(57)【要約】【課題】本発明は、新規な純物質の抽出方法を提供する。【解決手段】従来の純物質の抽出方法として慣用されている有機抽出液及びカラムクロマトグラフィーに代えて、本発明の方法は、アルコール溶液のみを使用して、紅麹発酵生産品の中からモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）及びアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有する沈殿物を抽出する方法である。なお、本発明の方法により得られた純物質の沈殿物は、減圧濃縮工程を不要とし、抽出回収率が９７．３５％まで上るモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び抽出回収率が９５．１６％まで上るアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を自然に含有する。従って、本発明の新規な純物質の抽出方法は、抽出速度が早く、効率が高いほか、有機溶剤の使用を減少できるなどの利点があることが実証された。【選択図】図１Ａ
2016214235.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
紅麹発酵生産品の中から抽出された少なくとも１種の二次代謝産物に適した新規な純物質の抽出方法であって、
（１）特定重量の紅麹発酵生産品を準備して、第１体積の第１採取液により第１温度下で前記紅麹発酵生産品に対して第１抽出時間かかって抽出を行うステップと、
（２）前記ステップ（１）の第１抽出液を収集して濾過することで、第１濾過抽出液を得ると共に、一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品を得るステップと、
（３）第２体積の第２採取液により前記第１温度下で一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品に対して第２抽出時間かかって再抽出を行うステップと、
（４）前記ステップ（３）の第２抽出液を収集して濾過することで、第２濾過抽出液を得るステップと、
（５）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を収集してそれを純物質になるように処理するステップとを含むことを特徴とする、
新規な純物質の抽出方法。
【請求項２】
前記ステップ（５）は、（５１）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を混合して混合抽出液を得ると共に、前記混合抽出液を濃稠状に濃縮するステップと、（５２）前記混合抽出液の中に第３体積の溶剤を加えて試料溶液を得るステップと、（５３）第２温度の水浴中で前記試料溶液を第１撹拌時間かかって撹拌するステップと、（５４）前記試料溶液の中に第４体積の水を続いて加え、再び前記試料溶液を第２撹拌時間かかって撹拌するステップと、（５５）２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（５４）に得られた前記試料溶液に対して遠心工程を第１遠心時間かかって行うステップと、（５６）遠心工程を完了して前記純物質の沈殿物を続いて収集するステップと、を含むことを特徴とする、請求項１に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項３】
前記紅麹発酵生産品の前記特定重量が、少なくとも６０ｇであり、かつ前記紅麹発酵生産品は、紅麹米または紅麹山薬のいずれか１種であることを特徴とする、請求項１に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項４】
前記第１採取液と前記第２採取液は、濃度９５％のエタノールであることを特徴とする、請求項１に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項５】
前記第１体積と前記第２体積が、２５０ｍＬ〜３２０ｍＬの間であり、かつ前記第４体積が、８ｍＬ〜１２ｍＬの間であることを特徴とする、請求項１に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項６】
前記第１温度が、５０℃〜６５℃の間であり、かつ前記第２温度が、５５℃〜７５℃の間であることを特徴とする、請求項１に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項７】
前記第１抽出時間が、１〜３時間であり、かつ前記第２抽出時間が、１〜３時間であることを特徴とする、請求項１に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項８】
前記溶剤は、濃度９５％のエタノールであり、かつ前記溶剤の前記第３体積が、８〜１２ｍＬの間であることを特徴とする、請求項２に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項９】
前記第１撹拌時間が、３〜７分間であり、かつ前記第２撹拌時間が、３〜７分間であることを特徴とする、請求項２に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１０】
１ｇあたりの前記沈殿物は、少なくとも２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び少なくとも１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有することを特徴とする、請求項２に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１１】
前記沈殿物は、前記試料溶液に対して重量百分率で少なくとも２５％を占めることを特徴とする、請求項２に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１２】
前記モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９７．３５％であり、かつ前記アンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９５．１６％であることを特徴とする、請求項１０に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１３】
紅麹発酵生産品の中から抽出された少なくとも１種の二次代謝産物に適した新規な純物質の抽出方法であって、
（１’）特定重量の紅麹発酵生産品を準備して、第１体積の第１採取液により第１温度下で前記紅麹発酵生産品に対して第１抽出時間かかって抽出を行うステップと、
（２’）前記ステップ（１’）の第１抽出液を収集して濾過することで、第１濾過抽出液を得ると共に、一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品を得るステップと、
（３’）第２体積の第２採取液により第２温度下で一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品に対して第２抽出時間かかって再抽出を行うステップと、
（４’）前記ステップ（３’）の第２抽出液を収集して濾過することで、第２濾過抽出液を得るステップと、
（５’）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を収集してそれを純物質になるように処理するステップとを含むことを特徴とする、
新規な純物質の抽出方法。
【請求項１４】
前記ステップ（５’）は、（５１’）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を混合して混合抽出液を得るステップと、（５２’）前記混合抽出液を第３体積に濃縮してから、前記混合抽出液の中に第４体積の水を加えて第１試料溶液を得るステップと、（５３’）２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（５２’）に得られた前記第１試料溶液に対して遠心工程を第１遠心時間かかって行うステップと、（５４’）遠心工程を完了した後、第１沈殿物を続いて収集するステップと、（５５’）第５体積の溶剤中に前記第１沈殿物を溶解させて第２試料溶液を得るステップと、（５６’）第３温度の水浴中で前記第２試料溶液を第１撹拌時間かかって撹拌するステップと、（５７’）前記第２試料溶液の中に第６体積の水を続いて加え、再び前記第２試料溶液を第２撹拌時間かかって撹拌するステップと、（５８’）２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（５７’）に得られた前記第２試料溶液に対して遠心工程を第２遠心時間かかって行うステップと、（５９’）遠心工程を完了した後、前記純物質である第２沈殿物を続いて収集するステップと、を含むことを特徴とする、請求項１３に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１５】
前記紅麹発酵生産品の前記特定重量が、少なくとも２０ｋｇであり、かつ前記紅麹発酵生産品は、紅麹米または紅麹山薬のいずれか１種であることを特徴とする、請求項１３に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１６】
前記第１採取液と前記第２採取液は、いずれも濃度９５％のエタノールであり、かつ前記第１体積と前記第２体積が、少なくとも６０Ｌであることを特徴とする、請求項１３に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１７】
前記第１温度と前記第２温度が、５０℃〜６５℃の間であり、かつ前記第３温度が、５５℃〜７５℃の間であることを特徴とする、請求項１３に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１８】
前記第１抽出時間が、１〜３時間であり、かつ前記第２抽出時間が、１〜３時間であることを特徴とする、請求項１３に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項１９】
前記第３体積が、少なくとも４Ｌであり、前記第４体積が、少なくとも４Ｌであり、かつ前記第６体積が、１．５〜２．５Ｌの間であることを特徴とする、請求項１４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項２０】
前記第１遠心時間が、８〜１２分間であり、かつ前記第２遠心時間が、８〜１２分間であることを特徴とする、請求項１４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項２１】
前記溶剤は、濃度９５％のエタノールであり、かつ前記第５体積が、１〜２Ｌの間であることを特徴とする、請求項１４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項２２】
前記第１撹拌時間が、１０〜２０分間であり、かつ前記第２撹拌時間が、３〜７分間であることを特徴とする、請求項１４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項２３】
１ｇあたりの前記第２沈殿物は、少なくとも２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び少なくとも１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有することを特徴とする、請求項１４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項２４】
前記第２沈殿物は、前記第２試料溶液に対して重量百分率で少なくとも２５％を占めることを特徴とする、請求項１４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【請求項２５】
前記モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９８．５９％であり、かつ前記アンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９８．５１％であることを特徴とする、請求項２４に記載の新規な純物質の抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、物質の抽出と純化の技術分野に係り、特に、紅麹発酵生産品の二次代謝産物の純化抽出方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
ＮＴＵ  ５６８紅麹菌株（Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｍｕｔａｎｔ，Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｐｕｒｐｕｒｅｕｓ  ＮＴＵ  ５６８）は、台湾国立大学の微生物と生化学研究院の院長潘子明教授及びその研究開発チームによって研究開発された１つの優良な台湾本土の紅麹菌株である。このＮＴＵ  ５６８紅麹菌は、増長が迅速であるほか、澱粉加水分解能力が強く、二次代謝（ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ）能力が強いという特点を有する。なお、ＮＴＵ  ５６８紅麹菌の最適な培地は、２％の米粉（ｒｉｃｅ  ｐｏｗｄｅｒ）を含有する必要があると共に、その最適な培養温度が３０℃で、最適な培養時間が４８時間で、最適な培養圧力が１大気圧である。
【０００３】
このＮＴＵ  ５６８紅麹菌の生存能力（ｖｉａｂｉｌｉｔｙ）を実証するために、ＮＴＵ  ５６８紅麹菌を傾斜チューブの中（ｓｌａｎｔ  ｔｕｂｅ）から、ポテトデキストロース寒天培地（ｐｏｔａｔｏ  ｄｅｘｔｒｏｓｅ  ａｇａｒ，ＰＤＡ）上に転写して１５日間培養する。培養後、ＰＤＡ上から１ｃｍ３の菌糸体を３箇所堀ると共に、菌糸体を２％の米粉（ｒｉｃｅ  ｐｏｗｄｅｒ）を含有する培養液に置き、４８時間を経ると、培養液は紅色を呈することが分かる。これはＮＴＵ  ５６８紅麹菌は、相当な生存能力を有することを示す。このほか、補充説明すべき点は、ＮＴＵ  ５６８紅麹菌の保存方式は、４℃の環境下で、ＰＤＡ培地を有する傾斜チューブ内に留置し、かつ３ヶ月ごとに１回継代培養（ｓｕｂ−ｃｕｌｔｕｒｅｄ）する必要がある点である。
【０００４】
近年、保健食品の勢いよく発展に伴い、多効能の機能性発酵製品である紅麹が益々重要視されつつある。アジア地域では、紅麹菌（Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ）が飲食、医薬方面での応用は、千年の歴史を持ち、その内、紅麹菌の重要な二次代謝産物は下記の４種類を含む。
（１）色素群：赤色系色素（ｒｕｂｒｏｐｕｎｃｔａｍｉｎｅ、ｍｏｎａｓｃｏｒｕｂｒａｍｉｎｅ）、黄色色素（ａｎｋａｆｌａｖｉｎ、ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及びオレンジ色色素（ｒｕｂｒｏｐｕｎｃｔａｎｉｎ、ｍｏｎａｓｃｏｒｕｂｒｉｎ）を含む。
（２）コレステロール低下物質：例えば、ｍｏｎａｃｏｌｉｎ  Ｋが挙げられる。
（３）血圧低下物質：例えば、γ−アミノ酪酸（γ−ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ  ａｃｉｄ，ＧＡＢＡ）が挙げられる。
（４）抗酸化物質：ジメルミン酸（ｄｉｍｅｒｕｍｉｃ  ａｃｉｄ）、及び３−ヒドロキシ−４−メトキシ安息香酸（３−ｈｙｄｏｘｙ−４−ｍｅｔｈｏｘｙ−ｂｅｎｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）を含む。
【０００５】
早期、モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の化学構造を確認するために、研究者は、薄層クロマトグラフィー分離方法（Ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を利用して、紅麹菌糸体の中からモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を分離する。その内、早期の薄層クロマトグラフィー分離方法は、以下のステップを含む。
ステップ（Ｓ０１ａ）：菌糸体を収集して水で洗浄すると共に、室温下で乾燥した後、それを粉末に粉砕する。
ステップ（Ｓ０２ａ）：ヘキサンで粉状の菌糸体を抽出して抽出液を得る。
ステップ（Ｓ０３ａ）：抽出液を濃縮して０℃下で２日間留置する。
ステップ（Ｓ０４ａ）：抽出液を濾過して濾過物を得る。
ステップ（Ｓ０５ａ）：ヘキサン及びセルロースクロマトグラフィーカラムを準備して、クロマトグラフィー法（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）により、前記濾過物に対して純化を行う。
ステップ（Ｓ０６ａ）：２０ｃｍ平方のシリカゲル製の薄層クロマトグラフィー板（ＴＬＣ，Ｔｈｉｎ  Ｌａｙｅｒ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）、及び展開液（エーテル２５％含有ベンゼン）を準備して、前記ステップ（Ｓ０５ａ）に得られた黄色分層の中のアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）とモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）を分離し、アンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）分層を削り取る。
ステップ（Ｓ０７ａ）：ジクロロメタンと酢酸エチルでアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）分層を抽出する。
ステップ（Ｓ０８ａ）：前記ステップ（Ｓ０７ａ）の抽出物を乾燥した後、エタノールでそれを結晶させて黄色プリズム結晶（ｙｅｌｌｏｗ  ｐｒｉｓｍ）を得る。その内、１ｇあたりの黄色プリズム結晶の中には、７４ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有する。
【０００６】
従来周知のように、薄層クロマトグラフィー分離方法（Ｔｈｉｎ  ｌａｙｅｒ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）は、主に微量の純物質の分離純化に応用されており、大量の純物質の分離純化には応用されない。薄層クロマトグラフィー分離方法を例として、黄色分層の中から１ｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を分離するには、２０〜１００枚のシリカゲル製の薄層クロマトグラフィー板を同時に使用する必要がある。
【０００７】
伝統な薄層クロマトグラフィー分離方法は、大量の純物質の分離純化には応用されない。これに鑑みて、非特許文献１に純物質の大量抽出方法が提出されている。ここで、非特許文献１とは、Ｔｏｓｈｉｈｉｒｏ  ｅｔ．ａｌ，“Ａｚａｐｈｉｌｏｎｅｓ，Ｆｕｒａｎｏｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｄｅｓ，ａｎｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｓ  ｏｆ  Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｐｉｌｏｓｕｓ−Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｒｉｃｅ（Ｒｅｄ−Ｍｏｌｄ  Ｒｉｃｅ）  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ”，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，２００５，Ｖｏｌ．５３，ｐｐ．５６２−５６５のことである。非特許文献１に記載の紅麹黄色素（ＭｏｎａｓｃｉｎとＡｎｋａｆｌａｖｉｎ）の純化抽出方法は、以下のステップを含む。
ステップ（Ｓ０１ｂ）：１２Ｌのアルコール（７０％）で１．５ｋｇの紅麹米を３０分間抽出する。
ステップ（Ｓ０２ｂ）：前記ステップ（Ｓ０１ｂ）の産物を濾過すると共に、３Ｌのアルコール（７０％）で濾過物を洗浄する。
ステップ（Ｓ０３ｂ）：５０℃下で前記ステップ（Ｓ０２ｂ）の濾液と洗浄液に対して（真空）減圧濃縮を行う。
ステップ（Ｓ０４ｂ）：前記ステップ（Ｓ０３ｂ）の産物内のアルコールを除去して、１５２．９ｇの第１粗抽出物を得る。
ステップ（Ｓ０５ｂ）：前記第１粗抽出物を１Ｌの水の中に置いてから、０．５Ｌの酢酸エチルで５回の液抽出を行う。
ステップ（Ｓ０６ｂ）：５０℃下で前記ステップ（Ｓ０５ｂ）に得られた酢酸エチル抽出液に対して（真空）減圧濃縮を行う。
ステップ（Ｓ０７ｂ）：前記ステップ（Ｓ０６ｂ）の産物内の酢酸エチルを除去して、２６．１ｇの第２粗抽出物を得る。
ステップ（Ｓ０８ｂ）：シリカゲルクロマトグラフィーカラム及び溶離溶剤を準備して、クロマトグラフィー法（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）により、１１．９ｇの第２粗抽出物に対して純化を行う。その内、前記溶離溶剤としては１０種類が用意され、それぞれヘキサン／酢酸エチル＝１／０、ヘキサン／酢酸エチル＝９：１、ヘキサン／酢酸エチル＝４：１、ヘキサン／酢酸エチル＝１：１、ヘキサン／酢酸エチル＝３：７、ヘキサン／酢酸エチル＝１：９、ヘキサン／酢酸エチル＝０／１、酢酸エチル／メタノール＝９：１、酢酸エチル／メタノール＝１：１、酢酸エチル／メタノール＝０／１（ｖ／ｖ，体積比）のものがある。
ステップ（Ｓ０９ｂ）：前記ステップ（Ｓ０８ｂ）に得られた１１個の分層（Ａ〜Ｋ）の中から２５０ｍｇのＣ分層を取り出す。
ステップ（Ｓ１０ｂ）：溶離液を準備して、高速液体クロマトグラフィー法（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）により、２．５ｍＬ／ｍｉｎの溶離液流速で２５０ｍｇのＣ分層に対して純化を行う。こうして、溶離液を２７分間収集して１４ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）が得られ、かつ溶離液を４０分間収集して４ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）が得られる。その内、前記溶離液としては、メタノール／水／酢酸＝７５：２５：３のものが用意される。
【０００８】
純物質の抽出技術を熟知している技術者は、実務操作することにより、非特許文献１の純化抽出方法は、発酵紅麹米（Ｒｅｄ  Ｍｏｌｄ  Ｒｉｃｅ）の中からの大量の紅麹黄色素の抽出には応用されないことが分かる。その理由は、下記であると考えられる。
非特許文献１の純化抽出方法は、最終に得られた紅麹黄色素が１８ｍｇ（１４ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）と４ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ））であるので、２５０ｍｇのＣ分層の中には、僅か７．２％（１８／２５０）の黄色素しか含有していないことが推測される。即ち、非特許文献１の純化抽出方法のステップ（Ｓ０１ｂ）〜ステップ（Ｓ０９ｂ）に使用されている技術は、黄色分層を分離するための最適な技術ではないと考えられる。
【０００９】
非特許文献１の純化抽出方法では、発酵紅麹米の中からモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を高効率に抽出することができない。これに鑑みて、特許文献１に高速液体クロマトグラフィー法（Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ）が提出されている。ここで、特許文献１とは、中国特許第１０１２５５１６８（Ｂ）号明細書のことである。特許文献１に記載の高速液体クロマトグラフィー法は、以下のステップを含む。
ステップ（Ｓ０１ｃ）：ヘキサンを採取液とすることによって、採取液が無色になるまで１０ｇの紅麹米粉末を抽出する。
ステップ（Ｓ０２ｃ）：採取液を収集して濾過することで、濾液を得る。
ステップ（Ｓ０３ｃ）：前記濾液に対して（真空）減圧濃縮を行い、粗抽出物を得る。
ステップ（Ｓ０４ｃ）：メタノールの中に前記粗抽出物を溶解させて５０ｍＬのメタノール溶液を得る。
ステップ（Ｓ０５ｃ）：前記ステップ（Ｓ０４ｃ）に得られたメタノール溶液を濾過することで、試料溶液を得る。
ステップ（Ｓ０６ｃ）：溶離液を準備して、高速液体クロマトグラフィー法（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）により、５ｍＬ／ｍｉｎの溶離液流速で前記試料溶液に対して純化を行うと共に、溶離液を収集する。その内、前記溶離液としては、メタノール／水＝８：２のものが用意される。
【００１０】
特許文献１には、その高速液体クロマトグラフィー法は、純度９６．７６１％のモナスシン純品（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び純度９９．２３４％のアンカフラビン純品（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を作製することができることが記載されている。しかしながら、純物質の抽出技術を熟知している技術者は、実務操作することにより、特許文献１の高速液体クロマトグラフィー法は、依然として以下の欠点があることが分かる。
【００１１】
毎回のＨＰＬＣでは、８０分間かからなければ、１ｍＬの試料溶液を分離することができないため、１ｍＬの試料溶液を得るには、５０回のＨＰＬＣ（計４，０００分間かかる）を行わなければ完成することができない。さらに、毎回８０分間のＨＰＬＣは、僅か０．６ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）しか得られないので、効率的ではない。
【００１２】
特許文献１の純化抽出方法では、発酵紅麹米の中からモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を迅速に抽出することができない。これに鑑みて、特許文献２に高速向流クロマトグラフィー法（Ｈｉｇｈ  Ｓｐｅｅｄ  Ｃｏｕｎｔｅｒ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ，ＨＳＣＣＣ）が提出されている。ここで、特許文献２とは、中国特許第１０１８６４１９１（Ｂ）号明細書のことである。特許文献２に記載の高速向流クロマトグラフィー法は、以下のステップを含む。
ステップ（Ｓ０１ｄ）：６０℃の水浴中でメタノール溶液を使用して粉状の紅麹米を抽出する。その内、粉状の紅麹米とメタノール溶液の固液体積は１：１５である。
ステップ（Ｓ０２ｄ）：前記ステップ（Ｓ０１ｄ）に得られた産物を真空濃縮することで、粗抽出物を得る。
ステップ（Ｓ０３ｄ）：８００ｍｇの粗抽出物を準備してから、固定相に溶解する。
ステップ（Ｓ０４ｄ）：高速向流クロマトグラフィーシステム及び溶離溶剤（即ち、流動相）を準備して、高速向流クロマトグラフィー（ＨＳＣＣＣ）により、前記ステップ（Ｓ０３ｄ）に得られた産物に対して純化を行う。その内、前記溶離溶剤としては、石油エーテル／酢酸エチル／エタノール／水＝２．５：７．５：５：５（ｖ：ｖ：ｖ：ｖ）のものが用意される。
ステップ（Ｓ０５ｄ）：黄色色素純化画分を収集して、前記黄色色素純化画分を８５％のアセトン溶液で溶解させる。
ステップ（Ｓ０６ｄ）：６０℃下で、前記ステップ（Ｓ０５ｄ）の産物を過飽和になるまで真空濃縮してから、１５℃になるまで緩慢に降温すると、モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の結晶体を得ることになる。
【００１３】
しかしながら、純物質の抽出技術を熟知している技術者は、実務操作することにより、特許文献２のＨＳＣＣＣは、依然として以下の欠点があることが分かる。
【００１４】
（１）ＨＳＣＣＣは、８００ｍｇの紅麹抽出物の単回処理において、多種の溶剤を同時に使用する必要があり、その内、８００ｍｇの紅麹抽出物は、およそ１２ｇの紅麹米の中から抽出して得られる。
【００１５】
（２）なお、現在、分取型ＨＳＣＣＣ設備で４８ｇ（＝１２ｇ×４）の紅麹米粉に対して抽出を行うには、依然として１３３分間かかり、依然として生産量不足の問題を有する。また一方、分取型ＨＳＣＣＣ設備の価格が非常に高価であり、その一基あたりの販売価格は約１，４００万台湾ドルである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１６】
【特許文献１】中国特許第１０１２５５１６８（Ｂ）号明細書
【特許文献２】中国特許第１０１８６４１９１（Ｂ）号明細書
【非特許文献】
【００１７】
【非特許文献１】Ｔｏｓｈｉｈｉｒｏ  ｅｔ．ａｌ，“Ａｚａｐｈｉｌｏｎｅｓ，Ｆｕｒａｎｏｉｓｏｐｈｔｈａｌｉｄｅｓ，ａｎｄ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｅｘｔｒａｃｔｓ  ｏｆ  Ｍｏｎａｓｃｕｓ  ｐｉｌｏｓｕｓ−Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｒｉｃｅ（Ｒｅｄ−Ｍｏｌｄ  Ｒｉｃｅ）  ａｎｄ  Ｔｈｅｉｒ  Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ  Ｅｆｆｅｃｔｓ”，Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．，２００５，Ｖｏｌ．５３，ｐｐ．５６２−５６５
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
そのため、従来の純物質の抽出方法、液体クロマトグラフィー法と高速向流クロマトグラフィー法のいずれも、実務応用上は数多くの欠点を有する。これに鑑みて、本願の発明者は、極力研究発明した結果、紅麹発酵生産品の中から抽出された少なくとも１種の二次代謝産物に適した本発明の新規な純物質の抽出方法を研究開発して完了させた。
【００１９】
本発明の主要な目的は、従来の純物質の抽出方法と異なる新規な純物質の抽出方法を提供することである。習用の有機抽出液及びカラムクロマトグラフィーに代えて、本発明の方法は、アルコール溶液のみで、紅麹発酵生産品の中からモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）及びアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有する沈殿物を抽出する方法であるため、抽出速度が早いほか、有機溶剤の使用を減少できるという利点がある。なお、本発明の方法により得られた沈殿物は、減圧濃縮工程を不要とし、抽出回収率が９７．３５％まで上るモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び抽出回収率が９５．１６％まで上るアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を自然に含有する。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
従って、本発明の主要な目的を達成するために、本願の発明者は、紅麹発酵生産品の中から抽出された少なくとも１種の二次代謝産物に適した新規な純物質の抽出方法を提出する。前記方法は以下のステップを含む。
（１）特定重量の紅麹発酵生産品を準備して、第１体積の第１採取液により第１温度下で前記紅麹発酵生産品に対して第１抽出時間かかって抽出を行うステップ。
（２）前記ステップ（１）の第１抽出液を収集して濾過することで、第１濾過抽出液を得ると共に、一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品を得るステップ。
（３）第２体積の第２採取液により前記第１温度下で一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品に対して第２抽出時間かかって再抽出を行うステップ。
（４）前記ステップ（３）の第２抽出液を収集して濾過することで、第２濾過抽出液を得るステップ。
（５）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を収集してそれを純物質になるように処理するステップ。
【００２１】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記ステップ（５）は、以下の詳細なステップを含むことが望ましい。
（５１）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を混合して混合抽出液を得ると共に、前記混合抽出液を濃稠状に濃縮するステップ。
（５２）前記混合抽出液の中に第３体積の溶剤を加えて試料溶液を得るステップ。
（５３）第２温度の水浴中で前記試料溶液を第１撹拌時間かかって撹拌するステップ。
（５４）前記試料溶液の中に第４体積の水を続いて加え、再び前記試料溶液を第２撹拌時間かかって撹拌するステップ。
（５５）２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（５４）に得られた前記試料溶液に対して遠心工程を第１遠心時間かかって行うステップ。
（５６）遠心工程を完了して前記純物質の沈殿物を続いて収集するステップ。
【００２２】
上記の新規な純物質の抽出方法において、紅麹発酵生産品の前記特定重量が、少なくとも６０ｇであり、かつ前記紅麹発酵生産品は、紅麹米または紅麹山薬のいずれか１種であってもよいことが好ましい。
【００２３】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記第１採取液と前記第２採取液は、濃度９５％のエタノールであることが好ましい。
【００２４】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記第１体積と前記第２体積が、２５０ｍＬ〜３２０ｍＬの間であり、かつ前記第４体積が、８ｍＬ〜１２ｍＬの間であることが好ましい。
【００２５】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記第１温度が、５０℃〜６５℃の間であり、かつ前記第２温度が、５５℃〜７５℃の間であることが好ましい。
【００２６】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記第１抽出時間が、１〜３時間であり、かつ前記第２抽出時間が、１〜３時間であることが好ましい。
【００２７】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記溶剤は、濃度９５％のエタノールであり、かつ前記溶剤の前記第３体積が、８〜１２ｍＬの間であることが好ましい。
【００２８】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記第１撹拌時間が、３〜７分間であり、かつ前記第２撹拌時間が、３〜７分間であることが好ましい。
【００２９】
上記の新規な純物質の抽出方法において、１ｇあたりの前記沈殿物は、少なくとも２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び少なくとも１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有することが好ましい。
【００３０】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記沈殿物は、前記試料溶液に対して重量百分率で少なくとも２５％を占めることが好ましい。
【００３１】
上記の新規な純物質の抽出方法において、前記モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９７．３５％であり、かつ前記アンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９５．１６％であることが好ましい。
【００３２】
また、本発明の主要な目的を達成するために、本願の発明者は、前記新規な純物質の抽出方法の別の実施例を提出する。前記方法は以下のステップを含む。
（１’）特定重量の紅麹発酵生産品を準備して、第１体積の第１採取液により第１温度下で前記紅麹発酵生産品に対して第１抽出時間かかって抽出を行うステップ。
（２’）前記ステップ（１’）の第１抽出液を収集して濾過することで、第１濾過抽出液を得ると共に、一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品を得るステップ。
（３’）第２体積の第２採取液により第２温度下で一次抽出を経た前記紅麹発酵生産品に対して第２抽出時間かかって再抽出を行うステップ。
（４’）前記ステップ（３’）の第２抽出液を収集して濾過することで、第２濾過抽出液を得るステップ。
（５’）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を収集してそれを純物質になるように処理するステップ。
【００３３】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記ステップ（５’）は、以下の詳細なステップを含むことが好ましい。
（５１’）前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を混合して混合抽出液を得るステップ。
（５２’）前記混合抽出液を第３体積に濃縮してから、前記混合抽出液の中に第４体積の水を加えて第１試料溶液を得るステップ。
（５３’）２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（５２’）に得られた前記第１試料溶液に対して遠心工程を第１遠心時間かかって行うステップ。
（５４’）遠心工程を完了した後、第１沈殿物を続いて収集するステップ。
（５５’）第５体積の溶剤中に前記第１沈殿物を溶解させて第２試料溶液を得るステップ。
（５６’）第３温度の水浴中で前記第２試料溶液を第１撹拌時間かかって撹拌するステップ。
（５７’）前記第２試料溶液の中に第６体積の水を続いて加え、再び前記第２試料溶液を第２撹拌時間かかって撹拌するステップ。
（５８’）２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（５７’）に得られた前記第２試料溶液に対して遠心工程を第２遠心時間かかって行うステップ。
（５９’）遠心工程を完了した後、前記純物質である第２沈殿物を続いて収集するステップ。
【００３４】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記紅麹発酵生産品の前記特定重量が、少なくとも２０ｋｇであり、かつ前記紅麹発酵生産品は、紅麹米または紅麹山薬のいずれか１種であることが好ましい。
【００３５】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第１採取液と前記第２採取液は、いずれも濃度９５％のエタノールであり、かつ前記第１体積と前記第２体積が、少なくとも６０Ｌであることが好ましい。
【００３６】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第１温度と前記第２温度が、５０℃〜６５℃の間であり、かつ前記第３温度が、５５℃〜７５℃の間であることが好ましい。
【００３７】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第１抽出時間が、１〜３時間であり、かつ前記第２抽出時間が、１〜３時間であることが好ましい。
【００３８】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第３体積が、少なくとも４Ｌであり、前記第４体積が、少なくとも４Ｌであり、かつ前記第６体積が、１．５〜２．５Ｌの間であることが好ましい。
【００３９】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第１遠心時間が、８〜１２分間であり、かつ前記第２遠心時間が、８〜１２分間であることが好ましい。
【００４０】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記溶剤は、濃度９５％のエタノールであり、かつ前記第５体積が、１〜２Ｌの間であることが好ましい。
【００４１】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第１撹拌時間が、１０〜２０分間であり、かつ前記第２撹拌時間が、３〜７分間であることが好ましい。
【００４２】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、１ｇあたりの前記第２沈殿物は、少なくとも２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び少なくとも１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有することが好ましい。
【００４３】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記第２沈殿物は、前記第２試料溶液に対して重量百分率で少なくとも２５％を占めることが好ましい。
【００４４】
上記の新規な純物質の抽出方法の別の実施例において、前記モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９８．５９％であり、かつ前記アンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）の抽出回収率が、少なくとも９８．５１％であることが好ましい。
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１Ａ】本発明の新規な純物質の抽出方法の第１実施例のステップフローチャートである。
【図１Ｂ】本発明の新規な純物質の抽出方法の第１実施例のステップフローチャートである。
【図２Ａ】本発明の新規な純物質の抽出方法の第２実施例のステップフローチャートである。
【図２Ｂ】本発明の新規な純物質の抽出方法の第２実施例のステップフローチャートである。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
本発明が提出した新規な純物質の抽出方法をより明瞭に記述するために、添付図面を参照しながら、本発明の好適な実施例を以下に詳述する。
【実施例１】
【００４７】
図１Ａと図１Ｂの、本発明が提出した新規な純物質の抽出方法の第１実施例のステツプフローチヤートを参照する。図１Ａと図１Ｂに示すように、本発明の新規な純物質の抽出方法の第１実施例は、以下のステップＳ０１〜Ｓ０８を含む。
ステップ（Ｓ０１）：６０ｇの発酵紅麹米を準備して、３００ｍＬのエタノール（９５％）を採取液とすることによって、６０℃下で前記発酵紅麹米に対して２時間かけて抽出を行う。
ステップ（Ｓ０２）：前記ステップ（Ｓ０１）の第１抽出液を収集して濾過することで、第１濾過抽出液を得ると共に、一次抽出を経た前記発酵紅麹米を得る。
ステップ（Ｓ０３）：３００ｍＬのエタノール（９５％）を採取液とすることによって、それから６０℃下で前記発酵紅麹米に対して２時間かけて再抽出を行う。
ステップ（Ｓ０４）：前記ステップ（Ｓ０３）の第２抽出液を収集して濾過することで、第２濾過抽出液を得る。
ステップ（Ｓ０５）：前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を混合して混合抽出液を得て、前記混合抽出液を濃稠状に濃縮する。
ステップ（Ｓ０６）：前記混合抽出液の中に１０ｍＬのエタノール（９５％）を加えて試料溶液を得る。
ステップ（Ｓ０７）：６０℃の水浴（ｗａｔｅｒ  ｂａｔｈ）中で前記試料溶液を５分間かけて撹拌し、前記試料溶液の中に１０ｍＬの水を続いて加え、それから再び前記試料溶液を５分間かけて撹拌する。
ステップ（Ｓ０８）：２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（Ｓ０７）に得られた前記試料溶液に対して遠心工程を１０分間かけて行い、沈殿物を続いて収集する。
【００４８】
ここで、補充説明すべき点は、ステップ（Ｓ０１）において、エタノールで発酵紅麹米に対して抽出を行うが、しかしながら、本発明の新規な純物質の抽出方法は、紅麹発酵生産品の中から純物質を抽出するために用いられるので、ステップ（Ｓ０１）において、エタノールを使用して紅麹山薬に対して抽出を行うこともできる点である。勿論、ステップ（Ｓ０１）に説明するように、秤取された発酵紅麹米の量は６０ｇであるが、これにも限定されない。
また、本発明では、ステップ（Ｓ０１）とステップ（Ｓ０３）に使用されるエタノール採取液の体積も、３００ｍＬに特別に制限されなければならないことはなく、実務操作においては、前記採取液の体積は、２５０ｍＬ〜３２０ｍＬの間であればよい。このほか、採取温度（３０℃）を、状況に応じて５０℃〜６５℃の間に調整することができ、かつ６０℃の水浴温度も、状況に応じて５５℃〜７５℃の間に調整することができる。
【００４９】
特に、強調すべき点は、ステップ（Ｓ０６）に記載のエタノール溶剤の体積（即ち、１０ｍＬ）、及びステップ（Ｓ０７）に記載の水の体積（即ち、１０ｍＬ）を、適切に調製する必要があり、前記両者の大きさは、沈殿物が試料溶液に占める重量百分率、及び紅麹黄色素（ａｎｋａｆｌａｖｉｎとｍｏｎａｓｃｉｎ）の抽出回収率に影響を与える点である。下記の表１には、異なるエタノール溶剤の体積及び水の体積が、沈殿物の重量と紅麹黄色素の抽出回収率に対する影響が記載されている。
【００５０】
【表１】
2016214235.tif 000003
【００５１】
表１から分かるように、ステップ（Ｓ０６）に記載のエタノールの体積、及びステップ（Ｓ０７）に記載の水の体積を適切に８ｍＬ及び１２ｍＬに調製すると、得られた沈殿物が最大の重量百分率（４３．２４％）を表示すると同時に、紅麹黄色素（ａｎｋａｆｌａｖｉｎとｍｏｎａｓｃｉｎ）の抽出回収率も最高である９９．８％と９９．７９％まで達する。
【００５２】
前記第１実施例の抽出方法は、実験室レベルに属する抽出方法であり、それは実際上、アルコール溶液を採取液とすることのみによって、紅麹発酵生産品の二次代謝産物の中からモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を抽出することができる。続いて、以下、量産レベルに属する抽出方法である本発明が提出した新規な純物質の抽出方法の第２実施例を説明する。
【実施例２】
【００５３】
図２Ａと図２Ｂの、本発明が提出した新規な純物質の抽出方法の第２実施例のステツプフローチヤートを参照する。図２Ａと図２Ｂに示すように、本発明の新規な純物質の抽出方法の第２実施例は、以下のステップＳ０１’〜Ｓ１０’を含む。
ステップ（Ｓ０１’）：２０ｋｇの発酵紅麹米を準備して、６０Ｌのエタノール（９５％）を採取液とすることによって、６０℃下で前記発酵紅麹米に対して２時間かけて抽出を行う。
ステップ（Ｓ０２’）：前記ステップ（Ｓ０１’）の第１抽出液を収集して濾過することで、第１濾過抽出液を得ると共に、一次抽出を経た前記発酵紅麹米を得る。
ステップ（Ｓ０３’）：６０Ｌのエタノール（９５％）を採取液とすることによって、それから６０℃下で前記発酵紅麹米に対して２時間かけて再抽出を行う。
ステップ（Ｓ０４’）：前記ステップ（Ｓ０３’）の第２抽出液を収集して濾過することで、第２濾過抽出液を得る。
ステップ（Ｓ０５’）：前記第１濾過抽出液と前記第２濾過抽出液を混合して混合抽出液を得る。
ステップ（Ｓ０６’）：前記混合抽出液を４Ｌに濃縮してから、前記混合抽出液の中に４Ｌの水を加えて第１試料溶液を得る。
ステップ（Ｓ０７’）：２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（Ｓ０６’）に得られた前記第１試料溶液に対して遠心工程を１０分間かけて行い、第１沈殿物を続いて収集する。
ステップ（Ｓ０８’）：１．５Ｌのエタノール（９５％）中に前記第１沈殿物を溶解させて第２試料溶液を得る。
ステップ（Ｓ０９’）：６０℃の水浴中で前記第２試料溶液を１５分間かけて撹拌し、前記第２試料溶液の中に２Ｌの水を続いて加え、その後、再び前記第２試料溶液を５分間かけて撹拌する。
ステップ（Ｓ１０’）：２０００ｒｐｍ／ｍｉｎの回転速度で前記ステップ（Ｓ０９’）に得られた前記第２試料溶液に対して遠心工程を１０分間かけて行い、第２沈殿物を続いて収集する。
その内、前記第２沈殿物の中には、抽出回収率が９８．５９％に達するモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び抽出回収率が９８．５１％に達するアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含む。
【００５４】
上記ステップ（Ｓ１０’）に得られた第２沈殿物は、モナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を確かに含有することを実証するために、さらに、下記の純物質の分離ステップを利用して、第２沈殿物の中のモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を分離する。
ステップ（Ｓ１１’）：計６６２ｇの乾燥の第２沈殿物と溶離液を準備して、中圧液体クロマトグラフィー（Ｍｅｄｉｕｍ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＭＰＬＣ）を続いて利用して前記第２沈殿物に対して純化を行う。その内、前記溶離溶剤としては５種類が用意され、それぞれヘキサン／酢酸エチル＝１／０、ヘキサン／酢酸エチル＝９：１、ヘキサン／酢酸エチル＝８：２、ヘキサン／酢酸エチル＝７：３、ヘキサン／酢酸エチル＝６：４（ｖ／ｖ，体積比）のものがある。
ステップ（Ｓ１２’）：前記ステップ（Ｓ１１’）に得られた５個の分層の中から黄色素分層を取り出す。
ステップ（Ｓ１３’）：前記黄色素分層に対して（真空）減圧濃縮を行い、乾燥試料を得る。
ステップ（Ｓ１４’）：５０ｍＬのメタノールの中に１ｇの乾燥試料を溶解させ、高速液体クロマトグラフィー法（ｈｉｇｈ  ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  ｌｉｑｕｉｄ  ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＨＰＬＣ）により、１５ｍＬ／ｍｉｎの溶離液流速で前記メタノール溶液に対して純化を行う。こうして、溶離液を１３．５１分間収集して２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）（純度＝９９．１％）が得られ、かつ溶離液を１８．７８分間収集して１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）（純度＝９９．０％）が得られる。その内、前記溶離液としては、メタノール／水＝８７：１３のものが用意される。
【００５５】
こうして、上記ステップ（Ｓ１１’）〜  ステップ（Ｓ１４’）により、ステップ（Ｓ１０’）に得られた第２沈殿物の中には、高純度のモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を確かに含有することが実証される。また、前記第２沈殿物が中圧液体クロマトグラフィーを経た後、クロマトグラフィーにより得られた黄色素分層は、少なくとも５７．５％のモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を含有する。予測可能に、分取型ＨＰＬＣ設備で黄色素分層の中のモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）とアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を分離しようとすれば、毎回の分離（各２０分間ごとに）ごとに、２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を得ることができる。
【００５６】
上記のように、本発明の新規な純物質の抽出方法の詳細なステップと技術的特徴を十分かつ明瞭に開示した。さらに、上記によれば、本発明の新規な純物質の抽出方法は、下記の利点を有することが分かる。
【００５７】
（１）従来の純物質の抽出方法と異なって、本発明の新規な純物質の抽出方法は、習用の抽出液及びカラムクロマトグラフィーに代えてアルコール溶液を用いるので、抽出速度が早いほか、有機溶剤の使用を減少できるという利点を有する。
【００５８】
（２）また、本発明の方法により得られた沈殿物は、減圧濃縮工程を不要とし、抽出回収率が９７．３５％まで上るモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び抽出回収率が９５．１６％まで上るアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を自然に含有する。
【００５９】
（３）さらに、従来の高速向流クロマトグラフィー法と異なって、本発明の方法により得られた沈殿物は、分取型ＨＰＬＣ設備のみで毎回の分離工程（各２０分間ごとに）ごとに、２２．５ｍｇのモナスシン（Ｍｏｎａｓｃｉｎ）、及び１６．８３ｍｇのアンカフラビン（Ａｎｋａｆｌａｖｉｎ）を得ることができる。明らかに、本発明の方法は、低コスト、高量産効率の効果を奏する。
【００６０】
強調すべき点は、上記の詳細な説明は、本発明の実施可能な実施例を具体的に説明したものであり、但し、本発明の特許範囲はこれらの実施例に限定されるものではなく、本発明の技術的思想を逸脱しない限り、その等効果の実施又は変更は、なお、本願の特許請求の範囲内に含まれるものとする。
【符号の説明】
【００６１】
Ｓ０１〜Ｓ０４：方法ステップ
Ｓ０５〜Ｓ０８：方法ステップ
Ｓ０１’〜Ｓ０５’：方法ステップ
Ｓ０６’〜Ｓ１０’：方法ステップ
【図１Ａ】
2016214235.tif 000004
【図１Ｂ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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