(57)【要約】【課題】核酸と夾雑物とを含む検体であっても、核酸増幅反応を効率的に行うことができる核酸増幅反応用マイクロチップを提供する。【解決手段】本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップ１は、核酸と夾雑物とを含む検体を導入するための検体導入部１１と、前記検体と混合される前処理液を導入するための前処理液導入部１２と、核散増幅反応を進行させる核酸増幅部１３と、マイクロ流路部１４とを備え、前記検体導入部１１と前記前処理液導入部１２と前記核酸増幅部１３とが、前記マイクロ流路部１４に接続されており、前記前処理液は、前記検体と前記前処理液とが混合された混合液の状態で、前記混合液に含まれる前記核酸の核酸増幅反応を進行させることを可能にする性質を有する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
核酸と夾雑物とを含む検体を導入するための検体導入部と、
前記検体と混合される前処理液を導入するための前処理液導入部と、
核散増幅反応を進行させる核酸増幅部と、
マイクロ流路部とを備え、
前記検体導入部と前記前処理液導入部と前記核酸増幅部とが、前記マイクロ流路部に接続されており、
前記前処理液は、前記検体と前記前処理液とが混合された混合液の状態で、前記混合液に含まれる前記核酸の核酸増幅反応を進行させることを可能にする性質を有する、核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項２】
前記検体、前記前処理液又は前記混合液を加熱するための加熱部をさらに備える、請求項１に記載の核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項３】
第１の主面と、該第１の主面と対向する第２の主面とを有する基板を有し、前記基板内に、前記前処理液導入部、前記核酸増幅部、前記マイクロ流路部及び前記加熱部が設けられており、
前記第１の主面と前記第２の主面とを結ぶ前記基板の厚み方向において、前記前処理液導入部と、前記加熱部とが異なる位置に設けられている、請求項２に記載の核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項４】
前記第１の主面及び前記第２の主面の面方向に視たときに、前記前処理液導入部と、前記加熱部とが重ならない位置に設けられている、請求項３に記載の核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項５】
前記検体、前記前処理液又は前記混合液を移動させるためのマイクロポンプ部を備える、請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項６】
前記マイクロポンプ部が、ガス発生材を含み、
前記マイクロポンプ部は、前記ガス発生材からガスを発生させることで作動可能である、請求項５に記載の核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項７】
前記前処理液が、前記検体に含まれる前記核酸を前記夾雑物から分離する液とは異なる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の核酸増幅反応用マイクロチップ。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸増幅反応用マイクロチップを用いる核酸増幅反応方法であって、
前記検体導入部から、前記マイクロ流路部内に前記検体を導入し、前記マイクロ流路部内を前記検体を移動させる工程と、
前記前処理液導入部から、前記前処理液を導入し、前記検体と前記前処理液とを混合し、混合液を形成し、前記マイクロ流路部内を前記混合液を移動させ、前記混合液を前記核酸増幅部に移動させる工程と、
前記核酸増幅部において、前記混合液に含まれる前記核酸の増幅反応を進行させる工程とを備える、核酸増幅反応方法。
【請求項９】
前記検体の導入から、前記混合液を形成するまでの時間を１０分以下にする、請求項８に記載の核酸増幅反応方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、核酸増幅反応に用いられるマイクロチップに関する。また、本発明は、上記マイクロチップを用いる核酸増幅反応方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）に代表される核酸増幅反応は、生物の遺伝子多型（ＳＮＰ）を調べる方法としてのみならず、細胞中への導入遺伝子の発現量を調べる方法としても有用である。また、核酸増幅反応は、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、癌細胞など、特別の状態にある細胞の遺伝子発現パターンの把握や、病原体の同定にも用いられている。さらに、核酸増幅反応は、ごく微量の核酸を視覚的に捉えられる量にまで増幅することができるため、核酸増幅反応は、微生物の迅速検出法としても用いられている。例えば、イムノ−ＰＣＲ法のように分子認識試薬に標識した核酸の増幅は、微生物の極微量検出にも有用である。また、近年、核酸増幅反応は、逆転写酵素を用いることにより、ＲＮＡの微量検出にも利用されている。この場合、逆転写酵素を用いて、ＲＮＡを相補的なＤＮＡ（ｃＤＮＡ）に転換した後、ｃＤＮＡを核酸増幅反応によって増幅する方法が用いられている。
【０００３】
分析に用いる核酸を含む検体は、一般に、夾雑物を含む。核酸と夾雑物とを含む検体中の核酸の核酸増幅反応を行うために、検体に含まれる核酸を夾雑物から分離している。
【０００４】
下記の特許文献１には、検体から夾雑物を除去する前処理方法が開示されている。特許文献１では、検体である全血試料を希釈する工程と、希釈された全血試料を熱処理する工程と、熱処理後の試料を遠心分離する工程とが行われている。
【０００５】
下記の特許文献２には、試験サンプルから核酸を分離する方法が開示されている。この方法は、試験サンプルを酸化金属担体物質及び結合バッファーと接触させて、核酸／酸化金属担体物質複合体を形成させる工程と、上記複合体を上記試験サンプルから分離する工程と、上記核酸を上記酸化金属担体物質から溶出させる工程とを備える。
【０００６】
他方、下記の特許文献３には、核酸と夾雑物を含む検体をそのまま用い、夾雑物を除去することなく、試薬と混合し、加熱により直接的ＰＣＲを行う方法が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−１８７２２１号公報
【特許文献２】特開２０１４−１２０１１号公報
【特許文献３】特開２０１２−５５６９１３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
特許文献１，２に記載のように、核酸と夾雑物とを含む検体から、核酸を分離する場合には、前処理時間が長くなり、結果として核酸増幅反応を効率的に行うことができない。
【０００９】
特許文献１では、遠心分離等に長時間を要し、前処理時間が長くなる。また、特許文献２に記載のような分離工程を含む前処理は、一般に手作業で行われるので、前処理時間が長くなったり、前処理に試料を多く用いる必要があったり、異物が混入したりするという問題がある。
【００１０】
また、特許文献３に記載の方法では、手作業により、検体と試薬とを混合し、ＰＣＲが行われている。従って、処理時間が長くなり、かつ必要な試薬量が多くなるという問題があった。
【００１１】
本発明の目的は、核酸と夾雑物とを含む検体であっても、核酸増幅反応を効率的に行うことができる核酸増幅反応用マイクロチップを提供することである。また、本発明は、上記マイクロチップを用いる核酸増幅反応方法を提供することも目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明の広い局面によれば、核酸と夾雑物とを含む検体を導入するための検体導入部と、前記検体と混合される前処理液を導入するための前処理液導入部と、核散増幅反応を進行させる核酸増幅部と、マイクロ流路部とを備え、前記検体導入部と前記前処理液導入部と前記核酸増幅部とが、前記マイクロ流路部に接続されており、前記前処理液は、前記検体と前記前処理液とが混合された混合液の状態で、前記混合液に含まれる前記核酸の核酸増幅反応を進行させることを可能にする性質を有する、核酸増幅反応用マイクロチップが提供される。
【００１３】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップのある特定の局面では、前記核酸増幅反応用マイクロチップは、前記検体、前記前処理液又は前記混合液を加熱するための加熱部がさらに備えられている。
【００１４】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップの他の特定の局面では、第１の主面と、該第１の主面と対向する第２の主面とを有する基板を有し、前記基板内に、前記前処理液導入部、前記核酸増幅部、前記マイクロ流路部及び前記加熱部が設けられており、前記第１の主面と前記第２の主面とを結ぶ前記基板の厚み方向において、前記前処理液導入部と、前記加熱部とが異なる位置に設けられている。
【００１５】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップのさらに他の特定の局面では、前記第１の主面及び前記第２の主面の面方向に視たときに、前記前処理液導入部と、前記加熱部とが重ならない位置に設けられている。
【００１６】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップのある特定の局面では、前記核酸増幅反応用マイクロチップは、前記検体、前記前処理液又は前記混合液を移動させるためのマイクロポンプ部を備える。
【００１７】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップのある特定の局面では、前記マイクロポンプ部が、ガス発生材を含み、前記マイクロポンプ部は、前記ガス発生材からガスを発生させることで作動可能である。
【００１８】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップのある特定の局面では、前記前処理液が、前記検体に含まれる前記核酸を前記夾雑物から分離する液とは異なる。
【００１９】
本発明の広い局面によれば、上述した核酸増幅反応用マイクロチップを用いる核酸増幅反応方法であって、前記検体導入部から、前記マイクロ流路部内に前記検体を導入し、前記マイクロ流路部内を前記検体を移動させる工程と、前記前処理液導入部から、前記前処理液を導入し、前記検体と前記前処理液とを混合し、混合液を形成し、前記マイクロ流路部内を前記混合液を移動させ、前記混合液を前記核酸増幅部に移動させる工程と、前記核酸増幅部において、前記混合液に含まれる前記核酸の増幅反応を進行させる工程とを備える、核酸増幅反応方法が提供される。
【００２０】
本発明に係る核酸増幅反応方法のある特定の局面では、前記検体の導入から、前記混合液を形成するまでの時間を１０分以下にする。
【発明の効果】
【００２１】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップは、核酸と夾雑物とを含む検体を導入するための検体導入部と、上記検体と混合される前処理液を導入するための前処理液導入部と、核散増幅反応を進行させる核酸増幅部と、マイクロ流路部とを備え、上記検体導入部と上記前処理液導入部と上記核酸増幅部とが、上記マイクロ流路部に接続されており、上記前処理液は、上記検体と上記前処理液とが混合された混合液の状態で、上記混合液に含まれる上記核酸の核酸増幅反応を進行させることを可能にする性質を有するので、核酸と夾雑物とを含む検体であっても、核酸増幅反応を効率的に行うことができる。よって、全体の処理時間を短縮することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】図１は、本発明の一実施形態に係る核酸増幅反応用マイクロチップを模式的に示す断面図である。
【図２】図２は、図１に示すマイクロチップの動作状態を説明するための模式的な断面図である。
【図３】図３は、図１に示すマイクロチップの動作状態を説明するための模式的な断面図である。
【図４】図４は、本発明の第２の実施形態に係る核酸増幅反応用マイクロチップを模式的に示す断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明の詳細を説明する。
【００２４】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップは、核酸と夾雑物とを含む検体を導入するための検体導入部と、上記検体と混合される前処理液を導入するための前処理液導入部と、核散増幅反応を進行させる核酸増幅部と、マイクロ流路部とを備える。
【００２５】
上記検体導入部と上記前処理液導入部と上記核酸増幅部とが、上記マイクロ流路部に接続されている。上記前処理液は、上記検体と上記前処理液とが混合された混合液の状態で、上記混合液に含まれる上記核酸の核酸増幅反応を進行させることを可能にする性質を有する。
【００２６】
本発明に係る核酸増幅反応用マイクロチップでは、上記の構成が備えられているので、核酸と夾雑物とを含む検体であっても、核酸増幅反応を効率的に行うことができる。本発明では、予め分離された核酸ではなく、核酸と夾雑物とを含む検体を用いていても、マイクロチップによって、核酸増幅反応を行わせることができる。このため、核酸の分離工程を省略でき、核酸増幅反応までの時間を短くすることができる。さらに、本発明では、マイクロチップ内で、上記検体と上記前処理液とを混合するので、混合作業を効率的に行うことができ、核酸増幅反応までの時間を短くすることができる。また、混合液への異物の混入を防ぐことができる。
【００２７】
上記核酸増幅反応用マイクロチップを用いた核酸増幅反応は、例えば、上記検体導入部から、上記マイクロ流路部内に上記検体を導入し、上記マイクロ流路部内を上記検体を移動させる工程と、上記前処理液導入部から、上記前処理液を導入し、上記検体と上記前処理液とを混合し、混合液を形成し、上記マイクロ流路部内を上記混合液を移動させ、上記混合液を上記核酸増幅部に移動させる工程と、上記核酸増幅部において、上記混合液に含まれる上記核酸の増幅反応を進行させる工程とを備える。
【００２８】
本発明では、上記の工程を経ることで、核酸と夾雑物とを含む検体であっても、核酸増幅反応を効率的に行うことができる。
【００２９】
以下、図面を参照しつつ、本発明の具体的な実施形態を説明する。
【００３０】
図１は、本発明の一実施形態に係る核酸増幅反応用マイクロチップを模式的に示す断面図である。
【００３１】
図１に示すマイクロチップ１は、核酸増幅反応に用いられる。
【００３２】
マイクロチップ１は、基板２を備える。上記基板の材質は特に限定されないが、樹脂であることが好ましく、熱可塑性樹脂であることが好ましい。上記樹脂としては、ポリカーボネート樹脂、シクロオレフィン樹脂、ポリエチレンテレフタレート樹脂、アクリル樹脂、シリコーン樹脂及びエポキシ樹脂等が挙げられる。
【００３３】
マイクロチップ１は、基板２において、検体導入部１１と、前処理液導入部１２と、核酸増幅部１３と、マイクロ流路部１４と、マイクロポンプ部１５と、加熱部１６と、ガス排出部１７とを備える。
【００３４】
検体導入部１１は、核酸と夾雑物とを含む検体を導入するための部位である。検体の移動開始前及び検体導入部１１に接続されたマイクロポンプ部１５の作動前に、検体導入部１１は、検体を含む。前処理液導入部１２は、前処理液を導入するための部位であり、本実施形態のように前処理液が予め内包されていてもよい。前処理液の移動開始前及び前処理液導入部１２に接続されたマイクロポンプ部１５の作動前に、前処理液導入部１２は、前処理液を含む。上記前処理液は、上記検体と混合される。上記前処理液は、核酸と夾雑物とを含む状態で、上記検体と混合される。核酸増幅部１３は、核酸増幅反応を進行させる部位である。
【００３５】
検体導入部１１と前処理液導入部１２と核酸増幅部１３とは、マイクロ流路部１４に接続されている。マイクロ流路部１４において、検体導入部１１と前処理液導入部１２との下流側に、核酸増幅部１３が位置している。前処理液導入部１２は、検体導入部１１と核酸増幅部１３との間に位置している。検体導入部１１から導入された検体と、前処理液導入部１２から導入された前処理液とは、核酸増幅部１３の上流側において混合される。
【００３６】
マイクロ流路部１４の一端に、検体導入部１１が接続されている。マイクロ流路部１４の他端に、核酸増幅部１３が接続されている。マイクロ流路部１４の側部に、前処理液導入部１２が接続されている。マイクロ流路部１４の一端と他端との間に、前処理液導入部１２が接続されている。
【００３７】
マイクロ流路部１４は、マイクロ流路を有する。「マイクロ流路」とは、マイクロ流路部を流れる液体に所謂マイクロ効果が発現する形状寸法に形成されている流路をいう。具体的には、「マイクロ流路」とは、マイクロ流路部を流れる液体が、表面張力と毛細管現象との影響を強く受け、通常の寸法の流路を流れる液体とは異なる挙動を示す形状寸法に形成されている流路をいう。
【００３８】
マイクロチップ１は、マイクロポンプ部１５を２つ有する。一方のマイクロポンプ部１５（第１のマイクロポンプ部）は、検体導入部１１の上流側に接続されている。他のマイクロポンプ部１５（第２のマイクロポンプ部）は、前処理液導入部１２の上流側に接続されている。マイクロポンプ部１５は、マイクロ流路部１４内を検体、前処理液及び混合液を移動させる。
【００３９】
マイクロチップは、マイクロポンプ部を複数有していてもよい。例えば、マイクロチップは、検体導入部に接続されたマイクロポンプ部と、前処理液導入部に接続されたマイクロポンプ部とを備えていてもよい。検体導入部に接続されたマイクロポンプ部は、検体を移動させ、好ましくは混合液を移動させる。前処理液導入部に接続されたマイクロポンプ部は、前処理液を移動させ、好ましくは混合液を移動させる。混合液を効率的に移動させるために、マイクロチップは、マイクロ流路部に直接接続されたマイクロポンプ部を備えていてもよい。
【００４０】
ポンプ圧力の制御が容易であるので、マイクロポンプ部は、ガス発生材を含むことが好ましい。マイクロポンプ部は、ガス発生材からガスを発生させることで作動可能であることが好ましい。マイクロポンプ部は、検体、前処理液又は混合液を移動させることが好ましい。マイクロチップは、マイクロポンプ部を備えることが好ましい。但し、マイクロチップの外部に配置されたマイクロポンプ部を用いてもよい。
【００４１】
上記ガス発生材は、外部刺激によりガスを発生するガス発生材であることが好ましく、加熱又は光の照射によりガスを発生させるガス発生材であることがより好ましい。上記外部刺激として、光の照射と加熱との双方を用いてもよい。ガスの発生量を高精度に制御する観点からは、上記外部刺激は光の照射であることが好ましく、上記ガス発生材は、光の照射によりガスを発生するガス発生材（光応答性ガス発生材）が好ましい。
【００４２】
上記ガス発生材は、光の照射によりガスを発生する化合物を含むことが好ましい。上記光の照射によりガスを発生する化合物としては、光の照射により分解して、ガスを発生する化合物等が挙げられる。上記光の照射によりガスを発生させる化合物としては、アゾ化合物、アジド化合物及びポリオキシアルキレン化合物等が挙げられる。これらの化合物では、光の照射により、光分解反応が進行する。上記光の照射によりガスを発生する化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。
【００４３】
上記アゾ化合物としては、アゾアミド化合物、アゾニトリル化合物、アゾアミジン化合物及びサイクリックアゾアミジン化合物等が挙げられる。上記アゾ化合物の具体例としては、２，２’−アゾビス−（Ｎ−ブチル−２−メチルプロピオンアミド）等が挙げられる。
【００４４】
上記アジド化合物としては、４−ドデシルベンゼンスルホニルアジド、４−アセチルアミノベンゼンスルホニルアジド、ｐ−ｔ−ブチルベンズアジド、３−アジドメチル−３−メチルオキセタン及びグリシジルアジドポリマー等が挙げられる。
【００４５】
加熱部１６は、検体、前処理液又は混合液を加熱するための部位である。本実施形態では、加熱部１６は、混合液を加熱するための部位である。加熱部１６は、マイクロ流路部１４の側面に配置されており、混合液が流れる部位に位置する。
【００４６】
加熱部は、検体を加熱する部位であってもよい。前処理液と混合される前の検体を加熱することで、検体と前処理液との均一混合性を高めることができる。加熱部は、マイクロ流路部における混合液が流れる部位に位置していてもよい。加熱部は、前処理液を加熱する部位であってもよい。検体と混合される前の前処理液を加熱することで、検体と前処理液との均一混合性を高めることができる。混合液の均一性をより一層高め、核酸増幅反応を効率的に行う観点からは、加熱部は、混合液を加熱するための部位であることが好ましい。加熱部は、マイクロ流路部における混合液が流れる部位に位置することが好ましい。
【００４７】
核酸増幅部１３の下流側に、ガス排出部１７が接続されている。検体及び前処理液の導入前に核酸増幅部１３などの内部空間に存在していた気体は、ガス排出部１７から排出させることができる。
【００４８】
図２及び図３は、図１に示すマイクロチップの動作状態を説明するための模式的な断面図である。
【００４９】
マイクロチップ１を用いた核酸増幅反応は、例えば、以下のようにして行われる。
【００５０】
検体導入部１１から、マイクロ流路部１４内に、核酸と夾雑物とを含む検体を導入する。夾雑物とは、検体に含まれる核酸以外の物質である。例えば、全血試料が検体である場合に、全血試料は、核酸と夾雑物とを含む。
【００５１】
検体導入部１１の上流側に位置し、かつ検体導入部１１に接続されているマイクロポンプ部１５の作動によって、マイクロ流路部１４内を検体を移動させる。
【００５２】
前処理液導入部１２から、マイクロ流路部１４内に前処理液を導入する。前処理液導入部１２に接続されているマイクロポンプ部１５の作動によって、マイクロ流路部１４内に前処理液を移動させる。
【００５３】
図２に示すように、マイクロ流路部１４内において、検体と前処理液とを混合し、混合液を形成する。マイクロポンプ部１５の作動によって、マイクロ流路部１４内を混合液を移動させ、混合液を核酸増幅部１３に移動させる。前処理液は、検体に含まれる核酸を夾雑物から分離する液とは異なる。前処理液としては、タカラバイオ社製「ＭｉｇｈｔｙＡｍｐ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｖｅｒ．２」等が挙げられる。
【００５４】
混合液の移動時に、加熱部１６により、混合液が加熱される。加熱によって、混合液の均一性が高くなる。
【００５５】
図３に示すように、混合液は、核酸増幅部１３に至る。核酸増幅部１３において、混合液に含まれる核酸の増幅反応を進行させる。核酸増幅部１３において、核酸と夾雑物とを含む検体と、前処理液とが混合された状態で、核酸の増幅反応が進行される。
【００５６】
核酸増幅反応をより一層効率的に行う観点からは、上記マイクロチップを用いた核酸増幅反応において、検体の導入から、混合液を形成するまでの時間を１０分以下にすることが好ましい。上記の構成を備えるマイクロチップでは、検体の導入から、混合液を形成するまでの時間を１０分以下にすることが容易である。
【００５７】
従って、本実施形態によれば、核酸増幅反応を効率的に行うことができるため、検体の導入から混合液を形成し、核酸増幅反応を開始するまでの時間を短縮することができる。すなわち、本発明における効率良く反応させることは、このような工程に必要な時間を短縮することをも含む概念である。
【００５８】
核酸増幅反応をより一層効率的に行う観点からは、上記マイクロチップを用いた核酸増幅反応において、検体の導入から、核酸増幅反応を開始するまでの時間を１０分以下にすることが好ましい。上記の構成を備えるマイクロチップでは、検体の導入から、核酸増幅反応を開始するまでの時間を１０分以下にすることが容易である。
【００５９】
図４は、第２の実施形態に係る核酸増幅反応用マイクロチップを示す模式的断面図である。図４に示すマイクロチップ２１は、基板２２を有する。基板２２は、マイクロチップ１の基板２と同様の材料からなる。好ましくは、基板２２は、射出成形品からなる基板本体の両面に、被覆樹脂層を積層した構造を有する。射出成形品を用いた場合、生産性を高めることができる。
【００６０】
基板２２は、対向し合う第１の主面２２ａと第２の主面２２ｂとを有する。
【００６１】
基板２２内に、マイクロポンプ部Ｐ、マイクロ流路部２３が設けられている。マイクロ流路部２３の上流側においては、前処理液導入部２４が設けられている。マイクロ流路部２３の下流側には加熱部２５が設けられている。また、マイクロ流路部２３の前処理液導入部２４の下流側部分には、合流部２３ａが設けられている。合流部２３ａに、検体導入部が接続されている。検体導入部も、基板２２内に設けられている。
【００６２】
前処理液導入部２４と、加熱部２５とは、第１の主面２２ａと第２の主面２２ｂとを結ぶ方向において異なる位置に設けられている。より具体的には、前処理液導入部２４は、第１の主面２２ａ側に寄せられて設けられており、加熱部２５は、第２の主面２２ｂ側に寄せられて設けられている。好ましくは、本実施形態のように、第１の主面２２ａ及び第２の主面２２ｂの面方向に視たときに、前処理液導入部２４と、加熱部２５とが重ならないように設けられる。それによって、前処理液導入部２４と加熱部２５との前述した面方向距離を小さくすることができる。
【００６３】
加熱部２５が設けられている部分において、第２の主面２２ｂの外側に、ヒーター３１が配置されている。ヒーター３１は、加熱部２５内のマイクロ流体を加熱するために設けられている。
【００６４】
本実施形態では、前処理液導入部２４からマイクロ流路部２３に前処理液が導入され、他方、合流部２３ａにおいて検体も導入される。そして、検体と前処理液との混合液が、加熱部２５に導かれる。加熱部２５において、ヒーター３１により加熱され、ＰＣＲが行われる。
【００６５】
前処理液導入部２４と、加熱部２５とが、前述した面方向において重ならない位置に設けられているため、マイクロ流路部２３が設けられている部分の面方向に沿う距離Ｒを小さくすることができる。仮に、前処理液導入部２４と、加熱部２５とが、面方向において重なる位置に設けられている場合には、距離Ｒを大きくしなければならない。さもないと、ヒーター３１による熱が、前処理液導入部２４側に伝わり、試薬が失活するおそれがある。これに対して、本実施形態では、前処理液導入部２４と、加熱部２５との間の距離Ｒを小さくすることができ、その場合であっても、試薬は失活が生じ難い。よって、マイクロチップ２１では小型化を図ることができ、かつ検体の導入から核酸増幅反応を終了するまでの処理時間を短縮することができる。
【００６６】
以下、実施例を挙げて、本発明を具体的に説明する。本発明は、以下の実施例のみに限定されない。
【００６７】
（実施例１）
図１に示すマイクロチップ１を用意した。核酸と夾雑物とを含む検体として、口腔スワブを用意した。前処理液として、タカラバイオ社製「ＭｉｇｈｔｙＡｍｐ  ＤＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｖｅｒ．２」を用意した。
【００６８】
マイクロポンプ部１５の作動によって、検体導入部１１から、マイクロ流路部１４内に、検体を導入し、マイクロ流路部１４内を検体を移動させた。マイクロポンプ部１５の作動によって、前処理液導入部１２から、マイクロ流路部１４内に前処理液を導入し、マイクロ流路部１４内において、検体と前処理液とを混合し、混合液を形成した。検体の導入から、混合液を形成するまでの時間は、２分であった。加熱部１６により、混合液を加熱しつつ、マイクロポンプ部１５の作動によって、マイクロ流路部１４内を混合液を移動させ、混合液を核酸増幅部１３に移動させた。
【００６９】
核酸増幅部１３において、混合液に含まれる核酸を増幅反応させた。検体の導入から、核酸増幅反応を開始するまでの時間は７分であった。
【００７０】
（実施例２）
図４に示したマイクロチップ２１を用意した。実施例２において、図４の距離Ｒすなわち、前処理液導入部２４と、加熱部２５の間の距離Ｒは２ｍｍ、この間の流路部分の道のりは４ｍｍであった。なお、実施例１において、前処理液導入部１２から、加熱部１６までの上記面方向に沿う距離は５１ｍｍ、流路部分の道のりは６０ｍｍであった。検体及び前処理液は実施例１と同じものを用い、実施例１と同様にして、マイクロ流路部２３内に、検体を導入し、かつ前処理液を導入した。そして、マイクロ流路部２３から加熱部２５に混合液を供給し、加熱部２５において加熱し、核酸増幅反応を開始した。検体の導入から、核酸増幅反応を開始するまでの時間は５分であった。
【００７１】
（比較例）
すべて手作業により、実施例１で用いた検体と、実施例１で用いた前処理液とを混合し、混合液を得た。この混合液を加熱装置内において加熱した。手作業による混合開始から、核酸増幅反応を開始するまでの時間は、２０分であった。
【符号の説明】
【００７２】
１…マイクロチップ
２…基板
１１…検体導入部
１２…前処理液導入部
１３…核酸増幅部
１４…マイクロ流路部
１５…マイクロポンプ部
１６…加熱部
１７…ガス排出部
２１…マイクロチップ
２２…基板
２２ａ…第１の主面
２２ｂ…第２の主面
２３…マイクロ流路部
２３ａ…合流部
２４…前処理液導入部
２５…加熱部
３１…ヒーター
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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