(57)【要約】【課題】Ｔｈ１７細胞に関わる上皮又は粘膜の不具合を抑制することができる新規な組成物の提供。【解決手段】上皮又は粘膜に投与される組成物は、（ｉ）Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ｉｉ）内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質を有効成分として含有し、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制するため、又はＴｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患の治療または予防に用いられる。【選択図】図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
上皮又は粘膜に投与される組成物であって、
（ｉ）Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ｉｉ）内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質
を有効成分として含有し、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制するために用いられる組成物。
【請求項２】
上皮又は粘膜に投与される組成物であって、
（ｉ）Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ｉｉ）内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質
を有効成分として含有し、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患の治療または予防に用いられる組成物。
【請求項３】
前記皮膚疾患は、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する炎症性角化症である請求項２記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、上皮又は粘膜に投与される組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症性角化症として、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌の増加を一因とする疾患が知られている。その一例である尋常性乾癬は、全身の皮膚に生じる慢性の炎症性角化症であり、全身のあらゆる部位に、厚い鱗屑を伴う大小の紅斑を散在性またはびまん性に生じる。
【０００３】
従来、尋常性乾癬の治療は、ステロイドやビタミンＤ３の外用、ビタミンＡ誘導体やシクロスポリンの内服、光線療法、生物学的製剤の注射などにより行われてきた。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかし、尋常性乾癬の外用治療には、ほとんどの場合、非常に強いステロイドを長期にわたって外用する必要があり、皮膚に対する副作用が避けがたい。ビタミンＤ３は、その効果の発現に数週間を要することと、高カルシウム血症の点で問題を有する。その他の治療にもそれぞれ重大な副作用が伴い、適用が限られる。このため、上記従来の成分に代わる新規な有効成分へのニーズがある。
【０００５】
本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、Ｔｈ１７細胞に関わる上皮又は粘膜の不具合を抑制することができる新規な組成物の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、チオレドキシンの活性部位（Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓ）を含むポリペプチドが、意外にも、上皮又は粘膜に投与されると、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制し、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患の治療または予防することができることを見出し、本発明を完成するに至った。具体的に、本発明は以下のものを提供する。
【０００７】
（１）  上皮又は粘膜に投与される組成物であって、
（ｉ）Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ｉｉ）内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質
を有効成分として含有し、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制するために用いられる組成物。
【０００８】
（２）  上皮又は粘膜に投与される組成物であって、
（ｉ）Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ｉｉ）内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質
を有効成分として含有し、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患の治療または予防に用いられる組成物。
【０００９】
（３）  前記皮膚疾患は、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する炎症性角化症である（２）記載の組成物。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質を含むことで、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制し、またＴｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患を治療または予防することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明の実施例に係る組成物の、乾癬様皮膚炎の発症で増加する耳介厚に対する影響を示すグラフである。
【図２】本発明の実施例に係る組成物の、皮膚の乾癬様組織学的変化に対する影響を示す顕微鏡写真である。
【図３】本発明の実施例に係る組成物の、Ｔｈ１７型サイトカインの生産量への影響を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明の実施形態を説明するが、これらに本発明が限定されるものではない。
【００１３】
本発明は、上皮又は粘膜に投与される組成物であって、（ｉ）Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含むアミノ酸配列からなるポリペプチド、又は（ｉｉ）内在性チオレドキシンタンパク質の生産を局所的に亢進する物質を有効成分として含有し、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制するために用いられる組成物である。また、本発明は、上記有効成分を含有し、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患の治療または予防に用いられる組成物である。
【００１４】
Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓはチオレドキシンタンパク質の活性サイトを構成するアミノ酸配列であり、この配列を含むポリペプチドは、酸化還元活性を介し、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制する効果を発揮すると考えられる。また、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌が局所的に抑制されることで、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患を治療または予防することができる。上記ポリペプチドは、従来人体へ投与されてきたチオレドキシンタンパク質の活性に基づくため、その安全性は極めて高く、副作用が生じにくいと考えられる。
【００１５】
従来、チオレドキシンを全身投与（代表的には、経口投与、注射投与）することが知られていたが、上皮又は粘膜への投与によるサイトカイン生産又は分泌の局所的抑制作用は報告されていない。本発明は、チオレドキシンタンパク質が、意外にも、局所作用的にＴｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を抑制することの発見に基づき、完成された。局所とは、特に限定されないが、ケラチノサイト、病変部皮膚リンパ球等が挙げられる。
【００１６】
本発明で生産又は分泌が抑制されるＴｈ１７型サイトカインは、特に限定されないが、ＩＬ−１７（具体的にはＩＬ−１７ａ、１７ｆ）、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３等の１種以上である。本発明の組成物が、Ｔｈ１７型以外のサイトカイン（例えばＴＮＦ−α、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＣＸＣＬ−１、ＭＣＰ−１）の生産又は分泌をも抑制することは、本発明から除外されないが、それらのサイトカインのみの生産又は分泌の抑制のための用途は、本発明から除外される。
【００１７】
本発明で治療又は予防されるＴｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患は、特に限定されないが、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する炎症性角化症（例えば、尋常性乾癬など）、皮膚炎や皮膚ウイルス感染症（例えば、アトピー性皮膚炎、自己免疫諸疾患（シェーグレン症候群他）、皮膚粘膜症候群含む皮膚粘膜炎症性疾患、炎症性腸疾患など）等が挙げられる。逆に、本発明の適用には、Ｔｈ１７細胞に起因も関連もするとはいえない皮膚疾患、Ｔｈ１７細胞に起因も関連もするとはいえない炎症性角化症は、包含されない。
【００１８】
別の側面で、本発明の組成物は、全身性免疫を標的とするものではないので、従来の免疫抑制剤の投与が適切でないと考えられる患者にも好適に投与することができる。例えば、感染症、自己免疫疾患、肺がん、及び皮膚がんからなる群より選ばれる１種以上に併せて罹患した患者、非ステロイド性抗炎症薬の投与が禁忌である患者が挙げられる。
【００１９】
一方、投与経路及び作用のしかたは異なるものの、チオレドキシンがＣｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓサイトの活性を通じて抗炎症を改善することは公知である。この技術水準にある当業者は、本明細書の開示に触れることで、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを有するポリペプチドの上皮又は粘膜投与により、Ｔｈ１７型サイトカインの生産又は分泌を局所的に抑制し得ることを容易に理解することができる。
【００２０】
従って、本発明で用いられるポリペプチドは、生産効率の観点では、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓを含み、必要最小限の数のアミノ酸で構成されることが好ましい。ポリペプチドの長さの下限は、４以上であればよく、具体的には１０以上、２５以上、５０以上、７５以上、１００以上であってよい。ポリペプチドの長さの上限は、特に限定されず、例えば２００以下、１７５以下、１５０以下、１２５以下、１０５以下、１００以下、７５以下、５０以下、２５以下、１０以下、５以下、４であってよい。
【００２１】
一方で、本発明で用いられるポリペプチドは、免疫応答を生じにくいよう、ヒトチオレドキシンタンパク質と類似の配列を有することが好ましく、具体的には配列番号１（ヒトチオレドキシンタンパク質）のアミノ酸配列、又は配列番号１と８０％以上の相同性（ただし、Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｃｙｓは保存されている）を有するアミノ酸配列を含んでよい。相同性は、８５％以上であることが好ましく、より好ましくは９０％以上、９５％以上である。
【００２２】
本発明に係る組成物は、局所的なサイトカインの生成又は分泌を、増加幅を低減し、又は増加の予防をすることができるので、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患を罹患した患者に対する治療、及び罹患前の患者に対する予防の双方において好適に使用される。
【００２３】
本発明の組成物は、種々の剤形をとることができ、適用箇所（上皮又は粘膜）に応じて適宜の剤形から選択されてよい。粘膜としては、例えば口腔、肺等が挙げられる。剤形としては、具体的に、軟膏剤、クリーム、ゲル等の半固形状製剤、散剤、粒剤、スチック剤、シート剤（フィルム状のものも含む）、坐剤等の固形状製剤、水溶液、懸濁液、ローション、乳液等の液状製剤が挙げられる。また、必要に応じてこれらをスプレー剤にしてもよい。更に、貼付剤の形態、例えばパップ剤、プラスター剤、パッチ剤等も挙げられる。好ましくは、軟膏剤、クリーム、ゲル、スチック剤、シート剤（フィルム状のものも含む）、パップ剤が挙げられる。
【００２４】
本発明の組成物は、剤形等に応じ、上記の有効成分であるポリペプチドに加え、外用剤に用いられる任意の成分を含有することができる。具体的な成分の詳細な説明は、省略する。また、本発明の組成物は、全身性免疫抑制を伴いにくいので、投与される有効成分量や投与頻度を、自由に選択することができる。
【実施例】
【００２５】
Ｃ５７ＢＬ／６マウスの耳介両面にイミキモド（「ＩＭＱ」、ベセルナクリーム５％、持田製薬社製）を片面当たり１０ｍｇ、２４時間おきに連日外用（乾癬モデルマウスの標準的な作成方法である）し、片耳当たり８μＬのＰＢＳまたは２２ｍｇ／ｍＬチオレドキシン（「ＴＲＸ」）を同時に連日外用した。各時点での耳介厚と第０日目の耳介厚との差をグラフ化した。その結果を図１に示す。また、第５日目に耳介を採取し病理標本（ヘマトキシリン・エオジン染色）を作成し、顕微鏡にて組織学的に評価した。その結果を図２に示す。
【００２６】
図１に示されるように、チオレドキシン外用群ではＰＢＳ外用群に比べて耳介厚の増大幅が小さかった。また、図２に示されるように、チオレドキシン外用群ではＰＢＳ外用群に比べて表皮、真皮の肥厚並びに炎症細胞浸潤が減弱した。このように、ＰＢＳ外用群で顕著な乾癬様皮膚炎の発症が、チオレドキシン外用群では抑制されたことから、チオレドキシン外用が乾癬様皮膚炎を抑制することが判明した。
【００２７】
各マウス耳の試料から、ＱｕｉｃｋＧｅｎｅ  ＲＮＡ  ｔｉｓｓｕｅ  ｋｉｔ  ＳＩＩ（富士フィルム社）を用いて、全ＲＮＡを抽出した。この全ＲＮＡを、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ  ＲＴ試薬キット（タカラバイオ社）を用いて逆転写させ、ＳＹＢＲ（登録商標）Ｐｒｅｍｉｘ  Ｅｘ  Ｔａｑ（商標）ＩＩ（タカラバイオ社）を用いてリアルタイムＰＣＲにより定量を行った（タカラバイオ社より入手した適切なプライマーを使用、ハウスキーピング遺伝子としてＧＡＰＤＨを用いた）。ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ７５００配列検出システム（アプライドバイオシステムズ社）を用いて反応を行い、ｍＲＮＡを定量した。この結果を図３に示す。
【００２８】
図３に示されるように、チオレドキシン群では、ＰＢＳ群に比べ、ＩＬ−１７ａ、ＩＬ−２２、及びＩＬ−２３のｍＲＮＡ量が有意に低減されていた。これらはいずれもＴｈ１７型サイトカインであり、その発現が抑制されたことは、チオレドキシン局所投与による、Ｔｈ１７細胞に起因又は関連する皮膚疾患の治療または予防効果を示唆する。また、図１〜３を総合して、チオレドキシンの作用点は、ケラチノサイトおよび病変部皮膚リンパ球であることが考えられた。
【図１】
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【図３】
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【図２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年7月14日(2015.7.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
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