(57)【要約】【課題】高血圧患者、高血圧予備軍といわれる健者に、副作用の少ない、安全な食物由来の血管弛緩剤を提供することである。さらに当該組成物を含む飲食品、健康食品、機能性食品、健康補助食品等の食品類、飲料類を提供することを課題とする。【解決手段】酵母の抽出物を有効成分とする。酵母抽出物としては、酵母を熱水処理、酸またはアルカリ処理、及び酵素処理するという簡単な操作により得られる酵母エキスが、より優れた血管弛緩作用を有することを見出した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母エキスを有効成分として含有する血管弛緩剤。
【請求項２】
グルタチオン含量が15重量％以上、リボフラビン含量が0.01重量％以上、葉酸含量が0.01重量％以上かつNAD含量が0.5重量％以上の酵母エキスを有効成分として含有する、請求項１の血管弛緩剤。
【請求項３】
血管弛緩作用を有する酵母エキス。
【請求項４】
グルタチオン含量が15重量％以上、リボフラビン含量が0.01重量％以上、葉酸含量が0.01重量％以上かつNAD含量が0.5重量％以上の請求項３に記載の血管弛緩作用を有する酵母エキス。
【請求項５】
前記酵母がキャンディダ・ユティリス又はサッカロマイセス・セレビシエである、請求項３又は４記載の血管弛緩作用を有する酵母エキス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管弛緩作用を有する酵母エキスに関する。本発明によって提供される酵母エキスは、血管弛緩作用を有し、血管弛緩剤として医薬品又は食品の分野で有用である。
【背景技術】
【０００２】
2012年世界保健統計（世界保健機関（WHO））によると、2008年の世界の総死亡数の63％にあたる3.600万人が、脳卒中や癌、心疾患、糖尿病など生活習慣病で死亡しており、脳卒中、心疾患は、高血圧症が原因となっていると報告されている。高血圧症には、自覚症状がほとんどないため気がつかないうちに動脈硬化を促し、さまざまな合併症を引き起こす。特に血管収縮が継続すると血管の機能が低下し、動脈硬化の発生・進展につながる。
【０００３】
これまで高血圧症の予防および治療方法としてさまざまな方法が用いられてきた。一般療法として減量、節酒、適度な運動、適切な食事等生活習慣を改善する方法である。これは、薬物を使用しないため、副作用の懸念あるいは経済的負担という点で利点があるものの、個人の意欲と環境によるため必ずしも改善効果が得られるものではない。一方、薬物療法は、確実な降圧効果が期待できる。利尿剤、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、カルシウム拮抗剤、交感神経遮断薬など、種々の機序を介して作用する薬剤が開発されている。しかし、これらの治療薬は、高血圧症が重度で医師の診断のもと処方されるものであり、高血圧症予備軍の患者に改善目的での使用はされていない。これらのことから安全で長期間継続的に摂取できる方法が望まれている。
【０００４】
この課題の解決を目的として食品が数多く開発された。例えば、わかめペプチド（特許文献１）、杜仲葉配糖体（非特許文献１）、鰹節オリゴペプチド（特許文献２）、ラクトトリペプチド（特許文献３）、サーデンペプチド（特許文献4）、γ-アミノ酪酸配合食品などが知られるが、酵母エキスが血管弛緩作用を有することはほとんど知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開2002-138100号公報
【特許文献２】特開平05-331191号公報
【特許文献３】特開平11-98978号公報
【特許文献４】特開2006-56805号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】生薬學雜誌 59(3), 117-120, 2005-06-20
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上記のように、動脈硬化などの予防、高血圧症の改善のために、副作用の少なく、安価、安全で効果的な予防が望まれていた。特に、医薬品だけでなく、健康食品、機能性食品、健康補助食品等として、血管弛緩作用、特に血圧降下作用を有するものが求められていた。このため、本発明の課題は、高血圧患者、高血圧予備軍といわれる健者に、副作用の少ない、安全な食物由来の血管弛緩剤を提供することである。さらに当該組成物を含む飲食品、健康食品、機能性食品、健康補助食品等の食品類、飲料類を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、酵母が作り出すさまざまな成分の機能性を検討している。その結果、酵母エキスに大動脈を弛緩させる機能を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
本願発明は、
（１） 酵母エキスを含有する血管弛緩剤、
（２）グルタチオン含量が15重量％以上、リボフラビン含量が0.01重量％以上、葉酸含量が0.01重量％以上かつNAD含量が0.5重量％以上の酵母エキスを含む、（１）の血管弛緩剤、
（３）血管弛緩作用を有する酵母エキス、
（４）グルタチオン含量が15重量％以上、リボフラビン含量が0.01重量％以上、葉酸含量が0.01重量％以上かつNAD含量が0.5重量％以上の（３）に記載の血管弛緩作用を有する酵母エキス、
（５）前記酵母がキャンディダ・ユティリス又はサッカロマイセス・セレビシエである、請求項３又は４記載の血管弛緩作用を有する酵母エキス、
を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本願発明により、食品として利用されている酵母から抽出されるものであるため、安全であり、長期間服用することができるため、高血圧症患者、高血圧予備軍といわれる健者が、食品としても摂取することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本願発明の酵母エキスの製造に用いられる酵母は、一般的に用いられている酵母であれば使用することができる。具体的には、パン酵母、ビール酵母、トルラ酵母などを挙げることができる。この中でも、特にトルラ酵母（Candida utilis）が望ましい。
【００１２】
本発明に用いた酵母エキスは、グルタチオン含量15重量％以上、リボフラビン含量0.01重量％以上、葉酸含量0.01重量％以上かつNAD含量0.5重量％以上を有する酵母エキスである。
【００１３】
このような酵母エキスは、グルタチオンを含有する酵母菌体から酵母エキスを抽出することで、グルタチオンを15重量％以上含有する酵母エキスが得られる。酵母の培養形式は特に制限がないが、一般にバッチ培養、あるいは連続培養のいずれかが用いられる。培地も一般に使用されているものが使用できる。例えば、炭素源として、ブドウ糖、酢酸、エタノール、グリセロール、糖蜜、亜硫酸パルプ廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩などが使用される。リン酸、カリウム、マグネシウム源も過リン酸石灰、リン酸アンモニウム、塩化カリウム、水酸化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム等の通常の工業用原料でよく、その他亜鉛、銅、マンガン、鉄イオン等の無機塩を添加する。その他、ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等を添加したり、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトン等の有機物を添加しても良い。培養温度は２１〜３７℃、好ましくは２５〜３４℃で、ｐＨは３．０〜８．０、特に３．５〜７．０が好ましい。培養条件によりアミノ酸や核酸の生産性が変動するため、目的とする酵母エキスの製品仕様に合わせて条件設定を行う。
【００１４】
菌体培養後に本発明のエキス抽出を行う。抽出法には、とくに制限はないが、一般的に、自己消化法、熱水抽出法、酵素抽出法、酸、若しくはアルカリ抽出法、又はこれらの組み合わせにより行うことが可能である。
【００１５】
自己消化により酵母エキスを抽出する場合は、例えば、５５℃で４時間攪拌する。酵素抽出法であれば、細胞壁溶解酵素又はプロテアーゼ等で攪拌抽出する。酸抽抽出法であれば、硫酸等で酸性に調整後、抽出する。アルカリ抽出法であれば、アルカリに調整後、抽出する。又は、自己消化後（例えば５５℃で４時間攪拌）に、酵素抽出をする等の組み合わせも可能である。
【００１６】
エキス抽出後は遠心分離で酵母残渣を分離し、濃縮後、凍結乾燥又は熱風乾燥することでグルタチオン含有酵母エキスを得ることが出来る。酵母エキス中に含まれるグルタチオンは、還元型グルタチオン、酸化型グルタチオン、及びこれらの混合物の何れでも良い。
【００１７】
本願発明の酵母エキスは、酵母エキス中でグルタチオンを１５重量％以上含有する酵母エキスである。酵母エキス中のグルタチオン含量が１５％以上となるためには、培養酵母中のグルタチオン含量ができるだけ高いものから、前述の抽出法により酵母エキスを抽出する方が効率がよい。酵母中のグルタチオン含量を高める方法としては、公知の方法で良い。例えば、培地中に亜鉛イオンを添加する方法（特開２０００−２７９１６４号公報）、カドミウム耐性、マクロライド系抗生物質耐性を指標としたグルタチオン高含有酵母株の取得方法（特開２００６−４２６３７号公報、特開２００６−４２６３８号公報）がある。特開２０１１−１０３７８９号公報のように変異酵母菌体から抽出することでも得ることができる。また、一般に販売されている酵母エキスであれば、例えば、興人ライフサイエンス社製の「ハイチオンエキス」ＹＨ−１５などがある。
【００１８】
本願発明のグルタチオン濃度の測定方法は、DTNB-HPLC法（Journal of Chromatography,194(1980)424-428）で行った。本願のグルタチオン含量は、還元型及び酸化型グルタチオンを合わせた総グルタチオン含量をいう。リボフラビン濃度、葉酸の測定方法は、日本食品標準表で定められた分析方法に従って行った。具体的には、一般財団法人日本食品分析センターで測定できる方法に従う。
【００１９】
NAD濃度の測定方法は、下記の測定方法・条件によって定量を行うことができる。すなわち、試料0.1gを蒸留水で100ｍｌにメスアップした後、0.45μｍのフィルターで濾過し、濾液を液体クロマトグラフィー分析により分析することができる。分析条件は以下のように設定することができる。 
＜液体クロマトグラフィー分析条件＞
・カラム：Wakosil-ＩＩ 5C18RS、φ4.6mm×150mm
・移動相：0.5%リン酸水素二アンモニウム緩衝液(pH3.2)
・流量：1.0ml/min
・カラム温度：40℃
・ΜV検出器210nm
【００２０】
本願発明の酵母エキスは、グルタチオンの他に、リボフラビン含量0.01重量％以上、葉酸含量0.01重量％以上かつNAD含量0.5重量％以上を含有するものを使用する。この含量であれば、使用する酵母エキスに制限はないが、例えば、グルタチオン含量が、１５重量％以上の酵母エキスとリボフラビン含量0.01重量％以上、葉酸含量0.01重量％以上、NAD含量0.5重量％以上を含有する酵母エキスの混合物でもよい。本願は、酵母エキスであるため、酵母エキスを直接摂取することもでき、さらに食品、飲料等に添加して摂取してもよい。
【００２１】
本願発明の血管弛緩作用は、上記の酵母エキスを有効成分として含むものであり、食料品、飲料品、嗜好品、サプリメント等として、経口で摂取するものを指す。その形態は特に限定されない。また、サプリメントとしての形態も特に限定されるものではなく、錠剤、カプセル、ソフトカプセル、栄養ドリンク状の形態をとることもできる。
【００２２】
飲食品における上記組成物の配合量は血管弛緩作用効果を有する限り特に限定されるものではなく、当業者であれば、適宜設計することができる。例えば本願発明の酵母エキスが飲食品の重量１００ｇに対し１０μｇ〜２０ｇ含まれていればよい。中でも１００μｇ〜２ｇが好適であり、１mｇ〜1ｇは更に好適である。
【００２３】
医薬品における組成物の配合量は特に限定されるものではなく、例えば本願発明の酵母エキスが組成物の重量100gに対し10μg〜20g含まれていればよい。中でも100μgｇ〜2gが好適であり、１mg〜1gは更に好適である。
【実施例】
【００２４】
以下に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定
されるものではない。
【００２５】
（実施例1）
１．血管張力測定方法
a.試薬・材料
・ラット : 雄性S Dラット （ 8〜 1 1 w k） ；
・Buffer:  PSS (pH7.4）[NaCl 145 , KCl 5 , Na2HPO4 1 ,CaCl2 2.5 , MgSO4・7H2O 0.5 , glucose 10, HEPES 5 （mM）]
・収縮刺激剤 : 1.0μM  phenylephrine(PE)
b.調製
PE:10μMとなるようにPSSに溶解した。
ハイチオンエキスYH-15：調製した10μM PEに溶解した。
用いた「ハイチオンエキスYH-15」は、グルタチオン含量が19.0重量％、リボフラビン含量が0.027重量％、葉酸含量が0.014重量％かつNAD含量が0.615重量％含有するものであった。
【００２６】
c.実験手順
胸部大動脈血管を摘出後、37℃のPSS中で混合ガス（95％O２、5％CO２）によりバブリングしながら4 5分間平衡化した。その後、脂肪組織を除去し、2-3mmに切断したものを血管リング標本とした。
PSS、4.5mLを満たしたOrgan bath中のフック対に血管リング標本をマウントし、2gの負荷をかけて45分間平衡化した。なお、平衡化中は15分ごとにバブリングしておいたPSSでOrgan bath中の溶液を交換した。平衡化後、10μMフェニルエフェリン（PE）、0.5mL(終濃度：1.0μM)添加し、血管を収縮させた。収縮後の張力が安定になった後、Organ bath中の一定量の溶液を等量のサンプル溶液と  交換することでOrgan bath 中のサンプル濃度を変化させ、各サンプル濃度における血管弛緩率を評価した。また、PE刺激(PE添加)による張力の増加量(T0)を100とし、サンプル溶液添加後の張力の減少量（ΔT） を、弛緩率として評価した（血管弛緩率（%） =ΔT /T0×100）。
【００２７】
2.結果
酵母エキスに、濃度依存的に血管弛緩作用が認められた（ 図1及び図2） 。また、エキスのEC50 値（1.0μM PEの作用を50%阻害する濃度）として、7.16±5.48（mg/ml）が得られた。同様血管拡張薬であるverapamilについても血管弛緩作用が認められた（図3及び図4）。EC50値は3.65±1.63（μM）であった。
【００２８】
（比較例１）
実施例１において、酵母エキスとして「ハイチオンエキスYH-15」のかわりに、「ヌクレアミン」（興人ライフサイエンス製）を用いた以外は、実施例１と同様に実験を行った。なお、用いた酵母エキス「ヌクレアミン」は、グルタチオン含量が0.8重量％、リボフラビン含量が0.01重量％、葉酸含量が0.001 重量％かつNAD含量が0.008重量％含有するものであった。これを評価したところ血管弛緩作用は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明の酵母エキスは、大動脈弛緩作用を有すること、さらに発明者らの鋭意研究の結果、本酵母エキスのうちODSカラムに吸着した分子量500以下の低分子画分に特に強い作用があることがわかった。血管平滑筋の緊張性と血管障害性の疾患（例えば、血管萎縮、高血圧、動脈硬化症など）または状態との関係はよく知られており、血管弛緩作用を有する薬剤は、高血圧症、心不全、狭心症、虚血性心疾患もしくは心筋梗塞の治療・予防に有効とされていることから本発明の酵母エキスにおいてもこれらの疾患または状態に対して有効であると考えられる。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、ハイチオンエキスYH-15の血管弛緩作用の濃度依存性に関し、マグヌス測定装置を用いた張力測定結果を示したチャートである。PSSを満たしたOrgan bath中のフック対に血管リング標本をマウントし、2 gの張力が得られるように初期張力を負荷した。平衡化し、張力が安定したところで、をOrgan bathに添加し、血管収縮を行った。収縮張力が安定した後、ハイチオンエキスYH-15溶液を適宜添加し、張力変化を記録した。ハイチオンエキスYH-15には、濃度依存的に血管弛緩作用が認められた。
【図２】図２は、ハイチオンエキスYH-15の血管弛緩作用の濃度依存性を示したグラフである。刺激剤添加後の張力増加量（T0） を100としたときのペプチド溶液添加後の張力の減少量（ΔT）を、弛緩率として評価した（弛緩率（%）=△T /T0×100）。ハイチオンエキスYH-15には、濃度依存的に血管弛緩作用が認められた。また、ハイチオンエキスYH-15のEC50値（1.0μM PEの作用を5 0 %阻害する濃度）は、7.16±5.48(mg/ml)であった。(n=3)
【図３】図３は、verapamilについて、同様にマグヌス測定装置を用いて行った張力測定試験の結果を示したチャートである。
【図４】図４は、verapamilの血管弛緩作用の濃度依存的を示したグラフである。EC50値は3.65±1.63（μM） であった。（n=4）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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