(57)【要約】      （修正有）【課題】新規な膀胱平滑筋過収縮抑制剤の提供。【解決手段】グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とする膀胱平滑筋過収縮抑制剤であって、該グミ科ヒッポファエ属抽出物はオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、新規オレアノール酸エステル化合物、及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものである膀胱平滑筋過収縮抑制剤。及びシソ科マンネンロウ属の抽出物を有効成分とする膀胱平滑筋過収縮抑制剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とする膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項２】
上記グミ科ヒッポファエ属抽出物はオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、下記化学式（１）で示される化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものである請求項１に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【化１】
2016216364.tif 000004
【請求項３】
グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とするTGF-β1による膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項４】
上記グミ科ヒッポファエ属抽出物はオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、上記化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものである請求項３に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項５】
オレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、上記化合物Ａ、及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を有効成分とする請求項３に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項６】
グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とするアセチルコリンによる膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項７】
グミ科ヒッポファエ属の抽出物はウルソール酸、ポモル酸、上記化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものであることを特徴とする請求項６に記載のアセチルコリンによる膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項８】
ウルソール酸、ポモル酸、上記化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を有効成分とするアセチルコリンによる膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項９】
下記化学式（１）で示される化合物Ａ。
【化２】
2016216364.tif 000005
【請求項１０】
シソ科マンネンロウ属の抽出物を有効成分とする膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【請求項１１】
上記シソ科マンネンロウ属の抽出物にはウルソール酸を含有することを特徴とする請求項１０に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、膀胱平滑筋過収縮抑制剤に関する。本発明は、医薬品、健康食品（特定保健用食品、機能性表示食品、サプリメント等も含む）に広く利用される。
【背景技術】
【０００２】
ストレスによって膀胱の平滑筋はその収縮力が変化する。この時，膀胱の平滑筋内のTGF-β１濃度が上昇している。TGF-β1は平滑筋細胞のアクチン繊維を変化させたり，ストレス性繊維の発現を上昇させる。すなわち，膀胱の収縮力を過度に上昇させる原因になっている（過収縮，過活動）（非特許文献１）。
【０００３】
また、過活動膀胱は、加齢とともに増加するといわれている。加齢とともに体力や様々な臓器の機能の低下を生じるが、同様に膀胱の機能も加齢とともに低下していく。
排尿に関与する膀胱は３種類の神経によって多重支配を受けており、それらは副交感神経、交感神経および体性神経である。副交感神経は膀胱排尿筋の求心路と遠心路を支配し、膀胱伸展による尿意を伝える。同神経の興奮で排尿筋が収縮する。交感神経は主に膀胱頚部を支配し、膀胱頚部の緊張を保ち尿の保持に関与する。体性神経は尿生殖隔膜と外尿道括約筋を支配し、外尿道括約筋の随意収縮に関わっている。この３種類の神経によって支配された膀胱と尿道の運動が協調することによって、充分な尿量を貯めても尿失禁がなく、かつ円滑な排尿が可能になる（非特許文献２）。したがって排尿と自律神経系とは密接にかかわっており、排尿障害は自律神経失調の主訴の内でももっとも多いものの一つといわれる。
【０００４】
過活動膀胱では尿が出やすくなっている。そこで過活動膀胱の治療薬は排尿を促進させる副交感神経興奮を抑制すれば良い事が分かる。副交感神経の興奮にはアセチルコリンが関与しているが、これらアセチルコリンの働きを抑える抗コリン薬を使用することによって、排尿促進の逆の作用として尿を溜めやすくすることができる。 このように、抗コリン作用によって過活動膀胱を治療する薬としてソリフェナシン（商品名：ベシケア）、プロピベリン（商品名：バップフォー）、イミダフェナシン（商品名：ウリトス、ステーブラ）などがある（非特許文献3）。
【０００５】
別の作用機序を持った治療薬としてβ3受容体刺激薬がある。交感神経と副交感神経はそれぞれ逆の作用をするが，本薬剤は膀胱を支配する交感神経のβ3受容体を刺激する。すなわち副交感神経興奮の逆の作用を得るために交感神経を刺激するという方法である。このように、β3受容体刺激作用によって過活動膀胱を治療する薬としてミラベグロン（商品名：ベタニス）がある（非特許文献4）。
【０００６】
【非特許文献１】Ramachandran A., et al. JunB mediates basal- and TGFβ1-inducedsmooth muscle cell contractility. PLoS One. 2013;8(1):e53430
【非特許文献２】榊原  隆次, 岸  雅彦, 露崎  洋平, 舘野  冬樹, 内山  智之, 山本  達也  神経内科と膀胱〜排尿の神経機序と排尿障害の見方・扱い方〜  臨床神経, 53：181−190, 2013.
【非特許文献３】松本成史，柿崎秀宏  過活動膀胱診療を考える  過活動膀胱治療薬の特徴と使い方・使い分け−エビデンスも踏まえて− Progress in Medicine 32（4），829-833（2012）.
【非特許文献４】Bragg R, Hebel D, Vouri SM, Pitlick JM. Mirabegron: a Beta-3 agonist for overactive bladder. Consult Pharm. 29 (12), 823-837 (2014).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
このような、背景の下、本発明者は、グミ科ヒッポファエ属の抽出物及びシソ科マンネンロウ属、並びにこれらの含有成分について膀胱平滑筋細胞を包埋したコラーゲンゲルの収縮及びラット摘出膀胱平滑筋のアセチルコリン性収縮に対する作用を評価した結果、膀胱平滑筋の過収縮を抑制する作用を有することを見出し、本発明を完成させた。
本発明は、新規の膀胱平滑筋抑制剤及びそれを用いた排尿機能改善剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決するための本発明の特徴は以下の通りである。
１．グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とする膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
２．上記グミ科ヒッポファエ属抽出物はオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、下記化学式（１）で示される化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものである上記１．に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【化１】
2016216364.tif 000002
３．グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とするTGF-β1による膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
４．上記グミ科ヒッポファエ属抽出物はオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、上記化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものである上記３．に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
５．オレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、上記化合物Ａ、及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を有効成分とする上記３．に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
６．グミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とするアセチルコリンによる膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
７．グミ科ヒッポファエ属の抽出物はウルソール酸、ポモル酸、上記化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有するものであることを特徴とする上記６．に記載のアセチルコリンによる膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
８．ウルソール酸、ポモル酸、上記化合物Ａ及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を有効成分とするアセチルコリンによる膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
９．下記化学式（１）で示される化合物Ａ。
【化２】
2016216364.tif 000003
１０．シソ科マンネンロウ属の抽出物を有効成分とする膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
１１．上記シソ科マンネンロウ属の抽出物にはウルソール酸を含有することを特徴とする上記１０．に記載の膀胱平滑筋過収縮抑制剤。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】シーベリーからオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、及び化合物Ａの単離方法を示すスキームである。
【図２】シーベリーからイソラムネチン7-O-ラムノシドを単離する方法を示すスキームである。
【図３】シーベリー抽出物のTGF-b１誘発膀胱平滑筋細胞含有コラーゲンゲル収縮抑制作用を示すグラフである。
【図４】ウルソール酸のTGF-b１誘発膀胱平滑筋細胞含有コラーゲンゲル収縮抑制作用を示すグラフである。
【図５】ノコギリヤシオイル（比較例）のTGF-b１誘発膀胱平滑筋細胞含有コラーゲンゲルの収縮に対する作用を示すグラフである。
【図６】シーベリー抽出物含有成分のTGF-b１誘発膀胱平滑筋細胞含有コラーゲンゲル収縮に対する抑制作用を示すグラフである。
【図７】シーベリー抽出物におけるラット摘出膀胱平滑筋のアセチルコリン性収縮に対する作用を示すグラフである。
【図８】ウルソール酸におけるラット摘出膀胱平滑筋のアセチルコリン性収縮に対する作用を示すグラフである。
【図９】ポモル酸、イソラムネチン7-O-ラムノシド、化合物Ａ（3-O-p-coumaroyl-2,19,23-trihydroxy oleanolic acid）におけるラット摘出膀胱平滑筋のアセチルコリン性収縮に対する作用を示すグラフである。
【図１０】ローズマリー抽出物におけるラット摘出膀胱平滑筋のアセチルコリン性収縮に対する作用を示すグラフである。
【図１１】化合物ＡのHMBCおよび1H-1H COSYの相関を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
以下、本発明を詳細に説明する。
また、本発明はグミ科ヒッポファエ属の抽出物を有効成分とすることを特徴とする。上記グミ科ヒッポファエ属の植物としては、例えばシーベリー（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）、サリシフォリア（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｓａｌｉｓｉｆｏｌｉａ  Ｌ．）、チベターナ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｔｈｉｂｅｔａｎａ  Ｌ．）、ネウロコルパ（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｎｅｕｒｏｃｏｒｐａ  Ｌ．）などが挙げられる。
それらのうちでも、得られる抽出物の有効成分の含有量の観点からシーベリー（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）の使用が最も好ましい。
【００１１】
それらグミ科ヒッポファエ属植物の抽出物を調製する場合、該植物の抽出対象部位には特に限定はなく、例えば種子、果実、葉、樹皮、幹、根、地上部など適宜の部分を用いることができるが、なかでも果実が最も好ましい。抽出方法としては、それらの抽出対象部位を必要ならば予め水洗、乾燥、細切もしくは粉砕した上、浸漬法、向流抽出法など常法に従って抽出溶媒と接触せしめることによって行うことができる。
【００１２】
抽出物の抽出溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、水等を用いることができる。これらの中で、エタノール、１，３−ブチレングリコール、水、アセトン、ジクロロメタン等が好ましく用いられる。これらの溶媒は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。溶媒を混合して用いる場合、各溶媒の混合比は、溶媒の種類に応じて適宜調整すればよい。
【００１３】
抽出方法については、特に限定されるものではなくグミ科ヒッポファエ属の果実に溶媒（例えば、エタノール）を加えた後、抽出物に含まれる活性成分の活性を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を適宜適用できる。また、一定量の溶媒にグミ科ヒッポファエ属の果実を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的に溶媒を送り続ける連続抽出法等、公知の種々の抽出法を適用できる。
【００１４】
具体的な抽出方法の一例を挙げると、例えば、グミ科ヒッポファエ属に対して、その乾燥重量の５〜５０重量倍程度、好ましくは、１０〜４０重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬して加温（２５〜１００℃）し、１〜６時間程度溶媒を攪拌させることにより、活性成分を抽出することができる。勿論、溶媒の種類、溶媒量や加熱温度、加熱時間等については、活性成分を効率的に抽出できるように適宜調整すればよい。
また、上記グミ科ヒッポファエ属の抽出物は、オレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、化合物Ａ、及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を含有することが好ましい。
【００１５】
また、本発明の膀胱平滑筋過収縮抑制剤はオレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、化合物Ａ、及びイソラムネチン7-O-ラムノシドのうちの少なくとも１種を有効成分とすることを特徴とする。オレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、化合物Ａ、及びイソラムネチン7-O-ラムノシドを得る方法は特に限定されないが、
グミ科ヒッポファエ属の果実から抽出単離することが好ましい。これらの化合物を高濃度に含有するからである。また、これらの化合物は、例えば本明細書の実施例の方法に基づいて単離精製することができる。
【００１６】
本発明の膀胱平滑筋過収縮抑制剤はシソ科マンネンロウ属の抽出物を有効成分とする。シソ科マンネンロウ属として特にローズマリーが好ましい。
該植物の抽出対象部位には特に限定はなく、例えば種子、果実、花、葉、樹皮、幹、根、地上部など適宜の部分を用いることができるが、なかでも葉が最も好ましい。抽出方法としては、それらの抽出対象部位を必要ならば予め水洗、乾燥、細切もしくは粉砕した上、浸漬法、向流抽出法など常法に従って抽出溶媒と接触せしめることによって行うことができる。
【００１７】
抽出物の抽出溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；１，３−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等のグリコール類；酢酸エチル、酢酸ブチル等のエステル類；エチルエーテル、プロピルエーテル、イソプロピルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素；アセトン、メチルエチルケトン、ジエチルケトン、シクロヘキサノン等のケトン類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル、水等を用いることができる。これらの中で、エタノール、１，３−ブチレングリコール、水、アセトン、ジクロロメタン等が好ましく用いられる。これらの溶媒は、単独で又は２種以上を混合して用いることができる。溶媒を混合して用いる場合、各溶媒の混合比は、溶媒の種類に応じて適宜調整すればよい。
【００１８】
抽出方法については、特に限定されるものではなくグシソ科マンネンロウ属に溶媒（例えば、エタノール）を加えた後、抽出物に含まれる活性成分の活性を失活させない程度に加温加熱する加熱抽出法や、超臨界抽出法等を適宜適用できる。また、一定量の溶媒にシソ科マンネンロウ属を浸漬してバッチ処理する浸漬抽出法や連続的に溶媒を送り続ける連続抽出法等、公知の種々の抽出法を適用できる。
【００１９】
具体的な抽出方法の一例を挙げると、例えば、シソ科マンネンロウ属に対して、その乾燥重量の５〜５０重量倍程度、好ましくは、１０〜４０重量倍程度の抽出溶媒を加えて浸漬して加温（２５〜１００℃）し、１〜６時間程度溶媒を攪拌させることにより、活性成分を抽出することができる。勿論、溶媒の種類、溶媒量や加熱温度、加熱時間等については、活性成分を効率的に抽出できるように適宜調整すればよい。シソ科マンネンロウ属の抽出物はウルソール酸を含有することが好ましい。このとき、ウルソール酸の含有量は特に限定されないが、０．５％以上、好ましくは１．５％以上、さらには３．０％以上含有することが好ましい。
さらに、シソ科マンネンロウ属の抽出物としてローズマリー抽出物を使用する場合、市販品を使用してもよい。具体的には、サビンサ社製の「ローズマリー（ローズマリー抽出物）」を使用してもよい。尚サビンサ社製の「ローズマリー（ローズマリー抽出物）」には1.5％以上のウルソール酸を含有している。
【００２０】
本発明の膀胱平滑筋過収縮抑制剤の割合は、膀胱平滑筋過収縮抑制剤が膀胱平滑筋過収縮抑制作用を発揮する限りにおいて特に制限されない。また、膀胱平滑筋過収縮抑制剤だけからなるものであってもよい。膀胱平滑筋過収縮抑制剤の含有量として、具体的には、乾燥重量に換算して総量として０．００５重量％以上の割合を挙げることができる。膀胱平滑筋過収縮抑制剤としてグミ科ヒッポファエ属抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物等が上記割合となる量を使用すればよい。
【００２１】
本発明の膀胱平滑筋過収縮抑制剤は、その形状も特に制限されない。例えば、粉末状、顆粒状、錠剤状、丸剤状、乳剤状、液状、懸濁液状、濃縮エキス、乾燥エキス等を例示することができる。
【００２２】
本発明の膀胱平滑筋過収縮抑制剤は、前述の効果を目的として、様々な用途に適用することができる。用途として、医薬品、試薬（研究用、テストキット用）、経口摂取用組成物（たとえば、健康食品、機能性表示食品、サプリメント、特定用途食品、及びペット用サプリメント等）が挙げられる。
【００２３】
本発明の膀胱平滑筋過収縮抑制剤を含む医薬組成物は、賦形剤、担体又は添加剤を含んでいてもよい。賦形剤、担体及び添加剤としては、通常使用され、かつ薬学的に許容されるものであれば特に限定されず、その種類及び組成は、適宜変更が可能である。
【００２４】
賦形剤としては、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム等が挙げられ、担体としては、滅菌水、生理食塩水、及び各種緩衝液等が挙げられる。添加剤としては、粘ちょう剤、緩衝材、保存剤、防腐剤等が挙げられる。
【００２５】
医薬用組成物の剤型としては特に制限されるものではなく、必要に応じて適宜選択すればよいが、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤；注射剤、坐剤、塗布剤等の非経口剤が挙げられる。
【００２６】
錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等の経口剤は、例えば、デンプン、乳糖、白糖、トレハロース、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される、これらの製剤中の本発明の化合物の配合量は特に限定されるものではなく、適宜設定することができる。この種の製剤には、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を適宜使用することができる。
【００２７】
非経口剤の場合、患者の年齢、体重、疾患の程度等に応じて用量を調節し、例えば、静注、点滴静注、皮下注射、筋肉注射等によって投与する。この非経口剤は常法に従って製造され、希釈剤として一般に注射用蒸留水、生理食塩水等を用いることができる。さらに必要に応じて、殺菌剤、防腐剤、安定剤等を加えてもよい。また、この非経口剤は安定性の点から、バイアル等に充填後冷凍し、通常の凍結乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液剤を再調製することもできる。さらに必要に応じて、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を加えてもよい。その他の非経口剤の例として、外用液剤、軟膏等の塗布剤、直腸内投与のための坐剤等が挙げられ、これらも常法に従って製造される。
【００２８】
本発明を健康食品（機能性表示食品、特定保健用食品、健康飲料及びサプリメントを含む）に用いる場合、各種健康食品の原材料として本発明の化合物を健康食品に添加したり、必要に応じてデキストリン、乳糖、デンプン等の賦形剤や香料、色素等とともにペレット、錠剤、顆粒等に加工したり、またゼラチン等で被覆してカプセルに成形加工して健康食品を製造することができる。
【００２９】
健康食品に配合される膀胱平滑筋過収縮抑制剤の配合割合は、該膀胱平滑筋過収縮抑制剤の期待される効果が得られるのであれば特に制限されないが、通常、１回あたりの摂取量が０．０００１〜２０ｍｇ程度である。抽出物を用いる場合には、その中に含まれる化合物（１）が上記割合となるような量を設定すればよい。
【００３０】
これらの健康食品には、その種類に応じて種々の成分を配合することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等の食品素材を使用することができる。さらに、健康維持機能をもった膀胱平滑筋過収縮抑制剤には、他の抗酸化物質や健康食品素材などの配剤、例えば、抗酸化物質（還元型アスコルビン酸（ビタミンC）、ビタミンE、還元型グルタチン、トコトリエノール、ビタミンＡ誘導体、リコピン、ルテイン、アスタキサンチン、ゼアキサンチン、フコキサンチン、尿酸、ユビキノン、コエンザイムＱ10、葉酸、ニンニクエキス、アリシン、セサミン、リグナン類、カテキン、イソフラボン、カルコン、タンニン類、フラボノイド類、クマリン、イソクマリン類、ブルーベリーエキス）、健康食品素材（V.（ビタミン）A、V.B1、V.B2、V.B6、V.B1２、V.C、V.D、V.E、V.P、コリン、ナイアシン、パントテン酸、葉酸カルシウム、EPA、オリゴ糖、食物繊維、スクアレン、大豆レシチン、タウリン、ドナリエラ、プロテイン、オクタコサノール、DHA、卵黄レシチン、リノール酸、ラクトフェリン、マグネシウム、亜鉛、クロム、セレン 、カリウム、ヘム鉄、カキ肉エキス、キトサン、キチンオリゴ糖、コラーゲン、コンドロイチン、ウコン、カンゾウ、クコシ、ケイヒ、サンザシ、生姜、霊芝、シジミエキス、スッポン、カンゾウ、クコシ、ケイヒ、サンザシ、生姜、霊芝、オオバコ、カミツレ、カモミール、セイヨウタンポポ、ハイビスカス、ハチミツ、ボーレン、ローヤルゼリー、ライム、ラベンダー、ローズヒップ 、ビフィズス菌、フェーカリス菌、ラクリス、小麦胚芽油、ゴマ油、シソ油、大豆油、中鎖脂肪酸、アガリクス、イチョウ葉エキス、ウコン、コンドロイチン、玄米胚芽エキス、レイシ、タマネギ、DHA、 EPA、 DPA、 甜茶、冬虫夏草、ニンニク、蜂の子、パパイヤ、プーアル、プロポリス、メグスリの木、ヤブシタケ、ロイヤルゼリー、ノコギリヤシ、ヒアルロン酸、コラーゲン、ギャバ、ハープシールオイル、サメ軟骨、グルコサミン、レシチン、ホスファチジルセリン、田七ニンジン、桑葉、大豆抽出物、エキナセア、エゾウコギ、大麦抽出物、オリーブ葉、オリーブ実、ギムネマ、バナバ、サラシア、ガルシニア、キトサン、セントジョーンズワート、ナツメ、ニンジン、パッションフラワー、ブロッコリー、プラセンタ、ハトムギ、ブドウ種子、ピーナッツ種皮、ビルベリー、ブラックコホシュ、マリアアザミ、月桂樹、ラフマ、黒酢、ゴーヤー、マカ、紅花、亜麻、ウーロン茶、花棘、カフェイン、カプサイシン、キシロオリゴ糖、グルコサミン、ソバ、シトラス、食物繊維、プロテイン、プルーン、スピルリナ、大麦若葉、核酸、酵母、椎茸、梅肉、アミノ酸、深海鮫抽出物、ノニ、カキ肉、スッポン、シャンピニオン、オオバコ、アセロラ、パイナップル、バナナ、モモ、アンズ、メロン、イチゴ、ラズベリー、オレンジ、フコイダン、メシマコブ、クランベリー、コンドロイチン硫酸、亜鉛、鉄、セラミド、シルクペプチド、グリシン、ナイアシン、チェストツリー、L-システイン、赤ワイン葉、ミレット、ホーステール、ビオチン、センテラアジアティカ、ハスカップ、ピクノジェノール、フキ、ルバーブ、クローブ、カテキン、プーアル、クエン酸、ビール酵母、メリロート、ブラックジンガー、ショウガ、ガジュツ、ナットウキナーゼ、ベニコウジ、トコトリエノール、ラクトフェリン、シナモン、韃靼ソバ、ココア、ユズ種子エキス、シソの実エキス、ライチ種子エキス、月見草エキス、黒米エキス、α−リポ酸、生コーヒー豆エキス、温州みかんエキス、トリテルペノイド、キウイ種子エキス、赤ショウガエキス、アスタキサンチン、クルミエキス、レスベラトロール、赤米エキス、白キクラゲ多糖体、イチゴ種子エキス、イチゴ種子エキス、ニラ種子エキス、リンゴンベリーエキス、桜の花エキス、ササクレヒトヨダケエキス、マキベリーエキス、黒ショウガエキス、米ポリアミン、小麦ポリアミン、ジュンサイエキス、紫茶エキス、菊の花エキス）なども配合することができる。
【実施例】
【００３１】
以下、本発明の実施例を説明する。
実施例
１．シーベリー（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）抽出物の調製
シーベリー（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）の乾燥果実を粉砕し粉砕された果実の重量に対して5倍量のn-ヘキサンで、20〜40℃、撹拌1時間の条件で脱脂し、その後、固液分離を行い、脱脂原料を得た。
その後、この脱脂原料を乾燥させ、この乾燥した脱脂原料に対して7倍容量の70vol%含水エタノールで70℃以上、撹拌1時間の条件で抽出し、その後、遠心分離機で固液分離を行い、この抽出液を濃縮乾固してシーベリー抽出物を得た。
【００３２】
２．シーベリー抽出物の構成成分の単離
（１）シーベリー抽出物の構成成分のうち、オレアノールアルデヒド，オレアノール酸，ウルソール酸，ポモル酸,ウバオール、上記化学式（１）に示される化合物Ａは、図１に示されるスキームに従って単離した。即ち、シーベリー（Ｈｉｐｐｏｐｈａｅ  ｒｈａｍｎｏｉｄｅｓ  Ｌ．）の乾燥果実を粉砕し粉砕された果実（３６４ｇ）を５０ｗｔ%含水メタノールで撹拌２時間の条件で抽出し、抽出液を得た。その後、この抽出液を液液分配（ｎ−ヘキサン、酢酸エチル、ブタノール、及び水）し、ｎ−ヘキサン層（0.73ｇ）、酢酸エチル層（6.0ｇ）ブタノール層（4.3ｇ）及び水層（13.2ｇ）を得た。
そして、上記ｎ−ヘキサン層と酢酸エチル層を混合し、シリカゲルカラム（移動相等の条件は図１を参照）で分離し、Ｆｒ．１〜８の画分を得た。ＨＰＬＣにて、Ｆｒ．２画分からオレアノールアルデヒド（９ｍｇ）、Ｆｒ．３画分からウルソール酸（３４ｍｇ）、Ｆｒ．４画分からポモル酸（７ｍｇ）、ウルソール酸（２０５ｍｇ）及び新規物質（２３ｍｇ）、Ｆｒ．５画分からポモル酸（１４ｍｇ）、ウバオール（３５ｍｇ）、新規物質（５ｍｇ）を得た。
【００３３】
（３）上記新規物質について、1Hおよび13C-NMRスペクトルの測定を行った。そのデータを以下に示す。
Ｉ）物理化学データ
淡黄色粉末. 1H-NMR（CD3OD, 600 MHz）dH: 0.77（3H, s, 24-H）, 0.79（3H, s, 26-H）, 0.92（3H, s, 29-H）, 0.93（3H, s, 30-H）, 1.01（3H, s, 25-H）, 1.20（3H, s, 27-H）, 2.50（1H, brs, 18-H）, 3.88（2H, m, 23-H）, 3.92（1H, m, 2-H）, 4.93（1H, m, 3-H）, 5.30（1H, brs, 12-H）, 6.40（1H, d, J=5.5, 8’-H）, 6.79（1H, d, J=8.9 , 3’, 5’-H）, 7.45（1H, d, J=8.2 , 2’, 6’-H）, 7.65（1H, d, J=8.2 , 7’-H）. 13C-NMR（CD3OD, 150 MHz）dC:13.9（C-24）, 14.0（C-26）, 16.0（C-29）, 16.0（C-30）, 16.9（C-25）, 26.0（C-27）42.5（C-14）, 43.7（C-1）, 48.1（C-9）, 54.5（C-18）, 64.5（C-23）, 67.1（C-2）, 73.0（C-19）, 79.4（C-3）,  115.2（C-8’）, 116.3（C-3’, 5’）, 123.5（C-1’）, 128.6（C-12）, 130.6（C-2’, 6’）, 139.6（C-13）, 146.0（C-7’）, 160.7（C-4’）, 169.4（C-9’）, 181.7（C-28）. 
ＩＩ）二次元NMR
HMQC（1H-detected multiple quantum coherence spectrum）およびHMBC（1H-detected multi-bond heteronuclear multiple quantum coherence spectrum）、1H-1H COSY（1H-1H correlation spectroscopy）の解析の結果、図１１に示すHMBCおよび1H-1H  COSYの相関が認められた。以上により、新規物質は上記化学式（１）に示された化合物Ａであることが確認された。
【００３４】
（２）イソラムネチン7-O-ラムノシドは図２のスキームにより単離した。即ち、上記ブタノール層をシリカゲルカラム（移動相等の条件は図１を参照）によりＦｒ．１Ｂ〜６Ｂの画分に分離した。そのうち、Ｆｒ．３Ｂの画分からRP-HPLC（TSK-Gel ODS-120T）移動相60% MeOHにてイソラムネチン7-O-ラムノシド（６．４ｍｇ）を得た。
【００３５】
３．ローズマリー抽出物の調製
ローズマリーの葉・茎100ｇを粉砕し7倍容量の70vol%含水エタノールで70℃以上、撹拌1時間の条件で抽出し、その後、遠心分離機で固液分離を行い、この抽出液を濃縮乾固してローズマリー抽出物7.6ｇを得た。このローズマリー抽出物は0.98％のウルソール酸を含有していた。
【００３６】
試験例１：膀胱平滑筋過収縮抑制作用の評価（膀胱平滑筋細胞を包埋したコラーゲンゲルの収縮作用の評価）
ヒト膀胱平滑筋細胞液（1.5×106 cells/mL）とラット尾由来コラーゲン液（1.2  mg/mL）を1：9で混合し，24ウェルプレートに500 uLずつ播種した。1時間インキュベート後に，ウェルに0.5%FCS含有培地を500uLずつ添加し1晩インキュベートした。ここに，TGF-b1 (2.5 ng/mL) および評価サンプルを添加して24時間培養後，ゲルを取り出した。PBS中で画像撮影後，ゲルの面積を算出した。その結果を図３（シーベリー抽出物）図４（ウルソール酸）図５に示す。
【００３７】
結果及び試験例１における実施例の効果
試験の結果，シーベリー抽出物(図３)とウルソール酸(図４)にゲルの収縮抑制作用が認められた排尿障害抑制作用で知られるノコギリヤシオイル（インデナ社製）も同様に評価した結果，ほとんど収縮抑制作用は認められなかった（図５）。シーベリー抽出物はストレスによる慢性的な膀胱過収縮を抑制する作用があることが確認された。
さらに図６に示されるように、シーベリー抽出物の含有成分についても同様の評価を行った結果，トリテルペンではウバオール，ポモル酸，オレアノールアルデヒドおよび新規物質（化合物Ａ；3-O-p-coumaroyl-2,19,23-trihydroxy oleanolic acid）に収縮抑制作用が認められた。またフラボノイドのイソラムネチン7-O-ラムノシドにも抑制が見られた。
【００３８】
試験例２：ラット摘出膀胱平滑筋のアセチルコリン性収縮に対する作用
実験ではラットの膀胱平滑筋をマグヌス装置に懸垂し，栄養液中で，カルバコール（副交感神経刺激剤）で刺激した際の収縮に対する作用を調べた。すなわち，SDラット（雄，7-8週齢）から摘出した膀胱を，3×5 mmの切片を作成し，クレブズ液の入ったマグヌス槽に懸垂した。95％酸素/5%二酸化炭素の混合ガスを通気しながら，37℃で1 gの負荷をかけた。アイソトニックトランスデューサーを介して張力波形を記録し，安定化後10-6 Mのカルバコールを添加して，収縮を惹起した。収縮確認，洗浄，安定化の後，評価サンプルを加えて10分間作用させた。その後，10-8〜10-4Mのカルバコールを累積添加し，収縮波形を記録した。最後に，洗浄，10-4Mのカルバコールによる収縮確認を行って，膀胱平滑筋に毒性を示さないことを確認した。
得られた結果は，カルバコールによる最大収縮に対する各カルバコール濃度の収縮率を算出し，グラフ化した。その結果を図７（シーベリー抽出物）図８（ウルソール酸）図９（その他のシーベリー構成成分）、図１０（ローズマリー抽出物
）に示す。
【００３９】
結果及び試験例２における実施例の効果
図７に示すように、シーベリー抽出物は10-6M以下のカルバコール収縮に対して抑制作用を示した。また、図８に示されるように、主成分のウルソール酸の作用はさらに明瞭で，1〜100 ug/mLの範囲で3×10-6M以下のカルバコール収縮を抑制した。また、図９に示されるように、イソラムネチン7-O-ラムノシド３×１０−５Ｍ以下カルバコール収縮に対して抑制作用を示した。10-7Mにおいて、有意に抑制した。また、化合物Ａ（１０μｇ）は、10-4Mのカルバコール収縮、ポモル酸は、３×10-6M〜３×10-５Mカルバコール収縮に対して抑制傾向がみられた。この結果よりシーベリー抽出物やウルソール酸は膀胱平滑筋に働きかけることで膀胱の収縮を抑制することが明らかになった。さらに図１０に示すように、ローズマリー抽出物において，10〜100 ug/mLの範囲で10-5Mのカルバコール収縮を抑制した。これによりローズマリー抽出物は膀胱平滑筋に働きかけることで膀胱の収縮を抑制することが明らかになった。
【００４０】
本発明による膀胱平滑筋過収縮抑制剤（グミ科ヒッポファエ属抽出物）の配合例を示す。尚、以下の配合例は本発明を限定するものではない。また、配合例には挙げていないがローズマリー抽出物においても同様に配合することができる。
配合例１：チューインガム（機能性表示食品又は特定保健用食品）
砂糖                          ５３．０ｗｔ％
ガムベース                    ２０．０
グルコース                    １０．０
水飴                          １６．０
香料                            ０．５
グミ科ヒッポファエ属抽出物      ０．５
１００．０ｗｔ％
【００４１】
配合例２：グミ（機能性表示食品又は特定保健用食品）
還元水飴                      ４０．０ｗｔ％
グラニュー糖                  ２０．０
ブトウ糖                      ２０．０
ゼラチン                        ４．７
水                              ９．６８
ユズ果汁                        ４．０
ユズフレーバー                  ０．６
色素                            ０．０２
グミ科ヒッポファエ属抽出物        １．０
１００．０ｗｔ％
【００４２】
配合例３：キャンディー（機能性表示食品又は特定保健用食品）
砂糖                          ５０．０ｗｔ％
水飴                          ３３．０
水                            １４．４
有機酸                          ２．０
香料                            ０．２
グミ科ヒッポファエ属抽出物      ０．４
１００．０ｗｔ％
【００４３】
配合例４：ヨーグルト（ハード・ソフト）（機能性表示食品又は特定保健用食品）
牛乳                          ４１．５ｗｔ％
脱脂粉乳                        ５．８
砂糖                            ８．０
寒天                            ０．１５
ゼラチン                        ０．１
乳酸菌                          ０．００５
グミ科ヒッポファエ属抽出物      ０．４
香料                              微量
水                                残余
１００．０ｗｔ％
【００４４】
配合例５：清涼飲料（機能性表示食品又は特定保健用食品）
果糖ブドウ糖液糖              ３０．０ｗｔ％
乳化剤                          ０．５
グミ科ヒッポファエ属抽出物      ０．３
香料                              適量
精製水                            残余
１００．０ｗｔ％
【００４５】
配合例６：錠菓（機能性表示食品又は特定保健用食品）
砂糖                          ７６．４ｗｔ％
グルコース                    １９．０
ショ糖脂肪酸エステル            ０．２
グミ科ヒッポファエ属抽出物      ０．５
精製水                          ３．９
１００．０ｗｔ％
【００４６】
配合例７：ソフトカプセル（サプリメント又は医薬品）
玄米胚芽油                    ４７．０ｗｔ％
ユズ種子油                    ４０．０
乳化剤                        １２．０
グミ科ヒッポファエ属抽出物      １．０
１００．０ｗｔ％
【００４７】
配合例８：錠剤（サプリメント又は医薬品）
乳糖                          ５４．０ｗｔ％
結晶セルロース                ３０．０
澱粉分解物                    １０．０
グリセリン脂肪酸エステル        ５．０
グミ科ヒッポファエ属抽出物      １．０
１００．０ｗｔ％
【産業上の利用可能性】
【００４８】
以上により、本発明は、膀胱平滑筋過収縮抑制剤として有用であり、医薬品、健康食品等に利用することができる。
【図１】
2016216364.tif 000006
【図２】
2016216364.tif 000007
【図３】
2016216364.tif 000008
【図４】
2016216364.tif 000009
【図５】
2016216364.tif 000010
【図６】
2016216364.tif 000011
【図７】
2016216364.tif 000012
【図８】
2016216364.tif 000013
【図９】
2016216364.tif 000014
【図１０】
2016216364.tif 000015
【図１１】
2016216364.tif 000016