(57)【要約】【課題】希少細胞及び血液を含有する液体から、希少細胞を高い捕捉率で捕捉する方法を提供する。【解決手段】希少細胞及び血液を含有する液体から赤血球の少なくとも一部を除去する工程と、赤血球の少なくとも一部を除去した該液体をフィルターでろ過する工程と、を含む、希少細胞を捕捉する方法。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
希少細胞及び血液を含有する液体から赤血球の少なくとも一部を除去する工程と、
赤血球の少なくとも一部を除去した該液体をフィルターでろ過する工程と、
を含む、希少細胞を捕捉する方法。
【請求項２】
除去する工程において、希少細胞及び血液を含有する液体を遠心分離して、分離された赤血球の少なくとも一部を除去する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
除去する工程において、希少細胞及び血液を含有する液体に溶血剤を添加する、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
フィルターの孔径が５μｍ〜１５μｍである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
希少細胞が、血中循環癌細胞又は血中循環内皮細胞である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、希少細胞を捕捉する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌細胞濃縮の研究及び臨床的意義は極めて大きく、血液中の癌細胞を濃縮、すなわち癌細胞を選択的に捕捉することができれば、癌の診断に応用することができる。例えば、癌の予後及び治療に最も重要な要素は、初診時及び処置時における癌細胞の転移の有無である。癌細胞の初期の拡散が末梢血中に及んだ場合、血中循環癌細胞（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｔｕｍｏｒ  Ｃｅｌｌ、以下、「ＣＴＣ」ともいう。）を検出することは、癌の病状進行を判断する有用な手段である。しかしながら、血液中には、赤血球及び白血球等の血液成分が圧倒的に多く存在するため、極めて少量のＣＴＣの検出は困難である。血中循環内皮細胞（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  Ｃｅｌｌ、以下、「ＣＥＣ」ともいう。）も癌の予後及び治療のバイオマーカーとして利用されるが、血中には極めて少量しか存在せず、ＣＴＣと同様に検出は困難である。
【０００３】
血液からＣＴＣ及びＣＥＣ等の希少細胞を濃縮する方法として、フィルターを用いる方法（以下、「フィルター法」ともいう。）がある。フィルター法は、細胞のサイズ及び変形能の違いで希少細胞を濃縮する方法である。
【０００４】
フィルター法の一例として、パリレンを用いた樹脂フィルターを使用することで、少量のＣＴＣを検出する方法が提案されている（特許文献１）。
【０００５】
フィルター法の他の例として、金属を用いたフィルターを使用することでフィルターの強度を向上させ、白血球と癌細胞の変形能の違いにより、これらを分離する方法が提案されている（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】国際公開第２０１０／１３５６０３号
【特許文献２】特開２０１３−４２６８９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
血液中に存在する希少細胞の数は極めて少なく、場合によっては、血液７．５ｍＬ中に希少細胞が１個しか存在しないこともある。また、希少細胞は、その細胞ごとに表面のタンパク質の種類及び数などの性質が異なると考えられており、その不均一性を測定するために、希少細胞の喪失を可能な限り防止することが求められる。
【０００８】
本発明は、このような課題に鑑みてなされたものであり、希少細胞及び血液を含有する液体から、希少細胞を高い捕捉率で捕捉する方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の希少細胞を捕捉する方法は、希少細胞及び血液を含有する液体から赤血球の少なくとも一部を除去する工程（除去工程）と、赤血球の少なくとも一部を除去した該液体をフィルターでろ過する工程（ろ過工程）と、を含む。
【００１０】
希少細胞及び血液を含有する液体をフィルターでろ過して希少細胞をフィルター上に捕捉する場合、通常、赤血球は、希少細胞及び白血球と比べて小さい細胞直径を有するため、血小板及び非血球成分とともにフィルターの孔を容易に通り抜け、希少細胞の捕捉率には影響を及ぼさないと考えられた。しかしながら、上記のように希少細胞及び血液を含有する液体から、あらかじめ、少なくとも一部の赤血球を除去しておくことで、希少細胞の捕捉率を向上することができる。特定の理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、本発明における赤血球除去の作用を以下のように推定している。すなわち、赤血球を除去することで希少細胞及び血液を含有する液体の粘度が低下し、希少細胞をフィルターの貫通孔へ押し出す力が減少するため、希少細胞がフィルターを通過（希少細胞の喪失）することを軽減できるものと考えられる。
【００１１】
ここで、除去工程において、希少細胞及び血液を含有する液体を遠心分離して、分離された赤血球の少なくとも一部を除去してもよい。また、除去工程において、希少細胞及び血液を含有する液体に溶血剤を添加してもよい。
【００１２】
また、フィルターの孔径は５μｍ〜１５μｍであってもよい。
【００１３】
さらに、希少細胞は、血中循環癌細胞又は血中循環内皮細胞であってもよい。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、希少細胞及び血液を含有する液体から、希少細胞を高い捕捉率で捕捉することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】フィルターの模式図である。
【図２】ＣＴＣ捕捉装置の構成を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
「希少細胞」とは、捕捉の対象となる細胞のことであり、その細胞数の割合が希少細胞及び血液を含有する液体に含有される全細胞の総数に対して極めて小さいものをいう。希少細胞は、例えば、ＣＴＣ若しくは癌幹細胞等の癌細胞又はＣＥＣ等の内皮細胞である。
【００１７】
希少細胞及び血液を含有する液体は、血液であることができ、血液を緩衝液などの液体で希釈したものであることができる。
【００１８】
「捕捉」とは、細胞を含有する液体をフィルターでろ過して、細胞をフィルター上に残留させることを意味する。
【００１９】
本発明の希少細胞を捕捉する方法は、希少細胞及び血液を含有する液体から赤血球の少なくとも一部を除去する除去工程と、赤血球の少なくとも一部を除去した該液体をフィルターでろ過するろ過工程と、を含む。以下、これらの工程について図１及び図２を参照しながら、詳細に説明していく。
【００２０】
まず、希少細胞及び血液を含有する液体中の赤血球の少なくとも一部を除去する除去工程ついて説明する。
【００２１】
希少細胞及び血液を含有する液体中の赤血球の少なくとも一部を除去する方法としては、例えば、遠心分離による方法が挙げられる。希少細胞及び血液を含有する液体を遠心分離することで、血液の成分ごとに層が形成される。層は上の層から順に、血漿層、バフィーコート層、赤血球層である。バフィーコート層は、白血球を含む層であり、希少細胞もこの層に分離される。赤血球層の少なくとも一部を除去することで、希少細胞及び血液を含有する液体中の赤血球の少なくとも一部を除去することができる。上記遠心分離による方法は取り扱い性が良いため、赤血球を除去する方法として好ましい。また、希少細胞及び血液を含有する液体に抗凝固剤を添加した後に遠心分離を行うと、血液成分を十分に分離することができるため、好ましい。
【００２２】
除去する赤血球層の量は、赤血球層の全量に対して、５０％以上であることが好ましく、１００％であることがより好ましい。
【００２３】
遠心分離時の遠心力は、１００×ｇ〜１５００×ｇが好ましく、２００×ｇ〜１３００×ｇがより好ましく、３００×ｇ〜１０００×ｇがさらに好ましい。遠心力が１００×ｇ以上であれば、血液成分を十分に分離することができる。遠心力が１５００×ｇ以下であれば、希少細胞が遠心力で破壊されるリスクを軽減できる。
【００２４】
遠心分離時の遠心時間は、１分〜６０分が好ましく、３分〜３０分がより好ましく、５分〜１５分がさらに好ましい。遠心時間が１分以上であれば、血液成分を十分に分離することができる。遠心時間が６０分以下であれば、作業時間の観点から好ましい。
【００２５】
希少細胞及び血液を含有する液体が血液である場合、通常の方法により被験者から採血することで血液（血液サンプル）を得られる。この場合、抗凝固剤及び固定剤等、血液サンプルに従来添加される添加剤がさらに添加されることができる。抗凝固剤としては、例えば、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ−２Ｎａ）、エチレンジアミン四酢酸二カリウム（ＥＤＴＡ−２Ｋ）、クエン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム及びヘパリンが挙げられる。固定剤としては、例えば、パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）、グルタルアルデヒド及びエタノールが挙げられる。これらの添加剤は、採血する前の採血管にあらかじめ入れておくこともできるし、採血後に添加することもできる。血液サンプルは、例えば、緩衝液で希釈されることもできる。
【００２６】
希少細胞及び血液を含有する液体中の赤血球の少なくとも一部を除去する他の方法として、希少細胞及び血液を含有する液体に溶血剤を添加する方法が挙げられる。溶血剤は物理的又は化学的に赤血球に作用し、赤血球を溶解する試薬である。溶血剤としては、従来使用されているものを使用することができ、例えば、塩化アンモニウム、合成界面活性剤及びアルコールが挙げられる。遠心分離による方法と溶血剤による方法とを併用してもよい。
【００２７】
次に、赤血球の少なくとも一部を除去した上記液体をフィルターでろ過するろ過工程について説明する。
【００２８】
この工程により、希少細胞及び血液を含有する液体から残りの血液成分を除去し、希少細胞を選択的に捕捉する。
【００２９】
以下、図１を参照しながら、この工程で使用し得るフィルターについて説明する。フィルター２００は、プラスチック又は金属等の薄膜１２０に多数の貫通孔１１０が形成されている構造を有するものであれば特に限定されず、従来公知のものを使用することができる。フィルター２００は、希少細胞及び血液を含有する液体から希少細胞以外の成分をろ液とともに取り除き、貫通孔１１０を通過しなかった希少細胞をその表面に捕捉する。
【００３０】
フィルター２００は金属からなることが好ましく、細胞毒性が低いという観点から、表面に金めっきを有する金属からなることが好ましい。また、フィルター２００は、あらかじめ、哺乳動物の血清又は血漿に浸漬することでフィルター表面の生体適合性が向上されたものが好ましい。このように表面が処理されたフィルター２００であれば、ろ過工程においてフィルター２００の表面に血球細胞が吸着するのを防ぐことができる。
【００３１】
希少細胞及び血液を含有する液体として癌細胞を含む血液を使用する場合には、フィルターの貫通孔１１０が、好ましくは５μｍ〜１５μｍ、より好ましくは６μｍ〜１２μｍ、さらに好ましくは７μｍ〜１０μｍの孔径を有するフィルターを用いることによって、赤血球、白血球、及び血小板等の血液成分をろ液として取り除き、希少細胞である癌細胞をフィルター２００に捕捉することができる。なお、本明細書において貫通孔１１０の孔径（単に「フィルターの孔径」ともいう。）とは、貫通孔１１０を通過できる球の直径の最大値をいう。
【００３２】
希少細胞を捕捉後、捕捉した希少細胞を回収して、希少細胞含有液を得ることができる。希少細胞の回収方法としては、例えば、逆洗、マイクロマニピュレーション及びピペッティングが挙げられる。逆洗とは、フィルターの、細胞が捕捉された面とは反対の面から液を流し、フィルター上に捕捉された細胞をはがし取ることをいう。マイクロマニピュレーションとは、ピコピペットを用いて細胞１つ１つをフィルター上から回収することをいう。ピペッティングとは、フィルター上の液体をマイクロピペットを用いて混合し、フィルター上に捕捉された細胞をはがし取ることをいう。
【実施例】
【００３３】
以下、実施例に基づき発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００３４】
（フィルターの作製）
感光性樹脂組成物（ＰＨＯＴＥＣ  ＲＤ−１２２５：厚さ２５μｍ、日立化成株式会社製）を２５０ｍｍ角の基板（ＭＣＬ−Ｅ６７９Ｆ：ＭＣＬの表面にピーラブル銅箔を貼り合わせた基板、日立化成株式会社製）の片面にラミネートした。ラミネートは、ロール温度９０℃、圧力０．３ＭＰａ及びコンベア速度２．０ｍ／分で行った。
【００３５】
基板の感光性樹脂組成物をラミネートした面に、開口率６．７％で開口部を有するガラスマスクを静置した。ガラスマスクの開口部は、光の透過部であり、７．８μｍ×１００μｍ大の角丸長方形状の貫通孔が、ガラスマスクの長軸及び短軸方向に沿って、一定のピッチで同一方向を向いて整列している。なお、上記角丸長方形のサイズは、角丸長方形を形成する長方形の短辺の長さ（７．８μｍ）と長辺の長さ（１００μｍ）によって規定されている。また、開口率とは、フィルター全体の面積に対する貫通孔が占める面積をいう。
【００３６】
６００ｍｍＨｇ以下の真空下において、紫外線照射装置を用いて、ガラスマスクを載置した基板に露光量３０ｍＪ／ｃｍ２で紫外線を照射した。
【００３７】
紫外線照射後の基板を１．０％炭酸ナトリウム水溶液で現像し、基板上に角丸長方形のフォトレジストが並んだレジスト層を形成した。このレジスト層付き基板を、ｐＨ４．５のニッケルめっき液で、液中温度５５℃で約２０分処理し、露出した銅箔上に厚み約２０μｍのニッケルめっきを形成した。ニッケルめっき液の組成を表１に示す。
【００３８】
【表１】
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【００３９】
得られたニッケルめっき層をピーラブル銅箔とともに基板から剥離した。このニッケルめっき層付き銅箔を、温度４０℃のエッチング薬液（メックブライトＳＦ−５４２０Ｂ、メック株式会社製）中、約１２０分間撹拌し、銅箔部分を化学的溶解によって除去することで、金属フィルターとなるニッケルの自立膜（サイズ２０ｍｍ×２０ｍｍ）を得た。
【００４０】
自立膜を、温度６０℃のレジスト剥離液（Ｐ３  Ｐｏｌｅｖｅ、Ｈｅｎｋｅｌ社製）中、約４０分間超音波処理することで、自立膜内に残ったフォトレジストを除去し、微細貫通孔を有する金属フィルターを得た。完成した金属フィルターは、シワ、折れ、キズ及びカール等のダメージはなく、充分な精度の貫通孔を有していた。
【００４１】
温度４０℃の酸性脱脂液Ｚ−２００（株式会社ワールドメタル社製）に金属フィルターを３分間浸漬し、金属フィルター上の有機物を除去した。
【００４２】
金属フィルターを水洗後、非シアン系の置換型無電解Ａｕめっき液であるＨＧＳ−１００（日立化成株式会社製）からＡｕ供給源である亜硫酸金を抜いた液に、金属フィルターを８０℃で１０分浸漬し、置換金めっき前処理を行った。次いで、金属フィルターを８０℃のＨＧＳ−１００に２０分浸漬し、置換金めっきを行った。置換金めっきの厚みは０．０５μｍであった。
【００４３】
めっき処理した金属フィルターを水洗後、非シアン系還元型無電解Ａｕめっき液であるＨＧＳ−５４００（日立化成株式会社製）に金属フィルターを６５℃で１０分浸漬し、金めっきを行った。その後、金属フィルターを水洗し、乾燥させた。金めっきの厚みの合計は０．２μｍであった。
【００４４】
（ＣＴＣ捕捉装置）
以下、本実施例で使用するＣＴＣ捕捉装置について、図２を参照しながら説明する。図２に示すＣＴＣ捕捉装置１００は、血液サンプルをフィルターでろ過することで、サンプル中に含まれる希少細胞を捕捉する装置である。また、捕捉された希少細胞を染色液で染色し、希少細胞の特定及び希少細胞の個体数のカウント等も行うことができる。
【００４５】
ＣＴＣ捕捉装置１００には、フィルターを内部に備えるフィルターユニット１、フィルターユニット１に処理液を供給する処理液流路３、フィルターユニット１にサンプルを供給するサンプル流路４が設けられている。
【００４６】
処理液流路３の上流側には、それぞれ異なる処理液が入った複数の処理液収納容器５が設けられている。処理液収納容器５に投入される処理液としては、例えば、希少細胞を染色するための染色液、及びフィルターに捕捉された希少細胞等を洗浄するための洗浄液が挙げられる。各処理液収納容器５にはそれぞれ軟質チューブが挿入されて個別の処理液流路６を形成している。これらの流路は選択バルブ８に接続されており、選択バルブ８を回転させることにより処理液流路３に接続する処理液が選択される。
【００４７】
サンプル流路４には、リザーバー１０が接続されており、サンプルはこのリザーバー１０に供給される。フィルターユニット１には、処理液及びサンプルのいずれか一方を供給する構成となっており、処理液及びサンプルのうちいずれの液体を供給するかの制御は流路３，４のそれぞれに取り付けられたピンチバルブ１２，１３よって切り替える。
【００４８】
処理液及びサンプルの供給は、フィルターユニット１の下流に設けられたペリスタポンプ１４によって吸引することで行われる。サンプル又は処理液は、処理液流路３又はサンプル流路４の内部を流れてフィルターユニット１に供給され、その後廃液タンク１６に流れ込む。サンプル中の希少細胞は、フィルターユニット１内の流路上に設けられたフィルターによって捕捉され、染色液によって染色される。
【００４９】
上記の各部は制御部４８により制御される。具体的には、選択バルブ８の制御は、制御部４８からの指示に基づいて選択バルブドライバ４９により行われる。ピンチバルブ１２，１３は、それぞれに接続された２つのバルブドライバ５０により制御される。ペリスタポンプ１４の駆動は、ポンプドライバ５１により制御される。
【００５０】
（癌細胞懸濁液の調製）
非小細胞癌細胞株であるＮＣＩ−Ｈ３５８細胞を、培養フラスコ中で、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含むＲＰＭＩ−１６４０培地にて、５％ＣＯ２条件下、３７℃で静置培養した。トリプシン処理により細胞を剥離させて回収し、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）で洗浄後、２ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．５％ＢＳＡを含むＰＢＳ（以下、「洗浄液」ともいう。）に懸濁し、癌細胞懸濁液を得た。ＰＢＳは、和光純薬工業株式会社製の製品コード１６６−２３５５５のものを用いた。ＢＳＡは、Ａｌｂｕｍｉｎ  ｆｒｏｍ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ−Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ  ｐｏｗｄｅｒ，Ｂｉｏ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を用いた。ＥＤＴＡ−２Ｎａは、和光純薬工業株式会社製の製品コード３４５−０１８６５のものを用いた。
【００５１】
（実施例１）
健常人ドナーの血液をＥＤＴＡ−２Ｎａ含有真空採血管に採血し、採血より４８時間経過後、癌細胞が５００個となる量の癌細胞懸濁液を加え、３ｍＬの血液サンプルを調製した。
【００５２】
上記血液サンプルを遠心力４００×ｇで１０分間遠心し、赤血球層をマイクロピペットで取り除くことで、赤血球濃度０％の血液サンプルを得た。
【００５３】
上記ＣＴＣ捕捉装置１００を用いて、以下の実験を行った。まず、リザーバー１０に洗浄液を入れ、フィルターユニット１の内部を洗浄液で満たした。続いて、血液サンプルをリザーバー１０に導入し、流速６００μＬ／分で約１５分間送液した。処理液収納容器５から洗浄液６ｍＬを送液してフィルターを洗浄した。
【００５４】
ＰＢＳに固定剤である４％ＰＦＡを溶かした液をフィルターユニット１に送液し、細胞が捕捉されたフィルターを１５分浸した。フィルターを洗浄液で洗浄後、ＰＢＳに０．２％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）を溶かした液をフィルターユニット１に送液し、フィルターを１５分浸した。
【００５５】
洗浄液でフィルターを洗浄後、２ｍＬの細胞染色液（ＦＩＴＣ標識抗Ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ抗体、ＰＥ標識抗ＣＤ４５抗体、１μｇ／ｍＬ  Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２）をフィルターユニット１に送液し、フィルター上の細胞を３０分間蛍光染色した。その後、洗浄液３ｍＬで細胞を洗浄した。
【００５６】
コンピューター制御式電気ステージ及び冷却デジタルカメラ（ＡｘｉｏＣａｍ  ５０６  ｍｏｎｏ、カールツァイスマイクロスコピー社製）を装備した蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏ  Ｉｍａｇｅｒ  Ｍ２、カールツァイスマイクロスコピー社製）でフィルターを観察した。ＦＩＴＣ由来の蛍光を観察するために、蛍光顕微鏡にＦｉｌｔｅｒ  ｓｅｔ  ３８（カールツァイスマイクロスコピー社製）を使用し、観察視野の画像を取得した。画像の取得及び解析にはＺＥＮ（カールツァイスマイクロスコピー社製）を用いた。癌胞数（ＦＩＴＣ陽性細胞数）を計測し、癌細胞の捕捉率（％）を、癌細捕捉率＝捕捉された癌細胞数／血液サンプルに加えた癌細胞数×１００、として算出した。
【００５７】
以上の実験を、健常人ドナー３人分の血液について行い、得られた癌細胞捕捉率の平均値を求めた。
【００５８】
（実施例２）
赤血球濃度０％の血液サンプルの代わりに、血液サンプルを遠心分離した後、赤血球層全量の５０体積％に相当する量の赤血球層と、赤血球層全量の５０体積％に相当する量の血漿層と、をマイクロピペットで取り除いた血液サンプル（赤血球濃度が、赤血球除去前の血液サンプルの赤血球濃度に対して５０％）を使用した以外は実施例１と同様にして実験を行い、フィルターに捕捉された癌細胞の捕捉率の平均値を求めた。
【００５９】
（比較例１）
赤血球層を取り除かなかったこと、及び、使用した血液サンプルの数を健常人ドナー２人分としたこと以外は、実施例１と同様にして実験を行い、フィルターに捕捉された癌細胞の捕捉率の平均値を求めた。
【００６０】
（評価）
実施例１，２及び比較例１の結果を表２に示す。実施例１及び２で示されるように、血液サンプルをフィルターでろ過する前に血液サンプル中の赤血球を除去しておくと、赤血球を除去しなかった比較例１と比べて、高い捕捉率で癌細胞を捕捉することができた。
【００６１】
【表２】
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【００６２】
（実施例３）
実施例１と同様に、健常人ドナーの血液をＥＤＴＡ−２Ｎａ含有真空採血管に採血し、採血より４８時間経過後、癌細胞が５００個となる量の癌細胞懸濁液を加え、３ｍＬの血液サンプルを調製した。
【００６３】
血液サンプルに、溶血剤としてＶｅｒｓａＬｙｓｅ Ｌｙｓｉｎｇ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ社製）３０ｍＬを加え、ボルテックスミキサーで混合し、室温で１０分間反応させて血液サンプルを溶血した。溶血後のサンプルを遠心力４００×ｇで１０分間遠心し、上清をマイクロピペットで取り除くことで、赤血球濃度０％の血液サンプルを得た。
【００６４】
溶血により得られた上記赤血球濃度０％の血液サンプルを血液サンプルとして使用した以外は実施例１と同様にして実験を行い、フィルターに捕捉された癌細胞の捕捉率を求めた。溶血剤の添加により、実施例１と同様に癌細胞捕捉率の向上が認められた。
【符号の説明】
【００６５】
１…フィルターユニット、３、６…処理液流路、４…サンプル流路、５…処理液収納容器、８…選択バルブ、１０…リザーバー、１２，１３…ピンチバルブ、１４…ペリスタポンプ、１６…廃液タンク、４８…制御部、４９…選択バルブドライバ、５０…バルブドライバ、５１…ポンプドライバ、１００…ＣＴＣ捕捉装置、１１０…貫通孔、１２０…薄膜、２００…フィルター。
【図１】
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【図２】
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