(57)【要約】      （修正有）【課題】生体安全性及び有効性にすぐれた天然物由来成分からなる新規の皮膚外用又は経口用機能性素材の提供。【解決手段】ミカン科ミカン属の植物の果皮を含む未成熟果実抽出物を有効成分とする皮膚化粧料、毛髪化粧料又は経口組成物。【効果】前記抽出物は、抗酸化作用（ＤＰＰＨラジカル消去作用、ＳＯＤ様活性作用）、メラニン合成抑制作用等を有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミカン科ミカン属の植物の未成熟果実の抽出物を有効成分とする皮膚化粧料。
【請求項２】
ミカン科ミカン属の植物の未成熟果実の抽出物を有効成分とする毛髪化粧料。
【請求項３】
ミカン科ミカン属の植物の未成熟果実の抽出物を有効成分とする経口組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体安全性にすぐれた植物抽出物を有効成分とする化粧料及び経口組成物を提供する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は、加齢に伴う細胞増殖・分化の不活化、ホルモン分泌の低下、細胞外マトリックス成分の量的低下等の内的要因と、太陽光（紫外線）に誘発される活性酸素、大気汚染物質や環境ホルモン等の化学物質、花粉等のアレルギー物質、環境ストレス等の外的要因とが複雑に絡み合って、老化現象、体調不良、肌荒れ、皮膚や毛髪の色調の変化が生じる。
【０００３】
例えば、外的要因である紫外線、化学物質、アレルギー物質は、生体細胞や組織、細胞にダメージを与えて細胞中の成分を変質させたり、又は活性酸素を発生させたりすることで、生体の不健全化（炎症、疾患等）や老化現象の原因となり、さらには、皮膚においてメラニン色素の異常沈着を誘発してシミ、ソバカス、肝斑等を生じさせる。
【０００４】
以上のような生体の不健全化や老化を防ぎ、維持するため、従来、種々の活性成分の使用が提案され、それら活性成分を配合した化粧品や経口組成物が上市されている。例えば、ビタミンＣ、ビタミンＥ、カタラーゼ等の抗酸化剤や、シミ、ソバカス、肝斑等の色素沈着の発生を抑制する物質として、コウジ酸やリノール酸等が知られており、美白剤が広く使用されている。
【０００５】
しかし、従来の抗酸化剤や美白剤は、皮膚等に対する安全性、また、実際に皮膚への適用又は服用に際しての有効性の観点で問題が存在する。従って、かかる点が改善された機能性素材が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明者らは、かかる従来技術の問題点に鑑みて、天然物由来の新たな機能性素材を見出すべく鋭意研究を行った。その結果、ミカン科ミカン属に属する植物の未成熟果実が、抗酸化効果、保湿効果及び美白効果、並びに、髪質改善効果及び育毛効果を奏し、かつ、生体安全性にすぐれた皮膚外用組成物や経口組成物の提供が可能になることを見出した。
【０００７】
従来、ミカン科ミカン属の植物の成熟果実及び果皮の抽出物が化粧料に利用可能であることは、例えば、特許文献１〜４により記載されている。また、温州ミカンの未成熟果実が美白効果や育毛効果を有することについては、例えば、特許文献５により知られていた。しかし、ミカン科ミカン属の植物（温州ミカンを除く）の未成熟果実が、抗酸化効果及び美白効果、並びに髪質改善効果及び育毛効果を有することは知られていなかった。
【特許文献１】特開平08-295621号
【特許文献２】特開2002-356413号
【特許文献３】特開2002-068956号
【特許文献４】特開2006-089452号
【特許文献５】特開2007-153740号
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、ミカン科ミカン属に属する植物（温州ミカンを除く）の未成熟果実の抽出物を有効成分とする皮膚化粧料である。
また、本発明は、ミカン科ミカン属に属する植物（温州ミカンを除く）の未成熟果実の抽出物を有効成分とする毛髪化粧料である。
また、本発明は、ミカン科ミカン属に属する植物（温州ミカンを除く）の未成熟果実の抽出物を有効成分とする経口組成物である。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、ミカン科ミカン属に属する植物（温州ミカンを除く）の未成熟果実の抽出物を有効成分とする化粧料であって、本発明によれば、当該有効成分が有する抗酸化効果及び美白効果、髪質改善効果及び育毛効果を発揮する化粧料や経口用組成物を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明の好ましい実施の形態について詳細に説明する。
本発明において、本発明で用いるミカン科ミカン属に属する植物としては、例えば、ユズ(Citrus junos Sieb. ex Tanaka）、ハッサク(Citrus hassaku Hort. ex Tanaka）、グレープフルーツ（Citrus paradisi Macfadyen[Rutaceae]））、バンペイユ（Citrus grandis (syn. Citrus maxima)、レモン（Citrus limon Burm.）、イヨカン(Citrus iyo Hort. ex Tanaka）、オレンジ（Citrus sinensis Osbeck）、カボス(Citrus sphaerocarpa Hort. ex Tanaka：)、ザボン（Citrus grandis Osbeck）、シークヮーサー（Citrus depressa Hayata）、スダチ（Citrus sudachi Hort. ex Shirai）、ダイダイ(Citrus aurantium L.）、タチバナ(Citrus tachibana Tanaka）、ネーブル（Citrus sinensis Osbeck var. brasiliensis Tanaka）、ハナユ（Citrus hanayu Hort. ex Shirai）、ヒュウガナツ（Citrus tamurana Hort. ex Tanaka）、及びポンカン（Citrus reticulata Blanco）等が挙げられる。
【００１１】
本発明において未成熟果実（果皮及び果肉を含む）とは、食用に適する成熟期前のものをいい、成熟期のものより、ヘスペリジンやナリンギン等のフラボノイドが多く含まれるものが好ましい。例えば、ミカン属植物の果実の栽培において、収穫期よりも前に間引きする摘果果実を使用することができる。
【００１２】
植物抽出物の調製は、使用部位（未成熟果実）を、必要に応じてこれに予め水洗、粉砕、乾燥処理等を施した上、浸漬法、向流抽出法等適宜の手段により抽出溶媒と接触させることによって行うことができる。また、超臨界抽出法や水蒸気蒸留法を用いてもよい。また、各植物の抽出物、水蒸気蒸留物及び精油のいずれか２以上の混合物を使用しても良い。また、本発明においては未成熟果実の搾汁液を使用することも可能である。かかる場合、予め洗浄した未成熟果実をそのまま又は粉砕した上で、圧搾機等で圧搾処理を施し、当該処理により得られる搾汁液を使用することができる。
【００１３】
抽出溶媒としては、水；メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール類；エチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、１，３−プロパンジオール、グリセリン等の多価アルコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル等のエステル類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；エチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル類；ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルム等の炭化水素系溶媒等が挙げられ、それらは単独で又は二種以上を混合して用いられる。
【００１４】
それら抽出溶媒のうちでも、得られる抽出物の有効性、さらには、皮膚刺激性の観点から、又化粧料等への幅広い適用が可能であるという点からも、本発明においては、水、低級アルコール類又は多価アルコール類等の親水性溶媒が好適である。この親水性溶媒を用いる場合の好ましい例としては、例えば、水、低級アルコール類（例えば、エタノール）、又は多価アルコール（例えば、１，３−ブチレングリコール、１，３−プロパンジオール、グリセリン）の単独使用、或いは、水と低級アルコール類（特にエタノール）との混合溶媒、又は水と多価アルコール類（例えば、１，３−ブチレングリコール、１，３−プロパンジオール、グリセリン）との混合溶媒の使用等が挙げられるが、なかでも水若しくは多価アルコールの単独使用、又は水と１，３−ブチレングリコール若しくは１，３−プロパンジオールの混合溶媒が特に好ましい。
【００１５】
混合溶媒を用いる場合の混合比は、例えば水と１，３−ブチレングリコール若しくは１，３−プロパンジオールとの混合溶媒であれば、容量比（以下同じ）で１：１０〜１０：１、水とエタノールとの混合溶媒であれば、１：１０〜２５：１、水とグリセリンとの混合溶媒であれば１：１〜２０：１の範囲とすることが好ましい。
【００１６】
また、各植物の部位と抽出溶媒との重量比は好ましくは１：１〜１：８０の範囲であり、より好ましくは、１：５〜１：５０の範囲である。
【００１７】
抽出物の調製に際して、そのｐＨに特に限定はないが、一般には３〜９の範囲とすることが好ましい。かかる意味で、必要であれば、前記抽出溶媒に、水酸化ナトリウム、炭酸ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ性調整剤、又はクエン酸、塩酸、リン酸、硫酸等の酸性調整剤を配合し、所望のｐＨとなるように調整してもよい。
【００１８】
抽出温度、抽出時間等の抽出条件は、用いる溶媒の種類やｐＨによっても異なるが、例えば、水若しくはアルコール類（多価アルコールや低級アルコール等）、又は水とアルコール類との混液を溶媒とする場合であれば、抽出温度は一般的には０℃〜９０℃の範囲であり、又抽出時間は一般的には０．５時間〜７日間の範囲である。
【００１９】
なお、各抽出物には、安定性を向上する目的や、化粧料や経口組成物の成分として好ましくない不純物等を除去する目的で、活性炭処理や、非イオン交換樹脂等の合成吸着剤による吸着処理を行っても良い。さらに、各抽出物又は抽出物に含まれる成分を濃縮する目的で、活性炭処理、イオン交換樹脂等の合成吸着剤による濃縮処理を行っても良い。
【００２０】
活性炭としては、松等の木、竹、椰子殻、胡桃殻等の植物質のほか、石炭質、石油質等を原材料として、それらの原材料に水蒸気や二酸化炭素、空気等のガスを使う高温炭化法等の物理的な方法や塩化亜鉛等の化学薬品を使って処理した上で加熱し、多孔質にする化学的な方法による活性化処理を施して得られる活性炭等何れを用いても良い。
【００２１】
イオン交換樹脂としては、陽イオン交換樹脂又は陰イオン交換樹脂が挙げられ、例えば、強酸性陽イオン交換樹脂、弱酸性陽イオン交換樹脂等が、強塩基性陰イオン交換樹脂、弱塩基性陰イオン交換樹脂等が挙げられる。処理方法としては、イオン交換樹脂に抽出物溶液が接液すれば良く、例えば、抽出物溶液にイオン交換樹脂を投入して撹拌し、得られた非吸着画分を使用する方法や、イオン交換樹脂を充填したカラムに抽出液又は抽出物の水溶液を通液し、得られた非吸着画分を使用する方法が挙げられる。
【００２２】
また、本発明の抽出処理に先立って、又は抽出処理と並行して、必要に応じて抽出部位に加水分解処理を施してもよい。これによって、当該抽出物の保存安定性等を改善できる可能性がある。
【００２３】
抽出物に酵素加水分解処理を施す場合、酵素としては、アクチナーゼ、パパイン、ペプシン等の蛋白分解酵素、グルコアミラーゼ、α−アミラーゼ、β−アミラーゼ等の澱粉分解酵素、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ、ペクチナーゼ等の繊維素分解酵素、及びリパーゼ等の脂肪分解酵素のいずれかの酵素群から選ばれた１種又は２種以上を用いてもよいが、それらの酵素群からそれぞれ選ばれた１種又は２種以上の酵素を組み合わせて用いることがより好ましい。
【００２４】
酵素の添加量は、未成熟果実の固形分に対して、合計で０．００１〜５０重量％の範囲とすることが好ましい。
【００２５】
上述のように調製した抽出物は、一般にはｐＨを３〜９に調製した上で、これをそのままの状態で使用しても良く、又減圧濃縮等により所望の濃度として使用しても良い。また、抽出物はスプレードライ法等の常法により乾燥物としても良い。
【００２６】
また、上述のように調製した抽出物は、保存安定性等を高めるために、一定時間冷蔵保存した上で、上清を使用しても良い。
【００２７】
本発明に係る抽出物を含む化粧料（医薬部外品も含む）としては、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、スリミング剤、ボディシャンプー、毛髪用シャンプー、石けん等が挙げられ、また、育毛剤、さらには浴剤等も挙げられるが、勿論これらに限定されるものではない。また、経口組成物としては、美容飲料、栄養ドリンク、スポーツドリンク、ニアウォーター、ビタミン飲料、ミネラル飲料、アルコール飲料等の飲料；各種スープ類（粉末スープも含む）、乳製品、ゼリー、キャンディ、錠菓、ガム等の食品；錠剤、液状、顆粒状又はゼリー状の健康食品・飲料等に配合することができるが、本発明はこれに限るものではなく、経口摂取できる飲食品等に配合することができる。
【００２８】
化粧料における本発明の抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、基礎化粧料の場合は、一般に０．０００２〜１．０重量％（固形分重量％、以下同じ）、好ましくは０．００２〜０．２重量％の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、一般に０．０００２〜１．０重量％、好ましくは０．００２〜０．２重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、一般に０．０００２〜１０．０重量％、好ましくは０．００２〜７．０重量％の範囲である。また、毛髪用化粧料の場合は、抽出物の固形分として、一般的には０．０００１〜５．０重量％であり、好ましくは、０．００１〜３．０重量％である。また、経口組成物における本発明の抽出物の配合量は、抽出物の固形分として、０．０１〜１５重量％の範囲が好ましい。
【００２９】
化粧料には、必須成分である抽出物のほかに、通常化粧料や経口組成物に用いられる成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、粉体成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、当該抽出物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分を組み合わせて配合することも何ら差し支えない。
【００３０】
ここで、油性成分としては、例えばハス油、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米糠油、米胚芽油、ヤシ油、カミツレ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、ローズヒップ油、ランベンダー油、シアーバター、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。
【００３１】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。
【００３２】
乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）、サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。
【００３３】
保湿剤としては、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等があり、さらにトレハロース等の糖類、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。
【００３４】
増粘剤としては、例えばアルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。
【００３５】
防腐・殺菌剤としては、例えば尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、ポリリン酸、プロパンジオール、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液、サトウキビ等の植物由来のエタノール又は１，３−ブチレングリコール等がある。
【００３６】
粉体成分としては、例えばセリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。
【００３７】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。
【００３８】
抗酸化剤としては、例えばブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、ムラサキシキブの抽出物、シラン根の抽出物、シャクヤク抽出物、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。
【００３９】
美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。
【００４０】
上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド、アスコルビルトコフェリルマレイン酸、アスコルビルトコフェリルリン酸Ｋ、ミリスチル３−グリセリルアスコルビン酸、カプリリル２−グリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体、Ｌ−アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、Ｌ−アスコルビン酸のヒアルロン酸誘導体、３−Ｏ−Ｄラクトース−Ｌ−アスコルビン酸、イソステアリルアスコルビルリン酸塩等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。
【００４１】
生理活性成分としては、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌醗酵米、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、党参抽出物又はその加水分解物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、酒粕抽出物又はそれに含まれるセラミド、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス(Pandanus amaryllifolius Roxb.)抽出物、アルカンジェリシア・フラバ（Arcangelicia flava Merrilli）抽出物、カミツレ抽出物等が挙げられる。また、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（ハス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵エキス、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、ダマスクバラの花の抽出物、タケノコの皮の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、ニンジン抽出物、オタネニンジン抽出物又はその発酵物、紅参抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、モモ抽出物、桃仁抽出物、キウイ抽出物、ヒマワリ抽出物、ジュアゼイロ（Zizyphus joazeiro)抽出物、パウダルコ樹皮抽出物、萱草（デイリリー）抽出物又は発酵物、ハイビスカスの花抽出物又は発酵物、ハゴロモグサ抽出物、チェリモヤ抽出物、マンゴー抽出物、マンゴスチン抽出物、フノリ抽出物、烏龍茶抽出物、紅富貴抽出物、シラン抽出物、山椒果皮又は種皮の抽出物又は加水分解物、ベニバナ花抽出物、カサブランカ抽出物、甘藷抽出物又はその発酵物、グアバ葉抽出物、ドクダミ抽出物、アロエ抽出物、イチジク花抽出物、リンゴ抽出物、ホワイトアスパラガス抽出物等がある。
【００４２】
次に、製造例、処方例及び試験例によって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また％はすべて重量％を意味する。
【００４３】
製造例１．ユズ抽出物の調製（１）
ユズの未成熟果実を乾燥、粉砕して得られた粉砕物４０gに１，３−ブチレングリコールを２００ｇ添加した後、８０℃、３時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液１６８gを得た（固形分濃度１．６７％）。
【００４４】
製造例２．ユズ抽出物の調製（２）
ユズの未成熟果実を乾燥、粉砕して得られた粉砕物３０gに１，３−プロパンジオールの混合溶媒（精製水と１，３−プロパンジオールの混合比が：７：３）混合溶媒を３００ｇ添加した後、４０℃、４時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液２８３gを得た（固形分濃度２．０１％）。
【００４５】
製造例３．ハッサク抽出物の調製（１）
ハッサクの未成熟果実を粉砕して得られた粉砕物４０gに１，３−ブチレングリコールを２００ｇ添加した後、８０℃、３時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液１５３gを得た（固形分濃度５．７７％）。
【００４６】
製造例４．ハッサク抽出物の調製（２）
ハッサクの未成熟果実を粉砕して得られた粉砕物３００gに１，３−プロパンジオールを４５０ｇ添加した後、４０℃、４時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液１６２gを得た（固形分濃度５．１５％）。
【００４７】
製造例５．グレープフルーツ抽出物の調製（１）
グレープフルーツの未成熟果実を粉砕して得られた粉砕物３００gに１，３−ブチレングリコールを４５０ｇ添加した後、８０℃、２時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液５４４gを得た（固形分濃度３．７７％）。
【００４８】
製造例６．グレープフルーツ抽出物の調製（２）
グレープフルーツの未成熟果実を粉砕して得られた粉砕物３００gに１，３−プロパンジオールを４５０ｇ添加した後、８０℃、２時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液５３２gを得た（固形分濃度３．５２％）。
【００４９】
製造例７．バンペイユ抽出物の調製（１）
バンペイユの未成熟果実を乾燥、粉砕し、粉砕物３０ｇに１，３−ブチレングリコールを３００ｇ添加した後、８０℃で３時間、攪拌抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液２１７gを得た（固形分濃度２．４５％）。
【００５０】
製造例８．バンペイユ抽出物の調製（２）
バンペイユの未成熟果実を乾燥、粉砕し、粉砕物５０ｇに１，３−プロパンジオールを５００ｇ添加した後、８０℃で２時間攪拌抽出した。８０℃、２時間抽出を行った。抽出後、濾過して黄褐色透明の抽出物溶液４７８gを得た（固形分濃度２．７７％）。
【００５１】
処方例１．化粧水
［成分］                                                    部
ホホバ油                                                  １．０
ポリオキシエチレン（５．５）セチルアルコール              ５．０
ブチルパラベン                                            ０．１
製造例１の抽出物                                          ５．０
グリセリン                                                ５．０
１，３−ブチレングリコール                                ５．０
水酸化カリウム                                              適量
精製水                                    全量が１００部となる量
香料  適量
【００５２】
処方例２．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例２の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５３】
処方例３．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例３の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５４】
処方例４．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例４の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５５】
処方例５．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例５の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５６】
処方例６．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例６の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５７】
処方例７．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例７の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５８】
処方例８．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例８の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。
【００５９】
処方例９．乳液
［成分］                                                    部
流動パラフィン                                            ６．０
ヘキサラン                                                ４．０
ホホバ油                                                  １．０
ハス精油                                                  ０．０２５
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート      １．０
親油型ステアリン酸グリセリル                              １．０
水添大豆レシチン                                          １．５
製造例１の抽出物                                          ３．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                        ２．０
水酸化カリウム                                            ０．５
グリセリン                                                ３．０
１，３−ブチレングリコール                                ２．０
カルボキシメチルセルロース                                ０．３
ヒアルロン酸ナトリウム                                    ０．０１
水溶性コラーゲン                                          ０．１
精製水                                      全量が１００部となる量
香料                                                      適量
【００６０】
処方例１０．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例２の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６１】
処方例１１．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例３の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６２】
処方例１２．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例４の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６３】
処方例１３．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例５の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６４】
処方例１４．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例６の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６５】
処方例１５．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例７の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６６】
処方例１６．化粧水
処方例９に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例８の抽出物５．０部を用いるほかは、処方例９と同様にして化粧水を得た。
【００６７】
処方例１７．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてトラネキサム酸２．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００６８】
処方例１８．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてアルブチン３．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００６９】
処方例１９．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えてニコチン酸アミド３．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００７０】
処方例２０．乳液
処方例９の成分中、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０部及び水酸化カリウム０．５部に代えて米糠抽出物の加水分解物５．０部を用いるほかは処方例９と同様にして乳液を得た。
【００７１】
処方例２１．乳液
［成分］                                                  部
スクワラン                                              ３．０
ベヘニルアルコール                                      ３．０
ヘキサラン                                              ４．０
ホホバ油                                                １．０
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノステアレート    １．０
グリセリン脂肪酸エステル                                １．０
大豆レシチン                                            １．５
製造例５の抽出物                                        ５．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド                      ２．０
水酸化カリウム                                          ０．５
グリチルリチン酸ジカリウム                              １．０
グリセリン                                              ３．０
１，３−ブチレングリコール                              ２．０
水溶性コラーゲン                                        ０．１
ヒアルロン酸ナトリウム                                  ０．０１
精製水                                    全量が１００部となる量 
【００７２】
処方例２２．乳液
処方例２１の成分中、グリチルリチン酸ジカリウム１．０部に代えてトラネキサム酸１．０部を用いるほかは処方例２１と同様にして乳液を得た。
【００７３】
処方例２３．ローション
［成分］                                                  部
製造例７の抽出物                                      １０．０
エタノール                                            １０．０
グリセリン                                              ３．０
１、３−ブチレングリコール                              ２．０
メチルパラベン                                          ０．２
クエン酸                                                ０．１
クエン酸ナトリウム                                      ０．３
カルボキシビニルポリマー                                ０．１
キサンタンガム                                          ０．１
グアーガム                                              ０．１
香料                                                      適量
水酸化カリウム                                            適量
精製水                                  全量が１００部となる量
【００７４】
処方例２４．エッセンス
［成分］                                                  部
エタノール                                              ２．０
グリセリン                                              ５．０
１，３−ブチレングリコール                              ５．０
メチルパラベン                                          ０．１
ヒアルロン酸                                            ０．１
加水分解ヒアルロン酸液                                  ０．１
製造例１の抽出物                                        ５．０
クエン酸                                                ０．３
クエン酸ナトリウム                                      ０．６
精製水                                全量が１００部となる量
【００７５】
実施例２５．リキッドファンデーション
［成分］                                                  部
ステアリン酸                                            ２．４
モノステアリン酸プロピレングリコール                    ２．０
セトステアリルアルコール                                ０．２
液状ラノリン                                            ２．０
流動パラフィン                                          ３．０
ミリスチン酸イソプロピル                                ８．５
プロピルパラベン                                        ０．０５
製造例３の抽出物                                        ５．０
カルボキシメチルセルロースナトリウム                    ０．２
ベントナイト                                            ０．５
プロピレングリコール                                    ４．０
トリエタノールアミン                                    １．１
メチルパラベン                                          ０．１
精製水                                  全量が１００部となる量
酸化チタン                                              ８．０
タルク                                                  ４．０
着色顔料                                                  適量
【００７６】
処方例２６．ボディシャンプー
［成分］                                                  部
Ｎ−ラウロイルメチルアラニンナトリウム                ２５．０
ヤシ油脂肪酸カリウム液（４０％）                      ２６．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                          ３．０
メチルパラベン                                          ０．１
製造例５の抽出物                                        ５．０
１，３−ブチレングリコール                              ２．０
精製水                                  全量が１００部となる量
【００７７】
処方例２７．ヘアシャンプー
［成分］                                                    部
Ｎ−ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム                １０．０
ポリオキシエチレン（３）アルキルエーテル硫酸ナトリウム  ２０．０
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン                      １０．０
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド                            ４．０
メチルパラベン                                            ０．１
クエン酸                                                  ０．１
製造例６の抽出物                                          ２．０
１，３−ブチレングリコール                                ２．０
精製水                                    全量が１００部となる量
【００７８】
実施例２８．ヘアコンディショナー
［成分］                                                    部
ポリオキシエチレン（１０）硬化ヒマシ油                    １．０
塩化ジステアリルジメチルアンモニウム                      １．５
塩化ステアリルトリメチルアンモニウム                      ２．０
２−エチルヘキサン酸グリセリル                            １．０
セタノール                                                ３．２
ステアリルアルコール                                      １．０
メチルパラベン                                            ０．１
製造例７の抽出物                                          ２．０
１，３−ブチレングリコール                                ５．０
精製水                                    全量が１００部となる量
【００７９】
処方例２９．育毛用化粧料
［成分］                                                    部
グリチルリチン酸ジカリウム                                ０．１
モノニトログアヤコールナトリウム                          ０．０２
塩酸ピリドキシン                                          ０．０３
ｌ−メントール                                            ０．８
タマサキツヅラフジ根エキス                                ０．３
褐藻エキス                                                ０．３
オタネニンジンエキス                                      ０．３
センブリエキス                                            ２．０
製造例１の抽出物                                          ３．５
トリメチルグリシン                                        ０．５
乳酸                                                      ０．２
１，３−ブチレングリコール                              １０．０
フェノキシエタノール                                      ０．２
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                            ０．４
Ｌ−アルギニン                                              適量
エタノール                                              ２０．０
精製水                                    全量が１００部となる量
【００８０】
試験例１．DPPH(1,1-ジフェニル-2-ピクリルヒドラジル）ラジカル消去作用評価試験
ＤＰＰＨ２．４部をエタノール２０部に溶解し、これに精製水２０部を加えてＤＰＰＨ溶液を調製した。このＤＰＰＨ溶液２４部に対して、１８ｖ/ｖ％エタノール溶液を１９．２部、２Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液(pH5.5)を４．８部加えて、ＤＰＰＨ添加溶液として調製した。また、抽出液そのものの色調が試験に及ぼす影響を差し引くため、ＤＰＰＨ溶液の代わりに５０ｖ/ｖ％エタノール溶液を用いて、１８ｖ/ｖ％エタノール溶液と２Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液を混合した液を対照液とした。次に、製造例１〜８の各抽出物溶液を精製水で希釈して試料溶液を調製した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する各抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）がそれぞれ１．０％,２．０％となるように調製した２種の濃度のものを使用した。この試料溶液とＤＰＰＨ添加溶液又は対照液とを１：３の割合で混合し、室温で１０分静置後、各試験溶液をＤＰＰＨ添加溶液と混合した場合の５５０ｎｍにおける吸光度と、同じく各試験溶液を対照液と混合した場合の５５０ｎｍにおける吸光度との差を測定し、ＤＰＰＨラジカルの残存量を確認した。また、同時にコントロールとして製造例１の抽出物溶液の代わりに、５０％１，３−ブチレングリコール水溶液を用いて上記と同様の操作を行い、ここに得られる ＤＰＰＨラジカル残存率に対する各試料添加時のＤＰＰＨラジカル残存率の相対値を求めた。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として水溶性ビタミンＥ(終濃度２５μＭ)を添加した場合についても、同様の試験を行った。
【００８１】
［表１］
2017214349.tif 000002
【００８２】
表１に示すように、本発明に係る抽出物は、濃度依存的に格段にすぐれたＤＰＰＨラジカル消去作用を有することが認められた。陽性対照である水溶性ビタミンＥも同様の作用が認められたことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００８３】
試験例２．ＳＯＤ様活性評価試験
１Ｍトリス−塩酸緩衝液０．１５ｍＬ、１ｍＭエチレンジアミン四酢酸・二ナトリウム塩溶液０．３０ｍＬ、１ｍＭキサンチン溶液０．３０ｍＬ、０．７５ｍＭニトロブル-テトラゾリウム溶液０．２０ｍＬ、製造例１〜８の各抽出物溶液０．１０ｍＬ及び精製水１．９０ｍＬを混合して試験溶液を調製した。ここで、また、試験溶液において、製造例１〜８の各抽出物溶液０．１０ｍＬに代えて５０％１，３−ブチレングリコール０．１０ｍＬを用いる他は上記試験溶液と同様の組成からなる混合液（コントロール）を調製した。ここで、試料溶液としては、その全量に対する各抽出物溶液の終濃度（溶液としての濃度）が１．０％となるように調製したものを使用した。又試験溶液において各抽出液０．１０ｍＬに代えて、０．８７５Ｕｎｉｔ／ｍＬのスーパーオキシドジスムターゼ溶液０．１０ｍＬを用いる他は上記試験溶液と同様の組成からなる混合液（陽性対照）を調製した。上記試験溶液、又は試料無添加の混合液をそれぞれ３７℃でインキュベートした後、これに１Ｕｎｉｔ／ｍＬキサンチンオキシダーゼ溶液０．０５ｍＬを添加し、一定時間経過後（５分）、各被験液の５７０ｎｍにおける吸光度（被験液中のスーパーオキシドアニオン量の指標）を測定した。結果は、コントロールの混合液の吸光度を１００％とした時の各試験溶液、又は陽性対照（スーパーオキシドジスムターゼ［ＳＯＤ］）の混合液の吸光度を％で示した。
【００８４】
［表２］
2017214349.tif 000003
【００８５】
表２に示すように、本発明に係る抽出物は、格段にすぐれたＳＯＤ様活性を有することが認められた。また、陽性対照であるＳＯＤも同様の作用が認められたことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００８６】
試験例３．ナトリウム依存性ビタミンＣトランスポーター合成促進の評価
本試験例では、細胞膜に存在し、細胞内へのビタミンＣの取り込みに関与するビタミンＣトランスポーター（ＳＶＴＣ１）の合成能を評価した。
正常ヒト表皮メラニン細胞を増殖添加剤含有DermaLife（登録商標）「クラボウ社製」にて１×１０５個/ｍＬに調製し、９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ播種して、５％炭酸ガス、飽和水蒸気下、３７℃で培養した。２４時間後、本発明の製造例１〜８に係る抽出物を試料溶液として含んだ培養液を追添加しさらに培養した。ここで、試料溶液は、培養液に対する溶液としての終濃度が０．５％，１．０％となるように調製した。また、コントロールとして、試料溶液に代えてＰＢＳ（−）を含んだ培養液を追添加した対照区を設定した。なお、ＰＢＳ（‐）は、試料溶液と同様に溶液としての培養液に対して終濃度１.０％となるように調製した。４８時間後、培養上清を除去して、ＰＢＳ（−）を２００μＬずつ添加して除去し、次に１０％トリクロロ酢酸（和光純薬社）を５０μＬずつ添加して冷温下で３０分間インキュベートした後、上清を除去した。ＰＢＳ（−）を１００μＬ用いて洗浄し、０．２％Triton-X含有ＰＢＳ（−）を５０μＬずつ添加して室温下で1時間インキュベートをした。上清を除去して８％牛血清アルブミン（SIGMA社）含有ＰＢＳ（−）を５０μＬずつ添加して室温下で２時間インキュベートした。上清を除去し０．２％Triton-X含有ＰＢＳ（−）を１００μＬ用いて洗浄し、抗ＳＶＣＴマウスモノクローナル抗体（Santa Cruz社）を５０μＬずつ添加して冷温下で２４時間インキュベートした。上清を除去し０．２％Triton-X含有ＰＢＳ（−）１００μＬを用いて洗浄を３回繰り返した。Alexa Fluor 488抗マウス二次抗体（Life Technologies社）を５０μＬ添加して室温下、暗所にて2時間インキュベートした。上清を除去し０．２%Triton-X含有ＰＢＳ（−）１００μＬを用いて洗浄を３回繰り返し、ＰＢＳ（−）を１００μＬずつ添加して蛍光プレートリーダー（大日本製薬社）を用いてＥｘ４８５／Ｅｍ５２０における蛍光強度を測定した。対照区の測定値に対する蛍光強度の相対値をＳＶＣＴ１合成率（％）とした。
【００８７】
試験例３の結果を表３に示す。
［表３］
2017214349.tif 000004
【００８８】
表３に示すように、本発明に係る抽出物は、濃度依存的にすぐれたビタミンＣトランスポーター（ＳＶＴＣ１）の合成促進効果を有することが確認された。
【００８９】
試験例４．メラニン合成抑制効果
培養Ｂ１６マウスメラノーマ細胞Ｂ１６−Ｆ１０を、２４穴マイクロプレートに２．４×１０４個／穴播種し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地中、３７℃、５．０％ＣＯ２の条件下に１日間プレ培養した。その後、本発明の製造例１〜８に係る抽出物、製造例１，３，５，７の抽出物とアスコルビン酸誘導体（アスコルビン酸グルコシド）との併用組成物（それぞれ順に組成物１〜４と称する。）を試料溶液として使用し、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地で試料溶液を希釈した溶液と終濃度１ｍＭになるように調整したテオフィリン含有培地を添加し、同条件で２日間培養した。ここで、試料溶液の濃度は、抽出物に関しては、当該抽出物を含む１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地に対する溶液としての終濃度が０．５％、１．０％となるように調製し、アスコルビン酸グルコシドに関しては、０．５重量％となるように調製した。次に培養液を除去し、１Ｎ ＮａＯＨ／１０％ジメチルスルフォキシド溶液を１穴あたり２００μＬ添加し、シールして５０℃、２時間インキュベートして細胞を溶解させた。この溶液１００μＬを別の９６穴マイクロプレートに移し、マイクロプレートリーダー（Model 680、バイオラッド社製）を用い、波長４９０ｎｍでメラニン値を測定した。一方同じ細胞を溶解させた溶液を５μＬ別の９６穴マイクロプレートに移し、さらに精製水で５倍希釈したDye Reagent Concentrate（バイオラッド社）溶液を２００μＬ添加し、マイクロプレートリーダー（Model 680、バイオラッド社製）を用い、波長５７０ｎｍの吸光度を測定した。別で既知の量の牛血清アルブミン（Sigma社製）を段階希釈し、同様に操作して得られた検量線から、アルブミン当量のタンパク質量を計測した。得られた吸光度をタンパク質量で除算して、タンパク質あたりのメラニン量を求めた。試料溶液に代えて５０％１，３−ブチレングリコール溶液を添加した試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたタンパク質あたりのメラニン量に対する各試料添加時のタンパク質あたりのメラニン量の相対値を求め、メラニン合成率（％）とした。なお、比較のため、試料溶液の代わりに、０．５％のアスコルビン酸誘導体（アスコルビン酸グルコシド）を添加した場合（陽性対照）についても同様の試験を行った。
【００９０】
［表４］
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【００９１】
表４に示すように、本発明に係る抽出物１〜８及び組成物１〜４は、濃度依存的に格段にすぐれたメラニン合成抑制作用を有することが認められた。また、陽性対照であるアスコルビン酸誘導体も同様の作用が認められたことから、本試験系が正常に行われたことも確認された。
【００９２】
以上のように、本発明に係るミカン属に属する植物の未成熟果実の抽出物は、抗酸化作用（ＤＰＰＨラジカル消去作用、ＳＯＤ様活性作用）、ＳＶＴＣ１合成促進作用、メラニン合成抑制作用を有し、それらの相乗作用により、肌荒れやアトピー性皮膚炎、ニキビ、及び肌のシワ、タルミを改善し、肌のハリ、ツヤを向上させ、さらには、シミ、ソバカスの改善や、紫外線等の外的要因による肌のダメージ（酸化ダメージ及び炎症ダメージ）の予防及び改善効果を発揮する化粧料又は経口組成物を提供することができる。さらには、過剰な皮脂分泌により生じる毛穴のつまり等も改善や、育毛又は脱毛防止用の化粧料又は経口組成物を提供することもできる。