(57)【要約】      （修正有）【課題】モリブデン鉱物を選別する方法の提供。【解決手段】Ｍ１３ファージを含む組成物であって、モリブデンを含む物質を分離するための組成物。前記Ｍ１３ファージは特定のアミノ酸配列を有するペプチドを有するＭ１３ファージであり、Ｍ１３ファージは、他の鉱物には結合せず、輝水鉛鉱に選択的に結合する性質を有し、Ｍ１３ファージが、遺伝子工学的に他の遺伝子を導入した物であってもよい組成物。前記組成物は、目的（具体的には、モリブデン含有鉱物、より具体的には輝水鉛鉱）の物質が分散状態にある懸濁液に添加し、添加後、Ｍ１３ファージは、目的の物質と結合し、凝集させ、最終的には沈降させ、沈降物を回収し。Ｍ１３ファージを結合させた微粒子を用いて、目的の物質を分離する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｍ１３ファージを含む組成物であって、モリブデンを含む物質を分離するための組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の組成物を用いて、モリブデンを含む物質を分離する方法。
【請求項３】
前記モリブデンを含む物質が輝水鉛鉱である請求項２に記載の方法。
【請求項４】
請求項２又は３に記載の方法であって、
前記組成物を、モリブデンを含む物質が分散した液に添加するステップと、
前記モリブデンを含む物質を凝集させ、沈降させるステップと、
前記凝集及び沈降した物質を回収するステップと
を含む方法。
【請求項５】
請求項２又は３に記載の方法であって、
前記組成物中のＭ１３ファージを担体に固定するステップと、
前記担体をカラムに導入するステップと、
モリブデンを含む物質が分散した液を前記カラムに通過させるステップと
を含む方法。
【請求項６】
請求項２又は３に記載の方法であって、
前記組成物中のＭ１３ファージを微粒子に固定するステップと、
モリブデンを含む物質が分散した液に、前記微粒子を添加するステップと
を含む方法。
【請求項７】
請求項２又は３に記載の方法であって、
前記組成物中のＭ１３ファージを用いて浮遊選鉱を行うステップ
を含む方法。
【請求項８】
Ｍ１３ファージベクターを含む組成物であって、請求項１に記載の組成物を製造するための、該組成物。
【請求項９】
Ｍ１３ファージであって、
下記アミノ酸配列（１）及び／又は（２）のアミノ酸配列を有するペプチドを有する、Ｍ１３ファージ：
（１）  （ＡＬＲＫＮＭＤＦＣＰＱＳＥＴＧＷＨＹＩＶ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＨＰＷＲＫ）−（ＴＳＮＱ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＴＳＮＱ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＦＹＷ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＨＰＷＲＫ）
（２）  （ＬＩＶＦＡ）−（ＲＨＫ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＲＨＫ）−（ＲＨＫ）−（ＨＰＷ）
｛ただし、上記式の（）中の少なくとも１種のアミノ酸のいずれか１つが選択される｝
【請求項１０】
請求項９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ：
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【請求項１１】
請求項９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列でのペプチドを有する、Ｍ１３ファージ：
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【請求項１２】
請求項９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【請求項１３】
請求項９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【請求項１４】
請求項９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【請求項１５】
請求項９に記載のファージであって、
以下のいずれか１つのアミノ酸配列において、１〜５個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加された配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【請求項１６】
Ｍ１３ファージであって、
請求項９〜１５に記載されたアミノ酸配列のうちいずれか１つをコードする核酸を含む、Ｍ１３ファージ。
【請求項１７】
Ｍ１３ファージであって、
請求項９〜１５に記載されたアミノ酸配列のうちいずれか１つをコードする核酸の配列と少なくとも９０％以上同一の配列を有する核酸を含む、Ｍ１３ファージ。
【請求項１８】
Ｍ１３ファージベクターであって、
請求項９〜１５に記載されたアミノ酸配列のうちいずれか１つをコードする核酸を含む、Ｍ１３ファージベクター。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はウイルス組成物及びそれを用いた分離方法に関する。より具体的には特定の元素に特異的に結合するウイルスを含む組成物及びその分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
モリブデンは特殊鋼の合金成分、石油精製の触媒、潤滑剤などに用いられる有価な元素である。このモリブデンは、斑岩銅鉱床（ポーフィリー型鉱床）などに輝水鉛鉱などの硫化鉱物として硫化銅鉱石に付随して存在する場合が多く、モリブデン精鉱として回収される。斑岩銅鉱床から生産されるモリブデン精鉱は、硫化銅鉱物の濃集・精製過程における浮遊選鉱（以下浮選という）の副産物として回収されている。輝水鉛鉱は浮上し易い鉱物であり、浮選剤としてケロシンや軽油等に起泡剤を添加することによって比較的容易に浮上させることができる。ただし、付随する硫化銅鉱物も浮遊性が高いため、硫化銅鉱物の浮上を抑制するための浮上抑制剤として、シアン化合物や水硫化ソーダを添加する必要がある。
【０００３】
しかしながら、シアン化合物利用ではシアン化合物の毒性による環境汚染の危険性があり、水硫化ソーダ利用では鉱石スラリーが酸性を示す場合などに硫化水素が発生する危険性があった。
【０００４】
そこで、モリブデン精鉱精製方法として、毒性物質の利用や発生しない方法として、特許文献１に示すようなオゾン酸化を利用する方法や、特許文献２に示すようなプラズマ照射を行う方法が提案されてきた。また、特許文献３に示すように、アミノ酸を無機材料に担持させてモリブデンを回収する方法も提案されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許第３２７７５３２号公報
【特許文献２】特開２０１４−１８８４２８号公報
【特許文献３】特開２０１５−２２４２２５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上述した文献に記載されている方法では、オゾン利用やプラズマ照射のための特別な装置の導入が必要となり、現実的な方法ではなく、現在までに実用化されていない。
【０００７】
本発明は、モリブデンを含む物質を分離するための新規な方法を提供する事を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、特定のファージが輝水鉛鉱に選択的に結合することを見出した。
【０００９】
上記知見に基づき、本発明は一側面において以下の発明を包含する。
（発明１）
Ｍ１３ファージを含む組成物であって、モリブデンを含む物質を分離するための組成物。
【００１０】
（発明２）
発明１に記載の組成物を用いて、モリブデンを含む物質を分離する方法。
【００１１】
（発明３）
前記モリブデンを含む物質が輝水鉛鉱である発明２に記載の方法。
【００１２】
（発明４）
発明２又は３に記載の方法であって、
前記組成物を、モリブデンを含む物質が分散した液に添加するステップと、
前記モリブデンを含む物質を凝集させ、沈降させるステップと、
前記凝集及び沈降した物質を回収するステップと
を含む方法。
【００１３】
（発明５）
発明２又は３に記載の方法であって、
前記組成物中のＭ１３ファージを担体に固定するステップと、
前記担体をカラムに導入するステップと、
モリブデンを含む物質が分散した液を前記カラムに通過させるステップと
を含む方法。
【００１４】
（発明６）
発明２又は３に記載の方法であって、
前記組成物中のＭ１３ファージを微粒子に固定するステップと、
モリブデンを含む物質が分散した液に、前記微粒子を添加するステップと
を含む方法。
【００１５】
（発明７）
発明２又は３に記載の方法であって、
前記組成物中のＭ１３ファージを用いて浮遊選鉱を行うステップ
を含む方法。
【００１６】
（発明８）
Ｍ１３ファージベクターを含む組成物であって、発明１に記載の組成物を製造するための、該組成物。
【００１７】
（発明９）
Ｍ１３ファージであって、
下記アミノ酸配列（１）及び／又は（２）のアミノ酸配列を有するペプチドを有する、Ｍ１３ファージ：
（１）  （ＡＬＲＫＮＭＤＦＣＰＱＳＥＴＧＷＨＹＩＶ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＨＰＷＲＫ）−（ＴＳＮＱ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＴＳＮＱ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＦＹＷ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＨＰＷＲＫ）
（２）  （ＬＩＶＦＡ）−（ＲＨＫ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＲＨＫ）−（ＲＨＫ）−（ＨＰＷ）
｛ただし、上記式の（）中の少なくとも１種のアミノ酸のいずれか１つが選択される｝
【００１８】
（発明１０）
発明９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ：
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００１９】
（発明１１）
発明９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列でのペプチドを有する、Ｍ１３ファージ：
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００２０】
（発明１２）
発明９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９０％同一である配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００２１】
（発明１３）
発明９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００２２】
（発明１４）
発明９に記載のファージであって、
以下のうち、いずれか１つのアミノ酸配列と少なくとも９８％同一である配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００２３】
（発明１５）
発明９に記載のファージであって、
以下のいずれか１つのアミノ酸配列において、１〜５個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加された配列を含むペプチドを有する、Ｍ１３ファージ。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００２４】
（発明１６）
Ｍ１３ファージであって、
発明９〜１５に記載されたアミノ酸配列のうちいずれか１つをコードする核酸を含む、Ｍ１３ファージ。
【００２５】
（発明１７）
Ｍ１３ファージであって、
発明９〜１５に記載されたアミノ酸配列のうちいずれか１つをコードする核酸の配列と少なくとも９０％以上同一の配列を有する核酸を含む、Ｍ１３ファージ。
【００２６】
（発明１８）
Ｍ１３ファージベクターであって、
発明９〜１５に記載されたアミノ酸配列のうちいずれか１つをコードする核酸を含む、Ｍ１３ファージベクター。
【発明の効果】
【００２７】
一側面において、本発明では、ファージを活用する。これにより、従来の方法に比べて、大規模な設備を要さない。また、シアン化合物や水硫化ソーダなど毒性を有する化合物もしくは毒性化合物を発生する恐れのある化合物を使用する必要がない。また、本発明で使用するファージはＰ１レベルの物である。従って、安全に分離を行うことができる。
【００２８】
また、本発明で用いるファージは、効率的に分離を行うことを可能にする。さらに言えば、目的の鉱物を選択的に分離することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】本発明の一実施形態に係るファージが、特定の鉱物に選択的に結合することを示すグラフである。各群の５本のバーは、左から順に輝水鉛鉱、硫黄、黄銅鉱、硫砒銅鉱、黄鉄鉱を表す。
【図２】本発明の一実施形態に係るペプチドが、特定の鉱物に選択的に結合することを示すグラフである。各群の５本のバーは、左から順に輝水鉛鉱、硫黄、黄銅鉱、硫砒銅鉱、黄鉄鉱を表す。
【図３】本発明の一実施形態に係る５０−ｐｈａｇｅ等を用いて輝水鉛鉱を沈降させたときの濁度変化を表すグラフである。
【図４】本発明の一実施形態に係る５０−ｐｈａｇｅ等を用いて輝水鉛鉱を沈降させたときの粒子径を表す写真である。
【図５】本発明の一実施形態に係る５０−ｐｈａｇｅ等を用いて輝水鉛鉱を沈降させたときの濁度変化を表すグラフである。
【図６】本発明の一実施形態に係る５０−ｐｈａｇｅ等を用いて輝水鉛鉱を沈降させたときの最大粒子径の変化とｐＨ依存性を表すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
以下、本発明の理解を促進するために、具体的な実施形態を挙げて説明する。以下の実施形態の説明は本発明の範囲を限定することを意図したものではない。
【００３１】
１．適用対象の物質
本発明は、一実施形態において、特定の物質を分離する方法に適用することができる。特定の物質として、モリブデンを含む物質が挙げられる。より具体的には、モリブデンを含む鉱物を分離する方法に適用することができる。モリブデンを含む鉱物としては、輝水鉛鉱、モリブデン鉛鉱、パウエライト、鉄水鉛鉱等が挙げられる。実質採掘されているという観点から、典型的なモリブデンを含む鉱物として、輝水鉛鉱が挙げられる。
【００３２】
２．ウイルス
本発明では、一実施形態において、特定のウイルスを提供する。より具体的には、Ｍ１３ファージを提供する。Ｍ１３ファージは、組成物（例えば、バッファ（Ｔｒｉｓ等）やＥＤＴＡを含む）の中に含めた形で提供してもよい。Ｍ１３ファージや、Ｍ１３ファージを含む組成物は、モリブデンを含む物質を分離するために使用することができる。
【００３３】
Ｍ１３ファージ自体は、ファージディスプレイ等の遺伝子工学的な手法で典型的に使用される物である。本発明者らは、従来技術において知られていない性質をＭ１３ファージが有することを見出した。より具体的には、Ｍ１３ファージが、モリブデンを含む物質（例：輝水鉛鉱）に結合する性質があることを見出した。さらに言えば、Ｍ１３ファージが、他の鉱物には結合せず、輝水鉛鉱に選択的に結合する性質があることを見出した。
【００３４】
本発明で使用するＭ１３ファージは、遺伝子工学的に他の遺伝子を導入した物であってもよい。あるいは、全く他の遺伝子を導入させていない状態の物であってもよい。
【００３５】
３．使用方法
こうした未知の属性を利用して、一実施形態において、以下のような応用が可能となる。
【００３６】
３−１．目的の物質の沈降 
本発明は、一実施形態において、Ｍ１３ファージ、又はＭ１３ファージを含む組成物を含む。前記組成物は、目的の物質が分散状態にある懸濁液に添加することができる。添加後、Ｍ１３ファージは、目的の物質と結合し、凝集させ、最終的には沈降させることができる。そして、沈降物を回収することができる。
【００３７】
３−２．微粒子への結合
本発明は、一実施形態において、Ｍ１３ファージを結合させた微粒子を包含する。微粒子は、ビーズ（例：磁気ビーズ、ガラスビーズ、高分子ビーズなど）、担体等が挙げられる。微粒子の大きさについては、特に限定されず、用途に応じて適宜調整すればよい。また、微粒子の表面にＭ１３ファージを結合させる手法については、当分野で公知の手法を用いることができる。
【００３８】
本発明では、Ｍ１３ファージを結合させた微粒子を用いて、目的の物質を分離することができる。例えば、目的の物質を、Ｍ１３ファージに結合させて沈降させることにより、分離することができる。
【００３９】
３−３．精製カラム
目的の物質を分離する方法としてカラムクロマトグラフィーが挙げられる。カラムクロマトグラフィーは、カラム（カラム表面の官能基）が特定の物質に選択的に結合することを利用する。本発明の一実施形態では、上述したＭ１３ファージを担体に担持させることができる。そして、この担体をカラムに導入することができる。こうしたカラムを使用することにより、目的の物質を分離することができる。
【００４０】
３−４．浮遊選鉱の捕収剤
浮遊選鉱（浮選）は、微粒子を気泡にトラップさせることにより分離する方法である。この際に、捕収剤を使用することができる。本発明の一実施形態では、Ｍ１３ファージが気泡にトラップされやすい場合には、Ｍ１３ファージそのものを捕収剤として用いることができる。もしくは、Ｍ１３ファージを公知の捕収剤や起泡剤に結合し、気泡にトラップしやすい形態として用いることができる。これにより、目的の物質を気泡にトラップすることができ、結果として分離することができる。
【００４１】
３−５．ファージの分量
上述した用途又はそれ以外の用途において、Ｍ１３ファージの分量は、特に限定されない。用途ごとに適宜設定することが可能である。例えば、Ｍ１３ファージそのものや、Ｍ１３ファージを含む組成物を使用して、鉱物粒子を回収する場合、鉱物粒子の量３ｇ／Ｌに対し、０．５×１０8ｐｆｕ／ｍＬ〜５×１０8ｐｆｕ／ｍＬ、より好ましくは、０．６×１０8ｐｆｕ／ｍＬ〜１．５×１０8ｐｆｕ／ｍＬである。あるいは、鉱物粒子の量１０ｇ／Ｌに対し、０．５×１０9ｐｆｕ／ｍＬ〜５×１０9ｐｆｕ／ｍＬ、より好ましくは、０．６×１０9ｐｆｕ／ｍＬ〜１．５×１０9ｐｆｕ／ｍＬであってもよい。あるいは、ファージ量（ｐｆｕ／ｍＬ）／鉱物量（ｇ／Ｌ）の比率が、０．１３×１０8〜５×１０8、より好ましくは０．３３×１０8〜１×１０8である。
【００４２】
４．応用形態（分離方法）
上述した応用形態に関する方法を以下具体的に説明する。
【００４３】
４−１．分離対象 
上述した応用形態はいずれも所定の物質を分離することに関する。ここで、分離対象の物質はモリブデンである。例えば、上述したモリブデン含有鉱物（例えば、輝水鉛鉱）を分離することができる。
【００４４】
４−２．Ｍ１３ファージ又はＭ１３ファージを含む組成物を用いた分離方法
本発明は、一実施形態において、Ｍ１３ファージ又はＭ１３ファージを含む組成物を使用して、物質（具体的には、モリブデン含有鉱物、より具体的には輝水鉛鉱）を分離することができる。例えば、分離対象となる物質が分散した分散液を用意する。ここで、Ｍ１３ファージ又はＭ１３ファージを含む組成物を添加することができる。添加後、Ｍ１３ファージは、分離対象となる物質と結合し、凝集させ、最終的には沈降させることができる。そして、沈降物を回収することができる。
【００４５】
４−３．カラムクロマトグラフィーを用いた分離方法
本発明は、一実施形態において、カラムクロマトグラフィーを用いて、物質（具体的には、モリブデン含有鉱物、より具体的には輝水鉛鉱）を分離することができる。方法としては、まず、Ｍ１３ファージを、公知の手法により、担体に固定させることができる。その後、その担体を精製用のカラムに導入することができる。前記カラムが準備できたら、分離対象の物質が分散した液を、前記カラムの中に通す。すると、前記物質は、カラムの中に結合するか、又は溶出が遅れる。これにより、特定の物質を分離することができる。
【００４６】
４−４．微粒子を用いた分離方法
本発明は、一実施形態において、微粒子を用いて、物質（具体的には、モリブデン含有鉱物、より具体的には輝水鉛鉱）を分離することができる。まず、Ｍ１３ファージを、公知の手法により、微粒子表面に固定させることができる。その後、鉱物粒子が分散した液に、微粒子を添加することができる。微粒子を添加した後、暫く放置すると、微粒子表面にあるファージが鉱物粒子と結合し、凝集が起こる。そして、溶液の底に沈降する。その後、底に沈降した鉱物を回収することができる。あるいは、微粒子として磁気ビーズを用いることができ、沈降することを待つことなく、磁力を用いて、鉱物粒子を回収することができる。
【００４７】
４−５．浮選を用いた分離方法
本発明は、一実施形態において、捕収剤又は起泡剤を用いて、物質（具体的には、モリブデン含有鉱物、より具体的には輝水鉛鉱）を分離することができる。具体的には、捕収剤又は起泡剤を、公知の方法により、Ｍ１３ファージと結合させる。そして、結合させた捕収剤を溶液に導入して撹拌させ（適宜他の薬剤も導入し）、気泡を発生させる。その後、鉱物粒子を導入し、該鉱物粒子を気泡にトラップさせる。これにより、鉱物粒子を回収することができる。あるいは、Ｍ１３ファージそのものを捕収剤として使用してもよい。
【００４８】
５．鉱物との結合における選択性
上述したように、Ｍ１３ファージは、特定の鉱物に特に強く結合し、他の鉱物には結合しないという選択性を有する。より具体的には、モリブデンを含む鉱物（例：輝水鉛鉱）には強く結合し、他の鉱物（例えば、硫黄、黄銅鉱、硫砒銅鉱、黄鉄鉱）には、結合しない（又は、モリブデンを含む鉱物の場合と比べて結合度合いが著しく低い）という性質を有する。従って、モリブデンを含む鉱物と他の鉱物との混合物であっても、上述した方法を用いることにより、モリブデンを含む鉱物を分離することができる。
【００４９】
６．Ｍ１３ファージウイルスベクター
本発明では、一実施形態において、特定のウイルスベクターを提供する。より具体的には、Ｍ１３ファージベクターを提供する。前記ベクターは、組成物（例えば、バッファ（Ｔｒｉｓ等）やＥＤＴＡを含む）の中に含めた形で提供してもよい。そして、Ｍ１３ファージベクターや、Ｍ１３ファージベクターを含む組成物は、Ｍ１３ファージやＭ１３ファージを含む組成物を製造するために用いることができる。そして、製造された、Ｍ１３ファージや、Ｍ１３ファージを含む組成物は、モリブデンを含む物質を分離するために使用することができる。
【００５０】
Ｍ１３ファージベクター自体は、Ｍ１３ファージから精製してもよいし、市販の業者から入手してもよい（例えば、ＢＡＹＯＵ  ＢｉｏＰｌｕｓ社のＭ１３ｍｐ１８−Ｓｉｎｇｌｅ  Ｓｔｒａｎｄｅｄ  Ｐｈａｇｅ  ＤＮＡ（商品コードＰ−１０７）や、タカラバイオのＭ１３  ｍｐ１８  ＲＦ  ＤＮＡ（商品コード３１１８）など）。
【００５１】
７．ペプチド 
上述した物質を分離するため、本発明は、一実施形態において、ペプチドをＭ１３ファージ（又はＭ１３ファージベクター）と組み合わせて使用することができる。これにより、モリブデンを含む物質の抽出機能を強化することができる。特に、モリブデンを含む鉱物を選択的に抽出する機能を強化することができる。より具体的には、少なくとも以下のいずれか１つの配列を含むペプチドを用いることができる。典型的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０のうちから選択される２つの数で規定される範囲（例：１以上１０以下、５以上２０以下）のアミノ酸をＮ末端側及び／又はＣ末端側に付加することができる。
【００５２】
（１）  （ＡＬＲＫＮＭＤＦＣＰＱＳＥＴＧＷＨＹＩＶ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＨＰＷＲＫ）−（ＴＳＮＱ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＴＳＮＱ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＦＹＷ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＨＰＷＲＫ）
（２）  （ＬＩＶＦＡ）−（ＲＨＫ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＴＳＮＱ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＬＩＶＦＡ）−（ＲＨＫ）−（ＲＨＫ）−（ＨＰＷ）
｛ただし、上記式の（）中の少なくとも１種のアミノ酸のいずれか１つが選択される｝
【００５３】
後述する実施例においては、以下のアミノ酸配列のペプチドを用いて、輝水鉛鉱を分離した例が示されている。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００５４】
上記（１）及び（２）に記載のアミノ酸配列と、上記（Ａ）及び（Ｂ）に記載のアミノ酸配列とを対比させると以下の通りとなる。
【表１】
2017216920.tif 000002
【００５５】
【表２】
2017216920.tif 000003
【００５６】
表１にあるように、配列（Ａ）１番目はグリシンである。グリシンの側鎖は（−Ｈ）なので、これ自体で特定の機能に関与する可能性は低いと考えられる。従って、グリシン部分についてはすべての天然アミノ酸に置換しても同様の効果を有すると考えられる。
【００５７】
配列（Ａ）２番目はロイシンである。ロイシンは疎水性アミノ酸である。従って、同様の性質を持つ、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、アラニン等に置換しても同様の効果を有すると考えられる。
【００５８】
配列（Ａ）３番目はヒスチジンである。ヒスチジンは、ヘテロ環構造を側鎖に有する。従って、同様の性質を持つ、トリプトファンやプロリンに置換しても同様の効果を得られると考えられる。また、ヒスチジンは、極性電荷（塩基性）側鎖を有するアミノ酸である。従って、同様の性質を持つ、アルギニンやリジン（リシン）に置換しても同様の効果を得られると考えられる。
【００５９】
配列（Ａ）４〜５番目はスレオニン（トレオニン）及びセリンである。これらは、極性非電荷側鎖を有する。従って、同様の性質を持つ、スレオニン（トレオニン）、セリン、アスパラギン、グルタミンに置換しても、同様の効果を有すると考えられる。
配列（Ａ）の１０番目はチロシンである。チロシンは芳香族アミノ酸であるため、同様の性質を有するトリプトファンやフェニルアラニンに置換しても、同様の効果を有すると考えられる。
【００６０】
配列（Ｂ）の２番目はアルギニンである。アルギニンは、塩基性の側鎖を有する。従って同様の性質を持つ、リシンやヒスチジンに置換しても同様の効果を有すると考えられる。
【００６１】
以下、他のアミノ酸についても、同様の観点（親水性−疎水性、酸性−中性−塩基性、共通の官能基など）に基づいて置換可能と考えられる。
【００６２】
また、本発明は、一実施形態において、以下のアミノ酸配列を含むペプチドを包含する。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
アミノ酸配列（Ａ）及び（Ｂ）のＮ末端側及び／又はＣ末端側には、任意の数のアミノ酸が付加されてもよい。典型的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０のうちから選択される２つの数で規定される範囲（例：１以上１０以下、５以上２０以下）のアミノ酸をＮ末端側及び／又はＣ末端側に付加することができる。
【００６３】
また、本発明は、一実施形態において、以下の１２個のアミノ酸配列で表されるペプチドを包含する。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００６４】
上記したアミノ酸配列（Ａ）及び（Ｂ）については、軽微な改変（例：アミノ酸の挿入、置換、付加）を行ったとしても、アミノ酸配列（Ａ）及び（Ｂ）と同様の機能を発揮することができる。例えば、アミノ酸配列（Ａ）及び（Ｂ）と６６％以上、７５％以上、８３％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上、又は９９％以上同一であるペプチド又は該同一性を有する配列を含むペプチドも同様の機能を発揮することができる。
【００６５】
配列の同一性の数値の算出方法については、当分野で公知の手法を用いることができる。例えば、ＢＬＡＳＴ（登録商標）が提供するアミノ酸（又はタンパク質）のホモロジー検索で用いるＢｌａｓｔｐなどで判定される数値に基づいてもよい。
【００６６】
また、本発明は、一実施形態において、以下のいずれか１つのアミノ酸配列において、１〜５個のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加された配列を含むペプチドを包含する。典型的には、４個以下、３個以下、又は２個以下のアミノ酸が欠失、置換及び／又は付加された配列を含むペプチドを包含する。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００６７】
８．ペプチドをコードする核酸
本発明は、一実施形態において、上述したペプチドをコードする核酸を包含する。核酸は、ＤＮＡでもＲＮＡでもよい。また、本発明は、一実施形態において、上述したペプチドをコードする核酸のセンス鎖に対して相補的な配列を有する核酸であってもよい。
【００６８】
更に、本発明は、一実施形態において、上述したペプチドをコードする核酸をコードする核酸配列と、少なくとも８０％以上、８５％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上同一の配列を有する核酸を包含する。配列の同一性の算出方法については、上述したアミノ酸配列と同様公知技術を用いて算出できる。例えば、ＢＬＡＳＴのＢｌａｓｔｎ等で検索したときに判定される数値に基づいてもよい。
【００６９】
更に、本発明は、一実施形態において、上述したペプチドをコードする核酸のセンス鎖に対して相補的な配列と、ハイブリダイズすることができる核酸を包含する。より具体的には、ストリンジェントな条件でハイブリダイズすることができる核酸を包含する。ストリンジェントな条件とは、当分野で公知の基準を用いることができる。例えば、特開２０１５−０２３８３１号に記載されているような基準を条件にしてもよい。具体的には、ＤＮＡを固定化したフィルターを用いて、０．７〜１．０Ｍの塩化ナトリウム存在下、６５℃でハイブリダイゼーションを行った後、０．１〜２倍濃度のＳＳＣ（ｓａｌｉｎｅ−ｓｏｄｉｕｍ  ｃｉｔｒａｔｅ）溶液（１倍濃度のＳＳＣ溶液の組成は、１５０ｍＭ  塩化ナトリウム、１５ｍＭ  クエン酸ナトリウムである）を用い、６５℃条件下でフィルターを洗浄することにより同定できる条件を意味する。
【００７０】
上述したいずれの核酸も、遺伝子工学的な手法を通して、目的とするペプチドを製造するのに有用である。例えば、上述したいずれの核酸を、発現ベクターに組み込んで目的のペプチドを大量に発現させることができる。あるいは後述するファージディスプレイ法を用いて、表面に目的のペプチドを有するファージを製造することができる。
【００７１】
前記核酸がＤＮＡである場合（且つ前記核酸がコーディング鎖である場合）、該核酸は、Ｍ１３ファージのウイルスベクターに組み込むことができる。
【００７２】
９．ｐＨ依存性
上述したペプチドが、モリブデンを含む鉱物（例：輝水鉛鉱）と結合する際には、溶液を特定のｐＨ範囲に調整することにより、結合（更には凝集）を促すことができる。具体的にはｐＨが増大する程、溶液中の粒度分布における最大粒子径が増大する。例えば、ｐＨが４〜１２の範囲、より好ましくはｐＨが５以上の範囲で、最大粒子径を増大させることができる。
【実施例】
【００７３】
以下、実施例により、上述した本発明の実施形態をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００７４】
（実施例１）輝水鉛鉱結合ファージのＥＬＩＳＡ分析
Ｍ１３ファージは、通常ファージディスプレイ法で使用されるウイルスである。そして、Ｍ１３ファージは、遺伝子工学的な手法により、特定のペプチドをファージの表面に提示させることができる。本実施例では、こうした遺伝子工学的な操作を行っていないＭ１３ファージ（ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅ）を使用した。
【００７５】
輝水鉛鉱と、ペプチドを提示させていないＭ１３ファージ（ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅ）について、ＥＬＩＳＡ法（Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ  ＩｍｍｕｎｏＳｏｒｂｅｎｔ  Ａｓｓａｙ、酵素結合免疫吸着法）により、輝水鉛鉱との結合量を測定した。具体的には輝水鉛鉱３０００ｍｇ／Ｌを懸濁した液を９６穴マイクロプレートの各ウェルに添加し、それぞれのウェルにファージを添加後、未結合のファージを洗浄した。さらにこの懸濁液に酵素（ペルオキシダーゼ）標識した抗Ｍ１３ファージ抗体を添加したのち、未結合の抗ファージ抗体を洗浄した。ここに酵素の基質となる２，２’−ａｚｉｎｏ−ｂｉｓ（３−ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｏｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ−６−ｓｕｌｐｈｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）  ｄｉａｍｍｏｎｉｕｍ  ｓａｌｔ（ＡＢＴＳ）を添加し、青色の発色をマイクロプレートリーダーで波長４０５ｎｍにて吸光度測定した。更に、これらの手順を、他の鉱物（硫黄、黄銅鉱、硫砒銅鉱、黄鉄鉱）に変更したうえで行った。
【００７６】
Ｍ１３ファージ（ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅ）と輝水鉛鉱とを接触させたときのＥＬＩＳＡ分析での吸光度を１００％したときの各鉱物の吸光度の比率（すなわち、「ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅの輝水鉛鉱への結合量」に対する「ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅの各鉱物への結合量の割合」）を図１に示す。図１に示す通り、Ｍ１３ファージ（ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅ）においては、輝水鉛鉱への結合量と比べると、硫黄、黄銅鉱、硫砒銅鉱、黄鉄鉱への結合量が著しく低かった。従って、Ｍ１３ファージ（ｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅ）は、輝水鉛鉱を選択的に分離するのに有用であることが示された。
【００７７】
（実施例２）ペプチドを表面に提示させた輝水鉛鉱結合ファージのＥＬＩＳＡ分析
実施例１と同様の方法で、ＥＬＩＳＡ分析を行った。ただし、Ｍ１３ファージについては、以下のペプチドを表面に提示させたファージを用いた。
（Ａ）Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ
（Ｂ）Ｉｌｅ−Ａｒｇ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｒｐ
【００７８】
以後、（Ａ）に示すペプチドを表面に提示したファージを５０−ｐｈａｇｅ、（Ｂ）に示すペプチドを表面に提示したファージをＭ４８−ｐｈａｇｅと呼ぶ。結果を図２に示す。図２は、図１で使用したｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅの輝水鉛鉱のＯＤ４０５を１００％としたときの吸光度を示す。図１のデータと比較すると、輝水鉛鉱の結合能力が強化されたことが示された。
【００７９】
（実施例３）輝水鉛鉱３ｇ／Ｌ時の沈降速度測定と顕微鏡観察
温度３０℃において、粒子径７５μｍ以下の輝水鉛鉱を３ｇ／Ｌのパルプ濃度となるように水に懸濁した。この懸濁液に、５０−ｐｈａｇｅおよびｎｕｌｌ−ｐｈａｇｅの各ファージを１０7〜１０9ｐｆｕ／ｍｌとなる濃度に添加し、添加後ただちに懸濁液上部における濁度を波長６６０ｎｍにて分光光度計で添加時から５秒ごとに測定した。図３にその時の濁度の推移を示す（ファージ添加時＝０秒を１００％とする）。その結果、５０−ｐｈａｇｅを１０8ｐｆｕ／ｍｌ添加した場合、迅速な濁度の低下すなわち輝水鉛鉱粒子の急速な沈降が確認された。また同条件における輝水鉛鉱粒子を光学顕微鏡にて観察したところ（図４）、５０−ｐｈａｇｅを輝水鉛鉱に添加した場合に、より顕著に輝水鉛鉱粒子が凝集することが確認された。本結果から、５０−ｐｈａｇｅを輝水鉛鉱懸濁液に適切な濃度で添加することで、輝水鉛鉱を選択的に分離回収できる可能性が示された。
【００８０】
（実施例４）５０−ｐｈａｇｅ添加時の沈降速度測定と顕微鏡観察
輝水鉛鉱粒子のパルプ濃度を１０ｇ／Ｌとした以外は実施例３と同様の方法にて５０−ｐｈａｇｅ添加時の沈降速度を測定した。その結果を図５に示す。輝水鉛鉱１０ｇ／Ｌ時には、５０−ｐｈａｇｅ濃度１０9ｐｆｕ／ｍｌにおいて輝水鉛鉱の沈降が顕著に進むことがわかった。
【００８１】
（実施例５）５０−ｐｈａｇｅ添加時の最大粒子径の変化とｐＨ依存性
温度３０℃において、粒子径７５μｍ以下の輝水鉛鉱を１０ｇ／Ｌのパルプ濃度となるように水に懸濁した。この懸濁液に、５０−ｐｈａｇｅを１０9ｐｆｕ／ｍｌとなる濃度で添加し、添加後、ＮａＯＨおよびＨＣｌで懸濁液のｐＨを所定の値に調整した。粒子径をＡｃｏｕｓｔｏＳｉｚｅｒＩＩｘ（協和界面科学（株）製）で測定した。結果を図６に示す。ｐＨが大きくなるほど、最大粒子径が増加する傾向が見られた。特にｐＨ４以上の場合に、輝水鉛鉱だけと比べて５０−ｐｈａｇｅを添加すると最大粒子径が顕著に増加する傾向が見られた。
【図１】
2017216920.tif 000004
【図２】
2017216920.tif 000005
【図３】
2017216920.tif 000006
【図４】
2017216920.tif 000007
【図５】
2017216920.tif 000008
【図６】
2017216920.tif 000009