(57)【要約】【課題】生体サンプル中のターゲット遺伝子の濃度Ｑを、希釈装置の系統エラーを低減して定量する。【解決手段】定量方法は、（ａ）ターゲット濃度定量装置にマイクロ流路チップを装着し、（ｂ）第１のディスペンサにより、第１の流路に、希釈されたサンプル液体を供給し、かつ第２のディスペンサにより、第２の流路に、分離液を供給し、（ｃ）第１の流路にサンプル液体を通過させ、かつ第２の流路に分離液を通過させるにより、排出流路１９に、希釈倍率毎に、複数の液滴群が形成され、（ｄ）排出流路１９に形成された複数の液滴群は、ＰＣＲリアクタにおいて、ＰＣＲ処理され、検出流路に供給され、（ｅ）光学検出器により、検出流路を流れる複数の液滴群のそれぞれについて、液滴群の液滴の総数と液滴群に含まれる標識液滴の数とをカウントし、（ｆ）標識液滴の数及び液滴の総数と所定の基準とに基づいて、サンプル液滴中のターゲット遺伝子の濃度を算出する。【選択図】図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンプル液中のターゲット遺伝子の濃度の定量方法であって、
（ａ）ターゲット濃度定量装置にマイクロ流路チップを装着し、
前記ターゲット濃度定量装置は、第１のディスペンサと、第２のディスペンサと、光学検出器と、算出回路とを有し、
前記マイクロ流路チップは、第１の導入孔を有する第１の流路と、第２の導入孔を有する第２の流路と、排出流路と、ＰＣＲリアクタと、検出流路とを有し、
（ｂ）前記第１のディスペンサにより、前記第１の流路に、希釈されたサンプル液体を供給し、かつ前記第２のディスペンサにより、前記第２の流路に、分離液を供給し、ここで、前記希釈されたサンプル液体は、１０ｉ倍（ｎは１以上の整数）で表される複数の希釈倍率で希釈されており、
（ｃ）前記第１の流路に前記サンプル液体を通過させ、かつ前記第２の流路に前記分離液を通過させるにより、排出流路１９に、前記複数の希釈倍率のそれぞれに対応して、複数の液滴群が形成され、
（ｄ）前記排出流路１９に形成された複数の液滴群は、前記ＰＣＲリアクタにおいて、ＰＣＲ処理され、前記検出流路に供給され、
（ｅ）前記光学検出器により、前記検出流路を流れる前記複数の液滴群のそれぞれについて、前記液滴群の液滴の総数と前記液滴群に含まれる標識液滴の数とをカウントし、
（ｆ）前記標識液滴の数及び前記液滴の総数と所定の基準とに基づいて、サンプル液滴中のターゲット遺伝子の濃度を算出する、
を含む、濃度の定量方法。
【請求項２】
前記工程（ｆ）において、前記標識液滴の数及び前記液滴の総数とポアソン分布関数とに基づいて、ターゲット遺伝子数を推定し、
前記標識液滴の数をｎｉとし、前記液滴の総数をＶｉとし、前記推定されたターゲット遺伝子数をｍｉとしたとき、横軸をｉ、縦軸をｌｏｇ（ｍｉ／Ｖｉ）における１次関数の縦軸の切片を求めて、ｌｏｇＱを取得し、
前記Ｑを前記ターゲット遺伝子の濃度として算出する、
請求項１の濃度の定量方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ターゲット遺伝子の濃度の定量方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
癌疾患の再発検査などの疾患関連の特定遺伝子変位を定量するためのディジタルドロップレット定量ＰＣＲ（ｄｄＱＰＣＲ）法の有用性が期待されている。小型な遺伝子診断装置により、短時間で処理できることは、フィールドまたは家庭において用いられるＰｏＣ（ポイントオブケア）用途の遺伝子診断装置において有効である。
【０００３】
図２は、ＤＮＡサンプルをｄｄＱＰＣＲ法により定量する処理の流れを示す工程系統図である。図２に示されるように、ＱＰＣＲ法によってＤＮＡ定量を行う際には主に三つの工程を経ている。
【０００４】
第一の工程において、生体サンプル源からのＤＮＡを抽出される（ＤＮＡ抽出とも呼ぶ）。第二の工程において、多重ＰＣＲ測定を行われる（多重ＰＣＲ測定とも呼ぶ）。第三の工程において、増幅産物の検出および統計データ解析によりＤＮＡ定量データが取得される（ＤＮＡ定量データ取得とも呼ぶ）。これら三つの工程のうちの第一の工程および第三の工程は、ＱＰＣＲ法以外の従来のＤＮＡ定量手法と共通する技術である。
【０００５】
また、ＱＰＣＲ法の信頼性を高めるためには、第二の工程の精度を十分高めることが望ましい。すなわち、生体サンプルを希釈することによる複数の異なる倍率の希釈列を精度よく多数調整し、多重測定する必要がある。このような多重測定をするためにＰＣＲの前処理（煩雑な希釈列作成、ＰＣＲ試薬混合、および液滴作成などの前処理工程）が必要である。特許文献２には、前処理工程をマイクロ流路化した自動装置が開示されている。また、特許文献１には、液体サンプルから液滴を作成し、ｄｄＱＰＣＲを行う装置および方法が開示されている。特許文献３には、ポンプ、バルブ、サーマルリアクタ、および液体源を統合したチップが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１３−５２１７６４号公報
【特許文献２】特許第３６２１９２５号公報
【特許文献３】特開２０１３−６６８８５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、前記従来の課題を解決するために、希釈倍率に含まれる系統誤差に拘わらず、高い精度を有するｄｄＱＰＣＲの定量分析法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の１態様に係るサンプル液中のターゲット遺伝子の濃度の定量方法は、
（ａ）ターゲット濃度定量装置にマイクロ流路チップを装着し、
前記ターゲット濃度定量装置は、第１のディスペンサと、第２のディスペンサと、光学検出器と、算出回路とを有し、
前記マイクロ流路チップは、第１の導入孔を有する第１の流路と、第２の導入孔を有する第２の流路と、排出流路と、ＰＣＲリアクタと、検出流路とを有し、
（ｂ）前記第１のディスペンサにより、前記第１の流路に、希釈されたサンプル液体を供給し、かつ前記第２のディスペンサにより、前記第２の流路に、分離液を供給し、ここで、前記希釈されたサンプル液体は、１０ｉ倍（ｎは１以上の整数）で表される複数の希釈倍率で希釈されており、
（ｃ）前記第１の流路に前記サンプル液体を通過させ、かつ前記第２の流路に前記分離液を通過させるにより、排出流路１９に、前記希釈倍率毎に、複数の液滴群が形成され、
（ｄ）前記排出流路１９に形成された複数の液滴群は、前記ＰＣＲリアクタにおいて、ＰＣＲ処理され、前記検出流路に供給され、
（ｅ）前記光学検出器により、前記検出流路を流れる前記複数の液滴群のそれぞれについて、前記液滴群の液滴の総数と前記液滴群に含まれる標識液滴の数とをカウントし、
（ｆ）前記標識液滴の数及び前記液滴の総数と所定の基準とに基づいて、サンプル液滴中のターゲット遺伝子の濃度を算出する。
【発明の効果】
【０００９】
希釈倍率に含まれる系統誤差に拘わらず、ｄｄＱＰＣＲの定量分析法の精度を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】本発明の実施の形態１における検出数のグラフ
【図２】ｄｄＱＰＣＲ法の処理の流れを示す工程系統図
【図３】実施の形態１における多段階希釈液体サンプルを示す図
【図４】実施の形態１におけるマイクロ流路の構成を示す図
【図５】実施の形態１におけるマイクロ流路の合流部を示す図
【発明を実施するための形態】
【００１１】
（本発明の基礎となる知見）
各工程を自動化し、小型の遺伝子診断装置において実施する場合、μＬオーダーの液体を処理する各機能要素をチップに統合したμＴＡＳ（ｍｉｃｒｏ−ｔｏｔａｌ−ａｎａｌｙｓｉｓ−ｓｙｓｔｅｍ）デバイスが望まれる。
【００１２】
μＴＡＳデバイスは、携帯性に優れ、かつ短時間処理が可能である。μＴＡＳデバイスの一例は、平板状のチップである。μＴＡＳデバイスに含まれる各構成要素は、数ｍｍ２の面積を有する平板に設置されている。一方、μＴＡＳデバイスに含まれる各構成要素は、例えば、０．１ｍｍ以下の高さを有する。つまり、高さ方向の加工精度は、面内方向の加工精度と比較して、１桁または２桁小さい寸法公差が要求される。この装置で希釈操作の精度を高めるためには、高度な加工精度の管理が必要である。例えばポンプ、バルブ、サーマルリアクタ、液体源の流路構成を統合したチップの構成例が、特許文献３に開示されている。
【００１３】
しかしながら、前記従来の構成では、ポンプなどの送液操作にかかわる構成部品の厚みが狂いやすく、ＱＰＣＲ法の濃度算定をする上で重要である希釈濃度が設計値と異なり、装置の厚みの狂いによる誤差が含まれやすい。
【００１４】
例えば特許文献３に記載の装置に利用可能なポンプとして、約２μＬの容量を有し、かつ樹脂製のディスポーザルポンプが提案されている。このディスポーザルポンプのポンプ室において、底面は直径約４．５ｍｍであるのに対し、ダイアフラムの高さは約０．１ｍｍである。一般公差でダイアフラムを加工することは困難である。コスト管理が容易な寸法公差は、一般的に０．０２ｍｍであるため、このディスポーザルポンプを用いて希釈作業を行う場合、２０％のエラーが発生する。このエラーは、希釈液をテンプレートに逐次合流させて多段階希釈列を作成する場合には乗算されてしまうため、ターゲット濃度のＱＰＣＲによる見積もりの信頼性が大きく低減する。
【００１５】
また、ＱＰＣＲの定量法は、第三の工程において、生体サンプルおよび試薬の正確な希釈操作がされることが前提であり、従来の手作業による比較的容量の大きい液体サンプルの調整法と同じ方法が取られている。よって、従来の方法では設定した容量からの誤差が解析の結果に含まれる。
【００１６】
本方法によって、希釈装置の希釈倍率が設計値と異なる場合でも、真の希釈倍率であるβを変数とし、前記希釈倍率の系統的エラーを低減し、生体サンプルのターゲット濃度を定量することができる。このため、多段階希釈列を作成するための装置に要求される加工精度や動作精度を、大幅に低減することが容易になる。さらに、デバイス寸法が小型で流通する液量も少ないマイクロ流路装置で、高コストにつながる高い加工精度を不要とするため、生体サンプル中のターゲット濃度を正確に決定するマイクロ流路装置の製造が容易になる。
【００１７】
以下、本発明の実施の形態について、図面を参照しながら説明する。
【００１８】
ターゲット濃度定量装置１は、第１のディスペンサ２１と、第２のディスペンサ２２と、光学検出器２３と、算出回路２４とを備える。流路チップ１００は、ターゲット濃度定量装置１に装着される。
【００１９】
（流路チップ１００）
流路チップ１００は、第１の導入孔３を有する第１の流路１７と、第２の導入孔４を有する第２の流路１８と、排出流路１９と、ＰＣＲリアクタ２０と、検出流路２１とを有する。第１の流路１７、第２の流路１８、および排出流路１９とは、合流部１５で接続されている。
【００２０】
図５に、流路チップ１００の一部を拡大した模式断面図を示す。図５に示すように、第２の流路１８は、第２の導入孔４を有する導入流路１８１と、導入流路１８１から分岐する第１の分岐流路１８２と、第２の分岐流路１８３とを含む。
【００２１】
例えば、ＰＣＲリアクタ２０は、排出流路１９に接続される。ＰＣＲリアクタ２０において、ＰＣＲ法（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｃｈａｉｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｍｅｔｈｏｄ）により、ターゲット遺伝子を増幅される。ＰＣＲリアクタ２０は検出流路２１に接続される。
【００２２】
（第１のディスペンサ２１、および第２のディスペンサ２２）
第１のディスペンサ２１により、第１の導入孔３から第１の流路１７に、あらかじめ希釈されたサンプル液体が供給される。サンプル液体は、ターゲット遺伝子が含まれている。第２のディスペンサ２２により、第２の導入孔４から第２の流路１８に、分離液が導入される。第１のディスペンサ２１、および第２のディスペンサ２２は同じディスペンサであっても良い。
【００２３】
サンプル液体の希釈倍率は、（第１の所定の容量＋第２の所定の容量）／（第１の所定の容量）により表される。第１の所定の容量は、サンプル溶液の容量であり、第２の所定の容量は、希釈溶液の容量である。例えば、第１の所定量が０．３μＬであり、第２の所定量が２．７μＬである場合、１０倍の希釈液である。
【００２４】
（光学検出器２３）
光学検出器２３は、検出流路２１を流れるサンプル液体から出力される光を検出して、サンプル溶液の希釈倍率毎に、標識された液滴数と、全ての液滴数とをカウントする。例えば、第１の閾値以上の光を受け付けたとき回数を、標識された液滴数としてカウントする。第２の閾値以上の光を受け付けた回数を、全ての液滴数としてカウントする。例えば、第１の閾値は、第２の閾値よりも大きい。サンプル液滴の屈折率および分離液の屈折率などに基づいて、第１の閾値及び第２の閾値は決定され得る。
【００２５】
希釈倍率毎にカウントするために、第１のディスペンサ２１によりサンプル液体が注入されたタイミングと、あらかじめ定められた時間とに基づいて、サンプル溶液の希釈倍率毎に、液滴数がカウントされる。あらかじめ定められた時間は、例えば、第１のディスペンサ２１により注入されるサンプル液体の容量と、第１のディスペンサ２１から検出流路２１まで到達する時間とに基づいて、決定される。
【００２６】
例えば、光学検出器２３は、光源２３１と受光部２３２とを有しても良い。光源２３１と受光部２３２との間には、検出流路２１が位置する。光源２３１は検出流路２１に向かって光を出力し、受光部２３２は検出流路２１から通過した光を受光する。
【００２７】
（算出回路２４）
算出回路２４は、液滴数（ｎｉ）及び総液滴数（Ｖｉ）と所定の基準とに基づいて、サンプル液滴中のターゲット遺伝子の濃度を算出する。詳細は図１に基づいて後述する。
【００２８】
（希釈されたサンプル液体）
図３は、生体サンプル中のターゲット遺伝子の濃度Ｑをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）法により定量するために、流路６１中で濃度Ｑの液体サンプル中の生体材料が、αｉ倍に希釈される。さらに、複数個の液滴５８に分割された液滴群は、分離液２３０中に整列している。例えば、液滴群５７は、Ｎ１個の液滴を有する。α倍に希釈されることによって、濃度Ｑα−１の生体サンプルを含んだＮ１個の液滴が形成される。
【００２９】
また、液滴群５６は、α２倍された濃度Ｑα−２の生体サンプルを含んだＮ２個の液滴を有する。
【００３０】
ここで、希釈系列を希釈回数ｉについて区別し、希釈列ｉと呼ぶ。また、濃度の異なる液滴の間に、区域を明確にするためのマーカーとして、液滴５３、５４、５５を含んでも良い。このマーカーは、生体サンプルを含まない希釈液のみから構成されるネガティブコントロールとして良い。図３に示す流路には、希釈度ごとに区分されている、複数の多段階希釈列が位置する。
【００３１】
また、希釈液にはＰＣＲに必要な試薬と、液滴５８で生産された増幅産物にハイブリダイズするプローブを含み、そのプローブを蛍光標識であるとする。
【００３２】
生体分子中のターゲット遺伝子は、一塩基多型などの対立遺伝子変異体などである。希釈液の構成例を表１に示す。工程二を終え、検出可能標識が検出可能となっている液滴群を、流路６１の出口に配置した光学カウンタでカウントし、希釈列ｉの標識された液滴数をｎｉとする。また、液滴５８の総体積をＶｉとする。
【００３３】
（ステップＳ１００）
第１のディスペンサ２１により、第１の流路１７に、少なくとも第１の希釈倍率に希釈されたサンプル液体、および第２の希釈倍率に希釈されたサンプル液体が供給される。第１の希釈倍率と第２の希釈倍率とは異なる。希釈されたサンプル液体が導入されているときに、第２のディスペンサ２１により、第２の流路１８に、分離液が供給される。
【００３４】
（ステップＳ２００）
第１の流路１７にサンプル液体が流れ、かつ第２の流路１８に分離液が流れることにより、排出流路１９に、希釈倍率毎に、複数の液滴群が形成される。
【００３５】
（ステップＳ３００）
排出流路１９に形成された複数の液滴群は、ＰＣＲリアクタ２０において、ＰＣＲ処理される。
【００３６】
（ステップＳ４００）
検出流路２１に、ＰＣＲ処理された複数の液滴群を通過させているときに、光学検出器２３により、希釈倍率毎に、液滴数（ｎｉ）をカウントする。
【００３７】
（ステップＳ５００）
算出回路２４により、液滴数（ｎｉ）及び総液滴数（Ｖｉ）と所定の基準とに基づいて、サンプル液滴中のターゲット遺伝子の濃度を算出する。
【００３８】
（遺伝子ターゲットの濃度の定量方法の具体例）
生体サンプルに含まれる遺伝子ターゲットの濃度の定量方法をより具体的に説明する。図４を参照しながら、液体の生体サンプルと希釈液を混合した多段階希釈液から、液滴を作成する方法を説明し、ＰＣＲ後に光学検出により生体サンプルの濃度を定量分析する方法を説明する。
【００３９】
まず、ディスペンサにより試料を取られ、希釈列が作成される。
【００４０】
第３のディスペンサ（設計容量０．３μＬ）および第４のディスペンサ（設計容量２．７μＬ）のそれぞれにより、テンプレートおよび希釈液を取り、両方を容器に分注して混合することにより、希釈されたサンプル液体が精製される。この操作により、３μＬの１０倍希釈液が準備される。
【００４１】
次に、１０倍希釈したテンプレートを第１のディスペンサ２１（設計容量２μＬ）により、第１の導入孔３から分注される。同時に、第２のディスペンサ２２により、第２の導入孔４から分離液を注入させることにより、液滴が作成される。
【００４２】
図５に示すように、第２の流路１８中に分離液２０３を通過させることにより、第１の流路１７から送液されるテンプレート２２０を、第１の流路１７と第２の流路１８との合流点で細かく分離され、液滴２１０が作成され、排出流路１９から排出される。
【００４３】
この操作により、直径７０μｍを有する液滴が作成される場合、液滴は分離液中に１００００個以上作成され得る。この溶液の体積は約４μＬである。
【００４４】
１０倍希釈列は、ＰＣＲリアクタ２０に供給される。ＰＣＲリアクタ２０は反応室を有する。ＰＣＲリアクタ２０は、流路の形状を有し、かつ反応室は蛇行する流路を有し、蛇行する流路が反応室内で密に位置することが望ましい。蛇行する流路の例は、図３に示す流路が蛇行していることである。これにより、多段階希釈列を互いに区分したまま、検出処理まで行うことができる。
【００４５】
また、第３のディスペンサ１により、導入されず残った１０倍希釈液から０．３μＬを取り分け、次の１００倍希釈のためのテンプレートにする。さらに、テンプレートに対する希釈操作を繰り返されることにより、希釈倍率１０倍の多段階希釈溶液が作成される。
【００４６】
（ターゲット遺伝子の濃度の定量方法）
以下、任意のｉについて１０ｉ倍に希釈された希釈列ｉを含む、生体サンプルの多段階希釈列を用いて、ターゲット遺伝子を定量する工程について説明する。算出回路２４によるターゲット遺伝子の濃度等の算出に相当する。
【００４７】
作成された多段階希釈列の液滴は、ＰＣＲリアクタ２０に希釈列ｉ毎に分離された状態で封入され、ＰＣＲ処理される。
【００４８】
ＰＣＲ処理後、光学検出器で希釈列ｉの標識された液滴数をｎｉカウントし、さらに、液滴２１０と分離液２０３の屈折率の違いを利用して液滴と分離液とを区別し、希釈列ｉの総液的数Ｎｉをカウントする。Ｎｉと液滴の一滴あたりの体積ｖから、液滴の総体積Ｖｉ＝ｎｉｖを求める。
【００４９】
次にｎｉ／Ｖｉが、ｉの違いによりカウント数の誤差の範囲を超えて変化している希釈列ｉを選出し、ｎｉおよびその母数Ｎｉから、ポアソン分布関数によってｎｉに含まれるターゲット遺伝子数を推定し、ｍｉとする。
【００５０】
βを変数とし、またターゲット遺伝子の濃度Ｑを変数として、関数Ｑβ−ｉ＝ｍｉ／Ｖｉまたはその任意の基底の対数のデータセットを作製し、最小二乗法によって、Ｑを定量することができる。
【００５１】
図１に、本実施の形態における関数Ｑβ−ｉ＝ｍｉ／Ｖｉと、１倍希釈の生体サンプルのテンプレートに含まれるターゲットの濃度Ｑの関係を示す。関数の対数は、ｌｏｇ（ｍｉ／Ｖｉ）＝ｌｏｇＱ-ｉｌｏｇβにより表される。横軸はｉであり、縦軸はｌｏｇ（ｍｉ／Ｖｉ）である。これらの軸の空間に、カウント及び算出されたデータをプロットしている。図１に示すように、ｌｏｇ（ｍｉ／Ｖｉ）が線形的に変化している領域を最小二乗法フィットすることで、１次関数の勾配と切片が求まり、その切片が、ｌｏｇＱである。
【００５２】
図１では、希釈列あたりの液滴数を、α６個にしている。また、傾きから真の希釈倍率βを求めることで設計した希釈倍率と実際の差異を知ることができる。
【００５３】
つまり、算出回路２４は、光学検出器２３から希釈倍率毎のｎｉおよびＶｉを取得する。次に、算出回路２４は、ｎｉおよびその母数Ｎｉから、ポアソン分布関数に基づいて、ｎｉに含まれるターゲット遺伝子数を推定し、ｍｉとする。算出回路２４は、希釈倍率と、ｍｉおよびＶｉとに基づいて、横軸をｉ、縦軸をｌｏｇ（ｍｉ／Ｖｉ）における１次関数の縦軸の切片を求めて、ｌｏｇＱを取得することにより、濃度Ｑを算出する。
【００５４】
なお、本実施の形態１では、希釈倍率を１０倍とする場合の例を説明したが、分注機の容量を設計することによって、テンプレートは任意の希釈倍率で希釈可能である。また、希釈列を１０２倍毎、または１０３倍毎に取り分けて、多段階希釈列の希釈倍率を大きくしてもよい。また、希釈度はαｉであれば、ｉごとに等倍率で希釈されていなくても良く、隣り合うｉ同士の希釈倍率の２乗以上の液滴を希釈系列が含んでいれば良い。なお、隣り合うｉ同士の希釈倍率の３乗以上の液滴を含むことが、最小二乗法解析に用いる点数を３点以上にできるため、望ましい。
【００５５】
また、図３の全ての第二の工程を、制御された機械により正確に行うことで、希釈列ごとに含まれる液滴数をほぼ一定数にすることができる。これにより、前記関数はより単純になり、Ｑβ−ｉ＝ｍｉを解析すれば良くなり、生体サンプル中のターゲット濃度を求めることがより容易になる。また、生体サンプルに含まれる複数のターゲットを同時に検出するために、試薬に含むプローブの構成員それぞれが、異なる検出可能標識を含んでもよい。
【００５６】
本方法によって、希釈装置の希釈倍率が設計値と異なる場合でも、真の希釈倍率であるβをパラメータとし、前記希釈倍率の系統的エラーを排除して、正確に前記生体サンプルのターゲット濃度を定量することができる。このため、課題の項にて説明した、加工精度の限界に由来するディスペンサ（ポンプ）の送液誤差２０％の装置であっても正確に生体サンプル中のターゲット濃度を定量でき、前記多段階希釈列を作成するための装置に要求される加工精度や動作精度を、大幅に低減することが容易になる。さらに、デバイス寸法が小型で流通する液量も少ないマイクロ流路装置で、高コストにつながる高い加工精度を必要としなくなるため、生体サンプル中のターゲット濃度を正確に決定するマイクロ流路装置の製造が容易になる。
【００５７】
本発明のディジタル検体分析法によれば、希釈倍率のエラーに含まれる希釈機の系統的エラーを排除してターゲット濃度を決定できる。このため、多段階希釈列を作成するための装置に要求される加工精度や動作精度を、大幅に低減して低コストでの製造が容易になる。さらに、小型のマイクロ流路装置の製造において、ターゲット濃度を正確に決定するマイクロ流路装置の製造が容易になり、フィールドやＰｏＣで有用な小型ｄｄＱＰＣＲ装置の定量分析法に適した装置の提供が可能になる。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
加工精度に由来する希釈装置のエラーが大きい小型のマイクロ流体装置を用いたｄｄＱＰＣＲの定量分析などに有用である。
【符号の説明】
【００５９】
１７、１８、６１  流路
５６、５７  液滴群
５３、５８、２１０  液滴
２２０  テンプレート
【図１】
2017147991.tif 000003
【図２】
2017147991.tif 000004
【図３】
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【図４】
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【図５】
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