(57)【要約】【課題】フェノールを実質的に含有しないＡＰＴＴ測定用試薬において、新規な方法によってエラグ酸の沈殿を抑制するＡＰＴＴ測定用試薬を提供すること。【解決手段】エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含むＡＰＴＴ測定用試薬、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む第１試薬と、カルシウム塩を含む第２試薬とを含むＡＰＴＴ測定用試薬キット、並びに血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを混合して試料を得る第１混合工程、第１混合工程で得られた試料とカルシウム塩とを混合して測定試料を得る第２混合工程、および第２混合工程で得られた測定試料のＡＰＴＴを測定する工程を含むＡＰＴＴの測定法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬。
【請求項２】
前記ポリビニルアルコール化合物のけん化度が７２〜８９ｍｏｌ％である請求項１に記載の試薬。
【請求項３】
前記ポリビニルアルコール化合物の重合度が３００〜５００である請求項１または２記載の試薬。
【請求項４】
前記ポリビニルアルコール化合物の含有量が、０．０２５〜０．２質量％である請求項１〜３のいずれか１項に記載の試薬。
【請求項５】
前記エラグ酸化合物１００質量部あたりの前記ポリビニルアルコール化合物の量が、１０〜５０質量部である請求項１〜４のいずれか１項に記載の試薬。
【請求項６】
金属イオン形成化合物をさらに含む請求項１〜５のいずれか１項に記載の試薬。
【請求項７】
前記金属イオン形成化合物が亜鉛イオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物との混合物またはマンガンイオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物との混合物である請求項６に記載の試薬。
【請求項８】
芳香族アミノ酸化合物をさらに含む請求項１〜７のいずれか１項に記載の試薬。
【請求項９】
フェノールを実質的に含有しない請求項１〜８のいずれか１項に記載の試薬。
【請求項１０】
エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む第１試薬と、
カルシウム塩を含む第２試薬と
を含む活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬キット。
【請求項１１】
血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを混合して試料を得る第１混合工程、
前記第１混合工程で得られた試料とカルシウム塩とを混合して測定試料を得る第２混合工程、および
前記第２混合工程で得られた測定試料の活性化部分トロンボプラスチン時間を測定する工程
を含む活性化部分トロンボプラスチン時間の測定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬、活性化部分トロンボプラスチン時間測定用試薬キットおよび活性化部分トロンボプラスチン時間の測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
凝固の活性化剤としてのエラグ酸と、エラグ酸の沈殿を抑制する物質としてのフェノールとを含有している活性化部分トロンボプラスチン時間（以下、「ＡＰＴＴ」ともいう）測定用試薬がある。しかし、環境負荷物質であるフェノールの使用に対する規制が厳しくなっているので、フェノールを実質的に含有することなく、エラグ酸の沈殿を抑制するＡＰＴＴ測定用試薬が望まれている。そのようなＡＰＴＴ測定用試薬として、特許文献１に記載の試薬が提案されている。特許文献１に記載の試薬は、エラグ酸と、エラグ酸の沈殿を抑制する物質として芳香環を有するアミノ酸とを含む。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１３−２０５０８７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、フェノールを実質的に含有しないＡＰＴＴ測定用試薬において、新規な方法によってエラグ酸の沈殿を抑制するＡＰＴＴ測定用試薬、それを含むＡＰＴＴ測定用試薬キット、これらを用いるＡＰＴＴの測定方法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の１つの側面は、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含むＡＰＴＴ測定用試薬を含む。
【０００６】
本発明の他の側面は、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む第１試薬と、カルシウム塩を含む第２試薬とを含むＡＰＴＴ測定用試薬キットを含む。
【０００７】
本発明の別の側面は、血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを混合して試料を得る第１混合工程、
前記第１混合工程で得られた試料とカルシウム塩とを混合して測定試料を得る第２混合工程、および
前記第２混合工程で得られた測定試料の活性化部分トロンボプラスチン時間を測定する工程
を含むＡＰＴＴの測定方法を含む。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、フェノールを実質的に含有しないＡＰＴＴ測定用試薬において、新規な方法によってエラグ酸の沈殿を抑制するＡＰＴＴ測定用試薬、それを含むＡＰＴＴ測定用試薬キット、これらを用いるＡＰＴＴの測定方法を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＡＰＴＴ測定用試薬キットの構成図である。
【図２】参考例１、２、比較例６および７において、ＡＰＴＴ比を調べた結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
１．ＡＰＴＴ測定用試薬
本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬（以下、単に「試薬」ともいう）は、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む。本実施形態に係る試薬において、エラグ酸化合物、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物は、通常、水系溶媒に溶解されている。
【００１１】
本明細書において、「エラグ酸化合物」とは、エラグ酸、エラグ酸の塩およびエラグ酸の金属キレート化合物の総称をいう。エラグ酸は、内因系凝固経路に関与する接触因子の活性化剤であることが知られている。接触因子としては、例えば、プレカリクレイン、高分子キニノゲン、第ＸＩＩ因子、第ＸＩ因子などが挙げられるが、特に限定されない。エラグ酸は、天然由来のエラグ酸であってもよく、合成されたエラグ酸であってもよい。エラグ酸の塩としては、例えば、エラグ酸のアルカリ金属塩などが挙げられるが、特に限定されない。アルカリ金属塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などが挙げられるが、特に限定されない。エラグ酸は、配位結合を介して金属イオンと金属キレート化合物を形成することにより、内因系凝固経路に関与する接触因子に対し強力な活性化作用を示す。したがって、本実施形態に係る試薬中において、エラグ酸化合物は、エラグ酸の金属キレート化合物であることが好ましい。金属イオンは、好ましくは亜鉛イオンとアルミニウムイオンとの混合物およびマンガンイオンとアルミニウムイオンとの混合物である。
【００１２】
本実施形態に係る試薬におけるエラグ酸化合物の量は、ＡＰＴＴの測定条件などに応じて適宜決定できる。本実施形態に係る試薬におけるエラグ酸化合物の量は、通常、好ましくは０．０１〜０．５ｍＭ、より好ましくは０．０５〜０．２ｍＭである。
【００１３】
本実施形態に係る試薬には、内因系凝固経路に関与する接触因子の活性化剤として、エラグ酸化合物以外の活性化剤をさらに含んでいてもよい。かかる活性化剤としては、例えば、シリカ、カオリン、珪藻土（例えば、セライトコーポレーション製、商品名：セライト（登録商標）など）などが挙げられるが、特に限定されない。この場合、本実施形態に係る試薬におけるエラグ酸化合物とエラグ酸化合物以外の活性化剤との合計量は、接触因子の活性化剤としての効果を十分に確保する観点から、好ましくは０．０５ｍＭ以上、より好ましくは０．１ｍＭ以上であり、良好な試薬感度を確保する観点から、好ましくは０．２ｍＭ、より好ましくは０．１１ｍＭ以下である。
【００１４】
本明細書において、「ポリビニルアルコール化合物」とは、ポリビニルアルコールおよびその誘導体の総称をいう。また、本明細書において、「ポリビニルアルコールの誘導体」は、ポリビニルアルコールの側鎖に、修飾基を有する化合物をいう。修飾基は、ポリビニルアルコールによるエラグ酸の分散能を妨げない官能基であればよい。修飾基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基などの炭素数１〜３のアルキル基などが挙げられるが、特に限定されない。
【００１５】
ポリビニルアルコール化合物のけん化度は、水系溶媒に対する溶解性を十分に確保する観点から、好ましくは７２ｍｏｌ％以上、より好ましくは７８ｍｏｌ％以上であり、より長期間にわたって沈殿の発生を抑制し、長期保存安定性を向上させる観点から、好ましくは８９ｍｏｌ％以下、より好ましくは８０ｍｏｌ％以下である。ここで、ポリビニルアルコール化合物のけん化度は、ＪＩＳ  Ｋ６７２６−１９９４に規定されたポリビニルアルコール試験方法に準じて算出することによって求められる値である。
【００１６】
ポリビニルアルコール化合物の重合度は、分散効果を十分に確保する観点から、好ましくは２００以上、より好ましくは３００以上であり、粘性増加を抑制する観点から、好ましくは５００以下、より好ましくは４００以下である。
【００１７】
エラグ酸は、従来のＡＰＴＴ測定用試薬に用いられる水系溶媒に溶解しにくく、沈殿を生じやすいという性質を有する。エラグ酸の沈殿が生じた場合、凝固反応系におけるエラグ酸が不足し、凝固反応の進行が遅くなる。そのため、凝固時間が過度に延長することがある。そこで、従来のＡＰＴＴ測定用試薬では、エラグ酸の沈殿防止剤としてフェノールを配合することにより、エラグ酸の沈殿を抑制している。しかし、フェノールは、環境への負荷の低減の観点から、使用をさけることが望まれている。これに対し、本実施形態に係る試薬においては、ポリビニルアルコール化合物によってエラグ酸の沈殿を防止できる。そのため、本実施形態に係る試薬は、フェノールを実質的に含有していなくてもよい。すなわち、本実施形態に係る試薬は、エラグ酸化合物と、エラグ酸化合物の沈殿防止剤としてのポリビニルアルコール化合物とを含むが、フェノールを実質的に含有しない試薬である。ここで、「フェノールを実質的に含有しない」とは、本実施形態に係る試薬に、人為的にフェノールが配合されておらず、慣用の検出手段にて検出不可能であることを意味する。
【００１８】
本実施形態に係る試薬におけるポリビニルアルコール化合物の含有量は、沈殿の発生を抑制する観点から、好ましくは０．０２５質量％以上、より好ましくは０．０５質量％以上であり、粘性の増加を抑制する観点から、好ましくは０．２質量％以下であり、０．１質量％以下である。エラグ酸１００質量部あたりのポリビニルアルコール化合物の量は、十分な分散効力を確保する観点から、好ましくは１０質量部以上、より好ましくは１５質量部以上であり、十分な分散効力を確保する観点から、好ましくは５０質量部以下、より好ましくは４０質量部以下である。
【００１９】
リン脂質は、血液の凝固反応を促進する。リン脂質は、分子構造中にリン酸エステル部位を有する脂質である。リン脂質は、天然由来リン脂質であってもよく、合成リン脂質であってもよい。天然由来リン脂質としては、例えば、ウサギ、ウシ、ブタ、ニワトリ、ヒトなどの動物、大豆などの植物に由来するリン脂質などが挙げられるが、特に限定されない。動物に由来するリン脂質としては、例えば、ウサギ脳、ウシ脳、卵黄、ヒト胎盤などに由来するリン脂質などが挙げられるが、特に限定されない。リン脂質としては、具体的には、例えば、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロールなどが挙げられるが、特に限定されない。これらのリン脂質のなかでは、血液の凝固反応が効率的に進むことから、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルコリンおよびホスファチジルセリンが好ましい。これらのリン脂質は、単独で用いてもよく、２種類以上を混合して用いてもよい。リン脂質が有する脂肪酸側鎖としては、例えば、パルミトイル基、オレオイル基、ステアロイル基などが挙げられるが、特に限定されない。これらの脂肪酸側鎖は、血液の凝固反応を妨げない範囲で適宜選択できる。
【００２０】
本実施形態に係る試薬におけるリン脂質の量は、リン脂質の種類、ＡＰＴＴの測定条件などに応じて適宜決定できる。本実施形態に係る試薬におけるリン脂質の量は、通常、好ましくは３０〜２０００μｇ／ｍＬ、より好ましくは１００〜６００μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである場合、本実施形態に係る試薬におけるリン脂質の量は、通常、好ましくは１０〜７００μｇ／ｍＬ、より好ましくは３０〜３００μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルコリンである場合、本実施形態に係る試薬におけるリン脂質の量は、通常、好ましくは２０〜１０００μｇ／ｍＬ、より好ましくは３０〜５００μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルセリンである場合、本実施形態に係る試薬におけるリン脂質の濃度は、通常、好ましくは３〜３００μｇ／ｍＬ、より好ましくは５〜１５０μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルグリセロールである場合、本実施形態に係る試薬におけるリン脂質の量は、通常、好ましくは３〜３００μｇ／ｍＬ、より好ましくは５〜１５０μｇ／ｍＬである。
【００２１】
水系溶媒は、血液凝固能の臨床検査に通常用いられる水系溶媒から適宜選択できる。水系溶媒としては、例えば、水、生理食塩水などが挙げられるが、特に限定されない。
【００２２】
本実施形態に係る試薬のｐＨは、好ましくは６〜８、より好ましくは７〜７．６である。本実施形態に係る試薬のｐＨは、ＡＰＴＴ測定用試薬に通常用いられる緩衝液成分によって適宜調整できる。緩衝液成分は、ｐＨ５〜９、好ましくはｐＨ６〜８の範囲で緩衝作用を有する緩衝液成分であることが好ましい。緩衝液成分としては、例えば、２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール（Ｔｒｉｓ）、３−モルホリノプロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）などが挙げられるが、特に限定されない。
【００２３】
本実施形態に係る試薬は、金属イオン形成化合物をさらに含むことが好ましい。金属イオン形成化合物は、本実施形態に係る試薬中において、金属イオンを形成する化合物であればよい。本実施形態に係る試薬が防腐剤としてアミノグリコシド系抗生物質を含む場合、金属イオン形成化合物は、亜鉛イオン形成化合物、マンガンイオン形成化合物およびアルミニウムイオン形成化合物のなかから選択された任意の組み合わせが好ましい。なかでも、亜鉛イオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物との混合物、およびマンガンイオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物との混合物が、アミノグリコシド系抗生物質による凝固時間の過度の延長を効果的に抑制する観点から好ましい。亜鉛イオン形成化合物としては、例えば、塩化亜鉛などのハロゲン化亜鉛などが挙げられるが、特に限定されない。マンガンイオン形成化合物としては、例えば、塩化マンガンなどのハロゲン化マンガンなどが挙げられるが、特に限定されない。アルミニウムイオン形成化合物としては、例えば、塩化アルミニウムなどのハロゲン化アルミニウムなどが挙げられるが、特に限定されない。
【００２４】
本実施形態に係る試薬における金属イオン形成化合物の量は、通常、接触因子の活性化作用を向上させる観点から、好ましくは１μＭ以上、より好ましくは１０μＭ以上であり、沈殿物の発生を抑制する観点から、好ましくは１ｍＭ以下、より好ましくは５００μＭ以下である。本実施形態に係る試薬における金属イオン形成化合物が、亜鉛イオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物との混合物、またはマンガンイオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物との混合物である場合、本実施形態に係る試薬における金属イオン形成化合物の量は、アミノグリコシド系抗生物質による凝固時間の過度の延長を効果的に抑制する観点から、好ましくは１０〜５００μＭである。
【００２５】
本実施形態に係る試薬は、芳香族アミノ酸化合物をさらに含むことが好ましい。この場合、芳香族アミノ酸化合物により、エラグ酸化合物の沈殿をより効果的に抑制できる。本明細書において、「芳香族アミノ酸化合物」とは、芳香族アミノ酸、および芳香族アミノ酸の誘導体の総称をいう。芳香族アミノ酸は、芳香環を側鎖に有するアミノ酸である。芳香環としては、例えば、ベンゼン環、縮合ベンゼン環、非ベンゼン芳香環、複素芳香環などが挙げられるが、特に限定されない。芳香族アミノ酸化合物中における芳香環の数は、１個であってもよく、複数個であってもよい。芳香族アミノ酸化合物が複数個の芳香環を有する場合、複数個の芳香環は、同一であってもよく、互いに異なっていてもよい。芳香族アミノ酸は、α−アミノ酸である。芳香族アミノ酸は、タンパク質中に見出される種類のアミノ酸およびその誘導体から選択される少なくとも１種であることが好ましい。芳香族アミノ酸としては、例えば、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジンなどが挙げられるが、特に限定されない。芳香族アミノ酸の誘導体とは、芳香族アミノ酸に含まれる芳香環における水素原子または水酸基が、適切な置換基により任意に置換された化合物である。置換基は、血液凝固反応およびエラグ酸の可溶化または分散化を妨げない置換基であればよい。芳香族アミノ酸化合物のなかでは、フェニルアラニンおよびチロシンが好ましく、フェニルアラニンがより好ましい。なお、芳香族アミノ酸化合物は、Ｌ−体、Ｄ−体およびそれらの混合物のいずれであってもよい。また、芳香族アミノ酸化合物は、天然由来の化合物であってもよいし、合成された化合物であってもよい。
【００２６】
本実施形態に係る試薬における芳香族アミノ酸化合物の量は、芳香族アミノ酸化合物の種類、本実施形態に係る試薬に含まれるエラグ酸化合物の量などに応じて適宜決定できる。本実施形態に係る試薬における芳香族アミノ酸化合物の量は、通常、分散効力を十分に確保する観点から、好ましくは０．００１ｗ／ｖ％以上、より好ましくは０．０１ｗ／ｖ％以上であり、水系溶媒に対する十分な溶解性を確保する観点から、好ましくは１０ｗ／ｖ％以下、より好ましくは１．０ｗ／ｖ％以下である。
【００２７】
本実施形態に係る試薬は、添加剤をさらに含んでいてもよい。添加剤としては、例えば、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤などが挙げられるが、特に限定されない。防腐剤としては、例えば、アミノグリコシド系抗生物質などの抗生物質、アジ化ナトリウムなどが挙げられるが、特に限定されない。抗酸化剤としては、例えば、３−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソールなどが挙げられるが、特に限定されない。安定化剤としては、例えば、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドンなどが挙げられるが、特に限定されない。
【００２８】
本実施形態に係る試薬は、例えば、水系溶媒とリン脂質およびポリビニルアルコール化合物とエラグ酸化合物とを混合し、得られた混合物のｐＨを適切なｐＨに調整することなどによって製造できる。なお、得られた試薬には、必要に応じて、金属イオン形成化合物、芳香族アミノ酸化合物、添加剤などをさらに添加してもよい。
【００２９】
本実施形態に係る試薬は、一般的なＡＰＴＴの測定条件下で、カルシウム塩の溶液とともに適切に使用した場合、従来のＡＰＴＴ測定用試薬と同程度の測定結果を得ることができる。より具体的には、本実施形態に係る試薬を用いて、所定の正常血漿〔例えば、シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＸ〕のＡＰＴＴを測定した場合、ＡＰＴＴが２５〜３５秒の範囲内となることが望ましい。また、所定の異常血漿〔例えば、シスメックス（株）製、商品名：コアグトロールＩＩＸ〕のＡＰＴＴを測定した場合、ＡＰＴＴが６０〜１００秒の範囲内となることが望ましい。
【００３０】
本実施形態に係る試薬は、ＡＰＴＴの測定およびＬＡの検出に好適に用いることができる。本実施形態に係る試薬の使用方法は、従来のＡＰＴＴ測定用試薬と同様である。
【００３１】
２．ＡＰＴＴ測定用試薬キット
本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬キット（以下、単に「キット」ともいう）は、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む第１試薬と、カルシウム塩を含む第２試薬とを含むことを特徴とする。
【００３２】
本実施形態に係るキットの一例としては、図１に示されるキット１０などが挙げられるが、特に限定されない。図１に示されるキット１０は、第１試薬容器１１と、第２試薬容器１２とを含む。第１試薬容器１１は、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含む第１試薬を収容する。第２試薬容器１２は、カルシウム塩を含む第２試薬を収容する。本実施形態に係るキットは、添付文書をさらに含んでもよい。添付文書は、本実施形態に係るキットを用いてＡＰＴＴの測定を行なう操作手順などの記載を含んでもよい。
【００３３】
第１試薬に用いられるエラグ酸化合物、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物は、前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬に用いられるエラグ酸、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物と同様である。また、第１試薬におけるエラグ酸化合物、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物それぞれの量は、前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ試薬におけるエラグ酸、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物それぞれの量と同様である。第１試薬は、適宜、水系溶媒、添加剤などを含んでもよい。水系溶媒および添加剤は、前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬に用いられる水系溶媒および添加剤と同様である。第１試薬は、好ましくは前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬である。
【００３４】
なお、本実施形態に係るキットでは、エラグ酸化合物、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物が、別々の容器に収容されていてもよい。この場合、別々の容器に収容されたエラグ酸化合物、リン脂質およびポリビニルアルコール化合物それぞれを、使用時に混合することによって第１試薬を調製することができる。
【００３５】
第２試薬は、カルシウム塩を含む。カルシウム塩は、ＡＰＴＴを測定する際に用いられる測定試料中でカルシウムイオンを形成する塩であればよい。カルシウム塩としては、塩化カルシウム、硫酸カルシウム、亜硝酸カルシウム、炭酸カルシウム、乳酸カルシウム、酒石酸カルシウムなどが挙げられるが、特に限定されない。これらのカルシウム塩は、単独で用いてもよく、２種類以上を混合して用いてもよい。第２試薬におけるカルシウム塩の量は、好ましくは２．５〜４０ｍＭ、より好ましくは１０〜３０ｍＭである。第２試薬は、適宜、水系溶媒、添加剤などを含んでもよい。水系溶媒および添加剤は、前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬に用いられる水系溶媒および添加剤と同様である。
【００３６】
本実施形態に係るキットは、必要に応じ、希釈用の水系溶媒、対照血漿などをさらに含んでもよい。水系溶媒は、前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬に用いられる水系溶媒と同様である。対照血漿としては、例えば、正常血漿、精度管理用血漿、各種の凝固因子が欠乏した血漿、ＬＡ陽性血漿などが挙げられるが、特に限定されない。精度管理用血漿としては、例えば、シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＸ、シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＩＸなどが挙げられるが、特に限定されない。
【００３７】
本実施形態に係るキットを用い、例えば、ＬＡを検出する場合、希釈用の水系溶媒で第１試薬を所望の希釈率となるように希釈し、互いにリン脂質濃度の異なる２種類の第１試薬を調製することができる。
【００３８】
本実施形態に係るキットは、ＡＰＴＴの測定およびＬＡの検出に好適に用いることができる。本実施形態に係るキットの使用方法は、従来のＡＰＴＴ測定用試薬キットと同様である。
【００３９】
３．ＡＰＴＴの測定方法
本実施形態に係るＡＰＴＴの測定方法（以下、単に「測定方法」ともいう）は、血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを混合して試料を得る第１混合工程、
前記第１混合工程で得られた試料とカルシウム塩とを混合して測定試料を得る第２混合工程、および
前記第２混合工程で得られた測定試料のＡＰＴＴを測定する工程
を含むことを特徴とする。本実施形態に係る測定方法によれば、第ＩＸ因子を含む血液検体を用いた場合であっても十分な感度でＡＰＴＴを測定することができる。
【００４０】
なお、本明細書において、「試料」とは、血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物との混合物をいう。また、「測定試料」とは、血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とカルシウム塩との混合物をいう。
【００４１】
第１混合工程において、血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを混合して試料を得る。なお、第１混合工程に先立ち、血液検体を、凝固反応を行なうのに適した温度に加温してもよい。この場合、血液検体の加温温度は、通常、好ましくは３０〜４５℃、より好ましくは３６〜３８℃である。
【００４２】
血液検体としては、例えば、血液、血液から得られた血漿などが挙げられるが、特に限定されない。本実施形態に係る測定方法では、血液検体として、被検者の血液から得られた血漿、前述の対照血漿およびそれらの混合物などを用いることができる。血漿は、例えば、血液を溶血させないように遠心分離に供して血球成分を除くことなどによって得られる。また、血液には、血液凝固能の臨床検査に通常用いられる公知の抗凝固剤が添加されていてもよい。抗凝固剤としては、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられるが、特に限定されない。本実施形態に係る測定方法では、対照血漿として、正常血漿、精度管理用血漿、各種の凝固因子が欠乏した血漿、ＬＡ陽性血漿などを用いることができる。正常血漿は、健常者の血液から得られた血漿であってもよく、市販の正常血漿であってもよい。
【００４３】
ＬＡの検出を目的とする場合は、血液検体として、ＬＡが存在する可能性のある血漿と正常血漿との混合物をさらに用いることが好ましい。被検者が凝固因子を欠損している場合、被検者の血漿と正常血漿との混合により凝固時間の延長が防止され、検査の感度が向上する。なお、被験血漿／正常血漿（体積比）は、通常、好ましくは８／２〜２／８、特に好ましくは５／５である。
【００４４】
第１混合工程において、血液検体とエラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物との混合の順番は、特に限定されない。
【００４５】
第１混合工程において、血液検体と混合されるエラグ酸化合物の量は、測定試料におけるエラグ酸化合物の濃度が所定濃度となる量であればよい。測定試料におけるエラグ酸化合物の濃度は、通常、好ましくは３．５〜１５０μＭ、より好ましくは１０〜５０μＭである。
【００４６】
血液検体と混合されるリン脂質の量は、測定試料におけるリン脂質の濃度が所定濃度となる量であればよい。測定試料におけるリン脂質の濃度は、リン脂質の種類に応じて適宜設定することができる。リン脂質がホスファチジルエタノールアミンである場合、測定試料におけるリン脂質の濃度は、通常、好ましくは１〜１５０μｇ／ｍＬ、より好ましくは５〜５０μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルコリンである場合、測定試料におけるリン脂質の濃度は、通常、好ましくは１〜１００μｇ／ｍＬ、より好ましくは５〜８０μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルセリンである場合、測定試料におけるリン脂質の濃度は、通常、好ましくは０．１〜５０μｇ／ｍＬ、より好ましくは１〜１０μｇ／ｍＬである。リン脂質がホスファチジルグリコールである場合、測定試料におけるリン脂質の濃度は、通常、好ましくは０．１〜５０μｇ／ｍＬ、より好ましくは１〜１０μｇ／ｍＬである。リン脂質が２種類以上のリン脂質の混合物である場合、測定試料における各リン脂質の濃度の合計は、通常、好ましくは５〜４００μｇ／ｍＬ、より好ましくは２０〜１００μｇ／ｍＬである。
【００４７】
なお、第１混合工程においては、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを別々に用いる代わりに、前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬または前述の本実施形態に係るＡＰＴＴ測定用試薬キットの第１試薬を用いることができる。なお、ＬＡの検出を目的とする場合は、ＡＰＴＴ測定用試薬または第１試薬を希釈して、互いに異なるリン脂質濃度を有する２種類のＡＰＴＴ測定用試薬または第１試薬を調製して用いることが好ましい。血液検体とＡＰＴＴ測定用試薬または第１試薬との混合に際し、［血液検体］／［ＡＰＴＴ測定用試薬または第１試薬］（体積比）は、通常、好ましくは８／２〜２／８、より好ましくは６／４〜４／６、特に好ましくは５／５である。
【００４８】
第１混合工程における加温温度は、血液の凝固反応を行なうのに適した温度であればよい。加温温度は、通常、好ましくは２５〜４５℃、より好ましくは３５〜３８℃である。また、加温時間は、通常、好ましくは１〜１０分間、より好ましくは３〜５分間である。
【００４９】
第２混合工程において、第１混合工程で得られた試料とカルシウム塩とを混合して測定試料を調製し、測定試料のＡＰＴＴを測定する。
【００５０】
第２混合工程においては、試料にカルシウム塩を添加するのに先立ち、試料を、凝固反応を行なうのに適した温度に加温してもよい。試料の加温温度は、凝固反応の反応性の観点から、好ましくは３０℃以上、より好ましくは３６℃以上であり、タンパク質の安定性の観点から、好ましくは４５℃以下、より好ましくは３８℃以下である。この場合、加温時間は、凝固反応の反応性の観点から、好ましくは１分間以上、より好ましくは２分間以上であり、タンパク質の安定性の観点から、好ましくは６分間以下、より好ましくは５分間以下である。
【００５１】
試料と混合されるカルシウム塩の量は、測定試料におけるカルシウム塩の濃度が所定濃度となる量であればよい。測定試料におけるカルシウム塩の濃度は、好ましくは２〜２０ｍＭ、より好ましくは４〜１０ｍＭである。
【００５２】
なお、第２混合工程では、カルシウム塩として、前述の本実施形態に係るキットの第２試薬を用いることができる。第１混合工程で得られた試料と第２試薬との混合に際し、血液検体／第２試薬（体積比）は、通常、好ましくは８／２〜５／５、より好ましくは７／３〜６／４、特に好ましくは２／１である。
【００５３】
第２混合工程における加温温度は、第１混合工程における加温温度と同様である。
【００５４】
測定試料のＡＰＴＴは、凝固情報に基づいて調べることができる。凝固情報としては、例えば、測定試料に光を照射したときの透過光または散乱光の変化、測定試料の粘度の変化などが挙げられるが、特に限定されない。この場合、測定試料のＡＰＴＴは、測定試料に光を照射し、測定試料を透過した透過光または測定試料からの散乱光の変化をモニターすること、測定試料の粘度の変化をモニターすることなどによって調べることができる。ＡＰＴＴの測定には、一般的なＡＰＴＴの測定に用いられる測定装置が用いられる。測定装置としては、例えば、光学的情報検出部を備える市販の血液凝固測定装置などが挙げられるが、特に限定されない。測定装置の具体例としては、シスメックス（株）製の商品名：ＣＳ−２０００ｉ、商品名：ＣＳ−２１００ｉなどが挙げられる。なお、本明細書において、ＡＰＴＴは、第１混合工程で得られた試料へのカルシウム塩の添加開始時から血漿が凝固するまでの時間である。血漿の凝固は、例えば、光が照射された測定試料からの光の変化がなくなったこと、測定試料の粘度の変化がなくなったことなどを指標として判断することができる。
【００５５】
ＬＡの検出を目的とする場合、検査対象の血漿（以下、「被検血漿」ともいう）および正常血漿それぞれについて、ＡＰＴＴ測定用試薬およびこれを希釈した試薬と、カルシウム塩とを用いることが好ましい。また、ＬＡの検出は、ＡＰＴＴ測定用試薬およびこれを希釈した試薬それぞれを用いて被検血漿から得たＡＰＴＴに基づいて得られる値と、閾値とを比較し、比較結果に基づいて行われることが好ましい。なお、ＡＰＴＴ測定用試薬を用いる代わりに、ＡＰＴＴ測定用試薬キットの第１試薬を用いることもできる。
【００５６】
閾値として、例えば、正常血漿のＡＰＴＴに対する被検血漿のＡＰＴＴの比などが用いられる。閾値の具体例としては、ループス比（以下、「ＬＲ値」ともいう）、ロスナーインデックスなどが挙げられるが、特に限定されない。
【００５７】
ここで、ＬＲ値とは、式（Ｉ）：
【００５８】
［ＬＲ値］＝（ｂ／ａ）／（ｄ／ｃ）＝ｂｃ／ａｄ      （Ｉ）
（式中、ａは被検血漿と第１試薬とを用いて得られたＡＰＴＴ、ｂは被検血漿と希釈したＡＰＴＴ測定用試薬とを用いて得られたＡＰＴＴ、ｃは正常血漿とＡＰＴＴ測定用試薬とを用いて得られたＡＰＴＴ、ｄは正常血漿と希釈したＡＰＴＴ測定用試薬とを用いて得られたＡＰＴＴを示す）
【００５９】
にしたがって算出された値をいう。正常血漿の場合、ＬＲ値は１程度である。また、血液凝固因子欠損患者、ワーファリン投与患者またはヘパリン投与患者に由来する血漿の場合、ＬＲ値は１程度となる。これに対して、ＬＡ陽性患者に由来する血漿の場合、ＬＲ値は１より大きい。したがって、被検血漿のＬＲ値と正常血漿のＬＲ値との比較結果より、被検血漿中のＬＡを検出できる。
【実施例】
【００６０】
以下において、各略語の意味は、以下のとおりである。なお、「重量平均分子量」は、ゲル浸透クロマトグラフによって求められた値である。
＜略語＞
ＰＶＡ：ポリビニルアルコール
ＨＥＰＥＳ：２−［４−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−１−イル］エタンスルホン酸
Ｔｒｉｓ：２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）−１，３−プロパンジオール
ＰＶＰ：ポリビニルピロリドン（キシダ化学（株）製、ポリビニルピロリドンＫ−３０）
ＰＥＧ６０００：ポリエチレングリコール６０００（重量平均分子量：７３００〜９３００）
ＰＥ：ホスファチジルエタノールアミン
ＰＣ：ホスファチジルコリン
ＰＳ：ホスファチジルセリン
ＰＧ：ホスファチジルグリセロール
ＢＨＡ：３−ｔ−ブチル−４−ヒドロキシアニソール
【００６１】
また、以下において、用いられたポリビニルアルコールの特性は、表１に示されるとおりである。
【００６２】
【表１】
2017049040.tif 000002
【００６３】
（実施例１〜１２および比較例１）
表２に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、ポリビニルアルコール化合物、添加剤および水を、表２に示された組成となるように混合し、フェノールを含有していない試薬を得た（実施例１〜１２）。また、表２に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、添加剤および水を、表２に示された組成となるように混合して試薬を得た（比較例１）。
【００６４】
【表２】
2017049040.tif 000003
【００６５】
実施例１〜１２および比較例１の試薬それぞれを６０℃で保存した。保存開始から６日間経過時および１２日間経過時に沈殿の有無を肉眼で観察することにより、実施例１〜１２および比較例１の試薬それぞれの長期保存安定性を評価した。その結果を表３に示す。なお、長期保存安定性の評価基準は、以下のとおりである。
＜評価基準＞
ＡＡ：１２日間経過時に沈殿が観察されず、優れた長期保存安定性を有する
Ａ  ：６日間経過時に沈殿が観察されず、良好な長期保存安定性を有する
ＮＧ：６日間経過時に沈殿が観察され、長期保存安定性を有しない
【００６６】
【表３】
2017049040.tif 000004
【００６７】
表３に示された結果から、エラグ酸とポリビニルアルコール化合物とを含む実施例１〜１２の試薬では、保存開始から６日間経過時において、沈殿が観察されなかった。したがって、実施例１〜１２の試薬は、良好な長期保存安定性を有することがわかった。また、けん化度が７２〜８９であるポリビニルアルコール化合物を含む実施例５〜１２で得られた試薬では、保存開始から１２日間経過時において、沈殿が観察されなかった。したがって、実施例５〜１２の試薬は、優れた長期保存安定性を有することがわかった。一方、ポリビニルアルコール化合物を含まない比較例１の試薬では、保存開始から６日間経過時において、沈殿が観察された。
【００６８】
これらの結果から、エラグ酸を含むＡＰＴＴ測定用試薬に、ポリビニルアルコール化合物をさらに配合することにより、長期保存時における沈殿の発生を抑制できることが示唆された。また、長期保存時の安定性の点から、ポリビニルアルコール化合物のけん化度は、７２〜８９が好ましいことがわかった。
【００６９】
（実施例１３〜１５および比較例２）
（１）試薬の調製および熱処理
表４に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、リン脂質、ポリビニルアルコール化合物、添加剤および水を、表４に示された組成となるように混合し、フェノールを含有していない試薬を得た（実施例１３〜１５）。また、表４に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、リン脂質、添加剤および水を、表４に示された組成となるように混合して試薬を得た（比較例２）。得られた試薬を４５℃で２週間保存した。
【００７０】
【表４】
2017049040.tif 000005
【００７１】
（２）ＡＰＴＴの測定
被検血漿５０μＬを３０℃で１分間加温した。つぎに、加温後の被験血漿と、第１試薬５０μＬとを混合した。得られた混合物を３７℃で３分間加温した。加温後の混合物と、第２試薬５０μＬとを混合し、全自動血液凝固分析装置〔シスメックス（株）製、商品名：ＣＳ−２１００ｉ〕を用いてＡＰＴＴを測定した。なお、被検血漿として、正常血漿〔シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＸ〕、正常血漿〔プレシジョン・バイオロジック・インコーポレーテッド（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ＢｉｏＬｏｇｉｃ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）製、商品名：ＣＲＹＯｃｈｅｃｋ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｌａｓｍａ〕、異常血漿〔シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＩＸ〕、ヘパリン添加血漿〔プレシジョン・バイオロジック・インコーポレーテッド製、商品名：ＣＲＹＯｃｈｅｃｋ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌ〕または陽性対照〔プレシジョン・バイオロジック・インコーポレーテッド製、商品名：ＣＲＹＯｃｈｅｃｋ  Ｌｕｐｕｓ  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌ〕を用いた。また、第１試薬として、実施例１３、１４、１５または比較例２の試薬を用いた。第２試薬として、２５ｍＭ塩化カルシウム水溶液を用いた。ＡＰＴＴの測定は、各被検血漿につき、２回ずつ行なった。その結果を表５に示す。
【００７２】
【表５】
2017049040.tif 000006
【００７３】
異常血漿〔シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＩＸ〕およびヘパリン添加血漿〔プレシジョン・バイオロジック・インコーポレーテッド製、商品名：ＣＲＹＯｃｈｅｃｋ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌ〕それぞれのＡＰＴＴの規格範囲は、通常、６０〜１００秒間であった。表５に示された結果から、実施例１３〜１５で得られた試薬を用いた場合、異常血漿〔シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩＩＸ〕およびヘパリン添加血漿〔プレシジョン・バイオロジック・インコーポレーテッド製、商品名：ＣＲＹＯｃｈｅｃｋ  Ｈｅｐａｒｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌ〕それぞれのＡＰＴＴが通常のＡＰＴＴの規格範囲と同様に６０〜１００秒間であることがわかった。また、ポリビニルアルコール化合物を含む試薬は、ポリビニルアルコール化合物を含まない試薬（比較例２）で確認された異常血漿のＡＰＴＴの短縮およびエラグ酸の沈殿を抑制した。なお、規格範囲内のＡＰＴＴについては、一般的な異常域対照試料（異常血漿）を用いることによって凝固時間測定時の精度管理が可能であることが知られていた。また、エラグ酸の沈殿と異常血漿のＡＰＴＴの短縮現象とには因果関係があることが知られていた。したがって、これらの結果から、実施例１３〜１５で得られた試薬は、熱処理が施された場合でも十分な感度を確保することができ、かつ長期保存安定性に優れることがわかった。
【００７４】
（実施例１６、比較例３〜５）
（１）試薬調製
表６に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、リン脂質、ポリビニルアルコール化合物、添加剤および水を、表６に示された組成となるように混合し、フェノールを含有していない試薬を得た（実施例１６）。また、表６に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、リン脂質、添加剤および水を、表６に示された組成となるように混合して試薬を得た（比較例３）。
【００７５】
【表６】
2017049040.tif 000007
【００７６】
市販のＡＰＴＴ測定用試薬〔シーメンスヘルスケアダイアグノスティックス製、商品名：ＡＣＴＩＮ−ＦＳ〕を比較例４の試薬、市販のＡＰＴＴ測定用試薬〔シーメンスヘルスケアダイアグノスティックス製、商品名：ＡＣＴＩＮ−ＦＳＬ〕を比較例５の試薬として用いた。
【００７７】
（２）ＡＰＴＴの基準範囲の測定
被検血漿５０μＬを３０℃で１分間加温した。つぎに、加温後の被験血漿と、第１試薬５０μＬとを混合した。得られた混合物を３７℃で３分間加温した。加温後の混合物と、第２試薬５０μＬとを混合し、全自動血液凝固分析装置〔シスメックス（株）製、商品名：ＣＳ−２１００ｉ〕を用いてＡＰＴＴを測定した。なお、被検血漿として、正常血漿４９検体を用いた。また、第１試薬として、実施例１６、比較例３、４または５の試薬を用いた。第２試薬として、２５ｍＭ塩化カルシウム水溶液を用いた。ＡＰＴＴの測定は、各被検血漿につき、１回ずつ行なった。ＡＰＴＴの測定値から、平均値、ＳＤ、基準範囲上限および基準範囲下限を求めた。その結果を表７に示す。
【００７８】
【表７】
2017049040.tif 000008
【００７９】
（３）第ＩＸ因子感度試験
正常血漿〔プレシジョン・バイオロジック・インコーポレーテッド（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ＢｉｏＬｏｇｉｃ  Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ）製、商品名：ＣＲＹＯｃｈｅｃｋ  Ｎｏｒｍａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｐｌａｓｍａ〕と、ＩＸ因子欠乏血漿〔シスメックス国際試薬（株）製、商品名：第ＩＸ因子欠乏血漿〕とを、正常血漿／ＩＸ因子欠乏血漿（体積比）が３／７となるように混合し、被検血漿を得た。
【００８０】
被検血漿５０μＬを３０℃で１分間加温した。つぎに、加温後の被験血漿と、第１試薬５０μＬとを混合した。得られた混合物を３７℃で３分間加温した。加温後の混合物と、第２試薬５０μＬとを混合し、全自動血液凝固分析装置〔シスメックス（株）製、商品名：ＣＳ−２１００ｉ〕を用いてＡＰＴＴを測定した。なお、第１試薬として、実施例１６、比較例３、４または５の試薬を用いた。第２試薬として、２５ｍＭ塩化カルシウム水溶液を用いた。ＡＰＴＴの測定は、各被検血漿につき、５回ずつ行なった。ＡＰＴＴの測定値から、ＡＰＴＴの平均値およびＡＰＴＴの平均値と平均基準範囲上限との差を求めた。ＡＰＴＴの平均値と平均基準範囲上限との差は、式（ＩＩ）：
［ＡＰＴＴの平均値と平均基準範囲上限との差］
＝［平均基準範囲上限］−［ＡＰＴＴの平均値］                （ＩＩ）
にしたがって求めた。その結果を表８に示す。
【００８１】
【表８】
2017049040.tif 000009
【００８２】
表８に示された結果から、エラグ酸とポリビニルアルコール化合物とを含む実施例１６の試薬を用いた場合、測定されたＡＰＴＴの平均値が基準範囲上限よりも大きいことがわかった。また、実施例１６の試薬で得られたＡＰＴＴの平均値と基準範囲上限との差は、比較例４の試薬で得られたＡＰＴＴの平均値と基準範囲上限との差よりも大きいことがわかった。一方、ポリビニルアルコール化合物を含まない比較例３および５の試薬では、測定されたＡＰＴＴの平均値が基準範囲上限よりも小さいことがわかった。ＡＰＴＴの平均値が基準範囲上限よりも大きいことは、正常検体と第IX因子が７割欠損している検体とを切り分けできることを示すと考えられた。したがって、エラグ酸とポリビニルアルコール化合物を含むＡＰＴＴ測定用試薬によれば、ＩＸ因子を高感度で検出できることがわかった。
【００８３】
（参考例１、２、比較例６および７）
表９に示された緩衝液成分、活性化剤、金属イオン形成化合物、リン脂質、添加剤および水を、表９に示された組成となるように混合し、フェノールを含有していない試薬を得た（参考例１および２）。参考例１の試薬は、亜鉛イオン形成化合物である塩化亜鉛とアルミニウムイオン形成化合物である塩化アルミニウムとが配合されている。また、参考例２の試薬は、マンガンイオン形成化合物である塩化マンガンとアルミニウムイオン形成化合物である塩化アルミニウムとが配合されている。
【００８４】
【表９】
2017049040.tif 000010
【００８５】
銅イオン形成化合物とアルミニウム形成化合物とを含む市販のＡＰＴＴ測定用試薬〔シスメックス（株）製、商品名：トロンボチェックＡＰＴＴ−ＳＬＡ〕を比較例６の試薬、銅イオン形成化合物を含む市販のＡＰＴＴ測定用試薬〔シスメックス（株）製、商品名：トロンボチェックＡＰＴＴ〕を比較例７の試薬として用いた。
【００８６】
被検血漿５０μＬを３０℃で１分間加温した。つぎに、加温後の被験血漿と、第１試薬５０μＬとを混合した。得られた混合物を３７℃で３分間加温した。加温後の混合物と、第２試薬５０μＬとを混合し、全自動血液凝固分析装置〔シスメックス（株）製、商品名：ＣＳ−２１００ｉ〕を用いてＡＰＴＴを測定した。なお、被検血漿として被検血漿Ａ〔シスメックス（株）製、商品名：コアグトロールＩ〕、または被検血漿Ｂ〔シスメックス（株）製の商品名：コアグトロールＩにトプラマイシンをその濃度が１０μｇ／ｍＬとなるように添加して得られた混合物〕を用いた。また、第１試薬として、参考例１、２、比較例６または７の試薬を用いた。第２試薬として、２５ｍＭ塩化カルシウム水溶液を用いた。ＡＰＴＴの測定値から、式（ＩＩＩ）：
【００８７】
［ＡＰＴＴ比］
＝［被検血漿ＢのＡＰＴＴ］／［被検血漿ＡのＡＰＴＴ］            （ＩＩＩ）
【００８８】
にしたがってＡＰＴＴ比を算出した。ＡＰＴＴの測定値を表１０、ＡＰＴＴ比を図２に示す。
【００８９】
【表１０】
2017049040.tif 000011
【００９０】
表１０および図２に示された結果から、参考例１および２の試薬では、ＡＰＴＴ比が１．１であった。これに対し、比較例６および７の試薬では、ＡＰＴＴ比が１．２〜２．５であった。ＡＰＴＴ比の許容範囲は、通常、１．２であった。これらの結果から、参考例１および２の試薬によれば、トプラマイシンなどのアミノグリコシド系抗生物質に起因するＡＰＴＴの過度の延長をより抑制できることがわかった。したがって、これらの結果から、エラグ酸化合物とリン脂質とポリビニルアルコール化合物とを含むＡＰＴＴ試薬において、亜鉛イオン形成化合物またはマンガンイオン形成化合物とアルミニウムイオン形成化合物とをさらに配合した場合にも、参考例１および２の試薬と同様に、アミノグリコシド系抗生物質に起因するＡＰＴＴの過度の延長をより抑制できることが示唆された。
【符号の説明】
【００９１】
１０  キット
１１  第１試薬容器
１２  第２試薬容器
【図１】
2017049040.tif 000012
【図２】
2017049040.tif 000013