(57)【要約】【課題】ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸の治療に用いる免疫グロブリンＧ組成物を提供すること等。【解決手段】本発明の免疫グロブリンＧ組成物は、間接クームス試験（ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０）に対する陰性の結果に基づく抗Ａ抗体の抗体価および抗Ｂ抗体の抗体価をそれぞれ含有している。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸の治療またはＡＢＯ不適合によって引き起こされる新生児の溶血性の疾患の治療のための医薬としての、間接クームス試験（ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０）に対する陰性の結果に基づく抗Ａ抗体の抗体価および抗Ｂ抗体の抗体価をそれぞれ含有していることを特徴とする治療学的な使用のための免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）組成物。
【請求項２】
上記間接クームス試験に対する陰性の結果に基づく上記抗Ａ抗体の抗体価および上記抗Ｂ抗体の抗体価が、希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果（希釈比の分母）”）で、それぞれ、６４であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
上記間接クームス試験に対する陰性の結果に基づく上記抗Ａ抗体の抗体価および上記抗Ｂ抗体の抗体価が、希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果（希釈比の分母）”）で、それぞれ、０〜８であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
上記間接クームス試験は、３０ｇ／ｌに調整された初期濃度を有しているＩｇＧ溶液を用いて行われることを特徴とする、請求項１から３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項５】
残留している多反応性のＩｇＧの含有量が、ＩｇＧの総含有量に対して０．０１％〜０．１％であることを特徴とする、請求項１から４の何れか１項に記載の組成物。
【請求項６】
安定化剤をさらに含有していることを特徴とする、請求項１から５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項７】
上記安定化剤は、糖アルコール、好ましくはマンニトールまたはソルビトール、グリシンおよび非イオン性の界面活性剤の混合物であることを特徴とする、請求項１から６の何れか１項に記載の組成物。
【請求項８】
静脈内に注射可能であることを特徴とする、請求項１から７の何れか１項に記載の組成物。
【請求項９】
以下の工程を包含している方法によって取得されることを特徴とする、請求項１から８の何れか１項に記載の組成物：
ａ）ウイルスを不活性化する工程を含んでいる、エタノール分画および／またはクロマトグラフ分離によってＩｇＧ濃縮物を調製する工程、
ｂ）担体の混合物、すなわち血液型ＡおよびＢに免疫原性が類似したオリゴ糖基を用いてグラフトされた充填材における上記ＩｇＧ濃縮物の透過によって、免疫親和性クロマトグラフィーを行う工程、および
ｃ）ウイルスおよび／または２０ｎｍよりも大きい粒子を排除ろ過する工程。
【請求項１０】
上記方法の工程ａ）が、血漿またはＩｇＧを豊富に含む血漿の画分を用いた脂質混入物の沈殿による前精製、アルカリｐＨにて行われる陰イオン交換樹脂担体における一回のクロマトグラフィー、およびｐＨ４〜７の適切な緩衝液を用いた１工程におけるＩｇＧの選択的な溶出を含んでいることを特徴とする、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
上記方法の上記オリゴ糖基は、血液型ＡおよびＢのエピトープに対応する三糖類であることを特徴とする、請求項９または１０に記載の組成物。
【請求項１２】
上記方法の上記ウイルスを不活性化する工程は、溶媒／界面活性剤によって実施されることを特徴とする、請求項８から１１の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
血液型Ａに抗原性が類似している基がグラフトされた担体および血液型Ｂに抗原性が類似している基がグラフトされた担体の上記混合物は、上記各担体が、それぞれ、２５／７５〜７５／２５（ｖ／ｖ）、好ましくは、５０／５０（ｖ／ｖ）の割合であることを特徴とする、請求項８から１２の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１４】
上記方法は、限外ろ過および滅菌ろ過によって濃縮する工程を包含していることを特徴とする、請求項８から１３の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１５】
上記滅菌ろ過は、ナノろ過によって行われることを特徴とする、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
上記方法は、工程ｃ）の後に、上記ＩｇＧ濃縮物に対して、保存安定化剤を添加する工程を包含していることを特徴とする、請求項９から１５の何れか１項に記載の組成物。
【請求項１７】
ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸の治療が意図された医薬を製造するための、請求項１から１６の何れか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１８】
ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸またはＡＢＯ新生児溶血性疾患を治療する方法であって、
請求項１から１７の何れか１項に記載のＩｇＧ組成物を、これを必要とする人に対して投与する工程を含んでいることを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
〔技術分野〕
本発明は、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸を治療することを目的とした医薬を製造するための、抗Ａ抗体（ＡｃａＡ）および抗Ｂ抗体（ＡｃａＢ）を減少させた免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）濃縮物の使用に関する。
【０００２】
以下の説明において、大括弧（[ ]）内の参考文献は、実施例の後に示した参考文献一覧を参照する。
【０００３】
〔背景技術〕
新生児溶血性疾患（ＮＨＤ）は、母親の抗赤血球抗体と子供の赤血球との間の不適合に起因する、胎児または新生児の障害である。抗赤血球抗体は、子宮内で既に生じている溶血の原因となり、そして、臨床像の重大さによっては、子供における重度の貧血の原因となることもある。（ヘモグロビンを構成している）ヘムの分解産物であるビリルビンが血液中に輸送されると、上記臨床像は、子供における黄疸を伴う高ビリルビン血症から、浮腫（胎児水腫）を有する非常に重度の病変および死産児の出産へと及ぶ可能性がある。未治療の高ビリルビン血症は、新生児における核黄疸を引き起こす可能性がある。
【０００４】
有効な治療（子宮内／出生後の交換輸血、ＵＶ新生児療法）に加えて、今日の有効な手段はＮＨＤを予防するために利用できるので（抗Ｄ予防またはＲＨ因子）、臨床像の知識およびその診断用調査の知識は、一層、非常に重要である。
【０００５】
それでもなお、危険性が時間内に認識された場合、すなわち妊娠前に（特に、母親の血液型および場合によっては父親の血液型を決定することによって）、妊娠開始時に（場合によっては、血液型の確認および抗Ａ／抗Ｂ免疫抗体を含むアロ抗体の調査によって）、または妊娠中に（３〜４週毎に抗体価における変化を調査することによって）認識された場合に限り、この全てが可能である。さらに、子供の推定血液型を推定することが可能であるので、子供の父親の血液型を決定することは、非常に有用（推定Ｒｈ遺伝子型についての結論に至るための指針を有する有用な表現型）であるかもしれない。
【０００６】
ＮＨＤの真の危険性は、母親の血液型またはアロ抗体の低い抗体価および子供の推定血液型に従って推定され得る。子供の推定血液型は、父親の血液型から決定される。母親が、危険性を有する血液型（例えば、ＯまたはＲｈ  Ｄ陰性）の一部をなしている場合は、いかなる状況であっても、中止された抗体価における変化を調査すべきである。
【０００７】
まれに、種々の類似した危険性がある場合に、絨毛生検から子供の血液型の生体分子を決定することが示唆されるかもしれない。
【０００８】
ＡＢＯ不適合は、通常、血液型Ｏの母親と、血液型ＡまたはＢの子供との場合に生じる。
【０００９】
ＩｇＭアイソタイプの抗ＡＢＯ抗体は、自然の状態において存在し、胎盤関門を通過しない。ＡＢＯ式血液型は、出生時には、まだ完全に発達して発現していない。このため、血液型の最終的な決定は、子供が６ヶ月齢になる前に行われるべきではないが、血液型ＡまたはＢは、妊娠の初期段階にて、胎児の赤血球において検出される可能性がある。このような理由で、この一群においてさえも、母親の免疫が、比較的頻繁におこる。さらに、抗Ａ  ＩｇＧ免疫抗体および抗Ｂ  ＩｇＧ免疫抗体は、妊娠または過去の輸血に関わらず、異種タンパク質によって誘導される可能性がある。しかし、抗Ａ  ＩｇＧ抗体または抗Ｂ  ＩｇＧ抗体は、ほとんどの場合は、Ｒｈ不適合の場合における同様の抗体よりも低い溶血能を有している。それゆえ、ＮＨＤにおける変化は、より目立たないものである。
【００１０】
黄疸は、出生後２４時間〜７２時間の間に、７０％の患者において出現する。全ての患者において、多くの場合に、光線療法の成功する開始の根拠となる臍帯血の結果を受理する前に、黄疸は、視覚的または機器によって検出される。黄疸の診断が提示されない限りは、どのような場合であっても、血液型の結果の知見は、治療学的、予防的または治癒的な手段をもたらさない。血液型の結果の知見によって、せいぜい、新生児の着色化が現れる危険性が高いことがわかるだけである。
【００１１】
黄疸は、新生児期において観察される、特に最も頻度の高い症状である。
【００１２】
第１の特徴は、大人とは異なり、新生児における黄疸は、極めて多くの場合に、間接型ビリルビン（ＢＲ）を伴っている。
【００１３】
組織体における蓄積によるこの着色は、全ての組織、特に、肝臓（中でも、この蓄積に注意が払われる。）、血液（部分的に運搬し、そして色素を蓄える。）、皮膚および脳に関連し、ビリルビン性脳障害の一定の潜在的な危険性を有し、これによって、診断行為および治療行為において最大の困難を示す。
【００１４】
伝統的に、子供は、静脈注射用免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）および光線療法によって治療され、そして、最も深刻な場合は、交換輸血によって治療される。
【００１５】
研究は、ＡＢＯ不適合溶血性疾患および／またはＲｈ不適合溶血性疾患に罹患している新生児の、高用量のＩＶＩＧ（静脈注射用免疫グロブリン）を用いた治療に関係し、そして、研究によって、ＩＶＩＧの投与によって、光線療法による治療の継続期間のみならず、交換輸血を必要としている子供の数が減少することが示された（Gottstein et al. (2003), Archives of Disease in Childhood; Fetal and Neonatal Edition; vol. 88, no. 1, p. F6-F10[2]）。
【００１６】
また、研究によって、ＡＢＯ不適合溶血性疾患および／またはＲｈ不適合溶血性疾患に罹患している新生児に対する、高用量のＩＶＩＧを用いた治療が、溶血、血清中のビリルビンのレベルおよび交換輸血を実施する必要性を軽減することが示された（Alplay et al (1999), Acta Paediatrica, International Journal of Paediatrics; vol. 88, no. 2, p. 216-219[3]）。
【００１７】
しかし、研究によって、Ｒｈ不適合およびＡＢＯ不適合に起因する同種免疫性の溶血性黄疸に罹患している新生児に対するＩＶＩＧの投与が、ＡＢＯ同種免疫の治療よりも、Ｒｈ同種免疫の治療に対して有意によい結果を生じさせることが示された。これは、光線療法による治療と比較して、ＩＶＩＧの投与による治療の終わりに、Ｒｈ不適合に起因する高ビリルビン血症を有している新生児の交換輸血の必要性が低下するためである。一方で、ＡＢＯ不適合を有している新生児の場合には、光線療法およびＩＶＩＧの投与は、結果の点では違いを示さなかった（Nasseri et al. (2006) Saudi Med J.; 27(12): 1827-30[4]）。
【００１８】
さらに、高用量のＩＶＩＧの投与は、ＡＢＯ不適合を有している一部の患者において危険性を伴う治療であることが考慮されるべきである。これは、ＩＶＩＧがヒト血漿に由来する免疫グロブリンの濃縮物であり、そして、この点で、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を誘導するためである。
【００１９】
多くの科学的な刊行物は、エタノールを用いた沈殿またはオクタン酸による沈殿（Steinbuch et al. (1969) Rev. Franc. Et. Clin, et Biol., XIV, 1054 [5]）のような従来の分画技術によって取得された免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）の注射が、治療を受けている患者において、偶発的な溶血を引き起こし、いくつかの重篤な溶血を誘発することを示唆している。一例として、Buchta C. et al, Biologicals. 33, 2005, 41-48 ([6]）、Wilson J.R. et al, Muscle & Nerve, 29(9), 1997, 1142-1145 ([7]、Copelan E.A. et al, Transfusion, 26, 1986, 410-412 ([8])およびMisbah S.A. et al, Drug Safety, 9, 1993, 254-262([9])による刊行物が引用され得る。特に、直接クームス試験（ＤＣＴ）によって実施される、溶血を有している患者の血液におけるこれらのＩｇＧの作用の研究は、赤血球が、その表面に存在しているＡ抗原、Ｂ抗原またはＤ抗原に対する免疫グロブリンによって覆われ、それゆえ赤血球の溶血を引き起こすことを示した。
【００２０】
このような理由で、現在市販されているＩｇＧは、高い抗体価の抗Ａまたは抗Ｂの存在を回避するために、選ばれた血漿から取得されている。
【００２１】
ヨーロッパ薬局方（間接クームス試験（ＩＣＴ）としても言及された方法２．６．２０，１９９７）によれば、ＩＶＩＧは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける間接クームス試験（ＩＣＴ）において、３０ｇ／ｌに調整された初期濃度を有するＩｇＧの溶液を用いた１／６４希釈にて、Ａ赤血球またはＢ赤血球の凝集を示してはいけない。言い換えれば、ヨーロッパ薬局方によって許容される最大の抗体価は、ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０に従って、６４（希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果−希釈比の分母”））より低い必要がある。すなわち、１／６４に希釈されたＩＶＩＧの組成物は、赤血球の凝集を引き起こしてはいけない。
【００２２】
ヨーロッパ薬局方に従った１／６４よりも低い希釈のＩＶＩＧの溶液の存在下において、ＩＣＴ試験に対する陰性の結果、すなわち赤血球の凝集がなければ、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体がヨーロッパ薬局方によって許容される低いレベルであることを証明している。しかし、ヨーロッパ薬局方によって規定された試験に対して陰性の結果を与えるＩｇＧの濃度、すなわち、１／６４より低い希釈であっても、溶血反応の危険性を排除することができない（[6]）。
【００２３】
さらに、米国および日本の薬局方は、残留している抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の含有量を制御する必要性に関する規定を全く含んでいない。
【００２４】
抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体は、エタノール分画のような従来の方法によるＩｇＧ濃縮物の調製の間に、部分的に排除される。しかし、残留している含有量は、ヨーロッパ薬局方の高い基準の制限値よりも多い可能性があることが観察されている。さらに、出願人によって開発された方法、すなわち出願人の特許出願ＷＯ０２／０９２６３２に従って調製された濃縮物は、エタノール分画によって得られたＩｇＧ濃縮物よりも抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を多く含有している。ＩｇＧ濃縮物のいくつかのバッチは、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体のそれぞれに関して、ヨーロッパ薬局方によって許容される閾値よりも含有量が多い可能性がある。
【００２５】
従って、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸のために、溶血を引き起こす虞がなくＡＢＯ不適合に罹患している新生児に対して投与可能な、利用可能な治療の必要性がある。
【００２６】
〔本発明の説明〕
この目的のために、そしてその広範囲の研究の間に、出願人は、驚くべきことに、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの間接クームス試験に対する陰性の結果に一致する抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の各抗体価を有している免疫グロブリンＧの組成物が、従来技術の組成物に関して認められる好ましくない副次的効果を引き起こすことなく、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合よって引き起こされる新生児の黄疸またはＡＢＯ不適合によって引き起こされる新生児の溶血性疾患の治療のために用いられ得ることを示した。
【００２７】
それゆえ、本発明は、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合よって引き起こされる新生児の黄疸またはＡＢＯ不適合によって引き起こされる新生児の溶血性疾患を治療するための医薬としての、治療学的な使用のためのヘモグロビンＧ（ＩｇＧ）組成物に関し、間接クームス試験（ヨーロッパ薬局方の方法２．５．２０）に対する陰性の結果に一致する抗Ａ交代および抗Ｂ抗体の各抗体価を含んでいる。
【００２８】
“免疫グロブリンＧ”は、本発明の意味の範囲内で、ポリクローナルＩｇＧを意味し、これは、血漿または既にＩｇＧが豊富な血漿の画分から取得され得る。治療学的な使用のためのＩｇＧの組成物または濃縮物は、有利に、一般に使用される濃度のＩｇＧ、好ましくは、５０ｇ／ｌ〜１００ｇ／ｌの濃度のＩｇＧを有している。
【００２９】
“治療学的な使用”は、本発明の意味の範囲内で、患者の健康状態の改善、例えば、黄疸の毒性の軽減、またはその全体的もしくは部分的な消失、さらには患者の治癒を目的とした使用を意味する。
【００３０】
“抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の各抗体価”は、本発明の意味の範囲内で、ヨーロッパ薬局方（ヨーロッパ薬局方２．６．２０）において規定され、そして間接クームス試験（ＩＣＴ試験）によって測定される抗体価を意味する。言い換えれば、上記抗体価は、ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０に従って凝集が検出される希釈である。同様に言い換えれば、上記抗体価は、溶血が観察される希釈である。
【００３１】
ＩＣＴ試験（ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０）は、本発明のＩｇＧ組成物、すなわちヒトＩｇＧの単位を対象にする抗体（抗グロブリン）の溶液と接触する、赤血球の懸濁液からなる。これらの抗体は、赤血球に付着する抗Ａ抗体または抗Ｂ抗体に対して固定され、そしてそれゆえ、ＩｇＧ同士の架橋を形成することによってこれらを凝集させ得る。抗Ａ抗体または抗Ｂ抗体に関する調査からなる試験は、この従来の血液学的な血清試験（間接クームス試験）に直接的に端を発する。
【００３２】
本発明の背景において、ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０は、以下の方法において用いられ得る：本発明のＩｇＧ組成物の２つの同一のシリーズの希釈を、９ｇ／ｌの塩化ナトリウムＲ溶液において調製する。第１シリーズの各希釈に対して、塩化ナトリウム溶液を用いて予め３回洗浄された５％Ｖ／Ｖの赤血球Ａの懸濁液を等量添加する。第２シリーズの各希釈に対して、塩化ナトリウム溶液を用いて予め３回洗浄された５％Ｖ／Ｖの赤血球Ｂの懸濁液を等量添加する。懸濁液を、３７℃にて３０分間インキュベートし、その後、塩化ナトリウム溶液を用いて細胞を洗浄する。各懸濁液を、多目的ヒト抗グロブリン試薬と３０分間接触させる。混合物を遠心分離することなく、あらゆる凝集物が顕微鏡検査によって探し出される。希釈前のＩｇＧ組成物が３０ｇ／ｌよりも多い免疫グロブリン含有量を有している場合は、この試験に用いられる希釈物を調製するために、３０ｇ／ｌの濃度を達成するための希釈が行われるべきである。１／６４に希釈すると、いかなる凝集の徴候も現れない。
【００３３】
ＩｇＧ濃縮物において、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体のレベルが非常に低い場合は、ＩＣＴ試験は陰性であり、ヨーロッパ薬局方の条件下においては一層、ヒト抗ＩｇＧ抗体を添加したとしても赤血球の凝集反応はもはや起こらない。これは、赤血球およびヒト抗ＩｇＧ抗体に対して固定される抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の結合による赤血球同士の架橋を形成するには、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の密度が低すぎるためである。
【００３４】
ヨーロッパ薬局方試験２．６．２０、すなわちＩＣＴ試験は、規制レベルにて認識される唯一の試験であり、そして、欧州において販売されている全てのＩＶＩＧは、この試験に従わなければならない。すなわち、１／６４希釈において凝集が生じないようにしなければならない。薬局方によって許容された最小の抗体価は、６４未満（＜６４）（希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果−希釈比の分母”）でなければならない。すなわち、１／６４希釈にて、試験された産物は、ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０の記載に基づき、凝集を引き起こさない。
【００３５】
“間接クームス試験に対する陰性の結果”は、本発明の意味の範囲内で、多目的ヒト抗グロブリンの存在において、本発明に係る組成物のＩｇＧと接触させる場合に、ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０に従って測定された、赤血球の凝集が存在しないことを意味する。
【００３６】
本発明に係る免疫グロブリンＧの組成物は、それゆえ、６４（希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果（希釈比の分母）”）のｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける間接クームス試験に対する陰性の結果、すなわち１／６４倍の希釈に対する陰性の結果に基づいて、有利に、それぞれの抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価を有し得る。
【００３７】
本発明に係る免疫グロブリンＧ組成物は、有利に、０〜８（有利に０は排除される）の抗体価（希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果−希釈比の分母”））を有している。これらの抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価では、本発明に係るＩｇＧ組成物は、ＩＣＴに従った結果を有する。すなわち凝集がない。すなわち、０（希釈なし）〜１／８（有利に０は排除される）の希釈において、本発明に係るＩｇＧ組成物は、ヨーロッパ薬局方の方法２．６．２０の記載に従って凝集を引き起こさない。それゆえ、８の抗体価は、試料の第８番目の希釈（１／８希釈）を超えると凝集が観察されることを意味する。０の抗体価は、試料が希釈されない場合であっても検出される凝集がないことを意味する。
【００３８】
有利に、自然数（希釈画分の下方部分）として与えられた抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価は、４より小さい、または２より小さい。そのようなＩｇＧ組成物は、それぞれ４回希釈（□に希釈）または２回希釈（□に希釈）した場合に、凝集を引き起こさない。
【００３９】
それゆえ、本発明を実施するためのＩｇＧ組成物（または濃縮物）は、標準的なＩｇＧ濃縮物、すなわち、エタノール分画および／または問題となっている抗体を排除する補助的な工程を経ることなくクロマトグラフに関連する精製技術を使用することによって取得されたＩｇＧ濃縮物において観察されるよりもかなり低い抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価を有している。
【００４０】
さらに、この抗体価は、ヨーロッパ薬局方によって許容される閾値よりもかなり低く、治療中の一部の患者における溶血の危険性を極めて有意に抑制する。本発明に係るＩｇＧ組成物を用いた間接クームス試験の実施は、それ自体が希釈されていないＩｇＧの試料を用いたとしても陰性の結果となり得る。
【００４１】
本発明に係るＩｇＧ濃縮物は、それゆえ、赤血球に存在しているエピトープに対する抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の活性化原理の顕著な欠如によって規定される。
【００４２】
出願人は、記載されたＩｇＧ組成物が、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸の治療に特に適していることを見出した。
【００４３】
有利に、本発明に係る免疫グロブリンＧ組成物は、それゆえ、有利に、それぞれの抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価が、６４、希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果（希釈比の分母”）と同等、または０〜８、または４より小さい、例えば、２より小さい。有利に、これらの場合において、クームス試験は、３０ｇ／ｌに調整された初期濃度を有するＩｇＧ溶液を用いて実施される。
【００４４】
“ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸”は、本発明の意味の範囲内において、ＡＢＯ式血液型に関する不適合によって引き起こされる新生児の溶血性疾患（ＮＨＤ）に付随して起こる黄疸を意味する（ＡＢＯ溶血性疾患、ＡＢＯ不適合を有する新生児の溶血性疾患またはＡＢＯ不適合が原因である同種免疫性溶血性黄疸ともいう）。この黄疸は、いくつかの臓器におけるビリルビンの蓄積が原因である。ビリルビンは、血液中に輸送されたヘムの分解産物である。
【００４５】
より具体的には、記載されたＩｇＧ組成物が投与される可能性がある患者は、早産の新生児、または、例えば、出生から出生後第２８日目までの時期に生まれた新生児であり得る。これらの新生児は、通常、ＡＢＯ溶血性疾患を原因とする高ビリルビン血症を示し、抗グロビン新生児試験（間接クームス試験）に対して陽性であり、そして、網状赤血球の数が多い（１０％以上）。これらの幼児は、男児または女児であり得る。
【００４６】
本発明の組成物は、それゆえ、ＡＢＯ不適合によって引き起こされる新生児の溶血性疾患を治療するための医薬としても用いられ得る。
【００４７】
上記で規定されたようなＩｇＧ組成物、ＩｇＧ濃縮物は、多反応性のＩｇＧの含有量が非常に少ない。例えば、０．０１％〜０．１％、特に、０．７％〜０．１％であり得る。この状況において、多反応性のＩｇＧの含有量は、モル％または重量％を意味する。この含有量は、特許出願ＥＰ１  ０５９  ０８８において、出願人によって記載された方法によって決定される。
【００４８】
例えば、本発明に係る免疫グロブリンＧ組成物は、有利に、３０ｇ／ｌに調整された初期濃度を有するＩｇＧ溶液を用いて実施されたクームス試験において、それぞれ、抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価が、６４、希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果（希釈比の分母”）、または０〜８、または４より小さい、例えば、２より小さく、例えば、０．０１％〜０．１％、特に０．０７％〜０．１％である多反応性のＩｇＧ含有量を有している可能性がある。
【００４９】
“多反応性のＩｇＧ”は、本発明の意味の範囲内において、上記で規定したＩｇＧ組成物に含まれているＩｇＧ画分を意味し、意図的な免疫に由来せず、且つ自己抗原に対する可変的な親和性を発現しない天然の抗体と、抗イディオタイプ抗体（いわゆる、他の抗体の可変領域に対する抗体）と、上記で規定されたＩｇＧ組成物の精製方法の異なる工程の間に行われた処理の後で多反応性となる抗体との合計に相当する。有利に、本発明において用いられるＩｇＧ組成物は、多反応性をほぼ完全に有さない点で、市販されている他のＩｇＧ組成物と区別される。しかし、出願人は、全く驚くべきことに、非常に低いレベルの抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の組み合わせを有するＩｇＧ組成物において多反応性をほぼ完全に有さないことが、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸またはＡＢＯ不適合によって引き起こされる新生児の溶血性疾患の治療にとって重要な特徴であることを発見した。それゆえ、本発明において用いられるＩｇＧ組成物は、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸またはＡＢＯ不適合によって引き起こされる新生児の溶血性疾患を治療するための医薬として有効である。さらには、（具体的には、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を低下させることによって）赤血球に関する望ましくない反応を回避すること、および多反応性のＩｇＧの存在に起因する望ましくない副次的反応（具体的には、熱、悪心および頭痛）を軽減する。
【００５０】
本発明の組成物は、１以上の安定化剤を含有してもよい。
【００５１】
“安定化剤”は、本発明の意味の範囲内において、ＩｇＧ組成物を長期間に渡って保存するための化合物を意味する。安定化剤は、具体的には、ＩｇＧ組成物を特定の期間に渡って維持し得る。さらに、安定化剤は、有利に、治療学的な使用に適用される。
【００５２】
安定化剤は、有利に、特許出願ＷＯ２２０４／０９１６５６において出願人によって開発された安定化剤の内の１種、すなわち、糖アルコール（好ましくはマンニトール、ソルビトールまたはこれらの異性体）、グリシンおよびＴｗｅｅｎＴＭ８０、ＴｗｅｅｎＴＭ２０、Ｔｒｉｔｏｎ  □  Ｘ１００またはＰｌｕｒｏｎｉｃ  □  Ｆ６８のような非イオン性の界面活性剤の混合物であり得、これらの全ては、薬学的な水準において許容され得る化合物である。
【００５３】
ＩｇＧ組成物におけるマンニトールの最終濃度は、３０ｇ／ｌ〜５０ｇ／ｌであり得、グリシンの最終濃度は、７ｇ／ｌ〜１０ｇ／ｌであり得る。これらの化合物の濃度は、ＩｇＧ組成物における最終濃度を表している。
【００５４】
有利に、製剤の濃度は、液体および／または凍結乾燥された形態を安定化するために、出願人によって決定される。
【００５５】
本発明の組成物は、静脈内または皮下に投与され得る。この目的のために、本発明に係るＩｇＧ濃縮物は、例えば、Ｔｗｅｅｎ□  ８０／ＴｎＢＰまたはＴｒｉｔｏｎ□  Ｘ  １００／ＴｎＢＰ、これらの混合物を用いる、従来技術から公知の従来の溶媒／界面活性剤処理によって、および／または、感染性海綿状脳症の原因物質であるプリオンのような、溶媒／界面活性剤による殺ウイルス処理によって排除されないウイルスおよび／またはその他の高分子を排除する必要がある場合に、順番にろ過工程を行うことによって、ウイルスから保護されている必要がある。
【００５６】
本発明に係るＩｇＧ濃縮物は、ナノろ過工程に供されてもよい。
【００５７】
本発明の組成物は、適切な安定化剤の存在下において液体または凍結乾燥された形態になるように、または次の使用を待っている間、保存されるように、形成され得る。
【００５８】
有利に、上記組成物は、静脈内に投与され得る。
【００５９】
この実施形態において、本発明の組成物は、注射のための溶液、例えば、５ｇ／１００ｍｌ（５％）にて用いられる静脈内注射のための正常ヒト免疫グロブリンの溶液であり得る。
【００６０】
有利に、注射の溶液は、１ｇ／１００ｍｌ（１％）、または２ｇ／１００ｍｌ（２％）、または３ｇ／１００ｍｌ（３％）、または４ｇ／１００ｍｌ（４％）、または５ｇ／１００ｍｌ（５％）にて投与され得る。
【００６１】
有利に、注射可能な溶液のＩｇＧ投与量は、１ｇ／１００ｍｌ〜５ｇ／１００ｍｌ、または２ｇ／１００ｍｌ〜５ｇ／１００ｍｌ、３ｇ／１００ｍｌ〜５ｇ／１００ｍｌ、または５ｇ／１００ｍｌであり得る。
【００６２】
本発明を実施するための組成物は、例えば、５００ｍｇ／ｋｇ〜２０００ｍｇ／ｋｇの量にて、光線療法による治療と同時に、または光線療法による治療に引き続いて投与され得る。５００ｍｇ／ｋｇの投与にて開始し、その後、ビリルビンのレベルが低下しない場合は（公知のビリルビン血症試験によって試験され得る。）、ビリルビンのレベルが正常になるまで、５００ｍｇ／ｋｇずつ投与量を増加させることが可能である。投与は、反復して行われ得る。
【００６３】
本発明を実施するための組成物は、光線療法を同時に行うことなく投与されてもよい。投与される量は、５００ｍｇ／ｋｇ〜２０００ｍｇ／ｋｇであり得る。５００ｍｇ／ｋｇの投与にて開始し、その後、ビリルビンのレベルが低下しない場合は（公知のビリルビン血症試験によって試験され得る。）、ビリルビンのレベルが正常になるまで、５００ｍｇ／ｋｇずつ投与量を増加させることが可能である。投与は、反復して行われ得る。
【００６４】
本発明の実施に適した組成物は、ＷＯ２００７／０７７３６５公報に記載の組成物と同一であってもよい。
【００６５】
ＩｇＧ組成物は、当業者に公知の任意の方法によって取得され得る。
【００６６】
具体的には、上記組成物は、以下の工程を包含している方法によって取得され得る：
ａ）ウイルス不活性化工程を含む、エタノール分画及びクロマトグラフィー分離によってＩｇＧ組成物を調製する工程、
ｂ）担体、すなわちＡ血液型およびＢ血液型と抗原性が類似したオリゴ糖基がグラフトされた充填材の混合物においてＩｇＧ組成物を透過することによる免疫親和性クロマトグラフィーを行う工程、および
ｃ）ウイルスおよび／または２０ｎｍよりも大きい粒子を排除ろ過する工程。
【００６７】
有利に、そのような方法は、ＷＯ２００７／０７７３６５公報において記載されている。
【００６８】
そのような方法は、非常に有利に、工業規模において実施され得る。さらに、ＩｇＧ組成物を調製する工程と、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を排除する特定の工程とを組み合わせることによって、治療学的な使用のための、好ましくは、全ＩｇＧ含有量に対して０．１％より少ないレベルの多反応性のＩｇＧを含有しているＩｇＧ組成物を取得することが可能となる。さらに、そのような組成物は、望ましくないＡｃａＡおよびＡｃａＢを、ヨーロッパ薬局方において記載された試験の規制値、すなわち、６４（希釈度の逆数（“自然数として与えられた結果−希釈比の分母”））よりもはるかに少なく、そして希釈していない試料を用いたＩＣＴ試験の実施によって陰性の結果が得られるほどの抗体価で含有している。すなわち、抗体価は０である。
【００６９】
好ましくは、上記方法の工程ａ）は、当業者によって周知の方法のような、それ自体が、ＩｇＧ濃縮物を取得するための方法であり得る。それは、Cohnら（Cohn et al. 1946, J. Am. Chem. Soc. 68, 459; Oncley et al. 1949, J. Am. Chem. Soc. 71, 541 [11]）によって開発されたエタノール分画、または、例えばＥＰ０  ７０３  ９２２およびＷＯ９９／６４４６２において記載されたようなクロマトグラフ分離の場合である。特許出願ＷＯ９４／２９３３４およびＷＯ０２／０９２６３２において出願人によって開発された方法が特に好ましい。そして、特に、ＷＯ０２／０９２６３２に記載された方法が好ましい。この場合に、本発明の方法の工程ａ）は、血漿またはＩｇＧを豊富に含む血漿の画分から脂質汚染物質を沈殿させることによる前精製、アルカリｐＨにて行われる陰イオン交換樹脂担体における１回のクロマトグラフィー、およびｐＨ４〜７の適切な緩衝液による１工程におけるＩｇＧの選択的な溶出を含んでいる。
【００７０】
“脂質汚染物質”は、本発明の意味の範囲内において、免疫グロブリン以外の血漿の構成物質を意味する。
【００７１】
“ＩｇＧを豊富に含む血漿の画分”は、本発明の意義の範囲において、既に精製工程を経て、この画分のＩｇＧ濃度を増加させた血漿画分を意味する。
【００７２】
“１回のクロマトグラフィー”は、本発明の意義の範囲において、クロマトグラフィー工程が連続して繰り返されないことを意味する。
【００７３】
“１工程におけるＩｇＧの選択的溶出”は、本発明の意義の範囲において、免疫グロブリンの主要部分を溶出するための溶出工程を意味する。
【００７４】
本発明の目的のために、１工程におけるＩｇＧの選択的溶出のための緩衝液は、当業者に周知の任意の緩衝液であり得る。
【００７５】
上記方法の工程ａ）は、特許ＵＳ４  ７６４  ３６９においてHorowitzによって記載されたような、好ましくは、溶媒／界面活性剤によって行われるウイルスを不活性化する処理を含んでいる。特にこの処理の化学残留物を排除するために、続くクロマトグラフィー工程の前に必要である場合には、特に注意深く行われる。
【００７６】
この濃縮物は、その後、血液型ＡおよびＢと抗原性が類似している基がグラフトされた２つの担体の混合物において、好ましくは、担体の混合物が充填されたカラムにおいて、免疫親和性クロマトグラフィー工程に供される。好ましくは、クロマトグラフィーの担体は、アガロース型の架橋された天然の重合体から作られた充填材からなり、スペーサーまたは連結アームがグラフトされている。すなわち、血液型ＡおよびＢのエピトープに対応する三糖類（オリゴ糖）を有利に代表するオリゴ糖がそれぞれグラフトされている。
【００７７】
“血液型ＡおよびＢと抗原性が類似するオリゴ糖基”は、本発明の意義の範囲において、血液型ＡおよびＢと同じ抗体または同じ免疫グロブリンによって認識されるオリゴ糖基を意味している。
【００７８】
具体的には、そのような担体、すなわち血液型Ａのエピトープに対応し、Ｎ−アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）−ガラクトース（Ｇａｌ）−フコース（Ｆｕｃ）構造を有する三糖類と、血液型Ｂのエピトープに対応し、ガラクトース−ガラクトース−フコース構造を有している三糖類とを用いることによって、非常によい結果が得られる。そのような担体は、非常に有利に、ゲルまたはGlycorex Transplantation AS（スウェーデン）から製造される、GLYCOSORB ABO□という名前で市販されている樹脂を代表する。
【００７９】
一例として、この担体が用いられる場合、血液型Ａのエピトープに対応する三糖類は、以下の構造を有している：
【００８０】
【化１】
2016041754.tif 000002
【００８１】
一例として、この担体が用いられる場合、血液型Ｂのエピトープに対応する三糖類は、以下の構造を有している：
【００８２】
【化２】
2016041754.tif 000003
【００８３】
“担体”は、本発明の意義の範囲において、充填材を支持するために役に立つ不活性物質を意味する。有利に、ある種の官能基、すなわち、ある種のオリゴ糖基を有している充填材が、担体に対してグラフトされている。
【００８４】
これらの担体は、当業者に周知である。
【００８５】
充填材は、任意の適切な充填材であり得る。これらの充填材は、当業者に周知である。セファロース充填材、例えば、Glycosorb ABO（Glycorex Transplantation）を、特に、例として挙げることができる。
【００８６】
Glycosorb ABO充填材（Glycorex Transplantation）を用いることができる。この充填材は、血液型ＡおよびＢの三糖類がグラフトされている。
【００８７】
“担体の混合物”は、本発明の意義の範囲において、血液型Ａと抗原性が類似しているオリゴ糖を用いてグラフトされた充填剤を有している担体と、血液型Ｂと抗原性が類似しているオリゴ糖を用いてグラフトされた充填剤を有している担体との混合物を意味している。
【００８８】
異なる種の充填材は、それゆえ、変更可能な比率において見出され得る。
【００８９】
有利に、血液型Ａおよび血液型Ｂに抗原性が類似している基を用いてグラフトされた担体の混合物は、それぞれ、２５／７５〜７５／２５（ｖ／ｖ）の割合である。実際に、ドナーの血液型の配分に応じて、ドナーの集団に対してカラムにおける２つの担体の割合を調整することは可能である。習慣的な使用の状況において、カラムは、好ましくは、上記のそれぞれの特異的な担体の５０／５０（ｖ／ｖ）の混合物を用いて充填されているだろう。長さが１５ｃｍ〜２５ｃｍで、且つ直径が０．５ｃｍ〜１ｃｍの分析用カラムを用いることが可能である。試験的な規模において実施する場合に、長さが４０ｃｍ〜６０ｃｍで、且つ直径が４０ｍｍ〜６０ｍｍのカラムを用いることが可能である。この場合、６００ｍｌの免疫親和性の担体を用いてカラムを充填することが可能である。
【００９０】
そのような担体は、２つの使用周期の間に、１Ｍ  ＮａＯＨ中で保存することができる。使用の前に、担体は、水を用いて洗浄される。
【００９１】
免疫親和性クロマトグラフィーカラムは、その後、担体１ミリリットル当たり、好ましくは、０．２〜４リットル、特に、１〜２リットルの範囲のＩｇＧ濃縮物を用いて満たされ得る。そのような担体の特異性は、ＩｇＧ画分の事前の調整を必要としない。すなわち、従来技術の血漿分画技術によって取得されたＩｇＧの濃縮物のあらゆる画分が適合し得る。
【００９２】
濃縮物の透過は、溶出機構に関与しない。従って、ＩｇＧ濃縮物が取得される方法であれば何でも、必要に応じてポンプを用いて、カラムを通して透過させることができる。この透過は、ＡｃａＡおよびＡｃａＢおよび多反応性のＩｇＧを保持させることができる。有利に、カラムは、その後、カラムのデッド・ボリュームにまだ存在しているＩｇＧを回収するために、水を用いて洗浄される。
【００９３】
ＩｇＧ濃縮物の透過後に、製造工程に由来する多反応性のＩｇＧのみならず、ＡｃａＡおよびＡｃａＢを減少させたＩｇＧの画分が取得される。これは、クロマトグラフィーの担体の抗原単位にＡｃａＡおよびＡｃａＢが保持され、これらの立体構造が改変されるためである。
【００９４】
二次的な方法において保持されたこれらの多反応性ＩｇＧの親和性は、ＡｃａＡおよびＡｃａＢの親和性よりも非常に強い。ＩｇＧの通過後に、例えば、ｐＨ３〜８．６にて０．１〜１．５Ｍの濃度を有するアルカリ土類金属を含有している溶出用緩衝液を用いることによって、分画された状態でＩｇＧを溶出することができる。
【００９５】
クロマトグラフィーカラムおよび担体は、その後、担体に保持されたＡｃａＡおよびＡｃａＢの脱離のために、グリシン−ＨＣｌ（ｐＨ２．８）のような酸性溶液を用いて洗浄され得る。この担体は、その後、水を用いて洗い流され、そして、１Ｍ  ＮａＯＨ溶液を用いて処理される。
【００９６】
ＡｃａＡおよびＡｃａＢを大幅に減少させたＩｇＧ濃縮物は、その後、溶媒／界面活性剤処理に耐性を示すウイルスおよび／またはプリオン、その製造工程の間に生成されたＩｇＧ重合体、ミセル化されたリポ多糖類、核酸および凝集したタンパク質のような２０ｎｍより大きいその他の粒子を排除するためにろ過に供される。そのような処理は、有利に、ナノろ過を意味し、ナノろ過は、１００から１５ｎｍに減少する空隙率のフィルターによって実施され、具体的には、１００、５０および２０ｎｍの連続して且つ減少する保持閾値を処理する、３つのフィルターにおいて実施される。
【００９７】
有利に、上記方法は、ウイルス不活性化工程を包含している。
【００９８】
“ウイルス不活性化”は、本発明の意義の範囲において、ウイルス粒子を不活性化する、すなわち、血漿タンパク質の機能性を保持しながらウイルス粒子を効果的に変性させるための、あらゆる方法または工程を意味する。
【００９９】
ウイルス不活性化の方法は、当業者に周知である。これらの方法の中で、ウイルス不活性化工程は、溶媒／界面活性剤工程または低温殺菌から選択され得る。
【０１００】
有利に、ウイルス不活性化工程は、溶媒／界面活性剤工程によって実施され得る。
【０１０１】
このようにして取得されたＩｇＧ画分は、既に、十分に濃縮されている。そして、その後、限外ろ過および滅菌ろ過によって、さらなる濃縮工程を受けることができる。
【０１０２】
上記方法は、工程ｂ）の後で、限外ろ過および滅菌ろ過による濃縮工程を包含し得る。
【０１０３】
有利に、滅菌ろ過工程は、ナノろ過によって実施され得る。
【０１０４】
上記方法は、工程ｃ）の後で、第１に、長期間に渡る保存の間のＩｇＧ濃縮物の安定性を保証し、そして第２に、凍結乾燥によって、関連する種々の段階におけるＩｇＧの変性を防ぐことができるように、安定化剤を添加するさらなる工程を包含し得る。好ましくは、薬学的に許容され得る単一の安定化させる製剤が添加され、同時に、ＩｇＧの２つの想定される保存の形態、すなわち、液体または凍結乾燥された形態の安定化を保証するという目的を満足する。そして、特許出願ＷＯ２００４／０９１６５６において記載されたように、これらのＩｇＧの治療学的な有効性を維持するか、さらに改善するために安定化剤が添加される。
【０１０５】
ＩｇＧ組成物は、必要に応じて、限外ろ過による濃縮の次工程に供され、そして、その後、滅菌ろ過に供される。そして、フラスコに包装され、好ましくは、およそ４℃の温度にて保持され得る。
【０１０６】
分析方法は、本発明において記載されたＩｇＧ組成物の抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を分析するために用いられ得る。
【０１０７】
そのような、ＩｇＧ濃縮物における抗Ａ抗体および／または抗Ｂ抗体を分析する方法は、以下の工程を包含し得る：
ａ）血液型Ｏ  Ｒｈ＋の赤血球の懸濁液を調製し、且つ測定する工程、
ｂ）生物学的に許容され得る緩衝液において、０〜２００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲におけるモノクローナル抗Ｄ抗体溶液を調製する工程、
ｃ）上記赤血球を、モノクローナル抗Ｄ抗体溶液と接触させ、且つそのようにして得られた赤血球の混合物を、所定の期間に渡ってインキュベートする工程、
ｄ）赤血球の各混合物に、蛍光色素によって標識されたヒト抗ＩｇＧ抗体Ｆ（ａｂ’）２の断片を添加し、且つ当該赤血球をインキュベートする工程、
ｅ）工程ｄ）にて得られた赤血球の各混合物を、フローサイトメトリーに供する工程、および
ｆ）蛍光の関数として、抗Ｄモノクローナル抗体濃度の標準曲線を作成する工程。
【０１０８】
その後、以下の方法を用いることによって、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を分析することが可能である：
ａ）血液型Ａ、Ｂ−の赤血球の懸濁液を調製し、且つ測定する工程、
ｂ）生物学的に許容され得る緩衝液において、０〜２００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲におけるモノクローナル抗Ｄ抗体溶液を調製する工程、
ｃ）上記赤血球を、ＩｇＧの溶液の試料と接触させ、且つそのようにして得られた赤血球の混合物を、所定の期間に渡ってインキュベートする工程、
ｄ）赤血球の各混合物に、蛍光色素によって標識されたＦ（ａｂ’）２ヒト抗ＩｇＧ抗体の断片を添加し、且つ当該赤血球をインキュベートする工程、
ｅ）工程ｄ）にて得られた赤血球の各混合物を、フローサイトメトリーに供する工程、および
ｇ）ｎｇ／ｍｌにおいて有利に発現された抗Ｄを割り当てるために確立された標準曲線によって、ＩｇＧ濃縮物における抗Ａ抗体抗体価および／または抗Ｂ抗体抗体価を決定する工程。
【０１０９】
抗Ａ抗体抗体価および／または抗Ｂ抗体抗体価を決定するそのような方法を実施するための１つの方法は、０．８〜１．５重量％のウシ血清アルブミンＢＳＡを含有しているＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０〜７．４）における血液型Ａ、Ｂおよび／またはＯの１％（ｖ／ｖ）赤血球懸濁液の調製を包含していてもよい。懸濁液の赤血球は、その後、懸濁液１ｍｌあたり３７〜４３．１０６個赤血球にて懸濁液を測定するために、当業者に使用が公知の通常のフローサイトメトリー装置において計測される。モノクローナル抗Ｄ抗体溶液が調製され、緩衝液、好ましくは適切な０．８〜１．５重量％のウシ血清アルブミンＢＳＡを含有しているＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０〜７．４）において、０〜２００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲にて含有されている。そのようにして調製された各溶液は、そのモル吸光係数（□）を決定するために、吸光光度分析法によって分析される。
【０１１０】
ＩｇＧ組成物は、その後、０．８〜１．５重量％のウシ血清アルブミンＢＳＡを含有しているＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０〜７．４）によって、１〜５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１ｍｇ／ｍｌの閾値における濃度に調製される。
【０１１１】
５０〜１００μｌの体積の各血液型の赤血球の懸濁液は、例えば９６ウェルを有するマイクロプレートの各ウェルに入れられ、そして、その後、この赤血球の懸濁液に、５０〜１００μｌのＩｇＧの溶液、または５０〜１００μｌの抗Ｄ抗体溶液が入れられる。全体を、１時間３０分〜２時間３０分にわたって、特に２時間にわたって、通常３０℃〜４０℃の温度、好ましくは３７℃にてインキュベートする。
【０１１２】
そのようにして取得された赤血球の異なる混合物は、その後、好ましくは、前述のＢＳＡを含有しているＰＢＳ緩衝液を用いて洗浄され、そして遠心分離される。そして、その後、マイクロプレートウェルに入れられた赤血球の各混合物に、ＰＢＳ緩衝液および上記において規定されたＢＳＡ中に存在している、例えばフィコエリスリンのような蛍光色素を用いて標識された５０〜１００μｌの抗ヒトＩｇＧヤギＦ（ａｂ’）２抗体が添加される。
【０１１３】
全体のインキュベーションは、遮光して、およそ２０〜３０分間実施される。
【０１１４】
そのようにして取得された赤血球の異なる混合物は、その後、洗浄され、そして、分析される化合物の蛍光検出のための装置を備えている任意の適切な市販の装置を用いて実施されるフローサイトメトリーに供される。
【０１１５】
平均蛍光強度（ＮＦＩ）は、抗Ｄモノクローナル抗体濃度に従って報告され、そして直線回帰方程式がエクセルソフトウェアによって取得される。その後、各試料について、当量の抗Ｄ抗体濃度が直線状の直線回帰方程式を用いて取得される。３つ組みにおいて分析された試料は、濃度平均が確立され、そして、変動係数がエクセルソフトウェアによって計算される。
【０１１６】
本発明に係るＩｇＧ濃縮物における抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の含有量は、予め有利に得られた値から推定される。
【０１１７】
好ましくは、上記ＩｇＧ濃縮物のＡｃａＡおよびＡｃａＢを分析する方法は、本発明の状況に適合したフローサイトメトリーによって実施され、その原理は、これらの抗体の含有量に比例する蛍光信号の検出を利用した、要求されるＡｃａＡ抗体価およびＡｃａＢ抗体価の特異的な決定法に従った、血液型ＡまたはＢのヒト赤血球の使用に基づいている。
【０１１８】
そのような分析方法は、以下からなる工程を包含している：
ａ）血液型ＡまたはＢの赤血球の懸濁液を調製し、且つ測定する工程、
ｂ）上記赤血球をＩｇＧの溶液の希釈された試料と接触させ、且つそのようにして得られた混合物を、所定の期間に渡ってインキュベートする工程、
ｃ）蛍光色素によって標識された抗ＩｇＧ抗体の存在下において、上記赤血球をインキュベートする工程、および
ｄ）工程ｃ）にて得られた赤血球の懸濁液を、フローサイトメトリーに供する工程。
【０１１９】
血液型ＡまたはＢの赤血球の１％（ｖ／ｖ）懸濁液は、０．８〜１．５重量％のウシ血清アルブミンＢＳＡ（ＢＳＡ）を含有しているＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．０〜７．４）において調製される。懸濁液の赤血球は、その後、懸濁液１ｍｌあたり３７〜４３．１０個の赤血球にて懸濁液を測定するために、使用が当業者に公知である通常のフローサイトメトリー装置において計測される。
【０１２０】
５０〜１００μｌの体積の懸濁液は、９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに入れられ、そして、その後、０．２３４ｇ／ｌのＩｇＧの溶液が得られるまで３０ｇｌの溶液から２つずつ希釈した５０〜１００μｌのＩｇＧの異なる溶液が入れられる。
【０１２１】
全体を、１時間３０分〜２時間３０分間、特に２時間にわたって、通常３０℃〜４０℃の温度、好ましくは３７℃にてインキュベートする。
【０１２２】
赤血球は、その後、前述のＢＳＡを含有しているＰＢＳ緩衝液を用いて洗浄され、そして、遠心分離される。そして、その後、例えばフィコエリスリンのような蛍光色素を用いて標識された、５０〜１００μｌの抗ヒトＩｇＧヤギＦ（ａｂ’）２抗体が、各ウェルに添加される。
【０１２３】
全体（工程ｃ）のインキュベーションは、遮光して、およそ２０〜３０分間実施される。
【０１２４】
そのようにして取得された懸濁液は、その後、洗浄され、そして、分析される化合物の蛍光検出のための装置を備えている任意の適切な市販の装置を用いて実施されるフローサイトメトリーに供される。
【０１２５】
一例として、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の減少に関して、コーン（Cohn）法に従ったエタノール分画（Ｂ１）、特許出願ＷＯ０２／０９２６３２に従った方法（Ｂ２）、および特許出願ＷＯ０２／０９２６３２の後に免疫親和性クロマトグラフィーを行う方法（Ｂ３）によってそれぞれ調製したＢ１、Ｂ２およびＢ３と称される３つのＩｇＧ濃縮物の抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の含有量が、以下の表１において示される。結果は、参照として、試料Ｂ１の参照となる抗Ａ抗体抗体価および抗Ｂ抗体抗体価、すなわち、１にて適宜固定したこれらの抗体の比率に対して示される。
【０１２６】
【表１】
2016041754.tif 000004
【０１２７】
この表の結果は、まず第１に、コーン法に従って調製したＩｇＧ濃縮物（Ｂ１）の抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の含有量は、ＷＯ０２／０９２６３２に記載の方法に従って調製したＩｇＧ濃縮物（Ｂ２）よりも、含有量がおよそ４倍少ないことを示している。さらに、特異的な免疫親和性カラムによるこれらのＩｇＧ濃縮物の続く処理は、抗Ａ抗体抗体価をおよそ５倍低下させ、そして、抗Ｂ抗体抗体価に関してはおよそ７倍低下させる（ｂ３）。
【０１２８】
抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の含有量を決定する他の方法として、当業者に公知であるが本発明の要件のために特別に開発された、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける補体による溶解からなる方法を有利に用いることができる。そのような分析方法は、以下からなる工程を包含している：
ａ）予め計測された血液型Ａ，Ｂ、ＡＢおよびＯから選択されたパパイン処理された赤血球の懸濁液を、適切な放射性標識によって放射標識する工程、
ｂ）放射標識された赤血球を、所定の体積にて、ＩｇＧ濃縮物の試料と接触させる工程、
ｃ）工程ｂ）の血液型ＡＢの正常血清と同じ体積を添加する工程、
ｄ）工程ｃ）にて取得した混合物を、所定の期間に渡ってインキュベートする工程、および
ｅ）そのようにして取得した、インキュベートされた溶液の放射活性を側定する工程。
【０１２９】
血液型Ａ、Ｂ、ＡＢまたはＯのパパイン処理された赤血球の１％（ｖ／ｖ）懸濁液が調製され、そして、その後、１０６個の赤血球を得るために、マラッセ細胞（Malassez cell）において計測される。１００μＣｉの５１Ｃｒが添加される（１体積の赤血球あたり１体積）。全体が１〜２時間に渡ってインキュベートされ、そして、放射標識された赤血球は、その後４〜６回洗浄される。
【０１３０】
放射標識された赤血球は、その後、例えば１００μｌの体積において、４〜６．１０６個の放射標識された赤血球に対して、好ましくは、１〜３ｍｇ／ｍｌ、特に１．２ｍｇ／ｍｌの濃度にて、ＩｇＧ濃縮物の試料と接触させられる。
【０１３１】
相補的な方法の異なる要素を添加するために、前述のものと同じ体積、例えば、１００μｌの血液型ＡＢの正常血清が、前述の混合物に対してさらに添加される。
【０１３２】
そのようにして得られた反応混合物は、その後、好ましくは、３〜５時間、特に４時間に渡って、通常、３０℃〜４０℃、好ましくは３７℃の温度にてインキュベートされる。
【０１３３】
反応混合物は、その後、好ましくは、遠心分離され、そして、適切な市販の装置を用いて、インキュベートされた溶液の放射活性が測定される。測定された溶液の放射活性は、処理された赤血球の溶血の程度に比例し、その結果、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の含有量と比例する。
【０１３４】
一例として、本発明のＩｇＧ濃縮物（Ｂ３）と、市販の濃縮物のなかでも、より低い溶血レベルを有している従来技術のＩｇＧ濃縮物（Ｃ１）とを考慮して得られた血液型Ａ、ＢおよびＡＢの赤血球の溶血の程度が、以下の表２において示される。
【０１３５】
【表２】
2016041754.tif 000005
【０１３６】
本発明の他の主題は、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸を治療することを目的とした医薬を製造するための、上記で規定された組成物の使用である。
【０１３７】
上記で述べた本発明の全ての局面は、この使用に適合し、そして本発明のこの他の主題の一部となる。
【０１３８】
本発明の他の主題は、ＡＢＯ式血液型に関する母体−胎児不適合によって引き起こされる新生児の黄疸またはＡＢＯ新生児溶血性疾患を治療するための方法であり、上記で規定したＩｇＧ組成物の投与を包含している。
【０１３９】
この実施形態において、本発明の組成物は、注射のための溶液、例えば、５ｇ／１００ｍｌ（５％）にて用いられる静脈注射のための正常ヒト免疫グロブリンの溶液であり得る。
【０１４０】
有利に、注射用の溶液は、１ｇ／１００ｍｌ（１％）、または２ｇ／１００ｍｌ（２％）、または３ｇ／１００ｍｌ（３％）、または４ｇ／１００ｍｌ（４％）、および有利に、最大で５ｇ／１００ｍｌ（５％）にて投与され得る。
【０１４１】
有利に、注射可能な溶液のＩｇＧの投与量は、１ｇ／１００ｍｌ〜５ｇ／１００ｍｌ、または２ｇ／１００ｍｌ〜５ｇ／１００ｍｌ、または３ｇ／１００ｍｌ〜５ｇ／１００ｍｌであり得る。
【０１４２】
本発明を実施するための組成物は、例えば、５００ｍｇ／ｋｇ〜２０００ｍｇ／ｋｇの量にて、光線療法処置と同時にまたは光線療法治療に引き続いて投与され得る。この投与は、繰り返されてもよい。
【０１４３】
上記の本発明の全ての局面は、この治療方法に適合し、そして、本発明のこの他の主題の一部となる。
【０１４４】
他の利点についても、以下の実施例を読み取ることによって当業者に対して明らかになり得る。
【０１４５】
〔実施例〕
実施例１：抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を減少させたＩｇＧ組成物の調製
４０ｇ／ｌ  ＩｇＧ濃縮物（Ｂ２）の試料を、ＷＯ０２／０９２６３２に記載された方法を実施することによって取得する。
【０１４６】
長さ５０ｃｍ、直径４４ｍｍのクロマトグラフィーカラムを、血液型Ａのエピトープおよび血液型Ｂのエピトープに対応する三糖類を用いてグラフトされたGlycosorb ABO担体の混合物（５０／５０（ｖ／ｖ））で満たし、そして、その後、１２００ｍｌの水による前洗浄工程に供する。
【０１４７】
ＩｇＧ濃縮物Ｂ２を、ポンプを用いて、担体１ｍｌに対して０．２ｌの割合で注入する。この量をカラムを介して浸透させた時点で、カラムのデッド・ボリュームに存在しているＩｇＧを回収するために、カラムを、注射可能な調製（ＩＰＰ）のための最小限の体積の水によって洗浄する。
【０１４８】
ＡｃａＡ、ＡｃａＢおよび多反応性のＩｇＧを減少させた、およそ４０ｇ／ｌのＩｇＧ濃縮物Ｂ３を回収し、そして濃度が６０ｇ／ｌとなるように限外ろ過に供し、そして、順番に配置された１００、５０および２０ｎｍの減少する保持閾値を有する３つのフィルターにおいて、ウイルス排出ナノろ過に供した。
【０１４９】
６０ｇ／ｌのＩｇＧ濃縮物に、７ｇ／ｌのグリシン、３０ｇ／ｌのマンニトールおよび２０ｐｐｍのＴｗｅｅｎ□  ８０の混合物からなる安定化賦形剤を溶解し、その後、水ＩＰＰ法によって、ＩｇＧ濃度を５０ｇ／ｌに調整する。その後、濃縮物を無菌的にろ過し、そしてフラスコに分配する。
【０１５０】
実施例２：ＩＶＩＧにおける抗Ａ／Ｂの定量化
１）投与の原理
１．１）ヒト赤血球の調製
血液型Ａ  Ｒｈ＋、血液型Ｂ  Ｒｈ＋または血液型Ｏ  Ｒｈ＋のヒト赤血球の懸濁液を、ＰＢＳ緩衝液＋１％ＢＳＡ（ｐＨ＝７．４）において、４０×１０６赤血球／ｍｌの濃度に規格化する。
【０１５１】
１．２）モノクローナル抗Ｄレンジの調製
ＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）に対する２８０ｎｍにおける光学密度（ＯＤ）のために、モノクローナル抗Ｄ（Ｒ２９７と称する。）の調合液を投与する。タンパク質のモル吸光係数（□）を、そのアミノ酸組成物について計算し、そしてモノクローナル抗Ｄの濃度（Ｃ）を、式Ｃ＝ＯＤ／□に、１＝ＯＤを測定するための容器の幅を適用することによって求める。
【０１５２】
０〜２００ｎｇ／ｍの範囲の抗Ｄモノクローナル抗体を、１２点（２００ｎｇ／ｍｌ；１５０ｎｇ／ｍｌ；１００ｎｇ／ｍｌ；７５ｎｇ／ｍｌ；５０ｎｇ／ｍｌ；２５ｎｇ／ｍｌ；１２．５ｎｇ／ｍｌ；６．２５ｎｇ／ｍｌ；３．１３ｎｇ／ｍｌ；１．５６ｎｇ／ｍｌ；０．７８ｎｇ／ｍｌおよび０ｎｇ／ｍｌ）にて作製する。
【０１５３】
１．３）免疫グロブリン溶液の調製
市販の異なる静脈注射用免疫グロブリンを調査した。これらの免疫グロブリンの主な特徴を、以下の表に列挙する。
【０１５４】
【表３】
2016041754.tif 000006
【０１５５】
免疫グロブリンの異なる調合液を、ＰＢＳ緩衝液＋１％ＢＳＡ（ｐＨ＝７．４）を用いて、１ｍｇ／ｍｌの濃度に調整する。
【０１５６】
１．４）赤血球の感作
丸底マイクロプレートにおいて、以下をウェル中に沈殿させる：
−  ４０×１０６赤血球／ｍｌの濃度の赤血球Ａ  Ｒｈ＋、Ｂ  Ｒｈ＋またはＯ  Ｒｈ＋の５０μｌ懸濁液、
−  ５０μｌの抗Ｄレンジまたは解析すべき５０μｌの試料（ＩｇＩＶ）。当該解析すべき試料を、三つ組み（triplicate）にて加える。
【０１５７】
プレートを、その後、振とうしながら、３７℃にて２時間インキュベートする。
【０１５８】
１．５）洗浄
プレートを７７０ｇにて１分間遠心する。反転させて上清を分離し、そしてその後、２００μｌのＰＢＳ＋１％ＢＳＡを各ウェルに加える。この操作を３回繰り返す。
【０１５９】
１．６）複合体（conjugate）の添加および洗浄
フィコエリスリン（ＰＥ）を用いて標識した（Ｆｃ特異的な）抗ヒトＩｇＧヤギのＦ（ａｂ’）２（Beckman Coulter ref: PN IM0550）を、ＰＢＳ緩衝液＋１％ＢＳＡ（ｐＨ＝７．４）において１／２０に希釈し、そしてその後、５０μｌの溶液を各ウェルに加える。プレートを、その後、遮光して、室温にて、２０〜３０分間インキュベートする。段落１−５）に記載したように、３回の連続的な洗浄を行う。
【０１６０】
１．７）フローサイトメトリーを用いた解析
赤血球懸濁液を、適切なプログラムに従って、フローサイトメトリー（Beckman Coulter FC500）によって解析する。
【０１６１】
５０，０００事象に対して解析が行われ、そして、装置は、各範囲地点または各試料の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を自動的に算出する。
【０１６２】
１．８）結果の解釈
ＭＦＩは、抗Ｄモノクローナル抗体の濃度に従って報告され、そして直線回帰方程式がエクセルソフトウェアを用いて取得される。その後、この直線回帰放擲式を用いて、各試料に関して、抗Ｄ抗体の当量濃度が取得される。試料は三つ組みにて分析され、濃度の平均が算出され、そしてエクセルソフトウェアによって変動係数が計算される。
【０１６３】
２）結果：
２．１）抗Ａ抗体濃度
【０１６４】
【表４】
2016041754.tif 000007
【０１６５】
２．２）抗Ｂ抗体の濃度
【０１６６】
【表５】
2016041754.tif 000008
【０１６７】
３）結論：
親和性工程は、実際、抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の排除に役立つ。市場に存在している研究されている異なる免疫グロブリンの中で、ＩｇＮＧ２は、わずかな抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体を含有している製品である。
【０１６８】
実施例３：実施例１にて得られたＩｇＧ  Ｂ濃縮物中の抗Ａおよび抗Ｂの定量化
血液型Ａの赤血球の１％（ｖ／ｖ）懸濁液を、１重量％のウシ血清アルブミンＢＳＡを含有しているＰＢＳ緩衝液（ｐＨ７．４）において調製する。５０μｌの赤血球の懸濁液を取り、そして、流量を測定する５０μｌの内部マーカー溶液と一緒に、Beckmann Coulter Epics XLフローサイトメーター用のチューブに入れる。懸濁液を４０．１０６赤血球／ｍｌに調整する。
【０１６９】
実施例１にて得られたＩｇＧ濃縮物（ｖ／ｖ）（Ｂ３）、３０ｇ／ｌである最も濃縮されたバッチおよび０．２３４ｇ／ｌにて最も希釈されたバッチの内の２つの要素によって、ＩｇＧ溶液の８つのバッチを、連続的な希釈によって調製する。次いで、５０μｌの体積の懸濁液を９６ウェルマイクロプレートの各ウェルに加え、そして、その後、希釈された５０μｌの異なるＩｇＧ溶液を加える。全体を、振とうさせながら、３７℃の温度にて２時間インキュベートする。
【０１７０】
各ウェルを、その後、先のＢＳＡをいくらか含有しているＰＢＳ緩衝液を２００μｌ用いて洗浄し、そしてマイクロプレートを２０００回転／分にて１分間遠心分離する。上清を除去した後に、フィコエリスリン蛍光色素（Beckman-Coulter)を用いて標識した抗ヒトＩｇＧヤギＦ（ａｂ’）２抗体をＰＢＳ−ＢＳＡを用いて１／２０に希釈した５０μｌの溶液を、各ウェルに加える。
【０１７１】
全体のインキュベーションを、遮光して３０分間実施する。
【０１７２】
このようにして得られた懸濁液は、その後、上述したように洗浄される。
【０１７３】
各ウェルの残留物を１００μｌのＰＢＳ−ＢＳＡによって回収する。マイクロプレートの各ウェルに含まれている体積をチューブに移し、次いで、アイソフローダクト（Coulter）からの５００μｌの液体を、その後添加し、そしてデータ収集ソフトウェアおよび結果を利用するためのソフトソフトウェアを備えているBeckman Coulter Epics XL装置を用いて実施するフローサイトメトリーに供する。フローサイトメトリー測定を各試料に関して行う。
【０１７４】
同じ手順を、血液型Ｂ由来の赤血球を用いて行う。
【０１７５】
この操作様式を、ＩｇＧ（Ｂ３）の３つの異なるバッチに関して用い、そしてコーン法（前に掲載した）に従ったエタノール分画によって調製されたＩｇＧ（Ｂ１）の３つの異なるバッチに対しても適用する。
【０１７６】
得られた結果を以下の表３に示す。
【０１７７】
【表６】
2016041754.tif 000009
【０１７８】
実施例４：赤血球の溶血の測定
パパイン処理した血液型Ａ，Ｂ、ＡＢまたはＯの赤血球の１％（ｖ／ｖ）懸濁液を調製し、そして、その後、１０個の赤血球を取得するために、マラッセ細胞において数を数える。１００μＣｉの５１Ｃｒ（１体積の赤血球あたり１体積）を加える。全体を１時間インキュベートし、そして放射性標識した赤血球を、その後、５回洗浄する。
【０１７９】
放射性標識した赤血球を、その後、１００μｌの体積における５．１０６個の放射性標識赤血球に対して１．２ｍｇ／ｍｌの濃度にて、実施例１にて得られたＩｇＧ濃縮物（Ｂ２）の試料と接触させる。
【０１８０】
１００μｌの血液型ＡＢの正常な血清の前述の１つと同一の体積を、その後、残留物の種々の要素を添加するために、前述の混合物に対して添加する。
【０１８１】
得られた反応混合物を、その後、３７℃の温度にて４時間インキュベートする。
【０１８２】
反応混合物を、その後、２０００回転／分にて、１分間遠心分離し、そして、適切な市販の利用できる装置を用いて、インキュベートした上清の放射活性を測定する。溶液の測定された放射活性は、処理された赤血球の溶血の程度に比例し、従って、抗Ａ抗体含有量および抗Ｂ抗体含有量に比例する。同一の手順を、全てＲｈ＋である血液型Ｂ、ＡＢおよびＯの赤血球、および血液型Ｏ＋の血清の試料に関して行う。この操作を、ＩｇＧ（Ｂ２）の３つの異なるバッチに関して用いる。さらに、上記方法を、Ｃ２〜Ｃ４の名称であるＩｇＧ濃縮物の市販の試料の３つのバッチ、および陰性対照としてインキュベートした血液型Ｏ＋の血清の試料Ｃ５に対して適用する。
【０１８３】
溶液の測定された放射活性は、処理された赤血球の溶血の程度に比例し、従って、赤血球に対して固定された抗Ａ抗体および抗Ｂ抗体の量と比例する。
【０１８４】
得られた溶血の結果を、以下の表４に示す。
【０１８５】
【表７】
2016041754.tif 000010
【０１８６】
得られた結果は、本発明に係る親和性クロマトグラフィーに供したＩｇＧ濃縮物Ｂが、異なる血液型由来の赤血球の溶血の程度を最も低くする、最も少ない量のＡｃａＡおよびＡｃａＢを含有していることを示す。陰性対照としてインキュベートした表現型Ｏ＋の赤血球に関して、溶血は観察されない。
【０１８７】
実施例５：ＩｇＧ濃縮物Ｂ２（免疫親和性クロマトグラフィー前）およびこのクロマトグラフィー後の、実施例１に記載の（ＩｇＧ濃縮物Ｂ３）の多反応性の測定
これらのＩｇＧ濃縮物の多反応性を、多反応性のＩｇＧに対して反応する２つの抗原を用いて、特許ＥＰ１  ０５９  ０８８に従って測定する。これらは、ミオシンおよびジニトロフェニル基によって改変されたアルブミン（ＤＮＰアルブミン）である。
【０１８８】
表５は、実施例３の試料Ｂ２、Ｂ３およびＣ４、並びに参照として任意に１で固定したＩｇＧ含有物の多反応性のＩｇＧの濃縮係数を示す。
【０１８９】
これらの測定を、考慮されたＩｇＧ濃縮物の３つの異なるバッチにおいて行った。
【０１９０】
【表８】
2016041754.tif 000011
【０１９１】
結果は、本発明のＩｇＧ濃縮物Ｂ３は、従来技術のＣ４の濃縮物よりも多反応性のＩｇＧの含有量が５〜８倍少ないことを示唆している。
【０１９２】
実施例６：ＩｇＧ濃縮物（Ｂ１）と、ＡｃａＡ、ＡｃａＢおよび多反応性のＩｇＧを減少させたＩｇＧ濃縮物（Ｂ３）との有効性に対する比較例
研究は、本発明に係るＩｇＧ濃縮物の免疫調整活性を評価する目的で処理されたＦｃ□ＲＩ受容体およびＦｃ□ＲＩＩＩ受容体を欠損するマウスに関する。これらの動物は、血小板減少性紫斑病のためのモデルとなる。コーン法に従ったエタノール分画によって取得されたＩｇＧ濃縮物（Ｂ１）が、参照として用いられる。
【０１９３】
Ｔｅｅｌｉｎｇ  Ｊ．Ｌ．ら（Blood, 15/08/2001, vol. 98, number 4, pp. 1095-1099 [10]）によって記載された実験のプロトコルが適用される。１ｇ／ｋｇの治療学的な投与量にて、ＩｇＧ  Ｂ１およびＢ３を用いて処理した動物において、抗血小板モノクローナルＩｇＧの注入によって９．１０８／ｍｌから２．１０８／ｍｌのレベルに破壊された血小板が、再び、７．１０８／ｍｌに上昇する。
【０１９４】
本発明に係るＩｇＧ濃縮物Ｂ３の免疫調整活性は、免疫親和性クロマトグラフィーの使用によって改変されなかった。
【０１９５】
実施例７：実施の例
投与されるべき投与量および治療に対する寛容の評価。
【０１９６】
本発明を実施するためのＩｇＧ組成物、例えば、Ｂ３組成物または市場で入手できる他のＩｇＧ組成物を、ＡＢＯ溶血性疾患、すなわち、高ビリルビン血症で、直接新生児抗グロビン試験（直接クームス試験）が陽性であり、且つ高網状赤血球数（１０％以上）である症状に罹患している新生児、すなわち、２８日齢に満たない男児および女児に対して投与する。
【０１９７】
患者の除外基準は、ＩｇＡの欠如、抗ＩｇＥ／ＩｇＧ抗体の存在、４ｍｇ以上の臍帯におけるビリルビンレベルを有する出産に対する交換輸血の指示、胎児胎盤浮腫（胎児水腫）、心不全、および母体ＩＶＩＧの出産前治療および／または子宮の輸血における出産前治療である。
【０１９８】
治療プロトコルは、５００ｍｇ／ｋｇおよび２０００ｍｇ／ｋｇにおけるＩｇＧの投与（ｎ＝約１０）の投与のみ、または反復可能な光線療法との組合せである。
【０１９９】
一次評価基準は、交換輸血の必要性であり、そして、血清中のビリルビンの合計レベルを、組成物の第１回目の投与後３日目に測定する。
【０２００】
主な２次評価基準は、光線療法の合計の継続期間、入院期間の継続期間、分娩後第２７日目における後期貧血（late anemia）の発症、および免疫グロブリン組成物の第１回目の投与後２４時間目の血清における総ビリルビンレベルである。
【０２０１】
結果の比較分析をカプラン・マイアー法を用いて実行する。
【０２０２】
停止基準は、高ビリルビン血症に関する小児科の小委員会の米国学会による臨床業務の指示（the directives of the clinical practices of the American Academy of Paediatric Subcommittee on Hyperbilirubinemia）（Paediatrics. 2004 July; 114(1): 297-316）に基づく交換輸血の開始である。
【０２０３】
公知の試験の１つによってビリルビンレベルを測定し、患者の回復における変化をモニターする。
【０２０４】
〔参考文献一覧〕
[1] Cohn et al, 1946, J. Am. Chem. Soc. 68, 459; Oncley et al. 1949, J. Am. Chem. Soc. 71, 541.
[2] Gottstein et al, (2003) Archives of Disease in Childhood: Fetal and NeonatalEdition, vol. 88, no. 1, p. F6-F10.
[3] Alplay et al, (1999), Acta Paediatrica, International Journal of Paediatrics; vol. 88, no. 2, p. 216-219.
[4] Nasseri et al, (2006) Saudi Med J.; 27(12): 1827-30.
[5] Steinbuch et al. (1969) Ref. Franc. Et. Clin, and Biol, XIV, 1054.
[6] Buchta C. et al, Biologicals, 33, 2005, 41-48.
[7] Wilson J.R. et al, Muscle & Nerve, 29(9), 1997, 1142-1145.
[8] Copelan E.A. et al, Transfusion, 26, 1986. 410-412.
[9] Misbah S.A. et al, Drug Safety, 9, 1993, 254-262.
[10] Teeling J.L. et al, Blood 15/08/2001, vol. 98, number 4, pp. 1095-1099.