(57)【要約】【課題】本発明は、簡単な工程で調製することが可能なエンドトキシン標準溶液の調製方法およびそれに用いられるエンドトキシン標準溶液調製用キットを提供することを主目的とする。【解決手段】本発明は、所定量の注射用水が収容された気密容器を３個以上準備する準備工程と、エンドトキシン標準原液を一つの上記気密容器に注入して希釈し、希釈された上記エンドトキシン標準原液を他の上記気密容器に注入してさらに希釈し、上記気密容器の数だけ上記エンドトキシン標準原液の希釈を繰り返し行う希釈工程とを有し、エンドトキシン濃度の異なる３種以上のエンドトキシン標準溶液を調製することを特徴とするエンドトキシン標準溶液の調製方法を提供することにより、上記課題を解決する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定量の注射用水が収容された気密容器を３個以上準備する準備工程と、
エンドトキシン標準原液を一つの前記気密容器に注入して希釈し、希釈された前記エンドトキシン標準原液を他の前記気密容器に注入してさらに希釈し、前記気密容器の数だけ前記エンドトキシン標準原液の希釈を繰り返し行う希釈工程と
を有し、エンドトキシン濃度の異なる３種以上のエンドトキシン標準溶液を調製することを特徴とするエンドトキシン標準溶液の調製方法。
【請求項２】
所定量の注射用水が収容され、再閉可能な気密容器を３個以上有することを特徴とするエンドトキシン標準溶液調製用キット。
【請求項３】
前記気密容器が蓋部を有することを特徴とする請求項２に記載のエンドトキシン標準溶液調製用キット。
【請求項４】
前記気密容器が、本体部と、頭部と、前記本体部および前記頭部を連結し、切断可能な切断部とを有し、前記頭部が前記蓋部であることを特徴とする請求項３に記載のエンドトキシン標準溶液調製用キット。
【請求項５】
前記頭部がヒンジを介して前記本体部に連結されていることを特徴とする請求項４に記載のエンドトキシン標準溶液調製用キット。
【請求項６】
前記気密容器が、本体部と、前記本体部の開口部に配置され、開口弁を有する内蓋と、摘み部と、前記内蓋および前記摘み部を連結し、切断可能な切断部とを有し、前記内蓋が前記蓋部であることを特徴とする請求項３に記載のエンドトキシン標準溶液調製用キット。
【請求項７】
前記気密容器がプラスチック製であることを特徴とする請求項２から請求項６までのいずれかに記載のエンドトキシン標準溶液調製用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、エンドトキシン試験法における検量線作成のためのエンドトキシン標準溶液の調製方法およびそれに用いられるエンドトキシン標準溶液調製用キットに関するものである。
【背景技術】
【０００２】
エンドトキシンはグラム陰性菌の細胞壁に存在する物質であり、発熱性等の種々の生物活性を有している。そのため、医薬品や医療用具がエンドトキシンで汚染された場合、ごく微量でも重篤な結果を招くことがあり、これらのエンドトキシン汚染量は厳密に管理されなければならない。
【０００３】
エンドトキシン試験法には定性試験および定量試験があり、定性試験としてはゲル化法、定量試験としては比濁法、比色法が一般に知られている。エンドトキシン試験法においては、予備試験として、少なくとも３種の濃度のエンドトキシン標準溶液を調製し、検量線を作成する。
【０００４】
エンドトキシン標準溶液の調製に際しては、まずエンドトキシン標準品を注射用水またはエンドトキシン試験用水で溶解してエンドトキシン標準原液を調製し、次いで試験管にエンドトキシン標準原液および注射用水を分注してエンドトキシン標準原液を段階的に希釈する。この際、エンドトキシン標準溶液には外部環境からエンドトキシンを混入させないことが必須であり、エンドトキシン標準溶液の調製にはある程度の熟練を要し、煩雑な手順や時間を要する。そのため、エントドキシン標準溶液の調製工程を簡略化することが求められている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】生化学バイオビジネス株式会社「第十六改正日本薬局方におけるエンドトキシン試験法標準操作法」、２０１１年８月１日
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、上記実情に鑑みてなされたものであり、簡単な工程で調製することが可能なエンドトキシン標準溶液の調製方法およびそれに用いられるエンドトキシン標準溶液調製用キットを提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的を達成するために、本発明は、所定量の注射用水が収容された気密容器を３個以上準備する準備工程と、エンドトキシン標準原液を一つの上記気密容器に注入して希釈し、希釈された上記エンドトキシン標準原液を他の上記気密容器に注入してさらに希釈し、上記気密容器の数だけ上記エンドトキシン標準原液の希釈を繰り返し行う希釈工程とを有し、エンドトキシン濃度の異なる３種以上のエンドトキシン標準溶液を調製することを特徴とするエンドトキシン標準溶液の調製方法を提供する。
【０００８】
本発明によれば、予め所定量の注射用水が気密容器に収容されているため、エンドトキシン標準原液を希釈する際には気密容器にエンドトキシン標準原液または希釈されたエンドトキシン標準原液を注入するだけでよく、簡単な工程でエンドトキシン標準溶液を調製することが可能である。また、工程を簡略化することができるため、外部環境からのエンドトキシンの混入を抑制することができる。
【０００９】
また本発明は、所定量の注射用水が収容され、再閉可能な気密容器を３個以上有することを特徴とするエンドトキシン標準溶液調製用キットを提供する。
【００１０】
本発明によれば、予め所定量の注射用水が気密容器に収容されているため、エンドトキシン標準原液を希釈する際には気密容器にエンドトキシン標準原液または希釈されたエンドトキシン標準原液を注入するだけでよい。したがって、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットを用いることにより、簡単な工程でエンドトキシン標準溶液を調製することが可能である。また、気密容器は再閉可能であるため、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットを用いてエンドトキシン標準溶液を調製する際に、エンドトキシン標準溶液に外部環境のエンドトキシンが混入するのを抑制することができる。
【００１１】
また本発明においては、上記気密容器が蓋部を有することが好ましい。気密容器を容易に再閉することができるからである。
【００１２】
さらに本発明においては、上記気密容器が、本体部と、頭部と、上記本体部および上記頭部を連結し、切断可能な切断部とを有し、上記頭部が上記蓋部であってもよい。このような気密容器は、頭部を捩る、引っ張るまたは本体部の方に押し付けて切断部で切り離すことで開けることができ、滅菌状態が担保された頭部を蓋部として利用することができる。
【００１３】
上記の場合、上記頭部がヒンジを介して上記本体部に連結されていることが好ましい。作業中に蓋部になる頭部の落下を防ぐことができるからである。
【００１４】
また本発明においては、上記気密容器が、本体部と、上記本体部の開口部に配置され、開口弁を有する内蓋と、摘み部と、上記内蓋および上記摘み部を連結し、切断可能な切断部とを有し、上記内蓋が上記蓋部であってもよい。このような気密容器では、摘み部を捩る、引っ張るまたは本体部の方に押し付けて切断部で切り離した後、開口弁で開閉可能である。そのため、作業効率を高め、外部環境からのエンドトキシンの混入をさらに抑制することができる。
【００１５】
また本発明においては、上記気密容器がプラスチック製であることが好ましい。使い捨てのプラスチック製の気密容器は利便性が良いからである。
【発明の効果】
【００１６】
本発明は、簡単な工程でエンドトキシン標準溶液を調製することが可能であるという効果を奏する。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】本発明のエンドトキシン標準溶液の調製方法の一例を示す工程図である。
【図２】本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットの一例を示す模式図である。
【図３】本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける気密容器の一例を示す模式図である。
【図４】本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける気密容器の他の例を示す模式図である。
【図５】本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける気密容器の他の例を示す模式図である。
【図６】本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける気密容器の他の例を示す模式図である。
【図７】本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける気密容器の他の例を示す概略断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明のエンドトキシン標準溶液の調製方法およびエンドトキシン標準溶液調製用キットについて詳細に説明する。
【００１９】
Ａ．エンドトキシン標準溶液の調製方法
本発明のエンドトキシン標準溶液の調製方法は、所定量の注射用水が収容された気密容器を３個以上準備する準備工程と、エンドトキシン標準原液を一つの上記気密容器に注入して希釈し、希釈された上記エンドトキシン標準原液を他の上記気密容器に注入してさらに希釈し、上記気密容器の数だけ上記エンドトキシン標準原液の希釈を繰り返し行う希釈工程とを有し、エンドトキシン濃度の異なる３種以上のエンドトキシン標準溶液を調製することを特徴とする方法である。
【００２０】
本発明のエンドトキシン標準溶液の調製方法について図面を参照して説明する。
図１（ａ）〜（ｂ）は、本発明のエンドトキシン標準溶液の調製方法の一例を示す工程図である。まず、図１（ａ）に示すように、０．９ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１を５個、０．６ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１を２個準備する。この気密容器１はプラスチックアンプルであり、本体部２と、頭部３と、本体部２および頭部３を連結し、切断可能な切断部４とを有し、本体部２と切断部４と頭部３とが一体に形成されている。また、気密容器１は、図１（ｂ）に示すように頭部３を捩る、引っ張るまたは本体部２の方に押し付けて切断部４で切り離すことができるものであり、また頭部３は蓋部であり頭部３で再閉できるものである。
次に、図１（ｂ）に示すように、頭部３を捩り切って気密容器１を開け、１０，０００ＥＵ／ｍＬのエンドトキシン標準原液１２  ０．１ｍＬを、０．９ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１に注入して１０倍希釈し、続いて１０倍希釈されたエンドトキシン標準原液１２  ０．１ｍＬを別の０．９ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１に注入してさらに１０倍希釈し、１０倍希釈を５回繰り返し、０．１ＥＵ／ｍＬのエンドトキシン標準溶液を調製する。次いで、０．１ＥＵ／ｍＬのエンドトキシン標準溶液０．２ｍＬを、０．６ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１に注入して４倍希釈し、４倍希釈を２回繰り返す。これにより、検量線作成用の３種のエンドトキシン標準溶液（０．１、０．０２５、０．００６２５ＥＵ／ｍＬ）を調製する。この際、外部環境からのエンドトキシンの混入を防ぐために、気密容器１にエンドトキシン標準原液１２または希釈されたエンドトキシン標準原液１２を注入した後は、速やかに頭部３で気密容器１を閉じる。
【００２１】
本発明においては、予め所定量の注射用水が気密容器に収容されており、気密容器にエントドキシン標準原液または希釈されたエンドトキシン標準原液を注入することでエンドトキシン標準原液を段階的に希釈することができるため、簡単な工程でエンドトキシン標準溶液を調製することができる。したがって、エンドトキシン試験法における予備試験の工程を簡略化することが可能である。また、工程を簡略化することができるため、外部環境からのエンドトキシンの混入を抑制することができる。
【００２２】
また本発明においては、気密容器に収容される注射用水の量を適宜調整することで、種々のエンドトキシン試験法の予備試験に適用することが可能である。
【００２３】
以下、本発明のエンドトキシン標準溶液の調製方法における各工程について説明する。
【００２４】
１．準備工程
本発明における準備工程は、所定量の注射用水が収容された気密容器を３個以上準備する工程である。
【００２５】
ここで、「気密容器」とは、日本薬局方で定められている気密容器であり、通常の取扱い、運搬または保存状態において、固形または液状の異物が侵入せず、内容医薬品の損失、風解または蒸発を防ぐことができる容器をいう。また、気密容器は、エンドトキシンで汚染されてない容器である。
【００２６】
気密容器としては、密封容器を用いることもできる。
ここで、「密封容器」とは、日本薬局方で定められている密封容器であり、通常の取扱い、運搬または保存状態において、気体の侵入しない容器をいう。
【００２７】
なお、気密容器については、後述の「Ｂ．エンドトキシン標準溶液調製用キット」に詳しく記載するので、ここでの説明は省略する。
【００２８】
注射用水は、日本薬局方で定められている注射用水であり、常水を蒸留、イオン交換、逆浸透、限外ろ過、またはそれらの組み合わせにより精製した後、滅菌したものであり、エンドトキシン試験に適合したものである。注射用水としては、エンドトキシン試験に用いるライセート試薬の検出限界以上のエンドトキシンを含まず、エンドトキシン試験を行うのに適したものであればよい。例えば、大塚製薬社製の大塚蒸留水を用いることができる。
【００２９】
気密容器に収容される注射用水の量としては、エンドトキシン試験法やライセート試薬の種類に応じて適宜選択される。例えば、ライセート試薬として生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−５０Ｍを用いたカイネティック比色法（マイクロプレート法）、ライセート試薬として生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−２４Ｓを用いたカイネティック比色法（シングルバイアル法）、およびライセート試薬としてＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ社製のパイロテル−Ｔを用いたカイネティック比濁法（マイクロプレート法）の場合、０．９ｍＬの注射用水が収容された気密容器を５個および０．６ｍＬの注射用水が収容された気密容器を２個準備する。また例えば、ライセート試薬としてＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ社製のＰｙｒｏｃｈｒｏｍｅを用いたカイネティック比色法（マイクロプレート法）の場合、０．９ｍＬの注射用水が収容された気密容器を６個および０．５ｍＬの注射用水が収容された気密容器を１個準備する。また、ゲル化法では、表示感度λおよび希釈倍数に応じて気密容器に収容される注射用水の量が適宜調整される。
【００３０】
気密容器に注射用水を充填し、注射用水が収容された気密容器を製造する際には、滅菌環境とし、具体的には滅菌基準Ｄ６（生菌数１０−６ｃｆｕ／ｍＬ未満）とすることが好ましい。また、滅菌バリデーションが実施された無菌充填システムにて製造することが好ましい。
【００３１】
気密容器の数は３個以上であり、エンドトキシン標準原液の希釈回数と同数である。例えば図１（ａ）、（ｂ）に示すようにエンドトキシン標準原液を段階的に７回希釈する場合には、気密容器の数は７個となる。
【００３２】
２．希釈工程
本発明における希釈工程は、エンドトキシン標準原液を一つの上記気密容器に注入して希釈し、希釈された上記エンドトキシン標準原液を他の上記気密容器に注入してさらに希釈し、上記気密容器の数だけ上記エンドトキシン標準原液の希釈を繰り返し行う工程である。
【００３３】
エンドトキシン標準原液は、日本薬局方で定められているエンドトキシン標準原液であり、エンドトキシン標準品を注射用水で溶解して調製したものである。
エンドトキシン標準品は、ライセート試薬の感度を確認する上で、日本薬局方が定めた定量保証のエンドトキシンであり、例えば医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団や、エンドトキシン検出試薬メーカーである生化学工業、和光純薬、ロンザ等から入手することができる。
【００３４】
気密容器を開けてエンドトキシン標準原液または希釈されたエンドトキシン標準原液を注入した後は、外部環境のエンドトキシンの混入を防ぐために、速やかに気密容器の開口部を塞ぐことが好ましい。この際、気密容器が蓋部を有する場合には蓋部によって気密容器を閉じることができる。また、乾熱滅菌されたアルミキャップやアルミ箔等で気密容器の開口部を塞いでもよい。
【００３５】
また、エンドトキシン標準原液の希釈に際しては、エンドトキシン標準原液または希釈されたエンドトキシン標準原液を気密容器に注入した後、例えば、試験管ミキサー、ボルテックスミキサー等の撹拌機器を用いて撹拌する。
上記撹拌は、２〜１０ｍL容の広口プラスチックアンプルにて行うことが好ましい。アンプル内の標準溶液を均一に混合できるとともに、アンプル外に溢出することなく、所望のエンドトキシン標準溶液を正確に調製できるからである。
【００３６】
エンドトキシン標準原液の希釈回数としては、エンドトキシン試験法やライセート試薬の種類に応じて適宜選択される。例えば、ライセート試薬としてＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ社製のＰｙｒｏｃｈｒｏｍｅを用いたカイネティック比色法（マイクロプレート法）、ライセート試薬として生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−５０Ｍを用いたカイネティック比色法（マイクロプレート法）、ライセート試薬として生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−２４Ｓを用いたカイネティック比色法（シングルバイアル法）、およびライセート試薬としてＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ社製のパイロテル−Ｔを用いたカイネティック比濁法（マイクロプレート法）の場合、エンドトキシン標準原液を段階的に７回希釈する。また、ゲル化法では、表示感度λに応じて希釈回数が適宜調整される。
【００３７】
３．エンドトキシン標準溶液
本発明においては、エンドトキシン濃度の異なる３種以上のエンドトキシン標準溶液を調製する。
検量線作成に用いられるエンドトキシン標準溶液の種類の数としては、エンドトキシン試験法やライセート試薬の種類に応じて適宜選択される。例えば、ライセート試薬として生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−５０Ｍを用いたカイネティック比色法（マイクロプレート法）、ライセート試薬として生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−２４Ｓを用いたカイネティック比色法（シングルバイアル法）、およびライセート試薬としてＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ社製のパイロテル−Ｔを用いたカイネティック比濁法（マイクロプレート法）の場合、検量線作成用の少なくとも３種のエンドトキシン標準溶液（０．１、０．０２５、０．００６２５ＥＵ／ｍＬ）を調製する。また例えば、ライセート試薬としてＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｏｆ Ｃａｐｅ Ｃｏｄ社製のＰｙｒｏｃｈｒｏｍｅを用いたカイネティック比色法（マイクロプレート法）の場合、検量線作成用の５種のエンドトキシン標準溶液（５０、５、０．５、０．０５、０．００５ＥＵ／ｍＬ）を調製する。また、ゲル化法では、予備試験のために４種のエンドトキシン標準溶液を調製する。
【００３８】
Ｂ．エンドトキシン標準溶液調製用キット
本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットは、所定量の注射用水が収容され、再閉可能な気密容器を３個以上有することを特徴とするものである。
【００３９】
本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットについて図面を参照して説明する。
図２は、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットの一例を示す模式図である。図２に例示するように、エンドトキシン標準溶液調製用キット１０は、０．９ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１を５個、０．６ｍＬの注射用水１１が収容された気密容器１を２個有している。この気密容器１はプラスチックアンプルであり、本体部２と、頭部３と、本体部２および頭部３を連結し、切断可能な切断部４とを有し、本体部２と切断部４と頭部３とは一体に形成されている。
【００４０】
図３（ａ）〜（ｂ）は本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける気密容器の使用方法の一例を示す模式図である。気密容器１は、図３（ａ）に例示するように頭部３を捩る、引っ張るまたは本体部２の方に押し付けて切断部４で切り離すことができるものであり、また図３（ｂ）に例示するように頭部３は蓋部であり頭部３で再閉できるものである。まず、図３（ａ）に示すように、頭部３を捩り切って気密容器１を開け、注射用水１１が収容された気密容器１にエンドトキシン標準原液１２または希釈されたエンドトキシン標準原液を注入して希釈する。この際、外部環境からのエンドトキシンの混入を防ぐために、気密容器１にエンドトキシン標準原液１２または希釈されたエンドトキシン標準原液１２を注入した後は、図３（ｂ）に例示するように速やかに頭部３で気密容器１を閉じる。
【００４１】
図１（ａ）〜（ｂ）は本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットの使用方法の一例を示す工程図であり、図２に示すエンドトキシン標準溶液調製用キットを用いる例である。なお、図１（ａ）〜（ｂ）については、上記「Ａ．エンドトキシン標準溶液の調製方法」に詳しく記載したので、ここでの説明は省略する。
【００４２】
本発明においては、予め所定量の注射用水が気密容器に収容されており、気密容器にエントドキシン標準原液または希釈されたエンドトキシン標準原液を注入することでエンドトキシン標準原液を段階的に希釈することができる。そのため、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットを用いることにより、簡単な工程でエンドトキシン標準溶液を調製することができ、エンドトキシン試験法における予備試験の工程を簡略化することが可能である。
【００４３】
また本発明においては、気密容器に収容される注射用水の量を適宜調整することで、種々のエンドトキシン試験法の予備試験に適用することが可能である。
【００４４】
また本発明においては、気密容器は再閉可能であるため、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットを用いてエンドトキシン標準溶液を調製する際に、エンドトキシン標準溶液に外部環境のエンドトキシンが混入するのを抑制することができる。
【００４５】
以下、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットにおける各構成について説明する。
【００４６】
１．気密容器
本発明に用いられる気密容器は、所定量の注射用水が収容されるものであり、再閉可能なものである。
【００４７】
気密容器は、上記「Ａ．エントドキシン標準溶液の調製方法」に記載したものであり、再閉可能なものであればよいが、中でも蓋部を有することが好ましい。蓋部によって気密容器を容易に再閉することができ、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットを用いてエンドトキシン標準溶液を調製する際に、エンドトキシン標準溶液に外部環境のエンドトキシンが混入するのを抑制することができるからである。
【００４８】
蓋部を有する気密容器としては、例えばアンプルやバイアル、スクリューキャップやピルファープルーフキャップ、フリップトップ、ディスクトップ等を有する蓋付き容器、開口弁を有する内蓋を有する容器、シール部を有する容器、開口シールタブを有する容器等が挙げられる。
【００４９】
具体的には、気密容器としては、本体部と、頭部と、本体部および頭部を連結し、切断可能な切断部とを有し、頭部が蓋部であるものが挙げられる。
図２および図３（ａ）、（ｂ）は本発明における気密容器の一例を示す模式図である。なお、図２および図３（ａ）、（ｂ）については、上述したので、ここでの説明は省略する。このような気密容器は、頭部を捩る、引っ張るまたは本体部の方に押し付けて切断部で切り離すことで開けることができ、滅菌状態が担保された頭部を蓋部として利用することができる。
図４（ａ）は本発明における気密容器の他の例を示す模式図である。図４（ａ）に例示するように、気密容器１は、本体部２と、頭部３と、本体部２および頭部３を連結し、切断可能な切断部４とを有し、本体部２と切断部４と頭部３とは一体に形成されている。この気密容器１は、図４（ｂ）に例示するように、頭部３を捩るまたは引っ張り切断部４で切り離すことで開けることができ、図４（ｃ）に例示するように、頭部３は中栓として機能し、頭部３で再閉することができる。
【００５０】
本体部と切断部と頭部とを有する気密容器において、頭部で構成される蓋部としては、本体部の開口部を塞ぐことができるものであればよく、例えば図２および図３（ａ）、（ｂ）に示すように本体部の開口部に載せるだけものであってもよく、図４に示すように中栓として機能するものであってもよく、図示しないが本体部の開口部を覆うものであってもよい。頭部で構成される蓋部が中栓として機能するものである場合には、蓋部が外れにくくなることから、再閉後の気密容器の取扱いが容易になる。また、頭部で構成される蓋部が本体部の開口部を覆うものであって、本体部に係止可能なものである場合にも、蓋部が外れにくいことから、再閉後の気密容器の取扱いが容易になる。
【００５１】
気密容器が本体部と切断部と頭部とを有する場合、頭部がヒンジを介して本体部に連結されていることが好ましい。作業中に蓋部である頭部の落下を防ぐことができるからである。
図５（ａ）は本発明における気密容器の他の例を示す模式図である。図５（ａ）に例示するように、気密容器１は、本体部２と、頭部３と、本体部２および頭部３を連結し、切断可能な切断部４と、本体部２および頭部３を連結し、切断部４よりも厚みが厚いヒンジ５とを有し、本体部２と切断部４とヒンジ５と頭部３とは一体に形成されている。この気密容器１は、図５（ｂ）に例示するように、頭部３を引っ張るまたは本体部２の方に押し付けて切断部４で切り離すことで開けることができ、図５（ｃ）に例示するように、頭部３で再閉することができる。開閉の際には、ヒンジ５によって頭部３の落下を防ぐことができる。
ヒンジとしては、本体部および頭部を連結し、切断部で切断した際に切断されないものであればよく、例えば切断部よりも厚みが厚い厚肉部であってもよく、ストラップ状のヒンジであってもよい。ヒンジが厚肉部の場合には、図５（ｂ）に例示するように頭部３は完全に切り離されていないが、ストラップ状のヒンジの場合には、図示しないが頭部は完全に切り離されていてもよい。
【００５２】
本体部と切断部と頭部とを有する気密容器としては、例えば公知のプラスチックアンプルの中から適宜選択して適用することができる。
【００５３】
また、気密容器としては、本体部と、本体部の開口部に配置され、開口弁を有する内蓋と、摘み部と、内蓋および摘み部を連結し、切断可能な切断部とを有し、内蓋が蓋部であるものが挙げられる。このような気密容器は、開口弁によって開閉可能である。
図６（ａ）は本発明における気密容器の他の例を示す模式図である。図６（ａ）に例示するように、気密容器１は、本体部２と、本体部２の開口部に配置され、開口弁を有する内蓋７と、摘み部８と、内蓋７および摘み部８を連結し、切断可能な切断部４とを有し、本体部２と内蓋７と切断部４と摘み部８とは一体に形成されている。この気密容器１は、図６（ｂ）に例示するように、摘み部８を捩る、引っ張るまたは本体部２の方に押し付けて切断部４で切り離し、図６（ｃ）に例示するように、本体部２の側面を押すことで内蓋７の開口弁６を開けることができる。また、本体部２の側面を元に戻すことで、図６（ｂ）に例示するように、開口弁６を閉じることができる。
この場合、気密容器内の圧力を大気圧よりも高くすることにより、開口弁を開けた際に、外部環境のエンドトキシンが混入するのを効果的に防ぐことができる。
【００５４】
シール部を有する容器においては、シール部が蓋部になる。この場合、シール部の一部を剥がすことで気密容器を開けることができ、またシール部の剥がした部分を元に戻すことで気密容器を再閉することができる。
シール部としては、一般的なものから適宜選択して用いることができ、例えばアルミシールが挙げられる。
【００５５】
蓋付き容器においては、例えばスクリューキャップやピルファープルーフキャップ等が蓋部になる。また、蓋付き容器は、内蓋としてシール部を有していてもよい。この場合、気密容器を開ける際にはシール部は全て剥がされる。
【００５６】
また、上記蓋付き容器としては、例えば、本体部と蓋部とが薄肉部を介して連結され、蓋部を捩ることにより初期開封することが可能であり、かつ再封可能な容器を挙げることができる。
図７は本発明における気密容器の他の例を示す概略断面図である。図７においては、気密容器本体の開口部から肩部までを示している。図７（ａ）は上記気密容器の開封前の例を示す概略断面図であり、図７（ｂ）は上記気密容器の再封時の例を示す概略断面図である。
図７（ａ）に例示するように、気密容器１は、本体部２と蓋部１３が薄肉部１４および１４’を介して連結され、上記蓋部１３を捩ることにより薄肉部１４および１４’を切断し、初期開封をすることが可能な蓋付き容器であり、上記蓋部の天部に逆止弁状のテーパー１５を有している。
また、図７（ｂ）に例示するように、上記気密容器１は、開封後、蓋部１３を本体部２の開口部に押し込むことにより、再封可能な容器である。再封時に、上記蓋部内側の逆止弁状のテーパー１５が本体部２の開口部の内周面に当接するとともに、蓋部１３の外周下端に形成された爪部１６と本体部２の首部に形成された鍔部１７が係合することにより、再封した容器の気密性を保つことが可能になる。
【００５７】
また、蓋部は片手で再閉可能なものであることが好ましい。作業効率を高め、外部環境からのエンドトキシンの混入をさらに抑制することができるからである。例えば、気密容器が本体部、切断部および頭部を有するものである場合には、頭部がヒンジを介して本体部に連結されていることにより、頭部を片手で再閉可能とすることができる。また、気密容器が本体部、開口弁を有する内蓋、切断部および摘み部を有するものである場合には、本体部の側面を押したり戻したりすることで、開口弁を片手で開閉可能である。また、気密容器が蓋付き容器である場合、例えばワンプッシュで閉じることが可能なスクリューキャップを用いることで、片手で再閉可能とすることができる。
【００５８】
気密容器の材質としては、標準液を調整する際に十分な混合が出来るように、撹拌操作に耐えられる強度を有していれば特に限定されないが、例えばプラスチック、ガラス、金属等を挙げることができる。中でも、プラスチックが好ましい。使い捨てのプラスチック製の気密容器は利便性が良いからである。プラスチックとしては、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート等が挙げられる。
プラスチック製の気密容器としては、例えばプラスチックアンプル、プラスチックボトル等を用いることができる。
【００５９】
気密容器は透明、半透明、不透明のいずれであってもよいが、注射用水およびエンドトキシン標準原液を視認しやすいことから、透明または半透明であることが好ましい。
【００６０】
また、プラスチック製の気密容器の場合には、気密容器の内側および外側の少なくともいずれかにバリア層が形成されていることが好ましい。これにより、気密容器内の水分の蒸発を防ぐことができるからである。
バリア層の材料としては、プラスチック製の気密容器の表面に形成可能なものであれば特に限定されるものではなく、例えばエチレン−ビニルアルコール共重合体、酸化ケイ素、アルミナ等が挙げられる。
バリア層の形成方法としては、例えば塗布法、蒸着法等が挙げられる。
【００６１】
また、所定量の注射用水が収容された気密容器は、密封包装されていてもよい。これにより、気密容器内の水分の蒸発を抑制することができるからである。
包装体としては、例えばアルミ箔やアルミ蒸着膜を有するものを用いることができる。
この場合、包装体内に、水分を含む清浄綿等のような、所定の水分を蓄え、水分を吸収および排出可能な湿度調整剤が配置されていてもよい。湿度調整剤は、例えばシート状であってもよくブロック状であってもよい。
【００６２】
気密容器の容量としては、エンドトキシン試験法に応じて適宜選択されるものであるが、撹拌時に注入口および排出口から溢水しない高さを有するものであることが好ましい。例えば１ｍＬ〜２０ｍＬの範囲内であることが好ましく、中でも２ｍＬ〜１０ｍＬの範囲内であることが好ましい。従来、エンドトキシン標準溶液の調製に際しては、例えば２０ｍＬ〜１０００ｍＬのプラスチックボトルから数ｍＬの試験管に注射用水を分注していたが、本発明においてはこのような工程を省略することができる。
【００６３】
３個以上の気密容器は、連結されたものであってもよい。気密容器が連結されている場合、本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットを使用する際には、通常、個々の気密容器に分離される。
【００６４】
気密容器の製造方法としては、一般的な成型方法を適用することができる。
【００６５】
なお、気密容器の数等については、上記「Ａ．エンドトキシン標準溶液の調製方法」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【００６６】
２．注射用水
本発明においては、上記気密容器に所定量の注射用水が収容される。
なお、注射用水については、上記「Ａ．エンドトキシン標準溶液の調製方法」に記載したので、ここでの説明は省略する。
【００６７】
３．使用方法
本発明のエンドトキシン標準溶液調製用キットは、上述のエンドトキシン標準溶液の調製方法に用いることができる。
【００６８】
本発明は、上記実施形態に限定されるものではない。上記実施形態は例示であり、本発明の特許請求の範囲に記載された技術的思想と実質的に同一な構成を有し、同様な作用効果を奏するものは、いかなるものであっても本発明の技術的範囲に包含される。
【実施例】
【００６９】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。
【００７０】
[実施例１]
（準備工程）
大塚製薬（株）製の注射用水２０ｍＬ入りのプラスチックアンプルを７本用意し、クリーンベンチ内での上記アンプルの頭部と本体部分の切断部分を乾熱滅菌したカッターにて切り込みを入れ、注射用水を全量排出した。
上記プラスチックアンプルを試験管立てに１０分間反転静置し、頭部に溜まった注射用水を生化学工業製のエンドトキシンフリーピペットチップを用いて吸出後、５分間反転静置し、アンプル内壁に水滴の付着がないことを確認した。
新たに大塚製薬製の注射用水２０ｍＬ入りのプラスチックアンプルを用意し、上記7本のプラスチックアンプルに、エンドトキシンフリーピペットチップを用い、注射用水を分注した（０．６ｍL：２本、０．９ｍL：５本）。
（希釈工程）
生化学工業社製のエンドスペシーＥＳ−２４Ｓを用いたカイネティック比色法の標準操作法に従い、図１（ｂ）に示す希釈系列にて、日本薬局方標準エンドトキシン標準品（１０，０００ＥＵ／ｍＬ）を希釈し、３種のエンドトキシン標準溶液（０．１、０．０２５、０．００６２５ＥＵ／ｍＬ）を調製した。
上記操作の際、外部からエンドトキシンが混入することを防止するため、上記工程にて準備したアンプルの摘み部を押して切込部を開口し、エンドトキシン標準溶液を所定量分注し、試験管ミキサーにて１分間激しく混合した。
（検量線の信頼性確認工程）
上記工程にて調製したエンドトキシン標準溶液をエンドスペシーＥＳ−２４Ｓを用いたカイネティック比色法（シングルバイアル法）に従い、波長５４５ｎｍにて吸光度を測定した。
【００７１】
[実施例２]
ニプロファー（株）製の５ｍＬ容プラスチックアンプルを用い、実施例１と同様の手順にてエンドトキシン標準溶液の調製および検量線作成を行った。
【００７２】
［評価］
実施例１および実施例２にて、プラスチックアンプルの容量を変え、検量線を作成し、直線回帰分析を行ったところ、相関係数ｒが０．９８０以上の範囲内の値である、信頼性の高い検量線を得ることができた。
また、５ｍＬ容アンプルでは、２０ｍＬ容アンプルを使用する場合に比べ、操作性に優れており、かつ、撹拌時にアンプルの外に溶液が溢出することなく、好適にエンドトキシン標準液の調製を行うことができた。
【符号の説明】
【００７３】
１  …  気密容器
２  …  本体部
３  …  頭部
４  …  切断部
５  …  ヒンジ
６  …  開口弁
７  …  内蓋
８  …  摘み部
１０  …  エンドトキシン標準溶液調製用キット
１１  …  注射用水
１２  …  エンドトキシン標準原液
１３  …  蓋部
１４、１４’  …  薄肉部
１５  …  逆止弁状のテーパー
１６  …  爪部
１７  …  鍔部
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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