(57)【要約】【課題】十分なＶＥＧＦの産生促進及び育毛効果を有し、安定して供給可能なＶＥＧＦ産生促進剤、毛乳頭細胞賦活剤、及び毛髪化粧料を提供する。【解決手段】本発明の一形態に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする。  また、上記発酵代謝物を有効成分として含有する毛乳頭細胞賦活剤は、高いＶＥＧＦ産生促進作用を有することから、育毛効果を発揮することができる。【選択図】図２
2016117683.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする
血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤。
【請求項２】
請求項１に記載のＶＥＧＦ産生促進剤であって、
前記発酵代謝物は、菌体を含まない
ＶＥＧＦ産生促進剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＶＥＧＦ産生促進剤であって、
前記発酵代謝物は、豆乳、牛乳、山羊乳及びめん羊乳の少なくともいずれか一方を含む培地で前記乳酸菌を発酵することで生成される
ＶＥＧＦ産生促進剤。
【請求項４】
乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする
毛乳頭細胞賦活剤。
【請求項５】
乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする
毛髪化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤、並びにそれを用いた毛乳頭細胞賦活剤及び毛髪化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
毛髪は、成長しては抜け落ち、同じ毛根から新しい毛が生えてくるというサイクルを繰り返す。これをヘアサイクルといい、一般に、成長期、移行期、休止期の３期に分けられる。成長期は、毛髪の生え始めから成長が止まるまでの間とされる。移行期は、退行期とも言われ、成長期から休止期に移行する過程の時期とされる。休止期は、毛根が退化してから脱毛するまでの期間とされる。休止期に入ると、毛根部分の長さが成長期よりも短くなり、やがて脱毛する。薄毛等の頭髪トラブルは、男性ホルモンやストレス、生活習慣等がきっかけとなり、成長期の短縮等のヘアサイクルの乱れ等によって発生すると考えられる。
【０００３】
毛髪は、その基部に、毛髪の成長に関与する毛乳頭細胞と毛母細胞とを有する。毛母細胞は、ヘアサイクルの成長期に活発に細胞分裂し、毛髪の生成に関与する。毛乳頭細胞は、毛細血管からアミノ酸等を取得して毛母細胞に与えるとともに、成長因子、増殖因子等を分泌し、ヘアサイクルを制御する。
毛乳頭細胞が分泌する増殖因子としては、例えば血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ；Vascular Endothelial Growth Factor）が挙げられる。ＶＥＧＦは、新生血管の形成を促進する作用があり、毛髪の成長を促進することが知られている。
【０００４】
従来、ＶＥＧＦ等の産生を促進する成分としてミノキシジルやアデノシンが知られており、これらの成分を配合した毛髪化粧料が提案されている（特許文献１及び２）。また、特許文献３には、温州ミカンの未成熟時期の果皮や果実の抽出物を有効成分とするＶＥＧＦの産生促進剤、及び当該剤を含む毛髪化粧料が記載されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】米国特許第４１３９６１９号
【特許文献２】国際公開第２００５／０４４２０５号
【特許文献３】特開２０１２−２３６７７４号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１及び２に記載のミノキシジルやアデノシンは、ＶＥＧＦ等の産生促進作用が不十分であり、育毛効果も十分とは言えなかった。また、皮膚刺激等の副作用の可能性もあった。一方、特許文献３に記載のＶＥＧＦの産生促進剤は、温州ミカンの未成熟時期の果皮や果実を用いるため、製造時期が季節や気候によって左右されるとともに、大量生産が困難となる可能性があった。
【０００７】
以上のような事情に鑑み、本発明の目的は、十分なＶＥＧＦの産生促進及び育毛効果を有し、安定して供給可能なＶＥＧＦ産生促進剤、毛乳頭細胞賦活剤、及び毛髪化粧料を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記目的を達成するため、本発明の一形態に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする。
【０００９】
上記ＶＥＧＦ産生促進剤によれば、例えば毛乳頭細胞等によるＶＥＧＦ産生を促進することが可能となる。これにより、当該細胞周囲における血管新生を促し、当該細胞の増殖等を促すことが可能となる。
【００１０】
また、上記発酵代謝物は、菌体を含まなくてもよい。
【００１１】
本発明の発酵代謝物は、菌体を含まずとも高いＶＥＧＦ産生促進作用を有する。
【００１２】
上記発酵代謝物は、豆乳、牛乳、山羊乳及びめん羊乳の少なくともいずれか一方を含む培地で上記乳酸菌を発酵することで生成されてもよい。
【００１３】
また、本発明の他の形態に係る毛乳頭細胞賦活剤は、乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１４】
本発明の発酵代謝物は、毛乳頭細胞に対して高いＶＥＧＦ産生促進作用を有することから、毛乳頭細胞の細胞増殖を促し、育毛効果を発揮することができる。
【００１５】
本発明のさらに他の形態に係る毛髪化粧料は、乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１６】
これにより、毛乳頭細胞の細胞増殖作用を有し、育毛効果を発揮することができる。
【発明の効果】
【００１７】
これにより、十分なＶＥＧＦの産生促進及び育毛効果を有し、安定して供給可能なＶＥＧＦ産生促進剤、毛乳頭細胞賦活剤、及び毛髪化粧料を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】毛髪を模式的に示す図である。
【図２】試験例１の結果を示すグラフである。
【図３】試験例２の結果を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
以下、本発明について詳細を説明する。
【００２０】
本発明の乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株（以下、Ｈ−６１株とする）株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センターに寄託されており、その受託番号はＮＩＴＥ  Ｐ−９２である（特許第４６０４２０７号参照）。また上記Ｈ−６１株は、独立行政法人農業生物資源研究所の農業生物資源ジーンバンクにも、ＭＡＦＦ  Ｎｏ．４００００７として寄託されている。
【００２１】
本発明の発酵代謝物は、Ｈ−６１株を任意の条件で発酵させた後、菌体を除去したものをいい、菌体が非常に少ない、又は菌体を含まないものである。すなわち、本発明の発酵代謝物は、主に乳酸、各種アミノ酸等を含む。「菌体を含まない」発酵代謝物とは、実質的に菌体を含まないことを示し、例えば発酵後、０．１〜０．５μｍ以下の径を有するフィルターによって培養液を濾過した濾過液、及び当該濾過液の処理物をいうものとする。なお、濾過前に、常法により培養液をホモジナイズしたものも含むものとする。
【００２２】
本発明の発酵代謝物の製造に用いる発酵培地は、例えば、牛乳、豆乳、山羊乳、めん羊乳又はこれらを混合させたものを含むことができる。これにより、Ｈ−６１株の発酵効率を高めることができる。
【００２３】
本発明の発酵代謝物は、例えば、上記菌株を常法に従い培養し、発酵させた後、殺菌し、発酵液を濾過することで、製造することができる。発酵条件は特に限定されない。例えば、上記発酵代謝物は、２０℃〜４０℃の発酵温度で発酵されたものとすることができる。また上記発酵代謝物は、７０時間以上、好ましくは７０時間〜７００時間発酵されたものとすることができる。
【００２４】
上記発酵液は、常法により加熱殺菌及び懸濁され、濾過される。濾過には、上述のように、０．１〜０．５μｍ以下の径を有するフィルターが用いられる。なお、径の比較的大きなフィルターで濾過した後、上記フィルターを用いた濾過を行うこともできる。
【００２５】
本発明の発酵代謝物は、上記濾過液に含まれる。なお、上記濾過液には、摂取形態に応じて適宜、エバポレータを用いた脱エタノール処理や、加熱殺菌処理等を施してもよい。上記濾過液を、以下、発酵代謝物含有液と称する。
【００２６】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤は、上記発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする。当該ＶＥＧＦ産生促進剤は、例えば毛髪の毛乳頭細胞に対してＶＥＧＦの産生を促進する。これにより、後述するように、毛髪の成長を促されるとともに、毛髪の成長期を長期化させ、育毛を促進する。ここでいう育毛とは、毛髪を丈夫に育てることを言うものとする。
なお本明細書において「毛髪」とは、ヒトの頭髪に限定されず、ヒトの体毛、動物の被毛を含むものとする。
【００２７】
ＶＥＧＦは、血管新生に関与する糖蛋白質であり、ＶＥＧＦ受容体（ＶＥＧＦＲ）に結合し、例えば血管内皮細胞の細胞分裂や遊走、分化等を刺激する。ＶＥＧＦは、例えば以下のような機序によって毛髪の成長に関与する。
【００２８】
図１は、毛髪を模式的に示す図である。毛髪１０は、表皮２０に一部が埋没しており、基部には毛球部１１が形成される。毛球部１１は、毛乳頭細胞１２及び毛母細胞１３を含む。毛母細胞１３は、毛髪１０の成長期に活発に細胞分裂し、毛髪の成長に関与する。毛乳頭細胞１２は、毛細血管からアミノ酸等を取得して毛母細胞１３に与えるとともに、成長因子、増殖因子等を分泌する。
毛乳頭細胞１２は、増殖因子の一つとしてＶＥＧＦを産生することで、毛球部１１周囲の血管１４の新生を促進する。これにより、毛乳頭細胞１２に血管１４を介して必要な栄養素が供給され、毛乳頭細胞１２の細胞分裂が促される。したがって、毛乳頭細胞１２が賦活化されて多くの栄養分や成長因子を毛母細胞１３に対して与えることで、毛母細胞１３が活性化し、毛髪１０の成長が促されるとともに、毛髪１０の成長期を長期化させる。
【００２９】
本発明の毛乳頭細胞賦活剤は、上記発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とし、ＶＥＧＦの産生を促進することにより毛乳頭細胞の細胞分裂を促す。これにより、毛髪の成長が促されるとともに、毛髪１０の成長期を長期化させ、育毛を促進させる。
【００３０】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤及び毛乳頭細胞賦活剤の剤形としては、特に限定されないが、例えば、軟膏、水剤、エキス剤、ローション剤、トニック剤、スプレー剤及び乳剤等が挙げられる。
また、当該ＶＥＧＦ産生促進剤及び当該毛乳頭細胞賦活剤には、上記発酵代謝物の他に、助剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、吸収促進剤及び界面活性剤等の薬学的に許容される担体を任意に組合せて配合することができる。また、ＶＥＧＦ産生促進剤及び毛乳頭細胞賦活剤においては、上記発酵代謝物の他に、通常用いられる養毛薬効剤、例えば、毛包賦活剤、血行促進剤、抗菌剤、抗炎症剤、保湿剤、抗脂漏剤、局所刺激剤、抗男性ホルモン剤、カリウムチャンネルオープナー、抗酸化剤等を必要に応じて適宜配合し、育毛効果の向上を図ることができる。
【００３１】
本発明のＶＥＧＦ産生促進剤における上記発酵代謝物含有液の含有量は、例えば以下の量が好ましい。すなわち、下限値は、例えば０．０１％以上であればよく、好ましくは０．１％以上、より好ましくは１％以上であればよい。これにより、十分なＶＥＧＦ産生促進作用を発揮することができる。上限値は、特に限定されないが、例えば１０％以下が好ましい。
また、本発明の毛乳頭細胞賦活剤における上記発酵代謝物含有液の含有量は、例えば以下の量が好ましい。すなわち、下限値は、例えば０．０１％以上であればよく、好ましくは０．１％以上、より好ましくは１％以上であればよい。これにより、十分な毛乳頭細胞賦活作用を発揮することができる。上限値は、特に限定されないが、例えば１０％以下が好ましい。
なお、これらの含有量は、投与される人（動物）の年齢、性別、症状（薄毛等）の程度、投与形態に応じて調整することができる。
【００３２】
本発明の毛髪化粧料も、上記発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とし、ＶＥＧＦの産生を促進することにより毛髪の成長を促し、育毛を促進することが可能となる。
【００３３】
本発明の毛髪化粧料の剤形としては、特に限定されないが、例えば、トニック、ローション、シャンプー、リンス、ヘアトリートメント、ヘアクリーム等が挙げられる。
当該毛髪化粧料は、例えば、上記発酵代謝物の他に、通常用いられる養毛薬効剤、例えば、毛包賦活剤、血行促進剤、抗菌剤、抗炎症剤、保湿剤、抗脂漏剤、局所刺激剤、抗男性ホルモン剤、カリウムチャンネルオープナー、抗酸化剤等を必要に応じて適宜配合し、育毛効果の向上を図ることができる。
また、当該毛髪化粧料は、例えば、通常育毛料に用いられる配合成分、例えば油性成分、界面活性剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、色素、香料、生理活性物質等を必要に応じて適宜配合することができる。
【００３４】
本発明の毛髪化粧料における上記発酵代謝物含有液の含有量は、例えば以下の量が好ましい。すなわち、下限値は、例えば０．０１％以上であればよく、好ましくは０．１％以上、より好ましくは１％以上であればよい。これにより、十分な育毛効果を発揮することができる。上限値は、特に限定されないが、例えば１０％以下が好ましい。
なお、含有量は、投与される人（動物）の年齢、性別、薄毛の程度、使用形態に応じて調整することができる。
【実施例】
【００３５】
（実施例）
豆乳を５００mL容器に加えて常法により加熱滅菌し、冷却して豆乳培地を用意した。Ｈ−６１株は、常法に従い、予め７日間培養した。そして、培養したＨ−６１株を豆乳培地に接種し、約３５℃で一昼夜培養し、菌体を１×１０９ＣＦＵ／mLまで増殖させた。そして、常法により加熱殺菌し、エタノールを加えてホモジナイズ処理し、１次濾過した。この１次濾過液を、さらに０．２μｍ径の中空糸膜を用いて２次濾過した。この２次濾過液を、エバポレータにより脱エタノール処理し、９０％乳酸を加えて、常法により加熱殺菌した。これにより、実施例に係る発酵代謝物含有液が製造された。
【００３６】
（試験例１  ＶＥＧＦ検出試験）
実施例を用いて、ＶＥＧＦ検出試験を行った。
【００３７】
まず、ヒト頭髪毛乳頭細胞（以下、毛乳頭細胞とする）を培養した。
毛乳頭細胞は、２２歳男性、頭頂部由来のものであり、東洋紡株式会社から入手した。毛乳頭細胞は、毛乳頭細胞専門培地（東洋紡株式会社製、Cat No. TMTPGM-250）（以下試験培地とする）を用い、ＣＯ２インキュベータ（５％  ＣＯ２、３７℃）内で培養した。培養には、それぞれI型コラーゲンコートしたフラスコ（75cm2 cell culture flask、Corning製、Cat No.3276）及びマルチウェルプレート（96 well culture plate、SUMILON製、Cat No.MS-8096）を使用した。細胞の継代は、毛乳頭細胞専用サブカルチャーセット（東洋紡株式会社製、Cat No.CA090K）を用い、毛乳頭細胞をフラスコより剥離することにより行った。本試験例では、３継代目の細胞を用いた。
【００３８】
続いて、サンプルを調整した。
実施例に係る発酵代謝物含有液を、発酵代謝物含有液の濃度が１０％となるように試験培地に添加し、フィルタ滅菌した。これを試験培地により、０．１％、０．５％、１％となるように希釈した。発酵代謝物含有液を０．１％含有したサンプルを実施例１、発酵代謝物含有液を０．５％含有したサンプルを実施例２、発酵代謝物含有液を１％含有したサンプルを実施例３とした。
陰性対照として、実施例を添加していない試験培地を用意し、このサンプルを比較例１とした。
陽性対照として、従来より毛乳頭細胞に対するＶＥＧＦの産生促進効果が確認されているミノキシジル（Minoxidil）及びアデノシン（Adenosine）を試験培地に添加し、ミノキシジルを60μmol/m3（1.26x10-6wt％）、アデノシンを25μg/mL（0.0025wt%）の濃度となるように希釈した。これらのサンプルを、それぞれ比較例２，３とした。
溶媒対照として、ＤＭＳＯ（Dimethyl Sulfoxide）を用意し、このサンプルを比較例４とした。
【００３９】
続いて、毛乳頭細胞を各サンプルを含む培地で培養し、培養上清を回収した。
毛乳頭細胞を４８ウェルプレート（48 well culture plate、greinerbio-one製、Cat No.677180）に播種した。この際、１ウェルあたりの細胞数を１．２×１０４、１ウェルあたりの試験培地の量を0.3 mLとした。
ＣＯ２インキュベータ（５％  ＣＯ２、３７℃）内で１日間培養後、各サンプルを含む培地に置換した。１サンプルにつき、毛乳頭細胞が培養されたウェルの５ウェルずつを用いた。その後、３日間培養し、培養上清を回収し、一旦−８０℃にて保存した。
【００４０】
続いて、ＶＥＧＦ検出試験を行った。
保存していた培養上清を解凍し、培養上清に含まれるＶＥＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。ＥＬＩＳＡ法は、ＥＬＩＳＡキットとして、Human VEGF Quantikine ELISA（Ｒ＆Ｄ systems製、Cat No.DVE00）を用い、以下のように行った。
まず、ＶＥＧＦ標準原液（2000pg/mL）をもとに、反応緩衝液を用いて、1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6 pg/mLのＶＥＧＦ標準溶液を調製した。予備検討により、培養上清を３倍希釈し、測定することとした。続いて、200μLのＶＥＧＦ標準溶液及び検体（培養上清）と50μLの希釈溶液をＶＥＧＦ固相化マイクロプレートの各ウェルに添加し、室温にて２時間反応した（一次反応）。続いて、各ウェル内の溶液を除去し、洗浄液で３回洗浄した。続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ＶＥＧＦ抗体溶液を各ウェルに200μLずつ添加し、室温で２時間反応させた（二次反応）。続いて、ウェル内の溶液を除去し、洗浄液で３回洗浄し、基質溶液200μLを各ウェルに添加し、室温で２０分反応させた。続いて、反応停止溶液を各ウェルに50μLずつ添加し、プレートミキサーで１分間混和後、プレートリーダ（Varioscan Flash microplate reader、Thermo SCIENTIFIC製）で各ウェルの吸光度を測定した（測定波長４５０ｎｍ）。そして、標準曲線から、検体中のＶＥＧＦ濃度を算出した。
【００４１】
表１及び図２に、試験例１の結果を示す。図２は、横軸に各サンプル、縦軸に培養上清中のＶＥＧＦ濃度（pg /mL）を示している。また、表１における「相対ＶＥＧＦ濃度」は、比較例１の平均値に対する各サンプルの平均値の割合を示す。
なお、比較試験区間では有意差検定を行った。検定はstudent's t-testで両側検定を行い、ｐ＜０．０５のものを有意差ありと判断し、図２のグラフ中に記載した。また、図２のグラフのデータは、平均値±標準誤差として示した。
【００４２】
【表１】
2016117683.tif 000003
【００４３】
表１及び図２に示すように、実施例１，２，３では、陰性対照である比較例１と比較してＶＥＧＦ濃度が有意に高く、特に実施例３の平均濃度は、比較例１の平均濃度の約２３４％（２．３４倍）であった。さらに、実施例１，２，３では、濃度依存的にＶＥＧＦ濃度が高くなっていたため、本発明に係る発酵代謝物が毛乳頭細胞に対してＶＥＧＦ産生効果を有することが確認された。
一方、陽性対照である比較例２でも、陰性対照と比較してＶＥＧＦ濃度が有意に高かったものの、実施例１，２，３のいずれよりもＶＥＧＦ濃度が低かった。また、同じく陽性対照である比較例３では、陰性対照と比較してＶＥＧＦ濃度が高かったものの有意な差は得られず、かつ実施例１，２，３のいずれよりも濃度が低かった。これにより、本発明に係る発酵代謝物は、ミノキシジルやアデノシンと比較しても、毛乳頭細胞に対してより高いＶＥＧＦ産生促進効果を有することが確認された。
【００４４】
（試験例２  毛乳頭細胞賦活化試験）
実施例を用いて、毛乳頭細胞賦活化試験を行った。なお、毛乳頭細胞を培養するステップ、サンプルを調整するステップ、及び各サンプルを含む培地で毛乳頭細胞を培養し培養上清を回収するステップは試験例１と同様であるため、説明を省略する。
【００４５】
培養上清を回収した後の毛乳頭細胞を用いて、細胞賦活化試験を行った。
培養上清を回収後、各毛乳頭細胞の増殖性を生細胞数測定試薬ＳＦ（nacalai tesque製、Cat No.07553）により測定した。なお、生細胞数測定試薬ＳＦは、細胞増殖能力や細胞生存能力を発色測定により定量する試薬である。
具体的には、毛乳頭細胞を３００μLのＤ-ＰＢＳで洗浄した後、生細胞数測定試薬ＳＦを１０％含む試験培地を、１ウェルあたり３００μL添加した。添加後、３０分後、９０分後にマイクロプレートリーダ（Varioscan Flash microplate reader、Thermo SCIENTIFIC製）にて吸光度を測定し（測定波長４５０ｎｍ）、９０分−３０分の値から１時間あたりの吸光度変化量を算出した。その後、陰性対照である比較例１の結果を１００としたときの相対値として、相対生細胞数を算出した。
【００４６】
表２及び図３に、試験例２の結果を示す。図３は、横軸に各サンプル、縦軸に陰性対照である比較例１の生細胞数を１００％とした場合における相対生細胞数の割合を示している。
なお、比較試験区間では有意差検定を行った。検定はstudent's t-testで両側検定を行い、ｐ＜０．０５のものを有意差ありと判断し、図３のグラフ中に記載した。また、図３のグラフのデータは、平均値±標準誤差として示した。
【００４７】
【表２】
2016117683.tif 000004
【００４８】
表２及び図３に示すように、実施例３では、陰性対照である比較例１よりも有意に毛乳頭細胞が増殖した（対比較例１で１０７．６％、ｐ＜０．０５）。一方、実施例１，２については、比較例２，３，４よりも毛乳頭細胞が増殖したが、比較例１よりも増殖しなかった。但し、実施例１，２，３に関しては濃度依存的に毛乳頭細胞が増殖しているため、本発明に係る発酵代謝物は、毛乳頭細胞を増殖させる効果があると考えられる。
【００４９】
以上の試験例１，２より、本発明に係る発酵代謝物は、毛乳頭細胞に対して顕著なＶＥＧＦ産生促進効果、及び毛乳頭細胞の賦活効果を有することが確認された。本発明に係る発酵代謝物は、毛乳頭細胞に作用してＶＥＧＦの産生を促進し、毛乳頭細胞を増殖させるとともに、血管新生を促進し、毛髪の成長を促進する。試験例１より、本発明に係る発酵代謝物は、従来育毛剤の有効成分として知られているミノキシジルやアデノシンよりも顕著なＶＥＧＦ産生促進効果を有していたため、高い育毛効果を有すると考えられる。
さらに、試験例２において、実施例１，２で毛乳頭細胞の賦活化が見られなかったのは、発酵代謝物を添加した培地で毛乳頭細胞を培養した期間が３日間と短かったためと考えられる。すなわち、毛乳頭細胞によるＶＥＧＦの産生が促進されてから毛乳頭細胞の増殖が開始されるまで多少の時間差があると考えられるため、より長期間培養することにより、より顕著な毛乳頭細胞の賦活効果が得られると考えられる。
【００５０】
さらに、本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤及び毛乳頭細胞賦活剤は、乳酸菌の発酵代謝物を有効成分として含有するため、乳酸菌を培養することにより、容易に製造することができる。また、乳酸菌は、農産物と異なり季節や気候に関係なく製造することができるとともに、指数対数的に増殖するため大量生産も容易である。これにより、本発明によれば、安定して供給可能なＶＥＧＦ産生促進剤、毛乳頭細胞賦活剤、及び毛髪化粧料を提供することができる。
また、乳酸菌は食品にも添加され得る材料であるため、安全性の高いＶＥＧＦ産生促進剤、毛乳頭細胞賦活剤、及び毛髪化粧料を提供することができる。
【００５１】
加えて、本発明に係る発酵代謝物は、顕著なＶＥＧＦ産生促進効果を有するため、毛乳頭細胞に限定されず他の細胞に対しても血管新生促進作用が期待でき、毛髪用以外の用途にも活用できるものと考えられる。
【符号の説明】
【００５２】
１０…毛髪
１１…毛球部
１２…毛乳頭細胞
１３…毛母細胞
１４…血管
【図１】
2016117683.tif 000005
【図２】
2016117683.tif 000006
【図３】
2016117683.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成28年3月7日(2016.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤の製造方法であって、
前記発酵代謝物は、豆乳、牛乳、山羊乳及びめん羊乳の少なくともいずれか一方を含む培地で前記乳酸菌を発酵することで生成される
ＶＥＧＦ産生促進剤の製造方法。
【請求項２】
請求項１に記載のＶＥＧＦ産生促進剤の製造方法であって、
前記発酵代謝物は、菌体を含まない
ＶＥＧＦ産生促進剤の製造方法。
【請求項３】
乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞賦活剤の製造方法であって、
前記発酵代謝物は、豆乳、牛乳、山羊乳及びめん羊乳の少なくともいずれか一方を含む培地で前記乳酸菌を発酵することで生成される
毛乳頭細胞賦活剤の製造方法。
【請求項４】
乳酸菌ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ  クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）  Ｈ−６１株の発酵代謝物を有効成分として含有することを特徴とする毛髪化粧料の製造方法であって、
前記発酵代謝物は、豆乳、牛乳、山羊乳及びめん羊乳の少なくともいずれか一方を含む培地で前記乳酸菌を発酵することで生成される
毛髪化粧料の製造方法。