(57)【要約】【課題】長期保存安定性に優れ、かつその使用時に速やかに溶媒に溶解する、ボルテゾミブを含む凍結乾燥製剤の提供。【解決手段】（１）ボルテゾミブと、（２）グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤とを含む、凍結乾燥製剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）ボルテゾミブと、
（２）グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤と
を含む、凍結乾燥製剤。
【請求項２】
前記添加剤がグルコン酸マグネシウムである、請求項１に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項３】
ボルテゾミブと前記添加剤との重量比が、２：１〜１：２５である、請求項１又は２に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項４】
薬学的に許容される他の添加剤をさらに含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の凍結乾燥製剤。
【請求項５】
（ｉ）ボルテゾミブと、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤とを水性混合溶媒に溶解して溶液を調製する工程と
（ｉｉ）前記溶液を凍結乾燥する工程と
を含む、ボルテゾミブと前記少なくとも１つの添加剤とを含む凍結乾燥製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ボルテゾミブを含む凍結乾燥製剤及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ボルテゾミブ（Ｎ−（２−ピラジン）カルボニル−Ｌ−フェニルアラニン−Ｌ−ロイシンボロン酸）は、以下の式（１）で示される化合物であり、ベルケイド（Ｖｅｌｃａｄｅ）（登録商標）の名で販売されている。ボルテゾミブは、２６Ｓプロテアソーム阻害剤であり、様々な腫瘍性疾患の治療（特に、再発した多発性骨髄腫及びマントル細胞リンパ腫の治療）における使用が認可されている。
【化１】
2017218399.tif 000002
【０００３】
ボルテゾミブは、自発的に１，３転位を起こし、アミンへと容易に分解されることが知られている。またボルテゾミブは、多くの実験条件下で酸化分解を受けることが知られている。（特許文献１）
【０００４】
ボルテゾミブにマンニトールやソルビトールなどの二糖類を添加して調製された凍結乾燥製剤において、ボルテゾミブの分解が抑制されることが知られている。当該凍結乾燥製剤は、溶媒に速やかに溶解する。（特許文献２）
【０００５】
また、ボルテゾミブにα−又はβ−ヒドロキシカルボン酸（例えばクエン酸）を添加して調製された凍結乾燥製剤において、ボルテゾミブの分解が抑制されることが知られている（特許文献３）。当該凍結乾燥製剤は、溶媒に速やかに溶解する。（特許文献３）
【０００６】
また、特許文献４において、ボルテゾミブにグルコン酸ナトリウムを添加して調製された凍結乾燥製剤が報告されている。当該文献には、調製された凍結乾燥製剤が貯蔵時に比較的安定であること、及び当該製剤が溶媒に速やかに溶解することが記載されている。しかし当該文献には、具体的にどの程度ボルテゾミブの分解が抑制されるかについて、及び製剤がどの程度速やかに溶解するのかについて、実証している実施例はない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１３−２０３７３８号公報
【特許文献２】国際公開第２００２／０５９１３０号
【特許文献３】国際公開第２００９／１５４７３７号
【特許文献４】国際公開第２０１５／０２５０００号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
水性溶媒に速やかに溶解し、かつ長期保存安定性に優れる、ボルテゾミブを含む凍結乾燥製剤はなお必要とされている。本発明は当該凍結乾燥製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは鋭意検討した結果、ボルテゾミブを遊離体のグルコン酸と共に凍結乾燥することで、長期保存安定性に優れ、かつ優れた溶解性を有する凍結乾燥製剤が得られることを見出した。また、特許文献４に開示されたグルコン酸のナトリウム塩以外の他の金属塩を用いた場合においても、長期保存安定性に優れ、かつ優れた溶解性を有する凍結乾燥製剤が得られることを見出した。
【００１０】
すなわち本発明は、以下の態様を有する。
［１］
（１）ボルテゾミブと、
（２）グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤と
を含む、凍結乾燥製剤。
［２］
前記添加剤がグルコン酸マグネシウムである、［１］に記載の凍結乾燥製剤。
［３］
ボルテゾミブと前記添加剤との重量比が、２：１〜１：２５である、［１］又は［２］に記載の凍結乾燥製剤。
［４］
薬学的に許容される他の添加剤をさらに含む、［１］〜［３］のいずれか１つに記載の凍結乾燥製剤。
［５］
（ｉ）ボルテゾミブと、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤とを水性混合溶媒に溶解して溶液を調製する工程と
（ｉｉ）前記溶液を凍結乾燥する工程と
を含む、ボルテゾミブと前記少なくとも１つの添加剤とを含む凍結乾燥製剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の凍結乾燥製剤は、長期保存安定性に優れ、かつ溶媒に速やかに溶解して投与可能な溶液とすることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の一態様は、（１）ボルテゾミブと、（２）グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤とを含む、凍結乾燥製剤に関する。以下、当該凍結乾燥製剤を「本発明の凍結乾燥製剤」とも呼ぶ。
【００１３】
本発明の凍結乾燥製剤においてボルテゾミブと共に使用される上記添加剤としては、グルコン酸マグネシウムが好ましい。
【００１４】
本発明の凍結乾燥製剤中における、ボルテゾミブと添加剤との重量比（ボルテゾミブ：添加剤）は、安定なボルテゾミブ製剤を提供する限りにおいて特に限定されないが、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは２：１〜１：２５であり、より好ましくは１：１〜１：２５であり、特に好ましくは１：６〜1：１２である。また、本発明の凍結乾燥製剤中における、ボルテゾミブと添加剤とのモル比（ボルテゾミブ：添加剤）は、安定なボルテゾミブ製剤を提供する限りにおいて特に限定されないが、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは２：１〜１：２２であり、より好ましくは１：１〜１：２２であり、特に好ましくは１：１〜1：５である。
【００１５】
本発明の凍結乾燥製剤は、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される添加剤に加えて、薬学的に許容される他の添加剤を含んでも良い。当該他の添加剤としては、特に限定されないが、例えば、有機酸又は無機酸の塩、ｐＨ調節剤、賦形剤、界面活性剤、浸透圧調整剤、防腐剤及び抗酸化剤が挙げられる。ボルテゾミブと当該他の添加剤との重量比（ボルテゾミブ：添加剤）は、特に限定されないが、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは、１：０．５〜１：３０であり、より好ましくは１：０．８〜１：１５である。また、ボルテゾミブと当該他の添加剤とのモル比（ボルテゾミブ：添加剤）は、特に限定されないが、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは１：５．１〜１：１６．３であり、より好ましくは１：５．１〜1：９．６である。
【００１６】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよい有機酸又は無機酸の塩としては、特に限定されないが、例えば、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウムなどを挙げることができる。好ましくは、グルコン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウムである。有機酸又は無機酸の塩は、単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１７】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよいｐＨ調節剤としては、特に限定されないが、例えば、塩酸及びリン酸などの無機酸、クエン酸、酒石酸、炭酸、乳酸及び酢酸などの有機酸、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム及び水酸化リチウムなどのアルカリ金属又はアルカリ土類金属の水酸化物、リン酸２水素ナトリウム、リン酸１水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどの無機酸のアルカリ金属塩などを挙げることができる。好ましくは、塩酸、リン酸もしくはその塩（リン酸２水素ナトリウム、リン酸１水素ナトリウムなど）及び水酸化ナトリウムが挙げられる。より好ましくは、塩酸及び水酸化ナトリウムである。ｐＨ調整剤は単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１８】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよい賦形剤としては、特に限定されないが、例えば、グルコース、フルクトースなどの単糖類、及び、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロースなどの二糖類、マンニトール、エリスリトール、イノシトール及びソルビトールなどの糖アルコール類が挙げられる。好ましくは、マルトース、トレハロースである。賦形剤は単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００１９】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよい界面活性剤としては、特に限定されないが、例えば、ポリソルベート、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリエチレン硬化ヒマシ油及びセスキオレイン酸ソルビタンなどが挙げられる。界面活性剤は単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２０】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよい浸透圧調整剤としては、特に限定されないが、例えば、ブドウ糖、キシリトール及びソルビトールなどが挙げられる。浸透圧調整剤は単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２１】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよい防腐剤としては、特に限定されないが、例えば、安息香酸及びアスコルビン酸などが挙げられる。防腐剤は単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２２】
本発明の凍結乾燥製剤に含まれてもよい抗酸化剤としては、特に限定されないが、例えば、塩酸システイン、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、エデト酸ナトリウム、チオグリコール酸ナトリウムなどが挙げられる。抗酸化剤は単独で用いてもよく、また二種以上を組み合わせて用いてもよい。
【００２３】
本発明の凍結乾燥製剤は、溶媒によって容易に溶解され、静脈注射剤、皮下注射剤、筋肉注射剤又は点滴注射剤などの注射剤（注射液）として、非経口投与することができる。溶解のために使用する溶媒としては、通常、注射剤に使用される溶媒であれば特に限定されないが、例えば、水、生理食塩水、５％ブドウ糖又はマンニトール液、水溶性有機溶媒（例えば、グリセロール、エタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリドン、ポリエチレングリコール、クレモホールなど及びそれらの混合液）並びに水と該水溶性有機溶媒の混合液などが挙げられる。
【００２４】
本発明の凍結乾燥製剤の溶媒への溶解時のｐＨ値は、通常４．０〜７．０であり、好ましくは５．０〜６．０である。
【００２５】
本発明の凍結乾燥製剤の一実施形態は、（１）ボルテゾミブと、（２）添加剤としてのグルコン酸マグネシウムと、（３）薬学的に許容される他の添加剤とを含む、凍結乾燥製剤である。ここで、（１）と（２）との重量比は、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは２：１〜１：２５であり、より好ましくは１：１〜１：２５であり、特に好ましくは１：６〜1：１２である。また、（１）と（２）とのモル比は、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは２：１〜１：２２であり、より好ましくは１：１〜１：２２であり、特に好ましくは１：１〜1：５である。また、（１）と（３）との重量比は、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは、１：０．５〜１：３０であり、より好ましくは１：０．８〜１：１５であり、さらに好ましくは１：０．８〜１：５であり、特に好ましくは１：０．８〜１：１．５である。また、（１）と（３）とのモル比は、例えば９９：１〜１：９９であり、好ましくは１：５．１〜１：１６．４であり、より好ましくは１：５．１〜１：９．６であり、特に好ましくは１：５．１〜１：７．８である。
【００２６】
本発明の一態様は、（ｉ）ボルテゾミブと、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される少なくとも１つの添加剤とを水性混合溶媒に溶解して溶液を調製する工程と、（ｉｉ）前記溶液を凍結乾燥する工程とを含む、本発明の凍結乾燥製剤の製造方法に関する。以下、「本発明の製造方法」とも呼ぶ。
【００２７】
本発明の製造方法において「水性混合溶媒」とは、水に加えて、１つ以上の共溶媒を含む混合溶媒のことである。共溶媒は、好ましくは水混和性有機溶媒であり、より好ましくはメタノール、エタノール、１−ブタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール、又はそれらの混合物であり、さらに好ましくはエタノール、メタノール、ｔｅｒｔ−ブタノールである。一実施形態において、本発明の製造方法において使用される水性混合溶媒は、通常３％〜９５％（ｖ／ｖ）の、好ましくは３％〜４０％（ｖ／ｖ）のアルコールを含む水溶液である。
【００２８】
本発明の製造方法における溶液の調製は、任意の順序で原料を添加することによって調製できる。例えば、添加剤をボルテゾミブを含む水性混合溶媒に加えてもよく、ボルテゾミブを添加剤を含む水性混合溶媒に加えてもよく、または、ボルテゾミブと添加剤とを水性混合溶媒に同時に加えてもよい。あるいは、ボルテゾミブ及び／又は添加剤を水性混合溶媒に加えた後、水で希釈してもよい。
【００２９】
本発明の製造方法における溶液の調製時において、溶液へ必要に応じてｐＨ調整剤を加えても良い。ｐＨ調整剤としては、例えば上記したものが挙げられる。
【００３０】
本発明の製造方法における溶液の調製時に、当該溶液に、グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムから成る群から選択される添加剤に加えて、薬学的に許容される他の添加剤を添加してもよい。他の添加剤としては、例えば上記した有機酸又は無機酸の塩、ｐＨ調節剤、賦形剤、界面活性剤、浸透圧調整剤、防腐剤及び抗酸化剤が挙げられる。
【００３１】
本発明の製造方法において、凍結乾燥工程自体は、通常この分野で実施される凍結乾燥方法に従って実施すればよい。
【実施例】
【００３２】
以下に示す実施例、参考例及び比較例を参照して本発明をさらに詳しく説明するが、本発明の範囲は、これらの実施例によって限定されるものでないことは言うまでもない。
【００３３】
参考例２を除き、以下で使用されるボルテゾミブは、国際公開第２００８／０７５３７６号に記載された、ボルテゾミブのＦｏｒｍ−１の製造方法と同一の方法で製造されたものを使用した。
【００３４】
Ｉ．製剤の調製
実施例１
ボルテゾミブとグルコン酸とを含む凍結乾燥製剤
５０％グルコン酸水溶液２．２ｇを超純水２０ｍＬで希釈した後、０．１Ｍ ＮａＯＨ水溶液でｐＨ４．２に調整した。また、ボルテゾミブ３３mgをｔ−ブタノール３．３ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製されたグルコン酸水溶液（１３．２ｍＬ）とボルテゾミブ溶液（全量）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液１．５ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−１０℃まで約３時間かけて昇温し、約３６時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００３５】
実施例２
ボルテゾミブとグルコン酸カリウムとを含む凍結乾燥製剤
グルコン酸カリウム１３３３．３ｍｇを超純水４０ｍＬに溶解し、０．１Ｍ 塩酸水溶液でｐＨ４．２に調整した。また、ボルテゾミブ３３ｍｇをｔ−ブタノール３．３ｍＬに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製されたグルコン酸カリウム水溶液（１３．２ｍＬ）とボルテゾミブ溶液（全量）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液１．５ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−１０℃まで約３時間かけて昇温し、約３６時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００３６】
実施例３
ボルテゾミブとグルコン酸カルシウムとを含む凍結乾燥製剤
グルコン酸カルシウム２００mｇを超純水２４ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ２１mgをｔ−ブタノール４．２ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製されたグルコン酸カルシウム水溶液（１６．８ｍＬ）とボルテゾミブ溶液（全量）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−３０℃まで約２時間かけて冷却、約５時間保持し、その後、−５０℃まで冷却し、約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−３０℃まで約３時間かけて昇温し、４８時間一次乾燥を行った。その後、圧量設定値を０Ｐａとし、３０℃まで約３時間かけて昇温し、約１２時間二次乾燥をすることで、凍結乾燥製剤を得た。
【００３７】
実施例４
ボルテゾミブとグルコン酸マグネシウムとを含む凍結乾燥製剤（１）
グルコン酸マグネシウム１．２９３ｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ８５．２mgをメタノール２．８ｍLに添加し、室温で溶解した。調製されたボルテゾミブ溶液（０．６９ｍＬ）にグルコン酸マグネシウム水溶液（０．８１ｍＬ）を加え、さらに超純水１９．５ｍＬを加え均一になるまで撹拌した。調製された溶液を塩酸でｐＨ５．５に調整した。当該溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、−２０℃で約９時間熱処理した後、再度−５０℃で約３時間凍結を行い、３０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約６０時間かけて昇温し、約２４時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、６０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００３８】
実施例５
ボルテゾミブとグルコン酸マグネシウムとを含む凍結乾燥製剤（２）
グルコン酸マグネシウム１．２９３ｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ８５．２mgをメタノール２．８ｍLに添加し、室温で溶解した。調製されたボルテゾミブ溶液（０．６９ｍＬ）にグルコン酸マグネシウム水溶液（４．８７ｍＬ）を加え、さらに超純水１５．４４ｍＬを加え均一になるまで撹拌した。調製された溶液を塩酸でｐＨ５．５に調整した。当該溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、−２０℃で約９時間熱処理した後、再度−５０℃で約３時間凍結を行い、３０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約６０時間かけて昇温し、約２４時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、６０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００３９】
実施例６
ボルテゾミブとグルコン酸マグネシウムとを含む凍結乾燥製剤（３）
グルコン酸マグネシウム１．２９３ｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ８５．２mgをメタノール２．８ｍLに添加し、室温で溶解した。調製されたボルテゾミブ溶液（０．６９ｍＬ）にグルコン酸マグネシウム水溶液（２０．３ｍＬ）を加え、均一になるまで撹拌した。調製された溶液を塩酸でｐＨ５．５に調整した。当該溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、−２０℃で約９時間熱処理した後、再度−５０℃で約３時間凍結を行い、３０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約６０時間かけて昇温し、約２４時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、６０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００４０】
実施例７
ボルテゾミブとグルコン酸マグネシウムとを含む凍結乾燥製剤（４）
グルコン酸マグネシウム１５００mｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、塩化ナトリウム４００ｍｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ３６mgをｔ−ブタノール１４．４ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製されたボルテゾミブ溶液（全量）に、グルコン酸マグネシウム水溶液（７．２ｍＬ）、塩化ナトリウム水溶液（３．６ｍL）を加え、さらに超純水１０．８ｍLを加え、均一になるまで撹拌した。調製された溶液を塩酸でｐＨ５．５に調整した。当該溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約３０時間かけて昇温し、約１８時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで、凍結乾燥製剤を得た。
【００４１】
実施例８
ボルテゾミブとグルコン酸マグネシウムとを含む凍結乾燥製剤（５）
グルコン酸マグネシウム１５９７ｍｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、マルトース６１８８ｍｇを超純水４０ｍLに溶解した。ボルテゾミブ２６０ｍｇをｔ−ブタノール２６ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調整されたグルコン酸マグネシウム水溶液（６．２ｍL）とマルトース溶液（３．２ｍL）と超純水（３．８ｍＬ）ボルテゾミブ溶液（３．３ｍL）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液を塩酸でｐＨ４．５に調整した。調製された溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約３時間かけて昇温し、約３６時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００４２】
実施例９
ボルテゾミブとグルコン酸マグネシウムとを含む凍結乾燥製剤（６）
グルコン酸マグネシウム１５９７ｍｇを超純水５０ｍLに溶解した。また、トレハロース２８２８ｍｇを超純水４０ｍLに溶解した。ボルテゾミブ２６０ｍｇをｔ−ブタノール２６ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調整されたグルコン酸マグネシウム水溶液（６．２ｍL）とトレハロース溶液（７．０ｍL）とボルテゾミブ溶液（３．３ｍL）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液を塩酸でｐＨ４．５に調整した。調製された溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約３時間かけて昇温し、約３６時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００４３】
比較例１
ボルテゾミブと乳酸ナトリウムとを含む凍結乾燥製剤
乳酸ナトリウム３３３．３mｇを超純水２０ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ２１mgをｔ−ブタノール２．１ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製された乳酸ナトリウム水溶液（８．４ｍＬ）とボルテゾミブ溶液（全量）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−２０℃まで約３時間かけて昇温し、その後約３６時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで、凍結乾燥製剤を得た。
【００４４】
参考例１
ボルテゾミブとグルコン酸ナトリウムとを含む凍結乾燥製剤
グルコン酸ナトリウム３２４ｍｇを超純水２０ｍＬに溶解し、０．１Ｍ塩酸でｐＨ４．２に調整した。また、ボルテゾミブ２７ｍｇをｔ−ブタノール５．４ｍＬに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製されたグルコン酸ナトリウム水溶液とボルテゾミブ溶液とを混合し、さらに超純水１．６ｍＬを加え、均一になるまで撹拌した。調製された溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、１０Ｐａまで減圧後−３０℃まで約２０時間かけて昇温し、２４時間保持、その後−１０℃まで昇温し約２４時間一次乾燥し、その後圧量設定値を０Ｐａとし、５０℃で約１２時間二次乾燥をすることで、凍結乾燥製剤を得た。
【００４５】
参考例２
ボルテゾミブとマンニトールとを含む凍結乾燥製剤
ベルケイド（登録商標）注射用３ｍｇ（ヤンセンファーマ社製）をそのまま使用した。なお、ベルケイド（登録商標）注射用３ｍｇの添付文書によると、当該薬剤は、１バイアル中ボルテゾミブ３ｍｇ含有し、添加剤としてＤ−マンニトールを３０ｍｇ含む凍結乾燥注射剤である。
【００４６】
参考例３
ボルテゾミブとクエン酸とを含む凍結乾燥製剤
クエン酸１７３mｇを超純水１２ｍLに溶解した。また、ボルテゾミブ１５mgをｔ−ブタノール３．０ｍLに添加し、４０℃で撹拌しながら溶解した。調製されたクエン酸水溶液（全量）とボルテゾミブ溶液（全量）とを混合し、均一になるまで撹拌した。調製された溶液３ｍＬを１０ｍＬガラスバイアルに分注し、−５０℃で約３時間凍結し、−２０℃で約９時間熱処理した後、再度−５０℃で約５時間凍結を行い、７０Ｐａまで減圧後−３０℃まで約３時間かけて昇温し、約４８時間一次乾燥を行い、その後圧量設定値を０Ｐａとし、３０℃で約１５時間二次乾燥をすることで凍結乾燥製剤を得た。
【００４７】
ＩＩ．溶解試験
実施例１〜９、参考例１〜３、並びに比較例１の凍結乾燥製剤へ生理食塩水（３ｍＬ）を加え、溶解時間及び溶解後のｐＨを測定した。完全に溶解したことを、目視で確認した。なお、当該生理食塩水の量は静注用製剤の調製を想定したものである。結果を以下の表１に示す。
【表１】
2017218399.tif 000003
【００４８】
ＩＩＩ．安定性試験
実施例１〜９、参考例１〜３、並びに比較例１の凍結乾燥製剤を８０℃の定温恒温乾燥器（EYELA社製  NDO-600SD）にて３日間加温した。製剤化直後、及び８０℃にて３日間放置後の各サンプルについて、下記の純度試験を行った。
【００４９】
サンプルを含むバイアルへ、ギ酸溶液（水／ギ酸＝１０００／１）（ｖ／ｖ）を６ｍＬ加えて溶解し、試料溶液とした。また、試料溶液（１ｍＬ）を量り取り、ギ酸溶液（水／ギ酸＝１０００／１）（ｖ／ｖ）を加えて１００ｍＬとし、これを標準溶液とした。各試料溶液及び標準溶液につき、下記の上記塩で高速液体クロマトグラフィーにより定量分析を行った。それぞれの試料溶液及び標準溶液につき、ボルテゾミブ由来のピーク面積、及び、各分解物質由来のピーク面積を、自動積分法により測定した。
【００５０】
高速液体クロマトグラフィーの測定条件：
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２７０ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍのステンレス管にオクチルシリル化シリカゲル（５μｍ）を充填したカラム。
カラム温度：３５℃付近の一定温度
サンプルクーラー：５℃付近の一定温度
移動相：
・移動相Ａ：水／アセトニトリル／ギ酸混液（７１５／２８５／１）（ｖ／ｖ／ｖ）
・移動相Ｂ：アセトニトリル／水／ギ酸混液（８００／２００／１）（ｖ／ｖ／ｖ）
移動相の送液：移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比を下記表２のように変えて濃度勾配を制御した。
【表２】
2017218399.tif 000004
【００５１】
安定性試験の結果を以下の表３に示す。当該表の値は、（分解物質由来の各ピーク面積の総和／ボルテゾミブ由来のピーク面積）×１００（％）を表す。
【表３】
2017218399.tif 000005
【００５２】
グルコン酸、グルコン酸カリウム、グルコン酸カルシウム及びグルコン酸マグネシウムを添加剤として使用したいずれの場合においても、ボルテゾミブの分解を良好に抑制することができた。特に、グルコン酸マグネシウムを添加剤として使用した場合（実施例４〜９）では、グルコン酸ナトリウム（参考例１）を使用した場合と比較して約１．８倍〜１８倍ボルテゾミブの分解を抑制することができた。また、マンニトール（参考例２）を使用した場合と比較してもボルテゾミブの分解を抑制することができた（実施例４、７〜９）。なお、添加剤として乳酸ナトリウムを使用した場合には、生理食塩水への速やかな溶解性を示したが（表１）、ボルテゾミブの安定化効果は低かった（比較例１）。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明の凍結乾燥製剤は、長期保存安定性に優れ、かつその使用時に速やかに溶媒に溶解する。当該凍結乾燥製剤は、用時調製型の製剤として有効に利用され得る。