(57)【要約】【課題】タンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性を向上させるのに利用可能な１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体及びその製造方法を提供すること。【解決手段】本発明は、下記に代表される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体及びその製造方法を提供する。2016011261.tif 000031【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【化１】
2016011261.tif 000025
[式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表し、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１（ここで、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す。）を表し、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して天然型若しくは非天然型のアミノ酸残基又は単結合を表す。］
【請求項２】
Ｗ、Ｘ及びＹの少なくとも一つは、天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表す、請求項１記載の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
Ｗは、チロシン残基又は単結合を表し、
Ｘは、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基又は単結合を表し、
Ｙは、フェニルアラニン残基又は単結合を表す、
請求項１又は２記載の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
一般式（ＩＩ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体とＨＯ−Ｗ１−Ｒ２（ここで、Ｒ２は、アミノ基の保護基を表し、Ｗ１は、天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表す。）とを縮合するアミド化反応工程と、
【化２】
2016011261.tif 000026
［式中、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す。］
前記カルボキシル基の保護基を脱保護し、一般式（ＩＩＩ）で示される１−カルボキシ−２−アザアダマンタン誘導体を得る脱保護反応工程と、
【化３】
2016011261.tif 000027
［式中、Ｒ２及びＷ１は、前記定義に同じ。］
前記１−カルボキシ−２−アザアダマンタン誘導体とＨ２Ｎ−Ｘ１−Ｙ１−ＯＲ１（ここで、Ｒ１は、前記定義に同じであり、Ｘ１は、必要に応じて官能基が保護された天然型若しくは非天然型のアミノ酸残基又は単結合を表し、Ｙ１は、必要に応じて官能基が保護された天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表す。）とを縮合するアミド化反応工程と、
一部又は全部の保護基を脱保護して１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体を得る脱保護反応工程と、
を備える、請求項１〜３のいずれか一項記載の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の製造方法。
【請求項５】
一般式（ＩＶ）で示されるビシクロ［３．３．１］ノナン−３−アミン誘導体にエポキシ環を形成するエポキシ化反応工程と、
【化４】
2016011261.tif 000028
［式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表す。］
前記エポキシ環を開裂して、一般式（Ｖ）で示される１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体を得る開環反応工程と、
【化５】
2016011261.tif 000029
［式中、Ａは、前記定義に同じ。］
前記１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体のヒドロキシメチル基を酸化して１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体を得る酸化反応工程と、
を備える、
一般式（ＶＩ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の製造方法。
【化６】
2016011261.tif 000030
[式中、Ａは、前記定義に同じであり、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１を表し、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す。］
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体及びその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インスリンをはじめとする生理活性ペプチドは、優れた生理作用を有しているが、その反面、タンパク質分解酵素によって分解され易く、生体内では速やかに代謝されてしまうため、生理活性ペプチドをそのまま医薬品として利用することは困難である。
【０００３】
そのため、生理活性ペプチドのタンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性を向上させる方法として、生理活性ペプチドの構成アミノ酸の一部を別のアミノ酸に置換する方法が利用されている。例えば、糖尿病治療作用を有するグルカゴン様ペプチド−１の一部を天然型アミノ酸に置換した例（特許文献１）や鎮痛作用を有するエンドモルフィンのプロリン残基を非天然型アミノ酸である１−アミノシクロプロパンカルボン酸と置換した例（特許文献２）が挙げられる。
【０００４】
一方、Ｎ−ベンゾイル−２−アザアダマンタンは、水酸化カリウム存在下で一週間加熱環流する過酷な塩基性加水分解条件においても、そのアミド結合が加水分解されないことが知られている（非特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特表２００２−５０８７４２号公報
【特許文献２】国際公開第２００２／１０２８３３号
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Ｈｅｎｋｅｌら、Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１９８１年、第４６巻、ｐ．４９５３−４９５９
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
しかしながら、生理活性ペプチドの構成アミノ酸の一部を別のアミノ酸に置換して代謝抵抗性を向上させた場合であっても、その代謝抵抗性は消失半減期を３〜８倍程度改善するのが限界であり（特許文献２）、医薬品に望まれる代謝抵抗性を得ることは困難な場合が多いのが現状である。
【０００８】
その一方で、１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（以下、Ａｚａｄと表記することがある）を構成アミノ酸として含むペプチドは、これまでに合成された例がない。
【０００９】
そこで本発明は、タンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性を向上させるのに利用可能な１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体及びその製造方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは上記課題を解決するため鋭意検討した結果、スキーム１に示す方法でＡｚａｄを化学合成することに成功し、得られたＡｚａｄを生理活性ペプチドの構成アミノ酸とすることにより、生理活性ペプチドのタンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性が飛躍的に向上することを見出し、本発明を完成させるに至った。
【化１】
2016011261.tif 000002
［式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表す。］
【００１１】
すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を提供する。
【化２】
2016011261.tif 000003
[式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表し、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１（ここで、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す。）を表し、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して天然型若しくは非天然型のアミノ酸残基又は単結合を表す。］
【００１２】
上記の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体は、Ｗ、Ｘ及びＹの少なくとも一つが天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表すことが好ましく、さらに、Ｗがチロシン残基又は単結合を表し、Ｘがトリプトファン残基、フェニルアラニン残基又は単結合を表し、かつ、Ｙがフェニルアラニン残基又は単結合を表すことがより好ましい。
【００１３】
これにより、オピオイド受容体に対する結合活性が高まり、エンドモルフィン様の作用が期待できる。
【００１４】
また本発明は、一般式（ＩＩ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体とＨＯ−Ｗ１−Ｒ２（ここで、Ｒ２は、アミノ基の保護基を表し、Ｗ１は、天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表す。）とを縮合するアミド化反応工程と、
【化３】
2016011261.tif 000004
［式中、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す。］
上記カルボキシル基の保護基を脱保護し、一般式（ＩＩＩ）で示される１−カルボキシ−２−アザアダマンタン誘導体を得る脱保護反応工程と、
【化４】
2016011261.tif 000005
［式中、Ｒ２及びＷ１は、前記定義に同じ。］
上記１−カルボキシ−２−アザアダマンタン誘導体とＨ２Ｎ−Ｘ１−Ｙ１−ＯＲ１（ここで、Ｒ１は、前記定義に同じであり、Ｘ１は、必要に応じて官能基が保護された天然型若しくは非天然型のアミノ酸残基又は単結合を表し、Ｙ１は、必要に応じて官能基が保護された天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表す。）とを縮合するアミド化反応工程と、一部又は全部の保護基を脱保護して１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体を得る脱保護反応工程と、を備える、上記１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の製造方法を提供する。
【００１５】
これにより、高収率、かつ高純度で目的とする１−カルボキシ−２−アザアダマンタン誘導体を得ることができる。
【００１６】
また本発明は、一般式（ＩＶ）で示されるビシクロ［３．３．１］ノナン−３−アミン誘導体にエポキシ環を形成するエポキシ化反応工程と、
【化５】
2016011261.tif 000006
［式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表す。］
前記エポキシ環を開裂して、一般式（Ｖ）で示される１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体を得る開環反応工程と、
【化６】
2016011261.tif 000007
［式中、Ａは、前記定義に同じ。］
上記１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体のヒドロキシメチル基を酸化して１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体を得る酸化反応工程と、を備える、一般式（ＶＩ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の製造方法を提供する。
【化７】
2016011261.tif 000008
[式中、Ａは、前記定義に同じであり、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１を表し、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す。］
【００１７】
これにより、目的物を再現性よく、かつ数グラム以上の量にて得ることができる。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、生理活性ペプチドの構成アミノ酸として使用することにより、タンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性が飛躍的に向上した生理活性ペプチド又はその製造中間体の製造に利用できる。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
本明細書で使用する用語は、特に断りがない限り、下記の定義の通りである。
【００２０】
本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、下記一般式（Ｉ）
【化８】
2016011261.tif 000009
[式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表し、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１（ここで、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す）を表し、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して天然型若しくは非天然型アミノ酸残基又は単結合を表す。］で表されることを特徴とする。
【００２１】
「アミノ基の保護基」とは、ペプチド合成に一般的に用いられる、アミノ酸のアミノ基の保護基を意味し、例えば、ベンジルオキカルボニル基（Ｃｂｚ基又はＺ基）、ｔ−ブチルオキシカルボニル基（Ｂｏｃ基）、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）が挙げられるが、ベンジルオキカルボニル基が好ましい。
【００２２】
「カルボキシル基の保護基」とは、ペプチド合成に一般的に用いられる、アミノ酸のカルボキシル基の保護基を意味し、例えば、炭素数１〜６のアルキル基、ｔ−ブチル基、ベンジル基（Ｂｎ基又はＢｚｌ基）、メトキシベンジル基、ニトロベンジル基、トリクロロエチル基、フェナシル基（Ｐａｃ基）又はアリル基が挙げられるが、炭素数１〜６のアルキル基又はフェナシル基が好ましい。
【００２３】
炭素数１〜６のアルキル基とは、炭素原子を１〜６個有する直鎖状、炭素原子を３〜６個有する分岐鎖状又は炭素原子を３〜６個有する環状のアルキル基を意味し、直鎖状のアルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、ペンチル基又はヘキシル基が挙げられ、分岐鎖状のアルキル基としては、例えば、イソプロピル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、イソペンチル基、１−エチルプロピル基、イソヘキシル基、２−エチルブチル基、シクロプロピルメチル基、２−（シクロプロピル）エチル基、シクロブチルメチル基又はシクロペンチルメチル基が挙げられ、環状のアルキル基としては、例えば、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基又はシクロヘキシル基が挙げられる。
【００２４】
「天然型又は非天然型のアミノ酸残基」としては、例えば、アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン（以下、フェニルアラニン残基をＰｈｅと表記することがある）、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リジン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、スレオニン、バリン、トリプトファン（以下、トリプトファン残基をＴｒｐと表記することがある）、チロシン（以下、チロシン残基をＴｙｒと表記することがある）又はオルニチンの残基が挙げられるが、フェニルアラニン、トリプトファン又はチロシンの残基が好ましい。
【００２５】
「薬理学的に許容される塩」としては、例えば、硫酸、塩酸若しくは燐酸などの鉱酸との塩、酢酸、シュウ酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸若しくはベンゼンスルホン酸などの有機酸との塩、トリメチルアミン若しくはメチルアミンなどのアミンとの塩又はナトリウムイオン、カリウムイオン若しくはカルシウムイオンなどの金属イオンとの塩が挙げられる。
【００２６】
上記一般式（Ｉ）中、Ｗ、Ｘ及びＹの少なくとも一つが天然型又は非天然型のアミノ酸残基を表すことが好ましく、さらに、Ｗは、チロシン残基又は単結合であることが好ましく、Ｘは、トリプトファン残基、フェニルアラニン残基又は単結合であることが好ましく、Ｙはフェニルアラニン残基又は単結合であることが好ましい。
【００２７】
また、下記一般式（ＶＩ）
【化９】
2016011261.tif 000010
[式中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表し、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１（ここで、Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す）を表す。］
で表される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の製造方法、すなわち、ビシクロ［３．３．１］ノナン−３−アミン誘導体にエポキシ環を形成するエポキシ化反応工程と、上記エポキシ環を開裂して、１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体を得る開環反応工程と、上記１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体のヒドロキシメチル基を酸化する酸化反応工程と、を備える１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の製造方法について、以下に説明する。
【００２８】
出発原料として用いるビシクロ［３．３．１］ノナン−３−アミン誘導体は、公知文献（国際公開第２００６／００１３８７号公報又はＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、２００６年、第１２８巻、ｐ．８４１２−８４１３）を参考にして合成できる。
【００２９】
上記のエポキシ化反応工程は、出発原料にエポキシ化試薬を作用させて、ｅｘｏ−メチレン部位をエポキシ化する工程である。
【００３０】
上記のエポキシ化試薬としては、例えば、ｍ−クロロ過安息香酸（以下、ｍＣＰＢＡ）、過酸化水素又はｔ−ブチルヒドロペルオキシドが挙げられる
【００３１】
上記の開環反応工程は、エポキシ化反応工程で形成したエポキシ環を、自発的に（必要に応じて酸又は塩基の添加又は加熱を行って）、１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体を得る工程である。
【００３２】
なお、選択したエポキシ化試薬によっては、下記の酸化反応工程を経ずとも、ヒドロキシメチル基がアルデヒド又はカルボキシル基へと酸化される場合がある。
【００３３】
上記の酸化反応工程は、開環反応工程で得られた１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン誘導体に酸化剤を作用させて、ヒドロキシメチル基をカルボキシル基へと酸化する工程である。
【００３４】
上記の酸化剤としては、例えば、１，１，１−トリアセトキシ−１，１−ジヒドロ−１，２−ベンゾヨードキシル−３（１Ｈ）−オン（Ｄｅｓｓ−Ｍａｒｔｉｎ酸化試薬）、二酸化マンガン、二クロム酸ピリジウム（以下、ＰＤＣ）、ジメチルスルホキシド−ピリジン・三酸化硫黄コンプレックス（Ｐａｒｒｉｋｈ−Ｄｏｅｒｉｎｇ酸化試薬）、亜塩素酸ナトリウム又は２，２，６，６−テトラメチル−１−ピリジルオキシ（ＴＥＭＰＯ）が挙げられる。
【００３５】
上記一般式（ＶＩ）で表される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体は、そのままペプチド合成に用いることができるが、必要に応じて、一般的なペプチド合成に用いられるアミノ酸と同じ構造的特徴を有する誘導体に変換してもよい。
【００３６】
上記のアミノ酸の保護基としては、例えば、メチル基又はフェナシル基が挙げられる。
【００３７】
上記一般式（Ｉ）で示される１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体の合成方法について、以下に説明する。
【００３８】
Ａｚａｄ残基を含むペプチドの合成は、Ｃ末端からＮ末端方向に向けてアミド化と脱保護を繰り返す、公知のペプチド合成法に準じて行うことができ、又は、全ての保護基を脱保護することなく、アミノ基の保護基のみを脱保護し、公知のペプチド合成法に準じて、さらにＮ末端方向に伸張することも可能であるが、目的物の純度又は収量の観点から、とても現実的な方法とはいえない。Ａｚａｄ残基を含むペプチドの合成は、目的物の純度又は収量の観点から、スキーム２に示す、カルボキシル基を保護したＡｚａｄとアミノ酸をアミド化してからカルボキシル基を脱保護し、次に一残基以上のペプチド鎖をアミド化し、最後に全ての保護基を脱保護する方法が好ましい。なお、スキーム２中、Ａは、水素又はアミノ基の保護基を表し、Ｂは、水酸基、アミノ基又はＯＲ１（Ｒ１は、カルボキシル基の保護基を表す）を表し、Ｗ、Ｘ及びＹは、それぞれ独立して天然型若しくは非天然型アミノ酸残基又は単結合を表す。］
【化１０】
2016011261.tif 000011
【００３９】
上記のアミド化反応に用いる試薬としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（以下、ＨＡＴＵ）又はフルオロ−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホルムアミジニウムヘキサフルオロリン酸塩（以下、ＴＦＦＨ）が挙げられる。
【００４０】
上記の脱保護に用いる試薬としては、例えば、トリフルオロ酢酸、臭化水素酸−酢酸混合溶液又はピペリジンが挙げられる。また、上記の脱保護は、パラジウム／活性炭の存在下、水素を用いる接触還元法でも行うことができる。
【００４１】
Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２及びＰｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２は、公知のペプチド合成法により合成できる。例えば、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２は、Ｃｂｚ−ＴｒｐとＰｈｅ−ＮＨ２とを１−エチル−３−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を用いてアミド化した後に、接触還元法によってＣｂｚ基を脱保護することで合成できる。
【００４２】
本発明の作用効果であるタンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性を評価する試験方法としては、例えば、タンパク質分解酵素を用いて試験物質の消失半減期を測定する方法、代謝酵素を用いて試験物質の消失半減期を測定する方法、各種生体内酵素を含んだ血漿を用いて試験物質の消失半減期を測定する方法又は試験物質を投与した動物から採血することで消失速度を測定する方法が挙げられるが、各種生体内酵素を含んだ血漿を用いて試験物質の消失半減期を測定する方法が好ましい。
【００４３】
本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、タンパク質分解酵素に対する代謝抵抗性が飛躍的に向上した生理活性ペプチド又はその製造中間体として利用でき、特に、生理作用の持続を特徴とする医薬品、農薬又は香料などの有効成分として好適である。
【００４４】
本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩を医薬として用いる場合は、胃酸による加水分解に対する耐性の向上又は分子全体の脂溶性の向上の観点から、経口剤又は経皮吸収剤として用いることが好ましいが、アザアダマンタンがシクロデキストリンに抱合される観点から、難溶性ペプチドの可溶化に対する応用性が期待できる。
【実施例】
【００４５】
以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００４６】
（実施例１）
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタンの合成：
【化１１】
2016011261.tif 000012
ｍＣＰＢＡ（１９０ｍｇ、１．１０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５．０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−７−メチレンビシクロ［３．３．１］ノナン−３−アミン（２８５ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（５．０ｍＬ）を滴下した。６時間撹拌後、ｍＣＰＢＡ（１００ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）を追加し、１７時間撹拌した。反応溶液に１０％亜硫酸ナトリウム水溶液を加え、３０分撹拌した後、ジクロロメタンにて抽出をした。有機層を合わせて飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮して粗生成物を得た。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィーにて精製（ＳｉＯ２、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン（１７７ｍｇ、収率５９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ），１．６８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６，１２．４Ｈｚ），１．７３−１．８８（４Ｈ，ｍ），２．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），２．１４（２Ｈ，ｓ），３．６８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．４３（１Ｈ，ｂｒｓ），４．５６（１Ｈ，ｓ），５．１１（２Ｈ，ｓ），７．３０−７．４０（５Ｈ，ｍ）．
Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３０２（Ｍ＋Ｈ）＋．
【００４７】
なお、ヒドロキシメチル基がホルミル基に酸化されたＮ−ベンジルオキシカルボニル−１−ホルミル−２−アザアダマンタン（３９ｍｇ、収率１３％）も、同時に得られた。
【００４８】
（実施例２）
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−ホルミル−２−アザアダマンタンの合成：
【化１２】
2016011261.tif 000013
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−ヒドロキシメチル−２−アザアダマンタン（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ；１０ｍＬ）に溶解し、ＰＤＣ（４４０ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）を加え、５時間撹拌した。その後、ＰＤＣ（２００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）を追加し、１７時間撹拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルにて抽出をした。有機層を合わせて水、飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮して粗生成物を得た。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィーにて精製（ＳｉＯ２、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−ホルミル−２−アザアダマンタン（８８ｍｇ、収率８９％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．６５−１．９８（１０Ｈ，ｍ），２．２２（２Ｈ，ｓ），４．３３（１Ｈ，ｓ），５．１５（２Ｈ，ｓ），７．２８−７．４０（５Ｈ，ｍ），９．４２（１Ｈ，ｓ）．
Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３００（Ｍ＋Ｈ）＋．
【００４９】
（実施例３）
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（Ｎ−Ｃｂｚ−Ａｚａｄ）の合成：
【化１３】
2016011261.tif 000014
リン酸二水素ナトリウム二水和物（９２ｍｇ、０．５９ｍｍｏｌ）を水（１．０ｍＬ）に溶解し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−ホルミル−２−アザアダマンタン（８８ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド溶液（以下、ＤＭＳＯ溶液；３．０ｍＬ）を加えた。この反応溶液に、亜塩素酸ナトリウム（１３３ｍｇ、１．４７ｍｍｏｌ）の水溶液（１．０ｍＬ）をゆっくり滴下し、３時間撹拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルにて抽出をした。有機層を合わせて飽和食塩水にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮して粗生成物を得た。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィーにて精製（ＳｉＯ２、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（６０ｍｇ、収率６５％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．６８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ），１．７８−１．９４（６Ｈ，ｍ），２．１７（２Ｈ，ｓ），２．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ），４．４０（１Ｈ，ｂｒｓ），５．１４（２Ｈ，ｓ），７．２６−７．３７（５Ｈ，ｍ）．
Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３１６（Ｍ＋Ｈ）＋．
【００５０】
（実施例４）
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン（Ｎ−Ｃｂｚ−Ａｚａｄ−ＯＰａｃ）の合成：
【化１４】
2016011261.tif 000015
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（５２０ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）をメタノール（３．５ｍＬ）に溶解し、蒸留水（１．０ｍＬ）と炭酸セシウム（３００ｍｇ、０．９２ｍｍｏｌ）を加えて２０分間攪拌した後、反応液を濃縮し減圧乾燥した。残渣にＤＭＦ（５．０ｍＬ）を加えて懸濁液にした後に、２−ブロモアセトフェノン（３００ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）を加えて室温で１９時間攪拌した。反応液をろ過した後、ろ物を酢酸エチルで洗浄し、ろ液と洗浄液を合わせて濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーにて精製（ＳｉＯ２、ｎ−ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン（６７５ｍｇ、収率９４％）を黄色アモルファス固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．６１−２．３８（１２Ｈ，ｍ），４．４２（１Ｈ，ｂｒｓ），５．１３（４Ｈ，ｂｒｓ），７．３５（５Ｈ，ｂｒｓ），７．４７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．５９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．９２（２Ｈ，ｂｒｓ）．
【００５１】
（実施例５）
粗１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン臭化水素酸塩（Ａｚａｄ−ＯＰａｃ・ＨＢｒ）の合成：
【化１５】
2016011261.tif 000016
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン（８１８ｍｇ、１．８９ｍｍｏｌ）に３３％臭化水素酸（以下、ＨＢｒ）−酢酸溶液（３．７ｍＬ、２２．６ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌開始５分後に反応液は白濁した。室温で６時間攪拌し、原料の消失をＴＬＣで確認後、ジエチルエーテルを用いて４回デカンテーションを行った。沈殿物を濃縮乾固することで、白色固体の粗１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン臭化水素酸塩（７０３ｍｇ、収率９６％）を得た。得られた粗１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン臭化水素酸塩を精製することなく、次の反応に用いた。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．９６−２．１２（６Ｈ，ｍ），２．２７（４Ｈ，ｔ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ），２．４５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ），３．７９（１Ｈ，ｂｒｓ），５．６５（２Ｈ，ｓ），７．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），７．６８（１Ｈ，ｔｔ，Ｊ＝７．４，１．４Ｈｚ），７．９８（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．３Ｈｚ）．
Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３００［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００５２】
（実施例６）
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン（Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ−ＯＰａｃ）の合成：
【化１６】
2016011261.tif 000017
１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン臭化水素酸塩（７００ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（６．０ｍＬ）に懸濁させ、ついでジイソプロピルエチルアミン（以下、ＤＩＥＡ；１．６ｍＬ、９．２ｍｍｏｌ）とＤＭＦ（６．０ｍＬ）を加えると溶解した。Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）（１．１２g、２．７６ｍｍｏｌ）とＨＡＴＵ（１．２６ｇ、３．３１ｍｍｏｌ）を加え室温で３０時間攪拌した。反応溶液に水を加え、酢酸エチルにて抽出をした。有機層を合わせて１Ｎ塩酸、水、飽和食塩水にて順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮して粗生成物を得た。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィーにて精製（ＳｉＯ２、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−１−フェナシルオキシカルボニル−２−アザアダマンタン（４９０ｍｇ、収率３８％）を黄色アモルファス固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．４７−２．３４（１２Ｈ，ｍ），２．９４（２Ｈ，ｂｒｓ），４．０２（１Ｈ，ｂｒｓ），４．８１−５．１４（５Ｈ，ｍ），５．６１−５．７９（２Ｈ，ｍ），６．８４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．１６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．３０−７．４０（１０Ｈ，ｍ），７．４８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．５９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），７．９３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）．
【００５３】
（実施例７）
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ）の合成：
【化１７】
2016011261.tif 000018
Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ−ＯＰａｃ（３９０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）を酢酸（３．７５ｍＬ）と水（０．７５ｍＬ）との混合溶媒に溶解し、０℃まで冷却した。亜鉛粉末（１．８６ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）を加えて１時間攪拌した後、反応液をろ過した。ろ物を酢酸で洗浄し、ろ液と洗浄液を合わせて濃縮した。得られた黄色固体を酢酸エチルで懸濁させ、１０％クエン酸にて洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮して粗生成物を得た。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにて精製（ＯＤＳ、アセトニトリル／１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）し、Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−Ｏ−ベンジル−Ｌ−チロシル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（２２６ｍｇ、収率７０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．２８−２．０９（１２Ｈ，ｍ），２．８７（２Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝３１．２，１３．７，７．３Ｈｚ），４．１３（１Ｈ，ｂｒｓ），４．７３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．９７−５．０８（４Ｈ，ｍ），６．８８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．２４−７．４２（１０Ｈ，ｍ）．
【００５４】
（実施例８）
Ｌ−チロシル−（１−カルボニル−２−アザアダマンチル）−Ｌ−フェニルアラニアル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（Ｔｙｒ−Ａｚａｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）の合成：
【化１８】
2016011261.tif 000019
Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ（１１０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．０ｍＬ）に溶解し、Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２・ＨＢｒ（２７０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（３３２ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．３０ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）の順で加えた。室温で１６時間攪拌した後、反応液に水を加えて反応停止させた。減圧濃縮して得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにて精製（ＯＤＳ、アセトニトリル／１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）し、Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（８０ｍｇ、収率４７％）を得た。
Ｍａｓｓ（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）：ｍ／ｚ＝８８４［Ｍ＋Ｎａ］＋．
【００５５】
アルゴン雰囲気下、Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（６７ｍｇ、０．０７８ｍｍｏｌ）をメタノール（６．０ｍＬ）に溶解し、５ｗｔ％Ｐｄ／Ｃ（１．７ｍｇ、０．７８μｍｏｌ）を加えた。系内を水素ガスで置換し、室温で５時間攪拌した後、系内をアルゴンガスで置換した。反応液をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにて精製（ＯＤＳ、アセトニトリル／１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）し、Ｌ−チロシル−（１−カルボニル−２−アザアダマンチル）−Ｌ−フェニルアラニアル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（以下、実施例８ペプチド）（３０ｍｇ、収率６０％）を得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．３８−２．０１（１２Ｈ，ｍ），２．６７−２．９３（３Ｈ，ｍ），３．０９−３．３４（３Ｈ，ｍ），３．９７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），４．１５（１Ｈ，ｂｒｓ），４．４２（１Ｈ，ｂｒｓ），４．６２−４．７０（１Ｈ，ｍ），６．６９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．０１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．１４−７．３２（１０Ｈ，ｍ）．
Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝６３８［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００５６】
（実施例９）
Ｌ−チロシル−（１−カルボニル−２−アザアダマンチル）−Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（Ｔｙｒ−Ａｚａｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）の合成：
【化１９】
2016011261.tif 000020
Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ（１１０ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．８ｍＬ）に溶解し、Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（２３０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、ＴＦＦＨ（３２２ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．２９ｍＬ、１．７ｍｍｏｌ）の順で加えた。室温で１６時間攪拌した後、反応液に水を加えて反応停止させた。減圧濃縮して得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにて精製（ＯＤＳ、アセトニトリル／１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）することでＮ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（６４ｍｇ、収率３７％）を得た。
【００５７】
アルゴン雰囲気下、Ｎ−Ｃｂｚ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ａｚａｄ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２（５９ｍｇ、０．０６５ｍｍｏｌ）をメタノール（６．０ｍＬ）に溶解し、５ｗｔ％Ｐｄ／Ｃ（１．４ｍｇ、０．６５μｍｏｌ）を加えた。系内を水素ガスで置換し、室温で５時間攪拌した後、系内をアルゴンガスで置換した。反応液をメタノールでセライトろ過し、ろ液を濃縮した。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにて精製（ＯＤＳ、アセトニトリル／１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）し、Ｌ−チロシル−（１−カルボニル−２−アザアダマンチル）−Ｌ−トリプトファニル−Ｌ−フェニルアラニンアミド（以下、実施例９ペプチド）（３６ｍｇ、収率８３％）を白色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．５１−２．０３（１２Ｈ，ｍ），３．０６−３．３４（６Ｈ，ｍ），３．８１（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．０７−４．１２（１Ｈ，ｍ），４．４６（１Ｈ，ｂｒｓ），４．６８（１Ｈ，ｂｒｓ），６．６８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），６．８９−７．３３（１１Ｈ，ｍ），７．５５−７．５７（１Ｈ，ｍ）．
【００５８】
（実施例１０）
１−メトキシカルボニル−２−アザアダマンタン（Ａｚａｄ−ＯＭｅ）の合成：
【化２０】
2016011261.tif 000021
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（１４５ｍｇ、０．４６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン−メタノール（４：１）混合溶媒（２．５ｍＬ）に溶解し、反応液を０℃に冷却した後、トリメチルシリルジアゾメタンの２Ｍｎ−ヘキサン溶液（１．０ｍｍｏｌ、０．５０ｍＬ）を滴下し２０分間攪拌した。酢酸を加えて反応を停止させた後、ジクロロメタンにて抽出した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、濃縮して粗生成物を得た。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィーにて精製（ＳｉＯ２、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）し、Ｎ−Ｃｂｚ−Ａｚａｄ−ＯＭｅを（１３６ｍｇ、収率９０％）で得た。
Ｍａｓｓ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３３０［Ｍ＋Ｈ］＋．
【００５９】
Ｎ−Ｃｂｚ−Ａｚａｄ−ＯＭｅ（１３６ｍｇ、０．４１ｍｍｏｌ）をメタノール（３．０ｍＬ）に溶解し、５ｗｔ％Ｐｄ／Ｃ（８．８ｍｇ、４．１μｍｏｌ）を加えた。系内を水素ガスで置換し、室温で４時間攪拌した後、系内をアルゴンガスで置換した。反応液をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。得られた粗生成物をカラムクロマトグラフィーにて精製（アミン修飾シリカゲル、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル）することで１−メトキシカルボニル−２−アザアダマンタン（５１ｍｇ、収率６３％）を白色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：１．７３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ），１．８５−１．９２（６Ｈ，ｍ），２．０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ），２．１７（２Ｈ，ｓ），３．２９（１Ｈ，ｂｒｓ），３．７１（３Ｈ，ｓ）．
【００６０】
（実施例１１）
１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（Ａｚａｄ）の合成：
【化２１】
2016011261.tif 000022
Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（３５５ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）をメタノール（５．０ｍＬ）に溶解し、５ｗｔ％Ｐｄ／Ｃ（２４ｍｇ、１１μｍｏｌ）を加えた。系内を水素ガスで置換し、室温で４時間攪拌した後、系内をアルゴンガスで置換した。反応液をセライトろ過し、ろ液を濃縮した。得られた粗生成物を逆相カラムクロマトグラフィーにて精製（ＯＤＳ、アセトニトリル／１０ｍＭ炭酸水素アンモニウム水溶液）することで１−カルボキシ−２−アザアダマンタン（２００ｍｇ、収率９８％）を白色固体として得た。
１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：１．８８−１．９５（６Ｈ，ｍ），２．０２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ），２．１５（２Ｈ，ｓ），２．２４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ），３．６１（１Ｈ，ｓ）．
【００６１】
（血漿中安定性試験）
生理活性ペプチドであるエンドモルフィン−１（Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）及びエンドモルフィン−２（Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−ＮＨ２）（いずれも、シグマ  アルドリッチ  ジャパン株式会社）、並びに、その構成アミノ酸のプロリンをＡｚａｄで置換した実施例９ペプチド（エンドモルフィン−１誘導体）及び実施例８ペプチド（エンドモルフィン−２誘導体）について、血漿中消失半減期を測定した。
【００６２】
超高速液体クロマトグラフィー（Ｕｌｔｒａ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；以下、ＵＰＬＣ）はＡＣＱＵＩＴＹ（登録商標）ＵＰＬＣ（日本ウォーターズ株式会社）を用いた。検出器には、ＡＣＱＵＩＴＹ（登録商標）ＵＰＬＣフォトダイオードアレイ（Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ；以下、ＰＤＡ）検出器２９９６ＰＤＡ（日本ウォーターズ株式会社）を用いた。検出波長は２１０〜３５０ｎｍとし、分析対象物にとって最適な波長を選択した。解析ソフトはＥｍｐｏｗｅｒ２（日本ウォーターズ株式会社）を使用した。カラムはＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＭＧＩＩＩ、５μＭ、２．１ｍｍ  ＩＤ×５０ｍｍ（株式会社資生堂）を使用し、移動相には０．０８％トリフルオロ酢酸／Ｈ２Ｏとアセトニトリルを用い、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎで、４分間でアセトニトリルを直線勾配（１→６０％）で増加させた。
【００６３】
へパリン添加ヒト血漿をリン酸緩衝生理食塩水で希釈して、１０％希釈ヒト血漿を調製した。次いで、試験物質の１０ｍＭ  ＤＭＳＯ溶液を１０％希釈ヒト血漿に加え、試験物質最終濃度２０μＭの試験溶液（２００μＬ）を調製した。試験溶液を３７℃で保温し、０、５、１０及び２０分後にそれぞれ冷却したアセトニトリル２００μＬを加え反応を止めた。これを３，０００ｒｐｍ、１０分の条件で遠心分離し、得られた上清をフィルターでろ過した後、ろ液４０μＬをＵＰＬＣで分析した。
【００６４】
結果を表１に示す。エンドモルフィン−１及びエンドモルフィン−２の２０分後の残存率は、それぞれ１７％及び１９％であったが、一方、実施例８ペプチド及び実施例９ペプチドの２０分後の残存率は、それぞれ１００％及び９１％であった。また、残存率に基づき算出したエンドモルフィン−１及びエンドモルフィン−２の血漿中半減期は約８〜９分であったのに対し、実施例９ペプチドの血漿中半減期は１８４分であり、実施例８ペプチドに至っては、血漿中でほとんど分解されることがなかった（実際の消失半減期は、５１４．０分以上と推測される）。
【００６５】
【表１】
2016011261.tif 000023
【００６６】
これらの結果から、生理活性ペプチドの構成アミノ酸の一部をＡｚａｄで置換した実施例８ペプチド及び実施例９ペプチドは、タンパク質分解酵素に対する顕著な代謝抵抗性を有することが示された。したがって、本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩が、タンパク質分解酵素に対する顕著な代謝抵抗性を有し、血漿中で極めて安定に存在することは明らかである。
【００６７】
（ペプチドの受容体結合親和性試験）
エンドモルフィン−１誘導体である実施例９ペプチドについて、放射性リガンド受容体結合分析による、オピオイド受容体に対する結合親和性試験を行った。
【００６８】
モルモット前脳及び小脳を氷冷バッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４）にてホモジナイズした後、遠心分離（１２，０００×ｇ、２０分、４℃）し、上清を捨てた。この操作を３回繰り返し、得られた沈渣を上記バッファーにて再懸濁させ、膜標本とした。
【００６９】
ポリプロピレンチューブに膜標本（０．２〜０．６ｍｇ／チューブ）、放射性リガンド（μ受容体：０．５ｎＭ［３Ｈ］−ＤＡＭＧＯ、δ受容体：０．１ｎＭ［３Ｈ］−ＮＴＩ、κ受容体：０．５ｎＭ［３Ｈ］−Ｕ６９５９３）、実施例９ペプチドを添加し、２５℃にて１２０分間インキュベートした。反応終了後、０．１％ポリエチレンイミンに少なくとも２時間浸したＧＦ／Ｂフィルター（Ｗｈａｔｍａｎ社）を通して、迅速に吸引濾過し、氷冷バッファーにて洗浄した（３ｍＬを５回）。フィルターをバイアルに移し、シンチレーションカクテルを５ｍＬずつ添加し、バイアル中の放射活性（ｄｐｍ）を液体シンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ社）にて計測した。
【００７０】
特異的結合（ＳＢ）は、総結合（ＴＢ）から各受容体に対する過剰量の非放射性リガンド添加によって得られる非特異的結合（ＮＳＢ）を差し引くこと（ＴＢ−ＮＳＢ）により算出し、実施例９ペプチドの存在下におけるＳＢを、対照ＳＢの百分率で表した。放射性リガンドによる特異的結合を５０％阻害する実施例９ペプチドの濃度（ＩＣ５０）を表計算ソフトＭｉｃｒｏｓｏｆｔ  Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ社）により算出した（５０％を挟む２点の直線回帰）。
【００７１】
結果を表２に示す。表２の結果から、実施例９ペプチドがオピオイド受容体に対して結合性を有することが示された。したがって、本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩が、本来の生理活性ペプチドが有する生理活性を維持していることは明らかである。
【００７２】
【表２】
2016011261.tif 000024
【産業上の利用可能性】
【００７３】
本発明の１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体又はその薬理学的に許容される塩は、医薬として有益な生理活性ペプチドの構成アミノ酸の一部として利用することができ、１−カルボニル−２−アザアダマンタン誘導体を構成アミノ酸の一部として含有する生理活性ペプチドは、タンパク質分解酵素に対して顕著な代謝抵抗性を有し、かつ極めて長い生体内半減期を示し得ることから、生理活性が持続可能なペプチド医薬品として利用できる。