(57)【要約】【課題】本発明は、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法や、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に利用するためのキット等を提供することを目的とする。【解決手段】米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型を、耳鳴の重症度又は重症化リスクの遺伝子マーカーとして用いる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型からなる、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用遺伝子マーカー。
【請求項２】
遺伝子マーカーを用いて、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法であって、
（Ａ）被験者から採取された核酸検体について、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルを検出する工程；
を有し、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、前記方法。
【請求項３】
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、請求項２に記載の耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法。
【請求項４】
以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列を有するか、又は、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプローブであって、
（ａ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）上記（ａ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列における連続する１５〜５００個のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であって、かつ、配列番号１に示されるヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むヌクレオチド配列；
（ｄ）上記（ｃ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
【請求項５】
耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマーであって、
配列番号１に示されるＢＣＲ遺伝子のヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片の増幅に用いることができるポリヌクレオチドプライマー。
【請求項６】
フォワードプライマー及びリバースプライマーのプライマー対である請求項５に記載の耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマー。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、耳鳴（耳鳴り）の重症度又は重症化リスクの診断に関し、より詳しくは、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法や、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に利用するためのキット等に関する。
【背景技術】
【０００２】
耳鳴とは、「身体の内部以外には音源がないにもかかわらず、何らかの音の感覚が生じる異常な聴覚現象」と定義されている。耳鳴の音としては、例えば、ベル音、ブザー音、ホイッスル音、うなり声などが挙げられ、耳鳴においては、これらの音が連続的又は断続的に聞こえるように感じられる。耳鳴を経験したことのある人は人口の約１０〜１５％ともいわれており、特に６５歳以上の人の約３０％が耳鳴の経験があるとの報告がある。一般に若年者の耳鳴は一過性のものであり、気が付いたら消えているといったように自然と軽快するものがほとんどである。一方、老年者の耳鳴は難聴を伴うことが多く、慢性化しやすい傾向がある。６５歳以上の人の約２０％が、ある一定期間以上持続する耳鳴を感じているともいわれている。慢性化した耳鳴は患者のＱＯＬ（quality of life：生活の質）を下げることがあり、特に耳鳴苦痛度が高い患者においては、感情の乱れ、ストレス、不眠症、不安症などにつながる場合もあり、ＱＯＬが大きく損なわれることもある。
【０００３】
耳鳴は、大きく分けて、本人にしか聞こえない自覚的耳鳴と、外部から聴取可能な他覚的耳鳴に分類される。他覚的耳鳴は、耳の周囲の異常（顎関節の異常、耳周りの血管異常、高血圧等）に起因して生じる、耳の周囲の筋肉の音や、耳の周囲の関節の音や、耳の周囲の血管の血流の音などが原因となる。したがって、他覚的耳鳴は、その耳鳴の原因を改善するような外科的な治療を施すことや、耳の周囲の血行を促進することによって、改善されることが比較的多い。他方、自覚的耳鳴には、原因が不明の場合も多く、耳鳴の治療法によって耳鳴症状が改善する場合もあれば、ほとんど改善しない場合もあった。
【０００４】
耳鳴の治療法としては、経口の耳鳴改善薬の投与が比較的多く用いられている。かかる耳鳴改善薬としては、内耳の血管を拡張して血液循環を改善するためのアデノシン三リン酸二ナトリウム水和物や、末梢神経の栄養状態を改善するためのビタミンＢ１２や、血液循環を改善するためのビタミンＥや、内耳の血液循環を改善するための「ニコチン酸アミド及びパパベリン塩酸塩」などが挙げられる。これらの耳鳴改善薬によって、耳鳴が改善するかどうかは、その耳鳴改善薬を１〜２年間程度は患者に投与してみないと分からなかった。ある一種の耳鳴改善薬が効果を発揮しない場合、別種の耳鳴改善薬を試みるなどして、しかも結果としていずれの種類の耳鳴改善薬もその患者に効果を発揮しないケースもあった。このようなケースでは、患者や医療保険機関がその間に医療機関に支払った費用や、その間に投与した耳鳴改善薬や、投与を行ったその期間は、結果として、用をなさないということになる。耳鳴改善薬がほとんど効果を発揮しない耳鳴患者などには、例えば、耳鳴再訓練療法（Tinnitus Retraining Therapy：ＴＲＴ）と呼ばれる音響療法などを試みることができる。ＴＲＴは、補聴器のような形をした機械である耳鳴制御機器（Tinnitus Control Instrument：ＴＣＩ）から発生させる雑音を患者に聞かせることによって、耳鳴が少し聞こえる程度にまで患者の耳鳴をかき消し、それによって、患者が耳鳴の音に順応、馴化させるように脳を訓練する方法である。
【０００５】
以上のように、ある耳鳴患者に耳鳴改善薬が効果を発揮するかどうかは、耳鳴改善薬の投与を一定期間行わないと分からなかったため、その間に患者や医療保険機関が医療機関に支払う費用、その間に投与した耳鳴改善薬、投与を行ったその期間は、結果として、用をなさないという問題があった。
【０００６】
ところで、ＢＣＲ（breakpoint cluster region）遺伝子は、ヒトの２２番染色体長腕（２２ｑ１１）に座位する遺伝子である。９番染色体長腕（９ｑ３４）に座位するＡＢＬ（Abelson murine leukemia virus）遺伝子と、前述のＢＣＲ遺伝子とが相互転座して、ＢＣＲ−ＡＢＬキメラ遺伝子が形成されると、チロシンキナーゼ活性が亢進した異常タンパク質が産生され、白血病の病態が形成されることが知られている（非特許文献１）。正常なＢＣＲ遺伝子産物であるＢＣＲタンパク質は、セリン／トレオニン リン酸化酵素活性を有しており、ｐ２１ｒａｃに対するＧＴＰａｓｅ活性化タンパクである。ＢＣＲタンパク質の機能は明確ではないが、ｒｓ１３１７０２（ＮＣＢＩのＳＮＰデータベースにおける登録番号）を含む、ＢＣＲ遺伝子の１１個の一塩基多型（ＳＮＩＰｓ）が双極性障害（いわゆる、躁うつ病）や大うつ病性障害（いわゆる、うつ病）の病態に関与している可能性が示唆されている（非特許文献２）。非特許文献２によれば、ｒｓ１３１７０２は、双極性障害との関連は示唆されているものの、大うつ病性障害との関連は否定されている（非特許文献２のTable 1）。
【０００７】
これまでにＢＣＲ遺伝子のＳＮＰと耳鳴の重症度等との関連は知られておらず、ましてや、ｒｓ１３１７０２と耳鳴の重症度等との関連は知られていなかった。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Blood. 1990 Jul 1;76(1):136-41.
【非特許文献２】Biol Psychiatry 2005; 57(10):1097-1102.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法や、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に利用するためのキット等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、耳鳴患者の治療に携わる中で、耳鳴苦痛度が比較的高い患者の中でも、うつ（鬱）又は不安に関連するとされている遺伝的背景を持つ患者には、それに配慮した医療行為を行うことが望ましいのではないかと考えた。そこで、本発明者らは、うつ又は不安に関連するとされる遺伝的背景と、耳鳴苦痛度との関連性について調査を試みた。
【００１１】
かかる遺伝的背景の候補となるＳＮＰ（一塩基多型）としては、遺伝子とそれに関連する疾患についてのデータベースであるＯＭＩＭ（Online Mendelian Inheritance in Man）において、うつ、不安障害又は強迫性障害との関連が報告されているもの中で、ＨａｐＭａｐ ｊａｐａｎにおいてマイナーアレル頻度（Minor allele frequency：ＭＡＦ）が０．１（１０％）以上である８種類のＳＮＰを選択した（実施例の表１）。耳鳴苦痛度の指標であるＴＨＩ（Tinnitus handicap inventory）スコアと、前述の８種類のＳＮＰの遺伝子型の相関関係の有無を解析したところ、ＢＣＲ（breakpoint cluster region）遺伝子におけるｒｓ１３１７０２（ＮＣＢＩのＳＮＰデータベースにおける登録番号）というＳＮＰの遺伝子型が、ＴＨＩスコアとの間に有意な相関関係を有することを見いだした。すなわち、本発明者らは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰの少なくとも１つのアレルがＧである（該ＳＮＰの遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型である）と、ＴＨＩスコアが高いという相関関係、より詳しくは、該ＳＮＰの遺伝子型が、Ｇ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で、ＴＨＩスコアが高いという相関関係を見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１２】
なお、耳鳴苦痛度は、その時点での耳鳴の重症度と評価することができる。また、耳鳴に罹患してからの期間を問わない患者のＴＨＩスコアを用いて相関関係を解析しているため、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰの少なくとも１つのアレルがＧであるとＴＨＩスコアが全体の傾向として高いということは、かかるアレルを持つ患者でＴＨＩスコアがまだあまり高くない患者は、耳鳴の重症化リスクが高いと評価することもできる。
【００１３】
すなわち、本発明は、
（１）米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型からなる、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用遺伝子マーカーに関する。
【００１４】
また、本発明は、
（２）遺伝子マーカーを用いて、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法であって、
（Ａ）被験者から採取された核酸検体について、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルを検出する工程；
を有し、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、前記方法や、
（３）上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、上記（２）に記載の耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法に関する。
【００１５】
さらに、本発明は、
（４）以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列を有するか、又は、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプローブであって、
（ａ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）上記（ａ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列における連続する１５〜５００個のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であって、かつ、配列番号１に示されるヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むヌクレオチド配列；
（ｄ）上記（ｃ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；や、
（５）耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマーであって、
配列番号１に示されるＢＣＲ遺伝子のヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片の増幅に用いることができるポリヌクレオチドプライマーや、
（６）フォワードプライマー及びリバースプライマーのプライマー対である上記（５）に記載の耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマーに関する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法や、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に利用するためのキット等を提供することができる。
【００１７】
また、本発明によれば、その耳鳴患者の耳鳴の重症化リスクが高いこと、例えば、その耳鳴患者に従来の耳鳴改善薬があまり効果を発揮しない可能性が高いということをより早期に診断することができる。そのため、その耳鳴患者が従来の耳鳴改善薬をより長期間試みることにより生じる費用や、要する期間を減少させることができ、また、耳鳴再訓練療法（Tinnitus Retraining Therapy：ＴＲＴ）や、他の将来的な治療法へより早期に切り替えることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
１．＜本発明の耳鳴の重症度又は重症化リスクの遺伝子マーカー＞
本発明の「耳鳴の重症度又は重症化リスクの遺伝子マーカー」（以下、単に「本発明の遺伝子マーカー」とも表示する。）としては、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型（以下、「本発明におけるＳＮＰ」とも表示する。）からなる限り特に制限されない。ｒｓ１３１７０２とは、ヒトの２２番染色体の２３３０８８００番目のヌクレオチドのＴ／Ｇ多型である。
【００１９】
後述の実施例の結果から分かるように、ｒｓ１３１７０２は、耳鳴苦痛度が重症・最重症であると評価される群（「重症・最重症耳鳴患者群」）と、耳鳴苦痛度が軽症・中等症であると評価される群（「軽症・中等症耳鳴患者群」）を比較したときに、重症・最重症耳鳴患者群において、ＴアレルよりもＧアレルの頻度が有意に高い。したがって、ｒｓ１３１７０２は、耳鳴の重症度又は重症化リスク（以下、まとめて「耳鳴の重症度等」とも表示する。）の診断用マーカーとして有用である。
【００２０】
また、後述の実施例の結果から分かるように、ＴＨＩスコアは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰがＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で高く、しかもこの傾向は有意であった。したがって、ｒｓ１３１７０２は、耳鳴の重症度等の診断用マーカーとして有用である。同様に、ＳＴＡＩ（State-Trait Anxiety Inventory）状態不安検査で得られたＳＴＡＩスコアは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰがＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で高く、しかもこの傾向は有意であった。したがって、ｒｓ１３１７０２は、耳鳴の重症化に伴う状態不安の診断用マーカーとしても有用である。
【００２１】
本発明の遺伝子マーカーのアレル又は遺伝子型の情報は、該情報のみで、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断したり、前記情報のみを耳鳴の重症度等の診断のためのデータとしてもよいし、他の情報等と組み合わせて耳鳴の重症度等を診断したり、他の情報と組み合わせて耳鳴の重症度等のためのデータとしてもよい。
【００２２】
本明細書における「耳鳴の重症度」とは、その時点での耳鳴の重症度を意味する。本明細書における「耳鳴の重症度」としては、耳鳴のいずれかの症状の重さの度合を表している限り特に制限されないが、耳鳴苦痛度の指標として汎用されているＴＨＩ（Tinnitus handicap inventory）のスコアの高さの度合が好ましく挙げられる。ＴＨＩは２５問の質問から構成されており、１つの質問に４点、２点又は０点が割り当てられている。各質問への回答に応じた得点を２５問分合算した点が、その対象のＴＨＩスコアとなる。ＴＨＩスコアが高いほど耳鳴苦痛度が高く、ＴＨＩスコアが低いほど耳鳴苦痛度が低いことを示す。
【００２３】
本明細書における「耳鳴の重症化リスク」とは、耳鳴が将来的に重症化するリスク（危険度）を意味する。本明細書における「耳鳴の重症化リスク」としては、耳鳴の重症度が将来的に増加するリスク（危険度）である限り特に制限されないが、ＴＨＩスコアが将来的に上昇するリスク（危険度）が好ましく挙げられる。ここで「将来的に」とは、その時期を特に制限するものではなく、例えば、１ヶ月後以降、３ヶ月後以降、６ヶ月後以降、１年後以降、２年後以降、３年後以降、５年後以降、１０年後以降などが挙げられる。また、期間の上限は特に制限されないが、５０年後以内、４０年後以内、３０年後以内などが挙げられる。
【００２４】
耳鳴の重症化リスクの高さは、耳鳴の難治リスクや予後の悪さと関連するため、ｒｓ１３１７０２は、耳鳴の難治リスクや予後の悪さの診断用マーカーとしても用いることができる。
【００２５】
本発明の遺伝子マーカーは、ｒｓ１３１７０２がＧアレルを有している場合に、Ｇアレルを有していない場合よりも、耳鳴の重症度や重症化リスクが高いと評価することができる。また、本発明の遺伝子マーカーは、ｒｓ１３１７０２が、Ｇ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す。したがって、被験者のｒｓ１３１７０２の遺伝子型がＧ／Ｔ型である場合は、Ｔ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、被験者のｒｓ１３１７０２の遺伝子型がＧ／Ｇ型である場合は、Ｇ／Ｔ型である場合や、Ｔ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す。
【００２６】
２．＜本発明の耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法＞
本発明の「耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法」（以下、単に「本発明のデータの収集方法」とも表示する。）としては、
（Ａ）被験者から採取された核酸検体について、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルを検出する工程；
を有し、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、前記方法である限り特に制限されない。
【００２７】
上記工程（Ａ）としては、被験者から採取された核酸検体について、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルを検出する工程である限り特に制限されない。
【００２８】
上記の「核酸検体」としては、ヒトである被験者から採取された核酸であって、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰ部位を有する核酸を含む検体である限り特に制限されず、被験者の例えば血液、皮膚細胞、粘膜細胞、毛髪等から公知の抽出方法、精製方法を用いて調製することができる。
【００２９】
本明細書において「アレル」とは、ある一塩基多型部位において取りうる、互いに異なる塩基（ヌクレオチド）を有するそれぞれの型を言う。本明細書において「遺伝子型」とは、ある一塩基多型部位において、対立するアレルの組み合わせを言う。ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型において、対立するアレルの組合せである遺伝子型には、Ｇ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の３つの型がある。
【００３０】
上記工程（Ａ）における「一塩基多型のアレルを検出する」とは、その一塩基多型のアレルの塩基の種類を同定することを意味する。「一塩基多型のアレルを検出する」ことには、一塩基多型の一方のアレルを検出することも含まれるが、その一塩基多型の両方のアレルを検出し、その一塩基多型の遺伝子型を同定することが好ましく含まれる。
【００３１】
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルや遺伝子型のデータは、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するために用いることができる。具体的には、上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の両方のアレルがＴである場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す。また、上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す。
【００３２】
上記工程（Ａ）における、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレル（好ましくは遺伝子型）を検出する方法（解析する方法）としては、特に制限されず、例えばアレル特異的プライマー（及びプローブ）を用い、ＰＣＲ法による増幅、及び増幅産物の多型を蛍光又は発光によって検出する方法や、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法を利用したＰＣＲ−ＲＦＬＰ（restriction fragment length polymorphism：制限酵素断片長多型）法、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（single strand conformation polymorphism：単鎖高次構造多型）法（Orita,M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A., 86, 2766-2770 (1989)等）、ＰＣＲ−ＳＳＯ（specific sequence oligonucleotide：特異的配列オリゴヌクレオチド）法、ＰＣＲ−ＳＳＯ法とドットハイブリダイゼーション法を組み合わせたＡＳＯ（allele specific oligonucleotide：アレル特異的オリゴヌクレオチド）ハイブリダイゼーション法（Saiki, Nature, 324, 163-166 (1986)等）、ＴａｑＭａｎ（登録商標、Roche Molecular Systems社）−ＰＣＲ法（Livak, KJ, Genet Anal, 14, 143 (1999), Morris, T. et al., J. Clin. Microbiol., 34, 2933 (1996)）、Ｉｎｖａｄｅｒ（登録商標、Third Wave Technologies社）法（Lyamichev V et al., Nat Biotechnol, 17,292 (1999)）、ＦＲＥＴ（Fluorescence Resonance Energy Transfer）を利用した方法（Heller, Academic Press Inc, pp. 245-256 (1985)、Cardullo et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 8790-8794 (1988)、国際公開第９９／２８５００号パンフレット、特開２００４−１２１２３２号公報など）、ＡＳＰ−ＰＣＲ（Allele Specific Primer-PCR）法（国際公開第０１／０４２４９８号公報など）、プライマー伸長法を用いたＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ（matrix）法（Haff LA, Smirnov IP, Genome Res 7, 378 (1997)）、ＲＣＡ（rolling cycle amplification）法（Lizardi PM et al., Nat  Genet 19, 225 (1998)）、ＤＮＡチップ又はマイクロアレイを用いた方法（Wang DG et al., Science 280, 1077 (1998)等）、プライマー伸長法、サザンブロットハイブリダイゼーション法、ドットハイブリダイゼーション法（Southern,E., J. Mol. Biol. 98, 503-517 (1975)）等、公知の方法を採用できる。さらに、検出対象の一塩基多型部位を直接シークエンスすることにしてもよい。尚、これらの方法を任意に組み合わせて一塩基多型を検出してもよい。また、ＰＣＲ法又はＰＣＲ法を応用した方法などの核酸増幅法により核酸試料を予め増幅（核酸試料の一部領域の増幅を含む）した後、上記いずれかの検出方法を適用することもできる。
【００３３】
多数の核酸検体を検出する場合にはアレル特異的ＰＣＲ法、アレル特異的ハイブリダイゼーション法、ＴａｑＭａｎ−ＰＣＲ法、Ｉｎｖａｄｅｒ法、ＦＲＥＴを利用した方法、ＡＳＰ−ＰＣＲ法、プライマー伸長法を用いたＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ（matrix）法、ＲＣＡ（rolling cycle amplification)法、又はＤＮＡチップ又はマイクロアレイを用いた方法等、多数の検体を比較的短時間で検出可能な検出法を用いることが特に好ましい。
【００３４】
以上の方法では、各方法に応じたプローブやプライマー等のポリヌクレオチドが使用される。このような耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプローブや、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマーも、本発明に含まれる。
【００３５】
（耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプローブ）
本発明の「耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプローブ」（以下、単に「本発明のポリヌクレオチドプローブ」とも表示する。）としては、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列を有するか、又は、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列に対して特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドプローブである限り特に制限されず、中でも、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドプローブや、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列に対して特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドプローブであることが好ましい。
（ａ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）上記（ａ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列における連続する１５〜５００個のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であって、かつ、配列番号１に示されるヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むヌクレオチド配列；
（ｄ）上記（ｃ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
【００３６】
上記の「配列番号１に示されるヌクレオチド配列」は、ヒトのＢＣＲ（breakpoint cluster region）遺伝子のヌクレオチド配列である。配列番号１に示されるヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型部位に該当する。
【００３７】
上記（ｃ）における連続するヌクレオチドの個数としては、１５〜５００個である限り特に制限されないが、１８〜２００個が好ましく、２０〜６０個がさらに好ましく、２２〜５０個がより好ましい。
【００３８】
上記の「（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列に対して特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドプローブ」とは、（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドと、そのポリヌクレオチドプローブとが特異的にハイブリダイズするようなヌクレオチド配列を、そのポリヌクレオチドプローブが有していることを意味する。
【００３９】
本明細書において「特異的にハイブリダイズする」とは、ポリヌクレオチドプローブによる検出の際に通常採用されるハイブリダイゼーション条件（好ましくはストリンジェントな条件）の下、標的のポリヌクレオチド領域に対してハイブリダイズする一方で、他のポリヌクレオチド領域との間にクロスハイブリダイゼーションを有意に生じないことを意味する。なお、当業者であれば、例えばMolecular Cloning（Fourth Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York）を参考にして、特異的なハイブリダイゼーションが生じるハイブリダイゼーション条件を容易に設定可能である。また、上記のストリンジェントな条件としては、例えば、１倍濃度のＭＥＳ（2-(N-Morpholino)ethanesul fonic Acid及び塩化テトラメチルアンモニウム混合溶液）緩衝液中（水素イオン濃度は6.5〜6.7）、４９℃でハイブリダイズし、６倍濃度のＳＳＣ（塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム混合溶液）(水素イオン濃度は８．０)、２５℃、次いで０．６倍濃度のＳＳＣ（水素イオン濃度は８．０）、４５℃で順次洗浄するような条件が挙げられる。
【００４０】
上記の「（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列に対して特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドプローブ」には、（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列と９５％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、より好ましくは９９．５％以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドプローブが含まれ、好ましくは、（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列と９５％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、より好ましくは９９．５％以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドプローブが含まれる。また、上記の「（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列に対して特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドプローブ」には、（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列との間のミスマッチのヌクレオチドの個数が１〜１０個、好ましくは１〜７個、より好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは１又は２個、さらに好ましくは１個が挙げられる。
【００４１】
（耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマー）
本発明の「耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用ポリヌクレオチドプライマー」（以下、単に「本発明のポリヌクレオチドプライマー」とも表示する。）としては、配列番号１に示されるＢＣＲ遺伝子のヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片の増幅（好ましくは、特異的な増幅）に用いることができるポリヌクレオチドプライマーである限り特に制限されない。
【００４２】
本発明のポリヌクレオチドプライマーの例としては、検出対象の一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド領域に相補的な配列を有し、当該一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片（好ましくはＤＮＡ断片）を特異的に増幅できるように設計されたポリヌクレオチドを挙げることができる。本発明のポリヌクレオチドプライマーの他の例として、検出対象の一塩基多型部位がいずれかのヌクレオチドである場合にのみ当該一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片（好ましくはＤＮＡ断片）を特異的に増幅するように設計されたポリヌクレオチドセットを挙げることができる。より具体的には、検出対象の一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片（好ましくはＤＮＡ断片）を特異的に増幅するように設計されたポリヌクレオチドセットであって、一塩基多型部位がいずれかのヌクレオチドであるアンチセンス鎖の当該一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド領域に対して特異的にハイブリダイズするセンスプライマーと、センス鎖の一部のポリヌクレオチド領域（一塩基多型部位の近傍領域）に対して特異的にハイブリダイズするアンチセンスプライマーとからなるポリヌクレオチドセットを例示することができる。ここで、増幅されるポリヌクレオチド断片のヌクレオチド数はその検出に適した範囲で適宜設定され、例えば１５〜１０００個の範囲内、好ましくは２０〜５００個の範囲内、更に好ましくは３０〜２００個の範囲内が挙げられる。
【００４３】
上記の「ポリヌクレオチド領域に対して特異的にハイブリダイズする」ポリヌクレオチドプライマーには、該ポリヌクレオチド領域のヌクレオチド配列と９５％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、より好ましくは９９．５％以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドプライマーが含まれ、好ましくは、上記ポリヌクレオチド領域のヌクレオチド配列と９５％以上、好ましくは９７％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上、より好ましくは９９．５％以上の配列同一性を有するヌクレオチド配列からなるポリヌクレオチドプライマーが含まれる。また、上記の「ポリヌクレオチド領域に対して特異的にハイブリダイズする」ポリヌクレオチドプライマーには、該ポリヌクレオチド領域のヌクレオチド配列との間のミスマッチのヌクレオチドの個数が１〜１０個、好ましくは１〜７個、より好ましくは１〜５個、さらに好ましくは１〜３個、より好ましくは１又は２個、さらに好ましくは１個が挙げられる。
【００４４】
本発明のポリヌクレオチドプローブや、本発明のポリヌクレオチドプライマーは、ホスホジエステル法など公知の方法によって合成することができる。なお、多型を検出するためのポリヌクレオチドプローブや、ポリヌクレオチドプライマーの設計、合成等に関しては成書（例えばMolecular Cloning，fourth Edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press, New YorkやCurrent protocols in molecular biology（edited by Frederick M. Ausubel et al., 1987））を参考にすることができる。
【００４５】
本発明のポリヌクレオチドプローブや、本発明のポリヌクレオチドプライマーは、予め標識物質で標識しておくことができる。標識化ポリヌクレオチドプローブや、標識化ポリヌクレオチドプライマーを用いることにより例えば、増幅産物の標識量を指標として一塩基多型を検出することができる。また、一塩基多型を構成する各遺伝子型の遺伝子における部分ポリヌクレオチド領域をそれぞれ特異的に増幅するように設計された２種類のプライマーを互いに異なる標識物質で標識しておけば、増幅産物から検出される標識物質及び標識量によって核酸検体の遺伝子型を判別できる。このような標識化プライマーを用いた検出方法の具体例としては、一塩基多型を構成する各遺伝子型のセンス鎖にそれぞれ特異的にハイブリダイズする２種類のポリヌクレオチドプライマー（アレル特異的センスプライマー）をフルオレセインイソチオシアネートとテキサスレッドでそれぞれ標識し、これら標識化プライマーとアンチセンス鎖に特異的にハイブリダイズするアンチセンスプライマーとを用いて一塩基多型部位を含む部分ポリヌクレオチド領域を増幅し、得られた増幅産物における各蛍光物質の標識量を測定して一塩基多型を検出する方法を挙げることができる。なお、ここでのアンチセンスプライマーを例えばビオチンで標識しておけば、ビオチンとアビジンとの特異的な結合を利用して増幅産物の分離を行うことができる。
【００４６】
本発明のポリヌクレオチドプローブや、本発明のポリヌクレオチドプライマーの標識に用いられる標識物質としては7-AAD、Alexa Fluor（登録商標）488、Alexa Fluor（登録商標）350、Alexa Fluor（登録商標）546、Alexa Fluor（登録商標）555、Alexa Fluor（登録商標）568、Alexa Fluor（登録商標）594、Alexa Fluor（登録商標）633、Alexa Fluor（登録商標）647、Cy（登録商標）2、DsRED、EGFP、EYFP、FITC、PerCP（登録商標）、R-Phycoerythrin、Propidium Iodide、AMCA、DAPI、ECFP、MethylCoumarin、Allophycocyanin（APC）、Cy（登録商標）3、Cy（登録商標）5、Rhodamine-123、Tetramethylrhodamine、テキサスレッド（Texas Red（登録商標））、PE、PE-Cy（登録商標）5、PE-Cy（登録商標）5.5、PE-Cy（登録商標）7、APC-Cy（登録商標）7、オレゴングリーン（Oregon Green）、カルボキシフルオレセイン、カルボキシフルオレセインジアセテート、量子ドットなどの蛍光色素、３２Ｐ、１３１Ｉ、１２５Ｉなどの放射性同位元素、ビオチンを例示でき、標識方法としてはアルカリフォスファターゼ及びＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いた５’末端標識法、Ｔ４ ＤＮＡポリメラーゼやＫｌｅｎｏｗ断片を用いた３’末端標識法、ニックトランスレーション法、ランダムプライマー法（Molecular Cloning，third Edition，Chapter 9，Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York）などを例示できる。
【００４７】
本発明のポリヌクレオチドプローブや、本発明のポリヌクレオチドプライマーは、不溶性支持体に固定化した状態で用いることもできる。固定化に使用する不溶性支持体をチップ状、ビーズ状などに加工しておけば、これら固定化ポリヌクレオチドを用いて一塩基多型の検出をより簡便に行うことができる。
【００４８】
（耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用キット）
本発明の「耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断用キット」（以下、単に「本発明のキット」とも表示する。）としては、上記の本発明のポリヌクレオチドプローブ又は本発明のポリヌクレオチドプライマーを含んでいる限り特に制限されず、好ましくは、上記の本発明のポリヌクレオチドプローブ及び本発明のポリヌクレオチドプライマーを含んでいる。本発明のキットはその他に、核酸増幅用の酵素やバッファを含んでいてもよい。
【００４９】
本発明は他の態様として、以下の発明を含む。
（耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断する方法）
遺伝子マーカーを用いて、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断する方法であって、
（Ａ）被験者から採取された核酸検体について、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルを検出する工程；及び、
（Ｂ）検出した前記アレルに基づいて、被験者の耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断する工程；を含み、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、前記方法。
【００５０】
（耳鳴の重症度又は重症化リスクを判定する方法）
遺伝子マーカーを用いて、耳鳴の重症度又は重症化リスクを判定する方法であって、
（Ａ）被験者から採取された核酸検体について、米国国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）のＳＮＰデータベースにおける登録番号ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型のアレルを検出する工程；
を有し、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｇ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型又はＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示し、又は、
上記工程（Ａ）で検出した、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＧ／Ｔ型であることが、ｒｓ１３１７０２で特定される一塩基多型の遺伝子型がＴ／Ｔ型である場合よりも、耳鳴の重症度又は重症化リスクが高いことを示す、前記方法。
【００５１】
（耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に用いるためのポリヌクレオチドプローブ）
耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に用いるためのポリヌクレオチドプローブであって、
前記ポリヌクレオチドプローブは、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列を有するか、又は、以下の（ａ）〜（ｄ）のいずれかのヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズするヌクレオチド配列を有する。
（ａ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列；
（ｂ）上記（ａ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
（ｃ）配列番号１に示されるヌクレオチド配列における連続する１５〜５００個のヌクレオチドからなるヌクレオチド配列であって、かつ、配列番号１に示されるヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むヌクレオチド配列；
（ｄ）上記（ｃ）のヌクレオチド配列と相補的なヌクレオチド配列；
【００５２】
（耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に用いるためのポリヌクレオチドプライマー）
耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に用いるためのポリヌクレオチドプライマーであって、
前記ポリヌクレオチドプライマーは、配列番号１に示されるＢＣＲ遺伝子のヌクレオチド配列の１２８４３６番目のヌクレオチドにおけるＴ又はＧである一塩基多型部位を含むポリヌクレオチド断片の増幅に用いることができる。
【００５３】
以下に実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００５４】
耳鳴苦痛度の重症度又は重症化リスクを診断し得るＳＮＰ（以下、「耳鳴診断用ＳＮＰ」という）を同定することを目的として、耳鳴診断用候補ＳＮＰを選択し、慢性耳鳴患者について、かかる候補ＳＮＰと、耳鳴の重症度や状態不安との相関性分析を行った。
【００５５】
［慢性耳鳴患者の特徴］
男性５９名、及び女性７９名の計１３８名の慢性耳鳴患者（平均年齢は６１．３１±１３．１２歳）は、３ヶ月以上継続する耳鳴に対する苦痛を主訴に２０１３年から２０１５年４月までに慶應義塾大学病院耳鼻咽喉科を受診した慢性耳鳴患者で明らかな精神疾患を持たない患者のうち、初診時に耳鳴苦痛度の指標であるＴＨＩスコアの確認のなされた者であった。これら患者からは、本研究における利用の承諾を取得している。
【００５６】
［耳鳴診断用候補ＳＮＰの選択方法］
遺伝子とそれに関連する疾患についてのデータベースであるＯＭＩＭ（Online Mendelian Inheritance in Man）において、うつ、不安障害又は強迫性障害との関連が報告されているもの中で、ＨａｐＭａｐ ｊａｐａｎにおいてマイナーアレル頻度（Minor allele frequency：ＭＡＦ）が０．１（１０％）以上のものを、耳鳴診断用候補ＳＮＰとして選択した。その結果、ヒトのフィラデルフィア染色体で転座の結果形成される融合タンパク質（ＢＣＲ−ＡＢＬタンパク質）を構成するタンパク質（ＢＣＲ；breakpoint cluster region）をコードするＢＣＲ遺伝子のＳＮＰ３種（rs140504、rs131690、及びrs131702）；精神疾患治療薬の標的であるセロトニントランスポーターをコードするＳＬＣ６Ａ４／１５遺伝子のＳＮＰ（rs1545843）；セロトニン受容体をコードするＨＴＲ２Ａ遺伝子のＳＮＰ（rs7997012）；アデニル酸シクラーゼと共役し、その下流の代謝経路に影響を及ぼすＡＤＣＹＡＰ１Ｒ１遺伝子のＳＮＰ（rs2267735）；抗老化遺伝子と考えられているＳＩＲＴ１遺伝子のＳＮＰ（rs10997870）；が選択された（表１参照）。なお、表中の「Major」及び「Minor」（アレル）の割合は、日本人の平均値を示す。また、上記選択方法とは別に、ＭＡＯＢ遺伝子のＳＮＰ（rs1799836）を、耳鳴診断用候補ＳＮＰとして選択した。
【００５７】
【表１】
2017175988.tif 000002
【００５８】
慢性耳鳴患者由来の血液試料から、Gentra Puregene Blood Kit（QIAGEN社製）を用いてゲノムＤＮＡを抽出した。上記表１の８種類のＳＮＰ（rs1545843、rs7997012、rs140504、rs131690、rs131702、rs2267735、rs10997870、及びrs1799836）のタイピングには、TaqMan（登録商標）SNPGenotyping Assays（Life Technologies社製）およびKAPA PROBE FAST qPCR kit（Kapa Biosystems社製）を利用し、PRISM Sequence Detection System 7900HT（Life Technologies社製）を用いて、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＰＣＲ法に従って行った。上記手順は、それぞれのキットおよび機器に添付のマニュアルに従って行った。
【００５９】
［耳鳴の重症度の評価法］
慢性耳鳴患者における耳鳴の重症度は、Newmanらが作成した「耳鳴りによる障害度についての問診表」（ＴＨＩ；Tinnitus Handicap Inventory）を基に評価した。すなわち、ＴＨＩスコアが５６以下である患者と、５８以上である患者の２群に分け、ＴＨＩスコア５６以下である患者を、耳鳴苦痛度が軽症・中等症であると評価（軽症・中等症耳鳴患者群）し、ＴＨＩスコア５８以上である患者を、耳鳴苦痛度が重症・最重症であると評価（重症・最重症耳鳴患者群）した。軽症・中等症耳鳴患者群と、重症・最重症耳鳴患者群との間でＳＮＰによる有意差があるかどうかは、Fisher正確確率検定により解析した（表２参照）。また、ＳＮＰとＴＨＩスコアとの間に関連性があるかどうかは、トレンド検定により解析した（表３参照）。
【００６０】
【表２】
2017175988.tif 000003
【００６１】
【表３】
2017175988.tif 000004
【００６２】
［状態不安の評価法］
慢性耳鳴患者における状態不安は、1970年スピールバーガーの原著で、千葉大学医学部名誉教授 水口公信、文京女子大学教授 下仲順子、岩手県立大学教授 中里克治によって日本標準化されたＳＴＡＩ（State-Trait Anxiety Inventory）状態不安検査で得られたＳＴＡＩスコアを基に評価した。ＳＮＰとＳＴＡＩスコアとの間に関連性があるかどうかは、トレンド検定により解析した（表４参照）。
【００６３】
【表４】
2017175988.tif 000005
【００６４】
［結果］
ＢＣＲ遺伝子のＳＮＰ（ｒｓ１３１７０２）、すなわち、Genome Reference Consortium Human Build 38 patch release 2（ＧＲＣｈ３８.ｐ２)に登録されている２２番染色体の２３，３０８，８００部位（フォワード鎖）におけるＧアレル（Ｇ／Ｇ型、又はＧ／Ｔ型）の割合は、軽症・中等症耳鳴患者群よりも重症・最重症耳鳴患者群の方が高かった（表２参照）。また、上記のトレンド検定の結果から、ＴＨＩスコアは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰがＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で高いことが示された（表３参照）。すなわち、ＴＨＩスコアは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰがＧ／Ｇ型の耳鳴患者群で最も高く、Ｇ／Ｔ型の耳鳴患者群で２番目に高く、Ｔ／Ｔ型の耳鳴患者群で最も低かった（表３参照）。さらに、上記のトレンド検定の結果から、ＳＴＡＩスコアは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰがＧ／Ｇ型、Ｇ／Ｔ型、Ｔ／Ｔ型の順で高いことが示された（表３参照）。すなわち、ＳＴＡＩスコアは、ｒｓ１３１７０２のＳＮＰがＧ／Ｇ型の耳鳴患者群で最も高く、Ｇ／Ｔ型の耳鳴患者群で２番目に高く、Ｔ／Ｔ型の耳鳴患者群で最も低かった（表４参照）。
【００６５】
これらの結果は、ＢＣＲ遺伝子のＳＮＰ（rs131702）におけるＧアレルの有無や程度、該ＳＮＰの遺伝子型を指標にして、耳鳴の重症化や、耳鳴の重症化に伴う状態不安を判定・評価できることを示している。一方、ＢＣＲ遺伝子のＳＮＰ（rs131702）以外の７種類のＳＮＰ（rs140504、rs131690、rs1545843、rs7997012、rs2267735、rs10997870、及びrs1799836）については、耳鳴の重症化や、耳鳴の重症化に伴う状態不安との関連性は認められなかった（表２〜４参照）。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
本発明によれば、耳鳴の重症度又は重症化リスクを診断するためのデータを収集する方法や、耳鳴の重症度又は重症化リスクの診断に利用するためのキット等を提供することができる。
【００６７】
また、本発明によれば、その耳鳴患者の耳鳴の重症化リスクが高いこと、例えば、その耳鳴患者に従来の耳鳴改善薬があまり効果を発揮しない可能性が高いということをより早期に診断することができる。そのため、その耳鳴患者が従来の耳鳴改善薬をより長期間試みることにより生じる費用や、要する期間を減少させることができ、また、耳鳴再訓練療法（Tinnitus Retraining Therapy：ＴＲＴ）や、他の将来的な治療法へより早期に切り替えることができる。
【配列表】
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