(57)【要約】      （修正有）【課題】妊娠中や出生直後から小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを低減するための処置をとるうえで有用な、小児のアトピー性皮膚炎発症リスクの出生前予測方法を提供する。【解決手段】妊娠母体の血液中のカロテノイド濃度から小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アトピー性皮膚炎発症リスクを予測する方法であって、
胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルと、予め決められた閾値とに基づいて、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測する方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、
前記血液サンプル中のカロテノイドレベルが前記閾値よりも低い場合には、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測される方法。
【請求項３】
前記予め決められた閾値が、アトピー性皮膚炎を発症した小児を出産した母親の当該小児を妊娠中のカロテノイドレベルの値と、アトピー性皮膚炎を発症しなかった小児を出産した母親の当該小児を妊娠中のカロテノイドレベルから求められる値である、請求項１又は請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記カロテノイドレベルが、総カロテノイドレベル、リコピンレベル、及びルテインレベルから選択される１種類のレベルである、請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記血液サンプルが、妊娠後期に採取された血液サンプルである、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記血液サンプルが血清である、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する装置であって、
該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを入力するカロテノイドレベル入力手段と、
該カロテノイドレベル入力手段にて入力されたカロテノイドレベルから前記胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定するリスク判定手段と、
を備え、
前記リスク判定手段は、前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルが予め決められた閾値と比較して低い場合には、前記胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると判定することとした装置。
【請求項８】
胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する装置であって、
該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプルを用いてカロテノイドを測定するカロテノイド測定手段と、
該カロテノイド測定手段にて測定された血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定するカロテノイドレベル決定手段と、
該カロテノイドレベル決定手段にて決定されたカロテノイドレベルから前記胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定するリスク判定手段と、
を備え、
前記リスク判定手段は、前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルが予め決められた閾値と比較して低い場合には、前記胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると判定することとした装置。
【請求項９】
出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法であって、
ａ）請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の方法を用いて胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測すること；
ｂ）出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に被検薬剤又は被検食品を摂取させること；
ｃ）前記被検薬剤又は被検食品を摂取後の前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルと、前記被検薬剤又は被検食品の摂取前の血液サンプル中のカロテノイドレベルと比較すること；
ｄ）前記被検薬剤又は被検食品が、胎児のアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低下させるか否かを、前記被検薬剤又は被検食品の摂取前後のカロテノイドレベルの比較結果から判定すること、ここで、前記被検薬剤又は被検食品の摂取後のカロテノイドレベルが前記被検薬剤又は被検食品の摂取前のカロテノイドレベルよりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定される方法。
【請求項１０】
カロテノイドを有効成分として含有する、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載の方法により、出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に摂取させるための組成物であって、当該胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させるための組成物。
【請求項１１】
前記カロテノイドが、リコピン及び／又はルテインである、請求項１０に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、小児のアトピー性皮膚炎を予測する分野に関する。より具体的には、本発明は、出生後の小児のアトピー性皮膚炎発症を出生前に予測する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、アトピー性皮膚炎の発症予知のために、出生後に得られる臍帯血や母乳などの生体試料中の物質の測定が行われてきた（特許文献１〜３）。たとえば、特許文献１及び特許文献２には母乳中サイトカイン／ケモカイン値に基づく小児アトピー性皮膚炎の発症予知する技術について開示されている。特許文献１及び２に開示の技術によれば、小児アトピー性皮膚炎の発症リスクを高い精度で予測することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２０１４−４８０８２
【特許文献２】特開２０１２−２３３７７７
【特許文献３】特開２０１１−９５１３２
【発明の概要】
【０００４】
しかし、従来の技術は全て出生後の授乳をしている段階で小児のアトピー性皮膚炎のリスクを予測するものであり、出生前に小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測する方法はこれまでに報告されていない。よって、従来技術は、出生後、授乳をしている段階で小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測することはできても、出生前に小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測することはできなかった。出生前に小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測することができれば、妊娠中や出生直後から小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを低減するための処置をとることができ、極めて有用である。
【０００５】
そこで、本発明者らは、妊娠母体の血液中の成分と小児におけるアトピー性皮膚炎発症の関係について広く検討した結果、妊娠母体の血液中のカロテノイド濃度と小児のアトピー性皮膚炎発症とが相関することを見出し、本発明を完成させた。
【０００６】
よって、本発明は、出生前に小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測する方法に関し、具体的には、妊娠母体の血液中のカロテノイド濃度から小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測する方法に関する。より具体的には、本発明は以下の発明に関する：
（１）  アトピー性皮膚炎発症リスクを予測する方法であって、
胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルと、予め決められた閾値とに基づいて、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測する方法。
（２）  （１）に記載の方法であって、
前記血液サンプル中のカロテノイドレベルが前記閾値よりも低い場合には、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測される方法。
（３）  前記予め決められた閾値が、アトピー性皮膚炎を発症した小児を出産した母親の当該小児を妊娠中のカロテノイドレベルの値と、アトピー性皮膚炎を発症しなかった小児を出産した母親の当該小児を妊娠中のカロテノイドレベルから求められる値である、（１）又は（２）に記載の方法。
（４）  カロテノイドレベルが、総カロテノイドレベル、リコピンレベル、及びルテインレベルから選択される１種類のレベルである、（１）〜（３）のいずれか１項に記載の方法。
（５）  前記血液サンプルが、妊娠後期に採取された血液サンプルである、（１）〜（４）のいずれか１項に記載の方法。
（６）  前記血液サンプルが血清である、（１）〜（５）のいずれか１項に記載の方法。
（７）  胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する装置であって、
該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを入力するカロテノイドレベル入力手段と、
該カロテノイドレベル入力手段にて入力されたカロテノイドレベルから前記胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定するリスク判定手段と、
を備え、
前記リスク判定手段は、前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルが予め決められた閾値と比較して低い場合には、前記胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると判定することとした装置。
（８）  胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する装置であって、
該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプルを用いてカロテノイドを測定するカロテノイド測定手段と、
該カロテノイド測定手段にて測定された血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定するカロテノイドレベル決定手段と、
該カロテノイドレベル決定手段にて決定されたカロテノイドレベルから前記胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定するリスク判定手段と、
を備え、
前記リスク判定手段は、前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルが予め決められた閾値と比較して低い場合には、前記胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると判定することとした装置。
（９）  出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法であって、
ａ）（１）〜（６）のいずれか１項に記載の方法を用いて胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測すること；
ｂ）出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に被検薬剤又は被検食品を摂取させること；
ｃ）前記被検薬剤又は被検食品を摂取後の前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルと、前記被検薬剤又は被検食品の摂取前の血液サンプル中のカロテノイドレベルと比較すること；
ｅ）前記被検薬剤又は被検食品が、胎児のアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低下させるか否かを、前記被検薬剤又は被検食品の摂取前後のカロテノイドレベルの比較結果から判定すること、ここで、前記被検薬剤又は被検食品の摂取後のカロテノイドレベルが前記被検薬剤又は被検食品の摂取前のカロテノイドレベルよりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定される方法。
（１０）  カロテノイドを有効成分として含有する、（１）〜（６）のいずれか１項に記載の方法により、出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に摂取させるための組成物であって、当該胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させるための組成物。
（１１）  前記カロテノイドが、リコピン及び／又はルテインである、（１０）に記載の組成物。
【０００７】
よって、本発明は妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルを指標として、該妊娠母体から出生する小児が将来アトピー性皮膚炎を発症する可能性があるか否かを該小児の出生前に予測する方法に関する。また、本発明によれば、胎児が出生した後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを該胎児の妊娠中に予測することができることから、小児のアトピー性皮膚炎発症リスクをコントロールすることが必要な妊娠母体を選択し、当該妊娠母体の胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを下げる処置を当該妊娠母体に行うことにより、小児のアトピー性皮膚炎発症リスクを下げることを可能とする。例えば、カロテノイドの経口摂取と血液中のカロテノイド濃度には相関がある（Ｓｕｇｉｕｒａら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ  （２００９），  １０２，  １２１１−１２１９）ことから、小児のアトピー性皮膚炎を発症するリスクを下げる処置として、当該妊娠母体へのによるカロテノイドの経口摂取が考えられる。
【０００８】
別の態様において本発明は、カロテノイドレベルから前記胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する発症判定手段を備える、胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する装置に関する。当該装置は、カロテノイドレベルに関する情報を取得する手段として、該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプルを用いてカロテノイドを測定するカロテノイド測定手段と、該カロテノイド測定手段にて測定された血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定するカロテノイドレベル決定手段とを備えていてもよいし、あるいは、該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを入力するカロテノイドレベル入力手段を備えていてもよい。前記発症判定手段は、前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルが予め決められた閾値と比較して低い場合には、前記胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると判定する。
【０００９】
該装置は、胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する。本発明の胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを判定する装置は、カロテノイド測定手段を備えていてもよい。ここで、「カロテノイド測定手段」は、妊娠母体由来の血液サンプルにおけるカロテノイド濃度の測定を実行する装置であって、被検妊娠母体由来の血液サンプルに対する所定の処理によって、血液サンプル中のカロテノイド濃度に関する情報をデジタル化又は電気信号化する。また、カロテノイド測定手段は、例えば、カロテノイド濃度を反映した吸光度等のパラメータを測定する。また、「カロテノイドレベル決定手段」は、カロテノイド測定手段により測定された測定値のカロテノイドレベルとしての決定、又は測定値からカロテノイドレベルの算出を実行する装置である。
【００１０】
本明細書において、「カロテノイド」とは、自然界に存在する黄色・赤色・橙色の脂溶性色素成分を意味する。カロテノイドとしては、例えば、α−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、及びリコピンなどのカロテン；ルテイン、β−クリプトキサンチン、カプサンチン、アスタキサンチン、及びゼアキサンチンなどのキサントフィルを挙げることができる。本明細書において、カロテノイドとは、１種類のカロテノイドを意味していても良いし、２種類以上のカロテノイドを意味していても良い。例えば、本明細書におけるカロテノイドは、リコピン又はルテインなどの１種類のカロテノイドであっても良いし、リコピンとルテインなど２種類のカロテノイドであっても良い。本明細書における「総カロテノイド」とは、ルテイン、ゼアキサンチン、β−クリプトキサンチン、α−カロテン、β−カロテン、及びリコピンの６種類のカロテノイドを意味する。
【００１１】
本明細書において、「カロテノイドレベル」とは、カロテノイド濃度に関する値のことであり、実際のカロテノイド濃度（モル濃度及び質量濃度等）に限らず、カロテノイド濃度を測定する測定装置から出力される測定値そのもの（例えば、吸光度、質量分析のピーク強度）、該測定値から算出された濃度に基づく別の値（例えば、他の血中成分に対する比、又はカロテノイド濃度やその測定値を序数とした値）等であってもよい。カロテノイドレベルは、上述の特定の１種類のカロテノイド（リコピン、ルテインなど）のレベルであっても良いし、２種類以上の複数のカロテノイドのレベルを合算したレベルであっても良い。なお、「総カロテノイドレベル」とは、ルテイン、ゼアキサンチン、β−クリプトキサンチン、α−カロテン、β−カロテン、及びリコピンの６種類のカロテノイドのレベルを合算したレベルである。
【００１２】
本明細書において、「アトピー性皮膚炎」とは、増悪、寛解を繰り返す、掻痒のある湿疹を主病変とする疾患を意味する。アトピー性皮膚炎を発症しているか否かは、例えば、ハニヒンとライカの診断基準（Ｈａｎｉｆｉｎ  ａｎｄ  Ｒａｊｋａ  ａｔｏｐｉｃ  ｅｃｚｅｍａ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ）により診断することができるが、前記定義に該当する限り、他の診断基準で診断することもできる。本明細書において、「アトピー性皮膚炎を発症した小児」とは、出生後にアトピー性皮膚炎を発症していると診断されたことがある小児を意味し、例えば、生後半年、１歳、２歳、又は３歳でアトピー性皮膚炎を発症していると診断された小児であってもよい。
【００１３】
本明細書全体に亘って、「血液サンプル」は、クルードな血液のほか、血清及び血漿などの血液由来成分、及び血液及び血液由来成分の処理及び／又は抽出物を含む。また、血液サンプルの材料となる血液は、妊娠母体のいかなる時期に採取したものであっても良く、例えば、妊娠初期、妊娠中期、又は妊娠後期の妊娠母体の血液を用いることができる。本明細書において、妊娠初期とは妊娠１〜４ヶ月（０〜１５週）を意味し、妊娠中期とは妊娠５〜７ヶ月（１６〜２７週）を意味し、妊娠後期とは妊娠８〜１０ヶ月（２８〜３９週）を意味する。好ましくは、当該血液は、妊娠後期の妊娠母体の血液であり、例えば、３３〜３９週、３４週〜３８週、又は３６週の妊娠母体の血液であってもよい。
【００１４】
本明細書において、「母親」とは、小児を出産した女性のヒトを意味し、「妊娠母体」とは、妊娠している女性のヒトを意味する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを該胎児の出生前に予測することが可能である。このため、妊娠中や出生後の授乳中に、胎児や出生した小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを低減するための処置を行うことができ、有用である。
【００１６】
また、カロテノイドは、タンパク質よりも変性しにくいため、高精度な測定を行うことができ、アトピー性皮膚炎発症リスク予測を高精度に行うことができる。従って、タンパク質をマーカとする場合と比較して、カロテノイドをマーカとする場合、精度面で優位といえる。特に、カロテノイドの濃度測定に質量分析を用いる場合には、より高精度で測定することができる。
【００１７】
本発明は、胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを指標として、該胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを判定できることから、当該リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法にも用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】妊娠母体血清総カロテノイド濃度と生後１歳のアトピー性皮膚炎発症との相関を示すグラフである。縦軸は妊娠母体血清総カロテノイド濃度（μＭ）を示す。横軸のＡＤはアトピー性皮膚炎発症群を、非ＡＤはアトピー性皮膚炎非発症群を表す。
【図２】妊娠母体血清リコピン濃度と生後１歳のアトピー性皮膚炎発症との相関を示すグラフである。縦軸は妊娠母体血清総カロテノイド濃度（μＭ）を示す。横軸のＡＤはアトピー性皮膚炎発症群を、非ＡＤはアトピー性皮膚炎非発症群を表す。
【図３】妊娠母体血清ルテイン濃度と生後１歳のアトピー性皮膚炎発症との相関を示すグラフである。縦軸は妊娠母体血清総カロテノイド濃度（μＭ）を示す。横軸のＡＤはアトピー性皮膚炎発症群を、非ＡＤはアトピー性皮膚炎非発症群を表す。
【図４】本発明の実施の形態に係る、カロテノイド測定手段と、カロテノイドレベル決定手段とを備えるアトピー性皮膚炎発症リスク判定装置の概略構成図を示す。
【図５】本発明の実施の形態に係る、カロテノイドレベル入力手段を備えるアトピー性皮膚炎発症リスク判定装置の概略構成図を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
１．出生後の小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを出生前に予測する方法
一態様において、本発明は、アトピー性皮膚炎発症リスクを予測する方法であって、
胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルと、予め決められた閾値とに基づいて、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測する方法に関する。
【００２０】
一態様において、本発明は、胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測する方法であって：
ａ）該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定すること；
ｂ）決定されたカロテノイドレベルを、予め決められた閾値と比較すること；
ｃ）該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを、前記比較の結果から予測すること、
ここで、決定されたカロテノイドレベルが前記閾値よりも低い場合には、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測され、かつ／又は、決定されたカロテノイドレベルが前記閾値よりも高い場合には、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有しないと予測される、を備える方法に関する。
【００２１】
血液サンプル中のカロテノイドレベルは、当業者周知の方法により血液サンプル中のカロテノイドを測定することにより決定することができる。例えば、血液サンプル中のカロテノイドの測定は、後述するカロテノイド測定方法、又はこれらが改変された方法を用いることができる。原則として、本発明の方法において比較される二つのカロテノイドレベルは同じ測定方法により測定されたカロテノイドレベルである。また、カロテノイドレベルは、本発明の予測方法を実施する時に同時に決定されることを必要とするものではなく、本発明の方法よりも前に、又は本発明の方法とは別個に測定されたカロテノイドレベルの値を用いて、アトピー性皮膚炎発症リスクを予測してもよい。すなわち、本発明のアトピー性皮膚炎発症リスクを予測する方法は、既に得られているカロテノイドレベルの値を用いて行ってもよい。
【００２２】
具体的な血液サンプル中のカロテノイドの測定方法としては、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた方法があげられる。例えば、血液サンプルから有機溶媒にてカロテノイドを抽出し、フォトダイオードアレイ検出器を接続したＨＰＬＣにて測定する方法を用いることができる（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｋｈａｃｈｉｋら、Ｊ．  Ａｇｒｉｃ．  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，  １９８６，  ３４  （４），  ｐｐ  ６０３−６１６参照）。また、高速液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を利用することにより、ＨＰＬＣで分離しないカロテノイドを区別して検出することができる。例えば、高速液体クロマトグラフィーによる分離を行い、その後、大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）を正イオンモードで用いることにより質量分析によるカロテノイドの検出を行うことができる。他の方法として、分光光度法を用いることもできる。例えば、血漿のアルコール／ヘプタン抽出物の４４８ｎｍにおける吸光度から血漿中のカロテノイド濃度を測定可能であることが報告されている（Ｍｉｃｈａｅｌ  Ｄｏｎａｌｄｓｏｎら、ＢＭＣ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｎｏｔｅｓ  （２０１２）  ５：５２１参照）。選択した測定方法及びその測定条件によっては、カロテノイドは、その異性体が分離され、検出される。本発明において、カロテノイドは、異性体も含む。
【００２３】
本発明は上述のとおり、妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルに基づき該妊娠母体が妊娠している胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを予測するものである。該予測は、測定された妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルと予め決められた閾値とを比較することにより行うことができる。具体的には、本発明の方法においては、カロテノイド濃度が上昇すればカロテノイドレベルが上昇する関係にある場合、被検妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルが該閾値よりも低い場合には、当該妊娠母体が妊娠している胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測され、被検妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルが該閾値以上の場合には、当該妊娠母体が妊娠している胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有しないと予測される。また、カロテノイド濃度が上昇すればカロテノイドレベルが減少する関係にある場合、被検妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルが該閾値よりも低い場合には、当該妊娠母体が妊娠している胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有しないと予測され、被検妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルが該閾値以上の場合には、当該妊娠母体が妊娠している胎児は出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測される。ここで、「予め決められた閾値」とは、過去に実施された出生後の小児のアトピー性皮膚炎発症の転帰が知られているコホートにおいて、当該小児を妊娠中の妊娠母体の血液中のカロテノイドレベルと出生後の当該小児のアトピー性皮膚炎発症の有無から決定することができる。すなわち、アトピー性皮膚炎を発症した小児を出産した母親の該小児を妊娠中の血液サンプル中のカロテノイドレベル、及びアトピー性皮膚炎を発症しなかった小児を出産した母親の該小児を妊娠中の血液サンプル中のカロテノイドレベルに基づいて決定することができる。具体的には、妊娠母体から得られた血液サンプル中のカロテノイドレベルと、該妊娠母体が出産した小児の例えば、生後半年、１歳、２歳、又は３歳におけるアトピー性皮膚炎発症の有無とを調べ、アトピー性皮膚炎を発症した小児を出産した母親の当該小児を妊娠中の血液中のカロテノイドレベルと、アトピー性皮膚炎を発症しなかった小児を出産した母親の当該小児を妊娠中のカロテノイドレベルとを最も明確に区別でき、最良の予測性（感度及び特異度）が得られるカロテノイドレベルの値を閾値として設定することができる。受信者動作特性曲線（ＲＯＣ曲線）を用いて最適な閾値を求める方法が既に本技術分野において広く知られている。本明細書における閾値は、必用に応じて好ましい感度及び特異度を与える閾値として設定することができ、例えば、感度（陽性率）が最も高くなる閾値や偽陽性率(１−特異度)が最も低くなる閾値としてもよい。また、予め決められた閾値は必ずしも数値として提供される必要はなく、被験者のカロテノイド濃度を測定する際に、同時に閾値を決定するために測定されるコントロールサンプルとして提供されていてもよい。この場合、測定毎に閾値が具体的な数値として決定されてもよい。
【００２４】
アトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するとの予測は、被検妊娠母体の胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を１００％の確率で発症することを意味するものではなく、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症する可能性が増大していることを意味するものである。よって、アトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するとは、妊娠中の血液中のカロテノイドレベルが閾値よりも低い妊娠母体から出生する小児が、同レベルが閾値よりも高い妊娠母体から出生する小児と比較して、アトピー性皮膚炎をより発症しやすいということを意味する。
【００２５】
本発明の出生後の小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを該小児の出産前に予測する方法は、出生前に一度だけ行っても良いし、複数回行うことにより発症リスクをモニタリングしても良い。発症リスクをモニタリングすることにより、食事、睡眠、運動及びその他の生活習慣の改善、並びに、栄養成分、サプリメント、及び薬剤の投与が発症リスクに与える変化を知ることができ、発症リスク低下に向けた適切な方法を導くことができる。
【００２６】
２．出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法
本発明の出生後の小児のアトピー性皮膚炎発症のリスクを当該小児の妊娠中に予測する方法は、妊娠中の薬剤の投与又は食品の摂取が小児のアトピー性皮膚炎発症のリスクへ与える影響を評価するために用いることができる。すなわち、本発明によれば、妊娠母体由来の血液中のカロテノイドレベルを指標として出生後の小児のアトピー性皮膚炎発症リスクを判定できることから、出生後の小児のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品をスクリーニングする方法に用いることができる。
【００２７】
よって、本発明は、  出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法であって、
ａ）上述の方法を用いて胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測すること；
ｂ）出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に被検薬剤又は被検食品を摂取させること；
ｃ）前記被検薬剤又は被検食品を摂取後の前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルと、前記被検薬剤若しくは被検食品の摂取前の血液サンプル中のカロテノイドレベル又は予め決められた閾値と比較すること；
ｄ）前記被検薬剤又は被検食品が、胎児のアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低下させるか否かを、前記ｃ）の比較結果から判定すること、ここで、前記被検薬剤又は被検食品の摂取後のカロテノイドレベルが、前記被検薬剤若しくは被検食品の摂取前のカロテノイドレベル又は予め決められた閾値よりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定される方法に関する。
【００２８】
例えば、本発明の方法は、出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法であって、
ａ）上述の方法を用いて該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを予測すること；
ｂ）出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に被検薬剤又は被検食品を摂取させること；
ｃ）前記被検薬剤又は被検食品を摂取後の前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定すること；
ｄ）決定されたカロテノイドレベルを、前記被検薬剤若しくは被検食品の摂取前に決定されたカロテノイドレベル又は予め決められた閾値と比較すること；
ｅ）前記被検薬剤又は被検食品が、胎児のアトピー性皮膚炎を発症するリスクを低下させるか否かを、前記ｄ）の比較結果から判定すること、ここで、前記被検薬剤又は被検食品の摂取後に決定されたカロテノイドレベルが、前記被検薬剤若しくは被検食品の摂取前に決定されたカロテノイドレベル又は予め決められた閾値よりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定される方法であってもよい。
【００２９】
より具体的には、本発明は、出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させる薬剤又は食品のスクリーニング方法であって、
ａ）該胎児を妊娠している妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定すること；
ｂ）前記ａ）で決定されたカロテノイドレベルを、予め決められた閾値と比較すること；
ｃ）該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有するか否かを、決定されたカロテノイドレベルと前記閾値との比較結果から予測すること、ここで、決定されたカロテノイドレベルが前記閾値よりも低い場合には、該胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測される；
ｄ）出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児を妊娠している妊娠母体に被検薬剤又は被検食品を摂取させること；
ｅ）前記被検薬剤又は被検食品を摂取後の前記妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを決定すること；
ｆ）前記ｅ）で決定されたカロテノイドレベルを、予め決められた閾値と比較すること；
ｇ）前記被検薬剤又は被検食品が、出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の当該リスクを低下させるか否かを、前記ｅ）で決定されたカロテノイドレベルと前記閾値との比較結果から予測すること、ここで、決定されたカロテノイドレベルが前記閾値よりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定される方法を含む。
【００３０】
本方法において、前記被検薬剤又は被検食品の摂取前後のカロテノイドレベルの比較は、必ずしも予め決められた閾値との比較を必要とするものではなく、摂取前後のカロテノイドレベルの値そのものを直接比較しても良い。よって、前記被検薬剤又は被検食品の摂取後に決定されたカロテノイドレベルの値が前記被検薬剤又は被検食品の摂取前に決定されたカロテノイドレベルの値よりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定してもよい。あるいは、閾値との比較を指標として、前記被検薬剤又は被検食品の摂取後に決定されたカロテノイドレベルが閾値よりも高い場合には、前記被検薬剤又は被検食品が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを有すると予測された胎児の出生後のアトピー性皮膚炎発症リスクを低下させると判定してもよい。
【００３１】
３．出生後のアトピー性皮膚炎発症リスク判定装置
別の態様において、本発明は、妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを測定することによる小児のアトピー性皮膚炎発症リスク判定装置に関する。図４に示すように、この実施の形態に係るアトピー性皮膚炎発症リスク判定装置１は、被検妊娠母体が妊娠している胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを判定する装置である。アトピー性皮膚炎発症リスク判定装置１は、測定装置２、情報処理装置３、及び出力装置４を備える。この実施の形態では、測定装置２は、試料入出部２１を備え、また、情報処理装置３は、レベル決定部３１とリスク判定部３２を備える。ただし、アトピー性皮膚炎発症リスク判定装置１は、測定装置２、情報処理装置３および出力装置４に分離された形態の装置でなくとも良い。測定装置２、情報処理装置３および出力装置４の内の２以上を１つの装置としていても良い。
【００３２】
また、試料入出部２１は、測定装置２と別体であっても良い。試料入出部２１は、妊娠母体由来の血液サンプル２２を用いてカロテノイドを測定するカロテノイド測定手段として機能する構成部である。試料入出部２１は、好ましくは、血液サンプル２２と試薬２３とを含む試料２４を保持する試料保持部２５と、試料２４に入射光２７を照射する発光部２６と、入射光を照射された試料２４を透過した光を検知する光検知部２８と、を備える。測定装置２は、試料入出部２１を少なくとも含む装置であり、試料入出部２１の他に、例えば、中央処理装置（ＣＰＵ）、読み取り専用のメモリ（ＲＯＭ）、読み書き可能なメモリ（ＲＡＭ）およびハードディスクドライブ（ＨＤＤ）を備えるコンピュータ、あるいはそのコンピュータを含む装置であってもよい。光検知部２８は、光を検知するセンサー及び検知されたアナログ信号をデジタル信号に変換するＡ／Ｄ変換器を備える。ただし、前記Ａ／Ｄ変換器はセンサーとは別体に備えていてもよい。
【００３３】
情報処理装置３は、レベル決定部３１と、リスク判定部３２と、を少なくとも備える。情報処理装置３は、好適には、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭおよびＨＤＤを備えるコンピュータである。レベル決定部３１およびリスク判定部３２の両処理は、主として、ＣＰＵがＨＤＤ内のコンピュータプログラムを読み出すことにより実行される。なお、当該コンピュータプログラムは、ＨＤＤに格納されるものではなく、例えば、ＲＡＭあるいはＲＯＭに格納されるものでも良い。また、測定装置２および情報処理装置３は、共通のＣＰＵ、共通のＲＯＭ、共通のＲＡＭあるいは共通のＨＤＤを備えていても良い。その場合、コンピュータプログラムは、測定装置２および情報処理装置３に共通のＨＤＤ、ＲＡＭあるいはＲＯＭに格納されていても良い。
【００３４】
レベル決定部３１は、測定装置２の光検知部２８からデジタル信号を受け取って、測定された血液サンプル２２中のカロテノイドレベルを決定するカロテノイドレベル決定手段として機能する構成部である。当該決定は、好ましくはＣＰＵがカロテノイドレベル決定手段として処理することにより行われる。リスク判定部３２は、レベル決定部３１にて決定されたカロテノイドレベルから被検妊娠母体の胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを判定するリスク判定手段として機能する構成部である。リスク判定部３２は、被検妊娠母体由来の血液サンプル２２中のカロテノイドレベルが閾値と比較して低い場合に、被検妊娠母体の胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクが高いと判定する。リスク判定部３２による判定は、好ましくは、ＣＰＵがカロテノイドレベル決定手段として、ＨＤＤあるいはＲＡＭなどのメモリに予め格納された情報（すなわち、閾値のカロテノイドレベルの情報）を読み出して、その情報を参照することによって行われる。ただし、その情報は、予めメモリに格納されたものではなく、陰性及び／又は陽性比較対象由来の血液サンプルを血液サンプル２２として用いて、当該血液サンプル中のカロテノイドを測定しながら逐次蓄積されたものであっても良い。ここで、陽性比較対象とは、アトピー性皮膚炎を発症した小児を出産した母親から当該小児を妊娠している間に採取した血液サンプルを意味し、陰性比較対象とは、アトピー性皮膚炎を発症しなかった小児を出産した母親から当該小児を妊娠している間に採取した血液サンプルを意味する。
【００３５】
出力装置４は、リスク判定部３２の判定結果を出力する装置であり、例えば、静止画像あるいは動画を出力するモニタである。出力装置４は、測定装置２あるいは情報処理装置３と同様、例えば、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭおよびＨＤＤを備えるコンピュータ、あるいはそのコンピュータを含む装置であっても良い。その場合、コンピュータプログラムは、測定装置２と情報処理装置３と出力装置４に共通、測定装置２と出力装置４に共通、あるいは情報処理装置３と出力装置４に共通するＨＤＤ、ＲＡＭ若しくはＲＯＭに格納されていても良い。出力装置４は、モニタに限定されず、判定結果を音声にて出力するスピーカ、紙などの媒体に印字して出力するプリンタ、あるいは発光の形態で出力する発光装置などの如何なる出力形態を有する装置であっても良い。
【００３６】
図５に示される実施の形態に係るアトピー性皮膚炎発症リスク判定装置１ａは、被検妊娠母体が妊娠している胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクを判定する装置であって、カロテノイドレベル入力手段２ａ、リスク判定部３２及び出力装置４を備える装置である。リスク判定部３２と出力装置４を１つの装置としていても良い。
【００３７】
カロテノイドレベル入力手段２ａは、妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルを入力する装置であり、例えば、サンプルキーボード、マイク、受信機、タッチパネルである。カロテノイドレベル入力手段２ａは、例えば、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭおよびＨＤＤを備えるコンピュータ、あるいはそのコンピュータを含む装置であっても良い。その場合、コンピュータプログラムは、カロテノイドレベル入力手段２ａとリスク判定部３２とに共通するＨＤＤ、ＲＡＭ若しくはＲＯＭに格納されていても良い。
【００３８】
リスク判定部３２は、好適には、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭおよびＨＤＤを備えるコンピュータである。リスク判定部３２の処理は、主として、ＣＰＵがＨＤＤ内のコンピュータプログラムを読み出すことにより実行される。なお、当該コンピュータプログラムは、ＨＤＤに格納されるものではなく、例えば、ＲＡＭあるいはＲＯＭに格納されるものでも良い。リスク判定部３２は、カロテノイドレベル入力手段２ａにより入力された被検妊娠母体由来の血液サンプル中のカロテノイドレベルが閾値と比較して低い場合に、被検妊娠母体の胎児が出生後にアトピー性皮膚炎を発症するリスクが高いと判定する。リスク判定部３２による判定は、好ましくは、ＣＰＵがカロテノイドレベル決定手段として、ＨＤＤあるいはＲＡＭなどのメモリに予め格納された情報（すなわち、閾値のカロテノイドレベルの情報）を読み出して、その情報を参照することによって行われる。閾値は例えば、陽性比較対象と陰性比較対象をもっとも区別可能なカロテノイドレベルの値として設定することができ、ここで、陽性比較対象とは、アトピー性皮膚炎を発症した小児を出産した母親を意味し、陰性比較対象とは、アトピー性皮膚炎を発症しなかった小児を出産した母親を意味する。
【００３９】
出力装置４は、リスク判定部３２の判定結果を出力する装置であり、例えば、静止画像あるいは動画を出力するモニタである。出力装置４は、例えば、ＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭおよびＨＤＤを備えるコンピュータ、あるいはそのコンピュータを含む装置であっても良い。その場合、コンピュータプログラムは、リスク判定部３２と出力装置４に共通、カロテノイドレベル入力手段２ａと出力装置４に共通、あるいはカロテノイドレベル入力手段２ａとリスク判定部３２と出力装置４に共通するＨＤＤ、ＲＡＭ若しくはＲＯＭに格納されていても良い。出力装置４は、モニタに限定されず、判定結果を音声にて出力するスピーカ、紙などの媒体に印字して出力するプリンタ、あるいは発光の形態で出力する発光装置などの如何なる出力形態を有する装置であっても良い。
【００４０】
以下、本発明をより詳細に説明するため実施例を示すが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、本願全体を通して引用される全文献は参照によりそのまま本願に組み込まれる。
【実施例】
【００４１】
本研究は千葉大学生命倫理審査委員会の承認を得たプロトコルで実施した。また、研究に参加した者の各々からインフォームドコンセントを受領した。また、以下の実施例において検定は、ノンパラメトリック検定として、マン・ホイットニーのＵ検定を行い、ｐ＜０．０５の場合に、有意差有りとした。
【００４２】
（実施例１）妊娠母体血中カロテノイドと小児アトピー性皮膚炎発症との相関性解析
（１）被検対象者
医療法人社団  誠馨会千葉メディカルセンター、及び千葉大学病院（共に、千葉、日本）を２０１０年１月から２０１１年１２月までの間に受診した、家族がアレルギー疾患に罹患している２８２人の小児及びその母親を対象とした出生コホート研究を行った。ここで、家族がアレルギー疾患に罹患しているととは、一人以上の家族（母親、父親又は兄弟）がアトピー性皮膚炎、喘息、アレルギー性鼻炎、及び／又は食物アレルギーを有する場合とした。本人又は配偶者が重症疾患に罹患しておらず、かつ、重症先天性疾患の子をもたない妊娠３４週の妊娠母体に参加を依頼し、当該妊娠母体から出生した小児を本研究に登録した。
【００４３】
（２）アレルギー性疾患罹患の決定方法
小児は、生後１月、生後６月、１歳、及び２歳で病院を受診し、各受診の際に小児の親に該小児の健康に関するインタビューを行った。インタビューの内容は、アレルギー性疾患の症状及び診断、授乳の状況、生後１月、生後６月、１歳、及び２歳における訪問による動物への接触（最後の接触からのデータを含む）とした。また、親がインタビューを受けた２年間、更に毎日の生活の様子、生活環境、家族の状況、ペット及び該小児の病歴について親に質問を行った。
該小児が３歳となってから６歳になるまでの間は、健康に関する情報は、この期間に医師から喘息の診断を受けたことがあるかどうかを親にインタビューすることにより更新した。
【００４４】
（３）血液サンプルの取得
母親の血液サンプルを妊娠３６週で採取した。サンプルは滅菌プラスチックチューブに回収し、２４時間以内に−３０℃で保管した。その後、カロテノイドを測定するまで−３０℃で保管を行った。
【００４５】
（４）カロテノイド、レチノール、及びα−トコフェロールの測定
血清に含まれるカロテノイド（ルテイン、ゼアキサンチン、β−クリプトキサンチン、α−カロテン、β−カロテン、及びリコピン）、レチノール、及びα−トコフェノールレベルを既に報告された方法（ＯｓｈｉｍａらＪ  Ｎｕｔｒ．  １９９７Ａｕｇ；１２７（８）：１４７５−９．）を一部改変して測定した。
２００μＬの血清に内部標準としてトランス−β−８’−アポカロテナール含有エタノール溶液（カロテノイド用）、酢酸レチニル含有エタノール溶液（レチノール用）、及びδ−トコフェロール含有エタノール溶液（α−トコフェロール用）をそれぞれ２０μＬずつ添加し、１．０ｍＬの０．０１％（ｗ／ｖ）ブチルヒドロキシルトルエン含有エタノール溶液と４．０ｍＬの混合溶液（ヘキサン／ジクロロメタン，４：１，  ｖ／ｖ）を加え、ラボミキサーにて１分間攪拌した。攪拌後、遠心分離（８０００×ｇ，１０分間）にて分離し、上清を回収した。残った下層に再度１．０ｍＬ  の０．０１％（ｗ／ｖ）ブチルヒドロキシルトルエン含有エタノール溶液と４．０ｍＬの混合溶液（ヘキサン／ジクロロメタン，４：１，ｖ／ｖ）を加え、ラボミキサーでの攪拌、遠心分離および上清採取の操作を行った。回収した上清を合わせ、遠心濃縮機（３０℃，  １時間程度）により溶媒を留去した。乾固物を２００μＬの混合溶液（ヘキサン／エタノール／アセトン／トルエン，２０：２９：１２：１４，ｖ／ｖ／ｖ／ｖ）に完全に溶解させ、０．２２μｍフィルターを通過させ、ＨＰＬＣに供するサンプルを得た。得られたサンプルは、以下の条件でＨＰＬＣ分析に供した。
カラム：ＹＭＣ  Ｃａｒｏｔｅｎｏｉｄ  Ｓ５（２５０×４．６ｍｍ，５μｍ；ＹＭＣ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＮＣ，ＵＳＡ）
カラム温度：３０℃
検出器：フォトダイオードアレイ検出器（ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ，島津製作所，京都，日本）
流速：０．２ｍＬ／ｍｉｎ
検出波長：４６０ｎｍ（カロテノイド）、３２５ｎｍ（レチノール）、３００ｎｍ（α−トコフェロール）、
溶媒組成：
溶媒Ａ：メタノール／ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／水，７５：５：２０，ｖ／ｖ／ｖ／ｖ
溶媒Ｂ：メタノール／ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル／水，８：９０：２，ｖ／ｖ／ｖ／ｖ
グラジュエント条件：
（溶液Ａ  １００％（０分）→溶液Ｂ  １００％（２５分）→溶液Ｂ  １００％（２８分）→溶液Ａ  １００％（３０分））
測定されたそれぞれの濃度は、各内部標準の抽出効率で補正して算出した。
【００４６】
血清中のカロテノイド濃度、レチノール濃度、及びα−トコフェロール濃度について、生後１歳のアトピー性皮膚炎の発症との関連性の強さを比較した。その結果、生後１歳でアトピー性皮膚炎を発症しなかった小児の妊娠母体では、生後１歳でアトピー性皮膚炎を発症した小児の妊娠母体と比較して、妊娠母体血中総カロテノイド濃度、リコピン濃度およびルテイン濃度が有意に高値を示した（図１〜３）。妊娠母体血液中の総カロテノイド濃度、リコピン濃度およびルテイン濃度は、発症リスク予測マーカとして特に有用であることが示された。このことから、妊娠母体血液中のカロテノイドからの小児のアトピー性皮膚炎の発症リスクを予測することが可能であることが示された。
【００４７】
（実施例２）カロテノイド摂取による新生児アトピー性皮膚炎発症抑制効果
実施例１により、妊娠中の母体血液中の総カロテノイド、リコピン及びルテイン濃度が出生児のアトピー性皮膚炎罹患と相関することが示されたことから、このような妊婦がカロテノイドを摂取することにより、出生児がアトピー性皮膚炎に罹患することを抑制可能であるかどうかをマウスを用いて検討する。
妊娠したアレルギー発症モデルマウスを１週間馴化させた後、妊娠第２週〜出産まで、及び出産から授乳期間（約３週間）中、通常の飼料（コントロール群）又はリコピン添加飼料（リコピン摂取群）を給餌する。３週令から１２週令の子のマウスにピクリルクロライドを塗布する。
アトピー性皮膚炎発症の有無は、以下の項目を評価することにより行う：３週令までの水分蒸発量；３週令の子のマウスを解剖し、皮膚機能として、角層の厚さ、セラミド含量、及び皮膚バリア関連遺伝子（ＬＡＳＳ３／４、ｆｉｌａｇｒｉｎ、ＩＬ−３３、ＴＳＬＰ）の発現量、免疫バランス機能として総ＩｇＥ濃度、脾臓細胞におけるＴｈ１／Ｔｈ２細胞比（Ｆａｃｓにて測定）を測定；１２週令までのアレルギー性疾患発症スコア；１２週令の子のマウスを解剖し、表皮の厚さ、炎症細胞浸潤数、炎症性関連遺伝子（ＩＬ−２、ＴＮＦ−α）発現量を測定する。
これらの実験により、カロテノイド摂取群においてアレルギー発症の可能性が低減することが予測される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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