(57)【要約】【課題】パッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として各種組織の修復に適用できる、魚皮由来組織修復材料及びその製造方法の提供。【解決手段】本発明の魚皮由来組織修復材料及びその製造方法は、組織修復材料の提供に適用され、かつこの組織修復材料がパッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として各種組織の修復に適用できる。組織修復材料はコラーゲンを備え、損傷組織の修復を促進し、かつ予期される組織修復応用に必要な特定の特徴を備えている。さらに、この組織修復材料は人畜共通疾患（ウイルスにより引き起こされる）の病原因子の残留がない。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
魚皮由来組織修復材料であって、
魚皮に由来し、かつ無細胞の光学的に透明な片状体を含み、前記光学的に透明な片状体が、コラーゲンマトリクスと、前記コラーゲンマトリクス中の水を含むことを特徴とする、
魚皮由来組織修復材料。
【請求項２】
前記光学的に透明な片状体が、７０％より大きいかまたはこれに等しい光透過率、５ＭＰａより大きいかまたはこれに等しい極限応力、４０ｇより大きいかまたはこれに等しい可縫性を備えることを特徴とする、請求項１に記載の魚皮由来組織修復材料。
【請求項３】
前記コラーゲンマトリクスが層状構造であり、前記層状構造が複数のコラーゲン繊維を備え、かつ前記各コラーゲン繊維が前記光学的に透明な片状体の一表面に沿って延伸されることを特徴とする、請求項１に記載の魚皮由来組織修復材料。
【請求項４】
前記コラーゲンマトリクスが層状構造であり、前記層状構造が複数のコラーゲン繊維を備え、かつ前記複数のコラーゲン繊維中の一部分のコラーゲン繊維が前記光学的に透明な片状体の一表面から前記光学的に透明な片状体の別の一表面に沿って一方向に延伸されることを特徴とする、請求項１に記載の魚皮由来組織修復材料。
【請求項５】
前記光学的に透明な片状体が、完全に魚鱗及び魚肉のない前期魚皮に由来することを特徴とする、請求項１に記載の魚皮由来組織修復材料。
【請求項６】
前記光学的に透明な片状体が前記魚皮に由来し、かつすり下ろされていないことを特徴とする、請求項１に記載の魚皮由来組織修復材料。
【請求項７】
前記光学的に透明な片状体が、前記魚皮上の魚鱗、油脂、細胞、色素、ポケット様構造を除去して純化後魚皮を得る工程と、酸液で前記純化後魚皮を処理して未崩解の固態片状体を得る工程と、前記固態片状体を成形して特定形状の成形後片状体を得る工程と、安定化プロセスを実行して前記成形後片状体を安定させる工程を含む製造方法により製造されることを特徴とする、請求項１に記載の魚皮由来組織修復材料。
【請求項８】
魚皮由来組織修復材料の製造方法であって、
魚肉のない魚皮を取得する工程と、
前記魚皮上の魚鱗、油脂、細胞、色素、ポケット様構造を除去して純化後魚皮を得る工程と、
酸液で前記純化後魚皮を処理して未崩解の固態片状体を得る工程と、を含むことを特徴とする、
魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項９】
さらに、前記固態片状体を成形して特定形状を備えた成形後片状体を得る成形工程を含むことを特徴とする、請求項８に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１０】
さらに、前記成形後片状体の水洗工程を含むことを特徴とする、請求項９に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１１】
さらに、前記水洗工程の前に、前記成形後片状体を乾燥させる工程を含むことを特徴とする、請求項１０に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１２】
さらに、前記水洗工程の後に、前記成形後片状体を乾燥させる乾燥工程を含むことを特徴とする、請求項１０に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１３】
さらに、前記乾燥工程の後、前記成形後片状体を水で戻す工程を含むことを特徴とする、請求項１２に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１４】
さらに、前記水洗工程の前に、前記成形後片状体を乾燥させる工程を含むことを特徴とする、請求項１３に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１５】
前記成形工程が、前記固態片状体を切断して前記成形後片状体を得る工程を含み、そのうち、前記成形後片状体の表面が前記固態片状体の断面であることを特徴とする、請求項９乃至１４のいずれか一項に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１６】
前記成形工程が、前記固態片状体を切断して前記成形後片状体を得る工程を含み、そのうち、前記成形後片状体の表面が前記固態片状体の表面であることを特徴とする、請求項９乃至１４のいずれか一項に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１７】
さらに、前記固態片状体からコラーゲン溶液を抽出する工程を含むことを特徴とする、請求項８に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１８】
さらに、前記固態片状体を凍結乾燥する工程を含むことを特徴とする、請求項８に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項１９】
さらに、前記固態片状体の少なくとも１つの外側層を除去する工程と、酸液で前記少なくとも１つの外側層を除去した後の前記固態片状体を処理する工程を含むことを特徴とする、請求項８に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法。
【請求項２０】
請求項８乃至１９のいずれか一項に記載の魚皮由来組織修復材料の製造方法により製造されることを特徴とする、魚皮由来組織修復材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は組織修復材料に関し、特に魚皮由来組織修復材料及びその製造方法であって、魚皮由来組織修復材料を提供し、かつこの魚皮由来組織修復材料が、パッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として各種組織の修復に適用できる、魚皮由来組織修復材料及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織工学は生物及び薬物の生物材料と関連があり、移植手術を行う病人の血管造影、組織整合、組織再建を強化することができ、生物材料は生体適合性を備えた人工組織修復材料であり、人造器官の再建、修復または補修、さらには人体組織の置き換えに応用されている。
【０００３】
コラーゲンは組織修復材料の重要な組成物であり、組織の成長、傷口の治癒等の機能を備えている。このほか、コラーゲンを組織修復材料とした応用分野の規模は拡大を続けているため、より医療価値があり、より多様なコラーゲン含有組織修復材料を開発し、各種用途に応用することが現今研発者の主要な研究の１つとなっている。
【０００４】
現在の組織修復材料はほとんどが自分の体、ドナー、または動物に由来している。しかしながら、一部の疾病の治療においては、自分の体の組織修復材料を取得できない、または自分の体の組織修復材料を取得できても充分ではない場合がある。
さらに、ドナー由来の組織修復材料はドナーの供給、作製準備手順が複雑で、コストが相対して高く、免疫拒絶反応のリスク等の問題がある。また、動物由来の組織修復材料も、作製準備手順が複雑で、コストが相対して高く、免疫拒絶反応のリスク、人畜共通疾患等の問題がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、パッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として各種組織の修復に適用できる、魚皮由来組織修復材料及びその製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
一実施例において、魚皮由来組織修復材料は、魚皮に由来し、かつ光学的に透明な片状体である。この光学的に透明な片状体は無細胞で、かつコラーゲンマトリクス及びコラーゲンマトリクス中の水を含む。
【０００７】
一部の実施例において、この光学的に透明な片状体は、７０％より大きいかまたはこれに等しい光透過率、５ＭＰａより大きいかまたはこれに等しい極限応力、４０ｇより大きいかまたはこれに等しい可縫性を備えてもよい。
【０００８】
一部の実施例において、このコラーゲンマトリクスは、コラーゲン繊維の層状構造を備えてもよく、かつ各コラーゲン繊維が光学的に透明な片状体の表面に沿って延伸されてもよい。別の一部の実施例において、このコラーゲンマトリクスは、コラーゲン繊維の層状構造を備えてもよく、かつ一部のコラーゲン繊維が光学的に透明な片状体の一表面から別の一表面の方向に沿って延伸される。
【０００９】
一部の実施例において、この光学的に透明な片状体は、完全に魚鱗及び魚肉のない魚皮に由来してもよい。
【００１０】
一部の実施例において、この光学的に透明な片状体は、魚皮に由来し、かつすり下ろされていなくてもよい。
【００１１】
一部の実施例において、この光学的に透明な片状体は、魚皮上の魚鱗、油脂、細胞、色素及びポケット様構造を除去して純化後魚皮を取得する工程と、酸液で純化後魚皮を処理して未崩解の固態片状体を取得する工程と、固態片状体の成形を行い、特定形状の成形後片状体を取得する工程と、安定化プロセスを行い、成形後片状体を安定化させる工程と、を含む製造方法により製造することができる。
【００１２】
一実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法は、魚肉のない魚皮を取得する工程と、魚皮上の魚鱗、油脂、細胞、色素及びポケット様構造を除去して純化後魚皮を取得する工程と、酸液で純化後魚皮を処理して未崩解の固態片状体を取得する工程を含む。
【００１３】
一部の実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法はさらに、成形後片状体を水洗する工程を含んでもよい。一部の実施例において、組織修復材料の製造方法はさらに、水洗工程の前または後に、成形後片状体を乾燥させる工程を含んでもよい。一部の実施例において、組織修復材料の製造方法はさらに、乾燥工程の後に、成形後片状体を水で戻す工程を含んでもよい。
【００１４】
一部の実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法はさらに、固態片状体の成形を行い、特定形状の成形後片状体を取得する工程を含んでもよい。一部の実施例において、成形工程は、固態片状体をカットして成形後片状体を取得し、この成形後片状体の表面が固態片状体の断面である工程を含んでもよい。別の一部の実施例において、成形工程は、固態片状体をカットして成形後片状体を取得し、この成形後片状体の表面が固態片状体の表面である工程を含んでもよい。
【００１５】
一部の実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法はさらに、固態片状体からコラーゲン溶液を抽出する工程を含んでもよい。
【００１６】
一部の実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法はさらに、固態片状体を凍結乾燥する工程を含んでもよい。
【００１７】
一部の実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法はさらに、固態片状体の外側層を除去する工程と、酸液で外側層を除去した後の固態片状体を処理する工程を含んでもよい。
【００１８】
一実施例において、魚皮由来組織修復材料は、前述のいずれかの製造方法で製造される。
【発明の効果】
【００１９】
上述をまとめると、本発明に基づいた魚皮由来組織修復材料及びその製造方法は、組織修復材料の提供に適用され、かつこの組織修復材料がパッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として各種組織の修復に適用できる。
この組織修復材料はコラーゲンを備え、損傷組織の修復を促進し、かつ予期される組織修復応用に必要な特定の特徴を備えている。さらに、現在の各研究によれば、この組織修復材料は人畜共通疾患（ウイルスにより引き起こされる）の病原因子の残留がないことが示されている。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】一実施例の魚皮由来組織修復材料の製造方法のフローチャートである。
【図２】一実施例の工程Ｓ２０のフローチャートである。
【図３】一実施例の工程Ｓ３０のフローチャートである。
【図４】別の一実施例の魚皮由来組織修復材料の製造方法のフローチャートである。
【図５】実施例１の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図６】実施例２の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図７】実施例３の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図８】実施例４の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図９】実施例５の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図１０】実施例６の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図１１】実施例７の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図１２】実施例８の工程Ｓ４０のフローチャートである。
【図１３】さらに別の一実施例の魚皮由来組織修復材料の製造方法のフローチャートである。
【図１４】一実施例の原初の魚皮表面の写真である。
【図１５】一実施例の原初の魚皮の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による顕微鏡写真である。
【図１６】一実施例の原初の魚皮の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による顕微鏡写真である。
【図１７】一実施例の原初の魚皮の走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）による顕微鏡写真である。
【図１８】一実施例の第２純化後魚皮のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図１９】一実施例の第１固態片状体の写真である。
【図２０】一実施例の第１固態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図２１】一実施例の第１固態片状体の染色切片の顕微鏡写真である。
【図２２】一実施例の第１安定状態片状体の写真である。
【図２３】一実施例の第１安定状態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図２４】一実施例の第１安定状態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図２５】一実施例の第４安定状態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図２６】一実施例の第５安定状態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図２７】一実施例の第６安定状態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【図２８】一実施例の第７安定状態片状体のＳＥＭによる顕微鏡写真である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下で言及される「第１」、「第２」、「第３」…等の順序を示す用語は、その指し示す部材を区別するために用いられ、順序を示したりその指し示す部材の差異を限定するものではなく、かつ本発明の範囲を制限するものではない。
【００２２】
一実施例において、魚皮由来組織修復材料は魚皮に由来する片状体である。この片状体は無細胞で、かつコラーゲンマトリクス及びコラーゲンマトリクス中の水を含む。この魚皮に由来する片状体は各種組織修復の応用に適用できる可縫性を備えている。そのうち、魚皮由来組織修復材料は、パッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として、例えば眼科組織、口内組織、皮膚、骨組織等、各種組織の修復に適用できる。
一部の実施例において、この片状体は光学的に透明な片状体とし、傷口の観察及び（または）眼科組織の修復に用いることができる。一部の実施例において、この片状体はパッチ、包帯材、担体、支持体または埋入物とするに足る極限応力を備えてもよい。
【００２３】
一部の実施例において、光学的に透明な片状体は、７０％より大きいかまたはこれに等しい光透過率、５ＭＰａより大きいかまたはこれに等しい極限応力、４０ｇより大きいかまたはこれに等しい可縫性を備えてもよい。
【００２４】
一部の実施例において、コラーゲンマトリクスは層状構造としてもよく、かつこの層状構造は複数のコラーゲン繊維を含む。一部の実施例において、各コラーゲン繊維は片状体の表面に沿って延伸されてもよい。別の一部の実施例において、複数のコラーゲン繊維は一部のコラーゲン繊維が片状体の一表面から別の一表面の方向に延伸され、別の一部が異なる方向に延伸されてもよい（例えば、片状体の表面に沿って延伸される）。
【００２５】
図１に示すように、一実施例において、魚皮由来組織修復材料の製造方法は主に魚肉のない魚皮を取得（工程Ｓ１０）した後に実行される純化プロセス（工程Ｓ２０）及び成形プロセス（工程Ｓ３０）を備えている。
【００２６】
工程Ｓ１０の一部の実施例において、魚皮は魚鱗を備えているが、魚肉のない原初の魚皮としてもよい。一部の実施例において、生産履歴等の関連証明書類を提供可能な魚場から魚を取得し、取得した魚の皮と肉を分離して、魚鱗を備えているが、魚肉のない原初の魚皮を得てもよい。一部の実施例において、魚皮を提供する魚の種類は、例えばスズキ、鯛、ハタ科の魚（例：ハタ等）、テラピア等の色素が魚皮表層にのみ存在する魚の種類としてもよい。
【００２７】
図２に示すように、純化プロセス（工程Ｓ２０）は、魚皮上の魚鱗を除去する工程（工程Ｓ２１０）と、魚皮上の油脂および細胞を除去する工程（工程Ｓ２３０）と、魚皮上の色素およびポケット様構造を除去する工程（工程Ｓ２５０）を含む。この純化プロセス（工程Ｓ２０）を完了すると、純化後魚皮が得られる。
【００２８】
工程Ｓ２１０の一実施例において、少なくとも１つの方式（以下、第１方式という）を通じて原初の魚皮上の魚鱗を完全に除去して魚鱗を除去した魚皮を取得し、きれいな水で魚鱗を除去した魚皮を洗浄して魚鱗と魚皮上の異物（例えば組織液、血、またはその組み合わせなど）を除去してもよい。
一部の実施例において、第１方式は物理的方式、化学的方式またはその組み合わせとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、物理的方式において、手で原初の魚皮上の魚鱗を除去したり、包丁で原初の魚皮上の魚鱗を除去したり、液体の剪断力で原初の魚皮上の魚鱗を除去したり、高圧気（液）体で原初の魚皮上の魚鱗を除去したり、あるいは原初の魚皮を２５℃〜６０℃の温水に浸漬して魚鱗を除去したりすることができる。化学方式の一実施例において、例えば（但しこれに限らない）、原初の魚皮は酸液に浸漬して魚鱗を除去する。一部の実施例において、酸液は有機酸または無機酸としてもよい。そのうち、酸液はコハク酸、ギ酸、酢酸、クエン酸、ピルビン酸、フマル酸、塩酸（ＨＣｌ）、硝酸（ＨＮＯ３）、または硫酸（Ｈ２ＳＯ４）とすることができる。化学方式の別の一実施例において、例えば（但しこれに限らない）、原初の魚皮はアルカリ液に浸漬して魚鱗を除去する。そのうち、アルカリ液は水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）または水酸化カリウム（ＫＯＨ）とすることができる。化学方式のさらに別の一実施例において、例えば（但しこれに限らない）、原初の魚皮は過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）に浸漬して魚鱗を除去する。
【００２９】
工程Ｓ２３０の一実施例において、魚鱗を除去した魚皮上の油脂と細胞は同一の処理作業または異なる処理作業を通じて除去される。最後に、処理後の魚皮（即ち、油脂と細胞を除去した後の魚鱗除去済み魚皮）を水洗いし、処理後の魚皮上の異物を除去し、及び（または）処理後の魚皮のｐＨ値を中和する。そのうち、使用する水はきれいな水、脱イオン水、二段脱イオン水（ＤＤＷ）、生理食塩水、リン酸塩緩衝溶液（ＰＢＳ）、またはリン酸緩衝溶液（ＰＢ）としてもよい。一部の実施例において、魚鱗を除去した魚皮は化学薬剤で油脂を除去してもよい。そのうち、使用する化学薬剤はアルコール溶液、アルカリ液またはその任意の組み合わせとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、アルコール溶液はイソプロピルアルコールとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、アルカリ液はＮａＯＨまたはＫＯＨとしてもよい。
一部の実施例において、魚鱗を除去した魚皮は、少なくとも１つの方式（以下で第２方式という）を通じて細胞を除去してもよい。一部の実施例において、第２方式は化学方式、酵素処理方式、物理方式、またはその任意の組み合わせとしてもよい。化学方式においては、化学薬剤を使用して魚鱗を除去した魚皮上の細胞を除去する。そのうち、使用する化学薬剤は、塩類、アルカリ液、酸液、酸化剤、キレート剤、またはその任意の組み合わせとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、塩類は塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）または塩化カリウム（ＫＣｌ）としてもよい。例えば（但しこれに限らない）、アルカリ液はＮａＯＨまたはＫＯＨとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、酸液はコハク酸、ギ酸、酢酸、クエン酸、ピルビン酸、フマル酸、ＨＣｌ、ＨＮＯ３、またはＨ２ＳＯ４としてもよい。例えば（但しこれに限らない）、酸化剤は過酸化水素または過硫酸としてもよい。例えば（但しこれに限らない）、キレート剤は遷移金属元素を含む試薬、例えば：Ｃａ２＋、Ｆｅ２＋、Ｍｎ２＋…等としてもよい。
酵素処理方式においては、少なくとも１種類の酵素で魚鱗を除去した魚皮上の細胞を除去する。そのうち、使用する酵素はプロテアーゼ、エンドヌクレアーゼ、またはエキソヌクレアーゼとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、エンドヌクレアーゼはＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＴａｑＩ、ＮｏｔＩ、ＨｉｎｆＩ、またはＳａｕ３Ａとしてもよい。例えば（但しこれに限らない）、エキソヌクレアーゼは、リボヌクレアーゼＲ、リボヌクレアーゼＩＩ、リボヌクレアーゼＤ、ＲＮａｓｅ  ＢＮ、リボヌクレアーゼＰＨ、またはエキソヌクレアーゼＩとしてもよい。物理方式の一部の実施例においては、魚鱗を除去した魚皮を冷凍して魚鱗を除去した魚皮上の細胞を除去してもよい。
工程Ｓ２３０の一示範例において、魚鱗を除去した魚皮をＮａＯＨとＮａＣｌの混合溶液中に１２〜２４時間浸漬し、かつ浸漬の過程で混合溶液を数回交換し、処理後の魚皮を得る。浸漬後、処理後の魚皮をＤＤＷで洗浄し、魚皮のｐＨ値が中性に戻るまで浸漬した混合溶液を洗い流す。一部の実施例において、工程Ｓ２３０の実施過程で、処理温度は４℃〜２０℃に制御してもよい。例えば（但しこれに限らない）、工程Ｓ２３０の実施過程において、使用するすべての溶液はいずれも４℃〜２０℃の溶液温度である、及び（または）環境温度を４℃〜２０℃に制御する。
【００３０】
工程Ｓ２５０の一実施例において、魚鱗を除去した魚皮（中性）上の色素とポケット様構造は同一の処理作業または異なる処理作業を通じて除去される。一実施例において、処理後の魚皮は少なくとも１種類の酸液中に浸漬し、処理後の魚皮を膨潤させる（以下、膨潤魚皮という）。その後、膨潤魚皮にポケット様構造除去方式を施し、膨潤魚皮上のポケット様構造を除去する。そのうち、例えば（但しこれに限らない）、使用する酸液はコハク酸、ギ酸、酢酸、クエン酸、ピルビン酸、フマル酸、ＨＣｌ、ＨＮＯ３、またはＨ２ＳＯ４としてもよい。ここで、異なる種類の酸液に基づき異なる酸液濃度を選択して用いる。かつ、異なる酸液濃度に基づいて異なる浸漬時間を組み合わせる。例えば（但しこれに限らない）、０．０１Ｍ〜０．５Ｍの酢酸を使用するとき、浸漬時間は０．５時間〜１８時間とすることができ、或いは、０．３Ｍの酢酸を使用するとき、浸漬時間は約３０分間〜５０分間とすることができる。
さらに、処理変数（即ち、酸液濃度と浸漬時間）も処理後の魚皮の寸法に基づいて調整される。一示範例において、ポケット様構造除去方式を実施するとき、同時に膨潤魚皮上の色素を除去してもよい。別の一示範例において、膨潤魚皮は別途色素除去薬剤を用いて膨潤魚皮上の色素を除去してもよい。
ポケット様構造除去方式の一部実施例においては、鈍器を使用して膨潤魚皮上のポケット様構造を除去してもよい。例えば（但しこれに限らない）、使用する鈍器は手（例：指）、鉄片、プラスチック片、あるいは魚皮表面を損傷しない任意の器具としてもよい。一部の実施例において、使用する色素除去薬剤は酸化剤（例：過酸化水素または次亜塩素酸ナトリウム）あるいは界面活性剤（例：Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ１００）としてもよい。一部の実施例において、ポケット様構造除去方式を実施する過程において、膨潤魚皮上の模様、筋肉組織および不要な残留組織を同時に除去してもよい。
【００３１】
ここで理解されるべきは、フローの工程順序は単なる例示であって、本技術分野において通常の知識を有する者が本発明を理解できるように提供したまでであり、本発明の実施範囲を限定するものではない点である。
関連技術を熟知した者であれば合理的状況下で一部工程の実行順序を同時進行としたり、前後を入れ替えたり、合併して実行したりしてもよいことが理解されるであろう。例えば、各工程の実行内容に基づき、工程Ｓ２１０、工程Ｓ２３０、工程Ｓ２５０のうち任意の２つの工程または３つの工程を合併して１つの工程としてもよい。例えば、魚皮を酸液中に浸漬し、魚皮を膨潤させた後、鈍器で膨潤魚皮上の魚鱗とポケット様構造を同時に除去する。
【００３２】
図３に示すように、成形プロセス（工程Ｓ３０）は純化後魚皮を酸液で処理して未崩解かつ魚皮に由来する固態片状体を得る工程（工程Ｓ３１０）と、固態片状体を特定形状に成形し、特定形状を備え、かつ魚皮に由来する成形後片状体を得る工程（工程Ｓ３３０）を含む。そのうち、この成形後片状体は光学的に透明としてもよい。
【００３３】
工程Ｓ３１０の一部実施例において、純化後魚皮を少なくとも１種類の酸液中に浸漬し、純化後魚皮を膨潤させるが、崩解させない（即ち、魚皮に由来する固態片状体）。その後、この固態片状体を各種器具または金型で特定形状に成形し、成形後片状体（即ち、特定形状を備えた固態片状体）を形成する。そのうち、例えば（但しこれに限らない）、使用する酸液はコハク酸、ギ酸、酢酸、クエン酸、ピルビン酸、フマル酸、ＨＣｌ、ＨＮＯ３またはＨ２ＳＯ４としてもよい。ここで、異なる種類の酸液に基づき異なる酸液濃度を選択して用いる。かつ、異なる酸液濃度に基づいて異なる浸漬時間を組み合わせる。
さらに、処理変数（即ち、酸液濃度と浸漬時間）も処理後の魚皮の寸法に基づいて調整される。一部の実施例において、成形後片状体の特定形状は、二次元の片状、表面が平坦な袋状、弧状、管状、直線または非直線状（例：単一の線または複数本を接続して成る）、球状（例：粉末または顆粒）、塊状、針状、中実の多辺形、または中空の多辺形としてもよい。
【００３４】
一部の実施例において、成形工程（工程Ｓ３３０）を実行する過程で、固態片状体は特定の寸法に切断してもよい。一示範例において、切断した後、固態片状体の表面（即ち、固態片状体の表面の小さな一部分）が成形後片状体の表面となる。別の一示範例において、切断した後、固態片状体の断面が成形後片状体の表面となる（即ち、成形後片状体の上表面及び（または）下表面が固態片状体の断面であり、成形後片状体の側辺が固態片状体の表面の小さな一部分である）。
【００３５】
一部の実施例において、成形工程（工程Ｓ３３０）を実行する過程で、固態片状体はすり下ろされない。
【００３６】
別の一実施例において、図４に示すように、成形プロセス（工程Ｓ３０）を実行した後、安定化プロセス（工程Ｓ４０）を実行してもよい。
【００３７】
一実施例において、安定化プロセス（工程Ｓ４０）は、成形後片状体を安定させ、安定状態の光学的に透明な片状体を得ることを含む。
【００３８】
安定化工程の実施例１において、図５に示すように、成形プロセス（工程Ｓ３０）を実行した後、片状体のｐＨ値が中性になるまで固態片状体を直接水洗いしてもよい（工程Ｓ４５０）。つまり、成形プロセス（工程Ｓ３０）と水洗工程（工程Ｓ４５０）の間にいかなる乾燥工程もない。
【００３９】
安定化工程の実施例２において、図６に示すように、成形プロセス（工程Ｓ３０）を実行した後、片状体のｐＨ値が中性になるまで固態片状体を直接水洗いし（工程Ｓ４５０）、魚皮に由来する中性片状体を取得してもよい。水洗工程の後、中性片状体を乾燥させ（工程Ｓ４７０）、その後再度水中に浸漬し、片状体を水で戻す（工程Ｓ４９０）。
【００４０】
安定化工程の実施例３において、図７に示すように、成形プロセス（工程Ｓ３０）を実行した後、まず成形後片状体を乾燥させ（工程Ｓ４３０）、その後片状体のｐＨ値が中性を回復するまで水洗いし（工程Ｓ４５２）、魚皮に由来する中性片状体を取得してもよい。
【００４１】
安定化工程の実施例４において、図８に示すように、成形プロセス（工程Ｓ３０）を実行した後、まず成形後片状体を乾燥させ（工程Ｓ４３０）、その後片状体のｐＨ値が中性を回復するまで水洗いし（工程Ｓ４５２）、魚皮に由来する中性片状体を取得してもよい。水洗工程の後、中性片状体を乾燥させ（工程Ｓ４７２）、その後中性片状体を水中に浸漬し、片状体を水で戻す（工程Ｓ４９０）。
【００４２】
安定化プロセス（工程Ｓ４０）において、使用する水はきれいな水、脱イオン水、ＤＤＷ、生理食塩水、ＰＢＳまたはＰＢとしてもよい。安定化プロセス（工程Ｓ４０）において、使用する乾燥方式は、例えば風による乾燥または低温乾燥などの温和な乾燥方式としてもよい。
【００４３】
別の一実施例において、図９〜図１２に示すように、安定化プロセス（工程Ｓ４０）で、安定化工程を実行する前に、先に表面図案化工程（工程Ｓ４１０）を実行してもよい。
【００４４】
表面図案化工程（工程Ｓ４１０）の一実施例において、特定図案を備えたモールド内に成形後片状体を入れ、成形後片状体の表面に特定図案に対応する模様（以下、表面模様という）を具備させる。
成形後片状体の表面模様とモールド内側表面の特定図案はマッチする。例えば（但しこれに限らない）、表面模様は凸模様、凹模様、またはその組み合わせとしてもよい。つまり、モールド内側表面の特定図案は相対して凹溝図案、凸出図案またはその組み合わせとしてもよい。
【００４５】
一部の実施例において、表面図案化工程（工程Ｓ４１０）は成形工程（工程Ｓ３３０）と合併してもよい。即ち、表面模様は成形工程（工程Ｓ３３０）中で形成し、安定化プロセス（工程Ｓ４０）中に表面図案化工程（工程Ｓ４１０）はないものとしてもよい。
【００４６】
一部の実施例において、成形プロセス（工程Ｓ３０）と安定化プロセス（工程Ｓ４０）は交互に１回実行するか、繰り返して複数回実行してもよい（図示しない）。
【００４７】
さらに別の一実施例において、図１３に示すように、安定化プロセス（工程Ｓ４０）の後、切断プロセス（工程Ｓ５０）を実行してもよい。切断プロセス（工程Ｓ５０）において、製品のニーズに従って安定状態の光学的に透明な片状体を特定の寸法に切断してもよい。
【００４８】
一部の実施例において、純化プロセス（工程Ｓ２０）と成形プロセス（工程Ｓ３０）の間、または成形プロセス（工程Ｓ３０）と安定化プロセス（工程Ｓ４０）の間に架橋プロセスを実行してもよい。さらに、この架橋プロセスは成形プロセス（工程Ｓ３０）と同時に実行したり、或いは安定化プロセス（工程Ｓ４０）と同時に実行したりしてもよい。
架橋プロセスの実行過程において、純化後魚皮または光学的に透明な片状体は少なくとも１種類の架橋方式で処理を行い、機械的特性をさらに強化する。一部の実施例において、架橋方式は物理架橋方式または化学架橋方式としてもよい。例えば（但しこれに限らない）、物理架橋方式は紫外光（ＵＶ）照射、γ線（γ−ｒａｙ）照射、または加熱としてもよい。例えば（但しこれに限らない）、化学架橋方式はグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅ；ＧＡ）、１，４−ブタンジオールディグリシディルエーテル（１，４−ｂｕｔａｎｅｄｉｏｌ  ｄｉｇｌｙｃｉｄｙｌ  ｅｔｈｅｒ；ＢＤＤＥ）、ゲニピン（ｇｅｎｉｐｉｎ）、またはＥＤＣ／ＮＨＳ（１−Ｅｔｈｙｌ−３−（３−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｒｏｐｙｌ）−  ｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ／Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ）等の架橋剤を使用してもよい。
【００４９】
一部の修飾態様において、成形プロセス（Ｓ３０）の工程を調整し、成形プロセス（Ｓ３０）後のプロセスを排除してもよい。そのうち、調整後の成形プロセスは酸液で純化後魚皮を処理し、魚皮に由来する固態片状体を取得して、固態片状体からコラーゲン溶液を抽出する工程を含んでもよい。ここで、コラーゲン溶液は得られた魚皮に由来する組織修復材料である。
一部の示範例において、調整後の成形プロセスは成形工程（工程Ｓ３３０）を排除してもよい。その他の示範例において、調整後の成形プロセスは成形工程（工程Ｓ３３０）を保留し、固態片状体を抽出の実行に適した特定の寸法及び（または）特定の形状に切断してもよい。
【００５０】
さらに、調整後の成形プロセスにおいて、酸処理工程と抽出工程の間で、中和工程を実行し、固態片状体のｐＨ値を中性に戻してもよい。例えば、中和工程は固態片状体を水洗いすることを含んでもよい。
【００５１】
その他の修飾態様において、成形プロセス（Ｓ３０）の工程を調整し、成形プロセス（Ｓ３０）後のプロセスを排除してもよい。ここで、調整後の成形プロセスは酸液で純化後魚皮を処理し、未崩解の魚皮に由来する固態片状体を取得して（工程Ｓ３１０）、固態片状体を凍結乾燥し、コラーゲン海綿を取得する工程を含んでもよい。ここで、コラーゲン海綿は得られた魚皮に由来する組織修復材料である。一部の示範例において、調整後の成形プロセスは成形工程（工程Ｓ３３０）を排除してもよい。その他の示範例において、調整後の成形プロセスは成形工程（工程Ｓ３３０）を維持し、かつ酸処理工程（工程Ｓ３１０）と凍結乾燥工程の間に実行してもよい。
【００５２】
さらに、調整後の成形プロセスにおいて、酸処理工程（工程Ｓ３１０）（または成形工程（工程Ｓ３３０））と凍結乾燥工程の間に、中和工程を実行し、片状体のｐＨ値を中性に戻してもよい。例えば、中和工程は片状体を水洗いすることを含んでもよい。
【００５３】
また別の一部の修飾態様において、成形プロセス（Ｓ３０）の工程を調整してもよい。ここで、調整後の成形プロセスにおいて複数回の酸処理工程（工程Ｓ３１０）を実行してもよい。かつ、任意の２回の酸処理工程（工程Ｓ３１０）の間に、固態片状体の少なくとも１つの外側層を除去する。最後に、コラーゲン薄膜の魚皮由来組織修復材料を得ることができる。そのうち、毎回の酸処理工程（工程Ｓ３１０）の処理変数（例：酸液の種類、酸液の濃度、浸漬時間）は同じでも、異なっても、それらの組み合わせでもよい。
【００５４】
一部の示範例において、調整後の成形プロセスは成形工程（工程Ｓ３３０）を排除してもよい。その他の示範例において、調整後の成形プロセスは成形工程（工程Ｓ３３０）を維持し、かつ任意の１回の酸処理工程（工程Ｓ３１０）の後に実行してもよい。
【００５５】
一部の示範例において、成形プロセス（Ｓ３０）の後のプロセスを排除してもよい。その他の示範例において、調整後の成形プロセスは成形プロセス（Ｓ３０）後のプロセスを維持してもよい。成形プロセス（Ｓ３０）後のプロセスを排除する場合、すべての酸処理工程（工程Ｓ３１０）を完了した後、中和工程を実行して片状体のｐＨ値を中性に戻してもよい。例えば、中和工程は片状体を水洗いすることを含んでもよい。
【００５６】
作製プロセス１：ＳＥＭ試料の作製
【００５７】
脱イオン水中に試料（即ち、観察対象の魚皮または観察対象の片状体）を３０分間置く。その後、脱イオン水を２．５％グルタルアルデヒド溶液で置換し、かつ試料をグルタルアルデヒド溶液中に２０分間浸漬する。グルタルアルデヒド溶液での浸漬を完了した後、脱イオン水で試料を１０分間、３回洗浄する。続いて、１％オスミン酸（ｏｓｍｉｃ  ａｃｉｄ）を加え、試料と２時間反応させる。その後、オスミン酸を除去し、脱イオン水で試料を１０分間、３回洗浄する。
続いて、段階的濃度（３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、１００％）のアルコール（ａｌｃｏｈｏｌ）で試料を脱水する。その後、試料を臨界点乾燥機（ＥＭ  ＣＰＤ３００、Ｌｅｉｃａ）に入れて乾燥させ、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）（Ｓ−３０００  Ｎ、Ｈｉｔａｃｈｉ）でＳＥＭ測定／観察が可能な試料（以下、ＳＥＭ試料）を得る。
【００５８】
作製プロセス２：切片の冷凍およびＨ＆Ｅ染色
【００５９】
試料（即ち、観察対象の片状体）を４％パラホルムアルデヒド（ｐａｒａｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ）で２４時間固定してから、３０％スクロース溶液（ｓｕｃｒｏｓｅ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を用いて４℃で脱水し、水分が氷晶を生じて試料の組織を破壊しないように予防する。試料を脱水し、あらかじめ包埋剤（Ｏ．Ｃ．Ｔ）を加えたモールドに入れ、液体窒素を利用して瞬間冷凍する。Ｏ．Ｃ．Ｔが凍結した後、冷凍切片機（ＣＭ１９００、Ｌｅｉｃａ）を用いて−２５℃で薄切りし、切片試料を得る。ここで、切片試料の切片厚さは１０μｍである。
切片試料をヘマトキシリン溶液に入れて染色を行い、室温で１分間放置する。続いて、脱イオン水に浸漬して切片試料を１０分間洗浄し、エオシン溶液を入れて６分間染色する。その後、脱イオン水で切片試料を８分間洗浄する。続いて、切片試料を段階的濃度（７５％、８５％、９５％、１００％）のアルコールで順に脱水を行い、風乾後封入して。光学顯微鏡（ＤＭ６０００Ｂ、Ｌｅｉｃａ）で観察する。
【００６０】
試験プロセス１：機械試験
【００６１】
試料（即ち、試験対象の片状体）をＡＳＴＭ  Ｄ６３８−２００３規格に従ってダンベル形に切った後、万能試験機（３３６５、ＩＮＳＴＲＯＮ）のクリップ上に固定する。機械試験は万能試験機を用いて速度５ｍｍ／分及び力量５００Ｎで試験を行う。ここで、各組の試験を行う切片試料数は６より大きいかまたはこれに等しく、切片試料で測定された極限応力の平均を計算する。
【００６２】
試験プロセス２：光透過率試験
【００６３】
試料（即ち、試験対象の片状体）をＤＤＷ中に１６時間浸漬し、片状体に水分を戻す。そのうち、試料とＤＤＷの比率は８片の試料を５００ｍｌのＤＤＷ中に浸漬する。試料を直径０．７ｃｍの小円形片にカットした後、小円形片をマイクロプレートの底部に置き、１００μｌのＤＤＷを加える。マイクロプレートのコントロール孔には１００μｌのＤＤＷのみを加える。
その後、酵素免疫測定器（ＥＬＩＳＡ  ｍｅｔｅｒ）（Ｓｕｎｒｉｓｅ、ＴＥＣＡＮ）で４００ｎｍ〜７００ｎｍの全波長で読み取りを行い、読み取った全波長の吸光値の平均を計算する。その後、次の公式に基づいて光透過率を計算する。
【００６４】
Ａ＝ｌｏｇ（１／Ｔ）
【００６５】
Ｔは光透過率を表し、Ａは小円形片の読み取られた吸光値の平均を表す。
【００６６】
試験プロセス３：厚さ試験
【００６７】
試料（即ち、試験対象の片状体）の厚さは膜厚計で異なる位置の複数点をランダムに測定した後、平均を得る。
【００６８】
試験プロセス４：可縫性試験
【００６９】
試料（即ち、試験対象の片状体）を１＊１ｃｍの寸法に切断し、非吸収性縫合糸（ＳＴＩＮ−ＳＴ４  ４．０）を魚皮上下辺縁から０．２ｃｍの箇所に通す。その後、上の縫合糸を可縫性試験台上に掛けて固定し、下の縫合糸に重りを掛ける。下の縫合糸に掛ける重りの重量に魚皮が耐えられず破裂するまで徐々に増加する。このとき下の縫合糸に掛けられた重りの重量がこの試料の可縫性である。
【００７０】
試験プロセス５：含水率試験
【００７１】
乾燥した試料（即ち、試験対象の片状体）の重さを測定し、原初重量を記録する。続いて、重量変異が原初重量の０．０５％より小さくなるまでオーブンを用いて１０５±３℃で試料を加熱し、かつ２回続ける。加熱後、試料の重さを量り、加熱後重量を記録する。その後、次の公式で含水率を計算する。含水率＝［（原初重量−加熱後重量）／原初重量］×１００％。
【００７２】
実験１：原初魚皮の観察
【００７３】
全体を見たとき、魚鱗を備えた原初魚皮は不透明の白色であり、かつ図１４に示すように、原初魚皮はポケット様構造の部分に大量の色素を持つ。
【００７４】
魚鱗を備えた原初魚皮を作製プロセス１で処理し、ＳＥＭ試料とする。
【００７５】
図１５に原初魚皮の断面を示す。そのうち、原初魚皮の表面にはポケットに似た突起状の結合組織があり、魚鱗を覆っている。図１６及び図１７に高倍率で観察した原初の魚皮の断面を示す。そのうち、ポケット様構造を除き、原初の魚皮は一層状の構造である。
【００７６】
実験２：純化プロセス
【００７７】
原初の魚皮を取得（４℃未満の低温下に置く）した後、原初の魚皮上の魚鱗を手作業で完全に除去して魚鱗を除去した魚皮を取得し、その後きれいな水で魚鱗を除去した魚皮を洗浄し、組織液と血を取り除き、きれいな魚鱗を除去した魚皮を得る。きれいな魚鱗を除去した魚皮を０．５Ｍ  ＮａＯＨ／０．５Ｍ  ＮａＣｌの混合溶液に１２時間浸漬し、魚鱗を除去した魚皮を膨潤（腫脹）させると、半透明になる（以下、処理後の魚皮という）。その後、等体積の水を使用して撹拌し、処理後の魚皮を洗浄する。
混合溶液が洗浄される（即ち、魚皮が白くなり、かつｐＨ値が中性になる）まで水を１回または複数回交換する。さらに処理後の魚皮（中性）を１Ｌ／０．３Ｍ酢酸溶液に６０分間浸漬する。酢酸の浸漬後、処理後の魚皮表面上のポケット様構造が脆弱になるため、その後手で完全にポケット様構造を除去して純化後魚皮（以下、第１純化後魚皮という）を得る。
【００７８】
実験３：純化プロセス
【００７９】
原初の魚皮を取得（４℃未満の低温下に置く）した後、原初の魚皮上の魚鱗を手作業で完全に除去して魚鱗を除去した魚皮を取得し、その後きれいな水で魚鱗を除去した魚皮を洗浄し、組織液と血を取り除き、きれいな魚鱗を除去した魚皮を得る。きれいな魚鱗を除去した魚皮を０．１Ｍ  ＮａＯＨ／１０Ｍ  ＮａＣｌの混合溶液に１２時間浸漬し、魚鱗を除去した魚皮を膨潤（腫脹）させると、半透明になる（以下、処理後の魚皮という）。その後、等体積の水を使用して撹拌し、処理後の魚皮を洗浄する。
混合溶液が洗浄される（即ち、魚皮が白くなり、かつｐＨ値が中性になる）まで水を１回または複数回交換する。さらに処理後の魚皮（中性）を０．１Ｍ酢酸溶液に３０分間浸漬する。酢酸の浸漬後、処理後の魚皮表面上のポケット様構造が脆弱になるため、その後鈍器で完全にポケット様構造を除去して純化後魚皮（以下、第２純化後魚皮という）を得る。
【００８０】
実験４：第２純化後魚皮の観察
【００８１】
第２純化後魚皮を作製プロセス１で処理し、ＳＥＭ試料とする。
【００８２】
第２純化後魚皮の断面はコラーゲンマトリクスを備え、このコラーゲンマトリクスは層状構造であり、かつ図１８に示すように、この層状構造に複数のコラーゲン繊維が形成されている。図１８に示すように、コラーゲン繊維は層状構造の複数層に分散して配列されており、同じ層のコラーゲン繊維は同じ方向に配列され、かつ相隣しない２層のコラーゲン繊維は９０度で互い違いになっている。かつ、水平層に垂直な縦方向繊維が存在する。
【００８３】
実験５：成形プロセス、安定化プロセス、架橋プロセス
【００８４】
第１純化後魚皮を０．５Ｌ／０．３Ｍ酢酸溶液に２４時間浸漬し、第１純化後魚皮を成形状態にする（以下、第１固態片状体という）。このため、その厚さと形状を簡単に制御／調整することができる。
【００８５】
第１固態片状体を平滑な表面のモールド内に入れて成形後片状体を得た後、成形後片状体とモールドを一緒にドラフトチャンバ内に入れて成形後片状体が完全に乾燥されるまで乾燥する。乾燥後、成形後片状体を１Ｌの水中に浸漬して撹拌し、溶液が洗い流されるまで洗浄する。続いて、成形後片状体を再度モールド内に入れ、かつ再度完全に乾燥させる。こうして安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第１安定状態片状体という）が得られる。
【００８６】
一実験において、第１安定状態片状体を紫外光ライト管（１１０Ｖ、８Ｗかつ２５４ｎｍ）から５０ｃｍの場所に置き、各面に６０分間、２回照射して、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第２安定状態片状体という）を得る。
【００８７】
別の一実験において、第１安定状態片状体を１％ＢＤＤＥ（または０．０５％ＧＡ）溶液中に入れ、撹拌して１２時間浸漬し、脱イオン水に浸漬して３回すすぎ（毎回１０分間）、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第３安定状態片状体という）を得る。
【００８８】
実験６：第１固態片状体の観察
【００８９】
全体を見ると、第１固態片状体は図１９に示すように透明なゲルの状態を呈する。
【００９０】
第１固態片状体を作製プロセス１で処理し、ＳＥＭ試料とする。図２０にＳＥＭ測定下の第１固態片状体の断面を示す。そのうち、第１固態片状体の層状構造は緻密ではない。
【００９１】
第１固態片状体を作製プロセス２で処理し、染色切片試料とする。図２１に示すように、第１固態片状体の染色切片試料から第１固態片状体に細胞の残留がないことが観察できる。
【００９２】
実験７：第１〜第３安定状態片状体の観察
【００９３】
全体を見ると、図２２に示すように、第１安定状態片状体は透明かつ平坦である。
【００９４】
第１安定状態片状体を作製プロセス１で処理し、ＳＥＭ試料とする。図２３及び図２４に、ＳＥＭ測定下の第１安定状態片状体の断面を示す。そのうち、第１安定状態片状体の構造は緻密であり、かつ第１安定状態片状体の表面は平坦である。
【００９５】
第１〜第３安定状態片状体の平均極限応力を表１に示す。
【００９６】
【表１】
2016193891.tif 000003
【００９７】
ここから分かるように、第１〜第３安定状態片状体の平均極限応力は正常なヒトの角膜に接近するか、またはより大きくすることができる。
【００９８】
実験８：成形プロセス
【００９９】
第２純化後魚皮を直径１６ｍｍの小円形片に切断して４０組に分ける。４０組の小円形片を異なる反応条件（下の表２に示す）で酢酸に浸漬する。
【０１００】
【表２】
2016193891.tif 000004
【０１０１】
酢酸で浸漬を完了した後、第３０組及び第３３組〜第４０組の第２純化後魚皮はすでに崩解しており、その形態を保つことができなかった。
【０１０２】
実験９：成形プロセスと安定化プロセス
【０１０３】
第２純化後魚皮の背、腹、尾等のコラーゲン含量が少ない部位（良好な膨潤状態が得られない）を切除し、第２純化後魚皮の中央部位を残す。中央部位の寸法は７＊２４ｃｍである。さらに中央部位を７＊３ｃｍに切断する（計８片）。そのうち、各片の表面は中央部位の表面に由来する。各片を０．５Ｌ／０．１Ｍ酢酸溶液に６時間浸漬し、かつ１６時間冷蔵する。続いて、各片をさらに層で分け、複数の片状体（以下、第２固態片状体という）にする。
【０１０４】
第２固態片状体を前述の実施例１の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第４安定状態片状体という）を得る。第２固態片状体を前述の実施例２の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第５安定状態片状体という）を得る。
第２固態片状体を前述の実施例３の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第６安定状態片状体という）を得る。第２固態片状体を前述の実施例４の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第７安定状態片状体という）を得る。
【０１０５】
実験１０：第４〜第７安定状態片状体の観察
【０１０６】
図２５にＳＥＭ測定下の第４安定状態片状体の断面を示す。そのうち、第４安定状態片状体は縦方向のコラーゲン繊維を保っているものの、第４安定状態片状体の構造は緻密ではなく、かつその平均極限応力は相対的に低い（膨潤形態）。
【０１０７】
図２６にＳＥＭ測定下の第５安定状態片状体を示す。そのうち、第５安定状態片状体はやはり縦方向のコラーゲン繊維を保っており、かつ第２安定状態片状体の光透過率は約７０％である。
【０１０８】
図２７にＳＥＭ測定下の第６安定状態片状体を示す。そのうち、第６安定状態片状体は一部縦方向のコラーゲン繊維が失われているが、第６安定状態片状体はまだ大部分の縦方向コラーゲン繊維を維持している。第６安定状態片状体の光透過率は約８０％〜８５％であり、かつ第６安定状態片状体の平均極限応力は第７安定状態片状体と顕著な差異がない。
【０１０９】
図２８にＳＥＭ測定下の第７安定状態片状体を示す。そのうち、第７安定状態片状体は一部縦方向のコラーゲン繊維が失われているが、その構造は整って緻密に重なっており、かつ第７安定状態片状体はまだ大部分の縦方向コラーゲン繊維を維持している。第７安定状態片状体の光透過率は９０％より大きく、かつ第７安定状態片状体の平均極限応力は第５安定状態片状体の２．５倍である。
【０１１０】
実験１１：異なる厚さ
【０１１１】
一実験において、第２固態片状体は２ｍｍのクリップで厚さの切断を行い、かつ前述の実施例４の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第８安定状態片状体という）を得る。
【０１１２】
別の一実験において、第２固態片状体は５ｍｍのクリップで厚さの切断を行い、かつ前述の実施例４の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第９安定状態片状体という）を得る。
【０１１３】
第８安定状態片状体の厚さは約２０８±３６．８μｍであり、第８安定状態片状体の光透過率は９０％より大きいかまたはこれに等しく、かつ第８安定状態片状体の可縫性は４０ｇより大きいかまたはこれに等しい。
【０１１４】
第９安定状態片状体の厚さは約５００±６０．８μｍであり、かつ第９安定状態片状体の可縫性は５５ｇより大きいかまたはこれに等しい。
【０１１５】
ここで、切断の厚さと最終厚さ（安定化プロセス後）の比率は約１：０．１である。
【０１１６】
実験１２：含水率試験
【０１１７】
第２固態片状体を切断し、切断後前述の実施例４の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第１０安定状態片状体という）を得る。
【０１１８】
第１０安定状態片状体の厚さが約２００μｍのとき、その含水率は約９０％である。
【０１１９】
実験１３：毒性試験
【０１２０】
毒性試験はＩＳＯ１０９９３−１２に基づいて行われた。第７安定状態片状体から材料抽出液を抽出した後、材料抽出液を培養液中に加えて細胞培養を行う。材料抽出液を含む培養液の試験値を、材料抽出液を含まない培養液の試験値で除算して得られた数値は９２％より大きい。毒性試験の結果が７０％より大きければ法規の規定を満たしている。
【０１２１】
実験１４：成形プロセス、安定化プロセス、架橋プロセス
【０１２２】
第２純化後魚皮の背、腹、尾等のコラーゲン含量が少ない部位（良好な膨潤状態が得られない）を切除し、第２純化後魚皮の中央部位を残す。中央部位の寸法は７＊２４ｃｍである。さらに中央部位を７＊３ｃｍに切断する（計８片）。そのうち、各片の表面は中央部位の断面に由来する。各片を０．５Ｌ／０．１Ｍ酢酸溶液に６時間浸漬し、かつ１６時間冷蔵して、固態片状体（以下、第３固態片状体という）を得る。
【０１２３】
続いて、第３固態片状体を前述の実施例４の安定工程に基づいて処理し、安定状態の光学的に透明な片状体（以下、第１１安定状態片状体という）を得る。
【０１２４】
実験１５：第１安定状態片状体の観察
【０１２５】
第１１安定状態片状体の厚さが約５０μｍ〜６０μｍのとき、第１１安定状態片状体の光透過率は９５％より大きいかまたはこれに等しく、かつ第１１安定状態片状体の可縫性は６０ｇより大きいかまたはこれに等しい。第１１安定状態片状体の厚さが約９０μｍ〜１７０μｍのとき、第１１安定状態片状体の光透過率は９０％より大きいかまたはこれに等しく、かつ第１１安定状態片状体の可縫性は６０ｇより大きいかまたはこれに等しい。
第１１安定状態片状体の厚さが約１９０μｍ〜２５０μｍのとき、第１１安定状態片状体の光透過率は８５％より大きいかまたはこれに等しく、かつ第１１安定状態片状体の可縫性は６０ｇより大きいかまたはこれに等しい。第１１安定状態片状体の厚さが約２８０μｍ〜３２０μｍのとき、第１１安定状態片状体の光透過率は７０％より大きいかまたはこれに等しく、かつ第１１安定状態片状体の可縫性は６０ｇより大きいかまたはこれに等しい。そのうち、最大可縫性は１５０ｇより大きくしてもよい。第１１安定状態片状体の平均極限応力は第７安定状態片状体の２倍である。
【０１２６】
実験１６：コラーゲン溶液の作製
【０１２７】
第２純化後魚皮を０．０１Ｍ酢酸溶液中に２時間浸漬し、かつ異物を除去して固態片状体を得る。続いて、抽出プロセスで固態片状体からコラーゲン溶液を抽出する。
【０１２８】
実験１７：コラーゲン海綿の作製
【０１２９】
第２純化後魚皮を０．１Ｍ酢酸溶液中に１時間浸漬した後凍結乾燥し、コラーゲン海綿を得る。
【０１３０】
実験１８：コラーゲン薄膜の作製
【０１３１】
第２純化後魚皮を０．０１Ｍ酢酸溶液中に２時間浸漬した後外側層を除去して固態片状体を得る。続いて、固態片状体を０．１Ｍ酢酸溶液中に１時間浸漬し、コラーゲン薄膜を得る。
【０１３２】
上述をまとめると、本発明に基づいた魚皮由来組織修復材料及びその製造方法は、組織修復材料の提供に適用され、かつこの組織修復材料がパッチ、包帯材、担体、支持体、埋入物、または薬剤として各種組織の修復に適用できる。
この組織修復材料はコラーゲンを備え、損傷組織の修復を促進し、かつ予期される組織修復応用に必要な特定の特徴を備えている。さらに、現在の各研究によれば、この組織修復材料は人畜共通疾患（ウイルスにより引き起こされる）の病原因子の残留がないことが示されている。
【符号の説明】
【０１３３】
Ｓ１０    魚肉のない魚皮を取得  
Ｓ２０    純化プロセス
Ｓ３０    成形プロセス
Ｓ４０    安定化プロセス
Ｓ５０    切断プロセス
Ｓ２１０  魚皮上の魚鱗を除去
Ｓ２３０  魚皮上の油脂と細胞を除去
Ｓ２５０  魚皮上の色素とポケット様構造を除去
Ｓ３１０  酸液で純化後魚皮を処理して未崩解の固態片状体を得る  
Ｓ３３０  固態片状体の成形を行い、特定形状の成形後片状体を得る  
Ｓ４１０  表面図案化工程
Ｓ４３０  成形後片状体を乾燥させる  
Ｓ４５０  成形後片状体を直接水で洗う  
Ｓ４５２  成形後片状体を水で洗う  
Ｓ４７０  成形後片状体を乾燥させる  
Ｓ４７２  成形後片状体を再度乾燥させる  
Ｓ４９０  成形後片状体を水に浸漬して成形後片状体を水で戻す
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【外国語明細書】
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