(57)【要約】【課題】培養液の波立ちや液跳ね等に起因する容器外部への培養液の漏出、及びそれによるコンタミネーションの発生を防止し得る細胞培養容器を提供することを目的とする。【解決手段】底面部１００及び底面部１００の周縁に立設される側外壁部１０１を有し、上部が開口した容器本体１０と、容器本体１０に嵌合される蓋体２０とを備える細胞培養容器１であって、容器本体１０における側外壁部１０１よりも内側に、側外壁部１０１と離間して、側外壁部１０１よりも高さが低い側内壁部１０２が立設され、側外壁部１０１と側内壁部１０２との間に培養液退避部１０３を備えることを特徴とする。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
底面部及び前記底面部の周縁に立設される側外壁部を有し、上部が開口した容器本体と、前記容器本体に嵌合される蓋体とを備える細胞培養容器であって、
前記容器本体における前記側外壁部よりも内側に、前記側外壁部と離間して、前記側外壁部よりも高さが低い側内壁部が立設され、前記側外壁部と前記側内壁部との間に培養液退避部を備える前記細胞培養容器。
【請求項２】
前記側外壁部及び前記側内壁部によって囲まれた前記底面部の面積Ｓ１（ｍｍ２）と前記側内壁部の高さｈ（ｍｍ）との積を前記培養液退避部の容積Ａとしたとき、
０＜Ａ≦（前記側内壁部よりも内側の前記底面部の面積Ｓ２（ｍｍ２）×２）
である請求項１に記載の細胞培養容器。
【請求項３】
前記培養液退避部に、培養液を保持可能な保持部材を備える請求項１又は２に記載の細胞培養容器。
【請求項４】
前記側外壁部に、前記容器本体の内側へ向かって庇部が突設される請求項１〜３のいずれかに記載の細胞培養容器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞培養容器に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、細胞や組織の培養のため、底面及び側壁面から構成され上部が開口した容器に、蓋をかぶせて使用する有底円筒形状の細胞培養容器（培養皿、シャーレ）が知られている。
【０００３】
例えば、特許文献１には、内底面が培養面となる有底円筒形状で小径の絞り部と円筒形状で大径の開口部とを連結部を介して連結した皿本体と、前記絞り部の底面の外側に設けられた支持部材とを備え、前記開口部の外径及び前記支持部材の外径が、汎用の培養皿の外径と同じである培養皿が開示されている。この構成により、少量の細胞を培養しつつ、汎用品に適合するように設計された設備機器に対応可能とされている。
【０００４】
また、特許文献２には、本体と蓋体とよりなるシャーレにおいて、蓋体の天板の全体又は一部がフレネルレンズに形成されている構成が開示されている。さらに、特許文献３には、シャーレ本体と該シャーレ本体に嵌着する蓋体とよりなるシャーレにおいて、蓋体の周壁部の外周面に複数個の突起を設けた構成が開示されている。
【０００５】
上記従来の細胞培養容器は、上部に大きな開口部が形成されるため、容器内部への培養液の出し入れ等の培養操作が実施し易いというメリットを有している。一方、上記従来の細胞培養容器は、いずれも培養液の上部全体が開口部となるため、輸送時の振動等によって培養液が波立ち、あるいは培養液が跳ねたりした場合に、側壁面の上端を通じて培養液が容器外部に直接漏れたり、跳ねた培養液が天井面（蓋の内面）に付着することで蓋の内面を経由して容器外部に漏れたりする恐れがある。これにより、培養液を介して細胞培養容器の内部と外部が通じることとなりコンタミネーションが生じるリスクがあった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２０１３−２４７９０９号公報
【特許文献２】特開２００１−２２４３５６号公報
【特許文献３】特開平１０−００４９５１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記従来の状況に鑑み、本発明は、培養液の波立ちや液跳ね等に起因する容器外部への培養液の漏出、及びそれによるコンタミネーションの発生を防止し得る細胞培養容器を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者が鋭意検討を行った結果、容器の外壁よりも内側に、外壁とは離間させて内壁を設け、その外壁と内壁の間を、培養液が流入可能な培養液退避部とすることによって上記課題が解決されることを見出し、発明を完成した。すなわち、本発明の要旨は以下の通りである。
【０００９】
（１）底面部及び前記底面部の周縁に立設される側外壁部を有し、上部が開口した容器本体と、前記容器本体に嵌合される蓋体とを備える細胞培養容器であって、
前記容器本体における前記側外壁部よりも内側に、前記側外壁部と離間して、前記側外壁部よりも高さが低い側内壁部が立設され、前記側外壁部と前記側内壁部との間に培養液退避部を備える前記細胞培養容器。
（２）前記側外壁部及び前記側内壁部によって囲まれた前記底面部の面積Ｓ１（ｍｍ２）と前記側内壁部の高さｈ（ｍｍ）との積を前記培養液退避部の容積Ａとしたとき、
０＜Ａ≦（前記側内壁部よりも内側の前記底面部の面積Ｓ２（ｍｍ２）×２）
である上記（１）に記載の細胞培養容器。
（３）前記培養液退避部に、培養液を保持可能な保持部材を備える上記（１）又は（２）に記載の細胞培養容器。
（４）前記側外壁部に、前記容器本体の内側へ向かって庇部が突設される上記（１）〜（３）のいずれかに記載の細胞培養容器。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の細胞培養容器によれば、側外壁部と側内壁部との間に培養液退避部を備えることで、培養液の波立ちや液跳ね等の事象が発生した際に、培養液を培養液退避部に流入させ、それによって容器外部への培養液の漏出、及びコンタミネーションの発生を低減することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明に係る細胞培養容器の第１の実施形態を示す側断面図である。
【図２】本発明に係る細胞培養容器の第１の実施形態において培養液退避部に培養液が流入する過程を説明するための部分拡大図である。
【図３】本発明に係る細胞培養容器の第１の実施形態において培養液退避部に培養液が流入した状態を示す部分拡大図である。
【図４】本発明に係る細胞培養容器の第２の実施形態を示す側断面図である。
【図５】本発明に係る細胞培養容器の第３の実施形態を示す側断面図である。
【図６】従来の細胞培養容器を示す側断面図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
まず、本発明に係る細胞培養容器の第１の実施形態について、図１〜図３に基づき説明する。図１に示すように、この実施形態に係る細胞培養容器１は、底面部１００、及び底面部１００の周縁に立設される側外壁部１０１を有し、上部が開口した容器本体１０と、その容器本体１０に嵌合される蓋体２０とから概略構成されている。図１では、容器本体１０の内部が培養液Ｌで満たされた状態を示している。この培養液Ｌは、培養のために調製された液体であって、培地と同じ意味である。また、本発明の目的上、適用可能な培養液Ｌの範囲には、細胞を含有するもの、及び培養すべき細胞を未だ含有していないものの両方が包含されることは無論である。
【００１３】
容器本体１０の平面形状は、特に制限されるものではなく、円形や多角形とすることができるが、通常は、製造の容易性や取り扱い易さ等の観点から円形であることが好ましい。サイズは、従来の細胞培養容器の大きさに準ずることができ、例えば、容器本体１０を、直径が１０ｃｍ、６ｃｍ、あるいは３．５ｃｍの有底円筒形状等とすることができる。
【００１４】
容器本体１０及び蓋体２０の材質は、従来の細胞培養容器に用いられている材質から適宜選択することができる。具体的には、ガラス、あるいはポリスチレン、ポリアクリレート、ポリエチレン等の各種樹脂を挙げることができ、外部からの観察を容易にするため透明であることが好ましい。また、容器本体１０及び蓋体２０は、細胞を扱うため予め滅菌処理を施すことが好ましい。滅菌処理の方法に特に制限はなく、エタノール滅菌、ＵＶ照射、ＥＢ照射、エチレンオキサイドガス滅菌、γ線照射等の各種方法を利用することができる。
【００１５】
なお、培養液Ｌとしては、当技術分野で通常用いられる細胞培養用培地であれば特に制限なく用いることができる。例えば、培養する細胞の種類に応じて、ＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地、ＢＭＥ培地、ＤＭＥ培地、αＭＥＭ培地、ＩＭＤＭ培地、ＥＳ培地、ＤＭ−１６０培地、Ｆｉｓｈｅｒ培地、Ｆ１２培地、ＷＥ培地及びＲＰＭＩ１６４０培地等、朝倉書店発行「日本組織培養学会編  組織培養の技術第三版」５８１頁に記載されているような基礎培地を用いることができる。さらに、基礎培地に血清（ウシ胎児血清等）、各種増殖因子、抗生物質、アミノ酸等を加えても良い。また、Ｇｉｂｃｏ無血清培地（インビトロジェン社）等の市販の無血清培地等を用いることもできる。
【００１６】
そして、本実施形態に係る細胞培養容器１では、図１に示すように、容器本体１０における側外壁部１０１の内側に、側外壁部１０１と離間して側内壁部１０２を立設している。これにより、側外壁部１０１と側内壁部１０２との間に培養液退避部１０３が設けられる。ここで、側内壁部１０２の高さｈ（ｍｍ）は、側外壁部１０１の高さＨ（ｍｍ）に比べて低いことを要するが、培養液Ｌの液面（通常、底面部１００から２ｍｍ上の位置）よりは高いことが好ましい。ここで、高さｈは、図１において側内壁部１０２の下端（底面部１００の上面）から側内壁部１０２の上端までの鉛直方向の距離をいい、高さＨは、同じく図１において側外壁部１０１の下端（底面部１００の上面）から側外壁部１０１の上端までの鉛直方向の距離をいう。好ましくはｈ≦Ｈ−２、特に好ましくは、ｈ≦Ｈ−５であり、且つ側内壁部１０２の高さｈを培養液Ｌの液面より少なくとも３ｍｍ程度高くなるよう設定する。側内壁部１０２は、例えば底面部１００及び側外壁部１０１と同じ材質とし、容器本体１０を製造する際に底面部１００及び側外壁部１０１とともに一体に形成しても良いし、あるいは側内壁部１０２のみを別途作製し、底面部１００上に接着等によって後から固定しても良い。
【００１７】
図６に示すように、容器本体３０の底面部上に側内壁部を有さない従来の細胞培養容器２では、輸送時の振動等によって培養液Ｌが波立ち、液跳ね等を生ずると、培養液Ｌの液面が側外壁部の上端に達し、あるいは蓋体４０の内面に培養液Ｌが付着することで、嵌合する蓋体４０及び容器本体３０の隙間から培養液Ｌが外部に漏れる恐れがある。その結果、培養液Ｌを介して細胞培養容器の内部と外部が通じ、コンタミネーションが生じる可能性がある。
【００１８】
これに対し、本実施形態に係る細胞培養容器１では、図２に示すように、輸送時の振動等によって培養液Ｌが波立ち、液跳ねを生じたとしても、培養液Ｌの波は側内壁部１０２を乗り越えて培養液退避部１０３に流入し、図３に示す状態となって波が収まるため、培養液Ｌが外部に漏れることはない。したがって、コンタミネーションの発生を低減することができる。上述のように、ｈ≦Ｈ−２とし、側内壁部１０２の高さｈを培養液Ｌの液面より少なくとも３ｍｍ高く設定することが特に好ましく、これにより、培養液Ｌの液面が揺れない平静の状態では培養液退避部１０３へ培養液Ｌが流入することはなく、培養液Ｌが波立った場合に初めて、蓋体２０の内面に培養液Ｌが付着することなく、速やかに培養液退避部１０３へ流入するという効果が最も得られ易くなる。しかし、場合によっては、側内壁部１０２の高さｈを培養液Ｌの液面と同程度かそれよりも低く形成しても良く、そのような構成であっても培養液Ｌに生じた波を鎮める効果は得ることができる。
【００１９】
側内壁部１０２を設ける位置に関して制限はなく、側外壁部１０１から任意の距離だけ離間させることができるが、特に好ましくは、側外壁部１０１及び側内壁部１０２によって囲まれた底面部１００の面積Ｓ１（ｍｍ２）と側内壁部１０２の高さｈ（ｍｍ）との積を培養液退避部１０３の容積Ａとしたとき、
０＜Ａ≦（側内壁部１０２よりも内側の底面部１００の面積Ｓ２（ｍｍ２）×２）
とする。培養液Ｌの深さは、通常２ｍｍに設定されるため、「面積Ｓ２×２」の値は培養液Ｌの量を表している。したがって、上式において培養液退避部１０３の容積Ａをとり得る範囲の最大値になるよう設定した場合、万が一、培養液Ｌの全量が培養液退避部１０３に流入する事態となっても、培養液退避部１０３はその培養液Ｌの全量を収容することができ、培養液Ｌが外部へ漏出することはない。また、上式によれば、例えば容器本体１０の形状を有底円筒形状とし、側外壁部１０１に沿って円周状に設けられる側内壁部１０２の高さｈを１ｃｍ、側内壁部１０２の内側の円形領域の直径を１０ｃｍとした場合、側外壁部１０１と側内壁部１０２の距離は最大で約０．４７ｃｍとなるに過ぎない。このように、培養液退避部１０３の最大値を制限し、効果が得られる範囲内で側外壁部１０１と側内壁部１０２との距離をできるだけ小さくすることによって、培養液Ｌを入れる領域を確保し、顕微鏡等で細胞培養容器の上側から観察する場合に観察像を狭めてしまう培養液退避部１０３の部分を最小限にすることができる。
【００２０】
続いて、本発明の細胞培養容器の第２の実施形態について図４に基づき説明する。図４に示す細胞培養容器１は、図１と同様に、底面部１００及び底面部の周縁に立設される側外壁部１０１を有し、上部が開口した容器本体１０と、容器本体１０に嵌合される蓋体２０とから構成されている。側外壁部１０１の内側には側内壁部１０２が立設され、培養液退避部１０３を有している。そして、本実施形態では、培養液退避部１０３に、培養液Ｌを保持可能な保持部材１０４を備えている。これにより、培養液Ｌが波立つ等して培養液退避部１０３に流入した際に、培養液Ｌが保持部材１０４に捕捉されるため、培養液退避部１０３内において培養液Ｌが再び跳ねる等して側内壁部１０２の内側の領域に培養液Ｌが戻ったり、蓋体２０の内面に培養液Ｌが付着する等の事態が生じるのを防止することができる。
【００２１】
保持部材１０４としては、培養液退避部１０３に流入した培養液Ｌを保持して再び流動することを阻止できるものであれば特に限定されることなく適用可能である。具体的には、ポリアクリル酸ナトリウム等の吸水性物質や、綿、不織布等の繊維材料、スポンジ等を挙げることができる。
【００２２】
次に、本発明の細胞培養容器の第３の実施形態について図５に基づき説明する。図５に示す細胞培養容器１では、図１に示す各構成に加えて、側外壁部１０１に、容器本体１０の内側へ向かって庇部１０５を突設させている。庇部１０５は、例えば底面部１００、側外壁部１０１及び側内壁部１０２と同じ材質とし、容器本体１０を製造する際に底面部１００、側外壁部１０１及び側内壁部１０２とともに一体に形成しても良いし、あるいは庇部１０５のみを別途作製し、側外壁部１０１の内側に接着等によって後から固定しても良い。これにより、容器本体１０の上部の開口面積が、底面積に比べて狭められることとなる。
【００２３】
側内壁部１０２に加え庇部１０５を設けることで、培養液Ｌの外部への漏出はより確実に防止されることとなる。すなわち、培養液Ｌが波立ち、液跳ねした場合に、庇部１０５によって波が容器本体１０の内側へ戻されることとなる。また、仮に液跳ね等によって培養液Ｌが庇部１０５の内面（図５の庇部１０５の下側の面）に付着したとしても、その付着した培養液Ｌが外部に漏れることがない。したがって、コンタミネーションの発生を確実に低減することができる。
【００２４】
図５における庇部１０５の大きさｄは、特に限定されるものではなく、大きくするほど培養液Ｌの外部への漏出を防止する効果をより高めることができる。その反面、庇部１０５によって容器本体１０の上部の開口面積がより狭められ、培養した細胞を容器本体１０の上側から顕微鏡等で観察する場合に観察可能な領域が小さくなる不都合を生ずるため、これらのバランスを考慮して適宜設定される。好ましくは、庇部１０５の先端が、側内壁部１０２より内側にならないようにする。培養液退避部１０３の部分は、元々顕微鏡による観察像から除かれる領域であるため、庇部１０５の先端が側内壁部１０２より内側にならないよう大きさｄを設定することで、庇部１０５の存在により顕微鏡観察が困難になる領域を元々細胞を観察できない領域内に留めることができ、庇部１０５による培養液Ｌの漏出防止というメリットのみを享受することができる。
【００２５】
なお、本実施形態では、庇部１０５を底面部１００と平行に突設させているが、これに限定されるものではなく、例えば、側外壁部から容器本体の内側へ向かって庇部が下降するように傾斜させたり、庇部の先端をかぎ状に曲げたりする態様を採用しても良い。また、第１〜第３の実施形態において、側内壁部１０２は底面部１００から鉛直方向へ立設しているが、これに限定されるものではなく、例えば、容器本体１０の内側へ傾斜するように立設しても良い。
【実施例】
【００２６】
次に、実施例に基づき本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２７】
（実施例）
以下のように、側内壁部を設けた本発明に係る細胞培養容器を簡易的に作製し、培養液Ｌの液面が流動した場合の漏出防止効果を確認した。
Ｎｕｎｃ（商標）６０ｍｍ細胞培養皿の内底面の中央位置に、Ｎｕｎｃ（商標）３５ｍｍ細胞培養皿の外底面を、両面テープにより接着した。６０ｍｍ細胞培養皿及び３５ｍｍ細胞培養皿の側壁の高さは、それぞれ１３ｍｍ、９ｍｍである。接着した状態において、６０ｍｍ細胞培養皿の側壁の高さと３５ｍｍ細胞培養皿の側壁の高さとの差（図１におけるＨ−ｈの値に相当する）は２ｍｍであった。Ｎｕｎｃ６０ｍｍ細胞培養皿の内底面のうち、Ｎｕｎｃ３５ｍｍ細胞培養皿と接していない範囲（培養液退避部に相当する）に、内径３８ｍｍ、外径４２ｍｍのリング状に切り出した不織布ワイパー「コットンシーガル」を載せ、側内壁部を設けた本発明に係る細胞培養容器を完成させた。
【００２８】
完成した細胞培養容器における３５ｍｍ細胞培養皿の内部に、２ｍｌのダルベッコ改変イーグル培地を入れた。その後、６０ｍｍ細胞培養皿の蓋体を、蓋体の内面が３５ｍｍ培養皿の側壁（側内壁部に相当する）の上端から５ｍｍ上部へ離れた状態で保持し、細胞培養容器を傾けたところ、培養液が蓋体に接することなく３５ｍｍ培養皿の外へ流出した。流出した培養液は不織布に保持され、振動等の操作によって、培養液が染み出すことはなかった。これにより、本来発生し得る、培養液が蓋体に付着する等して漏出することによるコンタミネーションの発生を効果的に抑止可能であることが確認された。
【符号の説明】
【００２９】
１      細胞培養容器
２      細胞培養容器
１０    容器本体
２０    蓋体
３０    容器本体
４０    蓋体
１００  底面部
１０１  側外壁部
１０２  側内壁部
１０３  培養液退避部
１０４  保持部材
１０５  庇部
Ｌ      培養液
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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