(57)【要約】【課題】診断用医薬として有用な新たなステロイド化合物及びこれを含有する医薬の提供。【解決手段】式（１）2016027000.tif 000022（式中、Ｒ1はヒドロキシ基、保護ヒドロキシ基、ハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を示し、Ｒ2及びＲ3は同一又は異なって水素原子又はヒドロキシ基の保護基を示し、ｎは１〜５の整数を示す）で表されるステロイド化合物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2016027000.tif 000019
（式中、Ｒ1はヒドロキシ基、保護ヒドロキシ基、ハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を示し、Ｒ2及びＲ3は同一又は異なって水素原子又はヒドロキシ基の保護基を示し、ｎは１〜５の整数を示す）
で表されるステロイド化合物。
【請求項２】
Ｒ1が放射性同位元素又は放射性同位元素含有基であり、Ｒ2及びＲ3が水素原子はである請求項１記載のステロイド化合物。
【請求項３】
Ｒ1が水素原子、炭素原子若しくはハロゲン原子の放射性同位体、又は放射性同位元素含有基である請求項１又は２記載のステロイド化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか１項記載のステロイド化合物を含有する医薬。
【請求項５】
診断薬である請求項４記載の医薬。
【請求項６】
ＰＥＴ用診断薬である請求項４又は５記載の医薬。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項記載のステロイド化合物を含有するエストロゲン受容体結合剤。
【請求項８】
式（２）
【化２】
2016027000.tif 000020
（式中、Ｒ4はヒドロキシ基又は保護ヒドロキシ基を示し、Ｒ2及びＲ3は同一又は異なって水素原子又はヒドロキシ基の保護基を示し、ｎは１〜５の数を示す）
で表される化合物にハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有化合物を反応させ、Ｒ2及びＲ3にヒドロキシ基の保護基がある場合には該保護基を脱離させることを特徴とする、式（１ａ）
【化３】
2016027000.tif 000021
（Ｒ1aはハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を示し、ｎは前記と同じ）
で表されるステロイド化合物の製造法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＰＥＴ用診断薬として有用なステロイド化合物及びこれを含有する医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
エストロゲンは、ステロイドホルモンの１種であり、エストロン（Ｅ１）、エストラジオール（Ｅ２）及びエストリオール（Ｅ３）の３種類存在し、このうちエストラジオールが最も多い。エストロゲンは、生殖機能の形成という機能だけでなく、細胞の増殖を促進する作用を有することから、がん細胞の増殖も促進することが知られている。エストロゲンがこれらの作用を発現するには、エストロゲンがエストロゲン受容体（ＥＲ）に結合することが必要であり、ＥＲは乳腺や子宮に多く分布しており、乳癌や子宮癌の患者では健常人と比べてＥＲの発現が上昇していることが報告されている。
【０００３】
このような観点から、ＥＲに特異的に結合する標識化合物は乳癌や乳癌療法の治療薬選択及び効果判定に有用である。ＥＲに結合する標識化合物としては、１６α−［18Ｆ］フルオロ−１７β−エストラジオール（ＦＥＳ）が知られている（非特許文献１）。
【０００４】
【化１】
2016027000.tif 000002
【０００５】
また、スルホニルオキシ基を有する標識化合物（特許文献１）、１６位にラクトースを有するエストラジオール誘導体（特許文献２）等も報告されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特表２０１１−５２６２６７号公報
【特許文献２】特表２０１２−５０９３５１号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Anticancer Res. 17:1573-1576, 1997
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
前記エストラジオール標識化合物のうち、最も研究が進んでいる化合物はＦＥＳであるが、ＦＥＳは、小動物ポジトロン断層法（ＰＥＴ）で撮像しても膀胱、小腸への高い集積が見られるのみで、標的臓器である子宮や卵巣では明瞭な画像が得られないこと、定量性が認められないこと、乳癌患者に投与してから撮像に至るまでの時間がかかりすぎる等の欠点が指摘されている。
かように、乳腺や子宮への集積性が高く、投与してから撮像可能までの時間が短く、ＰＥＴ用診断薬に代表される診断薬として有用な新たなステロイド化合物の開発が望まれていた。
従って、本発明の課題は、診断用医薬として有用な新たなステロイド化合物及びこれを含有する医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
そこで本発明者は、エストラジオール骨格の種々の位置に放射性同位元素を導入し、当該化合物の各種臓器への集積性について検討してきたところ、後記式（１）で表される、エストラジオールの７位にアルキル基を導入した化合物が、ＥＲへの親和性及び子宮や卵巣への集積性が高く、かつ腫瘍への集積性も高く、診断用医薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【００１０】
すなわち、本発明は、次の［１］〜［８］を提供するものである。
［１］式（１）
【００１１】
【化２】
2016027000.tif 000003
【００１２】
（式中、Ｒ1はヒドロキシ基、保護ヒドロキシ基、ハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を示し、Ｒ2及びＲ3は同一又は異なって水素原子又はヒドロキシ基の保護基を示し、ｎは１〜５の整数を示す）
で表されるステロイド化合物。
【００１３】
［２］Ｒ1が放射性同位元素又は放射性同位元素含有基であり、Ｒ2及びＲ3が水素原子である［１］記載のステロイド化合物。
［３］Ｒ1が水素原子、炭素原子若しくはハロゲン原子の放射性同位体、又は放射性同位元素含有基である［１］又は［２］記載のステロイド化合物。
［４］［１］〜［３］のいずれかに記載のステロイド化合物を含有する医薬。
［５］診断薬である［４］記載の医薬。
［６］ＰＥＴ用診断薬である［４］又は［５］記載の医薬。
［７］［１］〜［３］のいずれか１項記載のステロイド化合物を含有するエストロゲン受容体結合剤。
［８］式（２）
【００１４】
【化３】
2016027000.tif 000004
【００１５】
（式中、Ｒ4はヒドロキシ基又は保護ヒドロキシ基を示し、Ｒ2及びＲ3は同一又は異なって水素原子又はヒドロキシ基の保護基を示し、ｎは１〜５の数を示す）
で表される化合物にハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有化合物を反応させ、Ｒ2及びＲ3にヒドロキシ基の保護基がある場合には該保護基を脱離させることを特徴とする、式（１ａ）
【００１６】
【化４】
2016027000.tif 000005
【００１７】
（Ｒ1aはハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を示し、ｎは前記と同じ）
で表されるステロイド化合物の製造法。
【発明の効果】
【００１８】
本発明のステロイド化合物（１）は、ＥＲへの選択性が高く、かつ子宮や卵巣等のＥＲの多い組織への集積性が高く、腫瘍への集積性も高く、かつ投与から短時間での撮像が可能であることから、診断用医薬、特にＰＥＴ用診断薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１９】
【図１】７α−［18Ｆ］ＦＥＳの体内分布試験結果を示す図である。
【図２】７α−［18Ｆ］ＦＥＳのエストロゲン受容体組織への結合性を示す図である。
【図３】７α−［18Ｆ］ＦＥＳのＥＲ（＋）腫瘍への集積性を示す図である。
【図４】７α−［18Ｆ］ＦＥＳのＥＲ（＋）腫瘍への集積性を示す図である。
【図５】７α−［18Ｆ］ＦＥＳのＥＲに対する結合阻害（ＩＣ50）を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００２０】
本発明のステロイド化合物は、前記式（１）で表される化合物である。
【００２１】
Ｒ1はヒドロキシ基、保護ヒドロキシ基、ハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を示す。ここで、保護ヒドロキシ基としては、有機合成化学分野において用いられている保護基であればよく、例えばメトキシメトキシ基、エトキシメトキシ基、メトキシエトキシメトキシ基等のアルコキシ系保護ヒドロキシ基、ベンジルオキシ基等のアラルキルオキシ基、フェノキシ基等のアリールオキシ基、アセトキシ基等のアシルオキシ基、ｐ−トルエンスルホニルオキシ基（トシルオキシ基）、メタンスルホニルオキシ基等のスルホニルオキシ系保護基等が挙げられる。
【００２２】
ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。放射性同位元素としては、3Ｈ、14Ｃ、11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、18Ｆ、35Ｓ、62Ｃｕ、64Ｃｕ、67Ｇａ、68Ｇａ、99mＴｃ、111Ｉｎ、122Ｉ、123Ｉ、124Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、133Ｘｅ、201Ｔｌ等が挙げられる。このうち、ＰＥＴのための核種としては11Ｃ、13Ｎ、15Ｏ、18Ｆが好ましく、11Ｃ及び18Ｆがより好ましい。またＳＰＥＣＴ（Single photon emission computed tomography）のための核種としては、ガンマ線放出核種である67Ｇａ、99mＴｃ、111Ｉｎ、123Ｉ、124Ｉ、131Ｉ、133Ｘｅ、201Ｔｌなどが好ましい。
また、放射性同位元素含有基としては、上記の放射性同位元素を有する置換基であればよく、例えば11Ｃ等を有するアルキル基、糖残基等が挙げられる。
【００２３】
Ｒ1としては、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基が好ましく、ハロゲン原子、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基がより好ましく、放射性同位元素又は放射性同位元素含有基がさらに好ましい。
【００２４】
Ｒ2及びＲ3は同一又は異なって、水素原子又はヒドロキシ基の保護基を示す。ここで、ヒドロキシ基の保護基としては、有機合成化学分野において用いられている保護基であればよく、例えばメトキシメチル基、エトキシメチル基、メトキシエトキシメチル基等のアルキル系保護基、ベンジル基等のアラルキル基、フェニル基等のアリール基、アセチル基等のアシル基、ｐ−トルエンスルホニル基（トシル基）、メタンスルホニル基等のスルホニル系保護基等が挙げられる。
【００２５】
Ｒ2及びＲ3としては、いずれも水素原子であるのが好ましい。
【００２６】
ｎは１〜５の整数を示すが、１〜４の整数が好ましく、１〜３の整数がより好ましく、２が特に好ましい。
【００２７】
本発明のステロイド化合物（１）は、例えば前記［８］の方法により製造できるが、より具体的には次に示す反応によって製造することができる。
【００２８】
【化５】
2016027000.tif 000006
【００２９】
（式中、Ｒ2a及びＲ3aは水酸基の保護基を示し、Ｒ4はヒドロキシ基又は保護ヒドロキシ基を示し、ｎは前記と同じ。）
【００３０】
すなわち、化合物（２）をハイドロボレーション反応することにより化合物（１ｃ）とし、得られた化合物（１ｃ）のヒドロキシ基を保護し、次いで得られた化合物（１ｂ）にハロゲン化剤、放射性同位元素を反応させ、水酸基の保護基を脱離させれば、化合物（１ａ）が得られる。
【００３１】
化合物（２）のハイドロボレーション反応は、例えば化合物（２）にボラン、ボランエーテル錯体等のボラン化合物、過酸化水素及び塩基を反応させることにより行うことができる。塩基としては水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等が用いられる。反応は、ＴＨＦ、ジエチルエーテル、メチルエチルエーテル等のエーテル系溶媒中で、０℃〜室温で１〜１０時間行えばよい。
【００３２】
化合物（１ｃ）のヒドロキシ基の保護には、前記の保護基を用いることができる。例えばｐ−トルエンスルホニルクロリド等のスルホニル化剤を用いるのが好ましい。スルホニル化剤は、化合物（１ｃ）１モルに対して１〜３モル用いるのが好ましい。反応はトリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン等の塩基の存在下に行うのが好ましい。反応は、ジクロロメタン、クロロホルム等の溶媒中、０℃〜１００℃で１時間〜３０時間行えばよい。
【００３３】
化合物（１ｂ）のハロゲン化又は放射性同位元素化は、フッ化カリウム、フッ化ナトリウム等のハロゲン化剤、放射性同位元素化合物を反応させることにより行われる。反応は、フッ化テトラブチルアンモニウム等の第４級アンモニウム塩、４，７，１３，１６，２１，２４−ヘキサオキサ−１，１０−ジアザビシクロ［８．８．８］ヘキサコサン等の環状アミンの存在下に行うのが好ましい。ハロゲン化剤は、化合物（１ｂ）１モルに対して１〜５モル用いるのが好ましい。反応はアセトニトリル等の極性溶媒中、１分〜１０分行えばよい。
また、化合物（１ｂ）の水酸基が保護されている場合には、当該保護基を加水分解により脱離させるのが好ましい。ここで加水分解反応は、例えば塩酸等の酸の存在下、１〜３０分行えばよい。
【００３４】
本発明化合物（１）、特にＲ1として放射性同位元素又は放射性同位元素含有基を有する化合物（１）は、ＥＲへの選択性が高く、かつ子宮や卵巣のＥＲの多い組織への集積性が高く、腫瘍への集積性も高く、かつ投与から短時間での撮像が可能であることから、診断用医薬、特にＰＥＴ用診断薬として有用である。
【００３５】
本発明化合物（１）は、生体におけるＥＲの局在ならびに発現量を放射線計測により検出および定量することができる。例えば、本発明化合物（１）は子宮、卵巣、乳腺等のＥＲの発現が多い組織に集積するため、子宮体癌、子宮内膜増生症（嚢胞性腺増生症、子宮腺筋症、子宮筋腫）、卵巣癌、卵巣腫瘍（嚢胞腺腫）、乳癌、乳腺症、乳腺繊維腫瘍等の診断薬として有用である。また、放射性核種の選択によりＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、シンチグラフィ等による画像診断に特に有用である。これに加えて、γプローブによるＥＲ発現リンパ節転移の生検などにも有用である。
さらに、本発明化合物（１）は試験例２で示された如く、ＥＲを標的とする抗がん剤やホルモン補充療法薬の受容体占拠率やファーマコダイナミクスの計測に有用であり、同様な理由で環境ホルモン等の生体内でのＥＲ受容体への結合率の測定などにも応用が可能である。
【００３６】
本発明化合物（１）を診断薬として用いる場合、局所又は全身性でも良く、静脈内、動脈内、髄腔内などに投与することができ、用途や対象とする疾病に見合った剤形を選択すればよい。化合物（１）の放射性同位元素標識化合物を検出可能量投与し、該標識化合物がＥＲと結合するのに十分な時間をとり（例えば１５分〜２４０分）、標的組織のＥＲと結合した標識化合物を検出することによりＥＲ発現組織が画像化できる。この際、ＥＲと結合した標識化合物は、対象疾患に合わせ生体領域を、検出に適した画像化装置（ＳＰＥＣＴ、ＰＥＴなど）によって検出する。診断プロトコールは対象とする疾病や患者、検出装置に見合った条件に依存する。
また、本発明化合物（１）を手術直前に投与し、術中にγ線プローブを用いて所属リンパ節の放射能を計数することによって、ＥＲ発現腫瘍のリンパ節転移を検出することも可能である。
投与時の非水性溶媒としては、プロピレングリコール、植物油、及び注射用有機エステルである。水性溶媒としては、水、アルコール溶液水溶液、生理食塩水などが挙げられる。また、放射性同位元素で標識されている本発明化合物（１）の投与量は、更にＳＰＥＣＴあるいはＰＥＴ装置等の放射線イメージング装置の測定条件並びに患者の被曝も考慮して、適宜決定すればよい。例えば、放射能として、３７〜７４０ＭＢｑ、好ましくは、１１１〜３７０ＭＢｑである。
【実施例】
【００３７】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。
【００３８】
参考例１
（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン
【００３９】
【化６】
2016027000.tif 000007
【００４０】
エストラジオール（ａ）（４７７．６mg，１．７５mmol）の無水ジクロロメチン（６ml）溶媒に、室温でジイソプロピルエチルアミン（３ml，１７．５mmol）を加え、次いでクロロメチルメチルエーテル（１．３３ml，１７．５mmol）を滴下した。混合物を８０℃で３時間攪拌した。反応混合物をゆっくりＮＨ4Ｃｌでクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせ、生理食塩水で洗浄して、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:EtOAc＝９：１）で精製し、組成物（ｂ）（６０７．４mg，９７％）を得た。
【００４１】
1H NMR(400Hz,CDCl3):δ7.21(1H,d,J=8.5Hz), 6.83(1H,dd,J=8.2,2.8Hz), 6.77(1H,d,J=2.8Hz), 5.14(2H,s), 4.66(2H,q,J=2.3,6.4Hz), 3.63(1H,t,J=8.5Hz), 3.47(3H,s), 3.38(3H,s), 2.84(2H,m), 2.34-1.96(4H,m), 1.91-1.83(1H,m), 1.74-1.54(2H,m), 1.53-1.26(5H,m), 1.23-1.15(1H,m) and 0.81(3H,s).
13C NMR(400Hz,CDCl3):δ 155.0, 138.1, 134.0, 126.4, 116.2, 113.7, 96.0, 94.5, 86.6, 55.9, 55.2, 50.0, 44.0, 43.0, 38.6, 29.8, 28.1, 27.2, 26.3, 23.1, 11.7 .
IR(ATR)2925(m,C-H, -O-C-O-)
LRMS(FAB)Observed m/z:360.0
【００４２】
参考例２
（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オール
【００４３】
【化７】
2016027000.tif 000008
【００４４】
化合物（ｂ）（６０７．４mg，１．６９mmol）、ｔ−ＢｕＯＫ（７６３．０mg，６．８mmol）、及びジイソプロピルアミン（０．９５ml，６．８mmol）の無水ＴＨＦ（６ml）の冷溶液に、ｎ−ＢｕＬｉ（２．６ml，２．６Ｍ  in hexane）を−７８℃で１０分かけて加えた。得られた暗赤色溶液を更に３時間攪拌した。トリメチルボレート（２．３ml）を加え、０℃で２時間攪拌した。得られた乳化溶液に、３５％  Ｈ2Ｏ2溶液（２ml）を加えた。室温で１時間攪拌後、反応混合物をＮａ2Ｓ2Ｏ3でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧下で蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:EtOAc＝４：１）で精製し、化合物（ｃ）（３２９．０mg，５３％）を得た。
【００４５】
1H NMR(400Hz,CDCl3):δ7.25(1H,d,J=2.8Hz), 7.19(1H,d,J=8.5Hz), 6.91(1H,dd,J=8.5,2.8Hz), 5.16(2H,q,J=6.6,4.6Hz), 4.82(1H,m), 4.65(2H,q,J=6.6,30Hz), 3.60(1H,t,J=8.5Hz), 3.47(3H,s), 3.36(3H,s), 2.30-2.21(2H,m), 2.13-1.95(2H,m), 1.75-1.65(1H,m), 1.63-1.18(9H,m) and 0.80(3H,s).
13C NMR(400Hz,CDCl3):δ 155.3, 140.6, 133.4, 126.1, 115.3, 114.3, 99.7, 94.2, 86.2, 69.5, 55.1, 54.8, 49.1, 44.1, 42.6, 37.7, 37.6, 36.8, 27.7, 25.9, 22.7, 11.4 .
IR(ATR)3420(br,O-H), 2930(m,C-H,-O-C-O-)
【００４６】
参考例３
（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン
【００４７】
【化８】
2016027000.tif 000009
【００４８】
ＣＨ2Ｃｌ2（３ml）及びオキザリルクロリド（０．０９ml，１．０５mmol）の溶液を−７８℃に冷却した。Ｍｅ2ＳＯ（４２１μl，５．９３mmol）を、攪拌しながらオキザリルクロリド溶液にゆっくり加え、反応液を更に５分間攪拌した。ここでＭｅ2ＳＯの添加はゆっくりとするのが、反応液の温度を−５０℃以上にならないようにするために重要である。化合物（ｃ）（３２９．０mg，０．８７mmol，in ３ml ＣＨ2Ｃｌ2）を１５分かけてゆっくり加え、更に１時間攪拌した。その後ＴＥＡ（０．８７ml）を加え、反応液を室温で２０分間攪拌した。反応混合物を水でクエンチし、ＣＨ2Ｃｌ2で抽出した。有機相を合わせ、生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥、濾過後減圧下で蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane EtOAc:＝９：１）で精製し、目的物（ｄ）（３１１．５mg，９６％）を得た。
【００４９】
1H NMR(400Hz,CDCl3):δ7.69(1H,d,J=2.7Hz), 7.35(1H,d,J=8.7Hz), 7.21(1H,dd,J=8.7,2.7Hz), 5.19(2H,s), 4.65(2H,q,J=6.6,2.5Hz), 3.62(1h,t,J=8.5Hz), 3.46(3H,s), 3.37(3H,s), 2.73(1H,dd,J=17.0,3.4Hz), 2.51-1.87(5H,m), 1.74-1.54(3H,m), 1.45-1.22(4H,m) and 0.81(3H,s) .
13C NMR(400Hz,CDCl3):δ 197.6, 155.6, 1406, 133.5, 126.6, 122.4, 113.5, 96.0, 94.4, 86.2, 56.0, 55.2, 49.8, 44.0, 43.0, 42.7, 39.8, 36.7, 27.9, 25.5, 22.7, 11.5 .
IR(ATR) 2929(m,C-H,-O-C-O-), 1682(s,C=O)
LRMS(FAB)Observed m/z:375.0
【００５０】
参考例４
（８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−アリル−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン
【００５１】
【化９】
2016027000.tif 000010
【００５２】
０．５ＭのＫＨＭＤＳ  ＴＨＦ（０．４８ml，０．２２mmol）溶液に化合物（ｄ）（８４．１mg，０．２２mmol）のＴＨＦ（２ml）冷溶液を加えた。反応混合物を０℃で、３０分攪拌した後、アリルヨード（０．０２ml，０．２２mmol）を滴下した。反応混合物を室温で２０時間攪拌した。反応液をＮＨ4Ｃｌでクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧下蒸発乾固した。粗生成物（ｅ）を次の反応に用いた。
【００５３】
参考例５
（７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−アリル−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン
【００５４】
【化１０】
2016027000.tif 000011
【００５５】
粗生成物（ｅ）のＭｅＯＨ（３ml）溶液にＮａＯＭｅ（０．５ml）を加え、還流下に過熱し１２時間攪拌した。反応混合物を水でクエンチし、ジエチルエーテルで抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:ethyl acetate＝２４：１）で精製し、目的物（ｆ）（４４．０mg，４５％）を得た。
【００５６】
1H NMR(400Hz,CDCl3):δ7.68(1H,d,J=2.7Hz), 7.34(1H,d,J=8.7Hz), 7.20(1H,dd,J=8.7,2.7Hz), 5.80(1H,m), 5.20(2H,s), 4.97(2H,m), 4.66(2H,q,J=6.6,2.3Hz), 3.64(1H,t,J=8.5Hz), 3.47(3H,s), 3.37(3H,s), 2.73(1H,dt,J=11.4,4.6Hz), 2.57(1H,m), 2.46-2.35(2H,m) and 0.81(3H,s) .
13C NMR(400Hz,CDCl3):δ 199.7, 155.8, 139.6, 135.7, 132.4, 127.2, 122.4, 116.5, 114.2, 96.1, 94.5, 86.3, 56.1, 55.2, 49.0, 45.3, 43.0, 42.2, 37.4, 37.0, 28.9, 27.9, 26.6, 22.3, 11.5 .
IR(ATR) 2929(m,C-H,-O-C-O-), 1682(s,C=O)
【００５７】
参考例６
（７Ｓ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−アリル−３．１７−ジヒドロキシ−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−６−オン
【００５８】
【化１１】
2016027000.tif 000012
【００５９】
化合物（ｆ）（３５．０mg，０．０９mmol）、３Ｎ−ＨＣｌ（０．５ml）のＴＨＦ（２．０ml）溶液を５０℃で２４時間攪拌した。反応液を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:ethyl acetate＝１：１）で精製し目的物（ｇ）（２８．８mg，quant.）を得た。
【００６０】
1H NMR(400Hz,CDCl3):δ 7.52(1H,d,J=2.7Hz), 7.30(1H,d,J=8.5Hz), 7.06(1H,dd,J=2.7,8.5Hz), 5.77(1H,m), 4.96(2H,m), 3.78(1H,t,J=8.7Hz), 2.73(1H,dt,J=4.6,11.4Hz), 2.57(1H,m), 2.46-2.35(2H,m) and 0.79(3H,s) .
13C NMR(400Hz,CDCl3):δ200.4, 154.6, 138.3, 135.5, 132.3, 127.4, 121.5, 116.6, 113.4, 81.6, 62.1, 49.0, 45.4, 44.9, 43.3, 42.4, 37.3, 29.9, 29.0, 10.9 .
【００６１】
参考例７
（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−アリル−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール
【００６２】
【化１２】
2016027000.tif 000013
【００６３】
化合物（ｇ）（１４．５mg，０．０４４mmol）の無水ジクロロメタン（２．０ml）溶液に室温下トリエチルシラン（１．１ml，３．６mmol）を加え、続いて三フッ化ホウ素エーテラート（０．７２ml，５．３mmol）を滴下した。得られた黄色溶液を４時間攪拌した。反応液をＫ2ＣＯ3溶液でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせ、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:acetone＝８：２）で精製し、目的物（ｈ）（１４．１mg，quant.）を得た。
【００６４】
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ 7.16(1H,d,J-8.5Hz), 6.64(1H,dd,J=8.5,2.7Hz), 6.54(1H,d,J=2.7Hz), 5.84-5.73(1H,m), 4.99(1H,d,J=10.0Hz), 4.93(1H,d,J=17.2Hz),3.75(1H,t,J=8.5Hz), 2.83(1H,dd,J=17.2,5.5Hz), 2.73(1H,d,J=17.2Hz), 2.37-2.26(2H,m), 2.18-2.08(2H,m) and 0.79(3H,s) .
13C NMR(400MHz,CDCl3):δ 138.0, 127.1, 116.1, 115.9, 112.9, 82.0, 46.5, 43.4, 41.9, 39.6, 38.1, 36.9, 33.9, 33.0, 30.6, 27.6, 22.6, 11.1 .
(IR)3346(br,O-H), 2923(m,C-H)
LRMS(FAB)Observed mz/:312.45 .
【００６５】
参考例８
（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−アリル−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン
【００６６】
【化１３】
2016027000.tif 000014
【００６７】
アリルエストラジオール（ｈ）（７８．０mg，０．２５mmol）の無水ジクロロメタン（２．５ml）溶液に室温下ジイソプロピルエチルアミン（０．２２ml，１．２５mmol）を加え、次いでクロロメチルメチルエーテル（０．０９５ml，１．２５mmol）を滴下した。混合物を８０℃で３時間攪拌した。反応混合物をＮＨ4Ｃｌでゆっくりクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせ、生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過後、減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:EtOAc＝９：１）で精製し、目的物（ｉ）（９７mg，９７％）を得た。
【００６８】
実施例１
３−（（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−７−イル）プロパン−１−オール
【００６９】
【化１４】
2016027000.tif 000015
【００７０】
化合物（ｉ）（６３．４mg，０．１５８mmol）の無水ＴＨＦ（ｊ）（１．５ml）溶液にＢＨ3−ＴＨＦ（０．２２ml，０．２３７mmol）を０℃で加えた。その後、混合物を室温で１時間攪拌した。１Ｎ  ＮａＯＨ（０．１１ml）と３５％Ｈ2Ｏ2水溶液（０．１１ml）を０℃で加え、室温で１時間攪拌した。反応混合物をゆっくりＮＨ4Ｃｌでクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせ、生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過後、減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:EtOAc＝８：２）で精製し、目的物（ｊ）（５５．５mg，８４％）を得た。
【００７１】
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ 7.12(d,1H), 6.75(dd,1H), 6.67(d,1H), 5.06(s,2H), 4.58(dd,2H), 3.54(m,3H), 3.40(s,3H), 3.29(s,3H), 2.84(dd,1H), 2.67(d,1H), 2.25(m,2H), 0.74ppm(s,3H) .
【００７２】
実施例２
３−（（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−３，１７−ビス（メトキシメトキシ）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−７−イル）プロピル  ４−メチルベンゼンスルホネート
【００７３】
【化１５】
2016027000.tif 000016
【００７４】
化合物（ｊ）（３３．１mg，０．０７９mmol）の無水ジクロロメタン（０．１５ml）溶液にトリエチルアミン（０．１４ml，０．１９８mmol）及びｐ−トルエンスルホニルクロリド（３０．１２mg，０．１５８mmol）を０℃で加えた。混合物を室温で２０時間攪拌した。反応混合物をＮＨ4Ｃｌでクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。有機相を合わせ、生理食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過後減圧下で蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（hexane:ethyl acetate＝９：１）で精製し、目的物（ｋ）（３２．５mg，７２％）を得た。
【００７５】
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ 7.76(d,2H), 7.33(d,2H), 7.19(d,1H), 6.83(d,1H), 6.71(d,1H), 6.67(d,1H), 5.15(s,2H), 4.67(dd,2H), 3.99(t,2H), 3.61(t,1H), 3.49(s,3H), 3.39(s,3H), 2.87(m,1H), 2.64(d,1H), 2.46(s,3H), 2.25(m,2H), 0.79ppm(s,3H).
【００７６】
実施例３
（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−（３−フルオロプロピル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ［ａ］フェナントレン−３，１７−ジオール（７α−ＦＥＳ）
【００７７】
【化１６】
2016027000.tif 000017
【００７８】
化合物（ｋ）（３．１mg，０．００６mmol）のアセトニトリル（０．５ml）溶液にＫＦ（０．９mg，０．０１５mmol）及びクリプトフィクス２２２（商標）（２．０mg）を加えた。混合物を１００℃で５分間攪拌した。反応混合物１Ｎ  ＨＣｌ（０．３ml）を加え、２分間攪拌した。反応混合物を減圧下に蒸発乾固した。フラッシュクロマトグラフィー（CH2Cl2:MeOH＝９：１）で精製し、目的物（ｌ）（１．４mg，７０％）を得た。
【００７９】
[MOM-F-Estradiol]1H NMR(400MHz, CDCl3):δ 7.20(d,1H), 6.84(dd,1H), 6.75(d,1H), 5.14(s,2H), 4.66(dd,2H), 4.52-4.30(m,2H), 3.63(t,1H), 3.48(s,3H), 3.38(s,3H), 3.24(dt,2H), 2.93(dd,1H), 2.72(d,1H), 0.81(s,3H)ppm.
【００８０】
実施例４
（７Ｒ，８Ｒ，９Ｓ，１３Ｓ，１４Ｓ，１７Ｓ）−７−（３−[18Ｆ]フルオロプロピル）−１３−メチル−７，８，９，１１，１２，１３，１４，１５，１６，１７−デカヒドロ−６Ｈ−シクロペンタ[ａ]フェナントレン−３，１７−ジオール（７α−[18Ｆ]ＦＥＳ）
【００８１】
【化１７】
2016027000.tif 000018
【００８２】
サイクロトロン（住友重機械工業製、ＨＭ−１８）を用いて、１８ＭｅＶに加速した陽子を、18Ｏ−水を充填したターゲットへ２０μＡの電流値で照射して、18Ｏ（ｐ、ｎ）18Ｆ核反応により、18Ｆ−フルオライド水溶液を製造した。[18Ｆ]フルオライド水溶液（４７４０ＭＢｑ）、４０mmol／ｌクリプトフィックス［２．２．２］（商標）アセトニトリル溶液（１．０ml，４０μmol）、６６mmol／ｌ炭酸カリウム水溶液（０．３ml，２０μmol）の混合溶液をオイルバス（１００℃）を用いて濃縮しアセトニトリル（２．０ml）を用いて２回供沸した。標識前駆体（２mg，３．５μmol）のアセトニトリル溶液（２．０ml）を加え、１００℃で１５分間攪拌した（step 1）。次に、アセトニトリルを留去し０．５Ｍ塩酸／アセトニトリル溶液２．０mlを加え、１００℃で２分間加水分解した後、１．０mlのメイロンを加えて中和した（step 2）。反応混合液をＨＰＬＣを用いて精製し、７α−［18Ｆ］ＦＥＳ（２５７４ＭＢｑ、５４．３％）を合成した。得られた７α−［18Ｆ］ＦＥＳは、０．２５％ポリソルベート８０を含む生理食塩水（５〜１０ｍｌ）に溶解し、０．２２μｍの滅菌フィルターを通して注射剤とした。
【００８３】
精製：ＨＰＬＣ  固定相  ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ−Ａ（１０ｍｍ×２５０ｍｍ）
移動相  アセトニトリル／水＝４５／５５
流  速  ５ｍｌ／分
検出器  ＵＶ  ２６０  ｎｍ
【００８４】
試験例１
（体内分布試験）
８週齢の雌性ｄｄＹマウス（ｎ＝５）に、７α−［18Ｆ］ＦＥＳ注射剤を１匹あたり２ＭＢｑ尾静脈投与した。各時間経過後に頸椎脱臼により屠殺し、心採血および関心臓器の摘出を行った後、臓器重量と放射能をオートウエルγカウンターにて計測した。組織への放射能取り込みは、時間に対する組織ｇあたりの投与量の百分率（％ＩＤ／ｇ）で算出した。その結果、図１に示すように、エストロゲン受容体を高発現する子宮および卵巣への選択的な放射能の集積が認められた。また、これら標的組織への集積性はＰＥＴ撮像に至適な時間内で速やかに疑似平衡状態に達することも認められた。
【００８５】
試験例２
（結合阻害試験）
７α−［18Ｆ］ＦＥＳのエストロゲン受容体発現組織への結合が特異的であることを確認する目的で、エストロゲン並びにエストロゲン受容体に結合するタモキシフェンを用いたインビボ結合阻害試験を実施した。８週齢の雌性ｄｄＹマウス（ｎ＝５）に、エストロゲンもしくはタモキシフェンと７α−［18Ｆ］ＦＥＳ注射剤（１匹あたり２ＭＢｑ）を同時に尾静脈投与した。エストロゲンおよびタモキシフェンの投与量は、１０、３３、１００、３３３、１０００、３３３３ｎｍｏｌ／ｋｇとした。投与１５分後に頸椎脱臼により屠殺し、心採血および関心臓器の摘出を行った後、臓器重量と放射能をオートウエルγカウンターにて計測した。組織への放射能取り込みは、時間に対する組織ｇあたりの投与量の百分率（％ＩＤ／ｇ）で算出した。その結果、７α−［18Ｆ］ＦＥＳの子宮及び卵巣への集積はエストロゲンによって用量依存的に阻害を受け、エストロゲン受容体への特異的結合が証明された。子宮および卵巣における５０％阻害率（ＩＣ50）は、それぞれ、３４および３９ｎｍｏｌ／ｋｇであった（図２）。また、受容体密度の高い子宮では結合性の弱いタモキシフェンでも用量依存的な結合阻害が観察された。タモキシフェンのＩＣ50は１４６ｎｍｏｌ／ｋｇと算出された。
【００８６】
試験例３
（腫瘍への集積性）
７α−［18Ｆ］ＦＥＳのエストロゲン受容体発現組織への結合が特異的であることが明らかとなったため、腫瘍におけるエストロゲン受容体の発現の差を検出可能であるか否かを検討した。雌性免疫不全マウス（ＳＣＩＤ）にエストロゲン受容体を発現する腫瘍（乳がん）細胞株（ＥＲ＋）としてＴ−４７Ｄを、エストロゲン受容体を発現する細胞株（ＥＲ−）としてＭＤＡ−ＭＢ−２３１を移植し、移植後腫瘍の生着を確認した後に実験を行った。腫瘍移植マウスに７α−［18Ｆ］ＦＥＳ注射剤（１匹あたり２ＭＢｑ）を尾静脈投与し、投与１５分後に頸椎脱臼により屠殺、心採血および関心臓器の摘出を行った後、臓器重量と放射能をオートウエルγカウンターにて計測した。組織への放射能取り込みは、時間に対する組織ｇあたりの投与量の百分率（％ＩＤ／ｇ）で算出した。その結果、７α−［18Ｆ］ＦＥＳはエストロゲン受容体を発現しない腫瘍細胞株（ＥＲ−）に比べて、エストロゲン受容体を発現する（ＥＲ＋）細胞株への優位に高い集積性を示した（図３〜図４：Unpaired t-test with Welch's correction; p = 0.015）。
【００８７】
試験例４
（結合阻害試験）
７α−ＦＥＳを用いてＥＲタンパク質に対する結合阻害試験を行った。
エストラジオール、７α−ＦＥＳ及びｅｎｔ−エストラジオールを試料として用い、エストラジオールＥＩＡ  ｋｉｔ（Cayman社）を用いてＥＲタンパク質とエストラジオールの結合性に対する７α−ＦＥＳ阻害作用を検討した。
その結果、図５に示すように７α−ＦＥＳは強力なＥＲタンパク質に対する結合阻害性を示した。
【図１】
2016027000.tif 000023
【図２】
2016027000.tif 000024
【図３】
2016027000.tif 000025
【図４】
2016027000.tif 000026
【図５】
2016027000.tif 000027