(57)【要約】【課    題】白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させること、および／または、脂肪組織における炎症抑制を介して、褐色脂肪組織を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させることで、生体内の過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制して、糖尿病や脂質異常症、動脈硬化症などの生活習慣病やそれら生活習慣病と肥満、特に、内臓脂肪型肥満が一個人に集積した状態であるメタボリックシンドロームの予防や治療に有効である肥満抑制用製品を提供することを課題とする。【解決手段】コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、副甲状腺ホルモン関連蛋白(Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ：ＰＴＨｒＰ)の、少なくとも、いずれか一つを有効成分として含有することを特徴とする肥満抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸及び／またはＰＴＨｒＰを有効成分とする肥満抑制剤。
【請求項２】
前記コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸及び／またはＰＴＨｒＰが乳由来であることを特徴とする請求項１に記載の肥満抑制剤。
【請求項３】
肥満抑制効果がエネルギー代謝を亢進することを特徴とする請求項１乃至２に記載の肥満抑制剤。
【請求項４】
肥満抑制効果が白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進することを特徴とする請求項１乃至３に記載の肥満抑制剤。
【請求項５】
肥満抑制効果が、褐色脂肪組織を活性化することを特徴とする請求項１乃至３に記載の肥満抑制剤。
【請求項６】
肥満抑制効果が、脂肪組織における炎症を抑制することを特徴とする請求項１乃至３又は５に記載の肥満抑制剤。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれかに記載の肥満抑制剤を含むことを特徴とする肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料又は肥満抑制用医薬品。
【請求項８】
飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、請求項７に記載の肥満抑制用飲食品
【請求項９】
請求項１乃至８のいずれかに記載の肥満抑制剤を経口摂取することによる肥満を抑制する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞における脱共役タンパク質１（ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １：ＵＣＰ１）を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させること、および／または、脂肪組織における炎症抑制を介して、褐色脂肪組織を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させることにより、生体内の脂肪蓄積を抑制するとともに、肥満を抑制する効果に優れ、生活習慣病やメタボリックシンドロームの予防や治療に有効で、安定性及び安全性に優れた肥満抑制剤に関する。また、本発明は、該肥満抑制剤を含有する、肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料又は肥満抑制用医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年の食習慣や生活習慣の変化に伴い、先進諸国を中心として、糖尿病や脂質異常症、動脈硬化症等の生活習慣病の患者数が増加している。また、医療費の増大に直結するわが国の肥満者の割合は、男性２８％、女性２０％にも及び、大きな社会問題となっている（非特許文献１）。一方、それら生活習慣病と肥満、特に、内臓脂肪型肥満が一個人に集積した状態はメタボリックシンドロームと呼ばれ、脳卒中などの重篤な疾病につながることが知られている。また、最近では、ヒト以外の哺乳動物、例えば、家庭内で飼育されているペット等においても内臓脂肪型の肥満が多発しており、動物愛護の観点から大きな問題となっている。
【０００３】
肥満は脂肪細胞が肥大化することが主な原因とされている。また、肥大化した脂肪細胞は、Ｔｕｍｏｒ  Ｎｅｃｒｏｓｉｓ  Ｆａｃｔｏｒ  α（ＴＮＦα）などの炎症性サイトカインや遊離脂肪酸を分泌して、慢性的な炎症状態からインスリン抵抗性を惹起させ、糖尿病を含む生活習慣病を発症させると考えられている。一方、肥大化していない脂肪細胞は、ＡｄｉｐｏｎｅｃｔｉｎやＬｅｐｔｉｎなどの抗炎症性のサイトカインを分泌してイスリン感受性を亢進させることが知られている。したがって、脂肪細胞の肥大化を防止して炎症を抑制することは、肥満や肥満に伴う生活習慣病ならびに、メタボリックシンドロームなどの様々な疾患を予防する上で、非常に重要である（特許文献１、２）。
【０００４】
一般的に、脂肪細胞には白色脂肪細胞と褐色脂肪細胞の２種類の細胞があることが報告されている（非特許文献２）。白色脂肪細胞は、細胞内にトリグリセリドの形で脂肪を蓄積し、エネルギーを貯蔵する。一方、褐色脂肪細胞は、白色脂肪細胞と同様に細胞内に脂肪を蓄積するものの、そのミトコンドリア膜上に存在するＵＣＰ１の働きにより、電子伝達系により生じたプロトン勾配をＡＴＰに変換することなく、熱エネルギーに変換する。つまり、生体内では、白色脂肪細胞によるエネルギーの貯蔵や褐色脂肪細胞の熱産生によるエネルギーの消費により、全身的なエネルギーや体脂肪のバランスが調整されている。また、最近の研究では、褐色脂肪細胞には胚発生初期時にすでに細胞運命が決定している「既存型」と成人において様々な環境要因等により白色脂肪細胞から分化誘導される「誘導型」の２種類が存在することが分かっている（非特許文献２）。ヒトでは、既存型の褐色脂肪細胞は、肩甲骨周辺と首の後ろ、わきの下など限られた場所に少量存在し、加齢とともに減少する。一方、長期の寒冷刺激やＰＰＡＲγアゴニストの投与などにより、成人の既存型の褐色脂肪細が活性化したり、白色脂肪組織に存在する白色脂肪前駆細胞が褐色脂肪細胞に分化することが報告されている。したがって、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化することでエネルギー代謝を亢進して、生体における過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制し、メタボリックシンドローム等を予防または改善することが可能である。
【０００５】
さらに、最近では、脂肪含量が高い食事を摂取すると、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１の機能が低下して肥満を呈するものの、人為的にＵＣＰ１を過剰に発現させたマウスでは、脂肪含量の高い飼料を摂取しても肥満にならないことが報告されている。したがって、ＵＣＰ１の機能を亢進させ、肥満を抑制する効果が期待できる医薬や食品の探索が盛んに行われている。また、炎症状態は褐色脂肪細胞に存在するＵＣＰ１の機能不全を引き起こすため、抗炎症作用を介してＵＣＰ１の機能を亢進させ、肥満を抑制する効果が期待できる医薬や食品の探索も行われている。但し、この場合、生体内の過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制するためには、生活習慣、特に、食習慣を見直すことが重要であることから、日常的に安全に摂取することが可能で、長期間摂取しても安全上問題のないことが重要となる。
【０００６】
牛乳、乳製品は古来より食されてきたことから、日常的に安全に長期間摂取することが可能な食品であり、それらの摂取によって、肥満が抑制することが疫学調査により報告されている。また、乳に含まれるタンパク質であるκ-カゼインやラクトフェリンには、それぞれ、脂肪細胞における脂肪の蓄積を抑制することや脂質代謝を改善することが知られている（特許文献３、４）。しかしながら、コハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、副甲状腺ホルモン関連蛋白(Ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎ−ｒｅｌａｔｅｄ  Ｐｅｐｔｉｄｅ：ＰＴＨｒＰ)、特に、牛乳や乳製品に含まれるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰが白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞に存在するＵＣＰ１の機能を亢進させることにより、生体内の脂肪蓄積を抑制し、優れた肥満抑制効果を発揮することは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２００６−２８０４９号公報
【特許文献２】特開２０１１−１５３０９３号公報
【特許文献３】特開２００９−１９０９８０号公報
【特許文献４】国際公開第２００３／０５７２４５号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】厚生労働省, 平成２５年国民健康・栄養調査報告
【非特許文献２】Ｋａｊｉｍｕｒａ，  Ｓ.  ｅｔ．  ａｌ．：  Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂ．,  ２０１０、１１：２５７−２６２，  ２０１０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させること、および／または、脂肪組織における炎症抑制を介して、褐色脂肪組織を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させることにより、生体内の脂肪蓄積を抑制するとともに、肥満を抑制する効果に優れ、生活習慣病やメタボリックシンドロームの予防や治療に有効で、安定性及び安全性に優れた肥満抑制剤に関する。また、本発明は、該肥満抑制剤を含有する、肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料又は肥満抑制用医薬品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記の課題を解決するため鋭意検討を進めたところ、コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰに白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させること、および／または、脂肪組織における炎症抑制を介して、褐色脂肪組織を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させることにより、顕著な肥満抑制効果があることを見出した。
すなわち本発明は、以下の様態を含むものである。
（１）コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸及び／またはＰＴＨｒＰを有効成分とする肥満抑制剤。
（２）前記コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸及び／またはＰＴＨｒＰが乳由来であることを特徴とする上記（１）に記載の肥満抑制剤。
（３）肥満抑制効果がエネルギー代謝を亢進することを特徴とする上記（１）乃至（２）に記載の肥満抑制剤。
（４）肥満抑制効果が白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進することを特徴とする上記（１）乃至（３）に記載の肥満抑制剤。
（５）肥満抑制効果が、褐色脂肪組織を活性化することを特徴とする上記（１）乃至（３）に記載の肥満抑制剤。
（６）肥満抑制効果が、脂肪組織における炎症を抑制することを特徴とする上記（１）乃至（３）又は（５）に記載の肥満抑制剤。
（７）上記（１）乃至（６）のいずれかに記載の肥満抑制剤を含むことを特徴とする肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料又は肥満抑制用医薬品。
（８）飲食品が粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハースのいずれかである、（７）に記載の肥満抑制用飲食品
（９）（１）乃至（８）のいずれかに記載の肥満抑制剤を経口摂取することによる肥満を抑制する方法。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の肥満抑制剤は、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させること、および／または、脂肪組織における炎症抑制を介して、褐色脂肪組織を活性化させ、褐色脂肪組織におけるエネルギー消費を増加させる作用が顕著であり、生体内の過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制して、糖尿病や脂質異常症、動脈硬化症などの生活習慣病やそれら生活習慣病と肥満、特に、内臓脂肪型肥満が一個人に集積したメタボリックシンドロームの予防や治療に有効である。また、本発明の肥満抑制剤は、哺乳類の乳に含まれる物質を有効成分としているため、日常的に安全に長期間摂取することが可能である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の肥満抑制剤の有効成分であるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰは、公知の方法で調製されたものを使用することが可能である。例えば、ヒト、ウシ、水牛、ヤギ、ヒツジ、ラクダ、ウマ、リャマ、ヤク等の哺乳類の乳から調製されたものや貝、貝柱、貝汁、穀類、はちみつ等の食品から調製されたもの、微生物により産生されたもの、化学的に合成されたもの、遺伝子工学的手法により生産されたもの、血液や臓器から精製されたもの等が使用可能である。また、精製され、市販されている試薬を使用することも可能である。
【００１３】
本発明の肥満抑制剤の有効成分であるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰはそのまま肥満抑制剤として使用してもよいが、必要に応じて常法に従い、粉末剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、ドリンク剤等に製剤化して用いることも出来る。また、そのまま又は製剤化した後に、栄養剤や粉乳、乳飲料、乳酸菌飲料、発酵乳、清涼飲料水、チーズ、マーガリン、クリーム、プリン、ゼリー、ウエハース等の飲食品、栄養組成物、飼料及び医薬品に配合することも可能である。
【００１４】
本発明の肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料及び肥満抑制用医薬品は、コハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰ、それぞれを単独もしくは、任意の組み合わせで含有することが可能であり、他の飲食品、飼料及び医薬に通常含まれる安定剤や糖類、脂質、フレーバー、ビタミン、ミネラル、フラボノイド、ポリフェノール等の原材料等を含有することができる。また、本発明の肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料及び肥満抑制用医薬品には、有効成分であるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰに加えて、肥満抑制作用を有する他の成分、例えば、κ-カゼインやラクトフェリン等を使用することも可能である。さらに、そのような肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料又は肥満抑制用医薬品を原材料として、他の飲食品等に通常含まれる原材料等を配合して調製することも可能である。
【００１５】
本発明の肥満抑制剤や肥満抑制用飲食品、肥満抑制用栄養組成物、肥満抑制用飼料及び肥満抑制用医薬品におけるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰの配合量には、特に制限はないが、白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進したり、褐色脂肪細胞を活性化させるためには、成人一人一日あたり、コハク酸の場合は１０〜１００ｍｇ、好ましくは１００ｍｇ以上、グルコン酸の場合は８０〜８００ｍｇ、好ましくは８００ｍｇ以上、２−ケト−Ｄ−グルコン酸の場合は０．８〜８ｍｇ、好ましくは８ｍｇ以上、ＰＴＨｒＰの場合は２０〜２００ｍｇ、好ましくは２００ｍｇ以上、経口摂取できるように、飲食品や栄養組成物、飼料及び医薬等への配合量を調整することが好ましい。
【００１６】
本発明の肥満抑制用飲食品である粉乳は、生乳、牛乳若しくは特別牛乳又はこれらを原料として噴霧乾燥や凍結乾燥させることで、粉末状に加工したものをいい、脂粉乳、部分脱脂粉乳、クリームパウダー、全脂粉乳、ホエイ粉、乳ミネラル濃縮物、乾燥チーズ粉末、ＷＰＩ、ＷＰＣ、調製粉乳又は特殊粉乳等が含まれる。副原料として安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料、香料又は栄養物質等、一般に粉乳類の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００１７】
本発明の肥満抑制用飲食品である乳飲料は、生乳、牛乳若しくは特別牛乳又はこれらを原料として製造した飲料をいい、乳固形分３．０％以上のものである。副原料として野菜の汁液、果物の汁液、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料、香料、栄養物質等、一般に乳飲料の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００１８】
本発明の肥満抑制用飲食品である乳酸菌飲料は、生乳、牛乳若しくは特別牛乳又はこれらを原料として乳酸菌又は酵母で発酵させたものを加工し、又は、主要原料とした飲料のことをいい、乳酸菌数又は酵母数が１，０００万個/ｍｌ以上のものである。副原料として野菜の汁液、果物の汁液、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料、香料、栄養物質等、一般に乳酸菌飲料の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００１９】
本発明の肥満抑制用飲食品である発酵乳は、生乳、牛乳若しくは特別牛乳又はこれらを原料として乳酸菌又は酵母で発酵させたものいい無脂乳固形分８．０％以上かつ乳酸菌数又は酵母数が１，０００万個/ｍｌ以上のものであり、小売容器に充填して発酵させたプリン状の組織を有するハードタイプ、発酵してできたカードを破砕して容器に充填するソフトタイプ、カードを破砕後に均質化して液状にした液状発酵乳などが含まれる。副原料として野菜の汁液、果物の汁液、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料、香料又は栄養物質等、一般に発酵乳の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２０】
本発明の肥満抑制用飲食品である清涼飲料水は、乳酸菌飲料、乳及び乳製品を除く酒精分1容量パーセント未満を含有する飲料をいい、炭酸飲料、果実飲料、コーヒー飲料、茶系飲料、スポーツ飲料、乳性飲料、機能性飲料、栄養飲料、豆乳飲料等が含まれる。
副原料として安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料、香料又は栄養物質等、一般に清涼飲料の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２１】
本発明の肥満抑制用飲食品であるチーズは、ナチュラルチーズであってもプロセスチーズであってもよく、例えばクリームチーズ、モッツァレラ、リコッタ、マスカルポーネ、フロマージュ・ブランなどのフレッシュチーズ、カマンベール、ブリーなどの白カビチーズ、ゴルゴンゾーラ、スチルトン、ロックフォールなどの青カビチーズ、リヴァロなどのウォッシュチーズ、プロボローネ、ゴーダなどのセミハードチーズ、グラナ、エメンタール、チェダーなどのハードチーズなどのナチュラルチーズ、プロセスチーズ、チーズフードや乳等を主原料とする食品などすべてのチーズ類等を含む。
プロセスチーズ類の原料チーズとしては、通常のプロセスチーズ類の製造で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、硬質又は半硬質のナチュラルチーズ等のいずれでも、あるいはこのようなチーズを組み合わせたものであっても使用することができる。また、プロセスチーズ類を原料の一部として用いることも可能である。
プロセスチーズ類の溶融塩、乳化剤としては、通常のプロセスチーズ類の製造で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、クエン酸塩、リン酸塩、ショ糖脂肪酸エステル等のいずれでも、あるいはこのような溶融塩、乳化剤を組み合わせたものであっても使用することができる。
副原料として脱脂粉乳などの乳製品、乳成分、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料、香料等、一般にプロセスチーズ類の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２２】
本発明の肥満抑制用飲食品であるマーガリン類は、マーガリンやファットスプレッドなどの油中水型乳化組成物をいい、油脂、乳成分、乳化剤等の１種又は２種以上を主原料として調製される。油脂原料としては、通常のマーガリンやスプレッドなどの油中水型乳化組成物の製造で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、ナタネ油、大豆油、パーム油、コーン油、サフラワー油、ヤシ油若しくはオリーブ油等の植物油脂又は乳脂肪、魚油、牛脂、豚脂等の動物油脂若しくはこれらの硬化油、エステル交換油、分別油等のいずれでも、あるいはこのような油脂を組み合わせたものであっても使用することができる。
副原料として脱脂粉乳などの乳製品、乳成分、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料又は香料等、一般にマーガリン類の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２３】
本発明の肥満抑制用飲食品であるクリームは、ホイップクリームやコーヒークリームなどの水中油型乳化組成物をいい、油脂、乳成分、乳化剤等の１種又は２種以上を主原料として調製される。油脂原料としては、通常のホイップクリームやコーヒークリームなどの水中油型乳化組成物の製造で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、ナタネ油、大豆油、パーム油、コーン油、サフラワー油、ヤシ油若しくはオリーブ油等の植物油脂又は乳脂肪、魚油、牛脂、豚脂等の動物油脂若しくはこれらの硬化油、エステル交換油、分別油等のいずれでも、あるいはこのような油脂を組み合わせたものであっても使用することができる。
副原料として脱脂粉乳などの乳製品、乳成分、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料又は香料等、一般にクリーム類の製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２４】
本発明の肥満抑制用飲食品であるプリンは、卵のタンパク質の熱凝固を利用したプリンや、ゲル化剤を利用したプリンをいい、卵、乳成分、糖類等の１種又は２種以上を主原料として調製される。ゲル化剤としては、通常のプリン製造で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、寒天、ゼラチン、ローカストビーンガム、キサンタンガム、ジェランガム、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、グァーガム、タマリンドシードガム、カラヤガム、ペクチン、カルボキシメチルセルロース、サイリウムシードガム、プルラン又はカードラン等のいずれでも、あるいはこのようなゲル化剤を組み合わせたものであっても使用することができる。
副原料として安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料又は香料等、一般にプリンの製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２５】
本発明の肥満抑制用飲食品であるゼリーは、ゲル化剤を利用して固めたゼリーをいい、果実汁、野菜汁、糖類の１種又は２種以上を主原料として調製される。ゼリーにはインスタントコーヒー、果汁、果肉、香料又は着色料等の１種又は２種以上を配合することができる。またゼリーは、ホイップしたり気泡を保持させたりしたものを用いることができる。
ゲル化剤としては、通常のゼリー製造で用いられるものであれば特に限定されず、例えば、寒天、ゼラチン、ローカストビーンガム、キサンタンガム、ジェランガム、カラギーナン、アルギン酸ナトリウム、澱粉、グァーガム、タマリンドシードガム、カラヤガム、ペクチン、カルボキシメチルセルロース、サイリウムシードガム、プルラン、カードラン等のいずれでも、あるいはこのようなゲル化剤を組み合わせたものであっても使用することができる。
【００２６】
本発明の肥満抑制用飲食品であるウエハースは、小麦粉、粉乳、卵黄、膨張剤、塩、香料、油脂等の１種又は２種以上の原料を混合し、水を加えて生地の濃度を調整し、上下２枚の焼型プレートに流し込んで、薄板状に焼き上げたウエハースシート間に、クリーム、チョコレート、キャラメル、ゼリー等の１種又は２種以上をサンドしたものをいう。
副原料として脱脂粉乳などの乳製品、乳成分、安定剤、乳化剤、澱粉、加工澱粉、植物性脂肪、貝汁、貝柱、穀類、糖質類、香辛料又は香料等、一般にウエハースの製造に用いられる副原料はいずれも使用可能である。また、栄養強化の目的から、ビタミン類、ミネラル類、野菜粉末、小麦胚芽又はオリゴ糖等を添加することもできる。これらの副原料は物性調整や風味調整を目的として使用されるが、特に必要が無ければ用いなくても良い。
【００２７】
本発明の肥満抑制剤は、上記の有効成分であるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰに適当な助剤を添加して任意の形態に製剤化して、経口投与が可能な肥満抑制用組成物とすることができる。製剤化に際しては、通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤又は賦形剤を用いることができる。賦形剤としては、例えばショ糖、乳糖、デンプン、結晶性セルロース、マンニット、軽質無水珪酸、アルミン酸マグネシウム、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素カルシウム、カルボキシルメチルセルロースカルシウム等の１種又は２種以上を組み合わせて加えることができる。
【００２８】
以下に実施例、試験例を示し、本発明について詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
（コハク酸の調製方法）
クリームセパレーターを用いて、生乳２００ｋｇから脱脂乳を得た。この脱脂乳を分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜（ＨＦＫ１３１（ＫＯＣＨ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ社製））に供して、タンパク質を除去した。このタンパク質を除去した溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（ＩＲ１２０Ｂ（オルガノ社製））を充填したカラムに通液して有機酸を遊離型とし、その後、その溶出液を強塩基性陰イオン交換樹脂（ＩＲ４００（オルガノ社製））を充填したカラムに通液して、有機酸を樹脂に吸着させた。樹脂を洗浄後、１Ｎ炭酸アンモニウムを用いて樹脂に吸着した有機酸をアンモニウム塩の形で溶出させ、再び強酸性陽イオン交換樹脂（ＩＲ１２０Ｂ（オルガノ社製））を充填したカラムに通液してアンモニアを除去した後、減圧濃縮した。この濃縮液を、ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ（三菱化学社製）を充填したカラムへ通液して有機酸を樹脂に吸着させた後、０-１００％の濃度のメタノールを段階的に通液して、コハク酸を含むフラクションを回収した。このフラクションを真空乾燥して、１００ｇのコハク酸（実施例品１）を得た。このコハク酸をＨＰＬＣによって分析したところ、純度は９０％以上であった。このようにして得られたコハク酸は、そのまま本発明の肥満抑制剤として使用可能である。
【実施例２】
【００３０】
（グルコン酸の調製方法）
クリームセパレーターを用いて、生乳４００ｋｇから脱脂乳を得た。この脱脂乳を分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜（ＨＦＫ１３１（ＫＯＣＨ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ社製））に供して、タンパク質を除去した。このタンパク質を除去した溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（ＩＲ１２０Ｂ（オルガノ社製））を充填したカラムに通液して有機酸を遊離型とし、その後、その溶出液を強塩基性陰イオン交換樹脂（ＩＲ４００（オルガノ社製））を充填したカラムに通液して、有機酸を樹脂に吸着させた。樹脂を洗浄後、１Ｎ炭酸アンモニウムを用いて樹脂に吸着した有機酸をアンモニウム塩の形で溶出させ、再び強酸性陽イオン交換樹脂（ＩＲ１２０Ｂ（オルガノ社製））を充填したカラムに通液してアンモニアを除去した後、減圧濃縮した。この濃縮液を、ダイヤイオンＨＰ２０ＳＳ（三菱化学社製）を充填したカラムへ通液して有機酸を樹脂に吸着させた後、０-１００％の濃度のメタノールを段階的に通液して、グルコン酸を含むフラクションを回収した。このフラクションを真空乾燥して、１００ｇのグルコン酸（実施例品２）を得た。このグルコン酸をＨＰＬＣによって分析したところ、純度は９０％以上であった。このようにして得られたグルコン酸は、そのまま本発明の肥満抑制剤として使用可能である。
【実施例３】
【００３１】
（２−ケト−Ｄ−グルコン酸の調製方法）
クリームセパレーターを用いて、生乳２００ｋｇから脱脂乳を得た。この脱脂乳を分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜（ＨＦＫ１３１（ＫＯＣＨ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ社製））に供して、タンパク質を除去した。このタンパク質を除去した溶液を強酸性陽イオン交換樹脂（ＩＲ１２０Ｂ（オルガノ社製））を充填したカラムに通液して有機酸を遊離型とし、その後、その溶出液を強塩基性陰イオン交換樹脂（ＩＲ４００（オルガノ社製））を充填したカラムに通液して、有機酸を樹脂に吸着させた。樹脂を洗浄後、１Ｎ炭酸アンモニウムを用いて樹脂に吸着した有機酸をアンモニウム塩の形で溶出させ、再び強酸性陽イオン交換樹脂（ＩＲ１２０Ｂ（オルガノ社製））を充填したカラムに通液してアンモニアを除去した後、減圧濃縮した。この濃縮液をμＢｏｎｄｐａｋＣ１８カラム（ウォーターズ社製）ヘ供し、２０%アセトニトリル／３ｍＭ リン酸バッファーを通液して、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を含むフラクションを回収した。このフラクションを凍結乾燥して、８０ｇの２−ケト−Ｄ−グルコン酸（実施例品３）を得た。この２−ケト−Ｄ−グルコン酸をＨＰＬＣによって分析したところ、純度は９０％以上であった。このようにして得られた２−ケト−Ｄ−グルコン酸は、そのまま本発明の肥満抑制剤として使用可能である。
【実施例４】
【００３２】
（ＰＴＨｒＰの調製方法）
クリームセパレーターを用いて、８０,０００ｋｇの生乳から脱脂乳を得た。この脱脂乳を分画分子量１０ｋＤａのＵＦ膜に通液してタンパク質を除去し、減圧濃縮後に凍結乾燥した。この凍結乾燥品をＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５（ＧＥヘルスケアジャパン株式会社）を充填したカラムへ供し、０〜１Ｍの濃度の塩化ナトリウム溶液を段階的に通液して、ＰＴＨｒＰを含むフラクションを回収した。次に、このフラクションにアセトンを加え、タンパク質を沈殿させ、２０ｇ／Ｌの臭化シアンを含む７０％ギ酸溶液に再溶解して１晩静置し、減圧濃縮後に、７．５Ｍの尿素溶液と０．１％のトリフルオロ酢酸溶液を加えた。この溶液をＧＲＡＣＥ  Ｖｙｄａｃ  Ｃ１８カラム（ＧＲＡＣＥ ＶＹＤＡＣ社製）へ供し、１％のトリフルオロ酢酸を含む２０%アセトニトリル／３ｍＭリン酸バッファーを通液して、ＰＴＨｒＰを含むフラクションを回収した。このフラクションを凍結乾燥して、１２ｇのＰＴＨｒＰ（実施例品４）を得た。このＰＴＨｒＰをＨＰＬＣによって分析したところ、純度は９０％以上であった。このようにして得られたＰＴＨｒＰは、そのまま本発明の肥満抑制剤として使用可能である。
【００３３】
＜試験例１＞
褐色脂肪細胞の活性化に対する、コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰの効果を調べた。
褐色脂肪前駆細胞であるＨＢ２細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）で培養した。コンフルーエントに達してから２日後に、２０ｎＭのインスリンを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）に、実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：５００ ｎｇ／ｍｌ）、または実施例２のグルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０００ｎｇ／ｍｌ）、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０ｎｇ／ｍｌ）、実施例４のＰＴＨｒＰを溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１０００ｎｇ／ｍｌ）、実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：２５０ｎｇ／ｍｌ）と実施例２のグルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：２０００ｎｇ／ｍｌ）を混合したもの、実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：２５０ｎｇ／ｍｌ）と実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：２０ｎｇ／ｍｌ）を混合したもの、実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：２５０ｎｇ／ｍｌ）と実施例４のＰＴＨｒＰを溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：５００ｎｇ／ｍｌ）を混合したもの、実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１５０ｎｇ／ｍｌ）と実施例２のグルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１６００ｎｇ／ｍｌ）と実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１６ｎｇ／ｍｌ）を混合したもの、コハク酸（和光純薬工業社製）を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：５００ ｎｇ／ｍｌ）、グルコン酸（和光純薬工業社製）を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０００ ｎｇ／ｍｌ）、２−ケト−Ｄ−グルコン酸（シグマアルドリッチ社製）を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０ ｎｇ／ｍｌ）、ＰＴＨｒＰ（シグマアルドリッチ社製）を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１０００ ｎｇ／ｍｌ）を、それぞれ添加した培地に交換した。コントロールは２０ｎＭのインスリンを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）のみの培地とした。それぞれを８日間培養した後、上記の培地に１０μＭのイソプロテレノール（Ｉｓｏ）を添加した培地に交換し、さらに４時間培養した。その後、培養後の細胞からセパゾール ＲＮＡ １ ＳｕｐｅｒＧ 試薬（ナカライテスク社製）を用いて、すべてのＲＮＡを抽出した。逆転写反応はＲｅｖｅｒＴｒａ  Ａｃｅ  ｑＰＣＲ  ＲＴ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（東洋紡社製）を用いた。得られたｃＤＮＡを使用して、ＴＨＵＮＤＥＲＢＩＲＤ  ｑＰＣＲ  Ｍｉｘ（東洋紡社製）でリアルタイムＰＣＲを行い、ＵＣＰ１遺伝子の発現量を定量した。なお、遺伝子発現量を評価するための内部標準として、３６Ｂ４遺伝子��発現量を使用し、解析にはＵＣＰ１には配列表配列番号１、２のプライマーを、３６Ｂ４には配列表配列番号３，４のプライマーを用いた。
その結果表２に示すように、実施例品１のコハク酸や実施例品２のグルコン酸、実施例品３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸、実施例品４のＰＴＨｒＰは、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１遺伝子の発現を有意に増加させた。また、コハク酸とグルコン酸、コハク酸と２−ケト−Ｄ−グルコン酸、コハク酸とＰＴＨｒＰ、コハク酸とグルコン酸と２−ケト−Ｄ−グルコン酸を添加した場合も、コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰそれぞれを単独で添加した場合と同様に、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１遺伝子の発現量が増加した。さらに、実験用の試薬であるコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰも、褐色脂肪細胞におけるＵＣＰ１遺伝子の発現を有意に増加させることがわかった。
したがって、本発明のコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−グルコン酸、ＰＴＨｒＰは褐色脂肪細胞を活性化し、肥満抑制剤として使用可能であることがわかった。
【００３４】
【表１】
2017193508.tif 000002
【００３５】
【表２】
2017193508.tif 000003
数値は、コントロールを１００とした場合の、平均値（％）±標準偏差（ｎ＝４）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００３６】
＜試験例２＞
白色前駆脂肪細胞である３Ｔ３−Ｌ１細胞の褐色脂肪細胞への分化に対するコハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰの効果を調べた。
３Ｔ３−Ｌ１細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）で培養した。コンフルーエントに達してから２日後に、褐色脂肪細胞へ分化させるために、インスリン、ＩＢＭＸ、ＤＥＸ、トリヨードサイロニン（Ｔ３）をそれぞれ１０μｇ／ｍｌ、０．５ｍＭ、０．２５μＭ、５０ｎＭ含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）に交換して２日間培養した。次に、インスリン、ＩＢＭＸ、Ｔ３、ロジグリタゾンをそれぞれ１０μｇ／ｍｌ、０．５ｍＭ、５０ｎＭ、１μＭ含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）に交換し、さらに６日間培養した。また、褐色脂肪細胞への分化誘導開始時より上記培地に実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：５００ ｎｇ／ｍｌ）、または実施例２のグルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０００ｎｇ／ｍｌ）、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０ｎｇ／ｍｌ）、実施例４のＰＴＨｒＰを溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１０００ｎｇ／ｍｌ）をそれぞれ添加して（コントロールはいずれも添加しなかった）８日間培養した後、上記培地に１０μＭのＩｓｏを添加した培地に交換し、さらに４時間培養した。その後、試験例１と同様の方法ですべてのＲＮＡを抽出してＵＣＰ１遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲで定量した。その結果、表３に示すように、実施例品１のコハク酸や実施例品２のグルコン酸、実施例品３の２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、実施例品４のＰＴＨｒＰを添加した場合、ＵＣＰ１遺伝子の発現量が有意に増加した。したがって、本発明のコハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰは白色脂肪前駆細胞から褐色脂肪細胞への分化を促進し、肥満抑制剤として使用可能であることがわかった。
【００３７】
【表３】
2017193508.tif 000004
数値は、コントロールを１００とした場合の、平均値（％）±標準偏差（ｎ＝４）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００３８】
＜試験例３＞
脂肪組織における炎症状態を模倣した細胞実験である、脂肪細胞とマクロファージ細胞の共培養系を用いて、コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰの脂肪組織における炎症抑制を介した、褐色脂肪組織の活性化効果を調べた。
褐色脂肪前駆細胞であるＨＢ２細胞を１２ウェルプレートに播種し、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）で培養した。コンフルーエントに達してから２日後に褐色肪細胞へ分化させるために、２０ｎＭのインスリンを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）に交換して７日間培養した。その後、マウスマクロファージ様細胞株であるＲａｗ２６４．７細胞を１×１０＾５ ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように、ＨＢ２細胞を培養しているウェルに添加して、２４時間培養した。その際、実施例１のコハク酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：５００ ｎｇ／ｍｌ）、または実施例２のグルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０００ｎｇ／ｍｌ）、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸を溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：４０ｎｇ／ｍｌ）、実施例４のＰＴＨｒＰを溶解して遠心分離した後にフィルター滅菌したもの（終濃度：１０００ｎｇ／ｍｌ）を、それぞれ添加した。なお、コントロールは２０ｎＭのインスリンを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（高グルコース）のみの培地とした。培養後、試験例１と同様の方法ですべてのＲＮＡを抽出してＴＮＦα遺伝子とＵＣＰ１遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲで定量した。なお、ＴＮＦαの遺伝子発現量の解析には配列表配列番号５、６のプライマーを用いた。
その結果、表５に示すように、実施例品１のコハク酸や実施例品２のグルコン酸、実施例品３の２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、実施例品４のＰＴＨｒＰを添加した場合、ＴＮＦα遺伝子の発現量が有意に減少するとともに、ＵＣＰ１遺伝子の発現量が有意に増加した。したがって、コハク酸やグルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰは脂肪組織における炎症抑制を介して、褐色脂肪組織を活性化し、肥満抑制剤として使用可能であることがわかった。
【００３９】
【表４】
2017193508.tif 000005
【００４０】
【表５】
2017193508.tif 000006
数値は、コントロールを１００とした場合の、平均値（％）±標準偏差（ｎ＝４）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００４１】
＜試験例４＞
マウスを用いて、コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰの褐色脂肪細胞の活性化による肥満抑制効果を調べた。
４週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ６／ＪＪｃｌマウスを１週間馴化した後、平均体重に差がないように１０匹ずつ、実施例１のコハク酸をマウス体重１ｋｇあたり１０ｍｇと１００ｍｇ投与する群、実施例２のグルコン酸をマウス体重１ｋｇあたり８０ｍｇと８００ｍｇ投与する群、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸をマウス体重１ｋｇあたり０．８ｍｇと８ｍｇ投与する群、実施例４のＰＴＨｒＰをマウス体重１ｋｇあたり２０ｍｇと２００ｍｇ投与する群に分け、１日１回ゾンデで経口投与した。また溶媒である水のみを投与する群（コントロール）を設けて、体重増加抑制と褐色脂肪細胞の活性化に対する効果を比較検証した。なお、すべてのマウスには、高脂肪食（日本クレア株式会社製）を４週間自由に摂取させた。試験終了時に、５時間絶食させてから、副精巣周囲脂肪と褐色脂肪組織を摘出し、副精巣周囲脂肪は重量を測定した。褐色脂肪組織は、生理食塩水にて洗浄後、ポリトロンホモジナイザーを用いて破砕し、試験例１と同様の方法でＵＣＰ１遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲで定量した。
結果を表６と表７に示す。表６に示すように、マウス体重１ｋｇあたり、コハク酸を１０ｍｇと１００ｍｇ、グルコン酸を８０ｍｇと８００ｍｇ、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を０．８ｍｇと８ｍｇ、ＰＴＨｒＰを２０ｍｇと２００ｍｇ、それぞれ摂取した群では、それらをいずれも摂取していないコントロールと比較して、体重や副精巣周囲脂肪の重量が有意に減少し、その効果は、マウス体重１ｋｇあたり、コハク酸を１００ｍｇ、グルコン酸を８００ｍｇ、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を８ｍｇ、ＰＴＨｒＰを２００ｍｇ摂取した場合に顕著であった。また、表７に示すように、マウス体重１ｋｇあたり、コハク酸を１０ｍｇと１００ｍｇ、グルコン酸を８０ｍｇと８００ｍｇ、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を０．８ｍｇと８ｍｇ、ＰＴＨｒＰを２０ｍｇと２００ｍｇそれぞれ摂取した群では、コントロールと比較して、褐色脂肪組織におけるＵＣＰ１遺伝子の発現量が有意に増加した。
したがって、実施例品１のコハク酸や実施例品２のグルコン酸、実施例品３の２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、実施例品４のＰＴＨｒＰは、褐色脂肪細胞を活性化することによって、過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制することがわかった。また、その効果は、マウス体重１ｋｇあたり、コハク酸を１０ｍｇ以上、グルコン酸を８０ｍｇ以上、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を０．８ｍｇ以上、ＰＴＨｒＰを２０ｍｇ以上、好ましくは、コハク酸を１００ｍｇ以上、グルコン酸を８００ｍｇ以上、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を８ｍｇ以上、ＰＴＨｒＰを２００ｍｇ以上摂取した場合に認められることが明らかとなった。
【００４２】
【表６】
2017193508.tif 000007
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝１０）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００４３】
【表７】
2017193508.tif 000008
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝１０）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００４４】
＜試験例５＞
マウスを用いて、コハク酸、グルコン酸、２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、ＰＴＨｒＰの脂肪組織における炎症抑制を介した、褐色脂肪組織の活性化による肥満抑制効果を調べた。
４週齢の雄性Ｃ５７ＢＬ６／ＪＪｃｌマウスを１週間馴化した後、平均体重に差がないように１０匹ずつ、実施例１のコハク酸をマウス体重１ｋｇあたり１００ｍｇ投与する群、実施例２のグルコン酸をマウス体重１ｋｇあたり８００ｍｇ投与する群、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸をマウス体重１ｋｇあたり８ｍｇ投与する群、実施例４のＰＴＨｒＰをマウス体重１ｋｇあたり２００ｍｇ投与する群に分け、１日１回ゾンデで経口投与した。また溶媒である水のみを投与する群（コントロール）を設けて、体重増加抑制と褐色脂肪細胞の活性化に対する効果を比較検証した。なお、すべてのマウスには、高脂肪食（日本クレア株式会社製）を１６週間自由に摂取させた。試験終了時に、５時間絶食させてから、副精巣周囲脂肪と褐色脂肪組織を摘出し、副精巣周囲脂肪は重量を測定した。褐色脂肪組織は、生理食塩水にて洗浄後、ポリトロンホモジナイザーを用いて破砕し、試験例３と同様の方法でＴＮＦα遺伝子とＵＣＰ１遺伝子の発現量をリアルタイムＰＣＲで定量した。
結果を表８と表９に示す。表８に示すように、マウス体重１ｋｇあたり、コハク酸を１００ｍｇ、グルコン酸を８００ｍｇ、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を８ｍｇ、ＰＴＨｒＰを２００ｍｇ、それぞれ摂取した群では、それらをいずれも摂取していないコントロールと比較して、体重や副精巣周囲脂肪の重量が有意に減少した。また、表９に示すように、体重１ｋｇあたり、コハク酸を１００ｍｇ、グルコン酸を８００ｍｇ、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を８ｍｇ、ＰＴＨｒＰを２００ｍｇ、それぞれ摂取した群では、コントロールと比較して、褐色脂肪組織におけるＴＮＦα遺伝子の発現量が減少すると共に、ＵＣＰ１遺伝子の発現量が有意に増加した。
したがって、実施例品１のコハク酸や実施例品２のグルコン酸、実施例品３の２−ケト−Ｄ−ケトグルコン酸、実施例品４のＰＴＨｒＰには、褐色脂肪組織における炎症を抑制することにより、褐色脂肪細胞を活性化させて、過剰な脂肪の蓄積や肥満を抑制することがわかった。また、その効果は、マウス体重１ｋｇあたり、コハク酸を１００ｍｇ以上、グルコン酸を８００ｍｇ以上、２−ケト−Ｄ−グルコン酸を８ｍｇ以上、ＰＴＨｒＰを２００ｍｇ以上摂取した場合に認められることが明らかとなった。
【００４５】
【表８】
2017193508.tif 000009
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝１０）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【００４６】
【表９】
2017193508.tif 000010
数値は、平均値±標準偏差（ｎ＝１０）を示す。
※は、コントロールと比較して有意差があることを示す（ｐ＜０．０５）。
【実施例５】
【００４７】
（肥満抑制用カプセル剤の調製）
表１０に示す配合で原材料を混合後、常法により造粒し、カプセルに充填して、本発明の肥満抑制用カプセル剤を製造した。
【００４８】
【表１０】
2017193508.tif 000011
【実施例６】
【００４９】
（肥満抑制用錠剤の調製）
表１１に示す配合で原材料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の肥満抑制用錠剤を製造した。
【００５０】
【表１１】
2017193508.tif 000012
【実施例７】
【００５１】
（肥満抑制用液状栄養組成物の調製）
グルコン酸（和光純薬工業社製）２００ｇを４８００ｇの脱イオン水に溶解し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合して２００ｇ／５ｋｇのグルコン酸溶液を得た。このグルコン酸溶液５．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１７．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機 (第１種圧力容器、ＴＹＰＥ: ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所製)で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の肥満抑制用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用液状栄養組成物２００ｇには、グルコン酸が８００ｍｇ含まれていた。
【実施例８】
【００５２】
（肥満抑制用飲料の調製）
実施例品１のコハク酸１ｇを６９９ｇの脱イオン水に溶解した後、４０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社製）にて、９，５００ｒｐｍで２０分間撹拌混合した。マルチトール１００ｇ、酸味料２ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１７６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９５℃、１５秒間殺菌後、密栓し、本発明の肥満抑制用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。なお、本発明の肥満抑制用飲料１００ｇには、コハク酸が１００ｍｇ含まれていた。
【実施例９】
【００５３】
（イヌ用肥満抑制用飼料の調製）
実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸１．６ｇを３，９９８．４ｇの脱イオン水に溶解し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫ ＩＩ １６０型；特殊機化工業社製）にて、３，６００ｒｐｍで２０分間撹拌混合して１．６ｇ／４ｋｇのグルコン酸溶液を得た。このグルコン酸溶液２ｋｇに大豆粕１ｋｇ、脱脂粉乳１ｋｇ、大豆油０．４ｋｇ、コーン油０．２ｋｇ、パーム油２.３ｋｇ、トウモロコシ澱粉１ｋｇ、小麦粉０．９ｋｇ、ふすま０．２ｋｇ、ビタミン混合物０．５ｋｇ、セルロース０．３ｋｇ、ミネラル混合物０．２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間加熱殺菌して、本発明の肥満抑制用飼料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用飼料１００ｇには、２−ケト−Ｄ−グルコン酸が８ｍｇ含まれていた。
【実施例１０】
【００５４】
(肥満抑制用粉乳の調製)
実施例１のコハク酸１００ｇ、脱脂粉乳９．２ｋｇ、脱イオン水９０ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を噴霧乾燥して本発明の肥満抑制用粉乳１０ｋｇを製造した。なお本発明の肥満抑制粉乳１０ｇにはコハク酸が１００ｍｇ含まれていた。
【実施例１１】
【００５５】
（肥満抑制用乳飲料の調製）
実施例２のグルコン酸４０ｇ、牛乳９．９６ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。１３０℃で２秒間、加熱殺菌した後、１０℃以下まで冷却して本発明の肥満抑制用乳飲料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用乳飲料２００ｇにはグルコン酸が８００ｍｇ含まれていた。
【実施例１２】
【００５６】
（肥満抑制用発酵乳の調製）
コハク酸（和光純薬工業社製）５ｇ、脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７６９５ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後１０℃以下まで冷却し、本発明の肥満抑制用発酵乳１０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用発酵乳２００ｇには、コハク酸が１００ｍｇ含まれていた。
【実施例１３】
【００５７】
（肥満抑制用乳酸菌飲料の調製）
脱脂粉乳１７００ｇ、グルコース３００ｇ、脱イオン水７７００ｇを混合し、９５℃で２時間保持することで加熱殺菌した。これを３７℃まで冷却し、乳酸菌スターター（Ｌｂ．ｃａｓｅｉ）を３００ｇ植菌し、攪拌混合後、３７℃に保持したインキュベーター内でｐＨ４．０まで発酵させた。ｐＨ４．０到達後、攪拌しながら１０℃以下まで冷却し、発酵ベースを得た。また、実施例２のグルコン酸５０ｇ、上白糖１８００ｇ、酸味料２０ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水８１２０ｇを混合し、９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却し、糖液を得た。前述の発酵ベース２０００ｇと糖液８０００ｇを混和し、均質機で組織を滑らかにし、２００ｍｌ入り紙容器５０本に分注後、アルミ蓋で密封し、本発明の肥満抑制用乳酸菌飲料１０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用乳酸菌飲料２００ｍｌには、グルコン酸が８００ｍｇ含まれていた。
【実施例１４】
【００５８】
（肥満抑制用清涼飲料水の調製）
２−ケト−Ｄ−グルコン酸（シグマアルドリッチ社製）２００ｍｇ、５０％乳酸０．７５ｋｇ、エリスリトール５．７ｋｇ、香料１ｋｇ、脱イオン水４２．５５ｋｇを混合し、４０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。この溶液を９０℃で１０分間殺菌後１０℃以下まで冷却することで、本発明の肥満抑制用清涼飲料水５０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用清涼飲料水２００ｍｌには、２−ケト−Ｄ−グルコン酸が８ｍｇ含まれていた。
【実施例１５】
【００５９】
（肥満抑制用チーズの調製）
ゴーダチーズ９ｋｇ、チェダーチーズ９ｋｇ、アサリむき身１ｋｇ、コハク酸（和光純薬工業社製）１００ｇ、クエン酸ナトリウム２００ｇ、脱イオン水７００ｇを混合し、８５℃で乳化した。乳化後にチーズをカルトンに充填して２昼夜、５℃で冷却して、本発明の肥満抑制用チーズ２０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用チーズ１００ｇには、コハク酸が１００ｍｇ含まれていた。
【実施例１６】
【００６０】
（肥満抑制用マーガリンの調製）
大豆硬化油２ｋｇ、大豆白絞油４ｋｇ、パーム油２．５ｋｇ、グリセリン脂肪酸エステル５０ｇを混合して油層を調製した。次に、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸８ｇ、乳酸１０ｇ、脱イオン水１４３２ｇを混合し、油層へ添加して油中水型乳化物を得た、この乳化物をマーガリン製造機で冷却、固化および練圧して、本発明の肥満抑制用マーガリン１０ｋｇを製造した。なお本発明の肥満抑制マーガリン１０ｇには、２−ケト−Ｄ−グルコン酸が８ｍｇ含まれていた。
【実施例１７】
【００６１】
（肥満抑制用クリームの調製）
ナタネ硬化油４．５ｋｇ、レシチン４０ｇ、モノグリセリン脂肪酸エステル１０ｇ、ソルビタン脂肪酸エステル１０ｇを混合し、油相を調製した。次に、実施例３の２−ケト−Ｄ−グルコン酸８ｇ、脱脂粉乳４００ｇ、カゼインナトリウム１０ｇ、シュガーエステル２０ｇ、リン酸塩１０ｇ、キサンタンガム５ｇ、脱イオン水４．９８７ｋｇを混合して、水相を調製した。水相を６５℃に加温し、７０℃に加温した油相を少量ずつ攪拌しながら添加し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合した。これを均質機で均質処理して本発明の肥満抑制クリーム１０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制クリーム１０ｇには、２−ケト−Ｄ−グルコン酸が８ｍｇ含まれていた。
【実施例１８】
【００６２】
（肥満抑制プリンの調製）
はちみつ２０００ｇ、グルコン酸（和光純薬工業社製）７０ｇｇ、脱脂粉乳８００ｇ、マスカルポーネ３００ｇ、液状水飴７００ｇ、グラニュー糖５００ｇ、生クリーム２５０ｇ、バター２００ｇ、加糖卵黄４００ｇ、ゼラチン４０ｇ、寒天１５ｇ、ローカストビーンガム１２０ｇ、脱イオン水４６０５ｇを混合して、プリンミックスとした。このプリンミックスをＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、６０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明の肥満抑制プリン１００個を製造した。なお、本発明の肥満抑制プリン１００ｇには、グルコン酸が８００ｍｇ含まれていた。
【実施例１９】
【００６３】
（肥満抑制用ゼリーの調製）
ＰＴＨｒＰ（シグマアルドリッチ社製）２０ｇ、果糖２０００ｇ、グラニュー糖１５００ｇ、水飴５００ｇ、寒天１００ｇ、香料１０ｇ、脱イオン水５８７０ｇを混合し、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社製）にて、６，０００ｒｐｍで１０分間撹拌混合し、５０℃に加熱して溶解した後、１００ｇずつ容器へ充填して冷却することで、本発明の肥満抑制用ゼリー１００個を製造した。なお、本発明の肥満抑制用ゼリー１００ｇには、ＰＴＨｒＰが２００ｍｇ含まれていた。
【実施例２０】
【００６４】
（肥満抑制用ウエハースの調製）
実施例４のＰＴＨｒＰ０．０２ｋｇ、小麦粉８．５ｋｇ、コーンスターチ１．２１ｋｇ、パーム油０．２２ｋｇ、膨張剤０．０５ｋｇを混合した後、脱イオン水を適量加えてバッターを調製した後、ウエハース焼成機で焼成して、本発明の肥満抑制用ウエハース１０ｋｇを製造した。なお、本発明の肥満抑制用ウエハース５０ｇには、ＰＴＨｒＰが１００ｍｇ含まれていた。
【配列表】
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