(57)【要約】      （修正有）【課題】サーチュイン遺伝子の転写産物レベル及び／又はサーチュインタンパク質レベルでの発現を増強する新規なサーチュイン発現増強剤の提供。【解決手段】以下の構造式で表されるピセアタンノール誘導体若しくはその塩或いはその配糖体を有効成分として含有する、サーチュイン発現増強剤。前記化合物が下記式で表される化合物の内で、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニン又はラポンチゲニンであることが好ましいサーチュイン発現増強剤。2017071575.tif 000007（Ｒ１〜Ｒ６は夫々独立に、−Ｈ、−ＯＨ又は−ＯＲ；ＲはＣ１〜６のアルキル基）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を有効成分として含有する、サーチュイン７発現増強剤。
2017071575.tif 000005
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【請求項２】
Ｒがメチル基である、請求項１または２に記載のサーチュイン発現増強剤。
【請求項３】
ピセアタンノールまたはレスベラトロールを含有する、請求項１または２に記載のサーチュイン発現増強剤。
【請求項４】
イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンを含有する、請求項１または２に記載のサーチュイン発現増強剤。
【請求項５】
以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した動物個体から採取された細胞またはピセアタンノールまたは以下の構造式を有するピセアタンノール誘導体を投与した細胞におけるサーチュイン７遺伝子の転写産物またはサーチュイン７タンパク質の発現レベルを調べる、サーチュイン７発現解析方法。
2017071575.tif 000006
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【請求項６】
Ｒがメチル基である、請求項５に記載のサーチュイン７発現解析方法。
【請求項７】
ピセアタンノールまたはレスベラトロールが投与される、請求項５または６に記載のサーチュイン７発現解析方法。
【請求項８】
イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンが投与される、請求項５または６に記載のサーチュイン７発現解析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サーチュイン発現増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピセアタンノールは、スチルベン類の化合物であって、例えば、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）の果物であるパッションフルーツの種子に含まれており、シミ、ソバカス、日焼けなどによる色素沈着の原因となるメラニンの生成を抑制する効果があることが報告されている（特許文献１を参照）。
【０００３】
このピセアタンノールは、サーチュイン１タンパク質の活性を増強するという報告がある。サーチュイン（Sirtuin; SIRT）は、ヒトの場合、サーチュイン１〜７のメンバーを有する脱アセチル化酵素であるが、近年、サーチュインの機能に関する研究が盛んになり、特に、サーチュイン１は、抗老化作用、糖尿病改善作用、心血管保護作用、腎疾患改善作用、炎症性サイトカイン産生の抑制作用、神経保護作用等、様々な機能を有することが明らかになった。 これらのサーチュイン１脱アセチル化活性を増強する因子として、レスベラトロールやケルセチンなどの化合物が注目され、抗老化剤（アンチ・エージング剤）、糖尿病治療薬、心血管疾患治療薬、神経系疾患治療薬、抗炎症剤などに利用すべく、活発な研究が行われている（例えば、非特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００９−１０２２９８号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】実験医学 ２０１０年２８巻１９号 ３０６８−３０７６頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、サーチュイン遺伝子の転写産物レベル及び／又はサーチュインタンパク質レベルでの発現を増強する新規なサーチュイン発現増強剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、ピセアタンノールの機能を解明しようと、鋭意努力した結果、毛乳頭細胞および表皮角化細胞（ケラチノサイト）において、ピセアタンノールや誘導体がサーチュインの発現を増強することを見出し、本発明にいたった。
【０００８】
本発明の一実施態様は、以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を有効成分として含有する、サーチュイン７発現増強剤である。
2017071575.tif 000002
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【０００９】
Ｒがメチル基であってもよい。前記サーチュイン発現増強剤がピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニン、ラポンチゲニン、またはスキルプシンＢであってもよい。
【００１０】
本発明の他の一実施態様は、以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した動物個体から採取された細胞または以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した細胞におけるサーチュイン７遺伝子の転写産物またはサーチュイン７タンパク質の発現レベルを調べる、発現解析方法である。
2017071575.tif 000003
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【００１１】
Ｒがメチル基であってもよい。前記サーチュイン発現増強剤がピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニン、ラポンチゲニン、またはスキルプシンＢが投与されてもよい。
【００１２】
本発明のさらなる一実施形態は、ピセアタンノールを有効成分として含有し、皮膚細胞に投与される、サーチュイン３発現増強剤である。パッションフルーツ種子エキスを含んでもよい。皮膚細胞はケラチノサイトであってもよい。
【００１３】
本発明のさらなる一実施形態は、ピセアタンノールを投与した動物個体から採取された皮膚細胞またはピセアタンノールを投与した皮膚細胞におけるサーチュイン３遺伝子の転写産物またはサーチュイン３タンパク質の発現レベルを調べる、サーチュイン３発現解析方法。パッションフルーツ種子エキスが投与されてもよい。皮膚細胞はケラチノサイトであってもよい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によって、サーチュイン遺伝子の転写産物レベル及び／又はサーチュインタンパク質レベルでの発現を増強する新規なサーチュイン発現増強剤を提供することができるようになった。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】本発明の一実施例において、ヒト毛乳頭細胞にピセアタンノール、レスベラトロール、イソポンチゲニンを１−２０μＭの濃度で添加したときの、SIRT1遺伝子のmRNAレベルを示した図である。
【図２】本発明の一実施例においてヒト毛乳頭細胞にピセアタンノールまたはレスベラトロールを１−１０μＭの濃度で添加したときの、SIRT4 mRNA発現レベルを示した図である。
【図３】本発明の一実施例においてヒト毛乳頭細胞にピセアタンノールまたはレスベラトロールを１−２０μＭの濃度で添加したときの、SIRT5 mRNA発現レベルを示した図である。
【図４】本発明の一実施例においてヒト毛乳頭細胞にレスベラトロールを１−１０μＭの濃度で添加したときの、SIRT6 mRNA発現レベルを示した図である。
【図５】本発明の一実施例においてヒト毛乳頭細胞にピセアタンノールまたはレスベラトロールを１−１０μＭの濃度で添加したときの、SIRT7 mRNA発現レベルを示した図である。
【図６】本発明の一実施例において、ケラチノサイトにピセアタンノール、パッションフルーツ種子エキス、レスベラトロール、イソポンチゲニン、またはスキルプシンＢを４．５−２７μＭまたは４．５−９μＭの濃度で添加したときの、SIRT1遺伝子のmRNAレベルを示した図である。
【図７】本発明の一実施例においてヒトケラチノサイトにピセアタンノール、またはパッションフルーツ種子エキスを４．５−２７μＭまたは４．５−９μＭの濃度で添加したときの、SIRT3 mRNA発現レベルを示した図である。
【図８】本発明の一実施例においてヒトケラチノサイトにピセアタンノール、パッションフルーツ種子エキス、またはレスベラトロールを４．５−２７μＭまたは４．５−９μＭの濃度で添加したときの、SIRT4 mRNA発現レベルを示した図である。
【図９】本発明の一実施例においてヒトケラチノサイトにパッションフルーツ種子エキス、またはレスベラトロールを４．５−２７μＭまたは４．５−９μＭの濃度で添加したときの、SIRT5 mRNA発現レベルを示した図である。
【図１０】本発明の一実施例においてヒトケラチノサイトにピセアタンノール、パッションフルーツ種子エキス、またはレスベラトロールを４．５−９μＭμＭの濃度で添加したときの、SIRT6 mRNA発現レベルを示した図である。
【図１１】本発明の一実施例においてヒトケラチノサイトにピセアタンノール、パッションフルーツ種子エキス、またはレスベラトロールを４．５−２７μＭまたは４．５−９μＭの濃度で添加したときの、SIRT7 mRNA発現レベルを示した図である。
【図１２】本発明の一実施例において、SIRT1発現増強能を調べた化合物の構造式を示した図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的に実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【００１７】
（１）サーチュイン発現増強剤
本発明の一実施形態は、サーチュイン発現増強剤であって、ピセアタンノールまたはその誘導体を含有することを特徴とする。
【００１８】
ピセアタンノールまたはその誘導体は特に限定されないが、下記構造式（Ｉ）で示される化合物のトランス体および多量体、並びにそれらの塩および配糖体が好ましい。なお、誘導体の中で、アルキル化誘導体が特に好ましく、メチル化誘導体がさらに好ましい。また、多量体は、二量体、三量体など単量体が複数個多量化したものを言うが、なかでもスキルプシンＢが好ましい。
【００１９】
2017071575.tif 000004
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基である。）
なお、置換基Ｒに関して、様々な態様が考えられるが、Ａ）〜Ｃ）が好ましい。
【００２０】
Ａ）ＲはＣ１〜Ｃ１２のいずれかである。
Ｂ）ＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。
Ｃ）ＲはＣ１のメチル基である。
【００２１】
また、Ｒ１〜Ｒ６に関しても、様々な組み合わせが考えられるが、１）〜６）が好ましい。
【００２２】
１）Ｒ１〜Ｒ３のいずれも−ＯＲである。
２）Ｒ１〜Ｒ３のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲである。
３）Ｒ１〜Ｒ３のうち、Ｒ３は−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲである。
４）Ｒ４〜Ｒ６のいずれも−ＯＲである。
５）Ｒ４〜Ｒ６のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲである。
６）Ｒ４〜Ｒ６のうち、Ｒ６は−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲである。
【００２３】
ここで、本明細書では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６が−ＯＨであって、Ｒ３が−Ｈであって、Ｒ４とＲ５のうち、一方が−Ｈで、もう一方が−ＯＨである化合物をピセアタンノールと呼ぶ。また、ピセアタンノールのメチル化誘導体として、ＲはＣ１のメチル基であって、Ｒ１〜Ｒ３のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＨまたは−ＯＲであって、Ｒ４〜Ｒ６のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＨまたは−ＯＲである場合（上記選択肢において、Ｃ／２／５の組み合わせ）が好ましい。ここで、Ｒ１、Ｒ２が−ＯＨであって、Ｒ３が−Ｈであって、Ｒ６が−ＯＣＨ３であって、Ｒ４とＲ５のうち、一方が−Ｈで、もう一方が−ＯＨである化合物がラポンチゲニンであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６が−ＯＨであって、Ｒ３が−Ｈであって、Ｒ４とＲ５のうち、一方が−Ｈで、もう一方が−ＯＣＨ３である化合物がイソラポンチゲニンである。また、ピセアタンノールのアルキル化誘導体として、ＲはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であって、Ｒ１〜Ｒ３のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲであって、Ｒ４〜Ｒ６のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲである場合（上記選択肢において、Ｂ／２／５の組み合わせ）が好ましい。
【００２４】
サーチュイン発現増強剤中のピセアタンノールまたはその誘導体の含有量は、１％以上であることが好ましいが、２％以上、３％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、５０％以上、７０％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上のいずれかであることがさらに好ましい。
【００２５】
本明細書では、「サーチュイン」という用語が単独で用いられた場合、すべてのサーチュインタンパク質およびそのホモログであるサーチュインタンパク質の総称を表すものとする。サーチュインの由来の動物は特に限定されず、ヒトであっても、ヒト以外の脊椎動物であっても、ヒト以外のほ乳類であってもよい。ヒトの場合、サーチュイン1〜7のいずれであってもよい。本発明で発現増強させる対象としては、サーチュイン1が好ましく、ヒトサーチュイン１が最も好ましい。そして、「サーチュイン遺伝子」とは、サーチュインをコードする遺伝子のことを言う。
【００２６】
本明細書で、「サーチュイン発現」とは、サーチュイン遺伝子の転写産物レベルでの発現とサーチュインタンパク質レベルでの発現を総称するものとする。
【００２７】
本明細書で、「サーチュイン発現増強」とは、サーチュイン遺伝子の転写産物（サーチュイン転写産物とも称する）及び／又はサーチュインタンパク質が増えることであって、例えば、遺伝子の転写及び／又は翻訳の活性化、転写産物及び／又はタンパク質の安定性の向上、転写産物及び／又はタンパク質分解の阻害などのメカニズムは問わないものとする。従って、「サーチュイン発現増強剤」とは、そのメカニズムに関わらず、サーチュイン遺伝子の転写産物レベル及び／又はサーチュインタンパク質レベルを亢進させることができる薬剤をいう。
【００２８】
ピセアタンノールまたはその誘導体の製造方法は特に限定されず、植物から単離しても、化学合成であってもかまわない。サーチュイン発現増強剤の剤形は特に限定されないが、精製されたピセアタンノールまたはその誘導体がバッファーに溶解された溶液であってもよく、その中に、適量の塩やキレート剤を含有してもかまわない。
【００２９】
また、ピセアタンノールとして、ピセアタンノールを含む植物のエキスを用いてもよい。ここで、植物の種類は、ポリフェノールを含む植物であれば特に限定されず、パッションフルーツ（例えば、Passiflora edulis、Passiflora alata、Passiflora amethystine、Passiflora antioquiensis、Passiflora biflora、Passiflora buonapartea、Passiflora capsularis、Passiflora cearensis、Passiflora coccinea、Passiflora cochinchinesis、Passiflora filamentosa、Passiflora herbertiana、Passiflora laurifolia、Passiflora ligularis、Passiflora lunata、Passiflora lutea、Passiflora maliformis、Passiflora mixta、Passiflora mucronata、Passiflora mollissima、Passiflora nibiba、Passiflora organensis、Passiflora pallida、Passiflora parahypensis、Passiflora pedeta、Passiflora pinnatistipula、Passiflora popenovii、Passiflora quadrangularis、Passiflora riparia、Passiflora rubra、Passiflora serrate、Passiflora tiliaefolia、Passiflora tripartite、Passiflora villosa、Passiflora warmingiiなど）、テンニンカ（例えば、Rhodomyrtus tomentosaなど）、ブラシノキ（例えば、マキバブラシノキCallistemon speciosus、Callistemon rigidusなど）が例示できる。エキスを抽出するのは、植物全体のうち、どの部分であっても良く、例えば、果実、花、種子、葉、枝、樹皮、幹、茎、または、根であっても良いが、パッションフルーツを用いる場合は種子であることが好ましく、テンニンカである場合には果実であることが好ましく、ブラシノキである場合には茎であることが好ましい。以下、パッションフルーツ種子エキスを一例として、その製造方法を説明する。
【００３０】
（２）パッションフルーツ種子エキスの製造方法
パッションフルーツ種子エキスの具体的な製造方法として、公知の方法を用いることができ、例えば、パッションフルーツ種子を、乾燥した後に、破砕、粉砕、または、切断などによって種子分解物を得、溶媒を用いて抽出し、残渣を除去することによって抽出液を得、さらに、抽出液から溶媒を除去することによって、抽出物を得ることができる。この段階のいずれのものも、本発明のパッションフルーツ種子エキスとして使用することができる。
【００３１】
抽出に用いる溶媒の種類は、当業者であれば適切に選択することができるが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、２−プロパノール、１，４−ジオキサン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であっても良く、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましく、水、エタノール、または、水およびエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。混合溶媒を用いる場合の、各溶媒の混合比は特に限定されないが、例えば水およびエタノールの混合溶媒を用いる場合には、水とエタノールとの体積比は、１：９９〜９９：１であっても良く、３：９７〜８０：２０であることが好ましく、５：９５〜５０：５０であることがより好ましく、１０：９０〜４０：６０であることが特に好ましい。
【００３２】
溶媒として、水、または、水との混合溶媒を用いる場合には、熱水、または、熱水との混合溶媒であることが好ましい。水、または、水との混合溶媒は塩を含んでいても良く、塩を含む溶媒の例として、バッファー（緩衝液）であっても良い。バッファーのｐＨは、特に限定されず、酸性、中性、または、アルカリ性のいずれであっても良いが、酸性であることが好ましく、ｐＨ６以下の酸性であることがより好ましく、ｐＨ１〜ｐＨ５の酸性であることがさらに好ましい。バッファーに用いる塩の種類は特に限定されず、例として、クエン酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、酢酸塩および炭酸塩などが挙げられる。
【００３３】
抽出液から溶媒を除去する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができる。例えば、減圧留去、凍結乾燥、または、スプレードライ（噴霧乾燥）であっても良いが、凍結乾燥、または、スプレードライであることが好ましく、スプレードライであることがより好ましい。
【００３４】
抽出物の形状は、特に限定されず、例えば粉体などの固体状、アモルファス状、または、オイル状であっても良い。
【００３５】
（３）サーチュイン発現増強方法
本発明の一実施形態は、サーチュイン発現を増強する方法であって、細胞に、ピセアタンノールまたはその誘導体を投与する工程を含む。この工程が行われるのは、in vitroであっても、in vivoであってもかまわない。用いる細胞は特に限定されないが、毛乳頭細胞または皮膚細胞（特にケラチノサイト）が好ましい。
【００３６】
in vitroで用いられる細胞は、生体外にあればよく、培養条件下にあることが好ましいが、ライン化されていても、初代培養細胞であってもよく、あるいは培養組織中の細胞であってもかまわない。細胞がin vivoにある場合は、すなわち生体内に存在する細胞を投与対象としている。細胞内で、ピセアタンノールまたはその誘導体が作用する対象であるサーチュイン遺伝子、そのプロモーター、転写産物、及び／又はタンパク質などが由来する動物種と、細胞が由来する動物種は、異なっていてもかまわないが、同じであることが好ましい。すなわち、それらサーチュイン遺伝子及びそのプロモーターなどは、内在性であっても外来性であってもかまわない。
【００３７】
ピセアタンノールまたはその誘導体は、用いる系にあわせて（１）で述べたように剤形化されていてもよい。この化合物の投与量は、用いる系によって、実施者が適宜、容易に決定することができる。投与方法も、用いる系によって、実施者が適宜、容易に決定することができる。例えば、培養細胞の場合、培養細胞を培養している培地に、適量を添加すればよい。生体内の細胞の場合、ピセアタンノールまたはその誘導体は個体に投与される。投与経路は、全身投与または局所投与のいずれも選択することができる。この場合、疾患、症状、状態などに応じた適当な投与経路を選択する。本発明に係る薬剤は、経口経路、非経口経路のいずれによっても投与できる。非経口経路としては、通常の静脈内投与、動脈内投与の他、皮下、皮内、筋肉内などへの投与を挙げることができる。さらに、塗布や噴霧などによる経粘膜投与または経皮投与を実施することができる。
【００３８】
ここで述べた方法によって、ピセアタンノールまたはその誘導体を用いて、サーチュイン発現を増強することができる。
【００３９】
（４）サーチュイン発現測定方法
サーチュイン発現を測定する方法は、ピセアタンノールまたはその誘導体を用いてサーチュイン発現を増強する工程と、サーチュイン転写産物及び／又はサーチュインタンパク質を検出する工程と、を含む。
【００４０】
ピセアタンノールまたはその誘導体を用いてサーチュイン発現を増強する工程は、（３）で述べたように行う。
【００４１】
その後、サーチュイン転写産物及び／又はサーチュインタンパク質を検出する。転写産物は、転写後スプライシングが行われる前のｈｎＲＮＡであっても、スプライシングが行われた後のｍＲＮＡであってもかまわない。検出方法は特に限定されないが、ノーザンハイブリダイゼーションやＲＴ−ＰＣＴが好ましい。タンパク質の検出方法も特に限定されないが、ウエスタン・ブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ、ＲＩＡ、ＣＦ、ＣＬＩＡなどが例示できる。
【００４２】
この方法によって、ある特定の条件で、ピセアタンノールまたはその誘導体によって、サーチュイン発現がどのくらいのレベルで増強されるかを知ることができる。
【００４３】
（５）ピセアタンノール誘導体
ピセアタンノールまたはその誘導体は、サーチュイン発現増強能を有する。従って、ピセアタンノールをリード化合物として作製された誘導体に対し、サーチュイン発現増強能を調べれば、サーチュイン発現増強能を有する化合物を得られる確率が高くなる。そして、複数の誘導体を調べ、サーチュイン発現増強能を有する化合物をサーチュイン発現増強物質として特定することによって、サーチュイン発現増強能を有する化合物をスクリーニングすることができる。
【００４４】
ここで、ピセアタンノールまたはそのメチル化体をリード化合物として作製された誘導体は、特に限定されないが、上記構造式（Ｉ）において、Ａ／１〜３／４〜６、Ｂ／１／４〜５、Ｂ／１〜２／４のいずれかの組み合わせを有する化合物であることが好ましい。なお、水素やアルキル基は、ハロゲン、芳香環、などに任意に置換されてもよい。
【００４５】
（６）サーチュイン発現増強剤を含有する薬品
サーチュインは、老化予防（アンチ・エージング）作用、糖尿病改善作用、心血管保護作用、腎疾患改善作用、炎症性サイトカイン産生の抑制作用、神経保護作用等、様々な機能を有するため、生体内で、サーチュイン発現を増強し、サーチュインの体内濃度を上げることによって、抗老化作用、糖尿病改善作用、心血管保護作用、炎症性サイトカインの抑制作用、神経保護作用等を発揮させることができる。従って、サーチュイン発現増強剤は、アンチ・エージング（老化予防）剤、糖尿病治療剤及び予防剤、心血管疾患治療剤及び予防剤、神経系疾患治療剤及び予防剤、腎疾患治療剤及び予防剤、並びに抗炎症剤などに使用することができる。具体的な対象疾患としては、例えば、２型糖尿病などの糖尿病、動脈硬化、心筋梗塞などの心血管疾患、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、または認知症などの神経系疾患、ネフローゼまたは腎機能障害などの腎疾患、肺炎、肝炎、膵炎、潰瘍性大腸炎などの様々な炎症性疾患などを挙げることができる。特に、これらの対象疾患が、同時に複数生じるような、多臓器（心臓、肝臓、膵臓、腎臓など）の機能低下による全身性の疾患である「老年病」に対して有効に作用し、複数の疾患を一元的に治療または予防できるという点で、極めて有効である。このように、ピセアタンノールまたはその誘導体を有効成分として含有するサーチュイン発現増強剤は、高齢者医療のあり方を根本的に変えることが期待される。
【００４６】
なお、サーチュインは、NF-kappaB抑制作用を有するため、サーチュイン発現増強剤は、NF-kappaB抑制剤としても用いることができる。サーチュイン発現増強剤は、NF-kappaB抑制を通じて、ＮＯシグナルを活性化し、TNF-alfa、ICAM-1、IL-6、IL-1などの炎症性サイトカインや誘導型NOS(i-NOS)を抑制することができるので、心血管保護作用や抗炎症作用の少なくとも一部は、このNF-kappaB抑制作用によるものと考えられる。
【実施例】
【００４７】
（実施例１）毛乳頭細胞
本実施例では、ピセアタンノール（Piceatannol; PIC）、レスベラトロール（Resveratrol; RES）、イソラポンチゲニン（Isorhapontigenin; ISO）によってサーチュイン発現が増強されることを示す。
なお、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンは東京化成工業株式会社より入手した。
【００４８】
ヒト毛乳頭細胞初代培養細胞（東洋紡社）を、毛乳頭細胞増殖培地（東洋紡社）で培養した。１ウエル当たり70,000個の毛乳頭細胞を１２ウエルのプレートに播種し、二晩培養し、培地を0.1% FCS-DMEM培地に置換し、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンを1-20μMの濃度で添加した。
【００４９】
６時間後、細胞からRNAを回収し、RT-PCRによってサーチュイン１（SIRT1）遺伝子のmRNA量およびGAPDH遺伝子のmRNA量を測定した。そして、SIRT1mRNA発現レベルを標準化するため、SIRT1/GAPDH比を算出し、試薬の代わりに等量のDMSOを添加した非刺激群（Control; Cont）を１とした場合の、各物質で刺激した場合の値を計算した。
【００５０】
図１〜図５に、試薬の各濃度に対し、６時間刺激後のSIRT1, SIRT4, SIRT5, SIRT6, SIRT7 の各mRNA発現レベルを示す。ピセアタンノールおよびレスベラトロールは、調べた全てのSIRTのmRNA発現レベルを増強した。また、イソラポンチゲニンも、SIRT1のmRNA発現レベルを増強した。このように、毛乳頭細胞では、ピセアタンノールおよびレスベラトロールは、SIRT1, SIRT4, SIRT5, SIRT6, SIRT7 の発現増強剤として機能する。
【００５１】
（実施例２）ケラチノサイト
本実施例では、ピセアタンノール（Piceatannol; PIC）、レスベラトロール（Resveratrol; RES）、イソラポンチゲニン（Isorhapontigenin; ISO）、パッションフルーツ種子エキス、スキルプシンＢ（scirpusin B; sciB）によってサーチュイン発現が増強されることを示す。
【００５２】
なお、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンは東京化成工業株式会社より入手した。スキルプシンＢは、パッションフルーツ種子から分離精製した。パッションフルーツ種子を凍結乾燥粉砕させた粉砕物に80%アセトンを添加し、室温で攪拌して種子抽出液を作製した。これを、ODSカラムを用いたHPLCによって分画した。ＨＰＬＣによる分画条件は、以下のとおりとした。
・  カラム：ODS-3  径20mm、長さ250mm（ジーエルサイエンス株式会社製）
・  カラム温度：室温
・  溶出条件：流速5ml/min、10％アセトニトリル（0min）→50％アセトニトリル（70min）→80％アセトニトリル（75min）→80％アセトニトリル（90min）
・  ＵＶ検出：280nm  
【００５３】
ＨＰＬＣの結果、保持時間57分付近に溶出するピーク画分を分取して、更にＨＰＬＣで、純度97％程度になるまで精製したものをスキルプシンＢとして用いた。パッションフルーツ種子エキスは、パッションフルーツ種子を焙煎して粉砕し、これに８０％含水エタノール（80v/v%エタノール＋20v/v%水）を加えて混合、攪拌した後、濾過することで固液分離し、得られた抽出液をエバポレータで濃縮して、スプレードライによって粉末化することによって得た。
【００５４】
ヒトケラチノサイト初代培養細胞（クラボウ社）を、ケラチノサイト増殖培地（クラボウ社）で培養した。１ウエル当たり120,000個のケラチノサイトを１２ウエルのプレートに播種し、二晩培養し、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニン、スキルプシンＢを1-20μMの濃度で添加した。パッションフルーツ種子エキスは、0.00115％〜0.00231％（ピセアタンノール4.5〜9μＭ相当含有）の濃度で添加した。
【００５５】
６時間後、細胞からＲＮＡを回収し、ＲＴ−ＰＣＲによってサーチュイン遺伝子のmRNA量およびGAPDH遺伝子のmRNA量を測定した。そして、SIRTmRNA発現レベルを標準化するため、SIRT/GAPDH比を算出し、試薬の代わりに等量のDMSOを添加した非刺激群（Control; Cont）を１とした場合の、各物質で刺激した場合の値を計算した。
【００５６】
図６〜図１１に、試薬の各濃度に対し、６時間刺激後のSIRT1, SIRT3〜7 の各mRNA発現レベルを示す。ピセアタンノール、パッションフルーツ種子エキス、レスベラトロールは、調べた全てのSIRTのmRNA発現レベルを増強した。また、イソラポンチゲニン及びスキルプシンＢも、SIRT1のmRNA発現レベルを増強した。このように、ケラチノサイトでは、ピセアタンノール、パッションフルーツ種子エキス、レスベラトロール、イソラポンチゲニン及びスキルプシンＢは、SIRTの発現増強剤として機能する。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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