(57)【要約】【課題】サンドイッチ法による免疫学的測定に用いられる固相への非特異吸着を大幅に抑制することができる、サンドイッチ法による被検抗体の新規な免疫学的測定方法を提供すること。【解決手段】検体中の被検抗体の免疫学的測定方法は、検体中の被検抗体と抗原抗体反応する抗原を固定化した固相と、被検抗体と抗原抗体反応する標識抗体とを用いたサンドイッチ法により、検体中の被検抗体を免疫学的に測定する方法である。固相が多糖類によって被覆されており、かつ、反応溶液中に遊離の多糖類が共存する状態で免疫学的測定を行う。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体中の被検抗体と抗原抗体反応する抗原を固定化した固相と、前記被検抗体と抗原抗体反応する標識抗体とを用いたサンドイッチ法により、検体中の被検抗体を免疫学的に測定する方法であって、前記固相が多糖類によって被覆されており、かつ、反応溶液中に遊離の多糖類が共存する状態で免疫学的測定を行う、検体中の被検抗体の免疫学的測定方法。
【請求項２】
前記抗原は前記多糖類上に固定化されている、請求項１記載の方法。
【請求項３】
固相を被覆する前記多糖類及び前記遊離の多糖類がデキストランである請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
固定化された前記多糖類が、共有結合のための官能基を持つ多糖類又は持たない多糖類である請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
結合のための官能基を持つ前記多糖類が、アミノ多糖類である請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記アミノ多糖類がアミノデキストランである請求項５記載の方法。
【請求項７】
前記固相が粒子である請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記粒子が磁性粒子である請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記遊離の多糖類が、固相に固定化された、結合のための官能基を持つ前記多糖類と同じ官能基を持つ多糖類である請求項４〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
酵素免疫学的測定である請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記検体が、血清、血漿若しくは全血又はこれらの希釈物である請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血清等の検体中の被検抗体の免疫学的測定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、ウイルスや細菌等による感染症の診断等のために、血液中に存在する、これらの病原体に対する抗体の検出を免疫学的測定により行うことが広く行われている。代表的な免疫学的測定の１つにサンドイッチ法があり、検体中の被検抗体を検出するサンドイッチ法では、標識抗体として、標識抗ヒトＩｇＧ抗体や標識抗ヒトＩｇＭ抗体が用いられている。
【０００３】
しかしながら、これらの抗ヒトイムノグロブリン抗体を標識抗体として用いると、非特異吸着による高いバックグランドが生じるという問題がある。従来より、免疫学的測定に用いられる固相に対する非特異吸着を防止するために、ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）やゼラチン等のブロッキング剤で固相を被覆することが広く行われており、様々なブロッキング剤が市販されている。サンドイッチ法による抗体検出のための免疫学的測定では、このようなブロッキング剤で固相を被覆することにより、ある程度は非特異吸着の防止によりバックグラウンドを低減することが可能となったが、更なるバックグランドの低減が求められていた。
【０００４】
固相を用いる免疫学的測定における固相への非特異吸着を抑制するために様々な提案がなされている。特許文献１では、凝集法において、非特異吸着抑制の目的で、デキストラン硫酸等のポリアニオンの存在下で抗原抗体反応を行うことが開示されている。特許文献２では、磁性粒子をゼラチン−アミノデキストランで被覆することが開示されており、ゼラチン被覆粒子と比較して、ゼラチンとアミノデキストランで粒子を被覆することにより非特異吸着がさらに抑制できることが記載されている。特許文献３には、従来技術として、デキストラン架橋抗AFP抗体結合粒子を用いたAFPの免疫学的測定法が記載されている。特許文献３記載の方法では、反応後、デキストラナーゼでデキストランを切断し、切断後の上清と粒子を測定している。特許文献４には、免疫学的測定用の多糖コーティング粒子とその製造方法が記載されている。特許文献５には、デキストラン硫酸から成る間接凝集免疫測定用の非特異反応吸収剤が開示されている。特許文献５には、デキストラン中の水酸基の少なくとも６０％が硫酸エステル基で置換されているデキストラン硫酸が非特異反応抑制に有効であることが記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開昭57-182169号公報
【特許文献２】特開2004-3991号公報
【特許文献３】特開平10-197535号公報
【特許文献４】特表平4-501313号公報
【特許文献５】特開平9-89893号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
上記のとおり、免疫学的測定における非特異吸着を抑制する方法は種々提案されているが、その非特異吸着抑制効果は必ずしも満足できない。
【０００７】
したがって、本発明の目的は、サンドイッチ法による免疫学的測定に用いられる固相への非特異吸着を大幅に抑制することができる、サンドイッチ法による被検抗体の新規な免疫学的測定方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本願発明者らは、固相への非特異吸着を抑制すべく種々検討の結果、固相をデキストラン等の多糖類で被覆しても効果はなく、むしろ、逆に非特異吸着が増大することを見出した。しかしながら、さらに鋭意検討の結果、固相をデキストラン等の多糖類で被覆すると共に、反応液中にデキストラン等の多糖類を共存させることにより、固相への非特異吸着を大幅に抑制できることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、検体中の被検抗体と抗原抗体反応する抗原を固定化した固相と、前記被検抗体と抗原抗体反応する標識抗体とを用いたサンドイッチ法により、検体中の被検抗体を免疫学的に測定する方法であって、前記固相が多糖類によって被覆されており、かつ、反応溶液中に遊離の多糖類が共存する状態で免疫学的測定を行う、検体中の被検抗体の免疫学的測定方法を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、サンドイッチ法による免疫学的測定に用いられる固相への非特異吸着を、従来のブロッキング剤と比較して大幅に抑制することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】下記実施例１において、アミノデキストランで被覆した又は被覆していない磁性粒子に対する、遊離のデキストラン若しくはアミノデキストランの共存下又は非共存下での非特異吸着（シグナルカウント）を比較した結果を示す図である。
【図２（１）】下記実施例２で測定した、アミノデキストランで被覆した又は被覆していない磁性粒子と、遊離のデキストランの共存下又は非共存下で特異的に結合した抗ｇｐ４１抗体の量（シグナルカウント）を示す図である。
【図２（２）】下記実施例２で測定した、アミノデキストランで被覆した又は被覆していない磁性粒子と、遊離のデキストランの共存下又は非共存下で特異的に結合した抗ｇｐ４１抗体の量のＳ／Ｎ比を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
上記の通り、本発明の免疫学的測定方法は、固相を用いるサンドイッチ法による免疫学的測定方法であり、サンドイッチ法自体は周知である。用いられる固相自体も従来からサンドイッチ法に用いられている周知の固相を用いることができ、ポリスチレンビーズやラテックスビーズのようなビーズ（粒子）、ポリスチレン製等のマイクロタイタープレートのウェル等を挙げることができる。これらのうち、磁性材料を含む磁性ビーズは、磁力によりビーズの収集を迅速、容易に行うことができるので好ましい。また、後述のようにデキストラン等の多糖類は、共有結合により固相に固定化することが好ましいので、共有結合に供される官能基を持つ固相を用いると便利である。このような官能基としては、カルボキシル基やアミノ基を挙げることができる。表面にこのような官能基を有する固相も市販されているので、市販品を好ましく用いることができる。例えば、下記実施例で用いた、表面にカルボキシル基を持つ磁気ビーズであるLife Technologies社のDynabeads（登録商標）等を例示することができる。
【００１３】
本発明は、免疫学的測定方法に用いられる固相が、デキストラン等の多糖類で被覆されていることを１つの重要な特徴とする。多糖類としては、例えば、デキストラン、グリコーゲン、アミロース、アミロペクチン、アガロース、セルロース、デキストリン、グルカン、イヌリン、マンナン、キチン、カラギーナン、およびヒアルロン酸などを用いることができる。本発明に用いられる好ましい多糖類は、デキストランである。
【００１４】
多糖類の分子量（重量平均分子量）は、特に限定されないが、通常、１ｋＤａ〜２，０００ｋＤａ、好ましくは、３ｋＤａ〜３００ｋＤａ程度である。各種分子量の多糖類が市販されているので、所望の分子量の市販品を好ましく用いることができる。また、多糖類は、共有結合のための官能基を有していてもよい。このような官能基の好ましい例として、アミノ基やカルボキシル基を挙げることができ、特にアミノ基が好ましい。例えば、デキストラン中の水酸基の一部がアミノ基になっているアミノデキストランをデキストランとして好ましく用いることができる。このように、本発明で言う、「デキストラン」には、アミノ基のような、共有結合のための官能基を持つものも包含する意味で用いている。なお、デキストラン硫酸は、硫酸基が共有結合のための官能基ではないので、本発明でいう「デキストラン」ではない。アミノデキストランは、市販されているので、市販品を好ましく用いることができる。
【００１５】
多糖類による被覆量は、特に限定されないが、通常、固相1cm2当りに接触させる多糖類の量は、１μｇ〜４００μｇ、好ましくは、３μｇ〜２５０μｇ程度である。
【００１６】
多糖類は、物理吸着により固相に固定化してもよいが、多糖類が固相から離脱しないことを確保するために、共有結合により固定化することが好ましい。多糖類を共有結合で固相に結合させる方法自体は周知であり、例えば、固相として、カルボキシル基のような官能基を持つものを用い、例えば、デキストランとしてアミノデキストランのような、共有結合のための官能基を持つものを用いることにより容易に行うことができる。下記実施例では、表面にカルボキシル基を持つ市販の磁気ビーズを固相として用い、デキストランして市販のアミノデキストランを用い、周知の縮合剤であるカルボジイミドを用いることにより、磁気ビーズ上のカルボキシル基とアミノデキストランのアミノ基をアミド結合させている。なお、デキストラン等の多糖類を固相に共有結合させる際の反応液にBSA、ゼラチン、カゼイン等の周知のブロッキング剤を含ませることにより、さらに非特異吸着を低減してもよい。この場合、通常、過剰量のブロッキング剤を用いる。
【００１７】
本発明の免疫学的測定方法に用いられる固相には、被検抗体と抗原抗体反応する抗原が固定化されている。抗原は、被検抗体と抗原抗体反応するものであればよく、被検抗体を誘導した抗原の一部分であってもよい。この抗原は、固相上に直接固定化されてもよいが、固相を被覆する多糖類上に固定化されていることが好ましい。
抗原を多糖類に固定化する場合、抗原は、物理吸着により多糖類に固定化してもよいが、多糖類からの離脱しないことを確保するために、共有結合により多糖類に結合することが好ましい。抗原を共有結合により多糖類に固定化する方法自体は周知であり、例えば、タンパク質から成る抗原を還元してチオール化し（タンパク質中のS-S結合を切断してチオール基（スルフヒドリル基(-SH基)に変換する）、マレイミド等のリンカーを用いて共有結合させることができる（下記実施例参照）。あるいは、抗原中のカルボキシル基を、カルボジイミド等の縮合剤の存在下、アミノデキストランのアミノ基と結合することも可能である。抗原の被覆量は、検体中の被検抗体の予想濃度等に応じて適宜選択することができ、通常、固相1cm2当り０．００３μｇ〜１０μｇ、好ましくは０．０３μｇ〜８μｇ程度である。
【００１８】
抗原を固相上に直接固定化する場合、抗原を共有結合により固定化する方法自体は周知であり、例えば、固相として、カルボキシル基のような官能基を持つものを用い、抗原中のアミノ基等を利用して共有結合させることができる。抗原の被覆量は、検体中の被検抗体の予想濃度等に応じて適宜選択することができ、通常、固相1cm2当り０．００３μｇ〜１０μｇ、好ましくは０．０３μｇ〜８μｇ程度である。抗原を固相上に直接固定化する場合、多糖類を固相上に固定化した後に抗原を固定化してもよいし、抗原を固相上に固定化した後に多糖類を固定化してもよい。
【００１９】
本発明のもう１つの重要な特徴は、抗原抗体反応を、遊離の多糖類の共存下で行うことである。ここで、利用可能な多糖類及び好ましい多糖類は、上記した、固相の被覆に用いられる多糖類と同様であり、アミノデキストランのような、共有結合のための官能基を持つものも好ましく用いることができる（もちろん、反応液中の多糖類は共有結合されるものではないが）。固相の被覆に用いた多糖類と同一の多糖類を反応液中に共存させることが好ましいが、異なる多糖類を共存させてもよい。反応液中の多糖類の濃度は、特に限定されないが、通常０．０３質量％〜８質量％程度、好ましくは、０．１質量％〜１．０質量％程度である。また、サンドイッチ法における抗原抗体反応を、固相化抗原と被検抗体との抗原抗体反応と、被検抗体と標識抗体との抗原抗体反応との別個の計２段階で行う場合、２段階の抗原抗体反応のいずれにおいても遊離の多糖類の共存下で行ってもよいが、固相化抗原と被検抗体との抗原抗体反応を遊離の多糖類の存在下で行えば、十分な非特異吸着抑制効果を得ることができる。
【００２０】
本発明の免疫学的測定は、上記した固相の多糖類による被覆及び遊離の多糖類の共存下で抗原抗体反応を行う点を除けば、周知の通常のサンドイッチ法と全く同様にして行うことができる。すなわち、上記の通り抗原を固定化した固相と、被検抗体を含む可能性がある検体とを接触させ、固定化抗原と検体中の被検抗体とを抗原抗体反応させる。抗原抗体反応の条件は、抗原抗体反応が起きる条件であれば特に限定されず、通常、２５℃〜４２℃で１分間〜３０分間程度である。次いで、洗浄後、被検抗体と抗原抗体反応する標識抗体を固相と接触させ、固相上に結合した被検抗体と標識抗体とを抗原抗体反応させる。反応の条件は、抗原抗体反応が起きる条件であれば特に限定されず、通常、２５℃〜４２℃で１分間〜３０分間程度である。次いで、洗浄後、固相に結合した標識抗体の標識を測定する。種々の既知濃度の被検抗体を上記方法で免疫学的測定に供し、抗体濃度を横軸に、測定された標識量を縦軸にプロットして検量線を作成し、未知の検体について測定した標識量をこの検量線に当てはめることにより、未知の検体中の被検抗体を定量することができる。
【００２１】
上記した一般的なサンドイッチ法を行う自動化装置も種々市販されているので、それらの市販の自動化装置を用いて本発明の免疫学的測定を行うことも可能である。
【００２２】
本発明の免疫学的測定方法に供される検体は、何ら限定される物ではないが、非特異吸着が問題となる様々な物質を含む体液である場合に本発明の威力が特に発揮される。体液としては、血液（全血、血清及び血漿）、尿、ぬぐい液、唾液や痰等を挙げることができるがこれらに限定されるものではない。また、これらの体液を必要に応じて希釈したものも検体として供することができる。
【００２３】
本発明の免疫学的測定方法により測定される被検抗体は、特に限定されないが、通常、感染症の病原体であるウイルス及び細菌並びにそれらの部分に対する抗体、および自己抗体であり、より具体的には、抗ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）抗体、抗Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）抗体、抗Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）抗体、抗ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ）抗体、抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体、抗サイログロブリン抗体、抗インスリン抗体、およびＩｇＥ等を例示することができるが、もちろんこれらに限定されるものではない。
【００２４】
標識抗体としては、酵素、蛍光色素、放射性物質等で標識した抗体が周知であり、種々市販されているので、市販の標識抗体を好ましく用いることができる。なお、標識抗体は、被検抗体と抗原抗体反応するものであるから、例えば、検体がヒト由来の体液等で、被検抗体がヒト抗体である場合には、標識抗体としては、標識抗ヒトＩｇＧ抗体や標識抗ヒトＩｇＭ抗体等の抗ヒトイムノグロブリン抗体を用いることができる。これらの標識抗ヒトＩｇＧ抗体も市販されている。
【００２５】
以下、本発明を実施例に基づき具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例中、「％」は全て「質量％」である。
【実施例】
【００２６】
実施例１    デキストラン被覆粒子と遊離のデキストラン添加による非特異吸着抑制評価
１−１．デキストラン被覆粒子の調製
精製水で洗浄した２ｍｇカルボキシル化磁性粒子（ダイナビーズ（登録商標）、ライフテクノロジーズ社製)に、２ｍｇ／ｍＬアミノデキストラン（平均分子量約４０ｋＤａ）の水溶液１００μＬを添加し、さらに水溶性カルボジイミド水溶液（１９ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加えた。混合物を撹拌させた状態で２５℃、一晩反応させた。混合物を精製水で３回洗浄し、５０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．２、ＮａＣｌ、ＢＳＡを含む）で３回洗浄した後、この粒子を５０ｍＭトリス緩衝液に分散させて、デキストラン被覆粒子を得た。
【００２７】
１−２．デキストラン被覆粒子と遊離のデキストラン添加による非特異吸着抑制評価
上記１−１．で得られたデキストラン被覆粒子を、キュベット内で、遊離の１％デキストラン（平均分子量約４０ｋＤａ）（Ｄｅｘ（４０ｋ））、又は１％アミノデキストラン（平均分子量約４０ｋＤａ）（ＮＨ２Ｄｅｘ（４０ｋ））を加えた５０ｍＭトリス緩衝液２５０μＬに懸濁した。この粒子懸濁液に２０μＬの脱脂血清を混合し、３７℃、１０分間静置した。なお、本実施例では非特異吸着を検討するため、ＨＩＶ陰性の脱脂血清を用いた。
【００２８】
このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この後、ルミパルス（登録商標）洗浄液（富士レビオ社製）を加え撹拌した。このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この操作を４回繰り返した。この粒子を含むキュベットに、２５０μＬのアルカリフォスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（０．２μｇ／ｍＬ）を混合し、３７℃、１０分間静置した。このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この後、ルミパルス（登録商標）洗浄液を加え撹拌した。このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この操作を６回繰り返した。
【００２９】
この粒子を含むカートリッジに、化学発光基質である３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３”−ホスホリルオキシ）フェニル−１、２−ジオキセタン・２ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ（登録商標））を含むルミパルス（登録商標）基質液（富士レビオ社製）２００μＬを加え３７℃で反応させた。５分間反応を行った後、ルミパルスフォルテ（富士レビオ社製）でカウント値を測定した。比較として、デキストラン被覆の無い粒子を用いて、デキストラン被覆粒子と同様に測定した。
【００３０】
結果を、図１に示す。図１は、各条件で測定したカウント値を示す。図１に示される通り、デキストラン被覆のない粒子に遊離のデキストランを添加しない条件では、約４０万カウントとなり、非特異吸着が高いことが確認された。この粒子の反応液に遊離のデキストランを添加しても、ほとんどカウント値が低下しなかった。遊離のアミノデキストランを添加すると、約８万カウントに低下するが、その非特異吸着抑制効果は小さいものであった。以上のことから、デキストラン被覆のない粒子では、遊離のデキストラン又はアミノデキストランの添加は、非特異吸着抑制に効果がないか、又は非常に小さい効果しかないことが分かった。
【００３１】
他方、デキストラン被覆粒子では、遊離のデキストランを添加しないと、約６５万カウントと、デキストラン被覆のない粒子に比べてカウント値が約１．５に上昇してしまった。つまり、遊離のデキストランを添加していない条件では、粒子をデキストランで被覆することによって、非特異吸着がむしろ増加することが分かった。
【００３２】
これに対し、デキストラン被覆粒子の反応液中に遊離のデキストランを添加すると、約９００カウントと、大幅にカウント値が低下した。アミノデキストランを添加した場合は、約３５０カウントとさらにカウント値の低下が確認された。
【００３３】
これらの結果から、粒子をデキストランで被覆し、さらに反応液中に遊離のデキストランまたはアミノデキストランを共存させることによって、大幅に非特異吸着を抑制することができることが明らかとなった。
【００３４】
実施例２．抗ｇｐ４１抗体アッセイ
２−１．ＨＩＶ由来ｇｐ４１抗原結合デキストラン被覆粒子の作製
精製水で洗浄した２ｍｇカルボキシル化磁性粒子（ダイナビーズ（登録商標）、ライフテクノロジーズ社製）に、２ｍｇ／ｍＬアミノデキストラン（平均分子量約４０ｋＤａ）の水溶液１００μＬを添加し、さらに水溶性カルボジイミド水溶液（１９ｍｇ／ｍＬ）１００μＬを加えた。混合物を撹拌させた状態で２５℃、一晩反応させた。混合物を精製水および５０ｍＭトリス緩衝液でそれぞれ３回洗浄した。得られた粒子を０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）に懸濁し、１６０μＬのエタノールに溶解させたＮ−スクシンイミジル−４−マレイミド酪酸溶液（１ｍｇ／ｍＬ）を加え２５℃、１時間撹拌した。エタノール、０．１Ｍリン酸緩衝液で２回ずつ洗浄した後、０．１Ｍリン酸緩衝液に懸濁し、チオール化したＨＩＶ由来ｇｐ４１抗原を加えた。混合物を２５℃で一晩撹拌させた。それを０．１Ｍリン酸緩衝液で洗浄し、２００μＬの０．１Ｍリン酸緩衝液に溶解させたシステイン溶液（０．６ｍｇ／ｍＬ）を加え２５℃、３時間撹拌した。５０ｍＭトリス緩衝液で３回洗浄した後、５０ｍＭトリス緩衝液に分散させて、ｇｐ４１抗原結合デキストラン被覆粒子とした。
【００３５】
２−２．ｇｐ４１抗原結合デキストラン被覆粒子による抗ｇｐ４１抗体アッセイ
上記２−１．で得られたｇｐ４１抗原結合デキストラン被覆粒子３７．５μｇを、キュベット内で、１％デキストラン（平均分子量約４０ｋＤａ）を加えた５０ｍＭトリス緩衝液２５０μＬに懸濁した。この粒子懸濁液に２０μＬのサンプルを混合し、３７℃、１０分間静置した。本実施例では、抗ｇｐ４１抗体を含まないＨＩＶ陰性の血清を陰性サンプルとして、本ＨＩＶ陰性の血清に所定の濃度の抗ｇｐ４１抗体を添加したサンプルを陽性サンプルとして用いた。
【００３６】
粒子懸濁液とサンプルを混合したキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この後、ルミパルス（登録商標）洗浄液を加え撹拌した。このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この操作を４回繰り返した。この粒子を含むキュベットに、２５０μＬのアルカリフォスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（０．２μｇ／ｍＬ）を混合し、３７℃、１０分間静置した。このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この後、ルミパルス（登録商標）洗浄液（富士レビオ社製）を加え撹拌した。このキュベットを磁石に接して粒子を集磁させ、上清を廃液した。この操作を６回繰り返した。
【００３７】
この粒子を含むキュベットに化学発光基質である３−（２’−スピロアダマンタン）−４−メトキシ−４−（３”−ホスホリルオキシ）フェニル−１、２−ジオキセタン・２ナトリウム塩（ＡＭＰＰＤ（登録商標））を含むルミパルス（登録商標）基質液２００μＬを加え３７℃で反応させた。５分間反応を行った後、ルミパルスフォルテ（富士レビオ社製）で測定した。
【００３８】
結果を、図２に示す。図２（１）は、ｇｐ４１抗原結合デキストラン被覆粒子を用いて、遊離のデキストランの有無の条件で、陽性サンプルと陰性サンプルをそれぞれ測定したカウント値を示す。また、図２（２）は、それぞれのカウント値から求めたＳ／Ｎ比（陰性サンプルの測定値Ｎに対する陽性サンプルの測定値Ｓの比率×１００）を示す。
【００３９】
その結果、デキストラン被覆粒子を用いた抗ｇｐ４１抗体アッセイでは、反応系に遊離のデキストランを共存させることによって、陰性サンプルにおけるカウント値が大幅に低下し、抗ｇｐ４１抗体アッセイにおいても非特異吸着が抑制されていることが確認できた。これにより、Ｓ／Ｎ比が約３０倍以上向上し、アッセイ系の感度が大幅に改善することが明らかとなった。
【図１】
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【図２（１）】
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【図２（２）】
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