(57)【要約】【課題】細胞毒性を示す新規化合物を提供すること。【解決手段】沖縄県石垣島吉原にて採取された藍藻から単離した次の化学式（１）で表される新規化合物。【化１】2017036239.tif 000005【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の化学式（１）で表される化合物。
【化１】
2017036239.tif 000004
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
新規生物活性物質の発見は、生命科学や医学の分野におけるブレークスルーにつながることがある。例えば、腔腸動物イワスナギンチャク毒パリトキシンはナトリウムポンプに作用し、クロイソカイメンなど由来のオカダ酸はタンパク質脱リン酸化酵素に作用することから、生理機能解明のツールとして利用されている。クロイソカイメン由来の抗癌活性を示すハリコンドリンＢの発見は、抗癌剤エリブリンの創製へとつながった。
このように、生物活性物質の探索研究は基礎生命科学研究のみならず、臨床応用へも発展する可能性がある。中でも、海洋生物は、酸素濃度や塩濃度、温度や圧力、日照などの生息条件が陸上と全く異なることから、陸上生物には見られない特異な構造や機能を持つ二次代謝産物を生産しており、有用生物活性物質の探索源として今なお注目されている。本発明者らも、近年、渦鞭毛藻Ａｍｐｈｉｄｉｎｉｕｍ  ｓｐ．由来のカルシウムイオンチャネル阻害活性物質Ａｍｄｉｇｅｎｏｌ類（非特許文献１，２）やシアノバクテリアＬｅｐｔｏｌｙｎｇｂｙａ  ｓｐ．由来の脂肪細胞分化阻害活性物質Ｙｏｓｈｉｎｏｎｅ  Ａ（非特許文献３）などの新規生物活性物質の単離・構造解析・生物活性評価について報告している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Ｉｎｕｚｕｋａ，Ｔ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｙ．，Ｙａｍａｄａ，Ｋ．，Ｕｅｍｕｒａ，  Ｄ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１２，５３，２３９−２４２
【非特許文献２】Ｉｎｕｚｕｋａ，Ｔ．，Ｙａｍａｄａ，Ｋ．，Ｕｅｍｕｒａ，Ｄ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１４，５５，６３１９−６３２３
【非特許文献３】Ｉｎｕｚｕｋａ，Ｔ．，Ｙａｍａｍｏｔｏ，Ｋ．，Ｉｗａｓａｋｉ，Ａ．，Ｏｈｎｏ，  Ｏ．，Ｓｕｅｎａｇａ，Ｋ．，Ｋａｗａｚｏｅ，Ｙ．，Ｕｅｍｕｒａ，Ｄ．  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ２０１４，５５，６７１１−６７１４
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は細胞毒性を示し、抗癌剤としての利用が期待される新規化合物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、沖縄県石垣島で採集した藍藻から分離した下記化学式（１）で表される化合物が、ＨｅＬａ細胞に対して細胞毒性を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は下記化学式（１）
【化１】
2017036239.tif 000002
で表される化合物に関するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、細胞毒性を示す化学式（１）で表される化合物を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【０００８】
【図１】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の分画・精製過程を示す図である。
【図２】本発明に係る化学式（１）で表される化合物の分画・精製過程を示す図である。
【図３】本発明に係る化学式（１）で表される１Ｈ−ＮＭＲのチャートを示す図である。
【図４】本発明に係る化学式（１）で表される１３Ｃ−ＮＭＲのチャートを示す図である。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明の実施形態について詳述する。
本発明に係る化学式（１）で表される化合物は、藍藻から抽出し、精製することにより得ることができる。より詳細には、本発明に係る化学式（１）で表される化合物は沖縄県石垣島吉原にて採取した藍藻から抽出し、精製することにより得た。
【００１０】
藍藻は光合成を行う原核生物であり、淡水湖沼、汽水域、海洋、土壌など様々な環境下で広く生育しているものであるが、本発明で使用する藍藻としては、沖縄県石垣島吉原近辺に生息する藍藻を用いるのが好ましい。本発明に係る化学式（１）で表される化合物を含有する藍藻またはその部位としては、それ自身を乾燥させた乾燥物、その粉砕物、それら自身を圧搾抽出することにより得られる搾汁、水あるいはアルコール、エーテル、アセトンなどの有機溶媒による粗抽出物、および粗抽出物を分配、カラムクロマトなどの各種クロマトグラフィーなどで段階的に精製して得られた抽出画分など、すべてを利用することができる。これらは単独で用いてもよく、また２種以上混合してもよい。
【００１１】
例えば、藍藻を採取した後に冷凍保存し、含水メタノールにて粉砕・抽出し、粗抽出物を得、粗抽出物を酢酸エチル層と水層とに分配し、さらに、有機層としての酢酸エチル層をＯＤＳシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより画分することができる。
【００１２】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物は新規な化合物であり、本発明者により細胞毒性を示すことを見出されたものである。
【００１３】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物は、特にＨｅＬａ細胞に対して細胞毒性を示すことから、抗癌剤として使用が期待されるものである。
【００１４】
以下、実施例を挙げて、本発明の具体的態様を示すものであるが、本発明の技術的範囲は実施例の記載により何ら限定されるものではない。
【実施例】
【００１５】
本発明に係る化学式（１）で表される化合物の単離・精製・構造決定
沖縄県石垣島吉原で採取した藍藻５０ｇ（湿重量）を冷凍保存し、小石を取り除いてから含水メタノール中にてブレンダーで粉砕した。抽出液を吸引濾過し、エバポレーターを用いて濾液を濃縮した。粗抽出物を酢酸エチル（１００ｍｌ×３）と水（１００ｍｌ）とで分配した。得られた酢酸エチル層を減圧濃縮し、濃縮物を９０％メタノール−水（５０ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（５０ｍｌ×３）で脱脂した。得られた９０％メタノール層を減圧濃縮し、濃縮物をＯＤＳカラムクロマトグラフィー［Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（登録商標）  ７５Ｃ１８−ＯＰＮ（φ２０×１２０ｍｍ）、メタノール／水（２０／８０→４０／６０→６０／４０→８０／２０→メタノール）］により５画分（Ｆｒ．１〜５）に分離した。
（図１参照）
【００１６】
得られた各溶出画分の内、メタノール溶出画分（Ｆｒ．５）５５．４ｍｇを逆相高速液体クロマトグラフィー［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ（登録商標）ＯＤＳ  ＨＧ−５（φ１０×２５０ｍｍ）、アセトニトリル／水（７０／３０）→（グラジェント３０分）→（１００／０）、検出ＵＶ２１５ｎｍ、流速２．０ｍＬ／分］により４画分（Ｆｒ．５−１〜４）に分離した。この内の第３画分（Ｆｒ．５−３）にＨｅＬａ細胞増殖阻害活性が認められた。得られたＦｒ．５−３を逆相高速液体クロマトグラフィー［Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  ＯＤＳ  ＨＧ−５（φ１０×２５０ｍｍ）、アセトニトリル／水（８５／１５）→（グラジェント１０分）→（９０／１０）→（１０分）→（９０／１０）→（グラジェント５分）→（１００／０）、検出ＵＶ２１５ｎｍ、流速１．５ｍＬ／分）］により６画分（Ｆｒ．５−３−１〜５−３−６）に分離した。この内の第５画分（Ｆｒ．５−３−５）にＨｅＬａ細胞増殖阻害活性が認められた。得られたＦｒ．５−３−５を減圧濃縮・乾固して化学式（１）で表される化合物（１．５ｍｇ）を不定形白色粉末として得た。
（図２参照）
【００１７】
図１および図２に示した操作により得られた不定形白色粉末である本発明に係る化学式（１）で表される化合物について、高分解能ＥＳＩ−ＭＳにより分子イオンピーク［ｍ／ｚ９２６．４５４４（Ｍ＋Ｈ）＋］が観測され、分子式がＣ４５Ｈ７５Ｎ５Ｏ１３Ｓであることが判明した。
さらに、１Ｈ−ＮＭＲ、１３Ｃ−ＮＭＲおよびＨＭＢＣを測定し、得られたスペクトルを解析することにより、不定形白色粉末であって、Ｃ４５Ｈ７５Ｎ５Ｏ１３Ｓの分子式を有する化合物の構造を以下のとおり決定した。
【化２】
2017036239.tif 000003
【００１８】
図１および図２に示した操作により得られた不定形白色粉末である本発明の化学式（１）で表される化合物についての１Ｈ−ＮＭＲ、および１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトルデータを以下に示す。
１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．９８（１Ｈ），７．９５（１Ｈ，ＮＨ），７．３９（１Ｈ，ＮＨ），５．３０（１Ｈ），４．９７（１Ｈ），４．８８（１Ｈ），４．４４（１Ｈ），３．９３（１Ｈ），３．８４（１Ｈ），３．８２（１Ｈ），３．６９（１Ｈ），３．６４（１Ｈ），３．４０（１Ｈ），３．３５（１Ｈ），３．２８（１Ｈ），３．２６（３Ｈ），３．１０（１Ｈ），２．９９（１Ｈ），２．４９（１Ｈ），２．３２（１Ｈ），２．２１（１Ｈ），１．９０（１Ｈ），１．７３（３Ｈ），１．６１（１Ｈ），１．６０（３Ｈ），１．６０（１Ｈ），１．５１（１Ｈ），１．４０−１．２０（２Ｈ），１．３５（１Ｈ），１．２９，（２Ｈ），１．２９（２Ｈ），１．２５（３Ｈ），１．２２（１Ｈ），１．１３（１Ｈ），１．０８（３Ｈ），１．０１（３Ｈ），０．９７（３Ｈ），０．９７（３Ｈ），０．９５（３Ｈ），０．９２（３Ｈ），０．９２（３Ｈ），０．８９（３Ｈ），０．８９（３Ｈ），０．８２（３Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：１７８．６，１７７．０，１７５．５，１７３．３，１７２．８，１７１．３，１６６．２，１４９．９，１２４．８，８６．５，８５．５，８２．２，７８．９，７７．９，７５．３，７３．５，６８．７，６０．４，５８．２，５５．３，４７．２，４４．０，４３．１，３９．９，３８．５，３８．０，３７．２，３５．８，３５．０，３３．３，３２．４，３１．３，２７．３，２６．１，２６．１，２４．２，２１．０，１９．８，１７．９，１６．６，１５．２，１４．９，１３．１，１２．０，１１．２，１０．７
【００１９】
試験例（化学式（１）で表される化合物の癌細胞増殖阻害活性試験（ＨｅＬａ））
ヒト子宮頸がん由来細胞株（ＨｅＬａ）は、１０％ウシ胎児血清含有のＤＭＥＭ培地にて炭酸ガス培養器（５％ＣＯ２、３７℃）で培養した。ＨｅＬａ細胞を９６穴プレートに播種し（１×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）、１６時間培養後にＤＭＳＯに溶解した本発明に係る化学式（１）で表される化合物を所定の濃度（１μｇ／ｍＬから開始して、１／２段階希釈を１０段階）になるように細胞に添加した。４８時間培養を続けた。細胞数の測定にはｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｉｎｇ  ｋｉｔ（同仁化学）を用い、取扱説明書に従って行った。その結果、ＩＣ５０＝０．１０μｇ／ｍＬの濃度で癌細胞の増殖を阻害した。
【産業上の利用可能性】
【００２０】
本発明の化学式（１）で示される化合物は、ＨｅＬａ細胞に対して細胞毒性を示すことから、抗癌剤として有用である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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