(57)【要約】      （修正有）【課題】末梢血中の好中球生細胞率を増加させることのできる血液循環用カラムを提供する。【解決手段】好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムであって、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に用いられる、血液循環用カラム。さらに、リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有する、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有し、リンパ球の除去率が７０％以下であり、血小板の通過率が７５％以上である血液循環用カラム。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムであって、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に用いられる、血液循環用カラム。
【請求項２】
リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有する、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有する、請求項１に記載の血液循環用カラム。
【請求項３】
リンパ球の除去率が７０％以下である、請求項１又は２に記載の血液循環用カラム。
【請求項４】
血小板の通過率が７５％以上である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。
【請求項５】
繊維状担体又は粒状担体が充填され、該担体の表面に親水性高分子を有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。
【請求項６】
親水性高分子が塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する、請求項５に記載の血液循環用カラム。
【請求項７】
塩基性官能基がジメチルアミノエチルメタクリレート由来であり、且つ非イオン性親水基が２−ヒドロキシエチルメタクリレート由来である、請求項６に記載の血液循環用カラム。
【請求項８】
繊維状担体が平均繊維径１．４μｍ以上２．６μｍ以下である担体を含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。
【請求項９】
繊維状担体が平均繊維径８μｍ以上１４μｍ以下である担体をさらに含む、請求項８に記載の血液循環用カラム。
【請求項１０】
繊維状担体が不織布である、請求項５〜９のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。
【請求項１１】
繊維状担体の臨界湿潤表面張力が生理的溶液の表面張力以上である、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の血液循環用カラム。
【請求項１２】
体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機からなり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるあるときに好中球除去に用いられる、遠心分離機。
【請求項１３】
潰瘍性大腸炎、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者であって創分類クラス２以上の患者若しくは手術侵襲の高い患者、又は感染症を有している患者のための、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の血液循環用カラム又は請求項１２に記載の遠心分離機。
【請求項１４】
末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを血球測定手段で確認後に使用する、請求項１〜１１若しくは１３のいずれか１項に記載の血液循環用カラム又は請求項１２若しくは１３に記載の遠心分離機。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液循環用カラム及び遠心分離機に関する。
【背景技術】
【０００２】
好中球は、感染防御のファーストラインで中心的な役割を果たし、強力な細胞内殺菌作用を有している。好中球の細胞内殺菌作用として、侵入異物に走化していく走化能、オプソニン化された異物を付着させ、血管内皮細胞に膠着する付着能、付着した異物や細菌を細胞内に取り込む貧食能、貧食した異物を破壊し消化する殺菌能があり、貪食能及び殺菌能が代表的機能である。
好中球は生体防御や創傷治癒において重要な役割を担っているが、その一方、リンパ球やマクロファージ等他の免疫細胞に比べると自己と異物の識別能に劣るため、過剰な活性化や重要臓器への異常集積によって自己組織を障害し、臓器障害を引き起こす危険性もある。中でも、腸管や実質臓器の手術操作は臓器の虚血再灌流を招き、その際、好中球は、臓器障害の原因となりうる。
【０００３】
成人の末梢血内には概ね１０の１０乗個のオーダーの好中球が存在するとされ、体重５０ｋｇのヒトの場合、末梢血内に８０億個から３００億個程度の好中球が存在する。血液内での好中球の寿命は１日以内、概ね１０時間程とされ、組織内では数日である。また、血管壁や組織、肝臓等にも末梢血内に匹敵する量の好中球が辺縁プールとして存在する。さらに骨髄には末梢血内の１０から３０倍もの量の好中球の貯留プールが存在し、生体内すべてでは１０の１１乗のオーダーで、数千億個の好中球が存在する。
したがって、好中球の大きな貯留プールがある為、好中球を末梢血から除去しても貯留プール内の好中球が動員され、末梢血内の好中球数は速やかに増加する。
【０００４】
一方、血小板は、骨髄で産生されてから肝臓、脾臓等の臓器で処理されるまで８〜１０日かかり、毎日１／８〜１／１０が入れ替わっている。末梢の血小板のうち約１／３は脾臓にプールされている。血液中には、通常、血小板が１０万から４０万個／μＬ程度含まれており、血小板数が１０万／μＬ未満になると出血時間の延長等が起こる。好中球と比較すると貯留プールが小さく、末梢血から血小板を除去すると血小板数が回復するのに時間がかかる。
【０００５】
消化器外科手術では腹部の切開創や腸管の吻合部が存在し、これらの部分で適切な創傷治癒が生じる必要がある。創傷治癒は血液凝固期、炎症期、増殖期、組織再構築期といった一連の過程からなるが、好中球は特に炎症期に創部に滲出する。
非感染性の高度外科侵襲では、末梢血中の好中球の機能、すなわち遊走能や貧食能、活性酸素産生能、殺菌能の抑制が見られ、該抑制が侵襲後の易感染性に関与すると報告されている。
【０００６】
例えば、特許文献１には、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）患者は、高率にｓｕｒｇｉｃａｌ  ｓｉｔｅ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（ＳＳＩ）をはじめとする術後感染性合併症を来すことが開示されている。
ＵＣ患者は周術期のｃｙｔｏｋｉｎｅ産生が亢進しており、また、ｃｙｔｏｋｉｎｅは主に好中球で産生されており、好中球エラスターゼが高値であると術後ＳＳＩ発症リスクが高いことが知られている（非特許文献１）。
ＵＣの活動期における内科的治療として有効性が認められている白血球除去療法（Ｌｅｕｋｏｃｙｔａｐｈｅｒｅｓｉｓ；ＬＣＡＰ）を術直後に導入し、ＳＳＩ発症を抑制できる可能性が報告されている（非特許文献２及び３）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特許第５０４８２２５号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｄｉｇ  Ｓｕｒｇ．２００６；２３（３）：１７９−８５
【非特許文献２】日本消化器外科学会雑誌  ２００７；４０（７）：１００７
【非特許文献３】Ｓｕｒｇ  Ｔｏｄａｙ  ２００８；３８：６０９−６１７
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明者らは、術直後の感染リスクの高い患者の末梢血顆粒球をフローサイトメーターで解析して、初期アポトーシス又は後期アポトーシスを起こした好中球が多数存在すること、並びに血液循環用カラムで多数存在する初期アポトーシス又は後期アポトーシスを起こした好中球を取り除くとｖｉａｂｌｅ好中球が増えることを見出した。特定の繊維状担体が充填された血液循環用カラムで処理すると、止血能を維持する範囲に体内循環血液中の血小板数を制御しながら、体内循環血液中の好中球生細胞率（全好中球に占めるｖｉａｂｌｅ好中球の割合）を高めることが可能である。
本発明が解決しようとする課題は、末梢血中の好中球生細胞率を増加させることのできる血液循環用カラムを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は以下のとおりである。
（１）好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填した血液循環用カラムであって、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に用いられる、血液循環用カラム。
（２）リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有する、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有する、（１）に記載の血液循環用カラム。
（３）リンパ球の除去率が７０％以下である、（１）又は（２）に記載の血液循環用カラム。
（４）血小板の通過率が７５％以上である、（１）〜（３）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（５）血液循環用カラムに繊維状担体又は粒状担体が充填され、該担体の表面に親水性高分子を有する、（１）〜（４）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（６）親水性高分子が塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する、（５）に記載の血液循環用カラム。
（７）塩基性官能基がジメチルアミノエチルメタクリレート由来であり、且つ非イオン性親水基が２−ヒドロキシエチルメタクリレート由来である、（６）に記載の血液循環用カラム。
（８）繊維状担体が平均繊維径１．４μｍ以上２．６μｍ以下である担体を含む繊維状担体が充填される、（１）〜（７）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（９）繊維状担体が平均繊維径８μｍ以上１４μｍ以下である担体をさらに含む、（８）に記載の血液循環用カラム。
（１０）繊維状担体が不織布である、（５）〜（９）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（１１）繊維状担体の臨界湿潤表面張力が生理的溶液の表面張力以上である、（５）〜（１０）のいずれかに記載の血液循環用カラム。
（１２）体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機からなり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるあるときに好中球除去に用いられる、遠心分離機。
（１３）潰瘍性大腸炎、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者であって創分類クラス２以上の患者若しくは手術侵襲の高い患者、又は感染症を有している患者のための、（１）〜（１１）のいずれかに記載の血液循環用カラム又は（１２）に記載の遠心分離機。
（１４）末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを血球測定手段で確認後に使用する、（１）〜（１１）若しくは（１３）のいずれかに記載の血液循環用カラム又は（１２）若しくは（１３）に記載の遠心分離機。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、末梢血中の好中球生細胞率を増加させることのできる血液循環用カラムを提供することが可能である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を実施する形態（以下、「実施形態」という）について詳細に説明する。なお、以下に説明する実施形態は、本発明を限定するものではない。
【００１３】
本実施形態の血液循環用カラムは、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体を充填したカラムであり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球を除去するために使用する。
本実施形態においては、顆粒球の除去率が高くなくても、本実施形態の血液循環用カラムを１回以上使用することにより６０％未満の好中球生細胞率を６０％以上に増加することが可能である。
【００１４】
好中球は、急性細菌感染症や特定の真菌感染症に対して体を守るという大きな役割を果たす。一般に、好中球は、血液中にある全白血球の約４５〜７５％を占めている。血液１マイクロリットルあたりの好中球数が１，０００個未満になると、感染のリスクが高くなり、５００個未満になると、感染のリスクは大幅に上昇する。好中球による重要な防御がなくなると、感染症に対する制御がきかなくなり、感染症で死亡するリスクが高まる。成人の健康基準範囲とされる白血球数は、血液１マイクロリットルあたり４，０００〜９，０００個である。白血球数の健康基準範囲の下限値である４，０００個の内の４５％が好中球であるとすると１，８００個が健康維持に必要な好中球数であると算出される。この内１，０００個が必ず機能しないと感染のリスクが高くなることから、（１，８００個×６０％＝１，０８０個と算出されるので）末梢血中の好中球生細胞率を６０％以上にする必要がある。
【００１５】
本実施形態においては、本実施形態の血液循環用カラムと同様の、体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機からなり、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるあるときに好中球除去に用いられる、遠心分離機も提供する。
体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機では、以下に記載する遠心分離法が採用されている。該遠心分離法では、供血者から全血を採取して遠心分離機内に収集し、高密度、中間密度及び低密度の各成分に分離するいわゆる「ドロー」ステップに始まり、所要血液成分を分取した後、使い捨てシステム内に残った血液成分を供血者に戻すいわゆる「リターン」ステップで終わる。現在では間歇血流方式が主流であり、アフェレーシス中に供血者と装置の間で行われる流体のやりとりは、単一の、例えば採血針のような経路を通して行われる。
これまで遠心分離法は種々の手法により改良されている。改良手法として、遠心分離機外に分取した低密度成分を遠心分離機に短期間再循環させるいわゆる「ドウェル」ステップや、低密度成分をサージ流量、即ち時間と共に増大する流量で遠心分離機内に再循環させ、中間密度成分から血小板等を優先的に流出させるいわゆる「サージ」ステップ等が挙げられる。現在一般には、遠心分離法は、上述のステップを組み合わせて構成され、平均して１５分程度を擁する１サイクルを数サイクル繰り返し、所定の血液成分を採取するように行われている。
また、「ドロー」ステップ自体にも改良が加えられている。「ドロー」ステップの改良手法として、「ドロー」ステップ中に遠心分離機内を通過する血漿流速や遠心回転数を供血者に応じて選択し、１サイクル当たりの全血処理量を個々の供血者に最適となるよう制御すること等が挙げられる。
体外循環式遠心分離法で用いることができる具体的な遠心分離機としては、血液成分採血装置のヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏ．，Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ  ＵＳ）等が挙げられる。このシステムでは、抗凝固剤としてはクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，Ａｃｉｄ  Ｃｉｔｒａｔｅ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）液等を用い、Ｂｌｏｏｄ  ａｃｃｅｓｓは肘静脈などに１本留置し、このルートより脱血・返血を行うことができる。
体外循環式遠心分離機が使用できない場合は、バッチ式遠心分離法を用いてもよい。バッチ式遠心分離機においては、供血者の全血を一端取り出し、遠心分離によって白血球成分を分離除去したのち、白血球を除いた血液を供血者に返血する。
【００１６】
本実施形態において、血液循環用カラムは、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であるときに好中球除去に使用される。
血液循環用カラムとは、全血を通過させることが可能なカラムであって、体内を循環する血液を体外に取り出して該カラムに通し、再び体内に戻すことが可能なカラムを意味する。
本実施形態において、血液循環用カラムには、好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体が充填される。
【００１７】
好中球を含む白血球に対して親和性を有する担体としては、繊維状、粒状、スポンジ状多孔質体、平板等が挙げられる。中でも、体積当たりの表面積が大きいという観点から、繊維状担体又は粒状担体が好ましく、血液の通液性、除去効率、充填の容易さという観点から、繊維状担体がより好ましい。
【００１８】
血液循環用カラムは、リンパ球よりも好中球と親和性がある形態を有しているか、及び／又はリンパ球よりも好中球と親和性がある高分子を有していることが好ましい。
リンパ球よりも好中球と親和性がある形態としては、担体が挙げられ、担体の形状としては、繊維状、粒状、スポンジ状多孔質体、平板等が挙げられる。中でも、体積当たりの表面積が大きいという観点から、繊維状担体又は粒状担体が好ましく、血液の通液性、除去効率、充填の容易さという観点から、繊維状担体がより好ましい。リンパ球よりも好中球と親和性がある高分子としては、非イオン性親水基及び重合性官能基を有するモノマーと、塩基性官能基及び重合性官能基を有するモノマーとの共重合体が好ましく、例えば、非イオン性親水基を有する（メタ）アクリル酸誘導体と、塩基性官能基を有する（メタ）アクリル酸誘導体との共重合体が挙げられる。
【００１９】
繊維状担体や粒状担体を充填した血液循環用カラムは、血液循環用カラムとして用いることができる。好中球に対して親和性が高く、血小板に対して親和性が低い血液循環用カラムとすることができる観点から、繊維状担体を充填した血液循環用カラムを用いることが好ましい。血小板の通過率が７５％以上であれば、３Ｌの血液処理でも血小板数は術前の９０％以上に維持されることから、血液循環用カラムの血小板の通過率を７５％以上にすることが好ましい。
【００２０】
繊維状担体又は粒状担体を充填した血液循環用カラムは、具体的には、通液される血液の入口と出口を有する容器と、該容器に充填された繊維状担体又は粒状担体から構成される。
繊維状担体とは、水不溶性であって、繊維状基材からなる担体である、織布、不織布、綿状、糸状、束状等の繊維構造体を意味する。中でも、血液細胞の吸着性、分離材としての取り扱い性の観点から、織布、不織布が好ましく、血液細胞との多点的な接触が可能である点で不織布がより好ましい。
【００２１】
繊維状担体は、繊維状基材と、該繊維状基材の表面に固着された親水性高分子を有することが好ましい。
繊維状基材として、血液を濾過し得るものであれば、血液細胞にダメージを与えにくいものであれば特に限定されないが、有機高分子材料が切断等の加工性に優れるため好ましい。
【００２２】
有機高分子材料としては、例えば、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリスチレン、ポリメチルメタアクリレート、ポリ弗化ビニル、ポリウレタン、ポリビニルアルコール、ポリビニルアセタール、ポリスルホン、ポリ弗化ビニリデン、ポリトリフルオロクロロビニル、弗化ビニリデン−テトラフルオロエチレン共重合体、ポリエーテルスルホン、ポリアクリレート、ブタジエン−アクリロニトリル共重合体、ポリエーテル−ポリアミドブロック共重合体、エチレン−ビニルアルコール共重合体、セルロース、セルロースアセテート等が挙げられる。
有機高分子材料としては、容易に繊維状基材とすることができるため、好ましくはポリエステル、ポリオレフィンであり、より好ましくはポリエステルである。
【００２３】
繊維状担体が、その表面に親水性高分子を有する場合、親水性高分子のコート量は、繊維状担体１ｇ当たり１ｍｇ〜９０ｍｇであれば好ましく、より好ましくは繊維状担体１ｇ当たり４ｍｇ〜５０ｍｇである。
親水性高分子としては、繊維状基材表面に固着できる親水性の高分子であれば特に限定されないが、塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する化合物であることが好ましい。
【００２４】
塩基性官能基とは、正の荷電を有する官能基を意味する。
塩基性官能基としては、例えば、第一級アミノ基、第二級アミノ基、第三級アミノ基、四級アンモニウム基等のアミノ基、及びピリジル基、イミダゾール基等の含窒素芳香族基等が挙げられ、中でも、アミノ基が好ましい。
塩基性官能基は正の荷電を有しているため、生理的条件下で負に荷電している好中球を静電的な相互作用によって吸着する効果がある。
【００２５】
非イオン性親水基とは、極めてイオン化し難く、親水性の高い形態の構造を有する官能基を意味する。
非イオン性親水基としては、例えば、水酸基、エチレンオキシド鎖、アミド基等が挙げられ、中でも、水酸基が好ましい。水酸基には補体が活性化されて生成したＣ３ｂが結合し、Ｃ３ｂの受容体ＣＲ１（ＣＤ３５）を有する好中球を吸着する。非イオン性親水基が繊維状基材表面に存在すると、繊維状担体が血液と接触したときに濡れ易くなるため、血液の片流れを防止する効果があり、その結果、繊維状担体における血液の流れ面積が増加し、好中球除去能向上にも寄与することができる。
【００２６】
繊維状基材表面への親水性高分子のコート方法としては、例えば、放射線グラフトやプラズマグラフト等のグラフト法、ポリマーによるコーティング法等が挙げられる。
操作が簡便で、製造性に優れる観点から、コーティング法が好ましい。
コーティング法に用いることのできるポリマーは、ビニル基等の重合性官能基を有するモノマーより通常のラジカル重合、アニオン重合等によって合成することができる。また、２種以上のモノマーをランダム共重合、ブロック共重合させて合成してもよい。
【００２７】
コーティング用ポリマーを合成しうるモノマーとしては、例えば、塩基性官能基を有するジアルキルアミノエチル（メタ）アクリレート等の（メタ）アクリル酸誘導体等が挙げられるが、中でも、ジメチルアミノエチルメタクリレートが好ましい。
コーティング用ポリマーを合成しうるモノマーとしては、例えば、非イオン性親水基を有する２−ヒドロキシエチル（メタ）アクリレート、ヒドロキシメチル（メタ）アクリレート、メトキシポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、（メタ）アクリルアミド等が挙げられるが、中でも、２−ヒドロキシエチルメタクリレートが好ましい。
塩基性官能基と非イオン性親水基とを有する化合物として、塩基性官能基を有するモノマーと、非イオン性親水基を有するモノマーとの共重合体が好ましい。
【００２８】
顆粒球の９０％から９５％は好中球である。顆粒球を除去すると体内循環血液中に存在する初期アポトーシス、ネクローシス、後期アポトーシスを起こしている好中球（以上をまとめて、ｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球という）が除去され、体内貯留プールから体内循環血液中に好中球が動員されて、体内循環血液の好中球生細胞率が増加する。体内循環血液の好中球生細胞率が増加すると、感染リスクの高い患者の細菌感染抵抗性が増し、感染リスクが低下する。
【００２９】
既に感染の起こっている患者では、体内循環血液中のｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球の数が多いが、血液循環用カラムを用いて好中球除去を施行することにより、ｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球の数は減少し、好中球生細胞率が増加して感染菌の排除効率が著しく上がる。ｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球はＰｒｏｐｉｄｉｕｍ  Ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）又はＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖを結合するので、ＰＩと、蛍光標識又はビオチン標識したＡｎｎｅｘｉｎ  Ｖで二重染色した好中球をフローサイトメーターで分析することによりｎｏｎ−ｖｉａｂｌｅ好中球を測定できる。
【００３０】
血液循環用カラムに充填される繊維状担体はどのような形状であってもよいが、血液の体外循環治療中に繊維状担体が目詰まりを起こさずに十分な量の顆粒球を除去するためには、顆粒球を選択的に除去するためのフィルタとして、繊維状担体が、平均繊維径１．４μｍ以上である担体から構成されることが好ましい。
繊維状担体が、平均繊維径１．４μｍ以上である担体から構成されるとは、平均繊維径１．４μｍ未満の担体を含まないことを意味する。
繊維状担体は、繊維状基材からなるが、１種類の繊維状基材からなっていてもよく、２種類以上の繊維状基材からなっていてもよい。繊維状担体を構成する各担体は、各担体間で、平均繊維径が異なっていてもよい。
平均繊維径が１．４μｍ以上であるとは、繊維状担体を構成する担体１つ１つにおいて、平均繊維径が１．４μｍ以上であり、繊維状担体を構成する担体単位ごとに平均繊維径が１．４μｍ以上であることを意味している。
したがって、２種類以上の担体からなる場合、構成する担体の平均繊維径は異なることがあるが、平均繊維径が異なる場合でも、各担体において平均繊維径は１．４μｍ以上である。
繊維状担体を１つ１つの担体に分離した後、各担体の平均繊維径を測定し、最小の平均繊維径が１．４μｍ以上である場合に、繊維状担体が、平均繊維径１．４μｍ以上である担体を含むといえる。
繊維状担体において、最小平均繊維径が１．４μｍ以上であることにより、血液が通過するに伴う圧力損失の増大を抑制し血液を流し続けることが可能になる。
【００３１】
血液循環用カラムのリンパ球除去性能を抑え、より顆粒球を選択的に除去するために、血液循環用カラムが、平均繊維径が２．０μｍ以上である担体からなることが好ましい。
リンパ球の除去性能として、リンパ球の除去率が７０％以下であれば、免疫記憶を司るリンパ球に重大な障害を与えることはないので、感染症発症抑制の観点からはより好ましい。
繊維状担体は顆粒球の除去性能を高めるために、平均繊維径２．６μｍ以下の繊維状担体を含むことが好ましい。繊維状担体の平均繊維径は、好ましくは１．４μｍ以上２．６μｍ以下であり、より好ましくは２．０μｍ以上２．６μｍ以下である。リンパ球の除去率が７０％以下であれば、免疫記憶を司るリンパ球に重大な障害を与えることはないので、感染症発症抑制の観点からはより好ましい。
【００３２】
また、血液循環用カラムは好中球を除去するためのフィルタに加え、凝集物を除去するためのプレフィルタとして平均繊維径８μｍ以上１４μｍ以下の比較的目の粗い担体をさらに含むことがより好ましい。
平均繊維径、リンパ球の除去率及び血小板の通過率は、実施例に記載の方法により測定することができる。
【００３３】
血液循環用カラムがプレフィルタを含む場合は、プレフィルタが容器の血液入口側に配置され、好中球を除去するためのフィルタは容器の血液出口側に配置されることが好ましい。
繊維状担体の臨界湿潤表面張力（ＣＷＳＴ）は血液循環用カラムをプライミングする際に使用する生理的溶液の表面張力以上であることが好ましい。生理的溶液の表面張力は、表面をアルコールランプ等で充分に赤熱し清浄化した白金プレートを用意し、この白金プレートを生理的溶液に浸漬して引き出す時の抵抗を測定する、いわゆるＷｉｌｈｅｌｍｙ法を用いて測定する。表面張力計としては、例えば、ＦＡＣＥ  ＳＵＲＦＡＣＥ  ＴＥＮＳＩＯＭＥＴＥＲ  ＣＢＶＰ−Ａ３（協和界面科学社株式会社）を用いることができる。
本方法で生理的溶液の表面張力を測定すると、例えば、生理食塩液や、チトラミン（扶桑薬品工業株式会社）、ＡＣＤ−Ａ液（テルモ株式会社）、フサン（登録商標：鳥居薬品株式会社）等の抗凝固剤を含む生理食塩液の表面張力は、７２ｄｙｎ／ｃｍとなる。
【００３４】
繊維状担体のＣＷＳＴは７２ｄｙｎ／ｃｍ以上であることが好ましく、より好ましくは７２ｄｙｎ／ｃｍ以上１１５ｄｙｎ／ｃｍ以下である。
繊維状担体のＣＷＳＴは、以下の方法によって求められる値をいう。
２ないし４ｄｙｎ／ｃｍずつ表面張力が変化するように水酸化ナトリウム、塩化カルシウム、硝酸ナトリウム、酢酸及びエタノールの濃度の異なる水溶液を調整する。各水溶液の表面張力（ｄｙｎ／ｃｍ）は、水酸化ナトリウム水溶液で９４〜１１５、塩化カルシウム水溶液で９０〜９４、硝酸ナトリウム水溶液で７５〜８７、純粋な水で７２．４、酢酸水溶液で３８〜６９、エタノール水溶液で２２〜３５のものが得られる（「化学便覧  基礎編ＩＩ」改訂２版、日本化学会編、丸善、１６４（１９７５））。また、水酸化ナトリウムで、表面張力が７４〜１００ｄｙｎ／ｃｍの水溶液を調製してもよい。このようにして得られた表面張力が２ないし４ｄｙｎ／ｃｍ異なる水溶液を表面張力が低いものから順番にフィルタ材上に１０滴ずつ乗せ１０分間放置する。１０分間放置後、１０滴中９滴以上がフィルタ材に吸収された場合に湿潤した状態であると定義し、吸収が１０滴中９滴未満である場合に非湿潤状態であると定義する。このようにしてフィルタ材上に表面張力が小さい液体から順次測定していくと湿潤状態と非湿潤状態が出現する。この時湿潤状態を観察した液体の表面張力の値と非湿潤状態を観察した液体の表面張力の値の平均値をそのフィルタ材のＣＷＳＴ値とする。
例えば、６４ｄｙｎ／ｃｍの表面張力を有する液体で湿潤し、６６ｄｙｎ／ｃｍの表面張力を有する液体で非湿潤であった場合、そのフィルタ材のＣＷＳＴ値は６５ｄｙｎ／ｃｍとなる。
繊維状担体は、同一のフィルタ材からなっていてもよく、異なるフィルタ材からなっていてもよい。
【００３５】
血液循環用カラムの容器内容積は、血液を体外循環処理する血液浄化器として使用できる範囲内であれば特に限定されないが、通常、５０ｍＬ〜５００ｍＬであり、好ましくは７０ｍＬ〜４００ｍＬであり、より好ましくは９０ｍＬ〜３００ｍＬである。
【００３６】
本実施形態の血液循環用カラムは、放射線滅菌、エチレンオキサイドガス滅菌、オートクレーブ滅菌のいずれかの方法で滅菌されていることが好ましい。安全性、環境負荷、熱によるカラムへの影響の観点から放射線滅菌されていることがより好ましい。
血液循環用カラムを放射線滅菌する場合は、繊維状担体が酸素濃度１％以下の雰囲気にある状態で放射線滅菌されることが好ましい。
滅菌に使用される放射線としては、例えば、γ線、電子線、Ｘ線等が挙げられ、線種は特に限定されない。
血液循環用カラムの好中球の除去性能や血小板の透過性への影響の観点から、滅菌後も繊維状担体が酸素濃度１％以下の雰囲気の中に維持されていることが好ましい。
【００３７】
本実施形態においては、血液循環用カラムは、粒状担体が充填されていてもよい。粒状担体とは、均一な単層構造又は外層と内層とを有する多層構造で構成されていてもよく、例えば、ビーズ、微粒子等が挙げられる。内層の構造は、特に限定されず、外層と内層との間に１以上の中間層が形成されていてもよい。
外層を構成する材料として、生体適合性材料が用いられる。生体適合性材料としては、セルロース類（例えば、酢酸セルロース、再生セルロース等）、ナイロン類（例えば、６−ナイロン、１１−ナイロン等）、ポリスチレン、ポリトリフルオロエチレン、ポリエチレンテレフタレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ポリメタクリル酸メチル、ポリビニルアルコール等の様々な樹脂材料が挙げられる。
内層を構成する材料としては、例えば、外層に用いられる生体適合性材料、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート等の合成樹脂、鉄、アルミ、銅等の金属、セラミックス又はガラス等の無機材料等が挙げられる。
また、粒状担体は、粒状担体の表面に固着された親水性高分子を有することが好ましい。ここで用いられる親水性高分子としては、繊維状担体について記載した親水性高分子等が挙げられる。
【００３８】
粒状担体の機械的強度を高めるためには、内層を構成する材料として、外層を構成している材料よりも機械的強度の高い材料を用いることが好ましく、金属や機械的強度に優れた合成樹脂を用いることが好ましく、中でも、ポリカーボネートを用いることが好適である。溶出物を発生しないほうが安全性の点で好ましいため、溶出物を発生し難い、ガラス等を内層を構成する材料として用いてもよい。
【００３９】
外層を構成する材料として酢酸セルロースを用い、内層を構成する材料としてポリカーボネートを用いた多層構造の粒状担体を形成する方法として、例えば、特開昭５９−２２０３４２号公報や特開昭６２−１５６９１７号公報に記載の製造方法を用いてもよい。
【００４０】
本実施形態の血液循環用カラムを用いて血液を体外循環処理する際には、抗凝固剤を使用してもよいし、体外循環回路内で血液が凝固する恐れがなければ抗凝固剤を使用しなくてもよい。
血液の抗凝固剤としては、ヘパリン等の抗トロンビン活性を示すもの、クエン酸及びその塩等の二価金属イオンと錯体を形成することによって抗凝固活性を示すもの、メシル酸ナファモスタット（Ｎａｆａｍｏｓｔａｔ  Ｍｅｓｉｌａｔｅ）等の蛋白分解酵素阻害剤等のいずれも使用できるが、好ましくは二価金属イオンと錯体を形成する抗凝固剤であり、より好ましくはクエン酸及びその塩を含む抗凝固剤である。
クエン酸及びその塩を主成分とする抗凝固剤としては、例えば、チトラミン（扶桑薬品工業株式会社）、ＡＣＤ−Ａ液（テルモ株式会社）等が挙げられる。
【００４１】
本実施形態の血液循環用カラム又は遠心分離機を、ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者等感染リスクの高い患者や感染症を有している患者に対して使用すると、体内循環血液中の好中球生存率を増加させ、好中球の感染防御機能を正常化させるので、感染リスクが低下し、あるいは感染菌排除の効率が著しく高まるので有用である。
ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者等感染リスクの高い患者として、ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、創分類クラス２以上の患者、栄養状態及び／又は全身状態が不良の患者、手術侵襲が高い患者等が挙げられる。
ここで創分類クラス２以上の患者とは、清潔創１段階以外の準清潔創（クラス２）、汚染創（クラス３）、感染・不潔創（クラス４）の患者を指す。
【００４２】
また、本実施形態の血液循環用カラム又は遠心分離機を、感染症を有している患者で、末梢血中のアポトーシス細胞の割合が正常値より高い患者に施行すると、ｖｉａｂｌｅ好中球の割合が増え、アポトーシス好中球の割合が減少し、ｖｉａｂｌｅ好中球／アポトーシス好中球の割合が顕著に増加するので、好中球機能が正常化し、感染菌の排除効率が著しく上がるので有用である。
【００４３】
本実施形態においては、末梢血中の好中球生細胞率を容易に判定することが可能である。
末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを定時間内に光学的に識別する血球測定手段を用いることにより末梢血中の好中球生細胞率を容易に判定することが可能である。
【００４４】
本実施形態においては、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満であることを血球測定手段で確認後に、末梢血中の好中球を除去することが好ましい。
血球測定手段は、末梢血中の白血球の濃縮手段、好中球生細胞の染色手段、染色した好中球生細胞の濃縮手段、染色した好中球生細胞濃縮物の比色分析手段からなる。
【００４５】
末梢血中の白血球の濃縮手段とは、血液中に存在する赤血球、白血球、血小板、血漿タンパク質から白血球を分離・採取する手段を意味する。白血球吸着フィルタ、遠心分離機等の機器により白血球を濃縮分離した後、洗浄により他の血球とタンパク質を除去することが可能である。
【００４６】
好中球生細胞の染色手段とは、好中球の生細胞を染色する試薬を意味する。好中球の生細胞の染色試薬としてはローズベンガル溶液を例示することができる。なお、好中球の非生細胞の染色試薬としてはトリパンブルー溶液を例示することができる。
【００４７】
染色した好中球生細胞の濃縮手段とは、好中球生細胞と染色試薬の混合物から脱液して好中球生細胞を取り出す手段を意味する。濾紙、精密ろ過膜、限外濾過膜、遠心分離機等を例示することができる。
【００４８】
染色した好中球生細胞濃縮物の比色分析手段とは、染色した好中球生細胞濃縮物の濃度を色調変化から決定する化学分析手段を意味する。物質の色の濃さ又は色調を、標準物質の色調と比較して、その物質を定量する分析手段である。標準物質としては、写真、紙等の標本が例示される。必要に応じて、光学顕微鏡の使用、紫外線、赤外線の使用、光度計及び分光法の使用、或いはこれらの組み合わせも可能である。
【００４９】
本実施形態においては、血球測定手段により末梢血中の好中球生細胞率を測定することができる。
末梢血中の好中球生細胞率の測定方法は、末梢血中の白血球を濃縮する工程、好中球生細胞を染色する工程、染色した好中球生細胞を濃縮する工程、及び染色した好中球生細胞濃縮物を比色分析する工程を含む。
【実施例】
【００５０】
以下、本発明を実施例によって、さらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら制限されるものではない。本実施例における測定法は以下のとおりである。
【００５１】
（１）末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定
以下の手順により好中球生細胞率を簡易判定した。
抗凝固剤を添加した末梢血３０ｍＬを室温で２０００Gにて１０分間遠心分離してバフィーコートを得た。バフィーコートにリン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）を加え、好中球濃度が１×１０6個／ｍＬ〜３×１０6個／ｍＬとなるように調整して、細胞懸濁液を得た。細胞懸濁液５００μＬに０．００３％のローズベンガル溶液（東京化成工業株式会社）を加え、３７℃で１０分間培養した。培養液を４００Ｇで１０分間遠心して脱液することによりペレットを得た。ペレットにリン酸緩衝生理食塩水を５００μＬ加えて再懸濁し、懸濁液を再度４００Ｇで１０分間遠心して脱液することによりペレットを得た。得られたペレットを予め用意した色見本（写真）と比較することにより好中球生細胞率を簡易判定した。
【００５２】
（２）血球性能及び圧力損失
７質量％となるように、ＡＣＤ−Ａ液（テルモ株式会社）を添加した豚血を調整し、血液分析装置（シスメックス株式会社  ＴＸ−１８００ｉ）により、血液循環用カラム通過
前の顆粒球、リンパ球及び血小板の各濃度を測定した。
豚血を３７±１℃に加温して、血液ポンプにて５０ｍＬ／ｍｉｎの流速で、２Ｌの加温した豚血を血液循環用カラムに流し、血液循環用カラム出口から流出した血液を全て捕集した。捕集した血液について、顆粒球、リンパ球及び血小板の各濃度を測定した。
血液循環用カラム通過前後での各成分の除去率又は通過率を求めた。
２Ｌの血液を処理した時点の血液循環用カラム入口圧と血液循環用カラム出口圧を測定し、入口圧から出口圧を引いた値を圧力損失とした。
【００５３】
（３）繊維状担体の総表面積
血液循環用カラムに充填された繊維状担体の総表面積は、繊維状担体の平均繊維径から算出される繊維状担体の比表面積と、充填される繊維状担体の重量との積の合計として算出した。複数種のフィルタ材を用いて繊維状担体としている場合には、フィルタ材ごとに表面積を算出して、その総和を繊維状担体の総表面積とした。
繊維状担体の比表面積（ｍ2／ｇ）は、平均繊維径をＤ（μｍ）、担体の材料の密度をρとすると、４／（ρ×Ｄ）で算出した。繊維状担体の基材密度は、ＪＩＳ  Ｚ  ８８０７：２０１２に従って測定した。
【００５４】
（４）親水性高分子のコート量
親水性高分子をコートした繊維状担体を、フィルタ材ごとに、一定量採取し、重量（Ｗ０）を測定した。
親水性高分子を溶解し、かつ基材を溶解しない溶媒に、重量測定後の繊維状担体を浸漬し５分間振盪撹拌した。撹拌後、溶媒を交換し、再度５分間振盪撹拌した。溶媒の交換と振盪撹拌を計３回繰り返した後、溶媒を廃棄し、繊維状担体を２４時間５０℃で真空乾燥した。乾燥後の重量（Ｗ１）を測定した。
コート量を（Ｗ１−Ｗ０）／Ｗ０により算出した。
【００５５】
（５）平均繊維径
フィルタ材ごとに、走査電子顕微鏡を用いて拡大倍率２５００倍で、合計本数が１００本を超えるまで視野を変えながら繊維状担体の写真を撮影した。撮影した、それぞれの繊維の繊維軸に直角な繊維の幅を、その繊維の直径として測定した。測定した繊維の直径の総和を、直径を測定した繊維の総本数で割った値を平均繊維径として算出した。
【００５６】
（６）ＣＷＳＴ
繊維状担体をフィルタ材ごとに、１００ｍｍ四方に切断した。表面張力が９０ｄｙｎ／ｃｍから１００ｄｙｎ／ｃｍの範囲で、２ｄｙｎ／ｃｍずつ異なる水酸化ナトリウム水溶液を表面張力が低いものから順番にフィルタ材上に１０滴ずつ乗せ１０分間放置した。１０分放置後、１０滴中９滴以上がフィルタ材に吸収された場合に湿潤状態であるとし、吸収が１０滴中９滴未満である場合に非湿潤状態であるとして、湿潤状態であると観察された内で水酸化ナトリウム水溶液の最大の表面張力値と、非湿潤状態であると観察された内で水酸化ナトリウムの最小の表面張力値を平均し、繊維状担体のＣＷＳＴ値として測定した。
【００５７】
（７）好中球画分の測定法
遠心チューブに血球分離溶液を入れ、同量の採取した血液を重層した。遠心チューブ内の溶液を遠心し、多核顆粒球浮遊液を採取した。リン酸緩衝生理食塩水を加えて混和し、再度遠心して、上清を除去し、残った多核顆粒球をリン酸緩衝生理食塩水で懸濁して検体とした。
次に検体にＰｒｏｐｉｄｉｕｍ  ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）とＦＩＴＣ標識したＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖを加えて反応、染色した。フローサイトメーターでＰＩ及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖともに陰性の細胞（ＰＩ及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖのいずれでも染色されない細胞）の割合を測定し、それを好中球生細胞率とした。
また、ＰＩ陰性且つＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ陽性の細胞を初期アポトーシス好中球、ＰＩ陽性且つＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ陰性の細胞をネクローシス好中球、ＰＩ及びＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖともに陽性の細胞を後期アポトーシス好中球とした。
【００５８】
（８）感染リスクの高い患者又は感染症を有している患者に対する血液循環用カラムの使用
血液循環用カラムをＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者等感染リスクの高い患者や感染症を有している患者に対して施行し、患者好中球の機能を評価する非盲検試験を実施した。
感染リスクの高い患者又は感染症を有している患者とは、１）選択基準のいずれかに該当し、２）除外基準のいずれにも該当しない患者のことである。
１）選択基準
・ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、創分類クラス２以上の患者
・ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、栄養状態及び／又は全身状態が不良の患者
・ＵＣ、大腸穿孔、食道癌、直腸癌開腹術後患者の内、手術侵襲が高い患者
・感染症を有している患者
２）除外基準
・心疾患（発症後６ヶ月以内の急性心筋梗塞、虚血性心疾患、加療を要する不整脈）の患者
・脳梗塞・脳出血等の脳血管障害の合併、既往を有する患者
・低血圧症又は収縮期血圧８０ｍｍＨｇ以下の患者
・妊娠中、授乳中の女性、妊娠している可能性のある女性
・認知症の患者
・体外循環治療中にショックの既往歴を有する患者
・アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬を服用しており、体外循環施行に先立って服用中止が困難な患者
ここで創分類クラス２以上の患者とは、清潔創１段階以外の準清潔創（クラス２）、汚染創（クラス３）、感染・不潔創（クラス４）の患者を指す。
実施の選択は手術予定症例では術前、感染症発生症例では感染症治療実施中に本試験の説明を行い、血液循環用カラム使用の同意が得られた場合には実施群、使用には同意が得られないものの、好中球機能評価について同意が得られた場合には非実施群（対照群）とした。
【００５９】
［血液循環用カラムを用いた施行条件］
１）繊維状担体が充填される血液循環用カラムの使用時
時期は術直後とし、実施回数は１回とした。抗凝固剤としてはチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を用いた。施行条件は血液流量５０ｍＬ／分、体外循環時間約１時間、目標血液処理量３，０００ｍＬとした。
２）粒状担体が充填される血液循環用カラムの使用時
時期は術直後とし、実施回数は１回とした。抗凝固剤としてはヘパリン（扶桑薬品工業株式会社）を用いた。施行条件は血液流量３０ｍＬ／分、体外循環時間約１時間、目標血液処理量１，８００ｍＬとした。
３）遠心分離機の使用時
抹消血中から白血球のみを除去する設定とした体外循環式遠心分離法で用いる遠心分離機として体外循環型遠心分離機ヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏ．，Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ  ＵＳ）を使用した。抗凝固剤としてクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，Ａｃｉｄ  Ｃｉｔｒａｔｅ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間で行った。
【００６０】
＜親水性高分子の合成＞
２−ヒドロキシエチルメタクリレート（ＨＥＭＡ）とジメチルアミノエチルメタクリレート（ＤＭ）とをモル比で９７：３の割合で混合し、エタノール中の総モノマー濃度を１．０モル／Ｌとして、１／２００モル／Ｌのアゾビスイソブチロニトリルの重合開始剤の存在下、６０℃で８時間、溶液ラジカル重合することによって親水性高分子（以下、ＨＭ−３と略称する）を合成した。
【００６１】
＜繊維状担体の作成＞
フィルタ材（Ａ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径１２μｍ、目付１００ｇ／ｍ2、厚み０．４７ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に、５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ａ）を得た。ポリエチレンテレフタレートの密度は、１．３８ｇ／ｃｍ3であった。
フィルタ材（Ａ）のＣＷＳＴ値は９５ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ａ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり１７ｍｇであった。
【００６２】
フィルタ材（Ｂ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径１２μｍ、目付３０ｇ／ｍ2、厚み０．２０ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ｂ）を得た。
フィルタ材（Ｂ）のＣＷＳＴ値は９５ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ｂ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり８ｍｇであった。
【００６３】
フィルタ材（Ｃ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径２．３μｍ、目付６０ｇ／ｍ2、厚み０．３０ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ｃ）を得た。
フィルタ材（Ｃ）のＣＷＳＴ値は９５ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ｃ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり３２ｍｇであった。
【００６４】
フィルタ材（Ｄ）
ＨＭ−３濃度が０．４質量％となるように、ＨＭ−３を５０％エタノール水溶液に溶解した。得られた溶液に、平均繊維径１．４μｍ、目付６６ｇ／ｍ2、厚み０．４０ｍｍのポリエチレンテレフタレート製不織布を浸漬し、余分な液を除去した後に５０℃で２０分間乾燥して、フィルタ材（Ｄ）を得た。
フィルタ材（Ｄ）のＣＷＳＴ値は９１ｄｙｎ／ｃｍであった。フィルタ材（Ｄ）の親水性高分子のコート量を、溶媒に５０％エタノール水溶液を用いて測定したところ、繊維状担体１ｇ当たり２７ｍｇであった。
【００６５】
＜血液循環用カラムの作成＞
血液循環用カラム（１）
フィルタ材（Ｃ）を１０枚積層し、その上にフィルタ材（Ａ）を９枚、フィルタ材（Ｂ）を４枚重ねてシート状フィルタを作成した。シート状フィルタを９７ｍｍ四方に切断して、液体の第１出入口と第２出入口とをそれぞれ対向の頂角部に有する容量１２５ｍＬの四角形状扁平型容器へ、フィルタ材（Ａ）が第２出入口側になるように充填して、超音波溶着を行うことで扁平型のカラムを作製した。カラムを脱酸素剤（三菱瓦斯化学株式会社、エージレス（登録商標）ＳＳ２００）と共にナイロン、アルミ、ポリエチレンの積層フィルムによって作られた包装袋に入れ、包装袋をヒートシールすることで密閉した。
包装袋内の酸素濃度を酸素濃度計（飯島電子工業株式会社、ＲＯ−１０２−ＳＤＰ）を用いて測定し、酸素濃度が１％以下になった後、２５ｋＧｙのγ線を照射し滅菌を行い、血液循環用カラム（１）を得た。繊維状担体の総表面積並びにカラムの圧力損失は、それぞれ９ｍ2、１ｋＰａであった。
【００６６】
血液循環用カラム（２）
フィルタ材（Ｃ）を１２枚積層し、その上にフィルタ材（Ａ）を９枚、フィルタ材（Ｂ）を４枚重ねてシート状フィルタを作成した。シート状フィルタを９７ｍｍ四方に切断して、液体の第１出入口と第２出入口とをそれぞれ対向の頂角部に有する容量１２５ｍＬの四角形状扁平型容器へ、フィルタ材（Ａ）が第２出入口側になるように充填して、超音波溶着を行うことで扁平型のカラムを作製した。カラムを脱酸素剤（三菱瓦斯化学株式会社、エージレス（登録商標）ＳＳ２００）と共にナイロン、アルミ、ポリエチレンの積層フィルムによって作られた包装袋に入れ、包装袋をヒートシールすることで密閉した。
包装袋内の酸素濃度を酸素濃度計（飯島電子工業株式会社、ＲＯ−１０２−ＳＤＰ）を用いて測定し、酸素濃度が１％以下になった後、２５ｋＧｙのγ線を照射し滅菌を行い、血液循環用カラム（２）を得た。繊維状担体の総表面積並びにカラムの圧力損失は、それぞれ１０ｍ2、１ｋＰａであった。
【００６７】
血液循環用カラム（３）
フィルタ材（Ｄ）を１８枚積層し、その上にフィルタ材（Ａ）を９枚、フィルタ材（Ｂ）を４枚重ねてシート状フィルタを作成した。シート状フィルタを９７ｍｍ四方に切断して、液体の第１出入口と第２出入口とをそれぞれ対向の頂角部に有する容量１２５ｍＬの四角形状扁平型容器へ、フィルタ材（Ｃ）が第２出入口側になるように充填して、超音波溶着を行うことで扁平型のカラムを作製した。カラムを脱酸素剤（三菱瓦斯化学株式会社、エージレス（登録商標）ＳＳ２００）と共にナイロン、アルミ、ポリエチレンの積層フィルムによって作られた包装袋に入れ、包装袋をヒートシールすることで密閉した。
包装袋内の酸素濃度を酸素濃度計（飯島電子工業株式会社、ＲＯ−１０２−ＳＤＰ）を用いて測定し、酸素濃度が１％以下になった後、２５ｋＧｙのγ線を照射し滅菌を行い、血液循環用カラム（３）を得た。繊維状担体の総表面積並びにカラムの圧力損失は、それぞれ２１ｍ2、４ｋＰａであった。
【００６８】
［実施例１］
４７才女性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。
ここで、ＡＳＡ（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｉｓｔｓ）分類とはアメリカ麻酔科学会における全身状態分類のことである。ＡＳＡ分類１は、器質的、生理的、生化学的あるいは精神的な異常がなく、手術の対象となる疾患は局在的であって、全身的（系統的）な障害を惹き起こさないものである。ＡＳＡ分類２は、軽度〜中程度の系統的な障害があるものをいう。その原因は、外科的治療の対象となった疾患、又は、それ以外の病態生理学的な原因によるものである。ＡＳＡ分類３は、重症の系統的疾患があるものをいう。この場合，系統的な障害を起こす原因は何であってもよいし、はっきりした障害の程度を決められない場合でも差し支えない。ＡＳＡ分類４は、それによって生命がおびやかされつつあるような高度の系統的疾患があって、手術をしたからといって、その病変を治療できるとは限らないものである。ＡＳＡ分類５は、瀕死の状態の患者で助かる可能性は少ないが、手術をしなければならないものをいう。ＡＳＡ分類６は脳死患者を指す。
手術は内視鏡下手術で、手術時間は２２０分であった。手術侵襲のやや高い患者であり、輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（１）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００６９】
［実施例２］
４０才女性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２７９分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（２）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００７０】
［実施例３］
５１才男性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２３０分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（３）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００７１】
［実施例４］
４４才男性、創分類クラス３、栄養状態良好、ＡＳＡ分類３の全大腸炎型ＵＣ患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２４５分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（１）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００７２】
［実施例５］
３９才女性、創分類クラス３、栄養状態良好、ＡＳＡ分類２の腹腔内膿瘍患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２２８分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、血液循環用カラム（１）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてチトラミン（扶桑薬品工業株式会社）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、及び後期アポトーシス好中球を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００７３】
［実施例６］
３７才女性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２１０分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、生理食塩水８００ｍＬ及びヘパリン添加生理食塩水５００ｍＬ（２０００単位／５００ｍＬ）で洗浄及びプライミングを行ったアダカラム（ＪＩＭＲＯ社製、直径約２ｍｍのセルローストリアセテートビーズ（粒状担体）、Ｒａ＝１３３ｎｍ）を用いて好中球除去を開始した。抗凝固剤としてヘパリン（扶桑薬品工業株式会社）を用い、循環中ヘパリンを１８００単位／時間で抗凝固剤注入ラインから持続注入した。血液処理量は１．８Ｌ、施行時間は１時間であった。
好中球除去施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００７４】
［実施例７］
３０才男性、創分類クラス２、栄養状態良好、ＡＳＡ分類１のクローン患者に対して、待機手術を行った。手術時間は２０３分で、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。手術終了１時間後に、体外循環型遠心分離機ヘモネティクスコンポーネントコレクションシステムＣＣＳ（Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ，Ｈａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏ．，Ｂｒａｉｎｔｒｅｅ，ＭＡ  ＵＳ）を使用した。抗凝固剤としてクエン酸デキストロース（ＡＣＤ，Ａｃｉｄ  Ｃｉｔｒａｔｅ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ）を使用し、血液流量に対して６％となるように添加した。血液処理量は３．０Ｌ、施行時間は１時間であった。
【００７５】
施行前後で末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
【００７６】
［比較例１］
４７才男性、創分類クラス２、ＡＳＡ分類１の全大腸炎型ＵＣ患者に対して、待機手術を行った。手術は内視鏡下手術で、手術時間は２９９分、手術侵襲のやや高い患者であった。輸血は無かった。
施行前の末梢血中の好中球生細胞率の簡易測定した結果、生細胞率は６０％未満であった。
手術終了１時間後及び２時間後に末梢血を採取し、末梢血好中球生細胞率、後期アポトーシス好中球、及び血小板数を測定した。
以上の結果をまとめて表１に示す。併せて、好中球除去に用いた血液循環用カラムの顆粒球／リンパ球の除去率、血小板の通過率、の結果を表１に示す。
【００７７】
【表１】
2017113181.tif 000002
【００７８】
クローン病患者５例、ＵＣ患者１例、腹腔内膿瘍患者１例の計７例で、好中球除去の施行後、好中球生細胞率は６０％未満から６０％以上に増加した。血液循環用カラムの血小板通過率が７５％以上であれば、３Ｌの血液処理でも血小板数は術前の９０％以上に維持されていることを確認した。施行により後期アポトーシス好中球数は減少した。
好中球除去の施行により、患者末梢血中の後期アポトーシス好中球の数が減少することも確認された。
本発明の血液循環用カラムを用いて感染リスクの高い患者の末梢血を体外循環処理すると、末梢血中の好中球生細胞率が増加し、感染リスクを低下させることができる。また、本発明の血液循環用カラムを用いて既に感染の起こっている患者の末梢血を体外循環処理すると、末梢血中の好中球生細胞率が増加し、感染菌の排除効率を著しく上げることができる。
本発明の血液循環用カラムを用いると、血小板の通過率が高く、止血能を維持する範囲に体内循環血液中の血小板数をコントロールすることができる。
本発明の遠心分離機においても、本発明の血液循環用カラムを用いた場合と同様の結果が得られた。
末梢血中の好中球生細胞率を測定した結果、フローサイトメーター測定で生細胞率が６０％未満のものは簡易測定でも６０％未満であった。抗凝固剤を含んだ末梢血を用いて簡易測定による生細胞率の判断に要する時間は、何れの例でも１時間以内であった。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明における血液循環用カラム又は遠心分離機を用いることで、末梢血中の好中球生細胞率が６０％未満である適用対象において、好中球生細胞率を６０％以上にすることができ、医療分野において産業上の利用可能性を有する。