(57)【要約】【課題】被験者における卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別できる技術を提供する。【解決手段】被験者から採取した体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標として、前記被験者における卵巣癌を検出することを特徴とする卵巣癌の検出方法が提供される。メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５の測定には、ＣＡ１２５に対する抗体とメソテリンとを組み合わせたサンドイッチイムノアッセイを採用することができる。当該方法を用いた卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法、並びに、これらの方法に用いるためのキットも提供される。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者から採取した体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標として、前記被験者における卵巣癌を検出することを特徴とする卵巣癌の検出方法。
【請求項２】
前記体液は、血液であることを特徴とする請求項１に記載の卵巣癌の検出方法。
【請求項３】
前記体液を、ＣＡ１２５に対する抗体又はメソテリンに接触させる工程を包含することを特徴とする請求項１又は２に記載の卵巣癌の検出方法。
【請求項４】
前記ＣＡ１２５に対する抗体又はメソテリンは、支持体に固定化されていることを特徴とする請求項３に記載の卵巣癌の検出方法。
【請求項５】
支持体に固定化されたメソテリンに前記体液を接触させて、体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を、前記メソテリンに結合させて捕捉する第１工程と、
第１工程で捕捉された、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５に、ＣＡ１２５に対する抗体を結合させる第２工程とを包含することを特徴とする請求項４に記載の卵巣癌の検出方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の卵巣癌の検出方法を用いて、前記被験者における卵巣癌と子宮内膜症とを鑑別することを特徴とする卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれかに記載の卵巣癌の検出方法又は請求項６に記載の卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法に用いるためのキットであって、ＣＡ１２５に対する抗体とメソテリンとを含むことを特徴とするキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵巣癌の検出方法、卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法、並びに、キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
体液中の腫瘍マーカーを指標とした癌の臨床診断が広く行われている。そして、卵巣癌を検出できる腫瘍マーカーとして、癌関連糖鎖抗原の一種であるＣＡ１２５（carbohydrate antigen 125）がよく用いられている。すなわち、卵巣癌患者の血液においてＣＡ１２５濃度が上昇する。ＣＡ１２５は２２１５２アミノ酸から成る糖タンパク質であり、ムチンの一種（ＭＵＣ１６）としても知られている。
【０００３】
一方、ＣＡ１２５は子宮内膜症患者と卵巣癌患者で共通に産生される抗原であり、血中ＣＡ１２５は子宮内膜症でも上昇することが知られている（非特許文献１）。そのため、ＣＡ１２５を指標とした卵巣癌診断においては、子宮内膜症患者が卵巣癌と誤判定されてしまう可能性を含んでいる。つまり、ＣＡ１２５の量的な差異のみをもって卵巣癌と子宮内膜症とを正確に区別することは難しいのが現状である。
【０００４】
このような背景の下、ＣＡ１２５の量的な変化だけではなく質的な変化を捉えることによって、卵巣癌と子宮内膜症とを鑑別しようとする試みがある。特許文献２には、ＣＡ１２５に結合しているシアリルＴｎ抗原を指標として卵巣癌を検出する技術が開示されている。この技術は、ＣＡ１２５上のシアリルＴｎ抗原が、卵巣癌患者においては検出されるが、子宮内膜症患者ではほとんど検出されないことを見出し、完成されたものである。この卵巣癌の検出技術によれば、子宮内膜症に対する陽性率を低く抑えることができ、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができる。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−０１４６２６号公報
【特許文献２】特開２０１２−１５４８８１号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】杉村隆  監修、「図説臨床癌シリーズ（１９）」、第２版、メジカルビュー社、１９９３年８月、ｐ３１−３２
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記したように、卵巣癌の検出にあたり、卵巣癌と子宮内膜症とを正確に鑑別する技術開発が望まれている。そのための方策として、従来法とは異なる新たな原理に基づく鑑別技術の開発が望まれる。そのような技術があれば、例えば、従来法と組み合わせることにより、卵巣癌と子宮内膜症とをさらに正確に鑑別できる可能性がある。
そこで本発明は、卵巣癌と子宮内膜症とを鑑別できる新たな臨床マーカーを特定し、卵巣癌を正確に検出できる一連の技術を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、ＣＡ１２５の質的な変化を捉えることによる卵巣癌と子宮内膜症との鑑別技術について、さらなる研究を行った。その結果、ＣＡ１２５におけるメソテリンに対する結合能を指標とすることにより、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別できることを見出した。上記した課題を解決するために提供される本発明は、以下のとおりである。
【０００９】
請求項１に記載の発明は、被験者から採取した体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標として、前記被験者における卵巣癌を検出することを特徴とする卵巣癌の検出方法である。
【００１０】
本発明は卵巣癌の検出方法に係るものであり、被験者から採取された体液中に存在する「メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５」を指標として、前記被験者における卵巣癌を検出する。すなわち、従来技術におけるＣＡ１２５を指標とした卵巣癌の検出方法では、コアタンパク質を有する全てのＣＡ１２５を測定対象としていたが、本発明では、メソテリンに対する結合能を有する特定のＣＡ１２５を指標とする。本発明によれば、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができ、卵巣癌を正確に検出することができる。
【００１１】
メソテリン（mesothelin）は、ＧＰＩアンカー型の膜結合型糖タンパク質であり、中皮細胞の表面に発現している（Clin. Cancer Res. 2004; 10: 3937-42）。ＣＡ１２５とメソテリンとの相互作用が、上皮性卵巣癌（ＥＯＣ）細胞における腹膜への接着性促進に役割を果たすことが示唆されている（J. Biol. Chem. 2004; 279: 9190-8、及びMol. Cancer 2006; 5: 50）。現在のところ、メソテリンが結合するＣＡ１２５上の糖鎖構造は明らかでなく、また、メソテリンが結合する糖鎖構造が細胞の癌化によって変化するのか否かについても明らかではない。
【００１２】
ここで「メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標とする」とは、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を定量的または定性的に解析し、その解析結果を基に判断をすることを指す。例えば、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５の体液中濃度を測定し、当該測定値を、予め設定した基準値と比較して卵巣癌の有無等を検出することが挙げられる。
また「卵巣癌の検出」には、被験者における卵巣癌の有無を検出することのほか、卵巣癌の進行度の把握や再発のモニタリングを行うことも含まれる。
本発明において、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５の体液中における量は、卵巣癌患者の体液でより高値を示す。
【００１３】
請求項１に記載の卵巣癌の検出方法において、前記体液は、血液であることが好ましい（請求項２）。
【００１４】
請求項３に記載の発明は、前記体液を、ＣＡ１２５に対する抗体又はメソテリンに接触させる工程を包含することを特徴とする請求項１又は２に記載の卵巣癌の検出方法である。
【００１５】
本発明の卵巣癌の検出方法は、被験者の体液をＣＡ１２５に対する抗体又はメソテリンに接触させる工程を包含する。かかる構成により、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を簡便かつ正確に測定することができる。例えば、サンドイッチ法によるイムノアッセイが可能である。
【００１６】
請求項３に記載の卵巣癌の検出方法において、前記ＣＡ１２５に対する抗体又はメソテリンは、支持体に固定化されていることが好ましい（請求項４）。
【００１７】
請求項４に記載の卵巣癌の検出方法において、支持体に固定化されたメソテリンに前記体液を接触させて、体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を、前記メソテリンに結合させて捕捉する第１工程と、第１工程で捕捉された、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５に、ＣＡ１２５に対する抗体を結合させる第２工程とを包含する構成が好ましい（請求項５）。
【００１８】
かかる構成により、サンドイッチ法によるイムノアッセイによって、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を測定することができる。
【００１９】
請求項６に記載の発明は、請求項１〜５のいずれかに記載の卵巣癌の検出方法を用いて、前記被験者における卵巣癌と子宮内膜症とを鑑別することを特徴とする卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法である。
【００２０】
本発明は卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法に係るものであり、上記した本発明の卵巣癌の検出方法を用いる。換言すれば、被験者から採取した体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標として、前記被験者における卵巣癌と子宮内膜症とを鑑別する。本発明によれば、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができる。
【００２１】
請求項７に記載の発明は、請求項１〜５のいずれかに記載の卵巣癌の検出方法又は請求項６に記載の卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法に用いるためのキットであって、ＣＡ１２５に対する抗体とメソテリンとを含むことを特徴とするキットである。
【００２２】
本発明は、上記した本発明の卵巣癌の検出方法又は卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法に用いるためのキットに係るものであり、ＣＡ１２５に対する抗体と、メソテリンとを含む。本発明のキットによれば、イムノアッセイを用いたメソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５の測定を、簡便かつ迅速に行うことができ、その結果、卵巣癌の検出や卵巣癌と子宮内膜症との鑑別を簡便かつ迅速に行うことができる。
【発明の効果】
【００２３】
本発明の卵巣癌の検出方法によれば、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができ、卵巣癌を正確に検出することができる。
【００２４】
本発明の卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法によれば、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができる。
【００２５】
本発明のキットによれば、卵巣癌の検出や卵巣癌と子宮内膜症との鑑別を簡便かつ迅速に行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】実施例で構築したＣＡ１２５meso測定系の直線性を検討した結果を表すグラフである。
【図２】（ａ）は子宮内膜症患者および卵巣癌患者の血清について、ＣＡ１２５mesoを測定した結果を示すドットプロット図、（ｂ）は子宮内膜症患者および卵巣癌患者の血清について、ＣＡ１２５を測定した結果を示すドットプロット図、（ｃ）は子宮内膜症と卵巣癌との鑑別結果のＲＯＣ曲線を表すグラフである。
【図３】子宮内膜症患者および卵巣癌患者の血清について、ＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５を測定した結果を示すドットプロット図である。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明の卵巣癌の検出方法は、被験者から採取した体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標として、前記被験者における卵巣癌を検出するものである。また本発明の卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法は、被験者から採取した体液中に存在する、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を指標として、前記被験者における卵巣癌と子宮内膜症とを鑑別するものである。
以下の説明において、メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５を「ＣＡ１２５meso」と略記することがある。
【００２８】
本発明で用いる体液としては特に限定はないが、血液が好ましく採用される。特に、血液から調製した血清が、測定試料として好ましく採用される。
【００２９】
本発明では、「メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５」（ＣＡ１２５meso）を指標とする。「指標」の代表例は、基準値との比較である。すなわち、被験者の体液におけるＣＡ１２５meso量を測定し、その測定値を、予め設定した基準値（例えば、カットオフ値）と比較し、卵巣癌の検出あるいは卵巣癌と子宮内膜症との鑑別を行う。当該基準値は、例えば、卵巣癌に罹患していない人の体液におけるＣＡ１２５meso量のデータを収集し、統計処理を行って設定することができる。
例えば、予め設定したカットオフ値と測定値とを比較し、当該カットオフ値よりも測定値が大きい場合に、当該被験者を卵巣癌患者と判定することができる。
【００３０】
ＣＡ１２５におけるメソテリンに対する結合性の有無は、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中でメソテリンとＣＡ１２５とを共存および接触させることにより、確認することができる。例えば、後述する実施例のように、固相化されたメソテリンにＰＢＳ中でＣＡ１２５を接触させ、その後ＰＢＳで洗浄した場合に、メソテリン上に捕捉されたＣＡ１２５は、メソテリンに対する結合性を有する。
【００３１】
なお、従来のＣＡ１２５による卵巣癌の検出技術と本発明の方法とを組み合わせることにより、より効率的かつ正確に卵巣癌の検出や卵巣癌と子宮内膜症との鑑別を行うことができる。例えば、まず従来技術の方法により、卵巣癌（及び子宮内膜症）を広くスクリーニングする（一次判定、一次スクリーニング）。次に、従来技術で陽性と判定された被験者について、本発明の方法を適用する（二次判定、二次スクリーニング）。これにより、卵巣癌の検出並びに卵巣癌と子宮内膜症との鑑別を、高効率かつ正確に行うことが可能となる。
【００３２】
メソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５（ＣＡ１２５meso）を測定する方法としては特に限定はないが、好ましい実施形態では、被験者の体液をＣＡ１２５に対する抗体又はメソテリンに接触させる工程を包含する。
ＣＡ１２５に対する抗体は、モノクローナル抗体でもよいし、ポリクローナル抗体でもよい。例えば、市販のＣＡ１２５に対するモノクローナル抗体を用いることができる。
メソテリンは、単離精製されたものであればよく、例えば、市販の組換え型メソテリンを用いることができる。
【００３３】
この好ましい実施形態の代表例として、ＣＡ１２５に対する抗体とメソテリンを用いたサンドイッチ法によるイムノアッセイが挙げられる。例えば、メソテリンを支持体に固定化し、該メソテリン上にＣＡ１２５mesoを捕捉する。そして、ＣＡ１２５に対する抗体を用いて、捕捉されたＣＡ１２５mesoを検出する。
サンドイッチ法に用いる固相（支持体）の例としては、マイクロタイタープレート、ビーズ、ラテックス粒子、基板などが挙げられる。
標識の例としては、酵素（ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ等）、ラジオアイソトープ（Ｉ125等）、蛍光物質（フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン等）、生物又は化学発光物質（ルシフェリン／ルシフェラーゼ等）などが挙げられる。これらの標識は、抗体に直接的に結合されたものでもよいし、アビジン−ビオチン複合体、プロテインＡ、金コロイドなどを介して間接的に結合されたものでもよい。
【００３４】
ここで、サンドイッチ法によるイムノアッセイの具体例を挙げる。この例は、酵素標識を利用したサンドイッチ法（サンドイッチＥＩＡ、サンドイッチＥＬＩＳＡ）である。
【００３５】
まず、固相用のメソテリンと、検出用の抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体を用意する。メソテリンとしては、市販の組換え型メソテリンを採用することができる。抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体としては、ＣＡ１２５のコアタンパク質を認識するものを使用することができる。また、固相（支持体）として、市販の９６ウェルマイクロタイタープレートを採用する。
【００３６】
マイクロタイタープレートの各ウェルに、メソテリンを固定化する。各ウェルをＰＢＳで洗浄後、ＢＳＡ等でブロッキングする。続いて、各ウェルをＰＢＳで洗浄後、血清等の体液試料を適宜希釈して各ウェルに添加する。これにより、体液試料中のＣＡ１２５mesoが、その試料中の濃度に応じて、メソテリンを介して固相上に捕捉される（第１工程）。各ウェルをＰＢＳで洗浄後、酵素標識した抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体を添加する。これにより、固相上に捕捉されたＣＡ１２５mesoに、酵素標識した抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体が結合する（第２工程）。各ウェルをＰＢＳで洗浄後、発色基質を添加し、発色反応を行う。最後に、吸光度を測定し、当該吸光度からＣＡ１２５mesoの濃度を算出する。
なお、検出感度を高めるために、抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体に対する標識２次抗体や、アビジン−ビオチン複合体による増幅検出系を用いてもよい。
【００３７】
なお、検量線作成のためのＣＡ１２５meso標準品としては、例えば、卵巣癌患者の血清から調製した管理血清を用いることができる。その他、卵巣癌細胞の培養上清を用いることができる。もちろん、精製されたＣＡ１２５mesoを用いることもできる。
【００３８】
上記の例では、メソテリンを固相化しているが、抗ＣＡ１２５抗体を固相化し、捕捉されたＣＡ１２５にメソテリンを接触させてＣＡ１２５mesoを検出してもよい。この場合には、標識されたメソテリン或いはメソテリンに対する標識抗体等を用いてＣＡ１２５mesoを検出することができる。
【００３９】
得られた数値データについては、ＣＡ１２５mesoの量をもって評価することができるが、「単位ＣＡ１２５あたりのＣＡ１２５meso量」をもって評価することもできる。後者の場合には、別途、従来の方法で体液中の全ＣＡ１２５量を測定し、「（ＣＡ１２５mesoの量）／（全ＣＡ１２５量）」の値を算出することになる。以下、この値（インデックス）を「ＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５」と表記することがある。
【００４０】
サンドイッチ法以外の例としては、競合法によるイムノアッセイが挙げられる。さらに、免疫沈降法、ラテックス凝集法、ウエスタンブロット法、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析（ＭＳ）などの手法を用いてもよい。
【００４１】
本発明のキットは、本発明の卵巣癌の検出方法又は卵巣癌と子宮内膜症との鑑別方法に用いるためのものであり、ＣＡ１２５に対する抗体とメソテリンとを含む。抗体やメソテリンの形状は、凍結乾燥物でもよいし、溶液状でもよい。また本発明のキットには、さらに他の試薬類、例えば、標準品、各種の緩衝液、標識２次抗体、発色基質、プレート等の支持体、などを含めてもよい。
【００４２】
以下に本発明のキットの構成例を挙げる。以下の構成例は、いずれもサンドイッチＥＬＩＳＡ用のものであり、メソテリンと抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体を含んでいる。
【００４３】
〔キットの構成例１〕
・組換え型ヒトメソテリン（固相用）：適量
・酵素標識抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体（検出用抗体）：適量
・ＣＡ１２５meso標準品：適量
・希釈用緩衝液：適量
【００４４】
〔キットの構成例２〕
・組換え型ヒトメソテリン（固相用）：適量
・抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体（検出用抗体、１次抗体）：適量
・酵素標識２次抗体（１次抗体に対する抗体）：適量
・ＣＡ１２５meso標準品：適量
・希釈用緩衝液：適量
【００４５】
〔キットの構成例３〕
・組換え型ヒトメソテリン（固相用）：適量
・ビオチン標識抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体（検出用抗体）：適量
・酵素標識ストレプトアビジン：適量
・ＣＡ１２５meso標準品：適量
・希釈用緩衝液：適量
【００４６】
以下に、実施例をもって本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例】
【００４７】
１．検体
子宮内膜症患者５９名（年齢幅２４〜６５歳、平均年齢４０歳）および上皮性卵巣癌（ＥＯＣ）患者３６名（年齢幅４３〜８６歳、平均年齢６１歳）から採取した血清を検体とした。
【００４８】
２．方法
（１）サンドイッチＥＬＩＳＡによるＣＡ１２５mesoの測定系構築
メソテリンを固相化し、抗ＣＡ１２５抗体を標識抗体として用いたサンドイッチＥＬＩＳＡの系を構築し、以下の手順にて、各検体におけるメソテリンに対する結合能を有するＣＡ１２５（ＣＡ１２５meso）の濃度を測定した。
【００４９】
組換え型ヒトメソテリン（R&D system社）を５０ｍＭ炭酸水素ナトリウム溶液で５μｇ／ｍＬのタンパク質濃度に希釈し、固相溶液とした。Maxisorp Immunoplate（Nunc 社）に固相溶液を１ウェル当り５０μＬ加え、４℃で一晩、インキュベートした。
次に、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳを各ウェルに加え、室温で２時間、ブロッキングを行った。
０．０５％ Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）にて各ウェルを４回洗浄した後、血清検体を１ウェル当たり５０μＬ加え、４℃で一晩、インキュベートした。血清検体は、必要に応じて１％ＢＳＡを含むＰＢＳ（１％ＢＳＡ／ＰＢＳ）を用いて希釈した後、測定に用いた。
【００５０】
ＰＢＳ−Ｔにて各ウェルを４回洗浄した後、１％ＢＳＡ／ＰＢＳを用いて１μg／ｍＬのタンパク質濃度に希釈したビオチン標識抗ＣＡ１２５抗体（clone: X306, HyTest社）を１ウェル当たり５０μＬ加え、室温で２時間反応させた。抗体のビオチン標識はＮＨＳ−ＰＥＯ4−Ｂｉｏｔｉｎ 試薬（Thermo Scientific社）を用いて行った。
【００５１】
ＰＢＳ−Ｔにて各ウェルを４回洗浄した後、１％ＢＳＡ／ＰＢＳを用いて１０，０００倍に希釈したＨＲＰ標識ストレプトアビジンポリマー（Sigma社）を１ウェル当り５０μＬ加え、室温で１時間反応させた。
続いて、ＰＢＳ−Ｔにて各ウェルを４回洗浄した後、1-STEPTM Ultra TMB-ELISA （Thermo Scientific 社）を１ウェル当り５０μＬ加え、遮光条件下にて呈色反応を行った。同量の１Ｍ硫酸を加え、反応を停止させた後、４５０ｎｍの波長における吸光度（Ａ450）を測定した。
得られた吸光度からＣＡ１２５meso濃度[Ｕ／ｍＬ]を算出するに当っては、ヒト卵巣癌培養細胞株の１つであるＯＶＣＡＲ−３細胞の培養上清から調製したＣＡ１２５（０−４００Ｕ／ｍＬのＣＡ１２５濃度）をキャリブレーターとして作成した検量線を使用した。
【００５２】
（２）従来法によるＣＡ１２５測定
従来法によるＣＡ１２５測定を行うために、抗ＣＡ１２５モノクローナル抗体（clone X52, 1μg/mL，50μL/well；HyTest社）を上記（１）と同様にして固相化した。各血清検体のＣＡ１２５濃度を、CA125 calibrator（GenWay社）を用いて測定した。
【００５３】
（３）統計解析
マン・ホイットニーのＵ検定（Mann-Whitney U test）を用いた（ｐ＜０．０５）。ＣＡ１２５mesoの上記ＥＬＩＳＡ、及び従来法のＣＡ１２５測定法について、ＲＯＣ解析で評価した。バイオマーカー間の相関係数の決定には、スピアマンの順位相関係数（Spearman rank correlation coefficient）を用いた。統計解析には、エクセル統計（社会情報サービス社）を用いた。
【００５４】
３．結果
（１）ＣＡ１２５meso測定系の直線性
上記２−（１）で構築したＣＡ１２５meso測定系について、直線性を確認した。試料として、ランダムに抽出した上記卵巣癌患者２名の血清検体、ランダムに抽出した上記子宮内膜症患者２名の血清検体、及びＯＶＣＡＲ−３細胞の培養上清を用い、０〜１００Ｕ／ｍＬのＣＡ１２５濃度範囲について確認した。結果を図１に示す。すなわち、いずれの試料を用いた場合でも直線性を有していることが確認された。なお図１に示すように、各試料間でＣＡ１２５meso値が異なっていた。
【００５５】
（２）ＣＡ１２５meso測定による卵巣癌と子宮内膜症の鑑別
子宮内膜症患者５９名および上皮性卵巣癌患者３６名の上記血清検体について、上記２−（１）の方法でＣＡ１２５mesoを測定した。別途、上記２−（２）の方法でＣＡ１２５を測定した。図２（ａ）にＣＡ１２５mesoを測定したドットプロット図、図２（ｂ）にＣＡ１２５を測定したドットプロット図を示す。
【００５６】
図２（ａ）、図２（ｂ）に示すように、ＣＡ１２５mesoとＣＡ１２５のいずれにおいても、子宮内膜症患者（○）と上皮性卵巣癌患者（●）との間で差が認められ、上皮性卵巣癌患者の方が子宮内膜症患者よりも高値を示した。しかしながら、ＣＡ１２５mesoの方が上皮性卵巣癌患者と子宮内膜症患者との差が顕著であり（ｐ＝０．００００１）、ＣＡ１２５の場合（ｐ＝０．００１）よりも高い信頼性をもって両疾患を鑑別することができた。
ＲＯＣ解析を行った結果、ＣＡ１２５mesoでは曲線下面積（ＡＵＣ）が０．７７１、ＣＡ１２５ではＡＵＣが０．６９７であり、ＣＡ１２５mesoの方が高いＡＵＣを示した（図２（ｃ））。
【００５７】
詳細には、図２（ａ）に示すＣＡ１２５mesoの場合には、子宮内膜症患者における平均値±標準偏差は６４．６±２７０．２Ｕ／ｍＬ、卵巣癌患者における平均値±標準偏差は３３４１．２±１０３５３．９Ｕ／ｍＬであった。
カットオフ値を１５Ｕ／ｍＬに設定すると、卵巣癌に対する陽性率が７７．８％（３６症例中２８症例）、子宮内膜症に対する陽性率が４７．５％（５９症例中２８症例）であった。
ＲＯＣ解析によれば、カットオフ値を５６．４Ｕ／ｍＬに設定したときに、卵巣癌に対する陰性率と子宮内膜症に対する陽性率が最も低く、すなわち偽陰性と偽陽性が最も少なく、両疾患の分離性能がよかった。このカットオフ値を採用すると、卵巣癌に対する陽性率が６６．７％（３６症例中２４症例）、子宮内膜症の陽性率が１８．６％（５９症例中１１症例）であった。
このように、ＣＡ１２５mesoを指標とした卵巣癌検出では、子宮内膜症に対する陽性率がかなり低く抑えられ、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができた。
【００５８】
一方、図２（ｂ）に示すＣＡ１２５の場合には、子宮内膜症患者における平均値±標準偏差は１３８．０±２５５．６Ｕ／ｍＬ、卵巣癌患者における平均値±標準偏差は１０３３．３±２０７３．３Ｕ／ｍＬであった。カットオフ値を一般的な３５Ｕ／ｍＬに設定すると、卵巣癌に対する陽性率が８３．３％（３６症例中３０症例）、子宮内膜症に対する陽性率が７９．７％（５９症例中４７症例）であった。すなわち、従来法のＣＡ１２５測定による卵巣癌検出では、子宮内膜症の陽性率が高く、卵巣癌と子宮内膜症との鑑別は不十分であった。
【００５９】
（３）「ＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５」による卵巣癌と子宮内膜症の鑑別
上記検体についてＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５を算出し、同様の解析を行った。ドットプロット図を図３に示す。すなわち、ＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５の値は、子宮内膜症患者（○）と上皮性卵巣癌患者（●）との間で大きく異なっていた（ｐ＝０．００００００６）。これにより、ＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５を用いることで、子宮内膜症と卵巣癌とをさらに正確に鑑別できることが分かった。
【００６０】
詳細には、ＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５を用いた場合の子宮内膜症患者における平均値±標準偏差は０．２７±０．２７、卵巣癌患者における平均値±標準偏差は１．２９±１．８６であった。カットオフ値を０．３に設定すると、卵巣癌に対する陽性率が７７．８％（３６症例中２８症例）、子宮内膜症に対する陽性率が３９．０％（５９症例中２３症例）であった。すなわちＣＡ１２５meso／ＣＡ１２５を指標とした卵巣癌検出でも、子宮内膜症の陽性率がかなり低く抑えられ、卵巣癌と子宮内膜症とを高精度で鑑別することができた。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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