(57)【要約】【課題】検水に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるか否かを簡単に短時間で検査できるようにする。【解決手段】検水槽１１０においてｐＨが２．０〜４．５になるよう調整された検水の所定量を捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙２１０に通水した後、第１シリンジ２４１からパージガスを送ることでガラス繊維濾紙２１０を水切りする。このガラス繊維濾紙２１０に第２シリンジ２５１から界面活性剤を含有する緩衝液を添加し、ヒータ２２５によりガラス繊維濾紙２１０を加熱する。第１シリンジ２４１から再度パージガスを送ることでガラス繊維濾紙２１０に付着している液分を採取経路２７１に流して採取し、この液分をレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用する。【選択図】図１
2016182080.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
検水のレジオネラ属菌を検査するための方法であって、
捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙に対して所定量の前記検水を通水する工程１と、
工程１の後、前記ガラス繊維濾紙に界面活性剤を含有する緩衝液を添加し、前記ガラス繊維濾紙を加熱する工程２と、
工程２の後、前記ガラス繊維濾紙に付着している液分を採取し、この液分をレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用する工程３と、
を含むレジオネラ属菌の検査方法。
【請求項２】
工程１において前記ガラス繊維濾紙に通水する前記検水のｐＨを２．０〜４．５に調整する、請求項１に記載のレジオネラ属菌の検査方法。
【請求項３】
検水のレジオネラ属菌を検査可能な試料を調製するための方法であって、
捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙に対して所定量の前記検水を通水する工程１と、
工程１の後、前記ガラス繊維濾紙に界面活性剤を含有する緩衝液を添加し、前記ガラス繊維濾紙を加熱する工程２と、
工程２の後、前記ガラス繊維濾紙に付着している液分を採取する工程３と、
を含むレジオネラ属菌検査用試料の調製方法。
【請求項４】
工程１において前記ガラス繊維濾紙に通水する前記検水のｐＨを２．０〜４．５に調整する、請求項３に記載のレジオネラ属菌検査用試料の調製方法。
【請求項５】
検水のレジオネラ属菌を検査可能な試料を調製するための装置であって、
前記検水の所定量を貯水するための検水槽と、
捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙を前記検水槽からの前記検水を通水可能に保持するためのホルダと、
前記検水槽から前記ホルダへ前記検水を送るためのポンプと、
前記ホルダを加熱するためのヒータと、
前記ホルダに保持された前記ガラス繊維濾紙に対し、界面活性剤を含有する緩衝液を添加するための添加手段と、
前記ホルダに保持された前記ガラス繊維濾紙に対し、付着した液分を除去するためのパージガスを供給するためのパージガス供給手段と、
前記パージガスにより前記ガラス繊維濾紙から除去された前記液分を採取するための採取経路と、
を備えたレジオネラ属菌検査用試料の調製装置。
【請求項６】
前記検水槽から前記ホルダへ送られる前記検水のｐＨを２．０〜４．５に調整するためのｐＨ調整手段をさらに備えている、請求項５に記載のレジオネラ属菌検査用試料の調製装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、レジオネラ属菌の検査方法、特に、検水のレジオネラ属菌を検査するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
公衆浴場や宿泊施設での循環式の温泉水や浴槽水、或いは、クーリングタワーの循環冷却水において屡々検出されるレジオネラ属菌は、ポンティアック熱や重篤な肺炎（レジオネラ肺炎）等の疾病の原因となる病原菌である。そこで、温泉水等の浴槽水については、条例によりレジオネラ属菌の規制値が１０ＣＦＵ／１００ｍＬ未満と規定されるとともに、年に一度のレジオネラ属菌の検査が義務付けられており、また、クーリングタワーの循環冷却水については、別途１ＣＦＵ／１ｍＬ以下の推奨値が設けられるとともに同様の検査が推奨されている。
【０００３】
浴槽水や循環冷却水のレジオネラ属菌の検査方法として、非特許文献１は、公定法を規定している。公定法では、浴槽水等の検水をろ過濃縮法または遠心分離濃縮法により濃縮した後に雑菌処理することで試験溶液を調製する。そして、試験溶液の一定量を選択培地に塗布して５〜７日間培養し、湿潤性の青白および灰白の集落が出現した場合は検水に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるものと仮に判断し、確認試験を実施する。確認試験では、選択培地に出現した集落をＢＣＹＥα培地に塗布して２〜７日間培養し、ＢＣＹＥα培地に形成された集落をＬ−システイン不含培地およびＢＣＹＥα培地に塗布して２〜７日間さらに培養する。これでＢＣＹＥα培地のみに集落が形成された場合、この集落にグラム染色を行い、グラム陰性の桿菌が確認されたものをレジオネラ属菌と確定し、検水に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるものと最終判断する。
【０００４】
公定法は、レジオネラ属菌の菌数の判定や生菌と死菌との判定ができるなど、レジオネラ属菌の検査方法として優れたものであるが、日数を要する培養工程を数回実施する必要があることから工程や操作が複雑であるだけではなく、必要な結果が得られるまでに５〜１４日程度の長時間を要する。したがって、公定法によれば、公衆浴場や宿泊施設等のその場において、レジオネラ属菌を検査するのが困難である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】日本工業規格  ＪＩＳ  Ｋ  ０３５０−５０−１０：２００６、「工業用水・工場排水中のレジオネラ試験方法」
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、検水に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるか否かを簡単に短時間で検査できるようにしようとするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、検水のレジオネラ属菌を検査するための方法に関するものである。この検査方法は、捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙に対して所定量の検水を通水する工程１と、工程１の後、ガラス繊維濾紙に界面活性剤を含有する緩衝液を添加し、ガラス繊維濾紙を加熱する工程２と、工程２の後、ガラス繊維濾紙に付着している液分を採取し、この液分をレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用する工程３とを含む。
【０００８】
工程１において検水の所定量をガラス繊維濾紙に通水すると、検水にレジオネラ属菌が含まれる場合、そのレジオネラ属菌はガラス繊維濾紙に捕集される。工程２において界面活性剤を含有する緩衝液をガラス繊維濾紙に添加し、このガラス繊維濾紙を加熱すると、ガラス繊維濾紙に捕集されたレジオネラ属菌からレジオネラ抗原が分離する。このレジオネラ抗原は、界面活性剤の作用を受けてガラス繊維濾紙から遊離し、緩衝液中に移動する。そこで、工程３においてガラス繊維濾紙に付着している液分を採取し、これをレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用すると、液分のレジオネラ属菌が規制値未満の場合はイムノクロマト試験紙が陰性を呈するのに対し、液分に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれる場合はイムノクロマト試験紙が陽性を呈する。この結果、検水に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるか否かを判定することができる。
【０００９】
他の観点に係る本発明は、検水のレジオネラ属菌を検査可能な試料を調製するための方法に関するものである。この方法は、捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙に対して所定量の検水を通水する工程１と、工程１の後、ガラス繊維濾紙に界面活性剤を含有する緩衝液を添加し、ガラス繊維濾紙を加熱する工程２と、工程２の後、ガラス繊維濾紙に付着している液分を採取する工程３とを含む。
【００１０】
工程１において検水の所定量をガラス繊維濾紙に通水すると、検水にレジオネラ属菌が含まれる場合、そのレジオネラ属菌はガラス繊維濾紙に捕集される。工程２において界面活性剤を含有する緩衝液をガラス繊維濾紙に添加し、このガラス繊維濾紙を加熱すると、ガラス繊維濾紙に捕集されたレジオネラ属菌からレジオネラ抗原が分離する。このレジオネラ抗原は、界面活性剤の作用を受けてガラス繊維濾紙から遊離し、緩衝液中に移動する。工程３においてガラス繊維濾紙に付着している液分を採取すると、採取した液分はレジオネラ属菌検査用試料として用いることができる。
【００１１】
この調製方法により調製された検査用試料は、レジオネラ属菌のための各種の検査法、例えば、イムノクロマト法、ＬＡＭＰ法（遺伝子検査法）、ＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応法）またはイムノアッセイ法の一つであるＥＬＩＳＡ法などのために用いることができる。
【００１２】
本発明に係るレジオネラ属菌の検査方法およびレジオネラ属菌検査用試料の調製方法では、工程１においてガラス繊維濾紙に通水する検水のｐＨを２．０〜４．５に調整するのが好ましい。この場合、工程１において、検水に含まれるレジオネラ属菌がガラス繊維濾紙に捕集されやすくなるため、ガラス繊維濾紙に通水する検水の所定量を抑えることができる。
【００１３】
他の観点に係る本発明は、レジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙を用いて検水のレジオネラ属菌を検査可能な試料を調製するための装置に関するものである。この試料調製装置は、検水の所定量を貯水するための検水槽と、捕粒子径が２．７μｍ以下のガラス繊維濾紙を検水槽からの検水を通水可能に保持するためのホルダと、検水槽からホルダへ検水を送るためのポンプと、ホルダを加熱するためのヒータと、ホルダに保持されたガラス繊維濾紙に対し、界面活性剤を含有する緩衝液を添加するための添加手段と、ホルダに保持されたガラス繊維濾紙に対し、付着した液分を除去するためのパージガスを供給するためのパージガス供給手段と、パージガスによりガラス繊維濾紙から除去された液分を採取するための採取経路とを備えている。
【００１４】
ホルダに保持されたガラス繊維濾紙に対し、検水槽に貯水された所定量の検水の全量をポンプにより送ると、検水にレジオネラ属菌が含まれる場合、そのレジオネラ属菌がガラス繊維濾紙に捕集される。ホルダに保持されたガラス繊維濾紙に対して添加手段から界面活性剤を含有する緩衝液を添加した後にホルダを加熱すると、ガラス繊維濾紙が加熱され、ガラス繊維濾紙に捕集されたレジオネラ属菌からレジオネラ抗体が分離する。このレジオネラ抗体は、緩衝液中に移動することから、ホルダに保持されたガラス繊維濾紙に対してガス供給手段からパージガスを供給することでガラス繊維濾紙に付着した液分を除去し、この液分を採取経路を通じて採取すると、イムノクロマト試験紙に対して適用可能なレジオネラ属菌検査用試料が得られる。
【００１５】
この検査用試料調製装置は、例えば、検水槽からホルダへ送られる検水のｐＨを２．０〜４．５に調整するためのｐＨ調整手段をさらに備えている。この場合、検水に含まれるレジオネラ属菌がガラス繊維濾紙に捕集されやすくなることから、ガラス繊維濾紙に通水するために検水槽に貯水する検水の所定量を抑えることができ、検水槽を含む検査用試料調製装置全体の小型化が容易になる。
【発明の効果】
【００１６】
本発明に係るレジオネラ属菌の検査方法は、上述の工程を含むものであることから、検水に規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるか否かを簡単に短時間で検査することができる。
【００１７】
本発明に係るレジオネラ属菌検査用試料の調製方法および調製装置は、上述のようなものであることから、レジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙を用いて検水のレジオネラ属菌を検査可能な試料を簡単に短時間で調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１８】
【図１】本発明に係るレジオネラ属菌検査用試料の調製装置の概略図。
【図２】実験例の結果の一部を抽出して作成したグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１９】
図１を参照し、本発明に係るレジオネラ属菌検査用試料の調製装置を説明する。図において、調製装置１は、主に、貯水部１００、試料調製部２００および廃水処理部３００を備えている。
【００２０】
貯水部１００は、検水槽１１０を有している。検水槽１１０は、循環式の温泉水や浴槽水またはクーリングタワーの循環冷却水等、レジオネラ属菌の検査対象となる検水の所定量を貯水するためのものであり、貯水した検水を試料調製部２００へ送るための送水経路１３０を有している。送水経路１３０は、検水槽１１０の底部から試料調製部２００へ延びており、検水槽１１０の底部側の端部にプレフイルタ１３１を有している。プレフイルタ１３１は、試料調製部２００へ送られる検水に含まれる固形分を除去するためのものである。
【００２１】
また、検水槽１１０は、第１ｐＨ調整装置１４０（ｐＨ調整手段の一例）を有している。第１ｐＨ調整装置１４０は、検水槽１１０に貯留された検水のｐＨを調整するためのものであり、検水槽１１０内に配置された第１ｐＨセンサ１４１と、検水槽１１０に貯留された検水に対してｐＨ調整剤を添加するための第１添加装置１４２とを備えている。第１ｐＨセンサ１４１は、検水槽１１０に貯留された検水のｐＨを測定するためのものであり、第１添加装置１４２に測定データを伝達可能である。第１添加装置１４２から添加するｐＨ調整剤は、検水のｐＨを低下させるための酸性の薬剤であり、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ホウ酸若しくはフッ化水素酸などの無機酸またはクエン酸、酢酸、ギ酸若しくはシュウ酸などの有機酸である。これらの薬剤は、二種以上のものが併用されてもよい。第１添加装置１４２は、第１ｐＨセンサ１４１から伝達される測定データに基づいて、検水のｐＨが所定の範囲になるよう動作する。
【００２２】
試料調製部２００は、ガラス繊維濾紙２１０を保持したホルダ２２０とヒータ２２５とを有している。ガラス繊維濾紙２１０は、捕粒子径が２．７μｍ以下のものであり、通常、径が１９〜２９３ｍｍで厚さが２６０〜７５０μｍのものである。ホルダ２２０は、一体化可能であるとともに分離可能な円筒状の第１部材２２１と第２部材２２２とを備えており、試料調製部２００において、これらの部材がガラス繊維濾紙２１０を挟むように一体化されている。
【００２３】
第１部材２２１は、供給経路２３０が着脱可能に連絡している。供給経路２３０は、送水経路１３０、パージガス供給路２４０および処理剤供給路２５０が連絡する四方弁２６０を有している。四方弁２６０は、供給経路２３０が送水経路１３０、パージガス供給路２４０または処理剤供給路２５０のいずれかと連絡するよう切り換えるためのものである。
【００２４】
パージガス供給路２４０は、ホルダ２２０に保持されたガラス繊維濾紙２１０に対し、供給経路２３０を通じて空気流を供給するためのものであり、空気を保持可能な第１シリンジ２４１（パージガス供給手段の一例）に連絡している。処理剤供給路２５０は、ホルダ２２０に保持されたガラス繊維濾紙２１０に対し、供給経路２３０を通じて処理剤を供給するためのものであり、処理剤を保持可能な第２シリンジ２５１（添加手段の一例）に連絡している。
【００２５】
処理剤は、界面活性剤を含有する緩衝液である。緩衝液としては、例えば、ｐＨを５．０〜１０．０に調整可能なもの、例えば、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、炭酸塩緩衝液、重炭酸緩衝液または塩化カリウム−水酸化ナトリウム緩衝液を用いることができる。また、この緩衝液に含まれる界面活性剤は、特に限定されるものではなく、石鹸や各種の合成界面活性剤を用いることができる。利用可能な合成界面活性剤は、特に限定されるものではなく、カルボン酸型、スルホン酸型、硫酸エステル型若しくはリン酸エステル型等のアニオン系界面活性剤、第四級アンモニウム塩型、アルキルアミン塩型若しくはピリジン誘導体等のカチオン系界面活性剤、アルキルベタイン型、脂肪酸アミドプロピルベタイン型、アルキルイミダゾール型、アミノ酸型若しくはアミンオキシド型等の両性界面活性剤またはエステル型、エーテル型、エステルエーテル型、アルカノールアミド型、アルキルグリコシド若しくは高級アルコール等のノニオン系界面活性剤等、各種のものから適宜選択して用いることができる。界面活性剤は、二種以上のものが併用されてもよい。なお、界面活性剤として好ましいものは、ガラス繊維濾紙２１０へのレジオネラ属菌の吸着を抑制可能なことから、電荷を持たないノニオン系界面活性剤である。
【００２６】
界面活性剤の濃度は、緩衝液において０．０１〜１０重量％になるよう設定するのが好ましい。界面活性剤の濃度が０．０１重量％未満の場合、界面活性剤が活性能を発揮しにくいことから、後記するレジオネラ抗体の一部がガラス繊維濾紙２１０から緩衝液へ移動しにくくなり、一部がガラス繊維濾紙２１０に残留する可能性がある。逆に、１０重量％を超える場合、イムノクロマト試験紙の抗体に影響を及ぼす可能性がある。
【００２７】
一方、第２部材２２２は、排出経路２６５が着脱可能に連絡している。排出経路２６５は、先端が開口する採取経路２７１および廃棄経路２８０が連絡する三方弁２７０を有している。三方弁２７０は、排出経路２６５が採取経路２７１または廃棄経路２８０のいずれかと連絡するよう切り換えるためのものである。
【００２８】
ヒータ２２５は、ホルダ２２０の全周面に配置されており、ホルダ２２０を通じてガラス繊維濾紙２１０を加熱するためのものである。
【００２９】
廃棄経路２８０は、吸水ポンプ２８１を有しており、廃水処理部３００へ延びている。
【００３０】
廃水処理部３００は、廃棄経路２８０が連絡する廃水槽３１０と、第２ｐＨ調整装置３２０とを有している。第２ｐＨ調整装置３２０は、廃水槽３１０に貯留された廃水を中和するためのものであり、廃水槽３１０内に配置された第２ｐＨセンサ３２１と、廃水槽３１０に貯留された廃水に対して中和剤を添加するための第２添加装置３２２とを備えている。第２ｐＨセンサ３２１は、廃水槽３１０に貯水された廃水のｐＨを測定するためのものであり、第２添加装置３２２に測定データを伝達可能である。第２添加装置３２２から添加する中和剤は、廃水のｐＨを高めるための薬剤であり、例えば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物である。第２添加装置３２２は、第２ｐＨセンサ３２１から伝達される測定データに基づいて、廃水が中和されるよう動作する。
【００３１】
次に、上述の調製装置１を用いて検水からレジオネラ属菌検査用試料を調製する方法を説明する。なお、調製装置１は、レジオネラ属菌検査用試料の調製に際し、四方弁２６０において供給経路２３０が送水経路１３０と連絡し、また、三方弁２７０において排出経路２６５が廃棄経路２８０と連絡するよう初期設定する。
【００３２】
循環式の温泉水や浴槽水またはクーリングタワーの循環冷却水等、レジオネラ属菌の検査対象となる検水を汲み取り、この検水の所定量を検水槽１１０に貯水する。本実施の形態において、検水槽１１０に貯水する検水の所定量は、例えば１０Ｌ程度である。
【００３３】
次に、第１ｐＨ調整装置１４０を作動させ、貯水した検水のｐＨを調整する。ここで、第１ｐＨ調整装置１４０は、第１ｐＨセンサ１４１から伝達される検水のｐＨデータに基づいて第１添加装置１４２から検水に対して適宜ｐＨ調整剤を添加し、検水のｐＨが７．６以下、好ましくは２．０〜４．５になるよう調整する。検水のｐＨが２．０未満の場合、検水に含まれるレジオネラ属菌が死滅する可能性があり、信頼性の高いレジオネラ属菌検査用試料の調製が困難になる可能性がある。一方、検水のｐＨが４．５を超える場合、特に、７．６を超える場合は、検水に含まれるレジオネラ属菌の一部がガラス繊維濾紙２１０を通過するおそれがあり、結果的に信頼性の高いレジオネラ属菌検査用試料の調製が困難になる可能性がある。
【００３４】
検水のｐＨ調整の完了後に吸水ポンプ２８１を作動すると、検水槽１１０に貯水された検水は、吸水ポンプ２８１により吸引されて送水経路１３０から供給経路２３０へ流れ、実質的に全量がホルダ２２０に保持されたガラス繊維濾紙２１０に通水される。このとき、検水に混入している固形物は、プレフイルタ１３１により捕捉され、送水経路１３０への流入が抑えられる。一方、検水に含まれるレジオネラ属菌は、ガラス繊維濾紙２１０に捕集される。ここで、検水のｐＨは７．６以下になるよう調整されていることから、検水に含まれるレジオネラ属菌は、少なくとも６０％がガラス繊維濾紙２１０により捕集される。特に、検水のｐＨが２．０〜４．５になるよう調整されている場合、検水に含まれるレジオネラ属菌の実質的に全量がガラス繊維濾紙２１０により捕集される。
【００３５】
ガラス繊維濾紙２１０を通過した検水は、排出経路２６５から廃棄経路２８０へ流れ、廃水槽３１０に貯留される。検水槽１１０に貯水した検水の実質的に全量がガラス繊維濾紙２１０を通過して廃水槽３１０に貯水された後、第２ｐＨ調整装置３２０を作動させ、貯水した検水のｐＨを調整する。ここで、第２ｐＨ調整装置３２０は、第２ｐＨセンサ３２１から伝達される検水のｐＨデータに基づいて第２添加装置３２２から検水に対して適宜中和剤を添加し、検水のｐＨが中性付近になるよう調整する。これにより、廃水槽３１０に貯水された検水は、安全に廃棄することができる。
【００３６】
次に、供給経路２３０とパージガス供給路２４０とが連絡するよう四方弁２６０を切り換えるとともに排出経路２６５と採取経路２７１とが連絡するよう三方弁２７０を切り換え、パージガス供給路２４０へ第１シリンジ２４１から空気を瞬時に注入する。パージガス供給路２４０へ注入された空気は、供給経路２３０からホルダ２２０へ至る空気流となり、ガラス繊維濾紙２１０を瞬時に通過して排出経路２６５へ流れる。この際、ガラス繊維濾紙２１０に付着している検水が空気流により排出経路２６５へ圧し出され、空気流とともに採取経路２７１から排出される。この結果、ガラス繊維濾紙２１０は、水切りされた状態となる。
【００３７】
採取経路２７１から空気流が排出された後、供給経路２３０と処理剤供給路２５０とが連絡するよう四方弁２６０を切り換えるとともに排出経路２６５と採取経路２７１とが連絡するよう三方弁２７０を維持し、第２シリンジ２５１を操作することで処理剤供給路２５０から供給経路２３０を通じてガラス繊維濾紙２１０へ処理剤を供給する。これにより、ガラス繊維濾紙２１０は処理剤により湿潤する。
【００３８】
ガラス繊維濾紙２１０が既述の大きさの場合、処理剤の供給量は、通常１０〜１０，０００μＬに設定するのが好ましい。処理剤の供給量が１０μＬ未満の場合、ガラス繊維濾紙２１０に対して十分に処理剤が行き渡らない可能性がある。逆に、１０，０００μＬを超える場合、調製される検査用試料の感度が著しく低下する可能性がある。
【００３９】
続いて、ヒータ２２５を作動させてホルダ２２０を加熱し、これによってガラス繊維濾紙２１０を加熱する。この加熱により、ガラス繊維濾紙２１０に捕集されたレジオネラ属菌が破壊され、レジオネラ抗体が分離する。分離したレジオネラ抗体は、処理剤の緩衝液のｐＨが５．０〜１０．０であることからガラス繊維濾紙２１０に対する吸着力が弱まるとともに界面活性剤の作用を受けて疎水性を有するガラス繊維濾紙２１０から遊離しやすくなり、緩衝液中へ移動する。
【００４０】
ヒータ２２５によるホルダ２２０の加熱は、通常、ガラス繊維濾紙２１０に付着した処理剤の温度が２５℃以上になるようにするのが好ましいが、処理剤の揮散を抑制する観点で同温度が１００℃以下に抑えられるよう制御するのが好ましい。加熱温度が２５℃未満の場合、ガラス繊維濾紙２１０に捕集されたレジオネラ属菌からレジオネラ抗体が分離しにくくなる可能性があることから長時間の加熱が必要となり、レジオネラ属菌の迅速な検査が困難になる可能性がある。加熱時間は、処理剤の加熱温度に応じて適宜設定することができるが、通常、１分（加熱温度が１００℃程度の高温の場合）〜１７時間（加熱温度が２５℃程度の低温の場合）程度である。
【００４１】
ホルダ２２０の加熱完了後、ガラス繊維濾紙２１０に付着している処理剤を採取する。ここでは、供給経路２３０とパージガス供給路２４０とが連絡するよう四方弁２６０を切り換えるとともに排出経路２６５と採取経路２７１とが連絡するよう三方弁２７０を維持し、パージガス供給路２４０へ第１シリンジ２４１から空気を瞬時に注入する。パージガス供給路２４０へ注入された空気は、供給経路２３０からホルダ２２０へ至る空気流となり、ガラス繊維濾紙２１０を瞬時に通過して排出経路２６５へ流れる。ガラス繊維濾紙２１０に付着している処理剤は、ガラス繊維濾紙２１０を通過する空気流により排出経路２６５へ圧し出され、空気流とともに採取経路２７１から排出される。採取経路２７１から採取された処理剤は、レジオネラ抗体を含むものであることから、レジオネラ属菌検査用試料として用いることができる。
【００４２】
レジオネラ属菌検査用試料を調製後の調製装置１は、検水の通水経路等を水道水などで洗浄後、ホルダ２２０のガラス繊維濾紙２１０を交換することで繰返し使用することができる。
【００４３】
調製装置１により調製されたレジオネラ属菌検査用試料は、レジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用することができる。レジオネラ属菌検査用試料を適用したイムノクロマト試験紙が陽性を呈した場合、検水には規制値以上のレジオネラ属菌が含まれるものと判断することができ、また、当該イムノクロマト試験紙が陰性を呈した場合、検水には規制値以上のレジオネラ属菌が含まれないものと判断することができる。
【００４４】
レジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙は市販のものを用いることができる。例えば、尿中のレジオネラニューモフィラ血清型１抗原（ＬＰＳ）検出試薬である「チェックレジオネラ」（ＳＡ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  ＩＮＣ．社の商品名）や「Ｑライン極東レジオネラ」（極東製薬工業株式会社の商品名）などを用いることができる。
【００４５】
なお、調製装置１を用いて検水からレジオネラ属菌検査用試料を調製し、このレジオネラ属菌検査用試料をイムノクロマト試験紙に適用して検査結果が得られるまでに要する時間は、概ね１〜１８時間程度である。
【００４６】
上述の実施の形態に係る調製装置１は、検水槽１１０に貯水した検水のｐＨを第１ｐＨ調整装置１４０により調整していることから、検水に含まれるレジオネラ属菌を実質的に漏れなくガラス繊維濾紙２１０により捕集することができる。したがって、ガラス繊維濾紙２１０に通水する検水の量を抑えつつ、検水から短時間で効率的に高感度のレジオネラ属菌検査用試料を調製することができる。このため、調製装置１は、検水槽１１０および廃水槽３１０を含む全体の小型化が可能であり、検水の取水現場（温泉や公衆浴場或いはクーリングタワーの設置場所）においてレジオネラ属菌検査用試料を調製することができ、また、調製したレジオネラ属菌検査用試料は当該取水現場で直ちにレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用し、レジオネラ属菌を検査することができる。
【００４７】
上述の実施の形態に係る調製装置１は、検水槽１１０に貯留した検水のｐＨ調整をするための第１ｐＨ調整装置１４０と、廃水槽３１０に貯水した検水を中和するための第２ｐＨ調整装置３２０とを備えているが、これらのｐＨ調整装置を省き、ｐＨ試験紙などで検水のｐＨを確認しながら手作業でｐＨ調整剤または中和剤を添加するように変更することもできる。
【００４８】
また、調製装置１は、ガラス繊維濾紙２１０に付着した液分を除去するためのパージガスを第１シリンジ２４１から供給しているが、第１シリンジ２４１に替えてコンプレッサーなどの他のガス供給手段を用いることもできる。また、パージガスは、窒素ガスなどの不活性ガスであってもよい。
【００４９】
さらに、調製装置１は、吸水ポンプ２８１の配置箇所を廃棄経路２８０から排出経路２６５に変更することができる。この場合、パージガス供給路２４０と第１シリンジ２４１とを省き、吸水ポンプ２８１をパージガス供給手段の一部として利用することができる。すなわち、ガラス繊維濾紙２１０に対してパージガスを供給するときは、検水槽１１０において送水経路１３０のプレフイルタ１３１を空気中に位置させ、吸水ポンプ２８１を短時間動作させる。これにより、プレフイルタ１３１から送水経路１３０内に空気が吸引され、吸引された空気流がパージガスとして供給経路２３０からガラス繊維濾紙２１０へ供給される。
【００５０】
この場合、吸引ポンプ２８１は、吸引する流体と触れずに動作可能なもの、例えば、東京理化器械株式会社の定量送液ポンプ（商品名「ローラーポンプ」）などを用いるのが好ましい。このような吸引ポンプ２８１を用いると、ガラス繊維濾紙２１０から圧し出されて排出経路２６５を通過する処理剤、すなわち、レジオネラ属菌検査用試料は、吸引ポンプ２８１を通過するときに汚染を受けず、信頼性を維持することができる。
【００５１】
上述のように吸水ポンプ２８１の配置箇所を変更する場合、調製装置１は、三方弁２７０に替えて排出経路２６５と廃棄経路２８０とを脱着可能に連結するためのジョイントを用いることができる。このようなジョイントを用いた調製装置１によりレジオネラ属菌検査用試料を調製する場合、検水槽１１０に貯水された検水をガラス繊維濾紙２１０に通水した後にジョイントから廃棄経路２８０を取り外す。そして、そのジョイントに対して清浄な別の管路を連結すると、当該管路を通じて目的のレジオネラ属菌検査用試料を採取することができる。
【００５２】
調製装置１は、第２シリンジ２５１を用いてガラス繊維濾紙２１０に対して処理剤を添加しているが、第２シリンジ２５１に替えて定量ポンプやその他の薬液注入装置を用いることもできる。
【００５３】
レジオネラ属菌検査用試料の調製では、調製装置１を用いてガラス繊維濾紙２１０に所定量の検水を通水した後にホルダ２２０を調製装置１から取り外し、取り外したホルダ２２０に対してシリンジを用いてパージ用の空気を供給することでガラス繊維濾紙２１０の水切りをした後、そのホルダ２２０に対してシリンジを用いて処理剤を供給するよう変更することもできる。この場合、処理剤を供給したホルダ２２０は、ドライオーブンやインキュベータなどの加熱装置を用いて加熱することができる。また、加熱後のホルダ２２０に付着している処理剤は、ホルダ２２０に対してシリンジを用いてパージ用の空気を供給することでガラス繊維濾紙２１０から採取することができる。
【００５４】
調製装置１により調製されたレジオネラ属菌検査用試料は、イムノクロマト試験紙を用いる方法とは別のレジオネラ属菌の検査方法のために用いることもできる。例えば、ＬＡＭＰ法（遺伝子検査法）、ＰＣＲ法（ポリメラーゼ連鎖反応法）またはイムノアッセイ法の一つであるＥＬＩＳＡ法などのために、調製されたレジオネラ属菌検査用試料を用いることができる。
【実施例】
【００５５】
実験例：ガラス繊維濾紙によるレジオネラ属菌の捕集実験
約１，０００ＣＦＵ／ｍＬの濃度でレジオネラ属菌を含む水に濃度が２０ｍＭになるよう緩衝剤を添加し、表１に示すＡ〜ＦのｐＨが異なる６種類の試験検水を調製した。
【００５６】
【表１】
2016182080.tif 000003
【００５７】
ホルダに保持されたガラス繊維濾紙に各試験検水を個別に通水し、ガラス繊維濾紙によるレジオネラ属菌の捕集性能（吸着性能）を評価した。ここでは、１Ｌの試験検水を表２に示したガラス繊維濾紙に対して同表に示す流量で通水し、ガラス繊維濾紙を通過後の試験検水におけるレジオネラ属菌の濃度（Ｘ）をガラス繊維濾紙に通水する前の試験検水のレジオネラ属菌の濃度（Ｙ）と比較し、レジオネラ属菌の捕集率（Ｘ／Ｙ×１００％）を求めた。試験検水におけるレジオネラ属菌の濃度は、ＢＣＹＥα寒天培地を用い、３６℃で７日間培養することで調べた。表２に示したガラス繊維濾紙の詳細は下記の通りである。結果を表２に示す。
【００５８】
（ガラス繊維濾紙）
ＧＦ／Ｂ（ワットマン社の商品名）：
径２５ｍｍ、厚さ６７５μｍ、捕粒子径１．０μｍ
ＧＦ／Ｄ（ワットマン社の商品名）：
径２５ｍｍ、厚さ６７５μｍ、捕粒子径２．７μｍ
ＧＡ−１００（ＡＤＶＡＮＴＥＣ株式会社の商品名）：
径２５ｍｍ、厚さ４４０μｍ、捕粒子径１．０μｍ
【００５９】
【表２】
2016182080.tif 000004
【００６０】
表２からガラス繊維濾紙としてＧＦ／Ｂを用いた場合の結果を抽出して作成したグラフを図２に示す。図２によると、試験検水のｐＨが７．６以下の場合、試験検水に含まれるレジオネラ属菌の６０％以上を捕集可能である。
【００６１】
実施例１
９．８×１０３ＣＦＵ／１０Ｌの濃度でレジオネラ属菌を含む水を調製し、この水にクエン酸およびクエン酸三ナトリウム二水和物を添加することでｐＨを３．５に調整した試験水を調製した。ホルダに保持されたガラス繊維濾紙（ワットマン社の商品名「ＧＦ／Ｄ」：径２５ｍｍ、厚さ６７５μｍ、捕粒子径２．７μｍ）に対して試験検水を１０Ｌ通水した後、ホルダに装着したシリンジからガラス繊維濾紙に対して空気流を瞬時に送ることでガラス繊維濾紙を水切りした。
【００６２】
次に、ノニオン系界面活性剤としてポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（和光純薬工業株式会社製）を１重量％含み、リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸水素カリウムを添加することでｐＨ８．０に調整した０．１Ｍリン酸緩衝液を処理剤として調製し、この処理剤をホルダに装着したシリンジからガラス繊維濾紙に添加した。そして、ホルダをドライオーブン中でガラス繊維濾紙の温度が７７℃になるよう１０分間加熱した。
【００６３】
次に、加熱後のホルダにシリンジを装着し、このシリンジからガラス繊維濾紙に対して空気流を瞬時に送り、これによりガラス繊維濾紙から圧し出された液分を試験管に採取した。採取した液分から１００μＬを分取し、これをレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙（ＳＡ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，  ＩＮＣ．社の商品名「チェックレジオネラ」）に適用して１５分後に観察したところ、「＋」判定の陽性であった。
【００６４】
実施例２
下記の変更点を除いて実施例１と同様に操作し、ガラス繊維濾紙から圧し出された液分を試験管に採取した。この液分をガラス繊維濾紙に添加したものと同じ処理剤を用いて２倍に希釈し、その１００μＬをレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用して１５分後に観察したところ、「＋」判定の陽性であった。
【００６５】
変更点１：
１．８×１０４ＣＦＵ／１０Ｌの濃度でレジオネラ属菌を含む水を調製し、この水にクエン酸を添加することでｐＨを２．６に調整した試験水を用いた点。
変更点２：
ノニオン系界面活性剤としてポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（和光純薬工業株式会社製）を１重量％含み、炭酸ナトリウムおよび炭酸水素ナトリウムを添加することでｐＨ１０．０に調整した０．１Ｍ重炭酸緩衝液を処理剤として用いた点。
変更点３：
ホルダをドライオーブン中でガラス繊維濾紙の温度が４０℃になるよう１６時間３０分間加熱した点。
【００６６】
実施例３
下記の変更点を除いて実施例１と同様に操作し、ガラス繊維濾紙から圧し出された液分を試験管に採取した。この液分をガラス繊維濾紙に添加したものと同じ処理剤を用いて２倍に希釈し、その１００μＬをレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用して１５分後に観察したところ、「＋」判定の陽性であった。
【００６７】
変更点１：
１．６×１０４ＣＦＵ／１０Ｌの濃度でレジオネラ属菌を含む水を調製し、この水にクエン酸およびクエン酸三ナトリウム二水和物を添加することでｐＨを４．９に調整した試験水を用いた点。
変更点２：
ノニオン系界面活性剤としてポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（和光純薬工業株式会社製）を１重量％含み、リン酸水素二ナトリウムおよびリン酸水素カリウムを添加することでｐＨ５．０に調整した０．１Ｍリン酸緩衝液を処理剤として用いた点。
変更点３：
ホルダをドライオーブン中でガラス繊維濾紙の温度が９５℃になるよう１０分間加熱した点。
【００６８】
実施例４
下記の変更点を除いて実施例１と同様に操作し、ガラス繊維濾紙から圧し出された液分を試験管に採取した。この液分をガラス繊維濾紙に添加したものと同じ処理剤を用いて１．５倍に希釈し、その１００μＬをレジオネラ属菌検査用のイムノクロマト試験紙に適用して１５分後に観察したところ、「＋」判定の陽性であった。
【００６９】
変更点１：
１．９×１０４ＣＦＵ／１０Ｌの濃度でレジオネラ属菌を含む水を調製し、この水にクエン酸およびクエン酸三ナトリウム二水和物を添加することでｐＨを４．６に調整した試験水を用いた点。
変更点２：
ノニオン系界面活性剤としてポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート（和光純薬工業株式会社製）を１重量％含み、水酸化ナトリウムおよび塩化カリウムを添加することでｐＨ１２．０に調整した０．１Ｍの塩化カリウム−水酸化ナトリウム緩衝液を処理剤として用いた点。
変更点３：
ホルダをドライオーブン中でガラス繊維濾紙の温度が９５℃になるよう１０分間加熱した点。
【符号の説明】
【００７０】
１          レジオネラ属菌検査用試料の調製装置
１１０      検水槽
１４０      第１ｐＨ調整装置
２１０      ガラス繊維濾紙
２２０      ホルダ
２２５      ヒータ
２４１      第１シリンジ
２５１      第２シリンジ
２８１      ポンプ
２７１      採取経路
【図１】
2016182080.tif 000005
【図２】
2016182080.tif 000006