(57)【要約】      （修正有）【課題】自閉スペクトラム症の症状を改善するために有効な組成物を提供する。【解決手段】（１）ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物と、（２）チアミン、その誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のチアミン化合物とを組み合わせてなる、経口医薬組成物または飲食組成物である自閉スペクトラム症改善用組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物を有効成分とする、自閉スペクトラム症改善用組成物。
【請求項２】
ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量（または摂取量）がピリドキサミンの量に換算して飲食組成物の場合は１０ｍｇ以上、経口医薬組成物の場合は３００ｍｇ以上であるである、請求項１に記載の自閉スペクトラム症改善用組成物。
【請求項３】
（１）ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物と、
（２）チアミン、その誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のチアミン化合物
とを組み合わせてなる、請求項１または２に記載の自閉スペクトラム症改善用組成物。
【請求項４】
チアミン化合物１日当たりの投与量（または摂取量）がチアミンの量に換算して１〜５００ｍｇである、請求項３に記載の自閉スペクトラム症改善用組成物。
【請求項５】
経口医薬組成物または飲食組成物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の自閉スペクトラム症改善用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、自閉スペクトラム症（Autism Spectrum Disorder）の症状を改善するための組成物に関する。当該自閉スペクトラム症は、「自閉症スペクトラム障害」とも称されるが、本発明及び本明細書では「自閉スペクトラム症」と称する。
【背景技術】
【０００２】
非特許文献１等に記載されているDSM-5によれば、自閉スペクトラム症は、対人的相互関係、対人的相互反応で用いられる非言語的コミュニケーション行動、及び人間関係を発展・維持、および理解する能力などの欠陥を含み、さまざまな状況における社会的コミュニケーションおよび対人的相互反応の持続的な欠陥によって特徴づけられる。このため、自閉スペクトラム症の診断は、主として、その基本的特徴である「持続する相互的な社会的コミュニケーションや対人的相互反応の障害」（診断基準Ａ）、および「限定された反復的な行動、興味、または活動の様式」（診断基準Ｂ）等に基づいて判断される。これらの症状は幼児期早期から認められ、日々の活動を制限するか障害する（診断基準ＣとＤ）。機能的な障害が明らかとなる局面は、個々の特性や環境によって異なる。主要な診断的特徴は発達期の間に明らかとなるが、治療的介入、代償、および現在受け入れている支援によって、少なくともいくつかの状況ではその困難が隠されている可能性がある。障害の徴候もまた、自閉症状の重症度、発達段階、暦年齢によって大きく変化するので、それゆえに「スペクトラム」という単語で表現される。自閉スペクトラム症は、以前には早期幼児自閉症、カナー型自閉症、高機能自閉症、非定型自閉症、特定不能の広範性発達障害、小児期崩壊性障害、およびアスペルガー障害と呼ばれていた障害を包括するものである（以上、非特許文献１）。
【０００３】
こうした自閉症の症状を改善するために従来から様々な提案がなされている。
例えば、本件発明に関連する技術として、非特許文献２には、自閉スペクトラム症やアスペルガー症候群等の広汎性発達障害と診断された小児のうち、音に対して過敏、言語の表出障害、統合運動障害を有する小児に対してピリドキシン（ビタミンＢ６）を大量に投与することにより、当該障害の改善を示すＩＱ（intelligence quotient）スコアの増加が認められることが記載されている。また非特許文献３には、自閉スペクトラム症と診断された小児の会話や言語を改善するために高用量のピリドキシン（ビタミンＢ６）が投与されること、高用量のピリドキシン投与による好ましくない副作用を軽減するために、小児だけでなく大人の自閉スペクトラム症の症状の改善にピリドキシンとＭｇとを併用することが記載されている。さらに非特許文献４には、上記非特許文献２及び非特許文献５を引用して、ピリドキシン（ビタミンＢ６）の大量投与は、自閉スペクトラム症と精神的及び身体的特徴が類似するビタミンＢ６依存性痙攣の改善に有効であるのみならず、音に対して過敏、言語の表出障害、及び統合運動障害を有する小児の自閉スペクトラム症の症状改善にも有効であることが記載されている。
【０００４】
このようにピリドキシンのほか、投与用量30mg/kg/dayのピリドキサールが自閉症患者の反復行動に対して効果があったという報告もあるが、効果が見られなかったという報告もあり、これらの薬物は自閉スペクトラム症の一般的な治療薬として普及していないのが現状である（非特許文献６）。
【０００５】
一方、ピリドキサミンは、きわめて微量なビタミンＢ６アイソフォームとして自然界に存在しており、生体内でピリドキサールに代謝され、腎臓より速やかに排泄されることにより蓄積性のない物質として知られている。またピリドキサミンは、有害なカルボニル化合物によるタンパク（酵素）の修飾を阻害し、さらに修復（脱カルボニル反応）することにより、生体内ではカルボニルストレスの消去剤として機能する点で（非特許文献６）、ピリドキシンやピリドキサールとは異なる固有の特徴を有する物質であり、日本を始め、海外でもいまだ薬剤として承認されていない。上記非特許文献２〜５でもピリドキシンの効果が言及されているにすぎず、ピリドキサミンについては記載も示唆もされていない。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】「ＤＳＭ−５（登録商標）  精神疾患の診断・統計マニュアル」31-32頁、49-57頁、日本語版用語監修  日本精神神経学会、株式会社医学書院発行、2015年2月15日第１版第４刷
【非特許文献２】Shinichi Kuriyama et al., Pyridoxine treatment in a subgroup of children with pervasive developemental disorders. Developmental Medicine & Child Neurology (2002), 44: 283-286
【非特許文献３】Nye C, Brice A, Combined vitamin B6-magnesium treatment in autism spectrum disorder (Review). Cochrane Database of Systematic Reviews 2005, Issue 4, Art. CD003497. DOI:10.1002/14651858.CD003497.pub2.
【非特許文献４】平成22年5月27日作成「科学研究費補助金研究成果報告書」、研究期間：2007〜2009年度、研究課題名「自閉症に対するビタミンＢ６投与の有効性評価：ランダム化比較試験」、研究代表者：栗山進一（東北大学・大学院医学系研究科）
【非特許文献５】Developmental Medicine & Child Neurology (1996), 38: 998-1006
【非特許文献６】N Lofthouse, R Hendren, E Hurt, L. E Arnold, E Butter. A Review of Complemantary and Alternative Treatments for Autism Spectrum Disorders. Autism Res Treat 2012; 28: 384-390
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、自閉スペクトラム症の症状を改善するために好適に使用される組成物を提供することを課題とする。また、本発明は、ピリドキサミン化合物を一定量以上投与したときに生じ得るビタミンＢ１欠乏症を予防しながら、自閉スペクトラム症の症状を改善することができる組成物を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、鋭意研究を重ねたところ、ピリドキサミン化合物が、自閉スペクトラム症の症状改善にきわめて有効であることを見出した。しかしながら、その一方で、ピリドキサミン化合物を一定量以上投与した場合には、ウェルニッケ脳症等のビタミンＢ１欠乏症が発症する危険性があるため、これを予防しながら、自閉スペクトラム症の症状を改善する必要がある。本発明はこうした知見及び必要性に基づいて完成されたものであり、以下の態様を含むことを特徴とする。
【０００９】
項１．ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物を有効成分とする、自閉スペクトラム症の症状を改善するための組成物。
項２．ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量（または摂取量）がピリドキサミンの量に換算して、飲食組成物の場合は１０ｍｇ以上、経口医薬組成物の場合は３００ｍｇ以上である、項１に記載の組成物。
項３．（１）ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物と、
（２）チアミン、その誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のチアミン化合物
とを組み合わせてなる、項１または２記載の自閉スペクトラム症の症状を改善するための組成物。
項４．チアミン化合物１日当たりの投与量（または摂取量）がチアミンの量に換算して１〜５００ｍｇである、項３記載の自閉スペクトラム症改善用組成物。
項５．経口医薬組成物または飲食組成物である、項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
項６．（１）ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量１００重量部に対する（２）チアミン化合物の１日当たりの投与量が１〜２０重量部であることを特徴とする、項３〜５のいずれか一項に記載の組成物。
項７．（１）ピリドキサミン化合物、及び（２）チアミン化合物が、それぞれ単体または薬学的に許容される担体または添加剤とともに、別個の製剤として包装されており、
被験体に対する、ピリドキサミン化合物またはピリドキサミン化合物を含有する製剤の投与、及びチアミン化合物またはチアミン化合物を含有する製剤の投与が、異時、同時又は並行して行われるものである、項３〜６のいずれか一項に記載の組成物。
項８．被験体に対するピリドキサミン化合物またはピリドキサミン化合物を含有する製剤の投与を、チアミン化合物またはチアミン化合物を含有する製剤の投与よりも先に行うか、または
被験体に対するピリドキサミン化合物またはピリドキサミン化合物を含有する製剤の投与を、チアミン化合物またはチアミン化合物を含有する製剤の投与よりも後に行う
項７に記載する組成物。
項９．（１）ピリドキサミン化合物、及び（２）チアミン化合物を同一製剤中に含む配合剤である、項３〜６項のいずれかに記載の組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明に係る組成物によれば、自閉スペクトラム症の症状を改善することができる。また、ビタミンＢ６化合物の大量投与時に発症する畏れのあるビタミンＢ１欠乏症を予防しながら、自閉スペクトラム症の症状を改善することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施例１の症例１において、自閉スペクトラム症の評価に使用した「異常行動チェックリスト(Aberrant Behavior Checklist Community)日本語版（ABC-J）」の評価項目（58項目）をリストした図である。
【図２】ABC-J の診断58項目（サブスケールを含む）とDSM-5の診断基準との関係、並びにABC-J の診断58項目とPARS-TRの診断57項目と、ADI-Rアルゴリズム分類との関係を示した図である。
【図３】症例１（自閉スペクトラム症患者）について、試験薬を服用前と服用１ヶ月後の症状を、ABC-Jに基づいてスコアリングした結果を示す図である。
【図４】症例２（自閉スペクトラム症患者）について、試験薬を服用前と服用17日後の症状を、ABC-Jに基づいてスコアリングした結果を示す図である。
【図５】カルボニル化合物であるグリオキサールによる脳内アミンの捕捉をビタミンＢ６が阻害できるか確認した結果を示す。縦軸は、陰性コントロールを100％とした場合の脳内アミンの相対量を示す。図中「nd」は、検出できなかったことを示す。「＋」は化合物を添加したことを、「−」は化合物を添加しなかったことを示す。その他の略号については、表５を参照のこと。
【図６】被験者２名（ID:N0.3及び6）に対するピリドキサミン化合物（ピリドキサミン二塩酸塩：図中「PM」と表記）及びチアミン化合物（フルスルチアミン：図中「VB1」と表記）の投与プロトコール、並びにこれらの患者について経時的に測定した全血中ビタミンB1（VB1）量、血清中のピリドキサミン（PM）濃度、ピリドキサール（PL）濃度、及びピリドキシン（PN）濃度を示す。星印はウェルニッケ脳症が疑われた時点、黒丸はウェルニッケ脳症が消失した時点をそれぞれ示す。
【図７】被験者（各群６名ずつ、△：300mg/回投与群、●：600mg/回投与群、□：900mg/回投与群）に対してピリドキサミン化合物（ピリドキサミン・二塩酸塩）を投与した後の、ピリドキサミン（未変化体）、ピリドキサール（PL）、４−ピリドキシン酸（4−PA）、及びピリドキシン（PN）の血漿中濃度（ng/mL）の変化を示す。横軸はピリドキサミン化合物は０時間目、６時間目及び１２時間目に経口投与している。
【図８】ピリドキサミン・二塩酸塩（終濃度：5, 50, 500μg/mL）又はピリドキサール塩酸塩（終濃度：5, 50, 500μg/mL）をそれぞれ添加したヒト全血（試料）中のビタミンＢ１濃度の変化を示す。図８Ａは１時間インキュベーションした試料、Ｂは16時間インキュベーションした試料の測定結果を示す。図８Ａ及びＢの各上段は、全血中ビタミンＢ１濃度を示し、下段は、ヒト全血（インキュベーション前）中のビタミンＢ１濃度（BL：ベースライン）と、インキュベーション後のビタミンＢ１濃度との差を表したものである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
１．ピリドキサミン化合物を有効成分とする組成物 
本発明の組成物は、ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物を有効成分とし、自閉スペクトラム症の症状を改善するために使用される。また本発明の組成物は、一旦、症状が改善した自閉スペクトラム症患者に対して、再度の発症（症状の発現）または悪化を抑制するためにも使用することができる。
【００１３】
本発明において「改善」とは、発現した自閉スペクトラム症の症状を軽減または消失させることをいう。また「改善」には、自閉スペクトラム症の症状が一過的又は継続的に表出しないようにすることも含まれる。
【００１４】
自閉スペクトラム症は、神経発達症群（神経発達障害群）の一種である。その用語（定義）、障害の特徴、及び診断基準は、「疾病及び関連保健問題の国際統計分類：International Statistical Classification of Diseases and Related Health Problems、略称：国際疾病分類（International Classification of Diseases：ICD）第10版」（そのうちの第5章「精神および行動の障害」）及び「DSM-5（登録商標）精神疾患の診断・統計マニュアル」（日本語版用語監修  日本精神神経学会、株式会社医学書院発行、2015年2月15日第１版第４刷、31-57頁）等に詳細に説明されている。なお、自閉スペクトラム症を的確に診断することのできる診断基準であればよく、上記ICD-10及びDSM-5に特に限定するものではない。本明細書の記載は主としてDSM-5に基づくものであり、DSM-5のマニュアルの記載は本件明細書に援用される。
【００１５】
表１に、DSM-5による診断基準を抜粋する。
【表１】
2017155007.tif 000002
【００１６】
自閉スペクトラム症の症状の改善の有無やその程度は、「異常行動チェックリスト(Aberrant Behavior Checklist Community)日本語版（ABC-J）」（1994  Slosson Educational Publications, Inc.）（日本語版は2006年にじほう社から出版）（以下、単に「ABC-J」と称する）または／および「広汎性発達障害日本自閉症協会評定尺度（Pervasive Developmental Disorders Autism Society Rating Scale：PARS）」（以下、単に「PARS」と称する）の改訂版（以下、「PARS-TR」と称する）に基づいて判断することができる。これらの詳細は、実施例１及び２において説明する。
【００１７】
本発明において「ピリドキサミン化合物」とは、ピリドキサミン（IUPAC名：4-(aminomethyl)-5-(hydroxymethyl)-2-methylpyridin-3-ol）、及び、その薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種をいう。これらは一種単独で用いてもよいし、二種以上を任意に組み合わせて用いることもできる。
【００１８】
薬学的に許容される塩は、特に限定されないが、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、及びリン酸等の無機酸との酸付加塩；またはギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マイレン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、及びグルタミン酸等の有機酸との酸付加塩；ナトリウム、カリウム（以上、アルカリ金属塩）、マグネシウム、カルシウム（以上、アルカリ土類金属塩）、及びアルミニウム等の無機塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、及びオルニチン等の有機塩基との塩；及びアンモニウム塩等が挙げられる。好ましくは、塩酸との酸付加塩；ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、またはアルミニウム等の無機塩であり、より好ましくは、ピリドキサミン二塩酸塩である。
【００１９】
ピリドキサミン化合物は、生体内に吸収されるとキナーゼの働きによりリン酸化され、ピリドキサミン５’−リン酸（PMP）となる。さらにPMPは、オキシダーゼの働きにより、ピリドキサール５’−リン酸（PLP）となる。このPLPがピリドキサミン化合物の生体内における活性化型との説がある。さらに、PLPは、ホスファターゼの働きにより脱リン酸化されて、ピリドキサール（PL）となり、PLはさらにオキシダーゼの働きによって４−ピリドキシン酸（4−PA）に代謝される。
【００２０】
ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量は、対象とする組成物が医薬組成物であるか、または飲食組成物であるかによって異なる。
【００２１】
例えば本発明が対象とする組成物が経口医薬組成物である場合、その１日当たりの投与量はピリドキサミンに換算して300 mg/日以上である。つまり、ピリドキサミン化合物の１日当たりの最少投与量は、ピリドキサミンに換算して300、400、500、600、700、又は800 mgであり、より好ましい最少投与量はこの中から適宜設定することができる。なお、当該１日当たりの最少投与量（mg/day）を体重（1 kg）当たりの量に換算すると、体重を60 kgと仮定した場合に、5、6.7、8.3、10、又は13.3 mg/kg/日となる。またピリドキサミン化合物の１日当たりの最多投与量は、ピリドキサミンに換算して2,000、3,000、4,000、5,000、又は10,000 mgであり、より好ましい最多投与量はこの中から適宜設定することができる。これを体重（1 kg）当たりの量に換算すると、体重 を60 kgと仮定した場合に、33.3、50.0、66.7、83.3、又は166.7 mg/kg/日となる。
【００２２】
また本発明の組成物が飲食組成物である場合、ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量は、ピリドキサミンに換算して、10 mg/日以上を挙げることができる。自閉スペクトラム症改善に効果的な飲食物でのピリドキサミンの摂取量は、日常生活で摂取されるビタミンＢ６の摂取量（日本国厚労省の「日本人の食事摂取基準（2015年版）策定検討会」の報告書参照。ピリドキサミンの合計量として認識されている）である約0.5-1.4mg/日程度よりも多い量とすることが望ましいと考えられ、少なくとも 2mg/日 以上するのがよいと言える。但しピリドキサミンの摂取量が多くなるほど、改善効果が増大すると考えられることから、さらに摂取量を増やし、最低の値を10, 20, 30, 40, 50, 60, 100 mg/日とすることも効果的である。上限は必ずしも明確に定まるものではなく、例えば60, 80, 100, 150, 200, 250, 300mg/日と設定することが考えられる。これらは、例えば、効果が明確に現れる範囲でなるべく少量にとどめる観点から決めてもよいし、法令に基づく規制がある場合に当該規制の範囲で決定することもできる。
【００２３】
なおピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量を上記のように300 mg以上とすると、体内のビタミンＢ１濃度が低減し、ウェルニッケ脳症等のビタミンＢ１欠乏症といった副作用が生じやすくなる。これは、老人や小児など低体重者において特に顕著である。また低体重者でなくても、ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量が300 mg以上、400 mg以上、500 mg以上、600 mg以上、600 mg以上、700 mg以上、及び800 mg以上と多くなるにつれてビタミンＢ１欠乏症は生じやすくなる。
【００２４】
当該ピリドキサミン化合物を含む組成物の投与（摂取）の投与開始日及び投与終了日は、自閉スペクトラム症患者を含む被験体の症状の出現日及びその期間に応じて適宜設定することができる。
【００２５】
当該ピリドキサミン化合物を含む組成物の投与（摂取）は、上記投与量で１日に１回行えばよいが、症状が強い患者に対しては、上記投与量を１日に２、又は３回行ってもよい。また、当該ピリドキサミン化合物を含む組成物の投与（摂取）は、毎日又は１日おき等の隔日に行うことができるが、好ましくは毎日である。
【００２６】
当該ピリドキサミン化合物を含む組成物は、投与を繰り返すことが好ましい。また、１日当たりの投与量が300 mg以上である場合、ビタミンＢ１欠乏症を予防するため、１投与期間終了後から次の投与期間までは、休薬してもよい。
【００２７】
当該ピリドキサミン化合物を含む組成物は、ピリドキサミン化合物と適当な担体または添加剤を組み合わせて製剤の形態に調製することができる。なお、ここで製剤には、医薬用途で用いられる製剤（医薬組成物）のほか、飲食物用途で用いられる製剤（飲食組成物）が含まれる。当該製剤形態の組成物の調製に用いられる担体や添加剤としては、その剤形に応じて通常の薬剤や飲食物（例えばサプリメント）に汎用される各種のもの、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤、界面活性剤等を例示できる。
【００２８】
上記組成物が経口投与される経口医薬組成物または飲食物である場合の剤形は、特に制限されないが、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤（硬質カプセル剤及び軟質カプセル剤を含む）、液剤、丸剤、懸濁剤、及び乳剤等が例示される。また上記組成物が、非経口投与される医薬組成物である場合には、注射剤、点滴剤、坐剤、点鼻剤、及び経肺投与剤等が例示できる。本発明における組成物は、経口組成物及び非経口組成物のいずれであってもよいが、好ましくは経口組成物（経口医薬組成物、飲食組成物）である。
【００２９】
上記組成物が、錠剤、散剤、顆粒剤、丸剤、カプセル剤等の経口用固形組成物である場合の調製に際しては、担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、メチルセルロース、グリセリン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等の賦形剤；単シロップ、プドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース、セラック、メチルセルロース、エチルセルロース、水、エタノール、リン酸カリウム等の結合剤；乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤；白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤；ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、デンプン等の保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フイルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。
【００３０】
上記組成物が、丸剤の経口用固形組成物である場合の調製に際しては、担体として、例えばブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤；ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。
【００３１】
上記組成物が、カプセル剤の経口用固形組成物である場合の調製に際しては、カプセル剤は有効成分を上記で例示した各種の担体と混合し、硬質カプセル基材または軟質カプセル基材等に充填若しくは包み込んで調製される。
【００３２】
上記製剤が液剤の場合には、水性又は油性の懸濁液、溶液、シロップ、エリキシル剤であってもよく、通常の添加剤を用いて常法に従い、調製される。
【００３３】
上記組成物が注射剤の場合の調製に際しては、担体として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等の希釈剤；クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウム等のｐＨ調整剤；リン酸二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、クエン酸ナトリウム等の緩衝剤；ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸等の安定化剤；凍結乾燥した際の成形剤として例えばマンニトール、イノシトール、マルトース、シュクロース、ラクトース等の糖類を使用できる。なお、この場合等張性の溶液を調整するに十分な量のブドウ糖或いはグリセリンを製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、無痛化剤、局所麻酔剤等を添加しても良い。これらの担体を添加して、常法により皮下、筋肉内、静脈内用注射剤を製造することができる。
【００３４】
上記製剤が点滴剤の場合には、投与化合物を生理食塩水、リンゲル液等を基本とした等張電解質輸液製剤に溶解して調製することができる。
【００３５】
２．ピリドキサミン化合物及びチアミン化合物の組み合わせ組成物
本発明のピリドキサミン化合物及びチアミン化合物の組み合わせ組成物は、（１）ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物と、（２）チアミン、その誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のチアミン化合物とを組み合わせてなり、自閉スペクトラム症の症状を改善するために使用される。また一旦改善した自閉スペクトラム症患者について、再度の発症または悪化を抑制するためにも使用することができる。
【００３６】
「自閉スペクトラム症」、「ピリドキサミン化合物」、「改善」の定義は、上記１で述べたとおりである。
【００３７】
本発明において「チアミン化合物」とは、チアミン、その誘導体、及びこれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種をいう。従って、これらは一種単独で用いてもよいし、二種以上を任意に組み合わせて用いることもできる。
【００３８】
チアミン誘導体としては、ジスルフィド型、アシル型、又はこれらの混合物であってもよい。チアミン誘導体の例としては、ビスチアミン、チアミンジスルフィド、チアミンジセチル硫酸エステル塩、ベンフォチアミン、プロスルチアミン、フルスルチアミン、ビスベンチアミン、シコチアミン、オクトチアミン、アリチアミン、プロスルチアミン、チアミンテトラヒドロフルフリルジスルフィド、ジセチアミン、ビスブチアミン、ビスイブチアミン、チアミンモノホスフェートジスルフィド、チアミンピロリン酸、シコチアミン、及びチアミンエチルジスルフィド等が挙げられる。チアミン誘導体として、好ましくはオクトチアミン、プロスルチアミン、フルスルチアミン、ビスベンチアミン、ベンフォチアミン、コカルボキシラーゼ、及びチアミンジスルフィドからなる群から選択される少なくとも一種であり、より好ましくは、オクトチアミン、プロスルチアミン、及びフルスルチアミンからなる群から選択される少なくとも一種である。さらに好ましくはフルスルチアミンであるが、これに限定されるものではない。
【００３９】
チアミン及びその誘導体の薬学的に許容される塩は、特に限定されないが、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、硝酸、及びリン酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、マイレン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、及びグルタミン酸等の有機酸との酸付加塩；ナトリウム、カリウム（以上、アルカリ金属塩）、マグネシウム、カルシウム（以上、アルカリ土類金属塩）、アルミニウム等の無機塩；メチルアミン、エチルアミン、エタノールアミン、リジン、オルニチン等の有機塩基との塩；及びアンモニウム塩等が挙げられる。好ましくは、塩酸との酸付加塩；ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、及びアルミニウム等の無機塩であり、最も好ましくは、塩酸塩、及び硝酸塩などの無機酸との酸付加塩である。
【００４０】
チアミン化合物として、好ましくはオクトチアミン、プロスルチアミン、フルスルチアミン、ビスベンチアミン、ベンフォチアミン、コカルボキシラーゼ、チアミンジスルフィド、及びこれらの塩；チアミン塩化物塩酸塩；チアミン硝酸塩；並びにジセチアミン塩酸塩からなる群から選択される少なくとも一種であり、より好ましくは、オクトチアミン、プロスルチアミン、フルスルチアミン及びこれらの塩からなる群から選択される少なくとも一種であり、さらに好ましくは、フルスルチアミン又はその塩（例えば、フルスルチアミン塩酸塩）である。
【００４１】
ここで「組み合わせてなる」とは、本発明が対象とする組成物が、
（ｉ）ピリドキサミン化合物とチアミン化合物とが同一製剤中に混合された態様で含まれている状態（配合剤）である場合、
（ｉｉ）ピリドキサミン化合物単体若しくはピリドキサミン化合物を含有する製剤と、チアミン化合物単体若しくはチアミン化合物を含有する製剤とが、おのおの別個の製剤として包装されており、両者が組み合わせ物（キット）として販売される場合、
（ｉｉｉ）ピリドキサミン化合物単体若しくはピリドキサミン化合物を含有する製剤と、チアミン化合物単体若しくはチアミン化合物を含有する製剤とがおのおの個別の製剤であり、これらが組み合わせて一つの包装物として販売される場合、または
（ｉｖ）ピリドキサミン化合物単体若しくはピリドキサミン化合物を含有する製剤と、チアミン化合物単体若しくはチアミン化合物を含有する製剤とが、おのおの別個の製剤として包装されており、また両者は別個の流通経路で市場に存在し、使用時に組み合わせて使用される場合
を包含する意味で用いられる。
【００４２】
すなわち、本発明において「組み合わせてなる組成物」とは、被験体に対するピリドキサミン化合物またはピリドキサミン化合物を含有する製剤の投与（摂取）が、チアミン化合物またはチアミン化合物を含有する製剤の投与（摂取）と、異時、同時又は並行して行われる態様であればよく、販売を含む流通段階におけるピリドキサミン化合物及びチアミン化合物の形態を特に問うものではない。なお、上記態様には、被験体に対するピリドキサミン化合物またはピリドキサミン化合物を含有する製剤の投与（摂取）を、チアミン化合物またはチアミン化合物を含有する製剤の投与（摂取）よりも先に行う態様、並びに被験体に対するピリドキサミン化合物またはピリドキサミン化合物を含有する製剤の投与（摂取）を、チアミン化合物またはチアミン化合物を含有する製剤の投与（摂取）よりも後に行う態様が含まれる。
【００４３】
また、ここで「ピリドキサミン化合物を含有する製剤」とはピリドキサミン化合物に他の成分を組み合わせた製剤を意味し、また「チアミン化合物を含有する製剤」とはチアミン化合物に他の成分を組み合わせた製剤を意味し、それぞれピリドキサミン化合物単体からなる製剤、及びチアミン化合物単体からなる製剤と区別される。なお、他の成分としては、上記１で述べた組成物用の担体または添加剤を挙げることができ、製剤の調製も上記組成物と同様にして調製することができる。
【００４４】
ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量は、上記１で述べたピリドキサミン化合物を含む組成物と同様に、ピリドキサミンの量に換算して決定することができる。また、ピリドキサミン化合物の投与開始日、投与終了日、１投与期間も、上記１で述べたピリドキサミン化合物を含む組成物と同様に決定することができる。
【００４５】
ピリドキサミン化合物とチアミン化合物と併用する場合には、ピリドキサミン化合物によるビタミンＢ１欠乏症を予防することができるため、毎日服用してもよい。
【００４６】
チアミン化合物の１日当たりの投与量は、特に制限されないが、流通しているビタミン製剤に含まれるチアミン含有量を適用することができる。例えばチアミン化合物の１日当たりの最低投与量は、チアミンに換算して1、2、5、又は10 mg以上であり、より好ましい最少投与量はこの中から適宜設定することができる。最多投与量は、50、100、300又は500mgであり、より好ましい最多投与量はこの中から適宜設定することができる。
【００４７】
また、ピリドキサミン化合物の投与量100重量部に対するチアミン化合物の投与量の割合は１〜20重量部であり、当該割合の下限値として、好ましくは1、1.5、又は3重量部である。当該割合の上限値として好ましくは10、15、又は20重量部である。
【００４８】
当該チアミン化合物の投与は、ピリドキサミン化合物の投与（摂取）と同時に行ってもよいし、異時に行ってもよい。またチアミン化合物の投与時期（投与期間）をピリドキサミン化合物の投与時期（投与期間）と同一にしてもよいし、前後にずらしてもよく、投与開始日及び投与終了日は、ピリドキサミン化合物の投与期間に応じて適宜設定することができる。
【００４９】
当該チアミン化合物の投与は、上記投与量で１日に１回行えばよいが、ピリドキサミン化合物の投与量に応じて、上記投与量を１日に２、又は３回行ってもよい。また、当該チアミン化合物を含む組成物の投与は、毎日、１日おき等の隔日に行うことができるが、好ましくは毎日である。
【００５０】
ピリドキサミン化合物及びチアミン化合物は、それぞれ単体で、又は他の成分を組み合わせた製剤（ピリドキサミン化合物を含有する製剤、チアミン化合物を含有する製剤）として、経口投与、筋肉注射、皮下注射、及び／又は血管内投与等により投与することができる。好ましくは、ピリドキサミン化合物を含有する製剤及びチアミン化合物を含有する製剤の両方を経口投与することが好ましい。
【００５１】
ピリドキサミン化合物を含有する製剤及び／又はチアミン化合物を含有する製剤は、ピリドキサミン化合物及び／又はチアミン化合物と適当な製剤用の担体または添加剤を組み合わせて調製することができる。当該製剤の調製に用いられる担体や添加剤としては、上記１に記載の組成物の調製に用いられる担体や添加剤を使用することができる。また、当該製剤の調製方法も、上記１の組成物の調製方法に準じて行うことができる。
【実施例】
【００５２】
以下、本発明を参考実験例及び実験例などを用いて具体的に説明するが、本発明はこれらの例に制限されるものではない。
【００５３】
実施例１  自閉スペクトラム症患者に対するピリドキサミン化合物投与（症例１）
自閉スペクトラム症と診断された被験者（自閉スペクトラム症患者）を対象として、探索的に、ピリドキサミン化合物投与による自閉スペクトラム症の改善効果を確認した。
【００５４】
１．方法
上記自閉スペクトラム症と診断された患者（女性、年齢29歳、体重54kg）に、下記の試験薬を１ヶ月間、毎日服用してもらい、服用前（投与開始前）と服用１ヶ月後（投与開始１ヶ月後）のそれぞれにおいて、下記の診断方法を用いて自閉スペクトラム症の症状を評価した。
［試験薬］
ピリドキサミン・二塩酸塩：毎日朝晩食後２回服用  300mg/回
ビタミンＢ１（フルスルチアミン）：  毎日朝食後ピリドキサミン服用時に１回服用  25mg/回。
［診断方法］
被験者の症状は、自閉スペクトラム症について専門的知識を有する同居の家族が評価者となって、被験者の行動を「異常行動チェックリスト(Aberrant Behavior Checklist Community)日本語版（ABC-J）」（1994  Slosson Educational Publications, Inc.）（日本語版は2006年にじほう社から出版）を用いて評価した。なお、ABC-Jは、アメリカの心理学者 Aman M.G. と Singh N. N が開発した知的障害・発達障害に関連する行動障害を定量的に評価するための評価尺度である。ABC-Jでは、評価者が図１に記載する５８項目について「０＝問題なし」、「１＝問題行動の程度は軽い」、「２＝問題行動の程度は中等度」、及び「３＝問題の程度は著しい」の４段階評価するものである。これらの５８項目は「Ｉ.興奮性」、「II.無気力」、「III.常同行動」、「IV.多動」、及び「Ｖ.不適切な言語」の５つのサブスケールＩ〜Ｖに分類されており、各サブスケール毎に評価することが可能である（厚生労働省  平成24年障害者総合福祉推進事業「発達障害児者支援とアセスメントに関するガイドライン」、特定非営利活動法人  アスペ・エルデの会  平成25年3月）。
【００５５】
それぞれのサブスケールには下記のような問題行動が含まれている。
(a)サブスケールＩ（興奮性）15項目：2,4,8,10,14,19,25,29,34,36,41,47,50,52,57
他者への暴力や暴言、物の破壊、自傷行為など、さまざまな形の攻撃性や、激しい感情の起伏（焦燥）に関連する問題行動が含まれる。泣き叫んだり、かんしゃくを起こすなど、いわゆる「パニック」と呼ばれる状態に関連する項目は、このサブスケールに含まれる。
(b)サブスケールII（無気力）16項目：3,5,12,16,20,23,26,30,32,37,40,42,43,53,55,58
サブスケールＩとは対照的に、不活発、活動性や反応性の乏しさ、孤立や対人的な関わりを避ける（ひきこもり）傾向が含まれる。
(c)サブスケールIII（常同行動）7項目：6,11,17,27,35,45,49
比較的重度の知的障害・発達障害の人たちにしばしば見られるような、頭、手足、体全体などを、無目的に繰り返し動かし続ける行動が含まれる。
(d)サブスケールIV（多動）16項目：1,7,13,15,18,21,24,28,31,38,39,44,48,51,54, 56
サブスケールＩと類似した外在性問題行動であるが、人や物への攻撃性ではなく、活動性の過剰や集中の困難、指導に従わない不服従などの問題が含まれる。
(e)サブスケールＶ（不適切な言語）4項目：9, 22, 33, 46 
多弁、大声で話す、同じことやひとつの単語・文節を繰り返し言うなど、場にそぐわない不適切な発語・発声や反復的なことばの問題についての項目が含まれる。
【００５６】
ABC-Jの58項目（サブスケールを含む）とDSM-5による自閉スペクトラム症の診断基準との関係を示した表を図２に示す。DSM-5の診断基準に関係するABC-Jの項目には○（項目番号を下線太字で示す）を、DSM-5の診断基準に参考になるABC-Jの項目には△（項目番号を斜字で示す）を記載する。DSM-5の診断基準に注目した場合には、DSM-5と関係が強いABC-Jの項目に特に注目して評価を行えば良い。
【００５７】
２．結果
被験者の服用前と服用１ヶ月後のABC-Jスコアを各サブスケール毎に纏めた結果を、表２及び図３を示す。
【表２】
2017155007.tif 000003
【００５８】
上記表２及び図３に示すように、投与前と比較して、５つのサブスケールＩ〜Ｖ（興奮性、無気力、常同行動、多動、及び不適切な言語）の全てに亘り、有意な症状改善が認められた。特にDSM-5の診断基準と関連性が高い自閉スペクトラム症に特徴的な症状であるサブスケールIII（常同行動）の項目６、１１、１７、２７、３５、４５及び４９の症状、並びにサブスケールII（無気力）の項目３０、３７及び４３の症状については改善が顕著であった。
【００５９】
実施例２  自閉スペクトラム症患者におけるピリドキサミン化合物投与の効果（症例２）
実施例１とは異なる自閉スペクトラム症患者を対象として、探索的に、ピリドキサミン化合物投与による自閉スペクトラム症の改善効果を確認した。
【００６０】
１．方法
自閉スペクトラム症と診断された患者（男性、年齢27歳、体重76kg）に、下記の試験薬を17日間、毎日服用してもらい、服用前（投与開始前）と服用17日後（投与開始17日後）のそれぞれにおいて、下記の診断方法を用いて自閉スペクトラム症の症状を評価した。
［試験薬］
ピリドキサミン・二塩酸塩：毎日朝晩食後２回服用  300mg/回
ビタミンＢ１（フルスルチアミン）：  毎日朝食後ピリドキサミン服用時に１回服用  25mg/回。
［診断方法］
被験者の症状は、服用前と服用17日後に同一の専門医師が、ABC-Jの診断基準（実施例１参照）、およびPARS-TRに従う診断基準に基づいて判断した。
なお、PARSは、広汎性発達障害（Pervasive Developmental Disorder :PDD）の判定と支援に関係する困難度を母親（母親から情報を得がたい場合は他の主養育者）に面接し評定する57項目の尺度であり（広汎性発達障害日本自閉症協会評定尺度：Pervasive Developmental Disorder Autism Society Japan Rating Scale:PARS）、PARS-TRはそのテキスト改訂版である。テキスト改訂とは、評定尺度の信頼性と妥当性は従来のPARSを維持しながら、質問項目の解説部分の文言などを改訂したものである。ちなみにPARS-TRの質問項目と評定、並びに各年齢帯で評定するPARS-TR項目および得点計算法と自閉スペクトラム症（ASD）特性の判定手法については、「PARS-TR  テキスト改訂版」（一般社団法人  発達障害支援のための評価研究会編著、スペクトラム出版社）に詳細に説明されており、当該記載は本明細書に援用することができる。また、図２に、ABC-Jの58項目 とPARS-TRの57項目との関係（両者でほぼ同様の内容を尋ねている項目）、及び各項目と自閉スペクトラム症との関係（○、△）、及びそれをADI-Rのアルゴリズム毎に分類した表を示す。例えば、ABC-Jの58項目について、DSM-5の診断基準に着目した場合には、DSM-5との関連が深い項目を選択して評価することも可能であるし、PARS-TRの観点に着目した場合にはPARS-TRとの関係が深い項目を選択して評価することも可能である。同様に、PARS-TRについて、DSM-5の診断基準に着目した評価や、ABC-Jの観点に着目した評価を行うこともできる。
【００６１】
本試験では成人を対象としていることから、PARS-TRの質問項目としては項目25〜57について、服用前と服用17日後に評定を行い、そのスコアの合計を比較した。
【００６２】
２．結果
被験者の服用前と服用17日後のABC-Jスコアを各サブスケール毎に纏めたものを表３および図４に示す。また、PARS-TRの項目25〜57について、服用前と服用17日後の各スコアの合計を比較したものを表４に示す。
【表３】
2017155007.tif 000004
【表４】
2017155007.tif 000005
【００６３】
上記表３及び図４に示すように、試験薬の投与によって、投与前と比較して、５つのサブスケールＩ〜Ｖ（興奮性、無気力、常同行動、多動、及び不適切な言語）の全てに亘り、有意な症状改善が認められた。DSM-5の診断基準と関連性が高い自閉スペクトラム症に特徴的な症状であるサブスケールIII「常同行動」とＶ「不適切な言語」においても改善が見られている。
また表４に示すPARS-TRの結果から、試験薬の投与によって、投与前と比較して項目25〜57のスコアの合計が有意に減少し、自閉スペクトラム症の改善が確認された。
実験例１  グリオキサールによるセロトニン又はドーパミンの捕捉実験
被験化合物（ピリドキサミン又はピリドキサール）によって、カルボニル化合物（グリオキサール）による脳内アミン（セロトニン又はドーパミン）の捕捉が阻害されるか否かを確認するため、以下の実験を行った。
【００６４】
１．方法
表５に示すように、セロトニン（5-HT：セロトニン・塩酸塩［シグマアルドリッチジャパン］）又はドーパミン（DP：ドーパミン・塩酸塩［和光純薬工業株式会社］）１モルに対して、グリオキサール（GO：40％グリオキサール溶液［和光純薬工業株式会社］）及び／又は被験化合物（ピリドキサミン（PM）又はピリドキサール（PL））をそれぞれ10モルとなるように混合した反応液を調製し、常温で反応液をインキュベーションした後、グリオキサールに捕捉されていない反応液中のフリーのセロトニン又はドーパミンの量をHPLCで測定した。
陰性対照は、5-HT又はDPのみの（GO及び被験化合物の両方を添加しない）ものとし、陽性対照は、5-HT又はDPにGOのみを添加したものとした。5-HTを用いた実験のインキュベーション時間は2時間、DPを用いた実験のインキュベーション時間は30分とした。インキュベーション後の反応液は、0.25 M リン酸緩衝液で10倍希釈して、HPLC解析に供した。HPLC解析には、株式会社島津製作所製のsystem controller:SCL-10A vp、Auto injector:SIL-10A、degasser:DGU-12A、Liquid Chromatograph: LC-10AD vp、UV-Vis detector: SPD-10A vp、column oven: CTO-10AC vpを用い、表４に示す条件で行った。データの解析は、CHROMATOPAC C-R7A plusを使用して行った。
【００６５】
【表５】
2017155007.tif 000006
【００６６】
【表６】
2017155007.tif 000007
【００６７】
２．結果
実験結果を図５に示す。脳内アミン量は、陰性対照を100％とした場合の相対値で表した。セロトニン又はドーパミンにグリオキサールを添加した陽性対照では、フリーのセロトニンは陰性対照の約40％、フリーのドーパミンは陰性対照の約30％しか検出されなかった。このことから、脳内アミンがカルボニル化合物に捕捉されたと考えられた。ピリドキサミン存在下では、グリオキサールが存在していてもフリーのセロトニン量又はフリーのドーパミン量は陰性対照の約70％まで回復した。このことからピリドキサミンはカルボニル化合物による脳内アミンの捕捉を有意に抑制することが明らかとなった。一方、ピリドキサールを添加した場合には、むしろフリーセロトニン又はフリーのドーパミンの量が減少し、ドーパミンに至っては、ピリドキサールが存在することによりフリーのドーパミンが全く検出されなくなった。
【００６８】
以上のことから、ピリドキサールは、チアミンなどの生体に重要な化合物を枯渇させ、神経障害を招く必要があるので、大量投与は好ましくないと考えられる。
【００６９】
参考実験例１  ピリドキサミン化合物投与中に生じるビタミンＢ１欠乏症に対する処置
図６は、ピリドキサミン化合物（ピリドキサミン二塩酸塩）投与（以下、単に「投薬」と称する）中にビタミンＢ１欠乏症（ウェルニッケ脳症）を発症した被験者２名（ID：No. 3（年齢61歳、体重43kg）及びNo. 6（年齢62歳、体重44kg）（いずれも統合性失調症患者）について、投薬プロトコール、及び投薬プロトコールを通じた全血中ビタミンB1（VB1）量、血清中ピリドキサミン（PM）濃度、血清中ピリドキサール（PL）濃度、及び血清中ピリドキシン（PN）濃度の推移を示したものである。
【００７０】
なお、全血中（ヘパリン採血）のビタミンB1量、血清中のピリドキサミン濃度、ピリドキサール濃度、及びピリドキシン濃度の測定は、いずれも外部委託（株式会社エスアールエル、三菱化学メディエンス株式会社（現在の株式会社LSIメディエンス））により、LC/MS/MSで測定した。
【００７１】
ピリドキサミン化合物として、ピリドキサミン二塩酸塩を、図６のプロトコールにしたがって（図６中「PM投与量（mg/1回）」として記載）、被験者に１回当たり400 mg又は600 mgの投与量で１日３回（朝、昼及び就寝前）、毎日経口的に服用してもらった（１日当たりのピリドキサミンの投与量：約830 mg又は1250mg）。
【００７２】
ID No. 3の被験者は、投薬開始から６週間目にてんかん様症状が出現したため脳のMRI検査を行ったところ、ウェルニッケ脳症を疑う所見が得られた。その際の被験者の全血中のビタミンＢ１量は28 ng/mLであり、基準値（24-66 ng/mL）の下限値付近の値を示した。このことから、投薬中にビタミンＢ１の欠乏症をきたした可能性が疑われた。投薬開始から４週間目の当該被験者の血清中ピリドキサミン濃度は1543 ng/mLであり、投薬開始時と比較して、約7700倍の濃度に上昇していた。また、血清中ピリドキサール濃度は2357 ng/mLであり、投薬開始時と比較して、約380倍の濃度に上昇していた。ウェルニッケ脳症が疑われてから、直ちにチアミン化合物（フルスルチアミン（武田薬品））の経口投与を75 mg/dayで開始し（１日１回投与）、毎日継続した。その結果、投薬開始から12週目（チアミン化合物の投与開始から６週目）で、全血中ビタミンＢ１量は、135 ng/mLまで増加していた。また、ピリドキサミン化合物を毎日継続して投与しているにもかかわらず、この時の血清中ピリドキサミン濃度は23.2 ng/mL、血清中ピリドキサール濃度は1179 ng/mLであり、いずれも投薬開始４週目よりも、血清中濃度が低下していた。そして、投薬開始から14週目（チアミン化合物の投与開始から８週目）に、ウェルニッケ脳症の症状は消失した。
【００７３】
ID No. 6の被験者は、投薬開始から９週間目に脳のMRI検査を行ったところ、ウェルニッケ脳症を疑う所見が得られた。その際の被験者の全血中のビタミンＢ１量は25 ng/mLであった。投薬開始から８週間目の当該被験者の血清中ピリドキサミン濃度は421 ng/mLであり、投薬開始時と比較して約2100倍の濃度に上昇していた。また、血清中ピリドキサール濃度は2968 ng/mLであり、投薬開始時と比較して約850倍の濃度に上昇していた。ウェルニッケ脳症が疑われてから、直ちにチアミン化合物（フルスルチアミン（武田薬品））の静脈投与（300 mg/day）を行い、その後（投薬開始から10週間目）からは100〜50 mg/dayの割合でチアミン化合物の経口投与を継続した。その結果、投薬開始から11週目（チアミン化合物の投与開始から３週目）で、全血中ビタミンＢ１量は150 ng/mLまで増加し、ウェルニッケ脳症の症状も消失した。この時の血清中ピリドキサミン濃度は、140 ng/mL、血清中ピリドキサール濃度は、3941 ng/mLであった。
【００７４】
これらの症例から、ピリドキサミン化合物の高用量投与によってビタミンＢ１欠乏症が惹起される可能性が示唆された。
【００７５】
参考実験例２  ピリドキサミン化合物の血中動態
上記参考実験例１に記載するように、ピリドキサミン化合物を投与すると、血中ピリドキサミン濃度だけでなく、血中ピリドキサール濃度も上昇する。むしろ血中では、ピリドキサミン濃度よりもピリドキサール濃度が優位となった。そこで、ピリドキサミン化合物投与後のピリドキサミン（未変化体）、及びその代謝物（ピリドキサール（PL）、ピリドキシン（PN）、及び４−ピリドキシン酸（4-PA））の血漿中の濃度変化を経時的に観察した結果を示す。なお、これは本出願人の協力者が行った臨床試験の結果を参考までに示しめしたものである。
【００７６】
具体的には、被験者（健康成人男性）１８名をピリドキサミンの投与量（300mg/回、600mg/回、900mg/回）に応じて下記の３群に分け、これらを対象として、ピリドキサミン・二塩酸塩を経口投与した（1日三回投与：0時間目、6時間目、12時間目）。
１群：ピリドキサミン300mg/回投与（平均年齢：25.0歳、平均身長：172.55cm、平均体重59.92kg、平均BMI：20.12）
２群：ピリドキサミン600mg/回投与（平均年齢：25.5歳、平均身長：172.30cm、平均体重61.97kg、平均BMI：20.80）
３群：ピリドキサミン900mg/回投与（平均年齢：23.8歳、平均身長：171.55cm、平均体重59.65kg、平均BMI：20.23）
【００７７】
各群について、経口投与後一定時間おきに採血をして血漿を採取し、血漿中のピリドキサミン、ピリドキサール（PL）、ピリドキシン（PN）、及び４−ピリドキシン酸（4-PA）濃度をLC-MS-MS法にて測定した。
【００７８】
その結果を図７Ａ（ピリドキサミン）、Ｂ（ピリドキサール）、Ｃ（ピリドキシン）、及びＤ（４−ピリドキシン酸）に示す。図７Ａに示すように、ピリドキサミン（未変化体）の血漿中濃度は、ピリドキサミン・二塩酸塩服用後３時間でピークに達し、その後減少した。ピリドキサミン投与後４〜６時間では、ピリドキサミンのピークと入れ替わるように、ピリドキサール（PL）と４−ピリドキシン酸（4-PA）の濃度がピークに達した。また、ピリドキサミン、ピリドキサール及び４−ピリドキシン酸の血漿中濃度は、ピリドキサミン・二塩酸塩服用量の増加に伴って増加した。一方、ピリドキシン（PN:◆）に大きな変化は認められなかった。このことから、体内に吸収されたピリドキサミンのほとんどがピリドキサール、及び４−ピリドキシン酸に変換されていることが明らかとなった。
【００７９】
参考実験例３  ピリドキサミン、ピリドキサールが全血中ビタミンB1濃度に及ぼす影響
上記参考実験例１において、ピリドキサミン化合物投与がビタミンB1の欠乏症を惹起する可能性が示唆されたため、ピリドキサミン化合物が全血中ビタミンB1濃度を減少させるかどうかを、in vitro試験にて検討した。また、上記参考実験例１及び参考実験例２で述べたように、ピリドキサミン化合物を投与すると血清中のピリドキサミンだけでなく、血清中のピリドキサール濃度も上昇するため、ピリドキサミン及びピリドキサールの両方を被験物質として検討した。
【００８０】
１．方法
抗凝固剤としてEDTA・2Kを用いて、ヒトから採血した。また、ピリドキサミンとしてピリドキサミン二塩酸塩（シグマアルドレッチジャパン）、ピリドキサールとしてピリドキサール塩酸塩（ナカライテスク株式会社）を用い、それぞれ0.5、5、50 mg/mLになるように生理食塩水に溶解して、これを被験溶液とした。上記で採血した全血1 mLに対して、被験溶液を各10μLずつ添加した（被験試料）。被験試料中の各被験物質の終濃度はそれぞれ5、50、500μg/mLとなる。また、vehicleとして、全血1 mlに生理食塩水を10μl添加したものを調製した。vehicle、及び被験試料を37℃で１時間、又は16時間インキュベーションし、その後直ちに凍結した。生理食塩水及び被験溶液のいずれも未添加のインキュベーション開始前の全血（ベースライン：図８中、‘BL’で表す。）、並びにインキュベーション後のvehicle、及び被験試料中のビタミンB1濃度の測定は、株式会社エスアールエルに依頼し、LC/MS/MSにて測定した。
【００８１】
２．結果
測定結果を、図８に示す。図８Ａ及びＢはそれぞれインキュベーション１時間後及び16時間後の結果を示す。また図８Ａ及びＢの上段は全血中ビタミンＢ１濃度であり、下段は、ベースラインの全血のビタミンB1濃度と、インキュベーション後のビタミンＢ１濃度との差を表したものである。
【００８２】
インキュベーション１時間後では、ピリドキサミン二塩酸塩を添加した全血において、ビタミンＢ１濃度に変化は認められなかった。一方、ピリドキサール塩酸塩を添加した全血では、ピリドキサール塩酸塩の濃度依存的に、ビタミンB1濃度の減少が認められた（図８Ａ）。
【００８３】
インキュベーション16時間後では、ピリドキサミン二塩酸塩を添加した全血でベースラインと比較してビタミンＢ１濃度の低下は認められたものの、この減少量はvehicleと同程度であり、ピリドキサミン添加に依存するものではないと考えられた。一方、一方ピリドキサール塩酸塩を添加した全血では、ピリドキサール塩酸塩の濃度依存的に、ビタミンＢ１濃度の減少が認められた（図８Ｂ）。
【００８４】
これらの結果から、ピリドキサミンには、直接全血中のビタミンＢ１量を低下させる作用はないが、ピリドキサールには、全血中のビタミンＢ１量を低下させる作用があることが明らかとなった。
【００８５】
また、上記参考実験例１及び２で示したように、ピリドキサミンは生体内に吸収されると速やかにピリドキサールに代謝されることから、ピリドキサミン化合物投与により増加した代謝産物のピリドキサールが、生体内のビタミンＢ１濃度を低下させ、結果的にビタミンＢ１欠乏症の症状が生じることが予測された。
【００８６】
参考実験例４  ピリドキサミン化合物とチアミン化合物の併用投与によるビタミンB1欠乏症の予防
上記参考実験例の結果から、ピリドキサミン化合物を投与する場合、ビタミンＢ１欠乏症を予防する必要があると考えられた。
【００８７】
ピリドキサミン化合物とチアミン化合物の併用投与の効果を確認するため、ピリドキサミン化合物投与を行う被験者７名（平均年齢44.3歳、平均体重55.4kg）に対して、チアミン化合物投与を並行して行った。具体的には、ピリドキサミン化合物としてピリドキサミン・二塩酸塩を用い、これを被験者７名に１日あたり1200〜1800mgの量を（400〜600 mgを1日３回投与）、24週間継続して毎日経口投与した。なお、ピリドキサミン・二塩酸塩の投与量400〜600 mg/dayを、ピリドキサミンの投与量に換算すると、277〜415 mg/dayとなる。チアミン化合物投与は、チアミン化合物としてフルスルチアミンを用いて75 mg/dayの割合でピリドキサミン化合物投与開始から2〜21週目から開始し、その後ピリドキサミン化合物の投与終了まで毎日継続して経口投与した。
【００８８】
その結果、被験者７名とも、ピリドキサミン化合物投与終了時までビタミンＢ１欠乏症を疑う所見は認められなかった。このことから、高用量のピリドキサミン化合物を投与する際には、チアミン化合物の投与を併用することが好ましいと考えられる。 
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【手続補正書】
【提出日】平成28年12月14日(2016.12.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物を有効成分とする、自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【請求項２】
上記自閉スペクトラム症の症状が、「持続する相互的な社会的コミュニケーションおよび対人的相互反応の障害」、または「限定された相互的な反復的な行動、興味または活動の様式に関する症状」である、請求項１記載の自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【請求項３】
ピリドキサミン化合物の１日当たりの投与量（または摂取量）がピリドキサミンの量に換算して飲食組成物の場合は１０ｍｇ以上、経口医薬組成物の場合は３００ｍｇ以上であるである、請求項１または２に記載の自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【請求項４】
チアミン、その誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のチアミン化合物と組み合わせて、自閉スペクトラム症と診断された被験者に投与される請求項1〜３のいずれか一項に記載する自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【請求項５】
（１）ピリドキサミン及びその薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のピリドキサミン化合物と、
（２）チアミン、その誘導体、及びそれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される少なくとも一種のチアミン化合物
とを組み合わせてなる、請求項１〜４のいずれか一項に記載の自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【請求項６】
チアミン化合物１日当たりの投与量（または摂取量）がチアミンの量に換算して１〜５００ｍｇである、請求項５に記載の自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【請求項７】
経口医薬組成物または飲食組成物である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の自閉スペクトラム症の症状改善用組成物。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
その結果を図７Ａ（ピリドキサミン）、Ｂ（ピリドキサール）、Ｃ（４−ピリドキシン酸）、及びＤ（ピリドキシン）に示す。図７Ａに示すように、ピリドキサミン（未変化体）の血漿中濃度は、ピリドキサミン・二塩酸塩服用後３時間でピークに達し、その後減少した。ピリドキサミン投与後４〜６時間では、ピリドキサミンのピークと入れ替わるように、ピリドキサール（PL）と４−ピリドキシン酸（4-PA）の濃度がピークに達した。また、ピリドキサミン、ピリドキサール及び４−ピリドキシン酸の血漿中濃度は、ピリドキサミン・二塩酸塩服用量の増加に伴って増加した。一方、ピリドキシン（PN）に大きな変化は認められなかった。このことから、体内に吸収されたピリドキサミンのほとんどがピリドキサール、及び４−ピリドキシン酸に変換されていることが明らかとなった。