(57)【要約】【課題】前立腺癌又はその癌化リスクの検出及び予後の治療方法を決定する際の補助となるリスク評価方法の提供を目的とする。【解決手段】バイオマーカーを用いた前立腺癌の検出又は前立腺癌の癌化リスクの検出方法であって、前記バイオマーカーとして体液中のＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルを組み合せた指標を用いる。【選択図】  図１
2016205905.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
バイオマーカーを用いた前立腺癌の検出又は前立腺癌の癌化リスクの検出方法であって、
前記バイオマーカーとして体液中のＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルを組み合せた指標を用いる、前記検出方法。
【請求項２】
前記ＰＳＡレベルは血液又は血清中濃度４０ｎｇ／ｍｌ以上か否か、であること、前記ＣＣＬ２レベルは血液又は血清中濃度３２０ｐｇ／ｍｌ以上か否か、であることの組み合せである、請求項１記載の検出方法。
【請求項３】
バイオマーカーを用いた前立腺癌を有する対象の予後のリスクを評価する方法であって、
前記バイオマーカーとして体液中のＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルとを組み合せた、前記方法。
【請求項４】
前記バイオマーカーとしてＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルとを用い、次の３つのリスク区分に区分けし、前記予後のリスクを評価する、請求項３記載の方法。
（１）第１リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌ以下で且つ、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌ以下である。
（２）第２リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌを越えるか又は、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌを越えるのどちらか一方を満たす。
（３）第３リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌを越え且つ、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌを越える。
【請求項５】
体液中のＰＳＡレベルを測定するキットと体液中のＣＣＬ２レベルを測定するキットとからなる前立腺癌の検出キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は前立腺癌及びその癌化リスクを検出する、又は、前立腺癌を有する対象の予後のリスクを評価することで治療方針の補助となる、バイオマーカーに関する。
【背景技術】
【０００２】
前立腺癌（ＰＣａ：prostate cancer）は前立腺の細胞が異常増殖して発生する癌であり、男性ホルモン（アンドロゲン）が大きく関与している。
アンドロゲン（androgen）は男性ホルモンの総称であり、精巣ではテストステロン（testosterone）が作られ、副腎では副腎性アンドロゲンが作られている。
進行前立腺癌の治療には、外科的精巣摘除術又はホルモン療法によるアンドロゲン除去療法が行われている。
ホルモン療法が効かなくなると、去勢抵抗性前立腺癌（ＣＲＰＣ：castration-resistant prostate cancer）となり、抗癌剤による化学療法が必要となる。
よって、前立腺癌患者に対しては、予後の治療方針を評価及び決定するのに有用なリスク管理方法が期待されていた。
また、これまで前立腺癌のバイオマーカーとして、前立腺特異抗原（ＰＳＡ：prostate specific antigen）が用いられている。
ＰＳＡは、前立腺から分泌され精液中に含まれる生体物質であるが、前立腺癌を有すると血清中の含有量が上昇し、早期前立腺癌においても陽性率が高く、数値の変動が病勢と一致するため、臨床的に広く使用されている。
しかし、ＰＳＡのレベルは前立腺炎や前立腺肥大症等でも上昇する場合があり、信頼性を補助するバイオマーカーが期待されている。
特許文献１には、抗アンドロゲン処置及び一般的な抗癌処置の効力を評価するのに抗体ポリペプチドを用いた腫瘍結合フリーＰＳＡを測定する方法を開示する。
しかし、同公報に開示する技術はフリーＰＳＡによるものであるが、ＰＳＡレベルを指標としている点でＰＳＡ以外のレベルをバイオマーカーとしたものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特表２０１５−５０２３３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、前立腺癌又はその癌化リスクの検出及び予後の治療方法を決定する際の補助となるリスク評価方法の提供を目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、バイオマーカーを用いた前立腺癌の検出又は前立腺癌の癌化リスクの検出方法であって、前記バイオマーカーとして体液中のＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルを組み合せた指標を用いる。
詳細は後述するが、本発明者らは２００７年〜２０１３年に金沢大学泌尿器科で前立腺生検を施行し、前立腺癌と診断された患者２５５人と癌のなかった１２４人を対象として、血清中のＰＳＡ，ＴＴ，Ｐ１ＮＰ，ＴＲＡＣＰ−５ｂ，ＴＧＦ−β１，ＣＣＬ２の値と各種生存期間等を解析した結果、ＣＣＬ２が癌患者で有意に高いことが明らかとなった。
また、前立腺癌細胞を用いて評価した結果、ａｎｄｒｏｇｅｎ／ＡＲシグナルを抑制していない状態でもＣＣＬ２は、ＰＣａの細胞の浸潤・転移能を亢進させていることが明らかになった。
このことから、バイオマーカーＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルとの組み合せによる指標に着目し、本発明に至った。
ここで、ＣＣＬ２（C-C motif chemokine 2）は、ＭＣＰ１（Monocyte chemoattractant Protein 1）とも称される。
例えば、ＰＳＡレベルは血液又は血清中濃度４０ｎｇ／ｍｌ以上か否か、であること、前記ＣＣＬ２レベルは血液又は血清中濃度３２０ｐｇ／ｍｌ以上か否か、であることの組み合せである。
【０００６】
また、本発明は、ＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルとの組み合せにて前立腺癌の対象をリスク分類に区分することで、ホルモン療法，抗癌剤による化学療法等、その後の治療法を評価，決定するのに有効であることが明らかになった。
そこで、本発明は、バイオマーカーを用いた前立腺癌を有する対象の予後のリスクを評価する方法であって、前記バイオマーカーとして体液中のＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルとを組み合せた。
本発明は、目的に応じてリスク区分の分類の方法を適用できるが、例えば前記バイオマーカーとしてＰＳＡレベルとＣＣＬ２レベルとを用い、次の３つのリスク区分に区分けし、前記予後のリスクを評価できる。
（１）第１リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌ以下で且つ、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌ以下である。
（２）第２リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌを越えるか又は、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌを越えるのどちらか一方を満たす。
（３）第３リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌを越え且つ、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌを越える。
【０００７】
従来から前立腺癌の診断にＰＳＡ検査キットが使用されているが、本発明はこれにＣＣＬ２レベルを測定するキットをセットした前立腺癌検出及びリスク評価用の検出キットとすることができる。
今回のＰＳＡ及びＣＣＬ２の濃度測定には下記のキットを用いた。
＜ＰＳＡ＞
ベックマン・コールター株式会社製の「前立腺特異抗原キット  アクセスハイブリテックＰＳＡ」（承認番号２０５００ＡＭＹ００１１８０００）を用い、その添付文書にしたがって測定した。
＜ＣＣＬ２＞
Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．製の「Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ（登録商標），Ｈｕｍａｎ  ＣＣＬ２／ＭＣＰ−１  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ」を用い、その説明書にしたがって測定した。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、ＰＳＡバイオマーカーとＣＣＬ２バイオマーカーとの組み合せにより、従来のＰＳＡバイオマーカーの信頼性を補助する新たなバイオマーカーとなる。
また、これにより予後の治療方法を評価，決定するのに有用な新たなリスク分類方法が提供できる。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】ＰＳＡとＣＣＬ２との関係を示す散布図である。（ａ）は前立腺癌と診断された対象の散布図、（ｂ）は癌でないと診断された対象の散布図、（ｃ）はそれらを重ね合せた状態を示す。
【図２】前立腺癌と判断された対象と癌と診断されなかった対象との各値の検定表を示す。
【図３】各リスク区分毎の生存率を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
通常のＰＳＡ検査キットにより、ＰＳＡの値が高い対象者に対して、施行した前立腺生検において前立腺癌と診断された対象２５５人と、癌とは診断されなかった１２４人を対象として、血清中の各種値を測定した結果及びその有意差を検定した結果を図２の表に示す。
表中、ＰＣａは前立腺癌と診断された対象者の各種値を示し、No malignancyは生検で前立腺癌でないと診断された対象者の値を示す。
ｔ検定したｐの値を見るとＰＳＡの値は有意でなく、高度に有意と判断されたのはＣＣＬ２の値のみであった。
そこで、ＰＳＡ値とＣＣＬ２値との値を散布図にしたのが、図１に示した散布図である。
図１を分かりやすくするために、（ａ）は前立腺癌と診断された２５５人の値のみをプロットし、（ｂ）は癌と診断されなかった１２４人の値のみをプロットしたものである。
（ｃ）は（ａ）のプロットと（ｂ）のプロットとを合せてプロットした散布図である。
この散布図から（ｂ）に示すように、前立腺癌でないと診断された対象のプロットは、多くがＰＳＡ値４０ｎｇ／ｍｌ未満、ＣＣＬ２値３２０ｐｇ／ｍｌ未満の範囲に収まっている。
したがって逆の表現をすると、ＰＳＡの値は４０ｎｇ／ｍｌ以上、バラツキを考慮すると１００ｎｇ／ｍｌ以上、あるいはＣＣＬ２値３２０ｐｇ／ｍｌ以上、又は４００ｐｇ／ｍｌ以上であれば前立腺癌を有するか、あるいは癌化するリスクが非常に高いと言える。
【００１１】
次に前立腺癌と診断された対象２５５人を次のリスク区分に分類し、生存率を調査した。
＜リスク区分＞
（１）第１リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌ以下で且つ、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌ以下である。
（２）第２リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌを越えるか又は、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌを越えるのどちらか一方を満たす。
（３）第３リスク：血液又は血清中のＰＳＡ濃度１００ｎｇ／ｍｌを越え且つ、血液又は血清中のＣＣＬ２濃度３２０ｐｇ／ｍｌを越える。
その結果を図３のグラフに示す。
グラフ中「Ｍｏｓ」は月数を示す。
「ＯＳ」は全生存期間（overall survival）、「ＰＣａＳＳ」は癌特異的生存期間（prostate cancer-specific survival）、「ＣＦＳ」はＣＲＰＣまでの期間（CRPC-free survival）を示す。
ここでＣＦＳは、ホルモン療法が効かなくなるまでの期間と言われるものである。
また、グラフでは前記第１リスク区分（１）を「ｇｏｏｄ」と表示し、第２リスク区分（２）を「ｉｎｔｅｒ（intermediate）」と表示し、第３リスク区分（３）を「ｐｏｏｒ」と表示してある。
このグラフから、「ｇｏｏｄ」の区分に分類された対象は生存率が高く、「ｐｏｏｒ」の区分に分類された対象は生存率が低く、特にＣＦＳまでの期間が短いことから早い段階でホルモン療法と化学療法を組み合せる等の評価，判断がしやすくなる。
このような分類法は、前立腺癌の治療方法を判断するのに有用なリスク分類方法と言える。
【図１】
2016205905.tif 000003
【図２】
2016205905.tif 000004
【図３】
2016205905.tif 000005