(57)【要約】      （修正有）【課題】赤かび病菌かび毒抑制剤の提供。【解決手段】トレオニン及びその類縁体を有効成分として含む、トリコテセン系かび毒の生合成の抑制剤。下式で示される構造が抑制効果として基本骨格であるＬ−アミノ酸類縁体、及びこれを含むオリゴペプチドを有効成分とする、赤かび病菌のかび毒生合成を阻害するかび毒産生の抑制剤。トレオニン、及びセリンはアミノ酸として食品に広く含まれ、生物に普遍的に存在する物質であることから、安全性の問題もない。2017095370.tif 000005【選択図】図１
2017095370.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
トレオニン及び／又はセリンを有効成分として含むトリコテセン系かび毒抑制剤。
【請求項２】
前記有効成分として含まれるトレオニン及び／又はセリンが、アミノ酸及び／又はオリゴペプチドであることを特徴とする請求項１記載のトリコテセン系かび毒抑制剤。
【請求項３】
前記トレオニンが、Ｌ-トレオニン、又はＬ−アロ−トレオニンであり、前記セリンがＬ-セリンであることを特徴とする請求項１又は２記載のトリコテセン系かび毒抑制剤。
【請求項４】
トレオニン及び／又はセリンを有効成分として含むトリコテセン系かび毒抑制剤によって、農産物、その種子、農産物を栽培する圃場、栽培中の農産物の少なくとも１つを処理することを特徴とするトリコテセン系かび毒抑制方法。
【請求項５】
前記有効成分として含まれるトレオニン及び／又はセリンが、アミノ酸及び／又はオリゴペプチドであることを特徴とする請求項４記載のトリコテセン系かび毒抑制方法。
【請求項６】
前記トレオニンが、Ｌ-トレオニン又はＬ−アロ−トレオニンであり、前記セリンがＬ-セリンであることを特徴とする請求項４又は５記載のトリコテセン系かび毒抑制方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、赤かび病菌のかび毒産生を抑制する薬剤に関する。特に、赤かび病菌の産生するトリコテセンの生合成を抑制するアミノ酸、及びその類縁体に関する。
【背景技術】
【０００２】
フザリウム  グラミネアラム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）やフザリウム  アシアティクム（Ｆｕｓａｒｉｕｍ  ａｓｉａｔｉｃｕｍ）等のかびは畑等の土壌に生息する糸状菌である。これらフザリウム属の菌が、麦、トウモロコシの穂に感染することにより、粒が肥大しなくなったり、穂全体が枯れたりする赤かび病と呼ばれる植物病害が生じる。
【０００３】
赤かび病は、麦等の植物の組織を壊死させるために収穫量の減少を引き起こす。さらに、かび毒を生成することから、摂取したヒト、家畜に健康被害をもたらすことが知られている。フザリウム属は、化学構造からトリコテセン系かび毒、ゼアラレノン、ブテノライド等、数種類のかび毒を生成することが知られている。特に、トリコテセン系かび毒は、真核生物のタンパク合成阻害を引き起こす。そのため、ヒトや家畜が汚染された穀物を摂取すると、食中毒性無白血球症と言われる悪心、嘔吐、腹痛、下痢、造血機能障害、免疫不全を伴う中毒症状を引き起こす。
【０００４】
赤かび病に罹患した作物では、外見上委縮するなど形態的に異常が認められる穀粒だけではなく、外見健全粒といわれる外見は全く正常な穀粒であってもかび毒によって汚染されている場合がある。そのため、汚染された作物をヒトや家畜が摂取し、重篤な中毒症状が引き起こされることがあった。そのため、農林水産省は、トリコテセン系かび毒の一つであるデオキシニバレノール（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ、ＤＯＮ）については農産物検査規格を改正し、流通上の規制の強化を行っている。かび毒は加工や調理工程において除去することは難しいため、生産段階において防除することがヒト、家畜での健康被害を生じさせないためには重要になっている。
【０００５】
また、トリコテセン系かび毒は宿主の病徴の進展への関与も指摘されている。したがって、トリコテセン系かび毒の合成を阻害することができれば、麦、トウモロコシの植物病害も低減することができる。トリコテセン系かび毒の産生を制御する農薬の開発は、食の安全性の確保に寄与するばかりではなく、植物病害防除に対しても画期的な薬剤を提供することになる。
【０００６】
トリコテセン産生抑制剤としてはプレコセンが開示されている（特許文献１）。プレコセンは昆虫の抗幼若ホルモンとして既知の化合物であるが、新たにトリコテセン産生を抑制する機能が見出された。クロメン誘導体であるプレコセンには、構造式の異なるプレコセン-１、プレコセン-２、プレコセン-３が存在するが、中でもプレコセン-２は培地へ添加した試験の結果から毒素産生抑制効果が高いとされていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００９−１６７１３８号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｔａｋｉｔａｎｉ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，１９７９年、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．、Ｖｏｌ．１７２、ｐ．３３５−３４２．
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら、プレコセン−２は、植物体上での赤かび接種試験を行った結果、植物体上では効果が認められなかった。また、特許文献１で用いられている菌株、Ｈ３株以外の赤かび病菌株に対しては抑制効果が全く認められなかったことから、菌株特異的な抑制効果であったと考えられている。したがって、菌株に依存しない有効な防除効果が認められる薬剤の開発が待たれている。
【００１０】
また、開花期以降に散布することから、残留してもヒトや動物に対する毒性の心配のない薬剤である必要がある。
【００１１】
本発明はトリコテセン系かび毒の産生を抑止する薬剤を提供することを課題とする。さらに、該薬剤によって、フザリウム属のかびが産生するかび毒による農産物の汚染を防ぎ、かび毒の汚染の心配のない作物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（１）トレオニン及び／又はセリンを有効成分として含むトリコテセン系かび毒抑制剤。
（２）前記有効成分として含まれるトレオニン及び／又はセリンが、アミノ酸及び／又はオリゴペプチドであることを特徴とする（１）記載のトリコテセン系かび毒抑制剤。
（３）前記トレオニンが、Ｌ-トレオニン、又はＬ−アロ−トレオニンであり、前記セリンがＬ-セリンであることを特徴とする（１）又は（２）記載のトリコテセン系かび毒抑制剤。
（４）トレオニン及び／又はセリンを有効成分として含むトリコテセン系かび毒抑制剤によって、農産物、その種子、農産物を栽培する圃場、栽培中の農産物の少なくとも１つを処理することを特徴とするトリコテセン系かび毒抑制方法。
（５）前記有効成分として含まれるトレオニン及び／又はセリンが、アミノ酸及び／又はオリゴペプチドであることを特徴とする（４）記載のトリコテセン系かび毒抑制方法。
（６）前記トレオニンが、Ｌ-トレオニン又はＬ−アロ−トレオニンであり、前記セリンがＬ-セリンであることを特徴とする（４）又は（５）記載のトリコテセン系かび毒抑制方法。
【発明の効果】
【００１３】
本発明者らは、自然界に存在するアミノ酸であるトレオニン（Ｔｈｒ）及びこれに類似する構造を備えた化合物がかび毒産生を抑制することを見出した。本発明の化合物を有効成分とする薬剤は、かび毒の生合成を阻害し、赤かび病によるかび毒を防除することができる。
【００１４】
特にトレオニン、及びセリンはアミノ酸として食品に広く含まれ、生物に普遍的に存在する物質であることから、安全性に関する試験を行う必要がない。また、製造コストも低く環境中での安全性も確かである。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】トレオニンによる毒素産生抑制効果を示す図。図１（Ａ）はＴＬＣによる解析を、図１（Ｂ）はＨＰＬＣによる定量的な解析結果を示す。
【図２】オオムギ穂へのトレオニン散布による毒素産生抑制効果を示す図。
【図３】トレオニンの毒素産生、菌体生育に対する効果を経時的に示す図。図３（Ａ）はトレオニンによる毒素産生抑制効果を経時的に示す。図３（Ｂ）は、毒素産生、エルゴステロール量に対する定量的な解析結果を示す。
【図４】トレオニン類縁体、及び構造の類似しているセリンによる毒素産生抑制効果を示す図。
【図５】トレオニンを含むジペプチドの毒素産生抑制効果を示す図。
【図６】トレオニンを含むオリゴペプチドの毒素産生抑制効果を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明者らは、トリコテセン系かび毒の生合成制御を研究する過程で、トレオニンが菌体のトリコテセン生合成を阻害することを見出し、本発明を完成するに至った。本発明でトリコテセン生合成を阻害することが明らかとなったトレオニンやセリンは、食品に広く含まれているアミノ酸である。したがって、農産物のかび毒抑制剤として用いても、安全性が高いことから、安心して用いることができる。
【００１７】
本発明の赤かび病菌かび毒産生抑制剤は、トリコテセン生合成を阻害することによるかび毒の抑制剤である。したがって、フザリウム属の菌に限らず、トリコセシウム属等、トリコテセン系かび毒を産生する全ての菌に有効である。
【００１８】
本発明の赤かび病菌かび毒産生抑制剤は単独で用いてもよいが、他の農薬と混合して用いてもよい。本発明の赤かび病菌かび毒産生抑制剤はトリコテセン系かび毒の生合成を抑制するが、赤かび病菌自体の生育は抑制しない。そのため赤かび病の進展を抑制することはできない。したがって、赤かび病菌の生育を抑制する農薬と混合して用いることにより、より高い効果を得ることが期待できる。他の殺菌剤と混ぜて製剤化、施用することで減農薬を可能とし、より効果的に使用することができる。
【００１９】
赤かび病菌の生育を抑制する農薬としては、作用機序の異なるトリアゾール系のエルゴステロール合成阻害剤であるメトコナゾール（商品名ワークアップフロアブル）、テブコナゾール（商品名シルバキュアフロアブル）、ベンズイミダゾール系の細胞分裂（微小管重合）阻害剤であるチオファネートメチル（商品名トップジンＭ）と混合して用いることにより、より高い抑制効果を期待することができる。
【００２０】
本発明の赤かび病菌かび毒産生抑制剤は、農薬製剤の製造方法の定法にしたがって、必要に応じて界面活性剤、その他の補助剤を加えて製剤化してもよい。具体的な製剤例としては、粒剤、粉剤、水和剤、懸濁性剤、乳剤、塗布剤、油剤等を例示することができる。
【００２１】
本発明のかび毒産生抑制剤として、例えば、トレオニンを用いた場合、水和剤で用いるのが好ましいが、乳剤、懸濁製剤として用いてもよい。使用時期としては、開花期で降雨のない時期に散布するのが好ましい。また、濃度は、使用目的、使用時期等によって適宜変更することができる。また、トレオニンをはじめとする本発明のアミノ酸、アミノ酸類縁体の毒素抑制効果はいつまでも持続する訳ではない。したがって、適宜追加散布を行い、効果を持続させることが好ましい。
【実施例】
【００２２】
≪トレオニンによる毒素産生抑制効果≫
本発明者らは菌体を培養した際にトレオニンを添加することにより、赤かび病菌の毒素産生が抑制されることを見出した。さらに、トレオニンをオオムギ穂へ散布した場合も毒素産生抑制効果を有することを確認した。以下、実験結果を踏まえながら本発明を説明する。
１．トレオニンの固体培養での毒素産生抑制効果
固体培養は以下のようにして行った。０．５ｇの粉砕玄米を９ｍＬのバイアル瓶に用意し、吸水させ滅菌した（以下、バイアル培養法という。）。植菌前にトレオニン水溶液（１０ｍｇ/ｍＬ）又は滅菌ＤＷを５０μＬ添加し、３０分間放置したものを固体培地として用いた。なお、以下単に「トレオニン」と記載する場合には、特に断りのない限り、Ｌ-トレオニンをいう。
【００２３】
固体培地に、赤かび病菌ＪＣＭ９８７３株の胞子懸濁液（１ｘ１０５  ｃｏｎｉｄｉａ／ｍＬ）５０μＬを植菌・撹拌し、４日間２５℃で培養を行った。菌体は、固体培地を含めて０．５ｇをサンプリングし、２ｍＬの８４％アセトニトリルを加え良く懸濁した。上清１ｍＬをとってアセトニトリルを蒸発させ、４００μＬまでＤＷを加え、さらに等量の酢酸エチルを加えて抽出を行った。抽出は２回繰り返した。
【００２４】
次に、酢酸エチルを蒸発させ、少量のエタノールに懸濁し、ＴＬＣガラスプレートシリカゲルＦ２５４（Ｍｅｒｃｋ社製）を用いて解析した。展開溶媒は、酢酸エチル：トルエン＝３：１を用い分離した。展開後のプレートはＮＢＰ−ＴＥＰＡ法（非特許文献１）によって青〜青紫色のスポットとして検出した。結果を図１（Ａ）に示す。
【００２５】
トレオニンを添加した培地で培養した菌体では、赤かび病菌によって産生される毒素である１５−アセチルデオキシニバレノール（１５−ａｃｅｔｙｌ−ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ、１５-ＡＤＯＮ）、デオキシニバレノール（Ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ、ＤＯＮ）ともに明らかに産生が抑制されていた。
【００２６】
これを定量的に確認するために、ＨＰＬＣにより解析を行った。上記と同様に、８４％アセトニトリルを加えて調整した上清２００μＬを酢酸エチルで抽出した後、１２．５％アセトニトリル５０μＬに溶かしてＨＰＬＣ（Ｓｈｉｍａｄｚｕ社製、ＬＣ−１０Ａ  ＨＰＬＣ  ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｅｇａｓｉｌ  ＯＤＳ  ＳＰ１００カラム（４．６ｘ２５０ｍｍ、５μｍ、１００Å；センシュー科学社製）で解析した。
【００２７】
溶出条件は以下のとおりである。０−１０分、１２．５％アセトニトリル、１０−２５分、２５％アセトニトリル、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、検出は２２０ｎｍの波長を用いて行った。デオキシニバレノールは溶出開始後８．３分、１５−アセチルデオキシニバレノールは２０分で溶出する。既知の濃度スタンダードを用いて、ピーク面積から濃度を算出した。結果を図１（Ｂ）に示す。
【００２８】
図１（Ｂ）は５回の実験結果から１５−アセチルデオキシニバレノールとデオキシニバレノールの濃度の和の平均値と標準偏差を求めたものである。トレオニン処理試料（８．３９ｍＭ  トレオニン）では、無処理に比べて有意に毒素産生を抑制していることが明らかとなった。
２．オオムギ穂へのトレオニン散布による毒素産生抑制効果
次に、オオムギに赤かび病菌を接種した実験系を用い、トレオニンが毒素産生抑制効果を示すか解析した。
【００２９】
オオムギはＴｕｒｋｅｙ４５を用い、接種菌株はＨ３株（３−ＡＤＯＮ型）を用いた。開花期のオオムギに、トレオニン溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を１ｍＬ噴霧し、２４時間後に再度トレオニン溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を１ｍＬ噴霧、４時間後に１０４／ｍＬ濃度の胞子懸濁液を１ｍＬ噴霧し、６日後に病徴観察を行い、毒素分析用の試料とした。１週間後に病徴および穂の成長をチェックし、ほぼ同じ赤かび病進展の穂を選んでデオキシニバレノールをＨＰＬＣで定量した。
【００３０】
破砕試料に対して８４％アセトニトリルを７５ｍｇ／ｍＬとなるよう加え、撹拌しながら３０分毒素の抽出操作を行った。抽出液を濾紙で濾過後、Ｍｙｃｏｃｅｐ＃２２７カラム（Ｒｏｍｅｒ  Ｌａｂｓ社製）に通した。
【００３１】
最初に溶出してくる２ｍＬを廃棄し、残りの通過液を全て回収した。通過液のうち１ｍＬを窒素ガス下で乾固させ、５０μＬの移動相に再溶解し、ＨＰＬＣ解析用サンプルとした。再溶解サンプル１０μＬ、すなわち植物試料１５ｍｇ相当をＨＰＬＣで解析し、デオキシニバレノールと３−アセチルデオキシニバレノール（３−ａｃｅｔｙｌ−ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ、３−ＡＤＯＮ）をそれぞれ検出・定量した。結果を図２に示す。
【００３２】
オオムギ穂を用いた実験系においてもトレオニン処理区（８．３９ｍＭ）は無処理区に比べて毒素産生を有意に抑制していた。しかしながら、トレオニン処理区においても、オオムギ穂の褐変を抑制することはできなかった。以上の結果より、トレオニンは、トリコテセン生合成を抑制するものの、赤かび病菌自体の生育抑制はしないことを確認した。
３．トレオニンの菌体の生育に対する効果
トレオニンはかび毒産生を抑制することは上記実験から明らかであるが、オオムギ穂の褐変を抑制することができなかった。そこで、トレオニンの菌体の生育に対する効果の検討を行った。具体的には、かびに特有の細胞膜の成分であるエルゴステロールを経時的に測定し解析した。
【００３３】
固体培養は以下のようにして行った。２５ｇの粉砕玄米を用意し、１２．５ｍＬのＤＷを加えてよく撹拌し、３時間放置した後、オートクレーブにより滅菌した。２．５ｍＬのトレオニン水溶液（１０ｍｇ/ｍＬ）又は滅菌ＤＷを添加、撹拌し、３０分間放置したものを固体培地として用いた。
【００３４】
固体培地に、赤かび病菌ＪＣＭ９８７３株の胞子懸濁液（１ｘ１０５  ｃｏｎｉｄｉａ／ｍＬ）を２．５ｍＬ植菌・撹拌し、無菌的に６．０ｇずつ１００ｍＬのビーカーに分取し、コンテナ内で２５℃で培養を行った。
【００３５】
２４時間毎に薬さじで無菌的によく撹拌し、培養開始３６時間後から１２時間毎にサンプリングを行い、赤かび病菌の毒素とエルゴステロール量の解析を行った。毒素の測定は、以下のようにして行った。固体培地を含む２ｇの菌体に８ｍＬの８４％アセトニトリル加え懸濁した。上清１ｍＬを取り、上記と同様にして酢酸エチルにより抽出を行い、薄層クロマトグラフィーにより解析を行った（図３（Ａ））。
【００３６】
エルゴステロールは以下の手順により抽出し測定を行った。固体培地を含む菌体１ｇあたり５ｍＬメタノールを加え、１分撹拌し、３分ソニケーションを行い上清を回収した。濾紙（Ｎｏ．１  アドバンテック東洋社製）を用いて濾過を行い、５００μＬをチューブに回収した。次に、７０ｍｇ  ＫＣｌを加え、ヘキサン２５０μＬを加え、６５℃で３０分間静置した。さらに、１２５μＬのＤＷ、２５０μＬのヘキサンを加え、撹拌、遠心して上層を回収した。再度２５０μＬヘキサンによる抽出操作を繰り返し、抽出したサンプルをひとつにまとめて乾固させ、２００μＬのエタノールに溶かし、１０μＬをＨＰＬＣによる解析に用いた。
【００３７】
溶出条件は以下のとおりである。メタノール：アセトニトリル：ＤＷ＝４９：４９：２の溶出液を用い、無勾配で溶出した。カラムは４０℃に維持し、流速は１．０ｍＬ／分、２８２ｎｍの波長でモニターを行った。溶出開始後、約２１分でエルゴステロールのピークが出る。ピーク面積より濃度を計算した（図３（Ｂ））。
【００３８】
培地中の毒素の経時的な解析結果（図３（Ａ））から、赤かび毒素は３６時間後から産生されているが、トレオニンを添加した培地では、毒素産生の初期段階から顕著な毒素産生抑制効果が認められた。一方、エルゴステロール量はトレオニンの有無に関わらず経時的に増加していた（図３（Ｂ）中央）。
【００３９】
培地単位重量当たりの毒素量（図３（Ｂ）上）、エルゴステロール量（図３（Ｂ）中央）を定量的に解析し、エルゴステロール単位量当たりの毒素量（図３（Ｂ）下）を算出した。経時的な解析結果から、菌体量と相関するエルゴステロールは、トレオニンの有無に関わらず８４時間目までほぼ直線的に増加していた。一方、エルゴステロールが示す菌体量の増加にも関わらず、毒素量は９６時間目までほとんど増加しなかった。したがって、トレオニンは少なくとも９６時間目まで持続的に毒素産生を抑制していた。これらの結果から、トレオニンは、かび毒産生を抑制するが、培養菌体の生育には影響を及ぼさないものと考えられる。
４．トレオニン類縁体のかび毒産生に対する効果
トレオニンにかび毒抑制効果があることが明らかとなったことから、トレオニン類縁体のかび毒産生に対する効果を解析した。Ｌ-トレオニン（和光純薬）、そのエナンチオマー（鏡像異性体）であるＤ-トレオニン、Ｌ-アロ-トレオニン、共通の側鎖を持つがカルボキシル基が修飾されているＬ-トレオニンベンジルエステル（以上、東京化成）、また、構造が非常に良く似ているアミノ酸Ｌ-セリン（和光純薬）を用いて、固体培養の系を用いて毒素産生をＴＬＣにより２連で解析した。なお、解析は、培養時間を７２時間とした以外は、上記の「１．トレオニンの固体培養での毒素産生抑制効果」と同様の手順で行った。
【００４０】
図４に示すように、Ｌ-アロ-トレオニン、Ｌ-セリンは、Ｌ-トレオニンと同程度の毒素産生抑制効果を示した。しかしながら、Ｄ-トレオニン、Ｌ-トレオニンベンジルエステルには毒素抑制効果が見られなかった。したがって、下記化学式に示す構造が抑制効果に寄与する基本骨格であると考えられる。
【００４１】
【化１】
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５．トレオニンを含むペプチドの毒素産生に対する効果
効果が確認されたトレオニン類縁体やセリンをアミノ酸としてではなく、これらを配列に含むペプチドの形で処理した場合であっても、菌が産生するプロテアーゼによって分解されることにより毒素抑制効果を示す可能性がある。これを確認するためにトレオニンのジペプチドを用いて解析を行った。
【００４２】
トレオニン−トレオニン（Ｔｈｒ-Ｔｈｒ）（ＡｎａＳｐｅｃ社製）のジペプチド、及び陽性コントロールとしてＬ-トレオニンを用いて解析を行った。
【００４３】
アミノ酸溶液は、すべて１０ｍｇ／ｍＬになるように調整した。Ｌ-トレオニンは５０μＬを、ジペプチドは２５μＬをバイアルに添加して、バイアル培養法（０．５ｇ固体培地／バイアル）により、２５℃で６日間培養し解析を行った。ジペプチド１０ｍｇ／ｍＬの濃度で固体培地に添加していることから、菌体が産生するプロテアーゼによってジペプチドが完全に分解されると仮定した際の有効濃度は、トレオニン−トレオニンを添加したものでは４．５ｍＭ、また、Ｌ−トレオニンは８．４ｍＭの濃度で固体培地に添加していることになる。
【００４４】
固体培地を含む菌体０．２５ｇ相当から上記の「１．トレオニンの固体培養での毒素産生抑制効果」と同様の手順で毒素を抽出し、薄層クロマトグラフィーにより解析を行った（図５）。図中下に示すのは、スタンダードから算出した各処理試料での１５−アセチルデオキシニバレノールの濃度である。無処理試料（Ｎｔ）で産生されている毒素量を１００％とすると、Ｌ-トレオニン処理試料では２５％、トレオニン−トレオニン処理試料では７５％の毒素量とかび毒の有意な抑制が見られた。Ｌ−トレオニンは８．４ｍＭの濃度で処理したのに対し、トレオニン−トレオニンはトレオニンの有効濃度として４．５ｍＭであることを鑑みれば、トレオニンをジペプチドで添加した場合も、アミノ酸の形態で添加した場合も同等の効果があると認められる。
【００４５】
次に、テトラペプチドを用いて解析を行った。用いたテトラペプチドは、アルギニン−トレオニン−トレオニン−アルギニン（Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ、ＲＴＴＲ）である。
【００４６】
固体培地０．５ｇを９ｍＬのバイアル瓶に用意し、５ｍＭ、１０ｍＭトレオニン、２．５ｍＭ、５ｍＭのテトラペプチドとなるように処理し、バイアル培養法で４日間培養し、かび毒抑制に対する効果を薄層クロマトグラフィーにより解析した。２．５ｍＭ、５ｍＭのテトラペプチド（アルギニン−トレオニン−トレオニン−アルギニン、（株）医学生物学研究所にて合成）が完全に分解されると仮定した際のトレオニンの有効濃度は、それぞれ５ｍＭ、１０ｍＭに相当する。結果を図６及び表１に示す。
【００４７】
【表１】
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実験は４連で行い、図６はその１例である。また、４回の実験の平均、及び標準偏差を表１に示す。無処理試料を１００％とすると、１５−アセチルデオキシニバレノール（１５-ＡＤＯＮ）濃度は、５ｍＭトレオニン処理試料では３６．３％、２．５ｍＭテトラペプチド（有効トレオニン濃度５．０ｍＭ）では７４．０％、１０ｍＭトレオニン処理試料で８．０％、５ｍＭテトラペプチド（有効トレオニン濃度１０．０ｍＭ）で４８．０％とテトラペプチドを用いた方が、かび毒抑制効果は低いものの有意にかび毒産生の抑制が認められた。したがって、オリゴペプチドの配列中にトレオニンやセリン等の赤かび毒産生を抑制するアミノ酸が含まれていれば十分な毒素抑制効果があると認められる。
【００４８】
以上の結果から、本発明で赤かび毒産生に対して抑制効果の認められたトレオニンとその類縁体、及びセリンはアミノ酸の形態であっても、ペプチドの一部として含まれていても十分な効果があるものと考えられる。ペプチドの形態で赤かび毒産生抑制剤として用いる場合には、有効濃度を高めるためにもペプチドの配列には、トレオニン、セリン等が多く含まれている配列であることが好ましい。
【産業上の利用可能性】
【００４９】
赤かび毒産生抑制効果が認められたトレオニンやセリンはアミノ酸として食品に広く含まれ、生物に普遍的に存在する物質であることから、他の農薬のように安全性に関する試験を行う必要がない。また、製造コストも低く、環境中での安全性も確かであることから、毒素産生抑制剤として好ましい性質を備えている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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