(57)【要約】【課題】検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されたタンパク質アレイ及びその製造方法を提供する。【解決手段】基板を準備する基板準備工程と、溶媒中に溶解又は分散させたタンパク質を前記基板上にスポッティングするスポッティング工程と、前記スポッティング工程後の前記基板上にある前記溶媒を除去する乾燥工程と、前記乾燥工程後の前記基板をブロッキング溶液に浸漬するブロッキング工程と、を備える、タンパク質アレイの製造方法であって、前記乾燥工程が、前記基板を相対湿度４０％以下の環境下で０．１〜２５時間静置する工程である製造方法、及び、上記製造方法により製造されたタンパク質アレイ。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
基板を準備する基板準備工程と、
溶媒中に溶解又は分散させたタンパク質を前記基板上にスポッティングするスポッティング工程と、
前記スポッティング工程後の前記基板上にある前記溶媒を除去する乾燥工程と、
前記乾燥工程後の前記基板をブロッキング溶液に浸漬するブロッキング工程と、
を備える、タンパク質アレイの製造方法であって、
前記乾燥工程が、前記基板を相対湿度４０％以下の環境下で０．１〜２５時間静置する工程である、製造方法。
【請求項２】
前記ブロッキング工程の後に、更にスポット検査工程を備える、請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
前記乾燥工程の終了後１時間以内に前記ブロッキング工程を実施する、請求項１又は２に記載の製造方法。
【請求項４】
前記スポッティング工程を相対湿度６０％以下の環境下で行う、請求項１ないし３のいずれか一項に記載の製造方法。
【請求項５】
請求項１ないし４のいずれか一項に記載の製造方法により製造されたタンパク質アレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、タンパク質アレイの製造方法及びタンパク質アレイに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、ガラスやプラスチック等の基板上にタンパク質を固定したタンパク質アレイが知られている。タンパク質アレイは、例えば、生体試料中の対象物質を迅速に検出又は定量することができるため、各種疾患の診断や基礎研究等に利用されている。
【０００３】
例えば、特許文献１には、炭素基板上に、アミンを介して親水性スペーサーの一端が結合され、該親水性スペーサーの他端に所望の生体関連物質が結合されて成るバイオチップが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−９１２４５号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、従来のタンパク質アレイは、製造ロットにより検出シグナルが低い場合があり、また、製造ロット間で検出シグナルが大きくばらつく場合がある。
【０００６】
そこで、本発明は、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されたタンパク質アレイ及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は以下の通りである。
（１）基板を準備する基板準備工程と、溶媒中に溶解又は分散させたタンパク質を前記基板上にスポッティングするスポッティング工程と、前記スポッティング工程後の前記基板上にある前記溶媒を除去する乾燥工程と、前記乾燥工程後の前記基板をブロッキング溶液に浸漬するブロッキング工程と、を備える、タンパク質アレイの製造方法であって、前記乾燥工程が、前記基板を相対湿度４０％以下の環境下で０．１〜２５時間静置する工程である、製造方法。
（２）前記ブロッキング工程の後に、更にスポット検査工程を備える、（１）に記載の製造方法。
（３）前記乾燥工程の終了後１時間以内に前記ブロッキング工程を実施する、（１）又は（２）に記載の製造方法。
（４）前記スポッティング工程を相対湿度６０％以下の環境下で行う、（１）ないし（３）のいずれかに記載の製造方法。
（５）（１）ないし（４）のいずれかに記載の製造方法により製造されたタンパク質アレイ。
【発明の効果】
【０００８】
本発明によれば、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されたタンパク質アレイ及びその製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内であれば種々に変更して実施することができる。
【００１０】
＜タンパク質アレイの製造方法＞
一実施形態において、本発明は、基板を準備する基板準備工程と、溶媒中に溶解又は分散させたタンパク質を前記基板上にスポッティングするスポッティング工程と、前記スポッティング工程後の前記基板上にある前記溶媒を除去する乾燥工程と、前記乾燥工程後の前記基板をブロッキング溶液に浸漬するブロッキング工程と、を備える、タンパク質アレイの製造方法であって、前記乾燥工程が、前記基板を相対湿度４０％以下の環境下で０．１〜２５時間静置する工程である、製造方法を提供する。
【００１１】
本実施形態の製造方法により、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されたタンパク質アレイを製造することができる。
【００１２】
ここで、「検出シグナルが高い」とは、例えば、抗ｈＣＧ  αサブユニット抗体を基板上に固定化したタンパク質アレイを使用して、１ｎｇ／ｍＬと５ｎｇ／ｍＬの標準ｈＣＧ抗原を検出した場合に、検出シグナルの強度に有意差があることを意味する。
【００１３】
ここで、「ばらつきが抑制された」とは、本実施形態の製造方法で製造した複数ロット（３ロット以上）のタンパク質アレイを用いて、試料中の特定のタンパク質の存在を検出した場合に、下記式（Ｆ１）により算出される検出シグナルのばらつき（ＣＶ）が、例えば２０％以下、例えば１５％以下、例えば１０％以下であることを意味する。式（Ｆ１）中、σは、複数ロットのタンパク質アレイにおける検出シグナルの標準偏差を示し、ｘは、複数ロットのタンパク質アレイにおける検出シグナルの平均値を示す。
ＣＶ（％）＝σ／ｘ×１００  （Ｆ１）
【００１４】
以下、各工程について説明する。
［基板準備工程］
タンパク質アレイの基板としては、特に制限はなく、ガラス、金属、プラスチック等が挙げられる。タンパク質アレイの基板は、表面処理の容易性、量産性の観点から、プラスチックであってもよい。プラスチックとしては、例えば熱可塑性樹脂が挙げられる。熱可塑性樹脂としては、蛍光発生量が少なく、高い信号対雑音比（Ｓ／Ｎ比）を得やすい観点から、ポリカーボネート、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリスチレン、飽和環状ポリオレフィン、ポリペンテン、ポリアミド、これらの共重合体等が挙げられる。飽和環状ポリオレフィンとは、環状オレフィン構造を有する重合体単独又は環状オレフィンとα−オレフィンとの共重合体に水素添加した飽和重合体を意味する。
【００１５】
基板の形状には、特に制限はなく、例えばスライドガラス状、マルチウェルプレート状、円盤状等が挙げられる。基板は、微細な流路を備えたマイクロ流路デバイスを構成していてもよい。
【００１６】
（ポリマー）
基板の表面は、タンパク質を固定化するための官能基を有するポリマーでコーティングされていてもよい。上記官能基としては、化学的に活性な基であればよく、より具体的には、アルデヒド基、活性エステル基、エポキシ基、ビニルスルホン基、チオール基、アミノ基、イソシアネート基、イソチオシアネート基、ヒドロキシル基、アクリレート基、マレイミド基、ヒドラジド基、アジド基、アミド基、スルホネート基、カルボキシル基等が挙げられる。また、これらの基を介して結合した受容体、リガンド等であってもよい。
【００１７】
上記ポリマーは、更に、基板表面の官能基と共有結合を形成してポリマーを基板上に結合させることができる基を有していてもよい。このような基としては、化学的に活性な基であればよく、より具体的には、アルコキシシラン基、アルデヒド基、活性エステル基、エポキシ基、ビニルスルホン基、チオール基、アミノ基、イソシアネート基、イソチオシアネート基、ヒドロキシル基、アクリレート基、マレイミド基、ヒドラジド基、アジド基、アミド基、スルホネート基等が挙げられる。
【００１８】
上記の基を用いてポリマーを基板に結合させるには、基板表面に上記の基と反応する官能基が必要となる。このような官能基としては、例えば、水酸基、カルボキシル基、アミノ基、アルキニル基等が挙げられる。例えば、水酸基は、基板表面の酸化により容易に形成することができる。基板表面の酸化は、例えば、プラズマ処理、コロナ処理、放射線照射処理等により行うことができる。
【００１９】
基板の表面をコーティングするポリマーとしては特に限定されず、例えば、下記式（１）で表される高分子化合物を好適に用いることができる。
【００２０】
【化１】
2016114410.tif 000002
【００２１】
式（１）で表される化合物は、３つのユニットから構成される。式（１）において、左側に示したユニットは、親水性であることから、タンパク質等の非特異吸着を抑制する機能を有する。また、中央に示したユニットは、活性エステル基を有することから、アミノ基を有する生理活性物質を固定化する機能を有する。また、右側に示したユニットは、加水分解するとシラノールを形成することから、基板への結合やポリマー同士の架橋により洗浄時に流出を防止する機能を有する。以下、それぞれのユニットについて、より詳細に説明する。
【００２２】
まず、左側に示したユニットについて説明する。式（１）中、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立に、水素原子又はメチル基を表し、Ｘは２価の基を表し、ｐは３〜９０の整数を表す。Ｘとしては、例えば、エチレングリコール残基が挙げられる。
【００２３】
本ユニットの組成割合（ｌ１、ｍ１及びｎ１の和に対するｌ１の割合）は、非特異的吸着を抑制し、かつ他のユニットの相対的な減少によるシグナルの低下や洗浄時の流出を防止する観点から、５〜９８ｍｏｌ％であることが好ましい。
【００２４】
続いて、中央に示したユニットについて説明する。式（１）中、Ｒ３は水素原子又はメチル基を表し、Ｙは２価の基を表し、ｑは２〜８０の整数を表し、Ｗは活性エステル基を表す。Ｙとしては、例えば、エチレングリコール残基又はアルキル基が挙げられる。
【００２５】
本ユニットの組成割合（ｌ１、ｍ１及びｎ１の和に対するｍ１の割合）は、タンパク質等の生理活性物質を十分に固定化でき、かつ非特異的吸着を抑制する観点から、１〜５０ｍｏｌ％であることが好ましい。
【００２６】
続いて、右側に示したユニットについて説明する。式（１）中、Ｒ４は水素原子又はメチル基を表す。Ｚは炭素数１〜２０のアルキレン基であり、特に構造は限定されない。Ａ１、Ａ２、Ａ３のうち、少なくとも一つはメトキシ基又はエトキシ基であり、残りはメチル基、エチル基等の加水分解しない不活性な基である。
【００２７】
本ユニットの組成割合（ｌ１、ｍ１及びｎ１の和に対するｎ１の割合）は、基板に十分に固定化でき、かつ非特異的吸着を抑制する観点から、０．１〜１０ｍｏｌ％であることが好ましい。
【００２８】
式（１）で表される化合物の化学構造は、上記の３つのユニットを含む構造であれば、その結合方式が、ランダム、ブロック、グラフト等いずれの形態であってもよい。
【００２９】
ポリマーのコーティングは、例えば、０．０５〜１０質量％の濃度で有機溶媒に溶解した上記ポリマーを、上記基板上に、浸漬、スプレー、スピンコーティング等により塗布した後、２０〜１２０℃程度の室温下又は加温下で乾燥させることにより行うことができる。上記有機溶媒としては、例えば、２−ブタノン、エタノール、メタノール、ｔ−ブチルアルコール、ベンゼン、トルエン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロロメタン、クロロホルム、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。
【００３０】
基板の表面とポリマーとの結合は、共有結合、静電的相互作用、水素結合、疎水効果による結合等どのような結合様式であってもよいが、アッセイ中にポリマーが基板から流出しないようにするためには、共有結合で結合していることが好ましい。
【００３１】
［スポッティング工程］
本工程において、溶媒中に溶解又は分散させたタンパク質を上記基板上にスポッティングして固定化する。
【００３２】
基板上に固定化するタンパク質としては、例えば、レクチン、抗体、アレルゲン等が挙げられる。タンパク質を溶解又は分散させる溶媒としては、特に制限はないが、タンパク質の変性を抑制する観点から水溶性の溶液であってもよい。水溶性の溶液としては、一般的な緩衝液を用いることができ、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、生理食塩水等が挙げられる。
【００３３】
上記溶媒には、基板上に固定化するタンパク質のほか、合成高分子やアルブミン、スキムミルク、カゼイン等の生体高分子を含有させてもよい。これにより、基板上に固定化するタンパク質を安定化することができる。基板表面へのタンパク質の固定化は、化学結合により行われてもよく、物理化学的結合により行われてもよい。
【００３４】
スポッティングは、例えば、市販のスポッターを使用して行うことができる。スポットのサイズは、例えば直径０．２〜１ｍｍ程度であってよい。
【００３５】
スポッティング工程は、例えば相対湿度６０％以下、例えば相対湿度１０〜６０％、例えば相対湿度２５〜５５％の環境下で行ってもよい。これにより、製造されるタンパク質アレイの、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきを、更に抑制することができる傾向がある。
【００３６】
［乾燥工程］
本工程において、基板から上記溶媒を除去して乾燥させる。具体的には、スポッティング工程後の基板を相対湿度４０％以下、例えば１０〜４０％、例えば２０〜３５％の環境下で０．１〜２５時間、例えば０．２〜２０時間、例えば０．５〜１６時間放置する。これにより、タンパク質溶液又はタンパク質分散液の溶媒を除去して乾燥させることができる。乾燥工程は、４〜３７℃程度で実施してもよい。
【００３７】
［ブロッキング工程］
続いて、乾燥工程後の基板をブロッキング溶液に浸漬し、官能基を失活させるブロッキングを行う。ブロッキング溶液としては、例えば、エタノールアミン、水酸化ナトリウム等のアルカリ溶液等が挙げられる。
【００３８】
ブロッキング工程は、上述した乾燥工程の終了後１時間以内に実施することが好ましい。これにより、製造されるタンパク質アレイの、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきを、更に抑制することができる傾向がある。
【００３９】
ブロッキングの終了後に、基板を洗浄液で洗浄してもよい。洗浄は、例えば基板を洗浄液に浸漬した後、４〜３７℃程度で乾燥させることにより行うことができる。洗浄液としては、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、生理食塩水等の一般的な緩衝液を用いることができる。
【００４０】
ブロッキングの終了後又は洗浄液による洗浄後に、基板を保護液で処理してもよい。保護液による処理は、例えば、基板を保護液に浸漬した後、室温下又は加温下で乾燥させることにより行うことができる。
【００４１】
［スポット検査工程］
上記ブロッキング工程の後に、更にスポットが確実に実施できていることをその形状から検査する工程（スポット検査工程）を実施してもよい。スポット検査工程は、ブロッキング工程の前に行った方がスポットの形状を確認しやすい。しかしながら、上述したように、ブロッキング工程を、乾燥工程後速やかに実施することにより、製造されるタンパク質アレイの、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきを、更に抑制することができる傾向がある。
【００４２】
そこで、スポット検査工程を、ブロッキング工程の後に実施することにより、乾燥工程後ブロッキング工程を実施するまでの時間を短縮することができる。スポット検査工程は、例えば、基板を顕微鏡で観察することにより実施することができる。
【００４３】
＜タンパク質アレイ＞
一実施形態において、本発明は、上記製造方法により製造されたタンパク質アレイを提供する。
【００４４】
本実施形態のタンパク質アレイは、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されている。このため、例えば、本実施形態のタンパク質アレイを用いて生体試料中の対象物質を検出又は定量することにより、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制された結果を得ることができる。
【実施例】
【００４５】
以下、実施例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００４６】
（ｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＭＥＯＮＰ）の合成）
０．０１ｍｏｌのポリエチレングリコールモノメタクリレート（Ｂｌｅｎｍｅｒ  ＰＥ−２００（ｎ＝４）、日本油脂（株）製）を２０ｍＬのクロロホルムに溶解させた後、−３０℃まで冷却した。−３０℃に保ちながら、この溶液に、予め作製しておいた０．０１ｍｏｌのｐ−ニトロフェニルクロロフォーメート（Ａｌｄｒｉｃｈ製）と０．０１ｍｏｌのトリエチルアミン（和光純薬（株）製）及びクロロホルム２０ｍＬの均一溶液をゆっくりと滴下した。−３０℃で１時間反応させた後、さらに２時間溶液を攪拌した。その後、ろ過により反応液から塩を除去し、溶媒を留去してｐ−ニトロフェニルオキシカルボニル−ポリエチレングリコールメタクリレート（ＭＥＯＮＰ）を得た。得られたモノマーを重クロロホルム溶媒中１Ｈ−ＮＭＲで測定し、エチレングリコール残基が４．５単位含まれていることを確認した。
【００４７】
（ポリマーの合成）
ポリエチレングリコールメチルエーテルメタクリレート（ＰＥＧＭＡ、数平均分子量Ｍｎ＝４６８、新中村化学株式会社製）、上記ＭＥＯＮＰ、３−メタクリロキシプロピルジメチルメトキシシラン（ＭＰＤＭＳ、ＧＥＬＥＳＴ，ＩＮＣ．製）を、それぞれ順に０．９０ｍｏｌ／Ｌ、０．０５ｍｏｌ／Ｌ、０．０５ｍｏｌ／Ｌになるように脱水エタノールに溶解させ、モノマー混合溶液を作製した。
【００４８】
このモノマー混合溶液に、２，２−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ、和光純薬工業株式会社製）を０．００２ｍｏｌ／Ｌになるように添加し、均一になるまで撹拌した。その後、アルゴンガス雰囲気下、６０℃で４時間反応させた後、反応溶液をジエチルエーテル中に滴下し、沈殿を回収した。得られたポリマーを重エタノール溶媒中１Ｈ−ＮＭＲで測定し、０．７ｐｐｍ付近に現れるＭＰＤＭＳのＳｉに結合したメチレンに帰属されるピーク、３．４ｐｐｍ付近に現れるＰＥＧＭＡの末端メトキシ基に帰属されるピーク、７．４ｐｐｍおよび８．３ｐｐｍ付近に現れるＭＥＯＮＰのベンゼン環に帰属されるピークそれぞれの積分値より、この高分子化合物の組成比を算出した。表１に結果を示した。
【００４９】
【表１】
2016114410.tif 000003
【００５０】
飽和環状ポリオレフィン樹脂製のスライドガラス形状基板（寸法：７６ｍｍ×２６ｍｍ×１ｍｍ）を作製した。この基板を上述したポリマーの０．３質量％エタノール溶液に浸漬、乾燥することにより、基板表面に上述したポリマーを含む層を導入した。
【００５１】
［実施例１］
上記基板上にＰＢＳバッファー（日水製薬製：組織培養用ダルベッコＰＢＳ（−）を１Ｌの水中に９．６ｇ溶解したバッファー）に０．５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解したマウス抗ｈα−サブユニット抗体（型式「Ａｎｔｉ−ｈ  Ａｌｐｈａ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ｃｌｏｎｅ  ６６０１  ＳＰＲ−５」、Ｍｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製）をスポッティングした。スポッティングは、温度２１．５℃、相対湿度５２％の環境下で行った。基板１枚あたりのスポット数は４０個とした。
【００５２】
続いて、スポッティング後の基板を温度２１．２℃、相対湿度３０％の環境下で１５時間静置し、基板を乾燥させる乾燥工程を実施した。
【００５３】
乾燥工程の終了後、直ちに基板をブロッキング溶液に浸漬して１時間静置し、ブロッキングした。ブロッキング溶液には０．１ｍｏｌ／Ｌのエタノールアミン水溶液を使用した。続いて、基板を洗浄液に浸漬して３分間静置した後、遠心により乾燥させ、実施例１のタンパク質アレイを製造した。洗浄液にはＰＢＳバッファー（日水製薬製）を使用した。
【００５４】
続いて、基板を顕微鏡で観察し、スポット検査を行い、スポットが正確に出来ていることを確認した。タンパク質アレイは、使用するまで−２０℃で冷凍保存した。
【００５５】
［実施例２］
実施例１と同様の製造方法により、別ロットである実施例２のタンパク質アレイを製造した。
【００５６】
［実施例３］
実施例１と同様の製造方法により、別ロットである実施例３のタンパク質アレイを製造した。
【００５７】
［比較例１］
乾燥工程を温度２１．８℃、相対湿度９４％の環境下で１５時間静置する条件で行った以外は実施例１と同様にして、比較例１のタンパク質アレイを製造した。タンパク質アレイは、使用するまで−２０℃で冷凍保存した。
【００５８】
［比較例２］
比較例１と同様の製造方法により、別ロットである比較例２のタンパク質アレイを製造した。
【００５９】
［比較例３］
比較例１と同様の製造方法により、別ロットである比較例３のタンパク質アレイを製造した。
【００６０】
［実験例１］
ＰＢＳバッファー（日水製薬製）で１％に希釈したＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社製）溶液を作製した。この溶液を用いて、ｈＣＧ抗原（型式「Ｈｕｍａｎ  Ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ  Ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｈｉｎ、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ（ｈＣＧ）、Ｐ３８２−０」、ＢＢＩ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ社製）を１、５、１０ｎｇ／ｍＬの濃度に調製した溶液を作製した。この溶液を、実施例及び比較例の各基板３枚ずつに接触させることにより抗原抗体反応を行った。反応は、３７℃で２時間実施した。反応後、０．０５質量％の非イオン性界面活性剤Ｔｗｅｅｎ２０（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を添加した１×ＳＳＣバッファー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製ＳＳＣ２０×Ｂｕｆｆｅｒを希釈して使用）を用いて、室温で基板を５分間洗浄した。
【００６１】
洗浄後、二次抗体であるビオチン標識抗ｈＣＧ抗体を反応させた。二次抗体は、Ｂｉｏｔｉｎ  Ｌａｂｅｌｉｎｇ  Ｋｉｔ−ＮＨ２（同仁化学研究所製）を用いて、抗ｈＣＧ抗体（型式「Ａｎｔｉ−ｈＣＧ  ｂｅｔａ  ｃｌｏｎｅ  ５０１４  ＳＰＴＮ−５」、Ｍｅｄｉｘ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ社製）をビオチン標識した溶液を用いた。ビオチン標識抗ｈＣＧ抗体をＰＢＳバッファー（日水製薬製）に添加することにより２０ｎｍｏｌ／Ｌの溶液を作製した。この溶液と基板とを３７℃で２時間接触させて、抗原抗体反応を実施した。抗原抗体反応後、０．０５質量％のＴｗｅｅｎ２０（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を添加した１×ＳＳＣバッファー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）を用いて、室温で基板を５分間洗浄した。
【００６２】
最後に、Ｃｙ５標識されたストレプトアビジンをＰＢＳバッファー（日水製薬製）に添加することにより２０ｎｍｏｌ／Ｌの溶液を作製した。この溶液と基板とを３７℃で３０分反応させた後、０．０５質量％のＴｗｅｅｎ２０（ロシュ・ダイアグノスティックス株式会社製）を添加した１×ＳＳＣバッファー（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）を用いて、室温で基板を５分間洗浄した。
【００６３】
実施例および比較例の蛍光量測定には、Ｐａｃｋａｒｄ  ＢｉｏＣｈｉｐ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製のマイクロアレイスキャナー「Ｓｃａｎ  Ａｒｒａｙ」を用いた。測定条件は、レーザー出力９０％、ＰＭＴ感度５０％、励起波長６４９ｎｍ、測定波長６７０ｎｍ、解像度５０μｍであった。
【００６４】
表２に、蛍光シグナル強度の測定結果を示す。表中、「＊」の記号は、１ｎｇ／ｍＬの結果に対し、有意差があることを示す。表中、ロットごとの平均値、標準偏差及びＣＶは、実施例１〜３及び比較例１〜３のタンパク質アレイそれぞれについて、４０個のスポットの蛍光シグナル強度に基づいて算出した。また、ロット間における平均値、標準偏差及びＣＶは、実施例については、実施例１〜３それぞれの平均値に基づいて算出した。また、比較例については比較例１〜３それぞれの平均値に基づいて算出した。
【００６５】
その結果、実施例１〜３のタンパク質アレイでは、１ｎｇ／ｍＬと５ｎｇ／ｍＬのｈＣＧ抗原を検出した場合に、検出シグナルの強度に有意差が認められたのに対し、比較例１〜３のタンパク質アレイでは、１ｎｇ／ｍＬと５ｎｇ／ｍＬのｈＣＧ抗原の検出シグナルの強度に有意差が認められなかった。また、ｈＣＧ抗原５ｎｇ／ｍＬと１０ｎｇ／ｍＬを検出する場合のシグナル強度も、実施例では有意差が認められたのに対し、比較例では有意差が認められなかった。
【００６６】
また、実施例１〜３のタンパク質アレイでは、１、５、１０ｎｇ／ｍＬのｈＣＧ抗原を検出した場合に、ロット間におけるＣＶが１０％以下であったのに対し、比較例１〜３のタンパク質アレイでは、１、５、１０ｎｇ／ｍＬのｈＣＧ抗原を検出した場合に、ロット間におけるＣＶが１０％を超える結果となった。
【００６７】
以上の結果は、実施例１〜３のタンパク質アレイが、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されていることを示す。
【００６８】
【表２】
2016114410.tif 000004
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明によれば、検出シグナルが高く、検出シグナルの製造ロット間におけるばらつきが抑制されたタンパク質アレイ及びその製造方法を提供することができる。