(57)【要約】【課題】  多血小板血漿などの血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた血小板濃縮製剤の製造方法を提供すること。【解決手段】  本発明の血小板濃縮製剤の製造方法は、血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによるものである。本発明によれば、血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた、長期保存が可能な血小板濃縮製剤を製造することができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによる血小板濃縮製剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血小板濃縮製剤の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
多血小板血漿（Ｐｌａｔｅｌｅｔ  Ｒｉｃｈ  Ｐｌａｓｍａ：以下「ＰＲＰ」と略称する）は、血液中に含まれる３種類の血球（赤血球、白血球、血小板）のうちの血小板のみを高濃度に濃縮させたものであり、細胞の再生を促す種々の成分、例えば、ＥＧＦ（表皮増殖因子：Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＰＤＧＦ（血小板増殖因子：Ｐｌａｔｅｌｅｔ−Ｄｅｒｉｖｅｄ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子：Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＩＧＦ（インスリン様成長因子：Ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＦＧＦ（線維芽細胞増殖因子：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＨＧＦ（肝細胞増殖因子：Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）、ＴＧＦ（トランスフォーミング増殖因子：Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ）などの増殖因子などが含まれていることから、骨、血管、皮膚などの再生促進機能を有することが知られており、難治性皮膚潰瘍などの治療に用いられている。ＰＲＰの調製は、例えばＰＲＰを適用する患者から採血した血液を遠心分離することで行われているが（特許文献１）、こうした方法で調製されるＰＲＰには、血小板と分離しきれなかった白血球が含まれている場合がある。しかしながら、ＰＲＰに白血球が含まれていても、その数はわずかであるので、ＰＲＰに含まれている白血球の有核細胞としての機能を喪失させるための措置は行われていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００６−７８４２８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
そこで本発明は、ＰＲＰなどの血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた血小板濃縮製剤の製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
上記の点に鑑みてなされた本発明の血小板濃縮製剤の製造方法は、請求項１記載の通り、血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによるものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、ＰＲＰなどの血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することで、血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた、長期保存が可能な血小板濃縮製剤を製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の血小板濃縮製剤の製造方法は、血小板濃縮物に対し、細胞膜破壊処理を施した後、冷凍することによるものである。
【０００８】
本発明において、血小板濃縮製剤の原料となる血小板濃縮物としては、例えばＰＲＰが挙げられる。ＰＲＰは、例えば、ＰＲＰを適用する患者から採血した血液を、採血に用いたシリンジのままやシリンジからスピッツや真空採血管に移し替えて遠心分離することによって調製することができる。遠心分離の条件は公知の条件を採用することができる。また、血小板濃縮製剤の原料となる血小板濃縮物は、ｉＰＳ細胞やＥＳ細胞などの幹細胞由来の血小板を、その取得態様に応じて濃縮したものであってもよい。
【０００９】
血小板濃縮物に対する細胞膜破壊処理としては、超音波破砕による方法や界面活性剤添加による方法などが例示される。血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施すことによって白血球の細胞膜を破壊し、白血球の有核細胞としての機能を喪失させることで、機能の発現による不測の事態が起こらないように徹底することが本発明の目的である。超音波破砕による方法は、超音波破砕機や超音波洗浄機などを用いて行うことができる。例えば、超音波破砕機を用いてＰＲＰに対して細胞膜破壊処理を施す場合、調製したＰＲＰ（遠心分離機にかけた容器内で分離したＰＲＰ）を、シリンジで抜き取ってスピッツや真空採血管に移し替え、氷冷下、連続的または間欠的に、１０秒間〜５分間行えばよい。超音波洗浄機を用いる場合、室温下、１分間〜３０分間行えばよい。なお、血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施すと、血小板の細胞膜も破壊されるが、血小板の細胞膜が破壊されても、血小板に含まれる各種の成分の量などが低下するといったことはない。
【００１０】
細胞膜破壊処理を施した血小板濃縮物は、冷凍することで長期保存が可能となる。細胞膜破壊処理を施した血小板濃縮物の冷凍は、例えば、血小板濃縮物に対して細胞膜破壊処理を施した容器のまま、あるいは、容器内から細胞膜破壊処理を施した血小板濃縮物を抜き取ったシリンジの先端をルアーキャップなどで密封し、−１８℃〜−１９６℃で行えばよい。こうして冷凍された本発明の血小板濃縮製剤は、例えば自然解凍してから患者に適用することができる。
【実施例】
【００１１】
以下、本発明を実施例によって詳細に説明するが、本発明は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００１２】
実施例１：
抗凝固剤として６００μｌのクエン酸ナトリウム液（扶桑薬品工業株式会社）を２０ｍｌのシリンジ（テルモ株式会社）に分取し、３名の健常者から１２ｍｌの採血を行った。それぞれの血液１０ｍｌを真空採血管（日本ベクトン・ディッキンソン）に移し、２回遠心分離法を実施して（１回目：２００Ｇで１５分間、２回目：１２００Ｇで１５分間）、０．５ｍｌのＰＲＰを調製した。調製されたそれぞれのＰＲＰ０．４ｍｌに対し、超音波破砕機（東京超音波技研株式会社）を用いて２０分間の超音波破砕を行った。超音波破砕の条件は、１５０Ｗ出力、氷冷下、１５秒照射と２０秒停止のサイクルを７回とした。超音波破砕を行ったＰＲＰに白血球が含まれるかどうかを検査会社に依頼して調べたところ、３名のＰＲＰすべてにおいて、超音波破砕を行う前に認められた白血球の存在が超音波破砕を行った後は認められなかった。また、超音波破砕を行ったＰＲＰを−２０℃で冷凍し、７日後、自然解凍し、血小板に含まれている増殖因子の含有量をＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍ社のＥＬＩＳＡキットを用いて調べたところ、ＥＧＦ：１８００〜４０００ｐｇ／ｍｌ、ＰＤＧＦ：１６３００〜２４０００ｐｇ／ｍｌ、ＶＥＧＦ：６００〜２６００ｐｇ／ｍｌ、ＩＧＦ：１０〜５０ｐｇ／ｍｌ、ＦＧＦ：２００〜４００ｐｇ／ｍｌ、ＨＧＦ：７００〜９００ｐｇ／ｍｌ、ＴＧＦ：２４００〜６０００ｐｇ／ｍｌであって、超音波破砕を行う前の含有量とほぼ同じであり、ＰＲＰに対して超音波破砕を行ったこととその後に冷凍したことによる増殖因子の含有量の低下は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００１３】
本発明は、ＰＲＰなどの血小板濃縮物に含まれている乃至は含まれている可能性のある白血球の有核細胞としての機能を喪失させた血小板濃縮製剤の製造方法を提供することができる点において産業上の利用可能性を有する。