(57)【要約】      （修正有）【課題】グリコーゲンシンターゼ活性化能を有する安全性が高い新規化合物を提供する。【解決手段】下記一般式で表される化合物又はその医薬上許容される塩。2016130214.tif 000024（式中、Ａｒ1は、以下のいずれかで表され、Ｒ1は、置換を有するアミノ基を表す。)2016130214.tif 000025【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式(I)で表される化合物又はその医薬上許容される塩。
一般式(I):
【化１】
2016130214.tif 000020
（式中、Ａｒ1は、以下の（II）又は（III）のいずれかの環で表され、
【化２】
2016130214.tif 000021
(II)                   (III)
これらの環は１又は複数の置換基を有していてもよく、該置換基は、アセトアミド基、アミノカルボニル基、ハロゲン原子、アルキル基、ヒドロキシルアルキル基、アルコキシアルキル基、シアノ基、シアノアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、モノアルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、アルコキシ基及びハロゲノアルコキシ基よりなる群から選択され； 
Ｒ2は、アルキル基を表し、Ｒ3は水素原子またはアルキル基を表し、
Ｒ1は、以下の（IV）〜（VI）のいずれかの置換基で表され、
【化３】
2016130214.tif 000022
(IV)                         (V)                          (VI)
（式中、Ｌ1は、結合又はアルキレン基；
Ｒ4は、シアノアルキル基、アミノカルボニルアルキル基、ジアルキルアミノカルボニルアルキル基、モノアルキルアミノカルボニルアルキル基、アルキルスルホニルアルキル基、アミノアルキル基、モノアルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルスルホニルアミノアルキル基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシアルキル基もしくは以下の（VII）〜（IX）のいずれかの置換基で表わされ、
【化４】
2016130214.tif 000023
(VII)         (VIII)            (IX)
Ｒ5及びＲ6は同じでも異なっていてもよく、水素原子又はアルキル基で表され、場合によっては、Ｒ5とＲ6が一緒になって環を形成してもよく、
Ｒ7は、水素原子又はアルキル基を表す。））
【請求項２】
一般式（I）中、Ａｒ1が２又は３の置換基を有し、それらがハロゲン原子である請求項１記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項３】
一般式（I）の環（II）又は環（III）中、Ｒ2がメチル基で、Ｒ3が水素原子又はメチル基を表す請求項１又は２記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項４】
一般式（I）の式（V）中、Ｌ1が結合又は炭素数１〜５のアルキレン基を表す請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項５】
一般式（I）の置換基（IV）〜（IX）中、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7が水素原子を表す請求項１〜４記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する糖尿病治療用医薬組成物。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有するグリコーゲンシンターゼ活性化剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、グリコーゲンシンターゼ活性化作用を有する新規化合物及び該化合物を含有する糖尿病治療用医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、現代人にとって重要な病気であり、糖尿病の発生率は近年上昇傾向にある。糖尿病の発生のメカニズムにより多くの糖尿病治療薬が開発され、実際に使用されている。例えば、インスリン感受性増強剤、α−グリコシダーゼ阻害剤、インスリン分泌促進剤、インスリン製剤などが１種又は２種以上組み合わせて使用されている。
このような状況下において、前記従来の糖尿病治療薬とは異なる新しいメカニズムであるグリコーゲンシンターゼを活性化させることによって、糖尿病を治療しようとする技術が開発されている。具体的には、グリコーゲンシンターゼを活性化できる化合物として、ビアリールオキシメチルアレーンカルボン酸が提案されている（特許文献１〜９）。
一方、新規な医薬的活性化合物については、病気治療についての所期の効果に加えて、副作用がないことなどの安全性が求められており、薬物の安全性評価として、ペルオキシソーム増殖薬−活性化受容体PPAR（peroxisome proliferator-activated receptor)について検討することが提案されている（非特許文献１）。これは、ラットなどの動物実験において、ある種の薬物投与によって肝肥大、肝内酵素の顕著な誘導、その薬物の長期投与によって肝癌が発生し、その変化の特徴は肝細胞内小器官ペルオキシソームの顕著な増殖である。薬物−肝ペルオキシソーム増殖−発肝癌の機構には、ペルオキシソーム増殖薬（PP）により活性化される受容体PPAR、とくにそのサブファミリーであるPPARαが関与していることが明らかになっており、この現象は医薬品開発段階において、薬物の安全性評価（特に発癌性評価）において注目されているものである。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】ＷＯ２００５/０００７８１
【特許文献２】ＷＯ２００６/０５８６４８
【特許文献３】ＷＯ２０１１/０５７９５６
【特許文献４】ＷＯ２０１１/０５７９５９
【特許文献５】ＷＯ２０１１/０５７９９３
【特許文献６】ＷＯ２０１１/０５８１２２
【特許文献７】ＷＯ２０１１/０５８１５４
【特許文献８】ＷＯ２０１１/０６７１７４
【特許文献９】ＷＯ２０１１/０６７２６６
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】医学のあゆみ Vol. 220, No.1 (2007) pp.75-80
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、グリコーゲンシンターゼ活性化能を有するが、受容体PPARが活性化されることが少なくて安全性が高い新規化合物を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記化合物を含有する医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記化合物を含有する糖尿病治療用医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、上記化合物を含有するグリコーゲンシンターゼ活性化剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、特許文献１〜９に記載のビアリールオキシメチルアレーンカルボン酸化合物について鋭意検討したところ、一方の末端に位置するビアリール環の末端アリール基として特定のアリール基を有し、かつ別の末端に位置するアミノ基として特定のアミノ基を有する化合物が極めて高いグリコーゲンシンターゼ活性化能を有することを見出し、これらの化合物を用いると上記課題を効率的に解決できるとの知見に基づいてなされたものである。
すなわち、本発明は、下記[1]〜[8]を提供する。
[1]  下記一般式(I)で表される化合物又はその医薬上許容される塩。
一般式(I):
2016130214.tif 000002
（式中、Ａｒ1は、以下の（II）又は（III）のいずれかの環で表され、
2016130214.tif 000003
(II)                 (III)
これらの環は１又は複数の置換基を有していてもよく、該置換基は、アセトアミド基、アミノカルボニル基、ハロゲン原子、アルキル基、ヒドロキシルアルキル基、アルコキシアルキル基、シアノ基、シアノアルキル基、アミノ基、アミノアルキル基、モノアルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、アルコキシ基及びハロゲノアルコキシ基よりなる群から選択され； 
Ｒ2は、アルキル基を表し、Ｒ3は水素原子またはアルキル基を表し、
Ｒ1は、以下の（IV）〜（VI）のいずれかの置換基で表され、
【０００７】
2016130214.tif 000004
(IV)                         (V)                        (VI)
（式中、Ｌ1は、結合又はアルキレン基；
Ｒ4は、シアノアルキル基、アミノカルボニルアルキル基、ジアルキルアミノカルボニルアルキル基、モノアルキルアミノカルボニルアルキル基、アルキルスルホニルアルキル基、アミノアルキル基、モノアルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルスルホニルアミノアルキル基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシアルキル基もしくは以下の（VII）〜（IX）のいずれかの置換基で表わされ、
2016130214.tif 000005
(VII)         (VIII)            (IX)
Ｒ5及びＲ6は同じでも異なっていてもよく、水素原子又はアルキル基で表され、場合によっては、Ｒ5とＲ6が一緒になって環を形成してもよく、
Ｒ7は、水素原子又はアルキル基を表す。））
【０００８】
[2]  一般式（I）中、Ａｒ1が２又は３の置換基を有し、それらがハロゲン原子である[1]記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
[3]  一般式（I）の環（II）又は環（III）中、Ｒ2がメチル基で、Ｒ3が水素原子又はメチル基を表す[1]又は[2]記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
[4]  一般式（I）の置換基（V）中、Ｌ1が結合又は炭素数１〜５のアルキレン基を表す[1]〜[3]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
[5]  一般式（I）の置換基（IV）〜（VI）中、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7が水素原子を表す[1]〜[4]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩。
[6]  [1]〜[5]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する医薬組成物。
[7]  [1]〜[5]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有する糖尿病治療用医薬組成物。
[8]  [1]〜[5]のいずれかに記載の化合物又はその医薬上許容される塩を含有するグリコーゲンシンターゼ活性化剤。
【発明を実施するための形態】
【０００９】
以下、式（Ｉ）の化合物の定義について説明する。
本明細書中、「アルキル基」とは、炭素数１〜１２、好ましくは炭素数１〜６の直鎖状および分枝鎖状の脂肪族炭化水素から任意の水素原子を１個除いて誘導される１価の基である。具体的にはメチル、エチル、イソプロピル、ブチル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、２，３−ジメチルプロピル、ヘキシルなどの基が挙げられる。より好ましくはＣ1-4アルキルである。
「アルキレン基」とは、炭素数１〜６の直鎖状および分岐鎖状の脂肪族炭化水素から任意の水素原子を２個除いて誘導される２価の基である。メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンなどの基が挙げられる。好ましくは、炭素数１〜３のアルキレン基であり、さらに好ましくは、メチレン基およびエチレン基である。
【００１０】
「ハロゲン原子」とは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素原子などを意味する。
「アルコキシ基」とは炭素数１〜６のアルキル−Ｏ−を意味する。具体的には、メトキシ、エトキシ、１−プロポキシ、２−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｉ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、１−ペンチルオキシ、２−ペンチルオキシ、３−ペンチルオキシ、２−メチル−１−ブチルオキシ、３−メチル−１−ブチルオキシ、２−メチル−２−ブチルオキシ、３−メチル−２−ブチルオキシ、２，２−ジメチル−１−プロピルオキシ、１−へキシルオキシ、２−へキシルオキシ、３−へキシルオキシなどの基があげられる。好ましくは炭素数１〜３のアルコキシである。
「モノアルキルアミノ基」とは、窒素原子上の１個の水素原子が、前記アルキルにより置換されたアミノ基であり、アルキル−ＮＨ−を意味する。具体的には、メチルアミノ、エチルアミノ等の基があげられる。好ましくは、炭素数１〜３のモノアルキルアミノである。
「モノアルキルアミノアルキル基」とは、前記モノアルキルアミノ基により置換されたアルキル基であり、アルキル−ＮH−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りである。好ましくは、それぞれのアルキル基の炭素数が１〜３のモノアルキルアミノアルキル基である。
【００１１】
「ジアルキルアミノ基」とは、窒素原子上の２個の水素原子が、前記アルキルによりそれぞれ置換されたアミノ基であり、（アルキル）2Ｎ−を意味する。アルキル基は同一または異なっていてもよい。具体的には、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等の基があげられる。好ましくは、それぞれのアルキル基の炭素数が１〜４のジアルキルアミノである。また、アルキル同士が同じ炭素原子を共有し炭素数３〜６の環を形成してもよく、具体的には、ピロリジニル、ピペリジニルなどの基が挙げられる。
「ジアルキルアミノアルキル基」とは、前記ジアルキルアミノ基により置換されたアルキル基であり、（アルキル）2Ｎ−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りである。好ましくは、それぞれのアルキル基の炭素数が１〜４のジアルキルアミノアルキル基である。
【００１２】
「アルキルスルホニル基」とは、前記アルキルにより置換されたスルホニル基であり、アルキル−ＳＯ2−を意味する。アルキルは、前記の通りである。好ましくは、炭素数１〜３のアルキルスルホニルである。
「アルキルスルホニルアミノ基」とは、前記アルキルにより置換されたスルホニルアミノ基であり、アルキル−ＳＯ2−ＮＨ−を意味する。アルキルは、前記の通りである。好ましくは、炭素数１〜３のアルキルスルホニルアミノである。
「アルキルスルホニルアミノアルキル基」とは、前記アルキルスルホニルアミノ基により置換されたアルキル基であり、アルキル−ＳＯ2−ＮＨ−アルキルを意味する。アルキルは、前記の通りである。好ましくは、それぞれのアルキル基の炭素数が１〜３のアルキルスルホニルアミノアルキル基である。
「モノアルキルアミノカルボニル基」とは、窒素原子上の１個の水素原子が、前記アルキルにより置換されたアミノ基が付いたカルボニル基であり、アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−を意味する。アルキル基は同一または異なっていてもよい。具体的には、メチルアミノカルボニル、エチルアミノカルボニル等の基があげられる。好ましくは、アルキル基の炭素数が１〜３のモノアルキルアミノカルボニル基である。
「モノアルキルアミノカルボニルアルキル基」とは、前記モノアルキルアミノカルボニル基により置換されたアルキル基であり、アルキル−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りである。具体的には、メチルアミノカルボニルアルキル、エチルアミノカルボニルアルキル等の基が挙げられる。好ましくは、それぞれのアルキル基の炭素数が１〜３のモノアルキルアミノカルボニルアルキル基である。
【００１３】
「ジアルキルアミノカルボニル基」とは、窒素原子上の２個の水素原子が、前記アルキルによりそれぞれ置換されたアミノ基が付いたカルボニル基であり、（アルキル）2Ｎ−Ｃ（Ｏ）−を意味する。アルキル基は同一または異なっていてもよい。具体的には、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等の基が付いたカルボニル基があげられる。また、アルキル同士が同じ炭素原子を共有し炭素数３〜６の環を形成してもよく、具体的には、ピロリジニルカルボニル、ピペリジニルカルボニルなどの基が挙げられる。
「ジアルキルアミノカルボニルアルキル基」とは、前記ジアルキルアミノカルボニル基により置換されたアルキル基であり、（アルキル）2Ｎ−Ｃ（Ｏ）−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りである。アルキル基は同一または異なっていてもよい。具体的には、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ等の基が付いたカルボニル基があげられる。また、アルキル同士が同じ炭素原子を共有し炭素数３〜６の環を形成してもよく、具体的には、ピロリジニルカルボニルアルキル基、ピペリジニルカルボニルアルキル基などの基が挙げられる。
「アミノカルボニルアルキル基」とは、アミノカルボニル基により置換されたアルキル基であり、ＮＨ2−Ｃ（Ｏ）−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りである。好ましくは、アルキル基の炭素数が１〜３のアミノカルボニルアルキル基である。
「アルコキシアルキル基」とは、アルコシキ基で置換されたアルキル基であり、アルキル−Ｏ−アルキル−を意味する。アルコシキ基及びアルキル基は、前記の通りである。好ましくは、アルコシキ基及びアルキル基のそれぞれの炭素数が１〜４のアルコシキアルキル基である。
【００１４】
「ヒドロキシアルキル基」とは、ヒドロキシ基で置換されたアルキル基であり、ＨＯ−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りであり、好ましくは、炭素数１〜５のヒドロキシアルキル基である。
「カルボシキアルキル基」とは、カルボキシル基で置換されたアルキル基であり、ＨＯ（Ｏ）Ｃ−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りであり、好ましくは、炭素数２〜５のヒドロキシアルキル基である。
「シアノアルキル基」とは、シアノ基ので置換されたアルキル基であり、ＮＣ−アルキル−を意味する。アルキル基は、前記の通りであり、好ましくは、炭素数２〜５のシアノアルキル基である。
【００１５】
又、Ａｒ1を表す一般式(II)の基は１〜４つの、Ａｒ1を表す一般式(III)の基は１〜４つの同じ若しくは異なる置換基を有することができる。これらのうち、ハロゲン原子、ヒドロキシルアルキル基、アルキル基、シアノ基、アミノ基であるのが好ましく、これらを１〜３有するのがより好ましく、特に好ましくは２又は３有するものである。特に、フッ素又は塩素などのハロゲン原子やメチル基が好ましい。
式(V)におけるＬ1とピロリジン環との結合は、どのような立体配置をとってもよい。又、式(VI)で表される置換基は、下記の立体配置を有するのが好ましい。
2016130214.tif 000006
(VI-1)
【００１６】
一般式(IV)中、Ｒ4は、シアノアルキル基、アミノカルボニルアルキル基又はジアルキルアミノカルボニルアルキル基、モノアルキルアミノカルボニルアルキル基、アルキルスルホニルアルキル基、アミノアルキル基、モノアルキルアミノアルキル基、ジアルキルアミノアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルスルホニルアミノアルキル基、ヒドロキシアルキル基、カルボキシアルキル基であるのが好ましい。又、以下の式で表わされる基であるのが好ましい。
2016130214.tif 000007
(VII)         (VIII)            (IX)
一般式(I)中、Ｒ5及びＲ6の１つ又は２つが水素原子であるのが好ましい。また、Ｒ5及びＲ6が一緒になって環を形成する場合は、窒素原子を少なくとも１個含み、酸素原子及び硫黄原子を含んでもよい４員環から７員環の環状アミンが好ましく、特にピロリジン環又はピペリジン環が好ましい。Ｒ7は水素原子が好ましい。
【００１７】
一般式(I)で表される本発明の化合物及びその医薬上許容される塩は、下記の合成スキームに従って合成することができる。
2016130214.tif 000008
【００１８】
X1がボロン酸誘導体であるフェノール誘導体（１）を、例えば、ＤＭＦなどの溶媒中、炭酸カリウムなどの塩基存在下で、X2がハロゲン原子である安息香酸エステル誘導体（２）を作用することにより、エステル誘導体を得ることができ、これに、例えば、メタノールなどの溶媒中、水酸化リチウムなどの塩基存在下、加水分解を行うことにより、カルボン酸（３）へと導いた。カルボン酸（３）を例えば、ジオキサン、水などの溶媒中、X３がハロゲン原子である種々の誘導体（４）と、触媒としてPdなどを用い、炭酸ナトリウムなどの塩基存在下、カップリング反応を行うことにより、化合物（５）を得ることができる。その後、例えばチオニルクロライドなどを用いて酸クロライドへと変換後、例えば、ジクロロメタンなどの溶媒中、水酸化ナトリウムなどの塩基存在下、種々のアミノ酸を作用させることにより、アミド体（６）を得ることができる。
【００１９】
本発明において、一般式(I)で表される化合物が塩の形態を成し得る場合、その塩は医薬的に許容しうるものであればよく、例えば、式中にカルボキシル基等の酸性基が存在する場合の酸性基に対しては、アンモニウム塩、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属との塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属との塩、アルミニウム塩、亜鉛塩、トリエチルアミン、エタノールアミン、モルホリン、ピペリジン、ジシクロへキシルアミン等の有機アミンとの塩、アルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸との塩が挙げられるが、中でもナトリウムを用いるのが好ましい。
式中に塩基性基が存在する場合の塩基性基に対しては、塩酸、硫酸、リン酸、硝酸、臭化水素酸などの無機酸との塩、酢酸、トリフルオロ酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、コハク酸、タンニン酸、酪酸、ヒベンズ酸、パモ酸、エナント酸、デカン酸、テオクル酸、サリチル酸、乳酸、シュウ酸、マンデル酸、リンゴ酸等の有機カルボン酸との塩、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸等の有機スルホン酸との塩が挙げられるが、中でも塩酸、トリフルオロ酢酸を用いるのが好ましい。
塩を形成する方法としては、一般式(I)で表される化合物と必要な酸または塩基とを適当な量比で溶媒、分散剤中で混合することや、他の塩の形より陽イオン交換または陰イオン交換を行うことによっても得られる。
本発明の化合物には、一般式(I)で表される化合物の溶媒和物、例えば水和物、アルコール付加物等も含まれる。
【００２０】
本発明の化合物は、プロドラッグ化することもできる。本発明におけるプロドラッグとは、体内で変換されて本発明の化合物を生成する化合物を表す。例えば、活性本体がカルボキシル基などを含む場合はそれらのエステル、アミド等が挙げられる。また、活性本体がアミノ基を含む場合にはそのアミド、カーバメート等が挙げられる。活性本体が水酸基を含む場合にはそのエステル、カーボネート、カーバメート等が挙げられる。本発明の化合物をプロドラッグ化する際にはアミノ酸、糖類と結合していてもよい。
本発明は一般式（Ｉ）で表される化合物の全ての同位体を含む。本発明化合物の同位体は、少なくとも１の原子が、原子番号（陽子数）が同じで，質量数（陽子と中性子の数の和）が異なる原子で置換されたものである。本発明化合物に含まれる同位体の例としては、水素原子、炭素原子、窒素原子、酸素原子、リン原子、硫黄原子、フッ素原子、塩素原子などがあり、それぞれ、２Ｈ，３Ｈ，１３Ｃ，１４Ｃ，１５Ｎ，１７Ｏ，１８Ｏ，３１Ｐ，３２Ｐ，３５Ｓ，１８Ｆ，３６Ｃｌ等が含まれる。特に、３Ｈや１４Ｃのような、放射能を発して中性子を放つ不安定な放射性同位体は、医薬品あるいは化合物の体内組織分布試験等の際、有用である。安定同位体は、崩壊を起こさず、存在量がほとんど変わらず、放射能もないため、安全に使用することができる。本発明の化合物の同位体は、合成で用いている試薬を、対応する同位体を含む試薬に置き換えることにより、常法に従って変換することができる。
本発明の医薬組成物は、グリコーゲン合成酵素活性の低下が介在する疾患の治療に好適に使用することができる。特に、糖尿病、中でも２型糖尿病や耐糖能異常の治療に好適に使用することができる。
本発明の医薬組成物やグリコーゲンシンターゼ活性化剤は、投与対象、投与ルート、対象疾患、症状等によっても異なるが、投与ルートとしては、経口投与で用いるのが好ましく、一回の投与を、有効成分１ｍｇ〜１０００ｍｇ/人の量で行うのが好ましく、より好ましくは、有効成分１ｍｇ〜１００ｍｇ/人の量であり、この量を1日1回乃至3回投与することが望ましい。
【００２１】
本発明の医薬組成物やグリコーゲンシンターゼ活性化剤は、有効成分として、上記一般式(I)で表される化合物及び/又はその医薬上許容される塩を含有するが、通常、経口投与薬剤に用いられている各種成分、例えば、医薬的や生理学的に許容される固体又は液体の担体、添加物等を含有させてもよい。
上記担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ゼラチン、アルブミン、アミノ酸、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤等の慣用の添加剤を適宜添加することもできる。
上記添加物としては、目的に応じて当該目的に対して通常用いられるものであれば特に制限されないが、具体的には、例えば、香料、糖類、甘味料、食物繊維類、ビタミン類、グルタミン酸ナトリウム（ＭＳＧ）などのアミノ酸類、イノシン一リン酸（ＩＭＰ）などの核酸類、塩化ナトリウムなどの無機塩類、水などが挙げられる。
【００２２】
本発明の医薬組成物やグリコーゲンシンターゼ活性化剤は、乾燥粉末、ペースト、溶液などの物性に制限なしに経口投与可能な形態で用いることができる。
このような経口投与可能な形態としては、例えば、錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠、舌下錠、口腔内崩壊錠を含む）、カプセル剤（ソフトカプセル、マイクロカプセルを含む）、顆粒剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、フィルム剤（例、口腔内崩壊フィルム）、凍結乾燥剤等が挙げられる。
また、本発明の医薬組成物やグリコーゲンシンターゼ活性化剤は、注射剤（例、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤、点滴剤）、外用剤（例、経皮製剤、軟膏剤）、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤）、ペレット、経鼻剤、経肺剤（吸入剤）、点眼剤等の非経口剤での形態でも用いることができる。
【００２３】
これらはそれぞれ経口的あるいは非経口的（例、局所、直腸、静脈投与）に安全に投与できる。これらの製剤は、速放性製剤または徐放性製剤等の放出制御製剤（例、徐放性マイクロカプセル）であってもよい。これらの製剤は製剤上の常套手段により調製することができる。
また、本発明の医薬組成物やグリコーゲンシンターゼ活性化剤は、他の糖尿病治療剤、糖尿病合併症治療剤、高脂血症治療剤、降圧剤、抗肥満剤（以下、併用薬剤と略記する）と組み合わせて用いることができる。これらの併用薬剤は、低分子であってもよく、また高分子のタンパク、ポリペプチド、抗体、核酸（アンチセンス核酸、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡを含む）であるか、あるいはワクチン等であってもよい。これらの併用薬剤は、1種又は2種以上と組み合わせて用いることができる。
本発明の医薬組成物やグリコーゲンシンターゼ活性化剤、または併用薬剤の投与時期は限定されず、これらを投与対象に対し、同時に投与してもよいし、時間差をおいて投与しても良い。
【００２４】
なお、糖尿病治療剤としては、インスリン製剤（例、ウシ、ブタの膵臓から抽出された動物インスリン製剤；大腸菌、イーストを用い遺伝子工学的に合成したヒ トインスリン製剤；インスリン亜鉛；プロタミンインスリン亜鉛；インスリンのフラグメントまたは誘導体（例、ＩＮＳ−１）、経口インスリン製剤）、インスリン抵抗性改善剤（例、ピオグリタゾンまたはその塩（好ましくは、塩酸塩）、ロシグリタゾンまたはその塩（好ましくは、マレイン酸塩）、テサグリタザール （Tesaglitazar）、ラガグリタザール（Ragaglitazar）、ムラグリタザール（Muraglitazar）、エダグリタゾン (Edaglitazone)、メタグリダセン(Metaglidasen)、ナベグリタザール（Naveglitazar）、AMG-131、THR- 0921）、α−グルコシダーゼ阻害剤（例、ボグリボース、アカルボース、ミグリトール、エミグリテート）、ビグアナイド剤（例、メトホルミン、ブホルミ ンまたはそれらの塩（例、塩酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩））、インスリン分泌促進剤［スルホニルウレア剤（例、トルブタミド、グリベンクラミド、グリクラジド、クロルプロパミド、トラザミド、アセトヘキサミド、グリクロピラミド、グリメピリド、グリピザイド、グリブゾール）、レパグリニド、ナテグリニド、ミチグリニドまたはそのカルシウム塩水和物］、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤（例、アログリプチン（Alogliptin）、ヴィルダグリプチン(Vildagliptin)、シタグリプチン(Sitagliptin)、サクサグリプチン (Saxagliptin)、T-6666、TS-021）、β３アゴニスト（例、AJ-9677）、ＧＰＲ４０アゴニスト、ＧＰＲ１２０アゴニスト、ＧＬＰ−１受容体アゴニスト ［例、GLP-1、GLP-1MR剤、NN-2211、AC-2993(exendin-4)、BIM-51077、Aib(8,35)hGLP- 1(7,37)NH2、CJC-1131］、アミリンアゴニスト（例、プラムリンチド）、ホスホチロシンホスファターゼ阻害剤 （例、バナジン酸ナトリウム）、糖新生阻害剤（例、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害剤、グルコース−６−ホスファターゼ阻害剤、グルカゴン拮抗剤）、 ＳＧＬＴ（sodium-glucose cotransporter）阻害剤（例、ダパグリフロジン、カナグリフロジン、イプラグリフロジン、ＢＩ−１０７７３）、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ阻害薬（例、BVT-3498）、アジポネクチンまたはその作動薬、ＩＫＫ阻害薬（例、AS-2868）、レプチン抵抗性改善薬、ソマトスタチン受容体作動薬、グルコキナーゼ活性化薬（例、Ro- 28-1675）、ＧＩＰ（Glucose-dependent insulinotropic peptide）等が挙げられる。
さらに、サプリメントなどで用いられている顆粒や錠剤、又はゼラチンカプセルなどに上記一般式(I)で表される化合物及び/又はその医薬上許容される塩を収納した形態でもちいてもよい。
【実施例】
【００２５】
以下、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
中間体１-A  3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]安息香酸の合成
2016130214.tif 000009
工程１  7-ブロモ-4,5-ジフルオロ-1-ベンゾフランの合成
２-ブロモ-４，５-ジフルオロフェノール（２．５１ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（３．３２ｇ，２４．０ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ-ジメチルホルムアミド（以下、ＤＭＦ）（６０ｍＬ）に、ブロモアセトアルデヒド  ジメチルアセタール（２．８２ｍＬ，２４．０ｍｍｏｌ）および触媒量のヨウ化ナトリウムを加え、８０℃で一晩撹拌した。減圧下溶媒を留去し、残渣を酢酸エチルで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製して得られた化合物（３．００ｇ，１０．１ｍｍｏｌ）をクロロベンゼン（４０ｍＬ）に溶解し、ポリリン酸（３．０ｇ）のクロロベンゼン懸濁液（２０ｍＬ）に１２０℃で加えた。反応液を１２０℃で一晩撹拌した後、減圧下で溶媒を留去し、残渣に酢酸エチルおよび水を加えた。これを氷冷下、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に注ぎ撹拌した後、不溶物を濾別し酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧下で溶媒を留去して得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン）で精製し、表題化合物を得た。
収量：５７２ｍｇ（２．４５ｍｍｏｌ） 収率：２０％
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.69 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.31-7.38 (m, 1H), 6.98 (d, J = 2.2 Hz, 1H).
【００２６】
工程２  中間体１-Ａの合成
４-（４，４，５，５-テトラメチル-１，３，２-ジオキサボロラン-２-イル）フェノール（８．４６g，３８．４ｍｍｏｌ）、３-（ブロモメチル）安息香酸メチル（８．８０g，３８．４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１０．６ｇ，７６．８ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１２５ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌した。酢酸エチルで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣にメタノール（１５０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、および水酸化リチウム（４．８g，１１４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。減圧下溶媒を留去後、酢酸エチルで希釈した後、１N塩酸、および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣のうち、３．３４g（９．４ｍｍｏｌ）に、工程１で得られた化合物（２．２ｇ，９．４ｍｍｏｌ）、１，４-ジオキサン（７５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）、炭酸ナトリウム（１．５ｇ，１４．２ｍｍｏｌ）および［１，１’-ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］ジクロロパラジウム（II）（以下、ＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ））（触媒量）を加えて１００℃で２時間撹拌した。不溶物を濾別した後、減圧下溶媒を留去後、酢酸エチルで希釈した後、１N塩酸、および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣をアセトニトリルで洗浄し、表題化合物を得た。
収量：２．９５ｇ（７．７６ｍｍｏｌ） 収率：８３％
【００２７】
中間体１-B  3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル クロリドの合成
2016130214.tif 000010
中間体１-A（２．９５ｇ，７．７６ｍｍｏｌ）に塩化チオニル（１５ｍＬ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。冷却後、減圧下溶媒を留去して表題化合物を得た。
収量：２．４ｇ（６．０ｍｍｏｌ） 収率：７７％
【００２８】
中間体２-A  3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-スルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]安息香酸の合成
2016130214.tif 000011
工程１  1-ブロモ-4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-ベンゼンの合成
２-ブロモ-４，５-ジフルオロチオフェノール（９．７８ｇ，４３．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１００ｍＬ）に、炭酸カリウム（７．５ｇ，５４．３ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（３．３９ｍＬ，５４．３ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。酢酸エチルで希釈した後、水および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去して得られた残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、表題化合物を得た。
収量：１０．４ｇ（４３．５ｍｍｏｌ） 収率：１００％
1H NMR (400 MHz, CDCl3)δ 7.39 (dd, J = 9.5, 7.6 Hz, 1H), 6.97 (dd, J = 10.9, 7.6 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H).
工程２  中間体２-Ａの合成
４-（４，４，５，５-テトラメチル-１，３，２-ジオキサボロラン-２-イル）フェノール（８．４６g，３８．４ｍｍｏｌ）、３-（ブロモメチル）安息香酸メチル（８．８０g，３８．４ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１０．６ｇ，７７ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１２５ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌した。酢酸エチルで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣にメタノール（１５０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、および水酸化リチウム（４．８g，１１４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。減圧下溶媒を留去後、酢酸エチルで希釈した後、１Ｎ塩酸、および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣のうち３．７４g（１０．６ｍｍｏｌ）に、工程１で得られた１-ブロモ-４，５-ジフルオロ-２-（メチルチオ）ベンゼン（２．５３ｇ，１０．６ｍｍｏｌ）、１，４-ジオキサン（７５ｍＬ）、水（２５ｍＬ）、炭酸ナトリウム（２．２４ｇ，２１．２ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）（触媒量）を加えて１００℃で２時間撹拌した。不溶物を濾別した後、減圧下溶媒を留去後、酢酸エチルで希釈した後、１Ｎ  塩酸、および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣をアセトニトリルで洗浄し、表題化合物を得た。
収量：４．０２ｇ（１０．４ｍｍｏｌ） 収率：９８％
【００２９】
中間体２-B  3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-スルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル  クロリドの合成
2016130214.tif 000012
中間体２-Ａ（４．０ｇ，１０．４ｍｍｏｌ）に塩化チオニル（１５ｍＬ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。冷却後、減圧下溶媒を留去して表題化合物を得た。
収量：３．３ｇ（８．５ｍｍｏｌ） 収率：８２％
【００３０】
中間体３  3-[[4-(4,5-ジフルオロ-3-メチル-ベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル クロリドの合成
2016130214.tif 000013
工程１  ７-ブロモ-４，５-ジフルオロ-３-メチル-１-ベンゾフランの合成
中間体１-Ａの工程１と同様の操作を、ブロモアセトアルデヒド  ジメチルアセタールの代わりにブロモアセトン（０．５０４ｍＬ，６．００ｍｍｏｌ）を用いて行い、表題化合物を得た。
収量：１５０ｍｇ（０．６０７ｍｍｏｌ） 収率：１２％
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.43 - 7.40 (m, 1H), 7.27 - 7.32 (m, 1H), 2.35 (d, J = 0.9 Hz, 3H).
工程２  中間体３の合成
４-（４，４，５，５-テトラメチル-１，３，２-ジオキサボロラン-２-イル）フェノール（８．４６g，３８ｍｍｏｌ）、３-（ブロモメチル）安息香酸メチル（８．８g，３８ｍｍｏｌ）、および炭酸カリウム（１０．６ｇ，７７ｍｍｏｌ）にＤＭＦ（１２５ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌した。酢酸エチルで希釈し、水および飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣にメタノール（１５０ｍＬ）、水（３０ｍＬ）、および水酸化リチウム（４．８g，１１４ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。減圧下溶媒を留去後、酢酸エチルで希釈した後、１Ｎ塩酸、および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣のうち、６．２５g（１７．７ｍｍｏｌ）に、７-ブロモ-４，５-ジフルオロ-３-メチルベンゾフラン（４．８ｇ，１９．４ｍｍｏｌ）、１，４-ジオキサン（７５ｍＬ）および水（２５ｍＬ）炭酸ナトリウム（３．７４ｇ，３５．３ｍｍｏｌ）およびＰｄＣｌ2（ｄｐｐｆ）（触媒量）を加えて１００℃で２時間撹拌した。不溶物を濾別した後、減圧下溶媒を留去後、酢酸エチルで希釈した後、１Ｎ  塩酸、および飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。減圧下溶媒を留去して得られた残渣をアセトニトリルで洗浄した。得られた残渣に塩化チオニル（１５ｍＬ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。冷却後、減圧下溶媒を留去して表題化合物を得た。
収量：４．０ｇ（９．７ｍｍｏｌ） 収率：５５％
【００３１】
実施例１  2-[(2-アミノ-2-オキソ-エチル)-[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸
工程１  2-[(2-アミノ-2-オキソ-エチル)-[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸ベンジルの合成
２-アミノアセトアミド  塩酸塩（５５．３ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）にメタノール（２．５ｍＬ）および２５ｗｔ％ナトリウムメトキシド／メタノール溶液（０．１１４ｍＬ）を加えて室温で１０分撹拌した後、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣をアセトニトリル（４ｍＬ）で希釈し、炭酸カリウム（６９．１ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）を加えて-１０℃〜-１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸ベンジル（０．０７８４ｍＬ，０．５００ｍｍｏｌ）を滴下して２．５時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣をジクロロメタン（４ｍＬ）で希釈し、氷冷下ジイソプロピルエチルアミン（以下、ＤＩＰＥＡ）（０．０８７１ｍＬ，０．５００ｍｍｏｌ）および中間体１-Ｂ（８０．０ｍｇ，０．２００ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮後、残渣を酢酸エチルで希釈し、０．５Ｎ  塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下溶媒を留去することにより、表題化合物を無精製で得た。
収量：１７３ｍｇ
MS (ESI, m/z) 585 [M+H]+
【００３２】
工程２  実施例１化合物の合成
工程１で得られた化合物をテトラヒドロフラン（以下、ＴＨＦ）（３ｍＬ）およびメタノール（１．５ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、氷冷下１Ｎ  水酸化リチウム水溶液（０．９ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣をＯＤＳを充填剤とする逆相ＨＰＬＣに付し、トリフルオロ酢酸を０．１％（ｖ／ｖ）含有する水とアセトニトリルの混合溶液で溶出し、目的のフラクションを凍結乾燥することにより、表題化合物を得た。
収量：４１．２ｍｇ（０．０８３２ｍｍｏｌ）  収率：４２％
MS (ESI, m/z) 495 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.19 - 12.77 (m, 1H), 8.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 2H), 7.66 - 7.46 (m, 5H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.13 - 3.87 (m, 4H).
【００３３】
実施例２  (2S,3S)-1-[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-3-ヒドロキシ-ピロリジン-2-カルボン酸
工程１  (2S,3S)-1-[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-3-ヒドロキシ-ピロリジン-2-カルボン酸メチルの合成
（２Ｓ、３Ｓ）-３-ヒドロキシピロリジン-２-カルボン酸（１９．６ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）に塩化アセチル（０．１０３ｍＬ）とメタノール（３．０ｍＬ）から調製した塩酸／メタノールを氷冷下で加えて４時間撹拌した後、減圧下溶媒を留去した。得られた残渣にジクロロメタン（１．５ｍＬ）、１-エチル-３-（３-ジメチルアミノプロピル）-カルボジイミド（以下、WSC）塩酸塩（５６．４ｍｇ，０．３００ｍｍｏｌ）、中間体１-Ａ（５７．０ｍｇ，０．１５０ｍｍｏｌ）、１-ヒドロキシベンゾトリアゾ-ル（以下、ＨＯＢｔ）・一水和物（４１．１ｍｇ，０．３００ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．０６２６ｍＬ，０．４５０ｍｍｏｌ）を加え、室温で一晩撹拌した。減圧下濃縮して得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：３８．５ｍｇ（０．０７５９ｍｍｏｌ）
MS (ESI, m/z) 508 [M+H]+ 
工程２  実施例２化合物の合成
工程１で得られた化合物をＴＨＦ（１．７ｍＬ）に溶解し、氷冷下１Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液（１．７ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：３０．０ｍｇ（０．０６０７ｍｍｏｌ）  収率：４０％
MS (ESI) m/z 494 [M+H]+
【００３４】
実施例３  (2S,3R)-1-[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-3-ヒドロキシ-ピロリジン-2-カルボン酸
実施例２と同様の操作を、（２Ｓ，３Ｓ）-３-ヒドロキシピロリジン-２-カルボン酸の代わりに（２Ｓ，３Ｒ）-３-ヒドロキシピロリジン-２-カルボン酸を用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：３．００ｍｇ（０．００６０１ｍｍｏｌ）  収率：４．０％
MS (ESI) m/z 494 [M+H]+
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.78 - 11.96 (m, 1H), 8.19 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.87 - 7.79 (m, 2H), 7.67 - 7.63 (m, 1H), 7.63 - 7.57 (m, 2H), 7.54 - 7.47 (m, 2H), 7.23 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 2H), 5.29 - 5.18 (m, 2H), 4.56 - 4.38 (m, 2H), 3.72 - 3.58 (m, 1H), 3.48 - 3.43 (m, 1H), 1.99 - 1.73 (m, 2H).
【００３５】
実施例４  (2S,5R) or (2S,5S)-5-カルバモイル-1-[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]ピロリジン-2-カルボン酸の合成
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２００２，４３，１５９７―１５９８．の記載方法に従い、（２Ｓ）-５-オキソピロリジン-２-カルボン酸エチル（１．００ｇ，６．６２ｍｍｏｌ）から（２Ｓ，５Ｒ）ｏｒ（２Ｓ，５Ｓ）-５-シアノピロリジン-２-カルボン酸エチルを得た。得られた化合物を４Ｎ  塩酸／１，４-ジオキサン溶液に溶解し、一晩室温で撹拌した。有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製して得られた化合物のうちの一部（４４．３ｍｇ，０．２５１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２．０ｍＬ）に溶解した。その溶液にＤＩＰＥＡ（０．０６５ｍＬ，０．３７５ｍｍｏｌ）、中間体１-Ｂ（５０．０ｍｇ，０．１２４ｍｍｏｌ）を順次加えて室温で１時間半撹拌した。有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製して得られた化合物をＴＨＦ（１ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、室温下２Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液（０．０４ｍＬ）を加え、室温で２時間半撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：３．５ｍｇ（０．００６７２ｍｍｏｌ）  収率：５．４％
MS (ESI, m/z) 521 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.67 (bs, 1H), 8.19 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.89 - 7.76 (m, 2H), 7.69 - 7.57 (m, 2H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.34 - 7.27 (m, 1H), 7.24 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 2H), 7.11 - 6.87 (m, 1H), 5.21 (m, 2H), 4.70 - 4.21 (m, 2H), 2.47 - 1.77 (m, 4H).
【００３６】
実施例５  (2S,3S)-1-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-3-ヒドロキシ-ピロリジン-2-カルボン酸
実施例２と同様の操作を中間体１-Ａの代わりに中間体２-Ａを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：８．７５ｍｇ（０．０１７５ｍｍｏｌ）  収率：１２％
MS (ESI, m/z) 500 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 - 7.43 (m, 4H), 7.40 - 7.25 (m, 4H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 5.25 - 5.15 (m, 2H), 4.34 - 4.09 (m, 2H), 3.66 - 3.55 (m, 1H), 3.51 - 3.40 (m, 1H), 2.39 (d, J = 1.6 Hz, 3H), 2.04 - 1.73 (m, 3H).
【００３７】
実施例６  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-メトキシエチル)アミノ]酢酸
工程１  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-メトキシエチル)アミノ]酢酸エチルの合成
２-メトキシエタンアミン（０．０４３ｍＬ，０．５０ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（４ｍＬ）溶液に、炭酸カリウム（６９ｍｇ，０．５０ｍｍｏｌ）を加え−１０℃〜−１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸エチル（０．０５５ｍＬ，０．５０ｍｍｏｌ）を滴下し２時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣をジクロロメタン（４ｍＬ）で希釈し、ＤＩＰＥＡ（０．０８７ｍＬ，０．５００ｍｍｏｌ）および中間体２-Ｂ（８１ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を加えて室温で１時間撹拌した。反応液に水を加えジクロロメタンで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下溶媒を留去することにより、表題化合物を無精製で得た。
MS (ESI, m/z) 530 [M+H]+ 
工程２  実施例６化合物の合成
工程１で得られた化合物を１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶解し、１Ｎ水酸化リチウム水溶液（０．６ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を１Ｎトリフルオロ酢酸水溶液で中和後、減圧下留去し、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：６３．１ｍｇ（０．０１２６ｍｍｏｌ）  収率：６３％
MS (ESI, m/z) 502 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.60 - 7.23 (m, 8H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.29 - 5.13 (m, 2H), 4.20 - 3.97 (m, 2H), 3.66 - 3.31 (m, 4H), 3.30 - 3.10 (m, 3H), 2.39 (s, 3H).
【００３８】
実施例７  2-[2-シアノエチル-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸
中間体２-Ｂ（５０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）にＮ-（２-シアノエチル）グリシン（６５ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（２ｍＬ）、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加え、室温で一晩撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：２８ｍｇ（０．０５６ｍｍｏｌ）  収率：４３％
MS (ESI) m/z 497 [M+H]+
実施例８  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-メチルスルホニルエチル)アミノ]酢酸
実施例１と同様の操作を、２-アミノアセトアミド塩酸塩の代わりに２-メチルスルホニルエタンアミン塩酸塩、メタノール溶媒の代わりにＴＨＦ、２-ブロモ酢酸ベンジルの代わりに２-ブロモ酢酸エチルを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：７０．８ｍｇ（０．１３０ｍｍｏｌ）  収率：６５％
MS (ESI, m/z) 544 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.90 - 7.79 (m, 2H), 7.69 - 7.12 (m, 8H), 5.32 - 5.17 (m, 2H), 4.20 - 4.02 (m, 2H), 3.94 - 3.46 (m, 4H), 3.12 - 2.81 (m, 3H).
【００３９】
実施例９  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(テトラヒドロピラン-4-イルメチル)アミノ]酢酸
４-（アミノメチル）テトラヒドロピラン（１００ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（４ｍＬ）、炭酸カリウム（１２０ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）を加えて-１０℃〜-１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸ベンジル（０．１３６ｍＬ，０．８７ｍｍｏｌ）を滴下して２．５時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣にＴＨＦ（４ｍＬ）、中間体１-Ｂ（５０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．２４０ｍＬ，１．７４ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液に、メタノール（４ｍＬ）、１Ｎ  水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を中和し、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：３２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）  収率：４６％
MS (ESI) m/z 536 [M+H]+
実施例１０  2-[(2-アミノ-2-オキソ-エチル)-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸
実施例１と同様の操作を、中間体１-Ｂの代わりに中間体２-Ｂを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：４４．６ｍｇ（０．０８９１ｍｍｏｌ）  収率：３６％
MS (ESI, m/z) 501 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.95 (br s, 1H), 7.61 - 7.45 (m, 4H), 7.40 - 7.15 (m, 6H), 7.12 - 7.05 (m, 2H), 5.18 (s, 2H), 4.12 - 3.86 (m, 4H), 2.39 (s, 3H).
【００４０】
実施例１１  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[2-(ジメチルアミノ)-2-オキソ-エチル]アミノ]酢酸
工程１  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[2-(ジメチルアミノ)-2-オキソ-エチル]アミノ]酢酸ベンジルの合成
２-アミノ-Ｎ，Ｎ-ジメチルアセトアミド（５１．１ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（４ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１０４ｍｇ，０．７５０ｍｍｏｌ）を加えて-１０℃〜-１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸ベンジル（０．０８６ｍＬ，０．５５０ｍｍｏｌ）を滴下し、徐々に室温に上げて一晩撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣をジクロロメタン（２．５ｍＬ）で希釈し、氷冷下ＤＩＰＥＡ（０．０４４ｍＬ，０．２５０ｍｍｏｌ）および中間体１-Ｂ（１００ｍｇ，０．２５１ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液に０．５Ｎ塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下溶媒を留去することにより、表題化合物を無精製で得た。
収量：２０７ｍｇ
MS (ESI, m/z) 613 [M+H]+ 
工程２  実施例１１の合成
実施例１の工程２と同様の操作を、２-［（２-アミノ-２-オキソ-エチル）-［３-［［４-（４，５-ジフルオロベンゾフラン-７-イル）フェノキシ］メチル］ベンゾイル］アミノ]酢酸ベンジルの代わりに工程１で得られた化合物を用いて行い、表題化合物を得た。
収量：９９．５ｍｇ（０．１９０ｍｍｏｌ）  収率：７６％
MS (ESI, m/z) 523 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.18 - 12.63 (m, 1H), 8.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 2H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.53 - 7.43 (m, 2H), 7.31 - 7.25 (m, 1H), 7.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.21 - 7.15 (m, 2H), 5.26 - 5.18 (m, 2H), 4.37 - 3.91 (m, 4H), 3.04 - 2.65 (m, 6H).
【００４１】
実施例１２  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(4-ピペリジルメチル)アミノ]酢酸  トリフルオロ酢酸塩
４-（アミノメチル）ピペリジン-１-カルボン酸ｔｅｒｔ-ブチル（５５０ｍｇ，２．５７ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（４ｍＬ）、炭酸カリウム（３５４ｍｇ，２．５７ｍｍｏｌ）を加えて-１０℃〜-１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸ベンジル（０．４ｍＬ，２．５７ｍｍｏｌ）を滴下して２．５時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣にＴＨＦ（８ｍＬ）、中間体１-Ｂ（２５０ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．２０ｍＬ，８．７ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液に、メタノール（８ｍＬ）、１Ｎ 水酸化ナトリウム水溶液（４ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を中和し、溶媒を減圧下留去した後、４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサン溶液（１０ｍＬ）を氷冷下加え、1時間撹拌した。溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：２３２ｍｇ（０．３６ｍｍｏｌ）  収率：５５％
MS (ESI, m/z) 535 [M+H]+
【００４２】
実施例１３  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-ジメチルアミノエチル)アミノ]酢酸  トリフルオロ酢酸塩
工程１  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-ジメチルアミノエチル)アミノ]酢酸ベンジルの合成
Ｎ，Ｎ-ジメチル-１，２-エタンジアミン（４４．１ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した。その溶液に炭酸カリウム（１０４ｍｇ， ０．５５ｍｍｏｌ）を加え、その後、２-ブロモ酢酸ベンジル（１２６ｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）を加えて，自然昇温しながら室温で１５時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣をジクロロメタン（２ｍＬ）で希釈し、室温でＤＩＰＥＡ（０．０８７ｍＬ，０．５０ｍｍｏｌ）および中間体１-Ｂ（９９．７ｍｇ，０．２５０ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧下溶媒を留去することにより、表題化合物を無精製で得た。
収量：１６８ｍｇ
MS (ESI, m/z) 599 [M+H]+ 
工程２  実施例１３化合物の合成
工程１で得られた化合物をＴＨＦ（１ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、室温下２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：７２．２ｍｇ（０．１１６ｍｍｏｌ）  収率：４６％
MS (ESI, m/z) 509 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ13.1 (bs, 1H), 9.38 (s, 1H), 8.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.88 - 7.79 (m, 2H), 7.68 - 7.45 (m, 4H), 7.45-7.29 (m, 1H), 7.25 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.22 - 7.14 (m, 2H), 5.29-5.19 (m, 1H), 4.19-3.99 (m, 1H), 3.86-3.78 (m, 2H), 3.61-3.25 (m, 2H), 2.91-2.56 (m, 6H).
【００４３】
実施例１４  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-3-メチル-ベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-メチルスルホニルエチル)アミノ]酢酸
実施例１と同様の操作を、２-アミノアセトアミド塩酸塩の代わりに２-メチルスルホニルエタンアミン塩酸塩、２−ブロモ酢酸ベンジルの代わりに２−ブロモ酢酸エチル、中間体１-Ｂの代わりに中間体３を用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：４７．８ｍｇ（０．０８５７ｍｍｏｌ）  収率：４３％
MS (ESI, m/z) 558 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.63 - 7.39 (m, 5H), 7.20 - 7.12 (m, 2H), 5.29 - 5.16 (m, 2H), 4.19 - 4.02 (m, 3H), 3.88 - 3.45 (m, 4H), 3.09 - 2.81 (m, 3H), 2.34 (s, 3H).
実施例１５  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[2-(メチルアミノ)-2-オキソ-エチル]アミノ]酢酸
実施例１と同様の操作を、２-アミノアセトアミド塩酸塩の代わりに２-アミノ-Ｎ-メチル-アセトアミド塩酸塩（６２．３ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）を用いて行い、表題化合物を得た。
収量：３８．０ｍｇ（０．０７４７ｍｍｏｌ）  収率：３０％
MS (ESI, m/z) 509 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.90 (bs, 1H), 8.19 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.06 - 7.96 (m, 1H), 7.87 - 7.79 (m, 2H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.53 - 7.45 (m, 2H), 7.37 - 7.29 (m, 1H), 7.24 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.21 - 7.14 (m, 2H), 5.22 (s, 2H), 4.14 - 3.85 (m, 4H), 2.67 - 2.57 (m, 3H).
【００４４】
実施例１６  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[2-(メタンスルホンアミド)エチル]アミノ]酢酸
工程１ 2-[2-(メタンスルホンアミド)エチルアミノ]酢酸ベンジルの合成
Ｎ-［２-（メタンスルホンアミド）エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ-ブチル（２５０ｍｇ，１．０５ｍｍｏｌ）を４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサン溶液（１．１ｍＬ）と１，４−ジオキサン（５ｍＬ）に溶解し、室温で17時間撹拌した。減圧下濃縮して凍結乾燥した。得られた残渣をアセトニトリル（３ｍＬ）とＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解して０℃に冷却した。その溶液に炭酸カリウム（１７３ｍｇ， １．２５ｍｍｏｌ）を加え、その後、２−ブロモ酢酸ベンジル（２５２ｍｇ，１．１０ｍｍｏｌ）を加えて，自然昇温しながら室温で１６時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮することで、表題化合物を無精製で得た。
MS (ESI, m/z) 287 [M+H]+ 
工程２  実施例１６化合物の合成
工程１で得られた化合物をジクロロメタン（２ｍＬ）で溶解し、室温でＤＩＰＥＡ（０．０８７ｍＬ，０．５０ｍｍｏｌ）および中間体１-Ｂ（７９．７ｍｇ，０．２００ｍｍｏｌ）を加えて室温で１７時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧下溶媒を留去した。得られた残渣にＴＨＦ（１ｍＬ）とメタノール（１ｍＬ）を加えて溶解した。その溶液に２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ）を加えて、室温で1時間半撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：５７．６ｍｇ（０．１０３ｍｍｏｌ）  収率：５２％
MS (ESI, m/z) 559 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.85 (s, 1H), 8.18 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.31 Hz, 2H), 7.66 - 7.44 (m, 4H), 7.41-7.27 (m, 1H), 7.23 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.21 - 7.03 (m, 3H), 5.28-5.19 (m, 2H), 4.19-4.01 (m, 1H), 3.60-3.51 (m, 1H), 3.41-3.32 (m, 1H), 3.30-3.20 (m, 1H), 3.17-3.07 (m, 1H), 2.98-2.81 (m, 3H).
【００４５】
実施例１７  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[2-(メタンスルホンアミド)エチル]アミノ]酢酸
実施例１６の工程１で得られた化合物の半量をジクロロメタン（２ｍＬ）に溶解し、ＤＩＰＥＡ（０．０８７ｍＬ，０．５０ｍｍｏｌ）および中間体２-Ｂ（８１．０ｍｇ，０．２００ｍｍｏｌ）を加えて室温で１７時間撹拌した。反応液を酢酸エチルで希釈し、飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥して減圧下溶媒を留去した。得られた残渣にＴＨＦ（１ｍＬ）とメタノール（１ｍＬ）を加えて溶解した。その溶液に２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（０．３ｍｌ）を加えて、室温で１時間半撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：６２．５ｍｇ（０．１１１ｍｍｏｌ）  収率：５５％
MS (ESI, m/z) 565 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ12.94 (bs, 1H), 7.61 - 7.43 (m, 3H), 7.41-7.25 (m, 3H), 7.21-7.02 (m, 3H), 5.24-5.15 (m, 1H), 4.18-3.99 (m, 1H), 3.59-3.50 (m, 1H), 3.51-3.30 (m, 1H), 3.29- 3.19 (m, 1H), 3.16-3.06 (m, 1H), 2.97-2.80 (m, 3H), 2.40 (s, 3H).
【００４６】
実施例１８  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロベンゾフラン-7-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(3-ヒドロキシ-3-メチル-ブチル)アミノ]酢酸
４-アミノ-２-メチルブタン-２-オール（１００ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）にアセトニトリル（４ｍＬ）、炭酸カリウム（１２０ｍｇ，０．８７ｍｍｏｌ）を加えて-１０℃〜-１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸ベンジル（０．１３６ｍＬ，０．８７ｍｍｏｌ）を滴下して２．５時間撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣にTHF（４ｍＬ）、中間体１-B（５０ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（０．２４０ｍＬ，１．７４ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液に、メタノール（４ｍＬ）、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を中和し、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：３２ｍｇ（０．０６ｍｍｏｌ）  収率：４６％
MS (ESI, m/z) 524 [M+H]+ 
実施例１９  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(4-ピリジルメチル)アミノ]酢酸  トリフルオロ酢酸塩
４-ピリジンカルボキシアルデヒド（０．１５ｍＬ，１．６ｍｍｏｌ）にジクロロメタン（５ｍＬ）、グリシンベンジルエステル パラ-トルエンスルホナ-ト（５４０ｍｇ，１．６ｍｍｏｌ）、酢酸（０．１８ｍＬ、３．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分撹拌後、トリアセトキシ水素化ほう素ナトリウム（６８０ｍｇ，３．２ｍｍｏｌ）を加え、一晩撹拌した。を中間体４と同様に逆相ＨＰＬＣで精製後、ＴＨＦ（４ｍＬ）、中間体２-Ｂ（１５０ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ）、トリエチルエチルアミン（０．７２０ｍＬ，５．２２ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液に、メタノール（６ｍＬ）、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３ｍＬ）を加え、室温で２時間撹拌した。反応液を中和し、有機溶媒を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：５５ｍｇ（０．０８５ｍｍｏｌ）  収率：２２％
MS (ESI, m/z) 535 [M+H]+
【００４７】
実施例２０  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-ピリジルメチル)アミノ]酢酸  トリフルオロ酢酸塩
実施例６と同様の操作を、２-メトキシエタンアミンの代わりに２-ピリジルメタンアミンを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：５８．６ｍｇ（０．０９０３ｍｍｏｌ）  収率：４５％
MS (ESI, m/z) 535 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.68 - 8.54 (m, 1H), 8.08 - 7.17 (m, 11H), 7.17 - 6.92 (m, 2H), 5.29 - 5.10 (m, 2H), 4.89 - 4.55 (m, 2H), 4.20 - 4.04 (m, 2H), 2.39 (s, 3H).
実施例２１  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(3-ヒドロキシブチル)アミノ]酢酸
実施例１１と同様の操作を、２-アミノ-Ｎ，Ｎ-ジメチルアセトアミドの代わりに４-アミノブタン-２-オール（４４．６ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）を、中間体１-Ｂの代わりに中間体２-Ｂ（１０３ｍｇ，０．２５４ｍｍｏｌ）を用いて行い、表題化合物を得た。
収量：８３．０ｍｇ（０．１６１ｍｍｏｌ）  収率：６４％
MS (ESI, m/z) 516 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.79 (br s, 1H), 7.59 - 7.23 (m, 8H), 7.12 - 7.04 (m, 2H), 5.28 - 5.13 (m, 2H), 4.17 - 3.90 (m, 2H), 3.77 - 3.12 (m, 4H), 2.39 (s, 3H), 1.79 - 1.47 (m, 2H), 1.15 - 0.88 (m, 3H).
【００４８】
実施例２２  2-[[(1S)-2-アミノ-1-メチル-2-オキソ-エチル]-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸
工程１  2-[[(1S)-2-アミノ-1-メチル-2-オキソ-エチル]-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸ベンジルの合成
Ｌ-アラニンアミド塩酸塩（６２．３ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（３ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１７３ｍｇ，１．２５ｍｍｏｌ）を加えて-１０℃〜-１５℃に冷却した後、アセトニトリル（１ｍＬ）で希釈した２-ブロモ酢酸ベンジル（０．０８６ｍＬ，０．５５０ｍｍｏｌ）を滴下し、自然昇温にて室温に上げ一晩撹拌した。不溶物を濾別後、減圧下濃縮して得られた残渣をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈し、氷冷下ＤＩＰＥＡ（０．０８８ｍＬ，０．５０ｍｍｏｌ）および中間体２-Ｂ（１０３ｍｇ，０．２５４ｍｍｏｌ）を加えて室温で２時間撹拌した。反応液に０．５Ｎ塩酸を加え、ジクロロメタンで抽出後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液および飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下溶媒を留去することにより、表題化合物を無精製で得た。
収量：１７８ｍｇ
MS (ESI, m/z) 605 [M+H]+ 
工程２  実施例２２化合物の合成
実施例１の工程２と同様の操作を、２-[(２-アミノ-2-オキソ-エチル)-[３-[[４-(４，５-ジフルオロベンゾフラン-７-イル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸ベンジルの代わりに工程１で得られた化合物を用いて行い、表題化合物を得た。
収量：４１．６ｍｇ（０．０８０８ｍｍｏｌ）  収率：３２％
MS (ESI, m/z) 515 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.95 (br s, 1H), 7.65 - 7.44 (m, 4H), 7.42 - 7.25 (m, 6H), 7.14 - 7.05 (m, 2H), 5.24 - 5.13 (m, 2H), 4.52 - 3.83 (m, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.48 - 1.28 (m, 3H).
【００４９】
実施例２３  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-メトキシ-2-メチル-プロピル)アミノ]酢酸
実施例６と同様の操作を、２-メトキシエタンアミンの代わりに２-メトキシ-２-メチル-プロパン-１-アミンを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：４７．６ｍｇ（０．０８９９ｍｍｏｌ）  収率：４５％
MS (ESI, m/z) 530 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 - 7.22 (m, 8H), 7.12 - 7.03 (m, 2H), 5.31 - 5.11 (m, 2H), 4.29 - 4.04 (m, 2H), 3.57 - 3.25 (m, 2H), 3.15 - 2.93 (m, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.23 - 0.82 (m, 6H).
実施例２４  2-[2-ジエチルアミノエチル-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸 トリフルオロ酢酸塩
実施例６と同様の操作を、２-メトキシエタンアミンの代わりにＮ，Ｎ-ジエチル-１，２-エタンジアミンを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：９８．７ｍｇ（０．１５０ｍｍｏｌ）  収率：７５％
MS (ESI, m/z) 543 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.31 (s, 1H), 7.78 - 7.22 (m, 8H), 7.22 - 6.99 (m, 2H), 5.32 - 5.02 (m, 2H), 4.27 - 3.96 (m, 2H), 3.89 - 3.50 (m, 3H), 3.31 - 2.89 (m, 5H), 2.40 (s, 3H), 1.43 - 0.88 (m, 6H).
【００５０】
実施例２５  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-(2-オキソ-2-ピロリジン-1-イル-エチル)アミノ]酢酸
工程１  N-(2-オキソ-2-ピロリジン-1-イル-エチル)カルバミン酸 tert-ブチルの合成
２-（ｔｅｒｔ-ブトキシカルボニルアミノ）酢酸（１．０５ｇ，６．００ｍｍｏｌ）、ＷＳＣ 塩酸塩（１．１５ｇ，６．００ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ・一水和物（９１９ｍｇ，６．００ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、トリエチルアミン（０．８３６ｍＬ，６．００ｍｍｏｌ）およびピロリジン（０．４９６ｍＬ，６．００ｍｍｏｌ）を加えて室温で一晩撹拌した。反応液をジクロロメタンで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、１Ｎ塩酸および飽和食塩水で洗浄後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下濃縮した。得られた残渣にヘキサン／酢酸エチルの混合溶媒を加えて撹拌し、析出した固体を濾取することにより、表題化合物を得た。
収量：５９８ｍｇ（２．６２ｍｍｏｌ）  収率：４４％
MS (ESI, m/z) 229 [M+H]+ 
工程２  2アミノ-1ピロリジン-1-イル-エタノン塩酸塩の合成
工程１の化合物（５９８ｍｇ，２．６２ｍｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（３ｍＬ）に溶解し、４Ｎ塩酸／１，４−ジオキサン溶液（１０ｍＬ）を加えて室温で１．５時間撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、トルエンに懸濁して減圧下濃縮して得られた残渣に酢酸エチルを加えて撹拌し、析出した固体を濾取することにより表題化合物を得た。
収量：４３７ｍｇ（２．６５ｍｍｏｌ）  収率：定量的
工程３  実施例２５化合物の合成
実施例２２と同様の操作を、Ｌ-アラニンアミド塩酸塩の代わりに工程２で得られた化合物（８２．３ｍｇ，０．５００ｍｍｏｌ）を用いて行い、表題化合物を得た。
収量：９８．５ｍｇ（０．１７８ｍｍｏｌ）  収率：７１％
MS (ESI, m/z) 555 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.16 - 12.73 (m, 1H), 7.59 - 7.54 (m, 1H), 7.52 - 7.44 (m, 2H), 7.39 - 7.25 (m, 5H), 7.11 - 7.05 (m, 2H), 5.23 - 5.15 (m, 2H), 4.29 - 3.94 (m, 4H), 3.51 - 3.00 (m, 4H), 2.39 (s, 3H), 1.97 - 1.61 (m, 4H).
【００５１】
実施例２６  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]アミノ]酢酸  トリフルオロ酢酸塩
実施例６と同様の操作を、２-メトキシエタンアミンの代わりにＮ，Ｎ-ジメチルプロパン-１，３-ジアミンを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：４６．８ｍｇ（０．０７２８ｍｍｏｌ）  収率：３６％
MS (ESI, m/z) 529 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.37 (s, 1H), 7.68 - 7.43 (m, 3H), 7.43 - 7.23 (m, 5H), 7.15 - 7.02 (m, 2H), 5.27 - 5.09 (m, 2H), 4.19 - 3.95 (m, 2H), 3.49 - 3.07 (m, 5H), 2.97 - 2.62 (m, 7H), 2.40 (s, 3H), 2.03 - 1.82 (m, 2H).
実施例２７  2-[カルボキシメチル-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸
イミノ二酢酸（２００ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３ｍＬ）およびジクロロメタン（２ｍＬ）を加え、氷冷下中間体２-Ｂ（１０３ｍｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液（１ｍＬ）を加え、室温で３．５時間撹拌した。反応液を中和後、有機溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：１３．３ｍｇ（０．００２６５ｍｍｏｌ）  収率：１０％
MS (ESI) m/z 502 [M+H]+
【００５２】
実施例２８  2-[[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]-[2-(メチルアミノ)エチル]アミノ]酢酸  トリフルオロ酢酸塩
工程１  2-[2-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)エチル-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸エチルの合成
実施例６の工程１と同様の操作を、２-メトキシエタンアミンの代わりにＮ-（２-アミノエチル）カルバミン酸 ｔｅｒｔ-ブチルを用いて行うことにより、表題化合物を得た。
収量：９４．６ｍｇ（０．１２１ｍｍｏｌ）  収率：４９％
MS (ESI, m/z) 615 [M+H]+ 
工程２  2-[2-[tert-ブトキシカルボニル(メチル)アミノ]エチル-[3-[[4-(4,5-ジフルオロ-2-メチルスルファニル-フェニル)フェノキシ]メチル]ベンゾイル]アミノ]酢酸の合成
工程１で得られた化合物（９４．６ｍｇ，０．１２１ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解し、水素化ナトリウム（１６ｍｇ，０．３６４ｍｍｏｌ）、ヨウ化メチル（０．０３８ｍＬ，０．６０５ｍｍｏｌ）を加えアルゴン雰囲気下、室温で２時間撹拌した。さらに、水素化ナトリウム（１６ｍｇ，０．３６４ｍｍｏｌ）、ヨウ化メチル（０．０３８ｍＬ，０．６０５ｍｍｏｌ）を加え室温で一晩撹拌した。反応液を冷却した後、飽和塩化アンモニウム水溶液でクエンチし、反応液を減圧下留去した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：４１．３ｍｇ（０．０６８７ｍｍｏｌ）  収率：５７％
MS (ESI, m/z) 601 [M+H]+ 
工程３  実施例２８化合物の合成
工程２で得られた化合物（５０．０ｍｇ，０．０８３３ｍｍｏｌ）をジクロロメタンに溶解し、トリフルオロ酢酸（０．０３２ｍＬ，０．４１２ｍｍｏｌ）を加え室温で６時間撹拌した。さらにトリフルオロ酢酸（０．０３２ｍＬ，０．４１２ｍｍｏｌ）を加え室温で一晩撹拌し、反応液を減圧濃縮した後、得られた残渣を実施例１の工程２と同様に逆相ＨＰＬＣで精製し、表題化合物を得た。
収量：４４．４ｍｇ（０．０７２２ｍｍｏｌ）  収率：８７％
MS (ESI, m/z) 501 [M+H]+ 
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.10 (s, 1H), 8.46 - 8.21 (m, 2H), 7.67 - 7.44 (m, 3H), 7.45 - 7.23 (m, 5H), 7.14 - 7.02 (m, 2H), 5.26 - 5.09 (m, 2H), 4.21 - 3.98 (m, 2H), 3.78 - 3.51 (m, 2H), 3.25 - 3.05 (m, 2H), 2.66 - 2.46 (m, 3H), 2.40 (s, 3H).
上記実施例で得られた化合物の構造式および物性値を表１−１〜表１−４に示す。
【００５３】
表１−１
2016130214.tif 000014
【００５４】
表１−２
2016130214.tif 000015
【００５５】
表１−３
2016130214.tif 000016
【００５６】
表１−４
2016130214.tif 000017
【００５７】
試験例１  グリコーゲンシンターゼ活性測定
ヒトＧＹＳ１発現プラスミド（ｐＣＤＮＡ３．１（＋）−ｈＧＹＳ１）は、次の方法で構築した。Ｈｕｍａｎ  ＭＴＣ  Ｐａｎｅｌ Ｉ（タカラバイオ、６３６７４２）のヒト骨格筋ｃＤＮＡをテンプレートとして用い、クローニングプライマー（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ：ＡＴＧＣＣＴＴＴＡＡＡＣＣＧＣＡＣ、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ：ＴＴＡＧＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＧＣ）を用いたＰＣＲ法で、ヒトＧＹＳ１遺伝子を増幅した。増幅したヒトＧＹＳ１配列をテンプレートとして用い、サブクローニングプライマー（Ｆｏｒｗａｒｄ  Ｐｒｉｍｅｒ：ＣＣＣＴＣＧＡＧＡＣＣＡＴＧＣＣＴＴＴＡＡＡＣＣＧＣＡＣＴＴ、Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｐｒｉｍｅｒ：ＧＧＴＣＴＡＧＡＴＴＡＧＴＴＡＣＧＣＴＣＣＴＣＧＣＣＣＡＧ）を用いたＰＣＲ法により制限酵素配列を付加した後、ｐＣＤＮＡ３．１（＋）（インビトロジェン、Ｖ７９０−２０）のＸｈｏ Ｉサイト、Ｘｂａ ＩサイトにヒトＧＹＳ１遺伝子を導入した。
【００５８】
グリコーゲンシンターゼの調製は、既報（ＴＨＥ  ＪＯＵＮＡＬ  ＯＦ  ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  Ｖｏｌ．２７４，Ｎｏ．５１，：３６２９３-３６２９９,１９９９）に準じ、次の方法で行った。ヒト腎臓由来のＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ(ナカライテスク、０８４５８７４）培地を用い、ディッシュ（サーモフィッシャーサイエンティフィック、１６８３８１）に播種し、一晩培養した後、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＬＴＸ（インビトロジェン、１５３３８−１００）を用い、添付のマニュアルに準じてヒトＧＹＳ１発現ベクターのトランスフェクションを行った。３７℃、５％ＣＯ2条件下で２日間培養した後、リシスバッファー（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、２ｍＭ  ＥＧＴＡ、１００ｍＭ  ＮａＦ、１ｍＭ  ＰＭＳＦ、1ｍＭ  ＤＴＴ、１ｘＣｏｍｐｌｅｔｅ（ロシュ、１８７３５８０））に溶解し、ホモジェナイズした後、１６０００ｘｇ、４℃、１５分間の遠心分離を行い、沈殿画分にリシスバッファーを加えて再溶解したものをグリコーゲンシンターゼとして評価に用いた。
【００５９】
グリコーゲンシンターゼの活性測定は次の方法で行った。ポリスチレン９６ウエルハーフエリアプレートに、３０ｍＭのグリシルグリシン（ｐＨ７．３）、４０ｍＭのＫＣｌ、２０ｍＭのＭｇＣｌ2、各種濃度の被検化合物を含む９．２％ＤＭＳＯ、1０ｍＭのＧｌｕｃｏｓｅ−６−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ（シグマアルドリッチ、Ｇ７８７９）を含む溶液を１２μＬ／ウェル加えた。
次に、３０ｍＭのグリシルグリシン（ｐＨ７．３）、４．３ｍｇ／ｍＬのグリコーゲン（シグマアルドリッチ、Ｇ８８７６）、２１．６ｍＭのＵＤＰ−グルコース（シグマアルドリッチ、Ｕ４６２５）、２１．６ｍＭのホスホエノールピルビン酸（シグマアルドリッチ、Ｐ０５６４）および４．０５ｍＭのＮＡＤＨ（シグマアルドリッチ、Ｎ８１２９）を含む基質溶液を１８μＬ／ウェル加えた。
さらに、５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２７ｍＭのＤＴＴ（ナカライテスク、１４１２８−０４）、０．２ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン、０．１７ｍｇ／ｍＬのグリコーゲンシンターゼ、１．５μＬのピルベートキナーゼ／ラクテートデヒドロゲナーゼ溶液（シグマアルドリッチ、Ｐ０２９４）を含む酵素溶液を１８μＬ／ウェル加え、反応溶液とした。反応溶液を３７℃で２５分間インキュベートした後、Ｂｅｎｃｈｍａｒｋ  Ｐｌｕｓ（バイオラッドラボラトリーズ）を用いて３４０ｎｍの吸光度を測定した。
【００６０】
被検化合物の活性の算出は次の方法で行った。化合物を含まずＤＭＳＯのみを含む反応溶液の３４０ｎｍの吸光度から、化合物およびＤＭＳＯを含む反応溶液の３４０ｎｍの吸光度を引くことによって、吸光度変化（ΔＡ３４０）を算出した。ＷＯ／２０１１／０５８１５４実施例１化合物を最終濃度で１０μＭ含む反応溶液のΔＡ３４０を１００％とし、被検化合物の各種濃度における相対活性（％）を算出した。５０％の相対活性の上昇を起こす化合物濃度をＥＣ５０とし、ＸＬｆｉｔ（ｉｄｂｓ）により算出した。結果を表２に示す。
【００６１】
表２
2016130214.tif 000018
【００６２】
試験例２  ＰＰＡＲ−α活性測定
ＰＰＡＲ−αの活性測定は、既報（ＴＨＥ  ＪＯＵＮＡＬ  ＯＦ  ＢＩＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ  Ｖｏｌ．２７０，Ｎｏ．２２，：１２９５３-１２９５６,１９９５）に準じて行った。
ＰＰＡＲ−αの活性測定に用いたプラスミドは次のように構築した。ルシフェラーゼ発現プラスミド（ＵＡＳｘ５−ＴＫ−Ｌｕｃ）は、ｐＴＡＬ- Ｌｕｃ（タカラバイオ、６２５２−１）のチミジンキナーゼプロモーター上流に、酵母のＧＡＬ４結合配列が５個タンデムに連結した配列を導入したものを用いた。ＰＰＡＲ-α受容体発現プラスミド（ｈＧＲ−ＧＡＬ４−ｈＰＰＡＲα）は、ｐＥｘｃｈａｎｇｅ−１  Ｃｏｒｅ  Ｖｅｃｔｏｒ（インビトロジェン、２１１１７６）のＮｏｔ ＩサイトとＳａｌ ＩサイトにヒトＧＲのＮ末領域（１−７６ａａ）、酵母のＧＡＬ４ＤＮＡ結合領域（１−１４７ａａ）及びＰＰＡＲαのリガンド結合領域（１６７− ４６８ａａ）を導入したものを用いた。
【００６３】
レポーターアッセイはアフリカミドリザル腎由来のＣＶ−１細胞を用いて、次の方法で行った。ＣＶ−１細胞を、１０％ＦＢＳを含むＤＭＥＭ（ナカライテスク、０８４５８７４）培地を用い、２ｘ１０4細胞／ウェルとなるように９６ウエルプレート（サーモフィッシャーサイエンティフィック、４９３８）に播種し、３７℃、５％ＣＯ2条件下で２時間培養した後、プラスミドのトランスフェクションを行った。トランスフェクションはＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ  ＬＴＸ（インビトロジェン、１５３３８−１００）を用い、添付のマニュアルに準じて行った。プラスミド溶液は、ルシフェラーゼ発現プラスミドおよびＰＰＡＲ-α受容体発現プラスミドの混合溶液をＯＰＴＩ−ＭＥＭ Ｉ（インビトロジェン、１１０５８−０２１）に添加して調製した。トランスフェクションを行った後、被検化合物を添加し、３７℃、５％ＣＯ2存在下で１８〜２０時間培養した。培養終了後に、Ｂｒｉｇｈｔ−Ｇｌｏ（プロメガ、Ｅ２６２０）を用い、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｓｏｒ  ＪＮＲ（ＡＴＴＯ）によりルシフェラーゼ活性を測定した。
被検化合物のＰＰＡＲ−α誘導倍率は次の方法で算出した。被検化合物の３μＭ、１０μＭ、３０μＭ、１００μＭにおけるＰＰＡＲ−α活性の中の最大値をA、WO／２０１１／０５８１５４の化合物の１００μＭにおけるＰＰＡＲ−α活性をBとしたときの、１００（A／B）をＰＰＡＲ−α相対誘導倍率（％）とした。結果を表３に示す。
【００６４】
表３
2016130214.tif 000019