(57)【要約】【課題】アルツハイマー型認知症等の脳神経疾患治療剤の提供。【解決手段】下記式（１）2016153377.tif 000008で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）
【化１】
2016153377.tif 000006
で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の治療剤。
【請求項２】
脳神経疾患がアルツハイマー型認知症である請求項１記載の治療剤。
【請求項３】
下記式（１）
【化２】
2016153377.tif 000007
で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経突起伸展促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経細胞の変性、障害による脳神経疾患、例えばアルツハイマー型認知症の治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化社会が進む中、深刻な問題の一つとしてアルツハイマー型認知症に代表される認知症が挙げられる。本疾患における特徴的な症状は、初期には単純な物忘れが見受けられるが、中期から後期にかけては著しい記憶障害を伴うため、患者は日常生活を営むことが極めて困難となる。また患者本人のみならず、家族を含めた周囲の介護者の負担・損失も多大であることから、昨今大きな社会問題になっている。特にわが国における６５歳以上の住民の認知症有病率は最近の厚生労働省研究斑の調査によれば１５％を超え、今後さらに増大することが予想されており、有効な治療方法の確立が急務となっている。
【０００３】
アルツハイマー型認知症患者の脳には、老人斑の沈着や神経原線維変化、神経細胞の脱落といった病理学的特徴が見られる。神経毒性の強いβアミロイドタンパク質の神経細胞への沈着による細胞の異常・脱落が発症の原因とする「アミロイド・カスケード仮説」が最も有力な説明と考えられている。現在までに認可されている認知症治療薬は、低下した脳機能を補助する対症療法を目的としている。しかしながらβアミロイドの除去及び生産抑制、若しくはそれに起因する神経細胞の障害を解決するのに有効な治療薬は未だ開発されていない。
【０００４】
近年、βアミロイドのような異常タンパク質から神経細胞そのものを保護し、認知症の進行を抑えようとする新たな治療薬の開発が行われている。例えば、特許文献１に記載のイデベノン、特許文献２に記載のベンゼンスルホンアミド誘導体、特許文献３に記載のアルキルエーテル誘導体、非特許文献１に記載のレスベラトロール、非特許文献２に記載のフペルジンAなどが知られている。また神経突起の伸展を促進するような薬物も崩壊した神経ネットワークを再構築し、低下した神経機能を改善させるための治療に有効であることも知られている（非特許文献３、４）。
【０００５】
一方、次式（１）
【０００６】
【化１】
2016153377.tif 000002
【０００７】
で示される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリンは、抗血小板作用、抗血栓作用、PDE3阻害作用を有し、脳粥状硬化、脳梗塞、一過性脳虚血発作、回復型虚血性神経脱落症の脳疾患、心筋梗塞、狭心症等の心疾患、バージャー病、閉塞性動脈硬化症、間欠性跛行等の慢性動脈症、糖尿病性神経症、糖尿病性皮膚潰瘍、糖尿病性腎症等の糖尿病合併症、経皮的冠動脈形成術（ＰＣＴＡ）、方向性冠動脈粥腫切除術（ＤＣＡ）やステントのインターベーション処置後の再狭窄防止、人工血管等の人工臓器や腎等の移植処置後の再閉塞の防止、または手術後、人工腎透析等の体外循環時の血栓、塞栓の発生防止等の虚血性疾患の治療に有用であることが知られている（特許文献４、非特許文献５及び６）。しかしながら、当該式（１）の化合物が認知症に有効であるか否かは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開平１０−７７２２６号公報
【特許文献２】特開平７−３０９７５７号公報
【特許文献３】国際公開第０３／０３５６４７号
【特許文献４】国際公開第９７／０１２８６９号
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】PLOS ONE，8,e59888,2013.
【非特許文献２】Neuroscience Letters，317,143-146,2002.
【非特許文献３】Molecules, 17,6728,2012.
【非特許文献４】Therapeutic potential of culinary-medicinal mushrooms for the management of neurodegenerative diseases: diversity, metabolite, and mechanism (Crit Rev Biotechnol. 2014)
【非特許文献５】Biochem. Biophys. Res. Commun.，2007,353(4),1111.
【非特許文献６】Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998,8(12),1471.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明の課題は、βアミロイドによって誘起される神経細胞死を抑制し、アルツハイマー型認知症等の神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の新たな治療剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
そこで本発明者は、上記課題を解決すべく、鋭意検討を行ったところ、前記式（１）の化合物が、βアミロイドによって誘起される神経細胞死を顕著に抑制し、かつ神経細胞の神経突起を伸展させる作用を有することから、アルツハイマー型認知症等の神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の治療剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【００１２】
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔１２〕を提供するものである。
〔１〕下記式（１）
【００１３】
【化２】
2016153377.tif 000003
【００１４】
で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の治療剤。
〔２〕脳神経疾患がアルツハイマー型認知症である〔１〕記載の治療剤。
〔３〕前記式（１）で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物を有効成分とする神経突起伸展促進剤。
〔４〕神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の治療剤製造のための前記式（１）で表される（−）−６−（３−〔３−シクロプロピル−３−{（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル}ウレイド〕プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物の使用。
〔５〕脳神経疾患が、アルツハイマー型認知症である〔４〕記載の使用。
〔６〕神経突起伸展促進剤製造のための式（１）で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物の使用。
〔７〕神経細胞の変性、障害による脳神経疾患を治療するための前記式（１）で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物。
〔８〕脳神経疾患が、アルツハイマー型認知症である〔７〕記載の化合物。
〔９〕神経突起伸展を促進するための前記式（１）で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物。
〔10〕前記式（１）で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする神経細胞の変性、障害による脳神経疾患の治療方法。
〔11〕脳神経疾患がアルツハイマー型認知症である〔１０〕記載の治療方法。
〔12〕前記式（１）で表される（−）−６−（３−［３−シクロプロピル−３−｛（１Ｒ，２Ｒ）−２−ヒドロキシシクロヘキシル｝ウレイド］プロポキシ）−２（１Ｈ）−キノリン、その塩又はそれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする神経突起伸展促進方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、βアミロイドによって誘起される神経細胞の障害又は変性によって起こる脳神経疾患、例えばアルツハイマー型認知症を治療することができる。さらに式（１）の化合物は神経細胞の神経突起を伸展させるので、アルツハイマー型認知症の進行によって低下した神経系機能を改善させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】βアミロイド存在下における式（１）の化合物の非添加又は添加時の神経細胞の生存率を示す図である。
【図２】神経細胞の突起伸展作用に対する式（１）の化合物の非添加又は添加時の結果を示す写真である。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明の医薬の有効成分は、前記式（１）の化合物、その塩又はその溶媒和物である。当該式（１）の化合物は、前記特許文献４及び非特許文献５、６に記載のように、抗血小板作用を有し、脳血管疾患や虚血性心疾患に有効であることは知られているが、神経細胞に対する作用は全く知られていない。
【００１８】
式（１）の化合物は、特許文献４又は非特許文献５に記載の方法によって製造でき、塩又はそれらの溶媒和物の形で用いることもできる。このような塩としては、例えばカリウム、ナトリウム等のアルカリ金属類、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属類との塩基付加塩が挙げられ、溶媒和物としては、水和物、アルコール和物等が挙げられる。
【００１９】
式（１）の化合物は、後記実施例に示すように、βアミロイドによって誘起される神経細胞死を顕著に抑制する作用を有する。さらに神経細胞の神経突起の伸展に対して促進作用を有する。従って、式（１）の化合物、その塩又はそれらの溶媒和物は、ヒトを含む動物における脳神経細胞の障害又は変性によって引き起こされる脳神経疾患に対する治療薬として有用であり、当該疾患としては、アルツハイマー型認知症が挙げられる。
【００２０】
また医薬用途における投与経路としては、経口投与が好ましい。投与剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤が挙げられる。
【００２１】
例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤は、乳糖、マンニトール、デンプン、結晶セルロース、軽質無水ケイ酸、炭酸カルシウム、リン酸水素カルシウム等の賦形剤、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロース、低置換度ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、シリコーン樹脂等のコーティング剤、パラオキシ安息香酸エチル、ベンジルアルコール等の安定化剤、甘味料、酸味料、香料等の矯味矯臭剤等を必要に応じて化合物１に組み合わせて、調製することができる。
【００２２】
投与量は、症状、年齢、剤型等により適宜選択して使用することができる。例えば、経口剤であれば通常１日当たり式（１）の化合物として０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは１〜３００ｍｇを１回又は数回に分けて投与することができる。
【実施例】
【００２３】
以下、実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明するが、これにより本発明は限定されるものではない。
【００２４】
＜試験例１＞βアミロイドによって誘起される神経細胞死に対する抑制作用
(方法)
ラット髄質由来褐色細胞ＰＣ１２細胞（ＰＣ１２．Ｐ３；医薬基盤研究所  ＪＣＲＢバンク）は以下の手順で培養した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ；ナカライテスク）に１０％非働化処理済ウマ血清、１０％非働化処理済ウシ胎仔血清、および１×ペニシリン−ストレプトマイシン混合溶液（ナカライテスク）を添加して培地を調製した（増殖培地）。培養環境は５％ＣＯ2，９５％空気、飽和湿潤、３７℃のインキュベーターを使用した。Ｒａｔ  ｔａｉｌ  ｔｙｐｅ  Ｉコラーゲン溶液でコートした１０ｃｍ径ディッシュに、１−２×１０６ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈになるようにＰＣ１２細胞を播種し、継代は１週間に１度、培地交換は３−４日に１回の割合で行った。
【００２５】
１週間以上前培養したＰＣ１２細胞をポリ−Ｌ−リジン溶液でコートした９６−ウェルプレートに５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌに播種した。培地はＮｅｕｒｏｂａｓａｌ  ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に１×Ｂ２７  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン溶液、１×ペニシリン−ストレプトマイシン混合溶液（ナカライテスク）を添加した培地（神経分化誘導培地）にＮ−２  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔを添加したものを使用した。５日間の培養の後、Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ  ｍｅｄｉｕｍに１×Ｂ２７  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ、Ｎ−２  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ添加した培地で培地交換しさらに一晩培養した。化合物１は少量のＤＭＳＯ（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ）に溶解した後培地で希釈して、終濃度０〜３０μＭの式（１）の化合物および０．１％ＤＭＳＯが含まれるようにした。式（１）の化合物添加から１時間後、β−アミロイド（Ａβ２５−３５）（ペプチド研究所）を終濃度２０μＭになるように添加して２４時間培養した。生細胞の計測にはＣｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（ｃｃｋ−８）（同仁化学研究所）を使用した。ｃｃｋ−８  １０μＬ／ｗｅｌｌ添加して３７℃で２時間インキュベートした後、マイクロプレートリーダー（Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ  ＪＸ；Ｔｈｅｒｍｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して波長４５０ｎｍ−６３０ｎｍで吸光度測定を行った。測定は各条件２ウェルずつ行い、平均値を測定値とした。細胞生存率は式（１）の化合物、βアミロイド未添加条件の測定値を１００％とした相対値で評価した。
【００２６】
（結果）
結果は表１及び図１に示す。０．３μＭの式（１）の化合物を添加した条件では、Ａβ２５−３５のみ添加した条件と比較して細胞生存率が改善された。提示される結果は、式（１）の化合物がＡβ２５−３５の神経細胞毒性に対して保護作用を発揮することを示している。
【００２７】
【表１】
2016153377.tif 000004
【００２８】
＜試験例２＞神経突起伸展作用
（方法）
マウス神経芽細胞腫／ラットグリオーマ細胞（ＮＧ１０８−１５；ＡＴＣＣ）は以下の手順で培養した。ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ；ナカライテスク）に１０％非働化処理済ウシ胎仔血清、および１×ペニシリン−ストレプトマイシン混合溶液（ナカライテスク）を添加して培地を調製した（増殖培地）。培養環境は５％ＣＯ2，９５％空気、飽和湿潤、３７℃のインキュベーターを使用した。１０ｃｍ径ディッシュに、１−２×１０６ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈになるようにＮＧ１０８−１５細胞を播種し、継代は１週間に１−２度、培地交換は３−４日に１回の割合で行った。
【００２９】
６−ウェルプレートに５×１０３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌになるようにＮＧ１０８−１５細胞を播種した。培地は神経分化誘導培地に１００ｎｇ／ｍＬＮＧＦ（２．５Ｓ−Ｎｅｒｖｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ｆｒｏｍ Ｍｏｕｓｅ ｓｕｂｍａｘｉｌｌａｒｙ ｇｌａｎｄｓ；Ａｌｏｍｏｎｅ Ｌａｂｓ）（ポジティブコントロール）または式（１）の化合物を添加した。すべての培養条件が終濃度０．１％ＤＭＳＯを含むように調製した。６日間の培養の後、光学顕微鏡（ＩＸ７１；オリンパス）にて細胞の神経突起誘導を撮影した。各条件の平均的な細胞例を図２に示した。また突起の誘導状況は以下の方法でスコア化して評価した。各条件のウェルを無作為に３〜５ヶ所を可視光で撮影し、画像処理ソフトｉｍａｇｅＪを用いて各条件とも１０〜３０個ずつ細胞の長径と誘導された突起の長さを１〜３本ずつ計測した。細胞の長径の１倍未満の突起：スコア０、長径の１倍以上２倍未満の突起：スコア１、長径の２倍以上３倍未満の突起：スコア２、長径の３倍以上の突起：スコア３とした。突起誘導のスコア評価値をＮＧＦや化合物未添加の場合（コントロール）を１００％とした相対値で算出し、神経突起誘導の増強率とした。
（結果）
細胞の撮影結果を図２に、神経突起誘導の評価結果を表２に示した。
式（１）の化合物による細胞処理は濃度依存的に神経突起を誘導することが示された。
【００３０】
【表２】
2016153377.tif 000005
【００３１】
以上の結果から、式（１）の化合物はβアミロイドによって誘起される神経細胞死を抑制するとともに、神経突起の伸展作用を有する。すなわち式（１）の化合物、その塩又はそれらの溶媒和物は、神経細胞の障害、変性によって起こる神経疾患の治療に対して有効である。
【図１】
2016153377.tif 000009
【図２】
2016153377.tif 000010