(57)【要約】【課題】細胞培養の安定性を高める観点から有利で新規な細胞培養用フィルムを提供する。【解決手段】本発明の細胞培養用フィルム（１）は、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を提供する一方の表面（１ａ）を有する。細胞培養用フィルム（１）において、一方の表面（１ａ）と反対側の表面（１ｂ）において観察される２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する欠点及び異物の数が１４０ｃｍ2当たり１０個以下である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を提供する一方の表面を有し、
前記一方の表面と反対側の表面において観察される２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する欠点及び異物の数が１４０ｃｍ2当たり１０個以下である、
細胞培養用フィルム。
【請求項２】
前記樹脂組成物におけるフッ素の含有量が１〜６０質量％であり、かつ、前記樹脂組成物のイミド化率が２０％以上である、請求項１に記載の細胞培養用フィルム。
【請求項３】
前記一方の表面における水接触角が７０°以上である、請求項１又は２に記載の細胞培養用フィルム。
【請求項４】
３ＧＰａ以下の引張弾性率を有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞培養用フィルム。
【請求項５】
２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する異物の数が２２５ｃｍ2当たり１０個以下である支持体の表面に含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を塗布して乾燥させ、
前記含フッ素ポリアミド酸の少なくとも一部をイミド化し、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を、前記支持体に接触する面と反対側の表面に形成する、
細胞培養用フィルムの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞培養用フィルム及び細胞培養用フィルムの製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、様々な分野において、ポリイミドでできたフィルムが使用されている。例えば、特許文献１には、所定のポリイミド前駆体溶液から得られるポリイミドシームレス環状フィルムが記載されている。このポリイミドシームレス環状フィルムは、電子写真の分野における部品としての使用が想定されている。
【０００３】
特許文献２には、外観不良、強度低下、及びイミド化反応に伴う白化を生じることがない、ポリイミドフィルムの製造方法が提案されている。特許文献２によれば、所定のポリアミド酸含有溶液が支持体上に塗布される。次に、ポリアミド酸含有溶液の塗膜からなるポリアミド酸含有フィルムがタックフリーとなるまでポリアミド酸含有溶液中の溶剤が１５０℃以下の温度で乾燥される。次に、ポリアミド酸含有フィルムが支持体から剥離される。次に、ポリアミド酸含有フィルムが固定され、１５０℃以下から昇温しながらポリアミド酸含有フィルムの加熱が行われ、ポリアミド酸がイミド化される。このようにして、ポリイミドフィルムが製造されている。
【０００４】
特許文献３には、電子部品の基材フィルムとして好適な耐熱性、剛性、及び熱変形安定性を有するポリイミドフィルムの製造方法が記載されている。特許文献３によれば、芳香族ジアミン類と、芳香族テトラカルボン酸無水物類とが重縮合してなるポリイミドの前駆体であるポリアミド酸の溶液を支持体に塗布流延したうえで乾燥させて得られた自己支持性を有するポリイミド前駆体フィルムをイミド化している。このようにしてポリイミド前駆体フィルムが製造されている。
【０００５】
特許文献４には、含フッ素ポリイミド基材が血管形成細胞の培養に利用可能であることが記載されている。また、特許文献５及び６によれば、光導波路として有用なフッ素化ポリイミド多層膜の製造方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００１−１６３９７４号公報
【特許文献２】特開２０１２−２３３０２１号公報
【特許文献３】特開２００６−１９３５５５号公報
【特許文献４】特開２００９−２１３７１６号公報
【特許文献５】特開２００６−２９０９５５号公報
【特許文献６】特開２００６−２８９１９４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
特許文献４に記載のように、含フッ素ポリイミド膜表面上で細胞を培養できる。しかし、特許文献４によれば、細胞が培養される含フッ素ポリイミド膜の表面と反対側の面における欠点及び異物の量と細胞の培養の安定性との関係について具体的な検討はなされていない。特許文献１〜３には、ポリイミドフィルム及びその製法について記載されているものの、含フッ素ポリイミドを用いた細胞培養用フィルム及びその製法は記載も示唆もされていない。特許文献５及び６には、光導波路に有用なフッ素化ポリイミド多層膜及びその製法が記載されているが、細胞培養用フィルムに関して記載も示唆もされていない。
【０００８】
そこで、本発明は、含フッ素ポリイミドを用いた細胞培養用フィルムであって、細胞培養の安定性を高める観点から有利で新規な細胞培養用フィルム及びその製法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、
含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を提供する一方の表面を有し、
前記一方の表面と反対側の表面において観察される２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する欠点及び異物の数が１４０ｃｍ2当たり１０個以下である、
細胞培養用フィルムを提供する。
【００１０】
また、本発明は、
２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する異物の数が２２５ｃｍ2当たり１０個以下である支持体の表面に含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を塗布して乾燥させ、
前記含フッ素ポリアミド酸の少なくとも一部をイミド化し、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を、前記支持体に接触する面と反対側の表面に形成する、
細胞培養用フィルムの製造方法を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
上記の細胞培養用フィルムは、細胞培養の安定性を高める観点から有利である。また、上記の製造方法によれば、細胞培養の安定性を高める観点から有利な細胞培養用フィルムを製造できる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の細胞培養用フィルムを示す側面図
【図２】ポリアミド酸シートの形成方法の一例を示す側面図
【図３】ポリアミド酸シートの形成方法の別の一例を示す側面図
【図４】ポリアミド酸シートの形成方法のさらに別の一例を示す側面図
【図５Ａ】ポリアミド酸シートの形成方法のさらに別の一例を示す側面図
【図５Ｂ】ポリアミド酸シートの形成方法のさらに別の一例を示す側面図
【図６】ポリアミド酸シートの形成方法のさらに別の一例を示す側面図
【発明を実施するための形態】
【００１３】
以下、本発明の実施形態について図面を参照しつつ説明する。なお、以下の説明は本発明の一例に関するものであり、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００１４】
図１に示すように、細胞培養用フィルム１は、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を提供する一方の表面１ａを有する。また、細胞培養用フィルム１は、一方の表面１ａと反対側の表面１ｂを有する。表面１ｂにおいて観察される２０μｍ以上の最大径を有する欠点及び異物の数が１４０ｃｍ2当たり１０個以下である。本明細書において、「欠点」とは、表面１ｂに形成された「穴」及び「へこみ」を意味する。「欠点」は、典型的には、細胞培養用フィルム１を製造するための支持体の表面に付着していたパーティクルによって形成されると考えられる。本明細書において、「異物」とは、表面１ｂを形成する材料とは異なる種類の材料でできた表面１ｂとは明確に区別可能な物質を意味する。「異物」は、典型的には、表面１ｂに付着した塵である。
【００１５】
本発明者らは、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物を用いた細胞培養用フィルムにおいて、細胞を培養する側の表面と反対側の表面において観察される欠点及び異物の数が意外にも細胞培養の安定性に影響を及ぼすことを見出した。本発明は、このような知見に基づいてなされた。細胞培養用フィルム１によれば、表面１ｂにおいて観察される２０μｍ以上の最大径を有する欠点及び異物の数が１４０ｃｍ2当たり１０個以下であることにより、細胞培養の安定性が高まる。すなわち、複数の細胞培養用フィルム１を用いて同一の条件で細胞の培養を行った場合に、細胞培養の再現性が良好である。
【００１６】
また、細胞培養用フィルム１によれば、表面１ｂにおいて観察される２０μｍ以上の最大径を有する欠点及び異物の数が少ないので、欠点及び異物によって視野が妨げられず、表面１ａの足場に培養された細胞を顕微鏡により良好に観察できる。
【００１７】
細胞培養用フィルム１の表面１ｂにおいて、例えば、１０００μｍより大きい最大径を有する欠点及び異物は存在しない。
【００１８】
表面１ａにおいて細胞を三次元的に培養できることが望ましい。この観点から、表面１ａを形成している樹脂組成物におけるフッ素の含有量は、例えば１〜６０質量％であり、望ましくは５〜６０質量％であり、より望ましくは１０〜６０質量％であり、さらに望ましくは１５〜５０質量％である。また、樹脂組成物のイミド化率は、例えば２０％以上であり、望ましくは２５％以上であり、より望ましくは３０％以上であり、さらに望ましくは３５％以上であり、とりわけ望ましくは４０％以上である。この樹脂組成物のイミド化率は、望ましくは１００％以下であり、より望ましくは９９．５％以下であり、さらに望ましくは９９％以下である。これにより、樹脂組成物は、細胞の三次元培養を可能にする観点から有利な柔軟性及び疎水性を有する。また、高圧蒸気滅菌等による滅菌処理等のために表面１ａを加熱するときにクラックの発生又は寸法変化を抑制できる。樹脂組成物のイミド化率は、後述の実施例に記載の方法に従って測定できる。
【００１９】
表面１ａにおける水接触角は、例えば７０°以上であり、より望ましくは７３°以上であり、より望ましくは７５°以上である。これにより、細胞が表面１ａに適度な強度で付着しやすく、表面１ａにおいてより確実に細胞を三次元的に培養できる。表面１ａにおける水接触角は、例えば１１５°以下であり、望ましくは１１２°以下であり、より望ましくは１１０°以下である。「水接触角」は、自動接触角計（協和界面科学社製、製品名：ＤＭ−５００）を用いて温度２５℃において水による接触角測定を行うことによって算出できる。
【００２０】
細胞の三次元的な培養を可能にするために、細胞培養用フィルム１は、所定の柔軟性を有することが望ましい。この観点から、細胞培養用フィルム１は、例えば３ＧＰａ以下の引張弾性率を有する。細胞培養用フィルム１の引張弾性率は、望ましくは２．８ＧＰａ以下であり、より望ましくは２．５ＧＰａ以下である。細胞培養用フィルム１の引張弾性率は、例えば０．１ＧＰａ以上であり、望ましくは０．３ＧＰａ以上であり、より望ましくは０．５ＧＰａ以上である。
【００２１】
細胞培養用フィルム１は、オートクレーブによる滅菌処理などにおいて加熱される可能性がある。このため、細胞培養用フィルム１が所定の耐熱性を有していることが望ましい。表面１ａを形成する樹脂組成物の耐熱温度（ガラス転移温度）は、例えば１００℃以上であり、好ましくは１５０℃である。ガラス転移温度は、例えば、ＪＩＳ（日本工業規格）Ｋ  ７１２１−１９８７に規定されているものである。表面１ａを形成する樹脂組成物の耐熱温度（ガラス転移温度）は、例えば、４００℃以下である。表面１ａを形成する樹脂組成物は、ガラス転移温度を示さない樹脂組成物であってもよい。この場合、高温蒸気滅菌等の処理が表面１ａに施されても、表面１ａを形成する樹脂組成物の変形を防止できる。
【００２２】
樹脂組成物に含まれる含フッ素ポリイミドは、例えば１種以上の酸二無水物と１種以上のジアミンとを反応させることにより得られる。この場合、酸二無水物及びジアミンの少なくとも１種の化合物として、分子内にフッ素原子を有する化合物が使用される。含フッ素ポリイミドは、例えば、１種以上の酸二無水物と１種以上のジアミンとを重合させて得られる含フッ素ポリアミド酸をイミド化することにより得られる。樹脂組成物は、含フッ素ポリイミドに加えて含フッ素ポリアミド酸を含んでいてもよい。
【００２３】
含フッ素ポリイミドは、例えば、下記式（１ａ）に示す繰返し単位を含む芳香族ポリイミドである。この場合、表面１ａにおいて細胞が三次元的に培養されやすい。式（１ａ）で示される芳香族ポリイミドは、例えば、下記式（１ｂ）に示す繰返し単位を含む含フッ素ポリアミド酸をイミド化することにより得られる。
【００２４】
【化１】
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【００２５】
式（１ａ）及び式（１ｂ）において、Ｘ1は２価の有機基であり、Ｙ1は芳香族基を有する２価の有機基であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4、Ｚ5、及びＺ6は、互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、及びヨウ素原子のいずれかである。Ｘ1、Ｙ1、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4、Ｚ5、及びＺ6の少なくとも１つは１つ以上のフッ素原子を含む。式（１ａ）及び式（１ｂ）において、ｐは、０又は１である。ｐ＝０である場合は、Ｘ1は存在せず、左右のベンゼン環が直接結合しており、ｐ＝１である場合は、左右のベンゼン環がＸ1を介して結合している。
【００２６】
Ｘ1は、例えば、アルキレン基、アリーレン基、アリーレンオキシ基、アリーレンチオ基、−Ｏ−、及び−Ｓ−からなる群から選ばれる少なくとも１つの基である。Ｘ1は、望ましくは、アルキレン基、アリーレン基、アリーレンオキシ基、及びアリーレンチオ基からなる群から選ばれる少なくとも１つの基であり、より望ましくは、アルキレン基、アリーレンオキシ基、及びアリーレンチオ基からなる群から選ばれる少なくとも１つの基であり、さらに望ましくはアルキレン基及びアリーレンオキシ基から選ばれる少なくとも１つの基である。これらは、フッ素原子などのハロゲン原子で置換されていてもよい。
【００２７】
Ｘ1であるアルキレン基は、例えば、−Ｃ（ＣＡ3）2−及び−Ｃ（ＣＡ3）2−Ｃ（ＣＡ3）2−からなる群から選ばれる少なくとも１つの基である。ここで、Ａは、独立して水素原子又はフッ素原子であり、望ましくはフッ素原子である。この場合、Ｘ1が嵩高い構造を取り接触角が大きくなるので、生体物質付着防止性が高まるとともに、細胞を三次元的に培養しやすくなる。Ｘ1であるアルキレン基は、Ｙ1にフッ素原子が含まれない場合は、フッ素置換されたアルキレン基であることが特に望ましい。
【００２８】
Ｙ1は、例えば、１つのベンゼン環を有する基、又は、２つ以上のベンゼン環が、炭素原子、酸素原子、若しくは硫黄原子を介して若しくは直接結合している基である。
【００２９】
含フッ素ポリイミドは、細胞培養用フィルム１の着色の観点から、上記の芳香族ポリイミドに代えて又はこれとともに、脂肪族ポリイミドを含んでいてもよい。例えば、含フッ素ポリイミドは、下記式（２ａ）に示す繰返し単位を含む脂肪族ポリイミドを含む。式（２ａ）で示される脂肪族ポリイミドは、例えば、下記式（２ｂ）に示す繰返し単位を含む含フッ素ポリアミド酸をイミド化することにより得られる。
【００３０】
【化２】
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【００３１】
式（２ａ）及び式（２ｂ）において、Ｘ2は、２価の有機基であり、Ｙ2は、脂肪族基を有し、かつ、芳香族基を有しない２価の有機基である。Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4、Ｚ5、及びＺ6は、互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、及びヨウ素原子のいずれかである。Ｘ2、Ｙ2、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4、Ｚ5、及びＺ6の少なくとも１つは１つ以上のフッ素原子を含む。式（２ａ）及び式（２ｂ）において、ｐは０又は１である。ｐ＝０である場合は、Ｘ2は存在せず、左右のベンゼン環が直接結合しており、ｐ＝１である場合は、左右のベンゼン環がＸ2を介して結合している。
【００３２】
Ｘ2である２価の有機基は、例えば、Ｘ1として例示した基と同様の基である。Ｘ2は、望ましくはフッ素原子を含有するアルキレン基である。
【００３３】
Ｙ2は、例えば、１個の脂肪族基、又は、２個以上の脂肪族基が、炭素原子、酸素原子、若しくは硫黄原子を介して若しくは直接結合している基である。
【００３４】
含フッ素ポリイミドは、下記式（３ａ）に示す繰返し単位を含む脂肪族ポリイミドを含んでいてもよい。式（３ａ）で示される脂肪族ポリイミドは、例えば、下記式（３ｂ）に示す繰返し単位を含む含フッ素ポリアミド酸をイミド化することにより得られる。
【００３５】
【化３】
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【００３６】
式（３ａ）及び式（３ｂ）において、Ｘ3は２価の有機基であり、Ｙ3は脂肪族基又は芳香族基を有する２価の有機基であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4、Ｚ5、及びＺ6は、互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、及びヨウ素原子のいずれかである。Ｘ3、Ｙ3、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｚ4、Ｚ5、及びＺ6の少なくとも１つは１つ以上のフッ素原子を含む。式（３ａ）及び式（３ｂ）において、ｐは、０又は１である。ｐ＝０である場合は、Ｘ3は存在せず、左右のベンゼン環が直接結合しており、ｐ＝１である場合は、左右のエチレン基がＸ3を介して結合している。Ｘ3で示される２価の有機基は、例えば、以下に示される群から選択される少なくとも１つの炭素鎖を有する基である。
【００３７】
【化４】
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【００３８】
Ｙ3は、脂肪族基又は芳香族基を有する２価の有機基であり、例えば、上記のＸ1、Ｙ1、Ｙ2、又は、Ｘ3として例示した基と同様の基である。
【００３９】
含フッ素ポリイミドは、下記式（４ａ）に示す繰返し単位を含む脂肪族ポリイミドを含んでいてもよい。式（４ａ）で示される脂肪族ポリイミドは、例えば、下記式（４ｂ）に示す繰返し単位を含む含フッ素ポリアミド酸をイミド化することにより得られる。
【００４０】
【化５】
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【００４１】
式（４ａ）及び式（４ｂ）において、Ｘ4は脂肪族基を有する４価の有機基であり、Ｙ4は脂肪族基又は芳香族基を有する２価の有機基であり、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、及びＺ4は、互いに独立して水素原子、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、及びヨウ素原子のいずれかである。Ｘ4、Ｙ4、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、及びＺ4の少なくとも１つは１つ以上のフッ素原子を含む。
【００４２】
Ｘ4で示される脂肪族基を有する４価の有機基は、例えば、炭素数１〜４０の脂肪族炭化水素基である。Ｘ4は、例えば、２つ以上の環構造を有し、かつ、環同士が１つ以上の結合を共有する多環式構造、スピロ炭化水素構造、及びビフェニルのように環と環とが単結合などの結合基で結合された構造からなる群から選択される少なくとも１種の構造を有する有機基であってもよい。この場合、結合基としては、単結合の他に、エーテル結合、チオエーテル基、ケトン基、エステル結合、スルフォニル基、アルキレン基、アミド基、及びシロキサン基からなる群から選択される少なくとも１つが例示される。Ｘ4は、例えば、以下に示される群から選択される少なくとも１つの炭素鎖を有する基である。
【００４３】
【化６】
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【００４４】
次に、細胞培養用フィルム１の製造方法について説明する。図２に示すように、まず、支持体１０ａの表面に上記の含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を塗布して乾燥させる。このようにして、ポリアミド酸シート２が得られる。ここで、支持体１０ａとして、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物が塗布されるべき表面における、２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する異物の数が２２５ｃｍ2当たり１０個以下である支持体が使用される。これにより、細胞培養用フィルム１の表面において観察される２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する欠点及び異物の数を１４０ｃｍ2当たり１０個以下にしやすくなる。次に、支持体１０ａの表面に形成されたポリアミド酸シート２に含まれる含フッ素ポリアミド酸の少なくとも一部をイミド化する。これにより、含フッ素ポリイミドを含む樹脂組成物でできた、細胞を培養するための足場を、支持体１０ａに接触する面と反対側の表面に形成する。このようにして、細胞培養用フィルム１を製造できる。
【００４５】
含フッ素ポリアミド酸は、例えば、上記の式（１ｂ）、（２ｂ）、（３ｂ）、及び（４ｂ）のいずれかで示される含フッ素ポリアミド酸であり、所定の芳香族又は脂肪族の酸二無水物と、所定の芳香族又は脂肪族のジアミンとを溶媒中で公知の手法によりアミド化反応させることにより得ることができる。アミド化反応は、例えば、溶媒中に酸二無水物及びジアミンを溶解させた溶液を窒素等の不活性ガス雰囲気中において室温で攪拌して均一溶液とすることにより進行する。アミド化反応の反応混合物は、溶媒中に含フッ素ポリアミド酸を含む。この反応混合物は、そのまま熱イミド化に供することができる。また、生成された含フッ素ポリアミド酸を反応混合物から分離して再度適切な溶媒に溶解させて熱イミドに供されてもよい。このようにして、含フッ素ポリアミド酸の液状の樹脂組成物を調製できる。含フッ素ポリアミド酸の液状の樹脂組成物における含フッ素ポリアミド酸の濃度は、例えば５質量％以上であり、望ましくは１０質量％であり、かつ、例えば５０質量％以下であり、望ましくは４０質量％以下である。
【００４６】
アミド化反応は、望ましくは有機溶媒中で行われる。この場合、有機溶媒としては、原料である酸二無水物とジアミンとの反応が効率良く進行させることができ、これらの材料に対して不活性であれば、特に限定されない。有機溶媒としては、例えば、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルフォキシド、スルホラン、メチルイソブチルケトン、アセトニトリル、ベンゾニトリル、ニトロベンゼン、ニトロメタン、ジメチルスルフォキシド、アセトン、メチルエチルケトン、イソブチルケトン、及びメタノール等の極性溶媒、又は、トルエン及びキシレン等の非極性溶媒が挙げられる。中でも、極性溶媒を使用することが望ましい。これらの有機溶媒は単独で使用されてもよいし、２種以上の混合物として使用されてもよい。
【００４７】
支持体１０ａの表面における含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物の乾燥の条件は、液状の樹脂組成物を固化させてポリアミド酸シート２を作製できる限り特に制限されないが、例えば４０〜１５０℃、望ましくは４０〜７０℃で、例えば１〜３００分間、望ましくは１〜１２０分間加熱することによって液状の樹脂組成物からポリアミド酸シート２を作製できる。
【００４８】
含フッ素ポリアミド酸のイミド化は、例えば熱イミド化によって行われる。この場合、例えば、空気中で、５０〜４００℃、望ましくは１００℃〜３８０℃の温度で、０．１〜１０時間、望ましくは０．２〜５時間の条件下で、ポリアミド酸シート２を焼成することによって、含フッ素ポリアミド酸のイミド化を行うことができる。
【００４９】
支持体１０ａは、特に制限されないが、例えば、ガラス板、金属製の板、セラミックス製の板、及び樹脂製の板を用いることができる。
【００５０】
支持体１０ａに含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を塗布する方法は特に制限されないが、例えば、スピンコーティング法、キャスティング法、ロールコーティング法、ダイコーティング法、コンマコーティング法、グラビアコーティング法、スプレーコーティング法、バーコーティング法、フレキソ印刷法、及びディップコーティング法等の方法により、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を支持体１０ａに塗布できる。
【００５１】
図２に示すように、例えば、ダイコーティング法を用いて含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を支持体１０ａに塗布する場合、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物をスロットダイ１１から平板状の支持体１０ａに向かって吐出させながら、スロットダイ１１を支持体１０ａに対して相対的に移動させる。この場合、支持体１０ａに支持されたポリアミド酸シート２が加熱されてイミド化が行われ、支持体１０ａに支持された状態で細胞培養用フィルム１が製造される。その後、細胞培養用フィルム１が支持体１０ａから剥離される。このとき、細胞培養用フィルム１は、水中において支持体１０ａから剥離されてもよい。
【００５２】
図３に示すように、平板状の支持体１０ａに代えて、ドラム１０ｂを支持体として用いてポリアミド酸シート２を作製してもよい。この場合、ドラム１０ｂの表面における異物の数が上記の基準を満たしている。ドラム１０ｂの表面は、金属、合金、又は樹脂等の材料でできている。例えば、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物をスロットダイ１１から所定の回転速度で回転しているドラム１０ｂの表面に向かって吐出することによってポリアミド酸シート２を作製できる。この場合、作製されたポリアミド酸シート２は、ドラム１０ｂの回転及び中間ローラー２１の回転により、ドラム１０ｂから剥離され、巻き取られ、ポリアミド酸シート２の巻回体３が得られる。その後、巻回体３からポリアミド酸シート２を展開し、ポリアミド酸シート２を上記の条件で加熱することによってポリアミド酸をイミド化させて細胞培養用フィルム１を製造できる。これにより、連続的に細胞培養用フィルム１を製造できる。
【００５３】
図４に示すように、平板状の支持体１０ａに代えて、平坦な外周面を有するベルト１０ｃを支持体として用いてポリアミド酸シート２を作製してもよい。この場合、ドラム１０ｃの表面における異物の数が上記の基準を満たしている。ドラム１０ｃの表面は、金属、合金、又は樹脂等の材料でできている。ドラム１０ｃは、例えば、スチール製のエンドレスベルトである。ドラム１０ｃは、駆動ローラー３０ａ及び従動ローラー３０ｂに対して所定の張力で掛けられている。例えば、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物をスロットダイ１１から所定の回転速度で回転しているベルト１０ｃの表面に向かって吐出することによってポリアミド酸シート２を作製できる。その後、ポリアミド酸シート２をベルト１０ｃから剥離し、ポリアミド酸シート２を上記の条件で加熱することによってポリアミド酸をイミド化させて細胞培養用フィルム１を製造できる。ポリアミド酸のイミド化に先立って、ポリアミド酸シート２は巻き取られて巻回体を形成してもよい。
【００５４】
図５Ａに示すように、平板状の支持体１０ａに代えて、ローラー４０によって搬送される基材１０ｄを支持体として用いてポリイミド酸シート２を作製してもよい。この場合、基材１０ｄの表面における異物の数が上記の基準を満たしている。基材１０ｄは、例えば、ＰＥＴ（ポリエチレンテレフタレート）等の樹脂でできたシートである。例えば、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物をスロットダイ１１からローラー４０によって所定の速度で搬送されている基材１０ｄに向かって吐出することによってポリアミド酸シート２を作製できる。また、これにより、基材１０ｄとポリアミド酸シート２とが積層された積層体を得ることができる。この積層体は巻き取られて巻回体を形成してもよい。その後、ポリアミド酸シート２は、基材１０ｄから剥離され、ポリアミド酸シート２が上記の条件で加熱されてポリアミド酸をイミド化させて細胞培養用フィルム１を製造できる。
【００５５】
図５Ｂに示すように、スロットダイ１１に代えて、コンマコーター１２を用いて、基材１０ｄに含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物を吐出してポリアミド酸シート２を作製してもよい。なお、「コンマコーター」は、株式会社ヒラノテクノシードの登録商標である。
【００５６】
図６に示すように、ポリアミド酸シート２の基材１０ｄと反対側の表面には、保護フィルム１５が積層されてもよい。保護フィルム１５は、例えば、ポリオレフィン等の樹脂製のフィルムである。例えば、ローラー５０によって保護フィルム１５がポリアミド酸シート２の基材１０ｄと反対側の表面に搬送されて積層される。これにより、基材１０ｄ、ポリアミド酸シート２、及び保護フィルム１５を備えた積層体がローラー５０によって搬送されて巻き取られ、この積層体の巻回体４が得られる。その後、巻回体４が展開され、ポリアミド酸シート２が基材１０ｄ及び保護フィルム１５から剥離され、上記の条件で加熱されてポリアミド酸がイミド化される。このようにして、細胞培養用フィルム１を得ることができる。
【００５７】
上記の細胞培養用フィルム１の製造方法において、細胞を培養するための足場を形成する部分に加わる線圧は、望ましくは１Ｎ／ｃｍ以下である。これにより、細胞を培養するための足場の特性が安定するので、細胞培養用フィルム１における細胞培養の安定性がより確実に高まる。特に、図３、図４、図５Ａ、図５Ｂ、及び図６に示すように、ポリアミド酸シート２が支持体に載せられた状態で搬送されて細胞培養用フィルム１が製造される場合に、この条件を満たすことが望ましい。
【００５８】
細胞培養用フィルム１の製造方法において、細胞を培養するための足場を形成する部分に加わる線圧を１Ｎ／ｃｍ以下にするために、ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブを搬送するためのローラーとして、ニップローラーとフィードローラーとの一対のローラーではなく、ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブを吸引可能なサクションローラーを用いることが望ましい。ここで、サクションローラーは、サクションローラーの内周面から外周面に延びる吸引穴を有する。また、サクションローラーの内部空間の空気は真空ポンプなどによりサクションローラーの外部に排出されて、サクションローラーの内部空間が負圧に保たれる。これにより、ポリアミド酸シート２を含むウェブを吸引しつつ搬送できる。この場合、ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブがニップされないので、細胞を培養するための足場を形成する部分に加わる線圧を１Ｎ／ｃｍ以下にできる。
【００５９】
また、ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブを搬送するために、圧縮空気を吐出するための吐出孔を外周面に有する筒状の搬送部材を用いてもよい。この搬送部材の断面の一部は、半円状又は半楕円状の輪郭を有し、この輪郭を有する部分が搬送されるべきウェブに対向する。ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブがこの搬送部材を通過するときに、搬送部材の吐出孔からポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブに向かって圧縮空気が吹き出され、ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブとこの搬送部材の外周面との間に隙間が形成される。すなわち、この搬送部材によれば、ポリアミド酸シート２又はポリアミド酸シート２を含むウェブを搬送部材に接触させることなく搬送できる。これにより、細胞を培養するための足場を形成する部分に加わる線圧を１Ｎ／ｃｍ以下にできる。
【００６０】
細胞培養用フィルム１の製造方法において、細胞を培養するための足場を形成する部分には別の部材が接触しないことが望ましい。これにより、細胞を培養するための足場の特性がより確実に安定する。この観点から、細胞培養用フィルム１の細胞を培養するための足場を形成する部分の上には保護フィルム等の部材が重ねられないことが望ましい。
【実施例】
【００６１】
実施例を用いて本発明をより詳細に説明する。ただし、本発明は、以下の実施例に限定されない。
【００６２】
＜実施例１＞
（フッ素含有ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物の調製）
１，４−ビス（アミノフェノキシ）ベンゼン２．９７６ｇ（１０．２ミリモル）、４，４’−ヘキサフルオロイソプロピリデンジフタル酸無水物４．５２４ｇ（１０．２ミリモル）、及びＮ、Ｎ−ジメチルアセトアミド４２．５ｇを１００ｍｌの容量を有する三つ口フラスコに加え、窒素雰囲気下において、室温で５日間攪拌した。これにより、含フッ素ポリアミド酸を含む液状の樹脂組成物（固形分濃度１５．０質量％）が得られた。
【００６３】
液状の樹脂組成物における含フッ素ポリアミド酸の重量平均分子量を以下の条件で測定したところ、２２万であった。
装置：東ソー株式会社製  ＨＣＬ−８２２０ＧＰＣ
カラム：ＴＳＫｇｅｌ  Ｓｕｐｅｒ  ＡＷＭ−Ｈ
溶離液（ＬｉＢｒ・Ｈ2０、リン酸入りＮＭＰ（Ｎ−メチルピロリドン））：０．０１ｍｏｌ／Ｌ
測定方法：０．５％溶液を溶離液で作製し、ポリエチレンで作製した検量線を基に分子量を測定した。
【００６４】
伊藤忠マシンテクノス株式会社製の卓上ダイコーターにスロットダイを取り付けて、１５０ｍｍ×１５０ｍｍ×２ｍｍの寸法を有するガラス板（大阪硝子工業株式会社製）の一方の表面に上記の含フッ素ポリアミド酸の液状の樹脂組成物を塗布した。ガラス板の一方の表面を光学顕微鏡により観察したところ、２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する異物の数は３個であった。液状の樹脂組成物の塗布速度は３ｍｍ／秒に調整した。スロットダイの先端からガラス板の表面までの距離は４００μｍに調整した。液状の樹脂組成物の塗布直後の湿潤状態での塗膜の膜厚は０．４ｍｍに、塗膜の幅は１００ｍｍに、塗膜の長さは１４０ｍｍにそれぞれ調整した。塗膜を充分に乾燥させ、実施例１に係るポリアミド酸シートを得た。その後、ポリアミド酸シートを窒素雰囲気下において３００℃で１時間加熱し、ポリアミド酸のイミド化を行い、実施例１に係る細胞培養用フィルムを作製した。常温に冷却した後、ガラス板から細胞培養用フィルムを剥離した。
【００６５】
得られた細胞培養用フィルムの膜厚は３８μｍであった。実施例１に係る細胞培養用フィルムに含まれる樹脂組成物のフッ素の含有量は１７質量％であった。フッ素の含有量は、元素分析装置（ジェイサイエンス社製、マイクロコーダー  ＪＭ−１０）を用いて測定した。
【００６６】
実施例１に係る細胞培養用フィルムに含まれる樹脂組成物のイミド化率は９０％であった。このイミド化率は、ＦＴ−ＩＲ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製、Ｎｉｃｏｌｅｔ  Ｎｅｘｕｓ  ６７０）によるポリイミドフィルム分析でポリイミドのＣＮ伸縮振動に由来する１３７０ｃｍ-1付近の吸光度（Ａ（１３５０ｃｍ-1））とベンゼン環骨格振動に由来する１５００ｃｍ-1付近の吸光度（Ａ（１５００ｃｍ-1））との吸光度比Ａ（１３５０ｃｍ-1）／Ａ（１５００ｃｍ-1）を用いて以下の式に基づいて算出した。
イミド化率（％）＝[実施例１に係る細胞培養用フィルムに含まれる樹脂組成物のＡ（１３５０ｃｍ-1））／Ａ（１５００ｃｍ-1）]÷[完全熱処理後のポリイミドフィルムに含まれる樹脂組成物のＡ（１３５０ｃｍ-1）／Ａ（１５００ｃｍ-1）]×１００
【００６７】
ここで、「完全熱処理後のポリイミドフィルムに含まれる樹脂組成物のＡ（１３５０ｃｍ-1）／Ａ（１５００ｃｍ-1）」とは、上記の実施例１に係るポリアミド酸シートを３８０℃で１時間加熱して含フッ素ポリアミド酸を完全にイミド化（イミド化率：１００％）させたポリイミドフィルムに含まれる樹脂組成物のＡ（１３５０ｃｍ-1）／Ａ（１５００ｃｍ-1）である。
【００６８】
実施例１に係る細胞培養用フィルムの細胞を培養すべき表面、すなわち、ガラス板と接触していた面と反対側の表面における水接触角は８３°であった。ここで、水接触角の測定において、自動接触角計（協和科学社製、ＤＭ−５００）を用いて、２５℃の温度で水２μｌを滴下した直後の液滴の付着角度を測定した。
【００６９】
実施例１に係る細胞培養用フィルムの引張弾性率は、２．０ＧＰａであった。引張弾性率は以下の条件で測定した。
測定装置：ティー・エイ・インスツルメント社製  動的粘弾性測定装置  ＲＳＡIII
測定方法：５×４０ｍｍの試験片を作製し、２５℃における応力及び引張ひずみを測定して引張弾性率を算出した。
【００７０】
実施例１に係る細胞培養用フィルムにおけるガラス板と接触していた面を光学顕微鏡により観察したところ、２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する欠点及び異物の数は３個であった。また、３００μｍより大きい最大径を有する欠点及び異物は確認されなかった。
【００７１】
ライフテクノロジー社より入手したラット凍結肝細胞を以下の組成の培地で懸濁し、３枚の実施例１に係る細胞培養用フィルムのそれぞれの細胞を培養すべき表面に播種し、３７℃、５％ＣＯ2の条件で培養した。
培地組成：William's E medium（和光純薬工業社製）＋１０％ ＦＢＳ（和光純薬工業社製）＋８．６ｎＭ インスリン＋２５５ｎＭ デキサメサゾン＋５０ｎｇ／ｍＬ ＥＧＦ＋５ＫＩＵ／ｍＬ  アプロチニン＋抗生物質（ペニシリン（１００ｕｎｉｔ／ｍＬ）／スプレプトマイシン（１００μｇ／ｍＬ））
【００７２】
いずれの実施例１に係る細胞培養用フィルムの細胞を培養すべき表面においても、均一にかつ偏りなく細胞を培養できた。また、いずれの実施例１に係る細胞培養用フィルムにおいても、培養液は漏れなかった。
【００７３】
＜実施例２＞
連続塗工装置（ヒラノテクシード社製）にコンマコーター（ヒラノテクノシード社製）を取り付けて、ＰＥＴフィルム（東レ社製、製品名：Ｔ６０、厚さ：３８μｍ、幅：３００ｍｍ、）を搬送させながら、上記の含フッ素ポリアミド酸の液状の樹脂組成物を、コンマコーターを用いてＰＥＴフィルムの一方の表面に塗布した。含フッ素ポリアミド酸の液状の樹脂組成物を塗布する前にＰＥＴフィルムの一方の表面を光学顕微鏡で観察したところ、２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する異物の数は２２５ｃｍ2当たり３個であった。コンマコーターの先端とＰＥＴフィルムとの距離は、液状の樹脂組成物の塗布直後の湿潤した状態での塗膜の膜厚が０．４ｍｍとなるように調整した。また、液状の樹脂組成物の塗布速度は１ｍ／分、塗膜の幅は２００ｍｍに調整した。塗膜を充分に乾燥させて、実施例２に係るポリアミド酸シートを得た。実施例２に係るポリアミド酸シートを枠材に挟んで固定し、実施例２に係るポリアミド酸シートを、窒素雰囲気下において３００℃で１時間加熱し、ポリアミド酸のイミド化を行った。このようにして、実施例２に係る細胞培養用フィルムを作製した。
【００７４】
実施例２に係る細胞培養用フィルムの厚みは３３μｍであった。実施例１と同様にして、実施例２に係る細胞培養用フィルムに含まれる樹脂組成物のフッ素の含有量を測定したところ、１７質量％であった。実施例１と同様にして、実施例２に係る細胞培養用フィルムに含まれる樹脂組成物のイミド化率を測定したところ、９２％であった。
【００７５】
実施例２に係る細胞培養用フィルムの細胞を培養すべき表面、すなわち、ＰＥＴフィルムと接触していた面と反対側の表面における水接触角は９６°であった。ここで、水接触角の測定は、実施例１と同様にして行った。
【００７６】
実施例２に係る細胞培養用フィルムにおけるＰＥＴフィルムと接触していた面を光学顕微鏡により観察したところ、２０μｍ以上１０００μｍ以下の最大径を有する欠点及び異物の数は１４０ｃｍ2当たり３個であった。また、３００μｍより大きい最大径を有する欠点及び異物は確認されなかった。
【符号の説明】
【００７７】
１            細胞培養用フィルム
１ａ          一方の表面
１ｂ          一方の表面と反対側の表面
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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