(57)【要約】      （修正有）【課題】免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞および治療でのそれらの使用の提供。【解決手段】免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞であって、前記細胞は、検出可能なレベルの、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する、ＩＭＰ細胞を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞であって、
前記細胞は、検出可能なレベルの、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項２】
請求項１に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項３】
請求項１または２に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、（ａ）ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９およびＣＤ１４０ｂ、または、（ｂ）ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項４】
請求項１または２に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、ＣＤ７２、ＣＤ１３３、ＣＤ１９２、ＣＤ２０７、ＣＤ１４４、ＣＤ４１ｂ、ＦＭＣ７、ＣＤ７５、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ２８２、ＣＤ１００、ＣＤ９４、ＣＤ３９、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ１５、ＰＡＣ−１、ＣＬＩＰ、ＣＤ４８、ＣＤ２７８、ＣＤ５、ＣＤ１０３、ＣＤ２０９、ＣＤ３、ＣＤ１９７、ＨＬＡ−ＤＭ、ＣＤ２０、ＣＤ７４、ＣＤ８７、ＣＤ１２９、ＣＤｗ３２９、ＣＤ５７、ＣＤ１６３、ＴＰＢＧ、ＣＤ２０６、ＣＤ２４３（ＢＤ）、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１３８、ＣＤ７、ＣＤ５０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１５８ｅ２、ＣＤ６４、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５、ＣＬＡ、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ３４、ＣＤ１０１、ＣＤ２、ＣＤ４１ａ、ＣＤ６９、ＣＤ１３６、ＣＤ６２Ｐ、ＴＣＲαβ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１ａ、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１５４、ＣＤ７０、ＣＤｗ２１８ａ、ＣＤ１３７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ１５０、ＣＤ６６、ＣＤ２１２、ＣＤ１７７、ＣＤ１４２、ＣＤ１６７、ＣＤ３５２、ＣＤ４２ａ、ＣＤ３３６、ＣＤ２４４、ＣＤ２３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２２９、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤＨ６、ＣＤ２８、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ３３５、ＣＤ１３１、ＣＤ３２、ＣＤ１５７、ＣＤ１６５、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ３３２、ＣＤ１８０、ＣＤ６５およびＣＤ２４の、１または複数を発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、請求項２、３および／または４で定義した全てのマーカーを発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項６】
請求項１から５のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、ＭＩＣ  Ａ／Ｂに関して少なくとも３３０の抗体平均蛍光強度（ＭＦＩ）、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）に関して少なくとも２１０のＭＦＩ、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）に関して少なくとも２２１のＭＦＩ、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）に関して少なくとも１８６のＭＦＩ、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）に関して少なくとも１８１のＭＦＩ、ＣＤ９９に関して少なくとも１８４のＭＦＩ、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）に関して少なくとも３００のＭＦＩ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）に関して少なくとも１７３のＭＦＩ、ＣＸＣＲ２に関して少なくとも２３６のＭＦＩ、および、ＣＤ１２６に関して少なくとも１６０のＭＦＩを示す、
ＩＭＰ細胞。
【請求項７】
請求項１から６のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）と比較して増加した量の、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６の、１または複数を発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項８】
請求項１から７のいずれか一項に記載のＩＭＰであって、
前記ＩＭＰ細胞は、ＭＳＣと比較して増加した量の、ＣＤ８５ｈ、ＣＤ１１１、ＣＤ１１８、ＣＤ１２０ａ、ＣＤ１２５、ＣＤ１４３、ＣＤ１４８、ＣＤ１５８ｆ、ＣＤ１９１、ＣＤ２２３、ＣＤ２４９、ＣＤ８５ｊ、ＣＤ１４１、ＣＤ３２４、ＳＳＥＡ−３、ＣＤ２５５、ＣＤ７９ａ、ＣＤ１７、ＣＤ２１８ｂ、ＣＤ３２６、ＣＤｗ２１０、ＣＤ１１２、ＦＬＭＰ−Ｒ、ＣＤ３００ｅ、ＣＤ８６、ＣＤ３６２、ＣＤ２０１、ＣＤ２１５、ＣＤＨ１１、ＣＤ２７５、ＣＤ１ＣおよびＣＤ８５ｄの、１または複数を発現する、
ＩＭＰ。
【請求項９】
請求項６、７または８に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記のＭＦＩまたは量は、ハイスループット蛍光活性化セルソーティング（ＨＴ−ＦＡＣＳ）を用いて測定される、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１０】
請求項１から９のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−８、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０；インターフェロンγ誘導タンパク質１０；ＩＰ−１０）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２；単球走化性タンパク質−１；ＭＣＰ−１）およびケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５；ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅ；ＲＡＮＴＥＳ）の、１または複数を分泌する、ＩＭＰ細胞。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、ＭＳＣと比較して増加した量の、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１およびＲＡＮＴＥＳの、１または複数を分泌する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１２】
請求項１から１１のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、表１の全てのマーカーを発現する、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１３】
請求項１から１２のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、患者における特定の損傷組織へ遊走することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１４】
請求項１から１３のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、患者における特定の損傷組織へ付着することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１５】
請求項１から１４のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、血管の内皮を通って患者における特定の損傷組織へ遊出することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１６】
請求項１から１５のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、患者における特定の損傷組織において増殖することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１７】
請求項１から１６のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、患者における特定の損傷組織において抗炎症性効果を有することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１８】
請求項１から１７のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、患者における特定の損傷組織において血管新生を促進することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項１９】
請求項１３から１８のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記の特定の組織は、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である、
ＩＭＰ細胞。
【請求項２０】
請求項１から１９のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は、インビトロで中胚葉細胞へ分化することが可能な、
ＩＭＰ細胞。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記ＩＭＰ細胞は自己由来である、
ＩＭＰ細胞。
【請求項２２】
請求項１から２０のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞であって、
前記細胞は同種異系である、
ＩＭＰ細胞。
【請求項２３】
請求項１から２２のいずれか一項に記載の２以上のＩＭＰ細胞の、
集団。
【請求項２４】
免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞の集団であって、
（ｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも９０％が、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂを発現し、
（ｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも６０％が、検出可能なレベルのＣＤ３０４（ニューロピリン１）を発現し、
（ｉｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも４５％が、検出可能なレベルのＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）を発現し、
（ｉｖ）前記集団内の前記細胞の少なくとも１０％が、検出可能なレベルのＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）を発現し、
（ｖ）前記集団の少なくとも１５％が、検出可能なレベルのＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）を発現し、
（ｖｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも２０％が、検出可能なレベルのＣＤ９９を発現し、
（ｖｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも８０％が、検出可能なレベルのＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）を発現し、
（ｖｉｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも３０％が、検出可能なレベルの上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）を発現し、
（ｘｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも６０％が、検出可能なレベルのＣＸＣＲ２を発現し、および、
（ｘ）前記集団内の前記細胞の少なくとも５％が、検出可能なレベルのＣＤ１２６を発現する、
集団。
【請求項２５】
請求項２４に記載の集団であって、
（ｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも９７％が、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂを発現し、
（ｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも６５％が、検出可能なレベルのＣＤ３０４（ニューロピリン１）を発現し、
（ｉｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも５１％が、検出可能なレベルのＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）を発現し、
（ｉｖ）前記集団内の前記細胞の少なくとも１１％が、検出可能なレベルのＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）を発現し、
（ｖ）前記集団の少なくとも１８％が、検出可能なレベルのＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）を発現し、
（ｖｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも２４％が、検出可能なレベルのＣＤ９９を発現し、
（ｖｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも８５％が、検出可能なレベルのＣＤ１８１（ＣＸＣＲ１）を発現し、
（ｖｉｉｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも３３％が、検出可能なレベルの上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）を発現し、
（ｘｉ）前記集団内の前記細胞の少なくとも６８％が、検出可能なレベルのＣＸＣＲ２を発現し、および、
（ｘ）前記集団内の前記細胞の少なくとも７％が、検出可能なレベルのＣＤ１２６を発現する、
集団。
【請求項２６】
請求項２４または２５に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の少なくとも９０％が、検出可能なレベルの、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する、
集団。
【請求項２７】
請求項２６に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の少なくとも９０％が、検出可能なレベルの、請求項２６に挙げた全てのマーカーを発現する、
集団。
【請求項２８】
請求項２４から２７のいずれか一項に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の少なくとも８０％が、検出可能なレベルの、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９およびＣＤ１４０ｂの、１または複数を発現する、
集団。
【請求項２９】
請求項２８に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の少なくとも８０％が、検出可能なレベルの、請求項２８に挙げた全てのマーカーを発現する、
集団。
【請求項３０】
請求項２４から２９のいずれか一項に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の少なくとも７０％が、検出可能なレベルの、ＣＤ３１８、ＣＤ３５１、ＣＤ２８６、ＣＤ４６、ＣＤ１１９およびＣＤ１３２の、１または複数を発現する、
集団。
【請求項３１】
請求項３０に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の少なくとも７０％が、検出可能なレベルの、請求項３０に挙げた全てのマーカーを発現する、
集団。
【請求項３２】
請求項２４から３１のいずれか一項に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の１％以下が、検出可能なレベルの、ＣＤ７２、ＣＤ１３３、ＣＤ１９２、ＣＤ２０７、ＣＤ１４４、ＣＤ４１ｂ、ＦＭＣ７、ＣＤ７５、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ２８２、ＣＤ１００、ＣＤ９４、ＣＤ３９、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ１５、ＰＡＣ−１、ＣＬＩＰ、ＣＤ４８、ＣＤ２７８、ＣＤ５、ＣＤ１０３、ＣＤ２０９、ＣＤ３、ＣＤ１９７、ＨＬＡ−ＤＭ、ＣＤ２０、ＣＤ７４、ＣＤ８７、ＣＤ１２９、ＣＤｗ３２９、ＣＤ５７、ＣＤ１６３、ＴＰＢＧ、ＣＤ２０６、ＣＤ２４３（ＢＤ）、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１３８、ＣＤ７、ＣＤ５０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１５８ｅ２、ＣＤ６４、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５、ＣＬＡ、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ３４、ＣＤ１０１、ＣＤ２、ＣＤ４１ａ、ＣＤ６９、ＣＤ１３６、ＣＤ６２Ｐ、ＴＣＲαβ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１ａ、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１５４、ＣＤ７０、ＣＤｗ２１８ａ、ＣＤ１３７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ１５０、ＣＤ６６、ＣＤ２１２、ＣＤ１７７、ＣＤ１４２、ＣＤ１６７、ＣＤ３５２、ＣＤ４２ａ、ＣＤ３３６、ＣＤ２４４、ＣＤ２３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２２９、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤＨ６、ＣＤ２８、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ３３５、ＣＤ１３１、ＣＤ３２、ＣＤ１５７、ＣＤ１６５、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ３３２、ＣＤ１８０、ＣＤ６５およびＣＤ２４の、１または複数を発現する、
集団。
【請求項３３】
請求項３２に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞の１％以下が、検出可能なレベルの、請求項３２に挙げた全てのマーカーを発現する、
集団。
【請求項３４】
請求項２４から３３のいずれか一項に記載の集団であって、
前記集団内の前記細胞は、請求項１３から２２のいずれか一項で定義した特性を有する、
集団。
【請求項３５】
請求項２３から３４のいずれか一項に記載の集団であって、
前記集団は、少なくとも５０００の細胞、少なくとも５０，０００の細胞、または少なくとも２５０，０００の細胞を含む、
集団。
【請求項３６】
医薬組成物であって、
（ａ）請求項１から２２のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞または請求項２３から３５のいずれか一項に記載の集団、および、
（ｂ）薬学的に許容できる担体または希釈剤、１または複数のリポソームおよび／または１または複数のマイクロバブルを含む、
医薬組成物。
【請求項３７】
請求項２３から３５のいずれか一項に記載のＩＭＰ細胞の集団を生産する方法であって、
（ａ）単核細胞（ＭＣ）を、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導する条件下で培養するステップ、および、
（ｂ）請求項１から８のいずれか一項で定義した発現パターンを有するＩＭＰ細胞を採取し、培養して、それにより、請求項２３から３５のいずれか一項に記載の集団を生産するステップ、
を含む、
方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法であって、
前記ＭＣが末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、
方法。
【請求項３９】
請求項３７または３８に記載の方法であって、
ステップ（ａ）は、前記ＩＭＰ細胞が付着することを可能にする条件下で、前記ＭＣを培養するステップを含む、
方法。
【請求項４０】
請求項３７から３９のいずれか一項に記載の方法であって、
ステップ（ａ）および／または（ｂ）は、前記のＭＳＣおよび／またはＩＭＰ細胞を、血小板溶解物とともに培養するステップを含む、
方法。
【請求項４１】
請求項３７から４０のいずれか一項に記載の方法であって、
前記ＭＣは、患者または同種異系ドナーから得られる、
方法。
【請求項４２】
患者における損傷組織を修復する方法であって、
請求項２３から３５のいずれか一項に記載の集団または請求項３６に記載の医薬組成物を前記患者に投与し（ここで、前記集団または組成物は治療的に効果的な数の細胞を含む）、それにより、前記患者における前記損傷組織を治療するステップを含む、
方法。
【請求項４３】
請求項４２に記載の方法であって、
前記組織は中胚葉に由来する、
方法。
【請求項４４】
請求項４３に記載の方法であって、
前記組織は、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である、
方法。
【請求項４５】
請求項４２から４４のいずれか一項に記載の方法であって、
前記組織は、外傷または疾患により損傷している、
方法。
【請求項４６】
請求項４５に記載の方法であって、
前記方法は、前記患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療するための、
方法。
【請求項４７】
請求項４６に記載の方法であって、
前記の心臓の外傷または疾患は、心筋梗塞、左室肥大、右室肥大、塞栓、心不全、先天性心臓欠損、心臓弁膜症、不整脈および心筋炎から選択される、
方法。
【請求項４８】
請求項４６に記載の方法であって、
前記の骨の外傷または疾患は、骨折、ソルター−ハリス骨折、若木骨折、骨棘、頭蓋骨癒合症、コフィン‐ローリー症候群、進行性骨化線維増殖症、線維性骨異形成症、フォング病（または爪膝蓋骨症候群）、低ホスファターゼ症、クリッペル・ファイル症候群、代謝性骨疾患、爪膝蓋骨症候群、変形性関節症、変形性骨炎（または骨パジェット病）、嚢胞性線維性骨炎（または線維性骨炎またはフォンレックリングハウゼン骨病）、恥骨骨炎、硬化性骨炎（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ｏｓｔｅｉｔｉｓ）（または硬化性骨炎（ｏｓｔｅｉｔｉｓ  ｃｏｎｄｅｎｓａｎｓ））、硬化性腸骨炎、離断性骨軟骨炎、骨形成不全症、骨軟化症、骨髄炎、骨減少症、大理石骨病、骨粗鬆症、骨壊死、骨萎縮性骨化過剰症、原発性副甲状腺機能亢進症、腎性骨ジストロフィー、骨癌、転移性癌と関連する骨病変、ゴーハム・スタウト病、原発性副甲状腺機能亢進症、歯周病、および関節置換の無菌的弛緩から選択される、
方法。
【請求項４９】
請求項４２から４８のいずれか一項に記載の方法であって、
前記集団は、前記患者または同種異系ドナーから得られるＭＣを用いて生産される、
方法。
【請求項５０】
請求項２３から３５のいずれか一項に記載の集団または請求項３６に記載の医薬組成物であって、
患者における損傷組織を修復する方法での使用のための、
集団または医薬組成物。
【請求項５１】
請求項２３から３５のいずれか一項に記載の集団または請求項３６に記載の医薬組成物であって、
患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療する方法での使用のための、
集団または医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞および治療でのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
中胚葉細胞は多くの組織に由来し、他の細胞型のための支持構造としての機能を果たす。例えば、骨髄は、造血系および間葉系の両方に由来する細胞でできている。２つの原則の間葉系細胞型、すなわち、（ｉ）間葉系幹細胞（ＭＳＣ）およびそれらの前駆細胞、および、（ｉｉ）骨髄に見られる間葉系前駆細胞（ＭＰＣ）が、以前に説明され特徴付けられている。間葉系幹細胞（ＭＳＣ）は、多能性の成人幹細胞である。ＭＳＣは、分化して骨組織に見られる異なる特異的細胞を形成する。例えば、それらは、軟骨細胞（コンドロサイト）、骨細胞（骨芽細胞）および脂肪細胞（アディポサイト）へ分化することができる。
【０００３】
ＭＳＣは、様々な治療、例えば、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）および心筋梗塞の治療に用いられる。患者に投与された時点で、ＭＳＣは典型的に、損傷組織へ遊走し（または戻り）、パラクリンシグナリングを介して、および、損傷組織内の隣接細胞の生存、修復および再生を促進することにより、それらの治療効果を発揮する。
【０００４】
現在の治療は典型的に、ＭＳＣサブタイプの混合物の注入を伴い、その一部は、目的の組織へ効率的に遊走しない。このことは、多くの細胞投与量の使用を余儀なくさせて、非特異的な副作用および容量依存的な副作用をもたらし得る。ＭＳＣは典型的に骨髄から得られるので、大量に得ることは難しい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、これまでに同定または単離されたことのない、新規の細胞型である免疫調節前駆細胞に関する。このＩＭＰ細胞はかなり独特で、その構成、機能および特性は、ＭＳＣおよびＭＰＣの両方と異なり、高い免疫調節能力を与える。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、驚くべきことに、特異的なマーカー発現パターンを有する新規の免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞を同定した。特に、ＩＭＰ細胞は、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。ＩＭＰ細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）よりも著しく大量のこれらのマーカーを発現する。本発明のＩＭＰ細胞は、単核細胞（ＭＣ）、例えば、末梢血ＭＣから単離することができる。ＩＭＰ細胞は、損傷組織へ効率的に遊走して修復することができる。特に、それらは、ホーミング、付着、遊出、増殖、血管新生の効果およびパラクリンシグナリングが可能である。
【０００７】
したがって、本発明は、免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞を提供し、その細胞は、検出可能なレベルの、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。
【０００８】
また、本発明は、以下を提供する：
−本発明の２以上のＩＭＰ細胞の集団；
−免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞の集団、ここで、
（ｉ）集団内の細胞の少なくとも９０％が、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂを発現し、
（ｉｉ）集団内の細胞の少なくとも６０％が、検出可能なレベルのＣＤ３０４（ニューロピリン１）を発現し、
（ｉｉｉ）集団内の細胞の少なくとも４５％が、検出可能なレベルのＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）を発現し、
（ｉｖ）集団内の細胞の少なくとも１０％が、検出可能なレベルのＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）を発現し、
（ｖ）集団の少なくとも１５％が、検出可能なレベルのＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）を発現し、
（ｖｉ）集団内の細胞の少なくとも２０％が、検出可能なレベルのＣＤ９９を発現し、
（ｖｉｉ）集団内の細胞の少なくとも８０％が、検出可能なレベルのＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）を発現し、
（ｖｉｉｉ）集団内の細胞の少なくとも３０％が、検出可能なレベルの上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）を発現し、
（ｘｉ）集団内の細胞の少なくとも６０％が、検出可能なレベルのＣＸＣＲ２を発現し、および、
（ｘ）集団内の細胞の少なくとも５％が、検出可能なレベルのＣＤ１２６を発現し；
−（ａ）本発明のＩＭＰ細胞または本発明の集団、および、（ｂ）薬学的に許容できる担体または希釈剤、１または複数のリポソーム、および／または、１または複数のマイクロバブルを含む、医薬組成物；
−（ａ）単核細胞（ＭＣ）を、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するように誘導する条件下で培養するステップ、および（ｂ）上記に定義した発現パターンを有するＩＭＰ細胞を採取し、培養して、それにより、本発明の集団を生産するステップ、を含む、本発明のＩＭＰ細胞の集団を生産する方法；
−本発明の集団または本発明の医薬組成物を患者に投与し（ここで、当該集団または組成物は、治療的に効果的な数の細胞を含む）、それにより、患者における損傷組織を治療するステップ、を含む、患者における損傷組織を修復する方法；
−患者における損傷組織を修復する方法での使用のための、本発明の集団または本発明の医薬組成物；および、
−患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療する方法での使用のための、本発明の集団または本発明の医薬組成物。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
開示された産物および方法の異なる適用は、当分野における特定のニーズに合わせられ得ることが理解されるよう。また、本明細書において用いられる専門用語は、本発明の特定の実施態様を説明する目的のためだけであり、限定されることを意図しないことも理解されよう。
【００１０】
さらに、本明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、内容が明らかに別段の指示をしない限り、複数形の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」との言及は「細胞（複数）（ｃｅｌｌｓ）」を含み、「組織（ａ  ｔｉｓｓｕｅ）」との言及は２以上のそのような組織を含み、「患者（ａ  ｐａｔｉｅｎｔ）」との言及は２以上のそのような患者を含むなどである。
【００１１】
本明細書中で上記または下記に挙げられる全ての刊行物、特許および特許出願は、それらの全体で参照により本明細書に援用される。
【００１２】
［本発明のＩＭＰ細胞］
本発明は、免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞を提供する。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。
【００１３】
ＭＩＣは、ＮＫキリングに対するそれらの感受性を低減させることにより、炎症性状況における細胞の適応およびそれらの免疫挙動を可能にする。
【００１４】
ＣＤ３０４（別名ニューロピリン１）は、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）に関する共受容体であり、血管新生、細胞生存、遊走および浸潤における役割を有する。
【００１５】
ＣＤ１７８（別名ＦＡＳリガンド）は、細胞表現型を維持し、分化を調節する。細胞の増殖を誘導することも可能である。ＦＡＳリガンドは、主にアポトーシスのシグナル伝達で知られるが、ＦＡＳおよびＦＡＳリガンドを発現する細胞は、ＦＡＳにより誘導されるアポトーシスに耐性であることが示されている。
【００１６】
ＣＤ２８９（別名Ｔｏｌｌ様受容体９）は、免疫応答の調節に関与し、標的組織へ向かう細胞遊走を促進し得る。
【００１７】
ＣＤ３６３（別名スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）の持続的な活性化は、インビボでの細胞の生着の増大をもたらしている。またＣＤ３６３は、血管新生を促進し、細胞のホーミングを調節し、細胞の遊走およびトラフィッキングを調節し、化学走性を制御する。
【００１８】
ＣＤ９９は、細胞の付着および遊出に関与する。
【００１９】
２つのクラスのインターロイキン−８（ＩＬ−８）受容体、ＣＸＣＲ１（またはＣＤ１８１）およびＣＸＣＲ２が存在する。両方の受容体は、他のＣＸＣケモカインとは対照的に、高い親和性でＩＬ−８と結合する。機能的には、ＣＸＣＲ１およびＣＸＣＲ２は、増殖、遊走、浸潤および血管新生において重大な役割を果たすことが示されている。損傷組織は、様々な可溶性炎症性因子、例えば、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）およびインターロイキン−８を放出し、これらの因子は、本発明のＩＭＰ細胞（および他の炎症性細胞）を、ＣＸＣＲ１および／またはＣＸＣＲ２への結合を介して（ｔｈｏｕｇｈ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｂｉｎｄｉｎｇ）損傷組織へ引き寄せ得る。
【００２０】
ＥＧＦ−Ｒは、細胞遊走、付着および増殖に関与する。
【００２１】
ＣＤ１２６（別名ＩＬ−６Ｒ１）は、免疫の恩恵を増大させる。
【００２２】
本発明のＩＭＰ細胞は、非常に多くの利点を有する。重要な利点は本明細書に要約される。しかしながら、さらなる利点が、以下の検討から明らかになるであろう。
【００２３】
本発明のＩＭＰ細胞は、患者における損傷組織を修復するために有利に用いられ得る。ＩＭＰ細胞は、損傷組織へ効率的に遊走する（または戻る）こと、および、組織において抗炎症性効果を発揮することが可能である。このことを以下により詳細に述べる。ＩＭＰ細胞の最も重要な能力の１つは、外傷した部位へ遊走する（または戻る）ことであり、それは化学走性を含む。これはケモカインシグナリングに基づき、ローリング、付着および遊出などのメカニズムを利用する。ＩＭＰ細胞の抗炎症性効果は、損傷組織内の隣接細胞の生存、修復および再生を促進する。また、細胞は、血管新生、走化性および抗アポトーシスの因子の分泌のような、パラクリン作用を発揮することが可能である。このことは以下でもより詳細に述べる。
【００２４】
以下により詳細に述べるように、ＩＭＰ細胞は、ヒト個体などの個体から得られる単核細胞（ＭＣ）、例えば末梢ＭＣから生産される。ＩＭＰ細胞はＭＣから生産されるので、それらは簡単に（例えば末梢血から）生産され得て、そして、治療される患者にとって自己由来であり得て、したがって、患者による免疫学的拒絶のリスクを避ける。
【００２５】
様々なサンプルのＭＣ（すなわち様々なサンプルの血液）を得ることができるので、原理的には、単一の個体から無制限の数のＩＭＰ細胞を生産することが可能である。非常に大量のＩＭＰ細胞を単一の個体から生産することが確実に可能である。したがって、本発明のＩＭＰ細胞は大量に作られ得る。
【００２６】
本発明のＩＭＰ細胞は、臨床関連の条件下で、例えば、微量のエンドトキシンおよび他の環境汚染物質、ならびに、動物産物、例えばウシ胎仔血清の不存在下で生産される。このことは、本発明のＩＭＰ細胞を、患者への投与に特に適切にする。
【００２７】
本発明のＩＭＰ細胞はＭＣから生産されるので、それらは実質的に同質であり、自己由来であり得る。また、それらは、ＭＳＣで度々生じるドナー間の変動を避ける。本発明のＩＭＰ細胞の非常に多くの集団は、任意の他の治療、例えば化学療法または放射線療法が始まる前に患者から得られる単一のサンプルから生産することができる。したがって、本発明のＩＭＰ細胞は、これらの治療のいかなる有害作用も避けることができる。
【００２８】
本発明のＩＭＰ細胞は、迅速に作ることができる。ＩＭＰ細胞は、３０日未満、例えば約２２日で、ＭＣから生産することができる。
【００２９】
ＭＣからのＩＭＰ細胞の生産は、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）に由来する間葉系幹細胞ＭＳＣの使用と関連する道徳的および倫理的影響を避ける。
【００３０】
本発明のＩＭＰ細胞は典型的に、ヒトＭＣから生産される。したがって、本発明のＩＭＰ細胞は、典型的にヒトである。あるいは、ＩＭＰ細胞は、他の動物または哺乳類由来、例えば、ウマ、ウシ、ヒツジまたはブタのような商業的に飼育される動物由来、マウスまたはラットのような実験動物由来、または、ネコ、イヌ、ウサギまたはモルモットのようなペット由来のＭＣから生産され得る。
【００３１】
本発明のＩＭＰ細胞は、系列が制限されたマーカーの発現、構造上および機能上の特性を含む、当技術分野で知られている標準的な方法を用いて、免疫調節前駆細胞として同定することができる。ＩＭＰ細胞は、ＩＭＰの特徴であることが知られる検出可能なレベルの細胞表面マーカーを発現する。これらを以下に述べる。
【００３２】
本発明のＩＭＰ細胞は、それらが中胚葉系列であることを確認するインビトロでの分化アッセイをうまく完了することが可能である。そのようなアッセイは、限定されないが、脂肪生成分化アッセイ、骨分化アッセイおよび神経分化アッセイを含む（Ｚａｉｍ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ  Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１２  Ａｕｇ；９１（８）：１１７５−８６）。
【００３３】
本発明のＩＭＰ細胞は幹細胞ではない。特に、それらはＭＳＣではない。それらは終末的に分化している。それらは、インビトロで適切な条件下で、例えば軟骨または骨細胞へ分化させることができるが、それらは典型的に、インビボでは分化しない。本発明のＩＭＰ細胞は、損傷組織へ遊走し、損傷組織においてパラクリンシグナリングを発揮することにより、それらの効果を有する。特に、ＩＭＰ細胞は、好ましくは、損傷組織において抗炎症性（ａｎｔｉ−ｆｌａｍｍａｔｏｒｙ）効果を誘導することが可能である。このことを以下により詳細に述べる。
【００３４】
本発明のＩＭＰ細胞は、典型的に、紡錘形の形態により特徴付けられる。ＩＭＰ細胞は、典型的に、線維芽細胞様であり、すなわち、それらは、長細い多少の細胞突起を有する小さな細胞体を有する。細胞は典型的に、直径が約１０〜約２０μｍである。
【００３５】
本発明のＩＭＰ細胞は、それらのマーカー発現パターンにより、ＭＳＣを含む公知の細胞から区別される。ＩＭＰは、検出可能なレベルの、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現する。ＩＭＰは、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量のこれらのマーカーを発現する。これは、本発明のＩＭＰにおけるマーカーの発現レベル／量を、同一条件下で同一技術を用いて、ＭＳＣにおける発現レベル／量と比較することにより判定することができる。適切なＭＳＣは市販されている。比較に用いられるＭＳＣは、好ましくはヒトＭＳＣである。ヒトＭＳＣは、Ｍｅｓｏｂｌａｓｔ（登録商標）Ｌｔｄ、Ｏｓｉｒｉｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（登録商標）Ｉｎｃ．またはＬｏｎｚａ（登録商標）から市販されている。ヒトＭＳＣは、好ましくはＬｏｎｚａ（登録商標）から得られる。そのような細胞は、実施例での比較のために用いた。ＭＳＣは、上述した任意の動物または哺乳類から得てよい。
【００３６】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６の、１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の、前記１０個のマーカーの全てを発現する。
【００３７】
当技術分野で知られている標準的な方法を用いて、上記（および下記）の様々なマーカーの、検出可能な発現または増加した発現を判定してよい。適切な方法は、限定されないが、免疫細胞化学、免疫測定法、フローサイトメトリー、例えば、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）、およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）、例えば、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）を含む。適切な免疫測定法は、限定されないが、ウェスタンブロッティング、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素結合免疫吸着スポット分析（ＥＬＩＳＰＯＴ分析）、競合的酵素免疫分析法（ｅｎｚｙｍｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｉｅｄ  ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）、放射性アレルゲン吸着（ＲＡＳＴ）試験、ラジオイムノアッセイ、ラジオバインディングアッセイおよび免疫蛍光を含む。ウェスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡおよびＲＴ−ＰＣＲは、全て定量的なので、存在するならば様々なマーカーの発現のレベルを測定するために用いることができる。ハイスループットＦＡＣＳ（ＨＴ−ＦＡＣＳ）の使用を実施例に開示する。本明細書中に開示の任意のマーカーの発現または増加した発現は、好ましくは、ＨＴ−ＦＡＣＳを用いて行われる。本明細書に述べた様々なマーカーの全てに関する抗体および蛍光標識抗体は市販されている。
【００３８】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＩＣ  Ａ／Ｂに関して少なくとも３３０、例えば少なくとも３５０または少なくとも４００の抗体平均蛍光強度（ＭＦＩ）、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）に関して少なくとも２１０、例えば少なくとも２５０または少なくとも３００のＭＦＩ、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）に関して少なくとも２２１、例えば少なくとも２５０または少なくとも３００のＭＦＩ、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）に関して少なくとも１８６、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）に関して少なくとも１８１、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＤ９９に関して少なくとも１８４、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）に関して少なくとも３００、例えば少なくとも３５０または少なくとも４００のＭＦＩ、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）に関して少なくとも１７３、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩ、ＣＸＣＲ２に関して少なくとも２３６、例えば少なくとも２５０または少なくとも３００のＭＦＩ、および、ＣＤ１２６に関して少なくとも１６０、例えば少なくとも２００または少なくとも２５０のＭＦＩを示す。平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、平方メートルあたりのワットで測定される、強度、時間平均エネルギー束の測定単位である。それはＳＩ単位である。各マーカーに関するＭＦＩは、典型的に、ＨＴ−ＦＡＣＳを用いて測定される。各マーカーに関するＭＦＩは、好ましくは、実施例に記載のようにＨＴ−ＦＡＣＳを用いて測定される。
【００３９】
上記に特定した１０個のマーカーに加えて、本発明のＩＭＰ細胞は、典型的に、検出可能なレベルの、実施例の表１に示す他のマーカーの１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。
【００４０】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ３４０、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ６３、ＣＤ５８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、より好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００４１】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９およびＣＤ１４０ｂの、１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、より好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９、ＣＤ１４０ｂ、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００４２】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ７２、ＣＤ１３３、ＣＤ１９２、ＣＤ２０７、ＣＤ１４４、ＣＤ４１ｂ、ＦＭＣ７、ＣＤ７５、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ２８２、ＣＤ１００、ＣＤ９４、ＣＤ３９、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ１５、ＰＡＣ−１、ＣＬＩＰ、ＣＤ４８、ＣＤ２７８、ＣＤ５、ＣＤ１０３、ＣＤ２０９、ＣＤ３、ＣＤ１９７、ＨＬＡ−ＤＭ、ＣＤ２０、ＣＤ７４、ＣＤ８７、ＣＤ１２９、ＣＤｗ３２９、ＣＤ５７、ＣＤ１６３、ＴＰＢＧ、ＣＤ２０６、ＣＤ２４３（ＢＤ）、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１３８、ＣＤ７、ＣＤ５０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１５８ｅ２、ＣＤ６４、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５、ＣＬＡ、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ３４、ＣＤ１０１、ＣＤ２、ＣＤ４１ａ、ＣＤ６９、ＣＤ１３６、ＣＤ６２Ｐ、ＴＣＲαβ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１ａ、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１５４、ＣＤ７０、ＣＤｗ２１８ａ、ＣＤ１３７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ１５０、ＣＤ６６、ＣＤ２１２、ＣＤ１７７、ＣＤ１４２、ＣＤ１６７、ＣＤ３５２、ＣＤ４２ａ、ＣＤ３３６、ＣＤ２４４、ＣＤ２３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２２９、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤＨ６、ＣＤ２８、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ３３５、ＣＤ１３１、ＣＤ３２、ＣＤ１５７、ＣＤ１６５、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ３３２、ＣＤ１８０、ＣＤ６５およびＣＤ２４の、１または複数を発現する。ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００４３】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織へ遊走することが可能である。換言すれば、損傷組織を有する患者に細胞が投与されると、細胞は、損傷組織へ遊走する（または戻る）ことが可能である。それは、細胞が、静脈内などの標準的な経路を経由して注入され得て、それから、損傷の部位を標的化することを意味するので、これは有利である。細胞は、損傷組織へ送達される必要はない。損傷は、以下により詳細に述べるように、外傷または疾患に起因してよい。
【００４４】
特定の組織は、好ましくは心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である。このことは、以下により詳細に述べるように、遊走だけでなく、付着、遊出、増殖、抗炎症性効果および血管新生にも当てはまる。
【００４５】
本発明のＩＭＰ細胞が損傷組織へ遊走する能力は、当技術分野で知られている標準的な分析を用いて測定され得る。適切な方法は、限定されないが、ゲノムの逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（レポーター遺伝子を用いる、または用いない、ＲＴ−ＰＣＲ）および標識技術を含む。
【００４６】
ＲＴ−ＰＣＲは、患者内での本発明のＩＭＰ細胞をトレースする最も直接的かつ簡単な方法である。形質導入された導入遺伝子または個々のドナーマーカーを、この目的のために用いることができ、移植された細胞に特異的なシグナルが、様々な患者試験において得られている。その結果は一般に半定量的である。
【００４７】
あるいは、本発明のＩＭＰ細胞は、目的の色素（蛍光色素など）で染色してよく、色素からのシグナルを介して患者内でモニターしてよい。そのような方法は、当分野で日常的である。
【００４８】
遊走（またはホーミング）は、典型的に、損傷組織に到着する細胞の数を測定することにより決定される。肺に（損傷組織ではなく）蓄積した細胞の数を観察することにより、間接的に測定してもよい。
【００４９】
損傷した心臓組織は、炎症性ケモカインおよびサイトカイン、例えば、間質細胞由来因子‐１（ＳＤＦ‐１）、インターロイキン‐８（ＩＬ‐８）、腫瘍壊死因子‐α（ＴＮＦ‐α）、顆粒球‐コロニー刺激因子（Ｇ‐ＣＳＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）および肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）を放出する。さらに、心筋梗塞は、ＶＥＧＦおよびエリスロポエチン（ＥＰＯ）のレベルを増大させる。ＣＸＣＲ４は、そのリガンドＳＤＦ‐１に結合するので、ＣＸＣＲ４を発現する本発明のＩＭＰ細胞は、損傷した心臓組織により生産されるＳＤＦ‐１の勾配に向かって遊走する。また、骨などの他の損傷組織も、ＳＤＦ−１を放出する。特定の損傷組織が心臓の組織である場合、本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルのＣＸＣＲ４を発現し、または、ＭＳＣと比較して増加した量のＣＸＣＲ４を発現する。
【００５０】
特定の損傷組織が骨の組織である場合、本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＴＧＦ−β３、骨形成タンパク質−６（ＢＭＰ−６）、ＳＯＸ−９、コラーゲン−２、ＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１２（ＣＣＬ１２）、ＣＣＬ７、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、血小板由来成長因子−Ａ（ＰＤＧＦ−Ａ）、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｄ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＩＧＦ−１、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ＰＤＧＦ−Ｒα、ＰＤＧＦ−Ｒβ、ＣＸＣＲ４、Ｃ−Ｃケモカイン受容体タイプ１（ＣＣＲ１）、ＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）、ＣＸＣＬ１２およびＮＦκＢを発現する。骨に戻る本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、間葉系幹細胞ＭＳＣと比較して増加した量の、これらの因子の１または複数、または実に全てを発現する。これらのマーカーの検出可能な発現は、上述のように測定し得る。
【００５１】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織へ付着することが可能である。付着および付着の分析は、当技術分野で知られている（Ｈｕｍｐｈｒｉｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．２００９；５２２：２０３−１０）。
【００５２】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、血管の内皮を通って患者における特定の損傷組織へ遊出することが可能である。遊出の分析は、当技術分野で知られている（Ｍｕｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｌｕｓｃｉｎｓｋａｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００８；４４３：１５５−１７６）。
【００５３】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織において、増殖することが可能である。細胞増殖の分析は、当技術分野でよく知られている。そのような分析は、例えばＬｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標）から市販されている。
【００５４】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者における特定の損傷組織において、血管新生を促進させることが可能である。血管新生の分析は、当技術分野で知られている（Ａｕｅｒｂａｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ．２００３  Ｊａｎ；４９（１）：３２−４０）。
【００５５】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者の損傷組織において、抗炎症性効果を有することが可能である。本発明のＩＭＰ細胞が抗炎症性効果を有する能力は、当技術分野で知られている標準的な分析を用いて測定することもできる。適切な方法は、限定されないが、サイトカインの分泌に関する酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、増強された混合白血球反応、および、共刺激分子および成熟マーカーの上方制御（フローサイトメトリーにより測定される）を含む。用いられ得る特定の方法を実施例に開示する。測定されるサイトカインは、典型的に、インターロイキン、例えば、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、セレクチン、接着分子、例えば、細胞間接着分子−１（ＩＣＡＭ−１）、および化学誘引物質タンパク質、例えば、単球走化性タンパク質−１（ＭＣＰ−１）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）である。これらのサイトカインに関する分析は、市販されている。抗炎症性因子は、好ましくは、実施例に記載のＬｕｍｉｎｅｘ（登録商標）分析を用いて検出および測定される。そのような分析は、Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標）から市販されている。
【００５６】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、ＩＬ−８、Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフケモカイン１０（ＣＸＣＬ１０；インターフェロンγ誘導タンパク質１０；ＩＰ−１０）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド２（ＣＣＬ２；単球走化性タンパク質−１；ＭＣＰ−１）およびケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド５（ＣＣＬ５；ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，ｎｏｒｍａｌ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ａｎｄ  ｓｅｃｒｅｔｅ；ＲＡＮＴＥＳ）の、１または複数を分泌する。ＩＭＰ細胞は、任意の数および組み合わせのこれらの因子を分泌し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、これらのマーカーの全てを分泌する。
【００５７】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１およびＲＡＮＴＥＳの、１または複数を分泌する。ＩＭＰ細胞は、増加した量の、任意の数および組み合わせのこれらの因子を分泌し得る。ＩＭＰ細胞は、好ましくは、増加した量のこれらのマーカーの全てを分泌する。
【００５８】
ＩＭＰ細胞は、好ましくは、間葉系幹細胞ＭＳＣと比較して減少した量のインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）および／またはＩＬ−１２を分泌する。ＩＬ−１０およびＩＬ−１２は、炎症促進性のサイトカインである。
【００５９】
本発明のＩＭＰ細胞は、より好ましくは、患者における損傷組織へ遊走すること、および、損傷組織において抗炎症性効果を有することが可能である。このことは、損傷が効率的に修復されることを可能にし、投与が必要な細胞の数を減らす。
【００６０】
本発明のＩＭＰ細胞は、上述したものに加えて、様々な異なる他のマーカーを発現する。これらの一部は、ＩＭＰ細胞が損傷組織へ遊走するそれらの能力を助け、そこで抗炎症性効果を有する。任意の本発明のＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、（ｉ）インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、（ｉｉ）ＩＧＦ−１受容体；（ｉｉｉ）Ｃ−Ｃケモカイン受容体タイプ１（ＣＣＲ１）、（ｉｖ）ストロマ細胞由来因子−１（ＳＤＦ−１）、（ｖ）低酸素誘導因子−１α（ＨＩＦ−１α）、（ｖｉ）Ａｋｔ１および（ｖｉｉ）肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）および／または顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）の、１または複数をさらに発現し得る。
【００６１】
ＩＧＦ−１受容体は、ＩＧＦ−１勾配に向かう遊走能力を促進する。ＩＧＦ−１が遊走を増大させるメカニズムの１つは、細胞の表面上のＣＸＣＲ４を上方制御することによるものであり、それは、ＳＤＦ−１シグナリングに対してそれらをさらに感受性にさせる。これは上述されている。
【００６２】
ＣＣＲ１は、ＣＣＬ７（以前はＭＣＰ３として知られる）の受容体であり、ＭＳＣのホーミングおよび生着能力を高め（したがって、本発明のＩＭＰ細胞に関して同一の効果を有することが期待される）、および、パラクリンシグナリングを介して、外傷した心筋における毛管密度を増大させることができる。
【００６３】
ＨＩＦ−１αは、酸素送達を増大させかつ適応性の生存促進性の応答を促進するパスウェイを活性化する。多くのＨＩＦ−１αの標的遺伝子の中には、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、エンドセリンおよびＶＥＧＦ（その受容体Ｆｌｋ−１を有する）がある。ＨＩＦ‐１αを発現または増加した量のＨＩＦ‐１αを発現するＩＭＰ細胞は、より治療的なサブタイプを促進し得る様々な血管原性成長因子などのパラクリン刺激の発現が上方制御される。以下により詳細に記載するように、本発明のＩＭＰ細胞は、低酸素（２０％未満の酸素）、例えば、約２％または約０％の酸素の条件下でそれらを培養することにより、より治療的なサブタイプへ前もって調整することができる。
【００６４】
Ａｋｔ１は、グルコース代謝、細胞増殖、アポトーシス、転写および細胞遊走などの複数の細胞のプロセスにおいて重要な役割を果たす、細胞内セリン／トレオニンタンパク質キナーゼである。Ａｋｔ１の過剰発現は、ラットＭＳＣがアポトーシスを受けるのを防ぐことが示されていて、本発明のＩＭＰ細胞において同一の効果を有するであろう。アポトーシスからの保護は、ＩＭＰ細胞の治療効果を高める。
【００６５】
ＭＳＣによるＨＧＦの過剰発現は、カルシニューリンが仲介するパスウェイを介したアポトーシスの阻害および血管新生により、虚血後の心不全を防ぐことが示されている。ＨＧＦおよびＧ−ＣＳＦは、この点について相乗効果を示す。また、ＨＧＦおよびその受容体ｃ‐ｍｅｔが高発現であるＭＳＣは、損傷組織への遊走能力も高い（ホルモンのパラクリンおよびオートクリンシグナリングを介して達成される）。ＨＧＦおよび／またはＧ−ＣＳＦを発現している本発明のＩＭＰ細胞についても同様である。
【００６６】
ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、上記に定義した（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数を発現し得る。本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、ＭＳＣと比較して増加した量の（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数を発現する。細胞マーカーに関する定量分析は上述される。これらのマーカーの検出可能な発現およびそれらの発現レベルは、上述のように測定し得る。
【００６７】
任意の本発明のＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、（ｉ）血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、（ｉｉ）形質転換成長因子β（ＴＧＦ−β）、（ｉｉｉ）インスリン様成長因子−１（ＩＧＦ−１）、（ｉｖ）線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、（ｖ）腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、（ｖｉ）インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）および（ｖｉｉ）インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）の、１または複数を発現し得る。ＶＥＧＦを過剰発現している細胞由来の馴化培地は、ハムスターモデルにおいて心不全を緩和することが示されている。それ故に、ＶＥＧＦを発現または増加した量のＶＥＧＦを発現する本発明のＩＭＰ細胞は、損傷した心臓の組織と同一効果を有する。
【００６８】
ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数を発現し得る。本発明のＩＭＰ細胞は、ＭＳＣと比較して増加した量の（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数を発現し得る。細胞マーカーに関する定量分析は上述される。これらのマーカーの検出可能な発現およびそれらの発現レベルは、上述のように測定し得る。
【００６９】
上記に示した（ｉ）〜（ｖｉｉ）の定義の両方のセットにおいて、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の１または複数の任意の組み合わせが発現され得て、または、増加した量で発現され得る。例えば、（ｉ）〜（ｖｉｉ）の各定義に関して、ＩＭＰ細胞は、検出可能なレベルの、または、増加した量の、（ｉ）；（ｉｉ）；（ｉｉｉ）；（ｉｖ）；（ｖ）；（ｖｉ）；（ｖｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）および（ｖ）；（ｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｖ）および（ｖｉ）；（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ、）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）およびｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉｉ）、ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）およびｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）、（ｖ）、（ｖｉ）および（ｖｉｉ）を、発現し得る。（ｉ）〜（ｖｉｉ）の各定義の組み合わせは、このリストから独立に選択される。
【００７０】
上述した任意のマーカーに加えて、本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＬＩＦおよび／または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体も発現する。本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、間葉系幹細胞と比較して増加した量のＬＩＦおよび／または血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）受容体を発現する。ＰＤＧＦ受容体は、好ましくは、ＰＤＧＦ−Ａ受容体および／またはＰＳＤＧＦ−Ｂ受容体である。これらの受容体の発現が高いＭＳＣは、血小板が活性化されている領域、例えば創傷および血栓性血管へ、効率的に遊走することができる。当該受容体を発現または増加した量の当該受容体を発現しているＩＭＰ細胞についても同様である。
【００７１】
本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは自己由来である。換言すれば、細胞は、好ましくは、細胞が投与される患者に由来する。あるいは、ＩＭＰ細胞は、好ましくは同種異系である。換言すれば、細胞は、好ましくは、細胞が投与される患者と免疫学的に適合する患者に由来する。
【００７２】
本発明のＩＭＰ細胞は、単離され、実質的に単離され、精製され、または、実質的に精製され得る。ＩＭＰ細胞は、任意の他の成分、例えば培養培地、本発明の他の細胞または他の細胞型が完全に存在しない場合に、単離され、または精製されている。ＩＭＰ細胞は、担体または希釈剤、例えば培養培地（その使用目的を妨げない）と混合されている場合に、実質的に単離されている。あるいは、本発明のＩＭＰ細胞は、以下に述べるように、増殖マトリックス中に存在してよく、または、表面上に固定化されてよい。
【００７３】
本発明のＩＭＰ細胞は、抗体に基づく技術を含む様々な技術を用いて単離され得る。細胞は、ＩＭＰ細胞上に存在する表面マーカー（上記参照）に対するモノクローナル抗体の結合に基づくネガティブおよびポジティブ選択技術を用いて単離され得る。それ故に、ＩＭＰ細胞は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）および磁気ビーズ分離を含む、任意の抗体に基づく技術を用いて分離され得る。
【００７４】
以下により詳細に述べるように、ＩＭＰ細胞は、エクスビボで処置され得る。したがって、細胞は、治療薬または診断薬がロードまたはトランスフェクトされて、それから、本発明の方法において治療的に用いられ得る。
【００７５】
［本発明の集団］
また、本発明は、２以上の本発明のＩＭＰ細胞の集団を提供する。任意の数の細胞が集団内に存在してよい。本発明の集団は、好ましくは、少なくとも約５×１０５の本発明のＩＭＰ細胞を含む。集団は、より好ましくは、少なくとも約１×１０６、少なくとも約２×１０６、少なくとも約２．５  ２×１０６、少なくとも約５×１０６、少なくとも約１×１０７、少なくとも約２×１０７、少なくとも約５×１０７、少なくとも約１×１０８または少なくとも約２×１０８の本発明のＩＭＰ細胞を含む。ある場合には、集団は、少なくとも約１．０×１０７、少なくとも約１．０×１０８、少なくとも約１．０×１０９、少なくとも約１．０×１０１０、少なくとも約１．０×１０１１または少なくとも約１．０×１０１２の本発明のＩＭＰ細胞を含んでよく、またはさらにより多く含んでよい。
【００７６】
２以上の本発明のＩＭＰ細胞を含む集団は、本発明のＩＭＰ細胞に加えて他の細胞を含んでよい。しかしながら、集団内の細胞の少なくとも７０％は、好ましくは本発明のＩＭＰ細胞である。より好ましくは、集団内の細胞の少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％または少なくとも約９９％は、本発明のＩＭＰ細胞である。
【００７７】
また、本発明は、ＩＭＰ細胞の特定の集団も提供する。本発明は、免疫調節前駆（ＩＭＰ）細胞の集団を提供し、ここで、
（ｉ）集団内の細胞の少なくとも９０％、好ましくは少なくとも９７％、より好ましくは少なくとも９７．１％は、検出可能なレベルのＭＩＣ  Ａ／Ｂを発現し、
（ｉｉ）集団内の細胞の少なくとも６０％、好ましくは少なくとも６５％、より好ましくは少なくとも６５．２％は、検出可能なレベルのＣＤ３０４（ニューロピリン１）を発現し、
（ｉｉｉ）集団内の細胞の少なくとも４５％、好ましくは少なくとも５１％、より好ましくは少なくとも５１．６％は、検出可能なレベルのＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）を発現し、
（ｉｖ）集団内の細胞の少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１１％、より好ましくは少なくとも１１．３％は、検出可能なレベルのＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）を発現し、
（ｖ）集団の少なくとも１５％、好ましくは少なくとも１８％、より好ましくは少なくとも１８．７％は、検出可能なレベルのＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）を発現し、
（ｖｉ）集団内の細胞の少なくとも２０％、好ましくは少なくとも２４％、より好ましくは少なくとも２４．８％は、検出可能なレベルのＣＤ９９を発現し、
（ｖｉｉ）集団内の細胞の少なくとも８０％、好ましくは少なくとも８５％は、検出可能なレベルのＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）を発現し、
（ｖｉｉｉ）集団内の細胞の少なくとも３０％、好ましくは少なくとも３３％、より好ましくは少なくとも３３．３％は、検出可能なレベルの上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）を発現し、
（ｘｉ）集団内の細胞の少なくとも６０％、好ましくは少なくとも６８％、より好ましくは少なくとも６８．８％は、検出可能なレベルのＣＸＣＲ２を発現し、および、
（ｘ）集団内の細胞の少なくとも５％、好ましくは少なくとも７％、より好ましくは少なくとも７．０５％は、検出可能なレベルのＣＤ１２６を発現する。
【００７８】
これらの好ましい集団内の細胞は、検出可能なレベルの、本発明のＩＭＰに関して上述した任意のマーカーをさらに発現し得る。これらの好ましい集団内の細胞は、上述したＩＭＰ細胞の任意の有利な特性を有し得る。
【００７９】
集団内の細胞の少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ１０、ＣＤ１１１、ＣＤ２６７、ＣＤ４７、ＣＤ２７３、ＣＤ５１／ＣＤ６１、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ１４６、ＣＤ５５、ＣＤ３４０、ＣＤ９１、Ｎｏｔｃｈ２、ＣＤ１７５ｓ、ＣＤ８２、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ９５、ＣＤ６３、ＣＤ２４５、ＣＤ５８、ＣＤ１０８、Ｂ２−ミクログロブリン、ＣＤ１５５、ＣＤ２９８、ＣＤ４４、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ１０５、ＣＤ１６６、ＣＤ２３０、ＨＬＡ−ＡＢＣ、ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ５９、ＣＤ７３、ＣＤ８１、ＣＤ９０、ＣＤ９８、ＣＤ１４７、ＣＤ１５１およびＣＤ２７６の、１または複数を発現する。集団内の細胞の少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％は、検出可能なレベルの任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。集団内の細胞の少なくとも９０％、例えば少なくとも９５％は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００８０】
集団内の細胞の少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ１５６ｂ、ＣＤ６１、ＣＤ２０２ｂ、ＣＤ１３０、ＣＤ１４８、ＣＤ２８８、ＣＤ３３７、ＳＳＥＡ−４、ＣＤ３４９およびＣＤ１４０ｂの、１または複数を発現する。集団内の細胞の少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％は、検出可能なレベルの任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。集団内の細胞の少なくとも８０％、例えば少なくとも８５％は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００８１】
集団内の細胞の少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ３１８、ＣＤ３５１、ＣＤ２８６、ＣＤ４６、ＣＤ１１９およびＣＤ１３２の、１または複数を発現する。集団内の細胞の少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％は、検出可能なレベルの任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。集団内の細胞の少なくとも７０％、例えば少なくとも７５％は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００８２】
集団内の細胞の１％以下、例えば０．５％以下は、好ましくは、検出可能なレベルの、ＣＤ７２、ＣＤ１３３、ＣＤ１９２、ＣＤ２０７、ＣＤ１４４、ＣＤ４１ｂ、ＦＭＣ７、ＣＤ７５、ＣＤ３ｅ、ＣＤ３７、ＣＤ１５８ａ、ＣＤ１７２ｂ、ＣＤ２８２、ＣＤ１００、ＣＤ９４、ＣＤ３９、ＣＤ６６ｂ、ＣＤ１５８ｂ、ＣＤ４０、ＣＤ３５、ＣＤ１５、ＰＡＣ−１、ＣＬＩＰ、ＣＤ４８、ＣＤ２７８、ＣＤ５、ＣＤ１０３、ＣＤ２０９、ＣＤ３、ＣＤ１９７、ＨＬＡ−ＤＭ、ＣＤ２０、ＣＤ７４、ＣＤ８７、ＣＤ１２９、ＣＤｗ３２９、ＣＤ５７、ＣＤ１６３、ＴＰＢＧ、ＣＤ２０６、ＣＤ２４３（ＢＤ）、ＣＤ１９、ＣＤ８、ＣＤ５２、ＣＤ１８４、ＣＤ１０７ｂ、ＣＤ１３８、ＣＤ７、ＣＤ５０、ＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ１５８ｅ２、ＣＤ６４、ＤＣＩＲ、ＣＤ４５、ＣＬＡ、ＣＤ３８、ＣＤ４５ＲＢ、ＣＤ３４、ＣＤ１０１、ＣＤ２、ＣＤ４１ａ、ＣＤ６９、ＣＤ１３６、ＣＤ６２Ｐ、ＴＣＲαβ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ１ａ、ＩＴＧＢ７、ＣＤ１５４、ＣＤ７０、ＣＤｗ２１８ａ、ＣＤ１３７、ＣＤ４３、ＣＤ２７、ＣＤ６２Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３６、ＣＤ１５０、ＣＤ６６、ＣＤ２１２、ＣＤ１７７、ＣＤ１４２、ＣＤ１６７、ＣＤ３５２、ＣＤ４２ａ、ＣＤ３３６、ＣＤ２４４、ＣＤ２３、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ２２９、ＣＤ２００、ＣＤ２２、ＣＤＨ６、ＣＤ２８、ＣＤ１８、ＣＤ２１、ＣＤ３３５、ＣＤ１３１、ＣＤ３２、ＣＤ１５７、ＣＤ１６５、ＣＤ１０７ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ３３２、ＣＤ１８０、ＣＤ６５およびＣＤ２４の、１または複数を発現する。集団内の細胞の１％以下、例えば０．５％以下は、検出可能なレベルの任意の数および組み合わせのこれらのマーカーを発現し得る。集団内の細胞の１％以下、例えば０．５％以下は、好ましくは、検出可能なレベルの全てのこれらのマーカーを発現する。
【００８３】
特定のマーカーを発現する細胞の％に関して集団が定義される上記の任意の実施態様では、集団は、好ましくは、少なくとも５，０００の細胞、例えば少なくとも６，０００、少なくとも７，０００、少なくとも８，０００、少なくとも９，０００、少なくとも１０，０００、少なくとも２０，０００、少なくとも３０，０００または少なくとも４０，０００の細胞を含む。これらの集団は、上述した任意の数の細胞を含んでよい。
【００８４】
本明細書に開示される細胞の任意の集団は、使用前に他の細胞で希釈してよい。例えば、集団は、患者の血液、単核細胞（ＭＣ）、ＭＳＣ、中胚葉系列の前駆細胞（ＰＭＬ）またはそれらの組み合わせと、組み合わせてよい。ＰＭＬは、ＰＣＴ／ＧＢ２０１２／０５１６００（ＷＯ２０１３／００５０５３として公開）に開示されている。
【００８５】
本発明の集団は、以下に述べるように、治療に有利である。本発明のＩＭＰ細胞を大量に含む集団を生産するこの能力は、本発明の重要な利点の１つである。本発明は、細胞の集団を用いて患者の治療を可能にし、そのほとんどは（全てではないとしても）、目的の組織へ効率的に遊走して、そこで抗炎症性効果を有する。このことは、低い細胞投与量の使用を可能にし、非特異的な副作用および容量依存的な副作用を避ける。
【００８６】
本発明の集団は、好ましくは同質である。換言すれば、集団内の全てのＩＭＰ細胞は、好ましくは、遺伝子型および表現型が同一である。集団は、上記に定義したように、好ましくは自己由来または同種異系である。
【００８７】
しかしながら、集団は、半同種異系であってもよい。半同種異系の集団は、典型的に、集団が投与される患者と免疫学的に適合する２以上の患者由来の単核細胞から生産される。換言すれば、集団内の全ての細胞は、好ましくは、遺伝学的に同一であり、または、その集団が、集団が投与される患者と免疫学的に適合するように十分に遺伝学的に同一である。本発明のＩＭＰ細胞は患者由来であり得るので、それらは治療される患者にとって自己由来であり得る（すなわち、患者と遺伝学的に同一であり、または、それらが患者への投与に適合するように十分に遺伝学的に同一である）。
【００８８】
本発明の集団は、単離され、実質的に単離され、精製され、または実質的に精製され得る。集団は、任意の他の成分、例えば培養培地および他の細胞が完全に存在しない場合に、単離され、または精製されている。集団は、担体または希釈剤、例えば培養培地（その使用目的を妨げない）と混合されている場合に、実質的に単離されている。他の担体および希釈剤は、以下により詳細に述べられる。実質的に単離され、または実質的に精製された集団は、本発明のＩＭＰ細胞以外の細胞を含まない。一部の実施態様では、本発明の集団は、以下に述べるように、増殖マトリックス中に存在し得て、または表面上に固定化され得る。
【００８９】
集団は典型的に、インビトロで培養される。細胞を培養する技術は当業者によく知られている。細胞は、血清を含まない培地中で、３７℃、５％ＣＯ２の標準的な条件下で培養してよい。細胞は、好ましくは、以下により詳細に述べるように、低酸素条件下で培養される。細胞は、標準的な６ウェルプレートのような平板のウェルを含む任意の適切なフラスコまたは容器内で培養してよい。そのようなプレートは、Ｆｉｓｈｅｒ  ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＶＷＲ  ｓｕｐｐｌｉｅｒｓ、Ｎｕｎｃ、ＳｔａｒｓｔｅｄｔまたはＦａｌｃｏｎから市販される。ウェルは典型的に、約１ｍｌ〜約４ｍｌの容量を有する。
【００９０】
フラスコ、容器またはウェル（その中に集団が含まれ、または培養される）を変更して、ＩＭＰ細胞のハンドリングを促進し得る。例えば、増殖マトリックスを含むなどしてフラスコ、容器またはウェルを変更して、細胞の培養を促進し得る。フラスコ、容器またはウェルを変更して、ＩＭＰ細胞の付着を可能し、または表面上へのＩＭＰ細胞の固定化を可能にし得る。１または複数の表面は、細胞外マトリックスタンパク質、例えばラミニンまたはコラーゲン、または、細胞に結合して表面（単数または複数）上にそれらを固定化または捕捉する任意の他の捕捉分子でコーティングされ得る。
【００９１】
集団は、本明細書に記載の任意の技術を用いて、エクスビボで修飾してよい。例えば、集団は、治療薬または診断薬がトランスフェクトまたはロードされ得る。集団はそれから、以下により詳細に述べる治療方法において用いられ得る。
【００９２】
［本発明のＩＭＰ細胞を生産する方法］
また、本発明は、本発明の集団を生産する方法も提供する。当該方法は、単核細胞（ＭＣ）を、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導する条件下で培養するステップを含む。当該方法は、それから、検出可能なレベルの、ＭＩＣ  Ａ／Ｂ、ＣＤ３０４（ニューロピリン１）、ＣＤ１７８（ＦＡＳリガンド）、ＣＤ２８９（Ｔｏｌｌ様受容体９）、ＣＤ３６３（スフィンゴシン−１−リン酸受容体１）、ＣＤ９９、ＣＤ１８１（Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン受容体タイプ１；ＣＸＣＲ１）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）、ＣＸＣＲ２およびＣＤ１２６を発現するＩＭＰ細胞を採取し、培養するステップを含む。採取した細胞は、検出可能なレベルの、または増加した量の、本発明の細胞に関して上述した任意のマーカーおよび因子を発現し得る。
【００９３】
単核細胞（ＭＣ）およびそれらを単離する方法は、当技術分野で知られている。ＭＣは、骨髄から単離される初期の（ｐｒｉｍａｒｙ）ＭＣであってよい。ＭＣは、好ましくは末梢血ＭＣ（ＰＢＭＣ）、例えば、リンパ球、単球および／またはマクロファージである。ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ（登録商標）などの親水性多糖類を用いて、血液から単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、実施例に開示されるように、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（登録商標）（市販の密度培地）を用いて血液から単離され得る。
【００９４】
培養する前に、ＭＣを、間葉系幹細胞エンリッチメントカクテルに曝してよい。カクテルは、好ましくは、ＣＤ３、ＣＤ１４、ＣＤ１９、ＣＤ３８、ＣＤ６６ｂ（不要な細胞上に存在する）を認識する抗体および赤血球の成分を含む。そのようなカクテルは、不要な細胞を赤血球と架橋させてイムノロゼット（ｉｍｍｕｎｏｒｏｓｅｔｔｅ）を形成し、それは必要なＭＣから除去され得る。好ましいカクテルはＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（登録商標）である。
【００９５】
ＭＣが間葉系細胞（主に中胚葉に由来する組織）へ分化するのを誘導する適切な条件は、当技術分野で知られている。例えば、適切な条件は、Ｃａｐｅｌｌｉ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．（Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｔｅｌｅｔ  ｌｙｓａｔｅ  ａｌｌｏｗｓ  ｅｘｐａｎｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｇｒａｄｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｆｒｏｍ  ｓｍａｌｌ  ｓａｍｐｌｅｓ  ｏｆ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ａｓｐｉｒａｔｅｓ  ｏｒ  ｍａｒｒｏｗ  ｆｉｌｔｅｒ  ｗａｓｈｏｕｔｓ．Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，２００７．４０：ｐ．７８５−７９１）に開示される。これらの条件を用いて、本発明のとおりにＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導してもよい。
【００９６】
当該方法は、好ましくは、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導するために、ＭＣを血漿溶解物とともに培養するステップを含む。血小板溶解物とは、血小板に含まれる天然の成長因子の組み合わせ（これらの血小板の溶解により放出されたもの）をいう。溶解は、化学的手段（すなわちＣａＣｌ２）、浸透圧的手段（蒸留Ｈ２Ｏの使用）を介して、または、凍結／融解の手順を介して、達成することができる。血小板溶解物は、米国特許第５，１９８，３５７号に記載のとおりに、全血から得ることができる。血小板溶解物は、好ましくは、ＰＣＴ／ＧＢ１２／０５２９１１（ＷＯ２０１３／０７６５０７として公開）に記載のとおりに調製される。血漿溶解物は、好ましくはヒト血漿溶解物である。
【００９７】
好ましい実施態様では、本発明の方法のステップ（ａ）は、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導するために、血小板溶解物を含む培地中で十分な時間、ＭＣを培養するステップを含む。十分な時間は、典型的に、約１５〜約２５日、好ましくは、約２２日である。培地は、好ましくは、約２０％以下（体積）、例えば約１５％以下（体積）、または約１０％以下（体積）の血小板溶解物を含む。培地は、好ましくは、約５％〜約２０％（体積）、例えば約１０％〜約１５％（体積）の血小板溶解物を含む。培地は、好ましくは、約１０％（体積）の血小板溶解物を含む。
【００９８】
別の好ましい実施態様では、本発明の方法のステップ（ａ）は、ＭＣを間葉性エンリッチメントカクテルに曝し、それから、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導するために、血小板溶解物を含む培地中で十分な時間、ＭＣを培養するステップを含む。十分な時間は、典型的に、約１５〜約２５日、好ましくは約２２日である。
【００９９】
ステップ（ａ）では、培地は、好ましくは最小必須培地（ＭＥＭ）である。ＭＥＭは、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈを含む様々な供給源から市販される。培地は、好ましくは、ヘパリン、Ｌ−グルタミンおよびペニシリン／ストレプトアビジン（Ｐ／Ｓ）の、１または複数をさらに含む。Ｌ−グルタミンは、ＧｌｕｔａＭＡＸ（登録商標）（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから市販される）と置き換えてよい。
【０１００】
上述したように、本発明のＩＭＰ細胞の一部は、検出可能なレベルのＣＸＣＲ４を発現する。ＣＸＣＲ４の発現はサイトカイン依存性であり、細胞が、幹細胞因子（ＳＣＦ）、インターロイキン−６（ＩＬ‐６）、Ｆｌｔ‐３リガンド、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）およびＩＬ‐３に曝されると増加する。培地は、（ｉ）ＳＣＦ、（ｉｉ）ＩＬ‐６、（ｉｉｉ）Ｆｌｔ‐３リガンド、（ｉｖ）肝細胞増殖因子および（ｖ）ＩＬ‐３、例えば、（ｉ）；（ｉｉ）；（ｉｉｉ）；（ｉｖ）；（ｖ）；（ｉ）および（ｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）および（ｖ）；（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｉｖ）；（ｉｉ）、（ｉｉｉ）および（ｖ）；（ｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）；または（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）、（ｉｖ）および（ｖ）の、１または複数を含んでよい。任意の（ｉ）〜（ｖ）は、約１０〜約１５０ｎｇ／ｍｌで存在してよい。
【０１０１】
ステップ（ａ）は、好ましくは、ＩＭＰ細胞が付着することを可能にする条件下でＭＣを培養するステップを含む。適切な条件は、上記でより詳細に述べられている。
【０１０２】
ステップ（ａ）では、ＭＣは、好ましくは、低酸素条件下で培養される。ＭＣは、好ましくは、約２０％未満の酸素（Ｏ２）、例えば約１９％未満、約１８％未満、約１７％未満、約１６％未満、約１５％未満、約１４％未満、約１３％未満、約１２％未満、約１１％未満、約１０％未満、約９％未満、約８％未満、約７％未満、約６％未満、約５％未満、約４％未満、約３％未満、約２％未満、または約１％未満の酸素（Ｏ２）において培養される。ＭＣは、好ましくは、約０％〜約１９％のＯ２、例えば約１％〜約１５％のＯ２、約２％〜約１０％のＯ２、または約５％〜約８％のＯ２において培養される。ＭＣは、最も好ましくは、約０％のＯ２において培養される。上記で見積もられた酸素の％（またはＯ２の％）に関する数字は、例えば細胞インキュベーターにより、培養中に細胞に供給されるガス中の酸素の％（体積）に関連する。一部の酸素は、インキュベーター内に漏れ得て、または、ドアーが開いているときに入り得ることが可能である。
【０１０３】
ステップ（ａ）では、ＭＣは、最も好ましくは、血小板溶解物の存在下および低酸素条件下で培養される。この組み合わせは、損傷組織内の自然な条件を模倣するので、より健康的かつより治療的に強力な細胞をもたらす。従来の細胞培養は、２０％または２１％酸素（およそ大気の含有量）で行われるが、ヒト体内に、この酸素レベルを有する場所はない。肺内の上皮細胞は、この酸素レベルを「見る」が、酸素が溶解して肺を去る時点で、１７％付近に減少する。それから、組織の大部分でさらにいっそう約１〜２％まで減少するが、関節内の軟骨のような無血管組織では０．１％という低さになる。
【０１０４】
ステップ（ｂ）では、当該方法は、上述の必須マーカー発現パターンを有するＩＭＰ細胞を採取し、培養するステップをさらに含む。必須マーカー発現パターンを有するＩＭＰ細胞は、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）および磁気ビーズ分離を含む任意の抗体に基づく技術を用いて採取され得る。ＦＡＣＳが好ましい。ＨＴ−ＦＡＣＳがより好ましい。
【０１０５】
ステップ（ａ）に関して開示されたＩＭＰ細胞を培養する任意の方法は、ステップ（ｂ）に同等に当てはまる。特に、ステップ（ｂ）において、細胞は、ステップ（ａ）に関して上述のように、血小板溶解物の存在下および低酸素条件下で培養される。
【０１０６】
上述から明らかなように、本発明の方法は、臨床関連の条件、すなわち、微量のエンドトキシンおよび他の環境汚染物質、例えば、リポ多糖、リポペプチドおよびペプチドグリカンなどの不存在下で行なわれる。このことは、本発明のＩＭＰ細胞を、患者への投与に特に適切にさせる。
【０１０７】
ＭＣは、好ましくは、患者または同種異系ドナーから得られる。また、本発明は、患者への投与に適切な本発明の集団を生産する方法を提供し、ここで、当該方法は、患者から得たＭＣを、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導する条件下で培養するステップ、および、（ｂ）上記で定義した発現パターンを有する前駆細胞を採取し、培養して、それにより、患者への投与に適切な本発明の集団を生産するステップ、を含む。集団は患者にとって自己由来であり、したがって、移植時に拒絶されない。また、本発明は、患者への投与に適切でありかつ当該方法で生産される、本発明の集団も提供する。
【０１０８】
あるいは、本発明は、患者への投与に適切な本発明の集団を生産する方法を提供し、ここで、当該方法は、細胞が投与される患者と免疫学的に適合する異なる患者から得られたＭＣを、ＭＣがＩＭＰ細胞へ分化するのを誘導する条件下で培養するステップ、および、（ｂ）上記で定義した発現パターンを有するＩＭＰ細胞を採取し、培養して、それにより、患者への投与に適切な本発明の集団を生産するステップ、を含む。集団は患者と同種異系であり、したがって、移植時の拒絶の機会を低減させる。また、本発明は、患者への投与に適切でありかつ当該方法で生産される、本発明の集団も提供する。
【０１０９】
［薬剤、方法および治療用途］
本発明のＩＭＰ細胞は、ヒトまたは動物の体の治療方法において使用され得る。したがって、本発明は、治療によるヒトまたは動物の体の治療方法での使用のための、本発明のＩＭＰ細胞または本発明の集団を提供する。特に、本発明は、患者における損傷組織を修復するための、本発明のＩＭＰ細胞または本発明の集団の使用に関する。また、本発明は、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療するための、本発明のＩＭＰ細胞または本発明の集団の使用にも関する。
【０１１０】
本発明は、本発明の集団を患者に投与し（ここで、集団は、治療的に効果的な数の細胞を含む）、それにより、患者における損傷組織を治療するステップを含む、患者における損傷組織を修復する方法を提供する。また、本発明は、患者における損傷組織の修復での使用のための、本発明の集団も提供する。また、本発明は、患者における損傷組織を修復するための薬剤の製造での、本発明の集団の使用も提供する。
【０１１１】
組織は、好ましくは中胚葉由来である。組織は、より好ましくは、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である。
【０１１２】
組織への損傷は、外傷または疾患に起因し得る。外傷または疾患は、好ましくは、患者における、心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患である。したがって、本発明は、本発明の集団を患者へ投与し（ここで、集団は、治療的に効果的な数の細胞を含む）、それにより、患者における外傷または疾患を治療するステップを含む、患者における心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療する方法を提供する。また、本発明は、患者における心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患の治療での使用のための、本発明の集団を提供する。また、本発明は、患者における心臓、骨、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の外傷または疾患を治療するための薬剤の製造での、本発明の集団の使用を提供する。
【０１１３】
心臓の外傷または疾患は、好ましくは、心筋梗塞（ＭＩ）、左室肥大、右室肥大、塞栓、心不全、先天性心臓欠損、心臓弁膜症、不整脈および心筋炎から選択される。
【０１１４】
ＭＩは、心筋により放出されるＶＥＧＦおよびＥＰＯのレベルを増加させる。さらに、ＭＩは、炎症性反応と関連し、および、梗塞組織は、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、インターロイキン（ＩＬ‐６）およびＫＣ／Ｇｒｏ‐αも放出する。ＣＣＬ７（以前はＭＣＰ３として知られる）、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ２は、心筋梗塞（ＭＩ）後に心臓内で著しく上方制御され、梗塞心筋へのＭＳＣのホーミングおよび生着の制御に関与し得る。
【０１１５】
心筋梗塞マウスモデルでは、ＩＬ‐８は、まず、ＭＩ後の最初の２日に遺伝子発現を高度に上方制御することが示された。驚くべきことに、ＩＬ‐８発現の増加は、主に、梗塞領域および境界域で生じ、残りの心筋ではよりいっそう低い程度であった。ＣＸＣＲ２を活性化することにより、ＭＩＦは、ケモカイン様の機能を示し、炎症性細胞動員およびアテローム発生の主なレギュレーターとして作用する。
【０１１６】
骨の疾患または外傷は、好ましくは、骨折、ソルター−ハリス骨折、若木骨折、骨棘、頭蓋骨癒合症、コフィン‐ローリー症候群、進行性骨化線維増殖症、線維性骨異形成症、フォング病（または爪膝蓋骨症候群）、低ホスファターゼ症、クリッペル・ファイル症候群、代謝性骨疾患、爪膝蓋骨症候群、変形性関節症、変形性骨炎（または骨パジェット病）、嚢胞性線維性骨炎（または線維性骨炎またはフォンレックリングハウゼン骨病）、恥骨骨炎、硬化性骨炎（ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ  ｏｓｔｅｉｔｉｓ）（または硬化性骨炎（ｏｓｔｅｉｔｉｓ  ｃｏｎｄｅｎｓａｎｓ））、硬化性腸骨炎、離断性骨軟骨炎、骨形成不全症、骨軟化症、骨髄炎、骨減少症、大理石骨病、骨粗鬆症、骨壊死、骨萎縮性骨化過剰症、原発性副甲状腺機能亢進症、腎性骨ジストロフィー、骨癌、転移性癌と関連する骨病変、ゴーハム・スタウト病、原発性副甲状腺機能亢進症、歯周病、および関節置換の無菌的弛緩から選択される。骨癌は、ユーイング肉腫、多発性骨髄腫、骨肉腫（骨の巨大な腫瘍）、骨軟骨腫または破骨細胞腫であり得る。骨病変をもたらす転移性癌は、乳癌、前立腺癌、腎臓癌、肺癌および／または成人Ｔ細胞白血病であり得る。
【０１１７】
損傷組織が心臓組織または骨組織である場合は、集団内のＩＭＰ細胞は、好ましくは、検出可能なレベルのＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ２７１、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２およびＣＸＣＲ４を発現し、検出可能なレベルのＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない。損傷組織が骨組織である場合は、集団内のＩＭＰ細胞は、より好ましくは、検出可能なレベルのＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５、ＣＤ２７１、ＴＧＦ−β３、骨形成タンパク質−６（ＢＭＰ−６）、ＳＯＸ−９、コラーゲン−２、ＣＤ１１７（ｃ−ｋｉｔ）、ケモカイン（Ｃ−Ｃモチーフ）リガンド１２（ＣＣＬ１２）、ＣＣＬ７、インターロイキン−８（ＩＬ−８）、血小板由来成長因子−Ａ（ＰＤＧＦ−Ａ）、ＰＤＧＦ−Ｂ、ＰＤＧＦ−Ｃ、ＰＤＧＦ−Ｄ、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、ＩＧＦ−１、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、ＰＤＧＦ−Ｒα、ＰＤＧＦ−Ｒβ、ＣＸＣＲ４、Ｃ−Ｃケモカイン受容体タイプ１（ＣＣＲ１）、ＩＧＦ−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）、肝細胞増殖因子受容体（ＨＧＦＲ）、ＣＸＣＬ１２およびＮＦκＢを発現し、検出可能なレベルのＣＤ１４、ＣＤ３４およびＣＤ４５を発現しない。
【０１１８】
疾患または障害は、歯周病、子宮内膜症または半月板断裂であり得る。
【０１１９】
全ての例において、本発明のＩＭＰ細胞は、好ましくは、患者または同種異系ドナー由来である。本発明のＩＭＰ細胞が患者に由来することは、患者の免疫系によってＩＭＰ細胞自体が拒絶されないことを確実にするであろう。ドナーとレシピエントとの間の任意の違いは最終的にＩＭＰ細胞のクリアランスをもたらすが、それらが損傷組織の少なくとも一部を修復する前ではない。
【０１２０】
本発明は、患者に、治療的に効果的な数の本発明のＩＭＰ細胞を、患者へ投与することに関する。治療的に効果的な数は、損傷、疾患または外傷の症状の１または複数を改善する数である。治療的に効果的な数は、好ましくは、損傷組織を修復する、または疾患または外傷を治療する数である。適切な数は、以下により詳細に述べられる。
【０１２１】
本発明のＩＭＰ細胞は、任意の適切な患者へ投与し得る。患者は一般にヒト患者である。患者は、ＩＭＰ細胞の由来に関して上述した任意の動物または哺乳類であり得る。
【０１２２】
患者は、幼児、子どもまたは成人であってよい。患者は、損傷組織を有することが知られていてよく、または、損傷組織を有する疑いがある。患者は、関連のある疾患または外傷を起こしやすくてよく、またはそのリスクがあってよい。例えば、患者は、遺伝学的に心不全に罹りやすくてよい。
【０１２３】
本発明は、損傷組織を修復する、または疼痛緩和を提供する、他の手段および物質と組み合わせて用いてよい。ある場合には、本発明のＩＭＰ細胞は、損傷組織を修復する、または疼痛緩和を提供することを目的とする他の物質と、同時に、連続して、または別々に投与してよい。ＩＭＰ細胞は、損傷組織のための既存の治療と組み合わせて用いてよく、例えば、そのような治療と単純にミックスしてよい。したがって、本発明は、損傷組織の既存の治療の有効性を増大させるために用いてよい。
【０１２４】
本発明は、好ましくは、治療薬および／または診断薬がロードまたはトランスフェクトされたＩＭＰ細胞の使用に関する。治療薬は、損傷組織を修復するのを助け得る。蛍光分子のような診断薬は、患者におけるＩＭＰ細胞の位置を特定するのを助け得る。ＩＭＰ細胞は、当技術分野で知られている任意の方法を用いてロードまたはトランスフェクトされ得る。ＩＭＰ細胞のローディングは、インビトロまたはエクスビボで行なわれ得る。それぞれの場合において、ＩＭＰ細胞は、培養物中で薬剤と単純に接触され得る。あるいは、ＩＭＰ細胞は、リポソームのような送達ビヒクルを用いて、薬剤がロードされ得る。そのようなビヒクルは、当技術分野で知られている。
【０１２５】
ＩＭＰ細胞のトランスフェクションは、インビトロまたはエクスビボで行なわれ得る。あるいは、安定したトランスフェクションは、ＭＣ段階で行なわれ得て、導入遺伝子を発現するＩＭＰ細胞がそれらから分化するのを可能にする。ＩＭＰ細胞は、薬剤をコードする核酸とともにトランスフェクトされる。例えば、薬剤をコードするウイルス粒子または他のベクターが用いられ得る。これを行なう方法は、当技術分野で知られている。
【０１２６】
核酸は、ＩＭＰ細胞内で薬剤の発現を生じさせる。核酸分子は、好ましくは、薬剤をコードする配列に作動可能に連結されかつＩＭＰ細胞内で活性のプロモーター、または、ＩＭＰ細胞において誘導され得るプロモーターを含む。
【０１２７】
特に好ましい実施態様では、薬剤をコードする核酸は、ウイルス粒子を介して送達され得る。ウイルス粒子は、効率的なトランスフェクションを確実にするための標的化分子を含み得る。標的化分子は、典型的に、その分子がウイルスをＩＭＰ細胞に対して標的化することができるように、ウイルスの表面上に全体的または部分的に与えられる。
【０１２８】
任意の適切なウイルスがそのような実施態様において用いられ得る。ウイルスは、例えば、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイルスまたは単純ヘルペスウイルスであってよい。特に好ましい実施態様では、ウイルスはレンチウイルスであってよい。レンチウイルスは、遺伝子の送達での使用に適切な修飾ＨＩＶウイルスであってよい。レンチウイルスは、ＳＩＶ、ＦＩＶ、またはウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＱＩＡ）に基づくベクターであってよい。ウイルスは、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭＭＬＶ）であってよい。本発明で用いられるウイルスは、好ましくは複製欠損型である。
【０１２９】
ウイルス粒子を使用する必要はない。従来のプラスミドＤＮＡまたはＲＮＡトランスフェクションなど、本発明のＩＭＰ細胞をトランスフェクトすることが可能な任意のベクターを用いてよい。
【０１３０】
核酸構築物の取り込みは、トランスフェクション剤の使用などを含む様々な公知のトランスフェクション技術により増強され得る。これらの試薬の例は、カチオン剤、例えば、リン酸カルシウムおよびＤＥＡＥ−デキストラン、および、リポフェクタント（ｌｉｐｏｆｅｃｔａｎｔ）、例えば、リポフェクタミン（ｌｉｐｏｆｅｃｔＡｍｉｎｅ）、フュージーン（ｆｕｇｅｎｅ）およびトランスフェクタム（ｔｒａｎｓｆｅｃｔａｍ）を含む。
【０１３１】
細胞は、適切な条件下でロードまたはトランスフェクトされ得る。細胞および薬剤またはベクターは、例えば、５分〜１０日間、好ましく１時間〜５日間、より好ましくは５時間〜２日間、さらにより好ましくは１２時間〜１日、接触してよい。
【０１３２】
また、本発明は、上述の薬剤がロードまたはトランスフェクトされているＩＭＰ細胞も提供する。そのようなＩＭＰ細胞は、本発明の治療的実施態様において用いられ得る。
【０１３３】
一部の実施態様では、ＭＣは、患者から回収され、本発明を用いてＩＭＰ細胞に変換され、インビトロでロードまたはトランスフェクトされ、それから、同一の患者へ戻し得る。そのような例では、本発明で用いられるＩＭＰ細胞は自己由来の細胞であり、患者と完全に一致する。好ましい例では、本発明で用いられる細胞は、患者から回収されて、エクスビボで使用され、その後に同一の患者へ戻される。
【０１３４】
［医薬組成物および投与］
本発明は、本発明のＩＭＰ細胞または本発明の集団を、薬学的に許容できる担体または希釈剤、（ｉｉ）１または複数のリポソーム、および／または、（ｉｉｉ）１または複数のマイクロバブルと組み合わせて含む、医薬組成物をさらに提供する。その組成物は、（ｉ）；（ｉｉ）；（ｉｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉ）；（ｉ）および（ｉｉｉ）；（ｉｉ）および（ｉｉｉ）；または（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）を含み得る。ＩＭＰ細胞または集団は、好ましくは、１または複数のリポソームおよび／または１または複数のマイクロバブルとともに含まれ得る。任意の数のリポソームおよび／またはマイクロバブルが存在し得る。本発明の集団に関して上述した任意の数が、リポソームおよび／またはマイクロバブルに同等に当てはまる。リポソームまたはマイクロバブルは、１のＩＭＰ細胞または１よりも多いＩＭＰ細胞を含み得る。
【０１３５】
組成物は、本明細書で述べた任意のＩＭＰ細胞または集団を含んでよく、一部の実施態様では、本明細書に記載の核酸分子、ベクター、またはウイルスを含んでよい。本発明は、有効量の本発明の医薬組成物を患者へ投与するステップを含む、患者における損傷組織を修復する方法を提供する。上述した任意の治療的実施態様は、本実施態様に同等に当てはまる。
【０１３６】
本発明の様々な組成物は、任意の適切な方法を用いて製剤化され得る。標準的な薬学的に許容できる担体および／または賦形剤を用いた細胞の製剤化は、調剤分野における常法を用いて行なってよい。製剤の厳密な性質は、投与される細胞および所望の投与経路を含む様々な因子に依存する。適切な製剤のタイプは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡに完全に記載されている。
【０１３７】
細胞は、任意の経路により投与され得る。適切な経路は、限定されないが、静脈内、筋肉内、腹腔内または他の適切な投与経路を含む。損傷組織が心臓組織である場合は、細胞は、心内膜心筋、心筋上（ｅｐｉｍｙｏｃａｒｄｉａｌ）、心室内、冠動脈内、逆行性冠状静脈洞、動脈内、心膜内または静脈内の経路を介して投与され得る。損傷組織が骨である場合は、細胞は、骨内経路を介して、または、骨折のような外傷、または疾患の部位へ、投与され得る。損傷組織が、軟骨、腱、靭帯、肝臓、腎臓または肺の組織である場合は、細胞は、その組織へ直接投与され得る。損傷組織が肺の組織である場合は、細胞は、肺内の経路を介して導入され得る。損傷組織が肝臓または腎臓である場合は、細胞は、腹膜内の経路を介して導入され得る。細胞は、好ましくは静脈内に投与される。
【０１３８】
組成物は、生理的に許容できる担体または希釈剤とともに調製され得る。典型的に、そのような組成物は、細胞の液体懸濁液として調製される。細胞は、薬学的に許容できかつ活性成分と適合する賦形剤とともに混合され得る。適切な賦形剤は、例えば、水、生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール等およびそれらの組み合わせである。
【０１３９】
さらに、必要に応じて、本発明の医薬組成物は、少量の補助物質、例えば、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、および／または有効性を高めるアジュバントを含み得る。組成物は、好ましくは、ヒト血清アルブミンを含む。
【０１４０】
適切な担体または希釈剤の１つは、Ｐｌａｓｍａ−Ｌｙｔｅ  Ａ（登録商標）である。これは、静脈内投与のための、滅菌の、非発熱性の等張液である。各１００ｍＬは、５２６ｍｇの塩化ナトリウム、ＵＳＰ（ＮａＣｌ）；５０２ｍｇのグルコン酸ナトリウム（Ｃ６Ｈ１１ＮａＯ７）；３６８ｍｇの酢酸ナトリウム三水和物、ＵＳＰ（Ｃ２Ｈ３ＮａＯ２・３Ｈ２Ｏ）；３７ｍｇの塩化カリウム、ＵＳＰ（ＫＣｌ）；および３０ｍｇの塩化マグネシウム、ＵＳＰ（ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ）を含む。それは抗菌剤を含まない。ｐＨは水酸化ナトリウムを用いて調整される。ｐＨは７．４（６．５〜８．０）である。
【０１４１】
ＩＭＰ細胞は、１または複数のリポソームおよび／または１または複数のマイクロバブル内に含まれ得る。適切なリポソームは、当技術分野で知られている。適切なリポソームは、例えば、Ａｋｂａｒｚａｄｅｈ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｎｏｓｃａｌｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１３，８：１０２  ａｎｄ  Ｍｅｇｈａｎａ  ｅｔ  ａｌ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  Ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１２，１（１）：１−１０に開示される。リポソームの形成での使用に適切な脂質を、マイクロバブルに関して以下に述べる。
【０１４２】
マイクロバブル、それらの形成および生体医学的使用は、当技術分野で知られている（例えばＳｉｒｓｉ  ａｎｄ  Ｂｏｒｄｅｎ，Ｂｕｂｂｌｅ  Ｓｃｉ  Ｅｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．Ｎｏｖ  ２００９；１（１−２）：３−１７）。マイクロバブルは、直径が１ミリメートルより小さく、直径が１マイクロメートルよりも大きいバブルである。本発明で用いられるマイクロバブルは、好ましくは、直径が８μｍ以下、例えば直径が７μｍ以下、直径が６μｍ以下、直径が５μｍ以下、直径が４μｍ以下、直径が３μｍ以下、または直径が２μｍ以下である。
【０１４３】
マイクロバブルは、任意の物質から形成され得る。マイクロバブルの一般的な組成は、シェルにより安定化されたガスコアである。ガスコアは、空気または重いガス、例えばパーフルオロカーボン、窒素またはパーフルオロプロパン（ｐｅｒｆｌｏｕｒｏｐｒｏｐａｎｅ）を含み得る。重いガスは、水可溶性が低いので、マイクロバブルから漏出してマイクロバブルの溶解をもたらす可能性が低い。重いガスコアを有するマイクロバブルは、典型的に、循環において、より長持ちする。
【０１４４】
シェルは、任意の材料から形成され得る。シェル材料は、好ましくは、タンパク質、界面活性剤、脂質、ポリマーまたはそれらの混合物を含む。
【０１４５】
適切なタンパク質は、限定されないが、アルブミン、リゾチームおよびアビジンを含む。シェル内のタンパク質は、例えばシステイン−システイン結合により、化学的に架橋され得る。他の架橋は当技術分野で知られている。
【０１４６】
適切な界面活性剤は、限定されないが、ソルビタンモノパルミテート（ＳＰＡＮ−４０など）、ポリソルベート洗浄剤（ＴＷＥＥＮ−４０など）、ＳＰＡＮ−４０およびＴＷＥＥＮ−４０の混合物、およびスクロースステアリン酸（モノ−およびジ−エステル）を含む。
【０１４７】
適切なポリマーは、限定されないが、アルギネートポリマー、エチリデンの二重エステルポリマー、共重合体ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）、ポリ（ビニルアルコール）（ＰＶＡ）、共重合体ポリパーフルオロオクチルオキシカルボニル（ｐｏｌｙｐｅｒｆｌｕｏｒｏｏｃｔｙｌｏｘｙｃａｒｏｎｙｌ）−ポリ（乳酸）（ＰＬＡ−ＰＦＯ）および他のブロック共重合体を含む。ブロック共重合体は、２以上のモノマーのサブユニットが共に重合されて単一のポリマー鎖を作る、ポリマー材料である。ブロック共重合体は、典型的に、それぞれのモノマーサブユニットにより与えられる特性を有する。しかしながら、ブロック共重合体は、個々のサブユニットから形成されるポリマーが保有しない独特の特性を有し得る。ブロック共重合体は、水性培地中で、モノマーサブユニットの１つが疎水性（すなわち脂溶性）であり、一方で、他方のサブユニット（単数または複数）が親水性であるように改変することができる。この場合、ブロック共重合体は、両親媒性の特性を有し得て、生物学的な膜を模倣する構造を形成し得る。ブロック共重合体は、ジブロック（２つのモノマーサブユニットからなる）であり得るが、２個よりも多いモノマーサブユニットからも作られ、両親媒性物質（ａｍｐｈｉｐｉｌｅ）として振る舞う、より複雑な配置を形成し得る。共重合体は、トリブロック、テトラブロックまたはペンタブロック共重合体であり得る。また、ブロック共重合体は、脂質サブ材料として分類されないサブユニットから作られてもよく；例えば、疎水性ポリマーは、シロキサンまたは他の非炭化水素系モノマーから作られ得る。また、ブロック共重合体の親水性のサブ部分は、低いタンパク質結合特性を有してもよく、このことは、生の生物学的サンプルに曝された場合に抵抗性が高い膜の形成を可能にする。この頭部基ユニットは、非古典的な脂質頭部基からも生じ得る。
【０１４８】
マイクロバブルを形成する任意の脂質材料が用いられ得る。脂質組成は、マイクロバブルが、表面電荷、充填密度または機械的特性などの必要な特性を有するように選択する。脂質組成は、１または複数の異なる脂質を含むことができる。例えば、脂質組成は、１００までの脂質を含むことができる。脂質組成は、好ましくは１〜１０の脂質を含む。脂質組成は、天然起源の脂質および／または人工の脂質を含んでよい。
【０１４９】
脂質は典型的に、頭部基、界面部分、および、同一または異なってよい２つの疎水性尾部基を含む。適切な頭部基は、限定されないが、中性頭部基、例えばジアシルグリセリド（ＤＧ）およびセラミド（ＣＭ）；双性イオン性頭部基、例えばホスファチジルコリン（ＰＣ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）およびスフィンゴミエリン（ＳＭ）；負に帯電した頭部基、例えばホスファチジルグリセロール（ＰＧ）；ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）、リン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ  ａｃｉｄ）（ＰＡ）およびカルジオリピン（ＣＡ）；および正に帯電した頭部基、例えばトリメチルアンモニウム−プロパン（ＴＡＰ）を含む。適切な界面部分は、限定されないが、天然起源の界面部分、例えばグリセロール系またはセラミド系の部分を含む。適切な疎水性尾部基は、限定されないが、飽和炭化水素鎖、例えばラウリン酸（ｎ−ドデカン酸）、ミリスチン酸（ｎ−テトラデカン酸）、パルミチン酸（ｎ−ヘキサデカン酸）、ステアリン酸（ｎ−オクタデカン）およびアラキジン（ｎ−エイコサン）；不飽和炭化水素鎖、例えばオレイン酸（シス−９−オクタデカン）；および分岐炭化水素鎖、例えばフィタノイルを含む。鎖の長さ、および、不飽和炭化水素鎖中の二重結合の位置および数は、変更することができる。鎖の長さ、および、分岐炭化水素鎖中の分岐の位置および数（例えばメチル基）は、変更することができる。疎水性尾部基は、エーテルまたはエステルとして界面部分に結合することができる。
【０１５０】
また、脂質は、化学的に修飾することもできる。脂質の頭部基または尾部基は、化学的に修飾することができる。頭部基が化学的に修飾されている適切な脂質は、限定されないが、ＰＥＧ修飾脂質、例えば１，２−ジアシル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−［メトキシ（ポリエチレングリコール）−２０００］；官能性ＰＥＧ脂質、例えば１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３ホスホエタノールアミン−Ｎ−［ビオチニル（ポリエチレングリコール）２０００］；および、結合のために修飾された脂質、例えば１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（スクシニル）および１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（ビオチニル）を含む。尾部基が化学的に修飾されている適切な脂質は、限定されないが、重合性脂質、例えば１，２−ビス（１０，１２−トリコサジイノイル（ｔｒｉｃｏｓａｄｉｙｎｏｙｌ））−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；フッ素化脂質、例えば１−パルミトイル−２−（１６−フルオロパルミトイル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；重水素化脂質、例えば１，２−ジパルミトイル−Ｄ６２−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；および、エーテル結合脂質、例えば１，２−ジ−Ｏ−フィタニル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリンを含む。上述のように、脂質は、化学的に修飾され、または官能化され、リガンド、受容体または抗体の結合を促進し得る。
【０１５１】
脂質組成は、マイクロバブルの特性に影響する１または複数の添加剤を含み得る。適切な添加剤は、限定されないが、脂肪酸、例えばパルミチン酸、ミリスチン酸およびオレイン酸；脂肪族アルコール、例えばパルミチンアルコール、ミリスチンアルコールおよびオレインアルコール；ステロール類、例えばコレステロール、エルゴステロール、ラノステロール、シトステロールおよびスチグマステロール；リゾリン脂質、例えば１−アシル−２−ヒドロキシ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；およびセラミド類を含む。
【０１５２】
マイクロバブルシェルは、好ましくはリン脂質から形成される。適切なリン脂質は当技術分野で知られている。
【０１５３】
Ｄｅｆｉｎｉｔｙ（Ｌａｎｔｈｅｕｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ）およびＳｏｎｏｖｕｅ（登録商標）（Ｂｒａｃｃｏ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）などの、様々な市販の脂質シェルマイクロバブル製剤が存在する。
【０１５４】
マイクロバブルは、予め形成されたマイクロバブル上に高分子電解質多層（ＰＥＭ）シェルを形成することを含むポリマー−界面活性剤複合型からも形成され得る。予め形成されたマイクロバブルは、帯電した界面活性剤またはタンパク質層で覆われ、それは、ＰＥＭ沈着のための基質として働く。多層集合の技術を用いて、逆に帯電したポリイオンをマイクロバブルシェルに連続して吸着させる。例えば、ＰＥＭは、ポリ（アリルアミンハイドロクロライド）（ＰＡＨ）およびポリ（スチレンスルホナート）（ＰＳＳ）をポリイオンペアに用いて、マイクロバブル上に沈着することができる。カチオン性頭部基トリメチルアンモニウムプロパン（ＴＡＰ）を下層シェルとして、および、ＤＮＡとポリ（Ｌ−リジン）（ＰＬＬ）をポリイオンペアとして含む、リン脂質を有するＰＥＭマイクロバブルも開発されている。
【０１５５】
マイクロバブルは典型的に、ガスとマイクロバブルシェル材料との間の界面を与えることにより形成される。上述した任意の材料を用いてよい。リン脂質などの一部の材料は、自然発生的にマイクロバブルを形成する。リン脂質は、マイクロバブルへセルフアセンブルする。他の材料は、界面のソニケーション、すなわち界面に対する音波または音エネルギーの適用を必要とする。超音波が典型的に用いられる。適切な方法は、ソニケーションに関する分野で知られている。
【０１５６】
マイクロバブルは、マイクロバブルの形成後またはマイクロバブルの形成中に、ＩＭＰ細胞がロードされ得る。
【０１５７】
ＩＭＰ細胞は、投与製剤と適合する方法で、かつ、治療的に効果的な量で投与される。投与される量は、治療される対象、対象の免疫系の能力、および所望の修復の度合いに依存する。投与が必要とされるＩＭＰ細胞の正確な量は、熟練者の判断に依存してよく、各対象に特有であってよい。
【０１５８】
任意の適切な数の細胞を対象に投与してよい。例えば、患者のｋｇあたり、少なくとも、または約、０．２×１０６、０．２５×１０６、０．５×１０６、１．５×１０６、４．０×１０６または５．０×１０６の細胞が投与され得る。例えば、少なくとも、または約、１０５、１０６、１０７、１０８、１０９の細胞が投与され得る。目安として、投与される本発明の細胞の数は、１０５〜１０９、好ましくは１０６〜１０８であり得る。典型的に、２×１０８までのＩＭＰ細胞が、各患者に投与される。本発明の集団に関して上述した任意の特定の数が投与され得る。細胞が投与され、または存在するような場合は、培養培地は、細胞の生存を促進するために存在してよい。ある場合には、本発明の細胞は、凍結アリコートで与えられてよく、ＤＭＳＯのような物質が、凍結中の生存を促進するために存在してよい。そのような凍結細胞は、典型的に解凍され、それから、維持または投与のいずれかのために、バッファーまたは培地中に置かれる。
【０１５９】
［複合型組成物］
１または複数の本発明のＩＭＰ細胞は、本出願と同時出願のＵＫ出願（ＣＴＬ  Ｒｅｆ：ＦＩＢＲＥ１）に開示されるように、複合型組成物の一部を形成し得て、好ましくは、そのような組成物の一部として患者へ投与される。特に、本発明は：
（ａ）１または複数の生体適合性繊維；
（ｂ）１または複数の本発明のＩＭＰ細胞；および、
（ｃ）（ｉ）１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させ、および／または、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込む、および／または、（ｉｉ）組成物を組織に付着させることが可能な、１または複数の生体適合性成分、
を含む、複合型組成物を提供する。
【０１６０】
本発明の複合型組成物は、１または複数の生体適合性繊維を含む。繊維は、損傷組織と接触したときに、いかなる有害反応または副作用をも生じさせない場合に、生体適合性である。
【０１６１】
組成物中に任意の数の生体適合性繊維が存在してよい。組成物は、１の繊維のみを含んでよい。組成物は典型的に、１よりも多い繊維、例えば少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００、少なくとも２００、少なくとも５００の繊維、少なくとも１０００の繊維、またはさらにより多くの繊維を含む。
【０１６２】
適切な生体適合性繊維は、当技術分野で知られている。１または複数の生体適合性繊維は、天然または合成であってよい。好ましい生体適合性繊維は、限定されないが、セルロース繊維、コラーゲン繊維、コラーゲン−グリコサミノグリカン繊維、ゼラチン繊維、絹フィブロイン繊維、１または複数のフィブリン繊維、キトサン繊維、スターチ繊維、アルギン酸繊維、ヒアルロン酸繊維、ポロキサマー（ｐｏｌｏａｘｍｅｒ）繊維またはそれらの組み合わせを含む。グリコサミノグリカンは、好ましくはコンドロイチンである。セルロースは、好ましくはカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはメチルセルロースである。ポロキサマーは、好ましくはプルロニック酸、場合によりＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７である。
【０１６３】
組成物中に１よりも多い繊維が存在する場合は、繊維の集団は同質であり得る。換言すれば、集団内の全ての繊維が同一タイプの繊維、例えばセルロース繊維であり得る。あるいは、繊維の集団は異質であり得る。換言すれば、繊維の集団は、異なるタイプの繊維、例えばセルロース繊維およびコラーゲン繊維を含み得る。
【０１６４】
１または複数の繊維は、任意の長さであってよい。１または複数の繊維は、好ましくは、組成物を用いて治療される組織内の損傷の深さとほぼ同じ長さである。１または複数の繊維の長さは、好ましくは、組成物が損傷組織を所定の深さまで突き抜けることができるように設計される。１または複数の繊維は、任意の長さであってよい。１または複数の繊維の長さの下限は、典型的に、１または複数の治療的細胞の直径により決定される。適切な長さは、限定されないが、少なくとも１μｍの長さ、少なくとも１０μｍの長さ、少なくとも１００μｍの長さ、少なくとも５００μｍの長さ、少なくとも１ｍｍの長さ、少なくとも１０ｍｍ（１ｃｍ）の長さ、少なくとも１００ｍｍ（１０ｃｍ）の長さ、少なくとも５００ｍｍ（５０ｃｍ）の長さ、または少なくとも１０００ｍｍ（１００ｃｍまたは１ｍ）の長さを含む。１または複数の繊維は、さらにより長くてよい。例えば、１または複数の繊維は、例えばヒト腸管に沿った損傷を修復するために用いられる場合は５ｍまたは１０ｍまでの長さであってよく、または、ウマなどのより大きな動物で用いられる場合はさらにより長い。１または複数の繊維の長さは、典型的に、それらの使用目的、および／または、例えば外科医による、ロボットによる、または磁性のような一部の他の手段を介した、取り扱われるそれらの能力により、決定される。
【０１６５】
１または複数の繊維は、帯電してよい。１または複数の繊維は、好ましくは正に帯電している。１または複数の繊維は、好ましくは負に帯電している。
【０１６６】
１または複数の繊維は磁性であってよい。１または複数の繊維は、１または複数の磁性原子または磁性基を含むように修飾してよい。このことは、組成物の磁性標的化を可能にする。磁性原子または磁性基は、常磁性または超常磁性であってよい。適切な原子または基は、限定されないが、金原子、鉄原子、コバルト原子、ニッケル原子、および、任意のこれらの原子を含む金属キレート基（ニトリロ三酢酸など）を含む。金属キレート基は、例えば、Ｃ（＝Ｏ）Ｏ−、−Ｃ−Ｏ−Ｃ−、−Ｃ（＝Ｏ）、−ＮＨ−、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ２−Ｉ、−Ｓ（＝Ｏ）２−および−Ｓ−から選択される基を含んでよい。
【０１６７】
また、組成物は、１または複数の生体適合性成分も含む。１または複数の生体適合性成分は、（ｉ）１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させる、および／または、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込む、および／または、（ｉｉ）組成物を組織に付着させることが可能である。１または複数の生体適合性成分は、以下であってよい。（ａ）１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させる、（ｂ）１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込む、（ｃ）組成物を組織に付着させることが可能である、（ｄ）１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させ、かつ、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込む、（ｅ）１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させ、かつ、組成物を組織に付着させることが可能である、（ｆ）１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込み、かつ、組成物を組織に付着させることが可能である、または、（ｇ）１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させ、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込み、かつ、組成物を組織に付着させることが可能である。
【０１６８】
成分は、損傷組織と接触したときにいかなる有害反応または副作用をも生じない場合に、生体適合性である。
【０１６９】
任意の数の生体適合性成分が、組成物中に存在してよい。組成物は典型的に、１のみの成分または２の成分を含む。組成物は、２よりも多い成分、例えば少なくとも３、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０の成分、またはさらにより多くの成分を含んでよい。
【０１７０】
１または複数の生体適合性成分は、好ましくは、１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させる生体適合性接着剤を含む。生体適合性接着剤は、１または複数の治療的細胞を、（ａ）１または複数の繊維の表面上に、（ｂ）１または複数の繊維の内部に、または、（ｃ）１または複数の繊維の表面上および内部の両方に、付着させ得る。
【０１７１】
生体適合性接着剤は、天然または合成であってよい。適切な生体適合性接着剤は、当技術分野で知られている。適切な接着剤は、限定されないが、フィブリン、フィブリンゲル、インテグリン、インテグリンゲル、カドヘリンおよびカドヘリンゲルを含む。
【０１７２】
１または複数の生体適合性成分は、好ましくは、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込む生体適合性ゲルを含む。適切な生体適合性ゲルは、当技術分野で知られている。生体適合性ゲルは、天然または合成であってよい。好ましい生体適合性ゲルは、限定されないが、セルロースゲル、コラーゲンゲル、ゼラチンゲル、フィブリンゲル、キトサンゲル、スターチゲル、アルギン酸ゲル、ヒアルロン酸ゲル、アガロースゲル、ポロキサマーゲルまたはそれらの組み合わせを含む。
【０１７３】
セルロースゲルは、上述した任意のセルロースから形成され得る。セルロースポリマー濃度は、好ましくは、約１．５％（ｗ／ｗ）〜約４．０％（ｗ／ｗ）、例えば約２．０％（ｗ／ｗ）〜約３．０％（ｗ／ｗ）である。セルロースポリマーは、好ましくは、約４５０，０００〜約４，０００，０００、例えば約５００，０００〜約３，５００，０００、約５００，０００〜約３，０００，０００または約７５０，０００〜約２，５００，０００または約１０００，０００〜約２，０００，０００の分子量を有する。
【０１７４】
ポロキサマーゲルは、好ましくはプルロニック酸ゲル、場合によりＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−１２７ゲルである。
【０１７５】
接着剤および／またはゲルは、好ましくは、室温で１０００〜５００，０００ｍＰａ・ｓ（ｃｐｓ）の範囲内の粘度、例えば、室温で約１５００〜約４５０，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約２０００〜約４００，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約２５００〜約３５０，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約５０００〜約３００，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約１０，０００〜約２５０，０００ｍＰａ・ｓ、室温で約５０，０００〜約２００，０００ｍＰａ・ｓ、または、室温で約５０，０００〜約１５０，０００ｍＰａ・ｓの粘度を有する。
【０１７６】
粘度は、接着剤および／またはゲルが、剪断応力または引張応力のいずれかによって変形される耐性の尺度である。粘度は、当技術分野で知られている任意の方法を用いて測定することができる。適切な方法は、限定されないが、粘度計またはレオメータの使用を含む。
【０１７７】
室温は、典型的に、約１８℃〜約２５℃、例えば、約１９℃〜約２４℃、または、約２０℃〜約２３℃、または、約２１℃〜約２２℃である。室温は、好ましくは、１８℃、１９℃、２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃および２５℃のいずれかである。粘度は、最も好ましくは２５℃で測定される。
【０１７８】
１または複数の生体適合性成分は、好ましくは、１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させる生体適合性接着剤、および、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込む生体適合性ゲルを含む。例えば、組成物は、１または複数の治療的細胞を１または複数の繊維に付着させるフィブリンゲル、および、１または複数の治療的細胞および１または複数の繊維を埋め込むセルロースゲルを含んでよい。
【０１７９】
任意の上述した実施態様では、生体適合性接着剤および／または生体適合性ゲルは、好ましくは血小板溶解物を含む。例えば、接着剤および／またはゲルは、血小板溶解物ゲルであってよい。血小板溶解物とは、血小板に含まれる天然の成長因子の組み合わせ（これらの血小板の溶解により放出されたもの）をいう。溶解は、化学的手段（すなわちＣａＣｌ２）、浸透圧的手段（蒸留Ｈ２Ｏの使用）、または凍結／融解手順により、達成することができる。血小板溶解物は、米国特許第５，１９８，３５７号に記載のように、全血から得ることができる。血小板溶解物は、好ましくは、ＰＣＴ／ＧＢ１２／０５２９１１（ＷＯ２０１３／０７６５０７として公開）に記載のように調製される。例えばそれは、血小板の集団を少なくとも１回の凍結−融解サイクルに供することにより調製され得て、ここで、各サイクルの凍結部分は、−７８℃以下の温度で行なわれる。
【０１８０】
接着剤および／またはゲルは、好ましくは、（ａ）血小板溶解物、（ｂ）少なくとも１つの薬学的に許容できるポリマー、および、（ｃ）リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アラニン、メチオニン、プロリン、セリン、アスパラギン、システイン、ポリアミノ酸、プロタミン、アミノグアニジン、亜鉛イオンおよびマグネシウムイオンからなる群から選択される少なくとも１つの薬学的に許容できる正電荷の化学種を含み、ここで、組成物は、室温で１０００〜５００，０００ｍＰａ・ｓ（ｃｐｓ）の範囲の粘度を有する水性ゲルである。薬学的に許容できるポリマーは、好ましくは、セルロースまたはポロキサマーである。上述した任意のセルロースおよびポロキサマーであってよい。
【０１８１】
血小板溶解物は、好ましくはヒト血小板溶解物である。血小板溶解物は、上記により詳細に述べられている。
【０１８２】
複合型組成物は、１または複数のリポソームまたは１または複数のマイクロバブル中に含まれてよい。そのような構造は、当技術分野で知られている。
【０１８３】
以下の実施例は、本発明を説明する。
【実施例】
【０１８４】
実施例１−骨髄および末梢血の単離＆ＩＭＰ細胞の増幅
骨髄サンプルをハンク緩衝生理食塩溶液で希釈し、遠心分離による単核細胞（ＭＣ）の単離のために、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅの上に重ねた。それから、ＭＣをハンク緩衝生理食塩溶液中に再懸濁し、０．４％トリパンブルー色素排除法アッセイを用いて計数して細胞の生存能力を評価した。細胞を、Ｔ２５フラスコ（５ｍｌの細胞培養培地中、αＭＥＭ、ＧｌｕｔａＭＡＸ、ペニシリン−ストレプトマイシン、血小板溶解物、ヘパリン）中に蒔き、３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。８日目に培地を変えた。ＩＭＰ様細胞の観察のために細胞を毎日モニターし、存在したら、メーカーの説明書に従って細胞解離溶液を用いて採取し、そして、上記と同一の培地中で継代培養した。細胞は、１０％ジメチルスルホキシドで補充された培養培地での継代培養２において−８０℃まで凍結保存し、後の使用のために液体窒素中に保管した。
【０１８５】
実施例２−ＨＴ−ＦＡＣＳ分析
ハイスループット蛍光活性化セルソーティング（ＨＴ−ＦＡＣＳ）分析は、懸濁液中の細胞の細胞表面の表現型を迅速に特性化することのできるハイスループットのスクリーニングプラットフォームであり、現在のところパネル中に３７０を超える細胞表面マーカーを有する。このプラットフォームは、広範な検証を受けていて、多くのタイプのヒト組織および細胞について実施されている。パネルは、９６ウェルプレートに配置された３７５のヒト細胞表面特異的な抗体からなる。
【０１８６】
目的は、本発明のヒトＩＭＰおよびＬｏｎｚａ（登録商標）から得られたヒトＭＳＣの、表面抗原発現プロファイルを決定することであった。ハイスループット−ＦＡＣＳ（ＨＴ−ＦＡＣＳ）プラットフォームは、３７５の表面抗原のスクリーニングを可能にする。
【０１８７】
１バイアルの凍結保存ＰＢ−ＭＳＣ（１×１０６細胞／ｍｌ）を、１５ｍＬのＣＴＬ培地（３７℃、５％ＣＯ２）を含むＴ７５  ｃｍ２フラスコ中に蒔いた。培地を２〜３日ごとに交換して、細胞を、８０〜９０％のコンフルエンスまで増殖させた。細胞を継代培養するために、培地を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。細胞を、３ｍｌのトリプシン０．２５％で、分離されるまで処理した。８ｍｌの培地を加えてトリプシンを不活化させ、４００ｇで５分間の遠心分離により細胞を回収した。細胞を５ｍｌの培地中に再懸濁し、３０ｍＬのＣＴＬ培地を含むＴ１７５  ｃｍ２フラスコ中に蒔いた（３７℃、５％ＣＯ２）。８０〜９０％コンフルエンスでの８〜１０のＴ１７５  ｃｍ２フラスコが、ＨＴ−ＦＡＣＳスクリーニングのために２〜３０００万の細胞（継代培養４で）を採取するのに必要であった。抗体あたり十分な数のフローサイトメトリー「イベント」を得るために、およそ２０００万の生存細胞が最適である。細胞を回収するために、培地を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄した。細胞を、５ｍｌのトリプシン０．２５％で、分離するまで処理した。培地を加えて（８ｍｌ）、トリプシンを不活化させ、細胞を回収した。細胞を、４００ｇで５分間、遠心分離した。細胞ペレットを、５ｍｌ全量のＨＢＳＳ（２ｍＭのＥＤＴＡおよび１％のＢＳＡで補充されたハンクス緩衝食塩水、マイナス、カルシウム／マグネシウム）中に再懸濁した（単一細胞懸濁液）。サンプルの１アリコート（１０μｌ）を用いて、排除色素（０．２％トリパンブルー）の使用により生存細胞の全数を決定した。
【０１８８】
１００μｌのサンプルを、各ウェルにロードした（ウェルあたり約４，００００細胞であり、ＦＡＣＳにおける１０，０００〜２０，０００イベントの回収を確実にする）。サンプルは、ＢＤ  Ｈｉｇｈ  Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  Ｓａｍｐｌｅｒ（自動サンプラー）がアップグレードされたＢＤ  ＦＡＣＳＤｉｖａで操作した。フローサイトメトリーデータの分析は、ＦｌｏｗＪｏ  Ｓｏｆｔｗａｒｅを用いて行なった。結果は、プロット、および、ポジティブ細胞のパーセンテージおよび各抗体に関するメジアン蛍光強度（ＭＦＩ）を含むＥｘｃｅｌスプレッドシートで得られた。
【０１８９】
【表１】
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【０１９０】
実施例３−ルミネックスアッセイ
ルミネックスアッセイを用いて、Ｌｏｎｚａ細胞およびＩＭＰ細胞の培養による馴化培地中の異なるサイトカインを定量した。データはＲＮＡ（ｐｇ／μｇ）で示され、これは、培養物中の細胞数に対してデータを標準化するためである。
【表２】
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【外国語明細書】
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