(57)【要約】【課題】プロテオグリカンの新規な薬理用途を提供する。【解決手段】終末糖化産物産生抑制剤は、水棲生物の軟骨由来のプロテオグリカンを０．００４質量％以上０．１質量％以下、及び、桜の花エキスを０．０２質量％以上０．５質量％以下の量で含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
水棲生物の軟骨由来のプロテオグリカンを０．００４質量％以上０．１質量％以下、及び、桜の花エキスを０．０２質量％以上０．５質量％以下の量で含む、終末糖化産物産生抑制剤。
【請求項２】
前記終末糖化産物産生抑制剤中の前記プロテオグリカンと、前記桜の花エキスとの質量比が、５：１〜１：２５の範囲である、
請求項１に記載の終末糖化産物産生抑制剤。
【請求項３】
請求項１又は請求項２に記載の終末糖化産物産生抑制剤を含む、食品、飲料、又は化粧品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、水棲生物の軟骨由来のプロテオグリカンと、桜の花エキスとを含む、終末糖化産物産生抑制剤、並びに、これを含む食品、飲料及び化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロテオグリカンは複合糖質のひとつで、コアタンパクとそれに結合するグリコサミノグリカン（酸性ムコ多糖）からなり、細胞外マトリックスの主な構成要素として、皮膚、軟骨、骨、血管壁などに存在する。近年、安全かつ低コストでサケ軟骨からプロテオグリカンを分離精製する技術が確立され、プロテオグリカンの大量供給が可能になったことから、プロテオグリカンの研究開発が精力的に行われている。
【０００３】
特許文献１（特開２００７−１３１５４８号公報）には、プロテオグリカンがＴＮＦ−α産生抑制作用、ＩＦＮ−γ産生抑制作用、ＩＬ−１０産生促進作用などのヘルパーＴ細胞のサブセットの１つである細胞性免疫を司るＴｈ１細胞に関連する分子に対する各種作用を有することが報告されている。
【０００４】
特許文献２（特開２０１０−２５４６５３号公報）には、プロテオグリカンがＴｈ１細胞とは異なるヘルパーＴ細胞のサブセットの１つであるＴｈ１７細胞の分化誘導を抑制する作用を有することが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００７−１３１５４８号公報
【特許文献２】特開２０１０−２５４６５３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、プロテオグリカンが有する薬理作用の全容はいまだ明らかでない。
そこで、本発明は、プロテオグリカンの新規な薬理用途を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、水棲生物の軟骨由来のプロテオグリカンを０．００４質量％以上０．１質量％以下、及び、桜の花エキスを０．０２質量％以上０．５質量％以下の量で含む、終末糖化産物産生抑制剤である。
【０００８】
本発明の終末糖化産物産生抑制剤において好ましくは、前記終末糖化産物産生抑制剤中の前記プロテオグリカンと、前記桜の花エキスとの質量比が、５：１〜１：２５の範囲である。
【０００９】
本発明は、前記終末糖化産物産生抑制剤を含む、食品、飲料、又は化粧品である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、プロテオグリカンの新規な薬理用途としての終末糖化産物産生抑制剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】プロテオグリカン及び桜の花エキスの濃度と、終末糖化産物の産生量との関係を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
［終末糖化産物産生抑制剤］
（終末糖化産物産生抑制作用）
終末糖化産物（Advanced Glycation End-Product：ＡＧＥ）とはタンパク質と糖類が非酵素的に反応することで産生される物質である。生体内においてタンパク質のリジン残基やアルギニン残基と還元糖とが反応し、アマドリ転移生成物が形成された後、酸化、脱水、縮合等の複雑な反応経路を経てＡＧＥに至ると考えられている。生体内におけるＡＧＥの蓄積は、皮膚や血管等の老化だけでなく、糖尿病性合併症、動脈硬化、骨粗しょう症等の生活習慣病の発症にも強く関与していると考えられている。本発明者らは、水棲生物の軟骨由来のプロテオグリカンと、桜の花エキスとを併用すると、優れた終末糖化産物産生抑制（以下、ＡＧＥ産生抑制とも記す）作用を得られることを見出した。
【００１３】
本発明の一実施の形態において、終末糖化産物産生抑制剤は、水棲生物の軟骨由来のプロテオグリカンと、桜の花エキスとを含む。
【００１４】
（プロテオグリカン）
プロテオグリカンは、サケ、サメ、ウシ、クジラなどの水棲生物の軟骨を原材料にして精製されたものを用いることができる。中でも、サケの鼻軟骨由来のプロテオグリカンを用いることが、原材料の入手及び抽出操作の容易性の観点から好ましい。
【００１５】
プロテオグリカンの精製方法は特に限定されず、公知の方法を用いることができる。例えば、特開２００２−６９０９７号公報に記載の酢酸を用いた方法を好適に採用することができる。この方法は、例えばミンチにしたサケの鼻軟骨から溶出溶媒として酢酸を用いて粗プロテオグリカンを溶出した後、得られる溶出液を濾過してから遠心分離し、その上澄液に食塩飽和エタノールを加えて遠心分離することにより得られる粗プロテオグリカンを含む半固形沈殿物を酢酸に溶解し、次いで透析する工程を含む。この方法によれば、例えばサケの鼻軟骨から約１００〜４００ｋＤａの分子量を有するプロテオグリカンを得ることができる。
【００１６】
プロテオグリカンの精製方法としては、特開２００８−１１２９６号公報に記載の方法も好適に採用することができる。この方法は、例えば凍結した水棲動物組織から、抽出に使用する水の温度及びｐＨを適正に設定して脂質と沈殿物とを分離して沈殿物を回収し、該沈殿物を乾燥微粉末化した後に、エタノールのような有機溶媒を使用して、沈殿物中に残存している脂質を除去する工程を含む。この方法によれば、組織中のプロテオグリカンの分解を伴うことなく、異臭が少なく、食品、飲料、化粧品等の用途に好適なプロテオグリカンを得ることができる。
【００１７】
なお、プロテオグリカンは高度に精製されたものである必要は必ずしもなく、異なる分子量を有する複数のプロテオグリカンの混合組成物やプロテオグリカンの作用に悪影響を及ぼさない他の成分を含むものであってもよい。
【００１８】
終末糖化産物産生抑制剤中のプロテオグリカンの含有量は、０．００４質量％以上０．１質量％以下である。これによると、優れたＡＧＥ産生抑制作用を得ることができる。なお、プロテオグリカンの含有量は、その製剤形態に応じて適宜選択することができ、例えば、０．０１質量％以上０．１質量％以下が好ましく、０．０２質量％以上０．１質量％以下がより好ましく、０．０４質量％以上０．１質量％以下がさらに好ましい。
【００１９】
（桜の花エキス）
桜の花エキスとは、桜の花の抽出物である。サクラ（桜、櫻）は、バラ科サクラ属の植物のうち、ウメ、モモ、アンズなどを除いた総称であり、一般にはサクラ亜属(Subgen. Cerasus)に属するものを指す。
【００２０】
本発明で用いる桜の種は特に限定されず、例えば、ヤマザクラ群、エドヒガン群、マメザクラ群、チョウジザクラ群、ミヤマザクラ群、シナミザクラ群等の群に属する桜を用いることができる。なお、これらの群に限定されず他の種も用いることができる。
【００２１】
桜の花エキスには、下記式（１）で示されるカフェオイルグルコース、下記式（２）で示されるケルセチングルコシド、下記式（３）で示されるクマロイルグルコース、下記式（４）で示されるシンナモイルグルコース、下記式（５）で示されるケンフェロールグルコシド、下記式（６）で示されるケルセチンマロニルグルコース、下記式（７）で示されるケンフェロールマロニルグルコース等が含まれている。
【００２２】
【化１】
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【００２３】
【化２】
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【００２４】
【化３】
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【００２５】
【化４】
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【００２６】
【化５】
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【００２７】
【化６】
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【００２８】
【化７】
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【００２９】
桜の花エキスを極性溶媒にて抽出する場合、用いる極性溶媒は特に限定されない。例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸、酢酸エチル、エーテル、ヘキサン等を用いることができる。これらのうち、水、メタノール、エタノールが好ましい。有効成分を効率よく抽出できるからである。尚、これらは１種のみ用いても良いし、２種以上併用しても良い。
【００３０】
抽出溶媒として水を使用する場合には、抽出温度２０〜１００℃、好ましくは４０〜７０℃程度で行うとよい。これは、抽出温度が低すぎると、有効成分が抽出されにくく、抽出温度が高すぎると桜に含有している、シアン化合物が残留しやすくなり、また、有効成分が分解されやすくなるため、好ましくない。抽出用の水の種類は、特に限定されず、水道水、蒸留水、ミネラル水、アルカリイオン水等を使用することができる。
【００３１】
抽出溶媒として含水アルコールを使用する場合、アルコール濃度２０重量％以上、好ましくは２５〜５０重量％であることが好ましい。２０重量％未満の場合、高い抽出量の有効成分を得ることが困難だからである。また、アルコール濃度が３０重量％以上の場合、抽出温度は、０〜９５℃、好ましくは０〜５０℃程度で行うとよい。なお、含水エタノール抽出は、有効成分の含有率を向上させるため、種々の濃度で繰り返すとよい。
【００３２】
桜の花エキスを極性溶媒にて抽出する場合、その抽出方法は特に限定されず、例えば、連続抽出、浸漬抽出、向流抽出等任意の方法を採用することができ、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。上述した方法にて抽出を行う場合、これらのうちの１つのみを行っても良いし、これらの方法を組み合わせても良い。また、これらの抽出は、１回のみ行っても良いし、２回以上行っても良い。
【００３３】
具体的な方法としては、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、攪拌しながら有効成分を溶出させる。例えば、抽出溶媒として水または含水アルコールを用いる場合には、抽出原料の３〜１００倍量程度（重量比）の極性溶媒を使用し、１分〜１５０時間程度抽出を行う。溶媒中に有効成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得る。その後、常法に従って抽出液に希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施すことにより桜の花エキスを得ることができる。
【００３４】
桜の花エキスの精製方法としては、例えば、活性炭処理、樹脂吸着処理、シリカゲル処理、イオン交換樹脂、液−液向流分配、膜分離等の方法が挙げられる。
【００３５】
桜の花エキスを超臨界抽出により抽出する場合、超臨界流体は特に限定されず、例えば、二酸化炭素及び窒素等を用いることができる。これらは１種のみを用いても良いし、２種類以上併用しても良い。また、これらのうち特に二酸化炭素が好ましい。より容易に有効成分を抽出することができるからである。また、このときの抽出方法は、公知の方法にて行えばよい。その後、常法に従って抽出液に希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施すことにより桜の花エキスを得ることができる。
【００３６】
終末糖化産物産生抑制剤中の桜の花エキスの含有量は、０．０２質量％以上０．５質量％以下である。これによると、優れたＡＧＥ産生抑制作用を得ることができる。なお、桜の花エキスの含有量は、その製剤形態に応じて適宜選択することができ、例えば、０．０４質量％以上０．５質量％以下が好ましく、０．１質量％以上０．５質量％以下がより好ましく、０．２質量％以上０．５質量％以下がさらに好ましい。
【００３７】
終末糖化産物産生抑制剤において、プロテオグリカンと桜の花エキスとの質量比は、ＡＧＥ産生抑制作用の観点から、５：１〜１：２５の範囲が好ましく、５：１〜１：５の範囲がより好ましく、１：１〜１：５の範囲がさらに好ましい。
【００３８】
（投与方法及び製剤形態）
終末糖化産物産生抑制剤の投与方法は、例えば、経口投与、経皮投与などが挙げられる。投与に際してはそれぞれの投与方法に適した剤型に製剤化すればよい。
【００３９】
製剤形態としては、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、細粒剤、丸剤、トローチ剤、舌下錠、軟膏、乳剤、懸濁剤、シロップなどが挙げられる。これら製剤の調製は、無毒性の賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、防腐剤、等張化剤、安定化剤、分散剤、酸化防止剤、着色剤、矯味剤、緩衝剤などの添加剤を使用して自体公知の方法にて行うことができる。無毒性の添加剤としては、例えば、でんぷん、ゼラチン、ブドウ糖、乳糖、果糖、マルトース、炭酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ペトロラタム、グリセリン、エタノール、シロップ、塩化ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、クエン酸、ポリビニルピロリドン、水などが挙げられる。なお、製剤中には、本発明の有用性を補強したり増強したりするために、他の薬剤を含有させてもよい。
【００４０】
終末糖化産物産生抑制剤の投与量は、投与対象者の性別や年齢や体重の他、症状の軽重などにより広範に調整することができるが、一般に１日当たり０．２ｍｇ／Ｋｇ以上２０ｍｇ／Ｋｇ以下とすることができる。上記の投与量は、１日１回または数回に分けて投与すればよい。
【００４１】
［食品、飲料、化粧品］
本発明の終末糖化産物産生抑制剤は、そのままあるいは加工して、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、飲料、動物薬、飼料、化粧品、医薬部外品、医薬品、治療薬または予防薬等に使用できる。
【００４２】
食品に使用する場合は、終末糖化産物産生抑制剤を、一般のいわゆる食品に添加して使用することができる。食品としては、例えば、チーズ、調製粉乳、アイスクリーム、ヨーグルト等の乳製品、チョコレート、クッキー、ビスケット、キャンディー、和菓子、米菓、ケーキ、パイ、プリン等の菓子類、パン、麺類等の小麦粉製品、雑炊、米飯等の米製品、しょうゆ、味噌、マヨネーズ、ドレッシング等の調味料等を挙げることができる。食品は、水産加工品、農産加工品、畜産加工品であっても良い。これらの食品は、カプセル剤（マイクロカプセル、ハードカプセル、ソフトカプセル）、錠剤、散剤、チュアブル錠、丸剤、シロップ、飲料等の経口投与形態であっても良い。
【００４３】
飲料に使用する場合は、終末糖化産物産生抑制剤を、一般のいわゆる飲料に添加して使用することができる。飲料としては、例えば、茶、コーヒー、牛乳、乳飲料、果汁飲料、ジュース、乳酸飲料、清涼飲料、栄養ドリンク、美容ドリンク等を挙げることができる。
【００４４】
化粧品に使用する場合は、終末糖化産物産生抑制剤を、一般のいわゆる化粧品に添加して使用することができる。化粧品とは、皮膚もしくは毛髪を健やかに保つために、または身体を清潔にし、美化し、魅力を増し、容貌を変えるために、身体に塗擦、散布などにより適用する物をいう。化粧品は、その用途に応じて、基礎化粧品、メイクアップ用化粧品、頭髪用化粧品などに分類される。本明細書においては、「化粧品」とは、薬用化粧品のような、薬事法における定義では医薬部外品に分類されるものも含む。化粧品としては、例えば、コールドクリーム、バニシングクリーム、中油性である混合型クリーム、マッサージクリーム、エモリエントクリーム、ハイゼニッククリーム、目元および手指用クリーム、リップクリーム、シェービングクリーム、アフターシェービングクリームなどのクリーム類；保湿化粧水、収斂性化粧水、酸性化粧水、アルカリ性化粧水、カーマインローション、アフターシェーブローションなどの化粧水類；ポリマー系を含む乳液などの乳液類；美容液および美容オイル；ボディ用スクラブ；パックおよび剥離性パック；下地クリーム、バニシングタイプファンデーション、おしろい、水おしろい、練りおしろい、スティック型を含む油性ファンデーション、水中油型または油中水型である乳液タイプのクリームファンデーション、パウダリーファンデーション、リキッドファンデーション、口紅、頬紅、ブラッシングパウダー、アイライナー、アイシャドウ、マスカラ、眉墨、機能性口紅、リップライナーペンシル、リップグロス、リップクリーム、ネイルエナメル、ベースコート、トップコート、除光液、ネイルクリーム、キューティクルリムーバーなどを含むメイクアップ用製品；シャンプー、コンディショニングシャンプー、リンス、ヘアトリートメント、リンス一体型シャンプー、育毛剤、養毛剤、ヘアムースおよびヘアフォーム、ヘアスプレー、ヘアミスト、ヘアジェル、セットローション、ヘアリキッド、スカルプトリートメント、ヘアクリーム、ヘアオイル、ヘアコーティングローション、ヘアグロススプレー、ヘアブロウ、ポマード、チック、ヘアワックス、染毛剤、ヘアブリーチなどを含む頭髪用製品類；ならびに浴用および洗顔石鹸、ボディ洗浄料、浴用剤、バブルバス、消臭剤、制汗剤、スリミング用、フレグランス用、香水、パヒューム、オードトワレ、オーデコロンなどを含むボディケア用製品類が挙げられる。
【実施例】
【００４５】
本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。ただし、これらの実施例により本発明が限定されるものではない。
【００４６】
［実施例１］
実施例１では、プロテオグリカン及び桜の花エキスの終末糖化産物産生抑制作用について検討した。
【００４７】
（実験方法）
D-glucoseを７．２質量％、及び、ウシ血清アルブミン（和光純薬（株）製の商品名「Fraction５」）を１．６質量％の濃度で含有するリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）を準備した。該リン酸緩衝生理食塩水を用いて、プロテオグリカン（株式会社角弘製の商品名「プロテオグリカン」、サケの鼻軟骨由来）及び桜の花エキス（オリザ油化株式会社製の商品名「桜の花エキス」）をそれぞれ表１に記載の濃度で含む溶液を各１００μＬずつ調整した（試料１〜３）。
【００４８】
【表１】
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【００４９】
試料１〜試料３の溶液を、９６ウェルプレートに分注して、６０℃で５日間静置した。溶液の蛍光光度（励起波長：３７０ｎｍ、測定波長：４４０ｎｍ）を蛍光マイクロプレートリーダーを用いて測定し、ＡＧＥ産生量の指標とした。プロテオグリカン及び桜の花エキス非添加群に対し、添加群（試料１〜試料３）におけるＡＧＥ産生量を百分率で示した。
【００５０】
（結果）
結果を図１に示す。図１において各値は３例の平均値と標準誤差で示した。アスタリスクはＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定による有意差＊＊：ｐ＜０．０１、＊：ｐ＜０．０５を表す。また、プロテオグリカンをＰＧと表記した。
【００５１】
試料１〜試料３のＡＧＥ産生量を比較したところ、桜の花エキス５．０ｍｇ／ｍＬに対し、プロテオグリカン１．０ｍｇ／ｍＬを混合した溶液（試料３）におけるＡＧＥ産生量が最も低い値であった。加えて、プロテオグリカン単体（試料１）及び桜の花エキス単体（試料２）の溶液と比較して、混合溶液（試料３）は有意にＡＧＥ産生を抑制した。すなわち、試料３の溶液が最も高いＡＧＥ産生抑制能を示した。
【００５２】
今回開示された実施の形態および実施例はすべての点で例示であって、制限的なものではないと考えられるべきである。本発明の範囲は上記した実施の形態ではなく特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味、および範囲内でのすべての変更が含まれることが意図される。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
本発明の終末糖化産物産生抑制剤は、食品、栄養機能食品、特定保健用食品、栄養補助剤、栄養剤、飲料、動物薬、飼料、化粧品、医薬部外品、医薬品、治療薬または予防薬等に使用できる。
【図１】
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