(57)【要約】【課題】抗カンジダ剤を提供する。【解決手段】前記抗カンジダ剤は、キチンオリゴ糖又はグルコサミンを有効成分として含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
キチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンを有効成分として含有する、抗カンジダ剤。
【請求項２】
キチンオリゴ糖が二量体〜六量体である、請求項１に記載の抗カンジダ剤。
【請求項３】
キチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンを含有する、カンジダ症の予防または治療用の食品、化粧品、又は口腔衛生用品。
【請求項４】
食品、化粧品、又は口腔衛生用品に添加するための、請求項１又は２に記載の抗カンジダ剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗カンジダ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
高齢化に伴い免疫力の低下した老人の口腔カンジダ症をはじめとする真菌症は増加傾向にある。口腔カンジダ症の原因菌は腸管内に常在するカンジダ属の真菌で、宿主の免疫力の低下などに伴って過剰増殖するものと考えられる。症状の悪化には酵母形から菌糸形への形態変化が伴い、菌糸形発育は組織内への侵襲を促進し、更に内臓カンジダを発症させる危険性を増す。さらに、近年カンジダの腸管内過剰増殖が、多彩な炎症性疾患発症とも関連することも議論されている（非特許文献１）。カンジダ症の原因菌はCandida albicansが大勢を占めていて、酵母形から菌糸形への形態変化の誘導因子は、本症の増悪因子として働くが、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）も、その増悪因子として認識されている（非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４）。
【０００３】
C. albicansはＮｇｔ１トランスポーターでＧｌｃＮＡｃを菌体内に取り込み、異化して自身の細胞壁を構成する糖を合成し、また、代謝してエネルギー合成を行うと考えられているが、同時に、ＧｌｃＮＡｃは菌体の信号伝達系を活性化して菌糸形発育を誘導する（非特許文献５）。ＧｌｃＮＡｃはカンジダのみならず、地球上の細菌から高等生物に至るあらゆる生命体に広範囲に存在して重要な生物学的役割を演じており、種を超えた生物間での情報としても関与している（非特許文献６）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】安部茂、滝沢登志雄。口腔を含む消化管でのカンジダの増殖と関連する炎症疾患. Med Mycol Res 2014; 5: 11-18.
【非特許文献２】Ishijima SA, Hayama K, Takahashi M, Holmes AR, Cannon RD, Abe S. N-acetylglucosamine increases symptoms and fungal burden in a murine model of oral candidiasis. Med Mycol 2012; 50: 252-258.
【非特許文献３】Simonetti N, Strippoli N, Cassone A. Yeast-mycelial conversion induced by N-acetyl-D-glucosamine in Candida albicans. Nature 1974; 250: 344-346.
【非特許文献４】Ishijima SA, Abe S. A novel murine candidiasis model with severe colonization in the stomach induced by N-acetylglucosamine-treatment and its scoring system based on local characteristic stomach symptoms. Med Mycol J 2015; 56E: E31-E39.
【非特許文献５】Naseem S, Gunasekera A, Araya E, Konopka JB. N-acetylglucosamine (GlcNAc) induction of hyphal morphogenesis and transcriptional responses in Candida albicans are not dependent on its metabolism. J Biol Chem 2011; 286: 28671-28680.
【非特許文献６】Naseem S, Parrino SM, Bueten DM, Konopka JB. Novel roles for GlcNAc in cell signaling. Commun Integrat Biol 2012; 5: 156-159.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らはこれまでに、マウスモデルを用いたインビボの実験系でＧｌｃＮＡｃがカンジダ症悪化を誘発することを報告してきた（非特許文献２、非特許文献４）。ところが、今回、ＧｌｃＮＡｃ単糖での前述の効果に反して、重合体オリゴマー〔（ＧｌｃＮＡｃ）２−６〕がカンジダの菌糸形発育をすみやかに抑制することを発見した。また、グルコサミンも抑制効果を示すことを見出した。
すなわち、本発明の課題は、新規の抗カンジダ剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
前記課題は、以下に記載の本発明により解決することができる：
［１］キチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンを有効成分として含有する、抗カンジダ剤。
［２］キチンオリゴ糖が二量体〜六量体である、［１］の抗カンジダ剤。
［３］抗カンジダ剤の製造におけるキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンの使用。
［４］カンジダ症の予防または治療に用いるためのキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミン。
［５］カンジダ症の予防または治療が必要な対象にキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンを有効量で投与する、カンジダ症の予防または治療方法。
［６］キチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンを含有する、カンジダ症の予防または治療用の食品、化粧品、又は口腔衛生用品。
［７］食品、化粧品、又は口腔衛生用品に添加するための、請求項１又は２に記載の抗カンジダ剤。
【０００７】
本明細書において「抗カンジダ活性」とは、カンジダ属の真菌類を抑制・減少させる活性を意味し、以下に限定されるものではないが、より具体的には、カンジダ菌糸形発育を抑制する活性を意味する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、抗カンジダ活性を発揮することにより、カンジダ症の予防または治療を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】カンジダ菌（Candida albicans TIMM1768株）にキチンオリゴ糖を添加培養した際の菌糸量を示すグラフである。
【図２】カンジダ菌（Candida albicans TIMM1768株）にキチンオリゴ糖を添加培養した際の菌糸量を示すグラフである（再実験）。
【図３】カンジダ菌（Candida albicans TIMM1768株）にキチンオリゴ糖を添加培養した際の菌糸形発育の顕微鏡像（３７℃、２０時間培養）を示す、図面に代わる写真である。
【図４】カンジダ菌（Candida albicans TIMM1768株）にキチンオリゴ糖を添加培養した際の菌糸形発育の顕微鏡像（３７℃、４時間培養）を示す、図面に代わる写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明の抗カンジダ剤は、有効成分として、キチンオリゴ糖及び／又はグルコサミン（すなわち、キチンオリゴ糖又はグルコサミンのいずれか一方、あるいは、キチンオリゴ糖及びグルコサミン）を含有することを特徴とする。本発明に用いるキチンオリゴ糖は、別名、キチンオリゴマー、Ｎ−アセチルグルコサミンオリゴマー、オリゴ−Ｎ−アセチルグルコサミンとも呼ばれ、Ｎ−アセチルグルコサミンが２〜６個程度、β−１，４グリコシド結合してなるオリゴ糖であり、例えば、キチンを限定的に加水分解することにより調製することができる。本発明の抗カンジダ剤においては、キチンオリゴ糖の重合度は、所望の抗カンジダ活性が得られる限り、特に限定されるものではなく、例えば、重合度が２〜６のキチンオリゴ糖（すなわち、二量体〜六量体）を用いることができ、好ましくは重合度が３〜６のキチンオリゴ糖（すなわち、三量体〜六量体）を用いることができる。
【００１１】
本発明の抗カンジダ剤においては、これらのキチンオリゴ糖は、一種類を単独で、あるいは、二種類以上を適宜組み合わせて使用することができる。
【００１２】
本発明の抗カンジダ剤に用いるグルコサミンは、例えば、Ｎ−アセチルグルコサミンの脱アセチル化により調製することができる。
【００１３】
本発明の抗カンジダ剤の投与形態は、カンジダ症（例えば、口腔カンジダ症、腸管カンジダ症、皮膚カンジダ症、膣カンジダ症、外陰部カンジダ症等）の予防または治療ができるものである限り、特に限定されるものではない。あるいは、本発明の抗カンジダ剤の投与形態は、例えば、口腔内、腸管内、皮膚、膣内、外陰部等において、抗カンジダ活性を発揮することにより、カンジダ属の真菌類を抑制・減少させることができるものである限り、特に限定されるものではない。このような本発明の抗カンジダ活性の投与形態としては、通常の医薬品、例えば、含嗽剤、洗浄剤、経口投与剤（例えば、液剤、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、腸溶性製剤）、軟膏、注射剤として投与することができるだけでなく、例えば、食品、化粧品、口腔衛生用品などの形態で使用することができる。前記食品としては、例えば、飴、ガム、トローチ、グミ等の菓子、飲料、ヨーグルト、ドレッシング、サプリメント、保健機能食品（例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品）、健康食品を挙げることができる。前記化粧品又は口腔衛生用品としては、例えば、洗口液、歯磨き、うがい液、ジェル、スプレーを挙げることができる。これらの各投与形態では、前記の各有効成分に加えて、各投与形態において使用される公知の担体、希釈剤、補助助剤などを添加することができる。
【００１４】
本発明の抗カンジダ剤の投与量は、例えば、疾患の症状、投与対象の年齢、人種、性別、投与形態などを考慮して個々の場合に応じて適宜決定することができる。１日の投与量は、有効成分であるキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンの量として、ある態様として０．１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、ある態様として１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、ある態様として２ｍｍｏｌ／Ｌ以上、ある態様として５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である。また、上限は、キチンオリゴ糖及びグルコサミンの毒性が報告されていない現在、かなり高値、例えば１００ｍｍｏｌ／Ｌでも可能である。より具体的には、食品として摂取したり、化粧品として使用する場合には、１ｍｍｏｌ／Ｌ以上、更に好ましくは２ｍｍｏｌ／Ｌ以上で有効な素材ができる。それらを食品等に添加するものとして作る場合には、例えば、５ｍｍｏｌ／Ｌ以上である。また、溶剤が揮発性物質からなるスプレーなどに使用する際は、皮膚などに使用されたのちに溶剤が揮発し本素材が濃縮されることを考え合わせると、例えば、０．１ｍｍｏｌ／Ｌ程度でも、十分使用に耐えられる。これらを１回であるいは２乃至４回に分けて投与することができる。
【００１５】
本発明には、抗カンジダ剤の製造におけるキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンの使用が含まれる。また、本発明には、カンジダ症の予防または治療に用いるためのキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンが含まれる。更に、本発明には、カンジダ症の予防または治療が必要な対象にキチンオリゴ糖及び／又はグルコサミンを有効量で投与する、カンジダ症の予防または治療方法が含まれる。これらの本発明における「キチンオリゴ糖」、「グルコサミン」、「抗カンジダ剤」、「カンジダ症の予防または治療」については、本発明の抗カンジダ剤における当該説明をそのまま適用することができる。
【実施例】
【００１６】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。
【００１７】
《実施例１：キチンオリゴ糖又はグルコサミンによるカンジダ菌糸形の抑制効果の評価》
【００１８】
本実験では、９６穴プラスチック培養器に１０３個のカンジダ菌（Candida albicans；帝京大学医真菌研究センター保存のTIMM1768株）を植菌して、それぞれに終濃度が３．１２５ｍｍｏｌ／Ｌ〜５０ｍｍｏｌ／Ｌとなるように２〜６量体のＧｌｃＮＡｃ重合体、ＧｌｃＮＡｃモノマー、グルコサミンを添加して３７℃で２０時間培養した。菌糸形発育については、鏡検後、アルコール固定して、プラスチック付着性の強い菌糸をクリスタルバイオレット（ＣＶ）で染色してその染色量から菌体量を求めた（Abe S, Satoh T, Tokuda Y, Tansho S, Yamaguchi H. A rapid colorimetric assay for determination of leukocyte-mediated inhibition of mycerial growth of Candida albicans. Microbiol Immunol 1994; 38(5): 385-8.）。
結果を図１に示す。ＧｌｃＮＡｃモノマーではカンジダの菌糸形発育が促進されたのに対して、オリゴマーは重合度が大きくなるにつれて強いカンジダ菌糸形発育の抑制効果を示した。また、グルコサミンもカンジダ菌糸形発育の抑制効果を示した。
【００１９】
本実験の再現性を確かめるために、キチンオリゴ糖又はグルコサミンの低濃度条件でのカンジダ菌糸形発育阻止実験を行った。すなわち、前回、菌糸形発育阻止が顕著に認められた１２．５ｍｍｏｌ／Ｌまでの濃度について再実験を行った。結果を図２に示す。これらオリゴマーの重合度の大きさによるカンジダ菌糸形発育阻止の性質は、前回の実験結果と同様の結果が得られた。
【００２０】
さらに、ＣＶ染色に先んじて顕微鏡観察を行った。３７℃で２０時間培養した後の顕微鏡像を図３に示す。対照である培地のみでの培養に比べて、単糖のＧｌｃＮＡｃを５０ｍｍｏｌ／Ｌ添加した場合は明らかに繊維状の菌糸形発育が増大している像が得られた。ところが、これに反して、（ＧｌｃＮＡｃ）３及び（ＧｌｃＮＡｃ）４では菌糸形発育の抑制効果を示す像が得られた。
【００２１】
３７℃で４時間培養した後の顕微鏡像を図４に示す。菌糸形発育阻止効果については、培養開始後の早い段階で既に観察されていた。すなわち、図４に示した様に培養開始４時間での顕微鏡像で、（ＧｌｃＮＡｃ）３及び（ＧｌｃＮＡｃ）４では、酵母形の発育を示す像が得られた。
【産業上の利用可能性】
【００２２】
本発明は、カンジダ症の治療用途に利用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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