(57)【要約】【課題】粘度の低い性質を有するプロテオグリカンを有効成分とする高保水剤を提供する。【解決手段】分解されたプロテオグリカンを有効成分とする。【選択図】図４
2016079126.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
プロテオグリカン分解物を有効成分とする高保水剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、化粧料や日用品などで使用される高保水剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肌に使用する化粧料は、肌の乾燥を防ぎ、潤いを与え、健康に美しく保つために、保水効果を有する物質が含有されていることが多い。また、同様に髪のつややかさを保つ目的に、髪の化粧料にも保水効果を有する物質は使用されている。このように保水効果を有する物質は化粧料に欠かせないものとなっている。保水効果の高い物質として、ヒアルロン酸やプロテオグリカンなどの高分子化合物が挙げられる。近年、プロテオグリカンは、細胞の増殖と成長に関わる上皮成長因子様作用を有することが明らかになったこともあり、化粧料の原料として着目され、用いられている。
【０００３】
プロテオグリカンは天然由来の化合物で、糖鎖であるグリコサミノグリカンとタンパク質の共有結合物の総称であり、一般の糖タンパク質に比べて、糖含量が極めて多いのが特徴である。動物において、結合組織の細胞外マトリックス中の基質を形成している。プロテオグリカンは起源となる動物や抽出法により、分子量や構成物質であるアミノ酸や糖（中性糖、ウロン酸、アミノ糖など）の種類や量、比率が異なり、さまざま種類が存在する。
【０００４】
プロテオグリカンは保水性を有している（特許文献１及び２）が、特許文献１及び２のプロテオグリカンはいずれも高分子のため粘度が高く、化粧料の原料に用いると、化粧料の粘性が高くなるためベタツキ感が生じるなど、使用感に難があった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２０１２−５５３７７４号  公報
【特許文献２】特開２０１４−１４１５８０号  公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、従来、保水剤として全く知られていなかったプロテオグリカン分解物について、粘度が低いという性質を持つ、新しい保水剤を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記課題を達成するために、本発明の保水剤は、プロテオグリカン分解物を有効成分とする。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、従来のプロテオグリカンより、粘度が低く、かつ、保水性に優れている保水剤を提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】本発明の、実施例１に係るプロテオグリカン分解物の分子量分布を示す図である。
【図２】実施例１および実施例２、実施例３に係り、プロテオグリカン分解物の原料とした鮭由来プロテオグリカンの分子量分布を示す図である。
【図３】実施例１のプロテオグリカン分解物の保水性の測定１に係り、原料の鮭由来プロテオグリカンの濃度と保水性との関係を説明するための図である。
【図４】実施例１のプロテオグリカン分解物の保水性の測定１に係り、実施例１で得られたプロテオグリカン分解物の保水性を、原料の鮭由来プロテオグリカンの保水性と比較するための図である。
【図５】実施例２に係るプロテオグリカン分解物の分子量分布を示す図である。
【図６】実施例２のプロテオグリカン分解物の保水性の測定２に係り、実施例２で得られたプロテオグリカン分解物の保水性を、原料の鮭由来プロテオグリカンの保水性と比較するための図である。
【図７】実施例３に係るプロテオグリカン分解物の分子量分布を示す図である。
【図８】実施例３のプロテオグリカン分解物の保水性の測定３に係り、実施例３で得られたプロテオグリカン分解物の保水性を、原料の鮭由来プロテオグリカンの保水性と比較するための図である。
【図９】実施例４に係るプロテオグリカン分解物の分子量分布を示す図である。
【図１０】実施例４のプロテオグリカン分解物の保水性の測定４に係り、実施例４で得られたプロテオグリカン分解物の保水性を、原料の鮫由来プロテオグリカンの保水性と比較するための図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、実施の形態をより具体的に説明する。
【００１１】
本発明のプロテオグリカン分解物は、プロテオグリカンが分解されたものであり、分子量は概ね５０ｋＤａ以下で、ウロン酸やアミノ糖、タンパク質から構成されるものである。
【００１２】
プロテオグリカン分解物の原料となるプロテオグリカンの由来は、牛、鶏、鯨などの哺乳類の軟骨や、鮭、鮫、エイなどの魚類の軟骨であり、その種類を問わない。プロテオグリカンの分解方法としては、プロテオグリカン分解酵素による方法や、プロテオグリカンを含む水溶液をプロトン型の強酸性陽イオン交換樹脂にて処理した後に加温する方法、プロテオグリカンを塩酸などの強酸やクエン酸などにより処理した後に加温する方法などがある。プロトン型の強酸性陽イオン交換樹脂、強酸やクエン酸などにより処理した場合、その水溶液のｐＨは約２〜３の酸性になるので、水酸化ナトリウムや水酸化カリウムなどのアルカリ性水溶液などで中和することが好ましい。得られた水溶液の状態のプロテオグリカン分解物は、そのまま使用してもよいが、噴霧乾燥やドラム乾燥、凍結乾燥などにより粉末化してもよいし、アルコールやアセトンなどの有機溶剤により沈殿、風乾して、粉末化してもよい。本発明のプロテオグリカン分解物は、粉末、水溶液、顆粒、乳化物、ゲル状物質など種々の状態で提供することができる。
【００１３】
本発明品はそのまま単独で使用してもよいが、化粧料などの原料の一部として用いることにより、製品の保水性向上を図ることが可能になる。化粧料としては、皮膚用化粧品やトイレタリー用品などがある。皮膚用化粧品の具体例として、化粧水や美容液、乳液、クリ−ム、パック、ローション、リップ類などに適用できる。トイレタリー用品としては、シャンプー、リンス、トリートメントから、入浴剤、石鹸、ボデイシャンプーなどが挙げられる。また、日用品としてはウェットティッシュなどがあり、さまざまな飲食品の原料の一部としても用いることができる。
【００１４】
本発明のプロテオグリカン分解物の配合割合は、特に限定されるものでなく、目的に応じて適量用いるとよい。化粧料や日用品の最終製品の全量に対し、おおよそ０．０００１重量％〜１０重量％の範囲で有効である。
【００１５】
本発明のプロテオグリカン分解物を化粧料の原料として用いる場合、本発明の高保水効果を損わない範囲において、他の原料である油性成分、アルコール、界面活性剤、保水剤、顔料、抗酸化剤、香料、保存料、その他無機物や有機物を添加しても問題ない。
【００１６】
以下に実施例を示して本発明を具体的に説明するが、これは単に例示の目的で述べるものであり、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００１７】
（プロテオグリカン分解物の製造１）
原料のプロテオグリカンは、市販の鮭由来プロテオグリカン（（株）角弘プロテオグリカン研究所）を購入して用いた。プロトン型の強酸性陽イオン交換樹脂（内径２．５ｃｍ、高さ８．２ｃｍ、商品名：ＡＧ ５０Ｗ−Ｘ８ ｒｅｓｉｎ、バイオラッド社製）に、原料の鮭由来プロテオグリカン０．４ｇを脱イオン水３０ｍＬに溶解した溶液を、室温でカラム上方から添加・流下した。その後、樹脂に脱イオン水を２７０ｍＬ流下した。溶出液をウォーターバスで４７℃に加温しながら、約１０ｍＬになるまで４５分間減圧濃縮した後、凍結乾燥し、０．３２ｇのプロテオグリカン分解物を得た。
【００１８】
（プロテオグリカン分解物の分析１）
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のタンパク質含量を、比色法であるローリー法にて、牛血清アルブミン（アクロス社製）を標準物質とした検量線から求めたところ、６．３％（重量比）であった。ウロン酸含量を、比色法であるカルバゾール硫酸法にて、グルクロン酸（シグマ社製）を標準物質とした検量線から求めたところ、３８．３％（重量比）であった。原料の鮭由来プロテオグリカンについて同様に分析したところ、タンパク質含量は６．５％（重量比）、ウロン酸含量は３４．６％（重量比）であった。これらの結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のタンパク質とウロン酸含量は、原料の鮭由来プロテオグリカンとほとんど変化がないことが明らかとなった。
【００１９】
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の相対粘度をオストワルド式で測定した。測定器具にはオストワルド相対粘度計Ｎｏ．１（柴田科学（株）製）を用い、溶媒は脱イオン水とし、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の５ｍｇ／ｍＬ水溶液の粘度を２６．５℃の水浴中で測定した。結果、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物５ｍｇ／ｍＬ水溶液の相対粘度は１．１であった。原料の鮭由来プロテオグリカン５ｍｇ／ｍＬ水溶液について同様の条件で測定したところ、相対粘度は３．７であった。
【００２０】
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量をゲルろ過法により測定した。ゲルろ過用樹脂はトヨパール ＨＷ５５Ｆ（内径２．７ｃｍ、高さ１１６ｃｍ、東ソー（株）製）、ポンプはＬＫＢ・ＰｕｍｐＰ−１（ファルマシア社製）、フラクションコレクターはＬＫＢ・ＦＲＡＣ−１００（ファルマシア社製）を用いた。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物１０ｍｇを１Ｍ塩化ナトリウム水溶液５ｍＬに溶解し、カラム上方から添加した。溶離液は１Ｍ塩化ナトリウム水溶液、流速０．５ｍＬ／分で、４ｍＬずつ溶出液を分取した。得られた各溶出液画分に対して、比色法であるカルバゾール硫酸法にてウロン酸含量を分析した。得られたウロン酸含量ピークの溶出体積に対して、分子量標準物質としてデキストラン（平均分子量７５，０００、３８，５００；和光純薬工業（株）製、１５０，０００、１０，０００；シグマアルドリッチ社製）を用いた検量線から分子量を求めた。
【００２１】
図１は、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のゲルろ過の結果を示すものであり、横軸はゲルろ過の溶出体積、縦軸はゲルろ過溶出液画分のカルバゾール硫酸法呈色液の５３５ｎｍでの吸光度を示す。図中の数字（ｋＤａ表記）は、分子量標準物質であるデキストランの平均分子量を示す。この結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量は３２ｋＤａと算出された。
【００２２】
なお、原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量測定については、ゲルろ過用樹脂はＳｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ−５００ ＨＲ（内径２．８ｃｍ、高さ１２０ｃｍ、ＧＥヘルスケア社製）、ポンプはＡＣ−２１２０ペリスタ・バイオミニポンプ（アトー（株）製）、フラクションコレクターはＡＤＶＡＮＴＥＣ ＦＲＣ−２１２０ Ｆｒａｃｔｉｏｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ（アドバンテック東洋（株）製）を用いた。原料の鮭由来プロテオグリカン１０ｍｇを０．１Ｍ塩化ナトリウム水溶液５ｍＬに溶解した溶液を、カラム上方から添加した。溶離液は０．１Ｍ塩化ナトリウム水溶液、流速０．５ｍＬ／分で、５．５ｍＬずつ溶出液を分取した。得られた各溶出液画分に対して、比色法であるカルバゾール硫酸法にてウロン酸含量を分析した。得られたウロン酸含量ピークの溶出体積に対して、分子量標準物質としてデキストラン（平均分子量１，４００，０００、６７０，０００、４１０，０００、１５０，０００、シグマアルドリッチ社製）を用いた検量線から分子量を求めた。
【００２３】
図２は、原料の鮭由来プロテオグリカンのゲルろ過の結果を示すものであり、横軸はゲルろ過の溶出体積、縦軸はゲルろ過溶出液画分のカルバゾール硫酸法呈色液の５３５ｎｍでの吸光度を示す。図中の数字（ｋＤａ表記）は、分子量標準物質であるデキストランの平均分子量を示す。この結果から、原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量は、１，４００ｋＤａ以上と確認された。
【００２４】
原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量との比較より、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮭由来プロテオグリカンが約４４分の１の大きさに分解されたものであることがわかった。
【００２５】
（プロテオグリカン分解物の保水性の測定１）
本実施例で用いた原料の鮭由来プロテオグリカン０．３ｇ、０．２ｇ、０．１ｇをそれぞれ脱イオン水１００ｍＬに溶解し、透析用セルロースチューブ（外周９ｃｍ×長さ３５ｃｍ、エーディア（株）製）に入れ、上下の口を封じ水中に浮遊させ、４℃の低温室で、水に対して透析した。水の交換は１週間に一度行った。吸水したセルロースチューブの重量を不定期に３０日間測定し、あらかじめ測定した風袋重量を控除し、吸水・保水した量を求めた。
【００２６】
図３は、原料の鮭由来プロテオグリカンの保水性を測定した結果を示すものである。グラフの横軸は経過日数（日）を示し、縦軸は透析用セルロースチューブ内液の重量（ｇ）を示す。いずれのプロテオグリカン濃度でも吸水・保水量は経過日数にほぼ比例して増加すること、また、プロテオグリカン濃度が高くなると吸水・保水量が増加することが明らかとなった。
【００２７】
原料の鮭由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物それぞれ０．２ｇを、脱イオン水１００ｍＬに溶解し、透析用セルロースチューブ（外周９ｃｍ×長さ３５ｃｍ、エーディア（株）製）に入れ、上下の口を封じ水中に浮遊させ、４℃の低温室で、水に対して透析した。水の交換は１週間に一度行った。吸水したセルロースチューブの重量を不定期に３０日間測定し、あらかじめ測定した風袋重量を控除し、吸水・保水した量を求めた。
【００２８】
図４は、原料の鮭由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の保水性を測定した結果を示すものである。グラフの横軸は経過日数（日）を示し、縦軸は透析用セルロースチューブ内液の重量（ｇ）を示す。３０日間の測定結果を平均すると、１日当たりの重量の増加量は、原料の鮭由来プロテオグリカン２．７ｇ／日に対して、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は７．６ｇ／日であった。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮭由来プロテオグリカンと比較して、約２．８倍の吸水・保水量があり、高保水性を有することが明らかとなった。
【実施例２】
【００２９】
（プロテオグリカン分解物の製造２）
原料のプロテオグリカンは、市販の鮭由来プロテオグリカン（（株）角弘プロテオグリカン研究所）を購入して用いた。プロトン型の強酸性陽イオン交換樹脂（内径２ｃｍ、高さ８ｃｍ、商品名：ダイヤイオンＳＫ１Ｂ、三菱化学（株）製）に、原料の鮭由来プロテオグリカン０．４ｇを脱イオン水３０ｍＬに溶解した溶液を、室温でカラム上方から添加・流下した。その後、樹脂に脱イオン水を１００ｍＬ流下した。溶出液をウォーターバスで４７℃に加温しながら、約１０ｍＬになるまで３０分間減圧濃縮した後、凍結乾燥し、０．３５ｇのプロテオグリカン分解物を得た。
【００３０】
（プロテオグリカン分解物の分析２）
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のタンパク質含量を、比色法であるローリー法にて、牛血清アルブミン（アクロス社製）を標準物質とした検量線から求めたところ、６．３％（重量比）であった。ウロン酸含量を、比色法であるカルバゾール硫酸法にて、グルクロン酸（シグマ社製）を標準物質とした検量線から求めたところ、３７．２％（重量比）であった。原料の鮭由来プロテオグリカンについて同様に分析したところ、タンパク質含量は６．５％（重量比）、ウロン酸含量は３４．６％（重量比）であった。これらの結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のタンパク質とウロン酸含量は、原料の鮭由来プロテオグリカンとほとんど変化がないことが明らかとなった。
【００３１】
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の相対粘度をオストワルド式で測定した。測定器具にはオストワルド相対粘度計Ｎｏ．１（柴田科学（株）製）を用い、溶媒は脱イオン水とし、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の５ｍｇ／ｍＬ水溶液の粘度を２６．５℃の水浴中で測定した。結果、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物５ｍｇ／ｍＬ水溶液の相対粘度は１．２であった。原料の鮭由来プロテオグリカン５ｍｇ／ｍＬ水溶液について同様の条件で測定したところ、相対粘度は３．７であった。
【００３２】
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量をゲルろ過法により測定した。ゲルろ過用樹脂はトヨパール ＨＷ５５Ｆ（内径２．７ｃｍ、高さ１１６ｃｍ、東ソー（株）製）、ポンプはＬＫＢ・ＰｕｍｐＰ−１（ファルマシア社製）、フラクションコレクターはＬＫＢ・ＦＲＡＣ−１００（ファルマシア社製）を用いた。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物１０ｍｇを１Ｍ塩化ナトリウム水溶液５ｍＬに溶解し、カラム上方から添加した。溶離液は１Ｍ塩化ナトリウム水溶液、流速０．５ｍＬ／分で、４ｍＬずつ溶出液を分取した。得られた各溶出液画分に対して、比色法であるカルバゾール硫酸法にてウロン酸含量を分析した。得られたウロン酸含量ピークの溶出体積に対して、分子量標準物質としてデキストラン（平均分子量７５，０００、３８，５００；和光純薬工業（株）製、１５０，０００、１０，０００；シグマアルドリッチ社製）を用いた検量線から分子量を求めた。
【００３３】
図５は、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のゲルろ過の結果を示すものであり、横軸はゲルろ過の溶出体積、縦軸はゲルろ過溶出液画分のカルバゾール硫酸法呈色液の５３５ｎｍでの吸光度を示す。図中の数字（ｋＤａ表記）は、分子量標準物質であるデキストランの平均分子量を示す。この結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量は１２ｋＤａと算出された。
【００３４】
実施例１に記載したとおり、原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量は、１，４００ｋＤａ以上であった。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物と原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量の比較より、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮭由来プロテオグリカンが約１２０分の１の大きさに分解されたものであることがわかった。
【００３５】
（プロテオグリカン分解物の保水性の測定２）
原料の鮭由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物それぞれ０．２ｇを、脱イオン水１００ｍＬに溶解し、透析用セルロースチューブ（外周９ｃｍ×長さ３５ｃｍ、エーディア（株）製）に入れ、上下の口を封じ水中に浮遊させ、４℃の低温室で、水に対して透析した。水の交換は１週間に一度行った。吸水したセルロースチューブの重量を不定期に３０日間測定し、あらかじめ測定した風袋重量を控除し、吸水・保水した量を求めた。
【００３６】
図６は、原料の鮭由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の保水性を測定した結果を示すものである。グラフの横軸は経過日数（日）を示し、縦軸は透析用セルロースチューブ内液の重量（ｇ）を示す。３０日間の測定結果を平均すると、１日当たりの重量の増加量は、原料の鮭由来プロテオグリカン２．７ｇ／日に対して、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は７．６ｇ／日であった。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮭由来プロテオグリカンと比較して、約２．８倍の吸水・保水量があり、高保水性を有することが明らかとなった。
【実施例３】
【００３７】
（プロテオグリカン分解物の製造３）
原料のプロテオグリカンは、市販の鮭由来プロテオグリカン（（株）角弘プロテオグリカン研究所）を購入して用いた。原料の鮭由来プロテオグリカン０．４ｇを脱イオン水１６０ｍＬに溶解し、撹拌しながら、塩酸の終濃度が０．０５Ｍになるように１Ｍ塩酸を８．４ｍＬ滴下した。４℃で３時間撹拌した後、反応液を透析用セルロースチューブ（エーディア（株）製）に入れ、外液を２５ｍＭ塩酸にし、４℃で一晩透析した。その後、外液を脱イオン水に変え、３日間透析した。外液の脱イオン水は１日３回交換した。セルロースチューブ内液を回収し、ウォーターバスで４７℃に加温しながら、約１０ｍＬになるまで３０分間減圧濃縮した。濃縮液を凍結乾燥し、０．３４ｇのプロテオグリカン分解物を得た。
【００３８】
（プロテオグリカン分解物の分析３）
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のタンパク質含量を、比色法であるローリー法にて、牛血清アルブミン（アクロス社製）を標準物質とした検量線から求めたところ、７．３％（重量比）であった。ウロン酸含量を、比色法であるカルバゾール硫酸法にて、グルクロン酸（シグマ社製）を標準物質とした検量線から求めたところ、３８．１％（重量比）であった。原料の鮭由来プロテオグリカンについて同様に分析したところ、タンパク質含量は６．５％（重量比）、ウロン酸含量は３４．６％（重量比）であった。これらの結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のタンパク質とウロン酸含量は、原料の鮭由来プロテオグリカンとほとんど変化がないことが明らかとなった。
【００３９】
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量をゲルろ過法により測定した。ゲルろ過用樹脂はトヨパール ＨＷ５５Ｆ（内径２．７ｃｍ、高さ１１６ｃｍ、東ソー（株）製）、ポンプはＬＫＢ・ＰｕｍｐＰ−１（ファルマシア社製）、フラクションコレクターはＬＫＢ・ＦＲＡＣ−１００（ファルマシア社製）を用いた。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物１０ｍｇを１Ｍ塩化ナトリウム水溶液５ｍＬに溶解し、カラム上方から添加した。溶離液は１Ｍ塩化ナトリウム水溶液、流速０．５ｍＬ／分で、４ｍＬずつ溶出液を分取した。得られた各溶出液画分に対して、比色法であるカルバゾール硫酸法にてウロン酸含量を分析した。得られたウロン酸含量ピークの溶出体積に対して、分子量標準物質としてデキストラン（平均分子量７５，０００、３８，５００；和光純薬工業（株）製、１５０，０００、１０，０００；シグマアルドリッチ社製）を用いた検量線から分子量を求めた。
【００４０】
図７は、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のゲルろ過の結果を示すものであり、横軸はゲルろ過の溶出体積、縦軸はゲルろ過溶出液画分のカルバゾール硫酸法呈色液の５３５ｎｍでの吸光度を示す。図中の数字（ｋＤａ表記）は、分子量標準物質であるデキストランの平均分子量を示す。この結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量は１２ｋＤａと算出された。
【００４１】
実施例１に記載したとおり、原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量は、１，４００ｋＤａ以上であった。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物と原料の鮭由来プロテオグリカンの分子量の比較より、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮭由来プロテオグリカンが約１２０分の１の大きさに分解されたものであることがわかった。
【００４２】
（プロテオグリカン分解物の保水性の測定３）
【００４３】
原料の鮭由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物それぞれ０．２ｇを、脱イオン水１００ｍＬに溶解し、透析用セルロースチューブ（外周９ｃｍ×長さ３５ｃｍ、エーディア（株）製）に入れ、上下の口を封じ水中に浮遊させ、４℃の低温室で、水に対して透析した。水の交換は１週間に一度行った。吸水したセルロースチューブの重量を不定期に３０日間測定し、あらかじめ測定した風袋重量を控除し、吸水・保水した量を求めた。
【００４４】
図８は、原料の鮭由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の保水性を測定した結果を示すものである。グラフの横軸は経過日数（日）を示し、縦軸は透析用セルロースチューブ内液の重量（ｇ）を示す。３０日間の測定結果を平均すると、１日当たりの重量の増加量は、原料の鮭由来プロテオグリカン２．７ｇ／日に対して、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は６．８ｇ／日であった。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮭由来プロテオグリカンと比較して、約２．５倍の吸水・保水量があり、高保水性を有することが明らかとなった。
【実施例４】
【００４５】
（プロテオグリカン分解物の製造４）
プロテオグリカン分解物の製造にあたって、原料となるプロテオグリカンを常法により鮫から調製した。市販の鮫軟骨粉末１００ｇに対して、５％酢酸（関東化学（株）製）を１Ｌ加え、４℃で一晩撹拌した。遠心分離により固形分を除去し、溶液を得た。この溶液を分画分子量１０万の限外ろ過膜（ミリポア社製）を装着した卓上循環式濃縮装置（（株）トライテック製）に通し、加水しながら、分子量１０万以上の成分を集めた。残っている低分子成分を除去するため、透析用セルロースチューブ（エーディア（株）製）に分子量１０万以上の画分を入れ、４℃の低温室で、水に対して３日間透析した。外液の水は定期的に交換した。透析用セルロースチューブ内の溶液を凍結乾燥し、０．８ｇの鮫由来プロテオグリカンを得た。
【００４６】
プロトン型の強酸性陽イオン交換樹脂（内径２．５ｃｍ、高さ８．２ｃｍ、商品名：ＡＧ ５０Ｗ−Ｘ８ ｒｅｓｉｎ、バイオラッド社製）に、原料の鮫由来プロテオグリカン０．２ｇを脱イオン水２０ｍＬに溶解した溶液を、室温でカラム上方から添加・流下した。その後、樹脂に脱イオン水を１００ｍＬ流下した。溶出液をウォーターバスで４７℃に加温しながら、約１０ｍＬになるまで３０分間減圧濃縮した後、凍結乾燥し、０．１７ｇのプロテオグリカン分解物を得た。
【００４７】
（プロテオグリカン分解物の分析４）
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の相対粘度をオストワルド式で測定した。測定器具にはオストワルド相対粘度計Ｎｏ．１（柴田科学（株）製）を用い、溶媒は脱イオン水とし、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の５ｍｇ／ｍＬ水溶液の粘度を２６．５℃の水浴中で測定した。結果、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物５ｍｇ／ｍＬ水溶液の相対粘度は１．１であった。原料の鮫由来プロテオグリカン５ｍｇ／ｍＬ水溶液について同様の条件で測定したところ、相対粘度は１．６であった。
【００４８】
本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量をゲルろ過法により測定した。ゲルろ過用樹脂はトヨパール ＨＷ５５Ｆ（内径２．７ｃｍ、高さ１１６ｃｍ、東ソー（株）製）、ポンプはＬＫＢ・ＰｕｍｐＰ−１（ファルマシア社製）、フラクションコレクターはＬＫＢ・ＦＲＡＣ−１００（ファルマシア社製）を用いた。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物１０ｍｇを１Ｍ塩化ナトリウム水溶液５ｍＬに溶解し、カラム上方から添加した。溶離液は１Ｍ塩化ナトリウム水溶液、流速０．５ｍＬ／分で、４ｍＬずつ溶出液を分取した。得られた各溶出液画分に対して、比色法であるカルバゾール硫酸法にてウロン酸含量を分析した。得られたウロン酸含量ピークの溶出体積に対して、分子量標準物質としてデキストラン（平均分子量７５，０００、３８，５００；和光純薬工業（株）製、１５０，０００、１０，０００；シグマアルドリッチ社製）を用いた検量線から分子量を求めた。
【００４９】
図９は、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物のゲルろ過の結果を示すものであり、横軸はゲルろ過の溶出体積、縦軸はゲルろ過溶出液画分のカルバゾール硫酸法呈色液の５３５ｎｍでの吸光度を示す。図中の数字（ｋＤａ表記）は、分子量標準物質であるデキストランの平均分子量を示す。この結果から、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の分子量は１２ｋＤａと算出された。
【００５０】
（プロテオグリカン分解物の保水性の測定４）
原料の鮫由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物それぞれ０．１ｇを、脱イオン水５０ｍＬに溶解し、透析用セルロースチューブ（外周９ｃｍ×長さ３５ｃｍ、エーディア（株）製）に入れ、上下の口を封じ水中に浮遊させ、４℃の低温室で、水に対して透析した。水の交換は１週間に一度行った。吸水したセルロースチューブの重量を不定期に３０日間測定し、あらかじめ測定した風袋重量を控除し、吸水・保水した量を求めた。
【００５１】
図１０は、原料の鮫由来プロテオグリカンと、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物の保水性を測定した結果を示すものである。グラフの横軸は経過日数（日）を示し、縦軸は透析用セルロースチューブ内液の重量（ｇ）を示す。３０日間の測定結果を平均すると、１日当たりの重量の増加量は、原料の鮫由来プロテオグリカン１．９ｇ／日に対して、本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は４．８ｇ／日であった。本実施例で製造したプロテオグリカン分解物は、原料の鮫由来プロテオグリカンと比較して、約２．５倍の吸水・保水量があり、高保水性を有することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
プロテオグリカンは、様々な機能を有すことが報告されており、本発明により粘性が改善された高保水剤が提供されることにより、化粧料産業や日用品産業に広く利用されることが可能である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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