(57)【要約】【課題】皮膚のバリア機能を改善する素材の提供。【解決手段】ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚保護剤、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤、微弱炎症の予防又は改善剤、炎症性サイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤、敏感肌改善剤、肌のツッパリ感改善剤又は肌つや改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚保護剤。
【請求項２】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤。
【請求項３】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤。
【請求項４】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、微弱炎症の予防又は改善剤。
【請求項５】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、炎症性サイトカインの分泌抑制剤。
【請求項６】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤。
【請求項７】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤。
【請求項８】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、敏感肌改善剤。
【請求項９】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、肌のツッパリ感改善剤。
【請求項１０】
ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、肌つや改善剤。
【請求項１１】
経皮投与される、請求項１〜１０のいずれか１項記載の剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚保護剤、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤、微弱炎症の予防又は改善剤、炎症性サイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤、及び敏感肌改善剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
表皮の最外層である角層は、様々な外界の刺激（乾燥、紫外線など）や異物侵入、又は体内の水分蒸散を防ぐバリア機能を担っている。皮膚のバリア機能は、アトピー性皮膚炎等の皮膚疾患において低下するが、健常な皮膚においても、界面活性剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ））処理やアセトンによる脱脂処理により、バリア機能が低下する（例えば、非特許文献１）。このうち、界面活性剤による皮膚の洗浄は、日常生活において毎日繰り返される。このため、皮膚のバリア機能の向上やバリア破壊時の耐性の強化及び破壊後の回復促進ができれば、皮膚は様々な刺激（外的及び内的刺激）の影響を受けにくくなり、回復も早まり、健常な状態を常時維持することができる。
【０００３】
表皮の角化細胞は、角化作用だけでなく、皮膚免疫にも関与しており、各種サイトカイン（ＩＬ−１α、ＩＬ−３、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８、ＴＮＦ−α、ＭＩＦ、ＩＬ−８、ＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＴＧＦ−α、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１０等）を産生して分泌し、免疫細胞の活性化を促している（例えば、非特許文献２）。炎症や外傷、皮膚バリア機能低下によって角化細胞が障害されるとＩＬ―１αやＩＬ−３、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦなど様々なサイトカインが放出され、真皮内のリンパ球や組織球（マクロファージ）、血管内皮細胞の活性化を惹起し、炎症反応を引き起こす（例えば、非特許文献２）。特にＩＬ−１αは角化細胞内に大量に存在しており、角化細胞が障害されるとＩＬ−１α等のサイトカインが分泌され、角化細胞自身の刺激、あるいは炎症細胞の刺激により角化細胞は炎症を止める働きを持つＩＬ−１ｒａを造りはじめる（例えば、非特許文献３）。
【０００４】
ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）による皮膚刺激によって、皮膚中のＩＬ−１α、ＩＬ−１ｒａ等のサイトカインや炎症マーカーが増加し、またＩＬ−１ｒａとＩＬ−１αの比（ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１α）が高まる（例えば、非特許文献４）。また、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１αは敏感肌群で高く（例えば、特許文献１）、角層試料におけるタンパク質の量に対するＩＬ−１ｒａの比率は、ＴＥＷＬ値と正の相関があり、バリア機能の低下した肌で高い（例えば、特許文献２）。このため、角化細胞からのサイトカイン分泌を調節できれば、刺激による過剰な生体の反応を調節することができ、皮膚が炎症を発症することを防止することができる。
【０００５】
一方、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖には、皮膚炎症を治療できる効果（例えば、特許文献３参照）や、皮膚の角化亢進を抑制して肌荒れを防止できる効果（例えば、特許文献４参照）があることが知られている。しかし、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖に、界面活性剤によって生じる皮膚のバリア破壊や炎症性サイトカインの分泌を抑制する作用があることはこれまで確認されていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開平１０−２１６１０６号公報
【特許文献２】特開２０１４−４１０４３号公報
【特許文献３】特開平６−３２１７９１号公報
【特許文献４】特開平５−３３９１４１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】K De Paepe, et al., European Academy of Dermatology and Venereology, 2002; 16: 587-594
【非特許文献２】清水  宏  あたらしい皮膚科学  第２版  中山書店、32ページ
【非特許文献３】日本皮膚科学会総会  資生堂共済イブニングセミナー「スキンケア−ストレスと敏感肌」技術情報
【非特許文献４】Cindy M. de Jongh, et al., Experimental Dermatology, 2007; 16: 1032-1040
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、皮膚バリア機能の破壊を防止し、又は皮膚におけるサイトカイン分泌を調節することで、皮膚を保護することができる素材の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者等は、鋭意検討を行った結果、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖が、界面活性剤による皮膚バリア破壊を防止するとともに、皮膚におけるサイトカインの分泌を抑制することで、皮膚を保護することを見出した。
【００１０】
したがって、本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚保護剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、微弱炎症の予防又は改善剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、炎症性サイトカインの分泌抑制剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、敏感肌改善剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、肌のツッパリ感改善剤を提供する。
また本発明は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、肌つや改善剤を提供する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明は、皮膚保護、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善、微弱炎症の予防又は改善、炎症性サイトカインの分泌抑制、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止、敏感肌改善、肌のツッパリ感改善、及び肌つや改善などに有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「全体的な肌状態」に関するアンケート結果。
【図２】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「乾燥の少なさ」に関するに関するアンケート結果。
【図３】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「なめらかさ」に関するアンケート結果。
【図４】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「ツッパリの少なさ」に関するアンケート結果。
【図５】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「かゆみの少なさ」に関するアンケート結果。
【図６】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「はり」に関するアンケート結果。
【図７】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「やわらかさ」に関するアンケート結果。
【図８】試験例３における、肌状態に関するアンケートの結果を示すグラフ。「つや」に関するアンケート結果。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
一態様において、本発明は、皮膚保護剤、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤、微弱炎症の予防又は改善剤、炎症性サイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤、敏感肌改善剤、肌のツッパリ感改善剤、及び肌つや改善剤（以下、これらをまとめて本発明の剤と称することがある）を提供する。
【００１４】
さらなる一態様において、本発明は、上記本発明の剤を用いた皮膚保護方法、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止方法、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善方法、微弱炎症の予防又は改善方法、炎症性サイトカインの分泌抑制方法、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制方法、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止方法、敏感肌改善方法、肌のツッパリ感改善方法、及び肌つや改善方法（以下、これらをまとめて本発明の方法と称することがある）を提供する。
【００１５】
本発明の剤は、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする。後述の実施例で実証するように、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖（以下、本発明の酸性ヘテロ多糖ともいう）は、界面活性剤による皮膚バリア破壊を防止する効果、炎症性サイトカインの分泌を抑制する効果、及び界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌を抑制する効果を有する。したがって、本発明の酸性ヘテロ多糖は、皮膚の保護、より好適には皮膚バリアの保護もしくは皮膚バリア破壊防止に有効であり、さらには肌のツッパリ感又は肌のつやの改善に有効である。また、本発明の酸性ヘテロ多糖による皮膚バリア保護効果やサイトカインの分泌を抑制する効果は、界面活性剤等の刺激に対する皮膚の感受性を低下させる。したがって、本発明の酸性ヘテロ多糖はまた、界面活性剤を含む組成物の使用（例えば洗浄剤での皮膚洗浄）の際に皮膚に生じる刺激の予防もしくは改善、又は敏感肌の改善に有効である。さらに、本発明の酸性ヘテロ多糖は、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止、又は、炎症状態や刺激感に至る前の段階である微弱炎症の予防もしくは改善に有効である。
【００１６】
本発明の剤によって分泌抑制される炎症性サイトカインとしては、例えば、ＩＬ−１α、ＩＬ−８等が挙げられる。また本発明の剤によって分泌抑制される界面活性剤により誘導されるサイトカインとしては、例えばＩＬ−１ｒａ等が挙げられる。したがって、本発明の剤によれば、界面活性剤処理後の皮膚におけるＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１α比の上昇が抑制される。界面活性剤としては、例えばドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が挙げられる。
【００１７】
皮膚のバリア機能の程度は、例えば、皮膚の経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）に基づいて評価することができる。皮膚のＴＥＷＬは、市販の経皮水分蒸散量測定機器により測定することができる。
【００１８】
本発明に用いる酸性ヘテロ多糖は、例えば、ポリアンテス属に属する植物から誘導されるカルスを植物ホルモン含有培地で培養した培養物から採取することによって製造することができる（例えば、特許第３４７６９３３号公報参照）。
【００１９】
ポリアンテス属に属する植物としては、例えばチューベローズ（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  ｔｕｂｅｒｏｓａ  Ｌ．）が挙げられる。当該植物の一部を外植片として培養し、カルスを誘導する。外植片として使用可能な当該植物の部位としては、花、茎、葉、鱗茎、根等の器官又は組織の一部が挙げられるが、花の一部が好ましい。
【００２０】
カルス誘導用の基本培地としては、植物組織培養に通常用いられるMurasige-Skoogの培地、Linsmaier-Skoogの培地、Gamborgの培地、Whiteの培地、Tuleekeの培地、Nitsch & Nitschの培地等を用いることができる。当該基本培地には、植物ホルモンを添加する。植物ホルモンとしては、２，４−ジクロロフェノキシ酢酸（２，４−Ｄ）、α−ナフタレン酢酸（ＮＡＡ）、インドール酢酸（ＩＡＡ）、インドール酪酸（ＩＢＡ）等のオーキシン類；フルフリルアミノプリン（カイネチン）、ベンジルアデニン（ＢＡ）、ジメチルアミノプリン（２ｉＰ）等のサイトカイニン類が挙げられる。その中でも、２，４−Ｄ単独、ＮＡＡとＢＡの組み合わせ、又はＮＡＡとカイネチンの組み合わせが良好な結果を与えるため好ましい。カルス誘導に必要な培地中の植物ホルモン濃度は、２，４−Ｄ単独の場合は、好ましくは５×１０-4Ｍから１×１０-7Ｍであり、ＮＡＡとＢＡの組み合わせ、又はＮＡＡとカイネチンの組み合わせの場合は、ＮＡＡの濃度は、好ましくは５×１０-4Ｍから１×１０-7Ｍ、ＢＡ又はカイネチンの濃度は、好ましくは１×１０-7Ｍである。カルス誘導培地には、上記の基本培地と植物ホルモンのほかに、炭素源として糖が加えられる。糖としては、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプンなどが挙げられるが、通常はサッカロースが用いられる。カルス誘導は、固体培地でも液体培地でも可能であるが、通常は固体培地が用いられる。
【００２１】
誘導されたカルスは、上記のカルス誘導培地で同じ形態を維持したまま１０代以上にわたって継代培養をすることができる。継代培養用の培地には、基本培地としては、好ましくは、Linsmaier-Skoogの培地又はMurasige-Skoogの培地が用いられ；植物ホルモンとしては、好ましくは、１×１０-4〜１×１０-7Ｍの２，４−Ｄ、又は１×１０-4〜１×１０-7ＭのＮＡＡと１×１０-4〜１×１０-7ＭのＢＡの組み合わせが用いられ；炭素源としては、好ましくは、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプン等が用いられるが、就中サッカロースがより好ましく、その添加量は１〜６質量％（以下、単に％という）が好ましい。
【００２２】
カルスから多糖類を製造するには、カルスを寒天培地等の固体培地、又は液体培地で培養すればよいが、就中液体培地で培養するのが好ましい。多糖類製造用の基本培地としてはカルス誘導培地と同様のものが用いられ、この基本培地に植物ホルモンを添加する。植物ホルモンの種類及び濃度は、多糖類の生産性に関係がある。例えば、２，４−Ｄ、ＮＡＡ、ＩＡＡ、ＩＢＡ等のオーキシン類；カイネチン、ＢＡ、２ｉＰ等のサイトカイニン類；ジベレリンＡ3（ＧＡ3）等のジベレリン類等が使用される。この中で、２，４−ＤもしくはＮＡＡを単独で、又はＮＡＡとＢＡもしくはカイネチンとを組み合わせて用いるのが好ましい。培地中の植物ホルモンの濃度は、２，４−Ｄ又はＮＡＡを単独で用いる場合は５×１０-4Ｍから１×１０-7Ｍ、好ましくは５×１０-5Ｍから５×１０-6Ｍ；ＮＡＡとＢＡ又はＮＡＡとカイネチンを組み合わせて用いる場合には、ＮＡＡの濃度は１×１０-4Ｍから１×１０-7Ｍ、好ましくは１×１０-4Ｍから５×１０-6Ｍであり、ＢＡ又はカイネチンの濃度は５×１０-5Ｍから１×１０-9Ｍ、好ましくは１×１０-5Ｍから１×１０-7Ｍである。培地の炭素源としては、グルコース、フラクトース、マンノース、キシロース、サッカロース、ラムノース、フコース、デンプン等が用いられ、好ましくはサッカロースが用いられる。多糖類の生産量は添加する炭素源の種類にはあまり強く影響されることはない。炭素源の濃度と多糖類の生産量との間にもあまり深い関係はないが、培地中の炭素源の濃度は１〜６％が好ましい。培養法は特に制限されないが、通常、２０〜３０℃の温度で１５〜３０日間行うのが好ましく、また振とう培養が好ましい。
【００２３】
このようにして得られた培養物からの酸性ヘテロ多糖の採取は、例えば、培養物から細胞を遠沈又はろ過等によって除去したのち、培養液をロータリーエバポレーター等を用いて濃縮し、濃縮液にエタノールを加えて沈澱させ、沈澱物を凍結乾燥することによって行われる。酸性ヘテロ多糖の精製は、通常の多糖類の精製法に従って行うことができる。例えば、粗精製の酸性ヘテロ多糖を水に溶解し、遠心分離して不溶物を完全に除去した後、透析あるいはイオン交換クロマトグラフィ又はゲル濾過クロマトグラフィにかけることによって、高純度精製品を得ることができる。
【００２４】
あるいは、本発明に用いる酸性ヘテロ多糖には、市販品を用いることができる。酸性ヘテロ多糖溶液の市販品としては、例えば、ソフケア（登録商標）ＴＰ−Ｓ（花王株式会社製）が挙げられる。
【００２５】
叙上の方法により得られる酸性ヘテロ多糖は水溶性であり、生理食塩水等に溶解して注射剤として投与することができる。又は、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口投与剤として投与することができる。あるいは、液剤、スプレー、ゲル、クリーム、軟膏剤、リニメント剤、パップ剤等の外用剤又は経皮投与剤の形態に調製して投与することもできる。本発明において、当該酸性ヘテロ多糖は、好ましくは経皮投与される。
【００２６】
本発明の剤の形態は特に制限されないが、例えば、医薬組成物（医薬品及び医薬部外品を含む）、化粧料組成物、食品組成物、もしくはその他の日用品組成物とするか、又はこれらに含有させることができる。
【００２７】
医薬組成物は、通常、有効成分である本発明の酸性ヘテロ多糖と、好ましくは薬学的に許容される担体を含む製剤として調製する。薬学的に許容される担体とは、一般的に、有効成分とは反応しない、不活性の、無毒の、固体又は液体の、増量剤、希釈剤又はカプセル化材料等をいい、例えば、水、エタノール、ポリオール類（例えば、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、及びポリエチレングリコール等）、適切なそれらの混合物、植物性油等の溶媒又は分散媒体などが挙げられる。
【００２８】
医薬組成物は、経口により、又は非経口により、例えば、口腔内に、皮膚に、皮下に、粘膜に、眼に、及び鼻腔内に投与される。経口投与製剤としては、錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤、チュアブル剤、ペレット剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤及び吸入剤などが挙げられる。非経口投与製剤としては、坐剤、保持型浣腸剤、点眼剤、点鼻剤、ペッサリー剤、注射剤、口腔洗浄剤、ならびに軟膏、液剤、クリーム剤、ゲル剤、スプレー、制御放出パッチ剤及び貼付剤等の皮膚外用剤もしくは経皮投与剤、などが挙げられる。あるいは、本発明の医薬組成物は、徐放性皮下インプラントの形態で、又は標的送達系（例えば、モノクローナル抗体、ベクター送達、イオン注入、ポリマーマトリックス、リポソーム及びミクロスフェア）の形態で、非経口で投与してもよい。
【００２９】
医薬組成物はさらに、医薬分野において慣用の添加剤を含んでいてもよい。そのような添加剤には、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、抗酸化剤、着色剤、矯味剤などがあり、必要に応じて使用できる。さらに必要に応じて、その他の添加剤や薬剤、例えば制酸剤、胃粘膜保護剤等を加えてもよい。長時間作用できるように徐放化するためには、既知の遅延剤等でコーティングすることもできる。
【００３０】
化粧料組成物を調製する場合、その形態は特に制限されず、溶液、乳液、粉末、水−油二層系、水−油−粉末三層系、ゲル、タブレット等の固形、エアゾール、ミスト、カプセル及びシート等任意の形態とすることができる。また、化粧料組成物の製品形態も任意であり、例えば、洗顔料、メーク落とし、化粧水、美容液、パック、乳液、クリーム及びサンスクリーン等のスキンケア化粧料、ファンデーション、化粧下地、口紅、アイシャドー、アイライナー、マスカラ、アイブロー、頬紅及びネイルエナメル等のメイクアップ化粧料、ヘアシャンプー、ヘアリンス、整髪料、染毛料及び育毛剤等の毛髪化粧料、石鹸、ボディソープ、デオドラント化粧料及び浴用剤等のボディ洗浄料、歯磨剤及び洗口剤等の口腔化粧料、香水等の芳香化粧料等が挙げられる。また、この化粧料は、日本の薬事法上、化粧品もしくは医薬部外品のどちらに属しても良い。
【００３１】
化粧料組成物は、化粧品、医薬部外品及び医薬品等に慣用される他の成分、例えば、保湿剤、美白剤、消炎剤、血行促進剤、抗脂漏剤等の活性成分、ならびに粉末成分、油脂、脂肪酸、アルコール類、エステル、シリコーン、界面活性剤、水溶性高分子、増粘剤、皮膜剤、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、防腐剤、香料、水、その他添加剤等を必要に応じて配合し、常法により製造することができる。
【００３２】
本発明の医薬組成物及び化粧料組成物は、口腔用組成物、外用組成物、内服組成物などの形態で適用することができ、皮膚外用組成物（又は経皮投与用組成物）の形態で用いることが好ましい。好ましくは、該医薬組成物及び化粧料組成物は、経皮投与される。皮膚外用組成物の形態で使用する場合、本発明の酸性ヘテロ多糖の他に、通常の皮膚外用組成物に用いられる成分、例えば界面活性剤、油性物質、高分子化合物、防腐剤、各種の薬効成分、紛体、紫外線吸収剤、色素、香料、乳化安定剤、ｐＨ調整剤等を適宜配合できる。薬効成分としては、表皮角化改善剤や皮膚保湿機能改善剤などが挙げられ、その例としては、ビタミンＤ３、スフィンゴシン誘導体、オレアノール酸、クロフィブリン酸、オレイエタノールアミドなどが挙げられる。
【００３３】
本発明により提供される日用品組成物としては、日常使用する皮膚に接触する可能性がある組成物、例えば、衣料用の洗剤や柔軟剤、台所や洗面、トイレ、浴室用の洗剤、その他の住居用洗剤、ハンドソープ等の手指洗浄もしくは消毒剤、などが挙げられる。これらの組成物は、当該組成物の通常の組成に、本発明の酸性ヘテロ多糖を配合することで調製することができる。
【００３４】
本発明により提供される食品組成物には、一般食品の他に、飲料も包含される。また当該食品は飼料を包含する。当該食品組成物には、皮膚の保護、界面活性剤による皮膚バリア破壊の防止、皮膚洗浄による刺激の予防もしくは改善、微弱炎症の予防もしくは改善、炎症性サイトカインの分泌抑制、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止、敏感肌改善、肌のツッパリ感改善、又は肌つや改善等をコンセプトとしてその旨を表示した飲食品（例えば、健康食品、機能性表示食品、病者用食品、栄養機能食品及び特定保健用食品等の保健機能食品など）も包含される。
【００３５】
食品組成物を調製する場合、その形態は特に制限されない。例えば、該食品組成物は、細粒剤、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、液剤、流動食等の各種製剤形態であり得る。製剤形態の食品組成物は、医薬製剤と同様に製造することができ、有効成分である本発明の酸性ヘテロ多糖と、食品として許容できる担体、例えば適当な賦形剤（例えば、でん粉、加工でん粉、乳糖、ブドウ糖、水等）等とを混合した後、慣用の手段を用いて製造することができる。あるいは、該食品組成物は、スープ類、ジュース類、乳飲料、茶飲料、コーヒー飲料、ココア飲料、ゼリー状飲料などの液状食品組成物、プリン、ヨーグルトなどの半固形食品組成物、パン類、うどんなどの麺類、クッキー、チョコレート、キャンディ、ガム、せんべいなどの菓子類、ふりかけ、バター、ジャムなどのスプレッド類等の形態をとり得る。これらの食品は、材料に本発明の酸性ヘテロ多糖を配合して、通常の製法で製造することができる。
【００３６】
食品組成物にはさらに、種々の食品添加物、例えば、酸化防止剤、香料、各種エステル類、有機酸類、有機酸塩類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤などの添加剤を単独、あるいは併用して配合してもよい。
【００３７】
本発明の剤を投与する対象は、好ましくは温血脊椎動物であり、より好ましくは哺乳動物である。本明細書において哺乳動物としては、例えば、ヒト、及びサル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタなどの非ヒト哺乳動物が挙げられる。本発明の剤は、ヒト、サルなどの霊長類、特にヒトへの投与に好適である。
【００３８】
好ましくは、上記対象の動物は、皮膚の保護、皮膚バリア保護、界面活性剤による皮膚バリア破壊の防止、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善、微弱炎症の予防又は改善、炎症性サイトカインの分泌抑制、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止、敏感肌改善、肌のツッパリ感改善、あるいは肌つや改善を必要とする動物である。
【００３９】
本発明の剤の上記対象への投与量は、該対象が上述した必要とする効果を達成できる有効量であればよい。本発明の剤の投与量は、対象である個体の状態、体重、性別、年齢、素材の活性、投与又は摂取経路、投与又は摂取スケジュール、製剤形態又はその他の要因により適宜決定することができる。例えば、本発明の剤の投与量は、有効成分である本発明の酸性ヘテロ多糖の質量に基づき、１日あたり、体重１ｋｇあたり、好ましくは０．００１ｍｇ以上、１ｇ以下、又は好ましくは０．００１〜１０ｍｇ、さらに好ましくは０．０１〜５ｍｇである。また、本発明の剤は、１日１回〜数回に分け、又は任意の期間及び間隔で摂取・投与され得る。
【００４０】
本発明の剤における、有効成分である本発明の酸性ヘテロ多糖の含有量は、上記投与量を達成するように適宜決定できる。例えば、本発明の剤における当該有効成分の含有量は、０．００００１質量％以上、好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上であって、かつ２０質量％以下、好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下であり得る。０．００００１〜２０質量％が好ましく、０．０００１〜１０質量％がより好ましく、０．００１〜１質量％がさらに好ましく、０．０１〜０．５質量％がさらに好ましい。
【００４１】
本発明の剤は、非治療的に使用することもできるが、治療的に使用することもできる。非治療的使用の例としては、界面活性剤からの皮膚バリアの保護；界面活性剤による（例えば界面活性剤を含む組成物との接触による、以下同じ）皮膚バリア破壊の防止；界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制；界面活性剤による皮膚刺激の予防もしくは改善；界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止；炎症を起こしていない状態での炎症性サイトカインの分泌抑制；微弱炎症の予防もしくは改善；敏感肌改善；肌のツッパリ感改善；肌つや改善、などが挙げられる。好ましくは、当該非治療的使用は、健常の皮膚を含む炎症を起こしていない皮膚における使用である。より好ましくは、炎症を起こしていないが皮膚バリア機能の低下した皮膚、敏感肌の皮膚、ツッパリ感を有する皮膚もしくは肌つやの低下した皮膚における使用である。治療的使用の例としては、炎症を起こしている皮膚における皮膚バリアの保護、皮膚バリア破壊防止、炎症性サイトカインの分泌抑制、もしくは界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制；微弱炎症から皮膚炎症への進行の防止、などが挙げられる。
【００４２】
本発明はまた、例示的実施形態として以下の物質、製造方法、用途、方法等を包含する。但し、本発明はこれらの実施形態に限定されない。
【００４３】
＜１＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚保護剤。
＜２＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤。
＜３＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤。
＜４＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、微弱炎症の予防又は改善剤。
＜５＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、炎症性サイトカインの分泌抑制剤。
＜６＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤。
＜７＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤。
＜８＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、敏感肌改善剤。
＜９＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、肌のツッパリ感改善剤。
＜１０＞ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を有効成分とする、肌つや改善剤。
＜１１＞前記皮膚保護が皮膚バリア保護又は皮膚バリア破壊防止である、＜１＞記載の剤。
＜１２＞医薬組成物、化粧料組成物、食品組成物、又は日用品組成物である、＜１＞〜＜１０＞のいずれか１項記載の剤。
＜１３＞経皮投与される、＜１＞〜＜１２＞のいずれか１項記載の剤。
＜１４＞前記有効成分の含有量が、０．００００１質量％以上（好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上）２０質量％以下（好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下）である、＜１＞〜＜１３＞のいずれか１項記載の剤。
【００４４】
＜１５＞皮膚保護のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜１６＞界面活性剤による皮膚バリア破壊防止のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜１７＞皮膚洗浄による刺激の予防又は改善のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜１８＞微弱炎症の予防又は改善のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜１９＞炎症性サイトカインの分泌抑制のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜２０＞界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜２１＞界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜２２＞敏感肌改善のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜２３＞肌のツッパリ感改善のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜２４＞肌つや改善のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜２５＞前記皮膚保護が皮膚バリア保護又は皮膚バリア破壊防止である、＜１５＞記載の使用。
＜２６＞化粧料組成物、食品組成物、又は日用品組成物の形態で使用される、＜１５＞〜＜２５＞のいずれか１項記載の使用。
＜２７＞皮膚外用組成物の形態で使用される、＜１５＞〜＜２６＞のいずれか１項記載の使用。
＜２８＞前記組成物における前記酸性ヘテロ多糖の含有量が、０．００００１質量％以上（好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上）２０質量％以下（好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下）である、＜２６＞又は＜２７＞記載の使用。
＜２９＞非治療的に使用される、＜１５＞〜＜２８＞のいずれか１項記載の使用。
【００４５】
＜３０＞皮膚保護に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３１＞界面活性剤による皮膚バリア破壊防止に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３２＞皮膚洗浄による刺激の予防又は改善に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３３＞微弱炎症の予防又は改善に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３４＞炎症性サイトカインの分泌抑制に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３５＞界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３６＞界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３７＞敏感肌改善に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３８＞肌のツッパリ感改善に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜３９＞肌つや改善に使用される、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖。
＜４０＞前記皮膚保護が皮膚バリア保護又は皮膚バリア破壊防止である、＜３０＞記載の酸性ヘテロ多糖。
＜４１＞経皮投与される、＜３０＞〜＜４０＞のいずれか１項記載の酸性ヘテロ多糖。
＜４２＞医薬組成物の形態で使用される、＜３０＞〜＜４１＞のいずれか１項記載の酸性ヘテロ多糖。
＜４３＞前記組成物における前記酸性ヘテロ多糖の含有量が、０．００００１質量％以上（好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上）２０質量％以下（好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下）である、＜４２＞記載の酸性ヘテロ多糖。
＜４４＞炎症を起こしている皮膚において使用される、＜３０＞〜＜４３＞のいずれか１項記載の酸性ヘテロ多糖。
【００４６】
＜４５＞皮膚保護剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜４６＞界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜４７＞皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜４８＞微弱炎症の予防又は改善剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜４９＞炎症性サイトカインの分泌抑制剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜５０＞界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜５１＞界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜５２＞敏感肌改善剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜５３＞肌のツッパリ感改善剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜５４＞肌つや改善剤の製造のための、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖の使用。
＜５５＞前記皮膚保護が皮膚バリア保護又は皮膚バリア破壊防止である、＜４５＞記載の使用。
＜５６＞医薬組成物、化粧料組成物、食品組成物、又は日用品組成物の製造のための使用である、＜４５＞〜＜５５＞のいずれか１項記載の使用。
＜５７＞皮膚外用組成物の製造のための使用である、＜４５＞〜＜５６＞のいずれか１項記載の使用。
＜５８＞前記組成物における前記酸性ヘテロ多糖の含有量が、０．００００１質量％以上（好ましくは０．０００１質量％以上、より好ましくは０．００１質量％以上、さらに好ましくは０．０１質量％以上）２０質量％以下（好ましくは１０質量％以下、より好ましくは１質量％以下、さらに好ましくは０．５質量％以下）である、＜５６＞又は＜５７＞記載の使用。
【００４７】
＜５９＞皮膚保護方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６０＞界面活性剤による皮膚バリア破壊防止方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６１＞皮膚洗浄による刺激の改善方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６２＞微弱炎症の改善方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６３＞炎症性サイトカインの分泌抑制方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６４＞界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６５＞界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６６＞敏感肌改善方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６７＞肌のツッパリ感改善方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６８＞肌つや改善方法であって、それを必要とする対象に、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を投与することを含む、方法。
＜６９＞前記皮膚保護が皮膚バリア保護又は皮膚バリア破壊防止である、＜５９＞記載の方法。
＜７０＞前記酸性ヘテロ多糖が経皮投与される、＜５９＞〜＜６９＞のいずれか１項記載の方法。
＜７１＞前記酸性ヘテロ多糖の投与量が、１日あたり、体重１ｋｇあたり、０．００１ｍｇ以上１ｇ以下（好ましくは０．００１〜１０ｍｇ、さらに好ましくは０．０１〜５ｍｇ）である、＜５９＞〜＜７０＞のいずれか１項記載の方法。
【実施例】
【００４８】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００４９】
調製例１
酸性ヘテロ多糖の製造：ポリアンテス属に属する植物として、チューベローズ（Ｐｏｌｉａｎｔｈｅｓ  ｔｕｂｅｒｏｓａ  Ｌ．）を用いた。滅菌したチューベローズの開花２〜７日前の蕾を、植物ホルモンとして１×１０-5ＭのＮＡＡと１×１０-6ＭのＢＡを含み、炭素源として３％のサッカロースを含むMurasige-Skoogの培地（寒天培地）を用いて培養し、カルスを誘導した。誘導されたカルスは同培地で継代培養した。数代以上に継代し安定化したカルスを、植物ホルモンとして１×１０-5Ｍの２，４−Ｄを含み、炭素源として５％のサッカロースを含むMurasige-Skoogの培地（液体培地）に５％濃度となるよう接種した。培養は５００ｍＬ三角フラスコに培地を２００ｍＬ仕込み、暗所にてロータリーシェーカーを用いて、振とう数９０ｒｐｍ、２６±１℃で１５日間行った。この後、ろ過及び遠心分離により培養液から細胞を取り除き、残った液をロータリーエバポレーターを用いて濃縮した。この濃縮液に約３倍量のエタノールを加え、５℃で２４時間静置し沈澱を得た。この沈澱を遠心分離によって回収し、７０％エタノールで３回洗浄した後、凍結乾燥により水分を除去し、目的とする酸性ヘテロ多糖を得た。この多糖に蒸発残分が０．５％（ｗ／ｖ）となるように１５％  １，３−ブチレングリコール水溶液を加えて酸性ヘテロ多糖溶液を調製した。
【００５０】
試験例１  経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ値）の測定
ヒト３次元培養表皮モデル（ＬａｂＣｙｔｅ  ＥＰＩ−ＭＯＤＥＬ１２  ６Ｄ、ジャパンティッシュエンジニアリング社製）を、専用の培地を入れた１２ウェルプレートに移して、３７℃、５％ＣＯ2条件下で４８時間前培養した。調製例１で得られた酸性ヘテロ多糖溶液を、ヒト３次元培養表皮モデルの角層側に、それぞれ１６０μＬずつ添加した。コントロールとして、調製例１の酸性ヘテロ多糖溶液のかわりに、１５％  １，３−ブチレングリコール水溶液をヒト３次元培養表皮モデルの角層側にそれぞれ１６０μＬずつ添加した。３７℃、５％ＣＯ2条件下で２４時間培養後、角層上に残存する調製例１の酸性ヘテロ多糖溶液又はコントロールとして添加した１５％  １，３−ブチレングリコール水溶液を除去した後、クリーンベンチ内でウェルプレートのカバーを外し、ヒト３次元培養表皮モデルの表面を４時間乾燥させた。培地を交換し、３７℃、５％ＣＯ2条件下でさらに７２時間培養後、クリーンベンチ内でウェルプレートのカバーを外し、ヒト３次元培養表皮モデルの表面を４時間乾燥させた後、閉鎖式の経皮水分蒸散量測定機器（ＶＡＰＯ  ＳＣＡＮ、アサヒバイオメッド社製）を用いて、該表皮モデルのＴＥＷＬ値をそれぞれ測定した。新たな培地に交換した後、ヒト３次元培養表皮モデルの角層側に直径８ｍｍのろ紙を設置し、そこに１０ｍＭ  ＳＤＳ水溶液を３０μＬずつ添加した。３７℃、５％ＣＯ2条件下でさらに２４時間培養した後、ろ紙を取り除き、クリーンベンチ内でウェルプレートのカバーを外し、約３０分間表面を乾燥させた後、経皮水分蒸散量測定機器（ＶＡＰＯ  ＳＣＡＮ、アサヒバイオメッド社製）を用いて、ＳＤＳ処理後のＴＥＷＬ値をそれぞれ測定した。また、コントロール群と酸性ヘテロ多糖（表中でＴＰＳ；Tuberose Polysaccharide Solution、と示した）群間のｔ検定を実施した。評価結果を表１に示す。
【００５１】
【表１】
2017214356.tif 000002
【００５２】
試験例２  炎症性サイトカイン分泌量の測定
ヒト３次元培養表皮モデル（ＬａｂＣｙｔｅ  ＥＰＩ−ＭＯＤＥＬ１２  ６Ｄ、ジャパンティッシュエンジニアリング社製）を、専用の培地を入れた１２ウェルプレートに移して、３７℃、５％ＣＯ2条件下で４８時間前培養した。調製例１で得られた酸性ヘテロ多糖溶液を、ヒト３次元培養表皮モデルの角層側にそれぞれ１６０μＬずつ添加した。コントロールとして、調製例１の酸性ヘテロ多糖溶液のかわりに、１５％  １，３−ブチレングリコール水溶液を、ヒト３次元培養表皮モデルの角層側にそれぞれ１６０μＬずつ添加した。３７℃、５％ＣＯ2条件下で２４時間培養後、角層上に残存する調製例１の酸性ヘテロ多糖溶液又はコントロールとして添加した１５％  １，３−ブチレングリコール水溶液を除去した後、クリーンベンチ内でウェルプレートのカバーを外し、ヒト３次元培養表皮モデルの表面を４時間乾燥させた。培地を交換し、３７℃、５％ＣＯ2条件下でさらに７２時間培養後、培養液を回収し新たな培地に交換した（ＳＤＳ処理前）。その後、ヒト３次元培養表皮モデルの角層側に直径８ｍｍのろ紙を設置し、そこに１０ｍＭ  ＳＤＳ水溶液を３０μＬずつ添加した。コントロールとして、ヒト３次元培養表皮モデルの角層側に直径８ｍｍのろ紙を設置し、そこに滅菌水を３０μＬずつ添加した。３７℃、５％ＣＯ2条件下でさらに２４時間培養した後、培養液を回収した（水処理後、ＳＤＳ処理後）。ＳＤＳ処理前に回収した培養液、及び水処理後又はＳＤＳ処理後に回収した培養液中のＩＬ−１α、ＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−８の濃度を、ＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ、Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社製）キットを用いて定量した。ＳＤＳ処理前の評価結果を表２に、水処理後及びＳＤＳ処理後の評価結果を表３に示す。表２では、コントロール群と酸性ヘテロ多糖（ＴＰＳ）群間のｔ検定を実施した。表３では、水処理群とＳＤＳ処理群間、又はコントロール群とＴＰＳ群間のｔ検定を実施した。
【００５３】
【表２】
2017214356.tif 000003
【００５４】
【表３】
2017214356.tif 000004
【００５５】
表１から明らかなように、ポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖（ＴＰＳ）は、界面活性剤であるＳＤＳ処理による皮膚バリアの破壊を防止する効果を有していた。
表２から明らかなように、ＴＰＳは、一定培養期間において培地中へのＩＬ−８の分泌量を抑制していたことから、炎症性サイトカイン分泌抑制効果があることがわかった。また表３から明らかなように、ＴＰＳは、ＳＤＳ処理後の培地中のＩＬ−１ｒａ、ＩＬ−１ｒａ／ＩＬ−１αを低減したことから、ＳＤＳにより高まるサイトカイン分泌を抑制する効果があることがわかった。さらに、ＴＰＳにより炎症性サイトカインの分泌を低減したり、サイトカインの分泌比率を改善することで、日常的に繰り返し発生し得る刺激との接触（例えば、界面活性剤を含む洗浄剤での皮膚洗浄）による皮膚への刺激の予防又は改善や、皮膚炎症の惹起の防止、あるいは外観や感覚では認知できないレベルの微弱炎症の予防又は改善が可能となる。
したがって、本発明のポリアンテス属に属する植物から誘導されたカルスが細胞外に分泌する酸性ヘテロ多糖を、皮膚バリア保護剤、界面活性剤による皮膚バリア破壊防止剤、皮膚洗浄による刺激の予防又は改善剤、微弱炎症の予防又は改善剤、炎症性サイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤により誘導されるサイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤による炎症性サイトカインの分泌抑制剤、界面活性剤による皮膚炎症惹起の防止剤、あるいは敏感肌改善剤の有効成分とすることができる。
【００５６】
試験例３  酸性ヘテロ多糖によるヒト肌状態改善効果
インフォームドコンセントが得られた、顔の肌荒れ、かさつきや乾燥が気になる女性３２名（３５〜５３歳、平均４４．７歳）を対象に、ハーフフェイスにて片側に酸性ヘテロ多糖（ＴＰＳ）配合化粧水０．４ｇ／回、次いでＴＰＳ配合乳液０．３ｇ／回（表４〜５）を、もう片側にはＴＰＳを含まないプラセボ化粧水０．４ｇ／回、次いでプラセボ乳液０．３ｇ／回（表４〜５）を、いずれも１日２回、１２週間連続で塗布した。塗布前、ならびに塗布４、８及び１２週後に、以下に従って肌状態に関するアンケートを行なうとともに、左右の頬部から角層を採取し、角層中の炎症性サイトカインを定量した。試験は二重盲検法にて実施した。アンケートや角層の採取は、洗顔して室温２０℃、湿度５０％の環境下で２０分以上馴化した後、同環境下にて実施した。
【００５７】
（肌状態に関するアンケート）
「全体的な肌状態」、ならびに「乾燥の少なさ」、「なめらかさ」、「ツッパリの少なさ」、「かゆみの少なさ」、「はり」、「やわらかさ」及び「つや」の個別的項目に関して左右を比較評価し、「左が良い」、「左がやや良い」、「どちらともいえない」、「右がやや良い」及び「右が良い」から１つを選択させた。回答結果をもとに、ＴＰＳ塗布とプラセボ塗布間の肌状態の評価結果として再集計した。「良い」及び「やや良い」と回答した数を合計し、ＴＰＳ塗布群とプラセボ塗布群で比較することにより、統計学的解析を行なった（Binominal test）。
【００５８】
（角層中の炎症性サイトカインの定量）
左右の頬部から、アクリルテープ４６５♯４０（寺岡製作所社製)２．５ｃｍ×５ｃｍを用いて同一部位から３回連続テープストリッピングにて角層を採取し、定量時まで−２０℃で保管した。採取した角層付きテープから２．５ｃｍ×２ｃｍを使用し、その３回採取分を細断して、０．００５％Ｔｗｅｅｎ２０含有ＰＢＳ溶液  １ｍＬに加え、氷冷下６０秒間ソニケーションを行った後、遠心して（４℃、１５０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ）上清（抽出液）を得た。抽出液中の炎症性サイトカイン（Ｌ−１α、ＩＬ−１ｒａ）の量を、ＥＬＩＳＡ（Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ、Ｒ＆Ｄ  ＳＹＳＴＥＭＳ社製）キットを用いて定量した。また抽出液中の可溶性タンパク質量を、ＢＣＡ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙ法（Ｐｉｅｒｃｅ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ，Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）にてＢＳＡを標準タンパク質として定量し、定量したタンパク質量に基づいて炎症性サイトカインの量を算出した。統計学的解析では、ＴＰＳ塗布側とプラセボ塗布側との間でpaired-t-testを実施した。
【００５９】
【表４】
2017214356.tif 000005
【００６０】
【表５】
2017214356.tif 000006
【００６１】
肌状態についてのアンケート結果を図１〜８に示す。全体的な肌状態に関しては、４週後及び８週後では半数近く、１２週後では６０％以上の被験者がＴＰＳ配合化粧料塗布側のほうが「良い」又は「やや良い」と回答しており、その数はプラセボ塗布側に対して有意に多かった（図１）。また、肌状態に関する具体的項目においても、４週後の「かゆみの少なさ」を除き、全ての週の全ての評価項目において、プラセボ塗布側と比較してＴＰＳ配合化粧料塗布側のほうが「良い」又は「やや良い」と回答した被験者の数が多かった。特に「なめらかさ」については、４週後、８週後及び１２週後の全てにおいて４０％以上の被験者が効果を実感しており、プラセボ塗布側に対して有意な差があった（図３）。それ以外の評価項目でも、「乾燥の少なさ」では８週後及び１２週後で（図２）、「ツッパリの少なさ」では４週後及び８週後で（図４）、「かゆみの少なさ」では１２週後で（図５）、「はり」では１２週後で（図６）、「やわらかさ」では４週後及び１２週後で（図７）、「つや」では１２週後で（図８）、プラセボ塗布側と比較してＴＰＳ配合化粧料塗布側のほうが「良い」又は「やや良い」と回答した被験者の数が有意に多かった。
【００６２】
一方、角層中の炎症性サイトカインの定量結果を表６に示す。ＩＬ−１αの初期値からの減少量は、プラセボ塗布部に比較して、ＴＰＳ配合化粧料塗布部で大きい傾向があり、酸性ヘテロ多糖によるＩＬ−１α分泌抑制の可能性が推察された。またＩＬ−１ｒａの初期値からの減少量についても、ＴＰＳ配合化粧料塗布部では、プラセボ塗布部に比較して減少量が大きい傾向があり（塗布４週間後にはｐ＜０．１）、酸性ヘテロ多糖によるＩＬ−１ｒａ分泌抑制の可能性が推察された。
【００６３】
【表６】
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【００６４】
肌荒れ、かさつきや乾燥状態にある角層では、外部刺激に対するバリアが弱い状態にあり、炎症性サイトカインの分泌が増え、微弱炎症状態にあると考えられている。ＴＰＳ配合化粧料は、外部刺激から角層を守り微弱炎症状態を改善して、角層中の炎症性サイトカインであるＩＬ−１αやＩＬ−１ｒａの分泌量を抑制し、その結果としてアンケート結果に示された各種の肌状態の改善効果が導かれたものと推察される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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