(57)【要約】【課題】細胞の培養凹部からの脱出を抑制し、仮に脱出しても隣接の培養凹部への混入を防止することができる細胞培養容器を提供することを目的とする。【解決手段】細胞培養容器１は、円板状の底部１０と、底部１０から立設した周壁部１１とを有する。底部１０には、上方に開口する複数の培養凹部１２が間に平面部１３を介在させるように配列されている。培養凹部１２の開口１２ｂの周辺には、該開口１２ｂを取り囲むと共に平面部１３から上方に突出する突出部１４が設けられている。培養凹部１２同士間の最短距離ｔは、１５０μｍ以上である。【選択図】図１
2017216967.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
上方に開口する培養凹部を複数有する細胞培養容器であって、
前記複数の培養凹部は、間に平面部を介在させるように配列され、
前記培養凹部の開口の周辺には、該開口を取り囲むと共に前記平面部から上方に突出する突出部が設けられ、
前記培養凹部同士間の最短距離は、１５０μｍ以上である細胞培養容器。
【請求項２】
前記培養凹部の底面は、平面状に形成され、その面積が１ｍｍ２以下であり、
前記培養凹部の開口の面積は、該培養凹部の底面の面積の２倍以上である請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項３】
前記培養凹部の深さは、該培養凹部の底面の最大幅よりも大きい請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項４】
前記培養凹部の底面は、円形状に形成され、その直径が１０００μｍ以下である請求項３に記載の細胞培養容器。
【請求項５】
前記平面部は、前記培養凹部の底面より下方に位置する請求項１〜４のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項６】
前記培養凹部には、細胞非接着層が設けられている請求項１〜５のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項７】
前記培養凹部の開口の縁部及び底面の隅部の少なくとも一方は、曲面部を有する請求項１〜６のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項８】
前記平面部であって前記突出部に隣接する領域には、前記培養凹部の開口の周縁に延在する溝部が設けられている請求項１〜７のいずれか一項に記載の細胞培養容器。
【請求項９】
前記溝部は断続的に設けられている請求項８に記載の細胞培養容器。
【請求項１０】
前記溝部の開口幅は、前記培養凹部に収容される細胞の直径の半分以上である請求項８又は９に記載の細胞培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本開示の実施形態は、受精卵などの個別管理が必要な細胞を培養するための細胞培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
培養系で精子と卵子とを体外受精させて受精卵を作製して、更に受精卵を卵割、桑実胚、胚盤胞の段階を経て、透明帯から孵化した脱出胚盤胞の段階まで培養することが可能となり、この卵割から胚盤胞の段階にある受精卵を子宮に移植して産子を得る補助的生殖技術（ＡＲＴ）が、家畜領域のみならずヒトの不妊治療でも確立されている。
【０００３】
これに伴って、受精卵の個別管理の重要性が高まり、受精卵などの個別管理が必要な細胞を培養する細胞培養容器の研究開発も盛んに行われている。一例として、例えば特許文献１には、上面が開口した容器本体と、該容器本体の上面を覆う蓋とを有し、容器本体中に複数のウェルが設けられ、少なくとも一部のウェルの底面に複数の細胞培養穴（培養凹部）が形成された細胞培養容器が開示されている。このように構成された細胞培養容器では、培養凹部毎に細胞の培養を行うことで、細胞の個別管理を実現している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００７−１８５１１０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかし、上述した細胞培養容器では、以下の問題が生じている。すなわち、培養液と共に培養凹部に収容された細胞が、通常では培養凹部の底面に沈んだ状態となっているが、振動等の原因で浮き上がって培養凹部から脱出する（すなわち、培養凹部から外に出る）可能性がある。特に、培養液を循環させる循環系を備える細胞培養容器の場合には、細胞が培養液の流れによって培養凹部から脱出しやすくなる。細胞が培養凹部から脱出すると、細胞の培養に影響を与えるだけではなく、隣接の培養凹部に混入し、該隣接の培養凹部に培養される細胞と混同してしまい、細胞の個別管理に影響を与えている。
【０００６】
本開示の実施形態は、上記の点に鑑みてなされたものであり、細胞の培養凹部からの脱出を抑制し、仮に脱出しても隣接の培養凹部への混入を防止することができる細胞培養容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器は、上方に開口する培養凹部を複数有する細胞培養容器であって、前記複数の培養凹部は、間に平面部を介在させるように配列され、前記培養凹部の開口の周辺には、該開口を取り囲むと共に前記平面部から上方に突出する突出部が設けられ、前記培養凹部同士間の最短距離は、１５０μｍ以上であることを特徴としている。
【０００８】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記培養凹部の底面は、平面状に形成され、その面積が１ｍｍ２以下であり、前記培養凹部の開口の面積は、該培養凹部の底面の面積の２倍以上であることが好適である。
【０００９】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記培養凹部の深さは、該培養凹部の底面の最大幅よりも大きいことが好適である。
【００１０】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記培養凹部の底面は、円形状に形成され、その直径が１０００μｍ以下であることが好適である。
【００１１】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記平面部は、前記培養凹部の底面より下方に位置することが好適である。
【００１２】
本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記培養凹部には、細胞非接着層が設けられていることが好適である。
【００１３】
また、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記培養凹部の開口の縁部及び底面の隅部の少なくとも一方は、曲面部を有することが好適である。
【００１４】
また、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記平面部であって前記突出部に隣接する領域には、前記培養凹部の開口の周縁に延在する溝部が設けられていることが好適である。
【００１５】
更に、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記溝部は断続的に設けられていることが好適である。
【００１６】
更に、本開示の一実施形態に係る細胞培養容器において、前記溝部の開口幅は、前記培養凹部に収容される細胞の直径の半分以上であることが好適である。
【発明の効果】
【００１７】
本開示によれば、細胞の培養凹部からの脱出を抑制し、仮に脱出しても隣接の培養凹部への混入を防止することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】（ａ）は第１実施形態の細胞培養容器を示す平面図であり、（ｂ）は（ａ）のＸ−Ｘ線に沿う断面図である。
【図２】細胞及び培養液が収容された細胞培養容器を示す部分拡大断面図である。
【図３】第２実施形態の細胞培養容器であり、内部に細胞及び培養液が収容される状態を示す部分拡大断面図である。
【図４】第３実施形態の細胞培養容器であり、内部に細胞及び培養液が収容される状態を示す部分拡大断面図である。
【図５】（ａ）は第４実施形態の細胞培養容器を示す部分平面図であり、（ｂ）は（ａ）のＹ−Ｙ線に沿う部分断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、図面を参照して本発明に係る細胞培養容器の実施形態を説明する。図面の説明において同一の要素には同一符号を付し、重複説明は省略する。また、以下の説明では、上下、左右及び前後の位置、方向は、細胞培養容器の通常の使用状態における位置及び方向である。更に、各図において、各構成部の間の距離や間隔などは、発明の理解を容易にするために、実施形態に記載の寸法に比べて大きく或いは小さく描かれている場合がある。
【００２０】
＜第１実施形態＞
図１（ａ）は第１実施形態の細胞培養容器を示す平面図であり、図１（ｂ）は図１（ａ）のＸ−Ｘ線に沿う断面図であり、図２は細胞及び培養液が収容された細胞培養容器を示す部分拡大断面図である。本実施形態の細胞培養容器１は、個別管理が必要とされる細胞を培養するのに適しており、内部に複数の培養凹部１２が設けられた有底円筒状の容器である。
【００２１】
ここで、個別管理が必要とされる細胞とは、培養中及び培養後において個々の細胞を特定する必要があるものをさし、複数の細胞を培養する培養容器において互いに混同してしまうことが望ましくない細胞をさす。個別管理が必要とされる細胞としては、例えば、受精卵、卵細胞、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）及びｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞）が挙げられる。卵細胞は、未受精の卵細胞をさし、未成熟卵母細胞及び成熟卵母細胞が含まれる。受精卵は、受精後、卵割により２細胞期、４細胞期、８細胞期と細胞数が増えていき、桑実胚を経て、胚盤胞へと発生する。
【００２２】
受精卵には、２細胞胚、４細胞胚及び８細胞胚などの初期胚、桑実胚、胚盤胞（初期胚盤胞、拡張胚盤胞及び脱出胚盤胞を含む）が含まれる。胚盤胞は、胎盤を形成する潜在能力がある外部細胞と胚を形成する潜在能力がある内部細胞塊からなる胚を意味する。ＥＳ細胞は胚盤胞の内部細胞塊から得られる未分化な多能性又は全能性細胞をさす。ｉＰＳ細胞は、体細胞（主に線維芽細胞）へ数種類の遺伝子（転写因子）を導入することにより、ＥＳ細胞に似た分化万能性を持たせた細胞をさす。
【００２３】
また、本実施形態の細胞培養容器１は、好ましくは哺乳動物及び鳥類の細胞、特に哺乳動物の細胞の培養に好適である。哺乳動物は、温血脊椎動物をさし、例えば、ヒト及びサルなどの霊長類、マウス、ラット及びウサギなどの齧歯類、イヌ及びネコなどの愛玩動物、ならびにウシ、ウマ及びブタなどの家畜が挙げられる。本実施形態の細胞培養容器１は、ウシの受精卵の培養に特に好適である。
【００２４】
図１に示すように、細胞培養容器１は、互いに平行に配置された上面１０ａと底面１０ｂとを有する略円板状の底部１０と、底部１０の周縁から立設された円筒状の周壁部１１とを備えており、底部１０及び周壁部１１によって形成される空間に培養液を収容可能となっている。なお、本実施形態の細胞培養容器１は、蓋部を備えていないが、通常のシャーレと同様に蓋部を備えても良い。
【００２５】
底部１０には、断面が上方に開口した円錐台形状を呈し、受精卵を収容し培養するための培養凹部１２が複数形成されている。平面視（図１（ａ）参照）において、これらの培養凹部１２は、前後左右方向に一定の間隔で近接して配列されている。断面視（図１（ｂ）及び図２参照）では、各培養凹部１２は、底部１０の上面１０ａから底面１０ｂ側に向かって縮径するように形成されている。換言すれば、各培養凹部１２は、その底面１２ａから開口１２ｂに向かって直径が徐々に拡がるように形成されている。
【００２６】
培養凹部１２の底面１２ａは、平面状に形成されている。このようにすることで、底面にテーパーを付けた場合と比べて、受精卵の観察作業を行い易くなる。すなわち、底面にテーパーを付けた場合には、受精卵がテーパーの底に安定した状態で保持されるが、培養凹部に混入された異物などもテーパーの底に集まり易い。異物などは観察作業を邪魔する。一方、本実施形態のように底面１２ａを平面状にすることで、異物などをどけたりずらしたりしやすくなるので、観察作業の効率向上を図ることができる。また、観察の際に受精卵を回転させて細胞分割数などを確認する場合もあり、底面１２ａを平面状にすることで、受精卵を横に転がして特定位置で静止した観察を実施し易くなる。
【００２７】
なお、ここでの平面状は、完全に水平であることが勿論だが、必ずしも完全な水平である必要はない。実質的に受精卵などの細胞に対して水平であれば良く、一般的な射出成形品の平面部のように数μｍ程度の差や、ＪＩＳ  Ｂ  ０４１９−１９９１で標準公差にあるような１％以下程度の製造上の表面粗さがあっても良い。
【００２８】
また、本実施形態において、培養凹部１２の底面１２ａの面積は１ｍｍ２以下であることが好ましい。これは、底面１２ａの面積が受精卵の大きさに対して広すぎると、顕微鏡を介して受精卵を見つけ難くなる問題が生じており、受精卵をスムーズに見つけて観察作業を効率良く行うために、底面１２ａの面積は１ｍｍ２以下であることが好適である。
【００２９】
更に、培養凹部１２の開口１２ｂの面積は底面１２ａの面積の２倍以上であることが好ましい。このようにすることで、受精卵を転がしたり、異物をどけたりする際に、これらの作業を行い易くなる。また、仮に受精卵が大きくなりすぎて培養凹部１２内にはまりそうな場合があっても、培養凹部１２の上部に受精卵の位置をずらしながら取り出すことが可能である。
【００３０】
更に、本実施形態において、培養凹部１２の底面１２ａは円形状に形成されており、その直径Ｄが１０００μｍ以下であることが好ましい。受精卵は、胚盤胞で直径が２５０μｍ程度まで、透明帯も含めて直径が５００μｍ程度まで成長することがある。このような受精卵の大きさを考慮しつつ、上述した観察作業、例えば、受精卵探し、異物排除を行い易くするために、底面１２ａの直径Ｄが受精卵最大直径の２倍である１０００μｍ以下と設定されている。なお、受精卵等の細胞は、成長によってその形が球状であったり、楕円状等の形状であったりする場合がある。このため、本実施形態での細胞の直径とは、球状の場合にその直径、球状でない場合に最大幅を意味する。
【００３１】
また、生殖医療分野では胚盤胞を直径２５０μｍ程度まで成長させて移植することが多いので、作業の余裕などを考慮し、底面１２ａの直径Ｄが６００μｍ以下であることが特に好ましい。更に、胚盤胞までしか成長させない場合には、底面１２ａの直径Ｄが３００μｍ以下であることがより好ましい。
【００３２】
なお、ここでの円形状は、完全に円形状であることが勿論だが、必ずしも完全な円形状である必要はない。例えば、一般的な標準公差にあるような１％以下程度の製造上の差があっても良い。
【００３３】
培養凹部１２の深さｈは、以下のことを考慮し、底面１２ａの直径Ｄ（すなわち最大幅）よりも大きく設定されている。すなわち、培養凹部１２の深さｈが底面１２ａの直径Ｄより小さくなると、収容される受精卵の頭が開口１２ｂから出やすくなる。受精卵の頭が開口１２ｂから出た場合には、培養液３０の流れの影響を受けやすくなるので、受精卵が培養凹部１２から脱出する可能性が高くなる。更に、顕微鏡を介しキャピラリーなどを用いて作業する際に、上下方向の距離を把握し難いので、キャピラリーなどで受精卵が傷つく可能性も高くなる。
【００３４】
一方、培養凹部１２の深さｈが深くなることにつれ、培養凹部１２内部を流れる培養液３０の速度が遅くなり、これによって受精卵２０が脱出し難くなるが、培養凹部１２が深すぎると、培養凹部１２内部、特に底面１２ａ付近の培養液３０の循環が悪くなるのみならず、受精卵の取り出し作業も難しくなる。例えば、キャピラリーでの吸出し作業では、培養凹部１２が深すぎると、キャピラリー先端と受精卵との位置合わせの困難さが増し、キャピラリーが折れる可能性や、受精卵にダメージを与えるリスクも高くなる。
【００３５】
以上のことを考慮し、本実施形態では、培養凹部１２の深さｈは底面１２ａの直径Ｄよりも大きく設定されている。なお、培養凹部１２の深さｈとは、開口１２ｂから培養凹部１２の底面１２ａまでの高さをさしており、開口１２ｂとは、培養凹部１２における底部１０の上面１０ａと同一平面上に位置する場所をさしている。
【００３６】
培養凹部１２の深さｈは、例えば光学顕微鏡又はレーザ顕微鏡を用いて測定することができる。光学顕微鏡を用いた場合には、光学顕微鏡で開口１２ｂと底面１２ａにそれぞれ焦点を合わせて両者間の差を測定する。その際に、両者間のＺ座標での差に基づいて測定しても良く、変位を計測できる機能を備えた光学顕微鏡であればその機能を使って両者間の変位を測定しても良い。一方、レーザ顕微鏡を用いた場合には、備えられた深度計測機能を使って開口１２ｂと底面１２ａとの差を測定する。
【００３７】
また、底面が円形状でない場合における底面の最大幅については、顕微鏡を用いて測定することが可能である。例えば、顕微鏡で培養凹部の底面に焦点を合わせ、該培養凹部の画像を取得する。次に、取得した画像に対し、２点間の距離を表示する計測ソフトで任意の２点間の距離を比較し最大長さを最大幅として導出しても良く、或いは形状などの各種特徴量を自動計算する画像処理ソフトで最大幅を導出しても良い。
【００３８】
また、図示しないが、培養凹部１２には、細胞非接着層が設けられることが好ましい。受精卵を胚盤胞まで培養する場合には、受精卵が直径２５０μｍを超えて大きく成長することが多く、特に透明帯を形成し透明帯から脱出するまで培養する場合には、受精卵が更に大きくなる。しかし、受精卵が大きくなることにつれ、細胞接着性が増加する傾向がある。細胞接着性が増加すると、受精卵を培養凹部１２から取り出し難くなる問題が生じる。このようなことを防止するために、本実施形態では、培養凹部１２の底面１２ａ及び側壁１２ｃの全体又はその一部には、細胞非接着層が設けられている。
【００３９】
細胞非接着層としては、ポリエチレングリコールやポリヒドロキシエチルメタクリレート、エチレンビニルアルコール共重合体などの親水性物質が用いられる。また、界面活性剤、リン脂質などのコーティング、プラズマ処理などの表面処理による親水化によって形成されても良い。
【００４０】
図１（ｂ）及び図２に示すように、隣接する培養凹部１２同士の間には、平面部１３が介在されている。本実施形態では、平面部１３は、底部１０の上面１０ａと同一平面上に配置されているが、必要に応じて上面１０ａより高くしたり、低くしたりしても構わない。
【００４１】
各培養凹部１２の開口１２ｂ周辺には、該開口１２ｂを取り囲むと共に、平面部１３より上方に突出する突出部１４が設けられている。突出部１４は、平面視で円環状に形成され、その内側（培養凹部１２の開口１２ｂに面する側）が培養凹部１２の側壁１２ｃと連結するように一体的に形成されている。一方、突出部１４の外側は、平面部１３と連結されている。これによって、隣接する培養凹部１２同士の間には、平面部１３と該平面部１３の両端にそれぞれ連結される２つの突出部１４とが介在されることになる。図１（ｂ）に示すように、突出部１４は断面が略半円形状に形成されている。
【００４２】
そして、培養凹部１２同士間の最短距離ｔ、すなわち、平面部１３の幅と該平面部１３の両端にそれぞれ連結される２つの突出部１４の幅との合計は、１５０μｍ以上であることが好ましい。培養凹部１２同士間の最短距離ｔが１５０μｍ以上であることは、以下のことを考慮し設定されたものである。すなわち、受精卵は、上述したように胚盤胞で直径が２５０μｍ程度まで、透明帯も含めて直径が５００μｍ程度まで成長することがある。そして、仮に受精卵が培養凹部１２から脱出した場合に、脱出した受精卵を受けて且つ安定した状態で保持できる幅が、受精卵の直径の半分以上が必要である。
【００４３】
そして、脱出した受精卵を保持できること及び高密度の個別管理の実現の両立を考慮した場合には、上記の最短距離ｔは１５０μｍ〜３００μｍであることがより好ましい。すなわち、該距離ｔが１５０μｍより小さくなると、脱出した受精卵を安定した状態で保持し難くなる。一方、該距離ｔが３００μｍより大きくなると、細胞培養容器１全体が大きくなるので、高密度の個別管理を実現し難くなる問題を招いてしまう。なお、培養凹部１２同士間の最短距離ｔは、顕微鏡を用いて測定することができる。例えば、測定顕微鏡を用いて隣接する培養凹部１２同士を観察しながら測定を行う。又は、ミクロメータを取り付けた通常の顕微鏡や、通常の顕微鏡の視野内にマイクロスケールの物差しを設置したものを利用して測定する。或いは、マイクロスコープを用いて培養凹部１２を観察しながら該マイクロスコープの計測機能を利用して測定する。
【００４４】
本実施形態の細胞培養容器１の材質は、特に制限されない。具体的には、金属、ガラス、及びシリコン等の無機材料、プラスチック、例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂で代表される有機材料を挙げることができる。また、この細胞培養容器１は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、プラスチック材料を用いて製造する場合には、射出成形により製造することができる。
【００４５】
このように構成された細胞培養容器１では、例えば図２に示すように、培養凹部１２毎に受精卵２０を１個ずつ収容し、細胞培養容器１の内部に培養液３０を充填して循環させながら受精卵２０を培養する。このとき、受精卵２０は自重によって培養凹部１２の底面１２ａに沈む。そして、振動や培養液３０の流れなどの原因で、受精卵２０が浮き上がった場合には、培養凹部１２の開口１２ｂ周辺に設けられた突出部１４が受精卵２０の動きを阻止し、受精卵２０が培養凹部１２から脱出することを抑制することができる。しかも、突出部１４は断面半円状に形成されているので、受精卵２０を傷つけずにその動きを易しく阻止することができる。
【００４６】
図２の矢印に示すように、仮に受精卵２０が突出部１４を飛び越えて培養凹部１２から脱出しても、隣接する培養凹部１２同士間の距離ｔが１５０μｍ〜３００μｍであるので、脱出した受精卵２０が隣接する培養凹部１２同士間の平面部１３に落ちてそこに留まる。更に、平面部１３に留まる受精卵２０は、該平面部１３の両側にそれぞれ設けられた突出部１４によりその動きが制限される。その結果、脱出した受精卵２０が隣接の培養凹部１２に混入することなく、従来のように混入による受精卵の混同を確実に防止することができる。
【００４７】
本実施形態の細胞培養容器１によれば、受精卵２０が培養凹部１２から脱出することを抑制することができると共に、仮に受精卵が脱出しても隣接の培養凹部１２への混入を確実に防止することができる。加えて、複数の培養凹部１２が形成されるので、大量の受精卵の個別管理を実現し、大量培養を行う際の観察を短時間で行うことが可能になる。更に、上述したように、観察作業の効率を向上する効果も奏する。
【００４８】
＜第２実施形態＞
図３は第２実施形態の細胞培養容器であり、内部に細胞及び培養液が収容される状態を示す部分拡大断面図である。本実施形態の細胞培養容器２と第１実施形態との相違点は、突出部１５が培養凹部１２の開口１２ｂから離れる場所に配置されることである。その他の構成は第１実施形態と同様であるため、重複説明を省略する。
【００４９】
具体的には、培養凹部１２の開口１２ｂ周辺には、該開口１２ｂを取り囲むと共に、平面部１３より上方に突出する突出部１５が設けられている。突出部１５は、第１実施形態の突出部１４と同様に平面視で円環状に形成され、その内側（培養凹部１２の開口１２ｂに面する側）が培養凹部１２の側壁１２ｃと一体的に形成されておらず、開口１２ｂから少し離れて配置されている。また、図示しないが、培養凹部１２の開口１２ｂの縁部及び底面１２ａの隅部の少なくとも一方は、曲面部を有することが好ましく、開口１２ｂの縁部及び底面１２ａの隅部はそれぞれ曲面部を有することがより好ましい。このようにすることで、受精卵２０がこれらの部位と接触する際に、受精卵２０が傷つくことを防止できる。更に、上述のように細胞非接着層がコーティングなどで形成された場合に、曲面部を有することで、処理漏れやムラの発生を防げる効果も奏する。
【００５０】
このように構成された細胞培養容器２は、上述の第１実施形態と同様な作用効果を得られる。
【００５１】
＜第３実施形態＞
図４は第３実施形態の細胞培養容器であり、内部に細胞及び培養液が収容される状態を示す部分拡大断面図である。本実施形態の細胞培養容器３と第１実施形態との相違点は、平面部１６が培養凹部１２の底面１２ａより下方に位置することである。その他の構成は第１実施形態と同様であるため、重複説明を省略する。
【００５２】
具体的には、隣接する培養凹部１２同士間に介在された平面部１６は、底部１０の上面１０ａと同一平面上に位置しておらず、培養凹部１２の底面１２ａより下方に位置するようにされている。
【００５３】
このように構成された細胞培養容器３は、上述の第１実施形態と同様な作用効果を得られるほか、平面部１６が培養凹部１２の底面１２ａより下方に位置するので、仮に受精卵２０が培養凹部１２から脱出した場合、脱出した受精卵が培養凹部１２より深い平面部１６に落下し、そこから外部に脱出し難くなる。これによって、隣接の培養凹部１２への混入をより確実に防止できる。
【００５４】
なお、本実施形態の細胞培養容器３において、平面部１６が培養凹部１２の底面１２ａより下方に位置するので、平面部１６は底面１２ａより更に窪む。従って、該平面部１６を有する窪む部分を培養凹部とし、底面１２ａを平面部として使用しても良い。この場合には、上述の第１実施形態と同様な作用効果を得られる。
【００５５】
<第４実施形態＞
図５（ａ）は第４実施形態の細胞培養容器を示す部分平面図であり、図５（ｂ）は図５（ａ）のＹ−Ｙ線に沿う部分断面図である。本実施形態の細胞培養容器４と第１実施形態との相違点は、平面部１３に溝部１７が更に設けられることである。その他の構成は第１実施形態と同様であるため、重複説明を省略する。
【００５６】
具体的には、平面部１３であって突出部１４に隣接する領域には、溝部１７が設けられている。平面視（図５（ａ）参照）において、溝部１７は、培養凹部１２の開口１２ｂの周縁に沿って円環状に形成されている。断面視（図５（ｂ）参照）では、溝部１７は下方から上方にむかって幅が拡がるように形成されている。溝部１７の開口幅、すなわち、最も幅広部分の幅は、培養凹部１２に収容される受精卵２０の直径の半分以上と設定されている。また、図示しないが、溝部１７の開口縁部が曲面部を有するように加工されている。
【００５７】
このように構成された細胞培養容器４は、上述の第１実施形態と同様な作用効果を得られるほか、更に以下の作用効果を得られる。すなわち、平面部１３における突出部１４に隣接する領域に溝部１７が設けられ、該溝部１７の幅が受精卵２０の直径の半分以上であるので、仮に受精卵２０が突出部１４を飛び越えて培養凹部１２から脱出しても、脱出した受精卵２０が溝部１７にはまり、その動きが制限される。これによって、隣接の培養凹部１２への混入を防止する効果を高められる。
【００５８】
なお、本実施形態において、溝部１７は連続して円環状に形成されているが、開口１２ｂの周縁に沿って一定の間隔で断続的に形成されても良い。また、溝部１７の断面形状は、上述した内容に限定されずに、幅が一定であるコ字状であっても良い。
【００５９】
以上、本発明の実施形態について詳述したが、本発明は、上記の実施形態に限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された本発明の精神を逸脱しない範囲で、種々の設計変更を行うことができるものである。例えば、本発明の細胞培養容器は、上述した細胞培養のほか、細胞の一時保管や、細胞培養に使う培地の一時保管等にも適用される。
【００６０】
また、上述の実施形態において、突出部１４，１５の断面形状として半円形の例を挙げて説明したが、三角形などの多角形であっても良い。更に、細胞培養容器としては、上述の有底円筒状のほか、有底楕円筒状や有底角筒状であっても良い。更に、本発明の細胞培養容器は、上記背景技術に挙げられた特許文献１に記載のように、区画される複数のウェルを細胞培養容器の底部に設け、各ウェルに上述した構造を有する培養凹部、平面部及び突出部などをそれぞれ形成してなるものであっても良い。
【００６１】
また、上述した実施形態において、底部及び周壁部を備えた細胞培養容器を挙げて説明したが、本発明は周壁部を備えずに板状の細胞培養容器にも適用される。また、培養凹部における細胞培養容器水平方向の断面形状が、円形に限られず、楕円形や三角形、四角形等の多角形であっても良い。
【符号の説明】
【００６２】
１，２，３，４    細胞培養容器
１０    底部
１０ａ    上面
１０ｂ    底面
１１    周壁部
１２    培養凹部
１２ａ    底面
１２ｂ    開口
１２ｃ    側壁
１３，１６    平面部
１４，１５    突出部
１７    溝部
２０    受精卵
３０    培養液
【図１】
2017216967.tif 000003
【図２】
2017216967.tif 000004
【図３】
2017216967.tif 000005
【図４】
2017216967.tif 000006
【図５】
2017216967.tif 000007