(57)【要約】  【課題】  本発明は食品素材として広く利用できる原料から多くの疾病に関与する炎症を抑制する食品添加用組成物を得ることを目的とした。  【解決手段】  アミノ酸，ペプチド又はタンパク質から選択される窒素化合物にフィチン酸を修飾することで強い抗炎症作用を有する食品添加用組成物を得ることができた。本発明品は食品あるいは飼料に添加された形態として広く利用することができる。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アミノ態有機窒素化合物のアミノ基と、フィチン酸もしくはその塩のリン酸基とが結合したフィチン酸結合体を有効成分とする、抗炎症用添加剤。
【請求項２】
アミノ態有機窒素化合物がアミノ酸，ペプチドもしくはタンパク質、又はこれらの塩から選択される、請求項１記載の抗炎症用添加剤。
【請求項３】
食品添加剤、医薬添加剤又は飼料添加剤である、請求項１又は２記載の抗炎症用添加剤。
【請求項４】
アミノ態有機窒素化合物及びフィチン酸もしくはその塩の混合物をｐＨ５．５以下に調整することにより、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基とフィチン酸もしくはその塩のリン酸基とを結合させたフィチン酸結合体を得ることを特徴とする、抗炎症用添加剤の製造法。
【請求項５】
アミノ態有機窒素化合物及びフィチン酸もしくはその塩の混合物をｐＨ５．５以下に調整することにより、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基とフィチン酸もしくはその塩のリン酸基とを結合させたフィチン酸結合体を得ることを特徴とする、該アミノ態有機窒素化合物に抗炎症能を付与する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、食品、飼料や医薬品などに抗炎症作用を付与するための、抗炎症用添加剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
「炎症」とは異物侵入や組織障害といった生体組織にとって好ましくない刺激に対して免疫系が引き起こす、生体にとって必須の防御反応である。しかし、免疫系の自己反応や過剰反応が起こると生体そのものにも損傷や苦痛を引き起こす有害な疾患となる。
炎症はがん、生活習慣病、自己免疫性疾患、神経疾患、肥満、炎症性腸疾患、変形性関節症、リウマチ、サルコペニアなど非常に多くの疾患への関与が知られており、その解決が求められている。
【０００３】
炎症は自然免疫系の免疫担当細胞やＴ細胞が組織に集積して血管拡張や血管透過性の亢進を引き起こし、腫脹や疼痛を誘起した状態である。また、全身炎症では発熱を引き起こし、これらの反応が組織内で起こることにより組織の機能障害が生じる。
【０００４】
炎症の初期には好中球が細菌，ウイルス，死細胞などの異物の処理を行うが、炎症後期ではマクロファージが食作用による処理を行う。抗原提示などによりこれら異物と遭遇したマクロファージは活性化し、TNF-α，IL-1β，IL-6といったサイトカインやIL-8といったケモカインを放出する。
炎症性サイトカインは血管浸透性を亢進して発熱，発赤や腫脹を引き起こす。またケモカインは白血球の走性を亢進して腫脹を引き起こす。マクロファージは生体の恒常性維持に重要な役割を担っているが、マクロファージの異常活性化により引き起こされる過剰な炎症反応は多くの疾患に作用する。そのため、抗炎症作用を有する素材の開発が求められている。
【０００５】
フィチン酸は生体物質の一種でmyo-イノシトールの六リン酸エステルである。種子などの多くの植物組織に存在するリンの貯蔵形態であり、キレート作用が強く自然界では多くの金属イオンを結合したフィチン酸塩の形態で存在する。このフィチン酸塩はフィチンと呼ばれる。フィチン酸は抗腫瘍効果があることが報告されている（非特許文献１）。
また、他にも尿路結石（非特許文献２）や腎結石の予防（非特許文献３）、歯垢形成の抑制効果（非特許文献４）などの報告もされている。抗炎症作用に関しては、ヒト大腸細胞やマクロファージでの炎症性サイトカイン抑制効果（非特許文献５）やラットのカラギニン足浮腫試験での浮腫抑制効果（非特許文献６）が報告されている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】J Nutr. 2003 Nov;133(11 Suppl 1):3778S-3784S.
【非特許文献２】Anticancer res., vol.19 No.5A, pp3717-3722, 1999
【非特許文献３】Front Biosci. 2007 Jan 1;12:2580-7.
【非特許文献４】Caries Res. 1982;16(6):472-4.
【非特許文献５】Dig Dis Sci (2007) 52:93-102
【非特許文献６】Indian Journal of Experimental Biology Vol.42, February 2004, pp.179-185
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
フィチン酸は抗腫瘍効果、抗酸化効果、そして抗炎症作用等の機能性を有する。しかし、一方でフィチン酸は強烈なキレート作用を有するため、生体内では即座にカチオンと結合して反応性の乏しい不溶塩の形態となってしまう。よって、その効果を発揮するためには充分量摂取することが必要であると考えられる。
一方で、フィチン酸自体の強烈なキレート作用は生体への刺激性が強く、ミネラルの吸収阻害や成長阻害を引き起こす悪影響も報告されているため、大量に摂取することは問題があるとも考えられる。
【０００８】
そこで本発明は、フィチン酸が持つ生理機能を有効に発揮するための技術を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者は本課題について鋭意検討する中で、フィチン酸がペプチド等のアミノ態有機窒素化合物にミネラルを介さずに直接結合した結合体が、生体内で強い抗炎症作用を発揮すること、またその効果が生体内においてはフィチン酸単体よりも優れていることを見出し、本発明を完成させた。
【００１０】
即ち、本発明は以下の発明を包含する。
（１）アミノ態有機窒素化合物のアミノ基と、フィチン酸もしくはその塩のリン酸基とが結合したフィチン酸結合体を有効成分とする、抗炎症用添加剤、
（２）アミノ態有機窒素化合物がアミノ酸，ペプチドもしくはタンパク質、又はこれらの塩から選択される、前記（１）記載の抗炎症用添加剤、
（３）食品添加剤、医薬添加剤又は飼料添加剤である、前記（１）又は（２）記載の抗炎症用添加剤、
（４）アミノ態有機窒素化合物及びフィチン酸もしくはその塩の混合物をｐＨ５．５以下に調整することにより、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基とフィチン酸もしくはその塩のリン酸基とを結合させたフィチン酸結合体を得ることを特徴とする、抗炎症用添加剤の製造法、
（５）アミノ態有機窒素化合物及びフィチン酸もしくはその塩の混合物をｐＨ５．５以下に調整することにより、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基とフィチン酸もしくはその塩のリン酸基とを結合させたフィチン酸結合体を得ることを特徴とする、該アミノ態有機窒素化合物に抗炎症能を付与する方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、フィチン酸をベースとした優れた抗炎症作用を有する抗炎症用添加剤を提供でき、食品添加剤、医薬添加剤または飼料添加剤などとして使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】実施例１で得られたタンパク質−フィチン酸結合体のマウスマクロファージ細胞に対する抗炎症作用を示すグラフである（実施例５）。
【図２】腸管炎症モデルの動物試験（実施例６）において、試験期間中の各群の体重変化を示したグラフである。
【図３】腸管炎症モデルの動物試験（実施例６）において、各群における炎症性サイトカイン（TNF-α）の発現量を示したグラフである。
【図４】腸管炎症モデルの動物試験（実施例６）において、各群における炎症性サイトカイン（IL-1β）の発現量を示したグラフである。
【図５】腸管炎症モデルの動物試験（実施例６）において、各群における炎症性サイトカイン（IL-6）の発現量を示したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
本発明の抗炎症用添加剤は、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基と、フィチン酸もしくはその塩のリン酸基とが結合したフィチン酸結合体を有効成分とすることを特徴とする。以下、本発明の実施形態について具体的に説明する。
【００１４】
（アミノ態有機窒素化合物）
本発明においてアミノ態有機窒素化合物は、分子中に窒素がアミノ基（-NH2）の状態で含まれる有機化合物を指す。アミノ態有機窒素化合物としては、タンパク質（ポリペプチド）、低分子ペプチド、アミノ酸等が挙げられる。該アミノ態有機窒素化合物は、それが含まれる天然物を用いることができるし、天然物の濃縮物又は精製物、あるいは合成化合物を用いることもできる。
【００１５】
タンパク質とは、動物性、植物性、合成を問わずアミノ酸が鎖状に重合してできた高分子化合物を指し、ポリペプチドと称する場合もある。例えば動物性タンパク質としては、乳由来タンパク質（カゼイン、ホエータンパク質等）、卵黄や卵白などの卵由来タンパク質、牛肉，豚肉，鶏肉，魚肉などの肉由来タンパク質（コラーゲン、ゼラチン等）、酵母，細菌，糸状菌などの微生物由来タンパク質等が挙げられる。また植物性タンパク質としては、大豆やエンドウなどの豆類由来タンパク質、小麦，大麦，米，米糠などの穀物由来タンパク質、キャノーラ，ナッツ類などの種子由来タンパク質等が挙げられるが、これらの例示に限られるものではない。
【００１６】
ペプチドとは、上記のタンパク質を酵素や化学処理によって分解してタンパク質よりも低分子化したもの、あるいは人工的に合成によりアミノ酸の複数の分子を重合させたものを指す。
【００１７】
アミノ酸としては、生体のタンパク質を構成する20種類のα−アミノ酸（カルボキシル基が結合している炭素にアミノ基も結合しているアミノ酸）が挙げられる。α−アミノ酸の中でもＤ型、Ｌ型の光学異性体があるが、そのいずれでもよい。β−アラニン等のβ−アミノ酸、γ−アミノ酪酸等のγ−アミノ酸、オルニチン、シトルリン、サルコシン、クレアチン、オパイン、トリメチルグリシン、テアニン、トリコロミン酸、カイニン酸、シスチン、ヒドロキシプロリン、ヒロシキシリシン、サイロキシン、Ｏ−ホスホセリン、デスモシン等のα−アミノ酸以外のアミノ酸などを用いることもできる。
【００１８】
（フィチン酸又はその塩）
フィチン酸はmyo-イノシトールの六リン酸エステルである。またフィチン塩としてはフィチン酸ナトリウムやフィチン酸カルシウムといったフィチン酸のアルカリ金属塩やアルカリ土類金属塩などが挙げられるが、これらの例示には限定されない。本発明ではフィチン酸とフィチン酸塩のいずれの形態でも用いることができ、取扱い性や組成物の製造工程を考慮して適宜選択することができる。
本発明に用いるフィチン酸は天然由来、たとえば米，大豆や小麦などの植物から抽出したものを用いることができる。また、化学合成法などにより合成して得られたものや試薬を用いることもできる。
【００１９】
（フィチン酸結合体）
本発明におけるフィチン酸結合体とは、上記のアミノ態有機窒素化合物とフィチン酸もしくはその塩とが結合したものであるが、カルシウムなどのカチオンを介した間接的なキレート結合ではなく、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基とフィチン酸のリン酸基とが直接結合したものを指す（以下、「本結合体」と称する場合がある）。カチオンによるキレート結合を介したフィチン酸結合体の場合、これを経口で摂取した場合に胃酸で容易に結合が外れてしまうことが予見される。これはキレート結合が酸性条件下で容易に結合が外れるためである。
一方、本結合物は直接結合であるため、生体内においても比較的安定である。このような直接結合は、アミノ態有機窒素化合物とフィチン酸とを単に混合するだけでは生じず、自然界では種子に代表される植物由来の一部に限られる。
【００２０】
本結合体はより簡便には、アミノ態有機窒素化合物とフィチン酸の共存下で、人為的な修飾工程を経ることにより得ることができる。
【００２１】
人為的な修飾工程を経て本結合体を得る方法の一つの態様として、次のように行うことができる。
まず、例えばアミノ態有機窒素化合物とフィチン酸もしくはその塩を水系下に混合して混合物を得て、両化合物を共存させる。次に、該混合物のｐＨを５．５以下の酸性に調整する。該ｐＨの上限はさらに５以下、４．５以下、４以下、３．５以下又は３以下とすることが好ましい。該ｐＨの下限は特に限定されないが、１以上とすることができる。ｐＨ調製後、必要により撹拌しつつ当該ｐＨを維持する。維持時間は特に限定されないが、本結合体が生成するために十分な時間維持すればよく、例えば１０分間〜２４時間、好ましくは１０分間〜３時間程度維持する。次に、当該ｐＨのまま、あるいは必要によりアルカリでｐＨをよりアルカリ性側に上げ、例えばｐＨ６〜８程度に中和してから、混合物を遠心分離して、沈殿物を回収することにより、本結合体を含む画分を得る。
【００２２】
ただし、アミノ態有機窒素化合物が低分子のために、ｐＨを酸性に調整しても沈殿が生じない場合には、膜分画等の分画手段により本結合体を濃縮することができる。あるいは、高分子の蛋白質の状態でフィチン酸との結合体を得てから、プロテアーゼ等の酵素により低分子のペプチドやアミノ酸に分解してもよい。
【００２３】
本結合体中のフィチン酸の含有量は、アミノ態有機窒素化合物の組成などによって直接結合できるフィチン酸の飽和量が異なるため、特に限定されない。
【００２４】
以上のような方法で、アミノ態有機窒素化合物のアミノ基とフィチン酸のリン酸基とを直接結合することにより、アミノ態有機窒素化合物に抗炎症能を付与することができる。
【００２５】
（抗炎症用添加剤）
本発明の抗炎症用添加剤は、上記の本結合体を有効成分とするものであり、本結合体そのものを抗炎症用添加剤として用いることができ、また必要により賦形剤等の他原料を混合することもできる。また抗炎症作用を有する他の有効成分を組み合わせることもできる。
【００２６】
本発明の抗炎症用添加剤は、食品添加剤、医薬添加剤、飼料添加剤、皮膚外用剤添加剤、化粧用添加剤等の種々の分野の用途にも用いることができる。また該抗炎症用添加剤を使用する対象も特に限定されるものではなく、例えばヒトの他、霊長類（チンパンジー、サルなど）、家畜動物（ウシ、ブタ、ニワトリ、ウマなど）、愛玩動物（イヌ、ネコなど）、実験動物（マウス、ラット、ウサギなど）等の哺乳動物や鳥類、その他の動物に有効成分を摂取させるための添加剤として用いるとができる。
【００２７】
本発明の抗炎症用添加剤は、炎症性の疾患又は症状を効果的に予防又は治療することができる。該添加剤は生体内において炎症性サイトカインの産生を低下または抑制するため、炎症性サイトカインに起因する炎症性疾患又は症状に対し特に有効である。このような症状としては、炎症性腸疾患、肥満、関節リウマチ、変形性関節症、サルコペニア、慢性炎症、動脈硬化、生活習慣病や肥満による炎症などが挙げられる。
【実施例】
【００２８】
以下、実施例により本発明の実施態様をさらに具体的に説明する。なお、単位の「％」や「部」は特段断りのない限り、「重量％」や「重量部」を意味するものとする。
【００２９】
（実施例１）タンパク質−フィチン酸結合体の調製
以下の通り、タンパク質へのフィチン酸修飾を行い、タンパク質−フィチン酸結合体を調製した。
0.792％水溶液濃度になるように6.3Ｌのカゼインナトリウムと分離大豆タンパクの２種類の水溶液をそれぞれ調製し、塩酸によりｐＨ２に調整した。水酸化ナトリウムによりｐＨ７に調整した400μMのフィチン酸ナトリウム水溶液を6.3Ｌ混和させた。ただちに塩酸によりｐＨ２に再調整し、室温で30分間攪拌した。6,000gで15分間遠心分離した後、沈殿を回収した。該沈殿を10倍希釈したリン酸緩衝生理食塩水（PBS(-)溶液）で洗浄した後、再度6,000gで15分間遠心分離を行い、沈殿を回収した。該沈殿を凍結乾燥し、カゼインナトリウムと分離大豆タンパクにフィチン酸がそれぞれ結合した修飾体１、修飾体２を得た。
酸性領域ではフィチン酸とカチオンとの結合が起こらずフィチン酸のリン酸基が遊離している。一方でタンパク質の等電点以下の酸性領域ではタンパク質はアミノ基がプラス電荷にチャージされており、これらが直接結合してタンパク質とフィチン酸の結合体が沈殿として生じたと考えられる。
【００３０】
（実施例２）人工消化物の調製
以下の通り、カゼインナトリウムと分離大豆タンパク、実施例１で得られた修飾体１、修飾体２の人工消化処理物を調製した。
2.5％水溶液濃度になるように、カゼインナトリウム、分離大豆タンパク、修飾体１、修飾体２の４種類の水溶液を調製し、塩酸によりｐＨ２に調整した。ペプシンを対基質１％添加して、37℃で２時間反応させた。
水酸化ナトリウムによりｐＨ８に調整後、トリプシンを対基質1.7％、α−キモトリプシンを対基質0.03％添加して、37℃で２時間反応させた。５分間の煮沸で酵素を失活させた後、1,000gで10分間の遠心分離を行い、上清を回収後に凍結乾燥して４種類の人工消化物を得た。
【００３１】
（実施例３）フィチン態リン含量の測定
以下の通り、実施例２で得られた４種類の人工消化物について、フィチン態リン含量の測定を行った。
タンパク質含量が２％程度になるように水溶液を８ml調製した。該水溶液に15％トリクロロ酢酸水溶液を２ml加えて15分間攪拌した。該水溶液を3,000gで15分間遠心分離した後に上清を0.45μmフィルターで濾過した。
該上清５mlに３mlの１％ FeCl3・6H2Oおよび５％ Na2SO4（in １Ｍ 塩酸）溶液を加え、30分間煮沸した。次に該溶液を遠心分離して上清を除去した後、沈殿に３％トリクロロ酢酸水溶液を５ml加えて攪拌した。
該溶液を遠心分離して上清を除去した後、沈殿に0.17M塩酸を５ml加えて攪拌した。該溶液を遠心分離して上清を除去した後、沈殿に温めた超純水を５ml加えて攪拌した。
該溶液を遠心分離して上清を除去した後、沈殿に60％過塩素酸を0.5ml加えて懸濁させた。重量測定した試験管に該溶液を分注して、180℃で２時間加熱した。
次に２Ｍの塩酸を２ml加えた後、30分間煮沸した。該溶液にフェノールフタレインを加えた後に20％水酸化ナトリウムで中和して試験管の重量を測定した。
100μlの試料溶液と検量線用標準液（KH2PO4, 0〜200μg/ml）に超純水を400μl加えて攪拌した。60％過塩素酸を50μl加えて攪拌した。
バナジン酸アンモニウム溶液（メタバナジン酸アンモニウム1.17ｇを温めた超純水に溶解、冷却後に60％過塩素酸を20ml加え、MiliQで500mlにメスアップ）を該溶液に150μl加えて攪拌した。3.53％モリブデン酸アンモニウム溶液（モリブデン酸アンモニウム35.3ｇを超純水に溶解し、１Ｌにメスアップ）を該溶液に300μl加えて攪拌した。
該溶液を室温で30分間静置後、96穴プレートに200μl分注し、420nmの吸光度を測定した。フィチン酸測定溶液から算出された全リン量からフィチン酸（MW=660.8）の含量を換算して算出した。測定結果を表１に示した。
【００３２】
（表１）フィチン態リン含量
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【００３３】
（考察）
表１の通り、フィチン酸結合修飾を行ったカゼインナトリウムを原料とする修飾体１、分離大豆タンパクを原料とする修飾体２のいずれにおいても、人工消化後のフィチン酸含量が未修飾のタンパク質よりも高値であることが認められた。すなわち、これらの修飾体はタンパク質とフィチン酸の結合が為されていること、そして人工消化後でもタンパク質とフィチン酸との結合が維持されていることが示された。
【００３４】
（実施例４）抗炎症評価のための細胞培養
実施例２で得られた人工消化物のマクロファージに対する抗炎症作用の評価を行うため、下記の手法により細胞培養を行った。
マウスマクロファージ細胞として「J774.1細胞」（理化学研究所より提供）を使用した。また「RPMI-1640」培地（和光純薬(株)製）に終濃度10％となるようにウシ血清を添加し、抗生物質として終濃度100IU/mlペニシリン及び100μg/mlストレプトマイシンを添加して細胞培養用培地とした。
J774.1細胞を細胞培養用培地にて37℃、５％CO2条件下で培養し、10cmシャーレでコンフルエントになるまで培養を行った。コンフルエントに達した細胞を回収し、2.5×105個/mlになるように希釈し、24穴細胞培養用プレートに１mlずつ添加した。
37℃、５％CO2条件下で24時間培養し、培地をアスピレーターにて除去した。除去後、終濃度5μg/mlになるように調製した人工消化物を350μl、及び炎症誘導物質として「Pam3CSK4」（InvivoGen社製）を終濃度10ng/mlになるように350μl添加し、37℃、５％CO2条件下で24時間培養した。その後、培養上清を200μl回収した。
【００３５】
（実施例５）ELISAによるIL-6濃度の測定
以下の通り、実施例４で細胞培養した各培地中の炎症性サイトカインIL-6濃度をELISA法により測定した。
「Purified rat anti-mouse IL-6」（１次抗体）、「Biotinylated rat anti-mouse IL-6」（２次抗体）、「Recombinant mouse IL-6」（標準IL-6）及び「Streptavidin-Alkalin Phosphate」は、すべてBD Biosciences社から購入し使用した。
１次抗体を0.1M Na2HPO4 buffer（ｐＨ９．０）で0.5μg/mlになるように調製したものを96ウェルマイクロプレートに50μl/wellずつ添加し、室温で２時間静置した。次にPBS-Tween20（PBS-T）で３回洗浄し、十分に水切りを行った。
その後、３％ BSA in PBS-Tを100μl/wellずつ添加し、室温で１時間静置後、PBS-Tで3回洗浄し、十分に水切りを行った。PBS-Tで適宜希釈した培養上清サンプルを50μl/wellずつ添加し、４℃で24時間放置後、PBS-Tで３回洗浄し、十分に水切りを行った。
PBS-Tで0.5μg/mlに調製した２次抗体を50μl/wellずつ添加し、アルミホイルで遮光して室温で１時間静置後、PBS-Tで３回洗浄し、十分に水切りを行った。「Streptavidin-Alkalin Phosphate in PBS-T」を50μl/wellずつ添加し、アルミホイルで遮光して室温で１時間静置後、PBS-Tで３回洗浄し、十分に水切りを行った。
0.2mg/mlの４−二トロフェニルリン酸２ナトリウムin 1Mジエタノールアミンbufferを50μl/wellずつ入れて、アルミホイルで遮光して20分間静置後、マイクロプレートリーダーにて405nm（参考波長492nm）の吸光度を２回測定し、平均値を算出した。測定結果を図１に示した。
【００３６】
（考察）
各人工消化物の抗炎症作用を検証した結果、図１に示すようにカゼインナトリウム人工消化物は、ポジティブコントロールのIL-6産生量と比較しても変化は見られず、抗炎症作用は認められなかった。
一方、修飾体１人工消化物ではIL-6産生量が大きく低下しており、抗炎症作用を獲得させることができた。
また、分離大豆タンパク人工消化物はフィチン酸修飾前でもIL-6産生量が抑制されているが、修飾体２人工消化物ではIL-6産生量がさらに大きく低下しており、フィチン酸を修飾することで抗炎症作用が増強されていることが示された。
【００３７】
（実施例６）腸管炎症動物試験
生体内での抗炎症作用を評価するため、デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）を用いたマウスの腸管炎症モデルの動物試験を行った。
マウス（C57BL/6、雌、7週齢）は日本SLC社より購入し、順化中の飼料は「CRF-1」（オリエンタル酵母工業(株)製）を、試験期間中はAIN93G組成食を与えた。飲水はイオン交換水を与えた。
飼料、飲料共にマウスに自由摂食させ、12時間周期の明期の下飼育した。全ての動物は３日間予備飼育してから本実験に用い、未投与群（n=6），DSS投与群（n=6），修飾体１群（n=6），フィチン酸群（n=6）の４群に分けた。
順化後に５日間、未投与群とDSS投与群はイオン交換水を、修飾体１群は実施例２に記載した修飾体１人工消化物の0.5％水溶液を、フィチン酸群は0.0285％フィチン酸ナトリウム水溶液を、自由飲水させた。
その後、DSS投与群、修飾体１群、フィチン酸群の自由飲水の溶液中に、DSS（MP Biochemicals社より購入、Mw36,000-50,000）を2.25％添加して自由飲水させた。図２に15日間の試験期間中における各群の体重変化を示した。
解剖はDSS投与開始から11日後に行った。解剖では大腸組織を回収した後、RNAの抽出を行い、炎症性サイトカイン（TNF-α、IL-1β、IL-6）の発現量を測定した。各サイトカインの測定結果を図３〜５に示した。
【００３８】
（考察）
図２に示した通り、DSSの自由飲水により腸管炎症が引き起こされ、DSS投与群では体重が著しく減少した。一方、フィチン酸群では体重減少の抑制効果が少し見られた。しかし、フィチン酸群と等量のフィチン酸が修飾された修飾体１群では、フィチン酸群よりも強い体重減少抑制効果が確認された。
また、図３〜５に示した通り、炎症性サイトカインの発現では、フィチン酸群ではTNF-α、IL-6では効果が無かったのに対し、修飾体１群では全てのサイトカインにおいてフィチン酸群よりも強い発現抑制効果を示した。すなわち、生体内ではフィチン酸単体では抗炎症作用は薄いが、等量であってもタンパク質とフィチン酸との結合体にすることで、より顕著な抗炎症作用を示していた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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