(57)【要約】【課題】  核酸クロマト法を行うにあたって、コンタミネーションを抑制すると共に、検出に用いる標的核酸を含むＰＣＲ反応液量を低減させ、検出精度を向上させることを可能とする。【解決手段】  遺伝子検査用のストリップ４を保持し、該ストリップにより標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具であって、ＰＣＲ用のチューブ５を挿入可能な第一の注入口１１１とクロマトグラフィー展開液を注入するための第二の注入口１１２とを備えた注入部１１、ストリップの検出領域を覆う展開部１２、チューブを切開する切開手段３を支持する切開手段支持部２１、及び、ストリップを保持するためのストリップ保持部２２を有する核酸クロマトグラフィー検査器具により核酸クロマト法を行う。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子検査用のストリップを保持し、該ストリップにより標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具であって、
ＰＣＲ用のチューブを挿入可能な第一の注入口とクロマトグラフィー展開液を注入するための第二の注入口とを備えた注入部、前記ストリップの検出領域を覆う展開部、前記チューブを切開する切開手段を支持する切開手段支持部、及び、前記ストリップを保持するためのストリップ保持部を有する
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項２】
前記注入部、及び、前記展開部を有する本体部と、
前記切開手段支持部、及び、前記ストリップ保持部を有し、かつ、前記本体部と嵌合する底蓋と、を備えた
ことを特徴とする請求項１記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項３】
前記第一の注入口と前記第二の注入口が、前記ストリップの展開開始領域の上方に、前記ストリップの長手方向に並んで備えられたことを特徴とする請求項１又は２記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項４】
前記切開手段の少なくとも一部が、前記第一の注入口の中に配置されるように前記切開手段支持部が備えられたことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項５】
少なくとも前記展開部及び／又は前記ストリップ保持部が透明部材からなることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項６】
前記切開手段が、前記第一の注入口に挿入された前記チューブを切開する切開刃と、前記ストリップに接触するストリップ接触部を有することを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項７】
前記第一の注入口の水平断面の開口が、トラック形状となるように形成されたことを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項８】
前記ストリップ保持部が、前記ストリップを固定するための複数の突起部からなる位置決め柱を有することを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具が、前記ストリップの短手方向に複数個配置され、前記核酸クロマトグラフィー検査器具と同数個連結されてなる連結式チューブの各チューブを、それぞれ前記核酸クロマトグラフィー検査器具における前記第一の注入口に同時に挿入可能に連結されてなる
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具。
【請求項１０】
請求項１〜９のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具と、
少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、
少なくとも標識用色素及び緩衝液を含むクロマトグラフィー展開液と、を含む
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査用キット。
【請求項１１】
請求項１〜９のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第一の注入口に、標的核酸を含む反応液が封入された前記チューブを挿入して、前記切開手段により前記チューブを切開し、
前記チューブから反応液を前記ストリップに浸透させ、展開させることによって、反応液中の標的核酸を、前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズさせ、
所定時間の経過後、前記第二の注入口からクロマトグラフィー展開液を注入して、該展開液に含まれる標識用色素を、プローブにハイブリダイズした標的核酸に結合させる
ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸クロマトグラフィー技術に関し、特に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、核酸クロマト法を行うにあたっては、一般的に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて、標的核酸をストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズ（相補的に結合）させることによって、検出が行われていた。
具体的には、例えば、検査対象の試料からゲノムＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法などにより標的核酸を増幅して得られた増幅産物を含む反応液に遺伝子検査用ストリップを浸漬して、増幅産物をストリップに展開させてプローブとハイブリダイズさせ、プローブとハイブリダイズした増幅産物に結合する標識用色素を目視で確認することによって、標的核酸の検出が行われていた。
【０００３】
このとき、抽出したゲノムＤＮＡをＰＣＲ反応試薬と共にＰＣＲチューブに入れてＰＣＲを行った後、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をＰＣＲチューブに混合して、増幅産物の着色が行われていた。そして、図５に示すように、このＰＣＲチューブ内の反応液に遺伝子検査ストリップを浸漬して、反応液を毛細管現象によってストリップに展開させ、ストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物により示される着色されたラインを確認することが行われていた。
【０００４】
しかし、このような従来の方法では、増幅産物のストリップへの展開が、開放形で行われることから、コンタミネーションの虞があるという問題があった。
このようなコンタミネーションを抑制するための技術として、特許文献１に記載の分析物検出デバイスを挙げることができる。このデバイスによれば、準密閉系となるように構成されたデバイス内において、増幅産物をストリップに展開させることが可能とされている。
具体的には、液体サンプルが入った容器をデバイスの空洞に挿入することで、容器の下部が穿孔されて容器内のサンプルが放出されてストリップに到達し、展開されるようになっている。このようなデバイスは、上述した従来の核酸クロマト法のプロトコルを行う場合には、好適に用いることが可能である。
【０００５】
【特許文献１】特表２０１５−５１２２５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ところで、このようなデバイスを用いる方法では、ＰＣＲなどによる増幅産物を着色した後に、これをストリップに展開していることから、着色が不安定で検出精度が十分でない場合があるという問題があった。このため、ＰＣＲ反応液を比較的多く使用することが必要となり、ＰＣＲ反応試薬量が多量に必要になるという問題があった。
【０００７】
このような問題を解消する方法として、増幅産物を含むＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開し、プローブとハイブリダイズした増幅産物に対して着色を行うプロトコルを用いることが考えられる。このようなプロトコルによれば、先にプローブと増幅産物とのハイブリダイゼーションを行い、その後、標識用色素を増幅産物に結合させることができるため、ハイブリダイゼーションの精度をより向上でき、安定的な着色が行われて、検出精度を向上させることが可能となる。
しかしながら、上述した従来のデバイスは、ＰＣＲ反応液とクロマトグラフィー展開液を別々に展開する場合に適したものではなく、このようなプロトコルで使用することは、困難であった。
【０００８】
そこで、本発明者らは、鋭意研究して、核酸クロマト法を準密閉系で行うことが可能であり、かつ、ＰＣＲ反応液をストリップに展開させた後に、クロマトグラフィー展開液を別途ストリップに展開させることの可能な核酸クロマトグラフィー検査器具を開発し、本発明を完成させた。
すなわち、本発明は、コンタミネーションを抑制できると共に、検出に使用する標的核酸を含むＰＣＲ反応液量を低減でき、検出精度を向上させることの可能な核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題を解決するために、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具は、遺伝子検査用のストリップを保持し、該ストリップにより標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具であって、ＰＣＲ用のチューブを挿入可能な第一の注入口とクロマトグラフィー展開液を注入するための第二の注入口とを備えた注入部、前記ストリップの検出領域を覆う展開部、前記チューブを切開する切開手段を支持する切開手段支持部、及び、前記ストリップを保持するためのストリップ保持部を有する構成としてある。
【００１０】
また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査キットは、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具と、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、少なくとも標識用色素及び緩衝液を含むクロマトグラフィー展開液とを含む構成としてある。
【００１１】
また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具の前記第一の注入口に、標的核酸を含む反応液が封入された前記チューブを挿入して、前記切開手段により前記チューブを切開し、前記チューブから反応液を前記ストリップに浸透させ、展開させることによって、反応液中の標的核酸を、前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズさせ、所定時間の経過後、前記第二の注入口からクロマトグラフィー展開液を注入して、該展開液に含まれる標識用色素を、プローブにハイブリダイズした標的核酸に結合させる方法としてある。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、核酸クロマト法を行うにあたって、コンタミネーションを抑制できると共に、検出に使用する標的核酸を含むＰＣＲ反応液量を低減でき、さらに検出精度を向上させることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の外観を示す斜視図である。
【図２】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の平面図及び側面図である。
【図３】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の底蓋の平面図及び側面図である。
【図４】本発明の実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の切開手段の側面図である。
【図５】従来の核酸クロマト法においてＰＣＲチューブと遺伝子検査ストリップを使用するようすを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の好ましい実施形態について、図面を参照しつつ説明する。
まず、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法において適用する核酸クロマト法のプロトコルについて説明する。
核酸クロマト法は、標的核酸が遺伝子検査用のストリップ内を一定方向に移動（展開）することにより、ストリップにスポッティングされているプローブに補足されるとともに、プローブが固定化されたスポットにおいて標的核酸が濃縮されることで、その標的核酸に結合した標識用色素により目視できるレベルまでの発色を得て、標的核酸を検出するものである。
【００１５】
本実施形態において適用する核酸クロマト法のプロトコル（以下、本適用プロトコルと称する場合がある）では、まず、標的核酸の増幅処理をＰＣＲ法などによって行う。すなわち、このＰＣＲ法などによる増幅産物は、標的核酸からなる。
具体的には、検査対象生物のゲノムＤＮＡにおける標的核酸を増幅させるためのプライマーセットを含むＰＣＲ反応試薬をＰＣＲチューブへ注入する。プライマーセットとしては、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを用いることができ、複数の標的核酸を同時に増幅するマルチプレックスＰＣＲを行うこともできる。
また、ＰＣＲ反応試薬には、プライマーセットの他、核酸合成基質（例えば、ｄＮＴＰｍｉｘｔｕｒｅ（dCTP、dATP、dTTP、dGTP））、核酸合成酵素（例えば、ＥＸ  Ｔａｑ  ＨｏｔＳｔａｒｔ  ＤＮＡ  ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、緩衝液等が含まれる。
そして、ＰＣＲチューブには、このようなＰＣＲ反応試薬と、生体試料から抽出されたゲノムＤＮＡ、及び残りの成分として水を含む溶液が注入され、この溶液がＰＣＲに使用する反応液として用いられる。
【００１６】
ゲノムＤＮＡの抽出は、ＣＴＡＢ法（Cetyl  trimethyl  ammonium  bromide）による方法やＤＮＡ抽出装置を用いる方法など、一般的な手法により行うことができる。
また、ＰＣＲ装置としては、一般的なサーマルサイクラーなどを用いることができる。ＰＣＲ反応は、例えば以下のような反応条件で行うことができるが、適宜変更して実施可能であり、全体を１５〜３０分程度で行っても良い。
（ａ）９５℃  ２分、（ｂ）９５℃（ＤＮＡ変性工程）  １０秒、（ｃ）６０℃（アニーリング工程）  ２０秒、（ｄ）７２℃（ＤＮＡ合成工程）  ９０秒（（ｂ）〜（ｄ）を４０サイクル）、（ｅ）７２℃  ２分
【００１７】
次に、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）を含むＰＣＲ反応液を、遺伝子検査ストリップに展開させる。
遺伝子検査ストリップは、増幅産物を捕捉するためのプローブが固定化された細長の部材であり、溶液が毛細管現象によって部材全体に浸透し、展開しやすいように形成される。このため、ストリップの部材としてはセルロースメンブランなどのセルロース等が好適に用いられる。また、ストリップに強度を持たせて取り扱いを容易にするために、その一方の面に樹脂を接着したものを好適に用いることができる。
【００１８】
遺伝子検査ストリップは、一又は二以上のプローブが、ストリップの特定の位置において、ストリップの短手方向にライン状に固定化された検出領域と、ＰＣＲ反応液やクロマトグラフィー展開液を浸透させ（染み込ませ）、展開させ始める部分である展開開始領域とからなる。なお、展開開始領域がストリップにおけるごく僅かな部分である場合もあり得る。
【００１９】
検出領域には、プローブが固定化された一又は二以上の領域（スポット）がストリップの短手方向にライン状に形成（スポッティング）されている。このプローブが固定化されたラインの数は、特に限定されず、例えば８〜１２個等のラインが形成されたものなどを好適に用いることができる。
このようなライン状に固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物に対して、例えば青色の標識用色素が結合すると、ストリップの検出領域上において、青色のラインを目視によって検出できる。また、検出領域には、プローブが固定化されたラインの位置を明確に確認できるようにするために、その他の色のライン、例えば赤色のラインが、位置決めマーカーとして好適に配置される。標識用色素は、特に限定されないが、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものを好適に用いることができる。
【００２０】
展開開始領域は、ＰＣＲ反応液とクロマトグラフィー展開液を最初に染み込ませる部分である。展開開始領域は、検出領域に隣接して連続して形成されており、展開開始領域に染み込んだ液体は、毛細管現象によって検出領域へ展開する。
また、液体をストリップに染み込み易くさせるため、吸水促進領域を展開開始領域と反対側の検出領域に隣接して連続して形成することも好ましい。吸水促進領域は、例えばストリップ上に吸水パッドやセルロース等の部材を積層して構成でき、このような吸水部材によってストリップに展開した水分の吸水を促進させることができる。また、このようにストリップに部材を積層して厚みを増加させた領域を形成することによって、ストリップをより取り扱い易くすることができる。
【００２１】
このような遺伝子検査ストリップにおける展開開始領域に対して、まずＰＣＲ反応液を染み込ませる。ＰＣＲ反応液は、展開開始領域から検出領域へ展開する。そして、検出領域に固定化されたプローブと相補的な塩基配列を有する増幅産物がＰＣＲ反応液に含まれている場合、そのプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
また、複数種類のプローブがストリップ上に個別にライン状に固定化され、各プローブにそれぞれハイブリダイズする増幅産物がマルチプレックスＰＣＲにより得られてＰＣＲ反応液に含まれている場合も同様に、それぞれ対応するプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
【００２２】
次に、遺伝子検査ストリップの展開開始領域に対して、クロマトグラフィー展開液を染み込ませる。
クロマトグラフィー展開液は、ＰＣＲ反応液が検出領域又は吸水促進領域まで十分に展開した後に染みこませることが望ましい。これにより、クロマトグラフィー展開液を検出領域へ十分に染みこませることが可能となる。クロマトグラフィー展開液を展開開始領域へ染み込ませるのは、ＰＣＲ反応液が検出領域へ展開した後、例えば５〜１０分程度経過した後に、行うことが好ましい。
【００２３】
クロマトグラフィー展開液には、少なくとも標識用色素（着色ビーズ、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものなど）と緩衝液が含まれる。この標識用色素は、増幅産物と結合することができる。展開液は、展開開始領域から検出領域へ展開する。そして、展開液に含まれる標識用色素がプローブとハイブリダイズした増幅産物と結合することによって、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。
このように、ストリップ上の着色されたラインを確認することによって、標的核酸を検出することができる。
【００２４】
このような核酸クロマト法のプロトコルによれば、増幅産物を含むＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開して、プローブとハイブリダイズした増幅産物に対して着色を行うことができる。このため、着色されたラインを安定的に得ることができ、検出精度を向上させることが可能となる。
その理由は、本適用プロトコルでは、先にプローブと増幅産物とのハイブリダイゼーションを行い、その後、標識用色素を増幅産物に結合させるため、ハイブリダイゼーションよりも先に標識用色素を増幅産物に結合させた場合に想定されるハイブリダイゼーションの立体障害が抑制され、ハイブリダイゼーションの精度をより向上できるためであると考えられる。
【００２５】
次に、図１を参照して、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の概略について説明する。図１は、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の斜視図を示している。
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、同図に示すように、ＰＣＲチューブ５を挿入可能な第一の注入口１１１、及び、クロマトグラフィー展開液を注入するための第二の注入口１１２を備えた注入部１１と、遺伝子検査ストリップ４における検出領域を覆う展開部１２と、ＰＣＲチューブ５を切開する切開手段３を支持する切開手段支持部２１と、遺伝子検査ストリップ４を保持するためのストリップ保持部２２を有している。
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、注入部１１及び展開部１２を有する本体部１と、切開手段支持部２１及びストリップ保持部２２を有し、かつ、本体部１と嵌合する底蓋２とを備えた構成とすることも好ましい。
【００２６】
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、本体部１と、底蓋２とを別体に構成するのではなく、一体成形によって形成することも好ましい。
この場合、該検査器具のいずれかの壁面において、遺伝子検査ストリップ４を挿入可能なスリットを設けることが好ましい。スリットは、例えば該検査器具の４つの側壁のいずれかに設けることができる。そして、遺伝子検査ストリップ４は、スリットを介して該検査器具の内部に差し込まれて、ストリップ保持部２２に配置される。図１は、このような核酸クロマトグラフィー検査器具を示している。
【００２７】
このように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具では、ＰＣＲチューブ５を挿入可能な第一の注入口１１１と、クロマトグラフィー展開液を注入するための第二の注入口１１２とが、別個に構成されている。このため、上述したＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開する本適用プロトコルを好適に行うことが可能となっている。
【００２８】
また、第一の注入口１１１と第二の注入口１１２は、遺伝子検査ストリップ４における展開開始領域の上方に、該ストリップの長手方向に並んで形成されている。このため、第一の注入口１１１からＰＣＲチューブ５を挿入し、ＰＣＲチューブ５を切開手段３により切開することで、ＰＣＲチューブ５から反応液をストリップに染み込ませ、展開させることができると共に、その後、第二の注入口１１２からピペットなどを用いてクロマトグラフィー展開液を注入することで、標識用色素をストリップに染み込ませて展開させ、先に展開されてプローブにハイブリダイズしている増幅産物に標識用色素を結合させることができる。このため、本実施形態に適用する上記プロトコルを好適に行うことが可能になっている。
【００２９】
なお、第一の注入口１１１と第二の注入口１１２の並び順は、図１に限定されず、これらを入れ替えた配置にしても良い。
また、第一の注入口１１１と第二の注入口１１２をこのように遺伝子検査ストリップ４の長手方向に並んで形成することによって、後述する連結式ＰＣＲチューブに対応した、連結型核酸クロマトグラフィー検査器具を構成するために適したものにすることも可能となる。
【００３０】
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具において、遺伝子検査ストリップ４の検出領域は、目視によって容易に確認可能にすることが好ましい。このため、遺伝子検査ストリップ４における検出領域を覆う展開部１２か、又は、遺伝子検査ストリップ４を保持するためのストリップ保持部２２の少なくともいずれかを透明部材からなるものとすることが好ましい。勿論、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具における注入部１１、展開部１２、切開手段支持部２１、及びストリップ保持部２２の全てを透明部材からなるものとすることもできる。このような透明部材としては、例えばポリスチレンやポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）などのアクリル樹脂等を好適に用いることができる。
【００３１】
このような本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具によれば、一般的な遺伝子検査ストリップ４やＰＣＲチューブ５を用いて、核酸クロマト法を上述した本適用プロトコルで行うことができ、より高い精度で実施することが可能となる。
【００３２】
次に、図２〜４を参照して、本体部１と、底蓋２とを別体に構成した核酸クロマトグラフィー検査器具について、詳細に説明する。図２は、本実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の平面図及び側面図であり、図３は、同検査器具の底蓋の平面図及び側面図であり、図４は、同検査器具の切開手段の側面図である。
【００３３】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、図２に示すように、第一の注入口１１１及び第二の注入口１１２を備えた注入部１１並びに展開部１２を有する本体部１と、ＰＣＲチューブ５を切開する切開手段３を支持する切開手段支持部２１及び遺伝子検査ストリップ４を保持するためのストリップ保持部２２を有し、かつ、本体部１と嵌合する底蓋２とを備えている。
また、切開手段支持部２１は、切開手段３の少なくとも一部が、第一の注入口１１１の中に配置されるように備えられている。
【００３４】
ＰＣＲチューブ５の内部には、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）が充填されている。ＰＣＲチューブ５は、ＰＣＲを行った後、蓋を開けることなく、そのまま第一の注入口１１１に押し込まれる。
このとき、ＰＣＲチューブ５は、切開手段３により切断あるいは穿孔、切開等されて、ＰＣＲチューブ５の底部や側面等において割れ目や開口が生じる。そして、ＰＣＲチューブ５内の反応液は、遺伝子検査ストリップ４へと流れ込む。これにより、ＰＣＲ反応液が遺伝子検査ストリップ４に染み込んで、展開していく。
【００３５】
このように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、ＰＣＲチューブ５の蓋を開けることなく、その底部や側面等に割れ目を入れることなどによって、反応液をストリップに展開させることができる。このとき、該検査器具は、ＰＣＲチューブ５を第一の注入口１１１に挿入することで、第一の注入口１１１の開口が閉塞され、第二の注入口１１２のみが開口する、準密閉系となっている。このため、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具によれは、コンタミネーションのリスクを低減することが可能になっている。
また、第二の注入口１１２の開口の大きさを、第一の注入口１１１の開口の大きさよりも小さくすることが好ましい。これによって、コンタミネーションのリスクをより低減することが可能となる。
【００３６】
第一の注入口１１１の形状は、特に限定されないが、例えば下細りの略円錐柱や略楕円錐柱等に形成することができ、第一の注入口１１１の水平面の開口は、例えば真円になるように形成することできる。同様に、第二の注入口１１２の形状も、特に限定されず、例えば下細りの略円錐柱などに形成することができ、第二の注入口１１２の水平面の開口は、例えば真円になるように形成することできる。
【００３７】
また、第一の注入口１１１の中心軸が、鉛直方向に対して斜めになるように、第一の注入口１１１を形成することもできる。例えば、該中心軸を遺伝子検査ストリップ４の長手方向で検出領域に対して反対側に傾けて第一の注入口１１１を形成し、この傾けた第一の注入口１１１にＰＣＲチューブ５を斜めに挿入するようにして、切開手段３によるＰＣＲチューブ５の切開位置を適宜調整しても良い。
なお、第二の注入口１１２の中心軸についても同様に、鉛直方向に対して斜めになるように、第二の注入口１１２を形成することも可能である。
【００３８】
また、第一の注入口１１１の水平面の開口は、トラック形状（陸上競技のトラックに類似する形状）となるように形成することが好ましく、例えば、対向する直線状の２辺と対向する２つの半円とからなる形状（第一の形状）とすることが好ましい。また、このトラック形状には、対向する直線状の２辺と対向する内側に凸状の２つの半円とからなる形状（第二の形状）が含まれていても良い。
【００３９】
第一の注入口１１１をこのように形成すると、ＰＣＲチューブ５を押し込んで切開手段３によって切開するときに、ＰＣＲチューブ５を第一の注入口１１１内に押し込むにつれて、ＰＣＲチューブ５が、直線状の２辺側の面（上記第一の形状の場合）、あるいは、内側に凸状の２つの半円側の面（上記第二の形状の場合）によって圧縮され、切開して生じた割れ目をより大きく開くことができ、反応液をＰＣＲチューブ５から外へ流れ出易くすることが可能となる。
【００４０】
また、第一の注入口１１１と第二の注入口１１２は、その形状や大きさ、高さ等を異なるものとすることも好ましい。第一の注入口１１１と第二の注入口１１２をこのように異なる形態にすることにより、例えば第二の注入口１１２をＰＣＲチューブ５が挿入できない大きさにして、ＰＣＲチューブ５の誤挿入を防止することなどが可能となる。
【００４１】
なお、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具において、第一の注入口１１１及び／又は第二の注入口１１２にアルミシールを貼付して、使用に際してこれを剥がすようにすることもできる。
【００４２】
ストリップ保持部２２には、図３に示すように、遺伝子検査ストリップ４を固定するための複数の突起部からなる位置決め柱２２１を形成することが好ましい。その個数は特に限定されないが、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具内で遺伝子検査ストリップ４が移動しないように、底蓋２上に対向して複数を設けることが好ましい。同図の例では、６セット１２個の位置決め柱２２１が形成されている。
【００４３】
切開手段３は、第一の注入口１１１内でＰＣＲチューブ５を切開可能なものであれば良く、特に限定されない。切開手段３として、例えば、金属刃、金属針、プラスチック刃、プラスチック針等を用いることができる。また、プラスチックによって形成する場合には、切開手段支持部２１と一体成形することも好ましい。
【００４４】
切開手段３として、金属刃やプラスチック刃等の刃物を用いる場合には、例えば、図４に示すように、第一の注入口１１１に挿入されたＰＣＲチューブ５を切開する切開刃３１と、遺伝子検査ストリップ４に接触するストリップ接触部３２を有するものとすることが好ましい。
このように金属刃などにストリップ接触部３２を設けると、切開されたＰＣＲチューブ５から流れ出たＰＣＲ反応液が、このストリップ接触部３２を介して遺伝子検査ストリップ４に移動でき、該ストリップに染み込み易くすることができるため、該ストリップへの展開をより確実に行うことが可能となる。
【００４５】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具において、注入部１１は略直方体状に形成され、展開部１２は内部に遺伝子検査ストリップ４を保持できる程度の薄厚かつ長尺に形成されている。注入部１１と展開部１２をこのように形成することで、該検査器具の容積を小さくすることができる。ただし、注入部１１と展開部１２の形状はこれらに限定されるものではなく、注入部１１を例えば略楕円柱状に形成したり、あるいは展開部１２をより厚く形成したりすることも可能である。
【００４６】
次に、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具を複数連結した構成の検査器具について説明する。
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具が、遺伝子検査ストリップ４の短手方向に複数個結合した状態で配置され、核酸クロマトグラフィー検査器具と同数個連結されてなる連結式チューブの各チューブを、それぞれ核酸クロマトグラフィー検査器具における第一の注入口１１１に同時に挿入可能に連結されていることを特徴とする。
【００４７】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具を短手方向に例えば８個連結して形成したものとすることが好ましい。このような連結型核酸クロマトグラフィー検査器具を用いれば、一般的に使用されている８連式のＰＣＲチューブを用いて８つのＰＣＲを同時に実行し、それぞれのＰＣＲ反応液について標的核酸の検出を同時に行うことが可能となる。
【００４８】
このように、連結型核酸クロマトグラフィー検査器具によれば、複数の検査を行う場合の処理の手間を低減でき、検体の取り違えなどが生じるリスクを低減することが可能となる。また、このような複数処理によれば、コスト削減に寄与することも可能となる。
なお、連結する核酸クロマトグラフィー検査器具の個数は８個に限定されず、４個や１２個など、その他の個数にすることができることは言うまでもない。
【００４９】
以上説明したように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具によれば、従来の開放形の核酸クロマト法に比較して、ＰＣＲ反応液の飛散などによるコンタミネーションのリスクを低減でき、またＰＣＲ反応液の揮発などによる検出精度の不安定性を解消することが可能となる。
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具によれば、上述した従来の準密閉系のデバイスに比較して、ＰＣＲ反応液をストリップに展開させた後に、クロマトグラフィー展開液をストリップに展開させるという本適用プロトコルに適したものにすることができ、検出精度をより向上させることが可能となっている。
さらに、連結型核酸クロマトグラフィー検査器具とすることによって、処理の手間や検体の取り違えなどが生じるリスクを低減することができ、さらにコスト削減に寄与することも可能となる。
【００５０】
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査キットとしては、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具と、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、少なくとも標識用色素及び緩衝液を含むクロマトグラフィー展開液とを含むものとすることが好ましい。
【００５１】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査キットをこのような構成にすれば、ＰＣＲを容易に実行して、ＰＣＲ反応液をストリップに展開させ、その後にクロマトグラフィー展開液をストリップに展開させることができる。このため、プローブとハイブリダイズした増幅産物に対して着色を行うことができ、検出精度を向上させることが可能となる。
【００５２】
また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法としては、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具の第一の注入口１１１に、標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲチューブ５を挿入して、切開手段３によりＰＣＲチューブ５を切開し、ＰＣＲチューブ５から反応液を遺伝子検査ストリップ４に浸透させ、展開させることによって、反応液中の標的核酸を、遺伝子検査ストリップ４に固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズさせ、所定時間の経過後、第二の注入口１１２からクロマトグラフィー展開液を注入して、該展開液に含まれる標識用色素を、プローブにハイブリダイズした標的核酸に結合させる方法とすることが好ましい。
【００５３】
本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法をこのような構成にすれば、準密閉系の核酸クロマトグラフィー検査器具を用いて、最初にＰＣＲチューブからＰＣＲ反応液をストリップに容易に展開させることができる。そして、その後に、クロマトグラフィー展開液を注入することで、これをストリップに展開させることができる。
このため、先に増幅産物をストリップ上のプローブにハイブリダイズさせた後に、この増幅産物に標識用色素を結合させ、この標識用色素によって示される着色されたラインを視認することで標的核酸を検出することができる。したがって、ハイブリダイゼーションの精度をより向上でき、安定的な着色が行われて、検出精度を向上させることが可能となる。
【００５４】
以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることは言うまでもない。
例えば、一個の核酸クロマトグラフィー検査器具内に複数の遺伝子検査ストリップを保持可能にして、それぞれに対応する第一の注入口と第二の注入口を備えた検査器具にするなど適宜変更することが可能である。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明は、核酸クロマト法を行うにあたって、コンタミネーションを抑制し、かつ検出精度を向上させるために、好適に利用することが可能である。
【符号の説明】
【００５６】
１  本体部
１１  注入部
１１１  第一の注入口
１１２  第二の注入口
１２  展開部
２  底蓋
２１  切開手段支持部
２２  ストリップ保持部
２２１  位置決め柱
３  切開手段
３１  切開刃
３２  ストリップ接触部
４  遺伝子検査ストリップ
５  ＰＣＲチューブ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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