(57)【要約】【課題】新たなＴＲＰＶ４活性化剤及び歯周ポケット形成抑制剤の提供。【解決手段】チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種を有効成分とするＴＲＰＶ４活性化剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種を有効成分とするＴＲＰＶ４活性化剤。
【請求項２】
チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩を含有する請求項１記載のＴＲＰＶ４活性化剤。
【請求項３】
（Ａ）チモールと（Ｂ）Ｎ−アシルサルコシン又はその塩の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１〜５である請求項２記載のＴＲＰＶ４活性化剤。
【請求項４】
チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種を有効成分とする歯周ポケット形成抑制剤。
【請求項５】
チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩を含有する請求項４記載の歯周ポケット形成抑制剤。
【請求項６】
（Ａ）チモールと（Ｂ）Ｎ−アシルサルコシン又はその塩の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１〜５である請求項５記載の歯周ポケット形成抑制剤。
【請求項７】
（Ａ）チモール及び（Ｂ）Ｎ−アシルサルコシン又はその塩を含有し、成分（Ａ）と成分（Ｂ）の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１〜５であり、カルバクロール及びシンナミックアルデヒドの含有量が成分（Ａ）に対して５質量％以下である口腔用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯周ポケット形成抑制剤及びＴＲＰＶ４（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｖａｎｉｌｌｏｉｄ  ４）活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
歯周病は、細菌の感染によって引き起こされる炎症性疾患であり、歯と歯肉の境目（歯肉溝）に細菌が停滞し（歯垢の蓄積）、歯肉の辺縁が炎症を帯びて赤くなったり、腫れたりする。そして、進行すると、歯周ポケットと呼ばれる歯と歯肉の境目が深くなり、次いで歯を支える土台（歯槽骨）が溶けて歯が動くようになり、最後は歯を抜かなければならなくなる。
【０００３】
歯周病の予防及び治療において、歯科領域では、歯周ポケットの縮小化及び形成抑制に主眼がおかれている。歯周病治療薬としては、殺菌剤、抗炎症剤が用いられているが、これらの薬剤では歯周ポケットの形成は抑制できないことが知られている。例えば、アスコルビン酸は、歯周炎に有効とされているが、歯周ポケットの形成には影響を与えない（例えば、非特許文献１、表１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１１−１０９９５１号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】日歯周誌  ４８（３）：２０１−２０７，２００６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
このような実情において本発明者は、従来の歯周病モデルが歯槽骨の吸収は観察されるが歯周ポケットが形成されないことから、ヒトの歯周病モデルと同様の病態を示さないことから、新たなモデルが必要と考えた。かかる考えに基づき、種々検討した結果、ラットの腹腔内にＬＰＳを注射して感作し、次いでＬＰＳを歯周溝に滴下投与すれば、歯周ポケットが形成され、次いで歯槽骨の吸収が生じるヒト歯周病モデルの作製に成功した（特許文献１）。そして、このモデルを用いて、歯周ポケットを形成し得る成分の探索を行ったところ、ＴＲＰＶ４活性化剤を歯肉溝に滴下投与すれば、歯周ポケットの形成が顕著に抑制できることを見出し、先に特許出願した（特願２０１４−２６３９６４）。すなわち、新たなＴＲＰＶ４活性化剤を見出せば、当該成分は歯周ポケット形成抑制剤として有用である。
【０００７】
従って、本発明の課題は、新たなＴＲＰＶ４活性化剤及び歯周ポケット形成抑制剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで本発明者は、新たなＴＲＰＶ４活性化作用及び歯周病ポケット形成抑制作用を有する成分を探索した結果、シンナミックアルデヒドやオイゲノール（クローブ油）などの殺菌効果が知られている成分にはＴＲＰＶ４活性化作用が認められなかったにもかかわらず、チモールとＮ−アシルサルコシン又はその塩が特異的に優れたＴＲＰＶ４活性化作用を有し、歯周ポケット形成抑制剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔３〕を提供するものである。
【００１０】
〔１〕チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種を有効成分とするＴＲＰＶ４活性化剤。
〔２〕チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種を有効成分とする歯周ポケット形成抑制剤。
〔３〕（Ａ）チモール及び（Ｂ）Ｎ−アシルサルコシン又はその塩を含有し、成分（Ａ）と成分（Ｂ）の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１〜５であり、カルバクロール及びシンナミックアルデヒドの含有量が成分（Ａ）に対して５質量％以下である口腔用組成物。
【発明の効果】
【００１１】
チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種の成分は、優れたＴＲＰＶ４活性化作用を有し、歯周ポケット形成抑制剤として有用である。従って、これらの成分を含有する口腔用組成物を用いれば、歯周病における歯周ポケットの形成が抑制でき、歯周病の発生、進展が抑制できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウムのＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図２】チモールのＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図３】タイム油のＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図４】アスコルビン酸のＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図５】シンナミックアルデヒドのＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図６】クローブ油のＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図７】Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム／チモール（５／１）のＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図８】Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム／チモール（１／１）のＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図９】４α−ＰＤＤのＴＲＰＶ４活性化作用を示す。
【図１０】水のＴＲＰＶに対する作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明のＴＲＰＶ４活性化剤及び歯周ポケット形成抑制剤の有効成分は、チモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種である。ＴＲＰＶ４活性化剤、歯周ポケット形成抑制剤又は口腔用組成物中のチモール及びＮ−アシルサルコシン又はその塩の含有量は、ＴＲＰＶ４活性を有効に発現させる観点から、好ましくは０．０００１質量％以上であり、より好ましくは０．０００５質量％以上であり、さらに好ましくは０．０００８質量％以上であり、刺激を抑制する観点から、好ましくは０．５質量％以下であり、より好ましくは０．２質量％以下であり、さらに好ましくは０．１質量％以下であり、よりさらに好ましくは０．０５質量％以下である。
【００１４】
チモールは、２−イソプロピル−５−メチルフェノールであり、タイム様の香気を有する香気成分である。チモールは、殺菌作用を有し、歯磨きや洗口剤に配合されている。しかし、チモールにＴＲＰＶ４活性化作用や歯周ポケット形成抑制作用があることは知られていない。
【００１５】
チモールは、タチジャコウソウ（タイム）油、カシア油、オレガノ油、マジョラム油、オリガナム油、アジョワン油等に含まれており、これらの精油として配合することもできる。しかし、チモール単独では優れたＴＲＰＶ４活性化作用を示すが、チモールとカルバクロールを含むタイム油や、チモールとシンナミックアルデヒドを含むカシア油では、ＴＲＰＶ４活性化作用が得られないことから、カルバクロール及びシンナミックアルデヒドはチモールの含有量の５質量％以下、より好ましくは４質量％以下、さらに好ましくは３質量％以下の含有量とするのが好ましい。
【００１６】
ＴＲＰＶ４活性化剤、歯周ポケット形成抑制剤又は口腔用組成物中のチモールの含有量は、ＴＲＰＶ４活性化作用、歯周ポケット形成抑制作用及び刺激性の点から、０．０００１質量％以上０．１質量％以下が好ましく、０．０００２質量％以上０．０２質量％以下がより好ましく、０．０００８質量％以上０．０１５質量％以下がさらに好ましい。
【００１７】
Ｎ−アシルサルコシン又はその塩としては、Ｎ−Ｃ8〜Ｃ22脂肪族アシルサルコシン又はその塩が好ましく、Ｎ−Ｃ8〜Ｃ20脂肪族アシルサルコシン又はその塩がより好ましい。また、塩としては、ナトリウム塩、カリウム等のアルカリ金属塩、トリエタノールアミン等のアミン塩が挙げられる。Ｎ−アシルサルコシン又はその塩の具体例としては、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム、Ｎ−ココイルサルコシンナトリウム、Ｎ−ミリストイルサルコシンナトリウム、Ｎ−パルミトイルサルコシンナトリウムが挙げられるが、このうちＮ−ラウロイルサルコシンナトリウムがさらに好ましい。
Ｎ−アシルサルコシン又はその塩も抗菌作用等を有することは知られているが、ＴＲＰＶ４活性化作用や歯周ポケット形成抑制作用については知られていない。
【００１８】
ＴＲＰＶ４活性化剤、歯周ポケット形成抑制剤又は口腔用組成物中のＮ−アシルサルコシン又はその塩の含有量は、ＴＲＰＶ４活性化作用の観点から、好ましくは０．０００５質量％以上０．５質量％以下であり、より好ましくは０．０００８質量％以上０．２質量％以下であり、さらに好ましくは０．００１質量％以上０．１質量％以下であり、チモールと併用する場合には、歯周ポケット形成抑制作用及び刺激性の点から、０．００００１質量％以上０．５質量％以下が好ましく、０．００００１質量％以上０．０６質量％以下がより好ましく、０．００００１質量％以上０．０１５質量％以下がより好ましい。  
【００１９】
本発明において（Ａ）チモールと（Ｂ）Ｎ−アシルサルコシン又はその塩とは、それぞれ単独で使用することもできるが、これらを併用してもよい。併用する場合には、ＴＲＰＶ４活性化作用、歯周ポケット形成抑制作用の点から、それらの質量比（Ｂ／Ａ）は、０．０１〜５が好ましく、０．０２〜３がより好ましく、０．０５〜１がさらに好ましい。
【００２０】
（Ａ）チモール及び（Ｂ）Ｎ−アシルサルコシン又はその塩から選ばれる１種又は２種を用いれば、後記実施例に示すように優れたＴＲＰＶ４活性化作用が得られ、ＴＲＰＶ４活性化作用は歯周ポケット形成抑制効果の指標であるから、歯周ポケット形成抑制作用が得られる。ＴＲＰＶ４活性化剤及び歯周ポケット形成抑制剤の形態としては、医薬組成物、医薬部外品が挙げられる。
【００２１】
本発明のＴＲＰＶ４活性化剤及び歯周ポケット形成抑制剤の具体的な使用形態としては、歯磨剤、デンタルリンス、マウスウォッシュ、クリーム、軟膏剤、歯周ポケット内洗浄剤、口腔用錠剤、口腔用スプレー剤、口腔用半固形剤、含嗽剤等の口腔用組成物が好ましい。
【００２２】
口腔用組成物とする場合の好ましい態様は、（Ａ）チモール及び（Ｂ）アシルサルコシン又はその塩を含有し、成分（Ａ）と成分（Ｂ）の質量比（Ｂ／Ａ）が０．０１〜５であり、カルバクロール及びシンナミックアルデヒドの含有量が成分（Ａ）に対して５質量％以下である口腔用組成物である。
【００２３】
また、本発明のＴＲＰＶ４活性化剤及び歯周ポケット形成抑制剤を口腔用組成物の形態とする場合には、本発明の効果を阻害しない範囲で、前記成分以外に、湿潤剤、粘結剤、研磨剤、非イオン界面活性剤、多価アルコール、糖アルコール、甘味剤、ｐＨ調整剤、抗炎症剤、防腐剤、殺菌剤、植物抽出物、香料、水等を配合することができる。
【実施例】
【００２４】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００２５】
実施例１
（１）ＴＲＰＶ４発現細胞の調製
Ｔ−７５  ＦｌａｓｋにＨｅＬａ細胞を１×１０6ｃｅｌｌｓ／Ｆｌａｓｋで播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で一晩培養後、ＴｒａｎｓＩＴ−ＨｅＬａＭＯＮＳＴＥＲ（Ｍｉｒｕｓ社）を用いてトランスフェクションを行った。ＤＭＥＭ／Ｆ１２無血清培地（ＰｈｅｎｏｌＲｅｄＦｒｅｅ）１９００μＬに８μｇのｈＴＲＰＶ４  ｖｅｃｔｏｒまたはＬａｃＺ  ｖｅｃｔｏｒを添加し、ピペッティングした。この溶液に、６０μＬのＴｒａｎｓＩｔ−ＨｅＬａＲｅａｇｅｎｔを添加し、ピペッティングした。さらにこの溶液に、３９μＬのＭＯＮＳＴＡＲ  Ｒｅａｇｅｎｔを添加しピペッティングした。２０ｍｉｎ静置し、この溶液を、２０ｍＬのＤＭＥＭ／Ｆ１２／１０％ＦＣＳに添加しピペッティングした。細胞が播かれたＴ７５  Ｆｌａｓｋの培地をアスピレートし、上記のＴｒａｎｓＩＴ／ＤＮＡコンプレックス溶液を入れ軽く撹拌した。さらに２４時間培養後にトランスフェクションしたＦｌａｓｋの細胞をＤｅｔａｃｈｉｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎではがし、蛍光用９６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｎｕｎｃ１６５３０５）に２×１０4ｃｅｌｌｓ／９０μＬ／ｗｅｌｌで播いた。その後、２４時間培養後、細胞内Ｃａ2+の測定をＣａｌｃｉｕｍ  Ｋｉｔ  ＩＩ−  ｆｌｕｏ  ４（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用いて行った。
（２）Ｃａｌｃｉｕｍ  Ｋｉｔ  ＩＩ−ｆｌｕｏ  ４（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用いた細胞内Ｃａ2+の測定法
【００２６】
【表１】
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【００２７】
表１の溶液に５０μＬのＤＭＳＯに溶解したｆｌｕｏ４−ＡＭを添加しローディングバッファーとした。
【００２８】
（３）細胞を播いた蛍光用９６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｎｕｎｃ１６５３０５）に、ローディングバッファーを９０μＬずつ添加し、プレートシェーカーで軽く攪拌し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で１時間静置した。
【００２９】
【表２】
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【００３０】
検体としては、ラウロイルサルコシンナトリウム、チモール、タイム油、アスコルビン酸、シンナミックアルデヒド、クローブ油、ラウロイルサルコシンナトリウムとチモールの混合液、４α−ＰＤＤ（４α−ホルボール−１２，１３−ジデカノエート）、及び水を用いた。なお、検体の最終濃度は、４α−ＰＤＤ以外は０．００１質量％であり、４αＰＤＤは１００μＭである。
表２の検体添加用バッファーを用いて、各検体を希釈し、最終濃度の１０倍の溶液を作製し、検体添加用９６ｗｅｌｌプレートに７０μＬずつ分注した。
ローディングバッファーを添加した細胞のプレートと検体添加用プレートをＦＤＳＳ（浜松ホトニクス）にセットし、室温（２５℃）で測定を行った。測定はＥｘ；４８０ｎｍ，Ｅｍ；５４０ｎｍで行い、２秒毎に測定した。
測定３０秒後に検体を２０μＬ添加し、３００秒まで経時的に測定した。
（４）結果
結果を図１〜図１０に示す。なお、図中、ＬａｃＺはコントロールである。
図１及び図２から、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム及びチモールは、優れたＴＲＰＶ４活性化作用を示した。
【００３１】
また、チモールとカルバクロールを１４：１で含有するタイム油はＴＲＰＶ４活性化作用を示さなかった（図３）。従って、チモールとカルバクロールを併用する場合は、カルバクロールの含有量を減らす必要がある。
【００３２】
また、アスコルビン酸もＴＲＰＶ４活性化作用を示さなかった（図４）。さらに、シンナミックアルデヒドやクローブ油は、ＴＲＰＶ４活性化作用を抑制した（図５、図６）。
【００３３】
（Ａ）チモールと（Ｂ）Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウムを採用した場合には、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウムの量が増加するに従い、ＴＲＰＶ４活性化作用が低下する傾向がみられた（図７及び図８）。従って、これらを併用する場合は、Ｂ／Ａが０．０１〜５が好ましい。
【００３４】
また、特願２０１４−２６３９６４に記載のように、ＴＲＰＶ４活性化剤である４α−ＰＤＤ（４α−ホルボール−１２，１３−ジデカノエート）が顕著に歯周ポケットの形成を抑制することから明らかなように、ＴＰＶ４活性化作用は、歯周ポケット形成抑制効果の指標になるから、チモールとＮ−アシルサルコシン又はその塩は、歯周ポケット形成抑制剤としても有用であることが判明した。なお、４α−ＰＤＤのＴＲＰＶ活性化作用及びコントロールとしての水のＴＲＰＶに対する作用を図９及び図１０に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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