(57)【要約】【課題】検体の誘導体化及びソフトイオン化の方法を提供すること。また、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）を用いて検体を検出する方法を提供すること。【解決手段】これらの方法は、検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合を介して接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させるステップと、解離可能な結合をソフトイオン化条件下で選択的に切断して、擬似分子検体基を含む主要な第１の断片化生成物及び脱離基を含む第２の断片化生成物を生成させるステップとを含む。本方法はさらに、第１及び第２の断片化生成物を質量分析計で分析して、擬似分子検体基に対応するイオンを同定することを含み得る。これらの方法は、試料の質量分光分析が望まれる様々な用途で使用される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合を介して接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させるステップと、
（ｂ）前記解離可能な結合をソフトイオン化条件下で選択的に切断することにより、前記擬似分子検体基を含む主要な第１の断片化生成物及び前記脱離基を含む第２の断片化生成物を生成させるステップと
を含む方法。
【請求項２】
前記第１及び第２の断片化生成物を質量分析計で分析して前記擬似分子検体基に対応するイオンを同定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記擬似分子検体基に基づいて前記検体を同定することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
質量分析計で前記第１の断片化生成物が前記第２の断片化生成物より優勢に検出される、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記イオン化条件が７０ｅＶ未満でのＥＩイオン化を含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記イオン化条件が２０ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記イオン化条件がＣＩを含む、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記解離可能な結合が、前記検体のＨを含有しない共有結合の結合エネルギー未満の結合エネルギーを有する、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記解離可能な結合が３５０ｋＪ／ｍｏｌ以下の結合エネルギーを有する、請求項１から８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記解離可能な結合が、Ｏ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合から選択される、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記誘導体化剤が、アミノ反応性剤、チオール反応性剤、ヒドロキシル反応性剤、酸反応性剤、ケト反応性剤及び求核性ハロアルキル反応性剤からなる群から選択される、請求項１から１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記誘導体化剤が式
Ｘ−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（式中、
Ｄは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択され、
Ｙ１−Ｚ１は、解離可能な結合を含み、ここでＹ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここで各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルであり、
Ｌ１は、任意選択のリンカーであり、
Ｘは、ハロゲン、トリフレート、メシレート、ペルクロレート、ジエチルアミノ又はシアニドである）
を有する、請求項１から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記誘導体化剤がジシリル試薬である、請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
クロマトグラフィー−質量分析を用いて検体を検出する方法であって、
検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合を介して接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させるステップと、
前記接触させた試料をソフトイオン化条件下でクロマトグラフィー−質量分析により分析するステップと、
前記検体に対応する擬似分子イオンを検出するステップと
を含む、方法。
【請求項１５】
試料を分析するためのキットであって、誘導体化剤、ならびに検体対照、溶媒、緩衝剤及び使用説明書から選択される１つ以上の構成成分を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
本出願は、その全体が本明細書に組み込まれている、２０１５年９月３０日に出願された米国仮出願第６２／２３５，３７０号の利益を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
質量分析法は化合物の同定のための試料の分析で広く使用されている。通常、試料がガス（ＧＣ）又は液体（ＨＰＬＣ）クロマトグラフを介して導入される。次いで、溶出する化合物がイオン化され、断片イオンが質量分析器を通過して質量スペクトルを生成する。最後に、生成したスペクトルを同様な条件下で得られた標準のライブラリースペクトル又はデータベースと比較することによって化合物が同定される。電子衝撃（ＥＩ）イオン化はＧＣ−質量分析法で最も一般的に使用されるイオン化技術である。ＥＩでは、エネルギーをもった電子ビームが中性の分子に衝突し、電子のエネルギーが分子のイオン化ポテンシャルより大きいときその分子をイオン化する。充分な信号を得るため、電子ビームは通常３０−１５０ｅＶ程度のエネルギーで分子に突き当たる。一般に、固定された７０ｅＶのＥＩが標準的である。有機化合物のイオン化ポテンシャルは一般に７．５〜１５ｅＶであるので、多くの検体は様々に断片化される。化合物の同定は、得られた質量スペクトルをライブラリースペクトルと一致させることによって達成される。
【０００３】
豊富な分子イオン又はより高い質量診断イオンで質量スペクトルを作成するには比較的ソフトなイオン化方法が使用されている。現行のよりソフトなイオン化方法は２つのカテゴリーに分けられる。第１のグループの方法はイオン化過程中少なめのエネルギーを使うことに基づいており、これには低電子エネルギーＥＩ、化学イオン化（ＣＩ）、電界イオン化（ＦＩ）及び光イオン化（ＰＩ）がある。第２のグループの方法はイオン化の前に分子の内部エネルギーを低下させることに集中しており、例えば「冷」ＥＩがある。冷ＥＩでは、検体は高圧のキャリヤーガスと混合された後制限オリフィス（ノズル）を通って真空中に膨張させられる。試料分子はこの断熱膨張中に「過冷却」され、「超音速分子ビーム」（ＳＭＢ）を生成する。その後分子は従来のイオン化方法、例えばＥＩ又はＰＩでイオン化することができる。
【発明の概要】
【０００４】
検体の誘導体化及びソフトイオン化の方法が提供される。これらの方法は、検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合を介して接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させ、解離可能な結合をソフトイオン化条件下で選択的に切断して、擬似分子検体基を含む主要な第１の断片化生成物及び脱離基を含む第２の断片化生成物を生成させることを含んでいる。方法はさらに、第１及び第２の断片化生成物を質量分析計で分析して、擬似分子検体基に対応するイオンを同定することを含み得る。また、クロマトグラフィー−質量分析（例えば、ＧＣ−ＭＳ）を用いて検体を検出する方法も提供される。これらの方法は、試料の質量分光分析が望まれる様々な用途で使用される。
【図面の簡単な説明】
【０００５】
【図１】図１は、断片をｍ／ｚでラベルして示した、７０ｅＶの電子エネルギーにおけるリナロールの質量スペクトルを示す図である。ｍ／ｚが１５４の分子イオンピークはほとんど見えない。
【図２】図２は、９ｅＶの電子エネルギーにおけるリナロールの質量スペクトルを示す図であり、上のピークラベルはｍ／ｚであり、下のピークラベルは相対存在率を示す。分子イオンピークは相対存在率＜２％であり、本質的に識別できない。
【図３】図３は、検体リナロールの誘導体化生成物である代表的な修飾検体リナロールペンタメチルジシリルエーテルの７０ｅＶで得られた質量スペクトルを示す図である。ｍ／ｚ＝２１１のイオンピークは、リナロールの化学構造に特徴的な擬似−分子イオンであり、図中に示されている（ラジカルのカチオン電荷は示されていない）、リナロールペンタメチルジシリルエーテルの断片化生成物に対応する。ｍ／ｚ＝１４７のイオンピークは、そのシリルエーテルのＣ−Ｏ結合での開裂の結果である。７０ｅＶの電子エネルギーのイオン化条件下でのｍ／ｚ＝２１１の擬似−分子イオンピークは基準ピークに対してほぼ４０％の相対存在率であり、９ｅＶの電子エネルギーでの検体リナロールのイオン化で観察された２％の分子イオンピークと比べて顕著な改良である。
【図４】図４は、９ｅＶの電子エネルギーにおける代表的な修飾検体リナロールペンタメチルジシリルエーテルの質量スペクトルを示す図である。この質量スペクトルでは、リナロールに特徴的なｍ／ｚ＝２１１の擬似分子イオンが主要な基準ピークである。
【発明を実施するための形態】
【０００６】
［定義］
代表的な実施形態についてより詳細に記載する前に、以下の記載で使用する用語の意味及び範囲を説明し規定するために次の定義を記載する。
【０００７】
他に定義しない限り、本明細書で使用する全ての技術用語及び科学用語は本発明が属する技術分野の当業者により一般に理解されるのと同じ意味を有する。にもかかわらず、明確にするため、そして参照を容易にするためにある特定の用語を以下に定義する。
【０００８】
本明細書で使用するとき、用語「リンカー」又は「リンケージ」とは、２つの基を接続しており、長さが１００以下の原子の主鎖を有する結合部分を指す。リンカー又はリンケージは２つの基を接続する共有結合であってもよいし、又は長さが１〜１００の原子、例えば長さが約１、２、３、４、５、６、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０個の炭素原子の鎖であってもよく、ここでリンカーは直鎖状、分岐状、環状であっても単一の原子であってもよい。ある特定の場合、リンカー主鎖の１、２、３、４又は５個以上の炭素原子が硫黄、窒素又は酸素といったヘテロ原子で場合により置換されていてもよい。主鎖原子間の結合は飽和でも不飽和でもよく、通常１、２、又は３つ以下の不飽和結合がリンカー主鎖に存在する。リンカーは１つ以上の置換基、例えばアルキル、アリール又はアルケニル基を含み得る。リンカーには、制限されることはないが、オリゴ（エチレングリコール）、エーテル、チオエーテル、第三アミン、アルキルが含まれ、アルキルは直鎖でも分岐でもよく、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、１−メチルエチル（イソ−プロピル）、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、１，１−ジメチルエチル（ｔ−ブチル）、などがある。リンカー主鎖は環式基、例えば、アリール、複素環又はシクロアルキル基を含むことがあり、環式基の２個以上の原子、例えば、２、３又は４個の原子が主鎖内に含まれる。リンカーは開裂可能であってもなくてもよい。
【０００９】
本明細書で使用するとき、用語「開裂可能なリンカー」とは、選択的に開裂して２つの生成物を生成することができるリンカーをいう。適切な開裂条件により開裂される開裂可能なリンカーを含有する分子にかかる開裂条件を適用すると２つの副生成物が生成する。本発明の開裂可能なリンカーは、開裂を誘発する刺激、例えば酵素のような作用物質又は化学剤もしくは光のような他の開裂を誘発する作用物質と接触するまで、例えば生理学的条件に対して安定である。明確にするために、２つの基を接続する原子の数は、２つの基自体の原子を除いて２つの基の間の共有結合した原子の最小の数を数えることによって計算される。２つの基の間のリンケージが環状部分を含む場合、２つの基を接続する原子の可能な最小の数が計算されるように環状部分の環の部分の最短の経路を数える。
【００１０】
「アルキル」とは、１〜１０個の炭素原子、例えば１〜６個の炭素原子、又は１〜５個、又は１〜４個、又は１〜３個の炭素原子を有する一価の飽和脂肪族ヒドロカルビル基をいう。この用語は、一例として、メチル（ＣＨ３−）、エチル（ＣＨ３ＣＨ２−）、ｎ−プロピル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−）、イソプロピル（（ＣＨ３）２ＣＨ−）、ｎ−ブチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、イソブチル（（ＣＨ３）２ＣＨＣＨ２−）、ｓｅｃ−ブチル（（ＣＨ３）（ＣＨ３ＣＨ２）ＣＨ−）、ｔ−ブチル（（ＣＨ３）３Ｃ−）、ｎ−ペンチル（ＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、及びネオペンチル（（ＣＨ３）３ＣＣＨ２−）のような直鎖状及び分岐ヒドロカルビル基を包含する。
【００１１】
用語「置換アルキル」とは、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及びＮＲａＲｂ（ここで、Ｒａ及びＲｂは同一でも異なってもよく、水素、場合により置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロ環式から選ばれる）からなる群から選択される１〜５個の置換基を有する、アルキル鎖中の１個以上の炭素原子が−Ｏ−、−Ｎ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）ｎ−（ここで、ｎは０〜２である）、−ＮＲ−（ここで、Ｒは水素又はアルキルである）のようなヘテロ原子で場合により置き換えられていてもよい本明細書中に定義されているようなアルキル基をいう。
【００１２】
用語「アルキルアミノアルキル」、「アルキルアミノアルケニル」及び「アルキルアミノアルキニル」とは、基Ｒ’ＮＨＲ”−をいい、ここで、Ｒ’は本明細書中に定義されているようなアルキル基であり、Ｒ”は本明細書中に定義されているようなアルキレン、アルケニレン又はアルキニレン基である。
【００１３】
用語「アルカリール」又は「アラルキル」とは、−アルキレン−アリール及び置換アルキレン−アリールといった基をいい、ここでアルキレン、置換アルキレン及びアリールは本明細書中に定義されている。
【００１４】
「アルコキシ」とは、基−Ｏ−アルキルをいい、ここでアルキルは本明細書中に定義されている通りである。アルコキシは、一例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、などを包含する。また、用語「アルコキシ」は、アルケニル−Ｏ−、シクロアルキル−Ｏ−、シクロアルケニル−Ｏ−、及びアルキニル−Ｏ−といった基も指し、ここでアルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、及びアルキニルは本明細書中に定義されている通りである。
【００１５】
用語「置換アルコキシ」とは、置換アルキル−Ｏ−、置換アルケニル−Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｏ−、置換シクロアルケニル−Ｏ−、及び置換アルキニル−Ｏ−といった基をいい、ここで置換アルキル、置換アルケニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル及び置換アルキニルは本明細書中に定義されている通りである。
【００１６】
用語「アルコキシアミノとは、−ＮＨ−アルコキシ基をいい、ここでアルコキシは本明細書中に定義されている。
【００１７】
用語「ハロアルコキシ」とは、アルキル基上の１個以上の水素原子がハロ基で置換されているアルキル−Ｏ−基をいい、一例として、トリフルオロメトキシ、などのような基が包含される。
【００１８】
用語「ハロアルキル」とは、アルキル基上の１個以上の水素原子がハロ基で置換されている上記のような置換アルキル基をいう。かかる基の例として、制限されることはないが、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロエチルなどのようなフルオロアルキル基がある。
【００１９】
用語「アルキルアルコキシ」とは、−アルキレン−Ｏ−アルキル、アルキレン−Ｏ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｏ−アルキル、及び置換アルキレン−Ｏ−置換アルキルといった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルキレン及び置換アルキレンは本明細書中に定義されている通りである。
【００２０】
用語「アルキルチオアルコキシ」とは、−アルキレン−Ｓ−アルキル、アルキレン−Ｓ−置換アルキル、置換アルキレン−Ｓ−アルキル及び置換アルキレン−Ｓ−置換アルキルといった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルキレン及び置換アルキレンは本明細書中に定義されている通りである。
【００２１】
「アルキニル」とは、２〜６個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子を有し、少なくとも１つ、好ましくは１〜２つの三重結合不飽和部位を有する直鎖又は分岐した一価のヒドロカルビル基をいう。かかるアルキニル基の例として、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）がある。
【００２２】
用語「置換アルキニル」とは、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、及びＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基、又は１〜３個の置換基を有する本明細書中に定義されているようなアルキニル基をいう。
【００２３】
「アルキニルオキシ」とは、−Ｏ−アルキニル基をいい、ここでアルキニルは本明細書中に定義されている通りである。アルキニルオキシとしては、一例として、エチニルオキシ、プロピニルオキシ、などがある。
【００２４】
「アシル」とは、Ｈ−Ｃ（Ｏ）−、アルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）−、アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、置換アルキニル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）−、シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、置換シクロアルケニル−Ｃ（Ｏ）−、アリール−Ｃ（Ｏ）−、置換アリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、置換ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）−、ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−、及び置換ヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）−といった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。例えば、アシルには「アセチル」基ＣＨ３Ｃ（Ｏ）−が包含される。
【００２５】
「アシルアミノ」とは、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキル、ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルキル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換シクロアルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルケニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アルキニル、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換アリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換ヘテロアリール、−ＮＲ２０Ｃ（Ｏ）ヘテロ環式、及びＮＲ２０Ｃ（Ｏ）置換ヘテロ環式といった基をいい、ここで、Ｒ２０は水素又はアルキルであり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００２６】
「アミノカルボニル」又は用語「アミノアシル」とは、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ２１Ｒ２２をいい、ここで、Ｒ２１及びＲ２２は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式といった基からなる群から選択され、Ｒ２１及びＲ２２は、それらに結合している窒素と場合により一緒になってヘテロ環式又は置換ヘテロ環式基を形成していてもよく、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００２７】
「アミノカルボニルアミノ」とは、−ＮＲ２１Ｃ（Ｏ）ＮＲ２２Ｒ２３基をいい、ここで、Ｒ２１、Ｒ２２、及びＲ２３は独立して、水素、アルキル、アリール又はシクロアルキルから選択され、又は２つのＲ基は一緒になってヘテロシクリル基を形成する。
【００２８】
用語「アルコキシカルボニルアミノ」とは、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ基をいい、ここで、各Ｒは独立して水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロシクリルであり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは本明細書中に定義されている通りである。
【００２９】
用語「アシルオキシ」とは、アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換アルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、置換シクロアルキル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、アリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、ヘテロアリール−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、及びヘテロシクリル−Ｃ（Ｏ）Ｏ−といった基をいい、ここで、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルは本明細書中に定義されている通りである。
【００３０】
「アミノスルホニル」とは、−ＳＯ２ＮＲ２１Ｒ２２基をいい、ここで、Ｒ２１及びＲ２２は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、置換ヘテロ環式からなる群から選択され、Ｒ２１及びＲ２２は、それらに結合している窒素と場合により一緒になってヘテロ環式又は置換ヘテロ環式基を形成していてもよく、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００３１】
「スルホニルアミノ」とは、−ＮＲ２１ＳＯ２Ｒ２２基をいい、ここで、Ｒ２１及びＲ２２は独立して、水素、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、置換アリール、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式からなる群から選択され、Ｒ２１及びＲ２２は、それらに結合している原子と場合により一緒になってヘテロ環式又は置換ヘテロ環式基を形成していてもよく、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００３２】
「アリール」又は「Ａｒ」は、単一の環（例えばフェニル基中に存在する場合）又は複数の縮合環を有する環系（かかる芳香族環系の例にはナフチル、アントリル及びインダニルがある）を有する炭素原子６〜１８個の一価の芳香族炭素環式基を指し、この縮合環は芳香族であってもなくてもよいが、結合点は芳香族環の原子を介在する。この用語には、一例として、フェニル及びナフチルが包含される。アリール置換基の定義により特に束縛されない限り、かかるアリール基は、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール及びトリハロメチルから選択される１〜５個の置換基、又は１〜３個の置換基で場合により置換され得る。
【００３３】
「アリールオキシ」とは、−Ｏ−アリール基をいい、ここでアリールは本明細書中に定義されている通りであり、一例として、フェノキシ、ナフトキシ、などが包含され、本明細書中に定義されている、場合により置換されていてもよいアリール基も包含される。
【００３４】
「アミノ」は基−ＮＨ２を指す。
【００３５】
用語「置換アミノ」とは、−ＮＲＲ基をいい、各Ｒは独立して水素、アルキル、置換アルキル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリール、ヘテロアリール、及びヘテロシクリルからなる群から選択され、但し少なくとも１つのＲは水素ではない。
【００３６】
用語「アジド」とは、基−Ｎ３をいう。
【００３７】
「カルボキシル」、「カルボキシ」又は「カルボキシレート」とは、−ＣＯ２Ｈ又はその塩をいう。
【００３８】
「カルボキシルエステル」もしくは「カルボキシエステル」又は用語「カルボキシアルキル」もしくは「カルボキシルアルキル」とは、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロ環式、及びＣ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロ環式といった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００３９】
「（カルボキシルエステル）オキシ」又は「カーボネート」とは、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アルキニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換アリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルキル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換シクロアルケニル、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロアリール、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−ヘテロ環式、及びＯ−Ｃ（Ｏ）Ｏ−置換ヘテロ環式といった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００４０】
「シアノ」又は「ニトリル」は−ＣＮ基を指す。
【００４１】
「シクロアルキル」とは、縮合、架橋、及びスピロ環系を含めて単一又は複数の環式環を有する炭素原子３〜１０個の環式アルキル基をいう。適切なシクロアルキル基の例には、例えば、アダマンチル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどがある。かかるシクロアルキル基には、一例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチル、などのような単環構造、又はアダマンタニル、などのような多環構造が含まれる。
【００４２】
用語「置換シクロアルキル」とは、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及びＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１〜５個の置換基、又は１〜３個の置換基を有するシクロアルキル基をいう。
【００４３】
「シクロアルキニル」とは、単一又は複数の環を有し、かつ少なくとも１つの三重結合を有する炭素原子５〜１０個の非芳香族シクロアルキル基をいう。
【００４４】
「シクロアルコキシ」とは、−Ｏ−シクロアルキルをいう。
【００４５】
「シクロアルケニルオキシ」とは、−Ｏ−シクロアルケニルをいう。
【００４６】
「ハロ」又は「ハロゲン」とは、フルオロ、クロロ、ブロモ、及びヨードをいう。
【００４７】
「ヒドロキシ」又は「ヒドロキシル」とは、−ＯＨ基をいう。
【００４８】
「ヘテロアリール」とは、環内に１〜１０個の炭素原子のような１〜１５個の炭素原子、ならびに酸素、窒素、及び硫黄からなる群から選択される１〜１０個のヘテロ原子を有する芳香族基をいう。かかるヘテロアリール基は（ピリジニル、イミダゾリル又はフリルのような）単一の環を有することも、又は環系内に（例えばインドリジニル、キノリニル、ベンゾフラン、ベンズイミダゾリル又はベンゾチエニルのような基内のように）複数の縮合環を有することもでき、ここで環系内の少なくとも１つの環は芳香族であり、但し結合点は芳香族環の原子を介する。ある特定の実施形態において、ヘテロアリール基の窒素及び／又は硫黄環原子は場合により酸化されて、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）、スルフィニル、又はスルホニル部分を提供してもよい。この用語は、一例として、ピリジニル、ピロリル、インドリル、チオフェニル、及びフラニルを包含する。ヘテロアリール置換基に対する定義により特に束縛されない限り、かかるヘテロアリール基は、アシルオキシ、ヒドロキシ、チオール、アシル、アルキル、アルコキシ、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、置換アルキル、置換アルコキシ、置換アルケニル、置換アルキニル、置換シクロアルキル、置換シクロアルケニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アシルアミノ、アルカリール、アリール、アリールオキシ、アジド、カルボキシル、カルボキシルアルキル、シアノ、ハロゲン、ニトロ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、アミノアシルオキシ、オキシアシルアミノ、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール及びＳＯ２−ヘテロアリール、ならびにトリハロメチルから選択される１〜５個の置換基、又は１〜３個の置換基で場合により置換され得る。
【００４９】
用語「ヘテロアラルキル」とは、基−アルキレン−ヘテロアリールをいい、ここでアルキレン及びヘテロアリールは本明細書中に定義されている。この用語は、一例として、ピリジルメチル、ピリジルエチル、インドリルメチル、などを包含する。
【００５０】
「ヘテロアリールオキシ」とは−Ｏ−ヘテロアリールをいう。
【００５１】
「複素環」、「ヘテロ環式」、「ヘテロシクロアルキル」、及び「ヘテロシクリル」とは、単一の環又は、縮合、架橋及びスピロ環系を含めて複数の縮合環を有し、かつ１〜１０個のヘテロ原子を含めて３〜２０個の環原子を有する飽和又は不飽和の基をいう。これらの環原子は窒素、硫黄、又は酸素からなる群から選択され、縮合した環系では１つ以上の環がシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであることができ、但し結合点は非芳香族環を介する。ある特定の実施形態において、ヘテロ環式基の窒素及び／又は硫黄原子は場合により酸化されてＮ−オキシド、−Ｓ（Ｏ）−、又はＳＯ２−部分を提供してもよい。
【００５２】
複素環及びヘテロアリールの例には、限定されることはないが、アゼチジン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、ジヒドロインドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、フタルイミド、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン、４，５，６，７−テトラヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン、チアゾール、チアゾリジン、チオフェン、ベンゾ［ｂ］チオフェン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルともいわれる）、１，１−ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニル、などがある。
【００５３】
ヘテロ環式置換基に対する定義により特に束縛されない限り、かかるヘテロ環式基は、アルコキシ、置換アルコキシ、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アミノアシルオキシ、オキシアミノアシル、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシル、オキソ、チオケト、カルボキシル、カルボキシルアルキル、チオアリールオキシ、チオヘテロアリールオキシ、チオヘテロシクロオキシ、チオール、チオアルコキシ、置換チオアルコキシ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−置換アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、−ＳＯ２−置換アルキル、−ＳＯ２−アリール、−ＳＯ２−ヘテロアリール、及び縮合複素環から選択される１〜５個、又は１〜３個の置換基により場合により置換され得る。
【００５４】
用語「ヒドロキシアミノ」とは、−ＮＨＯＨ基をいう。
【００５５】
「ニトロ」とは、−ＮＯ２基をいう。
【００５６】
「オキソ」とは、原子（＝Ｏ）をいう。
【００５７】
「スルホニル」とは、ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−置換アルキル、ＳＯ２−アルケニル、ＳＯ２−置換アルケニル、ＳＯ２−シクロアルキル、ＳＯ２−置換シクロアルキル、ＳＯ２−シクロアルケニル、ＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＳＯ２−アリール、ＳＯ２−置換アリール、ＳＯ２−ヘテロアリール、ＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＳＯ２−ヘテロ環式、及びＳＯ２−置換ヘテロ環式といった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。スルホニルには、一例として、メチル−ＳＯ２−、フェニル−ＳＯ２−、及び４−メチルフェニル−ＳＯ２−がある。
【００５８】
「スルホニルオキシ」とは、−ＯＳＯ２−アルキル、ＯＳＯ２−置換アルキル、ＯＳＯ２−アルケニル、ＯＳＯ２−置換アルケニル、ＯＳＯ２−シクロアルキル、ＯＳＯ２−置換シクロアルキル、ＯＳＯ２−シクロアルケニル、ＯＳＯ２−置換シクロアルケニル、ＯＳＯ２−アリール、ＯＳＯ２−置換アリール、ＯＳＯ２−ヘテロアリール、ＯＳＯ２−置換ヘテロアリール、ＯＳＯ２−ヘテロ環式、及びＯＳＯ２置換ヘテロ環式といった基をいい、ここでアルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヘテロ環式、及び置換ヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００５９】
用語「アミノカルボニルオキシ」とは、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲＲ基をいい、ここで各Ｒは独立して水素、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール、又はヘテロ環式であり、アルキル、置換アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロ環式は本明細書中に定義されている通りである。
【００６０】
「チオール」とは−ＳＨ基をいう。
【００６１】
「チオキソ」又は用語「チオケト」とは原子（＝Ｓ）をいう。
【００６２】
「アルキルチオ」又は用語「チオアルコキシ」とは、−Ｓ−アルキル基をいい、ここでアルキルは本明細書中に定義されている通りである。ある特定の実施形態において、硫黄は−Ｓ（Ｏ）−に酸化されていてもよい。スルホキシドは１種以上の立体異性体として存在し得る。
【００６３】
用語「置換チオアルコキシ」とは、−Ｓ−置換アルキル基をいう。
【００６４】
用語「チオアリールオキシ」とは、アリール−Ｓ−基をいい、ここでアリール基は本明細書中に定義されている通りであり、同様に本明細書中に定義されている場合により置換されていてもよいアリール基を含む。
【００６５】
用語「チオヘテロアリールオキシ」とは、ヘテロアリール−Ｓ−基をいい、ここでヘテロアリール基は本明細書中に定義されている通りであり、同様に本明細書中に定義されている場合により置換されていてもよいアリール基を含む。
【００６６】
用語「チオヘテロシクロオキシ」とは、ヘテロシクリル−Ｓ−基をいい、ここでヘテロシクリル基は本明細書中に定義されている通りであり、同様に本明細書中に定義されている場合により置換されていてもよいヘテロシクリル基を含む。
【００６７】
本明細書の開示に加えて、用語「置換（されている）」とは、特定の基又はラジカルを修飾するのに使用されている場合、その特定の基又はラジカルの１個以上の水素原子が各々、互いに独立して以下に定義されているような同一又は異なる置換基により置き換えられていることも意味することができる。
【００６８】
本明細書中で個々の用語に関して開示されている基に加えて、特定の基又はラジカルの飽和炭素原子上の１個以上の水素（単一の炭素上の２個の水素を＝Ｏ、＝ＮＲ７０、＝Ｎ−ＯＲ７０、＝Ｎ２又は＝Ｓで置き換えることができる）を置換するための置換基は、特に断らない限り、−Ｒ６０、ハロ、＝Ｏ、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＳＯ２ＯＲ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳＯ２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）Ｏ−Ｍ＋、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及びＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここで、Ｒ６０は場合により置換されていてもよいアルキル、シクロアルキル、ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、シクロアルキルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール及びヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、各Ｒ７０は独立して水素又はＲ６０であり、各Ｒ８０は独立してＲ７０であるか、あるいは２つのＲ８０は、それらが結合している窒素原子と一緒になって、Ｏ、Ｎ及びＳ（このうちのＮは−Ｈ又はＣ１−Ｃ３アルキル置換を有し得る）からなる群から選択される１〜４個の同一又は異なる追加のヘテロ原子を場合により含んでいてもよい５−、６−又は７−員のヘテロシクロアルキルを形成し、各Ｍ＋は正味の単一の正電荷を有する対イオンである。各Ｍ＋は独立して、例えば、Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｌｉ＋のようなアルカリイオン、＋Ｎ（Ｒ６０）４のようなアンモニウムイオン、又は［Ｃａ２＋］０．５、［Ｍｇ２＋］０．５、もしくは［Ｂａ２＋］０．５のようなアルカリ土類イオンであり得る（「下付の０．５は、かかる二価のアルカリ土類イオンの対イオンの一方が本発明の化合物のイオン化された形態であって、他方が塩素のような典型的な対イオンであることができるか、又は本明細書に開示されている２つのイオン化された化合物がかかる二価のアルカリ土類イオンの対イオンとして機能することができるか、又は本発明の二重にイオン化された化合物がかかる二価のアルカリ土類イオンの対イオンとして機能することができるということを意味する）。具体例として、−ＮＲ８０Ｒ８０は−ＮＨ２、−ＮＨ−アルキル、Ｎ−ピロリジニル、Ｎ−ピペラジニル、４Ｎ−メチル−ピペラジン−１−イル及びＮ−モルホリニルを包含することを意味する。
【００６９】
本明細書中の開示に加えて、「置換された」アルケン、アルキン、アリール及びヘテロアリール基中の不飽和炭素原子上の水素の置換基は、特に断らない限り、−Ｒ６０、ハロ、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｎ３、−ＳＯ２Ｒ７０、−ＳＯ３−Ｍ＋、−ＳＯ３Ｒ７０、−ＯＳＯ２Ｒ７０、−ＯＳＯ３−Ｍ＋、−ＯＳＯ３Ｒ７０、−ＰＯ３−２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−ＣＯ２−Ｍ＋、−ＣＯ２Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣＯ２−Ｍ＋、−ＯＣＯ２Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０ＣＯ２−Ｍ＋、−ＮＲ７０ＣＯ２Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及びＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここでＲ６０、Ｒ７０、Ｒ８０及びＭ＋は既に定義された通りであるが、但し置換されたアルケン又はアルキンの場合、置換基は−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、又はＳ−Ｍ＋ではない。
【００７０】
本明細書で個々の用語に関して開示されている基に加えて、「置換された」ヘテロアルキル及びシクロヘテロアルキル基中の窒素原子上の水素の置換基は、特に断らない限り、−Ｒ６０、−Ｏ−Ｍ＋、−ＯＲ７０、−ＳＲ７０、−Ｓ−Ｍ＋、−ＮＲ８０Ｒ８０、トリハロメチル、−ＣＦ３、−ＣＮ、−ＮＯ、−ＮＯ２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ７０、−Ｓ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｒ７０、−ＯＳ（Ｏ）２Ｏ−Ｍ＋、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７０、−Ｐ（Ｏ）（Ｏ−）２（Ｍ＋）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）Ｏ−Ｍ＋、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７０）（ＯＲ７０）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｓ）Ｒ７０、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＯＣ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）Ｒ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｓ）ＯＲ７０、−ＮＲ７０Ｃ（Ｏ）ＮＲ８０Ｒ８０、−ＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）Ｒ７０及びＮＲ７０Ｃ（ＮＲ７０）ＮＲ８０Ｒ８０であり、ここでＲ６０、Ｒ７０、Ｒ８０及びＭ＋は既に定義された通りである。
【００７１】
本明細書中の開示に加えて、ある特定の実施形態において、置換されている基は１、２、３、もしくは４個の置換基、１、２、もしくは３個の置換基、１もしくは２個の置換基、又は１個の置換基を有する。
【００７２】
上記定義の全ての置換された基で、さらなる置換基を有する置換基を自分自身に規定することによって到達するポリマー（例えば、置換アリール基でさらに置換されている置換アリール基で自身が置換されている置換基として置換アリール基を有する置換アリール、等）は、本発明に包含されることは意図されてないことと理解されたい。かかる場合、かかる置換の最大数は３である。例えば、特に本発明で考えられる置換アリール基の連続置換は置換アリール−（置換アリール）−置換アリールに限られる。
【００７３】
特に断らない限り、本明細書中に明白に定義されていない置換基の命名法は、官能基の末端部分に続いて結合点に向かって隣接する官能基を命名することによって達せられる。例えば、置換基「アリールアルキルオキシカルボニル」は基（アリール）−（アルキル）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−をいう。
【００７４】
１つ以上の置換基を含有する本明細書に開示されているあらゆる基に対して、当然、かかる基は立体的に実行不可能及び／又は合成的に実現不可能ないかなる置換又は置換パターンも含有しないと理解される。さらに、主題化合物はこれらの化合物の置換で生じる全ての立体化学異性体を包含する。
【００７５】
本発明の化合物は１つ以上の不斉中心を含有することがあり、したがって、鏡像異性体、ジアステレオマー、及びその他の、絶対立体化学により（Ｒ）−もしくは（Ｓ）−又はアミノ酸の場合（Ｄ）−もしくは（Ｌ）−として定義することができる立体異性体を生じ得る。本発明は、かかる可能な異性体、ならびに、それらのラセミ体及び光学的に純粋な形態を全て包含することを意図している。光学的に活性な（＋）及び（−）、（Ｒ）−及び（Ｓ）−、又は（Ｄ）−及び（Ｌ）−異性体はキラルシントンもしくはキラル試薬を用いて製造することもできるし、又は逆相ＨＰＬＣのような慣用の技術を用いて分割することもできる。本明細書に記載の化合物がオレフィン性二重結合又はその他の幾何学的非対称中心を含有する場合、特に断らない限り、これら化合物にはＥ及びＺ幾何異性体の両方が包含されることが意図されている。同様に、全ての互変異性形態も包含されることが意図されている。
【００７６】
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形態「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」は、前後関係から明らかに他が示されない限り複数の場合を含むことに留意されたい。さらに、特許請求の範囲は、任意の要素を除外して記載されていることにも留意されたい。したがって、この陳述は、特許請求の範囲の要素の引用に関して「専ら」、「唯一」などのような排他的な用語の使用、又は「負の」限定の使用に対する先行詞となることが意図されている。
【００７７】
その他の用語の定義は本明細書を通じて明らかにされよう。
【００７８】
［代表的な実施形態の詳細な説明］
上に要約されたように、検体の誘導体化及びソフトイオン化の方法が提供される。これらの方法は、検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合によって接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させるステップと、ソフトイオン化条件下で解離可能な結合を選択的に切断して、擬似分子検体基を含む主要な第１の断片化生成物及び脱離基を含む第２の断片化生成物を生成させるステップとを含んでいる。この方法はさらに、第１及び第２の断片化生成物を質量分析計で分析して、擬似分子検体基に対応するイオンを同定することを含んでいてもよい。また、クロマトグラフィー−質量分析（例えば、ＧＣ−ＭＳ）を用いて検体を検出する方法も提供される。これらの方法は、試料の質量分光分析が望まれる様々な用途で使用される。
【００７９】
本発明をより詳細に説明する前に、本発明が記載される特定の実施形態に限定されることはなく、したがって当然であるが変化し得ると理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明する目的だけのためのものであって、限定することを意図していないことと了解されたい。すなわち、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。
【００８０】
ある範囲の値が挙げられている場合、その範囲の上限と下限の間の、前後関係から明らかに他が示されない限りその下限の１０分の１の単位で、間にある各々の値、及びその述べられている範囲内のその他述べられている又は間にあるあらゆる値が本発明に包含されると理解される。
【００８１】
本明細書で引用された全ての刊行物及び特許は、各個々の刊行物又は特許が特に個別に参照により組み込まれると示されており、その刊行物等が引用されている関連の方法及び／又は材料を開示し説明するために参照により本明細書に組み込まれているかのように、本明細書に組み込まれる。ある刊行物の引用は出願日前のその開示のためであり、本発明が先発明の点でかかる刊行物に先行されることを認めるものと解されてはならない。さらに、提供されている刊行物の日付は別途確認される必要がある現実の刊行物の日付とは異なるかもしれない。
【００８２】
本明細書中に提供される見出しは、本発明の様々な態様又は実施形態を限定するものではない。したがって、すぐ下に定義される用語は本明細書全体を参照してより十分に定義される。
【００８３】
＜検体の誘導体化及びソフトイオン化の方法＞
検体の誘導体化及びソフトイオン化の方法が提供される。本発明の態様は、対象の検体を含むか、又は含むと疑われる試料を誘導体化剤と接触させることを含む。一般的にいって、対象の検体は本方法に従って誘導体化剤との反応で修飾検体を生成させることによって誘導体化される。誘導体化剤及び検体上のその反応の特定の部位（すなわち、反応部位）は、得られる修飾検体中に解離可能な結合が作られるように選択することができる。解離可能な結合は修飾検体の第１の基と第２の基を接続し、本方法のソフトイオン化条件下で優先的に断片化される。場合によって、修飾検体の第１の基は擬似分子検体基といわれ、第２の基は脱離基といわれ、この擬似分子検体基と脱離基は解離可能な結合を介して接続されている。
【００８４】
場合によって、解離可能な結合は誘導体化反応の生成物として検体の反応部位に作られる。幾つかの場合、解離可能な結合は反応部位に作られないが、誘導体化剤に由来する付加された基の一部として反応部位に隣接する位置に設けられる。
【００８５】
本明細書で使用するとき、用語「擬似分子」とは、その構造が当該部分の由来である対象の検体に特徴的な部分、例えば、使用される誘導体化の特定の方法及び誘導体化剤から予測可能な構造をいう。例えば、擬似分子イオンは、質量スペクトルにおいて、試料中の検体の存在を間接的に示す代用物として使用することができるｍ／ｚピークを有し得る。リナロールペンタメチルジシリルエーテルに変換され、ソフトイオン化条件下の質量分析計で断片化された検体リナロールに特徴的な２１１というｍ／ｚを有する擬似分子基の一例はスキーム５に描かれている。
【００８６】
本明細書で使用するとき、用語「擬似分子検体基」とは、任意の都合のよい修飾検体の断片であって、その質量が、由来元の親の検体の特徴的な質量である断片をいう。場合によって、擬似分子検体基は親の検体より小さい質量を有する。ときに、擬似分子検体基は親の検体より大きい質量を有し、例えば、リンカー及び／又は解離可能な結合の一部である基を含んでいる。
【００８７】
擬似分子検体基は検体に特徴的な構造上の特徴を有しており、その特徴は特定の誘導体化剤及び化学及び反応部位に基づいて予測可能である。場合によって、擬似分子検体基は検体より大きいＭＷを有する。場合によって、擬似分子検体基は検体のＭＷより１ダルトン小さいＭＷを有する（すなわち、ｍ−Ｈ）。
【００８８】
本明細書で使用するとき、用語「脱離基」及び「不安定な基」は修飾検体と関連して使用されるときは同義に用いられ、本明細書に記載されているソフトイオン化条件に従う解離可能な結合の切断中に放出される修飾検体の断片をいい、これは誘導体化剤に由来しており、検体の特徴である構造上の特徴を含んでいる。脱離基の大きさ及び性質は、脱離基がその後の擬似分子検体基の感受性の検出及び分析と適合するように選択され得る。本方法のソフトイオン化条件下で脱離基はイオン化及び分析の方法に応じてラジカル、カチオン、アニオン、中性種のようないかなる都合のよい電荷又は形態を有していてもよいことが理解される。１つの代表的な脱離基は、スキーム５に描かれている修飾検体から除去されるトリアルキルシリル基である。ある特定の実施形態において、脱離基は８０Ｄａ以下、６０Ｄａ以下、又はそれ以下のような１００Ｄａ以下のＭＷを有する。
【００８９】
修飾検体は、（例えば、分子の他の共有結合と比較して）解離可能な結合での選択的な断片化により２つの断片化生成物、例えば修飾検体の第１及び第２の基を放出するように偏っている。解離可能な結合は分子内の他の共有結合、例えば検体に固有のＨを含有しない共有結合より低い結合エネルギーを有し得る。場合によって、解離可能な結合は検体のあらゆる他の結合（例えば、Ｃ−Ｃ結合のようなＨを含有しない共有結合）の結合エネルギーより少なくとも１０％低い、例えば少なくとも２０％低い、少なくとも３０％低い、少なくとも４０％低い又は少なくとも５０％低い結合エネルギーを有する。選択的な断片化は、解離可能な結合を切断するのに十分であるが、得られる生成物のさらなる有意な断片化には至らないエネルギーを提供するソフトイオン化条件の下で達成され得る。場合によって、選択的な断片化は質量分析計で、例えば電子衝撃イオン化条件下で行われて、電荷をもった断片を生成する。
【００９０】
一般的にいって、選択的な断片化では、修飾検体の擬似分子検体基に対応する第１の断片化生成物、及び脱離基に対応する第２の断片化生成物が生成する。分子の、例えば質量分析計における断片化は、利用する修飾検体、方法、機器及び／又はイオン化条件に応じて様々な生成物種を生成させることができると理解され、例えば、生成物種には、限定されることはないが、カチオン、アニオン、イオンラジカル、プロトン化イオン、脱プロトン化イオン、中性ラジカル、脱水和種、等が含まれる。その後断片化生成物の質量分光分析を行うことができる。場合によって、第１の断片化生成物は質量分光分析の主要なイオン生成物であり、検体の特徴であるイオンピークを提供する。
【００９１】
場合によって、その後断片化生成物の質量分光分析を行って、試料中に存在する検体に対応する擬似分子イオンを同定することができる。誘導体化剤内の任意の都合のよい位置に同位体ラベルを含ませて断片化生成物の分析を容易にしてもよい。
【００９２】
本発明のある特定の態様をさらに例示するために、以下に具体例を挙げる。
【００９３】
＜検体＞
用語「検体」とは、試料の既知又は未知の成分をいう。場合によって、検体は環境汚染物質、例えば農薬又は薬物のような小さい（例えば、５００Ｄａ以下のような１０００Ｄａ以下の）有機化合物である。場合によって、検体は生体高分子、すなわち、オリゴヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、抗体、糖、などのようなオリゴマー又はポリマーである。試料中の成分は本明細書中で「検体」と呼ばれる。多くの実施形態において、試料は少なくとも約１０、５０、１０２、５×１０２、１０３、５×１０３、１０４、５×１０４、１０５、５×１０５、１０６、５×１０６、１０７、５×１０７、１０８、１０９、１０１０、１０１１、１０１２以上の種の検体を含有する複雑な試料である。
【００９４】
（例えば、本明細書に記載されているような）誘導体化剤との反応を介する化学選択的な修飾又は誘導体化が可能な官能基を含むあらゆる都合のよい検体を本方法に従って分析することができる。誘導体化剤は対象の検体の特定の反応部位で化学選択的に反応することができる。場合によって、反応部位はＯ、Ｎ、Ｓｉ、Ｓ、Ｐ又はハロゲン原子のようなヘテロ原子を含む検体の官能基であって、誘導体化剤との化学選択的な反応が可能な官能基である。本方法に従って誘導体化して解離可能な結合を生成させることができる対象の官能基として、限定されることはないが、ヒドロキシル、アミノ（例えば、第一級又は第二級アミノ基）、チオール、カルボン酸、ケト（例えば、アルデヒド又はケトン基）、エステル、などがある。ある特定の場合、官能基はヒドロキシルである。ある特定の実施形態において、官能基と誘導体化剤の反応により、検体の反応部位に解離可能な結合が作られる。場合によって、ヘテロ原子は求核性官能基の一部であり、誘導体化反応によってヘテロ原子と誘導体化剤との間に解離可能な結合である共有結合が作られる。ある特定の場合、解離可能な結合は誘導体化剤に由来する付加される基の隣接する部位に作られる。
【００９５】
場合によって、検体は求電子性官能基を含み、誘導体化剤による誘導体化は反応部位での求核置換を含み、その後続いて検体の置換基を放出する。ある特定の実施形態において、誘導体化剤は求核試薬である。場合によって、検体はハロゲン置換アルキル基を含み、誘導体化剤は反応によりハライド基を放出するチオール、ヒドラジド、ヒドラジン、ヒドロキシル又はアミノのような親核剤を含む。
【００９６】
場合によって、検体又は標的検体は質量分析計で検出することができる都合のよい対象分子を含むことができる。標的検体は臨床化学、医学、獣医学、法化学、薬理学、食品産業、労働安全性、及び環境汚染の１つ以上で興味深い可能性がある。場合によって、標的検体は少なくとも１個の炭素原子、例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個以上の炭素原子を含む有機分子である。標的検体は１，０００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、又は１５個までの炭素原子を含むことができる。
【００９７】
目的の臨床化学標的検体は生体（例えば、人体、動物体、菌類、細菌、ウィルス、など）に存在する任意の有機化合物を包含し得る。例えば、臨床化学標的検体には、限定されることはないが、ヌクレオシド−塩基（例えば、アデニン、シチジン、グアニン、チミン、ウラシル）、それらの類似体（例えば、７−デアザグアニン）、及び誘導体（例えば、一、二、三リン酸エステル又は環状リン酸エステル）、ホルモン（例えば、ステロイドホルモン）、アミノ酸、タンパク質（例えば、脳性ナトリウム利尿ペプチド）、代謝産物（例えば、クレアチニン、ビリルビン）、心臓マーカー（例えば、クレアチンキナーゼ−ＭＢ）、肝臓マーカー（例えば、アスパラギン酸トランスアミナーゼ）、神経伝達物質（例えば、ＧＡＢＡ、グリシン、生体アミン（例えば、ドーパミン、ノルエピネフリン、エピネフリン、ヒスタミン、セロトニン）、アセチルコリン、アデノシン、アナンドアミド）、薬物及びそれらの代謝産物（例えば、鎮静剤、トランキライザー、降圧剤、麻酔薬）が含まれる。
【００９８】
目的のヒト医学及び獣医学標的検体は、対象の疾患又は状態の診断、予防又は治療に使用することができるあらゆる有機化合物を包含し得る。例えば、ヒト医学及び獣医学標的検体には、限定されることはないが、疾病マーカー（例えば、腫瘍関連抗原）、紫外線遮断薬、造影剤、予防又は治療薬（例えば、アレルゲン、抗生物質、抗真菌剤、抗菌剤、抗ヒスタミン剤、抗腫瘍剤、鎮痛剤、食欲抑制剤、駆虫剤、抗けいれん剤、抗うつ薬、抗糖尿病薬、下痢止め薬、抗ヒスタミン薬、抗炎症剤、抗片頭痛製剤、制吐剤、抗パーキンソン症剤、かゆみ止め薬、抗精神病薬、解熱剤、けいれん防止薬、抗コリン作用薬、交感神経作動薬、キサンチン誘導体、心臓血管作用剤、例えばカルシウムチャンネル遮断薬、β遮断薬、抗不整脈剤、降圧薬、利尿薬、血管拡張薬、ＣＮＳ刺激剤、感冒薬、抗鼻炎薬、ホルモン、催眠剤、免疫抑制薬、防虫剤、筋弛緩薬、副交感神経遮断薬、副交感神経作動薬、精神刺激薬、鎮静剤、トランキライザー、生理学的に活性なペプチド及びタンパク質）がある。
【００９９】
目的の法化学標的検体は、被害者の身体からの試料（例えば、組織又は流体試料、毛髪、血液、精液、尿、など）のような犯罪の場で採取された試料中に存在するあらゆる有機化合物を包含し得る。例えば、臨床化学標的検体には、限定されることはないが、毒物、薬物及びそれらの代謝産物（例えば、鎮静剤、トランキライザー、降圧剤、及び麻酔薬）、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、農薬、天然産物、汚染物質、及び工業用化合物がある。
【０１００】
目的の薬理学標的検体は、医薬又はその代謝産物であるか、又は薬物の設計、合成、及び監視に使用することができるあらゆる有機化合物を包含し得る。例えば、薬理学標的検体には、限定されることはないが、予防及び／又は治療薬、それらのプロドラッグ、中間体及び代謝産物がある。
【０１０１】
目的の食品産業及び農業の標的検体は、食品、飲料、及び／又はその他の食品産業／農業産物の安全性の監視に関連があるあらゆる有機化合物を包含し得る。食品産業分野に由来する標的検体の例には、限定されることはないが、ステロイド、可塑剤、病原体マーカー、農薬、殺菌剤、汚染物質、アレルゲン（例えばグルテン及びナッツタンパク質）、マイコトキシン及び魚介毒、ならびに抗生物質（例えば、エビのクロラムフェニコール）がある。
【０１０２】
目的の職場安全性標的検体は職場に存在する可能性がある潜在的に有害なあらゆる有機化合物を包含し得る。例えば、職場安全性標的検体には、限定されることはないが、溶媒、低揮発性物質、汚染物質、発癌性物質、毒素、農薬、殺菌剤、及び（例えば、事務所、政府、規制、又は行政機関により）職業曝露限度が設定されているあらゆる有機物質がある。
【０１０３】
目的の環境汚染（又は産業）標的検体は環境（例えば、環境中の生物）にとって有害な可能性があるあらゆる有機化合物を包含し得る。例えば、環境汚染（又は産業）標的検体には、限定されることはないが、持続性有機汚染物質（例えば、アルドリン、クロルデン、ＤＤＴ、ディルドリン、エンドリン、ヘプタクロル、ヘキサクロロベンゼン、マイレックス、ポリ塩化ビフェニル、ポリ塩化ジベンゾ−ｐ−ダイオキシン、ポリ塩化ジベンゾフラン、及びトキサフェン）、多環式芳香族炭化水素（例えば、ベンズ［ａ］アントラセン及びクリセン）、揮発性有機化合物、ならびに環境生体異物（例えば、鎮痛剤、例えばアセトアミノフェン、アセチルサリチル酸、ジクロフェナク、コデイン、イブプロフェン、抗生物質、例えばマクロライド抗生物質、スルホンアミド、フルオロキノロン、クロラムフェニコール、チロシン、トリメトプリム、エリスロマイシン、リンコマイシン、スルファメトキサゾール、トリメトプリム、抗けいれん剤、例えばカルバマゼピン、プリミドン、β遮断薬、例えばメトプロロール、プロパノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、ナドロール、Ｘ線造影剤、例えばイオプロミド、イオパミドール、イオヘキシル、ジアトリゾ酸、細胞増殖抑制剤、ステロイド及びホルモン、例えば１７．アルファ．−エチニルエストラジオール、メストラノール、１９−ノルエチステロン）が含まれる。対象の検体はまた無機検体（例えば、リン化合物、ケイ素化合物、無機ポリマー、など）も含む。また対象の検体は油及び石油化学製品（例えば、鉱油など）も含む。
【０１０４】
対象の標的検体として、限定されることはないが、アミノ酸（例えば、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、Ｔｒｐ、Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、セレノシステイン、オルニチン、シトルリン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシプロリン、メチルリジン、カルボキシグルタミン酸）、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ペプチド−核酸、砂糖、単糖類、二糖類、オリゴ糖類、多糖類、デンプン、複合糖質、脂質、脂肪酸、脂肪、複合脂質、ステロイド、ビタミン（Ａ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｂ９、Ｂ１２、Ｃ、Ｄ、Ｄ２、Ｅ、Ｆ、Ｋ、Ｋ１、Ｋ２）、ホルモン（例えば、ペプチドホルモン（例えば、ＴＲＨ及びバソプレッシン）、脂質ホルモン（例えば、ステロイドホルモン及びエイコサノイド）、芳香族アミノ酸に由来するモノアミン（例えば、チロキシン及びアドレナリン））、アンドロゲン（例えば、アナボリックステロイド、アンドロステンジオン、デヒドロエピアンドロステロン、ジヒドロテストステロン、テストステロン）、エストロゲン（例えば、エストラジオール、エストリオール、エストロン、１７．アルファ．−エチニルエストラジオール、メストラノール）、黄体ホルモン作用物質（例えば、プロゲステロン、１９−ノルエチステロン）、プロゲスチン（例えば、ノルエチンドロン、ノルエチノドレル、酢酸ノルエチンドロン、エチノジオールジアセテート、レボノルゲストレル、ノルエチステロン、ノルゲストレル、デソゲストレル、ゲストデン、ノルゲスチメート、ドロスピレノン、ジエノゲスト、ドロスピレノン、ネストロン（ｎｅｓｔｏｒｏｎｅ）、ノメゲストロール酢酸エステル及びトリメゲストン（ｔｒｉｍｅｇｅｓｔｏｎｅ））、ステロイド、例えば、昆虫ステロイド（例えば、エクジステロン）、脊椎動物ステロイド（例えば、性ステロイド／ホルモン、コルチコステロイド（例えばグルココルチコイド及びミネラロコルチコイド（例えば、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ハルシノニド、ベタメタゾン、デキサメタゾン、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン−１７−酪酸エステル、ヒドロコルチゾン−１７−吉草酸エステル、プロピオン酸アルクロメタゾン（ａｃｌｏｍｅｔａｓｏｎｅ）、フルニソリド、プロピオン酸ベクロメタゾン））、アナボリックステロイド（例えば、テストステロン、ノルテストステロン、及びそれらの誘導体（例えば、１７−アルファ位でのアルキル化（例えばメチル又はエチル）、又は１７−ベータ位でのエステル化））、コレステロール及びその誘導体（例えば、オキシステロール及び胆汁酸））、植物ステロイド（例えば、植物ステロール及びブラシノステロイド（例えば、ベータ−シトステロール、カンペステロール、スチグマステロール、ブラシカステロール））、菌類ステロイド（例えばエルゴステロール）、工業用ポリマー（例えばポリ塩化ビニル、ポリエチレンテレフタレート、ポリアクリルアミド）及びそれらのモノマー、小さい有機分子、例えば薬物及び薬物様分子又はその断片がある。
【０１０５】
幾つかの実施形態において、対象の標的検体には、ステロイド（場合によってステロイドホルモン又は性ホルモン、例えばテストステロン、コルチゾール、エストロン、エストラジオール、１７−ＯＨ−プロゲステロン又はアルドステロン）、免疫抑制薬（例えば、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、エベロリムス、又はミコフェノール酸）、甲状腺マーカー（例えば、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、サイログロブリン、トリヨードチロニン（Ｔ３）、遊離のＴ３、チロキシン（Ｔ４）、遊離のＴ４、又はフェリチン）、ビタミン又はその代謝産物（例えば、ビタミンＤ２又はビタミンＤ３の２５−ヒドロキシ−、１，２５−ジヒドロキシ−又は２４，２５−ジヒドロキシ−形態）、心臓マーカー（例えば、トロポニン又は脳性ナトリウム利尿ペプチド）、アルファ−フェトプロテイン、アポリポタンパク質（ａｐｐｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ）、又は乱用薬物（例えば、ヒドロモルフォン、その他のオピオイド（ｏｐｉｏｄ）薬、又は治療薬）が含まれる。
【０１０６】
＜誘導体化試薬＞
本開示の様々な態様は、試料中の対象検体と化学選択的に反応して修飾検体を生成する誘導体化剤を含む。いかなる都合のよい誘導体化剤及び方法も本方法で利用できる。場合によって、誘導体化剤は対象検体の特定の反応部位で化学選択的に反応する化学試薬である。
【０１０７】
場合によって、擬似分子検体基と誘導体化剤との間の反応部位に生成する共有結合は解離可能な結合である。場合によって、誘導体化剤は式（Ｉ）
Ｘ−Ｚ１−Ｄ
（Ｉ）
［式中、
Ｄは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択され、
Ｚ１は、Ｏ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここで各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルであり、
Ｘは、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）、トリフレート、メシレート、等のような、置換反応の化学脱離基である］
を有する。ある特定の実施形態において、Ｚ１はＳｉＲ２である。場合によって、Ｘ−Ｚ１−Ｄはシリル試薬である。誘導体化剤は検体と反応して解離可能な結合（例えば、本明細書に記載されているようなＹ１−Ｚ１）を生成することができる。
【０１０８】
ある特定場合には、擬似分子検体基と誘導体化剤との間の反応部位に生成する共有結合は比較的安定な結合であり、誘導体化剤自体が、得られる修飾検体内で反応部位に隣接する位置に作られる潜在的な解離可能な結合を有する基を含んでいる。ある特定場合には、誘導体化剤は式（ＩＩ）
Ｘ−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（ＩＩ）
［式中、
Ｄは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択され、
Ｙ１−Ｚ１は、解離可能な結合を含み、ここでＹ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここで各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルであり、
Ｌ１は、任意選択のリンカー（例えば、共有結合、ヘテロ原子、又は連結基）であり、
Ｘは、ハロゲン（例えば、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）、トリフレート、メシレート、等のような、置換反応の化学脱離基である］
を有する。場合によって、Ｘ−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄはジシリル試薬である。
【０１０９】
ある特定の場合には、誘導体化剤は式（ＩＩＩ）
Ｈ−Ｙ２−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（ＩＩＩ）
［式中、
Ｄは、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択され、
Ｙ１−Ｚ１は、解離可能な結合を含み、ここで、場合によって、Ｙ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここで各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルであり、
Ｌ１は、任意選択のリンカー（例えば、共有結合、ヘテロ原子、又は連結基）であり、
ＨＹ２は、アミノ、ヒドロキシル又はチオールのような求核性官能基である］
を有する。
【０１１０】
ある特定の場合には、誘導体化剤は式（ＩＶ）
Ｈ−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（ＩＶ）
（式中、ＤはＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択され、
Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含んでおり、ここでＹ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここで各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルである）
を有する。
【０１１１】
ある特定の場合の誘導体化剤において、Ｙ１はＮＨ、Ｏ又はＳである。ある特定の場合の誘導体化剤において、Ｙ２はＮＨ、Ｏ又はＳである。ある特定の場合の誘導体化剤において、Ｙ１−Ｚ１はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合を含む。
【０１１２】
ある特定の場合には、検体は求電子性官能基を含んでおり、誘導体化剤による誘導体化は反応部位での求核置換を含み、その後検体の置換基を放出する。ある特定の実施形態において、誘導体化剤は求核試薬である。幾つかの場合、検体はハロゲン置換アルキル基を含み、誘導体化剤は反応してハライド基を放出するチオール、ヒドラジド、ヒドラジン、ヒドロキシル又はアミノのような親核剤を含む。
【０１１３】
ある特定の実施形態において、解離可能な結合はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合から選択される。解離可能な結合を含むことができるいかなる都合のよい官能基又は保護された官能基及びかかる基を作製する方法も本方法での使用に適合させられる。本方法に従って誘導体化して解離可能な結合を生成させることができる対象の官能基としては、限定されることはないが、ヒドロキシル、アミノ（例えば、第一級又は第二級アミノ基）、チオール、カルボン酸、ケト（例えば、アルデヒド又はケトン基）がある。対象の保護された官能基、試薬及び方法には、Ｇｒｅｅｎｅ及びＷｕｔｓにより“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，ｆｉｆｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２０１４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓに記載されているものが包含される。
【０１１４】
幾つかの実施形態において、誘導体化剤はアミノ反応性剤、チオール反応性剤、ヒドロキシル反応性剤、酸反応性剤、ケト反応性剤及び求核性ハロアルキル反応性剤から選択される。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はアミノ反応性剤である。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はチオール反応性剤である。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はヒドロキシル反応性剤である。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はカルボン酸（ｃａｒｏｂｘｙｌｉｃ  ａｃｉｄ）反応性剤である。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はケト反応性剤である。ある特定の実施形態において、誘導体化剤は求核性ハロアルキル反応性剤である。対象のヒドロキシル反応性剤には、限定されることはないが、シリル試薬、アシル試薬などがある。
【０１１５】
ある特定の実施形態において、誘導体化剤はシリル試薬である。ある特定の実施形態において、シリル試薬はヒドロキシル反応性剤である。ある特定の実施形態において、シリル試薬はチオール反応性剤である。ある特定の実施形態において、シリル試薬はカルボン酸反応性剤である。ある特定の実施形態において、シリル試薬はアミノ反応性剤である。
【０１１６】
ある特定の場合には、シリル試薬はトリアルキルシリル試薬である。対象のシリル試薬には、限定されることはないが、トリメチルシリル試薬（例えば、トリメチルシリルジエチルアミン、（Ｍｅ３Ｓｉ）２Ｏ、（Ｍｅ３Ｓｉ）２ＮＨ又はＭｅ３ＳｉＣｌ）、トリエチルシリル試薬（例えば、Ｅｔ３ＳｉＣｌ、トリエチルシリルトリフレート、シアン化トリエチルシリル、過塩素酸トリエチルシリル、トリエチルシラン、又はトリエチルシリルジエチルアミン）、トリイソプロピルシリル試薬（例えば、ＴＩＰＳＣｌ、ＴＩＰＳＨ、又はＴＩＰＳＯＴｆ）、ジメチルイソプロピルシリル試薬（例えば、（ｉ−ＰｒＭｅ２Ｓｉ）２ＮＨ又はｉ−ＰｒＭｅ２ＳｉＣｌ）、ジエチルイソプロピルシリル試薬（例えば、ジエチルイソプロピルシリルクロリド又はトリフレート）、及びそのジシリル型［例えば、一般式Ｒ３ＳｉＳｉＲ２Ｘ（式中、各Ｒは独立してＨ、アルキル又は置換アルキルであり、Ｘはクロリド、ジエチルアミン、トリフレート又はＨであり、例えば、ペンタメチルジシリルクロリドである）のジシリル試薬］がある。本明細書に記載されているシリル試薬のいずれも、本方法において検体の都合のよいヒドロキシル官能基を誘導体化して、シリルエーテル共有結合、例えば、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、ジメチルイソプロピルシリルエーテル、ジエチルイソプロピルシリルエーテルを生成させるのに利用することができる。ある特定の場合には、生成するシリルエーテル共有結合は解離可能な結合である。
【０１１７】
ある特定の場合には、生成するシリルエーテル共有結合は比較的安定であり、誘導体化剤はさらに潜在的な解離可能な結合、例えば、Ｓｉ−Ｓｉ解離可能な結合を含む。誘導体化剤はジシリル試薬であってもよい。ある特定の実施形態において、誘導体化剤は式（Ｖ）
Ｒ３ＳｉＳｉＲ２Ｘ
（Ｖ）
［式中、各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル（例えば、トリアルキルシリル）又は置換シリルであり、Ｘは水素、ハロゲン（例えば、クロロ、ヨード、ブロモ又はフルオロ）、トリフレート、メシレート、アミノ（例えば、ジエチルアミン）、シアノ又はペルクロレートである］
を有する。
【０１１８】
式（Ｖ）のある特定の実施形態において、各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アリール又は置換アリールである。式（Ｖ）のある特定の実施形態において、各Ｒは独立してアルキル又は置換アルキルである。式（Ｖ）のある特定の実施形態において、各Ｒは独立してメチル、エチル、イソプロピル又はブチルである。式（Ｖ）のある特定の実施形態において、各Ｒはメチルである。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はペンタメチルジシリルクロリドである。
【０１１９】
ある特定の実施形態において、誘導体化剤は式（ＶＩ）
【化１】
2017067779.tif 000002
［式中、各Ｒ１は独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アリール又は置換アリールであり、Ｘは式（Ｖ）で定義されている通りである］
を有する。式（ＶＩ）のある特定の実施形態において、各Ｒ１は独立してアルキル又は置換アルキルである。式（ＶＩ）のある特定の実施形態において、各Ｒ１は独立してメチル、エチル、イソプロピル又はブチルである。式（ＶＩ）のある特定の実施形態において、各Ｒ１はメチルである。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はトリス（トリメチルシリル）シリルクロリドのようなトリス（トリメチルシリル）シリル試薬である。
【０１２０】
本誘導体化試薬は、分子内の特定の位置に１個以上の同位体標識された原子を含ませて、これらの同位体標識された原子が誘導体化試薬の残部の一部として誘導体化反応のいずれかの修飾検体生成物中に組み込まれるように設計することができる。かかる同位体標識は、質量分析による検体の分析において、例えばこの同位体標識を示す化学種のみを選択するためにデータ依存性獲得パラメーターとして使用することができる。同位体標識は検体の質量分光分析で有用であろう。この同位体標識はハロゲン（１若しくは２個の臭素又は塩素原子）の使用によって、又は炭素、水素、窒素、酸素、リン及び／又は硫黄の重同位体を用いて組み込むことができる。
【０１２１】
修飾検体
上で要約されたように、誘導体化剤は対象検体の特定の反応部位で化学選択的に反応することができる。ある特定の場合には、反応部位は、Ｏ、Ｎ、Ｓｉ、Ｓ、Ｐ又はハロゲン原子のようなヘテロ原子を含む検体の官能基であり、この官能基は誘導体化剤との化学選択的な反応が可能である。ある特定実施形態において、官能基と誘導体化剤の反応により、検体の反応部位に解離可能な結合が作られる。ある特定の場合には、ヘテロ原子は求核性官能基の一部であり、誘導体化反応によりヘテロ原子と誘導体化剤との間に共有結合が生成する。場合によって、解離可能な結合は反応部位、又は修飾検体内の反応部位に隣接する位置に作られる。
【０１２２】
場合によって、修飾検体は、誘導体化剤に由来する第２の基に解離可能な結合を介して接続された、検体に由来する第１の基を含み、第１の基は誘導体化剤に由来するリンカーを場合により含んでいてもよい。幾つかの実施形態において、修飾検体は式（ＶＩＩ）
Ａ−Ｌ−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（ＶＩＩ）
［式中、
Ａは、検体に由来し、
Ｄは、誘導体化剤に由来し、Ｈ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択され、
Ｙ１−Ｚ１は、解離可能な結合を含み、ここでＹ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここで各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルであり、
Ｌは、誘導体化剤（ｄｅｒｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ）に由来する任意選択のリンカー（例えば、共有結合、ヘテロ原子、又は連結基）である］
を有する。式（ＶＩＩ）のある特定の場合、Ｙ１−Ｚ１はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合を含む。
【０１２３】
ある特定の場合には、Ｌ−Ｙ１−Ｚ１−Ｄは誘導体化剤に由来し、リンカーＬは検体の反応部位を介して検体に由来する基Ａと接続される。場合によって、リンカーＬは誘導体化反応中に形成される共有結合である。場合によって、Ｌは、誘導体化反応中に（例えば、アミド結合、エーテル結合、チオエーテル結合、エステル結合、等のような、都合のよい化学選択的な化学結合反応によって形成される共有結合を介して）検体に共有結合される連結基である。場合によって、Ｌは存在せず、Ａ−Ｙ１は検体に由来し、Ｚ１−Ｄは誘導体化剤に由来し、解離可能な結合Ｙ１−Ｚ１は誘導体化反応中に形成される。
【０１２４】
例えば、場合によって、修飾検体はスキーム１
【化２】
2017067779.tif 000003
（式中、Ａ−Ｙ１−Ｈは検体であり、Ｘ−Ｚ１−Ｄは誘導体化剤であり、Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含む）
に従って製造される。
【０１２５】
例えば、場合によって、修飾検体はスキーム２
【化３】
2017067779.tif 000004
（式中、Ａ−Ｙ２−Ｈは検体であり、Ｘ−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄは誘導体化剤であり、Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含む）
に従って製造される。
【０１２６】
例えば、場合によって、修飾検体はスキーム３
【化４】
2017067779.tif 000005
（式中、Ａ−Ｘは検体であり、Ｈ−Ｙ１−Ｚ１−Ｄは誘導体化剤であり、Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含む）
に従って製造される。
【０１２７】
例えば、場合によって、修飾検体はスキーム４
【化５】
2017067779.tif 000006
（式中、Ａ−Ｘは検体であり、Ｈ−Ｙ２−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄは誘導体化剤であり、Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含む）
に従って製造される。
【０１２８】
いかなる都合のよい化学選択的な化学も、上記スキーム１〜４で検体と誘導体化剤を結合するのに利用することができる。様々なスキームを使用して本明細書に記載の修飾検体に到達し得ることが理解される。ある特定の場合には、スキーム１〜４のいずれかの誘導体化反応は求核置換反応であり、Ｘは求核置換反応の慣用の脱離基（例えば、ハライド）であり、ＨＹ１又はＨＹ２はアミノ、ヒドロキシル又はチオールのような求核性官能基である。ある特定の場合には、スキーム１〜４のいずれか１つの誘導体化反応はシリル化反応である。場合によって、Ｘ−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄはジシリル試薬である。場合によって、Ｘ−Ｚ１−Ｄはシリル試薬である。ある特定の場合には、スキーム１〜４のいずれかの誘導体化反応はアシル化反応、例えば、アミノ基（ＨＹ２）と検体のカルボン酸基との間のアミド共有結合を形成する反応である。スキーム１〜４のある特定の場合、Ｙ１はＮＨ、Ｏ又はＳである。スキーム１〜４のある特定の場合、Ｙ２はＮＨ、Ｏ又はＳである。スキーム１〜４のある特定の場合、Ｙ２−Ｌは、例えば本明細書に記載されているようなリンカーである。
【０１２９】
様々な化学選択的な官能基及び生体共役結合方法が当業者に知られており、本修飾検体の製造及び検体の誘導体化の方法に使用できる。任意のかかる都合のよい基及び方法、例えば、Ｇ．Ｔ．Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，“Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ  Ｅｄ．，２００８に記載されているような基及び方法を本方法に使用できる。対象の検体又は誘導体化剤に使用できる化学選択的な官能基には、限定されることはないが、活性エステル、イソシアネート、イミドエステル、ヒドラジド、アミノ基、アルデヒド、ケトン、光反応性の基、マレイミド基、アルファ−ハロ−アセチル基、エポキシド、アジリジン（ａｚｉｒｄｉｎｅ）、アジド、アルキン、ホスフィン、などがある。
【０１３０】
本方法での使用に適合させられる誘導体化方法の例として、限定されることはないが、還元（酵素を使用してもしなくてもよい）、酸化（酵素を使用してもしなくてもよい）、アシル化（例えば、アセチル化）、アルキル化（例えば、メチル化）、加水分解（例えば、エステル、アミド、エポキシド基の加水分解）、付加（例えば、二重又は三重結合の水素添加）、縮合（例えば、イミン結合の生成）、脱離（例えば、還元的脱離又は水の脱離）、及び置換（例えば、求核置換又は求電子置換）がある。
【０１３１】
幾つかの実施形態において、修飾検体は式（ＶＩＩＩ）
Ａ−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（ＶＩＩＩ）
（式中、
Ａ−Ｙ１は検体に由来し、Ｚ１−Ｄは誘導体化剤に由来し、
Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含み、ここでＹ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２，Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シリル及び置換シリルであり、
ＤはＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択される）
を有する。
【０１３２】
式（ＶＩＩＩ）のある特定の場合、Ｙ１−Ｚ１はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合を含む。ある特定の場合には、Ｙ１−Ｚ１はＯ−ＳｉＲ２を含む。
【０１３３】
式（ＩＸ）のある特定の実施形態において、修飾検体は式を有する。
Ａ−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ）２−Ｄ
【０１３４】
ある特定の場合には、検体は求電子性官能基を含み、誘導体化剤による誘導体化は反応部位での求核置換を含み、その後検体の置き換えられる基が放出される。場合によって、検体はハロゲン置換アルキル基を含み、誘導体化剤はチオール、ヒドラジド、ヒドラジン、ヒドロキシル又はアミノのような親核剤を含む。場合によって、擬似分子検体基と誘導体化剤との間の反応部位に生成する共有結合は解離可能な結合である。ある特定の実施形態において、Ｙ１−Ｚ１はＣ−Ｓ、Ｃ−Ｏ又はＣ−Ｐ結合を含む。
【０１３５】
ある特定の場合には、擬似分子検体基と誘導体化剤との間の反応部位に生成する共有結合は比較的安定な結合であり、誘導体化剤自体が潜在的な解離可能な結合を含む。ある特定の実施形態において、解離可能な結合はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合から選択される。幾つかの実施形態において、修飾検体は式（Ｘ）
Ａ−Ｙ２−Ｌ１−Ｙ１−Ｚ１−Ｄ
（Ｘ）
［式中、
Ａ−Ｙ２は検体に由来し、Ｌ−Ｙ１−Ｚ１−Ｄは誘導体化剤に由来し、
Ｙ１−Ｚ１は解離可能な結合を含み、ここでＹ１及びＺ１は各々独立してＯ、Ｓ、Ｎ、ＮＲ、ＳｉＲ２、ＣＲ２、Ｃ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ又はＰＲであり、ここでＲはＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、シリル及び置換シリルであり、
Ｌ１は検体の官能基Ｙ２に接続されたリンカー（例えば、共有結合、ヘテロ原子又は連結基）であり、
ＤはＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、アシル及び置換アシルから選択される］
を有する。式（Ｘ）のある特定の場合、Ｙ２はＣ＝Ｏ、Ｃ＝Ｓ、Ｏ又はＮＲであり、ここでＲは上で定義された通りである。式（Ｘ）のある特定の場合、Ｙ１−Ｚ１はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合を含む。式（Ｘ）のある特定の場合、Ｙ２−Ｌは、例えば、本明細書に記載されているようなリンカーである。
【０１３６】
式（Ｘ）のある特定の実施形態において、Ｌ１は共有結合である。式（Ｘ）のある特定の実施形態において、Ｙ２はＯ又はＳである。式（Ｘ）のある特定の実施形態において、Ｙ１−Ｚ１はＳｉ−Ｓｉの解離可能な結合を含む。式（Ｘ）の幾つかの実施形態において、修飾検体は式（ＸＩ）
Ａ−Ｏ−ＳｉＲ２−ＳｉＲ２−Ｄ
（ＸＩ）
（式中、各Ｒは独立してＨ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アリール、置換アリール、複素環、置換複素環、シリル又は置換シリルである）
を有する。ある特定の場合には、各Ｒは独立してアルキル又は置換アルキルである。ある特定の場合には、各Ｒはメチルである。ある特定の場合には、誘導体化剤は検体のヒドロキシル基と反応してジシリルエーテルを生成するジシリル試薬である。
【０１３７】
＜解離可能な結合＞
本明細書に要約されているように、本修飾検体は擬似分子検体基と脱離基を接続する解離可能な結合を含んでいる。本明細書で使用するとき、「解離可能な結合」と関連して用語「解離可能」とは、選択的に断片化されて２つの生成物を生成することができる分子内の共有結合をいう。適切な断片化刺激により断片化される解離可能な結合を１より多く含有する分子にかかる刺激を与えると、２より多くの生成物が生成する。修飾検体の解離可能な結合の安定性は、その結合が、擬似分子検体基を有意に断片化しないイオン化条件下の質量分析計システムで選択的に断片化されることができるようなものである。
【０１３８】
本明細書で使用するとき、用語「断片化条件」とは、解離可能な結合が選択的に断片化され得る条件をいう。解離可能な結合を切断するが擬似分子検体基自体を断片化しないイオン化条件は断片化条件の一例である。本明細書で使用するとき、用語「ソフトイオン化条件」とは、擬似分子検体基の断片化を最小にするイオン化条件、例えば、擬似分子検体基自体は有意に断片化しないエネルギーを有するイオン化条件をいう。「有意に断片化しない」又は「選択的な断片化」とは、相対存在率すなわち検体分子に関連するイオンのイオン数に対する特定の検体の断片化に関連する総イオン数で測定して、５０％以下の望ましくない断片化、例えば４０％以下の望ましくない断片化、３０％以下の望ましくない断片化、２０％以下の望ましくない断片化、１０％以下の望ましくない断片化、５％以下の望ましくない断片化、２％以下の望ましくない断片化、又は１％以下の望ましくない断片化を意味する。かかる条件の１つの例は、＜１５ｅＶの電圧のいわゆる「イオン源」イオン化ポテンシャルがかけられる試料分析の標準のＧＣパラメーターで作動する改良型７２００−ＱＴＯＦ質量分析計のイオン源内部の条件である。
【０１３９】
かかる条件を提供するのに必要とされるエネルギーは使用する質量分析計システムの製造業者及び設計に応じて大きく変化し得る。かかる条件はまた、質量分析システムの他の部分、例えば衝突セルで生成させることもできよう。いかなる都合のよいＥＩ条件も本方法で解離可能な結合の選択的な断片化を提供するのに利用できる。幾つかの場合、ソフトイオン化条件は、７０ｅＶ未満、例えば６５ｅＶ以下、６０ｅＶ以下、５５ｅＶ以下、５０ｅＶ以下、４５ｅＶ以下、４０ｅＶ以下、３５ｅＶ以下、３０ｅＶ以下、２５ｅＶ以下、２０ｅＶ以下、１５ｅＶ以下、１０ｅＶ以下、５ｅＶ以下、又はそれ以下のＥＩイオン化を含むある特定の実施形態において、イオン化条件はＣＩ及び／又は光イオン化（ＰＩ）を含む。任意の都合のよいＣＩ又はＰＩ条件を本方法で利用して、例えば、相当量のエネルギーを修飾検体に伝えて本明細書に記載されているような選択的な断片化を実施することによって、解離可能な結合の選択的な断片化を提供できる。
【０１４０】
ある特定の場合には、解離可能な結合はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合又はＰ−Ｃ結合である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＯ−Ｏ結合（例えば、ペルオキシド）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＯ−Ｓｉ結合（例えば、シリルエーテル）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＯ−Ｃ結合（例えば、エーテル又はエステル結合）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＮ−Ｓｉ結合（例えば、アミノシリル）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＳ−Ｓｉ結合（例えば、シリルチオエーテル）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＳ−Ｓ結合（例えば、ジスルフィド）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＳｉ−Ｓｉ結合（例えば、ジシリル）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＮ−Ｎ結合（例えば、ヒドラジン又はヒドラジド）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＮ−Ｏ結合（例えば、アルコキシルアミノ）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＳ−Ｃ結合（例えば、チオエーテル）である。幾つかの実施形態において、解離可能な結合はＰ−Ｃ結合（例えば、ホスフィン）である。
【０１４１】
ある特定の実施形態において、解離可能な結合は修飾検体中の他の結合のいずれの結合エネルギーよりも小さい結合エネルギーを有する。修飾検体中の他の結合のいずれの結合エネルギーよりも小さい結合エネルギーとは、少なくとも１０％小さい、例えば少なくとも２０％小さい、少なくとも３０％小さい、少なくとも４０％小さい、少なくとも５０％小さい、少なくとも６０％小さい、少なくとも７０％小さい、少なくとも８０％小さい、又はそれ以上小さい結合エネルギーを意味する。解離可能な結合の特定の結合エネルギーは、検体の及び誘導体化剤の天然性ならびにそこに含有される結合のような様々な要因に依存して選択され得る。場合によって、解離可能な結合は３７５ｋＪ／ｍｏｌ以下の結合エネルギーを有する。場合によって、解離可能な結合は３５０ｋＪ／ｍｏｌ以下、例えば３４０ｋＪ／ｍｏｌ以下、３３０ｋＪ／ｍｏｌ以下、３２０ｋＪ／ｍｏｌ以下、３１０ｋＪ／ｍｏｌ以下、３００ｋＪ／ｍｏｌ以下、２９０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２８０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２７０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２６０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２５０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２４０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２３０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２２０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２１０ｋＪ／ｍｏｌ以下、２００ｋＪ／ｍｏｌ以下、又はそれ以下の結合エネルギーを有する。ある特定の場合には、解離可能な結合は、構造内の他の結合エネルギーより、及び／又は検体中の結合のエネルギーより比較的２０ｋＪ／ｍｏｌ以上低い結合エネルギーを有する。
【０１４２】
既に述べたように、修飾検体の解離可能な結合の安定性は、解離可能な結合が、擬似分子検体基を有意に断片化しないイオン化条件下の質量分析計システムで選択的に断片化され得るようなものである。例えば、修飾検体の代表的な開裂反応は図４の質量スペクトルに示されており、下記スキームに描かれている。
【化６】
2017067779.tif 000007
スキーム５：（ａ）解離可能なＳｉ−Ｓｉ結合を断片化し、擬似分子検体基（ｍ／ｚ＝２１１、図４参照）の断片化を最小にするイオン化条件。
【０１４３】
＜方法＞
本方法はあらゆる都合のよい試料の分析に使用される。
【０１４４】
本明細書で使用するとき、用語「試料」は、分析される、又は分析されることになる物質を指して、その最も広い意味で使用される。試料は天然及び／若しくは合成の生物学的又は環境のものであり得、ある特定のいかなる数及びあらゆる組合せの検体、材料、化合物、組成物、粒子、等を含有し得、必ずというわけではないが対象の１つ以上の成分を含有する流体、すなわち水性形態であり得る。試料は様々な起源、例えば、食料品、環境物質、生物試料もしくは固体、例えば個体から単離された組織又は流体、例えば、限定されることはないが、血漿、血清、髄液、精液、リンパ液、皮膚、呼吸、腸、及び泌尿生殖器管の外部切片、涙、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、臓器、ならびにインビトロ細胞培養構成成分の試料（例えば、限定されることはないが、細胞培養培地での細胞の増殖の結果得られる馴化培地、ウィルスに感染されたと推定される細胞、組換え細胞、及び細胞成分）に由来し得る。場合によって、試料は爆発物、麻酔薬、密売品、等に特徴的な検体を含有するか又は含有すると疑われるものである。
【０１４５】
用語「生物試料」はその慣用の意味で用いられており、全生物、植物、菌類、又は、場合によって血液、粘液、リンパ液、滑液、脳脊髄液、唾液、気管支肺胞洗浄、羊水、羊膜帯血液、尿、膣液及び精液中に見られる動物組織、細胞もしくは成分部分のサブセットをいう。したがって、「生物試料」とは、本来の生物又はその組織のサブセットならびに生物又はその組織のサブセット、例えば、限定されることはないが、血漿、血清、髄液、リンパ液、皮膚の切片、呼吸、胃腸、心臓血管、及び泌尿生殖器管、涙、唾液、乳、血液細胞、腫瘍、臓器から調製されたホモジネート、溶解物又は抽出物の両方を指す。生物試料は健常組織及び患部組織（例えば、癌、悪性腫瘍、壊死、等）の両者を含むあらゆる種類の生物組織であり得る。ある特定の実施形態において、生物試料は血液又はその誘導体、例えば血漿、涙、尿、精液、等のような液体試料であり、場合によって試料は静脈穿刺又は指穿刺で得られた血液のような全血を始めとする血液試料である（この血液はアッセイの前に保存料、抗凝固剤、等のような薬と混合してもしなくてもよい）。生物試料は細胞を含み得る。
【０１４６】
ある特定の実施形態において、試料の起源は「哺乳類」又は「哺乳動物」であり、ここでこれらの用語は肉食動物目（例えば、イヌ及びネコ）、齧歯目（例えば、マウス、モルモット、及びラット）、及び霊長目（例えば、ヒト、チンパンジー、及びサル）を含む哺乳綱内の生物を広く記載するために使用されている。場合によって、対象はヒトである。この方法は両方の性及びあらゆる成長段階（すなわち、新生児、幼児、少年、青年、成人）のヒト対象から得られた試料に適用してもよく、ある特定の実施形態においてヒト対象は少年、青年又は成人である。本発明はヒト対象に由来する試料に適用されるが、この方法はまた限定されることはないが、鳥類、マウス、ラット、イヌ、ネコ、家畜及びウマのような他の動物対象（すなわち、「非ヒト対象」）に由来する試料に対して実施してもよいことと理解されたい。ある特定の場合には、この方法は、無細胞試料（例えば、単離されたタンパク質、細胞溶解物、単離された細胞小器官、単離された核膜のような膜、又はその他の細胞断片）に対して、また無傷の細胞（例えば、培養で増殖した細胞）を含む試料に対して行ってもよい。幾つかの実施形態において、誘導体化試薬の細胞透過性は、誘導体化試薬が細胞内の特定の部位の対象検体を標的とし得るように調節される。
【０１４７】
対象の環境試料は、天然環境（例えば、海、土壌、空気、及び微生物叢）又は人工環境（例えば、運河、トンネル、建造物）のような環境に由来するあらゆる試料を包含する。かかる環境試料は環境汚染を発見し、追跡し、研究し、制御し、軽減し、そして回避するのに使用することができる。代表的な環境試料として、限定されることはないが、水（例えば、飲用水、河川水、地表水、地下水、飲料水、下水、流出水、廃水、又は浸出液）、土壌、空気、堆積物、生物相（例えば、土壌生物相）、微生物叢、動物相（例えば、魚類）、及び土の塊（例えば、根切り土）がある。
【０１４８】
対象の食品試料は食品（飲料を含む）に由来するあらゆる試料を包含し得る。かかる食品試料は、例えば、（１）食品が安全であるかどうかをチェックするため、（２）食品が食べられた時点で有害な汚染物質を含有していたかどうか（残留試料）又は食品が有害な汚染物質を含有しているかどうかをチェックするため、（３）食品が許可された添加物のみを含有しているかどうかをチェックするため（例えば、法規制順守）、（４）正確なレベルの必須成分を含有しているかどうか（例えば、食品のラベルの表示が正確であるどうか）をチェックするため、又は（５）食品中に含まれる栄養素の量を分析するためといった様々な目的に使用することができる。代表的な対象食品試料として、限定されることはないが、動物、野菜又は合成起源の食用産物（例えば、ミルク、パン、卵、又は肉）、粗挽き粉、飲料、及び残留試料のようなその一部がある。食品試料はまた、果実、野菜、マメ科植物、ナッツ、油料種子、油果実、穀物、茶、コーヒー、薬草煎じ液、ココア、ホップ、薬用植物、スパイス、糖料植物、肉、脂肪、腎臓、肝臓、くず肉、ミルク、卵、ハチミツ、魚類、及び飲料も包含することができる。
【０１４９】
対象の合成試料は工業プロセスに由来するあらゆる試料を包含し得る。この工業プロセスは生物学的工業プロセス（例えば、遺伝情報を含有し、自身を再生するか又は生物学的システムで再生されることができる生物学的材料を使用するプロセス、例えばトランスフェクトされた細胞を用いる発酵過程）又は非生物学的工業プロセス（例えば、医薬のような化合物の化学合成又は分解）であることができる。合成試料は、工業プロセスの進行をチェックし追跡するため、所望の生成物の収率を決定するたる、及び／又は副産物及び／又は出発材料の量を測定するために使用することができる。
【０１５０】
幾つかの実施形態において、方法は対象試料の質量分析の前に１つ以上の追加のステップを含む。追加のステップは手動で行うこともできるし、又は（例えば、特別にプログラムされたかもしくは特別に作られた機械で）自動化することもできる。
【０１５１】
幾つかの実施形態において、方法は、既知の量の潜在的に標的検体を含む試料を標的検体との反応が可能な誘導体化剤と組み合わせることによって試料を調製することを含む。適切な試料の調製は試料の性質及び分析のプロトコルに応じて変化し得る。例えば、試料の調製は、１種以上の適切な誘導体化剤を選択し、及び／又は分析の方法を選択することを含むことができる。
【０１５２】
ある特定の実施形態において、方法はまた、質量分析計信号を取得する前に試料を処理することも含む。例えば、試料の処理は、標的検体又は修飾検体を試料の他の成分から分離することを含むことができる。処理は、（１）質量分析計に導入される化合物の数を減らし、（２）例えば不要な化合物の枯渇及び／又は標的の富化により、標的検体又は修飾検体を濃縮し、及び／又は（３）ＭＳ分析に干渉する可能性がある他の化合物から標的を分離するために、ＭＳ分析に先立って試料を処理するための任意の都合のよい技術により、又はかかる技術の組合せにより実施することができる。かかる技術は、固相抽出、液相抽出、及びクロマトグラフィー（例えば、液体、ガス、親和性、免疫親和性、及び超臨界流体クロマトグラフィー）の１つ以上を含むことができる。
【０１５３】
したがって、分離システムは、質量分析計信号を取得する前に単一の試料の他の成分（例えば、マトリックス、汚染物質）から標的検体又は修飾検体を分離するための１つ以上の抽出、分離、クロマトグラフィー、又は同様なシステム（例えば、固相抽出、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、親和性、免疫親和性、超臨界流体クロマトグラフィー装置、など）を含むことができる。例えば、試料の少なくとも一部分を、固相抽出（例えば、順相固相抽出（ＳＰＥ）、逆相ＳＰＥ、イオン交換ＳＰＥ、サイズ排除ＳＰＥ、親和性ＳＰＥ又はこれらの組合せ）、液液抽出、クロマトグラフィー（例えば、ＨＰＬＣのような液体クロマトグラフィー、例えば、Ｗａｔｅｒｓ（登録商標）  ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ（登録商標）、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）、二酸化炭素に基づくクロマトグラフィー（すなわち、二酸化炭素を移動相の少なくとも一部分として使用する）、超高速液体クロマトグラフィー（ＵＨＰＬＣ）、ナノ−ＬＣ、特に順相クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー）又はガスクロマトグラフィー）、電気泳動（例えば、キャピラリー電気泳動）、沈殿、誘導体化、又はこれらの組合せにより処理することができる。抽出、クロマトグラフィー、又は電気泳動装置は質量分析計と組み合わせても（オンラインモード）組み合わせなくてもよい（オフラインモード）。
【０１５４】
＜分析方法＞
修飾検体の第１の断片化生成物は検体に由来する基、例えば擬似分子検体基を含む。本方法の態様は断片化生成物を質量分析計で分析して擬似分子検体基に対応するイオンを同定することを含む。
【０１５５】
修飾検体の断片化は標的検体の存在を示す主要な第１の断片化生成物を含む２つの生成物を放出するので、擬似分子検体基の残部が断片化することなく解離可能な結合が断片化されると、本修飾検体の質量分析による分析が簡単化される。第１の断片化生成物は由来した検体の特徴である検出可能な性質（例えば、特定の質量／電荷比、ｍ／ｚ）を有する。第１の断片化生成物は、標的検体が試料成分の大きい複雑な混合物の小さい割合として存在する場合でも、かかる検体を含む試料を同定するのに役立つリポーターである。
【０１５６】
ある特定の場合には、第１の断片化生成物の放出後、生成物イオンをさらなる分析（例えば、タンデム質量分析）のために選択して、由来した標的検体の同一性を確認してもよい。幾つかの場合、第１の断片化生成物は、試料中の修飾検体の、例えばエレクトロスプレー質量分析による分析を容易にする電荷を有するイオンである。
【０１５７】
質量分析計信号を取得するためのいろいろな方法が当技術分野で知られている。様々な実施において、質量分光分析は１種以上の化合物をイオン化して荷電した分子又は分子断片を生じさせ、それらの質量／電荷比を測定することを含む。かかる手順は、１種以上の化合物を含有する混合物をＭＳ装置に装填し、その１種以上の化合物を気化させ、混合物の成分をイオン化して荷電粒子（イオン）を形成し、分析器内でイオンをそれらの質量／電荷比に従って電磁的に分離し、イオンを（例えば、定性的な方法により）検出し、イオン信号を質量スペクトルに変換するというステップを含むことができる。
【０１５８】
質量分析計は、例えば、（１）フルスキャン、例えば、質量分析計は、ｍ／ｚスケール上の（０及び１００００のような）２つの離れた点の間の全てのイオンを検出する、（２）単一イオンモニター（ＳＩＭ）又は単一イオン記録（ＳＩＲ）、例えば、質量分析計は、特定のｍ／ｚ値を有するか、又は小さいｍ／ｚ範囲（例えば、１又は２質量単位の範囲）内にあるイオンのみを検出する、（３）複数反応モニター（ＭＲＭ）、例えば、複数の質量分析計装置を有する質量分析計で、少なくとも２つの装置がＳＩＭ／ＳＩＲモードで作動するというモードのいずれかで作動することができる。
【０１５９】
質量分析計でのイオンの分離及びその強度の測定後、例えば、検出されたイオンについて測定された強度を質量／電荷比（ｍ／ｚ）に対してプロットすることによって質量スペクトルが作成される。質量分析計が作動するモード（フルスキャン、ＳＩＭ／ＳＩＲ、又はＭＲＭ）に応じて、質量スペクトルは、（１）質量分析計においてｍ／ｚスケール上の２つの離れた点の間で検出される全てのイオン（前駆体及び生成物イオン）に対応するピーク、（２）（ａ）特定のｍ／ｚ値を有するか、又は非常に小さい質量ｍ／ｚ範囲内にある全てのイオンに対応するピーク、及び場合により（ｂ）（ａ）で特定されるイオンに由来する全ての生成物イオン、又は（３）１つ以上の選択される生成物／娘イオン（ＭＲＭチャンネル）のみを含むことができる。標的検体及び対応する類似体の各々を代表するイオンのＭＳ信号強度（又は相対的な信号強度）が決定され得る。質量スペクトルのイオンの信号強度（例えば、これらのイオンに対応するピークの強度）は、ピークの高さ又はピークの面積を基にして、例えば特定のイオンの信号強度を時間に関して積分することなどによってピークの面積を基にして決定することができる。質量スペクトルのイオン信号の強度は検出された最も強いイオン信号を例えば１００％に規格化することができる。
【０１６０】
質量分析計は（本発明のいずれかの方法の質量分析計と同様に）質量スペクトルを生成させるのに適したイオン化源、分析器、及び検出器を含む本質的に任意の装置であることができる。質量分析計は複数の質量分析計装置を含有していてもよく（ＭＳｎ、ここでｎ＝２、３、４…）及び／又はクロマトグラフィー又は電気泳動装置のような他の装置（例えば、分離システム、例えばＬＣ／ＭＳ／ＭＳ）と連結することができる。
【０１６１】
質量分析計は、エレクトロスプレーイオン化（「ＥＳＩ」）イオン源、大気圧光イオン化（「ＡＰＰＩ」）イオン源、大気圧化学イオン化（「ＡＰＣＩ」）イオン源、マトリックス支援レーザー脱離イオン化（「ＭＡＬＤＩ」）イオン源、レーザー脱離イオン化（「ＬＤＩ」）イオン源、大気圧イオン化（「ＡＰＩ」）イオン源、ケイ素上脱離イオン化（「ＤＩＯＳ」）イオン源、電子衝撃（「ＥＩ」）イオン源、化学イオン化（「ＣＩ」）イオン源、電界イオン化（「ＦＩ」）イオン源、電界脱離（「ＦＤ」）イオン源、誘導結合プラズマ（「ＩＣＰ」）イオン源、高速原子衝撃（「ＦＡＢ」）イオン源、液体二次イオン質量分析（「ＬＳＩＭＳ」）イオン源、脱離エレクトロスプレーイオン化（「ＤＥＳＩ」）イオン源、ニッケル−６３放射性イオン源、大気圧マトリックス支援レーザー脱離イオン化イオン源、及び熱スプレーイオン源のようなイオン源を含むことができる。
【０１６２】
様々な分離装置及び方法が本方法の質量分光分析と共に使用される。ある特定の場合には、限定されることはないが、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）、ガスクロマトグラフィー、順相ＬＣ、逆相ＬＣ、強カチオン交換ＬＣ、超臨界流体クロマトグラフィー、キャピラリー電気泳動、キャピラリー等電点電気泳動、一次元以上のゲル分離、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、２−Ｄゲル、及びこれらの組合せを始めとする、固相、液相又は気相で検体の分離及び分析に使用される装置がオンライン又はオフラインで連結される。あらゆる都合のよいクロマトグラフィー質量分析装置及び方法が本方法に利用され得る。ある特定の場合には、液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）装置及び方法が本方法に使用される。場合によって、ガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）装置及び方法が本方法に使用される。
【０１６３】
あらゆる都合のよいガスクロマトグラフィー質量分析（ＧＣ−ＭＳ）装置及び方法を本方法に利用できる。場合によって、分析はクロマトグラフィーカラム、電子衝撃イオン源、及び単一の四重極（単一Ｑｕａｄ）分析機を備えたタイプの単一−Ｑｕａｄ  ＧＣ−ＭＳ装置で行われる。
【０１６４】
試料の分析は質量分析法、例えば、タンデム質量分析法で行うことができる。質量分析計はエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）又はマトリックス支援レーザー脱離イオン化（ＭＡＬＤＩ）インターフェースを備えていてイオンを溶液から気相に移すことができる。タンデム質量分析法に応用可能な質量分析器は２つの基本的なカテゴリー、すなわちタンデムインスペースとタンデムインタイムに入る。これらのタイプの組合せも使用することができる。タンデムインスペース質量分析計は質量分析の各段階に対して別個の（ｄｉｓｃｒｅｅｔ）質量分析器を有しており、例として、セクター（一般に二重集束セクターならびにセクター及び四重極分析装置の「ハイブリッド」組合せ）、飛行時間及び三重の四重極装置、ならびに飛行時間及び四重極装置の「ハイブリッド」組合せがある。タンデムインタイム質量分析装置は質量分析器を１つだけ有しており、質量分析の各段階は同じ領域であるが一連の事象を介して時間的に分離されている領域で行われる。タンデムインタイム質量分析器の例には、ｂｏｔｈ  二次元及び三次元の四重極イオントラップ及びフーリエ変換イオンサイクロトロン共鳴（ＦＴ−ＩＣＲ）質量分析計がある。
【０１６５】
本方法は２つの試料を比較して一方の試料における他方と比べた変化を検出するのに使用することができる。例えば、本方法は、一方の試料が環境の変化又は特定の試験条件（例えば、化合物の付加）に付されたものであり、他方の試料が基準試料である２つの試料を分析するのに使用してもよい。かかるデータは様々な用途に使用することができる。
【０１６６】
幾つかの実施形態において、本方法はさらに、検出された擬似分子検体イオンに基づいて検体を同定することを含む。場合によって、この方法は処理システムに質量分析前のスクリーニングの結果をメモリーに保存された検体又は擬似分子検体データベースと比較させることを含み、ここで質量分析前のスクリーニングの結果とデータベース内の検体又は擬似分子検体の相関関係は予備的な正の同定を含む。
【０１６７】
＜キット＞
本開示により、上に記載した本方法を実施するためのキットも提供される。本キットは、少なくとも、例えば上記のような誘導体化剤を含有する。所望の場合、キットはさらに、本明細書に記載されている用途で使用される１つ以上の追加の成分、例えば、試薬、溶媒、緩衝剤等を含んでいてもよく、また試料分析と共に試験される正及び／又は負の対照を含有していてもよい。キットの様々な成分は別個の容器中に存在してもよいし、又は幾つかの適合する成分は所望により予め単一の容器にまとめて入れてもよい。
【０１６８】
上記成分に加えて、本キットはさらに、キットの構成成分を使用して本方法を実施するための説明書、すなわち試料分析のための説明書を含んでいてもよい。本方法を実施するための説明書は通常適切な記録媒体に記録されている。例えば、説明書は紙又はプラスチック、等のような基材に印刷されていてもよい。したがって、説明書はキット内に添付文書として、キットの容器又はその構成成分のラベル（すなわち、パッケージ又はサブパッケージと共に）等に存在し得る。他の実施形態において、説明書は適切なコンピューターで読み取り可能な記憶媒体、例えばＣＤ−ＲＯＭ、ディスケット、等に存在する電子記憶データファイルとして存在する。さらに他の実施形態においては、実際の説明書がキット内には存在しないが、説明書を遠隔地から、例えばインターネットによって取得する手段が提供される。この実施形態の一例は、説明書を閲覧することができるか、及び／又は説明書をダウンロードすることができるウェブアドレスを含むキットである。
【０１６９】
以下の実施例は例示として挙げるものであり、限定するものではない。
【実施例】
【０１７０】
［実施例１］
標準の７０ｅＶのイオン化及びそれより低い９ｅＶのイオン化エネルギーの両方で高分子量断片があまり多くないので、リナロール（ＣＡＳ  ７８−７０−６）を例として選択した。ジシリル作用剤による誘導体化を選択すると標準の７０ｅＶのＥＩ条件下での断片化が改善されたが、より低いイオン化（９ｅＶ）を適用すると「擬似分子の」イオン種が主体であるパターンが出現した。
【０１７１】
理解を明確にするための具体例として特定の実施形態を幾らか詳細に説明して来たが、本発明の教示に照らして添付の特許請求の範囲の思想又は範囲から逸脱することなく幾らかの変更及び修正をなすことができるということは明白である。
【０１７２】
したがって、以上の記載は単に本発明の原理を例示するものである。本明細書には明白に記載されても示されてもいないが、本発明の原理を具体化し、その思想及び範囲内に包含される様々なアレンジを考案することができる。さらにまた、本明細書中に挙げた全ての例及び条件言語は、主として、本発明の原理及び当該技術の推進に対して本発明者が寄与する概念を読者が理解するのを助けることを意図したものであり、かかる具体的に記載された例及び条件に制限されることはないと了解されたい。また、本発明の原理、態様、及び実施形態ならびにその特定の例を記載する本明細書中の全ての陳述は、その構造上及び機能上の等価物をいずれも包含することを意図している。さらに、かかる等価物は、構造に関係なく、現在知られている等価物及び将来開発される等価物、すなわち同じ機能を果たすように開発されるあらゆる要素の両方を含むことが意図されている。したがって、本発明の範囲は、本明細書に示され記載されている代表的な実施形態に限定されることはないことが意図されている。むしろ、本発明の範囲及び思想は添付の特許請求の範囲により具体化される。
【０１７３】
［実施形態］
本開示の態様は検体の誘導体化及びソフトイオン化の方法を含む。幾つかの実施形態において、この方法は、（ａ）検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合を介して接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させるステップと、（ｂ）ソフトイオン化条件（例えば、擬似分子検体基の断片化を最小にするイオン化条件）下で解離可能な結合を選択的に切断することにより、擬似分子検体基を含む主要な第１の断片化生成物及び脱離基を含む第２の断片化生成物を生成させるステップとを含む。ある特定の実施形態において、この方法はさらに、第１及び第２の断片化生成物を質量分析計で分析して擬似分子検体基に対応するイオンを同定することを含む。ある特定の実施形態において、この方法はさらに、最初の検体に対応する擬似分子イオンを分析することを含む。場合によって、この方法はさらに、擬似分子検体基に基づく検体を同定することを含む。この方法のある特定の実施形態において、第１の断片化生成物は質量分析計で第２の断片化生成物より優勢に検出される（例えば、第１の断片化生成物は質量スペクトルで基準ピークである）。
【０１７４】
本方法の幾つかの実施形態において、イオン化条件は７０ｅＶ未満での電子衝撃（ＥＩ）イオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は５０ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は２５ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は２０ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は１５ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は１０ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は９ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は８ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は７ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は６ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は５ｅＶ以下でのＥＩイオン化を含む。ある特定の実施形態において、イオン化条件は化学イオン化（ＣＩ）を含む。
【０１７５】
本方法の幾つかの実施形態において、解離可能な結合は検体のＨを含有しない共有結合の結合エネルギー未満の結合エネルギーを有する。ある特定の実施形態において、解離可能な結合は３５０ｋＪ／ｍｏｌ以下の結合エネルギーを有する。場合によって、解離可能な結合は構造中の他の結合エネルギーより２０ｋＪ／ｍｏｌ以上低い結合エネルギーを有する。場合によって、解離可能な結合は検体の結合のエネルギーより２０ｋＪ／ｍｏｌ以上低い結合エネルギーを有する。ある特定の実施形態において、解離可能な結合はＯ−Ｏ結合、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｏ−Ｃ結合、Ｎ−Ｓｉ結合、Ｓ−Ｓｉ結合、Ｓｉ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｎ結合、Ｎ−Ｏ結合、Ｓ−Ｃ結合及びＰ−Ｃ結合から選択される。
【０１７６】
本方法の幾つかの実施形態において、誘導体化剤はアミノ反応性剤、チオール反応性剤、ヒドロキシル反応性剤、酸反応性剤、ケト反応性剤及び求核性ハロアルキル反応性剤からなる群から選択される。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はジシリル試薬である。ある特定の実施形態において、修飾検体は最初の検体のシリル化（ｓｉｌａｔｅｄ）誘導体である。ある特定の実施形態において、誘導体化剤は求核試薬である。ある特定の実施形態において、修飾検体は検体の親核剤で置換された誘導体である。ある特定の実施形態において、検体は誘導体化剤と反応して解離可能な結合を生成させる、ヒドロキシ、カルボン酸、ケト、アミノ、チオール及びハロアルキルからなる群から選択される誘導体化可能な官能基を含む。ある特定の実施形態において、誘導体化剤はシリル又はジシリル試薬であり、本方法のステップ（ａ）は、誘導体化可能な官能基及びシリル又はジシリル試薬を結合させて、Ｏ−Ｓｉ結合、Ｎ−Ｓｉ結合及びＳ−Ｓｉ結合から選択される解離可能な結合を含む修飾検体を生成することを含む。ある特定の実施形態において、検体はヒドロキシ官能基を含み、誘導体化剤はジシリル試薬であり、本方法のステップ（ａ）はヒドロキシ基とジシリル試薬を結合させて反応部位にＯ−Ｓｉ結合を生成させることを含む。幾つかの実施形態において、脱離基はトリアルキルシリル基、ホスホニウム及びスルホニウムから選択される。
【０１７７】
本開示の態様はクロマトグラフィー−質量分析を用いて検体を検出する方法を含む。幾つかの実施形態において、この方法は、最初の検体を含む試料を誘導体化剤と接触させて、解離可能な結合を介して接続された擬似分子検体基及び脱離基を含む修飾検体を生成させるステップと、接触させた試料をソフトイオン化条件（例えば、擬似分子検体基を断片化しない条件）下でクロマトグラフィー−質量分析により分析するステップと、検体に対応する擬似分子イオンを検出するステップとを含む。ある特定の実施形態において、試料は複数の検体を含み、接触は複数の修飾検体を生成させることを含む。ある特定の実施形態において、クロマトグラフィー−質量分析の方法はガスクロマトグラフィー−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）を用いる方法である。ある特定の実施形態において、クロマトグラフィー−質量分析の方法は液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ−ＭＳ）を用いる方法である。
【０１７８】
本方法のある特定の実施形態において、分析は、接触させた試料を質量分析計のＥＩ源に導入し、接触させた試料に第１のイオン化エネルギーを有する電子ビームを照射して、複数の修飾検体の解離可能な結合を切断することにより、複数の修飾検体に由来する擬似分子イオンを生成させるステップと、擬似分子イオンをその質量に従って質量−分離するステップとを含む。ある特定の実施形態において、第１のイオン化エネルギーは２０ｅＶ以下である。
【０１７９】
本開示の態様は試料を分析するためのキットを含む。幾つかの実施形態において、このキットは誘導体化剤及び検体対照、溶媒、緩衝剤、使用説明書から選択される１つ以上の構成成分を含む。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【外国語明細書】
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