(57)【要約】【課題】皮膚外用剤として好適な、優れたメラニン取込み阻害剤を提供することを課題とする。【解決手段】キク科ベニバナ属ベニバナ（Carthamus tinctorius）の抽出物からなるメラニン取込み阻害剤。特にメラニン取込み阻害がＰＡＲ２活性化阻害であることが好ましい。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キク科ベニバナ属ベニバナ（Carthamus tinctorius）の抽出物からなるメラニン取込み阻害剤。
【請求項２】
請求項１に記載のメラニン取込み阻害がＰＡＲ２活性化阻害であることを特徴とする、メラニン取込み阻害剤。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載のメラニン取込み阻害剤を含有することを特徴とする、美白剤。
【請求項４】
請求項１または請求項２に記載のメラニン取込み阻害剤を含有することを特徴とする、肌色改善剤。
【請求項５】
請求項１または請求項２に記載のメラニン取込み阻害剤を含有する美白用の皮膚外用剤。
【請求項６】
請求項１または請求項２に記載のメラニン取込み阻害剤を含有する肌色改善用の皮膚外用剤。
【請求項７】
化粧料であることを特徴とする、請求項５又は６のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キク科ベニバナ属ベニバナ（Carthamus tinctorius）抽出物からなるメラニン取込み阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
シミ、ソバカスや日焼け後の色素沈着などは、皮膚に存在する色素細胞（メラノサイト）の活性化によりメラニン産生が亢進することにより生じる。
また、通常の色素沈着症状に加え、角化細胞（ケラチノサイト）への過剰な輸送により、蓄積及び排出遅延等によりケラチノサイトを不活性化させ、重層剥離等の肌症状の悪化を引き起こす（例えば、特許文献１を参照）。
色素沈着異常を含む肌症状の悪化を予防又は改善するために、美白剤をはじめとする様々な有効成分の研究開発がなされている。この様な研究により見出された美白剤としては、例えば、アスコルビン酸、過酸化水素、コロイド硫黄、グルタチオン、ハイドロキノン、カテコ−ル類などが知られ、これらを有効成分として配合した皮膚外用剤も広く使用されている（例えば、非特許文献１及び非特許文献２を参照）。
また、現在までに創出された美白剤の作用機序は、多岐に渡り、メラニン産生抑制剤（例えば、特許文献２を参照）、チロシナ−ゼ酵素阻害剤（例えば、特許文献３を参照）、チロシナ−ゼ酵素遺伝子発現抑制剤、α−MSH阻害剤（例えば、特許文献４を参照）、抗酸化剤等が報告されている。
また、メラニンを抑制する物質の評価として、メラニン取込み阻害効果の評価方法が使用され、メラニン取込み阻害を評価する方法としては、ＰＡＲ２（Protease Activated Receptor2）活性化阻害を評価する方法が知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００４−２５０３５４号公報
【特許文献２】特開２００８−２０８０７３号公報
【特許文献３】特開２００９−１９６８９５号公報
【特許文献４】特開２００１−２２０３４７号公報
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】武田克之ら監修、「化粧品の有用性、評価技術と将来展望」、薬事日報社刊（２００１年）．
【非特許文献２】大森敬之、FRAGRANCE JOURNAL 臨時増刊、No．１４、１９９５、  １１８−１２６．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、この様な状況下為されたものであり、新規なメラニン取込み阻害剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
この様な状況に鑑みて、本発明者らは、メラニン取込み阻害剤を求めて、鋭意努力を重ねた結果、キク科ベニバナ属ベニバナ（Carthamus tinctorius）抽出物（以下、「ベニバナ抽出物」という。）が、メラニン取込み阻害作用を有することを見出し、発明を完成させるに至った。
【０００７】
即ち、本発明は以下に示すとおりである。
＜１＞キク科ベニバナ属ベニバナ（Carthamus tinctorius）の抽出物からなるメラニン取込み阻害剤。
＜２＞＜１＞に記載のメラニン取込み阻害がＰＡＲ２活性化阻害であることを特徴とする、メラニン取込み阻害剤。
＜３＞＜１＞または＜２＞に記載のメラニン取込み阻害剤を含有することを特徴とする、美白剤。
＜４＞＜１＞または＜２＞に記載のメラニン取込み阻害剤を含有することを特徴とする、肌色改善剤。
＜５＞＜１＞または＜２＞に記載のメラニン取込み阻害剤を含有する美白用の皮膚外用剤。
＜６＞＜１＞または＜２＞に記載のメラニン取込み阻害剤を含有する肌色改善用の皮膚外用剤。
＜７＞化粧料であることを特徴とする、＜５＞又は＜６＞のいずれかに記載の皮膚外用剤。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、新規なメラニン取込み阻害剤を提供することができる。
本発明のメラニン取込み阻害剤は、優れた美白効果、肌色改善効果を有するものである。従って、本発明によれば、新規な美白用または肌色改善用の皮膚外用剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ベニバナ抽出物によるＰＡＲ２ｍＲＮＡ発現変動を示すグラフ
【図２】ベニバナ抽出物によるメラニン取込み減少を示すグラフ
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明のメラニン取込み阻害剤は、キク科ベニバナ属ベニバナ（Carthamus tinctorius）の抽出物であることを特徴とする。ここで、ベニバナ抽出物とはベニバナ抽出物自体、ベニバナ抽出物を分画、精製した分画、ベニバナ抽出物又は分画・精製物の溶媒除去物の総称を意味する。
本発明のベニバナ抽出物は、日本において、自生又は生育された植物、漢方生薬原料等として販売される日本産のものを用いて抽出物を作製することも
できるし、丸善製薬株式会社等より販売されている市販の抽出物を購入し使用することもできる。
【００１１】
前記植物より得られる植物抽出物の作製に用いる植物の部位は、特段限定されない。植物抽出物の作製には、全草を用いることができるが、植物体、地上部、根茎部、木幹部、葉部、茎部、花穂、花蕾、果実等の部位のみを使用することもできる。前記植物の抽出に際しては、植物体等の抽出に用いる部位は、予め、粉砕或いは細切して抽出効率を向上させるように加工することが好ましい。抽出物製造においては、植物体等の抽出に用いる部位又はその乾燥物１質量に対して、溶媒を１〜３０質量部加え、室温であれば数日間、沸点付近の温度であれば数時間浸漬する。浸漬後は、室温まで冷却し、所望により不溶物を除去した後、溶媒を減圧濃縮する等により除去することができる。しかる後、シリカゲルやイオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィー等で分画精製し、該抽出物を得ることができる。
【００１２】
前記抽出溶媒としては、極性溶媒が好適に例示でき、より好ましくは、メタノール、エタノール、イソプロピルアルコール、ブタノール等のアルコール類、１，３−ブチレングリコール、ポリプロピレングリコール等の多価アルコール類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン等のエーテル類、ヘキサン、ペンタン等の炭化水素類等から選択される１種又は２種以上が好適に例示でき、さらに好ましくは、エタノール、含水エタノール、１，３−ブチレングリコール、含水１，３−ブチレングリコールが好適に例示でき、抽出効率の点からは、５０〜９５％（溶量）含水エタノール、より好ましくは、５０〜７５％（溶量）含水エタノール、１，３−ブチレングリコールが好ましく例示できる。
【００１３】
＜製造例１： 本発明に係るベニバナ抽出物の製造方法＞
本発明のメラニン取込み阻害作用を有するベニバナ抽出物を以下の手順に従い製造した。キク科ベニバナ属ベニバナ花部の粗砕物１００ｇを６０％（容量）エタノール溶媒４０００Ｌに投入し、穏やかに攪拌しながら３時間、７０℃に保った後、ろ過した。ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、更に減圧乾燥機で乾燥し、固形分の植物抽出物を得た。
【００１４】
本発明に係るベニバナ抽出物をメラニン取込み阻害剤として用いる場合、その固形分として、好ましい含有量は７０質量％以上、より好ましくは、８０質量％以上であり、さらに好ましくは、９０質量％以上である。
【００１５】
本発明のメラニン取込み阻害剤は、美白効果、肌色を改善する目的で、医薬や化粧料として提供される皮膚外用剤、食品、飲料等の成分として使用することができる。
本発明のメラニン取込み阻害剤は、皮膚、特に表皮のメラニン取込み阻害作用を高める目的で使用するのに好適であり、この点から、好ましくは皮膚外用剤の成分として使用することができる。
【００１６】
メラニン取込み阻害を評価する方法としては、ＰＡＲ２（Protease Activated Receptor2）活性化阻害を評価する方法が知られている。従って、本発明者らは、前記メラニン取込み阻害は、ＰＡＲ２活性化阻害作用を有するものは、メラニン取込み阻害作用を有するものと推測し、キク科ベニバナ属ベニバナ抽出物に美白効果、肌色改善効果があることを明らかにした。
また、本発明のメラニン取込み阻害剤は、皮膚外用剤の形態として用いることが好ましい。すなわち、本発明の好ましい形態は、前記メラニン取込み阻害剤を含有する美白用、肌色改善用の皮膚外用剤である。
【００１７】
本発明の美白剤、肌色改善剤としてのメラニン取込み阻害剤の含有量の好ましい含有量は、ベニバナ抽出物の固形分として、０．０００１質量％〜１質量％、より好ましくは、０．００１質量％〜０．１質量％であり、さらに好ましくは、０．００５質量％〜０．０５質量％である。これは、あまり濃すぎると効果が頭打ちになる場合があり、少なすぎると有効濃度とならない場合があるからである。
本発明の皮膚外用剤におけるメラニン取込み阻害剤の含有量は、ベニバナ抽出物の固形分として、０．０００１質量％〜１質量％、より好ましくは、０．００１質量％〜０．１質量％であり、さらに好ましくは、０．００５質量％〜０．０５質量％である。これは、あまり濃すぎると効果が頭打ちになる場合があり、少なすぎると有効濃度とならない場合があるからである。
【００１８】
皮膚外用剤の形態としては、化粧料が好ましい。化粧料の形態には特段の限定はなく、例えば、エッセンス、乳液、クリーム等の基礎化粧料、アンダーメークアップ、ファンデーション、チークカラー、マスカラ、アイライナー等のメークアップ化粧料、ヘアクリーム等の毛髪化粧料等が好適に例示できる。
【００１９】
本発明のメラニン取込み阻害剤を化粧料に含有せしめる場合、化粧料で通常使用されている任意成分を本発明の効果を損なわない範囲において、含有することができる。
【００２０】
このような任意成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボカド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類、流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類、セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール等、イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類、ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン、アミノ変性ポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類、脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、ポリグリセリン脂肪酸エステル類、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ＰＯＥソルビタン脂肪酸エステル類（ＰＯＥソルビタンモノオレエート、モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン等）、ＰＯＥソルビット脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−ソルビットモノラウレート等）、ＰＯＥグリセリン脂肪酸エステル類（ＰＯＥ−グリセリンモノイソステアレート等）、ＰＯＥ脂肪酸エステル類（ポリエチレングリコールモノオレート、ＰＯＥジステアレート等）、ＰＯＥアルキルエーテル類（ＰＯＥ２−オクチルドデシルエーテル等）、ＰＯＥアルキルフェニルエーテル類（ＰＯＥノニルフェニルエーテル等）、プルロニック型類、ＰＯＥ・ＰＯＰアルキルエーテル類（ＰＯＥ・ＰＯＰ２−デシルテトラデシルエーテル等）、テトロニック類、ＰＯＥヒマシ油・硬化ヒマシ油誘導体（ＰＯＥヒマシ油、ＰＯＥ硬化ヒマシ油等）、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類、ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブタンジオール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキシレングリコール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等の多価アルコール類、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類、グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、キサンタンガム、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸，ローカストビーンガム，サクシノグルカン、カロニン酸、キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリエチレングリコール等の増粘剤、表面を処理されていても良い、マイカ、シリカ、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類、表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類、表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類、レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類、ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２'−ヒドロキシ−５'−ｔ−オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４'−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類、エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類、ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ6塩酸塩、ビタミンＢ6トリパルミテート、ビタミンＢ6ジオ��タノエート、ビタミンＢ2又はその誘導体、ビタミンＢ12、ビタミンＢ15又はその誘導体等のビタミンＢ類、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類等、フェノキシエタノール等の抗菌剤等が好ましく例示できる。
【００２１】
また、併用する美白成分としては、アスコルビン酸及び／又はその誘導体、アルブチン及び／又はその塩、エラグ酸及び／又はその塩、トラネキサム酸及び／又はその塩若しくは４−メトキシサリチル酸及び／又はその塩が好ましく例示でき、これらを含有させることで異なるメカニズムで美白や肌色改善効果の相乗的効果が期待できる。
【実施例】
【００２２】
以下に、実施例を挙げて、本発明について更に詳細に説明を加えるが、本発明が、かかる実施例にのみ限定されないことは言うまでもない。
【００２３】
＜試験例１： メラニン取込み因子の発現量確認試験＞
試験法を記載する。以下の手順で、ケラチノサイトにおけるメラニン取込み因子の発現変化を検討した。
新生児ヒト皮膚ケラチノサイトを、ＫＧ２培地で２４穴プレートに５．０×１０４細胞数／ウェルとなるように播種した。播種２４時間後、最終濃度０．５％となるように市販のベニバナ抽出物（一丸ファルコス製）を添加したＫＧ２培地（５００μＬ／ウェル）に交換した。その２４時間後、２４穴プレートのケラチノサイトにＲＮｅａｓｙＭｉｎｉＫｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社）のＲＬＴ ｂｕｆｆｅｒを添加しｍＲＮＡを抽出し、ＱｕａｎｔｉＴｅｃｔ Ｐｒｉｍｅｒ Ａｓｓａｙを用いてＲＴ−ＰＣＲを行いケラチノサイトに発現しているメラニン取込み因子（ＰＡＲ２）のｍＲＮＡ量を測定した。各遺伝子のｍＲＮＡ発現量は、１８ｓｒＲＮＡを内在性コントロールとして、比較ＣＴ法により算出し、ベニバナ抽出物非添加のケラチノサイトにおける遺伝子発現量を「１」とした場合の相対値で示した。結果を図１に示す。
【００２４】
図１に示すようにベニバナ抽出物を添加しないコントロールに比べ、ベニバナ抽出物がＰＡＲ２発現抑制効果を有することが確認された。
【００２５】
＜試験例２： メラニン取込み阻害の確認試験＞
以下の手順で、メラニンを模した蛍光ビーズを用いて、ケラチノサイトにおけるメラニン取込み阻害について検討した。
新生児ヒト皮膚ケラチノサイトを、ＫＧ２培地で４穴チャンバースライドに５．０×１０４細胞数／ウェルとなるように播種した。播種２４時間後、メラニン取込み因子ＰＡＲ２活性化試薬（ＳＬＩＧＲＬ：Ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ  Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ２  Ａｇｏｎｉｓｔ  Ｐｅｐｔｏｄｅ）を最終濃度５０μＭになるように添加し、４時間培養する。その後、最終濃度０．５％となるようにベニバナ抽出物をＫＧ２培地（５００μＬ／ウェル）に交換した。その２４時間後、メラニンを模した蛍光ビーズ（Ｆｌｕｏ  Ｓｐｈｅｒｅ&reg;  ０．５μｍ  Ｒｅｄ）を添加し、さらに４時間培養した後にＰＢＳで十分洗浄した。４穴チャンバースライドのケラチノサイトは、４％パラホルムアルデヒドで細胞固定した後、Ｄａｐｉ−Ｆｌｕｏｒｏｍｏｕｎｔ−Ｇにて封入後、蛍光顕微鏡の蛍光観察を行った。なお、画像解析ソフトＩｍａｇｅＪを用いて、蛍光強度を測定した。結果を図２に示す。
【００２６】
１）メラニン取込み因子ＰＡＲ２活性化試薬を加えていないコントロール、２）メラニン取込み因子ＰＡＲ２活性化試薬を添加しＰＡＲ２を活性化したもの、３）更にＰＡＲ２を活性化したものにベニバナ抽出物を加えたもの、について、蛍光強度を比較した。その結果、コントロールに比べＰＡＲ２活性化試薬を添加したものでは、蛍光ビーズの取込み増加により蛍光強度が増加し、ＰＡＲ２が活性化していることが確認された。さらに、ベニバナ抽出物を加えることで、蛍光強度の増加は抑制され、ＰＡＲ２の活性化が抑制されたことが確認された。
つまり、メラニン取込み阻害を評価する方法としては、ＰＡＲ２（Protease Activated Receptor2）活性化阻害を評価する方法が知られていることから、ベニバナ抽出物がメラニンの取込みを抑制することが推察された。
【００２７】
＜実施例１：本発明の皮膚外用剤＞
以下の表１に示す処方に従って、本発明の皮膚外用剤である化粧料１を作製した。
【００２８】
【表１】
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【図１】
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【図２】
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