(57)【要約】 【課題】  本発明の課題は、高い抗腫瘍効果または腫瘍細胞に対する高いアポトーシス促進効果を有する抗腫瘍剤、腫瘍細胞に対するアポトーシス促進剤、および組成物を提供することである。【解決手段】  乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせを含む抗腫瘍剤、腫瘍細胞に対するアポトーシス促進剤、および組成物を提供する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌とスルフォラファンとを含む、抗腫瘍剤。
【請求項２】
乳酸菌がラクトバチルス・ペントーサスである、請求項１に記載の抗腫瘍剤。
【請求項３】
ラクトバチルス・ペントーサスが、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８）である、請求項２に記載の抗腫瘍剤。
【請求項４】
乳酸菌が生菌体、死菌体、または菌体処理物の形態で含まれる、請求項１〜３のいずれかに記載の抗腫瘍剤。
【請求項５】
腫瘍が悪性腫瘍である、請求項１〜４のいずれかに記載の抗腫瘍剤。
【請求項６】
乳酸菌とスルフォラファンとを含む、腫瘍細胞に対するアポトーシス促進剤。
【請求項７】
乳酸菌がラクトバチルス・ペントーサスである、請求項６に記載のアポトーシス促進剤。
【請求項８】
ラクトバチルス・ペントーサスが、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８）である、請求項７に記載のアポトーシス促進剤。
【請求項９】
乳酸菌が生菌体、死菌体、または菌体処理物の形態で含まれる、請求項６〜８のいずれかに記載のアポトーシス促進剤。
【請求項１０】
腫瘍が悪性腫瘍である、請求項６〜９のいずれかに記載のアポトーシス促進剤。
【請求項１１】
乳酸菌とスルフォラファンとを含む、組成物。
【請求項１２】
乳酸菌がラクトバチルス・ペントーサスである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
ラクトバチルス・ペントーサスが、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８）である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
腫瘍細胞の増殖を阻害するための、請求項１０〜１３のいずれかに記載の組成物。
【請求項１５】
腫瘍が悪性腫瘍である、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
飲食品である、請求項１１〜１５のいずれかに記載の組成物。
【請求項１７】
乳酸菌およびスルフォラファンを保健機能成分（関与成分）とする機能表示を付した、請求項１６に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗腫瘍剤、アポトーシス促進剤、および抗腫瘍効果を有する組成物に関する。詳細には、乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせを含む、抗腫瘍剤、アポトーシス促進剤、および抗腫瘍効果を有する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
乳酸菌は、生体の免疫反応を活性化する作用、すなわち免疫賦活作用を示すことが知られている。たとえば、ラクトバチルス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）Ｓ−ＰＴ８４株は、免疫担当細胞に作用して、IL-12の発現を誘導する効果を有することが報告されている（非特許文献１、特許文献１、特許文献２）。また、ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）はTNF-αの発現を誘導する効果を有することが報告されている（非特許文献２）
一方、ブロッコリーのようなアブラナ科の植物に含まれるスルフォラファン（sulforaphane（SFN））は、生体の免疫反応を抑制する作用、すなわち免疫抑制作用を有することが知られている。たとえば、LPS刺激によるNF-κBの活性化をスルフォラファンが抑制することで、IFN-γ、IL-2、IL-17の産生が抑制された（非特許文献３）。また、関節炎誘発モデルマウスの脾細胞、リンパ節細胞にスルフォラファンを添加した結果、IFN-γ、TNF-α、IL-6の発現抑制効果を認め、さらに、免疫抑制型のIL-10の発現誘導効果も認めた（非特許文献４）。さらに、スルフォラファンがNrf2を活性化することで、LPS刺激によるTNF-α、IL-1βの産生が抑制された（非特許文献５）。
【０００３】
スルフォラファンはがん予防効果が期待されている食品由来成分としても知られている（非特許文献６）。たとえば、スルフォラファンが、前立腺癌細胞株において、Bcl-2やcIAP-1, 2とXIAPの発現を減少させることでアポトーシスを誘導したり（非特許文献７）、肝癌細胞株においてBaxの増加、Bcl-2、Bcl-xLの減少を介してアポトーシスを引き起こす（非特許文献８）ことが報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−３３３９１９
【特許文献２】特表２００８−５０１０１３
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】International Archives of Allergy and Immunology, 2008;145(3):249-57
【非特許文献２】Gut, 47(2000), 79-87
【非特許文献３】The Journal of Immunology, 2014 Apr 15;192(8):3530-9
【非特許文献４】Arthritis & Rheumatism, 2010 Jan;62(1):159-70
【非特許文献５】Biochemical Pharmacology, 2008 Oct 15;76(8):967-73
【非特許文献６】Mutation Research, 635 (2007), 90-104
【非特許文献７】Carcinogenesis, 28 (2007), 151-62
【非特許文献８】Carcinogenesis, 26 (2005), 2138-48
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、高い抗腫瘍効果または腫瘍細胞に対する高いアポトーシス促進効果を有する抗腫瘍剤、腫瘍細胞に対するアポトーシス促進剤、および組成物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、免疫賦活作用を有することが知られる乳酸菌であるラクトバチルス・ペントーサスと、それとは逆の作用である免疫抑制作用を有することが知られるスルフォラファンとの組み合わせを、ヒト末梢血単核細胞（PBMC）及びヒト大腸癌細胞の共培養系に添加したところ、まったく予想もしていなかったことに、ラクトバチルス・ペントーサスの免疫賦活作用が増強され、その結果、大腸癌細胞に対して、相加効果を超える相乗的なアポトーシス誘導活性が示されることを見出した。つまり、ラクトバチルス・ペントーサスと、スルフォラファンとの組み合わせが、ラクトバチルス・ペントーサスの免疫賦活作用を増強させ、高い抗腫瘍効果または腫瘍細胞に対する高いアポトーシス促進効果を示すことを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
すなわち、これに限定されるものではないが、本発明は以下の態様の発明を包含する。
［１］  乳酸菌とスルフォラファンとを含む、抗腫瘍剤。
［２］  乳酸菌がラクトバチルス・ペントーサスである、［１］に記載の抗腫瘍剤。
［３］  ラクトバチルス・ペントーサスが、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８）である、［２］に記載の抗腫瘍剤。
［４］  乳酸菌が生菌体、死菌体、または菌体処理物の形態で含まれる、［１］〜［３］のいずれかに記載の抗腫瘍剤。
［５］  腫瘍が悪性腫瘍である、［１］〜［４］のいずれかに記載の抗腫瘍剤。
［６］  乳酸菌とスルフォラファンとを含む、腫瘍細胞に対するアポトーシス促進剤。
［７］  乳酸菌がラクトバチルス・ペントーサスである、［６］に記載のアポトーシス促進剤。
［８］  ラクトバチルス・ペントーサスが、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８）である、［７］に記載のアポトーシス促進剤。
［９］  乳酸菌が生菌体、死菌体、または菌体処理物の形態で含まれる、［６］〜［８］のいずれかに記載のアポトーシス促進剤。
［１０］  腫瘍が悪性腫瘍である、［６］〜［９］のいずれかに記載のアポトーシス促進剤。
［１１］  乳酸菌とスルフォラファンとを含む、組成物。
［１２］  乳酸菌がラクトバチルス・ペントーサスである、［１１］に記載の組成物。
［１３］  ラクトバチルス・ペントーサスが、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株（受託番号：ＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８）である、［１２］に記載の組成物。
［１４］  腫瘍細胞の増殖を阻害するための、［１０］〜［１３］のいずれかに記載の組成物。
［１５］  腫瘍が悪性腫瘍である、［１４］に記載の組成物。
［１６］  飲食品である、［１１］〜［１５］のいずれかに記載の組成物。
［１７］  乳酸菌およびスルフォラファンを保健機能成分（関与成分）とする機能表示を付した、［１６］に記載の組成物。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の抗腫瘍剤、アポトーシス促進剤、および組成物は、乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせを含むことにより、高い抗腫瘍効果または腫瘍細胞に対する高いアポトーシス促進効果を示す。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１Ａ】図１Ａは、ヒト大腸癌細胞であるHT-29細胞に対するラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株およびスルフォラファンのアポトーシス誘導効果を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、ヒト大腸癌細胞であるHCT116細胞に対するラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株およびスルフォラファンのアポトーシス誘導効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
＜乳酸菌＞
本発明に用いる乳酸菌は、生体の免疫反応を活性化する作用、すなわち免疫賦活作用を示す乳酸菌であればいずれを用いてもよいが、たとえばラクトバチルス・ペントーサスを好適に用いることができる。本発明に用いるラクトバチルス・ペントーサスは、ラクトバチルス・ペントーサス（Lactobacillus pentosus）に属し、かつ、グリセロールの資化性が無いまたは弱いものであればよい。
【００１２】
ラクトバチルス・ペントーサスは、さらに、細胞外多糖（Extracellular Polysaccharide：以下「EPS」と略記する）産生株であることが好ましい。ラクトバチルス・ペントーサスのEPSは、菌体表面にとどまる莢膜多糖であり、墨汁染色により容易に確認できる。
【００１３】
本発明に用いるラクトバチルス・ペントーサスの代表的なものとして、ラクトバチルス・ペントーサスＳ−ＰＴ８４株を挙げることができる。本株は独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センターに寄託されており、その受託番号はＦＥＲＭ  ＢＰ−１００２８である。
【００１４】
本発明に用いる乳酸菌は、生菌体、死菌体、または菌体処理物のいずれの形態であってもよい。菌体は培養上清を除いて精製したものでも、固体培地や液体培地等の夾雑物が含まれるものでもよく、湿潤な状態または乾燥した状態のいずれの状態でもよい。湿潤な状態の菌体は、たとえば乳酸菌の菌体と固体培地または液体培地とを含む培養物をそのまま、あるいは培養物を濃縮した濃縮物を用いることができる。乾燥した状態の菌体は、噴霧乾燥、凍結乾燥、真空乾燥等の方法によって乾燥した菌体をそのまま、あるいは粉末化、顆粒化したものを用いることができる。死菌体は、乳酸菌の培養物、培養物の濃縮物、精製した菌体、または乾燥した菌体を加熱処理や放射線処理等によって殺菌処理して得られる。菌体処理物とは、超音波破砕や物理破砕等の破砕処理または粉砕処理によって得られる菌体破砕物や菌体粉砕物、細胞壁分解酵素等の酵素処理によって得られる菌体溶解物、菌体を固体担体やマイクロカプセル等に固定化した固定化菌体等や菌体培養液上清のように菌体を除去した後の培養物を意味する。
＜スルフォラファン＞
スルフォラファンは以下の構造を有する化合物である。
【００１５】
【化１】
2016150904.tif 000002
【００１６】
スルフォラファンはアブラナ科の植物、たとえばブロッコリー、ブロッコリーの芽、キャベツ、芽キャベツ、カリフラワー、カリフラワーの芽、チンゲンサイ等に含まれ、これらの植物から公知の方法によって抽出・精製することができる。また、市販のスルフォラファンを用いてもよい。本発明において、スルフォラファンはＤ体、Ｌ体、またはこれらの混合物のいずれを用いてもよい。
【００１７】
本明細書において、用語「スルフォラファン」は、上記構造を有するスルフォラファン、生体内でスルフォラファンに変換されるスルフォラファン誘導体、およびスルフォラファンの塩を含むものとする。
【００１８】
生体内でスルフォラファンに変換されるスルフォラファン誘導体の例としては、たとえばスルフォラファングルコシネートが挙げられるが、これに限定されない。スルフォラファングルコシネートは、ブロッコリーの芽やカリフラワーの芽に多く含まれる。
【００１９】
スルフォラファンの塩の例としては、たとえば酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルスルホン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、及びウンデカン酸塩のような酸付加塩；並びに、アンモニウム塩、ナトリウム及びカリウム塩のようなアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミンのような有機塩基との塩、及びアルギニン及びリジンのようなアミノ酸との塩といった塩基性塩が挙げられるが、これらに限定されない。
＜抗腫瘍剤、アポトーシス促進剤＞
本発明は、乳酸菌とスルフォラファンとを含む、抗腫瘍剤に関する。
【００２０】
本明細書において「腫瘍」とは、遺伝子変異によって自律的で制御されない増殖を行うようになった細胞集団をいい、良性腫瘍および悪性腫瘍を含む。本明細書において、用語「悪性腫瘍」は用語「がん」と交換可能に用いられる。用語「がん」は、上皮由来の癌腫である癌、肉腫、および白血病等の血液悪性腫瘍も含む広い意味で用いられる。上皮由来の癌腫である癌の例としては、胃癌、大腸癌、胆嚢癌、胆管癌、膵臓癌、十二指腸癌、腎臓癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮癌、乳癌、皮膚癌、肝細胞癌、舌癌、食道癌、咽頭癌等が挙げられるが、これらに限定されない。肉腫の例としては、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、皮膚線維肉腫、脂肪肉腫、筋肉腫、血管肉腫、カポジ肉腫、リンパ管肉腫、滑膜肉腫、骨肉腫等が挙げられるが、これらに限定されない。血液悪性腫瘍の例としては、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２１】
本発明の抗腫瘍剤は、腫瘍の増殖を抑制することによって、抗腫瘍効果を発揮する。
【００２２】
抗腫瘍効果は、固形の腫瘍の場合は、腫瘍の大きさが小さくなること、または腫瘍がなくなることを指標に評価することができる。また、血液悪性腫瘍の場合は、血液中の悪性腫瘍細胞の数が少なくなること、またはなくなることを指標に評価することができる。
【００２３】
本発明はまた、乳酸菌とスルフォラファンとを含む、腫瘍細胞に対するアポトーシス促進剤にも関する。
【００２４】
腫瘍細胞に対するアポトーシス促進効果は、目的の腫瘍細胞に誘導されたアポトーシスを検出することによって評価することができる。アポトーシスの誘導は、細胞膜の変化を利用した検出法、アポトーシス特有の酵素活性を利用した検出法、核の断片化を利用した検出法等の公知の手法によって検出することができる。具体的には、実地例に示したように、アポトーシス誘導によってDNAの断片化・分解が生じた結果、G1期の細胞よりDNA含量が少ない細胞の分画（sub-G1細胞）を、フローサイトメトリー等によって検出することができる
乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせが高い抗腫瘍効果または腫瘍細胞に対する高いアポトーシス促進効果を示すメカニズムは、理論に拘束されるものではないが、たとえば以下のようなものが考えられる。すなわち、スルフォラファンによって、乳酸菌の免疫賦活作用が増強され、免疫担当細胞が活性化されることにより、腫瘍細胞がアポトーシスを引き起こすことが考えられる。
【００２５】
本発明では、乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせをそのまま抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤として用いてよい。また、乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせに薬理学的に許容可能な担体や賦形剤を添加したものを、抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤として用いることもできる。担体の例としては、培地、水、生理食塩水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等が挙げられる。賦形剤の例としては、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、デキストリン、シクロデキストリン、キサンタンガム、グァーガム、アラビアガム、トラガントガム、ジェランガム、ローカストビーンガム、カラギーナン、ペクチン、寒天等が挙げられる。また、製剤化において一般的に使用される乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤等を適宜配合することもできる。
【００２６】
本発明の抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤の有効成分である乳酸菌の含量、およびスルフォラファンの含量は、効果面を考慮して任意に決定することができる。
【００２７】
たとえば乳酸菌としてラクトバチルス・ペントーサスの菌体を用いる場合は、菌体の乾燥重量として抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤中に０．００００１〜９０重量％含まれることが好ましく、０．０００５〜５０重量％含まれることがより好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがさらに好ましい。あるいは、菌体数として、１．０×１０２〜１．０×１０１２個／ｇの範囲内であることが好ましく、１．０×１０６〜１．０×１０１２個／ｇの範囲内であることがより好ましい。また、ラクトバチルス・ペントーサスの菌体処理物を用いる場合は、固形成分重量として抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤中に０．００００１〜９０重量％含まれることが好ましく、０．０００５〜５０重量％含まれることがより好ましく、０．０００１〜１０重量％含まれることがさらに好ましい。また、ラクトバチルス・ペントーサスの菌体と菌体処理物とを組み合わせて用いる場合は、菌体の乾燥重量と菌体処理物の固形成分重量とを合わせて、抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤中に０．００００１〜９０重量％含まれることが好ましく、０．０００５〜５０重量％含まれることがより好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがさらに好ましい。
【００２８】
また、スルフォラファンは、抗腫瘍剤またはアポトーシス促進剤中に０．０００１〜５０重量％含まれることが好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがより好ましく、０．０１〜１重量％含まれることがさらに好ましい。
＜組成物＞
本発明はまた、乳酸菌とスルフォラファンとを含む、組成物にも関する。
【００２９】
本発明の組成物は、高い抗腫瘍効果または腫瘍細胞に対する高いアポトーシス促進効果を有するため、腫瘍細胞の増殖を阻害する目的に好適に用いることができる。
【００３０】
本発明では、乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせをそのまま本発明の組成物として用いてよい。また、乳酸菌とスルフォラファンとの組み合わせに薬理学的に許容可能な担体や賦形剤を添加したものを、本発明の組成物として用いることもできる。担体の例としては、培地、水、生理食塩水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン等が挙げられる。賦形剤の例としては、ブドウ糖、ショ糖、乳糖、デキストリン、シクロデキストリン、キサンタンガム、グァーガム、アラビアガム、トラガントガム、ジェランガム、ローカストビーンガム、カラギーナン、ペクチン、寒天等が挙げられる。また、製剤化において一般的に使用される乳化剤、緊張化剤（等張化剤）、緩衝剤、溶解補助剤、防腐剤、安定化剤、抗酸化剤等を適宜配合することもできる。
【００３１】
本発明の組成物の利用形態は特に制限されない。カプセル剤、キャンデー、ドロップ、錠剤、顆粒剤、散剤、粉末剤、カプセル剤等の固形剤や、通常液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤等に製剤化することもできる。また、カプセル剤の内部組成物としても利用することができる。
【００３２】
本発明の組成物の有効成分である乳酸菌の含量、およびスルフォラファンの含量は、効果面を考慮して任意に決定することができる。
【００３３】
たとえば乳酸菌としてラクトバチルス・ペントーサスの菌体を用いる場合は、菌体の乾燥重量として組成物中に０．００００１〜９０重量％含まれることが好ましく、０．０００５〜５０重量％含まれることがより好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがさらに好ましい。あるいは、菌体数として、１．０×１０２〜１．０×１０１２個／ｇの範囲内であることが好ましく、１．０×１０６〜１．０×１０１２個／ｇの範囲内であることがより好ましい。また、ラクトバチルス・ペントーサスの菌体処理物を用いる場合は、固形成分重量として組成物中に０．００００１〜９０重量％含まれることが好ましく、０．０００５〜５０重量％含まれることがより好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがさらに好ましい。また、ラクトバチルス・ペントーサスの菌体と菌体処理物とを組み合わせて用いる場合は、菌体の乾燥重量と菌体処理物の固形成分重量とを合わせて、組成物中に０．００００１〜９０重量％含まれることが好ましく、０．０００５〜５０重量％含まれることがより好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがさらに好ましい。
【００３４】
また、スルフォラファンは、組成物中に０．０００１〜５０重量％含まれることが好ましく、０．００１〜１０重量％含まれることがより好ましく、０．０１〜１重量％含まれることがさらに好ましい。
【００３５】
本発明の組成物は、乳酸菌およびスルフォラファンが有する各種の保健機能（又は生理作用）を発揮することが期待されるため、例えば、健康食品、機能性食品（特定保健用食品、条件付き特定保健用食品、栄養機能食品が含まれる）、特別用途食品、健康補助食品等として好適に利用できる。
【００３６】
本発明の組成物は、その成分である乳酸菌およびスルフォラファンなどの保健機能成分（関与成分）に起因して、種々の保健機能（又は生理作用）を発揮する。ここで、保健機能成分（関与成分）とは、一定量摂取することで健康の維持増進に役立つ成分をいう。従って、本発明の組成物は、そのような保健機能成分に起因して発揮される機能に基づく用途に用いられ得る。保健機能成分である乳酸菌およびスルフォラファンに起因して発揮される機能に基づく用途の例としては、限定はされないが、腸内環境の改善、免疫賦活化、免疫活性化、腫瘍細胞の増殖抑制、および寿命の延長のための用途等が挙げられる。
【００３７】
たとえば、本発明の組成物は、乳酸菌およびスルフォラファンに起因して発揮される機能に基づく用途に用いるための、乳酸菌およびスルフォラファンを含む組成物、特に飲食品であることができる。
【００３８】
また、本発明の組成物は、乳酸菌およびスルフォラファンに起因して発揮される機能に基づく用途に用いられるものである旨の表示を付した、乳酸菌およびスルフォラファンを含む組成物、特に飲食品であることができる。本願明細書において、当該表示及び機能表示のような表示は、組成物自体に付されてもよいし、組成物の容器又は包装に付されていてもよい。
【００３９】
以下に本発明の実施例を示すが、本発明を制限するものではない。
【実施例】
【００４０】
（１）材料と方法
＜１日目＞
ヒト大腸癌細胞であるHT-29細胞およびHCT116細胞（以下、単に大腸癌細胞と記載する）は、American Type Culture Collectionより入手した。
【００４１】
大腸癌細胞は、共培養用の12穴 プレートに3 × 104 細胞/1 ml/穴となるように播種し、DMEM培地（日水製薬株式会社）を用いて、37 ℃、5 % CO2の条件下で培養した。
【００４２】
健常者の静脈より採取した血液を、血液分離溶液Lymphoprep（リンホプレップ）（商標）（Axis-Shield社）を用いた比重遠心に供し、末梢血単核細胞（PBMC）を分離した。得られたPBMCを、RPMI培地（日水製薬株式会社）を用いて3 × 106 細胞/ml の濃度に調整し、ラクトバチルス・ペントーサスS-PT84株(10 μg/ml)を添加した。
＜２日目＞
ラクトバチルス・ペントーサスS-PT84株刺激の24時間後に、BD Falcon 0.4μｍ セルカルチャーインサート（コーニングインターナショナル株式会社）を用い、PBMCと大腸癌細胞との共培養を開始した。ここでスルフォラファン(5 μM, 20 μM)も添加した。
＜４日目＞
共培養開始から48時間後にセルカルチャーインサートを除去した。上清中の大腸癌細胞を回収し、さらにtrypsin処理によって付着した大腸癌細胞をはがして回収した。回収した大腸癌細胞をPBSで洗浄した後、PI-PBS (0.1% Triton-X, 10 μg/ml propidium iodide)で懸濁した。FACSCalibur（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を用いてフローサイトメトリーを施行し、FL-2Aを測定した。Sub-G1の細胞の割合をCell Quest（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を用いて解析した。
（２）結果
結果を図１Ａ（HT-29細胞）および図１Ｂ（HCT116細胞）に示す。
【００４３】
ラクトバチルス・ペントーサスS-PT84株およびスルフォラファンの組み合わせを、大腸癌細胞とPBMCとの共培養系に添加した場合、ラクトバチルス・ペントーサスS-PT84株のみ、またはスルフォラファンのみを大腸癌細胞とPBMCとの共培養系に添加した場合と比較して、有意に大腸癌細胞のアポトーシス誘導効果が増加することが示された。
【図１Ａ】
2016150904.tif 000003
【図１Ｂ】
2016150904.tif 000004