(57)【要約】【課題】新規な脳腫瘍治療組成物を提供すること。【解決手段】各化合物ライブラリーからグリオーマ幹細胞株に対して増殖抑制効果を有する化合物を特定して、該化合物を含む脳腫瘍治療組成物を完成した。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
フロクスウリジン及び／又はプリカマイシンを有効成分として含む脳腫瘍治療組成物。
【請求項２】
フロクスウリジンを有効成分として含む請求項１に記載の脳腫瘍治療組成物。
【請求項３】
プリカマイシンを有効成分として含む請求項１に記載の脳腫瘍治療組成物。
【請求項４】
前記脳腫瘍は神経膠腫である請求項１〜３のいずれか１に記載の脳腫瘍治療組成物。
【請求項５】
前記神経膠腫は、膠芽腫である請求項４に記載の脳腫瘍治療組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、フロクスウリジン及び／又はプリカマイシンを有効成分として含む脳腫瘍治療組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
（脳腫瘍）
脳腫瘍（頭蓋内腫瘍）は、頭蓋内に発生する新生物のみならず、過誤腫や肉芽腫などの占拠性病変を含めた総称である。
一般には、（１）神経上皮組織から発生する神経膠腫、（２）神経鞘細胞から発生する腫瘍、（３）脳膜及び関連組織から発生する腫瘍、（４）悪性リンパ腫、（５）血管原性腫瘍、（６）胚細胞腫、（７）奇形腫様腫瘍（頭蓋咽頭腫など）と腫瘍様病変（過誤腫など）、（８）下垂体前葉腫瘍、（９）周辺組織の腫瘍の頭蓋内進展（褐色細胞腫や脊索腫など）及び（１０）転移性脳腫瘍等に分類される。
【０００３】
（神経膠腫）
神経膠腫（glioma）は、髄上皮（medullary epithelium）から分化してくる細胞系（グリア細胞、神経細胞、松果体実質細胞）の細胞から発生する腫瘍（新生物）の総称である。
一般に、グリア細胞系の腫瘍としては星細胞腫瘍系、乏突起細胞腫系、上衣腫系及び膠芽腫であり、神経細胞系としては髄芽腫、髄様上皮腫、神経芽細胞腫、神経節性神経腫及び神経細胞神経膠腫であり、松果体実質細胞系としては松果体細胞腫及び松果体芽細胞腫である。
なお、悪性神経膠腫のうち退形成性星細胞腫の割合は約30％、膠芽腫の割合は約57％であり、合わせて約80％以上を占める。
【０００４】
（膠芽腫）
膠芽腫（神経膠芽腫）は、原発性脳腫瘍の約9％を占め、神経膠腫の中でも最も分化度が低い悪性の腫瘍である（WHO grade IV）。成人の大脳半球に好発し、脳実質内にび慢性に浸潤増殖する。
標準的な治療方法は、開頭手術により新たな神経学的脱落症状を来たさない範囲で腫瘍を摘出する。そして、摘出手術後は放射線療法及び化学療法を行う。
しかし、上記治療を行っても、ほぼ100％の症例に再発を認め、平均生存期間は発症より約1年と、生命予後は極めて悪い。
これにより、膠芽腫の治療剤の開発要望が非常に高い。
【０００５】
また、本発明者らは、以下の特許出願及び非特許文献発表を行っている。
特許文献１は、「GSK3βのがん細胞の生存・増殖への関与を明らかにし、がんの治療・診断のための新たな手段を提供すること」を開示している。
特許文献２は、「複数のGSK3β阻害効果を有する化合物投与を特徴とする脳腫瘍治療方法、特に再発脳腫瘍治療方法並びに該治療方法を実施可能な脳腫瘍治療用キット」を開示している。
非特許文献１は、「GSK3βがヒト膠芽腫細胞の生存及び増殖に関与していること」を開示している。
【０００６】
しかし、上記特許文献及び非特許文献では、フロクスウリジン及び／又はプリカマイシンを有効成分として含む脳腫瘍治療組成物の開示又は示唆がない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】再表２００６−０７３２０２号公報
【特許文献２】特開２０１２―０４１３１４号公報
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Miyashita K, et al. Potential therapeutic effect of glycogen synthese kinase 3βinhibition against human glioblastoma. Clin Cancer Res 2009;15(3): 887-97.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
上述のように、膠芽腫は極めて分化度が低く悪性度が最も高い神経膠腫である。実際の腫瘍は手術で完全摘出できないことが多く、既存の抗癌剤治療や放射線照射治療に対しても耐性を示し、極めて難治性である。このように、本腫瘍に対する有効な治療法がないことから、その生命予後は最近の30年間、改善されていない実情であり、脳腫瘍に対する新しい治療薬剤の開発が切望されている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、上記課題を解決するために、各化合物ライブラリーからグリオーマ幹細胞株に対して増殖抑制効果を有する化合物を特定して、該化合物を含む脳腫瘍治療組成物を提供した。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の脳腫瘍治療組成物は、グリオーマ幹細胞に対しての増殖抑制効果を有する。
【００１２】
すなわち、本発明は以下の通りである。
「１．フロクスウリジン及び／又はプリカマイシンを有効成分として含む脳腫瘍治療組成物。
２．フロクスウリジンを有効成分として含む前項１に記載の脳腫瘍治療組成物。
３．プリカマイシンを有効成分として含む前項１に記載の脳腫瘍治療組成物。
４．前記脳腫瘍は神経膠腫である前項１〜３のいずれか１に記載の脳腫瘍治療組成物。
５．前記神経膠腫は、膠芽腫である前項４に記載の脳腫瘍治療組成物。」
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】プリカマイシンによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図２】アルベンダゾールによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図３】ノルフロキサシンによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図４】ノボビオシン・Naによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図５】PRIMA-1によるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図６】フロクスウリジンによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図７】クロファラビンによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図８】Trequinsinによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【図９】Zardaverineによるグリオーマ幹細胞株に対しての増殖抑制結果
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（本発明の脳腫瘍治療組成物）
本発明の脳腫瘍治療組成物は、フロクスウリジン及び／又はプリカマイシンの有効成分を含む。
【００１５】
｛プリカマイシン（プリカミシン）｝
分子式C52H76O24の抗生物質系の化合物（DNA切断作用を有することによる核酸合成阻害剤）であり、すでに抗悪性腫瘍薬として海外では副甲状腺癌の治療に使用されている。
また、商品名「ミトラマイシン」として市販されている。
【００１６】
（フロクスウリジン）
分子式C9H11FN2O5の核酸アナログ（5-FU類似物質）であり、すでに抗悪性腫瘍薬として海外では大腸癌、腎臓癌の治療に使用されている。
【００１７】
（薬学的に許容しうる塩）
さらに上記した化合物の薬学的に許容し得る塩、例えば塩基性の酸付加塩、無機もしくは有機の酸またはアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩等もまた、本発明に係るグリオーマ幹細胞（グリオーマ細胞）に対しての増殖抑制効果を有する化合物として利用することができる。
加えて、上記した化合物は、通常、それ自体公知の薬理学的に許容される担体、賦形剤、希釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味剤、粘稠剤、矯味剤、溶解補助剤、その他の添加剤、具体的には水、植物油、エタノール又はベンジルアルコールのようなアルコール、ポリエチレングリコール、グリセロールトリアゼテートゼラチン、ラクトース、デンプン等のような炭水化物、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ワセリン等と混合して錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、注射剤、液剤、懸濁剤等の形態により経口又は非経口的に投与することができる。
本発明の抗癌組成物に使用される有効成分の投与経路は特に制限されるものではないが、経口投与が好ましい。
【００１８】
（本発明の脳腫瘍治療用キット）
本発明の脳腫瘍治療用キットは、フロクスウリジン及びプリカマイシンを同時に、別々に、又は逐次的に投与可能とするために、各有効成分が別々に複数の容器に収納されているか、又は、各有効成分が空間的に隔離可能な複数の領域を有する１つの容器に収納されている。
さらに、本発明の脳腫瘍治療用キットは、各有効成分の投与に関する説明書を含んでも良い。なお、該説明書は、下記で示す本発明の脳腫瘍治療方法における各有効成分の投与スケジュールが記載されている。
特に、本発明の脳腫瘍治療用キットにおける各有効成分は、経口投与可能な錠剤が好ましいが、徐放性顆粒剤、シロップ、細粒、及び／又は注射剤とすることも可能である。
【００１９】
（本発明の脳腫瘍治療方法）
本発明の脳腫瘍治療方法において、フロクスウリジン及びプリカマイシンの投与量、投与回数及び投与間隔は、特に限定されず、予防（特に再発防止）及び／又は臨床的治療の目的、疾患のタイプ、患者の体重、年齢、疾患の重篤さなどのような条件に応じて適宜選定される。
例えば、以下の投与形態を利用することができるが、特に限定されない。
プリカマイシン：0.1mg〜0.5mg、好ましくは0.5〜1.0mg、より好ましくは1.0mg〜1.5mg、最も好ましくは1.5mg〜2.0mgを１日に１回又は１日数回（朝、昼、夕）に分けて投与する。加えて、連日投与が好ましいが、数日に１回投与又は隔週に数回投与とすることもできる。
フロクスウリジン：1.0mg〜5.0mg、好ましくは5.0〜15mg、より好ましくは15mg〜25mg、最も好ましくは25mg〜35mgを１日に１回又は１日数回（朝、昼、夕）に分けて投与する。加えて、連日投与が好ましいが、数日に１回投与又は隔週に数回投与とすることもできる。
【００２０】
（本発明の脳腫瘍治療スケジュール）
本発明の脳腫瘍治療スケジュールは、一般に以下の通りであるが、患者の症状に応じて、悪性神経膠腫の初発時術後あるいは再発時に、上記薬剤を標準治療薬のテモゾロミドと併用し上記に記載の投与方法にて使用する。
【００２１】
（本発明の脳腫瘍治療組成物、脳腫瘍治療用キット又は脳腫瘍治療方法の治療対象）
本発明の脳腫瘍治療組成物、脳腫瘍治療用キット又は脳腫瘍治療方法の治療対象は、脳腫瘍｛神経上皮組織から発生する神経膠腫、神経鞘細胞から発生する腫瘍、脳膜及び関連組織から発生する腫瘍、悪性リンパ腫、血管原性腫瘍、胚細胞腫、奇形腫様腫瘍（頭蓋咽頭腫など）と腫瘍様病変（過誤腫など）、下垂体前葉腫瘍、周辺組織の腫瘍の頭蓋内進展（褐色細胞腫や脊索腫など）及び転移性脳腫瘍等｝、特に神経膠腫｛グリア細胞（星細胞腫瘍系、乏突起細胞腫系、上衣腫系及び膠芽腫）、神経細胞（髄芽腫、髄様上皮腫、神経芽細胞腫、神経節性神経腫及び神経細胞神経膠腫）、松果体実質細胞（松果体細胞腫及び松果体芽細胞腫）｝、さらには膠芽腫である。
さらに、これらの腫瘍が再発、又は、開頭手術後に残存する腫瘍（原発性病変）も治療対象とする。
【００２２】
本明細書中で使用される場合、用語「患者」とは、哺乳動物、好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、より好ましくはヒトをいう。
【００２３】
本発明の脳腫瘍治療組成物、脳腫瘍治療用キット、及び／又は脳腫瘍治療方法は、癌組織及び／又は脳腫瘍の大きさを縮小、腫瘍細胞の増殖を遅延、及び／又は消滅させることを提供する。
腫瘍の大きさの縮小及び／又は増殖の抑制は、固形腫瘍における応答評価基準（RECIST）の指針によって測定できる。
【００２４】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例により限定されるものではない。
なお、以下の症例は（金沢大学医学倫理委員会）の承認を得て、実施されている。
【実施例１】
【００２５】
（薬剤ライブラリーからのプレスクリーニング）
FDA Approved Drug Library、Kinase Inhibitor Library、Phosphatase Inhhibitor Library及びICCB Known Bioactives Libraryの５つの薬剤ライブラリーから既存の１３００の化合物をスクリーニングのサンプルとして選択した。そして、該化合物がグリオーマ幹細胞に対しての増殖抑制効果を有するものを選択した。
【００２６】
（プレスクリーニングの結果）
プレスクリーニングにより１３００の化合物から８８の化合物を抽出した。
以上により、フロクスウリジン及びプリカマイシンを含む８８の化合物を抽出した。
【実施例２】
【００２７】
（低濃度におけるＷＳＴ−８増殖アッセイによるスクリーニング）
実施例１で抽出した８８の化合物について、より低濃度の条件で、ＷＳＴ−８増殖アッセイを行った。詳細は、以下の通りである。
【００２８】
３０Ｒ（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｔｙｐｅ）及び５２８ＰＮ（Ｐｒｏｎｅｕｒａｌ ｔｙｐｅ）の２種類のサブタイプのグリオーマ幹細胞株を使用して、グリオーマ幹細胞の増殖抑制効果を調べるために、以下に示す方法に従って、ＷＳＴ−８増殖アッセイを行った。
ＷＳＴ−８増殖アッセイに使用したＷＳＴ−８試薬には、Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ−ＷＳＴ（ＤＯＪＩＮＤＯ）を用いた。各種試薬の添加には、多機能・卓上ピペットステーション：ＥＤＲ−３８４ＳＩＩ（ＢｉｏＴｅｃ）を用いた。グリオーマ幹細胞をDMEM/F-12培地（B27,  EGF , bFGF , Glutamax, Penicilin-Streptavidinを含む）を添加し、培養した。さらに、DMEM/F-12にて2000 cells/wellになるように希釈し、細胞懸濁液を調製した。実施例１で抽出した８８の化合物を0.1μＭ、0.5μＭ、1μＭの３種類の濃度で細胞懸濁液に添加した。非接触３８４穴プレートの各ウェルに細胞懸濁液36μｌを播種した。発色試薬を各ウェルに4μｌ添加した。インキュベーター内で37℃、3時間培養した。培養後、マイクロプレートリーダー：ＲｅａｄｅｒｓＩｎｆｉｎｉｔｅｎ ２００ Ｐｒｏ（ＴＥＣＡＮ）を用いて４５０ｎｍの吸光度を測定した。測定結果より、薬剤を添加しなかったコントロールを１００％として、細胞生存率を算出した。
次に、得られた結果より、３０Ｒ及び５２８ＰＮの２種類のグリオーマ幹細胞株に対して増殖抑制効果を示した薬剤を抽出した。抽出条件として、（１）低濃度で強い増殖抑制効果、（２）３０Ｒ及び５２８ＰＮの両サブタイプに有効の２つを満たす薬剤を選択した。
【００２９】
（結果）
スクリーニングにより８８の化合物から２の化合物を抽出した。
プリカマイシンが顕著な増殖抑制効果を示した（図１）。３０Ｒの増殖を約３０％まで減少させ、５２８ＰＮの増殖を２０％以下まで減少させた。
一方、プリカマイシンと同じく抗生物質系の化合物であるアルベンダゾール（Ａｌｂｅｎｄａｚｏｌｅ、図２）、ノルフロキサシン（Norfloxacin、図３）、ノボビオシン・Na（Novobiocin・Na、図４）及びPRIMA-1（図５）は増殖抑制効果を示さなかった。
フロクスウリジンも顕著な増殖抑制効果を示した（図６）。より詳しくは、３０Ｒの増殖を約４０％以下まで減少させ、５２８ＰＮの増殖を約６０％まで減少させた。
一方、フロクスウリジンと同じく核酸アナログであるクロファラビン（Ｃｌｏｆａｒａｂｉｎｅ、図７）、Trequinsin（図８）及びZardaverine（図９）は増殖抑制効果を示さなかった。
以上より、スクリーニングにおいてフロクスウリジン及びプリカマイシンを抽出した。
【００３０】
（総論）
本実施例により、フロクスウリジン及びプリカマイシンが、グリオーマ幹細胞に対しての増殖抑制効果を有することを確認した。フロクスウリジン及びプリカマイシンは、グリオーマ幹細胞に対しての増殖抑制効果を有することにより、神経膠腫、特に膠芽腫に治療効果を有する。
さらに、プリカマイシンは、類似化合物であり、同じく抗生物質系の化合物であるアルベンダゾール、ノルフロキサシン、ノボビオシン・Na及びPRIMA-1とは異なり、グリオーマ幹細胞に対して特異的な増殖抑制効果を有することを確認した。
加えて、フロクスウリジンは、類似化合物であり、同じく核酸アナログであるクロファラビン、Trequinsin及びZardaverineとは異なり、グリオーマ幹細胞に対して特異的な増殖抑制効果を有することを確認した。
以上により、フロクスウリジン及びプリカマイシンのグリオーマ幹細胞に対しての増殖抑制効果は、顕著な効果かつ異質な効果であることを確認した。
【産業上の利用可能性】
【００３１】
本発明では、脳腫瘍治療組成物を提供することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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