(57)【要約】【課題】細胞毒性を示す新規化合物を提供すること。【解決手段】沖縄県南風原村にて採取されたマメスナギンチャクから単離した次の化学式（１）で表される新規化合物。【化１】2017036240.tif 000008【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学式（１）で表される化合物。
【化１】
2017036240.tif 000007
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
新規生物活性物質の発見は、生命科学や医学の分野におけるブレークスルーにつながることがある。例えば、腔腸動物イワスナギンチャク毒パリトキシンはナトリウムポンプに作用し、クロイソカイメンなど由来のオカダ酸はタンパク質脱リン酸化酵素に作用することから、生理機能解明のツールとして利用されている。クロイソカイメン由来の抗癌活性を示すハリコンドリンＢの発見は、抗癌剤エリブリンの創製へとつながった。
【０００３】
このように、生物活性物質の探索研究は基礎生命科学研究のみならず、臨床応用へも発展する可能性がある。中でも、海洋生物は、酸素濃度や塩濃度、温度や圧力、日照などの生息条件が陸上と全く異なることから、陸上生物には見られない特異な構造や機能を持つ二次代謝産物を生産しており、有用生物活性物質の探索源として今なお注目されている。本発明者らも、近年、渦鞭毛藻Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ  ｓｐ．由来のカルシウムイオンチャネル阻害活性物質Ａｍｄｉｇｅｎｏｌ類（非特許文献１，２）やシアノバクテリアＬｅｐｔｏｌｙｎｇｂｙａ  ｓｐ．由来の脂肪細胞分化阻害活性物質Ｙｏｓｈｉｎｏｎｅ  Ａ（非特許文献３）などの新規生物活性物質の単離・構造解析・生物活性評価について報告している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｉｎｕｚｕｋａ，Ｔ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．，Ｙａｍａｄａ，Ｋ．，Ｕｅｍｕｒａ  Ｄ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１２，５３，２３９−２４２
【非特許文献２】Ｉｎｕｚｕｋａ，Ｔ．，Ｙａｍａｄａ，Ｋ．，Ｕｅｍｕｒａ，Ｄ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１４，５５，６３１９−６３２３
【非特許文献３】Ｉｎｕｚｕｋａ，Ｔ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｋ．，Ｉｗａｓａｋｉ，Ａ．，Ｏｈｎｏ，  Ｏ．，Ｓｕｅｎａｇａ，Ｋ．，Ｋａｗａｚｏｅ，Ｙ．，Ｕｅｍｕｒａ，Ｄ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１４，５５，６７１１−６７１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は細胞毒性を示し、抗癌剤としての利用が期待される新規化合物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、沖縄県南風原村で採集したマメスナギンチャクから分離した下記化学式（１）で表される化合物が、ＨｅＬａ細胞に対して細胞毒性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は下記化学式（１）
【化１】
2017036240.tif 000002
で表される化合物に関するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、細胞毒性を示す化学式（１）で表される化合物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の分画・精製過程を示す図である。
【図２】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の分画・精製過程を示す図である。
【図３】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の１Ｈ−ＮＭＲのチャートを示す図である。
【図４】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の１３Ｃ−ＮＭＲのチャートを示す図である。
【図５】本発明に係る化学式（１）で表される化合物のＸ線構造解析の結果を示す図である。
【図６】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の（Ｓ）−ＭＴＰＡエステル体と（Ｒ）−ＭＴＰＡエステル体の１Ｈ−ＮＭＲの化学シフト値の差を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の実施形態について詳述する。
【００１１】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物は、マメスナギンチャクから抽出し、精製することにより得ることができる。より詳細には、本発明に係る化学式（１）で表される化合物は沖縄県南風原村にて採取したマメスナギンチャク（Ｚｏａｎｔｈｕｓ  ｓｐ．）から抽出し、精製することにより得た。
【００１２】
例えば、マメスナギンチャクを採取した後に冷凍保存し、含水メタノールにて粉砕・抽出し、粗抽出物を得、粗抽出物を酢酸エチル層と水層とに分配し、さらに、有機層としての酢酸エチル層をＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより画分することができる。
【００１３】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物は新規な化合物であり、本発明者により細胞毒性を示すことを見出されたものである。
【００１４】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物は、特にＨｅＬａ細胞に対して細胞毒性を示すことから、抗癌剤としての使用が期待されるものである。
【００１５】
以下、実施例を挙げて、本発明の具体的態様を示すものであるが、本発明の技術的範囲は実施例の記載により何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００１６】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物の単離・精製・構造決定
【００１７】
沖縄県南風原村で採取したマメスナギンチャク５００ｇ（湿重量）を冷凍保存し、小石を取り除いてから含水メタノール中にてブレンダーで粉砕した。抽出液を吸引濾過し、エバポレーターを用いて濾液を濃縮した。粗抽出物を酢酸エチル（２００ｍｌ×３）と水（２００ｍｌ）とで分配した。得られた酢酸エチル層を減圧濃縮し、濃縮物を９０％メタノール−水（２００ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（２００ｍｌ×３）で脱脂した。得られた９０％メタノール層を減圧濃縮し、濃縮物をＯＤＳカラムクロマトグラフィー［Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（登録商標）  ７５Ｃ１８−ＯＰＮ（φ２０×３００ｍｍ）、メタノール／水（２０／８０→４０／６０→６０／４０→８０／２０→メタノール）］により５画分（Ｆｒ．１〜５）に分離した。
（図１参照）
【００１８】
得られた各溶出画分の内、メタノール溶出画分（Ｆｒ．３）２５．７ｍｇを分取薄層クロマトグラフィー（Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０  Ｆ２５４（０．５×２００×２００ｍｍ）、メタノール／クロロホルム（１５／８５））により４画分（Ｆｒ．３−１〜４）に分離した。この内の第３画分（Ｆｒ．３−３）を逆相高速液体クロマトグラフィー［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ  ＨＧ−５（φ１０×２５０ｍｍ）、アセトニトリル／水（２０／８０）→（グラジェント１０分）→（５０／５０）→（グラジェント２０分）→（７０／３０）→（グラジェント１０分）→（１００／０）、検出ＵＶ２１５ｎｍ、流速４．５ｍＬ／分］により５画分（Ｆｒ．３−３−１〜３−３−５）に分離した。この内の第４画分（Ｆｒ．３−３−４）にＨｅＬａ細胞増殖阻害活性が認められた。得られたＦｒ．３−３−４を逆相高速液体クロマトグラフィー［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ  ＨＧ−５（φ１０×２５０ｍｍ）、アセトニトリル／水（２０／８０）→（グラジェント１０分）→（５０／５０）→（グラジェント２０分）→（７０／３０）→（グラジェント１０分）→（１００／０）、検出ＵＶ２１５ｎｍ、流速４．５ｍＬ／分）］により７画分（Ｆｒ．３−３−４−１〜３−３−４−７）に分離した。この内の第６画分（Ｆｒ．３−３−４−６）にＨｅＬａ細胞増殖阻害活性が認められた。得られたＦｒ．３−３−４−６を減圧濃縮・乾固して式（１）で表される化合物（０．３ｍｇ）を不定形白色粉末として得た。
（図２参照）
【００１９】
図１および図２に示した操作により得られた不定形白色粉末である本発明に係る式（１）で表される化合物について、高分解能ＥＳＩ−ＭＳにより分子イオンピーク［ｍ／ｚ４６９．３２８３（Ｍ＋Ｎａ）＋、Δ−１．１ｍｍｕ］が観測され、分子式がＣ２８Ｈ４６Ｏ４であることが判明した。
【００２０】
さらに、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＨＭＢＣを測定し、得られたスペクトルを解析することにより、不定形白色粉末であって、Ｃ２８Ｈ４６Ｏ４の分子式を有する化合物の平面構造を決定した。
【００２１】
図１および図２に示した操作により得られた不定形白色粉末である本発明の化学式（１）で表される化合物についての１Ｈ−ＮＭＲ、および１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータを以下に示す。
【００２２】
本発明の化学式（１）で表される化合物の１Ｈ−ＮＭＲ（８００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のスペクトルデータは以下のとおりである。
【表１】
2017036240.tif 000003
【００２３】
表中、ｓは一重線を表し、ｄは二重線を表し、ｍは多重線を表す。
【００２４】
本発明の化学式（１）で表される化合物の１３Ｃ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）のスペクトルデータは以下のとおりである。
【表２】
2017036240.tif 000004
【００２５】
表中、ｓは一重線を表し、ｄは二重線を表し、ｔは三重線を表し、ｑは四重線を表す。
【００２６】
また、メタノールを用いて化学式（１）で表される化合物を結晶化して、Ｘ線結晶構造解析を行い、図５の結果を得て相対立体配置を決定した。
【００２７】
さらに、化学式（１）で表される化合物における不斉炭素の絶対立体配置を決定することを目的として、化学式（１）で表される化合物の３位の水酸基の（Ｓ）−ＭＴＰＡエステル体と（Ｒ）−ＭＴＰＡエステル体を合成した。
【００２８】
化学式（１）で表される化合物の３位の水酸基の（Ｓ）−ＭＴＰＡエステル体と（Ｒ）−ＭＴＰＡエステル体の１Ｈ−ＮＭＲ（８００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）の代表的なスペクトルデータは以下のとおりである。
【００２９】
【表３】
2017036240.tif 000005
【００３０】
表中、ｓは一重線を表し、ｄは二重線を表し、ｍは多重線を表す。
【００３１】
化学式（１）で表される化合物の３位の水酸基の（Ｓ）−ＭＴＰＡエステル体と（Ｒ）−ＭＴＰＡエステル体の３位の周辺について１Ｈ−ＮＭＲの化学シフトの差を測定したところ図６のとおりであった。このことから、化学式（１）で表される化合物の３位の絶対立体配置はＳであることが改良モッシャー法により明らかとなった。なお、ＭＴＰＡとは、α−メトキシ−α−（トリフルオロメチル）フェニル酢酸を意味する。
【００３２】
以上のことから、化学式（１）で表される化合物における不斉炭素の絶対立体配置は、以下の化学式
【化２】
2017036240.tif 000006
に示すように、３Ｓ，８Ｓ，１０Ｒ，１３Ｒ，１４Ｒ，１７Ｓ，２０Ｒ，２４Ｒであることが判明した。
【００３３】
試験例（化学式（１）で表される化合物の癌細胞増殖阻害活性試験（ＨｅＬａ））
【００３４】
ヒト子宮頸がん由来細胞株（ＨｅＬａ）は、１０％ウシ胎児血清含有のＤＭＥＭ培地にて炭酸ガス培養器（５％ＣＯ２、３７℃）で培養した。ＨｅＬａ細胞を９６穴プレートに播種し（１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）、１６時間培養後にＤＭＳＯに溶解した本発明に係る化学式（１）で表される化合物を所定の濃度（０μＭから１０μＭおきに１００μＭまでの１１段階）になるように細胞に添加し、さらに４８時間培養を続けた。細胞数の測定にはｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ（同仁化学）を用い、取扱説明書に従って行った。その結果、ＩＣ５０＝７．７５μＭの濃度で癌細胞の増殖を阻害した。
【産業上の利用可能性】
【００３５】
本発明の式（１）で表される化合物は、ＨｅＬａ細胞に対して細胞毒性を示すことから、抗癌剤として有用である。
【図１】
2017036240.tif 000009
【図２】
2017036240.tif 000010
【図３】
2017036240.tif 000011
【図４】
2017036240.tif 000012
【図５】
2017036240.tif 000013
【図６】
2017036240.tif 000014