(57)【要約】【課題】低刺激性でかつ使用感の高い化粧料組成物、美白化粧料、細胞賦活化粧料、および、保湿化粧料を提供すること。【解決手段】水性基材に３ＨＢ（３ヒドロキシ酪酸）を含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
水性基材に３ＨＢ（３ヒドロキシ酪酸）を含有する化粧料組成物。
【請求項２】
ｐＨ４〜６である請求項１に記載の化粧料組成物。
【請求項３】
請求項１または２に記載の化粧料組成物を含有するとともに、前記３ＨＢを水性基材に０．１％以上１０％以下含有する美白化粧料。
【請求項４】
請求項１または２に記載の化粧料組成物を含有するとともに、前記３ＨＢを水性基材に０．１％以上１０％以下含有する細胞賦活化粧料。
【請求項５】
請求項１または２に記載の化粧料組成物を含有するとともに、前記３ＨＢを水性基材に３％以上１０％以下含有する保湿化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧料組成物に関し、その化粧料組成物を含有する美白化粧料、細胞賦活化粧料、および、保湿化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、乳液、クリーム、化粧水、パック、分散液、洗浄料等の化粧品や、軟膏剤、クリーム剤、外用液剤等の外用医薬品（以下化粧料と総称する）には、肌への刺激低減、使用感の向上を目的として保湿剤等の添加剤が加えられている場合が多い。また、化粧料の付加価値を高めるために、美白成分や、細胞賦活成分が添加されることもある。
色素沈着によって皮膚が黒くなるのはメラニンによるものである。メラニンは、表皮に存在する色素細胞の中に存在するメラニン生成酵素チロシナーゼが紫外線などの刺激によって生じる酸化ストレスによって活性化されることにより生成する。よって、色素沈着が少ないより白い肌になるためには、メラニンの生成を抑え、皮膚中のメラニンの排出を促す必要がある。メラニン生成の抑制は紫外線等の外部刺激から肌を守ることや、メラニンの生成を抑える化粧品（美白化粧品）を用いる方法が一般的である。そして、メラニンを老廃物として排出するために表皮細胞の正常なターンオーバーが必要である。美白化粧品であることを公にうたうためには、厚生労働省に認められた美白有効成分が配合されている必要がある。美白有効成分には、主にアルブチン、コウジ酸が挙げられる。その他ビタミンＣ誘導体、ルシノール、トラネキサム酸など十数種類がある（非特許文献１参照）。多くの美白有効成分は、メラニンの生成に重要なチロシナーゼと呼ばれる酵素に、直接的あるいは間接的に働きかけ、メラニン生成を抑える働きがあるとされる。
刺激となる酸化ストレスを軽減するのに有効な抗酸化剤としては生体内にすでに存在しているスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシダーゼに代表される抗酸化系酵素群、トランスフェリンなどに代表される金属キレート剤がある。そのほか生体由来抗酸化成分としてグルタチオン、また亜鉛、カドミウム、銅、銀、金などの重金属によって生体内で合成されるメタロチオネインやチオレドキシンがある。メタロチオネインはスーパーオキシドを、チオレドキシンは生体内において過酸化水素を消去する可能性が考えられている。また、哺乳類における含硫アミノ酸代謝過程に存在するチオタウリンは、一重項酸素捕捉作用があることが報告されている。
ラジカル捕捉型抗酸化剤として働く物質としては、抗酸化ビタミン類のビタミンＣ、ビタミンＥ、カロテノイドがある。代表的なラジカル捕捉型抗酸化剤であるビタミンＣあるいはアスコルビン酸（ＡｓＡ）は壊血病の予防に関与したビタミンとして古くから知られてきた。ＡｓＡが内在性の水溶性抗酸化剤として活性酸素、フリーラジカルの消去に優れた作用をもつことが明らかにされている。アスコルビン酸は生体内で生じたラジカルの終末的な抗酸化剤として働くと考えられている。また、１９２２年に発見されたビタミンＥは代表的な脂溶性抗酸化剤であり、ビタミンＥにはα−，β−，γ−，δ−トコフェロールとトコトリエノールの８種類がある。このうちα−トコフェロールがもっとも生理活性が高いことがわかっている。ビタミンＥはフリーラジカルを、みずからがビタミンＥラジカルになることで消去する。ビタミンＥラジカルは二量体をつくることにより、フリーラジカルを完全に消去する。ビタミンＣは、抗酸化剤として働いたビタミンＥを再生するので、ビタミンＥとビタミンＣは相乗的な抗酸化作用を示すことが明らかになっている。
例えば、主な添加剤としての保湿剤の役割は肌や毛髪からの水分蒸発をセーブして乾燥を防いだり、化粧品から水分が失われるのを防いで品質を保ったりすることである。保湿剤として化粧品にもっとも多く使われているのは多価アルコール類であり、古くから利用されているものにグリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトールなどがある。多価アルコールのほかにはＮＭＦ（ｎａｔｕｒａｌ  ｍｏｉｓｔｕｒｉｎｇ  ｆａｃｔｏｒ／天然保湿因子）の成分である乳酸塩、尿素やヒアルロン酸ナトリウムが用いられている（たとえば特許文献１に乳酸塩が、特許文献２にヒアルロン酸塩、尿素が例示されている。）。
【０００３】
特に近年、安価でかつ、肌の角質層に天然に存在するという理由から、乳酸塩が添加剤として多く用いられるようになってきた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特表２００９−５１７４２９号公報
【特許文献２】特開平０９−２９１０１１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】厚生省医薬安全局審査研究会  「医薬部外品原料規格２００６」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明は上記実状に鑑み、低刺激性でかつ使用感の良い化粧料組成物、美白化粧料、細胞賦活化粧料、および、保湿化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するための本発明の化粧料組成物は、水性基材に３ＨＢ（３ヒドロキシ酪酸）を含有することを特徴とする。
また、本発明の美白化粧料の特徴構成は、上記化粧料組成物を含有するとともに、前記３ＨＢを前記水性基材に対して０．１％以上１０％以下含有する点にあり、
細胞賦活化粧料の特徴構成は、上記化粧料組成物を含有するとともに、前記３ＨＢを前記水性基材に対して０．１％以上１０％以下含有する点にあり、
保湿化粧料の特徴構成は、上記化粧料組成物を含有するとともに、前記３ＨＢを前記水性基材に対して３％以上１０％以下含有する点にある。
【０００８】
本発明者らは、３ＨＢ（（Ｒ）−３−ヒドロキシ酪酸）はｐＫａが５．７と高く、肌への刺激性もないことから、肌の自然の状態である弱酸性状態でも利用することができることに着眼し、鋭意研究の結果、３ＨＢには、乳酸の６０％程度の保湿作用があること、加えて美白効果、細胞賦活効果もあることを発見した。そのため、３ＨＢを化粧料組成物として用いることで、ｐＨ５〜６の弱酸性で美白効果、細胞賦活効果、保湿効果のある美白化粧料、細胞賦活化粧料、保湿化粧料を、化粧品材料、外用医薬品材料として提供できる。
【０００９】
また、美白化粧料としては、前記３ＨＢを前記水性基材に対して０．１％以上１０％以下含有することができ、この場合、３ＨＢの高い美白効果が発揮されることを実験的に確認している。
【００１０】
また、細胞賦活化粧料としては、前記３ＨＢを前記水性基材に対して０．１％以上１０％以下含有することができ、この場合、３ＨＢの高い細胞賦活効果が発揮されることを実験的に確認している。
【００１１】
また、保湿化粧料としては、前記３ＨＢを水性基材に対して３％以上１０％以下含有することもでき、この場合、同濃度の乳酸の６０〜８０％程度の保湿力を発揮することを実験的に明らかにしており、従来保湿剤として乳酸あるいは乳酸塩の用いられていた化粧料組成物に対して、その代替成分として用いることができる。
【００１２】
なお、３ＨＢは遊離酸か、種々の塩として用いてもよい。この場合３ＨＢは、ｐＨ４〜６の弱酸性で用いることができる。これは、従来化粧料組成物として用いられている乳酸がｐＫａが３．８と低く肌への刺激性が強いのに対して、低刺激性である。また、乳酸はアルカリ性にしてナトリウム塩としなければ利用できないという問題があったのに対し、人の肌は弱酸性であるため、アルカリ性の乳酸塩等は肌に対する使用感が悪いという問題があったが、３ＨＢによると、よりマイルドな使用感（しっとり感がある等）となっている。
【００１３】
なお、本発明に言う水性基材とは、水を中心として水溶性の原料を主材に、各種有効成分を溶解可能にする基礎材料（液、クリーム、ペースト）を指し、本願で「材料Ｘを主材（主成分）とする」という場合、構成材料としての材料Ｘを主たる機能性成分の一つとしていることをいい、必要に応じて添加剤を添加していてもよく、その材料Ｘのもつ特性が現れていれば、配合割合に特に制限はなく、材料Ｘ単独では、必ずしも、混合物中で最も多い材料である必要はなく、好ましくは５０％以上が材料Ｘから構成されることが好ましいが、それ以下であってもよい。また、本発明において％と表記するものは特に断りのない限り質量％を指すものとする。
【発明の効果】
【００１４】
したがって、低刺激性でかつマイルドな使用感の化粧料組成物を提供することができ、上記化粧料組成物を含有する化粧料組成物を得るとともに、肌にやさしく、かつ、保湿作用の高い、美白効果、細胞賦活効果に優れた化粧料を提供できるようになった。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】実験１の試験結果を示すグラフ
【図２】実験２−１の試験結果を示すグラフ
【図３】実験２−１の比較試験結果を示すグラフ
【図４】実験２−２の試験結果を示すグラフ
【図５】実験２−３の試験結果を示すグラフ
【図６】実験３の試験結果を示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１６】
以下に、本発明の実施形態にかかる化粧料組成物、美白化粧料、細胞賦活化粧料、および、保湿化粧料を説明する。尚、以下に好適な実施形態を記すが、これら実施形態はそれぞれ、本発明をより具体的に例示するために記載されたものであって、本発明の趣旨を逸脱しない範囲において種々変更が可能であり、本発明は、以下の記載に限定されるものではない。
【００１７】
〔３ＨＢ〕
３ＨＢは、３ＨＢ生産性のハロモナス菌を添加した発酵プロセスを行い、得られた発酵液からハロモナス菌を分離除去し、精製することにより得られる。発酵プロセスは、果汁等の糖質栄養源を含有する原料液に、３ＨＢ生産性のハロモナス菌をそのまま添加し、好気発酵、嫌気発酵を順に行うプロセス（特開２０１３−０８１４０３号公報等参照）として実施することができる。これにより、糖質が３ＨＢに変換され、発酵液中に生産されることになる。生産された３ＨＢは、常法にて、膜分離、分離精製を経たのち、純粋な３ＨＢとして用いられる。
【００１８】
〔化粧料組成物〕
本発明の化粧料組成物は、精製水等の水性基材に３ＨＢを３％以上１０％以下溶解することにより、ｐＨ５〜６の水溶液として得られる。
この化粧料組成物には、他に、ｐＨ調整剤、グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトールなどの多価アルコール類や、ＮＭＦ成分である乳酸塩、尿素やヒアルロン酸ナトリウム、等を併せて含有していてもよい。ただし、３ＨＢを主成分として含有していることが好ましい。また、レシチン等の保湿成分や、酸化チタン、タルク、カオリン等の無機粒子を含油してもよく、水性基材にエタノール等のアルコール類や、植物油成分等の油性基材や、界面活性剤を混合して含んでいてもよい。
【００１９】
具体的には下記処方にて、化粧料組成物を構成することができる。
（処方）                                          （％）
（１）３ＨＢ                                          １５．０
（２）防腐剤                                          ０．１
（３）重炭酸ナトリウム                                １
（４）香料                                            適量
（５）界面活性剤                                      ２．０
（６）植物油                                          ０．１
（７）精製水                                          残量
ｐＨ      ６．０
【００２０】
〔美白化粧料、細胞賦活化粧料、保湿化粧料〕
本発明の化粧料組成物は、美白化粧料、細胞賦活化粧料として用いることができる。美白化粧料、細胞賦活化粧料は、上記化粧料組成物を主成分として含有し、通常の化粧料に含まれる任意の付加成分を含有してもよい。たとえば、パラフィン、パラフィン、セタノール、シクロデキストリン、ステアリン酸、コポリマー等の安定化剤、カオリンやタルク、カーボンブラック、カルミン等の顔料、脂肪酸石鹸等の起泡剤、炭酸マグネシウム、多孔質粒子等の吸着材、アラントイン、グリチルリチン酸２カリウム、カミツレエキス、アロエエキス、シャクヤクエキス等の抗炎剤、ビタミンＣ、プラセンタエキス等の細胞賦活剤、パラベン（パラオキシ安息香酸メチル）、ローズマリーエキス、フェノキシエタノール等の殺菌、抗菌成分、柿渋、みょうばん等の脱臭成分、トコフェロール等の酸化防止剤ローズマリーエキス、カミツレエキス、セージエキス、ユーカリエキス等の保存料等の成分は、種々公知の成分を任意の処方で含有することができる。
【００２１】
具体的には下記処方にて、美白化粧料を構成することができる。
【００２２】
（処方）                                          （％）
（１）上記化粧料組成物                                  １．０
（２）エチルアルコール                                １５．０
（３）防腐剤                                            ０．１
（４）ヒアルロン酸                                      ０．０１
（５）香料                                              適量
（６）クエン酸                                          ０．１
（７）クエン酸ナトリウム                                ０．３
（８）１，３−ブチレングリコール                        ４．０
（９）精製水                                            残量
ｐＨ      ６．０
【００２３】
具体的には下記処方にて、細胞賦活化粧料を構成することができる。
【００２４】
（処方）                                          （％）
（１）上記化粧料組成物                                  １．０
（２）エチルアルコール                                １５．０
（３）防腐剤                                            ０．１
（４）ヒアルロン酸                                      ０．０１
（５）香料                                              適量
（６）クエン酸                                          ０．１
（７）クエン酸ナトリウム                                ０．３
（８）１，３−ブチレングリコール                        ４．０
（９）精製水                                            残量
ｐＨ      ６．０
【００２５】
具体的には下記処方にて、保湿化粧料を構成することができる。
【００２６】
（処方）                                          （％）
（１）上記化粧料組成物                                ５０．０
（２）エチルアルコール                                  ２．０
（３）防腐剤                                            ０．１
（４）ヒアルロン酸                                      ０．０１
（５）香料                                              適量
（６）クエン酸                                          ０．１
（７）クエン酸ナトリウム                                ０．３
（８）１，３−ブチレングリコール                        ４．０
（９）精製水                                            残量
ｐＨ      ６．０
【００２７】
なお、上記化粧料組成物としては、精製された３ＨＢを用いて構成したが、発酵プロセスにより得られた発酵液をそのまま用いたり、その発酵液をベースに種々添加剤を添加して構成することもできる。
【００２８】
〔３ＨＢの美白効果の検証〕
（実験１）
美白効果の検証のため、正常ヒト色素細胞（ＮＨＥＭ、倉敷紡績製）を用いたチロシナーゼ生合成を検証した。
【００２９】
（方法１）
（１）ＮＨＥＭをＭｅｄｉｕｍ  ２５４培地（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）を用いて、９６穴マイクロプレートにコンフルエントになるように播種した。
（２）播種２４時間後、毒性を示さない濃度の被験物質を含む培地に交換し４８時間培養した。なお、陽性コントロール（Ｐ．Ｃ．）として乳酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）を用いた。
（３）培養終了後のＮＨＥＭを０．５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００含有リン酸緩衝液（１００ｍＭ、ｐＨ６．８）にて溶解し、これをチロシナーゼ粗酵素液とした。
（４）さらに、Ｌ−３，４−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎ（Ｌ−ＤＯＰＡ、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製）をリン酸緩衝液に溶解し、基質溶液とした。チロシナーゼ粗酵素液、基質溶液を混合し、３７℃で１時間反応させた。
（５）生成したＤＯＰＡ−メラニン由来の吸光度（４０５ｎｍ）を測定し、合成メラニンから作成した検量線を用いて生成したメラニン量を算出した。また、粗酵素液のタンパク量をＰｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（ＢＣＡ法、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製）にて定量した。
（６）被験物質のチロシナーゼ生合成に対する作用は、チロシナーゼ活性（単位タンパク量あたりのメラニン生成量）を指標として評価した。
【００３０】
（結果１）
被験物質によるチロシナーゼ生合成作用を図１に示した。Ｐ．Ｃ．として用いた乳酸ナトリウムは有意な細胞内チロシナーゼ活性の低下が認められた。３ＨＢナトリウム塩は処理濃度５．０００ｍｇ／ｍＬ以上にて、細胞内チロシナーゼ活性の濃度依存的な有意な低下が認められた。３ＨＢナトリウム塩濃度は１０．０００ｍｇ／ｍＬが７９．３ｍＭ、５．０００ｍｇ／ｍＬが３９．７ｍＭに相当するため、Ｐ．Ｃ．として用いた乳酸ナトリウムとほぼ同等の効果があることがわかった。すなわち、従来用いられている乳酸との比較で、乳酸ナトリウムと同等の保湿効果を発揮させることができ、３ＨＢが乳酸の代替成分として有用であることが明らかになった。
【００３１】
〔３ＨＢの細胞賦活効果の検証〕
（実験２−１）
細胞賦活効果の検証のため、ＭＴＴ還元法による繊維芽細胞に対する３ＨＢ添加効果を検証した。
【００３２】
（方法２−１）
サブコンフルエントになった細胞をトリプシンで剥がし，細胞数１０６個に相当する細胞懸濁液を遠心分離で集め、上清を除去した。ＦＢＳ含有培地５ｍＬで細胞を再懸濁し，９６ウエルプレート（イワキマイクロプレート）に１ウエルあたりコンフルエントになるように播種し、ＣＯ２インキュベータ中で一晩培養した。上清を除去後，３ＨＢ溶液を規定濃度になるように培地に添加し、ＣＯ２インキュベータ中で一晩静置した。９６ウエルプレートから上清を除去後，０．４ｍｇ／ｍＬ、ＭＴＴ溶液を１００μＬずつ添加、ＣＯ２インキュベータ中で２時間静置し上清を除去後，イソプロパノールを２００μＬずつ添加し細胞を溶解した。上清１５０μＬを新しい９６ウエルプレートに移し，５４０ｎｍと６６０ｎｍの吸光度を測定した。
【００３３】
（結果２−１）
ＭＴＴ還元能は，３ＨＢを添加しない細胞（コントロール）の差分（吸光度５４０ｎｍ−６６０ｎｍ）を１００とした百分率（％）で表した．結果を図２（ＦＢＳ添加なし）、図３（ＦＢＳ５％添加）に示す。ＦＢＳを添加しない培地のみ（栄養成分が存在しない培地のみ），３ＨＢを添加することにより３ＨＢ濃度依存的にＭＴＴ還元活性が２５％増加することが示された。すなわち、３ＨＢは、特に栄養不足の環境下におかれた細胞に対して細胞賦活効果を発揮しうることが明らかになった。
【００３４】
（実験２−２）
過酸化水素により強制的に老化状態にさせたヒト皮膚繊維芽細胞での３ＨＢ添加によるＭＴＴ還元能の亢進効果を検証した。
【００３５】
（方法２−２）
細胞の生存率を低下させない程度の濃度の過酸化水素含有Ｄ−ＭＥＭ培地で１時間処理することを４日間繰り返すことにより老化状態にさせた細胞を用いて、実験３−１と同じ試験をＦＢＳ濃度０％で行った。
【００３６】
（結果２−２）
その結果、図４のようになった。すなわち、老化が起こった細胞においても３ＨＢを５００ｐｐｍ添加することにより，３０％程度ＭＴＴ還元率が増加し、３ＨＢは、老化状態の細胞に対して細胞賦活効果を発揮しうることが明らかになった。
【００３７】
（実験２−３）
３ＨＢはヒト表皮細胞においても、細胞賦活効果を発揮するのか検証した。
【００３８】
（方法２−３）
ヒト表皮細胞を用いて、実験３−１と同じ試験をＦＢＳ濃度０％で行った。
【００３９】
（結果２−３）
その結果図５のようになった。すなわち、ヒト表皮細胞においては、３ＨＢを添加することでＭＴＴ還元率が５０％程度亢進し、分化が進んで細胞賦活能の低下した細胞においても３ＨＢは、細胞賦活効果を発揮しうることが明らかになった。
【００４０】
〔３ＨＢの保湿効果の検証〕
（実験３）
保湿効果の検証のため、ヒトの角層水分量測定試験を行った。
【００４１】
（方法３）
健康な成人を被験者として用いて指定する洗浄料を用いて左右の前腕を洗浄する。洗浄後、室温を２１±１℃、湿度を５０±５％に調節した環境試験室にて、２０分間以上安静待機し、馴化する。馴化時間中に、試験担当者が被験者の左右の前腕部を目視観察し、試験に適した５か所の評価部位を設定し、試験品塗布部、対照品塗布部、無塗布部の割付を行う。環境試験室への入室から２０分後に、評価部位の角層水分量を測定する。各評価部位に試験品を塗布し、塗布５分後、塗布１０分後、塗布２０分後、塗布３０分後に、各評価部位の角層水分量を測定する。
【００４２】
試験品としては、３％の３ＨＢナトリウム塩水溶液、５％の３ＨＢナトリウム塩水溶液、対照品としては、５％乳酸ナトリウム水溶液、精製水を用い、角層水分量の測定は、ＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（アイ・ビイ・エス株式会社）を用い、環境試験室（室温２１±１℃、湿度５０±５％）で馴化後の各被験者を座位にて測定した。また、各測定時点につき、同一部位を５回反復測定し、最大値と最小値を除いた３回の測定値の平均値を解析に用いた。
【００４３】
（結果３）
結果を図６に示す。図より３ＨＢナトリウム塩は、乳酸ナトリウムの６０〜８０％程度の保湿力を示すことがわかった。すなわち、従来用いられている乳酸との比較で、乳酸ナトリウム使用量の１．２〜１．６倍程度を使用すれば、乳酸ナトリウムと同等の保湿効果を発揮させることができ、３ＨＢが乳酸の代替成分として有用であることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明の化粧料組成物は、たとえば、肌にやさしく、かつ、保湿作用の高い保湿化粧料、美白効果の高い美白化粧料、細胞賦活効果の高い細胞賦活化粧料等として利用することができる。
【図１】
2017200883.tif 000002
【図２】
2017200883.tif 000003
【図３】
2017200883.tif 000004
【図４】
2017200883.tif 000005
【図５】
2017200883.tif 000006
【図６】
2017200883.tif 000007