(57)【要約】【課題】凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することができる凍結乾燥試薬の評価方法を提供する。【解決手段】本発明に係る凍結乾燥試薬の評価方法は、凍結乾燥試薬に照射光を照射する工程（Ｓ１０１）と、前記凍結乾燥試薬からの散乱光を受光する工程（Ｓ１０２）と、受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する工程（Ｓ１０３）と、を含む。【選択図】図２
2017032292.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
凍結乾燥試薬に照射光を照射する工程と、
前記凍結乾燥試薬からの散乱光を受光する工程と、
受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する工程と、
を含む、凍結乾燥試薬の評価方法。
【請求項２】
請求項１において、
前記判定する工程では、受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の含水量を判定し、前記凍結乾燥試薬の含水量の判定結果に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する、凍結乾燥試薬の評価方法。
【請求項３】
請求項１または２において、
前記判定する工程は、前記散乱光の強度が閾値以上か否かで、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する、凍結乾燥試薬の評価方法。
【請求項４】
請求項１ないし３のいずれか１項において、
前記照射光は、白色光である、凍結乾燥試薬の評価方法。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか１項において、
前記凍結乾燥試薬は、ポリメラーゼを含む、凍結乾燥試薬の評価方法。
【請求項６】
凍結乾燥試薬に照射光を照射する照射部と、
前記凍結乾燥試薬からの散乱光を受光する受光部と、
受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する判定部と、
を含む、凍結乾燥試薬用の評価装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、凍結乾燥試薬の評価方法および凍結乾燥試薬用の評価装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
生化学の分野において、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ：ポリメラーゼ連鎖反応）の技術が確立されている。最近、ＰＣＲ法における増幅の精度や検出感度は向上してきており、極微量の検体（ＤＮＡ等）を増幅し、検出・解析することができるようになってきた。ＰＣＲは、増幅の対象とする核酸（標的核酸）および試薬（核酸増幅反応試薬）を含む溶液に熱サイクルを施すことで、標的核酸を増幅させる手法である。ＰＣＲの熱サイクルとしては、２段階または３段階の温度で熱サイクルを施す手法が一般的である。
【０００３】
核酸増幅反応試薬は、保存安定性を実現させるために、凍結乾燥処理された状態で保存される。凍結乾燥処理後に、核酸増幅反応試薬（凍結乾燥試薬）の状態（例えば保存状態）を評価する方法として、一般的に、凍結乾燥試薬の含水量を求める方法が知られている。含水量が少ないほど、凍結乾燥試薬の状態が良く、凍結乾燥試薬は、安定して保存されることができる。例えば特許文献１には、凍結乾燥試料の乾燥前後の含水率を、カールフィッシャ滴定法により求めることが記載されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】「日本食品工学会誌」，Ｖｏｌ．１１，Ｎｏ．１，ｐｐ．１−１１，Ｍａｒ．２０１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、例えば凍結乾燥試薬が微量である場合は、凍結乾燥試薬の含水量も微量となる。そのため、凍結乾燥試薬の含水量を、正確に測定することができず、特許文献１に記載の方法では、凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することが難しい場合がある。
【０００６】
本発明のいくつかの態様に係る目的の１つは、凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することができる凍結乾燥試薬の評価方法を提供することにある。また、本発明のいくつかの態様に係る目的の１つは、凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することができる凍結乾燥試薬用評価装置を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、上記課題の少なくとも一部を解決するためになされたものであり、以下の態様または適用例として実現することができる。
【０００８】
［適用例１］
本発明に係る凍結乾燥試薬の評価方法の一態様は、
凍結乾燥試薬に照射光を照射する工程と、
前記凍結乾燥試薬からの散乱光を受光する工程と、
受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する工程と、
を含む。
【０００９】
本適用例に係る凍結乾燥試薬の評価方法によれば、凍結乾燥試薬の状態を判定するために、凍結乾燥前後での凍結乾燥試薬の含水量（含水率）を測定する必要がなく、散乱光を用いて凍結乾燥試薬の状態を判定することができる。そのため、上記適用例の凍結乾燥試薬の評価方法では、例えば凍結乾燥試薬が微量であったとしても、凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することができる。
【００１０】
［適用例２］
上記適用例において、
前記判定する工程では、受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の含水量を判定し、前記凍結乾燥試薬の含水量の判定結果に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定してもよい。
【００１１】
本適用例に係る凍結乾燥試薬の評価方法によれば、凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することができる。
【００１２】
［適用例３］
上記適用例において、
前記判定する工程は、前記散乱光の強度が閾値以上か否かで、前記凍結乾燥試薬の状態を判定してもよい。
【００１３】
本適用例に係る凍結乾燥試薬の評価方法では、凍結乾燥試薬の実際の含水量を求めなくても、凍結乾燥試薬の状態を判定することができる。
【００１４】
［適用例４］
上記適用例において、
前記照射光は、白色光であってもよい。
【００１５】
本適用例に係る凍結乾燥試薬の評価方法では、凍結乾燥試薬に照射光を照射することによって凍結乾燥試薬を破損することなく、凍結乾燥試薬を評価することができる。
【００１６】
［適用例５］
上記適用例において、
前記凍結乾燥試薬は、ポリメラーゼを含んでもよい。
【００１７】
本適用例に係る凍結乾燥試薬の評価方法では、凍結乾燥試薬を再溶解することにより、ＰＣＲを行うことができる。
【００１８】
［適用例６］
本発明に係る凍結乾燥試薬用の評価装置の一態様は、
凍結乾燥試薬に照射光を照射する照射部と、
前記凍結乾燥試薬からの散乱光を受光する受光部と、
受光された前記散乱光の強度に基づいて、前記凍結乾燥試薬の状態を判定する判定部と、
を含む。
【００１９】
本適用例に係る凍結乾燥試薬用の評価装置によれば、凍結乾燥試薬の状態を正しく評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本実施形態に係る凍結乾燥試薬用の評価装置を模式的に示す図。
【図２】本実施形態に係る凍結乾燥試薬の評価方法を説明するためのフローチャート。
【図３】凍結乾燥試薬をデジタルカメラで撮影した写真。
【図４】凍結乾燥試薬をデジタルカメラで撮影した写真。
【図５】凍結乾燥試薬についてＰＣＲを行った結果。
【図６】凍結乾燥試薬についてＰＣＲを行った結果。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の好適な実施形態について、図面を用いて詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、特許請求の範囲に記載された本発明の内容を不当に限定するものではない。また、以下で説明される構成の全てが本発明の必須構成要件であるとは限らない。
【００２２】
１．  凍結乾燥試薬用の評価装置
まず、本実施形態に係る凍結乾燥試薬用の評価装置について、図面を参照しながら説明する。図１は、本実施形態に係る凍結乾燥試薬用の評価装置１００を模式的に示す図である。
【００２３】
凍結乾燥試薬用の評価装置１００（以下、単に「評価装置１００」ともいう）は、図１に示すように、照射部１０と、受光部２０と、処理部３０と、チューブ保持部４０と、を含む。評価装置１００は、チューブ５０に収容された凍結乾燥試薬６０を評価するための装置である。
【００２４】
照射部１０は、凍結乾燥試薬６０に照射光Ｌ１を照射する。照射光Ｌ１は、チューブ５０内に配置された凍結乾燥試薬６０を照射する。図示の例では、照射部１０は、チューブ５０の底面５２側に（下方側に）設けられている。なお、凍結乾燥試薬６０を照射することができれば、照射部１０の位置は、特に限定されず、例えばチューブ５０の側方に設けられていてもよい。
【００２５】
照射部１０は、例えば、ＬＥＤ（Ｌｉｇｈｔ  Ｅｍｉｔｔｉｎｇ  Ｄｉｏｄｅ）である。照射光Ｌ１の波長は、例えば、３８０ｎｍ以上７８０ｎｍ以下である。照射光Ｌ１は、白色光であることが好ましい。なお、照射部１０は、レーザーであってもよく、照射光Ｌ１は、赤や緑などの単色光であってもよい。
【００２６】
受光部２０は、凍結乾燥試薬６０からの散乱光Ｌ２を受光する。散乱光Ｌ２は、チューブ５０を透過して、受光部２０に受光される。図示の例では、受光部２０は、チューブ５０の底面５２側に設けられている。なお、散乱光Ｌ２を受光することができれば、受光部２０の位置は、特に限定されず、例えばチューブ５０の側方に設けられていてもよい。照射部１０は、散乱光Ｌ２を遮らない位置に設けられていることが好ましい。
【００２７】
受光部２０は、例えば、撮像素子を備えたデジタルカメラである。デジタルカメラである受光部２０は、レンズを通して得た光を、撮像素子を用いて電気信号に変換することができる。撮像素子は、複数のフォトダイオードから構成されている。例えば、レンズの倍率は、０．８倍程度であり、画素数（フォトダイオードの数）は、１２２万画素程度である。
【００２８】
処理部３０は、所定のプログラムに従って、各種の計算処理を行う。具体的には、処理部３０は、所定のプログラムを実行することで、強度取得部３２および判定部３４として機能する。処理部３０の機能は、各種プロセッサ（ＣＰＵ、ＤＳＰ等）、ＡＳＩＣ（ゲートアレイ等）などのハードウェアや、プログラムにより実現することができる。
【００２９】
強度取得部３２は、受光部２０からの信号に基づいて、散乱光Ｌ２の強度を取得する。具体的には、強度取得部３２は、受光部２０がデジタルカメラである場合、受光部２０で撮影された像（写真）の所定の領域において平均輝度を算出して散乱光Ｌ２の強度を取得する。上記のように、受光部２０は、チューブ５０の底面５２側に設けられているので、受光部２０で撮影された像の所定の領域における輝度のばらつきを小さくすることができる。例えば、チューブ５０の側方に受光部２０が設けられている場合は、所定の領域における輝度のばらつきが大きくなる場合がある。これは、凍結乾燥試薬６０の上方側（底面５２と反対側）は、凍結乾燥試薬６０の下方側（底面５２側）よりも溶けやすいためである。
【００３０】
判定部３４は、受光部２０において受光された散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６０の状態（例えば保存状態）を判定する。具体的には、判定部３４は、強度取得部３２において取得された散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６０の含水量を判定し、凍結乾燥試薬６０の含水量の判定結果に基づいて、凍結乾燥試薬６０の状態を判定する。
【００３１】
ここで、凍結乾燥試薬６０の含水量が少ないほど、散乱光Ｌ２の強度は、大きくなる。その理由について説明する。凍結乾燥試薬６０は、スポンジ状であり、複数の微細孔が設けられている多孔質体である。微細孔の大きさは、凍結乾燥試薬６０の含水量が少ないほど小さくなる。そして、微細孔の大きさが小さいほど、照射光Ｌ１が照射された場合に、凍結乾燥試薬６０において散乱された散乱光Ｌ２の強度が大きくなる。微細孔の大きさが大きいと、照射光Ｌ１が照射された場合に、照射光Ｌ１の大部分は凍結乾燥試薬６０を透過するため、散乱光Ｌ２の強度は小さくなる。したがって、凍結乾燥試薬６０の含水量が少ないほど、散乱光Ｌ２の強度は、大きくなる。よって、判定部３４は、散乱光Ｌ２の強度に基づいて凍結乾燥試薬６０の含水量を判定することができる。
【００３２】
なお、受光部２０で撮影された像は、グレースケールで表されていてもよい。この場合、凍結乾燥試薬６０の微細孔の大きさが小さいほど、受光部２０で撮影された像における白色度は高くなる（白っぽくなる）。
【００３３】
判定部３４は、受光部２０において受光された散乱光Ｌ２の強度（強度取得部３２で取得された散乱光Ｌ２の強度）が閾値以上か否かで、凍結乾燥試薬６０の含水量を判定する。具体的には、散乱光Ｌ２の強度が閾値以上の場合、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量が少ないと判定し、凍結乾燥試薬６０の状態が良いと判定する。散乱光Ｌ２の強度が閾値未満の場合、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量が多い判定し、凍結乾燥試薬６０の状態が悪いと判定する。閾値は、所定の値であり、ユーザーによって適宜設定されることができる。処理部３０は、判定部３４の判定結果を、図示せぬ表示部に表示する処理を行ってもよい。
【００３４】
判定部３４は、散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６０の含水量を求めてもよい。具体的には、評価装置１００は、散乱光Ｌ２の強度と含水量との相関関係が記憶された記憶部を有しており、該相関関係から、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量を求めてもよい。
【００３５】
チューブ保持部４０は、チューブ５０を保持している。チューブ保持部４０の形状や材質は、チューブ５０を保持することができれば、特に限定されない。
【００３６】
チューブ５０は、凍結乾燥試薬６０を収容している。チューブ５０の底面５２の形状は、球面の一部であってもよいし、回転楕円体の一部であってもよい。図示の例では、底面５２の形状は、例えば半球面である。そのため、凍結乾燥試薬６０の形状が半球状である場合に、凍結乾燥試薬６０を底面５２に固定しやすい。チューブ５０は、照射光Ｌ１および散乱光Ｌ２に対して、高い透過性を有することが好ましい。チューブ５０の材質は、例えば、ポリプロピレン樹脂である。なお、図示はしないが、チューブ５０には、脱水されたシリコーンオイルが充填されており、凍結乾燥試薬６０は、該シリコーンオイルに覆われていてもよい。
【００３７】
凍結乾燥試薬６０は、例えば、１０μｌ以下の核酸増幅反応試薬を凍結乾燥（フリーズドライ）したものである。核酸増幅反応試薬は、例えば、標的核酸（例えばＤＮＡ）を増幅するためのＤＮＡポリメラーゼや、プライマー（核酸）、増幅産物を検出するための蛍光プローブを含む。核酸増幅反応試薬は、必要に応じて、逆転写酵素などの酵素を含んでもよい。
【００３８】
評価装置１００は、例えば、以下の特徴を有する。
【００３９】
評価装置１００では、凍結乾燥試薬６０に照射光Ｌ１を照射する照射部１０と、凍結乾燥試薬６０からの散乱光Ｌ２を受光する受光部２０と、受光された散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６０の状態を判定する判定部３４と、を含む。そのため、評価装置１００では、凍結乾燥試薬６０の状態を判定するために、凍結乾燥前後での凍結乾燥試薬６０の含水量（含水率）を測定する必要がなく、散乱光Ｌ２を用いて凍結乾燥試薬６０の状態を判定することができる。これにより、評価装置１００では、例えば凍結乾燥試薬６０が微量であったとしても、凍結乾燥試薬６０の状態を正しく評価する（判定する）ことができる。ここで、凍結乾燥試薬６０の状態を判定するとは、例えば、凍結乾燥試薬６０を調整した直後や、調整後に時間経過した後の凍結乾燥試薬６０の良否を判定することをいう。評価装置１００は、凍結乾燥試薬６０が時間経過とともに水分を吸収したとしても、凍結乾燥試薬６０の状態（保存状態）を正しく評価することができる。
【００４０】
評価装置１００では、判定部３４は、散乱光Ｌ２の強度が閾値以上か否かで、凍結乾燥試薬６０の状態を判定する。具体的には、散乱光Ｌ２の強度が閾値以上の場合、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量が少ないと判定し、凍結乾燥試薬６０の状態が良いと判定する。散乱光Ｌ２の強度が閾値未満の場合、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量が多い判定し、凍結乾燥試薬６０の状態が悪いと判定する。そのため、評価装置１００では、凍結乾燥試薬６０の実際の含水量を求めなくても、凍結乾燥試薬６０の状態を判定することができる。
【００４１】
評価装置１００では、照射光Ｌ１は、白色光である。そのため、評価装置１００では、凍結乾燥試薬６０に照射光Ｌ１を照射することによって凍結乾燥試薬６０を破損することなく、凍結乾燥試薬６０を評価することができる。例えば単色光のレーザー光を凍結乾燥試薬６０に照射すると、凍結乾燥試薬６０が破損する場合がある。
【００４２】
評価装置１００では、凍結乾燥試薬６０は、ポリメラーゼを含む。そのため、凍結乾燥試薬６０を再溶解することにより、ＰＣＲを行うことができる。
【００４３】
２．  凍結乾燥試薬の評価方法
次に、本実施形態に係る凍結乾燥試薬の評価方法について、図面を参照しながら説明する。図２は、本実施形態に係る凍結乾燥試薬の評価方法を説明するためのフローチャートである。以下では、本実施形態に係る凍結乾燥試薬の評価方法として、評価装置１００を用いた評価方法について説明する。
【００４４】
まず、図１に示すように、凍結乾燥試薬６０に照射光Ｌ１を照射する（Ｓ１０１）。具体的には、照射部１０から凍結乾燥試薬６０に照射光Ｌ１を照射する。
【００４５】
次に、凍結乾燥試薬６０からの散乱光Ｌ２を受光する（Ｓ１０２）。具体的には、受光部２０において凍結乾燥試薬６０からの散乱光Ｌ２を受光する。
【００４６】
次に、受光された散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６０の状態を判定する（Ｓ１０３）。具体的には、強度取得部３２は、受光部２０からの信号に基づいて、散乱光Ｌ２の強度を取得し、判定部３４は、強度取得部３２において取得された散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６０の含水量を判定する。そして、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量の判定結果に基づいて、凍結乾燥試薬６０の状態を判定する。より具体的には、判定部３４は、散乱光Ｌ２の強度が閾値以上か否かで、凍結乾燥試薬６０の状態を判定する。例えば、散乱光Ｌ２の強度が閾値以上の場合、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量が少ないと判定し、凍結乾燥試薬６０の状態が良いと判定する。散乱光Ｌ２の強度が閾値未満の場合、判定部３４は、凍結乾燥試薬６０の含水量が多いと判定し、凍結乾燥試薬６０の状態が悪いと判定する。
【００４７】
以上のように、凍結乾燥試薬６０の状態を判定することにより、凍結乾燥試薬６０の状態を評価することができる。
【００４８】
本実施形態に係る凍結乾燥試薬の評価方法では、凍結乾燥試薬６に照射光Ｌ１を照射する工程（Ｓ１０１）と、凍結乾燥試薬６からの散乱光Ｌ２を受光する工程（Ｓ１０２）と、受光された散乱光Ｌ２の強度に基づいて、凍結乾燥試薬６の状態を判定する工程（Ｓ１０３）と、を含む。そのため、本実施形態に係る凍結乾燥試薬の評価方法では、上記のように、凍結乾燥試薬６０の状態を正しく評価することができる。
【００４９】
３．  実験例
以下に実験例を示し、本発明をより具体的に説明する。なお、本発明は、以下の実験例によって何ら限定されるものではない。
【００５０】
３．１．  凍結乾燥試薬の作製
下記の第１混合試薬１．６μｌおよび第２混合試薬１．６μｌを、それぞれ２ｍｍテストチューブ内の底面に導入した。その後、凍結乾燥のため、−８０℃のディープフリーザー内で凍結し、十分に凍結したサンプルを、すばやく、凍結乾燥装置内に設置した。続いて、凍結乾燥装置内において、装置内温度−４０℃以下、装置内圧力１０Ｐａ以下の環境下にてオーバーナイトで凍結乾燥を行い、凍結乾燥試薬を作製した。
【００５１】
＜第１混合試薬溶液の組成＞
１ｘＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩＩ（逆転写酵素を含む）      ４μｌ
５ｘバッファー      ４０μｌ
１０μＭ  ｄＮＴＰ      ５μｌ
２０μＭ  フォワードプライマー      １６μｌ
２０μＭ  リバースプライマー      １６μｌ
１０μＭ  プローブ      １０μｌ
５００ｍｇ／ｍｌトレハロース水溶液      ４０μｌ
Ｄ．Ｗ．  ６９μｌ
プライマー：
Primer F：GAC CAA TCC TGT CAC CTC TGA C
Primer R：AGG GCA TTT TGG ACA AAG CGT CTA
プローブ：
TaqMan probe: FAM- TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG -TAMRA
【００５２】
＜第２混合試薬溶液の組成＞
１ｘＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ（逆転写酵素を含む）      ４μｌ
５ｘバッファー      ２０μｌ
１０μＭ  ｄＮＴＰ      ２．５μｌ
２０μＭ  フォワードプライマー      ８μｌ
２０μＭ  リバースプライマー      ８μｌ
１０μＭ  プローブ      ５μｌ
５００ｍｇ／ｍｌトレハロース水溶液      ２０μｌ
Ｄ．Ｗ．  ３２．５μｌ
プライマー：
Primer F：GAC CAA TCC TGT CAC CTC TGA C
Primer R：AGG GCA TTT TGG ACA AAG CGT CTA
プローブ：
TaqMan probe: FAM- TGC AGT CCT CGC TCA CTG GGC ACG -TAMRA
【００５３】
３．２．  輝度測定
上記の第１混合試薬溶液から作製した凍結乾燥試薬（第１凍結乾燥試薬）、および第２混合試薬溶液から作製した凍結乾燥試薬（第２凍結乾燥試薬）について、上記のような評価装置１００を用いて、輝度測定を行った。照射部として白色ＬＥＤを用いた。具体的には、ＣＣＳ社製の型式ＨＰＤ２−１００ＳＷを用いた。受光部として撮像素子を備えたデジタルカメラを用いた。具体的には、Ｂａｓｌｅｒ社製の型式ａｃＡ１３００−３０ｇｍを用いた。照射部および受光部は、テストチューブの底面の下方側に配置した。
【００５４】
第１凍結乾燥試薬の輝度は、１２１ｃｄ／ｍ２であった。第２凍結乾燥試薬の輝度は、４７ｃｄ／ｍ２であった。図３は、第１凍結乾燥試薬をデジタルカメラで撮影した写真である。図４は、第２凍結乾燥試薬をデジタルカメラで撮影した写真である。
【００５５】
上記のように、凍結乾燥試薬の含水量が少ないほど、散乱光Ｌ２の強度は大きくなる（輝度が大きくなる）ため、第１凍結乾燥試薬は、第２凍結乾燥試薬に比べて、含水量が少ないことがわかった。
【００５６】
３．３．  ＰＣＲ結果
次に、第１凍結乾燥試薬および第２凍結乾燥試薬がそれぞれ入ったチューブ内に、インフルエンザＡのテンプレートが入った水溶液１．６μｌを滴下して凍結乾燥体を再溶解し、その溶液を用いて、下記プロトコルでリアルタイムＲＴ−ＰＣＲを行った。
【００５７】
ＲＴ−ＰＣＲの条件は、以下の通りである。
【００５８】
＜標準条件＞
逆転写  ５０℃  ６０秒
増幅反応
変性  １０５℃  ５秒
アニーリング／伸張  ５７℃  ２０秒
変性とアニーリング／伸張を５０サイクル実施した。
【００５９】
＜高速条件＞
逆転写  ５０℃  ６０秒
増幅反応
変性  １０５℃  ４秒
アニーリング／伸張  ５７℃  ６秒
液滴サイズ:  １．６μｌ
実験装置:  昇降式（特開２０１２−１１５２０８号公報に記載の装置に類似の装置（自作））
【００６０】
図５は、第１凍結乾燥試薬についてＰＣＲを行った結果である。図６は、第２凍結乾燥試薬についてＰＣＲを行った結果である。図５および図６では、凍結乾燥したその日に再溶解したもの（０日目）、凍結乾燥して３０℃で２週間保管した後に再溶解したもの（２週間後）、凍結乾燥して３０℃で１０週間保管した後に再溶解したもの（１０週間後）について、２回ずつ（２つのサンプルずつ）ＰＣＲを行った。さらに、図５では、第１混合試薬溶液を凍結乾燥せずにＰＣＲを行った結果も示している。同様に、図６では、第２混合試薬溶液を凍結乾燥せずにＰＣＲを行った結果も示している。
【００６１】
上記の輝度測定において輝度が大きかった第１凍結乾燥試薬では、１０週間後でも核酸増幅反応が確認された。一方、図６に示すように、輝度が小さかった第２凍結乾燥試薬では、１０週間後では核酸増幅反応がほとんど確認されなかった。図５および図６より、輝度が大きい第１凍結乾燥試薬の方が、輝度が小さい第２凍結乾燥試薬に比べて、凍結乾燥試薬の状態が良好であることがわかった。すなわち、凍結乾燥試薬の輝度を測定することにより、凍結乾燥試薬の状態を評価することができることがわかった。
【００６２】
本発明は、実施の形態で説明した構成と実質的に同一の構成（例えば、機能、方法及び結果が同一の構成、あるいは目的及び効果が同一の構成）を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成の本質的でない部分を置き換えた構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成と同一の作用効果を奏する構成又は同一の目的を達成することができる構成を含む。また、本発明は、実施の形態で説明した構成に公知技術を付加した構成を含む。
【符号の説明】
【００６３】
１０…照射部、２０…受光部、３０…処理部、３２…強度取得部、３４…判定部、４０…チューブ保持部、５０…チューブ、５２…底面、６０…凍結乾燥試薬、１００…評価装置
【図１】
2017032292.tif 000003
【図２】
2017032292.tif 000004
【図３】
2017032292.tif 000005
【図４】
2017032292.tif 000006
【図５】
2017032292.tif 000007
【図６】
2017032292.tif 000008