(57)【要約】【課題】中枢神経疾患の予防及び進行を抑制する効果をもつ医薬組成物及び食品を提供することを目的とする。【解決手段】本発明の医薬組成物は、カミツレの抽出液を含有し、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられることを特徴とする。カミツレの抽出液を含有することで、ＣＲＥ依存性転写活性が促進され、記憶学習関連遺伝子の発現を亢進するという効果を生じるため、中枢神経疾患の予防及び進行を抑制することができる。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
中枢神経疾患の予防及び治療に用いられる医薬組成物であって、
カミツレの抽出液を含有する、
ことを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
前記カミツレの抽出液が、アルコール抽出液である、
ことを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記アルコール抽出液が、ブタノール抽出液である、
ことを特徴とする請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記カミツレの抽出液が、
ブタノール抽出液と、
熱水、ヘキサン、エタノールの群から選択される１種の抽出液と、を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記抽出液における前記カミツレの濃度が１００μｇ／ｍＬから１００００μｇ／ｍＬである、
ことを特徴とする請求項１から請求項４の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
中枢神経疾患の予防及び治療に用いられる食品であって、
カミツレの抽出物を含有する、
ことを特徴とする食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬組成物および食品に関し、特に中枢神経疾患の予防及び治療に用いられるカミツレを含有する医薬組成物及び食品に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
超高齢化社会に伴う認知症患者数の増加は、深刻な社会問題となっている。今後さらに高年齢者の数が増加することが予測されており、認知症を予防または治療する医薬品（医薬組成物）、食品に対する要求は増加すると考えられる。
記憶障害改善作用と作用機構を明らかにした植物由来成分として、柑橘類果皮由来のノビレチンが知られている（例えば、特許文献１）。
【０００３】
ノビレチンは、アルツハイマー病モデルを含む様々な記憶障害モデル動物において、その記憶障害を改善することが知られている。その作用機序として、ｐｒoｔｅｉｎ ｋｉｎａｓe Ａ（ＰＫＡ）／（ＥＲＫ）／ｃＡＭＰ（ＣＲＥ）-ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｔｅｉｎ（ＣＲＥＢ）細胞内シグナル経路を活性化し、ＣＲＥ依存性転写を亢進して記憶学習関連遺伝子の発現を亢進することが知られている（例えば、特許文献２）。
【０００４】
キク科の植物であるカミツレ（キク科属名シカギク属カモミール（Ｍａｔｒｉｃａｒｉａ Ｃｈａｍｏｍｉｌａ Ｌ）は、消炎、鎮痛、鎮痙、発汗、強壮などの作用を有し、神経痛、リューマチ、腰痛、不眠症、小児喘息に対する効果があることが知られている。この他、腸管の蠕動運動促進作用、便秘、下痢、胃腸炎に対して有効である。
また、カミツレは、その消炎作用から外用として用いることで皮膚粘膜の炎症や口内炎、咽喉炎の炎症も抑制することができる物質である。さらに、カミツレは、ハーブティーとして飲用され、食品成分としても使用されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１４−１１１６６４号公報
【特許文献２】特開２００７−６１０２８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
現在までに、認知症、特にその半数を占めるアルツハイマー病に対する予防や進行抑制効果を持つ決定的な臨床薬は存在していない。そのため、アルツハイマー病に対する予防や進行抑制効果を持つ医薬組成物や食品が求められている。
【０００７】
そこで、本発明は、中枢神経疾患の予防及び進行を抑制する効果をもつ医薬組成物及び食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明の医薬組成物は、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられる医薬組成物であって、カミツレの抽出液を含有することを特徴とする。
【０００９】
また、本発明の医薬組成物は、カミツレの抽出液がアルコール抽出液であることを特徴とする。
【００１０】
本発明の医薬組成物は、アルコール抽出液がブタノール抽出液であることを特徴とする。
【００１１】
本発明の医薬組成物は、カミツレの抽出液がブタノール抽出液と、熱水、ヘキサン、エタノールの群から選択される１種の抽出液と、を含むことを特徴とする。
【００１２】
本発明の医薬組成物は、抽出液におけるカミツレの濃度が１００μｇ／ｍＬから１００００μｇ／ｍＬであることを特徴とする。
【００１３】
本発明の医薬組成物は、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられる食品であって、カミツレの抽出物を含有することを特徴とする。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の医薬組成物は、カミツレの抽出液を含有することで、ＣＲＥ依存性転写活性を促進し、記憶学習関連遺伝子の発現を亢進するという効果を生じるため、中枢神経疾患の予防及び治療に用いることができる。
このカミツレのブタノール抽出液は、アルコールで抽出することができる。また、カミツレのブタノール抽出液は、他の抽出液（ヘキサン抽出液、エタノール抽出液、熱水抽出液）と比較し、高いルシフェラーゼ活性（ＣＲＥ依存性転写活性）を有する。
【００１５】
本発明の医薬組成物は、カミツレの抽出液がブタノール抽出液と、熱水、ヘキサン、エタノールの群から選択される１種の抽出液とからなる。ブタノール抽出液と他の抽出液を混合させた抽出液は、ルシフェラーゼ活性を向上させ、ＣＲＥ依存性転写活性を促進するため、中枢神経疾患の予防及び治療に用いることができる。中でも、ブタノール抽出液とエタノール抽出液との混合抽出液は、最も有効な医薬組成物である。
【００１６】
また、本発明の医薬組成物は、この抽出液におけるカミツレの濃度が１００μｇ／ｍＬから１００００μｇ／ｍＬとすることで、ノビレチン溶液のみの場合と比較し、ルシフェラーゼ活性を向上させることができ、ＣＲＥ依存性転写活性を促進させることができる。なお、カミツレの濃度に依存して、ルシフェラーゼ活性が向上するため、上記カミツレの濃度より高い抽出液を用いた場合でも、ルシフェラーゼ活性を向上する効果が生じると考えられる。
【００１７】
さらに、カミツレの抽出液（抽出物）は、ＣＲＥ依存性転写活性を促進し、記憶学習関連遺伝子の発現を亢進するという効果を有するため、中枢神経疾患の予防および治療するための食品に適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本実施形態に係るカミツレのメタノール抽出液を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図２】本実施形態に係るカミツレの純水抽出液（１群）、アルカリ還元水抽出液（２群）、９９％エタノール抽出液（３群）、５０％エタノール抽出液（４群）を添加した場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図３】本実施形態に係るカミツレの抽出液のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示すグラフである。
【図４】本実施形態に係るカミツレの抽出液のＰＤ９８０５９による阻害実験の結果を示すグラフである。
【００１９】
本発明の実施形態に係る医薬組成物は、カミツレの乾燥物または抽出液（抽出物）を含有し、中枢神経疾患の予防及び治療に用いられるものである。中枢神経疾患とは、例えば、アルツハイマー病やパーキンソン病等が挙げられる。
【００２０】
［試料調整］
カミツレの花を乾燥させた後、細切し、熱水、ヘキサン、メタノール、エタノールを用いて抽出し、各抽出液を得た。カミツレの濃度は、各抽出液に対して、１００、５００、１０００、および５０００μｇ／ｍＬとなるように調整した。
【００２１】
［ルシフェラーゼレポーターアッセイ］
各試料の遺伝子転写活性を評価するためにルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。
ルシフェラーゼレポーターアッセイは、被検物質の有する転写活性を定量的に解析するために使用されるものである。転写が活性化するためには、遺伝子の上流プロモーターに存在する様々な制御配列が必要である。
本実施例では、ＰＫＡ／ＥＲＫ／ＣＲＥＢ細胞内シグナルによって活性化される制御配列であり、かつ記憶学習関連遺伝子の上流プロモーターに存在するＣＲＥ配列と、発光酵素であるルシフェラーゼの遺伝子を連結したプラスミドを使用した。
被験物質がＣＲＥ依存性の転写を活性化した場合、その下流にあるルシフェラーゼ遺伝子が発現し、上昇してルシフェラーゼタンパク質が細胞内で増加する。そうすると、基質を添加することで蛍光を発するため、その吸光度を測定し、転写活性を定量できる。
ＰＣ１２細胞（ラット副腎髄質褐色細胞腫由来細胞株）を９６穴培養ディッシュに播種濃度４．０×１０４個／穴で播種した。その後、プラスミドをＰＣ１２細胞内に導入し、各試料を滴下した培地で培養した。培地には、１％血清を添加したα改変ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）を使用した。
ＰＣ１２細胞を所定時間培養した後、培地１ｍＬに対し、所定の濃度となるように試料を加えた培地に交換し、各試料を添加した培養ディッシュを３７℃、５％ＣＯ２雰囲気下で、５時間インキュベートし、ルシフェラーゼレポーターアッセイを行った（試験１〜試験３）。
【００２２】
［試験１］
試験１では、メタノール抽出液のルシフェラーゼ活性を調べた。
メタノール抽出液は、抽出液におけるカミツレの濃度が１００μｇ／ｍＬ（培地に対するカミツレ濃度：１０μｇ／ｍＬ）、５００μｇ／ｍＬ（培地に対するカミツレ濃度：５０μｇ／ｍＬ）、１０００μｇ／ｍＬ（培地に対するカミツレ濃度：１００μｇ／ｍＬ）の抽出液を用いた。
また、比較として、ノビレチン溶液を使用した。ノビレチンは、柑橘系植物から抽出したものを使用した（純度９９％）。ノビレチン溶液は、２μｇ／ｍＬ（５μＭ）（培地に対するノビレチン濃度：０．２μｇ／ｍＬ）、６μｇ／ｍＬ（１５μＭ）（培地に対するノビレチン濃度：０．６μｇ／ｍＬ）、１２μｇ／ｍＬ（３０μＭ）（培地に対するノビレチン濃度：１．２μｇ／ｍＬ）となるように調整した。
【００２３】
図１は、メタノール抽出液を添加した後のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示している。
１００μｇ／ｍＬメタノール抽出液は、ノビレチンがルシフェラーゼ活性を発現する濃度の溶液（２μｇ／ｍＬ）と、同等のルシフェラーゼ活性を示すことが分かった。
また、５００μｇ／ｍＬメタノール抽出液および１０００μｇ／ｍＬメタノール抽出液は、ノビレチン溶液（２、１２μｇ／ｍＬ）と比較し、非常に高いルシフェラーゼ活性を示した。
このことから、カミツレのメタノール抽出液は、ルシフェラーゼ活性を向上させることが明らかとなった。さらに、培地に対するカミツレの濃度が高くなるにしたがい、ルシフェラーゼ活性が高くなることが分かった。そのため、１０００μｇ／ｍＬメタノール抽出液よりも高い濃度の抽出液を使用した場合でも、ルシフェラーゼ活性を向上させることができると考えられる。
【００２４】
［試験２］
試験２では、純水（熱水）、アルカリ還元水（熱水）、９９％エタノール、５０％エタノールでカミツレを抽出した抽出液のルシフェラーゼ活性を調べた。
試料１群：純水の熱水抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：１５０〜１００００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：１５〜１０００μｇ／ｍＬ）
試料２群：アルカリ還元水の熱水抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：１５０〜１００００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：１５〜１０００μｇ／ｍＬ）
試料３群：９９％エタノール抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：１５０〜１００００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：１５〜１０００μｇ／ｍＬ）
試料４群：５０％エタノール抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：１５０〜１００００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：１５〜１０００μｇ／ｍＬ）
【００２５】
図２は、各試料を用いた場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示している。
純水抽出液とアルカリ還元水抽出液とを比較した場合、いずれのカミツレ濃度においてもアルカリ還元水を添加した場合の方が、ルシフェラーゼ活性が高いことが分かった。このことから、同じ水であってもｐＨが高い水の抽出液の方が、ルシフェラーゼ活性を向上させることが明らかとなった。
また、濃度の異なるエタノール抽出液（９９％、５０％）を比較した場合、いずれのカミツレ濃度においても５０％エタノール抽出液を添加した場合の方が、ルシフェラーゼ活性が高いことが分かった。
【００２６】
［試験３］
試験３では、以下の試料を用いた場合のルシフェラーゼ活性を調べた。
試料１：ノビレチン溶液
（ノビレチン濃度：１２μｇ／ｍＬ（３０μＭ））
（培地に対するノビレチン濃度：０．１２μｇ／ｍＬ）
試料２：ヘキサン抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料３：エタノール抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料４：ブタノール抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料５：熱水抽出液
（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）
（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料６：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋ヘキサン抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料７：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋エタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料８：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋熱水抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料９：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋ヘキサン抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋エタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料１０：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋ヘキサン抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋熱水抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料１１：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋エタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋エタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
試料１２：ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）＋ブタノール抽出液（抽出液におけるカミツレの濃度：５０００μｇ／ｍＬ）（培地に対するカミツレ濃度：５００μｇ／ｍＬ）
【００２７】
図３は、各試料を用いた場合のルシフェラーゼレポーターアッセイの結果を示している。
同じ濃度である、ヘキサン抽出液（試料２）、エタノール抽出液（試料３）、ブタノール抽出液（試料４）、熱水抽出液（試料５）の中では、ブタノール抽出液が最も高いルシフェラーゼ活性を示すことが分かった。さらに、５０００μｇ／ｍＬブタノール抽出液（試料４）は、１２μｇ／ｍＬノビレチン溶液（試料１）とほぼ同等の転写活性を示すことが分かった。
抽出液の中で、ルシフェラーゼ活性が最も高かったブタノール抽出液に、他の抽出液を加えた場合の、ルシフェラーゼ活性を調べた。その結果、ブタノール抽出液＋ヘキサン抽出液（試料６）およびブタノール抽出液＋熱水抽出液（試料８）では、相加効果が得られることが分かった。一方、ブタノール抽出液＋エタノール抽出液（試料７）では、顕著に高いルシフェラーゼ活性を示し、相乗効果が得られることが分かった。試料７を添加した場合、理論値の約２倍の転写活性を示した。
ここで、理論値とは、各試料が有するルシフェラーゼ活性の値を足し合わせた値を意味する。
また、ブタノール抽出液＋ブタノール抽出液（試料１２）は、理論値とほぼ同等の値を示した。ヘキサンや熱水の抽出液を加えたものと比較すると、ルシフェラーゼ活性は低いことが分かった。
これらの結果から、ブタノール抽出液に他の種類の抽出液（ヘキサン、エタノール、根水）を加えた抽出液を用いることで、ルシフェラーゼ活性が向上することが明らかとなった。
【００２８】
次に、活性が最も高いブタノール抽出液と他の２種類の抽出液を加えた３種混合の抽出液のルシフェラーゼ活性を調べた。
３つの試料（試料９、１０および１１）とも、相加効果が得られることが分かった。その中でも、ブタノール抽出液＋ヘキサン抽出液＋エタノール抽出液（試料９）の混合抽出液が最も高いルシフェラーゼ活性を示した。試料９と試料７では、ほぼ同等のルシフェラーゼ活性を示した。そして、ブタノール抽出液＋エタノール抽出液＋熱水抽出液（試料１１）、ブタノール抽出液＋ヘキサン抽出液＋熱水抽出液（試料１０）の順にルシフェラーゼ活性が高いことが分かった。
【００２９】
２種および３種を混合した抽出液を使用した結果、ブタノール抽出液＋エタノール抽出液（試料７）の組み合わせの抽出液のみが相乗効果を示し、最も効果的にルシフェラーゼ活性を向上させることができることが明らかとなった。
【００３０】
［ＰＤ９８０５９による阻害効果の検討実験］
次に、ＰＤ９８０５９阻害効果の実験を行った。
遺伝子の転写活性についての阻害剤であるＰＤ９８０５９を添加することで、遺伝子の転写活性を阻害させる。この遺伝子の転写活性剤が添加されて阻害活性が抑制されるということは、遺伝子の転写活性を維持または増加させることでの遺伝子転写活性を増強させる可能性が示唆される。脳機能において、遺伝子転写活性が活性化させる物質の投与によって、脳機能が維持されると考えられている。現在までに、ノベリチンについての研究から脳機能の維持改善メカニズムとして遺伝子の転写活性が関与しており、その遺伝子活性が増強活性化されることが明確となっている。
本実施形態では、試験３で、特に高いルシフェラーゼ活性を示したブタノール抽出液＋エタノール抽出液を培地に添加した場合における、ＰＤ９８０５９による遺伝子の転写活性阻害効果の検討を行った。ＰＤ９８０５９は、５０μＭ、１００μＭに調整し、遺伝子の転写活性阻害効果試験に使用した。
【００３１】
図４は、ＰＤ９８０５９による阻害実験の結果を示している。
ブタノール抽出液＋エタノール抽出液（５０００μｇ／ｍＬ）を添加した培地に、ＰＤ９８０５９（５０μＭ）を添加すると、顕著に遺伝子の転写活性の阻害が生じることが分かった。また、ＰＤ９８０５９（１００μＭ）を添加した場合、さらに遺伝子の転写活性を阻害することが分かった。どちらの場合も、ノビレチン溶液（１２μｇ／ｍＬ）よりも、遺伝子転写活性を阻害する効果が高いことが分かった。
一方、ブタノール抽出液＋ブタノール抽出液（５０００μｇ／ｍＬ）を添加した培地に、ＰＤ９８０５９（５０μＭ）、ＰＤ９８０５９（１００μＭ）を添加した場合でも、遺伝子の転写活性を阻害することが分かり、ノビレチン溶液（１２μｇ／ｍＬ）よりも、遺伝子の転写活性を阻害する効果が高いことが分かった。
阻害剤ＰＤ９８０５９を添加することにより、カミツレによる遺伝子転写活性が阻害されるため、カミツレのブタノール抽出液およびカミツレのエタノール抽出液の記憶遺伝子転写メカニズムは、ノビレチンと同じくＣＲＥＢの関与したＣＲＥ依存性の記憶遺伝子転写活性作用によるものであると考えられる。
【００３２】
以上の結果から、カミツレの抽出液（抽出物）は、ＣＲＥ依存性転写が促進し、記憶学習関連遺伝子の発現を亢進するという効果を有することが明らかとなった。
現在、カミツレは、健康食品の食品素材として使用されている。そのため、カミツレの抽出物は、アルツハイマー病やパーキンソン病などの中枢神経疾患の予防及び治療に用いられる食品に適用することもできる。
【００３３】
以上、本実施形態について説明したが、これ以外にも、本発明の主旨を逸脱しない限り、上記実施の形態で挙げた構成を取捨選択したり、他の構成に適宜変更することが可能である。
例えば、本実施形態では、熱水、ヘキサン、メタノール、エタノール、ブタノールの抽出溶媒を使用したが、他の抽出溶媒として、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の多価アルコールやアセトン等のケトン類や酢酸エチルエステル等のエステル類、やジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、キシレン、ベンゼン、クロロホルム等を使用することもできる。また、これらの抽出溶媒は、水性溶媒と有機溶媒との混合液として使用してもよい。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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