(57)【要約】【課題】不純物を含まず、良好な生体適合性、硬組織誘導能、抗菌効果、及び操作性を有する歯の象牙細管封入用製剤を提供する。【解決手段】本発明の歯の象牙細管封入用製剤は、水溶性カルシウム塩及び水溶性ケイ酸塩を含む水溶液であることを特徴とする。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
水溶性カルシウム塩及び水溶性ケイ酸塩を含む水溶液であることを特徴とする歯の象牙細管封入用製剤。
【請求項２】
前記水溶液のｐＨが７以上１３以下である請求項１に記載の歯の象牙細管封入用製剤。
【請求項３】
前記水溶液に含まれるカルシウムイオンの濃度が２００ｐｐｍ以上５，０００ｐｐｍ以下である請求項１又は２に記載の歯の象牙細管封入用製剤。
【請求項４】
前記水溶液に含まれるケイ素イオンの濃度が０．５ｐｐｍ以上３０ｐｐｍ以下である請求項１〜３のいずれか一項に記載の歯の象牙細管封入用製剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか一項に記載の歯の象牙細管封入用製剤と、リン酸緩衝剤とを備えることを特徴とする根管治療用キット。
【請求項６】
前記リン酸緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水である請求項５に記載の根管治療用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯の象牙細管封入用製剤及び根管治療用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
根尖性歯周炎の治療に際して、根管内細菌の制御は極めて重要である。難治性の症例では、根尖部象牙細管内における細菌侵入や根管側枝等の複雑な解剖学的形態の存在等、細菌感染のコントロールを妨げるさまざまな要因が存在すると考えられる。特に、根管壁象牙細管内に侵入及び定着した細菌については、機械的清掃や根管洗浄剤による化学的清掃を行ってもその効果は、通常、表層部に限局するため、深部まで死滅させることは極めて困難である。このような視点から, 根管充填材の所要性質として、封鎖性や抗菌効果に加えて、「残存細菌を封入し, その生活力を奪うこと（ｅｎｔｏｍｂｍｅｎｔ）」が提示されているが、根管壁象牙細管にまでｅｎｔｏｍｂｍｅｎｔ効果を明確に示す材料は、現在存在しない。
【０００３】
一方、Ｍｉｎｅｒａｌ  ｔｒｉｏｘｉｄｅ  ａｇｇｒｅｇａｔｅ（ＭＴＡ）等のケイ酸カルシウム系歯内療法用材料は、カルシウムイオンの放出に基づく生体機能効果を備え、 良好な生体適合性、硬組織誘導能や抗菌効果を有することから、直接覆髄等に応用されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Okiji T., et al., “Reparative dentinogenesis induced by mineral trioxide aggregate: a review from the biological and physicochemical points of view”, International Journal of Dentistry, Volume 2009, Article ID 464280, 12 pages, 2009.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
市販のＭＴＡは粉末状であるため、練和物がまとまりにくく、罹患部位への装填が極めて困難である。また、市販のＭＴＡには基本成分としてケイ酸カルシウムが含まれているが、その他に、酸化鉄やマグネシウム、その他微量元素等の不純物が含まれている。さらに、市販のＭＴＡは高価であるため、コスト面からも治療に使用することが敬遠されている。
【０００６】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであって、不純物を含まず、良好な生体適合性、硬組織誘導能、抗菌効果、及び操作性を有する歯の象牙細管封入用製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ケイ酸カルシウムを含む製剤を水溶液とすることで、根管内象牙細管を封入できることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００８】
本発明は、以下の態様を含む。
［１］水溶性カルシウム塩及び水溶性ケイ酸塩を含む水溶液であることを特徴とする歯の象牙細管封入用製剤。
［２］前記水溶液のｐＨが７以上１３以下である［１］に記載の歯の象牙細管封入用製剤。
［３］前記水溶液に含まれるカルシウムイオンの濃度が２００ｐｐｍ以上５，０００ｐｐｍ以下である［１］又は［２］に記載の歯の象牙細管封入用製剤。
［４］前記水溶液に含まれるケイ素イオンの濃度が０．５ｐｐｍ以上３０ｐｐｍ以下である［１］〜［３］のいずれか一つに記載の歯の象牙細管封入用製剤。
［５］［１］〜［４］のいずれか一つに記載の歯の象牙細管封入用製剤と、リン酸緩衝剤とを備えることを特徴とする根管治療用キット。
［６］前記リン酸緩衝剤がリン酸緩衝生理食塩水である［５］に記載の根管治療用キット。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、不純物を含まず、良好な生体適合性、硬組織誘導能、抗菌効果、及び操作性を有する歯の象牙細管封入用製剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例２におけるＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤と、１×ＰＢＳとの混合により得られた析出物を走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ＳＥＭ）を用いて観察した画像である。
【図２】実施例３におけるＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を注入し、ＰＢＳ含有綿栓で１週間封入したヒト新鮮抜去歯の表面を、ＳＥＭを用いて観察した画像である。
【図３】実施例３におけるＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を注入し、ＰＢＳ含有綿栓で２週間封入したヒト新鮮抜去歯の断面を、ＳＥＭを用いて観察した画像である。
【図４】実施例３におけるＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を注入し、ＰＢＳ含有綿栓で封入したヒト新鮮抜去歯の試片を３７℃の保温庫に３週間保管した後、ダイヤモンドデイスクで半切し、目視した画像を示す図である。
【図５】実施例３における波長分散型電子線マイクロアナライザーを用いて、Ｎｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を注入し、ＰＢＳ含有綿栓で２週間封入したヒト新鮮抜去歯の割断試片の形態観察および組成分析の結果を示す画像である。
【図６】実施例４におけるヒト根管に細菌を培養してから根管清掃後、Ｎｏ．１の象牙細管封入用製剤を注入し、ＰＢＳ含有綿栓を３日間封入した後、レーザー顕微鏡を用いて、割断試片に存在する細菌を分析した結果を示す画像である。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
＜＜歯の象牙細管封入用製剤＞＞
一実施形態において、本発明は、水溶性カルシウム塩及び水溶性ケイ酸塩を含む水溶液である歯の象牙細管封入用製剤を提供する。
【００１２】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、不純物を含まず、良好な生体適合性、硬組織誘導能、及び抗菌効果に加えて、優れた操作性を有するものである。
【００１３】
一般的に「象牙細管」とは、歯の象牙質全体にある直径０．８〜２．２μｍの細い管のことを意味する。象牙質内には無数の象牙細管が歯髄からエナメル象牙質境にかけて放射状に走っている。また、この象牙細管の構造は、象牙質表面側からの刺激を歯髄まで到達させる機構も兼ねており、う蝕、冷水、又は歯磨きによる凍みや痛みを感じるのはこのためである。本明細書においては、特に、根管象牙質の象牙細管を対象とする。
【００１４】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、ｐＨが７以上１３以下であることが好ましく、８以上１２以下であることがより好ましく、８以上１０以下であることがさらに好ましい。
ｐＨが上記範囲であることにより、根管内細菌を効果的に死滅させることができる。
【００１５】
本明細書において、「根管内細菌」としては、根管内においてよく見られるＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓの他、例えば、Ｃａｐｎｏｃｙｔｏｐｈａｇａ  Ｏｃｈｒａｃｅａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａ、Ｐｒｅｖｏｔｅｌｌａ  ｎｉｇｒｅｓｃｅｎｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｃｏｎｓｔｅｌｌａｔｕｓ、 Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｏｒｉｓ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｈｅｒｍａｎｉｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｒｏｔｈｉａ  ｍｕｃｉｌａｇｉｎｏｓａ等が挙げられる。また、これらの細菌により、いわゆるバイオフィルムも形成される。
【００１６】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤において、ｐＨを上記範囲内とするためにｐＨ調整剤を使用してもよい。ｐＨ調整剤としては、生体適合性を有するものであればよく、酸又は塩基を用いればよい。酸としては、例えば、リン酸等の無機酸、クエン酸、乳酸、酢酸、グルコン酸、コハク酸等の有機酸、又はこれらの水和物等が挙げられる。塩基としては、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア、酢酸ナトリウム、クエン酸三ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素一ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二カリウム等の１価或いは２価の塩又はそれらの水和物等が挙げられる。
【００１７】
本明細書において、「水溶性」とは、２３℃でｐＨ７．０の水１００ｇに対して、少なくとも０．１ｇの溶解度を有することを意味する。
【００１８】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤において使用可能な水溶性カルシウム塩としては、例えば、酸化カルシウム、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、リン酸二水素カルシウム等の無機酸のカルシウム塩、乳酸カルシウム、酢酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、パントテン酸カルシウム、プロピオン酸カルシウム、ギ酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム等の有機酸のカルシウム塩、又はこれらの水和物等が挙げられ、これらに限定されない。中でも、易溶解性及び生体内への不純物の持ち込みが少ない点から、本実施形態における水溶性カルシウム塩としては、酸化カルシウム、塩化カルシウム、酢酸カルシウム、乳酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、又はこれらの水和物であることが好ましい。
一方、溶解度が上記値に満たないカルシウム塩、例えばリン酸カルシウム等の難水溶性カルシウム塩は、本実施形態における使用可能な水溶性カルシウム塩に含まれない。
【００１９】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤に含まれるカルシウムイオンの濃度としては、２００ｐｐｍ以上５，０００ｐｐｍ以下であることが好ましく、３００ｐｐｍ以上２，０００ｐｐｍ以下であることがより好ましく、５００ｐｐｍ以上１，５００ｐｐｍ以下であることがさらに好ましい。カルシウムイオン濃度が上記範囲であることにより、後述のリン酸緩衝剤中のリン酸イオンと反応し、リン酸カルシウムを形成することができる。
【００２０】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤において使用可能な水溶性ケイ酸塩としては、例えば、二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、ケイ酸マグネシウム、ケイ酸カリウム、又はこれらの水和物等が挙げられ、これらに限定されない。中でも、易溶解性及び生体内への不純物の持ち込みが少ない点から、本実施形態における水溶性ケイ酸塩としては、二酸化ケイ素、ケイ酸カルシウム、又はこれらの水和物であることが好ましい。
【００２１】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤に含まれるケイ素イオンの濃度としては、０．５ｐｐｍ以上３０ｐｐｍ以下であることが好ましく、１ｐｐｍ以上２０ｐｐｍ以下であることがより好ましく、２ｐｐｍ以上１０ｐｐｍ以下であることがさらに好ましい。ケイ素イオンは、カルシウムイオンと後述のリン酸緩衝剤中のリン酸イオンとが反応し、形成されるリン酸カルシウムにおいて、プライマーとしての役割を果たしているため、ケイ素イオン濃度が上記範囲であることにより、効率よくリン酸カルシウムを形成することができる。
【００２２】
また、本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤に含まれるカルシウムイオンに対するケイ素イオンの割合は、０．０１モル％以上１５モル％以下であることが好ましく、０．０５モル％以上７モル％以下であることがより好ましく、０．１３モル％以上２モル％以下であることがさらに好ましい。カルシウムイオンに対するケイ素イオンの割合が上記範囲であることにより、効率よくリン酸カルシウムを形成することができる。
【００２３】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤において、水溶性カルシウム塩及び水溶性ケイ酸塩以外の構成成分として大部分を占めるのは水である。さらに、本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、その他の構成成分を含んでいてもよく、含んでいなくてもよい。その他の構成成分としては、生体適合性を有し、水溶性カルシウム塩及び水溶性ケイ酸塩とリン酸緩衝剤との反応を妨げるものでなければよい。中でも、本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、生体内への不純物の持ち込みが少ない点から、その他の構成成分を含まないことが好ましい。
【００２４】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤を用いて、根管の治療方法を提供することができる。
治療対象として限定はされず、ヒト又はヒト以外の哺乳動物が挙げられ、特に、ヒトが好ましい。
【００２５】
＜本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤の製造方法＞
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、例えば、水溶性カルシウム塩と水溶性ケイ酸塩とを水に溶解し、ｐＨ調整剤を用いて、所望のｐＨとなるように調整することで製造できる。より具体的には以下のとおりである。
【００２６】
例えば、まず、１０００ｐｐｍのカルシウムイオンと、２．５ｐｐｍのケイ素イオンとを含むように、酸化カルシウム及び二酸化ケイ素を水に溶解する。次いで、塩基性のｐＨ調整剤として、水酸化カルシウム溶液を用いて、ｐＨを７以上１３以下となるように調整する。
【００２７】
＜本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤の使用方法＞
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、例えば、以下に示す方法で使用できる。
すなわち、被検者の根管内を本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤１ｍＬ以上２０ｍＬを用いて、洗浄する。次いで、前記歯の象牙細管封入用製剤と同量のリン酸緩衝剤に浸した綿栓を根管に静置し、グラスアイオノマーセメントを用いて、根管を仮封すればよい。
【００２８】
また、歯髄が露出している場合には、被検者の歯髄内を本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤１ｍＬ以上２０ｍＬを用いて、洗浄する。次いで、被検者の歯髄内を前記歯の象牙細管封入用製剤と同量のリン酸緩衝剤を用いて、洗浄する。次いで、前記歯の象牙細管封入用製剤と同量のリン酸緩衝剤に浸した綿栓を髄腔に静置し、グラスアイオノマーセメントを用いて、髄腔を仮封すればよい。
【００２９】
根管関連疾患の治療における作用機構としては、本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤に含まれているカルシウムイオンは、リン酸緩衝剤中のリン酸イオンと反応し、リン酸カルシウムの形成を生じる。次いで、露髄部位や根管中の欠陥若しくは象牙細管を封鎖したり、２次象牙質の形成を促進したり、又は、象牙細管中の細菌を封じ込め、感染を抑制することにより、慢性根尖性歯周炎等の根管関連疾患を治癒することができる。
なお、本明細書において、「リン酸カルシウム」には、リン酸カルシウム（Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４））、ヒドロキシアパタイト（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ、ＨＡＰ、ＨＡｐ、ＯＨＡＰ）（Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２）、リン酸二水素カルシウム（Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２）（ＭＣＰＡ）、リン酸二水素カルシウム一水和物（Ｃａ（Ｈ２ＰＯ４）２・Ｈ２Ｏ）（ＭＣＰＭ）、リン酸水素カルシウム（ＣａＨＰＯ４）（ＤＣＰＡ）、リン酸水素カルシウム二水和物  （ＣａＨＰＯ４・Ｈ２Ｏ）（ＤＣＰＤ）、リン酸三カルシウム（Ｃａ３（ＰＯ４）２）（ＴＣＰ）、リン酸八カルシウム（Ｃａ８（ＰＯ４）４））（ＨＰＯ４）２（ＯＨ）２）（ＯＣＰ）、ピロリン酸カルシウム（Ｃａ２Ｐ２Ｏ７）、バイオガラス（Ｎａ２Ｏ−ＣａＯ−ＳｉＯ２−Ｐ２Ｏ５）又はそれらの組み合わせを含む。
【００３０】
また、本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤を使用する際に、カルシウムイオンに対するリン酸イオンの割合は、１モル％以上３０モル％以下であることが好ましく、１モル％以上２０モル％以下であることがより好ましく、１モル％以上１０モル％以下であることがさらに好ましい。カルシウムイオンに対するリン酸イオンの割合が上記範囲であることにより、効率よくリン酸カルシウムを形成することができる。
【００３１】
一般的に、「グラスアイオノマーセメント」とは、歯の表面の虫歯や、小さな虫歯の治療に使用される詰め物である。他の詰め物と比較して、硬さはやや劣るが、フッ素が含まれていることから、虫歯の再発防止の作用があると言われている。
【００３２】
本実施形態におけるリン酸緩衝剤としては、後述の＜＜根管治療用キット＞＞において、詳細を説明する。
【００３３】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤の使用回数としては、１週間に１回程度（１治療サイクル）使用することが好ましく、治療経過に応じて、前記治療サイクルを１〜５サイクル繰り返すことが好ましい。
【００３４】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤は、単独で用いてもよく、その他の歯内療法用材料又は治療薬（例えば、公知の根管貼薬等）と組み合わせて用いてもよい。使用可能な歯内療法用材料又は治療薬としては、公知のものを適宜選択できる。
【００３５】
本実施形態の歯の象牙細管封入用製剤を用いた治療対象となる根管関連疾患としては、例えば、歯髄露出、根管穿孔、根尖部破壊、根尖部形成不全、感染根管治療、根管亀裂、根管一部破折、急性根尖性歯周炎、慢性根尖性歯周炎、難治性根尖性歯周炎等が挙げられ、これらに限定されない。
【００３６】
＜治療方法＞
本発明の一側面は、根管関連疾患の治療のための上述の歯の象牙細管封入用製剤を提供する。
本発明の一側面は、根管関連疾患の治療のための上述の歯の象牙細管封入用製剤と、リン酸緩衝剤とを備える根管治療用キットを提供する。
また、本発明の一側面は、治療的に有効量の上述の歯の象牙細管封入用製剤を提供する。
また、本発明の一側面は、根管治療用キットを製造するための上述の歯の象牙細管封入用製剤の使用を提供する。
また、本発明の一側面は、上述の歯の象牙細管封入用製剤の有効量を、治療を必要とする患者に使用することを含む、根管関連疾患の治療方法を提供する。
【００３７】
＜＜根管治療用キット＞＞
一実施形態において、本発明は、上述の歯の象牙細管封入用製剤と、リン酸緩衝剤とを備える根管治療用キットを提供する。
【００３８】
本実施形態の根管治療用キットによれば、効果的に根管内細菌を死滅させることができる。
【００３９】
本実施形態におけるリン酸緩衝剤は、粉末であってもよく、溶液であってもよい。粉末である場合は、蒸留水に溶解して用いればよい。また、溶液である場合においても、所望の濃度に希釈して用いればよい。
【００４０】
本実施形態におけるリン酸緩衝剤としては、上述の歯の象牙細管封入用製剤に含まれるカルシウムイオンとリン酸カルシウムを形成できるものであればよく、例えば、リン酸緩衝液（リン酸二水素ナトリウム（ＮａＨ２ＰＯ４）とリン酸水素二ナトリウム（Ｎａ２ＨＰＯ４）とで調製）、リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）等が挙げられる。中でも、本実施形態におけるリン酸緩衝剤としては、体液と同程度の浸透圧であることから、ＰＢＳであることが好ましい。
【００４１】
本実施形態におけるリン酸緩衝剤として、ＰＢＳを用いる場合、ＰＢＳの濃度は、１倍以上３０倍以下であることが好ましく、１倍以上２０倍以下であることがより好ましく、１倍以上１０倍以下であることがさらに好ましい。ＰＢＳの濃度が上記範囲であることにより、効率よくリン酸カルシウムを形成することができる。
【００４２】
本実施形態の根管治療用キットは、さらに、根管治療に用いられる公知の治療薬、治療器具、治療用材料等を備えていてもよい。
【００４３】
治療薬としては、例えば、ホルモクレゾール等のホルマリン製剤；フェノールカンフル、パラモノクロロフェノールカンフル等のフェノール製剤；ヨードチンキ、ヨードグリセリン等のヨード製剤；アクリノール；クロラムフェニコール等の抗菌薬；水酸化カルシウム；パラホルムアルデヒド、三酸化ヒ素等の失活剤等が挙げられ、これらに限定されない。
治療器具としては、例えば、ラバーダム、マイクロスコープ、弾性のあるニッケルチタン製のリーマー及びファイル、超音波器具、歯科用ＣＴ等が挙げられる。
治療材料としては、例えば、綿栓、グラスアイオノマーセメント等が挙げられる。
なお、リーマー等を用いて根管治療を行った際に生じた微小な孔についても、上述の歯の象牙細管封入用製剤とリン酸緩衝剤によって形成されるリン酸カルシウムにより封入することができる。
【実施例】
【００４４】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００４５】
［実施例１］
（１）歯の象牙細管封入用製剤の製造
水溶性カルシウム塩として、２．７７５ｇ（カルシウムイオンの終濃度１，０００ｐｐｍ）の塩化カルシウムと、水溶性ケイ酸塩として、１．４４４ｇ（ケイ素イオンの終濃度２．５ｐｐｍ）のケイ酸ナトリウムとを１，０００ｍＬとなるように精製水に溶解し、歯の象牙細管封入用製剤を得た。ｐＨは８．９であった。
【００４６】
（２）歯の象牙細管封入用製剤とＰＢＳとの混和試験
（１）で作製した歯の象牙細管封入用製剤１０ｍＬと、１×リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ；ＰＢＳ）、１０×ＰＢＳ、又は３０×ＰＢＳ各１０ｍＬとをそれぞれ混和し、２４時間静置した。析出物の生成速度及び生成量を以下の表１に示す。
【００４７】
【表１】
2017210459.tif 000002
【００４８】
表１から、ＰＢＳの濃度依存で析出物の生成量が変化することが明らかとなった。
【００４９】
［実施例２］
（１）歯の象牙細管封入用製剤の製造
カルシウムイオンの終濃度、ケイ酸イオンの終濃度、及びｐＨが以下の表２に示す値となるようにした以外は、実施例１の（１）と同様の方法を用いて、歯の象牙細管封入用製剤を得た。
【００５０】
【表２】
2017210459.tif 000003
【００５１】
次いで、Ｎｏ．１〜３の歯の象牙細管封入用製剤１０ｍＬと、１×ＰＢＳ１０ｍＬとを混合し、２４時間静置した。また、図１は、Ｎｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤１０ｍＬと、１×ＰＢＳ１０ｍＬとの混合により得られた析出物を走査型電子顕微鏡（Ｓｃａｎｎｉｎｇ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ＳＥＭ）を用いて観察した画像である。
【００５２】
図１から、リン酸カルシウムの結晶が析出していることが確かめられた。
【００５３】
［実施例３］
（１）歯の象牙細管封入用製剤の製造
実施例１の（１）と同様の方法を用いて、実施例２のＮｏ．１〜３の象牙細管封入用製剤を作製した。
【００５４】
（２）試片の作製
ヒト新鮮抜去歯の根管を、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）及び 次亜塩素酸ナトリウムを用いて洗浄を行った後、（１）で作製したＮｏ．１〜３の歯の象牙細管封入用製剤を各０．５ｍＬずつ根管に注入した。次いで、ＰＢＳ０．５ｍＬに浸した綿栓を根管に挿入し、グラスアイオノマーセメントを用いて根管口を封じた。次いで、ＰＢＳ１０ｍＬに浸したガーゼに植立させ、３７℃の保温庫に１週間保管した。
【００５５】
（３）試片の表面観察
（２）で作製した試片をダイヤモンドデイスクで半切し、実体顕微鏡及びＳＥＭにより根管象牙質表層部における象牙細管の封鎖状態を解析した。代表例としてＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を用いた際の結果を図２に示す。
【００５６】
（４）試片の断面観察
また、（２）で作製した試片を３７℃の保温庫に合計２週間保管した後、イヤモンドデイスクを用いて、象牙質処理面と垂直に割断試片を作製し、析出物による象牙細管封鎖状況を、ＳＥＭを用いて確認した。代表例としてＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を用いた際の結果を図３に示す。図３において、白い矢印は深部の象牙位細管を示し、黒い矢印は象牙細管の開口部を示す。
【００５７】
図２から、表面に析出物が沈着し、象牙細管の開口が封鎖されていることが確かめられた。
また、図３から、析出物が象牙細管の中にまで沈着し、象牙細管の開口が封鎖されていることが確かめられた。
さらに、図４は、Ｎｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を用いた際における、（２）で作製した試片を３７℃の保温庫に合計３週間保管した後、ダイヤモンドデイスクで半切し、目視した画像を示す図である。
図４から、根管内部に析出物が沈着していることが確かめられた。
また、Ｎｏ．２〜３の歯の象牙細管封入用製剤を用いた場合においても同様に、表面及び象牙細管の中に析出物が沈着し、象牙細管の開口が封鎖されていることが確かめられた（図示せず）。
【００５８】
（５）試片の断面の元素分析
波長分散型マイクロアナライザー（島津製作所製）を用いて、（４）で作製した割断試片の元素分析を行った。図５は、Ｎｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を用いた際における、波長分散型マイクロアナライザー（島津製作所製）を用いて、（４）で作製した割断試片の組成分析画像である。図５において、黒い矢印は、析出物が存在する位置を示す。
【００５９】
図５から、析出物がリン酸カルシウムであることが確かめられた。
また、Ｎｏ．２〜３の歯の象牙細管封入用製剤を用いた場合においても同様に、析出物がリン酸カルシウムであることが確かめられた（図示せず）。
以上のことから、本発明の歯の象牙細管封入用製剤は、良好な生体適合性、硬組織誘導能を有することが確かめられた。
【００６０】
［実施例４］
（１）歯の象牙細管封入用製剤の製造
実施例１の（１）と同様の方法を用いて、実施例２のＮｏ．１〜３の象牙細管封入用製剤を作製した。
【００６１】
（２）試片断面の作製
ヒト新鮮抜去歯の根管に根管内細菌を培養した後、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）及び 次亜塩素酸ナトリウムを用いて洗浄し、（１）で作製したＮｏ．１〜３の歯の象牙細管封入用製剤を各０．５ｍＬずつ根管に注入した。次いで、ＰＢＳ０．５ｍＬに浸した綿栓を根管に挿入し、グラスアイオノマーセメントを用いて根管口を封じた。次いで、ＰＢＳ１０ｍＬに浸したガーゼに植立させ、３７℃の保温庫に３日間保管した。次いで、試片を３７℃の保温庫に３日間保管した後、イヤモンドデイスクを用いて、象牙質処理面と垂直に割断試片を作製した。
【００６２】
（３）試片の断面の細菌分析
次いで、共焦点レーザー顕微鏡を用いて、割断試片に存在する細菌を分析した。代表例としてＮｏ．１の歯の象牙細管封入用製剤を用いた際の結果を図６に示す。
【００６３】
図６から、象牙細管中の根管細菌の一部が死滅していることが確かめられた。
また、Ｎｏ．２〜３の歯の象牙細管封入用製剤を用いた場合においても同様に、象牙細管中の根管細菌の一部が死滅していることが確かめられた（図示せず）。
よって、本発明の歯の象牙細管封入用製剤は根管細菌に対する良好な抗菌効果を有することが確かめられた。
【産業上の利用可能性】
【００６４】
本発明によれば、不純物を含まず、良好な生体適合性、硬組織誘導能、抗菌効果、及び操作性を有する歯の象牙細管封入用製剤を提供することができる。また、本発明の歯の象牙細管封入用製剤及びリン酸緩衝剤を用いて、罹患部位を封入することにより、残存細菌を完全に死滅することができ、根管治療において、高い治療効果を得ることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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