(57)【要約】【課題】うつ病や急性ストレス障害などのバイオマーカーおよび新規治療法及びそれらをプラットフォームとした新規スクリーニング法の提供。【解決手段】  ステロイド性抗炎症薬を含む精神疾患用医薬組成物、及びレプチンを含む精神疾患バイオマーカー。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗炎症作用を有する物質を含む、精神疾患の治療又は予防用医薬組成物。
【請求項２】
抗炎症作用を有する物質が、 次式I:
【化３】
2017114855.tif 000005
（I）
（式中、R1は水素原子、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、R2は、水素
原子又はハロゲン原子を表し、R3は、水素原子、水酸基又は炭素数１〜６のアルキル基を
表し、R4は水酸基を表し、Xは酸素原子又は水酸基を表す。但し、R3とR4とは、互いに結
合してアセトニド基を形成してもよい。 ）で示される化合物又はその薬学的に許容され
る塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
式Iに示される化合物がプレドニゾロンである請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
精神疾患が、うつ病、急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害及び心的外
傷後ストレス障害からなる群から選択される少なくとも１つである請求項１〜３のいずれ
か１項に記載の医薬組成物または予防物質。
【請求項５】
精神疾患がうつ病である請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
うつ病が憎悪期のものである請求項４又は５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
精神疾患が、操作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態のもので
ある請求項１〜６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
レプチンの血中濃度が正常値の範囲よりも低下しているときに投与されるように用いら
れることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
レプチンを含む、精神疾患バイオマーカー。
【請求項１０】
精神疾患が、うつ病、急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害及び心的外
傷後ストレス障害からなる群から選択される少なくとも１つである請求項９に記載のバイ
オマーカー。
【請求項１１】
精神疾患がうつ病である請求項９に記載のバイオマーカー。
【請求項１２】
うつ病が憎悪期のものである請求項１０又は１１に記載のバイオマーカー。
【請求項１３】
精神疾患が、操作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態のもの
である請求項９〜１２のいずれか１項に記載のバイオマーカー。
【請求項１４】
被検者から採取された被検試料中のレプチンの濃度を測定し、当該濃度が対照と比較し
て低下しているときは、当該測定結果を、精神疾患である又は精神疾患のリスクがあるこ
との指標とする、精神疾患の検査方法。
【請求項１５】
精神疾患が、うつ病、急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害及び心的外
傷後ストレス障害からなる群から選択される少なくとも１つである請求項１４に記載の方
法。
【請求項１６】
精神疾患がうつ病である請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
うつ病が憎悪期のものである請求項１５又は１６に記載の方法。
【請求項１８】
精神疾患が、操作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態である請
求項１４〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
被検試料が血液、髄液、尿及び唾液からなる群から選ばれる少なくとも１つである請求
項１４〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
被検ラットをBrown Norwayラットとともに飼育することにより前記被検ラットにおける
精神疾患モデルラットを作製し、当該精神疾患モデルラット又はその組織に抗精神疾患薬
又は請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物を接触させ、抗精神疾患薬接触前の
精神疾患モデルラット又は組織において異常値を示し、抗精神疾患薬の接触後の前記モデ
ルラット又は組織において正常値を示した物質を、精神疾患のバイオマーカーとして選択
することを特徴とするバイオマーカーのスクリーニング方法。
【請求項２１】
被検ラットをBrown Norwayラットとともに飼育することにより前記被検ラットにおける
精神疾患モデルラットを作製し、当該モデルラット又はその組織に被検物質を接触させ、
請求項２０に記載の方法でスクリーニングされたバイオマーカーの血中濃度を指標として
抗精神疾患薬を選択することを特徴とする抗精神疾患薬のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、うつ病や急性ストレス障害の診断バイオマーカーおよび抗炎症薬を用いた
新規治療法・予防法等に関する。また、本発明はそれらをプラットフォームとした新規ス
クリーニング法に関する。
【背景技術】
【０００２】
大うつ病（以下うつ病）は、主症状として（毎日２週間以上続く）抑うつ気分や興味・
喜びの喪失、副症状として睡眠障害、摂食障害、慢性疲労、活動性の低下、判断力の低下
、集中できない、自罰的思考、希死念慮などを伴う精神疾患である。現在、血液検査など
の客観的診断法はなく、アメリカ精神医学会が発刊したDSM-5 という問診による操作的診
断基準に基づき診断される。問診上、上記症状とりわけ中核症状が毎日２週間続き、かつ
社会生活に支障が出ているとうつ病と診断される。
【０００３】
うつ病の成因は、遺伝的あるいは何らかの後天的な環境要因によってもたらされた「う
つ病脆弱性」を基盤に、社会心理学的ストレスなどを契機に発症すると考えられているが
、その本質は未だに不明である。
【０００４】
うつ病エピソードの経過は大まかには、「増悪期」、「回復期」、「寛解期」の３つの
段階に分けられる。なかでも「増悪期」は、上記の症状が最も強く出現し始める期間であ
る。その契機の多くは社会心理的ストレス、喪失体験、健康、経済的理由などさまざまで
あるが、中には明確な原因が認められないケースもある。極早期にこれらの時期を特定す
ることは現在の診断基準（症状が毎日2週間の継続）では難しく、さらに抗うつ薬による
超早期治療介入も議論がある。その後、問診による操作的診断によって明確にうつ病と確
定診断が下されると、通常は治療が開始され、症状が強弱を繰り返しながら徐々に回復し
ていく過程に入る。この「回復期」における治療の大半は、抗うつ薬を用いた薬物療法に
依存することが多いが、この時期に抗うつ薬が反応しない、いわゆる、治療抵抗性うつ病
が一定割合で認められており、それらに対する治療選択肢が十分でないという現状がある
。また抗うつ薬の効果が従来考えられていた程ではないという問題も指摘されている。以
上のさまざまな臨床的観点から、「増悪期」の早期発見のための客観的診断バイオマーカ
ーの開発や、既存の抗うつ薬治療とは異なる新しいうつ病治療法・予防法の確立、難治性
うつ病の治療・予防法の開発が望まれている。
【０００５】
従来のうつ病の病態研究の多くは、偶然発見された三環系抗うつ薬の作用機序研究を発
端にしたモノアミン仮説に基づくものが主流であり、その仮説に沿った形で、四環系抗う
つ薬が登場し、その後、SSRI やSNRI などのより特異性が高く副作用が少ない薬剤が開発
された。現在、治療の現場では SSRI や SNRI など第 3 世代の抗うつ薬が主流となって
いる。しかしながら、近年アメリカで公的資金を用いて行なわれた大規模臨床研究（STAR
*D）において、より実態に近い形で治療の効果が検証され、抗うつ薬による寛解率が従来
想定されていた割合よりはるかに低いことが明らかになった（1）。この事実は、これま
でのうつ病におけるモノアミン仮説を再検証し、既存の病態メカニズムを見直すべき時期
にきていることを強く示唆している。
モノアミン仮説にかわる生物学的仮説として、視床下部-下垂体-副腎系（HPA 軸）を中
心にストレスによる神経回路やホルモンフィードバック異常に注目したストレス仮説、神
経栄養因子Brain derived neurotrophic factor (BDNF)や海馬神経細胞新生などに注目し
た神経細胞可塑性仮説などが研究されてきた。近年、慢性肝炎治療に用いるインターフェ
ロン（IFN）α が高率で抑うつ症状を惹起すること、また、細菌由来の催炎症物質である
lipopolysaccaride（LPS）をマウスに全身投与すると、運動量低下（不活発）、食欲低
下、体重減少など、ヒトのうつ病に類似した行動（sickness behavior）が生じることか
ら、うつ病の炎症仮説が提唱されている（非特許文献2）。
実際、社会心理的ストレスとうつ、そして何らかの炎症が関連するという傍証が積み上
がっている。例えば幼児期の虐待は、血中の炎症性マーカーの増加、将来のうつ病発症率
増加と関連する（3,4）。近年の社会心理的ストレスを用いた動物実験では、うつ病様異
常行動の出現と相関して血中の炎症性マーカーが上昇することが繰り返し報告されており
（see review 5）、さらに最近では末梢骨髄由来のモノサイトが脳血液関門（BBB）を越
えて海馬など特定脳部位に浸潤することが報告されている（5）。これらの事実はうつ病
のストレス仮説と炎症仮説の間に何らかの強いクロストークがあることを示している。さ
らに炎症仮説はモノアミン仮説、神経可塑性仮説をも包摂出来る可能性がある。例えば炎
症性サイトカインはさまざまな経路でモノアミン（セロトニン、ドーパミン）代謝に影響
を及ぼす。また、炎症は神経細胞新生やBDNF など神経栄養因子の発現にも影響する（2, 
5）。これらの事実は、炎症をターゲットにした新しいうつ病など精神疾患の治療法・予
防法が開発できる可能性を示唆している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Trivedi MH, Rush AJ, Wisniewski SR et al (2006) Evaluation of outcomes with citalopram for depression using measurement-based care in STAR*D: implications for clinical practice. Am J Psychiatry. 163: 28-40.
【非特許文献２】Haroon E, Raison CL, Miller A (2012) Psychoneuroimmunology meets neuropsychopharmacology: Translational implications of the impact of inflammation on behavior. Neuropsychopharmacology. 37: 137-162.
【非特許文献３】Kendler KS, Karkowski LM, Prescott CA (1999) Causal relationship between stressful life events and the onset of major depression. Am J Psychiatry. 156: 837-841.
【非特許文献４】Carpenter LL, Gawuga CE, Tyrka AR, Lee JK, Anderson GM, Price LH (2010) Association between plasma IL-6 response to acute stress and early-life adversity in healthy adults. Neuropsychopharmacology. 35: 2617-2623.
【非特許文献５】Wohleb ES, McKim DB, Sheridan JF et al (2015) Monocyte trafficking to the brain with stress and inflammation: a novel axis of immune-to-brain communication that influences mood and behavior. Front Neurosci. 8:447.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
そこで本発明は、うつ病等の精神疾患の診断バイオマーカー及び当該疾患用医薬組成物
・予防物質を提供すること、またそれらのスクリーニング系を提供することを目的とする
。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、動物モデルにおいて抗炎
症薬がうつ病、特にその増悪期に有効であり、また、レプチンがうつ病、特にその増悪期
のバイオマーカーであること、さらにレプチンが抗炎症薬の抗うつ効果の治療効果判定物
質となりうること、すなわち診断・治療バイオマーカーとなること、さらに抗炎症薬とし
てステロイド剤、特にプレドニゾロンが効果的で、うつ病増悪期あるいは精神疾患が、操
作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態の治療薬として使用できる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。また、本発見は、当該動物モデルが、うつ病
や急性ストレス障害などの新規バイオマーカー探索や新規治療法・予防法のスクリーニン
グ系となることを実証しており、そのいずれの用途にも使用可能な初めての発明である。
すなわち、本発明は以下の通りである。
（１）抗炎症作用を有する物質を含む、精神疾患の治療又は予防用医薬組成物。
（２）抗炎症作用を有する物質が、 次式I:
【化１】
2017114855.tif 000002
（式中、R1は水素原子、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基を表し、R2は、水素
原子又はハロゲン原子を表し、R3は、水素原子、水酸基又は炭素数１〜６のアルキル基を
表し、R4は水酸基を表し、Xは酸素原子又は水酸基を表す。但し、R3とR4とは、互いに結
合してアセトニド基を形成してもよい。 ）で示される化合物又はその薬学的に許容され
る塩である、（１）に記載の医薬組成物。
（３）式Iに示される化合物がプレドニゾロンである（２）に記載の医薬組成物。
（４）精神疾患が、うつ病、急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害及び心
的外傷後ストレス障害からなる群から選択される少なくとも１つである（１）〜（３）の
いずれか１項に記載の医薬組成物または予防物質。
（５）精神疾患がうつ病である（１）〜（３）のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（６）うつ病が憎悪期のものである（４）又は（５）に記載の医薬組成物。
（７）精神疾患が、操作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態のも
のである（１）〜（６）のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（８）レプチンの血中濃度が正常値の範囲よりも低下しているときに投与されるように用
いられることを特徴とする（１）〜（７）のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（９）レプチンを含む、精神疾患バイオマーカー。
（１０）精神疾患が、うつ病、急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害及び
心的外傷後ストレス障害からなる群から選択される少なくとも１つである（９）に記載の
バイオマーカー。
（１１）精神疾患がうつ病である（９）に記載のバイオマーカー。
（１２）うつ病が憎悪期のものである（１０）又は（１１）に記載のバイオマーカー。
（１３）精神疾患が、操作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態の
ものである（９）〜（１２）のいずれか１項に記載のバイオマーカー。
（１４）被検者から採取された被検試料中のレプチンの濃度を測定し、当該濃度が対照と
比較して低下しているときは、当該測定結果を、精神疾患である又は精神疾患のリスクが
あることの指標とする、精神疾患の検査方法。
（１５）精神疾患が、うつ病、急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害及び
心的外傷後ストレス障害からなる群から選択される少なくとも１つである（１４）に記載
の方法。
（１６）精神疾患がうつ病である（１４）に記載の方法。
（１７）うつ病が憎悪期のものである（１５）又は（１６）に記載の方法。
（１８）精神疾患が、操作的診断基準に該当しない初期、増悪期又は急性ストレス状態で
ある（１４）〜（１７）のいずれか１項に記載の方法。
（１９）被検試料が血液、髄液、尿及び唾液からなる群から選ばれる少なくとも１つであ
る（１４）〜（１８）のいずれか１項に記載の方法。
（２０）  被検ラットをBrown Norwayラットとともに飼育することにより前記被検ラット
における精神疾患モデルラットを作製し、当該精神疾患モデルラット又はその組織に抗精
神疾患薬又は（１）〜（３）のいずれか１項に記載の医薬組成物を接触させ、抗精神疾患
薬接触前の精神疾患モデルラット又は組織において異常値を示し、抗精神疾患薬の接触後
の前記モデルラット又は組織において正常値を示した物質を、精神疾患のバイオマーカー
として選択することを特徴とするバイオマーカーのスクリーニング方法。
（２１）被検ラットをBrown Norwayラットとともに飼育することにより前記被検ラットに
おける精神疾患モデルラットを作製し、当該モデルラット又はその組織に被検物質を接触
させ、前記（２０）に記載の方法でスクリーニングされたバイオマーカー（本発明におい
て同定したレプチンを含む）を指標として抗精神疾患薬を選択することを特徴とする抗精
神疾患薬のスクリーニング方法。  
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、うつ病や急性ストレス障害のバイオマーカーおよび新規治療・予防法が
初めて生物学的に連携する形で提供される。特に本発明バイオマーカーの一つレプチンは
、従来の操作的診断基準（DSMなど）では診断不可能なうつ病の早期の「増悪期」をはじ
めとする各種急性ストレス状態の同定、またレプチン以外の新規バイオマーカーのスクリ
ーニング、新規治療法・予防法開発等に利用できる点で極めて有用である。また、ステロ
イドなどの抗炎症薬は、投与時期を工夫することで、うつ病様症状を従来の抗うつ薬以上
に改善するとともに、血清中のバイオマーカーレプチンをも改善する。抗炎症作用を持つ
物質は新規抗うつ薬、予防物質となる可能性が極めて高く、本発明は同様の効果を持った
新規治療・予防物質スクリーニング等にも利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】社会敗北ストレスを用いた動物モデルの実施方法(A)およびストレス終了後のinteraction試験(B)の概要図。A：ストレスの方法を示す。B：interaction試験の概要と一例を示す。  interaction試験の結果、ストレスを受けていないSDラット(対照群)では、Social target(BNラットもしくはSDラット)が存在する時には、存在しないときに比べてinteraction zone内の滞在時間が増加するが、社会敗北ストレスを受けたSDラット(ストレス群)では、interaction zone内の滞在時間が減少し、Social targetに対する接触回避行動が生じる（B）。以下、接触率（%）＝（Social target存在時の滞在時間）／（Social target非存在時の滞在時間）X 100 (%)を示す。
【図２】ストレスにより生じる接触回避行動に対する三環系抗うつ薬imipramineの効果。 A：実験スケジュールを示す。imipramine投与群以外には生食（Saline）を投与した。B - E:ストレス後1週間(B、C)および1ヶ月(D、E)の時点でのinteraction試験におけるSocial targetに対する接触率(B、DはSocial targetをBNラット、C、EはSDラットとした際)を示す。   ストレス後1週間(B、C)では、Social targetがBNラット(B)もしくは試験ラットと同系統のSDラット(C)のいずれの場合においても、対照群に比べてSocial targetに対する接触率が有意(B：BNラット；control vs stress、**p < 0.01、C：SDラット；control vs stress、**p < 0.01)に低下した。この回避行動は、ストレス終了後1ヶ月の時点でも持続して生じた(D：BNラット；**p < 0.01、E：SDラット；*p < 0.05)。  ストレス終了後からimipramineの慢性投与を行うと、ストレス後1週間(B、C)および1ヶ月(D、E)の時点で、ストレス群に比べて接触率はわずかに上昇傾向が認められたが、いずれも有意差は得られず、接触回避行動に対する効果はほとんどなかった。
【図３】接触回避行動に対する抗炎症薬prednisoloneのストレス期間中投与の効果。A：実験スケジュールを示す。prednisolone投与群以外には生食を投与した。B - E：ストレス直後(B、C)およびストレス後1ヶ月(D、E)でのinteraction試験におけるSocial targetに対する接触率(B、DはSocial targetをBNラット、C、EはSDラットとした際)を示す。   ストレス開始より3回目からストレス負荷と併行してprednisoloneを投与(A)すると、ストレス終了直後のinteraction試験において、Social targetがBNラット(B)、またはSDラット(C)のいずれの場合においても、Social targetに対する接触率は有意に上昇した(B：BNラット； stress vs pred、**p < 0.01、C：SDラット； stress vs pred、*p < 0.05)。この回避行動に対する改善効果は、ストレス終了後1ヶ月(D、E)でも持続していた(D：BNラット； stress vs pred、**p < 0.01、E：SDラット； stress vs pred、*p < 0.05)。
【図４】ストレスによる薬剤投与による体重の経時的変化。A：三環系抗うつ薬imipramineの効果を示す。薄いグレーの期間はストレス負荷期間を示す。ストレス群の体重は対照群に比べてストレス初回後より有意(p < 0.01)に減少し、ストレス終了後も長期にわたり低体重を維持した(A)。ストレス終了後よりimipramineの慢性投与を行った（矢印）が、体重は減少を維持したままとなった（A：薄いグレーの◇）。B：抗炎症薬prednisoloneのストレス期間中投与の効果を示す。ストレス開始3回目よりprednisoloneを投与する（矢印）と、ストレス後17日目より対照群との体重の有意差が認められなくなり、体重減少が改善された（B；グレーの△）。
【図５】ストレスおよびストレス負荷中のprednisolone投与による摂食量（A)、ショ糖の摂取量（B）、ショ糖嗜好性（C)、およびオープンフィールドにおける移動距離（D)への効果。A：摂食量を示す。薄いグレーの期間はストレス負荷期間、矢印はprednisolone投与期間を示す（A、B共通）。摂食量はストレス初回後より顕著に減少し(control vs. stress、p < 0.01)、その後は対照群に比べて低く推移し、ストレス後1ヶ月での摂食量も有意に少なかった(control vs. stress、p < 0.05)。prednisolone投与によってストレス後1ヶ月時点での摂食量の有意な改善が認められた(stress vs. pred、p < 0.05)。B：ショ糖摂取量を示す。ショ糖摂取量はストレスによって有意に減少し、ストレス1ヶ月後も減少が持続した(control vs. stress、p < 0.01)。prednisolone投与によってストレス期間中からショ糖摂取量は改善した。二重矢印はCのショ糖嗜好性試験の実施時期を示す。C：ストレス終了後の５日目のショ糖嗜好性を示す。ストレス群で嗜好性が有意に低下（黒いバー；control vs stress、*p < 0.05)した。ストレス中にprednisoloneを投与すると、この嗜好性低下は有意に改善した（格子模様バー；stress vs pred、*p < 0.05）。D：ストレス直後（a）、１週間後（b）および１ヶ月後（c）のオープンフィールド内における総移動距離を示す。図１BにおけるNo targetの状態でのオープンフィールド内（2.5分間）の総移動距離を比較したところ、ストレス群で短縮する傾向(control vs stress)を示したが有意差はつかなかった。一方、ストレス中にprednisoloneを投与すると総移動距離は延長する傾向を示したが、ストレス後１週間のみstress群とのみ有意差がついた(stress vs pred、*p < 0.05)。
【図６】血清中レプチン濃度。A：ストレス期間中からストレス後1ヶ月までの間（4点）における血清レプチンの動態を示す。ストレス5回目および10回目では、対照群に比べて血清レプチンレベルは大きく減少しており、その後は上昇傾向を示しながら、ストレス後1ヶ月で対照群とほぼ同レベルに戻った。B：ストレス終了直後の血清レプチンレベル低下とprednisolone投与による効果を示す。ストレス群では対照群に比べて血清中のレプチンレベルが有意に減少(control vs stress、****p < 0.00005)している一方、ストレス期間中にprednisoloneの投与を行うと、レプチンレベルは有意に上昇した(stress vs pred、**p = 0.005)。しかし、対照群よりは低値であった（control vs pred、***p = 0.002）。
【図７】ストレス負荷終了後からprednisoloneを投与した場合の接触回避行動に及ぼす効果。A：実験スケジュールを示す。prednisolone投与群以外には生食を投与した。B - E：prednisolone投与直後（ストレス後11日目、B、C）およびストレス後1ヶ月(D、E)でのinteraction試験におけるSocial targetに対する接触率(B、DはSocial targetをBNラット、C、EはSDラットとした際)を示す。   ストレス負荷終了後からprednisoloneを投与した場合でも、Social targetに対する接触率は有意に改善した（B：BNラット； stress vs pred、*p < 0.05、C：SDラット； stress vs pred、*p < 0.05）。この回避行動に対する改善効果は、ストレス終了後1ヶ月(D、E)でも持続していた(D：BNラット； stress vs pred、*p < 0.05、E：SDラット； stress vs pred、*p < 0.05)。
【図８】ストレス負荷終了後からprednisoloneを投与した場合の体重（A）、水摂取量（B）、ショ糖摂取量（Cのa）、ショ糖嗜好性（Cのb）、およびオープンフィールドにおける移動距離（D）への効果。A：体重量の変化を示す。薄いグレーの期間はストレス負荷期間、矢印はprednisolone投与期間を示す（A、B、C共通）。ストレス終了後のprednisoloneの投与はストレスによる体重減少を改善しない。B：摂食量を示す。prednisolone投与によってストレス後1ヶ月時点での摂食量の有意な改善が認められた(stress vs pred、p < 0.01)。C：ショ糖摂取量（a）およびストレス終了１ヶ月後のショ糖嗜好性試験の結果（b）を示す。（a）ショ糖摂取量はストレスによって低下するが、prednisolone投与によっても改善しない。二重矢印はCのショ糖嗜好性試験の実施時期を示す。（b）prednisolone投与は、ストレス１ヶ月後のショ糖嗜好性低下は改善しなかった（格子模様バー）。D：ストレス終了後１ヶ月後のオープンフィールド内における総移動距離を示す。オープンフィールド内（2.5分間）の総移動距離を比較したところ、ストレス群で短縮する傾向(control vs stress)を示したが有意差はつかなかった。一方、prednisolone投与で総移動距離は延長する傾向を示したが有意差がつかなかった。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
1．概要
本発明においては、われわれがこれまで開発してきた社会心理的ストレス（社会敗北ス
トレス）モデル動物を用いた。まず、三環系抗うつ薬imipramineに睡眠障害の改善効果が
ある一方、うつ病様回避行動にほとんど効果がないことを発見し、この動物モデルがヒト
における難治性うつ病モデルとなる可能性があることを示した。そこで、このモデル動物
を用いてヒトでは検証しにくいさまざまな時期（うつ病の急性増悪期、急性ストレス直後
など）に抗炎症薬、とりわけ抗炎症作用の強い合成グルココルチコイド（GC、薬品名 pre
dnisolone）、を投与することで、ストレス負荷に伴って出現するうつ様行動にどういっ
た効果をもたらすのかを検証した。合成GC を用いることで炎症との関連性のみならず、H
PA軸など既存のストレス仮説と社会心理的ストレスの関連性をより明確にできるものと考
えた。さらに血中の（炎症性）マーカーの変動も探索し、社会心理的ストレス、炎症、う
つ病様行動との関連を検証した。
その結果、抗炎症作用を有するステロイド系化合物が、投与期間を工夫することで、動
物モデルにおけるうつ病様行動の改善（うつ病の治療）に、三環系抗うつ薬imipramine以
上に有用であることが示された。また、モデル動物を用いて血中のバイオマーカーを調べ
たところ、レプチンがうつ病の、特に増悪期のバイオマーカーとして使用可能であり、レ
プチンを指標としてうつ病や急性ストレス障害など精神疾患を検査し得ること、また新規
治療薬（抗炎症薬を含む）治療効果を判定できることを見出した。従って本発明において
は、本発明において同定されたバイオマーカーとしてレプチン、あるいは本発明において
同定された抗炎症薬（プレドニゾロンを含む）の行動改善効果を指標に、レプチン以外の
より特異的なバイオマーカーの探索、新規治療・予防物質のスクリーニングも可能となっ
た。
【００１２】
２．精神疾患モデル動物
本発明者は、社会心理的ストレスを負荷する実験系を用いて、ラットではじめて他個体
に対する回避行動（うつ病様行動）をほぼ100%の確立で誘発させることに成功した。その
回避行動は、ストレッサーと同系統のラット（ストレッサーラット）に対してだけでなく
、本来はストレスにならないはずの被検ラットと同じ系統のラット（同種ラット）に対し
ても示されたことから、われわれが開発したモデル動物は異常回避行動における汎化、す
なわち恐怖の条件付けだけでは説明できない、よりうつ病様症状に近い行動異常を引き起
こすことが明らかとなった。
本モデルは、被検ラットをストレッサーラット（Brown Norwayラット）とともに飼育す
ることにより得られるものである。
【００１３】
このモデルでは、ストレスを受けたすべての動物が他個体を回避するという行動特性を
示した。これはマウスでの社会敗北ストレスによる回避率は約50％とする従来の報告とは
大きく異なる点である。したがって、本モデルで用いた動物系統の組み合わせによるスト
レスの負荷方法が、動物の回避行動を確実に惹起させるのに有効であり、それは抗うつ薬
のスクリーニングを行う上で、薬効判定の際に非常に優れた利点を持つことを示している
。この有用性は新規薬剤の開発のみでなく、開発後の様々な安全性試験に対しても期待で
きるものである。
【００１４】
（１）被検ラット
被検ラットとは、精神疾患モデルラットを作製する対象となるラットであり、その種類
は限定されるものではない。被検ラットとしては、Wistar（WI）ラット、Sprague Dawley
（SD）ラット、Long-Evansラットなどが挙げられ、SDラットであることが好ましい。
ラットの週齢も限定されるものではなく、好ましくは5週齢〜8週齢、さらに好ましくは
８週齢である。本発明においては、ストレスの負荷を開始するときの週齢が5週齢〜8週齢
、例えば８週齢であることが好ましい。
上記ラットは、自ら繁殖させてもよく、市販のもの（日本チャールス・リバー社）を使
用することもできる。
但し、被検ラットは後述のストレッサーに使用するBrown Norwayラットではないことが
必要である。
【００１５】
（２）ストレッサーラット
ストレッサーラットとは、上記被検ラットに対しストレスを与えるラットを意味する。
ストレスには多数の種類があるが、本発明では、例えば社会敗北ストレスなどの、他個体
との直接的、間接的接触を含む社会心理的な負荷方法を用いたストレスが挙げられる。
ストレッサーラットとしては、Brown Norway（BN）ラットが挙げられ、使用する週齢は
、被検ラットよりも身体が大きく、攻撃性を有する限り特に限定されるものではないが、
例えば、7ヶ月齢〜9ヶ月齢、さらに好ましくは9ヶ月齢以上である。
【００１６】
（３）飼育
被検ラットにストレスを負荷するには、被検ラットとストレッサーラットとをケージ内
で一緒に飼育する。飼育法は直接法でも間接法でもよく、両者を併用してもよい。直接法
の場合、ストレスを負荷するための飼育期間は、5分〜1時間、好ましくは10分〜15分であ
る。直接法では、飼育することにより、ストレッサーラットが被検ラットを追跡したり覆
い被さるなどの接触を起こす。
また、間接法では、被検ラットとストレッサーラットとを、しきり板で隔てた飼育ケー
ジの中で1時間〜48時間程度滞在させる。好ましくは24時間である。この場合、しきり板
は透明板であること、空気穴があることが好ましい。
【００１７】
（４）評価
被検ラットが精神疾患モデルであるか否かは、社会的接触行動評価（含む行動量評価）
、摂食行動評価（含むショ糖嗜好性）、血液検査等により評価することができる。
【００１８】
３．医薬組成物
本発明においては、上記モデル動物および評価系を用いて抗精神疾患薬のスクリーニン
グを行った結果、三環系抗うつ薬imipramineにうつ病様異常行動の改善がほとんど認めら
れなかった一方、抗炎症作用を有する物質、中でもステロイド系抗炎症薬が、投与期間を
工夫することで、精神疾患治療用医薬組成物として極めて有用であることが示された。
本発明の医薬組成物の有効成分は抗炎症薬として使用されている物質であればよく、例
えば、ステロイド系化合物、非ステロイド系抗炎症薬（NSAIDs）、抗体医薬品等が挙げら
れるが、ステロイド系化合物がより好ましい。
（１）ステロイド系化合物
ステロイド系化合物は、下記一般式Iで示される。
【００１９】
【化２】
2017114855.tif 000003
【００２０】
式Iにおいて、R1は水素原子、ハロゲン原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、R2
は、水素原子又はハロゲン原子であり、R3は、水素原子、水酸基又は炭素数１〜６のアル
キル基であり、R4は水酸基である。但し、R3とR4とは、互いに結合してアセトニド基を形
成してもよい。また、Xは酸素原子又は水酸基を表す。
【００２１】
「炭素数１〜６のアルキル基」とは、炭素数が１〜６個の直鎖状又は分枝鎖状のアルキ
ル基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、n-プロピル基、イソプロピル基、n-ブチル
基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げ
られ、メチル基であることが好ましい。
「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素原子(F)、塩素原子（Cl)、臭素原子（Br)
、ヨウ素原子（I)が挙げられるが、フッ素原子、塩素原子が好ましい。
本発明において使用し得る抗炎症ステロイドの具体例を表１に示す。
【００２２】
【表１】
2017114855.tif 000004
Δ1,2の欄において、＋は、式Iの1,2位間に二重結合を有すること、−は二重結合を有さ
ないことを表す。
【００２３】
上記抗炎症ステロイドは市販されており、当業者であれば容易に（例えば塩野義製薬株
式会社から）入手することができる。
本発明において、上記抗炎症薬はプレドニゾロンであることが好ましい。
本発明において使用される化合物は、製薬上許容される塩や水和物を形成してもよい。
製薬上許容される塩は、本発明の効果を有する限り特に限定されるものではなく、酸との
塩を形成しても塩基との塩を形成してもよい。
酸との塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩等の無機酸との塩、
蟻酸、酢酸、乳酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、メ
タンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸など
の有機酸との塩などを挙げることができる。
塩基との塩としては、例えばナトリウム塩、カリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシ
ウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、トリメチルアミン、トリエチルアミ
ン、ピリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジア
ミン等の有機塩基との塩（有機アミン塩）、あるいはアンモニウム塩などを挙げることが
できる。
【００２４】
また、本発明において使用される化合物は、その使用形態によっては、塩を形成しない
、いわゆるフリー体を選択することもできる。
本発明の医薬組成物では、式Iに示す化合物又はその薬学的に許容される塩をそのまま
用いることも、公知の薬学的に許容される担体などを配合して製剤化することも可能であ
る。このような薬学的に許容される担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑
沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、
防腐剤、および抗酸化剤などを挙げることができる。
また、本発明の医薬組成物の投与形態は特に限定されず、上記の剤形に基づいて経口又
は非経口的に投与することができる。非経口投与の形態として、例えば静脈内注射、点滴
静注、皮下注射、皮内注射、又は腹腔内注射などが挙げられる。製剤化の剤形としては、
経口的投与形態に用いられる錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤など
が、また非経口的投与形態に用いられる坐剤、注射剤、軟膏剤、バップ剤などが挙げられ
る。
【００２５】
経口的投与形態に用いられる経口用製剤を調製する場合には、当該有効成分に賦形剤、
さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法
により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤等とすることができる。
賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ぶどう糖、ソルビット、結晶
セルロース、二酸化ケイ素などが、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、エチ
ルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒド
ロキシプロピルメチルセルロース等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウ
ム、タルク、シリカ等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが
、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、龍脳、桂皮末等が用い
られる。
【００２６】
本発明において、注射剤は、必要により主薬に非水性の希釈剤（例えばプロピレングリ
コール、ポリエチレングリコールなどのグリコール、オリーブ油などの植物油、エタノー
ルなどのアルコール類など）、懸濁剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤、pH調
整剤、緩衝剤などを添加して調製することが可能である。注射剤の無菌化は、フィルター
による濾過滅菌、殺菌剤の配合などにより行うことができる。
また、注射剤は、用時調製の形態として製造することができる。すなわち、凍結乾燥法
などによって無菌の固体組成物とし、使用前に無菌の注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解し
て使用することができる。注射剤は、常法により点滴静注剤、あるいは静脈、皮下、筋肉
内注射剤とすることができる。
【００２７】
懸濁剤としては、例えば、メチルセルロース、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセ
ルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリ
オキシエチレンソルビタンモノラウレートなどを挙げることができる。
溶解補助剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート80、ニ
コチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ
油脂肪酸エチルエステルなどを挙げることができる。
また安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム等を、保存剤
としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、
フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどを挙げることができる。
経口投与における式Iに示す化合物又はその薬学的に許容される塩の有効な投与量は、
症状の程度、患者の年齢、性別、体重、投与方法、投与時期、投与間隔、投与期間、製剤
の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なるが、当業者であれば適宜設定する
ことができる。例えば、成人（体重60kg）に１日あたり5〜60ｍｇを経口投与することが
できる。
【００２８】
非経口投与、例えば注射剤における式Iの化合物又はその薬学的に許容される塩の有効
な投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投
与間隔、投与期間、製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なるが、当業
者であれば適宜設定することができ、生理食塩水又は市販の注射用蒸留水などの薬学的に
許容される担体中に、適当な濃度になるように溶解又は懸濁したものを、処置を必要とす
る患者に対し、適宜投与することができる。例えば、注射剤の場合、成人（体重60kg）に
１日あたり5〜60ｍｇを投与することができる。
【００２９】
本発明において、対象となる精神疾患は特に限定されるものではなく、例えばうつ病、
急性ストレス性障害、睡眠障害、不安障害、摂食障害、心的外傷後ストレス障害などが挙
げられ、1つ又は複数を対象とすることができる。また、社会心理学的ストレスを原因と
する身体諸症状も対象とすることができる。本発明の医薬組成物は上記精神疾患の治療又
は症状改善を目的として使用される。特に、本発明においては、これらの精神疾患のうち
うつ病が好ましい。うつ病の病期は、「増悪期」、「回復期」、「寛解期」の３つの段階
に分類されるが、なかでも「増悪期」のうつ病を対象とすることが好ましい。すなわち、
現在の操作的診断基準（DSMなど）では診断できない、早期のうつ増悪期、急性ストレス
状態などを対象とすることができる。また、それらの病的状態の予防も対象とできる。
これらの疾患は、互いに共通した症状、又はそれらの一部の症状を有していることが多
いため、本発明の医薬組成物の投与対象疾患とすることができる。
後述のとおり、本発明においてレプチンは上記精神疾患のバイオマーカーとして利用さ
れる。従って、レプチンの濃度は、本発明の医薬組成物を投与する際の指標となり得る。
本発明においては、レプチンの血中濃度が正常値よりも低下しているとき、例えば精神
疾患が想定され、レプチンの血中濃度が、年齢・性別・肥満度（BMI）・採血時間で補正
して決められた正常値の範囲から異常に低下しているときに投与されるように用いられる
ことを特徴とする。例えば、精神疾患が疑われる被験者の年齢、性別、BMI、採決時間な
どの条件が同一の対照者血清中のレプチン濃度との比較で、有意に低下している場合とな
る。
血中レプチン濃度が低いときに投与すると、その後の精神疾患状態（例えばうつ状態）
の予防し、又は治療することができる。
【００３０】
４．バイオマーカー及び検査方法
本発明は、バイオマーカーのスクリーニング方法、及び当該スクリーニングされたバイ
オマーカーを指標として抗精神疾患薬をスクリーニングする方法を提供する。
まず、被検ラットをBrown Norwayラットとともに飼育することにより前記被検ラットに
おける精神疾患モデルラットを作製する。精神疾患モデルラットの作製は、前記精神疾患
モデル動物の項で説明した方法を使用することができる。次に、当該精神疾患モデルラッ
ト又はその組織に抗精神疾患薬（既存薬、薬理効果が判明している薬）又は本願発明の医
薬組成物を接触させ、抗精神疾患薬接触前の精神疾患モデルラット又は組織において異常
値を示し、抗精神疾患薬の接触後の前記モデルラット又は組織において正常値を示したあ
るいは正常値の方向へ改善した物質を、精神疾患のバイオマーカーとして選択する。バイ
オマーカーが異常値及び正常値であることの確認は、血液検査等により行うことができる
。ここで、「異常値」とは条件を統一したで飼育された対照群で得られた「正常値」より
有意に上昇または低下している場合を指し、より正確には分布にオーバーラップがない事
が望ましい。
予めバイオマーカーの濃度の臨界値を設定しておいて、精神疾患モデルラットから採取
された試料中のバイオマーカーの濃度が、抗精神疾患薬を接触した後に変動があったとき
は、当該バイオマーカーを、精神疾患であることの指標とすることもできる。
このようにしてスクリーニングすることにより、本発明は、レプチンを精神疾患のバイ
オマーカーとすることができる。特に上記医薬組成物の投与時期を同定するうえで、スト
レス状況やそれに伴う臨床症状に加え、本バイオマーカーが重要指標となる。また、本バ
イオマーカーは医薬組成物の治療効果の判定にも用いることが出来る。
本発明においては、被検者から採取された試料から得られたレプチンの濃度を測定し、
所定濃度を臨界値として、又は条件を一致させた対照者より採取された試料から得られた
レプチン濃度と比較することにより、精神疾患であるか否か、ストレス状態であるか否か
を判定する。
【００３１】
使用する試料は、レプチンが含まれると予想されるものであれば限定されるものではな
く、例えば血液、髄液、尿、唾液などが挙げられるが、血液であることが好ましい。
なお、上記試料からレプチンを検出するには、例えば当分野において周知の手法、例え
ばELISA、クロマトグラフィー、ＭＳ等を単独で、又は適宜組み合わせることにより行う
ことができる。
【００３２】
予め、レプチンの濃度の臨界値を設定しておいて、被検者から採取された被検試料中の
レプチン濃度が、その臨界値以下であるとき、あるいは被検者から採取された被検試料中
のレプチンの濃度が、条件を統一した対照と比較して低いときは、当該レプチン濃度は、
被検者が精神疾患（例えばうつ病）である又は精神疾患（例えばうつ病）のリスク又は急
性ストレス状態であることの指標となる。また同時に、上記医薬組成品の投与時期の同定
が可能となる。
ここで、「対照」とは、健常者由来のレプチン濃度、又は健常者由来のレプチン濃度の
データをもとに標準化された正常値若しくはレベルを意味する。
【００３３】
ところで、本発明の方法では、複数の被験者由来の試料を用いてレプチンの濃度を測定
し、その結果を母集団とし、被験者個人の精神疾患を検出する場合に当該母集団を利用す
ることができる。例えば被検者由来のレプチン濃度の測定を行い、その結果当該個人が全
体のどの位置に存在又は属するかを調べることによって、各被験者個人の精神疾患の可能
性を知ることができる。また、予め規定された数の被験者（１次母集団）においてレプチ
ン濃度と表現型（精神疾患）との間の分析を行い、得られた測定値を基本データとして、
この基本データと、検出の対象となる単数又は複数の被験者由来のレプチン濃度とを比較
し、表現型である精神疾患と関連付けすることもできる。
【００３４】
上記測定された被験者由来のデータを前記母集団の値に組み込んで、レプチン濃度と精
神疾患とのリスクレベルを再度データ処理しておくと、対象となる被験者（母集団）の例
数を増やすことにより、解析の精度を高めることができる。
さらに、本発明においては、前記の通り作成された精神疾患モデルラット又はその組織
に被検物質を接触させ、前記方法によりスクリーニングされたバイオマーカーの血中濃度
を指標として抗精神疾患薬を選択することができる。
「血中濃度を指標として」とは、精神疾患モデルラットにおける異常血中濃度と、正常
血中濃度との変動を利用することを意味し、精神疾患モデルラットにおける血中濃度が正
常値（正常範囲）よりも高い又は低い値（異常値）を示し、候補物質を投与することによ
り血中濃度が正常値に戻ったとき又は正常値の方向へ有意に改善したときは、当該候補物
質は、抗精神疾患薬として選択することができる。
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。但し、本発明はこれら実施例に
限定されるものではない。
【実施例１】
【００３５】
社会敗北ストレス（図１）（6）
方法
1. 社会敗北ストレスの実施方法  
実験に使用するラットは事前に樹立したうつ病モデルラットとした。如以下にその方法を
簡単に概略する。すべての実験で用いたラットは個飼いとした。まず、実験対象となるSp
rague Dawley（SD）ラットを、より身体が大きく攻撃性の高い大型のBrown Norway（BN）
ラットが飼育されているケージの中に侵入させた（図１A）。10 分間にわたって、2匹の
ラットを直接 interaction させて、BN ラットが SD ラットを追跡したり、覆い被さるな
どの接触をしたこと（直接的接触）を確認し、その後、SD ラットとBN ラットを透明の小
穴の開いたしきり板で隔てた飼育ケージの中で24 時間一緒に滞在させた（間接的接触）
。翌日も同様の手続きでストレス負荷を行い、ストレッサーであるBN ラットは前日とは
別の個体を使用した。この条件にて、1 日 1 回 5 日間（月〜金曜日）連続でストレス負
荷を行った後、週末の2 日間は間接的接触のみ行う方法を用い、これを2 クール行った。
したがって、直接的接触と間接的接触を組み合わせた条件によるストレス負荷は合計10 
回実施、ストレスは計12 日間与える形式となる（図１A）。
【００３６】
２．ストレスの行動学的評価
ストレス負荷の前後に、SD ラットへの interaction 試験を実施した。オープンフィール
ド内にSD ラットの接触対象となるSocial target（ストレッサーであるBN ラット、もし
くは試験対象と同系統の SD ラット）をいれるための箱を設置し、最初は接触対象となる
ラットを入れない条件で、SD ラットを2.5 分間自由に行動させ、行動解析ソフトウェアT
ime OFCR4（O’HARA & CO, Ltd.）を用いて行動の軌跡や総移動距離（活動量の目安）等
を計測した。その後、箱内にSocial target を入れた条件にて同様の計測を行い、箱周辺
領域（interaction zone）内にSD ラットが侵入した時間を測定した。なお、他個体への
回避行動の指標となる接触率は、箱内にSocial targetがいない場合のinteraction zone 
内滞在時間を100%として、箱内にSocial target がいる場合のinteraction zone 内滞在
時間の割合を算出して求めた。接触率が100%以下となった場合に接触回避と判定した（図
１B）。
【００３７】
３．ストレスの生理学的評価
ストレス負荷およびその後の薬剤処置に伴う摂食行動の変化や体重の推移を確認するため
、実験開始より体重測定と餌の摂取量を継続的に測定した。また、SD ラットに水と1%シ
ョ糖溶液の摂取選択をさせて、それぞれの摂取量を計測した。なお、ショ糖嗜好性は、水
と1%ショ糖溶液を含めた全溶液の摂取量に対する1％ショ糖溶液の摂取量の割合として算
出した。
【００３８】
４．薬物投与実験
ストレス負荷が終了した翌日より、1 日1 回の頻度でimipramine（20mg/kg, i.p.）の慢
性腹腔内投与を25 日間（５週間）実施し、他個体との回避行動などの行動学的評価およ
び生理学的評価を行った。薬物投与実験の対照群として、0.9%生理食塩水の腹腔内慢性投
与（1 日1 回計25 回5週間）を行った。
【００３９】
ストレス負荷に対する抗炎症薬の効果を確認するため、以下の条件にて、1 日1 回の頻
度でSDラットに対する prednisolone（10mg/kg）の投与を実施した。第 1 条件として、
ストレス開始より 3 日目から prednisolone の腹腔内投与を開始し、ストレス負荷と併
行して8 回連続投与した。ストレス負荷およびprednisolone の投与期間が終了した翌日
より、0.9%生理食塩水の腹腔内投与を実施し、これを連続8 回行った（pred）。第2 条件
として、ストレス3 日目より0.9%生理食塩水の腹腔内投与を開始し、ストレス負荷期間終
了まで8 回にわたり継続した。ストレス終了直後よりprednisolone の腹腔内投与を開始
し、第1 条件と同様に投与回数は8 回とした（after pred）。ストレス群にはストレス3 
日目より連続8 回の0.9%生理食塩水の腹腔内投与を行ったのち、ストレス終了後も引き続
き0.9%生理食塩水を8 回連続で投与した（stress）。なお、薬物投与実験における第 1 
条件、第 2 条件の対照群として、ストレス群がストレス開始3 日目から薬剤を投与され
るのにあわせて、その対照群に連続8 回の0.9%生理食塩水の腹腔内投与を行ったのち、引
き続き0.9%生理食塩水を8 回連続で投与した群を用いた（control）。
【００４０】
５．血中の炎症性関連物質の測定
SD ラットに腹腔内投与による麻酔下で開腹し、下大静脈から採血を行った。下大静脈か
らの採決が困難な場合には心臓からの採血を行った。採血には、いずれもテルモ製のベノ
ジェクトII 採血針 S 22G とベノジェクト II 真空採血管(生化学検査用(血清)4mL・一般
血液検査用(血漿・洗浄赤血球)5mL)を用いた。採取した血液は採血管のプロトコルに従っ
て処理し、血清・血漿・洗浄赤血球とし、解析まで-80℃で保存した。ストレス負荷 5 日
目、直後、ストレス後 10 日後、1 ヶ月後に採血を行った。
【００４１】
血清中のサイトカイン/ケモカインは、MILLIOLEX（登録商標）MAP Rat Cytokine/Chemo
kine Panel 27Plex Pre-Mixを使用し、株式会社トランスジェニックに委託し、ブライン
ドで測定した。測定項目はIL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12(p70
)、IL-13、IL-17A、IL-18、 EGF、Eotaxin、Fractalkine、G-CSF、GM-CSF、GRO/KC/CINC-
1、IFN-γ、IP-10、レプチンである。ストレス直後のサンプルは3 群（対照control [n=5
]、ストレスstress [n=5]、およびストレス＋prednisolone処置pred [n=5]）を三重測定
し、その他のサンプルは 2 群（対照control [n=2]およびストレスstress [n=2]）を二重
測定した。
【００４２】
結果 
１．社会的回避行動に対する三環系抗うつ薬imipramineの慢性投与の効果
社会敗北ストレスの終了後1 週間（図 2B、C）および 1 ヶ月（図 2D、E）の時点におけ
るinteraction 試験の結果、ストレス群では対照群に比してSocial target に対して有意
な接触率の低下が生じた。この接触率の低下は、Social target がストレッサーであるBN
ラットの場合（図2B、D）だけでなく、試験ラットと同種のSD ラットの場合（図2C、E）
においても生じていた。また接触率の低下は3 ヶ月後も有意に認められた。ストレス終了
後から抗うつ薬であるimipramine を慢性投与（5 週間）すると、Social target に対す
る接触率はストレス群に比べてやや上昇傾向を示すものの、有意差はつかず、対照群と比
較して低下したままであった。具体的には、投与開始1 週間後も 1 ヶ月後も対照群と同
レベルに至るような接触率の回復は認められなかった（図２B -E）。
【００４３】
２．社会的回避行動に対するストレス負荷中のprednisolone投与の効果
社会敗北ストレス3 日目よりストレス期間が終了するまでの間、ストレス負荷と併行して
prednisolone を投与（計8 回）し、ストレス終了後にinteraction 試験を実施したとこ
ろ、ストレス終了直後にもかかわらず、Social target に対する接触率は有意に上昇した
（図3B は Social target が BN ラット、3C は SD ラット）。BN ラットと SD ラットと
の接触率を比較すると、SDラットの接触率が、対照群とほぼ同レベルまで回復していた（
図3C）。また、ストレス1 ヶ月後においては、BD、SD ラットいずれの場合でも接触率が
対照群と同レベルにまで完全回復した（図3D、E）。
【００４４】
３．ストレス負荷中のprednisolone投与の各種生理学的特性に対する効果
社会敗北ストレスを受けたラットの体重は、ストレス初回後より著しく減少し、その後は
対照群より有意差を伴う形で低い体重を維持しながら体重増加が続くという経過をたどる
（図4）。ストレス終了後よりimipramine を慢性投与しても、通常認められる体重増加が
認められず、ストレス群よりさらに低体重となった（図4Ａ）。一方、ストレス開始後3 
回目よりprednisolone を投与された群では、ストレス終了後、ストレス群より体重増加
カーブが上方にシフトし、1 ヶ月で対照群よりは低い体重ながら、対照群との有意差が消
失した（図4B）。
【００４５】
また、摂食行動はストレス初回後より有意に低下（図5A；p < 0.01）し、その後上昇し
ていくものの、ストレス終了後1 ヶ月の時点でも対照群に比べて有意に低下していた（図
5A；1 ヶ月時点control vs. stress、p< 0.05）。ストレス期間中にprednisolone を投与
すると有意に改善した（図5A；1 ヶ月時点stress vs pred、p<0.05）。また、ショ糖摂取
量もストレス期間中に低下、その後上昇していくものの、ストレス終了後1 ヶ月の時点で
も対照群に比べて有意に低下していた（図5B；1 ヶ月時点control vs. stress、p < 0.01
）。ストレス期間中にprednisolone を投与すると有意に改善した（図5B；1 ヶ月時点str
ess vs pred、p < 0.01）。ストレス終了後5日目のショ糖嗜好性試験では、ストレス群の
ショ糖嗜好性が対照群に比べて有意に低下した（図5C）が、ストレス期間中にprednisolo
ne を投与した場合には、ストレス群に比べて有意な改善が認められた（図5C）。さらに
、オープンフィールド内での運動量（総移動距離、図5D）については、対照群に比べてス
トレス群で減少傾向を示しているものの、ストレス直後（a）、１週間後（b）、１ヶ月後
（c）のいずれも有意差は認められなかった。ストレス期間中のprednisolone の投与は、
運動量を増加させる傾向にあるものの、ストレス後１週間の総移動距離がstress群との比
較で有意差がつく程度であった（図5Eb）。
【００４６】
４．血中の炎症関連物質の同定
27 種類の血清中サイトカイン/ケモカインをLuminex（登録商標） Systemを用いて調べた
。ストレス直後の血清において対照群とストレス群で明らかな違いが認められたものはレ
プチンのみであった。レプチン濃度はストレス群で有意に低下しており（p<0.00005）、
オーバーラップは全く認めなか った。レプチン濃度はストレス期間中にprednisoloneを
投与すると、有意に（p=0.005）上昇した。その上昇はストレス群とオーバーラップは認
めず、うつ病様回避行動の改善と相関した。しかしながら、対照群と同じレベルまでは回
復せず（p=0.002）、対照群とストレス群の中間の値を示した（図6B）。
レプチンの濃度はストレス開始5 日目から減少しており、ストレス終了後約10 日後に
はやや上昇するも対照群よりは低値を示した。しかしながら、ストレス終了後1 ヶ月には
対照群と同レベルにまで回復していた（図6A）。
【００４７】
５．ストレス終了後のprednisolone投与の効果および各種生理学的特性に対する効果
社会敗北ストレス終了後からprednisolone を投与（計8 回）し、投与直後にinteraction
試験を実施したところ（図7A）、Social target に対する接触率は有意に上昇していた
（図 7B はSocial target が BN ラット、7C は SD ラット）。また、ストレス1 ヶ月後
においては、BD、SD ラットいずれの場合でも接触率が対照群と同レベルにまで完全回復
した（図7D、E）。
ストレス終了後のprednisolone投与は体重低下を改善しなかったが（図8A）、摂食量は
ストレス後１ヶ月に改善していた（図8B）。ショ糖摂取量および１ヶ月後のショ糖嗜好性
は改善を認めなかった（図8Ca、b）。また、オープンフィールド内での運動量（総移動距
離、図8D）は各群で有意な差を認めなかった。
【００４８】
考察
本発明では、本発明者が別途考案したうつ病のモデル動物を用いて、新規治療薬や客観
的バイオマーカーの探索研究を行い、今後のうつ病治療に大きな影響を及ぼす可能性のあ
る２つの大きな知見を見出した。
第一に、治療薬としてprednisoloneなどの抗炎症性ステロイド化合物が有効であること
、また投与方法・期間などの条件によって、その効果は既存の三環系抗うつ薬imipramine
をはるかに上回る可能性があることを見出した。
第二に、うつ病様行動およびその治療の血中バイオマーカーとしてレプチンを見出した
。レプチンがストレス、炎症、うつ病のマーカーとなる可能性があることは以前より報告
されていたが、本発明のようにストレス期間やprednisoloneなどの治療効果と血清中のレ
プチン濃度が連動することを正確に示したものは他に存在しない。
一般的に病態機序の解明が進むとき、バイオマーカーと治療法が同時に発見される場合
が多い。今回、臨床応用可能な具体的な治療法を具体的バイオマーカーとともに提示でき
たことは大きな前進と考える。また、この知見はうつ病の病態に炎症が関連することを強
く支持する初めての科学的な根拠を具体的に示したといえる。
【００４９】
このモデル動物では社会敗北ストレスという、社会心理的ストレッサーをラットに負荷
することにより、試験ラットに他個体を回避するといううつ病様の社会的接触回避行動が
ほぼ100%の割合で生じる。社会敗北ストレスという実験方法は古くから知られていたが、
マウスに適応した場合、接触回避行動の出現は約50%程度と低い一方、三環系抗うつ薬imi
pramine の慢性投与（４週間）で回避行動がほぼ完全に改善する（6）。この抗うつ薬の
効果から、この社会的回避行動はうつ様状態を示す行動学的指標と考えられてきた。とこ
ろがより社会性の高いラット（7）を用いたわれわれのモデルでは、回避行動がほぼ100%
の割合で出現し、imipramine の慢性投与により、若干の回復傾向は示すものの、有意差
を伴った改善は見られず、対照群レベルまでの回復には至らなかった。このようにimipra
mine の慢性投与の回復効果が限定的なことから、われわれのラットモデルはマウスと異
なり、既存の抗うつ薬に対して治療抵抗性を有していると考えられ、より実際のヒト臨床
に近いうつ病モデル系が確立できたものと考えられる。また、われわれのモデルはモノア
ミン系以外の病態機序がうつ病様回避行動の出現に関与している可能性が指摘できる。
【００５０】
このモデルに対して、抗炎症薬であるprednisolone（合成 GC）をストレス開始初期か
ら投与すると、ストレス終了直後の段階ですでに回避行動は有意に改善することが示され
た。また、この改善効果はストレス終了後よりprednisolone を投与した場合においても
有意に認められた。他個体への接触率はprednisolone 投与群で対照群レベルにまで完全
回復していることから、既存の抗うつ薬による治療効果を大幅に上回る結果となった。こ
の知見は少なくとも強い社会心理的ストレスの期間中、または期間後すぐのタイミングに
おいて、うつ病様回避行動の出現に、何らかの炎症が関与していることを示すものである
。実際、最近報告されたマウスを用いた研究では、社会心理的ストレスによって、インタ
ーロイキン6（IL6）など末梢血液中の炎症性サイトカインが増加し、骨髄由来のモノサイ
トが海馬などうつ病発症に深く関わっているとされる中脳辺縁系周辺に浸潤すること、さ
らにモノサイトの中枢神経系への浸潤がうつ病様行動異常や不安行動と相関関係があるこ
となどが示されている。すなわち末梢に何らかの炎症反応が生じ、その炎症がモノサイト
などの中枢神経系への浸潤などの形を取って、精神行動異常へおよぶことが示唆される。
実際、中枢への移行性がそれほど高くないprednisolone で治療効果が認められたことは
、末梢の炎症抑制でうつ病様回避行動の出現を抑止できる可能性を示している。
【００５１】
また、われわれの知見は従来のHPA 軸の異常を中心としたストレス仮説に再考を促す可
能性が高い。ストレス仮説ではストレスへの暴露によってHPA 軸の過剰反応、GC（コルチ
ゾール）分泌増加、交感神経の過剰興奮などを起こす結果、樹状突起退縮やスパインの減
少、神経細胞新生の減少などが生じると考えられており（2）、基本的に GC のマイナス
の側面を強調している。実際、マウスモデルでは社会敗北ストレスによってGC は一時的
に上昇するが、持続せず、数日で対照群と同レベルにもどる（8）。GC の抗炎症薬として
の作用をプラスの側面としてとらえると、社会敗北ストレスで生じる内在性のGC上昇はス
トレスによって生じる炎症反応の抑制には不十分と考えられ、われわれの研究ではその不
足分を外部からの合成GC（prednisolone）投与で補うことで炎症反応が抑制し、うつ病様
行動異常を改善できた可能性が高い。このようなうつ病の治療概念は今までなく、全く新
しいうつ病治療法開発につながるものと考える。
【００５２】
今回われわれの研究では、血清中のレプチンレベルが、ストレス群で有意に低下し、ス
トレス期間中におけるprednisolone 投与で有意に増加することが明らかとなった。レプ
チンは脂肪細胞によって作り出される16kDa のペプチドホルモン（アディポサイトカイン
）であり、強力な飽食シグナルを視床下部に伝達し、交感神経活動亢進によるエネルギー
消費増大をもたらし、肥満の抑制や体重増加の制御を行い食欲と代謝を調節する。また、
レプチン受容体（Ob-Rb）は、炎症性サイトカインのシグナル伝達分子であるgp130 と高
い相同性を有しており、視床下部以外にもさまざまな末梢組織にも発現する（10）。実際
、遺伝的にレプチンを欠損するob/ob マウスあるいはOB-Rb に変異を有するdb/db マウス
では、肝障害モデルや血管障害モデルで抵抗性を示すことが報告されており、レプチンは
末梢では炎症促進作用を有する可能性が指摘されてきた（11, 12）。
【００５３】
レプチンは以前よりうつ病と関連すると報告されてきたが、うつ病患者血液研究のみに
限っても上昇、低下、不変と結果が一定せず、そのメカニズムは全く不明であった（9）
。本研究では、血清中のレプチン濃度は、ストレス負荷期間中（5 日目）においては対照
群に比べてより有意に低下しており、ストレス終了直後もその底値を維持していた。その
後血清レプチン値は徐々に上昇し、ストレス後1 ヶ月の時点では対照群と同レベルに戻っ
た。したがって、レプチンはうつ病の各病期のなかでも、特にストレス期間中〜直後（ヒ
ト臨床では増悪期）におけるバイオマーカーとして有用である。レプチンに関してさまざ
まな特許出願がされているが、上記有用性が記載されたものは存在しない。
また、本研究ではprednisoloneの治療効果と血清中のレプチン濃度が相関することも証
明されている。
【００５４】
さらに、ストレスによる体重減少や摂食行動の低下に関して、ストレス初期よりpredni
solone を投与された群で有意な改善効果が認められたが、ストレス終了後よりprednisol
one を投与された群ではストレス群と同等程度の指標が多く有意な改善効果は得られなか
った。すなわちprednisolone が投与される時期については、ストレス終了後に投与する
よりも、むしろストレスが負荷されている期間中（より早期）に投与するほうが、より臨
床的に有用である可能性が高い。動物モデルにおける社会心理的ストレスの負荷期間は、
うつ病の「増悪期」に該当すると考えられる。したがって、抗炎症薬がより適切な抗うつ
効果を発現するためには、ストレスがかかり始めてから、なるべく早い段階で抗炎症薬の
投与を開始することが重要である。また、その際の診断や治療判定バイオマーカーとして
レプチンが有用であろう。
【００５５】
参考文献
1. Trivedi MH, Rush AJ, Wisniewski SR et al (2006) Evaluation of outcomes with c
italopram for depression using measurement-based care in STAR*D: implications fo
r clinical practice. Am J Psychiatry. 163: 28-40.
2. Haroon E, Raison CL, Miller A (2012) Psychoneuroimmunology meets neuropsychop
harmacology: Translational implications of the impact of inflammation on behavio
r. Neuropsychopharmacology. 37: 137-162.
3. Kendler KS, Karkowski LM, Prescott CA (1999) Causal relationship between stre
ssful life events and the onset of major depression. Am J Psychiatry. 156: 837-8
41.
4. Carpenter LL, Gawuga CE, Tyrka AR, Lee JK, Anderson GM, Price LH (2010) Assoc
iation between plasma IL-6 response to acute stress and early-life adversity in 
healthy adults. Neuropsychopharmacology. 35: 2617-2623.
5. Wohleb ES, McKim DB, Sheridan JF et al (2015) Monocyte trafficking to the bra
in with stress and inflammation: a novel axis of immune-to-brain communication t
hat influences mood and behavior. Front Neurosci. 8:447.
6. Krishnan V, Han MH, Graham DL et al (2007) Molecular adaptations underlying s
usceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131
: 391-404.
7. Ben-Ami Bartal I, Decety J, Mason P (2011) Empathy and pro-social behavior in
rats. Science. 334: 1427-1430.
8. Hodes GE, Pfau ML, Leboeuf M et al (2014) Individual differences in the perip
heral immune system promote resilience versus susceptibility to social stress. P
roc Natl Acad Sci USA. 111: 16136-16141.
9. Hryhorczuk C, Sharma S, Fulton SE (2013) Metabolic disturbances connecting ob
esity and depression. Front Neurosci. 7:177.
10. Fei H, Okano HJ, Li C et al (1997) Anatomic localization of alternatively sp
liced leptin receptor (Ob-R) in mouse brain and other tissues. Proc Natl Acad Sc
i USA. 94: 7001-7005.
11. Honda H, Ikejima K, Hirose M et al (2002) Leptin is required for fibrogenic 
responses induced by thioacetamide in the murine liver. Hepatology. 36: 12-21.
12. Stephenson K, Tunstead J, Tsai A et al (2003) Neointimal formation after end
ovascular arterial injury is markedly attenuated in db/db mice. Arterioscler Thr
omb Vasc Biol 23: 2027-2033.
【図１】
2017114855.tif 000006
【図２】
2017114855.tif 000007
【図３】
2017114855.tif 000008
【図４】
2017114855.tif 000009
【図５】
2017114855.tif 000010
【図６】
2017114855.tif 000011
【図７】
2017114855.tif 000012
【図８】
2017114855.tif 000013