(57)【要約】【課題】効果が強く、かつ副作用の少ないドライアイ改善剤を提供することにある。【解決手段】ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするドライアイ改善剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするドライアイ改善剤。
【請求項２】
ジピべフリン又はアドレナリンを有効成分とするＭＣＰ−１発現抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ドライアイ改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ドライアイは、様々な要因による涙液及び角結膜上皮の慢性疾患であり、眼不快感や視機能異常を伴う疾患であり、我が国のドライアイ患者数は約２２００万人とも言われており、増加傾向にある。また加齢によって有病率は上昇する。
【０００３】
ドライアイは、涙液の分泌減少・蒸発増加によって涙液の高浸透圧化が生じ、角膜、結膜において炎症反応、細胞傷害が起こり、涙液層が不安定化する結果、発症進行すると考えられている（非特許文献１）。
【０００４】
現在のドライアイの治療法としては、ヒアルロン酸ナトリウム、ジクアホソルナトリウム（ムチン分泌促進）、レバミピド（ムチン産生促進）等の涙液補充療法や眼鏡やゴーグルの装用、涙点プラグ法等が用いられている。
また、特許文献１には、アドレナリンβ受容体アゴニスト、特にアドレナリンβ２受容体アゴニスト（Ｒ−サルブタモール）が、ドライアイにより傷害を受けている動物のマイボーム腺分泌を促進することが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１１／０６８７８６号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】日本眼科学会ホームページ
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、特許文献１に記載のサルブタモールのドライアイ改善効果は十分なものではなく、さらにドライアイ改善効果が強く、かつ副作用の発生頻度の少ないドライアイ改善剤が望まれていた。
従って、本発明の課題は、効果が強く、かつ副作用の少ないドライアイ改善剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで本発明者は、新たなドライアイ改善剤を開発すべく種々検討したところ、前記の特許文献１の記載によればアドレナリンβ２受容体選択的アゴニストがドライアイ改善剤として有効であるとのことであるが、β２受容体選択的アゴニストではなく、全く意外にもα及びβ受容体の両者を刺激する物質であるアドレナリン及びジピベフリンがサルブタモールに比べて優れたドライアイ改善効果及び炎症性サイトカインＭＣＰ−１発現抑制効果を有し、かつサルブタモールのように眼圧を上昇させないため、安全なドライアイ改善剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするドライアイ改善剤を提供するものである。
また、本発明は、ジピベフリン又はアドレナリンを有効成分とするＭＣＰ−１発現抑制剤を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明のドライアイ改善剤は、ドライアイ改善効果に優れ、かつ眼圧を上昇させず、さらにムチン量を増大させるため副作用の少ないドライアイ改善剤として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】高浸透圧条件（ＮａＣｌ  １５０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。
【図２】高浸透圧条件（ＮａＣｌ  １５０ｍＭ）における細胞傷害に対するサルブタモールの抑制作用を示す。
【図３】高浸透圧条件（グルコース  ２８０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。
【図４】高浸透圧条件（ソルビトール  ２８０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。
【図５】高浸透圧条件（スクロース  ２８０ｍＭ）における細胞傷害に対するアドレナリンの抑制作用を示す。
【図６】高浸透圧条件下（ＮａＣｌ  １５０ｍＭ）におけるアドレナリンのカスパーゼ−３様活性を示す。
【図７】高浸透圧条件下（ＮａＣｌ  １５０ｍＭ）におけるアドレナリンのアポトーシス抑制作用を示す。
【図８】ラットドライアイモデルのコットン系テストによる涙液量（ｓｃｈｉｍｅｒ  ｓｃｏｒｅ）に対する作用を示す。
【図９】ラットドライアイモデルにおける角膜の画像を示す。
【図１０】ラットドライアイモデルのフルオレセインのスコアに対する作用を示す。
【図１１】ラットドライアイモデルにおける生細胞量（ＴＵＮＥＬ陽性細胞）を示す。
【図１２】ムチンの発現効果を示す。
【図１３】ラットの眼圧に対する作用を示す。
【図１４】高浸透圧条件（ＮａＣｌ  １００ｍＭ）におけるＭＣＰ−１発現に対するアドレナリンの抑制作用を示す。
【図１５】ＬＰＳ刺激によるＭＣＰ−１発現に対するアドレナリンの抑制作用を示す。
【図１６】高浸透圧条件（ＮａＣｌ  １００ｍＭ）におけるＭＣＰ−１発現に対するα1アゴニスト（ナファゾリン）の作用を示す。
【図１７】高浸透圧条件（ＮａＣｌ  １００ｍＭ）におけるＭＣＰ−１発現に対するβ2アゴニスト（サルブタモール）の作用を示す。
【図１８】スコポラミン持続投与によるＭＣＰ−１発現に対するアドレナリン点眼の作用を示す。ＣＲＬはコントロール、Ｖｅｈｉｃｌｅは生理食塩水、Ａｄｒｅはアドレナリン投与群。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明のドライアイ改善剤及びＭＣＰ−１発現抑制剤の有効成分は、ジピベフリン又はアドレナリンである。ここでアドレナリンは、α及びβ受容体の両者を刺激することが知られている。アドレナリンは、アナフィラキシーショックや敗血症に対する血管収縮薬、気管支喘息発作時の気管支拡張薬として用いられているが、ドライアイ治療には用いられていない。
【００１３】
ジピベフリンは、化学名〔２（２，２−ジメチルプロパノイルオキシ）−４−（１−ヒドロキシ−２−メチルアミノ−エチル）フェニル〕２，２−ジメチルプロパノエートの化合物であり、アドレナリンのプロドラッグであるからα及びβ受容体の両者を刺激する作用を有し、開放隅角緑内障の治療薬として用いられている。しかし、ドライアイ治療には用いられていない。
【００１４】
アドレナリン及びジピベフリンには、水酸基が結合した炭素原子が不斉炭素原子であることから、光学異性体があるので、光学活性体も含まれる。アドレナリンの場合は（Ｒ）体が好ましく、ジピベフリンの場合は（±）体が好ましい。
【００１５】
ジピベフリン及びアドレナリンは、後記実施例に示すように、高浸透圧ストレスによる角膜上皮細胞生存率の低下を抑制し、高浸透圧ストレス依存の角膜上皮細胞アポトーシスを抑制し、角膜傷害を抑制し、ムチン量を増大させる作用を有するためドライアイ改善剤として有用である。また、ジピベフリン及びアドレナリンは、眼圧を上昇させないことから、サルブタモールのような副作用を発生しないと考えられる。
また、ジピベフリン及びアドレナリンは、高浸透圧ストレス及びＬＰＳ刺激によるＭＣＰ−１の発現を強く抑制し、さらにスコポラミン持続投与によるＭＣＰ−１の発現も強く抑制する。従って、ジピベフリン及びアドレナリンは、炎症性サイトカインであるＭＣＰ−１の発現を抑制することにより、ドライアイ改善効果を示しているものと考えられる。なお、β2アゴニストであるサルブタモールは、高浸透圧ストレスによるＭＣＰ−１の発現を抑制しない。
【００１６】
本発明のドライアイ改善剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤の投与形態としては、点眼剤等が挙げられる。点眼剤の形態とするには、薬学的に許容される担体とともに製剤化することができる。そのような担体としては、例えば、メントール、ボルネオール、カンフル等の清涼化剤、クロロブタノール、デヒドロ酢酸ナトリウム、フェネチルアルコール、パラオキシ安息香酸エステル類、ソルビン酸カリウム等の保存剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトール、プロピレングリコール等の等張化剤、エデト酸ナトリウム、シクロデキストリン、亜硫酸水素ナトリウム等の安定化剤、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース等の粘稠剤、塩酸、クエン酸またはその塩、ホウ酸またはその塩、リン酸またはその塩、酢酸またはその塩、酒石酸またはその塩、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のｐＨ調整剤が挙げられる。本発明のドライアイ改善剤を点眼剤とする場合には、ジピベフリン又はアドレナリンに加えて、ヒアルロン酸ナトリウム、ジクアホソルナトリウム、レバミピド等を配合することもできる。
【００１７】
さらに、本発明のドライアイ改善剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤中における本発明の有効成分の含有量は、特に限定されるものではないが、通常は、点眼剤全量に対して０．０１〜１０重量％、好ましくは０．０１〜１重量％である。
【００１８】
本発明のドライアイ改善剤又はＭＣＰ−１発現抑制剤の投与量は、投与する患者の症状、年齢、投与方法によって異なるがジピベクフン又はアドレナリンとして０．０５〜５０μｇ／ｋｇ／日が好ましく、特に０．１〜１０μｇ／ｋｇ／日が好ましい。
【実施例】
【００１９】
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。
【００２０】
実施例１（高浸透圧条件における細胞傷害の抑制効果）
ＨＣＥ細胞（ヒト角膜上皮細胞）１×１０6ｃｅｌｌｓ／６０  ｏｒ  １００ｍｍ  ｄｉｓｈ）を、被検化合物を含む高浸透圧培地で２４時間培養した。培地は、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２８０ｍＭのグルコース、２８０ｍＭのソルビトール、２８０ｍＭのスクロースにより高浸透圧条件とした。生細胞数をＭＴＴ法により測定し、コントロール（等張圧条件）の吸光度に対する相対値を算出した。結果を図１〜図５に示した。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１である。
図１〜図５より、アドレナリンは、高浸透圧条件により生じる角膜上皮細胞生存率の低下を顕著に抑制した。その効果は、β２受容体刺激剤であるサルブタモールよりも強かった。
【００２１】
実施例２（高浸透圧条件におけるアポトーシス抑制効果）
ＨＣＥ細胞を、被検化合物及び１５０ｍＭのＮａＣｌを含む高浸透圧培地で培養した。２時間培養後のアポトーシスのマーカーであるカスパーゼ−３様活性を、蛍光ペプチド基質を使用して測定し、結果を図６に示した。また、生細胞の核染色剤であるＨｏｅｃｈｓｔ  ３３２５８で染色した結果を図７に示した。数値は平均±Ｓ．Ｄ．（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）、＊＊Ｐ＜０．０１である。
図６及び図７より、アドレナリンは、高浸透圧ストレス依存性の角膜上皮細胞のアポトーシスを顕著に抑制した。
【００２２】
実施例３（ラットの角膜表面傷害治療効果）
ラットの涙腺を除去し、ドライアイモデルを作製した。涙腺除去後の１〜５週間の期間、被検化合物を含む水溶液５μＬを１日３回点眼投与した。涙液量をコットン糸テストにより測定し、結果を図８に示した。フルオレセインで染色された角膜の画像を図９に示した。フルオレセインのスコアを算出し、図１０に示した。ＴＵＮＥＬ陽性細胞量を測定し、図１１に示した。数値は平均±Ｓ．Ｅ．Ｍ．、＊Ｐ＜０．０５；＊＊Ｐ＜０．０１である。
図８〜１１より、アドレナリン及びそのプロドラックであるジピベフリンは、ドライアイモデルラットにおいて涙液量を変化させず、角膜表面の傷害を抑制した。また、その作用はサルブタモールよりも優れていた。
【００２３】
実施例４（メッセンジャーＲＮＡ発現量の変化（ムチンの発現効果））
ＨＣＥ細胞を、被検化合物を含む培地で培養した。３時間及び２４時間培養後のｍｕｃ１、ｍｕｃ４メッセンジャーＲＮＡ発現量を、ｒｅａｌ  ｔｉｍｅ  ＲＴ−ＰＣＲ法により測定した。ａｃｔｉｎメッセンジャーＲＮＡの発現量に対する相対値を算出し、結果を図１２に示した。数値は平均±Ｓ．Ｄ．（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）、＊Ｐ＜０．０５である。
図１２より、アドレナリンは、角膜上皮細胞のムチン発現量を増大することが判明した。
【００２４】
実施例５（眼圧に対する作用）
ラットに被験化合物を１日１回４日間（Ｄａｙ０〜Ｄａｙ４）点眼投与し、ラットにおける眼圧に対する作用を検討した。
結果を図１３に示す。図１３より、アドレナリン及びジピベフリンは、眼圧を低下させた。一方、サルブタモールは、最初眼圧を低下させたが、４日後では逆に眼圧を上昇させた。
【００２５】
実施例６（高浸透圧条件におけるＭＣＰ−１発現に対する効果）
ＨＣＥ細胞を、被検化合物及び５０〜１００ｍＭのＮａＣｌを含む高浸透圧培地で培養した。６時間培養後の炎症性サイトカインであるＭＣＰ−１遺伝子の発現量を、ＭＣＰ−１遺伝子特異的プライマーを用いたリアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより測定した。結果は、等張圧条件におけるアクチン（コントロール）の作用に対する相対値で示した。結果を図１４、図１６及び図１７に示す。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５である。
図１４より、アドレナリンは、高浸透圧条件により生じるＭＣＰ−１の発現を顕著に抑制した。また、図１６及び図１７より、高浸透圧条件により生じるＭＣＰ−１の発現を、β2アゴニストであるサルブタモールは抑制せず、α1アゴニストであるナファゾリンは抑制した。
【００２６】
実施例７（ＬＰＳ刺激によるＭＣＰ−１発現に対する効果）
ＨＣＥ細胞を、被検化合物及び１ｎＭ又は１０００ｎＭのＬＰＳ（リポポリサッカライド）を含む培地で培養した。６時間培養後のＭＣＰ−１遺伝子の発現量を実施例６と同様にＲＴ−ＰＣＲにより測定した。結果は、アクチン（コントロール）の作用に対する相対値で示した。結果を図１５に示す。数値は平均±ＳＤ（ｎ＝３）、＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５である。
図１５より、アドレナリンは、ＬＰＳ刺激により生じるＭＣＰ−１の発現を顕著に抑制した。
【００２７】
実施例８
スコポラミン（１２．５ｍｇ／ｄａｙ）を皮下に埋め込んだ浸透圧ポンプ（アルゼット（登録商標）２ＭＬ２）でｄａｙ０から持続注入することによりドライアイラットモデルを作製した。被検化合物（アドレナリン）は、ｄａｙ８からｄａｙ１４に局所投与した。アドレナリンの投与は、０．０１％（０．５５ｍＭ）含有液（５μｌ）又は生理食塩水（コントロール）を１日３回点眼した。最終投与（ｄａｙ１４）２時間後、眼科外科用ブレードで角膜上皮を削り取った。角膜上皮中のＭＣＰ−１遺伝子の発現量を実施例６と同様にＲＴ−ＰＣＲで測定した。結果を図１８に示す。結果は、アクチン（コントロール）の作用に対する相対値で示した。数値は、平均±Ｓ．Ｅ．Ｍである。
図１８より、アドレナリンは、ドライアイモデル動物であるスコポラミン持続注入ラットにおけるＭＣＰ−１発現を顕著に抑制した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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