(57)【要約】【課題】熱ショックタンパク質の発現を誘導し得る新規な天然物由来の成分を提供すること。【解決手段】ベニコウジ色素を有効成分とする熱ショックタンパク質発現誘導剤。【選択図】          図１
2016169168.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベニコウジ色素を有効成分とする熱ショックタンパク質発現誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、熱ショックタンパク質発現誘導剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
生体の防御システムの一つとして、例えば一般的な生理的温度を３℃以上超える高温や種々の化学薬品、重金属、放射線、紫外線、飢餓、酸素欠乏等様々なストレスを受けた際に、該ストレスから細胞を保護するため熱ショックタンパク質（Ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ  ｐｒｏｔｅｉｎ；以下、「ＨＳＰ」ともいう）と呼ばれる特異的タンパク質の発現（産生）が誘導されることが知られている。ＨＳＰにはいくつかの種類があり、その分子量に応じて、例えばＨＳＰ９０ファミリー（分子量９０ｋＤａ以上１１０ｋＤａ以下）、ＨＳＰ７０ファミリー（分子量７０ｋＤａ以上８０ｋＤａ未満）、ＨＳＰ６０ファミリー（分子量６０ｋＤａ以上７０ｋＤａ未満）及び低分子量ＨＳＰファミリー（分子量６０ｋＤａ未満）のように分類されている。
【０００３】
ＨＳＰは、上記のような種々のストレスにより細胞内のタンパク質が変性した場合に、該タンパク質が再度正常な立体構造を形成（フォールディング）し、生理機能を回復することを助ける役割を果たす。また非ストレス下においても生体内に一定量存在し、フォールディングに問題のあるタンパク質を補助する等、生体防御や生体の恒常性維持に寄与している。従って、このような機能を有するＨＳＰの発現を意図的に誘導すれば、種々のストレスからの細胞の保護や、機能低下又は機能不全を来した細胞の生理機能回復促進、タンパク質のフォールディング異常に起因する各種疾患や症状の予防又は治療等の効果が期待される。具体的には、ＨＳＰの発現を誘導することにより、例えば癌、胃潰瘍、脳梗塞やアルツハイマー病等の脳疾患、潰瘍性大腸炎、肺線維症等の予防又は治療、創傷治癒促進、抗炎症、抗酸化、メラニン産生抑制、抗シワ等に効果があることが知られている。
【０００４】
ＨＳＰの発現を誘導する方法としては、例えば温熱療法等、生体に対して故意にストレスを与えることが行われている。しかし、この方法では与えるストレスが強すぎると生体に過度の負担がかかるというリスクがある。そこで、このような外的ストレスによらずに生体内においてＨＳＰの発現を誘導する方法が提案されている。
【０００５】
特に近年、例えば、生薬の性質である四気のうち、温または平に該当する性質を持つ生薬の起源となる植物抽出物を含有する熱ショックタンパク質誘導剤（特許文献１）、アルニカを含有する熱ショックタンパク質の発現誘導剤（特許文献２）、ゼルンボン及びその類縁体、カロテン、リコペン、ゼアキサンチン、クリプトキサンチン、ルテイン、フェニルエチルイソチオシアネート、ならびに、ウルソール酸からなる群より選択される少なくとも１種を有効成分として含有することを特徴とする、熱ショックタンパク質発現誘導剤（特許文献３）、亜鉛化合物を１０ｍＭ以上含有する培地で培養した酵母の菌体抽出物を有効成分とするヒートショックプロテイン７０産生誘導剤（特許文献４）、ケール又はその加工品を有効成分とする熱ショックタンパク質発現促進剤（特許文献５）等、安全性の高い天然物由来の成分を利用する方法が注目されている。このような流れの中で、ＨＳＰの発現を誘導し得る新規な天然物由来の成分が求められていた。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特開２００８−１２７２９６号公報
【特許文献２】特開２０１１−１９０２００号公報
【特許文献３】ＷＯ２０１２／０４３８０８号公報
【特許文献４】特開２０１４−１０８９４５号公報
【特許文献５】特開２０１４−０８８３７８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、熱ショックタンパク質の発現を誘導し得る新規な天然物由来の成分を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、食品用天然着色料として用いられ、可食経験の豊富なベニコウジ色素がＨＳＰの発現を誘導することを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００９】
即ち、本発明は、ベニコウジ色素を有効成分とする熱ショックタンパク質発現誘導剤、からなっている。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の熱ショックタンパク質発現誘導剤は、生体におけるＨＳＰ、特にＨＳＰ７０の発現を誘導する。
本発明の熱ショックタンパク質発現誘導剤は、ＨＳＰの作用が関係する各種疾患等の予防又は治療剤等として利用できる。
本発明の熱ショックタンパク質発現誘導剤は、食品添加物として認可されたベニコウジ色素を有効成分とするため、経口的にも非経口的にも安全に生体に対して投与することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】各試験区におけるＨＳＰ７０含有量の測定結果を示すグラフ。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明の熱ショックタンパク質発現誘導剤（以下、「ＨＳＰ発現誘導剤」ともいう）の有効成分であるベニコウジ色素は、ベニコウジ菌（即ち、Ｍｏｎａｓｃｕｓ属の糸状菌）の培養生成物から抽出して得られる水溶性の色素であり、その主成分はモナスコルブリン類、アンカフラビン類、ルブロパンクタチン類等である。
【００１３】
ベニコウジ色素の形態に特に制限はなく、ベニコウジ色素液体製剤やベニコウジ色素粉末製剤等いずれであっても良い。ベニコウジ色素液体製剤は、水又は水とアルコールとの混合溶液等を抽出溶媒としてベニコウジ菌の培養生成物からベニコウジ色素を抽出することにより調製できる。また、ベニコウジ色素粉末製剤は、ベニコウジ色素液体製剤をデキストリン等の粉末化基材と共に混合液とし、該混合液を常法により噴霧乾燥する方法、或いは該ベニコウジ色素液体製剤を濃縮し、真空凍結乾燥する方法等により調製できる。
【００１４】
ベニコウジ色素の色価に特に制限はないが、例えばベニコウジ色素液体製剤であれば色価１０〜２００、ベニコウジ色素粉末製剤であれば色価１００〜３０００のものが通常用いられる。なお、本発明で言うところの色価は『第８版  食品添加物公定書』に記載の「１７．色価測定法」に従って測定される。
【００１５】
ベニコウジ色素としては、例えばリケカラーＲ−３０（商品名；ベニコウジ色素液体製剤；色価６０；理研ビタミン社製）、リケカラーＲ−１０００（Ｐ）（商品名；ベニコウジ色素粉末製剤；色価２００；理研ビタミン社製）、リケカラーＲ−２０００（Ｐ）（商品名；ベニコウジ色素粉末製剤；色価２０００；理研ビタミン社製）、リケカラーＲ−４２００（ＳＤ）（商品名；ベニコウジ色素粉末製剤；色価２０００；理研ビタミン社製）等が商業的に製造及び販売されており、本発明のＨＳＰ発現誘導剤にはこれらを用いることができる。
【００１６】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤は、ベニコウジ色素のみをそのまま用いても良く、或いはベニコウジ色素以外に本発明の効果を阻害しない範囲で他の任意の成分（医薬品添加物、食品添加物及び食品素材等）を配合し、少なくともベニコウジ色素を含有する組成物として調製しても良い。
【００１７】
上記組成物の調製に用いられるベニコウジ色素以外の任意の成分としては、例えば賦形剤（乳糖、デキストリン、コーンスターチ、結晶セルロース等）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル等）、崩壊剤（カルボキシメチルセルロースカルシウム、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等）、結合剤（デンプン糊液、ヒドロキシプロピルセルロース液、アラビアガム液等）、溶解補助剤（アラビアガム、ポリソルベート８０等）、甘味料（砂糖、果糖ブドウ糖液糖、ハチミツ、アスパルテーム等）、着色料（β−カロテン、食用タール色素、リボフラビン等）、保存料（ソルビン酸、パラオキシ安息香酸メチル、亜硫酸ナトリウム等）、増粘剤（アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム等）、酸化防止剤（ＢＨＴ、ＢＨＡ、アスコルビン酸、トコフェロール等）、香料（ハッカ、ストロベリー香料等）、酸味料（クエン酸、乳酸、ＤＬ−リンゴ酸等）、調味料（ＤＬ−アラニン、５´−イノシン酸ナトリウム、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム等）、ｐＨ調整剤（クエン酸、クエン酸三ナトリウム等）、乳化剤又は界面活性剤（グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、アルキル硫酸エステル塩、アルキルジメチルアミノ酢酸ベタイン、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム等）、油剤（高級アルコール、エステル油、流動パラフィン、ワセリン、スクワラン、ロウ、天然油脂、シリコーン油等）、低級アルコール類（エタノール、イソプロピルアルコール等）、多価アルコール類（プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、マルチトール等）、紫外線吸収剤（パラアミノ安息香酸エチル、サリチル酸オクチル、パラメトキシケイ皮酸２−エチルヘキシル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン等）、無機粉末（タルク、カオリン、窒化ホウ素等）、有機粉末（セルロースパウダー、架橋型シリコーン末、ポリ四フッ化エチレン粉末等）、ビタミン類、ミネラル類、アミノ酸類等が挙げられる。
【００１８】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤を医薬品として調製する場合、その剤形に特に制限はなく、投与経路に応じて任意の剤形に調製することができる。経口投与に適した剤形としては、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤、トローチ剤等が挙げられ、非経口投与に適した剤形としては、例えば注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤、乳剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、パップ剤等が挙げられる。なお、注射剤は、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、点滴等のいずれに用いるものであっても良い。
【００１９】
上記医薬品１００質量％中のベニコウジ色素の含有量はその色価や医薬品の剤形、投与経路等により異なるが、通常０．０００１〜５０質量％、好ましくは０．００１〜２０質量％、より好ましくは０．０１〜１０質量％の範囲内に設定することができる。
【００２０】
また、本発明のＨＳＰ発現誘導剤は飲食品、化粧料等に添加して使用することができる。
【００２１】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤を飲食品に添加して使用する場合、添加対象となる飲食品の形態に特に制限はないが、例えば清涼飲料、ドロップ、キャンディ、チューインガム、チョコレート、グミ、ヨーグルト、アイスクリーム、プリン、ゼリー菓子、クッキー等が挙げられる。
【００２２】
上記飲食品に対するベニコウジ色素の添加量はその色価や飲食品の形態等により異なるが、飲食品１００質量％中、通常０．００１〜５質量％、好ましくは０．０１〜３質量％の範囲内に設定することができる。
【００２３】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤を化粧料に添加して使用する場合、添加対象となる化粧料の形態に特に制限はないが、例えば化粧水、乳液、クリーム、美容液、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップベースクリーム等の下地化粧料、乳液状、油性、固形状等の各剤型のファンデーション、アイカラー、チークカラー等のメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ネッククリーム、ボディローション等の身体用化粧料等が挙げられる。
【００２４】
上記化粧料に対するベニコウジ色素の添加量はその色価や化粧料の形態等により異なるが、化粧料１００質量％中、通常０．００１〜１０質量％、好ましくは０．０１〜５質量％の範囲内に設定することができる。
【００２５】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤は、上記の通り医薬品として又は飲食品、化粧料等に添加して経口的若しくは非経口的に生体に投与することにより、生体内におけるＨＳＰの発現を誘導することができる。なお、本発明のＨＳＰ発現誘導剤の有効成分であるベニコウジ色素は食品添加物として認可された安全性の高い成分であることから、経口的に投与することが好ましい。
【００２６】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤が発現を誘導するＨＳＰに特に制限はないが、例えばＨＳＰ９０ファミリーに属するもの（分子量９０ｋＤａ以上１１０ｋＤａ以下；ＨＳＰ９０α、ＨＳＰ９０β、ＨＳＰ１０４、ＨＳＰ１１０等）、ＨＳＰ７０ファミリーに属するもの（分子量７０ｋＤａ以上８０ｋＤａ未満；ＨＳＰ７０、ＨＳＰ７２、ＨＳＰ７３等）、ＨＳＰ６０ファミリーに属するもの（分子量６０ｋＤａ以上７０ｋＤａ未満；ＨＳＰ６０、ＨＳＰ６５等）及び低分子量ＨＳＰファミリーに属するもの（分子量６０ｋＤａ未満；ＨＳＰ４７、ＨＳＰ４０、ＨＳＰ２７、ＨＳＰ２０等）が挙げられる。これらの中でも、ＨＳＰ７０ファミリーに属するもの、とりわけ分子量７０ｋＤａであるＨＳＰ７０に対して、本発明のＨＳＰ発現誘導剤は優れた発現誘導効果を発揮する。
【００２７】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤は、上記ＨＳＰの発現を誘導することによって、高温や種々の化学薬品、重金属、放射線、紫外線、飢餓、酸素欠乏等様々なストレスからの細胞の保護や、機能低下又は機能不全を来した細胞の生理機能回復促進、タンパク質のフォールディング異常に起因する疾患や症状の予防又は治療等に寄与する。具体的には、例えば癌、胃潰瘍、脳梗塞やアルツハイマー病等の脳疾患、潰瘍性大腸炎、肺線維症等の予防又は治療剤、創傷治癒促進剤、抗炎症剤、抗酸化剤、メラニン産生抑制剤、抗シワ剤等として使用できる。
【００２８】
本発明のＨＳＰ発現誘導剤の生体に対する投与量は、該ＨＳＰ発現誘導剤の配合組成や投与の目的、投与経路等により異なるが、例えば経口投与の場合、色価２０００のベニコウジ色素に換算して、成人１日当たり０．０１〜６００ｍｇの範囲である。
【００２９】
以下に本発明を実施例に基づいてより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【実施例】
【００３０】
［ＨＳＰ７０の発現誘導試験］
（１）細胞の培養
ヒト子宮頸部癌細胞（ＨｅＬａ細胞；ＲＣＢ０００７；理化学研究所バイオリソースセンター）を５×１０５個／０．５ｍＬの細胞濃度で２４ウェルプレートに播種し、１０容量％ＦＢＳ及び１容量％ペニシリン−ストレプトマイシン含有ＤＭＥＭ培地（ナカライテスク社製）中で３７℃、５％ＣＯ２の条件で一晩培養した。その後、ベニコウジ色素（商品名：リケカラーＲ−４２００；ベニコウジ色素粉末製剤；色価２０００；理研ビタミン社製）を規定の濃度で含有する新鮮な培地に交換し、同条件でさらに２４時間培養した（試験区１〜３）。また、対照としてベニコウジ色素を含有しない培地に交換して同様に処理した試験区（試験区４；陰性対照）と、ベニコウジ色素を含有しない培地に交換し、培地交換後１７時間が経過した時点から１時間、４２℃の熱ストレスを与えた試験区（試験区５；陽性対照）を設けた。各試験区におけるベニコウジ色素の濃度及び熱ストレスの有無を表１に示す。
【００３１】
【表１】
2016169168.tif 000003
【００３２】
（２）ＨＳＰ７０の発現誘導性の評価
上記試験区１〜５の細胞培養後、上清の培地を取り除き、トリプシンで細胞をウェルからはがし、氷冷ＰＢＳ（日水製薬社製）を添加、洗浄した後、細胞を回収した。回収した細胞にＨＳＰ７０  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔ（Ｓｔｒｅｓｓ  Ｘｐｒｅｓｓ社製）に付属したプロテアーゼ阻害剤含有Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｂｕｆｆｅｒを添加し、ボルテックスを用いて細胞を破壊した後、１２０００×ｇで１０分間遠心分離して上清をタンパク質抽出液として回収した。
得られた各タンパク質抽出液について、Ｍｉｃｒｏ  ＢＣＡ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（ＰＩＥＲＣＥ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）を用い、キット所定の手法に従ってタンパク質濃度を測定し、該タンパク質抽出液中の総タンパク質量を求めた。一方、ＨＳＰ７０  ＥＬＩＳＡ  ｋｉｔを用い、キット所定の手法に従って各タンパク質抽出液中のＨＳＰ７０含有量を測定し、各試験区の培養細胞中におけるタンパク質１μｇ当たりのＨＳＰ７０含有量を算出した。結果をグラフ化して図１に示す。
【００３３】
図１の結果から明らかなように、陽性対照である試験区５の培養細胞は陰性対照である試験区４の培養細胞に比べてＨＳＰ含有量が多くなっていたが、同様にベニコウジ色素を添加した試験区１〜３の培養細胞においても試験区４と比べてＨＳＰ７０含有量の増加が認められた。このことから、ベニコウジ色素が細胞内のＨＳＰの発現を誘導することがわかった。
【図１】
2016169168.tif 000004