(57)【要約】【課題】ＭＥＲＳウイルスに直接作用し、感染の予防を行えるものは未だ開発されていない。【解決手段】バキュロウイルスベクターにＭＥＲＳウイルスのスパイク蛋白質遺伝子を組み込み、カイコ細胞でリコンビナント蛋白質を得る工程と、  前記リコンビナント蛋白質を雌ダチョウに免疫する工程と、  前記免疫された雌ダチョウが産卵した卵からＩｇＹを精製する工程を含むことを特徴とするＭＥＲＳ用抗体の製造方法によって得られた抗体は、ＭＥＲＳウイルスの表面蛋白質とよく反応する。 【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
バキュロウイルスベクターにＭＥＲＳウイルスのスパイク蛋白質遺伝子を組み込み、カイコ細胞でリコンビナント蛋白質を得る工程と、
前記リコンビナント蛋白質を雌ダチョウに免疫する工程と、
前記免疫された雌ダチョウが産卵した卵からＩｇＹを精製する工程を含むことを特徴とするＭＥＲＳ用抗体の製造方法。
【請求項２】
バキュロウイルスベクターにＭＥＲＳウイルスのスパイク蛋白質遺伝子を組み込み、カイコ細胞でリコンビナント蛋白質を得る工程と、
前記リコンビナント蛋白質を雌ダチョウに免疫する工程と、
前記免疫された雌ダチョウから抗血清を取得する工程を含むことを特徴とするＭＥＲＳ用抗血清の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、中東呼吸器症候群コロナウイルス（Ｍｉｄｄｌｅ  Ｅａｓｔ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ：ＭＥＲＳ−ＣｏＶ）と反応する抗体および抗血清に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＭＥＲＳは、２０１２年に初めて確認されたウイルス性の感染症である。主な症状は、発熱、咳、息切れなどである。２００２年から２００３年に発見されたＳＡＲＳ（Ｓｅｖｅｒｅ  Ａｃｕｔｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ：重症急性呼吸器症候群）と症状は似ている。しかし、ＳＡＲＳの感染後の死亡率が９％程度であるのに対し、ＭＥＲＳの死亡率は４０〜５０％と高く、危険な病気であるといえる。
【０００３】
ＭＥＲＳはＭＥＲＳコロナウイルス（Ｍｉｄｄｌｅ  Ｅａｓｔ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ  ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ：ＭＥＲＳ−ＣｏＶ）によって引き起こされるということがわかっている。しかし、ＭＥＲＳの感染メカニズムについては、まだまだ不明な点が多く、直接作用する医薬組成物もまだ得られているとは言えない。
【０００４】
特許文献１は、生体に広く分布しているＣＤ２６の抗体の特定部分のアミノ酸配列を認識する抗モノクロナール抗体がＭＥＲＳ−ＣｏＶとＣＤ２６発現細胞との結合を阻害することで、ＭＥＲＳへの感染予防又は治療剤を提供する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１５−０５４８２４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１は、マウスから得たモノクロナール抗体を感染予防又は治療剤として用いる。しかし、特許文献１のモノクロナール抗体は、ＭＥＲＳ−ＣｏＶに直接結合するものではなく、また感染予防の直接実施例がないため、ＣＤ２６の発現細胞とＭＥＲＳ−ＣｏＶの結合が阻害されたということを示すに留まる。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、ＭＥＲＳ−ＣｏＶに直接作用し、宿主細胞との結合を阻害する抗体および抗血清を提供するものである。
【０００８】
より具体的に本発明に係るＭＥＲＳ用抗体の製造方法は、
バキュロウイルスベクターにＭＥＲＳウイルスのスパイク蛋白質遺伝子を組み込み、カイコ細胞でリコンビナント蛋白質を得る工程と、
前記リコンビナント蛋白質を雌ダチョウに免疫する工程と、
前記免疫された雌ダチョウが産卵した卵からＩｇＹを精製する工程を含むことを特徴とする。
【０００９】
また、本発明に係るＭＥＲＳ用抗血清の製造方法は、
バキュロウイルスベクターにＭＥＲＳウイルスのスパイク蛋白質遺伝子を組み込み、カイコ細胞でリコンビナント蛋白質を得る工程と、
前記リコンビナント蛋白質を雌ダチョウに免疫する工程と、
前記免疫された雌ダチョウから抗血清を取得する工程を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係るＭＥＲＳ用抗体およびＭＥＲＳ用工血清の製造方法では、ＭＥＲＳウイルスのスパイク蛋白質だけをカイコ細胞で作製し、抗原として利用するので、得られた抗体には毒性が混入する心配がない。
【００１１】
また、本発明に係るＭＥＲＳ用抗体およびＭＥＲＳ用工血清の製造方法で作製される抗体および抗血清は、ダチョウを使用するので、大量に産生することができる。また、ダチョウは、抗原に対して反応性が高い抗体を産生するので、医薬組成物の生産性が高くなる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下に本発明に係るＭＥＲＳ用医薬組成物の製造方法について実施例を示し説明を行う。なお、以下の説明は、本発明の一実施形態および一実施例を例示するものであり、本発明が以下の説明に限定されるものではない。以下の説明は本発明の趣旨を逸脱しない範囲で改変することができる。
【実施例】
【００１３】
＜抗原＞
バキュロウイルスベクターにＭＥＲＳウイルス  （ＨＣｏＶ−ＥＭＣ／２０１２）のスパイク蛋白遺伝子（Ｍｅｔ１−Ｔｒｐ１２９７））を組み込み、カイコ細胞（Ｓｆ９細胞）で作製したリコンビナント蛋白質を用いた。
【００１４】
＜抗体作製方法＞
成熟したメス鳥（ダチョウ、ニワトリ、ウズラ）を用いた。上記ＭＥＲＳスパイク蛋白液（蛋白量１００μｇ）をフロイントの完全アジュバント０．２ｍＬと混和し、ダチョウに初回免疫した。各抗原を個別に５羽のダチョウ、５羽のニワトリ、５羽のウズラに接種した。ダチョウもニワトリもウズラも同量の抗原を接種したことになる。
【００１５】
初回免疫後、２週目と４週目に５０μｇの抗原とフロイントの不完全アジュバントの混和液を、各鳥に追加免疫した。初回免疫後８週目に得られた各鳥からの血清分離、および卵黄から卵黄抗体（ＩｇＹ）を精製した。  
【００１６】
＜ＥＬＩＳＡ法＞  
得られた血清およびＩｇＹのＭＥＲＳスパイク蛋白対する反応性をＥＬＩＳＡにより検証した。  ９６穴ＥＬＩＳＡプレートの各穴にＭＥＲＳスパイク蛋白（リコンビナント蛋白）をそれぞれ２μｇを別々に固層化した（室温で４時間）。
【００１７】
その後、ダチョウ抗体（各５羽のダチョウから得た卵黄からの抗体の混合物）、ニワトリ抗体（各５羽のニワトリから得た卵黄からの抗体の混合物）、ウズラ抗体（各５羽のウズラから得た卵黄からの抗体の混合物）の段階希釈液（血清は原液）（ＩｇＹ原液は２ｍｇ／ｍＬ）を各穴に滴下し、室温で１時間反応させた。
【００１８】
洗浄後、各抗体に対するＨＲＰ標識２次抗体を室温で１時間反応させた。十分な洗浄後、ペルオキシダーゼ用発色キット（Ｓ−Ｂｉｏ  ＳＵＭＩＬＯＮ）を用いてプレートリーダーにて吸光度（４５０ｎｍ）を測定した。免疫前の各鳥種の卵黄抗体の２倍以上の吸光度値を示す最大希釈倍率をＥＬＩＳＡ値として示した。表１に結果を示す。
【００１９】
【表１】
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【００２０】
表１を参照して、ＭＥＲＳのスパイクタンパク質（  リコンビナント蛋白）を免疫することにより、ダチョウ、ニワトリ、ウズラに高感度の抗血清および卵黄ＩｇＹ抗体が作製されることが判明した。特に、各鳥種類には同量の抗原を免疫したのにもかかわらず、巨大なダチョウが最も反応性が高い抗体が産生されている。これは、少量の抗原でも高感度の抗体が産生できることを意味する。
【産業上の利用可能性】
【００２１】
本発明に係る抗体および抗血清は、ＭＥＲＳの感染予防・治療薬（点鼻薬、ネブライザー液、注射薬）、ＭＥＲＳの感染予防用スプレー剤、ＭＥＲＳの感染予防用マスク、ＭＥＲＳの感染予防用エアコンフィルターおよび噴霧剤、ＭＥＲＳの感染予防防疫服、ＭＥＲＳの感染予防用の食品（キャンディーやガムなど）、ＭＥＲＳの診断薬に利用することができる。