(57)【要約】【課題】本発明の主目的は、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制しうる新規な医薬を提供することにある。【解決手段】本発明として、例えば、（１）ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬、（２）ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬などを挙げることができる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬。
【請求項２】
前記医薬が配合剤である、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項４】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［（（Ｒ）−２，３−ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドである、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項５】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドであり、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項１又は２に記載の医薬。
【請求項６】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とを組み合わせてなる、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための組合わせ医薬。
【請求項７】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とが併用されることを特徴とする、請求項６に記載の組合わせ医薬。
【請求項８】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項６又は７に記載の組合わせ医薬。
【請求項９】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドである、請求項６又は７に記載の組合わせ医薬。
【請求項１０】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドであり、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項６又は７に記載の組合わせ医薬。
【請求項１１】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬であって、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬。
【請求項１２】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドである、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１３】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１４】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドであり、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項１１に記載の医薬。
【請求項１５】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬であって、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬。
【請求項１６】
ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１７】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドである、請求項１５に記載の医薬。
【請求項１８】
ＭＥＫ阻害作用を有する化合物がＮ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミドであり、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物がＮ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミンである、請求項１５に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を組み合わせてなる、骨髄線維症に伴う骨髄線維化を抑制するための医薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
骨髄線維症は骨髄に広範な線維化をきたす疾患の総称であり、原発性骨髄線維症と他疾患に伴って生じる続発性骨髄線維症に大別される。
原発性骨髄線維症では、造血幹細胞が腫瘍性増殖をきたし、そこで生じた巨核球を中心とした異常クローンからサイトカインが分泌されて線維芽細胞が反応性に増殖することで、骨髄の線維化が進行する。原発性骨髄線維症では、骨髄の線維化のほか、造血不全、脾腫大、全身症状の悪化など様々な臨床症状を示す。二次性骨髄線維症は種々の疾患に続発するが、骨髄異形成症候群、真正多血症、本態性血小板血症に続発することが多い。
原発性骨髄線維症の約半数の症例において、Ｊａｎｕｓ  ｋｉｎａｓｅ  ２（以下、「ＪＡＫ２」という。）の６１７番目のアミノ酸がバリンからフェニルアラニンへ置換された遺伝子変異（ＪＡＫ２Ｖ６１7Ｆ変異）が見出されたことから、ＪＡＫ２の活性化が原発性骨髄線維症発症の原因の一つと考えられている。
このような背景から、ＪＡＫ２阻害剤の原発性骨髄線維症における臨床試験が進められてきたが、これまでに臨床使用されたＪＡＫ２阻害剤は脾腫大の縮小に一定の効果はあるものの、骨髄の線維化にはあまり有効ではないとの報告がある（例えば、非特許文献１、２を参照）。
一方、ＭＡＰＫ／ＥＲＫ  ｋｉｎａｓｅ  （ｍｉｔｏｇｅｎ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ／ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｋｉｎａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ）（以下、「ＭＥＫ」という。）は細胞増殖シグナルに関与する因子として知られており、その阻害剤（ＭＥＫ阻害剤）は腫瘍細胞の増殖抑制剤として主に固形腫瘍患者を対象に臨床使用されている。しかしながら、ＭＥＫ阻害剤単独ないしＪＡＫ２阻害剤との併用が、骨髄線維症に伴う骨髄線維化に有効であることは知られていない（例えば、非特許文献３、４、５を参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＷＯ２００７／０７０５１４
【特許文献２】ＷＯ２００８／１５７２０８
【特許文献３】ＷＯ２００７／０５３４５２
【特許文献４】ＷＯ２００７／０５８６２７
【特許文献５】ＷＯ２００６／０７０１９５
【特許文献６】ＷＯ２０１０／０７４９４７
【特許文献７】ＷＯ２００８／１０９９４３
【特許文献８】ＷＯ２００７／０４９０４１
【特許文献９】ＷＯ２００７／０８９７６８
【特許文献１０】ＷＯ２０１１／０２８８６４
【特許文献１１】ＷＯ２０１０／０９０２９０
【特許文献１２】ＷＯ２００１／０４２２４６
【特許文献１３】ＷＯ２００２／０９６９０９
【特許文献１４】ＷＯ２００３／０４８１６２
【特許文献１５】ＷＯ２００７／０５８６２８
【特許文献１６】ＷＯ２０１１／０９７５２５
【特許文献１７】ＷＯ２００９／１１４５１２
【特許文献１８】ＷＯ２００７／０５８６２７
【特許文献１９】ＷＯ２００５／０３７８００
【特許文献２０】ＷＯ２０１０／０４６０３５
【特許文献２１】ＷＯ２０１２／０３０８８５
【特許文献２２】ＷＯ２０１０／１４９７６９
【特許文献２３】ＷＯ２００７／０８４５５７
【特許文献２４】ＷＯ２００５／０２３２５１
【特許文献２５】ＷＯ２００５／１２１１４２
【特許文献２６】ＷＯ２００７／０１４０１１
【特許文献２７】ＷＯ２００６／０４５５１４
【特許文献２８】ＷＯ２００５／０２３２５１
【特許文献２９】ＷＯ２００７／０４４５１５
【特許文献３０】ＷＯ２００９／０８５９８３
【特許文献３１】ＷＯ２００６／０１１４６６
【特許文献３２】ＷＯ２００７／０９１７３６
【特許文献３３】ＷＯ２００３／０７６４２４
【特許文献３４】ＷＯ２００５／０２３７９２
【特許文献３５】ＷＯ２００８／０７９８１４
【特許文献３６】ＷＯ１９９８／０３７８８１
【特許文献３７】ＷＯ１９９９／００１４２６
【特許文献３８】ＷＯ２００２／００６２１３
【特許文献３９】ＷＯ１９９９／０５２８６９
【特許文献４０】ＷＯ１９９６／０２２９８５
【特許文献４１】ＷＯ２０００／０２８３２４
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｄｒｕｇｓ．、２０１３年、２２巻、６８７頁−６９９頁
【非特許文献２】Ｂｌｏｏｄ、２０１２年、１１９巻、２７２１頁−２７３０頁
【非特許文献３】Ｂｌｏｏｄ、２０１０年、１１６巻、Ａｂｓｔｒａｃｔ、７９８頁
【非特許文献４】Ｌｅｕｋｅｍｉａ  ａｄｖａｎｃｅ  ｏｎｌｉｎｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、２０１４年７月１日、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｌｅｕ．２０１４．１７６
【非特許文献５】第７５回日本血液学会学術集会演題番号：ＯＳ−２−７４，２０１３年１０月１２日（土）
【非特許文献６】Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２００８年、２２巻、８７頁−９５頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の主目的は、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制しうる新規な医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、鋭意検討した結果、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とを組合わせて用いることにより、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を改善しうることを見出し、本発明の完成に至った。
即ち、本発明として、例えば、以下のものを挙げることができる。
（１）ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬。
（２）ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とを組み合わせてなる、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための組合わせ医薬。
（３）ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬であって、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬。
（４）ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬であって、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬。
さらに、本発明者らは、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物のみを用いることにより、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を改善しうることを見出した。したがって、本発明として、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬も挙げることができる。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】図１は、０．５％メチルセルロースを投与した後の骨髄線維症マウスにおける骨髄の切片写真（２００倍）を示す。
【図２】図２は、化合物１０のマレイン酸塩を投与した後の骨髄線維症マウスにおける骨髄の切片写真（２００倍）を示す。
【図３】図３は、化合物Ｍを投与した後の骨髄線維症マウスにおける骨髄の切片写真（２００倍）を示す。
【図４】図４は、化合物１０のマレイン酸塩と化合物Ｍを組合わせて投与した後の骨髄線維症マウスにおける骨髄の切片写真（２００倍）を示す。
【図５】図５は、野生型マウス（ＷＴ）、骨髄線維症マウス（ＴＧ）、化合物１０のマレイン酸塩を投与した後の骨髄線維症マウス（化合物１０のマレイン酸塩）、化合物１０のマレイン酸塩と化合物Ｍを組合わせて投与した後の骨髄線維症マウス（化合物１０のマレイン酸塩＋化合物Ｍ）、及び化合物Ｍを投与した後の骨髄線維症マウス（化合物Ｍ）における血漿中ＩＬ−１α濃度（ｐｇ／ｍｌ）を示す。
【図６】図６は、野生型マウス（ＷＴ）、骨髄線維症マウス（ＴＧ）、化合物１０のマレイン酸塩を投与した後の骨髄線維症マウス（化合物１０のマレイン酸塩）、化合物１０のマレイン酸塩と化合物Ｍを組合わせて投与した後の骨髄線維症モデルマウス（化合物１０のマレイン酸塩＋化合物Ｍ）、及び化合物Ｍを投与した後の骨髄線維症マウス（化合物Ｍ）における脾臓重量（ｇ）を示す。
【図７】図７は、０．５％メチルセルロースを投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓の切片写真（１００倍）を示す。
【図８】図８は、化合物１０のマレイン酸塩を投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓の切片写真（１００倍）を示す。
【図９】図９は、化合物Ｍを投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓の切片写真（１００倍）を示す。
【図１０】図１０は、化合物１０のマレイン酸塩と化合物Ｍを組み合わせて投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓の切片写真（１００倍）を示す。
【図１１】図１１は、０．５％メチルセルロースを投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓組織の切片写真（１００倍）を示す。
【図１２】図１２は、化合物１０のマレイン酸塩を投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓組織の切片写真（１００倍）を示す。
【図１３】図１３は、化合物Ｍを投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓組織の切片写真（１００倍）を示す。
【図１４】図１４は、化合物１０のマレイン酸塩と化合物Ｍを組合わせて投与した後の骨髄線維症マウスにおける脾臓組織の切片写真（１００倍）を示す。
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とを組合わせて用いることにより、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制する医薬に関するものである。
以下に本発明について詳述する。
本明細書中、「ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物」としては、例えば、以下の化合物を挙げることができる。
（１）化合物１：  ３（Ｒ）−シクロペンチル−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］プロパンニトリル  （例えば、特許文献１，特許文献２を参照。）、
（２）化合物２：  Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル−３−［５−メチル−２−［４−［２−（１−ピロリジニル）エトキシ］フェニルアミノ］ピリミジン−４−イルアミノ］ベンゼンスルホンアミド  （例えば、特許文献３を参照。）、
（３）化合物３：  １１−［２−（１−ピロリジニル）エトキシ］−１４，１９−ジオキサ−５，７，２７−トリアザテトラシクロ［１９．３．１．１（２，６）．１（８，１２）］ヘプタコサ−１（２５），２（２７），３，５，８（２６），９，１１，１６，２１，２３−デカエン  （例えば、特許文献４を参照。）、
（４）化合物４：  Ｎ−シクロプロピル−Ｎ’−［３−［５−（モルホリン−４−イルメチル）−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル］−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］ウレア  （例えば、特許文献５を参照。）、
（５）化合物５：  ３−（４−クロロ−２−フルオロベンジル）−２−メチル−Ｎ−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）−８−（モルホリン−４−イルメチル）イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン−６−アミン  （例えば、特許文献６を参照。）、
（６）化合物６：  Ｎ−（シアノメチル）−４−［２−［４−（４−モルホリニル）フェニルアミノ］ピリミジン−４−イル］ベンズアミド  （例えば、特許文献７を参照。）、
（７）化合物７：  ５−クロロ−Ｎ２−［１（Ｓ）−（５−フルオロピリミジン−２−イル）エチル］−Ｎ４−（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）ピリミジン−２，４−ジアミン  （例えば、特許文献８を参照。）、
（８）化合物８：  Ｎ−［４−（２−［［４−（モルホリン−４−イル）フェニル］アミノ］ピリミジン−４−イル）フェニル］−Ｄ−プロリンアミド  （例えば、特許文献９を参照。）、
（９）化合物９：  Ｎ，Ｎ−ジシクロプロピル−４−（１，５−ジメチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ）−６−エチル−１−メチル−１，６−ジヒドロイミダゾ［４，５−ｄ］ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−７−カルボキサミド  （例えば、特許文献１０を参照。）、
（１０）化合物１０：  Ｎ２−［１（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ６−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミン  （例えば、特許文献１１を参照。）、
（１１）化合物１１：  ３−［４（Ｒ）−メチル−３（Ｒ）−［Ｎ−メチル−Ｎ−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）アミノ］ピペリジン−１−イル］−３−オキソプロパンニトリル  （例えば、特許文献１２，特許文献１３，特許文献１４を参照。）、
（１２）化合物１２：  １４−メチル−２０−オキサ−５，７，１４，２７−テトラアザテトラシクロ［１９．３．１．１（２，６）．１（８，１２）］ヘプタコサ−１（２５），２（２７），３，５，８（２６），９，１１，１６，２１，２３−デカエン  （例えば、特許文献１５，特許文献１６を参照。）、
（１３）化合物１３：  ２−［１−（エチルスルホニル）−３−［４−（７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ピラゾール−１−イル］アゼチジン−３−イル］アセトニトリル  （例えば、特許文献１７を参照。）、
（１４）化合物１４：  １５−［２−（１−ピロリジニル）エトキシ］−７，１２，２６−トリオキサ−１９，２１，２４−トリアザテトラシクロ［１８．３．１．１（２，５）．１（１４，１８）］ヘキサコサ−１（２４），２，４，９（Ｅ），１４（２５），１５，１７，２０，２２−ノナエン  （例えば、特許文献１８を参照。）、
（１５）化合物１５：  （２Ｒ，３Ｒ）−３−［［２−［［４−（Ｓ−シクロプロピルスルホンイミドイル）フェニル］アミノ］−５−（トリフルオロメチル）ピリミジン−４−イル］オキシ］ブタン−２−オール  （例えば、特許文献１９，特許文献２０を参照。）、
（１６）化合物１６：  （±）−（４−フルオロフェニル）［４−［（５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）アミノ］キナゾリン−２−イル］メタノール  （例えば、特許文献２１を参照。）、
（１７）化合物１７：  Ｎ−［５−［４−（１，１−ジオキシドチオモルホリン−４−イルメチル）フェニル］［１，２，４］トリアゾロ［１，５−ａ］ピリジン−２−イル）シクロプロパンカルボキサミド  （例えば、特許文献２２を参照。）、
（１８）化合物１８：  Ｎ２−［２−（１Ｈ−ピロロ［２，３−ｂ］ピリジン−３−イル）ピリミジン−４−イル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｄ−イソバリンアミド  （例えば、特許文献２３を参照。）。
【０００９】
好ましい「ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物」としては、化合物１０（Ｎ−［（１Ｓ）−１−（４−フルオロフェニル）エチル］−４−（１−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−Ｎ’−（ピラジン−２−イル）ピリジン−２，６−ジアミン）を挙げることができる。
【００１０】
本明細書中、「ＭＥＫ阻害作用を有する化合物」としては、例えば、以下の化合物を挙げることができる。
（１）化合物Ａ：  ５−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−４−フルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾール−６−カルボキサミド  （例えば、特許文献２４を参照。）
（２）化合物Ｂ：  Ｎ−［３−［３−シクロプロピル−５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）−６，８−ジメチル−２，４，７−トリオキソ−１，２，３，４，６，７−ヘキサヒドロピリド［４，３−ｄ］ピリミジン−１−イル］フェニル］アセトアミド  （例えば、特許文献２５を参照。）
（３）化合物Ｃ：  （−）−Ｎ−［３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）−６−メトキシフェニル］−１−［２（Ｓ），３−ジヒドロキシプロピル］シクロプロパンスルホンアミド  （例えば、特許文献２６を参照。）
（４）化合物Ｄ：  Ｎ−［２（Ｓ），３−ジヒドロキシプロピル］−３−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）ピリジン−４−カルボキサミド  （例えば、特許文献２７を参照。）
（５）化合物Ｅ：  ５−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）アミノ］−４−フルオロ−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾ[ｄ]イミダゾール−６−カルボキサミド  （例えば、特許文献２８を参照。）
（６）化合物Ｆ：  １−［３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）フェニル］−１−［３−ヒドロキシ−３−［２（Ｓ）−ピペリジニル］アゼチジン−１−イル］メタノン  （例えば、特許文献２９を参照。）
（７）化合物Ｇ：  ５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）イミダゾ［１，５−ａ］ピリジン−６−カルボキサミド  （例えば、特許文献３０を参照。）
（８）化合物Ｈ：  ３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエトキシ）−５−（３−オキソ−１，２−オキサジナン−２−イルメチル）ベンズアミド  （例えば、特許文献３１を参照。）
（９）化合物Ｉ：  Ｎ−［３−フルオロ−４−［４−メチル−２−オキソ−７−（ピリミジン−２−イルオキシ）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イルメチル］ピリジン−２−イル］−Ｎ’−メチルスルファミド  （例えば、特許文献３２を参照。）
（１０）化合物Ｊ：  （５Ｚ）−１４−（エチルアミノ）−８（Ｓ），９（Ｓ），１６−トリヒドロキシ−３（Ｓ），４（Ｒ）−ジメチル−３，４，７，８，９，１０−ヘキサヒドロ−１Ｈ−２−ベンゾキサシクロテトラデシン−１，７−ジオン  （例えば、特許文献３３，特許文献３４を参照。）
（１１）化合物Ｋ：  ３−［２（Ｒ），３−ジヒドロキシプロピル］−６−フルオロ−５−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）−８−メチルピリド［２，３−ｄ］ピリミジン−４，７（３Ｈ，８Ｈ）−ジオン  （例えば、特許文献３５を参照。）
（１２）化合物Ｌ：  ２−（２−クロロ−４−ヨードフェニルアミノ）−Ｎ−（シクロプロピルメトキシ）−３，４−ジフルオロベンズアミド  （例えば、特許文献３６，特許文献３７を参照。）
（１３）化合物Ｍ：  Ｎ−［２（Ｒ），３−ジヒドロキシプロポキシ］−３，４−ジフルオロ−２−（２−フルオロ−４−ヨードフェニルアミノ）ベンズアミド  （例えば、特許文献３８を参照。）
（１４）化合物Ｎ：  （３Ｚ）−３−［（［３−［（ジメチルアミノ）メチル］フェニル］アミノ）（フェニル）メチリデン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボキサミド  （例えば、特許文献３９を参照。）
（１５）化合物Ｏ：  ２−（２−アミノ−３−メトキシフェニル）−４Ｈ−１−ベンゾピラン−４−オン  （例えば、特許文献４０を参照。）
（１６）化合物Ｐ：  ２，３−ビス［（Ｚ）−アミノ（２−アミノフェニルスルファニル）メチレン］スクシノニトリル  （例えば、特許文献４１を参照。）
【００１１】
好ましい「ＭＥＫ阻害作用を有する化合物」としては、化合物Ｍ（Ｎ−［２（Ｒ），３−（ジヒドロキシプロピル）オキシ］−３，４−ジフルオロ−２−［（２−フルオロ−４−ヨードフェニル）アミノ］ベンズアミド）を挙げることができる。
【００１２】
本明細書中、「医薬上許容される塩」としては、医薬上許容されるものであれば特に限定されないが、例えば、無機塩基との塩、有機塩基との塩、無機酸との塩、有機酸との塩との塩を挙げることができる。無機塩基との塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩を挙げることができる。有機塩基との塩としては、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、２，６−ルチジン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンとの塩を挙げることができる。無機酸との塩としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸との塩を挙げることができる。有機酸との塩としては、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フタル酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸との塩を挙げることができる。
本明細書中、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物の医薬上許容される塩として、具体的には、化合物１のリン酸塩、化合物４の塩酸塩、化合物６の二塩酸塩、化合物１０のマレイン酸塩、化合物１１のクエン酸塩、化合物１２のクエン酸塩、化合物１６の臭化水素酸塩を挙げることができる。
本明細書中、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物の医薬上許容される塩として、具体的には、化合物Ａの硫酸塩、化合物Ｄの塩酸塩を挙げることができる。
【００１３】
本明細書中、「ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物」の“溶媒和物”としては、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物の溶媒和物や、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物の医薬上許容される塩の溶媒和物を挙げることができる。
本明細書中、「ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物」の“溶媒和物”としては、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物の溶媒和物や、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物の医薬上許容される塩の溶媒和物を挙げることができる。
また、溶媒和物としては、例えば、水との溶媒和物（水和物）やアルコールやスルホキシド等の有機溶媒との溶媒和物を挙げることができる。
本明細書中、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物の溶媒和物として、具体的には、化合物Ｂのジメチルスルホキシド和物を挙げることができる。
【００１４】
本発明は、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とを組合わせて用いることを挙げることができる。
【００１５】
本発明において、「ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬」とは、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために投与される一つの医薬中に、有効成分として、（ａ）骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量のＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び（ｂ）骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量のＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬を意味する。好ましい態様としては、例えば、配合剤を挙げることができる。
有効成分として、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬（例えば、配合剤）は、連日投与、または間歇的に投与しても良く、一日当たりの投与回数は、１回または２〜３回に分けて行うことができる。
【００１６】
本発明において、「ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬、及びＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とを組み合わせてなる、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための組合わせ医薬」とは、（ａ）有効成分として骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量のＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と、（ｂ）有効成分として骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量のＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とをひとまとまりの状態にした、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬を意味する。例えば、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とを一式として揃えた状態である、キットの形態を挙げることができる。具体的なキットの形態としては、例えば、医薬の製造段階において一連の投与スケジュールに従って特定の期間に相当する両医薬を１つのシートにまとめて包装したブリスターパッケージ（例えば、ＰＴＰシート）、又は調剤又は処方段階において１回の使用ごとに両医薬が同一包装に入れられた状態のものを挙げることができる。
【００１７】
本発明において、「ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬であって、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬」とは、ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用するための、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量のＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含有する医薬を意味する。
【００１８】
本発明において、「ＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬であって、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用されることを特徴とする、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するための医薬」とは、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬と併用するための、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量のＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を有効成分として含有する医薬を意味する。
【００１９】
本発明において、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とを別々の医薬として組合わせて用いるときには、それぞれの医薬を同時に、又は逐次的に投与することができる。それぞれの医薬を逐次的に投与する場合、例えば、それぞれの医薬を異なる投与スケジュールで使用することもできる。例えば、一定の時間間隔をあけてそれぞれの医薬を投与する場合や、一定の期間一方の医薬を投与した後、他方の医薬を投与する場合も含まれる。
【００２０】
「骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制するために有効な量」とは、患者の体内に入ったときに、骨髄線維症に伴う骨髄の線維化を抑制又は骨髄線維症に伴う骨髄線維化の状態を改善するために必要な有効成分の量を意味する。例えば、投与量としては、年齢、体重、疾病の種類、程度等の患者の状態、投与経路を考慮した上で調製することが望ましいが、通常は、成人（体重約６０ｋｇ）に対してＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物の有効成分量として、経口投与の場合、１日あたり、０．０１ｍｇ〜５ｇ／成人の範囲内、好ましくは、１ｍｇ〜５００ｍｇ／成人の範囲内が適当である。場合によっては、これ以下でも足りるし、また逆にこれ以上の用量を必要とすることもある。
【００２１】
本発明において、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬とがそれぞれ別々の医薬である場合、それぞれの医薬は同じ剤形であっても、異なる剤型であっても構わない。また、それぞれの投与経路は同一であっても、異なっていてもよい。
【００２２】
本発明において、有効成分としてＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物とＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬（例えば、配合剤）、有効成分としてＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬、又は有効成分としてＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を含有する医薬は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を、そのまま又は医薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、例えば、０．００１％〜９９．５％、好ましくは、０．１％〜９０％含有する医薬として、人を含む哺乳動物に投与される。
上記担体としては、固形、半固形、又は液状の希釈剤、充填剤、及びその他の処方用の助剤一種以上が用いられる。
【００２３】
本発明に係る医薬は、固形又は液状の用量単位で、末剤、散剤、カプセル剤、錠剤、シロップ剤、懸濁剤、液剤、糖衣剤、顆粒剤、エリキシル剤、トローチ剤等の経口投与製剤、注射剤、軟膏剤、ローション剤、クリーム等の非経口投与製剤のいずれかの形態をもとることができる。徐放性製剤であってもよい。それらの中で、経口投与製剤が好ましい。
【００２４】
本発明に係る医薬の製剤化は、公知の製剤技術を用いることにより行うことができるが、例えば、以下の方法を用いることにより行うことができる。
末剤は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を適当な細かさにすることにより製造することができる。
散剤は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を適当な細かさにし、次いで同様に細かくした医薬用担体、例えば、澱粉、マンニトールのような可食性炭水化物と混合することにより製造することができる。任意に風味剤、保存剤、分散剤、着色剤、香料等を添加することができる。
カプセル剤は、まず上述したように粉末状となった末剤や散剤あるいは錠剤の項で述べるように顆粒化したものを、例えば、ゼラチンカプセルのようなカプセル外皮の中に充填することにより製造することができる。滑沢剤や流動化剤、例えば、コロイド状のシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、固形のポリエチレングリコールを粉末状となった末剤や散剤と混合し、その後、充填操作を行うことにより製造することもできる。崩壊剤や可溶化剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウムを添加すれば、カプセル剤が摂取されたときの医薬の有効性を改善することができる。また、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物の微粉末を植物油、ポリエチレングリコール、グリセリン、界面活性剤中に懸濁分散し、これをゼラチンシートで包んで軟カプセル剤とすることもできる。
錠剤は、粉末化されたＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物に賦形剤を加えて粉末混合物を作り、顆粒化若しくはスラグ化し、次いで崩壊剤又は滑沢剤を加えた後、打錠することにより製造することができる。
シロップ剤は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を適当な香味水溶液に溶解して製造することができる。エリキシル剤は、非毒性のアルコール性担体を用いることにより製造することができる。
懸濁剤は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物を非毒性担体中に分散させることにより製造することができる。必要に応じて、可溶化剤や乳化剤（例えば、エトキシ化されたイソステアリンアルコール類、ポリオキシエチレンソルビトールエステル類）、保存剤、風味付与剤（例えば、ペパーミント油、サッカリン）等を添加することができる。必要であれば、経口投与のための用量単位処方をマイクロカプセル化することができる。当該処方はまた、被覆をしたり、高分子・ワックス等中に埋め込んだりすることにより作用時間の延長や持続放出をもたらすこともできる。
注射剤は、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物の一定量を、注射の目的に適合する非毒性の液状担体、例えば、水性又は油性の媒体に懸濁し又は溶解し、次いで当該懸濁液又は溶液を滅菌することにより製造することができる。注射剤を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加することができる。また、安定剤、保存剤、乳化剤等を添加することもできる。
軟膏剤は、例えば、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物と疎水性基剤や親水性基剤等の基剤とを混合することにより製造することができる。また、保存剤、酸化防止剤等を添加することもできる。
ローション剤は、例えば、ＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物と溶剤、乳化剤、懸濁化剤等と上水や精製水等の水性の液体に加え、溶解又は分散させることにより製造することができる。また、保存剤等を添加することもできる。
液剤、トローチ剤、エリキシル剤もまたその一定量がＪＡＫ２阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物、及び／又はＭＥＫ阻害作用を有する化合物若しくはその医薬上許容される塩又はその溶媒和物の一定量を含有するように用量単位形態にすることができる。
【実施例】
【００２５】
以下に試験例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらのみに限定されるものではない。
骨髄線維症マウスには、骨髄や脾臓の線維化、脾臓の腫大等を呈するＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆトランスジェニックマウスを使用した（例えば、非特許文献６を参照）。本骨髄線維症マウス（４カ月齢、雌）に対しては、（Ａ）０．５％メチルセルロース溶液（和光純薬工業株式会社  ＣＡＴ．ＮＯ．１３８−０５０５２）、（Ｂ）０．５％メチルセルロース溶液で希釈された５０ｍｇ／ｋｇの化合物１０のマレイン酸塩（特許文献１１に記載の方法に従って製造）、（Ｃ）０．５％メチルセルロース溶液で希釈された５ｍｇ／ｋｇの化合物Ｍ（ＬＣ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製）、（Ｄ）０．５％メチルセルロース溶液で希釈された５０ｍｇ／ｋｇの化合物１０のマレイン酸塩と５ｍｇ／ｋｇの化合物Ｍを、それぞれ経口投与した。一方、野生型マウス（ＢＤＦ１マウス、４カ月齢、雌）に対しては、０．５％メチルセルロース溶液を経口投与した。それぞれのマウスに対し、３カ月間投与した後、安楽死させ、大腿骨、脛骨、脾臓、血漿を採取した。
【００２６】
試験例１：  骨髄線維症マウスを用いた骨髄線維化抑制作用の検討
薬物非投与の骨髄線維症マウス、化合物１０のマレイン酸塩を投与した骨髄線維症マウス、化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウス、及び化合物１０とマレイン酸塩と化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウスより採取した大腿骨及び脛骨をホルマリン固定後パラフィン包埋した（各群５〜６匹）。パラフィン切片を用いて鍍銀染色を行い、線維成分を染色した。代表的な大腿骨の写真を、一例ずつ図１〜４に示す。
【００２７】
試験例２：骨髄線維症マウスを用いた血漿中ＩＬ−１α濃度の検討
薬物非投与の野生型マウス、薬物非投与の骨髄線維症マウス、化合物１０のマレイン酸塩を投与した骨髄線維症マウス、化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウス、及び化合物１０とマレイン酸塩と化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウスより採取した血漿中のＩＬ−１α濃度をＥＬＩＳＡ法により測定した（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ＥＬＩＳＡ  Ｍｏｕｓｅ  ＩＬ−１α／ＩＬ−１Ｆ１  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）（各群６〜８匹）。その結果を図５に示す。
【００２８】
試験例３：骨髄線維症マウスを用いた脾臓重量の検討
薬物非投与の野生型マウス、薬物非投与の骨髄線維症マウス、化合物１０のマレイン酸塩を投与した骨髄線維症マウス、化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウス、及び化合物１０とマレイン酸塩と化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウスより採取した脾臓の重量を測定した（各群１０〜１６匹）。その結果を図６に示す。
【００２９】
試験例４：骨髄線維症マウスを用いた脾臓の線維化抑制作用の検討
薬物非投与の骨髄線維症マウス、化合物１０のマレイン酸塩を投与した骨髄線維症マウス、化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウス、及び化合物１０とマレイン酸塩と化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウスより採取した脾臓をホルマリン固定後パラフィン包埋した（各群５〜６匹）。パラフィン切片を用いて鍍銀染色を行い、線維成分を染色した。代表的な写真を、一例ずつ図７〜図１０に示す。
【００３０】
試験例５：骨髄線維症マウスを用いた脾臓機能の検討
薬物非投与の骨髄線維症マウス、化合物１０のマレイン酸塩を投与した骨髄線維症マウス、化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウス、及び化合物１０とマレイン酸塩と化合物Ｍを投与した骨髄線維症マウスより採取した脾臓をホルマリン固定後パラフィン包埋した（各群５〜６匹）。パラフィン切片を用いてヘマトキシリン・エオジン染色を行った。代表的な写真を、一例ずつ図１１〜図１４に示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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