(57)【要約】【課題】本発明は、肌質を改善することができる新たな肌質改善剤、及び化粧料を提供することを課題とする。【解決手段】本発明に係る肌質改善剤は、トマト由来物を有効成分とすることを特徴とする。また、本発明に係る化粧料は、トマト由来物を有効成分とする肌質改善剤を含有することを特徴とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
トマト由来物を有効成分とすることを特徴とする肌質改善剤。
【請求項２】
前記トマト由来物は、トマト搾汁粕抽出物であることを特徴とする請求項１に記載の肌質改善剤。
【請求項３】
前記トマト由来物は、トマト搾汁液発酵物であることを特徴とする請求項１に記載の肌質改善剤。
【請求項４】
ＡＧＥｓ生成阻害作用を有することを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の肌質改善剤。
【請求項５】
ヒアルロン酸産生促進作用を有することを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか１項に記載の肌質改善剤。
【請求項６】
請求項１から請求項５のいずれか１項に記載の肌質改善剤を含有することを特徴とする化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肌質改善剤、及び化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
肌は、乾燥状態に長期間さらされたり、紫外線を浴び過ぎたりする等の外的要因によるダメージや、現代人にみられがちなストレスといった内的要因によるダメージを受け易い。そして、このようなダメージが肌に蓄積すると、ハリ、弾力、潤い、透明感といった肌質が低下してしまう。
【０００３】
肌へのダメージの蓄積量は、加齢に伴って増加するものの、近年の高齢化社会において、美しく年齢を重ねるというニーズは非常に高く、その結果、化粧料に求められる役割は大きくなってきている。
このような状況において、肌質を改善するための様々な技術が開発されている。
【０００４】
例えば、特許文献１には、分解ヒアルロン酸亜鉛を含む肌質改善用外用組成物が開示されている。
また、特許文献２には、プロアントシアニジンの構成単量体あたりの没食子酸付加率が１０％（モル比）以下であるプロアントシアニジンを有効成分として含有することを特徴とする肌質改善剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１１／１２９３７４号
【特許文献２】国際公開第０１／０３２１３１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
特許文献１、２によると、特許文献１、２に開示されている技術は、いずれも、肌質を改善する効果が期待できると説明されている。
【０００７】
しかしながら、既存の肌質改善剤や化粧料では、肌に合わないといったユーザーの存在が想定されるため、多くの選択肢をユーザーに提示する必要がある。つまり、特許文献１、２に開示されているような従来の肌質改善剤や化粧料とは異なる、新たな肌質改善剤や化粧料の創出が求められている。
【０００８】
そこで、本発明は、肌質を改善することができる新たな肌質改善剤、及び化粧料を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題は、以下の手段により解決することができる。
（１）トマト由来物を有効成分とすることを特徴とする肌質改善剤。
（２）前記トマト由来物は、トマト搾汁粕抽出物であることを特徴とする前記１に記載の肌質改善剤。
（３）前記トマト由来物は、トマト搾汁液発酵物であることを特徴とする前記１に記載の肌質改善剤。
（４）ＡＧＥｓ生成阻害作用を有することを特徴とする前記１から前記３のいずれか１つに記載の肌質改善剤。
（５）ヒアルロン酸産生促進作用を有することを特徴とする前記１から前記４のいずれか１つに記載の肌質改善剤。
（６）前記１から前記５のいずれか１つに記載の肌質改善剤を含有することを特徴とする化粧料。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係る肌質改善剤は、トマト由来物を有効成分とすることから、肌質を改善する効果を発揮することができ、特に、ＡＧＥｓの生成を阻害する作用やヒアルロン酸の産生を促進する作用を発揮することができる。
また、本発明に係る化粧料は、前記の肌質改善剤を含むことから、肌質を改善する効果を発揮することができ、特に、ＡＧＥｓの生成を阻害する作用やヒアルロン酸の産生を促進する作用を発揮することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】トマト搾汁粕抽出物のＡＧＥｓ生成阻害作用を確認するための測定データである。
【図２】トマト搾汁液発酵物のＡＧＥｓ生成阻害作用を確認するための測定データである。
【図３】トマト搾汁粕抽出物のヒアルロン酸産生促進作用を確認するための測定データである。
【図４】トマト搾汁液発酵物のヒアルロン酸産生促進作用を確認するための測定データである。
【図５】トマト搾汁粕抽出物のヒアルロン酸合成酵素遺伝子の発現を確認するための測定データである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明に係る肌質改善剤、及び化粧料を実施するための形態（実施形態）について説明する。
【００１３】
≪肌質改善剤≫
本実施形態に係る肌質改善剤（以下、適宜「改善剤」という）は、トマト由来物を有効成分とすることを特徴とする。
そして、本実施形態に係る改善剤は、肌のなかでも肌質が低下している箇所や、肌質の低下を予防しておきたい箇所に対し、塗布、貼付、散布等を行う外用剤として好適に用いることができる。
以下、本実施形態に係る改善剤に含まれる物質や作用を詳細に説明する。
【００１４】
＜トマト由来物＞
トマト由来物とは、トマト（学名：Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）に由来する成分を含むものであり、具体的には、後記するトマト搾汁粕抽出物、トマト搾汁液発酵物を挙げることができる。
ここで、トマト由来物に使用するトマトの品種、ブランド、サイズ、色、産地等については、特に限定されず、一般に流通している生食用、加工用のいずれのトマトであっても用いることができる。
【００１５】
＜トマト搾汁粕抽出物＞
トマト搾汁粕抽出物とは、トマトの搾汁後の残渣から抽出した抽出物であり、具体的には、トマトの搾汁粕を固液抽出法により抽出した抽出物である。抽出に使用する溶媒は特に限定されず、水や有機溶媒（例えば、エタノール）を用いることができる。
ここで、トマトの搾汁粕とは、トマトを固体と液体とに分画した場合の固体部分であり、例えば、トマトからトマトジュース等を製造する際に副生される搾汁残渣、搾汁残渣を乾燥させたもの、乾燥させた搾汁残渣を粉砕機器によって細かくすりつぶしたもの等である。この搾汁残渣には、果皮だけでなく、種子や繊維質等が含まれていてもよい。
なお、本明細書でのトマトジュースとは、日本農林規格で定められているものであり、（１）トマトを破砕して搾汁し、又は裏ごしし、皮、種子等を除去したもの又はこれに食塩を加えたもの、（２）濃縮トマトを希釈して搾汁の状態に戻したもの又はこれに食塩を加えたもの、のいずれかである。
【００１６】
＜トマト搾汁液発酵物＞
トマト搾汁液発酵物とは、トマトの搾汁液を発酵させた発酵物であり、具体的には、トマトの搾汁液を乳酸菌によって発酵させた乳酸菌発酵物である。
ここで、トマトの搾汁液とは、トマトを固体と液体とに分画した場合の液体部分であり、例えば、トマトジュース等である。また、トマトの搾汁液は、トマトジュースを濾過若しくは遠心分離し沈殿物を除去した液体であってもよいし、さらには、前記の液体を濃縮させた液体等でもよい。
なお、トマトの搾汁液の発酵に使用する乳酸菌は特に限定されないが、例えば、ペディオコッカス（Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ）属に属する乳酸菌であり、好ましくは、ペディオコッカス  ペントサセウス  ＯＳ株である。
【００１７】
＜その他＞
本実施形態に係る改善剤は、後記する化粧料の素材（材料）として好適に用いる形態であれば、固体、液体、ペースト、ゼリー、粉末等のいずれの形態であってもよい。
そして、本実施形態に係る改善剤を固体状にする場合は、アミノ酸、核酸、コラーゲン、アセチルグルコサミン等の他、デキストリン、セルロース、ラクトース等の賦形剤、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、アスコルビン酸又はその塩等のビタミン類、鉄、カルシウム等のミネラル、その他、潤沢剤、香料等を含有させてもよい。本実施形態に係る改善剤を液体状にする場合は、さらに、アルギン酸又はその塩、キサンタンガム等の増粘剤、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等の乳化剤、炭酸水素ナトリウムやクエン酸等のｐＨ調整剤等を含有させてもよい。
なお、本実施形態に係る改善剤は、後記する化粧料として使用できる他、各種食品に含有させて使用することも可能である。また、本実施形態に係る改善剤を、常法に従い適当な賦形剤等の医薬品用担体と組合せて製剤化し、医薬品として使用することも可能である。
【００１８】
次に、本実施形態に係る肌質改善剤の作用（用途）について説明する。
≪肌質改善作用≫
本実施形態に係る改善剤の肌質改善作用とは、ハリ、弾力、潤い、透明感といった肌質を改善する作用であり、具体的には、ＡＧＥｓ生成阻害作用、ヒアルロン酸産生促進作用である。したがって、本実施形態に係る改善剤は、ＡＧＥｓ生成阻害剤、ヒアルロン酸産生促進剤と言い換えることもできる。
【００１９】
＜ＡＧＥｓ生成阻害作用＞
ＡＧＥｓ生成阻害作用とは、ＡＧＥｓ（最終糖化産物：Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）の生成を阻害し、ＡＧＥｓ量の増加を抑制する作用である。
ＡＧＥｓは、タンパク質の糖化反応によって作られる生成物である。そして、このタンパク質の糖化反応によると、コラーゲン等の細胞外マトリックス構成タンパク質を変性させることによって、タンパク質の機能を低下させてしまう。
例えば、コラーゲンが糖化し異常に架橋した状態になると、肌のハリ、弾力を低下させたり、黄色化によるくすみを生じさせることで肌の透明感を低下させたりしてしまう。さらに、異常に架橋したコラーゲンは、コラゲナーゼによる分解を受け難くなるため、コラゲナーゼの発現が誘導されてしまい、正常なコラーゲンまで分解されてしまうといった問題も生じる可能性がある。
したがって、本実施形態に係る改善剤のＡＧＥｓ生成阻害作用によれば、タンパク質の糖化反応を抑制し、ハリ、弾力、透明感といった肌質の改善や、これらの肌質の低下を予防することができる。
【００２０】
＜ヒアルロン酸産生促進作用＞
ヒアルロン酸産生促進作用とは、ヒアルロン酸の産生を促進し、ヒアルロン酸量の増加を促す作用である。
ヒアルロン酸は、細胞外マトリックス構成成分の一つであり、ヒアルロン酸合成酵素（ＨＡＳ：Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｓｙｎｔｈａｓｅ）によって産生される。そして、ヒアルロン酸は保水力に非常に優れることから、ヒアルロン酸が様々な要因によって減少してしまうと、肌のハリ、弾力、潤いを低下させてしまう。
したがって、本実施形態に係る改善剤のヒアルロン酸産生促進作用によれば、ハリ、弾力、潤いといった肌質の改善や、これらの肌質の低下を予防することができる。
【００２１】
次に、本実施形態に係る化粧料について説明する。
≪化粧料≫
本実施形態に係る化粧料とは、本実施形態に係る改善剤を含有する化粧料である。
そして、本実施形態に係る化粧料は、肌質を改善するための製品であれば、形態は特に限定されない。よって、本実施形態に係る化粧料は、固体、液体、ペースト、ゼリー、粉末等のいずれの形態であってもよい。なお、このような形態を形成するために、例えば、ゲル化剤を用いて固化したり、液体を用いて分散状態にしたり、溶媒を添加して溶液にしたり、乾燥させて粉末状にしたりすればよい。
【００２２】
そして、本実施形態に係る化粧料の種類としては、肌に接触する外用の化粧料が好ましく、例えば、化粧水、美容液、化粧クリーム、乳液、洗顔料、化粧石鹸、アイクリーム、アイシャドウ、アイライナー、化粧下地、ＢＢクリーム、ＣＣクリーム、ファンデーション、ほお紅、マスカラ、眉墨、口紅、リップクリーム、おしろい、パック、シャンプー、リンス、染毛料、ひげそり用クリーム、ひげそり用ローション、浴用化粧料、日焼けオイル、日焼け止めオイル、日焼けローション、日焼け止めローション、日焼けクリーム、日焼け止めクリーム等を挙げることができる。また、本実施形態に係る化粧料は、爪クリーム、爪エナメル、爪エナメル除去液、歯磨剤、デオドラント剤、香水、オーデコロン、養毛剤、育毛剤等として使用してもよい。また、本実施形態に係る化粧料は、軟膏剤や湿布剤等として使用することもできる。
【００２３】
本実施形態に係る化粧料には、使用目的に応じてさまざまな成分を添加させてもよい。添加成分としては、例えば、油脂成分、ＵＶ吸収剤、ＩＲ吸収剤、乳化剤、界面活性剤、防腐剤、防黴剤、抗酸化剤、美白剤、多糖類、蛍光材料、顔料、色素、香料、金属イオン封鎖剤、バインダー、増量剤、抗生物質、血行促進剤、消炎剤、細胞賦活剤等、通常の化粧料原料として使用されているものが挙げられ、使用目的に応じて適宜配合することができる。
【００２４】
≪製造方法≫
次に、本実施形態に係る肌質改善剤の製造方法について、トマト由来物としてトマト搾汁粕抽出物を使用した場合とトマト搾汁液発酵物を使用した場合とを例に挙げて説明する。
【００２５】
＜トマト搾汁粕抽出物の製造方法＞
まず、抽出の対象となるトマトの搾汁粕を準備する。トマトの搾汁粕としては、トマトからトマトジュース等を製造する際に副生される搾汁残渣や、搾汁残渣を乾燥させたもの、乾燥させた搾汁残渣を粉砕機器によって細かくすりつぶしたもの等を用いればよい。
そして、トマトの搾汁粕から溶媒を使用してトマト搾汁粕抽出物を抽出する。使用する溶媒としては、例えば、エタノール、メタノール、酢酸エチル等を挙げることができるが、化粧料等に適用することを考慮し、エタノール（無水エタノール、含水エタノール）が好ましい。なお、溶媒抽出法の条件（抽出温度、抽出時間、抽出回数等）は、公知の条件から適宜設定すればよい。
そして、得られたトマト搾汁粕抽出物をそのまま肌質改善剤としてもよいし、必要に応じて、前記した物質と混合したり、様々な形態に形成したりすることにより、肌質改善剤としてもよい。
【００２６】
＜トマト搾汁液発酵物の製造方法＞
まず、発酵の対象となるトマトの搾汁液を準備する。トマトの搾汁液としては、トマトジュース、トマトジュースを濾過若しくは遠心分離し沈殿物を除去した液体、又は前記の液体を濃縮させた液体等を用いればよい。なお、トマトの搾汁液は、前記の液体をＢｒｉｘ６０程度まで濃縮させた後、蒸留水で希釈した液体であってもよい。
そして、トマトの搾汁液を培養液として、乳酸菌（例えば、ペディオコッカス  ペントサセウス  ＯＳ株の乳酸菌）を接種して培養する。なお、培養条件（培養温度、培養時間、培養終了時の生菌数等）は、公知の条件から適宜設定すればよい。その後、培養液に対して、適宜、加熱殺菌処理等を施して、トマト搾汁液発酵物を得る。なお、これを適宜スプレードライ法等によって粉末化したものを、トマト搾汁液発酵物としてもよい。
そして、得られたトマト搾汁液発酵物をそのまま肌質改善剤としてもよいし、必要に応じて、前記した物質と混合したり、様々な形態に形成したりすることにより、肌質改善剤としてもよい。
【００２７】
本実施形態に係る化粧料の製造方法については、前記の方法によって製造した肌質改善剤を、化粧料の材料に混合し、その後は、当業者に公知の化粧料の製造方法によって製造すればよい。
【実施例】
【００２８】
次に、本発明の要件を満たす実施例とそうでない比較例とを例示して、本発明に係る肌質改善剤、及び化粧料について説明する。
【００２９】
≪実施例１≫
まず、実施例１では、トマト由来物質（トマト搾汁粕抽出物、トマト搾汁液発酵物）が発揮するＡＧＥｓ生成阻害作用について確認する。
【００３０】
＜試料の準備：トマト搾汁粕抽出物＞
トマトを破砕して搾汁した際に副生される搾汁残渣５０ｇ(乾物換算１０ｇ)に水を加え、５０℃で加熱・還流しながら水洗浄を行ない、夾雑物を抽出除去した。その後、抽出滓を回収し、溶剤として１６５ｍＬの９０％エタノールを加え、７０℃で加熱しながら抽出した。得られた抽出溶液を濾過した後に、濾液を減圧下で濃縮し、濃縮液の固形分に対して１．５倍量の賦形剤を添加して凍結乾燥を行ない、トマト搾汁粕抽出粉末を得た。
そして、トマト搾汁粕抽出粉末が、０．１ｗ／ｖ％、０．２ｗ／ｖ％、０．５ｗ／ｖ％、１．０ｗ／ｖ％となるようにジメチルスルホキシド（以下、適宜「ＤＭＳＯ」という）に懸濁したものを試料とした。
【００３１】
＜試料の準備：トマト搾汁液発酵物＞
トマトを破砕して搾汁し、皮、種子等を除去して得られた液体を、精密濾過膜を用いて濾過した後、Ｂｒｉｘ値が６０となるまで濃縮させた。この濃縮液を蒸留水でＢｒｉｘ４.７となるように希釈するとともにｐＨ６.０に調整し、１２１℃で１５分間加熱殺菌した。このようにして得られたトマト搾汁液に、−８５℃でグリセロール保存しておいたペディオコッカス  ペントサセウス  ＯＳ株を１白金耳接種して、３０℃で２４時間培養した。培養終了時の生菌数は２×１０９個／ｍＬであった。なお、生菌数の算出にはｃｆｕ（ｃｏｌｏｎｙ  ｆｏｒｍｉｎｇ  ｕｎｉｔ）を使用し、１ｃｆｕ／ｍＬを１個／ｍＬとして記載した。この培養液を１００℃で１０分間加熱処理し、培養液の固形分量に対して２／３倍量の賦形剤を混合してスプレードライ法にて粉末化し、トマト搾汁液発酵粉末を得た。
そして、トマト搾汁液発酵粉末が、５．０ｗ／ｖ％となるように蒸留水に懸濁し、孔径が０．４５μｍのフィルターを用いて濾過を行ったものを試料とした。
【００３２】
＜試験方法：ＡＧＥｓ生成阻害作用＞
試料２０μＬ、０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（以下、適宜「ＰＢＳ」という）５００μＬ、４０ｍｇ／ｍＬヒト血清アルブミン２０μＬ、２Ｍグルコース溶液１００μＬを混合し、蒸留水で１ｍＬに調製し試験溶液を作製した。なお、この試験溶液を試料添加区のグルコース添加群の溶液とする。
試料添加区のグルコース非添加群の溶液として、前記試験溶液のグルコース溶液の代わりに蒸留水を添加したものを準備した。また、蒸留水添加区のグルコース添加群の溶液として、前記試験溶液の試料の代わりに蒸留水を添加したものを準備した。また、蒸留水添加区のグルコース非添加群の溶液として、前記試験溶液の試料の代わりに蒸留水を添加するとともに、グルコース溶液の代わりに蒸留水を添加したものを準備した。
そして、各溶液を６０℃で４０時間インキュベートした。
【００３３】
インキュベート後、各溶液を２００μＬずつマルチウェルプレートに分注して、励起波長３７０ｎｍ、蛍光波長４４０ｎｍにて蛍光を測定した。
試料添加区におけるグルコース添加群の溶液の蛍光値とグルコース非添加群の溶液の蛍光値の差をＡとし、蒸留水添加区におけるグルコース添加群の溶液の蛍光値とグルコース非添加群の溶液の蛍光値の差をＢとしたとき、ＡＧＥｓ生成阻害活性は次式のように定義される。
ＡＧＥｓ生成阻害活性（％）＝｛１−（Ａ／Ｂ）｝×１００
【００３４】
また、ポジティブコントロールとして、ＡＧＥｓ生成阻害剤として知られるアミノグアニジン（以下、適宜「ＡＧ」という）を使用し、前記の試験方法と同様の方法によって、ＡＧＥｓ生成阻害活性を求めた。なお、図１、２中の０．５ｍｇ／ｍＬのＡＧの結果は、当該濃度のＡＧを前記試験方法における試料として使用した場合の結果を示している。
【００３５】
前記の試験方法によって得られたトマト搾汁粕抽出物のＡＧＥｓ生成阻害作用の試験結果を図１に示し、トマト搾汁液発酵物のＡＧＥｓ生成阻害作用の試験結果を図２に示した。
【００３６】
＜試験結果の検討＞
図１に示すように、トマト搾汁粕抽出物は、ＡＧＥｓ生成阻害作用を発揮できることが確認できた。そして、トマト搾汁粕抽出物は、トマト搾汁粕抽出粉末が１．０ｗ／ｖ％で、ＡＧが５ｍｇ／ｍＬ相当の場合と同程度のＡＧＥｓ生成阻害活性を示すことが確認できた。
【００３７】
図２に示すように、トマト搾汁液発酵物は、ＡＧＥｓ生成阻害作用を発揮できることが確認できた。そして、トマト搾汁液発酵物は、トマト搾汁液発酵粉末が５．０ｗ／ｖ％で、ＡＧが１０ｍｇ／ｍＬ相当の場合と同程度のＡＧＥｓ生成阻害活性を示すことが確認できた。
【００３８】
≪実施例２≫
次に、実施例２では、トマト由来物質（トマト搾汁粕抽出物、トマト搾汁液発酵物）が発揮するヒアルロン酸産生促進作用について確認する。
【００３９】
＜試料含有培地の準備：トマト搾汁粕抽出物＞
実施例１で使用したものと同様のトマト搾汁粕抽出粉末を、５．０ｗ／ｖ％となるようにＤＭＳＯに懸濁して、孔径が０．２２μｍのＰＴＦＥフィルターを用いて濾過を行ったものを試料とした。そして、トマト搾汁粕抽出粉末の濃度が図３の値になるように、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地（倉敷紡績株式会社製）に試料を含有させ、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１０ｖ／ｖ％となるように調製を行い、試料含有培地を準備した。
なお、コントロールとして、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地にトマト搾汁粕抽出粉末を含有させずに、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１０ｖ／ｖ％となるように調製したもの（図３では０．１０％ＤＭＳＯと示す）を準備した。
【００４０】
＜試料含有培地の準備：トマト搾汁液発酵物＞
実施例１で使用したものと同様のトマト搾汁液発酵粉末を、５．０ｗ／ｖ％となるように滅菌水に懸濁して、孔径が０．２２μｍのＰＴＦＥフィルターを用いて濾過を行ったものを試料とした。そして、トマト搾汁液発酵粉末の濃度が図４の値になるように、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地（倉敷紡績株式会社製）に試料を含有させ、最終滅菌水濃度が２．０ｖ／ｖ％となるように調製を行い、試料含有培地を準備した。
なお、コントロールとして、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地にトマト搾汁液発酵粉末を含有させずに、最終滅菌水濃度が２．０ｖ／ｖ％となるように調製したもの（図４では２．０％水と示す）を準備した。
【００４１】
＜試験方法：ヒアルロン酸産生促進作用＞
正常ヒト表皮角化細胞（倉敷紡績株式会社製、製品名ＮＨＥＫ（ＮＢ））を１ウェルあたり２．５×１０４個となるように２４ウェルプレートに播種し、３７℃、二酸化炭素濃度５ｖｏｌ％中にて２４時間培養した。播種培地には、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地（倉敷紡績株式会社製）を用いた。その後、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地に試料を含有させた前記の試料含有培地に交換し、さらに２４時間培養した。試料含有培地での２４時間培養の後に、培養上清を回収し培養上清のヒアルロン酸量をＥＬＩＳＡ法にて定量した。また、培養上清を回収した後の２４ウェルプレートの細胞を溶解し、タンパク質量をＢＣＡタンパク質定量法にて定量した。
培養上清のヒアルロン酸量を各ウェルのタンパク質量で除した値をヒアルロン酸産生量とし、コントロールのヒアルロン酸産生量を１００として各試料のヒアルロン酸産生量を評価した。
なお、細胞培養は各試験区につき３ウェルずつ使用し、Ｎ＝３とした。また、ヒアルロン酸の定量、及びタンパク質の定量は各ウェルにつき２回ずつ行い、その平均値を各ウェルの測定値とした。
【００４２】
＜試験方法：ヒアルロン酸合成酵素遺伝子の発現解析＞
前記の正常ヒト表皮角化細胞を１ウェルあたり３×１０５個となるように６ウェルプレートに播種し、３７℃、二酸化炭素濃度５ｖｏｌ％中にて２４時間培養した。播種培地には、前記のＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地を用いた。その後、ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＢ２培地に試料を含有させた前記の試料含有培地に交換し、さらに２４時間培養した。試料含有培地での２４時間培養の後に、培養上清を除去し、さらにｔｏｔａｌ  ＲＮＡ  分離用試薬（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｆｉｓｈｅｒ  ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ社、ＴＲＩｚｏｌ  ｒｅａｇｅｎｔ）を規定量添加して、細胞抽出液を得た。次いで、フェノール・クロロホルム法にてＲＮＡ精製を行いｔｏｔａｌ  ＲＮＡを得た。続いて、市販の逆転写キット（ＴａＫａＲａ社、Ｐｒｉｍｅ  Ｓｃｒｉｐｔ  ＲＴ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｋｉｔ  ｆｏｒ  ＳＹＢＲ  ｗｉｔｈ  ｇＤＮＡ  Ｅｒａｓｅｒ  （Ｐｅｒｆｅｃｔ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ）を用いてＲＮＡの逆転写を行いｃＤＮＡを得た。このｃＤＮＡをテンプレートとしてＨＡＳ２プライマー（ライフテクノロジーズジャパン社）及び市販キット（日本ジェネティクス社、ＫＡＰＡ  ＳＹＢＲ  ＦＡＳＴ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ｑＰＣＲ  ｋｉｔ  ）を用いてリアルタイム定量ＰＣＲを行い、比較Ｃｔ法によりＨＡＳ２遺伝子の発現量を測定した。
内在性コントロール遺伝子には、ＧＡＰＤＨ（ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ−３−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）を用いた。コントロール（ＤＭＳＯ０．１％添加群）の相対発現量を１として試料のＨＡＳ２遺伝子の発現レベルを評価した。
【００４３】
前記の試験方法によって得られたトマト搾汁粕抽出物のヒアルロン酸産生促進作用の試験結果を図３に示し、トマト搾汁液発酵物のヒアルロン酸産生促進作用の試験結果を図４に示し、トマト搾汁粕抽出物のヒアルロン酸合成酵素遺伝子の発現解析結果を図５に示す。
【００４４】
＜試験結果の検討＞
図３に示すように、トマト搾汁粕抽出物は、ヒアルロン酸産生促進作用を発揮できることが確認できた。また、図４に示すように、トマト搾汁液発酵物は、ヒアルロン酸産生促進作用を発揮できることが確認できた。
【００４５】
さらに、図５に示すように、トマト搾汁粕抽出物は、ＨＡＳ２発現が増強されていることが確認でき、ＨＡＳ２の発現亢進を介してヒアルロン酸産生促進作用が発揮されていると推察される。
【００４６】
本発明に係る肌質改善剤、及び化粧料について、実施の形態及び実施例を示して詳細に説明したが、本発明の趣旨は前記した内容に限定されることなく、特許請求の範囲の記載に基づいて改変・変更等することができることはいうまでもない。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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