(57)【要約】【課題】エンドトキシン含量の少ない生体物質の製造方法を提供する。【解決手段】下記（ａ）及び（ｂ）の工程を含む生体物質（Ａ）の製造方法であって、工程（ａ）において生体物質（Ａ）中にエンドトキシンを含有し、生体物質（Ａ）が、糖類及びタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも１種である生体物質の製造方法。  工程（ａ）：生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中でエンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を作用させる工程  工程（ｂ）：工程（ａ）後、生体物質（Ａ）と吸着剤（Ｂ）とを分離する工程【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（ａ）及び（ｂ）の工程を含む生体物質（Ａ）の製造方法であって、工程（ａ）において生体物質（Ａ）中にエンドトキシンを含有し、生体物質（Ａ）が、糖類及びタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも１種である生体物質の製造方法。
工程（ａ）：生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中でエンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を作用させる工程
工程（ｂ）：工程（ａ）後、生体物質（Ａ）と吸着剤（Ｂ）とを分離する工程
【請求項２】
吸着剤（Ｂ）が、２５℃の水１００ｇに対する溶解度が０．００００１〜０．５ｇの二価金属塩である請求項１に記載の生体物質の製造方法。
【請求項３】
吸着剤（Ｂ）が、カルシウム塩である請求項１又は２に記載の生体物質の製造方法。
【請求項４】
吸着剤（Ｂ）が、リン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト及び炭酸カルシウムからなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項１〜３のいずれかに記載の生体物質の製造方法。
【請求項５】
工程（ａ）において吸着剤（Ｂ）を水溶液（Ｃ）の重量に基づいて１〜２０重量％含む請求項１〜４のいずれかに記載の生体物質の製造方法。
【請求項６】
工程（ａ）において水溶液（Ｃ）中にリン酸イオンを１〜１００ｍＭ含み、塩化ナトリウムを０．００１〜２０重量％含む請求項１〜５のいずれかに記載の生体物質の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドトキシン含量の少ない生体物質の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
エンドトキシンとはグラム陰性菌の外膜の成分であるリポ多糖であり、生物学的作用としては致死性ショック及び発熱等がある。そのため、生体を対象とした生体物質を利用した技術分野（例えば医薬品分野）においては生体物質からのエンドトキシンの除去が必須となる。従来、エンドトキシンを除去あるいは失活させる方法として、熱、酸、アルカリによる処理などが知られているが、これらの方法の大部分は手間もかかり、生体物質を失活又は分解させる可能性が高い。また、メンブランフィルターによるろ過（特許文献１）、エンドトキシンとの特異的なアフィニティ結合を利用した方法（特許文献２）、陰イオン交換を利用した方法（特許文献３）などが試みられているが、いずれも大量生産には向いておらず、エンドトキシンの除去能力や生体物質の収率、また価格の点でも解決すべき問題が存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００８−０８８３１４号公報
【特許文献２】特表平３−５０１７３３号公報
【特許文献３】特開平６−１９９６５６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、エンドトキシン含量の少ない生体物質の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、鋭意研究を重ねてきた結果、本発明に到達した。
すなわち、本発明の生体物質の製造方法は、下記（ａ）及び（ｂ）の工程を含む生体物質（Ａ）の製造方法であって、工程（ａ）において生体物質（Ａ）中にエンドトキシンを含有し、生体物質（Ａ）が、糖類及びタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも１種である生体物質の製造方法。
工程（ａ）：生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中でエンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を作用させる工程
工程（ｂ）：工程（ａ）後、生体物質（Ａ）と吸着剤（Ｂ）とを分離する工程
【発明の効果】
【０００６】
本発明の生体物質の製造方法は、収率よくエンドトキシン含量の少ない生体物質を製造できる、という効果を奏する。
【発明を実施するための形態】
【０００７】
本発明の生体物質の製造方法は、下記（ａ）及び（ｂ）の工程を含む生体物質（Ａ）の製造方法であって、工程（ａ）において生体物質（Ａ）中にエンドトキシンを含有し、生体物質（Ａ）が、糖類及びタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも１種である生体物質の製造方法である。
工程（ａ）：生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中でエンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を作用させる工程
工程（ｂ）：工程（ａ）後、生体物質（Ａ）と吸着剤（Ｂ）とを分離する工程
【０００８】
本発明の生体物質の製造方法において、生体物質（Ａ）は、特に限定されないが、生体高分子（核酸、タンパク質及び多糖等）、生体高分子の構成要素（ヌクレオチド、ヌクレオシド、アミノ酸、各種の糖等）、脂質、ビタミン及びホルモン等が挙げられる。
これらの生体物質（Ａ）のうち、精製収率の観点から、糖類及びタンパク質からなる群より選ばれる少なくとも１種が好ましい。
【０００９】
糖類としては、多糖及びオリゴ糖等が挙げられる。
【００１０】
多糖としては、単糖が３〜１０，０００，０００個結合した多糖等が挙げられ、例えばヒアルロン酸、コンドロイチン、キサンタン、セルロース、ヘパリン、アミロース及びデキストラン等が挙げられる。これらの他にも１種の単糖が結合した多糖、２種以上の単糖がランダム又は交互に結合した多糖等が挙げられる。
【００１１】
オリゴ糖としては、スクロース、ラクトース、トレハロース、マルトース、ラフィノース、パノース、シクロデキストリン、ガラクトオリゴ糖及びフラクトオリゴ糖等が挙げられる。
【００１２】
タンパク質としては、酵素｛酸化還元酵素（コレステロールオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、アスコルビン酸オキシダーゼ及びペルオキシダーゼ等）、加水分解酵素（ヒアルロニダーゼ、リゾチーム、プロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、アミラーゼ、リパーゼ、セルラーゼ及びグルコアミラーゼ等）、異性化酵素（グルコースイソメラーゼ等）、転移酵素（プロテインキナーゼＡ、アシルトランスフェラーゼ及びスルホトランスフェラーゼ等）、合成酵素（脂肪酸シンターゼ、リン酸シンターゼ及びクエン酸シンターゼ等）及び脱離酵素（ペクチンリアーゼ及びアルギン酸リアーゼ等）等｝、ホルモンタンパク質｛骨形成因子（ＢＭＰ）、インターフェロンα、インターフェロンβ、インターロイキン１〜１２、成長ホルモン、エリスロポエチン、インスリン、顆粒状コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、組織プラスミノーゲン活性化因子（ＴＰＡ）、ナトリウム利尿ペプチド、血液凝固第ＶＩＩＩ因子、ソマトメジン、グルカゴン、成長ホルモン放出因子、血清アルブミン及びカルシトニン等｝、抗体｛１本鎖抗体、ＩｇＧラージサブユニット、ＩｇＧスモールサブユニット等｝、抗原タンパク質｛Ｂ型肝炎表面抗原等｝、機能性タンパク質｛プロネクチン（登録商標）、不凍ペプチド、抗菌ペプチド等｝、蛍光タンパク質（ＧＦＰ等）、発光タンパク質（ルシェラーゼ等）及びペプチド（特にアミノ酸組成を限定するものではなく、オリゴペプチド、ジペプチド及びトリペプチド等）等が挙げられる。
【００１３】
工程（ａ）において、生体物質（Ａ）の含有量は、エンドトキシン除去活性及び生体物質の収率の観点から、水溶液（Ｃ）の重量を基準として、０．０００１〜５０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜２０重量％である。
【００１４】
本発明における吸着剤（Ｂ）は、エンドトキシンを吸着するものである。
本発明における吸着剤（Ｂ）は、吸着剤（Ｂ）と生体物質（Ａ）との分離の容易さの観点から、２５℃の水１００ｇに対する溶解度が０．００００１〜０．５ｇである二価金属塩であることが好ましい。
吸着剤（Ｂ）は、１種を用いてもよく、２種以上を併用してもよい。
【００１５】
二価金属塩としては、ベリリウム塩（炭酸ベリリウム等）、マグネシウム塩（炭酸マグネシウム、リン酸マグネシウム等）、ストロンチウム塩（硫酸ストロンチウム等）、バリウム塩（リン酸水素バリウム、炭酸バリウム、硫酸バリウム等）、カルシウム塩（硫酸カルシウム二水和物、リン酸水素カルシウム、リン酸三カルシウム、炭酸カルシウム、ヒドロキシアパタイト等）、鉛塩（硫酸鉛（ＩＩ）、リン酸水素鉛（ＩＩ）、炭酸鉛（ＩＩ）等）、ニッケル塩（炭酸ニッケル（ＩＩ）等）、ラジウム塩（硫酸ラジウム等）、銅塩（炭酸銅（ＩＩ）等）、鉄塩（炭酸鉄（ＩＩ）等）及びマンガン塩（炭酸マンガン（ＩＩ）等）等が挙げられる。
【００１６】
本発明において、吸着剤（Ｂ）としては、エンドトキシンとの親和性の観点から、カルシウム塩が好ましく、さらに好ましくはリン酸三カルシウム、ヒドロキシアパタイト及び炭酸カルシウムからなる群より選ばれる少なくとも１種である。
【００１７】
工程（ａ）において、水溶液（Ｃ）中の吸着剤（Ｂ）の量は、水溶液（Ｃ）の重量に基づいて、１〜５０重量％であることが好ましく、１〜２０重量％であることがより好ましい。
吸着剤（Ｂ）の量が１重量％以上であることで、十分なエンドトキシン除去活性が得られ、５０重量％以下であることで、生体物質（Ａ）を収率よく得られる。
【００１８】
工程（ａ）において、水溶液（Ｃ）中の生体物質（Ａ）と吸着剤（Ｂ）との重量比（（Ａ）／（Ｂ））は、エンドトキシン除去活性及び生体物質の収率の観点から、０．０００００２〜５０が好ましく、さらに好ましくは０．００００５〜２０である。
【００１９】
工程（ａ）において、水溶液（Ｃ）に用いられる水としては、特に制限なく用いることができるが、例えば、蒸留水、イオン交換水、超純水及び注射用水等を用いることができる。これらのうち、エンドトキシン除去活性の観点から、超純水、蒸留水及び注射用水が好ましい。
【００２０】
工程（ａ）において、水溶液（Ｃ）中には、生体物質（Ａ）、吸着剤（Ｂ）及び水以外に、他の物質を用いてもよい。他の物質としては、特に限定されないが、リン酸化合物及び塩化ナトリウム等が挙げられる。
リン酸化合物としては、上記吸着剤（Ｂ）以外のものが含まれ、例えば、リン酸水素二ナトリウム・１２水和物及びリン酸二水素ナトリウム二水和物等が挙げられる。
リン酸化合物を含む場合、水溶液（Ｃ）中のリン酸化合物の含有量（モル濃度）は、水溶液（Ｃ）の体積を基準として、生体物質の収率の観点から、１〜１００ｍＭが好ましい。
水溶液（Ｃ）中のリン酸化合物の含有量は、水溶液（Ｃ）の重量を基準として、生体物質の収率の観点から、０．０１〜１重量％が好ましい。
水溶液（Ｃ）中のリン酸イオン（ＰＯ43-、ＰＯ4Ｈ2-及びＰＯ4Ｈ2-）の含有量（モル濃度）は、水溶液（Ｃ）の体積を基準として、生体物質の収率の観点から、１〜１００ｍＭが好ましい。
塩化ナトリウムの含有量は、水溶液（Ｃ）の重量を基準として、生体物質の収率の観点から、０．００１〜２０重量％が好ましい。
【００２１】
工程（ａ）において、生体物質（Ａ）とリン酸化合物との重量比（（Ａ）／リン酸化合物）は、生体物質の収率の観点から、０．０００１〜５０００が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜２０００である。
生体物質（Ａ）と塩化ナトリウムとの重量比（（Ａ）／塩化ナトリウム）は、エンドトキシン除去活性及び生体物質の収率の観点から、０．０００００５〜５００００が好ましく、さらに好ましくは０．００００５〜２００００である。
吸着剤（Ｂ）とリン酸化合物との重量比（（Ｂ）／リン酸化合物）は、生体物質の収率の観点から、０．１〜５０００が好ましく、さらに好ましくは１〜２０００である。
吸着剤（Ｂ）と塩化ナトリウムとの重量比（（Ｂ）／塩化ナトリウム）は、エンドトキシン除去活性及び生体物質の収率の観点から、０．００５〜５００００が好ましく、さらに好ましくは０．０５〜２００００である。
リン酸化合物と塩化ナトリウムとの重量比（リン酸化合物／塩化ナトリウム）は、生体物質の収率の観点から、０．０００５〜１０００が好ましい。
【００２２】
工程（ａ）において、生体物質（Ａ）、吸着剤（Ｂ）及び水を含む溶液中のｐＨは、生体物質の安定性の観点から、５〜１０が好ましく、さらに好ましくは６〜９である。
【００２３】
本発明の製造方法において、生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中でエンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を作用させる工程（ａ）後、生体物質（Ａ）と吸着剤（Ｂ）とを分離する工程（ｂ）を行うことにより、収率よくエンドトキシン含量の少ない生体物質が得られる。
【００２４】
工程（ａ）としては、例えばエンドトキシンを不純物として含む生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中で、エンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を、例えば０℃〜４０℃で作用させることが含まれる。
生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）の温度は、生体物質の安定性の観点から、０〜４０℃が好ましい。
作用させる方法としては、この分野で一般的に用いられているカラム法やバッチ法等が挙げられる。
【００２５】
例えば、カラム法による場合は、吸着剤（Ｂ）をカラムに充填し、塩類溶液、水、緩衝液などで洗浄後、工程（ａ）としてエンドトキシンを含有する生体物質（Ａ）の水溶液を通液すれば、カラム中が生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）となり、吸着剤が作用し、エンドトキシンが吸着剤（Ｂ）に吸着される。また、エンドトキシンを含まない生体物質を含む溶液がカラムを透過して得られる（工程（ｂ））。
一方、バッチ法による場合として、例えば、エンドトキシンを含有する生体物質（Ａ）の水溶液に吸着剤（Ｂ）を加えて水溶液（Ｃ）とし（工程（ａ））、該混合物を攪拌してエンドトキシンを吸着剤に吸着させた後、溶液と吸着剤（Ｂ）とを濾過や遠心分離等により分離（工程（ｂ））することにより、エンドトキシン含量の少ない溶液が得られる。
【００２６】
工程（ａ）において、生体物質（Ａ）、吸着剤（Ｂ）及び水を共存させる時間は、エンドトキシン除去活性及び生体物質の収率の観点から、０．０１〜１００時間が好ましく、さらに好ましくは０．１〜１０時間である。
【実施例】
【００２７】
以下、実施例により本発明を更に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２８】
＜実施例１＞
注射用水（大塚蒸留水）２２３μＬに１０ｇ／Ｌのヒアルロン酸ナトリウム（和光純薬工業（株）製、「ヒアルロン酸ナトリウム、鶏冠製」、分子質量：１０００〜２０００ｋＤａ）を５００μＬ、５００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を１０μＬ、６Ｍの塩化ナトリウム水溶液を１６７μＬ、１０００ＥＵ／ｍＬの標準エンドトキシン（和光純薬工業（株）製）溶液を１００μＬ加えてサンプル溶液１ｍＬを作製した。サンプル溶液１ｍＬに対してヒドロキシアパタイト（バイオラッド社製）をサンプル溶液の重量に基づいて１０重量％になるように加えて４℃で２時間攪拌処理を行った。２時間後、遠心分離機（４℃、１０，０００×ｇ、５分）を用いて遠心し、上清を分離回収した。回収したサンプル溶液に対して攪拌、遠心分離操作をもう一度行った。上清１００μＬを下記条件でＨＰＬＣにより分析し、ヒアルロン酸の吸着処理前後のピーク面積を記録した。
＜ＨＰＬＣによる測定条件＞
装置：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣシステム
カラム：Ｓｈｏｄｅｘ  ＯＨｐａｋ  ＳＢ−８０６Ｍ  ＨＱ
移動相：０．１５Ｍ  リン酸緩衝液  ｐＨ７．０
流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ
検出器：ＡＣＱＵＩＴＹ  ＵＰＬＣ  ＲＩＤ検出器
温度：４０℃
ヒアルロン酸ナトリウム（和光純薬工業（株）製、「ヒアルロン酸ナトリウム、鶏冠製」、分子質量：２０００ｋＤａ）を緩衝液Ｂに０．２５ｇ／Ｌ、０．５ｇ／Ｌ、１ｇ／Ｌ及び２ｇ／Ｌの濃度となるようにそれぞれ溶解したヒアルロン酸標準溶液（１）〜（４）を作製し、ＨＰＬＣにより分析したヒアルロン酸のピーク面積を縦軸（ｙ軸）とし、ヒアルロン酸標準溶液（１）〜（４）のヒアルロン酸濃度（ｇ／Ｌ）を横軸（ｘ軸）としてプロットし、線形近似して検量線を作成した。
サンプル溶液における吸着処理前後の回収率をピーク面積から算出したところ、６４．６％であった。
また、上清１００μＬをリムルスカラーＫＹテストワコー（和光純薬工業（株）製）を使用した比色法により測定し、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出したところ、処理前は９９．８ＥＵ／ｍｇ、処理後は０．３９ＥＵ／ｍｇであった。測定条件はキットに従った。測定結果は表１にまとめた。
【００２９】
＜実施例２〜１９＞
実施例１において、生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）の種類及び量を表１に記載のものとし、リン酸イオンの濃度及び塩化ナトリウムの濃度を表１に記載のものとする以外は同様にして実施した。それぞれ回収率、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出した。結果を表１に示す。
【００３０】
＜実施例２０＞
注射用水（大塚蒸留水）２２．３μＬに１ｇ／Ｌのグルコースオキシダーゼ（（株）シグマ製、コウジカビ由来）を５０μＬ、５００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を１μＬ、６Ｍの塩化ナトリウム水溶液を１６．７μＬ、１００ＥＵ／ｍＬの標準エンドトキシン（和光純薬工業（株）製）溶液を１０μＬ加えてサンプル溶液１００μＬを作製した。サンプル溶液１００μＬに対してヒドロキシアパタイト（バイオラッド社製）をサンプル溶液の重量に基づいて１０重量％になるように加えて４℃で２時間攪拌処理を行った。２時間後、遠心分離機（４℃、１０，０００×ｇ、５分）を用いて遠心し、上清を分離回収した。回収したサンプル溶液に対して攪拌、分離操作をもう一度行った。上清１０μＬをＢＣＡプロテインアッセイキット（タカラバイオ社製）によりタンパク質量を測定し、グルコースオキシダーゼの吸着処理前後の回収率を算出したところ、７３．３％であった。測定条件はキットに従った。
また、上清１０μＬをリムルスカラーＫＹテストワコー（和光純薬工業（株）製）を使用した比色法により測定し、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出したところ、処理前は９．７ＥＵ／ｍｇ、処理後は０．０８ＥＵ／ｍｇであった。測定条件はキットに従った。測定結果は表２にまとめた。
【００３１】
＜実施例２１〜３９＞
実施例２０において、生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を表２に記載のものとする以外は同様にして実施した。それぞれ回収率、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出した。結果を表２に示す。
【００３２】
＜比較例１＞
注射用水（大塚蒸留水）２２３μＬに１０ｇ／Ｌのヒアルロン酸ナトリウム（和光純薬工業（株）製、「ヒアルロン酸ナトリウム、鶏冠製」、分子質量：１０００〜２０００ｋＤａ）を５００μＬ、５００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を１０μＬ、６Ｍの塩化ナトリウム水溶液を１６７μＬ、１０００ＥＵ／ｍＬの標準エンドトキシン（和光純薬工業（株）製）溶液を１００μＬ加えてサンプル溶液１ｍＬを作製した。サンプル溶液１ｍＬを下記精製方法Ｉ又はＩＩ方法で処理し、サンプル溶液を回収した。
精製方法Ｉ：メンブランフィルター（ミリポア社製）で濾過した。
精製方法ＩＩ：ザルトバインドＱピコ（陰イオン交換カラム，ザルトリウス・ステディム社製）に通液した。
上清１００μＬを実施例１と同様にしてＨＰＬＣにより分析し、ヒアルロン酸の処理前後のピーク面積を記録した。
サンプル溶液における処理前後の回収率をピーク面積から算出したところ、Ｉでは４９．３％、ＩＩは２６．７％であった。
また、上清１００μＬをリムルスカラーＫＹテストワコー（和光純薬工業（株）製）を使用した比色法により測定し、処理前後のエンドトキシン濃度を算出したところ、処理前は９９．８ＥＵ／ｍｇ、処理後は、Ｉでは２４．３ＥＵ／ｍｇ、ＩＩは１２．６ＥＵ／ｍｇであった。測定条件はキットに従った。測定結果は表３にまとめた。
【００３３】
＜比較例２〜１１＞
比較例１において、生体物質（Ａ）を表３に記載のものとする以外は同様にして実施した。それぞれ回収率、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出した。結果を表３に示す。
【００３４】
＜比較例１２＞
注射用水（大塚蒸留水）２２．３μＬに１ｇ／Ｌのグルコースオキシダーゼ（（株）シグマ製、コウジカビ由来）を５０μＬ、５００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を１μＬ、６Ｍの塩化ナトリウム水溶液を１６．７μＬ、１００ＥＵ／ｍＬの標準エンドトキシン（和光純薬工業（株）製）溶液を１０μＬ加えてサンプル溶液１００μＬを作製した。サンプル溶液サンプル溶液を比較例１と同様にして、精製方法Ｉ又はＩＩ方法で処理し、サンプル溶液を回収した。上清１０μＬをＢＣＡプロテインアッセイキット（タカラバイオ社製）によりタンパク質量を測定し、グルコースオキシダーゼの回収率を算出したところ、Ｉでは３８．４％、ＩＩは３２．３％であった。測定条件はキットに従った。
また、上清１０μＬをリムルスカラーＫＹテストワコー（和光純薬工業（株）製）を使用した比色法により測定し、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出したところ、処理前は９．７ＥＵ／ｍｇ、処理後はＩでは２．３ＥＵ／ｍｇ、ＩＩは１．０４ＥＵ／ｍｇであった。測定条件はキットに従った。測定結果は表４にまとめた。
【００３５】
＜比較例１３〜２１＞
比較例１２において、生体物質（Ａ）を表４に記載のものとする以外は同様にして実施した。それぞれ回収率、吸着処理前後のエンドトキシン濃度を算出した。結果を表４に示す。
【００３６】
【表１】
2017178921.tif 000002
【００３７】
【表２】
2017178921.tif 000003
【００３８】
【表３】
2017178921.tif 000004
【００３９】
【表４】
2017178921.tif 000005
【００４０】
なお、表１〜４において、生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）としては下記を用いた。
ヒアルロン酸ナトリウム：「ヒアルロン酸ナトリウム、鶏冠製」、分子質量：１０００〜２０００ｋＤａ、和光純薬工業（株）製
コンドロイチン硫酸：サメ軟骨由来のコンドロイチン硫酸ナトリウム、和光純薬工業（株）製
キサンタンガム：細菌発酵由来のキサンタンガム、和光純薬工業（株）製
セルロース：植物由来のセルロース、和光純薬工業（株）製
ヘパリン：豚腸粘膜由来のヘパリンナトリウム、和光純薬工業（株）製
でんぷん：トウモロコシ由来のでんぷん、和光純薬工業（株）製
デキストラン：乳酸菌発酵由来のデキストラン、和光純薬工業（株）製
プルラン：黒酵母発酵由来のプルラン、和光純薬工業（株）製
マルトース：植物由来のマルトース、和光純薬工業（株）製
シクロデキストリン：シクロデキストリン、和光純薬工業（株）製
ガラクトオリゴ糖：４’−ガラクトシルラクトース、和光純薬工業（株）製
グルコースオキシダーゼ：コウジカビ由来のグルコースオキシダーゼ、（株）シグマ製
ヒアルロニダーゼ：ヒツジ精巣由来のヒアルロニダーゼ、和光純薬工業（株）製
リゾチーム：ニワトリ卵白由来のリゾチーム、（株）シグマ製
プロテインキナーゼＡ：ウシ心臓由来のプロテインキナーゼＡ、（株）シグマ製
クエン酸シンターゼ：ブタ心臓由来のクエン酸シンターゼ、（株）シグマ製
アルギン酸リアーゼ：フラボバクテリウム菌由来のアルギン酸リアーゼ、（株）シグマ製
ウシ血清アルブミン：ウシ血清由来のアルブミン、和光純薬工業（株）製
ポリヒスチジンタグ抗体：ウサギ由来のポリヒスチジンタグ抗体、クロンテック社製
プロテインＡ：大腸菌由来組換え体のプロテインＡ、アナスペック社製
ＦＬＡＧペプチド：和光純薬工業（株）製
ヒドロキシアパタイト：バイオラッド社製、２５℃の水１００ｇに対する溶解度０．００３ｇ
リン酸三カルシウム：和光純薬工業（株）製、２５℃の水１００ｇに対する溶解度０．００２ｇ
炭酸カルシウム：和光純薬工業（株）製、２５℃の水１００ｇに対する溶解度０．００３ｇ
【００４１】
本願発明の製造方法である実施例１〜３９の結果から、生体物質（Ａ）及び吸着剤（Ｂ）を含む水溶液（Ｃ）中でエンドトキシンに吸着剤（Ｂ）を作用させた後、吸着剤を生体物質（Ａ）を含む水溶液から分離することで、比較例１〜２１と比較して、高い回収率でエンドトキシン含量の少ない生体物質を得られることがわかる。
【産業上の利用可能性】
【００４２】
本発明の製造方法は、効率的にエンドトキシン含量の少ない生体物質を製造できる。また、大量生産への適応も可能である。したがって、本発明の製造方法は生体を対象とした技術分野（医療・医薬品分野等）及び研究試験用試薬等に有用である。