(57)【要約】【課題】NASHの予防又は治療可能な組成物、インスリン抵抗性を改善できる組成物を提供する。【解決手段】シジミ抽出物を含む、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）の予防又は治療用、インスリン抵抗性改善用並びにElovl6阻害用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
シジミ抽出物を含む、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）の予防又は治療用組成物。
【請求項２】
シジミ抽出物を含む、インスリン抵抗性改善用組成物。
【請求項３】
シジミ抽出物を含む、Elovl6阻害用組成物。
【請求項４】
タブレット、カプセル、顆粒、散剤、液剤の形態である請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
加工食品の形態である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Elovl6阻害、NASH（非アルコール性脂肪性肝炎）の予防又は治療並びにインスリン抵抗性改善用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
食生活の欧米化に伴う高脂肪食化や運動不足などにより過栄養状態となり、この状態が肥満をきたし、インスリン抵抗性を亢進することが指摘されている（非特許文献１）。インスリン抵抗性が亢進すると、インスリンが十分血中に分泌されているにもかかわらず、血糖値が下がりにくくなり、血糖値を正常に保つためにより多くのインスリンが必要となる。
【０００３】
食生活の欧米化やライフスタイルの変化により非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）も増加している。NASHは肝炎から肝硬変、さらには肝臓がんを発症する危険があり、NASHを予防もしくは改善することが求められている。
【０００４】
長鎖脂肪酸伸長酵素であるElovl6は、インスリン抵抗性を高め、NASHを促進することが知られている（非特許文献２、３）。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】「インスリン抵抗性」、松澤祐次等編集、株式会社医学書院発行、１３５〜１５０頁、２００８年
【非特許文献２】Nature Medicine Vol.13, No.10, 1193-1201, 2007
【非特許文献３】Hepatology, Vol.56, No.6, 2199-2208, 2012
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、NASHの予防又は治療可能な組成物、インスリン抵抗性を改善できる組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、以下の組成物を提供するものである。
項１．  シジミ抽出物を含む、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）の予防又は治療用組成物。
項２．  シジミ抽出物を含む、インスリン抵抗性改善用組成物。
項３．  シジミ抽出物を含む、Elovl6阻害用組成物。
項４．  タブレット、カプセル、顆粒、散剤、液剤の形態である項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
項５．  加工食品の形態である、項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【発明の効果】
【０００８】
シジミ抽出物を含む組成物は、Elovl6を阻害することでNASHを予防もしくは治療でき、さらにインスリン抵抗性を改善することができる。したがって、シジミ抽出物を含む組成物は、Elovl6阻害剤、NASHの予防剤又はNASHの治療剤、インスリン抵抗性改善剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】クロレトン（Chloretone）で誘発されるElovl6の発現亢進をシジミ抽出物（FCE）、その脂質画分（fat）、タンパク質画分（Protein）がいずれも抑制することを示す。Basalはクロレトン非投与かつシジミ抽出物又はその画分非投与のコントロールである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明に使用されるシジミとしては、二枚貝であり、ヤマトシジミ（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、セタシジミ（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ  Ｓａｎｄａｉ）、マシジミ（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ  ｌｅａｎａ）やタイワンシジミ（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ  ｆｌｕｍｉｎｅａ）などが挙げられ、これらのいずれを使用してもよいが、好ましくはタイワンシジミが挙げられる。抽出に用いられるシジミは、冷凍であっても生であっても乾燥品であってもよく、加熱処理したものでもよい。シジミ抽出物に用いられるのはシジミの可食部である。
【００１１】
抽出溶媒は、水、エタノール、イソプロパノール、アセトン、酢酸、テトラヒドロフラン、ジオキサンなどの水混和性有機溶媒、クロロホルム、塩化メチレンなどの塩素化炭化水素、酢酸エチルなどのエステル、トルエンなどの芳香族炭化水素などが挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて使用できる。好ましい抽出溶媒は、水又は含水溶媒であり、さらに好ましくは水である。
【００１２】
抽出温度は室温から溶媒の沸点までの温度が挙げられ、例えば水を抽出溶媒として使用する場合には４０〜１００℃、好ましくは６０〜９５℃程度の温度が挙げられる。抽出時間は１〜２４時間程度が挙げられる。抽出後はろ過により不溶物を除去し、抽出液を濃縮することにより、シジミ抽出物を得ることができる。
【００１３】
抽出に使用する溶媒量は、可食部重量に対して１〜１０倍量程度、好ましくは１．５〜３倍量程度である。
【００１４】
１つの好ましい実施形態において、本発明の組成物は、経口摂取用の製剤の形態が好ましい。製剤としては、具体的には錠剤、カプセル剤(ハードカプセル、ソフトカプセル)、丸剤、チュアブル錠、口腔内崩壊錠、顆粒剤、散剤、液剤、ドリンク剤、懸濁剤、乳濁剤などが挙げられる。
【００１５】
本発明の組成物は、シジミ抽出物とともに製剤用の担体を含むことができる。このような担体としては、固形製剤の場合、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤などが挙げられ、液状製剤の場合、溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤などが挙げられる。として配合される。また、必要に応じて防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、安定化剤等の製剤添加物を用いることもできる。カプセル剤の担体としては、ハードカプセルの場合には、カプセル皮膜としてゼラチンを挙げることができ、ソフトカプセルの場合には、カプセル用皮膜として、ゼラチン、多価アルコール（グリセリン、ソルビトール、マンニトール、マルチトール等）等を挙げることができる。ソフトカプセルはさらに水を含んでいてもよい。賦形剤としては、乳糖、白糖、D-マンニトール、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、無水ケイ酸等が挙げられる。
【００１６】
結合剤としては、水、エタノール、1-プロパノール、2-プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、α-デンプン液、ゼラチン液、D-マンニトール、カルボキシメチルセルロース
、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドン等が挙げられる
。
【００１７】
崩壊剤としては、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖等が挙げられる。
【００１８】
滑沢剤としては、精製タルク、ステアリン酸塩ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、ホウ砂、ポリエチレングリコール等が挙げられる。
【００１９】
着色剤としては、酸化チタン、酸化鉄等が挙げられる。
【００２０】
矯味・矯臭剤としては白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸等が挙げられる。
【００２１】
緩衝剤としては、クエン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００２２】
安定剤としては、トラガント、アラビアゴム、ゼラチン等が挙げられる。
【００２３】
本発明の組成物は、サプリメントの形態であってもよい。
【００２４】
本発明の他の好ましい実施形態において、本発明の組成物は加工食品の形態であってもよい。このような加工食品としては、飲料、キャンディー，錠菓，スナック等の菓子類、ゼリー，ケーキ，クッキー又は饅頭等の洋・和菓子類、アイスクリームやシャーベット等の冷菓、パン、インスタント米飯、うどん、ラーメン、パスタ、そば等の麺類；スープ、ポタージュ、みそ汁等のスープ類及びその即席粉末食品（粉末みそ汁、粉末スープ、粉末ポタージュ等）、蒲鉾，竹輪，魚肉ハム及び魚肉ソーセージ等の練り製品、小魚，イカ，貝類等のしぐれ煮又はあめ煮といった佃煮、魚介類を水煮，味付け，油漬け，味噌付け又は佃煮等にして缶や瓶に封入してなる水産物缶・瓶詰などが挙げられる。
【実施例】
【００２５】
以下に参考例、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、これらは本発明を限定するものではない。
実施例１
（１）実験方法
実験動物として4週令のWistar系雄ラット（日本SLCにより購入）30匹をステンレスケージに入れ、23±1℃の動物室において12時間の明暗交代下(明期 20：00〜8：00、暗期 8:00〜20:00) で飼育し、実験開始まで水および飼料は自由摂食とした。
【００２６】
固形飼料 (5L37：日本SLC) で2日間飼育し、環境に慣れさせた。基本食（精製食AIN−93G）を3日間与えた後に、実験食開始日に各群の平均体重が等しくなるように群分けをし
て、14日間実験食を与えた。実験食期間に各群を、20％カゼイン食を与えた基本食群、0.3％のクロレトンを加えた対照群（クロレトンChloretone群）、シジミ抽出物（FCE）を与えたFCE群、FCEの脂質画分を与えた脂質画分（Fat fraction）群、FCEのタンパク質画分
を与えたタンパク質画分（Protein fraction）群に分けた。FCE群は28.98質量%、Fat fraction群は6.05質量%、Protein fraction群は24.30質量%となるように餌に混合した。FCE
及びFat fraction群、Protein fraction群にはControl群と同様に0.3%クロレトンを与え
ている。
【００２７】
シジミ抽出物及び脂質画分とタンパク質画分は以下のように行われた。
【００２８】
まず、タイワンシジミ（Ｃｏｒｂｉｃｕｌａ  ｆｌｕｍｉｎｅａ） を蒸煮し、殻を非
可食部として取り除き、可食部を熱水にて撹拌抽出し、80 meshの濾布で濾過した。濾液
を噴霧乾燥し、シジミ抽出物（FCE）を得た。FCEの各画分は、FCEをクロロホルム：メタ
ノール＝２：１で抽出したものを脂質画分とし、残渣をβ−アミラーゼで処理し、アセトンによって沈殿させたものをろ過し、タンパク質画分とした。
【００２９】
飼育期間中、餌換えは2日に1回行い、自由摂食させた。解剖当日から絶食を行い、断頭屠殺し、解剖を行った。解剖時に肝臓を取り出し、遺伝子解析に必要なRNAをChomczunskiらの方法により抽出した。
【００３０】
遺伝子解析はリアルタイムPCR法により行った。cDNAはHigh capacity RNA-to-cDNA kit
(Applied Biosystems, Inc., California, USA #4387406) を用いて調製した。使用したプライマーは以下の通りである（Apo E Forward, 5’-TGAACCGCTTCTGGGATTAC-3’; Apo E
Reverse, 5’-TGTGTGACTTGGGAGCTCTG-3’, ELOVL6 Forward, 5’-ACCCGAACTAGGTGATACG-5’; ELOVL6 Reverse, 5’-CCCAGCTACCATGTCTTTG-3’）。反応はStepOne real time PCR system (Applied Biosystems, Inc., California, USA) で行い、検量線法によってmRNA
量を算出した。Apo EのmRNA量を内部標準として用い、各遺伝子のmRNA量を補正した。
【００３１】
統計処理は一元配置分散分析を行い、P<0.05の時に個々の平均値の比較としてDuncanの多重範囲検定法を用いた。その結果、P<0.05の時に有意差ありとした。
（２）結果
ELOVL6 mRNA量は基本食群に対してクロレトン群で有意に上昇した。一方で、FCE、FCE
の脂質画分およびFCEのタンパク質画分はクロレトンによって誘導されたELOVL6 mRNA量の上昇を有意に抑制した（図１）。
【００３２】
シジミ抽出物は、ELOVL6の発現を阻害することで非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）を予防又は治療し、インスリン抵抗性を改善できることが実証された。
【図１】
2017019726.tif 000002
【配列表】
2017019726000001.app