(57)【要約】【課題】  より安全に、毛乳頭細胞に対して、細胞死を誘導することが可能な薬剤を提供する。【解決手段】  本発明の毛乳頭細胞の細胞死誘導剤は、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも一つを含むことを特徴とする。【選択図】図１
2017100957.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも一つを含むことを特徴とする毛乳頭細胞の細胞死誘導剤。
【請求項２】
経皮用である、請求項１記載の細胞死誘導剤。
【請求項３】
さらに、経皮用の添加剤を含む、請求項１または２記載の細胞死誘導剤。
【請求項４】
前記添加剤が、非経口用の添加剤である、請求項３記載の細胞死誘導剤。
【請求項５】
請求項１から４のいずれか一項に記載の細胞死誘導剤を含むことを特徴とする脱毛剤。
【請求項６】
毛乳頭細胞に、請求項１から５のいずれか一項に記載の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことを特徴とする毛乳頭細胞の細胞死誘導方法。
【請求項７】
毛乳頭細胞に、請求項１から５のいずれか一項に記載の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことを特徴とする脱毛方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、永久脱毛剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本において、ムダ毛等の脱毛の市場規模は約１５００億円に上る。中でも、日本人女性の７３％がムダ毛に悩み、その年齢層は１０代〜５０代と幅広く、近年では、さらに、男性脱毛のニーズも急増している。
【０００３】
脱毛処理の一般的な手法としては、電気針脱毛、光脱毛および医療レーザー脱毛がある。しかし、毛乳頭を破壊することで永久脱毛できるのは、電気針脱毛のみであり、例えば、医療レーザー脱毛等は、毛周期に合わせて約１〜２ヶ月ごとの施術が必要である。
【０００４】
この他に、化学的手法として、脱毛剤を用いた脱毛処理も知られている。前記脱毛剤としては、チオグリコール酸カルシウム等が知られており、毛を溶かすことで脱毛が行われる（非特許文献１）。しかし、前記脱毛剤処理では、毛母細胞および毛乳頭細胞は生存しているため、毛が再生してくるという問題や、皮膚への刺激やアレルギー反応等を惹起するという問題もある。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Burnett CL, Bergfeld WF, Belsito DV, Klaassen CD, Marks JG Jr, Shank RC, Slaga TJ, Snyder PW. “Final amended report on the safety assessment of Ammonium Thioglycolate, Butyl Thioglycolate, Calcium Thioglycolate, Ethanolamine Thioglycolate, Ethyl Thioglycolate, Glyceryl Thioglycolate, Isooctyl Thioglycolate, Isopropyl Thioglycolate, Magnesium Thioglycolate, Methyl Thioglycolate, Potassium Thioglycolate, Sodium Thioglycolate, and Thioglycolic Acid.” Int J Toxicol. 2009, 28:68-133.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、より安全に、毛乳頭細胞に対して、細胞死を誘導することが可能な薬剤の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
前記目的を達成するために、本発明の毛乳頭細胞の細胞死誘導剤は、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも一つを含むことを特徴とする。
【０００８】
本発明の脱毛剤は、前記本発明の細胞死誘導剤を含むことを特徴とする。
【０００９】
本発明の毛乳頭細胞の細胞死誘導方法は、毛乳頭細胞に、前記本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことを特徴とする。
【００１０】
本発明の脱毛方法は、毛乳頭細胞に、前記本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことを特徴とする。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、より安全に、毛乳頭細胞に対して、細胞死を誘導することが可能な薬剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】図１は、実施例１において、各薬剤を添加したＦＤＰＣ細胞の細胞数の相対値を示すグラフである。
【図２】図２は、実施例１において、各薬剤を添加したＨａＣａＴ細胞の細胞数の相対値を示すグラフである。
【図３】図３は、実施例２において、各薬剤を添加したＦＤＰＣ細胞の細胞数の相対値と用量との関係を示すグラフである。
【図４】図４は、実施例２において、各薬剤を添加したＨａＣａＴ細胞の細胞数の相対値と用量との関係を示すグラフである。
【図５】図５は、実施例３において、各薬剤を添加したＦＤＰＣ細胞の細胞数およびＣａｓｐａｓｅ−３／７活性を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の細胞死誘導剤は、例えば、経皮用である。
【００１４】
本発明の細胞死誘導剤は、例えば、さらに、経皮用の添加剤を含む。
【００１５】
本発明の細胞死誘導剤は、例えば、前記添加剤が、非経口用の添加剤である。
【００１６】
本明細書で使用する用語は、特に言及しない限り、当該技術分野で通常用いられる意味で用いることができる。
【００１７】
以下に、本発明について、詳細に説明する。
【００１８】
（毛乳頭細胞の細胞死誘導剤）
本発明の毛乳頭細胞の細胞死誘導剤は、前述のように、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体（以下、「本発明における薬剤」という）からなる群から選択された少なくとも一つを含むことを特徴とする。
【００１９】
本発明の細胞死誘導剤は、前述した各種薬剤のうち少なくとも一つを含むことが特徴であり、その他の構成及び条件は、特に制限されない。
【００２０】
本発明の細胞死誘導剤において、前記各種薬剤は、いずれも抗アレルギー剤または抗ヒスタミン剤として知られている。これに対して、本発明者らは、メカニズムは不明であるが、これらの薬剤が、毛乳頭細胞の細胞死を誘導するとの新たな知見を得て、本発明を見出すに至った。前記薬剤は、抗アレルギー剤または抗ヒスタミン剤として承認されており、その安全性は確認されている。このため、本発明によれば、優れた安全性で、毛乳頭細胞の細胞死を誘導することができる。
【００２１】
本発明の細胞死誘導剤によれば、毛乳頭細胞の細胞死を誘導できることから、例えば、脱毛剤として使用できる。
【００２２】
本発明の細胞死誘導剤を使用した場合、毛乳頭細胞の細胞死の様式は、特に制限されず、例えば、アポトーシスによるものがあげられる。このため、本発明の細胞死誘導剤は、例えば、アポトーシス誘導剤ということもできる。なお、以下、毛乳頭細胞の細胞死誘導剤は、アポトーシス誘導剤と読み替え可能であり、細胞死誘導の効果は、アポトーシス誘導の効果と読み替え可能である。
【００２３】
本発明における薬剤は、前述のように、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体である。前記誘導体は、特に制限されず、列挙した薬剤の誘導体であればよく、各薬剤の塩、水和物、溶媒和物、異性体等があげられる。前記異性体は、例えば、立体異性体および互変異生体等があげられる。
【００２４】
本発明の細胞死誘導剤は、有効成分として前記薬剤を、例えば、一種類のみ含んでもよいし、二種類以上を併用して含んでもよく、その数は、特に制限されない。
【００２５】
本発明の細胞死誘導剤は、好ましくは、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体である。本発明の細胞死誘導剤は、好ましくは、メキタジン、フマル酸クレマスチン、エバスチン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、塩酸ホモクロルシクリジン、アゼラスチン塩酸塩、塩酸プロメタジン、塩酸シプロヘプタジン、プランルカスト、またはオキサトミド、およびこれらの誘導体である。
【００２６】
本発明の細胞死誘導剤は、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏで使用してもよいし、ｉｎ ｖｉｔｒｏで使用してもよい。本発明の細胞死誘導剤は、例えば、研究用試薬として使用することもでき、医薬品または医薬部外品として使用することもできる。
【００２７】
本発明の細胞死誘導剤の投与対象は、特に制限されず、例えば、毛乳頭細胞である。前記毛乳頭細胞は、例えば、前記毛乳頭細胞を含む動物でもよい。前記動物は、特に制限されず、例えば、ヒト、または、ヒトを除く非ヒト動物があげられる。前記非ヒト動物としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ウマ、ネコ、ヤギ、サル、モルモット、ウシ等の非ヒト哺乳類等があげられる。
【００２８】
本発明の細胞死誘導剤の投与形態は、特に制限されない。前記投与形態は、例えば、経口投与でもよいし、経皮投与でもよい。前記投与形態は、例えば、経皮投与が好ましい。
【００２９】
本発明の細胞死誘導剤の剤型は、特に制限されず、例えば、前記投与形態に応じて適宜決定できる。前記剤型は、例えば、貼付剤、塗布剤、軟膏、クリーム、ローション、ゲル等の外用剤があげられる。
【００３０】
本発明の細胞死誘導剤は、例えば、必要に応じて、添加剤を含んでもよく、本発明の細胞死誘導剤を医薬または医薬部外品として使用する場合、前記添加剤は、薬学上許容される添加剤が好ましい。前記添加剤は、例えば、賦形剤、安定剤、界面活性剤、保存剤、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、増粘剤、キレート剤、着色剤、着香剤、保湿成分、ビタミン類、アミノ酸類等があげられる。前記添加剤は、例えば、経皮用の添加剤、非経口用且つ経皮用の添加剤があげられる。経皮用の添加剤は、例えば、経皮吸収促進剤等である。本発明において、前記添加剤の配合量は、前記細胞死誘導剤の機能を妨げるものでなければ、特に制限されない。
【００３１】
前記経皮用の添加剤としては、例えば、グリセリン、ステアリン酸、水酸化カリウム、白色ワセリン、ラノリンアルコール、セトステアリルアルコール、乳化セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、チモール、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、イソプロパノール、セタノール、ミリスチン酸イソプロピル、ステアリン酸マクロゴール、パラオキシ安息香酸ブチル、プロピレングリコール、Ｄ−ソルビトール、セトマクロゴール、ステアリン酸グリセリン、中鎖脂肪酸トリグリセリド、ワセリン、エデト酸ナトリウム、ジイソプロパノールアミン、ｐＨ調整剤、プロピルアルコール、メントール等があげられる。
【００３２】
前記非経口用且つ経皮用の添加剤としては、例えば、水酸化カリウム、白色ワセリン、セトステアリルアルコール、乳化セトステアリルアルコール、イソプロパノール、ステアリン酸マクロゴール、セトマクロゴール、ワセリン、エデト酸ナトリウム、ジイソプロパノールアミン等があげられる。
【００３３】
前記賦形剤としては、例えば、グリセリン、ポリエチレングリコール等の多価アルコールまたはその誘導体等があげられる。前記安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；フェノール、クレゾール等のフェノール類；チメロサール；デヒドロ酢酸；ソルビン酸等があげられる。前記界面活性剤としては、例えば、モノステアリン酸グリセリン、モノステアリン酸ソルビタン等のＷ／Ｏ型乳化剤；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油６０、ポリソルベート６０等のＯ／Ｗ型乳化剤があげられる。前記保存剤としては、例えば、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル、フェノキシエタノール、チモール等があげられる。前記抗酸化剤は、例えば、亜硫酸水素ナトリウム、アスコルビン酸、トコフェロール、ジブチルヒドロキシトルエン、エデト酸ナトリウム水和物、ベンゾトリアゾール等があげられる。前記ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸水和物、クエン酸ナトリウム水和物、乳酸、ジイソプロパノールアミン、酢酸、酢酸ナトリウム水和物等があげられる。
【００３４】
本発明の細胞死誘導剤の投与条件は、特に制限されず、例えば、投与対象の種類、性別、年齢、投与対象の部位等に応じて、投与時期、投与期間、投与量等を適宜設定できる。
【００３５】
具体例として、本発明の細胞死誘導剤をヒトの皮膚に経皮投与する場合、１日あたりの投与量合計は、例えば、１０〜５０００ｍｇ／ｃｍ２、１００〜３０００ｍｇ／ｃｍ２である。投与期間は、例えば、１〜３０日、３〜２１日であり、１日あたりの投与回数は、例えば、１〜５回、２〜３回であり、投与間隔は、例えば、毎日、２〜７日ごと、３〜４日ごとである。
【００３６】
本発明の細胞死誘導剤における前記薬剤の含有量は、特に制限されず、例えば、前記細胞死誘導剤の全組成を１００質量％として、０．００１〜１０質量％、０．０５〜５質量％である。前記含有量は、例えば、前記薬剤１種類の含有量でもよいし、前記薬剤を２種類以上併用する場合は、前記複数の薬剤の合計の含有量でもよい。
【００３７】
本発明の細胞死誘導剤の投与対象部位は、特に制限されない。本発明の細胞死誘導剤は、前述のように、例えば、脱毛処理に使用できることから、前記投与対象部位は、例えば、体毛が生えている箇所があげられる。具体例としては、例えば、腋、脛、胸、肩、下腹部、腕、手、脚、爪先、ビキニライン、顔、顎、上唇、眉等があげられる。
【００３８】
（脱毛剤）
本発明の脱毛剤は、前述のように、本発明の細胞死誘導剤を含むことを特徴とする。本発明の脱毛剤は、前記本発明の細胞死誘導剤を含むことが特徴であって、その他の構成および条件は、特に制限されない。本発明の脱毛剤は、前記本発明の細胞死誘導剤等の記載を援用できる。本発明の脱毛剤によれば、安全に脱毛処理を行うことができ、例えば、永久脱毛も可能である。
【００３９】
（毛乳頭細胞の細胞死誘導方法）
本発明の毛乳頭細胞の細胞死誘導方法は、毛乳頭細胞に、前記本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことを特徴とする。本発明は、前記本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことが特徴であって、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤は、前述の通りである。本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤の投与条件等は、特に制限されず、例えば、本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤における記載と同様である。
【００４０】
（脱毛方法）
本発明の脱毛方法は、毛乳頭細胞に、前記本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことを特徴とする。本発明は、前記本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤を投与する工程を含むことが特徴であって、その他の工程および条件は、特に制限されない。本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤は、前述の通りである。本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤の投与条件等は、特に制限されず、例えば、本発明の細胞死誘導剤または脱毛剤における記載と同様である。
【００４１】
（薬剤の使用）
本発明は、毛乳頭細胞の細胞死誘導に使用するための、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも一つ（以下、「薬剤」ともいう。）の使用であり、また、脱毛に使用するための前記薬剤の使用である。本発明は、細胞死誘導剤の製造のための前記薬剤の使用であり、また、脱毛剤の製造のための前記薬剤の使用である。本発明は、例えば、前記本発明の細胞死誘導剤、脱毛剤、細胞死誘導方法および脱毛方法の説明を援用できる。
【実施例】
【００４２】
つぎに、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、下記実施例により制限されない。市販の試薬は、特に示さない限り、それらのプロトコルに基づいて使用した。
【００４３】
［実施例１］
本発明の薬剤が、毛乳頭細胞に対して、細胞死誘導効果を奏することを確認した。
【００４４】
薬剤として、抗ヒスタミン薬または抗アレルギー薬として知られる、塩酸ジフェンヒドラミン（Ｄｉｐｈｅｎｈｙｄｒａｍｉｎｅ）（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、ジフェニルピラリン塩酸塩（Ｄｉｐｈｅｎｙｌｐｙｒａｌｉｎｅ）（和光純薬社製）、フマル酸クレマスチン（Ｃｌｅｍａｓｔｉｎｅ）（和光純薬社製）、マレイン酸クロルフェニラミン（Ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｉｒａｍｉｎｅ）（和光純薬社製）、塩酸トリプロリジン（Ｔｒｉｐｒｏｌｉｄｉｎｅ）（Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社製）、塩酸プロメタジン（Ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）（東京化成工業社製）、酒石酸アリメマジン（Ａｌｉｍｅｍａｚｉｎｅ）（Ｔｒｏｎｔｏ  Ｒｓｅａｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ社製）、塩酸ヒドロキシジン（Ｈｙｄｒｏｘｙｚｉｎｅ）（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、塩酸ホモクロルシクリジン（Ｈｏｍｏｃｈｌｏｒｃｙｃｌｉｚｉｎｅ）（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）、塩酸シプロヘプタジン（Ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）（ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ社製）、メキタジン（Ｍｅｑｕｉｔａｚｉｎｅ）（和光純薬社製）、ケトチフェンフマル酸塩（Ｋｅｔｏｔｉｆｅｎ）（ＬＫＴ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、アゼラスチン塩酸塩（Ａｚｅｌａｓｔｉｎｅ）（ＡｄｏｏＱ（登録商標）ＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ社製）、エメダスチンフマル塩酸塩（Ｅｍｅｄａｓｔｉｎｅ）（東京化成工業社製）、エピナスチン塩酸塩（Ｅｐｉｎａｓｔｉｎｅ）（東京化成工業社製）、エバスチン（Ｅｂａｓｔｉｎｅ）（Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社製)、セチリジン塩酸塩（Ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）（東京化成工業社製）、ベポタスチンベジル酸塩（Ｂｅｐｏｔａｓｔｉｎｅ）（和光純薬社製）、フェキソフェナジン塩酸塩（Ｆｅｘｏｆｅｎａｄｉｎｅ）（東京化成工業社製）、ロラタジン（Ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）（東京化成工業社製）、レボセチリジン塩酸塩（Ｌｅｖｏｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）（東京化成工業社製）、ルパタジンフマル酸塩（Ｒｕｐａｔａｄｉｎｅ）（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）、トラニラスト（Ｔｒａｎｉｌａｓｔ）（東京化成工業社製）、プランルカスト（Ｐｒａｎｌｕｋａｓｔ）（東京化成工業社製）、およびオキサトミド（Ｏｘａｔｏｍｉｄｅ）（和光純薬社製）を使用した。前記薬剤をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、サンプルを調製した。
【００４５】
そして、ＦＤＰＣ細胞（ヒト毛乳頭細胞、Ｐｒｏｍｏ  Ｃｅｌｌ社）を、２４ウェルマイクロプレートに、５×１０４細胞／ｍＬ／ウェルとなるように播種し、２４時間培養した。これらの培養液に、前記各サンプルを、前記薬剤の終濃度が、それぞれ５０μｍｏｌ／Ｌとなるように添加し、さらに、３７℃、５％ＣＯ２下で、２４時間培養した。薬剤のコントロール（Ｖｅｈｉｃｌｅ）としては、前記サンプルに代えて、薬剤未添加のＤＭＳＯを前記培養液に添加した以外は、同様に培養を行った。
【００４６】
ＦＤＰＣ細胞の培養は、４％となるようにＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  Ｍｉｘ（Ｐｒｏｍｏ  Ｃｅｌｌ社、ＦＤＰＣ細胞のキットに付属）を添加した、Follicle  Dermal  Papilla  Cell  Growth  Medium（コスモバイオ社製）を使用した。
【００４７】
そして、前記培養後のＦＤＰＣ細胞に対し、ＡＴＰ量を測定することにより、細胞数を計測した。ＡＴＰの検出試薬として、ＡＴＰ  Ｌｉｔｅ（商標）（Perkin  Elmer  Life  and  Analytical  Sciences（Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）社製）を使用し、測定装置として、FilterMax  F5  Multi-Mode  Microplate  Reader（モレキュラーデバイスジャパン株式会社）を使用した。そして、コントロールにおける細胞数を基準値１００とし、各サンプルにおける細胞数の相対値を算出した。
【００４８】
これらの結果を、図１に示す。図１は、前記各薬剤を添加してから２４時間後におけるＦＤＰＣ細胞の細胞数の相対値を示したグラフである。図１において、縦軸は、細胞数の相対値を示し、横軸は、薬剤を示す。図１に示すように、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、またはオキサトミドの添加により、約８０％以下まで、ＦＤＰＣ細胞の細胞数が減少していた。中でも、メキタジン、フマル酸クレマスチン、エバスチン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、塩酸ホモクロルシクリジン、アゼラスチン塩酸塩、塩酸プロメタジン、塩酸シプロヘプタジン、プランルカスト、またはオキサトミドの添加により、約６０％〜５％程度までＦＤＰＣ細胞の細胞数が減少しており、強い細胞死誘導効果がみられた。
【００４９】
さらに、本発明の薬剤が、皮膚に与える影響を調べるため、表皮の大部分を構成するケラチノサイトへの影響を確認した。ＨａＣａＴ細胞（ヒトケラチノサイト、Cell  Lines  Service社）を用い、播種後の培養時間２４時間を７２時間にした。薬剤として、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、またはオキサトミドを使用した。これらの条件以外は、ＦＤＰＣ細胞と同じ条件で細胞死誘導効果を確認した。なお、ＨａＣａＴ細胞における播種後の培養時間の変更は、ＨａＣａＴ細胞はＦＤＰＣ細胞よりも細胞接着に時間がかかるため、薬剤添加前の細胞の状態を揃える目的で行った。
【００５０】
ＨａＣａＴ細胞の培養は、１０％となるようにウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ社製）および２０ｍｇ／Ｌとなるようにカナマイシン（Ｇｉｂｃｏ社製）を添加した、ＲＰＭＩ−１６４０培地（和光純薬社製）を使用した。
【００５１】
ケラチノサイトは、常に細胞増殖を繰り返して再生している。このため、ケラチノサイトであるＨａＣａＴ細胞に関しては、薬剤で処理した後の細胞数の相対値が、例えば、約２０％以上であれば、薬剤によるＨａＣａＴ細胞への影響はほとんどないと考えることができる。
【００５２】
これらの結果を、図２に示す。図２は、前記各薬剤を添加してから２４時間後におけるＨａＣａＴ細胞の細胞数の相対値を示したグラフである。図２において、縦軸は、細胞数の相対値を示し、横軸は、薬剤を示す。図２に示すように、いずれの薬剤も、細胞数の相対値は２０％以上であり、ＨａＣａＴ細胞への大きな影響はないといえる。特に、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、およびプランルカストは、細胞数の相対値が８０％以上であることから、ＨａＣａＴ細胞への影響を十分に回避できたといえる。
【００５３】
図１および図２の結果から、薬剤の中でも、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、プランルカスト、およびオキサトミドは、皮膚に影響を与えることなく、毛乳頭細胞に対して特異的に細胞死誘導効果を奏することがわかった。
【００５４】
［実施例２］
本発明の薬剤について、投与量依存的に、毛乳頭細胞に対して、特異的に細胞死誘導効果を奏することを確認した。
【００５５】
まず、実施例１において強い細胞死誘導作用が確認された、アゼラスチン塩酸塩（Ａｚｅｌａｓｔｉｎｅ）、フマル酸クレマスチン（Ｃｌｅｍａｓｔｉｎｅ）、塩酸シプロヘプタジン（Ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）、エバスチン（Ｅｂａｓｔｉｎｅ）、塩酸ホモクロルシクリジン（Ｈｏｍｏｃｈｌｏｒｃｙｃｌｉｚｉｎｅ）、メキタジン（Ｍｅｑｕｉｔａｚｉｎｅ）、オキサトミド（Ｏｘａｔｏｍｉｄｅ）、プランルカスト（Ｐｒａｎｌｕｋａｓｔ）、塩酸プロメタジン（Ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）、ルパタジンフマル酸塩（Ｒｕｐａｔａｄｉｎｅ）、またはトラニラスト（Ｔｒａｎｉｌａｓｔ）の前記サンプルを調製した。
【００５６】
そして、ＦＤＰＣ細胞またはＨａＣａＴ細胞を、２４ウェルマイクロプレートに、それぞれ、１．６×１０４細胞／ｍＬ／ウェルとなるように播種し、実施例１と同じ条件で培養した。これらの培養液に、前記サンプルを、前記薬剤の終濃度が、それぞれ所定濃度（６．２５、１２．５、２５、５０または１００μｍｏｌ／Ｌ）となるように添加し、実施例１と同じ条件で培養した。そして、前記培養後の各細胞の細胞数の相対値を、実施例１と同様にして算出した。
【００５７】
これらの結果を、図３および図４に示す。図３は、前記各薬剤を添加したＦＤＰＣ細胞の細胞数の相対値を示すグラフであり、図４は、前記各薬剤を添加したＨａＣａＴ細胞の細胞数の相対値を示すグラフである。図３および図４において、（Ａ）は、アゼラスチン塩酸塩を添加した結果を、（Ｂ）は、フマル酸クレマスチンを添加した結果を、（Ｃ）は、塩酸シプロヘプタジンを添加した結果を、（Ｄ）は、エバスチンを添加した結果を、（Ｅ）は、塩酸ホモクロルシクリジンを添加した結果を、（Ｆ）は、メキタジンを添加した結果を、（Ｇ）は、オキサトミドを添加した結果を、（Ｈ）は、プランルカストを添加した結果を、（Ｉ）は、塩酸プロメタジンを添加した結果を、（Ｊ）は、ルパタジンフマル酸塩を添加した結果を、（Ｋ）は、トラニラストを添加した結果を示す。図３および図４の各グラフにおいて、縦軸は、細胞数の相対値を示し、横軸は、薬剤の濃度を示す。
【００５８】
図３の各グラフに示すように、投与した薬剤はいずれも、ＦＤＰＣ細胞に対し、投与量依存的に細胞死誘導効果を示した。また、これらの薬剤の中でも、フマル酸クレマスチン、エバスチン、メキタジン、オキサトミド、ルパタジンフマル酸塩、およびトラニラストは、低用量でも効果的に細胞死誘導効果を奏することがわかった。
【００５９】
また、図４の各グラフに示すように、投与した薬剤は、投与量を増加させても、ＨａＣａＴ細胞にほとんど影響を示さなかった。これらの結果から、これらの薬剤が、投与量を増加させても、皮膚に影響を与えることなく、毛乳頭細胞に対して特異的に細胞死誘導効果を奏することがわかった。
【００６０】
［実施例３］
本発明の薬剤が、毛乳頭細胞に対して、アポトーシスによる細胞死を誘導することを確認した。
【００６１】
まず、前記実施例１と同様にして、アゼラスチン塩酸塩（Ａｚｅｌａｓｔｉｎｅ）、フマル酸クレマスチン（Ｃｌｅｍａｓｔｉｎｅ）、塩酸シプロヘプタジン（Ｃｙｐｒｏｈｅｐｔａｄｉｎｅ）、エバスチン（Ｅｂａｓｔｉｎｅ）、塩酸ホモクロルシクリジン（Ｈｏｍｏｃｈｌｏｒｃｙｃｌｉｚｉｎｅ）、メキタジン（Ｍｅｑｕｉｔａｚｉｎｅ）、オキサトミド（Ｍｅｑｕｉｔａｚｉｎｅ）、または塩酸プロメタジン（Ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ）について、前記サンプルを調製した。
【００６２】
そして、ＦＤＰＣ細胞を、２４ウェルマイクロプレートに、２．２×１０４細胞／ｍＬ／ウェルとなるように播種し、２４時間培養した。これらの培養液に、前記各サンプルを、前記薬剤の終濃度が、それぞれ２５μｍｏｌ／Ｌとなるように添加し、実施例１と同じ条件で培養した。薬剤のコントロール（Ｖｅｈｉｃｌｅ）についても、実施例１と同様に培養を行った。そして、前記培養後のＦＤＰＣ細胞の細胞数の相対値を、実施例１と同様にして算出した。
【００６３】
さらに、前記培養後のＦＤＰＣ細胞に対し、アポトーシスの指標となるＣａｓｐａｓｅ−３／７活性を測定することにより、アポトーシスが誘導されている細胞数を計測した。Ｃａｓｐａｓｅ−３／７の検出試薬として、Ｃａｓｐａｓｅ−ｇｌｏ  ３／７  ａｃｔｉｖｉｔｙ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を使用し、測定装置として、FilterMax  F5  Multi-Mode  Microplate  Reader（モレキュラーデバイスジャパン株式会社）を使用した。そして、コントロールにおける細胞数を基準値１００とし、各サンプルの細胞数の相対値を算出した。
【００６４】
これらの結果を、図５に示す。図５は、前記各薬剤を添加したＦＤＰＣ細胞の細胞数およびＣａｓｐａｓｅ−３／７活性を、相対値で示したグラフである。図５において、（Ａ）は、細胞数の相対値を示し、（Ｂ）は、Ｃａｓｐａｓｅ−３／７活性を示す。図５（Ａ）および（Ｂ）において、縦軸は、細胞数の相対値を示し、横軸は、薬剤を示す。図５（Ａ）および（Ｂ）に示すように、いずれの薬剤も、細胞数が減少し、それに対応して、Ｃａｓｐａｓｅ−３／７活性が増加していた。特に、エバスチン、メキタジン、アゼラスチン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、塩酸シプロヘプタジン、オキサトミドは、コントロールと比べて、Ｃａｓｐａｓｅ−３／７活性が、５〜１０倍以上増加していた。すなわち、これらの薬剤を添加することにより、毛乳頭細胞において、アポトーシスによる細胞死が誘導されることが示された。
【００６５】
以上、実施形態および実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態および実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をすることができる。
【産業上の利用可能性】
【００６６】
以上のように、本発明によれば、塩酸ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン塩酸塩、フマル酸クレマスチン、マレイン酸クロルフェニラミン、塩酸トリプロリジン、塩酸プロメタジン、酒石酸アリメマジン、塩酸ヒドロキシジン、塩酸ホモクロルシクリジン、塩酸シプロヘプタジン、メキタジン、ケトチフェンフマル酸塩、アゼラスチン塩酸塩、エバスチン、ロラタジン、ルパタジンフマル酸塩、トラニラスト、プランルカスト、オキサトミド、およびこれらの誘導体からなる群から選択された少なくとも一つを含むことにより、毛乳頭細胞の細胞死を誘導できる。そして、前記薬剤は、このように細胞の細胞死を誘導できることから、例えば、脱毛剤として使用できる。このため、本発明は、医薬の分野等において、極めて有用といえる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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