(57)【要約】      （修正有）【課題】特定の還元イソ−アルファ酸誘導体、実質的に鏡像異性体的に純粋な該誘導体の医薬組成物の提供。【解決手段】下式で表される化合物の塩であって、当該塩は、Ａｌ、Ｃａ、Ｃｕ、グアニジニウム、Ｆｅ、Ｌｉ、Ｎａ、Ｚｎ、シンコニジン又はジエタノールアミンの塩、及びそれらの結晶から選択される塩である還元イソ−アルファ酸誘導体。該誘導体及び組成物を、代謝障害、炎症及び、ＰＰＡＲγ変調に応答する状態、ＧＰＲ１２０変調に応答する状態等を治療する為の薬剤の製造の為の使用。2017101019.tif 000042【選択図】図２
2017101019.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造：
【化１２】
2017101019.tif 000040
を持つ、（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン又はその塩もしくは結晶。
【請求項２】
請求項１に記載の、（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オンの塩であり、当該塩が、カリウム、アルミニウム、カルシウム、銅、グアニジニウム、鉄、リチウム、マグネシウム、ナトリウム、亜鉛、シンコニジン、シンコニン及びジエタノールアミン塩からなる群から選択される、塩。
【請求項３】
請求項２に記載の塩であり、当該塩が、以下の構造：
【化１３】
2017101019.tif 000041
を持つカリウム塩である、塩。
【請求項４】
請求項３にカリウム塩の結晶であり、当該結晶が、単斜晶系空間群Ｐ２１２１２を持ち、単位セル長さがａ＝２３．３１１０（９）Ａ（オングストローム）、α＝９０°、ｂ＝２８．９０５２（１２）Ａ（オングストローム）、β＝９０°、ｃ＝１３．６８４５（５）Ａ及びγ＝９０°である、塩。
【請求項５】
請求項４に記載の結晶であり、当該結晶が、表２に記載の３次元原子座標を持つ、結晶。
【請求項６】
請求項１に記載の（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン又はその塩もしくは結晶の、実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物。
【請求項７】
請求項１に記載の（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン又はその塩もしくは結晶と、薬学的に許容可能なキャリアとの、実質的に鏡像異性体的に純粋な医薬組成物。
【請求項８】
請求項４に記載の結晶を含む、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
それを必要とする対象におけるＰＰＡＲγ変調に応答する状態を治療する方法であり、前記対象に請求項７に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法であり、前記状態が、糖尿病及び肥満からなる群から選択される、方法。
【請求項１１】
それを必要とする対象におけるＧＰＲ１２０状態変調に応答する状態を治療する方法であり、前記対象に請求項７に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１２】
それを必要とする対象における代謝障害を治療する方法であり、前記対象に請求項７に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法であり、前記代謝障害が糖尿病である、方法。
【請求項１４】
請求項１２に記載の方法であり、前記医薬組成物の投与が、グルコース及び／又は脂質レベルの減少をもたらす、方法。
【請求項１５】
それを必要とする対象における炎症を抑制するための方法であり、前記対象に請求項７に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１６】
それを必要とする対象における炎症に伴う状態を治療する方法であり、前記対象に請求項７に記載の医薬組成物の治療的有効量を投与するステップを含む、方法。
【請求項１７】
結晶性（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オンカリウム塩（１：１）。
【請求項１８】
結晶性（−）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オンカリウム塩（１：１）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、米国仮特許出願第６１／４０８５７２号（２０１０年１０月３０日出願）、米国仮特許出願第６１／４４８１５０号（２０１１年３月１日出願）、及び米国仮特許出願第６１／５０８４３４号（２０１１年７月１５日出願）の優先権を主張する出願であり、これらの内容は図面も含めて参照されて本明細書に援用される。
【背景技術】
【０００２】
アルファ酸ファミリーの最も豊富なメンバーは（−）−フムロンである。（−）−フムロンの絶対配置は既に報告されており（Ｄｅ  Ｋｅｕｋｅｌｅｉｒｅ  １９７０）、同様に、（−）−フムロンから誘導される、シス及びトランスイソ−アルファ酸の絶対配置割り当て(assignments)も報告されている（Ｄｅ  Ｋｅｕｋｅｌｅｉｒｅ  １９７１）。
【０００３】
所謂「還元イソ−アルファ酸」−シス及びトランス−アルファ酸の両方から誘導される還元生成物−がさらに分類される。この追加の分類は、飽和の位置と程度に依存する。Ｃ６カルボニルのみをヒドロキシに還元することにより得られる化合物の分類は、ロー(rho)イソ−アルファ酸（ＲＩＡＡ）としてまとめて参照される。テトラヒドロイソ−アルファ酸（ＴＨＩＡＡ）クラスは、両方のイソプレニル部分のみが飽和しているこれらの化合物を総称する。同様に、ヘキサヒドロ−イソ−アルファ酸（ＨＩＡＡ）は、Ｃ６のヒドロキシル及び両方のイソプレニル部分の飽和の両方を含むイソ−アルファ酸の還元誘導体を総称する。シス及びトランスジアステレオマーの存在に加えて、対応するフロログルシノールの生合成経路への様々な短鎖脂肪酸の取り込みの結果として、３つのクラスのそれぞれにおいて様々な同族体（ｃｏｎｇｅｎｅｒｓ）が存在する（Ｗａｎｇ  ２００８）。フロログルシノールは、イソ−アルファ酸の前駆体であるアルファ酸の一般的な前駆体であり、、これはさらに還元アルファ酸イソ−酸の前駆体となる。
【０００４】
最近、還元イソ−アルファ酸は、様々な試験管内（in  vitro）及びネズミ(murine)モデルにおいて、肥満、脂質異常症、及び炎症の治療において有益な効果を有することが示される。ロー(rho)イソ−アルファ酸の同族体(congeners)及び立体異性体の混合物−ＲＩＡＡと呼ばれる−は、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）−刺激成熟３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における抗炎症性活性、及び分化する３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における脂肪合成活性を示した（Ｂａｂｉｓｈ  ２０１０）。
【０００５】
テトラヒドロイソ−アルファ酸−ＴＨＩＡＡと呼ばれる−の同族体及び立体異性体の混合物は、脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）、ブルトン型(Burton’s)チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）、フォスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−キナーゼ）及びグリコーゲンシンターゼキナーゼ３β（ＧＳＫ３β）の活性、並びにインビトロ(in  vitro)でのβ−カテニンリン酸化を阻害した。さらに、ＴＨＩＡＡは、ＲＡＷ２６４．７細胞の破骨細胞への減少した変換、及び還元(reduced)ＴＲＡＰ活性により示されるように、破骨細胞形成を抑制し、且つ、関節リウマチ滑膜繊維芽細胞（ＲＡＳＦ）における１Ｌ−１β−活性化プロスタグランジンＥ２、マトリクスメタロプロテイナーゼ３、ＩＬ−６、ＩＬ−８及び単球走化性タンパク質１を抑制する。さらには、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を持つマウスにおいて、この同じ同族体及び立体異性体混合物（即ちＴＨＩＡＡ）が、関節炎指数を大きく減少させ、且つ、骨、関節及び軟骨劣化を低減させた。これらのマウスにおける血清ＩＬ−６濃度はまた、ＴＨＩＡＡで処理される場合の用量依存性を示した（Ｋｏｎｄａ  ２０１０）。
【０００６】
これらの知見と一致して、また、ＲＩＡＡ及びＴＨＩＡＡはそれぞれ、リポ多糖刺激ＲＡＷ２６４．７マクロファージにおけるプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）産生を阻害し、同様に、誘導性シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）タンパク質発現を阻害したことが報告されている。これに加えて、これらの混合物のそれぞれ、即ちＲＩＡＡ及びＴＨＩＡＡは、それぞれ、用量依存的に、減少したＮＦ−κＢ核内移行及び存在量を有することが報告されている（Ｔｒｉｐｐ  ２００９）。
【０００７】
ＲＩＡＡ及びＴＨＩＡＡの異質性(heterogeneity)は、それらの個々の、及び従って相対的な生物学的活性に関して、（ＲＩＡＡ又はＴＨＩＡＡ混合物のいずれかに存在する）種々の同族体及び立体異性体の関係についての理解又は知識を妨害している。さらに、ＲＩＡＡ及びＴＨＩＡＡにおいて存在する多くの化合物間の相乗作用の可能性は、全部ではないものの、これらの混合物の観察された生物学的活性の多くに関与している可能性がある。
【０００８】
それらの個々の、及び従って相対的な生物学的活性に関して、種々の同族体及び立体異性体の関係についての理解又は知識を得るためには、興味対象とされる化合物が、実質的に且つ鏡像異性体的に純粋な化合物として得られること、及びそれらの個々の生物学的活性が、実質的に及び鏡像異性体的に純粋な形で測定されることが必要である。この必要性は、必然的に、異なる分子の混合物（例えば、ＴＨＩＡＡ、ＲＩＡＡ、及びＨＨＩＡＡ）からなるいずれの不均一物質の生物学的活性が、前記不均一物質を含む異なる分子のパーセント組成、立体化学、構造及び他の特性に依存することによるものである。これらの理由のために、医薬組成物での使用及び治療のために実質的に鏡像異性体的に純粋な還元イソ−アルファ酸誘導性を製造し、且つ、精製するための必要性が存在する。
【０００９】
この必要性に加えて、実質的に及び鏡像異性体的に純粋な化合物を、医薬開発で通常遭遇する種々の工程のために好適な形で製造する必要がまた存在する。潜在的な薬物候補物の純粋な結晶形の製造は、医薬開発において有利である。１つの利点は、薬物候補物の化学的及び物理的性質の改良された特徴付けである。アモルファス形に比較して結晶形がより好ましい薬物動態性を持つことは、特別めずらしいことではなく、これらは、しばしば処理するのがより容易である。改良された貯蔵安定性は、しばしば結晶形に関連したさらなる利点である。潜在的薬物候補物の結晶形に固有の物理的性質は、特定の薬学的活性成分を選択する上で重要なファクタの一つである。一例は、前記潜在的な薬物の、製造、貯蔵及び使用のための好適な組成物への配合(formulation、製剤)である。具体的には、結晶性固体の粉砕前後での流動性は、処理(processin)及び投与剤形製造をする際の薬物候補物の取り扱い方法に大きなく影響する。粉砕した固体形の粒子が容易に流動しない場合において、製剤科学者は、この困難を相殺するために製剤開発に努力するであろう。これはしばしば、コロイド二酸化ケイ素、タルク及び澱粉又は三塩基性リン酸カルシウムなどの滑剤の使用を含む。潜在的な薬物化合物のさらなる固体性質は、水性流体への溶解速度(dissolution  rate)である。特定の結晶性多形体(polymorph)に関連した物理的性質は、その空間的な向き(orientation)、及び前記結晶性多形体の単位セルを含む個々の分子のユニークな立体構造(conformation)に、本質的に起因する。特定の結晶性多形体は、アモルファス形又は別の多形体のいずれかとは一般的に異なるユニークな熱的性質を持つ。
【００１０】
多形体の熱的性質は、キャピラリー融点、熱重量分析（ＴＧＡ）及び示差走査熱分析（ＤＳＣ）などの技術を用いて測定される。これらの測定の結果は、多形体フォーム(polymorphic  forms)の存在を識別及び同定するため、且つ、お互いを識別するために使用される。１つの特定の多形体フォームは、限定されるものでないが、粉末Ｘ線回折（ＸＲＰＤ）、単結晶Ｘ線結晶解析及び赤外線分光方法を含む種々の技術により検出可能である、明確な結晶学的及び分光学的性質を持つ。De
eukeleire Tetrahedron 26:385(1970)
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本書において、特定の実施形態において、シス３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン（「ＫＤＴ５００」）誘導体、実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物及びこれらの誘導体を含む医薬組成物を提供される。
【００１２】
特定の実施形態において、本書で提供される前記ＫＤＴ５００誘導体は、
式Ｉに記載した構造を持つ（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン（「（＋）−ＫＤＴ５００」）、
式ＩＩに記載した構造を持つ（−）−（４Ｒ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン（「（−）−ＫＤＴ５００」）、並びに
それらの塩及び結晶、
から選択される。
【００１３】
式Ｉ：
【化１】
2017101019.tif 000003
【００１４】
式ＩＩ：
【化２】
2017101019.tif 000004
【００１５】
特定の実施形態において、本書本書で提供されるＫＤＴ誘導体は、（＋）−ＫＤＴ５００又は（−）−ＫＤＴ５００の塩である。特定の実施形態において、これらの誘導体は、（＋）−ＫＤＴ５００又は（−）−ＫＤＴ５００の、カリウム、アルミニウム、カルシウム、銅、グアニジウム、鉄、リチウム、マグネシウム、ナトリウム、亜鉛、シンコニジン、シンコニン及びジエタノールアミン塩を包含するが、これらに限定されない、無機もしくは有機塩であり得る。これらの実施形態の特定のものにおいて、誘導体は、式ＩＩＩに記載された構造を持つ（＋）−ＫＤＴ５００のカリウム塩（「（＋）−ＫＤＴ５０１」）であり得る。
式ＩＩＩ：
【化３】
2017101019.tif 000005
【００１６】
特定の実施形態において、本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体は、（＋）−ＫＤＴ５００、（−）−ＫＤＴ５００又はそれらの塩の結晶である。これらの実施形態の特定のものにおいて、誘導体は、（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶であり、且つ、これらの実施形態の特定のものにおいて、結晶は、単斜晶系空間群Ｐ２１２１２、及び単位セル寸法  ａ＝２３．３１１０（９）Ａ（オングストローム）、α＝９０°、ｂ＝２８．９０５２（１２）Ａ、β＝９０°、ｃ＝１３．６８４５（５）Ａ、及びγ＝９０°を持つ。特定の実施形態において、結晶は、表２から表４に記載された特性(traits)の１つ以上を持つ。
【００１７】
本書で、実施形態において、ＫＤＴ５００誘導体の実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物が、本書において提供される。特定の実施形態において、これらの実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物は、（＋）−ＫＤＴ５００、（−）−ＫＤＴ５００、又はそれらの塩もしくは結晶である。
【００１８】
本書で特定の実施形態において、本書でＫＤＴ５００誘導体及び１以上の薬学的に許容可能なキャリアを含む、実質的に鏡像異性体的に純粋な医薬組成物が、本書において提供される。特定の実施形態において、これらの実質的に鏡像異性体的に純粋な医薬組成物は、（＋）−ＫＤＴ５００、（−）−ＫＤＴ５００、又はそれらの塩もしくは結晶を含む。
【００１９】
本書で特定の実施形態において、本書で本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上又はその組成物を用いてin  vitro又はin  vivoで、脂質生成を誘導する、脂肪生成を誘導する、ＰＰＡＲγを活性化する、又はＧＰＲ１２０を活性化する方法が本書において提供される。特定実施形態において、組成物は、ＫＤＴ５００誘導体及び１以上の薬学的に許容可能なキャリアを含む、実質的に鏡像異性体的に純粋な医薬組成物である。特定の実施形態において、前記方法は、それを必要とする対象(subject)における、低減した脂質生成、低減した脂肪生成又は低減したＰＰＡＲγもしくはＧＰＲ１２０活性に関連した状態(condition)を処置するために使用される。
【００２０】
本書で特定の実施形態において、対象に、本書において提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上又はその組成物の治療的有効量を投与することにより、それを必要とする対象における、ＰＰＡＲγ変調（modulation、モジュレーション）に応答する(responsive  to)状態を治療する、ＧＰＲ１２０変調に応答する状態を治療する、炎症を抑制する、又は炎症に関連した状態を治療する方法が、本書において提供される。本書で。これらの実施形態の特定のものにおいて、誘導体は、本書で提供されるように、実質的に鏡像異性体的に純粋な医薬組成物を介して投与される。特定の実施形態において、ＰＰＲＡＲγ変調に応答する状態は、ＩＩ型糖尿病、肥満症、高インシュリン血症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪肝炎、自己免疫疾患又は増殖性疾患である。特定の実施形態において、代謝傷害は糖尿病である。特定の実施形態において、本書において本書で提供される化合物もしくは組成物の投与は、トリグリセリドレベルを包含する、グルコース及び／又は脂質レベルの減少を生じることとなる。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、（＋）−ＫＤＴ５０１の立体化学構造を示す。単位セルからのカリウムイオン及び水分子は省略されている。
【図２】図２は、非対称性単位について（＋）−ＫＤＴ５０１結晶のＯＲＴＥＰ図を示す。
【図３】図３は、（＋）−ＫＤＴ５０１のＸＲＰＤ回折図(diffractogram)を示す。
【図４】図４は、（＋）−ＫＤＴ５０１のＴＧ／ＤＴＡサーモグラムを示す。
【図５】図５は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における脂質生成に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。ポジティブコントロールとしてロシグリタゾン(Rosiglitazone)を使用した。
【図６】図６は、ＴＨＰ−１細胞における、ＴＮＦ−α−（Ａ）及びＬＰＳ−（Ｂ）介在ＭＭＰ−９発現レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。データは、４回実験の平均±ＳＤ（標準偏差）を表す。
【図７】図７は、ＴＨＰ−１細胞における、ＴＮＦ−α−（Ａ）及びＬＰＳ−（Ｂ）介在ＩＬ−１β発現レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。データは、４回実験の平均±ＳＤを表す。
【図８】図８は、  ＴＨＰ−１細胞における、ＴＮＦ−α−（Ａ）及びＬＰＳ−（Ｂ）介在ＭＰＣ−１発現レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。データは、４回実験の平均±ＳＤを表す。
【図９】ＴＨＰ−１細胞における、、ＴＮＦ−α−（Ａ）及びＬＰＳ−（Ｂ）介在ＲＡＮＴＥＳ発現レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。データは、４回実験の平均±ＳＤを表す。
【図１０】ＴＨＰ−１細胞における、ＴＮＦ−α−（Ａ）及びＬＰＳ−（Ｂ）介在ＭＩＰ−１α発現レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。データは、４回実験の平均±ＳＤを表す。
【図１１】図１１は、ＲＡＳＦにおけるＩＬ−１β介在ＰＧＥ２レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図１２】図１２は、ＲＡＳＦにおけるＩＬ−１β介在ＭＭＰ１３レベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図１３】図１３は、ＰＰＡＲγ活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。ポジティブコントロールとしてロシグリタゾン(Rosiglitazone)及びテルミサルタン（telmisartan）を使用した。
【図１４】図１４は、ＰＰＡＲα活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。ポジティブコントロールとしてＧＷ５９０７３５を使用し、ネガティブコントロールとしてロシグリタゾン(Rosiglitazone)を使用した。
【図１５】図１５は、ＰＰＡＲδ活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。ポジティブコントロールとしてＧＷ０７４２を使用し、ネガティブコントロールとしてロシグリタゾン(Rosiglitazone)を使用した。
【図１６】図１６は、ＰＰＡＲγ活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。ポジティブコントロールとしてロシグリタゾン(Rosiglitazone)を使用した。
【図１７】図１７は、ＧＰＲ１２０活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を示す。データは、二重反復測定(duplicate  determinations)の平均±ＳＤ（標準偏差）を表す。ＤＨＡ、ＥＰＡ及びα−ＬＡがコントロールとして使用された。
【図１８】図１８は、無細胞アッセイにおける、ＤＡＰＫ１活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１のでの効果を示す。
【図１９】図１９は、ＺＤＦラットにおける、血中グルコースレベルに対するＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図２０】図２０は、ＺＤＦラットにおける、血中トリグリセリドレベルに対するＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図２１】図２１は、ＤＩＯマウスにおける、血中グルコースレベルに対するＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図２２】図２２は、ＤＩＯマウスにおける、血中インスリンレベルに対するＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図２３】図２３、ＤＩＯマウスにおける、ＨｂＡ１Ｃレベルに対するＫＤＴ５０１の効果を示す。
【図２４】図２４は、ＤＩＯマウスにおける、体脂肪量(fat  mass)に対するＫＤＴ５０１の効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明の以下の記載は本発明の種々の実施形態を説明することだけが意図される。従って、記載される具体的な変形例は本発明の範囲を限定するように解釈されるべきではない。当業者に明らかなことは、種々の均等物、変更及び改変は、本発明の範囲から外れることなく実施され得ることであり、理解されるべきことは、かかる均等な実施形態はここに含まれる、ということである。
【００２３】
本書で開示されるように、シス３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン（「ＫＤＴ５００」）誘導体が合成され、精製され、且つ、特徴付けされる。従って、特定の本書で実施形態において本書で提供されるものは、ＫＤＴ５００誘導体及びその塩及び結晶であり、塩の結晶を包含するる。本書でまた、これらの誘導性及びその塩及び結晶を含む組成物が提供され、実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物を包含する。
【００２４】
本書本書で使用される用語「塩」は、全ての薬学的に許容可能な塩を意味し得、例えば、カリウム、アルミニウム、カルシウム、銅、グアナジウム、鉄、リチウム、マグネシウム、ナトリウム及び亜鉛塩などの無機塩基塩、及びシンコニジン、シンコニン及びジエタノールアミン塩などの有機塩基塩を包含する。薬学的に許容可能な塩のさらなる例、及び本発明による調剤(preparations)は、例えばＢｅｒｇｅ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６６：１（１９７７）に見出され得る。
【００２５】
特定の実施形態において、本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体は、本書で式Ｉ又は式ＩＩに記載されれる構造を持つ。
【００２６】
式Ｉ：
【化４】
2017101019.tif 000006
式ＩＩ：
【化５】
2017101019.tif 000007
【００２７】
式Ｉ及び式ＩＩの化合物は、それぞれ、
（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン（以下、「（＋）−ＫＤＴ５００」とする）、及び
（−）−（４Ｒ，５Ｓ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン（以下、「（−）−ＫＤＴ５００」とする）
を表す。従って、特定の好ましい実施形態において、本書で本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体は、（＋）−ＫＤＴ５００又は（−）−ＫＤＴ５００である。
【００２８】
特定の実施形態において、本書本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体は、ＫＤＴ５００の塩である。ＫＤＴ５００の塩は、限定されるものではないが、ＫＤＴ５００のカリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、鉄塩、ナトリウム塩、銅塩、グアナジウム塩、シンコニジン塩及びシンコニン塩を包含する。例えば、ＫＤＴ５００の塩は、式ＩＩＩに記載された構造を有する、（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オンカリウム塩（以下、「（＋）−ＫＤＴ５０１」とする）であり得る。
式ＩＩＩ：
【化６】
2017101019.tif 000008
【００２９】
他の実施形態において、本書本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体は、ＫＤＴ５００の結晶又はその塩であるり、例えばＫＤＴ５０１を包含する。これらの実施形態の特定のものにおいて、単斜晶系空間群Ｐ２１２１２、及び単位セル寸法  ａ＝２３．３１１０（９）Ａ（オングストローム）（α＝９０°）、ｂ＝２８．９０５２（１２）Ａ（オングストローム）（β＝９０°）、及びｃ＝１３．６８４５（５）Ａ（オングストローム）（γ＝９０°）を持つ、（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶が提供される。この（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶形は、本書本書で「結晶（＋）−ＫＤＴ５０１」と称する。
【００３０】
特定の実施形態において、結晶（＋）−ＫＤＴ５０１は、
表２に記載された３次元原子座標、
表３に記載された結合長さ及び角度、及び／又は、
表４に記載された異方性変位(displacement)パラメータ、
を持つ。本書で、異方性変位ファクタ指数(exponent)は、次の形：
−２π２［ｈ２ａ＊２Ｕ１１＋．．．＋２ｈｋａ＊ｂ＊Ｕ１２］。
を取る。
【００３１】
本書で特定実施形態において、本書本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上を含む組成物が、本書で提供される。これらの実施形態の特定のものにおいて、組成物は実質的に鏡像異性体的に純粋である。本書本書で使用される用語「実質的に鏡像異性体的に純粋」とは、組成物中の９０％以上の１つの特定の化合物が第１の鏡像異性体形であると同時に、１０％以下が第２の鏡像異性体形である組成物を意味する。例えば、実質的に鏡像異性体的に純粋な（＋）−ＫＤＴ５００組成物において、組成物中のＫＤＴ５００の９０％以上は（＋）−ＫＤＴ５００であり、且つ、１０％以下は、（−）−ＫＤＴ５００である。特定の実施形態において、化合物の「第１の鏡像異性体形」は、そのような鏡像異性体形の塩及び結晶形を包含する。例えば、実質的に鏡像異性体的に純粋な（＋）−ＫＤＴ５００において、組成物中のＫＤＴ５００の９０％以上が、（＋）−ＫＤＴ５００又はその塩もしくは結晶の形態にあると同時に、１０％以下が（−）−ＫＤＴ５００又はその塩もしくは結晶の形態にある。特定の実施形態において、実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物は、化合物の第１の鏡像異性体形を９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、９９．９％、９９．９５％又は９９．９９％以上含有し得る。
【００３２】
特定の実施形態において、（＋）−ＫＤＴ５００の組成物が提供される。これらの実施形態の特定のものにおいて、組成物は実質的に鏡像異性体的に純粋である。これらの実施形態の特定のものにおいて、組成物中の（＋）−ＫＤＴ５００のパーセンテージは、（＋）−ＫＤＴ５００の塩又は結晶の形態である。これらの実施形態のいくつかにおいて、組成物中の（＋）−ＫＤＴ５００の全てが、塩又は結晶形態である。従って、本書で（＋）−ＫＤＴ５００塩又は結晶の実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物が、本書において提供される。他の実施形態において、組成物中の（＋）−ＫＤＴ５００は、全く塩又は結晶形ではない。
【００３３】
特定の実施形態において、（＋）−ＫＤＴ５００の組成物が提供される。これらの実施形態において、組成物は実質的に鏡像異性体的に純粋である。これらの実施形態のあるものにおいて、組成物中の（−）−ＫＤＴ５００のパーセンテージは、（−）−ＫＤＴ５００の塩又は結晶の形態である。こらの実施形態のいくつかにおいて、組成物中の（−）−ＫＤＴ５００の全てが塩又は結晶形態である。従って、本書で（−）−ＫＤＴ５００の塩又は結晶の実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物が本書において提供される。他の実施形態において、組成物中の（−）−ＫＤＴ５００は、全く塩又は結晶形ではない。
【００３４】
特定の本書で実施形態において、本書本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上と、１以上の薬学的に許容可能なキャリアとを含む医薬組成物が本書で提供される。特定の実施形態において、医薬組成物は実質的に鏡像異性体的に純粋である。これらの実施形態の特定のものにおいて、実質的に鏡像異性体的に純粋な医薬組成物は、（＋）−ＫＤＴ５００、（−）−ＫＤＴ５００、又はそれらの塩もしくは結晶を含む。本書本書で使用される「薬学的に許容可能なキャリア」とは、薬学的に許容さ可能な物質、組成物又はビヒクル(vehicle)を意味し、これは、興味対象の化合物を、一方の組織、器官又は身体の部分から、他方の組織、器官又は身体の部分へ、担持又は輸送する際に関与する。かかるキャリアは、例えば、液体又は固体フィラー、希釈剤、賦形剤、溶媒、カプセル化剤、安定化剤又はこれらの組み合わせを含んでよい。キャリアのそれぞれの成分は、それが組成物の他の成分と親和性である(compatible)ことが必要であり、且つ、遭遇し得るいずれの組織、器官又は身体部分にとって好適である必要があるという点で、「薬学的に許容可能な」ことがが必要であり、これは、毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、又はその治療効果を過度に超えるいずれの他の併発症のリクスを負うものであってはならない。
【００３５】
本書本書で提供される組成物において使用される薬学的に許容可能なキャリアの例は、限定されるものではないが、
（１）ラクトース、グルコース、スクロース又はマンニトールなどの糖；
（２）コーンスターチ及びジャガイモ澱粉などの澱粉；
（３）ナトリウムカルボキシメチルセルロース、エチルセルロース及びセルロースアセテートなどのセルロース及びその誘導体；
（４）粉末トラガカント；
（５）麦芽；
（６）ゼラチン；
（７）タルク；
（８）ココアバター及び座薬ワックスなどの賦形剤；
（９）ピーナッツ油、綿実油、べに花油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油及びダイズ油などの油；
（１０）プロピレングリコールなどのグリコール；
（１１）グリセリン、ソルビトール、マンニトール及びポリエチレングリコールなどのポリオール；
（１２）オレイン酸エチル及びラウリン酸エチルなどのエステル；
（１３）寒天又は炭酸カルシウムなどの崩壊剤；
（１４）水酸化マグネシウム及び水酸化アルミニウムなどの緩衝剤；
（１５）アルギン酸；
（１６）発熱性物質除去(pyrogen-free)水；
（１７）等張生理食塩水(saline)；
（１８）リンガー溶液；
（１９）エチルアルコール及びプロパンアルコールなどのアルコール；
（２０）リン酸塩緩衝液；
（２１）パラフィン；
（２２）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール又はラウリル硫酸ナトリウムなどの潤滑剤；
（２３）着色剤；
（２４）コロイド二酸化ケイ素、タルク及び澱粉又は三塩基性リン酸カルシウムなどの滑剤；及び
（２５）医薬組成物において利用されるその他の非毒性親和性(compatible)物質、例えばアセトンなど、
を包含する。一実施形態において、本書本書で使用される薬学的に許容可能なキャリアは、水溶性キャリア、例えば緩衝生理食塩水(saline)などである。他の実施形態において、薬学的に許容可能なキャリアは、極性溶媒、例えばアセトン及びアルコールである。
【００３６】
本書本書で提供される医薬組成物はさらに、生理学的条件に近似する必要がある、１以上の薬学的に許容可能な他の物質を含み得る。例えば組成物は、１以上のｐＨ調節剤、緩衝剤、又は毒性調節剤を含むことができ、例えば酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウム、その他同種の物などを包含る。
【００３７】
本書本書で提供される医薬組成物は、好適な剤形に配合(formulated,製剤)され得るものであり、例えば、カプセル、カシェ剤(cachets)、ピル、錠剤、（着香基材、通常は、スクロース及びアカシアもしくはトラガカント、を使用する）トローチ(lozenges)、粉末、顆粒、水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁物として、水中油又は油中水液体エマルションとして、エリキシル剤又はシロップ剤として、又は（ゼラチン及びグリセリン又はスクロース及びアカシアなどの不活性基材を使用する）トローチ(pastilles)として、及び／又はうがい剤、その他同種の物などを包含し、各々は、活性成分として所定量のＫＤＴ５００誘導体を含有する。特定の実施形態において、組成物は、徐放性送達ビヒクル、例えば徐放性カプセルとして製剤され得る。本書本書で使用される「徐放性ビヒクル」は、投与直後というよりは、ある期間にわたり活性成分を放出するいずれの送達ビヒクルを意味する。他の実施形態において、組成物は、即時放出送達ビヒクルとして製剤化され得る。
【００３８】
錠剤は、圧縮又はモールド成形(molding)により、場合により１以上の副成分と共に、作成され得る。圧縮錠剤は、バインダー（例えばゼラチン又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）、潤滑剤、不活性希釈剤、保存料、崩壊剤（例えば澱粉グリコレートナトリウム又は架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤又は分散剤を使用して、製造され(prepared)得る。モールド成形錠剤は、粉末ＫＤＴ５００誘導体の実質的に鏡像異性体的に純粋な混合物、又はさらに不活性希釈剤で湿らせたものを、好適な装置においてモールド成形することにより作成され得る。錠剤、及び他の固体投与形、例えば糖衣錠、カプセル、ピル及び顆粒は、場合により割線を入れられ(scored)、又は、医薬製剤分野においてよく知られている腸溶性コーティング及び他のコーティングなどのコーティング及びシェルと共に調製されてよい。これらはまた、その中においてＫＤＴ５００誘導体のゆっくりとした、又は制御された放出を与えるように、製剤され得る。例えば、所望の放出プロファイルを与えるため、様々な割合でヒドロキシプロピルメチルセルロース、その他のポリマーマトリクス、リポソーム及び／又はマイクロスフェアを使用する。これらは、例えば細菌保持フィルターを通じて濾過することにより、又は使用直前に滅菌水又は何か他の滅菌注射可能な媒体に溶解し得る滅菌固体組成物の形で滅菌剤を組み込むことにより、滅菌され得る。これらの組成物はまた、場合により鎮静剤(pacifying  agents)を含有してよく、且つ、それらがＫＤＴ５００誘導体のみを、又は優先的に、胃腸管の特定の部分において、場合において遅延して、放出する組成物であり得る。使用され得る埋め込み組成物の例は、ポリマー性物質及びワックスを包含する。ＫＤＴ５００誘導体はまた、必要に応じて、前記の賦形剤の１以上を含むミクロカプセル形状であってよい。
【００３９】
本書本書で提供される組成物中のＫＤＴ５００誘導体の濃度は変化し得る。濃度は、選択された特有の投与モード及び生理学的システムのニーズに応じて、液体容積、粘性、体重、その他に基づき選択され得る。特定の実施形態において、本書本書で提供される組成物中のＫＤＴ５００誘導体の濃度は、重量／容積(wt/vol)に基づき、約０．０００１％から１００％、約０．００１％から約５０％、約０．０１％から約３０％、約０．１％から約２０％、又は約１％から約１０％であり得る。
【００４０】
さらに、本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体を分析、合成、精製及び／又は結晶化する方法、並びに本書で提供される実質的に鏡像異性体的に純粋なＫＤＴ５００組成物を分析、合成、精製及び／又は結晶化する方法が、本書で提供される。
【００４１】
特定の実施形態において、本書で提供される合成方法は、ＫＤＴ５００誘導体の単一の鏡像異性体(enantiomer)を生成する。例えば、合成方法は、（＋）−ＫＤＴ５００のみ、又は（−）−ＫＤＴ５００のみを生成し得る。その他の実施形態において、合成方法は、ＫＤＴ５００誘導体の鏡像異性体形態の混合物をもたらす。これらの実施形態において、１以上の後続の分離及び／又は精製ステップが、単一の鏡像異性体を単離するため、又は本書で提供される実質的に鏡像異性体的に純粋な組成物を生成するために、実施されてよい。
【００４２】
本書で提供される合成及び精製方法の特定のものにおいて、（＋）−ＫＤＴ５００及び／又は（−）−ＫＤＴ５００は、出発物質としてルプロンを用いて合成されてよい（例えば、以下の実施例１１を参照）。これらの合成／精製方法の１つにおいて、ルプロンは最初に、還元的脱アルキル化によりテトラヒドロ−デオキシフムロンに変換され、そして、テトラヒドロ−デオキシフムロンは、不斉酸化により鏡像異性体的に純粋なテトラヒドロ−フムロン（（＋）及び／又は（−））に変換される。得られる鏡像異性体は、精製され、そして、鏡像異性体及びジアステレオマー選択性異性化により、対応するシスイソ−フムロンに変換される。
【００４３】
別の実施形態において、（＋）−ＫＤＴ５００及び／又は（−）−ＫＤＴ５００は、出発物質としてデオキシフムロンを用いて合成され得る（例えば以下の実施例１２を参照）。一実施形態において、デオキシフムロンは最初に、不斉酸化により、（＋）−フムロン及び／又は（−）−フムロンに変換される。（＋）−フムロンは、鏡像異性体及びジアステレオマー選択性異性化により、対応する鏡像異性体的に純粋な（−）−シスイソフムロンに変換され、及び次いで水素化によりさらに（−）−ＫＤＴ５００に変換される。（−）−フムロンは、鏡像異性体及びジアステレオマー選択性異性化により、対応する鏡像異性体的に純粋な（＋）−シスイソフムロンに変換され、及び次いで水素化によりさらに（＋）−ＫＤＴ５００に変換される。
【００４４】
別の実施形態において、鏡像異性体的に純粋な（＋）−フムロン及び（−）−フムロンは、ラセミ体(racemic)（±）−フムロンから精製され得る（例えば、以下の実施例１３を参照）。別の実施形態において、鏡像異性体的に純粋な（＋）−テトラヒドロフムロン及び（−）−テトラヒドロフムロンは、ラセミ体（±）−テトラヒドロフムロンから精製され得る（例えば、以下の実施例１３を参照）。
【００４５】
本書で開示されるように、（＋）−ＫＤＴ５０１は、３Ｔ３−Ｌ１ネズミ(murine)線維芽細胞モデルにおける脂質生成及び脂肪生成に対するその効果が評価された。（＋）−ＫＤＴ５０１は、用量依存的に脂質生成及び脂肪生成両方を誘導することが見出された。３Ｔ３−Ｌ１ネズミ線維芽細胞は、前脂肪細胞の複製、脂肪細胞分化、及びインスリン感受性効果についての研究を可能にする（Ｆａｓｓｈａｕｅｒ  ２００２；Ｌｉ  ２００２；Ｒａｚ  ２００５）。脂肪細胞中の脂質取り込みを促進する薬剤(agent)は、インスリン感受性を改善することが報告されている。１つの仮説は、血漿からの脂肪細胞への脂肪酸の取り込みが、筋肉中の脂肪酸の相対枯渇を、グルコース取り込みの付随的な改善と同時に(with)、引き起こす、ということである（Ｍａｒｔｉｎ  １９９８）。筋肉及び肝臓中の遊離脂肪酸のインスリン脱感作効果は、チアゾリジンジオン処置の結果として減少するであろう。これらin  vitroでの結果は、臨床的に確認された（Ｂｏｄｅｎ  １９９７；Ｓｔｕｍｖｏｌｌ  ２００２）。  
【００４６】
（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１は両方とも、これら標的の各々について、アゴニストリガンドの存在下で、それらの、ＰＰＡＲγ、ＳＣＮ２Ａ及びＡＧＴＲ２に競合的に結合する能力について、評価された。両方の分子は、同時に(with)、（＋）−ＫＤＴ５０１は、全３つの標的への高い親和性程度を示した。標的のうち、（＋）−ＫＤＴ５０１は、最も高い親和性でＰＰＡＲγに結合した。両方の化合物は、ＰＰＡＲγ活性を増加させたが、ＰＰＡＲα又はＰＰＡＲδ活性にほとんど又は全く影響を及ぼさなかった。しかし、ＰＰＡＲγ活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果は、全ての濃度で（−）−ＫＤＴ５０１の効果の少なくとも３倍であった。このことは、（＋）−ＫＤＴ５０１は、ＰＰＡＲγ活性化剤として実質的により有効であることを示唆している。ＰＰＡＲγは、脂肪生成、グルコース恒常性、及びインスリン感受性のマスターレギュレーターであり、且つ、細胞をインスリンに感作させ、肝臓、脂肪組織及び骨格筋において抗糖尿病効果を有するチアゾリジンジオンの分子標的である（Ｔｏｎｔｏｎｏｚ  １９９４；  Ｔｏｎｔｏｎｏｚ  １９９４）。
【００４７】
脂質生成、脂肪生成、及びＰＰＡＲγ活性を誘導するための本明細書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の能力に基づいて、
脂質生成を誘導し、脂肪生成を誘導し、及び／又はＰＰＡＲγを活性化する方法、並びに、
本明細書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１つ以上、又は実質的に鏡像異性的に純粋なその医薬組成物の治療有効量を投与することによって、それを必要とする対象におけるＰＰＡＲγ変調(modulation)
に応答する状態を治療する方法、
が本明細書において提供される。ＰＰＡＲγ変調(modulation)に応答する状態の例は、例えば、改善されたグルコース及びエネルギー恒常性により治療可能な状態を包含し、ＩＩ型糖尿病、肥満、高インスリン血症、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、自己免疫障害、及び増殖性障害を包含する（但し、これらに限定されない）。変調に応答する状態変調に応答する状態
【００４８】
上記のように、、既に同定されたＰＰＡＲγアゴニストは、炎症性応答を抑制することが示されている。ＰＰＡＲγは、脂質代謝のための標的遺伝子の転写を活性化するだけでなく、炎症遺伝子の発現を減少させる（Ｐａｓｃｕａｌ  ２００５）。ＰＰＡＲγアゴニストによる炎症反応の抑制は、抗糖尿病及び抗アテローム性動脈硬化症の効果と密接に関連している。炎症におけるＫＤＴ５０１の役割を評価するために、（＋）−ＫＤＴ５０１を、種々のＴＮＦ−α、ＬＰＳ−及びＩＬ−１β媒介炎症性因子の発現を阻害する能力について評価した。（＋）ＫＤＴ５０１は、ＴＨＰ−１細胞におけるＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ及びＭＩＰ−１αの、ＴＮＦ−α及びＬＰＳ媒介性発現を阻害し、且つ、関節リウマチ滑膜線維芽細胞（ＲＡＳＦ）細胞におけるＰＧＥ２及びＭＭＰ−１３のＩＬ−１β媒介性発現を阻害することが見出された。加えて、（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１は、ＤＡＰＫ１活性を阻害することが見出された。（＋）−ＫＤＴ５０１が最も有効であることを示した。
【００４９】
インスリン感受性及びグルコース調節を改善するのと、並びに、前炎症性シグナルを減少させる、ＫＤＴ５０１の能力は、インスリンシグナル伝達と炎症経路との間の相互作用に影響を与える機構を示唆する。この活性の１つの可能性のある機構は、Ｇタンパク質共役型受容体の刺激によるものである。この可能性を評価するために、Ｇタンパク質共役型受容体ＧＰＲ１２０を感作させる(sensitizing)ω３脂肪酸の活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を試験した。ＧＰＲ１２０の活性化はインスリン感受性を改善し、ＮＦ−κＢ経路を阻害することにより炎症を軽減する（Ｏｈ  ２０１０；Ｔａｌｕｋｄａｒ  ２０１１）。ＧＰＲ１２０はまた、腸のＬ細胞においてＧＬＰ−１分泌を媒介し（Ｈｉｒａｓａｗａ  ２００５；Ｈａｒａ  ２０１１）、且つ、脂肪細胞において脂質生成を増加させることが示し（Ｇｏｔｈ２００７）、それらのいずれも抗糖尿病効果に寄与していた。（＋）−ＫＤＴ５０１が、３０．３μＭのＥＣ５０値でＧＰＲ１２０活性を作動させる(agonize)ことが判明し、（＋）−ＫＤＴ５０１がＧＲＰ１２０活性化を介して部分的にその脂質生成作用を発揮する可能性が示唆された。  
【００５０】
本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体のＧＰＲ１２０活性を誘導する能力に基づき、本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上、又は実質的に鏡像異性体的に純粋なその医薬組成物の医療有効量を投与することにより、それを必要とする対象においてＧＰＲ１２０変調に応答する状態を治療する方法が本書で提供される。さらに、ＧＰＲ１２０及びＰＰＡＲγ活性を誘導し、且つ、種々のＴＮＦ−α、ＬＰＳ及びＩＬ−１β媒介性炎症因子の発現を阻害するための、本明細書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の能力に基づいて、本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上、又は実質的に鏡像異性体的に純粋なその医薬組成物の医療有効量を投与することにより、それを必要とする対象において炎症を阻害する方法が本書で提供される。本書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の１以上、又は実質的に鏡像異性体的に純粋なその医薬組成物の医療有効量を投与することにより、それを必要とする対象において、炎症及び／又は炎症性因子ＭＭＰ−９、ＩＬ−１β、ＭＣＰ−１、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＰＧＥ２及びＭＭＰの１以上の上昇したレベルに関連する状態を治療するための方法もまた本明細書において提供される。このような状態は、例えば、アテローム性動脈硬化症、アテローム性動脈硬化性プラーク不安定性、自己免疫疾患、例えば関節リウマチ、軟骨破壊、変形性関節症、アレルギー状態、ＨＩＶ／ＡＩＤＳなどの免疫不全疾患、腎症、腫瘍、糖尿病などを包含する。
【００５１】
本明細書中に開示されるように、（＋）−ＫＤＴ５０１は、ラット糖尿病モデルにおいてグルコース及び脂質レベルを変化させるその能力について評価された。２００ｍｇ／ｋｇの１日１回の投薬量で、（＋）−ＫＤＴ５０１はグルコースレベルを有意に低下させることが判明した。この減少は、メトホルミンで処置したラットにおいて観察されたものよりも大きく、ピオグリタゾンで処置したラットにおいて見られたものと同様であった。同様に、（＋）−ＫＤＴ５０１は、トリグリセリドレベルをピオグリタゾンで観察されたレベルとほぼ同じ程度まで低下させることが判明した。  
【００５２】
マウスモデルにおいて、（＋）−ＫＤＴ５０１の１日２回投与は、循環全血グルコース及びインスリンレベルを低下させるのに、経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）における濃度−時間曲線（ＡＵＣ）下でグルコース及びインスリン面積(area)を減少させるのに、及び食餌誘発肥満（ＤＩＯ）マウスにおいて脂肪量を減少させるのに、効果的であった。ＤＩＯマウスにおいて、糖化ヘモグロビン（ＨｂＡ１ｃ）含有率(percentage)の減少傾向も３０日間にわたり観察された。  
【００５３】
ラットモデル及びマウスモデルにおいて、循環グルコース、トリグリセリド、及びインスリンレベルを低下させる、本明細書で提供されるＫＤＴ５００誘導体の能力に基づいて、本書で提供される１以上のＫＤＴ５００、又は実質的に鏡像異性体的に純粋なその医薬組成物の治療的有効量を投与することによって代謝障害を治療する方法が、本明細書において提供される。本明細書で使用される「代謝障害」は、恒常性(homeostasis、ホメオスタシス)の代謝制御の喪失をもたらすいずれの状態を指す。代謝障害の例は、例えば、糖尿病、高血糖症、体重増加、インスリン抵抗性、異脂肪血症及び高コレステロール血症が包含する。特定の実施形態において、本明細書で提供されるＫＤＴ５００誘導体又は実質的に鏡像異性的に純粋な医薬組成物の１つ以上の治療有効量を投与することによって、それを必要とする対象におけるＩＩ型糖尿病を包含する糖尿病を治療する方法が提供される。同様に、特定の実施形態において、本明細書で提供される１つ以上のＫＤＴ５００誘導体又は実質的に鏡像異性的に純粋な医薬組成物の治療有効量を投与することによって、それを必要とする対象におけるグルコース及び／又は脂質レベルを低下させる方法が提供される。特定の実施形態において、ＫＤＴ５００誘導体又は組成物の投与は、血糖値の低下及び／又はトリグリセリドレベルの低下をもたらす。特定の実施形態において、ＫＤＴ５００誘導体又は組成物の投与は、例えば、例えば総コレステロール又はＬＤＬレベルを包含する、１以上のさらなる脂質レベルの低下をもたらす。
【００５４】
本明細書で提供される方法の特定の実施形態においては、対象(subject)は哺乳動物であり、且つ、これらの実施形態のあるものにおいて、対象はヒトである。「それを必要とする対象」とは、ＰＰＡＲγ変調(modulation)又は代謝障害に応答する状態と診断された対象、ＰＰＡＲγ変調もしくは代謝障害に応答する状態の１つ以上の症状を示すか又は呈した対象、又は１以上の遺伝的もしくは環境的因子に基づくＰＰＡＲγ変調に応答する状態もしくは代謝障害を発症する危険性があると考えられている対象を意味する。  
【００５５】
状態に関して本明細書で使用される「治療する」、「治療する」又は「治療」という用語は、状態を予防すること、状態の発症又は発症速度を遅くすること、状態を発症するリスクを低減すること、状態に関連する症状の発症を予防又は遅延させること、症状に関連する症状を軽減又は終結させること、状態の完全又は部分的退行を生じさせること、又はそれらの組合せを意味する。  
【００５６】
本明細書で使用されるＫＤＴ５００誘導体又は医薬組成物の「治療有効量」は、対象において所望の治療効果をもたらす組成物の量である。正確な治療有効量は、所与の対象における治療効果の面で最も有効な結果をもたらす化合物又は組成物の量である。この量は、治療化合物の特性（例えば、活性、薬物動態、薬力学、及びバイオアベイラビリティを包含する）、被検者の生理的状態（例えば、年齢、性別、疾患の種類及び段階、全身健康状態、所与の投与量に対する応答性、及び薬物治療の種類）、組成物中の医薬的に許容可能な１以上のキャリアの性質、ならびに投与経路を包含するが、これらに限定されない様々な要因に依存して変化する。臨床的及び薬理学的分野の当業者であれば、日常的な実験を介して、すなわち、化合物の投与に対する対象の応答をモニタリングし、それに応じて投与量を調整することにより、治療上有効な量を決定することができる。追加のガイダンスについては、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  Ｕｎｉｖ．  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ  （ＵＳＩＰ），  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，  ＰＡ，  ２００５を参照。その開示全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００５７】
特定の実施形態において、本明細書中に提供されるＫＤＴ５００誘導体又は組成物の治療有効量は、対象当たり、１日当たり約１０−１０ｇ〜約１００ｇ、約１０−１０ｇ〜約１０−３ｇ、約１０−９ｇ〜約１０−６ｇ、約１０−６ｇ〜約１００ｇ、約０．００１ｇ〜約１００ｇ、約０．０１ｇ〜約１０ｇ、又は約０．１ｇ〜約１ｇの活性成分（即ち、ＫＤＴ５００誘導体）から選択することができる。特定の実施形態において、ＫＤＴ５００誘導体又は組成物の治療有効量は、対象の体重に基づいて計算することができる。例えば、特定の実施形態において、治療有効量は、対象当たり、１日当たりの約１００ｍｇ／ｋｇ以上、約１５０ｍｇ／ｋｇ以上、約２５０ｍｇ／ｋｇ以上、約３００ｍｇ／ｋｇ以上の活性成分（即ち、ＫＤＴ５００誘導体）、であってもよい。
【００５８】
特定の実施形態において、本明細書で提供される化合物又は組成物は、１日に１回以上投与されてもよい。他の実施形態において、化合物又は組成物は、一日一回未満で送達されてもよい。例えば、化合物又は組成物は、週に一度、月に一度、又は数ヶ月に一度、投与されてもよい。本明細書で提供する化合物又は組成物の投与は、予め決定された特定の治療期間にわたって行うことができ、又はそれは無期限に、又は特定の治療基準に達するまで行うことができる。例えば、投与は、グルコース及び／又は脂質レベルが所定の閾値に達するまで行うことができる。特定の実施形態において、投与頻度は、治療の過程にわたって変化してもよい。例えば、ある治療基準が満たされると、被験者は治療過程にわたってより少ない頻度で投与を受ける可能性がある。
【００５９】
本明細書で開示される化合物及び組成物は、経口、エアロゾル、経腸、鼻、眼、非経口、又は経皮（例えば、局所クリーム又は軟膏、パッチ）を包含するが、これらに限定されるものではない、当該分野で公知のいずれの投与経路によって対象に送達され得る。「非経口」は、注射に一般に関連する投与経路を指し、眼窩内、輸液、動脈内、嚢内、心臓内、皮内、筋肉内、腹腔内、肺内、脊髄内、胸骨内、髄腔内、子宮内、静脈内、くも膜下腔、嚢下、皮下、経粘膜又は経気管を包含する。非経口投与可能な組成物を調製するための方法は、当業者に知られているか、又は明らかであり、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ２１ｓｔ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（２００５）に詳細に記載される。組成物は、ボーラス、舐剤、又はペーストとして投与することもできる。
【００６０】
特定の実施形態において、本明細書で提供される１以上のＫＤＴ５００誘導体又は実質的に鏡像異性体的に純粋なそれらの組成物の１以上を含むキット提供される。特定の実施形態において、キットは、用量又は投与指示などの使用のための指示を提供する。特定の実施形態において、キットは、それを必要とする対象における、ＰＰＡＲγ又はＧＰＲ１２０変調に応答する状態を治療するため、糖尿病などの代謝障害を治療するため、グルコース及び／又は脂質レベルを低下させるため、炎症を阻害するため、又は炎症に関連する状態を処置するために使用され得る。
【００６１】
特定の実施形態において、本明細書で提供されるＫＤＴ５００誘導体及び実質的に鏡像異性的に純粋なＫＤＴ５００誘導体組成物は、香味剤として使用することができる。これらの実施形態のいくつかでは、化合物は、苦い香味剤として使用される。
【００６２】
以下の実施例は、より良く本発明を例示するために提供され、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。特定の材料が言及される程度まで、それは例示の目的のためだけであり、本発明を限定するものではない。当業者は、本発明の能力を行使することなく、且つ、本発明の範囲から逸脱することなく、同等の手段又は反応物を開発することがでる。多くの変形が、依然として本発明の範囲内に留まりながら、本明細書に記載された手順で行うことができることが理解されるであろう。このような変形は本発明の範囲内に含まれることが発明者の意図である。
【実施例】
【００６３】
実施例１：  実質的に鏡像異性体的に純粋な（＋）−及び（−）−ＫＤＴ誘導性５００誘導体の結晶化及び特徴付け
（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶化（スキームＩ）：
ホップ処理で得られた１００ｇのシス主体のテトラヒドロ−イソアルファ酸を、高速液体向流クロマトグラフ（ＨＳＣＣＣ）を用いて報告された手順で精製した（Ｄａｈｌｂｅｒｇ  ２０１０）。ＨＰＬＣ及びＵＶピーク面積分析は、得られた生成物は＞９０％ＫＤＴ５００であることを示した。精製材料を、１当量のカリウム塩（例えばＫＯＨ）と反応させて（＋）−ＫＤＴ５０１に変換し、変色を除去するため、数回再結晶させた。充分な均一性に到達した後、（＋）−ＫＤＴ５０１はさらに、Ｘ線回折実験に十分な寸法を持つ（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶を得るために再結晶させた。
【００６４】
スキームＩ
【化７】
2017101019.tif 000009
【００６５】
４ｍＬのバイアルに水（４５０μＬ）と（＋）−ＫＤＴ５０１（４９．５ｍｇ）を加え、バイアルをキャップで密封し、熱加熱ブロック（７０℃）を用いて溶解するまで加熱した。溶液を２時間かけて３５℃に冷却した。この間、結晶のその場での(in  situ)形成が観察された。混合物を室温（２２℃）で８時間放置したところ、この時点で追加の結晶の生成が観察された。Ｘ線分析に適した個々の結晶を確認し、溶液から注意深く取り出し、マウントし、Ｘ線回折分析にかけた。  
【００６６】
（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶構造の分解能
無色ブロック（寸法０．３７×０．３０×０．２８ｍｍ３）をオイルを有するガラスキャピラリー上に取り付けた。データは、−１６３℃で、Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＰＥＸ  ＩＩ単結晶Ｘ−線回折計、Ｍｏ−放射線で収集された。水晶と検出器の距離は４０ｍｍで、露光時間はすべてのセットで１度当たり１０秒であった。走査幅は０．５°であった。データ収集は、９８．４％がθの２５°まで完了した。ｈ＝−２６〜２８、ｋ＝−３４〜３４、ｌ＝−１６〜１４の指標をカバーする合計６８２１１（併合した（ｍｅｒｇｅｄ））反射が収集された。１６６８１回の反射は対称独立であり、Ｒｉｎｔ＝０．０３８６は、データが良い（平均品質０．０７）を示した。インデキシングとユニットセルの細分化は、原始的な斜方晶格子を示した。空間群はＰ２１  ２１  ２（Ｎｏ．１８）であった。
【００６７】
データは、ＡＰＥＸ２ソフトウェアパッケージ内のＳＡＩＮＴ、ＳＡＤＡＢＳを使用して統合され、スケールされた（Ｂｒｕｋｅｒ  ２００７  ＡＰＥＸ２（バージョン２．１−４）、ＳＡＩＮＴ（バージョン７．３４Ａ）、ＳＡＤＡＢＳ（バージョン２００７／４）、ＢｒｕｋｅｒＡＸＳ  Ｉｎｃ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）。
【００６８】
直接方法（ＳＨＥＬＸＳ；  Ｓ１Ｒ９７（Ａｌｔｏｍａｒｅ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｃｒｙｓｔ  ３２：１１５（１９９９）、Ａｌｔｏｍａｒｅ  Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｃｒｙｓｔ  ２６：３４３（１９９３））によるソリューションは、提案された構造と一致する完全重原子段階モデルを生成した。ＳＨＥＬＸＬ９７を用いた差フーリエ合成によって構造を完成させた（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ，  “ＳＨＥＬＸＬ−９７：  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｒｙｓｔａｌ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ，”  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ，  Ｇｅｒｍａｎｙ  （１９９７）；  Ｍａｃｋａｙ  “ＭａＸｕｓ：  ａ  ｃｏｍｐｕｔｅｒ  ｐｒｏｇｒａｍ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｆｉｎｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｒｙｓｔａｌ  ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ｆｒｏｍ  ｄｉｆｆｒａｃｔｉｏｎ  ｄａｔａ，”  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｇｌａｓｇｏｗ，  Ｓｃｏｔｌａｎｄ  （１９９７））。散乱係数は、ＷａａｓｍａｉｒとＫｉｒｆｅｌによる（Ｗａａｓｍａｉｅｒ  Ａｃｔａ  Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ  Ａ  ５１：４１６  （１９９５））。水素原子は、幾何学的に理想化された位置に配置され、０．９５〜１．００オングストロームの範囲のＣ−Ｈ距離で親原子に乗るように拘束された。等方的熱的パラメータＵｅｑは、ＣＨの場合（CH’s）それらの親原子Ｕｅｑの１．２Ｕｅｑであり、及びメチル基の場合、それら親原子Ｕｅｑの１．５Ｕｅｑであるように固定された。全ての非水素原子は、フルマトリックス最小二乗法により異方性的に精製された。（＋）−ＫＤＴ５０１の結晶構造を図１に示す。結晶学的データを表１に示し、三次元原子座標を表２に示し、結合長さ及び角度を表３に示し、異方性変位(displacement)パラメータ（ここで、異方性変位係数指数が、
−２π２［ｈ２ａ＊２Ｕ１１＋  ．．．  ＋２ｈｋａ＊ｂ＊Ｕ１２］
のフォームをとる）を表４に示す。
【００６９】
（＋）−ＫＤＴ５０１結晶形のための非対称単位は、４個のカリウムカチオンを配位する（＋）−ＫＤＴ５０１分子の４個からなる。２個のカリウムカチオンは、酸素で架橋される。無秩序水分子は、他の２つと配位する。有機部分のケトンは、最密充填パターンにつながるカリウムカチオンと配位する。（＋）−ＫＤＴ５０１の非対称単位は、図２に示される。絶対配置は異常散乱から得られた（絶対構造パラメータ＝  ０．０４（４））。
【００７０】
（＋）−ＫＤＴ５０１のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）及び熱分析：
ＸＲＰＤ分析は、Ｃｕ  Ｘ線管とＰｉｘｃｅｌ検出器システムを装備したＰａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘｐｅｒｔ  Ｐｒｏ回折計を用いて行った。等温サンプルを透過モードで分析し、低密度ポリエチレンフィルムの間に保持した。ＸＲＰＤ回折図は、（＋）−ＫＤＴ５０１が結晶性であることを示した（図３）。
【００７１】
熱重量／示差温度アナライザー（ＴＧ／ＤＴＡ）：
熱分析は、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  Ｄｉａｍｏｎｄで行った。較正標準は、インジウムとスズであった。サンプルは、アルミニウム製サンプルパンに入れ、ＴＧ炉に挿入し、正確に秤量した。サンプルを、１０℃／分の速度で窒素気流中３０℃から３００℃に加熱した。炉の温度は、サンプル分析前に３０℃で平衡化した。
【００７２】
ＴＧ／ＤＴＡサーモグラム（図４）は、いくらかの溶媒損失を示す１．３７％の重量損失を表した。これは水和物又は溶媒和物の指標であった。１４５℃のオンセットを伴う融解吸熱を除いて、他の熱事象は存在しなかった。
【００７３】
実施例２：  ３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における脂質生成に対する（＋）ＫＤＴ０５１の効果
３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞において、脂質生成に対する（＋）ＫＤＴ０５１の効果を評価した。
【００７４】
ネズミ(murine)３Ｔ３−Ｌ１脂肪前駆細胞（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ；  ＡＴＣＣ）を補足したＤＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）で維持した。それらはコンフルエントな(confluent)単層を形成するまで培養物中で複製し、その後細胞−細胞接触はＧ０／Ｇ１増殖停止を誘発する。３−イソブチル−１−メチルキサンタン、デキサメタゾン及び高インスリンによる２日間の後続の刺激は、細胞が集密後有糸分裂クローン増殖を受け、細胞周期を終了し、脂肪細胞特異的遺伝子を発現し始めるよう促す。分化誘導の約５日後、細胞は特有の脂質充填脂肪細胞表現型を示す。
【００７５】
細胞を、２４ウェルプレートに約１．５×１０６細胞の初期密度で播種し、コンフルエントになるまで２日間増殖させた。０日目に、細胞を（＋）−ＫＤＴ５０１（２５，１２．５，６．２５，３．２５μＭ）、ロシグリタゾン（１０μＭ、陽性対照；ケイマン・ケミカルズ、ミシガン州アンハーバー）、又はＤＭＳＯ（ネガティブコントロール）で処置した。この最初の処理の後、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ（高グルコース）、０．５ｍＭメチルイソブチルキサンチン（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）、０．５μＭデキサメタゾン（Ｓｉｇｍａ）、及び１０μｇ／ｍＬインスリン（Ｓｉｇｍａ）からなる分化培地を添加することによって細胞を脂肪細胞に分化させた。２日後、培地を、１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ中の１０μｇ／ｍＬインスリンからなる進行培地に変更した。さらに２日後、培地を１０％ＦＢＳ／ＤＭＥＭからなる維持培地に交換した。成熟期（６日目／７日目）を通して、２日ごとに細胞をＤＭＳＯ中の（＋）−ＫＤＴ５０１又はロシグリタゾンで再処理した。新鮮な培地を添加するたびに、新鮮な試験物質も添加した。
【００７６】
顕微鏡評価は、脂肪細胞の形態(morphology)への前駆脂肪細胞の分化を評価するために、０日目及び試験を通して２日ごとに行われた。細胞内脂質はオイルレッドＯ染色を用いて定量した。培地を注意深く細胞層を乱すことなく、８日目／９日目の後に廃棄しました。１０％ホルマリンを添加し、１５分間インキュベートし、そしてプレートを６０％のイソプロパノールで洗浄し、室温で１０分間乾燥させた。３００μＬのオイルレッドＯ溶液（６０％エタノール中０．３６％；  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）を添加し、室温で１０分間インキュベートした。プレートを水で２回洗浄し、７０％エタノールで洗浄した。色素を、２０分間２００μＬの１００％イソプロパノールを添加することによって抽出した。１５０μＬのサンプルは、９６ウェルプレートに移され、吸光度を、プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐ．）を用いて５３０ｎｍで測定した。１００％イソプロパノールをブランクとして使用した。結果を図５に要約する。６．２５，１２．５及び２５μＭの（＋）−ＫＤＴ５０１は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞における脂質生成を統計的に有意に増加させた。観察された増加は、ロシグリタゾンで見られた増加に匹敵した。
【００７７】
実施例３：  ＴＨＰ−１細胞におけるＴＮＦ−α及びＬＰＳ媒介性炎症因子に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果：
ヒト単球ＴＨＰ−１細胞において、（＋）−ＫＤＴ５０１の抗炎症効果を評価した。  
【００７８】
ＴＨＰ−１細胞（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）を、製造業者の指示に従って、１０％の血清の存在下で、ＲＰＭ１１６４０において維持した。細胞を、様々な濃度（５０，２５，１２．５及び３．１２５μＭ）で１時間、（＋）−ＫＤＴ５０１とプレインキュベートし、次いでＴＮＦ−α（１０ｎｇ／ｍＬ；  Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）又は大腸菌ＬＰＳ（１μｇ／ｍＬ；  Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ）で一晩（１６〜２０時間）インキュベートした。培地中のＭＭＰ−９レベルを、ＥＬＩＳＡキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて測定し、サイトカインをＭｉｌｌｉｐｌｅｘ  ＭＡＰヒトサイトカイン／ケモカインキット（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を用いてアッセイした。分析物は、Ｌｕｍｉｎｅｘ  １００（商標）  ＩＳを用いて定量した。データは、５パラメータロジスティック法を用いて分析した。
【００７９】
結果を図６〜１０に示す。（＋）−ＫＤＴ５０１は、ＭＭＰ−９のＴＮＦ−α及びＬＰＳ誘導発現（図６）、ＩＬ−１β（図７）、ＭＣＰ−１（図８）、ＲＡＮＴＥＳ（図９）、及びΜΙΡ−１α（図１０）を用量依存的に阻害した。
【００８０】
実施例４：ＲＡＳＦにおけるＩＬ−１β媒介性炎症因子に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果：
関節リウマチ滑膜線維芽細胞（ＲＡＳＦ）において（＋）−ＫＤＴ５０１の抗炎症効果を評価した。
【００８１】
ヒトＲＡＳＦ細胞（Ａｓｔｅｒａｎｄ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）を培養し、１０％ウシ胎仔血清の存在下でＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培地中で維持した。細胞をウェルあたり１×１０４細胞の密度で２４ウェルプレートで継代培養し、２日間で７０〜８０％コンフルエンスに到達させた。０．１％ＤＭＳＯの最終濃度の無血清培地中のコンフルエントな細胞を、様々な濃度（５０，２５，１２．５及び６．２５μＭ）で（＋）−ＫＤＴ５０１と共に１時間インキュベートし、次いでＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍｌＬ）で２０〜２４時間刺激した。培地中のＭＭＰ−１３レベルをＥＬＩＳＡキット（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を用いて測定し、ＰＧＥ２レベルをＩｍｍｍｕｎｏ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎｓ、Ａｎｎ  Ａｒｂｏｒ、ＭＩ）を用いて測定した。
【００８２】
結果は図１１及び１２に示される。（＋）−ＫＤＴ５０１は、ＰＧＥ２（図１１）及びＭＭＰ−１３（図１２）のＩＬ−１β誘導発現を阻害した。
【００８３】
実施例５：  ＰＰＡＲγ、ＳＣＮ２Ａ及びＡＧＴＲ２に対するＫＤＴ５０１の競合結合：
ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）、電位依存性ナトリウムチャネルＩＩ型（ＳＣＮ２Ａ）、及びアンジオテンシンＩＩ受容体ＩＩ型（ＡＧＴＲ２）に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の競合的結合を、それぞれ、アゴニスト  ロシグリタゾン、ベラトリジン、及びアンジオテンシン−ＩＩの存在下で評価した。
【００８４】
ＰＰＡＲγの場合、細胞膜ホモジネート（８μｇタンパク質）を、１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）、５０ｍＭ  ＫＣｌ及び１ｍＭ  ＤＴＴを含有する緩衝液中の（＋）−ＫＤＴ５０１の存在下又は非存在下、５ｎＭ  ［３Ｈ］ロシグリタゾンと共に４℃で１２０分間インキュベートした。１０μＭロシグリタゾンの存在下で非特異的結合を測定した。
【００８５】
ＳＣＮ２Ａの場合、大脳皮質の細胞膜ホモジネート（２００μｇタンパク質）を、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ／Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、１３０ｍＭ塩化コリン、５．４ｍＭ  ＫＣｌ、０．８ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１ｇ／Ｌグルコース、０．０７５ｇ／Ｌサソリ毒及び０．１％ＢＳＡを含有する緩衝液中の（＋）−ＫＤＴ５０１の存在下又は非存在下、１０ｎＭの［３Ｈ］バトラコトキシンと２２℃で６０分間インキュベートした。３００μＭベラトリジンの存在下で非特異的結合を測定した。
【００８６】
ＡＧＴＲ２の場合、細胞膜ホモジネート（５μｇのタンパク質）を、５０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＤＴＡ及び０．１％ＢＳＡを含有する緩衝液中（＋）−ＫＤＴ５０１の存在下又は非存在下、０．０１ｎＭの［１２５Ｉ］  ＣＧＰ  ４２１１２Ａ（アンギオテンシンＩＩ受容体ＩＩ型アゴニスト）と３７℃で２４０分間、インキュベートした。１μＭアンジオテンシンＩＩの存在下で非特異的結合を測定した。
【００８７】
インキュベーション後、サンプルを、０．３％ＰＥＩで予備浸漬し、９６試料細胞ハーベスター（Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒ，Ｐａｃｋｅｒｄ）を用いて氷冷した５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで数回すすいだ、ガラス繊維フィルター（ＧＦ／Ｂ、Ｐａｃｋａｒｄ）を通して真空下で迅速に濾過した。フィルターを乾燥させ、次いでシンチレーションカクテル（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ０、Ｐａｃｋａｒｄ）を用いてシンチレーションカウンター（Ｔｏｐｃｏｕｎｔ、Ｐａｃｋａｒｄ）で放射活性について計数した。
【００８８】
結果を表５に要約する。（＋）−ＫＤＴ５０１は、アゴニストリガンドの存在下で３つの標的すべてに結合する能力を示し、ＰＰＡＲγとの最も高い親和性結合を生じた。
【００８９】
表５：
【数１】
2017101019.tif 000010
【００９０】
（＋）−ＫＤＴ５０１の代わりに（−）−ＫＤＴ５０１を用いて上記のように結合実験を繰り返した。これらの結果を表６に要約する。（＋）−ＫＤＴ５０１と同様に、（−）−ＫＤＴ５０１は、それらのアゴニストリガンドの存在下で３つの標的すべてに結合する能力を示した。しかし、３つの標的すべてについて、（−）−ＫＤＴ５０１のＩＣ５０及びＫｉは、（＋）−ＫＤＴ５０１で示されるものよりも高かった
【００９１】
表６：
【数２】
2017101019.tif 000011
【００９２】
実施例６：ＰＰＡＲ活性に対するＫＤＴ５０１の効果：
ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、及びＰＰＡＲγ活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の機能的効果を、ＰＰＡＲレポーターアッセイ（ＩＮＤＩＧＯ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、ＰＡ）を用いて評価した。このアッセイは、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、又はＰＰＡＲγの構成的高レベル発現を提供するように操作され、且つ、適切なＰＰＡＲに特異的なルシフェラーゼ報告遺伝子を含有する、非ヒト哺乳動物細胞を利用する。アゴニスト結合による活性化後、ＰＰＡＲはルシフェラーゼレポーター遺伝子の発現を誘導する。したがって、ルシフェラーゼ活性は、アゴニスト処理細胞におけるＰＰＡＲ活性を測定するための代用物(surrogate)を提供する。
【００９３】
レポーター細胞をウェル当たり１００μＬで９６ウェルプレート上にプレーティングし、種々の最終濃度（２５，１２．５，６．２５，３．１２５，１．５６及び０．７８μＭ）で１００μＬの（＋）−ＫＤＴ５０１を各ウェルに添加した。ＰＰＡＲγアッセイの場合、陽性対照としてロシグリタゾン（１，０．５，０．２５，０．１２５，０．０６３及び０．０３１μＭ）及びテルミサルタン（１０，５，２．５，１．２５及び０．６２５μＭ）を用いた。ＰＰＡＲαアッセイの場合、ＧＷ５９０７３５（１０，５，１，０．５，０．２５，０．１２５，０．０６３及び０．０３１μＭ）を陽性対照として使用し、ロシグリタゾン（１，０．５，０．２５，０．１２５，０．０６３及び０．０３１μＭ）を陰性対照として使用した。ＰＰＡＲδアッセイの場合、ＧＷ０７４２（１，０．５，０．２５，０．１２５，０．０６２５，０．０３１，０．０１６，０．００８μＭ）を陽性対照として使用し、ロシグリタゾン（１，０．５，０．２５，０．１２５，０．０６３及び０．０３１μＭ）を陰性対照として使用した。０．１％ＤＭＳＯもまた、各アッセイの陰性対照として用いた。プレートを３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーター内で２０時間インキュベートする。インキュベーション後、細胞培地を捨て、細胞を１００μＬのルシフェラーゼ検出試薬で１５分間処理した。ルミノメーター（Ｖｉｃｔｏｒ２、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いてプレートを分析した。平均相対光単位（ＲＬＵ）及び標準偏差を、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍを用いて分析した。
【００９４】
ＰＰＡＲγアッセイにおいて、陽性アゴニスト対照（ロシグリタゾン）は、予想されるようにＰＰＡＲγの活性を増加させた。ＰＰＡＲγの既知の部分アゴニストであるテルミサルタンもＰＰＡＲγ活性を増加させた。（＋）−ＫＤＴ５０１は、部分的なＰＰＡＲγアゴニストとしての活性と一致して統計学的に有意な様式でＰＰＡＲγ活性を増加させた（図１３）。（＋）−ＫＤＴ５０１は、ＰＰＡＲα及びＰＰＡＲδ活性にほとんど又は全く影響を及ぼさなかった（図１４及び１５）。
【００９５】
ＰＰＡＲ活性アッセイを、（＋）−ＫＤＴ５０１（１２．５，６．２５，３．１２５，１．５６、及び０．７８μＭ）及び（−）−ＫＤＴ５０１（２５，１２．５，６．２５，３．１２５，１．５６及び０．７８μＭ）の両方を使用して、上記のように繰り返した。（−）−ＫＤＴ５０１はＰＰＡＲγ活性を増加させたが、（＋）−ＫＤＴ５０１よりも有意に低い程度にであった（図１６）。両方の化合物についての結果を表７に要約する。
【００９６】
表７：
【数３】
2017101019.tif 000012
【００９７】
実施例７：ＧＰＲ１２０受容体活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果：
ＧＰＲ１２０活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果を、ＧＰＲ１２０を安定に発現するＣＨＯ−Ｋ１／ＧＰＲ１２０／Ｇα１５細胞を用いて評価した。ＧＰＲ１２０活性は、細胞内カルシウム応答によって測定した。
【００９８】
ＣＨＯ−Ｋ１／ＧＰＲ１２０／Ｇα１５細胞を定期的に継代して最適な細胞の健康状態を維持し、１０％ウシ胎仔血清、２００μｇ／ｍＬゼオシン、及び１００μｇ／ｍＬハイグロマイシンを補充したＨａｍ‘ｓ  Ｆ１２で培養した。実験開始の１８時間前に２０μＬの増殖培地中にウェル当たり２０，０００細胞の密度で３８４ウェルの黒壁、透明底プレートに細胞を播種し、３７℃／５％ＣＯ２で維持した。細胞にカルシウム−４を負荷し、蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）を用いてベースライン蛍光測定値を１秒〜２０秒で得た。２０秒で、（＋）−ＫＤＴ５０１（５×最終濃度）を読み取りプレートに加え、蛍光シグナルを１００秒間（２１秒〜１２０秒）モニターした。α−リノレン酸（ＬＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を対照として用いた。
【００９９】
データ取得及び分析は、ＳｃｒｅｅｎＷｏｒｋｓ（バージョン３．１）を使用して実行され、Ｅｘｃｅｌにエクスポートされた。最初の２０秒間の平均蛍光値をベースラインの読みとして計算した。相対蛍光単位（ΔＲＦＵ）強度値は、最大蛍光単位（２１ｓ〜１２０ｓ）を用いて計算し、ベースライン値を差し引いた。ＧｅｎＳｃｒｉｐｔで書かれたデータ分析ウィザードを用いてＥＣ５０を分析した。アンタゴニストの用量反応曲線をＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ４の４パラメーターロジスティック方程式  Ｙ＝Ｂｏｔｔｏｍ＋（Ｔｏｐ−Ｂｏｔｔｏｍ）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＩＣ５０−Ｘ）＊ＨｉｌｌＳｌｏｐｅ））を用いてフィッティングした。ここで、Ｘは濃度の対数であり、Ｙは応答である。
【０１００】
（＋）−ＫＤＴ５０１は、３０．３μＭのＥＣ５０値でＧＰＲ１２０アゴニスト活性を示した（図１７）。α−ＬＡ、ＤＨＡ及びＥＰＡのＥＣ５０値はそれぞれ３６．１μＭ、３５．３μＭ及び１１６．９μＭであった。
【０１０１】
実施例８：  ＤＡＰＫ１活性に対するＫＤＴ５０１の効果：
死亡関連プロテインキナーゼ１（ＤＡＰＫ１）活性に対する（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１の効果を評価した。
【０１０２】
ヒトＤＡＰＫ１を、８ｍＭＭＯＰＳ、ｐＨ７．０，０．２ｍＭＥＤＴＡ、２５０μＭＺＩＰペプチド基質（ＫＫＬＮＲＴＬＳＦＡＥＰＧ）、１０ｍＭＭｇＯＡｃ、及び［γ−３３Ｐ−ＡＴＰ］（比活性約５００ｃｐｍ／ｐｍｏｌ、必要に応じた濃度）でインキュベートした。様々な濃度（１００，３０，１０，１，０．３，０．１，０．０３，０．０１μＭ）における（＋）−ＫＤＴ５０１又は（−）−ＫＤＴ５０１を反応混合物に添加した。反応は、ＭｇＡＴＰ混合物の添加によって開始した。室温で４０分間インキュベートした後、３％リン酸溶液の添加により反応を停止させた。１０μＬの反応混合物をＰ３０フィルターマット上にスポットし、７５ｍＭリン酸中で５分間３回、メタノール中で先に１回洗浄し、その後乾燥させ、シンチレーション計数に供した。
【０１０３】
結果を図１８に示す。（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１はＤＡＰＫ１活性を用量依存的に阻害した。（＋）−ＫＤＴ５０１及び（−）−ＫＤＴ５０１についての計算されたＩＣ５０値は、それぞれ２．６５μＭ及び４０．９μＭであり、２つの化合物の約１５倍の差(15-fold  difference)を示した。このデータは、（＋）−ＫＤＴ５０１が（−）−ＫＤＴ５０１よりもＤＡＰＫ１活性の阻害においてより有効であることを示唆している。
【０１０４】
実施例９：  ラット糖尿病モデルにおけるグルコース及びトリグリセリドレベルに対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果：
グルコースレベルが１７５〜３００ｍｇ／ｄＬである６４週齢の６週齢の雄性Ｚｕｃｋｅｒ糖尿病性脂肪（ＺＤＦ）ラットを無作為化し、且つ、８投与群に分けた。：
１）ビヒクルのみ（０．５％メチルセルロース（ｗ／ｖ）、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０（ｗ／ｖ）；陰性対照）、
２）（＋）−ＫＤＴ５０１  ２５ｍｇ／ｋｇ、
３）（＋）−ＫＤＴ５０１  ５０ｍｇ／ｋｇ、
４）（＋）−ＫＤＴ５０１  １００ｍｇ／ｋｇ、
５）（＋）−ＫＤＴ５０１  ２００ｍｇ／ｋｇ、
６）メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ（陽性対照）、
７）メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ及び（＋）−ＫＤＴ５０１１００ｍｇ／ｋｇ、及び
８）ピオグリタゾン  ３０ｍｇ／ｋｇ（陽性対照）。
薬物は３３日間１日２回経口投与された。
【０１０５】
動物を無作為に、且つ、その後、１週間に１回秤量した。最新の体重測定値に基づいて計算した投与量を有していた。無作為化の３日前、無作為に、及び治療開始後１５日目及び２９日目に、血液サンプルを採血した。これらの血液サンプルを、グルコメーターを用いて全血グルコース評価を行うため、並びに、血中トリグリセリドレベルを測定するため、用いた。治療開始後２及び２９日目に体組成をｑＮＭＲにより試験した。経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を、治療開始後３１日目及び３２日目に実施した。ラットは、ＯＧＴＴに先立って一晩絶食し、グルコース及びインシュリンの尾の出血は、グルコースボーラス前及びグルコースボーラス後１５，３０，６０，９０、及び１２０分に実施された。グルコースボーラスは２ｇデキストロース／体重ｋｇであった。３３日目に、心臓穿刺をＰＫ分析のために行った。
【０１０６】
全血グルコースの結果を図１９に示す。期待されるように、陰性対照ラットは、研究の経過にわたって、全血グルコースレベルの有意かつ着実な増加を示した。ピオグリタゾンを投与した陽性対照ラットは、グルコースレベルの有意な減少を示したが、メトホルミンを受けた陽性対照ラットは、グルコースレベルのわずかな増加を示した。２５，５０、又は１００ｍｇ／ｋｇの用量で（±）ＫＤＴ５０１を投与したラットは、陰性対照ラットで観察されたものとほぼ同じグルコースレベルを示した。しかし、２００ｍｇ／ｋｇの用量で（＋）−ＫＤＴ５０１を投与したラットは、メトホルミン対照ラットで観察されたものよりもはるかに大きく、ピオグリタゾン対照ラットで観察されたものとほぼ同じグルコースレベルの有意な減少を示した。
【０１０７】
トリグリセリドレベルの結果を図２０に示す。メトホルミンを投与されたラットは、ネガティブコントロールラットに対して１５日目及び２９日目にトリグリセリドレベルの増加を示したが、ピオグリタゾンを投与したラットは有意な減少を示した。２５，５０、又は１００ｍｇ／ｋｇの用量で（±）ＫＤＴ５０１を投与したラットは、陰性対照ラットで観察されたものと同様のトリグリセリドレベルを示した。しかし、２００ｍｇ／ｋｇの用量で（＋）−ＫＤＴ５０１を投与したラットは、トリグリセリドレベルの有意な低下を示し、これはピオグリタゾン対照ラットにおいて観察されたものとほぼ同じ大きさであった。
【０１０８】
実施例１０：  高脂肪食誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスモデルにおけるグルコース、インスリン、ヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）及び脂肪量に対する（＋）−ＫＤＴ５０１の効果：
１４週齢の雄マウスを無作為化し、各群で１６匹の動物を含む７つの投与群に分けた：
１）ビヒクルのみ（０．５％メチルセルロース（ｗ／ｖ）、０．２％Ｔｗｅｅｎ８０（ｗ／ｖ）；陰性対照）、
２）（＋）−ＫＤＴ５０１  ２５ｍｇ／ｋｇ、
３）（＋）−ＫＤＴ５０１  ５０ｍｇ／ｋｇ、
４）（＋）−ＫＤＴ５０１  １００ｍｇ／ｋｇ、
５）（＋）−ＫＤＴ５０１  ２００ｍｇ／ｋｇ、
６）メトホルミン  ２００ｍｇ／ｋｇ（陽性対照）、及び
７）ピオグリタゾン  ３０ｍｇ／ｋｇ（陽性対照）。
薬物は３０日間１日２回経口投与された。
【０１０９】
動物を無作為に、且つ、その後、１週間に１回秤量した。最新の体重測定値に基づいて計算した投与量を有していた。マウスを高脂肪食（４０％Ｋｃａｌ）（ＴＤ９５２１７；ＣｏｖａｎｃｅＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ、ＩＮにより調製）上に維持した。治療開始後−５日目及び２８日目に体組成をｑＮＭＲにより試験した。処置開始後２９日目に血液を採取し、ヘモグロビンＡ１Ｃ（ＨｂＡ１Ｃ）レベルを測定した。経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）を、治療開始後３０日目に行った。マウスはＯＧＴＴに先立って一晩絶食し、グルコース及びインシュリンの尾の出血はグルコースボーラス前、及びグルコースボーラス後１５，３０，６０，９０及び１２０分に実施された。グルコースボーラスは２ｇデキストロース／体重ｋｇであった。ＯＧＴＴの結果は、曲線下面積（ＡＵＣ）測定及びダネット検定によって評価した。
【０１１０】
ＯＧＴＴから得られた血糖値を図２１に示す。ピオグリタゾン又はメトホルミンを投与した陽性対照マウスは、グルコースレベルの有意な低下を示した。同様に、（＋）−ＫＤＴ５０１を１００又は２００ｍｇ／ｋｇの投与量で受けたマウスは、グルコースレベルの有意な低下を示した。
【０１１１】
ＯＧＴＴからのインスリン結果を図２２に示す。ピオグリタゾン又はメトホルミンを投与した陽性対照マウスは、インスリンレベルの有意な低下を示した。同様に、（＋）−ＫＤＴ５０１を２００の投与量で受けたマウスは、インスリンレベルの有意な低下を示した。
【０１１２】
ＨｂＡ１Ｃの結果を図２３に示す。ＨｂＡ１Ｃの有意差は、ビヒクルのみの陰性対照群と陽性対照のメトホルミン投与群との間で観察された。（＋）−ＫＤＴ５０１の投与は、ＨｂＡ１Ｃ阻害への傾向を生じた。
【０１１３】
体脂肪量(fat  mass)結果を図２４に示す。メトホルミンを投与した陽性対照マウスは脂肪量の減少を示したが、ピオグリタゾンを投与した陽性対照マウスは差異を示さなかった。１００又は２００ｍｇ／ｋｇでの（＋）−ＫＤＴ５０１の投与は、陰性対照マウスと比較して、脂肪量に有意差をもたらした。
【０１１４】
実施例１１：  ルプロンからの（＋）−ＫＤＴ５００又は（−）−ＫＤＴ５００の不斉合成：
【０１１５】
スキームＩＩ
【化８】
2017101019.tif 000013
【０１１６】
ステップ１：  ルプロン（ＩＩ）からのテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）の合成。
メタノール中のルプロンの１０％溶液（ｗ／ｖ）を調製する。触媒量の濃ＨＣｌ（ａｑ）及び１０％Ｐｄ／Ｃを添加する。得られた混合物を水素（１．１気圧）下で３時間撹拌し、反応をＨＰＬＣでモニターする。反応が完了した後、濾過により触媒を除去し、濾液を減圧下で濃縮してテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を得、それをさらに精製することなく次の反応に使用することができる。
【０１１７】
ステップ２Ａ：  テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の不斉合成。
【０１１８】
オプション２Ａ（ｉ）：  テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の不斉合成。
無水ＴＨＦ中のテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）の１４％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、アセトン／ドライアイスバスを用いて−７８℃に冷却する。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１．２当量）を冷却し、（ＶＩ）の溶液に滴下して加える。この溶液を、−７８℃のアルゴン下で２．２当量のＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６及び２．３当量のジアミン配位子に由来するＴＨＦ中の［（−）−スパルタイン］２−Ｃｕ２−Ｏ２錯体に、カニューレを介して移す。得られた混合物を−７８℃又は所望の温度で１６時間撹拌する。４容量の５重量％硫酸水溶液で反応を停止させる。混合物を酢酸エチル（×３）で抽出し、合わせた抽出物を５％硫酸、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮する（Ｄｏｎｇ  ２００８）。
【０１１９】
オプション２Ａ（ｉｉ）：  テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の不斉合成。
テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）に変換することができる適切なＰ４５０変異酵素を構築し、米国特許第７，７０４，７１５号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように精製する。典型的な反応は、５００μＬの１００ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）中に１〜４μＭの精製Ｐ４５０ヘムドメイン酵素及び１〜２ｍＭのテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を含有する。以下を合わせる：  ７１３μＬ  精製水、２００μＬ  ０．１００Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．２、１００ｍＭ  最終濃度、２μＬ  ＤＭＳＯ中のテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）（１ｍＭ最終濃度）。
【０１２０】
１〜１０ｍＭのＨ２Ｏ２を添加することにより反応を開始させ、最大転化率についてＨＰＬＣによりモニターする。７．５μＬの６ＭＨＣｌの添加により反応を停止する。（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）は、抽出作業(work-up)によって得られ、前述のように精製される。
【０１２１】
オプション２Ａ（ｉｉｉ）：テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の不斉合成。
テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）に変換することができる微生物は、米国特許公開公報米国特許出願第２０１０／０１４４５４７号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように製造する。この微生物を、以下の発酵条件に従ってテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）の存在下で生育させる：  カナマイシン３０ｍｇ／Ｌを含むＬＢ培地で５００ｍＬ培養する。１．０のＯＤ６００で、細胞を最終ＯＤ６００が５．０になるまで濃縮し、１ｍＭ  ＩＰＴＧで誘導する。テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を最終濃度１ｍＭ及び４ｍＭになるように添加する。異なる時点で、培養サンプルを収集し、遠心分離し、濾過し、ＨＰＬＣ（５μＬ）に注入し、最大変換を決定する。最大変換後、ブロスをｐＨ２．０に酸性化し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、ヘキサンに再溶解する。（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）は、抽出作業によって得られ、前述のように精製される。
【０１２２】
ＬＢ、ＴＢ及びＦ１培地を含む本明細書に開示される本発明の実施形態での使用に使用され又は適合され得る、当技術分野で周知のＬＢ、Ｆ１又はＴＢ発酵培地などの様々な発酵培地。Ａ．テレウス（Ａ．  ｔｅｒｒｅｕｓ）及びＭ．ピロサス（Ｍ．ｐｉｌｏｓｕｓ）のような生育生物に合わせて調整されたさらなる培地もまた当該技術分野において周知である（例えばＭｉｙａｋｅ  ２００６；Ｈａｊｊａｊ  ２００１を参照）。
【０１２３】
ステップ２Ｂ：  テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の不斉合成。
オプション２Ｂ（ｉ）：  テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の不斉合成。
無水ＴＨＦ中のテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）の１４％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、アセトン／ドライアイスバスを用いて−７８℃に冷却する。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１．２当量）を冷却し、（ＶＩ）の溶液に滴下して加える。この溶液を、−７８℃のアルゴン下で２．２当量のＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６及び２．３当量のジアミン配位子に由来するＴＨＦ中の［（＋）−スパルタイン］２−Ｃｕ２−Ｏ２錯体に、カニューレを介して移す。得られた混合物を−７８℃又は所望の温度で１６時間撹拌する。４容量の５重量％硫酸水溶液で反応を停止させる。混合物を酢酸エチル（×３）で抽出し、合わせた抽出物を５％硫酸、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮する（Ｄｏｎｇ  ２００８）。
【０１２４】
オプション２Ｂ（ｉｉ）：  テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の不斉合成。
テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）に変換することができるＰ４５０変異酵素を、米国特許第７，７０４，７１５号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように構築及び精製する。典型的な反応は、５００μＬの１００ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．２）中に１〜４μＭの精製Ｐ４５０ヘムドメイン酵素及び１〜２ｍＭのテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を含有する。以下を合わせる：  ７１３μＬ  精製水、２００μＬ  ０．１００Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．２、１００ｍＭ  最終濃度、２μＬ  ＤＭＳＯ中のテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）（１ｍＭ最終濃度）。
【０１２５】
１〜１０ｍＭのＨ２Ｏ２を添加することにより反応を開始させ、最大転化率についてＨＰＬＣによりモニターする。７．５μＬの６Ｍ  ＨＣｌの添加により反応を停止する。（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）は、抽出作業(work-up)によって得られ、前述のように精製される。
【０１２６】
オプション２Ｂ（ｉｉｉ）：テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からの（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の不斉合成。
テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）に変換することができる微生物は、米国特許公開公報米国特許出願第２０１０／０１４４５４７号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように製造する。この微生物を、以下の発酵条件に従ってテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）の存在下で生育させる：  カナマイシン３０ｍｇ／Ｌを含むＬＢ培地で５００ｍＬ培養する。１．０のＯＤ６００で、細胞を最終ＯＤ６００が５．０になるまで濃縮し、１ｍＭ  ＩＰＴＧで誘導する。テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）を最終濃度１ｍＭ及び４ｍＭになるように添加する。異なる時点で、培養サンプルを収集し、遠心分離し、濾過し、ＨＰＬＣ（５μＬ）に注入し、最大変換を決定する。最大変換後、ブロスをｐＨ２．０に酸性化し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、ヘキサンに再溶解する。（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）は、抽出作業によって得られ、前述のように精製される。
【０１２７】
当技術分野で周知のＬＢ、Ｆ１又はＴＢ発酵培地などの様々な発酵培地を使用して、ＬＢ、ＴＢ及びＦ１培地を含む本明細書に開示された本発明の実施形態での使用に適合させることができる。Ａ．テレウス（Ａ．  ｔｅｒｒｅｕｓ）及びＭ．ピロサス（Ｍ．ｐｉｌｏｓｕｓ）のような生育生物に合わせて調整されたさらなる培地もまた当該技術分野において周知である（例えばＭｉｙａｋｅ  ２００６；Ｈａｊｊａｊ  ２００１を参照）。
【０１２８】
ステップ３Ａ：  （−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）からの（＋）−ＫＤＴ５００の不斉合成。
水中の（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の５０％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、密閉容器中で攪拌しながら８５℃に加温する。ＭｇＳＯ４（０．６当量）を連続的に撹拌しながら５分かけて溶液に加える。密閉容器に、ＫＯＨ溶液（３８．２５％（ｗ／ｖ）、１．０当量）を攪拌しながら滴下する。反応温度を次の３時間８５℃で、又は異性化が完了するまでＨＰＬＣで判断して８５℃に保持する。（＋）−ＫＤＴ−５００の遊離酸は、２容量のイソプロパノール、２容量の水及び１当量のＨ２ＳＯ４を反応混合物に加えることによって形成される。この混合物を完全に均質になるまで混合し、その時点でジクロロメタン２容量を用いて反応混合物を抽出する（３×）。有機抽出物を減圧濃縮し、ヘキサンに再溶解し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、減圧濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥する。最終生成物は遊離酸形態の（＋）ＫＤＴ−５００である。さらなる精製は、エピマー化、クロマトグラフィー、複合体形成、及び／又は結晶化を介して行われ得る。
【０１２９】
ステップ３Ｂ：  （＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）からの（−）−ＫＤＴ５００の不斉合成。
水中の（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の５０％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、密閉容器中で攪拌しながら８５℃に加温する。ＭｇＳＯ４（０．６当量）を連続的に撹拌しながら５分かけて溶液に加える。密閉容器に、ＫＯＨ溶液（３８．２５％（ｗ／ｖ）、１．０当量）を攪拌しながら滴下する。反応温度を次の３時間８５℃で、又は異性化が完了するまでＨＰＬＣで判断して８５℃に保持する。（−）−ＫＤＴ−５００の遊離酸は、２容量のイソプロパノール、２容量の水及び１当量のＨ２ＳＯ４を反応混合物に加えることによって形成される。この混合物を完全に均質になるまで混合し、その時点でジクロロメタン２容量を用いて反応混合物を抽出する（３×）。有機抽出物を減圧濃縮し、ヘキサンに再溶解し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し減圧濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥する。最終生成物は遊離酸形態の（＋）ＫＤＴ−５００である。さらなる精製は、エピマー化、クロマトグラフィー、複合体形成、及び／又は結晶化を介して行われ得る。
【０１３０】
実施例１２：  デオキシフムロンからの（＋）−ＫＤＴ５００又は（−）−ＫＤＴ５００の不斉合成：
【０１３１】
スキームＩＩＩ
【化９】
2017101019.tif 000014
【０１３２】
ステップ１Ａ：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）の不斉合成。
オプション１Ａ（ｉ）：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）の不斉合成。
無水ＴＨＦ中のデオキシフムロン（Ｉ）の１４％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、アセトン／ドライアイスバスを用いて−７８℃に冷却する。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１．２当量）を冷却し、（ＶＩ）の溶液に滴下して加える。この溶液を、−７８℃のアルゴン下で２．２当量のＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６及び２．３当量のジアミン配位子に由来するＴＨＦ中の［（−）−スパルタイン］２−Ｃｕ２−Ｏ２錯体に、カニューレを介して移す。得られた混合物を−７８℃又は所望の温度で１６時間撹拌する。４容量の５重量％硫酸水溶液で反応を停止させる。混合物を酢酸エチルで抽出し（×３）、合わせた抽出物を５％硫酸、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮する（Ｄｏｎｇ  ２００８）。
【０１３３】
オプション１Ａ（ｉｉ）：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）の不斉合成。
デオキシフムロン（Ｉ）を（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）に変換することができるＰ４５０変異酵素は、米国特許第７，７０４，７１５号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように構築及び精製される。典型的な反応は、１〜４μＭの精製Ｐ４５０ヘムドメイン酵素及び５００ｍＭの１００ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．２中の１〜２ｍＭのフムロン（Ｉ）を含有する。以下のものを組み合わせる：  精製水７１３μＬ、  ２００μＬ  ０．１００Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．２，  １００ｍＭ最終濃度、２μＬ  ＤＭＳＯ中のデオキシフムロン（Ｉ）（１ｍＭ最終濃度）。
【０１３４】
１〜１０ｍＭのＨ２Ｏ２を添加することにより反応を開始させ、最大転化率についてＨＰＬＣによりモニターする。７．５μＬの６Ｍ  ＨＣｌの添加により反応を停止する。（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）は、抽出作業(work-up)によって得られ、前述のように精製される。
【０１３５】
オプション１Ａ（ｉｉｉ）：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）の不斉合成。
デオキシフムロン（Ｉ）を（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）に変換することができる微生物は、米国特許公開公報米国特許出願第２０１０／０１４４５４７号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように製造する。この微生物を、以下の発酵条件に従ってデオキシフムロン（Ｉ）の存在下で生育させる：  カナマイシン３０ｍｇ／Ｌを含むＬＢ培地で５００ｍＬ培養する。１．０のＯＤ６００で、細胞を最終ＯＤ６００が５．０になるまで濃縮し、１ｍＭ  ＩＰＴＧで誘導する。デオキシフムロン（Ｉ）を最終濃度１ｍＭ及び４ｍＭになるように添加する。異なる時点で、培養サンプルを収集し、遠心分離し、濾過し、ＨＰＬＣ（５μＬ）に注入し、最大変換を決定する。最大変換後、ブロスをｐＨ２．０に酸性化し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、ヘキサンに再溶解する。（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）は、抽出作業によって得られ、前述のように精製される。
【０１３６】
当技術分野で周知のＬＢ、Ｆ１又はＴＢ発酵培地などの様々な発酵培地を使用して、ＬＢ、ＴＢ及びＦ１培地を含む本明細書に開示された本発明の実施形態での使用に適合させることができる。Ａ．テレウス（Ａ．  ｔｅｒｒｅｕｓ）及びＭ．ピロサス（Ｍ．ｐｉｌｏｓｕｓ）のような生育生物に合わせて調整されたさらなる培地もまた当該技術分野において周知である（例えばＭｉｙａｋｅ  ２００６；Ｈａｊｊａｊ  ２００１を参照）。
【０１３７】
ステップ１Ｂ：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の不斉合成。
オプション１Ｂ（ｉ）：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の不斉合成。
無水ＴＨＦ中のデオキシフムロン（Ｉ）の１４％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、アセトン／ドライアイスバスを用いて−７８℃に冷却する。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１．２当量）を冷却し、（ＶＩ）の溶液に滴下して加える。この溶液を、−７８℃のアルゴン下で２．２当量のＣｕ（ＣＨ３ＣＮ）４ＰＦ６及び２．３当量のジアミン配位子に由来するＴＨＦ中の［（＋）−スパルタイン］２−Ｃｕ２−Ｏ２錯体に、カニューレを介して移す。得られた混合物を−７８℃又は所望の温度で１６時間撹拌する。４容量の５重量％硫酸水溶液で反応を停止させる。混合物を酢酸エチルで抽出し（×３）、合わせた抽出物を５％硫酸、水及びブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮する（Ｄｏｎｇ  ２００８）。
【０１３８】
オプション１Ｂ（ｉｉ）：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の不斉合成。
デオキシフムロン（Ｉ）を（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）に変換することができるＰ４５０変異酵素は、米国特許第７，７０４，７１５号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように構築及び精製される。典型的な反応は、１〜４μＭの精製Ｐ４５０ヘムドメイン酵素及び５００ｍＭの１００ｍＭトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．２中の１〜２ｍＭのフムロン（Ｉ）を含有する。以下のものを組み合わせる：  精製水７１３μＬ、  ２００μＬ  ０．１００Ｍトリス−ＨＣｌ  ｐＨ８．２，  １００ｍＭ最終濃度、２μＬ  ＤＭＳＯ中のデオキシフムロン（Ｉ）（１ｍＭ最終濃度）。
【０１３９】
１〜１０ｍＭのＨ２Ｏ２を添加することにより反応を開始させ、最大転化率についてＨＰＬＣによりモニターする。７．５μＬの６Ｍ  ＨＣｌの添加により反応を停止する。（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）は、抽出作業(work-up)によって得られ、前述のように精製される。
【０１４０】
オプション１Ｂ（ｉｉｉ）：  デオキシフムロン（Ｉ）からの（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の不斉合成。
デオキシフムロン（Ｉ）を（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）に変換することができる微生物は、米国特許公開公報米国特許出願第２０１０／０１４４５４７号及びそこに含まれる参考文献に記載されているように製造する。この微生物を、以下の発酵条件に従って（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の存在下で生育させる：  カナマイシン３０ｍｇ／Ｌを含むＬＢ培地で５００ｍＬ培養する。１．０のＯＤ６００で、細胞を最終ＯＤ６００が５．０になるまで濃縮し、１ｍＭ  ＩＰＴＧで誘導する。デオキシフムロン（Ｉ）を最終濃度１ｍＭ及び４ｍＭになるように添加する。異なる時点で、培養サンプルを収集し、遠心分離し、濾過し、ＨＰＬＣ（５μＬ）に注入し、最大変換を決定する。最大変換後、ブロスをｐＨ２．０に酸性化し、酢酸エチルで抽出し、乾燥し、ヘキサンに再溶解する。（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）は、抽出作業によって得られ、前述のように精製される。
【０１４１】
当技術分野で周知のＬＢ、Ｆ１又はＴＢ発酵培地などの様々な発酵培地を使用して、ＬＢ、ＴＢ及びＦ１培地を含む本明細書に開示された本発明の実施形態での使用に適合させることができる。Ａ．テレウス（Ａ．  ｔｅｒｒｅｕｓ）及びＭ．ピロサス（Ｍ．ｐｉｌｏｓｕｓ）のような生育生物に合わせて調整されたさらなる培地もまた当該技術分野において周知である（例えばＭｉｙａｋｅ  ２００６；Ｈａｊｊａｊ  ２００１を参照）
【０１４２】
ステップ２Ａ：（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）（ＲＴＰ：Ｋ００８−４９）からの（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）の不斉合成。
９８．９ｍｇの（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）を１７０μＬの水で希釈し、キャップ付きの４ｍＬバイアル中で撹拌しながら８５℃に加温した。１９．８ｍｇ（０．６当量）のＭｇＳＯ４を添加し、５分間撹拌を続けた。この溶液に３８．２５％（ｗ／ｖ）ＫＯＨ溶液３１μＬ（１．０３当量）を加え、次の３時間８５℃で反応を進行させた。その時点で、反応は、ＨＰＬＣにより判断されるように完了した。得られた生成物を使用して、遊離酸又は（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）のＭｇ塩を生成した。
【０１４３】
イソプロパノール０．５ｍＬ、水０．５ｍＬ及びＨ２ＳＯ４  １当量を反応混合物に添加することにより、（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）の遊離酸を形成した。この混合物を完全に均質になるまで混合し、その時点で０．５ｍＬのジクロロメタンを用いて反応混合物を３回抽出した。有機抽出物を減圧下で濃縮し、ヘキサンに再溶解し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥させて遊離酸形態の（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）を得た。
【０１４４】
反応混合物を熱から除去し、０．５ｍＬの酢酸エチルを撹拌しながら完全に溶解するまで添加することにより、（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）のＭｇ塩を形成した。０．５ｍＬの水を加えて水性層と有機層を分離し、酢酸エチルを抽出した。酢酸エチル抽出をさらに２回繰り返し、抽出液を減圧濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥させた。最終生成物は、少量の塩不純物とともに、（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）のＭｇ塩であった。エピマー化、結晶化及び／又は錯化を介してさらに精製して、すべての（−）−トランスイソフムロンを除去することができる。
【０１４５】
ステップ２Ｂ：  （＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）からの（−）−シスイソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）の不斉合成。
１４３１ｍｇの（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）を１ｍＬの水で希釈し、キャップ付きの４ｍＬバイアル中で撹拌しながら８０℃に加温した。２７３ｍｇ（０．６当量）のＭｇＳＯ４を添加し、５分間撹拌を続けた。この溶液に３８．２５％（ｗ／ｖ）ＫＯＨ溶液４３０μＬ（１．０当量）を加え、次の６時間８０℃で反応を進行させた。その時点で、反応は、ＨＰＬＣにより判断されるように完了した。得られた生成物は、（−）−シスイソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）の遊離酸又はＭｇ塩のいずれかを生成するために使用することができる。この場合、反応混合物を溶液中に保ち、下記のステップ３Ｂを介して（−）ＫＤＴ５００に直接取った。
【０１４６】
イソプロパノール２容量、水２容量及びＨ２ＳＯ４  １当量を反応混合物に加えることにより、（−）−シスイソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）の遊離酸を形成する。この混合物を完全に均質になるまで混合し、その時点で２容量のジクロロメタンを用いて反応混合物を抽出する（３×）。有機抽出物を減圧下で濃縮し、ヘキサンに再溶解し、Ｈ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥して遊離酸形態の（−）−シスイソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）を得る。
【０１４７】
反応混合物を熱から除去し、２倍量の酢酸エチルを完全に溶解するまで撹拌しながら添加することにより、（−）−シスイソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）のＭｇ塩を形成する。２容量の水を加えて水性層と有機層を分離し、酢酸エチルを抽出する。この酢酸エチル抽出をさらに２回繰り返し、抽出物を減圧下で濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥させると、（−）−シス−イソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）のＭｇ塩が少量の塩の不純物と共に得られる。さらなる精製は、すべての（＋）−トランスイソフムロンを除去するため、エピマー化、結晶化、クロマトグラフィー、及び／又は複合体形成を介して行うことができる。
【０１４８】
ステップ３Ａ：（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）からの（＋）−ＫＤＴ５００の合成（ＲＴＰ：Ｋ００８−５０）
（＋）−シスイソフムロン（（＋）−ＶＩＩＩ）の乾燥Ｍｇ塩９６．３ｍｇを１ｍＬのメタノールに溶解した。３．１ｍｇ（０．３当量）のＭｇＯを加え、反応混合物を５分間撹拌した。３０ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃを溶液に加え、撹拌を再開した。この溶液に水素ガスをバブリングさせて水素雰囲気を導入した。４５分後、ＨＰＬＣにより反応が完了したと判断し、撹拌を停止し、バイアルを開けることによって水素雰囲気を除去した。１当量の硫酸を反応混合物（ｐＨ〜１）に添加し、反応物を０．２ｍｍシリンジフィルターで濾過した。反応容器及びフィルターを酢酸エチルで２回連続して洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、ヘキサンに再溶解し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、綿ピペットで濾過し、減圧濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥させた。５８．１ｍｇの（＋）−ＫＤＴ−５００を製造した。クロマトグラフィー及び結晶化によりさらに精製を行った。
【０１４９】
ステップ３Ｂ：（−）−シス−イソフムロン（（−）−ＶＩＩＩ）からの（−）−ＫＤＴ５００の合成。
ステップ２Ｂの反応混合物（〜１．４ｇの（−）−シス−イソフムロン）を１０ｍＬのメタノールに溶解し、２５６ｍｇのＭｇＯを加え、反応混合物を５分間攪拌した。この溶液を濾過し、２つ等しいストック（容量）に分割した。３４ｍｇのＭｇＯを「反応１」に加え、続いて２００ｍｇの１０％Ｐｄ／Ｃに加え、撹拌を再開した。この溶液に水素ガスをバブリングさせて水素雰囲気を導入した。１時間後、ＨＰＬＣにより反応が完了したと判断し、撹拌を停止し、バイアルを開けて水素雰囲気を除去した。１当量の硫酸を反応混合物（ｐＨ〜１）に添加し、反応物を０．２ｍｍシリンジフィルターで濾過した。反応容器及びフィルターを酢酸エチルで２回連続して洗浄した。濾液を減圧濃縮し、ヘキサンに再溶解し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、綿ピペットで濾過し、減圧下で濃縮し、０．０７０ｍｂａｒで一晩乾燥させた。両方の反応の組合せから９３３．５ｍｇの（−）−ＫＤＴ−５００を製造した。クロマトグラフィー及び結晶化によりさらに精製を行った。
【０１５０】
実施例１３：（−）−フムロン及びデオキシフムロンからの（＋）−フムロン及び（−）−フムロンの調製：
【０１５１】
スキームＩＶ
【化１０】
2017101019.tif 000015
【０１５２】
ステップ１：  ラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）の合成。
オプション１Ａ：（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）からのラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）の合成。
純粋な（−）−フムロンをピネン又は他の適切な溶媒（不活性高沸点アルカン、例えばリモネン、トリメチルヘキサン）に溶解して３〜１０％溶液を形成した。この溶液を圧力管に入れ、アルゴン又は窒素でパージしてすべての酸素を除去し、密封し、１２５〜１４５℃で１〜２０時間加熱した。次いで、反応物を室温に冷却し、溶媒を真空下で除去し、ラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）を必要に応じて他のところで説明したように精製した。
【０１５３】
オプション１Ｂ：デオキシフムロン（Ｉ）からのラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）の合成。
デ  オキシフムロン（Ｉ）をメタノールに完全に溶解し、この溶液に１当量の酢酸鉛を添加し、続いて触媒量（０．１当量）の１０％Ｐｄ／Ｃを加える。溶液を撹拌し、空気でバブリングする。約４時間後、鉛塩を濾過により分離し、鉛塩としてのラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）の完全な回収を確実にするために、追加の酢酸鉛を濾液に加える。全ての鉛塩（カナリアンイエロー）を回収し、メタノールに懸濁させた後、溶液に硫酸を添加する。硫酸鉛は不溶性沈殿物を形成し、これは遠心分離によって除去される。均質なメタノール溶液をヘキサンと水の間で抽出する（各々約２容積）。ラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）をヘキサン中に抽出し、減圧濃縮して遊離酸形態のラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）を得る。
【０１５４】
ステップ２Ａ：ラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）からの（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）の精製。
メタノール中のラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）の溶液（１０％、ｗ／ｖ）及びメタノール中の１Ｒ，２Ｒ−４−シクロヘキセン−１，２−ジアミンの溶液（１０％、ｗ／ｖ）をそれぞれ調製した。両方の溶液を等モル量（容積で約３：１）で混合し、メタノールを蒸発させ、残渣を最小量の２−プロパノールに再溶解した（他の溶媒、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル、又はベンゼンを使用可能である）。（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）塩が溶液中に残っている間に、（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）のアミン塩からなる結晶が形成された。結晶を濾過し、乾燥し、ヘキサン及び硫酸水溶液（ａｑ．）と混合して（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）の遊離酸を遊離させる。ヘキサン層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて、キラルＨＰＬＣによって示されるように（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）を得た。
【０１５５】
ステップ２Ｂ：ラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）からの（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の精製
メタノール中のラセミ（±）−フムロン（ＩＩＩ）（１０％、ｗ／ｖ）溶液及びメタノール中の１Ｓ，２Ｓ−４−シクロヘキセン−１，２−ジアミン（１０％、ｗ／ｖ）の溶液をそれぞれ調製した。両方の溶液を等モル量（容積で約３：１）で混合し、メタノールを蒸発させ、残渣を最小量の２−プロパノールに再溶解した（他の溶媒、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル、又はベンゼンを使用可能である）。（−）−フムロン（（−）−ＩＶ）塩が溶液中に残っている間に、（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）のアミン塩からなる結晶が形成された。結晶を濾過し、乾燥し、ヘキサン及び硫酸水溶液と混合して（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）の遊離酸を遊離させる。ヘキサン層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて、キラルＨＰＬＣによって示されるように（＋）−フムロン（（＋）−ＩＶ）を得た。
【０１５６】
実施例１４：  テトラヒドロデオキシフムロンからの（＋）−テトラヒドロフムロン及び（−）−テトラヒドロフムロンの調製：
【０１５７】
スキームＶ
【化１１】
2017101019.tif 000016
【０１５８】
ステップ１：テトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）からのラセミ（±）−テトラヒドロフムロン（ＩＸ）の合成。
酢酸中のテトラヒドロデオキシフムロン（ＶＩ）の１０％（ｗ／ｖ）溶液を調製し、触媒量の濃硫酸を溶液に添加する。溶液を撹拌し、１当量の３０％（ｗ／ｗ）過酸化水素溶液を滴下する。２時間後、ＨＰＬＣを用いて反応が完了したと判断し、水及びジクロロメタンを添加する。ラセミ（±）−テトラヒドロフムロン（ＩＸ）をジクロロメタン中に抽出し、減圧下で濃縮して遊離酸形態のラセミ（±）−テトラヒドロフムロン（ＩＸ）を得る。
【０１５９】
ステップ２Ａ：  ラセミ（±）−テトラヒドロフムロン（ＩＸ）からの（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の精製。
メタノール中のラセミ（±）−テトラヒドロフムロン（ＩＸ）（１０％、ｗ／ｖ）溶液及びメタノール中の１Ｓ，２Ｓ−４−シクロヘキセン−１，２−ジアミン（１０％、ｗ／ｖ）溶液をそれぞれ調製した。両方の溶液を等モル量（容積で約３：１）で混合し、メタノールを蒸発させ、残渣を最小量の２−プロパノールに再溶解した（他の溶媒、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル、又はベンゼンを使用可能である）。（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）塩が溶液中に残っている間に、（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）のアミン塩からなる結晶が形成された。結晶を濾過し、乾燥し、ヘキサン及び硫酸水溶液と混合して（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）の遊離酸を遊離させる。ヘキサン層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させて、キラルＨＰＬＣによって示されるように（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）を得た。
【０１６０】
ステップ２Ｂ：  ラセミ（±）−テトラヒドロフムロンからの（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の精製
メタノール中のラセミ（±）−テトラヒドロフムロン（ＩＸ）の溶液（１０％、ｗ／ｖ）及びメタノール中の１Ｓ，２Ｓ−４−シクロヘキセン−１，２−ジアミン溶液（１０％、ｗ／ｖ）をそれぞれ調製した。両方の溶液を等モル量（容積で約３：１）で混合し、メタノールを蒸発させ、残渣を最小量の２−プロパノールに再溶解する（他の溶媒、例えばｔ−ブチルメチルエーテル、アセトニトリル、酢酸エチル、又はベンゼンを使用可能である）。結晶は（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）のアミン塩からなり、（−）−テトラヒドロフムロン（（−）−ＸＩ）塩は溶液中に残る。結晶を濾過し、乾燥させ、ヘキサン及び硫酸水溶液(aq.)と混合して、（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）の遊離酸を遊離させる。ヘキサン層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、キラルＨＰＬＣによって示されるように、（＋）−テトラヒドロフムロン（（＋）−ＸＩ）に蒸発させる。
【０１６１】
実施例１５：追加のＫＤＴ５００塩の調製：
カルシウム（ＩＩ）塩（「ＫＤＴ５０５」）の調製：
水（１０００μＬ）及びＫＤＴ５００のカリウム塩（８８．２ｍｇ）を４ｍＬのバイアルに加え、続いて水１２０μＬ中の塩化カルシウム（１．１０当量）２６．６ｍｇを加えた。混合物を１時間撹拌し、沈殿物を濾別し、１ｍＬの水で４回洗浄し、高真空下で乾燥して６．９ｍｇの生成物を得た。生成物の融点は１２５．１℃であり、含水率は１．２８ＫＦであった。
【０１６２】
マグネシウム（ＩＩ）塩（「ＫＤＴ５０６」）の調製：
水（１２００μＬ）及びＫＤＴ５００のカリウム塩（５０．１ｍｇ）を４ｍＬのバイアルに加え、続いて２００μＬの水中の７．８ｍｇの硫酸マグネシウム（０．５３当量）を添加した。混合物を１時間撹拌し、沈殿物を濾別し、１ｍＬの水で２回洗浄し、高真空下で乾燥させて４７ｍｇの生成物を得た。生成物の融点は１３０．０℃であり、含水率は１．２７ＫＦであった。
【０１６３】
亜鉛（ＩＩ）塩（「ＫＤＴ５０７」）の調製：
水（１３００μＬ）及びＫＤＴ５００のカリウム塩（８４．７ｍｇ）を４ｍＬのバイアルに加え、続いて３００μＬの水中の３１．６ｍｇの硫酸亜鉛七水和物（０．５３当量）を添加した。混合物を１時間撹拌し、沈殿物を濾別し、１ｍＬの水で２回洗浄し、高真空下で乾燥させて、７１．６ｍｇの生成物を得た。生成物の融点は１３４．７℃であり、含水率は２．４２ＫＦであった。
【０１６４】
鉄（ＩＩＩ）塩（「ＫＤＴ５０８」）の調製：
水（１０００μＬ）及びＫＤＴ５００のカリウム塩（６１．９ｍｇ）を４ｍＬのバイアルに加え、続いて３００μＬの水中の４３．４ｍｇの塩化鉄（ＩＩＩ）六水和物（０．５３当量）を加えた。混合物を１時間撹拌し、沈殿物を濾別し、１ｍＬの水で２回洗浄し、高真空下で乾燥させて、７１．６ｍｇの生成物を得た。生成物の融点は７２．９℃であり、含水率は１．０７ＫＦであった。
【０１６５】
ナトリウム（Ｉ）塩（「ＫＤＴ５０９」）の調製：
水（１０００μＬ）及びＫＤＴ５００遊離塩（１０９．５ｍｇ）を４ｍＬバイアルに添加し、続いて１Ｍ  ＮａＯＨ溶液（３００μＬ、１．００当量）（ａｇ．）を加えた。混合物を蒸発させ、高真空下で乾燥させた。生成物は１１３．９℃の融点及び１．１５ＫＦの含水率を有していた。
【０１６６】
銅（ＩＩ）塩（「ＫＤＴ５１０」）の調製：
水（１０００μＬ）及びＫＤＴ５００遊離塩（１０９．５ｍｇ）を４ｍＬのバイアルに添加し、続いて１Ｍ  ＮａＯＨ溶液（３００μＬ、１．００当量）（ａｇ．）を加えた。混合物を蒸発させ、高真空下で乾燥させた。生成物の融点は１０４．９℃であり、含水量は１．１８ＫＦであった。
【０１６７】
グアニジニウム塩（「ＫＤＴ５１１」）の調製：
水（１０００μＬ）及びＫＤＴ５００遊離塩（１０９．５ｍｇ）を４ｍＬバイアルに添加し、続いて１Ｍ  ＮａＯＨ溶液（３００μＬ、１．００当量）（ａｇ．）を加えた。混合物を蒸発させ、高真空下で乾燥させた。生成物は１４０．８℃の融点及び０．９４ＫＦの含水量を有していた。
【０１６８】
上述したように、上記は単に本発明の様々な実施形態を説明することを意図したものである。上記の特定の変更は、本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。当業者には、本発明の範囲から逸脱することなく様々な均等物、変更及び修正を行うことができ、そのような均等な実施形態が本明細書に含まれることは明らかであろう。本明細書に引用された全ての参考文献は、本明細書に完全に記載されているかのように参照により組み込まれる。
【０１６９】
（参考文献）
１．  Ｂａｂｉｓｈ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｆｏｏｄ  １３：５３５  （２０１０）
２．  Ｂｅｒｇｅ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ６６：１  （１９７７）
３．Ｂｏｄｅｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４６：３  （１９９７）
４．  Ｄａｈｌｂｅｒｇ  Ｊ  Ｓｅｐ  Ｓｃｉ  ３３：２８２８  （２０１０）
５．  Ｄｅ  Ｋｅｕｋｅｌｅｉｒｅ  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２６：３８５  （１９７０）
６．  Ｄｅ  Ｋｅｕｋｅｌｅｉｒｅ  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２７：４９３９  （１９７１）
７．  Ｄｏｎｇ  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １３０：２７３８  （２００８）
８．  Ｆａｓｓｈａｕｅｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ２９０：１０８４  （２００２）
９．  Ｇｏｔｏｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ  ３５４：５９１  （２００７）
１０．  Ｈａｊｊａｊ  Ａｐｐｌ  Ｅｎｖｉｒｏｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ６７：２５９６  （２００１）
１１．  Ｈａｒａ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｓｃｉ  １００：３５９４  （２０１１）
１２．  Ｈｉｒａｓａｗａ  Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ  １１：９０  （２００５）
１３．  Ｋｏｎｄａ  Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ６２：１６８３  （２０１０）
１４．  Ｌｉ  Ｍｏｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  １６：１０４０  （２００２）
１５．  Ｍａｒｔｉｎ  Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １３７：Ｓ７５  （１９９８）
１６．  Ｍｉｙａｋｅ  Ｂｉｏｓｃｉ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ７０：１１５４  （２００６）
１７．  Ｏｈ  Ｃｅｌｌ  １４２：６８７  （２０１０）
１８．  Ｐａｓｃｕａｌ  Ｎａｔｕｒｅ  （Ｌｏｎｄｏｎ）  ４３７：７５９  （２００５）
１９．  Ｒａｚ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ２１：３  （２００５）
２０．  Ｓｔｕｍｖｏｌｌ  Ａｎｎ  Ｍｅｄ  ３４：２１７  （２００２）
２１．  Ｔａｌｕｋｄａｒ  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ  ３２：５４３  （２０１１）
２２．  Ｔｏｎｔｏｎｏｚ  Ｃｅｌｌ  ７９：１１４７  （１９９４）
２３．  Ｔｏｎｔｏｎｏｚ  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ  ８：１２２４  （１９９４）
２４．  Ｔｒｉｐｐ  Ａｃｔａ  Ｈｏｒｔ  （ＩＳＨＳ）  ８４８：２２１  （２００９）
２５．  Ｗａｎｇ  Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  １４８：１２５４  （２００８）
【０１７０】
表１：  提供された構造の結晶学的データ
【表１】
2017101019.tif 000017
【０１７１】
表２：結晶（＋）−ＫＤＴ５０１の原子座標（×１０４）及び等価等方性変位パラメータ（Å（オングストローム）２×１０３）（直交化されたＵｉｊテンソルのトレースの１／３として定義されるＵ（ｅｑ））
【表２】
2017101019.tif 000018
2017101019.tif 000019
2017101019.tif 000020
2017101019.tif 000021
2017101019.tif 000022
2017101019.tif 000023
【０１７２】
表３：  結晶（＋）−ＫＤＴ５０１のための結合長さ[Å]及び角度[]（同等の原子を生成するために使用される対称変換：  ＃１  −ｘ＋３／２，ｙ＋１／２，−ｚ＋２    ＃２  −ｘ＋３／２，ｙ−１／２，−ｚ＋２）
【表３】
2017101019.tif 000024
2017101019.tif 000025
2017101019.tif 000026
2017101019.tif 000027
2017101019.tif 000028
2017101019.tif 000029
2017101019.tif 000030
2017101019.tif 000031
2017101019.tif 000032
2017101019.tif 000033
【０１７３】
表４：結晶（＋）−ＫＤＴ５０１の異方性変位パラメータ（Å２×１０３）
【表４】
2017101019.tif 000034
2017101019.tif 000035
2017101019.tif 000036
2017101019.tif 000037
2017101019.tif 000038
2017101019.tif 000039
【符号の説明】
【０１７４】
＊    ビヒクル処置動物と比較して示された有意性
【図１】
2017101019.tif 000043
【図２】
2017101019.tif 000044
【図３】
2017101019.tif 000045
【図４】
2017101019.tif 000046
【図５】
2017101019.tif 000047
【図６】
2017101019.tif 000048
【図７】
2017101019.tif 000049
【図８】
2017101019.tif 000050
【図９】
2017101019.tif 000051
【図１０】
2017101019.tif 000052
【図１１】
2017101019.tif 000053
【図１２】
2017101019.tif 000054
【図１３】
2017101019.tif 000055
【図１４】
2017101019.tif 000056
【図１５】
2017101019.tif 000057
【図１６】
2017101019.tif 000058
【図１７】
2017101019.tif 000059
【図１８】
2017101019.tif 000060
【図１９】
2017101019.tif 000061
【図２０】
2017101019.tif 000062
【図２１】
2017101019.tif 000063
【図２２】
2017101019.tif 000064
【図２３】
2017101019.tif 000065
【図２４】
2017101019.tif 000066
【手続補正書】
【提出日】平成28年12月28日(2016.12.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オンの塩であって、当該塩は、アルミニウム、カルシウム、銅、グアニジニウム、鉄、リチウム、ナトリウム、亜鉛、シンコニジン、及びジエタノールアミン塩、及びそれらの結晶からなる群から選択される、塩。
【請求項２】
鏡像異性的純度９０％以上を有する、請求項１に記載の塩又は結晶の組成物。
【請求項３】
請求項２に記載の組成物及び医薬的に許容可能なキャリアを含む医薬製剤。
【請求項４】
ＰＰＡＲγ変調に応答する状態、ＧＰＲ１２０変調に応答する状態、代謝障害、炎症に関連する状態、及び炎症から選択される状態の治療のための薬剤の製造のための、（＋）−（４Ｓ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−２−（３−メチルブタノイル）−５−（３−メチルブチル）−４−（４−メチルペンタノイル）シクロペンタ−２−エン−１−オン又はその塩もしくは結晶の使用であって、その鏡像異性的純度は９０％以上である、使用。

【外国語明細書】
2017101019000001.pdf