粉末状に加工した食材であり、ココアパウダーの代替品等として用いられている。そして、カロブパウダーの食材としての機能としては、胃腸管等の炎症性疾患を低減しうる抗炎症性（特許文献３）や、加齢等の原因となる組織の酸化を抑制しうる抗酸化性（非特許文献１）等が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００６−１４３６１４号公報
【特許文献２】特開２００９−２６８４５２号公報
【特許文献３】特開２００３−３３９３５２号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Kumazawa et al., "Antioxidant Activity of Polyphenols in Carob Pods" Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2002, Vol.50, No.2, p.373-377
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
しかしながら、特許文献１及び２で提案された抗肥満食品は、その抗肥満性が必ずしも十分に高いとはいえず、さらなる改善の余地があった。また、特許文献３及び非特許文献１においては、カロブパウダーが抗肥満性を有する食材であることについて何ら報告されていない。
【０００９】
本発明は、このような従来技術の有する問題点に鑑みてなされたものであり、その課題とするところは、食材としての汎用性が高く、優れた抗肥満性を有する抗肥満食品を提供することにある。また、本発明の課題とするところは、優れた抗肥満性を有する抗肥満食品を提供することが可能なカロブパウダーの使用方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、以下の構成とすることによって上記課題を解決することが可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明によれば、以下に示す抗肥満商品が提供される。
［１］カロブパウダーを有効成分として含有する抗肥満食品。
［２］前記カロブパウダーが、焙煎カロブパウダーである前記［１］に記載の抗肥満食品。
【００１１】
また、本発明によれば、以下に示すカロブパウダーの使用方法が提供される。
［３］カロブパウダーを食品に配合して、前記食品に抗肥満作用を付与するカロブパウダーの使用方法。
［４］前記カロブパウダーが、焙煎カロブパウダーである前記［３］に記載のカロブパウダーの使用方法。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、食材としての汎用性が高く、優れた抗肥満性を有する抗肥満食品を提供することができる。また、本発明によれば、優れた抗肥満性を有する抗肥満食品を提供することが可能なカロブパウダーの使用方法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】脂肪前駆細胞分化誘導試験の結果を示すグラフである。
【図２】脂肪前駆細胞分化誘導試験の結果を示すグラフである。
【図３】ラジカル消去試験の結果を示すグラフである。
【図４】一酸化窒素産生試験の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施の形態について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではない。本発明の抗肥満食品は、カロブパウダーを有効成分として含有する。以下、その詳細について説明する。
【００１５】
カロブパウダーは、カロブビーン（イナゴマメ）の鞘（果肉）の部分を乾燥した後、粉末化することで得られる食材である。カロブパウダーは、食物繊維やカルシウムを多く含むとともに、脂質の含有量が少なく、かつ、カフェインやテオブロミン等の刺激物を含まない食品素材として知られている。さらに、カロブパウダーは、特有の甘味及び香りを有するとともに、僅かに茶色を呈する食品素材であることから、従来、ココア（カカオ）パウダーの代替品として、チョコレート風味の食品等を製造するための材料として用いられることが知られている。
【００１６】
本発明者らは、鋭意検討の結果、カロブパウダーが抗肥満性を有することを見出した。ここで、本明細書における「抗肥満性」とは、脂肪細胞内に蓄積される脂肪滴を縮小させて脂肪細胞の肥大化を抑さえ、肥満を抑制する性質を意味する。カロブパウダーが有するこのような抗肥満性は、本発明者らがはじめて見出した、従来知られていなかった機能である。このような機能を有するカロブパウダーを用いることで、食品に抗肥満性を付与し、抗肥満性を有する本発明の抗肥満食品とすることができる。
【００１７】
また、前述の通り、カロブパウダーは、抗炎症性及び抗酸化性を有する食材でもある。このため、カロブパウダーを有効成分として含有する抗肥満食品は、抗肥満性とともに、抗炎症性及び抗酸化性をもさらに兼ね備えた高機能性食品である。
【００１８】
カロブパウダーとしては、カロブビーンの鞘の部分を乾燥した後、粉末化した、いわゆる生の（未焙煎の）カロブパウダーの他、生のカロブパウダーを焙煎した焙煎カロブパウダーを用いることができる。焙煎カロブパウダーは、焙煎条件の相違（焙煎の程度の相違）により、例えば、カロブパウダーＬｉｇｈｔ（浅煎り）、カロブパウダーＤａｒｋ（中煎り）、及びカロブパウダーＥｘｔｒａ  Ｄａｒｋ（深煎り）等に分類することができる。なお、焙煎条件の相違（焙煎の程度の相違）により、得られる焙煎カロブパウダーに含まれる機能性成分の組成は異なることが推測されるが、そのような各成分の組成等を特定することは実質的に困難である。
【００１９】
本発明の抗肥満食品に有効成分として含まれるカロブパウダーは、焙煎カロブパウダーであることが好ましい。また、焙煎カロブパウダーとしては、カロブパウダーＬｉｇｈｔ（浅煎り）が好ましい。焙煎カロブパウダー、なかでも浅煎りの焙煎カロブパウダー（カロブパウダーＬｉｇｈｔ）を用いることで、得られる抗肥満食品の抗肥満性をより高めることができる。
【００２０】
本発明の抗肥満食品に含有させるカロブパウダーの量は、食品の種類や目的等に応じて適宜設定することができる。具体的には、抗肥満食品中のカロブパウダーの量は、抗肥満食品全体を基準として、５〜３０質量％程度であればよい。カロブパウダーの含有量が５質量％未満であると、抗肥満性が不足する場合がある。一方、カロブパウダーの含有量が３０質量％を超えると、食品の味に実質的な影響が生じやすくなることがある。
【００２１】
本発明の抗肥満食品は優れた抗肥満性を有することから、抗肥満、ダイエット、抗高中性脂肪血症、抗動脈硬化等の効果を得ることを目的とした、特定保健用食品、機能性食品、栄養補助食品、健康食品等として有用である。このような食品を日常的に摂取することでその効果を発揮することが期待される。
【００２２】
本発明の抗肥満食品の具体的な実施形態（食品の例）としては、パン、ケーキ等の小麦粉製品やその生地等；米飯類；スナック、ビスケット、クッキー、チョコレート、キャンディー、アイスクリーム、まんじゅう等の菓子類；ハム、ソーセージ等の加工肉製品；かまぼこ、ちくわ等の水産練り製品；粉乳、お茶、水、酒類、果汁、牛乳、その他の清涼飲料水等の飲料；等を挙げることができる。
【００２３】
本発明の抗肥満食品には、本発明の効果を損なわない範囲で、必要に応じて、種々の添加剤を配合することができる。添加剤の具体例としては、賦形剤、ｐＨ調整剤、清涼化剤、懸濁化剤、消泡剤、粘稠剤、溶解補助剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、コーティング剤、着色剤、矯味矯臭剤、界面活性剤、可塑剤、ミネラル、ビタミン、香料等を挙げることができる。
【実施例】
【００２４】
以下、本発明を実施例に基づいて具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、実施例、比較例中の「部」及び「％」は、特に断らない限り質量基準である。
【００２５】
＜カロブパウダーの用意＞
スペイン原産のイナゴマメ（Ceratonia siliqua）の鞘（果肉）の部分を１２０〜１８０℃に設定したオーブンに入れて３０分焙煎した。その後、粉砕して、焙煎カロブパウダー（カロブパウダーＬｉｇｈｔ）を調製した。また、焙煎時間を４５分及び６０分としたこと以外は、上記のカロブパウダーＬｉｇｈｔの場合と同様にして、焙煎カロブパウダーであるカロブパウダーＤａｒｋ及びカロブパウダーＥｘｔｒａ  Ｄａｒｋをそれぞれ調製した。さらに、乾燥したイナゴマメの鞘（果肉）の部分を焙煎することなく粉砕して、未焙煎のカロブパウダーを調製した。以降、未焙煎のカロブパウダーを「カロブＲ」と記す。さらに、焙煎して得たカロブパウダーＬｉｇｈｔ、カロブパウダーＤａｒｋ、及びカロブパウダーＥｘｔｒａ  Ｄａｒｋを、それぞれ「カロブＬ」、「カロブＤ」、及び「カロブＥ」と記す。
【００２６】
＜活性評価用サンプルの調製＞
調製した４種類のカロブパウダー（カロブＲ、Ｌ、Ｄ、及びＥ）５００ｍｇ、及び市販のココアパウダー（ココアＢ及びＨ）５００ｍｇにメタノール１０ｍＬをそれぞれ加え、超音波をかけて３０分間抽出した。静置後に上清をろ過した。残渣に８０％メタノール１０ｍＬをそれぞれ加え、超音波をかけて３０分間抽出した。静置後に上清をろ過し、先にろ過して得た上清と混合して抽出液とした。エバポレータを用いて得られた抽出液から溶媒を除去し、それぞれのメタノール抽出物を得た。得られたメタノール抽出物に水０．５ｍＬをそれぞれ加えて懸濁した後、コンディショニング及び平衡化済みのカラム（商品名「Ｓｅｐ−Ｐａｋ  Ｃ１８」、日本ウォーターズ社製）に供した。水０．５ｍＬ（２回）で洗浄後、メタノール０．５ｍＬで溶出させて溶出液を得た。エバポレータを用いて得られた溶出液から溶媒を除去し、乾固物（抽出物）を得た。得られた抽出物のそれぞれにジメチルスルフォキシド（ＤＭＳＯ）を添加し、抽出物の濃度が１００ｍｇ／ｍＬである活性評価用サンプルを調製した。
【００２７】
＜脂肪前駆細胞分化誘導試験＞
マウス由来の前駆脂肪細胞（３Ｔ３−Ｌ１）を１×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように９６穴プレートのウェルに１００μＬずつ入れ、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で２日間培養した。ＤＭＥＭ培地に、３−イソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）及びデキサメタゾン（Ｄｅｘ）をそれぞれ０．５ｍＭ及び０．１μＭとなるように添加して分化誘導培地を調製した。調製した分化誘導培地に活性評価用サンプルを添加し、２５、５０、及び１００μｇ／ｍＬの希釈系列をそれぞれの活性評価用サンプルについて作製した。９６穴プレートのウェル内の培地を除去し、活性評価用サンプルを含む分化誘導培地を１００μＬずつ加えた後、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で２日間培養した。なお、活性評価用サンプルを含まない分化誘導培地のみを１００μＬずつ加えたものを未処理のウェルとして培養した。
【００２８】
ＤＭＥＭ培地にインスリン（ｉｎｓｕｌｉｎ）を０．１μｇ／ｍＬとなるように添加して分化維持培地を調製した。調製した分化維持培地に活性評価用サンプルを添加し、２５、５０、及び１００μｇ／ｍＬの希釈系列をそれぞれの活性評価用サンプルについて作製した。９６穴プレートのウェル内の培地を除去し、活性評価用サンプルを含む分化誘導培地を１００μＬずつ加えた後、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で３日間培養した。なお、未処理のウェルには、活性評価用サンプルを含まない分化維持培地のみを１００μＬずつ加えて培養した。３日間培養後に同じ操作を行い、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で３日間培養した後、以下に示すＷＳＴ−８法及びＯｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ法により細胞生存率及び脂肪蓄積率をそれぞれ算出した。
【００２９】
（細胞生存率）
ＰＢＳにＷＳＴ−８が２％となるように添加して調製したＷＳＴ−８／ＰＢＳ溶液を、培地を除去した９６穴プレートのウェル内に１００μＬずつ加えた。３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で３時間培養した後、吸光プレートリーダーを使用して、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。未処理のウェルの吸光度の値を１００％として、測定した吸光度の値から各活性評価用サンプルで処理した細胞の「細胞生存率（％）」を算出した。なお、試験はｎ＝３で行った。結果を図１及び２に示す。
【００３０】
（脂肪蓄積率）
９６穴プレートの各ウェルからＷＳＴ−８／ＰＢＳ溶液を除去するとともに、ホルマリンを１００μＬずつ添加した後、４℃で一晩静置した。ホルマリンを除去するとともに、６０％イソプロパノール水溶液１００μＬを添加し、細胞を洗浄した後にイソプロパノール水溶液を除去した。Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ溶液（５ｍｇ／ｍＬ  Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ  ｉｎ  イソプロパノール：水＝６：４）１００μＬを各ウェルに添加し、室温で１０分間静置した後、Ｏｉｌ  Ｒｅｄ  Ｏ溶液を除去した。超純水１００μＬを加えて洗浄する洗浄操作を３回行った後、超純水を完全に除去した。イソプロパノール１００μＬを各ウェルに添加し、３分間振とうした後、吸光プレートリーダーを使用して、５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。未処理のウェルの吸光度の値を１００％として、測定した吸光度の値から各活性評価用サンプルで処理した細胞の「脂肪蓄積率（％）」を算出した。なお、試験はｎ＝３で行った。結果を図１及び２に示す。
【００３１】
（脂肪前駆細胞分化誘導試験の結果）
図１及び２に示すように、カロブＲ、カロブＬ、及びカロブＤの活性評価用サンプルを用いた場合には、対象区としたヘスペレチンを用いた場合（１２．５、２５、及び５０μｇ／ｍＬ）と同様に、有効な細胞蓄積率の低下が認められた。なお、カロブＬの活性評価用サンプルを各濃度で用いた細胞を顕微鏡で観察したところ、細胞内における脂肪滴の減少を確認することができた。また、いずれのサンプルについても、脂肪前駆細胞に対する細胞毒性は認められなかった（細胞生存率＞８０％）。一方、ココアＢ及びココアＨの活性評価用サンプルを用いた場合には、有効な細胞蓄積率の低下が認められないことが判明した（図２）。
【００３２】
＜ラジカル消去試験＞
２，２−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−１−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ）をエタノールに溶解し、０．１ｍＭのＤＰＰＨ溶液を調製した。一方、エタノールを用いて、５０、１００、及び２００μｇ／ｍＬの各活性評価用サンプルの希釈系列を調製した（最終濃度２５、５０、及び１００μｇ／ｍＬ）。調製した各活性評価用サンプルの希釈系列をそれぞれ１００μＬずつ９６穴プレートのウェルに入れるとともに、ＤＰＰＨ溶液を１００μＬずつさらに入れ、ボルテックスミキサーを用いて撹拌した。９６穴プレートをアルミホイルで遮光し、室温で３０分間静置した後、吸光プレートリーダーを使用して、５１７ｎｍにおける吸光度を測定した。未処理のウェルの吸光度の値を１００％として、測定した吸光度の値から各活性評価用サンプルの「ＤＰＰＨラジカル消去率（％）」を算出した。なお、試験はｎ＝３で行った。結果を図３に示す。
【００３３】
（ラジカル消去試験の結果）
図３に示すように、すべての活性評価用サンプルにおいて濃度に依存したＤＰＰＨラジカル消去活性が認められた。
【００３４】
＜一酸化窒素産生試験＞
マウスマクロファージ様細胞（Ｊ７７４．１）を１×１０5ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように９６穴プレートのウェルに１００μＬずつ入れ、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で一晩培養した。ＲＰＭＩ−１６４０培地に、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）を２０μｇ／ｍＬとなるように添加して培地を調製した。調製した培地に活性評価用サンプルを添加し、５０、１００、及び２００μｇ／ｍＬの希釈系列をそれぞれの活性評価用サンプルについて作製した（最終濃度２５、５０、及び１００μｇ／ｍＬ）。培養後の９６穴プレートのウェルに活性評価用サンプルを含む培地を１００μＬずつ加えた（総量２００μＬ）後、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で１日間培養した。なお、活性評価用サンプルを含まない培地のみを１００μＬずつ加えたものを未処理のウェルとして培養した。１日間培養後、以下に示すグリース試薬法及びＭＴＴ法により一酸化窒素産生率及び細胞生存率をそれぞれ算出した。
【００３５】
（一酸化窒素産生率）
新たな９６穴プレートのウェルにグリース試薬（１％スルファニルアミド、０．１％Ｎ−１−ナフチルエチレンジアミン、２．５％リン酸、及び超純水）を１００μＬずつ入れた。培養した培地上清１００μＬを加え、室温で２０分静置した後、吸光プレートリーダーを使用して５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。未処理のウェルの吸光度の値を１００％として、測定した吸光度の値から各活性評価用サンプルで処理した細胞の「一酸化窒素産生率（％）」を算出した。なお、試験はｎ＝３で行った。結果を図４に示す。
【００３６】
（細胞生存率）
培養した細胞の各ウェルから培地上清を除去し、５ｍｇ／ｍＬ  ＭＴＴ溶液が５μＬ入るように調製したＭＴＴ／ＰＢＳ溶液を１００μＬずつ加え、３７℃、５％ＣＯ2のインキュベータ内で３時間培養した。３時間培養後、上清を除去し、ジメチルスルフォキシド１００μＬを加えて細胞内のホルマザンを溶解させた。吸光プレートリーダーを使用して４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。未処理のウェルの吸光度の値を１００％として、測定した吸光度の値から各活性評価用サンプルで処理した細胞の「細胞生存率（％）」を算出した。なお、試験はｎ＝３で行った。結果を図４に示す。
【００３７】
（一酸化窒素産生試験の結果）
図４に示すように、カロブＤ及びカロブＥの活性評価用サンプルを用いた場合、特に、カロブＥの活性評価用サンプルを用いた場合に、有効な一酸化窒素産生率の低下が認められた。また、いずれのサンプルについても、マウスマクロファージ様細胞に対する細胞毒性は認められなかった（細胞生存率＞８６％）。
【産業上の利用可能性】
【００３８】
本発明の抗肥満食品は、抗肥満等の効果を得ることを目的とする機能性食品として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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