(57)【要約】【課題】神経突起伸長を改善するための方法であって、前記方法は、金属ナノ粒子または複数の前記金属ナノ粒子を積み重ねることによって形成される金属粒子が神経突起伸長を促進するように作用する程度までニューロンを曝露する工程を含む、方法を提供すること。【解決手段】本発明は、神経突起伸長を促進するため、ならびに神経障害を処置および／または予防するために金属ナノ粒子を使用する方法に関する。特に、本発明の方法は、神経突起伸長を促進して神経障害を処置および／または予防するために金ナノ粒子を使用する。一実施形態において、前記方法は、ニューロンと金属ナノ粒子または金属粒子とを接触させる工程を包含する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経突起伸長を改善するための医薬の製造における、金属ナノ粒子または複数の該金属ナノ粒子を積み重ねることによって形成された金属粒子の使用。
【請求項２】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が金ナノ粒子または金粒子である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記金属ナノ粒子のサイズが１ｎｍ〜１００ｎｍである、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、血液脳関門を通過する標的化剤と結合する、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、必要に応じて第２の治療剤と結合する（および／またはコンジュゲートされ）、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
ニューロンが傷ついたニューロンである、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
前記神経突起の伸長が、軸索伸長および／または樹状突起伸長である、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
前記神経突起がインビボまたはインビトロにある、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
被験体がヒトである、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
ニューロンが神経グラフトまたは神経移植片の一部を形成する、請求項１に記載の使用。
【請求項１２】
神経障害を処置および／または予防するための医薬の製造における、有効量の金属ナノ粒子または金属粒子の使用。
【請求項１３】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記金属ナノ粒子が金ナノ粒子または金粒子である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記金属ナノ粒子のサイズが１ｎｍ〜１００ｎｍである、請求項１２に記載の使用。
【請求項１６】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、直接接触、経口投与、吸入、皮下投与（Ｓ．Ｃ．）、静脈内投与（Ｉ．Ｖ．）、腹腔内投与（Ｉ．Ｐ．）、筋肉内投与（Ｉ．Ｍ．）、鼻腔内、髄腔内注射、局所適用、または局部的投与により投与され得る、請求項１２に記載の使用。
【請求項１７】
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、必要に応じて第２の治療剤と結合し得る、請求項１２に記載の使用。
【請求項１８】
被験体が動物である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１９】
被験体がヒトである、請求項１２に記載の使用。
【請求項２０】
前記神経障害が、多発性硬化症、坐骨神経欠損、神経系の傷害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；三叉神経痛；舌咽神経痛；ベル麻痺；重症筋無力症；筋ジストロフィー；進行性筋萎縮症；原発性側索硬化症（ＰＬＳ）；仮性球麻痺；進行性球麻痺；脊髄性筋萎縮症；進行性球麻痺；遺伝性筋萎縮症；椎間板症候群（例えば、椎間板ヘルニア症候群、破裂性椎間板症候群、および脱出性椎間板症候群）；頸椎症；神経叢障害；胸郭出口破壊症候群；末梢神経障害；ポルフィリン症；軽度認知障害；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；パーキンソンプラス症候群（例えば、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、および皮質基底核変性症）；レビー小体型認知症；前頭側頭型認知症；脱髄性疾患（例えば、ギラン・バレー症候群および多発性硬化症）；シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ；遺伝性運動感覚性ニューロパチー（ＨＭＳＮ）；遺伝性感覚運動性ニューロパチー（ＨＳＭＮ）および腓骨筋萎縮症としても知られている）；プリオン病（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）およびウシ海綿状脳症（ＢＳＥ、狂牛病として一般に知られている））；ピック病；てんかん；エイズ認知症複合（ＨＩＶ認知症、ＨＩＶ脳症、およびＨＩＶ関連認知症としても知られている）；糖尿病、がん、エイズ、肝炎、腎機能障害、コロラドダニ熱、ジフテリア、ＨＩＶ感染、ハンセン病、ライム病、結節性多発動脈炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、梅毒、全身性エリテマトーデス、またはアミロイドーシスによって引き起こされる末梢神経障害および神経痛；物理的傷害（例えば、熱傷、創傷、手術、および事故に関連する）、虚血、低温への長期曝露（例えば、凍傷）によって引き起こされる末梢神経損傷、ならびに例えば、脳卒中または頭蓋内出血（例えば、脳出血）に起因する中枢神経系の損傷である、請求項１２に記載の使用。
【請求項２１】
神経障害を処置および／または予防するのに十分な量で金属ナノ粒子または金属粒子を含む医療デバイス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経突起伸長を促進するため、ならびに神経障害を処置および／または予防するために金属ナノ粒子または金属粒子を使用する方法に関する。特に、本発明の方法は、金ナノ粒子または金粒子を使用して、神経突起伸長を促進、ならびに神経障害を処置および／または予防する。
【背景技術】
【０００２】
神経障害は、脳卒中および慢性老化のような急性の脳または索の傷害、およびアルツハイマー病、パーキンソン病およびハンチントン病のようないくつかの神経変性障害を含む。神経変性は、ニューロンの死を含むニューロンの構造または機能の進行性損失に関する。多くの神経変性疾患は、神経変性プロセスの結果として生じる。現在、神経変性疾患のためにニューロン機能の保護または回復のいずれかを提供する有効な療法は存在していない。神経栄養因子の注入によるそのような利点を提供する多くの臨床的努力は、臨床前アセスメントにおける強い努力にもかかわらず失敗している。これらの失敗の１つの重要な理由は、血液脳関門拡散制限（ｂｌｏｏｄ−ｂｒａｉｎ−ｂａｒｒｉｅｒ  ｄｉｆｆｕｓｉｏｎ  ｌｉｍｉｔ）に起因する、これらタンパク質分子を中枢神経系における意図される細胞標的に十分な量で提供することの困難性である。軸索が再成長し、それらの標的に到達し、そして機能を回復することができる、軸索再生応答を促進する新規な治療アプローチの開発に対する大きな必要性が存在する。
【０００３】
金属ナノ粒子は、それらの特有の光学的、電気的および触媒的性質に起因して熱心に研究されている。ナノサイズの金属粒子の化学的および物理的性質を利用および最適化するために、幅広い研究が、それらの性質の調整に重要であるサイズおよび形状の制御に焦点をあてている。ＵＶ照射、レーザーアブレーション、エアロゾル技術、リソグラフィ、超音波場、および光化学還元技法のような金属ナノ粒子を合成するためのいくつかのアプローチが実施されている。米国特許出願公開第２０１０００６８２４０号は、生分解性ポリマーおよび金属を主に含む移植可能な神経再生コンジットを開示しており、そこでは、ナノ金が、コンジットの物理的強度を増強するため、またはグリア細胞から放出されるＢＤＮＦおよびＧＤＮＦの量を増加させることにより神経再生を促進するために用いられている。しかし、米国特許出願公開第２０１０００６８２４０号で用いられているナノ金属は、移植可能なコンジッの強度を増強するため、ならびにＢＤＮＦおよびＧＤＮＦを放出するようにグリア細胞を刺激するためであり；しかし、この先行技術文献は、金属ナノ粒子自体による、直接的なニューロン成長の増加および神経障害の処置を教示も示唆もしていない。Ｓｅｕｎｇｍｏｏｎ  Ｊｕｎｇらは、細胞内金ナノ粒子が興奮性および増悪を増加することを開示し、その一方、この参考文献は、細胞内ＡｕＮＰが、病的状態下で異常発火パターンおよび悪化したてんかん活性に至ることを示し、それゆえ、細胞内ＡｕＮＰが、脳におけるニューロン機能不全または損傷を引き起こすか、あるいは悪化させ得る可能性を示唆している（Ｓｅｕｎｇｍｏｏｎ  Ｊｕｎｇら、ＰＬＯＳ  ＯＮＥ、Ｖｏｌ．９、Ｉｓｓｕｅ  ３、  ｅ９１３６０）．
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】米国特許出願公開第２０１０００６８２４０号明細書
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献２】Ｓｅｕｎｇｍｏｏｎ  Ｊｕｎｇら、ＰＬＯＳ  ＯＮＥ、Ｖｏｌ．９、Ｉｓｓｕｅ  ３、  ｅ９１３６０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
従って、ニューロン成長／伸長を促進するため、および神経障害を処置および／または予防するためのアプローチを開発する必要性がなお存在している。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の要旨）
本発明は、神経突起伸長を改善するための方法を提供し、この方法は、ニューロンを、金属ナノ粒子または複数の金属ナノ粒子を積み重ねることによって形成された金属粒子が神経突起伸長を促進するように作用する程度まで曝露すことを包含する。１つの実施形態において、この方法は、ニューロンを上記金属ナノ粒子または上記金属粒子と接触することを包含する。別の実施形態では、上記金属ナノ粒子または上記金属粒子は、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される。
【０００８】
本発明はまた、神経障害を処置および／または予防するための医薬の製造における、有効量の金属ナノ粒子または金属ナノ粒子の使用を提供する。
【０００９】
１つの別の実施形態では、上記金属ナノ粒子は、直接接触、経口投与、吸入、皮下投与（Ｓ．Ｃ．）、静脈内投与（Ｉ．Ｖ．）、腹腔内投与（Ｉ．Ｐ．）、筋肉内投与（Ｉ．Ｍ．）、髄腔内注射、鼻腔内、局所適用、または局部的投与により投与され得る。
【００１０】
さらなる実施形態では、上記金属ナノ粒子または粒子は、血液脳関門を通過する標的化剤と結合し得る。
【００１１】
さらなる実施形態では、上記神経障害は、多発性硬化症、坐骨神経欠損、神経系の傷害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；三叉神経痛；舌咽神経痛；ベル麻痺；重症筋無力症；筋ジストロフィー；進行性筋萎縮症；原発性側索硬化症（ＰＬＳ）；仮性球麻痺；進行性球麻痺；脊髄性筋萎縮症；進行性球麻痺；遺伝性筋萎縮症；椎間板症候群（例えば、椎間板ヘルニア症候群、破裂性椎間板症候群、および脱出性椎間板症候群）；頸椎症；神経叢障害；胸郭出口破壊症候群；末梢神経障害；ポルフィリン症；軽度認知障害；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；パーキンソンプラス症候群（例えば、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、および皮質基底核変性症）；レビー小体型認知症；前頭側頭型認知症；脱髄性疾患（例えば、ギラン・バレー症候群および多発性硬化症）；シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ；遺伝性運動感覚性ニューロパチー（ＨＭＳＮ）；遺伝性感覚運動性ニューロパチー（ＨＳＭＮ）および腓骨筋萎縮症としても知られている）；プリオン病（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）およびウシ海綿状脳症（ＢＳＥ、狂牛病として一般に知られている））；ピック病；てんかん；エイズ認知症複合（ＨＩＶ認知症、ＨＩＶ脳症、およびＨＩＶ関連認知症としても知られている）；糖尿病、がん、エイズ、肝炎、腎機能障害、コロラドダニ熱、ジフテリア、ＨＩＶ感染、ハンセン病、ライム病、結節性多発動脈炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、梅毒、全身性エリテマトーデス、またはアミロイドーシスによって引き起こされる末梢神経障害および神経痛；物理的傷害（例えば、熱傷、創傷、手術、および事故に関連する）、虚血、低温への長期曝露（例えば、凍傷）によって引き起こされる末梢神経損傷、ならびに例えば、脳卒中または頭蓋内出血（例えば、脳出血）に起因する中枢神経系の損傷である。
【００１２】
本発明はまた、神経障害を処置および／または予防するのに十分な量で金属ナノ粒子または金属粒子を含む医療デバイスを提供する。本発明はまた、神経障害を処置および／または予防するための方法を提供し、この方法は、被験体において、有効量の金属ナノ粒子を含む医療デバイスを用いることを包含し、それによって神経傷害を処置および／または予防する。
例えば、本発明は以下を提供する。
（項目１）
神経突起伸長を改善するための医薬の製造における、金属ナノ粒子または複数の該金属ナノ粒子を積み重ねることによって形成された金属粒子の使用。
（項目２）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記項目に記載の使用。
（項目３）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が金ナノ粒子または金粒子である、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目４）
前記金属ナノ粒子のサイズが１ｎｍ〜１００ｎｍである、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目５）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、血液脳関門を通過する標的化剤と結合する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目６）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、必要に応じて第２の治療剤と結合する（および／またはコンジュゲートされ）、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目７）
ニューロンが傷ついたニューロンである、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目８）
前記神経突起の伸長が、軸索伸長および／または樹状突起伸長のためである、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目９）
前記神経突起がインビボまたはインビトロにある、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１０）
被験体がヒトである、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１１）
ニューロンが神経グラフトまたは神経移植片の一部を形成する、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１２）
神経障害を処置および／または予防するための医薬の製造における、有効量の金属ナノ粒子または金属粒子の使用。
（項目１３）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１４）
前記金属ナノ粒子が金ナノ粒子または金粒子である、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１５）
前記金属ナノ粒子のサイズが１ｎｍ〜１００ｎｍである、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１６）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、直接接触、経口投与、吸入、皮下投与（Ｓ．Ｃ．）、静脈内投与（Ｉ．Ｖ．）、腹腔内投与（Ｉ．Ｐ．）、筋肉内投与（Ｉ．Ｍ．）、鼻腔内、髄腔内注射、局所適用、または局部的投与により投与され得る、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１７）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、必要に応じて第２の治療剤と結合し得る、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１８）
被験体が動物である、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目１９）
被験体がヒトである、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目２０）
前記神経障害が、多発性硬化症、坐骨神経欠損、神経系の傷害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；三叉神経痛；舌咽神経痛；ベル麻痺；重症筋無力症；筋ジストロフィー；進行性筋萎縮症；原発性側索硬化症（ＰＬＳ）；仮性球麻痺；進行性球麻痺；脊髄性筋萎縮症；進行性球麻痺；遺伝性筋萎縮症；椎間板症候群（例えば、椎間板ヘルニア症候群、破裂性椎間板症候群、および脱出性椎間板症候群）；頸椎症；神経叢障害；胸郭出口破壊症候群；末梢神経障害；ポルフィリン症；軽度認知障害；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；パーキンソンプラス症候群（例えば、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、および皮質基底核変性症）；レビー小体型認知症；前頭側頭型認知症；脱髄性疾患（例えば、ギラン・バレー症候群および多発性硬化症）；シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ；遺伝性運動感覚性ニューロパチー（ＨＭＳＮ）；遺伝性感覚運動性ニューロパチー（ＨＳＭＮ）および腓骨筋萎縮症としても知られている）；プリオン病（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）およびウシ海綿状脳症（ＢＳＥ、狂牛病として一般に知られている））；ピック病；てんかん；エイズ認知症複合（ＨＩＶ認知症、ＨＩＶ脳症、およびＨＩＶ関連認知症としても知られている）；糖尿病、がん、エイズ、肝炎、腎機能障害、コロラドダニ熱、ジフテリア、ＨＩＶ感染、ハンセン病、ライム病、結節性多発動脈炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、梅毒、全身性エリテマトーデス、またはアミロイドーシスによって引き起こされる末梢神経障害および神経痛；物理的傷害（例えば、熱傷、創傷、手術、および事故に関連する）、虚血、低温への長期曝露（例えば、凍傷）によって引き起こされる末梢神経損傷、ならびに例えば、脳卒中または頭蓋内出血（例えば、脳出血）に起因する中枢神経系の損傷である、前記項目のいずれか一項に記載の使用。
（項目２１）
神経障害を処置および／または予防するのに十分な量で金属ナノ粒子または金属粒子を含む医療デバイス。
（項目２２）
神経突起伸長を改善するための、金属ナノ粒子または複数の該金属ナノ粒子を積み重ねることによって形成された金属粒子を含む組成物。
（項目２３）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２４）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が金ナノ粒子または金粒子である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２５）
前記金属ナノ粒子のサイズが１ｎｍ〜１００ｎｍである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２６）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、血液脳関門を通過する標的化剤と結合する、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２７）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、必要に応じて第２の治療剤と結合する（および／またはコンジュゲートされ）、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２８）
ニューロンが傷ついたニューロンである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目２９）
前記神経突起の伸長が、軸索伸長および／または樹状突起伸長のためである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３０）
前記神経突起がインビボまたはインビトロにある、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３１）
被験体がヒトである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３２）
ニューロンが神経グラフトまたは神経移植片の一部を形成する、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３３）
神経障害を処置および／または予防するための、有効量の金属ナノ粒子または金属粒子を含む組成物。
（項目３４）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、銀ナノ粒子または銀粒子、金ナノ粒子または金粒子、白金ナノ粒子または白金粒子、パラジウムナノ粒子またはパラジウム粒子、アルミニウムナノ粒子またはアルミニウム粒子、ニッケルナノ粒子またはニッケル粒子、コバルトナノ粒子またはコバルト粒子、銅ナノ粒子または銅粒子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３５）
前記金属ナノ粒子が金ナノ粒子または金粒子である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３６）
前記金属ナノ粒子のサイズが１ｎｍ〜１００ｎｍである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３７）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、直接接触、経口投与、吸入、皮下投与（Ｓ．Ｃ．）、静脈内投与（Ｉ．Ｖ．）、腹腔内投与（Ｉ．Ｐ．）、筋肉内投与（Ｉ．Ｍ．）、鼻腔内、髄腔内注射、局所適用、または局部的投与により投与され得る、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３８）
前記金属ナノ粒子または金属粒子が、必要に応じて第２の治療剤と結合し得る、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目３９）
被験体が動物である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４０）
被験体がヒトである、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（項目４１）
前記神経障害が、多発性硬化症、坐骨神経欠損、神経系の傷害、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）；三叉神経痛；舌咽神経痛；ベル麻痺；重症筋無力症；筋ジストロフィー；進行性筋萎縮症；原発性側索硬化症（ＰＬＳ）；仮性球麻痺；進行性球麻痺；脊髄性筋萎縮症；進行性球麻痺；遺伝性筋萎縮症；椎間板症候群（例えば、椎間板ヘルニア症候群、破裂性椎間板症候群、および脱出性椎間板症候群）；頸椎症；神経叢障害；胸郭出口破壊症候群；末梢神経障害；ポルフィリン症；軽度認知障害；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；パーキンソンプラス症候群（例えば、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、および皮質基底核変性症）；レビー小体型認知症；前頭側頭型認知症；脱髄性疾患（例えば、ギラン・バレー症候群および多発性硬化症）；シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ；遺伝性運動感覚性ニューロパチー（ＨＭＳＮ）；遺伝性感覚運動性ニューロパチー（ＨＳＭＮ）および腓骨筋萎縮症としても知られている）；プリオン病（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）およびウシ海綿状脳症（ＢＳＥ、狂牛病として一般に知られている））；ピック病；てんかん；エイズ認知症複合（ＨＩＶ認知症、ＨＩＶ脳症、およびＨＩＶ関連認知症としても知られている）；糖尿病、がん、エイズ、肝炎、腎機能障害、コロラドダニ熱、ジフテリア、ＨＩＶ感染、ハンセン病、ライム病、結節性多発動脈炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、梅毒、全身性エリテマトーデス、またはアミロイドーシスによって引き起こされる末梢神経障害および神経痛；物理的傷害（例えば、熱傷、創傷、手術、および事故に関連する）、虚血、低温への長期曝露（例えば、凍傷）によって引き起こされる末梢神経損傷、ならびに例えば、脳卒中または頭蓋内出血（例えば、脳出血）に起因する中枢神経系の損傷である、前記項目のいずれか一項に記載の組成物。
（本開示の摘要）
本発明は、神経突起伸長を促進するため、ならびに神経障害を処置およ／または予防するために金属ナノ粒子を使用する方法に関する。特に、本発明の方法は、神経突起伸長を促進するため、ならびに神経障害を処置および／または予防する。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１Ａ〜１Ｄは、異なる日の、０および０．５ｐｐｍのナノ粒子を用いる神経突起伸長アッセイの免疫蛍光染色結果を示す（Ａ：コントロール群；およびＢ〜Ｄ：第１日目（ＤＩＶ１）、第２日目（ＤＩＶ２）および第３日目（ＤＩＶ３）に、それぞれ金ナノ粒子で処置されたニューロン）。
【００１４】
【図２−１】図２Ａ〜２Ｄは、０（Ａ）、０．１ｐｐｍ（Ｂ）、０．３ｐｐｍ（Ｃ）および０．５ｐｐｍ（Ｄ）のナノ粒子を用いる神経突起伸長アッセイの免疫蛍光染色結果を示す。
【図２−２】図２Ａ〜２Ｄは、０（Ａ）、０．１ｐｐｍ（Ｂ）、０．３ｐｐｍ（Ｃ）および０．５ｐｐｍ（Ｄ）のナノ粒子を用いる神経突起伸長アッセイの免疫蛍光染色結果を示す。
【００１５】
【図３−１】図３Ａ〜３Ｆは、異なる細胞密度（Ａ：コントロール群（ＤＩＶ６）；Ｂ：５×１０３細胞／ｍｌ（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６）；Ｃ：コントロール群（ＤＩＶ６）；Ｄ：３×１０４細胞／ｍｌ（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６））；Ｅ：６×１０４細胞／ｍｌ密度（ＤＩＶ６）およびＦ：６×１０４細胞／ｍｌ密度（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６）における細胞の分化に対する金ナノ粒子の効果の免疫蛍光染色結果を示す。
【図３−２】図３Ａ〜３Ｆは、異なる細胞密度（Ａ：コントロール群（ＤＩＶ６）；Ｂ：５×１０３細胞／ｍｌ（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６）；Ｃ：コントロール群（ＤＩＶ６）；Ｄ：３×１０４細胞／ｍｌ（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６））；Ｅ：６×１０４細胞／ｍｌ密度（ＤＩＶ６）およびＦ：６×１０４細胞／ｍｌ密度（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６）における細胞の分化に対する金ナノ粒子の効果の免疫蛍光染色結果を示す。
【図３−３】図３Ａ〜３Ｆは、異なる細胞密度（Ａ：コントロール群（ＤＩＶ６）；Ｂ：５×１０３細胞／ｍｌ（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６）；Ｃ：コントロール群（ＤＩＶ６）；Ｄ：３×１０４細胞／ｍｌ（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６））；Ｅ：６×１０４細胞／ｍｌ密度（ＤＩＶ６）およびＦ：６×１０４細胞／ｍｌ密度（ＤＩＶ２−ＤＩＶ６）における細胞の分化に対する金ナノ粒子の効果の免疫蛍光染色結果を示す。
【００１６】
【図４】図４Ａ〜４Ｃは、スクラッチ試験（Ａ：コントロール群；Ｂ：０．３ｐｐｍの金ナノ粒子で処置された群における再生された軸索の密度（緑））；Ｃ：０．５ｐｐｍの金ナノ粒子で処置された群における再生された軸索の密度（緑））の結果を示す。
【００１７】
【図５】図５Ａ〜５Ｃは、１ｎｍ〜５ｎｍのサイズを有する金ナノ粒子（Ａ：コントロール群；Ｂ：０．３ｐｐｍの金ナノ粒子；およびＣ：０．３ｐｐｍの金ナノ粒子）のスクラッチ試験の結果を示す。
【００１８】
【図６】図６Ａ〜６Ｅは、１ｎｍ〜２０ｎｍのサイズを有する金ナノ粒子（Ａ：コントロール群；Ｂ：０．５ｐｐｍの金ナノ粒子；Ｃ：０．７５ｐｐｍの金ナノ粒子；Ｄ：１．０ｐｐｍの金ナノ粒子；およびＥ：０．２５ｐｐｍ）のスクラッチ試験の結果を示す。
【００１９】
【図７−１】図７Ａ〜７Ｃは、１ｎｍ〜５ｎｍの金ナノ粒子（Ａ：試験日におけるラットの逃避潜時；試験日におけるＡｕＮＰ群；Ｂ：各日の四分円でラットが費やした逃避時間；およびＣ：探査試行の７日後の四分円で費やした時間）の水迷路アッセイを示す。
【図７−２】図７Ａ〜７Ｃは、１ｎｍ〜５ｎｍの金ナノ粒子（Ａ：試験日におけるラットの逃避潜時；試験日におけるＡｕＮＰ群；Ｂ：各日の四分円でラットが費やした逃避時間；およびＣ：探査試行の７日後の四分円で費やした時間）の水迷路アッセイを示す。
【００２０】
【図８】図８Ａおよび８Ｂは、本発明の金ナノ粒子で積み重ねられた金粒子の水迷路アッセイを示す（Ａ：試験日におけるマウスの逃避潜時；Ｂ：各日にマウスが費やした逃避時間）。
【００２１】
【図９】図９は、金ナノ粒子処置で坐骨神経損傷マウスの運動機能が有意に回復し、その一方、坐骨神経損傷コントロール群は４週間後にはわずかに回復したにすぎないことを示す。
【００２２】
【図１０】図１０は、ラットがビームを横切るために要した時間を示す。
【発明を実施するための形態】
【００２３】
本発明は、金属ナノ粒子または金属粒子が、神経栄養因子として役立ち、そして軸索および樹状突起の伸長を促進することによって神経突起伸長を促進し得るという発見に基づいている。金属ナノ粒子または粒子が、神経栄養因子自体として役立ち得るという事実を考慮して、これら金属ナノ粒子または粒子は、神経変性疾患および脳または索の傷害のような神経障害を修復および／または処置および／または予防し得る。
【００２４】
１つの局面では、本発明は、神経突起伸長を改善するための医薬の製造における複数の金属ナノ粒子を積み重ねることによって形成された金属ナノ粒子または金属粒子の使用を提供する。好ましくは、ニューロンは、この金属ナノ粒子または金属粒子と接触される。
【００２５】
別の局面では、本発明は、神経障害を処置および／または予防するための医薬の製造における有効量の金属ナノ粒子または金属粒子の使用を提供する。
（定義）
【００２６】
他に規定されていなければ、本明細書で用いられるすべての技術的および科学的用語は、当業者によって共通に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似または等価な任意の方法および材料が本発明の実施または試験で用いられ得るが、好ましい方法および材料がここで記載される。本明細書で述べられるすべての刊行物は、本明細書に参考として援用される。
【００２７】
上述の一般的説明および以下の詳細な説明の両方は、説明的および例示的であり、そして特許請求の範囲に記載のような主題に制限されないことが理解されるべきである。本出願において、他に具体的に述べられていなければ、単数形の使用は複数を含み、冠詞「１つの、ある（「ａ」または「ａｎ」）」は、「少なくとも１つ」を意味し、そして「または」の使用は、「および／または」を意味する。さらに、用語「含んでいる」、ならびに、「含む」および「含まれる」のようなその他の形態の使用は、限定しているのではない。また、「要素」または「構成要素」のような用語は、他に具体的に述べられていなければ、１つのユニットを含む要素または構成要素、および１つより多くのユニットを含む要素または構成要素の両方を包含する。
【００２８】
本明細書で用いられるとき、「金属ナノ粒子」とは、その相の少なくとも１つにおいて、ナノメートルサイズの範囲にある１つ以上の寸法（長さ、幅または厚み）を有する金属元素によって作製されたナノサイズの構造をいう。本明細書で用いられる「金属粒子」は、複数の上記金属ナノ粒子によって積み重ねられた金属粒子をいう。
【００２９】
本明細書で用いられるとき、「軸索再生」は、生存ニューロン細胞体からの新たな軸索の再成長、再生または発芽（ｓｐｒｏｕｔｉｎｇ）を意味する。
【００３０】
本明細書で用いられるとき、「神経障害」は、中枢神経系または末梢神経系中に存在するか、またはグリア細胞機能不全によって引き起こされるニューロンのいずれかの生理学的機能不全または死滅を意味する。このような障害の非限定的なリストは、多発性硬化症、坐骨神経欠損、脳または索損傷、認知症、前頭側頭骨葉認知症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、プリオン病、神経細胞障害および運動神経障害を含む。「神経細胞障害」は、運動神経または感覚神経の神経細胞細胞死滅によって特徴付けられ、それゆえ、神経細胞障害は、運動ニューロン障害および感覚ニューロン障害に再分割され得る。
【００３１】
本明細書で用いられるとき、「神経変性疾患」は、ニューロンの構造または機能の進行性損失または軸索の損失（死滅）を含む物理的変性をいう。神経変性疾患は、バーキンソン病、アルツハイマー病、ハンチントン病、および脳および脊髄傷害、ならびに脳卒中を含む。
【００３２】
本明細書で用いられるとき、「被験体」、「個体」または「患者」は、交換可能に用いられ、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトをいう。哺乳動物は、以下に限定されないが、マウス、サル、ヒト、家畜動物、スポーツ動物、およびペットを含む。インビトロで得られたか、またはインビトロで培養された生物学的実体の組織、細胞およびそれらの子孫もまた、包含される。
【００３３】
本明細書で用いられるとき、「処置」または「処置すること」または「寛解させること」は交換可能に用いられる。これらの用語は、以下に限定されないが、治療的利益および／または予防的利益を含む有益または所望の結果を得るためのアプローチをいう。治療的利益は、処置される内在する障害の根絶または寛解に関する。また、治療的利益は、内在する障害に関連する１つ以上の生理学的症候の根絶または寛解で達成され、その結果、患者はなお内在する障害に罹患しているかも知れないが、改善が患者において観察される。予防的利益のために、金属ナノ粒子は、特定の疾患を発症するリスクのある患者、または疾患の１つ以上の生理学的症候を報告する患者に、たとえ、この疾患の診断がなされていなくても、投与され得る。処置は、疾患を予防すること、すなわち、疾患の誘導前に保護的組成物の投与によって、疾患の臨床的症候を発症させないこと；疾患を抑制すること、すなわち、誘導事象の後ではあるが、疾患の臨床的所見または再発前に保護的金属ナノ粒子の投与によって疾患の臨床的症候を発症させないこと；疾患を阻害すること、すなわち、症候の初期所見後に金属ナノ粒子の投与によって臨床的症候の発症を抑止すること；疾患の再発を予防すること、および／または疾患を軽減すること、すなわち、症候の初期所見後に保護的金属ナノ粒子の投与によって、臨床的症候の後退を引き起こすことを含む。
【００３４】
本明細書で用いられるとき、「促進する」、または「増加する」、あるいは「促進すること」または「増加すること」は、交換可能に用いられる。これらの用語は、処置されていない細胞（組織または被験体）と比較して、処置された細胞（組織または被験体）における測定されたパラメータにおける増加をいう。比較はまた、処置の前と後の間で同じ細胞または組織または被験体でなされ得る。増加は、検出可能であることで十分である。いくつかの実施形態では、処置された細胞における増加は、処置されていない細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１倍、２倍、３倍、４倍またはそれ以上である。
【００３５】
本明細書で用いられるとき、「阻害する」、「予防する」または「低減する」、あるいは「阻害すること」、「予防すること」または「低減すること」は交換可能に用いられる。これらの用語は、処置されていない細胞（組織または被験体）と比較して、処置された細胞（組織または被験体）における測定されたパラメータにおける減少をいう。比較はまた、処置の前と後の間で同じ細胞または組織または被験体でなされ得る。減少は、検出可能であることで十分である。いくつかの実施形態では、処置された細胞における減少は、処置されていない細胞と比較して、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％であるか、または完全に阻害される。いくつかの実施形態では、測定されたパラメータは、処置されていない細胞と比較して、処置された細胞で検出可能でない（すなわち、完全に阻害される）。
【００３６】
本明細書で用いられるとき、用語「ニューロン」は、ニューロンおよびその部分（複数可）（例えば、ニューロン細胞体、軸索、または樹状突起）を含む。用語「ニューロン」は、中央細胞体（ｃｅｎｔｒａｌ  ｃｅｌｌ  ｂｏｄｙ）または細胞体（ｓｏｍａ）および２つのタイプの伸長部または突出部：樹状突起を含む神経系細胞を意味し、それによって、一般に、ニューロンシグナルの大部分は、細胞体、および軸索に伝達され、それによって、一般に、ニューロンシグナルの大部分は、細胞体から、標的ニューロンまたは筋肉のようなエフェクタ細胞に運搬される。ニューロンは、組織および器官からの情報を中枢神経系（求心性ニューロンまたは感覚ニューロン）へと伝達し得、そしてシグナルを中枢神経系からエフェクタ細胞（遠心性ニューロンまたは運動ニューロン）に伝達する。介在ニューロンと称されるその他のニューロンは、中枢神経系（脳および脊柱）内のニューロンを連結する。本発明による処置または方法を受け得るニューロンタイプのある具体的な例は、小脳顆粒ニューロン、後根神経節ニューロン、および皮質ニューロンを含む。
【００３７】
本明細書で用いられるとき、「神経突起」は、ニューロンから伸びる任意のプロセスをいう。本明細書で用いられるとき、この用語神経突起は、ニューロンから伸びるすべてのそのような細胞プロセス（軸索および樹状突起の両方を含む）を包含する。
【００３８】
本明細書で用いられるとき、「神経突起伸長」は、ニューロンから伸びる細胞のプロセス、またはニューロンからの伸長を含む細胞をいい、以下に限定されないが、神経突起の伸長、分岐および／または再生を含む。
【００３９】
本明細書で用いられるとき、「治療的に有効な量」は、疾患（例えば、神経変性疾患）に罹患した被験体を処置するか、またはこの疾患に関連する症候または合併症を軽減するために十分な量を意味する。
【００４０】
本明細書で用いられるとき、「薬学的組成物」は、活性剤（例えば、ウィタノライド）と、この組成物を治療的使用に特に適するようにする不活性または活性なキャリアとの組み合わせをいう。
【００４１】
本明細書で用いられるとき、「被験体」は、ヒトまたは非ヒト動物のいずれかをいう。
【００４２】
（金属ナノ粒子）
金属ナノ粒子は、ナノスケールである。このナノ−金属粒子は、好ましくは、銀、金、白金、パラジウム、アルミニウム、ニッケル、コバルト、銅およびこれらの組み合わせからなる群から選択される金属元素を含む。それらは、当該技術分野で公知のＵＶ照射、レーザアブレーション、エアロゾル技術、リソグラフィ、超音波場、および光化学還元技法に従って調製され得る。１つの実施形態において、この金属ナノ粒子は、台湾特許番号第Ｉ４３０８５８号に開示される製造システムおよび方法に従って調製されたものである。特にこの台湾特許番号第Ｉ４３０８５８号の金属ナノ粒子は、（１）９９．９９％の純度を有する金属材料を処理して０．３μｍより薄い厚みの金属薄膜を形成する工程；（２）この金属薄膜を、内部に不活性ガスを含む第１の閉鎖コンテナ中の循環コンベアベルト中に配置する工程；（３）溶かされ、そしてナノ金属粒子を生成するために、この金属薄膜を、マイクロ波加熱および焼結のために閉鎖タイプの循環コンベアベルトを用いて、プラズマアブレーションチャンバ中に輸送する工程；（ｄ）このナノ金属粒子を、循環コンベアベルトを用いて第２の閉鎖コンテナに輸送し、そしてこれらの粒子を冷却プロセッサによって冷却し、液体中に懸濁物を形成する工程；および（ｅ）これら懸濁されたナノ金属粒子を収集し、必要な高純度のナノ粒子金属を得る工程を含むプロセスに従って調製される。
【００４３】
本発明で用いられる金属ナノ粒子のサイズは、約１ｎｍ〜約１０００ｎｍの間、好ましくは約１ｎｍ〜４００ｎｍ；好ましくは、約１ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約１ｎｍ〜約３００ｎｍ、約１ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約１ｎｍ〜約２００ｎｍ、約１ｎｍ〜約１００ｎｍ、約１ｎｍ〜約５０ｎｍ、約１ｎｍ〜約３０ｎｍ、約１ｎｍ〜約２０ｎｍ、約１ｎｍ〜約１０ｎｍ、約１ｎｍ〜約５ｎｍ、約２０ｎｍ〜約３５０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約３００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約２００ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１５０ｎｍ、約２０ｎｍ〜約１００ｎｍまたは約２０ｎｍ〜約８０ｎｍ；より好ましくは、約１ｎｍ〜約２０ｎｍまたは約１ｎｍ〜約５ｎｍであり得る。
【００４４】
１つの実施形態では、上記金属ナノ粒子は、金属粒子を形成するために積み重ねられ得る。これら金属粒子はまた、神経障害を処置および／または予防するために用いられ得る。
【００４５】
促進または処置における使用のために必要な金属ナノ粒子または金属粒子の量は、選択された特定のナノ粒子だけでなく、投与の経路、処置が要求される状態の性質、および患者の年齢および状態によりまた変動し得ることが認識される。１つの実施形態では、金属ナノ粒子は、約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約２，０００μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１，０００μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約５００μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約２５０μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１２５μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１００μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約７５μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約５０μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約２５μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約５μｇ／ｋｇ／日；好ましくは、ヒトに関しては、約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約２０μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１０μｇ／ｋｇ／日または約０．０１μｇ／ｋｇ／日〜約１μｇ／ｋｇ／日；より好ましくは、ヒトに関しては、約０．０５μｇ／ｋｇ／日〜約５μｇ／ｋｇ／日の範囲で被験体に投与され得る。別の実施形態では、金属粒子は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１，０００ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５００ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２５０ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１２５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約７５ｍｇ／ｋｇ／日または０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約２５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１０ｍｇ／ｋｇ／日；または、ヒトに関しては、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５ｍｇ／ｋｇ／日好ましくは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜１０ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５ｍｇ／ｋｇ／日または約０．０１ｍｇ／ｋｇ／日〜約１ｍｇ／ｋｇ／日；より好ましくは、ヒトに関しては、約０．０２ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｍｇ／ｋｇ／日の範囲で、被験体に投与され得る。
【００４６】
所望の用量は、単一用量で、または、例えば、１日あたり、２回、３回、４回またはより多くの用量として、適切な間隔で投与される分割された用量として与えられ得る。治療における使用には、化合物は、未加工の化学物質として投与され得ることが可能であるが、薬学的組成物として活性成分が存在することが好ましい。それゆえ、本発明は、さらに、１つ以上の薬学的に受容可能なキャリア、および必要に応じて、その他の治療的および／または予防的成分とともに、本明細書に記載されるような金属ナノ粒子または金属粒子の薬学的組み合わせ、または組成物を提供する。キャリア（複数可）は、処方のその他の成分と適合可能であり、そしてそのレシピエントに有害ではないという意味で「受容可能」でなければならない。
【００４７】
本開示の金属ナノ粒子、もしくは金属粒子またはその組成物はまた、種々の方法によって被験体に投与され得る。例えば、本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物は、経口投与（胃管栄養法を含む）、吸入、皮下投与（Ｓ．Ｃ．）、静脈内投与（Ｉ．Ｖ．）、腹腔内投与（Ｉ．Ｐ．）、筋肉内投与（Ｉ．Ｍ．）、鼻腔内投与、およびこのような様式の組み合わせによって投与され得る。本開示のさらなる実施形態では、本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物は、局所適用（例えば、経皮パッチ、軟膏、クリーム、膏薬、点眼薬、など）によって投与され得る。さらなる投与の様式もまた想定され得る。
【００４８】
さらに、本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物は、神経障害を患った組織または脈管系のような、被験体における局在部位に投与され得る。例えば、本開示の金属ナノ粒子または組成物は、神経突起伸長の増加を必要とする被験体の脳または脊柱中に直接注射され得る。
【００４９】
本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物はまた、標的化処置のために利用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、治療組成物は、血液脳関門を通過するためである標的化剤と付随し得る、および／またはコンジュゲート化され得る。
【００５０】
種々の実施形態において、金属ナノ粒子または金属粒子は、必要に応じて、互いに、または関連する疾患または状態の処置で有用であることが知られるその他の薬剤と組み合わされ得るか、またはそれらと共同して投与され得る。それゆえ、ＡＬＳの処置において、例えば、金属ナノ粒子は、リルゾール（Ｒｉｌｕｔｅｋ）、ミノサイクリン、インシュリン様成長因子１（ＩＧＦ−Ｉ）、および／またはメチルコバラミンと組み合わせて投与され得る。別の例では、パーキンソン病の処置において、金属ナノ粒子は、Ｌ−ドーパ、ドーパミンアゴニスト（例えば、ブロモクリプチン、ペルゴリド、プラミペキソール、ロピニロール、カベルゴリン、アポモルフィン、およびリスリド）、ドーパデカルボキシラーゼインヒビター（例えば、レボドパ、ベンセラジド、およびカルビドパ）、および／またはＭＡＯ−Ｂインヒビター（例えば、セレギリンおよびラサギリン）とともに投与され得る。さらなる例では、アルツハイマー病の治療においては、金属ナノ粒子は、アセチルコリンエステラーゼインヒビター（例えば、ドネペジル、ガランタミン、およびリバスチグミン）、および／またはＮＭＤＡレセプターアンタゴニスト（例えば、メガンチン）とともに投与され得る。組み合わせ療法は、当業者によって適切に決定されるように、同じか、または異なる経路による、同時または連続投与を含み得る。本発明はまた、本明細書に記載のような組み合わせを含む薬学的組成物およびキットを含む。
【００５１】
（神経突起伸長）
本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物もしくは組み合わせは、神経突起伸長を促進するための方法で用いられ得る。特に、本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物もしくは組み合わせは、軸索および樹状突起の伸長を促進し得る。ニューロンを、上記金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物もしくは組み合わせの作用の範囲に曝露することによって、軸索および樹状突起は、長さおよび密度が増加し、そして再生によって回復する。
【００５２】
（神経疾患）
本開示の金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物もしくは組み合わせは、神経障害を処置および／または予防するための方法で用いられ得る。従って、これらの金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物もしくは組み合わせは、例えば、（ｉ）神経系の障害（例えば、神経変性疾患）、（ｉｉ）神経系の外側で一次的な影響を有する疾患、状態または療法に対して二次的である神経系の状態、（ｉｉｉ）物理的、機械的または化学的外傷によって引き起こされる神経系への傷害、（ｉｖ）記憶喪失、および（ｖ）精神医学的障害の治療で有用である。これらの疾患、状態、および損傷のいくつかの非限定的な例は、以下に提供される。
【００５３】
本発明に従って、神経突起伸長を促進することによって予防されるか、または処置され得る神経変性疾患および状態の例は、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、三叉神経痛、舌咽神経痛、ベル麻痺、重症筋無力症、筋ジストロフィー、進行性筋萎縮症、原発性側索硬化症（ＰＬＳ）、仮性球麻痺、進行性球麻痺、脊髄性筋萎縮症、進行性球麻痺、遺伝性筋萎縮症、椎間板症候群（例えば、椎間板ヘルニア症候群、破裂性椎間板症候群、および脱出性椎間板症候群）、頸椎症、神経叢障害、胸郭出口破壊症候群、末梢神経障害、ポルフィリン症、軽度認知障害、アルツハイマー病；ハンチントン病、パーキンソン病、パーキンソンプラス症候群（例えば、多系統萎縮症、進行性核上性麻痺、および皮質基底核変性症）、レビー小体型認知症、前頭側頭型認知症、脱髄性疾患（例えば、ギラン・バレー症候群および多発性硬化症）、シャルコー・マリー・トゥース病（ＣＭＴ；遺伝性運動感覚性ニューロパチー（ＨＭＳＮ）、遺伝性感覚運動性ニューロパチー（ＨＳＭＮ）および腓骨筋萎縮症としても知られている）；プリオン病（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー症候群（ＧＳＳ）、致死性家族性不眠症（ＦＦＩ）およびウシ海綿状脳症（ＢＳＥ、狂牛病として一般に知られている））、ピック病、てんかん、エイズ認知症複合（ＨＩＶ認知症、ＨＩＶ脳症、およびＨＩＶ関連認知症としても知られている）を含む。
【００５４】
神経系の外側で一次的な効果を有する特定の疾患および状態は、本発明の方法に従って処置され得る神経系への損傷に至り得る。このような状態の例は、例えば、糖尿病、がん、エイズ、肝炎、腎機能障害、コロラドダニ熱、ジフテリア、ＨＩＶ感染、ハンセン病、ライム病、結節性多発動脈炎、関節リウマチ、サルコイドーシス、シェーグレン症候群、梅毒、全身性エリテマトーデス、およびアミロイドーシスによって引き起こされる末梢神経障害および神経痛を含む。
【００５５】
さらに、本発明の方法は、重金属（例えば、鉛、ヒ素、および水銀）および工業溶剤、ならびに化学療法剤（例えば、ビンクリスチンおよびシスプラチン）、ダプソン、ＨＩＶ薬剤（例えば、ジドブジン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、リトナビル、およびアンピレナビル）、コレステロール低下薬物（例えば、ロバスタチン、インダパミド、およびゲムフィブロジル）、心臓薬剤または血圧薬剤（例えば、アミオダロン、ヒドララジン、ペルヘキシリン）、およびメトロニダゾールを含む薬物を含む毒性化合物への曝露によって引き起こされる、末梢神経障害のような神経損傷の処置に用いられ得る。
【００５６】
本発明の使用はまた、物理的、機械的、または化学的外傷によって引き起こされる神経系への傷害の処置に関する。それゆえ、本発明の使用は、物理的傷害（例えば、熱傷、創傷、手術、および事故に関連する）、虚血、低温への長期曝露（例えば、凍傷）によって引き起こされる末梢神経損傷、ならびに例えば、脳卒中または頭蓋内出血（例えば、脳出血）に起因する中枢神経系への損傷の処置に関する。
【００５７】
さらに、本発明の使用は、例えば、加齢性記憶喪失のような記憶喪失の予防または処置に関する。喪失によって影響され得、そしてそれゆえ、本発明に従って処置され得る記憶のタイプは、エピソード記憶、意味記憶、短期記憶、および長期記憶を含む。本発明に従って処置され得る記憶喪失に関連する疾患および症状の例は、軽度認知障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、化学療法ストレス、脳卒中、および外傷的脳傷害（例えば、脳震盪）を含む。
【００５８】
本発明の使用はまた、例えば、統合失調症、妄想性障害、統合失調感情障害、統合失調様、共有精神病性障害、精神病、妄想性人格障害、統合失調質人格障害、境界性人格障害、反社会的人格障害、自己愛性的人格障害、強迫性障害、精神錯乱、認知症、気分障害、双極性障害、うつ病、ストレス障害、パニック障害、広場恐怖症、社会恐怖、外傷後ストレス障害、不安障害、および衝動制御障害（例えば、窃盗癖、病的賭博、放火癖、および抜毛癖）を含む精神医学的障害の処置に関する。
【００５９】
さらに、本発明は、エクスビボで神経を処置するために用いられ得、これは、神経グラフトまたは神経移植片との関連で有用であり得る。それゆえ、本明細書で提供される金属ナノ粒子は、インビトロでの神経細胞の培養における使用のための培養培地の構成要素として有用であり得る。
【００６０】
別の局面では、本発明は、医療デバイスを提供し、これは、金属ナノ粒子もしくは金属粒子またはその組成物を、神経障害を処置および／または予防するのに十分な量で含む。本発明はまた、神経障害を処置および／または予防するための方法を提供し、この方法は、被験体において有効量の金属ナノ粒子を含む医療デバイスを用いることを含み、それによって、神経障害を処置し、そして／または予防する。神経系で用いられる任意の医療デバイスが、本発明で用いられ得る。１つの実施形態では、この医療デバイスは、移植可能なコンジットである。
【００６１】
本発明の特定の局面は、以下の非限定的な実施例においてより詳細に記載される。
【実施例】
【００６２】
（実施例１）神経突起伸長アッセイ
金ナノ粒子は、ＧＴＮ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  ＆  Ｍｅｄｉｃａｌｓ  Ｃｏ．（台北、台湾）によって提供され、そして台湾特許第Ｉ４３０８５８号に開示される製造システムおよび方法に従って、調製された。
【００６３】
初代皮質ニューロンは、妊娠１８日のＳＤラットの胎児から得た。皮質組織を消化し、そして次に５％ウシ胎児血清、５％ウマ血清および５μｇ／ｍｌのインスリン−トランスフェリン−セレニウムを含む最小必須培地に蒔いた。５×１０４細胞／ｍｌの密度で細胞を播種し、そして５％ＣＯ２下３７℃でインキュベータ中で培養した。３〜６時間後、蒔いた培地を、培養のための神経基礎培地（０．５ｍＭのグルタメートおよび１２．５μＭのグルタミンを含む２％Ｂ２７−神経基礎培地）で置き換えた。
【００６４】
ニューロンの異なる発生段階で添加した金ナノ粒子の影響を試験した。一般に、培養したニューロン軸索は、インビトロでの培養日数（ＤＩＶ）２〜３で決定し、次いで樹状突起を決定した。０．５ｐｐｍの濃度での金ナノ粒子は、第１日（ＤＩＶ１）、第２日（ＤＩＶ２）、および第３日（ＤＩＶ３）にそれぞれ初代皮質ニューロンに添加した。細胞を第６日（ＤＩＶ６）まで培養した後、免疫蛍光染色を実施した。ＴａｕおよびＭＡＰ２をこの染色において用い、軸索および樹状突起を区別した（軸索関してはＴａｕは緑、そして樹状突起関してはＭＡＰ２は赤）。コントロール群（図１Ａ）と比較して、金ナノ粒子で処置したニューロンは、より長く、かつより多くの軸索（緑）の分岐および樹状突起（赤）を示した。細胞核は、ＤＡＰＩ（青）によって染色されている（図１Ｂ、ＣおよびＤ）。
【００６５】
神経突起の伸長に対する金ナノ粒子の影響もまた評価した。０．１ｐｐｍ、０．３ｐｐｍおよび０．５ｐｐｍの濃度での金ナノ粒子を、ＤＩＶ２でそれぞれ初代皮質ニューロンに添加した。培養の８日後、免疫蛍光染色を実施した。コントロール群（図２Ａ）と比較して、金ナノ粒子で処置したニューロンは、より長く、かつより多くの軸索（緑）の分岐および樹状突起（赤）を示した。細胞核は、ＤＡＰＩ（青）によって染色されている（図２Ｂ、ＣおよびＤ）。
【００６６】
異なる細胞密度で、細胞の分化に対する金ナノ粒子の影響もまた評価した。０．３ｐｐｍの濃度で金ナノ粒子を、それぞれ、５×１０３細胞／ｍｌ、３×１０４細胞／ｍｌおよび６×１０４細胞／ｍｌの密度の細胞サンプルに添加した。４日間細胞を培養した後、免疫蛍光染色を実施した。５×１０３細胞／ｍｌ（図３Ｂ）および３×１０４細胞／ｍｌ（図３Ｄ）の密度での細胞については、コントロール群（図３Ａおよび３Ｃ）と比較して、軸索（緑）および樹状突起（赤）は長さおよび分岐の数が増加した。６×１０４細胞／ｍｌの密度での細胞については、わずかな変化が観察された（図３Ｅおよび３Ｆ）。スクラッチ試験を用いてニューロン再生における金ナノ粒子の影響を評価した。１×１０６細胞／ｍｌの密度で初代皮質ニューロンをＤＩＶ５まで培養した。スクラッチ試験を行った。２００ｐのチップを用いてプレートのウェルでクロスをマークした。それぞれ０．３ｐｐｍおよび０．５ｐｐｍの金ナノ粒子を含む培養培地をプレートに添加した。７２時間培養後、免疫蛍光染色を実施した。０．３ｐｐｍおよび０．５ｐｐｍの金ナノ粒子で処置した群（図４Ｂおよび４Ｃ）の両方で再生された軸索（緑）の密度は、コントロール群（図４Ａ）と比較した場合増加した。
【００６７】
小さなサイズのナノ粒子の影響を調査するために、１ｎｍ〜５ｎｍのサイズの金ナノ粒子を、０．５ｐｐｍ、０．７５ｐｐｍ、１ｐｐｍおよび１．２５ｐｐｍの濃度で、それぞれ、ＤＩＶ２で初代皮質ニューロンに添加した。培養の９６時間後、免疫蛍光染色を実施した。コントロール群（軸索あたり３７５．１μｍの平均長）と比較して、１ｎｍ〜５ｎｍの金ナノ粒子で処置したニューロンは、より長い軸索（緑）（０．５ｐｐｍ、０．７５ｐｐｍ、１ｐｐｍおよび１．２５ｐｐｍの金ナノ粒子について、それぞれ、軸索あたり４８２．２μｍの平均長、軸索あたり４９１．８μｍの平均長、軸索あたり４３７．２μｍの平均長、および軸索あたり４３０．８μｍの平均長）を示した。同様に、１ｎｍ〜２０ｎｍのサイズの金ナノ粒子を、０．５ｐｐｍ、０．７５ｐｐｍ、１ｐｐｍおよび１．２５ｐｐｍの濃度で、それぞれ、ＤＩＶ２で始原皮質ニューロンに添加した。コントロール群（軸索あたり３２０．２μｍの平均長）と比較して、１ｎｍ〜２０ｎｍの金ナノ粒子で処置したニューロンは、より長い軸索（緑）（０．５ｐｐｍ、０．７５ｐｐｍ、１ｐｐｍおよび１．２５ｐｐｍの金ナノ粒子について、それぞれ、軸索あたり４１２．５μｍの平均長、軸索あたり４０３μｍの平均長、軸索あたり４６７．５μｍの平均長、および軸索あたり３８４μｍの平均長）を示した。
【００６８】
１ｎｍ〜５ｎｍおよび１ｎｍ〜２０ｎｍのサイズを有する金ナノ粒子を上記で述べたようなスクラッチ試験に供した。結果は、１ｎｍ〜５ｎｍおよび１ｎｍ〜２０ｎｍのサイズでの金ナノ粒子は、再生された軸索の密度を増加させることを示す（３ｎｍ〜５ｎｍの金粒子については図５を、１ｎｍ〜２０ｎｍの金ナノ粒子については図６を参照のこと）。
【００６９】
（実施例２）モリス水迷路タスクアッセイ
１ｎｍ〜５ｎｍの金ナノ粒子を４日間の水迷路アッセイに供した。８週齢の２０匹のＳＤラットをこのアッセイに用い、そして２つの群に分割した（群あたり１０匹のラット）。１ヶ月の間、１つの群は、１ｎｍ〜５ｎｍの金ナノ粒子（０．５μｇ／ｋｇ；ＡｕＮＰ群）で腹腔内注射（ｉ．ｐ．）を受け、そして１つの群はＰＢＳ（コントロール群）でｉ．ｐ．を受けた。投与スケジュール、投与経路および用量は以下の表に示される。
【表１】
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【００７０】
水迷路法は、先の研究（Ｙ．  Ｃ．  Ｙａｎｇ，  Ｙ．  Ｌ．  Ｍａ，  Ｗ．  Ｔ．  Ｌｉｕ，およびＥ．  Ｈ．  Ｌｅｅ，  “Ｌａｍｉｎｉｎ−ｂｅｔａ１  ｉｍｐａｉｒｓ  ｓｐａｔｉａｌ  ｌｅａｒｎｉｎｇ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｒｋ／ｍａｐｋ  ａｎｄ  ｓｇｋ１  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，  Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  ｖｏｌ．  ３６，  ｎｏ．  １２，  ｐｐ．  ２５７１−２５８６，  ２０１１）の方法を改変したものを採用した。２．０ｍ直径、および０．６ｍ高さのプラスチックの円形プールを水（２５＋／−２℃）で３５ｃｍの深さまで満たした。円形のプラットホーム（直径２０ｃｍ）をプールの縁から特定位置に配置し、そして水面から２〜３ｃｍ下に沈めた。水を、無毒の色素を添加することにより濁した。特徴的な視覚合図を壁上にセットした。空間的学習のために、動物に、１回の試行は朝早く、１回の試行は正午に、そしてもう１回は夕方に、１日あたり３回の試行を受けさせた。このトレーニング手順は４日継続し、そして合計１２の試行を与えた。このトレーニング手順は、間隔を置いたトレーニングが、記憶固定を容易にするより良好なバラダイムであるので採用した。これらの試行に関して、ラットを、ランダムな順序でプールの周辺の等しく間隔を置いた異なる出発点に置いた。彼らは隠れたプラットホームを見出すために１２０秒を与えられた。ラットがプラットホームを見出せなかった場合、プラットホームに案内され、そして２０秒間そこにとどまらせた。各動物がプラットホームに到達するに要する時間を、逃避潜時として記録した。１２０秒の探査試行は、彼らの記憶保持を試験するために５日目に行われた。ラットを、プラットホームを移動したプール中に置き、そして彼らが、各四分円（四分円１、２、３、および４）で費やした時間を記録した。四分円３が標的四分円である。訓練され、そして泳ぐコントロール実験のために、訓練された群のラットを、通常の水迷路学習手順に供した。
【００７１】
結果は、ＡｕＮＰ群が、コントロール群より、プラットホームを見出すためにより少ない時間を費やし（図７Ａを参照のこと）、そしてコントロールより、プラットホームを見出すためにより少ない時間を費やしたＡｕＮＰ群は、２日目にスタートした（図７Ｂを参照のこと）ことを示す。４日目の試行の後、プラットホームは移動され、そして探査試行が実施された。ＡｕＮＰ群では、（プラットホームが移動された）四分円でラットが止まった時間は、探査試行の７日後でコントロール群より長い（図７Ｃを参照のこと）。
【００７２】
さらに、本発明の金ナノ粒子によって積み重ねられた金粒子を水迷路アッセイに供した。１．０３ｍｇ／ｋｇ／日の金粒子を２週間の間マウスに経口投与し、そして結果を図８に示す（８Ａおよび８Ｂは、それぞれ、試行日におけるマウスの逃避潜時、および各四分円で彼らが費やした逃避時間）
【００７３】
（実施例３）切断された坐骨神経傷害ラットモデルに対する金ナノ粒子の効果の運動機能回復アッセイ
後足を神経支配する坐骨神経の切断は、末梢神経傷害のモデルである。ＩＣＲ雄性マウスをランダムに４つの群に分けた（１群あたり３匹のマウス）。マウスを、５０％ｚｏｌｅｔｉｌおよび２％ｒｏｍｐｕｎを含む薬剤で麻酔した。麻酔したラットの１つの群は外科的手術を受けたが、坐骨神経は切断しなかった（ナイーブ群）。その他の３つの群の麻酔したラットの坐骨神経は手術によって切断され、ここで１つの群のラットには、神経傷害のみのコントロールとして０．９％ＮａＣｌを坐骨神経に直接投与し、１つの群のラットには、局所的に０．５ｐｐｍのＮＧを坐骨神経に直接投与し、１つの群のマウスには手術後（ＯＰ後）腹腔内注射（ｉ．ｐ．）によって０．５ｐｐｍのＮＧを投与した。投与スケジュールを以下の表に列挙する。
【表２】
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【００７４】
マウスの切断された坐骨神経の再生を評価するために、外科的手術の前後で、ロータロッド試験をそれぞれ実施した。ラットを、水平に配向され、２ｒｐｍで５分間ロータロッドの回転するシリンダ（ロッド）上に置いた。次いで、ロータロッドの速度を２０分間にわたって２０ｒｐｍまで増加させ、そしてマウスが地面に落下した時間を記録した。回復率は、外科的手術後マウスが地面に落下した時間を、外科的手術前にマウスが地面に落下した時間で割ることよって算出される。ＮＧの１週間の投与の後、金ナノ粒子処置を受けた坐骨神経傷害マウスの運動機能は有意に回復したが、坐骨神経傷害コントロール群は、４週間後わずかな回復のみを示した（図９）。
【００７５】
運動協調を、平均台試験（Ｍｅｔｚ，  Ｇ．Ａ．Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ  ｔｅｓｔｉｎｇ  ｏｆ  ｍｏｔｏｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎｊｕｒｅｄ  ｒａｔｓ．  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  ２０００．  ８８３（２）：  ｐ．  １６５；  Ｃｕｍｍｉｎｇｓ，  Ｂ．Ｊ．，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｌａｄｄｅｒ  ｂｅａｍ  ｗａｌｋｉｎｇ  ｔａｓｋ  ｔｏ  ａｓｓｅｓｓ  ｌｏｃｏｍｏｔｏｒ  ｒｅｃｏｖｅｒｙ  ｉｎ  ｍｉｃｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ  ｓｐｉｎａｌ  ｃｏｒｄ  ｉｎｊｕｒｙ．  Ｂｅｈａｖ  Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ，  ２００７．  １７７（２）：  ｐ．  ２３２−４１）を用いて切断坐骨神経傷害ラットにおいてさらに試験した。平均台上の成績は、マウスが平均台を横切るに要する時間を測定することによって定量化した。ラットが平均台を横切るために要した時間は、ナイーブ群について１８．５秒、神経傷害群について１４．６７秒、神経傷害＋局所適用されたＮＧ群について１１．７３秒および神経傷害＋ＯＰ後のＩＰ  ＮＧ群について１１．７３秒であった（図１０を参照のこと）。
【００７６】
（実施例４）新規物体認識試験（ｎｏｖｅｌ  ｏｂｊｅｃｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｔｅｓｔ）
新規物体認識試験は、目新しいものに対する特徴的なマウスの嗜好を用いる試験であり、そしてその他の学習の評価方法とは、この試験が任意の人工的補強因子を用いない点で異なっている。トレーニング装置は、白いマスキングで覆われた透明なＰｌｅｘｉｇｌａｓ  ｂｏｘ（４８ｃｍ×３８ｃｍ×２７．５ｃｍ）であり、マウスは、周辺環境を見ることはできなかった。順応のためにマウスをストレスなしでボックス中に１０分間置いた。２４時間後、同じ形状および色の２つの物体をボックス中においた。次いでマウスをボックス中に置き、そして５分間２つの同じ物体を調査させ、そして両方の物体を調査することに費やした合計時間と頻度を記録した。３時間後、ボックスの右側にある物体を、ボックスの左側にある物体とは異なる形状および色のものに変え、そして次にマウスをボックス中に５分間置いた。両方の物体を調査することに費やした合計時間と頻度を記録した。
【００７７】
２４時間後、上記で述べたものとは異なる２つの同じ物体をボックス中に置いた。次いでマウスをボックス中に５分間置き、そして両方の物体を調査することに費やした合計時間と頻度を記録した。２４時間後、ボックスの右側の物体を、ボックスの左側の物体とは異なる形状および色のものに変え、次いでマウスをボックス中に５分間置いた。両方の物体を調査することに費やした合計時間と頻度を記録した。
【００７８】
（実施例５）細胞生存率アッセイ
細胞生存率を、ＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）アッセイによって、０、１０、および１００ｐｐｍの濃度での金ナノ粒子処置の２４時間後に評価した。当該技術分野で公知のような標準的なＭＴＴアッセイプロトコルを実施した。細胞を、１ｍｌのＭＴＴ（０．５ｍｇ／ｍＬ）試薬（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および９ｍｌの神経基礎培地とともに３７℃で３時間インキュベートした。ＭＴＴ溶液を除去し、そしてＤＭＳＯをウェルに添加し、室温で１時間振とうした。ＭＴＴホルマザン産物の量を、ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｌａｂ  ｓｙｓｔｅｍ  ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＭＣＣ／３４０，Ａｒｇｅｓ，Ｒｏｍａｎｉａ）を用いることによって、５７０ｎｍおよび６３０ｎｍでその吸光度を測定することによって定量化した。
【００７９】
（実施例６）抑制性回避学習タスク
装置は、照射された安全コンパートメントと暗コンパートメントとを分離する摺動ドアによって分割されたトラフ形状の通路で構成されていた。電流を生成したショック発生器を暗コンパートメントの床に接続した（ＵＧＯ  Ｂａｓｉｌｅ，Ｃｏｍｅｒｉｏ  ＶＡ，Ｉｔａｌｙ）。用いた方法は、改変された先の研究の方法を採用した。トレーニングおよび試験手順を含む挙動タスクは、８：００ＡＭ〜６：００ＰＭに記録した。実験の前に、ラットは、薄暗い部屋で１時間慣れさせ、その結果、彼らは環境に順応できた。トレーニングフェーズでは、ラットを照射コンパートメントの遠端にドアと反対向きに置いた。ラットが振り向いたとき、ドアを閉め、そして２秒後、１ｍＡ／秒の足ショックを２回与えた。ラットを次いで通路から移動させ、そしてそのケージに戻した。トレーニング後、異なる時間で（１日および７日後）保持試験を行った。ラットを、１日および７日後、トレーニングにおけるのと同じ方法ではあるがショックを受けることなく試験した。試験は、ラットが暗チャンバに入ったときか、または入ることなく６００秒後のいずれかで終了した。暗コンパートメントに入らず、そして６００秒の天井スコアに到達したラットは、通路から移動し、そして良好な記憶を持つラットととして割り当てた。足ショック（１ｍＡ／秒、２秒間）を直接受けた暗コンパートメント中に置かれた動物は、足ショックのみのコントロール群に割り当てた。
【００８０】
（実施例７）ステップダウン受動回避試験
動物を、トレーニング前に２４時間器具に慣れさせた。翌日、ラットを、受動回避試験ボックスの床の中央に位置する上昇したプラットホーム上に置き、そしてステップダウンするまでの潜時を記録した。実験の３日目に、ステップダウンの直後、動物はグリッド床を通じて温和な電気ショック（３Ｖ、３秒の持続時間、Ｄ．Ｃ．）を受け、そして次に彼らのホームケージに戻した。次の日（２４時間の保持間隔で）ラットを、任意の電気ショックを彼らに与えることなく再びプラットホーム上に置いた。ステップダウンするまでの潜時を記録した。ラットがプラットホーム上に５分間残る場合、３００秒の最大スコアを割り当てた。
【００８１】
（実施例８）坐骨神経機能指標（ＳＦＩ）
坐骨神経切断の４週間後、すべての動物を、一連の毎週の運動活性評価に供した。活性の回復は、適切な神経挫滅後の右後足の神経再支配の証拠と考えられ、そして機能的回復は、自由歩行パターンの分析によってモニターした。この方法は、歩くラットのフットプリントの測定に基づく指標を説明し、これは、坐骨神経の機能的条件を評価する信頼性があり、そして容易に定量化可能な方法を提供する。この試験のために、ラットを暗ボックスで終わる、１００ｃｍ長、８．５ｃｍ幅のトラックの底を覆う白い一枚の紙上を歩くようにトレーニングした。その後、動物は、彼らの後足の足底に暗色素を塗布し、そして歩くためにトラック上に置いた。ラットフットプリントを用いて以下の測定値を決定した：かかとから第３趾までの距離［プリント長さ（ＰＬ）］、第１趾から第５趾までの距離［つま先広さ（ＴＳ）］、および第２趾から第４趾までの距離［中間つま先広さ（ＩＴＳ）］。これら３つの測定値を、動物の実験（Ｅ）サイドおよび通常（Ｎ）サイドの両方から得た。各足のいくつかのプリントは、各トラック上で得たが、各足の３つのプリントのみを用いてＥサイドおよびＮサイドにおける平均測定値を決定した。これらの平均測定値は、次いで、ＳＦＩ式：ＳＦＩ０−３８．３（ＥＰＬ−ＮＰＬ）／ＮＰＬ＋１０９．５（ＥＴＳ−ＮＴＳ）／ＮＴＳ＋１３．３（ＥＩＴ−ＮＩＴ）／ＮＩＴ−８．８に入れた。得られた結果は、坐骨神経の機能的指標と考えられ、ここで、０〜−１２は優れた機能を表し、−１３〜−９９は神経機能の部分的な回復を示し、そして−１００は神経機能の完全欠損を表した。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【外国語明細書】
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