(57)【要約】【課題】本発明は、蛍光が少ないため共焦点顕微鏡で使用可能な生体観察用プレートを提供するとともに、通気性の良い材料であるシリコーン樹脂を、接着剤を用いることなく樹脂基板の底面に接合して本発明の生体観察用プレートの製造を可能ならしめる方法を提供するものである。【解決手段】樹脂基板と、当該樹脂基板に設けられた観察部とからなり、少なくとも前記観察部は低蛍光樹脂で形成するとともに、前記観察部の肉厚を０．０２〜０．５ｍｍとした。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
樹脂基板と、
当該樹脂基板に設けられた観察部とからなり、
少なくとも前記観察部は低蛍光樹脂で形成されるとともに、
前記観察部はその肉厚が０．０２〜０．５ｍｍであることを特徴とする生体観察用プレート。
【請求項２】
前記樹脂基板には開口が形成されており、
前記開口を当該樹脂基板に接合された透明フィルムで覆うことにより前記観察部を形成するとともに、
前記透明フィルムは低蛍光樹脂で形成したことを特徴とする請求項１に記載の生体観察用プレート。
【請求項３】
前記樹脂基板と接合された前記透明フィルムとの間には、二酸化ケイ素またはケイ酸ナトリウムを主成分とするシリカ層またはケイ酸ガラス層が形成されており、
前記透明フィルムはポリジメチルシロキサンまたはポリジエチルシロキサンまたはこれらの混合物を含むシリコーン樹脂で形成されていることを特徴とする請求項２に記載の生体観察用プレート。
【請求項４】
シリコンアルコキシドもしくは二酸化ケイ素超微粒子またはケイ酸ナトリウムガラス超微粒子を溶剤中に分散させたゾルを樹脂基板に塗布する第一の工程、
前記ゾルを自然乾燥または加熱乾燥してシリカ層またはケイ酸ガラス層を形成する第二の工程、
前記樹脂基板上に形成されたシリカ層またはケイ酸ガラス層に酸素プラズマを照射して活性化する第三の工程、
シリコーン樹脂フィルムの一面に酸素プラズマを照射して活性化する第四の工程、
前記酸素プラズマを照射したシリカ層またはケイ酸ガラス層と前記酸素プラズマを照射したシリコーン樹脂フィルムの一面とを互いに対向させて密接押圧して接合する第五の工程とからなる生体観察用プレートの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、顕微鏡などの光学観察機器に用いられるプレートであって、液体中の生体を観察するときに発生する蛍光が少ない生体観察用プレートに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、顕微鏡などの光学観察機器に用いられる観察用プレートにおいては、例えば７６ｍｍ×２６ｍｍ×１ｍｍ程度の大きさのスライドガラスと呼ばれる透明な板ガラスの上に観察試料を置いて、この試料に照射された透過光または反射光を拡大結像して試料観察が行われるのが通常であった。このとき、観察される試料が液体中で流動するような試料である場合には、その試料の動きを制限するために、例えば１８ｍｍ×１８ｍｍ×０．１５ｍｍ程度の極めて薄いカバーガラスと呼ばれる透明なガラス板を試料の上に置いて観察する場合が多い。そのため、観察される試料は、スライドガラスとカバーガラスとで挟持されて実質的に固定した状態で観察されることになる。
【０００３】
このようにスライドガラスとカバーガラスとで試料を狭持して観察することによって、共焦点顕微鏡などの高倍率顕微鏡観察で用いられている青色レーザを用いても蛍光をほとんど発生させることなく試料観察をすることができる。
【０００４】
また、スライドガラス表面に熱硬化性インクでパターンを形成して、試料分類しながら観察することができるものも用いられている（特許文献３）。
【０００５】
青色光または近紫外光で試料を励起して観察する蛍光顕微鏡を用いる場合も、スライドガラスとカバーガラスとで試料を狭持することによってガラスからの蛍光が少ないために高感度の蛍光観察が可能となる。
【０００６】
一方、生体を生きたまま保持して観察するためのスライドガラスとしては、カバーガラスの周縁部にシーリング剤を形成したものを生体試料にかぶせることによって、生体試料とカバーガラスとの間に空隙を形成して、生体を破壊することなく生きたまま観察できるようなものも提案されている（特許文献１）。
【０００７】
また、培養細胞を自動的に観察するためのものとしては、マイクロプレートが知られている。このマイクロプレートは、装置で自動的に観察できるように外形寸法が規格化されており、その寸法領域内に９６穴または３８４穴のウェルが配列されている。このウェル中には、細胞を培養するのに十分な量の培養液を入れられるようになっており、細胞培養のために温度を例えば３７℃に維持した状態で保管されている。このようなマイクロプレートで培養されている細胞を観察する場合には、培養液がこぼれないように下面から顕微鏡観察するのが通常である。特に、高倍率の顕微鏡で観察できるように、フィルムを接着することによりウェルの底面を形成している例も見られる（特許文献２）。また、フィルムの代わりに、薄いガラスプレートを接着剤で貼り付けたものも存在している。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００４−２２９５４８号公報
【特許文献２】特開２００８−２０２３０号公報
【特許文献３】特開平０６−００３２３１号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
しかしながら従来のスライドガラスを用いたものは、破損しやすく焼却廃棄することができない上に、スライドガラスそのものを観察に適した形状に加工するのが困難であるという課題を有していた。
【００１０】
一方、特許文献１に示すような従来のプレートにおいては、生体をカバーガラスで形成された空隙に閉じ込めて観察しようとする場合、その空隙内に充分な量の培養液を充填することができないために、長時間の観察が困難であるという課題を有していた。
【００１１】
一方、マイクロプレートなどの場合には、充分な培養液中で細胞を観察することができ、また薄いフィルムを通して高倍率の観察をすることができるが、そのフィルムとして通気性が充分とれるものがないために、長時間の観察に使用できないという課題を有していた。
【００１２】
また、フィルムとして樹脂フィルムを用いる場合には、青色光や近紫外光で試料を観察するときに、この樹脂フィルムから蛍光が発生するため、特に共焦点顕微鏡などを用いる場合は高感度の観察ができないという課題を有していた。
【００１３】
さらにまた、通気性が良く低蛍光材料であるポリジメチルシロキサンは、接着剤を用いることができないために、プラスチック容器の底面に接合して使用することができないという課題を有していた。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
上記の目的を達成するために、本発明の生体観察用プレートは、樹脂基板と、当該樹脂基板に設けられた観察部とからなり、少なくとも前記観察部は低蛍光樹脂で形成されるとともに、前記観察部はその肉厚が０．０２〜０．５ｍｍである構成とすることによって、青色光や近紫外光などを用いて試料観察を行っても蛍光を極少量に抑えることができて高感度の観察ができるようになり、上記課題を解決することができた。
【００１５】
また、本発明の生体観察用プレートにおいて、前記樹脂基板には開口が形成されており、前記開口を当該樹脂基板に接合された透明フィルムで覆うことにより前記観察部を形成するとともに、前記透明フィルムは低蛍光樹脂で形成することによって、蛍光を発生させないばかりでなく、充分な量の溶液中に試料を入れた状態で裏面から観察することが可能となり上記課題を解決することができた。
【００１６】
さらに本発明の生体観察用プレートにおいて、前記樹脂基板と前記接合された透明フィルムとの間には、二酸化ケイ素またはケイ酸ナトリウムを主成分とするシリカ層またはケイ酸ガラス層が形成されており、前記透明フィルムはポリジメチルシロキサンまたはポリジエチルシロキサンまたはこれらの混合物を含むシリコーン樹脂で形成されている構成とすることによって、蛍光発生量が極めて少ない上に酸素透過度の大きなシリコーン樹脂を樹脂基板と組み合わせて用いることが可能となり上記課題を解決することができた。
【００１７】
そして、シリコンアルコキシドもしくは二酸化ケイ素超微粒子またはケイ酸ナトリウムガラス超微粒子を溶剤中に分散させたゾルを樹脂基板に塗布する第一の工程、前記ゾルを自然乾燥または加熱乾燥してシリカ層またはケイ酸ガラス層を形成する第二の工程、前記樹脂基板上に形成されたシリカ層またはケイ酸ガラス層に酸素プラズマを照射して活性化する第三の工程、シリコーン樹脂フィルムの一面に酸素プラズマを照射して活性化する第四の工程、前記酸素プラズマを照射したシリカ層またはケイ酸ガラス層と前記酸素プラズマを照射したシリコーン樹脂フィルムの一面とを互いに対向させて密接押圧して接合する第五の工程を用いることによって、従来困難であったシリコーン樹脂と樹脂基板とを接合させることが可能となり、上記課題を解決することができた。
【発明の効果】
【００１８】
本発明の生体観察用プレートにおいては、充分な量の培養液の中に生体を入れて観察ができるために長時間の観察を行うことができるという効果を有する。
【００１９】
また、本発明の生体観察用プレートは、観察部が０．０２〜０．５ｍｍという透明フィルムで形成されているために、焦点深度の浅い光学顕微鏡で高倍率の観察が可能であるという効果を有する。
【００２０】
さらに、透明フィルムとして酸素透過性に優れたポリジメチルシロキサンなどのシリコーン樹脂を材料として用いることができるために、これまで以上に長時間の生体観察や細胞培養ができるという効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図２】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図３】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図４】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図５】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図６】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図７】本発明の生体観察用プレートの製造方法に関する工程の１実施形態を示す説明図であり、（ａ）は第一の工程、（ｂ）は第二の工程、（ｃ）は第三の工程、（ｄ）は第四の工程、（ｅ）は第五の工程である。
【図８】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。
【図９】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図である。
【図１０】本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図である。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
以下、図面を参照して本発明の生体観察用プレートに係わる実施形態を説明する。
図１、図２、図３および図４は、本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。これらの図において、１は低蛍光樹脂基板、２は観察部、３は開口、４は斜面、５は樹脂基板、６は低蛍光樹脂フィルム、７はシリコーン樹脂フィルムである。
【００２３】
図１、図２、および図３においては、樹脂基板５の中央部に開口３が形成されており、その開口３が形成されているところが観察部２となっている。特に、図１においては、樹脂基板５として低蛍光樹脂基板１が用いられている。このように低蛍光樹脂基板１を用いることによって、観察部２と低蛍光樹脂基板１とを一体に成形でき、安定した品質が確保できるとともに安価に本発明の生体観察用プレートを作製することができる。
【００２４】
図１に示す実施形態においては、低蛍光樹脂材料を用いて射出成形で観察部２と低蛍光樹脂基板１とを一体に成形している。低蛍光樹脂としては、環状オレフィン樹脂やシリコーン樹脂を用いることができる。環状オレフィン樹脂としては、環状オレフィンポリマーや環状オレフィンコポリマーのいずれも使用することができる。これらの樹脂は、いずれも成形時の材料の流れが良いために、観察部２の肉厚として０．０２〜０．５ｍｍ程度を実現することが可能となる。
【００２５】
これら低蛍光材料は、アクリル、ポリカーボネート、あるいはポリスチレンに比べて、発生する蛍光量が約１／１０〜１／３程度と小さいために、青色レーザを用いた共焦点顕微鏡などによる観察を行っても、蛍光によるノイズを少なくすることができる。
【００２６】
また、観察部２の肉厚が０．０２〜０．５ｍｍと薄いために、上に述べた蛍光量もこの肉厚に比例して少なくなるため、より高感度の像観察が可能となる。すなわち、蛍光発生量は光照射部の肉厚に比例するために、通常の１．２ｍｍの肉厚の生体観察用プレートよりも、蛍光発生量を１７〜４２％程度低減させることができるのである。したがって、この観察部２を上に述べた低蛍光樹脂で作製することによって、発生する蛍光量を１．７〜１４％とすることができるのである。
【００２７】
一方、図２に示すように、観察部２の四方に斜面４を形成することによって、射出成形時の観察部２への樹脂流れをスムーズにして、流れむらによる複屈折分布の偏りが少ない観察部２とすることができる。また、この斜面４を形成することによって、観察部２にカバーガラスをかけたり、取り外したりする操作がしやすくなる。
【００２８】
一方、図３と図４に、開口３の部分を低蛍光樹脂フィルム６で覆って観察部２を形成した実施形態を示している。この低蛍光樹脂フィルム６は、樹脂基板５と熱融着によって接合されている。もちろん、接合の方法としては、熱融着以外にも溶剤接着や、粘着剤による貼合を用いてもよい。
【００２９】
低蛍光樹脂フィルムとしては、環状オレフィン樹脂やシリコーン樹脂を用いることができる。環状オレフィン樹脂としては、環状オレフィンポリマーや環状オレフィンコポリマーのいずれも使用することができる。
【００３０】
このように、観察部２に低蛍光樹脂フィルム６を用いることによって、市販で入手可能な最も薄いフィルムを用いることにより観察部２の肉厚を０．０２ｍｍと薄くすることが可能となった。このことによって、発生する蛍光量を肉厚１．２ｍｍの場合に比べて１．７％に低減することができた。また、低蛍光樹脂フィルムを用いることによって、射出成形で観察部２を形成する場合に比べて、より均一な複屈折分布とすることができた。
もちろん、図４に示すように、斜面４を形成することによって、観察部２にカバーガラスをかけたり、取り外したりする操作がしやすくなる。
【００３１】
図５、図６および図８は、本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図で、各々の図において（ａ）は平面図、（ｂ）は側面図である。５は樹脂基板、２は観察部、３は開口、４は斜面、７はシリコーン樹脂フィルム、８はシリカ層、９はケイ酸ガラス層である。
【００３２】
これらの図においては、樹脂基板１の中央部に開口３が開けられており、シリカ層８またはケイ酸ガラス層９を介して透明なシリコーン樹脂フィルム７が接合されている。このようにして、シリコーン樹脂フィルム７は、開口３を塞いで透明な観察部２を形成する。その結果、観察部２は樹脂基板１の厚み分だけの容積を持つことになり、生体をこの観察部に入れたときに、その生体を継続的に生存させるのに充分なだけの培養液をも同時に入れることが可能になる。その結果、生体を長時間生存させた状態で観察することが可能となる。
【００３３】
図６に示す実施形態においては、開口３は斜面４によって樹脂基板１の表面となだらかに接続されている。このような斜面４を形成することによって、生体および培養液を密閉するためにカバーガラスをかけるような場合に、そのカバーガラスの取り付け・取り外しを容易にすることができる。また、カバーガラスを取り付けたときに横ずれなどを起こし難くなるため、本実施形態に示す生体観察用プレートを手で持って扱うような場合も取り扱いが容易になる。
【００３４】
また、図８に示すように、開口３は樹脂基板５上に複数設けられていてもよい。このようにすることによって、樹脂基板１成形用の金型を変更する以外には、製造方法に大きな変更を加えることなく観察部２を複数形成することが可能となる。
【００３５】
ゲル状シリカ層８またはケイ酸ガラス層９は、アクリルなどの樹脂バインダー中に二酸化ケイ素超微粒子またはケイ酸ナトリウムガラス超微粒子が分散されたゲルであり、ゲル状シリカ層８またはケイ酸ガラス層９の膜厚は、１〜１０μｍの範囲、典型的には１〜３μｍの範囲で形成されている。この樹脂バインダー中に含まれる二酸化ケイ素超微粒子またはケイ酸ナトリウム濃度は、３〜１５％程度である。これらの超微粒子の濃度が高いほど、シリコーン樹脂との接合強度は向上する。
【００３６】
シリコーン樹脂フィルム７を構成する材料は、典型的にはポリジメチルシロキサンである。もちろん、ポリジエチルシロキサンやポリジメチルシロキサンとポリジエチルシロキサンとの複合体であってもよい。生体を長時間生存させておくには、酸素の供給が重要となってくる。その場合、酸素の透過性により優れているポリジメチルシロキサンを透明フィルムとして用いるのが望ましい。
【００３７】
観察部２にシリコーン樹脂フィルム７を用いる場合に、その酸素透過性を向上させるには、シリコーン樹脂の厚みを薄くすることで、酸素透過性を向上させることが可能である。具体的には、シリコーン樹脂フィルム７を０．１〜０．３ｍｍの薄さにして用いる。シリコーン樹脂は、ゴム状の弾性体であるため強度が弱く、その厚みを０．１ｍｍよりも薄くすると酸素透過性は著しく向上するが、膜破れが発生したり製造が困難になったりするなどの問題が多発してしまう。また、シリコーン樹脂の厚みを０．３ｍｍよりも厚くすると加工性は良くなるが酸素透過性性能が悪くなる。
【００３８】
もちろん、観察温度あるいは生体保存温度が３７℃と高温の場合は、シリコーン樹脂の酸素透過性も高くなり、シリコーン樹脂の厚みを０．５ｍｍとしても充分な酸素透過性が得られる。
【００３９】
シリコーン樹脂を用いて透明フィルム７を作る方法について簡単に説明する。
シリコーン樹脂は熱硬化性樹脂である。二液性のシリコーン樹脂の場合には、主剤と硬化剤とを材料で定められた割合で良く混合・脱泡した後、膜厚が０．３〜０．５ｍｍと厚い場合にはフィルム成形型に注入して加熱成形することができる。成形型を用いないでシリコーン樹脂フィルムを作製するには、平坦な定盤上に原料を目的の膜厚にするためのスキージで塗布し、自然乾燥または１００〜１５０°で１０〜３０分間程度大気中焼成すればよい。この焼成温度と焼成時間は、膜厚が薄くなればなるほど低温で短時間だけ行えば良い。この焼成は、ベーク炉で行っても良いし、短時間焼成であればベルト炉で行っても良い。焼成後、シリコーン樹脂フィルムの上に保護フィルムをかけて、シリコーン樹脂フィルムの作製が完了する。
【００４０】
次に、本発明の生体観察用プレートの製造方法を説明する。
図７は、本発明の生体観察用プレートの製造方法に関する工程の１実施形態を示す説明図であり、（ａ）は第一の工程、（ｂ）は第二の工程、（ｃ）は第三の工程、（ｄ）は第四の工程、（ｅ）は第五の工程である。図３において、５は樹脂基板、２は観察部、７はシリコーン樹脂フィルム、１０はゾル、１１は噴霧、１２はスプレイ、１３はゲル状シリカ層、１４は酸素プラズマである。
【００４１】
図７（ａ）に示す第一の工程は、樹脂基板１の裏面にスプレイ１２でゾル１０を形成する工程である。このゾルは液体でありスプレイ１２から噴霧１１として吐出される。吐出されたゾルは、樹脂基板１の裏面に表面張力でゾル１０として付着する。このゾル１０の厚みは、噴霧１１の吐出速度と吐出時間で定まる。
【００４２】
ゾルは、シリコンアルコキシドや二酸化ケイ素超微粒子またはケイ酸ナトリウム超微粒子をバインダーあるいは／および溶媒中に分散させたもので液体状となっている。シリコンアルコキシドは、８０〜１２０℃程度の温度で容易に分解して二酸化ケイ素超微粒子凝集体となる。このように二酸化ケイ素の超微粒子を析出・凝集した状態で溶媒を飛ばし二酸化ケイ素超微粒子の凝集を緻密に行うことにより、第二の工程で説明するように、ゾル１０は、容易にゲル化・固化させることができる。
【００４３】
このゾル１０の形成方法は、この実施形態で示したようなスプレイを用いた方法以外にも、印刷で形成する方法や、スピンコートする方法、あるいはディッピング法などを用いることができる。
【００４４】
図７（ｂ）に示す第二の工程は、樹脂基板１の裏面に形成したゾル１０を乾燥してゲル化しゲル状シリカ層１３を形成する工程である。この工程では、清浄な環境中でゾル１０を形成した樹脂基板を自然乾燥させたり、樹脂基板を清浄な乾燥庫中に入れて乾燥させたり、ベルト炉で乾燥させたりする。なお、樹脂基板を乾燥庫中で乾燥させる場合は、８０〜１２０℃で１０分程度乾燥させれば充分である。
【００４５】
図７（ｃ）に示す第三の工程と、図７（ｄ）に示す第四の工程は、各々樹脂基板１上に形成されたゲル状シリカ層１３表面および別途準備したシリコーン樹脂フィルム７表面に酸素プラズマを照射して、各々の表面を活性化する工程である。
酸素プラズマの照射を行うにはまず、酸素プラズマ照射装置の内部に設けられているプラズマ発生電極にゲル状シリカ層１３が形成されている樹脂基板５またはシリコーン樹脂フィルム７を、プラズマ照射面を向けて設置する。
【００４６】
次に、プラズマ照射装置の内部真空度が０．１Ｐａ程度以下になるまで真空引きした後、酸素ガスを２０〜３０ｓｃｃｍ程度流した状態でプラズマ発生電極間に高周波電力を供給して酸素プラズマを発生させ、これをゲル状シリカ層１３が形成されている樹脂基板５またはシリコーン樹脂フィルム７上に照射する。このとき印加する高周波出力の大きさや、酸素ガス流量は、使用するプラズマ発生装置の大きさや電極配置などによって変わるため、それに合わせて調整する必要がある。プラズマ照射時間も、電極配置や出力との関係が大きく、数秒〜３０秒程度の間で調節する必要がある。
【００４７】
プラズマ照射が終了したら、プラズマ発生装置内部を大気圧に戻して、第三工程または第四工程を終了する。
【００４８】
また、ゲル状シリカ層１３が形成されている樹脂基板１またはシリコーン樹脂フィルム７を同時にプラズマ発生装置内に入れて処理することによって、第三工程と第四工程とを同時に行うことができることは言うまでもない。
【００４９】
図７（ｅ）に示す第五の工程では、酸素プラズマ処理したゲル状シリカ層１３の表面とシリコーン樹脂フィルム７の表面とを対向して密着・押圧し、互いを接合する工程である。
【００５０】
この接合工程は、酸素プラズマ処理したゲル状シリカ層１３の表面とシリコーン樹脂フィルム７の表面を酸素プラズマ処理した後、表面の活性度が低下しないうちに直ちに行われることが望ましい。具体的には、酸素プラズマ処理後３０分以内に行われることが好ましい。
【００５１】
このようにして、樹脂基板５に形成された開口３は、シリコーン樹脂フィルム７で塞がれて透明な観察部２を形成することができる。また、このようにして、従来困難であったシリコーン樹脂フィルムを樹脂基板に接合することが可能となり、酸素透過性の良好な生体観察用プレートを提供することができるようになった。
【００５２】
図９と図１０に、本発明の生体観察用プレートの別の実施形態を示す。図１、２、および３に示した実施形態では、生体を短時間顕微鏡で観察する目的で使用する場合の実施形態を示した。図５と図６に示す実施形態では、長期間にわたって生体を生育または細胞を培養しながら、その都度観察が可能な生体観察用プレートを提供する。
【００５３】
図９と図１０は、本発明の生体観察用プレートの１実施形態を示す模式図であり、５は樹脂基板、２は観察部、３は開口、７はシリコーン樹脂フィルム、８はシリカ層、１５はウェル側壁、１６は底面、１７は脚部である。
【００５４】
図９に示す実施形態は、大きな容積空間の中で生体生育または細胞培養を行うと同時に顕微鏡観察が可能な生体観察用プレートを実現することを目的としたもので、その生育や培養に必要な培養液を入れるために、樹脂基板５にはウェル側壁１５が設けられている。ウェル側壁１５の端部は、折れ曲がって底面１６を形成している。この底面１６上には、図７に示した製造工程によってシリカ層８が形成されており、そのシリカ層８にはシリコーン樹脂フィルム７が接合されている。このようにして、ウェル側壁１５と底面１６およびシリコーン樹脂フィルム７とで、１つのウェルを形成する。
このシリコーン樹脂フィルム７の厚みは、０．１〜０．５ｍｍである。
【００５５】
また、樹脂基板５の周縁部には脚部１７が設けられており、この生体観察用プレートを台の上に置いたときに観察部２すなわちシリコーン樹脂フィルム７がその台に接触しないように浮かせて置けるようになっている。すなわち、脚部１７の先端位置は、観察部２よりも下の方にくるようになっている。
【００５６】
図９に示すような構成にすることによって形成されたウェルは、充分な量の培養液を蓄えるだけの大きさとなり、長期間の生体保持および細胞培養を行うことができる。また、観察部２は薄いフィルムで形成されているために、焦点深度の浅い顕微鏡を用いてもウェル内部の観察を行うことができる。さらに、シリコーン樹脂フィルム７を用いることによって観察部２における酸素透過性を向上させることができ、長期間の生体保持や細胞培養を行うことが可能となる。もちろん、シリコーン樹脂は低蛍光樹脂であり、しかも厚みが薄いために、短波長の光を照射されても発生する蛍光は少ない。
【００５７】
一方、図１０に示す本発明の生体観察用プレートの実施形態は、いわゆるマイクロプレートと呼ばれる複数のウェルを有する培養容器の底面にシリカ層８を介してシリコーン樹脂フィルム７を接合したものである。
【００５８】
このマイクロプレートは、樹脂基板５に多数の複数の開口であるウェルを形成するウェル側壁１５が形成され、底面１６に形成されたシリカ層８を介してシリコーン樹脂フィルム７が接合されて観察部２が形成されている。また、樹脂基板５の周縁部には脚部１７が形成されており、マイクロプレートを台上に置いたときに、シリコーン樹脂フィルム７すなわち観察部２が台に触れないようになっている。
【００５９】
このようにして、生体観察用プレートとしてのマイクロプレートの観察部２を酸素透過性にすぐれたシリコーン樹脂フィルム７とすることによって、複数のウェルを用いて生体育成や細胞培養を長期間行いながら観察することが可能となる。また、図９で説明したのと同様にして、観察時に発生する蛍光を低レベルに抑えることが可能となるため、蛍光顕微鏡での観察も容易になる。
【００６０】
なお、以上説明した全ての実施形態に共通して言えることは、観察部２以外の構成要素は遮光性の良い黒色としておくのが好ましいことである。このようにすることによって、観察部２以外からの光が顕微鏡に入射されることがなくなり、観察を容易にできるのである。
【００６１】
以上説明したように、本発明の生体観察用プレートは、樹脂基板と、当該基板に設けられた観察部とからなり、前記観察部は透明であって、その肉厚が０．０２〜０．３ｍｍであり、前記基板中央部に形成された開口が前記基板に接合された低蛍光樹脂フィルムで覆われてなり、前記観察部と前記接合されたフィルムとの間には、シリカ層やケイ酸ナトリウムガラス層が形成されており、前記フィルム材料はポリジメチルシロキサンなどのシリコーン樹脂とすることにより、通気性の良い充分な量の溶液環境内に生体を閉じ込めて生体観察用プレートの裏面から少ない蛍光環境の中で長時間観察することが可能ならしめるものである。
【００６２】
また、樹脂基板に、シリコンアルコキシドまたは二酸化ケイ素超微粒子またはケイ酸ナトリウム超微粒子を溶剤中に分散させたシリカゾルを塗布乾燥してゾルを塗布する第一の工程、前記ゾルを自然乾燥または加熱乾燥してシリカ層またはケイ酸ガラス層を形成する第二の工程、樹脂基板に形成したシリカ層またはケイ酸ガラス層に酸素プラズマを照射する第三の工程、シリコーン樹脂フィルムの一面に酸素プラズマを照射する第四の工程、前記酸素プラズマを照射した樹脂面とシリコーン樹脂フィルムの一面を密接押圧してこれらを互いに接合する第五の工程とで生体観察用プレートを製造することにより従来困難であったシリコーン樹脂フィルムの樹脂基板への接合を可能ならしめ、本発明の生体観察用プレートを実現らならしめるものである。
【符号の説明】
【００６３】
１  低蛍光樹脂基板、２  観察部、３  開口、４  斜面、５  樹脂基板、６  低蛍光樹脂フィルム、７シリコーン樹脂フィルム、８  シリカ層、９  ケイ酸ガラス層、１４  酸素プラズマ
【図１】
2016170090.tif 000003
【図２】
2016170090.tif 000004
【図３】
2016170090.tif 000005
【図４】
2016170090.tif 000006
【図５】
2016170090.tif 000007
【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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