(57)【要約】      （修正有）【課題】リウマチ性関節炎の治療のための薬剤の提供。【解決手段】抗ＩＬ−２０抗体及びＴＮＦａアンタゴニストを含む、リウマチ性関節炎の治療のための薬剤。該抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ７Ｅであるか、又はｍＡｂ７Ｅのものと少なくとも７０％一致する重鎖可変領域（ＶＨ）及びｍＡｂ７Ｅのものと少なくとも７０％一致する軽鎖可変領域（ＬＨ）を含むｍＡｂ７Ｅの機能的な等価物であることが好ましい。該ＴＮＦａアンタゴニストは、エタネルセプトポリペプチド、インフリキシマブ及びアダリムマブから選択されることが好ましい。前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ７Ｅのヒト化抗体である薬剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
個体に有効量のＩＬ−２０アンタゴニストを投与することを有する、個体の骨粗鬆症の
治療、骨粗鬆症の発症の遅延、または骨粗鬆症の予防方法。
【請求項２】
前記ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０またはその抗原結合断片に特異的に結合
する抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記抗体またはその抗原結合断片は、ヒトＩＬ−２０（配列番号：６）に特異的に結合
する、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記抗体またはその抗原結合断片は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８５８７を有するハイ
ブリドーマによって発現される抗体の、軽鎖由来の３つの相補性決定領域および重鎖由来
の３つの相補性決定領域を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記抗体は、ヒト化抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記抗体は、キメラ抗体である、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記キメラ抗体は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８５８７を有する細胞系によって生産さ
れる抗体由来の重鎖および軽鎖の可変領域配列を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体は、ヒト抗体由来の重鎖の定常領域配列および軽鎖の定常領域配列を有する、
請求項６または７に記載の方法。
【請求項９】
前記抗体は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８５８７を有する細胞系によって生産される抗
体由来の重鎖可変領域配列を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗体は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８５８７を有する細胞系によって生産される抗
体由来の軽鎖可変領域配列を有する、請求項３に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖからなる群より選
択され；また、前記抗原結合断片は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８５８７を有する細胞系
によって生産される抗体の結合特異性を保持する、請求項４に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０Ｒ１、ＩＬ−２０Ｒ２またはＩＬ−２２
Ｒ１の細胞外ドメインを有するポリペプチドであり、前記ポリペプチドは、前記ＩＬ−２
０に特異的に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ＩＬ−２０アンタゴニストは、前記ＩＬ−２０の発現を特異的に阻害するｓｉＲＮ
Ａ、アンチセンスＲＮＡ、またはミクロＲＮＡ(microRNA)である、請求項１に記載の方法
。
【請求項１４】
前記骨粗鬆症は、炎症性疾患に関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記炎症性疾患は、リウマチ性関節炎である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記骨粗鬆症は、エストロゲン欠乏に関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記エストロゲン欠乏は、更年期障害に関連する、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記骨粗鬆症は、アンドロゲン欠乏に関連する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＩＬ−２０アンタゴニストは、他の治療剤と組み合わせて投与される、請求項１に
記載の方法。
【請求項２０】
前記治療剤は、ＴＮＦａアンタゴニストである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＴＮＦアンタゴニストは、エタネルセプトポリペプチド、インフリキシマブおよび
アダリムマブからなる群より選択される、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記エタネルセプトポリペプチドは、ヒト可溶性ＴＮＦレセプターおよびヒト免疫グロ
ブリンＧ１のＦｃ成分を含む融合タンパク質である、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＩＬ−２０アンタゴニストを含む、骨粗鬆症の治療、骨粗鬆症の発症の遅延、または骨
粗鬆症の予防のためのキット。
【請求項２４】
骨粗鬆症の治療、骨粗鬆症の発症の遅延、または骨粗鬆症の予防のためにＩＬ−２０ア
ンタゴニストを使用するための指示書をさらに有する、請求項２３に記載のキット。
【請求項２５】
リウマチ性関節炎の治療が必要な患者に有効量のＩＬ−２０アンタゴニストおよび有効
量のＴＮＦａアンタゴニストを投与することを有する、リウマチ性関節炎の治療方法。
【請求項２６】
前記ＩＬ−２０アンタゴニストは、抗ＩＬ−２０抗体である、請求項２５に記載の方法
。
【請求項２７】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、American Type Culture Collectionに受託番号  ＰＴＡ−８
６８７で寄託されたハイブリドーマ細胞系によって生産されるｍＡｂ  ７Ｅである、請求
項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、American Type Culture Collectionに受託番号  ＰＴＡ−８
６８７で寄託されたハイブリドーマ細胞系によって生産されるｍＡｂ  ７Ｅの機能的な等
価物である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、American Type Culture Collectionに受託番号  ＰＴＡ−８
６８７で寄託されたハイブリドーマ細胞系によって生産されるｍＡｂ  ７ＥのＶＨおよび
ＶＬ領域を含む抗体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、１本鎖抗体またはキメラ抗体である、請求項２８に記載の方
法。
【請求項３１】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７Ｅのヒト化抗体である、請求項２８に記載の方法
。
【請求項３２】
前記ＴＮＦａアンタゴニストは、エタネルセプトポリペプチド、インフリキシマブおよ
びアダリムマブからなる群より選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項３３】
前記エタネルセプトポリペプチドは、ヒト可溶性ＴＮＦレセプターおよびヒト免疫グロ
ブリンＧ１のＦｃ成分を含む融合タンパク質である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記抗ＩＬ−２０アンタゴニストは、American Type Culture Collectionに受託番号  
ＰＴＡ−８６８７で寄託されたハイブリドーマ細胞系によって生産されるｍＡｂ  ７Ｅの
ＶＨおよびＶＬ領域を含む抗体またはその機能的な等価物である、請求項３３に記載の方
法。
【請求項３５】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７Ｅのヒト化抗体である、請求項３４に記載の方法
。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の引用
本願は、２００８年１０月７日出願の米国特許出願第１２／２４６，７１５号および２
００９年８月３１日出願の米国仮特許出願第６１／２３８，６６１号の利益を主張する。
各出願は、参考で全体を本明細書中に引用する。
【０００２】
発明の分野
本発明は、リウマチ性関節炎および骨粗鬆症の予防、当該疾患の発症の遅延または当該
疾患の治療のためのＩＬ−２０アンタゴニストの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
発明の背景
骨粗鬆症は、骨量の減少および骨組織の低下を特徴とする病気であり、これにより、骨
が弱くなったり、脆くなったりする。正味の骨量の減少は、様々な要因、例えば、低レベ
ルのエストロゲン、カルシウムやビタミンＤの不適切な摂取、および炎症によって誘発さ
れうる。骨吸収は、更年期後の骨粗鬆症の主要な病理学的因子である。骨粗鬆症は、骨格
の脆弱性を引き起こし、骨折の危険性を増加する骨強度が損なわれた疾患である(Theill,
LE, et al. (2002) Annu Rev Immunol 20:795-823; Boyle, WJ, et al. (2003) Nature 
423;337-342)。更年期でのエストロゲン欠乏および男性でのアンドロゲン欠乏は双方とも
、骨代謝回転の不安定な増加を引き起こし、この際、骨吸収が骨形成を上回る。比較的早
い骨量の減少がおき、それに付随して骨微細構造の破壊が起こる(Simonet, WS, et al. (
1997) Cell 89:309-319; McClung, M, (2007) Arthritis Res Ther 9 Suppl 1:S3)。ほと
んどの場合、骨量の減少は、破骨細胞数の増加によってまたは過剰な破骨細胞活性によっ
て起こる(Walsh, NC, et al. (2005) Immunol Rev 208:228-251)。破骨細胞は、酒石酸抵
抗性酸ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）およびカルシトニンレセプターを発現する多核巨細胞
である。破骨細胞の形成は、２つの因子が必要である：マクロファージコロニー刺激因子
（Ｍ−ＣＳＦ）およびＮＦ−κＢリガンドのレセプター活性化因子（ＲＡＮＫＬ）(Takay
anagi, H, et al. (2005) Immunol Rev 208:181-193; Ross, FP & Teitelbaum, SL, (200
5) Immunol Rev 208:88-105)。Ｍ−ＣＳＦは、単球／マクロファージ前駆細胞の生存およ
び増殖を媒介するが、初期には、間質線維芽細胞、骨芽細胞、及び活性化Ｔ細胞によって
生産される。ＲＡＮＫは、ＲＡＮＫＬの唯一のシグナル伝達レセプターであり、破骨細胞
の発生及び活性化を誘導する(Suda, T, et al., (1999) Endocr Rev 20:345-357)。マウ
スでのいずれの遺伝子の欠損が重篤な骨粗鬆症（骨量の増加）および破骨細胞の消失を引
き起こすという知見によって、ＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫシグナル伝達経路のインビボでの重
要性が確認された(Kong, YY, et al, (1999) Nature 397:315-323; Li, J, et al, (2000
) Proc Natl Acad Sci USA 97:1566-1571)。ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−Ｉβ、ＩＬ−１５、ＩＬ
−１７、及びＩＬ−２３等の、様々な炎症性サイトカインが、破骨細胞前駆体の多核細胞
化、または破骨細胞表現型へこれらのコミッタンスを誘導し、ＲＡＮＫＬと相乗的に作用
しうる(Feldmann, M, et al. (2001) Curr Dir Autoimmun 3:188-199; O' Gradaigh, D, 
et al. (2004) Ann Rheum Dis 63:354-359; Sato, K, et al, (2006) Exp Med 203:2673-
2682; Ju, JH, et al, (2008) J Immunol 181:1507-1518)。
【０００４】
多機能炎症性サイトカイン(pleiotropic inflammatory cytokine)ＩＬ−２０は、ＩＬ
−１０群：ＩＬ−１０、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、及びＩＬ−
２６(Blumberg, H, et al, (2001) Cell 104:9-19; Pestka, S, et al., (2004) Annu Re
v Immunol 22:929-979)の１つであるが、単球、上皮細胞、及び内皮細胞で発現する。Ｉ
Ｌ−２０は、ＩＬ−２０Ｒ１／ＩＬ−２０Ｒ２またはＩＬ−Ｒ２２Ｒ１／ＩＬ−２０Ｒ２
のいずれかのヘテロダイマーレセプター複合体を活性化することによって多数の細胞タイ
プに作用する(Dumoutier, L., et al., (2001) Immunol 167:3545-3549)。これは、乾癬(
Blumberg, H, et al, (2001) Cell 104:9- 19; Sa, SM, et al., (2007) J Immunol 178:
2229-2240; Wei, CC, et al., (2005) Clin Immunol 117:65-72)、リウマチ性関節炎(Hsu
, YH, et al., (2006) Arthritis Rheum 54:2722-2733)、アテローム性動脈硬化症(Calig
iuri, G, et al. (2006) Arterioscler Thromb Vase Biol 26:1929-1930; Chen, WY, et 
al. (2006) Arterioscler Thromb Vase Biol 26:2090-2095)、虚血性脳卒中(Chen, WY & 
Chang, MS, (2009) Immunol 182:5003-5012)、及び腎不全(Li, HH, et al., (2008) Gene
s Immun 9:395-404)等の、様々な炎症性疾患にかかわりがある。ＩＬ−２０は、低酸素や
ＩＬ−ＩβやＬＰＳ等の炎症性刺激によって調節される(Chen, WY & Chang, MS, (2009) 
Immunol 182:5003-5012; Otkjaer, K, et al., (2007) Invest Dermatol)。ＩＬ−２０は
、近年、血管形成が調節されることが報告された(Heuze- Vourc'h, N, et al., (2005) B
iochem Biophys Res Commun 333:470-475; Hsieh, MY, et al., (2006) Genes Immun 7:2
34-242; Tritsaris, K, et al., (2007) Proc Natl Acad Sci USA 104:15364-15369)。実
験によるリウマチ性関節炎では、ＩＬ−２０は、滑膜線維芽細胞がＭＣＰ−１、ＩＬ−６
、及びＩＬ−８を分泌するのを誘導し、さらにこれは、炎症性サイトカインとして作用す
る(Hsu, YH, et al., (2006) Arthritis Rheum 54:2722-2733)。
【０００５】
ＩＬ−２０は、リウマチ性関節炎にかかわりがあることが示され、また、ＩＬ−２０可
溶性レセプターはＩＬ−２０を遮断することが示され、これによりコラーゲン誘導関節炎
の重篤度を低減する(Hsu, YH, et al., (2006) Arthritis Rheum 54:2722-2733)。したが
って、ＩＬ−２０は、リウマチ性関節炎の進行中の促進因子である。しかしながら、骨吸
収におけるＩＬ−２０の機能について、またはＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫシグナル伝達が仲介
する破骨細胞形成におけるＩＬ−２０の機能について、ほとんど知られていない。
【発明の概要】
【０００６】
発明の要約
本発明は、有効量のＩＬ−２０アンタゴニストを個体に投与することを有する個体の骨
粗鬆症の治療、骨粗鬆症の発症の遅延、または骨粗鬆症の予防方法を提供する。
【０００７】
本発明また、有効量のＩＬ−２０アンタゴニストを有効量のＴＮＦａアンタゴニスト（
エタネルセプトポリペプチド等）と組み合わせて個体に投与することを有する個体のリウ
マチ性関節炎の治療、リウマチ性関節炎の発症の遅延、またはリウマチ性関節炎の予防方
法を提供する。
【０００８】
本明細書中に記載されるＩＬ−２０アンタゴニストは、骨粗鬆症またはリウマチ性関節
炎を治療する、発症を遅延する、または予防するのに使用してもよい。実施形態によって
は、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ｍＡｂ  ７Ｅ等の抗ＩＬ−２０抗体またはこの機能的
な等価物である。
【０００９】
態様によっては、本発明は、リウマチ性関節炎または骨粗鬆症の治療の必要のある患者
に有効量の抗ＩＬ−２０抗体７Ｅを投与することによるリウマチ性関節炎または骨粗鬆症
の治療方法を提供する。一例では、抗ＩＬ−２０抗体７Ｅは、American Type Culture Co
llectionに受託番号  ＰＴＡ−８６８７で寄託されたハイブリドーマ細胞系によって生産
される、ｍＡｂ  ７Ｅの重鎖及び軽鎖の可変領域を含む抗体である。この抗体の例として
は、以下に制限されないが、ｍＡｂ  ７Ｅ、この機能性断片（Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂな
ど）、一本鎖抗体、またはキメラ抗体が挙げられる。他の例では、抗ＩＬ−２０抗体７Ｅ
は、ｍＡｂ  ７Ｅのヒト化抗体である。
【００１０】
上記方法において、患者に、有効量のエタネルセプトポリペプチドをさらに投与するこ
とが好ましい。一例では、エタネルセプトポリペプチドは、ヒト可溶性ＴＮＦレセプター
（下記配列番号：５）およびヒトＩｇＧ１のＦｃ成分を含む融合タンパク質（即ち、エタ
ネルセプト）である。
【００１１】
骨粗鬆症の治療を目的とするまたは骨粗鬆症の治療用薬剤の製造を目的とする抗ＩＬ−
２０抗体７Ｅの使用もまた本発明の範囲に含まれる。リウマチ性関節炎及び骨粗鬆症の治
療を目的とするまたはこれらの治療用薬剤の製造を目的とする、好ましくはエタネルセプ
トポリペプチドと組み合わせた、抗ＩＬ−２０抗体７Ｅの使用もまた本発明の範囲に含ま
れる。
【００１２】
本発明の一以上の実施形態の詳細を下記説明に記載する。本発明の他の特徴または利点
は、下記図面および様々な実施形態の詳細な説明から、ならびに添付の特許請求の範囲か
ら明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、ＰＢＳ、ｍＩｇＧ、ｍＡｂ  ７Ｅ、エタネルセプト、またはｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置した健常ラットおよびコラーゲン誘発性関節炎ラットにおける重篤な後脚の腫れの発生率を示す図である。
【図２】図２は、ｍＩｇＧ、ｍＡｂ  ７Ｅ、エタネルセプト、またはｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置した健常ラットにおけるおよびコラーゲン誘発性関節炎ラットにおけるＴＮＦ−ａ（パネルＡ）、ＩＬ−Ｉβ（パネルＢ）およびＩＬ−２０（パネルＣ）のレベルを示す多くの図である。
【図３】図３ａは、ＩＬ−２０の血清レベルがＯＶＸ−群のマウスではアップレギュレートされたが、ｍＡｂ  ７Ｅによる処置後のＯＶＸ−マウスではダウンレギュレートされたことを示す図である。＊Ｐ＜０．０５（偽コントロールに比べて）  ＃Ｐ＜０．０５（ＯＶＸ−ｍｌｇＧに比べて）  図３ｂは、以下の処置によるＯＶＸをしてから２カ月後のマウスの右脛骨のミクロ−ＣＴ分析の代表的な図を示す：偽コントロールマウス（健常）、処置せずに卵巣摘出（ＯＶＸ）マウス、及び１７β−エストラジオールで処置した卵巣摘出マウス、ＯＶＸ＋ｍｌｇＧ、ＯＶＸ＋７Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ）、またはＯＶＸ＋７Ｅ（６ｍｇ／ｋｇ）。図３ｃは、各実験群の膝関節における骨ミネラル濃度を示す図である。値は、平均値±標準偏差である。
【図４】図４ａは、破骨細胞の分化のための培養システムの概略図である。図４ｂは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）−ａ、ｍＩｇＧ、またはｍＡｂ  ７Ｅを組み合わせたマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）及び可溶性ＮＦ−κＢ活性化受容体リガンド(NF-κB ligand receptor activator)（ｓＲＡＮＫＬ）の処置に関する破骨細胞の代表的な酒石酸抵抗性酸性フォスファターゼ（ＴＲＡＰ）染色を示す。図４ｃは、１ウェル当たりのＴＲＡＰ＋破骨細胞の数を示す図である。図４ｄは、初期のｍＡｂ  ７Ｅ処置に関する破骨細胞の分化培養システムの概略図である。図４ｅは、破骨細胞のＴＲＡＰ染色を示す。図４ｆは、１ウェル当たりのＴＲＡＰ＋破骨細胞の数を示す図である。３回の独立した実験の代表的な結果が示される。
【図５】図５ａは、ＭＣＳＦを用いたあるいは用いない骨髄由来の造血幹細胞（ＨＳＣ）におけるＩＬ−２０発現を示す図である。図５ｂは、ＲＡＮＫタンパク質ＩＬ−２０で処置したＨＳＣの表面発現のフローサイトメトリーによる分析を示す。アイソタイプは、アイソタイプ抗体のネガティブコントロールで染色した細胞を示す。図５ｃは、ＲＡＮＫ  ｍＲＮＡ発現がＩＬ−２０で予め処置した後のＨＳＣでアップレギュレートしたことを示す図である。図５ｄは、ｍＡｂ  ７ＥがリアルタイムＰＣＲ(real time-PCR)によって測定した際のＯＣ前駆細胞におけるＩＬ−２０で誘導されるＲＡＮＫ  ｍＲＮＡ発現を阻害することを示す図である。
【図６】図６ａは、ＲＴ−ＰＣＲによるＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞におけるＩＬ−２０及びそのレセプターの発現を示す。図６ｂは、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞におけるＩＬ−２０及びそのレセプターの細胞染色を示す：赤（ＩＬ−２０及びそのレセプター、ＡＥＣ）、青（核）。図６ｃは、以下の特異的な抗体を用いて所定の期間ＩＬ−２０と共にインキュベートした細胞のウエスタンブロット分析を示す：ホスホ−ＪＮＫ（ＪＮＫ）、ホスホ−ＥＲＫ（ＥＲＫ）、ホスホ−ＡＫＴ（ＡＫＴ）、ホスホ−ｐ３８（ｐ３８）、ホスホ−ＳＴＡＴ３（ＳＴＡＴ３）、及びβ−アクチン（β−アクチン）。図６ｄは、ＩＬ−２０で処置したＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞におけるＩＬ−１７  ｍＲＮＡ発現のＲＴ−ＰＣＲ分析を示す。図６ｅは、リアルタイムＰＣＲによって測定されたＩＬ−２０で処置したＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞におけるＲＡＮＫＬ  ｍＲＮＡ発現を示す図である。図６ｆは、ＩＬ−２０で処置したＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞におけるＲＡＮＫＬタンパク質発現を示す図である。
【図７】図７は、ｍＡｂ  ７ＥがＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞におけるＩＬ−２０で誘導されるＲＡＮＫＬ発現を阻害することを示す図である。３回の独立した実験の代表的な結果が示される。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
発明の詳細な説明
本発明は、ＩＬ−２０が破骨前駆細胞へのＲＡＮＫ発現及び骨芽細胞へのＲＡＮＫＬ発
現を引き起こす新規な破骨細胞形成サイトカインであるという知見に基づくものである。
ＩＬ−２０のアンタゴニスト；例えば、ＩＬ−２０に特異的なモノクローナル抗体ｍＡｂ
７Ｅは、ＩＬ−２０で誘導されるＲＡＮＫ及びＲＡＮＫＬ発現を消失させた。これらの
結果は、ＩＬ−２０アンタゴニストが、インビボで破骨細胞の分化を阻害し、骨粗鬆症に
よる骨量の減少から個体を保護するのに使用されうることを示した。本発明はまた、ＩＬ
−２０に特異的なモノクローナル抗体が単独でまたはエタネルセプトと組み合わせると、
後肢の腫脹(thickness and swelling)を減らすことによる関節炎の重篤度を有意に下げ、
さらにリウマチ性関節炎の動物モデルにおいて軟骨損傷及び骨量の減少を防止したという
知見に基づく。
【００１５】
本発明は、有効量のＩＬ−２０アンタゴニスト（抗ＩＬ−２０抗体またはその抗原結合
断片等）を投与することによる個体の骨粗鬆症の治療、骨粗鬆症の発症の遅延、または骨
粗鬆症の予防方法を提供する。実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、骨粗
鬆症の他の治療剤と組み合わせて投与される。実施形態によっては、骨粗鬆症は、更年期
後の骨粗鬆症である。実施形態によっては、骨粗鬆症は、ホルモン欠乏に関連する。例え
ば、場合によっては、骨粗鬆症は、ホルモンアブレーション処置に関連する。ホルモンア
ブレーション処置の例としては、乳癌の処置および前立腺癌の処置がある。実施形態によ
っては、骨粗鬆症は、ステロイドで誘導されたまたはステロイドに関連する骨粗鬆症であ
る。実施形態によっては、骨粗鬆症は、リウマチ性関節炎に関連する。
【００１６】
本発明はまた、有効量のＩＬ−２０アンタゴニスト（抗ＩＬ−２０抗体またはその抗原
結合断片等）及び有効量のＴＮＦａアンタゴニスト（エタネルセプトポリペプチド等）を
投与することによる処置の必要のある個体のリウマチ性関節炎の治療、リウマチ性関節炎
の発症の遅延、またはリウマチ性関節炎の予防方法を提供する。
【００１７】
一般的な技術
本発明の実施は、特記しない限り、分子生物学（組換技術を含む）、微生物学、細胞生
物学、生化学及び免疫学の公知技術を使用するであろうし、これらは当該分野に含まれる
。このような技術は、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Samb
rook, et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (MJ. Gai
t, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Labor
atory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I
. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and
P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedure
s (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; M
ethods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology
(D.M. Weir and CC. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectorsfor Mammalian Cells (
J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology 
(F.M. Ausubel, et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis,
et al, eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds.,
1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiolo
gy (CA. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: 
a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodi
es: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press
, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spri
ng Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, ed
s., Harwood Academic Publishers, 1995)等の、文献に十分に説明される。
【００１８】
定義
「抗体」（複数形でも同じ意味に使用される）は、免疫グロブリン分子の可変領域中に
位置する、少なくとも一の抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、
ポリペプチド等の、ターゲットに特異的に結合できる免疫グロブリン分子である。本明細
書中で使用される、当該ことばは、完全なポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体
のみでなく、その断片（ＦＡＢ、ＦＡＢ’、Ｆ（ＡＢ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ
）、その変異体、ｄＡｂ（抗体ドメイン; Ward、et. AL, 1989, Nature, 341:544-546を
参照)、抗体タンパク質を含む融合タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、二特異性抗体
（diabody）、線状抗体（linear antibody）、一本鎖抗体、多特異的抗体（例えば、二重
特異性抗体）及び所望の特異性を有する抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子の他の
修飾構造をも包含する。抗体はＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはこれらのサブクラ
ス）等の、いずれのクラスの抗体を包含し、また、抗体は特定のクラスである必要はない
。重鎖の定常領域の抗体アミノ酸配列によっては、免疫グロブリンは別のクラスであって
もよい。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの免疫グロブリンの５つの主要な
クラスがあり、これらのうち幾つかはサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、
ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分かれてもよい。様々な
クラスの免疫グロブリンに相当する重鎖の定常領域は、それぞれ、アルファ、デルタ、イ
プシロン、ガンマ、及びミューと呼ばれる。様々なクラスの免疫グロブリンのサブユニッ
ト構造及び３次元構造は既知である。
【００１９】
「モノクローナル抗体」は、均質な抗体集団であり、モノクローナル抗体は抗原の選択
的な結合に関与するアミノ酸（天然のおよび非天然の）から構成される。モノクローナル
抗体の集団は、非常に特異的であり、単一の抗原部位に対する。「モノクローナル抗体」
ということばは、完全なモノクローナル抗体や完全長のモノクローナル抗体のみでなく、
その断片（ＦＡＢ、ＦＡＢ’、Ｆ（ＡＢ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異
体、抗体タンパク質を含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクロ
ーナル抗体、及び所望の特異性を有する抗原認識部位を含み、抗原への結合能を有する免
疫グロブリン分子の他の修飾構造をも包含する。モノクローナル抗体の、抗体源または作
製される方法（例えば、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換発現、形質転換動物など）
は限定されるものではない。このことばは、全体の免疫グロブリンおよび「抗体」の定義
で上記したような断片などを包含する。モノクローナル抗体は様々な種、例えば、マウス
及びヒト由来であってもよい。
【００２０】
ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小限の配列を有する特定のキメラ免疫グ
ロブリン、免疫グロブリン鎖、またはその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）
２または抗体の他の抗原結合配列）である非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を意味す
る。大部分では、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が
、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、またはウサギ等の非ヒト種
（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基によって置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエン
ト抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ
）残基が相当する非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体に
もまたは挿入されたＣＤＲ若しくはフレームワーク配列にも見当たらないが、さらに精製
し抗体性能を最適化するのにかかわりのある残基を有していてもよい。通常、ヒト化抗体
は、実質的にすべての、少なくとも１つの、通常２つの、可変領域を有し、この際、すべ
てのまたは実質的にすべてのＣＤＲ領域が非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、また、
すべてのまたは実質的にすべてのＦＲ領域がヒト免疫グロブリンの共通配列のものである
。ヒト化抗体は、必要であれば、免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、具
体的にはヒト免疫グロブリンのもの、の少なくとも一部を有しているであろう。抗体は、
ＷＯ  ９９／５８５７２に記載されるのと同様にして修飾された領域を有していてもよい
。他の形態のヒト化抗体は、元の抗体に関して変更される１以上のＣＤＲ(１、２、３、
４、５、６）を有し、これらはまた、元の抗体由来の１以上のＣＤＲ由来である１以上の
ＣＤＲと称される。
【００２１】
「キメラ」抗体は、第一の種由来の可変領域または可変領域の一部および第二の種由来
の定常領域を有する抗体を意味する。具体的には、これらのキメラ抗体では、双方の軽鎖
及び重鎖の可変領域は１つの種の哺乳動物由来の抗体の可変領域を模倣し、定常部分は他
の種由来の抗体における配列に相同性を有する。実施形態によっては、アミノ酸修飾が可
変領域および／または定常領域でなされていてもよい。
【００２２】
ターゲットまたはエピトープに「特異的に結合する」または「結合する」（本明細書で
は同様の意味で使用される）抗体またはポリペプチドは、当該分野においてよく理解され
ることばであり、このような特異的な結合を測定する方法もまた当該分野において既知で
ある。別のターゲットに対してよりも、特定のターゲットと、より頻繁に、より迅速に、
より長い期間および／またはより高い親和性で反応するまたは結合する場合には、その分
子は「特異的な結合性」を有するといわれる。他の物質に結合するよりも、より高い親和
性(affinity)、親和性(avidity)で、より迅速におよび／またはより長い期間、結合する
場合には、その抗体またはポリペプチドはターゲットに「特異的に結合する」。例えば、
ＩＬ−２０エピトープに特異的にまたは優先的に結合する抗体は、他のＩＬ−２０エピト
ープまたはＩＬ−２０以外のエピトープに結合するよりも、より高い親和性(affinity)、
親和性(avidity)で、より迅速におよび／またはより長い期間、このＩＬ−２０エピトー
プに結合す抗体である。例えば、第一のターゲットに特異的に結合する抗体（または部分
）は第二のターゲットに特異的にまたは優先的に結合してもよいし結合しなくてもよいこ
ともまた、この定義を読むことによって理解される。このように、「特異的に結合する」
または「優先的に結合する」は、必ずしも排他的な結合を必要としない（ただし、排他的
な結合を包含できる）。通常、ただし必ずしもではないが、結合への言及は優先的な結合
を意味する。
【００２３】
本明細書中で使用される、「ＩＬ−２０」ということばは、インターロイキン−２０お
よびＩＬ−２０の活性の少なくとも一部を保持するその変異体を意味する。本明細書中で
使用される、ＩＬ−２０は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、またはウシ等の、天然の配列ＩＬ
−２０のすべての哺乳動物種を包含する。
【００２４】
「ＩＬ−２０レセプター」は、ＩＬ−２０によって結合するまたはＩＬ−２０によって
活性化される１以上のポリペプチドを意味する。場合によっては、ＩＬ−２０は、ＩＬ−
２０Ｒ１及びＩＬ−２０Ｒ２によって形成される複合体に結合する。他の場合では、ＩＬ
−２０は、ＩＬ−２０Ｒ２及びＩＬ−２２Ｒ１によって形成される複合体に結合する。こ
のように、ＩＬ−２０レセプターは、以下に制限されないが、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、
霊長類、またはウシ等の、いずれかの哺乳動物種のＩＬ−２０Ｒ１、ＩＬ−２０Ｒ２およ
びＩＬ−２２Ｒ１を包含する。ヒトＩＬ−２０レセプターの例としては、ｈＩＬ−２０Ｒ
１(GenBank Accession No. NM_014432.2)、ｈＩＬ−２０Ｒ２(GenBank Accession No. NM
_144717.2)及びｈＩＬ−２２Ｒ１(NM_181309.1)が挙げられる。ヒトＩＬレセプターの配
列は、例えば、米国特許第６，６１０，２８６号；第７，１２２，６３２号；第７，３９
３，６８４号；及び第７，５３７，７６１号；ならびに米国特許出願公開第２００６／０
２６３８５０  Ａ１号；第２００６／０２６３８５１  Ａ１号；第２００８／０２４７９
４５  Ａ１号、及び第２００９／００７４６６１  Ａ１号に記載されている。
【００２５】
「ＩＬ−２０アンタゴニスト」は、レセプター結合および／またはＩＬ−２０への細胞
応答の誘発等の、ＩＬ−２０シグナル伝達に仲介される下流経路などの、ＩＬ−２０生物
学的活性を遮断する、抑制するまたは低減する（有意にを含む）分子を意味する。「アン
タゴニスト」ということばは、生物学的作用の特異的なメカニズムを包含せず、直接的ま
たは間接的なに限らずすべての可能性のあるＩＬ−２０との薬理学的、生理学的、及び生
化学的相互作用を表現上包含するとみなされる。ＩＬ−２０アンタゴニストの例としては
、以下に制限されないが、抗ＩＬ−２０抗体またはその断片、ＩＬ−２０に対するアンチ
センス分子（ＩＬ−２０をコード化する核酸に対するアンチセンス分子を含む）、ＩＬ−
２０核酸に対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、ＩＬ−２０核酸に対するミクロＲＮ
Ａ(microRNA)、ＩＬ−２０阻害化合物が挙げられる。本発明を目的として、「アンタゴニ
スト」ということばは、ＩＬ−２０それ自体、ＩＬ−２０の生物学的活性（以下に制限さ
れないが、いずれかの態様の骨粗鬆症の仲介能を含む）、または生物学的活性の結果が実
質的に０になる、低減される、または大きく中和されるすべての前記したことば、タイト
ルならびに機能的な状態及び特性を包含する。実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴ
ニストは、ＩＬ−２０に結合して、ＩＬ−２０レセプター複合体形成を防止する。他の実
施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０合成および／または生産（放出）
を阻害するまたは低減する。ＩＬ−２０アンタゴニストのタイプの例は本明細書に記載さ
れる。
【００２６】
本明細書中で使用される、「抗ＩＬ−２０抗体」は、ＩＬ−２０に結合して、ＩＬ−２
０の生物学的活性および／またはＩＬ−２０シグナル伝達に仲介される下流経路を阻害で
きる抗体を意味する。
【００２７】
「抗ＩＬ−２０抗体７Ｅ」ということばは、モノクローナル抗体ｍＡｂ  ７Ｅ及びその
機能的な変異体を意味する。ｍＡｂ  ７Ｅは、American Type Culture Collection, 1080
1 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, U.S.A.に、受託番号：ＰＴＡ−８
６８７で寄託されるハイブリドーマ細胞系によって生産される。このハイブリドーマ細胞
系は、本出願で米国特許で特許登録されると取消不能の形で制限／条件なく公衆に公開さ
れるであろうし、寄託日から少なくとも３０年間、本特許の法的効力のある期間または最
も最近の日付から５年間ＡＴＣＣに維持されるであろう。
【００２８】
ｍＡｂ  ７Ｅの「機能的な等価物」は、（１）ヒトＩＬ−２０に特異的に結合し、およ
び（２）ｍＡｂ  ７Ｅのもの（配列番号：１のヌクレオチド配列によってコード化され、
配列番号：２として下記に示される）と少なくとも７０％（例えば、８０％、９０％、ま
たは９５％）一致する重鎖可変領域（ＶＨ）及びｍＡｂ  ７Ｅのもの（配列番号：３のヌ
クレオチド配列によってコード化され、配列番号：４として下記に示される）と少なくと
も７０％（例えば、８０％、９０％、または９５％）一致する軽鎖可変領域（ＬＨ）を含
む抗体である。米国特許出願第１１／７６３，８１２号を参照。
【００２９】
本明細書中で使用される、２つのアミノ酸配列の「％相同性」は、Karlin and Altschu
l, Proc, Natl. Acad. ScL USA 5873- 5877, 1993に記載されるように修飾される、Karli
n and Altschul, Proc, Natl. Acad. ScL USA 87:2264- 2268, 1990に記載のアルゴリズ
ムを用いて測定される。このようなアルゴリズムは、Altschul et al, J. MoI. Biol. 21
5:403-410, 1990のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに入れられる。ＢＬＡＳＴ
タンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて行わ
れ、参照ポリペプチドに相同するアミノ酸配列が得られる。比較目的でギャップトアライ
メント(gapped alighment)を得るために、Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:338
9-3402, 1997に記載されるようなＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴを用いる。ＢＬＡＳＴ及びＧ
ａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合には、各プログラムのデフォルトパラ
メーター（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）を使用する。www.ncbi.nlm.nih.gov
を参照。
【００３０】
ｍＡｂ  ７Ｅの機能的な等価物は、酵素消化によって生じるその断片、例えば、Ｆａｂ
またはＦ（ａｂ’）２がありうる。また、ｍＡｂ  ７ＥのＶＨ及びＶＬ領域を含む遺伝的
に操作された抗体であってもよい。このような抗体の例としては、以下に制限されないが
、ｍＡｂ  ７ＥのＶＨ及びＶＬがリンカー（例えば、ペプチドリンカー）を介して共有結
合的に融合する１本鎖抗体、及びｍＡｂ  ７ＥのＶＨ及びＶＬがそれぞれヒトＩｇＧの重
鎖及び軽鎖の定常領域と結合するマウス−ヒトキメラ抗体が挙げられる。
【００３１】
機能的な等価物はまたヒト化抗体であってもよい。「ヒト化抗体」ということばは、そ
のＶＨ及びＶＬのフレーム領域（ＦＲ)ならびに存在する場合には定常領域がヒト抗体の
ＦＲ及び定常領域と置換される、非ヒト抗体を意味する。さらに、ｍＡｂ  ７Ｅの機能的
な等価物は、ＶＨまたＶＬのいずれかのＦＲ中に突然変異を導入することによって得られ
てもよい。抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）がその抗原特異性を決定することは既知であ
る。したがって、ＦＲにおける突然変異は、一般的に、抗体の特異性に影響を及ぼさない
であろう。抗体のＣＤＲ及びＦＲは、そのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列に基づいて決定さ
れうる。www.bioinf.org.uk/absを参照。本明細書中に記載される機能的な等価物の結合
特異性は、既知の方法、例えば、ＥＬＩＳＡまたはウエスタンブロット分析を用いて試験
されうる。
【００３２】
モノクローナル抗体ｍＡｂ  ７Ｅおよびその機能的な等価物は、公知の方法により、例
えば、上記ハイブリドーマ細胞から分泌される抗体を精製することによって、または遺伝
子操作によって調製できる。
【００３３】
本明細書中で使用される、「治療(treating)」ということばは、当該疾患、当該疾患の
症状、または当該疾患にかかりやすい体質を治療する(cure)、治す(heal)、緩和する(all
eviate)、軽減する(relieve)、変える(alter)、修正する(remedy)、改善する(ameliorate
)、改良する(improve)、または作用することを目的として、１以上の活性剤を含む組成物
を、リウマチ性関節炎若しくは骨粗鬆症、いずれかの疾患の症状、または当該疾患にかか
りやすい体質を有する、患者に適用するまたは投与することを意味する。
【００３４】
本明細書中で使用される「有効量」とは、単独でまたは１以上の他の活性剤と組み合わ
せて、患者に治療効果を奏するのに必要な各活性剤の量を意味する。有効量は、当業者に
認識されるように、投与経路、賦形剤の使用、及び他の活性剤との併用によって異なる。
【００３５】
本明細書中で使用される、疾患（骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎等）の発症を「遅延
させる(delaying)」ということばは、当該疾患の進行を延ばす(defer)、妨げる(hinder)
、遅らせる(slow)、妨害する(retard)、安定化させる(stabilize)、および／または延期
させる(postpone)ことを意味する。この遅延は、病歴および／または治療される個体によ
って、期間の長さが異なってもよい。当業者には明らかなように、十分なまたは有意な遅
延は、実際には、その個体が当該疾患を発症しないという点で、予防を包含する。症状の
発症を「遅延させる」方法は、当該方法を使用しない場合と比べて、所定の期間その症状
を発症する可能性を低減するおよび／または所定の期間その症状の程度を低減する方法で
ある。このような比較は、具体的には、統計学的に有意な結果を得るのに十分多数の患者
を用いた、臨床研究に基づくものである。
【００３６】
疾患（骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎等）の「発症」または「進行」とは、当該疾患
の最初の症状および／または次の進行を意味する。当該疾患の発症は、当該分野において
既知の標準的な臨床技術を用いて検出及び評価可能である。しかしながら、発症はまた、
検出不可能な進行をも意味する。本発明を目的として、発症または進行は、症状の生物学
的な経過(biological course)を意味する。「発症」は、発生(occurrence)、再発(recurr
ence)、及び発病(onset)を包含する。本明細書中で使用される、骨粗鬆症の「発病(onset
)」または「発生(occurrence)」ということばは、初期の発病および／または再発を包含
する。
【００３７】
本明細書中で使用される、「薬剤(agent)」ということばは、生物学的、薬学的、また
は化学的化合物を意味する。以下に制限されないが、単一若しくは複合の有機若しくは無
機分子、ペプチド、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体断片、ビ
タミン誘導体、炭水化物、毒素、または化学療法化合物が挙げられる。様々な化合物は、
合成された、例えば、小分子及びオリゴマー（例えば、オリゴペプチド及びオリゴヌクレ
オチド）、および様々なコア構造に基づいた合成有機化合物でありうる。さらに、様々な
天然源により、植物または動物抽出物等の、スクリーニング用の化合物が提供されてもよ
い。本発明の薬剤の構造特性に制限されないことは、当業者が容易に認識できる。
【００３８】
本明細書中で使用される、「一緒に投与(co-administration)」または「と組み合わせ
て投与(administration in conjunction with)」ということばは、同時に投与および／ま
たは異なる時期の投与を包含する。一緒に投与はまた、一緒に処方(co-formulation)とし
ての一緒に投与（即ち、ＩＬ−２０アンタゴニスト及び薬剤が同じ組成物中に存在する）
または別の組成物としての投与を包含する。本明細書中で使用される、一緒に投与は、薬
剤及びＩＬ−２０アンタゴニストを個体に、同時におよび／または別々に投与する状況を
包含することを意味する。さらに本明細書中で使用されるが、ＩＬ−２０アンタゴニスト
及び薬剤を、異なる投与頻度または間隔で投与してもよいと解される。例えば、抗ＩＬ−
２０抗体は週に一度投与し、薬剤はそれ以上の頻度で投与してもよい。ＩＬ−２０アンタ
ゴニスト及び薬剤を、同じ投与経路または異なる投与経路を用いて投与してもよい。
【００３９】
「個体(individual)」または「患者(subject)」は、哺乳動物、より好ましくはヒトで
ある。哺乳動物としては、以下に制限されないが、家畜、競技用動物（sport animal）、
ペット、霊長類、ウマ、イヌ、ネコ、マウス及びラットが挙げられる。
【００４０】
本明細書中に記載されるすべての方法について、ＩＬ−２０アンタゴニストへの言及は
また、１以上のこれらの薬剤を含む組成物を包含する。これらの組成物は、当該分野にお
いて既知の、緩衝剤等の製薬上許容できる賦形剤（担体）などの、適当な賦形剤をさらに
含んでもよい。本発明は、単独でまたは他の公知の治療方法と組み合わせて使用できる。
【００４１】
本明細書中で使用され、また、添付の特許請求の範囲において、「a」、「an」、及び
「the」は、明らかに単数であると示さない限り複数を包含する。例えば、an「antibody(
抗体)」への言及は、モル量等の、１〜多数の抗体を言及するものであり、当業者により
既知の等価物などを包含する。
【００４２】
本明細書中に記載される本発明の態様および変更は、態様および変更から「構成される
」および「実質的に構成される」ことを包含するものと、解される。
【００４３】
ＩＬ−２０アンタゴニスト
本発明は、骨粗鬆症及びリウマチ性関節炎を治療する、発症を遅延させるおよび／また
は予防する必要のある個体（ヒトおよび非ヒト哺乳動物双方）における骨粗鬆症及びリウ
マチ性関節炎を治療する、発症を遅延させるおよび／または予防するのに有用である。
【００４４】
本発明の方法は、ＩＬ−２０アンタゴニストを使用するが、ＩＬ−２０アンタゴニスト
は、ＩＬ−２０へのレセプター結合および／またはＩＬ−２０への細胞応答の誘発等の、
ＩＬ−２０シグナル伝達によって仲介される下流経路などの、ＩＬ−２０生物学的活性を
（有意にを包含する）遮断する、抑制するまたは減少させる分子を意味する。ＩＬ−２０
の例としては、ヒトＩＬ−２０がある。実施形態によっては、ＩＬ−２０は、ＩＬ−２０
の天然の変異体(native variant)を包含する。ヒトＩＬ−２０のアミノ酸配列（配列番号
：６）は下記のとおりである：
【００４５】
【化１】
2016041730.tif 000002
【００４６】
ＩＬ−２０アンタゴニストの例としては、以下に制限されないが、抗ＩＬ−２０抗体ま
たはその断片、ＩＬ−２０に対するアンチセンス分子（ＩＬ−２０をコード化する核酸に
対するアンチセンス分子を含む）、ＩＬ−２０核酸に対する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮ
Ａ）、ＩＬ−２０核酸に対するミクロＲＮＡ、ＩＬ−２０阻害化合物、及びＩＬ−２０レ
セプターの細胞外部分を含むポリペプチドが挙げられる。本発明を目的として、「アンタ
ゴニスト」ということばは、ＩＬ−２０それ自体、ＩＬ−２０生物学的活性（以下に制限
されないが、いずれかの態様の骨粗鬆症、炎症性疾患の仲介能を含む）、または生物学的
活性の結果が実質的に０になる、低減される、または大きく中和されるすべての前記した
ことば、タイトルならびに機能的な状態及び特性を包含する。実施形態によっては、ＩＬ
−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０に結合して、ＩＬ−２０が１以上のレセプターと複
合体を形成するのを防止する。他の実施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−
２０合成および／または生産（放出）を阻害するまたは低減する。したがって、実施形態
によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０に結合する（ＩＬ−２０と物理的
に相互作用する）。実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０に結
合するポリペプチドである。実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ペプチ
ドまたは修飾ペプチド（Ｆｃドメインに融合する可溶性レセプター  ＩＬ−２０Ｒ１、Ｉ
Ｌ−２０Ｒ２および／またはＩＬ−２２Ｒ１等のＩＬ−２０結合ペプチドなど）である。
例えば、米国特許第６，６１０，２８６号；第７，１８９，３９４号；第７，３６４，７
３２号；第７，３９３，６８４号；及び第７，５３７，７６１号；ならびに米国特許出願
公開第２００６／０２６３８５０  Ａｌ号；第２００６／０２６３８５１  Ａｌ号；第２
００８／０１７１０４１Ａｌ号；及び第２００８／０２３３１１５  Ａｌ号を参照。他の
実施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニストは、抗ＩＬ−２０抗体である。さらに他の実施
形態では、抗ＩＬ−２０抗体は、ヒト化されている。実施形態によっては、抗ＩＬ−２０
抗体は、抗体ｍＡｂ  ７Ｅ（本明細書に記載されるような）またはｍＡｂ  ７Ｅの機能的
な等価物である。他の実施形態では、抗ＩＬ−２０抗体は、抗体ｍＡｂ  ７Ｅの１以上の
ＣＤＲ（ｍＡｂ  ７Ｅ由来の１、２、３、４、５、または実施形態によっては、６すべて
のＣＤＲ）を含む。他の実施形態では、抗体はヒト抗体である。さらに他の実施形態では
、抗ＩＬ−２０抗体は、重鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号：２）および／または軽
鎖可変領域のアミノ酸配列（配列番号：４）を有する。さらに他の実施形態では、抗体は
、免疫学的に不活性である、例えば、補体仲介性溶解(complement mediated lysis)を引
き起こさない、または抗体依存−細胞媒介細胞傷害(antibody-dependent cell mediated 
cytotoxicity)（ＡＤＣＣ）を刺激しない定常領域など、修飾された定常領域を有してい
る。他の実施形態では、定常領域は、Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624；ＰＣＴ出
願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；および／またはＵＫ特許出願第９８０９９５１．
８号に記載されるようにして修飾される。他の実施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニスト
は、ＩＬ−２０合成および／または放出を阻害（低減）する。
【００４７】
ｍＡｂ  ７Ｅの重鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号：１）およびアミノ酸配列
（配列番号：２）は下記のとおりである：
【００４８】
【化２】
2016041730.tif 000003
【００４９】
ｍＡｂ  ７Ｅの軽鎖可変領域のヌクレオチド配列（配列番号：３）およびアミノ酸配列
（配列番号：４）は下記のとおりである：
【００５０】
【化３】
2016041730.tif 000004
【００５１】
抗ＩＬ−２０抗体
本発明の実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、抗ＩＬ−２０抗体を含む
。抗ＩＬ−２０抗体は、当該分野において既知であり、例えば、米国特許第７，４３５，
８００号；第７，１１５，７１４号；第７，１１９，１７５号；第７，１５１，１６６号
；及び第７，３９３，６８４号；及びＰＣＴ公開  ＷＯ  ２００７／０８１４６５号；Ｗ
Ｏ  ９９／２７１０３号；ＷＯ  ２００４／０８５４７５号；及びＷＯ  ２００５０５２
０００号を参照。
【００５２】
他の実施形態では、抗ＩＬ−２０抗体は、抗体ｍＡｂ  ７Ｅの１以上のＣＤＲ（ｍＡｂ
７Ｅの１、２、３、４、５、または実施形態によっては、６すべてのＣＤＲ）を含む。
実施形態によっては、抗ＩＬ−２０抗体は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８５８７を有する
細胞系またはその子孫によって生産されるｍＡｂ  ７Ｅの重鎖由来の３つのＣＤＲおよび
／または軽鎖由来の３つのＣＤＲを有する。実施形態によっては、抗ＩＬ−２０抗体は、
配列番号：２に示されるアミノ酸由来の３つの重鎖ＣＤＲおよび／または配列番号：４に
示されるアミノ酸由来の３つの軽鎖ＣＤＲを有する。
【００５３】
ＣＤＲ領域の決定は当該分野において既知である。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈ
ｉａ、またはＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの組み合わせでもよい。ＣＤＲを決定する技
術は少なくとも２種ある：（１）種をまたぐ配列の可変性(cross-species sequence vari
ability)に基づく方法（即ち、Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological 
Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)）；および
（２）抗原−抗体複合体の結晶学的な研究に基づく方法(Chothia et al. (1989) Nature 
342:877; Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948))。本明細書に使用
される、ＣＤＲは、いずれかの方法によってまたは双方の方法の組み合わせによって定義
されるＣＤＲであってもよい。
【００５４】
本発明に使用できる抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例
えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃ等）、キメラ抗体、二重特異性抗
体、異種結合性（heteroconjugate）抗体、一本鎖（ＳｃＦｖ）、これらの変異体、抗体
部分を有する融合タンパク質、ヒト化抗体、及び抗体のグリコシル化変異体、抗体のアミ
ノ酸配列変異体、及び共有結合により修飾される抗体(covalently modified antibodies)
等の、所定の特異性を有する抗原認識部位を有する免疫グロブリン分子の他の修飾された
構造体を包含しうる。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または他の源（キメラまたはヒト
化抗体を包含する）であってもよい。本発明を目的として、抗体は、ＩＬ−２０および／
またはＩＬ−２０シグナル伝達機能によって仲介される下流経路を阻害するようにして、
ＩＬ−２０と反応する。一実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体またはヒトＩＬ
−２０で１以上のエピトープを認識するキメラ抗体である。実施形態によっては、抗ＩＬ
−２０抗体は、抗体ｍＡｂ  ７Ｅと同じヒトＩＬ−２０でのエピトープに結合する。他の
実施形態では、抗体は、免疫学的に不活性である、例えば、補体仲介性溶解(complement 
mediated lysis)を引き起こさない、または抗体依存−細胞媒介細胞傷害(antibody-depen
dent cell mediated cytotoxicity)（ＡＤＣＣ）を刺激しない定常領域など、修飾された
定常領域を有している。ＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号に開示される
方法を用いて評価できる。他の実施形態では、定常領域は、Eur. J. Immunol. (1999) 29
:2613-2624；ＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１号；および／またはＵＫ特許出
願第９８０９９５１．８号に記載されるのと同様にして修飾される。
【００５５】
抗ＩＬ−２０抗体のＩＬ−２０（ヒトＩＬ−２０等）への結合親和性は、約１００ｎＭ
、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭ
未満で約２ｐＭ以上であってもよい。結合親和性はＫＤまたは解離定数として表すことが
でき、結合親和性の増加は、ＫＤの低下に相当する。ＩＬ−２０への抗体の結合親和性の
測定方法の一つとして、抗体の単機能性のＦａｂ断片の結合親和性を測定することによる
ものがある。単機能性のＦａｂ断片を得るために、抗体（例えば、ＩｇＧ）をパパインで
切断するまたは組換で発現させてもよい。抗体の抗ＩＬ−２０  Ｆａｂ断片の親和性は、
表面プラズモン共鳴(BlAcore3000（商標） surface plasmon resonance (SPR) system, B
IAcore, INC, Piscaway NJ)によって測定できる。反応会合率(kinetic association rate
s)（ｋｏｎ）および反応解離率(kinetic association rates)（ｋｏｆｆ）（通常、２５
℃で測定）を得る；さらに平衡解離定数（ＫＤ）値をｋｏｎ／ｋｏｆｆとして算出する。
【００５６】
実施形態によっては、抗体は、ヒトＩＬ−２０に結合し、他の哺乳動物種由来のＩＬ−
２０とは有意に結合しない。実施形態によっては、抗体は、ヒトＩＬ−２０および他の哺
乳動物種由来の１以上のＩＬ−２０と結合する。さらに他の実施形態では、抗体は、ＩＬ
−２０と結合するが、他のサイトカイン（関連するサイトカイン  ＩＬ−１０、ＩＬ−１
７Ａ、ＩＬ−１９、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４及びＩＬ−２６等）と有意には交差反応しな
い。抗体によって結合したエピトープは、連続していても不連続であってもよい。一実施
形態では、抗体は、抗体ｍＡｂ  ７Ｅと同じヒトＩＬ−２０エピトープに実質的に結合す
る。
【００５７】
抗ＩＬ−２０抗体は既知の方法によって作製されうる。例えば、ＩＬ−２０を阻害する
抗体は、ＩＬ−２０の全長のまたは一部の配列を免疫原として用いた免疫処置によって作
製されうる。宿主動物の免疫処置のルート及びスケジュールは、さらに本明細書に記載さ
れるようにして、抗体の刺激及び生産について確立された公知の技術に沿って行われる。
マウス、ヒト化及びヒト抗体の一般的な技術は当該分野において既知であり、本明細書に
記載される。
【００５８】
ヒトを含む哺乳動物患者またはそれ由来の抗体生産細胞を、ヒト等の哺乳動物、ハイブ
リドーマ細胞系の生産の基礎として機能するように操作できると、解される。具体的には
、本明細書に記載されるようにしてなど、宿主動物の腹腔内に、筋肉内に、経口的に、皮
下に、足底内に(intraplantar)、および／または皮内に、一定量の免疫原を接種する。
【００５９】
ハイブリドーマは、Kohler, B. and Milstein, C. (1975) Nature 256:495-497のまた
はBuck, D. W., et al., In Vitro, 18:377-381 (1982)によって修飾されるような一般的
な体細胞ハイブリダイゼーション技術を用いてリンパ球及び不死化ミエローマ細胞から調
製できる。以下に制限されないが、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３及びSaIk Institute, Cell D
istribution Center, San Diego, Calif., USAのもの等の、使用できるミエローマ系がハ
イブリダイゼーションに使用されうる。通常、技術は、ポリエチレングリコール等の融合
誘起剤(fusogen)を用いて、当業者に既知の電気的手段によってミエローマ細胞及びリン
パ様細胞を融合することを含む。融合後、細胞を融合培地から分離し、ヒポキサンチン−
アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地等の、所定の成長培地で生育させ、ハイブリッ
ド形成していない親細胞を除去する。血清を含むまたは含まない、本明細書に記載される
いずれかの培地を、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するのに使用で
きる。他の別の細胞融合技術としては、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を用いて、本発明の抗ＩＬ−
２０モノクローナル抗体を生産してもよい。ハイブリドーマを展開し、必要であればサブ
クローニングし、さらに上清について、公知の免疫アッセイ方法（例えば、ラジオイムノ
アッセイ、酵素イムノアッセイ、または蛍光イムノアッセイ）によって抗免疫原活性を評
価する。
【００６０】
抗原の源として使用されうるハイブリドーマは、すべての派生細胞、ＩＬ−２０に特異
的なモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマの子孫細胞、またはその一部を包含
する。
【００６１】
このような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の方法を用いてインビトロでまたは
インビボで生育されうる。必要であれば、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、
クロマトグラフィー、及び限外濾過等の公知の免疫グロブリン精製方法によって、モノク
ローナル抗体を培地または体液から単離してもよい。例えば、固相に結合した免疫原から
作製された吸着剤に調製物を流し、免疫原から所望の抗体を溶出または放出することによ
って、存在する場合には望ましくない活性を除去してもよい。二官能性物質または誘導体
化剤、例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル(maleimidobenzoyl 
sulfosuccinimide ester)（システイン残基を介して結合）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイ
ミド（リジン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、または
Ｒ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（この際、Ｒ及びＲ１は異なるアルキル基である）を用いて、ヒトＩＬ
−２０、または免疫処置する種において免疫原性であるタンパク質、例えば、キーホール
リンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、または大豆トリプシン
阻害剤、に接合させたターゲットアミノ酸配列を含む断片で、宿主動物を免疫処置すると
、抗体集団（例えば、モノクローナル抗体）が得られる。
【００６２】
必要であれば、（例えば、ハイブリドーマによって生産された）有益な抗ＩＬ−２０抗
体（モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体）の配列を決定した後、ポリヌクレオ
チド配列を発現または繁殖のためにベクターにクローニングしてもよい。有益な抗体をコ
ード化する配列を宿主細胞中にベクターの形で維持した後、宿主細胞を拡張して、将来使
用するために凍結してもよい。または、ポリヌクレオチド配列を遺伝子操作に用いて、抗
体を「ヒト化する」または抗体の親和性若しくは他の特性を向上させてもよい。例えば、
抗体を臨床試験やヒトへの治療に使用する場合には、免疫応答を防ぐために、定常領域を
よりヒトに似せた定常領域になるように操作してもよい。ＩＬ−２０へより高い親和性及
びより高いＩＬ−２０阻害能を得るために、抗体の配列を遺伝的に操作することが好まし
い。ＩＬ−２０への結合能は維持させつつ、１以上のポリヌクレオチドの変更を抗ＩＬ−
２０抗体に行うことは当業者には明らかであろう。
【００６３】
「ヒト化」抗体は、通常、実質的に非ヒト種の免疫グロブリン由来である抗原結合部位
ならびにヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた分子の残りの免疫グロ
ブリン構造を有する分子を意味する。抗原結合部位は、定常領域に融合した完全な可変領
域または可変領域の適当なフレームワーク領域にグラフトした相補性決定領域（ＣＤＲ）
のみのいずれかを有する。抗原結合部位は、野生型であってもあるいは１以上のアミノ酸
置換によって修飾、例えば、ヒト免疫グロブリンにより密接に似るように修飾されてもよ
い。ヒト化抗体の形態によっては、すべてのＣＤＲ配列を保存する（例えば、マウス抗体
のすべての６個のＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）。ヒト化抗体の他の形態としては、元
の抗体に対して変更される１以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、６）を有する。場合に
よっては、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（ＦＲ）残基または他の残基が対応する
非ヒト残基で置換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体中
では見つからない残基を有していてもよい。ヒト化はまた、親和性成熟をも包含する。
【００６４】
さらに別の形態では、完全なヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現
するように予め操作された市販のマウスを用いることによって得てもよい。また、より望
ましい（例えば、完全なヒト抗体）またはより強い免疫応答をするように設計される形質
転換動物をヒト化またはヒト抗体を得るのに使用してもよい。このような技術の例として
は、Amgen, Inc. (Fremont, CA)製のXenomouse（登録商標）ならびにMedarex, Inc. (Pri
nceton, NJ) 製のHuMAb-Mouse（登録商標）及びTC Mouse（商標）がある。他の別の形態
では、抗体は、ファージディスプレイ技術によって組み換えられてもよい。例えば、米国
特許第５，５６５，３３２号；第５，５８０，７１７号；第５，７３３，７４３号；及び
第６，２６５，１５０号；ならびにWinter et al, (1994) Annu. Rev. Immunol. 12:433-
455を参照。または、ファージディスプレイ技術(McCafferty et al., (1990) Nature 348
:552-553)を用いて、未免疫処置のドナーの免疫グロブリン可変（Ｖ）領域遺伝子レパー
トリーから、インビトロでヒト抗体及び抗体断片を生産してもよい。
【００６５】
モノクローナル抗体をコード化するＤＮＡは容易に単離され、公知の方法を（例えば、
モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖をコード化する遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌ
クレオチドプローブを使用することによって）その配列を決定する。ハイブリドーマ細胞
は、このようなＤＮＡの好ましい源としての機能を果たす。単離されたら、そのＤＮＡを
１以上の発現ベクター中にいれ、次に他の形では免疫グロブリンタンパク質を生産しない
大腸菌(E. coli cell)細胞、サルのＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）
細胞、またはミエローマ細胞等の宿主細胞にトランスフェクトして、組換宿主細胞中にモ
ノクローナル抗体を合成してもよい。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ８７／０４４６２号を
参照。また、このＤＮＡは、例えば、Morrison et al., (1984) Proc. Nat. Acad. Sci. 
81:6851に記載されるように、相同性のあるマウスの配列の代わりにヒトの重鎖及び軽鎖
の定常領域のコーディング配列を使用することによって、または非免疫グロブリンポリペ
プチドのコーディング配列の全部または一部を免疫グロブリンのコーディング配列に結合
することによって、修飾されてもよい。そのように、本明細書中の抗ＩＬ−２０モノクロ
ーナル抗体の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体が調製される。
【００６６】
当該分野において既知の方法を用いて、抗ＩＬ−２０抗体の特性を明らかにしてもよい
。例えば、一つの方法として、結合するエピトープを同定する、すなわち「エピトープマ
ッピング」がある。例えば、Chapter 11 of Harlow and Lane, Using Antibodies, a Lab
oratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New Yor
k, 1999に記載されるような、抗原−抗体複合体の結晶構造を解く、競合アッセイ、遺伝
子断片発現アッセイ、及び合成ペプチドを用いたアッセイ等の、タンパク質上のエピトー
プの位置をマッピングし、その特性を明らかにする多くの方法が当該分野において知られ
ている。別の例では、エピトープマッピングを用いて、抗ＩＬ−２０抗体が結合する配列
を決定してもよい。エピトープは、鎖状のエピトープ、即ち、１本鎖のアミノ酸に含まれ
ても、または必ずしも１本鎖（一次構造の鎖状配列）中に含まれないアミノ酸の３次元相
互作用によって形成される立体配座エピトープであってもよい。様々な長さ（例えば、少
なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドが単離または合成（例えば、組換により）でき、
これを抗ＩＬ−２０抗体を用いた結合活性に使用してもよい。他の例では、抗ＩＬ−２０
抗体が結合するエピトープを、ＩＬ−２０由来の重複ペプチドを使用し、抗ＩＬ−２０抗
体による結合を測定することによる合成スクリーニングで決定してもよい。遺伝子断片発
現アッセイによると、ＩＬ−２０をコード化するオープンリーディングフレームをランダ
ムにまたは特定の遺伝的構造によって断片化し、ＩＬ−２０の発現断片と試験される抗体
との反応性を測定する。遺伝子断片は、例えば、ＰＣＲによって生産された後、放射性ア
ミノ酸の存在下で、インビトロでタンパク質に転写、翻訳されてもよい。次に、放射性標
識されたＩＬ−２０断片への抗体の結合性を、免疫沈降及びゲル電気泳動によって測定す
る。また、ファージ粒子の表面に表示するランダムなペプチド配列の大きなライブラリー
（ファージライブラリー）を用いることによって、特定のエピトープを同定してもよい。
または、重複ペプチド断片の特定のライブラリーについて、簡易結合アッセイで試験抗体
への結合性を試験してもよい。さらなる例では、抗原結合ドメインの突然変異誘発、ドメ
イン交換実験及びアラニンスキャンニング突然変異誘発を行って、エピトープ結合性に要
求される、十分なおよび／または必要な残基を同定してもよい。例えば、ＩＬ−２０ポリ
ペプチドの様々な断片を密接に関連するが抗原的には異なるタンパク質（ニューロトロフ
ィンタンパク質群の他のもの等）に置換（交換）した変異ＩＬ−２０を用いて、ドメイン
交換実験を行ってもよい。変異ＩＬ−２０への抗体の結合性を評価することによって、特
定のＩＬ−２０断片の抗体結合への重要性が評価できる。
【００６７】
実施形態によっては、本明細書に記載される抗体は、ｍＡｂ  ７Ｅによって認識される
ＩＬ−２０エピトープに結合する。実施形態によっては、本明細書に記載される抗体は、
ｍＡｂ  ７ＥのＩＬ−２０ポリペプチド（ヒトＩＬ−２０等）への結合と競合するまたは
当該結合を有意に阻害する。実施形態によっては、本明細書に記載される抗体は、ＩＬ−
２０ポリペプチドへの結合のための抗体ｍＡｂ  ７Ｅの重鎖可変領域および／またはｍＡ
ｂ  ７Ｅの軽鎖可変領域を有する抗体と競合する。
【００６８】
抗ＩＬ−２０抗体の特性を明らかにするのに使用できるさらなる他の方法としては、同
じ抗原、即ち、ＩＬ−２０の様々な断片に結合することが知られている他の抗体を用いた
競合アッセイを使用して、抗ＩＬ−２０抗体が他の抗体としての同じエピトープに結合す
るかを決定することがある。競合アッセイは、当業者には既知である。競合アッセイは、
２つの抗体が同一の若しくは立体的に重複するエピトープを認識することによって同じエ
ピトープに結合するか否かまたは１つの抗体が他の抗体の抗原への結合を競合的に阻害す
るか否かを決定するのに、使用できる。これらのアッセイは当該分野において既知である
。具体的には、ヒトＩＬ−２０へのｍＡｂ  ７Ｅの結合が、競合抗体の量を増やしながら
インキュベートすると、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％
、少なくとも約８０％、または少なくとも約９０％ほど減少する。抗体が結合するものへ
のマッピングに使用されてもよい他の方法は、Morris (1996) "Epitope Mapping Protoco
ls," in Methods in Molecular Biology v. 66 (Humana Press, Totowa, NJ)に提供され
る。
【００６９】
他のＩＬ−２０アンタゴニスト
抗ＩＬ−２０抗体以外の他のＩＬ−２０アンタゴニストを使用してもよい。本発明の実
施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、機能的なＩＬ−２０の発現を遮断また
は低減できる少なくとも１のアンチセンス分子を有する。ＩＬ−２０のヌクレオチド配列
は知られており、公衆に利用可能なデータベースで容易に利用できる。例えば、Ｇｅｎｂ
ａｎｋ  受託番号  ＮＭ  ０１８７２４．３及びＮＰ  ０６１１９４．２を参照。他のポ
リヌクレオチドと交差反応せずに、ＩＬ−２０  ｍＲＮＡに特異的に結合するであろうア
ンチセンスオリゴヌクレオチド分子を調製することは一般的である。ターゲッティングの
具体的な部位としては、以下に制限されないが、開始コドン、５’調節領域、コーディン
グ配列及び３’非翻訳領域が挙げられる。実施形態によっては、オリゴヌクレオチドは、
約１０〜１００ヌクレオチド長、約１５〜５０ヌクレオチド長、約１８〜２５ヌクレオチ
ド長、またはそれ以上である。オリゴヌクレオチドは、例えば、ホスホロチオエート結合
および当該分野において既知である２’−Ｏ糖修飾等の骨格修飾を有していてもよい。
【００７０】
または、ＩＬ−２０発現および／または放出は、遺伝子ノックダウン、モルホリノオリ
ゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡまたはＲＮＡｉ）、ミクロＲＮＡまたは
リボザイム、当該分野において既知の方法を用いて、低減できる。
【００７１】
他の実施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニストは、少なくとも１のＩＬ−２０阻害化合
物を含む。本明細書中で使用される、「ＩＬ−２０阻害化合物」とは、ＩＬ−２０の生物
学的活性を直接または間接的に減少させる、阻害する、中和する、または消失させる抗Ｉ
Ｌ−２０抗体以外の化合物を意味する。ＩＬ−２０阻害化合物は、下記特性の１以上を発
揮すべきである：（ａ）ＩＬ−２０に結合し、ＩＬ−２０の生物学的活性および／または
ＩＬ−２０シグナル伝達機能によって仲介される下流経路を阻害する；（ｂ）骨粗鬆症ま
たはリウマチ性関節炎のいずれかの態様を予防する、改善する、または治療する；（ｃ）
ＩＬ−２０レセプター活性化を遮断または低減する；（ｄ）ＩＬ−２０のクリアランスを
増加する；（ｅ）ＩＬ−２０合成、生産または放出を阻害（低減）する。当業者は、小分
子であるＩＬ−２０阻害化合物を調製できる。
【００７２】
実施形態によっては、ＩＬ−２０阻害化合物は、ＩＬ−２０レセプターには結合できる
がシグナル伝達は誘発できないＩＬ−２０変異体である。実施形態によっては、ＩＬ−２
０阻害化合物は、野生型のＩＬ−２０のＩＬ−２０レセプターへの結合を遮断することに
よりＩＬ−２０シグナル伝達を防止するＩＬ−２０変異体である。
【００７３】
実施形態によっては、ＩＬ−２０阻害化合物は、小分子を含み、小分子は、１００〜２
０，０００ダルトン、５００〜１５，０００ダルトン、または１０００〜１０，０００ダ
ルトンのいずれかの分子量を有することができる。小分子のライブラリーは、市販される
。小分子は、吸入、腹腔内、静脈内、筋肉内、皮下、鞘内、脳室内、経口、腸内、非経口
、鼻腔内、または皮内等の、当該分野において既知の手段を用いて投与できる。通常、本
発明に係るＩＬ−２０アゴニストが小分子である際には、１〜３回またはそれ以上の投与
に分けて０．１〜３００ｍｇ／ｋｇ  患者の体重の割合で投与されるであろう。一般的な
体重の成人患者では、１回の投与当たり１ｍｇ〜５ｇが投与されうる。
【００７４】
実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０レセプター（ＩＬ−２
０  Ｒ１、ＩＬ−２０Ｒ２、またはＩＬ−２２Ｒ１等）の細胞外部分（細胞外ドメイン等
）を有するポリペプチドを含み、この際、ポリペプチドは、ＩＬ−２０に特異的に結合し
、１以上のＩＬ−２０レセプターとの相互作用を遮断する。実施形態によっては、ＩＬ−
２０レセプターの細胞外部分は、免疫グロブリン（Ｉｇ）分子（ヒト免疫グロブリン等）
の重鎖または軽鎖の定常領域の全部または一部などの、定常領域ポリペプチドに融合され
る。実施形態によっては、重鎖の定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ
１ドメインをＣＨ２ドメインと連結するヒンジ配列から構成される。実施形態によっては
、軽鎖の定常領域は、ＣＬドメインから構成される。実施形態によっては、レセプターの
細胞外部分は、抗体のＦｃドメインに融合される。実施形態によっては、ポリペプチドア
ンタゴニストは、ダイマー（ホモダイマーまたはヘテロダイマー等）である。細胞外ドメ
イン及び可溶性レセプターの例は、ＰＣＴ  ＷＯ  ０１／４６２３２に記載される。
【００７５】
ＩＬ−２０アンタゴニストの同定
抗ＩＬ−２０抗体及び他のＩＬ−２０アンタゴニストは、ＩＬ−２０の生物学的活性の
減少、改善、または中和を検出および／または測定する、当該分野において既知の方法を
用いて同定できるまたはその特性が明らかにできる。例えば、ＥＬＩＳＡタイプのアッセ
イが、ＩＬ−２０カスケードを介して活性化されるタンパク質のリン酸化反応を測定する
ことによるＩＬ−２０が仲介するキナーゼ活性化の定性的または定量的な測定に適してい
る場合がある。例としては、ＪＮＫ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ｐ３８、ＳＴＡＴ３及びＴＲＡＦ
６がある。
【００７６】
ＩＬ−２０アンタゴニストはまた、候補薬剤をＩＬ−２０と共にインキュベートし、下
記特性の１以上をモニターすることによって同定できる：（ａ）ＩＬ−２０に結合し、Ｉ
Ｌ−２０の生物学的活性および／またはＩＬ−２０シグナル伝達機能によって仲介される
下流経路を阻害する；（ｂ）骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎のいずれかの態様を予防す
る、改善する、または治療する；（ｃ）ＩＬ−２０レセプター活性化を遮断または低減す
る；（ｄ）ＩＬ−２０のクリアランスを増加する；（ｅ）ＩＬ−２０合成、生産または放
出を阻害（低減）する。実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、候補薬剤を
ＩＬ−２０と共にインキュベートし、ＩＬ−２０の結合ならびにそれに付随するＩＬ−２
０の生物学的活性の減少または中和をモニターすることによって同定される。結合アッセ
イは、精製ＩＬ−２０ポリペプチドを用いて、またはＩＬ−２０ポリペプチドを天然に発
現する若しくはトランスフェクトによりＩＬ−２０ポリペプチドを発現する細胞を用いて
行われうる。一実施形態では、結合アッセイは、ＩＬ−２０結合に関する既知のＩＬ−２
０アンタゴニストとの候補抗体の競合能を評価する、競合結合アッセイである。このアッ
セイは、ＥＬＩＳＡ形式等の、様々な形式で行われる。他の実施形態では、ＩＬ−２０ア
ンタゴニストは、候補薬剤をＩＬ−２０とインキュベートし、それに付随するＩＬ−２０
Ｒ１／ＩＬ−２０Ｒ２複合体形成またはＩＬ−２０Ｒ２／ＩＬ−２２Ｒ１複合体形成の阻
害をモニターすることによって同定される。初期同定後は、候補抗ＩＬ−２０アンタゴニ
ストの活性をさらに確認し、ターゲットとされる生物学的活性を試験することが知られて
いる、バイオアッセイによって精製してもよい。または、バイオアッセイを用いて、候補
物質を直接スクリーニングしてもよい。
【００７７】
下記例により、候補ＩＬ−２０アンタゴニストをスクリーニングするのに使用できる多
くのアッセイが提供される。バイオアッセイとしては、以下に制限されないが、ＨＵＶＥ
Ｃ細胞の増殖のためのＭＴＴ（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５
−ジフェニルテトラゾリウムブロミド）アッセイ；例えば、ＴＲＡＰ染色によって測定さ
れるような、破骨細胞の分化に関する候補薬剤の分析；候補ＩＬ−２０アンタゴニストの
存在下での細胞へのＩＬ−２０の競合的結合を測定するフローサイトメトリー；および腎
臓上皮細胞でのＩＬ−２０により誘導されるアポトーシスの阻害が挙げられる。加えて、
ＩＬ−２０の発現を直接測定するまたはＴＮＦ−ａ、ＭＣＰ−１、ＩＬ−１β、ＩＬ−６
及びＶＥＧＦ等のＩＬ−２０によってアップレギュレートされる遺伝子の発現を測定する
のに使用できるＲＴ−ＰＣＲまたはリアルタイムＰＣＲ。
【００７８】
本発明の方法に使用される組成物
本発明の方法に使用される組成物は、有効量の１以上のＩＬ−２０アンタゴニスト（抗
ＩＬ−２０抗体等）を含み、実施形態によっては、製薬上許容できる賦形剤をさらに含む
。実施形態によっては、本組成物は、本明細書に記載される方法のいずれかに使用される
。ＩＬ−２０アンタゴニストの例は本明細書に記載される。本組成物は、１超のＩＬ−２
０アンタゴニストを含んでもよい。例えば、組成物は、１超のあるクラスのＩＬ−２０ア
ンタゴニストのもの（例えば、ＩＬ−２０の異なるエピトープを認識する抗ＩＬ−２０抗
体の混合物）、さらには異なるクラスのＩＬ−２０アンタゴニスト（例えば、抗ＩＬ−２
０抗体及びＩＬ−２０阻害化合物）を含んでもよい。他の具体的な組成物としては、同じ
エピトープを認識する１超の抗ＩＬ−２０抗体、ＩＬ−２０の異なるエピトープに結合す
る抗ＩＬ−２０抗体の異なる種、または異なるＩＬ−２０阻害化合物を含むものがある。
【００７９】
本発明に使用される組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態の、製薬上許容できる
担体、賦形剤、または安定化剤(Remington: The Science and Practice of Pharmacy 20t
h Ed. (2000) Lippincott Williams and Wilkins, Ed. K. E. Hoover.)をさらに含んでも
よい。許容できる担体、賦形剤、または安定化剤は使用される投与量及び濃度でレシピエ
ントに無毒であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸
及びメチオニン等の抗酸化剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアン
モニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベンズトニウム；フェ
ノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベンまたはプロピルパ
ラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール：３−
ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；
血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等の、タンパク質；ポリビニルピロリ
ドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニ
ン、またはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリン等の、単
糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート化剤；スクロース、マンニト
ール、トレハロースまたはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩を形成するカウンタ
ーイオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／あるいは、ＴＷＥＥ
Ｎ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等
の非イオン性界面活性剤が挙げられる。製薬上許容できる賦形剤は本明細書にさらに記載
される。
【００８０】
リウマチ性関節炎または骨粗鬆症を治療するのに使用される際には、本明細書に記載さ
れる抗体を、必要であればエタネルセプトポリペプチドと組み合わせて、製薬上許容でき
る担体と混合して、薬剤組成物を形成できる。「許容できる」とは、担体が、組成物の活
性成分と混合可能であり（及び好ましくは、活性成分を安定化でき）、治療される患者に
有害でないものでなければならないという意味である。適当な担体としては、微結晶セル
ロース、マンニトール、グルコース、脱脂粉末、ポリビニルピロリドン、及びスターチ、
またはこれらの組み合わせがある。
【００８１】
医薬の分野における当業者に既知の、公知の方法を用いて、治療される疾患のタイプま
たは疾患の部位に応じて、患者に抗ＩＬ−２０抗体含有薬剤組成物を投与できる。リウマ
チ性関節炎を治療するために、抗体含有組成物を注射により滑膜関節に直接デリバリーし
てもよい。この組成物はまた、他の公知の経路、例えば、皮下を介して投与されてもよい
。加えて、１、３、または６カ月の蓄積注射可能なまたは生分解可能な材料及び方法を用
いるなどの注射可能な蓄積投与経路を介して患者に投与してもよい。
【００８２】
注射可能な組成物は、植物油、ジメチルラクトアミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エ
チル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、及びポチオール水（グリセ
ロール、プロピレングリコール、液状ポリエチレングリコール等）などの様々な担体を含
んでもよい。静脈内注射用では、ドリップ方法によって水溶性抗体を投与してもよく、こ
れにより抗体及び薬理学的に許容できる賦形剤を含む製剤を輸注する。薬理学的に許容で
きる賦形剤としては、例えば、５％デキストロース、０．９％生理食塩水、リンガー溶液
または他の適当な賦形剤がある。筋肉内調製物、例えば、適当な可溶性塩形態の抗体の滅
菌製剤を、注射用水、０．９％生理食塩水、または５％グルコース溶液等の製薬上の賦形
剤中に溶解、投与してもよい。
【００８３】
本用途に提供される方法を実施するにあたって、上記薬剤組成物は、経口で、非経口で
、吸入スプレーによって、局所的に、直腸内に、鼻腔内に、口腔に、経膣的にまたは移植
されたリザーバーを介して投与されうる。本明細書中に使用される「非経口」ということ
ばは、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病巣
内、及び頭蓋内注射または輸注技術を包含する。
【００８４】
滅菌注射用組成物、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液は、適当な分散剤または
湿潤化剤（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０等）及び懸濁化剤を用いて当該分野において既知
の技術に従って処方できる。滅菌注射用組成物はまた、無毒な非経口投与に許容できる希
釈剤または溶剤における滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、１，３−ブタンジオール
における溶液であってもよい。マンニトール、水、リンガー溶液及び等張塩化ナトリウム
溶液が、使用できる許容できるベヒクル及び溶剤に含まれる。加えて、滅菌した固定油が
、溶剤または懸濁媒体（例えば、合成モノ−またはジ−グリセリド）として従来使用され
る。オレイン酸等の脂肪酸及びそのグリセリド誘導体が注射剤の調製に使用でき、同様に
して、特にポリオキシエチレン化形態の、オリーブ油またはヒマシ油等の天然の製薬上許
容できる油もまた使用できる。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈
剤若しくは分散剤、またはカルボキシメチルセルロース若しくは同様の分散剤を含んでも
よい。Ｔｗｅｅｎ若しくはＳｐａｎ等の他の一般的に使用される界面活性剤または製薬上
許容できる固体、液体、または他の投与形態の製造に一般的に使用される他の同様の乳化
剤またはバイオアベイラビリティ促進剤もまた、製剤目的で使用できる。
【００８５】
経口投与用組成物は、以下に制限されないが、カプセル、錠剤、エマルジョンならびに
水性懸濁液、分散液及び溶液等の、経口投与に許容できる投与形態でありうる。経口で使
用される錠剤の場合には、一般的に使用される担体としては、ラクトース及びコーンスタ
ーチがある。ステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤もまた一般的に添加される。カプセル
形態の経口投与では、使用できる希釈剤としては、ラクトース及び乾燥コーンスターチが
ある。水性懸濁液またはエマルジョンを経口で投与する際には、活性成分を乳化剤または
懸濁化剤と組み合わせた油相中に懸濁または溶解してもよい。必要であれば、特定の甘味
料、芳香剤、または着色剤を添加してもよい。鼻腔内エアロゾルまたは吸入用組成物は、
製剤処方の分野で既知の技術にしたがって調製できる。また、オキサジアゾール化合物を
含む組成物を直腸投与用の坐剤の形態で投与してもよい。
【００８６】
ＩＬ−２０アンタゴニスト及びその組成物はまた、薬剤の有効性を促進するおよび／ま
たは補足するように作用する他の薬剤と組み合わせて使用してもよい。
【００８７】
ＩＬ−２０アンタゴニストの投与および治療の評価
本発明は、個体の骨粗鬆症の治療、発症の遅延、または予防方法を提供する。上記した
ように、ＩＬ−２０は、破骨細胞の発達及び活性化における上流のＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫ
シグナル伝達化スケートに作用する破骨細胞形成サイトカインである。ＩＬ−２０の過剰
発現は、破骨細胞の分化を刺激することにより、骨粗鬆症に関連する骨損傷の修復能を減
少させる可能性がある。
【００８８】
骨粗鬆症を発達させる危険性を増大させる因子は数多く存在する。例えば、骨粗鬆症は
、更年期後に起こる低エストロゲンレベルと関連する。低エストロゲンレベルはまた、双
方の卵巣を初期に外科的に除去した結果でも起こる。加えて、卵巣への化学療法の有毒な
結果、化学療法が初期の更年期をもたらす場合がある。実施例に示されるように、ＩＬ−
２０アンタゴニストは、卵巣摘出したマウスにおける骨粗鬆症効果を改善した。ゆえに、
本明細書に記載されるＩＬ−２０アンタゴニストは、有効量のＩＬ−２０アンタゴニスト
を投与することによって、更年期後の個体の骨粗鬆症を治療する、発症を遅延する、また
は予防するのに使用されうる。
【００８９】
骨粗鬆はまた、ホルモンアブレーション処置からも生じる。前立腺癌及び乳癌双方で、
患者はホルモンアブレーション治療を受けることが一般的である；例えば、前立腺癌の場
合にはアンドロゲンおよび乳癌の場合にはエストロゲン、これにより、骨量の減少及び骨
折の危険性の増加を引き起こしうる。ゆえに、本明細書に記載されるＩＬ−２０アンタゴ
ニストは、有効量のＩＬ−２０アンタゴニストを投与することによって、ホルモンアブレ
ーション治療を受けた個体の骨粗鬆症を治療する、発症を遅延する、または予防するのに
使用されうる。
【００９０】
以下に制限されないが、リウマチ性関節炎及び慢性の肝臓疾患等の疾患による慢性の炎
症により、骨損傷が引き起こされる場合がある。実施例に示されるように、ＩＬ−２０ア
ンタゴニストは、リウマチ性関節のラットモデルにおける骨損傷を軽減した。ゆえに、本
明細書に記載されるＩＬ−２０アンタゴニストは、有効量のＩＬ−２０アンタゴニストを
投与することによって、慢性の炎症症状を有する個体の骨粗鬆症を治療する、発症を遅延
する、または予防するのに使用されうる。
【００９１】
ＩＬ−２０アンタゴニストは、適当な経路を介して個体に投与されうる。例えば、ＩＬ
−２０アンタゴニストは、経口で、静脈内に、舌下に、皮下に、動脈内に、滑液内に、嚢
内に(intravescicular)（膀胱を介するなど）、筋肉内に、心腔内に、胸郭内に、腹腔内
に、脳室内に、舌下に、吸入によって、坐剤によって、及び経皮的に投与できる。ＩＬ−
２０アンタゴニストは、経口で、例えば、当業者に認識される方法によって調製される、
錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、ウエハース、棒付きキャ
ンディー、チューイングガムなどの形態で投与されてもよい。本明細書中の実施例は本発
明を制限するものではなく、使用できる技術を詳細に説明するためのものであることは、
当業者には明らかであるべきである。
【００９２】
したがって、実施形態によっては、抗ＩＬ−２０抗体等の、ＩＬ−２０アンタゴニスト
は、静脈内投与、例えば、ボーラスとしてまたは一定期間にわたる連続輸注による、筋肉
内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液内、鞘内、経口、吸入若しくは局所経路によ
るなど、既知の方法に従って個体に投与される。ジェット噴霧器や超音波ネブライザー等
の、液状製剤用の市販のネブライザーが投与に使用できる。液状製剤を直接噴霧してもよ
く、凍結乾燥粉末を再構成(reconstitution)後噴霧してもよい。または、ＩＬ−２０アン
タゴニストは、フッ化炭素や定量吸入器を用いてエアロゾル化されてもよく、または凍結
乾燥し粉砕された粉末として吸入されてもよい。
【００９３】
一実施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニスは、部位特異的またはターゲットされた局所
的なデリバリー技術を介して投与される。部位特異的またはターゲットされた局所的なデ
リバリー技術の例としては、ＩＬ−２０アンタゴニストの様々な移植可能なデポー源また
は注入カテーテル、留置カテーテル、または針付きカテーテル等の、局所デリバリーカテ
ーテル(local delivery catheter)、合成グラフト、外膜覆い(adventitial wrap)、シャ
ント及びステントまたは他の移植可能なデバイス、部位特異的な担体、直接注射、または
直接塗布がある。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ  ００／５３２１１号及び米国特許第５，９
８１，５６８号を参照。
【００９４】
ＩＬ−２０アンタゴニスト（抗ＩＬ−２０抗体等）の様々な製剤が投与のために使用さ
れうる。実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストはそのまま投与されてもよい。
実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、抗ＩＬ−２０抗体を含み、製薬上許
容できる賦形剤を含む製剤などの、様々な製剤に含まれうる。製薬上許容できる賦形剤は
、当該分野において既知であり、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする比較的不活性
な物質である。例えば、賦形剤は、形態若しくは堅さ(consistency)を付与し、または希
釈剤として作用する。適当な賦形剤としては、以下に制限されないが、安定化剤、湿潤化
剤及び乳化剤、浸透圧を変えるための塩、封入剤、緩衝剤、及び皮膚浸透促進剤が挙げら
れる。非経口及び経口薬剤デリバリー用製剤に加えて、賦形剤は、Remington, The Scien
ce and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing (2000)に記載される。
【００９５】
実施形態によっては、これらの薬剤は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内
等）による投与を目的として処方される。したがって、これらの薬剤は、生理食塩水、リ
ンガー溶液、デキストロース溶液等の製薬上許容できるベヒクルと組み合わせてもよい。
特定の投与レジメ、即ち、投与量、タイミング及び繰り返しは、特定の個体及びその個体
の医療歴によって異なるであろう。
【００９６】
抗ＩＬ−２０抗体は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内等）によるなど、
適当な方法を用いて投与されうる。抗ＩＬ−２０抗体はまた、本明細書に記載されるよう
に、吸入により投与されてもよい。通常、抗ＩＬ−２０抗体の投与では、初期の候補投与
量は約２ｍｇ／ｋｇでありうる。本発明を目的として、具体的な１日あたりの投与量は、
上記した因子によって、おおよそ、０．１μｇ／ｋｇ〜３μｇ／ｋｇ〜３０μｇ／ｋｇ〜
３００μｇ／ｋｇ〜３ｍｇ／ｋｇ、〜３０ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上
のいずれかの範囲でありうる。症状に応じた、数日またはそれ以上にわたる繰り返し投与
では、治療は、症状の所望の抑制が起こるまでまたは十分な治療効果が達成され、骨粗鬆
症またはリウマチ性関節炎を抑えるまで、維持される。具体的な投与レジメは、約２ｍｇ
／ｋｇの初期投与量、次に約１ｍｇ／ｋｇの１週間当たりの維持投与量の抗ＩＬ−２０抗
体、または次に約１ｍｇ／ｋｇの隔週の維持投与量を投与することを有する。しかしなが
ら、医師が達成したいと望む薬物動態減衰のパターンに応じて、他の投与レジメを使用し
てもよい。例えば、１週間あたり１〜４回の投与が考えられる。実施形態によっては、約
３μｇ／ｍｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ（約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／ｍｇ
、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、及び約２ｍｇ／ｋｇ等）
の範囲の投与量を使用してもよい。実施形態によっては、投与頻度は、毎週、２週間毎に
、４週間毎に、５週間毎に、６週間毎に、７週間毎に、８週間毎に、９週間毎に、または
１０週間毎に、１回；または月に、２カ月毎に、３カ月毎に、またはそれ以上で１回であ
る。この治療の進捗は、公知の技術及びアッセイによって簡単にモニターされる。投与レ
ジメ（使用されるＩＬ−２０アンタゴニストを含む）は経時的に変化してもよい。
【００９７】
通常、抗体でない場合には、ＩＬ−２０アンタゴニストは、（実施形態によっては）１
〜３回に分けて患者の体重１ｋｇ当たり約０．１〜３００ｍｇの割合で、または本明細書
中に開示されるのと同様にして、投与してもよい。実施形態によっては、一般的な体重の
成人患者では、約０．３〜５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の投与量で投与されてもよい。特定
の投与レジメ、即ち、投与量、タイミング及び繰り返しは、特定の個体及びその個体の医
療歴、さらには個々の薬剤の性質（薬剤の半減期、及び当該分野において既知の他の考察
等）によって異なるであろう。
【００９８】
本発明を目的として、ＩＬ−２０アンタゴニストの適切な投与量は、使用されるＩＬ−
２０アンタゴニスト（またはその組成物）、治療される骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎
のタイプ及び重篤度、薬剤が予防または治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、
患者の病歴や薬剤への応答性、ならびに主治医の裁量によって異なるであろう。具体的に
は、臨床医は、所望の結果を達成する投与量に達するまで、抗ＩＬ−２０抗体等の、ＩＬ
−２０アンタゴニストを投与するであろう。
【００９９】
半減期等の、経験的考察により、通常、投与量が決定されるであろう。例えば、抗体の
半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系による攻撃を受けるのを防止するために、ヒト化抗
体または完全なヒト抗体等の、ヒトの免疫系に適合する抗体を使用してもよい。投与頻度
は、治療期間にわたって決定、調節されてもよく、通常、しかし、必ずしもではないが、
骨粗鬆症の治療および／または抑制および／または改善および／または遅延に基づくもの
である。または、抗ＩＬ−２０抗体の持続連続放出製剤が適切である場合がある。持続放
出を達成するための様々な製剤及びデバイスは当該分野において既知である。
【０１００】
一実施形態では、ＩＬ−２０アンタゴニストの投与量は、ＩＬ−２０アンタゴニスト（
抗体等）を予め１回以上投与された個体で経験的に決定されてもよい。個体は、ＩＬ−２
０アンタゴニスト、例えば、抗ＩＬ−２０抗体の投与量を増加させて投与してもよい。Ｉ
Ｌ−２０アンタゴニストの薬効を評価するために、骨粗鬆症の指標（骨ミネラル濃度）ま
たはリウマチ性関節炎の指標（関節の腫れ、痛み、凝り、及び組織の破壊等）に従っても
よい。
【０１０１】
本発明の方法によるＩＬ−２０アンタゴニストの投与は、例えば、レシピエントの生理
学的な症状、投与の目的が治療または予防であるかどうか、及び医師に知られている他の
因子によって、連続であってもまたは断続的であってもよい。（例えば、ＩＬ−２０アン
タゴニストが抗ＩＬ−２０抗体である場合の）ＩＬ−２０アンタゴニストの投与は、例え
ば、骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎の発症する前、間若しくは後のいずれかに、事前に
選択された期間にわたって連続していてもよく、または一連に間隔をあけた投与であって
もよい。
【０１０２】
実施形態によっては、１超の、抗体等のＩＬ−２０アンタゴニストが存在してもよい。
これらのアンタゴニストは、同一であってもまたは相互に異なるものであってもよい。少
なくとも１種の、少なくとも２種の、少なくとも３種の、少なくとも４種の、少なくとも
５種の異なるＩＬ−２０アンタゴニストが存在してもよい。通常、これらのＩＬ−２０ア
ンタゴニストは、相互に悪影響を及ぼさない補体活性を有する。ＩＬ−２０アンタゴニス
トはまた、薬剤の有効性を促進するおよび／または補足するように作用する他の薬剤と組
み合わせて使用してもよい。
【０１０３】
実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニストは、他の薬剤と組み合わせて投与され
る。実施形態によっては、上記他の薬剤は、リウマチ性関節炎の治療または改善のための
薬剤である。抗リウマチ性関節炎薬剤の例としては、ＴＮＦａアンタゴニスト、例えば、
ＴＮＦに結合してＴＮＦレセプターへのＴＮＦの結合に反映してＴＮＦ活性を阻害するポ
リペプチドがある。ＴＮＦａアンタゴニストの例としては、エタネルセプト（ＥＮＢＲＥ
Ｌ（登録商標））ならびにインフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））及びアダ
リムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））等の抗ＴＮＦａ抗体がある。一例では、エタネル
セプトポリペプチドは、ヒト可溶性ＴＮＦレセプター（配列番号：５、下記に示す）及び
ヒトＩｇＧ１（即ち、エタネルセプト）のＦｃ成分を含む融合タンパク質である。実施形
態によっては、他の薬剤は、骨粗鬆症の治療または改善のための薬剤である。抗骨粗鬆症
薬剤の例としては、アレンドロネート、イバンドロネート、リセドロネート、ゾレドロン
酸、カルシトニン、エストロゲン、選択的エストロゲン受容体調節因子、ラロキシフェン
、副甲状腺ホルモン、及びテリパラチドがある。
【０１０４】
ヒト可溶性ＴＮＦレセプターのアミノ酸配列（配列番号：５）
【０１０５】
【化４】
2016041730.tif 000005
【０１０６】
本発明の実施形態によっては、ＩＬ−２０アンタゴニスト；例えば、ｍＡｂ  ７Ｅまた
はその誘導体を、リウマチ性関節炎または骨粗鬆症の治療を目的として、エタネルセプト
ポリペプチドと組み合わせて使用してもよい。「エタネルセプトポリペプチド」というこ
とばは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の可溶性レセプター及び免疫グロブリンのＦｃ成分を含
む融合タンパク質を意味する。一例では、ＴＮＦ可溶性レセプターは、下記に示される配
列番号：５のアミノ酸配列を有するヒト可溶性ＴＮＦレセプターおよびその機能的な等価
物、即ち、配列番号：５に少なくとも８５％（例えば、９０％、９５％、または９８％）
一致するアミノ酸配列を有し、ヒトＴＮＦに結合できるポリペプチドである。エタネルセ
プトポリペプチドは、公知の組換技術によって作製できる。
【０１０７】
本発明に従って使用されるＩＬ−２０アンタゴニスト（抗体等）の治療用製剤は、凍結
乾燥製剤または水溶液の形態で、所望の純度を有する抗体を必要であれば製薬上許容でき
る担体、賦形剤または安定化剤(Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20t
h Ed. Mack Publishing (2000))と混合することによって、貯蔵用として調製される。許
容できる、担体、賦形剤、または安定化剤は、使用される投与量及び濃度でレシピエント
に無害であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤；塩化ナトリウム等の
塩；アスコルビン酸及びメチオニン等の抗酸化剤；保存剤（例えば、塩化オクタデシルジ
メチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム；塩化ベ
ンズトニウム；フェノール、ブチルアルコールまたはベンジルアルコール；メチルパラベ
ンまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロ
ヘキサノール：３−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満
の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリン等の、タンパク質
；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒ
スチジン、アルギニン、またはリジン等のアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデ
キストリン等の、単糖類、二糖類、および他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート化剤；ス
クロース、マンニトール、トレハロースまたはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩
を形成するカウンターイオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／
あるいは、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、またはポリエチレングリ
コール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１０８】
ＩＬ−２０アンタゴニスト（抗体等）を含むリポソームは、Epstein, et al., Proc. N
atl. Acad. ScL USA 82:3688 (1985)；Hwang, et al., Proc. Natl Acad. ScL USA 77:40
30 (1980)；及び米国特許第４，４８５，０４５号及び第４，５４４，５４５号に記載さ
れるなどの、当該分野において既知の方法によって調製される。循環時間が向上したリポ
ソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示される。特に有用なリポソームは、ホ
スファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ由来のホスファチジルエタノールアミン
（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法(reverse phase evaporation met
hod)によって得られる。リポソームを所定の孔径を有するフィルターで押し出すことによ
り、所定の直径を有するリポソームが得られる。
【０１０９】
活性成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によってまたは界面重合によって調
製されるマイクロカプセル、例えば、コロイドドラッグデリバリーシステム（例えば、リ
ポソーム、アルブミン小球体、ミクロエマルジョン、ナノ粒子及びナノカプセル）におけ
るまたはマイクロエマルジョンにおける、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたは
ゼラチン−マイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル中に封
入されてもよい。このような技術は、Remington, The Science and Practice of Pharmac
y 20th Ed. Mack Publishing (2000)に開示される。
【０１１０】
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の適当な例としては、抗体を含む固体疎水性
ポリマーの半透性マトリックスがあり、このマトリックスは成形製品、例えば、フィルム
、またはマイクロカプセルの形態を有する。徐放性マトリックスの例としては、ポリエス
テル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）、またはポ
リ（ビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グル
タミン酸及び７エチル−Ｌ−グルタメートの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、
ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体及び酢酸ロイプロリド
から構成される注射用マイクロスフェア）等の分解性乳酸−グリコール酸共重合体、イソ
酪酸酢酸スクロース(sucrose acetate isobutyrate)、及びポリ−Ｄ−（−）３−ヒドロ
キシ酪酸がある。
【０１１１】
インビボ投与に使用される製剤は、滅菌されていなければならない。これは、例えば、
滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。治療用抗ＩＬ−２０抗体組成物は、通
常、滅菌アクセスポートを有する容器、例えば、静脈注射用の溶液バックまたは皮下注射
針で穴のあくストッパーを有するバイアル瓶中に入れられる。
【０１１２】
本発明に係る組成物は、経口、非経口若しくは直腸投与、または吸入(inhalation)若し
くは吹送(insufflation)による投与を目的とした、錠剤、ピル、カプセル、粉末、顆粒、
溶液若しくは懸濁液、または坐剤等の、単位投薬形態(unit dosage form)であってもよい
。
【０１１３】
錠剤等の固体組成物を調製するには、主要な活性成分を、製薬上の担体、例えば、コー
ンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリ
ン酸マグネシウム、第二リン酸カルシウムまたはゴム等の、公知の錠剤化成分、および他
の製薬上の希釈剤、例えば、水と混合して、本発明の化合物、またはその無毒な製薬上許
容できる塩の均質な混合物を含む固体の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組
成物が均質であるとは、組成物が錠剤、ピル及びカプセル等の等しく有効な単位投薬形態
となるように容易に分割できるように、活性成分が組成物にわたって等しく分散している
ことを意味する。次に、この予備処方組成物を、本発明の活性成分を０．１〜約５００ｍ
ｇ含む上記タイプの単位投薬形態に分割する。新規な組成物の錠剤またはピルは、被覆さ
れてもまたはより長期間の作用を可能にする投薬形態が得られるように調合されてもよい
。例えば、錠剤またはピルは、内側投薬成分及び外側投薬成分を有し、この際、後者は前
者を包むような形態である。これらの２成分は、胃内での分解には耐性があり、内側成分
が十二指腸でそのまま通過できるまたは遅延して放出されるような腸溶層で分離されてい
てもよい。様々な材料が、このような腸溶層若しくは被覆に使用でき、このような材料と
しては、多数のポリマー酸ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコール及び酢酸セ
ルロース等の材料との混合物がある。
【０１１４】
適当な界面活性剤としては、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅ
ｎ（商標）  ２０、４０、６０、８０または８５）及び他のソルビタン（例えば、Ｓｐａ
ｎ（商標）  ２０、４０、６０、８０または８５）等の、非イオン性物質がある。界面活
性剤を含む組成物は、簡便には、０．０５〜５％の界面活性剤を含み、０．１〜２．５％
であってもよい。必要であれば、他の成分、例えば、マンニトールまたは他の製薬上許容
できるベヒクルを添加してもよいと、理解されるであろう。
【０１１５】
適当なエマルジョンは、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉ
ｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）及びＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ
（商標）等の、市販の脂肪エマルジョンを用いて調製されてもよい。活性成分は、予め混
合されたエマルジョン組成物中に溶解されてもまたは油（例えば、大豆油、サフラワー油
、綿実油、ゴマ油、トウモロコシ油または扁桃油）中に溶解されてもよく、エマルジョン
はリン脂質（例えば、卵リン脂質、大豆リン脂質または大豆レシチン）及び水と混合する
と形成される。他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコース、を添加して、エマル
ジョンの等張性を調節してもよい。適当なエマルジョンは、具体的には、２０％以下、例
えば、５〜２０％の油を含むであろう。脂肪エマルジョンは、０．１〜１．０ｎｍ、特に
０．１〜０．５ｎｍの脂肪小滴を含んでもよく、５．５〜８．０の範囲のｐＨを有しても
よい。
【０１１６】
エマルジョン組成物は、ＩＬ−２０アンタゴニストをＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）ま
たはその成分（大豆油、卵リン脂質、グリセロール及び水）と混合することによって調製
されるものであってもよい。
【０１１７】
吸入(inhalation)若しくは吹送(insufflation)用の組成物は、製薬上許容できる水性溶
剤若しくは有機溶剤における溶液及び懸濁液、またはこれらの混合物、ならびに粉末を含
む。液状または固体組成物は、上記したような適当な製薬上許容できる賦形剤を含んでも
よい。実施形態によっては、組成物は、局所的なまたは全身的な効果を目的として経口ま
たは鼻腔内呼吸器(nasal respiratory)経路によって投与される。好ましくは滅菌した製
薬上許容できる溶剤における組成物は、気体を用いることによって噴霧されてもよい。噴
霧溶液は、噴霧デバイスから直接吸い込まれてもよいし、または噴霧デバイスはフェイス
・マスク、テントまたは間欠的な陽圧呼吸機(intermittent positive pressure breathin
g machine)に取り付けられてもよい。溶液、懸濁液または粉末組成物は、適当に製剤をデ
リバリーするデバイスから、好ましくは経口または鼻腔内に、投与されてもよい。
【０１１８】
治療の有効性は、当該分野において既知の方法によって評価できる。
【０１１９】
アンチセンスポリヌクレオチド、発現ベクター、またはサブゲノムポリヌクレオチドを
含む治療用組成物のターゲットデリバリー(targeted delivery)もまた使用できる。レセ
プターが仲介するＤＮＡデリバリー技術は、例えば、Findeis et al, Trends Biotechnol
. (1993) 11:202; Chiou et al, Gene Therapeutics: Methods And Applications Of Dir
ect Gene Transfer (J.A. Wolff, ed.) (1994); Wu et al, J. Biol. Chem. (1988) 263:
621; Wu et al, J. Biol. Chem. (1994) 269:542; Zenke et al, Proc. Natl. Acad. ScL
USA (1990) 87:3655; Wu et al, J. Biol. Chem. (1991) 266:338に記載される。ポリヌ
クレオチドを含む治療用組成物は、遺伝子治療プロトコルで局所投与されることを目的と
して、約１００ｎｇ〜約２００ｍｇのＤＮＡ量で投与される。実施形態によっては、約５
００ｎｇ〜約５０ｍｇ、約１μｇ〜約２ｍｇ、約５μｇ〜約５００μｇ、および約２０μ
ｇ〜約１００μｇのＤＮＡまたはそれ以上の濃度範囲が遺伝子治療プロトコル中に使用さ
れうる。本発明の治療用ポリヌクレオチド及びポリペプチドは、遺伝子デリバリーベヒク
ルを用いてデリバリーされうる。遺伝子デリバリーベヒクルは、ウィルス由来であっても
あるいは非ウィルス由来であってもよい（通常、Jolly, Cancer Gene Therapy (1994) 1:
51; Kimura, Human Gene Therapy (1994) 5:845; Connelly, Human Gene Therapy (1995)
1:185; and Kaplitt, Nature Genetics (1994) 6:148を参照）。このようなコーディン
グ配列の発現は、内因性の哺乳動物または異種のプロモーターおよび／またはエンハンサ
ーを用いて誘導されうる。コーディング配列の発現は、構成性(constitutive)であっても
または調節されてもよい。
【０１２０】
所望のポリヌクレオチドのデリバリーおよび所望の細胞での発現用のウィルス由来のベ
クターは、当該分野において既知である。具体的なウィルス由来のベクターとしては、以
下に制限されないが、組換レトロウィルス（例えば、ＰＣＴ公開  ＷＯ  ９０／０７９３
６；ＷＯ  ９４／０３６２２；ＷＯ  ９３／２５６９８；ＷＯ  ９３／２５２３４；ＷＯ
９３／１１２３０；ＷＯ  ９３／１０２１８；ＷＯ  ９１／０２８０５；米国特許第５
，２１９，７４０号及び第４，７７７，１２７号；英国特許第２，２００，６５１号；な
らびに欧州特許第０  ３４５  ２４２号を参照）、アルファウィルス由来のベクター（例
えば、シンドビス  ウィルスベクター(Sindbis virus vector)、セムリキ森林熱ウィルス
(Semliki forest virus)（ＡＴＣＣ  ＶＲ−６７；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４７）、ロスリ
バーウィルス(Ross River virus)（ＡＴＣＣ  ＶＲ−３７３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２４６
）及びベネズエラウマ脳炎ウィルス(Venezuelan equine encephalitis virus)（ＡＴＣＣ
ＶＲ−９２３；ＡＴＣＣ  ＶＲ−１２５０；ＡＴＣＣ  ＶＲ  １２４９；ＡＴＣＣ  Ｖ
Ｒ−  ５３２））、ならびにアデノ随伴ウィルス(adeno-associated virus)（ＡＡＶ）ベ
クター（例えば、ＰＣＴ公開  ＷＯ  ９４／１２６４９、ＷＯ  ９３／０３７６９；ＷＯ
９３／１９１９１；ＷＯ  ９４／２８９３８；ＷＯ  ９５／１１９８４及びＷＯ  ９５
／００６５５を参照）が挙げられる。Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147に記載され
るような死滅アデノウィルスに連結したＤＮＡの投与もまた使用できる。
【０１２１】
非ウィルス由来のデリバリーベヒクルおよび方法もまた使用でき、以下に制限されない
が、死滅アデノウィルス単独に連結されるまたは連結されないポリカチオン縮合ＤＮＡ(p
olycationic condensed DNA)（例えば、Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147を参照）
；リガンド連結ＤＮＡ(ligand-linked DNA)（例えば、Wu, J. Biol. Chem. (1989) 264:1
6985を参照)；真核細胞デリバリーベヒクル細胞(eukaryotic cell delivery vehicles ce
lls)（例えば、米国特許第５，８１４，４８２号；ＰＣＴ公開  ＷＯ  ９５／０７９９４
；ＷＯ  ９６／１７０７２；ＷＯ  ９５／３０７６３；及びＷＯ  ９７／４２３３８を参
照）ならびに核酸電荷中和(nucleic charge neutralization)または細胞膜との融合が挙
げられる。裸のＤＮＡを使用してもよい。具体的な裸のＤＮＡの導入方法は、ＰＣＴ公開
ＷＯ  ９０／１１０９２及び米国特許第５，５８０，８５９号に記載される。遺伝子デ
リバリーベヒクルとして作用するリポソームは、米国特許第５，４２２，１２０号；ＰＣ
Ｔ公開  ＷＯ  ９５／１３７９６；ＷＯ  ９４／２３６９７；ＷＯ  ９１／１４４４５；
および欧州特許第０５２４９６８号に記載される。さらなる方法は、Philip, MoI. Cell 
Biol. (1994) 14:241 1に、およびWoffendin, Proc. Natl. Acad. Sci (1994) 91:1581に
記載される。
【０１２２】
また、発現ベクターを本明細書に記載されるタンパク質系のＩＬ−２０アンタゴニスト
（例えば、抗ＩＬ−２０抗体、イムノアドヘシン(immunoadhesin)等）のいずれかの直接
発現に使用してもよいことは明らかである。例えば、ＩＬ−２０および／またはＩＬ−２
０生物学的活性を遮断（一部から完全な遮断を含む）することが可能である他のＩＬ−２
０レセプター断片は当該分野において既知である。
【０１２３】
キット
本発明はまた、本方法に使用されるキットをも提供する。本発明のキットは、ＩＬ−２
０アンタゴニスト（本明細書中に記載される抗体ｍＡｂ  ７Ｅまたはその誘導体等の、抗
体など）を含む１以上の容器を有し、および実施形態によっては、本明細書中に記載され
る本発明の方法のいずれかに従って使用される指示書をさらに有する。実施形態によって
は、ＩＬ−２０アンタゴニストは、本明細書中に記載されるいずれかのＩＬ−２０アンタ
ゴニストである。他の実施形態では、キットは、抗ＩＬ−２０抗体以外のＩＬ−２０アン
タゴニストを含む。実施形態によっては、キットは、抗ＩＬ−２０抗体（本明細書中に記
載される抗体ｍＡｂ  ７Ｅ等）を含む。他の実施形態では、キットは、抗体ｍＡｂ  ７Ｅ
の１以上のＣＤＲ（ｍＡｂ  ７Ｅの１、２、３、４、５、または実施形態によっては、６
全てのＣＤＲ）を含む抗ＩＬ−２０抗体を含む。実施形態によっては、含まれる指示書に
は、本明細書に記載されるいずれかの方法に従って骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎を治
療する、発症を遅延させるまたは予防するためのＩＬ−２０アンタゴニストの投与が記載
されている。キットには、個体が骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎を有しているか否かに
基づいて治療に適する個体を選択することがさらに記載されてもよい。さらに他の実施形
態では、指示書には、骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎の危険性のある個体へのＩＬ−２
０アンタゴニストの投与が記載される。
【０１２４】
ＩＬ−２０アンタゴニストの使用に関する指示書は、通常、所望の治療のための投与量
、投与スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。容器は、単位投与、バルクパッ
ケージ（例えば、複数回投与用パッケージ）またはサブユニット投与を包含しうる。本発
明のキットに供給される指示書は、一般的には、ラベルまたは容器の同封物(package ins
ert)（例えば、キット中に含まれる紙シート）に書かれた指示書であるが、コンピュータ
が読取可能な指示書（例えば、磁気記憶ディスクまたは光学式記憶ディスクで行われる指
示書）もまた許容できる。
【０１２５】
ラベルまたは容器の同封物には、組成物が骨粗鬆症を治療する、発症を遅延させるおよ
び／または予防するために使用されることが記載される。指示書は本明細書に記載される
いずれかの方法を実施するにあたって使用されうる。
【０１２６】
本発明のキットは、適当なパッケージに入れられる。適当なパッケージとしては、以下
に制限されないが、バイアル瓶、ボトル、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密閉マイ
ラー(Mylar)樹脂製またはプラスチック製バッグ）などが挙げられる。吸入器、鼻腔内投
与デバイス（例えば、アトマイザー）またはミニポンプ等の輸注デバイスなどの、特定の
デバイスと組み合わせて使用されるパッケージもまた包含される。キットは、滅菌アクセ
スポートを有していてもよい（例えば、容器が静脈注射用の溶液バックまたは皮下注射針
で穴のあくストッパーを有するバイアル瓶であってもよい）。また、容器が、滅菌アクセ
スポートを有していてもよい（例えば、容器が静脈注射用の溶液バックまたは皮下注射針
で穴のあくストッパーを有するバイアル瓶であってもよい）。組成物中の少なくとも１の
活性剤が、抗ＩＬ−２０抗体等の、ＩＬ−２０アンタゴニストである。容器は、ＴＮＦａ
アンタゴニストまたは骨粗鬆症の治療のための他の薬剤などの、第二の製薬上活性のある
薬剤をさらに含んでもよい。
【０１２７】
キットは、必要であれば、緩衝剤等の別の成分および説明書き(interpretive informat
ion)を提供するものであってもよい。一般的に、キットは、容器および容器に添付された
または容器に付随したラベルまたは容器の同封物(package insert)を含む。
【０１２８】
実施形態によっては、本発明は、上記キットの内容物を含む製造物品を提供する。実施
形態によっては、キットは、骨粗鬆症またはリウマチ性関節炎の治療への使用を示す情報
付でＩＬ−２０アンタゴニスト（抗ＩＬ−２０抗体等）を含む。
【０１２９】
さらに説明がなくとも、当業者は、上記記載に基づいて、十分に本発明を利用できると
考えられる。したがって、下記特定の実施例は、単に詳細に説明するためのものであり、
本発明のいかなる残りの開示を制限するものではないと、解される。明細書に列挙される
すべての公報、文献、特許及び特許出願は、参考で全体を本明細書中に引用される。
【実施例】
【０１３０】
実施例１  モノクローナル抗体７Ｅ（ｍＡｂ  ７Ｅ）によるリウマチ性関節炎の治療
コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）を有するラットは、ヒトリウマチ性関節炎を研究する
ためのよく開発された動物モデルである。このモデルを本研究に用いて、ｍＡｂ  ７Ｅに
よるこの疾患の治療の有効性を試験した。
【０１３１】
ＣＩＡを、以下のようにして８週齢のオスのSprague-Dawleyラットで誘導した。完全フ
ロインドアジュバント、４ｍｇ／ｍｌの熱殺菌されたヒト型結核菌(Mycobacterium tuber
culosis)(Arthrogen-CIA; Chondrex, Redmond, WA)、およびウシタイプＩＩコラーゲン（
ＣＩＩ；０．０５Ｍ酢酸に溶解される２ｍｇ／ｍｌ）を１：１：１（ｖ／ｖ／ｖ）の割合
で含む２００μｌエマルジョンを（背に）皮下注射することによって、ラットを初期免疫
処置した。８日後、ラットの尾根に上記したエマルジョンを１００μｌ皮下注射して、免
疫反応を高めた。初期免疫処置から１１〜１３日の間で、ＣＩＡがこれらのラットに観察
された。
【０１３２】
下記４グループのラット（ｎ＝５）について本研究を行った：グループ（１）：健常な
ラット；グループ（２）：ＣＩＡ発症から１週目にＰＢＳを皮下（ｓ．ｃ．）投与した、
上記したような、ＣＩＡラット；グループ（３）：ＣＩＡ発症から１週目にｍＡｂ  ７Ｅ
（３ｍｇ／ｋｇ）を皮下（ｓ．ｃ．）投与した、ＣＩＡラット；およびグループ（４）：
ＣＩＡ発症から１週目にエタネルセプト（Ｅｎｅｂｒｅｌ（登録商標）；Wyeth, USA, ３
ｍｇ／ｋｇ）を皮下（ｓ．ｃ．）投与した、ＣＩＡラット。各処置ラットの後脚の厚みを
キャリパーで測定した。本研究で得られた全ての生の結果について、統計ソフトウェアPr
ism 4.0; GraphPad Software, San Diego, CA, USAを用いて統計学的に分析した。クラス
カル・ワリス検定(Kruskal-Wallis test)を用いて、後脚の厚みを比較した。Ｐ値＜０．
０５は有意差ありと考えた。スチューデントのｔ検定(Student's t-test)または一元配置
分散分析（ＡＮＯＶＡ）を用いて、有意差を評価した。統計学的有意差を、Ｐ＜０．０５
で設定した。
【０１３３】
下記表１に示されるように、ｍＡｂ  ７Ｅは、ＣＩＡラットにおいて後脚の厚みを有意
に減少させ（ｐ＜０．０５）、その有効性は市販の抗リウマチ性関節炎薬である、エタネ
ルセプトのもの（Mihara et ah, Br J Pharmacol., 2008, 154: 153- 164を参照）に近か
った。この結果から、エタネルセプトと同様、ｍＡｂ  ７Ｅもまたリウマチ性関節炎の治
療に有効であることが示される。
【０１３４】
【表１】
2016041730.tif 000006
【０１３５】
次に、ｍＡｂ  ７Ｅの滑膜組織の炎症性メディエータレベルの低減効果を以下にように
して試験した。処置ＣＩＡラットの膝関節周辺の滑膜組織を単離し、ＰＢＳ溶液中に懸濁
した。次に、この組織を均質化し、４℃で３０００ｒｐｍで１０分間遠心し、得られた上
清を８０℃で貯蔵して、分析の準備を行った。ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−Ｉβ（ＴＮＦ−ａ及び
ＩＬ−Ｉβキット；R&D Systems, Minneapolis, MN）、及びＩＬ−２０（ＩＬ−２０キッ
ト；PeproTech Asia/CytoLab, Rehovot, Israel）のレベルを、製造社の指示に従ってサ
ンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを用いて評価した。これら全ての炎症性メディエータがＣ
ＩＡラットで評価されることは、当該分野において既知である。
【０１３６】
得られた結果から、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプトは、ｍＩｇＧに比べて、ＴＮＦ−
ａ、ＩＬ−Ｉβ、及びＩＬ−２０のレベルを有意に減少させたことが示される。より詳細
には、ｍＩｇＧで処置したＣＩＡラットでは、滑膜組織におけるＴＮＦ−ａ、ＩＬ−Ｉβ
、及びＩＬ−２０のレベルは、健常なコントロールラットの滑膜組織における値に比べて
非常に高いものの、これらはｍＡｂ  ７Ｅまたはエタネルセプトで処置されたＣＩＡラッ
トでは有意に減少した。
【０１３７】
実施例２  ｍＡｂ  ７Ｅおよびエタネルセプト双方によるリウマチ性関節炎の治療
ＣＩＡを実施例１に記載される方法に従ってラットで誘導した。このＣＩＡラットをラ
ンダムに５グループ（各グループでｎ＝９）に分け、ＣＩＡ発症後週に３回、以下のよう
に処置した：グループ１：ＰＢＳ；グループ２：Chemicon International, Inc., Temecu
la, CA, USAから得られた、マウスＩｇＧ；グループ３：エタネルセプト（６ｍｇ／ｋｇ
、皮下）；グループ４：ｍＡｂ  ７Ｅ（６ｍｇ／ｋｇ、皮下）；およびグループ５：ｍＡ
ｂ  ７Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ、皮下）及びエタネルセプト（３ｍｇ／ｋｇ、皮下）。まず、各
処置ラットの後脚の厚さを上記実施例１に記載の方法に従って試験した。ｍＡｂ  ７Ｅ及
びエタネルセプトを合わせて処置したものは、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプトを個々に
処置したものに比べて後脚の厚さの低減効果が有意に高かった。
【０１３８】
次に、ラットの各後脚におけるＣＩＡの重篤度を、Hsu et al.(Arthritis Rheum. 2006
, 54:2722-2733)に記載される方法に従って、モニター、採点した。通常、ラットの重篤
度のスコアが３より高いと、そのラットは後脚に重篤な腫れがあると考えられる。クラス
カル・ワリス検定(Kruskal-Wallis test)を適用して、異なるグループから得られた重篤
度スコアを比較して、その結果が統計学的に有意であるか否かを評価した。下記表２に示
されるように、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置したラットの平均重篤度スコ
アは、ｍＡｂ  ７Ｅ単独でまたはエタネルセプト単独で処置したラットより非常に低かっ
た。これらの結果は統計学的に有意差があった（Ｐ＜０．０５）。
【０１３９】
【表２】
2016041730.tif 000007
【０１４０】
次に、重篤な後脚の腫れの存在を各処置ＣＩＡラットで試験し、結果を図１に示した。
予想されなかったことに、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプトで個々に処置したＣＩＡラッ
トでの重篤な腫れの発生率は、それぞれ、１００％から２２％及び１００から３３％に減
少したものの、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置したＣＩＡラットでの重篤な
腫れの発生率は１００％から６％にまで減少した。これらの結果は、フィッシャーの直接
確率検定(Fisher's exact test)を用いて分析すると統計学的に有意差があり、これから
、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプトを合わせて処置したものは、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネ
ルセプトを個々に処置したものに比べて非常により有効であることが示される。
【０１４１】
加えて、処置されたＣＩＡラットの骨損傷の重篤度を、放射線による画像(radio imagi
ng)によりウシコラーゲンで初期免疫処置してから２５日後に試験した。重篤な骨損傷が
ＰＢＳ及びｍＩｇＧで処置されたＣＩＡラット（即ち、グループ１及びグループ２のラッ
ト）の後脚の関節で観察された。驚くべきことに、局所的な足首の骨損傷の重篤度は、ｍ
Ａｂ  ７Ｅ、エタネルセプト、またはこれらの組み合わせで処置されたＣＩＡラット（即
ち、グループ３〜５のラット）では比較的軽かった。グループ１及び２のラットとグルー
プ３〜５のラットとの相違は、統計学的に有意であった（Ｐ＜０．０１〜０．０５）。こ
れらの結果から、ｍＡｂ  ７Ｅは、エタネルセプトと同じくらい効果的にＣＩＡラットで
骨損傷を軽減し、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプトを組み合わせた処置は相当する個々の
処置に比べてかなりより有効であったことがさらに確認される。
【０１４２】
さらに、高解像度で少量Ｘ線スキャナー(high resolution, low-dose X-ray scanner)
を備えた１０７６マイクロＣＴ−４０システム(1076 microCT-40 system)(Skyscan, Aart
selaar, Belgium)を用いた、マイクロコンピュータによるトモグラフィー解析(microcomp
uted tomographic analysis)を行って、ｍＡｂ  ７Ｅ単独及びｍＡｂ  ７Ｅとエタネルセ
プトとの組み合わせによるＣＩＡラットでの骨破壊の保護効果を評価した。スキャナーの
Ｘ線管を、０．５−ｍｍの厚みのフィルターを通して４８ｋＶの光子エネルギー、２００
μＡの電流、及び１１８０ｍｓの暴露時間で操作した。画像の画素サイズは１７．２０μ
ｍであり、スキャン時間はおおよそ１５分であった。スキャンした画像の復元を再構築し
た(standardized reconstruction)後、ソフトウェア(CTAn; Skyscan)を用いて、各脛骨サ
ンプルのデータセットの再見本をとり、同様にして各サンプルを配向した(orient)。閾値
等の条件を全分析にわたって一致させた。骨ミネラル濃度、３次元の骨特性パラメーター
を、５０枚の連続したスライスで分析した。結果をｍＩｇＧコントロールに対する値の割
合（％）(percentage versus value)として算出した。
【０１４３】
ＰＢＳ及びｍＩｇＧで処置されたＣＩＡラットから得られた脛骨は、健常なコントロー
ルで見出される損傷のない関節に比べて明らかな骨損傷を示した。ｍＡｂ  ７Ｅで処置さ
れたＣＩＡラットは、ｍＩｇＧで処置されたラットに比べて骨量の減少の軽減を示した。
ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置されたラットでは、骨量の減少が、ｍＡｂ  
７Ｅまたはエタネルセプト単独で処置したラットに比べてより重篤でなかった。
【０１４４】
疾患の重篤度を評価する定量的なパラメーターである、骨ミネラル濃度を、上記したの
と同様にして各処置ＣＩＡラットで測定した。ＣＩＡラットでのｍＡｂ  ７Ｅ処置は、ｍ
ＩｇＧで処置したＣＩＡラットに比べて骨量の減少を有意に阻害した（Ｐ＜０．０５）。
保護効果は、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置したＣＩＡラットで劇的に増加
した（Ｐ＜０．０１）。マイクロＣＴ結果は、足首の関節からの放射線によるデータを支
持するものであった。これらの結果から、ｍＡｂ  ７Ｅは、関節炎の重篤度を低減するの
みならず、骨量の減少を阻害するという証拠が得られた。
【０１４５】
最後に、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−Ｉβ、及びＩＬ−２０の発現レベルを、ｍＡｂ  ７Ｅ及び
エタネルセプト双方で処置したＣＩＡラットで試験したところ、得られた結果から、これ
らのサイトカインは有意に減少したことが示された。図２を参照。ＩＬ−６の発現もまた
、ｍＡｂ  ７Ｅ、エタネルセプト、ならびにｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプト双方で処置
後に減少した。
【０１４６】
要約すると、上記結果から、ｍＡｂ  ７Ｅは、関節炎の重篤度を低減し、骨量の減少を
阻害することによってＣＩＡを処置するのに有効であることが示される。また、これらの
結果から、ｍＡｂ  ７Ｅ及びエタネルセプトの合わせた効果は、ｍＡｂ  ７Ｅまたはエタ
ネルセプト個々の効果に比べて有意に高いことも示される。
【０１４７】
実施例３  ｍＡｂ  ７Ｅの骨粗鬆症の治療
１４週齢のメスのＢＡＬＢ／Ｃマウス(Laboratory Animal Center, National Cheng Ku
ng University, Tainan, Taiwan)を、到着したら環境が制御された実験室で飼育し、４日
間慣れさせた。動物を、温度／湿度が制御された部屋（２０〜２５℃及び４０〜４５％）
でポリカーボネート製のケージ（１ケージ当たり３匹）に割り当てた。明：暗サイクルを
、１２時間明所：１２時間暗所とし、餌及び水を自由に摂取できるよう供給した。動物を
、ペントバルビタール（５０ｍｇ／ｋｇ体重；Sigma-Aldrich, St. Louis, MO）を用いた
通常の麻酔下で背部の卵巣を摘出した（ＯＶＸ）または偽で手術した（偽コントロール）
。偽コントロールでは、左右の卵巣を暴露した後、除かずに皮膚を縫合して閉じた。マウ
スをＯＶＸまたはコントロール外科手術してから１週間回復させた後、６グループにラン
ダムに分けた：グループ１：偽コントロール（ｎ＝５）；グループ２：さらに処置を行わ
ないＯＶＸマウス（ｎ＝５）；グループ３：１７β−エストラジオール（Sigma- Aldrich
, St. Louis, MO, １０μｇ／ｋｇ／日、ｎ＝６）で処置したＯＶＸマウス；グループ４
：ｍＩｇＧ(Chemicon International, Inc., Temecula, CA, USA, ３ｍｇ／ｋｇ／３日、
ｎ＝７）で処置したＯＶＸマウス；グループ５：ｍＡｂ  ７Ｅ（３ｍｇ／ｋｇ／３日、ｎ
＝５）で処置したＯＶＸマウス；およびグループ６：ｍＡｂ  ７Ｅ（６ｍｇ／ｋｇ／３日
、ｎ＝５）で処置したＯＶＸマウス。ポジティブコントロールとして使用した１７β−エ
ストラジオール処置の投与量は、ＯＶＸマウスを処置するのに有効であることが知られて
いる従来のプロトコルに基づくものである。Cano et al, Osteoporos Int. 2008 Jun;19(
6):793-800を参照。
【０１４８】
全てのグループのマウスを２カ月後剖検した。各マウスの脛骨を無菌的に集め、洗浄し
て付着した軟組織を除き、３．７％ホルマリンを満たした管に沈めた。次に、上記実施例
２に記載の方法に従って、マイクロコンピュータによるトモグラフィー解析および骨ミネ
ラル濃度分析を行った。
【０１４９】
ＩＬ−２０の血清レベルはＯＶＸグループではアップレギュレートしたが、ｍＡｂ  ７
Ｅで処置したＯＶＸマウスではダウンレギュレートした（図３ａ）。マウス脛骨の骨ミネ
ラル濃度のマイクロＣＴスキャンから、グループ２及び３（未処置またはｍＩｇＧで処置
）の骨損傷のレベルがグループ４〜６（３ｍｇ／ｋｇ  ｍＡｂ  ７Ｅ、６ｍｇ／ｋｇ  ｍ
Ａｂ  ７Ｅ、及び１７β−エストラジオールで処置）のものに比べてかなり大きいことが
示され、これから、１７β−エストラジオールと同様、ｍＡｂ  ７ＥもＯＶＸマウスでの
骨の減少を低減したことが示される（図３ｂ）。さらに、ｍＡｂ  ７Ｅで処置された及び
１７β−エストラジオールで処置されたＯＶＸマウスでの骨ミネラル濃度は、偽コントロ
ール及びｍＩｇＧで処置したマウスに比べてかなり高かった（図３ｂ）。骨密度の統計学
的に有意な（ｍＩｇＧコントロールに比べてＰ＜０．０５）容量に応答した増加がこれら
のマウスで観察された（図３ｃ）。総合すると、これらの結果から、ｍＡｂ  ７Ｅは、骨
量の減少を低減することによって骨粗鬆症を治療するのに有効であることが示される。
【０１５０】
実施例４  ＩＬ−２０抗体  ｍＡｂ  ７Ｅは破骨細胞の分化を阻害する
骨形成は、骨芽細胞と破骨細胞とのクロストークによって密に調節される。不安定な破
骨細胞形成により、骨粗鬆症及びリウマチ性関節炎で骨量の減少が引き起こされる(Takay
anagi, H, et al. (2005) Immunol Rev 208:181-193; Ross, FP and Teitelbaum, SL (20
05) Immunol Rev 208:88-105)。ゆえに、我々は、ｍＡｂ  ７Ｅが破骨細胞の分化を阻害
することによってＯＶＸマウスの骨量の減少を保護するか否かを決定したかった。
【０１５１】
骨髄細胞（ＢＭＣ）を、マウスの脛骨から調製し、１２時間（３７℃／５％  ＣＯ２）
でインキュベートした。その後、非付着細胞を集め、２４ウェルプレートに播種し（２×
１０６細胞／ウェル）、３０ｎｇ／ｍｌ  組換マウスマクロファージコロニー刺激因子（
Ｍ−ＣＳＦ）(PreproTech)を補足した同じ培地で培養した。４８時間後、Ｍ−ＣＳＦによ
り誘導されたＢＭＣを、実験が終了するまで、マウスＭ−ＣＳＦ（４０ｎｇ／ｍｌ）及び
ｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍｌ）(PreproTech)と一緒に培養した。ｍＡｂ  ７Ｅの効果
を試験するために、ＭＣＳＦで誘導されるＢＭＣを、実験が終了するまで、Ｍ−ＣＳＦ及
びｓＲＡＮＫＬを含むａ−ＭＥＭ中で、ＩＬ−２０（２００ｎｇ／ｍｌ）、ｍＡｂ  ７Ｅ
（２μｇ／ｍｌ）、ｍＩｇＧ（２μｇ／ｍｌ）で処置した。
【０１５２】
ｍＡｂ  ７Ｅによる初期処置のために、ＢＭＣを１２時間培養した。非付着細胞を２４
ウェルプレートに播種し（２×１０６細胞／ウェル）、ｍＡｂ  ７Ｅ（２μｇ／ｍｌ）ま
たはコントロールｍＩｇＧ（２μｇ／ｍｌ）を含むａ−ＭＥＭで培養した後、Ｍ−ＣＳＦ
（４０ｎｇ／ｍｌ）を添加した。４０時間後、ｍＡｂ  ７Ｅ処置を終了し、細胞を血清を
含まない培養培地で洗浄した後、実験終了までａ−ＭＥＭ（４０ｎｇ／ｍｌ）及びｓＲＡ
ＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍｌ）中でインキュベートした。破骨細胞の数を計測するために、
細胞をアセトンで固定し、酸性ホスファターゼキット(Sigma-Aldrich)を用いてＴＲＡＰ
について染色した。
【０１５３】
破骨前駆細胞を骨髄由来の造血幹細胞（ＨＳＣ）から調製し、Ｍ−ＣＳＦ及び可溶性（
ｓ）ＲＡＮＫＬを培養物に添加して、ＯＣの分化を誘導した。２種の培養プロトコルを用
いて、初期及び後期の破骨細胞形成におけるＯＣ分化へのＩＬ−２０抗体ｍＡｂ  ７Ｅの
効果を分析した(図４）。４８時間後、Ｍ−ＣＳＦで誘導された骨髄マクロファージを、
実験終了まで、マウスＭ−ＣＳＦ（４０ｎｇ／ｍｌ）及びｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／ｍ
ｌ）と共に培養した。ＴＲＡＰ染色を用いて、分化した破骨細胞の数を定量した。ｍＡｂ
７Ｅ（２μｇ／ｍｌ）の存在下では、ＴＲＡＰ＋破骨細胞の数は、アイソタイプコント
ロールに比べて有意に（Ｐ＜０．０１）低かった（図４ｂ及び４ｃ）。ｍＡｂ  ７Ｅの存
在下では、ＯＣは検出されなかった。ｍＡｂ  ７Ｅが初期または後期でＯＣの分化に影響
を与えるかどうかを明らかにするために、骨髄細胞をｍＡｂ  ７ＥまたはｍＩｇＧと１時
間予めインキュベートした後、Ｍ−ＣＳＦをさらに４８時間加えた。細胞を集め、ｍＡｂ
７Ｅ抗体を含まずにＭ−ＣＳＦ及びｓＲＡＮＫＬを含む培地で３日間培養した（図４ｄ
）。ｍＡｂ  ７Ｅとの初期インキュベーションは、破骨細胞の分化を有効に阻害した（ｍ
ＩｇＧコントロールに比べてＰ＜０．０１）（図４ｅ及び４ｆ）。ゆえに、ＩＬ−２０抗
体は、初期及び後期双方の破骨細胞の分化を遮断した。
【０１５４】
さらに、ＩＬ−２０は、リウマチ性関節炎のＣＩＡラットモデルの滑膜線維芽細胞にお
けるＴＮＦａ及びＲＡＮＫＬは誘導したが、健常なラットの滑膜線維芽細胞での発現は誘
導しなかった。
【０１５５】
実施例５  Ｍ−ＣＳＦはＨＳＣにおけるＩＬ−２０をアップレギュレートした
ＩＬ−２０抗体  ｍＡｂ  ７Ｅは、骨髄由来のＨＳＣ由来の破骨細胞の分化を遮断した
（図４）。ＨＳＣがＩＬ−２０を培養培地に分泌する可能性を試験するために、４８時間
Ｍ−ＣＳＦと予め培養、処置した骨髄由来のＨＳＣにおけるＩＬ−２０の発現を調べた。
リアルタイムＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）から、ＩＬ−２０  ｍＲＮＡはコントロールに比べ
てＭ−ＣＳＦで処置したＨＳＣでより高いことが示され（図５ａ）、これは、ＩＬ−２０
がＭ−ＣＳＦ刺激に応答して内因的に分泌された証拠である。ＲＴ−ＰＣＲでは、蛍光検
出システム(DNA Engine Opticon 2; Bio-Rad)を用いたＳＹＢＲ  Ｇｒｅｅｎ  Ｉ(Bio-Ra
d)化学。蛍光−及び時間−に依存したシグナル生成を製造社のソフトウェアを用いて評価
した。
【０１５６】
ＩＬ−２０レセプターもまた、Ｍ−ＣＳＦで誘導されるＯＣ前駆細胞で発現した。これ
らの結果から、ＩＬ−２０がＨＳＣで誘導される破骨前駆細胞にオートクリン作用するこ
とが示唆された。
【０１５７】
実施例６  骨髄細胞のＭ−ＣＳＦで誘導されるＯＣ前駆細胞でのＩＬ−２０で誘導され
るＲＡＮＫ発現
ＲＡＮＫＬ−ＲＡＮＫシグナルは破骨細胞の分化で重要である(Wada, T et al. (2006)
Trends Mol Med 12:17-25)。ＲＡＮＫは、破骨細胞の表面で発現する。ＩＬ−２０がＲ
ＡＮＫＬ−ＲＡＮＫシグナル伝達を向上することによって破骨細胞の分化を増加させるか
どうかを調べるために、ＲＡＮＫ発現を骨髄細胞のＭ−ＣＳＦで誘導されるＯＣ前駆細胞
で分析した。細胞をスクラッピングによって集め、０．５ｍｇ／ｍｌ  抗マウスＲＡＮＫ
抗体(eBioscience)またはアイソタイプコントロール抗体と３０分間インキュベートし、
フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）と共役した二次抗体とインキュベートし
た後、フローサイトメーター(flow cytometer)(FACSCalibur; BD Biosciences)を用いて
分析した。この際、２０００個の事象を各サンプルで得た。
【０１５８】
フローサイトメトリー分析により、ＩＬ−２０で処置されたＭ−ＣＳＦで誘導されるＯ
Ｃ前駆細胞では、ＲＡＮＫタンパク質（図５ｂ）及びＲＮＡＫ  ｍＲＮＡ（図５ｃ）の表
面発現が破骨前駆細胞でアップレギュレートしたことが示された。
【０１５９】
破骨細胞の分化へのｍＡｂ  ７Ｅの阻害効果と一致して、ｍＡｂ  ７Ｅ処置はＲＡＮＫ
転写物の発現（図５ｄ）及びＲＡＮＫタンパク質の表面発現双方を阻害した。Ｍ−ＣＳＦ
で誘導されるＢＭＣを、Ｍ−ＣＳＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）及びｓＲＡＮＫＬ（１００ｎｇ／
ｍｌ）を含むａ−ＭＥＭ中で所定の濃度のＩＬ−２０、ｍＩｇＧ、ｍＡｂ７Ｅ、またはＩ
Ｌ−２０及びｍＡｂ  ７Ｅ双方と共に、２４時間培養した。ＲＡＮＫ生産をアッセイする
ために、細胞をＩＬ−２０（２００ｎｇ／ｍｌ）で刺激し、トリプシン処理した後、上記
したのと同様にして、フローサイトメトリー分析のためにＲＡＮＫ(eBioscience)に対す
るＰＥと共役した抗体で染色した。これらの結果は、ＩＬ−２０がＲＡＮＫ発現を増加さ
せることにより破骨細胞形成サイトカインとして破骨前駆細胞に作用する証拠である。
【０１６０】
実施例７  ＩＬ−２０は骨芽細胞をターゲットとし、ＲＡＮＫＬ発現をアップレギュレ
ートした
骨芽細胞におけるＲＡＮＫＬ発現の増加はまた、破骨細胞形成のカギとなる因子である
(Jordan, WJ et al. (2005) Eur J Immunol 35:1576-1582)。ＲＴ−ＰＣＲ分析（図６ａ
）及び細胞化学染色（図６ｂ）を用いて、骨芽細胞におけるＩＬ−２０の機能を明らかに
した。双方のインビトロアッセイにより、ＩＬ−２０及びその３つのレセプターサブユニ
ットがＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞中で発現することが示された。幾つかのシグナル伝達タ
ンパク質のリン酸化パターンを評価するために、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞を、所定の時間、
マウスのＩＬ−２０（２００ｎｇ／ｍｌ）(R&DSystems, Minneapolis, MN, USA)で刺激し
た。ウエスタンブロッティングを、製造社の指示を用いてリン酸化ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＴ
ＡＴ３、ｐ３８、及びＪＮＫ(Cell Signaling Technology)に特異的な抗体を用いて行っ
た。図４ｃに示されるように、ＪＮＫ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、及びｐ３８はＩＬ−２０で処理
されたＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞でリン酸化されたことから、ＩＬ−２０が骨芽細胞中で
内因的に発現し、オートクリンで上記細胞中のシグナル伝達を引き起こすというより明ら
かな証拠が得られた。Ｔｈ１７がＲＡの誘導及び進行で重要であることが近年報告された
。Ｔｈｌ７がＲＡの発症にかかわりがあることはＩＬ−１７で刺激される破骨細胞形成に
よるものである(Kotake, S, et al. (1999) . Clin. Invest. 103:1345-1352)。ＩＬ−１
７の転写物は、ＩＬ−２０で処理したＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨芽細胞でより高かった（図６ｄ
）。ＩＬ−２０が骨芽細胞でＲＡＮＫＬ発現を誘導することにより破骨細胞形成に寄与す
るか否かを決定するために、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞をＩＬ−２０と共に培養し、リアルタ
イムＰＣＲ及びフローサイトメトリーを用いてＲＡＮＫＬ発現を分析した。ＲＡＮＫＬ発
現は、未処置コントロールでよりも、ＩＬ−２０で処置した細胞で時間に依存してより高
く、処置してから６時間でピークになった（図６ｅ）。ＲＡＮＫＬタンパク質の表面発現
もまた、ＩＬ−２０で処置したＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞でより高かった（図６ｆ）。ＩＬ−
２０は、Ｔｈｌ７細胞に作用し、ＲＡＮＫＬの放出を誘導した。さらに、ＩＬ−２０及び
ＩＬ−１７は、よりＲＡＮＫＬ発現を相乗的に誘導し、さらに、破骨細胞の分化を向上し
、骨侵食を引き起こす。
【０１６１】
実施例８  ＩＬ−２０抗体は骨芽細胞でのＩＬ−２０で誘導されるＲＡＮＫＬ発現を阻
害した
上記したように、ＲＡＮＫＬ発現は、未処置ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１細胞でよりも、ＩＬ−２
０で処置した細胞でより高かった（図６ｅ及び６ｆ）。ＩＬ−２０抗体  ｍＡｂ  ７Ｅが
ＩＬ−２０で誘導されるＲＡＮＫＬ発現を阻害することを確認するために、細胞をＩＬ−
２０及びｍＡｂ  ７Ｅで同時に処置した。リアルタイムＰＣＲから、同時処置した細胞で
はＲＡＮＫＬ転写物は検出されないことが示された（図７）。これらの結果から、ＩＬ−
２０が骨芽細胞でのＲＡＮＫＬ発現に対して上流のアクチベーター(upstream activator)
であり、ｍＡｂ  ７ＥがＩＬ−２０で誘導されるＲＡＮＫＬ発現を阻害することが示され
た。これらの結果から、ＩＬ−２０が、インビトロで、骨芽細胞でのＲＡＮＫＬの上流の
インデューサー(upstream inducer)であり、破骨細胞形成を促進するという強固な証拠が
得られた。
【０１６２】
他の実施形態
本明細書に開示されるすべての態様は、いずれの組み合わせで併合されてもよい。本明
細書に開示される各態様は、同じ、等価の、または同様の目的を果たす別の態様に置換さ
れてもよい。ゆえに、特記されない限り、開示される各態様は、一連の等価のまたは同様
の態様の一例にすぎない。
【０１６３】
前記発明を明確に理解するために詳細に説明することによっておよび実施例によってい
くばくか詳細に説明してきたが、説明及び実施例によって本発明の範囲が制限されるおの
ではないと解されるべきである。
【図１】
2016041730.tif 000008
【図２】
2016041730.tif 000009
【図３】
2016041730.tif 000010
【図４】
2016041730.tif 000011
【図５】
2016041730.tif 000012
【図６】
2016041730.tif 000013
【図７】
2016041730.tif 000014
【配列表】
2016041730000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成27年11月4日(2015.11.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＩＬ−２０抗体およびＴＮＦａアンタゴニストを含む、リウマチ性関節炎の治療のための薬剤。
【請求項２】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７Ｅである、請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７Ｅのものと少なくとも７０％一致する重鎖可変領域（ＶＨ）及びｍＡｂ  ７Ｅのものと少なくとも７０％一致する軽鎖可変領域（ＬＨ）を含むｍＡｂ  ７Ｅの機能的な等価物である、請求項１に記載の薬剤。
【請求項４】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７ＥのＶＨおよびＶＬ領域を含む抗体である、請求項３に記載の薬剤。
【請求項５】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、１本鎖抗体またはキメラ抗体またはｍＡｂ  ７Ｅのヒト化抗体である、請求項３または４に記載の薬剤。
【請求項６】
前記ＴＮＦａアンタゴニストは、エタネルセプトポリペプチド、インフリキシマブおよびアダリムマブからなる群より選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の薬剤。
【請求項７】
前記エタネルセプトポリペプチドは、ヒト可溶性ＴＮＦレセプターおよびヒト免疫グロブリンＧ１のＦｃ成分を含む融合タンパク質である、請求項６に記載の薬剤。
【請求項８】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７ＥのＶＨおよびＶＬ領域を含む抗体、または、ｍＡｂ  ７ＥｍＡｂ  ７Ｅのものと少なくとも７０％一致する重鎖可変領域（ＶＨ）及びｍＡｂ  ７Ｅのものと少なくとも７０％一致する軽鎖可変領域（ＬＨ）を含むその機能的な等価物である、請求項７に記載の薬剤。
【請求項９】
前記抗ＩＬ−２０抗体は、ｍＡｂ  ７Ｅのヒト化抗体である、請求項８に記載の薬剤。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５２】
他の実施形態では、抗ＩＬ−２０抗体は、抗体ｍＡｂ  ７Ｅの１以上のＣＤＲ（ｍＡｂ  ７Ｅの１、２、３、４、５、または実施形態によっては、６すべてのＣＤＲ）を含む。実施形態によっては、抗ＩＬ−２０抗体は、ＡＴＣＣ  Ｎｏ．ＰＴＡ−８６８７を有する細胞系またはその子孫によって生産されるｍＡｂ  ７Ｅの重鎖由来の３つのＣＤＲおよび／または軽鎖由来の３つのＣＤＲを有する。実施形態によっては、抗ＩＬ−２０抗体は、配列番号：２に示されるアミノ酸由来の３つの重鎖ＣＤＲおよび／または配列番号：４に示されるアミノ酸由来の３つの軽鎖ＣＤＲを有する。
【外国語明細書】
2016041730000001.pdf
2016041730000002.pdf
2016041730000003.pdf
2016041730000004.pdf