(57)【要約】【課題】細胞に光が照射される環境であっても適正にその細胞を培養、保存又は輸送できるようにする。【解決手段】本発明の細胞を培養、保存又は輸送する方法は、（ａ）培養、保存又は輸送の対象となる対象細胞と同じ種類で同じ形態の試験用細胞を用意し、予め定められた基準波長領域の光を前記試験用細胞に照射したときの露光量と細胞活性指標との関係を求める工程と、（ｂ）前記関係に基づいて前記細胞活性指標の臨界点における前記露光量を閾値に設定する工程と、（ｃ）前記対象細胞を実際に培養、保存又は輸送する際に、前記対象細胞に照射される光の露光量の総量が前記閾値を超えないように前記対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する工程と、を含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）培養、保存又は輸送の対象となる対象細胞と同じ種類で同じ形態の試験用細胞を用意し、予め定められた基準波長領域の光を前記試験用細胞に照射したときの露光量と細胞活性指標との関係を求める工程と、
（ｂ）前記関係に基づいて前記細胞活性指標の臨界点における前記露光量を閾値に設定する工程と、
（ｃ）前記対象細胞を実際に培養、保存又は輸送する際に、前記対象細胞に照射される光の露光量の総量が前記閾値を超えないように前記対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する工程と、
を含む、細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項２】
前記工程（ａ）では、前記基準波長領域は前記対象細胞に照射する光の波長領域と同じである、
請求項１に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項３】
前記工程（ａ）では、前記露光量と前記細胞活性指標との関係を前記基準波長領域とは異なる波長領域についても求める、
請求項１又は２に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項４】
前記工程（ａ）では、前記基準波長領域の光を照射したときの所定の露光量に対応する前記細胞活性指標に対する、前記基準波長領域とは異なる波長領域の光を照射したときの前記所定の露光量に対応する前記細胞活性指標の割合を、前記異なる波長領域の波長係数として求め、
前記工程（ｃ）では、前記対象細胞に光を照射する露光量を、前記対象細胞に照射する光の波長領域の前記波長係数で補正し、補正後の前記露光量の総量が前記閾値を超えないように前記対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する、
請求項１又は２に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項５】
前記対象細胞は、角膜上皮細胞又は表皮細胞である、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項６】
前記露光量は、前記試験用細胞に照射される光の照度と照射時間との積として求める、
請求項１〜５のいずれか１項に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項７】
前記細胞活性指標は、コロニー形成率である、
請求項１〜６のいずれか１項に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【請求項８】
前記対象細胞に照射される光は、蛍光灯又はＬＥＤ灯の光である、
請求項１〜７のいずれか１項に記載の細胞を培養、保存又は輸送する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞を培養、保存又は輸送する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒトの身体からわずかな組織を採取し、その組織から得られる細胞を培養して得られるヒト細胞組込み型の再生医療製品が知られている。このような再生医療製品は、安全キャビネットやクリーンベンチ、アイソレータなどの清浄な環境下で操作され、製造される。これらの設備は、作業者による視認性と清浄度の高い環境を両立させるためにガラスなどの透明な障壁が設けられている。作業者は、この障壁越しに操作する資材等を視認しながら操作するため、操作領域は蛍光灯等で明るく照射されている。また、再生医療製品を保存（輸送）する場合にも、パッケージ内部の状態を確認しやすくするため、光透過性の透明な容器に入れることが一般的である。
【０００３】
このように細胞を培養したり保存・輸送したりする際には細胞は光照射されることが多いが、光による細胞への影響はあまり検討されておらず、特許文献１や非特許文献１などに報告がある程度である。特許文献１には、青色光暴露により胚の発育の遅れや胚の割球のアポトーシスが増加することが記載されている。非特許文献１は、本発明者らが発表した論文であるが、そこには、ヒト角膜上皮細胞を培養して作成した培養細胞シートに対する光照射による影響が記載されている。具体的には、５０１ｎｍ以下の光を遮断することで細胞障害性が低下し、５９８ｎｍ以下の光を遮断することで細胞障害性が消失することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２０１４−９７０５４号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】信方進吾、他５名，「ヒト培養角膜上皮に対する光照射の影響」，再生医療，メディカルレビュー社，平成２６年１月２７日，第１３巻，増刊号，ｐ．２４２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、細胞への影響を考慮して遮光した状態で細胞を取り扱うことにすると、作業者の操作性（視認性）が低減することになる。そのため、安全キャビネット等での細胞操作では光の暴露を完全に回避することは極めて困難であり、作業者の操作性（視認性）と細胞障害の程度を踏まえた運用を検討する必要がある。
【０００７】
本発明は、上述した課題を解決するためになされたものであり、細胞に光が照射される環境であっても適正にその細胞を培養、保存又は輸送できるようにすることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の細胞を培養、保存又は輸送する方法は、
（ａ）培養、保存又は輸送の対象となる対象細胞と同じ種類で同じ形態の試験用細胞を用意し、予め定められた基準波長領域の光を前記試験用細胞に照射したときの露光量と細胞活性指標との関係を求める工程と、
（ｂ）前記関係に基づいて前記細胞活性指標の臨界点における前記露光量を閾値に設定する工程と、
（ｃ）前記対象細胞を実際に培養、保存又は輸送する際に、前記対象細胞に照射される光の露光量の総量が前記閾値を超えないように前記対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する工程と、
を含むものである。
【０００９】
本発明の細胞を培養、保存又は輸送する方法では、まず、培養、保存又は輸送の対象となる対象細胞と同じ種類で同じ形態の試験用細胞を用意し、予め定められた基準波長領域の光を試験用細胞に照射したときの露光量と細胞活性指標との関係を求める。続いて、こうした関係に基づいて細胞活性指標の臨界点における露光量を閾値に設定する。そして、対象細胞を実際に培養、保存又は輸送する際に、対象細胞に照射される光の露光量の総量が閾値を超えないように対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する。こうすることにより、細胞に光が照射される環境であっても、光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節することで細胞障害の発生を抑えつつ適正にその細胞を培養、保存又は輸送できる。なお、光の照度、照射時間及び波長領域の調節には、遮光状態にすることも含まれる。本発明における露光量は、単に照度×照射時間を示すだけでなく、波長領域を調整する場合には、波長係数を乗じた値を含む。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１の光の影響確認試験の手順を示す説明図。
【図２】実施例１の光照射時間とコロニー形成率との関係を示すグラフ。
【図３】実施例２の光照射時間とコロニー形成率との関係を示すグラフ。
【図４】実施例３の光照射時間とコロニー形成率との関係を示すグラフ。
【図５】実施例４の照射光とコロニー形成率との関係を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の細胞を培養、保存又は輸送する方法は、
（ａ）培養、保存又は輸送の対象となる対象細胞と同じ種類で同じ形態の試験用細胞を用意し、予め定められた基準波長領域の光を前記試験用細胞に照射したときの露光量と細胞活性指標との関係を求める工程と、
（ｂ）前記関係に基づいて前記細胞活性指標の臨界点における前記露光量を閾値に設定する工程と、
（ｃ）前記対象細胞を実際に培養、保存又は輸送する際に、前記対象細胞に照射される光の露光量の総量が前記閾値を超えないように前記対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する工程と、
を含むものである。
【００１２】
工程（ａ）では、培養、保存又は輸送の対象となる対象細胞と同じ種類で同じ形態の試験用細胞を用意する。このように試験用細胞の種類や形態を対象細胞の種類や形態に合わせるのは、細胞の種類や形態によって露光量と細胞活性指標との関係が変動するからである。例えば、対象細胞が角膜上皮細胞の場合には、試験用細胞も角膜上皮細胞を用意し、対象細胞が表皮細胞の場合には、試験用細胞も表皮細胞を用意する。また、対象細胞の形態が細胞シートの場合には、試験用細胞の形態も細胞シートを用意する。また、細胞シートであっても支持体に支持されているかいないかによって、露光量と細胞活性指標との関係が変わる。そのため、対象細胞の形態が、支持体（例えば滅菌不織布製の板状体、ポリエチレンテレフタレート樹脂（ＰＥＴ）製の円盤状キャリア等）に細胞シートが支持された形態の場合には、試験用細胞の形態もそれと同様の形態とし、対象細胞の形態がフリーの細胞シートの場合には、試験用細胞の形態もそれと同様の形態とする。
【００１３】
工程（ａ）では、試験用細胞を用意した後、予め定められた基準波長領域の光を試験用細胞に照射したときの露光量と細胞活性指標との関係を求める。例えば、基準波長領域の光としては、蛍光灯の光又はＬＥＤ灯の光を用いてもよい。その際、蛍光灯の光又はＬＥＤ灯の光を遮光せずそのまま用いてもよいし、蛍光灯やＬＥＤ灯のうち所定の波長以下を遮断した光を用いてもよい。所定の波長としては、例えば３８０ｎｍとか５００ｎｍとか６００ｎｍなどが挙げられる。露光量が同じであれば、細胞障害は蛍光灯の全波長の光を用いる場合に比べて３８０ｎｍ以下を遮断した光を用いた方が少なく、５００ｎｍ以下を遮断した光を用いた方がより少なく、６００ｎｍ以下を遮断した光を用いた方が更に少ない。
【００１４】
露光量は、試験用細胞に照射される光の照度と照射時間との積として求めることが好ましい。例えば、工程（ａ）で露光量と細胞活性指標との関係を求めるにあたり、光の照度を一定のまま照射時間を変化させることにより露光量を変化させてもよい。この場合、実際に対象細胞を培養、保存又は輸送するときの光の照度を採用するのが好ましい。また、実際に対象細胞に照射する光の照度を変化させる場合には、それぞれの照度に応じて露光量と細胞活性指標との関係を求めることが望ましい。但し、露光量と細胞活性指標との関係が光の照度に依存しない場合には、光の照度をいくつに設定しても構わない。細胞活性指標としては、細胞の活性の程度を示す指標であれば特に限定されず、例えば生細胞率、生細胞密度、コロニー形成率、コロニー形成細胞密度などが挙げられるが、このうちコロニー形成率が好ましい。コロニー形成率は、細胞の活性の程度を示す指標としてよく知られているものであり、細胞障害が発生しているか否かの指標として相応しいからである。露光量と細胞活性指標との関係は、波長領域によって変動する。このため、実際に対象細胞に照射する光の波長領域の候補が複数存在する場合には、候補の波長領域ごとに露光量と細胞活性指標との関係を求め、波長領域に応じた波長係数を設定するのが好ましい。
【００１５】
工程（ｂ）では、工程（ａ）で求めた関係に基づいて細胞活性指標の臨界点における露光量を閾値に設定する。例えば、横軸を露光量、縦軸を細胞活性指標とするグラフから細胞活性指標の値が急に落ち込む地点を読み取り、その地点を細胞活性指標の臨界点とし、その臨界点に対応する露光量を閾値に設定してもよい。
【００１６】
工程（ｃ）では、対象細胞を実際に培養、保存又は輸送する際に、対象細胞に照射される光の露光量の総量が閾値を超えないように対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節する。例えば対象細胞に照射する光の照度が高いときには照射時間を短くして露光量が閾値を超えないようにし、対象細胞に照射する光の照射時間が長いときには照度を低くして露光量が閾値を超えないようにする。また、例えば対象細胞に照射する光の露光量が閾値を超えたときには、そのときの照度と照射時間をそのままにして波長領域を調節する（例えば３８０ｎｍ以下を遮断したり５００ｎｍ以下を遮断したりする）ことにより、露光量を低い値に補正し、補正後の露光量の総量が閾値を超えないようにする。こうすることにより、細胞に光が照射される環境であっても、光の照度及び照射時間を調節することで細胞障害の発生を抑えつつ適正にその細胞を培養、保存又は輸送できる。
【００１７】
工程（ａ）では、基準波長領域は、対象細胞に照射する光の波長領域と同じとしてもよい。こうすれば、試験用細胞を用いたときの露光量と細胞活性指標との関係を、そのまま対象細胞に適用することができる。
【００１８】
工程（ａ）では、露光量と細胞活性指標との関係を、基準波長領域だけでなく、基準波長領域とは異なる波長領域についても求めてもよい。こうすれば、対象細胞にどの波長領域の光を照射するかが決まっていないときに、基準波長領域の光を適用するか基準波長領域とは異なる波長領域の光を適用するかを決めることができる。
【００１９】
工程（ａ）では、基準波長領域の光を照射したときの所定の露光量に対応する細胞活性指標に対する、基準波長領域とは異なる波長領域の光を照射したときの所定の露光量に対応する細胞活性指標の割合を、異なる波長領域の波長係数として求め、工程（ｃ）では、対象細胞に光を照射する露光量を、対象細胞に照射する光の波長領域の波長係数で補正し、補正後の露光量の総量が閾値を超えないように対象細胞に照射される光の照度、照射時間及び波長領域の少なくとも１つを調節してもよい。こうすれば、対象細胞にどの波長領域の光を照射するかが決まっていないときに、波長係数を利用して、基準波長領域の光を適用するか基準波長領域とは異なる波長領域の光を適用するかを決めることができる。
【実施例】
【００２０】
以下に本発明の好適な実施例について説明する。但し、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではなく、本発明の技術的範囲に属する限り種々の態様で実施できることはいうまでもない。
【００２１】
［実施例１］
海外から入手した角膜組織の角膜輪部から組織を採取し、トリプシン溶液に浸漬して細胞分散処理を行った。処理後、トリプシン溶液を除去し、１０ｖ／ｖ％ＦＢＳ（ウシ胎児血清）含有ＤＭＥＭ／Ｆ１２混合培地を添加して角膜細胞の細胞懸濁液を調整した。
【００２２】
調整後、フィーダ細胞を敷設した培養容器に細胞懸濁液を播種した。フィーダ細胞としては、マイトマイシンＣやＸ線照射などで不活化処理をして増殖能を抑制したマウス線維芽細胞を使用した。播種後、１０ｖ／ｖ％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ／Ｆ１２混合培地を添加し、フィーダ細胞の存在下で角膜細胞を培養した。角膜細胞を継続的に培養することにより、約１週間程度でコンフルエント状態に達し、角膜上皮細胞の培養細胞シートが形成された。なおコンフルエント状態に達する頃には、フィーダ細胞のほとんどが培養系から排除された。培養して得られた角膜上皮細胞の培養細胞シートは、ＰＥＴ製の円盤状キャリアに接触支持させた状態で培養容器から剥離し、製品保存液と共に容器に入れて密閉した。このようにして円盤状キャリアに支持された細胞シートを入れた容器を８個用意した。
【００２３】
培養後の３日間（７２時間）、容器に入れた細胞シートに光の照度と照射時間の条件を変更して光を照射した。ここでは、蛍光灯の光の照度を１０００ルクスとし、蛍光灯の全波長の光を０時間、１時間、３時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間でそれぞれ照射し、光照射後の残りの時間は完全に遮光して時間を合計７２時間経過させた（図１参照）。なお、１，０００ルクスの照度は、培養交換等の作業を行う安全キャビネット内の照度に相当する。そして、７２時間後に細胞シートを円盤状キャリアから剥離してトリプシン溶液で分散処理し、コロニー形成率（ＣＦＥ：Ｃｏｌｏｎｙ  Ｆｏｒｍｉｎｇ  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ）を評価した。コロニー形成率は、細胞の増殖能を評価する指標として一般的に知られており、移植後の有効性評価に有用である。その結果を図２に示す。図２に示す通り、１，０００ルクスという照度では、１２時間で極端にコロニー形成率が低下した。すなわち、コロニー形成率の臨界点は照射時間１２時間であり、そのときの露光量（＝照度×照射時間）は１２，０００ルクス・時であった。
【００２４】
［実施例２］
実施例１と同様にして、角膜細胞を培養して細胞シートを作製し、円盤状キャリアに支持された細胞シートを入れた容器を５個用意した。実施例２では、培養後の３日間（７２時間）、光の照度を４，１００ルクスとし、実施例１よりも強い光を照射した。光の照射時間は０時間、１時間、３時間、６時間、７２時間とし、光照射後の残りの時間は完全に遮光して時間を経過させた。実施例１と同じく、照射時、蛍光灯の光を全波長照射した。なお、４，１００ルクスの照度は、移植が行われる手術室の照度に相当する。そして、７２時間後に細胞シートを円盤状キャリアから剥離してトリプシン溶液で分散処理し、コロニー形成率を評価した。その結果を図３に示す。図３に示す通り、４，１００ルクスという照度では、３時間で極端にコロニー形成率が低下した。すなわち、コロニー形成率の臨界点は照射時間３時間であり、そのときの露光量（＝照度×照射時間）は１２，３００ルクス・時であった。実施例１，２から、角膜細胞を培養した細胞シートであれば、コロニー形成率の臨界点における露光量はほぼ同じ閾値（１２，０００ルクス・時）になることがわかった。
【００２５】
実施例１，２では、円盤状キャリアに支持した状態で製品保存液と共に容器に入れられた培養角膜上皮細胞シートを用いて光の影響を調べたため、これと同じ細胞シートを実際に培養、保存又は輸送する際には、露光量が閾値（１２，０００ルクス・時）を超えないようにその細胞シートに照射される光の照度及び照射時間を調節すればよい。例えば、細胞シートに照射する光の照度が高いときには照射時間を短くして露光量が閾値を超えないようにし、細胞シートに照射する光の照射時間が長いときには照度を低くして露光量が閾値を超えないようにすればよい。こうすることにより、細胞シートに光が照射される環境であっても、光の照度及び照射時間を調節することで細胞障害の発生を抑えつつ適正にその細胞を培養、保存又は輸送できる。なお、実施例１，２では基準波長領域は蛍光灯の光の全波長である。
【００２６】
［実施例３］
実施例１と同様にして、角膜細胞を培養して細胞シートを作製し、円盤状キャリアに支持された細胞シートを製品保存液と共に入れた容器（容器Ｉ）を用意した。また、細胞シートを培養容器から剥離することなく、円盤状キャリアに接触させた状態で製品保存液と共に入れた容器（容器II）を用意した。実施例３では、培養後の３日間（７２時間）、光の照度を４，１００ルクスとし、光の照射時間を０時間、１時間、３時間、６時間、７２時間とし、その後の時間は完全に遮光して時間を経過させた。実施例１，２と同じく、照射時、蛍光灯の光を全波長照射した。そして、７２時間後、容器Ｉについては、細胞シートを円盤状キャリアから剥離してトリプシン溶液で分散処理してコロニー形成率を評価し、容器IIについては、細胞シートを剥離してそのままトリプシン溶液で分散処理してコロニー形成率を評価した。その結果を図４に示す。図４に示す通り、光照射時に培養容器から剥離した細胞シート（剥離あり、容器Ｉ）の方はコロニー形成率の臨界点は１時間（露光量は４，１００ルクス・時）であった。これに対して、光照射時に培養容器から剥離しなかった細胞シート（剥離なし、容器II）の方はコロニー形成率の臨界点は３時間（露光量は１２，３００ルクス・時）であった。このことから、細胞シートを剥離した形態の方が細胞シートを剥離していない形態に比べて光の影響を受けやすいことがわかった。
【００２７】
［実施例４］
実施例１と同様にして、角膜細胞を培養して細胞シートを作製し、円盤状キャリアに支持された細胞シートを入れた容器を５個用意した。ここでは、培養後の３日間（７２時間）、容器に入れた細胞シートに照射する光の波長を変更して光を照射した。具体的には、蛍光灯の光を使用し、照度を４，１００ルクス、照射時間を７２時間、露光量を２９５，２００ルクス・時とし、全波長照射（ケースＡ）、約４００（４０３）ｎｍまでの波長を遮断して照射（ケースＢ）、約５００（５０１）ｎｍまでの波長を遮断して照射（ケースＣ）、約６００（５９８）ｎｍまでの波長を遮断して照射（ケースＤ）という４つの条件を採用した。また、培養後７２時間遮光したものを対照試験とした。そして、遮光又は照射してから７２時間後に細胞シートを円盤状キャリアから剥離してトリプシン溶液で分散処理し、光の照射に対するコロニー形成率を評価した。その結果を図５に示す。図５からわかるように、対照試験と比べて、蛍光灯の全波長の光を照射した場合にはコロニー形成率が大きく低下し、遮断する波長領域の上限を約４００ｎｍ、約５００ｎｍ、約６００ｎｍに上げるのに伴ってコロニー形成率は高くなった。このことから、露光量が同じであれば、細胞障害は蛍光灯の全波長の光を用いる場合に比べて約４００ｎｍまでの波長を遮断した方が少なく、５００ｎｍまでの光を遮断した方がより少なく、６００ｎｍまでの光を遮断した方が更に少ないことがわかった。また、約６００ｎｍまでの光を遮断すれば対照試験とほぼ同等のコロニー形成率になることがわかった。
【００２８】
例えば、図５から、全波長照射したケースＡでは露光量２９５，２００ルクス・時に対応するコロニー形成率が約４％であるのに対して、約４００ｎｍまでの波長を遮断して照射したケースＢでは同じ露光量に対応するコロニー形成率が約１２％であり、約３倍のコロニー形成率であった。このとき、前者に対する後者の割合をケースＢの波長係数とすると、その波長係数は１／３（＝０．３３）である。ケースＢの露光量に波長係数である０．３３を乗じると、全波長照射したときの露光量に補正（換算）することができる。また、ケースＢでは、ケースＡに比して約３倍のコロニー形成率であったため、この結果を実施例１に適応した場合、約４００ｎｍまでの波長を遮断して光照射したときの臨界点は、全波長照射の臨界点である１２，０００ルクス・時の約３倍の３６，０００ルクス・時と推測することができる。
【００２９】
また、培養作業における照度が１，０００ルクス、輸送作業における照度が０ルクス（遮光）、移植作業（臨床現場）における照度が４，１００ルクスの場合の一例を、表１に示す。表１の場合、光照射を制御しない全波長照射の場合の露光量の総量は１９，２００ルクス・時となり、臨界点１２，０００ルクス・時を超える。そのため、著しい細胞障害が生じる可能性がある。これに対して、「照度を低くする」「作業時間を短くする」などで露光量を低減させる方法も考えられるが、表１では波長を制御した場合を示している。図５の約５００ｎｍまでの波長を遮断したケースＣでは、全波長照射したケースＡに比して約５倍のコロニー形成率であった。このことから、ケースＣの波長係数は１／５（＝０．２）であり、ケースＣの露光量に波長係数０．２を乗じると全波長照射したときの露光量に補正（換算）することができる。移植作業において、ケースＡのように全波長照射を行い、培養作業において、ケースＣのように約５００ｎｍまでの波長を遮断するように光照射を制御すると、露光量×波長係数の総量は表１の補正後の露光量の欄に示すように１０，４００ルクス・時となり、臨界点１２，０００ルクス・時を超えないようにすることができる。
【００３０】
表１のように各作業における光の照射状態が異なる場合であっても、露光量（＝照度×照射時間）を波長係数で補正し、補正後の露光量の総量が臨界点を超えないようにすることによって、細胞に障害が発生しないようにすることができる。
【００３１】
【表１】
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【００３２】
なお、実施例１〜４では、角膜上皮細胞について説明したが、表皮細胞についてもこれと同様の傾向が見られた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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