(57)【要約】      （修正有）【課題】ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現を増強する新規なＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤及びＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物の提供。【解決手段】以下の構造式を有するピセアタンノール誘導体からなる化合物若しくはその多量体、又はその塩若しくは配糖体を有効成分として含有する、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤。Ｒがメチル基であることが好ましく、更に、前記化合物の内で、パッションフルーツ種子エキス、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニン又はラポンチゲニン或いはピセアンタンノールの二量体のスキルプシンＢを含有することが好ましい、ＧＡＰＤＨ発現遺伝子増強用食品組成物。2017214322.tif 000008（Ｒ１〜Ｒ６は夫々独立に−Ｈ、−ＯＨ又は−ＯＲ；ＲはＣ１〜Ｃ６のアルキル基）【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を有効成分として含有する、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤。
2017214322.tif 000005
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【請求項２】
Ｒがメチル基である、請求項１に記載のＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤。
【請求項３】
パッションフルーツ種子エキス、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンを含有する、請求項１または２に記載のＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤。
【請求項４】
以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を有効成分として含有する、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物。
2017214322.tif 000006
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、-Ｈ、-ＯＨ及び-ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【請求項５】
Ｒがメチル基である、請求項４に記載のＧＡＰＤＨ発現遺伝子増強用食品組成物。
【請求項６】
パッションフルーツ種子エキス、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンを含有する、請求項４または５に記載のＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物。
【請求項７】
以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した動物個体から採取された細胞、または以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した細胞、におけるＧＡＰＤＨ遺伝子の転写産物またはＧＡＰＤＨ遺伝子タンパク質の発現レベルを調べる、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現解析方法。
2017214322.tif 000007
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）
【請求項８】
Ｒがメチル基である、請求項７に記載のＧＡＰＤＨ遺伝子発現解析方法。
【請求項９】
パッションフルーツ種子エキス、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンが投与される、請求項７または８に記載のＧＡＰＤＨ遺伝子発現解析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤及びＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピセアタンノールは、スチルベン類の化合物であって、例えば、トケイソウ科トケイソウ属（Passiflora）の果物であるパッションフルーツの種子に含まれており、シミ、ソバカス、日焼けなどによる色素沈着の原因となるメラニンの生成を抑制する効果があることが報告されている（特許文献１を参照）。このピセアタンノールは、サーチュイン１遺伝子などの遺伝子発現を増強するという報告がある（例えば、特許文献２参照）。
【０００３】
一方、ＧＡＰＤＨ（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ）遺伝子はハウスキーピング遺伝子として知られており、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現レベルは常に一定であって、多くの実験系で、目的の遺伝子発現を調べる場合の、測定値を標準化するための内部標準として使用されてきた。
【０００４】
ＧＡＰＤＨは多機能な酵素であることが知られており、解糖系の酵素としてだけでなく、ウラシル-ＤＮＡグリコシラーゼとしてＤＮＡ修復に関与したり（例えば、非特許文献１、２参照）、テロメアに結合して、その分解を抑制したり（例えば、非特許文献３参照）、テロメラーゼＲＮＡ構成要素に結合してテロメラーゼ活性を抑制したり（例えば、非特許文献４参照）、Ｍｇ２＋−ＡＴＰの存在下で自己リン酸化し、ＮＡＤ＋、ＮＡＤＨ、あるいはＧ３Ｐの存在下で脱リン酸化するというように、リン酸基を転移したり（例えば、非特許文献１、５参照）、チューブリンやアクチンに結合して微小管の形成を調節したり（例えば、非特許文献１、６参照）、低分子量Gタンパク質のRab2と結合して小胞体からゴルジ体への物質輸送に関与したり（例えば、非特許文献３、７、８参照）、バンド3 と結合することで、局所における酸素センシング機能に関与し、ヘモグロビンから酸素分子の解離を促進したり（例えば、非特許文献９参照）、細胞膜に局在して脂質二重膜の融合促進やエンドサイトーシスに関与したり（例えば、非特許文献１参照）することが知られている。また、ＧＡＰＤＨは細胞外へ放出され、ＩｇＭの分泌促進（例えば、非特許文献１０参照）、トランスフェリンの受容体として鉄の取り込み促進（例えば、非特許文献３、１１参照）、プラスミノーゲン活性化などの作用も有する（例えば、非特許文献１２参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−１０２２９８号公報
【特許文献２】特開２０１６−０４１６８０号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Sirover, M.A. (1999) Biochim. Biophys. Acta, 1432, 159-184.
【非特許文献２】Meyer-Siegler, K., Mauro, D.J., Seal, G., Wurzer, J., deRiel, J.K.,& Sirover, M.A. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 8460-8464.
【非特許文献３】Sirover, M.A. (2011) Biochim. Biophys. Acta, 1810, 741-751.
【非特許文献４】Nicholls, C., Pinto, A.R., Li, H., Li, L., Wang, L., Simpson, R., & Liu, J.P. (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 109, 13308-13313.
【非特許文献５】Laschet, J.J., Minier, F., Kurcewicz, I., Bureau, M.H., Trottier, S., Jeanneteau, F., Griffon, N., Samyn, B., Van Beeumen, J., Louvel, J., Sokoloff, P., & Pumain, R. (2004) J. Neurosci., 24,7614-7622.
【非特許文献６】Huitorel, P. & Pantaloni, D. (1985) Eur. J. Biochem., 150, 265-269.
【非特許文献７】Tristan, C., Shahani, N., Sedlak, T.W., & Sawa, A. (2011) Cell. Signal., 23, 317-323.
【非特許文献８】Tisdale, E.J., Kelly, C., & Artalejo, C.R. (2004) J. Biol. Chem., 279, 54046-54052.
【非特許文献９】Kinoshita, A., Tsukada, K., Soga, T., Hishiki, T., Ueno, Y., Nakayama, Y., Tomita, M., & Suematsu, M. (2007) J. Biol.Chem., 282, 10731-10741.
【非特許文献１０】Sugahara, T., Shirahata, S., Sasaki, T., & Murakami, H. (1995) FEBS Lett., 368, 92-96.
【非特許文献１１】Raje, C.I., Kumar, S., Harle, A., Nanda, J.S., & Raje, M. (2007) J. Biol. Chem., 282, 3252-3261.
【非特許文献１２】Henderson, B. & Martin, A. (2011) Infect. Immun., 79, 3476-3491.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現を増強する新規なＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤及びＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ピセアタンノールや誘導体が、これまで一定だとされてきたＧＡＰＤＨ遺伝子の発現を増強することを見出し、本発明にいたった。
【０００９】
本発明の一実施態様は、以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を有効成分として含有する、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤またはＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物である。
【００１０】
2017214322.tif 000002
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）Ｒがメチル基であってもよい。ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤またはＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物が、パッションフルーツ種子エキス、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンを含有してもよい。
【００１１】
本発明の他の実施態様は、以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した動物個体から採取された細胞、または以下の構造式を有する化合物もしくはその多量体、またはその塩もしくは配糖体を投与した細胞、におけるＧＡＰＤＨ遺伝子の転写産物またはＧＡＰＤＨ遺伝子タンパク質の発現レベルを調べる、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現解析方法である。
【００１２】
2017214322.tif 000003
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、−Ｈ、−ＯＨ及び−ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基であってＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。）Ｒがメチル基であってもよい。また、パッションフルーツ種子エキス、ピセアタンノール、レスベラトロール、イソラポンチゲニンまたはラポンチゲニンが投与されてもよい。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によって、ＧＡＰＤＨ遺伝子の発現を増強する新規なＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤及びＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物を提供することができるようになった。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】本発明の一実施例において、培地中のピセアタンノールおよびパッションフルーツ種子エキスが、培養細胞のＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルを増強することを示すグラフである。（*p<0.05（vs対照群）、#p<0.05（vsピセアタンノール群））
【図２】本発明の一実施例において、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルに対するパッションフルーツ種子エキスの濃度依存性を示すグラフである。（*p<0.05（vs対照群）、**p< 0.01（vs対照群））。
【図３】本発明の一実施例において、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルに対するピセアタンノール処理の時間的効果を示すグラフである。（*p<0.05（vs対照群、０時間）、**p< 0.01（vs対照群、０時間））。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。
【００１６】
（１）ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤またはＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物
本発明の一実施形態は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤またはＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物であって、ピセアタンノールまたはその誘導体を含有することを特徴とする。
【００１７】
ピセアタンノールまたはその誘導体は特に限定されないが、下記構造式（Ｉ）で示される化合物のトランス体および多量体、並びにそれらの塩および配糖体が好ましい。なお、誘導体の中で、アルキル化誘導体が特に好ましく、メチル化誘導体がさらに好ましい。また、多量体は、二量体、三量体など単量体が複数個多量化したものを言うが、なかでもスキルプシンＢが好ましい。
【００１８】
【化１】
2017214322.tif 000004
（式中、Ｒ１〜Ｒ６は、それぞれ独立に、-Ｈ、-ＯＨ及び-ＯＲ（Ｒはアルキル基）から選択される基である。）
なお、置換基Ｒに関して、様々な態様が考えられるが、Ａ）〜Ｃ）が好ましい。
【００１９】
Ａ）ＲはＣ１〜Ｃ１２のいずれかである。
【００２０】
Ｂ）ＲはＣ１〜Ｃ６のいずれかである。
【００２１】
Ｃ）ＲはＣ１のメチル基である。
【００２２】
また、Ｒ１〜Ｒ６に関しても、様々な組み合わせが考えられるが、１）〜６）が好ましい。
【００２３】
１）Ｒ１〜Ｒ３のいずれも-ＯＲである。
【００２４】
２）Ｒ１〜Ｒ３のうち、いずれか一つは-Ｈであって、残りの二つは-ＯＲである。
【００２５】
３）Ｒ１〜Ｒ３のうち、Ｒ３は-Ｈであって、残りの二つは-ＯＲである。
【００２６】
４）Ｒ４〜Ｒ６のいずれも-ＯＲである。
【００２７】
５）Ｒ４〜Ｒ６のうち、いずれか一つは-Ｈであって、残りの二つは-ＯＲである。
【００２８】
６）Ｒ４〜Ｒ６のうち、Ｒ６は-Ｈであって、残りの二つは-ＯＲである。
【００２９】
ここで、本明細書では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６が−ＯＨであって、Ｒ３が−Ｈであって、Ｒ４とＲ５のうち、一方が−Ｈで、もう一方が−ＯＨである化合物をピセアタンノールと呼ぶ。また、ピセアタンノールのメチル化誘導体として、ＲはＣ１のメチル基であって、Ｒ１〜Ｒ３のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＨまたは−ＯＲであって、Ｒ４〜Ｒ６のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＨまたは−ＯＲである場合（上記選択肢において、Ｃ／２／５の組み合わせ）が好ましい。ここで、Ｒ１、Ｒ２が−ＯＨであって、Ｒ３が−Ｈであって、Ｒ６が−ＯＣＨ３であって、Ｒ４とＲ５のうち、一方が−Ｈで、もう一方が−ＯＨである化合物がラポンチゲニンであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ６が−ＯＨであって、Ｒ３が−Ｈであって、Ｒ４とＲ５のうち、一方が−Ｈで、もう一方が−ＯＣＨ３である化合物がイソラポンチゲニンである。また、ピセアタンノールのアルキル化誘導体として、ＲはＣ１〜Ｃ６のアルキル基であって、Ｒ１〜Ｒ３のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲであって、Ｒ４〜Ｒ６のうち、いずれか一つは−Ｈであって、残りの二つは−ＯＲである場合（上記選択肢において、Ｂ／２／５の組み合わせ）が好ましい。
【００３０】
ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤中のピセアタンノールまたはその誘導体の含有量は特に限定されないが、０．０１％以上であることが好ましく、０．１％以上であることがより好ましく、１％以上、２％以上、３％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、５０％以上、７０％以上、９０％以上、９５％以上、９８％以上のいずれかであることがさらに好ましい。
【００３１】
本明細書では、「ＧＡＰＤＨ遺伝子」という用語が単独で用いられた場合、ＧＡＰＤＨ（ＥＣ１．２．１．１２）をコードする、すべてのＧＡＰＤＨ遺伝子およびそのホモログであるＧＡＰＤＨ遺伝子の総称を表すものとする。ＧＡＰＤＨ遺伝子の由来の動物は特に限定されず、ヒトであっても、ヒト以外の脊椎動物であっても、ヒト以外のほ乳類であってもよい。
【００３２】
本明細書で、「ＧＡＰＤＨ遺伝子発現」とは、ＧＡＰＤＨ遺伝子の転写産物レベルでの発現をいうものとする。また、「ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強」とは、ＧＡＰＤＨ遺伝子の転写産物が増えることであって、例えば、遺伝子の転写の活性化、転写産物の安定性の向上、転写産物分解の阻害などのメカニズムは問わないものとする。従って、「ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤」または「ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物」とは、そのメカニズムに関わらず、ＧＡＰＤＨ遺伝子の転写産物レベルを亢進させることができる薬剤または食品組成物をいう。
【００３３】
ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤の剤形やＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強用食品組成物の形状は特に限定されないが、例えば、ピセアタンノールを含むパッションフルーツ種子エキスなどであっても、精製されたピセアタンノールがバッファーに溶解された溶液であってもよく、その中に、適量の塩やキレート剤を含有してもかまわない。
【００３４】
ピセアタンノールまたはその誘導体の製造方法は特に限定されず、植物から単離しても、化学合成であってもかまわない。ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤の剤形は特に限定されないが、精製されたピセアタンノールまたはその誘導体がバッファーに溶解された溶液であってもよく、その中に、適量の塩やキレート剤を含有してもかまわない。
【００３５】
また、ピセアタンノールまたはその誘導体として、ピセアタンノールまたはその誘導体を含む植物のエキスを用いてもよい。ここで、植物の種類は、ピセアタンノールまたはその誘導体を含む植物であれば特に限定されず、パッションフルーツ（例えば、Passiflora edulis、Passiflora alata、Passiflora amethystine、Passiflora antioquiensis、Passiflora biflora、Passiflora buonapartea、Passiflora capsularis、Passiflora cearensis、Passiflora coccinea、Passiflora cochinchinesis、Passiflora filamentosa、Passiflora herbertiana、Passiflora laurifolia、Passiflora ligularis、Passiflora lunata、Passiflora lutea、Passiflora maliformis、Passiflora mixta、Passiflora mucronata、Passiflora mollissima、Passiflora nibiba、Passiflora organensis、Passiflora pallida、Passiflora parahypensis、Passiflora pedeta、Passiflora pinnatistipula、Passiflora popenovii、Passiflora quadrangularis、Passiflora riparia、Passiflora rubra、Passiflora serrate、Passiflora tiliaefolia、Passiflora tripartite、Passiflora villosa、Passiflora warmingiiなど）、テンニンカ（例えば、Rhodomyrtus tomentosaなど）、ブラシノキ（例えば、マキバブラシノキCallistemon speciosus、Callistemon rigidusなど）が例示できる。エキスを抽出するのは、植物全体のうち、どの部分であっても良く、例えば、果実、花、種子、葉、枝、樹皮、幹、茎、または、根であっても良いが、パッションフルーツを用いる場合は種子であることが好ましく、テンニンカである場合には果実であることが好ましく、ブラシノキである場合には茎であることが好ましい。以下、パッションフルーツ種子エキスを一例として、その製造方法を説明する。
【００３６】
（２）パッションフルーツ種子エキスの製造方法
パッションフルーツ種子エキスの具体的な製造方法として、公知の方法を用いることができ、例えば、パッションフルーツ種子を、乾燥した後に、破砕、粉砕、または、切断などによって種子分解物を得、溶媒を用いて抽出し、残渣を除去することによって抽出液を得、さらに、抽出液から溶媒を除去することによって、抽出物を得ることができる。この段階のいずれのものも、本発明のパッションフルーツ種子エキスとして使用することができる。
【００３７】
抽出に用いる溶媒の種類は、当業者であれば適切に選択することができるが、例えば、水、メタノール、エタノール、アセトン、酢酸エチル、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３-ブチレングリコール、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ-ジメチルホルムアミド、２-プロパノール、１，４-ジオキサン、ヘキサン、クロロホルム、ジクロロメタン、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であっても良く、水、エタノール、１，３-ブチレングリコール、または、これらから選択される２以上の溶媒の混合溶媒であることが好ましく、水、エタノール、または、水およびエタノールの混合溶媒であることがより好ましい。混合溶媒を用いる場合の、各溶媒の混合比は特に限定されないが、例えば水およびエタノールの混合溶媒を用いる場合には、水とエタノールとの体積比は、１：９９〜９９：１であっても良く、３：９７〜８０：２０であることが好ましく、５：９５〜５０：５０であることがより好ましく、１０：９０〜４０：６０であることが特に好ましい。
【００３８】
溶媒として、水、または、水との混合溶媒を用いる場合には、熱水、または、熱水との混合溶媒であることが好ましい。水、または、水との混合溶媒は塩を含んでいても良く、塩を含む溶媒の例として、バッファー（緩衝液）であっても良い。バッファーのｐＨは、特に限定されず、酸性、中性、または、アルカリ性のいずれであっても良いが、酸性であることが好ましく、ｐＨ６以下の酸性であることがより好ましく、ｐＨ１〜ｐＨ５の酸性であることがさらに好ましい。バッファーに用いる塩の種類は特に限定されず、例として、クエン酸塩、リンゴ酸塩、リン酸塩、酢酸塩および炭酸塩などが挙げられる。
【００３９】
抽出液から溶媒を除去する方法は、特に限定されず公知の方法を用いることができる。例えば、減圧留去、凍結乾燥、または、スプレードライ（噴霧乾燥）であっても良いが、凍結乾燥、または、スプレードライであることが好ましく、スプレードライであることがより好ましい。
【００４０】
抽出物の形状は、特に限定されず、例えば粉体などの固体状、アモルファス状、または、オイル状であっても良い。
【００４１】
（３）ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強方法
本発明の一実施形態は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現を増強する方法であって、ＧＡＰＤＨ遺伝子、そのプロモーター、及び転写産物からなる群から選択される少なくとも一つに、ピセアタンノールまたはその誘導体を投与する工程を含む。アルキル化誘導体は、メチル化誘導体であることが好ましい。
【００４２】
この工程が行われるのは、in vitroであっても、in vivoであってもかまわない。また、ピセアタンノールまたはその誘導体が作用する対象であるＧＡＰＤＨ遺伝子、そのプロモーター、及び／又は転写産物は、細胞内にあっても細胞外にあってもよい。
【００４３】
in vitroで細胞外にある場合、細胞抽出液中にあってもよく、単離された後に再構成されたin vitro転写系の中にあってもよい。
【００４４】
細胞内にある場合、ピセアタンノールまたはその誘導体が作用する対象であるＧＡＰＤＨ遺伝子、そのプロモーター、及び／又は転写産物は、外来性でも内在性でもよい。in vitroで用いられる細胞は、生体外にあればよく、培養条件下にあることが好ましいが、ライン化されていても、初代培養細胞であってもよく、あるいは培養組織中の細胞であってもかまわない。in vivoで細胞内にある場合は、すなわち生体内にある。ピセアタンノールまたはその誘導体が作用する対象であるＧＡＰＤＨ遺伝子、そのプロモーター、及び／又は転写産物が由来する動物種と、細胞が由来する動物種は、異なっていてもかまわないが、同じであることが好ましい。細胞の種類は、特に限定されない。
【００４５】
これらの系の中にあるＧＡＰＤＨ遺伝子、そのプロモーター、及び／又は転写産物に対し、ピセアタンノール及び／又はそのアルキル化誘導体が投与される。この化合物は、用いる系にあわせて（１）で述べたように剤形化されていてもよい。この化合物の濃度は、用いる系によって、実施者が適宜、容易に決定することができる。投与方法も、用いる系によって、実施者が適宜、容易に決定することができる。例えば、培養細胞の場合、培養細胞を培養している培地に、適量を添加すればよい。生体内の細胞の場合、ピセアタンノールは個体に投与される。投与経路は、全身投与または局所投与のいずれも選択することができる。この場合、疾患、症状などに応じた適当な投与経路を選択する。本発明に係る薬剤は、経口経路、非経口経路のいずれによっても投与できる。非経口経路としては、通常の静脈内投与、動脈内投与の他、皮下、皮内、筋肉内などへの投与を挙げることができる。さらに、経粘膜投与または経皮投与を実施することができる。本発明に係る食品組成物は、経口で摂取される。
【００４６】
ここで述べた方法によって、ピセアタンノールまたはその誘導体を通じて、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現を増強することができる。
【００４７】
（４）ＧＡＰＤＨ遺伝子発現測定方法
ＧＡＰＤＨ遺伝子発現を測定する方法は、ピセアタンノールまたはその誘導体を用いてＧＡＰＤＨ遺伝子発現を増強する工程と、ＧＡＰＤＨ遺伝子転写産物及び／又はＧＡＰＤＨタンパク質を検出する工程と、を含む。
【００４８】
ピセアタンノールまたはその誘導体を用いてＧＡＰＤＨ遺伝子発現を増強する工程は、（３）で述べたように行う。
【００４９】
その後、ＧＡＰＤＨ遺伝子転写産物及び／又はＧＡＰＤＨタンパク質を検出する。転写産物は、転写後スプライシングが行われる前のｈｎＲＮＡであっても、スプライシングが行われた後のｍＲＮＡであってもかまわない。検出方法は特に限定されないが、ノーザンハイブリダイゼーションやＲＴ-ＰＣＴが好ましい。タンパク質の検出方法も特に限定されないが、ウエスタン・ブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ＥＩＡ、ＲＩＡ、ＣＦ、ＣＬＩＡなどが例示できる。
【００５０】
この方法によって、ある特定の条件で、ピセアタンノールまたはその誘導体によって、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現がどのくらいのレベルで増強されるかを知ることができる。
【００５１】
（５）ピセアタンノール誘導体
ピセアタンノールまたはその誘導体は、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強能を有する。従って、ピセアタンノールをリード化合物として作製された誘導体に対し、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強能を調べれば、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強能を有する化合物を得られる確率が高くなる。そして、複数の誘導体を調べ、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強能を有する化合物をＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強物質として特定することによって、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強能を有する化合物をスクリーニングすることができる。
【００５２】
ここで、ピセアタンノールをリード化合物として作製された誘導体は、特に限定されないが、上記構造式（Ｉ）において、Ａ／１〜３／４〜６、Ｂ／１／４〜５、Ｂ／１〜２／４のいずれかの組み合わせを有する化合物であることが好ましい。なお、水素やアルキル基は、ハロゲン、芳香環、などに任意に置換されてもよい。
【実施例】
【００５３】
（実施例１）
本実施例では、ピセアタンノール（Piceatannol; PIC）（東京化成工業株式会社より入手）およびパッションフルーツ種子エキスによってＧＡＰＤＨ遺伝子発現が増強されることを示す。
【００５４】
パッションフルーツ種子エキスは、以下のようにして、抽出した。すなわち、パッションフルーツ種子を焙煎して粉砕し、これに８０％含水エタノール（８０ｖ／ｖ％エタノール＋２０ｖ／ｖ％水）を加えて混合、攪拌した後、濾過することで固液分離した。得られた抽出液をエバポレータで濃縮して、スプレードライによって粉末化してパッションフルーツ種子エキスとした。
【００５５】
ラット由来線維芽様細胞株(Rat-1; RIKEN Cell Bank, RCB1830) １×１０５個の細胞を、３５ｍｍディッシュに播種し、１０％ＦＢＳを添加したＤＭＥＭ（GIBCO社、11054-020）を用いて培養した。
【００５６】
５日目に、ピセアタンノール（Piceatannol）またはパッションフルーツ種子エキス（Passion fruit seed extract）を５０μＭの濃度で添加し、対照（Control）として、これらの溶媒であるＤＭＳＯだけを等量添加した。添加４時間後、細胞からＲＮＡを回収し、ＲＴ−ＰＣＲによってＧＡＰＤＨ遺伝子のｍＲＮＡ量およびＧＡＰＤＨ遺伝子のｍＲＮＡ量を測定した。そして、ＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現レベルを標準化するため、ＧＡＰＤＨ／３６Ｂ４比を算出し、対照を１００とした場合の、各物質で刺激した場合の値を計算した。
【００５７】
図１に、各試薬に対し、刺激４時間後のＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルを示す。ピセアタンノールおよびパッションフルーツ種子エキスはＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルを増強した。そして、パッションフルーツ種子エキスによる増加量はピセアタンノールよりも有意に高かった。
【００５８】
（実施例２）
ラット由来線維芽様細胞株を実施例１と同様に培養後、含有しているピセアタンノールの濃度が１０、２０、５０μＭ（２０μＭ＝５１．４７μｇ／ｍＬ）になるように、培地にパッションフルーツ種子エキスを添加した。４時間後、細胞からＲＮＡを回収し、ＲＴ−ＰＣＲによってＧＡＰＤＨ遺伝子のｍＲＮＡ量を測定した。そして、ＧＡＰＤＨｍＲＮＡ発現レベルを標準化するため、ＧＡＰＤＨ／３６Ｂ４比を算出し、各時間で対照を１００とした場合の値を計算した。
【００５９】
図２に、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルに対するパッションフルーツ種子エキスの濃度依存性を示す。パッションフルーツ種子エキスの濃度依存的にＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルは増強した。
【００６０】
（実施例３）
ラット由来線維芽様細胞株を実施例１と同様に培養後、ピセアタンノール１００μＭで添加した。２、４、８、２４時間後、細胞からＲＮＡを回収し、ＲＴ−ＰＣＲによってＧＡＰＤＨ遺伝子のｍＲＮＡ量を測定した。そして、ＧＡＰＤＨｍＲＮＡ発現レベルを標準化するため、ＧＡＰＤＨ／３６Ｂ４比を算出し、刺激前の０時間の対照を１００とした場合の値を計算した。
【００６１】
図３に、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルに対するピセアタンノールのタイムコースを示す。ピセアタンノールによるＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルは、刺激時間依存的に増強した。
【００６２】
（まとめ）
以上のように、パッションフルーツ種子エキス及びピセアタンノールは、ＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現レベルを増強し、ＧＡＰＤＨ遺伝子発現増強剤として有効である。
【図１】
2017214322.tif 000009
【図２】
2017214322.tif 000010
【図３】
2017214322.tif 000011