(57)【要約】【課題】本発明は、偽陽性の原因となる因子による影響を低減し、試料中の標的物質の有無を高い精度で判定することができる、イムノクロマト法に基づく新たな手法を提供することを目的とする。【解決手段】試料中の標的物質を捕捉するための手段と、その上流にさらに偽陽性の原因となる因子を捕捉するための手段とを備える、クロマト分析用ストリップ及びそれを用いた標的物質の検出方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
基材の上に、試料を添加するためのサンプルパッド、該試料中の標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）が配置・固定されている固相担体、及び吸収パッドが順次配置されてなり、さらに、該捕捉手段Ｉよりも上流に該試料中の偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）が配置・固定されていることを特徴とする、クロマト分析用ストリップ。
【請求項２】
捕捉手段ＩＩが、捕捉手段Ｉが配置・固定されている固相担体に配置・固定されている、請求項１に記載のクロマト分析用ストリップ。
【請求項３】
捕捉手段ＩＩが、サンプルパッドと捕捉手段Ｉが配置・固定されている固相担体との間に配置されたさらなる固相担体に配置・固定されている、請求項１に記載のクロマト分析用ストリップ。
【請求項４】
捕捉手段Ｉよりも上流に、標的物質と特異的に結合することが可能な標識物質を含む標識部位をさらに備える、請求項１〜３のいずれか一項に記載のクロマト分析用ストリップ。
【請求項５】
偽陽性原因因子が、リウマチ因子、ヒト抗マウス抗体（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸、ペクチン酸、フコイダン、コロミン酸、免疫グロブリンからなる群より選択される、請求項１〜４のいずれか一項に記載のクロマト分析用ストリップ。
【請求項６】
試料中に含まれる標的物質を検出するための方法であって、
（１）該試料を、試料中の偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）と接触させ、該試料中の偽陽性原因因子を捕捉し、次いで、試料中の標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）と接触させ、該試料中の標的物質を捕捉する工程、ならびに
（２）該捕捉手段Ｉに捕捉された標的物質を検出する工程、を含む、上記方法。
【請求項７】
標的物質の検出を、標的物質と結合した標識物質を検出することにより行う、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか一項に記載のクロマト分析用ストリップを用いて行う、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、偽陽性の原因となる因子による影響を低減し、試料中の標的物質の有無を高い精度で判定することができるクロマト分析用ストリップ及びそれを用いた標的物質の検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、試料中の標的物質を検出するための手法としてイムノクロマト法が注目されている。例えば、標的物質と特異的に結合することが可能な捕捉手段が配置・固定されているニトロセルロース膜のような固相担体に試料を滴下して、試料が毛細管現象により固相担体を移動する際に試料中の標的物質と捕捉手段とが接触し、標的物質が捕捉手段に結合する。次いで、捕捉手段に結合した標的物質を検出することにより、試料中の標的物質の有無を判定することができる。本方法は、迅速性及び簡便性に優れた手法であり、今日では本方法の原理を利用して、ウイルス、細菌、ホルモンや各種疾患関連バイオマーカーを検出するためのクロマト分析用ストリップが開発されており、様々な分野において利用されている。
【０００３】
一方、生体に由来する試料中には、標的物質以外にも様々な成分が含まれ、このような成分の中には前記捕捉手段と非特異的に結合する成分も含まれ得る（例えば、ヒト抗マウス抗体（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＨＡＭＡ）（特許文献１）、免疫グロブリンやヘパリン、フコイダン等の酸性多糖類（非特許文献１，２）、リウマチ因子（特許文献２）等）。これらの成分はイムノクロマト法において、前記捕捉手段と非特異的に結合するために、試料中に標的物質が存在しないにもかかわらず陽性の判定、すなわち「偽陽性」を生じ得る。
【０００４】
「偽陽性」の判定は検査の信頼性を低下させるものであり、また、「偽陽性」の判定に基づく誤った判断や処置がなされる虞もある。そのため、当該分野においては、試料中の標的物質の有無を高い精度で判定することができる信頼性の高い手法が切望されていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−１６７７３号公報
【特許文献２】特表平１１−５１１２５５号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日本不妊学会、２１（１）、８６−９３、１９７６
【非特許文献２】Ａｍ．Ｊ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，１３５，５０３−５０６，１９７９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、偽陽性の原因となる因子（以下、「偽陽性原因因子」と記載する）による影響を低減し、試料中の標的物質の有無を高い精度で判定することができる新たな手法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、イムノクロマト法の原理を利用するクロマト分析用ストリップにおいて、試料中の標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）と、その上流にさらに偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）とを備えることによって、捕捉手段Ｉへの偽陽性原因因子の非特異的な結合を低減することができ、標的物質の検出に際し偽陽性の発生が抑えられることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の発明を包含する。
［１］  基材の上に、試料を添加するためのサンプルパッド、該試料中の標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）が配置・固定されている固相担体、及び吸収パッドが順次配置されてなり、さらに、該捕捉手段Ｉよりも上流に該試料中の偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）が配置・固定されていることを特徴とする、クロマト分析用ストリップ。
［２］  捕捉手段ＩＩが、捕捉手段Ｉが配置・固定されている固相担体に配置・固定されている、［１］のクロマト分析用ストリップ。
［３］  捕捉手段ＩＩが、サンプルパッドと捕捉手段Ｉが配置・固定されている固相担体との間に配置されたさらなる固相担体に配置・固定されている、［１］のクロマト分析用ストリップ。
［４］  捕捉手段Ｉよりも上流に、標的物質と特異的に結合することが可能な標識物質を含む標識部位をさらに備える、［１］〜［３］のいずれかのクロマト分析用ストリップ。
［５］  偽陽性原因因子が、リウマチ因子、ヒト抗マウス抗体（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ）、コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸、ペクチン酸、フコイダン、コロミン酸、免疫グロブリンからなる群より選択される、［１］〜［４］のいずれかのクロマト分析用ストリップ。
［６］  試料中に含まれる標的物質を検出するための方法であって、
（１）該試料を、試料中の偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）と接触させ、該試料中の偽陽性原因因子を捕捉し、次いで、試料中の標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）と接触させ、該試料中の標的物質を捕捉する工程、ならびに
（２）該捕捉手段Ｉに捕捉された標的物質を検出する工程、を含む、上記方法。
［７］  標的物質の検出を、標的物質と結合した標識物質を検出することにより行う、［６］の方法。
［８］  ［１］〜［５］のいずれかのクロマト分析用ストリップを用いて行う、［７］の方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、偽陽性原因因子による影響を低減し、試料中の標的物質の有無を高い精度で判定することが可能な、迅速かつ簡便な手法を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１はラテラルフロー型クロマト分析用ストリップの一例を示す模式図を示す。（１）基材、（２）サンプルパッド、（３）固相担体、（４）吸収パッド、（５）標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）、（６）偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）。
【図２】図２はラテラルフロー型クロマト分析用ストリップの一例を示す模式図を示す。（１）基材、（２）サンプルパッド、（３）標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）を備える固相担体、（３’）偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）を備える固相担体、（４）吸収パッド、（５）標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）、（６）偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）。
【図３】図３は実施例１で作製した各クロマト分析用ストリップを用いた標的物質（インフルエンザＡ型抗原）の検出における、偽陽性原因因子（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＨＡＭＡ））による偽陽性の有無を示す写真図である。（レーン１）試料：インフルエンザＡ型抗原＋ＨＡＭＡ、クロマト分析用ストリップ：標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）及び偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）を共に備える。（レーン２）試料：ＨＡＭＡのみ、クロマト分析用ストリップ：標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）及び偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）を共に備える。（レーン３）試料：ＨＡＭＡのみ、クロマト分析用ストリップ：標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）のみを備え、偽陽性原因因子を捕捉するための手段を備えない。（レーン４）試料：ＰＢＳ、クロマト分析用ストリップ：標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）及び偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）を共に備える。ＰＣ：ポジティブコントロール。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．クロマト分析用ストリップ
本発明に係るクロマト分析用ストリップは、基材の上に、試料を添加するためのサンプルパッド、試料中の標的物質を捕捉するための固相担体、及び吸収パッドが順次配置されてなり、固相担体には標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）が配置・固定されており、さらに、当該捕捉手段Ｉよりも上流に偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）が配置・固定されてなる構造を有する。なお、「上流」とは、サンプルパッドに滴下された試料が、毛細管現象により固相担体及び吸収パッドへと順次展開する方向に対する上流、すなわちサンプルパッド側の領域を意味する。
【００１３】
以下、本発明のクロマト分析用ストリップについて模式図に記載される実施形態を用いて説明する場合があるが、本発明のクロマト分析用ストリップは本実施形態に限定されるものではない。なお、各部材に付された符号は、図中に示される符号に対応する。
【００１４】
図１のクロマト分析用ストリップは、基材（１）の上に、試料を添加するためのサンプルパッド（２）、固相担体（３）及び吸収パッド（４）が順次配置されてなる。固相担体（３）には、標的物質を捕捉するための手段（捕捉手段Ｉ）（５）、及び、当該捕捉手段Ｉよりも上流に、図１においてはサンプルパッドと捕捉手段Ｉとの間に偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）（６）が配置されてなる構造を有する。
【００１５】
基材はその上に配置された各種部材を支持することができればよく、例えば樹脂（プラスチック、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリスチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、塩化ビニル樹脂等）、金属、無機材料（ガラス、シリコン、セラミック等）からなるものを利用することができる（これらに限定はされない）。基材は、クロマト分析用ストリップの操作を容易にするものであればよく、形状は特に限定されず、例えば、平板、平膜、フィルムなどの平坦な形状を有するものや、その他の部材を包含し得る立体的な形状（例えばハウジングケース）を有するものであってもよい。
【００１６】
サンプルパッド、固相担体及び吸収パッドは、サンプルパッドに滴下された試料が、これら部材の中及び間を毛細管現象により展開できるものであればよく、例えば樹脂（プラスチック、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリスチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、塩化ビニル樹脂等）、金属、無機材料（ガラス、シリコン、セラミック等）、天然高分子（キチン、キトサン、セルロース等）からなるものを利用することができる（これらに限定はされない）。これら部材は孔質構造を有するものが好ましく、例えば、ニトロセルロースメンブレン、ポリエーテルスルフォンメンブレン、ナイロンメンブレン、ろ紙や乾燥させた各種ゲル（ゼラチンゲル、アガロースゲル、デキストランゲル、シリカゲル）等を利用することができる。
【００１７】
サンプルパッド、固相担体及び吸収パッドは、それぞれ異なる材料から構成されていてもよいし、同一の材料から構成されていてもよい。サンプルパッド、固相担体及び吸収パッドの大きさや形態は、クロマト分析用ストリップの操作や標的物質の検出に適切なものを適宜選択することができる。
【００１８】
サンプルパッド、固相担体及び吸収パッドは、滴下された試料がサンプルパッドから固相担体に、次いで固相担体から吸収パッドに順次展開できるように配置されていればよく、隣接する部材の一部が直接、又は間接的に接触するように配置される。例えば、図１に示すように、サンプルパッド（２）、固相担体（３）及び吸収パッド（４）は、順次重ねて配置することができる。
【００１９】
標的物質を捕捉するための捕捉手段Ｉは、標的物質と特異的に結合することが可能なものであればよく、標的物質との相互作用により特異的に結合する物質が挙げられる。標的物質と捕捉手段Ｉとの相互作用には、例えば抗体−抗原、核酸−その相補配列を有する核酸、アプタマー−その標的分子、アビジン−ビオチン、又はレクチン−糖鎖等の相互作用が含まれ（これらに限定はされない）、標的物質に応じて適当な物質を捕捉手段Ｉとして選択することができる。例えば、捕捉手段Ｉとして、標的物質と特異的に結合することが可能な抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡ等）やその断片、あるいは標的物質が抗体やその断片である場合には、その抗原やその断片を利用することができる。
【００２０】
「標的物質」としては、例えば、インフルエンザウイルス、ＨＩＶ、肝炎ウイルス等の各種ウイルス及びその抗原や抗体；黄色ぶどう球菌、大腸菌、緑膿菌、レンサ球菌、肺炎双球菌等の各種細菌及びその抗原や抗体や代謝産物；ヒト絨毛性腺刺激ホルモン、成長ホルモン、甲状腺刺激ホルモン等の各種ホルモン；ＤｉＡｃＳｐｍ、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９、ＰＳＡ、便潜血等の各種腫瘍マーカー、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＬ−２、ＩＬ−６等やＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２等のケモカインを含む各種サイトカイン、ＣＫ−８、ＣＫ−１８等の各種サイトケラチン、ＨＧＦ、ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＶＥＧＦ等の各種増殖因子、ＩｇＧ、ＩｇＭ等の免疫グロブリン、アルブミン等の各種血清タンパク質成分等が挙げられるが、これらに限定はされない。
【００２１】
捕捉手段Ｉの固相担体への配置・固定は、用いる捕捉手段Ｉ及び固相担体に応じて適宜選択することができ、適当なペプチド、タンパク質、核酸、官能基（アミノ基、カルボキシル基、水酸基、スルフィド基、メルカプト基、ジチオール基等）等を介して行ってもよいし、静電的相互作用、疎水的な相互作用、水素結合、共有結合等を利用して行ってもよい。
【００２２】
捕捉手段Ｉの固相担体への配置・固定は、インクジェット法、印刷法、スプレー塗布法等を用いて、特定の領域に限局してなされることが好ましい。捕捉手段Ｉが特定の領域に限局して配置・固定されることによって、捕捉された標的物質は所定の領域のみに限局して検出されるため、陽性又は陰性の判別を容易にすることができる。捕捉手段Ｉの固相担体への配置・固定は、例えば０．５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度にて行うことができる。
【００２３】
試料中に含まれる標的物質は、捕捉手段Ｉに到達し、捕捉手段Ｉと接触及び相互作用により結合する。これにより、試料中に含まれる標的物質を捕捉手段Ｉにて検出することを可能とする。
【００２４】
偽陽性原因因子を捕捉するための手段（捕捉手段ＩＩ）は、偽陽性原因因子と結合することが可能なものであればよく、偽陽性原因因子との相互作用により結合する物質が挙げられる。偽陽性原因因子と捕捉手段ＩＩとの相互作用には、例えば抗体−抗原、核酸−その相補配列を有する核酸、アプタマー−その標的分子、アビジン−ビオチン、又はレクチン−糖鎖等の相互作用が含まれ（これらに限定はされない）、試料中に含まれ得る偽陽性原因因子に応じて適当な物質を捕捉手段ＩＩとして選択することができる。例えば、捕捉手段ＩＩとして、偽陽性原因因子と結合することが可能な抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡ等）やその断片、あるいは偽陽性原因因子が抗体やその断片である場合には、その抗原やその断片を利用することができる。
【００２５】
「偽陽性原因因子」には、ヒト試料を用いたイムノクロマト分析において偽陽性の原因因子となり得る物質が含まれ、例えば、ＩｇＧ又はそのＦｃ領域に対する自己抗体等のリウマチ因子；ヒト抗マウス抗体（Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−Ｍｏｕｓｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ（以下、「ＨＡＭＡ」と記載する））；モノクローナル蛋白（Ｍ蛋白）；コンドロイチン硫酸、コンドロイチン、ヘパリン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ケラタン硫酸、ペクチン酸、フコイダン、コロミン酸などの酸性多糖類；ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ等の免疫グロブリン等が挙げられるが、これらに限定はされない。血液を試料として用いる場合、当該試料中にはリウマチ因子、ＨＡＭＡ、免疫グロブリンが大量に含まれ、これらの一又は複数の物質が偽陽性原因因子となり得る。また、組織の粘膜や粘液を試料として用いる場合、当該試料中には酸性多糖類や免疫グロブリンが大量に含まれ、これらの一又は複数の物質が偽陽性原因因子となり得る。
【００２６】
捕捉手段ＩＩとしては例えば、リウマチ因子に対する抗原（ＩｇＧ又はそのＦｃ領域）、マウス抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体、マウスポリクローナル抗体、マウス抗体を含有するマウス血清やマウス腹水等）、抗ヒト免疫グロブリン抗体、抗酸性多糖類抗体等が挙げられる。
【００２７】
試料中に複数種の偽陽性原因因子が含まれる場合には、異なる偽陽性原因因子にそれぞれ結合することが可能な複数種の物質を捕捉手段ＩＩとして利用することができる。
【００２８】
捕捉手段ＩＩは、捕捉手段Ｉよりも上流に配置される。これにより偽陽性原因因子は捕捉手段Ｉに到達する前に、捕捉手段ＩＩと接触及び相互作用により結合する。偽陽性原因因子は捕捉手段ＩＩにより捕捉されるために、捕捉手段Ｉへの偽陽性原因因子の結合による偽陽性の発生を防ぐことができる。図１に示すように、捕捉手段ＩＩ（６）は固相担体（３）に配置されてもよいし、または別の実施態様としてサンプルパッド（２）に配置されてもよい。あるいは、図２に示すように、サンプルパッド（２）と固相担体（３）との間に、両者に接するようにさらなる固相担体（３’）を設け、それに配置されてもよい。
【００２９】
捕捉手段ＩＩの固相担体への配置・固定は、用いる捕捉手段ＩＩ及び固相担体に応じて適宜選択することができ、適当なペプチド、タンパク質、核酸、官能基（アミノ基、カルボキシル基、水酸基、スルフィド基、メルカプト基、ジチオール基等）等を介して行ってもよいし、静電的相互作用、疎水的な相互作用、水素結合、共有結合等を利用して行ってもよい。捕捉手段ＩＩの固相担体への配置・固定には、インクジェット法、印刷法、スプレー塗布法、含侵法等を利用することができる。捕捉手段ＩＩは特定の領域に限局して配置・固定されていてもよいし、限局されていなくてもよい。
【００３０】
捕捉手段ＩＩが、異なる偽陽性原因因子にそれぞれ結合することが可能な複数種の物質を含む場合、これらの物質は混合されて一緒に配置されてもよいし、あるいは各物質はそれぞれ別々に配置されてもよいし、あるいは各物質は任意の組合せにて混合し各組合せにて別々に配置されてもよい。
【００３１】
捕捉手段ＩＩの固相担体への配置・固定は、例えば、０．５ｍｇ／ｍＬ〜１０ｍｇ／ｍＬの濃度にて行うことができる。異なる偽陽性原因因子にそれぞれ結合することが可能な複数種の物質を組合せて配置・固定する場合には、各物質を例えば２ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬの濃度にて行うことができる。
【００３２】
本発明に係るクロマト分析用ストリップにはさらに、試料中の標的物質を標識するための標識部位を備えることができる。標識部位には、標識となる物質で標識された、標的物質と特異的に結合することが可能な物質（以下、「標識物質」と記載する）が含まれる。ここで用いられる「標的物質と特異的に結合することが可能な物質」としては、標的物質との相互作用により特異的に結合する物質が挙げられる。標的物質と当該物質との相互作用には、例えば抗体−抗原、核酸−その相補配列を有する核酸、アプタマー−その標的分子、アビジン−ビオチン、又はレクチン−糖鎖等の相互作用が含まれ（これらに限定はされない）、標的物質に応じて適当な物質を選択することができる。例えば、「標的物質と特異的に結合することが可能な物質」として、標的物質と特異的に結合することが可能な抗体（ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＡ等）やその断片、あるいは標的物質が抗体やその断片である場合には、その抗原やその断片を利用することができる。好ましくは、標的物質と捕捉手段Ｉとの結合を妨げないものを選択する。
【００３３】
「標識となる物質」としては例えば、金属コロイド（例えば、金、銀、銅、白金等）粒子、着色されたラテックス粒子、色素を包含するシリカナノ粒子、色素、酵素（ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルシフェラーゼ等）、低分子化合物（例えば、ビオチン、ジゴキシゲニン、ＦＩＴＣ等）等を利用することができる。標識となる物質は、標識物質と結合した標的物質の移動や捕捉手段Ｉとの結合を妨げるものではなく、検出の際に明瞭に検出できるものであればよく、特に限定はされない。好ましくは、着色されたラテックス粒子、色素を包含するシリカナノ粒子や色素等、検出に際して更なる処理を要することなく目視で検出の有無を確認できるものが好ましい。このような標識となる物質としては、例えば粒径がおよそ５００ｎｍ以下、好ましく１０ｎｍ以上、１００ｎｍ以下の大きさのものを利用することができる。
【００３４】
標識部位は、捕捉手段Ｉよりも上流に、すなわち標的物質が捕捉手段Ｉに到達するまでのいずれかの位置に含めることができる。例えば、図１のクロマト分析用ストリップにおいて、標識部位はサンプルパッド（３）中に含めてもよいし、捕捉手段Ｉ（５）が配置・固定されるのと同じ固相担体（３）中に含めてもよい。あるいは、サンプルパッド（２）及び固相担体（３）とは別の固相担体を準備し、これに標識物質を含めて標識部位とし、サンプルパッド（２）と固相担体（３）との間のいずれかの位置に配置してもよい。
【００３５】
試料中の標的物質は、標識部位を通過する際に標識物質と接触及び相互作用により結合する。これにより、標的物質は標識物質により標識される。
【００３６】
標識物質はインクジェット法、印刷法、スプレー塗布法、含侵法等を用いてサンプルパッド又は固相担体中に含めることができる。標識物質は特定の領域に限局して配置・固定されていてもよいし、限局されていなくてもよい。
【００３７】
２．試料中の標的物質の検出方法
本発明に係る試料中の標的物質の検出方法は、以下の工程：
試料を捕捉手段ＩＩと接触させ、当該試料中の偽陽性原因因子を捕捉手段ＩＩにて捕捉する工程、
次いで、試料を捕捉手段Ｉと接触させ、当該試料中の標的物質を捕捉手段Ｉにて捕捉する工程、
次いで、捕捉手段Ｉにて捕捉された標的物質を検出する工程、
を含む。
【００３８】
本方法は上記本発明に係るクロマト分析用ストリップを用いて行うことができる。
【００３９】
本発明において「試料」とは、標的物質を含み得る任意のものを利用することができ、例えば、被験者の組織、細胞、体液（血液、血清、血漿、リンパ液、髄液、尿、精液、唾液、汗、涙、腹水、羊水等）、粘膜や粘液、便等が挙げられるが、これらに限定はされない。試料は、標的物質が抽出、精製、又は粗精製され得る処理に付されたものであってもよい。
【００４０】
試料はそのままサンプルパッドに滴下してもよいし、適当な緩衝液（又は展開液）中に希釈、又は懸濁されたものを用いてもよい。緩衝液（又は展開液）としては精製水、生理食塩水、リン酸緩衝液、Ｔｒｉｓ緩衝液、グッド緩衝液、ＳＳＣ緩衝液等を利用することができる。緩衝液（又は展開液）には必要に応じて、界面活性剤（非イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤等）、タンパク質成分（ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、カゼイン等）、変性剤（尿素、グアニジン塩酸、チオシアン酸塩等）等を含めることができる。
【００４１】
また、クロマト分析用ストリップが上記標識物質を含む標識部位を備えない場合には、緩衝液（又は展開液）中に標識物質を含めることができる。これにより試料中の標的物質は、標識物質と接触及び相互作用により結合し、標識物質により標識することができる。
【００４２】
サンプルパッドに滴下された試料はサンプルパッドから固相担体に、次いで固相担体から吸収パッドに向かって毛細管現象により展開する。
【００４３】
クロマト分析用ストリップが上記標識物質を含む標識部位を備える場合には、試料が標識部位を通過する際に、標的物質は標識物質と接触及び相互作用により結合する。これにより、標的物質は標識物質により標識される。
【００４４】
試料が捕捉手段ＩＩを通過する際に、偽陽性原因因子は捕捉手段ＩＩと接触及び相互作用により結合する。これにより、偽陽性原因因子は捕捉手段ＩＩにより捕捉されるために、試料中に含まれる偽陽性原因因子が低減又は除去される。
【００４５】
次いで、試料が捕捉手段Ｉを通過する際に、標的物質は捕捉手段Ｉと接触及び相互作用により結合・捕捉される。
【００４６】
捕捉手段Ｉにて捕捉された標的物質の検出は、用いた標識となる物質に応じた手法により標識物質を検出することによって行うことができる。用いた標識となる物質が目視確認できるものであれば、標識物質に起因して捕捉手段Ｉの領域が呈色する。当該標識物質の捕捉手段Ｉの領域における検出の有無を指標にして、試料中の標的物質の有無を判別することができる。
【００４７】
３．標的物質の検出キット
本発明に係る標的物質の検出キットは、上記のクロマト分析用ストリップを含み、さらに、試料を希釈、又は懸濁するために用いられる上記緩衝液（又は展開液）、緩衝液中に含め試料と共にサンプルパッドに滴下される上記標識物質、標識物質を検出するための試薬等を適宜含めることができる。
【００４８】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。但し、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４９】
実施例１：クロマト分析用ストリップの作製
ニトロセルロースメンブレン（メルクミリポア社製）を固相担体とし、その上に標的物質（インフルエンザＡ型）を捕捉・検出するための捕捉手段Ｉとして抗インフルエンザＡ型マウスモノクローナル抗体（ＩｇＧ１）（株式会社特殊免疫研究所社製）を２ｍｇ／ｍＬの用量にてライン状に塗布した。また、用いるクロマト分析用ストリップにおける捕捉手段ＩＩの要否に応じて、偽陽性原因因子（ＨＡＭＡ）を捕捉・検出するための捕捉手段ＩＩとしてマウスモノクローナル抗体（ＩｇＧ１）（株式会社特殊免疫研究所社製）を２ｍｇ／ｍＬの用量にて、捕捉手段Ｉの上流にライン状に塗布した。さらに、実験操作のポジティブコントロール（ＰＣ）として、抗マウスＩｇＧ＆ＩｇＭヤギ抗体（株式会社特殊免疫研究所社製）を３ｍｇ／ｍＬの用量にて、捕捉手段Ｉの下流にライン状に塗布した。
【００５０】
次いで、得られた固相担体を５０℃で３０分間乾燥させ、捕捉手段を備えた固相担体を得た。グラスファイバー製のサンプルパッド（日本ポール社製）及びセルロース製の吸収パッド（ワットマン社製）を、図１に示すように互いに重なり合わせて貼り合わせ、ラテラルフロー型クロマト分析用ストリップを作製した。
【００５１】
実施例２：標的物質の検出
ＰＢＳ（１％ＢＳＡ加）にＨＡＭＡ（０．２５ｍｇ／ｍＬ）（株式会社特殊免疫研究所社製）及び／又はインフルエンザＡ型抗原（２μｇ／ｍＬ）（ＨｙＴｅｓ  Ｌｔｄ．社製）を添加して試料とした。コントロール試料としてＰＢＳ（１％ＢＳＡ）を用いた。
【００５２】
実施例１で作製したクロマト分析用ストリップのサンプルパッドに、試料（８０μＬ）を添加し、室温にて８分間展開した。
【００５３】
次いで、固相担体上にライン状に固定された各捕捉手段及びポジティブコントロール（ＰＣ）における結合の有無を確認した。各ラインの検出は、捕捉手段Ｉに固定されている抗インフルエンザＡ抗原マウスモノクローナル抗体とは異なる部位で標的物質と結合する抗インフルエンザウイルスＡ抗原マウスモノクローナル抗体に赤色ラテックスビーズ（メルクミリポア社製）を結合させてなる抗体−カラーラテックスコンジュゲート（標識物質）を用いて行った。
結果を図３に示す
【００５４】
ＨＡＭＡのみを含む試料を、捕捉手段Ｉのみを備え、捕捉手段ＩＩを備えないクロマト分析用ストリップに滴下した場合、インフルエンザＡ型抗原を含まないにも関わらず捕捉手段Ｉにてラインが検出され、偽陽性が確認された（レーン３）。
【００５５】
一方、ＨＡＭＡのみを含む試料を、捕捉手段Ｉとともに捕捉手段ＩＩを備えるクロマト分析用ストリップに滴下した場合、捕捉手段Ｉにてラインは検出されず、偽陽性は確認されなかった（レーン２）。
【００５６】
以上の結果より、捕捉手段ＩＩを備える本発明のクロマト分析用ストリップによれば、偽陽性原因因子による偽陽性の判定を回避することができ、試料中の標的物質（ここではインフルエンザＡ型抗原）の有無を正確に判断することができることが確認された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2017120193.tif 000004