(57)【要約】【課題】新規な抗原虫薬の提供。【解決手段】β−ディフェンシン１３０（β−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ１３０）及び／又はその部分ペプチドを有効成分として含有する抗原虫薬を提供する。β−ディフェンシン１３０（β−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ１３０）及び／又はその部分ペプチドは、（１）配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド、（２）配列番号１記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド、（３）配列番号１記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチドのいずれか１以上とできる。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−ディフェンシン１３０（β−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ１３０）及び／又はその部分ペプチドを有効成分として含有する抗原虫薬。
【請求項２】
以下の（１）〜（３）のポリペプチド及び／又はその部分ペプチドのいずれか１以上を含有する請求項１記載の抗原虫薬。
（１）配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（２）配列番号１記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（３）配列番号１記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
【請求項３】
以下の（４）〜（６）のポリペプチドのいずれか１以上を含有する請求項２記載の抗原虫薬。
（４）配列番号２記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（５）配列番号２記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（６）配列番号２記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
【請求項４】
以下の（７）〜（９）のポリペプチドのいずれか１以上を含有する請求項２記載の抗原虫薬。
（７）配列番号４記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（８）配列番号４記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（９）配列番号４記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
【請求項５】
抗マラリア薬である請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗原虫薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗原虫薬に関する。より詳しくは、β−ディフェンシン１３０（β−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ１３０）及び／又はその部分ペプチドを有効成分として含有する抗原虫薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
マラリアは、マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）に感染したハマダラカの吸血によって媒介される原虫感染症である。マラリアは、結核、後天性免疫不全症候群（ＨＩＶ）とともに、世界三大感染症の一つとなっている。全世界におけるマラリア感染者は年間約２億人、死亡者は約６０〜７０万人とされている。
【０００３】
マラリアにはワクチンが存在せず、マラリア罹患者の治療には抗マラリア薬が用いられる。クロロキン、スルファドキシン、ピリメタミン及びメフロキン等の様々な抗マラリア薬が開発されてきたが、これらの抗マラリア薬はいずれも耐性株の蔓延が問題となっている。多剤耐性マラリアの治療のために有効なキニーネに関しても、低感受性株の出現が東南アジアやブラジルで報告されており、いまだマラリアの撲滅には至っていない。
【０００４】
マラリア原虫感染赤血球は、血中の単球から分化したマクロファージにより貪食され、排除される（非特許文献１）。マクロファージに貪食された病原体は、ファゴソーム内で活性酸素やプロテアーゼ、陽イオン性ペプチド等によって破壊される（非特許文献２）。
【０００５】
マクロファージが有するプロテアーゼ及び陽イオン性ペプチドは、様々な病原体を殺す働きがあり、これらに由来するペプチドを利用した創薬が試みられている。例えば、非特許文献３には、マクロファージが有するプロテアーゼであるエラスターゼ（ＭＭＰ１２）が強力な殺菌作用を有し、これに由来するペプチドが、宿主に対する副作用なしに殺菌作用を示すことが報告されている。しかしながら、これまでに、マクロファージ内において抗原虫作用を担う生体防御因子は特定されておらず、当該生体防御因子に由来するペプチドを利用した抗原虫薬の開発もなされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｂｌｏｏｄ，２０００，９６（９），３２３１−３２４０
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，７，３５５−３６６
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ，２００９，４６０，６３７−６４１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述の通り、従来の抗マラリア薬では耐性株の蔓延あるいは低感受性株の出現が問題となっている。このため、従来の抗マラリア薬とは異なる機序によって作用する抗原虫薬の開発が求められている。
【０００８】
そこで、本発明は、新規な抗原虫薬を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記課題解決のため、本発明は、以下の［１］〜［１０］を提供する。
［１］  β−ディフェンシン１３０（β−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ１３０）及び／又はその部分ペプチドを有効成分として含有する抗原虫薬。
［２］  以下の（１）〜（３）のポリペプチド及び／又はその部分ペプチドのいずれか１以上を含有する［１］の抗原虫薬。
（１）配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（２）配列番号１記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（３）配列番号１記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
［３］  以下の（４）〜（６）のポリペプチドのいずれか１以上を含有する［２］の抗原虫薬。
（４）配列番号２記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（５）配列番号２記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（６）配列番号２記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
［４］  以下の（７）〜（９）のポリペプチドのいずれか１以上を含有する［２］の抗原虫薬。
（７）配列番号４記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（８）配列番号４記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（９）配列番号４記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
［５］  抗マラリア薬である［１］〜［４］のいずれかの抗原虫薬。
【００１０】
［６］  β−ディフェンシン１３０（β−Ｄｅｆｅｎｓｉｎ１３０）及び／又はその部分ペプチドを有効成分として含有する原虫増殖阻害剤。
［７］  以下の（１）〜（３）のポリペプチド及び／又はその部分ペプチドのいずれか１以上を含有する［１］の原虫増殖阻害剤。
（１）配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（２）配列番号１記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（３）配列番号１記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
［８］  以下の（４）〜（６）のポリペプチドのいずれか１以上を含有する［２］の原虫増殖阻害剤。
（４）配列番号２記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（５）配列番号２記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（６）配列番号２記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
［９］  以下の（７）〜（９）のポリペプチドのいずれか１以上を含有する［２］の原虫増殖阻害剤。
（７）配列番号４記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（８）配列番号４記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（９）配列番号４記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
［１０］  マラリア原虫の増殖を阻害する［６］〜［９］のいずれかの原虫増殖阻害剤。
【００１１】
本発明において、「原虫の増殖を阻害する活性（原虫増殖阻害活性）」とは、ある物質について、in vitro又はin vivoにおける赤血球への原虫の感染が、当該物質の存在下で、当該物質の非存在下に比して抑制されることを意味する。具体的には、in vitro又はin vivoにおいて一定期間原虫に曝露された赤血球における原虫の寄生率が、当該物質の存在下で、非存在下に比して５％以上、１０％以上又は２０％以上、好ましくは３０％以上、４０％以上、５０％以上、より好ましくは６０％以上、７０％以上又は８０％以上、さらに好ましくは９０％以上、１００％以上又はそれ以上減少することを意味する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、新規な抗原虫薬が提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】マラリア原虫感染赤血球を貪食したマクロファージにおけるβ−ディフェンシン１３０発現量を測定した結果を示すグラフである（試験例１）。
【図２】in vivoにおいてβ−ディフェンシン１３０ペプチドの原虫増殖阻害活性を評価した結果を示すグラフである（試験例２）。図中、感染7日目及び8日目の結果は、左からDEFB130ペプチド投与群、スクランブルペプチド投与群及びPBS投与群を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明を実施するための好適な形態について説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明の代表的な実施形態の一例を示したものであり、これにより本発明の範囲が狭く解釈されることはない。
【００１５】
［ＤＥＦＢ１３０］
本発明に係る抗原虫薬は、β−ディフェンシン１３０（ＤＥＦＢ１３０）タンパク及び／又はその部分ペプチド（ＤＥＦＢ１３０ペプチド）を有効成分として含有することを特徴とする。本発明者らは、ＤＥＦＢ１３０タンパクについて、その部分ペプチドがin vitro及びin vivoにおいて顕著な原虫増殖阻害活性を示すことを見出し、ＤＥＦＢ１３０タンパク及び／又はＤＥＦＢ１３０ペプチドが原虫増殖阻害剤あるいは抗原虫薬として有用であることを明らかにした。
【００１６】
本発明に係る抗原虫薬において、ＤＥＦＢ１３０タンパク及び／又はＤＥＦＢ１３０ペプチドは、原虫増殖阻害活性を有する限りにおいて由来種は限定されず、ヒトの他、ラット、マウス、ハムスター、モルモット等のげっ歯類、ウサギ等のウサギ目、ブタ、ウシ、ヤギ、ヒツジ等の有蹄目、イヌ、ネコ等のネコ目、サル、アカゲザル、マーモセット、オランウータン、チンパンジーなどの霊長類であってよい。
【００１７】
ＤＥＦＢ１３０タンパク及び／又はＤＥＦＢ１３０ペプチドの由来種は、抗原虫薬を適用する種に応じて適宜選択することができ、好ましくは適用種と同じ種由来とされる。例えば、抗原虫薬をヒトに適用する場合は、ヒト由来のＤＥＦＢ１３０タンパク等を用いるのが好ましい。
【００１８】
ＤＥＦＢ１３０ペプチドは、原虫増殖阻害活性を有する限りにおいて、ＤＥＦＢ１３０タンパクの全長アミノ酸配列のうちの一部のアミノ酸配列を有する任意長のポリペプチドであってよい。
【００１９】
本発明に係る抗原虫薬において、ＤＥＦＢ１３０タンパク及び／又はＤＥＦＢ１３０ペプチドは、例えば、以下の（１）〜（３）のいずれか１以上であってよい。配列番号１記載のアミノ酸配列は、ヒトＤＥＦＢ１３０タンパクの全長アミノ酸配列である。
（１）配列番号１記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（２）配列番号１記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（３）配列番号１記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
【００２０】
上記（２）に関し、「１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列」とは、部位特異的突然変異誘発法等の公知の変異ポリペプチド作製法により欠失、置換、挿入もしくは付加できる程度の数（好ましくは１０個以下、より好ましくは７個以下、さらに好ましくは５個以下、最も好ましくは１又は２個）のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されたアミノ酸配列を意味する。
【００２１】
タンパク質あるいはポリペプチドのアミノ酸配列中のいくつかのアミノ酸が、当該タンパク質等の構造又は機能に有意に影響することなく容易に改変され得ることは、当該分野において周知である。さらに、天然に存在するタンパク質において、当該タンパク質の構造又は機能を有意に変化させない多型（ポリモルフィズム）が存在することもまた周知である。従って、「１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列」には、公知の変異ポリペプチド作製法により人為的に変異を導入して得られる改変配列に加えて、天然に存在する多型配列も含まれる。
【００２２】
アミノ酸配列の１個または数個のアミノ酸が置換する場合は、類似するアミノ酸残基間の保存的置換が好ましい。例えばアミノ酸は、その側鎖の性質に基づいて、疎水性アミノ酸（Ａ，Ｉ，Ｌ，Ｍ，Ｆ，Ｐ，Ｗ，Ｙ，Ｖ）、親水性アミノ酸（Ｒ，Ｄ，Ｎ，Ｃ，Ｅ，Ｑ，Ｇ，Ｈ，Ｋ，Ｓ，Ｔ）、脂肪族側鎖を有するアミノ酸（Ｇ，Ａ，Ｖ，Ｌ，Ｉ，Ｐ）、水酸基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｓ，Ｔ，Ｙ）、硫黄原子含有側鎖を有するアミノ酸（Ｃ，Ｍ）、カルボン酸及びアミド含有側鎖を有するアミノ酸（Ｄ，Ｎ，Ｅ，Ｑ）、塩基含有側鎖を有するアミノ酸（Ｒ，Ｋ，Ｈ）、芳香族含有側鎖を有するアミノ酸（Ｈ，Ｆ，Ｙ，Ｗ）に分類される。各群に分類されたアミノ酸は、相互に置換したときに、当該ポリペプチドの活性が維持される可能性が高いことが知られており、そのようなアミノ酸相互の置換が好ましい。例えば、グリシンとプロリン、グリシンとアラニンまたはバリン、ロイシンとイソロイシン、グルタミン酸とグルタミン、アスパラギン酸とアスパラギン、システインとスレオニン、スレオニンとセリン又はアラニン、リジンとアルギニン間での置換を挙げることができる。
【００２３】
上記（３）に関し、配列同一性は、当該ポリペプチドが原虫増殖阻害活性を維持し得る限り特に限定されないが、５０％以上、好ましくは６０％以上、より好ましくは７０％以上であってもよく、特に好ましくは９０％以上、さらに特に好ましくは９５％以上、最も好ましくは９８％以上であってもよい。
【００２４】
本発明に係る抗原虫薬において、ＤＥＦＢ１３０ペプチドは、好ましくは、以下の（４）〜（６）のポリペプチドのいずれか１以上とされる。配列番号２記載のアミノ酸配列は、ＤＥＦＢ１３０タンパクの全長アミノ酸配列の２３〜７９番目のアミノ酸配列に相当する。
（４）配列番号２記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（５）配列番号２記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（６）配列番号２記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
【００２５】
上記（５）及び（６）に関して、「１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列」及び配列同一性の用語の定義は、上記（２）及び（３）に関して上述した通りである。
【００２６】
本発明に係る抗原虫薬において、ＤＥＦＢ１３０ペプチドは、より好ましくは、以下の（７）〜（９）のポリペプチドのいずれか１以上とされる。配列番号４記載のアミノ酸配列は、ＤＥＦＢ１３０タンパクの全長アミノ酸配列の２９〜６１番目のアミノ酸配列に相当する。
（７）配列番号４記載のアミノ酸配列からなるポリペプチド。
（８）配列番号４記載のアミノ酸配列において１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列からなり、原虫の増殖を阻害する活性を有するポリペプチド。
（９）配列番号４記載のアミノ酸配列に対して８０％以上の配列同一性を示し、原虫の増殖を阻害する活性を有する活性を有するポリペプチド。
【００２７】
上記（８）及び（９）に関して、「１〜数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入もしくは付加されたアミノ酸配列」及び配列同一性の用語の定義は、上記（２）及び（３）に関して上述した通りである。
【００２８】
［原虫］
本発明に係る抗原虫薬が対象とする原虫は、特に限定されないが、例えばマラリア、トリパノソーマ、イソスポーラ、ネオスポーラ、トキソプラズマ、クリプトスポリジウム、リーシュマニア、赤痢アメーバ、コクシジウム、サルコシスチス、ロイコチトゾーン、ピロプラズマ等の原虫が挙げられる。本発明に係る抗原虫薬は、これらのうち特にマラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｓｐｐ．）に好適に適用される。
【００２９】
［医薬組成物］
本発明に係る抗原虫薬は、ＤＥＦＢ１３０タンパク及び／又はＤＥＦＢ１３０ペプチドを有効成分として含有する。この医薬は、赤血球への原虫の感染を抑制することが可能であるので、原虫感染症の予防及び／又は治療のために好適に用いられ得る。
【００３０】
本発明に係る抗原虫薬は、ＤＥＦＢ１３０タンパク及び／又はＤＥＦＢ１３０ペプチドを単独で、又は溶解剤、増量剤、賦形剤あるいは担体と混合して、注射剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、溶液剤、徐放剤等の製剤として用いることができる。溶解剤、増量剤、賦形剤あるいは担体などの添加剤は、薬剤学的に許容されるものが選ばれ、その種類および組成は投与経路や投与方法によって適宜決定され得る。例えば注射剤の場合、一般に食塩、グルコ−ス、マンニト−ル等の糖類が望ましい。経口剤の場合、でんぷん、乳糖、結晶セルロース、ステアリン酸マグネシウム等が望ましい。
【００３１】
本発明に係る抗原虫薬の投与経路は、経口的又は注射剤により非経口的に全身性に投与される。また、カテーテル等により遠隔的に投与してもよく、ステントやグラフトあるいは一体化させたステントグラフトに薬剤を結合させてもよい。さらに、体内に留置することにより徐放性に投与してもよい。特に経口投与が好ましい。
【００３２】
本発明に係る抗原虫薬の投与量は、剤型の種類、投与方法、投与対象（動物を含む）の年齢や体重、症状等を考慮して決定されるものであるが、患者の症状を治癒するか、あるいは少なくとも部分的に阻止するために十分な量とされる。また、投与期間は患者の年齢、症状により適宜選択することができる。
【００３３】
本発明に係る抗原虫薬は、抗原虫薬として既に臨床応用されている薬剤や研究段階にある薬剤を有効成分として含有していてもよい。臨床応用されている抗原虫薬としては、クロロキン、スルファドキシン、ピリメタミン、メフロキン及びキニーネ等が挙げられる。
【００３４】
本発明に係る抗原虫薬は、他の態様として、上述した既に臨床応用されている薬剤や研究段階にある薬剤と組み合わされて用いられるもの、あるいは組み合せてなるものであってもよい。ここで、「組み合わされて用いられる」とは、２以上の医薬のそれぞれを異なる時間に投与する場合、それぞれの医薬を同時に投与する場合を意味し、「組み合せてなる」とは、２以上の医薬を含んで成る１種類の医薬組成物を投与する場合を意味する。前者の場合、２以上の医薬のそれぞれを同一の投与経路で投与してもよく、又は別の投与経路で投与してもよい。各医薬は、患者に対して症状を治癒するか、あるいは少なくとも部分的に阻止するために十分な量で投与される。また、投与期間は患者の年齢、症状により適宜選択することができる。
【実施例】
【００３５】
［試験例１：抗原虫作用を有する生体防御因子のスクリーニング］
マクロファージ内において抗原虫作用を担う生体防御因子の同定を行った。
【００３６】
Ficoll-Paque PLUS（GE Healthcare）を用いて末梢血から単球を単離し、IFN-γ及びGM-CSFを含むRPMI-1640培地（Sigma）を用いて37℃、8日間培養することにより、ヒト末梢血由来マクロファージを得た。マクロファージ（5×106 cells）を培養フラスコ内に用意し、マラリア原虫感染赤血球又は非感染赤血球（1×108 cells）を混合し、37℃、2時間共培養した。マクロファージからmRNAを抽出し、マイクロアレイチップ（Agilent Technologies）を用いて遺伝子発現解析を行った。
【００３７】
マラリア原虫感染赤血球を貪食したマクロファージにおいて、非感染赤血球を貪食したマイクロファージに比して発現が上昇又は低下した遺伝子（P-value < 0.05, Fold change > 2.0）を１６８遺伝子（上昇）及び２１６遺伝子（低下）同定した。このうち、マラリア原虫感染赤血球を貪食したマクロファージにおいて特に高い発現を示す遺伝子としてβ-Defensin 130（DEFB130）を同定した。マイクロアレイチップ及びRT-PCRによるDEFB130の発現定量の結果を図１に示す。
【００３８】
［試験例２：DEFB130ペプチドの原虫増殖阻害活性の評価］
ヒトDEFB130の部分ペプチドを人工合成（Eurofins scientific, Tokyo, Japan）し、in vitro及びin vivoにおいて原虫増殖阻害活性を評価した。DEFB130ペプチドのアミノ酸配列を配列番号２に示す。比較のため、ペプチドのアミノ酸組成を変化させず、アミノ酸の配列順序を入れ替えたスクランブルペプチド（配列番号３）を合成した。
【００３９】
熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum 3D7株、Dd2株又はHB3株）感染赤血球を96ウェルプレートにヘマトクリット2%、寄生率1%となるように播種した。DEFB130ペプチド又はスクランブルペプチド（終濃度10 μM〜1 mM）を添加し、3日後に寄生率を測定した。結果を表１に示す。スクランブルペプチドの50%原虫増殖阻害濃度（IC50）は＞200 μMであったが、DEFB130ペプチドのIC50は43〜49 μMであった。
【００４０】
【表１】
2017100969.tif 000003
【００４１】
SPF 7週齢メスC57BL/6系統マウス（Clea, Tokyo, Japan）に、マウスマラリア原虫（Plasmodium yoelii 17-XNL株）感染赤血球1.0×107個を腹腔内投与し、感染4，5，6日経過後にDEFB130ペプチド又はスクランブルペプチドを静脈注射（5 mg/kg body weight）により投与した。比較のため、リン酸バッファー（PBS）のみも投与した。感染7，8日経過後に血中の原虫寄生率を測定した。結果を図２に示す。図中、7日目の結果及び8日目の結果は、左からDEFB130ペプチド群、スクランブルペプチド群及びPBS群を示す。DEFB130ペプチドを投与したマウスでは、スクランブルペプチドを投与したマウスと比較して、感染経過7、8日目における末梢血中の赤血球原虫寄生率が有意に減少した。
【００４２】
さらに、DEFB130ペプチドについて、そのＮ末端側のペプチド（DEFB130ペプチドN末端、配列番号３）とＣ末端側のペプチド（DEFB130ペプチドC末端、配列番号４）を合成し、上述の方法によりIC50を測定した。結果を前掲の表１に示す。DEFB130ペプチドC末端のIC50は＞200 μMであったが、DEFB130ペプチドN末端のIC50は90〜93 μMであった。
【００４３】
以上の結果から、DEFB130の部分ペプチドが、顕著な原虫増殖阻害活性を示すことが明らかとなった。
【配列表フリーテキスト】
【００４４】
配列番号１：DEFB130の全長アミノ酸配列
配列番号２：DEFB130ペプチドのアミノ酸配列
配列番号３：スクランブルペプチドのアミノ酸配列
配列番号４：DEFB130ペプチドN末端
配列番号５：DEFB130ペプチドC末端
【図１】
2017100969.tif 000004
【図２】
2017100969.tif 000005
【配列表】
2017100969000001.app