(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、より効果的に脂質代謝を促進して体脂肪を効率的に減少させることができる脂質代謝促進剤を提供することである。【解決手段】  本発明者らは、脂肪の代謝を促進し、体脂肪を効率的に減少させるような素材について鋭意研究を行ったところ、食経験のある主要なアミノ酸である、アルギニン、フェニルアラニン、およびアラニンを高濃度に含有する混合物に高い脂質代謝促進作用及び抗肥満作用があることを見出し、本発明を完成させた。  具体的には、アドレナリンを投与した動物の血中グリセロール変化量をモニターすることにより、従来のアミノ酸組成物よりも、アルギニン、フェニルアラニン、およびアラニンを高濃度に含有する組成物が脂肪の分解を促進することを見出した。さらに、高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物および、運動負荷をかけたヒトにおいても、脂質代謝促進効果を確認することができた。【選択図】図６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である、脂質代謝促進剤。
【請求項２】
アルギニンを８〜３０モル、
アラニンを１８〜３０モル、
フェニルアラニンを１０〜２０モル、
のモル比で含有する、請求項１に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項３】
アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、請求項１または２に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項４】
アルギニン、アラニン、フェニルアラニンおよびグリシンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して８５モル以上である、脂質代謝促進剤。
【請求項５】
アルギニンを８〜３０モル、
アラニンを１８〜３０モル、
フェニルアラニンを１０〜２０モル、
グリシンを２０〜２７モル、
のモル比で含有する、請求項４に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項６】
アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、請求項４または５に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項７】
さらに、他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、およびアスパラギン酸のみを含有する、請求項１または４に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項８】
さらに、他のアミノ酸として下記のアミノ酸のみを、下記のモル比で含有する、請求項２または５に記載の脂質代謝促進剤。
プロリン  ０．０１〜４モル
リジン  ０．０１〜２モル
チロシン  ０．０１〜２モル
スレオニン  ０．０１〜２モル
ロイシン  ０．０１〜２モル
バリン  ０．０１〜２モル
イソロイシン  ０．０１〜２モル
グルタミン酸  ０．０１〜１モル
トリプトファン  ０．０１〜１モル
ヒスチジン  ０．０１〜１モル
セリン  ０．０１〜１モル
メチオニン  ０．０１〜０．２モル
アスパラギン酸  ０．０１〜０．１モル
【請求項９】
アドレナリンの分泌が亢進する状態で摂取することを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項１０】
アドレナリンの分泌が亢進する状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、または多食による刺激を受ける状態である、請求項９に記載の脂質代謝促進剤。
【請求項１１】
褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１の発現量を増加することを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の脂質代謝促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを有効成分として高濃度に含有する脂質代謝促進剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
食生活やライフスタイルの欧米化に伴い、肥満人口は増加の一途をたどっている。厚生労働省「国民健康・栄養調査結果の概要（２０１０）」によると、日本人の肥満の割合は男性３０．４％、女性２１．１％となっている。さらに、推計２３００万人に達している肥満人口のうち約半分にあたる１１００万人が、高血糖や高脂血症、高血圧症、といったメタボリックシンドローム（生活習慣病）を合併しており、生活の質（ＱＯＬ）を大きく低下させている。これらの疾患の予防・改善には、食事量の制限を介した摂取カロリーのコントロールだけではなく、食品中の栄養素による生体調節機能と運動によるエネルギー消費が、近年大いに注目されている（非特許文献１）。
【０００３】
近年、アミノ酸の機能性が注目されている。例えば、スズメバチ成虫のエネルギー源となる幼虫の分泌する唾液中のアミノ酸組成を再現したアミノ酸組成物である「Ｖｅｓｐａ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ｍｉｘｔｕｒｅ（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）」は、摂取後に運動すると、血中リパーゼ活性が上昇して、血中遊離脂肪酸が上昇することなどが知られている（特許文献１〜３および非特許文献２）。また、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリンおよびグルタミンを特定のモル比で含有するアミノ酸組成物については、無酸素運動下での体脂肪を運動エネルギー利用するプロセスを促進することなどが知られている（特許文献４）。さらに、インスリン分泌機能を有するアミノ酸を含有する組成物が、運動等による体力の消耗時におけるスタミナ回復や栄養補給に有用であることも知られている（特許文献５）。その他に、アルギニン、グルタミン、および分岐鎖アミノ酸一定以上含有するアミノ酸組成物（特許文献６）や、アルギニンおよびグルタミンを一定以上含有する、乳幼児用体力増強剤及び運動能力向上剤（特許文献７）も知られている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平４−１１２８２５号公報
【特許文献２】特開平６−２４９７７号公報
【特許文献３】特開平５−１２７２５８号公報
【特許文献４】特開２００４−３５２６９６号公報
【特許文献５】特開昭６１−２１５３２３号公報
【特許文献６】特開２００５−２７５２４号公報
【特許文献７】特許第４５２６０４７号公報
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】河田照雄ら編集、日本栄養・食料学会監修  「肥満と脂肪エネルギー代謝−メタボリックシンドロームへの戦略−」、建帛社、ｐｐ．２１７−２３８（２００８）
【非特許文献２】Ｔｓｕｃｈｉｔａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ、Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ａ  Ｖｅｓｐａ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄ  ｍｉｘｔｕｒｅ  ｉｄｅｎｔｉｃａｌ  ｔｏ  ｈｏｒｎｅｔ  ｌａｒｖａｌ  ｓａｌｉｖａ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｂｌｏｏｄ  ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｉｎｄｉｃｅｓ  ｏｆ  ｒｕｎｎｉｎｇ  ｒａｔｓ．、Ｎｕｔｒ  Ｒｅｓ、１７（６）、ｐｐ．９９９−１０１２（１９９７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、より効果的に脂質代謝を促進して体脂肪を効率的に減少させることができる脂質代謝促進剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、脂肪の代謝を促進し、体脂肪を効率的に減少させるような素材について鋭意研究を行ったところ、食経験のある主要なアミノ酸である、アルギニン、フェニルアラニン、およびアラニンを高濃度に含有する混合物に高い脂質代謝促進作用及び抗肥満作用があることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
具体的には、アドレナリンを投与した動物の血中グリセロール変化量をモニターすることにより、従来のアミノ酸組成物よりも、アルギニン、フェニルアラニン、およびアラニンを高濃度に含有する組成物が脂肪の分解を促進することを見出した。さらに、高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物および、運動負荷をかけたヒトにおいても、脂質代謝促進効果を確認することができた。
【０００９】
すなわち、本発明は、
[１]  アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である、脂質代謝促進剤、
[２]  アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、のモル比で含有する、前記[１]に記載の脂質代謝促進剤、
[３]  アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、前記[１]または[２]に記載の脂質代謝促進剤、
[４]  アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンを有効成分として含有し、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して８５モル以上である、脂質代謝促進剤、
[５]  アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、グリシンを２０〜２７モル、のモル比で含有する、前記[４]に記載の脂質代謝促進剤、
[６]  アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して１００モルある、前記[４]または[５]に記載の脂質代謝促進剤、
[７]  さらに、他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、およびアスパラギン酸のみを含有する、前記[１]または[４]に記載の脂質代謝促進剤、
[８]  さらに、他のアミノ酸として下記のアミノ酸のみを、下記のモル比で含有する、前記[２]または[５]に記載の脂質代謝促進剤、
プロリンを０．０１〜４モル
リジンを０．０１〜２モル
チロシンを０．０１〜２モル
スレオニンを０．０１〜２モル
ロイシンを０．０１〜２モル
バリンを０．０１〜２モル
イソロイシンを０．０１〜２モル
グルタミン酸を０．０１〜１モル
トリプトファンを０．０１〜１モル
ヒスチジンを０．０１〜１モル
セリンを０．０１〜１モル
メチオニンを０．０１〜０．２モル
アスパラギン酸を０．０１〜０．１モル
[９]  アドレナリンの分泌が亢進する状態で摂取することを特徴とする、前記[１]〜[８]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[１０]  アドレナリンの分泌が亢進する状態が、運動、ストレス、寒冷暴露、入浴、または多食による刺激を受ける状態である、前記[９]に記載の脂質代謝促進剤、
[１１]  褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１の発現量を増加することを特徴とする、前記[１]〜[１０]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[１２]  脂肪から脂肪酸への分解を促進することを特徴とする、前記[１]〜[１０]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[１３]  脂肪酸から熱への変換を促進することを特徴とする、前記[１]〜[１０]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
[１４]  脂肪酸からエネルギーへの変換を促進することを特徴とする、前記[１]〜[１０]のいずれか１つに記載の脂質代謝促進剤、
からなる。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の脂質代謝促進剤は、脂質代謝を促進する効果があるので、正常の人と比べて脂肪の分解が遅くかつ少ない傾向にある肥満気味の人であっても、脂肪を効率的に燃焼させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】例１における血中グリセロール濃度の変化率（Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  ＡＵＣ  ｃｈａｎｇｅ  （％  ｏｆ  Ｖｅｈｉｃｌｅ  ｇｒｏｕｐ）を示す。
【図２】例２における血中グリセロール濃度の変化量（ΔＧｌｙｃｅｒｏｌ）を示す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図３】例３における血中グリセロール濃度の変化量（ΔＧｌｙｃｅｒｏｌ）を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｖｅｈｉｃｌｅ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図４】例４で測定した体重および試験期間中の摂餌量／体重を示す。平均値±標準誤差を表す。Ｎｏｒｍａｌ群：ｄａｙ３〜ｄａｙ４２で体重に有意差あり。製造例３群：ｄａｙ３〜ｄａｙ３９で体重に有意差あり。（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ｐ＜０．０５、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図５】例４で測定した腎周囲の脂肪重量を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図６】例４で測定した褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を示す。平均値±標準誤差を表す。＊：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤ検定）。
【図７】例５で得られた経時的な呼吸交換比の測定結果および呼吸交換比の変化量（Δ呼吸交換比）の結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  プラセボ群、１標本ｔ検定）。
【図８】例５で測定した、経時的な血中グリセロール濃度および遊離脂肪酸濃度の測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。
【図９】例５で測定した、経時的な血中のコルチゾール濃度、グルカゴン濃度、インスリン濃度、および血糖の測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５、＃＃：ｐ＜０．０１（ｖｓ．  プラセボ群、１標本ｔ検定）。
【図１０】例５で測定した、経時的な血中の総ケトン体濃度、３−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ濃度、およびアセト酢酸濃度の測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。＃：ｐ＜０．０５（ｖｓ．  プラセボ群、１標本ｔ検定）。
【図１１】例５で測定した、経時的な血中の成長ホルモン濃度、アドレナリン濃度、およびノルアドレナリン濃度の測定結果を示す。平均値±標準誤差を表す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施態様に限定されず、本発明の効果を発揮する範囲内で自由に変更できるものである。
【００１３】
本発明の有効成分であるアルギニン（Ａｒｇｉｎｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ−アルギニンのＣａｓ  Ｎｏ．は、７４−７９−３であり、その別名は、（Ｓ）−２−アミノ−５−グアニジノペンタン酸、（Ｓ）−２−アミノ−５−（アミジノアミノ）吉草酸、Ｌ−（＋）−アルギニン、アルギＵである。アルギニンの略号として、Ａｒｇ、Ｒを用いる場合もある。アルギニンは、水や蟻酸に溶けやすく、希塩酸に溶け、エタノールにはほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。アルギニンは、肉類等の多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。アルギニンは、尿素回路の中間体として生合成されるが、速やかに分解されるため子供では必須アミノ酸とされている。アルギニンは、成長ホルモンの分泌促進、免疫機能の向上に関与することが知られている。
【００１４】
本発明の有効成分であるアラニン（Ａｌａｎｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ−アラニンのＣａｓ  Ｎｏ．は、５６−４１−７であり、その別名は、（Ｓ）−２−アミノプロピオン酸、（２Ｓ）−２−アミノプロパン酸、α−アラニン、Ｌ−（＋）−アラニンである。アラニンの略号として、Ａｌａ、Ａを用いる場合もある。アラニンは、水や蟻酸に溶けやすく、エタノールには、ほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。アラニンは、多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。アラニンは、タンパク質の構成アミノ酸の一種であり、結合組織の材料であることが知られている。
【００１５】
本発明の有効成分であるフェニルアラニン（Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）は、必須アミノ酸の１つであり、それには、Ｄ体とＬ体とが存在する。Ｌ−フェニルアラニンのＣａｓ  Ｎｏ．は、６３−９１−２であり、その別名は、（Ｓ）−α−アミノベンゼンプロパン酸、（２Ｓ）−２−アミノ−３−フェニルプロパン酸、（Ｓ）−３−フェニル−２−アミノプロピオン酸、Ｌ−β−フェニルアラニン、Ｌ−（−）−フェニルアラニンである。フェニルアラニンの略号として、Ｐｈｅ、Ｆを用いる場合もある。フェニルアラニンは、蟻酸に溶けやすく、水にやや溶けにくく、希塩酸に溶け、エタノールにはほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。フェニルアラニンは、多種のタンパク質などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。
【００１６】
グリシン（Ｇｌｙｃｉｎｅ）は、非必須アミノ酸の１つである。グリシンのＣａｓ  Ｎｏ．は、５６−４０−６であり、その別名は、２−アミノ酢酸、α−アミノ酢酸、グリコリキシル、グリココールである。グリシンの略号として、Ｇｌｙ、Ｇを用いる場合もある。グリシンは、水や蟻酸に溶けやすく、エタノールには、ほとんど溶けない（第十六改正日本薬局方）。グリシンは、コラーゲン、ゼラチン、魚貝類などの様々な素材や食品に含まれていることが知られている。グリシンは、糖原性を持ち、ヘモグロビン、肝臓中の酵素などの構成成分であることや、中枢神経における神経伝達物質であることが知られている。
【００１７】
本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシンまたは他のアミノ酸は、フリーベースや水和物であってもよく、また、有機酸（酢酸、酒石酸、脂肪酸など）、有機塩基、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、過塩素酸など）、無機塩基（カリウム、ナトリウム、亜鉛など）と塩を形成していても構わない。そして、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシンは、Ｄ体とＬ体のいずれを用いてもよい。
【００１８】
本発明において、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシンまたは他のアミノ酸は、アルギニン、フェニルアラニン、アラニン、グリシンまたは他のアミノ酸を多く含む素材や食品などから、搾汁、濃縮、精製、結晶化又は各種の溶媒で抽出するなどして得ることができる。各種の溶媒として、水や通常に用いられる溶媒、例えば、アルコール類、炭化水素類、有機酸、有機塩基、無機酸、無機塩基、超臨界流体等を単独で、あるいは複数を組み合わせて用いることが可能である。また、微生物で生産したものを用いることも可能である。そして、化学的に合成されたものを用いることも可能である。
【００１９】
本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを有効成分として含有する。アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計は、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上、７０モル以上、８０モル以上、９０モル以上、または１００モルとすることができる。その例として、表２および表３に示す構成の脂質代謝促進剤（製造例１、製造例２、製造例３）を挙げることができるが、この例に限定されない。
また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれるアルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、のモル比で含有せしめることができる。
【００２０】
本発明の脂質代謝促進剤は、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンを有効成分として含有することもできる。アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンのモル数の合計は、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して８５モル以上、９０モル以上、９５モル以上、または１００モルとすることができる。
また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれるアルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンのモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、アルギニンを８〜３０モル、アラニンを１８〜３０モル、フェニルアラニンを１０〜２０モル、グリシンを２０〜２７モル、のモル比で含有せしめることができる。その例として、表３に示す構成の脂質代謝促進剤（製造例３）を挙げることができるが、この例に限定されない。アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンは、味や臭いが飲食や経口摂取に適しているため、これらを高度に含有する本発明の脂質代謝促進剤は風味にすぐれる。よって、本発明の脂質代謝促進剤には、これを添加した飲食品や医薬品の風味を損なわない利点がある。
【００２１】
さらに、本発明の脂質代謝促進剤は、さらに他のアミノ酸としてプロリン、リジン、チロシン、スレオニン、ロイシン、バリン、イソロイシン、グルタミン酸、トリプトファン、ヒスチジン、セリン、メチオニン、およびアスパラギン酸のみを含有していてもよい。他のアミノ酸は、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を阻害しないものを優先的に使用することもできる。
また、本発明の脂質代謝促進剤に含まれる他のアミノ酸のモル比はいずれの値であってもよい。あえて挙げるなら、プロリンを０．０１〜４モル、リジンを０．０１〜２モル、チロシンを０．０１〜２モル、スレオニンを０．０１〜２モル、ロイシンを０．０１〜２モル、バリンを０．０１〜２モル、イソロイシンを０．０１〜２モル、グルタミン酸を０．０１〜１モル、トリプトファンを０．０１〜１モル、ヒスチジンを０．０１〜１モル、セリンを０．０１〜１モル、メチオニンを０．０１〜０．２モル、アスパラギン酸を０．０１〜０．１モル、のモル比で含有せしめることができる。
【００２２】
脂肪の分解メカニズムは、以下のように概説できる。
（１）運動負荷、入浴、寒冷刺激などによってアドレナリンの分泌が亢進する。
（２）アドレナリンが脂肪細胞膜上のβレセプターに結合すると、細胞膜内面に存在するアデニル酸シクラーゼが活性化されて、ＡＴＰからサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）が合成される。
（３）細胞内ｃＡＭＰ濃度が上昇した結果、ｃＡＭＰ依存性のプロテインキナーゼＡが活性化され、このプロテインキナーゼＡにより脂肪細胞の中で、ホルモン感受性リパーゼがリン酸化されて活性化する。
（４）ホルモン感受性リパーゼが、トリアシルグリセロールを遊離脂肪酸とモノアシルグリセロールに変換する。
（５）モノアシルグリセロールリパーゼが、モノアシルグリセロールをグリセロールと遊離脂肪酸に変換する。
さらに、脂肪酸は、褐色脂肪細胞内で分解を受け、ＵＣＰ−１（Ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １、ミトコンドリア脱共役タンパク質）の働きを受けて熱に変換される。また、遊離脂肪酸は、体内でグルコース由来のエネルギーの代謝が不足すると、主として肝臓のミトコンドリア内でケトン体（アセト酢酸、β−ヒドロキシ酪酸、アセトン）に変換され、エネルギー源として代謝されるようになる。
【００２３】
後述の実験例（例２および例３）では、アドレナリンを投与して人為的にアドレナリン分泌が亢進した状態にした動物を用い、血中グリセロール変化量モニターすることにより、従来のアミノ酸組成物よりアルギニン、フェニルアラニン、アラニンおよびグリシンを高濃度に含有する本発明の脂質代謝促進剤が脂質代謝を促進することがわかった。
【００２４】
さらに、高脂肪食を給餌した動物やヒトを使用し、実際に運動負荷を与えてアドレナリン分泌が亢進した状態で、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を確認することができた（例４、例５）。
つまり、本発明の脂質代謝促進剤は、特にアドレナリンの分泌が継続的に亢進した状態において、より効率的に脂肪を代謝せしめることができる。
【００２５】
例４に示すように、本発明の脂質代謝促進剤を投与した動物では、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１の発現量が増加した。このことから、本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪の分解を高めると共に、脂肪酸から熱への変換効率を高めることがわかった。
また、例５に示すように、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、運動時のケトン体生成やグルカゴンの分泌が高まった。グルカゴンには、グリコーゲンの利用を促進すると共に、ケトン体の産生を促進する働きがある。このことから、本発明の脂質代謝促進剤は、グルコース由来のエネルギーの代謝が不足したときに脂肪酸からエネルギーへ変換する効率を高めることもわかった。ケトン体濃度の経時的推移に注目すると、運動負荷（ｔｉｍｅ３０〜ｔｉｍｅ９０）の後に、ケトン体の生成が大きく高まっている。このことから、運動中に亢進した脂肪酸からエネルギーへの変換が、運動終了後も引き続き高い状態を維持していることがわかった。
さらに、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、有酸素運動時の呼吸交換比の変化量が低下した。呼吸交換比はエネルギー代謝の指標の１つであり、この値が低下することは、エネルギー代謝における脂質の貢献が高まったことを示す。このことからも、本発明の脂質代謝促進剤が、脂肪酸からエネルギーへ変換する効率を高めることがわかった（例５）。
コルチゾールは糖質コルチコイドの一種であり、ストレスを受けると副腎皮質からの分泌が亢進されるホルモンである。コルチゾールの上昇は、グリコーゲンやタンパク質から糖への分解を促進する働きがあることから、その上昇は脂質代謝を亢進する。しかし、コルチゾールの高い分泌状態が続くと、筋グリコーゲンや肝グリコーゲンを早期に消耗し、運動パフォーマンスが低下する。さらに、免疫機能の低下や筋肉・臓器の萎縮といった体への悪影響を伴う。よって、運動時において、コルチゾールのレベルは早期に定常値に戻ることが好ましい。本発明の脂質代謝促進剤を摂取したヒト（アクティブ群）において、血中のコルチゾールは摂取直後（ｔｉｍｅ０）から上昇したが、摂取１５分後（ｔｉｍｅ１５）から速やかに下降し、その速度はプラセボ群より速やかであった。このことから、本発明の脂質代謝促進剤を摂取することによって、同じ運動負荷を与えても、より体に負担をかけずに運動を行なえることが明らかになった（例５）。
【００２６】
その一方で、本発明の脂質代謝促進剤を投与したヒトにおいて、血中のインスリン濃度や血糖に変化を認めなかった。よって、本発明の脂質代謝促進剤は、インスリンの分泌や血糖に影響を与えずに脂質代謝を促進することがわかった（例５）。インスリンの分泌が亢進した状態で運動を行うと、運動時中に低血糖を生じることがある。本発明の脂質代謝促進剤は、インスリンの分泌に影響を及ぼさないので、運動時に低血糖を来すことなく、脂質由来のエネルギーを効率的に産生することができる。
また、本発明の脂質代謝促進剤は、成長ホルモン、アドレナリンおよびノルアドレナリンの分泌にも影響を与えずに、脂質代謝促進効果を奏することもわかった（例５）。
これらの結果から、本発明の脂質代謝促進剤は、脂肪から脂肪酸への分解、脂肪酸から熱への変換、および脂肪酸からエネルギーへの変換のいずれの過程も促進することがわかった。
【００２７】
本発明の脂質代謝促進剤は、そのまま、あるいは、脂質代謝促進するための飲食品または医薬品に添加するなど、いずれの態様であってもよい。
【００２８】
本発明において、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンの脂質代謝促進剤への配合量は、剤型、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンの合計で０．２〜１００ｗ／ｗ％の配合量に設定することができ、好ましくは０．３〜１００ｗ／ｗ％の配合量、さらに好ましくは０．４〜１００ｗ／ｗ％の配合量に設定することができる。
【００２９】
本発明において、脂質代謝促進剤の一日当たりの摂取量は、年齢、症状、体重、用途などによって異なるため、特に限定されないが、あえて挙げるなら、脂質代謝促進剤に含まれるアミノ酸の合計が固形分として０．３〜３０ｇ、０．８〜８ｇ、１〜５ｇ、１．３〜３．５ｇ、１．５ｇまたは３ｇとなる摂取量に設定することができる。
本発明において、アルギニンの一日当たりの摂取量は、０．０６〜１２ｇ（または０．４〜７０ミリモル）、０．２〜４ｇ（または１〜２１ミリモル）、０．４〜２ｇ（または２〜１１ミリモル）、１．２ｇ（７ミリモル）、１ｇ（６ミリモル）、または０．６ｇ（４ミリモル）を例示することができる。
本発明において、アラニンの一日当たりの摂取量は、０．０３〜１０ｇ（または０．３〜１１２ミリモル）、０．０９〜３ｇ（または１〜３４ミリモル）、０．２〜２ｇ（または２〜１７ミリモル）、１ｇ（１１ミリモル）、０．６ｇ（６ミリモル）、または０．３ｇ（３ミリモル）を例示することができる。
本発明において、フェニルアラニンの一日当たりの摂取量は、０．０２〜１０ｇ（または０．１〜６１ミリモル）、０．０８〜３ｇ（または０．５〜１８ミリモル）、０．２〜２ｇ（または０．９〜９ミリモル）、１ｇ（６ミリモル）、０．５ｇ（３ミリモル）、または０．２ｇ（１ミリモル）を例示することができる。
本発明において、グリシンの一日当たりの摂取量は、４ｇ以下（または５９ミリモル以下）、１．３ｇ以下（または１８ミリモル以下）、０．７ｇ以下（または９ミリモル以下）、０．０２〜４ｇ（または０．３〜５９ミリモル）、０．０７〜１ｇ（または１〜１８ミリモル）、０．１〜０．７ｇ（または２〜９ミリモル）、０．４ｇ（６ミリモル）または０．２ｇ（３ミリモル）を例示することができる。
例えば、表２に示す脂質代謝促進剤（製造例１）を２．７ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計２．７ｇ（２２ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを、それぞれ１．２ｇ（７．０ミリモル）、０．５７ｇ（６．４ミリモル）、および０．４７ｇ（２．９ミリモル）の量で摂取したことになる。
例えば、表２に示す脂質代謝促進剤（製造例２）を３．０ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計３．０ｇ（２３ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを、それぞれ１．０ｇ（５．７ミリモル）、１．０ｇ（１１ミリモル）、および１．０ｇ（６．１ミリモル）の量で摂取したことになる。
例えば、表３に示す脂質代謝促進剤（製造例３）を３ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計３ｇ（２４ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンを、それぞれ１．２ｇ（７．０ミリモル）、０．５７ｇ（６．４ミリモル）、０．４７ｇ（２．９ミリモル）、および０．４５ｇ（５．９ミリモル）の量で摂取したことになる。
また、表３に示す脂質代謝促進剤（製造例３）を１．５ｇ摂取した場合、アミノ酸の合計１．５ｇ（２４ミリモル）のうち、アルギニン、アラニン、フェニルアラニン、およびグリシンを、それぞれ０．６１ｇ（３．５ミリモル）、０．２８ｇ（３．２ミリモル）、０．２４ｇ（１．４ミリモル）、および０．２２ｇ（３．０ミリモル）の量で摂取したことになる。
なお、本発明の脂質代謝促進剤は、従来公知の脂質代謝促進効果がある飲食品や医薬品の摂取と同時又は、それらの摂取の前後に併せて用いてもよい。
【００３０】
本発明の脂質代謝促進剤の実際の形態は、例えば、錠剤（タブレット）、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤、水剤、懸濁剤、ドリンク、飲食品などに添加する形態を挙げることができ、これを経口、経管、経静脈などにより摂取あるいは投与することができる。本発明の脂質代謝促進剤は、例えば、特定保健用食品などの特別用途食品、栄養機能食品、栄養補助食品やサプリメントに添加摂取することにより、または医薬品に添加して投与することにより、脂質代謝を促進することが期待される。なお、特定保健用食品などの特別用途食品、栄養機能食品、栄養補助食品やサプリメントに添加した場合、消費者にとって、一般食品と明確に区別しながら、脂質代謝の促進を期待することができる。
【００３１】
本発明の脂質代謝促進剤を用いて、本発明の脂質代謝促進剤および製剤化のための補助剤のみからなる剤を製造することもできる。製剤化のための補助剤として、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などを挙げることができる。なお、これらは飲食品あるいは医薬品の製剤技術の分野において通常で用いうるものであればよい。また、これらに適当量のビタミン、ミネラル、有機酸、糖類、ペプチド類、前記に挙げられていないアミノ酸などを配合してもよい。他の構成成分は、本発明の脂質代謝促進剤の脂質代謝促進効果を阻害しないものを優先的に使用することができる。
【００３２】
本発明の脂質代謝促進剤は、各種の食品（牛乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、栄養食品、冷凍食品、加工食品その他の市販食品など）に配合して、これを摂取してもよい。これらの食品の形態として、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状などを問わない。
【００３３】
本発明の脂質代謝促進剤を配合する食品には、水、タンパク質、糖質、脂質、ビタミン類、ミネラル類、有機酸、有機塩基、果汁、フレーバー類等を用いることができる。タンパク質として、例えば、全脂粉乳、脱脂粉乳、部分脱脂粉乳、カゼイン、ホエイ粉、ホエイタンパク質、ホエイタンパク質濃縮物、ホエイタンパク質分離物、ホエイタンパク質加水分解物、α−カゼイン、β−カゼイン、κ−カゼイン、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン、ラクトフェリン、大豆タンパク質、鶏卵タンパク質、肉タンパク質等の動植物性タンパク質、これらの分解物、バター、乳清ミネラル、クリーム、ホエイ、非タンパク態窒素、シアル酸、リン脂質、乳糖等の各種の乳由来成分等が挙げられる。カゼインホスホペプチド等のペプチドやアミノ酸を含んでいてもよい。糖質として、例えば、糖類、加工澱粉（テキストリンのほか、可溶性澱粉、ブリティッシュスターチ、酸化澱粉、澱粉エステル、澱粉エーテル等）、食物繊維等が挙げられる。脂質として、例えば、ラード、魚油等に、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の動物性油脂、パーム油、サフラワー油、コーン油、ナタネ油、ヤシ油等に、これらの分別油、水素添加油、エステル交換油等の植物性油脂等が挙げられる。ビタミン類として、例えば、ビタミンＡ、カロチン類、ビタミンＢ群、ビタミンＣ、ビタミンＤ群、ビタミンＥ、ビタミンＫ群、ビタミンＰ、ビタミンＱ、ナイアシン、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、イノシトール、コリン、葉酸等が挙げられる。ミネラル類として、例えば、カルシウム、カリウム、マグネシウム、ナトリウム、銅、鉄、マンガン、亜鉛、セレン等が挙げられる。有機酸として、例えば、リンゴ酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、エリソルビン酸等が挙げられる。これらの成分は、単独で、あるいは複数種類を組み合わせて用いることができ、合成品及び／又はこれらを多く含む食品を用いてもよい。これらの食品の形態として、液状、ペースト状、ゲル状、固形状、粉末状などを問わない。
【００３４】
本発明の脂質代謝促進剤は、普段の生活や療養中はもとより、アドレナリンの分泌が継続して亢進する状態の前や途中に摂取することで、効率的に脂質代謝を促進することができる。例えば、運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷が加えられた時、入浴の時、多食の者などにおいて、アドレナリンの分泌が継続して亢進することが知られている。従って、本発明の脂質代謝促進剤は、運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷などが加わる前、または運動負荷、寒冷暴露、ストレス負荷などが加わると共に摂取してもよい。あるいは、本発明の脂質代謝促進剤は、入浴の前や途中に摂取してもよい。多食傾向のある者が本発明の脂質代謝促進剤を摂取してもよい。
【００３５】
本発明は、脂質代謝促進剤を製造するための、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンの使用（使用方法）であって、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上である使用、でもある。
また、本発明は、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンを、アルギニン、アラニン、およびフェニルアラニンのモル数の合計が、アミノ酸全てのモル数の合計１００モルに対して６０モル以上になるように摂取させることを特徴とする、脂質代謝の促進方法（医療行為を除く）、でもある。
【００３６】
以下、本発明に関して、例を挙げて説明するが、本発明は、これにより限定されるものではない。
【００３７】
例１
脂質代謝促進効果における、各種アミノ酸と従来のアミノ酸組成物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）の比較。
（１）材料および方法
[被検試料]
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・各種アミノ酸：Ｌ−アラニン（Ａｌａ）、Ｌ−メチオニン（Ｍｅｔ）、Ｌ−フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、Ｌ−アルギニン（Ａｒｇ）、グリシン（Ｇｌｙ）を、それぞれ１ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
【００３８】
【表１】
2016102064.tif 000003
【００３９】
[動物実験]
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群の７群、各ｎ＝６）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。
尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を１０ｍｌ／ｋｇ（被検試料の用量１ｇ／ｋｇ）経口投与した。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、４ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の７５分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
【００４０】
[測定]
血中グリセロール：Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  （Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ−３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。次いで、血中グリセロール濃度の変化量について、ｔｉｍｅ０〜７５の曲線下面積（ＡＵＣ）を算出した。さらに、各アミノ酸群のＡＵＣについて、Ｖｅｈｉｃｌｅ群のＡＵＣに対する変化率（％）を算出した。
【００４１】
（２）結果
図１に血中グリセロール濃度の変化率を示す。アラニン群、メチオニン群、フェニルアラニン群、アルギニン群、グリシン群はいずれも、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群より高い値を示した。
このことから、アラニン、メチオニン、フェニルアラニン、アルギニン、グリシンは、従来のアミノ酸組成物よりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
しかし、各種アミノ酸の風味を確認した所、メチオニンは、味や臭いが経口摂取に適しないことがわかった。
【００４２】
例２
脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例１）と単独のアミノ酸の比較。
（１）材料および方法
[被検試料]
・「製造例１」：表２に示す組成のアミノ酸混合物（製造例１）を、２．７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。１０ｍｌ中に、Ｌ−アルギニン１．２ｇ、Ｌ−アラニン０．５７ｇおよびＬ−フェニルアラニン０．４７ｇが含まれる。
・アルギニン：Ｌ−アルギニンを１．２ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・アラニン：Ｌ−アラニンを０．５７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・フェニルアラニン：Ｌ−フェニルアラニンを０．４７ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
【００４３】
【表２】
2016102064.tif 000004
【００４４】
[動物実験]
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、「製造例１」群、アルギニン群、アラニン群、フェニルアラニン群の５群、各ｎ＝６）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。
尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例１」群、アルギニン群、アラニン群、フェニルアラニン群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を１０ｍｌ／ｋｇ経口投与した。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
[測定]
血中グリセロール：Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  （Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ−３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
【００４５】
[統計学的処理方法]
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、F検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
【００４６】
（２）結果
図２に血中グリセロール濃度の変化量を示す。「製造例１」群は、Ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。アドレナリン投与後１５分、３０分、４５分、６０分、および７５分（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５）において、「製造例１」群はＶｅｈｉｃｌｅ群と比較して有意に高い（ｐ＜０．０５）な血中グリセロール濃度の変化量を示した。フェニルアラニン群はアドレナリン投与後３０分（ｔｉｍｅ３０）のみ、Ｖｅｈｉｃｌｅ群よりも血中グリセロール濃度の変化量が有意に高くなった。他の群はＶｅｈｉｃｌｅ群と有意な差を認めなかった。
このことから、アラニン、フェニルアラニン、アルギニンは、３種を併用して摂取した方が、単独で摂取するよりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
【００４７】
例３
脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例３）と従来のアミノ酸組成物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）の比較。
（１）材料および方法
[被検試料]
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、３ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
・「製造例３」：表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、３ｇ／１０ｍｌの濃度で注射用水（大塚製薬）に懸濁して調製した。
【００４８】
【表３】
2016102064.tif 000005
【００４９】
[動物実験]
６週齢のＷｉｓｔａｒ系雄性ラット（ＳＬＣ社）を１週間予備飼育して試験に用いた。体重に基づいて群分けし（Ｖｅｈｉｃｌｅ群、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例３」群の３群、各ｎ＝７）、１８時間絶食した（ただし、水は自由摂取とした）。
尾静脈より採血を行い（ｔｉｍｅ−３０）、直ちに被検試料（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、「製造例３」群）又は注射用水（Ｖｅｈｉｃｌｅ群）を１０ｍｌ／ｋｇ経口投与した（表４）。３０分後、再度採血を行った（ｔｉｍｅ０）後、直ちにアドレナリン（（Ｒ）−（−）−Ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ、和光純薬工業）を腹腔内投与（０．２ｍｇ／ｋｇ、８ｍｌ／ｋｇ）した。その後、アドレナリン投与の９０分後まで、１５分おきに経時的な採血（ｔｉｍｅ１５、３０、４５、６０、７５、９０）を行った。採取した血液より血漿を得て、血中のグリセロールを測定した。
【００５０】
【表４】
2016102064.tif 000006
【００５１】
[測定]
血中グリセロール：Ｇｌｙｃｅｒｏｌ  Ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ  （Ｃａｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃａｍｐａｎｙ）を用い、付属の手順書に従って、血漿中のグリセロールを測定した。各測定時における測定値からｔｉｍｅ−３０の測定値を差し引いた値を算出し、これを血中グリセロール濃度の変化量とした。
【００５２】
[統計学的処理方法]
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、F検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
【００５３】
（２）結果
図３に血中グリセロール濃度の変化量を示す。「製造例３」群は、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群よりも、血中グリセロール濃度の変化量が高水準で推移した。アドレナリン投与後３０分（ｔｉｍｅ３０）および４５分（ｔｉｍｅ４５）において、「製造例３」群はＶｅｈｉｃｌｅ群と比較して有意に高い（ｐ＜０．０５）な血中グリセロール濃度の変化量を示した。
以上の結果から、アラニン、フェニルアラニン、およびアルギニンを高度に含有する本発明の脂質代謝促進剤は、従来のアミノ酸組成物よりも高い脂質代謝促進効果を示すことがわかった。
【００５４】
例４
高脂肪食を給餌して運動負荷をかけた動物における、本発明の脂質代謝促進剤（製造例３）の脂質代謝促進効果。
（１）材料および方法
［被検試料および餌］
・０．１％ＣＭＣ溶液：カルボキシメチルセルロース（和光純薬）を０．１ｗ／ｖ％の濃度で注射用蒸留水に溶解して調製した。
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。
・Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ：表１に示す組成のアミノ酸混合物（Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．）を１ｇ／１０ｍｌ、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０、太陽化学）をＣｏＱ１０として１０ｍｇ／１０ｍｌ、Ｌ−カルニチン（三栄源エフ・エフ・アイ）を６８ｍｇ／１０ｍｌの濃度になるように、０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。
・「製造例３」：表３に示す組成のアミノ酸混合物（製造例３）を、１ｇ／１０ｍｌの濃度で０．１％ＣＭＣ溶液に懸濁して調製した。
・ＡＩＮ−９３Ｍ（オリエンタル酵母工業）：組成を表５に示す。米国国立栄養研究所（ＡＩＮ）から１９９３年（ＡＩＮ−９３）に発表されたマウス・ラットを用いた栄養研究のための標準精製飼料である。
・ＨＦＤ−６０（オリエンタル酵母工業）：組成を表５に示す。脂肪分６０％カロリー比高脂肪飼料である。
【００５５】
【表５】
2016102064.tif 000007
【００５６】
［動物実験］
３週齢のＣ５７ＢＬ／６Ｊ系雄性マウス（クレア社）を１週間予備飼育及び１週間のトレッドミルへの馴化をした後に試験に用いた。体重に基づいて群分けし（ｄａｙ０）（Ｎｏｒｍａｌ群（ｎ＝９）、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群（ｎ＝１０）、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群（ｎ＝９）、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群（ｎ＝１０）、Ｈ＋「製造例３」群（ｎ＝１０）の５群）、以降、群分けから４２日後の試験最終日（ｄａｙ４２）までＡＩＮ−９３Ｍ（Ｎｏｒｍａｌ群）又はＨＦＤ−６０（Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群、Ｈ＋「製造例３」群）を自由摂取させた（ただし、水は自由摂取とした）。
［被験試料の投与］
被検試料（Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群、Ｈ＋Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群、Ｈ＋「製造例３」群）又は０．１％ＣＭＣ溶液（Ｎｏｒｍａｌ群、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群）を、試験最終日を除く４２日間毎日（ｄａｙ０〜ｄａｙ４１）、ゾンデを用いて強制経口投与した。被験試料又は０．１％ＣＭＣ溶液は１週間に１度調整して使用し、表６に示す用量（投与容量１０ｍＬ／ｋｇ）で投与した。
【００５７】
【表６】
2016102064.tif 000008
【００５８】
［トレッドミルによる運動負荷］
群分け〜試験最終日（ｄａｙ０〜ｄａｙ４２）の期間中、１週間に３回の頻度で、トレッドミルによる運動負荷（１５ｍ／ｍｉｎ〜２０ｍ／ｍｉｎ、４０分間）を行なった。
［体重測定］
群分け〜試験最終日（ｄａｙ０〜ｄａｙ４２）の期間中、３日に１回の頻度で、体重測定を行った。
［組織採取］
試験最終日（ｄａｙ４２）に解剖して腎周囲脂肪組織および褐色脂肪組織の重量を測定し、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を測定した。
【００５９】
[測定]
褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量：Ｍｏｕｓｅ  ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ  ｂｒｏｗｎ  ｆａｔ  ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  １  （ＵＣＰ１）  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ  （ＣＵＳＡＢＩＯ）を用い、付属の手順書に従って、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を測定した。
［統計学的処理方法］
測定値は、平均値±標準誤差で示した。データは統計ソフトＳｔａｔ  Ｖｉｅｗ  ５．０−Ｊを使用して、Ｆ検定による等分散の検定後、ＦｉｓｈｅｒのＰＬＳＤによって検定した。有意水準は５％とした。
【００６０】
（２）結果
図４に、体重測定および試験期間中の摂餌量／体重の結果を示す。Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群において、Ｎｏｒｍａｌ群と比較して投与３日目（ｄａｙ３）より有意に体重増加が見られた。「製造例３」群では、Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して投与３〜４２日目（ｄａｙ３〜ｄａｙ４２）にかけて有意な体重抑制効果が見られた。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群およびＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して体重に差異を認めなかった。試験期間中の摂餌量／体重は、ＡＩＮ−９３Ｍを給餌した群よりもＨＦＤ−６０を給餌した各群の方が低い値を示したが、ＨＦＤ−６０を給餌した各群の間に差異は認められなかった。
図５に、腎周囲の脂肪重量を示す。Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群ではＮｏｒｍａｌ群と比較して有意に重量が増加した。製造例３群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して有意に脂肪組織重量の増加を抑制した。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群およびＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して脂肪組織重量に差異を認めなかった。
図６に、褐色脂肪組織中のＵＣＰ−１発現量を示す。Ｈｉｇｈ−ｆａｔ群ではＮｏｒｍａｌ群と比較してＵＣＰ−１発現量に変化を認めなかった。製造例３群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較して有意にＵＣＰ−１発現量が増加した。一方で、Ｖ．Ａ．Ａ．Ｍ．群およびＶ．Ａ．Ａ．Ｍ．＋ＣｏＱ１０＋Ｌ−Ｃａｒｎｉｔｉｎｅ群はＨｉｇｈ−ｆａｔ群と比較してＵＣＰ−１発現量に差異を認めなかった。
以上の結果から、本発明の脂質代謝促進剤について運動負荷時の脂質代謝促進効果を確認することができた。
【００６１】
例５
脂質代謝促進効果における、本発明の脂質代謝促進剤の効果確認
（１）材料および方法
［試験食品］
内容物の有無を外観上識別不能なカプセル（日本薬局方セルロースホワイトカプセル（植物性）００号）を用い、下記２種類の試験食品を調製した。
・プラセボ：内容物を含まないカプセル。
・アクティブ：表３に記載の製造例３を３ｇ封入したカプセル。
【００６２】
［被験者］
被験者の選別をするために、２０歳以上の男性に対し、事前の血液生化学検査、血液学的検査および自転車運動を実施した（ＶＳ０）。自転車運動では、運動開始から疲労困憊するまでに要する時間および最大酸素摂取量（ＶＯ2ｍａｘ）の測定を行なった。さらに事前アンケートで生活習慣の確認を行い、これらの結果に基づいて、健康でかつ運動開始から疲労困憊するまでに要する時間とＶＯ2ｍａｘに偏りのないことを条件に、被験者の選抜を行なった。
今回の試験では、下記（１）〜（４）の判定基準を２つ以上満たしたときに、被験者が疲労困憊したと判断した。さらに、疲労困憊であると判断された直前に得られた最大の酸素摂取量をＶＯ2ｍａｘとした。
（１）酸素摂取量（ＶＯ2）の増加でプラトーの現象が出現した。
（２）呼吸交換比（ＶＣＯ2／ＶＯ2）が１．１以上に達した。
（３）心拍数（ＨＲ）が、２０歳で予想されている最高心拍数（ＨＲｍａｘ）である２００に達した。
（４）Ｂｏｒｇ  ｓｃａｌｅ日本語版（小野寺ら、全身持久性運動における主観的強度と客観的強度の対応性：Ｒａｔｉｎｇ  ｏｆ  ｐｅｒｃｅｉｖｅｄ  ｅｘｅｒｔｉｏｎの観点から、体育學研究、２１（４）、ｐ．１９１−２０３（１９７６））を用いた主観的運動強度（ＲＰＥ）が１９（非常にきつい（ｖｅｒｙ  ｖｅｒｙ  ｈａｒｄ））以上となった。
自転車運動は、自転車エルゴメータを使用し、回転数６０回転／分の条件で、運動開始０〜１分後は１００Ｗ、それ以降は１分経過毎２５Ｗずつ運動強度を上げ、疲労困憊となるまで運動を行った（多段階漸増運動負荷試験）。
こうして選抜された２０．５±０．２歳（平均値±標準誤差）、の被験者男性１２名にて、二重盲験クロスオーバー比較試験を行った。
【００６３】
[試験スケジュール]
ＶＳ０から１４日の間隔をあけて１回目の試験（ＶＳ１）を実施した。ＶＳ１では２種類の試験食品のうち一方を摂取し、自転車運動、採血、呼気ガスの採取・分析、および心拍数の測定を行なった。さらに、ＶＳ１から７日の間隔をあけて２回目の試験（ＶＳ２）を行なった。ＶＳ２ではＶＳ１とは異なる試験食品を摂取し、自転車運動、採血、呼気ガスの採取・分析、および心拍数の測定を行なった。
なお、試験開始日（ＶＳ０）以降、検査終了時（ＶＳ２）まで、日常範囲を大きく逸脱する過度な運動、摂食や過食の制限するよう指導した。さらに、本試験に影響を及ぼす可能性があるサプリメント、健康食品、医薬品（一般用医薬品を含む）の使用、及び喫煙は禁止した。さらに、試験（ＶＳ０、ＶＳ１、ＶＳ２）前日は禁酒し、食事は２２時までに終え、深夜０時までに就寝するように指導し、当日は、自転車運動を開始する２時間前までに食事を終え、それ以降は検査が終了するまで飲食を禁止した（飲水は可）。また、検査当日は同じ時刻に起床し、試験の実施はできる限り同じ時間帯で行なうように指導した。
【００６４】
[試験ＶＳ１および試験ＶＳ２の実施]
・試験食品の摂取：前記の試験食品を、水または白湯を用いて噛まずに飲み込んで摂取させた。
・自転車運動：自転車エルゴメータを使用して、試験食品摂取３０分後〜試験食品摂取９０分後（ｔｉｍｅ３０〜９０）の６０分間、回転数６０回転／分の条件で、ＶＳ０で測定したＶＯ2ｍａｘの５０％の運動強度にて継続的に実施した。
・採血：試験食品摂取前および試験食品摂取の１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０分後（ｔｉｍｅ０、１５、３０、４５、６０、７５、９０、１２０、１５０）に実施した。
・呼気ガスの採取・分析：ブレス・バイ・ブレス法を用い、試験食品摂取直後〜試験食品摂取１５０分後（ｔｉｍｅ０〜ｔｉｍｅ１５０）までの１５０分間、継続的に実施した。
・心拍数の測定：試験食品摂取直後〜試験食品摂取１５０分後（ｔｉｍｅ０〜ｔｉｍｅ１５０）の１５０分間、継続的に実施した。
【００６５】
[測定]
・呼吸交換比：採取した呼気を呼吸毎にガス分析装置で測定し、呼気中のＯ2およびＣＯ2の濃度、呼気の流量を測定した。この測定値に基づいて、酸素摂取量（ＶＯ2）（ｍｌ／体重ｋｇ／ｍｉｎ））、二酸化炭素産生量（ＶＣＯ2（ｍｌ／体重ｋｇ／ｍｉｎ））および呼吸交換比（ＶＣＯ2／ＶＯ2）を算出した。さらに、各時点の呼吸交換比からｔｉｍｅ０の呼吸交換比の各群平均値を差し引いて、呼吸交換比の変化量（ΔＶＣＯ2／ＶＯ2）を求めた。
・血中グリセロール：酵素法を用い、付属の手順書に従って、血清中のグリセロールを測定した。
・血中遊離脂肪酸：酵素−ＵＶ法を用いて、血清中の遊離脂肪酸濃度を測定した。
・血中コルチゾール：ＣＬＥＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血漿中のコルチゾール濃度を測定した。
・血中グルカゴン：ＲＩＡ２抗体（Ｄｏｕｂｌｅ‐ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血漿中のグルカゴン濃度を測定した。
・血中インスリン：ＣＬＩＡ（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）法を用いて、血清中のインスリン濃度を測定した。
・血糖：酵素法を用いて、血糖値を測定した。
・血中総ケトン体：酵素法を用いて、血清中の総ケトン濃度（３−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅおよびアセト酢酸の合計）を測定した。
・血中３−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ：酵素法を用いて、血清中の３−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ濃度を測定した。
・血中アセト酢酸：酵素法を用いて、血清中のアセト酢酸濃度を測定した。
・血中成長ホルモン：ＣＬＥＩＡ法を用いて、血清中の成長ホルモン濃度を測定した。
・血中アドレナリン：ＨＰＬＣ（Ｈｉｇｈ  Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）法を用いて、血漿中のアドレナリン濃度を測定した。
・血中ノルアドレナリン：ＨＰＬＣ法を用いて、血漿中のノルアドレナリン濃度を測定した。
［統計学的処理方法］
試験で得た各測定値、算出値または換算値は１標本ｔ検定で評価した。
【００６６】
（２）結果
図７に、経時的な呼吸交換比の変化量（ΔＶＣＯ2／ＶＯ2）の結果を示す。ΔＶＣＯ2／ＶＯ2は、運動開始から運動終了後までアクティブ群の方が低い値で推移し、運動時ではｔｉｍｅ８５、９０（分）でプラセボ群に比べて有意な低下が認められた。運動終了時ではｔｉｍｅ９５、１００（分）に両群とも一旦上昇するが、その後ｔｉｍｅ１３５（分）まで急激に低下した。特にｔｉｍｅ１２５〜１３５（分）の間では、有意な差は見られなかったものの、アクティブ群の方が低い平均値を示した。
図８に、経時的な血中グリセロールの濃度および遊離脂肪酸の濃度を測定した結果を示す。血中グリセロールの濃度は、運動時のｔｉｍｅ４５および９０（分）において、有意な差は見られなかったものの、アクティブ群の方が高い平均値を示した。
血中遊離脂肪酸は、運動開始時（ｔｉｍｅ３０（分））から試験終了時（ｔｉｍｅ１５０（分））までアクティブ群の方が高い平均値を示し、運動時のｔｉｍｅ９０（分）において最も高い平均値を示した。
【００６７】
図９に、経時的な血中のコルチゾール、グルカゴン、インスリンの濃度、および血糖を測定した結果を示す。
コルチゾールは、運動前のｔｉｍｅ０〜１５（分）まで上昇したが、その後減少した。ｔｉｍｅ１５〜７５（分）において、アクティブ群の値の方が低く、ｔｉｍｅ４５（分）で有意な差が認められた。
グルカゴンは、ｔｉｍｅ３０（分）の運動開始後から値が上昇し、運動時のｔｉｍｅ７５（分）ではアクティブ群は有意に高い値を示した。また、運動後のｔｉｍｅ１２０（分）においても、アクティブ群は有意に高い値を示した。
インスリンおよび血糖は、アクティブ群とプラセボ群の間に差を認めなかった。
図１０に、経時的な血中の総ケトン体、３−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ、およびアセト酢酸の濃度を測定した結果を示す。総ケトン体および３−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅは、運動時のｔｉｍｅ４５（分）（運動開始から１５分後）までアクティブ群、プラセボ群共に一旦低下するが、その後上昇を始め、ｔｉｍｅ４５〜１５０（分）まではアクティブ群の方が上昇量は大きく、ｔｉｍｅ１２０（分）で平均値が最大となった。ｔｉｍｅ６０（分）の測定値に有意な差が認められた。経時的推移に注目すると、運動負荷の後（ｔｉｍｅ１２０およびｔｉｍｅ１５０）に、アクティブ群のケトン体の生成が大きく高まっている傾向がみられた。
アセト酢酸は、両群に有意な差を認めなかったものの、総ケトン体と同様の推移を示した。
図１１に、血中の成長ホルモン、アドレナリンおよびノルアドレナリンの濃度を測定した結果を示す。成長ホルモンは、試験開始時（ｔｉｍｅ０）から、アクティブ群とプラセボ群共に上昇し、ほぼ同様の推移を示した。アクティブ群とプラセボ群の間に有意な差は認められなかった。アドレナリンおよびノルアドレナリンは、運動開始（ｔｉｍｅ３０）と共に値は上昇し、運動終了（ｔｉｍｅ９０）と共に値は低下した。いずれもアクティブ群とプラセボ群の間に有意な差は認められなかった。
以上の結果から、本発明の脂質代謝促進剤について運動負荷時の脂質代謝促進効果をヒトで確認することができた。さらに、本発明の脂質代謝促進剤は、インスリン、成長ホルモン、アドレナリンおよびノルアドレナリンの分泌に影響を与えずに、脂質代謝促進効果を奏することもわかった。
【００６８】
例６
本発明の脂質代謝促進剤を配合した飲料。
表３に示す製造例３を１．５ｗ／ｖ％、甘味料１．０ｗ／ｖ％、酸味料０．９ｗ／ｖ％、および増粘剤０．２ｗ／ｖ％の濃度で配合し、常法に従って飲料を製造した。飲料２００ｍｌを摂取すると、製造例３を３ｇ摂取することができる。
例７
本発明の脂質代謝促進剤を配合したタブレット。
表３に示す製造例３を５０ｗ／ｗ％、賦形剤、結合剤、崩壊剤、および滑沢剤を合わせて５０ｗ／ｗ％配合し、常法に従ってタブレットを製造した。
例８
本発明の脂質代謝促進剤を配合したサプリメント。
Ｌ−アルギニン１ｇ（５．７ミリモル）、Ｌ−アラニン１ｇ（１１ミリモル）、Ｌ−フェニルアラニン１ｇ（６．１ミリモル）の割合で混合し、これに賦形剤を添加して、カプセルに充填した。
【産業上の利用可能性】
【００６９】
本発明により効果的に脂肪を消費し、また同じ運動量においても体脂肪減少に効果が期待できる脂質代謝促進剤の開発が可能となる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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