(57)【要約】【課題】本発明は、先行発明では実現不可能なアルツハイマー型認知症（ＡＤ）の予防的先制医療医薬を標的とし、先行発明抗体と同等の認知機能障害発症予防効果を有す相補性決定領域（ＣＤＲ）ペプチドを提供することを目的とする。【解決手段】本発明によれば、神経毒性Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体の、新規薬理用途を有する特定のＣＤＲ機能性ペプチドを含む医薬組成物を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（配列番号１）、（２）Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ（配列番号２）、（３）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号３）、（４）Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号４）、（５）Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（配列番号５）、（６）Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（配列番号６）、（７）Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（配列番号７）、（８）Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（配列番号８）、（９）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（配列番号９）、（１０）Ｍｅｔ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１０）、及び（１１）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ（配列番号１１）からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含む、アルツハイマー型認知症を治療及び／又は予防するための医薬組成物。
【請求項２】
医薬として許容される担体、希釈剤、又は賦形剤をさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
ペプチドが、抗神経毒性活性、抗シナプス毒性活性、プロテアーゼ耐性、及び／又は細胞内移行活性を有する、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
ペプチドの治療有効量を経鼻的に注入可能な形態で投与する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
ペプチドの治療有効量が、対照と比較して８０％より大きい抗神経毒性活性を有するように選択される、請求項４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、７〜１６アミノ酸残基のペプチドによる、アルツハイマー型認知症（ＡＤ）を治療及び／又は予防する新規用途、並びに該ペプチドを含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）は、認知症の最も頻繁な病態であり、今日では、世界中で４７００万人の認知症患者が存在すると推測されていて、このうち約７０％をＡＤが占めている。ＡＤ患者脳の病理学的な主な特徴は、線維化した不溶性アミロイドβ（Ａβ）ペプチドからなる老人斑又はアミロイド斑と過剰にリン酸化したタウタンパク質からなる神経原線維変化沈着の形成である。ＡＤでは、神経細胞膜を貫通して局在する前駆体膜タンパク質である「アミロイド前駆体タンパク質」（ＡＰＰ）からプロテアーゼ切断によって生理的にモノマーの形態で産生されたＡβペプチドが重合し、可溶性Ａβオリゴマーを形成し、シナプス機能障害から致死的なタウカスケードへの引き金となり、認知機能障害が発症すると考えられている。最近、脳内Ａβやタウの直接的なＰＥＴイメージング解析が可能となり、それぞれ脳内蓄積はＡβが先行する形で、認知症発症の約１５年前から始まっていることが明らかとった。アミロイドＰＥＴ陽性であり、脳内病理は発症しているものの、認知機能が正常な高齢者を「プレクリニカルＡＤ」、両者の中間でアミロイド病理が陽性の軽度認知障害（ＭＣＩ）の高齢者を「ＭＣＩ  ｄｕｅ  ｔｏ  ＡＤ」と定義し、積極的な早期介入を図る二次予防が注目されている。しかしながら、このＰＥＴイメージング診断に対応した先制医療薬が未だ実用化されていない。
【０００３】
可溶性Ａβオリゴマーは、嗅内野皮質にプレクリニカルＡＤの段階から蓄積を開始し（非特許文献１）、脳内では神経細胞内に局在するが、ＡＤ患者脳では神経細胞外にもびまん性老人斑様の局在を認める（非特許文献１；非特許文献２）。先行発明において、細胞外の可溶性Ａβオリゴマーを制御すると、神経細胞内Ａβオリゴマーの蓄積阻止、ひいては神経細胞変性やシナプス変性阻止と記憶障害発症予防効果（非特許文献１）や記憶障害回復効果（非特許文献２）が達成されることを証明している。これまでは、認知症発症後のＡＤの症状のみが治療可能であったが、認知症の臨床症状は認めないものの、脳内病理発症の基盤分子である可溶性Ａβオリゴマーを標的対象とした先制医療薬・疾患修飾薬開発が望まれる。
【０００４】
従前、先行発明（特許文献１、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６）では、神経毒性Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）ペプチドのアミノ酸配列を開示しているが、これは他の先行技術（非特許文献３）と構造上で抗体としての形態差別化を図る目的であり、ＣＤＲペプチド自体を人工合成ペプチドとしてＡＤの根治治療薬（ｄｉｓｅａｓｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）や先制医療医薬として使用する薬理的用途については知られていない。他の先行技術（特許文献７、特許文献８、特許文献９）においては概念のみが言及されているが、具体的な薬理的用途については未知のままである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第５１１３８５３号公報
【特許文献２】国際公開第２００９／０９９１７６号
【特許文献３】国際公開第２００９／０５１２２０号
【特許文献４】米国特許第８３７８０８１号明細書
【特許文献５】米国特許第９０８５６１４号明細書
【特許文献６】米国特許第９０９０６８０号明細書
【特許文献７】特表２０１２−５２４０２３号公報
【特許文献８】特表２０１３−５００９４０号公報
【特許文献９】特表２０１３−５００９４１号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｔａｋａｍｕｒａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ．，２０１１，６：２０
【非特許文献２】Ｔａｋａｍｕｒａ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．，２０１２，９１：１１７７−１１８６
【非特許文献３】Ｌｅｅ  Ｅ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００６，２８１：４２９２−４２９９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、先行発明では実現不可能なアルツハイマー型認知症（ＡＤ）の予防的先制医療医薬を標的とし、先行発明抗体と同等の認知機能障害発症予防効果を有す相補性決定領域（ＣＤＲ）ペプチドを提供することを目的とする。より具体的には、本発明は、上記の従来技術が有する問題に鑑み、神経毒性Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体の、新規薬理用途を有するＣＤＲ機能性ペプチドを含む医薬組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、先行発明である神経毒性Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体におけるＣＤＲペプチドから、抗神経毒性活性、抗シナプス毒性活性、プロテアーゼ耐性、及び細胞内移行活性を有するＣＤＲ機能性ペプチドを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下の通りである。
［１］（１）Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（配列番号１）、（２）Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ（配列番号２）、（３）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号３）、（４）Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号４）、（５）Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（配列番号５）、（６）Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（配列番号６）、（７）Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（配列番号７）、（８）Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（配列番号８）、（９）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（配列番号９）、（１０）Ｍｅｔ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１０）、及び（１１）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ（配列番号１１）からなる群から選択される１つ以上のペプチドを含む、アルツハイマー型認知症を治療及び／又は予防するための医薬組成物。
［２］医薬として許容される担体、希釈剤、又は賦形剤をさらに含む、上記［１］に記載の医薬組成物。
［３］ペプチドが、抗神経毒性活性、抗シナプス毒性活性、プロテアーゼ耐性、及び／又は細胞内移行活性を有する、上記［１］又は［２］に記載の医薬組成物。
［４］ペプチドの治療有効量を経鼻的に注入可能な形態で投与する、上記［１］〜［３］のいずれかに記載の医薬組成物。
［５］ペプチドの治療有効量が、対照と比較して８０％より大きい抗神経毒性活性を有するように選択される、上記［４］に記載の医薬組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明者ら見出したＡβオリゴマー特異的抗体の特定のＣＤＲペプチドは、インビボにおいて、抗神経毒性活性、抗シナプス毒性活性、プロテアーゼ耐性、細胞内移行活性、並びに空間学習及び記憶能力低下防止効果を有し、アルツハイマー型認知症の治療及び予防に貢献することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、各ＣＤＲペプチドの抗神経毒性活性を示す。使用したＣＤＲペプチドは１２種類であり、それぞれの番号に対応するペプチドは、表２に列挙された各ＣＤＲペプチドに対応する（実施例２）。培養系にＡβオリゴマーを添加し、神経毒性活性による細胞死（１００％）を同時添加するペプチドによって防ぐことができるかをＡβオリゴマー単独投与対照に対する細胞死率として示した。「ＡβＯ」は、Ａβオリゴマーを単独で培養系に添加したものである。「７２Ｄ９」は、本発明の抗体を指し、特許第５１１３８５３号に記載の「６Ｈ４クローン」に対応する。
【図２】図２は、各ＣＤＲペプチドの抗シナプス毒性活性を示す。使用したＣＤＲペプチドは、図１の場合と同様である。後シナプス蛋白であるＰＳＤ−９５を指標に、Ａβオリゴマーによるシナプス保護能を蛍光顕微鏡下で観察した（実施例３）。
【図３】図３は、ＣＤＲペプチド（４種）のプロテアーゼ耐性について検討した結果を示す。上段は、プロテアーゼを含む試料にＣＤＲペプチドを添加してから３７℃で１時間インキュベート後のＮａｔｉｖｅ電気泳動の結果であり、下段は、３７℃で２４時間インキュベート後の結果である。添加したＣＤＲペプチドと各レーンの詳細は以下の通りである。（ａ）ＬＣＤＲ２−Ｎｏ．２ペプチド（レーン１：氷上の１０ｍＭ  ＰＢ）、レーン２：１０ｍＭ  ＰＢとともにインキュベート、レーン３：ＣＳＦとともにインキュベート、レーン４：脳ホモジェネートとともにインキュベート）、（ｂ）ＬＣＤＲ３−Ｎｏ．４（対照）ペプチド（レーン５：氷上の１０ｍＭ  ＰＢ、レーン６：１０ｍＭ  ＰＢとともにインキュベート、レーン７：ＣＳＦとともにインキュベート、レーン８：ＣＳＦ単独、レーン９：脳ホモジェネートとともにインキュベート、レーン１０：脳ホモジェネート単独）、（ｃ）ＨＣＤＲ１−Ｎｏ．６ペプチド（レーン１１〜１４（それぞれレーン１〜４に対応）、及び（ｄ）ＨＣＤＲ３−Ｎｏ．１２ペプチド（レーン１５〜２０（それぞれレーン５〜１０に対応）。
【図４】図４は、プロテアーゼ耐性を検証したＣＤＲペプチド（４種）の細胞内移行活性について検討した結果を示す。使用したＣＤＲペプチドは、図３の場合と同様である。実験では、蛍光標識したペプチドを用いた。
【図５】図５は、アルツハイマー病モデルマウス（Ｔｇ２５７６）と野生型マウスにおけるＣＤＲペプチド（Ｎｏ．２とＮｏ．４（対照））の経鼻投与による空間学習及び記憶能力低下防止効果を示す。左列は水迷路試験の結果を示し、右列はそのプローブテストの結果を示す。水迷路試験では、マウスがプラットフォームに到達する時間を１０日目まで毎日記録した。プローブテストでは、プラットフォームを取り出された場所に、マウスがどれほど滞在するのかを計測した。
【図６】図５と同様の実験であるが、使用するＣＤＲペプチドがＮｏ．６とＮｏ．１２の場合の結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は、Ａβオリゴマーを起因とする神経毒性、シナプス毒性に対して、神経細胞を防御するＣＤＲ機能性ペプチド、及びそれを含む医薬組成物を提供する。ここでは、本発明のより具体的な実施形態を説明するとともに、本明細書に使用される用語の定義を示す。
【００１３】
（１）Ａβオリゴマー（重合体）
本明細書で使用するとき、「アミロイド」とは、体内に沈着される不溶性線維性タンパク質凝集体を意味する。また、「アミロイドβ（Ａβ）タンパク質」は、上記アミロイドの主要構成成分であり、４０〜４２個のアミノ酸残基からなるペプチドであって、アミロイド前駆体タンパク質（ａｍｙｌｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓ  ｐｒｏｔｅｉｎ；ＡＰＰ）から、プロテアーゼ切断によって産生されることが知られている。ＡＰＰから生成されるＡβ分子には、超遠心沈査画分に回収されるアミロイド線維とは別に、可溶性モノマーに加え、オリゴマーの可溶性非線維性重合体がある。本発明における「Ａβオリゴマー」とは、可溶性非線維性重合体を指す。
【００１４】
（２）ＣＤＲ機能性ペプチドの取得及びアミノ酸配列
本発明は、Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体のアミノ酸配列を比較検討し、該抗体の相補性決定領域（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ  ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ  ｒｅｇｉｏｎ；ＣＤＲ）ペプチドから認知機能障害発症の予防効果を有する「ＣＤＲペプチド」を作製し、これらを使用することを特徴とする。
【００１５】
従前、先行発明（特許第５１１３８５３号、ＷＯ２００９／０９９１７６、ＷＯ２００９／０５１２２０）では、Ａβオリゴマー特異的であるが、Ａβモノマーとは全く反応せず、アルツハイマー型認知症（ＡＤ）モデルマウスの記憶障害の治療効果及び予防効果を発揮するモノクローナル抗体に関し、該モノクローナル抗体のアミノ酸配列を解析し、他の抗体と構造面で差別化している。しかしながら、先行発明を予防的先制医療で使用するにあたっては、そのコスト高のため非現実的であり、その実現には先行発明と同等若しくはそれに勝る小（低分子）化合物の発見及び開発が必要不可欠である。そこで、本発明によれば、従来の癌治療目的などに応用された手法である、低分子化することにより安価かつ活性の高い新規な抗体医薬取得を目指すのではなく、先行発明の標的特異性とＡＤ予防治療活性を兼ね備えた低分子化合物が提供される。
【００１６】
本発明の低分子化合物は、先行発明において抗原認識の直接的な役割を有する超可変領域に存在するＣＤＲペプチド自体であり、これまでにそれらの薬理的解析はなされていない。従来、抗体としての抗原認識において、ＣＤＲ３領域が最も重要であると考えられてきたが、ＣＤＲペプチド自体ではこの限りでなく、抗体で認められた活性を失うものもあることが証明された。本発明で使用されるＣＤＲペプチドは、抗体の構造及び機能形態をとることなく、抗体同等のＡＤ予防治療活性を保持し、より安価な根治治療薬（ｄｉｓｅａｓｅ−ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｙ）となり、抗体では実現不可能な先制医療医薬としての薬理的用途を有する。
【００１７】
より具体的には、本発明の低分子は、抗Ａβオリゴマー特異的抗体のＣＤＲ１〜３に対応し、アミノ酸配列は、以下：（ａ）Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ（配列番号１）、（ｂ）Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ（配列番号２）、（ｃ）Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号３）、（ｄ）Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｈｉｓ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｔｈｒ（配列番号４）、（ｅ）Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（配列番号５）、（ｆ）Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ（配列番号６）、（ｇ）Ｈｉｓ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−Ａｒｇ（配列番号７）、（ｈ）Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｔｈｒ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（配列番号８）、（ｉ）Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｔｙｒ（配列番号９）、（ｊ）Ｍｅｔ−Ｉｌｅ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ（配列番号１０）、及び（ｋ）Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｔｙｒ（配列番号１１）である。これらの１１種類のアミノ酸配列と、先行技術の特許第５１１３８５３号に記載の抗体のＣＤＲとの関係を示すと以下の通りとなる。
【００１８】
【表１】
2017132742.tif 000002
【００１９】
本発明のＣＤＲ機能性ペプチドは、後述する活性を典型的に有するものが該当するが、該ペプチドの合成は、当業者であれば、常法に従って容易に取得することができる。なお、本発明のＣＤＲ機能性ペプチドは、７〜１６個のアミノ酸残基で構成される短い配列を有するが、後述する活性を有する限り、１アミノ酸残基程度のアミノ酸の置換、欠失及び付加を有する変異体であってもよい。特に、「置換」については、アミノ酸残基の保存的置換が好ましく、具体的には、変異するアミノ酸残基において、アミノ酸側鎖の性質が保存されている別のアミノ酸に変異されることが好ましい。例えば、アミノ酸側鎖の性質としては、疎水性アミノ酸（Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、Ｙ、Ｖ）、親水性アミノ酸（Ｒ、Ｄ、Ｎ、Ｃ、Ｅ、Ｑ、Ｇ、Ｈ、Ｋ、Ｓ、Ｔ）、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ）、水酸基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｓ、Ｔ、Ｙ）、硫黄原子含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃ、Ｍ）、カルボン酸及びアミド含有側鎖を有するアミノ酸（Ｄ、Ｎ、Ｅ、Ｑ）、塩基含有側鎖を有するアミノ離（Ｒ、Ｋ、Ｈ）、芳香族含有側鎖を有するアミノ酸（Ｈ、Ｆ、Ｙ、Ｗ）を挙げることができる（括弧内はいずれもアミノ酸の一文字標記を表す）。
【００２０】
（３）ＣＤＲ機能性ペプチドの活性
先行技術である特許第５１１３８５３号には、Ａβオリゴマーに特異的に結合する抗体として、６種類の抗体：「５Ａ５」（Ｈ鎖：配列番号１；Ｌ鎖：配列番号３）、「５Ａ９」（Ｈ鎖：配列番号２１；Ｌ鎖：配列番号２３）、「４Ｆ７」（Ｈ鎖：配列番号４１；Ｌ鎖：配列番号４３）、「４Ｈ５」（Ｈ鎖：配列番号６１；Ｌ鎖：配列番号６３）、「６Ｅ４」（Ｈ鎖：配列番号８１；Ｌ鎖：配列番号８３）、及び「６Ｈ４」（Ｈ鎖：配列番号１０１；Ｌ鎖：配列番号１０３）が開示されている。これらの抗体については、以下の５つの機能が確認されている。
（ｉ）抗神経毒性活性、
（ｉｉ）Ａβアミロイド線維形成抑制活性、
（ｉｉｉ）Ａβオリゴマーのみを認識する特異性；
（ｉｖ）ＡＤ脳においてＡβオリゴマーを捕捉する能力、及び
（ｖ）ＡＰＰｓｗｅ−トランスジェニックマウス（Ｔｇ２５７６）におけるアルツハイマー病様表現型発症（記憶障害、脳Ａβ蓄積レベル）を予防する能力。
【００２１】
これらの抗体の能力を測定及び決定するための実験手法については、特許第５１１３８５３号に詳細に開示されているが、本発明のＣＤＲ機能性ペプチドの機能及び該ペプチドを含む医薬組成物（後述）の効果を測定するために、該特許文献にすでに開示されている実験手法を用いてもよいし、又は当業者に承認される常法に従って測定してもよい。
【００２２】
一実施形態によれば、使用されるＣＤＲ機能性ペプチドは、上記の特許第５１１３８５３号に開示されている抗体と同等の活性を有することが好ましい。ここで、用語「同等の活性」とは、本発発明のＣＤＲ機能性ペプチドが、対象となる抗体と同様の生物学的又は生化学的活性を有することを指す。「活性」としては、例えば、Ａβオリゴマーに特異的に認識及び結合するが、Ａβモノマーに結合しない活性、抗神経毒性活性、Ａβアミロイド線維形成抑制活性、抗シナプス毒性活性、抗記憶障害活性、プロテアーゼ耐性活性、及び細胞内移行活性などを例示することができる。本発明で使用されるＣＤＲ機能性ペプチドは、上記の活性を有する限り、限定されないが、好ましくは、本明細書において、配列番号１〜１１で示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲペプチドが好ましい。後述する実施例２において示されるように、神経細胞に与えるＡβオリゴマーの神経毒性から、これらの１１種類のＣＤＲペプチドは該神経細胞を保護するように機能する（図１参照）。特に、対象とする抗体（「７２Ｄ９（６Ｈ４クローン）」）と比較して、配列番号２、５及び１１で示されるアミノ酸配列を有するＣＤＲペプチドは、該抗体と同等の活性を有するためにより好ましい（図１参照）。
【００２３】
（４）医薬組成物
本発明は、上記ＣＤＲ機能性ペプチドからなる群から選択される１つ以上のペプチドを含む、アルツハイマー型認知症を治療及び／又は予防するための医薬組成物を提供する。
【００２４】
本発明の医薬組成物は、上記の通り、プレクリニカルＡＤ、ＭＣＩ  ｄｕｅ  ｔｏ  ＡＤ、アルツハイマー型認知症を対象とするものである。「アルツハイマー型認知症」の症状としては、記憶障害（前行性又は逆行性、すなわち、新たな情報を学習する能力又は以前に学習した情報を思い出す能力の障害）；及び以下の認知障害の１つ以上として発現される複合的な認知障害の発症が含まれる：失語（言語障害）、失行（運動機能は正常であるにもかかわらず、運動活動を行う能力が障害される）、失認（感覚機能は正常であるにもかかわらず、物体を認識又は同定することができない）、遂行機能（すなわち、計画、体系化、順序立て及び抽象化）の障害；これらの認知障害はそれぞれ、社会的又は職業的な機能における重大な障害を引き起こし、以前の機能のレベルよりも大きな低下をもたらす。その経過は、認知機能低下が徐々に発生して継続することを特徴とし、認知障害は記憶及び認知の進行性障害の原因となる別の状態（例えば、脳血管疾患、脳腫瘍、甲状腺機能低下症、ビタミンＢ欠乏症若しくは葉酸欠乏症、ナイアシン欠乏症、高カルシウム血症、神経梅毒、ＨＩＶ感染症又は化学物質被曝）によるものではない。認知障害に、徘徊、攻撃性若しくは不穏などの行動障害、又は抑うつ若しくは精神病などの心理学的障害が随伴することもある。
【００２５】
本明細書で使用するとき、「アルツハイマー型認知症の治療」とは、上記のアルツハイマー型認知症に特徴的な症状又は随伴症状を緩和すること（軽症化）、症状の悪化を阻止又は遅延することなどが含まれ、治療の中には疾患の改善も含まれる。「アルツハイマー型認知症の予防」とは、上記症状の発症／発現を防止若しくは遅延すること、又は発症／発現の危険性を低下させることをいう。プレクリニカルＡＤやＭＣＩ  ｄｕｅ  ｔｏ  ＡＤ症例に単なる予防ではなく、積極的な治療介入で認知症の発症予防（二次予防）を施行することを「先制医療」という。
【００２６】
本発明によれば、本発明のＣＤＲ機能性ペプチドを有効成分として含む、上記のプレクリニカルＡＤやＭＣＩ  ｄｕｅ  ｔｏ  ＡＤ、アルツハイマー型認知症を治療及び／又は予防するための医薬組成物として用いる場合には、当業者に公知の方法で製剤化することができる。例えば、必要に応じて、水又は他の任意の医薬として許容される液体で無菌性溶液若しくは懸濁液にすることによって、非経口的に投与されうる注入又は注射可能な形態へと調製することができる。例えば、本発明の医薬組成物に含まれるべきＣＤＲ機能性ペプチドを、医薬として許容される担体又は溶媒、具体的には、滅菌水、生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、溶剤、保存剤、結合剤などと混合して、医薬としての使用に必要な一般に許容される単位用量にすることができる。ここで、「医薬として許容される」という用語は、その物質が不活性であり、かつ薬物用の希釈剤又はビヒクルとして使用される物質を含むことを示す。
【００２７】
本発明においては、生理食塩水、グルコース、及びアジュバント（Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンノース、Ｄ−マンニトール、及び塩化ナトリウムなど）を含む他の等張性溶液を、注射用水溶液として使用することができる。これらは、アルコール、具体的には、エタノール及びポリアルコール（プロピレングリコール及びポリエチレングリコールなど）、並びに非イオン性界面活性剤（ポリソルベート８０（商標）又はＨＣＯ−５０など）などの適切な可溶化剤とともに使用することができる。
【００２８】
ゴマ油又はダイズ油を油性液体として用いることができ、これらと共に可溶化剤として安息香酸ベンジル又はベンジルアルコールを用いてもよい。緩衝液（リン酸緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、鎮痛薬（塩酸プロカインなど）、安定剤（ベンジルアルコール、フェノールなど）、並びに抗酸化剤を製剤に用いることができる。調製した注射液は適切なアンプルに充填することができる。
【００２９】
投与は、好ましくは非経口投与であり、具体的には、限定されないが、経鼻投与剤型、注射剤型、経肺投与剤型、経皮投与型などが挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射などにより全身又は局部的に投与することができる。
【００３０】
本発明の医薬組成物の有効投与量は、通常、１回につき体重１ｋｇあたり約０．００１ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲で選ばれる。あるいは、患者あたり０．０１〜１０００００ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で選ばれる。別の態様では、本発明の医薬組成物に含まれるＣＤＲ機能性ペプチドの治療有効量は、約１μｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲であってもよい。さらに、投与方法に関しては、本発明の医薬組成物及びＣＤＲ機能性ペプチドは、所望の治療及び／又は予防効果が得られるまで、複数回（例えば、２〜１０回）、適宜、間隔（例えば、１日に２回、１日に１回、１週間に２回、１週間に１回、２週間に１回）をおいて投与されてもよい。なお、本発明の医薬組成物及びＣＤＲ機能性ペプチドの１回あたりの投与量（具体的には、注入量）及び投与頻度は、上記の数値に限定されるものではなく、当業者（例えば、医師又は獣医師）が、適宜調整して決定され得る。
【００３１】
上記の通り、本発明の医薬組成物には、必要に応じて、製剤化のために担体、希釈剤などが含まれる。ここで、用語「担体」とは、細胞又は組織への化合物（具体的には、ＣＤＲ機能性ペプチド）の取り込みを促進する化合物と定義することができる。例えば、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯは、多くの有機化合物の生命体の細胞又は組織への取り込みを促進することから、通常用いられる担体である。適切な医薬として許容される担体としては、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、及び水相が挙げられる。共溶媒系であってもよい。用いられる通常の共溶媒系は、ＶＰＤ共溶媒系であり、それは、無水エタノール中において、３％ｗ／ｖベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非極性界面活性剤Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ  ８０（商標）、及び６５％ｗ／ｖポリエチレングリコール  ３００の量で構成される溶液である。当然ながら、共溶媒系の該比率は、その溶解性及び毒性の特性を損なうことなく、大きく変化させてもよい。さらに、該共溶媒成分の固有性を変化させてもよく：例えば、ＰＯＬＹＳＯＲＢＡＴＥ  ８０（商標）の代わりに他の低毒性の非極性界面活性剤を用いてもよく；ポリエチレングリコールの分画サイズを変化させてもよく；ポリエチレングリコールを他の生体適合性のポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン）で置き換えてもよく；並びに、ブドウ糖を他の糖又は多糖類で置き換えてもよい。
【００３２】
用語「希釈剤」は、目的の化合物（具体的には、ＣＤＲ機能性ペプチド）を溶解するとともに、該化合物の生物学的に活性な形態を安定させ得る、水に希釈された化合物と定義される。当該技術分野では、緩衝液に溶解された塩が希釈剤として用いられる。リン酸緩衝食塩水は、ヒト血液の塩条件を模倣していることから、通常用いられる緩衝液の１つである。緩衝塩は低濃度で溶液のｐＨを調節できるため、緩衝化された希釈剤が対象化合物の生物学的活性を変えることはほとんどない。医薬として許容される希釈剤の例としては、限定されないが、スクロース、フルクトース、グルコース、ガラクトース、ラクトース、マルトース、転化糖、炭酸カルシウム、ラクトース、デンプン、微結晶性セルロース、ラクトース一水和物、リン酸水素カルシウム、無水リン酸水素カルシウム、医薬として許容されるポリオール（例えば、キシリトール、ソルビトール、マルチトール、マンニトール、イソマルト及びグリセロール）、ポリデキストロース、デンプン、及びそれらの混合物が挙げられる。
【００３３】
医薬として許容される賦形剤としては、例えば、限定はされないが、微結晶性セルロース、ラクトース、スクロース、デンプン粉末、トウモロコシデンプン、若しくはそれらの誘導体、アルカン酸のセルロースエステル、セルロースアルキルエステル、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、酸化マグネシウム、リン酸及び硫酸のナトリウム塩並びにカルシウム塩、ゼラチン、アカシアガム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、及び／又はポリビニルアルコール、生理食塩水、ブドウ糖、マンニトール、ラクトース一水和物、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、システイン塩酸塩、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、各種ポロキサマー、ラウリル硫酸ナトリウム、コロイド状二酸化ケイ素などが挙げられる。
【００３４】
以下の実施例は、本開示の様々な態様を例証する。材料と方法の両方に対する多数の修飾は、本開示の範囲から逸脱せずに実施されてもよいことは当業者に明らかである。市販品供給業者から購入される全ての試薬及び溶媒は、さらに精製又は加工することなしに使用される。
【実施例】
【００３５】
［実施例１］ＣＤＲ機能性ペプチドの取得
抗Ａβオリゴマー（重合体）特異的抗体のＣＤＲ１〜３の遺伝子配列（特許第５１１３８５３号参照）を相互比較し、１２種類のＣＤＲ機能性ペプチドを設計し、常法に従って合成した（表１）。
【００３６】
【表２】
2017132742.tif 000003
【００３７】
［実施例２］抗神経毒性アッセイ
Ａβオリゴマー誘発による神経毒性アッセイは、特許第５１１３８５３号及びＹａｍａｍｏｔｏ，Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．：Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２８２：２６４６−２６５５，２００７に記載の方法を一部変更して行った。簡単には、ヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に３２，０００個／ｗｅｌｌの密度で１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ変法Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）中で２４時間培養した。次に、各ＣＤＲ機能性ペプチド（５μＭ）の存在下若しくは非存在下、又はＡβオリゴマー特異的モノクローナル抗体（７２Ｄ９−６Ｈ４クローン）の存在下で、２４時間４℃でインキュベートして作製した５μＭのＡβ１−４２オリゴマーを含む同培地に置き換えて、３７℃で３時間若しくは２４時間培養した。Ａβオリゴマーが惹起する神経毒性は、神経細胞の生存度は、ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ二色蛍光アッセイ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を製造元の指示に従って判定した（図１）。対照アッセイとして、Ａβオリゴマーのみを添加した系（図１中の「ＡβＯ」）、及びＡβオリゴマー＋Ａβオリゴマー特異的モノクローナル抗体（図１中の「ＡβＯ＋７２Ｄ９（６Ｈ４クローン）」）を用いた。対照アッセイであるＡβＯと比較した場合、１２種類のＣＤＲペプチドのうち、Ｎｏ．４（表２）のＣＤＲペプチドは、抗神経毒性活性を示さなかった。その他のＣＤＲペプチドについては、抗神経毒性活性を有意に示した。このうち、Ｎｏ．２、６、及び１２（表２）のＣＤＲペプチドについては、７２Ｄ９と同等に顕著な抗神経毒性活性を示した。以下の実施例では、抗神経毒性活性を有意に示さなかったＮｏ．４のＣＤＲペプチドを陰性対照として用いた。
【００３８】
［実施例３］抗シナプス毒性活性を有するＣＤＲ機能性ペプチドの取得
Ａβオリゴマー誘発によるシナプス毒性アッセイには、初代培養マウス神経細胞を用いた（胎生１５日マウス大脳半球、ＤＳ  ＰＨＡＲＭＡ  ＢＩＯＭＥＤＩＣＡＬ）。神経細胞の分散はＳＵＭＩＴＯＭＯ  Ｎｅｒｖｅ−Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｓｙｓｔｅｍの培養方法プロトコールに従い、５×１０５個／ｍｌを１００μｌづつ１０ｍｌ調整した。ＤＩＶ２０において、各ＣＤＲ機能性ペプチド（５μＭ）の存在下若しくは非存在下、又はＡβオリゴマー特異的モノクローナル抗体（７２Ｄ９（６Ｈ４クローン））の存在下で、２４時間４℃でインキュベートして作製した５μＭのＡβ１−４２オリゴマーを含む同培地に置き換えて、３７℃で３時間も培養後、固定して、ポリクロナール抗ＰＳＤ９５抗体（１：６００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とＡＦ  ４８８をコンジュゲートしたヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）により後シナプス蛋白であるＰＳＤ９５を指標にＢＺ−９０００（キーエンス、大阪）で検証（励起４７０ｎｍ／吸収５３５ｎｍ）評価した。
【００３９】
（結果）
対照（Ｎｏ．４のＣＤＲペプチド）と比較して、１１種類のうち３種類（Ｎｏ．２、６、及び１２）のＣＤＲペプチド）は、モノクローナル抗体（７２Ｄ９（６Ｈ４クローン））と同等の毒性中和活性を有することが確認された（図２）。
【００４０】
［実施例４］プロテアーゼ耐性ペプチドの取得及び検討
実施例２及び３の結果から、表２中のＮｏ．２、６、及び１２で示されるＣＤＲ機能性ペプチドが、上記７２Ｄ９（６Ｈ４クローン）抗体と同等の活性を示すことから、これらのＣＤＲ機能性ペプチドについて、プロテアーゼ耐性について検討した。
【００４１】
（１）プロテアーゼ耐性ペプチド
プロテアーゼ耐性は、試料（脳脊髄液及び脳ホモジェネート）にＣＤＲ機能性ペプチドを添加後、試料中のプロテアーゼに耐性があるか否かを電気泳動によって調べた。具体的には、試料として、ＡＤ患者１０名分をプールした脳脊髄液と、ＡＤ患者剖検脳を定法に従ってホモジェネート後、Ａβを枯渇させたＴＢＳ画分脳ホモジェネートを使用した。予め１００μｇ／ｍｌ濃度にＡｌｅｘａ  ４８８で蛍光標識したＣＤＲ機能性ペプチド（ペプチド研、大阪）を上記で調製したヒト脳脊髄液又は脳ホモジェネートに１：１（ｖ／ｖ）添加し、３７℃で１時間又は２４時間インキュベート後、１８％Ｎａｔｉｖｅ  ＰＡＧＥでペプチド（５００ｎｇ）を分離し、Ｔｙｈｏｏｎ  ＦＬＡ  ７０００（ＧＥヘルスケア、東京）でゲルより検出される蛍光（波長６５０ｎｍ）を指標にプロテアーゼ耐性を解析した。結果を図３に示す。Ａβオリゴマーによる神経毒性中和活性を有する３種類のＣＤＲ機能性ペプチドのうち２種類が５０％以上のプロテアーゼ耐性基準を満たした（ＬＣＤＲ２−Ｎｏ．２ペプチドとＨＣＤＲ１−Ｎｏ．６ペプチド）。ＨＣＤＲ３−Ｎｏ．１２ペプチドは、脳脊髄液では５０％以上のプロテアーゼ耐性基準を満たしたが、脳ホモジェネートでは２４時間後に５０％以上が分解され、この基準を満たさなかった。一方、Ａβオリゴマーによる神経毒性中和活性の示さなかった対照ペプチド（ＬＣＤＲ３（対照）−Ｎｏ．４ペプチド）もプロテアーゼ耐性基準を満たした。
【００４２】
（２）細胞内移行活性を有するプロテアーゼ耐性ペプチド
次に、ＣＤＲ機能性ペプチドが細胞内移行活性を有するか否かを検討した。具体的には、ＥＲＤＦ−ＲＤ１培地（極東製薬工業社製）に懸濁したヒト神経芽腫細胞（ＳＨ−ＳＹ５Ｙ）を２ｃｍ２のＣｕｌｔｕｒｅ  Ｓｌｉｄｅｓ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）に、７５００／ｃｍ２  ０．６ｍｌ播種２４時間後に突起伸長を確認し、１０％ＦＣＳ含有ＥＲＤＦを等量添加し、２４時間後に無血清ＥＲＤＦ−ＲＤ１培地と交換後、２４時間培養した。培養４日目にＡｌｅｘａ  ４８８標識したＣＤＲ機能性ペプチド（１０μＭ）を添加後、３０、６０、１２０、及び１８０分における細胞内移行活性を蛍光顕微鏡ＢＺ−９０００（キーエンス、大阪）で検証（励起４７０ｎｍ／吸収５３５ｎｍ）した。なお、蛍光標識単体では細胞内移行しないことは確認されている（Ｔａｋａｍｕｒａ  Ａ  ｅｔ  ａｌ，Ｍｏｌ  Ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒ  ２０１１）。
【００４３】
対照ペプチド（ＬＣＤＲ３（対照）−Ｎｏ．４ペプチド）とプロテアーゼ耐性のないＣＤＲ機能性ペプチド（ＨＣＤＲ３−Ｎｏ．１２ペプチド）を含め、すべてのペプチドに細胞内移行活性が観察された（図４）。このうちプロテアーゼ耐性を有するＣＤＲ機能性ペプチド（ＬＣＤＲ２−Ｎｏ．２ペプチド及びＨＣＤＲ１−Ｎｏ．６ペプチド）では、細胞内移行後、細胞質内にびまん性の分布を呈していた。
【００４４】
上記の結果から、まず前臨床試験に向けた各ペプチドの評価を以下の２点で行った。前臨床試験ではペプチドの効率的な脳内移行を想定した経鼻投与を計画したため、脳内移行後のプロテアーゼ耐性が重要な課題であった。今回Ｎｏ．２及び６と対照ペプチドで５０％以上のプロテアーゼ耐性を確認できている。Ｎｏ．１２は１時間後ではプロテアーゼ耐性が保たれていたが、２４時間後には非耐性ペプチドが優位であった。またＡβオリゴマーはＡＤ脳ではびまん性の細胞外蓄積と細胞内蓄積を、健常者では神経細胞内にのみ局在している。従って予防的先制医療の観点から、神経細胞内外Ａβオリゴマーを一網打尽にできる神経細胞内移行活性もまた重要な検討課題であったが、今回すべてのペプチドが細胞内移行活性を有することが判明した。以上の結果を受け、すべてのペプチドで前臨床試験に臨むことを決定した。
【００４５】
［実施例５］空間学習及び記憶能力の低下防止効果
本発明のＣＤＲ機能性ペプチドによる空間学習及び記憶能力の低下防止効果を検討するために、マウスを用いた水迷路試験及びプローブテストを行った。具体的には、６ヶ月齢のアルツハイマー病モデルマウス（Ｔｇ２５７６）と同年齢の野生型マウスの各１０匹に対して、ＬＣＤＲ２−Ｎｏ．２及びＬＣＤＲ３−Ｎｏ．４（対照）の各ペプチドを週１回経鼻投与（８ｎｍｏｌ投与：６．６９６μｇ（Ｎｏ．２）及び８．０８８μｇ（Ｎｏ．４））し、１４ヶ月齢において水迷路試験を施行した。この時点で、マウスの生存数（野生型／Ｔｇ２５７６）は、Ｎｏ．２群で９／１０、Ｎｏ．４（対照）群で１０／８であった。記憶障害発症予防効果検証は、以下の２点で行った。円形プールに課題用逃避台（直径１００ｃｍ、高さ１５．５ｃｍ、無色の直径８ｃｍ円筒形逃避台）が１ｃｍ水没するまで無臭の入浴剤で白色化した水（平均２７℃）を張り、マウスが出発点から泳いで逃避用プラットフォームに乗るまでの時間を計測した。次に、上記課題終了後、逃避用プラットフォームを取り除き、６０秒間自由に泳がせ、マウスのプローブテストを行った。４分割の内プラットホームの存在した％象限滞在時間を比較した。
【００４６】
結果を図５に示す。Ｎｏ．２ペプチドでは、場所課題では学習効果が得られているようにもみえるが、プローブテストでは有意な学習効果は証明されなかった。しかし、野生型マウスのプローブテストも同様の結果で、本ペプチドには記憶障害発症予防効果はないと考えられた。一方、Ｎｏ．４（対照）ペプチドでは、Ｔｇ２５７６及び野生型マウスの両者で場所課題で学習効果の証明は得られなかった。しかし、プローブテストでは統計的に有意ではないものの、学習効果傾向が観察された。
【００４７】
Ｎｏ．２ペプチド及びＮｏ．４（対照）ペプチドを用いた場合と同様に、ＨＣＤＲ１−Ｎｏ．６ペプチドとＨＣＤＲ３−Ｎｏ．１２ペプチドを用いて、上記の水迷路試験及びプローブテストをそれぞれのマウスについて行った。投与量は、８ｎｍｏｌであり、Ｎｏ．６ペプチドについては５．１０４μｇ、Ｎｏ．１２ペプチドについては７．５１２μｇで開始した。１４ヶ月齢の時点で、生存数（野生型／Ｔｇ２５７６）は、Ｎｏ．６群で１０／８、Ｎｏ．１２群で１０／８であった。結果を図６に示す。Ｎｏ．６ペプチドとＮｏ．１２ペプチドはともに、場所課題で十分な学習効果を獲得し、Ｔｇ２５７６マウスが野生型マウスと同等の記憶を保持できている傍証が得られた。プローブテストでもこの記憶保持効果が証明された。
【００４８】
上記から、本開示の具体的な実施形態は本明細書において例示を目的として記載されているが、様々な修正が本開示の精神と範囲から逸脱することなく行われてもよいことを理解されたい。従って、本開示は、添付の特許請求の範囲による場合を別として、限定されない。さらに、特許請求の範囲は、その全範囲及び同等物に権利を有する。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
アルツハイマー型認知症（ＡＤ）の予防的先制医療治療は市場性が高く、経済性を含む社会的有用性が高い。本発明のＣＤＲ機能性ペプチドを有効成分として含む医薬組成物は、ＡＤ治療用の抗体では実現不可能であった予防的先制医療を提供することができる。
【００５０】
本明細書に引用する全ての刊行物及び特許文献は、参照により全体として本明細書中に援用される。なお、例示を目的として、本発明の特定の実施形態を本明細書において説明したが、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく、種々の改変が行われる場合があることは、当業者に容易に理解されるであろう。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【配列表】
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