(57)【要約】【課題】ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制する物質の提供。【解決手段】嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２のアンタゴニストを有効成分とする、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ｐ−クレゾール臭抑制剤：
メチルセドリルケトン；
２，２，７，７−テトラメチルトリシクロ［６．２．１．０1,6］ウンデカン−５−オン；
３，７，１１−トリメチルドデカ−１，６，１０−トリエン−３−オール；
（Ｅ）−２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−１−シクロペンタ−３−エニル）ブト−２−エン−１−オール；および
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）オキシブタン−２−オール。
【請求項２】
下記化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、尿臭抑制剤：
メチルセドリルケトン；
２，２，７，７−テトラメチルトリシクロ［６．２．１．０1,6］ウンデカン−５−オン；
３，７，１１−トリメチルドデカ−１，６，１０−トリエン−３−オール；
（Ｅ）−２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−１−シクロペンタ−３−エニル）ブト−２−エン−１−オール；および
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）オキシブタン−２−オール。
【請求項３】
前記尿臭がｐ−クレゾールに起因する尿臭である、請求項２記載の尿臭抑制剤。
【請求項４】
下記化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＯＲ９Ｑ２またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニスト：
メチルセドリルケトン；
２，２，７，７−テトラメチルトリシクロ［６．２．１．０1,6］ウンデカン−５−オン；
３，７，１１−トリメチルドデカ−１，６，１０−トリエン−３−オール；
（Ｅ）−２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−１−シクロペンタ−３−エニル）ブト−２−エン−１−オール；および
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）オキシブタン−２−オール。
【請求項５】
前記ＯＲ９Ｑ２が、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、前記ＯＲ９Ｑ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭または尿臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである、請求項４記載のアンタゴニスト。
【請求項６】
前記ＯＲ９Ｑ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭または尿臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである、請求項５記載のアンタゴニスト。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、尿臭抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、下水道整備の向上により、トイレにおける便と尿が長期間接触することにより発生する強烈なアンモニア臭の問題は減少傾向にある。その反面、近年では、臭いの強度は弱いものの、トイレに飛び散った尿や、使用済みおむつなどの尿の吸収に関わる吸収性物品から発せられる尿臭が問題にされている。
【０００３】
尿の吸収に関わる吸収性物品としては、乳幼児や被介護者用おむつだけでなく、軽失禁用おむつや尿とりパッドなどの軽失禁用品、さらには女性用の生理用品など、結果的に尿を吸収する可能性がある製品もこれに含まれる。特に近年では、乳幼児や被介護者用おむつだけでなく、高齢者、経産婦、病中もしくは病後者などの軽度な失禁をケアするための軽失禁用おむつもしくはパッド等の軽失禁用品の需要が高まっている。これら軽失禁用品は、日常生活の中で使用されるため、使用後だけでなく、装着中における尿臭の防止も重要な課題である。
【０００４】
特許文献１には、飛び散って乾燥した尿や、使用後放置したおむつから発する尿臭に対する最も寄与の高い成分がｐ−クレゾールであることが記載されている。また特許文献１には、ｐ−クレゾールと、それ以外の炭素数６〜１０のフェノール化合物、例えば、フェノール、ジメチルフェノール、メトキシフェノール、メトキシビニルフェノール、ジヒドロキシベンゼンとの組成物により、当該尿臭を再現できることが記載されている。また、菌が産生するβ−グルクロニダーゼが尿に作用すると、フェノール、ｐ−クレゾール、４−ビニル−２−メトキシ−フェノール、４−ビニルフェノール、２−メトキシ−１，３−ベンゼンジオール、１，４−ベンゼンジオール、１，３−ベンゼンジオール、インドール等の成分が尿中に増加し、尿臭強度を顕著に増加させることが知られている（特許文献２）。これらの成分は、トイレに飛び散った尿や使用済みおむつなどの尿の吸収に関わる吸収性物品から発せられるアンモニア臭とは異なる尿臭に対して寄与の高い成分であると考えられている。
【０００５】
Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ、Ｉｓｏ−Ｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ、Ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ、Ｂａｃｄａｎｏｌ、およびＡｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）は、従来香料物質として知られている。さらにＡｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ、ＮｅｒｏｌｉｄｏｌおよびＡｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）は、スカトールを認識する嗅覚受容体のアンタゴニストであり、スカトール臭を抑える物質であることが報告されている（特許文献３）。特許文献４には、頭髪化粧料の基剤臭、アミン臭、アンモニア臭、硫黄臭などをマスキングするための組成物の一成分としてＡｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ、ＮｅｒｏｌｉｄｏｌおよびＡｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）が開示されている。さらに、Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅは、トリメチルアミン等の塩基性悪臭用消臭剤の一成分、および尿生殖路に存在するアミンによる悪臭を抑制する香料組成物の一成分として開示されている（特許文献５、６）。特許文献７には、尿からのアンモニア生成を抑制する香料組成物の一成分としてＡｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）を使用することができることが開示されている。特許文献８には、香料物質である一方で嗅細胞の活動を抑える効果も有する物質が開示されている。特許文献９には、ヘアカラーリング剤に添加してヘアカラーリング時に発生するアンモニア臭気を抑える成分の１つとして、Ｉｓｏ−Ｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅが開示されている。特許文献１０には、エステル類を含有する臭気中和剤に配合することができる芳香成分の一例としてＮｅｒｏｌｉｄｏｌが開示されている。しかし、現在のところ、これらの香料物質がｐ−クレゾールおよびこれに起因する尿臭に対して抑制効果をもつという報告はない。
【０００６】
最近、標的とする悪臭に対する嗅覚受容体の活性を特異的に阻害することによって、該悪臭を抑制する方法が提供された（例えば、特許文献３）。こうしたアンタゴニスト物質による受容体活性阻害に基づくにおいの抑制または変調のメカニズムは、嗅覚受容体アンタゴニズムと呼ばれる。嗅覚受容体アンタゴニズムによるにおいの抑制または変調は、香水や芳香剤等の別の強いにおいを付加することによる消臭方法と異なり、標的とする悪臭の認識を特異的に失くしてしまうことができ、また芳香剤の強いにおいによる不快感が生じることもないことから、好ましい消臭手段である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００９−１３２７７０号公報
【特許文献２】国際公開公報第２００９／０３７８６１号
【特許文献３】特開２０１２−２５０９５８号公報
【特許文献４】特開２００３−１３７７５８号公報
【特許文献５】特許第５６９５２８８号公報
【特許文献６】国際公開公報第２００４／０９８６６６号
【特許文献７】米国公開特許公報第２０１５／００７９０１７号
【特許文献８】国際公開公報第２００９／１２５６０４号
【特許文献９】特開２００４−０６７５９８号公報
【特許文献１０】特許第４５２０６８２号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、尿臭、またはその原因物質による臭いの抑制剤を提供することに関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は、嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２発現細胞が、尿臭原因物質であるｐ−クレゾールに応答すること、およびＯＲ９Ｑ２発現細胞の応答を抑制する物質が、嗅覚受容体アンタゴニズムにより、ｐ−クレゾールによる臭いおよびこれに起因する尿臭を抑制することができることを見出した。
【００１０】
したがって、本発明は、下記化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ｐ−クレゾール臭抑制剤を提供する。また本発明は、下記化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、尿臭抑制剤を提供する。
メチルセドリルケトン；
２，２，７，７−テトラメチルトリシクロ［６．２．１．０1,6］ウンデカン−５−オン；
３，７，１１−トリメチルドデカ−１，６，１０−トリエン−３−オール；
（Ｅ）−２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−１−シクロペンタ−３−エニル）ブト−２−エン−１−オール；および
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）オキシブタン−２−オール。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により提供されるｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤は、嗅覚受容体アンタゴニズムにより、ｐ−クレゾール臭およびこれに起因する尿臭を抑制することができる。したがって、当該抑制剤によれば、従来の消臭剤または芳香剤を用いる消臭方法において生じていた芳香剤の強いにおいに基づく不快感等の問題を生じることがなく、ｐ−クレゾールまたは尿による臭いを消臭することができる。本発明によれば、例えばトイレに飛び散った尿、使用済みおむつなどの吸収性物品などから発せられる、アンモニア臭とは異なる尿の臭いを抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】種々の濃度のｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体発現細胞の応答。ｎ＝３〜４、エラーバー＝±ＳＥ。
【図２】試験物質による嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２発現細胞のｐ−クレゾール応答の抑制効果。横軸に試験物質の濃度を、縦軸にｐ−クレゾール（１００μＭ）単独刺激への応答強度を１００％としたときの、ｐ−クレゾールと試験物質とを併用したときの受容体発現細胞の応答（％）を表す。ｎ＝３、エラーバー＝±ＳＥ。
【図３】Ａ：試験物質のｐ−クレゾール臭抑制効果の官能評価（ｎ＝９）。Ｂ：試験物質の尿臭抑制効果の官能評価（ｎ＝１０）。データの分布を箱ひげ図にて示す。箱の上下に出たひげは最大値と最小値をそれぞれ表す。箱の三つの横線は第１・３四分位点および中央値を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本明細書において、「嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制」とは、目的の臭い分子と他の分子をともに適用することにより、当該他の分子によって目的の臭い分子に対する受容体活性を阻害し、結果的に個体に認識される臭いを抑制する手段である。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制は、同様に他の分子を用いる手段であっても、芳香剤による消臭のように、目的の臭いを香料の香気によって隠蔽する手段とは区別される。嗅覚受容体アンタゴニズムによる臭いの抑制の一例は、アンタゴニスト等の嗅覚受容体の活性を阻害する物質を使用するケースである。特定の臭いをもたらす臭い分子の受容体にその活性を阻害する物質を適用すれば、当該受容体の当該臭い分子に対する活性が抑制されるため、最終的に個体に知覚される臭いを抑制することができる。
【００１４】
本明細書において、「尿の吸収に関わる吸収性物品」（または単に「吸収性物品」）とは、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつ、尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品など、ヒトや動物に装着されて、結果的に尿を吸収する可能性がある製品をいう。
【００１５】
本発明において、「ｐ−クレゾールによる臭い（またはクレゾール臭）」とは、ｐ−クレゾールによりもたらされる臭いであり得る。本発明における「ｐ−クレゾールによる臭い」は、代表的には、放尿もしくは採尿後時間が経った尿または飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、あるいは使用後放置したおむつなど、装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品から発せられる尿の臭いとして表現され得る。それらの尿中には、その中に含まれる菌が持つ酵素βグルクロニダーゼの作用によって生成されたｐ−クレゾールが含まれている。βグルクロニダーゼは、各種のアルコール類、フェノール類、アミン類等がグルクロン酸抱合された化合物（グルクロニド）を加水分解する酵素であり、尿中に含まれる菌に含有されている。
【００１６】
本明細書において、「尿臭」とは、好適には、放尿または採尿後時間が経った尿から発せられる臭いである。例えば、本明細書における「尿臭」は、飛び散って乾燥した尿の臭い、または使用後放置したおむつなど、装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品から発する尿の臭いであり得る。また好適には、本明細書における「尿臭」は、βグルクロニダーゼが作用した尿またはその抽出物の臭い（いわゆる、腐敗尿臭）である。本明細書における、「βグルクロニダーゼが作用した尿」には、放尿もしくは採尿された尿に積極的にβグルクロニダーゼを添加し、作用させたものも含まれるが、一方、βグルクロニダーゼは放尿もしくは採尿された尿中に含まれており、当該尿に作用するため、放尿もしくは採尿された後時間が経った尿もまた、βグルクロニダーゼが作用した尿に含まれる。βグルクロニダーゼが作用した尿中には、その作用によって生成されたｐ−クレゾールが含まれている。したがってより好適には、本明細書における「尿臭」は、βグルクロニダーゼが作用した、ｐ−クレゾールを含む尿の臭い、またはｐ−クレゾールに起因する尿臭であり得る。
【００１７】
本明細書において、「嗅覚受容体ポリペプチド」とは、嗅覚受容体またはそれと同等の機能を有するポリペプチドをいい、嗅覚受容体と同等の機能を有するポリペプチドとは、嗅覚受容体と同様に、細胞膜上に発現することができ、匂い分子の結合によって活性化し、かつ活性化されると、細胞内のＧαｓと共役してアデニル酸シクラーゼを活性化することで細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる機能を有するポリペプチドをいう（Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．，２００４，５：２６３−２７８）。
【００１８】
本明細書において、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列の同一性は、リップマン−パーソン法（Ｌｉｐｍａｎ−Ｐｅａｒｓｏｎ法；Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２７：１４３５−４１）によって計算される。具体的には、遺伝情報処理ソフトウェアＧｅｎｅｔｙｘ−Ｗｉｎ（Ｖｅｒ．５．１．１；ソフトウェア開発）のホモロジー解析（Ｓｅａｒｃｈ  ｈｏｍｏｌｏｇｙ）プログラムを用いて、Ｕｎｉｔ  ｓｉｚｅ  ｔｏ  ｃｏｍｐａｒｅ（ｋｔｕｐ）を２として解析を行うことにより算出される。
【００１９】
本明細書において、ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列に関する「少なくとも８０％の同一性」とは、８０％以上、好ましくは８５％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましくは９５％以上、さらにより好ましくは９８％以上、なお好ましくは９９％以上の同一性をいう。
【００２０】
嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２は、ヒト嗅細胞で発現している嗅覚受容体であり、ＧｅｎＢａｎｋにＧＩ：２８４４１３７１０として登録されている。ＯＲ９Ｑ２は、配列番号１で示されるヌクレオチド配列を有する遺伝子にコードされる、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質である。本発明者らは、嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２が、尿臭原因物質であるｐ−クレゾールに対して濃度依存的な活性化を示す（図１）、ｐ−クレゾールに対する受容体であることを見出した。
【００２１】
したがって、嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２発現細胞の応答を抑制するＯＲ９Ｑ２アンタゴニストを、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制のために使用することができる。ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、嗅覚受容体アンタゴニズムによりｐ−クレゾールに対するＯＲ９Ｑ２の活性を抑制することで、個体のｐ−クレゾール臭または尿臭の認識に変化を生じさせ、結果として、ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制することができる。
【００２２】
したがって、一態様において、本発明は、ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストを有効成分とする、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤を提供する。本発明で使用されるＯＲ９Ｑ２アンタゴニストとしては、下記が挙げられる：
メチルセドリルケトン（［１−［（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｓ）−２，６，６，８−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｔｒｉｃｙｃｌｏ［５．３．１．０1,5］ｕｎｄｅｃ−８−ｅｎ−９−ｙｌ］ｅｔｈａｎｏｎｅ；Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ）；
２，２，７，７−テトラメチルトリシクロ［６．２．１．０1,6］ウンデカン−５−オン（２，２，７，７−ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｔｒｉｃｙｃｌｏ［６．２．１．０1,6］ｕｎｄｅｃａｎ−５−ｏｎｅ；Ｉｓｏ−Ｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ）；
３，７，１１−トリメチルドデカ−１，６，１０−トリエン−３−オール（３，７，１１−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｄｏｄｅｃａ−１，６，１０−ｔｒｉｅｎ−３−ｏｌ；Ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ）；
（Ｅ）−２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−１−シクロペンタ−３−エニル）ブト−２−エン−１−オール（（Ｅ）−２−ｅｔｈｙｌ−４−（２，２，３−ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ−１−ｃｙｃｌｏｐｅｎｔ−３−ｅｎｙｌ）ｂｕｔ−２−ｅｎ−１−ｏｌ；Ｂａｃｄａｎｏｌ）；および
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）オキシブタン−２−オール（１−（２−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）ｏｘｙｂｕｔａｎ−２−ｏｌ；Ａｍｂｅｒ  ｃｏｒｅ（登録商標））。
【００２３】
より詳細には、上記の化合物は、ＯＲ９Ｑ２またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニストである。本明細書において「ＯＲ９Ｑ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチド」とは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭または尿臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドをいう。ＯＲ９Ｑ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドの例としては、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるマウスの嗅覚受容体Ｏｌｆｒ１４９７、および配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるラットの嗅覚受容体Ｏｌｆｒ３７７、およびそれらと９５％以上配列同一なポリペプチドが挙げられる。Ｏｌｆｒ１４９７は、ＯＲ９Ｑ２と相同なマウスの嗅覚受容体であって、配列番号２で示されるアミノ酸配列と８６％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭に対する応答性を有する。Ｏｌｆｒ３７７は、ＯＲ９Ｑ２と相同なラットの嗅覚受容体であって、配列番号２で示されるアミノ酸配列と８４％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭に対する応答性を有する。
【００２４】
上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物は、これまで香料素材として知られていたが、ＯＲ９Ｑ２に対するアンタゴニスト作用を有することや、ｐ−クレゾール臭または尿臭を選択的に抑制する機能があることは知られていなかった。なおこれらのＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物は、ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制する機能を有する一方で、香料素材として自身の香りを呈することができるので、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤としてと同時に香料としても使用することができる。
【００２５】
上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物は、いずれも市販のものを購入することができる（「合成香料  化学と商品知識」増補改訂版、印藤元一著、化学工業日報社、２００５年３月発行を参照）。例えば、上記ＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物は、Ｆｉｒｍｅｎｉｃｈ  Ｓ．Ａ．、Ｇｉｖａｕｄａｎ  Ｓ．Ａ．、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｆｌａｖｏｒｓ  ＆  Ｆｒａｇｒａｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、高砂香料工業株式会社、花王株式会社などから入手することが可能である。あるいは、化学合成によって、該市販品と同一物質またはそれを含む組成物を製造することが可能である。
【００２６】
本発明のｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤は、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つの化合物を有効成分として含有する。例えば、本発明のｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤の有効成分は、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つ、例えばいずれか単独もしくはいずれか２つ以上の組み合わせであり得る。あるいは、本発明のｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤は、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つから本質的に構成され得る。
【００２７】
本発明の別の一態様において、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための有効成分として使用され得る。
【００２８】
一実施形態において、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための化合物または組成物に、ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための有効成分として含有され得る。あるいは、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤の製造のため、またはｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための化合物もしくは組成物の製造のために使用することができる。ｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための化合物もしくは組成物の例としては、トイレ用の消臭剤または芳香剤、トイレ用洗浄剤、下着もしくはおむつ用の洗剤もしくは柔軟剤などが挙げられる。
【００２９】
一実施形態において、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制が所望されるあらゆる化合物もしくは組成物に対して、あるいはｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制が所望されるあらゆる環境下において、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制のための有効成分として使用され得る。あるいは、当該ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制のための有効成分として、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制が所望される化合物または組成物の製造のために使用することができる。ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制が所望される化合物または組成物の例としては、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材などが挙げられる。
【００３０】
上記ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制剤、およびｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための化合物または組成物は、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストに加えて、他の消臭効果を有する成分を、その目的に応じて適宜含有していてもよい。当該消臭効果を有する他の成分としては、尿においてｐ−クレゾールを発生させる酵素βグルクロニダーゼを阻害する成分であるＣｙｃｌｏｈｅｘａｄｅｃ−８−ｅｎ−１−ｏｎｅ（グロバノン（登録商標））などが挙げられる。さらに、上記抑制剤、およびｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制するための化合物または組成物は、消臭剤や防臭剤に一般的に添加される任意の成分を含んでいてもよい。
【００３１】
さらなる態様として、本発明は、ｐ−クレゾール臭または尿臭と、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２のアンタゴニストとを共存させる工程を含む、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制方法を提供する。
【００３２】
上記本発明の方法の一実施形態においては、ｐ−クレゾール臭または尿臭の存在下で、対象に、上記に挙げたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１つを適用することにより、ｐ−クレゾール臭または尿臭と当該アンタゴニストとを共存させる。それによって、該対象のＯＲ９Ｑ２と当該アンタゴニストが結合して、ｐ−クレゾールに対する該対象のＯＲ９Ｑ２の活性化が抑制されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによって、ｐ−クレゾール臭または尿臭が抑制される。
【００３３】
上記本発明の方法において、上記対象としては、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制を必要とする対象、好ましくは嗅覚受容体アンタゴニズムによるｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制を必要とする対象が挙げられる。当該対象は、哺乳動物であれば特に限定されないが、好ましくはヒトである。より詳細には、本発明の方法における、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制を必要とする対象の例としては、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）の使用者、病人または高齢者の介護従事者、清掃員、ごみの収集作業に従事するヒトなどが挙げられる。
【００３４】
上記本発明の方法の一実施形態において、上記ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾール臭または尿臭の発生する可能性のある環境下に予め適用される。それにより、当該環境下でｐ−クレゾール臭または尿臭が発生した場合、対象に対して該ｐ−クレゾール臭または尿臭存在下で該ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストが適用されるので、嗅覚受容体アンタゴニズムによってｐ−クレゾール臭または尿臭は抑制される。
【００３５】
上記本発明の方法の一実施形態において、上記ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾールを含有する化合物または組成物に配合される。これによって、当該化合物または組成物に含まれるｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体の活性を低下させ、対象におけるｐ−クレゾール臭または尿臭の認識を抑制し、結果としてｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制する。また別の実施形態において、上記ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、ｐ−クレゾールまたは尿臭を発生する可能性のある化合物または組成物に配合される。これによって、該アンタゴニストは当該化合物または組成物から発生したｐ−クレゾールに対する嗅覚受容体ＯＲ９Ｑ２の活性を低下させ、対象におけるｐ−クレゾール臭または尿臭の認識を抑制し、結果としてｐ−クレゾール臭または尿臭を抑制する。ｐ−クレゾールまたは尿臭を発生する可能性のある化合物または組成物の例としては尿、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材などが挙げられる。したがって、本発明のなお別の態様として、上記ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストからなる群より選択される少なくとも１種を含有する、吸収性物品（例えば、乳幼児や被介護者用おむつ、軽失禁用おむつや尿とりパッド等の軽失禁用品、女性用の生理用品）、ベッドパッド、ベッドマット、シーツ、ブランケット、下着、便器、便座シート、トイレ用マット、トイレの壁もしくは床材、トイレ用の消臭剤または芳香剤、トイレ用洗浄剤、または、下着もしくはおむつ用の洗剤もしくは柔軟剤が提供される。なおこれらの物品において、上記ＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物は、ｐ−クレゾール臭または尿臭の抑制成分としてと同時に香料としても機能し得る。
【００３６】
本発明の例示的実施形態として、さらに以下の物質、製造方法、用途あるいは方法を本明細書に開示する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００３７】
〔１〕下記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ｐ−クレゾール臭抑制剤。
〔表Ａ〕
メチルセドリルケトン；
２，２，７，７−テトラメチルトリシクロ［６．２．１．０1,6］ウンデカン−５−オン；
３，７，１１−トリメチルドデカ−１，６，１０−トリエン−３−オール；
（Ｅ）−２−エチル−４−（２，２，３−トリメチル−１−シクロペンタ−３−エニル）ブト−２−エン−１−オール；
１−（２−ｔｅｒｔ−ブチルシクロヘキシル）オキシブタン−２−オール
【００３８】
〔２〕ｐ−クレゾール臭の抑制のための、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種の使用。
【００３９】
〔３〕ｐ−クレゾール臭抑制剤の製造における、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種の使用。
【００４０】
〔４〕ｐ−クレゾール臭の抑制を必要とする対象に、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種を適用することを含む、ｐ−クレゾール臭の抑制方法。
【００４１】
〔５〕上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、尿臭抑制剤。
【００４２】
〔６〕尿臭の抑制のための、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種の使用。
【００４３】
〔７〕尿臭抑制剤の製造における、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種の使用。
【００４４】
〔８〕尿臭の抑制を必要とする対象に、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種を適用することを含む、尿臭抑制方法。
【００４５】
〔９〕上記〔５〕〜〔８〕のいずれか１項において、好ましくは、上記尿臭は、放尿または採尿後時間が経った尿から発せられる臭い、飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品から発せられる尿の臭い、βグルクロニダーゼが作用した尿またはその抽出物の臭い、またはｐ−クレゾールに起因する尿臭である。
【００４６】
〔１０〕上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分とする、ＯＲ９Ｑ２またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニスト。
【００４７】
〔１１〕ＯＲ９Ｑ２またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対するアンタゴニストとしての、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種の使用。
【００４８】
〔１２〕ＯＲ９Ｑ２またはそれと同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドに対する受容体活性阻害剤の製造における、上記表Ａ記載の化合物からなる群より選択される少なくとも１種の使用。
【００４９】
〔１３〕上記〔１０〕〜〔１２〕のいずれか１項において、
好ましくは、ＯＲ９Ｑ２は、配列番号２で示されるアミノ酸配列からなる嗅覚受容体ポリペプチドであり、かつ
好ましくは、ＯＲ９Ｑ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドは、配列番号２で示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列からなり、かつｐ−クレゾール臭または尿臭に対する応答性を有する嗅覚受容体ポリペプチドである。
【００５０】
〔１４〕上記〔１３〕において、好ましくは、ＯＲ９Ｑ２と同等な機能を有する嗅覚受容体ポリペプチドが、配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、および配列番号４で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチドを含む。
【００５１】
〔１５〕上記〔１３〕において、好ましくは、上記尿臭は、放尿または採尿後時間が経った尿から発せられる臭い、飛び散って乾燥した尿から発せられる臭い、装着中もしくは使用後の尿が付着した吸収性物品から発せられる尿の臭い、βグルクロニダーゼが作用した尿またはその抽出物の臭い、またはｐ−クレゾールに起因する尿臭である。
【実施例】
【００５２】
以下、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００５３】
本実施例で用いた尿臭物質および試験物質を下記表１に示す。
【００５４】
【表１】
2017101224.tif 000002
【００５５】
実施例１  ｐ−クレゾール受容体の同定
１）嗅覚受容体発現細胞の作製
ヒト嗅覚受容体はＧｅｎＢａｎｋに登録されている配列情報を基に、ｈｕｍａｎ  ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ  ｆｅｍａｌｅ（Ｇ１５２１：Ｐｒｏｍｅｇａ）を鋳型としたＰＣＲ法によりクローニングした。ＰＣＲ法により増幅した遺伝子をｐＥＮＴＲベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にマニュアルに従って組込み、ｐＥＮＴＲベクター上に存在するＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトを利用して、ｐＭＥ１８Ｓベクター上のＦｌａｇ−Ｒｈｏタグ配列の下流に作製したＮｏｔＩ、ＡｓｃＩサイトへと組換えた。また、培養細胞内で作られた嗅覚受容体タンパク質を細胞膜表面へ移行するタンパク質であるヒトＲＴＰ１Ｓをコードする遺伝子を別のｐＭＥ１８ＳベクターのＥｃｏＲＩ、ＸｈｏＩサイトへ組込んだ。
表２に示す組成の反応液を調製し、クリーンベンチ内で１５分静置した後、９６ウェルプレート（ＢＤ）の各ウェルに添加した。次いで、ＨＥＫ２９３細胞（３×１０５細胞／ｃｍ２）を９０μＬずつ各ウェルに播種し、３７℃、５％ＣＯ２を保持したインキュベータ内で２４時間培養した。対照として、嗅覚受容体を発現させない細胞（Ｍｏｃｋ）を用意した。
【００５６】
【表２】
2017101224.tif 000003
【００５７】
２）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３細胞に発現させた嗅覚受容体は、細胞内在性のＧαｓと共役しアデニル酸シクラーゼを活性化することで、細胞内ｃＡＭＰ量を増加させる。本研究でのｐ−クレゾール応答測定には、細胞内ｃＡＭＰ量の増加をホタルルシフェラーゼ遺伝子（ｆｌｕｃ２Ｐ−ＣＲＥ−ｈｙｇｒｏ）由来の発光値としてモニターするルシフェラーゼレポータージーンアッセイを用いた。また、ＣＭＶプロモータ下流にウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子を融合させたもの（ｈＲｌｕｃ−ＣＭＶ）を同時に遺伝子導入し、遺伝子導入効率や細胞数の誤差を補正する内部標準として用いた。
上記１）で作製した培養物から、培地を取り除き、新しい培地で調製したｐ−クレゾールを所定の濃度で含む試験物質溶液を７５μＬ添加した。細胞をＣＯ２インキュベータ内で３時間培養し、ルシフェラーゼ遺伝子を細胞内で十分に発現させた。ルシフェラーゼの活性測定には、Ｄｕａｌ−ＧｌｏＴＭｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  ａｓｓａｙ  ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用い、製品の操作マニュアルに従って測定を行った。ｐ−クレゾール刺激により誘導されたホタルルシフェラーゼ由来の発光値をｐ−クレゾール刺激を行わない細胞での発光値で割った値を、ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅとして算出し、応答強度の指標とした。
【００５８】
３）結果
３８７種類の嗅覚受容体それぞれを発現させた細胞についてｐ−クレゾールに対する応答を測定した結果、ｐ−クレゾールに対して活性化する受容体としてＯＲ９Ｑ２が見出された。ＯＲ９Ｑ２発現細胞のｐ−クレゾールに対する応答は濃度依存的であった（図１）。これらの結果から、ＯＲ９Ｑ２を、ｐ−クレゾールを認識するｐ−クレゾール受容体として同定した。
【００５９】
実施例２  ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストの同定
１）ルシフェラーゼアッセイ
実施例１と同様の手順で、ＯＲ９Ｑ２発現細胞を用いたルシフェラーゼアッセイにより、ＯＲ９Ｑ２発現細胞のｐ−クレゾール応答に対する試験物質の影響を調べた。ｐ−クレゾールの濃度は１００μＭとした。ＯＲ９Ｑ２発現細胞の応答強度は以下のとおり算出した。各種刺激条件について、ホタルルシフェラーゼ由来の発光値をウミシイタケルシフェラーゼ由来の発光値で除した値ｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃを算出した。ｐ−クレゾール単独刺激により誘導されたｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｘ）を、同じ受容体を導入し刺激を行わなかった細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除し、ｐ−クレゾール単独刺激による受容体活性Ｆｏｌｄ  ｉｎｃｒｅａｓｅ（Ｘ／Ｙ）を求めた。同様に、ｐ−クレゾールと試験物質との混合物での刺激によるｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｚ）を、刺激を行わない細胞でのｆＬｕｃ／ｈＲｌｕｃ値（Ｙ）で除し、試験物質添加時の受容体活性（Ｚ／Ｙ）を求めた。以下の計算式により、ｐ−クレゾール単独刺激による受容体活性（Ｘ／Ｙ）に対する試験物質添加時の受容体活性（Ｚ／Ｙ）の割合を算出し、試験物質存在下での応答強度（Ｒｅｓｐｏｎｓｅ％）を求めた。独立した実験を３回行い、各回の実験の平均値を得た。
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ（％）＝（Ｚ／Ｙ）／（Ｘ／Ｙ）×１００
【００６０】
２）結果
Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ、Ａｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）、Ｉｓｏ−Ｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ、Ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ、およびＢａｃｄａｎｏｌは、濃度依存的にＯＲ９Ｑ２発現細胞のｐ−クレゾール応答を抑制し、ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストであると判断された（図２）。
【００６１】
実施例３  ＯＲ９Ｑ２アンタゴニストによるｐ−クレゾール臭および尿臭抑制能
実施例２で同定されたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストによるｐ−クレゾール臭および尿臭抑制効果を、官能試験により確認した。
尿臭物質として、βグルクロニダーゼ処理した尿の抽出物を調製した。人尿４００ｍＬを３７℃で２時間２５ｕｎｉｔｓ／ｍＬのβグルクロニダーゼＴｙｐｅＶＩＩ−Ａで処理し、次に３７質量％の塩酸を用いてｐＨ４程度に調整した後、ジクロロメタンで抽出を行った。得られたジクロロメタン層に１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を添加して、酸性成分を水層に移行させて抽出し、中性成分を除去した。得られた水層を、塩酸を用いて酸性とした後、ジエチルエーテルで再抽出を行い、濃縮して抽出物を得た。尿原液８０ｍＬ相当量の抽出物を１ｍＬのエタノールに溶解し、さらにこの溶解液をミネラルオイルで１．２５％になるよう希釈したものを尿抽出物として使用した。ｐ−クレゾールとしては、蒸留水の１％（ｖ／ｖ）水溶液を用いた。実施例２で同定したアンタゴニスト化合物は、ミネラルオイル（Ｓｉｇｍａ）に溶解させて１％（ｖ／ｖ）溶液を調製し、試験物質溶液として用いた。
２０ｍＬ容のガラス瓶（マルエム、Ｎｏ．６）に２つの綿球を入れ、１つの綿球にはｐ−クレゾール水溶液または尿抽出物３０μＬを、もう１つの綿球にはいずれか一種の試験物質溶液３０μＬを染み込ませた。綿球を入れたガラス瓶は蓋をして３７℃で１時間静置した後、試験サンプルとして試験に用いた。実施例２で同定したアンタゴニスト化合物のうち、ｐ−クレゾールに対しては４つ、尿臭に対しては２つについて、それぞれ試験サンプルを準備した。基準サンプルとしてｐ−クレゾールまたは尿抽出物のみ、対照サンプルとしてミネラルオイルのみ（Ｖｅｈｉｃｌｅ）を準備した。
【００６２】
官能試験は、９名または１０名の評価者により単盲式にて行った。試験は、食後１時間半以上を経過した１４時以降から開始した。においの拡散を防ぐため、試験は基本的にドラフト付近で行った。においへの順応の影響を排除するため、試験中には適宜、基準サンプルからの悪臭の認知強度を確認させ、必要であれば休憩をとった。試験サンプルは、３名の評価者による評価後に新しいものと交換した。試験サンプルの評価では、次の５段階の基準「対象の悪臭が、１：わからない、２：感知できる、３：楽にわかる、４：強く感じる、５：耐えられないほど強く感じる」を設定し、基準サンプルでの悪臭強度を３としたときの各試験サンプルからの悪臭強度を、１．０から０．５刻みで５．０までの９段階で評価した。
【００６３】
各評価者による官能試験の評価結果の結果を図３に示す。試験されたＯＲ９Ｑ２アンタゴニストは、いずれもｐ−クレゾール臭および尿臭抑制効果を示した。ｐ−クレゾール臭に関しては、９人の被験者のうち、Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅは全員に、Ｎｅｒｏｌｉｄｏｌは７人に、Ａｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）およびＩｓｏ−Ｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅは５人に対して、ｐ−クレゾールを単独で嗅いだ場合と比較して弱いｐ−クレゾール臭強度（スコア３未満）を回答させるという抑制効果を示した。それぞれのアンタゴニストを併用したときのｐ−クレゾール臭強度の中央値は、Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ：２、Ｎｅｒｏｌｉｄｏｌ：２．５、Ａｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）：２．５、Ｉｓｏ−Ｌｏｎｇｉｆｏｌａｎｏｎｅ：２．５、であり、いずれもｐ−クレゾール単独の時に比べて強度が下がることを表す値であった。尿臭に関しては、１０人の被験者のうち、Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅおよびＡｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）は８人に対して抑制効果を示した。中央値は、Ａｃｅｔｙｌ  ｃｅｄｒｅｎｅ：２、Ａｍｂｅｒ  Ｃｏｒｅ（登録商標）：２、であり、いずれも尿抽出物単独の時に比べて強度が下がることを表す値であった。本実施例の結果から、試験されたＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物が、いずれもｐ−クレゾールおよび尿臭の抑制に有効であることが示された。また、本実施例で用いたＯＲ９Ｑ２アンタゴニスト化合物は、いずれも香料物質であるが、官能試験ではｐ−クレゾール臭を抑制する一方で自身の香りは保持しており、ｐ−クレゾール臭を抑制するとともに香料として機能した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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