(57)【要約】【課題】とくにコラーゲンにおいて糖化反応により生じる架橋を分解し得るコラーゲン架橋分解剤であって、安全に摂取することのできる植物由来のコラーゲン架橋分解剤を提供することを課題とする。【解決手段】上記課題を解決するために、サンザシ、ドクダミ、サラシア、ブルーベリー、トチュウ、菊花、キダチアロエ、ゴーヤ、トウガラシの抽出物のうちのいずれか一以上を有効成分として含有するコラーゲン架橋分解剤及び当該コラーゲン架橋分解剤を含有する食品等を提供する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
サンザシ、ドクダミ、サラシア、ブルーベリー、トチュウ、菊花、キダチアロエ、ゴーヤ、トウガラシの抽出物のうちのいずれか一以上を有効成分として含有するコラーゲン架橋分解剤。
【請求項２】
請求項１に記載のコラーゲン架橋分解剤を含有する食品。
【請求項３】
請求項１に記載のコラーゲン架橋分解剤を含有する食品添加物。
【請求項４】
請求項１に記載のコラーゲン架橋分解剤を含有する医薬品。
【請求項５】
請求項１に記載のコラーゲン架橋分解剤を含有する医薬部外品。
【請求項６】
請求項１に記載のコラーゲン架橋分解剤を含有する化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛋白質の糖化によりもたらされるコラーゲン架橋を分解するコラーゲン架橋分解剤及び、当該コラーゲン架橋分解剤を含有する食品などに関する。
【背景技術】
【０００２】
蛋白質糖化反応は、Ｌ．Ｃ．Ｍａｉｌｌａｒｄがアミノ酸と還元糖を加熱すると褐色の色素が生成することを発見したことからメイラード反応として知られるようになった。現在では、メイラード反応は蛋白質糖化反応の一態様と位置付けられている。近年、この蛋白質糖化反応が老化現象、認知症、癌、高血圧、シミなどの皮膚疾患、動脈硬化症などにも関与していることが明らかになっている。
【０００３】
また、糖化反応による最終生成物であるＡＧＥｓ（ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ）は、とくに糖尿病患者において血液中に蓄積され神経障害や網膜症などの合併症をもたらすとされている。このように、ＡＧＥｓの生成に至る蛋白質の糖化反応は人体に好ましくない影響を及ぼすものであり糖化反応の阻害などついて様々な研究がなされている。
【０００４】
図１は、蛋白質の糖化反応によるＡＧＥｓの生成過程の概略を示す図である。蛋白質とグルコースの反応に端を発し、反応の進行に応じて生成される「糖化反応中間体」と「ＡＧＥｓ（糖化反応最終生成物）」の一例を示している。
【０００５】
ここで、ＡＧＥｓの生成に至る中間体である糖化反応中間体として例示したグリオキサール（ＧＯ）、メチルグリオキサール（ＭＧ）、３−デオキシグルコソン（３ＤＧ）は、いずれも分子内に２つのカルボニル基（ｃ＝０）を有するα−ジカルボニル化合物である。
【０００６】
このα−ジカルボニル化合物は反応性に富んでおり蛋白質間に架橋を形成し、例えば生体内のコラーゲン分子間で架橋を形成する。正常な状態の皮膚や骨は、酵素の作用を介して遺伝的に規定された部位に秩序立って形成される架橋（生理的架橋）により皮膚や骨の適正な柔軟性や強度を維持しているが、α−ジカルボニル化合物による無秩序で余分に形成される架橋は皮膚の硬化や骨の脆弱化をもたらす。
【０００７】
このようなα−ジカルボニル化合物を分解することは、ＡＧＥｓの生成及び蓄積を抑制するとともに、糖化反応によりコラーゲンなどに形成された無秩序で余分な架橋を分解し、皮膚の硬化や骨の脆弱化などを回復させるために有効であると考えられる。
【０００８】
α−ジカルボニル化合物を分解することのできる物質として、Ｎ−フェナシルチアゾリウムブロミド（ｐｈｅｎａｃｙｌ−ｔｈｉａｚｏｌｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ； ＰＴＢ）が知られているが、副作用などの問題があると言われている。安全に摂取するという観点から、天然物由来であってα−ジカルボニル化合物を分解することのできる物質が求められるところだが、そのような物質としてユズなどの柑橘類が報告されている（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特許第４３１５６５０号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、とくにコラーゲンにおいて糖化反応により生じる架橋を分解し得るコラーゲン架橋分解剤であって、安全に摂取することのできる植物由来のコラーゲン架橋分解剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、サンザシ、ドクダミ、サラシア、ブルーベリー、トチュウ、菊花、キダチアロエ、ゴーヤ、トウガラシの抽出物のうちのいずれか一以上を有効成分として含有するコラーゲン架橋分解剤を提供する。また、当該コラーゲン架橋分解剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品及び化粧品を提供する。
【発明の効果】
【００１２】
本発明により、とくにコラーゲンにおいて糖化反応により生じる架橋を分解することのできるコラーゲン架橋分解剤などを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】蛋白質の糖化反応によるＡＧＥｓの生成過程の概略を示す図
【図２】試験の概念を示す図
【図３】試験結果を示す図
【発明を実施するための形態】
【００１４】
以下、本発明の実施の形態について説明する。なお、本発明は、これらの実施形態に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
＜実施形態＞
＜概要＞
【００１５】
本実施形態のコラーゲン架橋分解剤は、サンザシ、ドクダミ、サラシア、ブルーベリー、トチュウ、菊花、キダチアロエ、ゴーヤ、トウガラシの抽出物のうちのいずれか一以上を有効成分として含有するものである。
＜構成＞
【００１６】
本実施形態において、「コラーゲン架橋分解剤」とは、糖化反応によりコラーゲンに生じる３ＤＧなどのα−ジカルボニル化合物を分解することにより、３ＤＧなどにより形成される架橋を分解することができる剤を意味する。
【００１７】
「サンザシ（Ｃｒａｔａｅｇｕｓ  ｃｕｎｅａｔａ）」は、バラ科サンザシ属の植物である。乾燥させたサンザシの果実を煮出してサンザシ茶として飲まれている。
【００１８】
「ドクダミ（Ｈｏｕｔｔｕｙｎｉａ  ｃｏｒｄａｔａ）」は、ドクダミ科ドクダミ属の植物である。葉や茎を乾燥させて茶外茶としたり生薬として利用される。なお、「茶外茶」とは、チャノキの葉や茎などを原料とする「茶」に対して、チャノキ以外の植物の葉、茎、根などを原料とし、水や湯を注いで喫飲することができる飲料を意味する。
【００１９】
「サラシア（Ｓａｌａｃｉａ  ｒｅｔｉｃｕｌａｔｅ）」は、ニシキギ科サラシア属の植物である。乾燥させた地下茎ないし根を煮出してサラシア茶として飲まれている。
【００２０】
「ブルーベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｃｏｒｙｍｂｏｓｕｍ）」は、ツツジ科スノキ属の植物である。葉を煮出して飲まれている。
【００２１】
「トチュウ（Ｅｕｃｏｍｍｉａ  ｕｌｍｏｉｄｅｓ）」は、トチュウ科トチュウ属の植物である。葉を煮出して杜仲茶として飲まれている。
【００２２】
「菊花」は、キク科キク属の植物であり食用菊として用いられるＣｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ  ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ  Ｒａｍａｔ．などの頭花である。これを煮出して菊花茶として飲まれている。
【００２３】
「キダチアロエ（Ａｌｏｅ  ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ）」は、ユリ科アロエ属の植物である。刻んで乾燥させた葉を煮出してアロエ茶として飲まれている。
【００２４】
「ゴーヤ（Ｍｏｍｏｒｄｉｃａ  ｃｈａｒａｎｔｉａ  ｖａｒ．  ｐａｖｅｌ）」は、ウリ科ツルレイシ属の植物である。わたを除去した果実を乾燥させたものを煮出して飲まれている。
【００２５】
「トウガラシ（Ｃａｐｓｉｃｕｍ）」は、ナス科トウガラシ属の植物である。果実を香辛料として食用されるほか湯や茶で煮出して飲用されている。
【００２６】
上述した各植物の抽出物を得るための溶媒は、抽出物を含有する製品の種類や態様に応じて定法に則して適宜選択することができ、例えば、精製水、エタノール、メタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、プロピレングリコールなどの種々の溶媒を用いることができる。茶外茶のように各植物を煎じて飲用とする場合には水を用いて抽出することが簡便で好ましい。また、液体として抽出物を得た後にさらに乾燥等を施し粉体や粒体として得てもよい。
【００２７】
上記の各植物の抽出物を有効成分とする本実施形態のコラーゲン架橋分解剤は、さらに既知の方法を用いることにより、当該コラーゲン架橋分解剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして提供することが可能である。
【００２８】
例えば、医薬品とする場合には、本実施形態のコラーゲン架橋分解剤を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて製造することができる。また、食品とする場合には、各植物を適宜乾燥や破砕等を湯で煮出すことで提供できる。また、医薬品のようにカプセルや錠剤のような形態で提供してもよいし、他の飲料、調味料、菓子等の各種の食品にコラーゲン架橋分解剤を添加した態様で提供することもできる。
【００２９】
また、美容液、クリーム、ローションなどの化粧品とすることもできる。例えば、美容液とする場合には、本実施形態のコラーゲン架橋分解剤の他、水、コメヌカ油、ペンチレングリコール、グリセリン、スクワラン、パルミチン酸セチル、ダイマージリノール酸などを主成分とし、ヒアルロン酸Ｎａ、水添ナタネ油アルコール、カルボマー、キサンタンガム、水酸化Ｋ、ジメチコン、ポリソルベート−６０、ステアリン酸グリセリル、水添ヒマシ油、フェノキシエタノール、尿素、アルギニン、アルブチン、クエン酸などを添加剤とする。そして、各成分を水溶性原料・油溶性原料に分けて溶解してから、それらを加熱して混合・乳化する。これを冷却しながらエキスなどの添加物を配合し、さらに低温になったところで精油や香料などの揮発性の高いものを添加する。その後、所定の安全性の検査（菌、ｐＨ、温度安定性、粘度等）を行い、瓶などに充填して製品として提供することができる。
＜試験＞
【００３０】
本試験は、上述した各植物を水を用いて抽出した抽出物をサンプルとして、コラーゲン架橋分解活性を、α−ジカルボニル化合物分解活性を有することが既知のＮ−フェナシルチアゾリウムブロミド（以下、ＰＴＢ）に対する相対値として示す。具体的には、コラーゲンコートしたウェルにＡＧＥ化したウシ血清アルブミン（以下、ＡＧＥ−ＢＳＡ）を添加しコラーゲンとＡＧＥを架橋反応させた後サンプルを添加する。所定時間経過後ウェルに残存したＡＧＥ−ＢＳＡをＥＬＩＳＡ法で測定した。
【００３１】
本試験のサンプルとして上述のサンザシ、ドクダミ、サラシア、ブルーベリー、トチュウ、菊花、キダチアロエ、ゴーヤ、トウガラシを用いた。また各サンプルは、株式会社ひかわにより煎じて飲用する茶外茶の茶葉として製造されたものを用いた。サンプル調製及び試験方法、結果などについて以下に詳述する。
（１）サンプルの調製
【００３２】
８０℃に加熱した蒸留水４０ｍＬ中に各茶葉２ｇを加えて、８０℃に設定したウォーターバス中で１時間抽出した。
（２）ＡＧＥ−ＢＳＡの調製
【００３３】
コラーゲンとの蛋白架橋材としてＡＧＥ−ＢＳＡを調製した。すなわち０．１ｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）１０ｍＬ、２ｍｏｌ／Ｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ２ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）  ４ｍＬ、蒸留水４ｍＬを混合し、６０℃で４０時間反応させた。反応後のＡＧＥ−ＢＳＡ調製液はディスポーザブルカラムＰＤ−１０（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  Ｊａｐａｎ）を用いて精製し、蛋白量として１０μｇ／ｍＬに調製した。
（３）コラーゲン架橋分解活性の測定
【００３４】
コラーゲン架橋分解活性測定はＶａｓａｎらの方法を参考にした（Ｖａｓｓａｎ  Ｓ，  ｅｔ  ａｌ，  Ａｎ  ａｇｅｎｔ  ｃｌｅａｖｉｎｇ  ｇｌｕｃｏｓｅ−ｄｅｒｉｖｅｒｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．  １９９６．  Ｎａｔｕｒｅ；３８２：２７５−２７８）。図２は本試験の概念を示すものである。まず、コラーゲンコートした９６穴マイクロプレート（ＢｉｏＣｏａｔ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ｉ  ９６−ｗｅｌｌ  ｐｌａｔｅ，  コーニングインターナショナル）の各ウェルに、調製したＡＧＥ−ＢＳＡを添加し、３７℃で４時間反応させた。
【００３５】
その後、各ウェルに０．０５％  ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ（２０）  ｓｏｒｂｉｔａｎ  ｍｏｎｏｌａｕｒａｔｅ（Ｔｗｅｅｎ２０）／ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒｅｄ  ｓａｌｉｎｅ（ＰＢＳ）（−）を添加し３分間振とうし、ウェル内の溶液を全て廃棄する操作を３回繰り返した（ウェル洗浄）（図２（ａ））。
【００３６】
次いでウェルには試料を１００μＬ添加し、３７℃で１８時間反応させた（図２（ｂ））。その後、ウェル洗浄し、一次抗体 （ａｎｔｉ−ａｌｕｂｍｉｎ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ  ｒａｂｂｉｔ−ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ、１／２００００希釈）（Ａｎｔｉ−Ａｌｕｂｍｉｎ  Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ｒａｂｂｉｔ−Ｐｏｌｙ、ＲＯＣＫＬＡＮＤ）を１００μｇ／ｗｅｌｌで添加して、室温で３０分間反応させた。
【００３７】
さらにウェル洗浄後、二次抗体（ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ［ＨＲＰ]  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，１／３０００希釈］（Ｇｏａｔ  ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ  ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，Ｂｉｏ−Ｒａｄ）を１００μｇ／ｗｅｌｌ添加して、３０分間室温で反応させた。
【００３８】
反応後はウェル洗浄の後、発色基質としてＴＭＢ（３，３'，５，５'―ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）Ｏｎｅ  Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ  ＨＲＰ（ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ  ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ）Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ）を１００μｇ／ｗｅｌｌと１．５ｍｇ／ｍＬ  ｐｏｌｙｅｔｈｉｌｅｎｅ  ｇｌｙｃｏｌ  ６０００（ＰＥＧ６０００）を５０μＬ／ｗｅｌｌで添加し、遮光して２０分間反応させた（図２（ｃ））。
【００３９】
反応後、各ウェルに反応停止液（Ｓｔｏｐ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）として１  Ｎ  ＨＣｌを１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、４５０ｎｍ（主波長）／６３０ｎｍ（副波長）の吸光度をマイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）で測定した。
【００４０】
各ウェル内のＡＧＥ−ＢＳＡ量は試料を添加せずに反応させたＡＧＥ−ＢＳＡ検量線から算出した。コラーゲン架橋分解率は次式を用いて求めた。また、試料に代えて１０ｍｍｏｌ／Ｌ  ＰＴＢを添加した際のコラーゲン架橋分解率を１００として相対値を算出した。
コラーゲン架橋分解率（％）＝
｛（添加ＡＧＥ−ＢＳＡ量−残存ＡＧＥ−ＢＳＡ量）／添加ＡＧＥ−ＢＳＡ量｝×１００
（４）結果
【００４１】
図３は、上記試験の結果を示すものである。図示するように、各サンプルの抽出液はいずれも既知のコラーゲン架橋分解剤であるＰＴＢに対しても優れたコラーゲン架橋分解活性を示している。
＜効果＞
【００４２】
とくにコラーゲンにおいて糖化反応により生じる架橋を分解することのできるコラーゲン架橋分解剤などを提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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