(57)【要約】【課題】HER2陰性の乳癌においても標的となり得る新たな癌抗原を見出し、癌治療の新たな選択肢を提供する。【解決手段】ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドと、細胞毒性を有する薬剤との複合体であることを特徴とする抗癌剤を提供する。【選択図】図２
2017095417.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドと、細胞毒性を有する薬剤との複合体であることを特徴とする抗癌剤。
【請求項２】
ポリペプチドが、ヒトCD239に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体である、請求項１記載の抗癌剤。
【請求項３】
ポリペプチドが、以下の（ａ）〜（ｉ）：
（ａ）配列番号１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号３に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号４に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号５に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号６に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｂ）配列番号７に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号１０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｃ）配列番号１５〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｄ）配列番号１９に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２０に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｅ）配列番号２２に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｆ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｇ）配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２５に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２６に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号２７に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号２８に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号２９に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3、
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｈ）配列番号３０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号３１に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、及び
（ｉ）配列番号３２で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチド
から選択される、請求項２記載の抗癌剤。
【請求項４】
薬剤がジフテリア毒素である、請求項１〜３のいずれか１項記載の抗癌剤。
【請求項５】
乳癌に対する増殖抑制効果を有する、請求項１〜４のいずれか１項記載の抗癌剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載の抗癌剤を含有する医薬組成物。
【請求項７】
以下の（ａ）〜（ｉ）：
（ａ）配列番号１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号３に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号４に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号５に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号６に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3
を含むアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号７に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号１０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号１５〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号１９に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２０に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3
を含むアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号２２に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域を含むアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２５に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２６に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号２７に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号２８に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号２９に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3、
を含むアミノ酸配列、
（ｈ）配列番号３０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号３１に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むアミノ酸配列、及び
（ｉ）配列番号３２で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列
から選択されるアミノ酸配列を有する組換え蛋白質。
【請求項８】
更に配列番号３３〜３６から選択されるアミノ酸配列からなるシグナルペプチドを含む、請求項７記載の組換え蛋白質。
【請求項９】
請求項７又は８記載の組換え蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項９記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
【請求項１１】
請求項１０記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１１記載の宿主細胞を培養し、発現した蛋白質を回収することを含む、請求項７又は８記載の組換え蛋白質の製造方法。
【請求項１３】
ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを含む、CD239発現癌細胞を検出するためのマーカー。
【請求項１４】
ポリペプチドが請求項７記載の組換え蛋白質である、請求項１３記載のマーカー。
【請求項１５】
ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを含む、CD239発現癌細胞に対して細胞毒性を有する薬剤を送達するための担体。
【請求項１６】
ポリペプチドが請求項７記載の組換え蛋白質である、請求項１５記載の担体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、CD239を特異的に認識するポリペプチドを含む抗癌剤、及びこれを含有する医薬組成物を提供する。本発明はまた、CD239発現癌細胞検出のための新たなマーカー、及びCD239発現癌細胞に対して細胞傷害性を有する薬剤を送達するための担体を提供する。
【背景技術】
【０００２】
CD239は、細胞表面上に存在する免疫グロブリンスーパーファミリーの一つとして知られる細胞膜１回貫通型の糖蛋白質である。５つの免疫グロブリン様ドメインからなる細胞外領域を有し、ルテラン（Lutheran）式血液型糖タンパク質（Lu）（NCBI Accession No: NP_005572.2）あるいは細胞接着分子（Basal cell adhesion molecule（B-CAM））（NCBI Accession No: NP_001013275.1）とも呼称されるが（非特許文献１及び２）、Luの細胞内ドメインは59残基からなるのに対して、B-CAMはLuの40残基を欠損している。
【０００３】
CD239はまた、卵巣癌で発現が上昇する抗原として発見された（非特許文献２）。その後、ラミニンα５鎖の特異的な受容体であることが明らかにされ（非特許文献３）、鎌状赤血球症の塞栓形成に関わることも示されてきた（非特許文献４）。
【０００４】
また、CD239は癌細胞の運動に関与することが報告され（非特許文献５）、皮膚癌や肝細胞癌で発現上昇することも報告されている（非特許文献６及び７）が、乳癌細胞における発現についての報告はない。また、癌細胞の増殖に関与する報告はなく、創薬の標的分子として予測されるものではなかった。
【０００５】
一方、癌細胞の増殖や癌の免疫に関与する分子が抗体医薬の分子標的として注目されてきた。日本では、2001年に乳癌治療における新しい選択肢として、抗HER2（ヒト化）モノクローナル抗体であるトラスツズマブがHER2陽性症例に対して承認された（特許文献１）。また、トラスツズマブにチューブリン重合阻害剤であるエムタンシン（DM1）を安定性の高いリンカーで結合したトラスツズマブエムタンシン（T-DM1）が、HER2陽性の手術不能または再発乳癌を適応症とする抗体-薬物結合体（ADC: antibody-drug conjugate）として承認されており、HER2陽性乳癌のセカンドライン標準療法となっている（特許文献２）。この治療薬の作用機序は、トラスツズマブによってHER2シグナル伝達の阻害と抗体依存性細胞障害作用を発揮するとともに、DM1を直接HER2陽性の癌細胞内部に送達することとされている。
【０００６】
しかしながら、HER2陽性症例は悪性乳癌全体の20〜30％でしかなく、さらに治療抵抗性の症例があることが問題化している。現在、既存の抗体医薬品に結合させる化学療法剤やリンカーの開発が行われる一方で、ADCに適する癌の新たな標的抗原及び抗体が求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特表２００２−５４４２３８
【特許文献２】特表２０１４−５０２５９６
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1995、Vol．92、pp．5496-5500
【非特許文献２】Cancer Res．、1994、Vol．54、pp．5761-5765
【非特許文献３】J． Biol． Chem．、2002、Vol．277、pp．44864-44869
【非特許文献４】Transfusion、2006、Vol．46、pp．668-677
【非特許文献５】J． Biol． Chem．、2013、Vol．288、pp．30990-31001
【非特許文献６】J． Cutan． Pathol．、2000、Vol．27、pp．108-111
【非特許文献７】Exp． Cell Res．、2008、Vol．314、pp．2579-2590
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
抗体-薬物結合体（ADC）は薬物を癌細胞へ直接送達できるため、癌の治療において非常に有効であるが、使用される抗体が細胞表面の抗原に対するものに限られる一方、抗癌剤の多くは細胞内で傷害作用を示すため、細胞内に内在化される抗原が求められている。すなわち、ADCの創薬に適する標的抗原は、「発現度」「内在化」「動的挙動」の３つの性質のバランスが求められ、更にその抗体がヒト型であることが理想的である。
【００１０】
本発明の一つの課題は、上記の特性を有し、かつHER2陰性の乳癌においても標的となり得る新たな抗原の探索である。また、本発明のもう一つの課題は、新たな標的抗原に対するヒト型組換え抗体を開発することである。このような抗体が得られれば、トラスツズマブに抵抗性を持つHer2陽性乳癌だけでなく、乳癌を含む癌全体に対する治療の新たな選択肢として期待され得る。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者等は、癌細胞表面に存在する各種蛋白質分子を種々検討する中で、CD239が従来報告されていない乳癌組織で強く発現していることを明らかにした。CD239を特異的に認識する抗体は、HER2の発現の有無とは独立して、CD239を発現する乳癌細胞に高い親和性で結合した。さらに、ジフテリア毒素を結合させた抗CD239抗体を作製して検討した結果、この抗体がCD239を高発現する細胞において内在化され、癌細胞の増殖抑制に有効であることを見出した。
【００１２】
すなわち、本発明は以下を提供するものである。
１．ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドと、細胞毒性を有する薬剤との複合体であることを特徴とする抗癌剤。
２．ポリペプチドが、ヒトCD239に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体である、上記１記載の抗癌剤。
３．ポリペプチドが、以下の（ａ）〜（ｉ）：
（ａ）配列番号１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号３に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号４に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号５に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号６に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｂ）配列番号７に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号１０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｃ）配列番号１５〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｄ）配列番号１９に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２０に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｅ）配列番号２２に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｆ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチド、
（ｇ）配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２５に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２６に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号２７に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号２８に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号２９に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3、
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、
（ｈ）配列番号３０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号３１に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含む抗体又はその抗原結合性断片若しくは抗原結合性誘導体、及び
（ｉ）配列番号３２で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチド
から選択される、上記２記載の抗癌剤。
４．薬剤がジフテリア毒素である、上記１〜３のいずれか記載の抗癌剤。
５．乳癌に対する増殖抑制効果を有する、上記１〜４のいずれか記載の抗癌剤。
６．上記１〜５のいずれか記載の抗癌剤を含有する医薬組成物。
７．以下の（ａ）〜（ｉ）：
（ａ）配列番号１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号３に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号４に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号５に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号６に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3
を含むアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号７に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号１０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号１５〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号１９に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２０に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3
を含むアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号２２に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域を含むアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２５に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２６に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号２７に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号２８に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号２９に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3、
を含むアミノ酸配列、
（ｈ）配列番号３０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号３１に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むアミノ酸配列、及び
（ｉ）配列番号３２で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列
から選択されるアミノ酸配列を有する組換え蛋白質。
８．更に配列番号３３〜３６から選択されるアミノ酸配列からなるシグナルペプチドを含む、上記７記載の組換え蛋白質。
９．上記７又は８記載の組換え蛋白質をコードするポリヌクレオチド。
１０．上記９記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
１１．上記１０記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
１２．上記１１記載の宿主細胞を培養し、発現した蛋白質を回収することを含む、上記７又は８記載の組換え蛋白質の製造方法。
１３．ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを含む、CD239発現癌細胞を検出するためのマーカー。
１４．ポリペプチドが上記７記載の組換え蛋白質である、上記１３記載のマーカー。
１５．ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを含む、CD239発現癌細胞に対して細胞毒性を有する薬剤を送達するための担体。
１６．ポリペプチドが上記７記載の組換え蛋白質である、上記１５記載の担体。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の抗癌剤は、CD239を高発現する癌細胞の増殖を抑制することができる。また、本発明で提供されるポリペプチドは、CD239発現癌細胞のマーカーとして、また癌細胞に薬物を送達するための担体として利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１−１】ヒト乳癌組織におけるCD239とHer2の発現を示す。（ａ）マウス抗CD239モノクローナル抗体（87207）とウサギ抗Her2モノクローナル抗体を用いた乳癌組織における蛍光免疫染色の例。患者番号22では、Her2およびCD239の強い発現が観察された。患者番号8では、CD239のみの強い発現が観察された。
【図１−２】ヒト乳癌組織におけるCD239とHer2の発現を示す。（ｂ）病理診断がなされたヒト乳癌組織におけるCD239とHer2の発現。強い発現を＋＋＋、中間の発現を＋＋、弱い発現を＋、発現していない場合を−として分類した。（ｃ）各ヒト乳癌組織をCD239およびHer2発現のレベルでプロットした結果。
【図２】ヒト乳癌細胞株（SKBR3細胞）におけるCD239とHer2の発現を示す。（ａ）マウス抗CD239モノクローナル抗体（87207；左パネル）と抗Her2モノクローナル抗体（Herceptin；右パネル）を用いて、フローサイトメトリーを行った。実線のヒストグラムはそれぞれの抗体、グレーのヒストグラムはコントロール（抗体なし）を示す。SKBR3細胞は、CD239とHer2の双方を強く発現していた。（ｂ）マウス抗CD239モノクローナル抗体による細胞増殖アッセイの結果。ジフテリア毒素を結合させたマウス抗CD239モノクローナル抗体（87202、87207、BRIC221）、およびHerceptinは乳癌細胞株（SKBR3）の細胞増殖を抑制した。＊＜0.01
【図３】CD239に結合するファージ抗体の単離を示す。（ａ）CD239に結合するファージ抗体のバイオパンニング。ヒト肝細胞癌患者の末梢血由来のファージ抗体ライブラリーを用いて、固相化した可溶化型CD239組換え蛋白質に対するバイオパンニングを３ラウンド行った。結合したファージ抗体はELISAにより検出した。３ラウンド目でCD239に結合するファージが濃縮された。（ｂ）抗CD239ファージ抗体のクローニング。13種類のファージクローンを単離した。WildはscFvライブラリーを持たないオリジナルのファージを加えたコントロール、Noneはファージも加えないコントロールを示す。
【図４−１】クローニングした抗CD239ファージ抗体におけるscFvのアミノ酸配列を示す。各ファージクローンからDNAを抽出し、その塩基配列からscFvのアミノ酸配列を明らかにしたところ、３つのグループ（グループａ〜ｃ）に分けられた。CD239に結合するscFv-Fcの作製に利用したクローンC7を含むグループａの配列を示す。配列アライメントの結果、グループａのクローンから得られたscFvのアミノ酸配列は非常に類似していた。異なるアミノ酸を四角で囲んで示す。
【図４−２】クローニングした抗CD239ファージ抗体におけるscFvのアミノ酸配列を示す。グループｂ及びｃの配列を示す。グループｂの4種のクローンから得られたscFvは全て同じアミノ酸配列を有していた。
【図５】C7-Fcの構造及び細胞中での発現を示す。（ａ）scFv-Fcの模式図。（ｂ）C7-Fcの分泌に効果的なシグナル配列の検討。マウスIgGκ鎖（配列番号３３）、ヒトラミニンγ２鎖（配列番号３４）、ヒトLu／B-CAM（配列番号３５）、ヒトα-ディストログリカン（配列番号３６）のシグナルペプチド配列を使用した。（ｃ）各シグナルペプチドによる分泌効率の比較。ヒトラミニンγ２鎖のシグナルペプチドを融合したC7-Fcの分泌の効率が他のシグナルペプチドよりも優れていた。細胞による違いは見られなかった。
【図６】抗CD239組換え抗体（C7-Fc）の精製及びCD239蛋白質との結合親和性を示す。（ａ）精製した抗CD239組換え抗体（C7-FC）のSDS-PAGE。培養上清からプロテインＡセファロースにより精製されたC7-FCを、10％ゲル、還元条件下で電気泳動により分離した。Fcはコントロール組換え蛋白質。（ｂ）精製した抗CD239組換え抗体（C7-FC）のELISA。C7-Fcが可溶化型CD239組換え蛋白質に結合することを示している。（ｃ）C7-Fcのセンサグラム。（ｄ）C7-Fc、87202、BRIC221の可溶化型CD239組換え蛋白質に対する親和性解析。
【図７】細胞表面のCD239に対する抗CD239組換え抗体（C7-Fc）の結合を示す。CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）およびコントロール細胞（コントロール／HT1080F）を用いて、C7-Fcと細胞表面に発現するCD239の結合活性をフローサイトメトリーにより評価した。C7-Fcは特異的に細胞表面のCD239を認識した。
【図８】ジフテリア毒素を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）のCD239高発現乳癌細胞株に対する細胞増殖阻害活性を示す。（ａ）乳癌細胞株（SKBR3、BT474）におけるCD239の発現。C7-FcとFcを用いて、フローサイトメトリーにより解析した。SKBR3細胞とBT474細胞は、CD239を強く発現していた。（ｂ）ジフテリア毒素を結合させたC7-Fcの細胞増殖阻害活性。SKBR3細胞とBT474細胞はともに細胞増殖阻害を受けたが、CD239の発現の強いSKBR3のほうがより効果的に細胞増殖阻害を受けた。＊＜0.01
【図９】CD239を強制発現させた乳癌細胞株に対するジフテリア毒素を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）の細胞増殖阻害活性を示す。（ａ）MCF7細胞、及びこれにCD239を強制発現させたCD239（Lu）／MCF7細胞におけるCD239の発現。C7-FcとFcを用いて、フローサイトメトリーにより解析した。MCF7細胞におけるCD239の発現は、SKBR3細胞とBT474細胞などに比べて低いが、強制発現させたCD239（Lu）／MCF7細胞ではSKBR3細胞とBT474細胞と同等のレベルで発現していることが確認できた。（ｂ）ジフテリア毒素を結合させたC7-Fcの細胞増殖阻害活性。MCF7細胞の増殖抑制は見られなかったが、CD239（Lu）／MCF7細胞ではC7-Fcとジフテリア毒素の組合せで細胞増殖阻害を受けた。この結果は、ジフテリア毒素を結合させたC7-Fcが細胞増殖阻害作用が、CD239を高く発現する細胞に対して特異的に働くことを示している。＊＜0.01
【図１０】ジフテリア毒素を結合させたC7-Fcのin vitro及びin vivoにおける細胞増殖阻害活性を示す。（ａ）ヌードマウスに移植するCD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）とコントロール細胞（コントロール／HT1080F）に対するジフテリア毒素を結合させたC7-Fcのin vitroにおける細胞傷害活性。CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）に対して傷害活性が示された。＊＜0.01（ｂ）担癌マウスに対するジフテリア毒素を結合させたC7-Fcの投与。CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）とコントロール細胞（コントロール／HT1080F）をヌードマウスに移植し、担癌マウスを作製した。腫瘍塊に対してIT投与を行った。投与前の腫瘍塊の大きさに違いは見られなかったが、投与後７日目には有意な差がみられた。＊＜0.01
【発明を実施するための形態】
【００１５】
以下、本発明をより詳細に説明する。
本発明者等は、下記実施例で詳述するように、ヒト乳癌組織および乳癌細胞株SKBR3において、CD239が強く発現することを見出した（図１−１、図１−２、２ａ）。
【００１６】
マウス抗CD239モノクローナル抗体を用いてCD239発現乳癌細胞に対する効果を検討したところ、抗体単独では細胞傷害活性がないが、細胞膜結合ドメインを欠損したジフテリア毒素を結合させたマウス抗CD239モノクローナル抗体は、細胞内に内在化され、ジフテリア毒素が効果を示し、癌細胞増殖阻害剤として有効であることを見出した（図２ｂ）。
【００１７】
次いで、本発明者等は、肝細胞癌患者の末梢血より抗体重鎖可変領域（VH鎖またはVH）と抗体軽鎖可変領域（VL鎖またはVL）をコードする遺伝子を発現したヒト単鎖Fvファージディスプレイライブラリーから、ヒトCD239に結合するファージ抗体をクローニングし（図３ａ、ｂ）、抗ヒトCD239scFv抗体分子（抗体断片）をコードする遺伝子の塩基配列およびそのアミノ酸配列を明らかにした（図４−１及び４−２）。さらに、このscFv抗体とヒトIgG1 Fcを融合した組換え抗体（C7-Fc）を作製した（図５、６、７）。
【００１８】
マウスモノクローナル抗体で得られた知見と同様に、組換え抗体C7-Fc単独では細胞増殖阻害活性が見られなかったが、ジフテリア毒素を結合させたC7-Fcは細胞内に内在化され、ジフテリア毒素が効果を示し、抗癌剤として有効であることが見出された（図８）。この効果は、CD239の発現が弱い細胞に対しては示されず、発現が高い細胞にのみ細胞増殖阻害活性を示すことが判明した（図９）。ジフテリア毒素を結合させたC7-Fcは、in vitroだけでなく、in vivoでも細胞増殖阻害活性を示した（図１０）。
【００１９】
本発明は、一実施形態において、ヒトCD239（すなわちルテラン式血液型抗原）を特異的に認識し得るポリペプチドと、細胞毒性を有する薬剤との複合体であることを特徴とする抗癌剤を提供する。
【００２０】
ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドとしては、より具体的には、例えばヒトCD239と特異的に結合し得る抗体、特にIgG抗体、又はその抗原結合性断片及び抗原結合性誘導体が挙げられる。例えば、ポリペプチドは、ヒトCD239に特異的に結合する完全抗体、Fab、Fab'、F(ab')2断片、また重鎖可変領域（VH）及び軽鎖可変領域（VL）をリンカーで連結した一本鎖（single-chain）抗体断片（scFv断片）等であり得る。一本鎖とすることで、例えば完全抗体等の場合と比較して、組換え抗体を作製する場合の操作が省力化され、またファージ等での作製効率を高めることができる。当分野において、scFvは抗体断片として広く認識されているが、厳密にはリンカーで可変領域を連結した合成ポリペプチドであるため、抗原結合性誘導体と記載することが適切とも考えられる。本発明において使用可能なポリペプチドとして、これらの断片及び誘導体、更に抗原結合性に影響しない範囲で当業者に理解され得る誘導体、例えば抗体精製を容易にしたり安定性を高めたりするための修飾が施された誘導体も挙げられる。本明細書においては、上記の抗原結合性断片及び抗原結合性誘導体を、便宜的に「抗体」と記載する場合がある。
【００２１】
また、例えばペプチドライブラリーを用いたスクリーニングにより、ヒトCD239を特異的に認識して結合し得るポリペプチドを取得することができる。更に、例えばラミニンα5鎖を含むラミニン、又はその断片のポリペプチドも、本発明のポリペプチドとして好適に使用し得る。
【００２２】
上記ポリペプチドとヒトCD239との結合は、例えばin vitroにおいては、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ELISA）、BIAcore結合アッセイ等を用いて確認することができる。あるいはまた、蛍光等で標識したポリペプチドを用い、生体サンプル中のCD239の存在を確認することができる。
【００２３】
scFv断片を使用する場合、リンカーとしては、当分野で通常使用されるものであればいずれでも良く、特に限定するものではないが、例えば5〜25個、好ましくは10〜20個のアミノ酸残基からなるペプチドリンカーが挙げられ、(GGGS)n、(GGGGS)n（nは1〜4の整数を示す）、又は配列番号１４で示すアミノ酸配列からなるGSリンカー等を好適に使用することができる。また、上記のポリペプチドには、薬剤と複合体を形成させるために、例えば抗体重鎖定常領域のFc領域を連結させることもできる。Fcと結合させることで、血液中での安定化および半減期の延長、抗体依存性細胞傷害(ADCC: Antibody-Dependent-Cellular-Cytotoxicity)の誘導等も期待できる。
【００２４】
抗体は、ヒトに対して抗癌剤として、あるいはマーカーもしくは担体として使用することを考慮すれば、ヒト化抗体又はヒト抗体とすることが好ましく、ヒト抗体が特に好ましい。従って、本発明において好適に使用することができるポリペプチドは、ヒト抗体のフレームワーク領域（FR）と、CD239に対して高い結合親和性をもたらし得る相補性決定領域（CDR）とを含む抗体（又はその抗原結合性断片もしくは抗原結合性誘導体）であり得る。
【００２５】
尚、本明細書において、上記の「高い結合親和性」とは、特に限定するものではないが、CD239との結合において10-8M以下、好ましくは10-9M以下、より好ましくは10-10M以下のKD値を有するものであり得る。従って、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドは、ヒトCD239に対して上記の結合親和性を有することを特徴とする。
【００２６】
本発明者等は、下記実施例で実証するように、本発明のより具体的な例として、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドは、
配列番号１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号３に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号４に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号５に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号６に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3
を含むものであり得ることを見出した。これらのCDRの組合せを有する抗体は、下記実施例においてグループａとして記載する抗体群に該当する。
【００２７】
上記のグループａに含まれる抗体群は、重鎖及び軽鎖が全て同一のCDR配列を有し、かつFR1〜FR4のフレームワーク領域の配列も非常に類似し、同様の機能を有するものであり得る。従って、本発明で使用し得るポリペプチドは、
配列番号７に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号１０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むものであり得る。
【００２８】
本発明の別の例として、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドは、
配列番号１９に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２０に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3
を含むものであり得る。これらのCDRの組合せを有する抗体は、下記実施例においてグループｂとして記載する抗体群に該当する。
【００２９】
上記のグループｂに含まれる抗体群は、重鎖が全て同一のCDR配列を有し、かつフレームワーク領域の配列も非常に類似し、同様の機能を有するものであり得る。従って、本発明で使用し得るポリペプチドは、
配列番号２２に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域を含むものであり得る。グループｂのポリペプチドは軽鎖由来の配列をほとんど含んでいないが、当業者であれば、軽鎖が存在しない場合であっても抗原と結合し得ることは理解される（Trends in Biotechnology, 21, 484-490 (2003)を参照されたい）。
【００３０】
本発明の更に別の例として、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドは、
配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２５に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２６に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号２７に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号２８に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号２９に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3、
を含むものであり得る。これらのCDRの組合せを有する抗体は、下記実施例においてグループｃとして記載する抗体群に該当する。
【００３１】
上記のグループｃに含まれる抗体群は、重鎖及び軽鎖が全て同一のCDR配列を有し、かつFR1〜FR4のフレームワーク領域の配列も非常に類似し、同様の機能を有するものであり得る。従って、本発明で使用し得るポリペプチドは、
配列番号３０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号３１に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むものであり得る。
【００３２】
上記の配列特徴を有するポリペプチドが、リンカーで連結されたscFv断片である場合には、例えばヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドは、配列番号１５〜１８、２３及び３２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなるものであり得る。
【００３３】
当業者には理解されるように、本発明において使用できるポリペプチドは、CD239を特異的に認識可能なものであれば良く、CD239において認識されるエピトープの位置は特に限定されるものではない。例えば、上記のグループａ〜ｃに示す抗体群は、CD239の異なるエピトープを認識するものであり得る。また、下記実施例において同様にCD239との特異的結合が確認されたマウス抗体や、市販の抗CD239抗体も、それぞれ認識するエピトープは異なり得るが、CD239と特異的に結合し、複合体を形成した薬剤と共に癌細胞に内在化される限りにおいて、本発明において好適に使用され得る。
【００３４】
従って、本発明において、ポリペプチドは、市販の抗CD239抗体等を利用してもよく、あるいはまた、上記の配列情報に基づいて、目的の結合特異性を有するポリペプチドを合成することもできる。更に、これらのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを適切な宿主細胞に導入して発現させ、組換え蛋白質として得ることができる。この場合、ポリヌクレオチドはDNAであってもRNAであっても良く、また宿主細胞への導入手段は当分野で使用されているものを適宜利用することができる。ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するためのベクターとして、ウイルスベクター、プラスミドベクター、ファージベクター等を適宜使用することができる。宿主細胞としては、例えば大腸菌等の細菌、酵母、昆虫細胞、動物細胞等を利用することができる。
【００３５】
例えば、下記実施例に記載するように、本発明に使用するポリペプチド（実施例ではC7-Fc）をコードするDNAを、シグナル配列、ポリA配列、更にプロモーター配列等の調節配列、選択マーカーと共に含むベクターに組み込んで、適切な宿主細胞中に導入して培養することで、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを組換え蛋白質として取得することができる。
【００３６】
ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを組換え蛋白質として得る態様において、好ましいポリペプチドは、上記の配列番号で特定されるポリペプチドである。すなわち、本発明はまた、ヒトCD239を特異的に認識し得る上記のアミノ酸配列を有する組換え蛋白質を提供する。
【００３７】
本発明の組換え蛋白質は、例えば以下の（ａ）〜（ｉ）：
（ａ）配列番号１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号３に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号４に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号５に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号６に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3
を含むアミノ酸配列、
（ｂ）配列番号７に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号１０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むアミノ酸配列、
（ｃ）配列番号１５〜１８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
（ｄ）配列番号１９に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２０に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２１に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3
を含むアミノ酸配列、
（ｅ）配列番号２２に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域を含むアミノ酸配列、
（ｆ）配列番号２３で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列、
（ｇ）配列番号２４に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR1、
配列番号２５に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR2、及び
配列番号２６に示すアミノ酸配列からなるVH-CDR3、
及び
配列番号２７に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR1、
配列番号２８に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR2、及び
配列番号２９に示すアミノ酸配列からなるVL-CDR3、
を含むアミノ酸配列、
（ｈ）配列番号３０に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体重鎖可変領域、
及び
配列番号３１に示すアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して5個以下のアミノ酸の付加、置換及び欠失を有するアミノ酸配列からなる抗体軽鎖可変領域
を含むアミノ酸配列、及び
（ｉ）配列番号３２で示されるアミノ酸配列、または該アミノ酸配列に対して90％以上の配列同一性を有するアミノ酸配列
から選択されるアミノ酸配列を有する。
【００３８】
本発明の組換え蛋白質は更に、IgGκ鎖、ラミニンγ２鎖、Lu／B-CAM、α-ディストログリカン等に由来するシグナル配列と連結させて発現させることができる。好ましいシグナル配列は、限定するものではないが、例えばマウスIgGκ鎖（配列番号３３）、ヒトラミニンγ２鎖（配列番号３４）、ヒトLu／B-CAM（配列番号３５）、ヒトα-ディストログリカン（配列番号３６）由来のものであり、より好ましくはヒトラミニンγ２鎖（配列番号３４）由来のものである。
【００３９】
上記のポリペプチドを組換え蛋白質として得るために、本発明はまた、これらの本発明で開示される組換え蛋白質をコードするポリヌクレオチドを提供する。
【００４０】
本発明は更に、上記ポリヌクレオチドを含む発現ベクター、該ベクターを含む宿主細胞も提供する。
【００４１】
本発明は更に、上記宿主細胞を培養し、発現した蛋白質を回収することを含む、本発明の組換え蛋白質の製造方法も提供する。
【００４２】
ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドと結合して複合体を形成する薬剤としては、細胞、特に癌細胞に対して細胞毒性を示し得る毒素等の蛋白質、抗有糸分裂薬、アルキル化剤、抗生物質、代謝拮抗薬、アポトーシス薬、アルカロイド剤、タキソイド剤、放射性同位元素等が挙げられる。毒素としては、例えばジフテリア毒素、サポリン毒素、緑膿菌毒素、アブリン毒素、リシンＡ毒素、腫瘍壊死因子、インターフェロン-γ等が挙げられる。薬物には、抗有糸分裂薬、アルキル化剤、抗生物質、代謝拮抗薬、アポトーシス薬、アルカロイド剤、タキソイド剤、およびこれらの組合せから選択される。放射性同位元素としては90Ｙ、131Ｉ等が挙げられる。本発明において特に好適に使用できる薬剤は、ジフテリア毒素である。
【００４３】
ポリペプチドと薬剤との連結方法は、限定されるものではないが、例えば共有結合によって結合させることが好ましく、例えばリンカーを介してポリペプチドに薬剤が付加されていてもよい。リンカーは、ペプチド、脂肪酸、脂肪酸エステルなどの、薬物とポリペプチドとの連結部を構成できる任意の物質であり得る。リンカーは、ポリペプチドの立体構造を阻害しないためのスペーサーとして、あるいはプロテアーゼ認識部位を含む切断可能な連結部分として、薬物とポリペプチドとの間に挿入されたものでもよい。
【００４４】
また、例えば薬剤としてジフテリア毒素を使用する場合、目的の細胞に対してのみ毒性を発揮させるために、例えば天然のジフテリア毒素が有する細胞結合ドメインを欠損させ、その代わりにIgG結合分子、例えばProtein G等を結合させたものを作製することで、上記のFc領域を有するポリペプチドと複合体を形成するようにすることができる（例えばBiochem．Biophys．Res．Commun．、2014、Vol．454、pp．600−603を参照されたい）。
【００４５】
本発明の抗癌剤は、CD239を発現する癌細胞に対して特異的に作用し得る。癌細胞としては、例えば乳癌、皮膚癌、肝臓癌、大腸癌、卵巣癌等が挙げられる。本発明の抗癌剤は、特に乳癌に対する増殖抑制効果を有する。
【００４６】
本発明の抗癌剤は、単独で使用することもできるが、異なるメカニズムの抗癌剤及び抗癌治療と組み合わせて使用することができる。
【００４７】
本発明はまた、単独又は他の有効成分と組み合わせて上記の本発明の抗癌剤を含有する医薬組成物を提供する。
【００４８】
本発明の抗癌剤又は医薬組成物は、局所投与又は全身投与することができ、投与形態を限定するものではないが、例えば乳癌治療の場合には、患部若しくは患部の近辺に注射又は注入により投与することが好ましい。医薬組成物には、本発明の抗癌剤及び他の有効成分の他に、投与形態に応じて、当分野で通常使用される担体、賦形剤、緩衝剤、安定化剤等を含めることができる。本発明の抗癌剤の投与量は、患者の体重、年齢、疾患の重篤度等に応じて変動するものであり、特に限定するものではないが、例えば0.001〜10mg/kg体重の範囲で１日１回〜数回、２日毎、３日毎、１週間毎、２週間毎、毎月、２カ月毎、３カ月毎に投与することが可能である。
【００４９】
本発明は更に、別の実施形態において、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを含む、CD239発現癌細胞を検出するためのマーカーを提供する。本発明のマーカーは、単独で、又は他のマーカーと組み合わせて、例えばCD239を高発現する乳癌の検出のために使用することができる。例えば、本発明のマーカーは、血液や生検サンプル等の生物学的サンプル中のCD239の存在を検出することができる。あるいはまた、本発明のマーカーは、CD239を発現する癌の存在が疑われる被験者の体内に注入して、CD239を発現する細胞の存在を検出することができる。マーカーとして使用する場合、CD239とポリペプチドとの結合を、当分野で通常利用される手段を用いて検出することができる。また、ポリペプチドは、例えばCu64、In111、I131等の放射性物質で標識することもできる。
【００５０】
本発明は更に、別の実施形態において、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドを含む、CD239発現癌細胞に対して細胞毒性を有する薬剤を送達するための担体を提供する。本発明の担体は、抗原としてのCD239と共に内在化される抗CD239抗体であり得る。このような担体は、抗体-薬物結合体のプラットフォームとなり得る。
【００５１】
これらの実施形態においても、ヒトCD239を特異的に認識し得るポリペプチドは、例えば上記した通りの、ヒトCD239と特異的に結合し得る抗体、特にIgG抗体、又はその抗原結合性断片及び抗原結合性誘導体であり、上記の組換え蛋白質であり得る。
【実施例】
【００５２】
以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【００５３】
［実施例１：乳癌患者組織におけるCD239とHer2の発現］
乳癌組織（BioChain、Newark、CA、患者番号1〜34）に対して、マウス抗CD239モノクローナル抗体（87207、R＆D Systems、Minneapolis、MN）とウサギ抗Her2モノクローナル抗体（29D8、Cell Signaling Technology、Danvers、MA）を用いた蛍光免疫染色を行った。
【００５４】
まず、組織切片を10％のヤギ血清を含む1％ BSA／PBS(-)で10分間ブロッキングを行った。ブロッキングした切片にマウス抗CD239モノクローナル抗体（10μg/ml）とウサギ抗Her2モノクローナル抗体（400倍希釈）の溶液を添加し、室温で１時間インキュベーションした。１時間後、それらの溶液を取り除き、Alexa Fluor 488で標識された抗-マウスIgG抗体とAlexa Fluor 594で標識された抗-ウサギIgG抗体を加えてさらに１時間インキュベーションし、結合した抗体を蛍光顕微鏡（Keyence、Osaka、Japan）で観察した（図１−１(a)）。
【００５５】
各組織について、強い発現を＋＋＋、中間の発現を＋＋、弱い発現を＋、発現していない場合を−として分類した結果を図１−２(b)に示す。また、各組織におけるCD239の発現とHer2の発現を比較した（図１−２(c)）。その結果、Her2を強く発現する乳癌組織はCD239の発現も強いことが明らかとなった。一方、CD239を強く発現する乳癌組織の中には、Her2の発現を伴わないものもみられた。
【００５６】
このことから、CD239はHer2陰性の乳癌において新たな治療標的分子となる可能性が示された。また、CD239発現癌細胞の新たなマーカーとなり得ることも示された。
【００５７】
［実施例２：乳癌細胞株におけるCD239とHer2の発現］
フローサイトメーターを用いて、乳癌細胞株SKBR3（ATCCより購入）におけるCD239とHer2の発現を解析した（図２(a)）。SKBR3細胞は、細胞解離用バッファー（Life Technologies、Carlsbad、CA）にて剥離し、1x107細胞/mlになるように0.1％BSA／1mM EDTA／PBS(-)に懸濁した。100μl／チューブとなるように分注し、マウス抗CD239モノクローナル抗体（87207）およびトラスツズマブ（Herceptin: Chugai、Tokyo、Japan）を10μg/mlとなるように加え、氷上にて１時間反応させた。次に、0.1％BSA／1mM EDTA／PBS(-)により細胞を洗浄し、Alexa488で標識した抗マウスIgG抗体および抗ヒトIgG抗体でそれぞれ１時間反応させた。さらに洗浄後、FACScaliburフローサイトメーター（Becton Dickinson、San Jose、CA）を用いて解析を行った。
【００５８】
その結果、SKBR3細胞において、CD239の発現はHer2と同様に非常に強いことが明らかとなった。
【００５９】
［実施例３：ジフテリア毒素を結合させたマウス抗CD239モノクローナル抗体による乳癌細胞増殖阻害活性の解析］
マウス抗CD239モノクローナル抗体に結合させるジフテリア毒素（DT3C）として、膜貫通ドメイン、毒素ドメイン、プロテインＧ由来のIgG結合領域を含むものを使用した（Biochem．Biophys．Res．Commun．、2014、Vol．454、pp．600−603）。
【００６０】
細胞増殖アッセイには、SKBR3細胞を用いた。細胞培養は、MacCoy’5A培地にlow IgGの牛胎児血清（Life Technologies、Carlsbad、CA）を加えたものを使用した。細胞を96ウェルプレートに播種し、１日間の培養後、最終濃度15nMとなるようにマウス抗CD239モノクローナル抗体（87202、87207：R＆D Systems、Minneapolis、MN； BRIC221：Serotec、Oxford、UK）または等モルのジフテリア毒素(DT3C)を結合させた抗体を添加した。４日間の培養を行い、生存および増殖している細胞数を、MTT（Dojin、Kumamoto、Japan）により定量化した。生成したホルマザンを溶解し、570nmの吸光度を測定した。
【００６１】
その結果、単独のマウス抗CD239モノクローナル抗体はSKBR3細胞の増殖に影響を与えなかったが（図２(b)）、マウス抗CD239モノクローナル抗体にジフテリア毒素（DT3C）を結合させると、細胞の増殖が阻害された。このことは、細胞表面上のCD239が細胞内に取り込まれる内在化が起こっていることを示している。
【００６２】
［実施例４：肝細胞癌患者の末梢血からのファージ抗体ライブラリーの構築と抗CD239ファージ抗体のスクリーニング］
ファージライブラリーの構築は、J．D．Marksら（J．Mol．Biol．、1991、Vol．222、pp．581−597）により報告されている方法を参考に、４名の肝細胞癌患者の末梢血を出発材料に構築した。ライブラリーは1.85×108クローンの多様性を有していた。
【００６３】
バイオパンニングにより、CD239に結合するファージの濃縮を行った（図３(a)）。ELISAプレート（Maxisorp、ThermoFisher Scientific、Waltham、MA）に、可溶化型CD239組換え蛋白質（J．Biol．Chem．、2002、Vol．277、pp．44864−44869）を0.5μg／mlの濃度で、４℃で一晩かけて固定化した。ブロッキングバッファーは0.5％BSA／PBS(-)を用い、ブロッキングを２時間、室温で行った。ブロッキング後、一回のみブロッキングバッファーで、その後は洗浄用バッファー（0.05％Tween20、PBS(-)）で洗浄した。
【００６４】
scFvライブラリーを含むファージ（1.0×1010（cfu））を0.5％BSA／PBS(-)に懸濁し、BSAで固定化したウェルに加えて30分間の非特異的な吸着を２回行った後、可溶化型CD239組換え蛋白質を固定化したウェルに移し、１時間、室温で反応させた。結合したファージは、洗浄用バッファーで５回洗浄した後、グリシン-HCl（pH2.0）で溶出し、Tris-HCl（pH 9.1）で中和した。溶出したファージは、E．coli TG-1に感染させ、2TYAGプレート（2TY培地、1.5％アガー、２％グルコース、100μg／ml アンピシリン）に播き、30℃で一晩培養した。培養後、さらに2TY培地で増殖し、M13KO7 ヘルパーファージをMOI＝５で加え30分間、37℃で静置し、感染させた。1000×g、10分間の遠心後、2TYAK（2TY培地、100μg/ml アンピシリン、50μg/ml カナマイシン）でペレットを懸濁し、37℃で一晩培養した。培養後、1000×g、10分間の遠心で回収した上清に0.2容量の2.5M NaCl／20％PEG 6000を混合することでファージを調製し、さらに次のラウンドに用いた。
【００６５】
可溶化型CD239組換え蛋白質を用いたバイオパニングでは、３ラウンドのセレクションを行った。ブロッキングバッファーは、１回目および２回目のラウンドでは0.5％BSA／PBS(-)を、３回目のラウンドでは5％スキムミルク／PBS(-)を用いた。可溶化型CD239組換え蛋白質は、１回目のラウンドでは0.5μg／mlの濃度で、２回目および３回目のラウンドでは0.25μg／mlの濃度で、ELISAプレートに固定化した。標的抗原へのファージ反応後の洗浄は、１ラウンドごとに５回ずつ回数を増やした。また、３回目のラウンドでは吸収抗原としてIgAを用いた。
【００６６】
バイオパンニングにより濃縮されたファージは、大腸菌に感染させてコロニーを形成させた。形成されたコロニーをランダムにピックアップし、2TYAG（2TY培地、２％グルコース、100μg／ml アンピシリン）で、37℃で一晩培養した。培養物の一部を2TYAGに混合し、1.5時間、37℃で培養し、さらにM13KO7ヘルパーファージをMOI＝５で加えて30分間、37℃で感染させた。1000×g、10分間の遠心後、ペレットを2TYAK（2TY培地、100μg／ml アンピシリン、50μg／ml カナマイシン）に懸濁し、37℃で一晩増殖させた。2150×g、10分間、４℃の遠心後、上清を回収し、0.2容量の2.5M NaCl／20％PEG 6000と混合することで、クローンファージを単離した。
【００６７】
単離したクローンファージは、ELISAを行い、CD239に対する特異性を確認した（図３(b)）。ELISAプレートに、可溶化型CD239組換え蛋白質を４℃で一晩、もしくは室温で２時間かけて固定化した。ブロッキングは、0.5％BSA／PBS(-)を用いて２時間、室温で行った。ブロッキング後、一回のみブロッキングバッファーで、その後は洗浄用バッファーで洗浄した。各ファージは、約1×109（cfu）となるように各ウェルに加えて１時間、室温で反応させた。結合したファージを検出するため、Anti−Filamentous Phages M13 fd F1抗体［B62−FE2］（ビオチン）（Abcam、Cambridge、UK）とペルオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（VECTOR、Burlingame、CA）の複合体を0.5％BSA／PBS(-)で希釈したものを用いた。希釈した複合体とファージを１時間、室温で反応させ、TMB溶液（CALBIOCHEM、San Diego、CA）で30分間の発色を行い、1N HClで発色を停止した。450nmの吸光度は、マイクロプレートリーダー（BIO-RAD、Hercules、CA）により測定した。
【００６８】
14種類の単離したファージクローンのscFv遺伝子は、BigDye Terminator Cycle Sequencing Kit（Life Technologies、Carlsbad、CA）を用いて決定した（図４−１及び４−２）。解析された塩基配列からアミノ酸配列を決定し、VHおよびVLでアライメントした結果、大きく３つのグループ（グループa〜c）に分けられることが明らかとなった。以下の表１は、各ファージクローンに含まれるscFv及びその部分領域のアミノ酸配列を配列番号で整理したものである。
【００６９】
【表１】
2017095417.tif 000003
【００７０】
表１に示すように、異なるクローンから同一のCDR配列を有する複数種のscFvを得ることができた。これは、由来するクローンが類似したものである可能性、ライブラリー作製段階で変異が導入された可能性等が考えられるが、高い特異性でCD239に結合できる配列のみが選択されたことを示すものである。
【００７１】
また、異なるクローンから得られたscFvの可変領域全体の配列も非常に類似したものであった。グループａでは、重鎖可変領域（VH）で3種のアミノ酸配列（配列番号７〜９）、軽鎖可変領域（VL）で4種のアミノ酸配列（配列番号１０〜１３）が見出されたが、それぞれフレームワーク領域に2個以下、3個以下のアミノ酸の相違があるのみであった。
【００７２】
［実施例５：ヒトIgG1 Fcを融合した抗CD239scFvの発現と精製］
抗CD239ファージ抗体のDNAは常法に従って抽出し、テンプレートとしてscFv（クローンC7）をコードするDNAをPCRによって増幅した。抗CD239scFv-Fc（C7-Fc、図５(a)）は、生体内に存在しない抗体の形態をとり、培養細胞から効率的に分泌されない可能性が考えられた。従って、C7-Fcを培養細胞から効率的に分泌させるため、シグナルペプチドの選択を行った。シグナルペプチドには、マウスIgGκ鎖（配列番号３３）、ヒトラミニンγ２鎖（配列番号３４）、ヒトLu／B-CAM（配列番号３５）、ヒトα-ディストログリカン（配列番号３６）の配列を利用した（図５(b)）。各シグナルペプチドをscFvに融合するため、二つのDNA断片にまたがるプライマーをデザインし、各シグナルペプチドとscFvのDNAをテンプレートとして再度PCRを行った。その際、ヒトIgG1 Fcをコードする配列が組み込まれた発現ベクター（J．Biol．Chem．、2007、Vol．282、pp．14853-14860）とフレームが合うように、適切な制限酵素サイトをDNA断片の両端にデザインし、選択のためにゼオシン耐性遺伝子も組み込んだ。
【００７３】
ヒトIgG1 Fcを融合した抗CD239scFv（C7-Fc）を発現するプラスミドは、Lipofectamin2000（Life Technologies、Carlsbad、CA）を用いて、HEK293細胞またはCHO細胞に導入した。ELISAにより発現を比較したところ、いずれの細胞においても、ヒトラミニンγ２鎖のシグナルペプチドが、効果的にC7-Fcを分泌していることが明らかとなった（図５(c)）。
【００７４】
C7-Fcを発現するHEK293細胞を、ゼオシン（Life Technologies、Carlsbad、CA）によって選択し、大量培養に使用した。C7-Fcを発現する細胞がコンフルエントなった状態で、５日間の無血清培養を行い、C7-Fcを含む培養上清を調製した。培養上清は、1000rpmで５分間の遠心分離をすることで細胞を除き、さらに10,000rpmで10分間の遠心分離をすることで細胞の破片等を除去した。次に、C7-Fcを含む培養上清は、80％となるように硫安を加え、塩析により濃縮した。濃縮された培養上清は、PBS(-)に対して透析を行った。透析後、10,000rpmで10分間の遠心分離を行い、不溶成分を除去した。次に、C7-Fcを含む上清をプロテインＡ-セファロース（GE Healthcare、Piscataway、NJ）を充填したカラムに添加し、１時間、４℃でローテーションしながら結合させた。結合したC7-Fcを、カラムボリュームの10倍量のPBS(-)で３回洗浄した後、グリシン-HCl（pH2.5）で溶出し、Tris-HCl（pH8.8）で中和した。各分画はPBS(-)に対して透析し、蛋白質定量によって濃度を測定した。さらに、精製されたC7-Fcは、SDS-PAGEによって純度を確認した（図６(a)）。
【００７５】
［実施例６：精製した抗CD239組換え抗体（C7-Fc）と抗原との結合性］
ELISAプレートに、可溶型CD239組換え蛋白質を４℃で一晩かけて固定化した。1％BSA／PBS(-)によりブロッキング処理を行った後、洗浄用バッファー（0.05％Tween20、PBS(-)）で希釈した抗CD239組換え抗体（C7-Fc）を加え、室温で１時間放置した。洗浄用バッファーで洗浄後、ビオチン標識した抗ヒトIgG Fc抗体（Jackson ImmunoResearch、West Grove、PA）を加え、１時間、室温で放置した。さらに、洗浄用バッファーで洗浄後、ペルオキシダーゼ標識したストレプトアビジンを加え１時間、室温で放置した。洗浄用バッファーで洗浄後、o-フェニレンジアミン二塩酸塩（SIGMA、St Louis、MO）を0.4mg／mlとなるように50mM リン酸-クエン酸バッファーに溶解し、使用直前にH2O2を0.012％となるように加え30分間、室温で発色させた。450nmの吸光度は、Multiskan Go（Thermo Fisher Scientific、Vantaa、Finland）を用いて測定した。
【００７６】
その結果、抗CD239組換え抗体（C7-Fc）は可溶型CD239組換え蛋白質と反応することが明らかとなった（図６(b)）。
【００７７】
抗CD239組換え抗体（C7-Fc）と可溶型CD239組換え蛋白質との結合解離定数を、Biacore T100 system（GE Healthcare）により測定した（図６(c)）。ランニングバッファーとしてHBS-EPバッファー（0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl、3mM EDTA、0.005％Tween20）を用い、25℃、流速50μl／分で行った。センサーチップCM5（GE Healthcare）上に、アミノカップリングで可溶型CD239組換え蛋白質を100応答単位（RU）となるように固定化した。抗CD239組換え抗体（C7-Fc）は、HBS-EPバッファーを用いて異なる濃度で希釈し、低濃度から２分間反応させ、測定を行った。センサーチップの再生は、グリシン-HCl（pH3.0）、５秒間、次にグリシン-HCl（pH2.2）、５秒間で行った。データ解析は、BIA evaluationを使用した。
【００７８】
その結果、可溶型CD239組換え蛋白質との結合解離定数は2.5x10-9Ｍであり、完全長の抗体であるマウス抗ルテランモノクローナル抗体と同等であることが明らかとなった（図６(d)）。
【００７９】
［実施例７：抗CD239組換え抗体（C7-Fc）と細胞上のCD239への結合のフローサイトメーターによる解析］
細胞表面のCD239に対する精製抗CD239組換え抗体（C7-Fc）の結合活性をフローサイトメーターにより解析した。細胞には、CD239を発現していないヒト線維肉腫由来のHT1080細胞（ヒューマンサイエンス研究資源バンク（HSRRB、Osaka、Japan）より購入）にCD239を強制発現させたものを使用した。CD239のLuフォームをコードするDNA（NCBI Accession No: NP_005572.2）は、Flp-In システム(Life Technologies、Carlsbad、CA)を用いてHT1080細胞に導入した(J． Biol． Chem．、2013、Vol．288、pp．30990-31001)。コントロール細胞をコントロール/HT1080F細胞、CD239を発現させた細胞をCD239(Lu)/HT1080F細胞とした。細胞は、細胞解離用バッファー（Life Technologies、Carlsbad、CA）にて剥離し、1x107細胞/mlになるように0.1％BSA／1mM EDTA／PBS(-)に懸濁した。100μl／チューブとなるように分注し、精製した抗CD239組換え抗体（C7-Fc）およびコントロール組換え蛋白質（Fc）を10μg/mlとなるように加え、氷上にて１時間反応させた。次に、0.1％BSA／1mM EDTA／PBS(-)により細胞を洗浄し、Alexa488で標識した抗ヒトIgG抗体で１時間反応させた。さらに洗浄後、FACScaliburフローサイトメーター（Becton Dickinson、San Jose、CA）を用いて解析を行った。
【００８０】
その結果、図７に示すように抗CD239組換え抗体（C7-Fc）はCD239を発現させたCD239／HT1080F細胞に強く結合し、コントロール細胞であるコントロール／HT1080Fには結合しないことから、細胞膜上に発現しているCD239に特異的に結合することが明らかとなった。
【００８１】
［実施例８：ジフテリア毒素結合抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）のCD239高発現乳癌細胞株に対する増殖阻害活性］
乳癌由来のSKBR3細胞とBT474細胞（ATCC、Manassas、VA）におけるCD239の発現はフローサイトメーターを用いて解析した。細胞は実施例７で記載したように調製し、抗CD239組換え抗体（C7-Fc）とコントロール組換え蛋白質（Fc）を使用した。
【００８２】
その結果、BT474細胞におけるCD239の発現は、SKBR3細胞よりもわずかに弱い程度で同様に強いことが明らかとなった（図８(a)）。
【００８３】
SKBR3細胞の増殖アッセイには、実施例３に記載したように、MacCoy’5A培地にlow IgGの牛胎児血清（Life Technologies、Carlsbad、CA）を加えたものを使用した。また、BT474細胞の増殖アッセイには、DMEM／F12培地にlow IgGの牛胎児血清を加えてものを使用し、その他は上記と同様にして行った。
【００８４】
その結果、単独の抗CD239組換え抗体（C7-Fc）はSKBR3細胞及びBT474細胞のいずれの増殖にも影響を与えなかったが、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させると増殖を抑制するようになった（図８(b)）。このことは、抗CD239組換え抗体が細胞表面上のCD239に結合した後に細胞内に取り込まれる内在化が起こっていることを示している。
【００８５】
［実施例９：CD239を強制発現させた乳癌細胞株に対するジフテリア毒素結合抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）の細胞増殖阻害活性］
乳癌由来のMCF7細胞（ヒューマンサイエンス研究資源バンク（HSRRB、Osaka、Japan）より購入）におけるCD239の発現をフローサイトメーターにより解析した。細胞は実施例７で記載したように調製し、抗CD239組換え抗体（C7-Fc）とコントロール組換え蛋白質（Fc）を使用した。MCF7におけるCD239の発現はSKBR3やBT474よりも弱いことが明らかとなった（図９(a)）。
【００８６】
MCF7細胞の増殖アッセイには、DMEM培地にlow IgGの牛胎児血清を加えたものを使用し、その他は上記に記述したように行った。その結果、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）による細胞増殖の抑制は見られなかった（図９(b)）。この結果は、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）は、CD239の発現が弱い細胞に対しては効果がないことを示唆した。ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）の増殖抑制が、CD239の発現量に依存することを検証するため、MCF7にCD239を強制発現させた細胞を作製した。CD239のLuフォームをコードするDNA（NCBI Accession No: NP_005572.2）をPCRによって増幅した。得られたDNA断片を、常法に従って、pIRESpuro3（Clontech、Mountain View、CA）に挿入し、発現ベクターを構築した。Lipofectamin2000（Life Technologies、Carlsbad、CA）を用いて、MCF7細胞にプラスミドを導入し、0.5μg／mlのピューロマイシン（Wako、Osaka、Japan）により発現細胞の選択およびクローニングを行った。
【００８７】
得られたCD239（Lu）／MCF7細胞におけるCD239の発現をフローサイトメーターにより解析した結果、強くCD239を発現するクローンが得られた（図９(a)）。このCD239（Lu）／MCF7細胞を用いて、増殖アッセイを行った。
【００８８】
その結果、MCF7では細胞の増殖阻害は見られなかったが、CD239（Lu）／MCF7細胞では増殖の阻害が見られるようになった（図９(b)）。このことから、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）が細胞増殖阻害活性を示すには、強いCD239の発現が必要であることが明らかとなった。
【００８９】
［実施例１０：ジフテリア毒素を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）のin vitro及びin vivoにおける細胞増殖阻害活性］
CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）およびコントロール細胞（Control／HT1080F）に対するジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）のin vitroにおける細胞増殖阻害活性を確認した。細胞増殖アッセイには、DMEM培地にlow IgGの牛胎児血清を加えたものを使用し、その他は実施例８で記載したように行った。
【００９０】
その結果、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）は、コントロール細胞（コントロール／HT1080F）に対して細胞増殖の抑制を示さないが、CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）に対して細胞増殖を阻害した（図１０(a)）。
【００９１】
CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）およびコントロール細胞（コントロール／HT1080F）をヌードマウス（KSN／slc、7-11週、♀、日本エスエルシー（Hamamatsu、Japan）より購入）に移植した。各細胞は、0.05％トリプシン／EDTAにて剥離し、6.66x107cells／mlとなるようにPBS(-)に懸濁した後、5x106cells／75μl／チューブとなるように分注し、使用まで氷上に静置した。使用直前に75μlのCultrex Basement Membrane Extract（Trevigen、Gaithersburg、MD）と混合し、これを25Gの注射針でマウス皮下に移植してゲル化させた。移植後１０日目に、腫瘍塊の大きさを測定し、（幅）２ ｘ 長さ ｘ 0.5により腫瘍塊の体積を求め、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）の投与を行った。投与前では、CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）およびコントロール細胞（コントロール／HT1080F）の腫瘍塊の大きさに有意な差は見られなかった（図１０(b)、左パネル）。５μgの抗CD239組換え抗体（C7-Fc）に等モルとなるジフテリア毒素（DT3C）を結合させ、20μlとなるようにPBS(-)で調製した。投与方法は、腫瘍塊に直接投与する腫瘍内注入（IT）により行った。
【００９２】
投与後７日目に、腫瘍塊の大きさを測定したところ、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）は、CD239強制発現細胞（CD239（Lu）／HT1080F）の腫瘍塊を有意に縮小させた（図１０(b)、右パネル）。この担癌マウスの結果は、CD239がin vivoでも腫瘍細胞内に内在化され、ジフテリア毒素（DT3C）を結合させた抗CD239組換え抗体（C7-Fc＋DT）が抗癌剤として有効であることを示した。
【産業上の利用可能性】
【００９３】
本発明の抗癌剤は、CD239を高発現する癌細胞の増殖を抑制することができる。また、本発明で提供されるポリペプチドは、CD239発現癌細胞のマーカーとして、また癌細胞に薬物を送達するための担体として利用することができると共に、ADCの薬物およびリンカーを探索するプラットフォームとして利用できる有用性がある。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４−１】
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【図４−２】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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