(57)【要約】【課題】褐色脂肪細胞に対し高い活性化効果を有する製剤を提供する。【解決手段】ローズヒップ（Rosa canina L.）の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化剤を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローズヒップ（Rosa canina L.）の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項２】
UCP1の発現を亢進させることにより褐色脂肪細胞を活性化する請求項１に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項３】
前記ローズヒップ抽出物が、乾燥重量換算で１日あたり100〜3000ｍｇ摂取される量で配合されている請求項１又は２に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項４】
熱生産によるエネルギーの消費を促進するための請求項１〜３のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤を含む組成物。
【請求項６】
ローズヒップの抽出物を有効成分として含有するUCP1発現亢進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、褐色脂肪細胞活性化剤に関する。更に詳しくは、ローズヒップ抽出物を含有する褐色脂肪細胞活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、肥満に悩む者は多く、大きな社会問題となっている。肥満は、多くの病気の要因となり得る。例えば、メタボリックシンドローム、脂質異常症、糖尿病、高血圧などの生活習慣病と密接に関係しており、生活習慣病から、心筋梗塞、脳卒中、肝硬変、膵炎、痛風、癌等、様々な疾患へ進行するリスクも高くなる。更に、肥満により関節や骨への負担が増えることから腰痛、膝痛、関節炎、骨折なども起こしやすく、喉が圧迫されることにより睡眠時無呼吸症候群にもなりやすい。また、肥満は、家計の負担になるのみならず、医療費の増加をもたらすので各国の治療費や対策費がかかり経済への影響も多大になる。
【０００３】
肥満と脂肪には密接な関係がある。哺乳動物の脂肪組織は、その機能と組織学的特性により、白色脂肪組織（white adipose tissue：WAT）と、褐色脂肪組織（brown adipose tissue：BAT）の２つに大きく分類される。白色脂肪組織ではその中に存在する白色脂肪細胞が、余剰エネルギーを中性脂肪（トリアシルグリセロール）の形で貯蔵し、単房性の大きな脂肪滴を形成する。一方、褐色脂肪組織の生理的役割は全く逆で、交感神経の刺激等により、エネルギーを熱として消費・散逸する部位である。褐色脂肪組織には、多房性の脂肪滴や豊富なミトコンドリアを有することを特徴とする褐色脂肪細胞が存在しており、褐色脂肪細胞のミトコンドリアに存在するUCP1（uncoupling protein 1、脱共役蛋白質１）がエネルギーを熱として散逸させる機能を担っている（非特許文献１、２、及び３）。
【０００４】
さらに最近の研究により、褐色脂肪細胞は胎児期から存在する古典的褐色脂肪細胞と、長期の低温刺激等の環境要因によって白色脂肪組織中に出現する誘導性の褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞とも呼ばれる）とに分けられることがわかった。これらは、どちらも多房性の脂肪滴をもち、ミトコンドリアに富み、UCP1等の熱産生に関わる蛋白を発現するなどの共通の特徴をもつが、その発生学的特徴や発現遺伝子プロファイルが大きく異なっていることが明らかとなってきた（非特許文献１及び２）。
【０００５】
解剖組織学的検討によると、ヒトでは、乳幼児期などには褐色脂肪細胞が存在するが、成人以降では見いだし難くなる。他の大型哺乳動物でも同様の傾向が見られる。一方、マウスなどのげっ歯類では成獣になっても褐色脂肪細胞が見られる。よって、ヒト等の大型哺乳動物では、成長するにつれて褐色脂肪細胞が消失し、成人には褐色脂肪細胞が存在しないもしくは極微量しか存在しないという説が存在しており、成人のBATの存在や生理的な意義は否定的であった（非特許文献４、５及び７）。しかし、近年、陽電子放射断層撮影法(PET)を用いたグルコース代謝活性を指標としてヒトのBATを評価することが可能になった（非特許文献６）ことにより、成人にも代謝活性のあるBATが存在し、寒冷暴露時や食事摂取時の熱産生・エネルギー消費や体脂肪の調節に寄与しており、その機能低下が肥満、特に加齢に伴う体脂肪蓄積の一因になること等が明らかとなった（非特許文献７）。
【０００６】
さらに、ヒト成人で検出されるBATは、ベージュ脂肪細胞の特色をもつことが明らかとなり（非特許文献８〜１０）、ヒト成人において白色脂肪組織中にベージュ脂肪細胞（褐色脂肪様細胞）を特異的に分化誘導することができれば、寒冷誘導熱産生や食事誘導熱産生を増やし、全身のエネルギー消費を亢進させることが可能になると期待されている（非特許文献１、２、及び７）。
【０００７】
従って、現在、ベージュ脂肪細胞（褐色脂肪様細胞）を特異的に誘導したり、ベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞を活性化してエネルギー代謝を改善することにより肥満を予防及び／又は抑制する試みがされつつある。例えば、お茶等に含まれるカテキン類やトウガラシ等に含まれるカプサイシン類については、褐色脂肪組織の活性化作用があることが報告されている（非特許文献１１及び１３）。また、ショウガ等に含まれるパラドール、ハッカ等に含まれるメントール、ワサビ等に含まれるアリルイソチオシアネート、シナモン等に含まれるシナモンアルデヒド等について褐色脂肪細胞の活性化作用との関連が示唆されている（非特許文献１）が、その効果のほどは十分確認されているとは言い難い。そこで、褐色脂肪細胞を活性させる効果の高い更なる物質が望まれていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特許第３７９０７６７号公報
【特許文献２】特許第４２２９９４２号公報
【特許文献３】特開２０１０-２０２５９４号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】大野晴也、梶村真吾、医学の歩み Vol. 250 No.9, 2014, 8.30, p811-815
【非特許文献２】斉藤昌之、松下真美、医学の歩み Vol. 250 No.9, 2014, 8.30, p806-8105
【非特許文献３】R. Burcelin et. al., Biochem. J. (1993) 291, pp. 109-113
【非特許文献４】Ito T, Arch Histol. Cytol. (1991) Mar; 54(1):1-39
【非特許文献５】Heaton J. M. J. Anat. (1972) 112, 1, pp. 35-39
【非特許文献６】Saito M et. al., Diabetes, July (2009), Vol 58, pp. 1526-1531
【非特許文献７】ここまでわかった燃える褐色脂肪の不思議 (2013)斉藤昌之編, NAP Limited
【非特許文献８】Wu J. et. al., Cell, 150, July 20, 2012, pp. 366-376
【非特許文献９】Sharp LZ et. al., PLos One, November 2012, Volume 7, Issue 11, e49452
【非特許文献１０】Lidell E M. et. al., Nature Medicine (2013), Volume 19, Number 5, May 2012
【非特許文献１１】http://www.kao.com/jp/corp_news/2014/20140826_001.html
【非特許文献１２】T. Goto et.al., Journal of Nutritional Biochemistry 23 (2012) 768-776
【非特許文献１３】T. Yoneshiro et. al., The American Journal of Clinical Nutrition 2012; 95:845-850
【非特許文献１４】A. Nagatomo et. al., Preventive Nutrition and Food Science 2013; 18(2):85-91
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、ローズヒップ抽出物を含有する褐色脂肪細胞活性化剤の提供にある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、褐色脂肪細胞の活性化効果が高い物質を得るために鋭意研究した結果、ローズヒップの抽出物の褐色脂肪細胞の活性化効果が非常に高いことを発見した。
【００１２】
ローズヒップ（Rosa canina L.）（和名イヌノイバラ)は、バラ科バラ属の植物で、ビタミンCに富み、従来からお茶やジャムなどの食用として用いられているハーブである。また、ローズヒップオイルは食用油として用いられるほか、スキンケアや民間薬として用いられることもある。動脈硬化、通風、リウマチ等に対し作用があるとも言われている。しかし、ローズヒップが、褐色脂肪細胞に対し高い活性化効果を有することは、これまでに報告されていなかった。
【００１３】
ここで、ローズヒップ（Rosa canina L.)には、脂質代謝を改善する効果等があることは知られていた（特許文献１、２、及び３、非特許文献１４）。しかし、ローズヒップの抽出物がベージュ脂肪細胞（褐色脂肪様細胞）を分化誘導したり、ベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞でのエネルギー消費を促進する作用(以下、包括的に褐色脂肪細胞の活性化と呼ぶ)を有することはこれまでに報告されていなかった。特許文献１に記載の効果は、褐色脂肪細胞の活性化とは別に、肝臓などでの脂質の代謝を促進するものである。特許文献２及び３に記載の効果は、ローズヒップに含まれるチリロサイドに寄与するものである。チリロサイドは、β酸化を促す酵素を活性化する作用を有し、特に腹腔内などに蓄積された脂質の代謝を促進するものである（特許文献２及び非特許文献１２）。また、チリロサイドは、肝臓等におけるＰＰＡＲα及びγ（peroxisome proliferator-activated receptor alpha and gamma、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α及びγ）mRNA等の発現に深く関与しているとの報告もある（非特許文献１４）。これらの文献のいずれにおいても、褐色脂肪細胞の活性化についての言及はなく、褐色脂肪細胞の活性化との関連性は見出し難い。
【００１４】
従って、本願は、以下の発明を提供する。
（１）ローズヒップ（Rosa canina L.）の抽出物を有効成分として含有する褐色脂肪細胞活性化剤。
（２）UCP1の発現を亢進させることにより褐色脂肪細胞を活性化する（１）に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（３）前記ローズヒップ抽出物が、乾燥重量換算で１日あたり100〜3000ｍｇ摂取される量で配合されている（１）又は（２）に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（４）熱生産によるエネルギーの消費を促進するための（１）〜（３）のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤。
（５）（１）〜（４）のいずれか１項に記載の褐色脂肪細胞活性化剤を含む組成物。
（６）ローズヒップの抽出物を有効成分として含有するUCP1発現亢進剤。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、褐色脂肪細胞を活性化して寒冷誘導熱産生や食事誘導熱産生を増やし、全身のエネルギー消費を促進することができる。全身のエネルギー消費が上昇すると、肥満を予防又は抑制することができる。また、本発明の褐色脂肪細胞活性化剤の有効成分であるローズヒップは、従来からお茶や食用として用いられているハーブであり安全性の面でも好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、フッ素の放射性同位元素(18F)で標識したFDG（フルオロデオキシグルコース）の肩甲骨間BAT（iBAT）におけるSUV uptake ratioについて、ローズヒップポリフェノール摂取群（3% RHP）と対照群（control）との比較を示す。SUV uptake ratioは、脳部分（Brain）対する肩甲骨間BAT（iBAT）のSUV比（iBAT/Brain）として示す。
【図２】図２は、ローズヒップポリフェノール摂取群（RHP）と対照群（control）の鼠蹊部皮下脂肪組織のヘマトキシリン・エオジン染色像（上図：H・E）および抗UCP-1抗体の蛍光免疫組織染色像（下図：UCP-1+DAPI）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、ローズヒップ（Rosa canina L.）の抽出物を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明で用いられるローズヒップ（Rosa canina L.）は、バラ科バラ属の植物の植物であり、南米、ヨーロッパ、西部アジア、北アフリカに分布する落葉低木であり、果実は楕円形で緋紅色である。
【００１９】
また、従来のローズヒップ抽出物を有する脂肪代謝促進剤は、特に肝臓等での脂質の代謝を主に促進するチリロサイドに焦点を当てたものである。一方、本願の褐色脂肪細胞活性化剤により初めて、近年ヒト成人でも鎖骨上部などに存在することが明らかになってきた褐色脂肪細胞を活性化するという全く新しいアプローチにより全身のエネルギー消費を促進することができる。
【００２０】
本発明において、ローズヒップの抽出物とは、果実、偽果、又は種子の抽出物のことを指す。抽出物の抽出方法は溶媒抽出により行うことができる。溶媒抽出の場合、ローズヒップの果実、偽果、又は種子を必要に応じて乾燥させ、更に必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤、例えば冷水、温水、又は沸点若しくはそれより低温の熱水、あるいは含水有機溶媒、有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、１，３−ブタンジオール、エーテル等を常温で又は加熱して用いることにより抽出される。しかし、抽出方法は溶媒抽出に限定されず、当業界で知られている常用の手法によってもよい。また、本発明の効果を損なわない限り、上記抽出物の形態は、抽出液自体だけでなく、常用の手法により適宜希釈又は濃縮したものであってもよく、更に、抽出液を乾燥することによって得られる粉状あるいは塊状の固体であってもよい。
【００２１】
本発明に用いられる抽出溶媒は、含水有機溶媒が好ましく、特に含水メタノール、含水エタノール又は含水１，３−ブタンジオール等の含水低級アルコールを選ぶことが好ましく、含水エタノールが最も好ましい。その場合の含水率は、例えば２０〜８０質量％である。
【００２２】
本発明において褐色脂肪細胞とは、胎児期に形成される古典的褐色脂肪細胞および白色脂肪組織中に分化誘導される褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞又はブライト細胞と呼ぶこともある）の両方を指す。つまり、本発明では、狭義の古典的褐色脂肪細胞のみならず、白色脂肪組織中に誘導された褐色様の脂肪細胞も褐色脂肪細胞と呼ぶ。また、白色脂肪組織中に誘導される褐色様の脂肪細胞を特にベージュ脂肪細胞または褐色脂肪様細胞と呼ぶこともある。
【００２３】
白色脂肪細胞は、単房性脂肪滴で細胞サイズが大型で細胞質が少ない。一方、褐色脂肪細胞は、細胞サイズが小型で多房性脂肪滴であり、この多房性脂肪滴の周りに多数のミトコンドリアが存在し、そのため特有の褐色を帯び、交感神経や血管が豊富であるという形態学的・組織学的な特徴を持つ。従って、白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞は、形態学的・組織学的に細胞を観察することにより区別できる。また、白色脂肪はエネルギーを貯蔵するが褐色脂肪細胞はエネルギーを熱として消費・散逸するという違いがある。また、褐色脂肪細胞は白色脂肪細胞よりもエネルギーの代謝が高く、エネルギーを熱として放出するためにグルコースの取込みが増加する。したがって、褐色脂肪細胞の存在は、例えば、18Ｆで標識したグルコースの集積をＰＥＴ（陽電子放射断層撮影）で測定することにより評価できる。さらに、褐色脂肪細胞では、脱共役蛋白質１(UCP-1、uncoupling protein 1）と呼ばれる33KDaの蛋白質が細胞中のミトコンドリア内膜に特異的に発現しているので、UCP-1 mRNAの発現やUCP-1タンパク質を測定することにより褐色脂肪細胞の存在を確認できる。更に、褐色脂肪細胞は寒冷刺激により活性化されるので、寒冷誘導による熱産生を測定することでも評価できる。また、エネルギー消費量は、例えば、メタボリックチャンバーや簡易呼気分析装置などによる測定値からO2消費量をもとに算出することによって評価できる。
【００２４】
本願において、褐色脂肪細胞の活性化とは、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ細胞）が分化誘導されること、及び／又はベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞でのエネルギー消費を促進する作用のことを言う。褐色脂肪細胞活性化剤とは、上述のような褐色脂肪細胞の活性化作用を有する物質を指す。上述のように、褐色脂肪細胞の存在およびエネルギー代謝量の上昇は、UCP-1 mRNA発現やUCP-1タンパク質を測定すること、組織学的に細胞を観察すること、18Ｆ標識グルコースの集積をＰＥＴで測定すること、寒冷誘導による熱産生を測定すること等で評価できる。また、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞）が分化誘導されることを特に褐色脂肪細胞の再活性化と呼ぶこともある。
【００２５】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、熱生産によるエネルギーの代謝を促進し得る。エネルギーの代謝には、基礎代謝によるもの、運動によるもの、日常の生活活動によるもの、そして熱生産によるものがある。一日のエネルギー消費量の約60％は基礎代謝、約5％は運動、約25％は日常の生活活動、そして約10％が熱生産によるものである。筋肉を増やすことにより基礎代謝量を上げる、運動や日常の生活活動を活発に行うことによりエネルギー代謝を上げるといった試みは多くされている。一方、熱生産によるエネルギー消費は、身体が急激な温度変化に対応し得るためのもので、例えば寒冷刺激により上昇する。また、食事摂取により熱生産を増やすことや、感染や炎症などに対抗すべく発熱するために熱生産することも知られている。従って、本願において、熱生産によるエネルギー消費とは、基礎代謝や筋肉運動等によらない、寒冷刺激や食事摂取等に対応する熱生産のために消費される代謝性のエネルギー消費のことをいう。本願の褐色脂肪細胞活性化剤は、特に、交感神経を刺激することにより熱生産によるエネルギーの代謝を促進することもある。
【００２６】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤またはUCP1発現亢進剤におけるローズヒップ抽出物の含有量は特に限定されないが、乾燥重量換算で１日あたり好ましくは100〜3000ｍｇ、より好ましくは300〜1000ｍｇ摂取される量で配合されている。また、本発明の効果を高めるために、他の褐色脂肪細胞活性化剤や代謝促進剤等を併用してもよい。
【００２７】
ローズヒップ抽出物の摂取量は特に限定されないが、体重60ｋｇのヒトでは、１日あたり、乾燥重量換算で100〜3000ｍｇ摂取するのが好ましく、300〜1000ｍｇを摂取するのがより好ましい。
【００２８】
本発明の褐色脂肪細胞活性化剤の製造方法は、ローズヒップの果実、偽果、又は種子から抽出物を抽出する工程を含んでもよい。本発明で用いる抽出物の抽出方法や抽出物の形態は上記と同様に本発明の効果を損なわない限り、任意である。
【００２９】
また、本発明は、上記の褐色脂肪細胞活性化剤を含む組成物も提供する。本発明の組成物は、粉末状、液状、固形状、顆粒状、ペースト状、ゲル状、乳液状、クリーム状、シート状、スプレー状、泡状等の様々な形態であり得る。
【００３０】
本発明の組成物における褐色脂肪細胞活性化剤の含有量は特に限定されないが、ローズヒップ抽出物の乾燥重量換算で１日あたり好ましくは100〜3000ｍｇ、より好ましくは300〜1000ｍｇ摂取される量で配合されている。また、本発明の組成物は、褐色脂肪細胞活性化作用やエネルギー消費促進作用等を一層高めるために、褐色脂肪細胞活性化作用やエネルギー消費促進作用等がある他の物質を添加してもよい。
【００３１】
更に、本発明の組成物は、必要に応じて添加剤を任意に選択し併用することができる。添加剤としては賦形剤等を含ませることができる。
【００３２】
賦形剤としては、所望の形態としたときに通常用いられるものであれば何でも良く、例えば、コムギデンプン、コメデンプン、トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、デキストリン、シクロデキストリンなどのでんぷん類、結晶セルロース類、乳糖、ブドウ糖、砂糖、還元麦芽糖、水飴、フラクトオリゴ糖、乳化オリゴ糖などの糖類、ソルビトール、エリスリトール、キシリトール、ラクチトール、マンニトールなどの糖アルコール類が挙げられる。これら賦形剤は、単独で又は二種以上組み合わせて使用できる。
【００３３】
また、本発明の組成物は、必要に応じて、その他の成分、例えば、着色剤、保存剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、安定化剤、ゲル化剤、酸化防止剤、界面活性剤、保存剤、ｐＨ調整剤、油分、粉末、色材、水、アルコール類、増粘剤、キレート剤、シリコーン類、酸化防止剤、紫外線吸収剤、保湿剤、香料、各種薬効成分、防腐剤、ｐＨ調整剤、中和剤等、公知のものを適宜選択して使用できる。
【００３４】
上述のように、従来のローズヒップ抽出物を有する脂質代謝促進剤は、チリロサイドに焦点を当てたものである。チリロサイドは、体内においてβ酸化を促す酵素を活性化する作用を有し、特に肝臓内脂肪（脂肪肝）や腹腔内に蓄積された内臓脂肪におけるβ酸化を促すことで脂質代謝を促進する。一方、本願の褐色脂肪細胞活性化剤は、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ細胞）を分化誘導すること、及び／又はベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞でのエネルギー消費を促進するという全く異なるアプローチによるものである。また、ヒトの褐色脂肪細胞やベージュ細胞は主に鎖骨上部、頸部脊椎周囲等に存在するものであり、主に肝臓等でβ酸化を促進するチリロサイドとは全く異なるものである。
【００３５】
従って、本発明の褐色脂肪細胞活性化剤は、白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ細胞）を分化誘導すること、及び／又はベージュ脂肪細胞や褐色脂肪細胞を活性化し、特に熱生産による全身のエネルギー消費を促進するという全く新しいアプローチにより代謝を促進することで、肥満を予防及び／又は抑制することができる。従って、肥満に起因する疾患の治療及び／又は予防にも有効である。また、本発明の有効成分であるローズヒップは天然物であり安全性の面でも好ましい。
【実施例】
【００３６】
次に実施例によって本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。
【実施例１】
【００３７】
PETによる褐色脂肪細胞の活性化のin vivo評価
PET（Positron Emission Tomography、陽電子放射断層撮影）を用いて褐色脂肪細胞の活性化を評価した。褐色脂肪細胞が活性化するとグルコースが取り込まれる。そこで、フッ素の放射性同位元素(18F)で標識したFDG（フルオロデオキシグルコース）を利用して、PETにより糖の利用を可視化することで褐色脂肪細胞の活性化が評価できる（Fueger BJ(2006)J Nucl Med）。また、寒冷刺激は、褐色脂肪を活性化して、寒冷誘導熱産生を増加させる。そこで、低温負荷により寒冷刺激を与えたマウス褐色脂肪細胞の活性化に対するローズヒップ抽出物の作用を検討した。
【００３８】
本明細書の実施例において、ローズヒップ抽出物は、ローズヒップ果実（種子を含む）粉砕物を７０％エタノール（エタノール：水＝７０：３０：容積比)により抽出したものを用いた。
【００３９】
C57BL6Jマウス（オス、７週齢、日本チャールズリバー社製）１０匹を用いて、１週間の予備飼育後、群間の平均体重がほぼ同等になるようにコントロール群（５匹）とローズヒップ抽出物摂取群（５匹）に群分けを行った。コントロール群（control）には、脂肪分約３０質量％含む高脂肪食（粉末飼料。オリエンタル酵母（株）製）を自由摂取させた。ローズヒップ抽出物摂取群（3% RHP）には、上記高脂肪食（オリエンタル酵母（株）製）に、上述の方法で製造したローズヒップ抽出物（商品名「ローズヒップポリフェノールMJ」；森下仁丹株式会社製）を当該高脂肪食に対し３質量％（ｗ／ｗ）（実分）の配合割合となるよう添加したローズヒップ抽出物添加高脂肪食（粉末飼料）を自由摂取させた。
【００４０】
上記各飼料を各群4週間自由摂取させて飼育した後、両群とも被験動物の体重の測定を行った。低温負荷(4℃、60分間)をかけた後、室温下で[18F]FDG注射液（約7.4 MBq、500 μL未満、投与容量はガンマメーターで測定した放射線量を元に、投与時刻に合わせそれぞれ決定した。また、必要に応じて生理食塩液で希釈した。)を腹膜腔へ投与した。その後、再び30分間低温負荷をかけた。なお、低温負荷の間、試験飼料・水は、ともに自由摂取とした。
【００４１】
低温負荷後、室温約20℃の部屋で10分間放置し、吸入麻酔装置を用いてイソフルラン/酸素(導入時ガス濃度3.0%、維持ガス濃度1.0〜1.5%)で麻酔をかけた。以下のプロトコルに従い、INVEON dedicated PET(SIEMENS製)でPET撮像(エミッションスキャン30分、トランスミッションスキャン15分)を行った。
【００４２】
PET撮像および再構成に必要な処理条件は以下の表１のように設定した。
【００４３】
【表１】
2017088589.tif 000003
【００４４】
PET撮像で得られた再構成データを、PET付属ソフトウェアINVEON Research Workplace ver.4.0で開いた。マウスで古典的褐色脂肪細胞から形成されるBATである肩甲骨間BAT（iBAT）周辺で関心領域（region of interest、ROI）を設定し、SUV（standard uptake value）の最大値（MAX）及び平均値（Mean）を算出した。対照として脳部分（Brain）についてもROIを設定し、同様に最大SUV（SUV MAX）及び平均SUV（SUV Mean）を算出した。SUVとは、投与した全放射能が全身に均一に分布したときのSUVを１とした場合の相対的濃度値のことであり、PET等において放射性薬剤の腫瘍や臓器への集積の強さを表すための指標となる。具体的にはSUVは以下の式で求める。
【００４５】
【数１】
2017088589.tif 000004
【００４６】
これらの値からSUV uptake ratioを求めた。SUV uptake ratioは、以下の式で求める。
【００４７】
【数２】
2017088589.tif 000005
【００４８】
結果を図１に示す。図１の結果から明らかなように、ローズヒップ抽出物摂取群では対照群に比べ、SUV uptake ratioが有意に高値を示した。この結果より、ローズヒップ抽出物を摂取することにより、肩甲骨における古典的褐色脂肪細胞が活性化され、FDGの取り込みが促進されたと考えられる。また、FDG集積は肩甲骨間の組織だけでなく、腋下、腎周囲など古典的褐色脂肪細胞が存在する部位において非常に高くなっていた（図示せず）。以上の結果より、ローズヒップ抽出物を摂取すると、古典的褐色脂肪細胞が活性化されてエネルギー消費が促進されたと考えられる。
【実施例２】
【００４９】
蛍光免疫染色によるベージュ細胞誘導作用のin vivo評価
寒冷刺激は、ヒトにおいて褐色脂肪細胞を再活性化、つまり白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞）を誘導して、寒冷誘導熱産生を増加させ、体脂肪を低下させる[T. Yoneshiro et al., (2013)J. Clin. Invest.]。この寒冷刺激は、マウスの鼠蹊部白色脂肪組織中に褐色様脂肪細胞（すなわちベージュ脂肪細胞）を誘導することが知られている[Okamatsu-Ogura Y(2013)PLosOne]。また、褐色脂肪様細胞ではエネルギー消費に関与するUCP-1（脱共役蛋白質１）が特異的に発現している。そこで、ローズヒップ抽出物を与えた又は与えないマウスの鼠蹊部皮下脂肪組織を形態学的に観察すること、および当該組織におけるUCP-1を測定することによりローズヒップ抽出物のベージュ脂肪細胞誘導作用について検討した。
【００５０】
PET撮像後に、さらにそれぞれの飼料を各群4週間自由摂取させて飼育した後、麻酔下で採血及び鼠蹊部皮下白色脂肪組織(iWAT)の摘出を行った。右iWATを摘出し、重量を測定後、新鮮な上部組織より、カミソリ刃で無理な力をかけないよう5 mm×10 mm程度の大きさに四角く組織を切り出した。切り出した組織は、培養用シャーレ(直径＝35 mm）中で10%中性緩衝ホルマリン液に30分以上浸漬した後、それぞれの組織からカミソリで5 mm角未満の組織片を切り出した。組織サンプルは、10%中性緩衝ホルマリン液中で保存した後、パラフィンで包埋し、厚さ5μmの組織切片を作製した。組織切片は定法に従いヘマトキシリン・エオジン染色を行い、さらに既報をもとに抗UCP-1抗体による蛍光免疫組織染色を実施した[Lu X(2012) Endocrinology]。
【００５１】
結果を図２に示す。対照群の鼠蹊部皮下脂肪組織のヘマトキシリン・エオジン染色像では、白色脂肪の形態学的特徴である単房性脂肪滴を有する細胞のみが観察されるが、ローズヒップ抽出物群の組織では、多房性脂肪滴を含む褐色脂肪様の脂肪細胞がみとめられる。さらに抗UCP-1抗体の蛍光免疫組織染色像では、ローズヒップ抽出物群の多房性脂肪滴を含む褐色脂肪様の細胞のみが特異的に染色されていることから、これらの細胞が白色脂肪組織中に誘導された褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞）であることが明らかとなった。
【００５２】
以上の結果より、ローズヒップ抽出物の摂取は、寒冷刺激と同様にマウス鼠蹊部皮下脂肪組織中への褐色脂肪様細胞（ベージュ脂肪細胞）誘導作用を有することが分かった。したがって、ヒトにおいても褐色脂肪細胞を再活性化（白色脂肪組織中に褐色脂肪様細胞を分化誘導）して、寒冷誘導熱産生を増加させ、全身のエネルギー消費を促進すると考えられる。
【００５３】
従って、ローズヒップ抽出物を含有する本願の褐色脂肪細胞活性化剤を摂取することにより、白色脂肪組織中に褐色様脂肪細胞（ベージュ脂肪細胞）を分化誘導するとともに、褐色脂肪細胞やベージュ脂肪細胞を活性化して、寒冷誘導熱産生や食事誘導熱産生を増やし、全身のエネルギー消費を促進することにより、脂肪量を減少させひいては肥満を解消することが期待される。
【図１】
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【図２】
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