(57)【要約】【課題】生体中のＯＰＨ（酸化蛋白質）の活性を増強させることは、酸化蛋白質や糖化蛋白質、いわゆる老化蛋白質などの分解を促進し、老化や疾患を予防・治療できる可能性がある。そこで、ＯＰＨの活性を増強するＯＰＨ活性増強剤を提供することを課題とする。【解決手段】上記課題を解決するために、メトキシフラボノイドを含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。また、フラボノイド骨格のＡ環又は／及びＢ環にメトキシ基を有するメトキシフラボノイド含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。また、前記ＯＰＨ活性増強剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品及び化粧品を提供する。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
メトキシフラボノイドを含有するＯＰＨ活性増強剤。
【請求項２】
前記メトキシフラボノイドは、フラボノイド骨格のＡ環又は／及びＢ環にメトキシ基を有するものである請求項１に記載のＯＰＨ活性増強剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有する医薬品。
【請求項４】
請求項１又は２に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有する医薬部外品。
【請求項５】
請求項１又は２に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有する食品。
【請求項６】
請求項１又は２に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有する食品添加物。
【請求項７】
請求項１又は２に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有する化粧品
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、酸化蛋白質を分解する生体内酵素である酸化蛋白質分解酵素（oxidized protein hydrolase：ＯＰＨ）の活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤、及び、当該ＯＰＨ活性増強剤を含有する飲食品や医薬品などに関する。
【背景技術】
【０００２】
ＯＰＨは、蛋白のＮ末端アシル化アミノ酸を遊離するセリンプロテアーゼの一種で、アシルアミノ酸遊離酵素（acylamino-Acid Releasing Enzyme：AARE）、アシル化ペプチド分解酵素（acylpeptide hydrolase：APH）などとも言われている。また、ＯＰＨは、アシル化だけでなく、ホルミル化（Formyl）、アセチル化（Acetyl）、ブチル化（Butyl）、プロピル化（Propyl）された蛋白質のＮ末端アミノ酸に対しても作用する。
【０００３】
ＯＰＨはブタ肝臓、ラット脳、ヒト血液、角層などの生体組織に広く存在している。ＯＰＨは酸化蛋白質や糖化蛋白質を優先的に分解するとともにプロテアソームと協働して老化蛋白質を分解すること、アルツハイマー病の原因であるアミロイドβ蛋白質を減少させることが報告されている。またＯＰＨがＡＧＥｓ（終末糖化産物）を分解することも確認されている。これらのことから生体中のＯＰＨの活性を増強させることは、老化蛋白質の分解を促進し、老化や疾患を予防・治療できる可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開番号ＷＯ２０１１／００４７３３
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上記の事情を鑑み、本発明は、ＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、メトキシフラボノイドを含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。また、フラボノイド骨格のＡ環又は／及びＢ環にメトキシ基を有するメトキシフラボノイド含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。また、前記ＯＰＨ活性増強剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品及び化粧品を提供する。
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、酸化蛋白質を分解する生体内酵素であるＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】フラボノイドの基本骨格を示す図
【図２】試験に用いた各試料についての構造などを示す図
【図３】各試料のＯＰＨ活性増強作用を示す図
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
＜実施例＞
＜構成＞
【００１０】
本実施例に係るＯＰＨ活性増強剤は、メトキシフラボノイドを有効成分として含有するＯＰＨ活性増強剤である。「ＯＰＨ活性増強剤」とは、酸化蛋白質の分解酵素であるＯＰＨの酸化蛋白質分解活性（以下、単にＯＰＨ活性）を増強させる剤を意味する。
【００１１】
「メトキシフラボノイド」とは、メトキシ基（構造式がCH3O-と表わされる１価の官能基）を有するフラボノイドである。図１は、フラボノイドの基本骨格を示す図である。フラボノイドとは、ベンゼン環２個（図１におけるＡ環とＢ環）を３個の炭素原子でつないだジフェニルプロパン構造を有するフェニル化合物群の総称である。
【００１２】
フラボノイドは、Ｃ環の構造の差異により、フラボン類、フラボノール類、イソフラボン類などに分類される。本明細書におけるメトキシフラボノイドは、メトキシ基を有するフラボノイドであればよくフラボノイドの分類まで限定するものではない。メトキシフラボノイドには、例えば、フラボン類のトリシンやノビレチンなどがある。
【００１３】
本実施例におけるＯＰＨ活性増強剤は、さらに既知の方法を用いることにより、当該ＯＰＨ活性増強剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして提供することが可能である。
【００１４】
例えば、医薬品とする場合には、本実施例のＯＰＨ活性増強剤を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて製造することができる。また、食品とする場合には、各植物を適宜乾燥や破砕等を湯で煮出すことで提供できる。また、医薬品のようにカプセルや錠剤のような形態で提供してもよいし、他の飲料、調味料、菓子等の各種の食品にＯＰＨ活性増強剤を添加した態様で提供することもできる。
【００１５】
また、美容液、クリーム、ローションなどの化粧品とすることもできる。例えば、美容液とする場合には、本実施例のＯＰＨ活性増強剤の他、水、コメヌカ油、ペンチレングリコール、グリセリン、スクワラン、パルミチン酸セチル、ダイマージリノール酸などを主成分とし、ヒアルロン酸Ｎａ、水添ナタネ油アルコール、カルボマー、キサンタンガム、水酸化カリウム、ジメチコン、ポリソルベート−６０、ステアリン酸グリセリル、水添ヒマシ油、フェノキシエタノール、尿素、アルギニン、アルブチン、クエン酸などを添加剤とする。そして、各成分を水溶性原料・油溶性原料に分けて溶解してから、それらを加熱して混合・乳化する。これを冷却しながらエキスなどの添加物を配合し、さらに低温になったところで精油や香料などの揮発性の高いものを添加する。その後、所定の安全性の検査（菌、ｐＨ、温度安定性、粘度等）を行い、瓶などに充填して製品として提供することができる。
＜試験＞
【００１６】
本試験は、ＯＰＨとその反応基質であるN-Acetyl-L-alanine p-nitro-anilide（AAPA）との反応系に試料溶液を添加し、ＯＰＨの酵素反応への影響を評価するものである。
【００１７】
（試料）
本試験に用いた試料は、以下の通りである。
メトキシフラボン類として
（試料１）4',5,7-trihydroxy-3',5'-dimethoxyflavone (tricin：トリシン)
（試料２）3,5,7,3',4'-pentamethoxy flavone（3,5,7,3',4'-ペンタメトキシフラボン）
（試料３）3,5,7,4'-tetramethoxy flavone（3,5,7,4'-テトラメトキシフラボン）
（試料４）3,5,7-trimethoxy flavone（3,5,7-トリメトキシフラボン）
（試料５）5,7,4'-trimethoxy flavone（5,7,4'-トリメトキシフラボン）
（試料６）5,7-dimethoxy flavone（5,7-ジメトキシフラボン）
（試料７）5,6,7,3',4'-pentamethoxy flavone (sinensetin：シネンセチン)
（試料８）5,6,7,8,3',4'-hexamethoxy flavone (nobiletin：ノビレチン)
（試料９）5,6,7,8,4'-pentamethoxy flavone (tangeretin：タンゲレチン)
【００１８】
フラボン類として、（試料１０）ルテオリン-7-O-グルコシド、（試料１１）アストラガリン、（試料１２）ルチン、（試料１３）イソクェルシトリンを用いた。また、フラバン-3-オール類（フラバノール類）として、（試料１４）エピガロカテキンガレート、（試料１５）(+)カテキンを用いた。図２は上述した１５の各試料についての構造などを示す図である。
【００１９】
（方法）
ＯＰＨとしてacylamino-acid releasing enzyme （AARE）、ＯＰＨの反応基質としてＮ-acetyl-L-alaninep-nitroanilide（AAPA） 溶液を使用した。測定にはＯＰＨを0.01U/mL、0.005U/mL、0.001U/mLに調製して使用した。９６ウェルマイクロプレートの各ｗｅｌｌにＯＰＨ、ＡＡＰＡ、試料溶液を混合添加し、３７℃に設定したインキュベーター内で４時間反応させた反応液の４０５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーで測定した。
【００２０】
ＯＰＨの活性は１時間当たりの吸光度変化量（反応速度）を求めた。同時にｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｒｅｆ）として試料無添加時の反応速度を求め、下記の式１に従ってＲｅｆの反応速度を１００％とした時の活性増強作用を算出した。ＯＰＨ活性増強作用ネガティブコントロールにはエピガロカテキンガレート（EGCg）を使用した。
（式１）ＯＰＨ活性増強作用（％）＝（試料のＯＰＨ反応速度/ＲｅｆのＯＰＨ反応速度) ×100
【００２１】
（結果）
各試料のＯＰＨ活性増強作用を図３に示す。なお、結合する官能基は、以下の通りである。Ｈ：水素、ＯＨ：ヒドロキシ（hydroxy）基、ＭｅＯ：メトキシ（methoxy）基、Glc：グリコシル（glycosyl）基、Gal：ガレート（gallate）基。
【００２２】
図示するように、ＯＰＨ活性増強作用はメトキシフラボン類にみられ、フラボン類、フラバン-3-オール類にはみられなかった。メトキシフラボン類のＯＰＨ活性増強作用は、メトキシ基がＢ環よりもＡ−Ｃ環に結合していると活性増強作用が強かった。またＯＰＨ活性増強作用はＡ−Ｃ環におけるメトキシ基の位置が３位＜５位・７位＜６位・８位の順に影響が大きかった。
【００２３】
以上の結果から、フラボノイドによるＯＰＨ活性増強作用にはメトキシフラボンが有用であり、特にメトキシ基がＡ−Ｃ環に結合していること、さらにメトキシ基がＡ−Ｃ環の５位・７位および６位・８位へ結合していることが有用であった。
【００２４】
また、上記結果より、メトキシ基を有するフラボン類以外のフラボノイドについてもＯＰＨ活性増強作用が期待できる。
＜効果＞
【００２５】
メトキシフラボノイドの一つであるメトキシフラボン類には優れたＯＰＨ活性増強作用を有することが認められた。酸化蛋白質を分解する生体内酵素であるＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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