(57)【要約】【課題】本発明の目的は、光学異性体の分離能に優れたカラム充填剤およびカラムを提供することにある。本発明の目的は、また、ＬＣ／ＭＳに直結して使用することが可能な逆相移動相を用いて光学異性体を分離可能なカラム充填剤およびカラムを提供することにある。【解決手段】本発明は、シクロデキストリンがスペーサーを介して担体に結合しているカラム充填剤であって、前記スペーサーが糖鎖を含み、前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基がアセチル化されているカラム充填剤およびカラムにより、上記課題を解決する。【選択図】図１
2017023963.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
シクロデキストリン、スペーサーおよび担体を含むカラム充填剤であって、
前記シクロデキストリンが前記スペーサーを介して前記担体に結合しており、
前記スペーサーが単糖または糖鎖を含み、
前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基がアセチル化されていることを特徴とするカラム充填剤。
【請求項２】
光学異性体を分離するためのカラム充填剤であって、前記光学異性体がアミン系化合物であることを特徴とする請求項１に記載のカラム充填剤。
【請求項３】
前記アミン系化合物が下記一般式（１）：
【化１】
2017023963.tif 000012
（式中、
Ｒは、非置換、または水酸基もしくはフェニル基で置換された炭素数１〜３個のアルキル基である。）
で示される化合物、または、
下記一般式（２）：
【化２】
2017023963.tif 000013
（式中、
Ｒ１は、水素、または直鎖もしくは分岐鎖である炭素数１〜５個のアルキル基であり、
Ｒ２は、水素、非置換、もしくは水酸基で置換された炭素数１〜３個のアルキル基、またはフェニル基であり、
Ｒ３は、水素または水酸基であり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８は、各々独立して、水素または水酸基であり、
Ｒ６は、水素、水酸基または炭素数１〜３個のアルキル基である。）
で示される化合物であることを特徴とする請求項２に記載のカラム充填剤。
【請求項４】
前記アミン系化合物が、前記一般式（２）において、
Ｒ１が、水素であり、Ｒ２が、メチル基であり、Ｒ３が、水酸基であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、水素であるか、または
Ｒ１が、水素であり、Ｒ２が、フェニル基であり、Ｒ３が、水素であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８が、水素であり、Ｒ６が、メチル基であることを特徴とする請求項３に記載のカラム充填剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のカラム充填剤が充填されたカラム。
【請求項６】
有機酸を含む移動相を用いて分離することを特徴とする請求項５に記載のカラム。
【請求項７】
請求項５または６に記載のカラムを用いて光学異性体を分離することを特徴とする、光学異性体の分離方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カラム充填剤、前記カラム充填剤が充填されたカラム、および前記カラムを用いた光学異性体の分離方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、光学活性体は、その特有の生理活性作用のため、医薬、農薬、食品等の分野で広く使用されるようになってきている。光学活性体は、その異性体間で活性が異なる場合が多くあり、光学活性体を扱う分野においては、光学異性体を分離することは極めて重要である。
【０００３】
ところで、シクロデキストリンは、６〜８個のグルコース分子がα−１，４グリコシド結合した環状の化合物である。シクロデキストリンを構成しているグルコースの中には、光学活性な炭素が含まれているため、それ自体が光学分割能を有することが知られている。
【０００４】
シクロデキストリンを用いた充填剤は、古くから知られており、非特許文献１および２には、シクロデキストリンを用いた初期の光学分割用充填剤が記載されている。また、その後の研究により、光学異性体の分離能の改良が進められ、その一例として、シクロデキストリンの水酸基が化学修飾された充填剤が報告されている。そのような化学修飾を有する充填剤としては、例えば、シクロデキストリンの水酸基がアセチル化された充填剤や（非特許文献３および４、ならびに非特許文献５）、シクロデキストリンの水酸基がフェニルカーバメート化された充填剤が報告されている（特許文献１）。
【０００５】
一方、シクロデキストリンの水酸基の化学修飾以外にも、光学異性体の分離能を高める研究は進められており、例えば、本願の出願人による特許文献２では、シクロデキストリンと担体とを糖鎖を介して連結した充填剤を報告している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０００−４６８１８号公報
【特許文献２】特開２０００−１７６２８０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】J.Chromatogr.Sci.,22,1984,411-415
【非特許文献２】Anal.Chem.,57,1985,237-242
【非特許文献３】Anal.Chem.,62,1990,1610-1615
【非特許文献４】J.Chromatogr.A,793,1998,249-256
【非特許文献５】〔平成２７年６月２日検索〕、インターネット（URL:http://www.sigmaaldrich.com/）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
シクロデキストリン型の充填剤を用いた固定相は、逆相移動相と組み合わせて使用することができ、扱いやすいという利点を有するものの、分析対象となる化合物が限定されるという欠点を有しており、特にアミン系化合物の分離は困難な場合が多かった。
【０００９】
また、従来の技術では、アミン系化合物の分離は、多くの場合順相で行われており、逆相で行われた場合には、光学異性体の十分な分離に成功していなかった。さらに、アミン系化合物の分離を逆相で行う場合には、リン酸系の移動相が用いられることが多く、移動相との相性の問題で、従来の充填剤を充填したカラムは、ＬＣ／ＭＳ等の測定装置に直結して使用することには問題があった。
【００１０】
本発明の目的は、光学異性体の分離能に優れたカラム充填剤を提供すること、特にアミン系化合物の分離に適したカラム充填剤、カラムおよび光学異性体の分離方法を提供することにある。本発明の目的は、ＬＣ／ＭＳに直結して使用することが可能な逆相移動相を用いて光学異性体を分離可能なカラム充填剤、カラムおよび光学異性体の分離方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
前記課題を解決するために、鋭意検討した結果、本発明者らは、シクロデキストリンがスペーサーを介して担体に結合しているカラム充填剤において、前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基をアセチル化したときに光学異性体の分離能が高まることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち、本発明は、以下の発明を包含する。
（１）シクロデキストリン、スペーサーおよび担体を含むカラム充填剤であって、
前記シクロデキストリンが前記スペーサーを介して前記担体に結合しており、
前記スペーサーが単糖または糖鎖を含み、
前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基がアセチル化されていることを特徴とするカラム充填剤。
（２）光学異性体を分離するためのカラム充填剤であって、前記光学異性体がアミン系化合物であることを特徴とする（１）に記載のカラム充填剤。
（３）前記アミン系化合物が下記一般式（１）：
【００１３】
【化１】
2017023963.tif 000003
【００１４】
（式中、
Ｒは、非置換、または水酸基もしくはフェニル基で置換された炭素数１〜３個のアルキル基である。）
で示される化合物、または、
下記一般式（２）：
【００１５】
【化２】
2017023963.tif 000004
【００１６】
（式中、
Ｒ１は、水素、または直鎖もしくは分岐鎖である炭素数１〜５個のアルキル基であり、
Ｒ２は、水素、非置換、もしくは水酸基で置換された炭素数１〜３個のアルキル基、またはフェニル基であり、
Ｒ３は、水素または水酸基であり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８は、各々独立して、水素または水酸基であり、
Ｒ６は、水素、水酸基または炭素数１〜３個のアルキル基である。）
で示される化合物であることを特徴とする（２）に記載のカラム充填剤。
（４）前記アミン系化合物が、前記一般式（２）において、
Ｒ１が、水素であり、Ｒ２が、メチル基であり、Ｒ３が、水酸基であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、水素であるか、または
Ｒ１が、水素であり、Ｒ２が、フェニル基であり、Ｒ３が、水素であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８が、水素であり、Ｒ６が、メチル基であることを特徴とする（３）に記載のカラム充填剤。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載のカラム充填剤が充填されたカラム。
（６）有機酸を含む移動相を用いて分離することを特徴とする（５）に記載のカラム。
（７）（５）または（６）に記載のカラムを用いて光学異性体を分離することを特徴とする、光学異性体の分離方法。
【発明の効果】
【００１７】
本発明により、精度の高い光学異性体の分離が可能となる。特に、従来の技術では分離が困難もしくは不可能であったアミン系化合物の分離を高精度で行うことができる。
【００１８】
また、本発明のカラム充填剤を充填したカラムは、ＬＣ／ＭＳに直結して使用することが可能な逆相移動相を用いて光学異性体を分離することが可能であるため、ＬＣ／ＭＳに直結して使用することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】１,２−ジフェニルエチルアミンをクロマトグラフィーにより測定した結果を示す。図中、（ａ）は、カラム（Ａ）を用いて測定したクロマトグラム（比較例１）を、（ｂ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラム（実施例１）を示す。
【図２】フェニルグリシノールをクロマトグラフィーにより測定した結果を示す。図中、（ａ）は、カラム（Ａ）を用いて測定したクロマトグラム（比較例２）を、（ｂ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラム（実施例２）を示す。
【図３】１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミンをクロマトグラフィーにより測定した結果を示す。図中、（ａ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラム（実施例３）を、（ｂ）は、カラム（Ｃ）を用いて測定したクロマトグラム（比較例３）を示す。
【図４】オクトパミンをクロマトグラフィーにより測定した結果を示す。図中、（ａ）は、カラム（Ａ）を用いて測定したクロマトグラムを、（ｂ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラムを示す。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
〔カラム充填剤〕
本発明のカラム充填剤は、シクロデキストリン、スペーサーおよび担体を含んでおり、前記シクロデキストリンは、前記スペーサーを介して前記担体に結合する構成をとっている。
【００２１】
本発明において用いられるシクロデキストリンとしては、例えば、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリン等が挙げられ、より好ましくは、β−シクロデキストリンが用いられる。
【００２２】
本発明において用いられるシクロデキストリンは、その中に含まれている水酸基がアセチル化による化学修飾を受けている。アセチル化による化学修飾は、シクロデキストリンの水酸基全体に渡っていてもよく、部分的にアセチル化されていてもよい。
【００２３】
シクロデキストリンの水酸基のアセチル化は、特に限定されるものではないが、シクロデキストリンとシクロデキストリンの水酸基をアセチル化できる物質とを反応させることにより行われる。シクロデキストリンの水酸基をアセチル化できる物質は、例えば、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸メチル、Ｎ−メチルアセトアミド、酢酸、臭化アセチル、アセチルシアニド等が挙げられ、取扱いの容易性の観点から、無水酢酸がより好適である。
【００２４】
本発明において用いられる担体としては、シクロデキストリンが遊離しないように固定できるものであれば別段限定されないが、例えば、シリカゲル、ポーラスガラスが挙げられ、より好ましくは、シリカゲルが使用される。
【００２５】
シリカゲルは、その内部にスペーサーとの結合に適した結合部位を創出するために、任意に化学修飾されていてもよく、好ましくは、３−アミノプロピルシリル化されている。かかる場合、この３−アミノプロピルシリル化されてなるシリカゲルのアミノ基部分が、スペーサーと結合している。
【００２６】
本発明のカラム充填剤は、シクロデキストリンと担体とを連結するスペーサーを有している。スペーサーは、シクロデキストリンと担体とを連結する機能を有しているものであれば特に限定されないが、好ましくは、単糖または糖鎖を含んでいる。
【００２７】
本発明において、単糖は特に限定されるものではないが、例えば、グルコース、ガラクトース、マンノース、キシロース、フルクトース等を挙げることができる。
【００２８】
また、本発明において、糖鎖とは、単糖が２個以上連結したオリゴマーまたはポリマーをいい、２個以上の単糖は、１種類の単糖であってもよいし、２種類以上の単糖の組合せであってもよい。本発明において、糖鎖の長さは、特に限定されないが、例えば、単糖が２個以上、３個以上、４個以上、５個以上連結されたものであり得る。糖鎖の長さの上限は、糖鎖がスペーサーとしての機能を有する限りにおいて特に限定されないが、例えば、単糖が１５個以下、１４個以下、１３個以下、１２個以下、１１個以下、１０個以下連結されたものであり得る。糖鎖の長さは、好ましくは、２〜６個、より好ましくは、２〜４個、最も好ましくは、２個の単糖が連結されたものであり得る。２個の単糖が連結された糖鎖は、合成の容易性等の観点から最も好ましく使用される。
【００２９】
かかる糖鎖としては、より具体的には、例えば、マルトース、ラクトース、サッカロース、セロビオース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオース、トレハロース、セロビオース等を挙げることができる。本発明における糖鎖を構成する単糖としても特に限定されるものではないが、より好ましくは、グルコースである。
【００３０】
本発明におけるスペーサーとしては、例えば、２個のグルコースが連結したグルクロニルグルコノイル基が用いられる。
【００３１】
本発明におけるスペーサーに含まれる単糖または糖鎖は、その中に含まれている水酸基がアセチル化による化学修飾を受けている。アセチル化による化学修飾は、糖鎖の水酸基全体に渡っていてもよく、部分的にアセチル化されていてもよい。
【００３２】
本発明のカラム充填剤において、シクロデキストリンと単糖または糖鎖との両方がアセチル化されていることが好ましいが、すべての水酸基がアセチル化されている必要はなく、アセチル化されていない水酸基が存在していてもよい。
【００３３】
本発明において、シクロデキストリンとスペーサーとの結合様式、およびスペーサーと担体との結合様式は、特に限定されないが、通常、共有結合により結合している。結合に関して、シクロデキストリン、スペーサーおよび担体は、それぞれ結合に供し得る基を元々有していてもよく、外部から導入してもよい。結合に供し得る基、または外部から導入し得る基は、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、チオール基、リン酸基等を含むが、これらに限定されない。
【００３４】
本発明のカラム充填剤は、光学異性体の分離に好適に用いることができる。特に、本発明のカラム充填剤によれば、従来は分離が困難であったアミン系化合物の光学異性体を分離することができる。
【００３５】
本発明において好適に光学異性体を分離することができるアミン系化合物は、特に限定されるものではないが、より好ましくは、１級アミン化合物または２級アミン化合物であり、さらに好ましくは、１級アミン化合物である。
【００３６】
本発明のカラム充填剤を用いて好適に光学異性体を分離することができるアミン系化合物は、好適には、下記一般式（１）で示される化合物であり得る。
【００３７】
【化３】
2017023963.tif 000005
【００３８】
（式中、
Ｒは、非置換、または水酸基もしくはフェニル基で置換されたアルキル基である。）
で示される化合物である。
【００３９】
ここで、上記Ｒのアルキル基は、その炭素数が１〜１０個であってもよく、好ましくは、１〜５個であり、より好ましくは、１〜３個、とりわけ好ましくは、１個であり得る。また、アルキル基は、直鎖状、分岐鎖状、環状のいずれであってもよく、好ましくは、直鎖状であり得る。アルキル基が水酸基もしくはフェニル基で置換される場合、置換されるアルキル基上の水素の数は、例えば、１個、２個、３個、４個、５個であってよく、好ましくは、１個であり得る。また、アルキル基の置換は、水酸基もしくはフェニル基の一方のみで行われてもよく、水酸基およびフェニル基の両方で行われてもよい。
【００４０】
また、別の態様において、本発明のカラム充填剤を用いて分離可能なアミン系化合物は、下記の一般式（２）で示される化合物であり得る。
【００４１】
【化４】
2017023963.tif 000006
【００４２】
（式中、
Ｒ１は、水素、またはアルキル基であり、
Ｒ２は、水素、非置換、もしくは水酸基で置換された炭素数１〜３個のアルキル基、またはフェニル基であり、
Ｒ３は、水素または水酸基であり、
Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８は、各々独立して、水素または水酸基であり、
Ｒ６は、水素、水酸基または炭素数１〜３個のアルキル基である。）
で示される化合物である。
【００４３】
ここで、上記Ｒ１がアルキル基である場合、その炭素数は、１〜１５個であってもよく、好ましくは、１〜１０個であり、より好ましくは、１〜５個、とりわけ好ましくは、１個、２個もしくは３個であり得る。また、上記Ｒ１がアルキル基である場合、アルキル基は、直鎖状、分岐鎖状、環状のいずれであってもよく、好ましくは、直鎖状もしくは分岐鎖状であり得る。
【００４４】
上記Ｒ２がアルキル基である場合、その炭素数は、１〜１０個であってもよく、好ましくは、１〜５個であり、より好ましくは、１〜３個、とりわけ好ましくは、１個であり得る。また、アルキル基は、直鎖状、分岐鎖状、環状のいずれであってもよく、好ましくは、直鎖状であり得る。アルキル基が水酸基で置換される場合、置換されるアルキル基上の水素の数は、例えば、１個、２個、３個、４個、５個であってよく、好ましくは、１個であり得る。
【００４５】
上記Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８は、各々独立して、水素または水酸基であり、上記Ｒ６も含めて、例えば、下記の組み合わせが好ましい。
・Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８のすべてが水素である。
・Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ６が水酸基である。
・Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ６がメチル基である。
・Ｒ４、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ５が水酸基である。
・Ｒ４、Ｒ６およびＲ８が水素であり、Ｒ５およびＲ７が水酸基である。
・Ｒ４、Ｒ７およびＲ８が水素であり、Ｒ５およびＲ６が水酸基である。
【００４６】
上記Ｒ６がアルキル基である場合、その炭素数は、１〜１０個であってもよく、好ましくは、１〜５個であり、より好ましくは、１〜３個、とりわけ好ましくは、１個であり得る。また、アルキル基は、直鎖状、分岐鎖状、環状のいずれであってもよく、好ましくは、直鎖状であり得る。
【００４７】
本発明のカラム充填剤において、より好適なアミン系化合物は、上記一般式（２）において、
Ｒ１が、水素であり、Ｒ２が、メチル基であり、Ｒ３が、水酸基であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＲ８が、水素であるか、または
Ｒ１が、水素であり、Ｒ２が、フェニル基であり、Ｒ３が、水素であり、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ７およびＲ８が、水素であり、Ｒ６が、メチル基である化合物である（前者の化合物は、フェニルプロパノールアミンであり、後者の化合物は、１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミンである）。
【００４８】
本発明のカラム充填剤を用いて好適に光学異性体を分離することができるアミン系化合物としては、より具体的には、下記の化合物が挙げられるが、これらに限定されない：フェニルプロパノールアミン、１−フェニルエチルアミン、フェニルアラニノール、オクトパミン、１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミン（ＰＴＥ）、１,２−ジフェニルエチルアミン、フェニルグリシノール、ノルエピネフリン、２−アミノ−１，２−ジフェニルエタノール、２−アミノ−１−フェニルエタノール等（以上、１級アミン化合物）；エチレフリン、メタプロテレノール、エピネフリン、シネフリン、イソプロテレノール等（以上、２級アミン化合物）。
【００４９】
上記のアミン系化合物のうち、実用性の観点から、覚せい剤の成分であるフェニルプロパノールアミンや光学分割剤として使用される１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミンが、本発明のカラム充填剤による光学異性体の分離対象として好ましい。
【００５０】
上記のアミン系化合物と類似した化学構造を有するアミン系化合物もまた、本発明のカラム充填剤を用いて好適に光学異性体を分離することが可能なアミン系化合物の範囲に包含される。
【００５１】
〔カラム充填剤の製造方法〕
本発明の別の態様において、上記カラム充填剤を製造する方法を提供する。
【００５２】
一つの態様において、本発明の製造方法は、シクロデキストリン、スペーサーおよび担体を含むカラム充填剤の製造方法であって、前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基をアセチル化する工程を含む、カラム充填剤の製造方法である。
【００５３】
前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基をアセチル化する工程は、シクロデキストリンおよびスペーサーとそれらの水酸基をアセチル化できる物質とを反応させることにより行われる。シクロデキストリンおよびスペーサーの水酸基をアセチル化できる物質は、例えば、無水酢酸、塩化アセチル、酢酸メチル、Ｎ−メチルアセトアミド、酢酸、臭化アセチル、アセチルシアニド等が挙げられ、取扱いの容易性の観点から、無水酢酸がより好適である。
【００５４】
前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基をアセチル化する工程は、シクロデキストリンの水酸基をアセチル化する工程とスペーサーの水酸基をアセチル化する工程が別々に行われてもよいし、同一工程で行われてもよいが、より好ましくは同一工程で行われる。
【００５５】
本発明の他の態様において、前記シクロデキストリンおよび前記スペーサーの水酸基をアセチル化する工程の前に、シクロデキストリン、スペーサーおよび担体を結合させる工程が含まれ得る。シクロデキストリン、スペーサーおよび担体の結合は、それぞれの構成の結合に供する基の種類や結合方法をもとに、当分野における通常の知識に基づいて適宜行うことができる。
【００５６】
また、本発明の別の態様において、シクロデキストリン、スペーサーおよび担体の少なくともいずれかにおいて結合に供する基を導入する工程を含むこともできる。導入される結合に供する基は、上述のとおり、例えば、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、チオール基、リン酸基等を含むが、これらに限定されない。
【００５７】
本発明のカラム充填剤の製造方法は、上述した本発明のカラム充填剤を製造することができる方法であれば特に限定されるものではない。例えば、本発明のカラム充填剤の製造方法の一態様として、担体がシリカゲルであり、スペーサーが糖鎖である場合を例に挙げて説明する。
【００５８】
本発明のカラム充填剤は、例えば、ω−アミノアルキルシリル化、例えば、３−アミノプロピルシリル化したシリカゲルのアミノ基部分と、シクロデキストリンと結合した糖鎖のカルボン酸化（ヒドロキシメチルピラノースのヒドロキシメチル部がカルボン酸で置換）された部分とを縮合して、アミド結合を形成させ、最後にアセチル化させることによって製造することができる。
【００５９】
具体的には、例えば、通常６〜８個のグルコース分子が環状に連なったシクロデキストリンが、その分岐部分（ヒドロキシメチル基部分）にグルコース、マルトース等の糖鎖が縮合した構造の分岐シクロデキストリンにおいて、分岐糖鎖のヒドロキシメチル基部分がカルボン酸化されたものを原料として用い、この原料をω−アミノアルキルシリル化したシリカゲルと縮合させる。これにより、シクロデキストリンが糖鎖を含むスペーサーを介してシリカゲルに結合した複合体が得られる。続いて、得られた複合体に分岐シクロデキストリンと無水酢酸とを反応させて分岐シクロデキストリンの水酸基をアセチル化することにより、本発明のカラム充填剤が得られる。ここで、原料となる分岐シクロデキストリンは、常法により合成するか、または市販されているグルクロニルグルコニック−β−シクロデキストリン等を使用することもできる。
【００６０】
〔カラム〕
本発明の別の態様において、本発明のカラム充填剤が充填されたカラムが提供される。カラムの材質は、特に限定されないが、ガラス、アクリル、ステンレス等が挙げられ、好ましくは、ステンレスが使用される。
【００６１】
カラム充填剤のカラムへの充填は、当分野における通常の知識に基づいて行われ、例えば、湿式スラリー法により、カラム充填剤がカラムへ充填される。
【００６２】
本発明のカラムは、通常、クロマトグラフィー用の固定相として使用され、より好ましくは、高速液体クロマトグラフィー用の固定相として使用される。
【００６３】
本発明のカラムでは、アミン系化合物の分離を逆相で行うことができ、かつ、ＬＣ／ＭＳに直結して使用することが可能な逆相移動相を用いて光学異性体の分離を行うことができる。したがって、リン酸系の移動相との相性の問題で従来は直結できていなかった、光学異性体の分離を行うためのカラムと分離された光学異性体を定性（定量）するための測定装置を直結することが可能となり、一連の測定を容易に行うことができる。
【００６４】
本発明のカラムと組み合わせて使用される移動相としては、例えば、酢酸、ギ酸、クエン酸等の有機酸を含有する溶液が挙げられる。有機酸を含有する溶液としては、特に限定されないが、例えば、酢酸、酢酸緩衝液、酢酸アンモニウム、ギ酸、ギ酸アンモニウム、クエン酸、クエン酸ナトリウムを含む溶液等が挙げられるがこれらに限定されない。
【００６５】
一方、移動相として、従来からのリン酸系の移動相を用いた場合は、従来のカラムを用いたときと比べて、本発明のカラムにより、光学異性体を高精度に分離できる。
【００６６】
〔光学異性体の分離方法〕
本発明のさらに別の態様において、本発明のカラムを用いた光学異性体の分離方法が提供される。光学異性体の分離方法は、当分野における通常の知識に基づいて、適宜行うことができる。
【実施例】
【００６７】
以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるべきではない。
【００６８】
〔製造例１〕
グルクロニルグルコニック−β−シクロデキストリン８０ｇを脱水テトラヒドロフラン２００ｍＬに溶解し、氷冷下に攪拌しながらＮ−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン２５ｇを加え、氷冷下で攪拌した。これに３−アミノプロピルシリル化されたシリカゲル（平均粒径５μｍ、平均孔径１２０Å）約１００ｇを加えて懸濁させ攪拌した。次いで、濾過して得られた固体をテトラヒドロフラン、クロロホルム、メタノール各々１００ｍＬで順次４回洗浄し、乾燥して、本発明の比較となるカラム充填剤（Ａ）約１１０ｇを得た。これを、内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍのステンレス管に湿式スラリー法により充填し、本発明の比較となるカラム（Ａ）を得た。
【００６９】
〔製造例２〕
カラム充填剤（Ａ）約１２ｇに、ピリジン２４０ｍＬを加え懸濁させ、無水酢酸６０ｍＬを加えて攪拌した。反応液を濾過して、濾上物をテトラヒドロフラン５００ｍＬ、メタノール５００ｍＬで洗浄した。得られた固体にメタノール３００ｍＬを加え懸濁させて攪拌した。反応液を濾過して、トルエン、クロロホルム、ヘキサンの順でそれぞれ５００ｍＬで洗浄し、乾燥して、本発明のカラム充填剤（Ｂ）、約１４ｇを得た。これを、内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍのステンレス管に湿式スラリー法により充填し、本発明のカラム（Ｂ）を得た。
【００７０】
〔測定方法〕
保持係数（ｋ）は、ＪＩＳ  Ｋ０２１４：２０１３  分析化学用語（クロマトグラフィー部門）に従い、次式により算出した。
【００７１】
ｋ＝（ｔＲ―ｔ０）／ｔ０
ｔＲは対象成分の保持時間、ｔ０は保持されずに移動相と同じ速度でカラムを通過する時間を表す。
【００７２】
分離係数（α）は、ＪＩＳ  Ｋ０２１４：２０１３  分析化学用語（クロマトグラフィー部門）に従い、次式により算出した。
【００７３】
α＝ｋ２／ｋ１
ｋ１は保持時間が短い成分の保持係数、ｋ２は保持時間が長い成分の保持係数を表す。
【００７４】
〔試験例１〕
試料（１,２−ジフェニルエチルアミン）をメタノールに溶解し、試料濃度約１０ｍｇ／ｍＬ溶液とした。得られた溶液を、上記製造例で得られたカラム（Ａ）およびカラム（Ｂ）を用いて、下記の条件下で分析し、保持係数および分離係数を求めた。
【００７５】
移動相：２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）／メタノール（６０／４０）
カラム温度：室温
流速：０．５ｍＬ／分
検出：紫外吸光光度検出器  検出波長２５４ｎｍ
カラム（Ａ）を使用した場合を比較例１、カラム（Ｂ）を使用した場合を実施例１とする。
【００７６】
結果を表１に、クロマトグラムを図１に示す。図１中、（ａ）は、カラム（Ａ）を用いて測定したクロマトグラムを、（ｂ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラムを示す。また、ピークの上の数字は、１,２−ジフェニルエチルアミンの光学異性体それぞれの保持時間（分）を表す。
【００７７】
【表１】
2017023963.tif 000007
【００７８】
〔試験例２〕
試料（フェニルグリシノール）をメタノールに溶解し、試料濃度約１０ｍｇ／ｍＬ溶液とした。得られた溶液を、上記製造例で得られたカラム（Ａ）およびカラム（Ｂ）を用いて、下記の条件下で分析し、保持係数および分離係数を求めた。
【００７９】
移動相：２０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ３．０）
カラム温度：室温
流速：０．５ｍＬ／分
検出：紫外吸光光度検出器  検出波長２５４ｎｍ
カラム（Ａ）を使用した場合を比較例２、カラム（Ｂ）を使用した場合を実施例２とする。
【００８０】
結果を表２に、クロマトグラムを図２に示す。図２中、（ａ）は、カラム（Ａ）を用いて測定したクロマトグラムを示し、ピークの上の数字は、分離していないフェニルグリシノール光学異性体の保持時間（分）を表す。また、（ｂ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラムを示し、ピークの上の数字は、フェニルグリシノールの光学異性体それぞれの保持時間（分）を表す。
【００８１】
【表２】
2017023963.tif 000008
【００８２】
〔試験例１および２の結果〕
試験例１より、本願発明のカラム（Ｂ）を用いた場合、従来のカラム（Ａ）を用いた場合と比べて、保持係数および分離係数が高まる結果が得られた。また、試験例２より、本願発明のカラム（Ｂ）を用いると、従来のカラム（Ａ）では分離できなかったフェニルグリシノールの分離が可能となるという結果が得られた。
【００８３】
カラム（Ａ）とカラム（Ｂ）の相違は、カラム中のβ−シクロデキストリンおよびスペーサーの水酸基のアセチル化の有無であることから（カラム（Ａ）はアセチル化無し、カラム（Ｂ）はアセチル化有り）、β−シクロデキストリンおよびスペーサーをアセチル化することによって、アミン系化合物の分離能が顕著に高まること、また、従来は分離できなかったアミン系化合物を分離できるという驚くべき効果を奏することが見出された。
【００８４】
〔試験例４〜１２〕
さらに、試料として、下記の表３および４に記載の、フェニルプロパノールアミン（試験例４）、１−フェニルエチルアミン（試験例５）、フェニルアラニノール（試験例６）、オクトパミン（試験例７）、１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミン（ＰＴＥ）（試験例８）、エチレフリン（試験例９）、メタプロテレノール（試験例１０）、エピネフリン（試験例１１）、およびシネフリン（試験例１２）をそれぞれ用い、表３および４に記載の移動相を用いた以外は、試験例１と同様にして、保持係数および分離係数を求めた。
【００８５】
結果を表３および４に示す。また、試験例７のクロマトグラムを図４に示す。図４中、（ａ）は、カラム（Ａ）を用いて測定したクロマトグラムを、（ｂ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラムを示す。
【００８６】
上記の結果より、本願発明のカラム（Ｂ）を用いると、前記アミン系化合物に対しても、アミン系化合物の分離能が顕著に高まること、また、従来は分離できなかったアミン系化合物を分離できるという驚くべき効果を奏することが見出された。
【００８７】
なお、表３は、１級アミン化合物に対しての結果を示し、表４は、２級アミン化合物に対しての結果を示す。
【００８８】
【表３】
2017023963.tif 000009
【００８９】
【表４】
2017023963.tif 000010
【００９０】
〔試験例３〕
試料（１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミン）をメタノールに溶解し、試料濃度約１０ｍｇ／ｍＬ溶液とした。得られた溶液を、上記製造例で得られたカラム（Ｂ）および内径４．６ｍｍ、長さ２５ｃｍ、平均粒径５μｍのＡＳＴＥＣ社製カラム（商品名ＣＹＣＬＯＢＯＮＤＩ２０００ＡＣ、以下カラム（Ｃ））を用いて、下記の条件下で分析し、保持係数および分離係数を求めた。
【００９１】
移動相：０．１％トリメチルアンモニムアセテート緩衝液（ｐＨ４．６）／メタノール（６０／４０）
カラム温度：室温
流速：０．５ｍＬ/分
検出：紫外吸光光度検出器  検出波長２５４ｎｍ
カラム（Ｃ）を使用した場合を比較例３、カラム（Ｂ）を使用した場合を実施例３とする。
【００９２】
結果を表５に、クロマトグラムを図３に示す。図３中、（ａ）は、カラム（Ｂ）を用いて測定したクロマトグラムを示し、ピークの上の数字は、１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミンの光学異性体それぞれの保持時間（分）を表す。また、（ｂ）は、カラム（Ｃ）を用いて測定したクロマトグラムを示し、ピークの上の数字は、分離していない１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミン光学異性体の保持時間（分）を表す。
【００９３】
【表５】
2017023963.tif 000011
【００９４】
〔試験例３の結果〕
試験例３より、同条件で測定したところ、本願発明のカラム（Ｂ）を用いると、従来のカラム（Ｃ）では分離できなかった１−フェニル−２−（パラ−トリル）エチルアミンの分離が可能となるという結果が得られた。
【００９５】
ここで、カラム（Ｂ）とカラム（Ｃ）とは、カラム中のβ−シクロデキストリンの水酸基がアセチル化されているという点で一致しているが、β−シクロデキストリンと担体との結合様式が異なっている。すなわち、カラム（Ｃ）では、β−シクロデキストリンと担体が直接結合しているのに対して、カラム（Ｂ）では、β−シクロデキストリンと担体が糖鎖を含むスペーサーを介して結合している。
【００９６】
したがって、上記の結果より、β−シクロデキストリンのアセチル化のみならず、アセチル化したβ−シクロデキストリンと担体との結合様式がカラムの性能に大きな影響を与えることが見出された。そして、本願発明のように、アセチル化したβ−シクロデキストリンと担体との結合が糖鎖を含むスペーサーを介しているという構成を取ることにより、カラムの性能において顕著な効果を奏することが見出された。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明の方法により、光学異性体の高精度な分離が可能となる。したがって、光学活性体を扱う分野、例えば、医薬品、農薬、食品、香料、エレクトロニクス等の分野において利用可能である。また、本発明の方法により、特にアミン系化合物の分離が高精度で行えるため、覚せい剤原料化合物の分離が必要とされる分野においてとりわけ有用である。
【図１】
2017023963.tif 000014
【図２】
2017023963.tif 000015
【図３】
2017023963.tif 000016
【図４】
2017023963.tif 000017