(57)【要約】【課題】  プロテアソームの活性を向上させる効果を有する剤を提供すること。【解決手段】  カロテノイドを含むプロテアソーム活性向上剤である。カロテノイドは、α−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、δ−カロテン、ε−カロテン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、フコキサンチン、アスタキサンチン、アンテラキサンチン及びビオラキサンチンからなる群から選択される。【選択図】図１
2017132701.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カロテノイドを含む、プロテアソーム活性向上剤。
【請求項２】
前記カロテノイドは、α−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、δ−カロテン、ε−カロテン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、フコキサンチン、アスタキサンチン、アンテラキサンチン及びビオラキサンチンからなる群から選択される１種又は２種以上である、請求項１に記載のプロテアソーム活性向上剤。
【請求項３】
前記カロテノイドは、ヘマトコッカス藻由来のアスタキサンチンである、請求項１又は２に記載のプロテアソーム活性向上剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロテアソーム活性向上剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテアソームとは、細胞内での役割を終えたタンパク質や構造異常タンパク質等を分解する巨大な複合体型のプロテアーゼであり、細胞の恒常性を維持、監視する中心的役割を担う物質である。
例えば、特許文献１には、プロテアソームの主な機能は酸化により損傷したタンパク質を持つ細胞を駆逐することであると記載されている（段落番号０００６）。
【０００３】
また、特許文献２には、トコフェロール類、カロテノイド類及びフラボノイド類等の抗酸化物質の摂取は、生体内で発生する活性酸素の消去には関与するが、既に蓄積している異常タンパク質の除去には全く関与せず、従って、老化に伴って生体内に蓄積した異常タンパク質が関与する種々の疾病の予防及び改善には異常タンパク質の除去が必須となり、その異常タンパク質を除去する酵素として、プロテアソームが知られている旨が記載されている（段落番号０００３）。
【０００４】
そこで、プロテアソーム活性を促進するための物質として、特許文献１には、フェオダクチラム藻類抽出物が有効であると開示され、特許文献２には、ケール及び／又はその抽出物を含む組成物が有効であると開示されている。
【０００５】
近年、カロテノイド類の有する様々な効果が注目されている。特に、アスタキサンチンは、食品、化粧品及び医薬活性物質のための酸化防止成分として、並びに生体の酸化的組織障害を防御するための医薬活性成分として利用でき、抗炎症剤としても利用できることが知られている（特許文献３）。例えば、アスタキサンチンを含むオキアミ色素は、紫外線の損傷防止効果、皮脂の酸化防止効果、皮膚の老化防止効果を有することが知られている（特許文献４）。一方で、前記特許文献２の記載のように、カロテノイド類は既に蓄積している異常タンパク質の除去には全く関与しないとされている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２００４−５２５１６０号公報
【特許文献２】特開２００４−９１３９８号公報
【特許文献３】特開平２−４９０９１号公報
【特許文献４】特開平５−１５５７３６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明者らは、意外にも、カロテノイドがプロテアソームの活性を向上し得ることを見出した。本発明は係る知見により完成されたものである。
【０００８】
すなわち、本発明は、カロテノイドを含む、プロテアソーム活性向上剤を提供するものである。
本発明のプロテアソーム活性向上剤には、好ましくはα−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、δ−カロテン、ε−カロテン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、フコキサンチン、アスタキサンチン、アンテラキサンチン及びビオラキサンチンからなる群から選択される１種又は２種以上であるカロテノイドが含まれる。
また、前記カロテノイドは、好ましくは、ヘマトコッカス藻由来のアスタキサンチンである。
なお、本明細書において、「カロテノイド」は、カロテノイドそのもの、精製されたカロテノイド、及びカロテノイドを含む抽出物（例えば、動植物、藻類からの抽出物）をも含む概念とする。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、食品等にも用いられる安全な物質を有効成分としたプロテアソーム活性向上剤を提供できる。
また、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤をヒト等に適用して、構造異常タンパク質等を除去することができる。
なお、ここに記載された効果は、必ずしも限定されるものではなく、本明細書中に記載されたいずれかの効果であってもよい。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】B16メラノーマ細胞における、コントロールとアスタキサンチン3μM、30μMを適用したときのプロテアソーム活性の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明に係るプロテアソーム活性向上剤は、カロテノイドを含有する。本発明に係るプロテアソーム活性向上剤は、例えばヒトを含む哺乳動物に適用して、生体内の構造異常タンパク質、変性タンパク質等の分解を促進し、除去することができる。ここで、以下に構造異常タンパク質、変性タンパク質を挙げるが、本明細書においてはこれらのタンパク質は明確に区別するものではなく、同じタンパク質を指す場合もある。
【００１２】
構造異常タンパク質は、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋委縮性側索硬化症、ハンチントン病等の神経変性疾患、白内障等の患者に多くみられるタンパク質である。構造異常タンパク質は、細胞の機能を障害し、死に至らしめる毒性を有する。よって、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤をこれらの患者に適用することにより、疾患の予防、改善、治療効果が期待できる。
【００１３】
変性タンパク質は、活性酸素種等により変性されたタンパク質であり、変性タンパク質が増加・蓄積されると老化症状や老化病態の助長につながるとされている。よって、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤をヒト等に適用することにより、シミ、くすみ、シワ、骨粗しょう症、認知症等、老化症状や老化病態の予防効果が期待できる。
【００１４】
なお、前記構造異常タンパク質や変性タンパク質は、ユビキチンリガーゼ等の働きによりユビキチン化される。多くの場合、ユビキチン自身も更に重合し、ポリユビキチン鎖を形成する。ポリユビキチン修飾されたタンパク質は、プロテアソームにより認識され、タンパク質分解を受ける。よって、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤をヒト等に適用することにより、構造異常タンパク質や変性タンパク質等を細胞から除去する効果が期待できる。
【００１５】
本発明に係るプロテアソーム活性向上剤に含まれるカロテノイドは、天然物由来のもの又は合成により得られるものいずれも使用することができ、市販されている。
また、その種類も特に限定されず、例えばα−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、δ−カロテン、ε−カロテン、リコペン、ルテイン、ゼアキサンチン、カンタキサンチン、フコキサンチン、アスタキサンチン、アンテラキサンチン、ビオラキサンチンが挙げられ、これらのエステル体でもよい。これらのカロテノイドは、一種を単独で用いてもよいし、二種以上を組み合わせて用いてもよい。また、前記カロテノイドはこれを含む、動植物や藻類、またはそれらの抽出物を用いてもよい。
前記カロテノイドは、いずれも、ヒト等に適用してプロテアソーム活性の向上を図ることができる。
【００１６】
前記カロテノイドのうち、特に、品質がよく安定的に生産できるアスタキサンチンが好ましく用いられる。アスタキサンチンは、例えば、ヘマトコッカス藻のヘマトコッカス・プルビイアリス（Haematococcus pluvialis）から生産することができる。ヘマトコッカス藻の抽出物を用いてもよい。
アスタキサンチンにおいても、遊離型のアスタキサンチンだけでなく、エステル体でもよい。アスタキサンチンは分子内に２つの水酸基を有し、モノエステルまたはジエステルを形成できる。アスタキサンチンのエステルとしては、特に限定されないが、例えば、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ＥＰＡ、ＤＨＡなどの脂肪酸とのエステルが挙げられる。
【００１７】
本発明に係るプロテアソーム活性向上剤の剤形は特に限定されない。医薬品であれば、例えば経口投与又は非経口投与(静脈内、動脈内、腹腔内、経直腸内、皮下、筋肉内、舌下、経鼻腔内、経皮等)用に製剤化することができる。製剤の形態としては、溶液剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤、座剤、噴霧剤、制御放出剤、懸濁剤、ドリンク剤、注射剤、皮膚外用剤等が挙げられる。また、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤は、食品や化粧料に配合することもできる。
【００１８】
本発明に係るプロテアソーム活性向上剤に含まれるカロテノイドの用量は、患者の年齢、体重、性別、状態等の要因によって変化する。例えば、1日当たりの投与量は、カロテノイド量で0.01〜1000μg/kg体重、好ましくは0. 1〜500μg/kg体重であるが、この範囲に限定されない。必要に応じて、用量を数回、例えば2〜3回に分けて分割投与してもよい。また、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤は、他の医薬品等と併用して患者に投与することもできる。
あるいは、皮膚に塗布する剤形のものであれば、剤中、カロテノイド量で、0.0001〜1.0質量％、好ましくは0.001〜0.1質量％の量で含有させ、適量を皮膚に塗布すればよい。
【００１９】
本発明に係るプロテアソーム活性向上剤には、カロテノイド以外に、製剤上許容可能な担体である賦形剤、希釈剤や、結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤、懸濁化剤、保存剤、着色剤、風味剤及び甘味剤等から適宜選択される添加剤を、本発明の効果を発揮できる範囲の量で含有させることができる。
【００２０】
本発明に係るプロテアソーム活性向上剤の薬理評価は、例えば、下記実施例に記載のメラノーマ細胞を用いてin vitroで行うことができる。例えば、本発明に係るプロテアソーム活性向上剤存在下及び不存在下でマウス由来のＢ１６メラノーマ細胞を培養し、不存在下でのプロテアソーム活性を基準にして存在下でのプロテアソーム活性が上昇していれば、プロテアソーム活性が向上したと評価できる。
【００２１】
また、プロテアソーム活性向上剤は、医薬品以外の形態でもよい。その場合、プロテアソーム活性向上剤中のカロテノイド濃度は、好ましくは0.01μM以上、より好ましくは0.1μ以上、更に好ましくは0.3μM以上であって、かつ好ましくは100μM以下、より好ましくは50μM以下、更に好ましくは30μM以下とすることができる。
【００２２】
プロテアソーム活性の評価としては、前記培養した細胞内に存在するプロテアソーム複合体のキモトリプシン様、トリプシン様、カスパーゼ様プロテアーゼ活性を測定する方法が挙げられる。測定は、基質（SUC-LLVY-AMC）がプロテアソームに切断されて生じる蛍光物質を検出することにより行う。測定キットは市販されており、例えばPromega社のProteasome-Glo（登録商標）Assay、コスモ・バイオ社のProteasome 20S assay kit、フナコシ株式会社のProteasome 20S assay kitが挙げられる。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例に基づいて本発明を更に詳細に説明する。なお、以下に説明する実施例は、本発明の代表的な実施例の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【００２４】
＜B16メラノーマ細胞を用いたプロテアソーム活性向上剤の検討＞
（１）試料の準備
アスタキサンチンには、ヘマトコッカス藻のヘマトコッカス・プルビイアリス（Haematococcus pluvialis）由来のアスタキサンチンのものを使用した。
【００２５】
（２）方法
B16メラノーマ細胞を、96穴プレートに10％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地を適量とりB16メラノーマ細胞を播種し、37℃、二酸化炭素濃度5％中にて静置した。翌日、前記試料を、その最終濃度が3μM、30μMとなるようにエタノールに溶解して添加し混和した。培養3日目に培地を交換し、再度試料調製液を添加した。翌日、培地を除き、１枚のプレートについて、細胞をリン酸緩衝液にて洗浄した後回収した。対照には溶媒のエタノールのみを同濃度で添加したものを用意した。  
以降の検討においては、プロメガ社のProteasome-Glo（登録商標）Assayキットを、添付文書にしたがって使用した。
得られたペレットを、Glo Lysis Bufferに懸濁し、細胞を溶解してLysate溶液を得た。各Lysate溶液を10倍に希釈し、蛍光検出用96穴プレートに分注し、あらかじめ室温に戻したProteasome Glo Reagentを等量添加し、30分間インキュベーションした。その後、GloMax-Multi Detection System（登録商標）で蛍光測定を行った。
【００２６】
（３）結果
プロテアソーム活性（蛍光強度）の測定結果を図１に示す。
コントロールと比較して、アスタキサンチンを3μM濃度で添加した場合は、B16メラノーマ細胞内のプロテアソーム活性が上昇していることが見出された。
【００２７】
以上のことから、アスタキサンチンは、細胞内のプロテアソーム活性を向上させ、プロテアソームによる構造異常タンパク質、変性タンパク質等の分解を促進する作用に寄与することが考えられた。
【００２８】
応用例１：軟膏剤
（成分）                                                        （％）
１．ステアリン酸                                              １８．０
２．セタノール                                                  ４．０
３．酢酸ｄｌ−α―トコフェロール（注１）                        ０．２
４．トリエタノールアミン                                        ２．５
５．グリセリン                                                  ５．０
６．グリチルリチン酸ジカリウム（注２）                          ０．５
７．アスタキサンチン（注３）                                    ０．１
８．パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
９．精製水                                                        残量
（注１）エーザイ社製
（注２）和光純薬工業社製
（注３）ヘマトコッカス藻のヘマトコッカス・プルビイアリス（Haematococcus pluvialis）由来のアスタキサンチン
【００２９】
（製造方法）
Ａ．成分１〜３を加熱混合し、７５℃に保つ。
Ｂ．成分４〜９を混合し、７５℃に保つ。
Ｃ．ＡにＢを徐々に加え、軟膏剤を得た。
【００３０】
応用例２：錠剤
（処方）                                                          （％）
１．乳糖                                                          ２４．０
２．結晶セルロース                                                ２０．０
３．コーンスターチ                                                １５．０
４．アスタキサンチン（注３）                                        ０．０５
５．デキストリン                                                    残量
６．グリセリン脂肪酸エステル                                        ５．０
７．二酸化ケイ素                                                    １．０
【００３１】
（製造方法）
Ａ.成分１〜７を均一に混合し、常法に従って錠剤を得た。
【００３２】
応用例３：清涼飲料
（処方）                                                          （％）
１．果糖ブドウ糖液糖                                              ３０．０
２．乳化剤                                                          ０．５
３．アスタキサンチン（注３）                                        ０．０１
４．香料                                                            適量
５．精製水                                                          残量
【００３３】
（製造方法）
Ａ.成分１〜５を均一に混合し、常法に従って清涼飲料を得た。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明によれば、細胞内のプロテアソーム活性の向上効果が期待できる医薬品、医薬部外品、食品、機能性食品、化粧料、薬用化粧料等を提供することができる。
【図１】
2017132701.tif 000003