(57)【要約】      （修正有）【課題】微量のペプチドやタンパク質等のアミノ酸配列を決定する方法の提供、並びに該方法に適したエドマン試薬として使用できる化合物、具体的には、ＵＶ吸光度が大きく、ペプチドと効率よく反応する化合物の提供。【解決手段】式（１）で表されるアズレニルイソチオシアネート化合物。2017114779.tif 000031（Ｒは各々独立にハロゲン原子、Ｃ１〜１０のアルキル基、Ｃ１〜１０のアルコキシ基、Ｃ２〜１０のアルケニル基、Ｃ２〜１０のアルキニル基、Ｃ３〜１０のシクロアルキル基、Ｃ６〜１０のアリール基又はヘテロアリール基；ｎは０〜７の整数；特にＲがＣ１−１０のアルキル基であることが好ましく、炭素３，５、８の位置の１以上に置換基を有することが更に好ましい。）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）で表される化合物。
【化１】
2017114779.tif 000025
（式中、Ｒは、ハロゲン原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基又はヘテロアリール基であり、
ｎは０〜７いずれかの整数であり、ｎが２以上の場合は、各Ｒは、同じであっても異なっていてもよい。）
【請求項２】
式（１）中、Ｒが、炭素数１〜１０のアルキル基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
炭素３位、５位、８位から選択される１又は２以上の位置に置換基Ｒを有することを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
式（２）で表される請求項３に記載の化合物。
【化２】
2017114779.tif 000026
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を含むことを特徴とするエドマン試薬。
【請求項６】
請求項１〜４に記載の化合物を用いることを特徴とするエドマン分解法によるペプチドのアミノ酸配列の決定方法。
【請求項７】
式（３）で表される化合物。
【化３】
2017114779.tif 000027
［式中、Ｒは、ハロゲン原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基又はヘテロアリール基であり、
ｎは０〜７いずれかの整数であり、ｎが２以上の場合は、各Ｒは、同じであっても異なっていてもよく、
Ｘは、
【化４】
2017114779.tif 000028
（波線は隣接する炭素原子への共有結合を表し、*は不斉中心を表す。）
から選択されるいずれかを表す。］
【請求項８】
式（３）中、Ｒが、炭素数１〜１０のアルキル基であることを特徴とする請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
炭素３位、５位、８位から選択される１又は２以上の位置に置換基Ｒを有することを特徴とする請求項７又は８に記載の化合物。
【請求項１０】
式（４）で表される請求項９に記載の化合物。
【化５】
2017114779.tif 000029
（式中、Ｘは、請求項７と同じ定義である。）
【請求項１１】
式（４）におけるＸが、以下の式で表されることを特徴とする請求項１０に記載の化合物。
【化６】
2017114779.tif 000030
（波線は隣接する炭素原子への共有結合を表し、*は不斉中心を表す。）
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エドマン分解に用いられる新規なアズレニル化合物に関し、さらに詳しくは、ＵＶ吸光度が大きく、ペプチドとの反応においてＮ末端の位置選択的に反応が進行する新規なアズレニルイソチオシアネート化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
新規タンパク質やペプチドのアミノ酸配列情報を得ることや、タンパク質やペプチドを同定すること等のために、タンパク質やペプチドのアミノ酸配列の決定が必要である。ペプチドのアミノ酸配列の決定法には、Ｎ末端からアミノ酸配列を決定する方法として、ジニトロフェニル化法、エドマン分解法、Ｃ末端からアミノ酸配列を決定する方法として、ヒドラジン分解法、カルボキシペプチダーゼ法が知られている。中でも、エドマン分解法の原理を利用した分析が、アミノ酸配列の決定によく利用されている。
【０００３】
エドマン分解では、フェニルイソチオシアネート等のイソチオシアネート化合物とペプチドとを弱アルカリ条件下で反応させることにより、Ｎ−末端アミノ酸がチオカルバモイル体を形成し、該チオカルバモイル体を酸処理すると、環化しながらアミド結合が切断され、チオヒダントイン誘導体が得られる。該チオヒダントイン誘導体をＨＰＬＣ等により検出することで、Ｎ末端のアミノ酸を同定することができる。さらに、Ｎ末端の１残基アミノ酸が切断されたペプチドに対し、上記のエドマン分解を順次繰り返すことにより、アミノ酸配列を決定することができる。
【０００４】
エドマン分解を利用したアミノ酸配列の決定においては、フェニルイソチオシアネートがよく用いられているが、反応効率が悪く、生成したチオヒダントイン誘導体をＵＶ吸収で検出する際の感度も低いという問題がある。特に、試料のペプチドが微量である場合には、エドマン分解により生成するチオヒダントイン誘導体を高感度で検出できる方法が求められている。そのため、フェニルイソチオシアネートに代わるエドマン試薬として使用できる化合物が必要とされ、研究されている。例えば、フェニルイソチオシアネート以外のエドマン試薬として使用できる化合物として、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルホニル）−７−イソチオシアナト−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール（ＤＢＤ−ＮＣＳ）がある（非特許文献１）。
【０００５】
一方、本発明者らは、アズレン又はアズレン誘導体に置換基を導入する方法を開発しており、アズレン骨格の１位にヨウ素を導入する方法（特許文献１）やアズレン骨格の２位にホウ素化合物を導入する方法（特許文献２）を報告している。アズレン又はアズレン誘導体は、特異な電子状態を有し、アズレン骨格をポルフィリンやフタロシアニン等のπ電子系化合物に導入すると物理化学特性が大きく変化することから、二光子吸収材料の改良等、有機電子材料の改質手段として近年注目されている。また、アズレン誘導体のグアイアズレン類は結膜炎や口腔・咽頭疾患、ヘリコバクターピロリ菌による消化器系疾病等の治療薬としても知られている。しかし、アズレン骨格を有するイソチオシアネート化合物は知られておらず、アズレン骨格を有する化合物がエドマン試薬として使用できることも知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１２−１４４５０５号公報
【特許文献２】国際公開２０１０−０３９１３５パンフレット
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Novel fluorogenic edman reagents，K. Imai, S. Uzu, K. Nakashima, S. Akiyama, Biomed. Chromatogr. 1993， 7, 56.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の課題は、微量のペプチドやタンパク質等のアミノ酸配列を決定する方法を提供すること、また、該方法に適したエドマン試薬として使用できる化合物、具体的には、ＵＶ吸光度が大きく、ペプチドと効率よく反応する化合物を提供することにある。
生成するチオヒダントイン誘導体のＵＶ吸光度が大きいと、高感度の検出が可能となる。また、ペプチドとエドマン試薬として使用できる化合物との反応効率を上げることにより、生成するチオヒダントイン誘導体の収率が向上し、高感度の検出が可能となる。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
前記課題の解決のために鋭意研究の結果、アズレニル骨格を有するイソチオシアネート化合物をエドマン試薬として使用すると、ＵＶ吸光度が大きいチオヒダントイン誘導体が得られること、また、ペプチドのＮ末端のアミノ酸と位置選択的に反応し、副反応が抑えられ、効率よく反応が進行することを見いだした。
【００１０】
すなわち、本発明は以下の発明に関する。
（１）式（１）で表される化合物。
【化１】
2017114779.tif 000002
（式中、Ｒは、ハロゲン原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基又はヘテロアリール基であり、
ｎは０〜７いずれかの整数であり、ｎが２以上の場合は、各Ｒは、同じであっても異なっていてもよい。）
（２）式（１）中、Ｒが、炭素数１〜１０のアルキル基であることを特徴とする上記（１）に記載の化合物。
（３）炭素３位、５位、８位から選択される１又は２以上の位置に置換基Ｒを有することを特徴とする上記（１）又は（２）に記載の化合物。
（４）式（２）で表される上記（３）に記載の化合物。
【化２】
2017114779.tif 000003
（５）上記（１）〜（４）のいずれかに記載の化合物を含むことを特徴とするエドマン試薬。
（６）上記（１）〜（４）に記載の化合物を用いることを特徴とするエドマン分解法によるペプチドのアミノ酸配列の決定方法。
（７）式（３）で表される化合物。
【化３】
2017114779.tif 000004
［式中、Ｒは、ハロゲン原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基又はヘテロアリール基であり、
ｎは０〜７いずれかの整数であり、ｎが２以上の場合は、各Ｒは、同じであっても異なっていてもよく、
Ｘは、
【化４】
2017114779.tif 000005
（波線は隣接する炭素原子への共有結合を表し、*は不斉中心を表す。）
から選択されるいずれかを表す。］
（８）式（３）中、Ｒが、炭素数１〜１０のアルキル基であることを特徴とする上記（７）に記載の化合物。
（９）炭素３位、５位、８位から選択される１又は２以上の位置に置換基Ｒを有することを特徴とする上記（７）又は（８）に記載の化合物。
（１０）式（４）で表される上記（９）に記載の化合物。
【化５】
2017114779.tif 000006
（式中、Ｘは、上記（７）と同じ定義である。）
（１１）式（４）におけるＸが、以下の式で表されることを特徴とする上記（１０）に記載の化合物。
【化６】
2017114779.tif 000007
（波線は隣接する炭素原子への共有結合を表し、*は不斉中心を表す。）
【発明の効果】
【００１１】
本発明の化合物は、ペプチドやタンパク質との反応効率が良く、且つ、得られるチオヒダントイン誘導体のＵＶ吸収が大きいため、微量のペプチドやタンパク質であってもアミノ酸配列を決定することができる。また、上記チオヒダントイン誘導体を検出するためにＨＰＬＣによる分析に供したとき、該チオヒダントイン誘導体のピークがシャープなため、ピーク同士が重なり合わず分離能が良い。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】グアイアズレニルイソチオシアネートとグリシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｇｌｙ）とフェニルイソチオシアネートとグリシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｇｌｙ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図２】グアイアズレニルイソチオシアネートとアラニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ａｌａ）とフェニルイソチオシアネートとアラニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ａｌａ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図３】グアイアズレニルイソチオシアネートとアルギニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ａｒｇ）とフェニルイソチオシアネートとアルギニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ａｒｇ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図４】グアイアズレニルイソチオシアネートとアスパラギン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ａｓｎ）とフェニルイソチオシアネートとアスパラギン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ａｓｎ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図５】グアイアズレニルイソチオシアネートとアスパラギン酸由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ａｓｐ）とフェニルイソチオシアネートとアスパラギン酸由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ａｓｐ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図６】グアイアズレニルイソチオシアネートとグルタミン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｇｌｎ）とフェニルイソチオシアネートとグルタミン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｇｌｎ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図７】グアイアズレニルイソチオシアネートとグルタミン酸由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｇｌｕ）とフェニルイソチオシアネートとグルタミン酸由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｇｌｕ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図８】グアイアズレニルイソチオシアネートとヒスチジン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｈｉｓ）とフェニルイソチオシアネートとヒスチジン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｈｉｓ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図９】グアイアズレニルイソチオシアネートとイソロイシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｉｌｅ）とフェニルイソチオシアネートとイソロイシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｉｌｅ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１０】グアイアズレニルイソチオシアネートとロイシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｌｅｕ）とフェニルイソチオシアネートとロイシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｌｅｕ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１１】グアイアズレニルイソチオシアネートとリシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｌｙｓ）とフェニルイソチオシアネートとリシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｌｙｓ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１２】グアイアズレニルイソチオシアネートとメチオニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｍｅｔ）とフェニルイソチオシアネートとメチオニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｍｅｔ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１３】グアイアズレニルイソチオシアネートとフェニルアラニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｐｈｅ）とフェニルイソチオシアネートとフェニルアラニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｐｈｅ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１４】グアイアズレニルイソチオシアネートとプロリン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｐｒｏ）とフェニルイソチオシアネートとプロリン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｐｒｏ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１５】グアイアズレニルイソチオシアネートとセリン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｓｅｒ）とフェニルイソチオシアネートとセリン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｓｅｒ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１６】グアイアズレニルイソチオシアネートとスレオニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｔｈｒ）とフェニルイソチオシアネートとスレオニン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｔｈｒ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１７】グアイアズレニルイソチオシアネートとトリプトファン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｔｒｐ）とフェニルイソチオシアネートとトリプトファン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｔｒｐ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１８】グアイアズレニルイソチオシアネートとチロシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｔｙｒ）とフェニルイソチオシアネートとチロシン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｔｙｒ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【図１９】グアイアズレニルイソチオシアネートとバリン由来のチオヒダントイン誘導体（ＧＡＴＨ−ｖａｌ）とフェニルイソチオシアネートとバリン由来のチオヒダントイン誘導体（ＰＴＨ−ｖａｌ）との紫外可視吸光スペクトルの比較を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
（化合物）
本発明の化合物は、以下の式（１）で表される化合物である。
【化７】
2017114779.tif 000008
【００１４】
式中、Ｒは、ハロゲン原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基又はヘテロアリール基であり、
ｎは０〜７いずれかの整数であり、ｎが２以上の場合は、各Ｒは、同じであっても異なっていてもよい。
【００１５】
式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基とは、置換されていてもよい炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルキル基である。例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチルオ基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−へキシル基、ｎ−ヘプチル基、ｎ−オクチル基、ｎ−ノニル基、ｎ−デシル基等が挙げられる。
【００１６】
式（１）における炭素数１〜１０のアルコキシ基とは、置換されていてもよい炭素数１〜１０の直鎖状または分岐状のアルコキシ基である。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、ｎ−ペンチルオキシ基、イソペンチルオキシ基、ネオペンチルオキシ基、ｎ−へキシルオキシ基、ｎ−ヘプチルオキシ基、ｎ−オクチルオキシ基、ｎ−ノニルオキシ基、ｎ−デシルオキシ基等が挙げられる。
【００１７】
式（１）における炭素数２〜１０のアルケニル基とは、置換されていてもよい炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルケニル基である。例えば、ビニル基、１−プロペニル基、２−プロペニル基、１−ブテニル基、２−ブテニル基、３−ブテニル基、１，３−ブテニル基、１−ペンテニル基、１−ヘキセニル基、１−ヘプテニル基、１−オクテニル基、１−ノネニル基、１−デセニル基等が挙げられる。
【００１８】
式（１）における炭素数２〜１０のアルキニル基とは、置換されていてもよい炭素数２〜１０の直鎖状または分岐状のアルキニル基である。例えば、エチニル基、１−プロペニル基、１−ブチニル基、１−ペンチニル基、１−ヘキサニル基、１−ヘプチニル基、１−オクチニル基、１−ノニル基等が挙げられる。
【００１９】
式（１）における炭素数３〜１０のシクロアルキル基とは、置換されていてもよい炭素数３〜１０のシクロアルキル基である。例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロへキシル基、シクロヘプチル基、シクロオクチル基、シクロノニル基、シクロデシル基等が挙げられる。
【００２０】
式（１）における炭素数６〜１０のアリール基とは、置換されていてもよい炭素数６〜１０のアリール基である。「アリール基」は、単環又は多環のアリール基を意味する。ここで、多環アリール基の場合は、完全不飽和に加え、部分飽和の基も包含する。例えばフェニル基、ナフチル基、アズレニル基、インデニル基、インダニル基、テトラリニル基等が挙げられる。
【００２１】
式（１）におけるヘテロアリール基とは、窒素原子、酸素原子、および硫黄原子からなる群より選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む員数６〜１０の単環芳香族複素環または縮合芳香族複素環を有する、置換されていてもよい基である。縮合芳香族複素環には、ベンゼン環と窒素原子、酸素原子、および硫黄原子からなる群より選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む単環複素環が縮合したものが包含される。
その具体的な例としては、ピロリル基、イミダゾリル基、イミダゾリジニル基、ベンゾイミダゾリル基、ピラゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、フラザニル基、ピリジニル基、ピラジニル基、ピリミジニル基、ピリダジニル基、フラニル基、ピラニル基、チエニル基、ベンゾチオフェニル基、チオピラニル基、イソチオクロメニル基、チオクロメニル基、チオキサントレニル基、チアントレニル基、フェノキサチイニル基、ピロリジニル基、１Ｈ−１−ピリンジニル基、インドニジニル基、イソインドリル基、インドリル基、インダゾリル基、プリニル基、キノリジニル基、イソキノリニル基、キノリニル基、ナフチリジニル基、フタラジニル基、キノキサニリル基、キナゾリニル基、シンノリニル基、プテリジニル基、カルバゾリル基、β−カルボリニル基、フェナントリジニル基、アクリジニル基、ペリミジニル基、フェナントロリニル基、フェナジニル基、フェノチアジニル基、フェノキサジニル基、アンチジニル基、イソベンゾフラニル基、ベンゾフラニル基、イソクロメニル基、クロメニル基、キサンテニル基、パラチアジニル基、トリアゾリル基、またはテトラゾリル基等が挙げられる。
【００２２】
式（１）におけるハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
【００２３】
上記「置換基を有していてもよい」の置換基としては、ハロゲン原子、アルコキシ基、アリール基等が挙げられる。
【００２４】
本発明の式（１）で表される化合物は、イソチオシアネート基（−ＮＣＳ）が炭素１位にある場合は、炭素３位、５位、８位から選択される１又は２以上の位置に置換基Ｒを有することが好ましく、炭素３位、５位、及び８位に置換基Ｒを有することがより好ましい。また、置換基Ｒは、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基が好ましく、炭素数１〜６のアルキル基、炭素数２〜６のアルケニル基、炭素数２〜６のアルキニル基がより好ましく、炭素数１〜６のアルキル基がさらに好ましい。
さらに、イソチオシアネート基（−ＮＣＳ）の好ましい置換位置は、炭素１位又は３位である。
【００２５】
式（１）で表される化合物は、具体的には、表１に示す化合物を例示することができる。芳香環上の数字は、芳香環の炭素番号を表す。
【００２６】
【表１】
2017114779.tif 000009
2017114779.tif 000010
【００２７】
式（１）で表される化合物の中でも、上記表１の化合物番号６（式（２）の化合物）〜化合物番号１８が好ましく、化合物番号６（式（２）の化合物）がより好ましい。
【００２８】
（化合物の合成）
本発明の式（１）で表される化合物は、市販品を用いても良いが、有機合成手法により合成することができる。
例えば、以下に示すように、アズレン化合物Ｉを出発原料とし、ビルスマイヤー・ハック反応によりアルデヒドIIへと誘導する（工程１）。その後、Tetrahedron Letters 54 (2013) 661-664に記載の方法に従って、アルデヒドIIとヒドロキシルアミン塩酸塩等との反応等によりホルムアミドIIIへと誘導し（工程２）、上記ホルムアミドIIIとクロロ−１，３−ジメチルイミダゾリウムクロリド並びに１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタンとの反応に供してイソシアニドIVへと誘導し（工程３）、上記イソシアニドIVをモリブデン錯体及び硫黄との反応により式（１）で表される化合物へと誘導できる（工程４）。
【００２９】
【化８】
2017114779.tif 000011
【００３０】
出発原料であるアズレン化合物Ｉは、市販のアズレン、グアイアズレンを使用してもよいが、有機合成手法により合成することができる。
例えば、市販のアズレンに、特開２０１２−１４４５０５号公報に記載の方法に従って、ヨウ素を導入し、さらにＲ−ＢＹ２（Ｙは、同一でも異なっていてもよく、水酸基、アルキル基、アルコキシ基等を表す。）で表される有機ホウ素化合物との鈴木−宮浦カップリング反応を行うことにより、アズレン化合物Ｉを得ることができる。
【００３１】
【化９】
2017114779.tif 000012
【００３２】
また、例えば、市販のアズレンに、国際公開２０１２−０３９１３５パンフレットに記載の方法に従って、アズレンを有機ホウ素化合物とし、さらにＲ−Ｘ０（Ｘ０は、塩素、臭素又はヨウ素を表す。）で表される有機ハロゲン化合物等との鈴木−宮浦カップリング反応等を行うことにより、アズレン化合物Ｉを得ることができる。
【００３３】
【化１０】
2017114779.tif 000013
【００３４】
アズレン骨格への置換基Ｒの導入は、上記に示したようにアズレンに対し行っても良いが、式（Ｉ）で表される化合物やその合成中間体に対して行っても良い。
【００３５】
（アミノ酸配列の決定）
本発明におけるアミノ酸配列の決定は、式（１）で表されるイソチオシアネート化合物を用いたエドマン分解法により行われる。アミノ酸配列決定のスキームを以下に示す。
上記エドマン分解では、式（１）で表されるイソチオシアネート化合物とペプチドとを弱アルカリ条件下で反応させることにより、チオカルバモイル体が形成され、さらに酸処理することで上記チオカルバモイル体が環化しながら、上記ペプチドのアミド結合が切断され、チオヒダントイン誘導体が得られる。得られた該チオヒダントイン誘導体をＨＰＬＣ等により検出することで、Ｎ末端のアミノ酸を同定することができる。さらに、Ｎ末端の１残基アミノ酸が切断されたペプチドを、再び式（１）で表されるイソチオシアネート化合物との反応に供することを繰り返し、アミノ酸配列を決定することができる。
【００３６】
【化１１】
2017114779.tif 000014
（スキーム中、Ｒ１、Ｒ２、ＲＰは、ペプチドのＮ末端側からの１番目、２番目、Ｐ番目のアミノ酸の側差を意味する。Ｐは２以上の整数であり、ｍは１以上の整数を表す。）
【００３７】
また、本発明におけるアミノ酸配列の決定に市販のプロテインシーケンサーを用いれば、エドマン分解操作を自動的に繰り返し、遊離したチオヒダントイン誘導体を次々同定していくことができる。
【００３８】
本発明のチオヒダントイン誘導体は、式（１）で表される化合物とペプチドとの反応により得られる化合物であれば特に限られるものではないが、例えば以下の式（３）で表される化合物である。また、式（３）で表される化合物は、式（１）で表される化合物とアミノ酸との反応によっても得ることができる。なお、本発明のチオヒダントイン誘導体は、アミノ酸誘導体と呼ぶこともできる。
【００３９】
【化１２】
2017114779.tif 000015
【００４０】
式中、Ｒは、ハロゲン原子、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基又は員数６〜１０のヘテロアリール基であり、
ｎは０〜７いずれかの整数であり、ｎが２以上の場合は、各Ｒは、同じであっても異なっていてもよく、
Ｘは、
【００４１】
【化１３】
2017114779.tif 000016
（波線は隣接する炭素原子への共有結合を表し、*は不斉中心を表す。）
から選択されるいずれかを表す。
【００４２】
そしてまた、本発明のチオヒダントイン誘導体には、式（３）で表される化合物中の上記Ｘがさらに式（１）で表される化合物と反応した化合物も含まれ、具体的にはリシンと式（１）で表される化合物との反応により生成する化合物を挙げることができ、Ｘとして以下の構造も含まれる。
【００４３】
【化１４】
2017114779.tif 000017
（波線は隣接する炭素原子への共有結合を表し、*は不斉中心を表す。Ｒは、式（３）におけるＲと同義である。）
【００４４】
式（３）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、ヘテロアリール基は、式（１）における炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数１〜１０のアルコキシ基、炭素数２〜１０のアルケニル基、炭素数２〜１０のアルキニル基、炭素数３〜１０のシクロアルキル基、炭素数６〜１０のアリール基、ヘテロアリール基と同じ定義である。
【００４５】
式（３）で表される化合物は、アミノ酸配列の決定の際の、ＨＰＬＣ等による検出において、標準サンプルとして用いることができる。また、式（３）の化合物には、不斉炭素原子や軸不斉を有する場合があるが、これら不斉に基づく光学異性体が存在しうる。本発明は、式（３）の化合物の光学異性体の分離されたもの、あるいはそれらの混合物も包含する。  
【００４６】
本発明のアミノ酸配列の決定に供されるペプチドのアミノ酸残基数は、本発明の式（１）で表される化合物でアミノ酸配列の決定ができる範囲であれば特に制限はないが、５０以下が好ましく、３０以下がより好ましい。
【００４７】
Ｎ末端のアミノ酸が保護されていると式（１）で表される化合物との反応が起きないため、Ｎ末端アミノ酸は保護されていないペプチドを用いる。また、本発明のアミノ酸配列の決定に供されるペプチドの調製は、常套法により行えばよく、例えば、「新生物化学実験のてびき２：タンパク質の分離・分析と機能解析法  下西康嗣、永井克也、長谷俊治、本田武司  共編、化学同人、１９９６年出版」に記載の方法に従って行うことができる。
【００４８】
本発明のアミノ酸配列の決定によって、ペプチドだけでなく、タンパク質のアミノ酸配列も決定できる。具体的には、タンパク質に対して酵素等を作用させタンパク質のペプチド断片を得、該ペプチド断片のアミノ酸配列を決定することで、上記タンパク質のアミノ酸配列を決定できる。タンパク質のアミノ酸配列決定は、「新生物化学実験のてびき２：タンパク質の分離・分析と機能解析法  下西康嗣、永井克也、長谷俊治、本田武司  共編、化学同人、１９９６年出版」に記載の方法に従って行うことができる。
【００４９】
本発明のアミノ酸配列の決定に供されるペプチドやタンパク質は、天然のペプチドやタンパク質であっても、人工的に合成したペプチドやタンパク質であってもよい。また、本発明のアミノ酸配列の決定に供されるペプチドやタンパク質には、アミノ酸の類似体を含んでいても良い。
【００５０】
本発明のエドマン試薬は、前記式（１）で表される化合物を含んでいればよく、必要に応じて、試薬の調製に通常用いられる溶媒や添加剤を配合して用いてもよい。また、前記式（１）で表される化合物そのものをエドマン試薬として用いても良い。
【実施例】
【００５１】
以下に、実施例において本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術範囲は、これらに限定されるものではない。
【００５２】
実施例１．グアイアズレニルイソチオシアネートの合成
【００５３】
【化１５】
2017114779.tif 000018
【００５４】
［工程１］
グアイアズレン（１．０ｇ、５ｍｍｏｌ、東京化成工業株式会社製）とＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（２ｍＬ、和光純薬工業株式会社製）をベンゼン（１０ｍＬ、和光純薬工業株式会社製）に溶かし、激しく撹拌しながら塩化ホスホリル（１．０ｇ、６ｍｍｏｌ、片山化学工業株式会社製）を徐々に滴下し、滴下終了後４０分撹拌した。反応混合物を水中に注ぎ未反応の塩化ホスホリルを分解し、氷冷した２ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウム水溶液を加えて加水分解した。ジエチルエーテルを加えて抽出し、有機層を水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル／酢酸エチル：ヘキサン  １：１）で精製し、アルデヒド４（１．０４ｇ、収率９２％）を紫色針状結晶として得た。
【００５５】
［工程２］
アルデヒド４（０．２３ｇ,１．０ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（４ｍＬ）に、ヒドロキシルアミン塩酸塩（０．２１ｇ、３ｍｍｏｌ、関東化学株式会社製）、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、４ｍＬ）を加え、１時間還流しながら撹拌した。反応終了後、反応混合物をクロロホルム（１００ｍＬ）で抽出し、有機層を水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル／酢酸エチル：ヘキサン  １：３）で精製し、ホルムアミド５（０．２２ｇ、収率９１％）を青緑色結晶として得た。
【００５６】
［工程３］
ホルムアミド５（０．７２ｇ、３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液に、２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリウムクロリド（０．５ｇ、３ｍｍｏｌ、和光純薬工業株式会社製）と１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（０．７ｇ、６ｍｍｏｌ、Sigma-Aldrich社製）を加え、室温で２時間撹拌した。反応終了後、反応混合物をジクロロメタン（１００ｍＬ）で抽出し、有機層を水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ別した後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル／酢酸エチル：ヘキサン  ５：１）で精製し、イソシアニド６（０．５４ｇ、収率８１％）を青緑色針状結晶として得た。
【００５７】
［工程４］
アルゴン気流下、イソシアニド６（０．２２３ｇ、１ｍｍｏｌ）とモリブデン錯体（０．００４ｇ、１ｍｏｌ％）、硫黄（０．０６４ｇ、０．２５ｍｍｏｌ、ナカライデスク株式会社）をアセトン５ｍＬに溶かした後、６０℃で７２時間加熱撹拌した。反応終了後、水を加えて反応を停止させた後、反応混合物をジエチルエーテル（１００ｍＬ）で抽出し、有機層を水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥材をろ別した後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル／ヘキサン）で精製し、グアイアズレニルイソチオシアネート（０．２２ｇ、収率８７％）を緑色針状結晶として得た。以下に、１Ｈ及び１３ＣＮＭＲ、並びにＭＳの値を示す。
1H-NMR(CDCl3) δ:1.33 (6H, d, J=6.4 Hz), 2.56 (3H, s), 3.00 (3H, s), 3.00 (1H, sep, J=6.4 Hz), 6.89 (1H, d, J=10.4 Hz), 7.35 (1H, d, J=10.4 Hz), 7.48 (1H, s), 8.07 (1H,s)
13C-NMR(CDCl3) δ:12.67, 24.48, 25.29, 37.94, 112.15, 124.05, 127.86, 129.00, 132.40, 134.07, 135.41, 135.55, 136.62, 142.01, 145.92
MS m/z(%): 255(M), 257(M+2)
【００５８】
実施例２．グアイアズレニルイソチオシアネートとアミノ酸との反応によるアミノ酸誘導体の合成
【化１６】
2017114779.tif 000019
（Ｘは、前記のＸと同じ定義を表す。）
【００５９】
上記実施例１で合成したグアイアズレニルイソチオシアネートと各天然アミノ酸とを溶解したエタノール：水：ピリジン＝１：１：１（６％トリエチルアミン）の溶液（６ｍＬ）を、アルゴン気流下、６０℃で１時間撹拌した。反応溶液に濃塩酸０．３ｍＬを加え、温度を１２０℃に上げてさらに２時間撹拌した。反応終了後、水を加えて反応を停止させ、反応混合物を有機溶媒で抽出し、有機層を水洗後に無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥材をろ別した後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、アミノ酸誘導体を得た。以下に、各アミノ酸誘導体（４）を調製した反応条件及び結果を表２に示す。また、各天然アミノ酸に由来する誘導体の融点、１Ｈ及び１３ＣＮＭＲ、並びにＭＳの値を示す。なお、１Ｈ及び１３ＣＮＭＲにおけるmajor、minorは、グアイアズレニル部分とチオヒダントイン部分とのＣ−Ｎ結合の回転障害に起因する軸不斉による異性体を意味する。
【００６０】
【表２】
2017114779.tif 000020
2017114779.tif 000021
【００６１】
グリシン誘導体の各種スペクトルデータ
融点: 172-173 ℃
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.37 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.61 (3H, s), 2.64 (3H, s), 3.19 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.40 (1H, d, J=20.0 Hz), 4.49 (1H, d, J=20.0 Hz), 7.09 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.40 (1H, s), 7.57 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.29 (1H, d, J=1.6 Hz), 10.46(1H, s)
13C-NMR(CDCl3) δ:12.97, 24.08, 24.61, 38.04, 49.03, 114.84, 123.84, 128.69, 131.44, 135.44, 135.66, 136.04, 137.15, 142.06, 143.82, 172.59, 186.98
IR 3220 cm-1, 1744 cm-1, 1514 cm-1
UV λ=292.0 ε=40150, λ=349.6 ε=6300, λ=585.6 ε=620 
HRMS(APCI) Calcd for C18H21N2OS (M+H)+: 313.1369, Found 313.1357
【００６２】
アラニン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=72:28
融点: 101-105 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.36 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.43 (3H, d, J=7.2 Hz), 2.59 (3H, s), 2.64 (3H, s), 3.17 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.56 (1H, q, J=7.2 Hz), 7.09 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.42 (1H, s), 7.58 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.29 (1H, d, J=1.6 Hz), 10.64 (1H, s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.36 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.46 (3H, d, J=7.2 Hz), 2.58 (3H, s), 2.62 (3H, s), 3.17 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.63 (1H, q, J=6.8 Hz), 7.09 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.44 (1H, s), 7.58 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.29 (1H, s), 10.64 (1H, s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.99, 16.97, 24.20, 24,62, 38.03, 55.64, 115.25, 123.78, 128.61, 131.47, 135.36, 135.36, 135.93, 137.11, 142.02, 143.82, 175.65, 185.60
IR 3274 cm-1, 1749 cm-1, 1496 cm-1
UV λ=292.0 ε=38720, λ=349.6 ε=5970, λ=591.3 ε=560
HRMS(APCI) Calcd for C19H23N2OS (M+H)+: 327.1526, Found 327.1523
【００６３】
アルギニン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=51:49
融点:145-150 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.32 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.66-1.91 (4H, m), 2.50 (3H, s), 2.58 (3H, s), 3.15 (1H, sep,J=6.8 Hz), 3.17-3.21 (2H, m), 4.49-4.65 (1H, m), 7.00-7.60 (3H, br), 7.06 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.35 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.88 (1H, br-t), 8.25 (1H, s), 10.75 (1H, s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.32 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.66-1.91 (4H, m), 2.56 (3H, s), 2.58 (3H, s), 3.15 (1H, sep,J=6.8 Hz), 3.17-3.21 (2H, m), 4.62-4.65 (1H, m), 7.00-7.60 (3H, br), 7.04 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.38 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.88 (1H, br-t), 8.25 (1H, s), 10.78 (1H, s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.94, 24.28, 24.44, 24.59, 24.63, 29.29, 29.70, 37.90, 41.16, 59.47, 115.47, 115.62, 123.55, 128.61, 131.47, 135.09, 135.98, 136.88, 141.78, 144.26, 157.10, 176.00, 185.11
IR 3331 cm-1, 3167 cm-1, 1740 cm-1, 1667 cm-1, 1505 cm-1
UV λ=289.0 ε=30679, λ=349.7 ε=4929, λ=588.3 ε=449
HRMS(APCI) Calcd for C22H30N5OS (M+H)+: 412.2166, Found 412.2186
【００６４】
アスパラギン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=56:44
融点:243-245 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.60 (3H, s), 2.61 (3H, s), 2.60-2.71 (2H, m), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.61 (1H, m), 7.02-7.11 (2H, m), 7.41 (1H, s), 7.51-7.56 (2H, m), 8.24 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.37 (1H, s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.60 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.60-2.71 (2H, m), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.74 (1H, m), 7.02-7.11 (2H, m), 7.38 (1H, s), 7.51-7.56 (2H, m), 8.24 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.53 (1H, s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.94, 24.19, 24.59, 24.63, 36.50 ,36.92, 38.02, 56.42, 56.64, 115.13, 123.68,123.87, 128.54,128.70, 131.41,131.56,135.39, 135.54, 135.93, 135.93, 136.04, 137.08, 142.00, 143.57, 144.05, 171.64, 174.69, 175.02, 186.00, 186.12
IR 3442 cm-1, 3218 cm-1, 1752 cm-1, 1661 cm-1, 1515 cm-1
UV λ=291.7 ε=35900, λ=349.7 ε=5590, λ=592.5 ε=710
HRMS(APCI) Calcd for C20H24N3O2S (M+H)+: 370.1584, Found 370.1571
【００６５】
アスパラギン酸誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=68:32
融点:128-132 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.60 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.84 (1H, dd, J=17.6 Hz, J=4.4 Hz), 2.98 (1H, J=17.6 Hz, J=4.4 Hz), 3.13 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.71 (1H, m), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.34 (1H, s), 7.53 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.25 (1H, d, J=1.6 Hz), 10.45 (1H, s), 12.77 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.60 (3H, s), 2.62 (3H, s), 2.84 (1H, dd, J=17.6 Hz, J=4.4 Hz), 2.98 (1H, J=17.6 Hz, J=4.4 Hz), 3.13 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.75 (1H, m), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.38 (1H, s), 7.53 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.25 (1H, d, J=1.6 Hz), 10.57 (1H, s), 12.77 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ: 12.95, 24.22, 24.64, 35.53, 35.92, 38.05, 55.86, 56.07, 114.54, 114.64, 123.81, 123.89, 128.75, 128.80, 131.43, 131.62, 135.46, 135.88, 136.09, 137.18, 142.14, 142.21, 143.60, 143.90, 173.85, 173.99, 186.63
IR 3256 cm-1, 1748 cm-1, 1496 cm-1
UV λ=291.8 ε=32640, λ=349.4 ε=5570, λ=590.2 ε=490
HRMS(APCI) Calcd for C20H23N2O3S (M+H)+: 371.1424, Found 371.1430
【００６６】
グルタミン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=54:46
融点:144-148 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.82-2.05 (2H, m), 2.24-2.38 (2H, m), 2.57 (3H, s), 2.60 (3H, s), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.48 (1H, m), 6.87 (2H, br-s), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.39 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 8.26 (1H, s), 10.67 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.82-2.05 (2H, m), 2.24-2.38 (2H, m), 2.58 (3H, s), 2.60 (3H, s), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.60 (1H, m), 6.87 (2H, br-s), 7.06 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.39 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 8.26 (1H, s), 10.63 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.95, 24.19, 24.31, 24.60, 24.64, 27.13, 27.65, 30.74, 31.36, 38.02, 59.07, 59.23, 115.16, 115.28, 123.64, 123.78, 128.56, 128.66, 131.42, 131.53, 135.35, 135.68, 135.96, 137.07, 141.98, 143.78, 144.04, 174.84, 174.93, 175.43, 175.57, 185.70
IR 3326 cm-1, 3181 cm-1, 1749 cm-1, 1659 cm-1, 1523 cm-1
UV λ=291.7 ε=29960, λ=349.3 ε=4810, λ=590.0 ε=450
HRMS(APCI) Calcd for C21H26N3O2S (M+H)+: 384.1740, Found 384.1758
【００６７】
グルタミン酸誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=52:48
融点:105-109 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.32 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.78-2.15 (2H, m), 2.45-2.55 (2H, m), 2.56 (3H, s), 2.59 (3H, s), 3.13 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.59 (1H, m), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.38 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 8.25 (1H, s), 10.69 (1H, br-s), 12.29 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.32 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.78-2.15 (2H, m), 2.45-2.55 (2H, m), 2.57 (3H, s), 2.59 (3H, s), 3.13 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.48 (1H, m), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.39 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 8.25 (1H, s), 10.66 (1H, br-s), 12.29 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:11.89, 23.11, 23.29, 23.57, 23.59, 25.61, 25.83, 28.68, 29.35, 37.00, 58.27, 58.48, 114.10, 114.17, 122.73, 127.60, 130.59, 134.25, 134.75, 134.93, 136.09, 136.15, 140.93, 142.93, 174.04, 175.61, 176.02, 185.04, 185.12
ＩＲ 3239 cm-1, 1748 cm-1, 1506 cm-1
UV λ=291.8 ε=33610, λ=349.6 ε=5260, λ=592.7 ε=500
HRMS(APCI) Calcd for C21H25N2O3S (M+H)+: 385.1580, Found 385.1595 
【００６８】
ヒスチジン誘導体の各種スペクトルデータ
融点:136-140 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.31 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.57 (6H, s), 3.09-3.16 (1H, m), 4.71-4.77 (1H, m), 6.88 (1H, s), 7.03 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.34 (1H, s), 7.52 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.65 (1H, s), 8.22 (1H, s), 10.44 (1H, br-s), 11.90 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.31 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.57 (6H, s), 3.09-3.16 (1H, m), 4.71-4.77 (1H, m), 6.94 (1H, s), 7.03 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.34 (1H, s), 7.50 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.60 (1H, s), 8.22 (1H, s), 10.54 (1H, br-s), 11.90 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.92, 23.80, 24.15, 24.60, 29.70, 37.99, 60.29, 60.54, 115.29, 118.0, 123.56, 123.72, 128.61, 131.50, 135.29, 135.50, 135.97, 135.97, 137.02, 138.0, 141.87, 141.91, 144.10, 174.97, 175.32, 185.53
IR 3248 cm-1, 1744 cm-1, 1494 cm-1
UV λ=291.7 ε=32360, λ=349.9 ε=4810, λ=585.8 ε=390
HRMS(APCI) Calcd for C22H25N4OS (M+H)+: 393.1744, Found 393.1748
【００６９】
イソロイシン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=64:36
融点:173-178 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:0.91-0.98 (6H, m), 1.30-1.65 (2H, m), 1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.95-2.00 (1H, m), 2.59 (3H, s), 2.60 (3H, m), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.51-4.54 (1H, m), 7.06 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.27 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 8.26 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.62 (1H, br-d)
minor  
1H-NMR(DMSO-d6) δ:0.91-0.98 (6H, m), 1.30-1.65 (2H, m), 1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.95-2.00 (1H, m), 2.60 (3H, m), 2.63 (3H, s), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.58-4.59 (1H, m), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.35 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.8 Hz), 8.26 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.57 (1H, br-d)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:11.21, 11.63, 11.67, 11.77, 12.93, 13.35, 14.47, 15.19, 15.47, 23.89, 24.16, 24.61, 24.65, 24.99, 26.47, 26.70, 36.81, 37.22, 37.64, 37.78, 38.05, 63.69, 64.30, 64.68, 64.80, 115.25, 115.49, 123.74, 128.40, 128.58, 131.62, 135.36, 135.47, 135.97, 137.12, 141.86, 141.89, 144.03, 174.39, 174.70, 174.92, 175.27, 186.14, 186.43, 186.66
IR 3168 cm-1, 1757 cm-1, 1516 cm-1
UV λ=292.0 ε=47010, λ=349.5 ε=8310, λ=585.7 ε=840
HRMS(APCI) Calcd for C22H29N2OS (M+H)+: 369.1995, Found 369.1994
【００７０】
ロイシン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=51:49
融点:167-171 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:0.95-0.98 (6H, m), 1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.48-1.72 (2H, m), 1.90-2.01 (1H, m), 2.55 (3H, s), 2.59 (3H, m), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.60 (1H, m), 7.06 (1H, d, J=10.4 Hz), 7.35 (1H, s), 7.54 (1H, dd, J=10.8 Hz J=1.6 Hz), 8.26 (1H, d, J= 2.0 Hz), 10.69 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:0.95-0.98 (6H, m), 1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.48-1.72 (2H, m), 1.90-2.01 (1H, m), 2.59 (3H, s), 2.60 (3H, s), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.50 (1H, m), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.37 (1H, s), 7.54 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.25 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.72 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:13.01, 21.10, 21.51, 23.15, 23.26, 23.35, 23.66, 23.75, 23.91, 24.06, 24.22, 24.31, 24.63, 24.67, 25.06, 25.24, 38.05, 40.50, 41.00, 58.63, 58.65, 115.23, 115.30, 123.73, 123.77, 128.59, 128.62, 128.80, 131.45, 131.61, 135.65, 135.77, 135.96, 136.00, 137.11, 137.16, 141.94, 143.92, 143.99, 175.58, 175.81, 185.77, 185.81
IR 3254 cm-1, 1721 cm-1, 1505 cm-1
UV λ=292.0 ε=39490, λ=349.5 ε=6090, λ=590.0 ε=540
HRMS(APCI) Calcd for C22H29N2OS (M+H)+: 369.1995, Found 369.1998
【００７１】
リシン誘導体の各種スペクトルデータ（当該リシン誘導体は、リシンとグアイアズレニルイソチオシアネートの反応物にさらにグアイアズレニルイソチオシアネートが反応して生成した化合物である。）
融点:117-122 ℃
1H-NMR(DMSO-d6) mixture δ:1.29 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.32 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.46-1.90 (6H, m), 2.56 (6H, s),2.60 (3H, m), 2.77 (3H, s), 2.50-2.60 (2H, m), 3.05-3.17 (2H, m), 4.56-4.62 (1H, m), 6.90 (1H, d, J=10.4 Hz), 7.00-7.07 (1H, m), 7.35-7.41 (3H, m), 7.54 (1H, d, J=10.4 Hz), 7.68-7.78 (1H, m), 8.12 (1H, s), 8.26 (1H, s), 9.33 (1H, br-s), 10.66 (1H, br-m)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ: 8.68, 12.77, 12.87, 22.75, 24.15, 24.30, 24.51, 24.55, 24.59, 26.45, 30.68, 31.26, 37.67, 37.89, 45.98, 59.58, 70.49, 115.82, 115.94, 123.36, 128.35, 131.35, 131.44, 134.90, 135.66, 135.90, 136.33, 136.85, 141.46, 143.97, 144.15, 175.80, 175.92, 185.16
IR 3219 cm-1, 1748 cm-1, 1537 cm-1
UV λ=292.0 ε=45610, λ=349.8 ε=7730, λ=592.1 ε=630
HRMS(APCI) Calcd for C38H47N4OS2 (M+H)+: 639.3186, Found 639.3205
【００７２】
メチオニン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=55:45
融点:198-202 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ: 1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.88-2.21 (2H, m), 2.08 (3H, s), 2.56 (3H, s), 2.60 (3H, s),2.65-2.76 (2H, m) , 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.66 (1H, m), 7.06 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.40 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.0 Hz), 8.26 (1H, s), 10.66 (1H, br-s)
minor  
1H-NMR(DMSO-d6) δ: 1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.88-2.21 (2H, m), 2.10 (3H, s), 2.58 (3H, s), 2.60 (3H, s), 2.65-2.76 (2H, m), 3.14 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.59 (1H, m), 7.06 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.40 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10 Hz), 8.26 (1H, s), 10.72 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.99, 15.22, 15.32, 24.21, 24.28, 24.63, 24.66, 30.02, 30.12, 30.70, 31.09, 38.05, 58.86, 59.15, 115.16, 123.75, 123.82, 128.61, 128.65, 131.45, 131.58, 135.38, 135.56, 135.94, 135.99, 137.15, 141.99, 142.03, 143.76, 143.91, 174.93, 175.17, 185.83, 185.91
IR 3150 cm-1, 1747 cm-1, 1519 cm-1
UV λ=291.9 ε=39810, λ=349.5 ε=6140, λ=593.9 ε=620
HRMS(APCI) Calcd for C21H27N2OS2 (M+H)+: 387.1559, Found 387.1559
【００７３】
フェニルアラニン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=67:33
融点:103-108 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.30 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.54 (3H, s), 2.56 (3H, s), 3.10-3.15 (3H, m), 4.87-4.92 (1H, m), 6.33 (1H, s), 7.02 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.24-7.38 (5H, m), 7.51 (1H, d, J= 10.8 Hz), 8.19 (1H, s), 10.64 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.30 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.54 (3H, s), 2.56 (3H, s), 3.10-3.15 (3H, m), 4.87-4.92 (1H, m), 6.87 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.24-7.38 (6H, m), 7.46 (1H, d, J= 10.8 Hz), 8.19 (1H, s), 10.69 (1H, br-s)
13C-NMR(DMSO-d6) mixture δ:12.36, 22.28, 23.31, 24.34, 24.37, 35.42, 36.13, 37.02, 60.14, 60.59, 116.43, 116.28, 122.39, 122.55, 127.08, 127.54, 127.71, 128.18, 128.31, 129.90, 130.09, 130.89, 134.47, 134.53, 135.08, 135.47, 135.57, 135.65, 136.09, 136.19, 136.59, 140.99, 141.21, 143.65, 144.13, 174.51, 174.92, 184.12, 184.38
IR 3193 cm-1, 1752 cm-1, 1507 cm-1
UV λ=292.0 ε=39290, λ=349.8 ε=6320, λ=586.5 ε=630
HRMS(APCI) Calcd for C25H27N2OS (M+H)+: 403.1839, Found 430.1847
【００７４】
プロリン誘導体の各種スペクトルデータ
融点:146-151 ℃
1H-NMR(CDCl3) mixture δ: 1.35 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.84-2.90 (4H, br-m), 2.65 (3H, s), 2.72 (3H, s), 3.07 (1H, sep, J=6.8 Hz), 3.68-3.80 (1H, m), 4.10-4.16 (1H, m), 4.41-4.46 (1H, m), 6.98-7.00 (1H, m), 7.39-7.44 (2H, m), 8.25 (1H, s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.97, 24.12, 24.23, 24.62, 26.86, 27.11, 27.21, 29.72, 38.03, 48.86, 48.97, 65.48, 116.03, 116.25, 123.63, 123.89, 128.54, 131.13, 131.56, 135.34, 135.38, 135.92, 136.15, 137.01, 137.06, 141.86, 143.83, 143.92, 174.45, 174.80, 188.95, 189.04
IR 1750 cm-1, 1448 cm-1
UV λ=283.2 ε=39810, λ=350.0 ε=4590, λ=592.0 ε=560
HRMS(APCI) Calcd for C21H25N2OS (M+H)+: 353.1682, Found 353.168
【００７５】
セリン誘導体の各種スペクトルデータ
融点:>300 ℃
1H-NMR(DMSO-d6) mixture δ: 1.20 (1H, br-s),1.33 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.54 (3H, s), 2.55 (3H, s), 2.60 (3H, s), 2.61 (3H, s), 3.14 (1H, m), 3.40 (1H, m), 4.50-4.62 (1H, m), 7.35(1H, s), 7.38 (1H, s), 7.54 (1H, d, J=10.4 Hz), 8.26 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.61 (1H, s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.41, 22.92, 24.37, 37.05, 98.20, 115.93, 116.28, 122.67, 122.84, 128.02, 130.85, 134.77, 135.23, 135.76, 136.37, 136.54, 141.28, 141.51, 143.33, 143.92, 163.91, 179.95, 184.52
IR 3221 cm-1, 1738 cm-1, 1462 cm-1
UV λ=291.9 ε=37031, λ=348.5 ε=7740, λ=589.1 ε=623
HRMS(APCI) Calcd for C19H21N2OS (M+H)+: 325.1369, Found 325.1372
【００７６】
スレオニン誘導体（cis/trans混合物、major：minor=10:1）の各種スペクトルデータ
融点：240-243.5 ℃
major
1H-NMR(CDCl3) δ:1.35 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.94 (3H, d, J=7.6 Hz), 2.63 (3H, s), 
2.66 (3H, s), 3.08 (1H, m, J=6.8 Hz), 6.10 (1H, q, J=7.6 Hz), 7.01 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.40 (1H, s), 7.43 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=2.0 Hz), 8.27 (1H, d, J=2.0 Hz), 8.88 (1H, s)
minor
1H-NMR(CDCl3) δ:1.35 (6H, d, J=6.8 Hz), 1.94 (3H, d, J=7.6 Hz), 2.63 (3H, s), 
2.66 (3H, s), 3.08 (1H, m, J=6.8 Hz), 5.90 (1H, q, J=7.6 Hz), 7.01 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.40 (1H, s), 7.43 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=2.0 Hz), 8.27 (1H, d, J=2.0 Hz), 8.80 (1H, s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.95, 13.21, 23.99, 24.61, 24.64, 29.70, 38.04, 113.66, 115.00, 123.73, 128.65, 129.89, 131.49, 135.36, 135.70, 135.98, 137.12, 141.92, 144.07, 163.77, 179.94
IR 3114 cm-1, 1740 cm-1, 1487 cm-1
UV λ=293.0 ε=50050, λ=365.6 ε=7130, λ=598.0 ε=2620
HRMS(APCI) Calcd for C20H23N2OS (M+H)+: 339.1526, Found 339.1531
【００７７】
トリプトファン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=62:38
融点:142-146 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.29 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.38 (3H, s), 2.53 (3H, s), 3.07 (1H, sep, J=6.8 Hz), 3.20-3.40 (2H, m), 4.81-4.83 (1H, m), 5.80 (1H, s), 6.94 (1H, t, J=6.8 Hz), 6.99 (1H, d, J=11.2 Hz), 7.12 (1H, t, J=7.2 Hz), 7.19 (1H, d, J=2.0 Hz), 7.43 (1H, d, J=8.0 Hz), 7.49 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=2.0 Hz), 7.52 (1H, d, J=8.0 Hz), 8.13 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.58 (1H, br), 11.07 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ: 1.28 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.50 (3H, s), 2.55 (3H, s), 3.07 (1H, sep, J=6.8 Hz), 3.20-3.40 (2H, m), 4.81-4.83 (1H, m), 6.73 (1H, d, J=10.8 Hz), 6.94 (1H, t, J=6.8 Hz), 7.07 (1H, t, J=7.2 Hz), 7.21 (1H, d, J=2.0 Hz), 7.29 (1H, s), 7.37 (1H, d, J=8.0 Hz), 7.42 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=2.0 Hz), 7.59 (1H, d, J=8.0 Hz), 8.17 (1H, d, J=2.0 Hz), 10.70 (1H, br-s), 10.98 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ: 12.89, 23.70, 24.13, 24.65, 27.82, 38.03, 60.44, 60.91, 108.16, 109.00, 111.51, 115.15, 118.53, 118.85, 120.07, 122.47, 123.62, 123.80, 123.99, 126.86, 128.53, 128.57, 131.61, 135.23, 135.58, 135.89, 136.21, 137.05, 141.92, 143.88, 144.24, 175.10, 185.88
IR 3346 cm-1, 1730 cm-1, 1505 cm-1
UV λ=291.2 ε=47460, λ=350.0 ε=6010, λ=592.0 ε=570
HRMS(APCI) Calcd for C27H28N3OS (M+H)+: 442.1948, Found 442.1951
【００７８】
チロシン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=62:38
融点:136-141 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.31 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.50 (3H, s), 2.54 (3H, s), 3.03 (2H, m), 3.10 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.77-4.81 (1H, m), 6.40 (1H, s), 6.74 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.02 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.51 (1H, dd, J=10.8 Hz, 2.0 Hz), 8.20 (1H, d, J=2.0 Hz), 9.37 (1H, s), 10.58 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:1.30 (6H, d, J=6.8 Hz), 2.54 (3H, s), 2.56 (3H, s), 3.05 (2H, m), 3.10 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.77-4.81 (1H, m), 6.69 (2H, d, J=8.4 Hz), 6.87 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.01 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.30 (1H, s), 7.47 (1H, dd, J=10.8 Hz, 2.0 Hz), 8.20 (1H, d, J=2.0 Hz), 9.30 (1H, s), 10.64 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ: 12.40, 22.39, 23.30, 24.37, 60.94, 115.07, 116.56, 116.93, 122.55, 124.34, 125.05, 127.52, 130.92, 134.38, 136.09, 136.61, 140.95, 143.65, 144.20, 156.53, 174.61, 184.14
IR 3291 cm-1, 1731 cm-1, 1513 cm-1
UV λ=281.4 ε=37790, λ=349.8 ε=5590, λ=586.9 ε=540
HRMS(APCI) Calcd for C25H27N2O2S (M+H)+: 419.1788, Found 419.1768
【００７９】
バリン誘導体の各種スペクトルデータ
major:minor=60:40
融点:214-217 ℃
major
1H-NMR(DMSO-d6) δ:0.95 (3H, d, J= 6.8 Hz), 1.07 (3H, d, J= 6.8 Hz), 1.32 (6H, d, J=7.2  Hz), 2.20 (1H, m), 2.59 (6H, s,), 3.13 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.48 (1H, d, J=2.8 Hz), 7.05 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.26 (1H, s), 7.54 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.25 (1H, d, J=1.6 Hz), 10.65 (1H, br-s)
minor
1H-NMR(DMSO-d6) δ:0.99 (3H, d, J= 6.8 Hz), 1.09 (3H, d, J= 7.2 Hz), 1.32 (6H, d, J=7.2  Hz), 2.20 (1H, m), 2.57 (3H, s), 2.61 (3H, s), 3.13 (1H, sep, J=6.8 Hz), 4.37 (1H, d, J=3.6 Hz), 7.04 (1H, d, J=10.8 Hz), 7.35 (1H, s), 7.54 (1H, dd, J=10.8 Hz, J=1.6 Hz), 8.24 (1H, d, J=1.6 Hz), 10.62 (1H, br-s)
13C-NMR(CDCl3) mixture δ:12.91, 16.27, 17.94, 18.87, 19.28, 24.10, 24.59, 24.63, 29.70, 30.73, 31.23, 38.04, 65.16, 65.61, 115.26, 115.49, 123.72, 128.40, 128.56, 131.64, 135.31, 135.53, 135.94, 137.11, 137.14, 141.88, 144.02, 174.41, 174.73, 186.34, 186.41
IR 3171 cm-1, 1756 cm-1, 1515 cm-1
UV λ=276.8 ε=53190, λ=349.6 ε=5740, λ=589.4 ε=570 
HRMS(APCI) Calcd for C21H27N2OS (M+H)+: 355.1839, Found 355.1840
【００８０】
以上のグアイアズレニルイソチオシアネートから得られるアミノ酸誘導体は図１〜図１９に示すようにいずれも、フェニルイソチオシアネートから得られる従来のアミノ酸誘導体よりも全てのアミノ酸誘導体について吸光度が３倍近く、大きかった。
【００８１】
実施例３．グアイアズレニルイソチオシアネートとジペプチド又はトリペプチドとの反応によるアミノ酸誘導体の合成
【化１７】
2017114779.tif 000022
（Ｘは、前記のＸと同じ定義を表す。）
【００８２】
上記実施例１で合成したグアイアズレニルイソチオシアネートと各ペプチド、トリペプチドとを溶解したエタノール：水：ピリジン＝１：１：１（５％トリエチルアミン）の溶液（６ｍＬ）を、アルゴン気流下、６０℃で１時間撹拌した。反応溶液に濃塩酸０．３ｍＬを加え、温度を１２０℃に上げてさらに２時間撹拌した。反応終了後、水を加えて反応を停止させ、反応混合物を有機溶媒で抽出し、有機層を水洗後に無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥材をろ別した後、溶媒を減圧留去し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル）で精製し、アミノ酸誘導体（４）を青色粉末として得た。以下に、グアイアズレニルイソチオシアネートと各ジペプチド又は各トリペプチドとの反応条件及び結果を表３に示す。
【００８３】
【表３】
2017114779.tif 000023
（上記表中、Ｇｌｙはグリシンを、Ｌｅｕはロイシンを、Ｐｈｅはフェニルアラニンを、Ａｌａはアラニンを表す。）
【００８４】
比較例１．フェニルイソチオシアネートとジペプチド又はトリペプチドとの反応によるアミノ酸誘導体の合成
３−イソチオシアノ−７−イソプロピル−１，４−ジメチルアズレンの代わりにフェニルイソチオシアネートを用いること以外は、実施例３と同様に合成を行った。以下に、フェニルイソチオシアネートと各ジペプチド又は各トリペプチドとの反応条件及び結果を表４に示す。
【００８５】
【表４】
2017114779.tif 000024
（上記表中、Ｇｌｙはグリシンを、Ｌｅｕはロイシンを、Ｐｈｅはフェニルアラニンを、Ａｌａはアラニンを表す。）
【００８６】
グアイアズレニルイソチオシアネートとジペプチド又はトリペプチドとの反応では、得られるアミノ酸誘導体が８０％以上と高収率であった。一方、比較例の従来のフェニルイソチオシアネートは、ジペプチドがH2N-Gly-Leu-COOH、H2N-Phe-Gly-COOHであるとき、収率が７０％台であり、グアイアズレニルイソチオシアネートと反応させたときよりもアミノ酸誘導体の収率は低かった。以上の結果から、本発明の式（１）で表される化合物は、エドマン分解に従来用いられるフェニルイソチオシアネートよりも、ペプチドのＮ末端のアミノ酸と位置選択的に反応し、効率よく反応が進行するといえる。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
本発明の式（１）で表される化合物は、エドマン試薬として使用することができ、また、アミノ酸との反応により得られるチオヒダントイン誘導体はＵＶ吸光度が大きく、さらに、ペプチドのＮ末端のアミノ酸と位置選択的に反応するため、高感度の検出が可能となる。すなわち、微量のペプチドのサンプルであったとしても、アミノ酸配列の決定が可能となる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
2017114779.tif 000034
【図４】
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【図５】
2017114779.tif 000036
【図６】
2017114779.tif 000037
【図７】
2017114779.tif 000038
【図８】
2017114779.tif 000039
【図９】
2017114779.tif 000040
【図１０】
2017114779.tif 000041
【図１１】
2017114779.tif 000042
【図１２】
2017114779.tif 000043
【図１３】
2017114779.tif 000044
【図１４】
2017114779.tif 000045
【図１５】
2017114779.tif 000046
【図１６】
2017114779.tif 000047
【図１７】
2017114779.tif 000048
【図１８】
2017114779.tif 000049
【図１９】
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