(57)【要約】      （修正有）【課題】ＣＤ１３８発現細胞を標的とする免疫複合体の投与を含む、特にヒト対象のための方法及び治療レジメンの提供。【解決手段】ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療するための方法であって、それを必要とする患者に対して有効量の免疫複合体を投与することを含み、前記免疫複合体は、ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、少なくとも１つのエフェクター分子とを含み、前記標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、前記有効量は、許容量であることを特徴とする方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする患者に対して有効量の免疫複合体を投与する
ことを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、前記標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、前記有効量は、許容量である
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
免疫複合体は、有害な副作用を治療するための剤と組み合わせて投与される場合、対象に対して５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、又は薬物動態学的相当で５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の量で投与される
請求項１に記載の方法。
【請求項３】
初回投与終了から０から２時間後の対象の血漿における免疫複合体の最大濃度は、前記免疫複合体の理論最大濃度の５０％未満、好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、更に好ましくは２０％未満、更には１０％未満である
請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項４】
免疫複合体が少なくとも４回投与され、各回の投与終了から０から２時間後の対象の血漿における前記免疫複合体の最大濃度は、前記免疫複合体の理論最大濃度の５５％未満、好ましくは５０％未満、より好ましくは４０％未満、更に好ましくは３０％未満、２０％未満、又は１０％未満である
請求項３に記載の方法。
【請求項５】
免疫複合体は、用量として、好ましくは繰り返し単回用量として、約１０ｍｇ／ｍ２以下、約２０ｍｇ／ｍ２以下、約３０ｍｇ／ｍ２以下、約４０ｍｇ／ｍ２以下、約８０ｍｇ／ｍ２以下、約９０ｍｇ／ｍ２以下、約１００ｍｇ／ｍ２以下、又は約１２０ｍｇ／ｍ２以下の用量で投与され、
平均日量が、約４００μｇ／ｍ２から約６ｍｇ／ｍ２であって、約５００μｇ／ｍ２、約１ｍｇ／ｍ２、約２ｍｇ／ｍ２、約３ｍｇ／ｍ２、約４ｍｇ／ｍ２、約５ｍｇ／ｍ２を含み、及び／又は
平均週量が、約３ｍｇ／ｍ２から約４０ｍｇ／ｍ２であって、約５ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ／ｍ２、約１５ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約２５ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２、又は約３５ｍｇ／ｍ２を含む
請求項１に記載の方法。
【請求項６】
約２０日間、約３０日間、約４０日間、約５０日間、約６０日間、約７０日間、約８０日間、約９０日間、約１００日間、約１２０日間、約１４０日間、約１６０日間、約１８０日間、約１９０日間、約２００日間、約２１０日間、又はそれ以上の日数の間、病態安定が維持される
請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
１サイクル約３週間の治療サイクルにおいて、約１回、約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、約１０回、約１１回、約１２回の治療サイクルの間、病態安定が維持される
請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
少なくとも病態安定が、２０ｍｇ／ｍ２で５回、６回、７回、８回、９回、又は１０回の治療サイクルの間維持される
請求項７に記載の方法。
【請求項９】
最大８回の治療サイクルの後にやや有効が観測される
請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
１日目に免疫複合体を投与する約３週間を含む治療サイクルにおいて、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、若しくはそれ以上の回数の治療サイクルの期間持続するか、又は７日間、１４日間、２１日間、２８日間、３５日間、４２日間、４９日間、５６日間、６３日間、７０日間、７７日間、又は８２日間持続する、病態安定、奏効、特にやや有効、部分寛解、非常に良好な部分寛解、ストリンジェント完全寛解、若しくは完全寛解を生じる
請求項１から９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
免疫複合体は、５ｍｇ／ｍ２又は１０ｍｇ／ｍ２から１６０ｍｇ／ｍ２未満、好ましくは１５０ｍｇ／ｍ２、１４０ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２、又は１２０ｍｇ／ｍ２までの量で、対象に投与される
請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
最大濃度は、１０ｍｇ／ｍ２の場合３μｇ／ｍＬ未満、２０ｍｇ／ｍ２の場合８μｇ／ｍＬ未満、４０ｍｇ／ｍ２の場合１５μｇ／ｍＬ未満、８０ｍｇ／ｍ２の場合２５μｇ／ｍＬ未満、又は１２０ｍｇ／ｍ２の場合３０μｇ／ｍＬ未満である
請求項３に記載の方法。
【請求項１３】
最大濃度は、２０ｍｇ／ｍ２の場合１４μｇ／ｍＬ未満、４０ｍｇ／ｍ２の場合１５μｇ／ｍＬ未満、又は８０ｍｇ／ｍ２の場合２５μｇ／ｍＬ未満である
請求項４に記載の方法。
【請求項１４】
ＣＤ１３８が、患者における標的細胞及び非標的細胞に発現しており、投与の結果として、免疫複合体の穏やかな又は遅い血漿クリアランスが生じ、ＣＤ１３８を発現する前記非標的細胞、特に上皮細胞は、実質的に影響を受けない
請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
ＣＤ１３８を発現する標的及び非標的細胞におけるＣＤ１３８発現レベルは同等である
請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
投与される有効量は、有害な副作用を治療するための剤と組み合わせて投与される場合、２００ｍｇ／ｍ２未満であるか、又は薬物動態学的相当で２００ｍｇ／ｍ２未満であり、投与の結果として、好ましくは４０時間、３０時間、２０時間、１５時間、１０時間、９時間、８時間、７時間、６時間、又は５時間未満後に対象において奏効が生じる
請求項１４及び１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
有効量は、１２０ｍｇ／ｍ２超である
請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
有効量が、単回投与、繰り返し単回投与又は複数回投与で投与される
請求項１４から１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
各回投与後の最大血中濃度値が、理論最大血中濃度値の５５％超である
請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
投与の結果として、少なくとも病態安定、やや有効、又は部分寛解のＦＬＣ又はＭ蛋白質レベルが、患者において好ましくは初回投与後に生じる
請求項１４から１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
免疫複合体は、ＣＤ１３８に対する抗原結合領域（ＡＢＲ）と、更なる抗体領域とを有し、前記更なる抗体領域の少なくとも一部は、ヒト抗体のものであってＩｇＧ４アイソタイプ性を与える
請求項１から２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
免疫複合体は、ｎＢＴ０６２又はｎＢＴ０６２に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％の配列同一性を有する標的抗体を含む、又はＢＴ０６２に対応する
請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
免疫複合体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を投与することから実質的になり、前記組成物の活性成分は、実質的に、前記免疫複合体からなる
請求項１から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
免疫複合体が静脈内投与される
請求項１から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
免疫複合体が繰り返し単回投与で静脈内投与される
請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
疾患が、ＣＤ１３８発現に関連の血漿増殖性障害であり、多発性骨髄腫、特に再発性又は難治性多発性骨髄腫などである
請求項１から２５のいずれかに記載の方法。
【請求項２７】
標的細胞においてＣＤ１３８を発現する疾患は、腎細胞癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、前立腺腺癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、扁平上皮癌、肺癌、特に扁平上皮細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、胸腺、子宮、膀胱又は卵巣癌からなる群から選択される
請求項１及び２のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
疾患は、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかに関連し、免疫複合体の投与により、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを、好ましくは受容可能なレベルまで減じる
請求項１から２７のいずれかに記載の方法。
【請求項２９】
免疫複合体は、難治性表現型を克服する
請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療する方法であって、
（ｉ）前記疾患を、多発性骨髄腫などのＣＤ１３８発現標的細胞に関連しているものとして特定すると共に、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しいものとして特定することと、
（ｉｉ）対象に対して請求項２における有効量の免疫複合体を、好ましくは静脈内投与すること
を含み、前記対象は、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれか含む１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、前記疾患が治療される
ことを特徴とする方法。
【請求項３１】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療する方法であって、
そのような治療を必要とすると共に、５０ｎｇ／ｍＬ超、６０ｎｇ／ｍＬ超、７０ｎｇ／ｍＬ超、８０ｎｇ／ｍＬ超、１００ｎｇ／ｍＬ超、１５０ｎｇ／ｍＬ超、２００ｎｇ／ｍＬ超、２００ｎｇ／ｍＬ超、４００ｎｇ／ｍＬ超、５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、７００ｎｇ／ｍＬ超、８００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、１，０００ｎｇ／ｍＬ超、１，１００ｎｇ／ｍＬ超、１，２００ｎｇ／ｍＬ超、１，３００ｎｇ／ｍＬ超、１，４００ｎｇ／ｍＬ超、１，５００ｎｇ／ｍＬ超などの高レベルのｓＣＤ１３８を呈する患者に対して、請求項１における有効量の免疫複合体を投与すること
を含み、２０ｍｇ／ｍ２又は４０ｍｇ／ｍ２の量が有効でありやや有効などの奏効を提供する
ことを特徴とする方法。
【請求項３２】
奏効は、免疫複合体の選択的結合から生じる
請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
対象が、レナリドマイドなどの免疫調節薬及びボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しい
請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
少なくとも１つの細胞毒性剤と、ＣＤ１３８発現細胞を標的にする標的剤を含む少なくとも１つの免疫複合体と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含む抗癌組合せ剤であって、前記標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、
（ａ）前記組合せ剤が、１超、１．１超、１．２超、１．３超、１．４超のシナジー比を有するか、
（ｂ）前記組合せ剤が、２超のＬｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌを有するか、又は
（ｃ）前記組合せ剤が、約１のシナジー比を有し、前記エフェクター分子及び前記細胞毒性剤は、干渉作用機構を有し、
前記抗癌組合せ剤は、医薬組成物であるか、又は前記少なくとも１つの細胞毒性剤及び前記少なくとも１つの免疫複合体を別々の容器に含むキットである
ことを特徴とする抗癌組合せ剤。
【請求項３５】
細胞毒性剤は、プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤、血管新生抑制剤、ＤＮＡアルキル化剤、又はこれら２以上の混合物である
請求項３４に記載の抗癌組合せ剤。
【請求項３６】
細胞毒性剤は、ボルテゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、メルファラン、又はこれら２以上の混合物である
請求項３４に記載の抗癌組合せ剤。
【請求項３７】
標的剤は、ＣＤ１３８発現細胞を標的とする改変された標的抗体である
請求項３４から３６のいずれかに記載の抗癌組合せ剤。
【請求項３８】
改変された標的抗体は、ＣＤ１３８に対するＡＢＲと、
更なる抗体領域とを含み、前記更なる抗体領域の少なくとも一部は、ヒト抗体のものであってＩｇＧ４アイソタイプ性を与える
請求項３７に記載の抗癌組合せ剤。
【請求項３９】
免疫複合体は、ｎＢＴ０６２又はｎＢＴ０６２に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％の配列同一性を有する標的抗体を含む、又はＢＴ０６２に対応する
請求項３８に記載の抗癌組合せ剤。
【請求項４０】
エフェクター分子及び細胞毒性剤は、干渉作用機構を有し、前記作用機構は、好ましくは微小管の阻害又は細胞周期停止の誘導を伴う
請求項３３から３８のいずれかに記載の抗癌組合せ剤。
【請求項４１】
干渉作用機構が、細胞周期停止の誘導であって、細胞毒性剤が、メルファラン、ボルテゾミブ、レナリドマイド、又はサリドマイドである
請求項４０に記載の抗癌組合せ剤。
【請求項４２】
エフェクター分子及び細胞毒性剤は、非干渉作用機構を有する
請求項３４から３９のいずれかに記載の抗癌組合せ剤。
【請求項４３】
抗癌組合せ剤が、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物である
請求項３４から４２のいずれかに記載の抗癌組合せ剤。
【請求項４４】
抗癌組合せ剤が、第１の容器に免疫複合体を含み、第２の容器に少なくとも１つの細胞毒性剤を含み、キットの各コンポーネントの使用方法に関する指示書を含むキットである
請求項３４から４２のいずれかに記載の抗癌組合せ剤。
【請求項４５】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする患者に対して、請求項３４から４４のいずれかの抗癌組合せ剤、又は少なくとも１つの細胞毒性剤とＣＤ１３８発現細胞を標的とする標的剤及び少なくとも１つのエフェクター分子を含む少なくとも１つの免疫複合体とを有する抗癌組合せ剤の有効量を投与すること
を含み、前記標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、前記免疫複合体は、難治性表現型を克服すること
を特徴とする方法。
【請求項４６】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する非血漿増殖性疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする対象に対して又は前記非血漿増殖性疾患の細胞に対して有効量の免疫複合体を投与する
ことを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、前記標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、
前記ＣＤ１３８は、患者の標的細胞及び非標的細胞において同等レベルで発現される、又は前記ＣＤ１３８は、前記患者の前記標的細胞において、ＣＤ１３８発現非標的細胞のレベルよりも低いレベルで発現される
ことを特徴とする方法。
【請求項４７】
ＣＤ１３８発現非標的細胞は、上皮細胞である
請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
疾患の標的細胞からは、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間の期間に亘ってＣＤ１３８が取り除かれる
請求項４５に記載の方法。
【請求項４９】
疾患は、乳癌である
請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
免疫複合体は、固形腫瘍の寛解を誘発する
請求項４５及び４６のいずれかに記載の方法。
【請求項５１】
固形腫瘍は、膵臓癌又は乳癌である
請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
寛解の後、腫瘍の再成長がない期間が続く
請求項５０及び５１のいずれかに記載の方法。
【請求項５３】
疾患は、腎細胞癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、前立腺腺癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、扁平上皮癌、肺癌、特に扁平上皮細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、胸腺、子宮、膀胱又は卵巣癌である
請求項４５及び４６のいずれかに記載の方法。
【請求項５４】
腫瘍は、乳癌であり、前記乳癌は、エストロゲンレセプター陰性、プロゲステロンレセプター陰性及びハーセプチン耐性の少なくともいずれかである
請求項５０に記載の方法。
【請求項５５】
標的抗体は、改変された抗体である
請求項１から５４のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＣＤ１３８発現細胞を標的とする免疫複合体の投与を含む、特にヒト対象のための方法及び治療レジメンに関する。また本発明は、ＣＤ１３８発現標的細胞を有する癌の治療における抗癌組合せ剤、これを含む医薬組成物、及びその使用に関する。特に本発明は、当該組合せ剤の要素の全部は使用しない治療に比べ、相乗効果又は予想外の相加効果を治療において示す抗癌組合せ剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞外基質用のレセプターとして作用するＣＤ１３８は、多発性骨髄腫（ＭＭ）細胞において過剰発現されると共に、ＭＭ細胞発生及び／又は増殖に対して影響を有することが示されている。また例をあげるとするとＣＤ１３８は、卵巣癌の細胞、子宮頸癌（Ｎｕｍａら、２００２）、子宮内膜癌（Ｃｈｏｉら、２００７）、腎癌、胆嚢、移行上皮膀胱癌、胃癌（Ｗｉｋｓｔｅｎら、２００８）、前立腺腺癌（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら、２００３）、乳癌（Ｌｏｕｓｓｏｕａｒｎら、２００８）、非小細胞肺癌（Ｓｈａｈら、２００４）、肺扁平上皮癌（Ｔｏｙｏｓｈｉｍａら、２００１）、結腸癌細胞並びにホジキン及び非ホジキンスリンパ腫の細胞、結腸直腸癌（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら、２００８）、肝細胞癌（Ｌｉら、２００５）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、膵臓（Ｃｏｎｅｊｏら、２０００）、及び頭頸部癌（Ａｎｔｔｏｎｅｎら、１９９９）において発現される。
【０００３】
発明の説明及び特に実施に関する追加的詳細を示すために本明細書において用いられる出版物及び特許を含むその他資料については、参照により本明細書に援用される。便宜上これら出版物は、以下の説明において作者及び日付によって参照される、及び／又は添付目録において作者のアルファベット順により示される。
【０００４】
Ｔａｓｓｏｎｅら（２００４）は、マウスＩｇＧ１抗体Ｂ−Ｂ４による、ＭＭ細胞表面に発現したＣＤ１３８抗原への優れた結合を報告している。またＴａｓｓｏｎｅは、免疫複合体Ｂ−Ｂ４−ＤＭ１の高い細胞毒性活性を報告している。この免疫複合体Ｂ−Ｂ４−ＤＭ１は、多発性骨髄腫細胞に対し、マイタンシノイドＤＭ１をエフェクター分子として有している（特許文献１も参照）。
【０００５】
Ｉｋｅｄａら（２００８及び２００９）は、有望なｉｎ  ｖｉｔｒｏ結果と、Ｂ−Ｂ４に基づく免疫複合体ＢＴ０６２の異種移植モデルについての結果とを報告している。
【０００６】
ＴａｓｓｏｎｅらやＩｋｅｄａらが、ＭＭに関する有効治療法とその治療で適用され得る合成物との提供に対して貢献を示す一方で、この分野では未だ多くのニーズが存在する。
【０００７】
特に、ＭＭなどのＣＤ１３８発現に関する血漿増殖性障害を含んだＣＤ１３８発現に関連する病気について、適切な治療レジメンを提供すべきとのニーズが存在する。更に、単に一定許容量の免疫複合体を用いることにより、及び／又は免疫複合体と対象疾患への有効性が認められている細胞毒薬物とを組み合わせることにより、ＣＤ１３８を発現する非腫瘍細胞への毒性を臨床的に許容可能なレベルに確実に抑える治療レジメンへのニーズも存在する。また、当該疾患の他症状の緩和に用いられる薬物治療の必要性を低減する治療レジメンへのニーズも存在する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】米国特許出願公開第２００７０１８３９７１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ある実施形態において、一又はそれ以上のかかるニーズが満たされると共に、この分野におけるその他ニーズも満たされるものである。これらについては、以下の開示を介して当業者により良く理解されるものである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、本明細書において説明される方法であってＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための方法により、上述のニーズのうちの１以上を満たす。
【００１１】
一実施の形態において本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする対象に対して、特にヒト対象に対して、有効量の、好ましくは許容量の、免疫複合体を投与する
ことを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤、例えば改変された標的抗体、と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成する。
【００１２】
好ましくは、少なくとも改変された標的抗体の一部は、ＩｇＧ４アイソタイプ性、又はその代わりに本明細書において説明される他の任意の免疫複合体を与える。
【００１３】
更なる実施形態において本発明は、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための免疫複合体であって、
前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、前記免疫複合体は、有効量で投与され、当該有効量とは、許容量である。
【００１４】
更に本実施の形態において本発明は、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための薬剤の製造についての免疫複合体の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、前記免疫複合体は、有効量で投与され、当該有効量とは、許容量である。
【００１５】
かかる免疫複合体は、好ましくは対象に対して５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の量で投与される、又は薬物動態学的に相当する量で投与される。
【００１６】
更に好適な実施形態は、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患の治療において同時に、別々に、又は連続して使用される、免疫複合体及び有害な副作用を治療するための剤の複合製剤であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、前記免疫複合体は、単独投与される場合、前記免疫複合体の５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の薬物動態学的相当である量で投与される。
【００１７】
加えて、この更に好適な実施形態は、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患の治療において同時に、別々に、又は連続して使用される複合製剤の製造における、免疫複合体及び有害な副作用を治療するための剤の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、前記免疫複合体は、単独投与される場合、前記免疫複合体の５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の薬物動態学的相当である量で投与される。
【００１８】
特にかかる免疫複合体は、５ｍｇ／ｍ２又は１０ｍｇ／ｍ２から１６０ｍｇ／ｍ２未満の量で、好ましくは１５０ｍｇ／ｍ２、１４０ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２、又は１２０ｍｇ／ｍ２までの量で、対象に投与され得る。
【００１９】
初回投与終了から０から２時間後の対象の血漿における免疫複合体の最大濃度は、免疫複合体の理論最大濃度の５０％未満、好ましくは４０％未満、より好ましくは３０％未満、更に好ましくは２０％未満、更には１０％未満になり得る。
【００２０】
かかる免疫複合体は少なくとも４回投与され、各回の投与終了から０時間から２時間後の対象の血漿における免疫複合体の最大濃度は、上記免疫複合体の理論最大濃度の５５％未満、好ましくは５０％未満、より好ましくは４０％未満、更に好ましくは３０％未満、２０％未満、又は１０％未満になり得る。
【００２１】
かかる最大濃度は、１０ｍｇ／ｍ２について３μｇ／ｍＬ未満、２０ｍｇ／ｍ２について８μｇ／ｍＬ未満、４０ｍｇ／ｍ２について１５μｇ／ｍＬ未満、８０ｍｇ／ｍ２について２５μｇ／ｍＬ未満、１２０ｍｇ／ｍ２について３０μｇ／ｍＬ未満になり得る。
【００２２】
４回目の適用後であって初回投与終了から０時間から２時間後の対象の血漿における免疫複合体の最大濃度は、免疫複合体の理論最大濃度の５５％未満、好ましくは５０％未満、より好ましくは４０％、更に好ましくは３０％、２０％未満又は１０％未満になり得る。
【００２３】
かかる最大濃度は、２０ｍｇ／ｍ２について１４μｇ／ｍＬ未満、４０ｍｇ／ｍ２について１５μｇ／ｍＬ未満、又は８０ｍｇ／ｍ２について２５μｇ／ｍＬ未満になり得る。この免疫複合体は、静脈内投与され得る。この免疫複合体が繰り返し単回投与で静脈内投与され得ると共に、各投与終了から０時間から２時間後の対象の血漿における免疫複合体の最大濃度は、免疫複合体の理論最大濃度の５５％未満、５０％未満又は４０％未満になり得る。病態安定が、少なくとも４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回の治療サイクルの間（少なくとも１２週間、１５週間、１８週間、２１週間、２４週間、２７週間、３０週間）維持され得る。少なくとも病態安定の状態は、２０ｍｇ／ｍ２で５回、６回、７回、８回、９回、又は１０回の治療サイクルの間維持され得、更にある投与の終了から０時間から２時間後の対象の血漿における免疫複合体の最大濃度は、免疫複合体の理論最大濃度の５５％未満、５０％未満又は４０％未満にもなり得る。ある事例においては、最大８回の治療サイクル後にやや有効が観測され得る。
【００２４】
また本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする対象に対して、好ましくはヒト対象に対して、有効量の免疫複合体を投与することを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８が発現される細胞表面を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
前記免疫複合体は、用量として、好ましくは繰り返し単回用量として、１０ｍｇ／ｍ２以下、２０ｍｇ／ｍ２以下、３０ｍｇ／ｍ２以下、４０ｍｇ／ｍ２以下、８０ｍｇ／ｍ２以下、９０ｍｇ／ｍ２以下、１００ｍｇ／ｍ２以下、又は１２０ｍｇ／ｍ２以下の用量で投与され、
平均日量が、約４００μｇ／ｍ２から約６ｍｇ／ｍ２であって、約５００μｇ／ｍ２、約１ｍｇ／ｍ２、約２ｍｇ／ｍ２、約３ｍｇ／ｍ２、約４ｍｇ／ｍ２を含み、及び／又は
平均週量が、約３ｍｇ／ｍ２から約４０ｍｇ／ｍ２であって、約５ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ／ｍ２、約１５ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約２５ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２、又は約３５ｍｇ／ｍ２を含む。
【００２５】
本明細書において言及される方法により、約２０日間、約３０日間、約４０日間、約５０日間、約６０日間、約７０日間、約８０日間、約９０日間、約１００日間、約１２０日間、約１４０日間、約１６０日間、約１８０日間、約１９０日間、約２００日間、約２１０日間、又はそれ以上の日数の間、病態安定が維持され得る、及び／又は１サイクル約３週間の治療サイクルにおいて、約１回、約２回、約３回、約４回、約５回、約６回、約７回、約８回、約９回、約１０回、約１１回、約１２回、又はそれ以上の回数の治療サイクルの間、病態安定が維持され得る。
【００２６】
また本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための方法であって、そのような治療を必要とする対象に対して、好ましくはヒト対象に対して、有効量の免疫複合体を投与することを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８が発現される細胞表面を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
ＣＤ１３８は、かかる対象において標的細胞及び非標的細胞に発現しており、投与の結果として、穏やかな又は遅い血漿クリアランスが生じ、非標的細胞、特に上皮細胞は、実質的に影響を受けない。
【００２７】
投与される有効量は、有害な副作用を治療するための剤と組み合わせて投与される場合、２００ｍｇ／ｍ２未満であるか、又は薬物動態学相当で２００ｍｇ／ｍ２未満になり得ると共に、かかる投与の結果として、好ましくは４０時間、３０時間、２０時間、１５時間、１０時間、９時間、８時間、７時間、６時間、５時間未満後に対象において奏効が生じ得る。
【００２８】
かかる有効量は、１２０ｍｇ／ｍ２超となり得る。
【００２９】
標的及び非標的細胞（上皮細胞）におけるかかるＣＤ１３８の発現レベルは同等になり得る。
【００３０】
有効量が、例えば、単回投与、繰り返し単回投与又は複数回投与で投与され得る。
【００３１】
かかる有効量が複数回投与で投与され得、各回投与後の最大血中濃度値は、理論最大血中濃度値の５５％超である。
【００３２】
かかる疾患は、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかに関連し得、免疫複合体の投与又は本発明による抗癌組合せ剤により、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを、好ましくは受容可能なレベルまで減じ得る。骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを緩和するための投薬を、中止する又は一般的に投与される基本レベルから１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％ほど減じることができる。基本レベルは、治療対象の症状について一般的に推奨されるレベルであって、薬品に付随する使用指示から確認され得る、又は鎮痛薬を投与する当業者によって知られている。
【００３３】
例えば、通常４週間ごとに９０ｍｇ投与されるビスホスホネート、例えばパミドロネート、又は通常毎月１度４ｍｇの用量で投与されるゾレドロン酸（Ｔｅｒｐｏｓら、２００９）については、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％又は９０％ほど減じることができる（又はこの減少に対応する大きな時間間隔で）、又は排除することができる。
【００３４】
またかかる投与の結果として、少なくとも病態安定、やや有効、又は部分寛解のＦＬＣ又はＭ蛋白質レベルが、対象において好ましくは初回投与後に生じ得る。
【００３５】
かかる免疫複合体は、ＣＤ１３８に対する抗原結合領域（ＡＢＲ）と、更なる抗体領域とを有し、少なくとも当該更なる抗体領域の一部は、ヒト抗体のものであってＩｇＧ４アイソタイプ性を与え得る。
【００３６】
免疫複合体は、ｎＢＴ０６２若しくはｎＢＴ０６２に対し少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、９９％の配列同一性を有する標的抗体を含み得る、又はＢＴ０６２に相当し得る。
【００３７】
かかる対象は、ヒト対象であり得る。
【００３８】
かかる方法は、免疫複合体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を投与することから実質的になり、当該組成物の活性成分は、前記免疫複合体から実質的になる。
【００３９】
本明細書で説明される方法のいずれであっても結果として、１日目に免疫複合体を投与する約３週間を含む治療サイクルにおいて、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１１回、１２回、若しくはそれ以上の回数の治療サイクルの期間持続する、病態安定、奏効、特にやや有効、部分寛解、非常に良好な部分寛解、ストリンジェント完全寛解、若しくは完全寛解を生じる
【００４０】
また本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための方法であって、
（ｉ）前記疾患を、多発性骨髄腫などのＣＤ１３８発現標的細胞に関連しているものとして特定すると共に、レナリドマイドなどの免疫調節薬及びボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれか１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しいものとして特定することと、
（ｉｉ）対象に対して、本明細書において指定される有効量の免疫複合体を、好ましくは静脈内に、前記免疫複合体が単独で投与される場合は２００ｍｇ／ｍ２未満の用量で投与することと
を含み、又は当該有効量は、考え得る副作用を含む副作用を治療するための剤と組み合わせて投与される場合、薬物動態学的相当で２００ｍｇ／ｍ２であり、
当該対象は、レナリドマイドなどの免疫調節薬及びボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれか１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、前記疾患が治療される。
【００４１】
また本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための方法であって、
そのような治療を必要とすると共に、５０ｎｇ／ｍＬ超、６０ｎｇ／ｍＬ超、７０ｎｇ／ｍＬ超、８０ｎｇ／ｍＬ超、１００ｎｇ／ｍＬ超、１５０ｎｇ／ｍＬ超、２００ｎｇ／ｍＬ超、３００ｎｇ／ｍＬ超、４００ｎｇ／ｍＬ超、５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、７００ｎｇ／ｍＬ超、８００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、１，０００ｎｇ／ｍＬ超、１，１００ｎｇ／ｍＬ超、１，２００ｎｇ／ｍＬ超、１，３００ｎｇ／ｍＬ超、１，４００ｎｇ／ｍＬ超、１，５００ｎｇ／ｍＬ超などの高レベルのｓＣＤ１３８を呈する対象に対して、本明細書において指定される有効量の免疫複合体を投与することを含み、２０ｍｇ／ｍ２又は４０ｍｇ／ｍ２の量が有効でありやや有効などの奏効を生じる。かかる奏効は、免疫複合体の選択的結合から生じ得る。かかる対象は、レナリドマイドなどの免疫調節薬及びボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかの細胞毒性剤による治療に対して奏効し得ない又は十分に奏効し得ない。
【００４２】
かかる改変された標的抗体は、ＣＤ１３８に対する抗原結合領域（ＡＢＲ）と、更なる抗体領域を含み得、少なくとも当該更なる抗体領域の一部は、ヒト抗体のものであってＩｇＧ４アイソタイプ性を与える。
【００４３】
かかる疾患は、多発性骨髄腫、特に再発性又は難治性多発性骨髄腫であり得る。
【００４４】
また標的細胞においてＣＤ１３８を発現するかかる疾患は、腎細胞癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、前立腺腺癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、扁平上皮癌、肺癌、特に扁平上皮細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、胸腺、子宮、膀胱又は卵巣癌からなる群から選択され得る。
【００４５】
好適な実施形態においてかかる免疫複合体は、均一的にＣＤ１３８発現標的細胞を標的とする。
【００４６】
ある実施形態において本発明の改変された標的抗体は、
（ｉ）実質的に、非ヒト抗体のＣＤ１３８に対する抗原結合領域（ＡＢＲ）からなる、又は
（ｉｉ）ＣＤ１３８に対する抗原結合領域（ＡＢＲ）を含み得、当該抗原結合領域は非ヒト抗体のものであって、
更なる抗体領域を含み、少なくとも当該更なる抗体領域の一部は、ヒト抗体のものである。
【００４７】
かかるＡＢＲは、
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基９９から１１１を含む重鎖可変領域ＣＤＲ３と、
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残基８９から９７を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ３とをそれぞれ含み得る。
【００４８】
更にかかるＡＢＲは、
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基３１から３５及び５１から６８を含む重鎖可変領域ＣＤＲ１及びＣＤＲ２と
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残基２４から３４及び５０から５６を含む軽鎖可変領域ＣＤＲ１及びＣＤＲ２との少なくともいずれかをそれぞれ含み得る。
【００４９】
かかる更なる抗体領域は、
（ａ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基１２３から４４８と、
（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残基１０８から２１４との少なくともいずれかのそれぞれと、その突然変異とを含み得、当該突然変異は、
（ｉ）改変された標的抗体の抗体依存細胞毒性及び補体依存細胞毒性を維持又は低下させる、及び又は
（ｉｉ）改変された標的抗体を安定化させる。
【００５０】
かかる抗体は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対する配列同一性が少なくとも約７０％より好ましくは８０％、８５％又は９０％である軽鎖と、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対する配列同一性が少なくとも約７０％より好ましくは８０％、８５％又は９０％である重鎖とを含み得ると共に、上記指定された抗原結合領域を含み得る。
【００５１】
エフェクター分子は、かかる改変された標的抗体に対してリンカーを介して結合され得る。当該リンカーは、ジスルフィド結合を含み得る。このエフェクター分子（例えば、ＤＭ４）は、標的抗体及びエフェクター分子間において立体障害性を提供し得る。このエフェクター分子は、少なくとも１のメイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ３又はＤＭ４）タキサン、又はＣＣ１０６５、又はその類似体であり得る。
【００５２】
免疫複合体は、１５０％、１４０％、１３０％、１２０％、１１０％、１００％、９０％、８０％、７０％、６０％又は５０％未満のターゲティング変動でＣＤ１３８を結合し得る。
【００５３】
本明細書において説明される方法のある実施形態において免疫複合体は、
ＣＤ１３８を標的とする標的剤を含み得、当該標的剤は、
免疫グロブリン重鎖のアミノ酸配列又はその一部を含む単離ポリペプチドを有し、当該免疫グロブリン重鎖又はその一部は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも７０％の配列同一性を有する。かかる免疫グロブリン重鎖又はその一部の定常領域は、ＩｇＧ４アイソタイプ定常領域であり得る。
【００５４】
免疫複合体の標的剤は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有する軽鎖配列を有し得る。また免疫複合体の標的剤は、ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に対して少なくとも約７０％の配列同一性を有する重鎖配列を有し得る。
【００５５】
また本発明の対象とする医薬組成物は、腫瘍細胞拡散及び腫瘍成長の少なくともいずれかに対する阻害、遅延及び防止の少なくともいずれかのための、本明細書において指定される免疫複合体、及び１以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。
【００５６】
医薬組成物は、本明細書において指定されるような細胞毒性剤を含み得る。
【００５７】
また本発明の対象とするキットは、１以上の投与剤形で別々の容器にかかる医薬組成物を有すると共に、１以上の投与剤形をそれを必要とする対象、特にヒト対象、に対して繰り返し単回投与又は本明細書で考察される他の治療レジメンにより投与する方法のインストラクションを別の容器に含む。
【００５８】
特に本発明の一態様においては、本明細書で開示される免疫複合体のいずれかの投与は、そのような投与から恩恵を受ける対象又はそのような対象の細胞に対するものであって、特にヒト対象に対するものである。また免疫複合体は、そのような障害の治療のための薬剤の製造に用いられ得る。
【００５９】
更に本発明により提供されるものは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における疾患を治療するための免疫複合体であって、
前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、当該対象は、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、
前記免疫複合体は、対象に対して５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の量で好ましくは静脈内投与される。
【００６０】
加えて本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における疾患を治療するための薬剤の製造についての免疫複合体の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、当該対象は、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、
前記免疫複合体は、対象に対して５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の量で好ましくは静脈内投与される。
【００６１】
また本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における疾患の治療において同時に、別々に、又は連続して使用される、免疫複合体及び有害な副作用を治療するための剤の複合製剤であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
当該対象は、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、前記免疫複合体は、対象に対して単独投与される場合前記免疫複合体の５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の薬物動態学的相当量で好ましくは静脈内投与される。
【００６２】
更に本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における疾患の治療において同時に、別々に、又は連続して使用される複合製剤の製造における、免疫複合体及び有害な副作用を治療するための剤の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
当該対象は、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、前記免疫複合体は、対象に対して単独投与される場合前記免疫複合体の５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の薬物動態学的相当量で好ましくは静脈内投与される。
【００６３】
加えて本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の患者における疾患を治療するための免疫複合体であって、
前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
当該患者は、その血漿におけるｓＣＤ１３８レベルとして５０ｎｇ／ｍＬ超を呈し、
前記免疫複合体は、好ましくは有効量で投与されることにより少なくともやや有効を提供する。
【００６４】
また本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関する疾患を治療するための薬剤の製造についての免疫複合体の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
患者は、その血漿におけるｓＣＤ１３８レベルとして５０ｎｇ／ｍＬ超を呈し、
前記免疫複合体は、好ましくは有効量で投与されることにより少なくともやや有効を提供する。
【００６５】
好適な実施形態において免疫複合体は、少なくとも２０ｍｇ／ｍ２の量で、より好ましくは少なくとも４０ｍｇ／ｍ２の量で投与される。
【００６６】
好適な実施形態において、患者が血漿において呈するｓＣＤ１３８のレベルは、６０ｎｇ／ｍＬ超、７０ｎｇ／ｍＬ超、８０ｎｇ／ｍＬ超、１００ｎｇ／ｍＬ超、１５０ｎｇ／ｍＬ超、２００ｎｇ／ｍＬ、３００ｎｇ／ｍＬ超、４００ｎｇ／ｍＬ超、５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、７００ｎｇ／ｍＬ超、８００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、１，０００ｎｇ／ｍＬ超、１，１００ｎｇ／ｍＬ超、１，２００ｎｇ／ｍＬ超、１，３００ｎｇ／ｍＬ超、１，４００ｎｇ／ｍＬ超、又は１，５００ｎｇ／ｍＬ超である。
【００６７】
また本発明の対象とするところは、抗癌組合せ剤であって、前記抗癌組合せ剤は、
少なくとも１つの細胞毒性剤と、ＣＤ１３８発現細胞を標的にする標的剤を含む少なくとも１つの免疫複合体と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含む抗癌組合せ剤であって、かかる標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
（ａ）かかる組合せ剤は、１超、１．１超、１．２超、１．３超
、１．４超のシナジー比を有する、又は
（ｂ）かかる組合せ剤は、約１のシナジー比を有し、エフェクター分子及び細胞毒性剤は、干渉作用機構を有し、
かかる抗癌組合せ剤は、医薬組成物であるか、又は前記少なくとも１つの細胞毒性剤及び前記少なくとも１つの免疫複合体を別々の容器に含むキットである。
【００６８】
かかる細胞毒性剤は、プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤、血管新生抑制剤、ＤＮＡアルキル化剤、又はこれら２以上の混合物であり得る。
【００６９】
かかる細胞毒性剤は、ボルテゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、メルファラン、又はこれら２以上の混合物であり得る。
【００７０】
かかる抗癌組合せ剤のエフェクター分子及び細胞毒性剤は、干渉作用機構を有し得ると共に、当該作用機構は、好ましくは微小管の阻害又は細胞周期停止の誘導を伴う（メルファラン、ボルテゾミブ及びレナリドマイド又はサリドマイドは、細胞周期停止を誘発する細胞毒性剤である）。またその代わりとしてこれらは、非干渉作用機構を有し得る。
【００７１】
抗癌組合せ剤が医薬組成物の一部である場合、当該医薬組成物は少なくとも１つの薬学的に許容される添加剤を含み得る。
【００７２】
抗癌組合せ剤はキットの一部であり得、このキットでは少なくとも１つの細胞毒性剤と少なくとも１つの免疫複合体とが別々の容器に収容される。
【００７３】
また本発明の対象としては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療するための方法において、
それを必要とする患者に対して、本明細書において説明される抗癌組合せ剤の有効量、又は少なくとも１つの細胞毒性剤とＣＤ１３８発現細胞を標的とする標的剤及び少なくとも１つのエフェクター分子を含む少なくとも１つの免疫複合体とを有する抗癌組合せ剤の有効量を投与することを含み、かかる標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、免疫複合体は、かかる細胞毒性剤に対する患者の難治性表現型を克服する。
【００７４】
また本発明の対象としては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する疾患を治療するための方法にであって、
それを必要とする患者に対して、本明細書で考察される抗癌組合せ剤の有効量を投与することを含み、免疫複合体は、難治性表現型を克服する。
【００７５】
また本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する非血漿増殖性疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする対象に対して又は非血漿増殖性疾患の細胞に対して有効量の免疫複合体を投与する
ことを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
ＣＤ１３８はかかる対象の標的細胞及び非標的細胞において同等レベルで発現される、又はＣＤ１３８はかかる患者の標的細胞においてＣＤ１３８発現非標的細胞のレベルよりも低いレベルで発現される。
【００７６】
かかるＣＤ１３８発現非標的細胞は、上皮細胞であり得る。
【００７７】
また本発明の対象とするところは、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する非血漿増殖性疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする対象に対して又は非血漿増殖性疾患の細胞に対して有効量の免疫複合体を投与する
ことを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
かかる疾患の標的細胞からは、２４時間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間の期間に亘ってＣＤ１３８が取り除かれる。
【００７８】
かかる疾患は、乳癌であり得る。
【００７９】
更に本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における疾患の治療において同時に、別々に、又は連続して使用される、少なくとも１つの細胞毒性剤及び少なくとも１つの免疫複合体の複合製剤であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に少なくとも１つのエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
かかる対象は、難治性表現型を有する。
【００８０】
加えて本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における疾患の治療において同時に、別々に、又は連続して使用される複合製剤の製造における、少なくとも１つの細胞毒性剤及び少なくとも１つの免疫複合体の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的に少なくとも１つのエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、かかる対象は、難治性表現型を有する。
【００８１】
好適な実施形態において、少なくとも１つの細胞毒性剤及び少なくとも１つの免疫複合体の組合せ剤は、１超、１．１超、１．２超、１．３超
、又は１．４超のシナジー比を有する。若しくは少なくとも１つの細胞毒性剤及び少なくとも１つの免疫複合体の組合せ剤は、約１のシナジー比を有し、エフェクター分子及び細胞毒性剤は、重複作用機構を有する。
【００８２】
更なる態様において本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における非血漿増殖性疾患を治療するための免疫複合体であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
対象においてＣＤ１３８は、非標的細胞に発現されるＣＤ１３８と同等（相当）のレベル又はそれ未満のレベルで、標的細胞において発現される。
【００８３】
また本発明により提供されるものとしては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連の対象における非血漿増殖性疾患を治療するための薬剤の製造についての免疫複合体の使用であって、前記免疫複合体は、
（ｉ）ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
（ｉｉ）少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、
対象においてＣＤ１３８は、非標的細胞に発現されるＣＤ１３８と同等（相当）のレベル又はそれ未満のレベルで、標的細胞において発現される。
【００８４】
また本発明の対象としては、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する非血漿増殖性疾患を治療するための方法であって、
それを必要とする対象に対して又は非血漿増殖性疾患の細胞に対して有効量の免疫複合体を投与する
ことを含み、前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的剤と、
少なくとも１つのエフェクター分子と
を含み、前記標的剤は、機能的にエフェクター分子に結合することにより免疫複合体を形成し、免疫複合体は、固形腫瘍の寛解を誘発する。
【００８５】
かかる寛解については、寛解の後腫瘍の再成長がない（完全寛解）期間が続く場合がある。この期間は、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、８週間、９週間、１０週間超、半年又は１年若しくはそれ以上の期間であり得る。
【００８６】
かかる固形腫瘍は、膵臓癌又は乳癌であり得る。
【００８７】
かかる疾患は、腎細胞癌、子宮内膜癌、子宮頚部癌、前立腺腺癌、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、乳癌、肝細胞癌、結腸直腸癌、結腸癌、扁平上皮癌、肺癌、特に扁平上皮細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、胸腺、子宮、膀胱又は卵巣癌であり得る。
【００８８】
固形腫瘍は乳癌であり得、これはエストロゲンレセプター陰性及びプロゲステロンレセプター陰性の少なくともいずれかである。
【図面の簡単な説明】
【００８９】
【図１】図１は、結合されたエフェクター分子を有するｎＢＴ０６２を略式的に表現したものである。
【図２】図２は、ＢＴ０６２を化学的に表現したものである。
【図３】図３は、アンサマイトシンＰ−３のマイタンシノールへの変換を示す（単純化のため立体化学を省く）。
【図４】図４は、ＤＭ４の代表的な合成スキームを示す。
【図５】図５は、抗体結合（ｎＢＴ０６２からＤＭ４へ）を略式的に表現したものである。
【図６】図６は、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１、ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２抗体のＯＰＭ−２細胞への結合の分析を示す。異なる濃度のｎＢＴ０６２及び複合体が細胞へ与えられた。また平均蛍光度がＦＡＣＳ分析により測定された。
【図７Ａ】図７Ａは、ｎＢＴ０６２−ＤＭｘ複合体のＭＯＬＰ−８（ＣＤ１３８＋）及びＢＪＡＢ（ＣＤ１３８−）細胞へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を説明する。細胞は、平らな底板において培養され、免疫複合体の指示濃度で５日間インキュベートされた。更に３時間、ＷＳＴ試薬が加えられて細胞生存性を評価した。
【図７Ｂ】図７Ｂは、ｎＢＴ０６２−ＤＭｘ複合体のＭＯＬＰ−８（ＣＤ１３８＋）及びＢＪＡＢ（ＣＤ１３８−）細胞へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を説明する。細胞は、平らな底板において培養され、免疫複合体の指示濃度で５日間インキュベートされた。更に３時間、ＷＳＴ試薬が加えられて細胞生存性を評価した。
【図７Ｃ】図７Ｃは、ｎＢＴ０６２−ＤＭｘ複合体のＭＯＬＰ−８（ＣＤ１３８＋）及びＢＪＡＢ（ＣＤ１３８−）細胞へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を説明する。細胞は、平らな底板において培養され、免疫複合体の指示濃度で５日間インキュベートされた。更に３時間、ＷＳＴ試薬が加えられて細胞生存性を評価した。
【図７Ｄ】図７Ｄは、ｎＢＴ０６２−ＤＭｘ複合体のＭＯＬＰ−８（ＣＤ１３８＋）及びＢＪＡＢ（ＣＤ１３８−）細胞へのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性を説明する。細胞は、平らな底板において培養され、免疫複合体の指示濃度で５日間インキュベートされた。更に３時間、ＷＳＴ試薬が加えられて細胞生存性を評価した。ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の細胞毒性活性が、阻止抗体（１μＭ  ｎＢＴ０６２）の存在又は非存在下で分析された。
【図８Ａ】図８Ａは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、ＰＢＳで治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図８Ｂ】図８Ｂは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、ｎＢＴ０６２抗体で治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図８Ｃ】図８Ｃは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、フリーＤＭ４で治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図８Ｄ】図８Ｄは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、非ターゲティング複合体ｈｕＣ２４２−ＤＭ４で治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図９Ａ】図９Ａは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、ＰＢＳで治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図９Ｂ】図９Ｂは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４で治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図９Ｃ】図９Ｃは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１で治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図９Ｄ】図９Ｄは、ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞接種後ある時間（日数）に亘って、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１で治療された個々のマウスの腫瘍体積を示す。
【図１０】図１０は、接種後ある時間（日数）に亘って、ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスにおけるＭＯＬＰ−８ヒト多発性骨髄腫異種移植の平均腫瘍体積（＋／−ＳＤ）を示す。
【図１１Ａ】図１１Ａは、ＳＣＩＤマウスの大きなＭＯＬＰ−８腫瘍モデルにおけるＣＤ１３８＋ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞に対するｎＢＴ０６２−ＤＭｘの抗腫瘍活性を示す。腫瘍体積は、各グループの平均（＋／−ＳＤ）として与えられる。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、ＳＣＩＤマウスの大きなＭＯＬＰ−８腫瘍モデルにおけるＣＤ１３８＋ＭＯＬＰ−８腫瘍細胞に対するｎＢＴ０６２−ＤＭｘの抗腫瘍活性を示す。腫瘍体積は、各グループの平均（＋／−ＳＤ）として与えられる。
【図１２】図１２は、ヒト骨髄環境における多発性骨髄腫細胞に対しＳＣＩＤｈｕ／ＩＮＡ−６モデルにおけるＤＭｘ複合体を含むｎＢＴ０６２の抗腫瘍効能を示すグラフである。多発性骨髄腫細胞（ｓｈｕＩＬ−６Ｒ）により生成される可溶性ヒトＩＬ−６レセプターは、腫瘍負荷の指標として用いられた。三角形：ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１、四角形：ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ひし形：溶媒対照。
【図１３】図１３は、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４によって媒介されるｉｎ  ｖｉｔｒｏの場合のバイスタンダーキリングを示す。ＣＤ１３８陽性ＯＰＭ２細胞及びＣＤ１３８陰性ナマルバ細胞は、異なる濃度でのｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４と共に培養され、細胞生存率が測定された。ＯＤ４５０値により、細胞生存率の測定が示される。
【図１４】図１４は、ＢＴ０６２の単回注入において異種移植マウスにおける腫瘍成長曲線を示す。アスタリスク（＊）で示される用量は、リンクされたＤＭ４の分子量に基づく。
【図１５】図１５は、対照に対して、ＢＴ０６２により治療されたマウスにおける異種移植膵臓癌の完全寛解を示す。
【図１６】図１６は、対照に対して、ＢＴ０６２により治療されたマウスにおける異種移植乳癌の完全寛解を示す。
【図１７】図１７は、４０ｍｇ／ｍ２から１２０ｍｇ／ｍ２の範囲の用量に対する急速血漿クリアランスを説明する一方で、１６０ｍｇ／ｍ２の用量によりここで説明されるより高い用量が予期値により近い血漿クリアランスを示した旨を説明する。
【図１８】図１８は、ＢＴ０６２血漿プロファイルと同じ要領で治療されたサルのプロファイルとを比較している。この比較によれば、利用可能な動物モデルから低用量における急速な血漿クリアランスが推定され得ない旨とこの急速な血漿クリアランスがヒトに特異的である旨とが明らかになる。
【図１９】図１９は、理論最高血中濃度値に対するＢＴ０６２の測定最高血中濃度値を示す。
【図２０】図２０は、最高血中濃度値が一般的にいくつかの治療サイクルに亘って同様であることを示す。
【図２１】図２１は、最高血中濃度値が一般的にいくつかの治療サイクルに亘って同様であることを示す。
【図２２】図２２は、急速な血漿クリアランスが、可溶性ＣＤ１３８によって生じる緩衝効果に起因し得ない旨を明確にする。
【図２３】図２３は、指示された治療サイクルにおいて異なる用量のＢＴ０６２が投与されるヒト対象についての治療チャートを示し、各治療サイクルは２１日間続くと共に、それぞれの投与量は各サイクルの１日目に投与された。
【図２４】図２４は、３週間の間隔で２０ｍｇ／ｍ２を受けた患者について測定された尿Ｍ蛋白質のレベルを示す。５日目から２０５日目が示される。
【図２５】図２５は、３週間の間隔で４０ｍｇ／ｍ２を受けた患者について測定された血清Ｍ蛋白質のレベルを示す。２１日目から１１９日目が示される。
【図２６】図２６は、３週間の間隔で１６０ｍｇ／ｍ２を受けた患者について測定されたカッパＦＬＣのレベルを示す。２１日目から１０１日目が示される。
【図２７】図２７は、患者群について２０ｍｇ／ｍ２でのＢＴ０６２の血漿濃度を示す。
【図２８】図２８は、異種移植マウスモデルにおける平均腫瘍体積（ＴＶ）に対する組み合わせ治療の効果を示す。この結果では、ＢＴ０６２及びレナリドマイドの組み合わせの効果が示される。
【図２９】図２９は、異種移植マウスモデルにおける平均腫瘍体積（ＴＶ）に対する組み合わせ治療の効果を示す。この結果では、ＢＴ０６２及びベルケイドの組み合わせの効果が示される。
【図３０】図３０は、異種移植マウスモデルにおける平均腫瘍体積（ＴＶ）に対する組み合わせ治療の効果を示す。この結果では、ＢＴ０６２及びメルファランの組み合わせの効果が示される。
【発明を実施するための形態】
【００９０】
本発明は、本明細書において説明されるＣＤ１３８標的剤を含む免疫複合体を、投薬を必要とする対象、特にヒト対象（患者）、へ投与することに関する。また本発明は、免疫複合体のエフェクター分子の標的部位への搬送、及び標的部位内又は標的部位におけるエフェクター分子の放出、特に標的細胞、組織及び／又は臓器における放出に関する。具体的に本発明は、そのようなＣＤ１３８標的剤を有する免疫複合体と、この標的剤に付随する強力なエフェクター分子とに関する。エフェクター分子は、標的部位内又は標的部位における免疫複合体の標的剤部分からの開裂及び／又は解離によって活性化される場合がある。免疫複合体は、それのみで投与される場合がある。若しくは免疫複合体は、抗癌組合せ剤の一部として投与される場合があり、この抗癌組合せ剤には細胞毒薬物が含まれる。この細胞毒薬物としては、限定されるものではないが、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ）、免疫調節薬／抗血管新生薬（例えば、サリドマイド又はレナリドミド）、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、メルファラン）、又はコルチコステロイド（例えば、デキサメサゾン）がある。ここでこの抗癌組合せ剤によると、免疫複合体のみが用いられる単剤療法や、細胞毒薬物のみが用いられる単剤療法や、これら両方が用いられる場合と比して、癌治療において相乗効果又は予想外の相加効果を示す。
【００９１】
本発明による免疫複合体は、治療を必要とする対象に投与され得る。又はこの免疫複合体は、そのような治療を必要とする対象から分離された細胞に対して投与され得る。エフェクター分子又はその複数分子は、標的細胞、組織及び／又は臓器内又は標的細胞、組織及び／又は臓器における開裂／解離によって、免疫複合体から放出され得る。
【００９２】
一実施例においては、ｎＢＴ０６２抗体を介してＣＤ１３８発現細胞を標的とすると共にエフェクター分子としてＤＭ４を有する免疫複合体ＢＴ０６２が、再発性／難治性多発骨髄腫の患者に対して、１回あたり８０ｍｇ／ｍ２の量で４回繰り返し投与された。ここで、各治療サイクルの長さは２１日であって、各サイクルにおけるただ１度の投与がそのサイクルの初日に行われた。本実施例では、腫瘍細胞内及び／又は腫瘍細胞により集中するように、免疫複合体が患者の静脈内投与された。ＢＴ０６２の血漿濃度測定によれば、初期測定フェーズ（投与終了後最大２時間）において、ＢＴ０６２の最高血中濃度値が理論計算値を大幅に下回る値であることが示された。一方で、有害な副作用は確認されなかった。これはＢＴ０６２が、標的及び非標的ＣＤ１３８に対してランダムに結合するというよりも、腫瘍標的に集中しているということを示唆している。ｓＣＤ１３８に起因するバッファ効果については除外され得る（図２０参照）。
【００９３】
他の実施例においては、免疫複合体ＢＴ０６２が、再発性／難治性多発骨髄腫の患者に対して、１回あたり２０ｍｇ／ｍ２の量で１０回繰り返し投与された。ここで、各治療サイクルの長さは２１日であって、各サイクルにおけるただ１度の投与がそのサイクルの初日に行われた。本実施例では、腫瘍細胞内及び／又は腫瘍細胞により集中するように、免疫複合体が患者に静脈内投与された。エフェクター分子を免疫複合体から放出するための追加的手段は、設けられなかった。１０回にわたる治療サイクルは、問題なく許容されるものであった。このような治療サイクルに対し、少なくとも病態安定が達成された。
【００９４】
他の実施例においては、免疫複合体ＢＴ０６２が、再発性多発骨髄腫の患者に対して、１回あたり１６０ｍｇ／ｍ２の量で４回繰り返し投与された。ここで、各治療サイクルの長さは２１日であって、各サイクルにおけるただ１度の投与がそのサイクルの初日に行われた。本実施例では、腫瘍細胞内及び／又は腫瘍細胞により集中するように、免疫複合体が患者に静脈内投与された。この濃度では、血漿クリアランスが未だ理論最高血中濃度を下回るが、低用量で確認される程度ではなかった。しかしながら、ただ１度の治療後に血清ＦＬＣレベルの強力な低下を確認することができた。２回目、３回目及び４回目の治療後に部分寛解を確認することができた。
【００９５】
ある治療レジメンの場合、痛み及び／又は骨合併症の緩和薬剤の投与が中断される場合があった。これは、免疫複合体の投与後に患者の痛みが減少したためである。この結果、このような薬物治療に関連する副作用（ビスホスホネートやその他骨粗しょう症薬剤治療を含む）、例えば顎骨壊死など、が避けられた。
【００９６】
更に他の実施例においては、免疫複合体ＢＴ０６２が、再発性多発骨髄腫の患者に対して、１回あたり１２０ｍｇ／ｍ２の量で４回繰り返し投与されると共に、１日あたり１０ｍｇの免疫調節剤レナリドミドが繰り返し経口投与される。ここで、各治療サイクルの長さは２１日であって、各サイクルにおけるただ１度の投与がそのサイクルの初日に行われる。本実施例では、腫瘍細胞内及び／又は腫瘍細胞により集中するように、免疫複合体が患者に静脈内投与される。
【００９７】
他の実施例においては、免疫複合体ＢＴ０６２が、膵臓腫瘍を患う患者に対して、繰り返し投与される。ここで、各治療サイクルの長さは２１日であって、各サイクルにおけるただ１度の投与がそのサイクルの初日に行われる。本実施例では、腫瘍細胞内及び／又は腫瘍細胞により集中するように、免疫複合体が患者に静脈内投与される。
【００９８】
ＣＤ１３８又はシンデカン−１（以下のようにも説明される：ＳＹＮＤ１；ＳＹＮＤＥＣＡＮ；ＳＤＣ；ＳＣＤ１；ＣＤ１３８ＡＮＴＩＧＥＮ、スイスプロット受け入れ番号：Ｐ１８８２７ｈｕｍａｎ）は、膜糖蛋白質である。この膜糖蛋白質は、元来、上皮由来の細胞に存在するとされ、続いて造血細胞においても発見された（Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ、１９８９）。ＣＤ１３８は、長い細胞外ドメインを有し、このドメインは、可溶性分子（例えば、成長因子ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＨＧＦ）と、不溶性分子（例えば、細胞外基質成分コラーゲン及びフィブロネクチンへ）とへ、ヘパラン硫酸鎖（Ｌａｎｇｆｏｒｄ、１９９８；Ｙａｎｇ、２００７）を介して結合すると共に、かかる細胞外基質のレセプターとして作用する。またＣＤ１３８は、粘着細胞により発現されるヘパリン結合分子を介して細胞間接着を媒介する。ＣＤ１３８は、骨髄腫細胞の成長因子に対するコレセプターとしての役割を担うことが示されている（Ｂｉｓｐｉｎｇ、２００６）。血漿細胞分化の研究によれば、ＣＤ１３８を分化抗原として考慮すべきことも示されている（Ｂａｔａｉｌｌｅ、２００６）。
【００９９】
悪性造血の場合ＣＤ１３８は、ＭＭ細胞、卵巣悪性腫瘍、腎癌、胆嚢癌、乳癌、前立腺癌、肺癌、結腸癌細胞、及びホジキン及び非ホジキンスリンパ腫の細胞、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（Ｈｏｒｖａｔｈｏｖａ、１９９５）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄芽球性白血病（ＡＭＬ）（Ｓｅｆｔａｌｉｏｇｌｕ、２００３（ａ）；Ｓｅｆｔａｌｉｏｇｌｕ、２００３（ｂ））、固形組織肉腫、及び結腸癌の大部分や、ＣＤ１３８を発現する他の血液系腫瘍及び固形癌（Ｃａｒｂｏｎｅら、１９９９；Ｓｅｂｅｓｔｙｅｎら、１９９９；Ｈａｎら、２００４；Ｃｈａｒｎａｕｘら、２００４；Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌら、２００４；Ｏｒｏｓｚ及びＫｏｐｐｅｒ、２００１）において、高発現する。またＣＤ１３８の発現は、胃腸悪性腫瘍の異なるタイプに関連する（Ｃｏｎｅｊｏら、２０００）。表１に示すように、ＣＤ１３８発現／過発現に関連して多くの腫瘍形成細胞株が存在する。
【０１００】
【表１】
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【０１０１】
例えば乳癌細胞株及び膵臓癌細胞株の観測感度は、ＭＭ細胞株よりも十分に低かった。それにもかかわらず、乳癌及び膵臓癌患者からの細胞を用いた異種移植マウスモデルについての実験セクションで説明されるように、ＭＭによる比較用異種移植モデルの場合と比べて、匹敵するというだけでなく非常に良好な結果が得られた。両方の事例において、最終的に完全寛解を得ることができた。その一方で、比較用ＭＭモデルでは、完全寛解とはいえないものの、腫瘍増殖の著しい遅延が示された。
【０１０２】
膵臓癌の場合、早期の腫瘍と進行した腫瘍との間にシンデカン−１  ｍＲＮＡ発現についての違いが見当たらない。一方で乳癌の場合、微弱な又は不足のＩＨＣ染色によって反映されるように、ＣＤ１３８が時間経過と共に失われ得ることが報告されていた。ＣＤ１３８の発現欠失が報告されており、しばしば発現シフト、すなわち周囲ストロマにおけるデノボ発現（Ｌｏｕｓｓｏｕａｒｎ、２００８）、に関連付けられていた。この結果、期待されるＣＤ１３８標的剤に対する標的の数が、時間経過に伴って少なくなる可能性がある。
【０１０３】
ＣＤ１３８発現陽性であることが示されている他の癌としては、多くの卵巣腺癌、移行上皮膀胱癌、腎臓明細胞癌、扁平上皮細胞肺癌、及び子宮癌（例えば、以下の文献参照：Ｄａｖｉｅｓら、２００４；Ｂａｒｂａｒｅｓｃｈｉら、２００３；Ｍｅｎｎｅｒｉｃｈら、２００４；Ａｎｔｔｏｎｅｎら、２００１；Ｗｉｊｄｅｎｅｓ、２００２）がある。
【０１０４】
アクティブな（症候性の）多発性骨髄腫及び関連血漿増殖性障害の治療を、本発明の免疫複合体を介して治療可能な病気の一例とする。
【０１０５】
本明細書における血漿増殖性障害については、ＭＧＵＳ、ＳＭＭ、アクティブ（症候性）ＭＭ、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、孤立性形質細胞腫、全身性ＡＬアミロイドーシス、及びＰＯＥＭＳ症候群などの血漿細胞及び／又は血液障害を意味する。
【０１０６】
多発性骨髄腫（ＭＭ）は、通常、骨髄に由来する血漿細胞悪性増殖を意味し、主に患者の骨格に関連し、血漿蛋白形成における特定サイトの関与及び異常に起因する臨床特性を呈する。通常この病状の特徴としては、数多くのびまん性増殖巣、又は様々な骨の骨髄（特に頭蓋）における異常又は悪性血漿細胞の結節性蓄積があり、これにより明白な骨の膨張が、時折骨外性サイトにおいて生じる。放射線検査後、骨病変について特徴的な“パンチド・アウト”が現れる場合がある。骨髄腫に関わる細胞は、通常、異常な蛋白質を生成し、及び／又は血清及び尿における異常な蛋白質レベルを生じさせる。かかる病気は、通常、良性単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）から、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）へ、そしてアクティブ多発性骨髄腫（ＭＭ）へ発展する。これら病気の症状はそれぞれ異なるが、過カルシウム血症、腎不全、疲労、貧血症、骨痛、特発性骨折、感染症の頻度及び期間の増加、又は異常な尿の色又は臭いが挙げられる。本発明の場合多発性骨髄腫は、（ＭＧＵＳ）、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）及びアクティブ多発性骨髄腫（ＭＭ）、並びに最終的にアクティブＭＭへ進展し得るその他の血漿細胞悪性増殖を意味する。
【０１０７】
ＭＧＵＳとは、臨床的良性なＭＭの前兆状態であり、ＭＭよりも一般的である。ＭＧＵＳは、５０歳を超える人口の１％に生じ、７０歳を超える人口では３％である（Ｇｒｅｉｐｐ及びＬｕｓｔ、１９９５）。ＭＧＵＳの患者とＭＭの患者とを区別することは重要である。なぜならＭＧＵＳの患者の場合、治療に頼ることなく安全に観察され得るからである。しかしながら長期の追跡調査によれば、ＭＧＵＳを患う２４１人の患者のうち、５９人（２４．５％）が、ＭＭ又は関連疾患へ進展した（Ｋｙｌｅら、１９９３、を参照）。
【０１０８】
異常免疫グロブリン血症は、患者の免疫グロブリン合成の一次障害を意味する。
【０１０９】
単クローン性γグロブリン血症は、通常リンパ又は血漿細胞の単一クローンの増殖に関する疾患群のいずれかを意味する（普通、血清蛋白電気泳動法（ＳＰＥＰ）により単一ピークとして確認可能）と共に、患者の血清又は尿において単一クローン性免疫グロブリンが存在するという特徴がある。
【０１１０】
くすぶり型ＭＭ（ＳＭＭ）は、高齢者における症候性多発性骨髄腫の始まりに先立つものとして報告されている。くすぶり型多発性骨髄腫は、ＭＧＵＳの進行フェーズとしてとらえられる場合が多々ある。進行時であっても、くすぶり型多発性骨髄腫から進展した多発性骨髄腫は、通常、溶骨性病変やその他症候性多発性骨髄腫の基本的特徴を呈しない。
【０１１１】
ＭＭの臨床症状には、貧血症、過カルシウム血症、腎不全、及び溶解性骨病変が含まれる。良性単クローン性γグロブリン血症（ＭＧＵＳ）から、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、そしてアクティブ多発性骨髄腫（ＭＭ）へ進展する際の病気の進行及び重度の違いについては、下記の表２に示される。またこの表では、検出方法、診断、及びこれら病状の監視について概要を示す。このような症状や技術は、当業者に良く知られているものである。
【０１１２】
【表２】
2016053053.tif 000003
【０１１３】
通常、アクティブ多発性骨髄腫（ＭＭ）は、患者の骨髄における悪性血漿細胞の増殖から臨床的に認識される。これら腫瘍性血漿細胞は、免疫グロブリンを生成し、Ｂリンパ球から進展する。血漿細胞により生成される免疫グロブリンは、電気泳動試験により患者の血清中又は尿中から検出され得る。
【０１１４】
表２に示されるように血清Ｍ蛋白質の測定は、異なるステージにおけるＭＭを評価するための重要なツールである。
【０１１５】
“Ｍ蛋白質”は、単一クローン性蛋白質を意味し、この単一クローン性蛋白質は、通常、電気泳動ゲル上で幅の狭い帯状のものとして視覚化される、又は免疫電気泳動において異常な弧状のものとして視覚化される。これは、単一共通細胞に由来のクローン細胞によって生成された同種免疫グロブリンの増殖を示している。例えば、単一クラス及びサブクラスの重鎖及び単一タイプの軽鎖に特徴がある単一クローン性免疫グロブリンである（Ｍスパイク、より一般的には異常蛋白とも称される）。
【０１１６】
“血清蛋白電気泳動法”（ＳＰＥ又はＳＰＥＰ）及び“免疫固定電気泳動”（ＩＦＥ）によると、単一クローン性免疫グロブリンを検出することができる。この単一クローン性免疫グロブリンは、多発性骨髄腫（ＭＭ）を含むいくつかの血漿細胞増殖性疾患において生成される。人口全体では、これら所見のうち最大６１％は臨床症状に関連していないものであり、良性単クローン性γグロブリン血症の診断につながる。しかしながらＳＰＥ及びＩＦＥでは、特に軽鎖のみが分泌される場合、全ての単一クローン性免疫グロブリンが検出されるわけではない。
【０１１７】
これら“遊離軽鎖分子”（ＦＬＣｓ）は、λ及びκ軽鎖を含む。血漿細胞は、５つの重鎖タイプのうちの１つと共に、κ又はλ分子を生成する。通常、重鎖合成と比して約４０％の過剰遊離軽鎖が生成される。血漿細胞は、完全免疫グロブリン分子に加えて遊離軽鎖（ＦＬＣ、カッパ又はラムダ）を分泌する。そして血清軽鎖レベルは、合成（κ＞λ）及び腎排泄（κ＞λ）の相対比によって決定される。単一クローン性免疫グロブリン存在下では、関与するＦＬＣのクラスに応じて、κ：λ比率が通常範囲よりも高い又は低い場合がある。ＦＬＣｓの血清半減期は、２時間から６時間である。これに対し、ＩｇＡの場合５日間であり、ＩｇＭの場合６日間であり、ＩｇＧの場合２１日間である。かくして血清ＦＬＣレベルの測定によれば、完全免疫グロブリンの測定よりも、より速く治療に対する腫瘍の反応を評価することができる。同様に血清ＦＬＣ測定によれば、再発の早期発見が可能となる。
【０１１８】
また非血漿増殖性疾患は、ＣＤ１３８発現に関連している。
【０１１９】
膵臓癌
事例の大部分は、外分泌系からなる。これら外分泌系がんの大部分は、導管腺癌を呈する（より稀なサブタイプには、嚢腫、腺房細胞の腫瘍及び肉腫が含まれる）。膵臓の内分泌がんは、ホルモン産生腫瘍を示す。
【０１２０】
上皮内癌は、それが発生した細胞層に限定される場合で癌の初期段階を意味する。乳癌の場合においてｉｎ  ｓｉｔｕとは、癌細胞が導管（腺管上皮内癌）又は小葉（上皮内小葉癌）に限定されているということを意味する。これらは、乳房における奥の組織へ成長していない。又は、体内の他の臓器へ広がっていない。これらは、非浸潤性又は前浸潤性乳癌とも呼ばれる。
【０１２１】
浸潤（浸潤性）癌
膵臓の外分泌細胞及び内分泌細胞は、全く異なるタイプの腫瘍を形成する。
【０１２２】
外分泌腫瘍
これらは、膵臓癌の最も一般的なタイプである。大部分の膵外分泌腫瘍は、悪性である。外分泌膵臓癌の約９５％は、腺癌である（腺癌は、腺細胞において始まる癌である）。これらの癌は、通常膵臓の導管で始まるが、膵臓酵素を生成する細胞から進展する場合がある（腺房細胞癌）。
【０１２３】
外分泌膵臓腺管癌の一般的ではないタイプには、腺扁平上皮癌、扁平上皮癌、及び巨大細胞癌がある。
【０１２４】
内分泌腫瘍
内分泌膵臓の腫瘍は、一般的ではない。グループとしてこれら腫瘍は、膵神経内分泌腫瘍（ＮＥＴｓ）、又は時には膵島細胞腫瘍として知られている。膵島細胞腫瘍には、いくつかのサブタイプが存在する。それぞれは、開始するホルモン生成細胞のタイプに応じて名付けられている。
【０１２５】
外分泌膵臓癌のステージの説明に用いられる主なシステムとしては、米国癌協会（ＡＣＳ）によって提供される対癌米国合同委員会（ＡＪＣＣ）ＴＮＭシステムがある。診断用ＴＮＭシステムには、以下の３つの重要な情報が含まれる。
【０１２６】
Ｔは、センチメートル（ｃｍ）で測定される原発腫瘍のサイズを説明すると共に、癌が膵臓内又はその近くの臓器へ広がっているかを説明する。ＴＸ、Ｔ０、Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３及びＴ４によって区別される。ここで番号が高いほど、病気の進行を示す。
【０１２７】
Ｎは、近くの（領域の）リンパ節への広がりを説明する。Ｎのカテゴリには、ＮＸ、Ｎ０、及びＮ１がある。
【０１２８】
Ｍは、癌が体の他の臓器へ転移（拡散）しているかどうかを示す（膵臓癌の最も一般的な転移先は、肝臓、肺及び腹膜、つまり消化器官周りのスペースである）。Ｍのカテゴリには、ＭＸ、Ｍ０及びＭ１がある。
【０１２９】
Ｔ、Ｎ及びＭカテゴリの決定後、これら情報を結合してステージを割り当てる。このプロセスは、ステージ・グルーピングと呼ばれる。
【０１３０】
ステージ０（Ｔｉｓ、Ｎ０、Ｍ０）：腫瘍は、膵管細胞の最上層に限定されており、より奥の組織には侵入していない。これは、膵臓の外部には拡散していない。これら腫瘍は、上皮内膵癌又は膵上皮内腫瘍ＩＩＩ（ＰａｎＩｎ  ＩＩＩ）と称される場合がある。
【０１３１】
ステージＩＡ（Ｔ１、Ｎ０、Ｍ０）：腫瘍は、膵臓に限定されており、大きさが２ｃｍ未満である。腫瘍は、近くのリンパ節又は遠くの場所へ広がっていない。
【０１３２】
ステージＩＢ（Ｔ２、Ｎ０、Ｍ０）：腫瘍は、膵臓に限定されており、大きさが２ｃｍより大きい。腫瘍は、近くのリンパ節又は遠くの場所へ広がっていない。
【０１３３】
ステージＩＩＡ（Ｔ３、Ｎ０、Ｍ０）：腫瘍が、膵臓外で成長している一方で、大きな血管中へは広がっていない。腫瘍は、近くのリンパ節又は遠くの場所へ広がっていない。
【０１３４】
ステージＩＩＢ（Ｔ１−３、Ｎ１、Ｍ０）：腫瘍が、膵臓に限定されている又は膵臓外で成長している一方で、近くの大きな血管中又は主要神経へは広がっていない。腫瘍は、近くのリンパ節へ広がっている一方で、遠くの場所へ広がっていない。
【０１３５】
ステージＩＩＩ（Ｔ４、任意のＮ、Ｍ０）：腫瘍が、膵臓外で成長し、近くの大きな血管中や主要神経へ入り込んでいる。腫瘍は、近くのリンパ節へ広がっている、若しくは広がっていない場合がある。腫瘍は、遠くの場所へ広がっていない。
【０１３６】
ステージＩＶ（任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１）：癌が、遠くの場所へ広がっている。
【０１３７】
正式にはＴＮＭシステムには含まれないが、他の要素も病気経過（見通し）を決定する上で重要である。癌の悪性度（顕微鏡下で細胞がどのくらい異常に見えるか）を、Ｇ１からＧ４という度合いで列挙する場合がある。Ｇ１癌は、最も通常と思われる細胞であり、最も良好な見通しを保持する。
【０１３８】
手術を受けた患者にとって更なる重要な要素は、切除範囲である。つまり、全ての腫瘍が取り除かれたか否かである。これについては、Ｒ０（全ての視認可能で微小な腫瘍が取り除かれた状況）〜Ｒ２（視認可能な腫瘍が残っている状況）という度合いで列挙される場合がある。
【０１３９】
実際上、どの程度癌が広がっているのかという点については、手術なしでは正確に決定することができない場合が多い。したがって医者により頻繁に使用されるのは、より単純なステージング・システムであり、これにより外科的に除去可能かどうかに基づいて癌をグループ分けする。これらのグループとしては、切除可能、局所進行（切除不能）、及び転移がある。これらの用語により、外分泌及び内分泌膵臓癌の両方を説明することができる。
【０１４０】
切除可能：癌が膵臓のみに存在する場合（又は膵臓の外へ広がって間もない場合）であって外科医が腫瘍全体を除去できる場合、その癌は切除可能であると称される。
【０１４１】
局所進行（切除不能）：癌が遠くの臓器までは広がっていないが手術によって完全に除去され得ない場合、その癌は局所進行と称される。多くの場合、癌が除去不能である理由として、その大部分が近隣の血管に存在するということが挙げられる。
【０１４２】
転移：癌が遠くの臓器へ広がった場合、その癌は転移と称される。手術を行う場合があるが、治療方針は癌の治癒ではなく症状の緩和となる。
【０１４３】
膵神経内分泌癌は、外分泌膵臓癌のように段階分けされない。その代わりとして、統計を異なるステージへ細分化する。このステージとしては、局所性（膵臓内のみ）、領域性（近隣のリンパ節や組織への拡散）、及び遠隔性（肝臓などの遠くの場所への拡散）がある。
【０１４４】
膀胱腫瘍は、顕微鏡下での癌細胞の見え方に応じてグループ分けされる。
【０１４５】
移行上皮癌（尿路上皮癌とも称される）は、膀胱癌の最も一般的なタイプである。このグループ内には、サブタイプが存在する。これらの癌は、細胞の形及び他の臓器へ拡散及び侵入する傾向があるか否かに応じて名付けられる（膀胱壁の奥深くへ成長する可能性がある場合は浸潤性と呼ばれ、そうでない場合は非浸潤性と呼ばれる）。これらの腫瘍は、顕微鏡下での細胞の見え方に基づいて、複数のグレードへ分けられる。細胞が通常細胞と同様に見える場合、癌は低グレード癌と呼ばれる。細胞が異常に見える場合、癌は高グレードとなる。低グレード癌は、成長が遅く、高グレード癌と比してより良好な結果が得られる傾向がある。
【０１４６】
かかる定義に含まれるものとしては、扁平上皮癌（一般的でない；通常は浸潤性）、腺癌（一般的でない；ほとんど全て浸潤性）、小細胞型（稀）が挙げられる。その他の稀な膀胱癌も、この定義に含まれる。
【０１４７】
また膀胱癌は、以下のように段階分けされる。
【０１４８】
ステージ０ａ（Ｔａ、Ｎ０、Ｍ０）：
この癌は、非浸潤乳頭状癌である。この癌は、膀胱の中空中心部に向かって成長している一方で、膀胱壁の筋肉又は結合組織中へは成長していない。この癌は、リンパ節や遠くの場所へは広がっていない。
【０１４９】
ステージ０ｉｓ（Ｔｉｓ、Ｎ０、Ｍ０）：
この癌は、平坦な非浸潤癌であり、平坦型上皮内癌（ＣＩＳ）としても知られている。この癌は、膀胱の裏層のみで成長している。この癌は、内側の膀胱の中空部に向かって成長しておらず、また膀胱壁の筋肉又は結合組織へ侵入してもいない。この癌は、リンパ節や遠くの場所へは広がっていない。
【０１５０】
ステージＩ（Ｔ１、Ｎ０、Ｍ０）：
この癌は、膀胱壁内の筋肉厚層内へ成長していない一方で、膀胱の裏層下の結合組織層内へ成長している。この癌は、リンパ節や遠くの場所へは広がっていない。
【０１５１】
ステージＩＩ（Ｔ２、Ｎ０、Ｍ０）：
この癌は、膀胱壁の厚筋肉層へ成長している一方で、この筋肉を完全に貫通しておらず膀胱周囲の脂肪組織層へ達していない。この癌は、リンパ節や遠くの場所へは広がっていない。
【０１５２】
ステージＩＩＩ（Ｔ３又はＴ４ａ、Ｎ０、Ｍ０）：
この癌は、膀胱を完全に貫通して膀胱周囲の脂肪組織層内へ成長している（Ｔ３）。この癌は、前立腺、子宮又は腟（Ｔ４ａ）内へ広がっている可能性がある。この癌は、骨盤又は腹部壁へは成長していない。この癌は、リンパ節や遠くの場所へは広がっていない。
【０１５３】
ステージＩＶ（Ｔ４ｂ、Ｎ０、Ｍ０）、（任意のＴ、Ｎ１〜３、Ｍ０）又は（任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１）：
この癌は、膀胱壁を通り抜けて骨盤又は腹部壁へ広がっている（Ｔ４ｂ）、及び／又はリンパ節へ広がっている（Ｎ１−３）、及び／又は骨、肝臓又は肺などの遠くの場所へ広がっている（Ｍ１）。
【０１５４】
胆嚢癌のタイプ
１０中９超の胆嚢癌は、腺癌である。腺癌は、体の多くの内面及び外面（消化器系の内側を含む）に沿って並んだ腺様の特徴を有する細胞から始まる癌である。特記すべき胆嚢腺癌のタイプとしては、乳頭腺癌、すなわち乳頭癌と呼ばれるものがある。これらは、顕微鏡観察下で指状突起のように配列された細胞を有する胆嚢癌である。一般的に乳頭癌は、肝臓や近隣のリンパ節内へ成長する可能性は少ない。これらについては、大部分の他の種類の胆嚢腺癌よりも良好な予後（見通し）となる傾向がある。全ての胆嚢癌のうち約６％は、乳頭腺癌である。胆嚢へ進展し得る癌としては、他のタイプのものも存在する。例えば、腺扁平細胞癌、扁平上皮癌、及び小細胞癌などであるが、これらは一般的ではない。
【０１５５】
胆嚢癌における下記のステージは、ＡＪＣＣのＴＮＭシステムに基づいて区別される。
【０１５６】
ステージ０：Ｔｉｓ、Ｎ０、Ｍ０：胆嚢の上皮層のみに小さな癌が存在する。この癌は、胆嚢の外側には広がっていない。
【０１５７】
ステージＩＡ：Ｔ１（ａ又はｂ）、Ｎ０、Ｍ０：腫瘍が、基底膜（Ｔ１ａ）又は筋層（Ｔ１ｂ）中へ成長している。この癌は、胆嚢の外側には広がっていない。
【０１５８】
ステージＩＢ：Ｔ２、Ｎ０、Ｍ０：腫瘍が、筋肉周囲の線維組織中へ成長している。この癌は、胆嚢の外側には広がっていない。
【０１５９】
ステージＩＩＡ：Ｔ３、Ｎ０、Ｍ０：腫瘍が、漿膜層を介して広がっている、及び／又は肝臓中へ及び／又はもう１つのその他近くの構造体中へ直接成長している。この腫瘍は、リンパ節へ又は胆嚢から離れた組織又は臓器へ広がっていない。
【０１６０】
ステージＩＩＢ：Ｔ１〜Ｔ３、Ｎ１、Ｍ０：腫瘍が、胆嚢において成長していると共に、近隣のリンパ節（Ｎ１）へ広がっている。この腫瘍は、胆嚢から離れた組織又は臓器へ広がっていない。
【０１６１】
ステージＩＩＩ：Ｔ４、任意のＮ、Ｍ０：腫瘍が、肝臓へ通ずる主要血管へ侵入している、又は肝臓以外の１以上の近隣臓器へ達している。この腫瘍は、リンパ節へ広がっている、又は広がっていない場合がある。この腫瘍は、胆嚢から離れた組織又は臓器へ広がっていない。
【０１６２】
ステージＩＶ：任意のＴ、任意のＮ、Ｍ１：腫瘍が、胆嚢から離れた組織又は臓器へ広がっている。
【０１６３】
乳癌
一般的に腺癌とは、腺組織（物質を生成し分泌する組織）において始まる癌の一種である。乳癌の場合、乳房の導管及び小葉は腺組織である。したがって、これらの領域で始まる癌は、腺癌と呼ばれることが多い。乳癌にはいくつかのタイプが存在するが、それらの一部は非常にまれである。単一の乳房腫瘍が、これらタイプの組み合わせからなる場合がある、又は浸潤性癌と上皮癌癌との混合である場合がある。
【０１６４】
非浸潤性乳管癌（ＤＣＩＳ；乳管内癌としても知られる）は、非浸潤性乳癌の最も一般的なタイプである。
【０１６５】
浸潤性（浸潤）乳管癌（ＩＤＣ）は、乳癌の最も一般的なタイプである。浸潤性（浸潤）乳管癌（ＩＤＣ）は、乳房の乳路（乳管）において始まり、管壁を突き破って乳房の脂肪組織中へ成長する。この時点でこの癌は、リンパ系及び血流を介して体の他部位へ広がり（転移し）得る場合がある。１０中約８の湿潤性乳癌は、浸潤性乳管癌である。ＩＤＣ患者には、ＣＤ１３８発現が見られる（Ｌｏｕｓｓｏｕａｒｎら、２００８）。
【０１６６】
トリプルネガティブ乳癌とは、その細胞がエストロゲンレセプター及びプロゲステロンレセプターを有していないと共にその表面にＨＥＲ２蛋白質を過剰に有していない乳癌（通常は、浸潤性乳管癌）のことである。トリプルネガティブ乳癌は、多くの他の種類の乳癌よりもより速く成長し広がる傾向がある。腫瘍細胞がこれらレセプターを有していないため、ＨＥＲ２を標的とするホルモン治療も薬物もこれら癌に対しては有効ではない（その一方で、必要に応じて化学療法が有用である）。
【０１６７】
“乳癌”に分類されるその他の乳癌には、炎症性乳癌、髄様癌、化生性癌、膠様癌、管状癌、乳頭癌、腺様嚢胞癌（腺嚢癌腫）、葉状腫瘍がある。
【０１６８】
外科手術、放射線又は化学療法が、標準的な癌治療である。ホルモン治療が用いられる場合もある。ホルモン治療は、全身治療の一形態である。ホルモン治療は、多くの場合術後の癌再発リスクを減らすための補助療法として用いられるが、ネオアジュバント療法としても用いられることができる。またホルモン療法は、治療後に再発した癌や広がった癌を治療するのに用いられる。エストロゲンは、３個のうち約２個の乳癌の生育を促進する。ここでこの乳癌は、エストロゲンレセプター（ＥＲ陽性癌）及び／又はプロゲステロンレセプター（ＰＲ陽性癌）を含むものである。このため、エストロゲン効果を阻害するため又はエストロゲンレベルを下げるための手法をいくつか使用して、ＥＲ陽性及びＰＲ陽性乳癌が治療される。しかしながら、ＥＲｓ又はＰＲｓを有しない患者に対してホルモン治療は有効ではない。
【０１６９】
また乳癌は、以下のようなステージング・システムに従う。
【０１７０】
ステージ０：異型細胞は、導管又は小葉、乳生成器から周囲の乳房組織へ広がっていない。上皮内癌と称され、以下の２つのタイプに分類される。治療及び生存可能性の高い非常に早期の癌である“非浸潤性乳管癌”（ＤＣＩＳ）と、癌ではないが女性が乳癌進展の高いリスクを有することを示す指標である“上皮内小葉癌”（ＬＣＩＳ）とである。
【０１７１】
ステージＩ：癌が、２センチメートル（約１インチ）より大きくなく、周囲のリンパ節や乳房の外へ広がっていない。
【０１７２】
ステージＩＩ：このステージは、腫瘍の大きさとリンパ節へ広がっているか否かとに応じて２つのカテゴリに分類される。
ステージＩＩ・Ａ乳癌−腫瘍は、２センチメートル未満であり、最大３個の脇下補助リンパ節へ広がっている。若しくは腫瘍が、２センチメートルより大きく５センチメートル未満の大きさに成長しており、周囲のリンパ節には広がっていない。
ステージＩＩ・Ｂ乳癌−腫瘍は、２センチメートルから５センチメートルの大きさに成長しており、最大３個の脇下補助リンパ節へ広がっている。若しくは腫瘍が、５センチメートルより大きい一方で、周囲のリンパ節には広がっていない。
【０１７３】
ステージＩＩＩ：このステージも、２つのカテゴリへ分類される。
ステージＩＩＩ・Ａ乳癌−腫瘍は、２センチメートルより大きく５センチメートルより小さい状態で、最大９個の脇下補助リンパ節へ広がっている。
ステージＩＩＩ・Ｂ乳癌−癌は、乳房近隣の組織へ広がっている。この組織としては、皮膚、胸壁、肋骨、筋肉、又は胸壁内又は鎖骨より上のリンパ節を含む。
【０１７４】
ステージＩＶ：この場合癌が、肝臓、肺、脳、骨格系、又は鎖骨近くのリンパ節などの他の臓器又は組織へ広がっている。
【０１７５】
肺癌
４つのタイプの神経内分泌肺腫瘍が存在する。すなわち、大細胞神経内分泌癌、非定型カルチノイド腫瘍、定型カルチノイド腫瘍、及び肺小細胞癌である。カルチノイド腫瘍とは、びまん性神経内分泌系の細胞から始まる腫瘍である。定型及び非定形カルチノイド腫瘍は、顕微鏡下において外観が異なる。定型カルチノイド腫瘍は、成長が遅く滅多に肺の外へ広がらない。１０中約９の肺カルチノイドは、定型カルチノイドである。
【０１７６】
治療上の理由により、肺がんにおける２つの主要タイプは区別される。これらは、それぞれ大変異なった方法で治療される。すなわち、肺小細胞癌（ＳＣＬＣ）及び肺非小細胞癌（ＮＳＣＬＣ）である。癌が両方のタイプの特徴を有している場合、混合肺小細胞／大細胞癌と呼ばれる。
【０１７７】
全ての肺癌のうち約１０％から１５％は、小細胞タイプである。ＳＣＬＣの他の名前には、燕麦細胞癌及び小細胞未分化癌がある。
【０１７８】
かかる癌は、胸中心部近くの気管支において始まる場合が多い。癌細胞の大きさが小さくても、これら細胞の分割が非常に速い可能性があり、大きな腫瘍を形成しリンパ節及び体中の他の臓器へ広がる。外科手術が選択肢となることはまれであり、また施される唯一の治療法とは成りえない。治療には、広範囲にわたる病気を殺す薬などの細胞毒薬物が用いられる。
ＮＳＣＬＣには、３つのサブタイプが存在する。すなわち、扁平上皮癌、腺癌、及び大細胞（未分化）癌である。
【０１７９】
肺非小細胞癌のステージング
肺非小細胞癌を段階分けするために用いられるシステムは、ＡＪＣＣ（対癌米国合同委員会）システムである。ステージは、ローマ数字０からＩＶ（０から４）を用いて説明される。いくつかのステージは、更にＡ及びＢへ分けられる。ルールとしては、数字が小さいほど、癌の広がりは少ない。ステージＩＶ（４）などの高い数字は、より進行した癌を意味する。
【０１８０】
ステージＩからＩＶを含む各ステージング・システムは、扁平上皮癌（頭頚部癌）についても開発されている。ステージＩ癌は、小さく局所的で通常は治療可能なものである。ステージＩＩ及びＩＩＩ癌は、通常、局所的に進行しており、及び／又は局所リンパ節へ広がっているものである。ステージＩＶ癌は、普通、転移性であり（体の遠くの部位へ広がっており）、一般的に手術不可能であると考えられる。
【０１８１】
本発明の場合治療とは、進行を防止又は遅らせること、病状を安定化すること、病気を寛解すること、又はＣＤ−１３８発現細胞に関する疾患の１以上の症状を回復させることを含む。かくして治療とは、重症度が高くなることを防止又は遅くすること、又は疾患の寛解を含む。ＭＭの場合、アクティブＭＭステージＩＩ又はＩＩＩの患者のみ、一次治療を受け（ステージＩの患者又はＳＭＭの患者は、当初３カ月から６カ月間隔で観察される）。本発明による治療は、例えばＭＭのアクティブステージの治療だけでなく、従来治療される病状に先立つ病状形態の治療をも含む。特に治療は、一の病状から次の病状への進行の防止も含む。つまりＭＭの場合この進行とは、例えば、ＭＧＵＳからＳＭＭへの進行、又はＳＭＭからアクティブＭＭステージＩ又はＭＭの他ステージへの進行である。外分泌膵臓癌の場合、例えばステージＩからステージＩＩへの進行であり、ＡＪＣＣにより確立されたステージ内のカテゴリにより示される如何なる悪化、例えばＩＡからＩＢ、をも含む。しかしながらこの用語は、現状維持も含有する。つまり、病態安定を維持すること、及び、下記に説明するように、治療されている患者において特定の応答を誘発することなどである。
【０１８２】
また患者においてとりわけ下記のうちの１以上の点で観測可能及び測定可能減少の少なくともいずれか及び消滅が見られた場合、その患者の“治療”が成功したことになる。つまりこの点とは、癌細胞数の減少又は癌細胞の消滅；腫瘍の大きさの減少；軟組織及び骨への癌の広がりなどを含む周辺臓器への癌細胞浸潤の抑制（すなわち、ある程度の遅延、及び好ましくは停止）；腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅延、及び好ましくは停止）；ある程度の腫瘍成長の抑制；特定の癌に関する１以上の症状についてのある程度の軽減；及び罹患率及び死亡率の減少と生活の質問題の向上の少なくともいずれかである。一般的に患者の病状に対するある治療の効果については、ＭＭの場合、患者の血清及び尿の少なくともいずれかのうちのＭ蛋白質レベルを測定する及び／又は患者の血清及び尿の少なくともいずれかのうちのＦＬＣレベルを測定することにより監視することができる。ＣＤ−１３８発現細胞に関連する他の疾患の場合、本発明によれば他のパラメータを測定することにより治療効果が評価される。ＣＲＰは、臨床的癌モニタリングにおける非特異的な炎症パラメータである。例を挙げるとすると、膵臓癌の場合、測定され得る関連のパラメータには、ＣＡ１９−９（糖鎖抗原１９．９であり、膵臓癌においてしばしば上昇する腫瘍マーカーである）、ビリルビン、又はＣ反応性タンパクがある。加えて、超音波検査法、ＣＴ、ＭＲＴなどのイメージングが用いられる。頭頚部癌では、腫瘍タイプに依存するバイオマーカーが用いられる（例えば、扁平上皮癌の場合はＳＣＣ、メルケル細胞はＮＳＥ、ＣＥＡ）。乳癌の場合、ＣＡ１５−３Ｈｅｒ２発現及びカドヘリン発現がマーカーとして使用され得る一方で、治療が神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）などの血清マーカーによって監視される。
【０１８３】
症候性対象の状態を診断する際には、膀胱鏡検査（薄い発光チューブを用いて膀胱内を観察する）と併せて、膀胱腫瘍抗原（ＢＴＡ）及びＮＭＰ２２試験を用いることができる。これらの試験は、治療後患者の経過を観察する際に用いられる。しかしながら、診断及びフォローアップのための標準的な試験としては、膀胱鏡検査及び尿細胞診（顕微鏡を用いて尿中の癌細胞を調べる）が推奨される。ＢＴＡ及びＮＭＰ２２試験は、しばしば膀胱鏡検査法間で用いられる。正常値であれば、膀胱鏡検査の実施回数を減らすことが可能となる場合がある。しかしながら、尿細胞診及び膀胱鏡検査をかかる試験で置き換えることはできない。
【０１８４】
進行性膀胱癌の場合、ＣＥＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１９−９及びＴＰＡなどの他の癌に用いられるマーカーのうちのいくつかは、上昇する場合があり、治療中及び治療後の患者の経過観察に用いられ得る。肺癌の場合、確立したマーカーは存在せず、ＣＥＡ又はＮＳＥが上昇する可能性がある。
【０１８５】
骨髄腫細胞や乳癌細胞などの腫瘍細胞は、ＣＤ１３８を放出することが知られている。表面ＣＤ１３８の喪失は、骨髄腫における予後不良に関連する。高いレベルの可溶性ＣＤ１３８が、頭頸部や肺における癌などの他の腫瘍兆候においても検出された（Ａｎｔｔｏｎｅｎら、１９９９）。表面シンデカン−１の欠損は、ＥＭＴ（上皮間葉転換）に関連する。このプロセスは、悪性細胞から侵襲性及び転移性ステージに関するより少なく又は不十分に分化した細胞への変質を説明している。例えば転移性乳癌について、この点が報告されている（Ｌｏｕｓｓｏｕａｒｎら、２００８）。
【０１８６】
薬剤の有効量、特に免疫複合体の又は本発明の免疫複合体を含む医薬組成物の有効量とは、対象、特にヒト対象（患者）の病気又は疾患を治療するために必要な量を示している。ＭＭなどの癌の場合、薬剤の有効量によって、癌細胞数の減少、腫瘍サイズの減少、周辺臓器への癌細胞の浸潤の抑制（すなわち、ある程度の遅延、及び好ましくは停止）、腫瘍転移の抑制（すなわち、ある程度の遅延、及び好ましくは停止）、ある程度の腫瘍成長の抑制、及び癌に関する１以上の症状についてのある程度の軽減の少なくともいずれかが実現される。本明細書における“治療”の定義を参照されたい。
【０１８７】
例えば２００ｍｇ／ｍ２の薬物動態的等価なものは、免疫複合体が組み合わせで投与される場合において２００ｍｇ／ｍ２の用量で観察される薬物動態と同等の結果が得られる免疫複合体の量を意味する。この免疫複合体が組み合わせで投与される場合とは、ＣＤ１３８を発現する非標的細胞に対し潜在的に有害な副作用を含めた実際の治療用の薬剤と共に投与される場合を含む。これら等価量は、他の薬剤に応じて２００よりも若干少ない又は２００よりも若干多い場合がある。例えば含まれるものとしては、１６０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、１７０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、１８０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、１９０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、２１０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、２２０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、２３０ｍｇ／ｍ２未満の有効量、及び２４０ｍｇ／ｍ２未満の有効量である。例えば、当業者により容易に確認され得るものであるが、皮膚への副作用の場合コルチコイド又は抗生物質との組み合わせ投与によりやや高用量の免疫複合体が可能となることが当業者により予期される。
【０１８８】
薬物投与の成功を評価するには、ここで免疫複合体（機能的反応、すなわち効能を生成するためのその能力）、投与に対する異なる“奏効”が区別される。
【０１８９】
ＭＭ及びその他血漿増殖性障害の場合、奏効は以下のように区別される。
【０１９０】
完全寛解（ＣＲ）という用語は、血清及び尿の負の免疫固定と、軟組織血漿細胞腫の消滅と、骨髄における＜５％血漿細胞を意味する。
【０１９１】
ストリンジェント完全寛解（ｓＣＲ）という用語は、既に定義されたＣＲと、正常ＦＬＣ比率と、免疫組織化学又は免疫蛍光による骨髄におけるクローン細胞の欠如とを意味する。
【０１９２】
極めて良好な部分寛解（ＶＧＲＰ）という用語は、免疫固定で検出可能な血清及び尿Ｍ成分を意味するが、電気泳動においてではなく又は血清Ｍ成分及び＜１００ｍｇ尿Ｍ成分について２４時間あたり≧９０％以上の減少ではない。
【０１９３】
部分寛解（ＰＲ）とは、血清Ｍ蛋白質の≧５０％の減少、及び≧９０％の２４時間における尿Ｍ蛋白質の減少又は２４時間あたり＜２００ｍｇの減少を意味する。血清及び尿Ｍ蛋白質が測定不可能である場合、関与及び未関与ＦＣＬレベルの差について≧５０％の減少がＭ蛋白質基準の代わりに必要となる。血清及び尿Ｍ蛋白質が測定不可能である場合であって、血清遊離軽アッセイも測定不可能である場合、骨髄血漿細胞の≧５０％の減少がＭ蛋白質の代わりに必要となる。上記基準に加えて、ベースラインで存在する場合に、ベースライン・パーセンテージが≧３０％であった場合、軟組織血漿細胞腫のサイズの≧５０％減少も必要となる（Ｄｕｒｉｅら、２００６）。
【０１９４】
再発性／難治性骨髄腫の患者に関してやや有効（ＭＲ）という用語は、本発明の場合、血清Ｍ蛋白質の≧２５％且つ＜４９％の減少と、２４時間における尿Ｍ蛋白質の５０％から８９％の減少とを意味する。ここで、２４時間における尿Ｍ蛋白質の５０％から８９％の減少は、２４時間あたり２００ｍｇを上回る。上記基準に加えて、ベースラインで存在する場合に、軟組織血漿細胞腫のサイズの２５％から４９％減少も必要となり、溶解性骨病変のサイズ又は数に増加は見られない（圧迫骨折の進展によって奏効が除外されない）。
【０１９５】
しかしながら正式に分類されていないが、更に奏効は、少なくとも３０％の、好ましくは少なくとも４０％又は５０％の血清ＦＬＣレベルの減少を含む。これは、Ｍ蛋白質が測定不可能である場合特に重要である。
【０１９６】
不変（ＳＤ）という用語は、本発明の血漿増殖性障害の場合、ＣＲ、ＶＧＰＲ、ＰＲについての基準を満たしていないこと、又は進行性疾患であることを意味している。一方で進行性疾患（ＰＤ）という用語は、以下のうちの１以上の点において最小応答値からの２５％の増加を意味する。
・血清Ｍ成分（絶対増加は≧０．５ｇ／１００ｍＬである必要あり）及び／又は
・尿Ｍ成分（絶対増加は２４時間あたり≧２００ｍｇである必要あり）及び／又は
・測定可能血清及び尿Ｍ蛋白質レベルがない患者においてのみ：関与及び未関与ＦＬＣレベルの差（絶対増加が＞１００ｍｇ／ｌである必要あり）
・骨髄血漿細胞の割合（絶対パーセントが≧１０％である必要あり）
・新骨病変又は軟組織血漿細胞腫の明確な発達、又は既存骨病変又は軟組織血漿細胞腫の大きさの明確な増加
・血漿細胞増殖性疾患のみに起因する過カルシウム血症の発展（補正血清カルシウム＞１１．５ｍｇ／１００ｍＬ）
【０１９７】
本明細書における再発性骨髄腫という用語は、対象におけるアクティブＭＭの一形態を意味し、この場合上記対象は少なくとも事前に１度の治療レジメンを経ており、それが再発性／難治性骨髄腫についての基準を満たしていない。
【０１９８】
一般的に難治性骨髄腫という用語は、治療が施されているのにも関わらず血漿細胞数が増加する病状を意味している。すなわち評価時において、この病気が施された治療レジメンに対して非受容的であることを意味している。
【０１９９】
本明細書において再発性／難治性骨髄腫という用語は、救済療法中においての病気の再発、又は直近の治療の６０日以内の進行を意味する。
【０２００】
難治性表現型という用語は、難治性骨髄腫の如何なるタイプをも含む。すなわち、難治性及び再発性／難治性骨髄腫である。
【０２０１】
再発性又は難治性骨髄腫という用語は、再発性、難治性、及び再発性／難治性骨髄腫を含む。
【０２０２】
以下に詳細を説明する臨床研究では、対象が、研究に入る前に失敗に終わったが、少なくとも１つの免疫調節薬及びプロテオソーム阻害剤治療を用いて治療された。対象が以前の療法において進行性疾患（ＰＤ）を経験した場合、病気が治療難治性と考察された。
【０２０３】
ＳＭＭ患者に関して例えば“アクティブＭＭへの進行”という用語は、本発明の場合、ＭＭにおける進行性疾患のためのＩＭＷＧ（インターナショナル・ミエローマ・ワーキング・グループ）基準に基づく進行の証拠を意味している。潜在的なクローン性血漿細胞増殖性疾患、新軟組織血漿細胞腫又は骨病変の発達に関して下記の点のうち１以上が感じられる。つまりこの点とは、過カルシウム血症（＞１１ｍｇ／１００ｍＬ）、ヘモグロビン減少が≧２ｇ／１００ｍＬ、及び血清クレアチニンレベルが≧２ｍｇ／１００ｍＬである。（Ｋｙｌｅ及びＲａｊｋｕｍａｒ、２００９）。
【０２０４】
多発性骨髄腫の病因には、細胞表面接着分子を介した骨髄ストローマ細胞（ＢＭＳＣｓ）及び細胞外基質（ＥＣＭ）への骨髄腫細胞の結合が含まれる。この結合が生じさせるものは、多発性骨髄腫細胞の増殖、薬剤抵抗性及び骨髄環境におけるＭＭ細胞の移行であり、この結合がこれらの最終的な原因となり得る（Ｍｕｎｓｈｉら、２００８）。特にシンデカン−１（ＣＤ１３８）からタイプＩコラーゲンを介した多発性骨髄腫細胞のＥＣＭへの結合は、マトリックスメタロプロテアーゼ１の発現を含み、かくして骨吸収及び腫瘍浸潤を促進する（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、２００７）。多発性骨髄腫細胞と骨髄微小環境との相互作用の結果、多面的増殖及び抗アポトーシスカスケードの活性化が生じる。
【０２０５】
多発性骨髄腫患者については、また骨痛に関連する他の病気を患う患者については、この症状及びその他の症状を治療するための支持療法が数多く存在する。適切な薬物治療には、骨損傷を遅らせ得るビスホスホネート（例えば、パミドロネート、ゾレドロン酸）が含まれる。かかる薬剤が、溶骨性骨病変を減少させると共に、骨折を防止し得ることが示されている（Ｌｕｄｗｉｇら、２００７）。大部分の場合においてかかる薬剤は静脈を介して与えられ、これにより骨折などの骨合併症のリスクを低減すると共に、異常に高い血中カルシウムレベル（過カルシウム血症）を低減するようになされている。データによると、ビスホスホネートがＭＭに関する骨痛を低減することが示唆されている。骨が弱くなったり折れたりした場合、患者が手術を受ける場合もある。
【０２０６】
一実施の形態においては免疫複合体によって、骨壊死などの骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを減らす、特に許容レベルまで減らすようになされている。許容レベルまでの低減は、特にこのような痛みを緩和する薬剤投与の中断するための能力が関与し、又は上記骨合併症の低減を目的とする。パミドロネート、ゾレドロン酸及びクロドロネートなどのビスホスホネートは、一般的にＭＭ患者における骨壊死などの骨合併症を緩和するために投与され、これにより上記合併症に関する骨痛を緩和する。一般的なビスホスホネートには、経口投与用として、ＦＯＳＯＭＡＸ、ＢＯＮＩＶＡ、ＡＣＴＯＮＥＬ、ＤＩＤＲＯＮＥＬ及びＳＫＥＬＩＤが含まれ、静脈内投与用としては、ＢＯＮＥＦＯＳ、ＡＲＥＤＩＡ及びＺＯＭＥＴＡが含まれる。
【０２０７】
本発明によれば、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを低減することにより、患者に投与される抗鎮痛薬の量を減らす、及び／又はこのような合併症を中和するために投与される各種薬剤の量を減らし得る。この低減とは、（ｉ）上記患者が（ａ）本発明による治療とは異なる治療であって骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを生じさせた病気に対する治療を受けた場合若しくは（ｂ）如何なる治療も受けていない場合の事前投与量に対して相対的なものである場合がある。若しくはこの低減は、（ｉｉ）同じ病気を患う他患者であって病気の段階がほぼ同じである他患者対して投与された量に対して相対的なものである場合がある。好ましくはそのような低減は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％の低減であり、好ましくは薬物投与の完全中止である。後者が達成された場合、すなわち本発明の免疫複合体が単独又は本発明の制癌剤組み合わせの一要素として投与された結果患者が骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかに対する如何なる薬物治療も主観的に必要としなくなった場合、上記免疫複合体の投与によって骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかが許容レベルまで低減されたと言える。この結果、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかの緩和を目的として投与された薬物に起因する有害な副作用を低減又は消滅させる。
【０２０８】
骨髄間質コンパートメントへの多発性骨髄腫細胞のホーミングに続き、多発性骨髄腫細胞とＢＭＳＣｓとの間の密着が、インターロイキン−６（ＩＬ−６）及びインスリン様成長因子１（ＩＧＦ−１）などのサイトカインを数多く発現増加させる。これらのサイトカインは、血管新生及び腫瘍増殖活性を有する（Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、２００７）。これらサイトカインによって開始されるシグナリングカスケードの最終的な結果として、ＭＭ細胞が従来治療に対して耐性を有することになる（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、２０００；Ｈｉｄｅｓｈｉｍａら、２００６）。
【０２０９】
正常ヒト造血コンパートメントでは、ＣＤ１３８発現が血漿細胞に制限されている（Ｗｉｊｄｅｎｅｓ、１９９６；Ｃｈｉｌｏｓｉ、１９９９）。またＣＤ１３８は、末梢血リンパ球、単核細胞、顆粒白血球、及び赤血球では発現されない。特にＣＤ３４＋幹細胞及び前駆細胞はＣＤ１３８を発現せず、ａｎｔｉ−ＣＤ１３８ｍＡｂｓは造血幹細胞培養におけるコロニー形成単位数に影響を与えない（Ｗｉｊｄｅｎｅｓ、１９９６）。非造血コンパートメントでは、ＣＤ１３８は、主に肺、肝臓、皮膚、腎臓及び腸内の簡易且つ層状の上皮において発現される。弱い染色のみが内皮細胞において確認された（Ｂｅｒｎｆｉｅｌｄ、１９９２；Ｖｏｏｉｊｓ、１９９６）。ＣＤ１３８が多型体でヒトリンパ腫細胞に存在することが報告されている（Ｇａｔｔｅｉ、１９９９）。
【０２１０】
特定Ｂ−Ｂ４におけるモノクロナル抗体Ｂ−Ｂ４、ＢＣ／Ｂ−Ｂ４、Ｂ−Ｂ２、ＤＬ−１０１、１Ｄ４、ＭＩ１５、１．ＢＢ．２１０、２Ｑ１４８４、５Ｆ７、１０４−９、２８１−２が、ＣＤ１３８について特異的であることが報告されている。これらＢ−Ｂ４のうち１Ｄ４及びＭＩ１５は、ＣＤ１３８の完全な分子とコア蛋白質とを認識すると共に、同じ又は密接に関連するエピトープを認識することが示されている（Ｇａｔｔｅｉ、１９９９）。以前の研究によると、Ｂ−Ｂ４が可溶性ＣＤ１３８を認識せず、膜結合形態のＣＤ１３８のみを認識することが報告されている（Ｗｉｊｄｅｎｅｓ、２００２）。
【０２１１】
初期の抗ＣＤ１３８抗体は、Ｄｉａｃｌｏｎｅ  ＳＡＳ（Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）によって、マウス親のＭａｂ  Ｂ−Ｂ４として開発された。このＭａｂＢ−Ｂ４は、標準的なハイブリドーマ技術を用いて、ヒト多発性骨髄腫細胞株Ｕ２６６との免疫化により生成された（Ｃｌｅｍｅｎｔ、１９９５；Ｗｉｊｄｅｎｅｓ、１９９６）。Ｂ−Ｂ４は、ヒトシンデカン−１（ＣＤ１３８）におけるコア蛋白質の残渣９０から９３間の直線状エピトープに結合する（Ｗｉｊｄｅｎｅｓ、１９９６；Ｄｏｒｅ、１９９８）。ＣＤ１３８の発現パターンと一致しているＢ−Ｂ４は、血漿細胞株ＲＰＭＩ８２２６に対して強く反応する一方で、内皮細胞に対しては反応しないことが示されている。またＣＤ１３８の発現パターンと一致しているＢ−Ｂ４は、上皮細胞株Ａ４３１（ケラチノサイト由来）及びＨｅｐＧ２（ヘパトサイト由来）と反応した。イムノトキシンＢ−Ｂ４サポリンは、血漿細胞株ＲＰＭＩ８２２６に対して非常に毒性が強く、実際上フリーサポリンよりも非常に毒性が強かった。しかしながら、クローンアッセイではＢ−Ｂ４サポリンがＡ４３１細胞の増殖に対する抑制効果を示さない一方で、試験された２つの上皮細胞株からはＢ−Ｂ４サポリンが細胞株Ａ４３１のみに対する毒性のみを示した（Ｖｏｏｉｊｓ、１９９６）。
【０２１２】
他の研究者からは、腫瘍に対するＭＭ関連抗原の特異性の欠如が報告されている（Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒ、１９９９）。
【０２１３】
マイタンシノイドＤＭ１に共有結合しているＢ−Ｂ４は、多発性骨髄腫細胞株及び細胞に対する選択的細胞毒性と、ＳＣＩＤマウスのヒト多発性骨髄腫異種移植モデルにおける抗癌作用とを示した（Ｔａｓｓｏｎｅ、２００４）。
【０２１４】
本発明で使用する用語として腫瘍細胞は、癌細胞と、固形癌の一部を形成する又は形成しない可能性がある前癌状態細胞とを含む。
【０２１５】
本発明の標的剤は、標的細胞によって発現される分子に関連付けられることができると共に、ペプチドと非ペプチドとを含む。特に本発明の標的剤は、標的抗体と非免疫グロブリン標的分子とを含み、これらは非免疫グロブリン蛋白質に基づくものである可能性がある。この非免疫グロブリン蛋白質としては、限定されるものではないが、ＡＦＦＩＬＩＮ（登録商標）分子、ＡＮＴＩＣＡＬＩＮＳ（登録商標）、及びＡＦＦＩＢＯＤＩＥＳ（登録商標）が含まれる。また非免疫グロブリン標的分子としては、標的ＤＮＡ及びＲＮＡオリゴヌクレオチド（アプタマー）などの非ペプチド性標的分子も含まれ、更に生理的リガンド、特にＣＤ１３８などの対象抗原のリガンドも含まれる。
【０２１６】
本発明の標的抗体は、自然抗体である若しくは自然抗体に基づくものである、又は合成的若しくは遺伝子改変されたに生成される。この標的抗体は、細胞又は目的細胞（標的細胞）における抗原に結合する。本発明の標的抗体は、モノクローナル抗体、多クローン性抗体、多特異的抗体（例えば、二重特異性抗体）、又は抗体フラグメントを含む。標的抗体は、組み換え操作されることによって、例えば標的細胞への親和性が向上され得る（Ｒｏｓｓ、２００３）又はその免疫原性が低減され得る。標的抗体は、エフェクター分子を含むリポソーム製剤に対して結合され得る（Ｃａｒｔｅｒ、２００１）。抗体フラグメントは、完全抗体の一部、好ましくは完全抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む。本発明による抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメントが含まれるほか、ダイアボディ、ドメイン抗体（ｄＡｂ）（Ｗａｒｄ、１９８９；米国特許６，００５，０７９）、線形抗体、単鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成された多特異的抗体も含む。単鎖可変フラグメント抗体（ｓｃＦｖ）では、重鎖及び軽鎖（ＶＨ及びＶＬ）が、例えばシーケンスとして（グリシン４セリン）ｎを有する短アミノ酸リンカーによって連結され得る。この場合このリンカーは、十分な柔軟性を有することにより、２つのドメインによって機能的抗原結合ポケットを構成する。様々なシグナル配列を加えることによって、標的抗体によるターゲティングをより正確なものとすることができる。軽鎖定常領域（ＣＬ）の追加により、ジスルフィド結合を介した二量体形成も可能となり、安定性及び結合活性を向上させることができる。ｓｃＦｖを構成するための可変領域は、対象標的に対するｍＡｂが利用可能で有る場合、ＲＴ−ＰＣＲによって得ることができる。ここでこのＲＴ−ＰＣＲよれば、親ハイブリドーマから抽出されたｍＲＮＡから可変領域のクローンを作ることができる。若しくはファージディスプレイ技術によってｓｃＦｖを最初から生成することも可能である（Ｓｍｉｔｈ、２００１）。本明細書において使用される“機能的フラグメント”という用語は、標的抗体に関連して使用される際、当該標的抗体の一部を示すように意図されている。ここでこの標的抗体は、参照される抗体によって特異的に結合される抗原を特異的に結合することが可能なものである。本発明による二重特異性抗体は、例えば、標的組織に対して反応性のある少なくとも１つのアームと、リンカー部分に対して反応性のある１つのアームとを有する場合がある（米国特許公報２００２０００６３７９）。本発明による二重特異性抗体は、標的細胞における２以上の抗原に対して結合する場合もある（Ｃａｒｔｅｒ、２００１）。本発明による抗体は、例えば、システイン残基を導入することによってチオール基を導入することにより改変され得る（Ｏｌａｆｓｅｎ、２００４）。
【０２１７】
本発明に従えば、標的抗体は、如何なるソースからも得られる可能性があり、限定されるわけではないがラクダ抗体、マウス抗体、キメラヒト／マウス抗体、又はキメラヒト／サル抗体である可能性があり、特にｎＢＴ０６２などのキメラヒト／マウス抗体である可能性がある。
【０２１８】
ヒト化抗体は、ヒト抗体及び非ヒト抗体からのシーケンスを含む抗体であると共に、本発明の範囲に含まれるものである。抗体ヒト化に最適な方法には、ＣＤＲグラフティング（相補性決定領域グラフティング）（ＥＰ０２３９４００；ＷＯ９１／０９９６７；米国特許５，５３０，１０１；及び５，５８５，０８９）、ベニアリング又はリサーフェイシング（ＥＰ０５９２１０６；ＥＰ０５１９５９６；Ｐａｄｌａｎ、１９９１；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら、１９９４；Ｒｏｇｕｓｋａら、１９９４）、チェーンシャッフリング（米国特許５，５６５，３３２）、及びＤｅＩｍｍｕｎｏｓａｔｉｏｎ（商標）（Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ、ＬＴＤ）がある。ＣＤＲグラフティングでは、例えば、ｍＡｂＢ−Ｂ４からのマウス相補性決定領域（ＣＤＲｓ）が、ヒト可変フレームワークにグラフトされた後、それをヒト定常領域に結合させることにより、ヒトＢ−Ｂ４抗体（ｈＢ−Ｂ４）を生成する。ＭＹＬＯＴＡＲＧ（Ｓｉｅｖｅｒｓら、２００１）及びＨＥＣＥＰＴＩＮ（Ｐｅｇｒａｍら、１９９８）などのＣＤＲグラフティングによりヒト化されたいくつか抗体は、現在臨床使用されている。
【０２１９】
リサーフェイシング技術は、分子モデリング、統計解析、及び変異誘発性を組み合わせることにより、抗体可変領域の非ＣＤＲ表面を変化させ、これにより標的ホストの既知抗体の表面に類似させる。抗体リサーフェイシングの戦略及び方法、並びに異なるホスト内の抗体免疫原性を低下させるための他の方法については、例えば米国特許第５，６３９，６４１号に開示されている。ヒト抗体は、ファージディスプレイ法などの当該技術分野において既知である種々の方法により生成することができる。米国特許４，４４４，８８７、４，７１６，１１１、５，５４５，８０６、及び５，８１４，３１８；及び国際特許出願公開ＷＯ９８／４６６４５号、ＷＯ９８／５０４３３号、ＷＯ９８／２４８９３号、ＷＯ９８／１６６５４号、ＷＯ９６／３４０９６号、ＷＯ９６／３３７３５号、及びＷＯ９１／１０７４１号も参照されたい。
【０２２０】
キメラヒト／マウス抗体又はキメラヒト／サル抗体などの何らかの非天然改変を経た標的抗体、例えば標的細胞に対するそれらの親和性を向上させるように又はそれらの免疫原性を低下させるよう改変されたヒト化抗体又は抗体、更に抗体フラグメント、特に何らかの非天然改変を経た上記のような標的抗体の機能的フラグメント、ダイアボディ、ドメイン抗体、線状抗体、単鎖抗体分子、及び多特異性抗体を、本明細書においては改変された標的抗体と称する。
【０２２１】
キメラ抗体は、非ヒト抗体の抗体結合領域（ＡＢＲ又はＦａｂ領域）を保持している。例えばキメラ抗体はマウス抗体を保持し、これらキメラ抗体はこのマウス抗体に基づく。一方でどのような定常領域も、例えばヒト抗体により提供される可能性がある。一般的に、キメラ化及び抗体定常領域の交換の少なくともいずれかによって、抗体の親和性は影響を受けない。理由としては、抗原結合に寄与する抗体の領域が、かかる交換による影響を受けないためである。本発明の好ましい実施形態では、改変された、特にキメラ化された本発明の抗体は、その基となる各非ヒト抗体よりも高い結合親和性（ＫＤ値により表される）を有し得る。特に、それに基づくｎＢＴ０６２抗体及びその複数抗体は、マウスＢ−Ｂ４よりも高い抗体親和性を有し得る。
【０２２２】
本発明の他の好ましい実施形態においては、これら改変／キメラ化された抗体を有する免疫複合体も、このような高い抗体親和性を示す。またこれら免疫複合体は、ある実施形態において、その他の有益な特性を示し得る。これら有益な特性には、それらのＢ−Ｂ４含有対応物より高い腫瘍細胞量の減少などが含まれる。好ましい実施形態においては、改変された、特にキメラ化された標的抗体によって示される結合親和性は、解離定数ＫＤ（ｎＭ）が１．６未満、１．５未満、約１．４又は１．４未満であるという特徴がある。一方でそれらのマウス対応物の特徴は、解離定数ＫＤ（ｎＭ）が約１．６又は１．６よりも大きい点である。好ましいものは、標的剤を含む免疫複合体であり、例えば解離定数ＫＤ（ｎＭ）が２．６未満、２．５未満、２．４未満、２．３未満、２．２未満、２．１未満、２．０未満、１．９未満、又は約１．９であるという特徴を有する標的抗体などである。一方でマウス対応物抗体を有する免疫複合体の特徴は、解離定数ＫＤ（ｎＭ）が約２．６又は２．６より大きいという場合がある（表９、材料及び方法を比較されたい）。
【０２２３】
基本の抗体分子は二官能性構造である。ここでこの二官能性構造では、可変領域が抗原を結合する一方で、残っている定常領域が抗原非依存的応答を誘発させ得る。抗体の主要クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭは、定常領域によって特定される。これらのクラスは、サブクラス（アイソタイプ）へ更に分割され得る。例えばＩｇＧクラスは、４つのアイソタイプを有する。すなわち、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４であり、これらは定常領域によって特定される。様々なヒト抗体クラスのうち、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＭのみが、実質的に補体系を活性化させることが知られている。定常領域は抗原結合部位を形成することはないが、定常領域及びヒンジ領域の配置によって分節柔軟性が分子に対して与えられる場合があり、これにより抗原との結合が可能となる。
【０２２４】
異なるＩｇＧアイソタイプは、単核細胞、Ｂ細胞及びＮＫ細胞などの細胞におけるＦｃレセプターに結合することができる。かくして、これら細胞を活性化することによりサイトカインを放出させる。また異なるアイソタイプは、補体を活性化し、この結果局所又は全身性炎症を生じさせる。特に異なるＩｇＧアイソタイプは、ＦｃγＲを異なる程度で結合する場合がある。ＦｃγＲは、Ｉｇスーパーファミリーに属する表層糖蛋白質群であり、大部分は白血球において発現される。ＦｃγＲ糖蛋白質は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）で示される３つのクラスに分けられる。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２及びＩｇＧ３がＦｃγＲ糖蛋白質のこれら種々のクラスに対して強力に結合する一方で、ＩｇＧ４は非常に弱い結合性を示す。特にＩｇＧ４は、ＦｃγＲの中間バインダーであり、この結果ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞毒性作用）が比較的低い又はゼロとなる。またＩｇＧ４は、ＦｃγＲＩＩＩＡ又はＦｃγＲＩＩＡに対して結合しない。更にＩｇＧ４は、抑制性レセプターであるＦｃγＲＩＩＢの弱いバインダーである。
【０２２５】
更にＩｇＧ４は、弱い補体結合反応のみを媒介する又は如何なる補体結合反応をも媒介しない。またＩｇＧ４は、弱い補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を媒介する又は如何なる補体依存性細胞毒性をも媒介しない。本発明の場合ＩｇＧ４は、ＬＳＥＣｓ（肝類洞内皮細胞）におけるＦｃＲγＩＩとの相互作用を示さず、Ｋｕｐｆｆｅｒ細胞（マクロファージ）におけるＦｃＲγＩ−ＩＩＩとの相互作用は皆無又は弱く、更に肝性ＮＫ細胞におけるＦｃＲγＩＩＩとの相互作用は皆無であるため、肝性ＦｃＲのＦｃ媒介ターゲティングを防止するために特異的に用いられる場合がある。如何なるＣＤＣをも更に減らすようなある変異も、本発明の一部である。例えば、位置３２７、３３０及び３３１におけるＩｇＧ４残渣は、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞毒性作用）及びＣＤＣを減らすことが示されている（Ａｍｏｕｒ、１９９９；Ｓｈｉｅｌｄｓ、２００１）。抗体を安定化する１以上の変異も、本発明の一部である（本明細書では“安定化変異”とも呼ぶ）。これら変異には、特に、ＩｇＧ４のＣＨ２領域におけるロイシンからグルタミン酸への変異及びＩｇＧ４ヒンジコアにおけるセリンからプロリンへの交換が含まれる。これら変異は、本発明のある実施形態では、半分子量を１０％未満、５％未満及び好ましくは２％又は１％未満へ低減する。更に、そのように安定化された抗体のｉｎ  ｖｉｖｏ半減期が、数日分増加する可能性があり、この数日分には、１日間、２日間、３日間、４日間、又は５以上の日数を含む（Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ、１９９９）。
【０２２６】
本発明においてＩｇＧ４アイソタイプ特性を与える改変された標的抗体を有する免疫複合体が言及される際、これは当該改変された標的抗体が、ＩｇＧ１アイソタイプの抗体の親和性と比して、Ｆｃレセプター発現細胞に対して非常に低減された親和性を示すことを意味する。このような特性は、好ましくは更なる抗体領域により与えられる。ここでこの抗体領域は、ＡＢＲとは異なるものであり、この場合上記更なる抗体領域はヒト抗体の全体又は一部に存在する。この結果は、通常ＩｇＧ１アイソタイプ抗体で観測されるＣＤＣ又はＡＤＣＣ誘発潜在力と比して、ＣＤＣ又はＡＤＣＣ誘発潜在力の著しい低下（そのＩｇＧ１アイソタイプ対応物と比して９０％以上）又は完全な欠損である。この特性は、非抱合型の改変された標的抗体を用いることによりセルベースアッセイで測定可能である。ＣＤＣ及びＡＤＣＣは、異なる方法を介して測定可能であり、この方法には、Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．、３６、３７３（１９９３）やＧＵＡＶＡ  Ｃｅｌｌ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｓｓａｙにおいて開示されているものがある。ＩｇＧ４アイソタイプ特性を与える改変された標的抗体の少なくとも一部を含む免疫複合体の全体的な有益性は、結合特異性の向上と毒性の減少とにある。更に、結果として得られるＦｃレセプターに対する親和性減少により、腫瘍細胞の抗原特異的ターゲティングが向上し、ＣＤ１３８陰性細胞に対する毒性の低減につながる。
【０２２７】
本明細書において開示される標的抗体を含む標的剤については、抗原に対する、特にＣＤ１３８に対するそれらの結合親和性という観点から説明又は特定される場合もある。標的抗体などの標的剤の好ましい結合親和性の特徴は、解離定数ＫＤ（ｎＭ）が１．６未満、１．５未満、約１．４又は１．４未満という点にある。標的抗体などの上記標的剤を含む免疫複合体については、解離定数ＫＤ（ｎＭ）が１．６未満、１．５未満、２．５未満、２．４未満、２．３未満、２．２未満、２．１未満、２．０未満、１．９未満又は約１．９であることが好ましい。
【０２２８】
本発明による抗原結合領域（ＡＢＲ）は、用いられる標的抗体又は改変された標的抗体のタイプに基づいて異なる。天然由来抗体及び大部分のキメラ及びヒト化抗体においては、抗原結合領域が軽鎖と重鎖の最初の２ドメインとからなる。しかしながら軽鎖を欠いている重鎖抗体の場合、抗原結合領域は、例えば、重鎖の最初の２ドメインのみからなる。その一方で、単一ポリペプチド鎖において抗体分子の軽鎖及び重鎖可変ドメインを結合している単鎖抗体（ＳｃＦｖ）では、ＡＢＲは１つのポリペプチド分子のみによって提供される。ＦＡＢフラグメントは、通常パパイン消化によって得られるものであり、１つの軽鎖と重鎖の一部とを有することにより、ただ１つの抗原結合部でＡＢＲを構成する。一方で、ダイアボディは、２つの抗原結合領域を有する小さな抗体フラグメントである。しかしながら本発明の場合、標的抗体又は改変された標的抗体の抗原結合領域は、標的抗体又は改変された標的抗体の結合特異性を主に決定するための如何なる領域にも相当する。
【０２２９】
ＡＢＲ又は他の標的抗体領域が“ある抗体のもの”である、例えばヒト又は非ヒト抗体のものである場合、これは、本発明の場合、ＡＢＲが対応の天然由来ＡＢＲと同一である又はそれに基づくものであるということを意味する。ＡＢＲが天然由来ＡＢＲの結合特異性を有する場合、そのＡＢＲはかかる天然由来ＡＢＲに基づくものである。しかしながらこのようなＡＢＲは、例えば、点突然変異、付加部分、削除部分、グリコシル化などの翻訳後修飾を有する場合がある。このようなＡＢＲは、特に、天然由来ＡＢＲのシーケンスに対して７０％超、８０％超、９０％超、好ましくは９５％超、９８％超、又は９９％超のシーケンス同一性を有している場合がある。
【０２３０】
ｎＢＴ０６２（併せて図１を参照）は、マウスヒトキメラＩｇＧ４  ｍＡｂであり、すなわちＢ−Ｂ４のキメラ化されたものである。このキメラ化されたＢ−Ｂ４は、ＣＤ１３８に対するＢ−Ｂ４の抗体結合領域の機能性を維持しつつＨＡＭＡ（ヒト抗マウス抗体）反応を低減するために生成された。驚くべきことに、この改変された標的抗体を含む免疫複合体を用いて得られた結果は、より同質的なものであった（結果のばらつきが低減された）。ｎＢＴ０６２生成のプロトコルが、以下に示される。ｎＢＴ０６２を発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞が、２００７年１２月１１日ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ，Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ  Ｗｅｇ１，Ｄ−３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇに寄託された。識別番号は、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８７５である。Ｂ−Ｂ４に基づくＣＤ１３８特異的キメラ抗体は、通常本明細書ではｃ−Ｂ−Ｂ４と称される。
【０２３１】
重鎖及び軽鎖両方についてのアミノ酸配列は、ｎＢＴ０６２についてのヌクレオチド配列の翻訳から予測されている。重鎖及び軽鎖について予測されたアミノ酸配列は、表３において提示されている。予測可変領域は太字で示され、予測ＣＤＲｓはアンダーラインされている。
【０２３２】
【表３】
2016053053.tif 000004
【０２３３】
【表４】
2016053053.tif 000005
【０２３４】
完全なヒト抗体も使用される場合がある。これら抗体は、ファージディスプレイのアプローチによって選択され得る。この場合ＣＤ１３８又はその抗原決定基を用いることにより、例えばファージ発現Ｂ−Ｂ４可変領域を選択的に結合する（Ｋｒｅｂｓ、２００１を参照）。このアプローチは、便宜的に親和性成熟技術と併せて用いることにより、抗体の親和性を向上させる。本明細書において参照される全ての抗体は、単離された抗体である（米国特許出願公開２００９０１７５８６３号を参照）。
【０２３５】
一実施の形態では、標的抗体は、非結合であって、適度に又は不十分に内部移行されている。３７℃で３時間の培養の後、適度な内部移行が占める割合は、総抗体の内部移行の約３０％から約７５％であり、不十分な内部移行が占める割合は、約０．０１％から最大約３０％の内部移行である。他の好適な実施形態において標的抗体は、ＣＤ１３８、例えば、特定のＢ−Ｂ４における抗体Ｂ−Ｂ４、ＢＣ／Ｂ−Ｂ４、Ｂ−Ｂ２、ＤＬ−１０１、１  Ｄ４、ＭＩ１５、１．ＢＢ．２１０、２Ｑ１４８４、５Ｆ７、１０４−９、２８１−２に結合する。ＳＰ０２／０骨髄腫細胞をＢａｌｂ／ｃマウスの脾臓細胞とハイブリダイズすることにより生成されたハイブリドーマ細胞は、２００７年１２月１１日ＤＳＭＺ−Ｄｅｕｔｓｃｈｅ  Ｓａｍｍｌｕｎｇ  ｖｏｎ  Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ  ｕｎｄ  Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ  ＧｍｂＨ、Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ  Ｗｅｇ  １、Ｄ−３８１２４  Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇに寄託された。これらＢ−Ｂ４発現ハイブリドーマ細胞の識別番号は、ＤＳＭ  ＡＣＣ２８７４である。他の実施の形態では標的抗体が、実質的に非細胞表面発現ＣＤ１３８を結合しない。本発明の場合、特定の抗体の名前が“ｎＢＴ０６２標的抗体”のように“標的抗体”という単語と組み合わされている場合、この標的抗体が抗体ｎＢＴ０６２の結合特異性を有することを意味する。ある標的抗体が特定抗体に“基づいて”いると表現されている場合、この標的抗体がかかる抗体の結合特異性を有している一方で、標的抗体の上記定義に一致する任意形態をとる可能性があることを意味している。本発明の場合、特定の抗体の名前が”ＣＤ１３８標的抗体”のように”標的抗体”という単語と組み合わされている場合、この標的抗体がＣＤ１３８に対する結合特異性を有することを意味する。本発明の場合、例えば、“細胞表面発現ＣＤ１３８を選択的に標的にする”というように何らかを“選択的に”行うというように表現されている場合又は何かに対して“選択的”であるというように表現されている場合、提供された例のケースでは他の細胞表面発現抗原と比べると細胞表面発現ＣＤ１３８に対して重要な選択性（すなわち、ＣＤ１３８陰性細胞と比して、ＣＤ１３８陽性細胞に対する高い親和性）が存在することを意味する。任意環境における有害な副作用が、かかる選択性によって実質的に低減される又は回避される場合がある。
【０２３６】
本発明による“非免疫グロブリン標的分子”には、非免疫グロブリン蛋白質由来の標的分子や非ペプチド性標的分子が含まれる。この定義に含まれる小さな非免疫グロブリン蛋白質は、特に表面発現ＣＤ１３８に対して特異的な親和性を有するようになされている。これら小非免疫グロブリン蛋白質には足場ベースの改変された分子が含まれ、この改変された分子としては、１０ｋＤａから２０ｋＤａ程度の比較的低分子量のＡｆｆｉｌｉｎ（登録商標）分子などがある。適切な足場としては、例えば、ガンマクリスタリンなどがある。これらの分子は、自然状態において標的分子に対し特異的な結合活性があるわけではない。溶剤露出アミノ酸の局所的に限定されたランダム化を介して蛋白質表面を改変することにより、完全に新しい結合部位が生成される。これにより、以前は非結合的であった蛋白質が特異的結合蛋白質へ変質する。このような分子は、ＣＤ１３８などの標的に結合するように特異的に設計されることが可能となり、１以上のエフェクター分子の特定的運搬が可能となる（ｗｗｗ．ｓｃｉｌｐｒｏｔｅｉｎｓ．ｃｏｍ、２００４、においてｓｃｉｌ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ＧｍｂＨを参照されたい）。他の種類の非免疫グロブリン標的分子は、リポカリンに由来し、例えばＡＮＴＩＣＡＬＩＮＳ（登録商標）を含む。このＡＮＴＩＣＡＬＩＮＳは、構造的に免疫グロブリンにやや似ている。しかしながらリポカリンは、１６０から１８０のアミノ酸残基を有する単一ポリペプチド鎖からなる。リポカリンの結合ポケットは、高い親和性と特異性とを有する対象の分子を認識するように再形成され得る（例えば、Ｂｅｓｔｅら、１９９９、を参照されたい）。Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）（Ａｆｆｉｂｏｄｙ  ＡＢ）などの商標で市販されているものなどの人工的バクテリアレセプターも、本発明の範囲内である。これら人工的バクテリアレセプター分子は、小さく単純な蛋白質であると共に、蛋白質Ａ（黄色ブドウ球菌）のＩｇＧ結合ドメインのうちの１の足場に基づく３ヘリックスバンドルからなる場合がある。これら分子は、多くの免疫グロブリンと同様の結合特性を有する一方で、実質的にはより小さいものであり、それらの分子量が１０ｋＤａを超える場合はまれであり、またこれらは比較的安定している。適切な人工的バクテリアレセプター分子は、例えば、米国特許５，８３１，０１２、６，５３４，６２８及び６，７４０，７３４において説明されている。
【０２３７】
他の“非免疫グロブリン標的分子”は、対象抗原の生理的リガンドである。ＣＤ１３８の生理的リガンドとしては、例えば、限定されるわけではないが、ＡＤＡＭＴＳ４（アグリカナーゼ−１）、抗トロンビン−３、ｂＦＧＦ、カテプシンＧ、ＣＣＬ５（ＲＡＮＴＥＳ）、ＣＣＬ７、ＣＣＬ１１、ＣＣＬ１７、ＣＤ４４、コラーゲン（コラーゲンタイプ１、コラーゲンタイプ２、コラーゲンタイプ３、コラーゲンタイプ４、コラーゲンタイプ５、コラーゲンタイプ６）、ＣＸＣＬ１、エラスターゼ、ｇｐ１２０、ＨＧＦ［肝細胞増殖因子］、ラミニン−１、ラミニン−２、ラミニン−５、ミドカイン、ＭＭＰ−７、好中球エラスターゼ、及びプレイオトロフィン（ＨＢＮＦ、ＨＢＧＦ−８）が含まれる。非ペプチド性標的分子には、限定されるわけではないが、ＣＤ１３８（アプタマー）に結合するＤＮＡ及びＲＮＡオリゴヌクレオチドが含まれる。
【０２３８】
本発明による“エフェクター分子”はその分子又は誘導体又は類似体であり、これは標的剤、特に標的抗体及び改変された標的抗体の少なくともいずれかに結合すると共に、所望の効果を発揮する。この効果としては、例えば、アポプトーシス、又は他のタイプの細胞死、又は標的細胞又はその複数細胞における連続的細胞周期停止がある。本発明によるエフェクター分子には、標的細胞において所望効果を発揮し得る分子が含まれ、限定されるわけではないが、細胞傷害性薬剤が含まれる。この細胞傷害性薬剤には、低分子量の細胞傷害性薬剤が含まれる（分子量が、１，５００Ｄａ未満、好ましくは１，４００未満、１，２００未満、１，０００未満、８００未満、７００未満、６００未満、５００未満、３００未満であるが、一般的には１２０Ｄａ超である）。本発明によればこれら細胞傷害性薬剤は、一般的に非タンパク質の生物学的細胞傷害性薬剤であると共に、投与時にＣ原子及び少なくとも１の環構造の他の細胞傷害性薬剤の生成を含有又は誘発する。ここでこのＣ原子の数は、少なくとも５個、１０個、好ましくは１２個超、しばしば２０個超、時には３０個、４０個、又は５０個超である。またかかる環構造には、ベンゼン環などがあり、このベンゼン環はしばしば置換される。しかしながら相互接続環構造は、多くの場合これら分子の一部である。これら非タンパク質の生物学的細胞傷害性薬剤は、ＤＮＡ又はアルキレートＤＮＡへ挿入され（ＤＮＡインターカレーター）微小管形成を抑制すると共に、有糸分裂の阻害剤、ヒストン脱アセチル化などのＤＮＡ構造統合性に関する酵素の阻害剤、又はそうでない場合に細胞にとって重要であり且つ細胞代謝の崩壊を生じさせる酵素の阻害剤である。エフェクターを、放射性核種、生物反応調節剤、細孔形成剤、リボヌクレアーゼ、アポトーシス誘導活性を有するアポトーシスシグナリングカスケードの蛋白質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、抗転移薬、抗酸化物質、抗体又はサイトカイン、並びに官能性誘導体又はその類似物／フラグメントとして分類することができる。
【０２３９】
トキシンとしては、細菌毒素が含まれる場合があり、限定されるわけではないが、ジフテリア毒素又は外毒素Ａなどがある。またトキシンには、植物毒があり、限定されるわけではないが、リシン、他のアルカロイド及びポリフェノール、マイコトキシンなどがある。また、アルファアマニチン又はより特別なアマトキシン及びファロトキシンなどがある。トキシンは、バクテリア由来に限らず、真菌、植物、脊椎動物及び無脊椎動物由来である場合があり、これらについては全て遺伝的又は化学的改変が可能である。またトキシンは、環境毒素である場合もあり、この環境毒素としては、限定されるわけではないが、メチル水銀などがある。エフェクター分子は、アポトーシス誘導活性を有するアポトーシスシグナリングカスケードの蛋白質などの蛋白質である場合があり、これには、限定されるわけではないが、グランザイムＢ、グランザイムＡ、カスパーゼ−３、カスパーゼ−７、カスパーゼ−８、カスパーゼ−９、ｔｒｕｎｃａｔｅｄＢｉｄ（ｔＢｉｄ）、Ｂａｘ及びＢａｋが含まれる。トキシンは、ドラスタチン１０及び１５でもある可能性があり、これらは、海洋アメフラシ科タツナミガイから単離された小さなペプチドであり、チューブリンと相互作用することが示されている。
【０２４０】
【表５】
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【０２４１】
好適な一実施形態ではエフェクター分子は、特に免疫複合体の標的抗体の基である抗体の天然型が不十分に内部移行的である場合、免疫複合体の内部エフェクター運搬を増加させる。他の好適な実施形態では、エフェクターが天然型において非選択的である。ある実施形態では、天然型である際にエフェクターが、全身毒性を含む高い非選択的毒性を有する。本発明のエフェクター分子の“天然型”とは、標的剤に対して結合されて免疫複合体を形成する前のエフェクター分子である。他の好適な実施形態では、エフェクター分子の非選択的毒性は、標的剤との結合時に実質的に消滅されるものである。他の好適な実施形態では、標的細胞に達した際にエフェクター分子が、死又は細胞周期停止を生じさせる。これには、標的細胞における連続的な細胞周期停止が含まれる。
【０２４２】
本発明によるエフェクター分子には、限定されるわけではないが、抗腫瘍薬、特に以下に定義される細胞内化学療法剤が含まれる。
【０２４３】
低分子量細胞毒性薬物（分子量については上記参照）は、好ましくは、抗有糸分裂薬であり、より具体的には、チューブリン影響剤である。このチューブリン影響剤には、チューブリン重合阻害剤が含まれ、これには、メイタンシノイド、ドラスタチン（及びａｕｒｉｓｔａｔｉｎなどの誘導体）、及びクリプトフィシン及び強力なタキソイド（タキサン）薬などがある（Ｐａｙｎｅ、２００３）。小さく非常に細胞毒性である薬物の定義に更に含まれるものとしては、他のチューブリン干渉剤があり、これには、エポチロン（例えば、イキサベピロン）及びコルヒチン誘導体（チューブリン干渉剤については、以下で更に説明する）などがある。
【０２４４】
マイタンシノイドであるエフェクター分子には、任意起源のメイタンシノイドが含まれ、これには、限定されるわけではないが、合成メイタンシノール及びメイタンシノール類似体及び誘導体などがある。
【０２４５】
メイタンシンは、エチオピア低木Ｍａｙｔｅｎｕｓ  ｓｅｒｒａｔａ由来の天然物である（Ｒｅｍｉｌｌａｒｄ、１９７５；米国特許第３，８９６，１１１号）。この薬剤は、チューブリンの重合を阻害し、この結果分裂阻止及び細胞死が起こる（Ｒｅｍｉｌｌａｒｄ、１９７５；Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ、１９７７；Ｋｕｐｃｈａｎ、１９７８）。メイタンシンの細胞毒性は、臨床でチューブリン重合に影響を与えるために使用されるビンカアルカロイド又はタキソールなどの抗癌剤と比べて２００倍から１，０００倍高い。しかしながら、メイタンシンの臨床試験では、その高い全身毒性のため治療域に欠けることが示されている。メイタンシン及びメイタンシノイドは、非常に細胞毒性的であるが、主に腫瘍選択性が不十分であるということに起因する高い全身性副作用により、癌治療における臨床使用が著しく制限されている。メイタンシンの臨床試験では、中枢神経系と胃腸系とに対する重篤な副作用が示されている。
【０２４６】
メイタンシノイドも、他の植物から単離されている。この植物としては、Ｔｒｅｗｉａ  ｎｕｄｉｆｌｏｒａの種組織が含まれる（米国特許第４，４１８，０６４号）。
【０２４７】
ある微生物も、メイタンシノイドを生成する。このメイタンシノイドには、マイタンシノール及びＣ−３メイタンシノールエステルなどがある（米国特許第４，１５１，０４２号）。
【０２４８】
本発明は、任意由来のメイタンシノイドを対象とする。このメイタンシノイドには、例えば以下の文献に開示されている合成メイタンシノール及びメイタンシノール類似体が含まれる。かかる文献としては、米国特許第４，１３７，２３０号；米国特許第４，２４８，８７０号；米国特許第４，２５６，７４６号；米国特許第４，２６０，６０８号；米国特許第４，２６５，８１４号；米国特許第４，２９４，７５７号；米国特許第４，３０７，０１６号；米国特許第４，３０８，２６８号；米国特許第４，３０８，２６９号；米国特許第４，３０９，４２８号；米国特許第４，３１３，９４６号；米国特許第４，３１５，９２９号；米国特許第４，３１７，８２１号；米国特許第４，３２２，３４８号；米国特許第４，３３１，５９８号；米国特許第４，３６１，６５０号；米国特許第４，３６２，６６３号；米国特許第４，３６４，８６６号；米国特許第４，３７１，５３３号；米国特許第４，４２４，２１９号及び米国特許第４，１５１，０４２号がある。
【０２４９】
好適な一実施形態では、メイタンシノイドが、チオール含有メイタンシノイドであり、より好ましくは、米国特許第６，３３３，４１０からＣｈａｒｉら又はＣｈａｒｉらにおいて開示されるプロセスによって生成される（Ｃｈａｒｉ、１９９２）。
【０２５０】
ＤＭ−１（Ｎ２−デアセチル−Ｎ２−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシン）は、本発明において好適なエフェクター分子である。ＤＭ１は、メイタンシンよりも３倍から１０倍細胞毒性があると共に、ジスルフィド結合又は複数のジスルフィド結合を介して腫瘍関連抗原に向けられたモノクローナル抗体へ結合されることによりプロドラッグへ変換されている。これら接合体のうちの任意のもの（“腫瘍活性化プロドラッグ”（ＴＡＰｓ）と呼ばれる場合がある）は、血液コンパートメントにおいて細胞毒性がなく、この理由としては、これらは標的細胞に関連付けられて内部移行される際に活性化されることにより薬物を放出するからである（Ｂｌａｅｔｔｌｅｒ、２００１）。いくつかの抗体ＤＭ−１接合体が開発されており（Ｐａｙｎｅ、２００３）、臨床試験において評価されている。例えば、大腸癌患者におけるｈｕＣ２４２−ＤＭ１治療は、良好に許容的であり、検出可能な免疫応答が誘発されず、循環時間が長かった（Ｔｏｌｃｈｅｒ、２００３）。
【０２５１】
他の特に好適なメイタンシノイドは、立体障害型チオール結合を含む側鎖を有し、これには、限定されるわけではないが、“ＤＭ３”とも称されるメイタンシノイドＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシン、及び“ＤＭ４”とも称されるＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシンなどがある。ＤＭ４の合成は、図３及び４において示されると共に本明細書の他の部分にて説明される。ＤＭ４は、そのαＣにおいてメチル基を有するという点でＤＭ１及びＤＭ３と異なる。この結果、ＤＭ４が、リンカーを介して、特に限定されるわけではないがジスルフィド結合を有するリンカーを介して、ｎＢＴ０６２などの標的剤へ結合される際に立体障害が生じる。立体障害的チオール基を有する様々なメイタンシノイド（ＤＭ４のメチル置換基などの、１又は２の置換基、特にアルキル置換基を有する）が、２００４年１１月２５日公開の米国特許公開２００４／０２３５８４０において開示されており、これらは全て参照することにより本明細書に援用される。ＤＭ３及びＤＭ４の硫黄原子に近接の炭素におけるメチル基などのアルキル基による立体障害は、免疫複合体の細胞内開裂率に影響を与える場合がある。したがって、可変アルキルユニットは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏにおける有効性、効能、安全性及び毒性に影響を与える場合がある。
【０２５２】
Ｇｏｌｄｍａｈｋｅｒらにより米国特許公開第２００６／０２３３８１４号において報告されているように、そのような障害は、薬剤が標的へ放出されるとフリー薬剤のアルキル化（例えば、メチル化）を誘発する。アルキル化により薬剤の安定性が増加し、いわゆる傍観者効果が可能となる。しかしながら、当業者によって理解されるように、エフェクターがリンカーを介して標的剤へ結合された際に立体障害を生じる位置におけるアルキル基などの、置換基を有する他のエフェクター分子は、本発明の一部である（米国特許公開第２００４／０２３５８４０号）。好ましくはこの障害により化学修飾が引き起こされ、これには全体の安定性を増加させるフリー薬剤のアルキル化などがある。これによりかかる薬剤によって、ＣＤ１３８発現腫瘍細胞において細胞死又は連続的細胞周期停止だけでなく、任意的に補助細胞に対しても影響を与えることができる。ここでこの補助細胞は、例えば、腫瘍をサポート又は薬剤から保護するものであり、特に腫瘍間質及び腫瘍血管系の細胞であり、一般的にはそれらのサポート又は保護機能を低下又は失わせるためにＣＤ１３８を発現させない。
【０２５３】
メイタンシンは、全米癌研究所（ＮＣＩ）後援ＩＮＤ＃１１，８５７（１９７５年９月１９日にＦＤＡへ提出）によるフェーズＩ及びフェーズＩＩ臨床テストにおいて評価された。完全及び部分寛解の両方が、血液系腫瘍患者において確認され、部分寛解が、広範囲の固形腫瘍患者において確認された（Ｂｌｕｍ及びＫａｈｌｅｒｔ、１９７８、Ｉｓｓｅｌｌ及びＣｒｏｏｋｅ、１９７８、Ｃｈａｂｎｅｒら、１９７８、Ｅａｇａｎら、１９７８、Ｃａｂａｎｉｌｌａｓら、１９７８）。しかしながら、悪心、嘔吐、下痢、肝機能検査の上昇、倦怠感、及び末梢神経障害を含む著しい毒性が認められた（ＭａｙｔａｎｓｉｎｅＩＮＤ＃１１，８５７、年次報告、１９８４年２月；Ｂｌｕｍ及びＫａｈｌｅｒｔ、１９７８、Ｉｓｓｅｌｌ及びＣｒｏｏｋｅ、１９７８、Ｃｈａｂｎｅｒら、１９７８を参照）。毒性効果によって、更なる発展が防止された。
【０２５４】
チューブリン干渉剤のクラスは、タキサンを有しており（Ｐａｙｎｅ、２００３）、特に非常に強力なもの及びチオール又はジスルフィド基を含有するものを有している。タキサンは、紡錘体毒である。この紡錘体毒は、チューブリンの脱重合を阻害し、この結果微小管集合及び細胞死の割合を増加させる。本発明の範囲内のタキサンは、例えば、以下の文献において開示されている。この文献とは、米国特許第６，４３６，９３１号；米国特許第６，３４０，７０１号；米国特許第６，７０６，７０８号及び米国特許公開第２００４００８７６４９号；米国特許公開第２００４００２４０４９号及び米国特許公開第２００３０００４２１０号である。他のタキサンは、例えば、以下の文献に置いて開示されている。つまりこの文献とは、米国特許第６，００２，０２３号、米国特許第５，９９８，６５６号、米国特許第５，８９２，０６３号、米国特許第５，７６３，４７７号、米国特許第５，７０５，５０８号、米国特許第５，７０３，２４７号及び米国特許第５，３６７，０８６号である。当業者によって理解されるように、米国特許第６，５９６，７５７に開示されているようなペグ化タキサンも、本発明の範囲内である。
【０２５５】
本発明は、更にＤＮＡ影響エフェクター分子を含む。より具体的には、アントラサイクリン及び誘導体（ダウノルビシン、バルルビシン、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アムルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン）などの挿入剤、及び放線菌由来物質（アクチノマイシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、アクチノマイシン）又はアムサクリンなどのアントラセンジオンである。
【０２５６】
エフェクター分子は、より特定のＤＮＡアルキル化剤を示している場合がある。このＤＮＡアルキル化剤としては、より具体的には、ナイトロジェンマスタード及び類似体（例えば、シクロホスファミド、メルファラン、エストラムスチン）、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、アジリジン、ヒドラジン、エチレンイミン、及びトレニモン及びミトブロニトールなどの他の物質（マンニトール類似体）などである。特に好適なＤＮＡアルキル化剤は、ＣＣ−１０６５類似体又は誘導体（米国特許第５，４７５，０９２号；米国特許第５，５８５，４９９号；米国特許第６，７１６，８２１号）及びズオカルマイシンである。
【０２５７】
ＣＣ−１０６５は、ストレプトミセス属ｚｅｌｅｎｓｉｓの培養から単離された強力な抗腫瘍性抗生物質を示している。またＣＣ−１０６５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで非常に細胞毒性が強いことが示されている（米国特許第４，１６９，８８８号）。本発明の範囲に含まれるものとしては、例えば、米国特許第５，４７５，０９２号、米国特許第５，５８５，４９９号及び米国特許第５，７３９，３５０号において開示されているＣＣ−１０６５の類似体又は誘導体である。当業者によって容易に理解されるように、米国特許第５，８４６，５４５号において開示されている改質ＣＣ−１０６５類似体又は誘導体、及び例えば米国特許第６，７５６，３９７号において説明されているようなＣＣ−１０６５類似体又は誘導体のプロドラッグも、本発明の範囲内である。本発明のある実施形態では、ＣＣ−１０６５類似体又は誘導体が、例えば米国特許第６，５３４，６６０号において説明されているように、合成される場合がある。
【０２５８】
プラチナベースの物質などの他のＤＮＡアルキル化エフェクター分子も、更に含まれる（カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、トリプラチン、サトラプラチン）。
【０２５９】
かかるＤＮＡ影響エフェクター分子には、トポイソメラーゼＩ及びＩＩ阻害剤も含まれる。これには、カンレンボク属由来物質（ベロテカン、トポテカン）、及びポドフィロトキシン及び誘導体（エトポシド、テニポシド）などがある。
【０２６０】
ＤＮＡ影響エフェクター分子の更なるサブクラスには、代謝抵抗物質が含まれ、これには、葉酸類似体（ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤として知られるメトトレキサート）又はアミノプテリンなどがある。更に含まれるものとしては、プリン又はピリミジン代謝を干渉する代謝物質が含まれ、特に、アデノシンデアミナーゼ阻害剤（ペントスタチン）、又はハロゲン化／リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（クラドリビン、クロファラビン）、チオプリン及びチアゾフリンが含まれる。更なる代謝抵抗物質として、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤（シタラビン）、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（ゲムシタビン）、及びメチル化阻害剤（アザシチジン、デシタビン）、及びリボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤が含まれる。より一般的に含まれるものとしては、シスプラチンなどのＤＮＡ架橋物もある。
【０２６１】
本発明によるエフェクター分子は、抗癌性抗生物質である場合があり、ＤＮＡ改質又は傷害エフェクター分子として定義される。このエフェクター分子には、エンジイン抗生物質が含まれ、カリケアマイシンなどがある。このカリケアマイシンは、例えば、ガンマ１ｌ、Ｎ−アセチルカリケアマイシン、及びカリケアマイシンの他の誘導体を含む。カリケアマイシンは、配列特異的にＤＮＡの副溝に対して結合し、再配列を経て、フリーラジカルを露出させる。これにより二本鎖のＤＮＡが壊れ、この結果細胞アポトーシス及び細胞死が生じる。本発明において使用可能なカリケアマイシンエフェクター分子の一例が、米国特許５，０５３，３９４において説明されている。この化合物は、ゲムツズマブオゾガマイシン及びイノツズマブオゾガマイシンとして公開されているモノクローナル抗体を有する免疫複合体において使用される。
【０２６２】
エンジインのサブグループは、色素蛋白エスペラミシン及びネオカルチノスタチンを含む。特に、ＤＮＡ傷害物質として分類されるトラベクテジンが、抗癌性抗生物質と呼ばれる。トラベクテジンは、ＤＮＡ骨格開裂を生じさせると共に、ホヤ（エクテイナシジン７４３又はＥＴ−７４３としても知られる）から単離可能である。これは、ＹＯＮＤＥＬＩＳというブランド名でＺＥＬＩＴＡ及びＪＯＨＮＳＯＮ＆ＪＯＨＮＳＯＮから販売されている。
【０２６３】
好適なエフェクター分子の他のグループは、限定されるわけではないが、細胞代謝に影響を与えるトキシンなどの物質である。特に、限定されるわけではないがｏｌａｐｒｉｂなどの酵素阻害剤、又はより好適なプロテアソーム（例えば、ボルテゾミブ）及びプロテインキナーゼ阻害剤、又はマソプロコールなどのリポキシゲナーゼ阻害剤は、本発明の範囲内である。更に含まれるものとしては、限定されるわけではないがエンドセリンなどのレセプター阻害剤、レセプター阻害剤（例えば、アトラセンタン）、又はエストロン代謝に干渉するテストラクトンなどの性ステロイドがある。更に含まれるものとしては、植物由来ポリフェノールなどのエストロゲンレセプター相互作用物質があり、例えば限定されるわけではないが、イソフラボノイド、スチルベン、シリマリン、フィトエストロゲンと称されるフェニルプロパノイド配糖体などがある。
【０２６４】
更にエフェクター分子として適切なものとしては、細胞代謝に影響のある物質があり、光力学又は放射線療法に用いられる物質などがある。この物質としては、限定されるわけではないが、ポルフィリン誘導体が含まれる。例えば、δ−アミルブリン酸である。エファプロキシラルは、放射線増感剤を示し、これは、ヘモグロビンの酸素親和性を減じることにより酸素レベルを増加させる。更に含まれるものとしては、レチノイド（第１、第２及び第３世代）、特にトレチノイン（ＡＴＲＡ）、全トランス型レチノイン酸があり、これは、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＭＬ）の治療に用いられ、この表示でＲＯＣＨＥからブランド名ＶＥＳＡＮＯＩＤで販売されている。レチノイドは、化学的にビタミンＡに関連する化合物のクラスであり、例えば腫瘍抑制遺伝子の活性化として多種の機能を発揮する。現在のところこれらは、皮膚癌及び炎症性皮膚疾患の治療に用いられている。
【０２６５】
他の好適な実施形態では、エフェクター分子が、シグナリング経路に対して影響を与える可能性があり、限定されるわけではないが、カルシウムシグナリングなどである。例としては、三酸化ヒ素又はトリメチルスズ塩化物があり、後者の方は、毒性の強い有機スズ化合物である。
【０２６６】
本発明には、薬剤耐性メカニズムに対して影響を与えているエフェクター分子も含まれる。このメカニズムには、例えば、抗多剤耐性活性（Ｐ−糖蛋白質抑制を介する）が含まれる。二環式ヘテロ芳香族化合物及び誘導体が、非限定的な例として挙げられる可能性がある。
【０２６７】
他のエフェクター分子クラスには、物質又はアポトーシスシグナリング経路に干渉するより特異的な蛋白質が含まれる可能性がある。この蛋白質には、限定されるわけではないが、アンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれ、より具体的には、オリゴデオキシヌクレオチドが含まれる。このオリゴデオキシヌクレオチドとしては、オブリメルセン（ＩＮＮ、商品名ゲナセンス；オーグメロセン及びｂｃｌ−２アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドＧ３１３９としても知られている）。このオブリメルセンは、いくつかのタイプの癌に対する可能性のある治療法として実際に研究されたアンチセンスオリゴデオキシリボヌクレオチドである。この場合の癌のタイプとしては、慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、及び乳癌が含まれる。この化合物は、Ｂｃｌ−２の生成を阻害して化学療法に対する癌細胞の感度をより高めることにより癌細胞を殺す可能性があるという旨が提案されている。エフェクター分子として機能し得る更なる物質のアポトーシス含有クラスは、植物性ポリフェノールを有するものであり、これには、限定されるわけではないが、シリマリンなどがある。このシリマリンは、細胞周期調節因子とアポトーシスに関与する蛋白質とに対して干渉することが可能である。
【０２６８】
他のエフェクター分子には、酵素が含まれる可能性がある。この酵素には、限定されるわけではないが、アスパラギナーゼ又は抗新生物活性を有するその他酵素などがある。
【０２６９】
本発明による薬剤エフェクター分子は、ミルテホシンなどの抗原虫薬である可能性もある。
【０２７０】
他の実施形態においては、エフェクター分子は、植物ポリフェノールを示す可能性があり、これには、限定されるわけではないが、ソラレン及びそれらのヒドロキシ代謝物などがある。
【０２７１】
更に可能性のあるエフェクター分子としては、植物ポリフェノールがあり、これには、フラボノイド、タンニン（プロアントシアニジン）、スチルベノイド、クルクミノイド、上述の抗癌活性（例えば、アポトーシス誘導、細胞周期休止）のうちの１つ又は追加的活性を有するリグナンなどがある。この場合の追加的活性には、フリーラジカルスキャベンジング、金属キレート活性、エストロゲン受容体干渉活性、薬物代謝酵素に干渉する抗酸化剤がある。より具体的には、ソラレン及びそれらのヒドロキシ代謝物が好適なエフェクター分子である。この場合このソラレン及びヒドロキシ代謝物は、抗酸化作用及び細胞保護作用を有する金属キレータとして作用するＤＮＡへ挿入可能なものである。特に好適なものは、レセルバトール及びポリヒドロキシル化誘導体及びフラボノイドであり、カテキン及びエピカテキンなどがある。より具体的には、エピガロカテキン３−Ｏ没食子酸塩であり、これは、抗酸化剤として作用する場合がある。
【０２７２】
これらのメカニズムに応じたエフェクター分子の広範囲な分類も可能である。
【０２７３】
抗腫瘍薬及び免疫修飾剤（ＡＴＣコードＬ０１による）
特に“細胞内化学療法剤”
ＡＴＣ：解剖治療化学分類システム（ＷＨＯ）
１）   抗有糸分裂薬、又は微小管に影響する分子（チューブリン結合剤）。これには、ビンカアルカロイド及び類似体（ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンフルニン、ビンデシン、ビノレルビン）及びタキサン（パクリタクセル、ラロタキセル、ドセタキセル）ドラスタチン（及び誘導体、例えばアウリスタチン）及びクリトフィシン、メイタンシン及びコルヒチン誘導体、エポチロン（例えば、イキサベピロン）などがある。
２）   ＤＮＡ複製への影響
ａ）挿入剤。これには、アントラシクリン（ダウノルビシン、バルルビシン、ドキソルビシン、アクラルビシン、エピルビシン、イダルビシン、アムルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン）及びアントラセンジオンなどがある。またこれには、ストレプトミセス属由来物質（アクチノマイシン、マイトマイシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン）又はアムサクリンなどがある。
ｂ）アルキル化剤。これには、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、スルホン酸アルキル、アジリジン、ヒドラジン（プロカルバジン）、トリアゼン、エポキシド、エチレンイミン、アルトレタミン、ミトブロニトール、ズオカルマイシン及び類似体／立体異性体、トレニモン、エストラムスチン、ＣＣ−１０６５などがある。
ｃ）アルキル化のような剤。これには、プラチナ（例えば、カルボプラチンネダプラチン、オキサリプラチン、トリプラチン四硝酸塩、サトラプラチン）などがある。
ｄ）トポイソメラーゼＩ特異的阻害剤。これには、カンレンボク（ベロテカン、トポテカン）などがある。
ｅ）トポイソメラーゼＩＩ特異的阻害剤。これには、ポドフィロトキシン及び誘導体（エトポシド、テニポシド）などがある。
ｆ）代謝抵抗物質影響ＤＮＡ／ＲＮＡ合成で、葉酸に対する干渉による。この葉酸には、ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤（例えば、アミノプテリン、メトトレキサート）、チミジル酸合成酵素阻害剤などがある。
またプリンであり、これには、アデノシンデアミナーゼ阻害剤（ペントスタチン）、ハロゲン化／リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（クラドリビン、クロファラビン）、チオプリン、チアゾフリンなどがある。
またピリミジンであり、これには、ＤＮＡポリメラーゼ阻害剤（シタラビン）、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤（ゲムシタビン）、メチル化阻害剤（アザシチジン、デシタビン）などがある。
またデオキシリボヌクレオチドであり、これには、リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤ヒドロキシカルバミドなどがある。
ｇ）その他のＤＮＡ架橋剤。これには、プラチナベース化合物（例えば、シスプラチン）などがある。
３）   その他ＤＮＡ妨害物質、例えば“抗癌／細胞毒性抗生物質”。これには、エルサマイシンＡなどがある。更なる抗生物質として、ＣＣ−１０６５、及び抗生物質のサブクラスなどがある。これには、バクテリア由来エンジインカリケマイン又は色素タンパク質エンジインエスペラミシン（非常に毒性のあるＤＮＡスプライシング剤）又はネオカルチノスタチン（抗生物質のネオカルチノスタチングループの他のメンバーとしては、マクロモマイシン、アクチノキサンチン、ケダルシジン、及びマズロペプチン）又はトラベクテジン（ＤＮＡ骨格開裂）
４）   細胞代謝に影響を与えるトキシン、例えば、ＨＳＰ９０阻害剤、ロニダミド（呼吸と解糖との両方を阻害し細胞ＡＴＰの低下につながる）
ａ）酵素阻害剤、例えば、Ｏｌａｐｒｉｂ（ＰＡＲＰ阻害剤）、ＣＤＫ阻害剤（アルボシジブ）、プロテアソーム（ボルテゾミブ）、プロテインキナーゼ阻害剤、マソプロコール（リポオキシゲナーゼ阻害剤）
ｂ）レセプター拮抗剤。これには、ツチン（グリシンレセプター拮抗剤（植物毒）、アトラセンタン、レチノイドＸレセプター（ベキサロテン）、性ステロイドなどがある。この性ステロイドには、テストラクトン、エストロゲンレセプター妨害物質などがある。
ｃ）光増感剤又は光力学治療に用いられる他の物質（ポルフィマーナトリウム）、ポルフィリン誘導体、例えば、δ−アミノレブリン酸）
ｄ）放射線増感剤。これには、エファプロキシラルなどがあり、このエファプロキシラルは、ヘモグロビン酸素親和性を減じることにより酸素レベルを増加させる
ｅ）シグナリング経路に影響を与える物質、例えば、Ｃａ２＋シグナリングであり、これには、三酸化ヒ素及びトリメチルスズ塩化物などがある。
ｆ）代謝を妨害する他の物質。これには、レチノイド及び誘導体トレチノイン（ＡＴＲＡ）などがある。
５）   エピジェネティックプロセスに影響を与える。これには、ＨＤＡＣ阻害剤（例えば、パノビノスタット、ボリノスタット、バルプロン酸、ＭＧＣＤ０１０３（モセチノスタット）で、これらは、現在、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、急性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫又は濾胞性リンパ腫に関して臨床開発にある）
６）   薬剤抵抗性メカニズムに影響を与える。これには、二環性ヘテロ芳香族化合物などがあり、Ｐ−糖蛋白質を阻害する。
７）   アポトーシス性シグナリング／メカニズムを誘発する物質には、蛋白質に加えて、アンチセンスオリゴデオキシヌクレオチドが含まれる。これには、オブリメルセン（商品名ゲナセンス）などがある。
８）   アスパラギナーゼなどの酵素
９）   ミルテホシンなどの抗原虫薬
１０） 植物ポリフェノール。これには、フラボノイド、タンニン（プロアントシアニジン）、スチルベノイド、クルクミノイド及び上述の抗癌活性のうちの一を有するリグナン（例えば、アポトーシス誘導、細胞周期休止）又は追加的な活性であり、これには、フリーラジカルスキャベンジング、金属キレート活性、エストロゲン受容体干渉活性、薬物代謝酵素に干渉する抗酸化剤がある）。より具体的には、ソラレン及びそれらのヒドロキシ代謝物、レスベラトロール及びポリヒドロキシル化誘導体、フラボノイドであり、これには、カテキン及びエピカテキンなどがある。より具体的には、エピガロカテキン３−Ｏ没食子酸塩である。
１１） 更なる天然物質及び誘導体であり、これには、エオトキシンＡ、ジフテリア毒素、及びその誘導体がある。ここでかかる誘導体は、化学的又は遺伝的改変が可能である。
【０２７４】
またエフェクター分子は、属する物質クラスに応じて分類され得る。この物質クラスとしては、無機化合物、芳香族化合物、金属ベース化合物、細胞代謝に関する蛋白質、酵素、ペプチド、アンチセンスヌクレオチドなどのオリゴヌクレオチドなどがあり、細菌毒素、植物由来トキシン、及びポリフェノールなどがある。このポリフェノールには、タンニン、フラボノイド及びクマリンなどがある。更に、テルペノイド、アルカロイド、抗癌抗生物質（例えば、エンジイン抗生物質）、マイコトキシン、脊椎及び無脊椎動物からのトキシン、環境毒素がある。
【０２７５】
本発明による免疫複合体は、少なくとも１つの標的剤を含み、特にこれは、標的抗体及び１つのエフェクター分子である。この免疫複合体は、例えば安定化のために更なる分子を含む可能性がある。免疫複合体について、“結合する”という用語は、一般的に１以上のエフェクター分子に対する標的剤のオペレーティブな関連付けを定義するために用いられており、オペレーティブ関連付けの任意タイプのみを言及することを意図していない。更にこの用語は、特に“化学的結合”に限定されない。標的剤が標的部位に対して結合することが可能であると共に、結合エフェクターが意図したとおりに十分に機能している限り、特に標的部位に運搬された場合は、どのような結合モードも適切なものとなる。本発明による結合方法は、限定されるわけではないが、エフェクター分子及び標的抗体の少なくともいずれかの事前改質がある又はない場合における標的抗体へのエフェクター分子の直接結合、又はリンカーを介した結合が含まれる。リンカーは機能的に分類することが可能であり、例えば、酸性不安定、感光性リンカー、酵素切断可能リンカーに分類されることができ、これには、ペプチダーゼによって切断され得るリンカーなどがある。切断可能リンカーは、好適な本発明の実施形態の多くに存在する。このような切断可能リンカーは、細胞環境に存在する条件下、特に細胞内環境に存在する条件下で切断可能であり、これは、切断時に放出される薬物に対して如何なる有害効果をも有していない。ある細胞内部分に存在するため、４から５のｐＨなどの低ｐＨによって酸不安定性リンカーが切断される。一方で感光性リンカーは、例えば赤外線によって切断され得る。しかしながら、大部分の細胞に存在すると共に生理的条件によって又は生理的条件下で切断されるリンカーが好ましく、本明細書においては生理的切断可能リンカーと称される。したがって、本発明の多くの実施形態では、ジスルフィドリンカーが好まれる。これらのリンカーは、ジスルフィド交換を介して切断可能であり、この交換は、生理的条件下で発生し得る。好ましいヘテロ二機能性ジスルフィドリンカーには、限定されるわけではないが、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（例えば、Ｃａｒｌｓｓｏｎら（１９７８）を参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノアート（ＳＰＤＢ）（例えば、米国特許４，５６３，３０４を参照）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタン酸（ＳＰＰ）（例えば、ＣＡＳ登録番号３４１４９８−０８−６）、Ｎ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＳＭＣＣ）（例えば、Ｙｏｓｈｉｔａｋｅら（１９７９）を参照）、及びＮ−スクシンイミジル４−メチル−４−［２−（５−ニトロ−ピリジル）−ジチオ］ペンタン酸（ＳＭＮＰ）（例えば、米国特許４，５６３，３０４を参照）が含まれる。本発明の組成物における使用について最も好適なリンカー分子は、ＳＰＰ、ＳＭＣＣ及びＳＰＤＢである。
【０２７６】
その他の適するリンカーには、“非切断可能”結合が含まれ、これには、限定されるわけではないが、スルホスクシンイミジルマレイミドメチルシクロヘキサンカルボキシラート（ＳＭＣＣ）などがあり、これは、化合物とＳＨ含有化合物とを連結可能なヘテロ二機能リンカーである。Ｓ−（２−チオピリジル）−Ｌ−システインヒドラジド（ＴＰＣＨ）のような炭水化物指向ヘテロ二機能リンカー分子などの二機能性及びヘテロ二機能リンカー分子も、本発明の範囲内である（Ｖｏｇｅｌ、２００４）。マイタンシノイドなどのエフェクター分子は、標的抗体に対し２反応ステッププロセスを介して結合される場合がある。これには、Ｎ−スクシンイミジルピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）などの架橋試薬との標的抗体の第１ステップ改質が含まれ、これによりジチオピリジル基を標的抗体へ導入する。第２ステップでは、ＤＭ１などのチオール基を有する反応性メイタンシノイドが、改質された抗体へ加えられる場合があり、この結果改質抗体においてチオピリジル基の置換が生じると共に、ジスルフィド結合細胞毒性メイタンシノイド／抗体複合体の生成が生じる（米国特許５，２０８，０２０）。しかしながら、米国特許公開２００３００５５２２６からＣｈａｒｉらにおいて開示されているような１ステップ結合プロセスも、本発明の範囲内である。本発明の一実施形態においては、同種又は異種の複数エフェクター分子が、標的抗体へ結合される。本明細書の他の部分で論じられるように、使用されるリンカーの性質がバイスタンダーキリングに対して影響を与える場合がある（Ｋｏｖｔｕｎら、２００６）。図１３の議論も参照されたい。更に、免疫複合体の調製方法については、以下の文献も参照されたい。ここでこの文献は、特許５，２０８，０３０；５，４１６，０６４；６，３３３，４１０；６，４４１，１６３；６，７１６，８２１；６，９１３，７４８；７，２７６，４９７及び米国特許出願２００５／０１６９９３３である。
【０２７７】
ＣＣ−１０６５類似体又は誘導体は、例えば米国特許第６，７１６，８２１号に開示されているようなＰＥＧリンキンググループを介して標的剤に接合される場合がある。
【０２７８】
カリケアマイシンは、リンカーを介して標的抗体へ接合される場合がある（米国特許第５，８７７，２９６号及び米国特許第５，７７３，００１号）。また、この接合は、米国特許第５，７１２，３７４号及び米国特許第５，７１４，５８６号に開示されている接合方法に基づいて行われる場合がある。カリケアマイシン接合体を調製するための他の好適な方法は、米国特許公開第２００４００８２７６４号に開示されている。本発明の免疫複合体は、組換融合蛋白質の形態をとり得る。
【０２７９】
リンカーを用いた又は用いない結合形態のオペレーショナル関連付けについては、本明細書において“機能的結合”と称される。
【０２８０】
ある成分から本質的に構成される免疫複合体については、本発明の場合、指定成分及び追加的物質からなる又は抗体の基本的性質に対して実質的な影響を与えない物質からなる抗体／免疫複合体を意味する。
【０２８１】
図９は、（Ｃ）及び（Ｄ）において、マウス抗体ＢＢ４（ＢＢ４−ＳＰＰ−ＤＭ１；図９Ｃ）を含む免疫複合体とこれに基づく改変された標的抗体ｎＢＴ０６２（ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１；図９Ｄ）との間におけるターゲティング／結合の同質性の差を示している。このグラフからわかるように、改変された標的抗体を有する免疫複合体について得られた結果は、マウス抗体を含む免疫複合体について得られた結果と比べて、実質的により同質的である。これは、ＢＢ４の抗体結合領域がｎＢＴ０６２において改質されていないので、特に顕著である。かくしてマウス抗体の抗体結合領域を含む一方で当該マウス抗体の他部分を有していない免疫複合体は、当業者が予期し得る結果をはるかに凌駕する特性を示した。
【０２８２】
本発明の免疫複合体の一部は、立体障害型であると共に切断可能リンカーを含んでいるエフェクター分子を有している（ＨＩＣＬ−障害免疫複合体、切断可能リンカー）。ＣＤ１３８に対する改変された標的抗体を有する免疫複合体の非障害対応物（ＵＩ：非障害免疫複合体）は、切断可能リンカー（ＣＬ）を介してエフェクター分子に結合され、本明細書ではＵＩＣＬとして説明される。ＵＩＣＬは、改変された標的抗体を有するＨＩＣＬに相当する免疫複合体であり、この場合この改変された標的抗体では、エフェクター分子が立体障害型ではない。ＨＩＣＬ／ＵＩＣＬペアの例としては、ＢＴ０６２及びｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１がある。非切断可能リンカー（ＵＩＮＣＬ）を含むこのような免疫複合体の非障害対応物は、改変された標的抗体を有する等価的免疫複合体を意味し、この場合この改変された標的抗体では、エフェクター分子が立体障害型ではなく非切断可能リンカーを有している。ＢＴ０６２（ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＰ−ＤＭ４）に対して、ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１は、非切断可能リンカー（ＵＮＩＣＬ）を有するこのような非障害対応物の一例をなす。
【０２８３】
免疫複合体の腫瘍阻害活性（＝腫瘍成長阻害活性）の増加は、相対測定である。これにより、活性が１００％として設定された最高パフォーマンスの免疫複合体活性に比較して複合体の腫瘍成長阻害活性が説明される。例えば、最高パフォーマンスの免疫複合体、つまり３２日の腫瘍成長遅延（ＴＧＤ）を生じさせるＢＴ０６２など、の活性が１００％として設定されると、例えば、１８日の腫瘍成長遅延（ＴＧＤ）を生じさせる例えばｎＢＴ０６２−ＤＭ１の活性が以下のようにして計算される。
【０２８４】
腫瘍成長阻害活性＝
１００×（ＴＧＤｎＢＴ０６２−ＤＭ１／ＴＧＤＢＴ０６２）
より汎用的には：
腫瘍成長阻害活性＝
１００×（ＴＧＤＳａｍｐｌｅ／ＴＧＤＲｅｆｅｒｅｎｃｅ）
【０２８５】
【表６】
2016053053.tif 000007
【０２８６】
表６による例では、ＢＴ０６２による腫瘍阻害活性の増加は、非障害対応物（ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１）の活性を６０％上回っている。またＢＴ０６２による腫瘍阻害活性の増加は、非切断可能リンカーを有する非障害対応物免疫複合体（ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１）の活性を４４％上回っている。
【０２８７】
上述のように、マイタンシノイドなどのある薬物は、効果的である一方で毒性も高く、元来の、すなわち非結合型にあると細胞を非選択的に破壊してしまう。細胞毒性マイタンシノイドを抗体へ連結することにより、標的細胞に到達するまで薬物を非活性化することができる（Ｌａｍｂｅｒｔ、２００５）。いくつかの抗体マイタンシノイド複合体は、臨床開発を経ている。
【０２８８】
ＣＤ５６−陽性固形腫瘍（小細胞肺癌及び神経内分泌癌）を治療するためのＩＭＧＮ９０１（ｈｕＮ９０１−ＤＭ１、ＢＢ−１０９０１）についてのフェーズＩ及びＩＩ研究が、実施された。これらの研究では、ＩＭＧＮ９０１が、各６週間のうち４週連続投与され、全般的に良好に許容された（Ｆｏｓｓｅｌｌａら、２００５、Ｌｏｒｉｇａｎら、２００６、ＭｃＣａｎｎら、２００７、Ｃａｒｔｅｒ及びＳｅｎｔｅｒ、２００８、Ｊｏｈｎｓｏｎら、２００８）。免疫複合体ｈｕＮ９０１の抗体部分は、かなりのＣＤＣ又はＡＤＣＣ活性を示す。同じ免疫複合体が、ＣＤ５６−陽性多発性骨髄腫の治療について調査される。フェーズＩ調査では、各３週間のうち２週間連続ＩＭＧＮ９０１の投与が、既存の多発性骨髄腫治療を失敗したＣＤ５６−陽性多発性骨髄患者に対して行われ、安全性の予備的証拠並びに臨床活性が示された。報告によれば、１８人の患者がＩＭＧＮ９０１の投与を受けた（４０ｍｇ／ｍ２／週、６０ｍｇ／ｍ２／週、７５ｍｇ／ｍ２／週、９０ｍｇ／ｍ２／週、１１２ｍｇ／ｍ２／週、及び１４０ｍｇ／ｍ２／週のそれぞれで３人の患者ずつ）。予備的なＰＫ結果が報告され、投薬と観察された最大血清濃度との間に近似的な線形関係が示された。興味深い臨床活性が許容安全性プロファイルと共に報告された。確認されたやや有効（ＭＲ）が、積極的に事前治療を受けた患者について記録された（６０ｍｇ／ｍ２／週、９０ｍｇ／ｍ２／週、及び１１２ｍｇ／ｍ２／週のそれぞれで１人の患者ずつ）。この場合、ヨーロッパの骨髄移植の基準を用いている。耐久性のある安定した疾患が、６０ｍｇ／ｍ２／週、９０ｍｇ／ｍ２／週、１１２ｍｇ／ｍ２／週、及び１１４ｍｇ／ｍ２／週の場合において報告されている（Ｃｈａｎａｎ−Ｋｈａｎら、２００７、Ｃｈａｎａｎ−Ｋｈａｎら、２００８）。ＩＭＧＮ９０１については、固形腫瘍のフェーズＩ研究においても調査されている。免疫複合体が、各３週間のうち３日間毎日投与される。予備的な臨床活性が、小細胞肺癌、メルケル細胞癌及び他の固形癌を患う患者において認められた。用量増加が続いている。
【０２８９】
ＭＬＮ２７０４（ｈｕＪ５９１−ＤＭ１）が、性腺摘除抵抗性前立腺癌の治療について調査されている（Ｍｉｌｏｗｓｋｙら、２００６、Ｂｒａｎｄ及びＴｏｌｃｈｅｒ、２００６）。進行転移の性腺摘除抵抗性前立腺癌を患う患者に対するＭＬＮ２７０４のフェーズＩ試験では、４週間ごとに１度投与された場合におけるＭＬＮ２７０４の安全性プロファイル、薬物動態、免疫原性、及び抗癌活性が調査された。示された結果によれば、ＭＮＬ２７０４の治療用量を、反復的且つ安全に投与することが可能である（Ｇａｌｓｋｙら、２００８）。並列試験が、他のＤＭ１−免疫複合体について実施された。すなわち、ビバツツマブメルタンシンについてであり、このターゲットであるＣＤ４４ｖ６は、頭頸部癌及びその他の固形腫瘍に発現する。最も凝縮された投与スケジュール（毎週投与）による臨床試験では、皮膚のケラチノサイトにおけるＣＤ４４ｖ６への結合が、重篤な皮膚毒性を媒介した。ここで１人の患者では致死的転帰となり、ビバツツマブメルタンシンの開発プログラムの終結に至った（Ｔｉｊｉｎｋら、２００６、Ｓａｕｔｅｒら、２００７、Ｒｕｐｐら、２００７、Ｒｉｅｃｈｅｌｍａｎｎら、２００８）。
【０２９０】
ＣＤ４４ｖ６は、様々な癌細胞に発現するだけでなく、正常な皮膚組織にも発現する。この点において、癌細胞だけでなく正常な皮膚組織にも発現するＣＤ１３８に似ている。驚くべきことに、ビバツツマブメルタンシンにおいて発見されたように、ＢＴ０６２は皮膚毒性などの許容不可能な副作用なしに臨床的有効性を呈することが発見されている。図２３を参照されたい。図２３では、ＢＴ０６２の最大１６０ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与が、対応可能な副作用効果がある一方で、少なくとも安定的な疾患につながった。図２３において説明される結果では、以下の繰り返し単回投与が良好に許容されたことも示されている。つまり、１０回にわたる２０ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与（６カ月を超える治療）、５回にわたる４０ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与、５回にわたる８０ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与、６回にわたる１６０ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与、及び１回のみ２００ｍｇ／ｍ２の単回投与に続き６回にわたる１６０ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与（その結果、１１６０ｍｇ／ｍ２の総用量）（００３−００５及び００２−０１２、及び００２−０１１に関連する患者は、未だ継続治療中）。
【０２９１】
ＣＤ１３８は、正常な血液細胞や他の細胞にも発現し、これには、上皮細胞などがある。この細胞の破壊は、許容不可能な副作用につながる。これに関わらず、任意種類のＣＤ１３８発現非癌／非腫瘍性細胞に対する用量制限毒性は、１２０ｍｇ／ｍ２に至るまで図２３に記載の治療レジメンでは見つからなかった。一方でこの研究において最大耐容量（ＭＴＤ）は、１６０ｍｇ／ｍ２に決定され、最大投与量（ＭＡＤ）は、２００ｍｇ／ｍ２に決定された。１６０ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２間の用量については、試験が行われなかった。２００ｍｇ／ｍ２の用量制限毒性（ＤＬＴ）を鑑みて、一般的により高い用量は与えられない。しかしながら、以降においてより低い用量、つまり１６０ｍｇ／ｍ２など、が投与される場合、ＤＬＴ用量は受容可能であると観測された。ＣＤ１３８発現非癌／非腫瘍性細胞（非標的ＣＤ１３８発現細胞）に対する毒性が臨床的に重大でない場合、これは、本明細書の場合、そのような細胞及び対応臓器（複数対応臓器）に対して“臨床的受容毒性”又は“許容毒性”であると称される。投与された免疫複合体のそれぞれの量は、本明細書の場合、“許容量”と称される。したがって、本発明の一実施の形態において、免疫複合体は、非標的ＣＤ１３８発現細胞に対して臨床的受容毒性を呈する。特にこの細胞は、ＣＤ１３８を発現する上皮細胞である。この上皮細胞は、ヒト特異性のため、異種移植マウスモデルにおけるＢＴ０６２によって検知されない。
【０２９２】
臨床的受容毒性には、対応可能又は許容可能レベルまでの副作用の発生が含まれる。副作用とは、望ましくない効果と定義され、合理的に薬の使用に関連付けられる。この場合、免疫複合体であり、その副作用は、薬の薬理作用の一環として発生する又はその発生について予期不可能である場合がある。この定義には、薬の使用中に観測される全ての副作用が含まれるわけでなく、薬と副作用発生との因果関係の存在を裏付ける根拠があるもののみが含まれる。副作用は、兆候及び症状、検査パラメータの変化、及びその他重要身体機能の測定値の変化などがふくまれ、これには、生命徴候及びＥＣＧなどがある。
【０２９３】
非標的細胞、特にＣＤ１３８発現非標的細胞（非腫瘍細胞）などの細胞、が投与によって実質的に影響を受けないといわれる場合、特に免疫複合体などの化合物のある用量による投与が意味するところは、そのような化合物と上記非標的細胞との如何なる相互作用によっても何ら副作用を生じない又は対応可能／許容可能副作用が生じるということである。
【０２９４】
ＨＥＲ２過剰発現転移性乳癌の治療におけるトラスツズマブ（Ｔ−ＤＭ１）の免疫複合体に関するフェーズＩ調査を行い、毎週又は３週間に１度投与された場合のＴ−ＤＭ１の安全性及び薬物動態を調査する。両方の調査において、Ｔ−ＤＭ１に関するグレード≧２のＡＥｓは、稀であり対応可能なものであった。客観的腫瘍反応が、ＭＴＤにおいて又はそれ未満の容量において観察された（Ｂｕｒｒｉｓら、２００６、Ｋｒｏｐら、２００７、Ｂｅｅｒａｍら、２００８、Ｈｏｌｄｅｎら、２００８）。ＨＥＲ２陽性転移性乳癌のＴ−ＤＭ１を調査するフェーズＩＩ研究が、３週間に１度の投与で開始された（Ｂｅｅｒａｍら、２００８、Ｃａｒｔｅｒ及びＳｅｎｔｅｒ、２００８、Ｈｏｌｄｅｎら、２００８）。セカンドラインＨＥＲ２陽性転移性乳癌についてＴ−ＤＭ１を評価するフェーズＩＩＩ臨床試験、及びファースト、セカンド及びサードラインＨＥＲ２陽性転移性乳癌についてＴ−ＤＭ１を評価するフェーズＩＩＩ臨床試験が進行中である。ハーセプチンベースの治療が進行中のＨＥＲ２陽性転移性乳癌患者に対するペルツズマブを組み合わせたフェーズＩｂ臨床試験が計画されている。カンツズマブメルタンシン、大腸癌及びその他のＣ２４２発現癌で見られる抗原を標的とするｈｕＣ２４２抗体のＤＭ１複合体について、３つのフェーズＩ臨床試験が完了した。毎週並びに３週間に１度のｈｕＣ２４２−ＤＭ１の投与治療については、安全で許容できるものであることが分かった（Ｒｏｗｉｎｓｋｙら、２００２、Ｔｏｌｃｈｅｒら、２００３、Ｈｅｌｆｔら、２００４）。
【０２９５】
４つの研究において、チオール含有ＤＭ４メイタンシノイドを用いて免疫複合体を調査している。このチオール含有ＤＭ４メイタンシノイドは、ＢＴ０６２の成分でもある。
【０２９６】
カンツズマブメルタンシンの類似体ＩＭＧＮ２４２（ｈｕＣ２４２−ＤＭ４）がＣａｎＡｇ発現癌の対象のフェーズＩ研究において調査された（Ｔｏｌｃｈｅｒら、２００６）。対象は、３週間ごとに１度ＩＭＧＮ２４２のＩＶ注入を受け、この時の用量は１８ｍｇ／ｍ２から２９７ｍｇ／ｍ２であった。用量制限毒性を経験したのは、２度目の治療サイクル中に２２３ｍｇ／ｍ２の用量レベルで治療を受けた６中２の対象であった。当該薬物は、１６８ｍｇ／ｍ２のレベルで良好に許容されると共に、検出可能な抗体反応を誘発しなかった（Ｍｉｔａら、２００７）。フェーズＩ研究の最初の安全性結果に基づいて、フェーズＩＩ研究が開始され、ＣａｎＡｇ発現胃癌の治療用に１６８ｍｇ／ｍ２の用量でＩＭＧＮ２４２を評価した（Ｓａｎｋｈａｌａら、２００７）。２つの臨床試験において、４５人の患者がＩＭＧＮ２４２を用いて治療された。安全性及び徹底的な臨床薬物動態（ＰＫ）／薬力学（ＰＤ）解析に基づいて、フェーズＩＩ研究が修正され、低血漿ＣａｎＡｇレベルの患者を１２６ｍｇ／ｍ２の用量で治療すると共に、高血漿ＣａｎＡｇレベルの患者を１６８ｍｇ／ｍ２の用量で治療するようにした（Ｑｉｎら、２００８）。
【０２９７】
ＤＭ４に接合されたｈｕＭｙ９−６抗体（ＡＶＥ９６３３）についてのフェーズＩ研究も、ＣＤ３３陽性急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の患者に対する治療について行われた。この治療レジメンでは、ＩＶ注入を３週間ごとに１度１５ｍｇ／ｍ２から２６０ｍｇ／ｍ２の用量で行う。単回投与試験では、関連の骨髄抑制又は応答が認められなかった（Ｇｉｌｅｓら、２００６）。ＩＶ注入を２８日サイクルの１及び８日目で行う治療レジメンでＡＶＥ９６３３を調査する第２のフェーズＩ研究がおこなわれ、これによりＡＶＥ９６３３が良好に許容されることが示されると共に、抗白血病活性の証拠が示されている。ここでは１つの対象で、少なくとも４ヶ月間継続する完全寛解（不十分な血小板反応、輸血依存）があった（Ｌｅｇｒａｎｄら、２００７）。更に２つのＤＭ４免疫複合体（ＳＡＲ３４１９及びＢＩＩＢ０１５）が、フェーズＩ臨床試験に入った。
【０２９８】
また、ＣＤ３３を標的とするＭｙｌｏｔａｒｇなどの他の免疫複合体から、複合体の活性は患者を低用量で治療するには十分でない可能性がある旨が知られている。この問題は、ＣＤ３３発現標的細胞を感作させる例えば遺伝子組換えヒト顆粒球コロニー刺激因子（ｒｈＧ−ＣＳＦ）を投与することにより緩和された（Ｆｉａｎｃｈｉら、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２００８  １９（１）：１２８−１３４）。
【０２９９】
上記研究では、異なる免疫複合体、とくに免疫複合体を含有するメイタンシノイド（ＤＭ１又はＤＭ４など）、に対する反応が大きく変わることが示された。ヒト対象におけるＢＴ０６２試験では、異なる病態安定用量、特に最大１６０ｍｇ／ｍ２、でのＣＤ１３８発現非癌細胞に対する許容可能毒性が示された。
【０３００】
本明細書において説明される免疫複合体は、細胞毒性物質と組み合わせて投与することが可能である。このような組み合わせは、本明細書の場合、抗癌組合せ剤と称される。
【０３０１】
現在のところ、特に抗骨髄腫薬の多くの組み合わせが臨床試験にて調査されている。一般的に組み合わせて使用する目的は、効果の増強と、例えば骨髄腫細胞の難治性表現型の克服と、組み合わせ剤又はその組み合わせのうちの１つの低濃度使用に起因する副作用の低減とにある。例えば、レナリドマイドの低用量での使用と、デキサメサゾンの低用量での使用とを組み合わせると、毒性を低減することが示されている（Ｒａｊｋｕｍａｒら、２０１０）。
【０３０２】
特に再発性又は難治性多発性骨髄腫の患者において、いくつかの薬剤組み合わせが調査されると共に調査された。
【０３０３】
組み合わせ化学療法についての標準的な一例では、ビンクリスチン、デキサメタゾン、ドキソルビシンの３重組み合わせが示されている（ＶＡＤ  Ｒｅｇｉｍｅｎ）。
【０３０４】
ボルテゾミブなどのプロテアソーム阻害剤が、メルファラン及びプレドニゾン（ＶＭＰ）などの骨髄腫薬と組み合わされた。この組み合わせの結果は、完全寛解率１６％及び総合奏効率８９％である（Ｍａｔｅｏｓら、２００６）。
【０３０５】
ボルテゾミブについては、再発性又は難治性患者に対してリポソーマルドキソルビシンとの組み合わせ使用が認可されている（Ｎｉｎｇら、２００７）。
【０３０６】
ボルテゾミブについては、いくつかの臨床研究において、デキサメタゾン、メルファラン、プレドニゾン及びサリドマイドの少なくともいずれかとの組み合わせ使用が調査されている。
【０３０７】
更にボルテゾミブについては、多発性骨髄腫患者において、リポソーマルドキソルビシン、シクロホスファミド及びデキサメタゾンとの組み合わせが調査中である。ボリノスタットとの組み合わせは現在調査中であり、これは、この薬剤に対して不応性であるボルテゾミブに対して患者を再感作させることを目的としている。
【０３０８】
経口投与されるサリドマイドが、メルファラン／プレドニゾン（ＭＰＴ）と組み合わされた（Ｆａｃｏｎら、２００６）。若しくは、デキサメタゾン又はベンダムスチンと組み合わされた（Ｐｏｅｎｉｓｃｈら、２００８）。
【０３０９】
更に、免疫調節薬剤であるレナリドマイドとデキサメサゾンとが組み合わされて使用されると、デキサメサゾンのみの場合と比して、腫瘍進行の長期間化と生存性増加という結果となった（Ｗｅｂｅｒら、２００６）。レナリドマイドとデキサメサゾンとの組み合わせについては、新たに診断された患者においても研究された（Ｒａｊｋｕｍａｒら、２００５）。また、メルファラン／プレドニゾン（ＲＭＰ）との組み合わせも研究された（Ｐａｌｕｍｂｏら、２００６）。
【０３１０】
米国特許公開第２０１０／００２８３４６号からＬｕｔｚらでは、化学療法薬と用いた場合のある免疫複合体の相乗効果について説明している。
【０３１１】
この場合、組み合わせを用いることによる１つの目的は、本発明の免疫複合体の有効量の低減であり、これによりそれらの副作用を低減し、受容副作用との新たな治療域を開く。他の目的は、これまで用いてきたベルケイド又はレナリドマイドなどの細胞毒性剤の有効量を低減すると共に、好ましくはこれら薬剤の副作用を低減することにある。同様に、投与量の実用的な結果には、限定されるわけではないが、治療の延長、より高い投与量、他の適用スケジュール、より良好でより持続性のある治療への反応が含まれる。
【０３１２】
レナリドマイド、メルファランなどの薬剤に対して難治性表現型を示す患者（研究中）が、本発明による免疫複合体の使用によって再度感受性になる可能性がある。
【０３１３】
“細胞毒性剤”という用語には、“細胞毒性／抗癌剤”が含まれ、これには、化学療法薬、特に急速分裂細胞において一般的に用いられる化学療法薬、が含まれる。すなわちこの化学療法薬には、以下のものが挙げられる。
−アルキル化剤。これには、ナイトロジェンマスタード（例えば、メルファラン、シクロホスファミド、メクロレタミン、ウラムスチン、クロランブシル、イホスファミド）又はニトロスレアス（例えば、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン）又はアルキルスルホン酸塩などがある。
−アルキル化のような剤。これには、シスプラチン、カルボプラチン、ネダプラチン、オキサリプラチン；又は非古典的なアルキル化剤。これには、テトラジン、ダカルバジン、プロカルバジン、アルトレタミンなどがある。
−アントラサイクリン。これには、ドキソルビシン及びリポソームドキソルビシン（ＤＯＸＩＬ）などがある。
−アルカロイド。これには、ビンクリスチンなどがある。
【０３１４】
“細胞毒性剤”という用語には、免疫調節薬（ｌｍｉＤｓ）も含まれる。これには、サリドマイド（又は類似体）、レナリドマイド（ＣＣ―５０１３）、ポマリドマイド、アクチミドなどがあり、これらは、それらの多面的免疫調節特性という観点から骨髄腫治療に使用される。これらは、共通してＴＮＦアルファ産生阻害による抗炎症活性を示すだけでなく、血管新生抑制特性及び免疫調節特性も示す。これには、Ｔ細胞同時刺激及び規制Ｔ細胞への影響などがある（Ｑｕａｃｈら、２０１０）。
【０３１５】
“細胞毒性剤”という用語には、ステロイドが含まれ、これには、限定されるわけではないが、デキサメタゾン及びプレドニゾン、並びにプロテアソーム阻害剤などがある。このプロテアソーム阻害剤には、ボルテゾミブ（ベルケイド）又はカーフィルゾミブなどがある。このカーフィルゾミブは、アポトーシス促進経路の抑制に依存する新生細胞において、プログラム細胞死の活性を誘発する。更に強力な細胞毒性剤には、エトポシドが含まれ、これは、酵素トポイソメラーゼＩＩ、シタラビンを阻害し、これは、細胞周期がＳフェーズ（ＤＮＡの合成）に維持される場合変換時にＤＮＡにダメージを与え、これにより特に癌細胞などの急速分裂細胞に影響を与える。加えて、ビンカアルカロイド、タキサンなどの微小管阻害剤（エフェクター分子の場合で説明された）は、本発明によれば細胞毒性剤としても機能する。
【０３１６】
更に当該定義に含まれるものとしては、キナーゼ阻害剤があり、これには、ソラフェニブ又はＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）阻害剤が含まれる。また、ロミデプシン並びに成長阻害剤、抗ホルモン剤、血管新生阻害剤、心臓保護剤、免疫刺激剤、免疫抑制剤、新生阻害剤、蛋白質チロシンキナーゼ（ＰＴＫ）阻害剤などがある。
【０３１７】
更に当該定義に含まれるものとしては、免疫複合体を含む細胞毒性剤に基づく抗体、及び当該技術分野において認識される細胞毒性効果を有する抗体がある。抗ＣＤ４０は、好適な抗体である。その他の抗体としては、限定されるわけではないが、例えば、アバスチン（ベバシズマブ）又はＭＹＥＬＯＭＡＣＩＤＥ（ミラツズマブ）が含まれる。
【０３１８】
Ｔｈａｌｏｍｉｄｅ（α−（Ｎ−フタルイミド）グルタルイミド；サリドマイド）は、免疫調節剤である。サリドマイドの実験式は、Ｃ１３Ｈ１０Ｎ２Ｏ４であり、グラム分子量は、２５８．２である。サリドマイドのＣＡＳ番号は、５０−３５−１である。これは、重合動作を有すると思われ、これには、様々な方法による骨髄腫細胞の成長及び生存を阻害する能力と、新たな血管の成長を阻害する能力とが含まれる。
【０３１９】
レナリドマイド（レブリミド）は、サリドマイドの誘導体であり、免疫調節化合物（ｌｍｉＤｓ）の第２世代を示す。これは、当初ＴＮＦアルファの阻害剤として開発された。レナリドマイドの効果には、増殖停止又はアポトーシス、骨髄間質細胞への骨髄腫細胞付着の抑止、及び骨髄腫細胞の細胞増殖、生存、薬物耐性を促進するサイトカインの調整が含まれる（Ｍｏｒｇａｎら、２００６）。レナリドマイドは、サリドマイドに対して不応である患者に有効である。免疫細胞への効果に加えて、レナリドマイドなどのｌｍｉＤｓは、Ｇ０／Ｇ１フェーズにおいて細胞周期休止を生じさせることが示唆されている。更に、ｌｍｉＤｓは、細胞接着レセプター（ＶＬＡ−４、ＶＬＡ−５、ＣＤ１３８）をダウンレギュレートすると考えられている（Ｑｕａｃｈら、２０１０）。
【０３２０】
ＣＤ１３８のダウンレギュレーションが、ＢＴ０６２などの如何なるＣＤ１３８標的剤による標的細胞への結合減少を生じさせることが予期される。
【０３２１】
プロテアソーム阻害剤は、更なるサブクループへ分類することができる。
ａ）天然起源ペプチド誘導体。これは、Ｃ末端エポキシケトン構造、ベータラクトン誘導体、アクラシノマイシンＡ、ラクタシスチン、クラストラククタシスチンを有する。
ｂ）合成阻害剤（修飾ペプチドアルデヒド、アルファ、ベータエポキシケトン構造、ビニルスルホン、ホウ酸残基、ピナコールエステルを含む。本発明の好適なプロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブである（ＰＳ３４１；ベルケイド、以下の考察を参照）。提案されたメカニズムのうちの１つでは、プロテアソーム阻害がプロアポトーシス因子の分解を防止し、プロアポトーシス経路の抑制に依存する新生細胞におけるプログラム細胞死の活性化を許可することが示唆されている。加えて、ボルテゾミブは、Ｇ２／Ｍ細胞周期休止を生じさせる（Ｗａｎｇら、２００９）。かくしてボルテゾミブは、本発明の免疫複合体の一部である抗分裂剤に干渉する可能性がある。例えば、この細胞周期フェーズでも作用するマイタンシノイドＤＭ４の効果に干渉する可能性がある。更に、アポトーシスに貢献するＰＡＲＰ（ポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ）開裂は、ＤＭ４及びボルテゾミブによっても影響される。したがって、抗分裂剤を有する免疫複合体とボルテゾミブの特徴を呈するプロテアソーム阻害剤との組み合わせは、相乗効果を得るために事前に示された一般指針に準拠しない（Ｔａｋｉｍｏｔｏら、２００９）。
【０３２２】
ベルケイド（ボルテゾミブ）は、多発性骨髄腫の治療に用いられるプロテアソーム阻害剤である。ベルケイド、骨髄腫細胞に作用することによって細胞死を生じさせる、及び／又は間接的に作用すると共に骨微小環境に作用することによって骨髄腫細胞成長及び生存を阻害すると考えられている。特定の理論又は作用機構に限定されることなく、かくしてベルケイドは、正常な細胞プロセスを混乱させ、この結果プロテアソーム阻害を生じさせてアポトーシスを促進する。
【０３２３】
デキサメサゾンは、合成グルココルチコイドステロイドホルモンであり、これは、抗炎症及び免疫抑制剤として作用する。癌患者に投与されると、デキサメサゾンは癌治療の副作用を中和し得る。デキサメサゾンは、単体で又は他の抗癌剤と共に与えられ得る。この抗癌剤には、サリドマイド、レナリドマイド、ボルテゾミブ、アドリアマイシン又はビンクリスチンが含まれる。
【０３２４】
ＢＴ０６２と組み合わせて使用され得る治療物質には、免疫調節剤（例えば、サリドマイド、及びレナリドマイド、及びポマリドマイド）、プロテアソーム阻害剤（例えば、ボルテゾミブ及びカーフィルゾミブ）、ステロイド（例えば、デキサメサゾン）、アルキル化剤及び高用量化学療法、組み合わせ（例えば、メルファラン及びプレドニゾン（ＭＰ）、ビンクリスチン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、及びデキサメサゾン（ＶＡＤ））、及びビスホスホネートも含まれる。
【０３２５】
“と組み合わせて”という用語については、完全な同時投与に限定されない。その代わりにこの用語には、本発明の免疫複合体と他の形態（例えば、放射線療法）又は物質、特に上述の細胞毒性剤とが、一緒に作用して利益（例えば、活性の増加、副作用の減少）を提供するように順次且つある時間内に包括的に投与されることを含む。ここでこの利益は、本発明の免疫複合体のみ又は、例えば、他の物質若しくは複数物質による治療と比して、増加される。免疫複合体と他の物質又は複数物質とが相加的に作用することが好ましい。特に、これらが相乗的に作用することが好ましい。そのような分子は、意図する目的について有効となる量で適宜提供される。熟練した医療従事者であれば、経験的に又は物質の薬物動態及び作用機構を考慮することにより、各治療剤の適切用量を決定することができる。並びに、投与の適切なタイミングと方法とを決定することができる。本発明の場合において使用されているように、“同時投与”とは、免疫複合体と同時の投与を意味する。これについては、しばしば、組み合わせた投与量形態での投与である。
【０３２６】
相乗効果は、免疫複合体及び細胞毒性剤などの２つの成分の効果であり、厳密な相加的効果を上回る。このような相乗効果は、以下で更に考察される数多くの要因によって中和される可能性がある。
【０３２７】
相乗効果は、以下のようにして計算されている（Ｙｕら、２００１；Ｇｕｎａｒａｔｎａｍら、２００９）。
比率（ｒ）＝予期されるＦＴＶ（組み合わせ）／観察されるＦＴＶ（組み合わせ）
ＦＴＶ：断片腫瘍体積＝平均腫瘍体積（テスト）／平均腫瘍体積（コントロール）
【０３２８】
比率＞１は、相乗効果的とみなされ、ｒ＜１は、相加的未満となる。
【０３２９】
１より大きいとき比率（ｒ）は、本明細書の場合“シナジー比”と称される。
【０３３０】
“活性評価”は、組み合わせの効果の他の測定法である。この評価は、Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌに基づく。
Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ＝（Ｔ−Ｃ）／Ｔｄ×３．３２
ここで、（Ｔ−Ｃ）、すなわち腫瘍成長遅延、は、治療グループ（Ｇ）及び対照グループ（Ｃ）の腫瘍が所定サイズ（６００ｎｍ３）に到達するために必要な日数による平均時間である。Ｔｄは、腫瘍倍加時間であり、これは、コントロールマウスにおける平均腫瘍体積に基づき、３．３２は、細胞増殖のｌｏｇ当たりの細胞倍加数である。（Ｂｉｓｓｅｒｙら、１９９１）。Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌが２．８より高いとき、これは、組み合わせが高活性であることを示す。Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌが２．０から２．８であるとき、これは、組み合わせが非常に活性的であることを示す。Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌが１．３から１．９であるとき、これは、組み合わせが活性的であることを示す。Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌが０．７から１．２であるとき、これは、組み合わせがやや活性的であることを示す。Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌが０．７未満であるとき、これは、組み合わせが不活性であることを示す。
【０３３１】
薬剤組み合わせパートナーの選択
併用化学療法計画を設計するためのガイドラインセットが開発されている（Ｔａｋｉｍｏｔｏ、２００６）。これらガイドラインを遵守することにより、単剤療法の場合と比して、特定の組み合わせによって併用化学療法の最重要な３つの理論的利点のうちの少なくとも１つが実現される可能性が一般的に高まる。
１）非妨害用量制限毒性の物質を用いることによりｃｅｌｌ  ｋｉｌｌを最大化し、一方でホスト毒性を最小化する
２）特定タイプの治療に対する内因性抵抗と共に、腫瘍細胞に対する薬剤活性範囲を増加させる
３）新たな耐性腫瘍細胞の発達を防止又は遅らせる
【０３３２】
併用化学療法計画で使用する物質を選択するために考慮すべき推奨原理には、以下のものが含まれる。
ａ）単剤として完全寛解を誘発することが知られている薬剤を選択する
ｂ）異なる作用機構を有すると共に相加的又は相乗的細胞毒性効果を有する薬剤の選択を組み合わせる
ｃ）異なる用量制限毒性を有する薬剤を選択する
ｄ）異なる耐性パターンを有する薬剤を選択することにより、交差耐性を最小化する
【０３３３】
更に、薬剤を最適な用量及びスケジュールで投与する（ｅ）。投与を一定間隔で実施する一方で、無治療期間を最小限にすることで正常組織の回復を可能にする（ｆ）（Ｔａｋｉｍｏｔｏら、２００９）。
【０３３４】
相乗効果又は相加効果そのものは、様々な要素によって中和され得る。例えば、抗癌組合せ剤の成分は、例えばそれぞれを結合することによりそれぞれを不活性化させる場合がある。更に、抗癌組合せ剤の１成分が、他の成分の作用機構に干渉する可能性もある。例えば、レナリドマイドは、本発明の免疫複合体の標的であるＣＤ１３８などの細胞結合レセプターをダウンレギュレートする（Ｑｕａｃｈら、２０１０）。プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブは、Ｇ２／Ｍ細胞周期停止を生じさせる（Ｗａｎｇら、２００９）。ここでこの細胞周期停止は、抗分裂剤によっても影響される。かくして、免疫複合体のエフェクター分子がメイタンシノイドである場合、それは作用の標的をボルテゾミブと分かち合うことになり、これについては不利益と考えられている。
【０３３５】
本発明による投与用量、経路及び細胞毒性剤の推奨使用方法は、癌治療において広く用いられており、当該技術分野で知られていると共に、医師用添付文書集（ＰＤＲ）などの文献においても説明されている。ＰＤＲでは、様々な癌の治療において用いられている物質の用量が開示されている。投与計画及び有効なこれら細胞毒性剤の用量については、特定の治療対象癌、病気の程度、及び当該技術分野の当業者である医師にとって明らかな他の要素に依存すると共に、これらについては、医師によって決定され得る。医師用添付文書集（ＰＤＲ）の２００６年度版では、サリドマイドについて、作用メカニズム、好適な治療用量、及び投与計画が開示されている（ｐ９７９から９８３）。また、ベルケイド（ｐ２１０２から２１０６）及びメルファラン（ｐ９７６から９７９）についても開示されている。当業者は、ＰＤＲを再調査し、以下のパラメータのうちの１以上を使用して、投与計画及び化学療法薬剤及び複合体の用量を決定することができる。ここでこの化学療法薬剤及び複合体は、本発明の教示に従って使用され得る。
【０３３６】
これらパラメータには、以下のものが含まれる。
１．ａ）製造者、ｂ）製品（会社の又は商標薬剤名）、ｃ）カテゴリーインデックス（例えば、“プロテアソーム阻害剤”、“ＤＮＡアルキル化剤”、“メルファラン”など）、ｄ）一般的／化学的インデックス（非商標であって一般的な薬剤名）による総合インデックス
２．薬のカラー画像
３．ＦＤＡラベリングに合致した製品情報。これには、ａ）化学的情報、ｂ）機能／作用、ｃ）適応症及び禁忌、ｄ）試験研究、副作用、警告が含まれる。
【０３３７】
当業者によって予期されるように、免疫複合体ｎＢＴ０６２の好適な改変された標的抗体部分のアミノ酸配列については、ＣＤ１３８を標的とする抗体部分の機能性を失うことなく変化させることができる。これについては、特に、それぞれ抗原結合領域（ＡＢＲ）のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基９９から１１１を有する重鎖可変領域ＣＤＲ３、及びＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残基８９から９７を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ３の際、当てはまる。好都合なことに、それぞれ抗原結合領域（ＡＢＲ）のＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１のアミノ酸残基３１から３５及び５１から６８を有する重鎖可変領域ＣＤＲ１及びＣＤＲ２、及び（ｂ）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２のアミノ酸残基２４から３４及び５０から５６を有する軽鎖可変領域ＣＤＲ１及びＣＤＲ２の少なくともいずれかをも維持される。
【０３３８】
“配列相同性”という用語は、ヌクレオチド配列又はアミノ酸配列の同一性の尺度を示している。一般的に、最も高い順序合致が得られるように配列が調整される。“相同性”は、それ自体で、当該技術分野における意味を認識しており、公開されている技術を用いて計算され得る（例えば、以下のものを参照：Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｌｅｓｋ、Ａ．Ｍ．、ｅｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ、Ｓｍｉｔｈ、Ｄ．Ｗ．、ｅｄ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，ＰａｒｔＩ、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．  Ｍ．、ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ、Ｈ．Ｇ．、ｅｄｓ．、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ、Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７；及びＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ、Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ、Ｊ．、ｅｄｓ．、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１）。２つのポリヌクレオチド又はプロペプチド配列間の相同性を測定する方法が数多く存在する一方で、“相同性”という用語は当業者に良く知られている（Ｃａｒｉｌｌｏ、Ｈ．  ＆  Ｌｉｐｔｏｎ、Ｄ．、ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ  ４８：１０７３（１９８８））。
【０３３９】
ある特定の核酸分子が例えばｎＢＴ０６２核酸配列又はその一部に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％一致するかどうかという点は、従来方法によると既知のコンピュータプログラムを用いることにより決定することができる。このプログラムには、初期配列アラインメント用のＤＮＡｓｉｓソフトウェア（日立ソフトウェア、Ｓａｎ  Ｂｒｕｎｏ、Ｃａｌｉｆ．）、続いて多重配列アラインメント用のＥＳＥＥ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．０  ＤＮＡ／ｐｒｏｔｅｉｎ  ｓｅｑｕｅｎｃｅソフトウェア（ｃａｂｏｔ＠ｔｒｏｇ．ｍｂｂ．ｓｆｕ．ｃａ）などがある。
【０３４０】
アミノ酸配列が例えばＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１又はＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２、若しくはその一部、に対して少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％一致するかどうかという点は、従来方法によると既知のコンピュータプログラムを用いることにより決定することができる。このプログラムには、ＢＥＳＴＦＩＴプログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ８  ｆｏｒ  Ｕｎｉｘ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐａｒｋ、５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒｉｖｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．５３７１１）などがある。ＢＥＳＴＦＩＴでは、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ２：４８２−４８９（１９８１）のローカルホモロジーアルゴリズムが使用されており、これにより２つの配列間の相同性の最良セグメントを発見する。
【０３４１】
本発明によると、ＤＮＡｓｉｓ、ＥＳＥＥ、ＢＥＳＴＦＩＴ又はその他の配列アラインメントプログラムを用いて、例えば、特定配列が参照配列に対して９５％一致しているか否かを決定する場合、同一性割合が参照核酸又はアミノ酸配列の全ての長さに亘って計算されると共に参照配列における総ヌクレオチド数の最大５％の相同性の差が許容されるように、パラメータが設定される。
【０３４２】
本発明の場合、特定配列の残渣の組み合わせに対するある配列同一性が参照される場合、この配列同一性は、指定された残渣の総数を示す。
【０３４３】
上述のようにＢＴ０６２は、リンカー、この場合ＳＰＤＢ、を介して細胞増殖抑制メイタンシノイド誘導体ＤＭ４へ結合されたＣＤ１３８ターゲティングキメラ抗体ｎＢＴ０６２を有する免疫複合体である。ＢＴ０６２の化学的表現が、図１及び図２に示されている。ｎＢＴ０６２及びメイタンシノイドエフェクター分子を有する免疫複合体の特徴は、多くの場合それらのリンカーに関するものであり、例えば、ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１などのメイタンシノイドエフェクターは、ｎＢＴ０６２、ＳＭＣＣ（チオエステル結合を含む“非切断可能”リンカー）及びＤＭ１をエフェクターとして含む免疫複合体である。より一般的には、ｎＢＴ０６２を含む免疫複合体及びエフェクター分子は、ｎＢＴ０６２リンカーエフェクター又は単にｎＢＴ０６２エフェクター（ｎＢＴ０６２Ｎの場合、Ｎは本明細書において説明される任意エフェクターである（米国特許公開第２００９０２３２８１０号も参照））としても説明され得る。
【０３４４】
一実施の形態においては、ＢＴ０６２は、ＣＤ１３８陽性多発性骨髄腫細胞に結合する。標的細胞によって免疫複合体が内部移行及び／又は放出されると、ＤＭ４が標的分子から放出され、これによりＤＭ４の元来の細胞毒性能が復元される。かくしてＢＴ０６２によって、標的抗体ペイロード（ＴＡＰ）が提供される。ここでＤＭ４のｎＢＴ０６２への機能的結合により、それがＣＤ１３８発現標的細胞へ到達／内部移行されるまで細胞毒性薬剤が不活性化される。
【０３４５】
本明細書で考察される多発性骨髄腫細胞及び動物モデルにおけるＢＴ０６２の細胞毒性非を調査する非臨床研究からのデータによると、ＢＴ０６２が、マウスモデルにおいて良好に許容される用量で非常に高く有意な抗骨髄腫活性を有することが示されている。
【０３４６】
フェーズＩにおけるオープンラベルで用量増加の繰り返し単回投与試験が、再発性又は再発性／難治性多発性骨髄腫の患者について実施されている。
【０３４７】
本明細書において開示されている免疫複合体は、任意経路で投与され得る。この経路には、静脈的、非経口的、経口的、筋肉内的、髄腔内的、又はエアロゾルとしてのものが含まれる。送る方法は、所望の効果に依存することになる。当業者によれば、特定治療における投与の最適な経路が、本発明に従って容易に理解される。適切な用量は、投与ルートと指示される治療とに依存することになると共に、当業者により現在の治療プロトコルに鑑みて容易に決定され得る。
【０３４８】
本発明の免疫複合体及び更なる細胞毒性剤の少なくともいずれかを有効成分として含有する医薬組成物は、従来の医薬配合技術によって調製可能である。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７ｔｈ  Ｅｄ．（１９８５、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．）を参照されたい。通常、有効成分の有効量は、薬学的に許容される担体と混ぜられる。キャリアは、投与に望ましい調製形態におうじて様々な形態をとり得、例えば、静脈内、経口、非経口、髄腔内、経皮、又はエアロゾルによるものなどである。
【０３４９】
本発明の抗癌組合せ剤は、好ましくは、医薬組成物の形態又は異なる容器において抗癌組合せ剤の成分を含有するキットの形態に成り得る。キットの成分は、通常それぞれに組み合わされて投与される。しばしばこれらは、組み合わされた薬剤形態又は別々の薬剤形態のいずれかで同時投与される。このようなキットには、例えば、他の成分、当該成分を投与するためのデバイス若しくは組み合わせ、当該成分を組み合わせるためのデバイス、及び当該成分の使用及び投与方法のインストラクションの少なくともいずれかをも含まれ得る。
【０３５０】
経口投与の場合、免疫複合体及び細胞毒性剤の少なくともいずれかが、固形又は液体製剤へ処方され得、これには、カプセル、ピル、タブレット、トローチ、融成物、パウダー、懸濁剤又は乳剤などがある。経口投与形態で当該組成物を調製する際、通常の製剤媒体のうちの任意のものが用いられる場合があり、これには、例えば経口液体製剤の場合、水、グリコール、オイル、アルコール、着香料、防腐剤、着色剤及び沈殿防止剤などがある（例えば、懸濁液、エリキシル剤及び溶剤など）。若しくは経口固体製剤の場合、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、及び崩壊剤などのキャリアがある（例えば、パウダー、カプセル及びタブレットなど）。投与しやすさの点から、タブレット及びカプセルが最も有利な経口投与ユニット形態であり、この場合固体医薬キャリアが確実に用いられる。所望であれば、タブレットは標準的な技術によって糖衣又は腸溶性のものに加工される。活性薬剤は、胃腸管通過時に安定している必要がある。必要であれば、安定通過に最適な物質が使用され得、これには、文献において説明されるリン脂質又はレシチン誘導体、並びにリポソーム、微小粒子（マイクロスフェア及びマクロスフェアを含む）が含まれる場合がある。
【０３５１】
非経口投与の場合、免疫複合体及び細胞毒性剤の少なくともいずれかが、製薬キャリアに溶かされ、溶剤又は懸濁剤として投与される場合がある。適したキャリアとして例示されるものは、水、生理食塩水、リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、デキストロース溶液、フルクトース溶液、エタノール、又は動物由来、植物由来又は合成由来の油である。このキャリアには、他の原料をも含み得る。例えばこの原料としては、防腐剤、沈殿防止剤、溶解補助剤、及び緩衝剤などがある。非抱合型標的剤、免疫複合体及び細胞毒性剤の少なくともいずれかが側脳室内に又は髄腔内に投与されると、これらは脳脊髄液にも溶け得る。
【０３５２】
対象に投与された投薬量は、当該対象の表面積当たりの量として指定される場合がある（この対象には、ヒト並びに非ヒト動物も含まれる）。この投薬量は、そのような対象に対して、約５ｍｇ／ｍ２から約３００ｍｇ／ｍ２に限定されるわけではないが好ましくは、約１０ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約４０ｍｇ／ｍ２、約５０ｍｇ／ｍ２、約６０ｍｇ／ｍ２、約８０ｍｇ／ｍ２、約１００ｍｇ／ｍ２、約１２０ｍｇ／ｍ２、約１４０ｍｇ／ｍ２、約１５０ｍｇ／ｍ２、約１６０ｍｇ／ｍ２、及び約２００ｍｇ／ｍ２の量で投与され得る。免疫複合体は、一度に又は一連の治療を通して適切に投与される。複数の用量形態では、これらの量が１日に１度、１週間に１度、又は２週間に１度投与される場合がある。投薬量に対して単一高用量を加える、又は交互に短い間隔で定量量を投与した後長い間隔で区切られた用量を投与する方法は、本発明の好適な一実施形態である。好ましい実施の形態においては、投薬のタイミングが対象ごとに調整され、これにより２度目の治療及びそれ以降の治療の少なくともいずれかの前に十分の時間が経過する。これにより、以前の投薬が十分に代謝される一方で、対象のシステムに存在する免疫複合体の量は、未だ腫瘍成長を阻害する、遅らせる及び／又は防止するのに十分である。典型的な“繰り返し単回投与”計画には、各３週間ごとに１度だけ約１０、２０、４０、６０、８０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０又は２００ｍｇ／ｍ２の免疫複合体の用量を投与することが含まれる。その代わりとしては、例えば１６０ｍｇ／ｍ２の高初期用量の後、例えば約２０ｍｇ／ｍ２の１、２又は３週間ごとの維持用量が続く場合もある。この他の組み合わせは、当業者によって容易に確認され得る。しかしながら、他の投薬計画が便利な可能性もある。この治療の進行は、既知の技術及び分析方法によって容易に監視される。特に投薬量は、予防又は治療目的でこれらが投与されるのかという点、以前の治療コース、患者の臨床履歴、患者の病状、患者の腫瘍細胞量、患者の遺伝的素因、患者の合併症、最初の治療及び標的剤／免疫複合体に対する奏効後の病期、患者が経験した副作用、及び主治医の裁量に応じて変化する。
【０３５３】
一実施形態において本発明は、急速な血漿クリアランスが存在する場合の低用量投与形態を対象としており、他の実施形態においては、本明細書で説明されるように免疫複合体投与のための急速な血漿クリアランスが存在しない場合の低用量投与形態を対象としている。第１の形態によって提供されるのは、一般的に、任意の３週間間隔（周期）において、１６０ｍｇ／ｍ２未満であり、好ましくは最大約１２０ｍｇ／ｍ２、最大約１００ｍｇ／ｍ２、最大約８０ｍｇ／ｍ２、これには、最大約４０ｍｇ／ｍ２、好ましくは最大約２０ｍｇ／ｍ２、更に好ましくは最大約１０ｍｇ／ｍ２が含まれる。１０ｍｇ／ｍ２から１２０ｍｇ／ｍ２の範囲については、毎日の平均容量が約４７５μｇ／ｍ２から約５．７１ｍｇ／ｍ２、又は毎週の平均容量が約３．３３ｍｇ／ｍ２から約４０ｍｇ／ｍ２ということになる。かくして、約５００μｇ／ｍ２、約１ｍｇ／ｍ２、約２ｍｇ／ｍ２及び約３ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２を含む約４００μｇ／ｍ２から約５．７１ｍｇ／ｍ２という毎日の平均容量は、本発明の一部である。約５ｍｇ／ｍ２、約１０ｍｇ／ｍ２、約１５ｍｇ／ｍ２、約２０ｍｇ／ｍ２、約２５ｍｇ／ｍ２、約３０ｍｇ／ｍ２又は３５ｍｇ／ｍ２を含む約３ｍｇ／ｍ２から約４０ｍｇ／ｍ２という毎週の平均容量についても、同様である。この低用量投与スキームは、初期消失フェーズにおける急速な血漿クリアランスに関連し、すなわち、投与後最大２時間における投与中の如何なる時にでも完了される。この低用量投与形態と他の低用量形態とを区別するものは、急速な血漿クリアランスであり、これは、理論的最高血中濃度の好ましくは５５％未満、５０％未満、４０％未満又は３０％未満である期間中の測定最高血中濃度によって定義される。
【０３５４】
低用量投与形態は、高いレベルでは、急速とはいえない血漿クリアランスを伴う。すなわち、理論的最高血中濃度の５５％、しばしば６０％、７０％、８０％又は９０％を超える血漿クリアランスを伴う。この血漿クリアランスを、本明細書では並みの血漿クリアランス（理論的最高血中濃度の５５％以上８０％未満）又は遅い血漿クリアランス（理論的最高血中濃度の８０％以上）と称する。このようなクリアランスでは、驚くべきことに、血漿における免疫複合体の濃度が比較的高いのにも関わらず、このような投与形態が未だ許容毒性と関連付けられていることが分かった。これは、ＣＤ１３８を発現する非標的細胞、例えば如何なる治療の標的でもない上皮などの重要臓器の細胞、におけるＣＤ１３８の発現レベルがＣＤ１３８においても比較的高いという事実にも関わらずということである（ＣＤ１３８抗体ＢＢ４についての免疫組織化学分析により、上皮に対するこの抗体の反応性がＭＭ患者血漿細胞の反応性に合致する旨が示された（米国特許公開２００７０１８３９７１））。免疫組織化学分析において同じスコア（例えば、上記の例と同様に３のプラス）を生成する標的及び非標的細胞におけるＣＤ１３８の発現レベルは、本明細書では同等の発現レベルと称されると共に、本発明の一部である。他の実施形態では標的細胞における発現レベルは、実際には一貫して上皮のレベルより低かった（例えば、上皮については３のプラスの一方で、１又は２のプラス）。一部の腫瘍標的細胞は、混在発現レベルを呈する。つまり、一部の細胞がプラス２の発現レベルを有し、一部がプラス３の発現レベルを有するなどである。細胞の代表数の平均（１００のランダムにサンプルされた細胞など）により、これら対象腫瘍標的細胞が上皮と同等又はそれ未満の発現レベルを有しているという定義下にあるか否かが決定される。これら治療レジメンは、一般的に任意の３週間間隔（周期）において１２０ｍｇ／ｍ２より大きく２００ｍｇ／ｍ２より低い。これは、１日の用量が約５．７１ｍｇ／ｍ２から約９．５２ｍｇ／ｍ２である、又は週ごとの平均用量が約４０ｍｇ／ｍ２から約６６．６７ｍｇ／ｍ２であるということになる。
【０３５５】
患者００１−００６に関し、この患者の疾患は治療終了後になって進行したことが注目された。これは、ＢＴ０６２投与の有効性を示している（図２５）。
【０３５６】
“繰り返し単回投与”とは、一連の投与を意味しており、ここで、投与に続く投与については、これに先立つ投与とは独立したものとみなされる。かくして、この場合、対象血液における免疫複合体レベルは、各回投与後に同等であるとみなすことができる。免疫複合体が投与されるたびに、同等レベルの免疫複合体が当初から血中に存在することが予期される。
【０３５７】
繰り返し単回投与の“単回投与”間の投与間隔は、ＢＴ０６２、ＩｇＧ４の場合、免疫複合体のアイソタイプの理論的に計算された半減期に応じて定義される。
【０３５８】
一般的に、治療抗体の半減期は、主に抗体の特性／その構造的特性（例えば、Ｆｃレセプターに対する結合）及び標的に依存する。例えば、新生児レセプターＦｃＲｎへのＦｃ部分の結合親和性は、半減期に影響を与える。エンドソームにおけるＦｃＲｎへ結合することにより、抗体はリソソーム分解からサルベージされて循環に再利用された。これにより、半減期が延長される。ＩｇＧ４については、１５．６（＋／−４．５）日の半減期（Ａｌｙａｎａｋｉａｎら、２００３；Ｓａｌｆｅｌｄら、２００７）が報告されている。本明細書において参照される研究では、３週間の投与間隔を有する“繰り返し単回投与”が選択されている。しかし、約３週間、約４週間、更に約５又は約６週間についても、繰り返し単回投与の代替間隔となる。“約”というのは、３週間の場合＋／−９６時間を、４から６週間の場合＋／−１２０時間を意味している。
【０３５９】
治療の進度は、既知の技術及び分析方法によって簡単に監視される。投薬量は、特にこれらが予防又は治療目的で投与されているのかという点、以前の治療コース、患者の臨床履歴、患者の病状、患者の腫瘍細胞量、患者の遺伝的素因、患者の合併症、最初の治療及び標的剤／免疫複合体に対する奏効後の病期、患者が経験した副作用、及び主治医の裁量に応じて変化する場合がある。
【０３６０】
低用量形態の利点は、広範囲にわたる。しかしながら、最も重要と思われる利点は、有害な副作用のリスクを最小化することである。免疫複合体は、一般的に標的及び正常細胞間の繊細な区別を許可し、この結果ほとんどの従来化学療法剤の場合と比べて毒性副作用が少なくなる。その一方で多くの免疫複合体は、全く副作用がないとは未だ言えない状態である。優れたターゲティングであるのにも関わらず、一般的に対象の抗原が非癌細胞にも発現し、治療中にこの細胞が崩壊すると有害な副作用が起こり得る。ＣＤ１３８の場合当該抗原が、特に上皮細胞に発現する。更に免疫複合体は、体内において標的細胞内又は標的細胞における進行とは関係のない処理を経る可能性があり、ある割合のエフェクター分子が標的細胞から離れた場所から放出され、有毒性の副作用が生じる可能性がある。
【０３６１】
驚くべきことに、本発明の免疫複合体は、臨床的に受容可能な毒性を呈する一方で、低用量で有効であることが示されている。本発明における低用量とは、最大２００ｍｇ／ｍ２の用量を意味する。最大少なくとも１２０ｍｇ／ｍ２の用量である一方で、如何なる場合でも１６０ｍｇ／ｍ２未満の用量で、本発明の試験対象免疫複合体は、ヒト対象において急速な血漿クリアランスを呈した。表７及び８には、観測されたクリアランスが示される。
【０３６２】
【表７】
2016053053.tif 000008
【０３６３】
【表８】
2016053053.tif 000009
【０３６４】
治療されたヒト対象の血漿におけるＢＴ０６２の半減期は、カニクイザル（複数日）及び生体外のヒト血漿（１４日）において観測された血漿半減期よりも非常に低かった。しかしながら、免疫複合体は、２０ｍｇ／ｍ２ほどの低用量で投与された場合であっても、ヒト対象において未だ効果を示した。この事実は、加速する腫瘍ターゲティング及び腫瘍細胞結合を示唆し、その結果効果が増加する。本発明の免疫複合体のこの特性は、抗体／標的分子のＩｇＧ４アイソタイプから生じている可能性がある。
【０３６５】
上述したように、治療対象ＭＭ患者の血漿からの珍しい急速クリアランスが、早期の消去フェーズ（注入中及び注入後約０時間から２時間）において観測され、これに、最大１２０ｍｇ／ｍ２の用量で全体的に正常な端末消去フェーズが続く。この一方で、より一般的なクリアランスプロファイルが、１６０ｍｇ／ｍ２及び２００ｍｇ／ｍ２（３患者）で４人の患者全てに対して観測された。その一方で、クリアランスは、未だ理論最大血中濃度未満であった。加えて、早期の消去フェーズにおいて急速血漿クリアランスを呈した投与形態では（例えば、２０、４０、８０及び１２０ｍｇ／ｍ２）、観測されたのは早期の消去フェーズにおける急速血漿クリアランスだけではなく、奏効（尿Ｍ蛋白質の減少）も観測された。これには、繰り返し単回投与後に５０％超の尿Ｍ蛋白質の減少において示された奏効が含まれる（図２４）。
【０３６６】
図１７は、４０ｍｇ／ｍ２から１２０ｍｇ／ｍ２範囲の用量に対する急速血漿クリアランスを示している。一方で、ここで１６０ｍｇ／ｍ２の用量として説明されている高用量では、理論値に近い血漿クリアランスが示された。２０ｍｇ／ｍ２の用量で観測される血漿クリアランスについては、図２７を参照されたい。図１８では、ＢＴ０６２血漿プロファイルが、同等の用量で治療されたサルのプロファイルと比較されている。この比較により、低用量における急速血漿クリアランスは、利用可能な動物モデルから推測することができず、人間に特異なものであると考えられることが明らかになった。図２２では、急速血漿クリアランスが溶解性ＣＤ３８により生じる緩衝効果に起因し得ないことが明らかになった。図１９では、理論最大血中濃度に対するＢＴ０６２の測定最大血中濃度が示されている。
【０３６７】
例えば他の免疫複合体の投与スキームと比べると比較的低用量であるが１６０ｍｇ／ｍ２などのより高い用量では、端末クリアランスプロファイルは正常により近く、これは理論最大血中濃度値により近い。しかしながら、血清におけるＦＬＣの急速な減少が、単一の投与後に観測され得た。これは、２回目、３回目及び４回目投与後の部分寛解において示された（図２６）。
【０３６８】
かくして、一実施の形態において本発明は、低用量投与形態を対象としている。これには、繰り返し単回投与形態などがあり、この場合奏効が観測され、好ましくは少なくともＭＲ、好ましくはＶＧＲＰ、ＣＲ、ｓＣＲ又はＰＲである。
【０３６９】
この発明は、低用量治療レジメンをも対象としており、これには、繰り返し単回投薬投与形態が含まれる。この場合、複数の治療サイクルに亘って病態安定が達成され、これは３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９又は２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００又はこれ以上の週に亘って続く。
【０３７０】
類似体及び誘導体
細胞毒性剤などの治療剤の当業者であれば、本明細書で説明されるこのような薬剤のそれぞれが改質され得ると共に、その際生じた化合物が開始化合物の特異性及び活性の少なくともいずれかを保持するようにすることが可能である旨が容易に理解されよう。当業者であれが、これらの化合物の多くが本明細書で説明される治療剤の代わりに使用され得ることも理解されよう。かくするにつき、本発明の治療剤には、本明細書で説明される化合物の類似体及び誘導体が含まれる。
【０３７１】
免疫複合体の使用を例示する目的で、いくつかの非限定的な応用をここに示して説明する。
【０３７２】
材料及び方法
キメラ抗体構築（ｃＢ−Ｂ４：ｎＢＴ０６２）
Ｂ−Ｂ４
既に特徴づけられたようなマウス抗体Ｂ−Ｂ４（Ｗｉｊｄｅｎｅｓら、Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．、９４（１９９６）、３１８）が、これらの実験において用いられた。
【０３７３】
Ｂ−Ｂ４及びｃＢ−Ｂ４／ｎＢＴ０６２のクローニング及び発現
標準的な遺伝子組み換えＤＮＡ技術が、テキスト本に詳述されているようにして実施された。このテキスト本には、例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ；２ｎｄ  Ｅｄ．（１９８９）、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、ＵＳＡなどがある。もしくは、キットを利用する場合はその製造者の指示により推奨される方法で実施された。マウス可変領域のＰＣＲクローニング及び改質は、標準のＰＣＲ法を用いて実施された。各結果セクションで示されるプライマーが使用されている。
【０３７４】
ｃＢ−Ｂ４／ｎＢＴ０６２の発現
１０％のＦＣＳ、５８０μｇ／ｍＬのＬ−グルタミン、５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペニシリン、及び５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭにて培養された指数関数的に成長するＣＯＳ細胞が、トリプシン処理及び遠心分離によって収集された後、ＰＢＳにおいて洗浄された。細胞が、ＰＢＳにおいて再懸濁され、終濃度が１×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬとなった。７００μＬのＣＯＳ細胞懸濁液が、ジーンパルサーキュベットへ移され、重鎖及びカッパ軽鎖発現ベクターＤＮＡ（各１０μｇ又は１３μｇのスーパーベクター）と混ぜられた。細胞は、１９００Ｖ、２５μＦでバイオ・ラッドジーンパルサーを用いて電気穿孔された。転換細胞は、１０％のガンマグロブリン・フリーＦＢＳ、５８０μｇ／ｍＬのＬ−グルタミン、５０ｕｎｉｔｓ／ｍＬのペニシリン、及び５０μｇ／ｍＬのストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭで７２時間培養された後、抗体含有細胞培養上清が収集された。
【０３７５】
ＥＬＩＳＡを捕獲しｃＢ−Ｂ４／ｎＢＴ０６２の発現レベルを測定
９６のウェルプレートが、ＰＢＳで希釈された０．４μｇ／ｍＬヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体の１００μＬアリコートでコートされた（４℃、一晩）。プレートは、２００μＬ／ｗｅｌｌの洗浄バッファ（ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄された。ウェルは、ＰＢＳにおいて０．２％ＢＳＡ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０でブロックされた後、分泌された抗体を含む２００μＬの細胞培養上清が追加された（３７℃１時間の培養）。当該ウェルは、洗浄バッファで６回洗浄された後、ヤギ抗ヒトカッパ軽鎖ペルオキシダーゼ複合体を有する結合抗体が検出された。
【０３７６】
細胞培養上清からのｃＢ−Ｂ４／ｎＢＴ０６２の精製
ｃＢ−Ｂ４抗体が、ＰｒｏｔｅｉｎＡ  ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ  Ｐｌｕｓキット（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を用いその製造者の推奨に従って、転換ＣＯＳ７細胞の上清から精製された。
【０３７７】
ｃＢ−Ｂ４結合及び拮抗実験
ＣＤ１３８へのＢ−Ｂ４及びｃＢ−Ｂ４の結合活性の分析が、Ｄｉａｃｌｏｎｅ（Ｂｅｓａｎｃｏｎ、Ｆｒａｎｃｅ）のｓＣＤ１３８キットを用いその製造者の推奨に従うと共に結果セクションに説明された変化を考慮して実施された。
【０３７８】
ＲＮＡ調製及びｃＤＮＡ合成
ハイブリドーマＢ−Ｂ４細胞が、Ｑｉａｇｅｎ  Ｍｉｄｉキット（Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて育成及び処理された。これにより、製造者のプロトコルに従ってＲＮＡを単離した。約５μｇのＢ−Ｂ４ＲＮＡが逆転写を経てＢ−Ｂ４ｃＤＮＡを生成した。ここでは、製造者のプロトコルに従ってＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）  １ｓｔ  ｓｔｒａｎｄ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキットを用いた。
【０３７９】
Ｂ−Ｂ４免疫グロブリンｃＤＮＡのクローニング
免疫グロブリン重鎖（ＩｇＨ）ｃＤＮＡが、ＰＣＲによって増幅された。ここでは、ＩｇＨプライマーＭＨＶ７（５’−ＡＴＧＧＧＣＡＴＣＡＡＧＡＴＧＧＡＧＴＣＡＣＡＧＡＣＣＣＡＧＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３］とＩｇＧ１定常領域プライマーＭＨＣＧ１（５’−ＣＡＧＴＧＧＡＴＡＧＡＣＡＧＡＴＧＧＧＧＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４］を用いた。同様にして、免疫グロブリン重鎖（ＩｇＬ）が、３つの異なるＩｇｋプライマーＭＫＶ２（５’−ＡＴＧＧＡＧＡＣＡＧＡＣＡＣＡＣＴＣＣＴＧＣＴＡＴＧＧＧＴＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：５］、ＭＫＶ４（５’−ＡＴＧＡＧＧＧＣＣＣＣＴＧＣＴＣＡＧＴＴＴＴＴＴＧＧＣＴＴＣＴＴＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：６］及びＭＫＶ９（５’−ＡＴＧＧＴＡＴＣＣＡＣＡＣＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：７］を用いて増幅された。ここでそれぞれのプライマーは、プライマーＭＫＣ（５’−ＡＣＴＧＧＡＴＧＧＴＧＧＧＡＡＧＡＴＧＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：８］と組み合わされて用いられた。全ての増幅物は、ＴＯＰＯ−ＴＡ  ｃｌｏｎｉｎｇキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）を用い製造者の指示に従って、ｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクターに直接連結された。
【０３８０】
連結したｐＣＲ２．１ベクター構成物で転換されたＥ．ｃｏｌｉＴＯＰ１０バクテリア（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）が、ＬＢ−アンピシリン−Ｘｇａｌ寒天平板において選択された。小規模培養が、単一白色コロニーで接種され、一晩生育された。プラスミドが、ＱＩＡｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐキットを用い製造者の指示に従って単離された。
【０３８１】
ｃＤＮＡ配列決定
プラスミドの配列が、ＢｉｇＤｙｅ  Ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｖ３．０  Ｃｙｃｌｅ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ  Ｒｅａｄｙ  Ｒｅａｃｔｉｏｎキット（ＡＢＩ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を用いて決定された。選択されたプラスミドのそれぞれの配列が、ＧｅｎｅＡｍｐ９６００ＰＣＲマシンで循環される１２１０及び１２３３プライマーを用いて両方向で決定された。電気泳動配列解析が、ＡＢＩキャピラリーシーケンサーにおいて行われた。
【０３８２】
ＲＴ−ＰＣＲ、クローニング及びＤＮＡ配列分析の完全サイクルが繰り返され、各免疫グロブリン鎖について配列情報の３つの完全に独立したセットが得られた。
【０３８３】
Ｂ−Ｂ４  ＶＫ  ＤＮＡ配列
第１のストランド合成が、３つの独立した反応で実施された。プライマーＭＫＣ及びＭＫＶ２（配列は既に説明済み）を用いて生成されたＰＣＲ生成物は、製造者の指示に従ってｐＣＲ２．１−ＴＯＰＯベクター中へ連結された。ＲＴ−ＰＣＲ反応の各独立セットからのクローンは、両方の方向で配列決定された。ＭＫＶ刺激生成物配列は、ＭＯＰＣ−２１、ＳＰ２及びＡｇ８（Ｃａｒｒｏｌｌら、Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２５（１９８８）、９９１；Ｃａｂｉｌｌｙら、Ｇｅｎｅ、４０（１９８５）；１５７）などの骨髄腫融合パートナー由来の無菌カッパトランスクリプトに非常に類似していたため、無視されていた。
【０３８４】
ＭＫＣと共にＭＫＶ４及びＭＫＶ９プライマーを用いるＰＣＲ生成物は、それぞれ類似しており、リーダー配列プライマー内の不安定位置においてのみ異なっていた。
【０３８５】
Ｂ−Ｂ４  ＶＨ  ＤＮＡ配列
第１のストランド合成が、３つの独立した反応で実施された。ＰＣＲ生成物が、クローン化されると共に、各第１のストランド生成物から配列決定された。５つのクローンが、各第１のストランドから配列決定された。
【０３８６】
キメラｃＢ−Ｂ４発現ベクターの構築
キメラ発現ベクターの構築には、ＶＨ及びＶＫへの適切なリーダー配列の追加が伴う。これには、ＢａｍＨＩ制限部位及びＫｏｚａｋ配列が先立つ。Ｋｏｚａｋコンセンサス配列は、可変領域配列の効率の良い翻訳にとって重要である。正しいＡＵＧコドンを定義する。このコドンから、リボソームは翻訳を開始することができる。また、単一の最も重要なベースは、ＡＵＧ開始の上流における位置−３のアデニン（又は、これより好ましいとは言えないが、グアニン）である。リーダー配列が、Ｋａｂａｔデータベースにおける最も類似した配列として選択される（Ｋａｂａｔら、ＮＩＨ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、１９９１）。これら付加物は、フォアワード（Ｆｏｒ）プライマー内でエンコードされる（両方とも、配列５’−ＡＧＡＧＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣＡＴＧＡＴＴＧＣＣＴＣＴＧＣＴＣＡＧＴＴＣＣＴＴＧＧＴＣＴＣＣ−３’［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：９］を有する；制限部位にアンダーラインが施される；Ｋｏｚａｋ配列が太字で表される）。更に、キメラ発現ベクターの構築には、ヒトガンマ１定常領域の５’フラグメントの導入が伴う。これは、天然ＡｐａＩ制限部位にまで至り、Ｂ−Ｂ４のＪ領域の３’末端に隣接する。また軽鎖の場合、スプライスドナー部位及びＨｉｎｄＩＩＩ部位の付与を伴う。スプライスドナー部位は、可変領域のその適切な定常領域に対する正しいインフレームアタッチメントにとって重要である。かくして、Ｖ：Ｃイントロンを切り出す。カッパイントロン＋ＣＫは、Ｂ−Ｂ４ＶＫ配列の下流における発現構成物においてエンコードされる。同様にして、ガンマ−４  ＣＨは、Ｂ−Ｂ４ＶＨ配列の下流における発現構成物においてエンコードされる。
【０３８７】
Ｂ−Ｂ４  ＶＨ及びＶＫ遺伝子は、最初に慎重に分析されることにより、如何なる不要なスプライスドナー部位、スプライスアクセプター部位、Ｋｏｚａｋ配列及び如何なる余分なサブクローニング制限部位の存在が特定された。ここでこのサブクローニング制限部位は、これ以降において、機能的全体抗体のサブクローニング及び発現の少なくともいずれかと干渉する。不要なＨｉｎｄＩＩＩ部位が、ＶＫ配列において発見された。このＶＫ配列は、ＰＣＲを介してアミノ酸配列を変えることなく特定部位の突然変異誘発によって必然的に取り除かれる。この反応の場合、オリゴヌクレオチドプライマーＢＴ０３（５’−ＣＡＡＣＡＧＴＡＴＡＧＴＡＡＧＣＴＣＣＣＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＴＧＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１０］及びＢＴ０４（５’−ＣＣＡＣＣＧＡＡＣＧＴＣＣＧＡＧＧＧＡＧＣＴＴＡＣＴＡＴＡＣＴＧＴＴＧ−３’）［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１１］が用いられた。また突然変異誘発が、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ（Ｌａ  Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）Ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキットプロトコルに従って実行された。
【０３８８】
カッパ鎖キメラ化プライマー
ＰＣＲプライマー配列から独立した明確なＢ−Ｂ４ＶＫリーダー配列が、Ｋａｂａｔデータベースにおけるマウスリーダー配列と整列された。Ｂ−Ｂ４ＶＨリーダーについて最も近く合致したものは、ＶＫ−１０  ＡＲＳ−Ａ（Ｓａｎｚら、ＰＮＡＳ、８４（１９８７）、１０８５）であった。このリーダー配列は、ＳｉｇｎａｌＰアルゴリズム（Ｎｉｅｌｓｅｎら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ、１０（１９９７）；１）によって正確に切断されることが予期される。プライマーＣＢＢ４Ｋｆｏｒ（上記参照）及びｇ２２５８（５’−ＣＧＣＧＧＧＡＴＣＣＡＣＴＣＡＣＧＴＴＴＧＡＴＴＴＣＣＡＧＣＴＴＧＧＴＧＣＣＴＣＣ−３’［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１２］；制限部位にはアンダーラインが施される）は、ＰＣＲ生成物を生成するように設計されており、このＰＣＲ生成物には、この完全なリーダー、Ｂ−Ｂ４ＶＫ領域、及びＨｉｎｄＩＩＩ及びＢａｍＨＩ端末制限部位が、ｐＫＮ１００発現ベクターへのクローニングのために、含まれている。フォアワードプライマーＣＢＢ４Ｋは、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、Ｋｏｚａｋ翻訳開始部位、及びＶＫ−１０  ＡＲＳ−Ａリーダー配列を導入する。リバースプライマーｇ２２５８は、スプライスドナー部位及びＢａｍＨＩ制限部位を導入する。この結果得られるフラグメントは、ｐＫＮ１００のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢａｍＨＩ制限部位中へクローン化された。
【０３８９】
重鎖キメラ化プライマー
ＰＣＲプライマー配列から独立した明確なＢ−Ｂ４ＶＨリーダー配列が、Ｋａｂａｔデータベースにおけるマウスリーダー配列と整列された。Ｂ−Ｂ４ＶＫリーダーについて最も近く合致したものは、ＶＨ−１７−１Ａ（Ｓｕｎら、ＰＮＡＳ、８４（１９８７）、２１４）であった。このリーダー配列は、ＳｉｇｎａｌＰアルゴリズムによって正確に切断されることが予期される。プライマーｃＢＢ４Ｋｆｏｒ（上記参照）及びｇ２２９４９（５’−ＣＧＡＴＧＧＧＣＣＣＴＴＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＧＡＣＧＧＴＧＡＣＴＧＡＧＧＴＴＣＣ−３’［ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１３］；制限部位にはアンダーラインが施される）は、ＰＣＲ生成物を生成するように設計されており、このＰＣＲ生成物には、ＶＨ１７−１Ａリーダー、Ｂ−Ｂ４ＶＨ領域、及び端末ＨｉｎｄＩＩＩ及びＡｐａＩ制限部位が、ｐＧ４Ｄ２００発現ベクターへのクローニングのために、含まれている。フォアワードプライマーｃＢＢＨＦｏｒは、ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、Ｋｏｚａｋ翻訳開始部位、及びＶＨ−１７−１Ａリーダー配列を導入する。リバースプライマーｇ２２９４９は、ガンマ４Ｃ領域の５’末端及び天然ＡｐａＩ制限部位を導入する。この結果得られるフラグメントは、ｐＧ４Ｄ２００のＨｉｎｄＩＩＩ／ＡｐａＩ制限部位中へクローン化された。この結果、ベクターｐＧ４Ｄ２００ｃＢＢ４が得られた。
【０３９０】
ｃＢＢ４抗体の生産
１バイアルのＣＯＳ７細胞を解凍し、１０％のＦｅｔａｌ  ｃｌｏｎｅ  Ｉ血清と抗生物質が添加されたＤＭＥＭ中で増殖させた。１週間後、細胞（１０７細胞／ｍＬで０．７ｍＬ）が、ｐＧ４Ｄ２００ｃＢＢ４及びｐＫＮ１００ｃＢＢ４（各１０μｇＤＮＡ）又はＤＮＡ無しで、電気穿孔した。当該細胞は、８ｍＬの増殖培地に４日間播種された。電気穿孔は、７回繰り返した。
【０３９１】
キメラ抗体の検出
サンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、ＣＯＳ７上清における抗体濃度を測定した。一過性形質転換されたＣＯＳ７細胞が、約６，９５６ｎｇ／ｍＬの抗体を分泌した（データは示さず）。
【０３９２】
ｃＢ−Ｂ４の結合活性
ＣＯＳ７培養上清におけるｃＢ−Ｂ４の結合活性を分析するために、Ｄｉａｃｌｏｎｅ  ｓＣＤ１３８キットが用いられると共に、固相サンドイッチＥＬＩＳＡが用いられた。ｓＣＤ１３８に特異的なモノクローナル抗体が、提供されたマイクロタイターストリップのウェル上にコーティングされた。最初の培養中、ｓＣＤ１３８及びビオチン化Ｂ−Ｂ４（ｂｉｏ−Ｂ−Ｂ４）抗体が、未標識試験抗体（Ｂ−Ｂ４又はｃＢ−Ｂ４）の希釈系列と共に同時に培養される。
【０３９３】
この分析におけるｂｉｏ−Ｂ−Ｂ４の濃度については、未標識抗体の低濃度との競合作用を得るために減じられた（そうでない場合、ＣＯＳ７細胞培養上清におけるｃＢ−Ｂ４の濃度は低すぎて十分な競合作用を得ることができない）。この分析の結果によれば、両方の抗体がＣＤ１３８に対する同じ特異性を有することが明らかになる（データは示さず）。
【０３９４】
ｃＢ−Ｂ４の精製
キメラＢ−Ｂ４は、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ａ  ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ  Ｐｌｕｓ  キット（Ｐｉｅｒｃｅ）を用い製造者の推奨に従って、ＣＯＳ７細胞上清から精製された（データは示されていない）。
【０３９５】
ＫＤ−決定：比較ｎＢＴ０６２／ＢＢ４
溶解性ＣＤ１３８の精製
Ｕ−２６６細胞培養上清からの溶解性ＣＤ１３８抗原は、Ｂ−Ｂ４と固定化された１ｍＬの“ＨｉＴｒａｐ  ＮＨＳ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ＨＰ”カラムを用いて、ＦＰＬＣによって精製された。細胞培養上清は、ＰＢＳ−バッファｐＨ７．４中においてカラム上へロードされた。後ほど、ＣＤ１３８抗原は、２ｍＬフラクションで５０ｍＭトリエチルアミンｐＨ１１において溶出された。溶出されたＣＤ１３８は、ｐＨ３の３７５μＬ  １Ｍ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで即座に中和された。これにより、構造的及び機能的損害の少なくともいずれかを防止した。
【０３９６】
ＣＤ１３８のビオチン化
Ｓｕｌｆｏ−ＮＨＳ−ＬＣ（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて、ＣＤ１３８をラベル化した。ＮＨＳ活性化型ビオチンが、ｐＨ７から９のバッファにおけるリジン残基などの第一アミノ基と効率的に反応し、安定的なアミド結合を形成する。
【０３９７】
ＣＤ１３８のビオチン化の場合、５０μＬのＣＤ１３８が、蛋白質脱塩スピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）を用いて脱塩化された。ビオチン化試薬（ＥＺ−Ｌｉｎｋ  Ｓｕｌｆｏ  ＮＨＳ−ＬＣ−Ｂｉｏｔｉｎ、Ｐｉｅｒｃｅ）が、氷冷脱イオン化Ｈ２Ｏに溶かされ、最終濃度が、０．５ｍｇ／ｍＬとなった。ビオチン化試薬及び捕獲試薬溶剤が混合されて、捕獲試薬と比べてビオチン化試薬の過剰モル濃度が１２倍となった（６００ｐｍｏｌビオチン化試薬に対して５０ｐｍｏｌＣＤ１３８）。またビオチン化試薬及び捕獲試薬溶剤は、バイアルが穏やかに振られながら、室温で１時間培養された。未結合のビオチン化試薬が、蛋白質脱塩カラムを用いて取り除かれた。
【０３９８】
ｂＣＤ１３８の固定化
ＢＩＡＣＯＲＥアッセイで用いられるセンサチップ（ＳＥＮＳＯＲ  ＣＨＩＰ  ＳＡ、ＢＩＡＣＯＲＥ  ＡＢ）は、ＢＩＡＣＯＲＥシステムにおける相互作用解析のためにビオチン化分子を結合するようになされている。この表面は、ストレプトアビジンで事前に固定化されたカルボキシメチル化デキストランマトリックスからなると共に、ビオチン化リガンドの高親和性捕獲の用意ができている。ｂＣＤ１３８の固定化は、１０μＬ／ｍｉｎの流量を用いてマニュアル注入によりＳＥＮＳＯＲ  ＣＨＩＰ  ＳＡ上で実施された。チップ表面は、５０ｍＭのＮａＯＨにおける１ＭのＮａＣｌの３回連続１分間注入により調整された。その後、ビオチン化ＣＤ１３８が、１分間注入された。
【０３９９】
ＢＩＡＣＯＲＥを用いた異なる抗体のＫＤ−決定
ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｃのソフトウェアは、事前定義されたマスクを使用する。これは、別の実験の場合いわゆる“ウィザード”と呼ばれ、この場合ある設定のみ変更が可能である。元来、ＢＩＡＣＯＲＥ  Ｃは、濃度を測定するために開発された。そのため親和性測定を実行するために設計されたウィザードが存在しない。しかしながら、適当な設定において、“非特異的結合”用のウィザードを用いて、親和性レート定数を測定することができ、かくしてＫＤ−決定に用いることができた。このウィザードにより、２つのフローセルが測定された。また解離フェーズが、ＢＩＡＣＯＲＥランニングバッファによって“Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ１”を実行することにより、９０ｓに設定された。実際の再生に相当する“Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ２”が、１０ｍＭのＧｌｙｃｉｎｅ−ＨＣｌ  ｐＨ２．５で実行された。このステップ後、リガンドＣＤ１３８が再度結合受容状態となった。このプロシージャ全体において、ＨＢＳ−ＥＰが、ランニング及び希釈バッファとして用いられた。異なる抗体（〜１５０ｋＤａ）のＣＤ１３８への結合を決定するために、関連付け及び解離が異なる濃度で分析された（１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ及び３．１３ｎＭ）。解離平衡定数は、速度定数ｋａ及びｋｄを計算することにより決定された。その後分析物のＫＤ値が、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアによりｋｄ及びｋａの商によって計算された。この結果を、表９に示す。
【０４００】
【表９】
2016053053.tif 000010
【０４０１】
考察
各抗体の平均ＫＤ値は、３つの独立した実験から計算された。この結果によると、全ての計測において、ｎＢＴ０６２は、Ｂ−Ｂ４に比してやや小さいＫＤ値を呈する（平均ＫＤ値は、それぞれ１．４ｎＭ及び１．６ｎＭであった）。
【０４０２】
免疫複合体の調製
ｎＢＴ０６２−ＤＭ１及びｈｕＣ２４２−ＤＭ１
チオール含有メイタンシノイドＤＭ１が、Ｃｈａｒｉ（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１（１９９２）、１２７）により以前に説明されたように、微生物発酵生成物アンサマイトシンＰ−３から合成された。ヒト化Ｃ２４２（ｈｕＣ２４２）の調製（Ｒｏｇｕｓｋａら、ＰＮＡＳ、９１（１９９４）、９６９）が以前に説明された。抗体薬複合体が、以前に説明されたように調製された（Ｌｉｕら、ＰＮＡＳ、９３（１９９６）、８６１８）。平均３．５のＤＭ１分子が抗体分子ごとにリンクされた。
【０４０３】
ｎＢＴ０６２−ＤＭ４
ＢＴ０６２は、細胞毒性メイタンシノイド剤ＤＭ４からなる抗体薬複合体であり、ここでこの細胞毒性メイタンシノイド剤ＤＭ４は、ジスルフィド結合を介してリンカーを経てｎＢＴ０６２キメラモノクローナル抗体へリンクされている。メイタンシノイドは、チュブリン重合及び微小管会合を阻害する抗有糸分裂薬である（Ｒｅｍｉｌｌａｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ１８９（１９７７）、１００２）。ＢＴ０６２（ｎＢＴ０６２−ＤＭ４）の化学的及び略式的表現が、図１及び２において示される。
【０４０４】
ＤＭ４の合成
ＤＭ４は、よく知られている派生メイタンシノールから調製される（Ｋｕｐｃｈａｎら、Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．、２１（１９７８）、３１）。メイタンシノールは、リチウムトリメトキシアルミニウム水素化物との微生物発酵生成物アンサミトシンＰ３のエステル部分の還元分解反応によって調製される（図３参照）。
【０４０５】
ＤＭ４は、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）及び塩化亜鉛の存在下で、Ｎ−メチル−Ｎ−（４−メチルジチオペンタノイル）−Ｌ−アラニン（ＤＭ４側鎖）とのメイタンシノールのアシル化により合成される。これにより、ジスルフィド含有メイタンシノイドＤＭ４−ＳＭｅが与えられる。ＤＭ４−ＳＭｅは、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）で還元され、これにより所望のチオール含有メイタンシノイドＤＭ４が与えられる（ＤＭ４処理フロー図については図４参照）。
【０４０６】
免疫複合体ＢＴ０６２
ｎＢＴ０６２−ＤＭ４の調製の手順については、その概要が図５に示される。ｎＢＴ０６２抗体は、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＰＤＢリンカー）で改質され、これにより、ジチオピリジル基が導入される。ＤＭ４は、ジチオピリジル基の同等物を超える濃度で改質抗体と混合される。ＢＴ０６２複合体が、ＤＭ４のチオール基とリンカーを介して抗体へ導入されたジチオピリジル基との間のジスルフィド交換反応により生じる。クロマトグラフィー及びダイアフィルトレーション精製によって、低分子量反応物（ＤＭ４）及び反応生成物（チオピリジン）、並びに複合化抗体の凝集物が取り除かれ、これによりバルク薬物物質を生成する。
【０４０７】
ＦＡＣＳ分析及びＷＳＴ細胞毒性試験
ＦＡＣＳ分析
ＯＰＭ−２細胞は、ＣＤ１３８高発現を呈する血漿細胞白血病細胞株である。ＯＰＭ−２細胞は、ｎＢＴ０６２、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１又はｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１と共に異なる濃度で培養された（図６に示す）。これら細胞は洗浄され、ＣＤ１３８結合抗体又は複合体が、蛍光標識二次抗体を用いてＦＡＣＳ分析において検知された。これら実験で測定された平均蛍光光度が、抗体濃度に対してプロットされた。
【０４０８】
細胞生存率試験
ＣＤ１３８＋  ＭＯＬＰ−８細胞が、平らな底板に３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種された。ＣＤ１３８−  ＢＪＡＢコントロール細胞が、１，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種された。これら細胞は、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１又はｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１によって異なる濃度で５日間処理された（図７に示す）。ＷＳＴ試薬（水溶性テトラゾリウム塩、ＲＯＣＨＥ）が加えられ、製造者の指示（ＲＯＣＨＥ）に従って細胞生存率が測定された。この試薬は、ＭＯＬＰ−８細胞では７．５時間、ＢＪＡＢ細胞では２時間培養された。生存細胞の割合が、標準的な手順によりマイクロプレートリーダーにおいて測定された光学的密度に基づいて計算された。
【０４０９】
考察
ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１、ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１又はｎＢＴ０６２の結合がＦＡＣＳによって分析された。標的細胞としてＣＤ１３８＋  ＯＰＭ−２が、ｎＢＴ０６２又は免疫複合体と共に培養された。また細胞結合分子が、蛍光標識二次抗体を用いて検知された。図６では、細胞結合抗体量測定としての平均蛍光光度が、異なる抗体又は複合体濃度に対してプロットされている。この結果によると、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１が非常に類似した結合特性を呈することが分かる。加えてこの結果によると、非複合化抗体の結合特性は、複合化トキシンによる影響を受けないことが強く示唆されている。
【０４１０】
細胞生存率試験では、ＣＤ１３８＋  ＭＯＬＰ−８標的細胞に対する抗体及びＣＤ１３８−  ＢＪＡＢ  Ｂ−リンパ芽球腫コントロール細胞に対する抗体の細胞毒性活性が分析された。両方の細胞株が、平らな底板に播種され、濃度増加する免疫複合体と共に培養された。非複合化抗体が、コントロールとして用いられた。免疫複合体を追加してから５日間後、細胞毒性が分析された。ここでは、ＷＳＴ試薬を使用して細胞生存率を測定した。図７（Ａ）から（Ｃ）では、溶媒対照で処理されたコントロール細胞に対する生存細胞の割合が、増加する免疫複合体濃度に対してプロットされている。この結果によると、ＭＯＬＰ−８細胞に対するｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の細胞毒性活性が非常に類似していることが示された。予期されたように、ＣＤ１３８−  ＢＪＡＢコントロール細胞は、免疫複合体によって殺されなかった。これは、全ての免疫複合体がＣＤ１３８への細胞特異的結合を介して作用することを示している。競合実験では、ＭＯＬＰ−８細胞が、非複合化ｎＢＴ０６２のモル過剰によって事前培養された。事前培養によって、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の細胞毒性が実質上ブロックされた。これによって、免疫複合体が細胞表面上へのＣＤ１３８への特異的結合を介して細胞を殺す旨の証拠が更に与えられた（図７（Ｄ））。
【０４１１】
異種移植マウス実験
Ｂ−Ｂ４抗体ｎＢＴ０６２のヒトキメラバージョンの抗体メイタンシノイド複合体の抗癌活性についてＣＤ１３８ターゲティングの重要性を評価するために、異種移植マウス実験が実施された。ｎＢＴ０６２メイタンシノイド複合体の２つのバージョンが調製された。これらのバージョンは、それらのジスルフィド結合の化学的安定性の点で異なる可能性がある（ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４）。これら抗体薬複合体の抗癌活性が、Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１複合体（マウス親抗体を有する）の活性、並びに非複合化フリーメイタンシノイド（ＤＭ４）、本来の非改質ｎＢＴ０６２抗体及び非ターゲティング（無関係）ＩｇＧ１−メイタンシノイド複合体の活性と比較された。当該複合体は、重症複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスにおけるヒト多発性骨髄腫のＣＤ１３８陽性異種移植モデル（ＭＯＬＰ−８）において評価された。
【０４１２】
これらのマウスでは、ＭＯＬＰ−８細胞懸濁液の接種により皮下腫瘍が確立した（雌のＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウス）。腫瘍体積が平均１１３ｍｍ３に達した際、単一のボーラス静脈内注射による治療が行われた。腫瘍体積及び体重の変化が、毎週２回モニターされた。腫瘍細胞接種後６８日間に亘って実験が行われた。
【０４１３】
異種移植マウス実験Ａ
マウス
５週齢の雌ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスが、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから得られた。
【０４１４】
ヒト腫瘍細胞株
ヒト多発性骨髄腫細胞株であるＭＯＬＰ−８が、ＡＴＣＣから供給された。それらの細胞表面でＣＤ１３８抗原を発現すると共にＳＣＩＤマウスにおいて異種移植腫瘍を発達させるＭＯＬＰ−８細胞が、４ｍＭ  Ｌ―グルタミン（Ｂｉｏｗｈｉｔｔａｋｅｒ、Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ、ＭＤ）、１０％の牛血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ、Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）及び１％のストレプトマイシン／ペニシリンを添加したＰＲＭＩ−１６４０培地において、５％ＣＯ２を含んだ湿潤雰囲気下３７℃で維持された。
【０４１５】
パートＩ
マウスにおける腫瘍成長
各マウスには、１×１０７  ＭＯＬＰ−８細胞が右肩下のエリアに皮下接種された。総容量は、各マウス０．２ｍＬであった。この場合、マトリゲルに対する無血清培地の比率（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）は、１／１（ｖ／ｖ）であった。治療前、異種移植腫瘍を毎日モニターし確立させた。腫瘍細胞を接種してから約１１日間後、腫瘍体積は約１１３ｍｍ３に達した。ＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスの腫瘍取り込み率は、１００％であった。
【０４１６】
腫瘍細胞接種から１１日間後、腫瘍体積及び体重に基づいて４２のマウスが選択された。腫瘍体積の範囲は、６８．２ｍｍ３から１３５．９ｍｍ３であった。４２のマウスは、それぞれ腫瘍体積に基づく６つの動物の７つのグループ（ＡからＧ）にランダムに分けられた。
【０４１７】
グループＡの６匹のマウスのそれぞれは、溶媒対照として２００μＬのＰＢＳを受けた。グループＢの各マウスは、１３．８ｍｇ／ｋｇのｎＢＴ０６２ネイキッド抗体を受けた。この用量は、２５０μｇ／ｋｇのリンクされたメイタンシノイドにおけるｎＢＴ０６２抗体成分量と同等である。複合体分子におけるｎＢＴ０６２に対するメイタンシノイドの分子量比率は、約１／５５である。グループＣの各マウスは、２５０μｇ／ｋｇのＤＭ４を受けた。グループＤの各マウスは、２５０μｇ／ｋｇのｈｕＣ４２４−ＤＭ４を受けた。グループＥ、Ｆ及びＧの各マウスは、それぞれ２５０μｇ／ｋｇのｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１をそれぞれ受けた。
【０４１８】
全ての薬剤は、単一ボーラス注射として外側尾静脈を介し、２７ゲージ、１／２インチ針を装着した１ｍＬ注射器を用いて、静脈内投与された。投与前、ｎＢＴ０６２抗体、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４及びｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１保存溶液が滅菌ＰＢＳで希釈され、それぞれの濃度が２ｍｇ／ｍＬ、２８．１μｇ／ｍＬ及び２８．１μｇ／ｍＬとなった。かくして各マウスに対する注入体積が、１２０μＬから２２０μＬとなった。
【０４１９】
パートＩＩ
実験の第２セットでは、無血清培地及びマトリゲルの５０：５０混合で懸濁されたＭＯＬＰ−８細胞（１マウスあたり１．５×１０７細胞）が、右肩下のエリアに１００μＬで皮下接種された。細胞接種後、腫瘍体積は１１日目に約８０ｍｍ３に達した。また、コントロールの平均は２５日目で約７５０ｍｍ３であった。腫瘍倍加時間は、４．５８日と推定された。対照グループ（ｎ＝６）の各マウスは、０．２ｍＬの滅菌ＰＢＳを受けた。この滅菌ＰＢＳは、ボーラス注射として外側尾静脈（ｉ．ｖ．）中へ投与された。すべての治療用量は、複合化メイタンシノイドに基づいていた。９つのグループ（ｎ＝６）が、ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４又はｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１の単回静脈内投与で治療された。それぞれの用量は、４５０μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ及び１００μｇ／ｋｇであった。追加グループ（ｎ＝６）が、２５０μｇ／ｋｇのｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１を繰り返し投与で受けた（５週間の間毎週）。マウスは、ＬａｂＣａｔプログラムを用いて腫瘍体積により、１１のグループ（ｎ＝６）へ無作為化された。腫瘍体積の範囲は、４０．０ｍｍ３から１５２．５ｍｍ３であった。マウスは、個々の体重に基づいて投薬された。
【０４２０】
腫瘍サイズは、ＬａｂＣａｔシステム（Ｔｕｍｏｒ  Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｔｒａｃｋｉｎｇ、Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ  Ｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ、Ｉｎｃ．、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ）を用いて３次元で毎週２回測定された。Ｔｏｍａｙｋｏら（Ｔｏｍａｙｋｏら、１９８９）で説明されている方法を用いて、ｍｍ３の単位で腫瘍体積が計算された：
体積＝長さ×幅×高さ×１／２
Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌについては、Ｂｉｓｓｅｒｙら（Ｂｉｓｓｅｒｙら、１９９１）において説明されている式を用いて計算された。
Ｌｏｇ１０  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ＝（Ｔ−Ｃ）／Ｔｄ×３．３２
ここで（Ｔ−Ｃ）、すなわち腫瘍成長遅延、については、治療グループ（Ｔ）及び対照グループ（Ｃ）腫瘍が所定サイズ（６００ｍｍ３）に達するのに必要な日数による平均時間である。Ｔｄは、腫瘍倍加時間であり、これは、コントロールマウスにおける平均腫瘍体積に基づく。３．３２は、細胞成長のログあたりの細胞倍加数である。
【０４２１】
結果
個々のマウスにおける腫瘍成長については、図８及び９に示されている。各グループの平均（＋／−ＳＤ）腫瘍成長については、図１０に示されている。
ＰＢＳ処理された動物における腫瘍成長と比べられるように、ｎＢＴ０６２抗体、非複合フリーＤＭ４又は無関係な非ターゲティング複合体ｈｕＣ２４２−ＤＭ４による治療は、腫瘍成長に対して十分な阻害を生じさせなかった。
【０４２２】
３つのＣＤ１３８ターゲティング複合体全て、すなわちｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１、は、２５０μｇ／ｋｇの用量で腫瘍成長に対する顕著な遅延を生じさせた。治療グループにおいて測定された平均腫瘍体積に基づくと、ＤＭ４複合体ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４が最も活性的であった。一方で、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１複合体は、そのマウス対応物Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１に比して、やや高い活性を呈した（図１０）。更に個々のマウスについて得られた結果によれば、Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１で得られた抗癌活性は、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１で治療されたマウスでの測定結果と比べて、より不均一であり、したがってより断定し難い。抗癌活性の均一性という点では、標的抗体としてｎＢＴ０６２を用いる他の複合体、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４、が、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１と同様に作用した。
【０４２３】
如何なる治療グループにおいても体重減少は観測されなかった。したがって、治療が良好に許容された旨が示唆されている。
【０４２４】
考察
実験動物における３つのＣＤ３８ターゲティング複合体の分析結果によると、抗癌活性について標的化遺伝子導入の重要が示されている。ヒトキメラｎＢＴ０６２のメイタンシノイド複合体及びマウスＢ−Ｂ４抗体は、ｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌにより測定されたように有意な活性を示している。その一方で、非複合化ＤＭ４、非改質でネイティブのｈｕＢＴ０６２抗体又は非ターゲティングコントロール複合体（ｈｕＣ２４２−ＤＭ４）での治療からは、腫瘍成長に対する有意な影響が存在しない。
【０４２５】
ヒトキメラ抗体ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１から調製された免疫複合体は、そのマウス対応物Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１から調製された複合体よりも、わずかに高い抗癌活性を提供した。加えて、ｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１及びｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４での治療によれば、Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１での治療と比較されると、個々のマウスにおいてより均質な奏効が生じた。Ｂ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１の高い結合ばらつきにより説明されるのは、接種後のある時間（日数）にわたるＣＢ．１７  ＳＣＩＤマウスにおけるＭＯＬＰ−８ヒト多発性骨髄腫異種移植の平均腫瘍体積（＋／−ＳＤ）の測定により、実際ｎＢＴ０６２―ＳＰＰ−ＤＭ１（データは示さず）の場合よりもＢ−Ｂ４−ＳＰＰ−ＤＭ１について比較的良好な結果が提供されたということである。ｎＢＴ０６２を標的抗体として使用する免疫複合体のかかる特徴は、複合体の治療用途として特に有益であると考えられる。
【０４２６】
最後に、ＳＣＩＤマウスのＭＯＬＰ−８異種移植モデルにおける単回静脈内投与に続いて、メイタンシノイド複合体の最も強力なものは、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４であった。
【０４２７】
バイスタンダーキリング（細胞生存率分析）
ＣＤ１３８＋  ＯＰＭ２細胞及びＣＤ１３８−ナマルバ細胞が、別々のウェルで又は共生培養で、丸底プレートに播種された。これら細胞は、１×１０−８から１×１０−９Ｍの濃度で、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４で処理された。生存細胞の割合が、ＷＳＴ試薬（水溶性テトラゾリウム塩、ＲＯＣＨＥ）を用い製造者の指示（ＲＯＣＨＥ）に従って検出された。生存細胞の割合が、標準的な手順によりマイクロプレートリーダーにおいて測定された光学的密度に基づいて計算された。
【０４２８】
考察
ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４治療後多発性骨髄腫細胞に近接の非標的細胞（丸底ウェルに存在）のバイスタンダーキリングが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ研究において分析された。この研究では、ＣＤ１３８陽性ＯＰＭ２細胞が、ＣＤ１３８陰性ナマルバ細胞と共に共生培養で培養された（図１３）。一般的に、ＣＤ１３８陽性細胞は、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４によって効率的に殺される。一方で、ＣＤ１３８陰性細胞は、当該複合体による影響を受けなかった。しかしながら、丸底ウェルにおける共生培養では、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４によって、抗原陽性細胞に近接の抗原陰性細胞も殺された（しばしばバイスタンダーキリングと称される効果）。Ｋｏｖｔｕｎら（２００６）は、メイタンシノイド複合体により媒介されるバイスタンダーキリングは、抗原陽性細胞に近接する場所でのみ起こると論じている。Ｋｏｖｔｕｎら（２００６）については、参照されることによりその全てが本明細書に援用される。またＫｏｖｔｕｎら（２００６）は、免疫複合体のリンカーの重要性も論じている。Ｉｎ  ｖｉｖｏの場合、バイスタンダーキリングは、１）ＣＤ１３８を不均一に発現する腫瘍細胞の根絶、２）腫瘍間質細胞を殺すことによる腫瘍微小環境の崩壊、３）ＣＤ１３８陰性ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４耐性細胞の選択防止に対して貢献する可能性がある。
【０４２９】
免疫複合体の活性が、腫瘍において不均一に発現する標的抗原によって損なわれる場合、バイスタンダー効果は、特に重要である。このような場合、腫瘍の特定細胞は、有効な直接ターゲティング及び対応の免疫複合体による上記細胞の殺傷を可能とする量で抗原を発現しない。ＣＤ１３８陽性細胞と共生培養されたＣＤ１３８陰性細胞に対するｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の抗癌効能によれば、適切な条件下においては、標的細胞の存在がｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の非標的細胞への細胞毒性活性に影響を及ぼすことが明らかになった。
【０４３０】
異種移植マウス実験Ｂ
この実験セットでは、８５のマウスに対してＭＯＬＰ−８細胞（１．５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅ）が右肩に皮下接種された。腫瘍取り込み率は、１００％であった。平均腫瘍体積が約８０ｍｍ３の大きなＭＯＬＰ−８腫瘍を有する６６のＳＣＩＤマウスが、１１の治療グループ（ｎ＝６）へ無作為化された。マウスは、３つの複合体（ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１、ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４又はｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１）のうちの１つの複合体の単回投与で治療された。追加グループは、ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１の毎週投与を５回受けた。対照グループは、ＰＢＳの単回投与を受けた。平均腫瘍体積が、図１１Ａにおいて示されている。各複合体について、用量応答が確立された。ＰＢＳ治療動物における平均腫瘍体積７５０ｍｍ３が、２５日目で達成された。コントロール腫瘍成長の対数線形プロットに適合のベストフィット直線回帰曲線によって決定される腫瘍倍加時間は、４．５８日であった。４５０μｇ／ｋｇのｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４で治療された動物は、最も高いｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ（ＬＣＫ＝２．８９）を有していた。これに続くのは、毎週投与２５０μｇ／ｋｇのｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１で治療された動物（ＬＣＫ＝２．１；表１０を参照）であった。Ｄｕｎｎｅｔｔ’ｓ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｐｎ  Ｔｅｓｔを実行する反復測定ＡＮＯＶＡによる治療グループの平均腫瘍成長カーブの比較によれば、ＰＢＳ対照グループ及び４５０μｇ／ｋｇ  ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（ｐ＜０．０１）、２５０μｇ／ｋｇ  ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４（ｐ＜０．０５）及び５回の毎週投与２５０μｇ／ｋｇ  ｎＢＴ０６２−ＳＭＣＣ−ＤＭ１（ｐ＜０．０５）の間において重大な違いが示された。何れの治療グループにおいても部分的又は完全腫瘍退縮が起こらなかった。ただし、接種後８５日目までに部分的腫瘍退縮が起こった、４５０μｇ／ｋｇ  ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４を受けた１匹の動物を除く。
【０４３１】
【表１０】
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【０４３２】
骨髄環境におけるｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４及びｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１のｉｎ  ｖｉｖｏ効能
ヒト胎児骨インプラントを有するＳＣＩＤマウスの調製
ヒト胎児長骨（ヒト胎児骨片）が、以前説明したようにして（Ｕｒａｓｈｉｍａら、１９９７）、ＣＢ１７  ＳＣＩＤマウス（ＳＣＩＤ−ｈｕ）の上体に移植された。かくして、ヒトＭＭ細胞のヒトＢＭ細胞へのホーミングためのマウスにおけるモデルが提供された。
【０４３３】
治療レジメン（ＳＣＩＤ−ｈｕ／ＩＮＡ−６マウス）
骨移植から４週間後、最終体積が１００μＬのＲＰＭＩ−１６４０細胞培養液における２．５×１０６ＩＮＡ−６細胞が、上述のＳＣＩＤ−ｈｕマウスの骨髄腔中へ直接注入された。ＩＮＡ−６細胞によって放出される溶解性ヒトＩＬ−６レセプター（ｓｈｕＩＬ−６Ｒ）のレベルの増加が、ＭＭ細胞成長及び疾患負荷のパラメータとして使用された。
【０４３４】
マウスは、測定可能な血清ｓｈｕＩＬ−６Ｒを、ＩＮＡ−６細胞注入してから約４週間後発達させた。そしてマウスは、７週間にわたり毎週尾静脈注射を介して０．１７６ｍｇの複合体又は溶媒対照を受けた。各治療後、血液サンプルが収集され、ｓｈｕＩＬ−６Ｒレベルが酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）によって測定された。その結果は、図１２に示される。
【０４３５】
考察
インターロイキン６（ＩＬ−６）は、多発性骨髄腫細胞の成長及び生存因子である。ＩＮＡ−６は、ＩＬ−６依存ヒト骨髄腫細胞株であり、これは、増殖のために骨髄間質細胞（ＢＭＳＣ）も必要とする。ＩＮＡ−６細胞株は、溶解性ＩＬ−６レセプター（ｓｈｕＩＬ−６Ｒ）を生成する。ｓｈｕＩＬ−６Ｒのレベルの増加を、ＭＭ細胞成長及び疾患負荷のパラメータとして使用することができる。
【０４３６】
かくして、ｓＣＩＤ−ｈｕ／ＩＮＡ−６マウスにより、通常の骨髄環境で成長する多発性骨髄腫細胞のモデルが提供される。ヒト骨髄と直接的に相互作用するこのモデルの腫瘍細胞は、患者の状況と非常に類似している。この場合、腫瘍細胞成長は、間質細胞の存在によっても促進される。ＩＮＡ−６細胞が溶解性ヒトインターロイキン６レセプター（ｓｈｕＩＬ−６Ｒ）を放出すると、この蛋白質の血清濃度は、これらマウスの腫瘍細胞負荷の測定単位として用いられ得る。ｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４及びｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１のｉｎ  ｖｉｖｏ効能が、かかる環境で試験された。
【０４３７】
７週間にわたるｎＢＴ０６２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４又はｎＢＴ０６２−ＳＰＰ−ＤＭ１の毎週静脈内投与によるＳＣＩＤｈｕ／ＩＮＡ−６マウスの治療によって、効率的な腫瘍退縮が誘発された。これは、コントロールに対する血清ｓｈｕＩＬ−６Ｒレベルの低下によって検知される。かくして、ヒト骨髄環境であっても複合体の効能が良好であることが示され、これは、患者における関連の状況を反映している（図１２）。
【０４３８】
マウスの用量
関連用量を決定するため、１００μｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ及び４５０μｇ／ｋｇの用量（ＤＭ４濃度に基づく）でＢＴ０６２の単回投与が、腫瘍の平均腫瘍体積が８０ｍｍ３に達した際（図１４）に、マウスに対して与えられた。用量は、複合化ＤＭ４の濃度として報告された（１μｇＤＭ４は、約５５μｇ抗体蛋白質に相当する）。抗癌効能は、用量依存であった。また試験された最高用量（４５０μｇ／ｋｇ）の場合、ｌｏｇ  ｃｅｌｌ  ｋｉｌｌ（ＬＣＫ）が２．９となる結果が得られた（表１０も比較されたし）。動物は、当該研究中に体重増加した。これは、この治療にはマウスに対する害がないことを示している。
【０４３９】
図１４は、２５０μｇ／ｋｇがマウスにおける第１の有効用量であることを示している。これは、人間でいえば１６６ｍｇ／ｍ２の用量であることを意味する。
【０４４０】
インジケーター：膵臓／乳房及びその他の癌−異種移植モデル
一般的な実験セットアップ
ＣＤ１３８発現分析（腫瘍組織マイクロアレイについての免疫組織化学分析）に従って、腫瘍候補が、一次腫瘍集合から、すなわち患者由来腫瘍から選択された。腫瘍の皮下移植及び確立（誘導時間３０日）の後、２つの異なる濃度のメイタンシノイドＤＭ４、つまり４５０μｇ／ｋｇ及び２５０μｇ／ｋｇで、免疫複合体ＢＴ０６２が静脈内投与された（それぞれ、リンクされたＤＭ４の分子量に基づく（１ｍｇのＤＭ４は、５２ｍｇの抗体へ結合され、５３ｍｇの総質量に相当する；４５０μｇ／ｋｇＤＭ４＝２３．８５０μｇ）。この免疫複合体は、１０週間において各週１度（膵臓腫瘍移植マウスの治療の場合）及び５週間において各週１度（乳房腫瘍移植マウスの場合）投与された。
【０４４１】
実施例１：膵臓癌
膵臓腫瘍組織（ＰＡＸＦ７３６（Ｋｕｅｓｔｅｒｓら、２００６）が、ＮＭＲＩマウスに移植された（両側性）。移植された腫瘍は、患者の一次膵臓癌由来のものであった（低分化の浸潤腺癌（外分泌癌））。副作用は観測されなかった。この患者の腫瘍は、免疫組織化学研究によって高ＣＤ１３８発現組織として特定された。しかしながら、ＣＤ１３８は、腫瘍細胞株における流動細胞表面染色によって検知されるように、多発性骨髄腫患者における骨髄腫血漿細胞に匹敵する程度までは発現されない。
【０４４２】
ＢＴ０６２による治療は、腫瘍サイズの直径が約６ｍｍから８ｍｍ（最低５ｍｍ）に達した後に開始された。腫瘍直径は、１週間に２回測定された。腫瘍体積は、ａ＊ｂ＊ｂ／２という式に従って計算された。ここで、“ａ”は最長軸であり、“ｂ”はそれに対して垂直な軸である。溶媒対照グループに対する試験グループの腫瘍体積の阻害が、中央相対腫瘍体積の比率として計算された（Ｔ／Ｃ）。
【０４４３】
ある特定日の腫瘍阻害（％によるＴ／Ｃ）が、１００％で乗算された、試験グループ対対照グループの中央ＲＴＶ（相対腫瘍体積）値の比率から計算された。
【０４４４】
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【０４４５】
腫瘍体積は、このＢＴ０６２の毎週投与によって大きく減少させることができた。図２８においてわかるように、用量依存性の部分的及び完全寛解が観測された。この図では、２３．８５ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍移植から２８日間後に完全寛解が得られる一方で、１３．２５ｍｇ／ｋｇの用量で腫瘍移植から３５日間後に完全寛解が得られることが示されている。特に、５２日間後、両方の治療レジメンにおける全てのマウスは未だ生存していた（８／８）。対照グループｈｄの８匹のマウスは、１匹に減った。１０％以下のＴ／Ｃ値は、完全寛解（ＣＲ）を示す（Ｂｉｓｓｅｒｙら、１９９１）。この基準によれば、ＣＲが両方の治療グループにおいて達成された。これは、ＢＴ０６２によって達成された完全寛解を反映している。驚くべきことに治療無し観測フェーズでは、腫瘍の再成長は検知されなかった。これにより、このモデルにおける完全治癒が確認された。
【０４４６】
【表１１】
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【０４４７】
実施例２：乳癌
ＮＭＲＩ（ヌード）マウスに、患者の一次乳房腫瘍が移植された（両側性）（ＩＨＣ分析を介してＣＤ１３８の強い陽性として決定された）。乳癌の皮膚転移が、ステージＭ１に取られた。ハーセプチンに反応しなかったのは、腫瘍である（中間発現による低Ｈｅｒ２）。この腫瘍は、エストロゲンレセプター陰性及びプロゲステロンレセプター陰性であった。移植される腫瘍は、ＩＨＣ染色の結果に応じて選択された（ＢＴ０６２により検知されたＣＤ１３８の強力な均質発現、トリプル陰性（ホルモンレセプターエストロゲン及びプロゲステロンの陰性発現）；Ｈｅｒ２発現による２以下の得点（ハーセプチン非応答とみなされる）。
【０４４８】
ＢＴ０６２による治療は、腫瘍が直径約６ｍｍから８ｍｍの大きさ（最小５ｍｍ）に達した後開始された。腫瘍直径は、１週間に２度測定された。腫瘍体積は、ａ＊ｂ＊ｂ／２という式に従って計算された。ここで、“ａ”は最長軸であり、“ｂ”はそれに対して垂直な軸である。溶媒対照グループに対する試験グループの腫瘍体積の阻害が、中央相対腫瘍体積の比率として計算された（Ｔ／Ｃ）。
【０４４９】
腫瘍体積は、ＢＴ０６２の毎週投与によって大きく減少させることができた。用量依存性の部分的及び完全寛解が観測された。かかる免疫複合体は、良好に許容され、各注入後において体重に対する影響がなかった。１０％以下のＴ／Ｃ値が、両方の治療グループにおいて得られた。これは、ＢＴ０６２投与によって達成された完全寛解を反映している。図ＹＹＹにおいてわかるように、抗癌効果（すなわち、完全寛解）が２１日間後に達成された。これは、ＢＴ０６２に対する素早い反応と考えられる。膵臓モデルと比較すると、治療期間を半分にすることができた（１０週間ではなく５週間）。また、１３．２５ｍｇ／ｋｇの低用量を４ｍｇ／ｋｇへ減じて、同等の効果を達成した。すなわち、完全寛解と腫瘍再成長の排除とである。乳癌の治療期間の短縮化は予期されなかった。なぜなら、ＩＨＣ分析においてＣＤ１３８発現レベルが同等のものであったからである。かくして、ＣＤ１３８発現レベルからは、一般的な治療期間を推奨するための結論が得ることができない。２１日間後、治療及び対照グループの全てのマウスは、未だ全て生存していた。治療無し観測期間（免疫複合体の最終投与から３９日間後）では、腫瘍再成長は検知されず、完全治癒が確認された。
【０４５０】
【表１２ａ】
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【０４５１】
【表１２ｂ】
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【０４５２】
実施例３：膀胱癌
ＮＭＲＩ（ヌード）マウスに、膀胱癌が移植された（ＩＨＣ分析を介してＣＤ１３８の強い陽性として決定された）。すなわち、移行上皮癌である。
【０４５３】
ＢＴ０６２による治療は、腫瘍が５ｍｍ超の大きさに達した後開始された。腫瘍直径は、１週間に２度測定された。腫瘍体積は、ａ＊ｂ＊ｂ／２という式に従って計算された。ここで、“ａ”は最長軸であり、“ｂ”はそれに対して垂直な軸である。溶媒対照グループに対する試験グループの腫瘍体積の阻害が、中央相対腫瘍体積の比率として計算された（Ｔ／Ｃ）。腫瘍体積については、ＢＴ０６２の毎週投与によって大きく減少させることが求められる。如何なる用量依存性の部分的及び完全寛解も追跡される。
【０４５４】
実施例４：肺癌
ＮＭＲＩ（ヌード）マウスに、肺癌が移植された（ＩＨＣ分析を介してＣＤ１３８の強い陽性として決定された）。
【０４５５】
ＢＴ０６２による治療は、腫瘍が５ｍｍ超の大きさに達した後開始された。腫瘍直径は、１週間に２度測定された。腫瘍体積は、ａ＊ｂ＊ｂ／２という式に従って計算された。ここで、“ａ”は最長軸であり、“ｂ”はそれに対して垂直な軸である。溶媒対照グループに対する試験グループの腫瘍体積の阻害が、中央相対腫瘍体積の比率として計算された（Ｔ／Ｃ）。腫瘍体積については、ＢＴ０６２の毎週投与によって大きく減少させることが求められる。如何なる用量依存性の部分的及び完全寛解も追跡される。
【０４５６】
前臨床毒性試験
異種移植マウスモデルは、本発明の免疫複合体がマウスによってモデル化された癌の場合に有効か否かを決定するのに優れている。しかしながら、これらのモデルには、適切な生来のＣＤ１３８発現が欠けている。したがって、これらは、毒性研究における信頼性のあるモデルとは成り得ず、本発明の免疫複合体の許容量を完全に決定するために使用され得ない。
【０４５７】
カニクイザル及びアカゲザルにおいても、ＢＴ０６２が何らかのＣＤ１３８関係抗原に結合することが示されておらず、今のところ既知のＢＴ０６２の毒性研究において最も適した動物種である。したがって、マウス及びサルにおけるＢＴ０６２の毒性プロファイルは、複合体（ＤＭ４）の細胞毒性成分の非標的効果に起因するものと予期される。
【０４５８】
単回投与毒性試験が実施され、カニクイザル及びＣＤ−１マウスにおけるＧＬＰ要求を満たした。これらの試験は、重大な毒性を生じさせる用量と共に動物において副作用を生じさせない（又は最小限）用量を識別するように設計されていた。これにより、ヒトにおいて考えうる毒性を識別するともに、ＢＴ０６２の単回ボーラス注入を用いたフェーズＩ臨床試験のための安全な開始用量を識別する。
【０４５９】
急性マウス毒性試験
単回投与毒性試験が、６６ｍｇ／ｍ２から２５５ｍｇ／ｍ２（２０ｍｇ／ｋｇから８５ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量で単回ボーラスＩＶ注入によるＢＴ０６２投与マウスにおいて実施された。マウスにおけるＢＴ０６２の最高非重度毒性用量（ＨＮＳＴＤ）は、４５ｍｇ／ｋｇ（１３５ｍｇ／ｍ２）であり、推測ＳＴＤ１０は、５７ｍｇ／ｋｇ（１７１ｍｇ／ｍ２）であった。
【０４６０】
急性サル毒性試験
単回投与毒性試験が、４８ｍｇ／ｍ２から３３６ｍｇ／ｍ２（４ｍｇ／ｋｇから２８ｍｇ／ｋｇ）の範囲の用量でＢＴ０６２がＩＶ投与されたカニクイザルにおいて実施された。カニクイザルにおけるＢＴ０６２のＨＮＳＴＤは、１２ｍｇ／ｋｇ（１４４ｍｇ／ｍ２）であった。
【０４６１】
ＢＴ０６２のヒト試験
本発明の場合、ヒト対象は、低用量形態に対して良好に奏効した。これについては、標的細胞におけるＣＤ１３８の定性的又は定量的発現の考え得るばらつきを保証するための如何なる追加的治療がない場合も同様である（ＭＹＬＯＴＡＲＧを比較されたし）。マウスモデルによれば、ＢＴ０６２がマウスで良好に許容可能な用量で非常に強い抗骨髄腫活性を有することが示された。その一方で効能については、比較的高めの用量で非常に良好であることが示された（図１４参照）。したがって疑問点は、幅広い非腫瘍細胞でＣＤ１３８を発現するヒト対象により許容され得る高めの用量はどれくらいか、という点である。
【０４６２】
フェーズＩ調査研究
この研究は、効果（良好及び不良）を試験するため、且つ再発性又は再発性難治性骨髄腫の患者を治療するにあたってのＢＴ０６２のＭＴＤ（最大許容用量）を決定するために実施されている。
【０４６３】
現在のところ、２６人の患者が集められた。２６人のうち少なくとも１１人の患者では、少なくとも４度目の治療サイクルを受けることによって疾患進行の減少が見られた。一方で４人の患者については、治療進行中である。この試験は、異なる場所で行われている。３人及び４人の患者グループが、異なる用量レベル（１０ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２）で１から１０の治療サイクルの範囲で治療されている（図２３参照）。当業者によれば、より多くの治療サイクルが可能であると共に本発明の範囲内であることが理解されよう。この治療サイクルとしては、１０から５０、１０から１００、１０から２００及びそれ以上などがある。
【０４６４】
比較的低用量レベルでも疾患進行が減少した。すなわち、２０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２、８０ｍｇ／ｍ２及び１２０ｍｇ／ｍ２である。第２の用量レベルが２０ｍｇ／ｍ２の１患者では、２１日の１０治療サイクルの間、疾患進行が見られなかった。図２３を参照されたい。この場合、患者サンプル００１−００１、００３−００１、００２−００２、００２−００３、００２−００４、００３−００３、００１−００５、００１−００６、００１−００８、００１−００９、００４−００１、００１−０１１、００４−００２及び００１−０１２では、マイナー及び部分的奏効を含む病態安定及び奏効が観測され得たが、最終的に疾患進行が観測された。患者サンプル００１−００６では、用量が維持された。
【０４６５】
上述したように（表７及び８を参照）、これら用量レベルでは、血漿からのＢＴ０６２の急速なクリアランスも観測された。これら低用量投与スキームの一部薬物動態プロファイルが図１７において示されている。ヒトにおけるＢＴ０６２血漿プロファイルとサルのプロファイルとの比較が図１８において示されている。左側のグラフでは、１２０ｍｇ／ｍ２での差が示されている。右側のグラフ（１６０ｍｇ／ｍ２）では、より小さな差が示されている。
【０４６６】
また１６０ｍｇ／ｍ２及び２００ｍｇ／ｍ２の用量も投与された。１６０ｍｇ／ｍ２の用量は、ＭＴＤとして特定され、このグループにおける研究も、拡大された。２００ｍｇ／ｍ２の用量は、ＭＡＤとして特定された。用量制限毒性（ＤＬＴ）が、ＮＣＩ  ＣＴＣＡＥ  ｖ３．０（２００６年８月０９日、ｈｔｔｐ：／／ｃｔｅｐ．ｃａｎｃｅｒ．ｇｏｖ）による類別を用いて決定された。研究特異的ＤＬＴ基準が、以下に一覧で示される：
【０４６７】
非血液学的
・如何なるグレードの脱毛症も、ＤＬＴであるとは考えられない
・最適な制吐剤の投薬に関わらず３日間超えで続くグレード３から４の悪心及び嘔吐ａ
・最適な下痢止め剤の投薬に関わらず３日間超えで続くグレード３から４の下痢症ａ
ａ．最適な下痢止め剤及び制吐剤治療については、各調査員によって決定された。
【０４６８】
血液学的
・５日間超えで続くグレード４の好中球減少症。
・２つの連続判定が４時間開けられており、温度が１０１°Ｆ以上であるグレード３又はそれより高いグレードの好中球減少症
・グレード４の血小板減少症
・出血が伴い且つ血小板輸血の使用を必要とするグレード３又はそれより高いグレードの血小板減少症
・グレード３の好中球減少症、グレード３の血小板減少症は、ＤＬＴｓとは考えられなかった。
【０４６９】
全ての有害事象（ＡＥｓ）は、ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  ｖ３．０により評価された。ＮＣＩ−ＣＴＣＡＥ  ｖ３．０にリストされていないＡＥｓについては、重症度がこれらの基準に従って調査員により評価された。グレード１及びグレード２のみが受容可能であった。したがって、グレード１（マイルド）は、最小限の治療を必要とする又は治療を必要とせず、患者の日々の活動を干渉しない。グレード２（穏やか）の場合、治療対策について低レベルの不便さ又は不安が生じる。穏やかな事象の場合、対象の機能に何かしらの干渉が生じる可能性がある。
【０４７０】
ＢＴ０６２関すると考えられるグレード３（重症）及びグレード４（生命の危険性）のＡＥｓは、受容可能でないと考えられると共に、研究特異的ＤＬＴ基準によって定義されていない限りＤＬＴとして定義された。
【０４７１】
患者サンプル００３−００５、００２−０１２、及び００２−０１１は、未だ研究に参加している状態であった。
【０４７２】
患者サンプル００２−００３、００１−００２及び００２−００８は、辞退していた。
【０４７３】
図２３において示されるように、１０ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、４０ｍｇ／ｍ２２、８０ｍｇ／ｍ２、１２０ｍｇ／ｍ２、１６０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２の繰り返し単回投与の形態が２１日ごとに実施された。これは、１日目、２２日目、４３日目、６４日目、８５日目、１０６日目などであることを意味する。疾患は、血液学、臨床症状と臨床化学の医師評価により評価されており、またこれからも評価される。並びに、（ｇ／ｄＬ）により患者の血清及び尿中のＭ蛋白質レベルを測定すると共に、時間経過と共に患者の血清中の遊離軽鎖（ＦＬＣ）レベルを測定することによっても評価が行われる。
【０４７４】
免疫グロブリン評価
ＩｇＧサブグループの定量を含むＩｇ抗原の量が、スクリーニングで分析された。
【０４７５】
Ｍ蛋白質定量化及び血清遊離軽鎖分析
最初に治療への反応が、血清及び２４時間尿収集から、免疫電気泳動（ＩＥＰ）及び免疫固定電気泳動（ＩＦＥ）を用いて、治療サイクル１から３の１日目においてＭ蛋白質定量化により評価された。治療サイクル３及びそれ以降については、Ｍ蛋白質定量化が１５日目訪問で実施された。これは、その結果を利用して次の治療サイクル前に反応を評価するためである。一般的な定量的免疫グロブリンの評価が、Ｍ蛋白質定量化と共に実施された。
【０４７６】
血清サンプルを用いてＦＬＣ分析を実行し、検知可能なＭ蛋白質（非分泌性／オリゴ分泌性骨髄腫）を有しない多発性骨髄腫対象を調査した。またこれにより、治療に対する早期反応の検知を可能とした。したがって、血清ＦＬＣ分析は、治療サイクル１の１、２、３及び８日目に実施された。また、サイクル４の２、３、８及び１５日目に実施された。並びに、その他全ての治療サイクルの１、８及び１５日目に実施された。Ｍ蛋白質及びＦＬＣは、スクリーニング及びクローズアウト訪問時に分析された。サイクル１の１日目の評価が基線値として用いられた。
【０４７７】
【表１３】
2016053053.tif 000016
【０４７８】
血漿からのＢＴ０６２及びＤＭ４の決定
ＢＴ０６２の単回投与ＢＫ特性を評価するため、ＢＴ０６２のＩＶ投与後、広範囲にわたる血漿サンプリングが１度目の治療サイクル中に実行された。同じ評価が、治療サイクル４中に実施された。それほどではないにせよ、血漿サンプルが、その他全ての治療サイクルの１日目及び８日目並びにクローズアウト及びフォローアップ訪問においても取得された。
【０４７９】
ＳｈｅｄＣＤ１３８及びＨＡＰＡの決定
全ての投与前血漿サンプルが、ｓｈｅｄ／ｓｏｌｕｂｌｅＣＤ１３８（ｓＣＤ１３８）のレベルについて評価され、これによりｓＣＤ１３８のレベルと抗癌活性との間における考え得る相関性が調査された。これらの測定によって、予期したものより低い最大血中濃度値がＢＴ０６２の投与前に存在するｓＣＤ１３８の量に依存していないと判断することも可能になった（図２２参照）。各治療サイクルの一日目及びクローズアウト及びフォローアップ訪問からの投与前血漿サンプルが、ヒトアンチプロダクト抗体（ＨＡＰＡ）の評価により、ＢＴ０６２（製剤）に対する体液性応答の存在について評価された。
【０４８０】
観測されたＳｈｅｄＣＤ１３８測定
骨髄腫患者においては、高レベルのｓＣＤ１３８が観測され得、骨髄腫患者の予後の指標となり得る（Ｍａｉｓｎａｒら、２００５）。
【０４８１】
ＭＧＵＳ及びＭＭの患者の場合、骨髄におけるより高レベルのβ２−ミクログロブリン及び高い血漿細胞含有量に付随する高レベルの溶解性ＣＤ１３８を呈する可能性がある（Ａｒｅｆら、２００３）。
【０４８２】
キットを用いて、溶解性ＣＤ１３８を特定した。驚くべきことに、患者は治療前高レベルのｓＣＤ１３８を呈していたが、患者００３−００３における２０ｍｇ／ｍ２のＢＴ０６２で当該患者が尿Ｍ蛋白質レベルについてやや有効を呈することが分かった。
【０４８３】
可溶性ＣＤ１３８値は、それぞれ異なる対象で特定された。
【０４８４】
【表１４】
2016053053.tif 000017
【０４８５】
組み合わせ研究
考え得る抗骨髄腫薬候補が、細胞株におけるＢＴ０６２の組み合わせパートナーとして評価されている。
【０４８６】
細胞株研究
異種移植マウスモデルにおける組む合わせ研究の前に、細胞株の研究が行われた。異なる細胞株における相乗効果の測定が、Ｃｈｏｕ及びＴａｌｌａｙ（１９８４）に従って実施された。ここでは、メディアンエフェクト分析が用いられた。ここでは、各薬剤及び各細胞株について細胞毒性効果のＩＣ５０値が計算され、更に各薬剤ペアについてＩＣ５０比率が計算された。次にこれら細胞は、かかる薬剤混合の又は薬剤だけの希釈系列にさらされた。実験データは、ＣｏｍｐｕＳｙｎソフトウェア（ＣｏｍｂｏＳｙｎ、Ｉｎｃ．、Ｐａｒａｍｕｓ、ＮＪ）を用いて分析された。各独立した実験について組み合わせインデックス（ＣＩ）が計算され、別々に報告された。この分析では、１未満のＣＩ、１に等しいＣＩ、及び１超のＣＩは、それぞれ相乗効果、相加性及び拮抗作用を示す。この方法の作者であるＴ．Ｃ．Ｃｈｏｕ（ＣｏｍｐｕＳｙｎ．  Ｕｓｅｒ’ｓ  ｇｕｉｄｅ、２００４）の分類によると、相乗効果及び拮抗作用のスケールは、以下に示すとおりである。
【０４８７】
組み合わせインデックス      説明
＜０．１                      非常に強い相乗効果
０．１−０．３                強い相乗効果
０．３−０．７                相乗効果
０．７−０．８５              穏やかな相乗効果
０．８５−０．９              わずかな相乗効果
０．９−１．１                ほぼ相加的
１．１−１．２                わずかな拮抗作用
１．２−１．４５              穏やかな拮抗作用
１．４５−３．３              拮抗作用
３．３−１０                  強い拮抗作用
＞１０                        非常に強い拮抗作用
【０４８８】
【表１５】
2016053053.tif 000018
【０４８９】
この実施例では、ＭＯＬＰ８細胞株が、ボルテゾミブ、サリドマイド、レナリドマイド、メルファラン及びデキサメタゾンへのＢＴ０６２の組み合わせに用いられた。
【０４９０】
サリドマイド又はボルテゾミブとの組み合わせについては、拮抗的効果が得られる一方で、相乗的効果も相加的効果も得られなかった。これら細胞培養研究に対して以下に説明される異種移植モデルでは、ボルテゾミブとの組み合わせが相乗的であった。
【０４９１】
考え得る抗骨髄腫薬剤候補が、異種移植研究におけるＢＴ０６２の組み合わせパートナーとして評価された。ここでは、ＭＯＬＰ８多発性骨髄腫細胞が用いられた。
【０４９２】
実施例１
ＢＴ０６２及びレナリドマイドを用いた組み合わせ治療の抗骨髄腫効果
雌のＳＣＩＤマウスに、ＭＯＬＰ８ヒト骨髄腫細胞が皮下接種された。ＢＴ０６２単独による治療又はレナリドマイドとの組み合わせによる治療が、腫瘍接種後１１日目に開始された。ＢＴ０６２は、１００μｇ、２００μｇ及び４００μｇの濃度のみで用いられると共に、レナリドマイドとの組み合わせで用いられた。レナリドマイドは、１日目から５日目及び８日目から１２日目に１００ｍｇ／ｋｇで腹腔内に投与された。対照グループの動物は、同じスケジュール及び投与経路によりリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）を受けた。
【０４９３】
腫瘍成長は、腫瘍サイズを測定することによりモニターされた。また腫瘍成長は、長さ×幅×高さ×１／２という式で計算され、１０日目、１４日目、１８日目及び２１日目にそれぞれ決定された。
【０４９４】
相乗効果は、以下のようにして計算された（Ｙｕら、２００１；Ｇｕｎａｒａｔｎａｍら、２００９）：
比率（ｒ）＝予期されるＦＴＶ（組み合わせ）／観測されたＦＴＶ（組み合わせ）
ＦＴＶ：フラクショナル腫瘍体積＝平均腫瘍体積（試験）／平均腫瘍体積（対照）
【０４９５】
比率＞１は、相乗的とみなされる一方、ｒ＜１は、相加的未満である。
【０４９６】
比率（ｒ）は１より大きい際、本明細書では“シナジー比”と称される。
【０４９７】
表１５からわかるように、２８日間後、２００μｇ及び４００μｇのＢＴ０６２濃度において相乗効果が観測された。
【０４９８】
【表１６】
2016053053.tif 000019
【０４９９】
【表１７】
2016053053.tif 000020
【０５００】
図２８は、異種移植マウスモデルにおける平均腫瘍体積（ＴＶ）に対する組み合わせ治療の効果を示している。この結果では、組み合わせの相加的効果が示されている。シナジー比については、表１６を参照されたい。
【０５０１】
実施例２
ＢＴ０６２及びベルケイドを用いた組み合わせ治療の抗骨髄腫効果
ベルケイドが、異種移植研究におけるＢＴ０６２の考え得る多発性骨髄腫薬組み合わせパートナーとして評価された。ここでは、ＭＯＬＰ８多発性骨髄腫細胞（ＩＭＧＮ  Ｉｎｃ．）が用いられた。ＢＴ０６２単独による又はベルケイドとの組み合わせによる治療は、腫瘍移植してから１１日間後に開始された。ＢＴ０６２は、１００μｇ、２００μｇ及び４００μｇの濃度のみで用いられると共に、ベルケイドとの組み合わせで用いられた。ベルケイドは、１日目、４日目、８日目及び１１日目に１ｍｇ／ｋｇで投与された。対照グループの動物は、同じスケジュール及び投与経路によりリン酸緩衝塩類溶液（ＰＢＳ）を受けた。腫瘍成長は、腫瘍サイズを測定することによりモニターされた。また腫瘍成長は、長さ×幅×高さ×１／２という式で計算され、１０日目、１４日目、１７日目、２１日目、２４日目及び２８日目にそれぞれ決定された。
【０５０２】
相乗効果は、組み合わせ研究の実施例１と同様にして計算された。
【０５０３】
表１８からわかるように、相乗効果は、全てのＢＴ０６２投与形態において２５日目にベルケイドとＢＴ０６２との組む合わせについて観測された。文献にて報告されたＲ値はより高い（Ｙｕら、２００１）。
【０５０４】
【表１８】
2016053053.tif 000021
【０５０５】
【表１９】
2016053053.tif 000022
【０５０６】
図２９は、異種移植マウスモデルにおける平均腫瘍体積（ＴＶ）に対する組み合わせ治療の効果を示している。この結果では、使用されたモデルにおいてベルケイド単独治療によると腫瘍体積に対する影響がなかったことが示されている。ＢＴ０６２との組み合わせにより、相乗効果が提供された。シナジー比については表１８を参照されたい。
【０５０７】
実施例３：ＢＴ０６２／メルファラン
ＲＰＭＩ細胞が、ヌードマウスへ皮下移植された。マウスは、腫瘍総体積が約１００ｍｍ３に達した際に無作為化された。ＢＴ０６２は、静脈内に異なる２つの濃度で注入された。つまり、４００μｇ／ｋｇ及び１００μｇ／ｋｇの濃度で、それぞれはリンクされたＤＭ４の分子量に基づく。ＰＢＳを負の対照として用いた。各グループについて、それぞれ１つの腫瘍（一方的注入）を有する８匹のマウスが使用された。ＢＴ０６２の毎週投与に続いて、ＢＴ０６２の腹腔内に注入してから１日間後メルファランが毎週１度（３ｍｇ／ｋｇ）投与された。
【０５０８】
その結果は、図３０において示されている。
【０５０９】
上記開示がなされれば、当業者によって多くの他の特徴、変更及び改善が理解されよう。したがってこのような他の特徴、変更及び改善は、本発明の一部とみなされると共に、本発明の範囲は、本発明のサマリー及び以下の請求項によって決定される。
【０５１０】
参考文献
Ａｂｄｅｌｋｅｆｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｉｎｇｌｅ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｓｔｅｍ−ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｌｌｏｗｅｄ  ｂｙ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｉｓ  ｓｕｐｅｒｉｏｒ  ｔｏ  ｄｏｕｂｌｅ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｉｏｎ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １１１；  ２００８；  ｐｐ．：  １８０５−１８１０．
Ａｋｋｉｎａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｏｄｅｌｉｎｇ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｅｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＳＣＩＤ−ｈｕ  ｍｏｕｓｅ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ８４；  １９９４；  ｐｐ．：  １３９３−１３９８．
Ａｒｍｏｕｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ  ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｌａｃｋｉｎｇ  Ｆｃｇａｍｍａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｉ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｔｒｉｇｇｅｒｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ；”  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ；  ２９（８）；  １９９９；  ｐｐ．：  ２６１３−２４．
Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ：  Ｎｅｗ  Ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ；  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ；  ２０００；  ｐｐ．：  １４７−１６５．
Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ；  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｅｄｕｃ  Ｐｒｏｇｒａｍ；  ２００２；  ｐｐ．：  ２１４−４０．
Ａｎｔｔｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．：  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｈａｓ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｉｎ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ；”  Ｂｒ  Ｊ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  ７９  （３／４），  １９９９，  ｐｐ．：  ５５８−５６４．  
Ａｎｔｔｏｎｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｉｇｈ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｆａｖｏｕｒａｂｌｅ  ｏｕｔｃｏｍｅ  ｉｎ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｒｅａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｒａｄｉｃａｌ  ｓｕｒｇｅｒｙ；”  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ；  ３２（３）；  Ｊｕｎｅ  ２００１；  ｐｐ．：  ２９７−３０５．
Ａｒｅｆ  ｅｔ  ａｌ．：  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｔｏ  ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｆａｃｔｏｒｓ；”  Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ；  ８；  ２００３；  ｐｐ．：２２１−２２８．
Ｂａｒｂａｒｅｓｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｉｇｈ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｉｓ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｔｏ  ａｎ  ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ａｎｄ  ｔｏ  ｐｏｏｒｅｒ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ；  ９８（３）；  Ａｕｇｕｓｔ  １，  ２００３；  ｐｐ．：  ４７４−８３．
Ｂａｔａｉｌｌｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ，  ｒｅａｃｔｉｖｅ  ａｎｄ  ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ．  Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ”ｍａｎｙ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａｓ”  ａｎｄ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｔｈｅｒａｐｙ；”  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａ；  ９１（９）；  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００６；  ｐｐ．：  １２３４−４０．    
Ｂａｙｅｒ−Ｇａｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  （ＣＤ１３８）  ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｂｉｏｐｓｉｅｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｓｈｅｄ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ  ｉｎ  ｆｉｂｒｏｔｉｃ  ｒｅｇｉｏｎｓ；”  Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ．；  １４（１０）；  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００１；  ｐｐ．：  １０５２−８．
Ｂｅｅｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１  （Ｔ−ＤＭ１），  ａ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｃｌａｓｓ  ＨＥＲ２  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  （ＡＤＣ），  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  （ｐｔｓ）  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ＨＥＲ２＋  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  （ＢＣ）；”  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ；  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ；  Ｍａｙ  ２０，  ２００８；  ｐｐ．：  １０２８．
Ｂｅｒｅｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｅｗ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｓｕｐｐｏｒｔ  Ｐａｌｌｉａｔ  Ｃａｒｅ；  ２（３）；  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００８；  ｐｐ．：  ２０４−１０．
Ｂｅｒｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｙｎｄｅｃａｎｓ：  ａ  ｆａｍｉｌｙ  ｏｆ  ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ；”  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ；  ８；  １９９２；  ｐｐ．：  ３６５−３９３．
Ｂｅｓｔｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｍａｌｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｌｉｋｅ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｗｉｔｈ  ｐｒｅｓｃｒｉｂｅｄ  ｌｉｇａｎｄ  ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｉｅｓ  ｄｅｒｉｖｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  ｌｉｐｏｃａｌｉｎ  ｆｏｌｄ；”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ；  ９６；  １９９９；  ｐｐ．：  １８９８−１９０３．
Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｖｉｎｂｌａｓｔｉｎｅ  ｓｉｔｅｓ  ｏｆ  ｔｕｂｕｌｉｎ；”  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．；  ７５；  １９７７；  ｐｐ．：  １５９−１６２．
Ｂｉｓｐｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｋｉｎａｓｅｓ  ｂｙ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ａｂｒｏｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｒｏｍａ−ｄｅｒｉｖｅｄ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｃｙｔｏｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０７（５）；  Ｍａｒｃｈ  １，  ２００６；  ｐｐ．：  ２０７９−８９．  
Ｂｉｓｓｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  Ｔａｘｏｔｅｒｅ  （ＲＰ  ５６９７６，  ＮＳＣ  ６２８５０３），  ａ  Ｔａｘｏｌ  Ａｎａｌｏｇｕｅ”，  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５１，  １９９１，  ＰＰ．：  ４８４５−４８５２．  
Ｂｌａｄｅｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｏｎｃｏｌ；  ２０（６）；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００８；  ｐｐ．：  ６９７−７０４．
Ｂｌｕｍ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ：  Ａ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｓａ  ｍａｃｒｏｌｉｄｅ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ａｃｔｉｖｉｔｙ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｐ；  ６２；  １９７８；  ｐｐ．：  ４３５−４３８．
Ｂｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｉｇｈ  ｒｉｓｋ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ：  ｔｈｅ  ｃａｓｅ  ｆｏｒ  ｎｏｖｅｌ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ；”  Ｊ  Ｕｒｏｌ  Ｄｅｃ；  １７６  （６Ｐｔ  ２）；  ２００６；  ｐｐ．：  Ｓ７６−８０．
Ｂｌａｅｔｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｄｒｕｇｓ  ｔｏ  Ｅｎｈａｎｃｅ  ｔｈｅ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｃｙ  ｏｆ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｓ  Ｔｕｍｏｒ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ；”    Ｏｊｉｍａ，  Ｉ．，  Ｖｉｔｅ，  Ｇ．Ｄ．  ａｎｄ  Ａｌｔｍａｎｎ，  Ｋ．−Ｈ．，  Ｅｄｉｔｏｒｓ；  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ−Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，  ＤＣ，  ２００１；  ２００１；  ｐｐ．：  ３１７−３３８．
Ｂｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｐｐｒｏｖａｌ  ｓｕｍｍａｒｙ：  ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ  ｉｎ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ；”  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ７；  ２００１；  ｐｐ．：  １４９０−１４９６．
Ｂｕｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−ｃｌａｓｓ  ＨＥＲ２  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｉｎ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ２−ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ；”  ２９ｔｈ  Ａｎｎｕａｌ  Ｓａｎ  Ａｎｔｏｎｉｏ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  （ＳＡＢＣＳ）；  Ｐｏｓｔｅｒ  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃２０７０；  ２００６．
Ｃａｂａｎｉｌｌａｓ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ  ｕｓｉｎｇ  ａ  ３  ｄａｙ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｐ；  ６２；  １９７８；  ｐｐ．：  ４２５−４２８．
Ｃａｒｂｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “ＡＩＤＳ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｌａｓｍａ−  ｂｌａｓｔｉｃ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｏｒａｌ  ｃａｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｊａｗｓ：  ａ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ｄｉｌｅｍｍａ．Ａｎｎ；”  Ｏｔｏｌ．  Ｒｈｉｎｏｌ．  Ｌａｒｙｎｇｏｌ；  １０８；  １９９９；  ｐｐ．：  ９５−９９．
Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈｉｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｐｒｏｔｅｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ．  Ｎ−ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−３−（２−ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ）  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，  ａ  ｎｅｗ  ｈｅｔｅｒｏｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅａｇｅｎｔ；”  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｊ；  １７３；  １９７８；  ｐｐ．：  ７２３−７３７．
Ｃａｒｔｅｒ  Ｐ；  “Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ  ｔｈｅ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｂａｓｅｄ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ；”  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ；  １；  ２００１；  ｐｐ．：１１８−１２９．
Ｃａｒｔｅｒ  ａｎｄ  Ｓｅｎｔｅｒ，  ”Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ”，  Ｔｈｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊｏｕｒｎａｌ，  Ｖｏｌ．  １４（３），  ２００８，  ｐｐ．：  １５４−１６９
Ｃｈａｂｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｉｎｉｔｉａｌ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ  ｏｆ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ，  ａｎ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｐｌａｎｔ  ａｌｋａｌｏｉｄ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｐ；  ６２；  １９７８；  ｐｐ．：  ４２９−４３３．
Ｃｈａｎａｎ−Ｋｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｈｕＮ９０１−ＤＭ１  （ＢＢ−１０９０１）  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｐｓｅｄ／Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ＣＤ５６−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０８（１１）；  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃１１７４  （ＡＳＨ  Ｍｅｅｔｉｎｇ）；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １６，  ２００７．
Ｃｈａｎａｎ−Ｋｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＩＭＧＮ９０１  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｌａｐｓｅｄ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｐｓｅｄ／Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ＣＤ５６−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｂｌｏｏｄ  （ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）；  １１２；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００８；  ｐｐ．：  ３６８９．
Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ：  ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ５２；  １９９２；  ｐｐ．：  １２７−１３１．
Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａ  ＣＣ−１０６５  ａｎａｌｏｇｕｅ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｆｏｒｍａｔｉｏｎ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；  ５５；  １９９５；  ｐｐ．：  ４０７９−４０８４．  
Ｃｈａｒｎａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．；  “ＲＡＮＴＥＳ  （ＣＣＬ５）  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａ  ＣＣＲ５−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ  ｓｈｅｄｄｉｎｇ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  （ＣＤ１３８）  ａｎｄ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−４  ｆｒｏｍ  ＨｅＬａ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｓ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ｓｈｅｄ  ｅｃｔｏｄｏｍａｉｎｓ  ｏｆ  ｔｈｅｓｅ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ  ａｓ  ｗｅｌｌ  ａｓ  ｗｉｔｈ  ｔｈｏｓｅ  ｏｆ  ＣＤ４４；”  Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ；  １５（２）；  ２００５；  ｐｐ．：  １１９−１３０．  
Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ  ｃｅｌｌｓ  ｗｉｔｈ  ｓｅｃｏｎｄａｒｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｉｎ  ＳＣＩＤ−ｈｕ  ｍｉｃｅ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ８４；  １９９４；  ｐｐ．：  ２４９７−２５０５．
Ｃｈｉｌｏｓｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “ＣＤ１３８／ｓｙｎｄｅｃａｎ−１：  ａ  ｕｓｅｆｕｌ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｍａｒｋｅｒ  ｏｆ  ｎｏｒｍａｌ  ａｎｄ  ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｏｎ  ｒｏｕｔｉｎｅ  ｔｒｅｐｈｉｎｅ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｂｉｏｐｓｉｅｓ；”  Ｍｏｄ  Ｐａｔｈｏｌ．；  １２；  １９９９；  ｐｐ．：  １１０１−１１０６．
Ｃｈｏｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１，  ａ  ｋｅｙ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  ｉｎ  ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ  ｃａｎｃｅｒ；”  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  １２１（４）；  ２００７；  ｐｐ．：  ７４１−５０．  
Ｃｈｏｕ  ａｎｄ  Ｔａｌａｌａｙ；  “Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｄｏｓｅ−ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ：  ｔｈｅ  ｃｏｍｂｉｎｅｄ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｄｒｕｇｓ  ｏｎ  ｅｎｚｙｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ；”  Ａｄｖ．  Ｅｎｚｙｍｅ  Ｒｅｇｕｌ．  ２２；  １９８４，  ｐｐ．：２７−５５．
Ｃｌｅｍｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂ−Ｂ２  ａｎｄ  Ｂ−Ｂ４，  ｔｗｏ  ｎｅｗ  ｍＡｂ  ａｇａｉｎｓｔ  ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ；  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｐｒｅｓｓ．；  １；  １９９５；  ｐｐ．：  ７１４−７１５．
Ｃｏｎｅｊｏ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｓ  ｕｐ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｉｎ  ｏｔｈｅｒ  ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  ｃａｎｃｅｒｓ；”  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ；  ８８（１）；  ２０００  Ｏｃｔ  １；  ｐｐ．：１２−２０．
Ｃｏｕｔｕｒｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ｏｆ  ２１３Ｂｉ−ａｌｐｈａ  ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５（１０  Ｓｕｐｐｌ．）；  Ｏｃｔ  １９９９；  ｐｐ．：  ３１６５ｓ−３１７０ｓ．
Ｄａｖｉｅｓ  ＥＪ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  Ｈｅｐａｒａｎ  Ｓｕｌｆａｔｅ  Ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎｓ；”  Ｏｖａｒｉａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  １０（１５）；  ２００４；  ｐｐ．：  ５１７８−８６．
ＤｅＧｅｏｒｇｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｄｒｕｇｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；  ４１（３）；  １９９８；  ｐ．：  １７３−８５．
Ｄｍｏｓｚｙｎｓｋａ  Ａ．；  “Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｕｒｒｅｎｔ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｔｈｅｒａｐｙ；”  Ｐｏｌ  Ａｒｃｈ  Ｍｅｄ  Ｗｅｗｎ；  １１８（１０）；  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００８；  ｐｐ．：  ５６３−６．  
Ｄｈｏｄａｐｋａｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｉｓ  ａ  ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ：  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ，  ｇｒｏｗｔｈ，  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｃｅｌｌ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ９１；  １９９８；  ｐｐ．：  ２６７９−２６８８．
Ｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｎｏｖｅｌ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１９  （Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ  ７）；  ２００８；  ｐｐ．：  ｖｉｉ１２１−１２７．
Ｄｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｃｏｒｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｅｐｉｔｏｐｅｓ  ｏｆ  Ｂ−Ｂ２  ａｎｄ  Ｂ−Ｂ４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；”  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ；  ２６；  １９９８；  ｐｐ．：  ６７−７０．
Ｄｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ，  ａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｎ  ｆｉｒｓｔ  ｒｅｌａｐｓｅ；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；  ４１；  ２００１；  ｐｐ．：  １２０６−１２１４．
Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｙｅｌｏｍａ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ：  ａ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｒｅｐｏｒｔ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｄｖｉｓｏｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ；”  Ｈｅｍａｔｏｌ  Ｊ，  ４（６）；  ２００３；  ｐｐ．：  ３７９−９８．
Ｄｕｒｉｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｕｎｉｆｏｒｍ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｌｅｕｋｅｍｉａ；  ２０（１２）；  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００６；  ｐｐ．：  ２２２０．
Ｅａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅａｒｌｙ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａｎ  ｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔ  ｓｃｈｅｄｕｌｅ  ｆｏｒ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ  （ＮＳＣ−１５３８５８）：  ｂｒｉｅｆ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ；”  Ｊ  Ｎａｔｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉ  （Ｂｅｔｈｅｓｄａ）；  ６０；  １９７８；  ｐｐ．  ９３−９６．
Ｅｄｉｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｎｉｍａｌ  ｍｏｄｅｌｓ；”  Ｎｅｏｐｌａｓｉａ；  １；  １９９９；  ｐｐ．：３０３−３１０．
Ｆａｃｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｕｐｅｒｉｏｒｉｔｙ  ｏｆ  ｍｅｌｐｈａｌａｎ−ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ  （ＭＰ）  ＋  ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ  （ＴＨＡＬ）  ｏｖｅｒ  ＭＰ  ａｎｄ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｅｌｄｅｒｌｙ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．；  ２４（Ｓｕｐｐｌ．  １８）；  Ａｂｓｔｒａｃｔ  １；  ２００６．
Ｆｏｓｓｅｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ＢＢ−１０９０１  （ｈｕＮ９０１−ＤＭ１）  ｇｉｖｅｎ  ｗｅｅｋｌｙ  ｆｏｒ  ｆｏｕｒ  ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ  ｗｅｅｋｓ  ｅｖｅｒｙ  ６  ｗｅｅｋｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ＳＣＬＣ  ａｎｄ  ＣＤ５６−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏ，  ＡＳＣＯ    Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ；  ２３（１６Ｓ），  Ｐａｒｔ  Ｉ  ｏｆ  ＩＩ；  Ｊｕｎｅ  １，  ２００５；  ７１５９；  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ．
Ｇａｌｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ＭＬＮ２７０４  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  Ｗｉｔｈ  Ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  Ｃａｎｃｅｒ；”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；  Ｍａｙ  １，  ２００８；  ｐｐ．：  ２１４７−２１５４．
Ｇａｔｔｅｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ａｎｔｉ−ＣＤ１３８  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｓ  ｔｏｏｌｓ  ｆｏｒ  ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ．；  １０４；  １９９９；  ｐｐ．：  １５２−１６２．
Ｇｈｏｂｒｉａｌ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｅｍｅｒｇ  Ｄｒｕｇｓ；    １２（１）；  Ｍａｒｃｈ  ２００７；  ｐｐ．：  １５５−６３．
Ｇｉｌｅｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＡＶＥ９６３３，  ａｎ  ＡｎｔｉＣＤ３３−Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ  Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ，  Ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ａｓ  ａｎ  Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｉｎ  Ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  Ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ／Ｒｅｌａｐｓｅｄ  ＣＤ３３−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  （ＡＭＬ）；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０８（１１）；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １６，  ２００６．
Ｇｒｅｉｐｐ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｓｔａｇｉｎｇ  ｓｙｓｔｅｍ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ，”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ；  ２３（１５）；  Ｍａｒｙ  ２０，  ２００５；  ｐｐ．：３４１２−２０．
Ｇｒｅｉｐｐ  ａｎｄ  Ｌｕｓｔ；  “Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｒｅｌａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｇａｍｍｏｐａｔｈｉｅｓ  ｏｆ  ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ａｎｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ．  Ａｕｇ．  １３  Ｓｕｐｐｌ  ２；  １９９５；  ｐｐ．：１０−２１．
Ｇｕｎａｒａｔｎｕｍ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｇ−ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎ  ａｃｔ  ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ；”  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ；  ７８；  ２００９；  ｐｐ．：  １１５−１２２．
Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３３  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ；”  Ｃｈｏｉｃｅ  ｏｆ  ｌｉｎｋｅｒ；  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ；  １３；  ２００２；  ｐｐ．：  ４０−４６．
Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｅｗ  ｉｎｓｉｇｈｔｓ  ｉｎｔｏ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−２  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｕｍｏｕｒｉｇｅｎｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｊ  Ｍｏｌ  Ｈｉｓｔｏｌ；  ３５（３）；  ２００４；  ｐｐ．：  ３１９−２６．
Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｏｓｓ  ｏｆ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｗｉｔｈ  ｓｔａｇｅ  ａｎｄ  ｌｏｃａｌ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｏｆ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｓ：  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ａｎｎｏｔａｔｅｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”ＢＭＣ  Ｃａｎｃｅｒ  ８；  ２００８；  ｐ．１８５．
Ｈｅｌｆｔ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ａｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｎｃｅ  ｗｅｅｋｌｙ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  １０（１３）；  ２００４  Ｊｕｌ  １；  ｐｐ．：  ４３６３−８．
Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｅｒｉｆｏｓｉｎｅ，  ａｎ  ｏｒａｌ  ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｋｙｌｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ，  ｉｎｈｉｂｉｔｓ  Ａｋｔ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０７（１０）；  ２００６；  ｐｐ．：  ４０５３−６２．
Ｈｉｄｅｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｔｏ  ｉｄｅｎｔｉｆｙ  ｎｅｗ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｔａｒｇｅｔｓ；”  Ｎａｔ  Ｒｅｖ  Ｃａｎｃｅｒ；  ７（８）；  ２００７；  ｐｐ．：  ５８５−９８．
Ｈｉｒｏｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｎＢＴ０６２  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｔｏ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ  Ｈａｓ  Ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＤ１３８  Ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  Ｖｉｖｏ；”  Ｂｌｏｏｄ；  （ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）；  １１２；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２００８；  ｐ．：  １７１６．
Ｈｏｌｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｗｅｅｋｌｙ  ｄｏｓｉｎｇ  ｏｆ  ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１  （Ｔ−ＤＭ１）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  （ｐｔｓ）  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ＨＥＲ２＋  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  （ＢＣ）；”  ＡＳＣＯ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ；  Ｍａｙ  ２０，  ２００８；  ｐ．：  １０２９．
Ｈｏｒｖａｔｈｏｖａ  ｅｔ  ａｌ．；  Ｉｎ：  ａｌ．  ＳＦＳｅ，  ｅｄ．  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｖ．；  Ｏｘｆｏｒｄ：  Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ；  １９９５；  ｐｐ．：  ７１３−７１４．
Ｈｕａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ＦＡＣＴ／ＧＯＧ−Ｎｔｘ  ｓｕｂｓｃａｌｅ  ｆｏｒ  ｐｌａｔｉｎｕｍ／ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ  ｓｙｍｐｔｏｍｓ：  ａ  ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃ  ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ｇｒｏｕｐ  ｓｔｕｄｙ；”  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｃａｎｃｅｒ；  １７；  ２００７；  ｐｐ．：  ３８７−９３．
Ｈｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｅｗ  Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｗｏｒｌｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ；  ６；  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ６，  ２００６；  ｐｐ．：  １４７５−５０３．
Ｉｋｅｄａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｎＢＴ０６２  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｔｏ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ  ｈａｓ  ｐｏｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＤ１３８  ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ；”  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；  １５（１２）；  ２００９；  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｔ  ｈｔｔｐ：／／ｐｒｅｃｅｄｉｎｇｓ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／２３７４／ｖｅｒｓｉｏｎ／１．
Ｉｓｈｉｔｓｕｋａ  ｅｔ  ａｌ．；“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ＣＤ５６  ｂｙ  ｔｈｅ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ＩＭＧＮ９０１  （ｈｕＮ９０１−ＤＭ１）：  ａ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｍｏｄａｌｉｔｙ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｎａｔｕｒａｌ  ｋｉｌｌｅｒ／Ｔ  ｃｅｌｌ  ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ；”  Ｂｒ．  Ｊ．  Ｈａｅｍａｔｏｌ；  １４１（１）；  Ａｐｒｉｌ  ２００８；  ｐｐ．：１２９−３１．
Ｉｓｓｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ；”Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｒｅａｔ  Ｒｅｖ；  ５；  １９７８；  ｐｐ．：  １９９−２０７．
Ｊｅｍａｌ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃａｎｃｅｒ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ；”  ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ  Ｃｌｉｎ；  ５８；  ２００８；  ｐｐ．：  ７１−９６．
Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｏｖｅｌ  ａｎｄ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｓｍａｌｌ  Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ；”  ＡＳＣＯ  Ｅｄｕｃａｔｉｏｎａｌ  Ｂｏｏｋ；  Ｊａｎｕａｒｙ  １，  ２００８；  ｐｐ．：  ３６３−３６７．
Ｋｏｖｔｕｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｄｅｓｉｇｎｅｄ  ｔｏ  ｅｒａｄｉｃａｔｅ  ｔｕｍｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ  ａｎｄ  ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔａｒｇｅｔ  ａｎｔｉｇｅｎ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ６６（６）；    ２００６；  ｐｐ．：  ３２１４−２１．
Ｋｕｅｓｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＥｒｂＢ２  Ｇｅｎｅ  Ｓｔａｔｕｓ，  ｍＲＮＡ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ａ  Ｐａｎｅｌ  ｏｆ  ＞１００  Ｈｕｍａｎ  Ｔｕｍｏｒ  Ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｏｆ  Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  Ｏｒｉｇｉｎ；  Ｏｎｋｏｌｏｇｉｅ；  ２９；  ２００６；  ｐｐ：２４９−２５６
Ｋｒｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｉｇｈ−ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｏｆ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；”  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  Ｍｅｔｈｏｄｓ；  ２５４；  ２００１；  ｐｐ．：  ６７−８４．  
Ｋｒｏｐ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  Ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  Ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ−ＤＭ１，  ａ  Ｆｉｒｓｔ−ｉｎ−Ｃｌａｓｓ  ＨＥＲ２  Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｒｕｇ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ  （ＡＤＣ），  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ２＋  Ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ；”  １４ｔｈ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  （ＥＣＣＯ  １４）；  Ｐｏｓｔｅｒ  ＃２１１８；  ２００７．
Ｋｕｐｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｌｅｕｋｅｍｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｍｏｎｇ  ｔｈｅ  ｎａｔｕｒａｌｌｙ  ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ  ａｎｄ  ｓｅｍｉｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ；”  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ；  ２１；  １９７８；  ｐｐ．：３１−３７．
Ｋｙｌｅ；  “  Ｂｅｎｉｇｎ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｇａｍｍｏｐａｔｈｙ−ａｆｔｅｒ  ２０  ｔｏ  ３５  ｙｅａｒｓ  ｏｆ  ｆｏｌｌｏｗ−ｕｐ；”  Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ６８（１）；  １９９３；  ｐｐ．：２６−３６．
Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ；  ３５１（１８）；  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２８，  ２００４；  ｐｐ．：１８６０−７３．
Ｋｙｌｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，  ｓｔａｇｉｎｇ，  ｒｉｓｋ  ｓｔｒａｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｄｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｌｅｕｋｅｍｉａ；  ２３；  ２００９；  ｐｐ．：  ３−９．
Ｋｙｏｉｚｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｈｕｍａｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｉｎ  ＳＣＩＤ−ｈｕ  ｍｉｃｅ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ７９；  １９９２；  ｐｐ．：１７０４−１７１１．
Ｋｙｏｉｚｕｍｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｔｈｅ  ＳＣＩＤ−ｈｕ  ｍｏｕｓｅ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ８１；  １９９３；  ｐｐ．：１４７９−１４８８．
Ｌａｍｂｅｒｔ  ＪＭ；  “Ｄｒｕｇ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ；”  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ；  ５；  ２００５；  ｐｐ．：  ５４３−５４９．
Ｌａｎｇｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｃｈａｉｎｓ  ａｒｅ  ｒｅｑｕｉｒｅｄ  ｆｏｒ  ｏｐｔｉｍａｌ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｆｕｎｃｔｉｏｎ；”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ；  ２７３（４５）；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ６，  １９９８；  ｐｐ．：  ２９９６５−７１．
Ｌｅｇｒａｎｄ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｎ  ｏｐｅｎ  ｌａｂｅｌ，  ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ＡＶＥ９６３３  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ａｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ａｇｅｎｔ  ｂｙ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  （ＩＶ）  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｗｅｅｋｌｙ  ｆｏｒ  ２  ｗｅｅｋｓ  ｉｎ  ａ  ４−ｗｅｅｋ  ｃｙｃｌｅ  ｔｏ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ＣＤ３３−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  Ａｃｕｔｅ  Ｍｙｅｌｏｉｄ  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  （ＡＭＬ）；”  Ｂｌｏｏｄ；  １１８（１１）；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １６，  ２００７．
Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｐａｘｉｌｌｉｎ，  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ａｎｄ  ＥＭＭＰＲＩＮ  ｉｎ  ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ；”  Ｗｏｒｌｄ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．  １１（１０）；  ２００５；  ｐｐ．：１４４５−５１．
Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌａｒｇｅ  ｃｏｌｏｎ  ｔｕｍｏｒ  ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ  ｂｙ  ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄｓ；”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ；  ９３；  １９９６；  ｐｐ．：８６１８−８６２３．
Ｌｏｕｓｓｏｕａｒｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｉｍｐａｃｔ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｉｎｖａｓｉｖｅ  ｄｕｃｔａｌ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ；”  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ；  ２８；  ２００８；  ｐｐ．：  １９９３−１９９８
Ｌｏｒｉｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ＢＢ−１０９０１  （ｈｕＮ９０１−ＤＭ１）  ｇｉｖｅｎ  ｄａｉｌｙ  ｂｙ  ＩＶ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｒｅｅ  ｃｏｎｓｅｃｕｔｉｖｅ  ｄａｙｓ  ｅｖｅｒｙ  ｔｈｒｅｅ  ｗｅｅｋｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＳＣＬＣ  ａｎｄ  ｏｔｈｅｒ  ＣＤ５６−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ；  ４（１２）；  ２００６；  ｐｐ．：  １９５．
Ｌｕｄｗｉｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｕｐｐｏｒｔｉｖｅ  ｃａｒｅ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍ  Ｂｅｓｔ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ＆  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ；”    ２０；  Ｉｓｓｕｅ  ４；  ２００７；  ｐｐ．：８１７−８３５．
ＭｃＣａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｈｕＮ９０１−ＤＭ１  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ  （ＳＣＬＣ）  ａｎｄ  ＣＤ５６−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏ；  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｐａｒｔ  １；  ２５（１８Ｓ）；  ２００７  Ｊｕｎｅ  ２０；  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ；  ｐ．：１８０８４．
Ｍａｔｅｏｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ｐｌｕｓ  ｍｅｌｐｈａｌａｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ  ｉｎ  ｅｌｄｅｒｌｙ  ｕｎｔｒｅａｔｅｄ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｐｈａｓｅ  １／２  ｓｔｕｄｙ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０８；  ２００６；  ｐｐ．：  ２１６５−２１７２．
ＭｃＣｕｎｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  ＳＣＩＤ−ｈｕ  ｍｏｕｓｅ：  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｍａｔｏｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ；”  Ｓｃｉｅｎｃｅ；  ２４１；  １９９８；  ｐｐ．：  １６３２−１６３９．
Ｍｅｎｎｅｒｉｃｈ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｈｉｆｔ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｆｒｏｍ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ  ｔｏ  ｓｔｒｏｍａｌ  ｃｅｌｌｓ  ｄｕｒｉｎｇ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｕｒｓ；”  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ；  ４０（９）；  Ｊｕｎｅ  ２００４；  ｐｐ．：  １３７３−８２．
Ｍｉｌｏｗｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ  ａｎｔｉｇｅｎ  （ＰＳＭＡ）−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ＭＬＮ２７０４  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  （ｐｔｓ）  ｗｉｔｈ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｔ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  （ＣＲＰＣ）；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏ；  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｐａｒｔ  Ｉ；  ２４（１８Ｓ）；  ２００６  ｐ．：  ４５００．
Ｍｉｔａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ＣａｎＡｇ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ，  ｈｕＣ２４２−ＤＭ４，  ｉｎ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ＣａｎＡｇ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏ；  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  Ｐａｒｔ  １；  ２５（１８Ｓ）；  ２００７  Ｊｕｎｅ  ２０；  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ；  ｐ．：  ３０６２．
Ｍｉｔｓｏｇｉａｎｎｉｓ  ｅｔ  ａｌ；  “Ｐｌａｓｍａｃｙｔｏｉｄ  ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｂｌａｄｄｅｒ；”  Ｕｒｏｌｏｇｙ６６（１）；  ２００５；  ｐ．  １９４．
Ｍｏｒｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｏｒａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｌａｎｃｅｔ  Ｏｎｃｏｌ；  ７（４）；  Ａｐｒｉｌ  ２００６；  ｐｐ．：３１６−２５．
Ｍｏｓｍａｎｎ  Ｔ．；  “Ｒａｐｉｄ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｎｄ  ｓｕｒｖｉｖａｌ：  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｔｏ  ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ａｓｓａｙｓ；”  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ；  ６５；  １９８３  ｐｐ．：５５−６３．
Ｍｕｎｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ；”  Ｉｎ：  Ｂｒａｕｎｗａｌｄ  Ｅ，  Ｆａｕｃｉ  ＡＳ，  Ｋａｓｐｅｒ  ＤＬ，  Ｈａｕｓｅｒ  ＳＬ，  Ｌｏｎｇｏ  ＤＬ，  Ｊａｍｅｓｏｎ  ＪＬ，  ｅｄｉｔｏｒｓ；  Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；  １６ｔｈ  ｅｄ；  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  ：  ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｄｉｖｉｓｉｏｎ；  ２００８．  ｐｐ．：  ７００−７０７．
Ｎａｍｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｇｒｏｗｔｈ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ｍａｒｒｏｗ  ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ｏｆ  ＳＣＩＤ−ｈｕ  ｍｉｃｅ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ８２；  １９９３；  ｐｐ．：２５２６−２５３６．
ＮＣＣＮ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ；  “ＮＣＣＮ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｉｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ；”  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｖ．２．２００９；  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｎｅｔｗｏｒｋ；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ９，  ２００８；  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｔ  ｗｗｗ．ｎｃｃｎ．ｏｒｇ．
Ｎｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ  ｉｎ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  （Ｗｉｌｌｉｓｔｏｎ  Ｐａｒｋ）；  ２１（１２）；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  ２７７；  ｐｐ．：１５０３−８．
Ｎｕｍａ  ｅｔ  ａｌ．；”Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｕｔｅｒｉｎｅ  ｃｅｒｖｉｘ：  ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｌｙｍｐｈ  ｎｏｄｅ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ；    Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０（１）；  ｐｐ．：２００２  ３９−４３．
Ｏｃｉｏ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｎｅｗ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｆｉｎｄｉｎｇｓ；”  Ｌａｎｃｅｌｔ  Ｏｎｃｏｌ：  ９（１２）；  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００８；  ｐｐ．：１１５７−６５．
Ｏ’Ｃｏｎｎｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．；  “ＣＤ１３８  （Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１），  ａ  Ｐｌａｓｍａ  Ｃｅｌｌ  Ｍａｒｋｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｒｏｆｉｌｅ  ｉｎ  Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  ａｎｄ  Ｎｏｎｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ  Ｎｅｏｐｌａｓｍｓ；”  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ；  １２１；  ２００４；  ｐｐ．：２５４−２６３．
Ｏｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｕｍｏｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｎｏｖｅｌ  ｔａｘｏｉｄ−ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；”  Ｊ．  Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．；  ４５；  ２００２；  ｐｐ．  ５６２０−５６２３．  
Ｏｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  Ａｎｄ  Ｒｅｓｐｏｎｓｅ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  Ｏｆ  Ｔｈｅ  Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ；”  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ；  ５；  １９８２；  ｐｐ．：  ６４９−６５５．
Ｏｌａｆｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｖａｌｅｎｔ  ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ａｎｔｉ−ＣＥＡ  ｄｉａｂｏｄｙ  ａｌｌｏｗｓ  ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｉｎｇ  ｆｏｒ  ｔｕｍｏｒ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；”  Ｐｒｏｔ．  Ｅｎｇ．  Ｄｅｓｉｇｎ  ＆  Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  １７；  １；  ２００４；  ｐｐ．：２１−２７．
Ｏｒｏｓｚ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｓｏｆｔ  ｔｉｓｓｕｅ  ｔｕｍｏｕｒｓ；”  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ２１（１Ｂ）；  ２００１；  ｐｐ．：７３３−７．
Ｐａｄｌａｎ，  ＥＡ；  “Ａ  ｐｏｓｓｉｂｌｅ  ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ  ｆｏｒ  ｒｅｄｕｃｉｎｇ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｗｈｉｌｅ  ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ  ｔｈｅｉｒ  ｌｉｇａｎｄ−ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ；”  Ｍｏｌ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．；  ２８；  １９９１；  ｐｐ．：  ４８９−４９８．
Ｐａｌａｃｉｏｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂ−Ｂ４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｕｍａｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ；  ９６（３）；  Ｍａｒｃｈ  １９９７；  ｐｐ．：６５５−６５７．
Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｏｒａｌ  ｒｅｖｌｉｍｉｄ  ｐｌｕｓ  ｍｅｌｐｈａｌａｎ  ａｎｄ  ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ  （Ｒ−ＭＰ）  ｆｏｒ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｓｔｕｄｙ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０８；  （ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）；  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ８００；  ２００６．
Ｐａｌｕｍｂｏ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｌｅｕｋｅｍｉａ；  ２３；  Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １３，  ２００８；  ｐｐ．：  ４４９−４５６．  
Ｐａｔｒｉａｒｃａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ａ  ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ  ｓｔａｔｅｍｅｎｔ  ｆｒｏｍ  Ｉｔａｌｉａｎ  ｅｘｐｅｒｔｓ；”  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ；  ８２（２）；  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  ２００９；  ｐｐ．：９３−１０５．
Ｐａｙｎｅ  Ｇ．；  “Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ；  ３；  ２００３；  ｐｐ．：２０７−２１２．
Ｐｅｇｒａｍ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  ＩＩ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｕｓｉｎｇ  ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ｈｕｍａｎｉｚｅｄ  ａｎｔｉ−ｐ１８５ＨＥＲ２／ｎｅｕ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｐｌｕｓ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＨＥＲ２／ｎｅｕ−ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｔｏ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；”  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．；  １６；  １９９８；  ｐｐ．：  ２６５９−２６７１．  
Ｐｏｄａｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ  ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｅｗ  ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｔｈｅｒａｐｙ；”  Ｌｅｕｋｅｍｉａ；  ２３（１）；  Ｊａｎｕａｒｙ  ２００９；  ｐｐ．：  １０−２４．
Ｑｉｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓ  ｏｆ  ＩＭＧＮ２４２  （ｈｕＣ２４２−ＤＭ４）  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＣａｎＡｇ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，  ２００８  ＡＳＣＯ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  （Ｐｏｓｔ−Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｅｄｉｔｉｏｎ）；  ２６（１５Ｓ）；  Ｍａｙ  ２０，  ２００８；  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ；  ｐ．：  ３０６６．
Ｑｕａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．：  “Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  （ＩｍｉＤＳ）  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ，“  Ｌｅｕｋｅｍｉａ；  ２４；  ２０１０；  ｐｐ．：  ２２−３２．    
Ｒａｊｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ；  ６（９）；  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００６；  ｐｐ．：  １２３９−４７．
Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｗｉｔｈ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｐｌｕｓ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  （Ｒｅｖ／Ｄｅｘ）  ｆｏｒ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｂｌｏｏｄ；  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  １５，  ２００５；  １０６（１３）；  ｐｐ．：  ４０５０−４０５３．  
Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｐｌｕｓ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｗｉｔｈ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ａｌｏｎｅ  ｉｎ  ｎｅｗｌｙ  ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  Ａ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌ  ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｅａｓｔｅｒｎ  ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２００６；  ２４；  ｐｐ．：  ４３１−４３６．
Ｒａｊｋｕｍａｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  Ｔｒｉａｌ  ｏｆ  Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  Ｐｌｕｓ  Ｈｉｇｈ−Ｄｏｓｅ  Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  （ＲＤ）  Ｖｅｒｓｕｓ  Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  Ｐｌｕｓ  Ｌｏｗ−Ｄｏｓｅ  Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  （Ｒｄ）  ｉｎ  Ｎｅｗｌｙ  Ｄｉａｇｎｏｓｅｄ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ  （Ｅ４Ａ０３）：  Ａ  Ｔｒｉａｌ  Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｇｒｏｕｐ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １１０；  ２００７；  ｐ．：  ７４．
Ｒａｗｓｔｒｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｓｔａｇｅ；”  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ；  ９７；  １９９７；  ｐｐ．：  ４６−５５．
Ｒｅｍｉｌｌａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｎｔｉｍｉｔｏｔｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔ  ｔｕｍｏｒ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ；”  Ｓｃｉｅｎｃｅ；  １９８；  １９７５；  ｐｐ．：１００２−１００５．
Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｅｗ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ  ｆｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  （Ｗｉｌｌｉｓｔｏｎ  Ｐａｒｋ）；  １９（１４）；  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ２００５；  ｐｐ．：１７８１−９２．
Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ，  ６（８）；  Ａｕｇｕｓｔ    ２００６；  ｐｐ．：１１６５−７３．
Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ  ｆｏｒ  Ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  Ｊｕｎ；  １２（６）；  ２００７；  ｐｐ．：６６４−８９．
Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｌｅｎａｌｏｄｏｍｉｄｅ，  ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ，  ａｎｄ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ａｓ  ｆｒｏｎｔ−ｌｉｎｅ−ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  （ＭＭ）：  ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ／ＩＩ  ｓｔｕｄｙ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １１０；  ２００７；  ｐ．：  ６３ａ．
Ｒｉｅｃｈｅｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｔｒｉａｌ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ＣＤ４４ｖ６−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ  ｉｎ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ；”  Ｏｒａｌ  Ｏｎｃｏｌ；  ４４（９）；  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  ２００８；  ｐｐ．：８２３−９．    
Ｒｏｈ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｇａｌｌｂｌａｄｄｅｒ  ｃａｎｃｅｒ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ；”  Ｅｕｒ  Ｓｕｒｇ  Ｒｅｓ．  ４１（２）；  ２００８；  ｐｐ．：２４５−５０．  
Ｒｏｇｕｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎ  ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ；”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ；  ９１；  １９９４；  ｐｐ．：９６９−９７３．
Ｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ａｎｔｉｇｅｎ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｔａｒｇｅｔ：  ｔｉｓｓｕｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；  Ｍａｙ  １，  ２００２；  ６２（９）  ｐｐ．：２５４６−５３．
Ｒｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ；”  Ａｍ  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｐａｔｈ；  １１９；  Ａｐｒｉｌ  １７，  ２００３；  ｐｐ．：  ４７２−４８５．
Ｒｏｗｉｎｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．；  “ＳＢ−４０８０７５，  ａ  ｔｕｍｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｃ２４２  ＣａｎＡｇ  ａｎｔｉｇｅｎ  ｗｉｔｈ  ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ  ｐａｙｌｏａｄ：  ｐｈａｓｅ  Ｉ，  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  （ＰＫ），  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｓｔｕｄｉｅｓ；”  Ｐｒｏｃ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２１：  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃１１８；  ２００２．
Ｒｕｐｐ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＣＤ４４ｖ６−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ：  ｆｉｎａｌ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ；”  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ；  １８（４）；  Ａｐｒｉｌ  ２００７；  ｐｐ．：４７７−４８５．
Ｓａｌｆｅｌｄ，  “Ｉｓｏｔｙｐｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，  Ｎａｔ．  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．  ２５  （１２），  ２００７，  ｐｐ．  １３６９−１３７２．
Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ  ｅｘｐｒｅｓｓ  ａｎｄ  ｌｏｓｅ  ｓｙｎｄｅｃａｎ  ａｔ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｓｔａｇｅｓ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；”  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｇｕｌ．；  １９８９；  １；  ｐｐ．：２７−３５．
Ｓａｎｄｈｕ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｕｍａｎ  ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓ  ｉｎ  ＳＣＩＤ  ｍｉｃｅ  ｉｍｐｌａｎｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｈｕｍａｎ  ａｄｕｌｔ  ｃａｎｃｅｌｌｏｕｓ  ｂｏｎｅ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ８８；  １９９６；  ｐｐ．：１９７３−１９８２．
Ｓａｎｋｈａｌａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ａ  ＣａｎＡｇ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ，  ＨｕＣ２４２−ＤＭ４，  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＣａｎＡｇ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”  ＡＡＣＲ−ＮＣＩ−ＥＯＲＴＣ  ”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ”  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ；  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃Ｂ７０；  ２００７．
Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅ  ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ  ｒｅｄｕｃｅｓ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｂｕｒｄｅｎ  ｉｎ  ｂｏｎｅ  ｉｎ  ｎｕｄｅ  ｍｉｃｅ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．；  ５５；  １９９５；  ｐｐ．：  ３５５１−３５５７．
Ｓａｕｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，  ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ，  ａ  ｎｏｖｅｌ  ＣＤ４４ｖ６−ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ，  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ；”  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ．；  ３０（４）；  Ａｐｒｉｌ  ２００７；  ｐｐ．：  ９２７−３５．
Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｗｏ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｏｆ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｐｌａｓｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｄｅｆｉｎｅｄ  ｂｙ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ＣＤ４５  ａｎｔｉｇｅｎ；”  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ；  ９７；  １９９７；  ｐｐ．：  ５６−６４．
Ｓｃｈｕｕｒｍａｎ，  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｎｏｒｍａｌ  ｈｕｍａｎ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ４  ｉｓ  ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ：  ｉｔ  ｈａｓ  ｔｗｏ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ；”  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；  ９７；  １９９９；  ｐｐ．：  ６９３−６９８．
Ｓｅｂｅｓｔｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  （ＣＤ１３８）  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ  ｌｙｍｐｈｏｍａｓ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ；”  １０４（２）；  １９９９；  ｐｐ．：  ４１２−９．
Ｓｅｆｔａｌｉｏｇｌｕ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１／ＣＤ１３８  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｍｙｅｌｏｉｄ，  ａｃｕｔｅ  ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ  ａｎｄ  ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ａｃｔａ  Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ；  １０５；  ２００３；  ｐｐ．：２１３−２２１．
Ｓｅｆｔａｌｉｏｇｌｕ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  （ＣＤ１３８）  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｃｅｌｌｓ−−ａｎ  ｉｍｍｕｎｏ  ｅｌｅｃｔｒｏｎ  ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｉｃ  ｓｔｕｄｙ；”  Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ；  ４２；  ２００３；  ｐｐ．：７１−７４．
Ｓｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｓ  ｏｆ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｔｕｍｏｒｓ  ｗｉｔｈ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ；”  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ＃２０６２，  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  （Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，  ＣＡ：  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．）；  ２００７；  ｐ．：  ４１４．
Ｓｈａｈ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ａｎｄ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｒｅ  ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｗｉｔｈ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎｓｍａｌｌ  ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ；”  Ｃａｎｃｅｒ  １０１（７）；  ２００４  ；  ｐｐ．：１６３２−８．
Ｓｈｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｉｇｈ  ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｍａｐｐｉｎｇ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅ  ｏｎ  ｈｕｍａｎ  ＩｇＧ１  ｆｏｒ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩ，  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩ，  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  ＲＩＩＩ，  ａｎｄ  ＦｃＲｎ  ａｎｄ  ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  ＩｇＧ１  ｖａｒｉａｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｆｃ  ｇａｍｍａ  Ｒ．；”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ；  ２７６（９）；  ２００１；  ｐｐ．：６５９１−６０４．
Ｓｉｅｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｓａｆｅｔｙ  ｏｆ  ｇｅｍｔｕｚｕｍａｂ  ｏｚｏｇａｍｉｃｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ＣＤ３３−ｐｏｓｉｔｉｖｅ  ａｃｕｔｅ  ｍｙｅｌｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ  ｉｎ  ｆｉｒｓｔ  ｒｅｌａｐｓｅ；”  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．；  １９；  ２００１；  ｐｐ．  ３２４４−３２５４．
Ｓｉｅｖｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｍｙｌｏｔａｒｇ：  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｃｏｍｅｓ  ｏｆ  ａｇｅ；”  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｏｎｃｏｌ．；  １３；  ２００１；  ｐｐ．  ５２２−５２７．  
Ｓｍｉｔｈ  Ｒ．；  “Ｓｉｎｇｌｅ  ｃｈａｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｒｅｇｉｏｎ  ｆｒａｇｍｅｎｔｓ；”  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｔ  ｗｗｗ．ｓｔａｎｆｏｒｄ．ｅｄｕ／  〜ｓｍｉｔｈｒ／ｓｃｉｅｎｃｅ／ｓｃｆｖ．ｈｔｍｌ  （ｌａｓｔ  ｕｐｄａｔｅｄ  ｏｎ  Ｍａｙ，  ２００１）．
Ｓｔｒｏｂｅｃｋ  Ｍ；  “Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ；”  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ；  ６（３）；  Ｍａｒｃｈ  ２００７；  ｐｐ．：  １８１−８２．
Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｈｕｍａｎ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｒｅｔａｉｎ  ｆｕｌｌ  ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｙ  ｐｒｅｓｅｒｖｉｎｇ  ｎｏｎ−ＣＤＲ  ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ−ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ  ｒｅｓｉｄｕｅｓ；”  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．；  ７（６）；  １９９４  ｐｐ．：  ８０５−８１４．
Ｔａｉ  ｅｔ  ａｌ；  “Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｙ  ｄｒｕｇ  ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  （ＣＣ−５０１３，  ＩＭｉＤ３）  ａｕｇｍｅｎｔｓ  ａｎｔｉ−ＣＤ４０  ＳＧＮ−４０−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００５  Ｄｅｃ  １５；  ６５（２４）：１１７１２−２０．
Ｔａｋｉｍｏｔｏ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｏｎｃｏｌｏｇｉｃ  ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ：  Ａ  ｍｕｌｔｉｄｉｓｃｉｐｌｉｎａｒｙ  Ａｐｐｒｏａｃｈ；  １１ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ；  Ｃｈａｐｔｅｒ  ３；  ２００８；  Ａｐｒｉｌ  １５，  ２００９；  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｔ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃａｎｃｅｒｎｅｔｗｏｒｋ．ｃｏｍ／ｄｉｓｐｌａｙ／ａｒｔｉｃｌｅ／１０１６５／１４０２６２８．  
Ｔａｓｓｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｂ−Ｂ４−ＤＭ１  ａｇａｉｎｓｔ  ＣＤ１３８＋  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０４（１２）；  ２００４；  ｐｐ．：  ３６８８−３６９６．
Ｔｅｒｐｏｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｙｅｌｏｍａ  ＮｅｔｗｏｒｋＴｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ：  ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａｎ  ｅｘｐｅｒｔ  ｐａｎｅｌ  ｏｎ  ｂｅｈａｌｆ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｍｙｅｌｏｍａ  Ｎｅｔｗｏｒｋ；”  Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ．  ２０（８）；  ２００９；  ｐｐ．：１３０３−１７．
Ｔｉｊｉｎｋ  ｅｔ  ａｌ．；  “  Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｄｏｓｅ  ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｙ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉ−ＣＤ４４ｖ６  ｂｉｖａｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｎｃｕｒａｂｌｅ  ｓｑｕａｍｏｕｓ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｏｒ  ｅｓｏｐｈａｇｕｓ；”  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  １２（２０  Ｐｔ  １）；  Ｏｃｔｏｂｅｒ  １５，  ２００６；  ｐｐ．：６０６４−７２．
Ｔｏｌｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｈｕＣ２４２−ＤＭ４  ｔｏ  ａｓｓｅｓｓ  ｔｈｅ  ｓａｆｅｔｙ  ａｎｄ  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｏｆ  ｈｕＣ２４２−ＤＭ４  ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ  ａｓ  ａ  ｓｉｎｇｌｅ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｏｎｃｅ  ｅｖｅｒｙ  ｔｈｒｅｅ  ｗｅｅｋｓ  ｔｏ  ｓｕｂｊｅｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｓｏｌｉｄ  ｔｕｍｏｒｓ；”  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ；１２（４）；  ２００６  ｐ．：  ６６．
Ｔｏｌｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ，  ａ  ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  ｄｉｒｅｃｔｅｄ  ｔｏ  ｔｈｅ  ＣａｎＡｇ  ａｎｔｉｇｅｎ：  ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉ，  ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ，  ａｎｄ  ｂｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｖｅ  ｓｔｕｄｙ；”  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ；  ２１；  ２００３；  ｐｐ．：  ２１１−２２２．
Ｔｏｍａｙｋｏ  ｅｔ  ａｌ．，  “Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｔｕｍｏｒ  ｓｉｚｅ  ｉｎ  ａｔｈｙｍｉｃ  （ｎｕｄｅ）  ｍｉｃｅ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，  ２４；  １９８９；  ｐｐ．：  １４８．
Ｔｏｙｏｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｉｓ  ｃｏｍｍｏｎ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒｓ  ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｏｆ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ；”  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  ３１（２−３）；  ２００１；  ｐｐ．：１９３−２０２．
Ｕｒａｓｈｉｍａ  ｅｔ  ａｌ；  “Ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ａ  ｍｏｄｅｌ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｈｏｍｉｎｇ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｂｏｎｅ  ｍａｒｒｏｗ；”  Ｂｌｏｏｄ；  ９０；  １９９７；  ｐｐ．：  ７５４−７６５．
Ｖｏｇｅｌ，  ＣＷ；  “Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ  ｍｏｉｅｔｉｅｓ；”  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：  Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ；  ２８３；  ２００７  ｐｐ．：  ８７−１０８．
Ｖｏｏｉｊｓ  ｅｔ  ａｌ；  “Ｅｆｆｉｃａｃｙ  ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｐｌａｓｍａ−ｃｅｌｌ−ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ｂ−Ｂ２  ａｎｄ  Ｂ−Ｂ４  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ；  ４２；  １９９６；  ｐｐ．：  ３１９−３２８．
Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔａｒｇｅｔｅｄ  ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｖｅｌｃａｄｅ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｏｍａ  ａｎｄ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ；  Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ４，  ２００９  ａｖａｉｌａｂｌｅ  ａｔ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｓｐｒｉｎｇｅｒｌｉｎｋ．ｃｏｍ／ｃｏｎｔｅｎｔ／ｕ６３１ｒ５６７２８４１１８０１／．    
Ｗａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｂｉｎｄｉｎｇ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ａ  ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎ  ｖａｒｉａｂｌｅ  ｄｏｍａｉｎｓ  ｓｅｃｒｅｔｅｄ  ｆｒｏｍ  Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ；”  Ｎａｔｕｒｅ；  ３４１；  １９８９；  ｐｐ．  ：５４４−５４６．
Ｗａｒｇａｌｌａ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｒａｔｅ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎ  ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎ  ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ  ｗｉｔｈ  ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｇａｉｎｓｔ  ｈｕｍａｎ  ｔｕｍｏｒ  ｃｅｌｌｓ；”  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ；  ８６；  １９８９；  ｐｐ．：５１４６−５１５０．
Ｗｅｂｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ  ｐｌｕｓ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ｐｒｏｖｉｄｅｓ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｏｖｅｒａｌｌ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ｃｏｍｐａｒｅｄ  ｔｏ  ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ  ａｌｏｎｅ  ｆｏｒ  ｒｅｌａｐｓｅｄ  ｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｍｙｅｌｏｍａ  （ＭＭ）：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ２  Ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｓｔｕｄｉｅｓ  （ＭＭ−００９，  ＭＭ−０１０）  ａｎｄ  ｓｕｂｇｒｏｕｐ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｒｅｎａｌ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １０８；  （ＡＳＨ  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）；  Ａｂｓｔｒａｃｔ  ３５４７；  ２００６．
Ｗｉｋｓｔｅｎ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｖａｌｕｅ  ｏｆ  ａ  ｐａｎｅｌ  ｏｆ  ｔｉｓｓｕｅ  ｔｕｍｏｒ  ｍａｒｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ  ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ  ｆａｃｔｏｒｓ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ；”  Ｇａｓｔｒｉｃ：  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２８（４Ｃ）；  ２００８；  ｐｐ．：  ２２７９−８７．
Ｗｉｊｄｅｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａ  ｐｌａｓｍｏｃｙｔｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍＡｂ  （Ｂ−Ｂ４）  ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１；”  Ｂｒ  Ｊ  Ｈａｅｍａｔｏｌ；  ９４（２）  Ａｕｇｕｓｔ  １９９６；  ｐｐ．：３１８−２３．
Ｗｉｊｄｅｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．；  “ＣＤ１３８；”  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌ  Ｈｏｍｅｏｓｔ  Ａｇｅｎｔｓ；  １６（２）  Ａｐｒｉｌ−Ｊｕｎｅ  ２００２；  ｐｐ．：  １５２−１５５．
Ｗｉｔｚｉｇ  ｅｔ  ａｌ；  “Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｂｌｏｏｄ  ｂｙ  ｆｌｏｗ  ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；”  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；  ２６；  １９９６；  ｐｐ．：  １１３−１２０．
Ｘｉｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ｂｉｏｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ，  ｃａｎｔｕｚｕｍａｂ  ｍｅｒｔａｎｓｉｎｅ  （ｈｕＣ２４２−ＤＭ１），  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｔｗｏ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｉｎ  ｍｉｃｅ；”  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｅｘｐ  Ｔｈｅｒ．；  ３０８（３）；  Ｍａｒｃｈ  ２００４；  ｐｐ．：１０７３−８２．
Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｍｅｌａｎｏｍａ  ｂｏｎｅ  ａｎｄ  ｏｒｇａｎ  ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌｓ；”  Ｃｌｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ；  ５；  １９９９；  ｐｐ．  ：３５４９−３５５９．
Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｗｈｏｌｅ−ｂｏｄｙ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｉｍａｇｉｎｇ  ｏｆ  ｇｒｅｅｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ  ｔｕｍｏｒｓ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ；”  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ  Ｓ  Ａ；  ９７；  ２００；  ｐｐ．：１２０６−１２１１．
Ｙａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｈｅ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｈｅｐａｒａｎ  ｓｕｌｆａｔｅ  ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ  ｉｓ  ａ  ｖｉａｂｌｅ  ｔａｒｇｅｔ  ｆｏｒ  ｍｙｅｌｏｍａ  ｔｈｅｒａｐｙ；”  Ｂｌｏｏｄ；  １１０（６）；  Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ  １５，  ２００７  ｐｐ．：  ２０４１−８．  
Ｙａｓｕｉ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｒｅｃｅｎｔ  ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  Ｍｙｅｌｏｍａ；”  Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ；  ７（５）；  Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００６；  ｐｐ．：３８１−９３．
Ｙｏｓｈｉｔａｋｅ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｆｒｏｍ  Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｇｅｒ  ａｎｄ  ｒａｂｂｉｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｕｓｉｎｇ  Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅ  ｅｓｔｅｒ  ｏｆ  Ｎ−（４−ｃａｒｂｏｘｙｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｍｅｔｈｙｌ）−ｍａｌｅｉｍｉｄｅ；”  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ；  １０１；  １９７９；  ｐｐ．：  ３９５−３９９．
Ｙｕ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ  ｓｙｎｅｒｇｙ  ｏｆ  ＣＶ７８７，  ａ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ，  ａｎｄ  ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ  ａｎｄ  ｄｏｃｅｔａｘｅｌ；”  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；  ６１；  Ｊａｎｕａｒｙ  １５，  ２００１；  ｐｐ．：  ５１７−５２５．
Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．；  “Ｔｉｓｓｕｅ  ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｒｅｖｅａｌｓ  ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ  ｏｆ  ｓｙｎｄｅｃａｎ−１  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｉｎ  ｐｒｏｓｔａｔｅ  ｃａｎｃｅｒ；”  Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ５５（１）；  ２００３；  ｐｐ．：２０−９．
【図１】
2016053053.tif 000023
【図２】
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【図３】
2016053053.tif 000025
【図４】
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【図５】
2016053053.tif 000027
【図６】
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【図７Ａ】
2016053053.tif 000029
【図７Ｂ】
2016053053.tif 000030
【図７Ｃ】
2016053053.tif 000031
【図７Ｄ】
2016053053.tif 000032
【図８Ａ】
2016053053.tif 000033
【図８Ｂ】
2016053053.tif 000034
【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図９Ａ】
2016053053.tif 000037
【図９Ｂ】
2016053053.tif 000038
【図９Ｃ】
2016053053.tif 000039
【図９Ｄ】
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【図１０】
2016053053.tif 000041
【図１１Ａ】
2016053053.tif 000042
【図１１Ｂ】
2016053053.tif 000043
【図１２】
2016053053.tif 000044
【図１３】
2016053053.tif 000045
【図１４】
2016053053.tif 000046
【図１５】
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【図１６】
2016053053.tif 000048
【図１７】
2016053053.tif 000049
【図１８】
2016053053.tif 000050
【図１９】
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【図２０】
2016053053.tif 000052
【図２１】
2016053053.tif 000053
【図２２】
2016053053.tif 000054
【図２３】
2016053053.tif 000055
【図２４】
2016053053.tif 000056
【図２５】
2016053053.tif 000057
【図２６】
2016053053.tif 000058
【図２７】
2016053053.tif 000059
【図２８】
2016053053.tif 000060
【図２９】
2016053053.tif 000061
【図３０】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成27年11月16日(2015.11.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
再発性又は難治性多発性骨髄腫治療用医薬組成物であって、
前記医薬組成物は、免疫複合体を含み、
前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的抗体と、
少なくとも１つのエフェクター分子とを含み、
前記標的抗体は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、
前記標的抗体は、軽鎖と、重鎖とを含み、
前記軽鎖の可変領域は、配列番号：２のアミノ酸残基１〜１０７を含み、
前記重鎖の可変領域は、配列番号：１のアミノ酸残基１〜１２２を含み、
前記重鎖の定常領域は、ＩｇＧ４アイソタイプ定常領域であり、
前記少なくとも１つのエフェクター分子が、メイタンシノイドであり、
前記再発性又は難治性多発性骨髄腫が、ＣＤ１３８発現標的細胞に関連することを特徴とする医薬組成物。
【請求項２】
医薬組成物は、対象に対して、５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の免疫複合体の量で投与される、又は薬物動態学的相当で５ｍｇ／ｍ２から２００ｍｇ／ｍ２の免疫複合体の量で投与される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
医薬組成物は、対象に対して免疫複合体の有効量で投与され、前記有効量は、許容量である請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
医薬組成物は、免疫複合体の用量として、１０ｍｇ／ｍ２以下、２０ｍｇ／ｍ２以下、３０ｍｇ／ｍ２以下、４０ｍｇ／ｍ２以下、８０ｍｇ／ｍ２以下、９０ｍｇ／ｍ２以下、１００ｍｇ／ｍ２以下、又は１２０ｍｇ／ｍ２以下の用量で投与され、
免疫複合体の平均日量が、４００μｇ／ｍ２から６ｍｇ／ｍ２であって、５００μｇ／ｍ２、１ｍｇ／ｍ２、２ｍｇ／ｍ２、３ｍｇ／ｍ２、４ｍｇ／ｍ２、５ｍｇ／ｍ２を含み、及び／又は
免疫複合体の平均週量が、３ｍｇ／ｍ２から４０ｍｇ／ｍ２であって、５ｍｇ／ｍ２、１０ｍｇ／ｍ２、１５ｍｇ／ｍ２、２０ｍｇ／ｍ２、２５ｍｇ／ｍ２、３０ｍｇ／ｍ２、又は３５ｍｇ／ｍ２を含む請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
医薬組成物は、繰り返し単回用量として投与される請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
医薬組成物は、５ｍｇ／ｍ２又は１０ｍｇ／ｍ２から１６０ｍｇ／ｍ２未満の免疫複合体の量で、対象に投与される請求項１から５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
医薬組成物は、５ｍｇ／ｍ２又は１０ｍｇ／ｍ２から１５０ｍｇ／ｍ２、１４０ｍｇ／ｍ２、１３０ｍｇ／ｍ２、又は１２０ｍｇ／ｍ２までの免疫複合体の量で、対象に投与される請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
免疫複合体が、非標的ＣＤ１３８発現細胞に対して臨床的受容毒性を呈する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
非標的ＣＤ１３８発現細胞が、上皮細胞である請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
ＣＤ１３８を発現する標的及び非標的細胞におけるＣＤ１３８発現レベルは同等である請求項８から９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
有効量が、単回投与、繰り返し単回投与又は複数回投与で投与される請求項８から１０のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１２】
医薬組成物が、更に薬学的に許容される担体を含み、前記医薬組成物の活性成分は、前記免疫複合体である請求項１から１１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
再発性又は難治性多発性骨髄腫は、骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかに関連し、医薬組成物は、前記骨痛及び骨合併症の少なくともいずれかを減じるためのものである請求項１から１２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１４】
医薬組成物が、少なくとも１つの細胞毒性剤で治療されている対象において使用するためのものである請求項１から１３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
少なくとも１つの細胞毒性剤が、プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤、血管新生抑制剤、ＤＮＡアルキル化剤、又はこれらの２以上の混合物である請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
少なくとも１つの細胞毒性剤が、ボルテゾミブ、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイド、メルファラン、又はこれらの２以上の混合物である請求項１４から１５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１７】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する多発性骨髄腫治療用医薬組成物であって、
患者における前記多発性骨髄腫が、１以上の細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、
前記医薬組成物は、免疫複合体を含み、
前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的抗体と、
少なくとも１つのエフェクター分子とを含み、
前記標的抗体は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、
前記標的抗体は、軽鎖と、重鎖とを含み、
前記軽鎖の可変領域は、配列番号：２のアミノ酸残基１〜１０７を含み、
前記重鎖の可変領域は、配列番号：１のアミノ酸残基１〜１２２を含み、
前記重鎖の定常領域は、ＩｇＧ４アイソタイプ定常領域であり、
前記少なくとも１つのエフェクター分子が、メイタンシノイドであることを特徴とする医薬組成物。
【請求項１８】
医薬組成物は、免疫複合体の有効量で投与される請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
ＣＤ１３８発現標的細胞に関連する多発性骨髄腫治療用医薬組成物であって、
患者が５０ｎｇ／ｍＬ超のレベルのｓＣＤ１３８を呈し、
前記患者は、細胞毒性剤による治療に対して奏効しない又は奏効が乏しく、
前記医薬組成物は、免疫複合体を含み、
前記免疫複合体は、
ＣＤ１３８発現細胞を標的とする少なくとも１つの標的抗体と、
少なくとも１つのエフェクター分子とを含み、
前記標的抗体は、機能的に前記エフェクター分子に結合することにより前記免疫複合体を形成し、
前記標的抗体は、軽鎖と、重鎖とを含み、
前記軽鎖の可変領域は、配列番号：２のアミノ酸残基１〜１０７を含み、
前記重鎖の可変領域は、配列番号：１のアミノ酸残基１〜１２２を含み、
前記重鎖の定常領域は、ＩｇＧ４アイソタイプ定常領域であり、
前記少なくとも１つのエフェクター分子が、メイタンシノイドであることを特徴とする医薬組成物。
【請求項２０】
患者が、６０ｎｇ／ｍＬ超、７０ｎｇ／ｍＬ超、８０ｎｇ／ｍＬ超、１００ｎｇ／ｍＬ超、１５０ｎｇ／ｍＬ超、２００ｎｇ／ｍＬ超、４００ｎｇ／ｍＬ超、５００ｎｇ／ｍＬ超、６００ｎｇ／ｍＬ超、７００ｎｇ／ｍＬ超、８００ｎｇ／ｍＬ超、９００ｎｇ／ｍＬ超、１，０００ｎｇ／ｍＬ超、１，１００ｎｇ／ｍＬ超、１，２００ｎｇ／ｍＬ超、１，３００ｎｇ／ｍＬ超、１，４００ｎｇ／ｍＬ超、又は１，５００ｎｇ／ｍＬ超のレベルのｓＣＤ１３８を呈する請求項１９に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
患者が、１，０００ｎｇ／ｍＬ超のレベルのｓＣＤ１３８を呈する請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
医薬組成物は、対象に対して免疫複合体が有効量投与され、
前記医薬組成物は、２０ｍｇ／ｍ２又は４０ｍｇ／ｍ２の免疫複合体の量で投与されたとき有効であり奏効を提供する請求項１９から２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２３】
細胞毒性剤が、免疫調節薬及びプロテアソーム阻害剤の少なくともいずれかを含む請求項１７から２２のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２４】
患者が、細胞毒性剤で治療されている請求項１７から２３のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２５】
細胞毒性剤が、プロテアソーム阻害剤、免疫調節剤、血管新生抑制剤、ＤＮＡアルキル化剤、又はこれらの２以上の混合物である請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
細胞毒性剤が、ボルテゾミブ、サリドマイド、ポマリドマイド、レナリドマイド、メルファラン、又はこれらの２以上の混合物である請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
医薬組成物は、５０ｍｇ／ｍ２から１５０ｍｇ／ｍ２までの免疫複合体の量で、対象に投与される請求項１７から２６のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２８】
医薬組成物が静脈内投与される請求項１から２７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２９】
医薬組成物が繰り返し単回投与で静脈内投与される請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
標的抗体が、配列番号：２に対する配列同一性が少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％である軽鎖と、配列番号：１に対する配列同一性が少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％である重鎖とを含む請求項１から２９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３１】
標的抗体が、配列番号：２の軽鎖と、配列番号：１の重鎖とを含む請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
エフェクター分子が、ＤＭ１、ＤＭ３、及びＤＭ４から選択されるいずれかである請求項１から３１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項３３】
エフェクター分子が、ＤＭ４である請求項３１から３２のいずれかに記載の医薬組成物。