(57)【要約】【課題】単純性脂肪肝と非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）を非侵襲的に区別することを課題とする。【解決手段】下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を被験動物に投与し、該被検動物の肝臓におけるイリジウム錯体の発光強度を測定する。該発光強度のレベルが、健常動物の発光強度と比較して高い場合、該被験動物がNASHを発症していると判定する。2017124977.tif 000014 【選択図】図１
2017124977.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を含有する非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）診断薬。
【化１】
2017124977.tif 000010
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
【請求項２】
前記Ｒが水酸基である、請求項１に記載の診断薬。
【請求項３】
前記ｎが２である、請求項１または２に記載の診断薬。
【請求項４】
非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）を判定するための方法であって、
(a) 下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与された被験動物の肝臓におけるイリジウム錯体の発光強度を測定するステップ、及び
(b)該発光強度のレベルが、健常動物の発光強度と比較して高い場合、該被験動物がNASH
を発症していると判定するステップ
を備える、方法。
【化２】
2017124977.tif 000011
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
【請求項５】
非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）治療候補薬を投与されたNASHモデル動物に、下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与し、該NASHモデル動物の肝臓における該イリジウム錯体の発光強度を測定し、該発光強度が、NASH治療候補薬を投与されていないNASHモデル動物の発光強度と比較して低い場合、該NASH治療候補薬はNASH治療薬になり得ると判定するステップを備える、NASH治療薬のスクリーニング方法。
【化３】
2017124977.tif 000012
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
【請求項６】
下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与された被検動物の肝臓における該イリジウム錯体の発光強度を、経時的に測定し、該発光強度が低下した場合、該NASHの病態は改善したと判定するステップを備える、NASHの病態改善度評価方法。
【化４】
2017124977.tif 000013
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、イリジウム錯体を含有する非アルコール性脂肪性肝炎（NASH: non-alcoholic steatohepatitis）診断薬に関する。また、本発明は、イリジウム錯体を用いるNASHを
判定するための方法、NASH治療薬のスクリーニング方法、及びNASHの病態改善度評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪肝とは、肝臓に30%以上の脂肪蓄積が認められる疾病である。最近はアルコールを
あまり摂取しない人の脂肪肝も増え、メタボリック症候群との関係が注目されている。脂肪肝の中でも、飲酒との関係が認められないものを非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD
：non-alcoholic fatty liver disease）と呼ぶ。NAFLDは肝細胞に脂肪が沈着するのみの単純性脂肪肝と、脂肪沈着とともに炎症や線維化がおこる脂肪性肝炎に大別され、後者を非アルコール性脂肪性肝炎（NASH: non-alcoholic steatohepatitis）と呼ぶ。単純性脂
肪肝は、病態が進行することは希で病定義は少ないが、NASHへ進行すると5〜10年で5〜20%が肝硬変に進行すると言われ、欧米では肝硬変および肝がんの原因で第一位を占めるよ
うになってきている。そのため、メタボリック症候群が蔓延し始めた我が国でも、今後患者が増大するであろうと推定されている。
【０００３】
NAFLDにおける単純性脂肪肝とNASHはどちらも、病態に関する自覚症状はなく、肥満、
糖尿病、高インスリン血症などが現れた際に疾患を疑い検査するしかないのが現状である。従来の検査方法として、腹部エコー、CT（Computed Tomography）、MRI（nuclear magnetic resonance）があり、NAFLDの罹病疑念を可視化できる。しかし、それらの検査法で
は、単純性脂肪肝かNASHかの区別はつかないため、NASHの確定診断には、血液生化学検査とともに、肝生検組織診断が必須である。しかし、肝生検は、直接肝臓に太く長い針を刺して組織の一部を採取して調べるものであり、侵襲性の高さが難点であった。そのため、侵襲を伴う肝生検検査に変わる診断方法の開発が望まれていた。
【０００４】
現在NASHの治療法は確立されておらず、要因となっている肥満や糖尿病などの治療と生活習慣の改善が基本となっている。早期に治療薬の開発が望まれるが、現在、効果的な治療薬を探索するための動物評価モデルでは、マウスを実際にNAFLDやNASH状態にしたあと
、投薬し、効果があったかどうかを解剖後の肝臓所見で判断することしかできない。そのため、大規模な薬物探索スクリーニングとして活用するために、非破壊判別方法を開発する必要があった。
【０００５】
一方、病気の超早期診断・治療の実現に向けて、病態を非侵襲的に検出し、その分布を画像化して生体情報を得る「分子イメージング技術」の開発が世界的に推進されている。本発明者らも、イリジウム錯体の改良体BTPHSA等を作製してマウス腫瘍のイメージングを試み、マウス肝臓裏に移植した深部腫瘍のイメージングに成功している（特許文献１〜２、非特許文献１）。なお、これまでにイリジウム錯体は、Good Laboratory Practice (GLP) 基準の安全性検査は行なわれていないが、BTPHSA投与マウスは非投与マウスと同様に
異常を示すことなく生存しており、安全性は問題がないと考えられる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１０−０４４０５９号公報
【特許文献２】特開２０１０−０７０４９４号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Zhang, S., et al.: Phosphorescent Light-emitting Iridium Complexes Serve as a Hypoxia-sensing Probe for Tumor Imaging in Living Animals.  Cancer Research, 70, 4490-4498, 2010
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、非侵襲的に単純性脂肪肝とNASHを区別することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、イリジウム錯体の生体内代謝と排出経路の解析データから、血中に投与されたイリジウム錯体は肝臓に集積後、胆汁を経て便から排出されることを確認している。そこで本発明者らは、肝臓疾患をイリジウム錯体でイメージングできると考え、鋭意検討したところ、NASHはイリジウム錯体によるイメージングで高い発光強度を示すことを知見し、本発明を完成させた。
【００１０】
即ち、本発明は以下を要旨とする。
［１］下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を含有する非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）診断薬。
【化１】
2017124977.tif 000003
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
［２］前記Ｒが水酸基である、［１］に記載の診断薬。
［３］前記ｎが２である、［１］または［２］に記載の診断薬。
［４］非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）を判定するための方法であって、
(a) 下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与された被験動物の肝臓におけるイリジウム錯体の発光強度を測定するステップ、及び
(b)該発光強度のレベルが、健常動物の発光強度と比較して高い場合、該被験動物がNASH
を発症していると判定するステップ
を備える、方法。
【化２】
2017124977.tif 000004
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
［５］非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）治療候補薬を投与されたNASHモデル動物に、下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与し、該NASHモデル動物の肝臓における該イリジウム錯体の発光強度を測定し、該発光強度が、NASH治療候補薬を投与されていないNASHモデル動物の発光強度と比較して低い場合、該NASH治療候補薬はNASH治療薬になり得ると判定するステップを備える、NASH治療薬のスクリーニング方法。
【化３】
2017124977.tif 000005
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
［６］下記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与された被検動物の肝臓における該イリジウム錯体の発光強度を、経時的に測定し、該発光強度が低下した場合、該NASHの病態は改善したと判定するステップを備える、NASHの病態改善度評価方法。
【化４】
2017124977.tif 000006
（式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプ
チド残基を表す）
【発明の効果】
【００１１】
本発明におけるイリジウム錯体は、NAFLDにおける単純性脂肪肝とNASHの判別を、非侵
襲的・非破壊的に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】NASH誘発マウスにおけるイリジウム錯体BTPHSAによる生体肝臓のイメージング写真。（ａ）AおよびBは通常食で飼育したBTPHSA投与マウス、CはMCD diet（NASH誘発食）で４週間飼育しNASHを誘発したBTPHSA投与マウスを示す。点線の丸で囲まれた部分はBTPHSAの発光が見られた部分を示す。（ｂ）NASHマウスとNASHから回復したマウスを比較したところ、イリジウム錯体BTPHSAは回復マウスの肝臓で発光しないことを示すイメージング写真。WTは通常食で飼育したBTPHSA非投与マウス。A,D及びEはBTPHSAを投与したマウスであり、Aは通常食で飼育したマウス、DはMCD dietでNASHを誘発した後、通常食に変更して４週間飼育したマウス、EはMCD dietで飼育を続けたマウスを示す。（ｃ）単純性脂肪肝のマウスでは、肝臓でイリジウム錯体BTPHSAは発光しないことを示すイメージング写真。A,F及びCはBTPHSAを投与したマウスであり、Aは通常食で飼育したマウス、FはQuick fat dietで４週間飼育し、単純性脂肪肝を誘発したマウス、CはMCD dietで４週間飼育しNASHを誘発したマウスを示す。
【図２】マウス肝臓のヘマトキシリン・エオジン染色画像（写真）。Aは通常食マウス、BはNASH誘発後に通常食に戻し、NASHから回復したマウス、CはNASH誘発マウスを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
＜イリジウム錯体＞
本発明におけるイリジウム錯体は、下記式（Ｉ）で表される。
【００１４】
【化５】
2017124977.tif 000007
【００１５】
式（I）において、ｎは１〜５の自然数を表し、１〜３が好ましく、２が特に好ましい
。
【００１６】
Ｒは水酸基、アミノ酸残基またはペプチド残基を表し、水酸基が好ましい。当該アミノ酸残基またはペプチド残基としては、側鎖に水酸基、カルボキシル基またはアミノ基を有するアミノ酸の残基または該アミノ酸からなるペプチドの残基であることが好ましい。なお、「アミノ酸残基およびペプチド残基」とは、アミノ酸またはペプチドがそのアミノ基を介してアミド結合したときの残基をいう。
【００１７】
側鎖に水酸基を有するアミノ酸としては、チロシン、セリン、スレオニンが挙げられ、チロシンがより好ましい。側鎖にカルボキシル基を有するアミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸が挙げられ、側鎖にアミノ基を有するアミノ酸としてはリシンおよび
アルギニンが挙げられる。なお、アミノ酸はL体でもD体でもよく、非天然のアミノ酸でもよい。ペプチド残基としては、上記アミノ酸の１種又は複数種からなるペプチド残基が挙げられ、その長さは好ましくは２〜１０、より好ましくは２〜５である。より具体的には、Ｒがアスパラギン酸残基またはアスパラギン酸ジペプチドの残基であるものが好ましい。
【００１８】
本発明におけるイリジウム錯体の好ましい一態様であるBTPHSAを、下記式（II）において示す。
【００１９】
【化６】
2017124977.tif 000008
【００２０】
本発明のイリジウム錯体は、当業者であれば、公知の方法、たとえば特許文献１及び２並びに非特許文献１の記載に基づいて合成することができる。
【００２１】
＜非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）診断薬＞
肝細胞に中性脂肪が沈着して肝障害をきたす疾患を、脂肪性肝疾患という。この脂肪性肝疾患には、アルコール性と非アルコール性があり、患者が明らかな飲酒歴を有さない場合（例えば、１日のアルコール摂取量が２０ｇ以下）は非アルコール性とされ、非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD：non-alcoholic fatty liver disease）と呼ばれる。NAFLD
は肝細胞に脂肪が沈着するのみの単純性脂肪肝と、脂肪沈着とともに壊死、炎症又は線維化を伴う脂肪性肝炎に大別され、後者を非アルコール性脂肪性肝炎（NASH: non-alcoholic steatohepatitis）と呼ぶ。本発明は、このNASHを診断するものである。
【００２２】
本発明におけるNASH診断薬は、上記式（I）で表されるイリジウム錯体を含有する。当
該イリジウム錯体は、健常者や単純性脂肪肝の肝臓には集積しないが、NASHを患っている肝臓には集積して赤色のりん光を発する性質を有する。これにより、これまで鑑別が難しかった単純性脂肪肝とNASHの区別が可能となる。
【００２３】
本発明における診断薬は、上記式（I）で表されるイリジウム錯体を含有している限り
、投与対象及び投与態様に合わせて、医薬的に許容可能ないかなる添加物、たとえば、ｐＨ調整剤、安定化剤、防腐剤、可溶化剤等を含めてもよい。上記イリジウム錯体を含む診断薬は、当該診断薬と共に使用する他の試薬や、NASHを診断可能な他の診断薬等を含めてキットとしたものも含む。
【００２４】
＜NASHを判定するための方法＞
本発明におけるNASHを判定するための方法は、(a)上記式（Ｉ）で表されるイリジウム
錯体を投与された被験動物の肝臓におけるイリジウム錯体の発光強度を測定するステップ、及び、(b)該発光強度のレベルが、健常動物の発光強度と比較して高い場合、該被験動
物がNASHを発症していると判定するステップを備える。
【００２５】
上記被検動物には、NASHを発症している動物、NASHが疑われる動物、及び、健康診断を
目的とする健康な動物も含まれ得る。すなわち、NASHの有無を判定したい動物であればいずれのものでもよく、ヒト、マウス及びラット等のげっ歯類、サル、イヌ、ネコ、ブタ、フェレット等が挙げられる。
【００２６】
上記被検動物へのイリジウム錯体の投与は、肝臓におけるイリジウム錯体の発光が確認できる限りにおいていずれの方法でもよく、たとえば、静脈投与が挙げられる。
【００２７】
上記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体は、５００〜６００ｎｍの波長（励起波長）を照射すると赤色のりん光を発し、これは６３０〜６５０ｎｍ（検出波長）で検出可能である。よって、本発明におけるイリジウム錯体の発光強度を測定するステップは、上記励起波長を照射し、上記検出波長を検出できるような蛍光顕微鏡、蛍光測定装置、蛍光イメージング装置などを用いて行うことができる。たとえば、Ｍａｅｓｔｒｏ（住商ファーマインターナショナル株式会社）等のin vivoイメージング機器を使用することにより、当該
測定を行うことが可能である。
【００２８】
上記イリジウム錯体の肝臓における発光強度のレベルを健常動物と比較することにより、NASHの発症の有無を判定することが可能である。比較される健常動物としては、少なくとも脂肪性肝炎の症状を有さない健常動物が例示される。健常動物におけるイリジウム錯体の発光強度は、被検動物の測定時に一緒に測定してもよいし、前もって健常動物の肝臓におけるイリジウム錯体の発光強度を測定しておき、正常範囲を予め設定しておいてもよい。得られた被検動物における発光強度と健常動物における発光強度とを比較して、被検動物における発光強度が高い場合、NASHを発症していると判定される。「発光強度が高い」とは、誤差範囲を超えて高い場合、たとえば、統計学的にＰ値等で示すことができるような有意差をもって高い場合を意味する。
【００２９】
なお、当該「NASHを発症していると判定する」ステップには、医療目的で人間の病状や健康状態等の身体状態若しくは精神状態について、又は、それらに基づく処方や治療・手術計画について、判断する工程を含むものではなく、あくまで発光強度が健常動物より高い場合にNASHを発症していると自動的に振り分けるに過ぎない。
【００３０】
＜NASH治療薬のスクリーニング方法＞
本発明におけるNASH治療薬のスクリーニング方法は、NASH治療候補薬を投与されたNASHモデル動物に、上記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与し、該NASHモデル動物の肝臓における該イリジウム錯体の発光強度を測定し、該発光強度が、NASH治療候補薬を投与されていないNASHモデル動物の発光強度と比較して低い場合、該NASH治療候補薬はNASH治療薬になり得ると判定するステップを備える。
【００３１】
NASHモデル動物には、マウスやラット等のげっ歯類、サル、イヌ、ネコ、ブタ、フェレット等が挙げられ、NASHを発症している動物であればいずれのものでもよいが、ヒトは含まれない。
【００３２】
NASHモデル動物は、たとえば、NASHを引き起こすメチオニン−コリン欠乏食 （Methionine choline deficient (MCD) diets）を与えて飼育すること等により作製することがで
きるが、NASH誘発方法はこれに限定されるものではない。
【００３３】
NASHモデル動物に投与するNASH治療候補薬としては、例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチド性化合物、低分子合成化合物などが挙げられ、これらの化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合物であってもよい。また、これらの化合物を含む、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などでもよい。
その投与量、投与方法、処理時間等は、用いるモデル動物に従って適宜選択すればよい
。
【００３４】
上記NASH治療候補薬の投与期間が終了した後に、上記式（I）で表されるイリジウム錯
体を投与し、発光強度を測定する。当該測定は、上記「NASHを判定するための方法」にて記載したとおりである。
【００３５】
次に、治療候補薬が投与されたNASHモデル動物の肝臓におけるイリジウム錯体の発光強度を、NASH治療候補薬を投与されていないNASHモデル動物の発光強度（以下、「基準値」と呼ぶ」と比較する。基準値は、治療候補薬を投与する前のNASHモデル動物において予め測定しておいてもよいし、治療候補薬が投与されたNASHモデル動物の発光強度を測定するときに、一緒に測定してもよい。
【００３６】
治療候補薬が投与されたNASHモデル動物における発光強度が、基準値と比較して低い場合、該NASH治療候補薬はNASH治療薬になり得ると判定される。「発光強度が低い」とは、誤差範囲を超えて低い場合、たとえば、統計学的にＰ値等で示すことができるような有意差をもって低い場合を意味する。
【００３７】
＜NASHの病態改善度評価方法＞
本発明におけるNASHの病態改善度評価方法は、上記式（Ｉ）で表されるイリジウム錯体を投与された被検動物の肝臓における該イリジウム錯体の発光強度を、経時的に測定し、該発光強度が低下した場合、該NASHの病態は改善したと判定するステップを備える。
【００３８】
上記被検動物には、NASHを発症している動物のほか、NASHが疑われる動物等が含まれ得る。また、健康診断の意味で評価することも有効であるとの観点から、NASH病態の有無を判定したい健康な動物も含まれ得る。すなわち、NASHの有無または病態改善度を評価したい動物であれば、いずれのものでもよく、ヒトも含まれ得る。
【００３９】
上記被検動物は、NASHの治療を開始した後のものであってもよい。その場合、当該治療の前後におけるイリジウム錯体の発光強度を比較することにより、当該治療が有効であるか否かを評価することができ、最適な治療の選択に寄与する。NASHの治療は、どのような治療でもよく、外科的治療及び投薬治療の他、民間療法、食事療法及び運動療法等も含まれ得る。なお、本発明における評価方法では、医学的な治療の有無に関わらず、経過観察の意味で、同一罹患動物における経時的な発光強度の変化を比較して評価することも含まれる。
【００４０】
該被検動物に上記式（I）で表されるイリジウム錯体を投与し、該被検動物の肝臓にお
ける発光強度を測定する。当該測定は、上記「NASHを判定するための方法」にて記載したとおりである。「経時的に測定」とは、経過する時間順に測定することを意味し、経過時間は数分ごと、数時間ごと、数日ごと、数週間ごと、数か月ごと、数年ごと等のあらゆる期間が含まれ得る。
【００４１】
次に、被検動物において経時的に測定した該発光強度について、特定の２点間の強度を比較する。そして、発光強度が経時的に低下した場合、たとえば、今回の発光強度が前回のものよりも低下した場合、該NASHの病態は改善したと判定される。「発光強度が低下した」とは、誤差範囲を超えて低下した場合、たとえば、統計学的にＰ値等で示すことができるような有意差をもって低下した場合を意味する。
【実施例】
【００４２】
以下に、非限定的な例を参照して、本発明を更に説明する。
【００４３】
肝臓で脂質代謝を阻害して非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）を引き起こすメチオニン−コリン欠乏食 （Methionine choline deficient (MCD) diets）（Research Diets Inc.）、または単純性脂肪肝を誘発するQuick fat diets（日本クレア株式会社）をヌードマ
ウス:Balb/c nude (nu/nu) （日本チャールス・リバー株式会社）に餌として与えて4週間飼育し、NASHもしくは単純性脂肪肝を誘発した。
【００４４】
マウス体内の消化物は、イリジウム錯体の励起及び検出波長で自家蛍光を持つため、観察24時間前にマウスの餌を無蛍光食（CA-1アルファルファフリー；CREA Japan Inc.）に
変更し、消化器系の自家蛍光を排除した。同様に、マウス体毛もイリジウム錯体の励起及び検出波長で自家蛍光を持つため、体毛の無いヌードマウスを使用し、マウス内部のイメージング効率を高めた。
【００４５】
イリジウム錯体BTPHSA（非特許文献1参照）250nmolを、NASH誘発マウスに尾静脈から投与し、その2時間後に、in vivo イメージング機器（Maestro EX: Caliper Life Sciences；住商ファーマインターナショナル株式会社）で肝臓の発光を観察した。BTPHSAの至適励起波長は500-600nm、検出波長は635nm以上であるので、in vivo イメージング機器MAESTRO EXのフィルターセットは、励起波長：576-621nm、検出波長：＞675nmのフィルターセットで観察した。
【００４６】
イリジウム錯体BTPHSAをNASH誘発マウス及び通常食マウスに投与し、両者を比較した結果、通常食で飼育したマウス（図１(ａ)のＡ及びＢ）と比べて、MCD dietでNASHを誘発したマウス（図１(ａ)のＣ）の肝臓では、イリジウム錯体が有意に高い発光強度で発光する現象を見いだした。
【００４７】
上記NASH誘発マウスを、通常食に変更してさらに４週間飼育したところ、イリジウム錯体の肝臓での発光はみられなくなった（図1(ｂ)のＤ）。
【００４８】
一方、Quick fat dietで一か月飼育し単純性脂肪肝を誘発したマウスの肝臓では、イリジウム錯体BTPHSAの発光はみられなかった（図1(ｃ)のF）。
【００４９】
次に、上記実験で用いたNASH誘発マウスを、イリジウム錯体の発光観察後に解剖して、肝臓標本を作製してヘマトキシリン・エオジン染色をし、顕微鏡下で脂肪滴を観察して、NASH病態の誘発とその回復を検証した。その結果、NASHを誘発したマウスでは、肝臓標本に脂肪滴が観察されたが（図２Ｃの矢印）、NASH誘発マウスを通常食に変更してさらに４週間飼育したマウスの肝臓標本（図２Ｂ）では、通常食で飼育したマウス（図２Ａ）と同様に、脂肪滴はみられなかった。よって、イリジウム錯体は、非侵襲的・非破壊的にこの結果を観察できるものであることが分かった。
【００５０】
なお、イリジウム錯体BTPHSAを投与し発光する現象を見いだした後、解剖せずNASH病態が回復したマウスは、イリジウム錯体BTPHSAを投与しなかったマウスと同様に異常を示すことなく生存している。
【００５１】
また、上記実験で用いたNASH誘発マウスを、イリジウム錯体の発光観察後に解剖して、血液を採取し、血液中のヒアルロン酸値をQuantikine Hyaluronan ELISA Kit (R&D systems)を用いて測定した。その結果を表１に示す。
【００５２】
【表１】
2017124977.tif 000009
【００５３】
ヒアルロン酸は通常の脂肪肝と比較し、NASHで有意に高値を呈する。表１は、NASH誘発モデル動物におけるヒアルロン酸値が通常食マウス及びNASH回復マウスよりも高値であったことを示し、これは、イリジウム錯体での発光強度と一致するものであった。
【００５４】
以上のことから、イリジウム錯体は、健常マウス及び単純性脂肪肝マウスと比べて、NASH誘発マウスの肝臓において有意に高強度で発光することが示された。よって、イリジウム錯体は、NASHと単純性脂肪肝を区別することができる診断薬であることが分かった。また、NASHから回復したマウスの肝臓ではイリジウム錯体の発光はみられなかったことから、イリジウム錯体はNASHの経過観察にも使用できることが判明した。また、従来、投与した薬品のNASH病態に対する効果は、解剖後の肝臓所見や血液マーカー測定によって検証されていたが、イリジウム錯体BTPHSAを投与して発光を観察する方法により、非侵襲的・非破壊的にNASH病態の趨勢を判別することが可能になる。
【産業上の利用可能性】
【００５５】
NAFLDにおける単純性脂肪肝とNASHの判別を、非侵襲的・非破壊的に行うことができ、NASH病態の治療経過観察にも使用可能である。また、NASH治療薬の薬物探索スクリーニン
グとして大いに活用できる。
【図１】
2017124977.tif 000015
【図２】
2017124977.tif 000016