(57)【要約】【課題】Th3マーチ関連疾患の治療及び予防、特に未病先防を可能とする医薬及び各種検査等の方法を提供する。【解決手段】本発明は、亜鉛、カルシウム及びリン、さらには南瓜子及び南蛮毛を含み、ジンクフィンガーの活性化能を有する、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用医薬組成物である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜鉛、カルシウム及びリンを含む、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用医薬組
成物。
【請求項２】
さらに南瓜子及び南蛮毛を含む、請求項１記載の医薬組成物。
【請求項３】
ジンクフィンガーを活性化させるものである、請求項１又は２記載の医薬組成物。
【請求項４】
Th3マーチ関連疾患が、アトピー性皮膚炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット
病、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、喘息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症
、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシーからなる群より選ばれる少なくとも１種である
、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
【請求項５】
被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得られた
測定結果を指標として、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物の投与を開始、
継続、中断又は終了する、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防方法。
【請求項６】
被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得られた
測定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防分類を検査する方法。
【請求項７】
被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得られた
測定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防薬の使用意思を決定す
る方法。
【請求項８】
被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得られた
測定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の診断方法。
【請求項９】
サイトカイン及びケモカインが、TGF-β1、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、
IL-13、IFN-γ及びRANTESからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項５〜８
のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
さらに血中の亜鉛濃度も測定する、請求項５〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
Th3マーチ関連疾患が、アトピー性皮膚炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット
病、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、喘息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症
、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシーからなる群より選ばれる少なくとも１種である
、請求項５〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
被験動物がヒト又は非ヒト動物である、請求項５〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
非ヒト動物がイヌである、請求項１２記載の方法。
【請求項１４】
サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マーチ関連疾患の治療及
び／又は予防分類の検査用キット。
【請求項１５】
サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マーチ関連疾患の治療及
び／又は予防薬の使用意思決定用キット。
【請求項１６】
サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マーチ関連疾患の診断用
キット。
【請求項１７】
サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体、並びに請求項１〜４のいずれか１項
に記載の医薬組成物を含む、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用キット。
【請求項１８】
抗体がビーズアレイに担持されたものである、請求項１４〜１７のいずれか１項に記載
のキット。
【請求項１９】
Th3マーチ関連疾患が、アトピー性皮膚炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット
病、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、喘息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症
、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシーからなる群より選ばれる少なくとも１種である
、請求項１４〜１８のいずれか１項に記載のキット。
【請求項２０】
サイトカイン及びケモカインが、TGF-β1、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、
IL-13、IFN-γ及びRANTESからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項１４〜
１９のいずれか１項に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Th3マーチ関連疾患の、治療及び予防用医薬組成物、治療、予防及び診断方
法、治療及び予防分類の検査方法、治療及び予防用薬剤の使用意思決定方法、治療及び予
防分類の検査用キット、治療及び／又は予防用薬剤の使用意思決定用キット、並びに診断
用キット等に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、アレルギー疾患等の免疫疾患の治療においては、患者の遺伝的背景の多様なヒト
においては、同じような症状ではあっても、患者毎にその原因及び治療方法が異なる可能
性があるため、患者個々人の免疫機能を知ることが重要であると言われている。しかしな
がら、専ら動物実験などの結果から示唆するにとどまっており、十分に治療に応用可能な
具体的手法については、明らかにされていなかった。
アレルギー疾患の特徴として、アレルギーの中心症状が年齢によって変化するアレルギ
ーの連鎖現象、すなわちアレルギーマーチがあることが知られている（非特許文献１）。
例えば、アトピー素因のある人が、乳幼児期にアトピー性皮膚炎になり、その後幼児期に
は気管支喘息になり、さらに成人になるとアレルギー性鼻炎を発症するというものである
。このような疾患マーチによる症状の継続及び新規症状の発症は、社会的にも大きな問題
となっており、早急な対策が望まれている。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００３】
【非特許文献１】Peter I Frank et al., ”Long term prognosis in preschool children with wheeze: longitudinal postal questionnaire study 1993-2004”, BMJ, vol. 336, p. 1423-1426, 2008
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者は、哺乳類における新規Th3マーチ（Th3 march）を規準化した。このTn3マー
チは亜鉛細胞サイトカインシグナル伝達を経由する。Th3マーチは細胞表面のBMP（Bone M
orphogenetic Protein；骨形成タンパク質）とTGF-β1（新たにTGF-β1/Th3マーチと定義
）によって、細胞に伝達されるカルシウムとリン、さらにIFNとIL-13（Znf）により制禦
されている（図２Ａ及び図２Ｂ〜２Ｃ参照）。特に、臨床的に年令によって病変のみられ
る順序を新規に定義した。Th3マーチは若令から順に、Th1生体反応依存性（骨疾患）、Th
2生体反応依存性アトピー（結合組織の異常としての皮膚疾患）、及びTh3生体反応（重篤
治癒阻害因子）とマーチするが、これらTh3マーチ関連疾患の具体的な治療及び予防方法
並びに各種検査、決定及び評価方法はない。
【０００５】
このような状況下において、Th3マーチ関連疾患の治療及び予防、特に未病先防（マー
チングにより次段階に発症すると思われる疾患を未然に予防すること、ひいては早期治療
に介入すること）を可能とする医薬及び各種検査等の方法の開発が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記状況を考慮してなされたものであり、本発明者は、Th3マーチの到達部
位をジンクフィンガー(Znf)（DNA修復能）とし、その伝達経路に作用する新規薬剤を作出
した。また、この評価をTh9細胞とZnf活性化により亢進するIL-13で行う新規サイトカイ
ンパネルを開発した。Th3マーチを当該サイトカインパネルで評価し、その評価結果を指
標として上述の新規薬剤を投与等する、Th3マーチ関連疾患の治療、予防、診断及び各種
検査等の方法、並びにこれら方法に用いるキットを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、以下に示す、Th3マーチ関連疾患の、治療及び予防用医薬組成物
、治療、予防及び診断方法、治療及び予防分類の検査方法、治療及び予防用薬剤の使用意
思決定方法、治療及び予防分類の検査用キット、治療及び／又は予防用薬剤の使用意思決
定用キット、並びに診断用キット等を提供するものである。
【０００８】
（１）亜鉛、カルシウム及びリンを含む、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用医
薬組成物。
上記(1)の医薬組成物は、例えば、さらに南瓜子及び南蛮毛を含むものであってもよい
。
上記(1)の医薬組成物は、例えば、ジンクフィンガー（具体的にはそのDNA修復能）を活
性化させるものが挙げられる。
上記(1)の医薬組成物において、Th3マーチ関連疾患としては、例えば、アトピー性皮膚
炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット病、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、喘
息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシー
からなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げられる。
【０００９】
（２）被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得ら
れた測定結果を指標として、請求項１〜４のいずれか１項に記載の医薬組成物の投与を開
始、継続、中断又は終了する、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防方法。
（３）被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得ら
れた測定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防分類を検査する方
法。
（４）被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得ら
れた測定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防薬の使用意思を決
定する方法。
【００１０】
（５）被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモカインの濃度を測定し、得ら
れた測定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の診断方法。
上記(2)〜(5)の方法において、サイトカイン及びケモカインとしては、例えば、TGF-β
1、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IFN-γ及びRANTESからなる群より
選ばれる少なくとも１種が挙げられる。また、上記(2)〜(5)の方法は、これらサイトカイ
ン及びケモカインのほか、さらに血中の亜鉛濃度も測定する方法であってもよい。
上記(2)〜(5)の方法において、Th3マーチ関連疾患としては、例えば、アトピー性皮膚
炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット病、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、喘
息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシー
からなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げられる。
上記(2)〜(5)の方法において、被験動物としては、ヒト又は非ヒト動物が挙げられ、非
ヒト動物としてはイヌが挙げられる。
【００１１】
（６）サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マーチ関連疾患の治
療及び／又は予防分類の検査用キット。
（７）サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マーチ関連疾患の治
療及び／又は予防薬の使用意思決定用キット。
（８）サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マーチ関連疾患の診
断用キット。
（９）サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体、並びに請求項１〜４のいずれか
１項に記載の医薬組成物を含む、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用キット。
上記(6)〜(9)のキットにおいて、サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体は、
例えば、ビーズアレイに担持されたものが挙げられる。
【００１２】
上記(6)〜(9)のキットにおいて、Th3マーチ関連疾患としては、例えば、アトピー性皮
膚炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット病、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、
喘息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシ
ーからなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げられる。
上記(6)〜(9)のキットにおいて、サイトカイン及びケモカインとしては、例えば、TGF-
β1、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IFN-γ及びRANTESからなる群よ
り選ばれる少なくとも１種が挙げられる。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、Th3マーチ関連疾患の治療及び予防、特に未病先防、具体的にはマー
チングにより次段階に発症すると思われる疾患を未然予防する又は早期に治療することを
可能とする、医薬組成物を提供することができる。また、Th3マーチ関連疾患の未病先防
を実現するための、当該疾患の治療、予防及び診断方法、治療及び予防分類の検査方法、
治療及び予防用薬剤の使用意思決定方法、並びにこれら方法に用い得るキットを提供する
ことができる。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】Th3疾患マーチの一例を示す該略図である。イヌ797例の検査に基づくTh3マーチである（図中、年齢（0〜13才）はイヌの年齢）。なお、ヒト（238例）の検査においても同様のTh3マーチが認められた。
【図２Ａ】亜鉛Th細胞サイトカインシグナル伝達を示す該略図である。
【図２Ｂ】図２Ａの分解図としての図である。疾患マーチを利用したサイトカインパネル検査による未病先防に関し、各サイトカインシグナルの関連性と疾患等との関連性を示す。
【図２Ｃ】図２Ａの分解図としての図である。疾患マーチを利用したサイトカインパネル検査による未病先防に関し、各サイトカインシグナルの関連性と疾患等との関連性を示す。
【図２Ｄ】図２Ａの分解図としての図である。疾患マーチを利用したサイトカインパネル検査による未病先防に関し、血中サイトカインパネル検査に利用されるサイトカインとの関連性を示す。
【００１５】
【図３】イヌの関節リウマチでの特徴的骨吸収（Th1からTh2にシフトした骨吸収系疾患の例）を調べた結果を示す図である。
【図４】Th1生体反応性疾患である骨吸収像（治療前）と関節リウマチ炎症による関節炎、及び骨吸収と骨増生とが均衡したときの関節の改善像（治療後）を示す図である。
【図５】臨床的に改善された治療例におけるサイトカインパネル検査の結果をまとめた示した図である。
【図６】最重症アトピー性皮膚炎（前腕）の治療経過を示す図である。
【００１６】
【図７】エラースダンロス症候群（EDS）の症状を示す図である。
【図８】EDSについての単純Ｘ線検査の所見を示す図である。
【図９】骨ベーチェット病についての単純Ｘ線検査の所見を示す図である。
【図１０】骨ベーチェット病の治療経過を示す図である。
【００１７】
【図１１】EDSの治療経過を示す図である。
【図１２】マーチ喘息の悪化過程と治癒時についての単純Ｘ線検査の所見を示す図である。
【図１３】アトピー性皮膚炎の治療経過を示す図である。
【図１４】Th3マーチを想定して行った単純Ｘ線検査の所見を示す図である。
【図１５】DNA修復能を有するZnf（亜鉛フィンガー）の構造を示す図である。
【図１６】アトピー性皮膚炎あるいはTh3マーチの疾患に対する薬剤選定を実施する際のサイトカインパネル検査のためのZnfのDNA修復能などの位置関係を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
以下、本発明を詳細に説明する。本発明の範囲はこれらの説明に拘束されることはなく
、以下の例示以外についても、本発明の趣旨を損なわない範囲で適宜変更し実施すること
ができる。なお、本明細書において引用された全ての刊行物、例えば先行技術文献、及び
公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込まれる。
【００１９】
１．本発明の概要
免疫疾患の治療においては、Th1/Th2/Th3細胞のバランスにより表現される免疫バラン
スの是正が、特に重要である。これまでに特定の疾患で、特定のサイトカインやケモカイ
ンが上昇することは報告されていたが、いくつかのサイトカイン及びケモカインのパネル
で、疾患の特性を判断し、治療薬の投与等を決定する手法はなかった。
従来、この免疫バランスの測定には、細胞内サイトカインをフローサイトメーターにて
測定する方法が一般的であった。しかしながら、この方法は生きたリンパ球が必要であり
、検査できる範囲はかなり限定されていた。そこで本発明者は、このような免疫バランス
を血中のIL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IFN-γ, RANTES, TGF-β1の
サイトカイン及びケモカインを測定することにより、Th1/Th2/Th3細胞のバランスの測定
を可能とした。これまで、血液中に存在する微量のサイトカイン及びケモカインは、ELIS
A 法により測定されてきたが、手技上測定感度や多項目のサイトカインの測定には相当量
の血液が必要である等の理由により、前述のように多項目のサイトカイン及びケモカイン
を測定するのは非常に困難であった。本発明者は、近年開発されたビーズアレイを用い、
血中のIL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-13, IFN-γ, RANTES, TGF-β1のサ
イトカイン及びケモカインを測定することにより、各患者の免疫のバランスを知り、適切
な治療介入が可能となることを見出した。
【００２０】
すなわち、臨床上の疾患治療を、高度臨床検査技術と後述する治療薬（医薬組成物）等
で解決可能とした。例えば、アトピー患者では、アレルギーマーチと称されるように、乳
児期にアトピー性皮膚炎、次いで幼児期に気管支喘息やアレルギー性鼻炎・結膜炎が出現
するといったアレルギーの連鎖現象で、年齢とともにその症状は変化し進行する。そして
、気管支喘息などへと重症化することが知られている。最近では、未病先防という言葉に
代表されるように、できるだけ早い段階での適切な治療介入により、重症化が阻止できる
ことが分かっている。
なお、上記高度臨床検査技術等は、アレルギーのみならず、癌や自己免疫疾患など、免
疫の関与が推察される疾患の治療にも適用可能である。また、アトピー性皮膚炎、花粉症
、気管支喘息、癌といったような特定の疾患においては、前述のパネルの中から特定の疾
患用の項目（サイトカイン等）を限定したキットでも、治療分類検査に利用可能である。
【００２１】
本発明においては、多項目のサイトカイン等のパネルを用い、キーとなるサイトカイン
の測定により免疫バランスを明らかにすることを可能とし、さらにはその免疫バランス是
正のための治療及び予防薬や治療及び予防方法等も開発した。その結果、各個人の免疫バ
ランスに即した治療方法及び治療手順等を決定することができた。
その結果、Th3マーチ関連疾患の治療等において、未病先防のための検査方法や治療薬
等が完成された。Th3マーチとしては、限定はされないが、例えば、図１に示すような疾
患の流れ（つながり）がある。本発明に基づく、このような臨床的判断システムは、免疫
バランスの異常に関係すると推察される疾患の治療に大きく貢献するものと考えられる。
【００２２】
２．医薬組成物
本発明のTh3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用医薬組成物は、亜鉛を必須成分と
し、より好ましくは亜鉛、カルシウム及びリンを必須成分として含むものであるが、さら
に南瓜子及び南蛮毛を含むものであることがさらに好ましい。当該南瓜子（西洋南瓜子：
カボチャの成熟種子）及び南蛮毛は、いずれも加熱されたものであることが好ましい。
本発明の医薬組成物において、有効成分としての亜鉛（亜鉛剤）は、亜鉛単体及び各種
亜鉛化合物（例えば、亜鉛メチオネート等）や、これらを含む酵母（亜鉛酵母）等の形態
で提供されることが好ましい。
本発明の医薬組成物において、有効成分としての亜鉛、カルシウム及びリンの配合比（
重量比）は、限定はされないが、例えば、2.5〜3.5：1.5〜2.5：0.5〜1.5（＝亜鉛：カル
シウム：リン）であることが好ましく、特に好ましくは、同配合比が3：2：1である。ま
た、南瓜子及び南蛮毛は、上記カルシウムと同等の配合比であることが好ましい。
【００２３】
本発明の医薬組成物は、有効成分である亜鉛が、カルシウムとリンの働きで細胞内に取
り込まれることにより、細胞内のジンクフィンガー（亜鉛フィンガー）を活性化させる、
具体的には、ジンクフィンガーによるDNA修復機能を活性化させるものである（図２Ａ及
び図２Ｃ）。図２Ａ及び図２Ｃに示すように、当該活性化は、IL-13の亢進により確認す
ることができる。本発明の医薬組成物は、ジンクフィンガーを活性化させることにより、
例えば、亜鉛トランスポーター（Znt）の遺伝子欠損が原因となって発症する後述のエラ
ースダンロス症候群について、結果的に当該遺伝子欠損を修復することによって治療等す
ることもできる。
本発明の医薬組成物の治療及び予防対象となるTh3マーチ関連疾患としては、限定はさ
れないが、具体的には、アトピー性皮膚炎、エラースダンロス症候群、骨ベーチェット病
、陽性肢端炎、外耳炎、胃炎、腸炎、喘息、濃皮症、過敏性肺炎、慢性気管炎、花粉症、
アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシーからなる群より選ばれる少なくとも１種が挙げら
れ、また癌（骨肉腫等）や自己免疫疾患（慢性関節リウマチ等）など、免疫の関与が推察
される疾患も挙げられる。
【００２４】
また、本発明の医薬組成物の投与対象となる動物（被験動物）としては、上記各種Th3
マーチ関連疾患が発症し得る哺乳動物であればよく、限定はされず、ヒト及び各種非ヒト
哺乳動物が挙げられる。非ヒト哺乳動物としては、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブ
タ、ヒツジ、ヤギ、マウス、ラット、ウサギ、モルモット及びハムスター等が挙げられ、
中でも、イヌ、ネコ及びウマ等が好ましく、イヌが特に好ましい。
本発明の医薬組成物は、前述した亜鉛等の有効成分のほかに、さらに薬学的に許容され
る担体を含む形態で提供されてもよい。「薬学的に許容され得る担体」とは、賦形剤、希
釈剤、増量剤、崩壊剤、安定剤、保存剤、緩衝剤、乳化剤、芳香剤、着色剤、甘味剤、粘
稠剤、矯味剤、溶解補助剤あるいはその他の添加剤等が挙げられる。そのような担体の１
種以上を用いることにより、カプセル剤、注射剤、液剤、懸濁剤、軟膏、乳剤あるいはシ
ロップ剤等の形態の医薬組成物を調製することができる。これらの医薬組成物は、経口あ
るいは非経口的に投与することができる。経口投与の態様としては、例えば口腔投与、口
腔内投与、舌下投与、歯肉塗布、粘膜投与、噴霧投与などが挙げられる。非経口投与のた
めの投与形態としては、常法により処方される注射剤（皮下投与及び静注投与用の注射剤
）や、経皮投与（塗布）、経鼻等による粘膜投与及び噴霧投与などが含まれる。注射剤の
場合には、生理食塩水又は市販の注射用蒸留水等の薬学的に許容される担体中に溶解また
は懸濁することにより製造することができる。なお、本発明の医薬組成物の投与において
は、限定はされないが、経口投与（具体的には上述の通り）が好ましい。
【００２５】
本発明の医薬組成物中、有効成分としての亜鉛、カルシウム及びリン（南瓜子及び南蛮
毛を用いる場合はこれらも含む）の合計含有量（含有割合）については、Th3マーチ関連
疾患の治療効果が発揮される程度であれば、特に限定はされないが、例えば、10〜100重
量％が好ましく、より好ましくは20〜100重量％、さらに好ましくは50〜100重量％である
。
本発明の医薬組成物の生体内への投与量は、限定はされず、Th3マーチ関連疾患の病状
、患者の年齢、性別、体重及び病態、治療効果、投与方法、処理時間などにより異なって
いてもよく、治療分類検査キットでモニター等しながら又は症候の推移を評価しながら、
適宜設定することができる。
【００２６】
本発明の医薬組成物の生体内への投与量については、具体的には、治療として最終的に
血清中に亜鉛（Zn）濃度が55μg/mL以上、好ましくは60μg/mL以上、より好ましくは95μ
g/mL以上、さらに好ましくは、内在型Th3生体反応が0.88％以上の正常値に達し、同時に
血清亜鉛濃度が60μg/mL以上となるように、適宜投与計画等（１回あたりの投与量、１日
平均あたりの投与回数等）を立てて生体内に投与すればよく、限定はされない。特に、イ
ヌにおいては、血清中に亜鉛（Zn）濃度が85μg/mL以上であることが好ましい。なお、血
清中の亜鉛濃度は、正常値の上限を超え中毒症状を回避しながら生体に投与することが望
ましい。
【００２７】
特に、治療対象となる哺乳動物がヒトである場合は、本発明の医薬組成物の投与量は、
亜鉛についてみたときに、１回の投与において、亜鉛（Zn）換算で1mg/kg体重〜10g/kg体
重であることが好ましく、より好ましくは2mg/kg体重〜2g/kg体重、さらに好ましくは2 m
g/kg体重〜10mg/kg体重である。また、対象となる哺乳動物がイヌ及びネコ等である場合
は、本発明の医薬組成物の投与量は、亜鉛についてみたときに、１回の投与において、亜
鉛（Zn）換算で1mg/kg体重〜10g/kg体重であることが好ましく、より好ましくは2mg/kg体
重〜2g/kg体重、さらに好ましくは2mg/kg体重〜10mg/kg体重である。
なお、本発明は、Th3マーチ関連疾患を治療する医薬（薬剤）を製造するための亜鉛（Z
n）、カルシウム及びリン（南瓜子及び南蛮毛を用いる場合はこれらも含む）（下記にお
いて、亜鉛等という）の使用を提供するものでもある。また、本発明は、Th3マーチ関連
疾患の治療用の亜鉛等を提供するものでもある。さらに、本発明は、亜鉛等を用いること
（すなわち亜鉛等を患者に投与すること）を特徴とするTh3マーチ関連疾患の治療方法を
提供するものであり、また、Th3マーチ関連疾患を治療するための亜鉛等の使用を提供す
るものでもある。
【００２８】
３．治療及び予防方法等
本発明の医薬組成物は、前述の通り、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防方法に
用いることができる。具体的には、被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモ
カインの濃度を測定し、得られた測定結果を指標として、本発明の医薬組成物の投与を開
始、継続、中断又は終了することを特徴とする、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予
防方法が提供される。
ここで、血中濃度を測定するサイトカイン及びケモカインとしては、限定はされないが
、TGF-β1、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IFN-γ及びRANTESからな
る群より選ばれる少なくとも１種が好ましく挙げられる。本発明においては、さらに血中
の亜鉛濃度も測定することが好ましい。
【００２９】
ここで、各種サイトカイン及びケモカインの定義について、従来公知の内容及び本発明
者が見出した内容（※印）を含めて、以下に示す。
【００３０】
・TGF-β1： 免疫細胞や癌細胞が産生し、免疫抑制的に作用する、抗炎症サイトカイン。
TGF-β1は、リンパ球（T細胞やB細胞）の増殖・分化を抑制またNK細胞活性を抑制する。
その結果、免疫応答、炎症反応、造血が、抑制される。TGF-β1はIL-6あるいはIL-4の存
在により、Th17細胞に分化する。
【００３１】
・IL-1β： 単球・マクロファージ、Bリンパ球、内皮細胞、ケラチノサイトなどから産生
されるサイトカインで、脳視床下部の温度中枢に作用して、発熱を引き起こす内因性発熱
物質でもある。また、Tリンパ球を活性化してIL-2の産生を亢進させるサイトカインであ
る。
【００３２】
・IL-4： 活性化されたCD4T細胞（Th2細胞）、CD8T細胞、マスト細胞、好塩基球、NKT細
胞から産生されるサイトカインである。Th2細胞の増殖や分化を促進するサイトカインで
あり、いわゆる液性免疫を調節する代表的サイトカインである。活性化されたB細胞に作
用し、IgMから、IgG1、IgEへのクラススイッチを促進させ、IgG1抗体、IgE抗体の産生を
促進する。IFN-γの作用に拮抗し、IgG2へのクラススイッチを抑制する。
※アトピーはTh2優位の疾患であるが、初期の治癒過程にあっては臨床症状の良化とは
関連性がなかった。また、そのアレルギー・アトピーにおける量的変化は大きくはなかっ
た。
【００３３】
・IL-5： IL-5はTh2細胞やマスト細胞から産生されるサイトカインで、B細胞の増殖、抗
体産生を促進する。また、IL-5は好酸球系前駆細胞に働いて, 選択的な好酸球の増殖なら
びに分化を引き起こす。
※小児から重症アトピーの患者様は皮膚の治癒後、治り際における掻痒症が愁訴として
聴取されるが、この原因として挙げられる。
【００３４】
・IL-6： 単球/マクロファージ、血管内皮細胞、線維芽細胞、ケラチノサイトなどから産
生される。B細胞や抗体産生細胞を増殖させ、IgG、IgM、IgAを産生させる（抗体産生増強
）T細胞の分化や活性化にも関与する。また肝細胞に作用し、CRP、ハプトグロビンなどの
急性期蛋白を誘導する。
【００３５】
・IL-9： IL-9 はTh9と呼ばれているTヘルパー系細胞から分泌されることが最近、明らか
となった。この細胞は、IL-4やIL-5、IL-13を産生せずに、もっぱらIL-9やIL-10を産生す
る。新しいT細胞やB細胞、マスト細胞の増殖を促進することが報告されていて、Th9細胞
はTGF-βで誘導したTh2細胞からか、またはTGF-βとIL-4による未熟CD4+ T細胞から直接
分化できる。
※Th9細胞から産生され、ヒトやイヌにおけるアトピー疾患におけるIL-9の産生はアレ
ルギーやアトピーの本態であった。その量的な産生量が高値で、最重症アトピー（皮膚の
異常が36％以上の患者様）の治癒過程でのバイオパラメータであった。
【００３６】
・IL-10： IL-10は主にTh2細胞から産生され、他にも単球、活性化B細胞、ケラチノサイ
トなど様々な種類の細胞より産生される。IL-10はTh1細胞からのIFN-γ産生を抑制し、ま
たマクロファージからのIL-1、IL-6、Il-12、TNF-αの産生を抑制する。
【００３７】
・IL-13： IL-13は主にTh2細胞から産生される他、NK細胞、樹状細胞からも産生されるサ
イトカインで、B細胞の分化・増殖、マクロファージの炎症性サイトカイン産生の抑制しM
HCクラスII分子を発現に働く。B細胞に作用し、T細胞依存的増殖、IgEへのクラススイッ
チを促進する。また単球からの炎症性サイトカイン産生を抑制し、NK細胞からのIFN-γ産
生を増強する。
※亜鉛トランスポーター（Znt）と亜鉛フィンガー（Znf）の活性化、PAD（亜鉛酵母含
有薬）使用時にZnfが産生するサイトカインである。また、Znt欠損疾患においてZnfが作
用することにより、当該疾患が改善されたときに産生されるサイトカインである。
【００３８】
・IFN-γ： CD4T細胞のTh1細胞、CD8T細胞、NK細胞、NKT細胞から産生される：IFN-γは
、主に、CD4陽性ヘルパーT細胞（特に、Th1細胞）や、CD8陽性キラーT細胞（CTL）が産生
するが、IL-12で活性化されたNK細胞やNKT細胞も、ＩＦＮ-γを産生する。抗ウイルス効
果、NK細胞やCTLやマクロファージの細胞障害活性の増強作用がある。マクロファージに
よる一酸化窒素（NO）産生を、高める、細胞内寄生菌の殺菌を促進する。MHCクラスII分
子の発現を促進する。Th1細胞が産生するIFN-γは、Th2細胞のCD40リガンド発現を抑制し
、IgE抗体産生を抑制する。Th1細胞が産生するIFN-γは、ナイーブヘルパーT細胞（Th0細
胞）のTh1細胞への分化を促進し、Th2細胞の生成を抑制する。
【００３９】
・RANTES（Regulated upon Activation, Normal T cell Expressed and Secreted）： RA
NTESはTリンパ球、好酸球、マクロファージ、線維芽細胞、気道上皮細胞、メザンギウム
細胞, 腎尿細管上皮細胞などが遊離する。好酸球遊走活性、接着能増強、好酸球活性酸素
産生増強に働く。特にアレルギー性炎症の場におけるT細胞の集積とその作用に深く関わ
っている。
【００４０】
本発明の治療及び／又は予防方法において、対象となるTh3マーチ関連疾患、投与する
被験動物については、前記２.項における説明が同様に適用できる。
本発明の治療及び／又は予防方法では、被験動物における血中の各種サイトカイン及び
／又はケモカインの濃度を測定し（「サイトカインパネル検査」ということがある）、そ
の測定結果（すなわち、どのサイトカイン等がどの程度発現亢進又は抑制されているか）
に基づいて、当該被験動物の現状の疾患の有無及びその病状（病態）を判定するとともに
、Th3マーチとして次に発症すると想定される疾患の種類についても判定する。この判定
結果に基づいて、Th1/Th2/Th3細胞のバランスをどのようにとるのがよいかを検討し、前
述した本発明の医薬組成物の投与に関して開始、継続、中断又は終了のいずれかを選択す
る。ここで、投与の開始及び継続には、投与期間や投与量を一定にする又は増減させるこ
とも含む。すなわち、本発明の医薬組成物は、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防
用のものであるが、一般的な薬剤のように投与の開始や継続という使用態様のみではなく
、サイトカインパネル検査の結果に応じて投与の中断や終了という態様も選択され得るも
のである。現状の疾患の治療等とともに将来予想される疾患の予防（未病先防）も併せて
行うような場合は、Th1/Th2/Th3細胞のバランスを適度に保持させるため、通常であれば
投与を継続するところを敢えて中断又は終了することも必要な場合があるが、結果として
、DNA修復能（IL-13で評価）による早期介入（早期治療への介入）が期待でき、Th3マー
チ関連疾患の治療等に要する時間や使用する薬剤量等を低減することができる。
【００４１】
なお、サイトカインパネル検査における各サイトカイン等の血中濃度について、健常人
値に比較して高値と判断される値の目安を以下に例示する。
【００４２】
TGF-β1：  5 ng/ml以上
IL-1β：  1 pg/ml以上
IL-4：  2 pg/ml以上
IL-5：  2 pg/ml以上
IL-6：  10 pg/ml以上
IL-9：  30 pg/ml以上
IL-10：  1pg/ml以上
IL-13：  2 pg/ml以上
IFN-γ：  100 pg/ml以上
RANTES：  2000 pg/ml以上
【００４３】
本発明においては、上述のように被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモ
カインの濃度を測定し（さらに血中亜鉛濃度も測定することが好ましい。）、得られた測
定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防分類を検査する方法、並
びにTh3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防薬の使用意思を決定する方法も提供される
。ここで、治療及び予防分類検査とは、サイトカインパネル検査の結果から、現状どのよ
うなTh3マーチ関連疾患を発症しているか、又は将来どのようなTh3マーチ関連疾患を発症
し得ると予想されるかなど、Th3マーチ関連疾患の種類の判定及び予想を行う検査である
。また、治療及び／又は予防薬の使用意思決定とは、サイトカインパネル検査の結果から
、Th1/Th2/Th3細胞のバランスを適度に保持するために、本発明の医薬組成物を使用する
（投与する）必要性や、使用する場合はどの程度の投与量がよいかなどを決定することを
いう。
【００４４】
本発明においては、上述のように被験動物における血中のサイトカイン及び／又はケモ
カインの濃度を測定し（さらに血中亜鉛濃度も測定することが好ましい。）、得られた測
定結果を指標として、Th3マーチ関連疾患を診断する（検出する）方法も提供される。具
体的には、サイトカインパネル検査の結果から、現状どのようなTh3マーチ関連疾患を発
症しているか、又は将来どのようなTh3マーチ関連疾患を発症し得ると予想されるか、さ
らには現状発症している疾患については病状及び病態について、判定をすることができる
。
【００４５】
４．キット
本発明においては、サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体を含む、Th3マー
チ関連疾患の治療及び／又は予防分類の検査用キット、Th3マーチ関連疾患の治療及び／
又は予防薬の使用意思決定用キット、並びにTh3マーチ関連疾患の診断用キットが提供さ
れる。これら各種キットは、それぞれ、前記３.項で説明した各種方法におけるサイトカ
インパネル検査の実施に用いることができる。
また本発明においては、サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体、並びに前述
した本発明の医薬組成物を含む、Th3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防用キットも提
供される。当該治療及び／又は予防用キットの使用態様としては、当該抗体を用いるサイ
トカインパネル検査による各種サイトカイン等の血中濃度の測定結果を指標とし、本発明
の医薬組成物の被験動物への投与形態を決定して投与等することが好ましい。当該キット
をこのように使用する場合、当該キットはTh3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防薬と
して取り扱うこともできる（詳細は前述したTh3マーチ関連疾患の治療及び／又は予防方
法における説明が適宜適用できる。）。
【００４６】
本発明のキットにおいて、対象となるTh3マーチ関連疾患、サイトカイン及びケモカイ
ンについては、前記２.項及び３.項における説明が同様に適用できる。
本発明のキットにおいては、各種サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体は、
例えば、ビーズアレイ等に担持されたものであることが好ましい。ビーズアレイを用いた
場合、採取した血液サンプルから一度に多数のサイトカイン等の濃度を簡易に検出できる
ように、キットをコンパクトな構成とすることができる。また、ビーズアレイを用いる以
外に、ELISA、ウエスタンブロット法、イムノクロマト法（金コロイド法）を用いる、又
はビーズアレイと併用することもできる。
【００４７】
本発明のキットは、各種サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体以外に他の構
成要素を含むこともできる。他の構成要素としては、例えば1次抗体検出用試薬、発色基
質、各種バッファー、血漿採取用の各種器機及び容器、抗原抗体反応に使用し得る各種容
器、使用マニュアル等が挙げられる。具体的には、本発明のキットが、ビーズアレイ、EL
ISA、ウエスタンブロット法を利用するキットである場合は、他の構成要素としては、さ
らに1次抗体検出用試薬、発色基質等を挙げることができる。また、イムノクロマト法（
金コロイド法）を利用するキットである場合は、金コロイド標識抗体や各種固相化抗体に
加え、ニトロセルロースメンブレンやサンプルパッドやコンジュゲートパッド等を備えた
テストスティック等を挙げることができる。
本発明のキットは、構成要素として少なくとも前述した各種サイトカイン及び／又はケ
モカインに対する抗体を備えているものであればよい。従って、Th3マーチ関連疾患の診
断等に用いる構成要素の全てを、当該抗体と共に備えているものであってもよいし、そう
でなくてもよく、限定はされない。
【００４８】
５．Znf（亜鉛フィンガー）のDNA修復能をサイトカインカインで置き換えて評価する方法
、及び当該評価方法による薬剤の選定方法
DNA修復能を有するZnf（亜鉛フィンガー）の構造を図１５に示した。
図１５の構造をサイトカインパネル検査でIL-13を含めて測定するために、サイトカイ
ンの産生あるいはアミノ酸の配列との関係を明らかにした（図１６：サイトカインで置換
したパターン）。
図１６はアトピー性皮膚炎あるいはTh3マーチの疾患に対する薬剤選定を実施する際の
サイトカインパネル検査のためのZnfのDNA修復能などの位置関係を示したものである。ア
トピーに関連したTh2サイトカインであるIL-4は、第263〜287番目のローカスに存在する
。次いで、Th1サイトカインであるインターフェロンγ（IFN-γ：ヒト、イヌやネコなど
の哺乳類）はC末端である第318〜341番目のローカスに首座の産生部位が存在する。
【００４９】
N末端のIL-４産生部位の中で第264番目にはIL-5（ヒト、イヌやネコなどの哺乳類）の
存在あるいはIL-13の存在も指摘された。DNA修復能の首座は、第304〜306番目に位置して
おり、Znfの活性化のシグナルであるIL-13の首座は、図１６中、第368番目にサイトカイ
ン産生部位が位置している。亜鉛の指Znf／PADの投与時の薬効をはじめとして、各種薬剤
の評価をこの関係から評価することが可能となった（実施例参照）。また、このサイトカ
インパネル検査を駆使することにより薬剤の評価も可能である。
ついで、Ｎ末端からＣ末端までの翻訳時間は約6週間であり、間接的に薬効の発現時間
の推定も可能である。ヒトの最重症アトピー性皮膚炎の患者における亜鉛の指Znf／PADの
投与期間などの設定も可能となった（別途実施例を参照：IL-13の産生能）。
【００５０】
以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定され
るものではない。
【実施例１】
【００５１】
＜Th3マーチを利用した早期介入／未病先防＞
【００５２】
【表１Ａ】
2016106121.tif 000002
【００５３】
【表１Ｂ】
2016106121.tif 000003
【００５４】
【表１Ｃ】
2016106121.tif 000004
【００５５】
定義と概説：
Th3マーチは本発明者により初めて明らかにされた。亜鉛細胞サイトカインシグナル伝
達を経由するTh3マーチは細胞表面のBMP（骨形成タンパク質）とTGF-β1（新たにTGF-β1
/Th3マーチと定義）によって、細胞に伝達されるカルシウムとリン、さらにIFNとIL-13（
Znf）により制禦されている。特に、臨床的には年令によって病変のみられる順序が比較
的に明瞭であった。Th3マーチは若令から順に、Th1生体反応依存性（骨疾患）、Th2生体
反応依存性アトピー（結合組織の異常としての皮膚疾患）、及びTh3生体反応（重篤治癒
阻害因子）とマーチした。その後のマーチは骨系あるいは結合組織系で年令と共にマーチ
する。このときに、臨床的に発病し、イヌ又はヒト若令性関節リウマチ（Th1骨組織系病
）、イヌもヒトも3才でアトピー性皮膚炎（Th2結合組織系病）を現し、Th3系疾患に移行
する。Th3生体反応性病はTh1生体反応とTh2生体反応が混在したものである。年令の進ん
だ時に見られるTh3生体反応性病は亜鉛ならびにZntの異常や欠損症（エラースダンロス症
候群（EDS）など）を介することから、Th1又はTh2生体反応性病を重篤化しながら精神障
害（双極性障害I型やII型、ヒトの精神遅発障害など）を併発し、例えば最重症アトピー
（実施例参照）を誘導する。また、臨床的に骨系では骨ベーチェットから骨肉腫が誘導さ
れることが指摘されている。Th1からTh2にシフトした骨吸収系疾患の例を図３に示した。
【００５６】
図３は、イヌの関節リウマチでの特徴的骨吸収を調べた結果である。亜鉛細胞サイトカ
インシグナル伝達を経由するTh3マーチは細胞表面のBMP及びTGF-β1を経路としてマーチ
する。イヌの遺伝子組換え型インターフェロン-γ（IFN-γ）治療経過と共に骨吸収が優
位であったが（IFN-γ投与群）、その一方で骨吸収を調べたところ相互排他的にBAPは増
強する臨床的発見をした。その後、治癒がみられると（図４）骨吸収と骨増生は均衡して
いた。しかしながら、その後Th3生体反応が増強し、臨床的にはアトピー性皮膚炎を誘導
した。
【００５７】
図４では、単純Ｘ線所見は、Th1生体反応性疾患である骨吸収像（治療前）とリウマチ
炎症による関節炎を示した。また、図４右図の治療後では、骨吸収と骨増生とが均衡した
ときの関節の改善像を示した。Th1関節炎を治療したところ（IFN-γ ４MUを関節内に直接
投与）、関節周囲の浸潤と関節の炎症による透過性亢進像は著しく改善された。図４右図
の治療後の所見では肘関節における滑車切痕は可視化され、著しい良化改善傾向が観察さ
れた（評価：治療前は散歩を嫌っていたが、散歩（5分程度）が可能となった。なお、同
種正常犬における標準的散歩時間は30分以内である。）。
【実施例２】
【００５８】
＜アトピー性皮膚炎に対するサイトカインパネル検査の策定＞
１．健常者のサイトカインパネル
健常者と認められる248名に対してサイトカインパネル検査を実施し、測定値が高く再
検により臨床的指摘（喫煙（20本/日）や花粉症）を受けた者や高齢者を除いたボランテ
ィア63名のサイトカインパネルを、下記表１Ｄのサイトカインパネルに示した。この表か
ら各疾患（最重症アトピー性皮膚炎）の患者の特徴を、別途患者のサイトカインパネルと
した。（なお、イヌ等の動物についても同様なサイトカインパネル検査を実施した。）
【００５９】
【表１Ｄ】
2016106121.tif 000005
【００６０】
２．小児アトピー性皮膚炎のサイトカインパネル治療分類検査の項目
小児アトピー性皮膚炎のTh3マーチにおける評価と治療（早期介入・未病先防）の一元
化によるサイトカインパネル検査に必要な検査の項目を下記表２に記載した。
【００６１】
【表２】
2016106121.tif 000006
【００６２】
３．重症アトピー性皮膚炎のサイトカインパネル治療分類検査の項目
重症アトピー性皮膚炎の亜鉛細胞サイトカインシグナル伝達を利用したTh3マーチにお
ける評価と治療（早期介入・未病先防）の一元化によるサイトカインパネル検査に必要な
検査の項目を下記表３に記載した。
【００６３】
【表３】
2016106121.tif 000007
【００６４】
４．最重症アトピー性皮膚炎のサイトカインパネル治療分類検査の項目
哺乳類における最重症アトピー性皮膚炎の亜鉛細胞サイトカインシグナル伝達を利用し
た最も典型的な病態が形成され、臨床的には亜鉛又はZntに依存した精神障害を呈する。
この関係はTh3マーチに織り込んでおかない限り、本発明の医薬組成物（「亜鉛の指Znf／
PAD」（単に「亜鉛の指Znf」と表記することもある）と称することがある）による治癒は
望めない。そこで、Th3マーチにおける評価と治療（早期介入・未病先防）の一元化によ
るサイトカインパネル検査に必要な検査の項目を検討して下記表４に記載した。なお、本
発明の医薬組成物（「亜鉛の指Znf／PAD」）の詳細を表５に示した（以下、本願明細書の
各実施例において同様）。
【００６５】
【表４】
2016106121.tif 000008
【００６６】
【表５】
2016106121.tif 000009
【実施例３】
【００６７】
＜亜鉛シグナルTh3アトピー性皮膚炎のサイトカインパネル検査と治癒評価＞
（血清中亜鉛濃度/精神遅発障害等、Th9アレルギーアトピー細胞/IL-9、BAP/BMP/TGF-β1
を含んで診断や投薬を実施するキット。また、Znf活性化/IL-13を加えた治療評価：他の
実施例を参照）
【００６８】
【表６】
2016106121.tif 000010
【００６９】
検体は9名分の軽度アトピー性皮膚炎の凍結血漿であった。
結果：サイトカインパネル治療分類検査の項目と、Th3マーチを利用した新規亜鉛の指Z
nf／PADによる診断治療キット使用のための項目を表６に示した。
該当した項目を表中の塗り潰し（赤）で示した。このために最小広告に入れるべきサイ
トカインパネルの項目は、IL-1b、IL-1ra、IL-2、IL-4、IL-5、IL-17、IL-13とIL-9（治
療評価）、FGF、G-CSF、G-CSF、IP-10などであった。本実施例ではこの他の項目を含めて
測定したものである。例えば、RANTES、VEGE（以上花粉症関連項目）や27種サイトカイン
パネルである場合を含むものである。
【実施例４】
【００７０】
＜Th3マーチ花粉症のTh3マーチまたは花粉症のサイトカインパネル検査と治癒評価＞
（哺乳類のTh9アレルギーアトピー細胞/IL-9、BAP/BMP/TGF-β１を含んで診断や投薬を実
施するキット。また、Znf活性化/IL-13を加えた治療評価：他の実施例を参照）
【００７１】
【表７】
2016106121.tif 000011
【００７２】
検体は58名分の花粉症の凍結血漿であった。
結果：（新定義のために実施した）サイトカインパネル治療分類検査の項目と、Th3マー
チを利用した新規亜鉛の指Znf／PADによる診断治療キッド使用のための項目を表に示した
。
該当した項目を表中の塗り潰し（赤）で示した。このために最小項目に入れるべきサイト
カインパネルの項目は、IL-1b、IL-1ra、IL2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-9、IL-10、I
L-12、IL-13、IL-15、IL-17、Eotaxin、FGF、G-CSF、G-CSF、INF-γ、IP-10、MIP-1b、TN
F-αなどであった（上記標準サイトカインパネルとは異なる）。また、早期介入療法では
Th1生体反応、インターフェロン-γ、IL-13とIL-9などは治療評価としてサイトカインパ
ネルに含めて診断治療を一括して実施する。本実施例ではこの他の項目を含めて測定した
ものである。
【００７３】
患者の例：花粉症に罹患した40台後半の男性の患者
【００７４】
【表８】
2016106121.tif 000012
【００７５】
結果：サイトカインパネルの有用性が確認され、Th3マーチを利用した早期介入薬剤キ
ットの使用が可能となった。また、IL-4の産生もなく、血管障害が強く（VEGF、PANTES）
TGF/FGFの異常があり、Th3マーチの抑制期にあることがサイトカインパネルから決定され
た。呼吸器系の軟骨と結合組織が脆弱化し、潜在的には血管透過性が強調された病態にあ
り、刺激（花粉）による症状発現（鼻汁など）がよく理解できる治療分類検査であること
が証明された。
【実施例５】
【００７６】
＜イヌのTh2-Th3シフトマーチEDSのサイトカインパネル検査と、本発明の医薬組成物によ
る治癒の評価及びDNA修復能＞
イヌのZnt遺伝子欠損病であるEDSのサイトカインパネル検査の確認結果を下記表９に示
した。
【００７７】
【表９】
2016106121.tif 000013
【００７８】
結果：典型的なTh3マーチの症例でアレルギーが強いことが観察された。本発明の医薬
組成物で加療され、発毛と被毛の改善がみられた。
Znt又はZnfに影響するFDSのイヌの症例で、FGFも低値で臨床診断も含めEDSとサイトカ
インパネルで評価が可能であった。
【実施例６】
【００７９】
＜イヌのTh3マーチ関連疾患としてのEDSのサイトカインパネル検査と、本発明の医薬組成
物の治癒の評価及びDNA修復能＞
【００８０】
【表１０】
2016106121.tif 000014
【００８１】
結果：やはりアトピーとは鑑別診断された。病態は別途の実施例を参照。
血清亜鉛濃度は低値であったが、臨床症状は改善された。Th9細胞が高く、逆にIP-10が
低値な特徴がみられ、症例はTh3マーチにも合致して観察された（別途実施例参照）。
（Th3マーチのうちTh1-Th2マーチは別途実施例で示した。アトピーの治療阻害因子。）
【実施例７】
【００８２】
＜サイトカインパネル検査のアトピー性皮膚炎に対する有効性＞
アトピー性皮膚炎では、Th2よりTh9/IL-9の方がバイオパラメーターとして有用であっ
た。
IL-9/Th9細胞は、いわゆるアレルギーの責任細胞であり、IL-9をIL-4の十倍以上産生し
、哺乳類のアトピー・アレルギーの改善と共に低下し、特にアトピーの治療時にはその逆
相関性がみられる。IL-9/Th9細胞はアトピーの治療の新規のパラメータになることが分か
った。また、最重症アトピーの患者では、血漿中TGF-β1が高く、なおかつTh3生体反応（
薬剤を投与されたときのTh細胞のin vivoでの動態のこと）とTh1生体反応が低いときに、
その治療効果がみられるときにはIL-9/Th9が抑制される一方で、IL-13(Znf活性)は上昇す
る。また、哺乳類のアトピーの治癒時にはIL-9/Th9細胞とIL-13(Znf活性)は同様のことが
観察され、治癒の首座はIL-9とIL-13であることが初めて明らかにされた。
【００８３】
（最重症アトピー患者における治癒因子とサイトカインパネルによる評価）
臨床的に改善された治療例におけるサイトカインパネル検査の結果を示す（図５）。
アトピー性皮膚炎の要因であるIL-4/Th2細胞は、治癒過程においては、治療薬によるこ
ともあるが、サイトカインパネル上では数値も小さく、臨床症状に連動呼応することはな
かった（図５参照）。しかしながら、寛解（暖解）には結果的にIL-4の値は正常化して、
衛生仮説（Th1/Th2比）も改善された。また、Th17(IL-17)、Th22(IL-22)はTh9(IL-9)とは
異なり、最重症または重症アトピーの治癒時には、そのパラメータとしては有効ではなか
った。さらに、アトピーのバイオパラメーターとして不適切な順に、特異的IgE、トータ
ルIgE量、TARC、TGF-β1であった。
図５の棒グラフは、最重症アトピー（皮膚全体の36％以上の紅斑症と掻痒症）の治療前
（0日目）と74日目の治癒像をはさんで、経過日数ごとに、左からIL-1ra(IL-1レセプター
アンタゴニスト), IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10の順で示した。
【実施例８】
【００８４】
＜最重症アトピー性皮膚炎に対する亜鉛の指Znf／PADの投与効果＞
症例は50歳後半の罹患歴おおよそ49年の男性であった。初診時（当該治療開始時）に皮
膚紅斑症が皮膚全体の36％以上の最重症アトピー性皮膚炎と仮診断された。抗IgE血症も
みられた。治療は、「亜鉛の指Znf／PAD」（単に、亜鉛の指Znfとも表記する）（亜鉛酵
母実量として3.1 mg/kg又は上限として2 g）の経口投与によって実施した。
治療効果の判定は、サイトカインパネル検査又は本願明細書に記載の（本願発明におい
て見出した）評価基準により実施した。その結果を表１１に示す。
【００８５】
【表１１】
2016106121.tif 000015
【００８６】
表１１（亜鉛の指Znf／PADの投与時におけるアトピー患者のサイトカインパネルに対す
る臨床効果）から、最重症アトピー性皮膚炎の特徴であるTh1ならびにTh3生体反応が低値
で、その一方活性型TGF-β1は27pg/mlと高値であり、最重症アトピー性皮膚炎の特徴がみ
られた。また、Th2生体反応は治療によって低下するがTh2サイトカインであるIL-4は治療
効果と関連性は低いようであるが、主にTh9細胞（アトピー・アレルギー細胞として発見
：イヌにあってもその存在を確認）から産生されるIL-9は治療効果と相関して亜鉛の指Zn
f／PAD投与により抑制された。さらに、亜鉛シグナル伝達を介してDNA修復脳を有するZnf
が活性化することにより産生されるIL-13は著しく上昇した（表１１）。
【００８７】
IL-4とIL-13はシグナル伝達系にあり、IgEなどの抗体産生を促進するが、最重症アトピ
ー性皮膚炎の治癒仮定ではIL-4とIL-13の関係はなく、IgEが著しく抑制されていた（デー
タを示さず）。IL-13の産生増加における治癒仮定とIgEとの関連性は否定的であり、IL-1
3の産生はZntならびにZnfの活性化を介して本症例の治癒に関与していた。さらに、Zntな
らびにZnfは、骨、皮膚などの結合組織の増生と関与し、皮膚症状が改善しているところ
から、IL-13の産生はDNA修復と関連していることが示された。
上述した治療過程において、手（手の甲）の治療前は皮膚が厚く、ごわごわ触れ（苔せ
ん化）掻きこわしが目立っていた。治療後は皮膚がほぼ正常にもどり、滑らかになり、掻
きこわしが消失していた（図示せず）。なお、掻きこわしのあとの色素脱失がみられた。
【００８８】
また、前腕（図６；左から治療前、治療中、治療後232日目）では、手と同じように、
治療前（図６・左）は皮膚が厚く、ごわごわ硬く触れるが（苔せん化）、治療後（図６・
右）はそれらがなくなり、きめ細かさが見られ、皮膚の赤味（皮膚炎とアトピー炎症）は
消失していた。
【実施例９】
【００８９】
＜イヌのTh2アトピー治癒後Th3マーチを介したエラースダンロス症候群（EDS）に対する
亜鉛の指Znf／PADの投与効果＞
（症例）
種類：ミックス
性別：オス
年齢：11才3ヶ月
Th2アトピー性皮膚炎からTh3マーチによってEDSを呈した（図７参照）。
【００９０】
Th検査やその他でアトピー性皮膚炎を確定した後、標準的治療法で加療したところ、ア
トピーは寛解した（図７・左）。その９ヶ月後の頭部と外貌所見を示した。左眼上部の地
図状脱毛、典型的な肩甲部下降（下垂）ならびに前肢の開脚が観察された（図７・右上）
。
症状の現れ方：代表的臨床像は、5項目のうち、(3)肘関節の過伸展、(5)皮膚の過伸展
がみられ、皮膚の脆弱性（Th1とTh3が低値）の症状がみられた。
【００９１】
アトピーの治療時にはなかったEDSを疑い、単純Ｘ線検査を実施したところ（図８）、
結合組織の過伸展が負重の掛かりやすい関節で、検査上骨の異常は無いが多発した脱臼が
観察された（図８・各矢印）。また、サイトカインパネル検査ではEGFが0.5 pg/mlと著し
く低値であった。サイトカインパネル検査からイヌのEDSと確定された。
治療は亜鉛の指Znf／PAD（亜鉛酵母実量として3.1 mg/kg）の経口投与によって実施し
た。亜鉛の指Znf／PAD投与により、FGEならびにZnf活性（IL-13）は治療前より上昇し、
１ヶ月目で目の上の脱毛も改善された。
【実施例１０】
【００９２】
＜イヌの股関節脱臼・心拡大としてTh3マーチを介したEDSに対する亜鉛の指Znf／PADの投
与効果＞
（症例）
種類：A・コッカー・スパニエル
性別：メス（避妊処置済）
年齢：2才11ヶ月
Th3マーチ：症状の現れ方としては、まず最初に股関節脱臼があり、４ヶ月程度で改善
した。その後、心疾患を併発したがEDSの加療とともに心雑音は消失した。さらにその後
、骨ベーチェット病（図９のＸ線所見を参照）をマーチした。
【００９３】
本症例のEDS代表的臨床像は、５項目のうち、(3)肘関節の過伸展、(4)膝関節の過伸展
、(5)皮膚の過伸展と、皮膚の脆弱性（Th1とTh3が低値）、萎関節脱臼がみられた。
治療効果の判定は、血清亜鉛濃度、単純Ｘ線検査、サイトカインパネル検査又は本願明
細書に記載の（本願発明において見出した）評価基準により実施した。
図９においては、骨吸収（Lacuna skull）が認められた。本症は骨増生と骨吸収が混在
するが、骨の非薄化と骨吸収が主に観察された。骨ベーチェットは骨肉腫を誘導し易いも
のである（ヒト）。
【００９４】
治療は亜鉛の指Znf／PAD（亜鉛酵母実量として3.1 mg/kg）の経口投与によって実施し
た。治療前の血清亜鉛濃度は42 ng/mlであったが、亜鉛の指Znf／PAD投与により、亜鉛濃
度は50 ng/ml台まで回復した。サイトカインパネル検査では、FGFが低値であった（別途
サイトカインパネルの実施例を参照）。余剰した過伸展皮膚（図１０・0-day）と、頭蓋
骨の肥厚による隆起、その後舌の露呈と眼周囲の脱毛（図１０・9-Mo）の所見、さらに９
ヶ月後の所見（図１０・最右図）を、それぞれ示した。若令のこともありTh3マーチ疾患
が混在・重複して観察された。なお、結合組織の脆弱性と過伸展は９ヶ月目（9-Mo）でピ
ークに達した。亜鉛の指Znf／PAD投与により、心疾患は改善し、皮膚の状況は著しく改善
された（図１０・最右図）。BMPとTGF-β1シグナルリングによる臨床的変遷とも考えられ
た。
【実施例１１】
【００９５】
＜イヌのTh3マーチを介したEDSに対する亜鉛の指Znf／PADの投与効果＞
（症例）
種類：M・ダックス
性別：オス
年齢：5才7ヶ月
【００９６】
本症例のEDS 代表的臨床像は、５項目のうち、(1)第１指親指が背屈して前腕につく、(
2)第２〜５指が背屈して、指の付け根の関節が９０度以上曲がる、(3)肘関節の過伸展、(
4)左側膝関節の過伸展、(5)皮膚の過伸展の５項目が該当し、そのほかに、皮膚の脆弱性
（Th1 とTh3 が低値）がみられた。
治療は亜鉛の指Znf／PAD（亜鉛酵母実量として3.1 mg/kgまたは上限として2 g）の経口
投与によって実施した。治療結果等を図１１に示した。亜鉛の指Znf／PAD の投与40日で
、著しい結合組織の改善により外貌上での肩甲部下降（下垂）が正常化した。EDSの臨床
スコアもすべて改善された（図１１）。
【実施例１２】
【００９７】
＜Th3マーチにおける早期介入療法＞
イヌの最重症アトピー性皮膚炎（Th 検査による評価を含める）とその後にマーチする
喘息（慢性気管炎と好酸球性肺炎）の単純Ｘ線ならびにCT 像（小さなカット図）を、図
１２に示した。図１２は、下記実施例１２に示す、マーチ肺炎の早期介入（未病先防）の
評価としての実施例である（Th3マーチと検査による薬剤選定法による早期介入療法）。
【００９８】
図１２では、年令に準じたTh３マーチの過程で喘息（アトピー、慢性気管肺炎/喘息、花
粉症/特発性リンパプラズマ性鼻炎CT）を呈し、その悪化過程（図１２・左側から３枚の
図）と、早期介入療法実施後の治癒時の単純Ｘ線所見（図１２・最右図）を示した。悪化
過程を示した図では、進行した重篤化した右肺葉（左側から３番目のカット図）の所見を
並記した。矢印部分は好酸球浸潤時の肺野の縮小所見を示した。「亜鉛の指Znf／PAD」の
投与により、投与後IL-13（サイトカインパネル検査のＩ項目でZnf活性化の指標）の値も
上昇していた。
【実施例１３】
【００９９】
＜Th2とTh3生体反応のシフトとTh3マーチと慢性気管肺炎/喘息＞
（症例）
種類：M・ダックス
性別：オス
年齢：9才
アトピー性皮膚炎については標準的治療法で加療して、39日目で薬剤の離脱が可能であ
った（図１３、左図：治療前、右図：治療後）。
【０１００】
初診時（アトピー性皮膚炎加療開始時）は、活性型TGF-β1の測定値が10より高く16.8 
ng/mlであり、同時に軽度な発咳の既往があったため、Th3マーチを想定して単純Ｘ線検査
を実施した。その際の所見を図１４（左図：治療前、中図：治療中、右図：治療後）に示
した。気管を中心に気管支あるいは肺野末梢に血管炎と肺野の縮小が見られ、マーチ慢性
気管肺炎／喘息の兆候が見られた。特に、頸部気管は虚脱（TGFによる気管軟骨のリモデ
リングの継続・遷延化：バルーニング）し、気管のリモデリングを伴う蛇行が描出されて
いた。同時に左右中葉（心葉）に強いコンソリデーションが散見され、同肺野の炎症の局
在がみられた（図１４・左図、矢印部）。
【０１０１】
治療薬剤としては、TGF による気管軟骨のリモデリングを抑制するためにTGFの数値を抑
制後「亜鉛の指Znf／PAD」を投与し、マーチ疾患に早期介入療法を適用した。その結果、
呼吸器系の異常は皮膚疾患に遅れて発症し、結果的にはアトピーの治療期間より短い治療
期間で薬愛の離脱が可能であった。すなわち、早期介入療法（未病先防）では、マーチの
後に発生する疾患は、未治療期間がないことになることが示された。この評価はTh生体反
応検査あるいはサイトカインパネル検査で行った。
【実施例１４】
【０１０２】
＜Th3マーチとアトピーにおける精神的遅発遅延等の改善に対する亜鉛の指Znf／PADの投
与効果＞
最重症アトピー性皮膚炎の患者は、亜鉛細胞サイトカイン・シグナル伝達/Th マーチの
下流でのサイトカインパネルの検査で治療立案が最も容易である疾患であることを明らか
にした。特に、個体における治療はTh 生体反応検査ならびにサイトカインパネル検査無
しでは、治癒の達成されない皮膚病であることを併せて明らかにした。TGF-β1（Th3 サ
イトカイン）とTh3 生体反応はシグナル伝達系であるがZnt の異常が存在するとTGF-β1
の産生がありながら、Th3 細胞の活性化に供さないため、Th3 生体反応は低下する。血漿
活性型TGF-β1 が高値で、Th3 細胞のTh3 生体反応（特に内在型）測定値が低値（1.32％
以下）の関係（解離）が観察される。
【０１０３】
最重症アトピー性皮膚炎の患者、あるいは20歳代の中等度のアトピー性皮膚炎にあって
もTh3生体反応とTh1生体反応が低下している患者に、血漿活性型TGF-β1とTh3生体反応（
とくに内在型）測定値の低値（1.32％以下）が観察された。このような症例から、臨床的
に亜鉛シグナルの異常から精神遅発障害（Znf/Zntの不活性化、IL-13の低下、血清亜鉛濃
度 55 ng/ml以下で発症）がみられる。血清中亜鉛濃度が10上昇し、65 ng/ml以上に回復
すると、自律神経緊張異常、うつ様の精神症状、ADLの低下などが改善した。特に、血清
中亜鉛濃度と精神遅発障害は高齢者で顕著にみられ、また、Th1依存性皮膚病ではうつ様
症状が60％でみられた。「亜鉛の指Znf／PAD」の投与によりZnt（亜鉛トランスポーター
）あるいは血清中亜鉛濃度の低下（52以下）による精神的遅発障害もIL-13の上昇により
改善された。
【図１】
2016106121.tif 000016
【図２Ａ】
2016106121.tif 000017
【図２Ｂ】
2016106121.tif 000018
【図２Ｃ】
2016106121.tif 000019
【図２Ｄ】
2016106121.tif 000020
【図３】
2016106121.tif 000021
【図４】
2016106121.tif 000022
【図５】
2016106121.tif 000023
【図６】
2016106121.tif 000024
【図７】
2016106121.tif 000025
【図８】
2016106121.tif 000026
【図９】
2016106121.tif 000027
【図１０】
2016106121.tif 000028
【図１１】
2016106121.tif 000029
【図１２】
2016106121.tif 000030
【図１３】
2016106121.tif 000031
【図１４】
2016106121.tif 000032
【図１５】
2016106121.tif 000033
【図１６】
2016106121.tif 000034
【手続補正書】
【提出日】平成28年3月24日(2016.3.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
亜鉛、カルシウム及びリンを必須の有効成分として含む、ジンクフィンガーのDNA修復能活性化剤。
【請求項２】
さらに南瓜子及び南蛮毛を必須の有効成分として含む、請求項１記載の活性化剤。
【請求項３】
前記DNA修復能が、フィラグリン遺伝子DNAの欠損又は変異の修復能である、請求項１又は２記載の活性化剤。
【請求項４】
亜鉛、カルシウム及びリンを必須の有効成分として含む、フィラグリン遺伝子DNAの欠損又は変異の修復剤。
【請求項５】
さらに南瓜子及び南蛮毛を必須の有効成分として含む、請求項４記載の修復剤。
【請求項６】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤、又は請求項４若しくは５記載の修復剤を含む、尋常性乾癬、アトピー性皮膚炎、エーラスダンロス症候群、骨ベーチェット病、外耳炎、胃炎、腸炎、喘息、濃皮症、慢性気管炎、花粉症、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシーからなる群より選ばれる少なくとも１種の疾患の治療用及び／又は予防用医薬組成物。
【請求項７】
請求項１〜３のいずれか１項に記載の活性化剤、又は請求項４若しくは５記載の修復剤と、サイトカイン及び／又はケモカインに対する抗体とを含む、尋常性乾癬、アトピー性皮膚炎、エーラスダンロス症候群、骨ベーチェット病、外耳炎、胃炎、腸炎、喘息、濃皮症、慢性気管炎、花粉症、アレルギー性鼻炎及びアナフィラキシーからなる群より選ばれる少なくとも１種の疾患の治療及び／又は予防用キット。
【請求項８】
抗体がビーズアレイに担持されたものである、請求項７記載のキット。
【請求項９】
サイトカイン及びケモカインが、TGF-β1、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、IFN-γ及びRANTESからなる群より選ばれる少なくとも１種である、請求項７又は８記載のキット。