(57)【要約】      （修正有）【課題】気道上皮組織において、去痰の促進、喘息症状緩和ならびに誤嚥性肺炎予防に優れた効果を有するムチン産生抑制剤を提供する。【解決手段】ネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ  Ｌ．）を水、含水有機溶媒もしくは有機溶媒で抽出することにより得られる気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤。ムチン産生抑制剤を有効成分として含有する機能性食品及び食品添加物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ  Ｌ．）を水、含水有機溶媒もしくは有機溶媒で抽出することにより得られる気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤。
【請求項２】
請求項１記載の有機溶媒がエタノールであることを特徴とする気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤。
【請求項３】
請求項１記載の含水有機溶媒が含水エタノールであることを特徴とする気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤を含む去痰促進剤。
【請求項５】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤を含む喘息症状改善剤。
【請求項６】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤を含む誤嚥性肺炎防止剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、去痰の促進、喘息症状緩和ならびに誤嚥性肺炎予防作用を有する医薬品、機能性食品、食品添加物、ムチン産生抑制剤に係り、特に、ネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ  Ｌ．）を用いた去痰の促進、喘息症状緩和ならびに誤嚥性肺炎予防作用を有する機能性食品、食品添加物、ムチン産生抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
気道では、健常人でも一日に約１００ｍｌの気道分泌液が作られている。気道分泌液は、約９０％が水分、残りの約１０％がムチン（ｍｕｃｉｎ、ＭＵＣ）と呼ばれる糖タンパク質で構成されている（非特許文献１）。気道に炎症がない健常人であれば、気道分泌液は適切な量が作られるため問題はないが、慢性気管支炎、喘息、肺炎などの呼吸器疾病患者の気道では、ムチンが過剰に産生分泌され、気道分泌液の産生量も増加し粘性が高くなる。特に、慢性気管支炎を起こしている患者においては、ムチン産生の異常亢進により、喀痰喀出障害を招くと言われている。
【０００３】
厚生労働省「平成２５年までの人口動向」によると、日本人の死亡原因の第３位は肺炎であり、高齢者になるほど肺炎の死亡順位が上がる。嚥下機能の低下した高齢者では、食物などが気道に入ることで、気道上皮組織において気道分泌液（ムチン）の過剰分泌が起こり、誤嚥性肺炎の原因となる。さらには、粘液栓形成により呼吸困難に陥るおそれもある。気道分泌液の過剰生産分泌のメカニズムは、酸化ストレスを介した気道上皮細胞の炎症反応であり、効果的な予防法はないと言われている。
【０００４】
ネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ  Ｌ．）はヒガンバナ科ネギ亜科ネギ属に分類され、食用として広く栽培されてきた。食材として使用される以外にも、ネギの葉鞘は「蒼白（そうはく）」という生薬原料として利用されており、漢方では解表・通陽・解毒の効能があるとされている。また、特許文献１および特許文献２によると、感冒の初期や頭痛、下痢、腹痛、腫れ物に効果があるとされる。しかしながら、それらの作用機序の解明はなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許５７４２０６０号
【特許文献２】特開２０１１−８８８８１号公報
【特許文献３】特許５６７０００６号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日呼吸会誌３６（３）、１９９８．玉置淳ら
【非特許文献２】第５６回日本アレルギー学会秋季学術大会２００６年、下気道粘液分泌亢進の病態と対策、玉置淳
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献３には、ムチン産生抑制物質としてＬ−カルボシステイン製剤を含有する去痰剤が示されている。Ｌ−カルボシステイン製剤は、医薬品のため食品用途では使用できない。
【０００８】
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、上述の課題を解消することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の気道上皮組織におけるムチン産生抑制剤は、ネギ（Ａｌｌｉｕｍ  ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ  Ｌ．）を水、含水有機溶媒もしくは有機溶媒で抽出したエキスであり、気道上皮組織において去痰の促進、喘息症状緩和ならびに誤嚥性肺炎予防作用を有するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、気道分泌液の過剰産生に起因する気道機能を正常化し、種々の気道障害の予防及び改善に貢献できる。
【００１１】
ネギから気道上皮のムチン産生抑制物質を含む成分を抽出する場合には、水、含水有機溶媒もしくは有機溶媒が使用できる。水を用いて抽出する場合には、乾燥ネギを粉砕し、粉砕直後のネギ重量に対して水を５〜１００倍量、好ましくは３０−７０倍量を加える。次に、この溶液を８０−１００ ℃で１−３０分間、好ましくは１−５分間加熱し、抽出液を得る。その後、抽出液を栓付遠心管に入れ１０００−３０００ｒｐｍ、好ましくは２０００ｒｐｍで５−３０分間、さらに好ましくは１０分間の遠心分離を行って沈殿物を除き、清澄なネギ抽出液を得る。抽出液は、そのままムチン産生分泌抑制剤として用いることができるが、エバポレーターを用いて減圧下で濃縮乾固して得られたものをムチン産生分泌抑制剤として用いることもできる。
【００１２】
次に、含水有機溶媒もしくは有機溶媒を使用して抽出を行う場合について述べる。有機溶媒としては、エタノール、メタノール、アセトン、アセトニトリル等が挙げられるが、特に、含水エタノールもしくはエタノールが好ましい。抽出法の一例を示すと、乾燥ネギを粉砕し、分液ロート等の適当な容器に入れ、含水有機溶媒もしくは有機溶媒を加えて振盪することにより抽出を行う。このときの有機溶媒の使用量は、ネギ乾燥重量の５−１００倍量、好ましくは２０倍量が適当である。振盪は、適当な振盪機を用いて１５０−６００ｒｐｍ、好ましくは２００−４００ｒｐｍにて１０分間−２時間、好ましくは２０分間−１時間行って、目的とする成分を抽出する。
【００１３】
得られた抽出液を栓付遠心管に入れ１０００−３０００ｒｐｍ、好ましくは２０００ｒｐｍで５−３０分間、さらに好ましくは１０分間の遠心分離を行い、沈殿物を除いて清澄なネギ抽出液を得る。この抽出液をそのままムチン産生分泌抑制剤として用いることもできるが、濃縮、乾固したものを用いることが好ましい。
本発明で用いられるネギは、根深ネギや葉ネギでも良く、栽培方法や採取時期も限定されない。ネギ乾燥物の調製は、温風乾燥、噴霧乾燥、真空凍結乾燥などの乾燥法を用いて行うことができる。ネギ抽出物はネギ乾燥物を原料に抽出することが好ましいが、これに限定されるものではない。
【００１４】
上記ネギ抽出液等は、食品、医薬品、食品添加物などの形態で提供できる。食品もしくは食品素材として用いる場合は、単独で各種食品等に添加する他、必要に応じて、安定剤、増量剤、膨張剤などの補助剤と併用して用いることができる。本発明に係る有効成分の食品等への添加量は、用途などを考慮して適宜決定すればよい。また、医薬品として用いる場合には、散剤、顆粒、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、液剤、シロップ剤などの任意の剤形を採用することができる。製剤化にあたっては、賦形剤、結合剤などの常用の成分を必要に応じて適宜配合することができる。なお、有効成分の使用量については、用途などを考慮して適宜決定すればよい。
【実施例１】
【００１５】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
５ｘ１０４個のヒト気道上皮細胞株ＮＣＩ−Ｈ２９２を２４ｗｅｌｌマイクロプレートに播種し、１２時間ウシ胎児血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（１ｍｌ）中予備培養した。その後、無処理の区、グラム陰性菌の細胞外多糖であるリポポリサッカライド（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈｒａｒｉｄｅ、ＬＰＳ）を添加することで刺激し炎症を起こした状態のＮＣＩ−Ｈ２９２細胞区、また、ＬＰＳとネギ抽出物を同時に添加した区を作成し、さらに２日間培養した。
ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞を生理食塩水で洗浄し、エタノールで固定した後、ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞内および細胞表層のムチンをＰｅｒｉｏｄｉｃａｃｉｄ−Ｓｉｆｆ（ＰＡＳ）染色し、赤紫色に染まったムチン産生細胞の割合を顕微鏡観察下、算出した。
【００１６】
図１に示したように、未処理のＮＣＩ−Ｈ２９２細胞（ＰＡＳ陽性率は５％）と比較してＬＰＳ刺激細胞をＰＡＳ染色した結果、陽性細胞の割合が７８％まで増加した。一方、ＬＰＳと同時に、ネギ水抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）、３０％エタノール抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）、５０％エタノール抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）、７０％エタノール抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）もしくは１００％エタノール抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）を添加したＮＣＩ−Ｈ２９２細胞のＰＡＳ陽性細胞率は、それぞれ、６２％、３５％、４％、２５％、３８％であり、ＬＰＳ単独で処理した区と比較すると、有意に低下していることが分かった。これらの結果は、ＬＰＳ処理により炎症状態になったＮＣＩ−Ｈ２９２細胞において、水抽出物、３０％エタノール抽出物、５０％エタノール抽出物、７０％エタノール抽出物、１００％エタノール抽出物がムチンの産生分泌を抑制していることを示すものである。
【実施例２】
【００１７】
ヒトにおいては、現在２０種類のムチンの存在が確認され、気道では主にＭＵＣ１，ＭＵＣ２、ＭＵＣ４ＭＵＣ５ＡＣ、ＭＵＣ５Ｂ、ＭＵＣ７、ＭＵＣ８およびＭＵＣ１３の発現が確認されている。これらムチンのうち、気道上皮杯細胞ではＭＵＣ５ＡＣおよびＭＵＣ２が発現している。非特許文献２には、ＭＵＣ５ＡＣは、卵白アルブミンで反復感作した喘息モデルマウスの気道粘膜や、インターロイキン−１３で刺激した気道上皮細胞で発現の亢進が認められ、粘液産生促進や粘性の増加の一因になると記載されている。
【００１８】
そこで、先述のＰＡＳ染色における陽性細胞の増加と、ＭＵＣ２やＭＵＣ５ＡＣなどのムチン産生促進との相関を検証するため、ＬＰＳ処理によって発現誘導されたＭＵＣ２やＭＵＣ５ＡＣ遺伝子が、ネギ５０％エタノール抽出物添加により減衰するかどうかを調べた。
【００１９】
１２ｗｅｌｌマイクロプレートに播種したＮＣＩ−Ｈ２９２細胞（細胞数１ｘ１０５個、２ｍｌ）を１２時間培養した。１２時間後、５０μｇ／ｍｌのＬＰＳ単独、または同濃度のＬＰＳとともにネギ含水エタノール抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）を添加後、さらに４８時間培養したＮＣＩ−Ｈ２９２細胞における、ＭＵＣ２、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現量をリアルタイムＲＴ−ＰＣＲで定量した。
【００２０】
その結果を図２に示した。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲで分析された各遺伝子のｍＲＮＡ発現をコントロールのグリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｉｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｉｄｒｏｇｅｎａｓｅ、ＧＡＰＤＨ）を １００にしたときの比較発現量（％）で示した。
【００２１】
ＧＡＰＤＨ同様ハウスキーピング遺伝子であるベータ−グルクロニダーゼ（ｂｅｔａ−ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ、ＧＵＳ）の発現には、ＬＰＳ添加の有無およびネギ抽出物の添加はいずれも影響しなかった。
【００２２】
ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞におけるＭＵＣ２遺伝子ならびにＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現量は、５０μｇ／ｍｌのＬＰＳ処理により、無添加の区と比較して、それぞれ、２．０倍、３．４倍に亢進した。
【００２３】
一方、ＬＰＳと同時に５０％含水エタノール抽出物（終濃度０．１ｍｇ／ｍｌ）を添加したＮＣＩ−Ｈ２９２細胞では、ＬＰＳによる両遺伝子の発現亢進が抑制され、無処理の区と比較して、ＭＵＣ２遺伝子の発現量が０．８１倍、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現量が０．８５倍となった。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】ネギ抽出物によるＬＰＳ刺激ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞のＰＡＳ陽性率
【図２】ネギ５０％含水エタノール抽出物による、ＬＰＳ刺激ＮＣＩ−Ｈ２９２細胞におけるムチン遺伝子発現量に対する影響
【図１】
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【図２】
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