(57)【要約】      （修正有）【課題】ＨＥＲ２発現腫瘍を標的化する有用な抗体−コンジュゲートの提供。【解決手段】コアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させる第１のステップ、並びに修飾抗体を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得る第２のステップを含む、下式で示される抗体−コンジュゲート。2017200902.tif 000063［ＡＢは抗体であり、リンカーＬを介して標的分子Ｄと接続；Ｄはメイタンシノイド等；Ｓ（Ｆ１）ｘは官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体；ｘは１又は２；Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸；触媒はＳ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移させる］【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンカーＬを介して標的分子Ｄに接続されている抗体ＡＢを含む抗体−コンジュゲートであって、
（ｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであり、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化１】
2017200902.tif 000057
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾抗体を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾抗体を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであり、リンカーＬはＳ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ
によって得ることができ、
抗体ＡＢが、ＣＤ３０発現腫瘍を標的化でき、標的分子Ｄが、タキサン、アントラサイクリン、カンプトテシン、エポシロン、マイトマイシン、コンブレタスタチン、ビンカアルカロイド、メイタンシノイド、カリケアマイシン及びエンジイン、デュオカルマイシン、ツブリシン、アマトキシン、ドラスタチン及びオーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリンｏ−ベンゾジアゼピン二量体、放射性同位体、治療用タンパク質及びペプチド（又はそれらの断片）、キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、並びにそれらの類似体又はプロドラッグからなる群から選択される、抗体−コンジュゲート。
【請求項２】
抗体がＣＤ３０発現腫瘍を標的化でき、Ｋｉ−２、Ｋｉ−４、Ｋｉ−６、Ｋｉ−７、ＨＲＳ−１、ＨＲＳ−４、Ｂｅｒ−Ｈ８、Ｂｅｒ−Ｈ２、５Ｆ１１、Ｋｉ−１、Ｋｉ−５、Ｍ６７、Ｋｉ−３、Ｍ４４、ＨｅＦｉ−１、ＡＣ１０、ｃＡＣ１０、及びそれらの機能性類似体から選択される、請求項１に記載の抗体−コンジュゲート。
【請求項３】
リンカーＬ２が、式（１）に従った基又はその塩：
【化２】
2017200902.tif 000058
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ３１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ若しくはＮＲ３３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ３１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含む、請求項１又は２に記載の抗体−コンジュゲート。
【請求項４】
抗体ＡＢがブレンツキシマブであり、標的分子Ｄが、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦからなるオーリスタチンの群から選択され、好ましくはＤ＝ＭＭＡＤ又はＭＭＡＥである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体−コンジュゲート。
【請求項５】
（Ｉ）ＡＢ＝ブレンツキシマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９７に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝ＭＭＡＥである；
（ＩＩ）ＡＢ＝ブレンツキシマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９７に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝ＭＭＡＥである；
（ＩＩＩ）ＡＢ＝ブレンツキシマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９７に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝ＭＭＡＥである；
（ＩＶ）ＡＢ＝ブレンツキシマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９７に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ｄ）２であり、Ｄの各出現＝ＭＭＡＥである；
（Ｖ）ＡＢ＝ブレンツキシマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９７に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ｄ）２であり、Ｄの各出現＝ＭＭＡＥである；
（ＶＩ）ＡＢ＝イラツムマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９２に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝ＭＭＡＥである；又は
（ＶＩＩ）ＡＢ＝ブレンツキシマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ２９７に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝ＭＭＡＤである、
請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体−コンジュゲート。
【請求項６】
バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための、コンジュゲーションのモードの使用であって、前記コンジュゲーションのモードが、生体分子Ｂを標的分子ＤとリンカーＬを介して接続するために使用されており、
（ｉｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであり、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化３】
2017200902.tif 000059
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾糖タンパク質を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾糖タンパク質を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであり、リンカーＬはＳ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ
を含む、使用。
【請求項７】
抗体ＡＢが、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、αｖ−インテグリン／ＩＴＧＡＶ、ＢＣＭＡ、Ｃ４．４ａ、ＣＡ−ＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ１９ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ｃ−ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、ＣＤ１３８／ＳＤＣ１、ＣＥＡＣＡＭ５（ＣＤ６６ｅ）、クリプト、ＣＳ１、ＤＬＬ３、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）、ＥＮＰＰ３（ＡＧＳ−１６）、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＯＬＲ１（葉酸受容体ａ）、ｇｐＮＭＢ、グアニルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＨＥＲ２、Ｅｒｂ−Ｂ２、Ｌａｍｐ−１、ルイスＹ抗原、ＬＩＶ−１（ＳＬＣ３９Ａ６、ＺＩＰ６）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＵＣ１（ＣＡ６、ｈｕＤＳ６）、ＭＵＣ１６／ＥＡ−１２５、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン−４、Ｎｏｔｃｈ３、Ｐ−カドヘリン、ＰＳＭＡ／ＦＯＬＨ１、ＰＴＫ７、ＳＬＩＴＲＫ６（ＳＬＣ４４Ａ４）、ＳＴＥＡＰ１、ＴＦ（ＣＤ１４２）、Ｔｒｏｐ−１、Ｔｒｏｐ−２／ＥＧＰ−１、Ｔｒｏｐ−３、Ｔｒｏｐ−４から選択される抗原を発現する腫瘍、好ましくはＣＤ３０発現腫瘍を標的化できる、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
抗体−コンジュゲートの治療指数を増加させることが、
（ａ）抗体−コンジュゲートの治療的有効性を増加させること；及び／又は
（ｂ）抗体−コンジュゲートの耐容性を増加させること
から選択される、請求項６又は７に記載の使用。
【請求項９】
ステップ（ｉｉ）の反応が、
【化４】
2017200902.tif 000060
（式中、サイクルＡは、７〜１０員の（ヘテロ）環状部分である）によって表される（１０ｅ）、（１０ｉ）又は（１０ｇ）によって、好ましくは（１０ｇ）によって表される接続部分Ｚ３を形成するための（シクロ）アルキン−アジドコンジュゲーション反応である、請求項６〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
Ｆ１のうちの１つがアジド部分であり、Ｑ１が（シクロ）アルキン部分であり、Ｚ３がトリアゾール部分である、請求項６〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
ｘが１又は２であり、好ましくはｘが１である、請求項６〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
Ｓ（Ｆ１）ｘが６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンである、請求項６〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
抗体−コンジュゲートが、式（４０）又は（４０ｂ）：
【化５】
2017200902.tif 000061
（式中：
Ｒ３１は、水素、ハロゲン、−ＯＲ３５、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ３５、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、ここで２個の置換基Ｒ３１は、一緒に連結されて縮環シクロアルキル又は縮環（ヘテロ）アレーン置換基を形成することができ、Ｒ３５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｘは、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３２であり、ここでＲ３２はＲ３１又はＬ３（Ｄ）ｒであり、ここでＬ３はリンカーであり、Ｄは、請求項１に定義されている通りであり；
ｒは、１〜２０であり；
ｑは、０又は１であるが、ｑが０であるならば、ＸはＮ−Ｌ２（Ｄ）ｒであることを条件とし；
ａａは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ’は、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ＋ａａ’＜１０であり；
ｂは、０又は１であり；
ｐｐは、０又は１であり；
Ｍは、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＦ２−、−ＣＨ２−、−ＣＦ２−、又はフェニレンのＣ２及びＣ６若しくはＣ３及びＣ５に好ましくは位置する０〜４個のフッ素置換基、好ましくは２個のフッ素置換基を含有する１，４−フェニレンであり；
ｙは、１〜４であり；
Ｆｕｃは、フコースである）によって表される、請求項６〜１２のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１４】
Ｄが活性物質、好ましくは抗癌剤である、請求項６〜１３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１５】
リンカーＬを介して標的分子Ｄに接続されている抗体ＡＢを含む抗体−コンジュゲートを、それを必要とする対象に投与するステップを含む、ＣＤ３０発現細胞を標的化するための方法であって、抗体−コンジュゲートが、
（ｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであり、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化６】
2017200902.tif 000062
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾抗体を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾抗体を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１を含むリンカー−コンジュゲート及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであり、リンカーＬはＳ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ
によって得ることができ、
抗体ＡＢがＣＤ３０発現腫瘍を標的化できる、方法。
【請求項１６】
ＣＤ３０発現細胞を標的化するステップが、ＣＤ３０発現細胞、特にＣＤ３０発現腫瘍を処置すること、画像化すること、診断すること、その増殖を防止すること、封じ込めること及び低減することのうちの１つ又は複数を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
対象が、リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、大Ｂ細胞リンパ腫、小児リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫及び腸症関連Ｔ細胞リンパ腫（ＥＡＴＬ）、白血病、例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）及び肥満細胞白血病、生殖細胞癌、移植対宿主病（ＧｖＨＤ）、並びにループス、特に全身性ループスエリテマトーデス（ＳＬＥ）から選択される障害を患う、請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
標的分子Ｄが抗癌剤、好ましくは細胞毒である、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はバイオコンジュゲーションの分野におけるものである。より詳細には、本発明は、特にＨＥＲ２発現腫瘍を標的化する際にバイオコンジュゲートの治療指数に対して有益な効果を有するバイオコンジュゲートを調製するための、コンジュゲーションの特定のモードに関する。
【背景技術】
【０００２】
バイオコンジュゲーションは、少なくとも１つが生体分子である２つ以上の分子を連結するプロセスである。生体分子（単数又は複数）は、「目的の生体分子（単数又は複数）」と称されることもあり、他の分子（単数又は複数）は、「標的分子」又は「目的の分子」と称されることもある。典型的に、目的の生体分子（ＢＯＩ）は、タンパク質（又はペプチド）、グリカン、核酸（又はオリゴヌクレオチド）、脂質、ホルモン又は天然薬物（又はその断片若しくは組合せ）からなる。目的の他の分子（ＭＯＩ）は生体分子であってもよく、それゆえに、ホモ若しくはヘテロ二量体（又は高級オリゴマー）の形成に至るか、又は他の分子は、コンジュゲーションプロセスによって目的の生体分子に付与される特定の特色を有することができる。例えば、検出及び／又は単離のための化学プローブを用いる共有結合修飾によるタンパク質構造及び機能の変調は、プロテオームベースの研究調査及び生体医用用途における強力なツールとして発展してきた。タンパク質の蛍光性又は親和性タグ付けは、タンパク質の天然生育地におけるタンパク質の輸送を研究する上での鍵となる。タンパク質−炭水化物コンジュゲートに基づくワクチンは、ＨＩＶ、癌、マラリア及び病原性細菌との闘いにおいて活躍してきた。一方、マイクロアレイに固定されている炭水化物は、グライコームの解明に役立っている。合成のＤＮＡ及びＲＮＡオリゴヌクレオチド（ＯＮ）は、診断及び治療用途、例えばマイクロアレイ科学技術、アンチセンス及び遺伝子サイレンシング治療、ナノテクノロジー、並びに様々な材料科学用途のための適当な官能性基の導入を必要とする。例えば、細胞透過性リガンドの結合は、オリゴヌクレオチドベースの治療（アンチセンス、ｓｉＲＮＡ）中に遭遇するＯＮの低い内部移行速度に取り組むために、最も一般的に適用される戦略である。同様に、オリゴヌクレオチドベースのマイクロアレイの調製は、適当な固体表面、例えばガラスへのＯＮの選択的固定化を必要とする。
【０００３】
２つ（以上）の分子構造を共有結合的に連結するのに適当な化学反応の多数の例がある。しかしながら、生体分子の標識化は、適用することができる反応条件（溶媒、濃度、温度）に高い制限を課し、一方で、化学選択的標識化を所望の場合は、反応性基の選択が制限される。当然の理由により、生物系は一般に水性環境において最も良く機能し、これは、バイオコンジュゲーションの試薬が水性系における適用に適当であるべきであることを意味している。一般に、２つの戦略的概念がバイオコンジュゲーション科学技術の分野において認識され得る：（ａ）例えばチオール、アミン、アルコール若しくはヒドロキシフェノール単位などの目的の生体分子にすでに存在する官能基に基づくコンジュゲーション、又は（ｂ）実際のコンジュゲーションプロセスの前に１個（又は複数）の独特の反応性基をＢＯＩに改変することを伴う２段階プロセス。
【０００４】
第１の手法は、タンパク質（例えばシステイン、リシン、セリン及びチロシン）における反応性アミノ酸側鎖、又はグリカン（例えばアミン、アルデヒド）若しくは核酸（例えばプリン若しくはピリミジン官能性基又はアルコール）における官能基を典型的に伴う。とりわけ、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３に要約されている通り、ここ何年かの間に、これらの官能基のうちの１つの化学選択的標的化に、多数の反応性官能基、例えばマレイミド、ハロアセトアミド、活性化エステル、活性化カーボネート、ハロゲン化スルホニル、活性化チオール誘導体、アルケン、アルキン、アレンアミドなどが利用できるようになってきており、その各々がコンジュゲーションのそれ自体の特定の条件（ｐＨ、濃度、化学量論、光、など）を必要とする。最も顕著には、システイン−マレイミドコンジュゲーションは、高い反応速度及び化学選択性のおかげで、タンパク質コンジュゲーションで卓越している。しかしながら、多くのタンパク質、そして無論他の生体分子における場合のように、システインがコンジュゲーションに利用可能でないと、他の方法がしばしば必要とされ、各々が独自の欠点に悩まされている。
【０００５】
バイオコンジュゲーションのための的確な及び広く適用可能な解決策は、上記２段階手法に関与する。より面倒ではあるが、改変された官能性基を介する２段階コンジュゲーションは、天然官能性基におけるコンジュゲーションよりも高い選択性（部位特異性）が典型的には得られる。その上、完全な安定性は、コンストラクトの適切な選択によって達成することができる。この点は、特にシステイン−マレイミドコンジュゲーションの場合、未変性の官能性基における１段階コンジュゲーションの重要な欠点であり得る。ＢＯＩに付与することができる官能基の典型例としては、（歪み）アルキン、（歪み）アルケン、ノルボルネン、テトラジン、アジド、ホスフィン、ニトリルオキシド、ニトロン、ニトリルイミン、ジアゾ化合物、カルボニル化合物、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミン及びヒドラジンが挙げられ、これらは、化学的又は分子生物学手法のいずれかによって達成することができる。上の官能基の各々は、少なくとも１つの反応パートナーを有することが知られており、多くの場合に完全な相互反応性を伴う。例えば、シクロオクチンは１，３−双極子と、歪みアルケンはテトラジンと、及びホスフィンはアジドと選択的及び排他的に反応し、完全に安定な共有結合に至る。しかしながら、上の官能基のいくつかは、高親油性であるという不利な点を有し、このことは、特に目的の親油性分子との組合せでコンジュゲーション効率を損なうおそれがある（下記を参照されたい）。
【０００６】
生体分子と目的の他の分子との間の最終連結単位は、優先的に、可溶性、安定性及び生体適合性の点から水性環境と完全に適合性であるべきでもある。例えば、高親油性リンカーは、凝集（コンジュゲーション中及び／又は後）に至ることがあり、凝集は、特にＭＯＩが疎水性性質でもある場合、反応時間を著しく増加させる及び／又はコンジュゲーション収率を低減することがある。同様に、高親油性リンカー−ＭＯＩ組合せは、同じ又は他の生体分子の表面又は特定の疎水性パッチへの非特異的結合に至ることがある。リンカーが水性加水分解又は他の水誘発切断反応に感受性であるならば、元のバイオコンジュゲートを含む構成成分は拡散によって分離する。例えば、ある特定のエステル部分はケン化されるため適当でなく、一方、β−ヒドロキシカルボニル又はγ−ジカルボニル化合物は、それぞれレトロアルドール反応又はレトロマイケル反応に至り得る。最終的に、リンカーは、バイオコンジュゲートに存在する官能性基に対して、又はバイオコンジュゲートの適用中に遭遇し得る任意の他の官能性基に対して不活性であるべきであり、これにより、特に、例えばケトン部分若しくはアルデヒド部分（イミン形成に至ることがある）、α，β−不飽和カルボニル化合物（マイケル付加）、チオエステル若しくは他の活性化エステル（アミド結合形成）を特色とするリンカーの使用は除外される。
【０００７】
エチレングリコールの直鎖オリゴマーで作製されている化合物、いわゆるポリエチレングリコール（ＰＥＧ）リンカーは、最近、生体分子コンジュゲーションプロセスにおいて特に普及している。ＰＥＧリンカーは、高水溶性、非毒性、非抗原性であり、凝集をごくわずかにしか又は全く生じない。この理由により、目的の（生体）分子を用いていずれかの端部で選択的に修飾することができる多種多様な直鎖の二官能性ＰＥＧリンカーが、様々な供給元から市販されている。ＰＥＧリンカーは、酸化エチレンの重合プロセスの生成物であり、そのため、１ｋＤａ、２ｋＤａ、４ｋＤａ又はそれ以上（最大６０ｋＤａ）を中心とする平均重量分布を有するＰＥＧコンストラクトに部分的に分解することができる鎖長の確率的混合物として典型的に得られる。最大４ｋＤａの分子量を有する均質の個別ＰＥＧ（ｄＰＥＧ）も知られており、その分枝バージョンは最大１５ｋＤａになる。興味深いことに、ＰＥＧ単位それ自体は、生体分子に特別な特徴を付与する。特に、タンパク質ＰＥＧ化は、インビボにおける滞留の延長、代謝酵素による分解の減少、及びタンパク質免疫原性の低減又は消失に至ることがある。いくつかのＰＥＧ化タンパク質はＦＤＡ承認されており、現在市場に出ている。
【０００８】
ＰＥＧリンカーは、高い極性のおかげで、水性条件下で小さい部分及び／又は水溶性部分のバイオコンジュゲーションに全く適当である。しかしながら、目的の疎水性の非水溶性分子のコンジュゲーションの場合において、ＰＥＧ単位の極性は、疎水性を相殺するのに不十分で、反応速度の著しい低減、より低い収率及び凝集誘発の課題に至り得る。こうした場合において、長いＰＥＧリンカー及び／又はかなりの量の有機共溶媒が、試薬を可溶化するために必要とされることがある。例えば、抗体−薬物コンジュゲートの分野において、モノクローナル抗体への別々の数の毒性ペイロードの結合の制御が鍵であり、ペイロードはオーリスタチンＥ若しくはＦ、メイタンシノイド、デュオカルマイシン、カリケアマイシン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）の群から典型的に選択され、多くの他のものも検討中である。オーリスタチンＦを除いて、全ての毒性ペイロードは非水溶性に乏しく、成功コンジュゲーションを達成するために２５％のジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）又は５０％のプロピレングリコール（ＰＧ）などの有機共溶媒を必要とする。疎水性ペイロードの場合において、上述の共溶媒の使用にもかかわらず、大化学量論の試薬がコンジュゲーション中に必要とされることがあり、一方で、効率及び収率は、例えば、参照により組み込まれるＮａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎ．２０１４、２４、１２５６〜１２６３においてＳｅｎｔｅｒらによって記載されている通り、（プロセス中又は生成物単離後）凝集により著しく損なわれることがある。長いＰＥＧスペーサー（１２単位以上）の使用は、可溶性及び／又はコンジュゲーション効率を部分的に増強することができるが、長いＰＥＧスペーサーは、より急速なインビボクリアランスに至ることがあり、それゆえにＡＤＣの薬物動態プロファイルに負の影響を及ぼすことが示されている。
【０００９】
従来のリンカー（例えばＰＥＧ）を使用すると、有効なコンジュゲーションは、殊に相対的水不溶性又は疎水性標的分子が使用される場合に、水性媒体におけるリンカー−コンジュゲートの相対的に低い可溶性によってしばしば妨げられる。疎水性部分の速い及び効果的なコンジュゲーションを可能にする短い極性スペーサーに対する本発明者らの探求において、本発明者らは、リンカー−コンジュゲートの可溶性を改善し、それにより、コンジュゲーションの効率を著しく改善するとともにプロセス中における凝集及び生成物の凝集の両方を低減することが見出されたスルファミドリンカーを開発した。このスルファミドリンカーは、本明細書においてその全体が組み込まれる国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７に開示されている。
【００１０】
リンカーは当技術分野において知られており、例えば、参照により組み込まれる国際公開第２００８／０７０２９１号に開示されている。国際公開第２００８／０７０２９１号は、アンカリング構成成分への標的剤のカップリングのためのリンカーを開示している。上記リンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）によって代表される親水性領域、及び標的化剤へカップリングされるキラル中心を欠如している伸長を含有している。
【００１１】
参照により組み込まれる国際公開第０１／８８５３５号は、バイオコンジュゲーションのための表面用のリンカー系、特に、新規な親水性スペーサー基を有するリンカー系を開示している。上記リンカー系における使用のための親水性原子又は親水性基は、Ｏ、ＮＨ、Ｃ＝Ｏ（ケト基）、Ｏ−Ｃ＝Ｏ（エステル基）及びＣＲ３Ｒ４からなる群から選択され、ここでＲ３及びＲ４は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシ及びＣ１〜Ｃ４アシルオキシからなる群から独立して選択される。
【００１２】
参照により組み込まれる国際公開第２０１４／１００７６２号は、適切な条件下で切断可能であるとともに親水性基を組み込むことで化合物のより良好な可溶性を提供する親水性自己犠牲リンカーを有する化合物を記載している。上記化合物は、薬物部分、選択された細胞集団を標的化できる標的化用部分、並びにアシル単位、薬物部分と標的化用部分との間の距離を提供するための任意選択のスペーサー単位を含有するリンカー、適切な条件下で切断可能であり得るペプチドリンカー、親水性自己犠牲リンカー、及び任意選択の第２の自己犠牲スペーサー又は環化自己脱離リンカーを含む。親水性自己犠牲リンカーは、例えばベンジルオキシカルボニル基である。
【発明の概要】
【００１３】
本発明は、バイオコンジュゲート、即ち生体分子及び標的分子のコンジュゲートの治療指数を増加させるための方法又は使用に関する。本発明者らは、驚くべきことに、コンジュゲーションの特定のモードを介して調製されるバイオコンジュゲートが、コンジュゲーションの異なるモードを介して得られる同じバイオコンジュゲート、即ち、同じ生体分子、同じ標的分子（例えば活性物質）及び同じ生体分子薬物比と比較して、より大きな治療指数を呈することを見出した。標的分子へ生体分子をコンジュゲートするモードは、リンカーそれ自体において及び／又は生体分子へのリンカーの結合点において曝露される。リンカー及び／又は結合点が抗体−薬物−コンジュゲートなどのバイオコンジュゲートの治療指数に対して効果を有し得ることは、現在の知識に基づいては想起され得ない。上記分野において、リンカーは、処置に関しては不活性と考えられ、バイオコンジュゲートの調製の帰結として存在するだけである。コンジュゲーションの特定のモードの選択が治療指数に対して効果を有することは前例がなく、バイオコンジュゲート、特に抗体−薬物−コンジュゲートの分野における画期的発見である。
【００１４】
本発明によるバイオコンジュゲートは、一方で、コンジュゲーションの異なるモードを介して得られる同じバイオコンジュゲート、即ち同じ生体分子、同じ標的分子（例えば活性物質）及び同じ生体分子／標的分子比よりも効果的（治療的に有効）であり、並びに／又は他方で、より大きな耐容性を呈する。この知見は、治療ウィンドウが広がるので、本発明によるバイオコンジュゲートを用いる対象の処置に対して劇的な意義を有する。治療ウィンドウの拡大の結果として、処置投与量が低下され得、帰結として、潜在的な望まれない副作用が低減される。
【００１５】
一実施形態において、本発明によるコンジュゲーションのモードは以下を含む：
（ｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン置換基を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであって、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化１】
2017200902.tif 000002
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃは、Ｎ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃは、フコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾抗体を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾抗体を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであって、リンカーＬはＳ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ。
【００１６】
一実施形態において、本発明によるコンジュゲーションのモードは、バイオコンジュゲートが、式（１）：
【化２】
2017200902.tif 000003
に従った基又はその塩を含むリンカーＬを含有することを確実にする。
【００１７】
本発明者らは、驚くべきことに、式（１）に従った基又はその塩を含むリンカーＬを含有するように調製されたバイオコンジュゲートが、式（１）に従った基が存在しないリンカーを含有する同じバイオコンジュゲート、即ち同じ生体分子、同じ標的分子（例えば活性物質）及び同じ生体分子薬物比と比較して、より大きな治療指数を呈することを見出した。
【００１８】
式（１）に従った基において、
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、さらなる標的分子Ｄであり、ここでＤは、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている。
【００１９】
本発明の文脈において、コンジュゲーションの上記モードは、リンカーＬを介して生体分子Ｂを標的分子Ｄと接続するために使用されている。コンジュゲーションは、生体分子を標的分子に接続する特定のモードを指す。本発明によるバイオコンジュゲートは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
（式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分である）によって表される。
【００２０】
コンジュゲーションのモードが「スルファミド連結」と称される実施形態には、以下の実施形態が好ましい：
１．式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
（式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分である）のバイオコンジュゲートを、標的分子（Ｄ）の反応性基Ｑ１を生体分子（Ｂ）の官能基Ｆ１と反応させることによって、Ｌが式（１）：
【化３】
2017200902.tif 000004
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ若しくはＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）に従った基又はその塩を含むように調製するステップを含む、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための方法。
２．バイオコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与するステップをさらに含む、実施形態１による方法。
３．対象が癌患者である、実施形態２による方法。
４．生体分子が抗体であり、バイオコンジュゲートが抗体−薬物−コンジュゲートである、先行する実施形態のいずれかによる方法。
５．標的分子Ｄが活性物質、好ましくは細胞毒である、先行する実施形態のいずれかによる方法。
６．バイオコンジュゲートが式Ｂ−Ｚ３−Ｌ−Ｄを有し、ここでＺ３は、反応性基Ｑ１を官能基Ｆ１と反応させることによって得られる、先行する実施形態のいずれかによる方法。
７．Ｚ３が、式Ｑ１−Ｌ−Ｄ（式中、Ｌは、式（１）：
【化４】
2017200902.tif 000005
に従った基又はその塩を含む）を有するリンカー−コンジュゲートを、式Ｂ−Ｆ１を有する生体分子と反応させることによって得られ、ここでＢ、Ｄ、ａ及びＲ１は、実施形態１に定義されている通りである、実施形態６による方法。
８．リンカー−コンジュゲートが、式（４ａ）若しくは（４ｂ）：
【化５】
2017200902.tif 000006
（式中：
ａは、独立して０又は１であり；
ｂは、独立して０又は１であり；
ｃは、０又は１であり；
ｄは、０又は１であり；
ｅは、０又は１であり；
ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
ｇは、０又は１であり；
ｉは、０又は１であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３を、Ｓｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり、；
Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４を、Ｓｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又はＲ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］であり、ここでＤは標的分子であり、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｄ、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）又はその塩に従った、実施形態７によるプロセス。
９．Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４が、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は任意選択で置換されている、実施形態８によるプロセス。
１０．Ｚ１及びＺ２が、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＳＣ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｓ）−、−ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＳＳ（Ｏ）２−、−ＳＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＳＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は任意選択で置換されている、実施形態８又は９によるプロセス。
１１．Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４が、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、Ｑ１が、式（９ａ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｏ）又は（９ｐ）、（９ｔ）又は（９ｚｈ）：
【化６】
2017200902.tif 000007
（式中：
Ｕは、Ｏ又はＮＲ９であり、Ｒ９は、水素、直鎖若しくは分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基であり；
Ｒ１０は、（チオ）エステル基であり；
Ｒ１８は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される）に従う、実施形態８〜１０のいずれか１つによるプロセス。
１２．反応性基Ｑ１と官能基Ｆ１との間の反応が、（１０ａ）又は（１０ｂ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのチオール−アルケンコンジュゲーション、（１０ｃ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのアミノ−（活性化）カルボン酸コンジュゲーション、Ｙ＝ＮＨである（１０ｄ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのケトン−ヒドラジノコンジュゲーション、Ｙ＝Ｏである（１０ｄ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのケトン−オキシアミノコンジュゲーション、（１０ｅ）又は（１０ｇ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのアルキン−アジドコンジュゲーション、及びＮ２が脱離する（１０ｈ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのアルケン−１，２，４，５−テトラジンコンジュゲーション又はアルキン−１，２，４，５−テトラジンコンジュゲーションから選択されるコンジュゲーション反応であり、ここで、部分（１０ａ）、（１０ｂ）、（１０ｃ）、（１０ｄ）、（１０ｅ）、（１０ｇ）及び（１０ｈ）は、
【化７】
2017200902.tif 000008
（式中、Ｚは、水素、メチル及びピリジルから選択される）によって表される、先行する実施形態のいずれかによる方法。
１３．ａ＝０である、先行する実施形態のいずれかによる方法。
１４．式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
［式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分であり、
ここでＬは、式（１）：
【化８】
2017200902.tif 000009
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）に従った基又はその塩を含む］によって表される、それを必要とする対象の処置における使用のためのバイオコンジュゲート。
１５．癌の処置における使用のための、実施形態１４に従った使用のためのバイオコンジュゲート。
【００２１】
本発明は、したがって、第１の態様において、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための方法又は使用に関し、ここで、本発明によるコンジュゲーションのモードは、バイオコンジュゲートを調製することに含まれる又は調製するために使用される。一実施形態において、コンジュゲーションのモードは、本明細書において定義されている通りのステップ（ｉ）及び（ｉｉ）を含む。代替実施形態において、コンジュゲーションのモードは、上で定義されている通りのリンカーＬがバイオコンジュゲートに含まれるように式（Ａ）のバイオコンジュゲートを調製するステップを含む。一実施形態において、本発明による方法又は使用は、バイオコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することをさらに含む。第１の態様による本発明は、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための、バイオコンジュゲートにおける上で定義されている通りのコンジュゲーションのモードの使用として、又はバイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための、バイオコンジュゲートにおける上で定義されている通りのリンカーＬの使用として表すこともできる。
【００２２】
さらなる態様において、本発明は、本発明によるバイオコンジュゲートの投与を含む、それを必要とする対象の処置に関する。典型的に、上記バイオコンジュゲートは、治療有効量で投与される。治療的有効性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置におけるよりも頻繁に行わない及び／又はより低い用量で行うことがある。代替として、耐容性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置におけるよりも頻繁に及び／又はより高い用量で行うことがある。投与は単回用量であり得るか、又は例えば１カ月１〜４回、好ましくは１カ月１〜２回行うことができ、より好ましい投与は、３週又は４週毎に、最も好ましくは４週毎に１回行う。当業者によって理解される通り、本発明によるバイオコンジュゲートの用量は多くの因子に依存することがあり、最適用量は、日常的実験法を介して当技術者によって決定することができる。上記バイオコンジュゲートは、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ対象体重、より正確には０．０３〜２５ｍｇ／ｋｇ若しくは最も正確には０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ、又は代替として０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ若しくは０．５〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で典型的に投与される。
【００２３】
一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＴＤ５０よりも低い用量であり、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＴＤ５０の好ましくは多くとも９９〜９０％、より好ましくは多くとも８９〜６０％、いっそう好ましくは５９〜３０％、最も好ましくは多くとも２９〜１０％である。代替として、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＴＤ５０よりも高い用量であり、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＴＤ５０の好ましくは多くとも１０〜２９％、より好ましくは多くとも３０〜５９％、いっそう好ましくは６０〜８９％、最も好ましくは多くとも９０〜９９％である。
【００２４】
一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＥＤ５０よりも低い用量であり、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＥＤ５０の好ましくは多くとも９９〜９０％、より好ましくは多くとも８９〜６０％、いっそう好ましくは５９〜３０％、最も好ましくは多くとも２９〜１０％である。代替として、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＴＤ５０よりも高い用量であり、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないＴＤ５０の好ましくは多くとも１．１〜１．４９倍高い、より好ましくは多くとも１．５〜１．９９倍高い、いっそう好ましくは２〜４．９９倍高い、最も好ましくは多くとも５〜１０倍高い。
【００２５】
バイオコンジュゲートの調製は、式Ｑ１−Ｌ−Ｄを有するリンカー−コンジュゲートを反応させるステップを典型的に含み、ここでＬ及びＤは上で定義されている通りであり、Ｑ１は、官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり、生体分子は式Ｂ−Ｆ１を有し、ここで、Ｂは上で定義されている通りであり、Ｆ１は、Ｑ１と反応できる官能基である。本明細書において、Ｑ１及びＦ１は反応することで、式（Ａ）に従ったバイオコンジュゲート中、ＢとＬとの間のスペーサー部分に位置する接続基Ｚ３を形成する。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】生体分子のコンジュゲーションの一般概念を記載する図であり：１個又は複数の官能基Ｆ１を含有する目的の生体分子（ＢＯＩ）は、特定のリンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合している（過剰の）標的分子Ｄ（目的の分子又はＭＯＩとも称される）とともにインキュベートされる。バイオコンジュゲーションのプロセスにおいて、Ｆ１とＱ１との間の化学反応が起き、それによって、ＢＯＩとＭＯＩとの間の共有結合的接続を含むバイオコンジュゲートを形成する。ＢＯＩは、例えばペプチド／タンパク質、グリカン又は核酸であり得る。
【図２】例えば３−メルカプトプロピオニル基（１１ａ）、アジドアセチル基（１１ｂ）若しくはアジドジフルオロアセチル基（１１ｃ）を用いて２位で、又はアジドアジドアセチル基を用いてＮ−アセチルガラクトサミン（１１ｄ）の６位で修飾することができる、ガラクトサミンのＵＤＰ糖類の誘導体のいくつかの構造を示す図である。
【図３】ＵＤＰ−糖類１１ａ〜ｄの任意のものが、ガラクトシルトランスフェラーゼ突然変異体又はＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼの作用下で、ＧｌｃＮＡｃ部分１２（例えば、グリカンがエンドグリコシダーゼによってトリミングされているモノクローナル抗体）を含む糖タンパク質に結合することができ、それによって、ＧａｌＮＡｃ誘導体とＧｌｃＮＡｃ（それぞれ、化合物１３ａ〜ｄ）との間にβ−グリコシド１−４連結を生成させる方法を概略的に表示する図である。
【図４】修飾抗体１３ａ〜ｄが、マレイミドへの求核付加の手段によって（チオエーテルコンジュゲート１４に至る３−メルカプトプロピオニル−ガラクトサミン修飾１３ａ、又はチオエーテルコンジュゲート１７に至る改変システイン残基へのコンジュゲーションに関する）、又はシクロオクチン試薬を用いる歪み促進付加環化で（それぞれ、トリアゾール１５ａ、１５ｂ又は１６に至る１３ｂ、１３ｃ又は１３ｄに関する）バイオコンジュゲーションプロセスを受けることができる方法を示す図である。
【図５】天然に存在するか又は改変することによって導入されるかのいずれかである、生体分子における代表的な一連の官能基（Ｆ１）であって、反応性基Ｑ１との反応で接続基Ｚ３に至る官能基（Ｆ１）を示す図である。官能基Ｆ１は、選択の任意の位置で生体分子に人工的に導入する（改変する）こともできる。
【図６】本発明による好ましいバイオコンジュゲートを示す図である。実施例において、コンジュゲート８１〜８５が調製され、その治療指数が調査されている。コンジュゲート８１〜８５は、抗体としてトラスツズマブにコンジュゲートされている。
【図７Ａ】対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（図７Ａ）及び本発明による抗体−コンジュゲート８４（図７Ｂ）、８１（図７Ｃ）、８２（図７Ｄ）、８３（図７Ｅ）について実施例３４の耐容性研究の結果を図示するグラフである。処置の開始（１日目）での１００％に基づき、時間の経過による百分率体重変化（ΔＢＷ）が図示されている。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図７Ｂ】対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（図７Ａ）及び本発明による抗体−コンジュゲート８４（図７Ｂ）、８１（図７Ｃ）、８２（図７Ｄ）、８３（図７Ｅ）について実施例３４の耐容性研究の結果を図示するグラフである。処置の開始（１日目）での１００％に基づき、時間の経過による百分率体重変化（ΔＢＷ）が図示されている。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図７Ｃ】対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（図７Ａ）及び本発明による抗体−コンジュゲート８４（図７Ｂ）、８１（図７Ｃ）、８２（図７Ｄ）、８３（図７Ｅ）について実施例３４の耐容性研究の結果を図示するグラフである。処置の開始（１日目）での１００％に基づき、時間の経過による百分率体重変化（ΔＢＷ）が図示されている。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図７Ｄ】対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（図７Ａ）及び本発明による抗体−コンジュゲート８４（図７Ｂ）、８１（図７Ｃ）、８２（図７Ｄ）、８３（図７Ｅ）について実施例３４の耐容性研究の結果を図示するグラフである。処置の開始（１日目）での１００％に基づき、時間の経過による百分率体重変化（ΔＢＷ）が図示されている。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図７Ｅ】対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（図７Ａ）及び本発明による抗体−コンジュゲート８４（図７Ｂ）、８１（図７Ｃ）、８２（図７Ｄ）、８３（図７Ｅ）について実施例３４の耐容性研究の結果を図示するグラフである。処置の開始（１日目）での１００％に基づき、時間の経過による百分率体重変化（ΔＢＷ）が図示されている。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図８Ａ】対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（Ｋ）及び本発明による抗体−コンジュゲート８１〜８４について実施例３３の有効性研究の結果を図示するグラフである。有効性は時間の経過による腫瘍体積の変化として表され、ここで、より大きな有効性は、腫瘍体積のより大きな低減又はより少ない増加に至る。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図８Ｂ】同様の結果を図示するグラフである。本発明による抗体−コンジュゲート８５及び対照抗体−コンジュゲートＫａｄｃｙｌａ（Ｋ）の有効性は提示されている。有効性は時間の経過による腫瘍体積の変化として表され、ここで、より大きな有効性は、腫瘍体積のより大きな低減又はより少ない増加に至る。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【図８Ｃ】同様の結果を図示するグラフである。本発明による抗体−コンジュゲート９５〜９８の有効性は提示されている。有効性は時間の経過による腫瘍体積の変化として表され、ここで、より大きな有効性は、腫瘍体積のより大きな低減又はより少ない増加に至る。Ｃ＝ビヒクル処置された。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明の文脈において、コンジュゲーション反応は、一方では、官能基Ｆ１を含有する生体分子（ＢＯＩ）、及び他方では、反応性基Ｑ１を含有する標的分子（ＭＯＩ）、又は本明細書において定義されている通りの「リンカー−コンジュゲート」を伴い、ここで、Ｑ１はＦ１と反応することで、バイオコンジュゲートにおけるＢＯＩ及びＭＯＩを繋ぐ接続基を形成する。本明細書において、反応性基Ｑ１は、リンカーを介してＭＯＩに繋がれ、上記リンカーは、式（１）に従ったスルファミド部分を含む。
【化９】
2017200902.tif 000010
【００２８】
反応性基Ｑ１は、式（１）の部分のいずれの端部に結合していてもよく、この場合、ＭＯＩは、式（１）の部分の反対端部に結合している。一実施形態において、反応性基Ｑ１は、カルボニル端部を介して式（１）の部分に結合しており、ＭＯＩは、式（１）の部分のスルファミド端部を介して結合している。一実施形態において、反応性基Ｑ１は、スルファミド端部を介して式（１）の部分に結合しており、ＭＯＩは、式（１）の部分のカルボニル端部を介して結合している。
定義
【００２９】
「含むこと」という動詞、及びそれの活用は、本明細書及び請求項において使用される場合、上記単語に追従する項目が含まれるが、具体的に記述されてない項目が除かれないことを意味する非限定的な意味において使用される。
【００３０】
加えて、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」による要素への言及は、要素のうちの１つ及び１つだけがあることを文脈が明確に必要としていない限り、要素のうちの１つ超が存在するという可能性を除かない。不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は、したがって「少なくとも１つ」を通常意味する。
【００３１】
本明細書及び請求項に開示されている化合物は、１つ又は複数の不斉中心を含むことができ、上記化合物の異なるジアステレオマー及び／又はエナンチオマーが存在し得る。本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、別段に明記されていない限り、全てのジアステレオマー及びその混合物が含まれると意味される。加えて、本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、別段に明記されていない限り、個々のエナンチオマー、並びにエナンチオマーの任意の混合物、ラセミ又はそうでないものの両方が含まれると意味される。化合物の構造が、特定のエナンチオマーとして図示されている場合、本出願の発明は、その特定のエナンチオマーに限定されないと理解されるべきである。
【００３２】
化合物は、異なる互変異性体形態であることがある。本発明による化合物は、別段に明記されていない限り、全ての互変異性体形態が含まれると意味される。化合物の構造が特定の互変異性体として図示されている場合、本出願の発明は、その特定の互変異性体に限定されないと理解されるべきである。
【００３３】
本明細書及び請求項に開示されている化合物は、エキソ及びエンドジアステレオ異性体としてさらに存在することがある。別段に明記されていない限り、本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、化合物個々のエキソ及び個々のエンドジアステレオ異性体の両方、並びにその混合物が含まれると意味される。化合物の構造が特定のエンド又はエキソジアステレオマーとして図示されている場合、本出願の発明は、その特定のエンド又はエキソジアステレオマーに限定されないと意味される。
【００３４】
さらに、本明細書及び請求項に開示されている化合物は、シス及びトランス異性体として存在することがある。別段に明記されていない限り、本明細書及び請求項における任意の化合物の記載は、化合物の個々のシス及び個々のトランス異性体の両方、並びにその混合物が含まれると意味される。例として、化合物の構造がシス異性体として図示されている場合、対応するトランス異性体又はシス及びトランス異性体の混合物は、本出願の発明から除かれないと理解されるべきである。化合物の構造が特定のシス又はトランス異性体として図示されている場合、本出願の発明は、その特定のシス又はトランス異性体に限定されないと理解されるべきである。
【００３５】
非置換アルキル基は一般式ＣｎＨ２ｎ＋１を有し、直鎖又は分枝であり得る。任意選択で、アルキル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されている。アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、２−プロピル、ｔ−ブチル、１−ヘキシル、１−ドデシルなどが挙げられる。
【００３６】
シクロアルキル基は環状アルキル基である。非置換シクロアルキル基は少なくとも３個の炭素原子を含み、一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有する。任意選択で、シクロアルキル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されている。シクロアルキル基の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルが挙げられる。
【００３７】
アルケニル基は、１個又は複数の炭素−炭素二重結合を含み、直鎖又は分枝であり得る。１個のＣ−Ｃ二重結合を含む非置換アルケニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−１を有する。２個のＣ−Ｃ二重結合を含む非置換アルケニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−３を有する。アルケニル基は、末端炭素−炭素二重結合及び／又は内部炭素−炭素二重結合を含むことがある。末端アルケニル基は、炭素−炭素二重結合が炭素鎖の末端位置に位置するアルケニル基である。アルケニル基は、２個以上の炭素−炭素二重結合を含むこともある。アルケニル基の例としては、エテニル、プロペニル、イソプロペニル、ｔ−ブテニル、１，３−ブタジエニル、１，３−ペンタジエニルなどが挙げられる。別段に明記されていない限り、アルケニル基は、下記に定義されている通りの１個又は複数の独立して選択される置換基で任意選択で置換されていてもよい。別段に明記されていない限り、アルケニル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されることがある。
【００３８】
アルキニル基は、１個又は複数の炭素−炭素三重結合を含み、直鎖又は分枝であり得る。１個のＣ−Ｃ三重結合を含む非置換アルキニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−３を有する。アルキニル基は、末端炭素−炭素三重結合及び／又は内部炭素−炭素三重結合を含むことがある。末端アルキニル基は、炭素−炭素三重結合が炭素鎖の末端位置に位置するアルキニル基である。アルキニル基は、２個以上の炭素−炭素三重結合を含むこともある。別段に明記されていない限り、アルキニル基は、下記に定義されている通りの１個又は複数の独立して選択される置換基で任意選択で置換されていてもよい。アルキニル基の例としては、エチニル、プロピニル、イソプロピニル、ｔ−ブチニルなどが挙げられる。別段に明記されていない限り、アルキニル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から独立して選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されていることがある。
【００３９】
アリール基は、６〜１２個の炭素原子を含み、単環式及び二環式構造が含まれ得る。任意選択で、アリール基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。アリール基の例はフェニル及びナフチルである。
【００４０】
アリールアルキル基及びアルキルアリール基は、少なくとも７個の炭素原子を含み、単環式及び二環式構造が含まれ得る。任意選択で、アリールアルキル基及びアルキルアリールは、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。アリールアルキル基は例えばベンジルである。アルキルアリール基は例えば４−ｔ−ブチルフェニルである。
【００４１】
ヘテロアリール基は、少なくとも２個の炭素原子（即ち、少なくともＣ２）及び１個又は複数のヘテロ原子Ｎ、Ｏ、Ｐ又はＳを含む。ヘテロアリール基は、単環式又は二環式構造を有することがある。任意選択で、ヘテロアリール基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。適当なヘテロアリール基の例としては、ピリジニル、キノリニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラゾリル、イミダゾリル、チアゾリル、ピロリル、フラニル、トリアゾリル、ベンゾフラニル、インドリル、プリニル、ベンゾオキサゾリル、チエニル、ホスホリル及びオキサゾリルが挙げられる。
【００４２】
ヘテロアリールアルキル基及びアルキルヘテロアリール基は、少なくとも３個の炭素原子（即ち、少なくともＣ３）を含み、単環式及び二環式構造が含まれ得る。任意選択で、ヘテロアリール基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されていてもよい。
【００４３】
アリール基が（ヘテロ）アリール基として示される場合、表記は、アリール基及びヘテロアリール基が含まれると意味される。同様に、アルキル（ヘテロ）アリール基は、アルキルアリール基及びアルキルヘテロアリール基が含まれると意味され、（ヘテロ）アリールアルキルは、アリールアルキル基及びヘテロアリールアルキル基が含まれると意味される。したがって、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基は、Ｃ２〜Ｃ２４ヘテロアリール基及びＣ６〜Ｃ２４アリール基を含むと解釈されるべきである。同様に、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基は、Ｃ７〜Ｃ２４アルキルアリール基及びＣ３〜Ｃ２４アルキルヘテロアリール基が含まれると意味され、Ｃ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキルは、Ｃ７〜Ｃ２４アリールアルキル基及びＣ３〜Ｃ２４ヘテロアリールアルキル基が含まれると意味される。
【００４４】
シクロアルキニル基は環状アルキニル基である。１個の三重結合を含む非置換シクロアルキニル基は、一般式ＣｎＨ２ｎ−５を有する。任意選択で、シクロアルキニル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されている。シクロアルキニル基の例はシクロオクチニルである。
【００４５】
ヘテロシクロアルキニル基は、酸素、窒素及び硫黄の群から選択されるヘテロ原子によって中断されているシクロアルキニル基である。任意選択で、ヘテロシクロアルキニル基は、本文書においてさらに特定されている１個又は複数の置換基によって置換されている。ヘテロシクロアルキニル基の例はアザシクロオクチニルである。
【００４６】
（ヘテロ）アリール基は、アリール基及びヘテロアリール基を含む。アルキル（ヘテロ）アリール基は、アルキルアリール基及びアルキルヘテロアリール基を含む。（ヘテロ）アリールアルキル基は、アリールアルキル基及びヘテロアリールアルキル基を含む。（ヘテロ）アルキニル基は、アルキニル基及びヘテロアルキニル基を含む。（ヘテロ）シクロアルキニル基は、シクロアルキニル基及びヘテロシクロアルキニル基を含む。
【００４７】
（ヘテロ）シクロアルキン化合物は、本明細書において、（ヘテロ）シクロアルキニル基を含む化合物として定義されている。
【００４８】
本明細書及び請求項に開示されている化合物のいくつかは、縮合（ヘテロ）シクロアルキン化合物、即ち、第２の環構造が（ヘテロ）シクロアルキニル基に縮合されている、即ち環状化されている（ヘテロ）シクロアルキン化合物として記載することができる。例えば、縮合（ヘテロ）シクロオクチン化合物において、シクロアルキル（例えばシクロプロピル）又はアレーン（例えばベンゼン）は、（ヘテロ）シクロオクチニル基に環状化され得る。縮合（ヘテロ）シクロオクチン化合物における（ヘテロ）シクロオクチニル基の三重結合は、３つの可能な位置、即ち、シクロオクチン部分の２位、３位又は４位（「ＩＵＰＡＣ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｒｕｌｅ  Ａ３１．２に従った番号付け）のうちのいずれか１つに位置し得る。本明細書及び請求項における任意の縮合（ヘテロ）シクロオクチン化合物の記載は、シクロオクチン部分の全ての３つの個々の位置異性体が含まれると意味される。
【００４９】
別段に明記されていない限り、アルキル基、シクロアルキル基、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）アリール基、（ヘテロ）アリールアルキル基、アルキル（ヘテロ）アリール基、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、（ヘテロ）アリーレン基、アルキル（ヘテロ）アリーレン基、（ヘテロ）アリールアルキレン基、（ヘテロ）アリールアルケニレン基、（ヘテロ）アリールアルキニレン基、アルケニル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、（ヘテロ）アリールオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ５〜Ｃ１２シクロアルケニル基、Ｃ８〜Ｃ１２シクロアルキニル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基、ハロゲン、アミノ基、オキソ及びシリル基からなる群から独立して選択される１個又は複数の置換基で置換されていてもよく、ここでシリル基は、式（Ｒ２０）３Ｓｉ−によって表すことができ、ここでＲ２０は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニルオキシ基、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニルオキシ基及びＣ３〜Ｃ１２シクロアルキルオキシ基からなる群から独立して選択され、ここで、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、シクロアルキル基、アルコキシ基、アルケニルオキシ基、アルキニルオキシ基及びシクロアルキルオキシ基は、任意選択で置換されており、アルキル基、アルコキシ基、シクロアルキル基及びシクロアルコキシ基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されている。
【００５０】
「糖」という一般用語は、本明細書において、単糖、例えばグルコース（Ｇｌｃ）、ガラクトース（Ｇａｌ）、マンノース（Ｍａｎ）及びフコース（Ｆｕｃ）を示すために使用される。「糖誘導体」という用語は、本明細書において、単糖の糖の誘導体、即ち、置換基及び／又は官能基を含む単糖の糖を示すために使用される。糖誘導体の例としては、アミノ糖類及び糖酸、例えばグルコサミン（ＧｌｃＮＨ２）、ガラクトサミン（ＧａｌＮＨ２）Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ−アセチルノイラミン酸（ＮｅｕＮＡｃ）及びＮ−アセチルムラミン酸（ＭｕｒＮＡｃ）とも称されるシアル酸（Ｓｉａ）、グルクロン酸（ＧｌｃＡ）並びにイズロン酸（ＩｄｏＡ）が挙げられる。糖誘導体の例としては、本明細書においてＳ（Ｆ１）ｘとして示される化合物も挙げられ、ここでＳは糖又は糖誘導体であり、Ｓはｘ個の官能基Ｆ１を含む。
【００５１】
コアＮ−アセチルグルコサミン置換基（コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基）又はコアＮ−アセチルグルコサミン部分は、本明細書において、抗体にＣ１を介して、好ましくは抗体のアスパラギンアミノ酸の側鎖におけるアミド窒素原子にＮ−グリコシド結合を介して結合しているＧｌｃＮＡｃとして定義されている。コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基は、抗体の未変性グリコシル化部位に存在し得るが、コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基は、抗体の異なる部位に導入することもできる。本明細書において、コア−Ｎ−アセチルグルコサミン置換基は単糖置換基であるか、又は上記コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基がフコシル化されているならばＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）とさらに称される二糖類コア−ＧｌｃＮＡｃ−（α１−６−Ｆｕｃ）置換基である。本明細書において、「コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基」は、「コア−ＧｌｃＮＡｃ」と混同されるべきでない。コア−ＧｌｃＮＡｃは、本明細書において、ポリ糖又は２つ超の糖類を含むオリゴ糖の一部である内部ＧｌｃＮＡｃ、即ち、これを介してポリ又はオリゴ糖が抗体に結合しているＧｌｃＮＡｃとして定義されている。
【００５２】
したがって、本明細書において定義されている通りのコア−Ｎ−アセチルグルコサミン置換基を含む抗体は、上で定義されている通りの単糖コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含む抗体であるか、又は上記コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基がフコシル化されているならば二糖類コア−ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換基を含む抗体である。コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基又はＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基におけるＧｌｃＮＡｃがフコシル化されているならば、フコースは、コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基のＯ６にα−１，６で最も共通して連結されている。フコシル化コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基はコア−ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）と示され、フコシル化ＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基はＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）−Ｓ（Ｆ１）ｘと示される。
【００５３】
「ヌクレオチド」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用される。「ヌクレオチド」という用語は、ヌクレオベース、５炭素糖（リボース又は２−デオキシリボースのいずれか）、及び１個、２個又は３個のホスフェート基で構成される分子を指す。ホスフェート基なしで、ヌクレオベース及び糖がヌクレオシドを構成する。したがって、ヌクレオチドは、ヌクレオシド一リン酸、ヌクレオシド二リン酸又はヌクレオシド三リン酸と呼ぶこともできる。ヌクレオベースは、アデニン、グアニン、シトシン、ウラシル又はチミンであり得る。ヌクレオチドの例としては、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）、チミジン二リン酸（ＴＤＰ）、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）及びシチジン一リン酸（ＣＭＰ）が挙げられる。
【００５４】
「タンパク質」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用される。本明細書において、約１０以上のアミノ酸を含むポリペプチドは、タンパク質と考えられる。タンパク質は、天然だけでなく非天然のアミノ酸を含むことがある。
【００５５】
「糖タンパク質」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用され、タンパク質に共有結合した１種又は複数の単糖又はオリゴ糖鎖（「グリカン」）を含むタンパク質を指す。グリカンは、タンパク質のヒドロキシル基（Ｏ連結グリカン）に、例えばセリン、トレオニン、チロシン、ヒドロキシリシン若しくはヒドロキシプロリンのヒドロキシル基に、又はタンパク質（Ｎ−糖タンパク質）、例えばアスパラギン若しくはアルギニンのアミド官能基に、又はタンパク質（Ｃ−糖タンパク質）、例えばトリプトファンの炭素に結合していることがある。糖タンパク質は、１つ超のグリカンを含むことがあり、１種又は複数の単糖及び１種又は複数のオリゴ糖グリカンの組合せを含むことがあり、Ｎ連結グリカン、Ｏ連結グリカン及びＣ連結グリカンの組合せを含むことがある。全てのタンパク質の５０％超は、グリコシル化のある形態を有し、そのため、糖タンパク質として認定されることが推定される。糖タンパク質の例としては、ＰＳＭＡ（前立腺特異的膜抗原）、ＣＡＬ（カンジダアンタルチリパーゼ）、ｇｐ４１、ｇｐ１２０、ＥＰＯ（エリスロポエチン）、不凍タンパク質及び抗体が挙げられる。
【００５６】
「グリカン」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用され、タンパク質に連結されている単糖鎖又はオリゴ糖鎖を指す。したがって、グリカンという用語は、糖タンパク質の炭水化物部分を指す。グリカンは、さらなる置換がないことがある（単糖）又は糖のヒドロキシル基のうちの１つ又は複数においてさらに置換されていてもよい（オリゴ糖）１種の糖のＣ−１炭素を介してタンパク質に結合している。自然発生グリカンは、１〜約１０の糖類部分を典型的に含む。しかしながら、より長い多糖類鎖がタンパク質に連結されている場合、上記多糖類鎖は、本明細書においてグリカンとも考えられる。糖タンパク質のグリカンは単糖であり得る。典型的に、糖タンパク質の単糖グリカンは、タンパク質に共有結合している単一のＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、グルコース（Ｇｌｃ）、マンノース（Ｍａｎ）又はフコース（Ｆｕｃ）からなる。グリカンはオリゴ糖でもあり得る。糖タンパク質のオリゴ糖鎖は、直鎖又は分枝であり得る。オリゴ糖において、タンパク質に直接結合している糖は、コア糖と呼ばれる。オリゴ糖において、タンパク質に直接結合しておらず、少なくとも２種の他の糖類に結合している糖は、内部糖と呼ばれる。オリゴ糖において、タンパク質に直接結合していないが単一の他の糖に直接結合している糖、即ちその糖の他のヒドロキシル基のうちの１個又は複数にさらなる糖置換基を保有しない糖は、末端糖と呼ばれる。疑いを回避するため、糖タンパク質のオリゴ糖において複数の末端糖類だが、ただ１つのコア糖が存在することがある。グリカンは、Ｏ連結グリカン、Ｎ連結グリカン又はＣ連結グリカンであり得る。Ｏ連結グリカンにおいて、単糖又はオリゴ糖グリカンは、典型的にセリン（Ｓｅｒ）又はトレオニン（Ｔｈｒ）のヒドロキシル基を介して、タンパク質のアミノ酸におけるＯ原子に結合している。Ｎ連結グリカンにおいて、単糖又はオリゴ糖グリカンは、タンパク質のアミノ酸におけるＮ原子を介して、典型的にはアスパラギン（Ａｓｎ）又はアルギニン（Ａｒｇ）の側鎖におけるアミド窒素を介して、タンパク質に結合している。Ｃ連結グリカンにおいて、単糖又はオリゴ糖グリカンは、タンパク質のアミノ酸におけるＣ原子に、典型的にはトリプトファン（Ｔｒｐ）のＣ原子に結合している。
【００５７】
「抗体」という用語は、本明細書において、通常の科学的意味で使用される。抗体は、特定の抗原を認識及び結合できる免疫系によって生成されたタンパク質である。抗体は糖タンパク質の例である。抗体という用語は、本明細書において、最も広い意味において使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、抗体断片、並びに二重鎖抗体及び単鎖抗体が挙げられる。「抗体」という用語は、本明細書において、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、及び癌抗原を特異的に結合する抗体が含まれるとも意味される。「抗体」という用語は、抗体全体だけでなく抗体の抗原結合性断片、例えば抗体Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２、切断された抗体からのＦｖ断片若しくはＦｃ断片、ｓｃＦｖ−Ｆｃ断片、ミニ体、二特異性抗体、二重特異性抗体又はｓｃＦｖが含まれると意味される。さらに、上記用語には、遺伝的に改変された抗体及び抗体の誘導体が含まれる。抗体、抗体の断片及び遺伝的に改変された抗体は、当技術分野において知られている方法によって得ることができる。抗体の典型例としては、中でも、アブシキシマブ、リツキシマブ、バシリキシマブ、パリビズマブ、インフリキシマブ、トラスツズマブ、アレムツズマブ、アダリムマブ、トシツモマブ−Ｉ１３１、セツキシマブ、イブリツキシマブチウキセタン、オマリズマブ、ベバシズマブ、ナタリズマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、エクリズマブ、セルトリズマブペゴール、ゴリムマブ、カナキヌマブ、カツマキソマブ、ウステキヌマブ、トシリズマブ、オファツムマブ、デノスマブ、ベリムマブ、イピリムマブ及びブレンツキシマブが挙げられる。好ましい実施形態において、コア−Ｎ−アセチルグルコサミン置換基（コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基）を含む糖タンパク質は、コア−Ｎ−アセチルグルコサミン置換基（コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基）を含む抗体であり、好ましくはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）である。上記抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ抗体からなる群から選択されることが好ましい。上記抗体はＩｇＧ抗体であるのがより好ましく、上記抗体はＩｇＧ１抗体であるのが最も好ましい。上記抗体が抗体全体である場合、抗体は、好ましくは各重鎖に１個又は複数の、より好ましくは１個のコア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含み、上記コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基は任意選択でフコシル化されている。したがって、上記抗体全体は、好ましくは、２個以上の、好ましくは２個の、任意選択でフコシル化されているコア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含む。上記抗体が単鎖抗体又は抗体断片、例えばＦａｂ断片である場合、抗体は、好ましくは、任意選択でフコシル化されている１個又は複数のコア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含む。コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含む抗体において、上記コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基は、抗体のどこにでも位置することができるが、ただし、上記置換基が抗体の抗原結合性部位を妨害しないことを条件とする。好ましい実施形態において、上記コアＮ−アセチルグルコサミン置換基は、抗体の未変性Ｎ−グリコシル化部位に存在する。
【００５８】
リンカーは、本明細書において、化合物の２つ以上の要素を接続する部分として定義されている。例えば、バイオコンジュゲートにおいて、生体分子及び標的分子は、リンカーを介して互いに共有結合的に接続されており；リンカー−コンジュゲートにおいて、反応性基Ｑ１は、リンカーを介して標的分子に共有結合的に接続されており；リンカー−コンストラクトにおいて、反応性基Ｑ１は、リンカーを介して反応性基Ｑ２に共有結合的に接続されている。リンカーは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。
【００５９】
スペーサー部分は、本明細書において、間隔をあける（即ち、間に距離を提供する）とともにリンカーの２つ（以上）の部分を一緒に共有結合的に連結する部分として定義されている。リンカーは、下記に定義されている通り、例えばリンカー−コンストラクト、上記リンカー−コンジュゲート又はバイオコンジュゲートの一部であり得る。
【００６０】
バイオコンジュゲートは、本明細書において、生体分子がリンカーを介して標的分子に共有結合的に接続されている化合物として定義されている。バイオコンジュゲートは、１つ若しくは複数の生体分子及び／又は１つ若しくは複数の標的分子を含む。リンカーは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。抗体−コンジュゲートは、生体分子が抗体であるバイオコンジュゲートを指す。
【００６１】
生体分子は、本明細書において、自然から単離することができる任意の分子として、又は自然から誘導される巨大分子構造の構成要素、特に核酸、タンパク質、グリカン及び脂質である、より小さい分子構築ブロックで構成される任意の分子として定義されている。本明細書において、生体分子は、目的の生体分子（ＢＯＩ）とも称することができる。生体分子の例としては、酵素、（非触媒）タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、アミノ酸、オリゴヌクレオチド、単糖、オリゴ糖、多糖類、グリカン、脂質及びホルモンが挙げられる。
【００６２】
目的の分子（ＭＯＩ）とも称される標的分子は、本明細書において、コンジュゲーションで生体分子に付与される所望の特性を有する分子構造として定義されている。
【００６３】
「その塩」という用語は、酸性プロトン、典型的には酸のプロトンが、金属カチオン又は有機カチオンなどのカチオンによって置き換えられる場合に形成される化合物を意味する。適用可能な場合、塩は薬学的に許容される塩であるが、これは患者への投与が意図されない塩には必要とされない。例えば、化合物の塩において、化合物は、無機酸又は有機酸によってプロトン化されることでカチオンを形成することができ、塩のアニオン性構成成分として無機酸又は有機酸の共役塩基を用いる。
【００６４】
「薬学的に認容されている」塩という用語は、哺乳動物などの患者への投与に許容される塩（所与の投与計画に対する許容される哺乳動物の安全性を有する対イオンとの塩）を意味する。こうした塩は、薬学的に許容される無機塩基又は有機塩基から及び薬学的に許容される無機酸又は有機酸から誘導することができる。「薬学的に許容される塩」は、化合物の薬学的に許容される塩を指し、上記塩は、当技術分野において知られている様々な有機及び無機の対イオンから誘導され、例えば、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなど、及び分子が塩基性官能性基を含有する場合には有機酸又は無機酸の塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ギ酸塩、酒石酸塩、ベシル酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩などが挙げられる。
【００６５】
本明細書において、スルファミドリンカー及び上記スルファミドリンカーのコンジュゲートが開示されている。「スルファミドリンカー」という用語は、スルファミド基、より詳細にはアシルスルファミド基［−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ１）−］及び／又はカルバモイルスルファミド基［−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｓ（Ｏ）２−Ｎ（Ｒ１）−］を含むリンカーを指す。
【００６６】
本明細書において、「治療指数」（ＴＩ）という用語は、当業者によく知られている従来の意味を有し、集団の５０％において所望の薬理効果に至る用量（有効量又はＥＤ５０）によって割られた、集団の５０％に毒性である（即ち、標的化される適応症と適合性のない発生率又は重症度で有害作用を引き起こす）薬物の用量（ＴＤ５０）の比を指す。それゆえに、ＴＩ＝ＴＤ５０／ＥＤ５０である。治療指数は、臨床試験によって又は例えば血漿曝露試験によって決定することができる。Ｍｕｌｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２０１２、１１、７５１〜７６１も参照されたい。
【００６７】
本明細書において、「治療的有効性」という用語は、ある特定の治療効果、例えば腫瘍体積の低減を達成するための物質の能力を示す。治療効果は、典型的には同じ状況下で別の物質との比較において物質が所望の効果を達成する範囲を決定して測定することができる。治療的有効性のための適当な基準は、例えば臨床試験中に又は血漿曝露試験によって決定することができるＥＤ５０値である。前臨床的治療有効性決定の場合において、バイオコンジュゲート（例えばＡＤＣ）の治療効果は、マウスにおける患者誘導腫瘍異種移植片によって検証することができ、この場合において、有効性は、有益な効果を提供するためのＡＤＣの能力を指す。代替として、げっ歯類安全性研究における上記ＡＤＣの耐容性は、治療効果の基準でもあり得る。
【００６８】
本明細書において、「耐容性」という用語は、標的化される適応症と適合性のない発生率又は重症度で有害作用を引き起こさない特定の物質の最大用量を指す。特定の物質のための耐容性の適当な基準は、例えば臨床試験中に又は血漿曝露試験によって決定することができるＴＤ５０値である。
コンジュゲーションのモード
【００６９】
本発明の文脈において、「コンジュゲーションのモード」は、標的分子Ｄを生体分子Ｂ、特に抗体ＡＢにコンジュゲートするために使用されるプロセス、並びに結果として得られたバイオコンジュゲート、特に、コンジュゲーションのプロセスの直接的帰結である、標的分子を生体分子に接続するリンカーの構造的特色を指す。したがって、一実施形態において、コンジュゲーションのモードは、生体分子、特に抗体への標的分子のコンジュゲーションのためのプロセスを指す。代替実施形態において、コンジュゲーションのモードは、生体分子、特に抗体への標的分子のコンジュゲーションのためのプロセスの直接的帰結である、リンカーの構造的特色及び／又は生体分子へのリンカーの結合点を指す。
【００７０】
本発明の文脈において、コンジュゲーションのモードは、さらに下記で定義されている通りの「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」及び「スルファミド連結」の少なくとも一方を含む。コンジュゲーションのモードは、さらに下記で定義されている通りの「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」及び「スルファミド連結」の両方を含むのが好ましい。
コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化
【００７１】
一実施形態において、本発明によるコンジュゲーションのモードは、以下を含むプロセスを指す「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」と称される：
（ｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであって、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化１０】
2017200902.tif 000011
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾抗体を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾抗体を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであって、リンカーＬはＳ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ。
【００７２】
本実施形態において、抗体は、トリミングされているグリカンを介してコア−ＧｌｃＮＡｃ残基（フコースで任意選択で置換されている）にコンジュゲートされる。この残基は、１個又は２個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘで官能化され、上記官能基Ｆ１は、引き続いて、標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートに存在する官能基Ｑ１と反応させられる。抗体を標的分子と連結する、結果として得られたリンカーＬの構造的特色は、コンジュゲーションプロセスの直接的帰結であり、以下が含まれる：
（ａ）抗体ＡＢへのリンカーＬの結合点は、自然発生抗体においてグリコシル化されている特定のアミノ酸残基であるか、又は抗体における特定のアミノ酸残基の突然変異によって、人工的に導入されたグリコシル化部位である。したがって、高度に予測可能な標的分子対抗体比（又はＤＡＲ：「薬物抗体比」）を与える抗体へのリンカーの結合点は、特異的に選択することができる。
（ｂ）リンカーＬは、抗体のコア−ＧｌｃＮＡｃ部分にコンジュゲートされており、一般構造−Ｓ−（Ｍ）ｐｐ−Ｚ３−Ｌ２（Ｄ）ｒを有する。本明細書において、Ｓは、Ｏ４を介してコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に、並びにＣ２、Ｃ３、Ｃ４及びＣ６のうちの任意の１つを介して、好ましくはＣ６を介してＺ３に、任意選択でスペーサーＭを介して（即ちｐｐ＝０又は１）典型的に接続されている糖誘導体である。Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応によって得られる接続基である。Ｑ１、Ｆ１及びＺ３の選択肢は、当技術者に知られており、さらに詳細に下記で考察されている。Ｚ３は、リンカーＬ２を介して少なくとも１つの標的分子Ｄに接続されている（即ちｒ≧１）。
（ｃ）好ましい実施形態において、リンカーＬ、特にリンカーＬ２は、「スルファミド連結」と称されるコンジュゲーションのモードについて定義されている通りの式（１）に従った基又はその塩含む。本実施形態によるコンジュゲーションのモードがコンジュゲーションの「スルファミド連結」モードと組み合わされる場合、結果として得られたバイオコンジュゲートの治療指数を改善するという点で最良の結果が得られたことが見出された。
【００７３】
本発明者らは、驚くべきことに、標的分子を抗体にコンジュゲートするための上のプロセスを使用することは、抗体−コンジュゲートの治療指数に対して有益な効果を有することを見出した。言い換えると、本実施形態によるコンジュゲーションのモードを有する抗体−コンジュゲートの治療指数は、本実施形態によるコンジュゲーションのモードを有しない抗体−コンジュゲートよりも、改善された治療指数を有する。
【００７４】
本発明によるコンジュゲーションのモードの使用は、抗体−コンジュゲートを調製するプロセスと異なっており、ここでコンジュゲーションのモードは、抗体−コンジュゲートを調製するために使用される。抗体−コンジュゲートを調製するためのコンジュゲーションの多くのモードが存在するが、本発明者らは、コンジュゲーションの特定のモードを選択する一方で抗体及び標的分子（単数又は複数）を一定に保持することは、コンジュゲートの治療指数に有益に影響することを見出した。
【００７５】
「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」と称されるコンジュゲーションの本モードの文脈内で、一実施形態において、コンジュゲーションのモードは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
（式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分である）のバイオコンジュゲートを、標的分子（Ｄ）の反応性基Ｑ１を生体分子（Ｂ）の官能基Ｆ１と反応させることによって、Ｌが、式（１）に従った基又はその塩：
【化１１】
2017200902.tif 000012
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ若しくはＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含むように調製するステップを含む。
【００７６】
「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」と称されるコンジュゲーションの本モードの文脈内で、一実施形態において、コンジュゲーションのモードは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
（式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分である）のバイオコンジュゲートを、標的分子（Ｄ）の反応性基Ｑ１を生体分子（Ｂ）の官能基Ｆ１と反応させることによって、Ｌが、式（１）に従った基又はその塩：
【化１２】
2017200902.tif 000013
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ若しくはＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含むように調製するステップを含まない。
ステップ（ｉ）
【００７７】
ステップ（ｉ）において、１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質は、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触され、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移できる。本明細書において、糖タンパク質は典型的に、さらに下記に記載されている通り、コア−ＧｌｃＮＡｃ残基にトリミングされた抗体などの抗体である。
【００７８】
ステップ（ｉ）は、式（２４）：
【化１３】
2017200902.tif 000014
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾抗体を与える。
【００７９】
好ましい実施形態において、ｙ＝１、２若しくは４、より好ましくはｙ＝１若しくは２（例えば、ＡＢが単鎖抗体である場合）であるか、又は代替としてｙ＝２若しくは４（例えば、ＡＢが二重鎖抗体である場合）である。最も好ましくはｙ＝２である。
【００８０】
一実施形態において、任意選択でフコシル化されているコア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含む抗体は式（２１）の抗体であり、ここでＡＢは抗体を表し、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり、Ｆｕｃはフコースであり、ｂは０又は１であり、ｙは１〜４であり、ｙは１又は２であることが好ましい。
【化１４】
2017200902.tif 000015
【００８１】
コア−ＧｌｃＮＡｃ置換基を含むこうした抗体は、当技術分野において知られており、当技術者によって知られている方法によって調製することができる。一実施形態において、本発明によるプロセスは、コアＮ−アセチルグルコサミン置換基を含む抗体を得るためにエンドグリコシダーゼの存在下でのコアＮ−アセチルグルコサミンを有する抗体グリカンの脱グリコシル化をさらに含み、ここで、上記コアＮ−アセチルグルコサミン及び上記コアＮ−アセチルグルコサミン置換基は、任意選択でフコシル化されている。グリカンの性質に依存して、適当なエンドグリコシダーゼが選択され得る。エンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＳ、ＥｎｄｏＡ、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＭ、ＥｎｄｏＤ、ＥｎｄｏＨ及びＥｎｄｏＳＨ酵素並びに／又はその組合せからなる群から好ましくは選択され、この選択はグリカンの性質に依存する。ＥｎｄｏＳＨは、本発明の第４の態様において下記でさらに定義されている。さらに好ましい実施形態において、エンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＳ、ＥｎｄｏＳ４９、ＥｎｄｏＦ、ＥｎｄｏＳＨ又はその組合せである。さらに好ましい実施形態において、エンドグリコシダーゼは、ＥｎｄｏＳ、ＥｎｄｏＦ又はその組合せである。さらに好ましい実施形態において、エンドグリコシダーゼはＥｎｄｏＳである。別の好ましい実施形態において、エンドグリコシダーゼはＥｎｄｏＳ４９である。別の好ましい実施形態において、エンドグリコシダーゼはＥｎｄｏＳＨである。
【００８２】
ステップ（ｉ）において、ｙ＝１である抗体（２１ａ）の修飾は、１個のＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基を含む修飾抗体（２２）に至り、ｙ＝２である抗体（２１ｂ）の修飾は、２個のＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基を含む修飾抗体（２３）に至る。一実施形態において、ＡＢが二重鎖抗体である場合、ｙ＝２又は４であることが好ましい。一実施形態において、ＡＢが単鎖抗体である場合、ｙ＝１又は２であることが好ましい。
【化１５】
2017200902.tif 000016
【００８３】
好ましい実施形態において、抗体ＡＢは、５Ｔ４（ＴＰＢＧ）、αｖ−インテグリン／ＩＴＧＡＶ、ＢＣＭＡ、Ｃ４．４ａ、ＣＡ−ＩＸ、ＣＤ１９、ＣＤ１９ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ｃ−ＫＩＴ（ＣＤ１１９）、ＣＤ１３８／ＳＤＣ１、ＣＥＡＣＡＭ５（ＣＤ６６ｅ）、クリプト、ＣＳ１、ＤＬＬ３、ＥＦＮＡ４、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、エンドセリンＢ受容体（ＥＴＢＲ）、ＥＮＰＰ３（ＡＧＳ−１６）、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＯＬＲ１（葉酸受容体ａ）、ｇｐＮＭＢ、グアニルシクラーゼＣ（ＧＣＣ）、ＨＥＲ２、Ｅｒｂ−Ｂ２、Ｌａｍｐ−１、ルイスＹ抗原、ＬＩＶ−１（ＳＬＣ３９Ａ６、ＺＩＰ６）、メソテリン（ＭＳＬＮ）、ＭＵＣ１（ＣＡ６、ｈｕＤＳ６）、ＭＵＣ１６／ＥＡ−１２５、ＮａＰｉ２ｂ、ネクチン−４、Ｎｏｔｃｈ３、Ｐ−カドヘリン、ＰＳＭＡ／ＦＯＬＨ１、ＰＴＫ７、ＳＬＩＴＲＫ６（ＳＬＣ４４Ａ４）、ＳＴＥＡＰ１、ＴＦ（ＣＤ１４２）、Ｔｒｏｐ−１、Ｔｒｏｐ−２／ＥＧＰ−１、Ｔｒｏｐ−３、Ｔｒｏｐ−４から選択される抗原を発現する腫瘍、好ましくはＨＥＲ２発現腫瘍を標的化できる。
【００８４】
好ましい実施形態において、抗体ＡＢは、低ＨＥＲ２発現腫瘍を含むがこれに限定されないＨＥＲ２発現腫瘍を標的化でき、より好ましくは、抗体ＡＢは、トラスツズマブ、マパツムマブ、ペルツズマブ、ＨｕＭａｘ−Ｈｅｒ２、エルツマキソマブ、ＨＢ−００８、ＡＢＰ−９８０、ＢＣＤ−０２２、ＣａｎＭａｂ、Ｈｅｒｚｕｍａ、ＨＤ２０１、ＣＴ−Ｐ６、ＰＦ−０５２８００１４、ＣＯＶＡ−２０８、ＦＳ−１０２、ＭＣＬＡ−１２８、ＣＫＤ−１０１０１、ＨＴ−１９及びその官能性類似体からなる群から選択され、最も好ましくはトラスツズマブである。
【００８５】
Ｓ（Ｆ１）ｘは、ｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体として定義されており、ここでｘは１又は２であり、Ｆ１は、接続部分Ｚ３を形成するためにリンカー−コンジュゲートに存在するＱ１と反応できる官能基である。糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘは、１個又は２個の官能基Ｆ１を含むことができる。Ｓ（Ｆ１）ｘが２個の官能基Ｆ１を含む場合、各官能基Ｆ１は独立して選択される、即ち、１つのＳ（Ｆ１）ｘは、異なる官能基Ｆ１を含むことができる。一実施形態において、ｘ＝１である。一実施形態において、ｘ＝２である。糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘは、糖又は糖誘導体Ｓ、例えばアミノ糖又はその他の誘導体化糖から誘導される。糖類及び糖誘導体の例としては、ガラクトース（Ｇａｌ）、マンノース（Ｍａｎ）、グルコース（Ｇｌｃ）、グルクロン酸（ＧｌｕｃＡ）及びフコース（Ｆｕｃ）が挙げられる。アミノ糖は、ヒドロキシル（ＯＨ）基がアミノ基によって置き換えられている糖であり、例としては、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）及びＮ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）が挙げられる。その他の誘導体化糖の例としては、グルクロン酸（ＧｌｕｃＡ）及びＮ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）が挙げられる。糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘは、好ましくはガラクトース（Ｇａｌ）、マンノース（Ｍａｎ）、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、グルコース（Ｇｌｃ）、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、グルクロン酸（ＧｌｕｃＡ）、フコース（Ｆｕｃ）及びＮ−アセチルノイラミン酸（シアル酸）から、好ましくはＧｌｃＮＡｃ、Ｇｌｃ、Ｇａｌ及びＧａｌＮＡｃからなる群から誘導される。Ｓ（Ｆ１）ｘは、Ｇａｌ又はＧａｌＮＡｃから誘導されるのがより好ましく、Ｓ（Ｆ１）ｘは、ＧａｌＮＡｃから誘導されるのが最も好ましい。
【００８６】
ヌクレオシド一リン酸又はヌクレオシド二リン酸Ｐが糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘに連結されている式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物は、当技術分野において知られている。例えば、全て参照により本明細書に組み込まれるＷａｎｇら、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１０、１６、１３３４３〜１３３４５、Ｐｉｌｌｅｒら、ＡＣＳ  Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１２、７、７５３、Ｐｉｌｌｅｒら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００５、１５、５４５９〜５４６２及び国際公開第２００９／１０２８２０号は、多数の化合物Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐ及びそれらの合成を開示している。好ましい実施形態において、Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐにおけるヌクレオシド一リン酸又は二リン酸Ｐは、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）、チミジン二リン酸（ＴＤＰ）、シチジン二リン酸（ＣＤＰ）及びシチジン一リン酸（ＣＭＰ）からなる群から選択され、Ｐは、ウリジン二リン酸（ＵＤＰ）、グアノシン二リン酸（ＧＤＰ）及びシチジン二リン酸（ＣＤＰ）からなる群から選択されるのがより好ましく、Ｐ＝ＵＤＰであるのが最も好ましい。
【００８７】
Ｓ（Ｆ１）ｘにおける１個又は２個の官能基Ｆ１は、いくつかの方法で糖又は糖誘導体Ｓに連結されていてもよい。１個又は２個の官能基Ｆ１は、ヒドロキシル（ＯＨ）基の代わりに、糖又は糖誘導体のＣ２、Ｃ３、Ｃ４及び／又はＣ６に結合していてもよい。フコースがＣ６にＯＨ基を欠如しているので、Ｆ１がＦｕｃのＣ６に結合しているならば、Ｆ１は、Ｈ原子に取って代わることが留意されるべきである。Ｆ１がアジド基である場合、Ｆ１はＣ２、Ｃ４又はＣ６に結合していることが好ましい。上に記載された通り、Ｓ（Ｆ１）ｘにおける１個又は複数のアジド置換基は、ヒドロキシル（ＯＨ）基の代わりに、又は６−アジドフコース（６−ＡｚＦｕｃ）の場合においては水素原子の代わりに、糖又は糖誘導体ＳのＣ２、Ｃ３、Ｃ４又はＣ６に結合していてもよい。代替として又は追加として、アミノ糖誘導体のＮ−アセチル置換基は、アジドアセチル置換基によって置換されていてもよい。好ましい実施形態においてＳ（Ｆ１）ｘは、２−アジドジアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトース（ＧａｌＮＡｚ）、２−アジドジフルオロアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトース（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）、６−アジド−６−デオキシガラクトース（６−ＡｚＧａｌ）、６−アジド−６−デオキシ−２−アセトアミドガラクトース（６−ＡｚＧａｌＮＡｃ又は６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ）、４−アジド−４−デオキシ−２−アセトアミドガラクトース（４−ＡｚＧａｌＮＡｃ）、６−アジド−６−デオキシ−２−アジドジアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトース（６−ＡｚＧａｌＮＡｚ）、２−アジドジアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトース（ＧｌｃＮＡｚ）、６−アジド−６−デオキシグルコース（６−ＡｚＧｌｃ）、６−アジド−６−デオキシ−２−アジドジアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトース（６−ＡｚＧｌｃＮＡｃ）、４−アジド−４−デオキシ−２−アセトアミドグルコース（４−ＡｚＧｌｃＮＡｃ）及び６−アジド−６−デオキシ−２−アジドアセトアミドグルコース（６−ＡｚＧｌｃＮＡｚ）からなる群から、より好ましくはＧａｌＮＡｚ、４−ＡｚＧａｌＮＡｃ及び６−ＡｚＧａｌＮＡｃからなる群から選択される。Ｆ１がアジド基であるＳ（Ｆ１）ｘ−Ｐの例は下記に示されている。Ｆ１がケト基である場合、Ｆ１は、ＳのＯＨ基の代わりにＣ２に結合していることが好ましい。代替として、Ｆ１は、アミノ糖誘導体、好ましくは２−アミノ糖誘導体のＮ原子に結合していてもよい。糖誘導体は次いで−ＮＣ（Ｏ）Ｒ３６置換基を含む。Ｒ３６は、好ましくは、任意選択で置換されているＣ２〜Ｃ２４アルキル基である。Ｒ３６はエチル基であるのがより好ましい。好ましい実施形態において、Ｓ（Ｆ１）ｘは、２−デオキシ−（２−オキソプロピル）ガラクトース（２−ケトＧａｌ）、２−Ｎ−プロピオニルガラクトサミン（２−Ｎ−プロピオニルＧａｌＮＡｃ）、２−Ｎ−（４−オキソペンタノイル）ガラクトサミン（２−Ｎ−ＬｅｖＧａｌ）及び２−Ｎ−ブチリルガラクトサミン（２−Ｎ−ブチリルＧａｌＮＡｃ）、より好ましくは２−ケトＧａｌＮＡｃ及び２−Ｎ−プロピオニルＧａｌＮＡｃからなる群から選択される。Ｆ１がケト基であるＳ（Ｆ１）ｘ−Ｐの例は下記に示されている。Ｆ１がアルキニル基、好ましくは末端アルキニル基又は（ヘテロ）シクロアルキニル基である場合、上記アルキニル基は２−アミノ糖誘導体に存在することが好ましい。Ｆ１がアルキニル基であるＳ（Ｆ１）ｘの例は、２−（ブタ−３−イオン酸アミド）−２−デオキシ−ガラクトースである。Ｆ１がアルキニル基であるＳ（Ｆ１）ｘ−Ｐの例は、下記に示されている。
【００８８】
一実施形態において、Ｆ１は、アジド基、ケト基及びアルキニル基からなる群から選択される。アジド基はアジド官能基−Ｎ３である。ケト基は−［Ｃ（Ｒ３７）２］ｏＣ（Ｏ）Ｒ３６基であり、ここでＲ３６はメチル基又は任意選択で置換されているＣ２〜Ｃ２４アルキル基であり、Ｒ３７は、水素、ハロゲン及びＲ３６からなる群から独立して選択され、ｏは０〜２４、好ましくは０〜１０、及びより好ましくは０、１、２、３、４、５又は６である。Ｒ３７は水素であることが好ましい。アルキニル基は、好ましくは、上で定義されている通りの末端アルキニル基又は（ヘテロ）シクロアルキニル基である。一実施形態において、アルキニル基は−［Ｃ（Ｒ３７）２］ｏＣ≡Ｃ−Ｒ３７基であり、ここでＲ３７及びｏは、上で定義されている通りであり；Ｒ３７は、好ましくは水素である。
【００８９】
一実施形態において、Ｆ１はアジド又はアルキン部分である。Ｆ１はアジド基（−Ｎ３）であるのが最も好ましい。一実施形態において、Ｆ１はアジド部分であり、Ｑ１は（シクロ）アルキン部分であり、Ｚ３はトリアゾール部分である。
【００９０】
アジド又はアルキニル置換糖類及び糖誘導体に連結されているウリジン二リン酸であるＳ（Ｆ１）ｘ−ＵＤＰのいくつかの実施例（２５〜２８）が、下記に示されている。
【化１６】
2017200902.tif 000017
【００９１】
Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐは、ＧａｌＮＡｚ−ＵＤＰ（２５）、６−ＡｚＧａｌ−ＵＤＰ（２６）、６−ＡｚＧａｌＮＡｃ−ＵＤＰ（６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミン−ＵＤＰ）（２７）、４−ＡｚＧａｌＮＡｚ−ＵＤＰ、６−ＡｚＧａｌＮＡｚ−ＵＤＰ、６−ＡｚＧｌｃ−ＵＤＰ、６−ＡｚＧｌｃＮＡｚ−ＵＤＰ及び２−（ブタ−３−イオン酸アミド）−２−デオキシ−ガラクトース−ＵＤＰ（２８）からなる群から選択されることが好ましい。Ｓ（Ｆ１）ｘ−ＰはＧａｌＮＡｚ−ＵＤＰ（２５）又は６−ＡｚＧａｌＮＡｃ−ＵＤＰ（２７）であるのが最も好ましい。
【００９２】
Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移できる適当な触媒は、当技術分野において知られている。適当な触媒は、その特定のプロセスにおける特定の糖誘導体ヌクレオチドＳ（Ｆ１）ｘ−Ｐが基質である触媒である。より具体的には、触媒は、β（１，４）−グリコシドの結合の形成を触媒する。触媒は、好ましくはガラクトシルトランスフェラーゼ及びＮ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼの群から、より好ましくはβ（１，４）−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（ＧａｌＮＡｃＴ）及びβ（１，４）−ガラクトシルトランスフェラーゼ（ＧａｌＴ）の群から、最も好ましくは突然変異体触媒ドメインを有するβ（１，４）−Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼの群から選択される。適当な触媒及びその突然変異体は、全て参照により本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／０６５６６１号、国際公開第２０１６／０２２０２７号及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０５９１９４に開示されている。一実施形態において、触媒は、野生型ガラクトシルトランスフェラーゼ又はＮ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ、好ましくはＮ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼである。代替実施形態において、触媒は、突然変異体ガラクトシルトランスフェラーゼ又はＮ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ、好ましくは突然変異体Ｎ−アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼである。国際公開第２０１６／０２２０２７号及び国際出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１６／０５９１９４に記載されている突然変異体酵素が殊に好ましい。
【００９３】
これらのガラクトシルトランスフェラーゼ（突然変異体）酵素触媒は、内部糖類及び糖誘導体をアクセプターとして認識することができる。したがって、糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘは、ステップ（ｉ）におけるコア−ＧｌｃＮＡｃ置換基に連結されており、上記ＧｌｃＮＡｃがフコシル化されているか又はいないかには関わらない。
【００９４】
ステップ（ｉ）は、例えばホスフェート、緩衝生理食塩水（例えばホスフェート−緩衝生理食塩水、トリス−緩衝生理食塩水）、シトレート、ＨＥＰＥＳ、トリス及びグリシンなどの適当な緩衝溶液中で好ましくは実施される。適当な緩衝液は、当技術分野において知られている。緩衝溶液は、ホスフェート−緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）又はトリス緩衝液であることが好ましい。ステップ（ｉ）は、好ましくは約４℃〜約５０℃の範囲、より好ましくは約１０℃〜４５℃の範囲、いっそう好ましくは約２０℃〜約４０℃の範囲、及び最も好ましくは約３０℃〜約３７℃の範囲における温度で実施される。ステップ（ｉ）は、約５〜約９の範囲、好ましくは約５．５〜約８．５の範囲、より好ましくは約６〜約８の範囲におけるｐＨで好ましくは実施される。ステップ（ｉ）は、約７〜約８の範囲におけるｐＨで実施されるのが最も好ましい。
ステップ（ｉｉ）
【００９５】
ステップ（ｉｉ）において、修飾抗体は、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで、リンカーＬがＳ−Ｚ３−Ｌ２を含むとともにＺ３がＱ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である抗体−コンジュゲートを得る。リンカー−コンジュゲート及びその好ましい実施形態は、さらに下記で定義されている。リンカーＬ２は、好ましくは、式（１）に従った基又はその塩を含み、上記リンカーは、下記でさらに定義されている。
【００９６】
修飾抗体の官能基Ｆ１の相補的官能基Ｑ１は、当技術分野において知られている。例えば、Ｆ１がアジド基である場合、アジド−修飾抗体及びリンカー−コンジュゲートの連結は、好ましくは付加環化反応を介して行われる。次いで、官能基Ｑ１は、アルキニル基、好ましくは末端アルキニル基、及び（ヘテロ）シクロアルキニル基からなる群から好ましくは選択される。例えば、Ｆ１がケト基である場合、リンカー−コンジュゲートとのケト−修飾抗体の連結は、ヒドロキシルアミン誘導体又はヒドラジンとの選択的コンジュゲーションを介して好ましくは行われ、それぞれオキシム又はヒドラゾンをもたらす。次いで、官能基Ｑ１は、好ましくは第１級アミノ基、例えば−ＮＨ２基、アミノオキシ基、例えば−Ｏ−ＮＨ２、又はヒドラジニル基、例えば−Ｎ（Ｈ）ＮＨ２である。次いで、リンカー−コンジュゲートは、好ましくはそれぞれＨ２Ｎ−Ｌ２（Ｄ）ｒ、Ｈ２Ｎ−Ｏ−Ｌ２（Ｄ）ｒ又はＨ２Ｎ−Ｎ（Ｈ）−Ｌ２（Ｄ）ｒである。例えば、Ｆ１がアルキニル基である場合、リンカー−コンジュゲートとのアルキン−修飾抗体の連結は、付加環化反応、好ましくは１，３−二極性付加環化を介して好ましくは行われる。次いで、官能基Ｑ１は、好ましくは、アジド、ニトロン又はニトリルオキシドなどの１，３−双極子である。次いで、リンカー−コンジュゲートは、好ましくはＮ３−Ｌ２（Ｄ）ｒである。
【００９７】
好ましい実施形態において、ステップ（ｉｉ）において、本発明によるアジド−修飾抗体のアジドは、付加環化反応を介してリンカー−コンジュゲートのアルキニル基、好ましくは末端アルキニル基、又は（ヘテロ）シクロアルキニル基と反応する。末端アルキニル基又は（ヘテロ）シクロアルキニル基を含む分子とのアジドを含む分子の上記付加環化反応は、当技術分野において「クリックケミストリー」として知られている反応のうちの１つである。末端アルキニル基を含むリンカー−コンジュゲートの場合において、上記付加環化反応は、適当な触媒、好ましくはＣｕ（Ｉ）触媒の存在下で実施される必要がある。しかしながら、好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、（ヘテロ）シクロアルキニル基、より好ましくは歪み（ヘテロ）シクロアルキニル基を含む。（ヘテロ）シクロアルキニルが歪み（ヘテロ）シクロアルキニル基である場合、触媒の存在は必要とされず、上記反応は、歪み促進アジド−アルキン付加環化（ＳＰＡＡＣ）と呼ばれる反応によって自然発生的に起きることさえある。上記反応は、当技術分野において「金属フリークリックケミストリー」として知られている反応のうちの１つである。歪み（ヘテロ）シクロアルキニル基は、当技術分野において知られており、より詳細に下記で記載されている。
【００９８】
そのため、好ましい実施形態において、ステップ（ｉｉ）は、修飾抗体をリンカー−コンジュゲートと反応させることを含み、ここで、上記リンカー−コンジュゲートは、（ヘテロ）シクロアルキニル基及び目的のうちの１個又は複数の分子を含み、上記修飾抗体は、ＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基を含む抗体であり、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり、Ｓ（Ｆ１）ｘは、Ｆ１がアジド基であるとともにｘが１又は２であるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、上記ＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基は、上記ＧｌｃＮＡｃ−Ｓ（Ｆ１）ｘ置換基のＮ−アセチルグルコサミンのＣ１を介して抗体に結合しており、上記ＧｌｃＮＡｃは、任意選択でフコシル化されている。さらに好ましい実施形態において、上記（ヘテロ）シクロアルキニル基は歪み（ヘテロ）シクロアルキニル基である。
【００９９】
標的分子Ｄは、活性物質、レポーター分子、ポリマー、固体表面、ヒドロゲル、ナノ粒子、微小粒子及び生体分子からなる群から選択することができる。
【０１００】
Ｄの文脈において、「活性物質」という用語は、薬理学的及び／又は生物学的物質、即ち、生物学的に及び／又は薬学的に活性である物質、例えば薬物、プロドラッグ、診断剤、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、ペプチドタグ、アミノ酸、グリカン、脂質、ビタミン、ステロイド、ヌクレオチド、ヌクレオシド、ポリヌクレオチド、ＲＮＡ又はＤＮＡに関する。ペプチドタグの例としては、ヒトのラクトフェリン又はポリアルギニンのような細胞透過性ペプチドが挙げられる。グリカンの例はオリゴマンノースである。アミノ酸の例はリシンである。
【０１０１】
標的分子が活性物質である場合、活性物質は、薬物及びプロドラッグからなる群から好ましくは選択される。活性物質は、薬学的に活性な化合物、特に低〜中分子量化合物（例えば約２００〜約２５００Ｄａ、好ましくは約３００〜約１７５０Ｄａ）からなる群から選択されるのがより好ましい。さらに好ましい実施形態において、活性物質は、細胞毒、抗ウイルス剤、抗細菌剤、ペプチド及びオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。細胞毒の例としては、コルヒチン、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキサン、カリケアマイシン、ツブリシン、イリノテカン、エンジイン、阻害性ペプチド、アマニチン、ｄｅＢｏｕｇａｎｉｎ、デュオカルマイシン、メイタンシン、オーリスタチン、インドリノベンゾジアゼピン又はピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）が挙げられる。活性物質の難水溶性を勘案して、好ましい活性物質としては、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、タキサン、ツブリシン、アマニジン、デュオカルマイシン、メイタンシン、オーリスタチン、インドリノベンゾジアゼピン及びピロロベンゾジアゼピン、特にビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、タキサン、ツブリシン、アマニジン、メイタンシン、及びオーリスタチンが挙げられる。
【０１０２】
「レポーター分子」という用語は、本明細書において、存在が容易に検出される分子、例えば診断剤、色素、フルオロフォア、放射性同位元素標識、コントラスト剤、磁気共鳴画像剤又は質量標識を指す。
【０１０３】
蛍光プローブとも称される多種多様なフルオロフォアは、当業者に知られている。いくつかのフルオロフォアが、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１０章：「Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｂｅｓ」、３９５〜４６３ページにより詳細に記載されている。フルオロフォアの例としては、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒの全ての種類（例えばＡｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ５５５）、シアニン色素（例えばＣｙ３又はＣｙ５）及びシアニン色素誘導体、クマリン誘導体、フルオレセイン及びフルオレセイン誘導体、ローダミン及びローダミン誘導体、ホウ素ジピロメテン誘導体、ピレン誘導体、ナフタルイミド誘導体、フィコビリンタンパク質誘導体（例えばアロフィコシアニン）、クロモマイシン、ランタニドキレート、並びに量子ドットナノ結晶が挙げられる。フルオロフォアの難水溶性を勘案して、好ましいフルオロフォアとしては、シアニン色素、クマリン誘導体、フルオレセイン及びその誘導体、ピレン誘導体、ナフタルイミド誘導体、クロモマイシン、ランタニドキレート、並びに量子ドットナノ結晶、特にクマリン誘導体、フルオレセイン、ピレン誘導体及びクロモマイシンが挙げられる。
【０１０４】
放射性同位元素標識の例としては、例えばＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタ酢酸無水物）、ＤＯＴＡ（１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’’’−四酢酸）、ＮＯＴＡ（１，４，７−トリアザシクロノナンＮ，Ｎ’，Ｎ”−三酢酸）、ＴＥＴＡ（１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ’’’−四酢酸）、ＤＴＴＡ（Ｎ１−（ｐ−イソチオシアナトベンジル）−ジエチレントリアミン−Ｎ１，Ｎ２，Ｎ３，Ｎ３−四酢酸）、デフェロキサミン又はＤＦＡ（Ｎ’−［５−［［４−［［５−（アセチルヒドロキシアミノ）ペンチル］アミノ］−１，４−ジオキソブチル］ヒドロキシアミノ］ペンチル］−Ｎ−（５−アミノペンチル）−Ｎ−ヒドロキシブタンジアミド）又はＨＹＮＩＣ（ヒドラジノニコチンアミド）などのキレート化性部分を介して任意選択で接続されている９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１１４ｍＩｎ、１１５Ｉｎ、１８Ｆ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、２１２Ｂｉ、８８Ｙ、９０Ｙ、６７Ｃｕ、１８６Ｒｈ、１８８Ｒｈ、６６Ｇａ、６７Ｇａ及び１０Ｂが挙げられる。同位体標識化技法は当業者に知られており、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１２章：「Ｉｓｏｔｏｐｉｃ  ｌａｂｅｌｌｉｎｇ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、５０７〜５３４ページに、より詳細に記載されている。
【０１０５】
本発明による化合物における標的分子Ｄとしての使用に適当なポリマーは、当業者に知られており、いくつかの例が、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１８章：「ＰＥＧｙｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐｏｌｙｍｅｒ  ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、７８７〜８３８ページに、より詳細に記載されている。標的分子Ｄがポリマーである場合、標的分子Ｄは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリプロピレンオキシド（ＰＰＯ）、１，ｘｘ−ジアミノアルカンポリマー（ここでｘｘは、アルカンにおける炭素原子の数であり、好ましくは、ｘｘは、２〜２００、好ましくは２〜１０の範囲における整数である）、（ポリ）エチレングリコールジアミン（例えば、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン、及びより長いエチレングリコール鎖を含む同等物）、多糖類（例えばデキストラン）、ポリ（アミノ酸）（例えばポリ（Ｌ−リシン））及びポリ（ビニルアルコール）からなる群から好ましくは独立して選択される。ポリマーの難水溶性を勘案して、好ましいポリマーとしては、１，ｘｘ−ジアミノアルカンポリマー及びポリ（ビニルアルコール）が挙げられる。
【０１０６】
標的分子Ｄとしての使用に適当な固体表面は、当業者に知られている。固体表面は、例えば官能性表面（例えば、ナノ物質、炭素ナノチューブ、フラーレン又はウイルスカプシドの表面）、金属表面（例えば、チタン、金、銀、銅、ニッケル、スズ、ロジウム又は亜鉛の表面）、金属合金表面（ここで合金は、例えばアルミニウム、ビスマス、クロミウム、コバルト、銅、ガリウム、金、インジウム、鉄、鉛、マグネシウム、水銀、ニッケル、カリウム、プルトニウム、ロジウム、スカンジウム、銀、ナトリウム、チタン、スズ、ウラン、亜鉛及び／又はジルコニウム由来である）、ポリマー表面（ここでポリマーは、例えばポリスチレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリ（ジメチルシロキサン）又はポリメチルメタクリレート、ポリアクリルアミドである）、ガラス表面、シリコーン表面、クロマトグラフィー支持体表面（ここでクロマトグラフィー支持体は、例えばシリカ支持体、アガロース支持体、セルロース支持体又はアルミナ支持体である）などである。標的分子Ｄが固体表面である場合、Ｄは、官能性表面又はポリマー表面からなる群から独立して選択されることが好ましい。
【０１０７】
ヒドロゲルは当業者に知られている。ヒドロゲルは、ポリマー性構成要素間の架橋によって形成される水膨張ネットワークである。例えば、参照により組み込まれるＡ．Ｓ．Ｈｏｆｆｍａｎ、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．２０１２、６４、１８を参照されたい。標的分子がヒドロゲルである場合、ヒドロゲルは、ポリマー基準としてポリ（エチレン）グリコール（ＰＥＧ）で構成されていることが好ましい。
【０１０８】
標的分子Ｄとしての使用に適当なミクロ及びナノ粒子は、当業者に知られている。様々な適当なミクロ及びナノ粒子は、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３、１４章：「Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｎｄ  ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ」、５４９〜５８７ページに記載されている。ミクロ又はナノ粒子は、任意の形状、例えば球体、ロッド、チューブ、立方体、三角形及び円錐であり得る。ミクロ又はナノ粒子は球状形状であることが好ましい。ミクロ−及びナノ粒子の化学組成は変動し得る。標的分子Ｄがミクロ又はナノ粒子である場合、ミクロ又はナノ粒子は、例えば、ポリマー性ミクロ若しくはナノ粒子、シリカミクロ若しくはナノ粒子、又は金ミクロ若しくはナノ粒子である。粒子がポリマー性ミクロ又はナノ粒子である場合、ポリマーは、好ましくはポリスチレン、又はスチレンのコポリマー（例えば、スチレン及びジビニルベンゼン、ブタジエン、アクリレート及び／又はビニルトルエンのコポリマー）、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）、ポリビニルトルエン、ポリ（ヒドロキシエチルメタクリレート（ｐＨＥＭＡ）又はポリエチレングリコールジメタクリレート／２−ヒドロキシエチルメタクリレート）［ポリ（ＥＤＧＭＡ／ＨＥＭＡ）］である。任意選択で、ミクロ又はナノ粒子の表面は、二次ポリマーのグラフト重合によって、又は別のポリマー若しくはスペーサー部分などの共有結合によって、例えば洗剤で修飾されている。
【０１０９】
標的分子Ｄは生体分子でもあり得る。生体分子及びその好ましい実施形態は、より詳細に下記に記載されている。標的分子Ｄが生体分子である場合、生体分子は、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類、酵素、ホルモン、アミノ酸及び単糖類からなる群から選択されることが好ましい。
【０１１０】
Ｄのための好ましい選択肢は、第３の態様による抗体−コンジュゲートについてさらに下記で記載されている。本発明の文脈におけるバイオコンジュゲートは、同じ又は異なっていてもよい１つ超の標的分子Ｄを含有することができる。
【０１１１】
リンカー−コンジュゲートは、（ヘテロ）シクロアルキニル基を含むことが好ましい。好ましい実施形態において、上記リンカー−コンジュゲートは、式（３１）：
【化１７】
2017200902.tif 000018
（式中：
Ｌ２は、本明細書において定義されている通りのリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
ｒは、１〜２０であり；
Ｒ３１は、水素、ハロゲン、−ＯＲ３５、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ３５、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され、ここでアルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ３１は一緒に連結されて縮環シクロアルキル又は縮環（ヘテロ）アレーン置換基を形成することができ、Ｒ３５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｘは、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３２であり、ここでＲ３２は、Ｒ３１又はＬ２（Ｄ）ｒであり、Ｌ２、Ｄ及びｒは、上で定義されている通りであり；
ｑは、０又は１であるが、ｑが０であるならばＸはＮＬ２（Ｄ）ｒであることを条件とし；
ａａは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８である）を有する。
【０１１２】
別の好ましい実施形態において、上記リンカー−コンジュゲートは、式（３１ｂ）：
【化１８】
2017200902.tif 000019
（式中：
Ｌ２は、本明細書において定義されている通りのリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
ｒは、１〜２０であり；
Ｒ３１は、水素、ハロゲン、−ＯＲ３５、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ３５、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され、ここでアルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ３１は一緒に連結されて縮環シクロアルキル又は縮環（ヘテロ）アレーン置換基を形成することができ、Ｒ３５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｘは、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３２であり、ここでＲ３２はＲ３１又はＬ２（Ｄ）ｒであり、Ｌ２、Ｄ及びｒは、上で定義されている通りであり；
ｑは、０又は１であるが、ｑが０であるならばＸはＮＬ２（Ｄ）ｒであることを条件とし；
ａａは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ’は、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ＋ａａ’＜１０である）を有する。
【０１１３】
さらに好ましい実施形態において、ａａ＋ａａ’は、４、５、６又は７であり、ａａ＋ａａ’は４、５又は６であるのがより好ましく、ａａ＋ａａ’は５であるのが最も好ましい。
【０１１４】
好ましい実施形態において、ｑが１であるならば、ＸはＣ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３１である。
【０１１５】
別の好ましい実施形態において、ａは５であり、即ち、上記（ヘテロ）シクロアルキニル基は、好ましくは（ヘテロ）シクロオクチン基である。別の好ましい実施形態において、ＸはＣ（Ｒ３２）２又はＮＲ３２である。ＸがＣ（Ｒ３２）２である場合、Ｒ３２は水素であることが好ましい。ＸがＮＲ３２である場合、Ｒ３２はＬ２（Ｄ）ｒであることが好ましい。なお別の好ましい実施形態において、ｒは１〜１０であり、ｒは１、２、３、４、５、６７又は８であるのがより好ましく、ｒは１、２、３、４、５又は６であるのがより好ましく、ｒは１、２、３又は４であるのが最も好ましい。
【０１１６】
Ｌ２（Ｄ）ｒ置換基は、上記（ヘテロ）シクロアルキニル基におけるＣ原子上に、又はヘテロシクロアルキニル基の場合においては上記ヘテロシクロアルキニル基のヘテロ原子上に存在することができる。（ヘテロ）シクロアルキニル基が、置換基、例えば縮環シクロアルキルを含む場合、Ｌ２（Ｄ）ｒ置換基は、上記置換基に存在することもできる。
【０１１７】
リンカー−コンジュゲートを得るために、リンカーＬ２を一方の端部の（ヘテロ）シクロアルキニル基に及び他方の端部の標的分子に接続するための方法は、リンカー、（ヘテロ）シクロアルキニル基及び標的分子の正確にどのような性質を有するかに依存する。適当な方法は、当技術分野において知られている。
【０１１８】
リンカー−コンジュゲートは、（ヘテロ）シクロオクチン基、より好ましくは歪み（ヘテロ）シクロオクチン基を含むことが好ましい。適当な（ヘテロ）シクロアルキニル部分は、当技術分野において知られている。例えばＤＩＦＯ、ＤＩＦＯ２及びＤＩＦＯ３は、参照により組み込まれる米国特許出願公開第２００９／００６８７３８号に開示されている。ＤＩＢＯは、参照により組み込まれる国際公開第２００９／０６７６６３号に開示されている。ＤＩＢＯは、任意選択で、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１２、１３４、５３８１に開示されている通りの硫酸化（Ｓ−ＤＩＢＯ）であり得る。ＢＡＲＡＣは、全て参照により組み込まれるＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２０１０、１３２、３６８８〜３６９０及び米国特許出願公開第２０１１／０２０７１４７号に開示されている。
【０１１９】
（ヘテロ）シクロオクチン基を含むリンカー−コンジュゲートの好ましい例は、下記に示されている。
【化１９】
2017200902.tif 000020
【０１２０】
当技術分野において知られている他のシクロオクチン部分は、ＤＩＢＡＣ（ＡＤＩＢＯ又はＤＢＣＯとしても知られている）及びＢＣＮである。ＤＩＢＡＣは、参照により組み込まれるＣｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．２０１０、４６、９７〜９９に開示されている。ＢＣＮは、参照により組み込まれる国際公開第２０１１／１３６６４５号に開示されている。
【０１２１】
好ましい実施形態において、上記リンカー−コンジュゲートは、式（３２）、（３３）、（３４）、（３５）又は（３６）を有する。
【０１２２】
別の好ましい実施形態において、上記リンカー−コンジュゲートは、式（３７）：
【化２０】
2017200902.tif 000021
（式中：
Ｒ１、Ｌ２、Ｄ及びｒは、上で定義されている通りであり；
Ｙは、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３２であり、ここでＲ３２は、上で定義されている通りであり；
Ｒ３３は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｒ３４は、水素、Ｙ−Ｌ２（Ｄ）ｒ、−（ＣＨ２）ｎｎ−Ｙ−Ｌ２（Ｄ）ｒ、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、アルキル基は、Ｏ、Ｎ及びＳからなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、独立して任意選択で置換されており；並びに
ｎｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０である）を有する。
【０１２３】
さらに好ましい実施形態において、Ｒ３１は水素である。別の好ましい実施形態において、Ｒ３３は水素である。別の好ましい実施形態において、ｎは１又は２である。別の好ましい実施形態において、Ｒ３４は水素、Ｙ−Ｌ２（Ｄ）ｒ又は−（ＣＨ２）ｎｎ−Ｙ−Ｌ２（Ｄ）ｒである。別の好ましい実施形態において、Ｒ３２は水素又はＬ２（Ｄ）ｒである。さらに好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式３８：
【化２１】
2017200902.tif 000022
（式中、Ｙ、Ｌ２、Ｄ、ｎｎ及びｒは、上で定義されている通りである）を有する。
【０１２４】
別の好ましい実施形態において、上記リンカー−コンジュゲートは、式（３９）：
【化２２】
2017200902.tif 000023
（式中、Ｌ２、Ｄ及びｒは、上で定義されている通りである）を有する。
【０１２５】
別の好ましい実施形態において、上記リンカー−コンジュゲートは、式（３５）：
【化２３】
2017200902.tif 000024
（式中、Ｌ２、Ｄ及びｒは、上で定義されている通りである）を有する。
【０１２６】
ｐｐの値及びＭの性質は、リンカー−コンジュゲートに連結されている本発明によるアジド−修飾抗体に存在するアジド置換糖又は糖誘導体Ｓ（Ｆ１）ｘに依存する。Ｓ（Ｆ１）ｘにおけるアジドが、糖又は糖誘導体のＣ２位、Ｃ３位又はＣ４位（糖ＯＨ基の代わり）に存在するならば、ｐｐは０である。Ｓ（Ｆ１）ｘがアジドアセトアミド−２−デオキシ−糖誘導体、Ｓ（Ｆ１）ｘが例えばＧａｌＮＡｚ又はＧｌｃＮＡｚであるならば、ｐｐは１であり、Ｍは−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−である。Ｓ（Ｆ１）ｘにおけるアジドが、糖又は糖誘導体のＣ６位に存在するならば、ｐｐは０であり、Ｍは存在しない。
【０１２７】
連結単位とも称されるリンカー（Ｌ２）は、当技術分野においてよく知られている。本明細書に記載されている通りのリンカー−コンジュゲートにおいて、Ｌは、標的分子及び官能基Ｑ１に連結される。Ｌ２は、例えば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基、Ｃ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から選択することができる。任意選択で、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、置換されていてもよく、任意選択で上記基は、１個又は複数のヘテロ原子、好ましくは１〜１００個のヘテロ原子によって中断されていてもよく、上記ヘテロ原子は、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３５からなる群から好ましくは選択され、ここでＲ３５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択される。ヘテロ原子はＯであるのが最も好ましい。適当な連結単位の例としては、（ポリ）エチレングリコールジアミン鎖（例えば、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン、又はより長いエチレングリコール鎖を含む同等物）、ポリエチレングリコール鎖又はポリエチレンオキシド鎖、ポリプロピレングリコール鎖又はポリプロピレンオキシド鎖、及びｘｘがアルカンにおける炭素原子の数である１，ｘｘ−ジアミノアルカンが挙げられる。
【０１２８】
適当なリンカーの別のクラスは、切断可能なリンカーを含む。切断可能なリンカーは、当技術分野においてよく知られている。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｈａｂａｔら、Ｓｏｆｔ  Ｍａｔｔｅｒ  ２０１２、６、１０７３は、生物学的トリガー、例えば酵素的切断又は酸化事象で放出する自己犠牲部分を含む切断可能なリンカーを開示している。適当な切断可能なリンカーの一部の例は、プロテアーゼ、例えばカテプシン、プラスミン若しくはメタロプロテアーゼによる特異的認識で切断されるペプチド−リンカー、又はグリコシダーゼ、例えばグルクロニダーゼ、若しくは酸素の乏しい低酸素性部域で低減されるニトロ芳香族による特異的認識で切断されるグリコシドベースのリンカーである。
【０１２９】
好ましいリンカーＬ２は、「スルファミド連結」の実施形態について、並びに第３の態様による抗体−コンジュゲートについてさらに下記に定義されている。好ましいリンカー−コンジュゲートは、さらに下記でも定義されている。
【０１３０】
ステップ（ｉｉ）は、好ましくは、約２０℃〜約５０℃の範囲、より好ましくは約２５℃〜約４５℃の範囲、いっそう好ましくは約３０℃〜４０℃の範囲、及び最も好ましくは約３２℃〜約３７℃の範囲における温度で実施される。ステップ（ｉｉ）は、約５〜約９の範囲、好ましくは約５．５〜約８．５の範囲、より好ましくは約６〜約８の範囲におけるｐＨで好ましくは実施される。ステップ（ｉｉ）は、約７〜約８の範囲におけるｐＨで実施されるのが最も好ましい。ステップ（ｉｉ）は、好ましくは水中で実施される。上記水は、精製水であるのがより好ましい、いっそう好ましくは超純水、又はＩＳＯ  ３６９６に従って定義されている通りのＩ型の水である。適当な水は、例えばミリＱ（ｍｉｌｌｉＱ）（登録商標）水である。上記水は、例えばホスフェート−緩衝生理食塩水又はトリスで好ましくは緩衝処理されている。適当な緩衝液は、当業者に知られている。好ましい実施形態において、ステップ（ｉｉ）は、ホスフェート−緩衝生理食塩水又はトリスで緩衝処理されているｍｉｌｌｉＱ水中で実施される。
【０１３１】
一実施形態において、ステップ（ｉｉ）の反応は、
【化２４】
2017200902.tif 000025
（式中、環Ａは、７〜１０員の（ヘテロ）環状部分である）によって表される（１０ｅ）、（１０ｉ）又は（１０ｇ）によって、好ましくは（１０ｇ）によって表される接続部分Ｚ３を形成するための（シクロ）アルキン−アジドコンジュゲーションである。
【０１３２】
コンジュゲーションの本モードを含む又はコンジュゲーションの本モードによって得られるバイオコンジュゲートは、式（４０）又は（４０ｂ）：
【化２５】
2017200902.tif 000026
（式中：
ＡＢは抗体であり、Ｓは、糖又は糖誘導体であり、ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；
Ｒ３１は、水素、ハロゲン、−ＯＲ３５、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ３５、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され、ここでアルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、２個の置換基Ｒ３１は一緒に連結されて縮環シクロアルキル又は縮環（ヘテロ）アレーン置換基を形成することができ、Ｒ３５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｘは、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３２であり、ここでＲ３２はＲ３１又はＬ２（Ｄ）ｒであり、ここでＬ２はリンカーであり、Ｄは請求項１に定義されている通りであり；
ｒは、１〜２０であり；
ｑは、０又は１であるが、ｑが０であるならばＸはＮＬ２（Ｄ）ｒであることを条件とし；
ａａは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ’は、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ＋ａａ’＜１０であり；
ｂは、０又は１であり；
ｐｐは、０又は１であり；
Ｍは、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＦ２−、−ＣＨ２−、−ＣＦ２−、又は０〜４個のフッ素置換基、好ましくは、フェニレンのＣ２及びＣ６に又はＣ３及びＣ５に好ましくは位置する２個のフッ素置換基を含有する１，４−フェニレンであり；
ｙは、１〜４であり；
Ｆｕｃは、フコースである）によって好ましくは表される。
【０１３３】
好ましい実施形態において、本発明による抗体−コンジュゲートは、式（４１）：
【化２６】
2017200902.tif 000027
（式中、ＡＢ、Ｌ２、Ｄ、Ｙ、Ｓ、Ｍ、ｘ、ｙ、ｂ、ｐｐ、Ｒ３２、ＧｌｃＮＡｃ、Ｒ３１、Ｒ３３、Ｒ３４、ｎｎ及びｒは、上で定義されている通りであり、上記Ｎ−アセチルグルコサミンは、任意選択でフコシル化されている（ｂは０又は１である））
の抗体−コンジュゲートである。
【０１３４】
さらに好ましい実施形態において、Ｒ３１、Ｒ３３及びＲ３４は水素であり、ｎｎは１又は２であり、いっそう好ましい実施形態において、ｘは１である。
【０１３５】
別の好ましい実施形態において、抗体−コンジュゲートは、式（４２）：
【化２７】
2017200902.tif 000028
（式中、ＡＢ、Ｌ２、Ｄ、Ｘ、Ｓ、ｂ、ｐｐ、ｘ、ｙ、Ｍ及びＧｌｃＮＡｃは、上で定義されている通りであり、上記Ｎ−アセチルグルコサミンは任意選択でフコシル化されている（ｂは０又は１である））
の抗体−コンジュゲートであり；又は位置異性体（４２ｂ）：
【化２８】
2017200902.tif 000029
（式中、ＡＢ、Ｌ２、Ｄ、Ｘ、Ｓ、ｂ、ｐｐ、ｘ、ｙ、Ｍ及びＧｌｃＮＡｃは、上で定義されている通りであり、上記Ｎ−アセチルグルコサミンは任意選択でフコシル化されている）に従っている。
【０１３６】
別の好ましい実施形態において、抗体−コンジュゲートは、式（３５ｂ）：
【化２９】
2017200902.tif 000030
（式中、ＡＢ、Ｌ２、Ｄ、Ｘ、Ｓ、ｂ、ｐｐ、ｘ、ｙ、Ｍ及びＧｌｃＮＡｃは、上で定義されている通りであり、上記Ｎ−アセチルグルコサミンは任意選択でフコシル化されている）の抗体−コンジュゲートである。
スルファミド連結
【０１３７】
一実施形態において、本発明によるコンジュゲーションのモードは、生体分子Ｂ及び標的分子Ｄを連結する特定のリンカーＬの存在を指す「スルファミド連結」と称される。本実施形態の文脈におけるリンカーＬについて言われている全ては、コンジュゲーションのモードとしてのコア−ＧｌｃＮＡｃ官能化の実施形態によるリンカー、特にリンカーＬ２にも好ましくは当てはまる。リンカーＬは、式（１）に従った基又はその塩：
【化３０】
2017200902.tif 000031
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、又はＲ１は、さらなる標的分子Ｄであり、ここでＤは、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含む。
【０１３８】
式（１）の基が塩を含む場合、塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
【０１３９】
好ましい実施形態において、本発明によるリンカーＬは、ａが０である式（１）に従った基、又はその塩を含む。この実施形態において、リンカーＬは、したがって、式（２）に従った基又はその塩：
【化３１】
2017200902.tif 000032
（式中、Ｒ１は、上で定義されている通りである）を含む。
【０１４０】
別の好ましい実施形態において、本発明によるリンカーＬは、ａが１である式（１）に従った基又はその塩を含む。この実施形態において、リンカーＬは、したがって、式（３）に従った基又はその塩：
【化３２】
2017200902.tif 000033
（式中、Ｒ１は、上で定義されている通りである）を含む。
【０１４１】
式（１）、（２）及び（３）に従った基において、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、さらなる標的分子Ｄであり、ここでＤは、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている；
【０１４２】
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ２０アルキル基であり、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１６アルキル基であるのがより好ましく、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１０アルキル基であるのがいっそう好ましく、ここでアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯから選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される。好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。別の好ましい実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル基、より好ましくはＣ１〜Ｃ１６アルキル基、いっそう好ましくはＣ１〜Ｃ１０アルキル基であり、ここでアルキル基は、１個又は複数のＯ原子によって任意選択で中断されており、アルキル基は、−ＯＨ基、好ましくは末端−ＯＨ基で任意選択で置換されている。この実施形態において、Ｒ１は、末端−ＯＨ基を含む（ポリ）エチレングリコール鎖であることがさらに好ましい。別の好ましい実施形態において、Ｒ１は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル及びｔ−ブチルからなる群から、より好ましくは水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル及びｉ−プロピルからなる群、並びにいっそう好ましくは水素、メチル及びエチルからなる群から選択される。Ｒ１は水素又はメチルであるのがなおいっそう好ましく、Ｒ１は水素であるのが最も好ましい。
【０１４３】
別の好ましい実施形態において、Ｒ１はさらなる標的分子Ｄである。任意選択で、Ｄは、１つ又は複数のスペーサー部分を介してＮに接続されている。スペーサー部分は、存在するならば、ＤとＮとの間に間隔をあける部分、即ち、ＤとＮとの間にある特定の距離を提供し、Ｄ及びＮを共有結合的に連結する部分として定義されている。
【０１４４】
標的分子Ｄ及びその好ましい実施形態は、より詳細に上で定義されている。
【０１４５】
式（Ａ）のバイオコンジュゲートを得るため、式（１）の基は、３つの選択肢のうちの１つに導入することができる。まず第１に、式（１）に従った基又はその塩を含むリンカーＬは、Ｑ１−Ｄによって表されるリンカー−コンジュゲートに存在することができ、ここでＬは、Ｑ１とＤとの間のスペーサーである。第２に、式（１）に従った基又はその塩を含むリンカーＬは、Ｂ−Ｆ１によって表される生体分子に存在することができ、ここでＬは、ＢとＦ１との間のスペーサーである。第３に、式（１）に従った基又はその塩は、コンジュゲーション反応それ自体中に形成することができる。後者の選択肢において、Ｑ１及びＦ１は、それらの反応生成物、即ち接続基Ｚ３が、式（１）に従った基若しくはその塩を含有するか、又は式（１）に従った基若しくはその塩であるように選択される。式（１）に従った基又はその塩は、上に記述されている選択肢のうちの第１又は第２に従って導入されることが好ましく、最も好ましくは第１の選択肢に従って導入される。式（１）に従った基又はその塩が、コンジュゲーション反応中にそのままで、すでに存在する場合において、インプロセス凝集の可溶性及び非存在に対するプラス効果は、上で述べた通り、コンジュゲーション反応の効率を改善する。式（１）に従った基又はその塩がリンカー−コンジュゲートに存在する場合において、疎水性薬物さえコンジュゲーション反応に容易にかけられ得る。
リンカー−コンジュゲート
【０１４６】
リンカー−コンジュゲートは、Ｑ１−Ｄによって、好ましくはＱ１−Ｌ−Ｄによって表され、ここで、Ｄは標的分子であり、Ｌは、上でさらに定義されている通りのＱ１及びＤを連結するリンカーであり、Ｑ１は、生体分子の官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり、「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分である。一実施形態において、「−」は、本明細書において定義されている通りのスペーサー部分である。一実施形態において、「−」は、結合、典型的には共有結合である。リンカー−コンジュゲートは、標的分子が、好ましくはリンカー又はスペーサーを介して、最も好ましくは上で定義されている通りのリンカーＬを介して、反応性基Ｑ１に共有結合的に接続されている化合物である。リンカー−コンジュゲートは、リンカー−コンストラクトに存在する反応性基Ｑ２と標的分子に存在する反応性基との反応を介して得ることができる。
【０１４７】
式（１）に従った基又はその塩は、Ｑ１とＤとの間に位置することが好ましい。言い換えると、反応性基Ｑ１は、式（１）に従った基の第１の端部に共有結合しており、標的分子Ｄは、式（１）に従った基の第２の端部に共有結合している。本明細書において、「第１の端部」及び「第２の端部」は両方とも、式（１）に従った基のカルボニル端部若しくはカルボキシ端部、又は式（１）に従った基のスルファミド端部のいずれかを指すが、論理的には同じ端部を指していない。
【０１４８】
当業者によって理解される通り、本発明によるリンカー−コンジュゲートは、１つ超の標的分子Ｄ、例えば２つ、３つ、４つ、５つなどを含むことができる。その結果として、リンカー−コンジュゲートは、したがって、１つ超の「第２の端部」を含むことができる。同様に、リンカー−コンジュゲートは、１つ超の反応性基Ｑ１を含むことができ、即ち、リンカー−コンジュゲートは、１つ超の第１の端部を含むことができる。１つ超の反応性基Ｑ１が存在する場合、Ｑ１基は同じ又は異なっていてもよく、１つ超の標的分子Ｄが存在する場合、標的分子Ｄは同じ又は異なっていてもよい。
【０１４９】
本発明によるリンカー−コンジュゲートは、そのため、（Ｑ１）ｙ’Ｓｐ（Ｄ）ｚとして示すこともでき、ここでｙ’は１〜１０の範囲における整数であり、ｚは１〜１０の範囲における整数である。本明細書において：
ｙ’は、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｓｐは、スペーサー部分であり、ここでスペーサー部分は、反応性基Ｑ１及び標的分子Ｄの間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに反応性基Ｑ１及び標的分子Ｄを共有結合的に連結する部分として定義されており、好ましくはここで、上記スペーサー部分は、上で定義されている通りのリンカーＬであり、したがって、式（１）に従った基又はその塩を含む。
【０１５０】
ｙ’は１、２、３又は４であることが好ましく、ｙ’は１又は２であるのがより好ましく、ｙ’は１であるのが最も好ましい。ｚは１、２、３、４、５又は６であることが好ましく、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｚは１、２又は３であるのがいっそう好ましく、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｚは１であるのが最も好ましい。ｙ’は１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｙ’は１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２又は３であるのがなおいっそう好ましく、ｙ’は１又は２、好ましくは１であり、ｚは１又は２であるのがなおいっそう好ましく、ｙ’は１であり、ｚは１であるのが最も好ましい。好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式Ｑ１Ｓｐ（Ｄ）４、Ｑ１Ｓｐ（Ｄ）３、Ｑ１Ｓｐ（Ｄ）２又はＱ１ＳｐＤに従っている。
【０１５１】
Ｄは、好ましくは「活性物質」又は「薬学的に活性な物質」であり、薬理学的及び／又は生物学的物質、即ち、生物学的及び／又は薬学的に活性である物質、例えば薬物、プロドラッグ、診断剤を指す。活性物質は、薬物及びプロドラッグからなる群から選択されることが好ましい。活性物質は、薬学的に活性な化合物、特に低〜中分子量化合物（例えば約２００〜約２５００Ｄａ、好ましくは約３００〜約１７５０Ｄａ）であるのがより好ましい。さらに好ましい実施形態において、活性物質は、細胞毒、抗ウイルス剤、抗細菌剤、ペプチド及びオリゴヌクレオチドからなる群から選択される。細胞毒の例としては、コルヒチン、ビンカアルカロイド、アントラサイクリン、カンプトテシン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、タキサン、カリケアマイシン、ツブリシン、イリノテカン、エンジイン、阻害性ペプチド、アマニチン、ｄｅＢｏｕｇａｎｉｎ、デュオカルマイシン、メイタンシン、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）又はインドリノベンゾジアゼピン（ＩＢＤ）が挙げられる。好ましい活性物質としては、エンジイン、アントラサイクリン、カンプトテシン、タキサン、ツブリシン、アマニチン、デュオカルマイシン、メイタンシン、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン又はインドリノベンゾジアゼピン、特にエンジイン、アントラサイクリン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）が挙げられる。
【０１５２】
上記リンカー−コンジュゲートは、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基Ｑ１を含む。官能基は当業者に知られており、官能基を持つ分子に特定の特性を付与する任意の分子的実体として定義することができる。例えば、生体分子における官能基は、アミノ基、チオール基、カルボン酸、アルコール基、カルボニル基、ホスフェート基又は芳香族基を構成することができる。生体分子における官能基は、天然に存在し得るか、又は特定の技法、例えば（生）化学若しくは遺伝子技法によって生体分子に入れることができる。生体分子に入れられる官能基は、本来天然に存在する官能基であり得るか、又は化学合成、例えばアジド、末端アルキン若しくはホスフィン部分によって調製される官能基であり得る。本明細書において、「反応性基」という用語は、官能基を含むある特定の基を指すが、官能基それ自体を指すこともできる。例えば、シクロオクチニル基は、官能基、すなわちＣ−Ｃ三重結合を含む反応性基である。同様に、Ｎ−マレイミジル基は、官能基としてＣ−Ｃ二重結合を含む反応性基である。しかしながら、官能基、例えばアジド官能基、チオール官能基又はアミノ官能基は、本明細書において、反応性基とも称することができる。
【０１５３】
リンカー−コンジュゲートは、１個超の反応性基Ｑ１を含むことができる。リンカー−コンジュゲートが２個以上の反応性基Ｑ１を含む場合、反応性基Ｑ１は、互いに異なっていてもよい。リンカー−コンジュゲートは、１個の反応性基Ｑ１を含むことが好ましい。
【０１５４】
リンカー−コンジュゲートに存在する反応性基Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応することで、接続基Ｚ３を形成することができる。言い換えると、反応性基Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１に相補的であることが必要である。本明細書において、反応性基は、任意選択で他の官能基の存在下で、接続基Ｚ３を形成するために官能基と選択的に反応する場合、官能基に「相補的」と示される。相補的反応性基及び官能基は、当業者に知られており、より詳細に下で記載されている。
【０１５５】
好ましい実施形態において、反応性基Ｑ１は、任意選択で置換されている、Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基若しくはその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基若しくはその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基、アレンアミド基、１，２−キノン基、又はトリアジン基からなる群から選択される。
【０１５６】
好ましい実施形態において、Ｑ１はＮ−マレイミジル基である。Ｑ１がＮ−マレイミジル基である場合、Ｑ１は、好ましくは非置換である。Ｑ１はしたがって、好ましくは下記に示されている通りの式（９ａ）に従っている。こうしたマレイミジル基の好ましい例は、カルボン酸部分を介してリンカー−コンジュゲートの残部に接続することができる２，３−ジアミノプロピオン酸（ＤＰＲ）マレイミジルである。
【０１５７】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基である。Ｑ１がハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基である場合、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｂ）に従っていることが好ましく、ここでｋは、１〜１０の範囲における整数であり、Ｒ４は、−Ｃｌ、−Ｂｒ及び−Ｉからなる群から選択される。ｋは、１、２、３又は４であることが好ましく、ｋは１又は２であるのがより好ましく、ｋは１であるのが最も好ましい。Ｒ４は−Ｉ又は−Ｂｒであることが好ましい。ｋは１又は２であり、Ｒ４は−Ｉ又は−Ｂｒであるのがより好ましく、ｋは１であり、Ｒ４は−Ｉ又はＢｒであるのが最も好ましい。
【０１５８】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はスルホニルオキシＮ−アルキルアミド基である。Ｑ１がスルホニルオキシＮ−アルキルアミド基である場合、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｂ）に従っていることが好ましく、ここで、ｋは１〜１０の範囲における整数であり、Ｒ４は、−Ｏ−メシル、−Ｏ−フェニルスルホニル及び−Ｏ−トシルからなる群から選択される。ｋは１、２、３又は４であることが好ましく、ｋは１又は２であるのがより好ましく、ｋは１であるのがいっそう好ましい。ｋは１であり、Ｒ４は、−Ｏ−メシル、−Ｏ−フェニルスルホニル及び−Ｏ−トシルからなる群から選択されるのが最も好ましい。
【０１５９】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はエステル基である。Ｑ１がエステル基である場合、エステル基は活性化エステル基であることが好ましい。活性化エステル基は、当業者に知られている。活性化エステル基は、本明細書において、良好な脱離基を含むエステル基として定義されており、ここでエステルカルボニル基は、上記良好な脱離基に結合している。良好な脱離基は、当業者に知られている。活性化エステルは、下記で示されている通りの式（９ｃ）に従っているのがさらに好ましく、ここでＲ５は、−Ｎ−スクシンイミジル（ＮＨＳ）、−Ｎ−スルホ−スクシンイミジル（スルホ−ＮＨＳ）、−（４−ニトロフェニル）、−ペンタフルオロフェニル又は−テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）からなる群から選択される。
【０１６０】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はカーボネート基である。Ｑ１がカーボネート基である場合、カーボネート基は活性化カーボネート基であることが好ましい。活性化カーボネート基は、当業者に知られている。活性化カーボネート基は、本明細書において、良好な脱離基を含むカーボネート基として定義されており、ここでカーボネートカルボニル基は、上記良好な脱離基に結合している。カーボネート基は、下記で示されている通りの式（９ｄ）に従っているのがさらに好ましく、ここでＲ７は、−Ｎ−スクシンイミジル、−Ｎ−スルホ−スクシンイミジル、−（４−ニトロフェニル）、−ペンタフルオロフェニル又は−テトラフルオロフェニルからなる群から選択される。
【０１６１】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｅ）に従ったハロゲン化スルホニル基であり、ここでＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択される。ＸはＣｌ又はＢｒであることが好ましく、Ｃｌであるのがより好ましい。
【０１６２】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、チオール基（９ｆ）又はチオール基の誘導体若しくは前駆体である。チオール基はメルカプト基とも称され得る。Ｑ１がチオール基の誘導体又は前駆体である場合、チオール誘導体は、好ましくは、下記で示されている通りの式（９ｇ）、（９ｈ）又は（９ｚｂ）に従っており、ここでＲ８は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ２〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基であり、ＶはＯ又はＳであり、Ｒ１６は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ１２アルキル基である。Ｒ８は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ２〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基であるのがより好ましく、Ｒ８はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル又はフェニルであるのがいっそう好ましい。Ｒ８は、メチル又はフェニルであるのがいっそう好ましく、メチルであるのが最も好ましい。Ｒ１６は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル基であるのがより好ましく、Ｒ１６は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましく、メチルであるのが最も好ましい。Ｑ１が式（９ｇ）又は（９ｚｂ）に従ったチオール−誘導体であり、Ｑ１が生体分子の反応性基Ｆ１と反応させる場合、上記チオール−誘導体は、プロセス中にチオール基に変換される。Ｑ１が式（９ｈ）に従っている場合、Ｑ１は−ＳＣ（Ｏ）ＯＲ８又は−ＳＣ（Ｓ）ＯＲ８、好ましくはＳＣ（Ｏ）ＯＲ８であり、ここで、Ｒ８及びその好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
【０１６３】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はアルケニル基であり、ここでアルケニル基は直鎖又は分枝であり、アルケニル基は任意選択で置換されている。アルケニル基は、末端又は内部アルケニル基であり得る。アルケニル基は、１個超のＣ−Ｃ二重結合を含むことができ、そうであるならば、２個のＣ−Ｃ二重結合を好ましくは含む。アルケニル基がジエニル基である場合、２個のＣ−Ｃ二重結合は１個のＣ−Ｃ単結合によって隔てられていることがさらに好ましい（即ち、ジエニル基は、コンジュゲートされたジエニル基であることが好ましい）。上記アルケニル基は、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基であることが好ましく、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル基であるのがより好ましく、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル基であるのがいっそう好ましい。アルケニル基は末端アルケニル基であることがさらに好ましい。アルケニル基は、下記で示されている通りの式（９ｉ）に従っているのがより好ましく、ここでｌは、０〜１０の範囲、好ましくは０〜６の範囲における整数であり、ｐは、０〜１０の範囲、好ましくは０〜６における整数である。ｌは０、１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｌは０、１又は２であるのがより好ましく、ｌは０又は１であるのが最も好ましい。ｐは０、１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｐは０、１又は２であるのがより好ましく、ｐは０又は１であるのが最も好ましい。ｐは０であり、ｌは０若しくは１であるのが、又はｐは１であり、ｌは０若しくは１であることが特に好ましい。
【０１６４】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はアルキニル基であり、ここでアルキニル基は直鎖又は分枝であり、アルキニル基は任意選択で置換されている。アルキニル基は、末端又は内部アルキニル基であり得る。上記アルキニル基はＣ２〜Ｃ２４アルキニル基であることが好ましく、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル基であるのがより好ましく、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル基であるのがいっそう好ましい。アルキニル基は末端アルキニル基であることがさらに好ましい。アルキニル基は、下記で示されている通りの式（９ｊ）に従っているのがより好ましく、ここでｌは、０〜１０の範囲、好ましくは０〜６の範囲における整数である。ｌは０、１、２、３又は４であるのがより好ましく、ｌは０、１又は２であるのがより好ましく、ｌは０又は１であるのが最も好ましい。
【０１６５】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はシクロアルケニル基である。シクロアルケニル基は、任意選択で置換されている。上記シクロアルケニル基は、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルケニル基であることが好ましく、Ｃ３〜Ｃ１２シクロアルケニル基であるのがより好ましく、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルケニル基であるのがいっそう好ましい。好ましい実施形態において、シクロアルケニル基はｔｒａｎｓ−シクロアルケニル基、より好ましくはｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基（ＴＣＯ基とも称される）であり、最も好ましくは下記で示されている通りの式（９ｚｉ）又は（９ｚｊ）に従ったｔｒａｎｓ−シクロオクテニル基である。別の好ましい実施形態において、シクロアルケニル基はシクロプロペニル基であり、ここでシクロプロペニル基は、任意選択で置換されている。別の好ましい実施形態において、シクロアルケニル基はノルボルネニル基、オキサノルボルネニル基、ノルボルナジエニル基又はオキサノルボルナジエニル基であり、ここで、ノルボルネニル基、オキサノルボルネニル基、ノルボルナジエニル基又はオキサノルボルナジエニル基は、任意選択で置換されている。さらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、下記で示されている通りの式（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）又は（９ｚｃ）に従っており、ここでＴはＣＨ２又はＯであり、Ｒ９は、水素、直鎖若しくは分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から独立して選択され、Ｒ１９は、水素及びフッ素化炭化水素からなる群から選択される。Ｒ９は独立して水素又はａＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ９は独立して水素又はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ９は独立して水素又はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ９は独立して水素又はメチルであるのがなおいっそう好ましい。さらに好ましい実施形態において、Ｒ１９は、水素並びに−ＣＦ３、−Ｃ２Ｆ５、−Ｃ３Ｆ７及び−Ｃ４Ｆ９、より好ましくは水素及び−ＣＦ３の群から選択される。さらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、式（９ｋ）に従っており、ここで一方のＲ９は水素であり、他方のＲ９はメチル基である。別のさらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、式（９ｌ）に従っており、ここで両Ｒ９は水素である。これらの実施形態において、ｌは０又は１であることがさらに好ましい。別のさらに好ましい実施形態において、シクロアルケニル基は、式（９ｍ）に従ったノルボルネニル（ＴはＣＨ２である）基若しくはオキサノルボルネニル（ＴはＯである）基又は式（９ｚｃ）に従ったノルボルナジエニル（ＴはＣＨ２である）基若しくはオキサノルボルナジエニル（ＴはＯである）基であり、ここでＲ９は水素であり、Ｒ１９は水素又は−ＣＦ３、好ましくは−ＣＦ３である。
【０１６６】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は（ヘテロ）シクロアルキニル基である。（ヘテロ）シクロアルキニル基は、任意選択で置換されている。（ヘテロ）シクロアルキニル基は、（ヘテロ）シクロオクチニル基、即ちヘテロシクロオクチニル基又はシクロオクチニル基であることが好ましく、ここで（ヘテロ）シクロオクチニル基は、任意選択で置換されている。さらに好ましい実施形態において、（ヘテロ）シクロオクチニル基は、ＤＩＢＯ基とも称される式（９ｎ）、ＤＩＢＡＣ基とも称される式（９ｏ）、又はＢＡＲＡＣ基とも称される（９ｐ）、又はＣＯＭＢＯ基とも称される（９ｚｋ）に従っており、全て下記で示されている通りであり、ここでＵはＯ又はＮＲ９であり、及びＲ９の好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。（９ｎ）における芳香族環は、１つ又は複数の位置で任意選択でＯ−スルホニル化されており、一方で、（９ｏ）及び（９ｐ）の環は、１つ又は複数の位置でハロゲン化されていてもよい。
【０１６７】
殊に好ましい実施形態において、化合物（４ｂ）におけるＲ１に結合している窒素原子は、ヘテロシクロアルキン基の環の窒素原子、例えば（９ｏ）における窒素原子である。言い換えると、ｃ、ｄ及びｇは、化合物（４ｂ）において０であり、Ｒ１及びＱ１は、それらが結合している窒素原子と一緒に、ヘテロシクロアルキン基、好ましくはヘテロシクロオクチン基、最も好ましくは式（９ｏ）又は（９ｐ）に従ったヘテロシクロオクチン基を形成する。本明細書において、（９ｏ）のカルボニル部分は、式（１）に従った基のスルホニル基によって置き換えられている。代替として、Ｒ１が結合している窒素原子は、式（９ｎ）においてＵと指定される原子と同じ原子である。言い換えると、Ｑ１が式（９ｎ）に従っている場合、Ｕは式（１）に従った基の右の窒素原子であり得るか、又はＵ＝ＮＲ９であり、Ｒ９は式（１）に従った基の残部であり、Ｒ１はシクロオクチン部分である。
【０１６８】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、ＢＣＮ基とも称される、任意選択で置換されているビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基である。ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基は、下記で示されている通りの式（９ｑ）に従っていることが好ましい。
【０１６９】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応において反応できるコンジュゲートされた（ヘテロ）ジエン基である。好ましい（ヘテロ）ジエン基としては、任意選択で置換されているテトラジニル基、任意選択で置換されている１，２−キノン基及び任意選択で置換されているトリアジン基が挙げられる。上記テトラジニル基は、下記で示されている通りの式（９ｒ）に従っているのがより好ましく、ここでＲ９は、水素、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基又はＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される。Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ４〜Ｃ１０（ヘテロ）アリール基であることが好ましく、Ｒ９は水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基又はＣ４〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基であるのがより好ましい。Ｒ９は水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル又はピリジルであるのがいっそう好ましい。Ｒ９は水素、メチル又はピリジルであるのがなおいっそう好ましい。上記１，２−キノン基は、式（９ｚｌ）又は（９ｚｍ）に従っているのがより好ましい。上記トリアジン基は、任意の位置異性体であり得る。上記トリアジン基は、式（９ｚｎ）において示されている位置など、任意の可能な位置を介して結合することができる１，２，３−トリアジン基又は１，２，４−トリアジン基であるのがより好ましい。１，２，３−トリアジンはトリアジン基として最も好ましい。
【０１７０】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｓ）に従ったアジド基である。
【０１７１】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒライゲーション反応を受けるのに適当である、任意選択で置換されているトリアリールホスフィン基である。ホスフィン基は、下記で示されている通りの式（９ｔ）に従っていることが好ましく、ここでＲ１０は（チオ）エステル基である。Ｒ１０が（チオ）エステル基である場合、Ｒ１０は−Ｃ（Ｏ）−Ｖ−Ｒ１１であることが好ましく、ここで、ＶはＯ又はＳであり、Ｒ１１はＣ１〜Ｃ１２アルキル基である。Ｒ１１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｃ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１１は、メチル基であるのが最も好ましい。
【０１７２】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｕ）に従ったニトリルオキシド基である。
【０１７３】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はニトロン基である。ニトロン基は、下記で示されている通りの式（９ｖ）に従っていることが好ましく、ここでＲ１２は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ６〜Ｃ１２アリール基からなる群から選択される。Ｒ１２はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ１２はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１２はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ１２はメチルであるのがなおいっそう好ましい。
【０１７４】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はニトリルイミン基である。ニトリルイミン基は、下記で示されている通りの式（９ｗ）又は（９ｚｄ）に従っていることが好ましく、ここでＲ１３は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ６〜Ｃ１２アリール基からなる群から選択される。Ｒ１３はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１３はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ１３はメチルであるのがなおいっそう好ましい。
【０１７５】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はジアゾ基である。ジアゾ基は、下記で示されている通りの式（９ｘ）に従っていることが好ましく、Ｒ１４は、水素又はカルボニル誘導体からなる群から選択される。Ｒ１４は水素であるのがより好ましい。
【０１７６】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はケトン基である。ケトン基は、下記で示されている通りの式（９ｙ）に従っているのがより好ましく、ここでＲ１５は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ６〜Ｃ１２アリール基からなる群から選択される。Ｒ１５はＣ１〜Ｃ６アルキル基であることが好ましく、Ｒ１５はＣ１〜Ｃ４アルキル基であるのがより好ましい。Ｒ１５はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルであるのがいっそう好ましい。Ｒ１５はメチルであるのがなおいっそう好ましい。
【０１７７】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基である。（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基は、下記で示されている通りの式（９ｚ）に従っているのがより好ましい。
【０１７８】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はヒドラジン基である。ヒドラジン基は、下記で示されている通りの式（９ｚａ）に従っていることが好ましい。
【０１７９】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１はハロゲン化Ｎ−マレイミジル基又はスルホニル化Ｎ−マレイミジル基である。Ｑ１がハロゲン化又はスルホニル化Ｎ−マレイミジル基である場合、Ｑ１は、好ましくは下記で示されている通りの式（９ｚｅ）に従っており、ここでＲ６は、水素Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ−ＳＲ１８ａ及び−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ１８ｂからなる群から独立して選択され、ここでＲ１８ａは、任意選択で置換されているＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基、好ましくはフェニル又はピリジルであり、Ｒ１８ｂは、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基、好ましくはトリル又はメチルからなる群から選択されるが、少なくとも１つのＲ６が水素であることを条件とする。Ｒ６がハロゲンである場合（即ち、Ｒ６がＦ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩである場合）、Ｒ６はＢｒであることが好ましい。一実施形態において、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基は、カルボン酸部分を介してリンカー−コンジュゲートの残部に接続することができるハロゲン化２，３−ジアミノプロピオン酸（ＤＰＲ）マレイミジルである。
【０１８０】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、下記で示されている通りの式（９ｚｆ）に従ったハロゲン化カルボニル基であり、ここでＸは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ及びＩからなる群から選択される。ＸはＣｌ又はＢｒであることが好ましく、ＸはＣｌであるのが最も好ましい。
【０１８１】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ｚｇ）に従ったアレンアミド基である。
【０１８２】
別の好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ｚｈ）に従った１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、又はその脱離誘導体であり、ここでＲ１８は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される。Ｒ１８は、任意選択で置換されているＣ１〜Ｃ６アルキル基又はＣ４〜Ｃ６（ヘテロ）アリール基であるのがより好ましく、フェニル基であるのが最も好ましい。
【化３３】
2017200902.tif 000034
2017200902.tif 000035
（式中、ｋ、ｌ、Ｘ、Ｔ、Ｕ、Ｖ、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１８及びＲ１９は、上で定義されている通りである。）
【０１８３】
本明細書において下に記載されている通りの本発明によるコンジュゲーションプロセスの好ましい実施形態において、コンジュゲーションは、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応又は１，３−二極性付加環化、好ましくは１，３−二極性付加環化などの付加環化を介して達成される。この実施形態によると、反応性基Ｑ１（並びに生体分子のＦ１）は、付加環化反応において反応性の基から選択される。本明細書において、反応性基Ｑ１及びＦ１は相補的であり、即ち、反応性基Ｑ１及びＦ１は付加環化反応において互いと反応でき、得られる環状部分は接続基Ｚ３である。
【０１８４】
Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応について、Ｆ１及びＱ１のうちの一方はジエンであり、Ｆ１及びＱ１のうちの他方はジエノフィルである。当技術者によって理解されている通り、「ジエン」という用語は、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応の文脈において、１，３−（ヘテロ）ジエンを指し、コンジュゲートされたジエン（Ｒ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＲ＝ＣＲ２）、イミン（例えばＲ２Ｃ＝ＣＲ−Ｎ＝ＣＲ２又はＲ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＲ＝ＮＲ、Ｒ２Ｃ＝Ｎ−Ｎ＝ＣＲ２）及びカルボニル（例えばＲ２Ｃ＝ＣＲ−ＣＲ＝Ｏ又はＯ＝ＣＲ−ＣＲ＝Ｏ）が含まれる。Ｎ及びＯ含有ジエンとのヘテロ−Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応は、当業者に知られている。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応に適当であると当技術分野において知られている任意のジエンは、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができる。好ましいジエンとしては、上に記載されている通りのテトラジン、上に記載されている通りの１，２−キノン、及び上に記載されている通りのトリアジンが挙げられる。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応に適当であると当技術分野において知られている任意のジエノフィルは、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができるが、ジエノフィルは、好ましくは、上に記載されている通りのアルケン基又はアルキン基、最も好ましくはアルキン基である。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応を介するコンジュゲーションについて、Ｆ１はジエンであり、Ｑ１はジエノフィルであることが好ましい。本明細書において、Ｑ１がジエンである場合、Ｆ１はジエノフィルであり、Ｑ１がジエノフィルである場合、Ｆ１はジエンである。Ｑ１はジエノフィルであるのが最も好ましく、Ｑ１はアルキニル基である又はアルキニル基を含むことが好ましく、Ｆ１はジエン、好ましくはテトラジン基、１，２−キノン基又はトリアジン基である。
【０１８５】
１，３−二極性付加環化について、Ｆ１及びＱ１のうちの一方は１，３−双極子であり、Ｆ１及びＱ１のうちの他方は親双極子である。１，３−二極性付加環化に適当であると当技術分野において知られている任意の１，３−双極子は、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができる。好ましい１，３−双極子としては、アジド基、ニトロン基、ニトリルオキシド基、ニトリルイミン基及びジアゾ基が挙げられる。１，３−二極性付加環化に適当であると当技術分野において知られている任意の親双極子は、反応性基Ｑ１又はＦ１として使用することができるが、親双極子は、好ましくは、アルケン基又はアルキン基、最も好ましくはアルキン基である。１，３−二極性付加環化を介するコンジュゲーションについて、Ｆ１は１，３−双極子であり、Ｑ１は親双極子であることが好ましい。本明細書において、Ｑ１が１，３−双極子である場合、Ｆ１は親双極子であり、Ｑ１が場合親双極子であり、Ｆ１は１，３−双極子である。Ｑ１は親双極子であるのが最も好ましく、Ｑ１はアルキニル基である又はアルキニル基を含むことが好ましく、Ｆ１は１，３−双極子、好ましくはアジド基である。
【０１８６】
したがって、好ましい実施形態において、Ｑ１は、親双極子及びジエノフィルから選択される。Ｑ１はアルケン又はアルキン基であることが好ましい。殊に好ましい実施形態において、Ｑ１はアルキン基を含み、上に記載されている通りのアルキニル基、上に記載されている通りのシクロアルケニル基、上に記載されている通りの（ヘテロ）シクロアルキニル基、及びビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基から選択されることが好ましく、Ｑ１は、上で定義されているとともに下記に図示されている通りの式（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）及び（９ｚｋ）から選択されるのがより好ましく、式（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）及び（９ｚｋ）から選択されるのがより好ましい。Ｑ１は、好ましくは式（９ｑ）のビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基であるのが最も好ましい。これらの基は、本明細書に記載されている通りのアジド官能化生体分子とのコンジュゲーションにおいて高度に有効であると知られており、本発明によるスルファミドリンカーが、こうしたリンカー−コンジュゲートにおいて用いられる場合、任意の凝集は、有益には、最小に低減される。
【０１８７】
リンカー−コンジュゲートにおいて、上に記載された通り、Ｑ１は、生体分子に存在する反応性基Ｆ１と反応できる。反応性基Ｑ１に対する相補的反応性基Ｆ１は、当業者に知られており、より詳細に下で記載されている。Ｆ１とＱ１との間の反応、及び接続基Ｚ３を含むその対応する生成物の一部の代表例は、図１１に図示されている。
【０１８８】
上に記載されている通り、Ｄ及びＱ１は、好ましくは上で定義されている通りのリンカーＬを介して、本発明によるリンカー−コンジュゲートにおいて共有結合している。リンカーへのＤの共有結合は、例えば、Ｄに存在する官能基Ｆ２とリンカーに存在する反応性基Ｑ２との反応を介して生じることができる。リンカーへのＤの結合のための適当な有機反応は、反応性基Ｑ２に相補的である官能基Ｆ２であるとして当業者に知られている。その結果として、Ｄは、接続基Ｚを介してリンカーに結合することができる。
【０１８９】
「接続基」という用語は、本明細書において、化合物の１つの部分及び同じ化合物の別の部分を接続する構造要素を指す。当業者によって理解される通り、接続基の性質は、上記化合物の部分間の接続が得られた有機反応の型に依存する。例として、Ｒ−Ｃ（Ｏ）−ＯＨのカルボキシル基をＨ２Ｎ−Ｒ’のアミノ基と反応させてＲ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−Ｒ’を形成する場合、Ｒは接続基Ｚを介してＲ’に接続されており、Ｚは−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（Ｈ）−基によって表すことができる。
【０１９０】
反応性基Ｑ１は、同様の方式でリンカーに結合することができる。その結果として、Ｑ１は、接続基Ｚを介してスペーサー部分に結合することができる。
【０１９１】
リンカーへの標的分子の結合について、及びリンカーへの反応性基Ｑ１の結合について、多数の反応が当技術分野において知られている。その結果として、多種多様な接続基Ｚが上記リンカー−コンジュゲートに存在することができる。
【０１９２】
一実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式：
（Ｑ１）ｙ’（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）（Ｄ）ｚ
（式中：
ｙ’は、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｓｐは、間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともにＱ１及びＤを共有結合的に連結する部分として定義されているスペーサー部分であり；
Ｚｗは、上記スペーサー部分にＱ１を接続する接続基であり；
Ｚｘは、上記スペーサー部分にＤを接続する接続基であり、並びに；
上記スペーサー部分はリンカーＬであり、したがって、式（１）に従った基又はその塩を含み、ここで式（１）に従った基は、上で定義されている通りである）に従った化合物である。
【０１９３】
好ましい実施形態において、式（１）に従った基におけるａは０である。別の好ましい実施形態において、式（１）に従った基におけるａは１である。
【０１９４】
ｙ’及びｚについての好ましい実施形態は、（Ｑ１）ｙＳｐ（Ｄ）ｚについて上で定義されている通りである。上記化合物は、式Ｑ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）（Ｄ）４、Ｑ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）（Ｄ）３、Ｑ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）（Ｄ）２又はＱ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）Ｄ、より好ましくはＱ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）（Ｄ）２又はＱ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）Ｄ及び最も好ましくはＱ１（Ｚｗ）Ｓｐ（Ｚｘ）Ｄに従っていることがさらに好ましく、ここでＺｗ及びＺｘは、上で定義されている通りである。
【０１９５】
Ｚｗ及びＺｘは、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＳＣ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｓ）−、−ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＳＳ（Ｏ）２−、−ＳＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＳＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択されることが好ましく、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０１９６】
Ｄ及びＱ１についての好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
【０１９７】
一実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式（４ａ）又は（４ｂ）：
【化３４】
2017200902.tif 000036
（式中：
ａは、独立して０又は１であり；
ｂは、独立して０又は１であり；
ｃは、０又は１であり；
ｄは、０又は１であり；
ｅは、０又は１であり；
ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
ｇは、０又は１であり；
ｉは、０又は１であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３をＳｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり；
Ｚ２は、Ｄ若しくはＳｐ４をＳｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３−Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ１〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択されるか；又は
Ｒ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］であり、ここでＤは、さらなる標的分子であり、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）に従った化合物、又はその塩である。
【０１９８】
好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）に従った化合物において１である。別の好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）に従った化合物において０である。
【０１９９】
上で定義されている通り、Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３をＳｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり、Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４をＳｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基である。より詳細に上で記載されている通り、「接続基」という用語は、化合物の１つの部分及び同じ化合物のうちの別の部分を接続する構造要素を指す。
【０２００】
式（４ａ）に従った化合物において、接続基Ｚ１は、存在する場合（即ち、ｄが１である場合）、Ｑ１を（任意選択でスペーサー部分Ｓｐ３を介する）、式（４ａ）に従った化合物のＯ原子又はＣ（Ｏ）基に、任意選択でスペーサー部分Ｓｐ２を介して接続する。より詳細には、Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在しない場合（即ち、ｇは０であり、ｃは０である）、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＯ原子（ａは１である）に又はＣ（Ｏ）基（ａは０である）に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在し（即ち、ｇは１である）、Ｓｐ２が存在しない（即ち、ｃは０である）場合、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＯ原子（ａはである１）に又はＣ（Ｏ）基（ａはである０）に接続する。Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在する場合（即ち、ｇは１であり、ｃは１である）、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在せず（即ち、ｇは０である）、Ｓｐ２が存在する（即ち、ｃは１である）場合、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。
【０２０１】
式（４ｂ）に従った化合物において、接続基Ｚ１は、存在する場合（即ち、ｄが１である場合）、Ｑ１を（任意選択でスペーサー部分Ｓｐ３を介する）、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおけるＮ（Ｒ１）基のＮ原子に、任意選択でスペーサー部分Ｓｐ２を介して接続する。より詳細には、Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在しない場合（即ち、ｇは０であり、ｃは０である）、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在し（即ち、ｇは１である）、Ｓｐ２が存在しない（即ち、ｃは０である）場合、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ１が存在する場合（即ち、ｄは１である）、並びにＳｐ３及びＳｐ２が存在する場合（即ち、ｇは１であり、ｃは１である）、Ｚ１は、スペーサー部分Ｓｐ３を、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。Ｚ１が存在し（即ち、ｄが１である場合）、Ｓｐ３が存在せず（即ち、ｇは０である）、Ｓｐ２が存在する（即ち、ｃは１である）場合、Ｚ１は、Ｑ１を、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ２に接続する。
【０２０２】
式（４ａ）に従った化合物において、ｃ、ｄ及びｇが全て０である場合、Ｑ１は、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＯ原子に（ａが１である場合）又はＣ（Ｏ）基に（ａが０である場合）直接的に結合している。
【０２０３】
式（４ｂ）に従った化合物において、ｃ、ｄ及びｇが全て０である場合、Ｑ１は、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に直接的に結合している。
【０２０４】
式（４ａ）に従った化合物において、接続基Ｚ２は、存在する場合（即ち、ｅが１である場合）、Ｄを（任意選択でスペーサー部分Ｓｐ４を介する）、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に、任意選択でスペーサー部分Ｓｐ１を介して接続する。より詳細には、Ｚ２が存在する場合（即ち、ｅは１である）、並びにＳｐ１及びＳｐ４が存在しない場合（即ち、ｂは０であり、ｉは０である）、Ｚ２は、Ｄを、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ２が存在し（即ち、ｅが１である場合）、Ｓｐ４が存在し（即ち、ｉは１である）、Ｓｐ１が存在しない（即ち、ｂは０である）場合、Ｚ２は、スペーサー部分Ｓｐ４を、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に接続する。Ｚ２が存在する場合（即ち、ｅは１である）、並びにＳｐ１及びＳｐ４が存在する場合（即ち、ｂは１であり、ｉは１である）、Ｚ２は、スペーサー部分Ｓｐ１を、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ４に接続する。Ｚ２が存在し（即ち、ｅが１である場合）、Ｓｐ４が存在しせず（即ち、ｉは０である）、Ｓｐ１が存在する（即ち、ｂは１である）場合、Ｚ２は、Ｄを、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのスペーサー部分Ｓｐ１に接続する。
【０２０５】
式（４ａ）に従った化合物において、ｂ、ｅ及びｉが全て０である場合、Ｄは、式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＮ（Ｒ１）基のＮ原子に直接的に結合している。
【０２０６】
式（４ｂ）に従った化合物において、ｂ、ｅ及びｉが全て０である場合、Ｄは、式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートのＯ原子に（ａが１である場合）又はＣ（Ｏ）基に（ａが０である場合）直接的に結合している。
【０２０７】
当業者によって理解される通り、接続基の性質は、上記化合物の特定の部分間の接続が得られた有機反応の型に依存する。多数の有機反応が、反応性基Ｑ１をスペーサー部分に接続するのに、及び標的分子をスペーサー部分に接続するのに利用可能である。その結果として、多種多様な接続基Ｚ１及びＺ２がある。
【０２０８】
式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、Ｚ１及びＺ２は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＳ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＳＣ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｓ）−、−ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＳＳ（Ｏ）２−、−ＳＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＳＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０２０９】
上に記載されている通り、式（４ａ）又は（４ｂ）に従った化合物において、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４はスペーサー部分である。Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、独立して、存在しない又は存在することがある（ｂ、ｃ、ｇ及びｉは、独立して、０又は１である）。存在するならばＳｐ１は、存在するならばＳｐ２と、存在するならばＳｐ３及び／又はＳｐ４と異なっていてもよい。
【０２１０】
スペーサー部分は、当業者に知られている。適当なスペーサー部分の例としては、（ポリ）エチレングリコールジアミン（例えば、１，８−ジアミノ−３，６−ジオキサオクタン、又はより長いエチレングリコール鎖を含む同等物）、ポリエチレングリコール鎖又はポリエチレンオキシド鎖、ポリプロピレングリコール鎖又はポリプロピレンオキシド鎖、及びｘｘがアルカンにおける炭素原子の数である１，ｘｘ−ジアミノアルカンが挙げられる。
【０２１１】
適当なスペーサー部分の別のクラスは、切断可能なスペーサー部分、又は切断可能なリンカーを含む。切断可能なリンカーは、当技術分野においてよく知られている。例えば、参照により本明細書に組み込まれるＳｈａｂａｔら、Ｓｏｆｔ  Ｍａｔｔｅｒ  ２０１２、６、１０７３は、生物学的トリガー、例えば酵素的切断又は酸化事象で放出される自己犠牲部分を含む切断可能なリンカーを開示している。適当な切断可能なリンカーの一部の例は、還元で切断されるジスルフィド−リンカー、プロテアーゼ、例えばカテプシン、プラスミン若しくはメタロプロテアーゼによる特異的認識で切断されるペプチド−リンカー、又はグリコシダーゼ、例えばグルクロニダーゼ、若しくは酸素の乏しい低酸素性部域で低減されるニトロ芳香族による特異的認識で切断されるグリコシドベースのリンカーである。本明細書において、適当な切断可能なスペーサー部分としては、アミノ酸の特定の切断可能な配列を含むスペーサー部分も挙げられる。例としては、例えば、Ｖａｌ−Ａｌａ（バリン−アラニン）又はＶａｌ−Ｃｉｔ（バリン−シトルリン）部分を含むスペーサー部分が挙げられる。
【０２１２】
式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及び／又はＳｐ４は、存在するならば、アミノ酸の配列を含む。アミノ酸の配列を含むスペーサー部分は、当技術分野において知られており、ペプチドリンカーと称することもできる。例としては、Ｖａｌ−Ｃｉｔ部分を含むスペーサー部分、例えばＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢなどが挙げられる。Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ部分が、上記リンカー−コンジュゲートにおいて用いられることが好ましい。
【０２１３】
式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートの好ましい実施形態において、スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基が、上で定義されている通りの１個又は複数のヘテロ原子によって中断されている場合、上記基は、１個若しくは複数のＯ原子によって、及び／又は１個若しくは複数のＳ−Ｓ基によって中断されていることが好ましい。
【０２１４】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ１００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ１００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ１００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ１００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ１００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがより好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は任意選択で置換されている。
【０２１５】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ５０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ５０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ５０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ５０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ５０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ５０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０２１６】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがなおいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０２１７】
これらの好ましい実施形態において、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択されるのがさらに好ましい。
【０２１８】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択されるのが最も好ましく、アルキレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。この実施形態において、アルキレン基は、非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯ及び／又はＳの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択されるのがさらに好ましい。
【０２１９】
好ましいスペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４としては、したがって、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−が挙げられ、ここでｎは、１〜５０の範囲、好ましくは１〜４０の範囲、より好ましくは１〜３０の範囲、いっそう好ましくは１〜２０の範囲及びなおいっそう好ましくは１〜１５の範囲における整数である。ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、１、２、３、４、５、６、７又は８であるのがより好ましく、１、２、３、４、５又は６であるのがいっそう好ましく、１、２、３又は４であるのがなおいっそう好ましい。
【０２２０】
Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は独立して選択されるので、Ｓｐ１は、存在するならば、存在するならばＳｐ２と、存在するならばＳｐ３及び／又はＳｐ４と異なっていてもよい。
【０２２１】
反応性基Ｑ１は、より詳細に上で記載されている。式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおいて、反応性基Ｑ１は、任意選択で置換されているＮ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、ハロゲン化カルボニル基、アレンアミド基及び１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基、又はそれらの脱離誘導体からなる群から選択されることが好ましい。さらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）又は（９ｚｋ）に従っており、ここで（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）及びそれらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｒ）に従っている。いっそうさらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｑ）、（９ｐ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）に従っており、特に好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｔ）又は（９ｚｈ）に従っており、それらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
【０２２２】
式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおける標的分子Ｄ及び標的分子Ｄのための好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
【０２２３】
上に記載されている通り、Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］であり、ここで、Ｄはさらなる標的分子であり、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである。
【０２２４】
好ましい実施形態において、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ２０アルキル基であり、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１６アルキル基であるのがより好ましく、Ｒ１は水素又はＣ１〜Ｃ１０アルキル基であるのがいっそう好ましく、ここでアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯから選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される。さらに好ましい実施形態において、Ｒ１は水素である。別のさらに好ましい実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル基、より好ましくはＣ１〜Ｃ１６アルキル基、いっそう好ましくはＣ１〜Ｃ１０アルキル基であり、ここでアルキル基は、１個又は複数のＯ原子によって任意選択で中断されており、アルキル基は、−ＯＨ基、好ましくは末端−ＯＨ基で任意選択で置換されている。この実施形態において、Ｒ１は、末端−ＯＨ基を含むポリエチレングリコール鎖であることがさらに好ましい。別のさらに好ましい実施形態において、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基、より好ましくはＣ１〜Ｃ６アルキル基、いっそう好ましくはＣ１〜Ｃ４アルキル基であり、Ｒ１は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル及びｔ−ブチルからなる群から選択されるのがなおいっそう好ましい。
【０２２５】
別の好ましい実施形態において、Ｒ１は、さらなる標的分子Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］又は−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］であり、ここでＤは標的分子であり、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである。Ｒ１がＤ又は−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］である場合、リンカー−コンジュゲートは、式（４ａ）に従っていることがさらに好ましい。この実施形態において、リンカー−コンジュゲート（４ａ）は、同じ又は異なっていてもよい２個の標的分子Ｄを含む。Ｒ１が−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］である場合、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］におけるＳｐ１、ｂ、Ｚ２、ｅ、Ｓｐ４、ｉ及びＤは、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子に結合している［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］におけるＳｐ１、ｂ、Ｚ２、ｅ、Ｓｐ４、ｉ及びＤと同じ又は異なっていてもよい。好ましい実施形態において、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子の−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］及び−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］の両方は同じである。
【０２２６】
Ｒ１が−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］である場合、リンカー−コンジュゲートは、式（４ｂ）に従っていることがさらに好ましい。この実施形態において、リンカー−コンジュゲート（４ｂ）は、同じ又は異なっていてもよい２個の標的分子Ｑ１を含む。Ｒ１が−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］である場合、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］におけるＳｐ２、ｃ、Ｚ１、ｄ、Ｓｐ３、ｇ及びＤは、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子に結合している他の−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］におけるＳｐ１、ｂ、Ｚ２、ｅ、Ｓｐ４、ｉ及びＱ１と同じ又は異なっていてもよい。好ましい実施形態において、Ｎ（Ｒ１）のＮ原子の−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］基は同じである。
【０２２７】
式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおいて、ｆは１〜１５０の範囲における整数である。リンカー−コンジュゲートは、したがって、１つ超の式（１）に従った基を含むことができ、式（１）に従った基は、上で定義されている通りである。１つ超の式（１）に従った基が存在する場合、即ち、ｆが２以上である場合、ａ、ｂ、Ｓｐ１及びＲ１は、独立して選択される。言い換えると、ｆが２以上である場合、各ａは独立して０又は１であり、各ｂは独立して０又は１であり、各Ｓｐ１は同じ又は異なっていてもよく、各Ｒ１は同じ又は異なっていてもよい。好ましい実施形態において、ｆは、１〜１００の範囲、好ましくは１〜５０の範囲、より好ましくは１〜２５の範囲、及びいっそう好ましくは１〜１５の範囲における整数である。ｆは１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、ｆは１、２、３、４、５、６、７又は８であるのがいっそう好ましく、ｆは１、２、３、４、５又は６であるのがなおいっそう好ましく、ｆは１、２、３又は４であるのがなおいっそう好ましく、ｆは、この実施形態において１であるのが最も好ましい。別の好ましい実施形態において、ｆは、２〜１５０の範囲、好ましくは２〜１００の範囲、より好ましくは２〜５０の範囲、より好ましくは２〜２５の範囲、及びいっそう好ましくは２〜１５の範囲における整数である。ｆは２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、ｆは２、３、４、５、６、７又は８であるのがいっそう好ましく、ｆは２、３、４、５又は６であるのがなおいっそう好ましく、ｆは２、３又は４であるのがなおいっそう好ましく、ｆは、この実施形態において２であるのが最も好ましい。
【０２２８】
上に記載されている通り、好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）に従った化合物において０である。リンカー−コンジュゲートは、そのため、式（６ａ）又は（６ｂ）に従った化合物又はその塩：
【化３５】
2017200902.tif 000037
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｉ、Ｄ、Ｑ１、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りである）でもあり得る。
【０２２９】
上に記載されている通り、別の好ましい実施形態において、ａは、式（４ａ）又は（４ｂ）に従った化合物において１である。リンカー−コンジュゲートは、そのため、式（７ａ）又は（７ｂ）に従った化合物、又はその塩：
【化３６】
2017200902.tif 000038
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｉ、Ｄ、Ｑ１、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りである）でもあり得る。
【０２３０】
Ｓｐ４が式（４ａ）に従ったリンカー−コンジュゲートに存在しない場合、即ち、ｉが０である場合、Ｄは、Ｚ２（ｅが１である場合）、Ｓｐ１（ｅが０であり、ｂが１である場合）又はＮ（Ｒ１）（ｅが０であり、ｂが０である場合）に連結される。Ｓｐ４が式（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートに存在しない場合、即ち、ｉが０である場合、Ｄは、Ｚ２（ｅが１である場合）、Ｓｐ１（ｅが０であり、ｂが１である場合）、Ｏ原子（ａが１であり、ｂ及びｅが０である場合）又はＣ（Ｏ）基（ａが０であり、ｂ及びｅが０である場合）に連結される。リンカー−コンジュゲートは、そのため、式（４ｃ）又は（４ｄ）に従った化合物、又はその塩：
【化３７】
2017200902.tif 000039
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、Ｄ、Ｑ１、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｚ１、Ｚ２及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りである）でもあり得る。
【０２３１】
好ましい実施形態において、式（４ｃ）又は（４ｄ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおいて、ａは０である。別の好ましい実施形態において、式（４ｃ）又は（４ｄ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおいて、ａは１である。
【０２３２】
リンカー−コンジュゲート、特に、式（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）、（４ｄ）、（６ａ）、（６ｂ）、（７ａ）又は（７ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートの特定の実施形態において、Ｓｐ１、Ｓｐ２Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）又は（９ｚｋ）に従っており、ここで（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）及びそれらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｒ）に従っている。いっそうさらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）に従っており、特に好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｐ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）に従っており、それらの好ましい実施形態は上で定義されている通りである。
【０２３３】
上で定義されている通りの式（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）、（４ｄ）、（６ａ）、（６ｂ）、（７ａ）又は（７ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートに好ましくは含まれる通りのリンカーＬ、上で定義されている通りのリンカーは、それぞれ式（８ａ）及び（８ｂ）：
【化３８】
2017200902.tif 000040
によって表すことができる。
【０２３４】
当業者によって理解される通り、スペーサー部分（８ａ）及び（８ｂ）の好ましい実施形態は、例えば、リンカー−コンジュゲートにおける反応性基Ｑ１及びＤの性質、リンカー−コンジュゲートを調製するための合成方法（例えば標的分子の相補的官能基Ｆ２の性質）、リンカー−コンジュゲートを使用して調製されるバイオコンジュゲートの性質（例えば、生体分子の相補的官能基Ｆ１の性質）に依存し得る。
【０２３５】
Ｑ１が、例えば、上で定義されている通りの式（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）又は（９ｚｋ）に従ったシクロオクチニル基である場合、Ｓｐ３は存在する（ｇは１である）ことが好ましい。
【０２３６】
例えば、リンカー−コンジュゲートが、式（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）又は（９ｚｋ）に従ったシクロオクチニル基である反応性基Ｑ２とアジド官能基Ｆ２との反応を介して調製された場合、Ｓｐ４は存在する（ｉは１である）ことが好ましい。
【０２３７】
さらに、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在する、即ち、ｂ、ｃ、ｇ、及びｉのうちの少なくとも１つは０でないことが好ましい。別の好ましい実施形態において、Ｓｐ１及びＳｐ４のうちの少なくとも１つ並びにＳｐ２及びＳｐ３のうちの少なくとも１つは存在する。
【０２３８】
ｆが２以上である場合、Ｓｐ１は存在することが好ましい（ｂは１である）。
【０２３９】
リンカー部分（８ａ）及び（８ｂ）のこれらの好ましい実施形態は、より詳細に下で記載されている通りの本発明によるバイオコンジュゲートに含まれる場合、リンカー−コンジュゲートにも成り立つ。
【０２４０】
Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４の好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
生体分子
【０２４１】
生体分子はＢ−Ｆ１によって表され、ここでＢは生体分子であり、Ｆ１は、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１と反応できる官能基であり、「−」は結合又はスペーサー部分である。代替として、生体分子は、式（２４）によって表される修飾抗体であり、ここでＦ１は、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１と反応できる官能基である。式（２４）によって表される修飾抗体及びそれらの好ましい実施形態は、詳細に上で定義されている。
【０２４２】
一実施形態において、「−」は、本明細書において定義されている通りのスペーサー部分である。一実施形態において、「−」は結合、典型的には共有結合である。生体分子は、「目的の生体分子」（ＢＯＩ）と称することもできる。生体分子は、自然発生するような生体分子であってもよく、ここで官能基Ｆ１は、例えばチオール、アミン、アルコール又はヒドロキシフェノール単位など、目的の生体分子にすでに存在する。リンカー−コンジュゲートとのコンジュゲーションは、次いで、上で定義されている通りの第１の手法を介して生じる。代替として、生体分子は修飾生体分子であってもよく、ここで官能基Ｆ１は、目的の生体分子に特異的に組み込まれ、リンカー−コンジュゲートとのコンジュゲーションは、この改変官能性基、即ち上で定義されている通りのバイオコンジュゲーションの２段階手法を介して生じる。特定の官能性基を組み込むための生体分子のこうした修飾は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／０６５６６１号から知られている。
【０２４３】
本発明によるバイオコンジュゲートにおいて、生体分子Ｂは、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類、酵素、ホルモン、アミノ酸及び単糖類からなる群から好ましくは選択される。生体分子Ｂは、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類及び酵素からなる群から選択されるのがより好ましい。生体分子Ｂは、糖タンパク質及び抗体を含むタンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びグリカンからなる群から選択されるのがより好ましい。生体分子Ｂは、抗体又はその抗原結合性断片であるのが最も好ましい。
【０２４４】
官能基Ｆ１は、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１と反応することで接続基Ｚ３を形成できる。当業者には、官能基Ｆ１が相補的反応性基Ｑ１と反応できることは明らかである。上で定義されているとともに当業者に知られている通りの反応性基Ｑ１に相補的である官能基Ｆ１は、より詳細に下で記載されている。Ｆ１とＱ１との間の反応、及び接続基Ｚ３を含むそれらの対応する生成物の一部の代表例は、図１１に図示されている。
【０２４５】
本発明によるバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスにおいて、リンカー−コンジュゲートに存在する反応性基Ｑ１は、官能基Ｆ１と典型的に反応される。１つ超の官能基Ｆ１が生体分子に存在することができる。２個以上の官能基が存在する場合、上記基は同じ又は異なっていてもよい。別の好ましい実施形態において、生体分子は、同じ又は異なっていてもよい２個以上の官能基Ｆを含み、２個以上の官能基は、リンカー−コンジュゲートの相補的反応性基Ｑと反応する。例えば、２個の官能基Ｆ、即ちＦ１及びＦ２を含む生体分子は、同じ又は異なっていてもよい官能基Ｑ１を含む２つのリンカー−コンジュゲートと反応することでバイオコンジュゲートを形成することができる。
【０２４６】
生体分子における官能基Ｆ１の例は、アミノ基、チオール基、カルボン酸、アルコール基、カルボニル基、ホスフェート基、又は芳香族基を含む。生体分子における官能基は天然に存在することがあるか、又は特定の技法、例えば（生）化学的技法若しくは遺伝子的技法によって生体分子に入れることができる。生体分子に入れられた官能基は、本来天然に存在する官能基であり得るか、又は化学合成によって調製される官能基、例えばアジド、末端アルキン、シクロプロペン部分若しくはホスフィン部分であり得る。付加環化によるコンジュゲーションの好ましいモードを勘案して、Ｆ１は、ジエン、ジエノフィル、１，３−双極子又は親双極子など、付加環化において反応できる基であることが好ましく、Ｆ１は、１，３−双極子（典型的にはアジド基、ニトロン基、ニトリルオキシド基、ニトリルイミン基又はジアゾ基）又は親双極子（典型的にはアルケニル基又はアルキニル基）から選択されることが好ましい。本明細書において、Ｆ１は、Ｑ１が親双極子である場合に１，３−双極子であり、Ｆ１は、Ｑ１が１，３−双極子である場合に親双極子であり、又はＦ１は、Ｑ１がジエノフィルである場合にジエンであり、Ｆ１は、Ｑ１がジエンである場合にジエノフィルである。Ｆ１は１，３−双極子であるのが最も好ましく、Ｆ１はアジド基であるか又はアジド基を含むことが好ましい。
【０２４７】
生体分子に入れられる官能基のいくつかの例は、図２に示されている。図２は、例えばチオプロピオニル基（１１ａ）、アジドアセチル基（１１ｂ）若しくはアジドジフルオロアセチル基（１１ｃ）を用いて２位で、又はアジド基を用いてＮ−アセチルガラクトサミン（１１ｄ）の６位で修飾することができる、ガラクトサミンのＵＤＰ糖類の誘導体のいくつかの構造を示している。一実施形態において、官能基Ｆ１はチオプロピオニル基、アジドアセチル基、又はアジドジフルオロアセチル基である。
【０２４８】
図３は、ＵＤＰ−糖類１１ａ〜ｄのうちのいずれかが、どのようにしてＧｌｃＮＡｃ部分１２（例えば、グリカンがエンドグリコシダーゼによってトリミングされるモノクローナル抗体）を含む糖タンパク質に、ガラクトシルトランスフェラーゼ突然変異体又はＧａｌＮＡｃ−トランスフェラーゼの作用下で結合することができ、それによって、ＧａｌＮＡｃ誘導体とＧｌｃＮＡｃ（それぞれ化合物１３ａ〜ｄ）との間にβ−グリコシドの１〜４連結を生ずるのかを概略的に表示している。
【０２４９】
天然に存在する官能基Ｆ１の好ましい例としては、チオール基及びアミノ基が挙げられる。生体分子への組込みのための化学合成によって調製される官能基の好ましい例としては、ケトン基、末端アルキン基、アジド基、シクロ（ヘテロ）アルキン基、シクロプロペン基又はテトラジン基が挙げられる。
【０２５０】
上に記載された通り、相補的反応性基Ｑ１及び官能基Ｆ１は当業者に知られており、Ｑ１及びＦ１のいくつかの適当な組合せは上に記載されており、図１１に示されている。相補的基Ｑ１及びＦ１のリストは、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３（ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２３９−０）の３章の２３０〜２３２ページ、表３．１に開示されており、この表の内容は参照により本明細書に明確に組み込まれる。
バイオコンジュゲート
【０２５１】
バイオコンジュゲートは、本明細書において、生体分子がリンカーを介して標的分子Ｄに共有結合的に接続されている化合物として定義されている。バイオコンジュゲートは、１つ若しくは複数の生体分子及び／又は１つ若しくは複数の標的分子を含む。リンカーは、１つ又は複数のスペーサー部分を含むことができる。本発明によるバイオコンジュゲートは、本発明によるバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスによって好都合にも調製され、ここで、反応性基Ｑ１を含むリンカー−コンジュゲートは、官能基Ｆ１を含む生体分子にコンジュゲートされる。このコンジュゲーション反応において、Ｑ１基及びＦ１基は、互いに反応することで、標的分子Ｄを生体分子Ｂと接続する接続基Ｚ３を形成する。リンカー−コンジュゲート及び生体分子について本明細書に記載されている全ての好ましい実施形態は、したがって、Ｑ１及びＦ１について言われている全てを除いて本発明によるバイオコンジュゲートに同様に当てはまり、ここで、本発明によるバイオコンジュゲートは、Ｑ１及びＦ１、即ち接続基Ｚ３の反応生成物を含有する。一態様において、本発明は、バイオコンジュゲート、好ましくは本明細書に記載されている抗体−コンジュゲートにも関する。
【０２５２】
本発明によるバイオコンジュゲートは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
（式中：
Ｂは、生体分子、好ましくは抗体ＡＢであり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分である）を有する。
【０２５３】
第１の好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」として定義されているコンジュゲーションのモードによって、即ち、上で定義されている通りのステップ（ｉ）及び（ｉｉ）によって得ることができる。第２の好ましい実施形態において、式（Ａ）に従ったバイオコンジュゲートは、式（１）に従った基又はその塩：
【化３９】
2017200902.tif 000041
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基らなる群から独立して選択される；又はＲ１は、標的分子Ｄであり、ここでＤは、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含むリンカーＬを有する。
【０２５４】
一実施形態において、「−」は、本明細書において定義されている通りのスペーサー部分である。一実施形態において、「−」は結合、典型的には共有結合である。
【０２５５】
好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、Ｂ−Ｚ３−Ｌ−Ｄによって表され、ここで、Ｂ、Ｌ、Ｄ及び「−」は、上で定義されている通りであり、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との反応によって得ることができる接続基である。部分Ｚ３は、付加環化、好ましくは１，３−二極性付加環化反応によって得ることができることが好ましく、Ｚ３は、スペーサー部分、好ましくはＢとＬとの間、最も好ましくはＢと式（１）に従った基のカルボニル端部又はカルボキシル端部との間のスペーサー部分に位置する１，２，３−トリアゾール環であるのが最も好ましい。
【０２５６】
本発明によるバイオコンジュゲートが式（１）に従った基の塩を含む場合、塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
【０２５７】
本発明によるバイオコンジュゲートは、１つ超の標的分子を含むことができる。同様に、バイオコンジュゲートは、１つ超の生体分子を含むことができる。生体分子Ｂ及び標的分子Ｄ並びにそれらの好ましい実施形態は、より詳細に上で記載されている。本発明によるバイオコンジュゲートにおけるＤに関する好ましい実施形態は、より詳細に上で記載された通りの本発明によるリンカー−コンジュゲートにおけるＤの好ましい実施形態に対応する。本発明によるバイオコンジュゲートにおけるリンカー（８ａ）又は（８ｂ）に関する好ましい実施形態は、より詳細に上で記載された通りのリンカー−コンジュゲートにおけるリンカーの好ましい実施形態に対応する。本発明によるバイオコンジュゲートにおけるＢに関する好ましい実施形態は、より詳細に上で記載された通りの本発明による生体分子におけるＢの好ましい実施形態に対応する。
【０２５８】
本発明によるバイオコンジュゲートは、生体分子がスペーサー部分を介して標的分子にコンジュゲートされているバイオコンジュゲートとして定義することもでき、ここでスペーサー部分は、式（１）に従った基又はその塩を含み、ここで式（１）に従った基は、上で定義されている通りである。
【０２５９】
本発明によるバイオコンジュゲートは、（Ｂ）ｙ’Ｓｐ（Ｄ）ｚとして示すこともでき、ここで、ｙ’は１〜１０の範囲における整数であり、ｚは１〜１０の範囲における整数である。
【０２６０】
本発明は、したがって、式：
（Ｂ）ｙＳｐ（Ｄ）ｚ
（式中：
ｙ’は、１〜１０の範囲における整数であり；
ｚは、１〜１０の範囲における整数であり；
Ｂは、生体分子であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｓｐは、スペーサー部分であり、ここでスペーサー部分は、間隔をあける（即ち、間にある特定の距離を提供する）とともに生体分子Ｂ及び標的分子Ｄを共有結合的に連結する部分として定義されており；上記スペーサー部分は、式（１）に従った基又はその塩を含み、ここで式（１）に従った基は、上で定義されている通りである）に従ったバイオコンジュゲートにも関する。
【０２６１】
好ましい実施形態において、上記スペーサー部分は、付加環化、好ましくは１，３−二極性付加環化反応、最も好ましくはＢと式（１）に従った基との間に位置する１，２，３−トリアゾール環によって得ることができる部分をさらに含む。
【０２６２】
ｙ’は１、２、３又は４であることが好ましく、ｙ’は１又は２であることがより好ましく、ｙ’は１であることが最も好ましい。ｚは１、２、３、４、５又は６であることが好ましく、ｚは１、２、３又は４であることがより好ましく、ｚは１、２又は３であることがいっそう好ましく、ｚは１又は２であることがなおいっそう好ましく、ｚは１であることが最も好ましい。ｙ’は１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２、３又は４であることがより好ましく、ｙ’は１又は２、好ましくは１であり、ｚは１、２又は３であることがなおいっそう好ましく、ｙ’は１又は２、好ましくは１であり、ｚは１又は２であることがなおいっそう好ましく、ｙ’は１であり、ｚは１であることが最も好ましい。好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、式ＢＳｐ（Ｄ）４、ＢＳｐ（Ｄ）３、ＢＳｐ（Ｄ）２又はＢＳｐＤに従っている。
【０２６３】
上に記載されている通り、本発明によるバイオコンジュゲートは、上で定義されている通りの式（１）に従った基又はその塩を含む。好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、ａが０である式（１）に従った基又はその塩を含む。この実施形態において、バイオコンジュゲートは、したがって、式（２）に従った基又はその塩を含み、ここで（２）は、上で定義されている通りである。
【０２６４】
別の好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、ａが１である式（１）に従った基又はその塩を含む。この実施形態において、バイオコンジュゲートは、したがって、式（３）に従った基又はその塩を含み、ここで（３）は、上で定義されている通りである。
【０２６５】
本発明によるバイオコンジュゲートにおいて、Ｒ１、スペーサー部分Ｓｐ、並びにＲ１及びＳｐの好ましい実施形態は、本発明によるリンカー−コンジュゲートについて上で定義されている通りである。
【０２６６】
好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、式（５ａ）若しくは（５ｂ）又はその塩：
【化４０】
2017200902.tif 000042
（式中、ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、ｈ、ｉ、Ｄ、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｚ３及びＲ１、並びにそれらの好ましい実施形態は、リンカー−コンジュゲート（４ａ）及び（４ｂ）について上で定義されている通りであり；
ｈは、０又は１であり；
Ｚ３は、ＢをＳｐ３、Ｚ１、Ｓｐ２、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｂは、生体分子である）に従っている。
【０２６７】
ｈは１であることが好ましい。
【０２６８】
生体分子Ｂの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
【０２６９】
本発明によるバイオコンジュゲートが（５ａ）又は（５ｂ）の塩である場合、上記塩は、好ましくは薬学的に許容される塩である。
【０２７０】
Ｚ３は接続基である。上に記載されている通り、「接続基」という用語は、本明細書において、化合物の１つの部分及び同じ化合物の別の部分を接続する構造要素を指す。典型的に、バイオコンジュゲートは、リンカー−コンジュゲートに存在する反応性基Ｑ１と生体分子に存在する官能基Ｆ１との反応を介して調製される。当業者によって理解される通り、接続基Ｚ３の性質は、生体分子とリンカー−コンジュゲートとの間の接続を確立するために使用された有機反応の型に依存する。言い換えると、Ｚ３の性質は、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１の性質及び生体分子における官能基Ｆ１の性質に依存する。生体分子とリンカー−コンジュゲートとの間の接続を確立するのに利用可能な多数の異なる化学反応があるので、その結果として、Ｚ３について多数の可能性がある。
【０２７１】
Ｑ１を含むリンカー−コンジュゲートが相補的官能基Ｆ１を含む生体分子にコンジュゲートされている場合にバイオコンジュゲートに存在するＦ１及びＱ１の適当な組合せ並びに接続基Ｚ３のいくつかの例は、図１１に示されている。
【０２７２】
Ｆ１が例えばチオール基である場合、相補的基Ｑ１としては、Ｎ−マレイミジル基及びアルケニル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図１１に示されている通りである。Ｆ１がチオール基である場合、相補的基Ｑ１としては、アレンアミド基も挙げられる。
【０２７３】
Ｆ１が例えばアミノ基である場合、相補的基Ｑ１としては、ケトン基及び活性化エステル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図１１に示されている通りである。
【０２７４】
Ｆ１が例えばケトン基である場合、相補的基Ｑ１としては、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基及びヒドラジン基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図１１に示されている通りである。
【０２７５】
Ｆ１が例えばアルキニル基である場合、相補的基Ｑ１としては、アジド基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図１１に示されている通りである。
【０２７６】
Ｆ１が例えばアジド基である場合、相補的基Ｑ１としては、アルキニル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図１１に示されている通りである。
【０２７７】
Ｆ１が例えばシクロプロペニル基、ｔｒａｎｓ−シクロオクテン基又はシクロオクチン基である場合、相補的基Ｑ１としては、テトラジニル基が挙げられ、対応する接続基Ｚ３は、図１１に示されている通りである。これらの特別な場合において、Ｚ３は中間体構造だけであり、Ｎ２を排出し、それによって、ジヒドロピリダジン（アルケンとの反応から）又はピリダジン（アルキンとの反応から）を生ずる。
【０２７８】
Ｆ１及びＱ１の追加の適当な組合せ、並びに結果として得られる接続基Ｚ３の性質は、当業者に知られており、例えば、参照により組み込まれるＧ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３（ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２３９−０）、特に３章、２２９〜２５８ページに記載されている。バイオコンジュゲーションプロセスに適当な相補的反応性基のリストは、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、第３版、２０１３（ＩＳＢＮ：９７８−０−１２−３８２２３９−０）の３章の２３０〜２３２ページ、表３．１に開示されており、この表の内容は、参照により本明細書に明確に組み込まれる。
【０２７９】
（５ａ）及び（５ｂ）に従ったバイオコンジュゲートにおいて、Ｚ３、Ｓｐ３、Ｚ１及びＳｐ２のうちの少なくとも１つは存在すること、即ち、ｈ、ｇ、ｄ及びｃのうちの少なくとも１つは０でないことが好ましい。Ｓｐ１、Ｚ２及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在すること、即ち、ｂ、ｅ及びｉのうちの少なくとも１つは０でないことも好ましい。Ｚ３、Ｓｐ３、Ｚ１及びＳｐ２のうちの少なくとも１つは存在し、Ｓｐ１、Ｚ２及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在することがより好ましい、即ち、ｂ、ｅ及びｉのうちの少なくとも１つは０でなく、ｈ、ｇ、ｄ及びｃのうちの少なくとも１つは０でないことが好ましい。
バイオコンジュゲートの調製のためのプロセス
【０２８０】
本発明の様々な態様において、本発明によるバイオコンジュゲートは、本明細書において定義されている通りのバイオコンジュゲートの調製のためのプロセスによって典型的に得られる。バイオコンジュゲートのリンカーＬにおける式（１）に従った基又はその塩の存在は、本発明の鍵であるので、バイオコンジュゲートを調製する任意の方法は、得られるバイオコンジュゲートが本明細書において定義されている通りのリンカーＬを含む限り使用することができる。式（１）に従った基は、ＢとＺ３との間のリンカーＬに存在することができる、即ち、生体分子に由来する、若しくはＺ３とＤとの間、即ち、リンカー−コンジュゲートに由来する、又はＺ３は式（１）に従った基であるか若しくは式（１）に従った基を含む、即ち、式（１）に従った基は、コンジュゲーションで形成される。式（１）に従った基は、ＢとＺ３との間又はＺ３とＤとの間のリンカーＬに存在することが好ましく、式（１）に従った基は、Ｚ３とＤとの間のリンカーＬに存在するのが最も好ましい。同様に、Ｑ１及びＦ１の性質を含めて、コンジュゲーションの正確なモードは、本発明の文脈において大きな柔軟性を有する。ＢＯＩをＭＯＩへコンジュゲートするための多くの技法が当業者に知られており、本発明の文脈において使用することができる。一実施形態において、コンジュゲーション方法は、上で定義されている通りのステップ（ｉ）及び（ｉｉ）を含む。
【０２８１】
一実施形態において、コンジュゲーションのモードは、図１１に図示されているコンジュゲーションモードのいずれかから、即ち、（１０ａ）又は（１０ｂ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのチオール−アルケンコンジュゲーション（好ましくはシステイン−アルケンコンジュゲーション、好ましくはここで、アルケンはペンダントアルケン（−Ｃ＝ＣＨ２）又はマレイミド部分、最も好ましくはマレイミド部分である）、（１０ｃ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのアミノ−（活性化）カルボン酸コンジュゲーション（ここで、（活性化）カルボン酸は−Ｃ（Ｏ）Ｘによって表され、ここでＸは脱離基である）、Ｙ＝ＮＨである（１０ｄ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのケトン−ヒドラジノコンジュゲーション（好ましくはアセチル−ヒドラジノコンジュゲーション）、Ｙ＝Ｏである（１０ｄ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのケトン−オキシアミノコンジュゲーション（好ましくはアセチル−オキシアミノコンジュゲーション）、（１０ｅ）、（１０ｆ）、（１０ｉ）又は（１０ｇ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのアルキン−アジドコンジュゲーション（好ましくはここで、アルキンはペンダントアルキン（−Ｃ≡ＣＨ）又はシクロオクチン部分、最も好ましくはシクロオクチン部分である）、Ｎ２が除去される（１０ｈ）として表すことができる接続部分Ｚ３を形成するためのアルケン−１，２，４，５−テトラジンコンジュゲーション又はアルキン−１，２，４，５−テトラジンコンジュゲーションから選択される。殊に好ましいコンジュゲーションモードは、システイン−アルケンコンジュゲーション及びアルキン−アジドコンジュゲーション、より好ましくはシステイン−マレイミドコンジュゲーション及びシクロオクチン−アジドコンジュゲーションである。
【０２８２】
本発明によるバイオコンジュゲートは、本明細書において定義されている通りのリンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を、生体分子とも称される生体分子の官能基Ｆ１と反応させるステップを含むプロセスによって典型的に調製される。リンカー−コンジュゲート及び生体分子、並びにそれらの好ましい実施形態は、より詳細に上で記載されている。こうしたプロセスは、コンジュゲーション又はバイオコンジュゲーションとして当業者に知られている。図１は、生体分子のコンジュゲーションの一般概念を示している：１個又は複数の官能基Ｆ１を含む目的の生体分子（ＢＯＩ）は、特定のリンカーを介して反応性基Ｑ１に共有結合している（過剰の）標的分子Ｄ（目的の分子又はＭＯＩとも称される）とともにインキュベートされる。バイオコンジュゲーションの上記プロセスにおいて、Ｆ１とＱ１との間の化学反応が起き、それによって、ＢＯＩとＭＯＩとの間の共有結合を含むバイオコンジュゲートを形成する。ＢＯＩは、例えば、ペプチド／タンパク質、グリカン又は核酸であり得る。
【０２８３】
バイオコンジュゲーション反応は、リンカー−コンジュゲートの反応性基Ｑ１を生体分子の官能基Ｆ１と反応させるステップを典型的に含み、ここで、式（Ａ）のバイオコンジュゲートが形成され、ここでリンカーＬは、式（１）に従った基又はその塩：
【化４１】
2017200902.tif 000043
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されているさらなる標的分子Ｄである）を含む。
【０２８４】
好ましい実施形態において、バイオコンジュゲートは、（４＋２）−付加環化（例えばＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応）又は（３＋２）−付加環化（例えば１，３−二極性付加環化）などの付加環化を介して調製される。コンジュゲーションは、Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応又は１，３−二極性付加環化であることが好ましい。好ましいＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応は、逆電子要請Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ付加環化である。別の好ましい実施形態において、１，３−二極性付加環化、より好ましくはアルキン−アジド付加環化が使用され、最も好ましくはここで、Ｑ１はアルキン基であるか又はアルキン基を含み、Ｆ１はアジド基である。Ｄｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ反応及び１，３−二極性付加環化などの付加環化は、当技術分野において知られており、当技術者は、付加環化をどのように実施するかを知っている。
【０２８５】
Ｑ１がＦ１と反応する場合、リンカー−コンジュゲートに由来する生体分子と標的分子との間の共有結合接続が形成される。相補的反応性基Ｑ１及び官能基Ｆ１は、より詳細に上及び下で記載されている。
【０２８６】
バイオコンジュゲートを調製するためのプロセスの好ましい実施形態において、ａは、式（１）に従った基において０である。この実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、したがって、上で定義されている通りの式（２）に従った基を含む。バイオコンジュゲートを調製するためのプロセスの別の好ましい実施形態において、ａは、式（１）に従った基において１である。この実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、したがって、上で定義されている通りの式（３）に従った基を含む。
【０２８７】
生体分子は、より詳細に上で記載されている。本発明によるプロセスにおいて、生体分子は、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、脂質、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類、酵素、ホルモン、アミノ酸及び単糖類からなる群から選択されることが好ましい。生体分子Ｂは、タンパク質（糖タンパク質及び抗体を含む）、ポリペプチド、ペプチド、グリカン、核酸、オリゴヌクレオチド、多糖類、オリゴ糖類及び酵素からなる群から選択されるのがより好ましい。生体分子Ｂは、糖タンパク質及び抗体を含むタンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びグリカンからなる群から選択されるのがより好ましい。Ｂは、抗体又はその抗原結合性断片であるのが最も好ましい。
【０２８８】
バイオコンジュゲートを調製するためのプロセスにおいて、反応性基Ｑ１は、任意選択で置換されているＮ−マレイミジル基、ハロゲン化Ｎ−アルキルアミド基、スルホニルオキシＮ−アルキルアミド基、エステル基、カーボネート基、ハロゲン化スルホニル基、チオール基又はその誘導体、アルケニル基、アルキニル基、（ヘテロ）シクロアルキニル基、ビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基、シクロアルケニル基、テトラジニル基、アジド基、ホスフィン基、ニトリルオキシド基、ニトロン基、ニトリルイミン基、ジアゾ基、ケトン基、（Ｏ−アルキル）ヒドロキシルアミノ基、ヒドラジン基、ハロゲン化Ｎ−マレイミジル基、１，１−ビス（スルホニルメチル）メチルカルボニル基又はその脱離誘導体、ハロゲン化カルボニル基及びアレンアミド基からなる群から選択されることが好ましい。
【０２８９】
さらに好ましい実施形態において、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）又は（９ｚｋ）に従っており、ここで、（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｄ）、（９ｅ）、（９ｆ）、（９ｇ）、（９ｈ）、（９ｉ）、（９ｊ）、（９ｋ）、（９ｌ）、（９ｍ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｒ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｕ）、（９ｖ）、（９ｗ）、（９ｘ）、（９ｙ）、（９ｚ）、（９ｚａ）、（９ｚｂ）、（９ｚｃ）、（９ｚｄ）、（９ｚｅ）、（９ｚｆ）、（９ｚｇ）、（９ｚｈ）、（９ｚｉ）、（９ｚｊ）、（９ｚｋ）及びそれらの好ましい実施形態は、本発明によるリンカー−コンジュゲートについて上で定義されている通りである。Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｂ）、（９ｃ）、（９ｆ）、（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｓ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｒ）に従っているのがより好ましい。Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｓ）に従っているのがいっそう好ましく、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｐ），（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）に従っているのが最も好ましく、それらの好ましい実施形態は、上で定義されている通りである。
【０２９０】
殊に好ましい実施形態において、Ｑ１は、上に記載されている通りのアルキニル基、上に記載されている通りのシクロアルケニル基、上に記載されている通り（ヘテロ）シクロアルキニル基及びビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基から好ましくは選択されるアルキン基を含み、Ｑ１は、上で定義されている通りの式（９ｊ）、（９ｎ）、（９ｏ）、（９ｐ）、（９ｑ）及び（９ｚｋ）から選択されるのがより好ましい。Ｑ１は、好ましくは式（９ｑ）のビシクロ［６．１．０］ノナ−４−イン−９−イル］基であるのが最も好ましい。
【０２９１】
バイオコンジュゲートを調製するためのプロセスのさらに好ましい実施形態において、リンカー−コンジュゲートは、式（４ａ）若しくは（４ｂ）、又はその塩：
【化４２】
2017200902.tif 000044
（式中：
ａは、独立して０又は１であり；
ｂは、独立して０又は１であり；
ｃは、０又は１であり；
ｄは、０又は１であり；
ｅは、０又は１であり；
ｆは、１〜１５０の範囲における整数であり；
ｇは、０又は１であり；
ｉは、０又は１であり；
Ｄは、標的分子であり；
Ｑ１は、生体分子に存在する官能基Ｆ１と反応できる反応性基であり；
Ｓｐ１は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ２は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ３は、スペーサー部分であり；
Ｓｐ４は、スペーサー部分であり；
Ｚ１は、Ｑ１又はＳｐ３を、Ｓｐ２、Ｏ若しくはＣ（Ｏ）又はＮ（Ｒ１）に接続する接続基であり；
Ｚ２は、Ｄ又はＳｐ４を、Ｓｐ１、Ｎ（Ｒ１）、Ｏ又はＣ（Ｏ）に接続する接続基であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される；又はＲ１は、Ｄ、−［（Ｓｐ１）ｂ（Ｚ２）ｅ（Ｓｐ４）ｉＤ］若しくは−［（Ｓｐ２）ｃ（Ｚ１）ｄ（Ｓｐ３）ｇＱ１］であり、ここでＤは標的分子であり、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３、Ｓｐ４、Ｚ１、Ｚ２、Ｑ１、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｇ及びｉは、上で定義されている通りである）に従っている。
【０２９２】
Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、独立して、スペーサー部分であり、言い換えると、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、互いに異なっていてもよい。Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在する又は存在しないことがある（ｂ、ｃ、ｇ及びｉは、独立して、０又は１である）。しかしながら、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４のうちの少なくとも１つは存在することが好ましい、即ち、ｂ、ｃ、ｇ及びｉのうちの少なくとも１つが０でないことが好ましい。
【０２９３】
存在するならば、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されることが好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基が、上で定義されている通りの１個又は複数のヘテロ原子によって中断されている場合、上記基は、１個若しくは複数のＯ原子によって及び／又は１個若しくは複数のＳ−Ｓ基によって中断されていることが好ましい。
【０２９４】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ１００アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ１００アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ１００シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ１００シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ１００シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ１００アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ１００アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ１００アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがより好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０２９５】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ５０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ５０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ５０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ５０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ５０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ５０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ５０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ５０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０２９６】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルケニレン基、Ｃ２〜Ｃ２０アルキニレン基、Ｃ３〜Ｃ２０シクロアルキレン基、Ｃ５〜Ｃ２０シクロアルケニレン基、Ｃ８〜Ｃ２０シクロアルキニレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アルキルアリーレン基、Ｃ７〜Ｃ２０アリールアルキレン基、Ｃ８〜Ｃ２０アリールアルケニレン基及びＣ９〜Ｃ２０アリールアルキニレン基からなる群から独立して選択されるのがなおいっそう好ましく、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０２９７】
これらの好ましい実施形態において、アルキレン基、アルケニレン基、アルキニレン基、シクロアルキレン基、シクロアルケニレン基、シクロアルキニレン基、アルキルアリーレン基、アリールアルキレン基、アリールアルケニレン基及びアリールアルキニレン基は、非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されていることがさらに好ましく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択される。
【０２９８】
スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択されるのが最も好ましく、アルキレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３の群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。この実施形態において、アルキレン基は非置換であるとともにＯ、Ｓ及びＮＲ３、好ましくはＯ及び／又はＳ−Ｓの群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されていることがさらに好ましく、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基、好ましくは水素又はメチルからなる群から独立して選択される。
【０２９９】
特に好ましいスペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４としては、−（ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２−、−ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−、−（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−及び−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２（ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２）ｎ−が挙げられ、ここでｎは、１〜５０の範囲、好ましくは１〜４０の範囲、より好ましくは１〜３０の範囲、いっそう好ましくは１〜２０の範囲及びなおいっそう好ましくは１〜１５の範囲における整数である。ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９又は１０であるのがより好ましく、１、２、３、４、５、６、７又は８であるのがより好ましく、１、２、３、４、５又は６であるのがいっそう好ましく、１、２、３又は４であるのがなおいっそう好ましい。
【０３００】
本発明によるプロセスの別の好ましい実施形態において、式（４ａ）及び（４ｂ）に従ったリンカー−コンジュゲートにおいて、スペーサー部分Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及び／又はＳｐ４は、存在するならば、アミノ酸の配列を含む。アミノ酸の配列を含むスペーサー部分は、当技術分野において知られており、ペプチドリンカーと称することもできる。例としては、Ｖａｌ−Ａｌａ部分又はＶａｌ−Ｃｉｔ部分を含むスペーサー部分、例えばＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ、Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢなどが挙げられる。
【０３０１】
上に記載されている通り、Ｚ１及びＺ２は接続基である。本発明によるプロセスの好ましい実施形態において、Ｚ１及びＺ２は、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲ２−、−Ｎ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＳＣ（Ｏ）−、−ＳＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＳＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２−、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＳ（Ｏ）−、−ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＯＣ（Ｓ）−、−ＯＣ（Ｓ）Ｏ−、−ＯＣ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）Ｏ−、−ＮＲ２Ｃ（Ｓ）ＮＲ２−、−ＳＳ（Ｏ）２−、−ＳＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＳＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−、−ＮＲ２ＯＳ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２Ｏ−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２ＮＲ２−、−ＯＮＲ２Ｓ（Ｏ）２−、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＳＰ（Ｏ）（Ｒ２）２−、−ＮＲ２Ｐ（Ｏ）（Ｒ２）２−及びそれらの２つ以上の組合せからなる群から独立して選択され、ここでＲ２は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルケニル基、Ｃ２〜Ｃ２４アルキニル基及びＣ３〜Ｃ２４シクロアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基及びシクロアルキル基は、任意選択で置換されている。
【０３０２】
本発明による特に好ましいプロセスにおいて、Ｓｐ１、Ｓｐ２、Ｓｐ３及びＳｐ４は、存在するならば、直鎖又は分枝のＣ１〜Ｃ２０アルキレン基からなる群から独立して選択され、アルキレン基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３からなる群から選択される１個又は複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択され、Ｑ１は、式（９ａ）、（９ｐ）、（９ｑ）、（９ｎ）、（９ｔ）、（９ｚｈ）又は（９ｏ）：
【化４３】
2017200902.tif 000045
（式中：
Ｒ１０は、（チオ）エステル基であり；
Ｒ１８は、任意選択で置換されている、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル基及びＣ４〜Ｃ１２（ヘテロ）アリール基からなる群から選択される）に従っている。
【０３０３】
バイオコンジュゲートを調製するためのプロセスの実施形態は、図４に図示されている。図４は、修飾抗体１３ａ〜ｄが、マレイミドとの求核付加の手段によって（チオエーテルコンジュゲート１４に至る３−メルカプトプロピオニル−ガラクトサミン修飾１３ａに関する、又はチオエーテルコンジュゲート１７に至る改変システイン残基へのコンジュゲーションに関する）、又はシクロオクチン試薬との歪み促進付加環化で（それぞれトリアゾール１５ａ、１５ｂ又は１６に至る１３ｂ、１３ｃ又は１３ｄに関する）、バイオコンジュゲーションプロセスをどのように受けるかを示している。
【０３０４】
本発明によるバイオコンジュゲートの治療指数の増加に加えて、本明細書に記載されている通りのバイオコンジュゲート並びに本発明によるリンカー−コンジュゲート及びスルファミドリンカーの調製のためのプロセスのさらなる利点は、コンジュゲーション効率が、スルファミドリンカーが典型的なポリエチレングリコール（ＰＥＧ）スペーサーの代わりに使用される場合において増加することである。スルファミド基、特にアシルスルファミド基又はカルバモイルスルファミド基の追加の利点は、こうした基を含むリンカーの可溶性に対して、並びにコンジュゲーションの前、最中及び後における全体としてのコンストラクトに対してプラス効果を付与するスルファミド基の高い極性である。この増加された極性を勘案して、本発明によるスルファミドリンカーを含有するリンカー−コンジュゲートを用いるコンジュゲーションは、疎水性標的化合物を生体分子にコンジュゲートするのに特に適当である。スルファミドの高い極性は、疎水性部分が、コンジュゲーション中に多量の有機共溶媒を必要とすること及び／又はバイオコンジュゲートの凝集を誘発することが知られている目的の生体分子にコンジュゲートされる場合においてもプラスの影響を持つ。共溶媒の高いレベル（ＤＭＦの最大２５％又はＤＭＡ、プロピレングリコール若しくはＤＭＳＯの実に５０％）は、コンジュゲーションプロセス中にタンパク質変性を誘発することがある、及び／又は製造プロセスにおいて特殊装置を必要とすることがある。したがって、バイオコンジュゲートにおける疎水性の連結する部分と関連する凝集の問題は、バイオコンジュゲートの形成において、リンカー−コンジュゲートにおける標的分子と反応性基Ｑ１との間のスペーサーに、本発明によるスルファミドリンカーを使用することによって、効果的に解決される。本発明によるスルファミドリンカー及びバイオコンジュゲーションプロセスにおけるスルファミドリンカーの使用の追加の利点は、合成の簡便さ及び高収率である。
【０３０５】
本発明によるスルファミドリンカーの使用のこれらの有益な効果の証拠について、国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７、特にその表１〜３、図１１〜１４、２３及び２４、並びに実施例５７、５８、６０及び６１が参照される。国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７のこれらの表、図及び実施例は、本明細書に組み込まれる。
適用
【０３０６】
本発明は、したがって、第１の態様において、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための、上で定義されている通りの「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」及び「スルファミド連結」のうちの少なくとも１つを含むコンジュゲーションのモードの使用に関する。本態様による本発明は、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための方法として表現することもできる。好ましい実施形態において、コンジュゲーションのモードは、リンカーＬを介して生体分子Ｂを標的分子Ｄと接続するのに使用されており、ここでコンジュゲーションのモードは、以下を含む：
（ｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであって、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化４４】
2017200902.tif 000046
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは、０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾糖タンパク質を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾糖タンパク質を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであって、リンカーＬはＳ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ。
【０３０７】
本明細書において、生体分子は、好ましくは抗体であり、バイオコンジュゲートは、好ましくは抗体−コンジュゲートである。
【０３０８】
本明細書において、治療指数は、本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートと比較して増加されているか、又は本発明によるコンジュゲーションのモードによって得ることができる。したがって、第１の実施形態において、治療指数は、上で定義されている通りのステップ（ｉ）及び（ｉｉ）によって得ることができないバイオコンジュゲート、又は言い換えると、コンジュゲーションプロセスの直接的帰結である抗体を標的分子と連結する結果として得られるリンカーＬの構造的特色を含有しないバイオコンジュゲートと比較して増加される。したがって、第２の実施形態において、治療指数は、リンカーＬが式（１）に従った基又はその塩を含まない式（Ａ）のバイオコンジュゲートと比較して増加される。
【０３０９】
本発明者らは、驚くべきことに、本発明によるコンジュゲーションのモードが使用された場合、たとえ全ての他の因子、特に生体分子の型及び型及び生体分子−標的分子−比が一定に保たれていても、本発明によるバイオコンジュゲートの治療指数が顕著に増加されたことを見出した。治療指数の増加は、好ましくは、癌の処置における、特にＨＥＲ２発現腫瘍の標的化における治療指数の増加である。
【０３１０】
本発明の第１の態様による方法は、本発明によるコンジュゲーションのモードを有するバイオコンジュゲートを提供するステップを含む、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための方法として表現することもできる。
【０３１１】
本発明者らは、本発明によるコンジュゲーションのモードが、本発明によるバイオコンジュゲートに含まれている場合、治療指数の両態様に対して：（ａ）治療的有効性に対して及び（ｂ）耐容性に対して効果を有することを見出した。したがって、治療指数を増加させるための本使用又は方法は、好ましくは、（ａ）治療的有効性を増加させるため、及び／又は（ｂ）式（Ａ）のバイオコンジュゲートの耐容性を増加させるためである。バイオコンジュゲートは、抗体−コンジュゲートであることが好ましく、本使用又は方法は、抗体−コンジュゲートの治療指数を増加させるため、好ましくは、（ａ）抗体−コンジュゲートの治療的有効性を増加させるため、及び／又は（ｂ）抗体−コンジュゲートの耐容性を増加させるためである。一実施形態において、本方法又は使用は、バイオコンジュゲート、好ましくは抗体−コンジュゲートの治療的有効性を増加させるためである。一実施形態において、本方法又は使用は、バイオコンジュゲート、好ましくは抗体−コンジュゲートの耐容性を増加させるためである。
【０３１２】
したがって、一実施形態において、第１の態様による使用又は方法は、式（Ａ）のバイオコンジュゲートの治療的有効性を増加させるためである。本明細書において、「治療的有効性を増加させること」は、「有効量を低下させること」、「ＥＤ５０値を低下させること」又は「保護指数を増加させること」として表現することもできる。同様に、一実施形態において、第１の態様による方法は、式（Ａ）のバイオコンジュゲートの耐容性を増加させるためである。本明細書において、「耐容性を増加させること」は、「最大耐量（ＭＴＤ）を増加させること」、「ＴＤ５０値を増加させること」、「安全性を増加させること」又は「毒性を低減すること」として表現することもできる。殊に好ましい一実施形態において、第１の態様による方法は、（ａ）治療的有効性を増加させるため、及び（ｂ）式（Ａ）のバイオコンジュゲートの耐容性を増加させるためである。
【０３１３】
第１の態様による方法は、非常に非医療的である。一実施形態において、方法は、バイオコンジュゲートの治療指数を増加させるための非医療的方法である。
【０３１４】
本発明の第１の態様は、バイオコンジュゲートの治療指数（治療的有効性及び／又は耐容性）を改善することにおける使用のためのコンジュゲーションのモードとしても表現することができ、ここでコンジュゲーションのモードは、上で定義されている通りである。一実施形態において、本態様は、式（Ａ）のバイオコンジュゲートの治療的有効性を改善することにおける使用のための、上で定義されている通りの「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」に従ったコンジュゲーションのモードとしても表現され、ここでＬ及び（Ａ）は、上で定義されている通りである。一実施形態において、本態様は、バイオコンジュゲート、好ましくは抗体−コンジュゲートの治療指数（治療的有効性及び／又は耐容性）を改善することにおける使用のためのコンジュゲーションのモードとしても表現される。言い換えると、第１の態様は、バイオコンジュゲートの治療指数（治療的有効性及び／又は耐容性）を改善するための、バイオコンジュゲート、好ましくは抗体−コンジュゲートの調製のためのコンジュゲーションのモードの使用に関する。第１の態様による本発明は、バイオコンジュゲートの治療指数（治療的有効性及び／又は耐容性）を増加させるための、バイオコンジュゲート、好ましくは抗体−コンジュゲートにおける、又はバイオコンジュゲート、好ましくは抗体−コンジュゲートの調製における、コンジュゲーションのモードの使用としても表現することができる。
【０３１５】
一実施形態において、本発明の第１の態様による使用のためのコンジュゲーションの方法、使用又はモードは、それを必要とする対象、特に、例えば膵臓癌、膀胱癌、又は胃癌から選択される、ＨＥＲ２発現に関連する障害を患う患者への、本発明によるバイオコンジュゲートの投与をさらに含む。一実施形態において、対象は、癌患者、より適当にはＨＥＲ２発現腫瘍を患う患者である。抗体−薬物−コンジュゲートなどのバイオコンジュゲートの使用は、癌処置の分野においてよく知られており、本発明によるバイオコンジュゲートは、この点において殊に適当である。
【０３１６】
典型的に、バイオコンジュゲートは、治療有効量で投与される。投与は単回用量であり得るか、又は例えば月１〜４回、好ましくは月１〜２回行い得る。好ましい実施形態において、投与は、３週又は４週毎に、最も好ましくは４週毎に１回行う。治療的有効性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置中の場合よりも頻繁には行わないことがある。当業者によって理解される通り、本発明によるバイオコンジュゲートの用量は、多くの因子に依存することがあり、最適な投薬計画は、日常的実験法を介して当技術者によって決定することができる。バイオコンジュゲートは、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ対象体重、より正確には０．０３〜２５ｍｇ／ｋｇ若しくは最も正確には０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ、又は代替として０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ若しくは０．５〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で典型的に投与される。一実施形態において、投与は、静脈内注射を介して行う。
ＨＥＲ２発現細胞を標的化するための方法
【０３１７】
本発明は、第２の態様において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与を含む、低ＨＥＲ２発現細胞を含むがこれに限定されない、ＨＥＲ２発現細胞を標的化するための方法に関する。それを必要とする対象は、最も好ましくは癌患者である。抗体−薬物−コンジュゲートなどのバイオコンジュゲートの使用は、癌処置の分野においてよく知られており、本発明によるバイオコンジュゲートは、この点において殊に適当である。記載されている通りの方法は、癌の処置に典型的に適当である。本発明によるバイオコンジュゲートは、非常に詳細に上で記載されており、上記記載は、本発明の第２の態様において使用されるバイオコンジュゲートにも同様に当てはまる。本発明の第２の態様は、それを必要とする対象におけるＨＥＲ２発現細胞を標的化することにおける使用のための本発明によるバイオコンジュゲートとしても表現することができる。言い換えると、第２の態様は、それを必要とする対象におけるＨＥＲ２発現細胞を標的化することにおける使用のための医薬の調製のための、本発明によるバイオコンジュゲートの使用に関する。
【０３１８】
本態様の文脈において、ＨＥＲ２発現細胞の標的化としては、ＨＥＲ２発現細胞、特にＨＥＲ２発現腫瘍を処置すること、画像化すること、診断すること、その増殖を防止すること、封じ込めること及び低減することのうちの１つ又は複数が挙げられる。本態様は、ＨＥＲ２発現腫瘍の処置のためであるのが最も好ましい。
【０３１９】
一実施形態において、本態様は、それを必要とする対象の処置のための方法に関する。本発明の第２の態様は、それを必要とする対象の処置における使用のための、好ましくは癌の処置のための本発明によるバイオコンジュゲートとしても表現することができる。言い換えると、第２の態様は、それを必要とする対象の処置における使用のための、好ましくは癌の処置における使用のための医薬の調製のための本発明によるバイオコンジュゲートの使用に関する。
【０３２０】
本態様の文脈において、対象は、ＨＥＲ２発現に関連する障害、特に乳癌、膵臓癌、膀胱癌、又は胃癌から選択される障害を適当には患う。
【０３２１】
本態様の文脈において、標的分子Ｄは抗癌剤、好ましくは細胞毒であることが好ましい。
【０３２２】
第２の態様による方法において、バイオコンジュゲートは、治療有効量で典型的に投与される。投与は単回用量であり得るか、又は例えば月１〜４回、好ましくは月１〜２回行い得る。好ましい実施形態において、投与は、３週又は４週毎に、最も好ましくは４週毎に１回行う。当業者によって理解される通り、本発明によるバイオコンジュゲートの用量は、多くの因子に依存することがあり、最適な投薬計画は、日常的実験法を介して当技術者によって決定することができる。バイオコンジュゲートは、０．０１〜５０ｍｇ／ｋｇ対象体重、より正確には０．０３〜２５ｍｇ／ｋｇ若しくは最も正確には０．０５〜１０ｍｇ／ｋｇ、又は代替として０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ若しくは０．５〜１０ｍｇ／ｋｇの用量で典型的に投与される。一実施形態において、投与は、静脈内注射を介して行う。
【０３２３】
治療的有効性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置におけるよりも頻繁に行わない及び／又はより低い用量で行うことがある。一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＴＤ５０よりも低い用量であり、好ましくは、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＴＤ５０の多くとも９９〜９０％、より好ましくは多くとも８９〜６０％、いっそう好ましくは多くとも５９〜３０％、最も好ましくは多くとも２９〜１０％である。一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのために行う投与よりも頻繁に行わず、好ましくは、投与事象の数は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートの投与事象の数の多くとも７５％、より好ましくは多くとも５０％である。代替として、耐容性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置よりも高い用量で行うことがある。一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＴＤ５０よりも高い用量であり、好ましくは、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＴＤ５０の多くとも２５〜５０％、より好ましくは多くとも５０〜７５％、最も好ましくは多くとも７５〜１００％である。
【０３２４】
治療的有効性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置よりも頻繁に行わない及び／又はより低い用量で行うことがある。一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＥＤ５０よりも低い用量であり、好ましくは、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＥＤ５０の多くとも９９〜９０％、より好ましくは多くとも８９〜６０％、いっそう好ましくは多くとも５９〜３０％、最も好ましくは多くとも２９〜１０％である。一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのために行う投与よりも頻繁に行わず、好ましくは、投与事象の数は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートの投与事象の数の多くとも７５％、より好ましくは多くとも５０％である。代替として、耐容性の増加を勘案して、投与は、従来のバイオコンジュゲートを用いる処置におけるよりも高い用量で行うことがある。一実施形態において、本発明によるバイオコンジュゲートの投与は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＴＤ５０よりも高い用量であり、好ましくは、用量は、同じバイオコンジュゲートであるが本発明によるコンジュゲーションのモードを含まないバイオコンジュゲートのＴＤ５０の多くとも１．１〜１．４９倍高く、より好ましくは多くとも１．５〜１．９９倍高く、いっそう好ましくは２〜４．９９倍高く、最も好ましくは多くとも５〜１０倍高い。
【０３２５】
一実施形態において、本態様による使用若しくは方法又は使用のためのコンジュゲーションモードは、それを必要とする対象の処置における使用のためのバイオコンジュゲートであり、ここでバイオコンジュゲートは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
［式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分であり、
ここでＬは、式（１）に従った基又はその塩：
【化４５】
2017200902.tif 000047
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含む］によって表される。
【０３２６】
一実施形態において、本態様による使用若しくは方法又は使用のためのコンジュゲーションモードは、それを必要とする対象の処置における使用のためのバイオコンジュゲートではなく、ここでバイオコンジュゲートは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
［式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分であり、
ここでＬは、式（１）に従った基又はその塩：
【化４６】
2017200902.tif 000048
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含む］によって表される。
本発明による抗体−コンジュゲート
【０３２７】
第３の態様において、本発明は、ＨＥＲ２発現腫瘍を標的化することに特に適当である抗体−コンジュゲートに関する。本発明による抗体−コンジュゲートは、リンカーＬを介して標的分子Ｄに接続されている抗体ＡＢを含み、ここで抗体−コンジュゲートは、本発明によるコンジュゲーションのモードを含むか、又は本発明によるコンジュゲーションのモードによって得ることができる。特に、本発明による抗体−コンジュゲートは、以下によって得ることができる：
（ｉ）１〜４つのコアＮ−アセチルグルコサミン部分を含む糖タンパク質を、触媒の存在下で式Ｓ（Ｆ１）ｘ−Ｐの化合物と接触させるステップであって、Ｓ（Ｆ１）ｘは、官能基Ｑ１と反応できるｘ個の官能基Ｆ１を含む糖誘導体であり、ｘは１又は２であり、Ｐはヌクレオシド一リン酸又は二リン酸であり、触媒は、Ｓ（Ｆ１）ｘ部分をコア−ＧｌｃＮＡｃ部分に転移することで、式（２４）：
【化４７】
2017200902.tif 000049
（式中、Ｓ（Ｆ１）ｘ及びｘは、上で定義されている通りであり；ＡＢは抗体を表し；ＧｌｃＮＡｃはＮ−アセチルグルコサミンであり；Ｆｕｃはフコースであり；ｂは０又は１であり；ｙは１、２、３又は４である）に従った修飾抗体を得ることができる、ステップ；並びに
（ｉｉ）修飾抗体を、官能基Ｆ１と反応できる官能基Ｑ１及びリンカーＬ２を介してＱ１に接続されている標的分子Ｄを含むリンカー−コンジュゲートと反応させることで抗体−コンジュゲートを得るステップであって、リンカーＬは、Ｓ−Ｚ３−Ｌ２を含み、Ｚ３は、Ｑ１とＦ１との間の反応から生じる接続基である、ステップ。
【０３２８】
本明細書において、抗体ＡＢはＨＥＲ２発現腫瘍を標的化でき、標的分子Ｄは、タキサン、アントラサイクリン、カンプトテシン、エポシロン、マイトマイシン、コンブレタスタチン、ビンカアルカロイド、メイタンシノイド、カリケアマイシン及びエンジイン、デュオカルマイシン、ツブリシン、アマトキシン、ドラスタチン及びオーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリンｏ−ベンゾジアゼピン二量体、放射性同位体、治療用タンパク質及びペプチド及び毒素（又はそれらの断片）、キナーゼ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＫＳＰ阻害剤、並びにそれらの類似体又はプロドラッグからなる群から選択される。代替として、標的分子Ｄは細胞毒である。本態様による一実施形態において、標的分子Ｄは、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピン二量体、インドリンｏ−ベンゾジアゼピン二量体、エンジイン、オーリスタチン、及びアントラサイクリンからなる群から選択される。本態様による好ましい実施形態において、標的分子Ｄは、メイタンシノイド又はピロロベンゾジアゼピン二量体、より好ましくはＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、及びＡｈｘ−Ｍａｙ又はこれらの任意の機能性誘導体の群から選択されるメイタンシノイド、最も好ましくはＤ＝Ａｈｘ−Ｍａｙ又はその任意の機能性誘導体である。代替的に、Ｄはピロロベンゾジアゼピン二量体である。
【０３２９】
ステップ（ｉ）及び（ｉｉ）の好ましい実施形態は、上で定義されている通り、本発明による抗体−コンジュゲートに同様に当てはまる。当技術者は、これらの好ましい特色を本抗体−コンジュゲートの構造的特色にどのように翻訳するかを知っている。好ましい実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、式（Ａ）に従っており、リンカーＬは、式（１）に従った基又はその塩を含有することが好ましく、ここで（Ａ）及び（１）は、上で定義されている通りである。
【０３３０】
Ｓ（Ｆ１）ｘのための好ましい選択肢は、上に記載されている。好ましい一実施形態において、Ｓ（Ｆ１）ｘは６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミン（６−ＡｚＧａｌＮＡｃ又は６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ）である。
【０３３１】
好ましい実施形態において、ＨＥＲ２発現腫瘍を標的化できる抗体ＡＢは、トラスツズマブ、マパツムマブ、ペルツズマブ、ＨｕＭａｘ−Ｈｅｒ２、エルツマキソマブ、ＨＢ−００８、ＡＢＰ−９８０、ＢＣＤ−０２２、ＣａｎＭａｂ、Ｈｅｒｚｕｍａ、ＨＤ２０１、ＣＴ−Ｐ６、ＰＦ−０５２８００１４、ＣＯＶＡ−２０８、ＦＳ−１０２、ＭＣＬＡ−１２８、ＣＫＤ−１０１０１、ＨＴ−１９及びそれらの機能性類似体からなる群から選択される。ＨＥＲ２発現腫瘍を標的化できる抗体ＡＢは、トラスツズマブ又はその機能性類似体であるのが最も好ましい。
【０３３２】
殊に好ましい実施形態において、抗体ＡＢは、トラスツズマブであり、標的分子Ｄは、メイタンシノイド、オーリスタチン、及びピロロベンゾジアゼピン二量体からなる群から選択され、より好ましくはＤＭ１、ＤＭ３、ＤＭ４、及びＡｈｘ−Ｍａｙ又はこれらの任意の機能性類似体からなる群から選択されるメイタンシノイドである。最も好ましくはＤ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである。
【０３３３】
好ましい実施形態において、抗体−コンジュゲートは、式（４０）又は（４０ｂ）：
【化４８】
2017200902.tif 000050
（式中：
Ｒ３１は、水素、ハロゲン、−ＯＲ３５、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ３５、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され、アルキル基、（ヘテロ）アリール基、アルキル（ヘテロ）アリール基及び（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換されており、ここで２個の置換基Ｒ３１は、一緒に連結されて縮環シクロアルキル又は縮環（ヘテロ）アレーン置換基を形成することができ、Ｒ３５は、水素、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ６〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ７〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ７〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から独立して選択され；
Ｘは、Ｃ（Ｒ３１）２、Ｏ、Ｓ又はＮＲ３２であり、ここでＲ３２は、Ｒ３１又はＬ３（Ｄ）ｒであり、ここでＬ３はリンカーであり、Ｄは、請求項１に定義されている通りであり；
ｒは、１〜２０であり；
ｑは、０又は１であるが、ｑが０であるならば、ＸはＮ−Ｌ２（Ｄ）ｒであることを条件とし；
ａａは、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ’は、０、１、２、３、４、５、６、７又は８であり；
ａａ＋ａａ’＜１０であり；
ｂは、０又は１であり；
ｐｐは、０又は１であり；
Ｍは、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−、−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＦ２−、−ＣＨ２−、−ＣＦ２−、又は０〜４個のフッ素置換基、好ましくは、フェニレンのＣ２及びＣ６又はＣ３及びＣ５に好ましくは位置する２個のフッ素置換基を含有する１，４−フェニレンであり；
ｙは、１〜４であり；
Ｆｕｃは、フコースである）によって表される。
【０３３４】
ａ＝２、ａ’＝３、Ｘ＝Ｃ（Ｒ３１）２（即ち、縮合シクロオクテン環が存在する）であることが好ましく、ここで、１つのＲ３１＝Ｈであり、他のＲ３１は式（２０ｂ）に従った構造に存在するさらなるＲ３１置換基と一緒に連結されて、シクロオクテン部分の炭素原子５及び６（トリアゾール環と共有される炭素原子が１及び２と番号付けられている場合）を共有する縮環シクロプロピル環を形成する。
【０３３５】
本発明による抗体−コンジュゲートの好ましい特色は、特に、コンジュゲーションのモードとしての「コア−ＧｌｃＮＡｃ官能化」のステップ（ｉｉ）及びその生成物の記載において上に記載されている。
【０３３６】
一実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
［式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分であり、
ここでＬは、式（１）に従った基又はその塩：
【化４９】
2017200902.tif 000051
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含む］によって表されるバイオコンジュゲートである。
【０３３７】
一実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、式（Ａ）：
Ｂ−Ｌ−Ｄ
（Ａ）
［式中：
Ｂは、生体分子であり；
Ｌは、Ｂ及びＤを連結するリンカーであり；
Ｄは、標的分子であり；
「−」の各出現は、独立して、結合又はスペーサー部分であり、
ここでＬは、式（１）に従った基又はその塩：
【化５０】
2017200902.tif 000052
（式中：
ａは、０又は１であり；
Ｒ１は、水素、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基からなる群から選択され、Ｃ１〜Ｃ２４アルキル基、Ｃ３〜Ｃ２４シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ２４（ヘテロ）アリール基、Ｃ３〜Ｃ２４アルキル（ヘテロ）アリール基及びＣ３〜Ｃ２４（ヘテロ）アリールアルキル基は、任意選択で置換され、Ｏ、Ｓ及びＮＲ３から選択される１個若しくは複数のヘテロ原子によって任意選択で中断されており、ここでＲ３は、水素及びＣ１〜Ｃ４アルキル基からなる群から独立して選択される、又はＲ１は、追加の標的分子Ｄであり、ここで標的分子は、スペーサー部分を介してＮに任意選択で接続されている）を含む］によって表されるバイオコンジュゲートではない。
【０３３８】
本態様による好ましい抗体−コンジュゲートは、ここで下記にコンジュゲート（Ｉ）〜（Ｘ）として列挙されている。一実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、ここで下記に（Ｉ）〜（Ｘ）として定義されているコンジュゲートから選択され、より好ましくはここで下記に（Ｉ）〜（ＶＩ）として定義されているコンジュゲートから選択される。一実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、ここで下記に（ＶＩＩ）〜（Ｘ）として定義されているコンジュゲートではなく、好ましくはここで下記に（Ｉ）〜（Ｘ）として定義されているコンジュゲートではない。
（Ｉ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである；
（ＩＩ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミン、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）３−ＣＯ−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである；
（ＩＩＩ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである；
（ＩＶ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｎ（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ｄ）２であり、Ｄの各出現＝Ａｈｘ−Ｍａｙである；
（Ｖ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ｄ）２であり、Ｄの各出現＝Ａｈｘ−Ｍａｙである；
（ＶＩ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝６−アジド−６−デオキシ−Ｎ−アセチルガラクトサミンであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）２−ＣＯ−Ｖａｌ−Ａｌａ−であり、Ｄ＝ＰＢＤである；
（ＶＩＩ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝２−アジドジアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトースであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである（コンジュゲート９６）；
（ＶＩＩＩ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝２−アジドジアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトースであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである（コンジュゲート９５）。
（ＩＸ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝２−アジドジフルオロアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトースであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである（コンジュゲート９７）。
（Ｘ）ＡＢ＝トラスツズマブであり、ここでＳ（Ｆ１）ｘは、アミノ酸Ｎ３００に連結されているコア−ＧｌｃＮＡｃに接続されており、Ｓ（Ｆ１）ｘ＝２−アジドジフルオロアセトアミド−２−デオキシ−ガラクトースであり、Ｑ１は式（９ｑ）に従っており、Ｌ２＝Ｌ２＝−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−Ｓ（Ｏ）２−ＮＨ−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）４−ＣＯ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−であり、Ｄ＝Ａｈｘ−Ｍａｙである（コンジュゲート９８）。
【０３３９】
本明細書において、（９ｑ）は、
【化５１】
2017200902.tif 000053
によって表される。
【０３４０】
当業者は、ここで（Ｉ）〜（Ｘ）として定義されている抗体−コンジュゲートが、Ｆ１＝Ｎ３もＱ１＝（９ｑ）も含有しないが、Ｆ１とＱ１との間の反応から生じる接続基Ｚ３を含有することを理解している。より具体的には、上で定義されている通りの抗体−コンジュゲートは式（４０ｂ）に従っており、ここで、Ｓ＝ＧａｌＮＡｃ、ｙ＝２、ｘ＝１、ｂ＝０又は１、ｐｐ＝０（即ち、Ｍは存在しない）、ａａ＝２、ａａ’＝３、Ｘ＝Ｃ（Ｒ３１）２であり、ここで、１つのＲ３１＝Ｈであり、他のＲ３１は、式（４０ｂ）に従った構造に存在するさらなるＲ３１置換基と一緒に連結されて、シクロオクテン部分の炭素原子５及び６（トリアゾール環と共有されている炭素原子が１及び２と番号付けられている場合、上の構造（９ｑ）を参照）を共有する縮環シクロプロピル環を形成し、ｑ＝１、ｒ＝１又は２であり、Ｄ及びＬ２は、上で定義されている。より具体的には、上で定義されている通りの抗体−コンジュゲート（ＶＩＩ）及び（ＶＩＩＩ）は、式（４０ｂ）に従っており、ここで、Ｓ＝ＧａｌＮＡｃ、ｙ＝２、ｘ＝１、ｂ＝０又は１、ｐｐ＝１、Ｍ＝−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＨ２−、ａａ＝２、ａａ’＝３、Ｘ＝Ｃ（Ｒ３１）２であり、ここで、１つのＲ３１＝Ｈであり、他のＲ３１は、式（４０ｂ）に従った構造に存在するさらなるＲ３１置換基と一緒に連結されることで、シクロオクテン部分の炭素原子５及び６（トリアゾール環と共有されている炭素原子が、１及び２と番号付けられている場合、上の構造（９ｑ）を参照）を共有する縮環シクロプロピル環を形成し、ｑ＝１、ｒ＝１又は２であり、Ｄ及びＬ２は、上で定義されている。より具体的には、上で定義されている通りの抗体−コンジュゲート（ＩＸ）及び（Ｘ）は、式（４０ｂ）に従っており、ここで、Ｓ＝ＧａｌＮＡｃ、ｙ＝２、ｘ＝１、ｂ＝０又は１、ｐｐ＝１、Ｍ＝−Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）ＣＦ２−、ａａ＝２、ａａ’＝３、Ｘ＝Ｃ（Ｒ３１）２であり、ここで、１つのＲ３１＝Ｈであり、他のＲ３１は、式（４０ｂ）に従った構造に存在するさらなるＲ３１置換基と一緒に連結されることで、シクロオクテン部分の炭素原子５及び６（トリアゾール環と共有されている炭素原子が、１及び２と番号付けられている場合、上の構造（９ｑ）を参照）を共有する縮環シクロプロピル環を形成し、ｑ＝１、ｒ＝１又は２であり、Ｄ及びＬ２は、上で定義されている。
【０３４１】
本態様による抗体−コンジュゲートは、公知の抗体−コンジュゲートと比較して治療指数の改善を有し、ここで治療指数は、好ましくは、ＨＥＲ２発現腫瘍の処置のためである。治療指数の改善は、治療的有効性の改善及び／又は耐容性の改善の形態をとり得る。一実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、ＨＥＲ２発現腫瘍の処置のための公知の抗体−コンジュゲートと比較して治療的有効性の改善を有する。一実施形態において、本態様による抗体−コンジュゲートは、ＨＥＲ２発現腫瘍の処置のための公知の抗体−コンジュゲートと比較して耐容性の改善を有する。
【０３４２】
本発明による抗体−コンジュゲートは、他の態様においても、公知の抗体−コンジュゲートより性能がすぐれている。本発明者らは、本抗体−コンジュゲートが安定性の増加を呈する（即ち、本抗体−コンジュゲートは、時間の経過によるより少ない分解を呈する）ことを見出した。本発明者らは、本抗体−コンジュゲートが凝集課題の減少を呈する（即ち、本抗体−コンジュゲートは、時間の経過によるより少ない凝集を呈する）ことも見出した。本抗体−コンジュゲートの治療指数の改善、安定性の増加及び凝集の減少を勘案して、本抗体−コンジュゲートは、従来技術の抗体−コンジュゲートを超える際立った改善である。本発明は、したがって、バイオコンジュゲート、典型的には抗体−コンジュゲートの安定性を改善するための、本明細書において定義されている通りのコンジュゲーションのモードの使用にも関する。本発明は、したがって、バイオコンジュゲート、典型的には抗体−コンジュゲートの凝集を減少するための、本明細書において定義されている通りのコンジュゲーションのモードの使用にも関する。
エンドグリコシダーゼ融合酵素
【０３４３】
第４の態様において、本発明は、２種のエンドグリコシダーゼを含む融合酵素に関する。特別な例において、２種のエンドグリコシダーゼＥｎｄｏＳ及びＥｎｄｏＨは、リンカー、好ましくは−（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３−（Ｈｉｓ）６−（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３−リンカーを介して接続されている。本発明による融合酵素はＥｎｄｏＳＨとも称される。本発明による酵素は、配列番号１と少なくとも５０％の配列同一性、配列番号１と好ましくは少なくとも７０％、より好ましくは少なくとも８０％の配列同一性、例えば、配列番号１と少なくとも８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有する。同一性は、公知の方法及び／又は当技術分野において知られているコンピュータープログラム方法、例えばＮＣＢＩから公に利用可能なＢＬＡＳＴＰ及び他の供給元（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ、Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．ら、ＮＣＢＩ  ＮＬＭ  ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ  ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ、Ｓ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３〜４１０（１９９０）によって容易に算出することができる。配列番号１に対して上に示されている配列同一性を有する本発明の酵素は、ＥｎｄｏＳ及びＥｎｄｏＨ活性を有することが好ましい。本発明による酵素は、配列番号１と１００％の配列同一性を有するのが最も好ましい。
【０３４４】
ＥｎｄｏＳ及びＥｎｄｏＨの融合酵素も包含され、ここでリンカーは、当技術分野において知られている別の適当なリンカーによって置き換えられており、ここで上記リンカーは、剛性又は可撓性であり得る。上記リンカーは、隣接するタンパク質ドメインが相対的に自由に互いに転移するのを可能にする可撓性リンカーであることが好ましい。上記可撓性リンカーは、グリシン、セリン、ヒスチジン及び／又はアラニンのようなアミノ残基で構成されるとともに３〜５９のアミノ酸残基、好ましくは１０〜４５若しくは１５〜４０のアミノ酸残基、例えば１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９若しくは４０のアミノ酸残基、又は２０〜３８、２５〜３７若しくは３０〜３６のアミノ酸残基の長さを有することが好ましい。任意選択で、上記融合酵素は、Ｆｃ−タグ、ＦＬＡＧ−タグ、ポリ（Ｈｉｓ）−タグ、ＨＡ−タグ及びＭｙｃ−タグなど、当技術分野において知られている通りの精製及び／又は検出が簡便になるようにタグに共有結合的に連結されているか、又はタグを含む。
【０３４５】
糖タンパク質のトリミングは、当技術分野において、例えば国際公開第２００７／１３３８５５号又は国際公開第２０１４／０６５６６１号から知られている。本発明による酵素は、ＥｎｄｏＳ及びＥｎｄｏＨ活性の両方を呈し、糖タンパク質（抗体など）のグリカンをコア−ＧｌｃＮＡｃ単位においてトリミングし、糖タンパク質（ＥｎｄｏＳ活性）のコア−ＧｌｃＮＡｃ残基だけを残すことができ、また高マンノースグリカン（ＥｎｄｏＨ活性）を除去することもできる。驚くべきことに、融合酵素の両活性は、ｐＨ約７〜８で円滑に機能し、一方、単量体ＥｎｄｏＨは、最適に作動するために６のｐＨを必要とする。
【０３４６】
本発明による融合酵素は、酵素コード配列を含む発現ベクター（例えばプラスミド）を宿主細胞（例えば大腸菌）に導入して発現させ、上記宿主細胞から酵素が単離され得るなど、当技術分野におけるルーチン的技法によって調製することができる。本発明による融合酵素の調製及び精製のための可能な手法は実施例３〜５で与えられており、本発明による融合酵素の機能は実施例６で実証されており、ここでトラスツズマブは、単一ステップで効果的にトリミングされる。
融合タンパク質ＥｎｄｏＳＨの配列同定（配列番号１）：
1 MPSIDSLHYL SENSKKEFKEELSKAGQESQ KVKEILAKAQ QADKQAQELA
51 KMKIPEKIPM KPLHGPLYGG YFRTWHDKTSDPTEKDKVNS MGELPKEVDL
101 AFIFHDWTKD YSLFWKELAT KHVPKLNKQGTRVIRTIPWR FLAGGDNSGI
151 AEDTSKYPNT PEGNKALAKA IVDEYVYKYNLDGLDVDVEH DSIPKVDKKE
201 DTAGVERSIQ VFEEIGKLIG PKGVDKSRLFIMDSTYMADK NPLIERGAPY
251 INLLLVQVYG SQGEKGGWEP VSNRPEKTMEERWQGYSKYI RPEQYMIGFS
301 FYEENAQEGN LWYDINSRKD EDKANGINTDITGTRAERYA RWQPKTGGVK
351 GGIFSYAIDR DGVAHQPKKY AKQKEFKDATDNIFHSDYSV SKALKTVMLK
401 DKSYDLIDEK DFPDKALREA VMAQVGTRKGDLERFNGTLR LDNPAIQSLE
451 GLNKFKKLAQ LDLIGLSRIT KLDRSVLPANMKPGKDTLET VLETYKKDNK
501 EEPATIPPVS LKVSGLTGLK ELDLSGFDRETLAGLDAATL TSLEKVDISG
551 NKLDLAPGTE NRQIFDTMLS TISNHVGSNEQTVKFDKQKP TGHYPDTYGK
601 TSLRLPVANE KVDLQSQLLF GTVTNQGTLINSEADYKAYQ NHKIAGRSFV
651 DSNYHYNNFK VSYENYTVKV TDSTLGTTTDKTLATDKEET YKVDFFSPAD
701 KTKAVHTAKV IVGDEKTMMV NLAEGATVIGGSADPVNARK VFDGQLGSET
751 DNISLGWDSK QSIIFKLKED GLIKHWRFFNDSARNPETTN KPIQEASLQI
801 FNIKDYNLDN LLENPNKFDD EKYWITVDTYSAQGERATAF SNTLNNITSK
851 YWRVVFDTKG DRYSSPVVPE LQILGYPLPNADTIMKTVTT AKELSQQKDK
901 FSQKMLDELK IKEMALETSL NSKIFDVTAINANAGVLKDC IEKRQLLKKG
951 GGGSGGGGSG GGGSHHHHHHGGGGSGGGGS GGGGSAPAPV KQGPTSVAYV
1001 EVNNNSMLNV GKYTLADGGG NAFDVAVIFAANINYDTGTK TAYLHFNENV
1051 QRVLDNAVTQ IRPLQQQGIK VLLSVLGNHQGAGFANFPSQ QAASAFAKQL
1101 SDAVAKYGLD GVDFDDEYAE YGNNGTAQPNDSSFVHLVTA LRANMPDKII
1151 SLYNIGPAAS RLSYGGVDVS DKFDYAWNPYYGTWQVPGIA LPKAQLSPAA
1201 VEIGRTSRST VADLARRTVD EGYGVYLTYNLDGGDRTADV SAFTRELYGS
1251 EAVRTP
（リンカーは下線が引かれており、ＥｎｄｏＨ配列はイタリック体で示されている）
【実施例】
【０３４７】
還元モノクローナル抗体のＲＰ−ＨＰＬＣ分析：ＲＰ−ＨＰＬＣ分析の前に、１０μｇの（修飾）ＩｇＧの溶液を、１５分間３７℃で、１０ｍＭのＤＴＴ及び１００ｍＭのトリスｐＨ８．０とともに５０μＬの総体積でインキュベートすることによって、試料を還元した。４９％のＡＣＮ、４９％のＭＱ及び２％のギ酸（５０μＬ）の溶液を還元した試料に添加した。Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＨＰＬＣで、１ｍｌ／ｍｉｎにて７０℃で実行されるＺＯＲＢＡＸ  Ｐｈｏｒｏｓｈｅｌｌ  ３００ＳＢ−Ｃ８  １×７５  ５μｍ（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）カラムを使用し、２５〜５０％緩衝液Ｂの１６．９分直線勾配（緩衝液Ａ＝９０％のＭＱ、１０％のＡＣＮ、０．１％のＴＦＡ及び緩衝液Ｂ＝９０％のＡＣＮ、１０％のＭＱ、０．１％のＴＦＡを用いる）を使用して、逆相ＨＰＬＣを実施した。
【０３４８】
モノクローナル抗体の質量スペクトル分析：質量スペクトル分析の前に、ＩｇＧを、軽鎖及び重鎖の両方の分析を可能にするＤＴＴで処理したか、又はＦｃ／２断片の分析を可能にするファブリケーター（Ｆａｂｒｉｃａｔｏｒ）（商標）（Ｇｅｎｏｖｉｓ、Ｌｕｎｄ、Ｓｗｅｄｅｎから市販されている）で処理した。軽鎖及び重鎖の両方の分析のため、２０μｇの（修飾）ＩｇＧの溶液を、５分間３７℃で１００ｍＭのＤＴＴとともに４μＬの総体積でインキュベートした。存在するならば、アジド官能性基をこれらの条件下でアミンに還元する。Ｆｃ／２断片の分析のため、２０μｇの（修飾）ＩｇＧの溶液を、１時間の間３７℃で、Ｆａｂｒｉｃａｔｏｒ（商標）（１．２５Ｕ／μＬ）を用いて、ホスフェート−緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ６．６とともに１０μＬの総体積でインキュベートした。還元又はＦａｂｒｉｃａｔｏｒ消化後、ｍｉｌｌｉＱを用いてＡｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、試料を二回洗浄し、およそ４０μＬの最終サンプル体積をもたらした。次に、試料をエレクトロスプレーイオン化法飛行時間（ＥＳＩ−ＴＯＦ）によってＪＥＯＬ  ＡｃｃｕＴＯＦ上で分析した。Ｍａｇｔｒａｎソフトウェアを使用して、デコンボリューションされたスペクトルを得た。
【０３４９】
タンパク質構成成分の調製：実施例１〜２：
実施例１：トラスツズマブの一過性発現及び精製
トラスツズマブをＢｉｏｃｅｒｏｓ（Ｕｔｒｅｃｈｔ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって安定なＣＨＯ細胞株から発現させた。５０ｍＬのタンパク質ＡセファロースでパッキングされたＸＫ  ２６／２０カラムを使用して、上澄み（２．５Ｌ）を精製した。単回の実行において、０．５Ｌの上澄みをカラムに負荷し、続いて、少なくとも１０カラム体積の２５ｍＭのトリスｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌで洗浄した。保持されたタンパク質を０．１ＭのグリシンｐＨ２．７で溶出した。溶出生成物を１．５Ｍのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．８で直ちに中和し、２５ｍＭのトリスｐＨ８．０に対して透析した。次に、Ｖｉｖａｓｐｉｎ  Ｔｕｒｂｏ  １５限界濾過ユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して、生成物をおよそ２０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、さらなる使用の前に−８０℃で貯蔵した。
【０３５０】
実施例３：Ｈｉｓ−ＴｎＧａｌＮＡｃＴ（３３−４２１）の一過性発現及び精製
Ｈｉｓ−ＴｎＧａｌＮＡｃＴ（３３−４２１）（配列番号２によって同定される）をＣＨＯ  Ｋ１細胞中にＥｖｉｔｒｉａ（Ｚｕｒｉｃｈ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）によって５Ｌスケールで一過性発現させた。２５ｍＬのＮｉセファロースエクセル（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でパッキングされたＸＫ  １６／２０カラムを使用して、上澄みを精製した。各実行で、およそ１．５Ｌの上澄みをカラムにロードし、続いて、少なくとも１０カラム体積の緩衝液Ａ（２０ｍＭのトリス緩衝液、５ｍＭのイミダゾール、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５）で洗浄した。保持されたタンパク質を緩衝液Ｂ（２０ｍＭのトリス、５００ｍＭのＮａＣｌ、５００ｍＭのイミダゾール、ｐＨ７．５）で溶出した。ＨｉＰｒｅｐ  Ｈ２６／１０脱塩用カラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、溶出画分の緩衝液を２５ｍＭのトリスｐＨ８．０に交換した。Ｖｉｖａｓｐｉｎ  Ｔｕｒｂｏ  ４限界濾過ユニット（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）を使用して、精製されたタンパク質を少なくとも３ｍｇ／ｍＬに濃縮し、さらなる使用の前に−８０℃で貯蔵した。
Ｈｉｓ−ＴｎＧａｌＮＡｃＴ（３３−４２１）の配列（配列番号２）：
1 HHHHHHSPLR TYLYTPLYNATQPTLRNVER LAANWPKKIP SNYIEDSEEY
51 SIKNISLSNH TTRASVVHPP SSITETASKLDKNMTIQDGA FAMISPTPLL
101 ITKLMDSIKS YVTTEDGVKK AEAVVTLPLCDSMPPDLGPI TLNKTELELE
151 WVEKKFPEVE WGGRYSPPNC TARHRVAIIVPYRDRQQHLA IFLNHMHPFL
201 MKQQIEYGIF IVEQEGNKDF NRAKLMNVGFVESQKLVAEG WQCFVFHDID
251 LLPLDTRNLY SCPRQPRHMS ASIDKLHFKLPYEDIFGGVS AMTLEQFTRV
301 NGFSNKYWGW GGEDDDMSYR LKKINYHIARYKMSIARYAM LDHKKSTPNP
351 KRYQLLSQTS KTFQKDGLST LEYELVQVVQYHLYTHILVN IDERS
【０３５１】
実施例３〜５：エンドグリコシダーゼＥｎｄｏＳＨの生成
実施例３：ｐＥＴ２２Ｂ発現ベクターへの融合タンパク質ＥｎｄｏＳＨのクローニング
ＮｄｅＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ部位間にＥｎｄｏＳ−（Ｇ４Ｓ）３−（Ｈｉｓ）６−（Ｇ４Ｓ）３−ＥｎｄｏＨ（ＥｎｄｏＳＨ）コード配列（ＥｎｄｏＳＨは、配列番号１によって同定されている）を含有するｐＥＴ２２Ｂ−ベクターをＧｅｎｓｃｒｉｐｔから得た。ＥｎｄｏＳＨ融合タンパク質のためのＤＮＡ配列は、Ｎ末端連結グリシン−セリン（ＧＳ）リンカーを介してＥｎｄｏＨに融合されたＥｎｄｏＳのコード化する残基４８〜９９５からなる。グリシン−セリン（ＧＳ）リンカーは、−（Ｇ４Ｓ）３−（Ｈｉｓ）６−（Ｇ４Ｓ）３−フォーマットを含み、２つの酵素のスペーシングを可能にし、同時にＩＭＡＣ−精製タグを導入する。
【０３５２】
実施例４：融合タンパク質ＥｎｄｏＳＨの大腸菌発現
ＥｎｄｏＳＨ融合タンパク質（配列番号１によって同定される）の発現は、ＢＬ２１細胞へのプラスミド（ｐＥＴ２２ｂ−ＥｎｄｏＳＨ）の形質転換で開始する。次のステップは、ＢＬ２１細胞を有する５００ｍＬの培養物（ＬＢ培地＋Ａｍｐｉｌｉｃｉｎ）の接種である。ＯＤ６００が０．７に達した時に、培養物を１ｍＭのＩＰＴＧ（５００μＬの１Ｍストック溶液）で誘発した。
【０３５３】
実施例５：大腸菌からの融合タンパク質ＥｎｄｏＳＨの精製
３７℃での終夜誘発後、培養物を遠心分離によってペレット化した。ペレットを４０ｍＬのＰＢＳ中に再懸濁し、氷上で５ｍｌのリゾチーム（１０ｍｇ／ｍＬ）とともに３０分間インキュベートした。半時間後、５ｍｌの１０％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００を添加し、氷上で（１０分）超音波処理した。音波処理後、細胞デブリを遠心分離（１０分８０００ｘｇ）によって除去し、続いて、０，２２μＭ−孔径フィルターを介して濾過した。可溶性抽出物をＨｉｓＴｒａｐ  ＨＰ  ５ｍＬカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にロードした。カラムを最初に緩衝液Ａ（２０ｍＭのトリス緩衝液、２０ｍＭのイミダゾール、５００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５）で洗浄した。保持されたタンパク質を緩衝液Ｂ（２０ｍＭのトリス、５００ｍＭのＮａＣｌ、２５０ｍＭのイミダゾール、ｐＨ７．５、１０ｍＬ）で溶出した。画分をＳＤＳ−ＰＡＧＥによってポリアクリルアミドゲル（１２％）で分析した。精製標的タンパク質を含有した画分を合わせ、緩衝液を、終夜４℃で実施された透析によって２０ｍＭのトリスｐＨ７．５及び１５０ｍＭのＮａＣｌに対して交換した。Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、精製されたタンパク質を少なくとも２ｍｇ／ｍＬに濃縮した。生成物をさらなる使用の前に−８０℃で貯蔵する。
【０３５４】
トラスツズマブのリモデリング：実施例７〜８：
本発明による方法において使用されるべき生体分子として適当な以下の修飾生体分子の調製は、国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７に記載されている：
トラスツズマブ（ＧａｌＮＡｚ）２  １３ｂ（実施例１２、１３、１５、１６−１）；
トラスツズマブ（Ｆ２−ＧａｌＮＡｚ）２  １３ｃ（実施例１、７〜１３、１６−２）
【０３５５】
実施例６：融合タンパク質ＥｎｄｏＳＨの手段によるトリミングｃＡＣ１０の調製
トラスツズマブ（Ｂｉｏｃｅｒｏｓ（Ｕｔｒｅｃｈｔ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）によって実施されたＣＨＯ細胞における安定な発現を介して得られた）のグリカントリミングを、融合タンパク質ＥｎｄｏＳＨで実施した。したがって、トラスツズマブ（１００．８ｍＬ、２ｇ、２５ｍＭのトリスｐＨ８．０中１９．８５ｍｇ／ｍｌ）を、ＥｎｄｏＳＨ（５．２６ｍＬ、２０ｍｇ、２５ｍＭのトリスｐＨ７．５中３．８ｍｇ／ｍＬ）とともにおよそ１６時間の間３７℃でインキュベートした。ファブリケーター消化試料の質量スペクトル分析は、コア−ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換トラスツズマブに対応するＦｃ／２−断片（観察質量２４１３５Ｄａ、総Ｆｃ／２断片のおよそ９０％）の１つの主要なピークを示した。
【０３５６】
実施例７：トラスツズマブ（６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｚ）２  １３ｄの調製
実施例６において上に記載されている通りのトラスツズマブのＥｎｄｏＳＨ処理によって得られたトリミングトラスツズマブ（１１．８ｍｇ／ｍＬ）を、１０ｍＭのＭｎＣｌ２及び２５ｍＭのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．０中の基質６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ−ＵＤＰ（３．３ｍＭ、ＧｌｙｃｏＨｕｂから市販されている）及びＨｉｓ−ＴｎＧａｌＮＡｃＴ（３３−４２１）（０．７５ｍｇ／ｍＬ）とともに３０℃でインキュベートした。反応物を終夜３０℃でインキュベートした。生体分子１３ｄを反応混合物から、５０ｍＬのタンパク質ＡセファロースでパッキングされたＸＫ  ２６／２０カラムを使用し、ＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。溶出ＩｇＧを１．５Ｍのトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．８で直ちに中和し、ＰＢＳ  ｐＨ７．４に対して透析した。次に、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０  Ｍｅｍｂｒａｎｅ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して２８．５ｍｇ／ｍＬの濃度に、ＩｇＧを濃縮した。ファブリケーター消化試料の質量スペクトル分析は、コア６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ−ＧｌｃＮＡｃ（Ｆｕｃ）置換トラスツズマブに対応するＦｃ／２−断片（観察質量２４３６３Ｄａ、総Ｆｃ／２断片のおよそ９０％）の１つの主要なピークを示した。
【０３５７】
リンカー−コンジュゲート合成：実施例８〜２３：
本発明による方法において使用されるべきリンカー−コンジュゲートとして適当である以下の化合物の合成、又はそのモデルについて、国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７が参照される：
化合物１８（実施例２０）；
化合物２０（実施例２１、２３〜２５）；
化合物２１（実施例２６〜２７）；
化合物２３（実施例２９〜３１）；
化合物２６（実施例３６〜３８）；
化合物３０（実施例４３−１、３２）；
化合物３３（実施例３６〜３７、４７）；
化合物３４（実施例３６、３７、４８）；
化合物３５（実施例３６〜３７、４９）；
化合物３６（実施例２９、５０）；
化合物３７（実施例５１〜５３）；
化合物３８（実施例２９、５４〜５５）；
化合物３９（実施例２９、５４、５６）。
【化５２】
2017200902.tif 000054
【０３５８】
実施例８：化合物１０１の調製
ＴＨＦ及び水（８０ｍＬ／８０ｍＬ）の混合物中のＢＣＮ−ＯＳｕ（１．００ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、γ−アミノ酪酸（０．６０ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１．４３ｍＬ、１．０４ｇ、１０．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を４時間の間撹拌し、続いて、ＤＣＭ（２００ｍＬ）、及びＮＨ４Ｃｌ（８０ｍＬ）の飽和水溶液を添加した。分離後、水層をＤＣＭ（２×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０→１０％のＭｅＯＨ）で精製した。生成物を無色の濃厚な油として得た（７３０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ、７６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）４．８１（ｂｓ，１Ｈ）、４．１５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．３０〜３．２１（ｍ，２Ｈ）、２．４２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．３５〜２．１６（ｍ，６Ｈ）、１．８５（五重線，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）、１．６４〜１．５１（ｍ，２Ｈ）、１．３５（五重線，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）、１．００〜０．９０（ｍ，２Ｈ）
【０３５９】
実施例９：化合物１０２の調製
イソシアン酸クロロスルホニル（ＣＳＩ；０．９１ｍＬ、１．４８ｇ、１０ｍｍｏｌ）を、Ｅｔ２Ｏ（５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブタノール（５．０ｍＬ、３．８８ｇ、５２ｍｍｏｌ）の冷却（−７８℃）溶液に添加した。反応混合物を室温に加温し、濃縮した。残渣をＤＣＭ（２００ｍＬ）中に懸濁させ、引き続いて、Ｅｔ３Ｎ（４．２ｍＬ、３．０ｇ、３０ｍｍｏｌ）及び２−（２−アミノエトキシ）エタノール（１．０ｍＬ、１．０５ｇ；１０ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた混合物を１０分間撹拌し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０→１０％のＭｅＯＨ）で２回精製した。生成物を無色の濃厚な油として得た（２．９ｇ、１０ｍｍｏｌ、１００％）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）５．７５（ｂｓ，１Ｈ）、３．７９〜３．７４（ｍ，２Ｈ）、３．６７〜３．６２（ｍ，２Ｈ）、３．６１〜３．５７（ｍ，２Ｈ）、３．３５〜３．２８（ｍ，２Ｈ）、１．５０（ｓ，９Ｈ）。
【０３６０】
実施例１０：化合物１０３の調製
ＤＣＭ（４０ｍＬ）中の１０２（２．９ｇ、１０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ａｃ２Ｏ（２．９ｍＬ、３．１１ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１２．８ｍＬ、９．２９ｇ、９１．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２時間の間撹拌し、ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）の飽和水溶液で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２０％→１００％のＥｔＯＡｃ）で２回精製した。生成物を無色の油として得た（２．５ｇ、７．７ｍｍｏｌ、７７％）１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）５．４８（ｂｓ，１Ｈ）、４．２５〜４．２０（ｍ，２Ｈ）、３．７０〜３．６０（ｍ，４Ｈ）、３．３３〜３．２３（ｍ，２Ｈ）、２．１０（ｓ，３Ｈ）、１．５０（ｓ，９Ｈ）
【０３６１】
実施例１１：化合物１０４の調製
ＤＣＭ（８ｍＬ）中の１０３（８０ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＦＡ（２ｍＬ）を添加した。４０分後、反応混合物を濃縮した。残渣をトルエン（３０ｍＬ）中に溶かし、混合物を濃縮した。生成物を無色の油として得た（５４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ、９５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）５．１５（ｂｓ，２Ｈ）、４．２６〜４．１８（ｍ，２Ｈ）、３．７１〜３．６０（ｍ，４Ｈ）、３．３５〜３．２７（ｍ，２Ｈ）、２．０８（ｓ，３Ｈ）。
【０３６２】
実施例１２：化合物１０５の調製
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のＢＣＮ−ＧＡＢＡ（１０１）（６７ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及び１０４（５４ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の混合物に、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ．ＨＣｌ；５５ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２．８ｍｇ、２３μｍｏｌ）を添加した。混合物を１６の間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。分離後、水層をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０→１０％のＭｅＯＨ）で精製した。生成物を無色の濃厚な油として得た（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ、４２％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）５．８３〜５．７２（ｍ，１Ｈ）、５．１４〜５．０４（ｍ，１Ｈ）、４．２３〜４．１９（ｍ，２Ｈ）、４．１５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．６７〜３．５７（ｍ，４Ｈ）、３．２９〜３．１８（ｍ，４Ｈ）、２．４１〜２．３２（ｍ，２Ｈ）、２．３１〜２．１５（ｍ，６Ｈ）、２．１０（ｓ，３Ｈ）、１．８５（五重線，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）、１．６５〜１．４９（ｍ，２Ｈ）、１．３８〜１．２８
（ｍ，１Ｈ）、１．００〜０．８９（ｍ，２Ｈ）
【０３６３】
実施例１３：化合物１０６の調製
ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の１０５（５０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３時間の間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液（２０ｍＬ）で希釈した。混合物をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。生成物を無色の膜として得た（３９ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ、８８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）６．２５（ｂｓ，１Ｈ）、５．２６〜５．１８（ｍ，１Ｈ）、４．１５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．７７〜３．７１（ｍ，２Ｈ）、３．６３〜３．５３（ｍ，４Ｈ）、３．３３〜３．２７（ｍ，２Ｈ）、３．２７〜３．１７（ｍ，２Ｈ）、２．４５〜２．３４（ｍ，２Ｈ）、２．３４〜２．１４（ｍ，６Ｈ）、１．８５（五重線，Ｊ＝６．７ｈｚ，２Ｈ）、１．６５〜１．４８（ｍ，２Ｈ）、１．４１〜１．２８（ｍ，１Ｈ）、１．０１〜０．８８（ｍ，２Ｈ）。
【０３６４】
実施例１４：化合物１０７の調製
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の１０６（１５２ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（ＰＮＰ−ＣＯＣｌ；６９ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）及びピリジン（２８μＬ、２７ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１．５時間の間撹拌し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中５０％→１００％のＥｔＯＡｃ）で精製した。生成物を無色の濃厚な油として得た（９８ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、４７％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．３１〜８．２６（ｍ，２Ｈ）、７．４６〜７．４０（ｍ，２Ｈ）、５．６９〜５．５９（ｍ，１Ｈ）、４．９８〜４．９１（ｍ，１Ｈ）、４．４６〜４．４２（ｍ，２Ｈ）、４．１８（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ）、３．７９〜３．７５（ｍ，２Ｈ）、３．６９〜３．６４（ｍ，２Ｈ）、３．３３〜３．２４（ｍ，４Ｈ）、２．３９〜２．３１（ｍ，２Ｈ）、２．３２〜２．１８（ｍ，６Ｈ）、１．８４（五重線，Ｊ＝６．３Ｈｚ  ２Ｈ）、１．６５〜１．５０（ｍ，２Ｈ）、１．３５（五重線，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ）、１．０１〜０．９１（ｍ，２Ｈ）。
【０３６５】
実施例１５：リンカー−コンジュゲート８０の調製
ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）中のＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ａｈｘ−Ｍａｙ．ＴＦＡ（２０ｍｇ；１５．６μｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（６．５μｌ；４．７ｍｇ；４７μｍｏｌ）、及びＤＭＦ（３１１μＬ）中の溶液１０７（１９ｍｇ、３１μｍｏｌ）を添加した。混合物を２０時間の間静置し、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（１３．７μＬ、１４ｍｇ、９４μｍｏｌ）を添加した。２時間後、追加の２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（１３．７μＬ、１４ｍｇ、９４μｍｏｌ）を添加した。１．５時間後、反応混合物をＲＰ  ＨＰＬＣ（Ｃ１８、水（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ）によって精製した。得られた生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １／４）によってさらに精製した。所望の生成物を白色の膜として得た（１６ｍｇ、９．９μｍｏｌ、６３％）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７７Ｈ１１０ＣｌＮ１２Ｏ２２Ｓ＋（Ｍ−Ｈ２Ｏ＋Ｈ＋）の計算値１６２１．７３  実測値１６２１．７４。
【０３６６】
実施例１６：化合物１０９の調製
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の２−（２−（２−（２−アミノエトキシ）エトキシ）エトキシ）エタノール（５３９ｍｇ、２．７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＢＣＮ−ＯＳｕ（０．７４ｇ、２．５４ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１．０６ｍＬ、７７１ｍｇ、７．６２ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた溶液を２．５時間の間撹拌し、ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液（１００ｍＬ）で洗浄した。分離後、水性相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨｉｎＤＣＭ０→１０％）で精製した。生成物を無色の油として得た（９６５ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌの量）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）５．９３（ｂｓ，１Ｈ）、４．１４（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．７７〜３．６９（ｍ，４Ｈ）、３．６８〜３．５９（ｍ，８Ｈ）、３．５８〜３．５２（ｍ，２Ｈ）、３．４２〜３．３２（ｍ，２Ｈ）、２．３５〜２．１６（ｍ，６Ｈ）、１．６６〜１．５１（ｍ，２Ｈ）、１．３６（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、０．９９〜０．８７（ｍ，２Ｈ）。
【０３６７】
実施例１７：化合物１１０の調製
ＤＣＭ（５０ｍＬ）中の１０９（０．９６ｇ、２．５９ｍｍｏｌ）の溶液に、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（６８０ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（１．０８ｍＬ、７８４ｍｇ、７．７５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１６時間の間撹拌し、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中２０％→７０％のＥｔＯＡｃ（カラム１）及びヘプタン中２０％→１００％のＥｔＯＡｃ（カラム２））で２回精製した。生成物をわずかに黄色の濃厚な油として得た（０．９１ｇ、１．７０ｍｍｏｌ、６６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．３１〜８．２６（ｍ，２Ｈ）、７．４２〜７．３７（ｍ，２Ｈ）、５．１９（ｂｓ，１Ｈ）、４．４７〜４．４３（ｍ，２Ｈ）、４．１５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ）、３．８４〜３．８０（ｍ，２Ｈ）、３．７４〜３．６１（ｍ，８Ｈ）、３．５９〜３．５３（ｍ，２Ｈ）、３．４２〜３．３２（ｍ，２Ｈ）、２．３５〜２．１６（ｍ，６Ｈ）、１．６６〜１．５０（ｍ，２Ｈ）、１．４０〜１．３０（ｍ，１Ｈ）、１．００〜０．８５（ｍ，２Ｈ）。
【０３６８】
実施例１８：リンカー−コンジュゲート７７の調製
ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）中のＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ａｈｘ−Ｍａｙ．ＴＦＡ（２３．４ｍｇ；１８．２μｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（６．５μｌ；４．７ｍｇ；４７μｍｏｌ）、及びＤＭＦ（３７３μＬ）中の１１０（１２．５ｍｇ、２３．４μｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を４２時間の間静置し、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（１３．７μＬ、１４ｍｇ、９４μｍｏｌ）を添加した。４時間後、反応混合物をＲＰ  ＨＰＬＣ（Ｃ１８、水（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ）によって精製した。得られた生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １／４）によってさらに精製した。所望の生成物を無色の膜として得た（１９．５ｍｇ、１２．５μｍｏｌ、６８％）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７７Ｈ１１０ＣｌＮ１０Ｏ２１Ｓ＋（Ｍ−Ｈ２Ｏ＋Ｈ＋）の計算値１５４５．７５  実測値１５４６．８２。
【０３６９】
実施例１９：リンカー−コンジュゲート７８の調製
ＤＭＦ（０．５０ｍＬ）中のＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ａｈｘ−Ｍａｙ．ＴＦＡ（２０ｍｇ；１５．６μｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（６．５μｌ；４．７ｍｇ；４７μｍｏｌ）、及びＤＭＦ（２９３μＬ）中の化合物９９（国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７の実施例５０に開示され、国際出願ＰＣＴ／ＮＬ２０１５／０５０６９７の実施例５０に従って調製されている通りの化合物５８の活性化を介して調製した；２４ｍｇ、４６μｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を２１時間の間静置し、２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（１４μＬ、１４ｍｇ、９６μｍｏｌ）を添加した。２時間後、追加の２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（７μＬ、７．１ｍｇ、４８μｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応混合物をＲＰ  ＨＰＬＣ（Ｃ１８、水（１％のＡｃＯＨ）中３０％→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ）によって精製した。得られた生成物を、シリカカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １／４）によってさらに精製した。所望の生成物を無色の膜として得た（１６ｍｇ、１０μｍｏｌ、６４％）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７３Ｈ１０３ＣｌＮ１１Ｏ２１Ｓ＋（Ｍ−Ｈ２Ｏ＋Ｈ＋）の計算値１５３６．６７  実測値１５３６．７５
【化５３】
2017200902.tif 000055
【０３７０】
実施例２０−１：７０の調製
ＤＣＭ（２００ｍＬ）中のＢＣＮ−ＯＨ（２．０ｇ、１３．３１ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下で、イソシアン酸クロロスルホニル（１．１６ｍＬ、１３．３１ｍｍｏｌ）を添加し、結果として得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。次いで、Ｅｔ３Ｎ（３．７ｍＬ、２６．６２ｍｍｏｌ）を滴下により添加し、続いて、２−（２−アミノエトキシ）エタノール（１．４７ｍＬ、１４．６４ｍｍｏｌ）を滴下により添加した。１５分後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２００ｍＬ）を添加し、層を分離させた。水相をＤＣＭ（２×１５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０−１０％のＭｅＯＨ）で生成物が得られた（２．８７ｇ、７．９６ｍｍｏｌ、６０％）。１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ  ４．３０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．７２〜３．６７（ｍ，２Ｈ）、３．６１（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、３．５９〜３．５５（ｍ，２Ｈ）、３．２５（ｔ  Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．３８〜２．２０（ｍ，６Ｈ）、１．７４〜１．５８（ｍ，２Ｈ）、１．４５（五重線，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ）、１．０７〜０．９５（ｍ，２Ｈ）。
【０３７１】
実施例２０−２：７２の調製
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の７０（４７ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、ＣＳＩ（１１μＬ、１８ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を添加した。３０分後、Ｅｔ３Ｎ（９１μＬ、６６ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のジエタノールアミン（１６ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した（中間体７１を提供する）。３０分後、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート（５２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（５４μＬ、３９ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）を添加した。さらに４．５時間後、反応混合物を濃縮し、残渣を勾配カラムクロマトグラフィー（３３→６６％のＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１％のＡｃＯＨ））によって精製することで、７２が無色の油として得られた（８８ｍｇ、０．０９８ｍｍｏｌ、７５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）８．２８〜８．２３（ｍ，４Ｈ）、７．４２〜７．３５（ｍ，４Ｈ）、４．５２（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，４Ｈ）、４．３０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ）、４．２７〜４．２２（ｍ，２Ｈ）、３．８６（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，４Ｈ）、３．６９〜３．６５（ｍ，２Ｈ）、３．６４〜３．５９（ｍ，２Ｈ）、３．３０〜３．２２（ｍ，２Ｈ）、２．３４〜２．１４（ｍ，６Ｈ）、１．６２〜１．４６（ｍ，２Ｈ）、１．３８（五重線，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ）、１．０４〜０．９２（ｍ，２Ｈ）。
【０３７２】
実施例２１：リンカー−コンジュゲート７３の調製
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の７２（３．９ｍｇ、４．３μｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．０μＬ、２．２ｍｇ、２１．５μｍｏｌ）の溶液を、ＤＭＦ（１００μＬ）中のＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−Ａｈｘ−Ｍａｙ．ＴＦＡ（１０ｍｇ、８．６μｍｏｌ）の溶液に添加した。混合物を反応させ、引き続いて濃縮した。残渣を逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｈ２Ｏ（１％のＡｃＯＨ）中３０→９０％のＭｅＣＮ（１％のＡｃＯＨ）を介して精製することで、生成物７３を与えた（３．９ｍｇ、１．３２μｍｏｌ、３１％）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  Ｃ１３６Ｈ１９６Ｃｌ２Ｎ２２Ｏ４３Ｓ２（Ｍ＋２Ｈ＋）／２の計算値＝１４８０．１３；実測値１４８０．３５。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ  Ｃ８５Ｈ１１９ＣｌＮ１４Ｏ３１Ｓ２（Ｍ＋２Ｈ＋）／２の計算値＝９６５．３６；実測値９６５．５４。副生成物として、７３のモノ−Ａｈｘ−Ｍａｙ置換誘導体を単離した（図示されていない）。ＬＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ８５Ｈ１１９ＣｌＮ１４Ｏ３１Ｓ２２＋  ｍ／ｚの計算値９６５．３６  実測値９６５．５４。
【化５４】
2017200902.tif 000056
【０３７３】
実施例２２：７５の調製
ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中のＮＨ２−Ｖａｌ−Ａｌａ−ＯＨ（１６ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）の懸濁液に、ＤＭＦ（０．５ｍＬ）中の９９（２２ｍｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）の溶液及びＥｔ３Ｎ（２１ｍｇ、２９μＬ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた反応混合物を２６時間の間回転させ、ＤＣＭ（１０ｍＬ）及びリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ３．０、１０ｍＬ）の混合物中に注いだ。分離後、水性相をＤＣＭ（２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ヘプタン中５０％のＥｔＯＡｃ→ＥｔＯＡｃ（溶出液中１％のＡｃＯＨ）によって精製した。生成物を無色の膜として得た（１８ｍｇ、３１μｍｏｌ、７５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）７．０２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、６．２９（ｂｓ，１Ｈ）、５．９２（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ）、４．５６（五重線，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ）、４．４２〜４．３５（ｍ，１Ｈ）、４．２８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ）、４．１０〜４．０１（ｍ，２Ｈ）、３．７２〜３．５５（ｍ，４Ｈ）、３．３５〜３．２５（ｍ，２Ｈ）、２．３５〜２．１０（ｍ，６Ｈ）、１．６３〜１．４８（ｍ，２Ｈ）、１．４５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．３９（五重線，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ）、１．０２〜０．９４（ｍ，２Ｈ）、０．９７（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）、０．９２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
【０３７４】
実施例２３：リンカー−コンジュゲート７６の調製
２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリン（２．６ｍｇ、１１μｍｏｌ）を含有するバイアルに、ＭｅＯＨ及びＤＣＭ（５／９５、１．０ｍＬ）の混合物中の７５（６．１ｍｇ、１１μｍｏｌ）の溶液を添加した。結果として得られた混合物を３０分間放置した。反応混合物に、ＭｅＯＨ及びＤＣＭ（５／９５、０．５ｍＬ）の混合物中のＮＨ２−ＰＢＤ（５．０ｍｇ、６．９μｍｏｌ）を添加した。結果として得られた混合物を７４時間の間静置し、濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ→ＭｅＯＨ／ＤＣＭ  １／９）によって精製した。生成物を無色の膜として得た（２．６ｍｇ、２．０３μｍｏｌ）。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６６Ｈ７６Ｎ９Ｏ１６Ｓ＋（Ｍ＋Ｈ＋）の計算値１２８２．５１  実測値１２８２．７０
【０３７５】
抗体−薬物−コンジュゲート生成：実施例２４〜３２：
実施例２４：コンジュゲート９６を得るための、３０を用いる１３ｂのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としての修飾生体分子１３ｂへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物３０のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ（アジド）２（１３ｂ）（１５．５ｍＬ、２５５ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中１６．４７ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ＤＭＡ（１．４５ｍＬ）及び化合物３０（２５５μＬ、ＤＭＡ中４０ｍＭの溶液）を添加した。反応物を終夜室温でインキュベートし、続いて、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。還元試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲート重鎖に対応する１種の主要な重鎖生成物（観察質量５０９３８Ｄａ、総重鎖断片のおよそ８０％）を示す。
【０３７６】
実施例２５：コンジュゲート９５を得るための、３３を用いる１３ｂのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としての修飾生体分子１３ｂへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物３３のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ（アジド）２（１３ｂ）（６０７μＬ、１０ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中１６．４７ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ｍｉｌｌｉＱ（５０μＬ）及び化合物３３（１０μＬ、４０ｍＭの溶液ＤＭＡ）を添加した。反応物を終夜室温でインキュベートし、続いて、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  １０／３００  ＧＬ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。還元試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲート重鎖に対応する１種の主要な重鎖生成物（観察質量５０９８２Ｄａ、総重鎖断片のおよそ８０％）を示した。
【０３７７】
実施例２６：コンジュゲート９８を得るための、３０を用いる１３ｃのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としての修飾生体分子１３ｃへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物３０のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ（アジド）２（１３ｃ）（１４．２５ｍＬ、２５０ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中１７．５５ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ＤＭＡ（１．４ｍＬ）及び化合物３０（２５０μＬ、４０ｍＭの溶液ＤＭＡ）を添加した。反応物を終夜室温でインキュベートし、続いて、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。還元試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲート重鎖に対応する１種の主要な重鎖生成物（観察質量５０９６９Ｄａ、総重鎖断片のおよそ７０％）を示した。
【０３７８】
実施例２７：コンジュゲート９７を得るための、３３を用いる１３ｃのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としての修飾生体分子１３ｃへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物３３のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ（アジド）２（１３ｃ）（１４．２５ｍＬ、２５０ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中１７．５５ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、化合物３３（１８８μＬ、４０ｍＭの溶液ＤＭＡ）を添加した。反応物を終夜室温でインキュベートし、続いて、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。還元試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲート重鎖に対応する１種の主要な重鎖生成物（観察質量５１０２０Ｄａ、総重鎖断片のおよそ９０％）を示した。
【０３７９】
実施例２８：コンジュゲート８２を得るための、７８を用いる１３ｄのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としてのアジド修飾トラスツズマブへのリンカー−コンジュゲートとして化合物７８のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ−（６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ）２（１３ｄ）（８．１８ｍＬ、２７０ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中３３．０ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（７．１２ｍＬ）、ＤＭＦ（２．４８ｍＬ）及び化合物７８（２２５μＬ、ＤＭＦ中４０ｍＭの溶液）を添加した。反応物を室温で終夜インキュベートし、続いて、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。ファブリケーター消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートＦｃ／２断片に対応する１種の主要な生成物（観察質量２５９２１Ｄａ、総Ｆｃ／２断片のおよそ９０％）を示した。還元試料のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、１．９０の平均ＤＡＲを示した。
【０３８０】
実施例２９：コンジュゲート８３を得るための、８０を用いる１３ｄのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としてのアジド修飾トラスツズマブへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物８０のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ−（６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ）２（１３ｄ）（８．１８ｍＬ、２７０ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中３３．０ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（７．１２ｍＬ）、ＤＭＦ（２．４９ｍＬ）及び化合物８０（２１０μＬ、ＤＭＦ中４０ｍＭの溶液）を添加した。反応物を室温でおよそ４０時間の間インキュベートし、続いて、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。ファブリケーター消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートＦｃ／２断片に対応する１種の主要な生成物（観察質量２６０１０Ｄａ、総Ｆｃ／２断片のおよそ９０％）を示した。還元試料のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、１．９３の平均ＤＡＲを示した。
【０３８１】
実施例３０：コンジュゲート８１を得るための、７７を用いる１３ｄのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としてのアジド修飾トラスツズマブへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物７７のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ−（６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ）２（１３ｄ）（８．１８ｍＬ、２７０ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中３３．０ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（５．３２８ｍＬ）、ＤＭＦ（４．２８ｍＬ）及び化合物７７（２２５μＬ、ＤＭＦ中４０ｍＭの溶液）を添加した。室温での終夜インキュベーション後、ＲＰ−ＨＰＬＣ分析は不完全な反応を示した。追加の化合物７７（４５μＬ、ＤＭＦ中４０ｍＭの溶液）を、反応混合物に添加し、続いて、室温で終夜インキュベーションした。反応物をＰＢＳ  ｐＨ７．４（０．５Ｌ）に対して透析し、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。ファブリケーター消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートＦｃ／２断片に対応する１種の主要な生成物（観察質量２５９３１Ｄａ、総Ｆｃ／２断片のおよそ９０％）を示した。還元試料のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、１．９１の平均ＤＡＲを示した。
【０３８２】
実施例３１：コンジュゲート８４を得るための、７３を用いる１３ｄのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としてのアジド修飾トラスツズマブへのリンカー−コンジュゲートとしての化合物７３のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ−（６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｃ）２（１３ｄ）（４．０９ｍＬ、１３５ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中３３．０ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（２．６６ｍＬ）、ＤＭＦ（２．１４ｍＬ）及び化合物７３（１１３μＬ、ＤＭＦ中４０ｍＭの溶液）を添加した。反応物を室温で終夜インキュベートし、続いて、ＰＢＳ  ｐＨ７．４（０．５Ｌ）に対して透析し、ＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。ファブリケーター消化試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲートＦｃ／２断片に対応する１種の主要な生成物（観察質量２２７３３１Ｄａ、総Ｆｃ／２断片のおよそ９０％）を示した。還元試料のＲＰ−ＨＰＬＣ分析は、３．７８の平均ＤＡＲを示した。
【０３８３】
実施例３２：コンジュゲート８５を得るための、７６を用いる１３ｄのコンジュゲーション
本発明によるバイオコンジュゲートを、生体分子としての修飾生体分子１３ｄへのリンカー−コンジュゲートとしての７６のコンジュゲーションによって調製した。トラスツズマブ（６−Ｎ３−ＧａｌＮＡｚ）２（１３ｄ）（３２０μＬ、７．２ｍｇ、ＰＢＳ  ｐＨ７．４中２２．５ｍｇ／ｍｌ）の溶液に、７６（４４．５μＬ、１０ｍＭの溶液ＤＭＦ）及びＤＭＦ（６６μＬ）を添加した。反応物を終夜室温で２回インキュベートし、続いて、ＰＢＳ（１ｍＬ）で希釈し、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ−０．５、Ｕｌｔｒａｃｅｌ−１０  Ｍｅｍｂｒａｎｅスピンフィルター（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して濃縮した。次に、コンジュゲートをＨｉＬｏａｄ  ２６／６００  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００  ＰＧカラム（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）にてＡＫＴＡ精製器１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。ファブリケーター（Ｆａｂｒｉｃａｔｏｒ）（商標）処理後の試料の質量スペクトル分析は、コンジュゲート８５に対応する１つの主要なＦｃ／２生成物（観察質量２５６４９Ｄａ、総Ｆｃ／２のおよそ９０％）を示した。
【０３８４】
実施例３３〜３９：有効性、耐容性及び安定性の研究
実施例３３ａ：ＨＥＲ２有効性研究［Ｔ２２６  ＰＤＸモデル］
１５〜２５グラムの体重の、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｒａｎｃｅ）から得られた、実験フェーズの開始時に６〜９週齢の雌性ＳＨＯマウス（Ｃｒｌ：ＳＨＯ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｈｒｈｒ）に、２０ｍｍ３の腫瘍（Ｔ２２６）断片を皮下組織に移植した。少なくとも１７ｇの体重の健康なマウスを移植手順に含めた。各処置アームにおいて腫瘍体積の平均値及び中央値が均一になるように、マウスをその腫瘍体積に従って異なる群に割り当てた。樹立された成長する腫瘍及び６０〜２００ｍｍ３の範囲の腫瘍体積を有する５匹のマウスの群に、ビヒクル、Ｋａｄｃｙｌａ（１．３ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））、ＡＤＣ８１、８２、８３及び８４（９ｍｇ／ｋｇで）のいずれかを静脈内注射した。腫瘍を６０日の期間の間毎週２回測定した。腫瘍体積に対する結果は図８Ａに図示されている（中央値データが図示されている）。
【０３８５】
実施例３３ｂ：ＨＥＲ２有効性研究［ＨＢＣｘ−１３ｂ  ＰＤＸモデル］
１５〜２５グラムの体重の、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｒａｎｃｅ）から得られた、実験フェーズの開始時に６〜９週齢の雌性ＳＨＯマウス（Ｃｒｌ：ＳＨＯ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｈｒｈｒ）に、２０ｍｍ３の腫瘍（ＨＢＣｘ−１３ｂ）断片を皮下組織に移植した。腫瘍体積が６２ｍｍ３及び２５６ｍｍ３の範囲であるとき、各処置アームにおいて腫瘍体積の平均値及び中央値が均一になるように、マウスをその腫瘍体積に従って割り当てた。５匹のマウスの群に、ビヒクル、ＡＤＣ９５、９６、９７又は９８（６ｍｇ／ｋｇで）のいずれかの用量を静脈内に２回（０日目及び８日目に）注射した。腫瘍を６０日の期間の間毎週２回測定した。腫瘍体積に対する結果は図８Ｃに図示されている（中央値データが図示されている）。
【０３８６】
実施例３３ｃ：ＨＥＲ２有効性研究［ＨＢＣｘ−１５  ＰＤＸモデル］
１５〜２５グラムの体重の、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｆｒａｎｃｅ）から得られた、実験フェーズの開始時に６〜９週齢の雌性ＳＨＯマウス（Ｃｒｌ：ＳＨＯ−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ  Ｈｒｈｒ）に、２０ｍｍ３の腫瘍（ＨＢＣｘ−１５）断片を皮下組織に移植した。腫瘍体積が６２ｍｍ３及び２５６ｍｍ３の範囲であるとき、各処置アームにおいて腫瘍体積の平均値及び中央値が均一になるように、マウスをその腫瘍体積に従って割り当てた。５匹のマウスの群に、ビヒクル、Ｋａｄｃｙｌａ（９ｍｇ／ｋｇ）又は８５（０．５ｍｇ／ｋｇで）のいずれかの単回用量を静脈内注射した。腫瘍を６０日の期間の間毎週２回測定した。腫瘍体積に対する結果は図８Ｂに図示されている（平均データが図示されている）。
【０３８７】
実施例３４ａ：ＨＥＲ２耐容性研究
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓａｉｎｔ−Ｇｅｒｍａｉｎ−Ｎｕｅｌｌｅｓ、Ｆｒａｎｃｅから得られた、実験フェーズの開始時に６週齢の、Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（１群当たり３匹の雄性及び３匹の雌性）：ＯＦＡ：ＳＤを、尾静脈に導入されたマイクロフレックス注入セットを使用して９７（（１）２０ｍｇ／ｋｇで及び（２）４０ｍｇ／ｋｇ）又は９８（（１）２０ｍｇ／ｋｇで及び（２）４０ｍｇ／ｋｇ）の静脈内（ボーラス）注射で処置した（１ｍＬ／ｍｉｎで２ｍＬ／ｋｇ）。１つの動物群（対照）をビヒクルで処置した。投薬した後、全ての動物を５日の観察期間の間維持した。生存する動物を５日目に死亡させた。各動物を投薬の前に（０日目）並びに２日目及び４日目に無作為化／選択の時に秤量した。全ての動物（死亡が見出された動物又は瀕死で死亡させた動物を含む）を完全な剖検手順に供した。肝臓、脾臓及び坐骨神経の組織病理学的検査を、全ての動物について実施した。血液試料（瀕死で死亡させた動物を含む）を回収し、血液学的並びに血清臨床的化学パラメータの両方の決定にかけた。結果は、動物が、本発明によるコンジュゲート（９７）及び従来技術のリンカー（９８）を用いるコンジュゲートに同等に良好に耐容できたことを実証している。血小板数及び体重における有意な差異は観察されなかったが、両方のパラメータは、Ｋａｄｃｙｌａ処置ラットにつては急速に減少した。
【０３８８】
実施例３４ｂ：ＨＥＲ２耐容性研究
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、ＵＳＡから得られた、実験フェーズの開始時に６週齢のＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙラット（１群当たり２匹の雌性）を、尾静脈に導入されたマイクロフレックス注入セットを使用してＡＤＣ８４（２０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３５ｍｐｋ、５０ｍｐｋ及び６０ｍｐｋで）、又はＡＤＣ８１、８２及び８３（４０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、７０ｍｐｋ、１００ｍｐｋ及び１２０ｍｐｋで）の静脈内（ボーラス）注射で処置した（１ｍＬ／ｍｉｎで２ｍＬ／ｋｇ）。１つの動物群（対照）をビヒクルで処置し、別の群をＫａｄｃｙｌａ（２０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、３５ｍｐｋ、５０ｍｐｋ及び６０ｍｐｋで）で処置した。投薬した後、全ての動物を１２日の観察期間の間維持した。生存する動物を１２日目に死亡させた。各動物を、投薬の前に（０日目）及び全ての連続した処置日に無作為化／選択の時に秤量した。全ての動物（死亡が見出された動物又は瀕死で死亡させた動物を含む）を完全な剖検手順に供した。肝臓、脾臓及び坐骨神経の肉眼的組織病理学的検査を全ての動物について実施した。血液試料（瀕死で死亡させた動物を含む）を回収し、両方の血液学的パラメータの決定にかけた。
【０３８９】
ＡＤＣ当たりの異なる用量計画についてのラットの百分率体重損失についての結果は、図７に図示されている。Ｋａｄｃｙｌａについての体重ベースのＭＴＤは５０ｍｐｋ〜６０ｍｐｋの間であることが、これらの結果から明確であったが、一方で、ＡＤＣ８４（ＤＡＲ４）についての体重ベースのＭＴＤは＞６０ｍｐｋであることが見出された。ＡＤＣ８１、８２及び８３（全てＤＡＲ２）について、体重ベースのＭＴＤは＞１２０ｍｐｋであることが見出され、最も高い用量レベルでのこれらのＡＤＣのいずれについても有意な体重損失は観察されなかった。
【図１】
2017200902.tif 000064
【図２】
2017200902.tif 000065
【図３】
2017200902.tif 000066
【図４】
2017200902.tif 000067
【図５】
2017200902.tif 000068
【図６】
2017200902.tif 000069
【図７Ａ】
2017200902.tif 000070
【図７Ｂ】
2017200902.tif 000071
【図７Ｃ】
2017200902.tif 000072
【図７Ｄ】
2017200902.tif 000073
【図７Ｅ】
2017200902.tif 000074
【図８Ａ】
2017200902.tif 000075
【図８Ｂ】
2017200902.tif 000076
【図８Ｃ】
2017200902.tif 000077
【配列表】
2017200902000001.app
【外国語明細書】
2017200902000001.pdf