(57)【要約】      （修正有）【課題】簡便にかつ正確に交感神経活動を判定することができる交感神経活動判定マーカー、及び判定方法を提供する。【解決手段】交感神経活動を判定するための以下のタンパク質の組み合わせ。IgFc結合蛋白、カリクレイン−11、ＧＳＴ−Ｐ、アポリポ蛋白Ａ−Ｉ、Ｉｇ重鎖Ｖ-ＩＩＩ領域ＢＵＴ、セロトランスフェリン、ゲルゾリン、Ｈｅｍｏｐｅｘｉｎ、フィブリノーゲンβ鎖、アクチン，細胞質１、血清アルブミン、Ｅ３ユビキチン蛋白リガーゼＴＲＩＭ５６、α−１Ｂ−グリコプロテイン、ビタミンＤ結合蛋白、Ｔｒａｎｓｋｅｔｏｌａｓｅ、α−２−マクログロビン、Ｆｒｕｃｔｏｓｅ−ｂｉｓｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ａｌｄｏｌａｓｅ  Ａ、補体Ｃ３、α−１−酸性糖蛋白２、ハプトグロビン、Ｉｇ重鎖Ｖ−ＩＩＩ領域ＴＩＬ、フィブリノーゲンγ鎖、Ｉｇ  ｍｕ鎖Ｃ領域、アンチトロンビン-III、蛋白Ｓ１００−Ａ４。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
交感神経活動を判定するためのタンパク質の組み合わせであって、以下の（１）〜（２５）からなるタンパク質の組み合わせ。
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、（１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
【請求項２】
被験者から採取された唾液を用いて、下記（１）〜（２５）からなるタンパク質の各タンパク質量を測定する工程を含む、被験者の交感神経活動の判定方法。
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、（１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
【請求項３】
請求項２記載の方法において、各タンパク質のタンパク質量を説明変数とし、ＬＦ／ＨＦ値を目的変数とする多変量解析を行って得られる交感神経活動予測式に基づいて、交感神経活動を判定する請求項２記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、交感神経活動の判定に有効なバイオマーカー及び当該バイオマーカーを用いた交感神経活動の判定方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
交感神経系は、副交感神経系と共に自律神経系を構成し、全身臓器の機能を調節する。また、交感神経系はストレスなどによって亢進され、過度のストレスは不眠やめまいなどを含む自律神経失調症を引き起こす。したがって、交感神経系の活動状態を把握することは、身体及び精神の健康状態を把握する上で重要である。
【０００３】
これまで、交感神経活動やストレスの測定には、心拍のＲ−Ｒ間隔のデータを周波数解析することにより求めたパワースペクトル密度の分布を見ることにより行われている。すなわち、低周波領域部（ＬＦ）のパワースペクトル密度は交感神経活動と副交感神経活動を反映し、高周波領域部（ＨＦ）のパワースペクトル密度は副交換神経活動を反映することから、ＬＦ／ＨＦ値がストレスや交感神経活動の指標とされている。
また、交感神経活動やストレスに関連するマーカーの探索も行われており、例えば、唾液中のコルチゾール、クロモグラニンＡ、アミラーゼがストレスマーカーとして利用できること（非特許文献１）、体液中のＺｎ−α２−糖タンパク質の濃度を指標にストレスを判定すること（特許文献１）等が報告されている。
【０００４】
しかし、ＬＦ／ＨＦ値は、心拍信号のＲ−Ｒ間隔のデータを周波数解析してパワースペクトル密度の分布を求めるという複雑な演算を行う必要があると云う問題があった。一方、バイオマーカーを用いる方法では、何れも単独の分子を指標として判定が行われており、この場合には、先天的又は後天的に、交感神経活動とは無関係に当該指標分子の量などが著しく変化する場合がある。そのため、実際の測定値と大きなズレを生じる可能性がある。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際特許公開第２００７／０６６４８４号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】山口  昌樹、日本薬理学雑誌 129(2), 80-84, 2007
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、簡便にかつ正確に交感神経活動を判定することができる交感神経活動判定マーカー、及び当該バイオマーカーを用いた交感神経活動の判定方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、自律神経活動と唾液成分の関連について検討を行った結果、唾液中のタンパク質を、交感神経活動の高い被験者の唾液に特異的に多く存在するタンパク質、交感神経活動の低い被験者の唾液に特異的に多く存在するタンパク質、に分類できることを見出した。そして、これら唾液中に含まれるタンパク質のうち、特定のタンパク質を組み合わせて用いることにより交感神経活動を予測できることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、以下の１）〜２）に係るものである。
１）交感神経活動を判定するためのタンパク質の組み合わせであって、以下の（１）〜（２５）からなるタンパク質の組み合わせ。
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、（１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
２）被験者から採取された唾液を用いて、下記（１）〜（２５）からなるタンパク質の各タンパク質量を測定する工程を含む、被験者の交感神経活動の判定方法。
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、（１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein Ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
【発明の効果】
【００１０】
本発明のタンパク質の組み合わせによれば、簡便にかつ正確に交感神経活動を判定することができる。また、当該タンパク質を指標として、交感神経活動抑制剤などの薬剤効果の判定を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】本発明のタンパク質の定量値に基づくＬＦ／ＨＦの予測値と、ＬＦ／ＨＦの実測値との相関関係を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の交感神経活動を判定するためのタンパク質は、以下に示す２５種からなる。
ここで、各タンパク質の名称は、UniProt（Universal  Protein  Resource，URL：http://www.uniprot.org/）に記載されており、このデータベースに基づいて各タンパク質を記載している。尚、後記表１において、各タンパク質のＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔのアクセッションナンバーを併せて記載した。
【００１３】
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
【００１４】
斯かる２５種のタンパク質は、後記実施例に示すように、更年期女性（４５〜５５歳）５０名の唾液中から同定された１４７９種類のタンパク質について、そのタンパク質量と交感神経活動指標として公知のＬＦ／ＨＦ値（心拍変動の臨床応用-生理的意義、病態評価、予後予測  第4版、ｐ28-36）との相関解析を行った結果、有意な相関（ｐ＜０．１）が見られたタンパク質である。このうち、（１）〜（３）のタンパク質はＬＦ／ＨＦ値と負の相関を示すタンパク質であり、（４）〜（２５）のタンパク質はＬＦ／ＨＦ値と正の相関を示すタンパク質である（表１参照）。
したがって、斯かるタンパク質は、交感神経活動を判定するためのバイオマーカーとなり得る。
【００１５】
上記タンパク質は、交感神経活動を判定するために有用なタンパク質の組合せであるが、本発明の交感神経活動の判定に当たっては、当該タンパク質にさらに別のタンパク質を加えることによりその判定精度が上がる場合は、当該タンパク質を加えて判定を行うことができる。
【００１６】
本発明の交感神経活動の判定方法は、検体として被験者から採取された唾液が用いられ、当該唾液中に含まれる上記（１）〜（２５）からなるタンパク質の各タンパク質量が測定される。
ここで、「唾液」は、安静時、非安静時を問わず、そのまま吐出したもの、又は水などで含嗽したものとして得ることができるが、高濃度のタンパク質を含んでおり、非安静時における交感神経活動の変化を考慮に入れる必要がない点から安静時唾液を用いるのが好ましい。
また、タンパク質量の測定に際し、唾液試料は、唾液をカットオフ分子量が３０００以下のフィルターで限外ろ過し、夾雑物を除去したものを用いるのが好ましい。
【００１７】
タンパク質量の測定は、タンパク質の定量方法として公知の方法を用いて行うことができるが、多数のタンパク質の同時定量が可能な分析装置を用いる方法が好ましい。このような分析装置としては、高速液体クロマトグラフ質量分析装置（例えば、TripleTOF型質量分析計、Orbitrap型質量分析計、トリプル四重極型質量分析計等）等を挙げることができる。
【００１８】
得られた（１）〜（２５）の各タンパク質量を用いて交感神経活動を判定するには、例えば、各タンパク質の定量値を説明変数とし、前記したＬＦ／ＨＦ値を目的変数として用い、ＰＬＳ解析等の多変量解析を行って、交感神経活動予測式を得、この予測式より回帰係数を算出し、交感神経活動を予測する手法が挙げられる。
ここで、ＰＬＳ解析は、例えば”The R Project for Statistical Computing”（http://www.r-project.org/）を用い、ｐｌｓパッケージ中のｐｌｓｒ関数を使用することで可能である。
【００１９】
斯くして、後記表２に示すように、回帰係数を求めることができ、それらの回帰係数を各タンパク質の定量値に掛け合わせ、その和をとることで、交感神経活動の予測値（ＬＦ／ＨＦ値）を計算することができる。即ち、（交感神経活動の予測値）＝（IgFc-binding protein濃度）×（−０．１５１２６４３１２）＋（Kallikrein-11濃度）×（−０．１３４９９６６６８）＋（Glutathione S-transferase P濃度）×（−０．３９２５７８８９１）＋（Apolipoprotein A-I濃度）×（０．００６１９９６３１）＋（Ig heavy chain V-III region BUT濃度）×（０．００１３５４８９２）＋（Serotransferrin濃度）×（−０．０４７２７３１１２）＋（Gelsolin濃度）×（０．０５６２２９６１７）＋（Hemopexin濃度）×（−０．０３６５５２１７４）＋（Fibrinogen beta chain濃度）×（−０．０５５４２３９１３）＋（Actin，cytoplasmic 1濃度）×（０．０２３３８６８１２）＋（Serum albumin濃度）×（０．０６２５１２７７２）＋（E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56濃度）×（０．０９３４９８０３７）＋（Alpha-1B-glycoprotein濃度）×（−０．０１２４６５５２９）＋（Vitamin D-binding protein濃度）×（−０．０４３５６１４１７）＋（Transketolase濃度）×（−０．０２２２３０９５７）＋（Alpha-2-macroglobulin濃度）×（−０．０１３００１２１２）＋（Fructose-bisphosphate aldolase A濃度）×（０．０３６７５０３９９）＋（Complement C3濃度）×（−０．０４２８４７０４９）×（Alpha-1-acid glycoprotein 2濃度）×（０．１１４２８５４１７）＋（Haptoglobin濃度）×（０．０５８６６５７５７）＋（Ig heavy chain V-III region TIL濃度）×（０．０８２０３３８７５）＋（Fibrinogen gamma chain濃度）×（０．０９７８８３３６１）＋（Ig mu chain C region濃度）×（０．１７４９６０３９３）＋（Antithrombin-III濃度）×（０．１９０７８３６２８）＋（Protein S1OO-A4濃度）×（０．１６８７３６９４２）の計算式で算出することが可能である。
【００２０】
斯くして、本発明の（１）〜（２５）からなるタンパク質を用いることにより、交感神経活動状態を予測判定することができる。また、交感神経活動抑制剤などの交感神経活動制御剤の使用前後における当該タンパク質量を比較することによりその剤の効果の予測判定を行うことができる。
【００２１】
上述した実施形態に関し、本発明においては以下の態様が開示される。
＜１＞交感神経活動を判定するためのタンパク質の組み合わせであって、以下の（１）〜（２５）からなるタンパク質の組み合わせ。
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、（１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
＜２＞前記（１）〜（２５）からなるタンパク質が唾液中のタンパク質である、＜１＞記載のタンパク質の組合わせ。
＜３＞被験者から採取された唾液を用いて、下記（１）〜（２５）からなるタンパク質の各タンパク質量を測定する工程を含む、被験者の交感神経活動の判定方法。
（１）IgFc-binding protein、（２）Kallikrein-11、（３）Glutathione S-transferase P、（４）Apolipoprotein A-I、（５）Ig heavy chain V-III region BUT、（６）Serotransferrin、（７）Gelsolin、（８）Hemopexin、（９）Fibrinogen beta chain、（１０）Actin，cytoplasmic 1、（１１）Serum albumin、（１２）E3 ubiquitin-protein ligase TRIM56、（１３）Alpha-1B-glycoprotein、（１４）Vitamin D-binding protein、（１５）Transketolase、（１６）Alpha-2-macroglobulin、（１７）Fructose-bisphosphate aldolase A、（１８）Complement C3、（１９）Alpha-1-acid glycoprotein 2、（２０）Haptoglobin、（２１）Ig heavy chain V-III region TIL、（２２）Fibrinogen gamma chain、（２３）Ig mu chain C region、（２４）Antithrombin-III、（２５）Protein S1OO-A4
＜４＞上記＜３＞の方法において、各タンパク質のタンパク質量を説明変数とし、ＬＦ／ＨＦ値を目的変数とする多変量解析を行って得られる交感神経活動予測式に基づいて、交感神経活動を判定する上記＜３＞の方法。
＜５＞表２記載の各タンパク質の回帰係数を用いる、上記＜４＞に記載の交感神経活動を判定する方法。
【実施例】
【００２２】
以下、本発明を実施例に基づきさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２３】
試験例１  唾液タンパク質の網羅的定量
被験者（４５〜５５歳女性、５０名）に水で含嗽してもらい、座位安静時にて１０分間、口腔内の全唾液を採取した。
採取した唾液について、１５０００ｒｐｍ、４℃で１０分間遠心分離を行った。得られた上清について、限外濾過膜（カットオフ値：３０００）を用いて脱塩濃縮処理を行った。濃縮サンプル２５μＬに、還元液（３３３ｍＭ尿素、６．７ｍＭジチオトレイトール、２５ｍＭ炭酸アンモニウム）７５μＬを加え、５６℃で４５分間インキュベートを行った。さらに、アルキル化液（１％ヨードアセトアミド、２５ｍＭ炭酸アンモニウム）２５μＬ加え、遮光条件で室温下、３０分間インキュベートした。さらに、トリプシン液（５％トリプシン、２５０ｍＭ炭酸アンモニウム）１２５μＬ加え、３７℃で１５．５時間消化を行い、２．５μＬの１０％トリフルオロ酢酸を加えて反応を停止させた。このようにして、サンプルを調製した。なお、ここで用いた試薬は、全てＨＰＬＣグレードのものである。
【００２４】
前記サンプルをＴｒｉｐｌｅＴＯＦ型質量分析計により、含まれるタンパク質の網羅的解析を行った。なお、分析条件は以下の通りである。
【００２５】
＜ＬＣ条件＞
液体クロマトグラフ：Ultimate 3000 RSL Cnano System (Dionex)
トップカラム：Acclaim PepMap 100 Nano Trap C18, nano Viper
粒子径3μm, 内径75μm×20mm （Thermo）
試料ローディング液：0.1%TFA溶液（試料注入後5μL/minで5分間洗浄）
分析カラム：nanoAcquity UPLC BEH130C18
溶離液A：0.1％ギ酸水溶液
溶離液B：0.1％ギ酸80％アセトニトリル水溶液
グラジエント条件：B5%（Initial to 5min）→B50%（125min）→B95%（126min）→
B95%（150min）
流速：400nL/min
カラム温度：40℃
試料注入量：タンパク量として1μg
分析時間：150min
＜MS条件＞
質量分析計：TripleTOF5600+（ABSCIEX）
イオン化法：ナノエレクトロスプレーイオン化（nanoESI）法
極性：正イオンモード
スプレー電圧：1800V
ネブライザーガス：20 Abr
カーテンガス：20 Abr
Interface Heater温度：150℃
Declustering Potential (DP)：80 V
スキャン範囲：m/z350-1250
スキャン時間：250msec
MS/MS測定：衝突誘導解離（CID）法によるData  Dependent Scan
測定モード：High Sensitivity モード
MS/MSスキャン範囲：m/z100-2000
Collision Energy (CE)：37 V
Collision Energy Spread (CES)：15 V
Accumulation Time:  100msec
Experiment with charge state:  2 to 5  (which  exceed  150cps)
Mass Tolerance：  50ｍDa
Maximum number of candidate ions to monitor per cycle：  20
Exclude former target ions：  15sec
＜タンパク質データサーチ＞
検索エンジン：Mascot  サーチエンジンVer2.3  （Matrix  Science）
データベース：Swiss-Prot 2012/02
Enzyme:  Trypsin
Static modification:  Carbamidomethyl  （C）
Variable modification:  Oxidation  （M）
Maximum missed cleavage: 1
Precursor Mass tolerance:  ±20ppm
Fragment Mass tolerance: ±20ppm
【００２６】
その結果、１４７９種類のタンパク質について同定、定量した。
【００２７】
試験例２  交感神経活動測定
交感神経活動を間接的に得る手段として、被験者に装着した電極の検出信号から得られる心電図データ中の心拍数データに基づく心拍変動パワースペクトル解析がある。心拍変動のパワースペクトル密度関数は一般に低周波成分（ＬＦ）と高周波成分（ＨＦ）の２つのピークを示す。ＬＦは交感神経と副交感神経活動の両者を反映し、ＨＦは副交感神経活動を反映することがわかっており、そのため交感神経活動の指標としてはＬＦ／ＨＦ値が用いられる（心拍変動の臨床応用-生理的意義、病態評価、予後予測  第4版、ｐ28-36）。
前記５０名の被験者に対して、交感神経活動指標としてＬＦ／ＨＦ値を測定した。その詳細を下記に示す。
１５回／分の統制呼吸下、仰臥位状態で携帯型心電計を用いて心電図を記録した。心電図のＲＲ間隔から心拍変動解析を行い、時間領域解析及びスペクトル解析から０．０４−０．１５ＨｚをＬＦ値、０．１５−０．５ＨｚをＨＦ値とし、ＬＦ／ＨＦ値を算出した。
【００２８】
試験例３  交感神経活動マーカータンパク質の抽出
このようにして測定した交感神経活動ＬＦ／ＨＦ値と、各被験者のサンプルに含まれる唾液タンパク質量を基に相関解析（ピアソンの相関解析）を行った。その結果、相関に有意傾向（p<0.1）が見られたタンパク質は２５種類のタンパク質であり、これらを交感神経活動マーカータンパク質とした（表１）。そのうち、負の相関を示したタンパク質が表で示すＮｏ.１〜３のタンパク質、正の相関を示したタンパク質が表で示すＮｏ．４〜２５のタンパク質であった。これらの交感神経活動ＬＦ／ＨＦとの相関係数は交感神経活動マーカーとして使用されているＡｍｙｌａｓｅのそれより高く（山口ら、生体医工学、45（2）、161-168（2007））、マーカータンパク質としての性質を担保できる。
なお、表１に記載のアクセッションナンバーはタンパク質同定に用いたＳｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔのアクセッションナンバーを記載した。
【００２９】
【表１】
2016038340.tif 000002
【００３０】
得られた各被験者のサンプルに含まれる交感神経活動マーカータンパク質量と交感神経活動ＬＦ／ＨＦ値とに基づいて、ＰＬＳ回帰分析を行い、交感神経活動ＬＦ／ＨＦを目的変数、各タンパク質の定量値を説明変数としたときの、各タンパク質の回帰係数をそれぞれ算出した。なお、各タンパク質の定量値はそれぞれ標準化（前記５０名の被験者の平均値を０とし、標準偏差を１とする）した値を使用した。さらに、解析には”The R Project for Statistical Computing”（http://www.r-project.org/）を用い、plsパッケージ中のplsr関数を使用した。その結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
2016038340.tif 000003
【００３２】
上記のように算出した、各タンパク質の回帰係数に基づき、各被験者のサンプルに含まれる交感神経活動マーカータンパク質量から算出した交感神経活動ＬＦ／ＨＦの予測値と、実際に測定した交感神経活動ＬＦ／ＨＦとの関連を図１に示す。なお、図１において、サンプル中の交感神経活動マーカータンパク質量と、交感神経活動マーカータンパク質の回帰係数から予測した交感神経活動ＬＦ／ＨＦの値を縦軸に、実際に測定した値を横軸に示す。
【００３３】
図１から明らかなように、本発明の（１）〜（２５）のタンパク質量と、交感神経活動に相関関係があることがわかる。被験体の唾液中のタンパク質のうち、本発明の（１）〜（２５）のタンパク質量を定量することにより、交感神経活動を簡便にかつ正確に判定することができる。
【図１】
2016038340.tif 000004