(57)【要約】【課題】新たなサーチュイン１活性化剤の提供。【解決手段】分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖を有効成分とするサーチュイン１活性化剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖を有効成分とするサーチュイン１活性化剤。
【請求項２】
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖が、少なくともグルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸構造を有するものである請求項１記載のサーチュイン１活性化剤。
【請求項３】
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖が、コンドロイチン硫酸の高温高圧分解物である請求項１又は２記載のサーチュイン１活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新たなサーチュイン１活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
サーチュイン（ＳＩＲＴ）は長寿遺伝子とも呼ばれ、その活性化により生物の寿命が延びるとされる。サーチュインファミリーのうち、サーチュイン１（ＳＩＲＴ１）については、種々の検討がされており、ＳＩＲＴ１の活性化により、アルツハイマー病等の神経変性疾患、動脈硬化、骨粗鬆症、骨格筋減少症等が抑制できることが知られている（非特許文献１）。
【０００３】
ＳＩＲＴ１活性化剤としては、赤ワインに含まれるポリフェノールの一種であるレスベラトロールが広く知られている（非特許文献２）。また、ヒアルロン酸を構成するアミノ糖であるＮ−アセチルグルコサミンが、ヒト軟骨肉腫細胞（ＳＷ１３５３）を用いた実験系でＳＩＲＴ１を活性化させたことが報告されている（非特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１３−１９９６３９号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】実験医学，Vol.31, No.20（増刊）, p45-52(2013)
【非特許文献２】グルコサミン研究，Vol.9, p21-24(2013)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、新たなＳＩＲＴ１活性化剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで本発明者は、非特許文献２で用いられるＳＷ１３５３のようながん細胞株でなく、正常軟骨細胞を用いて種々の成分のＳＩＲＴ１活性化作用を検討したところ、全く意外にも、低分子化ヒアルロン酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン塩酸塩、さらにはプロテオグリカン、コンドロイチン硫酸及びコンドロイチン硫酸の構成アミノ糖であるＮ−アセチルガラクトサミンでもＳＩＲＴ１活性化作用を示さなかった濃度において、分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖が優れたＳＩＲＴ１活性化作用を有することを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔３〕を提供するものである。
【０００９】
〔１〕分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖を有効成分とするＳＩＲＴ１活性化剤。
〔２〕前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖が、少なくともグルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸構造を有するものである〔１〕記載のＳＩＲＴ１活性化剤。
〔３〕前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖が、コンドロイチン硫酸の高温高圧分解物である〔１〕又は〔２〕記載のＳＩＲＴ１活性化剤。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖は、特許文献１記載のように経口吸収性に優れることは知られているが、コンドロイチン硫酸と同様の薬理作用を示すか否かは報告されていない。かかる分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖は、優れたＳＩＲＴ１活性化作用を有し、ＳＩＲＴ１活性化により奏される種々の用途例えば、アルツハイマー病、認知症等の神経変性疾患、骨粗鬆症、糖尿病、特に２型糖尿病、ミトコンドリア性疾患、角化細胞バリア機能低下、肺疾患、角膜疾患、老眼、肥満症等の疾患の予防、治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】ヒト正常軟骨細胞における各種成分のＳＩＲＴ１遺伝子発現に及ぼす作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のＳＩＲＴ１活性化剤の有効成分は、分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖である。
このようなコンドロイチン硫酸オリゴ糖は、特許文献１に記載のように経口吸収性に優れていることは知られているが、コンドロイチン硫酸と同様の薬理作用を有するのか否かは知られていない。
【００１３】
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖の分子量は５００〜６，０００であり、より好ましくは５００〜５，０００であり、さらに好ましくは５００〜４，５００であり、さらに好ましくは５００〜３，０００である。ここで、分子量は、分子量既知のコンドロイチン硫酸オリゴ糖を標準品として、ゲル濾過ＨＰＬＣにより測定することができる。また、前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖の平均分子量は、５００〜３，５００が好ましく、1，０００〜３，０００がより好ましく、1，５００〜２，５００がさらに好ましい。
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖は、少なくともグルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸構造を有するものが好ましい。
すなわち、グルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸構造を１〜１２個有するものが好ましく、当該構造を１〜１０個有するものがより好ましく、当該構造を１〜９個有するものがさらに好ましく、当該構造を１〜６個有するものがさらに好ましい。ここで、グルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸には、グルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン４−硫酸構造、グルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン６−硫酸構造、グルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン４，６−硫酸構造が含まれる。
【００１４】
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖は、コンドロイチン硫酸を種々の条件で分解することにより得られる。分解の条件としては、酸やアルカリによる分解、酵素による分解、高温高圧条件による分解など種々の方法が挙げられるが、少なくともグルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸構造を有する分解物が得られる方法が好ましい。より好ましい分解方法としては、特許文献１記載のような、高温（１７５〜２２０℃）、高圧（５ＭＰａ〜２５ＭＰａ）条件の水熱処理（超臨界水又は亜臨界水処理）が挙げられる。
また、原料コンドロイチン硫酸としては、哺乳類や魚類、鳥類由来のもの、例えばウシ、ブタ、クジラ、エイ、サメ、サケ、イカ、ニワトリ等由来のものを用いることができる。
【００１５】
前記のコンドロイチン硫酸オリゴ糖は、後記実施例に示すように、正常軟骨細胞において、優れたＳＩＲＴ１活性化作用を有する。この正常軟骨細胞において、低分子化ヒアルロン酸、Ｎ−アセチルグルコサミン、グルコサミン塩酸塩等のヒアルロン酸関連物質は、ＳＩＲＴ１活性化作用を示さなかった。また、プロテオグリカン、コンドロイチン硫酸及びＮ−アセチルガラクトサミンもＳＩＲＴ１活性化作用を示さなかった。従って、本発明におけるコンドロイチン硫酸オリゴ糖の優れたＳＩＲＴ１活性化作用は、全く予想外であった。
【００１６】
本発明のＳＩＲＴ１活性化剤は、ＳＩＲＴ１活性化作用に基づく種々の用途、例えばアルツハイマー病、認知症等の神経変性疾患、骨粗鬆症、２型糖尿病等の糖尿病、ミトコンドリア性疾患、角化細胞バリア機能低下、肺疾患、角膜疾患、老眼、肥満症等の予防又は治療剤として有用である。ここで、本発明のＳＩＲＴ１活性化剤の形態としては、医薬品、飲食品（特定保健用食品、機能性表示食品等）、化粧品が挙げられる。医薬品としては、経口投与製剤、皮膚外用剤、点眼剤、注射剤等が挙げられる。
【００１７】
医薬品として使用する場合における経口投与製剤の剤型としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、糖衣錠、丸剤、細粒剤、散剤、粉剤、徐放性製剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤等が挙げられる。
【００１８】
上記製剤は、常法によって製造でき、また、前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖を単独で使用してもよく、薬学的に許容される担体と組み合わせて使用してもよい。該担体としては、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤；デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等の結合剤；ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤；ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、ポリソルベート８０等の界面活性剤；タルク、ロウ類、水素添加植物油、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール等の滑沢剤；軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等の流動性促進剤；注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、オリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等の希釈剤等が挙げられる。また、必要に応じて、矯味剤、着色剤、香料、殺菌剤、浸透圧調整剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、吸収助剤、酸化防止剤、増粘剤、等張化剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
【００１９】
点眼剤には、他の薬効成分、例えばグリチルリチン酸二カリウム、イプシロンアミノカプロン酸、アラントイン、アズレンスルホン酸ナトリウム、硫酸亜鉛などの抗炎症剤、フラビンアデニンジヌクレオチドナトリウム、ピリドキシン塩酸塩、パンテノールなどのビタミン類、Ｌ−アスパラギン酸カリウム、Ｌ−グルタミン酸などのアミノ酸類等を配合してもよい。
また、点眼剤には、例えば、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、乾燥炭酸ナトリウム、硫酸マグネシウム等の無機塩、リン酸水素ナトリウム，リン酸二水素ナトリウム、リン酸二水素カリウム、クエン酸等の緩衝剤、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒアルロン酸ナトリウム、メチルセルロース、デキストラン等の増粘剤、グリセリン、ブドウ糖、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトール、トレハロース等の等張化剤、エタノール、プロピレングリコール等の溶解補助剤、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム等の安定化剤、L−メントール等の清涼化剤を配合してもよい。
【００２０】
化粧品及び皮膚外用剤の形態としては、軟膏、水溶液剤、乳液、クリーム剤、ローション剤、リニメント剤等が挙げられる。これらの製剤とするには、各種油剤、水、乳化剤等を配合することができる。
【００２１】
飲食品の形態としては、飲食品として使用可能な添加剤を適宜使用し、慣用の手段を用いて食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペースト等に成形してもよく、また種々の食品、例えば、ハム、ソーセージ等の食肉加工品、かまぼこ、ちくわ等の水産加工品、パン、菓子、バター、粉乳、発酵飲食品に添加して使用し、又は水、果汁、牛乳、清涼飲料、茶飲料等の飲料に添加して使用してもよい。
【００２２】
本発明のＳＩＲＴ１活性化剤の投与量は、投与経路、症状等により相違するが、コンドロイチン硫酸オリゴ糖として、成人１日あたり５〜８００mgが好ましい。
【実施例】
【００２３】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれら実施例に限定されるものではない。
【００２４】
実施例１
（１）検体
・プロテオグリカン：サケ鼻軟骨から抽出した純度８０％の「プロテオグリカンＨＧ８０」(日本薬品製)を使用。
・コンドロイチン硫酸：ブタ気管軟骨から抽出した局外規の「コンドロイチン硫酸」（ＺＰＤ製)を使用（平均分子量１３，０００）。
・コンドロイチン硫酸オリゴ糖：ブタ気管軟骨から抽出したコンドロイチン硫酸をマイクロ化学プロセス製法（特開２０１３−１９９６３９号公報）により低分子化したコンドロイチン硫酸オリゴ糖(丸共バイオフーズ製)を使用（平均分子量２，５００，分子量５００〜５，０００，少なくともグルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン硫酸を有する）。
・低分子化ヒアルロン酸：発酵法によるヒアルロン酸を平均分子量２，０００まで低分子化した「ヒアロナノ」(キユーピー製)を使用。
・Ｎ−アセチルガラクトサミン：純度９８％の試薬「N-Acetyl-D-galactosamine」（ＳＩＧＭＡ社製）を使用。
・Ｎ−アセチルグルコサミン：キチンを酵素分解して得られる純度１００％の「マリンスウイート」（焼津水産化学製）を使用。
・グルコサミン塩酸塩：キチンを塩酸加水分解して得られる純度１００％の「グルコサミン塩酸塩」（Bayir Chemicals製）を使用。
【００２５】
（２）方法
軟骨細胞増殖培地を用いて１０cmディッシュ中にて正常ヒト軟骨細胞を培養し、フルコンフルエント状態となった時点でこれまでの培地を吸引除去し、各検体を含む軟骨細胞増殖培地を加え一晩培養した。
その後、正常ヒト軟骨細胞を１０cmディッシュから回収し懸濁状態で細胞密度を計測を行い、遠心分離により細胞のみを回収した。
次に、ＥＬＩＳＡキット（Adipogen製Sirtuin1(human)(Intracellular)ELISA Kit）を用いて、各細胞内のＳＩＲＴ１量を測定し、回収細胞１個当たりのＳＩＲＴ１量を求めた。
検体を加えていない軟骨細胞増殖培地を陰性コントロールとして用い同様の評価を行った。
【００２６】
（３）結果
正常ヒト軟骨細胞培養株に対し、各種素材を各濃度で添加し、ＥＬＩＳＡ法にてＳＩＲＴ１遺伝子量を測定した。
その結果、図１に示すように、コンドロイチン硫酸オリゴ糖を１％添加した場合のみＳＩＲＴ１遺伝子の発現が大きく増加することが明らかとなった。
これに対し、プロテオグリカン、コンドロイチン硫酸、低分子化ヒアルロン酸、Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｎ−アセチルグルコサミン及びグルコサミン塩酸塩を添加してもＳＩＲＴ１遺伝子の発現は増加しなかった。
【図１】
2017066128.tif 000002
【手続補正書】
【提出日】平成28年12月21日(2016.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子量５００〜６，０００のコンドロイチン硫酸オリゴ糖を有効成分とするサーチュイン１活性化剤（骨粗鬆症治療剤を除く）。
【請求項２】
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖が、少なくともグルクロン酸−Ｎ−アセチルガラクトサミン−硫酸構造を有するものである請求項１記載のサーチュイン１活性化剤。
【請求項３】
前記コンドロイチン硫酸オリゴ糖が、コンドロイチン硫酸の高温高圧分解物である請求項１又は２記載のサーチュイン１活性化剤。