(57)【要約】【課題】間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化を促進させる骨分化誘導因子を提供すること。【解決手段】  間葉系幹細胞を骨芽細胞へ分化させる骨分化誘導因子であって、ロジン誘導体を含む、骨分化誘導因子。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
間葉系幹細胞を骨芽細胞へ分化させる骨分化誘導因子であって、
ロジン誘導体を含む、骨分化誘導因子。
【請求項２】
前記ロジン誘導体は、デヒドロアビエチン酸、アビエチン酸、パラストリン酸、ピマール酸、イソピマール酸、および、ネオアビエチン酸から選択される１種以上である、請求項１に記載の骨分化誘導因子。
【請求項３】
さらに、骨形成因子を含有する、請求項１または２に記載の骨分化誘導因子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、間葉系幹細胞を骨芽細胞へ分化させる骨分化誘導因子に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化が進むにつれ、骨粗しょう症、関節炎、歯周病などの骨疾患を有する患者の数が、年々増加している。本来、骨組織は、自然治癒力を有する。実際、多くの骨折は、ギブスなどの保存的な加療により治癒する。しかしながら、広範囲な骨欠損などには、骨組織が本来もつ自然治癒力が充分な効果を発揮できない場合がある。そのため、これらの骨疾患に対する治療方法として、骨再生医療の研究が進められている。
【０００３】
骨を構成する細胞成分としては、骨芽細胞と骨細胞とがある。骨芽細胞は、骨基質の表面に存在して、新たな骨基質を分泌する細胞であり、骨形成過程において最も重要な役割を担う。骨細胞は、一部の骨芽細胞が分化した細胞であり、骨芽細胞が自ら分泌した骨基質中に埋もれていく過程で生成される。
【０００４】
骨再生医療として、一般的には、骨芽細胞を生体内へ移植する方法が用いられる。しかしながら、骨芽細胞は、骨基質の表面にへばりつくように存在するため、骨芽細胞を体内から得るためには、骨基質も一緒に採取しなければならない。骨基質を削りとって治療に必要な骨芽細胞の数を確保するのは、ドナーにとって負担が大きい行為である。すなわち、ドナーから骨芽細胞を得て、その骨芽細胞を移植するのは実用的でない。そこで、骨芽細胞へ分化し得る間葉系幹細胞を骨再生に利用する技術が進められている（非特許文献１）。
【０００５】
最近では、間葉系幹細胞から骨芽細胞および骨細胞への分化を促進させる技術がいくつか報告されている。例えば、特許文献１には、骨分化誘導因子として、従来広く使われている植物抽出物であって、かつ、安全性が確認されているケンフェロールを用いることにより、非常に短期間で、間葉系幹細胞を骨芽細胞に分化させられる点が開示されている。また、特許文献２には、アスコルビン酸、β−グリセロホスフェート、および、デキサメタゾンといった公知の分化誘導因子と、グルコサミノグリカンとを含む培地で細胞を培養することにより、間葉系幹細胞または骨芽細胞から骨細胞への分化を促進できる点が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００９−２５６３５０号公報
【特許文献２】特開２０１３−２０１９４０号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】あいみっく  Ｖｏｌ．３２  Ｎｏ．３  「骨再生医療」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明者らは、従来公知の骨分化誘導因子を用いて、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化を試みたが、骨分化過程において発現するＡＬＰ（アルカリホスファターゼ）活性が充分に高く、かつ、カルシウム沈着量が充分に多いとは言えなかった。また、ＡＬＰ活性およびカルシウム沈着量が目標値を超えるまでの時間が、充分に短縮されているとは言えなかった。すなわち、従来公知の骨分化誘導因子には未だ改善の余地があり、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化をより促進させるための骨分化誘導因子の開発が求められている。
【０００９】
本発明は、前記現状に鑑みてなされたものであり、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化をより促進させる骨分化誘導因子を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、前記課題について種々検討を行ったところ、松科の植物に多量に含まれる松脂（ロジン）を骨分化誘導因子として用いることにより、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化を促進させることを見出した。
【００１１】
本発明は、前記知見に基づいてなされたものであり、その要旨は、以下の通りである。
【００１２】
〔１〕間葉系幹細胞を骨芽細胞へ分化させる骨分化誘導因子であって、ロジン誘導体を含む、骨分化誘導因子。
【００１３】
〔２〕前記ロジン誘導体は、デヒドロアビエチン酸、アビエチン酸、パラストリン酸、ピマール酸、イソピマール酸、および、ネオアビエチン酸から選択される１種以上である、前記〔１〕に記載の骨分化誘導因子。
【００１４】
〔３〕さらに、骨形成因子を含有する、前記〔１〕または〔２〕に記載の骨分化誘導因子。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化をより促進させる骨分化誘導因子を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】ロジン誘導体のみを含む骨分化誘導因子を用いた骨分化誘導におけるＡＬＰ活性量の測定結果を示すグラフである。
【図２】骨分化誘導因子に含まれるロジン誘導体の濃度を変化させた場合のＡＬＰ活性量の測定結果を示すグラフである。
【図３】ＳＴ２細胞の骨分化誘導におけるＡＬＰ活性量の測定結果を示すグラフである。
【図４】Ｃ３Ｈ  １０Ｔ１／２細胞の骨分化誘導におけるＡＬＰ活性量の測定結果を示すグラフである。
【図５】Ｃ３Ｈ  １０Ｔ１／２細胞の骨分化誘導におけるカルシウム沈着量の測定結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明の一実施形態（以下、本実施形態ともいう）について詳しく説明する。本発明は、以下の内容に限定されるものではない。
【００１８】
１．骨分化誘導因子
本実施形態において、間葉系幹細胞を骨芽細胞へ分化させる骨分化誘導因子は、ロジン誘導体を含む。
【００１９】
ここで、ロジンとは、松科の植物に多量に含まれる松脂の不揮発性の成分であり、古くから化粧品原料および生薬として使用されている。このように、ロジンは、安全性の高い化合物であるため、薬剤として投与する際、副作用が出にくい。
【００２０】
ロジンは、採取方法により、トールロジン、ガムロジン、および、ウッドロジンに分類される。トールロジンは、松材からクラフト法でパルプを製造する工程で副生される粗トール油を減圧下で精留することにより、トール油脂肪酸と分離、精製されて得られる。ガムロジンは、松の幹に切り傷をつけた際に流れ出てくる生松脂をろ過精製し、水蒸気蒸留によりテレピン油を除くことで得られる。ウッドロジンは、松の切り株のチップから樹脂分を石油ナフサなどの溶剤で抽出し、溶媒とテレピン油とを分離した後、得られる。トールロジン、ガムロジン、および、ウッドロジンは、樹脂酸とよばれる各種異性体を主成分として含有する。前記樹脂酸としては、デヒドロアビエチン酸、アビエチン酸、パラストリン酸、ピマール酸、イソピマール酸、ネオアビエチン酸などが挙げられる。
【００２１】
前記ロジン誘導体としては、ロジンに含まれる樹脂酸であることが好ましい。具体的には、前記ロジン誘導体は、デヒドロアビエチン酸、アビエチン酸、パラストリン酸、ピマール酸、イソピマール酸、および、ネオアビエチン酸から選択される１種以上であることが好ましい。
【００２２】
また、前記ロジン誘導体は、前記ロジンに含まれる各樹脂酸から得られる、重合ロジン、アクリル化ロジン、水素添加ロジン、不均化ロジン、ホルミル化ロジン、ロジンエステル、ロジン変性マレイン酸樹脂、ロジン変性フェノール樹脂、ロジン変性アルキド樹脂であってもよい。
【００２３】
前記ロジン誘導体の培地への添加濃度は、１ｎＭ〜１００μＭであることが好ましく、１ｎＭ〜１０μＭであることがより好ましい。
【００２４】
本実施形態に係る骨分化誘導因子は、さらに、従来公知の骨分化誘導因子であるアスコルビン酸、β-グリセロホスフェート、デキサメタゾンなどを含んでいてもよい。アスコルビン酸の培地への添加濃度は、１０μＭ〜１０ｍＭであることが好ましい。β-グリセロホスフェートの培地への添加濃度は、１ｍＭ〜１００ｍＭであることが好ましい。デキサメタゾンの培地への添加濃度は、１０ｐＭ〜１００ｎＭであることが好ましい。
【００２５】
本実施形態に係る骨分化誘導因子は、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化をより促進させる観点から、さらに、骨形成因子を含むことが好ましい。前記骨形成因子としては、特に限定されないが、例えば、骨形成因子２（ＢＭＰ−２）、骨形成因子３（ＢＭＰ−３）、骨形成因子４（ＢＭＰ−４）、骨形成因子７（ＢＭＰ−７）などが挙げられる。これらの中でも、骨形成因子２（ＢＭＰ−２）であることが好ましい。
【００２６】
２．培養方法
以下、本実施形態に係る骨分化誘導因子を用いて、間葉系幹細胞を培養および骨分化誘導することにより、骨芽細胞に分化させる方法について、説明する。
【００２７】
前記間葉系幹細胞としては、特に限定されないが、例えば、哺乳類の間葉系幹細胞を用いることができる。哺乳類の間葉系幹細胞としては、ヒトの間葉系幹細胞、げっ歯類（ラット、マウスなど）の間葉系幹細胞などが挙げられる。また、これらの間葉系幹細胞は、種々の細胞バンクから入手可能なものを使用してもよい。具体的には、マウス胎仔由来繊維芽細胞Ｃ３Ｈ  １０Ｔ１／２、マウス由来骨前駆細胞ＭＣ３Ｔ３  Ｅ１、マウス骨髄由来ストローマ細胞ＳＴ２などを用いることができる。
【００２８】
前記培養および前記骨分化誘導に用いられる培地としては、特に限定されないが、例えば、アルファイーグル基本培地（αＭＥＭ）、イーグル基本培地（ＭＥＭ）、ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）、ハムのＦ−１２培地またはＦ−１０培地、間葉系細胞基本培地（ＭＳＣＢＭ）、ＲＰＭＩ１６４０培地などの基本培地を用いることができる。
【００２９】
前記基本培地は、アミノ酸、ビタミン類、無機塩類などを含む。前記アミノ酸類としては、例えば、Ｌ−アラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−アスパラギンサン、Ｌ−システイン、Ｌ−シスチン、Ｌ−グルタミンサン、Ｌ−グルタミン、グリシン、Ｌ−ヒスチジン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−リジン、Ｌ−メチオニン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−チロシン、Ｌ−バリンなどが挙げられる。前記ビタミン類としては、例えば、ビオチン、コリン、ビタミンＢ１２、葉酸、イノシトール、ニコチンアミド、パントテン酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ２、ビタミンＢ１などが挙げられる。前記無機塩類としては、例えば、塩化カルシウム、硫酸銅、硝酸鉄（ＩＩＩ）、硫酸鉄、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化カリウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸亜鉛などが挙げられる。
【００３０】
前記培地は、血清（例えば、ウシ胎児血清、自己血清、合成血清）を含んでいてもよいし、無血清または低血清であってもよい。
【００３１】
前記培養および前記骨分化誘導は、例えば、３７℃、５％ＣＯ２の環境下で行うことができる。骨分化誘導期間は、細胞の種類などに応じて適宜設定することができる。通常、骨分化誘導期間は４日以上であることが好ましく、７日以上であることがより好ましい。なお、培地は、３〜４日に１度交換を行うことが好ましい。
【００３２】
骨芽細胞への分化は、例えば、アルカリホスファターゼ活性またはカルシウムの沈着を指標に検出することができる。これらの検出には、市販のキット、例えば、カルシウム測定キット（カルシウムＥ−ＨＡテストワコー、和光純薬工業社製）、アルカリホスファターゼ測定キット（ラボアッセイＴＭＡＬＰ、和光純薬工業社製）などを用いることができる。
【００３３】
以下、本実施形態をより具体的に開示した実施例を示す。なお、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。
【実施例】
【００３４】
［試験例１］ロジン誘導体のみを含む骨分化誘導因子を用いた骨分化誘導
（実施例１）
理化学研究所バイオリソースセンターより入手したマウス骨髄由来ストローマ細胞ＳＴ２を、ＲＰＭＩ１６４０に１０％ウシ胎児血清と、１％ペニシリン・ストレプトマイシンとを加えた培地を入れた２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に、ウェルあたり２．５×１０４ｃｅｌｌｓとなるよう播種した。そして、５％ＣＯ２インキュベータ内で２日間、３７℃で培養した。その後、デヒドロアビエチン酸（純度９４％、和光純薬工業社製）を培地への終濃度が１００ｎＭとなるように添加し、骨分化誘導を開始した。骨分化誘導は、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータ内で行い、１０日後の細胞をサンプリングした。なお、培地は、３〜４日に一度、交換を行った。
【００３５】
（比較例１−１）
デヒドロアビエチン酸の代わりに、デキサメタゾン(ナカライテスク社製)を用いたこと以外は、実施例１と同様に細胞をサンプリングした。
【００３６】
（比較例１−２）
デヒドロアビエチン酸の代わりに、デキサメタゾン(ナカライテスク社製)を用い、さらに、アスコルビン酸（ナカライテスク社製）を濃度が５０μｇ／ｍＬ、β−グリセロホスフェート（ＳＩＧＭＡ社製）を濃度が１０ｍＭとなるように培地に添加したこと以外は、実施例１と同様に細胞をサンプリングした。
【００３７】
＜アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性量の測定＞
サンプリングした細胞を溶液（３Ｍ  塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）、０．３Ｍ  クエン酸三ナトリウム（ナカライテスク社製）、および、２００ｍｇ／Ｌ  ドデシル硫酸ナトリウム（ナカライテスク社製））に溶解させ、ラボアッセイＡＬＰ（和光純薬工業社製）を用いて、ＡＬＰ活性量を測定した。マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で４０５ｎｍの吸光度を測定し、得られた値を細胞数で割ることにより、細胞あたりのＡＬＰ活性量を求めた。結果を図１に示す。
【００３８】
図１から明らかなように、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体のみを添加した実施例１の細胞は、従来の骨分化誘導因子であるデキサメタゾンを添加した比較例１−１、ならびに、従来の骨分化誘導因子であるデキサメタゾン、アスコルビン酸およびβ−グリセロホスフェートを添加した比較例１−２の細胞に比べて、ＡＬＰ活性量が高かった。すなわち、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体を含むことにより、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化がより促進された。
【００３９】
［試験例２］骨分化誘導因子に含まれるロジン誘導体の適切な濃度範囲の検討
（実施例２）
マウス骨髄由来ストローマ細胞ＳＴ２を、ＲＰＭＩ１６４０に１０％ウシ胎児血清と、１％ペニシリン・ストレプトマイシンとを加えた培地を入れた４８ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に、ウェルあたり１．２５×１０４ｃｅｌｌｓとなるよう播種した。そして、５％ＣＯ２インキュベータ内で２日間、３７℃で培養した。その後、アスコルビン酸（ナカライテスク社製）を濃度が５０μｇ／ｍＬ、β−グリセロホスフェート（ＳＩＧＭＡ社製）を濃度が１０ｍＭ、デヒドロアビエチン酸（純度９４％、和光純薬工業社製）を培地への終濃度がそれぞれ１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭ、１μＭ、１０μＭおよび１００μＭとなるように添加し、骨分化誘導を開始した。骨分化誘導は、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータ内で行い、４日後の細胞をサンプリングした。
【００４０】
（比較例２）
デヒドロアビエチン酸の代わりに、デキサメタゾン(ナカライテスク社製)を用いたこと以外は、実施例２と同様に細胞をサンプリングした。
【００４１】
＜アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性量の測定＞
実施例２および比較例２のＡＬＰ活性量は、試験例１と同様に測定した。結果を図２に示す。
【００４２】
図２から明らかなように、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体を添加した実施例２の細胞は、従来の骨分化誘導因子であるデキサメタゾンを添加した比較例２の細胞に比べて、いずれの濃度においても、ＡＬＰ活性量が高かった。すなわち、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体を含むことにより、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化がより促進された。また、実施例２において、ロジン誘導体の培地への添加濃度が１ｎＭ〜１０μＭであった細胞は、ＡＬＰ活性がより高かった。すなわち、ロジン誘導体を含む骨分化誘導因子は、培地への添加濃度が１ｎＭ〜１０μＭとなるように添加することにより、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化がより促進された。
【００４３】
［試験例３］マウス骨髄由来ストローマ細胞ＳＴ２の骨分化誘導
（実施例３−１）
マウス骨髄由来ストローマ細胞ＳＴ２を、ＲＰＭＩ１６４０に１０％ウシ胎児血清と、１％ペニシリン・ストレプトマイシンとを加えた培地を入れた２４ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に、ウェルあたり２．５×１０４ｃｅｌｌｓとなるよう播種した。そして、５％ＣＯ２インキュベータ内で２日間、３７℃で培養した。その後、アスコルビン酸（ナカライテスク社製）を濃度が５０μｇ／ｍＬ、β−グリセロホスフェート（ＳＩＧＭＡ社製）を濃度が１０ｍＭ、および、中国ガムロジンを、該中国ガムロジン中の成分であるデヒドロアビエチン酸の培地への終濃度が１ｎＭ、１０ｎＭ、１００ｎＭとなるように添加し、骨分化誘導を開始した。骨分化誘導は、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータ内で行い、１０日後の細胞をサンプリングした。なお、培地は、３〜４日に一度、交換を行った。
【００４４】
中国ガムロジンの組成は以下の通りである。
アビエチン酸  ５６．６％
パラストリン酸  １４．４％
デヒドロアビエチン酸  １２．２％
ピマール酸  ８．９％
ネオアビエチン酸  ４．１％
その他  ２．８％
【００４５】
（実施例３−２）
中国ガムロジンの代わりに、デヒドロアビエチン酸（純度７６％、ハリマ化成社製）を用いたこと以外は、実施例３−１と同様に細胞をサンプリングした。
【００４６】
（実施例３−３）
中国ガムロジンの代わりに、デヒドロアビエチン酸（純度９４％、和光純薬工業社製）を用いたこと以外は、実施例３−１と同様に細胞をサンプリングした。
【００４７】
（比較例３）
中国ガムロジンの代わりに、デキサメタゾン（ナカライテスク社製）を用いたこと以外は、実施例３−１と同様に細胞をサンプリングした。
【００４８】
＜アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性量の測定＞
実施例３−１〜３−３および比較例３のＡＬＰ活性量は、試験例１と同様に測定した。結果を図３に示す。
【００４９】
図３から明らかなように、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体を添加した実施例３−１〜３−３の細胞は、従来の骨分化誘導因子であるデキサメタゾンを添加した比較例３の細胞に比べて、ＡＬＰ活性量が高かった。すなわち、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体を含むことにより、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化がより促進された。
【００５０】
［試験例４］マウス胎仔由来繊維芽細胞Ｃ３Ｈ  １０Ｔ１／２の骨分化誘導
（実施例４）
マウス胎仔由来繊維芽細胞Ｃ３Ｈ  １０Ｔ１／２を、α−ＭＥＭに１０％ウシ胎児血清と、１％ペニシリン・ストレプトマイシンとを加えた培地を入れた６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）に、ウェルあたり５．０×１０４ｃｅｌｌｓとなるよう播種した。そして、５％ＣＯ２インキュベータ内で２日間、３７℃で培養した。その後、アスコルビン酸（ナカライテスク社製）を濃度が５０μｇ／ｍＬ、β−グリセロホスフェート（ＳＩＧＭＡ社製）を濃度が１０ｍＭ、および、デヒドロアビエチン酸（純度７６％、ハリマ化成社製）を濃度が１０−８Ｍとなるように培地に添加し、骨分化誘導を開始した。骨分化誘導は、３７℃、５％ＣＯ２インキュベータ内で行い、１週間後、２週間後、３週間後、４週間後の細胞をサンプリングした。なお、培地は、３〜４日に一度、交換を行った。
【００５１】
（比較例４）
デヒドロアビエチン酸の代わりに、デキサメタゾン（ナカライテスク社製）を濃度が１０ｎＭとなるように培地に添加したこと以外は、実施例４と同様に細胞をサンプリングした。
【００５２】
＜アルカリホスファターゼ（ＡＬＰ）活性量の測定＞
実施例４および比較例４のＡＬＰ活性量は、試験例１と同様に測定した。結果を図４に示す。
【００５３】
＜カルシウム沈着量の測定＞
サンプリングした細胞を溶液（３Ｍ  塩化ナトリウム（和光純薬工業社製）、０．３Ｍ  クエン酸三ナトリウム（ナカライテスク社製）、および、２００ｍｇ／Ｌ  ドデシル硫酸ナトリウム（ナカライテスク社製））に溶解させ、該溶液と等量の１Ｍ  ＨＣｌ水溶液（ナカライテスク社製）を加えて、４℃で４時間以上静置した。その後、カルシウムＥ−ＨＡテストワコー（和光純薬工業社製）を用いて、カルシウム沈着量を測定した。マイクロプレートリーダー（ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ社製）で６００ｎｍの吸光度を測定し、得られた値を細胞数で割ることにより、細胞あたりのカルシウム沈着量を求めた。結果を図５に示す。
【００５４】
図４および図５から明らかなように、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体であるデヒドロアビエチン酸を添加した実施例４の細胞は、従来の骨分化誘導因子であるデキサメタゾンを添加した比較例４の細胞に比べて、ＡＬＰ活性量が高く、かつ、カルシウム沈着量が多かった。すなわち、骨分化誘導因子として、ロジン誘導体であるデヒドロアビエチン酸を含むことにより、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化がより促進された。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の骨分化誘導因子は、間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化を従来の骨分化誘導因子に比べてより促進させることができる。したがって、本発明の骨分化誘導因子は、再生医療、医薬および製薬業などの分野で利用することができる。例えば、再生医療研究者向けの試薬、人工培養骨を製造する際に用いる薬剤、健康食品、骨の修復を促進する医薬品などに好適に用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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