(57)【要約】【課題】ＰＤＴにおけるレーザー光のパルス照射による殺細胞効果を達成することができる光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）やその作動方法を提供すること。【解決手段】５−アミノレブリン酸類を対象に投与し、病変部にプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）を蓄積させた後に、かかる病変部に波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を、平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２、好ましくは２０〜５００Ｊ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上、好ましくは１ＭＨｚとなる制御条件下で照射する。さらに、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となる制御条件下でパルス照射することが好ましい。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−アミノレブリン酸類を用いて病変部を治療するための光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）であって、波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を病変部にパルス照射する照射手段と、該照射手段によりパルス照射するレーザー光の平均パワー密度及びパルス周波数を制御する制御手段とを備え、前記病変部の治療において、前記制御手段により平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となるように設計されていることを特徴とする、前記ＰＤＴ装置。
【請求項２】
制御手段により、パルス周波数が１ＭＨｚ以上となるように設計されていることを特徴とする請求項１記載のＰＤＴ装置。
【請求項３】
さらに、制御手段により、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となるように設計されていることを特徴とする請求項１又は２記載のＰＤＴ装置。
【請求項４】
５−アミノレブリン酸類が、５−アミノレブリン酸若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のＰＤＴ装置。
【請求項５】
５−アミノレブリン酸類を用いて病変部を治療するための光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）の作動方法であって、前記ＰＤＴ装置が、波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を、前記病変部にパルス照射する照射手段と、前記照射手段により照射するレーザー光の平均パワー密度及びパルス周波数を制御する制御手段とを備え、前記病変部の治療において、前記制御手段により平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となるように制御することを特徴とする、前記作動方法。
【請求項６】
制御手段により、パルス周波数が１ＭＨｚ以上となるように制御されていることを特徴とする請求項５記載の作動方法。
【請求項７】
さらに、制御手段により、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となるように制御されていることを特徴とする請求項５又は６記載の作動方法。
【請求項８】
５−アミノレブリン酸類が、５−アミノレブリン酸若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩であることを特徴とする請求項５〜７のいずれか記載の作動方法。
【請求項９】
５−アミノレブリン酸類を対象に投与し、病変部にプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）を蓄積させた後に、かかる病変部に波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を、平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となる制御条件下で照射することを特徴とする光線力学的治療方法。
【請求項１０】
パルス周波数が１ＭＨｚ以上となる制御条件下でパルス照射することを特徴とする請求項９記載の治療方法。
【請求項１１】
さらに、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となる制御条件下でパルス照射することを特徴とする請求項９又は１０記載の治療方法。
【請求項１２】
５−アミノレブリン酸類が、５−アミノレブリン酸若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩であることを特徴とする請求項９〜１１のいずれか記載の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５−アミノレブリン酸類を用いる光線力学的治療装置やその作動方法に関し、より詳しくは、５−アミノレブリン酸類を投与後、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上のレーザー光を病変部にパルス照射する光線力学的治療装置やその作動方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
光線力学的療法（以下「ＰＤＴ」ともいう）は、光増感剤を投与し、患部に集積させ、光励起により生成される一重項酸素をはじめとする活性酸素種の殺細胞性を利用した治療法である。この光線力学的療法は、非侵襲的かつ治療痕が残りにくい治療法であるため、近年注目を集めている。また、光増感剤として用いられているものの多くはテトラピロールと呼ばれる構造を持ち、波長４００ｎｍ付近に特徴的に高い吸光度を示す吸光スペクトルのピークや、波長６００〜７００ｎｍ付近に吸光スペクトルのピークをもち、腫瘍組織や新生血管へ特異的に集積することが知られている。光増感剤の吸光スペクトルのピークに対応する光を励起光として、腫瘍組織や新生血管に集積した光増感剤に照射することで生ずる一重項酸素が腫瘍組織や新生血管の細胞を変性・壊死させることができると考えられており、４００ｎｍ付近の短波長の光照射により、にきび等の皮膚表面の疾患の治療が、６００〜７００ｎｍ付近の比較的組織深達性が良い長波長の光照射により、がん治療等が行われている（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
また、レーザー光をパルス照射するＰＤＴにおいて、繰り返し周波数を１Ｈｚ〜１ｋＨｚとするなどレーザ照射条件を変えることにより、病変部の浅部から深部までの治療深度を制御でき、病変部を覆う健常な浅部を傷害させずに保存したまま、深部の病変部のみを傷害し得る光線力学的治療装置（例えば、特許文献２及び３参照）や、ＰＤＴ及び光線力学的診断（以下「ＰＤＤ」ともいう）を効率的に行うことができ、しかも、パルスレーザー光源のパルス発生器に連続発振から１００ｋＨｚまでの繰り返し周波数の調節機能を備えた光線力学診断・治療用の多波長レーザー装置（例えば、特許文献４参照）が提案されている。また、光線力学的療法用剤「フォトフリン」の添付文書には、「レーザー光照射に際しては、エキシマ・ダイ・レーザー（型名ＰＤＴＥＤＬ−１  浜松ホトニクス社製）の取扱説明書を参照すること。」の記載と共に、パルス周波数が３０〜４０Ｈｚである旨の表示がある。
【０００４】
他方、５−アミノレブリン酸（以下「ＡＬＡ」ともいう）は動物や植物や菌類に広く存在する、生体内に含まれる天然アミノ酸の一種であるが、ＡＬＡはそれ自体には光感受性はないものの、細胞内でヘム生合成経路の一連の酵素群により代謝活性化されたプロトポルフィリンＩＸ（以下「ＰｐＩＸ」ともいう）が４１０ｎｍ、５４５ｎｍ、５８０ｎｍ、６３０ｎｍ等にピークがある光増感剤として知られており（非特許文献１）、がん細胞内にＰｐＩＸを蓄積させた後に、６００〜７００ｎｍ付近の励起光を照射することにより疾患部位の細胞を変性・壊死させる、５−アミノレブリン酸−光線力学的療法（以下「ＡＬＡ−ＰＤＴ」ともいう）の研究が進められている（例えば、特許文献３及び５〜１１参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１１−００１３０７号公報
【特許文献２】特許第４５０４９１７号公報
【特許文献３】特開２０１０−１６３４４５号公報
【特許文献４】特開２０１２−２３２０１４号公報
【特許文献５】特開２００８−２０８０７２号公報
【特許文献６】特開２００７−０１５９３８号公報
【特許文献７】特開２００６−１８２７５３号公報
【特許文献８】特開２００５−３５０４１８号公報
【特許文献９】特開２００５−３４９０２８号公報
【特許文献１０】特開２００５−１３２７６６号公報
【特許文献１１】特開平１１−０１２１９７号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】マルホ皮膚科セミナー「光線力学療法（ＰＤＴ）」２０１０年２月２５日放送、第２５回日本皮膚悪性腫瘍学会(2)ワークショップ２より、松本義也
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従来のＡＬＡ−ＰＤＴの効果を向上させるためには、ＡＬＡの用量を増やすこと、励起光の強度を上げること、又は他の薬剤（ＡＢＣＧ２基質の抗がん剤等）と併用することが考えられていた。しかし、ＡＬＡ−ＰＤＴにおいて、高用量のＡＬＡを投与することは光線過敏等の有害事象を引き起こす可能性があること、励起光の強度を上げることは細胞内への酸素供給が追い付かず、その治療効率が低下すること、さらには、がん患者以外には抗がん剤を投与できないことから、ＡＬＡの高用量化及び励起光の高強度化をせずに、ＡＬＡ−ＰＤＴの治療効果を高める方法が切望されていた。また、従来のＰＤＴにおけるレーザー光のパルス照射は、主としてより生体深部でもＰＤＴによる殺細胞効果を達成する目的で行われていた。そのため、大きなピーク強度のレーザー光を照射して、生体成分の光吸収による発熱を回避しながら生体深部に励起光を到達させていた。本発明の課題は、ＰＤＴにおけるレーザー光のパルス照射による殺細胞効果を達成することができる光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）やその作動方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討し、従来の光増感剤を用いたＰＤＴでは、レーザー光のパルス照射における最適周波数は３０〜４０Ｈｚ程度とされていたが、ＡＬＡ−ＰＤＴでは、それ以上の周波数である１００ｋＨｚ以上を使用することによって、最適周波数を上回る癌細胞死滅効果が得られることを見いだした。このように、ＰＤＴにおけるレーザー光のパルス周波数が１００ｋＨｚ以上、好ましくは１ＭＨｚ以上となるようにレーザー光を制御すると、殺細胞効果が顕著に上昇することを見いだし、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は以下の事項により特定されるものである。
（１）５−アミノレブリン酸類を用いて病変部を治療するための光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）であって、波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を病変部にパルス照射する照射手段と、該照射手段によりパルス照射するレーザー光の平均パワー密度及びパルス周波数を制御する制御手段とを備え、前記病変部の治療において、前記制御手段により平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となるように設計されていることを特徴とする、前記ＰＤＴ装置。
（２）制御手段により、パルス周波数が１ＭＨｚ以上となるように設計されていることを特徴とする前記（１）記載のＰＤＴ装置。
（３）さらに、制御手段により、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となるように設計されていることを特徴とする前記（１）又は（２）記載のＰＤＴ装置。
（４）５−アミノレブリン酸類が、５−アミノレブリン酸若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩であることを特徴とする前記（１）〜（３）のいずれか記載のＰＤＴ装置。
（５）５−アミノレブリン酸類を用いて病変部を治療するための光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）の作動方法であって、前記ＰＤＴ装置が、波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を、前記病変部にパルス照射する照射手段と、前記照射手段により照射するレーザー光の平均パワー密度及びパルス周波数を制御する制御手段とを備え、前記病変部の治療において、前記制御手段により平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となるように制御することを特徴とする、前記作動方法。
（６）制御手段により、パルス周波数が１ＭＨｚ以上となるように制御されていることを特徴とする前記（５）記載の作動方法。
（７）さらに、制御手段により、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となるように制御されていることを特徴とする前記（５）又は（６）記載の作動方法。
（８）５−アミノレブリン酸類が、５−アミノレブリン酸若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩であることを特徴とする前記（５）〜（７）のいずれか記載の作動方法。
（９）５−アミノレブリン酸類を対象に投与し、病変部にプロトポルフィリンＩＸ（ＰｐＩＸ）を蓄積させた後に、かかる病変部に波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を、平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となる制御条件下で照射することを特徴とする光線力学的治療方法。
（１０）パルス周波数が１ＭＨｚ以上となる制御条件下でパルス照射することを特徴とする前記（９）記載の治療方法。
（１１）さらに、照射エネルギー密度が２０〜５００Ｊ／ｃｍ２となる制御条件下でパルス照射することを特徴とする前記（９）又は（１０）記載の治療方法。
（１２）５−アミノレブリン酸類が、５−アミノレブリン酸若しくはそのメチルエステル、エチルエステル、プロピルエステル、ブチルエステル、ペンチルエステルから選ばれるエステル類、又はそれらの塩であることを特徴とする前記（９）〜（１１）のいずれか記載の治療方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によると、ＰＤＴにおけるレーザー光のパルス照射によって優れた殺細胞効果を達成することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】異なるパルス周波数（１００ｋＨｚ、１ＭＨｚ）によるＰＤＴにおけるマウスＥＭＴ６細胞株の生存率を示す図である。照射時間１００秒及び２００秒共に、左から順にＣＷ（波長６３５ｎｍの半導体連続レーザー光）、１００ｋＨｚ（周波数１００ｋＨｚに変調した波長６３５ｎｍの半導体パルスレーザー光）、１ＭＨｚ（周波数１ＭＨｚに変調した波長６３５ｎｍの半導体パルスレーザー光）を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の光線力学的治療装置（ＰＤＴ装置）は、５−アミノレブリン酸類を用いて病変部を治療するための装置であり、波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を病変部にパルス照射する照射手段と、照射手段によりパルス照射するレーザー光の平均パワー密度を１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数を１００ｋＨｚ以上となるように制御する制御手段とを備えていれば特に制限されず、本発明のＰＤＴ装置の作動方法は、上記本発明のＰＤＴ装置におけるパルス照射するレーザー光の平均パワー密度を２０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数を１００ｋＨｚ以上となるように制御する作動方法であれば特に制限されないが、レーザー光としては、波長４８０〜５８０ｎｍ、好ましくは波長４９０〜５７０ｎｍ、より好ましくは波長５００〜５５０ｎｍ、さらに好ましくは５００〜５３０ｎｍの励起光や、波長６２５ｎｍ〜６４２ｎｍ、好ましくは波長６３０〜６４０ｎｍ、より好ましくは波長６３５ｎｍの励起光を好適に例示することができる。
【００１３】
本発明のＰＤＴ装置の照射手段における光源としては、青色〜赤色の半導体レーザーを好適に例示することができる。かかる半導体レーザーを光源とする場合、上記制御手段により、レーザーのパルス周波数は１ＭＨｚ以上で５ＭＨｚ以下に、平均パワー密度は２０〜２００ｍＷ／ｃｍ２にそれぞれ設計・制御することが好ましい。また、上記制御手段により、照射エネルギー密度は２０〜５００Ｊ／ｃｍ２、好ましくは２５〜１００Ｊ／ｃｍ２に設計・制御することが好ましい。また照射時間は、パルス周波数、平均パワー密度、照射エネルギー密度にもよるが、３０秒〜５分程度に制御することができる。そして、レーザー光のパルス照射により、正常な皮膚表面への損傷を小さくできる。照射手段は、光源に加えて、病変部にレーザー光をパルス照射可能な光ファイバケーブルを通常備えている。例えば、子宮頸部病変をコルポスコープにて観察しながら、光ファイバケーブルの出射端部から１００Ｊ／ｃｍ２のエネルギー密度で周波数１ＭＨｚのパルス照射を３分間するＰＤＴを挙げることができ、患部に照射したときの照射径が、１０ｍｍ以上であることが好ましく、１５ｍｍ以上であることが、患部への照射時間が短くなることから好ましい。
【００１４】
本発明のＰＤＴ装置は、ＰＤＤシステムを兼ね備えておくこともできる。かかるＰＤＤシステムとしては、例えば、病変部に蓄積した光感受性物質を励起させるための励起光の光源と、励起光を導光照射する光源用光ファイバーと、該光源用光ファイバーと一体化され、前記励起光によって励起されたＰｐＩＸが発する蛍光を受光し、検出器に導光する計測用光ファイバーと、検出器を有するシステムを挙げることができる。
【００１５】
上記制御手段は、レーザー光の波長、平均パワー密度を調整したり、繰り返し周波数、照射エネルギー密度等の光照射条件を制御することにより、上記病変部の治療において、平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となる波長４００〜７００ｎｍのパルスレーザー光を発生させるものであり、かかるパルスレーザー光の発生は、通常外部変調方式や直接変調方式により行われる。
【００１６】
本発明において５−アミノレブリン酸類（ＡＬＡ類）とは、５−アミノレブリン酸（ＡＬＡ）若しくはその誘導体、又はこれらの塩をいう。ＡＬＡは公知の化合物であり、それ自身は可視光の吸収も弱く光照射で蛍光も活性酸素も発生しないが、投与後体内で光増感物質であるプロトポルフィリンに代謝されるため光増感剤として有利に作用する。ＡＬＡ類を投与した場合のＰｐＩＸの蓄積は、がん、異形成、細菌・真菌感染部位、ウイルス感染細胞などの病変部に特異的であり、また、ＡＬＡ類は安全性も高い化合物であるためもっとも有望な光増感剤として作用する。
【００１７】
上記ＡＬＡの誘導体は、式Ｒ２Ｒ１ＮＣＨ２ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯＲ３ [式中、Ｒ１及びＲ２は各々独立に、水素原子、アルキル基、アシル基、アルコキシカルボニル基、アリール基又はアラルキル基を示し；Ｒ３はヒドロキシ基、アルコキシ基、アシルオキシ基、アルコキシカルボニルオキシ基、アリールオキシ基、アラルキルオキシ基又はアミノ基を示す。但し、Ｒ１及びＲ２が水素原子でＲ３がヒドロキシ基のＡＬＡは除く。]で示すことができる。ＡＬＡ誘導体としては、ＡＬＡメチルエステル、ＡＬＡエチルエステル、ＡＬＡプロピルエステル、ＡＬＡブチルエステル、ＡＬＡペンチルエステル、ＡＬＡヘキシルエステル等を挙げることができる。また、ＡＬＡ誘導体として、エステル基とアシル基を有するＡＬＡ誘導体を好適に例示することができる。エステル基とアシル基を有するＡＬＡ誘導体としては、メチルエステル基とホルミル基、メチルエステル基とアセチル基、メチルエステル基とｎ-プロパノイル基、メチルエステル基とｎ−ブタノイル基、エチルエステル基とホルミル基、エチルエステル基とアセチル基、エチルエステル基とｎ−プロパノイル基、エチルエステル基とｎ−ブタノイル基の組合せを具体的に例示することができる。
【００１８】
ＡＬＡ又はその誘導体の塩としては特に制限されないが、薬学的に許容される無機酸又は有機酸の酸付加塩が好ましい。無機酸の付加塩としては、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、リン酸塩、硝酸塩、硫酸塩を挙げることができ、有機酸の付加塩としては、酢酸塩、プロピオン酸塩、トルエンスルホン酸塩、コハク酸塩、シュウ酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、グリコール酸塩、メタンスルホン酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩等を挙げることができる。その他、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩等の金属塩や、アンモニウム塩、アルキルアンモニウム塩等も挙げることができる。なお、これらの塩は使用時において溶液として用いられる。
【００１９】
これらのＡＬＡ類のうち、もっとも望ましいものはＡＬＡ、ＡＬＡメチルエステル、ＡＬＡエチルエステル、ＡＬＡプロピルエステル、ＡＬＡブチルエステル、ＡＬＡペンチルエステル、及びこれらの塩酸塩、リン酸塩、硫酸塩である。
【００２０】
以上のＡＬＡ類は、水和物又は溶媒和物を形成していてもよく、またいずれかを単独で又は２種以上を適宜組み合わせて用いることができる。また、ＡＬＡ類は、化学合成、微生物による生産、酵素による生産のいずれの方法によって製造したものも用いることができる。
【００２１】
上記ＡＬＡ類を水溶液として調製する場合には、ＡＬＡ類の分解を防ぐため、水溶液がアルカリ性とならないように留意する必要がある。アルカリ性となってしまう場合は、酸素を除去することによって分解を防ぐことができる。
【００２２】
上記ＡＬＡ類には、安定化剤、分散剤、溶剤、増量剤、栄養剤、賦形剤等の担体を必要に応じて配合することができる。配合される担体としては、摂取するために適した有機若しくは無機の固体又は液体の、通常は不活性な製薬学的に許容できる担体材料が用いられ、例えば結晶性セルロース、ゼラチン、乳糖、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、タルク、植物性および動物性脂肪および油、ガム、ポリアルキレングリコール等を挙げることができる。本発明の組成物を治療剤として用いる場合の剤型としては、注射剤、点滴剤、膀胱内注入剤、錠剤、カプセル剤、細粒剤、シロップ剤、発布剤、座薬等を例示することができる。
【００２３】
上記ＡＬＡ類は静脈内注射や点滴に限らず、舌下投与も含む経口投与、パップ剤等による経皮投与、座薬、膀胱内注入などの各種の投与形態が適用可能であるが、患者の負担を考えると経口投与が有利である。また、ＡＬＡ類の投与量は、ＡＬＡ塩酸塩換算で、体重１ｋｇあたり、１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは１０ｍｇ〜５０ｍｇ、より好ましくは１５ｍｇ〜２５ｍｇ、さらに望ましくは２０ｍｇである。
【００２４】
本発明のＰＤＴ装置によると、病変部に特異的に集積されたＰｐＩＸに波長４００〜７００ｎｍのレーザー光を、平均パワー密度が１０〜５００ｍＷ／ｃｍ２で、かつ、パルス周波数が１００ｋＨｚ以上となる制御条件下でパルス照射することにより、選択的に病変部組織を傷害壊滅することができる。かかるＰＤＴ装置による治療の対象となる病変部は、組織において細胞の異常増殖や粥腫を伴う疾患の病変部であり、このような病変部を有する疾患としては、疣、子宮頸部がん、皮膚がん、甲状腺がん、悪性脳腫瘍などの表在性のがんや皮下性のがんを挙げることができる。
【００２５】
以下に、実施例を挙げてこの発明をさらに具体的に説明するが、この発明の技術的範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００２６】
マウス乳癌ＥＭＴ６培養細胞の総生数カウントをBurker-Turk計算盤を用いて行い、細胞濃度が５．０×１０３cells/wellとなるように濃度調整を行い、９６wellプレートに１００μＬずつ播種した。２４時間のインキュベーションをした後、２５０μＭの５−ＡＬＡを含む無血清培地１００μＬに置換し、インキュベータ内で４時間浸漬させた。浸漬後、各wellの薬剤含有無血清培地をＰＢＳに置換して洗浄した後、無血清培地に交換し、波長６３５ｎｍの半導体連続レーザー光（ＣＷ）、及び周波数１００ｋＨｚと１ＭＨｚに変調した波長６３５ｎｍの半導体パルスレーザー光を用いて、平均パワー密度１００ｍＷ／ｃｍ２で１００秒又は２００秒照射した。照射後、有血清培地に交換してＣＯ２インキュベータ内で２４時間培養した後、ＷＳＴアッセイ法により、細胞生存率を評価した。ＥＭＴ６細胞の生存率の結果を図１に示す。図１からわかるように、１００秒照射及び２００秒照射とも高周波数に変調したパルスレーザーを使用した場合は、連続光（ＣＷ）レーザーを使用した場合と比較してＥＭＴ６細胞株の生存率は低い値となった。この結果から、ＣＷレーザーより１００ｋＨｚ以上のパルスレーザーを用いた方が高い癌細胞殺傷効果が確認された。なお、レーザーのパルス化においては、波長６３５ｎｍの半導体レーザー（HL6388MG, Thorabs社）にパルスジェネレーター（8112A、Hewlett-Packard社）を接続してパルス化し、フォトダイオード（818-BB-21、Newport社）で検出された光強度の時間変化を、オシロスコープ（TDS3054C、Tektronix社）で測定した。レーザーの平均出力の測定にはパワーメーター（3A、Ophir Optronics社）を使用した。
【産業上の利用可能性】
【００２７】
本発明のＰＤＴ装置は、腫瘍等の治療の医療分野において有効利用される。
【図１】
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