(57)【要約】【課題】エクソソームの検出と内包物質の検出とを同一の検体で行うことを可能にする検体検出用装置を提供する。【解決手段】検体検出用装置５０は、ユニット保持部６０と磁界発生部７０と駆動部８０を備える。ユニット保持部６０は検出対象物質と結合する磁気微粒子を捕捉し、検出対象物質から内包物質を抽出するための溶液１０５を溜める試料分析用容器１０を保持する。磁界発生部７０は磁気微粒子を試料分析用容器１０内に捕捉するための磁石７２を有する。駆動部８０は試料分析用容器１０に溜められている溶液によって検出対象物質との結合が解除された磁気微粒子を磁石７２の磁力によって試料分析用容器１０内に捕捉させるよう磁石７２を試料分析用容器１０に接近させるように磁界発生部７０を駆動する。【選択図】図１８
2017138112.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検出対象物質と結合する磁気微粒子を捕捉し、前記検出対象物質から内包物質を抽出するための溶液を溜める試料分析用容器を保持するユニット保持部と、
前記磁気微粒子を前記試料分析用容器内に捕捉するための磁石を有する磁界発生部と、
前記試料分析用容器に溜められている前記溶液によって前記検出対象物質との結合が解除された磁気微粒子を前記磁石の磁力によって前記試料分析用容器内に捕捉させるよう前記磁石を前記試料分析用容器に接近させるように前記磁界発生部を駆動する駆動部と、
を備えることを特徴とする検体検出用装置。
【請求項２】
前記検出対象物質は、前記内包物質が膜で包まれた構造を有する膜小胞である
ことを特徴とする請求項１に記載の検体検出用装置。
【請求項３】
前記膜小胞はエクソソームである
ことを特徴とする請求項２に記載の検体検出用装置。
【請求項４】
前記試料分析用容器は、
貫通孔を有するカートリッジと、
凸部と凹部とが交互に配置されたトラック領域を有する試料分析用ディスクと、
を備え、
前記溶液は、前記貫通孔の内周面と前記トラック領域とによって構成されるウェルに溜められ、
前記磁石は、前記ウェルに対応して配置され、
前記磁気微粒子は、前記磁石の磁力によって前記ウェル内の前記トラック領域の凹部に捕捉される
ことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の検体検出用装置。
【請求項５】
検出対象物質と結合する磁気微粒子を試料分析用容器内に捕捉させ、
前記磁気微粒子が前記試料分析用容器内に捕捉された状態を維持するように磁界を発生させ、
前記磁界により前記磁気微粒子が前記試料分析用容器内に捕捉されている状態で、前記検出対象物質から内包物質を抽出する
ことを特徴とする検体検出方法。
【請求項６】
前記検出対象物質は、前記内包物質が膜で包まれた構造を有する膜小胞である
ことを特徴とする請求項５に記載の検体検出方法。
【請求項７】
前記膜小胞はエクソソームである
ことを特徴とする請求項６に記載の検体検出方法。
【請求項８】
前記試料分析用容器は、
貫通孔を有するカートリッジと、
凸部と凹部とが交互に配置されたトラック領域を有する試料分析用ディスクと、
を備え、
前記試料分析用ディスクは、凸部と凹部とが交互に配置されたトラック領域を有し、
前記磁気微粒子が前記磁界により前記試料分析用容器内の前記トラック領域の凹部に捕捉されている状態で、前記検出対象物質から前記内包物質を抽出する
ことを特徴とする請求項５〜７のいずれか一項に記載の検体検出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、検体から膜小胞とその内包物質とを検出するための検体検出用装置及び検体検出方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
検体から疾病と関連付けられている特定の抗原（または抗体）をバイオマーカとして検出して分析することで、疾病の発見や治療の効果等を定量的に分析することが広く行われている。近年、エクソソーム（exosome）と称されている微小な膜小胞が注目されている。エクソソーム等の膜小胞は、内包物質が膜で包まれた構造を有する。なお、エクソソームは、マイクロベシクル、細胞外小胞と称されることもあり、複数の呼称が存在する。
【０００３】
エクソソームは、血液，リンパ液，唾液，尿，母乳，精液等の体液に含まれている。エクソソームは、液体中では概略球形であり、脂質二重膜で覆われている。一般的に、エクソソームは、種類の異なる複数のたんぱく質を含んでいる。その中で、認識対象となるたんぱく質は、脂質二重膜の表面に発現しているたんぱく質であり、例えば、膜貫通型たんぱく質、接着分子、膜輸送たんぱく質、膜融合たんぱく質、糖たんぱく質等である。
【０００４】
エクソソームは直径が１００ｎｍ程度と非常に小さいため、エクソソームを光学的に直接検出することは難しい。
【０００５】
特許文献１には、検体から、エクソソームの表面に発現しているたんぱく質（抗原）と特異的に反応する抗体を用いて試料分析用ディスクと微粒子等の標識とでエクソソームをサンドイッチ捕獲し、標識を光学的に検出することで、エクソソームを間接的に検出する検体検出方法が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１３−１３４０８３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
一方、細胞情報を伝達する物質とされるＤＮＡ（デオキシボ核酸）、ＲＮＡ（リボ核酸）、ｍｉＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）等の高分子生体物質は、エクソソームに内包された状態となって体内で転移しているとされる研究が報告されている。そこで、体液中のエクソソームの個数とその内包物質の個数の関係性とガンやアルツハイマー等の重大疾病との相関に注目が集まっている。一般的に、生体物質の反応は安定性が低い場合もあるため、エクソソームの検出（計測）と内包物質の検出（計測）とを同一の検体で行うことが望ましい。
【０００８】
特許文献１に記載されているような方法で、エクソソームを高精度に計数することが可能である。エクソソームを計数するには検体を乾燥させた後に行う必要がある。従って、エクソソームの内包物質を抽出するためには、エクソソームの計数後に基板表面に捕捉したエクソソームと試薬とを再度反応させる必要がある。
【０００９】
また、エクソソームや内包物質などは乾燥により変性する可能性がある。そのため、エクソソームの計数と内包物質の抽出は別々に行い、それぞれの結果で関係性を評価するという方法をとらなければならない。従って、従来では、エクソソームの検出と内包物質の検出とを別々の検体を用いて行っている。さらに、検査や測定等をできる限り少ない量の検体で行う低侵襲診断が望まれている。
【００１０】
本発明は、エクソソーム等の膜小胞の検出とその内包物質の検出とを同一の検体で行うことを可能にする検体検出用装置及び検体検出方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、検出対象物質と結合する磁気微粒子を捕捉し、前記検出対象物質から内包物質を抽出するための溶液を溜める試料分析用容器を保持するユニット保持部と、前記磁気微粒子を前記試料分析用容器内に捕捉するための磁石を有する磁界発生部と、前記試料分析用容器に溜められている前記溶液によって前記検出対象物質との結合が解除された磁気微粒子を前記磁石の磁力によって前記試料分析用容器内に捕捉させるよう前記磁石を前記試料分析用容器に接近させるように前記磁界発生部を駆動する駆動部とを備えることを特徴とする検体検出用装置を提供する。
【００１２】
また、本発明は、検出対象物質と結合する磁気微粒子を試料分析用容器内に捕捉させ、前記磁気微粒子が前記試料分析用容器内に捕捉された状態を維持するように磁界を発生させ、前記磁界により前記磁気微粒子が前記試料分析用容器内に捕捉されている状態で、前記検出対象物質から内包物質を抽出することを特徴とする検体検出方法を提供する。
【発明の効果】
【００１３】
本発明の検体検出用装置及び検体検出方法によれば、エクソソーム等の膜小胞の検出とその内包物質の検出とを同一の検体で行うことが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】一実施形態の試料分析用容器を示す上面図である。
【図２】図１の試料分析用容器のＡ−Ａ断面を示す断面図である。
【図３】図１のウェルをＢ−Ｂで切断した状態を示す拡大斜視図である。
【図４】一実施形態の検体検出用装置を示す上面図である。
【図５】図４の検体検出用装置のＣ−Ｃ断面及びＤ−Ｄ断面を示す断面図である。
【図６】ユニット保持部の押さえ板を示す上面図である。
【図７】ユニット保持部のベース基板を示す上面図である。
【図８】磁界発生部を示す上面図及びＡ−Ａ断面図である。
【図９】一実施形態の検体検出方法を説明するためのフローチャートである。
【図１０】試料分析用容器のウェルに抗体を含む緩衝液が注入された状態を示す断面図である。
【図１１】抗体が試料分析用ディスクのトラック領域に固定されている状態を示す模式的な断面図である。
【図１２】ブロック層がトラック領域に形成されている状態を示す模式的な断面図である。
【図１３】試料分析用容器のウェルに検出対象の検体の試料液が注入された状態を示す断面図である。
【図１４】エクソソームを示す模式的な断面図である。
【図１５】エクソソームがトラック領域の凹部に捕捉されている状態を示す模式的な断面図である。
【図１６】試料分析用容器のウェルに磁気微粒子を含む緩衝液が注入された状態を示す断面図である。
【図１７】トラック領域の凹部に捕捉されているエクソソームと磁気微粒子とが結合した状態を示す模式的な断面図である。
【図１８】磁石をウェルの底面に接近させた状態で、エクソソームから内包物質を遊離させるための抽出液がウェルに注入された状態を示す断面図である。
【図１９】磁気微粒子が磁石の磁力によってトラック領域の凹部に捕捉されている状態を示す模式的な断面図である。
【図２０】複数の反応領域が形成された試料分析用ディスクを示す上面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
［試料分析用容器］
図１〜図３を用いて、一実施形態の試料分析用容器を説明する。
【００１６】
図１は試料分析用容器をカートリッジ側から見た状態を示している。図２（ａ）は図１の試料分析用容器のＡ−Ａ断面を示している。図２（ｂ）はカートリッジが試料分析用ディスクに対して取り外しできることを示している。図３は図１のウェルをＢ−Ｂで切断した状態を部分的に拡大して示している。
【００１７】
図１及び図２（ａ）に示すように、試料分析用容器１０は、試料分析用ディスク２０とカートリッジ３０とを備える。試料分析用容器１０は、検出対象物質であるエクソソーム等の膜小胞、及び膜小胞を標識する磁気微粒子を捕捉するための試料分析用容器の一形態である。
【００１８】
試料分析用ディスク２０は、例えば、ブルーレイディスク（ＢＤ）、ＤＶＤ、コンパクトディスク（ＣＤ）等の光ディスクと同等の円板形状を有する。試料分析用ディスク２０は、例えば、一般的に光ディスクに用いられるポリカーボネート樹脂やシクロオレフィンポリマー等の樹脂材料で形成されている。
【００１９】
図３に示すように、試料分析用ディスク２０の表面には、凸部２１と凹部２２とが半径方向に交互に配置されたトラック領域２３が形成されている。凸部２１及び凹部２２は、内周部から外周部に向かってスパイラル状に形成されている。凸部２１は光ディスクのランドに相当する。凹部２２は光ディスクのグルーブに相当する。
【００２０】
図１に示すように、カートリッジ３０はリング形状を有する。カートリッジ３０には、周方向に複数の円筒状の貫通孔３１が形成されている。複数の貫通孔３１は、それぞれの中心が同一円周上に位置するように等間隔に形成されている。
【００２１】
図２（ａ）及び図３に示すように、試料分析用容器１０は、カートリッジ３０の貫通孔３１と試料分析用ディスク２０のトラック領域２３とによって形成される複数のウェル４０を有する。複数のウェル４０は、それぞれの中心が同一円周上に位置するように等間隔に形成されている。貫通孔３１の内周面はウェル４０の内周面を構成し、試料分析用ディスク２０のトラック領域２３はウェル４０の底面を構成している。ウェル４０は試料液や緩衝液等の溶液を溜めるための容器である。
【００２２】
貫通孔３１と試料分析用ディスク２０の間に、シリコーンゴム等の弾性変形部材で作製したパッキンを配置することにより、溶液の漏れる可能性を低減することができる。
【００２３】
図２（ｂ）に示すように、カートリッジ３０と試料分析用ディスク２０とは分離することができる。検出対象物質であるエクソソーム等の膜小胞の検出、具体的には膜小胞を標識する磁気微粒子の検出は、カートリッジ３０が分離された試料分析用ディスク２０単体で行われる。
【００２４】
［検体検出用装置］
図４〜図８を用いて、一実施形態の検体検出用装置を説明する。
【００２５】
図４は試料分析用容器、ユニット保持部、及び磁界発生部を示している。図５（ａ）は図４のＣ−Ｃにおける断面を示している。図５（ａ）は磁界発生部が試料分析用ディスクに接近した状態を示している。図５（ｂ）は磁界発生部が試料分析用ディスク及びユニット保持部から離隔した状態を示している。図５（ｃ）は図４のＤ−Ｄにおける断面を示している。図６はユニット保持部の押さえ板を示している。図７はユニット保持部のベース基板を示している。図８（ａ）は磁界発生部を示している。図８（ｂ）は図８（ａ）のＡ−Ａにおける断面を示している。図６、図７、及び図８（ａ）は図４に対応する。図８（ｂ）は図５（ａ）に対応する。
【００２６】
図４及び図５（ａ）に示すように、検体検出用装置５０は、ユニット保持部６０と磁界発生部７０と駆動部８０とを備える。
【００２７】
ユニット保持部６０は、押さえ板６１とベース基板６２とを備える。ユニット保持部６０は、押さえ板６１とベース基板６２とで試料分析用容器１０を挟持することによって試料分析用容器１０を保持する。
【００２８】
図４及び図５（ｃ）に示すように、押さえ板６１とベース基板６２とをスペーサ６４を介してねじ６５等により固定するようにしてもよい。スペーサ６４の高さは試料分析用容器１０の高さと同等または若干低くすることが望ましい。
【００２９】
図６に示すように、押さえ板６１は開口部６１ａを有する。図４に示すように、試料分析用容器１０がユニット保持部６０に保持されている状態において、開口部６１ａは、全てのウェル４０が開口部６１ａ内に位置するような開口径を有する。
【００３０】
図７に示すように、ベース基板６２は複数の貫通孔６２ａを有する。図５（ｂ）に示すように、貫通孔６２ａはウェル４０に対応して形成されている。具体的には、貫通孔６２ａは、試料分析用容器１０がユニット保持部６０に保持されている状態において、ウェル４０の底面に位置するように形成されている。即ち、複数の貫通孔６２ａは、それぞれの中心が同一円周上に位置するように等間隔に形成されている。
【００３１】
図８（ａ）及び図８（ｂ）に示すように、磁界発生部７０は、基台７１と複数の磁石７２とを備える。磁石７２は基台７１に固定されている。
【００３２】
図４及び図５（ａ）に示すように、磁石７２はウェル４０に対応して形成されている。具体的には、磁石７２は、試料分析用容器１０がユニット保持部６０に保持されている状態において、ウェル４０の底面に位置するように形成されている。即ち、複数の貫通孔６２ａは、それぞれの中心が同一円周上に位置するように等間隔に形成されている。なお、ベース基板６２の貫通孔６２ａは、磁石７２をウェル４０の底面に接近させるための挿入孔である。そのため、貫通孔６２ａは、磁石の外径よりも若干大きい孔径を有する。
【００３３】
図５（ａ）及び図５（ｂ）に示すように、駆動部８０は、磁石７２が試料分析用容器１０のウェル４０の底面に接近したり、離隔したりするように磁界発生部７０を駆動させる。駆動部８０としてモータを用いてもよい。磁石７２をウェル４０の底面に接近させることにより、試料分析用容器１０のウェル４０内に磁界を発生させることができる。
【００３４】
［検体検出方法］
図９に示すフローチャート、及び図１０〜図２０を用いて、一実施形態の検体検出方法を説明する。なお、本実施形態の検体検出方法では、検出対象物質である膜小胞としてエクソソームを例に挙げて説明する。
【００３５】
オペレータは、ステップＳ１にて、図１０に示すように、試料分析用容器１０を検体検出用装置５０のユニット保持部６０に装着する。オペレータは、抗体（第１の結合物質）１０１を含む緩衝液１００を、試料分析用容器１０のウェル４０に注入する。
【００３６】
オペレータは、試料分析用容器１０を、適切な時間、適切な温度でインキュベートさせる。例えば、一般的な免疫学的測定で用いられる、４℃で一晩ほど静置してインキュベートさせる。これにより、図１１に示すように、抗体１０１は試料分析用ディスク２０のトラック領域２３上に固定される。
【００３７】
オペレータは、ウェル４０から緩衝液１００を排出し、ウェル４０を緩衝液で洗浄する。トラック領域２３に固定されなかった抗体１０１はこの洗浄によって除去される。
【００３８】
なお、図１０では磁界発生部７０の磁石７２がウェル４０の底面に接近した状態を示しているが、ステップＳ１では、磁石７２がウェル４０の底面から離隔した状態でもよい。
【００３９】
ステップＳ１は、オペレータが抗体１０１を固定させる場合に必要な工程である。工場等で事前に抗体１０１が固定されている試料分析用容器１０または試料分析用ディスク２０を使用する場合は、ステップＳ１を省略することができる。
【００４０】
図１１に示すように、抗体１０１はトラック領域２３を構成する凸部２１及び凹部２２に疎水結合によって固定される。抗体１０１の固定方法は疎水結合に限定されない。トラック領域２３に適切な化学的処理を行い、共有結合等を用いて抗体１０１をトラック領域２３に固定させてもよい。トラック領域２３に抗体１０１を固定させる方法は、免疫学測定法で一般的に使われている方法を用いることができる。
【００４１】
オペレータは、ステップＳ２にて、抗体１０１の抗原識別部以外に抗原が非特異的に吸着することを防ぐため、ウェル４０の内部をブロッキング処理する。具体的には、オペレータは、緩衝液で希釈されたスキムミルクをウェル４０に注入し、試料分析用容器１０を適切な時間、振盪させる。
【００４２】
スキムミルクはエクソソームに付着しないたんぱく質を含むので、ブロッキング処理に好適である。なお、ブロッキング処理に用いる物質は、同様の効果を奏するものであればスキムミルクに限定されない。
【００４３】
オペレータは、ウェル４０からスキムミルクを含む緩衝液を排出し、ウェル４０を緩衝液で洗浄する。洗浄に用いる緩衝液としては、スキムミルクを含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。また、洗浄を省略することも可能である。
【００４４】
これにより、図１２に示すように、ブロック層１０２がトラック領域２３上に形成される。
【００４５】
オペレータは、ステップＳ３にて、図１３に示すように、検出対象の検体である試料液（第１の溶液）１０３をウェル４０に注入する。なお、試料液１０３には検出対象のエクソソームが含まれていない場合もある。以下に、試料液１０３に検出対象のエクソソームが含まれている場合について説明する。
【００４６】
試料液１０３中には、検出対象のエクソソーム９０が含まれている。図１４に示すように、エクソソーム９０は、脂質二重膜９１で覆われている。脂質二重膜９１には、複数の種類の膜貫通型たんぱく質等のたんぱく質が表面分子９２として存在する。たんぱく質の個数や脂質二重膜１１における位置は、エクソソームの種類によって異なり、個体によっても異なる。これらの表面分子９２を抗原として抗原抗体反応を用いてエクソソーム９０を認識する。抗原である表面分子９２として、ＣＤ６３，ＣＤ９，Ｒａｂ−５ｂ等の他様々なたんぱく質等の分子の存在が多くの論文で報告されている。
【００４７】
エクソソーム９０は、細胞情報を伝達する物質とされるＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ等の高分子生体物質である内包物質９３が脂質二重膜９１内に内包されている。エクソソーム９０の直径は１００ｎｍ程度である。
【００４８】
オペレータは、試料分析用容器１０を、適切な時間、適切な温度でインキュベートさせる。インキュベート時に振盪させてもよい。例えば２時間程度、３７℃で試料分析用容器１０を振盪させる。
【００４９】
これにより、エクソソーム９０の表面分子９２とトラック領域２３上に固定されている抗体１０１とが抗原抗体反応によって特異的に結合する。その結果、図１５に示すように、エクソソーム９０はトラック領域２３、具体的にはトラック領域２３の凹部２２に捕捉される。
【００５０】
オペレータは、ウェル４０から試料液１０３を排出し、ウェル４０を緩衝液で洗浄する。なお、抗体１０１と結合しないで試料液１０３中に分散しているエクソソーム、及び、抗原抗体反応ではない非特異吸着によってトラック領域２３に付着しているエクソソームは、この洗浄によって除去される。即ち、検出対象のエクソソーム９０はトラック領域２３の凹部２２に捕捉され、検出対象ではないエクソソームは洗浄によって除去される。
【００５１】
なお、図１３では磁界発生部７０の磁石７２がウェル４０の底面に接近した状態を示しているが、ステップＳ２，Ｓ３では、磁石７２がウェル４０の底面から離隔した状態でもよい。
【００５２】
オペレータは、ステップＳ４にて、図１６に示すように、標識となる磁気微粒子（磁気ビーズ）１１０を含む緩衝液（第２の溶液）１０４をウェル４０に注入する。オペレータは、試料分析用容器１０を、適切な時間、適切な温度でインキュベートさせる。
【００５３】
図１７に示すように、磁気微粒子１１０は、略球形に形成されたポリスチレン等の合成樹脂で形成されている。磁気微粒子１１０は酸化鉄等の磁性体１１１を内包している。磁気微粒子１１０の表面には、エクソソーム９０の表面分子９２と特異的に結合する抗体（第２の結合物質）１１２が固定されている。磁気微粒子１１０の直径は２００ｎｍ程度である。
【００５４】
磁気微粒子１１０は磁石７２の磁界によって磁化され、ウェル４０の底面に向かって移動する。エクソソーム９０の表面分子９２と磁気微粒子１１０の抗体１１２とは、抗原抗体反応によって特異的に結合する。これにより、磁気微粒子１１０は、エクソソーム９０と結合した状態で、試料分析用容器１０内、具体的にはウェル４０内のトラック領域２３の凹部２２に捕捉される。
【００５５】
図１６では磁界発生部７０の磁石７２がウェル４０の底面に接近した状態を示しているが、ステップＳ４では、磁石７２がウェル４０の底面から離隔した状態でもよい。なお、ステップＳ４では、磁石７２をウェル４０の底面に接近させることにより、磁気微粒子１１０をウェル４０の底面に向かって迅速に移動させることができる。これにより、ステップＳ４を時間短縮することができる。
【００５６】
オペレータは、磁石７２がウェル４０の底面に接近した状態の場合には、磁石７２がウェル４０の底面から離隔するように検体検出用装置５０を操作する。オペレータは、ウェル４０から緩衝液１０４を排出し、ウェル４０を緩衝液で洗浄する。なお、エクソソーム９０と結合しないで緩衝液１０４中に分散している磁気微粒子１１０は、この洗浄によって除去される。即ち、検出対象のエクソソーム９０と結合している磁気微粒子１１０はトラック領域２３の凹部２２に捕捉され、検出対象のエクソソーム９０と結合していない余分な磁気微粒子１１０は洗浄によって除去される。
【００５７】
オペレータは、ステップＳ５にて、図１８に示すように、磁石７２がウェル４０の底面に接近するように検体検出用装置５０を操作する。オペレータは、エクソソーム９０から内包物質９３を遊離させるための抽出液（第３の溶液）１０５をウェル４０に注入する。
【００５８】
図１９に示すように、抽出液１０５でエクソソーム９０を溶解させることにより、抽出液１０５中に内包物質９３を遊離させることができる。エクソソーム９０から内包物質９３を遊離させる時間は、例えば抽出液１０５を注入してから数分間程度である。
【００５９】
エクソソーム９０が溶解することにより、トラック領域２３の凹部２２に捕捉されているエクソソーム９０と磁気微粒子１１０との結合は解除されてしまう。結合が解除された磁気微粒子１１０は磁石７２の磁力によって磁石７２側に引き寄せられるため、試料分析用容器１０内、具体的にはウェル４０内のトラック領域２３の凹部２２に捕捉されている状態を維持する。即ち、駆動部８０は、磁石７２をウェル４０の底面に接近させることにより、磁気微粒子１１０を磁石７２の磁力によってウェル４０内の底面の凹部２２に捕捉する。
【００６０】
オペレータは、ステップＳ６にて、内包物質９３が遊離された抽出液１０５をピペット等を用いてウェル４０から抽出し、例えばリアルタイムＰＣＲ（Real-Time Polymerase Chain Reaction）法を用いて内包物質９３を解析する。リアルタイムＰＣＲ法は、ＤＮＡポリメラーゼによる酵素反応を利用してＤＮＡを増幅させ、増幅産物の増加量をリアルタイムでモニタリングして解析する方法である。
【００６１】
例えば、段階的に希釈した基準サンプルに対してリアルタイムＰＣＲ法を適用することにより増幅産物の増幅曲線を得る。増幅曲線と設定された閾値との交わる点であるＣｔ（Threshold Cycle）値を算出し、検量線を作成する。ウェル４０から抽出した抽出液１０５についても基準サンプルと同様にＣｔ値を算出し、算出したＣｔ値と作成した検量線とからエクソソーム９０の内包物質９３であるＤＮＡを定性及び定量することができる。
【００６２】
従って、ウェル４０毎に抽出液１０５をサンプリングすることにより、各ウェル４０における内包物質９３を解析することができる。
【００６３】
オペレータは、磁石７２がウェル４０の底面に接近した状態で、ウェル４０から残りの抽出液１０５を排出し、ウェル４０を緩衝液で洗浄する。オペレータは、ウェル４０を乾燥させる。乾燥時間は１０分〜１５分程度である。乾燥は、ウェル４０の底面上の水滴がなくなる程度でもよい。
【００６４】
ウェル４０を洗浄し、乾燥させている期間は磁石７２がウェル４０の底面に接近しているため、磁気微粒子１１０は磁石７２の磁力によって凹部２２に捕捉されている状態を維持する。
【００６５】
オペレータは、ステップＳ７にて、試料分析用容器１０を検体検出用装置５０のユニット保持部６０から取り外す。オペレータは、図２（ｂ）に示すように、試料分析用容器１０のカートリッジ３０を試料分析用ディスク２０から取り外す。なお、乾燥後の磁気微粒子１１０はファンデルワールス力によって凹部２２に捕捉されている状態を維持する。
【００６６】
図２（ｂ）及び図２０に示すように、試料分析用ディスク２０には、複数のウェル４０に対応して複数の反応領域２４が形成される。即ち、複数の反応領域２４は、それぞれの中心が同一円周上に位置するように等間隔に形成されている。反応領域２４の凹部２２上には磁気微粒子１１０が捕捉されている（図１９参照）。
【００６７】
オペレータは、反応領域２４の凹部２２上に捕捉されている標識である磁気微粒子１１０を、例えば光ピックアップ等を用いて光学的に検出し、計数することで、凹部２２上に捕捉されていたエクソソーム９０を間接的に検出し、計数することができる。
【００６８】
例えば、外部に配置された光ピックアップから、磁気微粒子１１０が捕捉されている反応領域２４の凹部２２に向けてレーザ光を照射する。反応領域２４からの反射光を解析することで、磁気微粒子１１０を検出し、計数することができる。
【００６９】
具体的には、光ピックアップは、トラック領域２３にレーザ光を集光させるための対物レンズを備えている。試料分析用ディスク２０を一般的な光ディスクと同様に回転させ、光ピックアップを試料分析用ディスク２０の半径方向に移動させることにより、対物レンズによって集光されたレーザ光をトラック（具体的には凹部２２）に沿って走査する。反応領域２４からの反射光により得られた検出信号から、凹部２２に捕捉されている磁気微粒子１１０を検出し、計数する。
【００７０】
本実施形態の検体検出用装置及び検体検出方法では、エクソソーム９０を磁気微粒子１１０と結合した状態でトラック領域２３の凹部２２に捕捉する。磁石７２をウェル４０の底面に接近させた状態で、抽出液１０５によりエクソソーム９０から内包物質９３を遊離させる。磁気微粒子１１０が磁石７２の磁力によって凹部２２に捕捉されている状態で、内包物質９３が遊離した抽出液１０５を抽出し、内包物質９３を解析する。一方、試料分析用ディスク２０を乾燥させ、反応領域２４に捕捉されている磁気微粒子１１０を光学的に検出する。
【００７１】
従って、本実施形態の検体検出用装置及び検体検出方法によれば、エクソソーム９０の検出と内包物質９３の検出とを同一の検体（試料液１０３）で行うことができる。
【００７２】
本発明は、以上説明した実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において種々変更可能である。
【００７３】
本実施形態では、試料液１０３をウェル４０に注入してエクソソーム９０を凹部２２に捕捉した後、緩衝液１０４をウェル４０に注入して磁気微粒子１１０をエクソソーム９０と結合させたが、これに限定されるものではない。例えば、試料液１０３と緩衝液１０４とをウェル４０に注入して混合させてもよいし、試料液１０３と緩衝液１０４とをマイクロチューブやカラム等の別の容器で混合し、混合液をウェル４０に注入するようにしてもよい。
【００７４】
また、本実施形態では、試料分析用容器１０を試料分析用ディスク２０とカートリッジ３０とを備える構成としたが、これに限定されるものではない。試料分析用容器１０としてマイクロプレートを用いてもよい。マイクロプレートのウェルの底面に磁石７２を接近させた状態でエクソソーム９０から内包物質９３を遊離させることにより、本実施形態と同様の効果を奏する。試料分析用容器１０としてマクロチューブなどの試験管やシャーレなどを用いてもよい。試料分析用容器１０としてマイクロプレート、試験管、またはシャーレなどを用いる場合、磁気微粒子１１０は、磁石７２の磁力によって試料分析用容器１０内に捕捉された状態を維持できればよい。
【００７５】
また、ユニット保持部６０は、ウェル４０と試料検出用ディスク２０が分離して液漏れしないよう密着保持が可能であれば本実施形態に限定されるものではない。例えば、カートリッジ３０と試料分析用ディスク２０を係合させるつめなど各種ロック機構で試料分析用容器１０を保持してもよい。検体検出用装置５０に試料分析用容器１０を載置した際、試料分析用容器１０側での押さえ構造により試料分析用容器１０を保持してもよい。
【符号の説明】
【００７６】
１０  試料分析用容器
２０  試料分析用ディスク
４０  ウェル
５０  検体検出用装置
６０  ユニット保持部
７０  磁界発生部
７２  磁石
８０  駆動部
９０  エクソソーム
９３  内包物質
１０３  試料液（第１の溶液）
１０４  緩衝液（第２の溶液）
１０５  抽出液（第３の溶液）
１１０  磁気微粒子
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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