(57)【要約】      （修正有）【課題】より特異度の高い前立腺がん判定方法を提供する。【解決手段】被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークを指標とすることを含む、または、被検体の尿中の、メントール及びイソミントラクトンからなる群より選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を指標とすることを含む、前立腺がん判定方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークを指標とすることを含む、前立腺がん判定方法。
【請求項２】
前記クロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークの合計面積（被検面積）を指標とすることを含む、請求項１に記載の前立腺がん判定方法。
【請求項３】
前記被検面積が、非前立腺がん検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の対応するピークの合計面積（対照面積）よりも大きい場合に、前記被検体を前立腺がんであると判定することを含む、請求項１又は２に記載の前立腺がん判定方法。
【請求項４】
工程（ａ１）〜（ｃ１）を含む、請求項１〜３のいずれかに記載の前立腺がん判定方法：
（ａ１）被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラムを得る工程、
（ｂ１）工程（ａ１）で得られたクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークの合計面積（被検面積）と、非前立腺がん検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の対応するピークの合計面積（対照面積）とを比較する工程、及び
（ｃ１）被検面積が対照面積よりも大きい場合に、被検体を前立腺がんであると判定する工程。
【請求項５】
前記被検体の血中ＰＳＡ値が４．０ｎｇ／ｍＬ以上である、請求項１〜４のいずれかに記載の前立腺がん判定方法。
【請求項６】
前記尿試料が、前立腺触診を受けた後の被検体から採取された尿由来の試料である、請求項１〜５のいずれかに記載の前立腺がん判定方法。
【請求項７】
被検体の尿中の、メントール及びイソミントラクトンからなる群より選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を指標とすることを含む、前立腺がん判定方法。
【請求項８】
前記被検バイオマーカー量が、非前立腺がん検体の尿中の前記バイオマーカーの量（対照バイオマーカー量）よりも多い場合に、前記被検体を前立腺がんであると判定することを含む、請求項７に記載の前立腺がん判定方法。
【請求項９】
工程（ａ２）〜（ｃ２）を含む、請求項７又は８に記載の前立腺がん判定方法：
（ａ２）被検体の尿中の前記バイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を測定する工程、
（ｂ２）被検バイオマーカー量と、非前立腺がん検体の尿中の前記バイオマーカーの量（対照バイオマーカー量）とを比較する工程、及び
（ｃ２）被検バイオマーカー量が対照バイオマーカー量よりも多い場合に、被検体を前立腺がんであると判定する工程。
【請求項１０】
前記被検体の血中ＰＳＡ値が４．０ｎｇ/ｍＬ以上である、請求項７〜９のいずれかに記載の前立腺がん判定方法。
【請求項１１】
前記尿が、前立腺触診を受けた後の被検体から採取された尿である、請求項８〜１０のいずれかに記載の前立腺がん判定方法。
【請求項１２】
メントール及びイソミントラクトンからなる群より選択される少なくとも1種のバイオマーカーの検出剤を含有する、前立腺がん診断薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は前立腺がん判定方法、前立腺がん診断薬等に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本では、前立腺がんは、男性における発症率が最も高いがんであり、その発症者数は年間で約１０万人にも上る。また、食生活の欧米化や高齢化等に伴い、前立腺がんの発症率及びその発症者数は、今後も増加の一途を辿ることが予測されている。
【０００３】
前立腺がんの診断は、通常、血中の前立腺特異抗原（ＰＳＡ＝Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ａｎｔｉｇｅｎ）の濃度（ＰＳＡ値）に基づいて行われる。被検者の年齢によっても異なるが、一般に、ＰＳＡ値は、４．０ｎｇ／ｍＬ以上が異常値とされている。しかし、ＰＳＡ値は、前立腺肥大や炎症等に起因して異常値を示すこともあり、ＰＳＡ値が異常値である全ての被検者が前立腺がんである訳ではない。したがって、ＰＳＡ値が異常値である場合、超音波ガイド下の前立腺針生検による確定診断が行われる。
【０００４】
ところが、ＰＳＡ値が異常値の被検者に前立腺針生検を行っても、４．０〜１０ｎｇ／ｍＬの場合で２０〜４０％程度の被検者、１０ｎｇ／ｍＬ以上の場合で５０％程度の被検者にしか、前立腺がんは見つからない。また、前立腺針生検は、通常は、一泊二日程度の入院で施行されることが多く、被検者の負担が大きい。さらに、前立腺針生検は、侵襲性の高い検査であり、痛み、感染、血便、血尿、尿閉等の合併症を引き起こし得る。
【０００５】
このように、ＰＳＡ検査は特異度が低いので、該検査に基づく現行の診断方法では、実際には前立腺がんではないにも関わらずＰＳＡ値が異常値であった多くの被検者に対して、身体及び経済的負担や合併症リスクを伴う前立腺針生検を行っている。
【０００６】
一方、近年、訓練された犬が、尿のにおいから、前立腺がんを判別できることが報告されている（非特許文献１）。また、前立腺がんの各種診断マーカーが尿試料中に存在することが報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】THE JOURNAL OF UROLOGY, Vol.193, 1382-1387, April 2015.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、より特異度の高い前立腺がん判定方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は鋭意研究を行った結果、驚くべきことに、被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークを指標とすることにより、上記課題を解決できることを見出した。そして、これらのピークについてさらに解析を進めた結果、新規の、前立腺がん診断マーカを見出した。即ち、本発明は、下記の態様を包含する。
【００１０】
項１．  被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークを指標とすることを含む、前立腺がん判定方法．
項２．  前記クロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークの合計面積（被検面積）を指標とすることを含む、項１に記載の前立腺がん判定方法．
項３．  前記被検面積が、非前立腺がん検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の対応するピークの合計面積（対照面  積）よりも大きい場合に、前記被検体を前立腺がんであると判定することを含む、項１又は２に記載の前立腺がん判定方法．
項４．  工程（ａ１）〜（ｃ１）を含む、項１〜３のいずれかに記載の前立腺がん判定方法：
（ａ１）被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラムを得る工程、
（ｂ１）工程（ａ１）で得られたクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークの合計面積（被検面積）と、非前立腺がん検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の対応するピークの合計面積（対照面積）とを比較する工程、及び
（ｃ１）被検面積が対照面積よりも大きい場合に、被検体を前立腺がんであると判定する工程．
項５．  前記被検体の血中ＰＳＡ値が４．０ｎｇ／ｍＬ以上である、項１〜４のいずれかに記載の前立腺がん判定方法．
項６．  前記尿試料が、前立腺触診を受けた後の被検体から採取された尿由来の試料である、項１〜５のいずれかに記載の前立腺がん判定方法．
項７．  被検体の尿中の、メントール及びイソミントラクトンからなる群より選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を指標とすることを含む、前立腺がん判定方法．
項８．  前記被検バイオマーカー量が、非前立腺がん検体の尿中の前記バイオマーカーの量（対照バイオマーカー量）よりも多い場合に、前記被検体を前立腺がんであると判定することを含む、項７に記載の前立腺がん判定方法．
項９．  工程（ａ２）〜（ｃ２）を含む、項７又は８に記載の前立腺がん判定方法：
（ａ２）被検体の尿中の前記バイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を測定する工程、
（ｂ２）被検バイオマーカー量と、非前立腺がん検体の尿中の前記バイオマーカーの量（対照バイオマーカー量）とを比較する工程、及び
（ｃ２）被検バイオマーカー量が対照バイオマーカー量よりも多い場合に、被検体を前立腺がんであると判定する工程．
項１０．  前記被検体の血中ＰＳＡ値が４．０ｎｇ／ｍＬ以上である、項７〜９のいずれかに記載の前立腺がん判定方法．
項１１．  前記尿が、前立腺触診を受けた後の被検体から採取された尿である、項８〜１０のいずれかに記載の前立腺がん判定方法．
項１２．  メントール及びイソミントラクトンからなる群より選択される少なくとも1種のバイオマーカーの検出剤を含有する、前立腺がん診断薬．
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、前立腺がん判定方法を提供することができる。この方法によれば、血中ＰＳＡ値を指標とした従来の判定方法よりも高い特異度で、前立腺がんを判定することも可能である。さらに、この方法は非侵襲性であるので、前立腺針生検の場合のような合併症リスクが無い。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】m/z値が80.70〜81.70のガスクロマトグラムを示す（実施例１）。図１の右端中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示す。各クロマトグラム中、横軸は保持時間、縦軸はアバンダンスを示す。丸で囲まれたピークは、陽性被検者のクロマトグラムに特有のピークを示す。
【図２】図１のクロマトグラムの拡大図の代表例を示す（実施例１）。各クロマトグラムの右上の数字が被検者番号を示す（23076及び51326は前立腺針生検「陽性」、25151及び16551は前立腺針生検「陰性」）。各クロマトグラム中、横軸は保持時間、縦軸はアバンダンスを示す。図２中、矢印で示されるピークが、図１において丸で囲まれた、陽性被検者のクロマトグラムに特有の7つのピーク（ピーク1〜7）を示す。
【図３】ピーク1〜7の合計面積を、前立腺針生検「陽性」と前立腺針生検「陰性」とで比較したグラフを示す（実施例１）。図３の横軸中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示し、縦軸はピーク1〜7の合計面積を示す。各プロット（●又は■）は、各被験者のデータを示す。中央の横線は平均値を示し、該横線の上下の横線は標準偏差を示す。
【図４】左側の図は、全ピークの合計面積を、前立腺針生検「陽性」と前立腺針生検「陰性」とで比較したグラフを示す（実施例１）。図４左側の横軸中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示し、縦軸は全ピークの合計面積を示す。図４左側の各プロット（●又は■）は、各被験者のデータを示す。図４左側の中央の横線は平均値を示し、該横線の上下の横線は標準偏差を示す。右側の図は、左側のデータのROC曲線を示す。縦軸は感度を示し、横軸は特異度を示す。
【図５】血中PSA値を、前立腺針生検「陽性」と前立腺針生検「陰性」とで比較したグラフを示す（実施例１）。図５の横軸中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示し、縦軸は血中PSA値を示す。各プロット（●又は■）は、各被験者のデータを示す。中央の横線は平均値を示し、該横線の上下の横線は標準偏差を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書中において、「含有」及び「含む」なる表現については、「含有」、「含む」、「実質的にからなる」及び「のみからなる」という概念を含む。
【００１４】
１．前立腺がん判定方法１
本発明は、その一態様において、被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークを指標とすることを含む、前立腺がん判定方法（本明細書において、「本発明の前立腺がん判定方法１」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００１５】
被検体は、前立腺がんの判定対象である動物である限り特に限定されない。被検体としては、例えばヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ等の種々の哺乳類が挙げられる。
【００１６】
ＰＳＡ検査に基づく現行の診断方法では、実際には前立腺がんではないにも関わらずＰＳＡ値が異常値である多くの被検体に対して、身体及び経済的負担や合併症リスクを伴う前立腺針生検を行っている。一方、本発明の判定方法１は、血中ＰＳＡ値が異常値である被検体に対しても、高い特異度で前立腺がんを判定することができる。このような本発明の優位性を発揮できるという観点から、被検体の血中ＰＳＡ値は異常値であることが望ましい。なお、異常値であるか否かは、公知の基準に従って又は準じて判断される。典型的には、血中ＰＳＡ値が４．０ｎｇ／ｍＬ以上の場合に異常値とされる。
【００１７】
尿試料は、ガスクロマトグラフィー分析に適した状態の、被検体の尿由来の試料である限り特に限定されない。尿試料は、被検体の尿から、定法に従って又は準じて調製することができる。
【００１８】
尿試料調製に供する被検体の尿は、前立腺触診を受けた後の被検体から採取された尿であってもよい。前立腺触診は、定法に従った又は準じた方法で行われればよい。前立腺触診の時間は、特に制限されないが、例えば３〜３０秒間である。また、前立腺触診から尿の採取までの時間は、特に制限されないが、例えば前立腺触診から１時間程度まである。
【００１９】
尿試料は、より感度高めることが可能であるという観点から、揮発性有機物質吸着材料を用いて調製されたもの（すなわち、尿中成分が吸着している揮発性有機物質吸着材料）であることが好ましい。揮発性有機物質吸着材料としては、特に制限されないが、例えばシリコーン樹脂が挙げられ、中でもシリコーンエラストマーが好ましく挙げられる。シリコーン樹脂やシリコーンエラストマーとしては、例えばポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）又は、シリコーン化合物におけるポリマー鎖のメチル基がビニル基又はフェニル基に置換された、変性シリコーン化合物からなる吸着体が挙げられる。揮発性有機物質吸着材料は、適当な担体と組み合わせて用いられてもよい。典型的には、揮発性有機物質吸着材料が、攪拌子（スターバー）の表面にコーティングされたものを用いることができる。
【００２０】
揮発性有機物質吸着材料を用いた尿試料の調製方法としては、特に制限されず、公知の方法に従った又は準じた方法を採用することができる。例えば、被検体の尿と揮発性有機物質吸着材料を接触させることにより、尿中成分を揮発性有機物質吸着材料に吸着させることができる。
【００２１】
接触の態様は、特に制限されない。例えば、尿中に、揮発性有機物質吸着材料を浸漬することにより行われる。この際、液を攪拌することが望ましい。揮発性有機物質吸着材料が、攪拌子（スターバー）の表面にコーティングされている場合は、該攪拌子を回転させることによって、効率的に攪拌することができる。
【００２２】
接触時の温度は、特に制限されないが、例えば５〜４０℃、好ましくは１５〜２５℃である。
【００２３】
接触の時間は、特に制限されず、接触態様や温度によって適宜調節することができる。該時間は、例えば３０分間〜８時間、好ましくは１〜４時間程度である。
【００２４】
被検体の尿と揮発性有機物質吸着材料との接触後、揮発性有機物質吸着材料を水等で洗浄することにより、余分な尿を除去することが好ましい。また、接触又は洗浄後は、拭き取る等して水分を除去しておくことが望ましい。
【００２５】
上記した調製方法により、尿試料として、尿中成分が吸着している揮発性有機物質吸着材料を得ることができる。
【００２６】
ＧＣ／ＭＳ分析（ガスクロマトグラフィー／マススペクトロメトリー分析）は、被検体の尿試料をガスクロマトグラフィーによって分離し、各分離画分について質量分析することによって行われる。
【００２７】
ガスクロマトグラフィーは、公知の方法に従って又は準じて行うことができる。
【００２８】
ガスクロマトグラフィーにおける尿試料の気化及び導入は、尿試料の状態に応じて、公知の方法から適切な方法を選択すればよい。例えば、尿試料が尿中成分が吸着している揮発性有機物質吸着材料の場合であれば、加熱脱着により行うことができる。
【００２９】
ガスクロマトグラフィーにおけるキャリアガスは、不活性ガスである限り特に制限されない。キャリアガスとしては、例えばヘリウム、窒素、アルゴン等が挙げられ、好ましくはヘリウムが挙げられる。
【００３０】
ガスクロマトグラフィーの固定相は、特に制限されない。固定相としては、例えばポリエチレングリコール、ポリメチルシアノアルキルシロキサン、ポリジメチルシロキサン／ジフェニルシロキサン、ポリジメチルシロキサン等が挙げられる。これらの中でも、極性のより高い固定相が好ましく、具体的には、ポリエチレングリコール、ポリメチルシアノアルキルシロキサン、ポリジメチルシロキサン／ジフェニルシロキサン等が好ましく、ポリエチレングリコール、ポリメチルシアノアルキルシロキサン等がより好ましく、ポリエチレングリコールがさらに好ましい。なお、固定相としては、その他にも、シリカゲル、活性炭、ゼオライト、活性アルミナ等を例示することができる。
【００３１】
ガスクロマトグラフィーの検出器は、多様な成分を広く検出できるものである限り特に制限されない。検出器としては、例えば熱伝導度型検出器（ＴＣＤ）、水素炎イオン化型検出器（ＦＩＤ）、電子捕獲型検出器（ＥＣＤ）等が挙げられる。
【００３２】
質量分析は、公知の方法に従って又は準じて行うことができる。
【００３３】
質量分析におけるイオン化法は、特に制限されない。イオン化法としては、例えば電子イオン化法（ＥＩ法）、正化学イオン化法（ＰＣＩ法）、負化学イオン化法（ＮＣＩ法）等が挙げられ、好ましくは電子イオン化法が挙げられる。
【００３４】
質量分析におけるイオン化試料分子の分離方法は、特に制限されない。該分離方法としては、例えば飛行時間型、磁場偏向型、四重極型、イオントラップ型、フーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴型、タンデム型等を採用することができる。
【００３５】
ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラムは、以下のようにして得られる。まず、上記ガスクロマトグラフィーによって、横軸に保持時間、縦軸に検出された成分量を表す、クロマトグラム（クロマトグラム１）が得られる。次に、該クロマトグラム中の各ピークを質量分析して、それぞれのクロマトグラムピークを、各ｍ／ｚ値毎のピークに分解する。この結果に基づいて、クロマトグラム１から、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のみに関するクロマトグラム、換言すればクロマトグラム１からｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７以外のデータが排除されたクロマトグラム（クロマトグラム２）を得る。よって、クロマトグラム１の保持時間Ｘにおいて鋭いピークがあっても、該ピークを質量分析した際にｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のピークが無い場合、クロマトグラム２の保持時間Ｘにおいてはピークは無いこととなる。また、クロマトグラム１の保持時間Ｙにおけるピークが相対的に弱いピークであっても、該ピークを質量分析した際にｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のピークのみであった場合、クロマトグラム２の保持時間Ｙにおけるピークは相対的に強いピークとなり得る。
【００３６】
前立腺針生検等で確定診断された前立腺がん「陽性」の被検体の場合、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラムにおいて多数のピークが見られるのに対して、「陰性」の被検体の場合、該クロマトグラムにはピークがほとんど見られない（図１等参照）。よって、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークを指標とすることによって、前立腺がんを判定することができる。
【００３７】
判定の具体的態様は、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークを指標とする限りにおいて、特に限定されない。例えば、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークの有無や、少なくとも１つのピークの合計面積を指標とすることが挙げられる。
【００３８】
ピークの有無を指標とする場合は、特定の保持時間に現れる１つのピークまたは２以上のピークの有無を指標とすることができる。
【００３９】
少なくとも１つのピークの合計面積を指標とする場合は、特定の保持時間に現れる１つのピークのピーク面積を指標とすることが挙げられる。また、特定の保持時間に現れる２以上のピークの各ピーク面積の合計面積を指標とすることが挙げられる。また、クロマトグラム中のすべてのピークのピーク面積の合計面積を指標とすることが挙げられる。
【００４０】
１つのピークの面積または２以上もしくは全てのピークの合計面積を指標とする場合は、ｍ／ｚ値８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の１つのピークの面積または２以上もしくは全てのピークの合計面積（被検面積）が、非前立腺がん検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の対応するピークの面積もしくは合計面積（対照面積）よりも大きい場合に、被検体を前立腺がんであると判定することができる。
【００４１】
本発明の前立腺がん判定方法１のより具体的な態様は、工程（ａ１）〜（ｃ１）を含む：
（ａ１）被検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラムを得る工程、
（ｂ１）工程（ａ１）で得られたクロマトグラム中のピークから選択される少なくとも１つのピークの合計面積（被検面積）と、非前立腺がん検体の尿試料をＧＣ／ＭＳ分析して得られた、ｍ／ｚ値が８０．７〜８１．７のクロマトグラム中の対応するピークの合計面積（対照面積）とを比較する工程、及び
（ｃ１）被検面積が対照面積よりも大きい場合に、被検体を前立腺がんであると判定する工程。
【００４２】
工程（ｃ１）においては、例えば被検面積が、対照面積の例えば１．２倍以上、好ましくは１．５倍以上、より好ましくは２倍以上、さらに好ましくは５倍以上、よりさらに好ましくは１０倍以上の場合に、被検体を前立腺がんであると判定することができる。
【００４３】
２．前立腺がん判定方法２
本発明は、その一態様において、被検体の尿中の、メントール及びイソミントラクトンからなる群より選択される少なくとも１種のバイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を指標とすることを含む、前立腺がん判定方法（本明細書において、「本発明の前立腺がん判定方法２」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００４４】
被検体及び尿については、上記「１．前立腺がん判定方法１」と同様である。
【００４５】
メントールには複数の立体異性体があるが、前記メントールは、いずれの立体異性体であってもよい。また、前記バイオマーカーにはメントールのその他の異性体も含む。さらに、複数のメントール異性体をバイオマーカーにしてもよい。
【００４６】
イソミントラクトンには複数の立体異性体があるが、前記イソミントラクトンは、いずれの立体異性体であってもよい。また、前記バイオマーカーにはイソミントラクトンのその他の異性体も含む。さらに、複数のイソミントラクトン異性体をバイオマーカーにしてもよい。
尿中の各種バイオマーカー量の測定方法は、バイオマーカーを検出及び定量できる方法である限り特に制限されず、公知の方法に従った又は準じた方法を採用することができる。バイオマーカー量の測定方法としては、例えば、ガスクロマトグラフィー、液体クロマトグラフィー等のクロマトグラフィー、質量分析法、ＧＣ／ＭＳ、ＬＣ／ＭＳ、特異的な化学反応を利用した発光法、ニオイ分析センサーシステム等が挙げられる。ニオイ分析センサーシステムは、特殊な膜（感応膜）やセンサーに揮発性物質を吸着させてそのシグナルの変化を検出するシステムであり、京セラが物質材料研究機構と共同で開発した超小型センサー素子「MSS （Membrane-type Surface stress Sensor  /  膜型表面応力センサー）」を用いたシステムである。
【００４７】
或いは、バイオマーカー量の測定方法は、例えば測定対象のバイオマーカーの生理活性を利用した測定方法であってもよい。例えば測定対象のバイオマーカーが特定の受容体（例えばＴＲＰＭ８等の冷感受容体）に結合する物質（例えばメントール）である場合であれば次のように測定可能である。すなわち、受容体と該受容体のリガンド結合領域に特異的に結合する抗体との反応が、被検試料（尿由来の試料）によって阻害されるか否か（阻害されるのであればどの程度阻害されるのか）を評価することにより測定できる。より具体的には、例えば固相に固定化された受容体（又は該受容体に対する抗体）に、該受容体に対する抗体（又は受容体）と共に被検試料（尿由来の試料）を接触させた後、固相に固定化されていない物質を除去し、固相に固定化された抗体（又は受容体）を（必要に応じて、標識、発色操作等を加えた上で）検出することにより測定できる。該測定方法は、例えばＥＬＩＳＡ法やウェスタンブロット法等によって行うことができる。
【００４８】
受容体は、その機能（測定対象のバイオマーカーとの結合能）を損なわない限りにおいて、アミノ酸変異、化学修飾、タンパク質タグ付加等の修飾が施されていてもよい。
【００４９】
受容体には、ＮＣＢＩ等のデータベース上で公開されているアミノ酸配列に基づいて、公知の方法に従って又は準じて、例えば化学合成、哺乳動物の細胞又は組織（例えば血清等）からの精製、受容体をコードするポリヌクレオチドを含有する形質転換体からの精製等によって得ることができる。形質転換体からの精製により得る場合、形質転換体としては、受容体をコードするポリヌクレオチドから受容体を発現させることができる細胞である限り特に限定されず、大腸菌などの細菌、昆虫細胞、哺乳類細胞等の種々の細胞を利用することができる。
【００５０】
昆虫細胞としては、例えば、Ｓｆ細胞、ＭＧ１細胞、Ｈｉｇｈ ＦｉｖｅＴＭ細胞、ＢｍＮ細胞などが用いられる。Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１７１１）、Ｓｆ２１細胞などが用いられる。
【００５１】
動物細胞としては、例えば、サルＣＯＳ−７細胞、サルＶｅｒｏ細胞、チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ、マウスＬ細胞、マウスＡｔＴ−２０細胞、マウスミエローマ細胞、ラットＧＨ３細胞、ヒトＦＬ細胞などが用いられる。
【００５２】
抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、またはＦａｂフラグメントやＦａｂ発現ライブラリーによって生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。受容体のアミノ酸配列のうち少なくとも連続する、通常８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるポリペプチドに対して抗原結合性を有する抗体も、本発明の抗体に含まれる。
【００５３】
抗体は、リガンド結合部位のアミノ酸配列に対して抗原結合性を有する抗体が好ましい。各種受容体のリガンド結合部位は公知であり、この公知の情報に基づいて、このような抗体を製造することができる。
【００５４】
これらの抗体の製造方法は、すでに周知であり、本発明の抗体もこれらの常法に従って製造することができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ , Ｃｈａｐｔｅｒ １１．１２〜１１．１３（２０００））。具体的には、本発明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製した受容体を用いて、あるいは常法に従って当該受容体の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト動物に免疫し、該免疫動物の血清から常法に従って得ることが可能である。一方、モノクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製した受容体、あるいは受容体の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて調製したハイブリドーマ細胞の中から得ることができる（Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｅｄｉｔ. Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ. （１９８７） Ｐｕｂｌｉｓｈ. Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ. Ｓｅｃｔｉｏｎ １１．４〜１１．１１）。
【００５５】
抗体の作製に免疫抗原として使用される受容体は、公知の遺伝子配列情報に基づいて、ＤＮＡクローニング、各プラスミドの構築、宿主へのトランスフェクション、形質転換体の培養および培養物からのタンパク質の回収の操作により得ることができる。これらの操作は、当業者に既知の方法、あるいは文献記載の方法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ, Ｔ.Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ., ＣＳＨ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ （１９８３）, ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ, ＤＭ. Ｇｌｏｖｅｒ, ＩＲＬ ＰＲＥＳＳ （１９８５））などに準じて行うことができる。
【００５６】
具体的には、受容体をコードする遺伝子が所望の宿主細胞中で発現できる組み換えＤＮＡ（発現ベクター）を作製し、これを宿主細胞に導入して形質転換し、該形質転換体を培養して、得られる培養物から、目的タンパク質を回収することによって、本発明抗体の製造のための免疫抗原としてのタンパク質を得ることができる。また受容体の部分ペプチドは、公知の遺伝子配列情報に従って、一般的な化学合成法（ペプチド合成）によって製造することもできる。
【００５７】
また本発明の抗体は、受容体の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを用いて調製されるものであってよい。かかる抗体の製造のために用いられるオリゴ（ポリ）ペプチドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、受容体と同様な免疫原特性を有するものであることが望ましい。好ましくはこの免疫原特性を有し、且つ受容体のアミノ酸配列において少なくとも連続する８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるオリゴ（ポリ）ペプチドを例示することができる。
【００５８】
かかるオリゴ（ポリ）ペプチドに対する抗体の製造は、宿主に応じて種々のアジュバントを用いて免疫学的反応を高めることによって行うこともできる。限定はされないが、そのようなアジュバントには、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテリウム-パルヴムなどのヒトアジュバントが含まれる。
【００５９】
上記受容体や抗体は、適当な標識物、例えば蛍光色素、酵素、放射性同位体、化学発光物質、ビオチンなどが付加された状態であってもよい。
【００６０】
判定の具体的態様は、上記バイオマーカーの量を指標とする限りにおいて、特に限定されない。例えば、被検体の尿中の上記バイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）が、非前立腺がん検体の尿中の前記バイオマーカーの量（対照バイオマーカー量）よりも多い場合に、被検体を前立腺がんであると判定することができる。
【００６１】
本発明の前立腺がん判定方法２のより具体的な態様は、工程（ａ２）〜（ｃ２）を含む：
（ａ２）被検体の尿中の前記バイオマーカーの量（被検バイオマーカー量）を測定する工程、
（ｂ２）被検バイオマーカー量と、非前立腺がん検体の尿中の前記バイオマーカーの量（対照バイオマーカー量）とを比較する工程、及び
（ｃ２）被検バイオマーカー量が対照バイオマーカー量よりも多い場合に、被検体を前立腺がんであると判定する工程。
【００６２】
工程（ｃ２）においては、例えば被検バイオマーカー量が、対照バイオマーカー量の例えば１．２倍以上、好ましくは１．５倍以上、より好ましくは２倍以上、さらに好ましくは５倍以上、よりさらに好ましくは１０倍以上の場合に、被検体を前立腺がんであると判定することができる。
【００６３】
３．前立腺がん診断薬
本発明は、その一態様において、メントールもしくはその異性体、及び、イソミントラクトンもしくはその異性体からなる群より選択される少なくとも1種のバイオマーカーの検出剤を含有する、前立腺がん診断薬（本明細書において、「本発明の前立腺がん診断薬」と示すこともある。）に関する。以下、これについて説明する。
【００６４】
上記バイオマーカーの検出剤は、被検体の尿又は尿由来の試料中の上記バイオマーカーを検出及び定量できるものであれば、特に限定されず、例えば、公知のもの或いは公知の理論に基づいたものを広く利用することが可能である。具体的には、例えば、上記「２．前立腺がん判定方法２」における受容体や抗体が挙げられる。本発明の前立腺がん診断薬は、これらに加えてＥＬＩＳＡ法等に必要な試薬類（例えば標識物、標識物の検出剤、緩衝液、プレート等）等が含まれていてもよい。また、本発明の前立腺がん診断薬はキットの形態であってもよい。
【実施例】
【００６５】
以下に、実施例に基づいて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって限定されるものではない。
【００６６】
実施例１．前立腺がん判定方法の指標の探索
血中PSA値が4 ng/mLである被検者、比較的若年であり且つ血中PSA値が3 ng/mL以上の被検者、及び直腸診で前立腺がんの疑いのある被検者に対して、定法に従って前立腺触診を行い、その後尿を採取した。一方で、被検者に対して、定法に従って前立腺針生検を行い、前立腺がんの陽性又は陰性を判定した。
【００６７】
被検者18名の情報は以下のとおりである：
・年齢：中央値67歳（分布59〜79歳）
・血中PSA値：中央値8.05（分布3.07〜15.38）
・前立腺針生検陰性9例
・前立腺針生検陽性9例。
【００６８】
5 mLの尿をバイアル瓶に移した。そこへ、ツイスタ（長さ10 mm、膜厚 0.5 mm、GERSTEL社製）を添加し、室温で2時間攪拌抽出した。ツイスタを取り出して純粋にて洗浄後、水分を拭き取った。加熱脱着-GC/MSにより分析した。
【００６９】
分析装置及び分析条件は以下のとおりである：
＜分析装置＞
・前処理装置：GERSTEL MPS
・ガスクロマトグラフ：Agilent Technologies 7890
・質量分析計：Agilent Technologies 5975C MSD
＜分析条件＞
・カラム：DB-WAX (60 m、直径0.25 mm、膜厚0.25μm)
・キャリアガス：ヘリウム、2.11 mL/min
・イオン化法：EI（電子イオン化）法
・イオン化電圧：70 eV。
【００７０】
分析結果に基づいて、m/z値が80.7~81.7のガスクロマトグラムを作成した。結果を図１に示す。図１の右端中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示す。図１に示されるように、陽性被検者のクロマトグラムには、特有の多数のピークが見られた（丸で囲まれたピーク）。
【００７１】
クロマトグラムの拡大図の代表例を図２に示す。図２中、各クロマトグラムの右上の数字が被検者番号を示す（23076及び51326は前立腺針生検「陽性」、25151及び16551は前立腺針生検「陰性」）。図２中、矢印で示されるピークが、図１において丸で囲まれた、陽性被検者のクロマトグラムに特有の7つのピーク（ピーク1〜7）を示す。
【００７２】
ピーク1〜7の合計面積を測定した結果を図３に示す。図３中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示し、縦軸はピーク1〜7の合計面積を示す。図３に示されるように、ピーク1〜7の合計面積は、前立腺針生検「陰性」の被検者よりも、前立腺針生検「陽性」の被検者の方が有意に大きかった。よってこれら７つの特定のピークの合計面積を指標とすることにより、前立腺がんを判定できることが示された。
【００７３】
全ピークの合計面積を測定した結果を図４に示す。図４より、全ピークの合計面積を指標とすることにより、前立腺がんを判定できることが示された。  比較のために、血中PSA値の比較結果を図５に示す。図５中、「Negative」は前立腺針生検「陰性」の被検者の結果を示し、「Cancer」は前立腺針生検「陽性」の被検者の結果を示し、縦軸は血中PSA値を示す。図５に示されるように、血中PSA値は、前立腺針生検「陰性」の被検者と、前立腺針生検「陽性」の被検者との間に、有意差は無かった。
【００７４】
以上より、尿試料をGC/MS分析して得られた、m/z値が80.7~81.7のクロマトグラム中のピークを指標とすることにより、前立腺がんを判定できることが示唆された。また、この判定方法は、血中PSA値を指標とした従来の判定方法よりも高い特異度であることも示された。
【００７５】
実施例２．前立腺がんの判定マーカーの解析
ピーク1〜7が示す成分について定法に従って分析を進めた結果、ピーク2はメントールまたはその異性体であることが明らかとなった。また、ピーク7はイソミントラクトンまたはその異性体である可能性が高いことが明らかになった。この結果より、これらの成分の量を指標とすることにより、前立腺がんを判定できることが示唆された。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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