(57)【要約】【課題】本発明は、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができる新たなＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞において、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができるＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞においてエリスロポエチン産生の抑制を解除し、エリスロポエチンを産生させることができるエリスロポエチン産生誘導剤等を提供することを目的とする。【解決手段】式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含有するＧＡＴＡ阻害剤を用いる。かかる化合物の中でも、式（１）で表される化合物又は医薬的に許容されるそれらの塩が好ましく挙げられ、中でも、ミトキサントロン、ダウノルビシン、エピルビシン（epirubicin）がより好ましく挙げられる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤を含有することを特徴とするエリスロポエチン産生誘導剤。
【請求項２】
腎性貧血若しくは腎不全の治療、改善又は予防のためのエリスロポエチン産生誘導剤である請求項１に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
【請求項３】
ＧＡＴＡ阻害剤が、以下の式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含有することを特徴とする請求項２に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
式（１）：
【化１】
2017088573.tif 000084
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ２及びＲ３、並びにＲ７及びＲ８は、それぞれ一緒になって環を形成してもよく、該環は、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１で置換されていてもよい。］；
式（７）：
【化２】
2017088573.tif 000085
［式中、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、又は、水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を表し、
Ｒａ６は、水酸基又はメチル基を表し、
Ｌ１は、０〜３のいずれかの整数を表し、
Ｌ２は、１〜１０のいずれかの整数を表し、
Ａは、
【化３】
2017088573.tif 000086
を表し、
【化４】
2017088573.tif 000087
は、単結合又は二重結合を表す。］；
式（８）：
【化５】
2017088573.tif 000088
［式中、Ｒｂ１、Ｒｂ２は、同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、水酸基を表し、
Ｒｂ３は、水素原子又は有機基；
【化６】
2017088573.tif 000089
（上記有機基中、Ｒｂ４は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基を表し、Ｌ５は、０〜５のいずれかの整数を表す。）
を表し、
Ｌ３は、０〜５のいずれかの整数を表し、
Ｌ４は、０〜５のいずれかの整数を表す。］；
式（９）：
【化７】
2017088573.tif 000090
［式中、Ｒｃ１、Ｒｃ２は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ＮＲ１０Ｒ１１、チオール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（１０）：
【化８】
2017088573.tif 000091
［式中、Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒｄは、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表し、
Ｍは、０又は１の整数を表す。］；
式（１１）：
【化９】
2017088573.tif 000092
［式中、Ｒｅ１は、水素原子又は水酸基を表し、
Ｒｅ２は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表す。］；
式（１２）： 
【化１０】
2017088573.tif 000093
［式中、Ｒｆは、炭素数１〜１０のアルキル基を表す。］；
式（１３）：
【化１１】
2017088573.tif 000094
［式中、Ｒｇ１及びＲｇ２、並びにＲｇ４及びＲｇ５は、それぞれ一緒になって、カルボニル基及び／又は酸素原子を含む環を形成し、
Ｒｇ３は、水酸基を表し、
Ｒｇ６は、ＯＲ９を表し、
上記Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ６は、０〜５の整数を表す。］；
式（１４）で表される化合物
【化１２】
2017088573.tif 000095
［式中、Ｒｈ１及びＲｈ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ７は、０〜３の整数を表す。］；
式（１５）：
【化１３】
2017088573.tif 000096
［式中、Ｒｊ１、Ｒｊ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｌ８は、０〜３の整数を表し、
Ｌ９は、０〜２の整数を表す。］；
式（１６）：
【化１４】
2017088573.tif 000097
式（１７−１）：
【化１５】
2017088573.tif 000098
［式中、ｑは、同一でも異なっていてもよく、１〜１０の整数を表す。］；
式（１７−２）：
【化１６】
2017088573.tif 000099
【請求項４】
式（１）で表される化合物が、以下の式（２）で表される化合物、及び式（３）で表される化合物からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物であることを特徴とする請求項３に記載のＧＡＴＡ阻害剤。
式（２）：
【化１７】
2017088573.tif 000100
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８のいずれか１つは、ＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（３）：
【化１８】
2017088573.tif 000101
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｑは、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表す。
ｍは、１〜８のいずれかの整数であり、Ｑのいずれか１つは、ＯＲ９であり、Ｒ９は、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基である。］
【請求項５】
式（２）で表される化合物が、以下の化合物（４）であり、式（３）で表される化合物が、以下の化合物（５）及び化合物（６）であることを特徴とする請求項４に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
式（４）：
【化１９】
2017088573.tif 000102
式（５）：
【化２０】
2017088573.tif 000103
式（６）：
【化２１】
2017088573.tif 000104
【請求項６】
上皮系細胞が、腎上皮細胞、気管上皮細胞、胆管上皮細胞から選択されることを特徴とする請求項１〜５のいずれかに記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
【請求項７】
以下の式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含有することを特徴とするＧＡＴＡ阻害剤。
式（１）：
【化２２】
2017088573.tif 000105
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ２及びＲ３、並びにＲ７及びＲ８は、それぞれ一緒になって環を形成してもよく、該環は、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１で置換されていてもよい。］；
式（７）：
【化２３】
2017088573.tif 000106
［式中、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、又は、水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を表し、
Ｒａ６は、水酸基又はメチル基を表し、
Ｌ１は、０〜３のいずれかの整数を表し、
Ｌ２は、１〜１０のいずれかの整数を表し、
Ａは、
【化２４】
2017088573.tif 000107
を表し、
【化２５】
2017088573.tif 000108
は、単結合又は二重結合を表す。］；
式（８）：
【化２６】
2017088573.tif 000109
［式中、Ｒｂ１、Ｒｂ２は、同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、水酸基を表し、
Ｒｂ３は、水素原子又は有機基；
【化２７】
2017088573.tif 000110
（上記有機基中、Ｒｂ４は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基を表し、Ｌ５は、０〜５のいずれかの整数を表す。）
を表し、
Ｌ３は、０〜５のいずれかの整数を表し、
Ｌ４は、０〜５のいずれかの整数を表す。］；
式（９）：
【化２８】
2017088573.tif 000111
［式中、Ｒｃ１、Ｒｃ２は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ＮＲ１０Ｒ１１、チオール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（１０）：
【化２９】
2017088573.tif 000112
［式中、Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒｄは、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表し、
Ｍは、０又は１の整数を表す。］；
式（１１）：
【化３０】
2017088573.tif 000113
［式中、Ｒｅ１は、水素原子又は水酸基を表し、
Ｒｅ２は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表す。］；
式（１２）： 
【化３１】
2017088573.tif 000114
［式中、Ｒｆは、炭素数１〜１０のアルキル基を表す。］；
式（１３）：
【化３２】
2017088573.tif 000115
［式中、Ｒｇ１及びＲｇ２、並びにＲｇ４及びＲｇ５は、それぞれ一緒になって、カルボニル基及び／又は酸素原子を含む環を形成し、
Ｒｇ３は、水酸基を表し、
Ｒｇ６は、ＯＲ９を表し、
上記Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ６は、０〜５の整数を表す。］；
式（１４）で表される化合物
【化３３】
2017088573.tif 000116
［式中、Ｒｈ１及びＲｈ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ７は、０〜３の整数を表す。］；
式（１５）：
【化３４】
2017088573.tif 000117
［式中、Ｒｊ１、Ｒｊ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｌ８は、０〜３の整数を表し、
Ｌ９は、０〜２の整数を表す。］；
式（１６）：
【化３５】
2017088573.tif 000118
式（１７−１）：
【化３６】
2017088573.tif 000119
［式中、ｑは、１〜１０の整数を表す。］；
式（１７−２）：
【化３７】
2017088573.tif 000120
【請求項８】
式（１）で表される化合物が、以下の式（２）で表される化合物、及び式（３）で表される化合物からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物であることを特徴とする請求項７に記載のＧＡＴＡ阻害剤。
式（２）：
【化３８】
2017088573.tif 000121
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８のいずれか１つは、ＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（３）：
【化３９】
2017088573.tif 000122
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｑは、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表す。
ｍは、１〜８のいずれかの整数であり、Ｑのいずれか１つは、ＯＲ９であり、Ｒ９は、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基である。］
【請求項９】
式（２）で表される化合物が、以下の化合物（４）であり、式（３）で表される化合物が、以下の化合物（５）及び化合物（６）であることを特徴とする請求項８に記載のＧＡＴＡ阻害剤。
式（４）：
【化４０】
2017088573.tif 000123
式（５）：
【化４１】
2017088573.tif 000124
式（６）：
【化４２】
2017088573.tif 000125
【請求項１０】
請求項７〜９のいずれかに記載のＧＡＴＡ阻害剤を含有することを特徴とするエリスロポエチン産生誘導剤。
【請求項１１】
上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導のために用いることを特徴とする請求項１０に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
【請求項１２】
上皮系細胞が、腎上皮細胞、気管上皮細胞、胆管上皮細胞から選択されることを特徴とする請求項１１に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができる新たなＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞において、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができるＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞においてエリスロポエチン産生の抑制を解除し、エリスロポエチンを産生させることができるエリスロポエチン産生誘導剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
エリスロポエチン（ＥＰＯ）は、赤血球系幹細胞の分化誘導を刺激し、赤血球の産生を促進する糖タンパク質（ホルモン）であり、約９０％が腎臓の尿細管間質細胞で産生され、残りの約１０％が肝臓で産生される。エリスロポエチンは、赤芽球前駆細胞である未分化赤血球系前駆細胞（ＢＦＵ−Ｅ）や分化赤血球系前駆細胞（ＣＦＵ−Ｅ）が有するＥＰＯ受容体（ＥＰＯＲ）に結合することにより赤血球への分化を促進する（非特許文献１）。エリスロポエチン遺伝子の発現は、低酸素誘導因子（Hypoxia inducible factor：ＨＩＦ）による正の促進と、転写因子ＧＡＴＡによる負の抑制のバランスにより調節されている（非特許文献２、３）。このため、ＨＩＦ促進作用を有する化合物やＧＡＴＡ阻害作用を有する化合物が、エリスロポエチン産生促進薬として使用されることが期待される（特許文献１）。
【０００３】
ＨＩＦ促進剤であるＦＧ−２２１６（Fibrogen社製）は、ＨＩＦの分解を抑制することにより、エリスロポエチンの発現を促す（非特許文献４）。一方、ＧＡＴＡ阻害剤であるＫ−７１７４（興和社製）は、ＧＡＴＡ結合配列へのＧＡＴＡの結合を阻害することにより、エリスロポエチンの発現を促し（非特許文献５）、また、ＧＡＴＡ阻害剤であるＫ−１１７０６（興和社製）は、エリスロポエチン遺伝子のプロモーター上のＧＡＴＡ結合配列へのＧＡＴＡの結合を阻害するとともに、ＨＩＦの結合を促進させることにより、エリスロポエチンの発現を促す（非特許文献６）。これらＨＩＦ促進剤やＧＡＴＡ阻害剤は、貧血改善薬としては使用されているものの、対象とされている貧血は、炎症惹起による骨髄抑制時における貧血症状に限られており、また、確認されているエリスロポエチン産生誘導も、肝細胞などの既知のエリスロポエチン産生細胞においてであった。したがって、従来のＨＩＦ促進剤やＧＡＴＡ阻害剤は、腎機能が低下し、エリスロポエチン産生能が低下した慢性腎不全に対しては十分な効果が得られていないのが現状である。通常、慢性腎不全に対しては、遺伝子組換えヒトエリスロポエチンの投与による補充療法が用いられる。しかしながら、エリスロポエチン製剤は高価で、頻回の注射が必要であるなどの問題があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２０１４／０８０６４０号パンフレット
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Jelkmann, W. (2004) Intern Med. 43, 649-659.
【非特許文献２】Semenza, G.L. and Wang, G.L. (1992) Mol Cell Biol. 12, 5447-5454.
【非特許文献３】Imagawa, S. et al., (1997) Blood. 89, 1430-1439.
【非特許文献４】Hsieh, MM. et al., (2007) Blood. 110, 2140-2147.
【非特許文献５】Imagawa, S. et al., (2003) FASEB J. 17, 1742-1744.
【非特許文献６】Nakano, Y. et al., (2004) Blood. 104, 4300-4307.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができる新たなＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞において、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができるＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞においてエリスロポエチン産生の抑制を解除し、エリスロポエチンを産生させることができるエリスロポエチン産生誘導剤等を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った。具体的には、まず、化合物ライブラリーに含まれている１１６５類の既存薬化合物から、新規なＧＡＴＡ阻害物質を見いだした。
【０００８】
本発明者らは、いくつかのＧＡＴＡ阻害物質が上皮系細胞においてＧＡＴＡ阻害活性を発揮し得るかを調べた。その結果、既知のＧＡＴＡ阻害剤であり、かつ、エリスロポエチン産生誘導剤でもあるＫ−７１７４は、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導しなかったものの、新規なＧＡＴＡ阻害物質であるミトキサントロン、ピルビニウム、ジゴキシンは、腎上皮細胞や肺胞上皮細胞等の上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導することができることを本発明者らは見いだした。
【０００９】
さらに本発明者らは、新規なＧＡＴＡ阻害物質であるミトキサントロンをマウスに投与したところ、ミトキサントロンが腎組織においても、肺組織においても、エリスロポエチン産生を誘導することができることを見いだした。
【００１０】
本発明者らは、以上の知見等を見いだし、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、以下の発明に関する。
［１］上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤を含有することを特徴とするエリスロポエチン産生誘導剤。
［２］腎性貧血若しくは腎不全の治療、改善又は予防のためのエリスロポエチン産生誘導剤である上記［１］に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
［３］ＧＡＴＡ阻害剤が、以下の式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含有することを特徴とする上記［２］に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
式（１）：
【化１】
2017088573.tif 000002
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ２及びＲ３、並びにＲ７及びＲ８は、それぞれ一緒になって環を形成してもよく、該環は、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１で置換されていてもよい。］；
式（７）：
【化２】
2017088573.tif 000003
［式中、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、又は、水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を表し、
Ｒａ６は、水酸基又はメチル基を表し、
Ｌ１は、０〜３のいずれかの整数を表し、
Ｌ２は、１〜１０のいずれかの整数を表し、
Ａは、
【化３】
2017088573.tif 000004
を表し、
【化４】
2017088573.tif 000005
は、単結合又は二重結合を表す。］；
式（８）：
【化５】
2017088573.tif 000006
［式中、Ｒｂ１、Ｒｂ２は、同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、水酸基を表し、
Ｒｂ３は、水素原子又は有機基；
【化６】
2017088573.tif 000007
（上記有機基中、Ｒｂ４は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基を表し、Ｌ５は、０〜５のいずれかの整数を表す。）
を表し、
Ｌ３は、０〜５のいずれかの整数を表し、
Ｌ４は、０〜５のいずれかの整数を表す。］；
式（９）：
【化７】
2017088573.tif 000008
［式中、Ｒｃ１、Ｒｃ２は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ＮＲ１０Ｒ１１、チオール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（１０）：
【化８】
2017088573.tif 000009
［式中、Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒｄは、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表し、
Ｍは、０又は１の整数を表す。］；
式（１１）：
【化９】
2017088573.tif 000010
［式中、Ｒｅ１は、水素原子又は水酸基を表し、
Ｒｅ２は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表す。］；
式（１２）： 
【化１０】
2017088573.tif 000011
［式中、Ｒｆは、炭素数１〜１０のアルキル基を表す。］；
式（１３）：
【化１１】
2017088573.tif 000012
［式中、Ｒｇ１及びＲｇ２、並びにＲｇ４及びＲｇ５は、それぞれ一緒になって、カルボニル基及び／又は酸素原子を含む環を形成し、
Ｒｇ３は、水酸基を表し、
Ｒｇ６は、ＯＲ９を表し、
上記Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ６は、０〜５の整数を表す。］；
式（１４）で表される化合物
【化１２】
2017088573.tif 000013
［式中、Ｒｈ１及びＲｈ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ７は、０〜３の整数を表す。］；
式（１５）：
【化１３】
2017088573.tif 000014
［式中、Ｒｊ１、Ｒｊ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｌ８は、０〜３の整数を表し、
Ｌ９は、０〜２の整数を表す。］；
式（１６）：
【化１４】
2017088573.tif 000015
式（１７−１）：
【化１５】
2017088573.tif 000016
［式中、ｑは、１〜１０の整数を表す。］；
式（１７−２）：
【化１６】
2017088573.tif 000017
［４］式（１）で表される化合物が、以下の式（２）で表される化合物、及び式（３）で表される化合物からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物であることを特徴とする上記［３］に記載のＧＡＴＡ阻害剤。
式（２）：
【化１７】
2017088573.tif 000018
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８のいずれか１つは、ＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（３）：
【化１８】
2017088573.tif 000019
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｑは、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表す。
ｍは、１〜８のいずれかの整数であり、Ｑのいずれか１つは、ＯＲ９であり、Ｒ９は、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基である。］
［５］式（２）で表される化合物が、以下の化合物（４）であり、式（３）で表される化合物が、以下の化合物（５）及び化合物（６）であることを特徴とする上記［４］に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
式（４）：
【化１９】
2017088573.tif 000020
式（５）：
【化２０】
2017088573.tif 000021
式（６）：
【化２１】
2017088573.tif 000022
［６］上皮系細胞が、腎上皮細胞、気管上皮細胞、胆管上皮細胞から選択されることを特徴とする上記［１］〜［５］のいずれかに記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
【００１２】
また、本発明は、以下の発明に関する。
［７］以下の式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含有することを特徴とするＧＡＴＡ阻害剤。
式（１）：
【化２２】
2017088573.tif 000023
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ２及びＲ３、並びにＲ７及びＲ８は、それぞれ一緒になって環を形成してもよく、該環は、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１で置換されていてもよい。］；
式（７）：
【化２３】
2017088573.tif 000024
［式中、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、又は、水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を表し、
Ｒａ６は、水酸基又はメチル基を表し、
Ｌ１は、０〜３のいずれかの整数を表し、
Ｌ２は、１〜１０のいずれかの整数を表し、
Ａは、
【化２４】
2017088573.tif 000025
を表し、
【化２５】
2017088573.tif 000026
は、単結合又は二重結合を表す。］；
式（８）：
【化２６】
2017088573.tif 000027
［式中、Ｒｂ１、Ｒｂ２は、同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、水酸基を表し、
Ｒｂ３は、水素原子又は有機基；
【化２７】
2017088573.tif 000028
（上記有機基中、Ｒｂ４は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基を表し、Ｌ５は、０〜５のいずれかの整数を表す。）
を表し、
Ｌ３は、０〜５のいずれかの整数を表し、
Ｌ４は、０〜５のいずれかの整数を表す。］；
式（９）：
【化２８】
2017088573.tif 000029
［式中、Ｒｃ１、Ｒｃ２は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ＮＲ１０Ｒ１１、チオール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（１０）：
【化２９】
2017088573.tif 000030
［式中、Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒｄは、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表し、
Ｍは、０又は１の整数を表す。］；
式（１１）：
【化３０】
2017088573.tif 000031
［式中、Ｒｅ１は、水素原子又は水酸基を表し、
Ｒｅ２は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表す。］；
式（１２）： 
【化３１】
2017088573.tif 000032
［式中、Ｒｆは、炭素数１〜１０のアルキル基を表す。］；
式（１３）：
【化３２】
2017088573.tif 000033
［式中、Ｒｇ１及びＲｇ２、並びにＲｇ４及びＲｇ５は、それぞれ一緒になって、カルボニル基及び／又は酸素原子を含む環を形成し、
Ｒｇ３は、水酸基を表し、
Ｒｇ６は、ＯＲ９を表し、
上記Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ６は、０〜５の整数を表す。］；
式（１４）で表される化合物
【化３３】
2017088573.tif 000034
［式中、Ｒｈ１及びＲｈ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ７は、０〜３の整数を表す。］；
式（１５）：
【化３４】
2017088573.tif 000035
［式中、Ｒｊ１、Ｒｊ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｌ８は、０〜３の整数を表し、
Ｌ９は、０〜２の整数を表す。］；
式（１６）：
【化３５】
2017088573.tif 000036
式（１７−１）：
【化３６】
2017088573.tif 000037
［式中、ｑは、１〜１０の整数を表す。］；
式（１７−２）：
【化３７】
2017088573.tif 000038
［８］式（１）で表される化合物が、以下の式（２）で表される化合物、及び式（３）で表される化合物からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物であることを特徴とする上記［７］に記載のＧＡＴＡ阻害剤。
式（２）：
【化３８】
2017088573.tif 000039
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８のいずれか１つは、ＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。］；
式（３）：
【化３９】
2017088573.tif 000040
［式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｑは、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表す。
ｍは、１〜８のいずれかの整数であり、Ｑのいずれか１つは、ＯＲ９であり、Ｒ９は、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基である。］
［９］式（２）で表される化合物が、以下の化合物（４）であり、式（３）で表される化合物が、以下の化合物（５）及び化合物（６）であることを特徴とする上記［８］に記載のＧＡＴＡ阻害剤。
式（４）：
【化４０】
2017088573.tif 000041
式（５）：
【化４１】
2017088573.tif 000042
式（６）：
【化４２】
2017088573.tif 000043
［１０］上記［７］〜［９］のいずれかに記載のＧＡＴＡ阻害剤を含有することを特徴とするエリスロポエチン産生誘導剤。
［１１］上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導のために用いることを特徴とする上記［１０］に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
［１２］上皮系細胞が、腎上皮細胞、気管上皮細胞、胆管上皮細胞から選択されることを特徴とする上記［１１］に記載のエリスロポエチン産生誘導剤。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができる新たなＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞において、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができるＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞においてエリスロポエチン産生の抑制を解除し、エリスロポエチンを産生させることができるエリスロポエチン産生誘導剤等を提供することができる。
【００１４】
慢性腎不全患者は、エリスロポエチン産生を主に担っている腎臓の尿細管間質細胞が障害されていることが多いが、腎上皮細胞は障害されていない場合が多い。上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤やエリスロポエチン産生誘導剤は、このような慢性腎不全患者においても、エリスロポエチン産生誘導を行い得るため、そのような患者における腎性貧血の予防、改善及び／又は治療に用い得る。
【００１５】
また、エリスロポエチンは、細胞や組織を保護する作用（細胞・組織保護作用）を有しており、ヒト組換えエリスロポエチン製剤の投与により腎臓保護作用、心筋保護作用、末梢動脈保護作用等が報告されている（臨牀透析, vol.24, no.1,p.69-75(2008)）。したがって、上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤やエリスロポエチン産生誘導剤は、細胞や組織の保護に用いることができ、好ましくは、腎不全等の予防、改善及び／又は治療に用いることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】実施例１におけるルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示す図である。縦軸はルシフェラーゼの蛍光強度を表し、横軸の「Ｋ５６２」は、野生型のＫ５６２細胞の結果を表し、「Ｌ３」、「Ｌ６」、「Ｌ２７」は、Ｋ５６２細胞にレポータープラスミドpEV3-NlucPを導入した３ラインの細胞の結果を表す。また、黒の棒グラフは、既知のＧＡＴＡ阻害剤であるＫ−７１７４を含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、白抜きの棒グラフは、ネガティブコントロールであるＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表す。
【図２】実施例２におけるルシフェラーゼレポーターアッセイ及びＭＴＴアッセイの結果を示す図である。グラフ左の化合物名は、優れたＧＡＴＡ阻害活性を有する１９種類の候補物質の名称を表し、各化合物名の右に示される２本の棒グラフのうち、上側の棒グラフは、ＭＴＴアッセイにおけるViability（生存率）（％）を表し、下側の棒グラフは、ルシフェラーゼレポーターアッセイにおけるＲ．Ｌ．Ｕ（相対発光強度）を表す。
【図３】実施例３における上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ１の結果を示す図である。縦軸は、ハウスキーピング遺伝子であるＨｐｒｔ遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルに対する、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。横軸の「ＭＴＸ」は、ミトキサントロンを含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「Ｋ−７１７４」は、既知のＧＡＴＡ阻害剤であるＫ−７１７４を含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「ＤＭＳＯ」は、ＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表す。
【図４】実施例３における上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ２の結果を示す図である。縦軸は、ハウスキーピング遺伝子である１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルに対する、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。横軸の「Pyrvinium」は、ピルビニウムを含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「Mitoxantrone」は、ミトキサントロンを含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「ＤＭＳＯ」は、ＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「ＮＴ」は、ＤＭＳＯ溶液さえも添加しなかった場合の結果を表す。
【図５】実施例３における上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ３の結果を示す図である。縦軸は、ハウスキーピング遺伝子である１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルに対する、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。横軸の「Mitoxantrone」は、ミトキサントロンを含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「Digoxin」は、ジゴキシンを含むＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「ＤＭＳＯ」は、ＤＭＳＯ溶液を添加した場合の結果を表し、「ＮＴ」は、ＤＭＳＯ溶液さえも添加しなかった場合の結果を表す。
【図６】実施例４における、マウスを用いたエリスロポエチン産生誘導アッセイにおいて、腎臓や肺から切り取った組織の部位を表す図である。左図の点線内の領域は、腎臓から切り取った組織の部位を表し、右図の点線内の領域は、肺から切り取った組織の部位を表す。
【図７】実施例４における、マウスを用いたエリスロポエチン産生誘導アッセイの結果を示す図であり、左パネルは腎組織における結果を表し、右パネルは肺組織における結果を表す。縦軸は、ミトキサントロンを含まないＤＭＳＯ溶液を投与したマウスにおける特定の遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルを１としたときの、その遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。横軸の「ＥＰＯ」は、エリスロポエチン遺伝子の結果を表し、「Ｈｋ１」は、ヘキソキナーゼ１遺伝子の結果を表し、「Ｇｌｕｔ１」は、グルコーストランスポーター１遺伝子の結果を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明には、「上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤を含有することを特徴とするエリスロポエチン産生誘導剤」や、「上記の式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物を含有することを特徴とするＧＡＴＡ阻害剤」が含まれる。
【００１８】
本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤は、いずれかの哺乳動物細胞（好ましくは単球系の細胞、より好ましくは、白血病由来の単球系の細胞、さらに好ましくはＫ５６２細胞）及び／又は上皮系細胞においてＧＡＴＡ阻害作用を有し、好ましくは、少なくとも、上皮系細胞においてＧＡＴＡ阻害作用を有する。「いずれかの哺乳動物細胞においてＧＡＴＡ阻害作用を有する」とは、少なくとも１種類の哺乳動物細胞（好ましくは単球系の細胞、より好ましくは、白血病由来の単球系の細胞、さらに好ましくはＫ５６２細胞）において、少なくとも１種類の転写因子ＧＡＴＡのＧＡＴＡ配列への結合を阻害する作用を有することを意味する。また、上述の「上皮系細胞においてＧＡＴＡ阻害作用を有する」とは、少なくとも１種類の上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）において、少なくとも１種類の転写因子ＧＡＴＡのＧＡＴＡ配列への結合を阻害する作用を有することを意味する。前述の阻害作用（転写因子ＧＡＴＡのＧＡＴＡ配列への結合を阻害する作用）には、例えば、β−グロビン遺伝子座の制御領域（β-globin Locus Control Region：β−グロンビンＬＣＲ）の下流に作動可能に連結したレポーター遺伝子の発現を抑制する作用が好ましく含まれる。なお、β−グロンビンＬＣＲは、転写因子ＧＡＴＡ−１及びＧＡＴＡ−２が結合する領域として知られている。
【００１９】
本明細書における「上皮系細胞」とは、腎尿細管上皮細胞、腎集合管上皮細胞等の腎上皮細胞；気管上皮細胞；肺胞上皮細胞；胆管上皮細胞；胸腺髄質上皮系細胞；等が挙げられ、中でも、腎上皮細胞、気管上皮細胞、肺胞上皮細胞等が好ましく挙げられ、中でも、腎尿細管上皮細胞、腎集合管上皮細胞、気管上皮細胞、肺胞上皮細胞等がより好ましく挙げられる。具体的には、マウス腎集合管由来細胞であるｍＩＭＣＤ細胞や、ヒトの肺胞上皮細胞であるＡ５４９細胞（ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞）が挙げられる。上皮系細胞の由来となる生物種としては、特に制限されないが、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、ブタ、ヒツジなどの哺乳動物が好ましく挙げられ、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤やＧＡＴＡ阻害剤をヒトに適用する場合は、ヒト由来の上皮系細胞であることが好ましい。
【００２０】
また、本願明細書における「少なくとも１種類の転写因子ＧＡＴＡ」とは、ＧＡＴＡ−１、ＧＡＴＡ−２、ＧＡＴＡ−３、ＧＡＴＡ−４、ＧＡＴＡ−５及びＧＡＴＡ−６から選択される少なくとも１種類又は２種類又は３種類の転写因子ＧＡＴＡを意味する。本願明細書における「少なくとも１種類の転写因子ＧＡＴＡ」には、好ましくは、ＧＡＴＡ−１、ＧＡＴＡ−２及びＧＡＴＡ−３から選択される少なくとも１種類又は２種類又は３種類のＧＡＴＡが含まれ、より好ましくは、ＧＡＴＡ−１及びＧＡＴＡ−２から選択される少なくとも１種類又は２種類のＧＡＴＡが含まれ、さらに好ましくは、少なくともＧＡＴＡ−２が含まれる。ＧＡＴＡの由来となる生物種としては、特に制限されないが、例えばヒト、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、ブタ、ヒツジなどの哺乳動物が挙げられるが、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤やＧＡＴＡ阻害剤をヒトに適用する場合は、ヒト由来のＧＡＴＡであることが好ましい。
【００２１】
また、本発明の「エリスロポエチン産生誘導剤」は、いずれかの哺乳動物細胞（例えば、Ｋ５６２細胞等の単球系の細胞や、尿細管間質細胞など）及び／又は上皮系細胞においてエリスロポエチンの産生（発現）を誘導する作用（エリスロポエチン産生誘導作用）を有し、好ましくは、少なくとも、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生誘導作用を有する。
【００２２】
上述の「いずれかの哺乳動物細胞においてエリスロポエチン産生誘導作用を有する」とは、少なくとも１種類の哺乳動物細胞においてエリスロポエチン産生を誘導する作用を有することを意味し、より具体的には、少なくとも１種類の哺乳動物細胞（例えば、Ｋ５６２細胞等の単球系の細胞や、尿細管間質細胞など）において、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの転写やエリスロポエチンタンパク質の発現を促進（増加）させる作用を有することを意味する。かかるエリスロポエチン産生誘導作用には、少なくとも１種類の哺乳動物細胞（例えば、Ｋ５６２細胞等の単球系の細胞や、尿細管間質細胞など）におけるエリスロポエチン発現抑制を解除することによるエリスロポエチン産生誘導作用が好ましく含まれ、中でも、少なくとも１種類の哺乳動物細胞（例えば、Ｋ５６２細胞等の単球系の細胞や、尿細管間質細胞など）においてＧＡＴＡを阻害することによって、該哺乳動物細胞におけるエリスロポエチン発現抑制を解除することによるエリスロポエチン産生誘導作用がより好ましく含まれる。
【００２３】
また、上述の「上皮系細胞においてエリスロポエチン産生誘導作用を有する」とは、少なくとも１種類の上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）においてエリスロポエチン産生を誘導する作用を有することを意味し、より具体的には、少なくとも１種類の上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）において、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの転写やエリスロポエチンタンパク質の発現を促進（増加）させる作用を有することを意味する。かかるエリスロポエチン産生誘導作用には、上皮系細胞（好ましくは腎上皮細胞又は肺胞上皮細胞）におけるエリスロポエチン発現抑制を解除することによるエリスロポエチン産生誘導作用が好ましく含まれ、中でも、上皮系細胞（好ましくは腎上皮細胞又は肺胞上皮細胞）においてＧＡＴＡを阻害することによって、上皮系細胞におけるエリスロポエチン発現抑制を解除することによるエリスロポエチン産生誘導作用がより好ましく含まれる。なお、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤は、いずれかの哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）においてエリスロポエチン産生誘導作用を有している限り、元来エリスロポエチン産生を担っている腎臓の尿細管間質細胞におけるエリスロポエチン産生を増強する作用をさらに有していてもよいし、有していなくてもよい。
【００２４】
本発明のエリスロポエチン産生誘導剤において、上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤を含有するエリスロポエチン産生誘導剤は、エリスロポエチン産生を主に担っている腎臓の尿細管間質細胞が障害されている腎不全患者に対しても、エリスロポエチン産生誘導作用を発揮して、腎性貧血を予防、改善及び／又は治療することができる。したがって、上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤を含有するエリスロポエチン産生誘導剤は、「上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導するためのエリスロポエチン産生誘導剤」や、「腎性貧血の治療、改善又は予防薬」としても用いることができる。
【００２５】
また、エリスロポエチンは、細胞や組織を保護する作用（細胞・組織保護作用）を有しており、ヒト組換えエリスロポエチン製剤の投与により腎臓保護作用、心筋保護作用、末梢動脈保護作用等が報告されており（臨牀透析, vol.24, no.1,p.69-75(2008)）、特に、脳虚血障害時における神経細胞を保護する作用や、虚血性心疾患における心血管を保護する作用など、虚血障害時における細胞・組織保護作用が知られている。したがって、上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤やエリスロポエチン産生誘導剤は、好ましくは、「腎臓、心臓、脳等における細胞及び／又は組織の保護剤」、より好ましくは、「腎臓、心臓、脳等における急性又は慢性の虚血障害における細胞及び／又は組織の保護剤」、さらに好ましくは、「腎臓、心臓、脳等における慢性の虚血障害における細胞及び／又は組織の保護剤」としても用いることができる。上記の「腎臓、心臓、脳等における細胞及び／又は組織の保護剤」の中でも、「腎臓における細胞及び／又は組織の保護剤」が好ましく、かかる保護剤は具体的には、腎不全の治療、改善及び／又は予防薬として好ましく用いることができる。
【００２６】
本発明のエリスロポエチン産生誘導剤としては、
上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤を有効成分として含有するか、又は、
式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物、並びに、医薬的に許容されるそれらの塩からなる群から選択される１種又は２種以上の化合物（以下、必要に応じて「本件化合物群」と略称する。）を有効成分として含有するものであれば特に制限されるものではない。
【００２７】
上記の「上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤」としては、そのようなＧＡＴＡ阻害剤である限り、その化合物の構造等など、特に制限されないが、本件化合物群を好ましく挙げることができる。上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤は、例えば、公知のＧＡＴＡ阻害剤について、上皮系細胞でのエリスロポエチン産生誘導作用を確認することにより、選択することができる。かかる選択は、例えば後述するようなレポーターコンストラクトを遺伝子導入して得られた細胞を用いたレポーターアッセイ等の方法により行うことができる。
【００２８】
本発明のＧＡＴＡ阻害剤としては、本件化合物群を有効成分として含有するものであれば特に制限されるものではない。本発明のＧＡＴＡ阻害剤は、エリスロポエチン産生誘導剤としても用いることができ、「上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導するためのエリスロポエチン産生誘導剤」や、「腎性貧血の治療、改善及び／又は予防薬」としても好ましく用いることができる。
【００２９】
本発明のエリスロポエチン産生誘導剤や、本発明のＧＡＴＡ阻害剤が有効成分として含有する本件化合物群に含まれる化合物の詳細を以下に説明する。
【００３０】
上記式（１）で表される化合物、式（７）で表される化合物、式（８）で表される化合物、式（９）で表される化合物、式（１０）で表される化合物、式（１１）で表される化合物、式（１２）で表される化合物、式（１３）で表される化合物、式（１４）で表される化合物、式（１５）で表される化合物、式（１６）で表される化合物、式（１７−１）で表される化合物、及び、式（１７−２）で表される化合物の構造は以下の通りである。
【００３１】
式（１）で表される化合物：
【００３２】
【化４３】
2017088573.tif 000044
【００３３】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ２及びＲ３、並びにＲ７及びＲ８は、それぞれ一緒になって環を形成してもよく、該環は、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１で置換されていてもよい。
【００３４】
上記ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等を挙げることができる。
【００３５】
式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基とは、置換基を有していてもよい炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルキル基を意味し、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチルオ基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−へキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基等を挙げることができる。
【００３６】
式（１）における炭素数１〜１０のヘテロアルキル基とは、置換基を有していてもよい、エーテル基（−Ｏ−）、チオエーテル基（−Ｓ−）、アミノ基（−ＮＲ１２−）から選択される１又は２以上を含んでいてもよい上記炭素数１〜１０のアルキル基を意味する。
上記Ｒ１２は、水素、水酸基、炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を表す。炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基におけるアルキル基は、上記炭素数１〜１０のアルキル基と同様の基を例示することができる。
【００３７】
式（１）における炭素数２〜１０のアルケニル基とは、置換基を有していてもよい炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルケニル基を意味し、具体的には、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１，３−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基、１−ヘプテニル基、１−オクテニル基、１−ノネニル基、１−デセニル基等を挙げることができる。
【００３８】
式（１）における炭素数２〜１０のアルキニル基とは、置換基を有していてもよい炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルキニル基を意味し、具体的には、エチニル基、１−プロピニル基、１−ブチニル基、１−ペンチニル基、１−ヘキシニル基、１−ヘプチニル基、１−オクチニル基、１−ノナイン基等を挙げることができる。
【００３９】
式（１）における炭素数３〜１０のシクロアルキル基とは、置換基を有していてもよい炭素数３〜１０のシクロアルキル基を意味し、具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等を挙げることができる。
【００４０】
式（１）における炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基とは、置換基を有していてもよい炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基を意味し、具体的には、シクロプロピルエチル基、シクロブチルメチル基、シクロペンチルエチル基、シクロへキシルメチル基、シクロヘプチルエチル基、シクロオクチルメチル基、シクロノニルメチル基等を挙げることができる。
【００４１】
式（１）における炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基とは、置換基を有していてもよい、エーテル基（−Ｏ−）、チオエーテル基（−Ｓ−）、アミノ基（−ＮＲ１２−）から選択される１又は２以上を含んでいてもよい炭素数３〜１０のシクロアルキル基を意味する。
上記Ｒ１２は、水素、水酸基、炭素数１〜１０のヒドロキシアルキル基を表す。炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基としては、例えば、テトラヒドロフラニル（例えば、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル等）、テトラヒドロピラニル（例えば、テトラヒドロピラン−２−イル、テトラヒドロピラン−３−イル等）、ピペリジニル（例えば、ピペリジン−１−イル、ピペリジン−２−イル等）、モルフォリニル（例えば、モルフォリン−３−イル、モルフォリン−４−イル等）、ピペラジニル（例えば、ピペラジン−１−イル、ピペラジン−２−イル等）等を挙げることができる。
【００４２】
式（１）における炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基とは、置換基を有していてもよい炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基（カルボニル基の炭素は含まない）を意味し、具体的には、アセチル基、エチルカルボニル基、プロピルカルボニル基、ブチルカルボニル基、ｓｅｃ?ブチルカルボニル基、ｔｅｒｔ?ブチルカルボニル基、ペンチルカルボニル基、デシルカルボニル基等を挙げることができる。
【００４３】
式（１）における炭素数６〜１０のアリール基とは、置換基を有していてもよい炭素数６〜１０のアリール基を意味し、具体的には、フェニル基、ナフチル基を挙げることができる。
【００４４】
式（１）における炭素数２〜１０のヘテロアリール基としては、具体的には、チオフェン、チアゾール、チアジアゾール、フラン、オキサゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピリミジン、トリアジン、ベンゾチオール、ベンゾチアゾール、ベンゾフラン、ベンゾオキサゾール、キノリン、ピロール、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、ベンゾピロール、ベンゾピラゾール、ベンゾイミダゾール等が挙げられる。
【００４５】
上記「置換基を有していてもよい」の置換基としては、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を挙げることができる。
【００４６】
式（１）におけるＮＲ１０Ｒ１１におけるＲ１０、Ｒ１１としては、水素、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基が好ましく、水素、アミノ基（−ＮＲ１２−）を有する炭素数１〜１０のヘテロアルキル基がより好ましい。また、ＮＲ１０Ｒ１１としては、具体的には以下の好ましい構造を挙げることができる。
【００４７】
【化４４−１】
2017088573.tif 000045
【化４４−２】
2017088573.tif 000046
【化４４−３】
2017088573.tif 000047
【００４８】
前記式（１）で表される化合物の中でも、好ましくは、以下の式（２）、及び式（３）で表される化合物又はその塩である。
【００４９】
【化４５】
2017088573.tif 000048
【００５０】
式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８のいずれか１つは、ＮＲ１０Ｒ１１であり、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。
【００５１】
式（２）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１は、式（１）におけるそれらと同じ定義であり、同様の例示を挙げることができる。
【００５２】
また、上記Ｒ１及びＲ４は、ＮＲ１０Ｒ１１であることが好ましく、Ｒ５及びＲ８は、ＯＲ９であることが好ましい。
【００５３】
【化４６】
2017088573.tif 000049
【００５４】
式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、同一でも異なっていてもよく、水素、ハロゲン原子、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表し、
Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｑは、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１を表す。
ｍは、１〜８のいずれかの整数であり、Ｑのいずれか１つは、ＯＲ９であり、Ｒ９は、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基である。
【００５５】
式（３）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基、ＯＲ９、ＮＲ１０Ｒ１１は、式（１）におけるそれらと同じ定義であり、同様の例示を挙げることができる。
【００５６】
また、前記式（３）で表される化合物の中でも、好ましくは、以下の式（３−１）で表される化合物又はその塩である。
【００５７】
【化４７】
2017088573.tif 000050
【００５８】
式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８は、式（３）におけるＲ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ８と同じ定義であり、Ｑ１及びＱ２は、同一でも異なっていてもよく、水酸基、炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基を表し、Ｑ３は、ＯＲ９（Ｒ９は、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基である）である。また、＊は不斉点であることを表し、その絶対立体配置は、Ｒ配置でもＳ配置でもよい。
【００５９】
上記炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基は、置換基を有していてもよい炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基が好ましく、水酸基を有していてもよい炭素数１〜１０のアルキルカルボニル基がより好ましく、アセチル基、ヒドロキシメチルカルボニル基が特に好ましい。
【００６０】
また、上記Ｒ１は水素原子であることが好ましく、Ｒ４はＯＲ９であることが好ましく、Ｒ５及びＲ８は水酸基であることが好ましい。
【００６１】
前記式（２）で表される化合物の中でも、好ましくは、以下の化合物（４）である。なお、化合物（４）は、ミトキサントロン（Mitoxantrone）である。
【００６２】
【化４８】
2017088573.tif 000051
【００６３】
式（３）で表される化合物は、具体的には、特に以下の化合物（５）及び（６）が好ましい。なお、化合物（５）はエピルビシン（Epirubicin）であり、化合物（６）はダウノルビシン（Daunorubicin）である。
【００６４】
【化４９】
2017088573.tif 000052
【００６５】
式（７）で表される化合物：
【００６６】
【化５０】
2017088573.tif 000053
【００６７】
式中、Ｒａ１、Ｒａ２、Ｒａ３、Ｒａ４、Ｒａ５は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、又は、水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基を表し、
Ｒａ６は、水酸基又はメチル基を表し、
Ｌ１は、０〜３のいずれかの整数を表し、
Ｌ２は、１〜１０のいずれかの整数を表し、
Ａは、
【００６８】
【化５１】
2017088573.tif 000054
【００６９】
を表し、
【００７０】
【化５２】
2017088573.tif 000055
【００７１】
は、単結合又は二重結合を表す。なお、二重結合である場合、Ｒａ５は存在しない。
【００７２】
上記水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基における、炭素数１〜１０のアルキル基としては、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。また、水酸基で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルキル基の中でも、水酸基で置換されていてもよい、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基等の炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、メチル基、ヒドロキシメチル基がより好ましい。
【００７３】
上記式（７）で表される化合物として、例えば、以下の式（７−１）、式（７−２）、式（７−３）、及び、式（７−４）を挙げることができる。なお、式（７−１）はジギトキシン（Digitoxin）であり、式（７−２）はジゴキシン（Digoxin）であり、式（７−３）はウアバイン（Ouabain）であり、式（７−４）はプロスシラリジン（Proscillaridin）である。
【００７４】
【化５３】
2017088573.tif 000056
【００７５】
式（８）で表される化合物：
【００７６】
【化５４】
2017088573.tif 000057
【００７７】
式中、Ｒｂ１、Ｒｂ２は、同一でも異なっていてもよく、ハロゲン原子、水酸基を表し、
Ｒｂ３は、水素原子又は有機基；
【００７８】
【化５５】
2017088573.tif 000058
【００７９】
（上記有機基中、Ｒｂ４は、ハロゲン原子、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基を表し、Ｌ５は、０〜５のいずれかの整数を表す。）
を表し、
Ｌ３は、０〜５のいずれかの整数を表し、
Ｌ４は、０〜５のいずれかの整数を表す。
【００８０】
上記ハロゲン原子としては、式（１）におけるハロゲン原子と同義であり、中でもフッ素原子、塩素原子が好ましい。
【００８１】
上記炭素数１〜１０のアルキル基としては、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。
【００８２】
上記Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル基とは、Ｃ１〜Ｃ１０アルキル基の水素原子がハロゲン原子で置換された基であり、例えば、クロロメチル基、トリフルオロメチル基、トリクロロメチル基、γ−クロロプロピル基、３，３，３−トリフルオロプロピル基等が挙げられ、好ましくはトリフルオロメチル基である。
【００８３】
上記式（８）で表される化合物として、例えば、以下の式（８−１）及び式（８−２）を挙げることができる。なお、式（８−１）はヘキサクロロフェン（Hexachlorophene）であり、式（８−２）はペンフルリドール（Penfluridol）である。
【００８４】
【化５６】
2017088573.tif 000059
【００８５】
式（９）で表される化合物：
【００８６】
【化５７】
2017088573.tif 000060
【００８７】
式中、Ｒｃ１、Ｒｃ２は、同一でも異なっていてもよく、水素原子、ハロゲン原子、水酸基、ＮＲ１０Ｒ１１、チオール基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表す。
【００８８】
上記ハロゲン原子としては、式（１）におけるハロゲン原子と同義である。
【００８９】
上記炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。
また、上記ＮＲ１０Ｒ１１の中でも好ましくは、−ＮＨ２である。
【００９０】
上記式（９）で表される化合物として、例えば、以下の式（９−１）を挙げることができる。なお、式（９−１）はチオグアニン（Thioguanine）である。
【００９１】
【化５８】
2017088573.tif 000061
【００９２】
式（１０）で表される化合物：
【化５９】
2017088573.tif 000062
【００９３】
式中、Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｒｄは、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表し、
Ｍは、０又は１の整数を表す。
【００９４】
上記炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。
また、上記ＮＲ１０Ｒ１１の中でも好ましくは、−ＮＨ２である。
【００９５】
上記Ｒｄの中でも、好ましくは炭素数１〜１０のアルキル基であり、さらに好ましくは炭素数３〜１０のアルキル基である。
【００９６】
上記式（１０）で表される化合物として、例えば、以下の式（１０−１）及び（１０−２）で表される化合物を挙げることができる。式（１０−１）はアクリソルシン（Acrisorcin）であり、式（１０−２）はアミナクリン（Aminacrine）である。
【００９７】
【化６０】
2017088573.tif 000063
【００９８】
式（１１）で表される化合物：
【００９９】
【化６１】
2017088573.tif 000064
【０１００】
式中、Ｒｅ１は、水素原子又は水酸基を表し、
Ｒｅ２は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基を表す。
【０１０１】
上記炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができ、中でも、炭素数１〜１０のアルキル基が好ましく、さらに好ましくは炭素数１〜３のアルキル基である。
【０１０２】
上記式（１１）で表される化合物として、例えば、以下の式（１１−１）を挙げることができる。なお、式（１１−１）はシクロピロクスオラミン（Ciclopirox Olamine）である。
【０１０３】
【化６２】
2017088573.tif 000065
【０１０４】
式（１２）で表される化合物： 
【０１０５】
【化６３】
2017088573.tif 000066
【０１０６】
式中、Ｒｆは、炭素数１〜１０のアルキル基を表す。
【０１０７】
上記炭素数１〜１０のアルキル基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができ、中でも、炭素数１〜３のアルキル基が好ましく、ＮＲ１０Ｒ１１（Ｒ１０、Ｒ１１は、前記と同義であり、それぞれ水素原子が好ましい。）で置換されていることが好ましい。
【０１０８】
上記式（１２）で表される化合物として、例えば、以下の式（１２−１）を挙げることができる。なお、式（１２−１）はリマンタジン（Rimantadine）である。
【０１０９】
【化６４】
2017088573.tif 000067
【０１１０】
式（１３）で表される化合物：
【０１１１】
【化６５】
2017088573.tif 000068
【０１１２】
式中、Ｒｇ１及びＲｇ２、並びにＲｇ４及びＲｇ５は、それぞれ一緒になって、カルボニル基及び／又は酸素原子を含む環を形成し、
Ｒｇ３は、水酸基を表し、
Ｒｇ６は、ＯＲ９を表し、
上記Ｒ９は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ６は、０〜５の整数を表す。
【０１１３】
Ｒｇ１及びＲｇ２、Ｒｇ４及びＲｇ５は、以下の構造で表される環である。
【０１１４】
【化６６】
2017088573.tif 000069
【０１１５】
上記炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数３〜１０のヘテロシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。
また、上記Ｒ９の中でも好ましくは、炭素数１〜１０のアルキル基であり、さらに好ましくは、炭素数１〜３のアルキル基であり、特に好ましくは、メチル基である。
【０１１６】
上記Ｒｇ６の置換位置としては、オルト位、メタ位及びパラ位から選択されるいずれの位置でもよく、好ましくはメタ位、パラ位である。
【０１１７】
上記式（１３）で表される化合物として、例えば、以下の式（１３−１）を挙げることができる。なお、式（１３−１）はポドフィロックス（Podofilox）である。
【０１１８】
【化６７】
2017088573.tif 000070
【０１１９】
式（１４）で表される化合物：
【０１２０】
【化６８】
2017088573.tif 000071
【０１２１】
式中、Ｒｈ１及びＲｈ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｒ１０、Ｒ１１は、同一でも異なっていてもよく、水素、水酸基、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基を表し、
Ｌ７は、０〜３の整数を表す。
【０１２２】
上記炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のヘテロアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数４〜１０のシクロアルキルアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、炭素数２〜１０のヘテロアリール基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。
【０１２３】
また、上記Ｒｈ１、Ｒｈ２の中でも好ましくは、炭素数１〜１０のアルキル基であり、さらに好ましくは、炭素数１〜３のアルキル基であり、特に好ましくは、メチル基である。
【０１２４】
そしてまた、上記Ｒ１０、Ｒ１１の中でも好ましくは、水素、炭素数１〜１０のアルキル基であり、さらに好ましくは、炭素数１〜３のアルキル基であり、特に好ましくは、メチル基である。
【０１２５】
上記式（１４）で表される化合物及びその塩として、例えば、以下の式（１４−１）で表される塩を挙げることができる。なお、式（１４−１）はピルビニウムパモ酸塩（Pyrvinium Pamoate）である。
【０１２６】
【化６９】
2017088573.tif 000072
【０１２７】
式（１５）で表される化合物：
【０１２８】
【化７０】
2017088573.tif 000073
【０１２９】
式中、Ｒｊ１、Ｒｊ２は、同一でも異なっていてもよく、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基を表し、
Ｌ８は、０〜３の整数を表し、
Ｌ９は、０〜２の整数を表す。
【０１３０】
上記炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基と同義であり、同様の例示の基を挙げることができる。
【０１３１】
また、上記Ｒｊ１、Ｒｊ２の中でも好ましくは、炭素数１〜１０のアルキル基であり、さらに好ましくは、炭素数１〜３のアルキル基であり、特に好ましくは、メチル基である。
【０１３２】
上記式（１５）で表される化合物として、例えば、以下の式（１５−１）で表される化合物を挙げることができる。なお、式（１５−１）はアクチノマイシンＤ（actinomycin D）である。アクチノマイシンＤ（actinomycin D）は、ダクチノマイシン（Dactinomycin）とも呼ばれる。
【０１３３】
【化７１】
2017088573.tif 000074
【０１３４】
式（１６）で表される化合物：
【０１３５】
【化７２】
2017088573.tif 000075
【０１３６】
なお、式（１６）で表される化合物は、チロスリシン（Tyrothricin）である。
【０１３７】
式（１７−１）で表される化合物：
【０１３８】
【化７３】
2017088573.tif 000076
【０１３９】
式中、ｑは、１〜１０の整数を表す。上記ｑは、３〜８の整数であることが好ましい。
【０１４０】
上記式（１７−１）で表される化合物として、例えば、以下の式（１７−１−１）を挙げることができる。なお、式（１７−１−１）はグラミシジンＡ（Gramicidin A）である。
【０１４１】
【化７４】
2017088573.tif 000077
【０１４２】
式（１７−２）で表される化合物：
【０１４３】
【化７５】
2017088573.tif 000078
【０１４４】
式（１７−２）で表される化合物は、グラミシジンＳ（Gramicidin S）である。グラミシジン（Gramicidin）とは、グラミシジンＡ（Gramicidin A）及びグラミシジンＳ（Gramicidin S）を指す。
【０１４５】
本発明における塩には、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、亜鉛等から生成された金属塩や、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、リジン、プロカイン等から生成された有機塩などが含まれる。
【０１４６】
本件化合物群に含まれる化合物のうち、ジギトキシン（Digitoxin）、シクロピロクスオラミン（Ciclopirox Olamine）、ウアバイン（Ouabain）、アクリソルシン（Acrisorcin）、エピルビシン（Epirubicin）、アミナクリン（Aminacrine）、ピルビニウム（Pyrvinium）、アクチノマイシン Ｄ（actinomycin D）、チオグアニン（Thioguanine）、グラミシジン（Gramicidin）、チロスリシン（Tyrothricin）、プロスシラリジン（Proscillaridin）、ペンフルリドール（Penfluridol）、リマンタジン（Rimantadine）、ヘキサクロロフェン（Hexachlorophene）、ポドフィロックス（Podofilox）、ダウノルビシン（Daunorubicin）、ミトキサントロン（Mitoxantrone）、ジゴキシン（Digoxin）、及び、それらの塩が好ましく挙げられ、中でも、ジギトキシン（Digitoxin）、シクロピロクスオラミン（Ciclopirox Olamine）、ウアバイン（Ouabain）、アクリソルシン（Acrisorcin）、エピルビシン塩酸塩（Epirubicin Hydrochloride）、アミナクリン（Aminacrine）、ピルビニウムパモ酸塩（Pyrvinium Pamoate）、アクチノマイシン Ｄ（actinomycin D）、チオグアニン（Thioguanine）、グラミシジン（Gramicidin）、チロスリシン（Tyrothricin）、プロスシラリジン（Proscillaridin）、ペンフルリドール（Penfluridol）、リマンタジン塩酸塩（Rimantadine Hydrochloride）、ヘキサクロロフェン（Hexachlorophene）、ポドフィロックス（Podofilox）、ダウノルビシン（Daunorubicin）、ミトキサントロン塩酸塩（Mitoxantrone Hydrochloride）、ジゴキシン（Digoxin）という１９種類の化合物（後述の実施例における表１）がより好ましく挙られる。本件化合物群に含まれる好適な化合物として、ミトキサントロン、ダウノルビシン、エピルビシン、及び、それらの塩が挙げられ、中でも、ＧＡＴＡ阻害活性の高さと、細胞毒性の低さのバランスの観点から、ミトキサントロン、ダウノルビシン、及び、それらの塩が好ましく挙げられ、中でも、ミトキサントロン塩酸塩、ダウノルビシンがより好ましく挙げられる。
【０１４７】
（化合物の合成）
本件化合物群から選択される化合物の合成方法は、以下に例示することができるが、これらの方法に限られず、一般的に知られている合成法を用いることができる。また、以下に示す化合物は、シグマ−アルドリッチ社、東京化成工業、和光純薬、関東化学等から入手することができる。また、反応溶媒、反応温度に関して、特に記載のない場合は、通常その反応に利用される溶媒、温度で反応が行われる。反応は、通常、アルゴン又は窒素雰囲気下で行われる。保護基は、Green&Wuts, “PROTECTIVE GROUPS in ORGANIC SYNTHESIS” 3rded.John Wiley&Sons, Inc.を参照し、用いることできる。
【０１４８】
本発明における式（１）で表される化合物は、市販品を用いてもよいが、公知の有機化学反応を用いる有機合成手法によって得ることもできる。例えば、以下の無水フタル酸誘導体（Ａ、Ａ’）とベンゼン誘導体（Ｂ、Ｂ’）とを三塩化アルミニウム等のルイス酸存在下反応を行うフリーデルクラフツ反応を鍵反応として使用することにより合成することができる。
【０１４９】
【化７６−１】
2017088573.tif 000079
【化７６−２】
2017088573.tif 000080
【０１５０】
（上記式（Ａ）、（Ａ’）、（Ｂ）、（Ｂ’）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、式（１）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８と同じ意味である。）
【０１５１】
また、本発明における式（１）で表される化合物は、以下のナフトキノン誘導体（Ｃ、Ｃ’）と１，３−ジエン誘導体（Ｄ、Ｄ’）のディールズ・アルダー反応を鍵反応として使用することにより合成することもできる。
【０１５２】
【化７７−１】
2017088573.tif 000081
【化７７−２】
2017088573.tif 000082
【０１５３】
（上記式（Ｃ）、（Ｃ’）、（Ｄ）、（Ｄ’）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８は、式（１）におけるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８と同じ意味である。）
【０１５４】
上記無水フタル酸誘導体（Ａ、Ａ’）、ベンゼン誘導体（Ｂ、Ｂ’）、ナフトキノン誘導体（Ｃ、Ｃ’）、１，３−ジエン誘導体（Ｄ、Ｄ’）は、市販品を用いてもよいが、公知の有機反応によって合成することもできる。例えば、無水フタル酸誘導体（Ａ、Ａ’）、ベンゼン誘導体（Ｂ、Ｂ’）、ナフトキノン誘導体（Ｃ、Ｃ’）は、それぞれ市販の無水フタル酸、ベンゼン、ナフトキノンを出発物とし、Ｎ−ブロモスクシンイミド、Ｎ−ヨードスクシンイミド等によりハロゲン原子を導入した後、鈴木−宮浦カップリング反応、芳香族求核置換反応等のクロスカップリング反応を行うことによりＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８の置換基を導入することによって合成できる。また、１，３−ジエン誘導体（Ｄ、Ｄ’）は、公知のジエン合成法によって合成することができる。
【０１５５】
また、式（７）、式（８）、式（９）、式（１０）、式（１１）、式（１２）、式（１３）、式（１４）、式（１５）、式（１６）、式（１７）で表される化合物は、式（１）で表される化合物と同様に、市販品を用いてもよいが、公知の有機化学反応を用いる有機合成手法によって得ることもできる。
【０１５６】
以上の有機反応は、それぞれ溶媒中で行うことができるが、溶媒は反応温度や反応物等によって適宜選択される。また、上記有機反応の反応温度は、用いる溶媒の沸点等の条件によって適宜選択される。上記有機反応で溶媒を用いる場合、得られた反応溶液を必要に応じて濃縮した後、残渣をそのまま次の反応に使用してもよく、適宜な後処理を行った後に、式（１）で表される化合物として用いてもよい。後処理の具体的な方法としては、抽出処理及び／又は晶出、再結晶、クロマトグラフィー等の公知の精製を挙げることができる。
【０１５７】
本発明のＧＡＴＡ阻害剤や、エリスロポエチン産生誘導剤は、必要に応じて、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分がさらに添加されたものを例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
【０１５８】
合成した化合物が、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）においてＧＡＴＡ阻害作用を有することは、その化合物が、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞内における転写因子ＧＡＴＡとＧＡＴＡ配列との結合を阻害する作用を有することを、公知の分子生物学的手法を用いて解析することができる。かかる解析法としては、例えば、ＧＡＴＡ配列とプロモーター配列を含むポリヌクレオチドの下流にレポーター遺伝子（好ましくはルシフェラーゼ遺伝子）を作動可能に連結したＤＮＡコンストラクト（好ましくはプラスミド）を、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞に遺伝子導入して得られた細胞を用いたレポーターアッセイが好ましく挙げられる。上記のレポーターコンストラクトを含む細胞を、候補化合物の存在下で培養した場合のその細胞におけるレポーター活性が、その候補化合物の非存在下で培養した場合と比較して低下している場合に、その候補化合物を「哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞においてＧＡＴＡ阻害作用を有する」と評価することができる。上記のＧＡＴＡ配列とプロモーター配列を含むポリヌクレオチドとしては、β−グロビン遺伝子座の制御領域が好ましく挙げられ、上記のレポーターコンストラクトとしては、後述の実施例に記載されているpEV3-NlucPが好ましく挙げられる。
【０１５９】
また、合成した化合物が、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）においてエリスロポエチン産生誘導作用を有することは、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞におけるエリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現や、かかるｍＲＮＡから翻訳されたタンパク質（エリスロポエチン）の発現を、公知の分子生物学的手法を用いて解析することにより確認することができる。エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現を解析する方法としては、例えば、定量ＲＴ−ＰＣＲ（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction）法、ＲＴ−ＰＣＲ法、ノーザンブロティング法などの方法を具体的に挙げることができ、また、エリスロポエチンタンパク質の発現を解析する方法としては、例えば、ウエスタンブロッティング法、エリスロポエチン遺伝子プロモーターの下流にＧＦＰ（Green Fluorescent Protein）遺伝子、ルシフェラーゼ遺伝子等のレポーター遺伝子が挿入されたプラスミドを用いたレポーターアッセイ法、質量分析法などの方法を具体的に挙げることができる。
【０１６０】
本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤は、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）において、少なくとも１種類のＧＡＴＡを阻害することができ、好ましくは、少なくとも、上皮系細胞において、少なくとも１種類のＧＡＴＡを阻害することができる。すなわち、本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤は、ＧＡＴＡ−１、ＧＡＴＡ−２、ＧＡＴＡ−３、ＧＡＴＡ−４、ＧＡＴＡ−５及びＧＡＴＡ−６から選択される少なくとも１種類又は２種類又は３種類のＧＡＴＡを阻害することができ、好ましくはＧＡＴＡ−１、ＧＡＴＡ−２及びＧＡＴＡ−３から選択される少なくとも１種類又は２種類又は３種類のＧＡＴＡを阻害することができ、より好ましくは、少なくともＧＡＴＡ−２を阻害することができる。その結果、本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤は、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞において（好ましくは、少なくとも上皮系細胞において）、エリスロポエチン産生を誘導することができる。
【０１６１】
本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤は、in vivoで用いてもよいし、in vitroやex vivoで用いてもよい。in vivoで用いる方法としては、本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤を哺乳動物に投与して、該哺乳動物におけるＧＡＴＡを阻害する方法が挙げられ、中でも、本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤を哺乳動物に投与して、該哺乳動物の哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞におけるＧＡＴＡを阻害する方法が好ましく挙げられる。一方、in vitroやex vivoで用いる方法としては、本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤を哺乳動物細胞に接触させて、該哺乳動物細胞におけるＧＡＴＡを阻害する方法が挙げられ、中でも、本発明におけるＧＡＴＡ阻害剤を哺乳動物細胞及び／又は哺乳動物の上皮系細胞に接触させて、該哺乳動物細胞及び／又は該上皮系細胞におけるＧＡＴＡを阻害する方法が好ましく挙げられる。
【０１６２】
本発明のエリスロポエチン産生誘導剤は、哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）においてエリスロポエチン産生を誘導することができ、特に、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導する場合は、かかるエリスロポエチン産生誘導を介して、貧血を治療、改善及び／又は予防することができる。例えば慢性腎不全患者は、エリスロポエチン産生を主に担っている腎臓の尿細管間質細胞が障害されていることが多いが、腎上皮細胞は障害されていない場合が多い。上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導することができるエリスロポエチン産生誘導剤は、腎臓や肝臓以外の組織であって、ＧＡＴＡ因子による発現抑制を受けている上皮組織からエリスロポエチン（異所性エリスロポエチン）を全身性に発現誘導できるため、前述のような慢性腎不全患者においても、エリスロポエチン産生誘導を行うことができ、その結果、そのような患者における腎性貧血の予防、改善及び／又は治療に用い得る。
【０１６３】
エリスロポエチンは、細胞や組織を保護する作用（細胞・組織保護作用）を有しており、ヒト組換えエリスロポエチン製剤の投与により腎臓保護作用、心筋保護作用、末梢動脈保護作用等が報告されており（臨牀透析, vol.24, no.1,p.69-75(2008)）、特に、脳虚血障害時における神経細胞を保護する作用や、虚血性心疾患における心血管を保護する作用など、虚血障害時における細胞・組織保護作用が知られている。したがって、上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤やエリスロポエチン産生誘導剤は、好ましくは、「腎臓、心臓、脳等における細胞及び／又は組織の保護剤」、より好ましくは、「腎臓、心臓、脳等における急性又は慢性の虚血障害における細胞及び／又は組織の保護剤」、さらに好ましくは、「腎臓、心臓、脳等における慢性の虚血障害における細胞及び／又は組織の保護剤」としても用いることができる。上記の「腎臓、心臓、脳等における細胞及び／又は組織の保護剤」の中でも、「腎臓における細胞及び／又は組織の保護剤」が好ましく、かかる保護剤は具体的には、腎不全の治療、改善及び／又は予防薬として好ましく用いることができる。
【０１６４】
本発明のエリスロポエチン産生誘導剤は、in vivoで用いてもよいし、in vitroやex vivoで用いてもよい。in vivoで用いる方法としては、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤を哺乳動物に投与して、該哺乳動物におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法が挙げられ、中でも、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤を哺乳動物に投与して、該哺乳動物のいずれかの細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法が好ましく挙げられ、中でも、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤を哺乳動物に投与して、該哺乳動物の上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法がより好ましく挙げられる。一方、in vitroやex vivoで用いる方法としては、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤を哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞（好ましくは、哺乳動物由来の上皮系細胞）に接触させて、該哺乳動物細胞及び／又は上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法が挙げられ、中でも、本発明のエリスロポエチン産生誘導剤を哺乳動物の上皮系細胞に接触させて、該上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法が好ましく挙げられる。
【０１６５】
前述したように、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導することができるエリスロポエチン産生誘導剤は、貧血の治療、改善及び／又は予防薬としても用いることができる。かかる貧血としては、エリスロポエチン発現（産生）低下やエリスロポエチン反応性低下に起因する疾患に伴う貧血であれば特に制限されず、具体的には、膠原病（慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等）、慢性感染症（結核、感染性心内膜炎、肝膿瘍等）、アレルギー性疾患（アトピー性皮膚炎、乾癬等）、自己免疫疾患（リウマチ、多発性硬化症等）、腫瘍（卵巣腫瘍、黒色腫等）、慢性腎不全、甲状腺機能低下症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ミトコンドリア病などの疾患に伴う貧血を挙げることができる。前述のミトコンドリア病としては、細胞核ＤＮＡやミトコンドリアＤＮＡにおける遺伝子変異等により、ＡＴＰ産生、アポトーシスの調節、カルシウムイオンや鉄の細胞内濃度の調節等のミトコンドリア機能が低下することが原因の症状であればよく、具体的にはＣＰＥＯ（慢性進行性外眼麻痺症候群）、ＭＥＬＡＳ（メラス：脳筋症・乳酸アシドーシス・脳卒中様症候群）、ＭＥＲＲＦ（マーフ：赤色ぼろ線維・ミオクローヌスてんかん症候群）、Ｌｅｉｇｈ脳症（リー脳症：亜急性壊死性脳脊髄症）、Ｌｅｂｅｒ病（レーバー病）、Ｐｅａｒｓｏｎ病（ピアソン病）、フリードライヒ失調症（ＦＲＤＡ）を挙げることができ、これらの中でもＬｅｉｇｈ脳症が好ましい。
【０１６６】
前述したように、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導することができるエリスロポエチン産生誘導剤は、腎不全の治療、改善及び／又は予防薬としても用いることができる。本明細書における「腎不全」には、免疫系の異常や薬に対するアレルギーに起因する慢性腎不全、高血圧に起因する慢性腎不全、糖尿病に起因する慢性腎不全などの慢性腎不全；や、出血や急激な血圧低下に伴う急性腎不全、感染症に伴う急性腎不全、熱傷に伴う脱水に伴う急性腎不全などの急性腎不全；の他、ネフローゼ症候群、慢性糸球体腎炎、慢性尿細管間質性腎炎、慢性腎盂腎炎、アミロイド腎、家族性若年性高尿酸血症性腎症も含まれ、中でも、高血圧に起因する慢性腎不全、糖尿病に起因する慢性腎不全、ネフローゼ症候群、慢性糸球体腎炎、慢性尿細管間質性腎炎、慢性腎盂腎炎、アミロイド腎、家族性若年性高尿酸血症性腎症が好ましく挙げられ、中でも、高血圧に起因する慢性腎不全、糖尿病に起因する慢性腎不全がより好ましく挙げられる。
【０１６７】
本発明の貧血の治療・改善・予防薬や、腎不全の治療、改善及び／又は予防薬としては、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導することができる本発明のエリスロポエチン発現増強剤を含有するものであれば特に制限されず、薬学的に許容される通常の担体、結合剤、安定化剤、賦形剤、希釈剤、ｐＨ緩衝剤、崩壊剤、等張剤、添加剤、被覆剤、可溶化剤、潤滑剤、滑走剤、溶解補助剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、溶剤、ゲル化剤、栄養剤等の配合成分がさらに添加されたものを例示することができる。かかる配合成分としては、具体的に、水、生理食塩水、動物性脂肪及び油、植物油、乳糖、デンプン、ゼラチン、結晶性セルロース、ガム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、グリセリンを例示することができる。
【０１６８】
本発明のエリスロポエチン産生誘導剤や、ＧＡＴＡ阻害剤や、貧血の治療・改善・予防薬や、腎不全の治療、改善及び／又は予防薬の投与形態としては、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁液等の剤型で投与する経口投与や、溶液、乳剤、懸濁液等の剤型を注射、又はスプレー剤の型で鼻孔内投与する非経口投与を挙げることができる。
【０１６９】
また本発明の他の形態として、本件化合物群を哺乳動物に投与することにより、哺乳動物におけるＧＡＴＡを阻害する方法（好ましくは、哺乳動物の上皮系細胞におけるＧＡＴＡを阻害する方法）や、本件化合物群を哺乳動物に投与することにより、哺乳動物におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法（好ましくは、哺乳動物の上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導する方法）や、本件化合物群を哺乳動物に投与することにより、哺乳動物における貧血若しくは腎不全を治療、改善及び／又は予防する方法や、哺乳動物（好ましくは、哺乳動物の上皮系細胞）におけるＧＡＴＡによるエリスロポエチン遺伝子の発現抑制の解除における使用のための本件化合物群や、哺乳動物におけるエリスロポエチン欠乏（エリスロポエチン発現低下、及び、エリスロポエチン反応性の低下を含む）の改善における使用のための本件化合物群や、本発明における貧血若しくは腎不全の治療、改善及び／又は予防における使用のための本件化合物群や、本発明のＧＡＴＡ阻害剤を製造するための、本件化合物群の使用や、エリスロポエチン産生誘導剤を製造するための、本件化合物群の使用や、貧血若しくは腎不全の治療・改善・予防薬を製造するための、本件化合物群の使用を挙げることができる。
【０１７０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこれらの例示に限定されるものではない。
【実施例１】
【０１７１】
［ルシフェラーゼレポーターアッセイ系の樹立］
（１）レポータープラスミドpEV3-NlucPの構築
pEV3ベクター（Elefanty et al., EMBO J, (1996) vol.15, no. 2, 319-333）のEcoR1/Not1サイトにNanoluciferase 2(不安定型)（プロメガ社製）のｃＤＮＡを挿入して、レポータープラスミドpEV3-NlucPを作製した。このレポータープラスミドのＤＮＡ配列を、サンガーシーケンス法で決定し、Nanoluciferase 2のｃＤＮＡが挿入されていることを確認した。なお、このレポータープラスミドの発現制御領域は、β−グロビン遺伝子座の制御領域（β-globin Locus Control Region：β−グロンビンＬＣＲ）である。β−グロンビンＬＣＲは、転写因子ＧＡＴＡ−１及びＧＡＴＡ−２が結合する領域として知られている。
【０１７２】
（２）レポータープラスミドの安定発現細胞株の樹立
野生型のＫ５６２細胞に、Lipofection法でpEV3-NlucPを遺伝子導入した。遺伝子導入から２４時間後に、培養液に抗生物質Ｇ４１８（ジェネティシン（登録商標）；ライフサイエンステクノロジー社製）を４０μｇ／ｍＬとなるように添加し、培養を継続した。Ｇ４１８の添加から１週間経過後に、生き残った細胞を限界希釈法でクローニングした。得られたクローンのレポーター活性をNano-Glo（登録商標）Luciferase Assay System（Cat# N1110；プロメガ社製）で測定し、レポーター活性の強い３ライン（Ｌ３、Ｌ６、Ｌ２７）の細胞（以下、これら３ラインの細胞を合わせて「K562-Nluc2細胞」とも表示する。）を選択した。
【０１７３】
これら３ラインの細胞株を用いたルシフェラーゼレポーターアッセイを行い、既知のＧＡＴＡ阻害剤であるＫ−７１７４に対する応答性を確認した。ルミノメーターを用いて、Nanoluciferase 2の蛍光を測定した。その結果を図１に示す。図１から分かるように、Ｌ３、Ｌ６、Ｌ２７のいずれの細胞においても、Ｋ−７１７４を添加すると、Nanoluciferase 2の蛍光が低下し、レポーター活性が低下することが示された。これらの結果から、K562-Nluc2細胞は、ＧＡＴＡ阻害活性の測定に好適に用いることができることが確認できた。
【実施例２】
【０１７４】
［新規なＧＡＴＡ阻害物質のスクリーニング］
前述の実施例１で作製したK562-Nluc2細胞を用いたルシフェラーゼレポーターアッセイにより、新規なＧＡＴＡ阻害物質のスクリーニングを試みた。
【０１７５】
（ルシフェラーゼレポーターアッセイ）
スクリーニングする候補化合物として、既存薬の化合物を１１６５種類含む化合物ライブラリーを用意した。これらの候補化合物は、ＧＡＴＡ阻害活性の有無が知られていない化合物であり、アッセイには、ＤＭＳＯに溶解させて用いた。９６ウェルプレートにおける各ウェルに、各候補化合物を含むＤＭＳＯ溶液（各候補化合物の濃度はそれぞれ１００μＭ）を１０μＬずつ分注した。次いで、各ウェルの細胞数が１．５×１０４細胞／ウェルとなるように、K562-Nluc2細胞懸濁液を９０μＬずつ各ウェルに分注し（すなわち、各候補化合物の最終濃度は１０μＭ）、３７℃、５％ＣＯ２の環境下で２８時間培養した。その後に、ピペッティングで各ウェルの細胞液を懸濁し、各ウェルの細胞液を２０μＬずつ、新しい９６ウェルプレートの各ウェルに分注した。各ウェルの細胞液に、発光試薬（Nano-Glo（登録商標）Luciferase Assay System（Cat# N1110；プロメガ社製））を２０μＬずつ添加して懸濁した。懸濁後、１５分間以内にPHERAStar-FSプレートリーダー(BMG labtech社製)でルミネッセンスを測定した。
【０１７６】
また、ネガティブコントロールとして、前述の候補化合物のいずれも含まず、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を添加した培養液で培養したK562-Nluc2細胞を用い、同様にルミネッセンスを測定した。なお、ネガティブコントロールの培養液のＤＭＳＯ濃度は０．１％ｖ／ｖであり、このＤＭＳＯ濃度は、ネガティブコントロール以外の培養液におけるＤＭＳＯ濃度と同じであった。
【０１７７】
これらのルシフェラーゼレポーターアッセイの結果、レポーター活性が低下した候補化合物、すなわち、ＧＡＴＡ阻害活性を有する候補化合物が多数見いだされた。優れたＧＡＴＡ阻害活性を有することが見いだされた１９種類の候補化合物を図２に示す。また、図２の候補化合物名の右に示される２本の棒グラフのうち、下側の棒グラフに、その候補化合物のＲ．Ｌ．Ｕ（相対発光強度）を示す。Ｒ．Ｌ．Ｕは、ネガティブコントロールにおけるNanoluciferase 2の蛍光強度を１００％としたときの、蛍光強度の相対値を表す。図２から分かるように、これら１９種類の候補化合物のＲ．Ｌ．Ｕは、いずれも３０％以下と低く、いずれの候補化合物も優れたＧＡＴＡ阻害活性を有する化合物であることが示された。これらのスクリーニングにより、新規なＧＡＴＡ阻害物質を１９種類得ることができた（表１）。
【０１７８】
【表１】
2017088573.tif 000083
【０１７９】
なお、これら１９種類の化合物のうち、４種類は強心配糖体として知られる化合物であり、５種類は抗がん剤として知られる化合物であり、７種類は抗生剤として知られる化合物であった（図２）。また、アクチノマイシンＤ（actinomycin D）は、ダクチノマイシン（Dactinomycin）とも呼ばれる。
【０１８０】
（ＭＴＴアッセイ）
上記のルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて、優れたＧＡＴＡ阻害活性が見いだされた１９種類の候補化合物の細胞毒性を確認するために、以下のＭＴＴアッセイを行った。
【０１８１】
１９種類の候補化合物は、ＤＭＳＯに溶解させて用いた。９６ウェルプレートにおける各ウェルに、各候補化合物を含むＤＭＳＯ溶液（各候補化合物の濃度はそれぞれ１００μＭ）を１０μＬずつ分注した。次いで、各ウェルの細胞数が１．５×１０４細胞／ウェルとなるように、K562-Nluc2細胞懸濁液を９０μＬずつ各ウェルに分注し（すなわち、各候補化合物の最終濃度は１０μＭ）、３７℃、５％ＣＯ２の環境下で２７時間培養した。その後に、ＭＴＴ試薬（CellTiter 96（登録商標）AQueous One Solution Cell ProliferationAssay (Cat# G3580);Promega社製）を２０μＬずつ各ウェルに分注、懸濁して、３７℃、５％ＣＯ２の環境下で１時間培養した。次いで、PHERAStar-FSプレートリーダー(BMG labtech社製)で、４９０ｎｍの吸光度を測定した。この吸光度の測定値は細胞の生存率と相関する。
【０１８２】
また、ネガティブコントロールとして、前述の候補化合物のいずれも含まず、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を添加した培養液で培養したK562-Nluc2細胞を用い、同様に４９０ｎｍの吸光度を測定した。なお、ネガティブコントロールの培養液のＤＭＳＯ濃度は０．１％ｖ／ｖであり、このＤＭＳＯ濃度は、ネガティブコントロール以外の培養液におけるＤＭＳＯ濃度と同じであった。
【０１８３】
これらのＭＴＴアッセイの結果を、図２の候補化合物名の右に示される２本の棒グラフのうち、上側の棒グラフに示す。この棒グラフのViability（生存率）（％）とは、ネガティブコントロールにおける生存率を１００％としたときの、その候補化合物の生存率（％）の相対値を表し、具体的には、その候補化合物を用いてＭＴＴアッセイを行った際の４９０ｎｍの測定値を、ネガティブコントロールを用いてＭＴＴアッセイを行った際の４９０ｎｍの測定値で除した数値に１００を乗じた値を表す。図２から分かるように、１９種類の候補化合物はいずれも一定以上の細胞生存率を有していたが、ジゴキシン、ミトキサントロン塩酸塩、ダウノルビシン、ポドフィロックスは特に高い生存率を示した。
【実施例３】
【０１８４】
［上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導］
上皮系細胞においては、エリスロポエチン産生が抑制されている。実施例２において新たに見いだされたＧＡＴＡ阻害物質が、上皮系細胞においてエリスロポエチン産生を誘導することが可能かどうかを確認するために、以下のアッセイを行った。
【０１８５】
（上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ１）
実施例２において見いだされたＧＡＴＡ阻害物質の１つにミトキサントロン塩酸塩があるが、本アッセイでは、ミトキサントロンを用意した。ミトキサントロンはＤＭＳＯに溶解させて用いた。また、上皮系細胞の１種として、ｍＩＭＣＤ細胞（マウス腎集合管由来細胞）を用意した。
【０１８６】
６ウェルプレートにおける各ウェルに、細胞数が１×１０５細胞／ウェルとなるようにｍＩＭＣＤ細胞を播種し、３７℃、５％ＣＯ２の環境下で２４時間培養した。その後、ミトキサントロンを含むＤＭＳＯ溶液を、培養液中のミトキサントロンの濃度が１μＭになるまで各ウェルに添加した。ミトキサントロンの添加から１２時間後に培養液を除去し、各ウェルにＲＮＡ抽出試薬（Isogen；ニッポンジーン社製）を１ｍＬずつ添加し、各ウェル中の細胞をそれぞれ１．５ｍＬチューブに回収した。その後、前述のＲＮＡ抽出試薬が指定するプロトコールで各ウェルの細胞からＲＮＡを抽出した。次いで、超微量紫外可視分光光度計（Nanodrop2000；Thermo社製）を用いて、各ウェル由来のサンプルのＲＮＡ濃度を測定した。
【０１８７】
各ウェルの細胞から抽出したＲＮＡ（各１μｇ）を鋳型とし、逆転写酵素試薬（ReverTra Ace（登録商標）(Cat# TRT-101)；TOYOBO社製）を用いてｃＤＮＡをそれぞれ合成した。かかる逆転写反応のプロトコールは、前述の逆転写試薬が指定するプロトコールを利用した。合成して得られた各ｃＤＮＡをそれぞれ滅菌水で５倍希釈して、各ｃＤＮＡ液を調製した。各ｃＤＮＡ液を１０μＬずつと、ｑＰＣＲ試薬（Thunderbird（登録商標）（Cat# QPS-2010）；TOYOBO社製）と、ｑＰＣＲ機（7300 Real-Time PCR SYSTEM；ABI社製）とを用いて、２５μＬの反応スケールでｑＰＣＲ反応を実施した。ｑＰＣＲの結果は、ｄｄＣｔ法で解析した。なお、かかるｑＰＣＲにおいて、マウスエリスロポエチン遺伝子を特異的に増幅するためのプライマーとして、フォワードプライマー（catctgcgacagtcgagttctg：配列番号１）及びリバースプライマー（cacaacccatcgtgacattttc：配列番号２）を用いた。
【０１８８】
また、ネガティブコントロールとして、ミトキサントロンを含まず、ＤＭＳＯを添加した培養液で培養したｍＩＭＣＤ細胞を用い、同様のｑＰＣＲ解析を行った。また、比較対照として、既知のＧＡＴＡ阻害剤であるＫ−７１７４を含むＤＭＳＯ溶液を添加した培養液で培養したｍＩＭＣＤ細胞を用い、同様のｑＰＣＲ解析を行った。なお、ネガティブコントロールの培養液のＤＭＳＯ濃度は０．１％ｖ／ｖであり、このＤＭＳＯ濃度は、ミトキサントロンを含む培養液や、Ｋ−７１７４を含む培養液におけるＤＭＳＯ濃度と同じであった。
【０１８９】
これらのエリスロポエチン産生誘導アッセイにおけるｑＰＣＲ解析（試行回数３回）の結果を図３に示す。縦軸は、相対的なｍＲＮＡの発現レベルを表し、より具体的には、ハウスキーピング遺伝子であるＨｐｒｔ（hypoxanthine phosphoribosyltransferase）遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルに対する、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。図３から分かるように、既知のＧＡＴＡ阻害剤であり、かつ、エリスロポエチン産生誘導剤であるＫ−７１７４は、上皮系細胞の一種であるマウス腎集合管由来細胞においてはエリスロポエチン産生を誘導することができなかったのに対し、本発明のＧＡＴＡ阻害物質であるミトキサントロンは、上皮系細胞でエリスロポエチン産生を誘導することができることが示された。
【０１９０】
（上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ２）
実施例２において新たに見いだされたＧＡＴＡ阻害物質のうち、ミトキサントロン以外の物質も、上皮系細胞の一種であるｍＩＭＣＤ細胞（マウス腎集合管由来細胞）でエリスロポエチン産生を誘導することができるかどうかを調べるために、エリスロポエチン産生誘導アッセイを行った。
【０１９１】
エリスロポエチン産生誘導アッセイの方法は、前述の（上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ１）の方法にしたがった。ただし、ハウスキーピング遺伝子として、Ｈｐｒｔ遺伝子に代えて、１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子を利用した。また、今回のアッセイでは、ミトキサントロンに代えて、ピルビニウムを用いたアッセイも行った。また、ＤＭＳＯを添加したネガティブコントロールの他に、ＤＭＳＯも添加しないネガティブコントロール（ＮＴ）も設定した。
【０１９２】
これらのエリスロポエチン産生誘導アッセイにおけるｑＰＣＲ解析（試行回数４回）の結果を図４に示す。縦軸は、相対的なｍＲＮＡの発現レベルを表し、より具体的には、ハウスキーピング遺伝子である１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルに対する、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。図４の結果から分かるように、ミトキサントロンだけでなく、ピルビニウムも、上皮系細胞でエリスロポエチン産生を誘導することができることが示された。
【０１９３】
（上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ３）
実施例２において新たに見いだされたＧＡＴＡ阻害物質が、腎集合管由来細胞等の腎上皮細胞以外の上皮系細胞でもエリスロポエチン産生を誘導することができるかどうかを調べるために、ヒトの肺胞上皮細胞であるＡ５４９細胞（ヒト肺胞基底上皮腺癌細胞）を用いたエリスロポエチン産生誘導アッセイを行った。
【０１９４】
エリスロポエチン産生誘導アッセイの方法は、前述の（上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ２）の方法にしたがった。今回のアッセイでは、ミトキサントロンに代えて、ジゴキシンを用いたアッセイも行った。また、ＧＡＴＡ阻害物質を上皮系細胞に作用させる時間は、１２時間ではなく、２４時間にしてアッセイを行った。
【０１９５】
これらのエリスロポエチン産生誘導アッセイにおけるｑＰＣＲ解析（試行回数３回）の結果を図５に示す。縦軸は、相対的なｍＲＮＡの発現レベルを表し、より具体的には、ハウスキーピング遺伝子であるＨｐｒｔ（hypoxanthine phosphoribosyltransferase）遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルに対する、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。図５から分かるように、ミトキサントロン、ジゴキシンのいずれも、肺胞上皮細胞でエリスロポエチン産生を誘導することができることが示された。
なお、かかるｑＰＣＲにおいて、ヒトエリスロポエチン遺伝子を特異的に増幅するためのプライマーとして、フォワードプライマー（ctccgaacaatcactgct：配列番号３）及びリバースプライマー（ggtcatctgtcccctgtcct：配列番号４）を用いた。
【実施例４】
【０１９６】
［マウス個体内におけるエリスロポエチン産生誘導］
本発明のＧＡＴＡ阻害物質が、in vivoでもエリスロポエチン産生を誘導することができるかを調べるために、マウスを用いたエリスロポエチン産生誘導アッセイを行った。
【０１９７】
（マウスを用いたエリスロポエチン産生誘導アッセイ）
８〜１１週齢の雄のＩＣＲマウスを用意した。このマウスの腹腔内に、ミトキサントロンを含むＤＭＳＯ溶液を注射投与した。ミトキサントロンの投与量は５ｍｇ／ｋｇとした。投与から２０時間後に、頚椎脱臼によりマウス個体を屠殺した後、開腹して腎臓及び肺組織を摘出した。腎臓については、腎杯を中心として、皮質髄質を含む領域（図６の左の肺の点線内の領域）の腎組織を切り取った。この領域の腎組織は、腎上皮細胞を多く含む組織である。この腎組織を１ｍＬのＲＮＡ抽出試薬（Isogen；ニッポンジーン社製）中に浸漬した。その後、その腎組織をホモジナイズしてＲＮＡを抽出した。一方、肺については、気管支を中心とした領域（図６の右の肺の点線内の領域）の肺組織を摘出した。この肺組織は、肺上皮細胞を多く含む組織である。この肺組織を１ｍＬのＲＮＡ抽出試薬（Isogen；ニッポンジーン社製）中に浸漬した。その後、その肺組織をホモジナイズしてＲＮＡを抽出した。
【０１９８】
また、ネガティブコントロールとして、ミトキサントロンを含まないＤＭＳＯ溶液を投与したマウスについても同様に、腎組織及び肺組織からＲＮＡを抽出した。ネガティブコントロールにおけるＤＭＳＯ溶液の投与量は、ミトキサントロンを含むＤＭＳＯ溶液を投与した場合におけるＤＭＳＯ投与量と等量になるようにした。
【０１９９】
以上により抽出した各ＲＮＡを用いたｑＰＣＲ解析（試行回数６回）を行った。かかるｑＰＣＲ解析の方法は、前述の（上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生誘導アッセイ１）の方法にしたがった。なお、今回のｑＰＣＲ解析では、エリスロポエチン遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルだけでなく、ハウスキーピング遺伝子であるＨｋ１（ヘキソキナーゼ１）遺伝子や、Ｇｌｕｔ１（グルコーストランスポーター１）遺伝子の発現レベルも定量した。これらのｑＰＣＲ解析の結果を図７に示す。縦軸は、ミトキサントロンを含まないＤＭＳＯ溶液を投与したマウスにおける特定の遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルを１としたときの、その遺伝子のｍＲＮＡの発現レベルの相対比率（倍）を表す。図７の左パネルは、腎組織における結果を示し、右パネルは、肺組織における結果を示す。図７の結果から分かるように、ミトキサントロンは、腎組織においても、肺組織においても、エリスロポエチン産生を誘導することができることが示された。これらの結果から、ミトキサントロンは、in vivoにおいても、腎上皮細胞や肺上皮細胞等の上皮系細胞において、エリスロポエチン産生を誘導することができることが示された。
【産業上の利用可能性】
【０２００】
本発明によれば、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができる新たなＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞において、転写因子ＧＡＴＡによる遺伝子発現を阻害することができるＧＡＴＡ阻害剤や、腎上皮細胞等の上皮系細胞においてエリスロポエチン産生の抑制を解除し、エリスロポエチンを産生させることができるエリスロポエチン産生誘導剤等を提供することができる。
【０２０１】
慢性腎不全患者は、エリスロポエチン産生を主に担っている腎臓の尿細管間質細胞が障害されていることが多いが、腎上皮細胞は障害されていない場合が多い。上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤やエリスロポエチン産生誘導剤は、このような慢性腎不全患者においても、エリスロポエチン産生誘導を行い得るため、そのような患者における腎性貧血の予防、改善及び／又は治療に用い得る。
【０２０２】
また、エリスロポエチンは、細胞や組織を保護する作用（細胞・組織保護作用）を有しており、ヒト組換えエリスロポエチン製剤の投与により腎臓保護作用、心筋保護作用、末梢動脈保護作用等が報告されている（臨牀透析, vol.24, no.1,p.69-75(2008)）。したがって、上皮系細胞におけるエリスロポエチン産生を誘導することができるＧＡＴＡ阻害剤やエリスロポエチン産生誘導剤は、細胞や組織の保護に用いることができ、好ましくは、腎不全等の予防、改善及び／又は治療に用いることができる。
【図１】
2017088573.tif 000126
【図２】
2017088573.tif 000127
【図３】
2017088573.tif 000128
【図４】
2017088573.tif 000129
【図５】
2017088573.tif 000130
【図６】
2017088573.tif 000131
【図７】
2017088573.tif 000132
【配列表】
2017088573000001.app