(57)【要約】【課題】腫瘍部位と非腫瘍部位を判別する際の新規の方法を提供する。【解決手段】  本発明の方法は、検体の腫瘍部位に蓄積されたポルフィリン類に励起光を照射して、励起後の前記ポルフィリン類が発する蛍光を検出する工程（ａ）と、硬化させた検体を細断して病理診断の前処理を行う工程（ｂ）とを有する。工程（ａ）は、検体を収容する収容部を有する検体用ホルダを準備する工程（ａ１）と、収容部内に検体を収容する工程（ａ２）と、検体用ホルダの外側から励起光を射出させ、収容部内に収容された検体に照射させる工程（ａ３）と、励起光が照射されることで励起されたポルフィリン類から発される蛍光を受光する工程（ａ４）とを有する。工程（ｂ）は、工程（ａ４）の終了後の検体を薬液に浸漬させ、検体に含有されている水分を所定の材料に置換して検体を硬化させる工程（ｂ１）と、硬化した検体を細断する工程（ｂ２）とを有する。【選択図】        図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍部位の判別方法であって、
検体の腫瘍部位に蓄積されたポルフィリン類に励起光を照射して、励起後の前記ポルフィリン類が発する蛍光を検出する工程（ａ）と、
硬化させた前記検体を細断して病理診断の前処理を行う工程（ｂ）とを有し、
前記工程（ａ）は、
前記検体を収容する収容部を有する検体用ホルダを準備する工程（ａ１）と、
前記収容部内に前記検体を収容する工程（ａ２）と、
前記検体用ホルダの外側から前記励起光を射出させ、当該励起光を、前記検体用ホルダの所定の領域を透過させて前記収容部内に収容された前記検体に照射させる工程（ａ３）と、
前記励起光が照射されることで励起された前記ポルフィリン類から発される蛍光を受光する工程（ａ４）とを有し、
前記工程（ｂ）は、
前記工程（ａ４）の終了後の前記検体を薬液に浸漬させ、前記検体に含有されている水分を所定の材料に置換して前記検体を硬化させる工程（ｂ１）と、
硬化した前記検体を細断する工程（ｂ２）とを有することを特徴とする腫瘍部位の判別方法。
【請求項２】
前記工程（ｂ１）は、前記検体用ホルダごと前記薬液に浸漬させる工程を含むことを特徴とする請求項１に記載の腫瘍部位の判別方法。
【請求項３】
前記検体用ホルダは、当該検体用ホルダの外部から前記収容部に連絡された孔部を有し、
前記工程（ｂ１）は、前記孔部を通じて前記薬液を前記収容部に導くことで、前記検体を前記薬液に浸漬させる工程であることを特徴とする請求項２に記載の腫瘍部位の判別方法。
【請求項４】
前記検体用ホルダは、一部の領域に前記収容部が設けられた基体部と、前記収容部の上方を覆うための蓋部を備え、
前記孔部は、前記基体部又は前記蓋部の少なくとも一方に設けられていることを特徴とする請求項３に記載の腫瘍部位の判別方法。
【請求項５】
光源部から射出される励起光を検体に照射し、前記検体の腫瘍部位に存在するポルフィリン類が発する蛍光を分光して検出することで、前記腫瘍部位と非腫瘍部位の判別を行う腫瘍部位判別装置に使用される検体用ホルダであって、
前記検体を収容する収容部と、
前記検体用ホルダの外側から射出された前記励起光を透過させて前記収容部に収容された前記検体に当該励起光を照射させるための窓部と、
外部から前記収容部に連絡された孔部とを有することを特徴とする検体用ホルダ。
【請求項６】
前記孔部は、所定の薬液を前記検体用ホルダの外部から前記収容部に対して導入可能に構成されていることを特徴とする請求項５に記載の検体用ホルダ。
【請求項７】
前記検体用ホルダは、一部の領域に前記収容部が設けられた基体部と、前記収容部の上方を覆うための蓋部を備え、
前記孔部は、前記基体部又は前記蓋部の少なくとも一方に設けられていることを特徴とする請求項５又は６に記載の検体用ホルダ。
【請求項８】
前記収容部内に収容された前記検体の変位を抑制するための検体固定部を更に備えたことを特徴とする請求項５〜７のいずれか１項に記載の検体用ホルダ。
【請求項９】
前記検体用ホルダは、一部の領域に前記収容部が設けられた基体部と、前記収容部の上方を覆うための蓋部を備え、
前記検体固定部は、前記基体部又は前記蓋部の少なくとも一方に設けられた凸部によって構成されており、
前記蓋部の開閉によって、前記凸部が前記検体に接触する第一状態と、前記凸部が前記検体から離間する第二状態とを遷移可能に構成されていることを特徴とする請求項８に記載の検体用ホルダ。
【請求項１０】
前記検体固定部は、前記蓋部に離散的に設けられた複数の前記凸部で構成されていることを特徴とする請求項９に記載の検体用ホルダ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍部位の判別方法、腫瘍部位判別装置に使用される検体用ホルダに関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の日本は急速な高齢化社会を迎えており、癌の患者数は増加傾向にある。特に、リンパ節転移は重要な予後因子の一つであるため、患者の治療方法を決定する上では、リンパ節転移の有無を正確に診断することは重要である。特に、原発巣から離れた癌細胞が最初にたどり着くリンパ節はセンチネルリンパ節と呼ばれている。センチネルリンパ節にたどり着く癌細胞の数は当初は限定的であるため、センチネルリンパ節を調べて癌細胞の転移が極めて少なければ、それから先のリンパ節にはほぼ転移していないと考えてよいとされている。
【０００３】
術前のリンパ節転移診断法としては、ＣＴ（Computed Tomography）やＦＤＧ−ＰＥＴ（Fluorodeoxyglucose positron emission tomography）などが知られているが、診断精度の点でまだまだ十分なものとはいえないのが現状である。また、術中、術後のリンパ節転移の診断には病理組織診断が用いられるが、通常、単一の割面から得られた標本のみから転移の有無を診断するため、小さな転移巣が見逃されることがあり、その診断精度は十分なものとはいえない。更に、術中迅速検査においては、診断までに少なくとも３０分程度を要する上、病理医による判断を必要とするため、病理医個人のスキルの差によって診断結果に差異が生じる可能性もある。更には、病理医自体が不足している昨今の現状を踏まえると、病理医の判断を仰ぐことなく高い精度でリンパ節転移の診断が行える新たな方法が必要とされている。
【０００４】
昨今、消化器領域を含めた幅広い領域で、癌の検出に５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）を用いた光線力学的手法が応用されている。５−ＡＬＡは、生体内にも存在するアミノ酸の一種であり、水溶性で経口的、局所的に投与可能である。体外から５−ＡＬＡを投与すると、正常細胞ではヘムに速やかに代謝されるが、癌細胞では代謝酵素の活性の違いにより代謝産物であるプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）が選択的に蓄積する。ここで、ヘムは蛍光を認めない一方、ＰｐＩＸは蛍光物質であるため、この光を検出することで癌の診断を行うことが可能となる（特許文献１、非特許文献１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１３／００２３５０号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】「５−アミノレブリン酸（５−ＡＬＡ）を用いた消化器癌転移リンパ節の診断」京都府立医科大学雑誌，Vol.122，No.4，(2013)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記内容は、現時点では未だ実験室レベルの研究段階であり、実際に人間の診断に応用する上では種々の課題が生じることが想定される。本出願人らは、現在、検体の腫瘍部位に存在する、ＰｐＩＸなどのポルフィリン類が発する蛍光を分光して検出することで腫瘍部位と非腫瘍部位の判別を行う装置の開発を進めている。
【０００８】
本発明は、腫瘍部位と非腫瘍部位を判別する際の新規の方法を提供することを目的とする。また、本発明は、この方法に好適に用いることのできる、検体用ホルダを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、腫瘍部位の判別方法であって、
検体の腫瘍部位に蓄積されたポルフィリン類に励起光を照射して、励起後の前記ポルフィリン類が発する蛍光を検出する工程（ａ）と、
硬化させた前記検体を細断して病理診断の前処理を行う工程（ｂ）とを有し、
前記工程（ａ）は、
前記検体を収容する収容部を有する検体用ホルダを準備する工程（ａ１）と、
前記収容部内に前記検体を収容する工程（ａ２）と、
前記検体用ホルダの外側から前記励起光を射出させ、当該励起光を、前記検体用ホルダの所定の領域を透過させて前記収容部内に収容された前記検体に照射させる工程（ａ３）と、
前記励起光が照射されることで励起された前記ポルフィリン類から発される蛍光を受光する工程（ａ４）とを有し、
前記工程（ｂ）は、
前記工程（ａ４）の終了後の前記検体を薬液に浸漬させ、前記検体に含有されている水分を所定の材料に置換して前記検体を硬化させる工程（ｂ１）と、
硬化した前記検体を細断する工程（ｂ２）とを有することを特徴とする。
【００１０】
本明細書中における「ポルフィリン類」とは、ポルフィン環に置換基がついたものを指し、例えばＰｐＩＸの他、ＰｐＩＸから生成されたフォト−プロトポルフィリン（ＰＰｐ）などのプロトポルフィリン類が存在する。
【００１１】
腫瘍部位判別装置を用いて検体に腫瘍部位が含まれるか否かの検出を行うに際しては、まず、被験体である患者に５−ＡＬＡなどの所定の薬剤を投与する。正常細胞において５−ＡＬＡが吸収されると、細胞内ミトコンドリアでポルフィリン類の一つであるプロトポルフィリンＩＸ（以下、適宜「ＰｐＩＸ」と記載する。）に代謝され、ヘムに生合成される。しかし、悪性腫瘍細胞は、正常細胞に比べてＰｐＩＸ生成途中の酵素（ＰＢＧデアミナーゼ）活性が高く、ＰｐＩＸからヘム生合成を触媒する酵素（フェロケラターゼ）活性が低い。このため、悪性腫瘍細胞において５−ＡＬＡが吸収されると、この細胞にＰｐＩＸが多く蓄積される。
【００１２】
ＰｐＩＸは蛍光物質である一方、ヘムは蛍光物質ではない。このため、所定の励起光を検体に照射して、検体から発せされる蛍光を受光分析することで、腫瘍部位と非腫瘍部位の判別が可能となる。
【００１３】
図１ＡはＰｐＩＸの吸収スペクトルを示す図である。また、図１ＢはＰｐＩＸの蛍光スペクトルを示す図である。ＰｐＩＸは、所定の波長の励起光に対して高い吸光度を示す。具体的には、図１Ａに示すように、波長３７０ｎｍ以上、４５０ｎｍ以下の光に対して高い吸光度を示し、特に波長３８５ｎｍ以上４２５ｎｍ以下の光に対して極めて高い吸光度を示す。そして、上記波長範囲の光をＰｐＩＸに照射すると、図１Ｂに示すように、６３５ｎｍ近傍をピークとし、６２０ｎｍ以上７１０ｎｍ以下の波長成分を含む蛍光がＰｐＩＸから放射される。
【００１４】
腫瘍部位判別装置としては、上記の波長帯に含まれる波長の励起光を射出することのできる光源部と、ＰｐＩＸから放射される蛍光を受光する受光部が必要となる。また、検体を装置にセットするための機構が必要となる。
【００１５】
検体としては、リンパ節の切片などの生検材料が想定される。このような生検材料を装置にセットするに際しては、装置を汚染するなどの問題が生じないよう、本出願人らは、予め検体を所定のホルダ内に収容し、このホルダを装置の所定の位置にセットする方法を考案した。
【００１６】
上記工程（ａ）によれば、このホルダに設けられた収容部に検体を載置した状態で、励起光がホルダに対して照射される。これにより、ホルダ内に収容された検体に含まれているポルフィリン類が励起され、蛍光が発せられる。この蛍光を受光して強度分析することで、蛍光強度に基づく腫瘍部位と非腫瘍部位の判別が行える。
【００１７】
上記の方法によれば、蛍光強度に基づく判別工程（ａ）の終了後、検体を硬化させ、細断する工程（ｂ）を有している。このため、工程（ｂ）の終了後には、細断後の微小検体を病理医が目視などによって診断することができる。すなわち、本発明の方法によれば、病理医による診断の前工程までを効率的に行うことができる。
【００１８】
前記工程（ｂ１）は、前記検体用ホルダごと前記薬液に浸漬させる工程を含むものとしても構わない。
【００１９】
上記方法によれば、工程（ａ）の終了後、検体に含有されている水分を所定の材料に置換する工程（ｂ１）を行うに際し、検体用ホルダから、別のホルダに検体を移動させる必要がない。このため、処理の効率化が図られる。
【００２０】
ところで、工程（ａ）によって蛍光強度の分析が行われるのは、検体のうち、励起光が照射される側の面に近い領域になることが多い。また、硬化前の検体は容易にホルダ内で移動する。このため、工程（ｂ１）を行うに際して、検体用ホルダから別のホルダに検体を移し替えた際に、検体のうちの、蛍光強度の分析が行われた領域を取り違えてしまう可能性が高まるおそれがある。もしこのような事態が生じると、細断後の微小検体を病理医が診断する際に、蛍光強度分析が行われた領域とは異なる領域の微小検体を診断してしまうおそれがある。この場合、工程（ａ）では腫瘍部位が存在すると判断された検体が、病理医によって腫瘍部位が存在しないと誤判断される可能性も否定できない。
【００２１】
上記の方法によれば、工程（ａ）で用いた検体用ホルダに検体を収容したままの状態で工程（ｂ１）を行うことができるため、検体を収容するホルダの移し替えの回数を減らすことができ、誤判断のリスクが低下する。
【００２２】
より具体的には、
前記検体用ホルダは、当該検体用ホルダの外部から前記収容部に連絡された孔部を有し、
前記工程（ｂ１）は、前記孔部を通じて前記薬液を前記収容部に導くことで、前記検体を前記薬液に浸漬させる工程とすることができる。
【００２３】
このとき、
前記検体用ホルダは、一部の領域に前記収容部が設けられた基体部と、前記収容部の上方を覆うための蓋部を備え、
前記孔部は、前記基体部又は前記蓋部の少なくとも一方に設けられているものとすることができる。
【００２４】
また、本発明は、光源部から射出される励起光を検体に照射し、前記検体の腫瘍部位に存在するポルフィリン類が発する蛍光を分光して検出することで、前記腫瘍部位と非腫瘍部位の判別を行う腫瘍部位判別装置に使用される検体用ホルダであって、
前記検体を収容する収容部と、
前記検体用ホルダの外側から射出された前記励起光を透過させて前記収容部に収容された前記検体に当該励起光を照射させるための窓部と、
外部から前記収容部に連絡された孔部とを有することを特徴とする。
【００２５】
ここで、前記孔部は、所定の薬液を前記検体用ホルダの外部から前記収容部に対して導入可能に構成されているものとすることができる。
【００２６】
検体用ホルダは収容部を有し、利用時にはこの収容部内に検体が載置される。そして、このホルダには装置内の光源部から射出された励起光を透過させる窓部が設けられている。励起光が窓部を透過して検体に照射されることで、検体にポルフィリン類が含まれていれば、当該ポルフィリン類が励起されて蛍光を発する。装置側に備えられた受光部において受光した光を分光して分析することで、ポルフィリン類の蛍光由来の波長の光の強度に応じて腫瘍部位と非腫瘍部位を判別することができる。
【００２７】
そして、上記の検体用ホルダによれば、外部から収容部に連絡された孔部が備えられている。このため、蛍光分析工程が終了後、例えば検体用ホルダごと所定の薬液に漬けることで、当該薬液を収容部内に導くことができる。これにより、検体を検体用ホルダから取り出すことなく、検体に含まれる水分を別の材料に置換させることができる。この結果、検体を固定化して細断する次の工程に進めるに際し、検体を収容するホルダの移し替えの数が減り、上述した誤診断のリスクが低下する。
【００２８】
前記孔部は、検体用ホルダの任意の場所に設けることができる。一例として、
前記検体用ホルダは、一部の領域に前記収容部が設けられた基体部と、前記収容部の上方を覆うための蓋部を備え、
前記孔部は、前記基体部又は前記蓋部の少なくとも一方に設けられるものとして構わない。
【００２９】
前記検体用ホルダは、
前記収容部内に収容された前記検体の変位を抑制するための検体固定部を更に備えることができる。
【００３０】
本発明者らの鋭意研究によれば、検体が収容されたホルダを装置の所定の位置にセットして光を照射し、受光部において蛍光を受光している間に、検体が収縮したり、逆に膨張したりする場合があることが分かった。
【００３１】
このような現象が生じる理由の一つとしては、検体としてセンチネルリンパ節などの生検材料を想定している点が考えられる。上記のようなセンチネルリンパ節などの生検材料を検体として用いる場合、人体から切除した後、ホルダに収容される前に生理食塩水などによって洗浄されることが一般的である。このように、水分を多く含む状態の生検材料を検体とした場合、検体が収容されたホルダを装置の所定の位置にセットして光を照射している間に水分が蒸発し、検体が収縮したものと考えられる。また、生検材料は乾燥により収縮するが、その際に生じる部分的な収縮に起因した応力変形により、部分的に膨張する場合もある（膨らみ方向への移動）。
【００３２】
ここで、上述したように、ポルフィリン類の蛍光由来の波長の光の強度に応じて腫瘍部位と非腫瘍部位を判別する方法によれば、まず、装置に設けられた受光部において、位置別の光強度が所定の閾値を上回っているか否かの判定が行われる。そして、装置において、光強度が所定の閾値を上回っている箇所が腫瘍部位であり、光強度が閾値以下である箇所が非腫瘍部位であると判断される。
【００３３】
この方法の場合においては、例えば窓部を介して光が照射される領域を所定の小領域毎に分割し、この小領域毎に光強度が所定の閾値を上回っているか否かの判定が行われる。これによって、収容部上のどの領域に配置された検体の位置が腫瘍部位であるかの判定が行える。
【００３４】
しかし、上記のように、検体が膨張／収縮をしてしまうと、受光部において光量の判定を行っている最中に検体に位置ずれが生じてしまう。この結果、検体の位置ずれに応じて腫瘍部位の位置ずれが生じ、場合によっては腫瘍部位を誤認識するおそれがある。
【００３５】
これに対し、上記の構成によれば、収容部内に収容された検体の変位（位置の変動）を抑制するための検体固定部がホルダに備えられている。このため、ホルダに検体を収容した後において、検体固定部によって検体の変位が抑制される。この結果、仮に検体が膨張／収縮したとしても、検体の位置の変位量が従来と比べて抑制され、腫瘍部位が誤認識されるおそれが低下する。
【００３６】
前記検体固定部は、特に、前記収容部内に収容された前記検体の、前記収容部の底面に平行な方向、より詳細には水平方向に係る変位を抑制することのできる構成であるものとすることができる。
【００３７】
より具体的には、
前記検体用ホルダは、一部の領域に前記収容部が設けられた基体部と、前記収容部の上方を覆うための蓋部を備え、
前記検体固定部は、前記基体部又は前記蓋部の少なくとも一方に設けられた凸部によって構成されており、
前記蓋部の開閉によって、前記凸部が前記検体に接触する第一状態と、前記凸部が前記検体から離間する第二状態とを遷移可能に構成されているものとしても構わない。
【００３８】
この構成によれば、収容部内に検体を収容した後に、蓋部を閉じることで、凸部が検体に接触するため、検体の水平方向に係る移動が抑制される。なお、蓋部を閉じたときに凸部の先端が検体に接触するものとしても構わない。
【００３９】
より具体的には、前記検体固定部が、前記蓋部に離散的に設けられた複数の前記凸部で構成されていても構わない。この複数の前記凸部の配置態様としては種々の構成が可能である。一例としては、各凸部が角型形状を有して縦横に整列配置される態様や、千鳥型（a staggered arrangement）に分散配置される態様が可能である。また、各凸部の形状としては半球形状や、円錐形状、円錐台形状、多角錘形状、多角錐台形状、波型形状、その他の形状を採用することも可能である。
【発明の効果】
【００４０】
本発明の方法又は検体用ホルダによれば、腫瘍部位の判別を効率的に精度よく行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１Ａ】ＰｐＩＸの吸収スペクトルを示す図である。
【図１Ｂ】ＰｐＩＸの蛍光スペクトルを示す図である。
【図２】腫瘍部位判別装置の外観を模式的に示す図である。
【図３】腫瘍部位判別装置の内部構成を模式的に示すブロック図である。
【図４Ａ】検体用ホルダの一実施例における模式的な斜視図である。
【図４Ｂ】検体用ホルダの一実施例における基体部の模式的な平面図である。
【図４Ｃ】検体用ホルダの一実施例における蓋部の模式的な平面図である。
【図５Ａ】検体用ホルダの一実施例における基体部の模式的な斜視図である。
【図５Ｂ】検体用ホルダの一実施例における基体部の模式的な平面図である。
【図５Ｃ】検体用ホルダの一実施例における基体部の模式的な平面図である。
【図６Ａ】検体用ホルダの一実施例における蓋部の模式的な平面図である。
【図６Ｂ】検体用ホルダの一実施例における蓋部の模式的な平面図である。
【図６Ｃ】検体用ホルダの一実施例における蓋部の模式的な平面図である。
【図６Ｄ】検体用ホルダの一実施例における蓋部の模式的な平面図である。
【発明を実施するための形態】
【００４２】
［装置概要］
検体用ホルダの説明に先駆けて、このホルダを利用する腫瘍部位判別装置の構成について説明する。
【００４３】
図２は、装置の外観を模式的に示す図面である。また、図３は、装置内部の構成を模式的に示すブロック図である。なお、図２及び図３は、腫瘍部位判別装置の一例を示す図面であり、本発明のホルダが利用される装置は、図２及び図３に示された構成に限定されない。
【００４４】
図２に示すように、腫瘍部位判別装置１０（以下、適宜「装置１０」と呼ぶことがある。）は、ホルダ装着口１１及び表示部１２を備える。ホルダ装着口１１は、検体用ホルダ１を装着するための機構である。また、表示部１２は、腫瘍部位判別装置１０によって判定された結果が表示されるモニタに対応する。なお、ここでは、腫瘍部位判別装置１０の本体に表示部１２が設けられている構成を示しているが、装置１０の本体には表示部１２を備えずに、別のモニタに判定結果を表示させる構成を採用しても構わない。
【００４５】
図３に示すように、装置１０は、光源部２１、フィルタ２２、ダイクロイックミラー２３、対物レンズ２４、フィルタ２５、受光部２６、演算処理部２７を備える。なお、図３の例では、図２にならって、装置１０が表示部１２を備えている構成を想定している。
【００４６】
光源部２１は、例えば水銀ランプや発光ダイオード素子、レーザダイオード素子などで構成される。フィルタ２２は、光源部２１から射出された光から、特定の波長の光を選択的に透過させる機能を有し、例えば誘電体多層膜などで構成することができる。ここでは、フィルタ２２が、波長３９０ｎｍの光を選択的に透過させる機能を有するものとして説明するが、ポルフィリン類を励起することのできる特定の波長帯の光を選択的に透過させる機能を有していればよい。
【００４７】
ダイクロイックミラー２３は、所定の波長帯の光を反射させ、別の所定の波長帯の光を透過させる機能を有し、例えば誘電体多層膜などで構成することができる。ここでは、ダイクロイックミラー２３が、波長３９０ｎｍの光を反射し、波長６２０ｎｍ以上の光を透過する機能を有するものとして説明する。なお、このダイクロイックミラー２３は、フィルタ２２によって選択された波長の光を反射し、少なくとも検体２から発せられた蛍光のピーク波長近傍の光を透過する機能を有していればよい。
【００４８】
光源部２１から射出され、フィルタ２２を透過した波長３９０ｎｍの励起光３１は、ダイクロイックミラー２３で反射されて対物レンズ２４に導かれる。そして、対物レンズ２４を通過した光が、ホルダ１の所定の領域（以下、適宜「窓部５２」と記載する。）を透過して、ホルダ１に収容された検体２に照射される。検体２にＰｐＩＸなどのポルフィリン類が蓄積されていると、この波長３９０ｎｍの励起光３１によってポルフィリン類が励起され、蛍光３２を発する。蛍光３２は、ホルダ１の窓部５２を透過して、励起光とは逆向きに進行し、対物レンズ２４へと導かれる。そして、ダイクロイックミラー２３を透過してフィルタ２５に入射される。
【００４９】
フィルタ２５は、入射された光から、所定の波長の光を選択的に透過させる機能を有する。ここでは、フィルタ２５が、波長６３５ｎｍの光を選択的に透過させる機能を有するものとして説明するが、ポルフィリン類から発せられた蛍光のピーク波長の近傍の光を選択的に透過させる機能を有していればよい。
【００５０】
フィルタ２５を透過した波長６３５ｎｍの蛍光は、受光部２６において受光される。受光部２６は、例えばＣＣＤカメラなどの撮像装置で構成することができる。受光部２６は、受光した光の強度を検体２内の位置情報と共に演算処理部２７に出力する。演算処理部２７は、例えばマイコン等で構成され、位置別の光強度が所定の閾値を上回っているか否かの判定を行う。そして、演算処理部２７は、光強度が所定の閾値を上回っている箇所が腫瘍部位であり、光強度が閾値以下である箇所が非腫瘍部位であると判断する。そして、この判断結果を表示部１２に出力する。
【００５１】
表示部１２は、演算処理部２７から送られた腫瘍部位の座標情報に基づいて、例えば検体２の画像上の所定の位置に腫瘍部位であることを示すマークや発色を施した画像データを表示する。また、演算処理部２７において腫瘍部位と判断された領域が存在しない場合には、その旨の情報を表示部１２に表示するものとしても構わない。
【００５２】
検査員は、表示部１２を目視で確認することで、検体２に腫瘍部位が存在しているか否か、及び腫瘍部位が存在している場合にはその存在箇所を容易に認識することができる。また、例えば装置１０に操作ボタンを設け、検体２が収容されたホルダ１を装置１０に装着して当該操作ボタンを押下すると光源部２１から励起光が射出される仕組みとすることで、装置１０によって検体２の腫瘍部位判別判定を自動的に行わせることができ、検査員のスキルによる判断結果のバラツキが解消する。
【００５３】
なお、ダイクロイックミラー２３は、装置１０を小型化するために、励起光３１と蛍光３２の光路を一部共通化することを目的として設けられているが、装置１０においてダイクロイックミラー２３は必ずしも必須の構成ではない。また、フィルタ２２は、光源部２１と一体化されていても構わない。フィルタ２５は受光部２６と一体化されていても構わない。図３に示した装置１０の構成はあくまで一例であり、同じ機能を実現する構成であれば、種々の設計変更が可能であることは言うまでもない。
【００５４】
［ホルダ］
次に、ホルダ１の構成について説明する。
【００５５】
図４Ａはホルダ１の一実施例における斜視図である。図４Ａに示すように、ホルダ１は、基体部４２と蓋部４３を含んで構成されている。図４Ｂは本実施例における基体部４２の平面図であり、図４Ｃは本実施例における蓋部４３の平面図の一例である。
【００５６】
基体部４２と蓋部４３は、ヒンジによって連結されており、蓋部４３が基体部４２に対して回動可能に構成されている。基体部４２には所定の箇所に検体２を収容するための収容部４１が設けられている。この収容部４１は、その周囲よりも深さが深くなっており、収容部４１内に検体２を収容した状態で蓋部４３と基体部４２を重ねても、蓋部４３（より詳細には蓋部４３のうち凸部４４が形成されていない箇所）によって検体２が押し潰されることはない。
【００５７】
図４Ａに示すように、収容部４１には光を透過させるための窓部５２が設けられている。図４Ａでは、窓部５２が収容部４１の底面の所定の領域に設けられているが、収容部４１の底面の全体に設けられていても構わない。
【００５８】
本実施例のホルダ１は、蓋部４３に複数の孔部４７が設けられている。この孔部４７はホルダ１の外部に連絡されている。検体２を収容部４１内に収容した状態で、蓋部４３を基体部４２に重ねた状態であっても、孔部４７を介してホルダ１の外部から検体２に連絡させることができる。孔部４７の機能については後述される。
【００５９】
なお、本実施例では、図４Ａ及び図４Ｃに示されるように、蓋部４３には複数の凸部４４が設けられている。かかる構成とすることで、検体２を収容部４１に収容した後に、蓋部４３を閉じて基体部４２と蓋部４３を重ねることで、凸部４４の先端が検体２に接触される。これにより、検体２の水平方向への移動が抑制される。本実施例では、凸部４４が「検体固定部」に対応する。なお、この実施例では、孔部４７は、蓋部４３のうち、凸部４４が形成されていない領域に設けられているが、孔部４７を実装する態様については、種々採用可能であり、その点は後述される。
【００６０】
図３を参照して説明したように、装置１０においては、励起光３１がホルダ１を透過して検体２に照射される。ここでは、図４Ａにおいて、蓋部４３とは反対側から基体部４２に対して励起光３１が照射されると、窓部５２を介して、収容部４１に収容された検体２に励起光が導かれる。
【００６１】
ところで、収容部４１内に検体２が収容されたホルダ１を装置１０のホルダ装着口１１内に装着し、光源部２１から射出された励起光３１を検体２に照射して受光部２６で蛍光を受光している間に、検体２が膨張／収縮する可能性がある。もし、本実施例のように、ホルダ１に凸部４４が存在しない場合、受光部２６において蛍光の受光中に、ホルダ１内において検体２が膨張／収縮して水平方向に移動してしまう。この結果、演算処理部２７において、蛍光強度が所定の閾値を上回っていると判断した箇所が実際には腫瘍部位ではない場合や、逆に、蛍光強度が所定の閾値以下であると判断した箇所が実際には腫瘍部位である場合が起こり得る。
【００６２】
これに対し、本実施例の構成では、ホルダ１の蓋部４３に凸部４４が存在しているため、収容部４１内に検体２を収容した後、蓋部４３を閉じることで、凸部４４の先端が検体２に接触する。この結果、仮に検体２が膨張／収縮しようとしても、凸部４４と検体２の接触に伴う摩擦力で検体２の水平方向の移動が妨げられ、受光部２６で蛍光を受光している間に検体２の位置が変動する量が大きく抑制される。この結果、装置１０によって検体２における腫瘍部位を正しく判別することができる。
【００６３】
ホルダ１は、種々の形状の採用が可能である。以下、一例につき記載する。
【００６４】
〈１〉  図５Ａは、別の実施例のホルダ１の基体部４２の構成を模式的に示す斜視図である。図５Ａに示す基体部４２のように、基体部４２の側面に孔部４７が設けられていても構わない。、
【００６５】
図５Ｂ、及び図５Ｃは、それぞれ別の実施例のホルダ１の基体部４２の構成を模式的に示す平面図である。図５Ｂに示すように、基体部４２の底面全面に孔部４７が設けられていても構わないし、基体部４２の底面のうち、窓部５２を除く領域に孔部４７が設けられていても構わない。なお、図４Ｂを参照して上述したように、基体部４２には孔部４７が設けられていないものとしても構わない。
【００６６】
〈２〉  図６Ａ〜図６Ｄは、別の実施例のホルダ１の蓋部４３の構成を示す平面図である。
【００６７】
図６Ａに示すように、蓋部４３のうち、凸部４４が形成されている領域にも孔部４７が形成されるものとしても構わない。また、図６Ｂ及び図６Ｃに示すように、蓋部４３は、凸部４４の取り付け／取り外しが可能な構成であっても構わない。すなわち、蓋部４３は、凸部４４が取り付けられた状態においては、図６Ｂに示される構成であり、凸部４４が取り外された状態においては、図６Ｃに示される構成であっても構わない。
【００６８】
更に、図６Ｄに示すように、蓋部４３には孔部４７が設けられていなくても構わない。
【００６９】
〈３〉  ホルダ１に凸部４４を設ける場合において、凸部４４自体の形状、凸部４４の個数、及び凸部４４の配置形状は、種々の選択が可能である。凸部４４自体の形状としては、図４Ａに示したような角柱形状の他、半球形状、波型形状などを採用することができる。凸部４４の配置の態様としては、図４Ａに示したような縦横に整列配置された構成の他、千鳥形状や放射形状に配置されても構わない。また、ホルダ１が凸部４４を有しないものとしても構わない。
【００７０】
〈４〉  ホルダ１は、例えば、図４Ｂ、図５Ａ〜図５Ｃのうちの一の基体部４２と、図４Ｃ、図６Ａ〜図６Ｄのうちの一の蓋部４３とを備える構成とすることができる。
【００７１】
［判別方法］
以下、ホルダ１を用いた腫瘍部位の判別方法につき、説明する。
【００７２】
（ステップＳ１）
ホルダ１を準備し、このホルダ１に検査対象の検体２を収容する。検体２は、腫瘍部位の判別を行う対象となる生検材料（例えばセンチネルリンパ節を含む生体組織）である。この生検材料は、腫瘍部位が含まれていれば当該部位にポルフィリン類が蓄積されるよう、予め所定の措置が施されている。
【００７３】
検体２が収容されたホルダ１を、例えば図２に示すような装置１０に装着する。そして、装置１０内において光源部２１より所定の励起光３１を照射させる。このとき、窓部５２を介してホルダ１内の検体２に励起光３１が照射される。
【００７４】
検体２にポルフィリン類が蓄積されていれば、このポルフィリン類が励起光によって励起され、当該ポルフィリン類から蛍光３２が発せられる。受光部２６は、蛍光３２を受光すると、その強度に関する情報を演算処理部２７に出力する。演算処理部２７において、上述したような処理が行われることで、検体２に腫瘍部位が含まれているか否かが機械的に判定される。
【００７５】
このステップＳ１が工程（ａ）に対応する。
【００７６】
（ステップＳ２）
次に、検体２を病理医による目視診断を可能にするための前処理が行われる。この処理は、より具体的には、検体２を硬化させて細断する工程に対応する。一例としては、以下のステップＳ２Ａ〜Ｓ２Ｅの手順で行われる。
【００７７】
（ステップＳ２Ａ）
検体２に含まれる水分を除去する。例えば、装置１０がエタノールなどの脱水用薬液の注入手段を有している場合には、装置１０内にホルダ１を装着した状態で、装置１０の注入手段より、エタノールをホルダ１に対して供給する。また、装置１０が前記注入手段を有していない場合には、ホルダ１を装置１０から取り出し、ホルダ１ごとエタノールなどの薬液プールに着水させる。これにより、ホルダ１に設けられた孔部４７を介して、収容部４１内に収容された検体２にエタノールが浸漬する。この結果、検体２に含まれる水分がアルコールに置換され、脱水処理が施される。
【００７８】
（ステップＳ２Ｂ）
次に、ステップＳ２Ａによって検体２に含まれることとなったアルコールを検体２から除去する。例えば、装置１０が、キシレンやクロロホルムなどの脱アルコール用薬液の注入手段を有している場合には、装置１０内にホルダ１を装着した状態で、装置１０の注入手段より、前記薬液をホルダ１に対して供給する。また、装置１０が前記注入手段を有していない場合には、装置１０の外部において、ホルダ１ごとキシレンなどの薬液プールに着水させる。これにより、ホルダ１に設けられた孔部４７を介して、収容部４１内に収容された検体２にキシレンが浸漬する。この結果、検体２に含まれるアルコールがキシレンに置換され、脱アルコールが施される。この処理は、透徹処理とも呼ばれる。
【００７９】
なお、脱アルコールの薬液としては、キシレン、クロロホルムの他、アセトン、ベンゾール、ツェーデル油などを用いることができる。この薬液は、アルコールとパラフィンの双方に混和性があることが好ましい。
【００８０】
（ステップＳ２Ｃ）
次に、ステップＳ２Ｂによって検体２に含まれることとなったキシレン等の物質を、パラフィンに置換する。例えば、装置１０が、溶融パラフィンを注入する手段を有している場合には、装置１０内にホルダ１を装着した状態で、装置１０の注入手段より、溶融パラフィンをホルダ１に対して供給する。また、装置１０が前記注入手段を有していない場合には、装置１０の外部において、ホルダ１ごと溶融パラフィンに着水させる。これにより、ホルダ１に設けられた孔部４７を介して、収容部４１内に収容された検体２にパラフィンが浸漬し、検体２に含まれるキシレンがパラフィンに置換される。
【００８１】
（ステップＳ２Ｄ）
パラフィンが浸透した検体２をホルダ１から取り出し、溶融パラフィンが収容されている別の容器（包埋皿）に載置する。温度を低下させることで、検体２の周囲のパラフィンが硬化され、パラフィンブロックが形成される。
【００８２】
（ステップＳ２Ｅ）
その後、ミクロトームなどの器具を用いて、パラフィンブロックを細断する。これにより、検体２のうち、励起光３１が照射された領域を含む部分が取り出される。
【００８３】
このステップＳ２が工程（ｂ）に対応する。ステップＳ２Ｅを経て得られた微小検体は、病理医によって診断され、腫瘍部位の有無の判別がなされる。
【００８４】
この方法によれば、蛍光分析による腫瘍部位の判別がなされた後、ホルダ１に検体２を収容したままの状態で、検体２を細断するまでに必要な、薬液の投入処理を行うことができる。これにより、検体２の移し替えの工程が削減され、誤処理や、誤判断を防止することができる。
【００８５】
なお、ステップＳ２Ｃを省略し、ステップＳ２Ｂの後にステップＳ２Ｄを実行するものとしても構わない。
【００８６】
［別実施形態］
以下において、別実施形態について説明する。
【００８７】
〈１〉  上述した判別方法において、ステップＳ２Ｃを省略し、ステップＳ２Ｂの後にステップＳ２Ｄを実行するものとしても構わない。
【００８８】
〈２〉  上述の実施形態では、ホルダ１が基体部４２と蓋部４３を備える構成であるものとして説明した。しかし、ホルダ１が蓋部４３を備えない構成であっても構わない。この場合、基体部４２上に載置された検体２が落下したり検体２に含まれる生理食塩水等の液体が流出することのないように、基体部４２の外縁が壁で囲まれた構成を採用してもよい。
【００８９】
〈３〉  ホルダ１が孔部４７を備えないものとしても構わない。この場合には、ステップＳ１からステップＳ２に移行する際に、検体２をホルダ１とは別のホルダに移し替えるものとしても構わない。
【符号の説明】
【００９０】
１      ：        検体用ホルダ
２      ：        検体
１０      ：        腫瘍部位判別装置
１１      ：        ホルダ装着口
１２      ：        表示部
２１      ：        光源部
２２      ：        フィルタ
２３      ：        ダイクロイックミラー
２４      ：        対物レンズ
２５      ：        フィルタ
２６      ：        受光部
２７      ：        演算処理部
３１      ：        励起光
３２      ：        蛍光
４１      ：        収容部
４２      ：        基体部
４３      ：        蓋部
４４      ：        凸部
４５      ：        枠状部材
４７      ：        孔部
５２      ：        窓部
【図１Ａ】
2017194430.tif 000003
【図１Ｂ】
2017194430.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図４Ｃ】
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【図５Ａ】
2017194430.tif 000010
【図５Ｂ】
2017194430.tif 000011
【図５Ｃ】
2017194430.tif 000012
【図６Ａ】
2017194430.tif 000013
【図６Ｂ】
2017194430.tif 000014
【図６Ｃ】
2017194430.tif 000015
【図６Ｄ】
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