(57)【要約】【課題】１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中の遊離脂肪酸として存在する各種脂肪酸を効果的に分析することができる方法を提供する。【解決手段】本発明に係る遊離脂肪酸の分析方法は、１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の分析方法であって、反応生成物に対し、トリメチルシリル誘導体化試薬を用いて誘導体化処理を施すことにより、その反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸をトリメチルシリル化し、誘導体化処理後の溶液を濾過し、得られた濾液に対して加熱処理を施し、ガスクロマトグラフィーにより、加熱処理後の溶液に含まれるトリメチルシリル化した遊離脂肪酸を分析する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の分析方法であって、
前記反応生成物に対し、トリメチルシリル誘導体化試薬を用いて誘導体化処理を施すことにより、該反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸をトリメチルシリル化し、
前記誘導体化処理後の溶液を濾過し、得られた濾液に対して加熱処理を施し、
ガスクロマトグラフィーにより、前記加熱処理後の溶液に含まれるトリメチルシリル化した遊離脂肪酸を分析する
遊離脂肪酸の分析方法。
【請求項２】
非極性有機溶媒を溶媒とする前記トリメチルシリル誘導体化試薬の溶液を用いて、前記誘導体化処理を施す
請求項１に記載の遊離脂肪酸の分析方法。
【請求項３】
前記非極性有機溶媒は、ヘキサンである
請求項２に記載の遊離脂肪酸の分析方法。
【請求項４】
トリメチルシリル誘導体化試薬としてＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミドを含む溶液を用いて、前記誘導体化処理を施す
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の遊離脂肪酸の分析方法。
【請求項５】
前記濾過により得られた濾液を極性有機溶媒で希釈して前記加熱処理を施す
請求項１乃至４のいずれか１項に記載に遊離脂肪酸の分析方法。
【請求項６】
前記極性有機溶媒は、ピリジンである
請求項５に記載の遊離脂肪酸の分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、遊離脂肪酸の分析方法に関するものであり、より詳しくは、１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリースに用いる増ちょう剤は、有機系と無機系に大別される。有機系の増ちょう剤の代表例としては、ウレア化合物、金属石鹸等が挙げられる。その中でも、金属石鹸は、古くから使用されており、金属元素の選択により固有の性能を発現するという特徴があるため、全世界的に広く使用されているグリースの増ちょう剤である。
【０００３】
例えば、金属石鹸としてリチウム金属石鹸系は、耐熱性、耐水性、せん断安定性に優れおり、特に、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムは、万能な増ちょう剤として多くのグリースに用いられている。
【０００４】
金属石鹸の生成反応としては、複分解法と直接法とに大別される。具体的に、複分解法は、例えば下記反応式（ｉ）で示すように、金属元素を交換することによって目的とする金属石鹸を得る方法である。また、直接法は、例えば下記反応式（ｉｉ）に示すように、脂肪酸と金属（Ｌｉ）酸化物又は金属水酸化物とを直接反応させる方法である。
［複分解法の反応例］
ＲＣＯＯＮａ＋ＬｉＣｌ→ＲＣＯＯＬｉ＋ＮａＣｌ  ・・・（ｉ）
［直接法の反応例］
ＲＣＯＯＨ＋Ｌｉ（ＯＨ）・Ｈ２Ｏ→ＲＣＯＯＬｉ＋２Ｈ２Ｏ  ・・・（ｉｉ）
【０００５】
リチウム石鹸の場合、脂肪酸と水酸化リチウムとを反応させる直接法により生成させるのが一般的である。具体的には、リチウム石鹸として、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムを生成させる場合、１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを原料として、これらを脂肪酸の融点付近の温度で直接反応させる。このとき、脂肪酸と水酸化リチウム一水和物とは互いに等量ではなく、水酸化リチウム一水和物を過剰量添加して反応させる。このことは、反応しなかった脂肪酸（遊離脂肪酸）が残存すると、得られたリチウム石鹸を増ちょう剤として用いてグリースを構成したときに、そのグリースの耐熱性が低下し、変色等の負の影響を与えてしまうからである。
【０００６】
さて、グリースの適用先として、例えば軸受がある。軸受用グリースには、潤滑性に加えて優れた静粛性を奏することが求められており、そのようなグリースを静音グリースと呼ぶ。グリースの性質としての静粛性は、異物の混入が大きく影響する。例えば、異物が軸受の摺動面上に存在すると、その摺動に伴って異物粒子が解砕され、その際に異常音が発生して、静粛性を阻害する要因となる。
【０００７】
このような異物の混入は、グリースを構成する増ちょう剤成分の製造過程において生じることが予想されており、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムを生成させる場合において、未反応の遊離脂肪酸が異物となる可能性が考えられる。
【０００８】
一般的に、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウム中に存在する遊離脂肪酸は、中和価滴定法により測定することとされている（ＪＩＳ  Ｋ  ２２２０）。しかしながら、この中和滴定による方法では、遊離脂肪酸の総量としての判断となり、遊離脂肪酸の組成を確認する手法ではない。
【０００９】
また、非特許文献１には、脂肪酸金属塩中の遊離脂肪酸を選択的にＴＭＳ（トリメチルシリル）化して分析する手法が開示されている。しかしながら、この文献に開示されている方法は、脂肪酸金属塩と脂肪酸とが同量程度存在している場合に有効とされており、遊離脂肪酸が微量の場合にはその分析が困難となる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】ＢＵＮＳＥＫＩ  ＫＡＧＡＫＵ  ＶＯＬ．４９，Ｎｏ４，ｐｐ．２６５−２６７（２０００）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、このような実情に鑑みて提案されたものであり、増ちょう剤として用いられる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中の遊離脂肪酸として存在する各種脂肪酸を効果的に分析することができる方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは、上述した課題を解決するために鋭意検討を重ねた。その結果、反応生成物に対して、トリメチルシリル誘導体化試薬を用いて誘導体化処理を施すことにより遊離脂肪酸をトリメチルシリル化し、誘導体化処理後の溶液を濾過して得られた濾液に対して加熱処理を施すことで、その反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸を高い精度で効果的に分析できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
（１）本発明の第１の発明は、１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の分析方法であって、前記反応生成物に対し、トリメチルシリル誘導体化試薬を用いて誘導体化処理を施すことにより、該反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸をトリメチルシリル化し、前記誘導体化処理後の溶液を濾過し、得られた濾液に対して加熱処理を施し、ガスクロマトグラフィーにより、前記加熱処理後の溶液に含まれるトリメチルシリル化した遊離脂肪酸を分析する、遊離脂肪酸の分析方法である。
【００１４】
（２）本発明の第２の発明は、第１の発明において、非極性有機溶媒を溶媒とする前記トリメチルシリル誘導体化試薬の溶液を用いて、前記誘導体化処理を施す、遊離脂肪酸の分析方法である。
【００１５】
（３）本発明の第３の発明は、第２の発明において、前記非極性有機溶媒は、ヘキサンである、遊離脂肪酸の分析方法である。
【００１６】
（４）本発明の第４の発明は、第１乃至第３のいずれかの発明において、トリメチルシリル誘導体化試薬としてＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミドを含む溶液を用いて、前記誘導体化処理を施す、遊離脂肪酸の分析方法である。
【００１７】
（５）本発明の第５の発明は、第１乃至第４のいずれかの発明において、前記濾過により得られた濾液を極性有機溶媒で希釈して前記加熱処理を施す、遊離脂肪酸の分析方法である。
【００１８】
（６）本発明の第６の発明は、第５の発明において、前記極性有機溶媒は、ピリジンである、遊離脂肪酸の分析方法である。
【発明の効果】
【００１９】
本発明に係る遊離脂肪酸の分析方法によれば、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中に含まれる各種の遊離脂肪酸を高い精度で分析することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】実施例１におけるＧＣＭＳ分析の結果を示すクロマトグラフである。
【図２】参照例１におけるＧＣＭＳ分析の結果を示すクロマトグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の具体的な実施形態（以下、「本実施の形態」という）について詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲で種々の変更が可能である。
【００２２】
本実施の形態に係る遊離脂肪酸の分析方法は、１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の分析方法である。
【００２３】
ここで、遊離脂肪酸とは、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの生成反応における未反応の脂肪酸をいう。また、その脂肪酸としては、例えば、１２−ヒドロキシステアリン酸、ステアリン酸、パルミチン酸等が挙げられる。
【００２４】
具体的に、この遊離脂肪酸の分析方法では、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物に対して、トリメチルシリル（ＴＭＳ）誘導体化試薬を用いて誘導体化処理を施すことにより、その反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸をＴＭＳ化し、その後、誘導体化処理後の溶液を濾過し、得られた濾液に対して加熱処理を施す。そして、ガスクロマトグラフィーにより、加熱処理後の溶液に含まれるＴＭＳ化した遊離脂肪酸を、定性的にあるいは定量的に分析する。
【００２５】
なお、本実施の形態に係る遊離脂肪酸の分析方法により、分析することができる１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムは、特に限定されない。
【００２６】
この分析方法によれば、反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸のみを選択的に且つほぼ完全にＴＭＳ誘導体化することができ、各種の遊離脂肪酸を、また微量であっても、高い精度で分析することができる。
【００２７】
そして、このように遊離脂肪酸を定性的に且つ定量的に分析することができることにより、ＴＭＳ誘導体化物の検出量が少ない反応生成物（１２−ヒドロキシステアリン酸リチウム）を、増ちょう剤として使用することにより、変色し難く、また静粛性に優れたグリースを構成することができる。
【００２８】
［トリメチルシリル誘導体化処理］
本実施の形態に係る遊離脂肪酸の分析方法では、先ず、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物に対して、トリメチルシリル（ＴＭＳ）誘導体化処理を施す。
【００２９】
ＴＭＳ誘導体化では、遊離脂肪酸のカルボキシル基とヒドロキシル基における活性水素がトリメチルシリル基に置換される。一方で、リチウム石けんである１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムは、そのほとんどがＴＭＳ誘導体化されない。すなわち、遊離脂肪酸とリチウム石けんとでは、ＴＭＳ誘導体化の反応進行に大きな違いがある。したがって、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物に対してＴＭＳ誘導体化処理を施すことによって、反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸のみを選択的に反応させることができ、分析精度を高めることができる。
【００３０】
また、遊離脂肪酸をＴＭＳ誘導体化することにより、ガスクロマトグラフィーによる分析精度を向上させることができる。具体的には、例えば、液相にシロキサン化合物等を主成分とした、低極性物質の分離に有効な分離カラムを用いたガスクロマトグラフィーであっても、高極性化合物である脂肪酸をＴＭＳ誘導体化することにより、検出ピークの拡がりを抑えることができ、高い精度で分析することが可能となる。
【００３１】
ＴＭＳ誘導体化処理は、ＴＭＳ誘導体化試薬を用いて行う。ＴＭＳ誘導体化試薬としては、特に限定されず、例えば、Ｎ−トリメチルシリルイミダゾール（ＴＭＳＩ）、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）アセトアミド、Ｎ−メチル−Ｎ−トリメチルシリルトリフルオロアセトアミド（ＭＳＴＦＡ）、トリメチルシリルジメチルアミン（ＴＭＳＤＭＡ）、トリメチルシリルジエチルアミン（ＴＭＳＤＥＡ）、Ｎ−トリメチルシリル−Ｎ−メチルアセトアミド（ＭＳＴＡ）、トリメチルクロロシラン（ＴＭＣＳ）とヘキサメチルジシラザン（ＨＭＤＳ）の混合試薬等が挙げられる。
【００３２】
その中でも、特に、下記化学式で表されるＢＳＴＦＡを用いることが好ましい。ＢＳＴＦＡは、ＴＭＳ化の反応性が高く、また、沸点が比較的低いためガスクロマトグラフィーによる検出時間が速く、目的成分である遊離脂肪酸への妨害が少ない点で好ましい。
【００３３】
【化１】
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【００３４】
また、ＴＭＳ誘導体化処理においては、非極性有機溶媒を溶媒としてＴＭＳ誘導体化試薬を溶解させた溶液を用いることが好ましい。非極性有機溶媒を溶媒としたＴＭＳ誘導体化試薬の溶液を用いることにより、反応生成物の主成分である１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムとの反応が抑制され、その反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸との反応が有効に生じるようになる。これにより、遊離脂肪酸のみを選択的にＴＭＳ化することができ、反応生成物中の遊離脂肪酸をより高い精度で分析することができる。
【００３５】
非極性有機溶媒は、主に炭化水素系の有機溶媒であり、例えば、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン、イソペンタン、イソヘキサン、イソヘプタン、イソオクタン、２，２−ジメチルブタン等が挙げられるが、これに限定されない。
【００３６】
ＴＭＳ誘導体化試薬の溶液中における含有量としては、特に限定されないが、例えば、１０質量％〜５０質量％とし、より好ましくは２０質量％〜３０質量％とする。溶液の濃度がこのような範囲となるように、ＴＭＳ誘導体化試薬と非極性有機溶媒とを混合する。
【００３７】
具体的に、ＴＭＳ誘導体化処理においては、分析試料である１２−ヒドロキシステアリン酸リチウム（リチウム石けん）の反応生成物を容器に秤取し、その容器にＴＭＳ誘導体化試薬の溶液を添加する。この溶液の添加により、分析試料の濃度が、例えば１質量％〜１０質量％程度の範囲となるようにする。
【００３８】
ＴＭＳ化の反応に際しては、分散処理を施しながら行うことが好ましい。特に、ＴＭＳ誘導体化試薬を添加した溶液に対して超音波を用いた分散処理（超音波処理）を施すことが好ましく、これにより、より効率的に反応を促進させることができる。
【００３９】
反応時間としては、特に限定されず、例えば、１０分間〜２４０分間程度とすることができる。また、反応温度としては、反応時間に応じて適宜調整できるが、例えば、３０℃〜９０℃程度とすることができ、４０℃〜６０℃程度であることがより好ましい。
【００４０】
このようにして、２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物に対してＴＭＳ誘導体化処理を施すことにより、反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸をＴＭＳ化する。
【００４１】
［濾液に対する加熱処理］
次に、遊離脂肪酸の分析方法においては、ＴＭＳ誘導体化処理後の溶液を濾過し、濾過して得られる濾液に対して加熱処理を施す。
【００４２】
分析試料である反応生成物には、主成分である１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムが含まれている。そのことから、ＴＭＳ誘導体化処理後の溶液を濾過することにより、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムを分離除去する。
【００４３】
なお、濾過の方法としては、特に限定されず、自然濾過、加圧濾過、遠心濾過等の公知の方法により行うことができる。また、濾過操作としては、懸濁物質に起因して生じる固形分を効率的に除去するために、多段階で行うようにしてもよい。
【００４４】
そしてその後、濾過により得られた濾液に対して、加熱処理を施す。このように、濾液を所定の温度に加温する加熱処理を施すことによって、ＴＭＳ化の反応を完了させることができ、後工程のガスクロマトグラフィーによる分析操作において、未反応の成分に基づくピークの発生を抑制することができ、ＴＭＳ化した遊離脂肪酸を精度高く分析することができる。
【００４５】
加熱処理における温度としては、特に限定されず、ＴＭＳ誘導体化反応における反応温度に応じて適宜調整することができるが、例えば、６０℃〜９０℃程度の範囲とすることができる。また、反応時間としては、加温温度の条件に応じて適宜調整できるが、１０分間〜２４０分間程度とすることができる。
【００４６】
ここで、加熱処理においては、濾液に極性有機溶媒を添加して希釈し、その極性有機溶媒による希釈後の溶液に対して加熱処理を施すことが好ましい。このように、極性有機溶媒を添加することにより、ＴＭＳ化の反応をより効率的に完了させることができ、未反応の成分に基づくピークの発生をより効果的に抑制することができる。
【００４７】
極性有機溶媒としては、特に限定されないが、例えば、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ピリジン等が挙げられる。
【００４８】
［ガスクロマトグラフィーによる分析］
本実施の形態に係る遊離脂肪酸の分析方法では、上述のように加熱処理を施した後、ガスクロマトグラフィー質量分析計を用いて、その加熱処理後の溶液に含まれるＴＭＳ化した遊離脂肪酸を検出分析する。
【００４９】
一般的に、ガスクロマトグラフィーは、移動相にヘリウムや窒素ガス等を用いるクロマトグラフィーであり、固定相としては、中空カラム（ステンレス製、ガラス製等）に充填剤を充填させた充填カラムや、ポリイミド又はステンレスの内部にシリコーン等を結合させたキャピラリーカラムを使用する。なお、充填カラムにおける充填剤としては、例えば、シリカゲルにシリコーン等を修飾した粉末担体やスチレン−ジビニルベンゼン共重合体から構成されるポリマー粉末等が挙げられる。
【００５０】
ガスクロマトグラフィー装置としては、特に限定されないが、一般的には、試料注入部、分離部（分離カラム）、検出部（検出器）から構成される装置を用いることができる。
【００５１】
具体的に、試料注入部においては、例えば、マイクロシリンジ等に試料を採り、セプタムを通して注入するシリンジ法や、連続的に試料を注入できるフローインジェクション法を用いて、試料を注入することができる。試料の注入量としては、例えば、０．１μｌ〜２μｌ程度とすることができる。
【００５２】
また、分離カラムには、固定相が配置される。この分離カラムにおいては、試料に高沸点の化合物を含むことから、固定相としては、３００℃以上の温度に耐え得るものであることが好ましい。例えば、充填カラムとしては、ジーエルサイエンス株式会社製のＯＶ−１、ＯＶ−１０１等が市販されており、キャピラリーカラムとしては、Ａｇｉｌｅｎｔ社製のＤＢ−１、ＤＢ−５、ＤＢ−１７、ＤＢ−３５等が市販されている。
【００５３】
また、検出器としては、高感度でホウ酸化合物を検出することができる水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）、質量分析計（ＭＳ）等を用いることが好ましい。
【００５４】
ガスクロマトグラフィーにより分析は、煩雑な操作を伴わずに、ＴＭＳ化した遊離脂肪酸を、そのまま試料として用いることができる。このため、迅速で且つ簡便に分析操作を行うことができる。また、ガスクロマトグラフィーの試料注入量としては、例えば０．１μｌ〜２μｌ程度と極少量であり、使用する試料や試薬の量も少量とすることができる。さらに、高速液体クロマトグラフィーや液体クロマトグラフィーとは異なり、移動相に溶剤を使用しないため、廃棄物の発生を低減させることができる。
【００５５】
本実施の形態に係る遊離脂肪酸の分析方法では、加熱処理後の溶液を試料としてガスクロマトグラフィーにより分析することで、分析により得られるクロマトグラムにおいて、ＴＭＳ化した遊離脂肪酸のピークを出現させることができる。この分析方法では、遊離脂肪酸のピークが出現したクロマトグラムと、標準物質のクロマトグラムとを比較することにより、反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の定性分析を行うことができる。また、クロマトグラムにおけるピーク強度に基づき、検量線法により、反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸の定量分析を行うことができる。
【実施例】
【００５６】
以下、本発明の実施例を示してより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
【００５７】
［実施例１］
１２−ヒドロキシステアリン酸と水酸化リチウム一水和物とを反応させて得られた１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの反応生成物（試料）と、２５質量％の割合でＮ，Ｏ−ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ）を含むヘキサン溶液とを、１２−ヒドロキシステアリン酸リチウムの濃度が約２質量％となるように、蓋付きのガラス容器にそれぞれ秤取して混合し、密栓した。
【００５８】
次に、ガラス容器内の溶液を、超音波分散器を用いて３０分間の時間で分散させながら、反応生成物中に含まれる遊離脂肪酸をＴＭＳ誘導体化した。なお、ＴＭＳ誘導体化の反応時の温度は５０℃とした。
【００５９】
次に、ＴＭＳ誘導体化の処理後の溶液を、シリンジフィルターを用いて濾過して、溶液中に含まれる不溶解成分を除去した。その後、試料濃度が１質量％となるように濾液をピリジンで希釈し、密栓した後に８０℃の温度条件で２時間の加熱処理を施した。
【００６０】
その後、加熱処理後の溶液を、ガスクロマトグラフ質量分析装置（ＧＣＭＳ）で分析した。なお、ガスクロマトグラフ質量分析装置は、アジレント社製の５９７３Ｎ  ＧＣＭＳシステムを用い、分離カラムとしては、アジレント社製のＤＢ−５ＭＳ（長さ３０ｍ、内径０．２５ｍｍ、シリコーン結合相厚さ０．２５μｍ）とした。
【００６１】
図１は、ＧＣＭＳ分析結果を示すクロマトグラフである。図１に示すように、試料の反応生成物に含まれていた遊離脂肪酸のＴＭＳ誘導体化物を有効に検出することができた。
【００６２】
［参考例１］
参考例１として、ＴＭＳ誘導体化の処理後の溶液を濾過した後、得られた濾液をそのままＧＣＭＳ分析した。すなわち、実施例１において、濾液に対して加熱処理を施さない操作を行った。なお、それ以外は、実施例１と同様とした。
【００６３】
図２は、ＧＣＭＳ分析結果を示すクロマトグラフである。図２のクロマトグラフから分かるように、図１のクロマトグラフと比べて、ＴＭＳ誘導体化の反応が不十分であったことによるピークが確認された。
【００６４】
実施例１と参考例１との結果から、濾液に対して所定の温度にまで加温する加熱処理を施すことによって、ＴＭＳ誘導体化の反応を完了させることができ、反応不十分な遊離脂肪酸によるピークの出現を防いで、高い精度で分析することができることが分かった。
【図１】
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【図２】
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