(57)【要約】【課題】  本発明の目的は、加齢やストレス等により生じる白髪を予防又は改善する手段を提供することである。【解決方法】  コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウが優れた白髪改善、または防止作用を有すると共に、その作用が非常に高いbFGF産生促進作用に起因することを見出し、本発明を完成するに至った。  すなわち、本発明は、コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウからなる群より選ばれた少なくとも１を有効成分とする、白髪予防又は改善剤である。本発明の白髪予防又は改善剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品又は飲食品等として提供可能である。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、白髪予防又は改善剤。
【請求項２】
さらに、発育毛物質を含有する、請求項１に記載の白髪予防又は改善剤。
【請求項３】
皮膚外用である、請求項１又は２に記載の白髪予防又は改善剤。
【請求項４】
コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、bFGF産生促進剤。
【請求項５】
bFGF産生促進効果を有することを特徴とし、bFGFの産生を促進するために用いるものである旨の表示をした、請求項４に記載のbFGF産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、加齢やストレス等により生じる白髪の予防又は改善剤、bFGF（塩基性線維芽細胞増殖因子、basic Fibroblast Growth Factor、FGF-2）産生促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
体毛の色素は毛球部に存在する色素細胞により産生され、この色素を供給された毛母細胞が体毛を形成することにより、色素を持った体毛が発生する。体毛が生え変わる際に毛球部は消失し、それに伴って毛球部の色素細胞も消失する。新たな毛周期が始まり、新たな体毛が生じる際には、バルジ領域に存在する色素幹細胞より色素細胞が供給されることにより、再び色素を持った体毛が生じる。加齢や種々のストレスが原因となって、色素幹細胞が減少又は枯渇したり、色素細胞の供給過程に問題が生じることで、適切に色素細胞の供給が行なわれないと、色素を持たない白髪が発生する。
白髪の対処法として、一般に染毛剤が用いられているが、継続的な染毛が必要である煩わしさや、その刺激性からの髪へのダメージ、また接触皮膚炎が生じるなど、必ずしも十分とはいえない。
【０００３】
白髪の予防又は改善剤としては、色素細胞の色素合成に関わるチロシナーゼをはじめとする酵素を活性化する作用を指標として、数多くの物質が見出されている（特許文献１〜５、非特許文献１）。しかし、色素産生系を活性化しても、そもそも毛球部の色素細胞の数が不十分である場合等は、このような指標により見出された物質の効果はあまり期待できない。
【０００４】
白髪を予防するためには、色素幹細胞の減少を防いだり、毛母への移行を促進したり、減少した毛母の色素細胞を増加させることが重要であると考えられる。
bFGFは色素細胞系譜の細胞全般に対して、細胞増殖作用を示す因子として知られることから（非特許文献２）、毛球部の色素細胞やバルジ領域の色素幹細胞の減少を食い止め、また数を増やし、白髪予防又は改善に対して有効であると考えられる。実際に、bFGFを頭皮に適用することで白髪予防又は改善効果を発揮することが明らかにされている（特許文献  ６）。さらに毛乳頭細胞に作用し、bFGFをはじめとする因子の毛乳頭細胞からの発現を促す物質は、白髪を予防及び改善することが明らかにされている（特許文献７）。毛球部の色素細胞やバルジ領域の色素幹細胞に作用させるためには、毛包を構成する種々の細胞とインタラクションし、毛包の司令塔といわれる、毛乳頭細胞におけるbFGFの産生を促すことが重要である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特許4433241
【特許文献２】特開2001-131032
【特許文献３】特許4921732
【特許文献４】特開2011-157317
【特許文献５】特開2002-47130
【特許文献６】特開平5-43424
【特許文献７】特開2003-171240
【特許文献８】特開2010-126475
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】松田英秋ら著「アンチエイジングシリーズ１  白髪・脱毛・育毛の実際」エヌ・ティー・エス、2005年7月4日、p.37-48
【非特許文献２】Hirobe T et al.,Life cycle of human melanocytes is regulated by endothelin-1 and stem cell factor in synergy with cyclic AMP and basic fibroblast growth factor, J Dermatol Sci, 57(2), 123-131, （2010）
【非特許文献３】Sasaki S et al.,Influence of prostaglandin F2alpha and its analogues on hair regrowth and follicular melanogenesis in a murine model, Exp Dermatol, 14(5), 323-328,（2005）
【非特許文献４】Bellandi S et al.,Repigmentation of hair after latanoprost therapy, J Eur Acad Dermatol Venereol, 25(12), 1485-1487,（2010）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、加齢やストレス等により生じる白髪を予防又は改善する手段を提供することである。本発明のもう一つの目的は、bFGFの産生を促す素材を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
そこで発明者らは鋭意検討した結果、コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウが優れた白髪改善、または防止作用を有すると共に、その作用が非常に高いbFGF産生促進作用に起因することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、
（１）コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、白髪予防又は改善剤、
（２）さらに、発育毛物質を含有する、（１）に記載の白髪予防又は改善剤、
（３）皮膚外用である、（１）又は（２）に記載の白髪予防又は改善剤、
（４）コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウからなる群より選ばれる少なくとも１種を有効成分とする、bFGF産生促進剤、
（５）bFGF産生促進効果を有することを特徴とし、bFGFの産生を促進するために用いるものである旨の表示をした、（４）に記載のbFGF産生促進剤、
である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の白髪予防又は改善剤は、毛乳頭細胞に対しbFGFの産生を促すことで、加齢やストレス等により生じる白髪の発生を予防し又は改善することができる。また、bFGFの産生を促進し得る新規な素材を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、試験例１におけるbFGF相対発現量を示すグラフである。なお、図中、コウホネはエタノールと水の混液により抽出したコウホネエキスである。
【図２】図２は、試験例１におけるbFGF相対発現量を示すグラフである。なお、図中、ムクロジはエタノールと水の混液により抽出したムクロジエキスである。
【図３】図３は、試験例１におけるbFGF相対発現量を示すグラフである。なお、図中、ユキノシタは１，３−ブチレングリコールと水の混液により抽出したユキノシタエキスである。
【図４】図４は、試験例１におけるbFGF相対発現量を示すグラフである。なお、図中、タチジャコウソウはエタノールと水の混液により抽出したタチジャコウソウエキスである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明に用いるコウホネ（学名Nuphar japonicum）は、スイレン科の植物であり、根茎、茎、根等の部位を用いることができる。この根茎を縦割したものはセンコツと呼ばれる。  本発明に用いるムクロジ（学名Sapindus mukorossi）は、ムクロジ科の落葉高木であり、果皮等を用いることができる。本発明に用いるユキノシタ（学名Saxifraga stolonifera）は、ユキノシタ科の多年性植物であり、全草を用いることができる。本発明に用いるタチジャコウソウ（学名Thymus vulgaris）は、シソ科の多年生植物であり、地上部を用いることができる。
【００１３】
コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウは、生薬末やエキスの形で使用される。本発明に用いる生薬末としては、例えば乾燥刻み加工品を更に細かく粉砕した粉末状の乾燥品としてもよい。
【００１４】
本発明に用いるコウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウのエキスは、水、低級脂肪族アルコール（メタノール、エタノール、イソプロピルアルコールなど）、多価アルコール（プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、ジプロピレングリコールなど）、低級脂肪族ケトン（アセトンなど）などの溶媒により抽出したものを使用することができる。
【００１５】
コウホネのエキスについては、エタノールと水の混液又は１，３−ブチレングリコールで抽出することが好ましく、エタノールと水の混液で抽出することが最も好ましい。ムクロジのエキスについては、水、エタノール又はこれらの混液で抽出することが好ましく、エタノールと水の混液で抽出することが最も好ましい。ユキノシタのエキスについては、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出することが好ましく、１，３−ブチレングリコールと水の混液で抽出することが最も好ましい。 タチジャコウソウのエキスについては、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール又はこれらの混液で抽出することが好ましく、エタノールと水の混液で抽出することが最も好ましい。
【００１６】
コウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウを水とエタノールからなる溶媒で抽出する場合、溶媒中におけるエタノールの含有量は、30〜90体積％が好ましく、水と１，３−ブチレングリコールからなる溶媒で抽出する場合、溶媒中における１，３−ブチレングリコールの含有量は30〜70体積％が好ましい。
【００１７】
また、エキスの形態は特に制限されるものではなく、加熱処理、凍結乾燥あるいは減圧乾燥などの処理により、乾燥エキス末、エキス末、軟エキス、流エキスなどにすることができる。
【００１８】
本発明の白髪予防又は改善剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品又は飲食品等として提供することができる。その他、試薬として用いることも可能である。投与形態としては、特に限定されるものではないが、外用や内服が挙げられ、好ましくは頭皮を含む皮膚に適用する外用である。
【００１９】
本発明を外用で適用する場合の剤形としては、例えば、ローション剤、液剤、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、スプレー剤、シャンプー、コンディショナー、石鹸等が挙げられ、内服で適用する場合の剤形としては、錠剤、粉末剤、散剤、顆粒剤、液剤、カプセル剤、ドライシロップ剤、ゼリー剤、液状食品、半固形食品、固形食品等が挙げられる。これらは、公知の方法で製造することができる。製造に際しては、本発明の効果を損なわない範囲で、化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品又は試薬に含有可能な種々の添加物を配合することができる。
【００２０】
さらに本発明の白髪予防又は改善剤は、センブリエキス、ニンジンエキス、トウガラシチンキ、ショウキョウチンキ、ビワ葉エキス、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、パントテン酸、パンテノール、ビタミンE及びその誘導体、ヒノキチオール、サリチル酸、ピロクトンオラミン、ミノキシジル、アデノシン、t-フラバノン、サイトプリン、ペンタデカン酸グリセリド、アラントイン、ニコチン酸アミドをはじめとした発育毛物質と組み合わせて使用することもできる。組み合わせることにより、毛の産生が早まり、早期に白髪予防又は改善効果を得ることができる。
【００２１】
本発明のコウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、若しくはタチジャコウソウ、又はこれらのエキスの配合量は、化粧品、医薬部外品、医薬品、飲食品又は試薬で提供する場合、組成物全体に対して0.000001〜10質量％、好ましくは0.0001〜5質量％、より好ましくは0.001〜1質量％である。
【００２２】
また、本発明のbFGF産生促進剤を含む製品（医薬品、医薬部外品、化粧品、飲食品、又は試薬）又はその説明書は、bFGF産生を促進するために用いられる旨の表示を付したものである。ここで、「製品またはその説明書に表示を付した」とは、製品の本体、容器、包装などに表示を付したこと、あるいは製品の情報を開示する説明書、添付文書、宣伝物、申請資料、その他の印刷物又は広告などに表示を付したことを意味する。また、これら表示においては、bFGF産生の促進に起因する疾患の予防又は治療のために用いられることに関する情報を含むことができる。
【実施例】
【００２３】
以下に実施例および試験例を挙げ、本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例に限定されない。
【００２４】
（試験例１）ヒト毛乳頭細胞に対するbFGF産生促進作用の評価
＜試験方法＞
ヒト毛乳頭細胞は2×104細胞/mLの密度で播種し、１または2日間、37℃、CO2 5%にセットしたインキュベーター内で予備培養した。培地には、12%FBS及び規定量のペニシリン・ストレプトマイシンを含むEarle’s MEMを用いた。予備培養後、PBSにて細胞表面を洗浄した後、無血清Earle’s MEMに交換した。さらに1日間培養した後、被験物質または対照物質を添加して24時間培養した。その後、培地を吸引除去し、ライセートバッファーを添加して細胞を溶解し、細胞溶解液を回収した。細胞溶解液より、RNeasy Mini Kit（キアゲン）を用いて添付のプロトコールに従いRNAを回収し、これを鋳型として、Prime Script RT Master mix（タカラバイオ）を用いた逆転写反応によりcDNAを合成した。合成したcDNAを用いてリアルタイムPCRシステム（Step One Plus、アプライドバイオシステムズ）により、GAPDH及びbFGFそれぞれのmRNAの発現量を測定し、bFGF発現量をGAPDH発現量により補正した。プライマー・プローブとしては、TaqManR Gene Expression Assays（GAPDH: Hs99999905_m1、bFGF: Hs00266645_m1、アプライドバイオシステムズ）を用いた。なお、被験物質としては、エタノール50体積％と水50体積％の混液により抽出したコウホネエキス、エタノール70体積％と水30体積％の混液により抽出したムクロジエキス、１，３−ブチレングリコール50体積％と水50体積％の混液により抽出したユキノシタエキス、及びエタノール50体積％と水50体積％で抽出したタチジャコウソウエキスを用いた。コウホネエキスには固形分が存在したため、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）50体積％と水50体積％の溶媒にて溶解させて試験に用いた。なお、どの群においてもエタノール、１，３−ブチレングリコール、及びＤＭＳＯの終濃度については、細胞に対して毒性を示さないようにいずれも0.2体積％以下とした。
【００２５】
＜試験結果＞
図１〜４は、コウホネエキス、ムクロジエキス、ユキノシタエキス、及びタチジャコウソウエキスそれぞれのbFGF産生促進効果を評価した結果である。コントロール群（各エキス群よりエキスを抜き、溶媒の終濃度が各エキス群と同一となるように、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール、及びＤＭＳＯを加えて調製したもの）のbFGF相対発現量を１としたときの各群のbFGF相対発現量を示す。
コウホネエキス、ムクロジエキス、ユキノシタエキス、及びタチジャコウソウエキスは、コントロール群との比較において毛乳頭細胞におけるbFGFの発現量を上昇させた。各群のbFGF相対発現量をコントロール群と比較すると、図１においては、プロスタグランジンF2α（ＰＧＦ2α）群（ｐ＜0.001）及びコウホネエキス群（ｐ＜0.001）は有意に高く、図２においては、プロスタグランジンF2α群（ｐ＜0.001）及びムクロジエキス群（ｐ＜0.001）は有意に高く、図３においては、プロスタグランジンF2α群（ｐ＜0.01）は有意に高く、図４においては、プロスタグランジンF2α群（ｐ＜0.01）及びタチジャコウソウエキス群（ｐ＜0.001）は有意に高かった。プロスタグランジンF2α及びその誘導体には白髪予防又は改善作用があることが知られるが（特許文献８、非特許文献３、４）、コウホネエキス、ムクロジエキス、及びタチジャコウソウエキスによるbFGF産生促進効果は、プロスタグランジンF2α 10μM（本試験系で最大の作用を示す濃度）より高かった。
【００２６】
以上の結果から、コウホネエキス、ムクロジエキス、ユキノシタエキス、及びタチジャコウソウエキスは毛乳頭細胞におけるbFGF産生を促進する効果を有することが明らかとなったので、本作用に基づき、コウホネエキス、ムクロジエキス、ユキノシタエキス、及びタチジャコウソウエキスは白髪の予防及び改善効果を有することが示された。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明のコウホネ、ムクロジ、ユキノシタ、及びタチジャコウソウは、bFGF産生促進作用を有するため、加齢やストレス等により生じる白髪の予防又は改善用の化粧品、医薬部外品、医薬品又は飲食品の分野に利用可能である。また、本発明のbFGF産生促進剤は、素材スクリーニング等を行なうに際し、陽性対照薬として用いることができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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