(57)【要約】【課題】  効果が高く且つ安全な終末糖化物質の産生を阻害する剤の提供。【解決手段】  オウレン抽出物、オウバク抽出物及びサンシシ抽出物から選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有するＡＧＥｓ産生阻害剤。さらには、オウレン、オウバク、サンシシ及びオウゴンの混合物の抽出物やオウレン、オウバク、サンシシ、オウゴン、トウキ、シャクヤク、センキュウ及びジオウの混合物の抽出物が、相乗効果によりさらに優れたＡＧＥｓ産生阻害効果を示す。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オウレン抽出物、オウバク抽出物及びサンシシ抽出物からなる群から選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項２】
オウレン、オウバク、サンシシ及びオウゴンの混合物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項３】
オウレン、オウバク、サンシシ、オウゴン、トウキ、シャクヤク、センキュウ及びジオウの混合物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項４】
抽出溶媒が、水又はアルコール類又はそれらの混合液であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項５】
抽出溶媒が、水又はエタノール水溶液であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項６】
抽出溶媒が、１０〜９５％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項７】
抽出溶媒が、４０〜９５％エタノール水溶液であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のＡＧＥｓ産生阻害剤。
【請求項８】
オウレン、オウバク及びサンシシからなる群から選ばれる１種又は２種以上の植物から、水又はアルコール類又はそれらの混合液で抽出物を得ることを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤の製造方法。
【請求項９】
オウレン、オウバク、サンシシ及びオウゴンの混合物から、水又はアルコール類又はそれらの混合液で抽出物を得ることを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤の製造方法。
【請求項１０】
オウレン、オウバク、サンシシ、オウゴン、トウキ、シャクヤク、センキュウ及びジオウの混合物から、水又はアルコール類又はそれらの混合液で抽出物を得ることを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、終末糖化物質（Advanced Glycation End Products：ＡＧＥｓ）産生阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
人の皮膚は、健常な状態であるときは適度の弾力性を有し、通常は特別なケアを必要としないが、さまざまな環境要因（例えば、温度変化、湿度変化、光、水との接触等） や、洗剤等との接触、あるいは老化によって、しばしば変化・支障をきたすことがある。すなわち老化により皮膚機能が低下した皮膚は、乾燥し、硬く、光沢や弾力性も失われ、カサカサとした状態となる。老化の進行には様々な要因が関与しているが、その要因の１つに非酵素的蛋白糖化反応が挙げられている。これは、還元糖とアミノ酸又は蛋白質の結合により、蛋白質本来の機能に障害をもたらす反応であり、グリケーション（Glycation：糖化反応）と呼ばれている。生体内の種々の生理機能は蛋白質が司っており、糖化された蛋白質は本来の機能を発揮できず、各種の機能障害をもたらすと考えられる。
このグリケーションの初期段階反応物質は、アマドリ化合物と呼ばれる蛋白質と糖の結合物であり、更にこの反応は、脱水、重合を経て蛍光性、褐色化、分子内及び分子間架橋形成を特徴とする終末糖化物質（Advanced Glycation End Products、以下「ＡＧＥｓ」という）になる。
【０００３】
形成されたＡＧＥｓは、蛍光、褐色、架橋形成などを特徴とする物質であり、この現象は、皮膚や生体内の様々な個所で起こる。コラーゲンやエラスチンなどの代謝が遅いタンパク質などがターゲットになり易く、特にエラスチンのようにアミノ基を側鎖に多くもつ物質では顕著である。
ＡＧＥｓの生成により、これらのタンパク質は架橋されて変性していくことから、弾力、ハリなどが失わるシワ形成の原因と考えられている。
つまり、皮膚でＡＧＥｓが生成され蓄積されていくことによって、慢性的に弾力性、ハリがなくなるのである。
【０００４】
さらに、ＡＧＥｓが褐色であることから、皮膚全体の色が褐変化、あるいは黄色化し、慢性的な肌のくすみ、シミにつながる機構が考えられる。
ＡＧＥｓの蓄積に対し、その元となるグリケーションを阻害する薬剤としてアミノグアニジン（Aminoguanidine）が知られている。この化合物は、もともと糖尿病合併症の治療薬として開発が進められ、糖尿病合併症である網膜症、腎障害、神経障害に有効であることがモデル動物で確認されている。しかし、アミノグアニジン服用により種々の副作用が報告されている。
従って、重篤な副作用をもたらさない安全で効果の高いＡＧＥｓの産生を抑制する物質の研究が重要となっている。より高い安全性を図るためには、化学合成よりも天然物、特に植物由来の成分である方が有利である。
【０００５】
植物に由来するＡＧＥｓ産生阻害（抑制）剤の検討は従来からなされている。
例えば、特許文献１において、ボタン属植物抽出物、タツナミソウ属植物抽出物、セイヨウヤマハッカ属植物抽出物、ヒマワリ属植物抽出物、アロエ属植物抽出物、アマドコロ属植物抽出物、アマ属植物抽出物、バラ属植物抽出物、シナノキ属植物抽出物、カンアオイ属植物抽出物、ドクダミ属植物抽出物、カントウ属植物抽出物、ワレモコウ属植物抽出物、ハッカ属植物抽出物、ニワトコ属植物抽出物から選ばれるアドバンスド・グリケーション・エンド・プロダクツ生成抑制剤が提案されている。
【０００６】
また、特許文献２において、西洋バラ、ハイブリッドローズ、エイジツ、ブドウ葉、カキ葉、リンゴ葉、マリーゴールド花、モクレン葉の抽出物の抽出物を有効成分とするメイラード反応阻害剤が提案されている。
【０００７】
また、特許文献３において、アグリモニー、アシュワガンダ、アニス、アマチャヅル、甘葉懸鈎子、銀杏、ウイキョウ、ウイッチヘーゼル、ウコン、エキナセア、エゾウコギ、エルダー、エルバ・マテ、オリーブ、オレガノ、オレンジ、柿、カキドオシ、カミツレ、ガラナ、含羞草、菊、ギムネマ、キャッツクロー、キャットニップ、キラウェイ、キンギンカ、グァバ、クコヨウ、くまざさ、クミクスチン、黒大豆、くわ、シナモン、ケツメイシ、ゴーヤ、コーラナッツ、ゴカヒ、ゴツコラ、コリアンダー、コンフリー、サキシマスオウ、サフラワー、サラシア・オブロンガ、サンザシ、サンシチニンジン、しそ、ジュウヤク、ジュニパーベリー、ジンジャー、杉、スギナ、ステビア、スペアミント、セイジ、セイボリー、セイヨウサンザシ、仙査、タイム、タヒボ、ダンデライオン、チャービル、チャノキ、チャボトケイソウ、チョウジ、デイジー、ディル、トチュウ、ニクズク、南姜、ネトル、白猪母邱、白花蛇舌草、ハゴロモソウ、バジル、ハス、半枝連、ヒース、ピーチ、ヒソップ、びわ、フィーバーフュー、フクギ、藤、プランタゴ・サイリュウム、ブルーベリー、ブルーマロウ、ペニーロイヤル、ベニバナ、ペパーミント、ホップ、ポリジ、ポンドアップル、マシュマロー、マジョラム、マリーゴールド、マレイン、マロウスモール、マロウブルー、ミフクラギ、ミルクシスル、メデゥスイート、モッカ、ヤエヤマ アオキ、ヤクルマギク、ヤローフラワー、ユーカリ、ヨクイニン、ヨモギ、ラズベリー、ラベンダー、リンデン、ルイボス、レモングラス、レモンタイム、レモンバーベナ、レモンバーム、ローズヒップ、ローズピンクバッツ、ローズマリー、ローズレッド、ローレル、羅布麻、ワイルドストロベリーより選ばれる植物抽出物を含有するグリケーション阻害剤が提案されている。
【０００８】
さらに、特許文献４では、丹参、芍薬、香附子、木香、紅花、センキュウを構成生薬とする冠元顆粒を有効成分とする最終糖化産物生成抑制剤が提案されている。
一方、皮膚のケアに関しては、オウレン、オウバク、オウゴンおよびサンシシの抽出物からなる抗酸化性植物抽出物が、肌の老化防止等に有用であると提案されている（特許文献５）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特開２００３−２１２７４９号公報
【特許文献２】特開２００６−２７３８１１号公報
【特許文献３】特開２０１０−２４８２１２号公報
【特許文献４】特開２０１０−１８０２５０号公報
【特許文献５】特開２００８−９４７３６号公報
【特許文献６】特開２００８−９４７３９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、効果が高く且つ皮膚に刺激のない安全なＡＧＥｓ産生阻害剤の提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、本発明者らは種々多数の植物抽出物及びそれらの混合物を検索した結果、肌のキメ改善剤として提案されている（特許文献６）、漢方のウンセイイン（温清飲）の処方を構成する一群の生薬植物である、トウキ、シャクヤク、センキュウ、ジオウ、オウレン、オウバク、オウゴン及びサンシシの抽出物にＡＧＥｓ産生阻害作用
を見出し、特に、オウバク、オウレン、サンシシを所定濃度のエタノール水溶液で抽出して得られる抽出物に優れたＡＧＥｓ産生阻害効果を見出し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
すなわち本発明は、以下の通りである。
（１）オウレン抽出物、オウバク抽出物及びサンシシ抽出物からなる群から選ばれる１種又は２種以上を有効成分として含有することを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤。
（２）オウレン、オウバク、サンシシ及びオウゴンの混合物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤。
（３）オウレン、オウバク、サンシシ、オウゴン、トウキ、シャクヤク、センキュウ及びジオウの混合物の抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤。
（４）抽出溶媒が、水又はアルコール類又はそれらの混合液であることを特徴とする上記のＡＧＥｓ産生阻害剤。
【００１３】
（５）抽出溶媒が、水又はエタノール水溶液であることを特徴とする上記のＡＧＥｓ産生阻害剤。
（６）抽出溶媒が、１０〜９５％エタノール水溶液であることを特徴とする上記のＡＧＥｓ産生阻害剤。
（７）抽出溶媒が、４０〜９５％エタノール水溶液であることを特徴とする上記のＡＧＥｓ産生阻害剤。
【００１４】
（８）オウレン、オウバク及びサンシシからなる群から選ばれる１種又は２種以上の植物から、水又はアルコール類又はそれらの混合液で抽出物を得ることを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤の製造方法。
（９）オウレン、オウバク、サンシシ及びオウゴンの混合物から、水又はアルコール類又はそれらの混合液で抽出物を得ることを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤の製造方法。
（１０）オウレン、オウバク、サンシシ、オウゴン、トウキ、シャクヤク、センキュウ及びジオウの混合物から、水又はアルコール類又はそれらの混合液で抽出物を得ることを特徴とするＡＧＥｓ産生阻害剤の製造方法。
【発明の効果】
【００１５】
本発明のＡＧＥｓ産生抑制剤は、優れたＡＧＥｓ産生抑制効果を有するとともに、皮膚刺激性のない安全な素材であるため、各種皮膚化粧料、浴用剤等に用いることにより、皮膚老化予防を図ることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明で抽出の対象となる植物は、以下に示す８種類であり、何れも、葉、茎、根、花、種子あるいは全草を使用することができる。また、下記の植物を起源とする生薬を利用してもよい。
（１）オウバク  Phellodendron amurense Ruprecht（ミカン科）
（２）オウレン  Coptis japonica Makino（キンポウゲ科）
（３）サンシシ  Gardenia jasminoides Elliｓ（アカネ科）
（４）オウゴンScutellaria baicalensis Georgi（シソ科）
（５）トウキ  Angelica acutiloba Kitagawa（セリ科）
（６）センキュウ  Cnidium officinale Makino（セリ科）
（７）シャクヤク  Paeonia lactiflora Pallas（ボタン科）
（８）ジオウ  Rehmannia glutinosa Liboschitz var. purpurea Makino又は Rehmannia glutinosa Liboschitz（ゴマノハグサ科）
上記の各生薬の種類はこれに限定されることなく変種、同属種、その他近縁類も使用できる。
【００１７】
ウンセイインは、トウキ、シャクヤク、センキュウ、ジオウ、オウレン、オウバク、オウゴン、サンシシの８種を配合し、煎じたもので、皮膚の色つやが悪く、のぼせる人に対してその煎液を内服すると、月経不順、月経困難、血の道症、更年期障害、神経症に効果があるとされている。
【００１８】
ウンセイインは、患部が乾燥して赤みを帯び、灼熱感があり、かゆみがひどく、ひっかくと粉がこぼれるようなものの、湿疹や皮膚炎、出血症に内服により効果があるとされている（糸川秀治、大本太一、永井正博、古谷力編「天然物医薬品学」、朝倉書店、１９８７年４月１０日版；及び、大塚敬節、矢数道明、清水藤太郎著「漢方診療の実際」、南山堂、昭和３３年２月１５日版）。
しかしながら、ウンセイインの構成植物自体には抗老化効果は知られておらず、ましてやＡＧＥｓ産生阻害効果は知られていなかった。
【００１９】
本発明では、オウレン、オウバク、サンシシの植物から適当な溶媒を使用して有効成分を抽出する。
各植物の抽出物はそのまま用いることができるが、２種又は３種の抽出物を適宜組み合わせた混合物として用いることもできる。
一方、黄連解毒湯（オウレンゲドクトウ）と呼ばれる漢方の組成は、上記のオウレン、オウバク及びサンシシの他にオウゴンを含むものであるが、これら合計４種のすべてを配合した後抽出したものは、経時による澱の発生が少ない点で有利である。
また、同様に、上述の温清飲（ウンセイイン）の組成は、オウレン、オウバク及びサンシシの他に、オウゴン、トウキ、シャクヤク、センキュウ及びジオウを含むものであるが、これら合計８種のすべてを配合した後抽出したものは、経時による澱の発生が少ない点で有利である。
【００２０】
抽出溶媒は、水、アルコール類（例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノールなどの低級アルコール、あるいは1,3-ブチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、1,2-ペンタンジオール、1,3-プロパンジオールなどの多価アルコール）などを、単独或いは２種類以上の任意の混液として使用することができる。
【００２１】
抽出溶媒の中でも、本発明では水又はエタノール水溶液を用いることが、安全面から見て好ましく、効果の点からはエタノール水溶液を用いることが好ましく、通常は１０〜９５％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）、より好ましくは３０〜９５％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）、さらに好ましくは４０〜９５％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）、殊更好ましくは５０〜７５％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）で用いられる。
【００２２】
抽出溶媒としては、当該植物の乾燥体を基準として、通常は１〜５００倍量、好ましくは５〜２００倍量、より好ましくは１０〜１００倍量、最も好ましくは２０〜７０倍量用いられる。用いる溶媒量が１倍量未満の場合は、抽出後の固液分離が困難になる場合があり、溶媒量が５００倍量を超えた場合は、使用目的に応じては濃縮する必要が出てくることがある。
【００２３】
抽出温度は、通常は０〜２００℃、好ましくは３０〜１５０℃、より好ましくは４０〜１００℃、さらに好ましくは５０〜９０℃で行われる。抽出溶媒が水又はエタノール水溶液の場合は、その沸騰温度で抽出することが好適である。
【００２４】
抽出時間は、抽出する温度にも依存するが、通常は０.１〜８時間、好ましくは０.２〜４時間、より好ましくは０.５〜２時間で行われる。抽出時間が０.１時間未満の場合は抽
出が十分行われていない可能性があり、抽出時間が８時間を超える場合は、経済的でない場合がある。
【００２５】
本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤は、各種化粧料組成物、浴用剤組成物等に添加し外用剤として用いることができる。
本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を各種化粧料組成物、浴用剤組成物、洗剤組成物等に用いるときは、それぞれ液状、乳液状、ベースト状、ゲル状、パウダー状（粉末状）、顆粒状、ペレット状、スティック状、固形状等の何れの形態として提供されてもよい。
【００２６】
本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤が用いられる化粧料組成物としては、化粧水（ローション）、乳液、クリーム、オイル、軟膏、パック、リップ、口紅、ファンデーション、アイライナー、頬紅、マスカラ、アイシャドウー、マニキュア・ペディキュア、爪被覆剤、爪被覆除去剤、ひげ剃り用剤、シャンプー、リンス、ヘアトリートメント、ヘアトニック、ヘアスプレー、ヘアクリーム、ヘアローション、整髪料、育毛料、パーマネント液、染毛料、ハンドソープ、ボディーソープ、歯磨き剤、洗口料、洗顔料・石鹸類等が上げられる。
【００２７】
本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤が用いられる浴用剤組成物は、入浴時、浴湯に投じて使用するもので、液状、粉末状、顆粒状、固形状など性状は何れであってもよい。粉末、顆粒又は固形状である場合は、本発明の植物抽出液を乾燥せず、液状のままで吹きつけて乾燥することにより製造することも可能である。
その他、人の皮膚に直接接触する衛生用品、ウエットタイプのティシュペーパー、不織布、紙タオル、コットンなどに含浸させておくこともできる。
【００２８】
本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤が用いられる化粧料組成物においては、ＡＧＥｓ産生阻害剤は、乾燥固形分として０.００１〜５質量％程度、好ましくは０.０１〜１質量％程度含有していると使用性が良く、良好な効果が得られる。
また、浴用剤組成物においては、０.００１〜９９質量％で用いることができ、好ましくは０.１〜３０質量％含有していると使用性が良く、良好な結果が得られる。実際に使用するときの浴湯中における濃度が０.００００１〜０.０１質量％、好ましくは０.０００５〜０.００５質量％程度となるように１回分使用量を設定するとよい。
【実施例】
【００２９】
以下に、製造例、試験例を挙げて説明するが、本発明がこれに限定されるものではない。
【００３０】
実施例１（製造例１）
オウバク（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに対して５０％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）４,８００ｇを加え、撹拌環流下１時間抽出し、冷却後セライト濾過を行うことにより、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として３,９５０ｇ得た（乾燥固形分０.４１％）。
【００３１】
実施例２（製造例２）
抽出溶媒を３０％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）に変更した以外は、実施例１と同様に処理を行い、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を得た。
【００３２】
実施例３（製造例３）
抽出溶媒を７５％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）に変更した以外は、実施例１と同様に処理を行い、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を得た。
【００３３】
実施例４（製造例４）
抽出溶媒を９５％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）に変更した以外は、実施例１と同様に処理を行い、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を得た。
【００３４】
実施例５（製造例５）
オウレン（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに対して５０％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）４,０００ｇを加え、撹拌環流下１時間抽出し、冷却後セライト濾過を行うことにより、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として３,９５０ｇ得た（乾燥固形分０.７３％）。
【００３５】
実施例６（製造例６）
サンシシ（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに対して５０％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）４,８００ｇを加え、撹拌環流下１時間抽出し、冷却後セライト濾過を行うことにより、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として３,９５０ｇ得た（乾燥固形分０.９６％）。
【００３６】
実施例７（製造例７）
オウレンゲドクトウの構成生薬である、オウレン１.５ｇ、オウバク１.５ｇ、オウゴン３ｇ及びサンシシ２ｇを混合したものに対して、水５００ｍｌを添加し、１時間還流抽出した。
次いで、これを濾過して抽出液を得、さらに濃縮乾燥することにより、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を黄色の粉末として５ｇ得た。
【００３７】
実施例８（製造例８）
ウンセイインの構成生薬である、トウキ４ｇ、シャクヤク３ｇ、センキュウ３ｇ、ジオウ４ｇ、オウレン１.５ｇ、オウバク１.５ｇ、オウゴン３ｇ及びサンシシ２ｇを混合したものに対して、水５００ｍｌを添加し、１時間還流抽出した。
次いで、これを濾過して抽出液を得、さらに乾燥することにより、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤を黄褐色粉末として９ｇ得た。
【００３８】
比較例１（製造例９）
オウゴン（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに対して５０％エタノール水溶液（Ｖ／Ｖ）４,８００ｇを加え、撹拌環流下１時間抽出し、冷却後セライト濾過を行うことにより、比較例のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として３,９５０ｇ得た（乾燥固形分１.３１％）。
【００３９】
比較例２（製造例１０）
抽出生薬をトウキ（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに変更した以外は、比較例１と同様に処理を行い、比較例のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として得た。
【００４０】
比較例３（製造例１１）
抽出生薬をシャクヤク（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに変更した以外は、比較例１と同様に処理を行い、比較例のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として得た。
【００４１】
比較例４（製造例１２）
抽出生薬をセンキュウ（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに変更した以外は、比較例１と同様に処理を行い、比較例のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として得た。
【００４２】
比較例５（製造例１３）
抽出生薬をジオウ（日本薬局方）粉砕品１６０ｇに変更した以外は、比較例１と同様に処理を行い、比較例のＡＧＥｓ産生阻害剤を暗褐色の抽出液として得た。
【００４３】
試験例１（安全性試験−皮膚刺激性の評価）
製造例１〜１３で得られた抽出物について、皮膚刺激性を評価するため、健常人（２４〜５８歳男女）４５人のモニターによるパッチテストを行った。
〔試料の調製〕
製造例１〜１３で得た抽出物を精製水で固形分濃度５.０％に希釈した試料を用いて試験を行った。
【００４４】
〔試験の方法〕
各試料について、皮膚感作テスト用テープ（大正製薬製の「フィンチャンバー」）を用いて、各モニターの上腕屈側部と前膊内側の２箇所に２４時間、閉塞貼付を行い評価した。
すなわち、試料が蒸発しない状態で貼付後２４時間経過した時点で試料を除去、その１時間後それぞれ皮膚の状態を観察して評価を行い、平均値にして表１に示した。
【００４５】
〔評価基準〕
評価は以下の基準で紅斑（皮膚のかぶれ）の有無を観察した。
（＋）陽  性：紅斑を認めるもの
（±）疑陽性：軽微の紅斑あるいはその疑いがあるもの
（−）陰  性：紅斑が全く認められないもの
とした。
【００４６】
【表１】
2016210729.tif 000002
【００４７】
表１より、製造例１〜１３の抽出物はいずれも皮膚刺激性が認められなかった。
【００４８】
試験例２（ＡＧＥｓ産生阻害効果）
以下の方法で生成したＡＧＥｓの測定を行い、製造例で得られた抽出物のＡＧＥｓ産生阻害効果を評価した。
【００４９】
〔検体の調製〕
製造例３〜１３（実施例３〜８、比較例１〜５）で得られた抽出物を用い、乾燥乾固したものを蒸留水に溶解して１％溶液とした。
なお、比較のため、公知のＡＧＥｓ産生阻害剤であるアミノグアニジンの１％水溶液を陽性対照とした。
【００５０】
〔試験の手順〕
０.０５Ｍリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７.４）を５００μｌ、蒸留水を１００μｌ、タンパク質として０.０４％ヒト血清アルブミン水溶液２００μｌ、還元糖として２Ｍグルコース水溶液１００μｌ、検体１００μｌを混合し、６０℃のインキュベータ中に４０時間反応させ、反応後、蛍光マイクロプレートリーダー（励起波長３７０ｎｍ、蛍光波長４４０ｎｍ）にて吸光度を測定した（以下、糖（＋）・サンプルという）。
対照として、グルコースを含有しないものを測定した（以下、糖(−)・サンプルという）。
ブランクとして、検体及びヒト血清アルブミンを含有しないもの（以下、糖(＋)・蒸留水という）、検体、ヒト血清アルブミン及びグルコースを含有しないもの（以下、糖(−)・蒸留水という）を測定した。
ＡＧＥｓの生成率は、以下の式により算出した。結果を表２に示す。
【００５１】
【数１】
2016210729.tif 000003
【００５２】
【表２】
2016210729.tif 000004
【００５３】
表２の結果から、本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤は、既知の合成ＡＧＥｓ産生阻害剤であるアミノグアニジンに匹敵する効果を有し、表１に記載されているように皮膚に刺激をもたらさない有用な天然物由来のＡＧＥｓ産生阻害剤であるといえる。
【産業上の利用可能性】
【００５４】
本発明のＡＧＥｓ産生阻害剤は、皮膚に刺激をもたらさない安全な素材であり、かつ、優れたＡＧＥｓ産生阻害効果を有する有用な素材である。特に、皮膚外用剤に用いることにより、抗老化作用をもたらし、若々しい肌を保つことが期待される。