(57)【要約】【課題】  本発明の課題は、血管内皮細胞の増殖促進剤を提供すること、および、血色を改善し、肌状態改善作用に優れた皮膚外用剤を提供することである。【解決手段】  アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％、ステアロ・オレオ・レシチン換算で、リン脂質を１８〜２８質量％含有し、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸、１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有することを特徴とする米糠抽出物を含有する皮膚外用剤。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％、ステアロ・オレオ・レシチン換算で、リン脂質を１８〜２８質量％含有し、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸、１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有することを特徴とする米糠抽出物を含有する皮膚外用剤。
【請求項２】
アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％、ステアロ・オレオ・レシチン換算で、リン脂質を１８〜２８質量％含有し、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸、１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有することを特徴とする米糠抽出物を有効成分とする血管内皮細胞の増殖促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、米糠抽出物を含有する皮膚外用剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
米糠は玄米を精白する際に出る果皮、種皮、胚芽などの部分のことである。米糠には種々の有用な成分が含有されている。代表的な成分として、フィチン酸、イノシトール、フェルラ酸、γ-オリザノール、食物繊維、蛋白質、ビタミンB1、ビタミンB6、ビタミンE、ミネラルなどを例示することができる。米糠の抽出物を配合した皮膚外用剤の研究は数多く行われており、例えば、肌をつるつるにし、美白効果を有する米抽出物含有化粧料（特許文献１：特開平７−１０７３３号公報）や、線維芽細胞賦活作用、コラーゲン産生促進作用、シワ改善作用、ハリ・艶改善作用を有する発芽玄米糠エキス含有化粧料（特許文献２：特開２００７−１３１５７８号公報）が知られている。
血管系の疾病は日本人の主な死因であることから、「人は血管と共に老いる」と言われている。皮膚では、自然老化による血管の減少、光老化による血管壁の肥厚、周囲の炎症が確認されている。また加齢ともに皮膚色は「赤みが減り、明度が下がる」と言われており、加齢による毛細血管の減少や血流低下との関係が示唆される。
血管内皮細胞に関しては、高麗人参の実抽出物に血管内皮細胞での一酸化窒素の生成促進、血管内皮細胞の生存改善、血管内皮細胞の移動性増加作用があることが知られている（特許文献３：特開２０１４−１２９３６８号公報）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開平７−１０７３３号公報
【特許文献２】特開２００７−１３１５７８号公報
【特許文献３】特開２０１４−１２９３６８号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の課題は、血管内皮細胞の増殖促進剤を提供すること、および、血色を改善し、肌状態改善作用に優れた皮膚外用剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明の主な構成は、次のとおりである。
（１）アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％、ステアロ・オレオ・レシチン換算で、リン脂質を１８〜２８質量％含有し、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸、１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有することを特徴とする米糠抽出物を含有する皮膚外用剤。
（２）アシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％、ステアロ・オレオ・レシチン換算で、リン脂質を１８〜２８質量％含有し、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸、１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有することを特徴とする米糠抽出物を有効成分とする血管内皮細胞の増殖促進剤。
【発明の効果】
【０００６】
血管内皮細胞の増殖促進効果に優れた米糠抽出物を提供することができた。血管内皮細胞の増殖促進効果に優れる特定の米糠抽出物を皮膚外用剤に配合することにより、血色が改善し、肌の明るさが増し、肌状態改善作用に優れる皮膚外用剤を提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【０００７】
【図１】血管内皮細胞増殖促進試験結果
【発明を実施するための形態】
【０００８】
本発明に用いる米糠抽出物に含まれるアシル化ステロール配糖体は、アシル基や糖鎖の異なる化合物の総称であり、天然物中には通常複数の成分の混合物として存在する。アシル化ステロール配糖体の構成糖は主にグルコースである。また構成ステロールはβ−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロール等である。アシル化は主にグルコースの６位が、脂肪酸によってアシル化されており、構成脂肪酸は主にリノール酸、オレイン酸、パルミチン酸であることが明らかになっている（帯大研報，10，（1977）507〜514）。
【０００９】
本発明に用いる米糠抽出物は、上記のアシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％含有する。  
【００１０】
本発明に用いられる米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体の含有量の測定は以下の方法により行うことができる。
（１）米糠抽出物を適量秤取し、クロロホルム／メタノール混液（クロロホルム：メタノール＝２：１）を加え、メスフラスコにてメスアップする。
（２）（１）で得られた溶液は成分濃度に応じて適宜希釈し、分析用試料溶液とする。
（３）標品はＥｓｔｅｒｉｆｉｅｄ  Ｓｔｅｒｙｌ  Ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ（フナコシ）とし、高速液体クロマトグラフ法によりアシル化ステロール配糖体の濃度を算出する。
（４）高速液体クロマトグラフ法による分析条件
分析装置：ＨＰＬＣ
移動相Ａ：メタノール：水  ＝  ９５：５（ｖ／ｖ）
移動相Ｂ：クロロホルム  ＝  １００（ｖ／ｖ）
ポンプ：Ｍｏｄｅｌ  ５８２  
ｓｏｌｖｅｎｔ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍ
分析カラム：ＬｉＣｈｒｏｓｐｈｅｒ  Ｓｉ６０（５μｍ）
ＨＰＬＣ−Ｃａｒｔｒｉｄｇｅ（ＭＥＲＣＫ）
検出器：荷電化粒子検出器（コロナ  ダイオネクス社）
Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  Ｖｏｌｕｍｅ：２０μＬ
カラムオーブン：４０℃（ＦＬＯ社  ｍｏｄｅｌ  ５０２）
分析時間：４０ｍｉｎ
脱泡装置：ｕｎｉｆｌｏｗｓ  Ｄｅｇａｓｙｓ  
Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＤＶ      ３００３
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
グラジェント条件
以下に示すとおり
０−１５分
移動相Ａ：１％    →  ２５％、移動相Ｂ：  ９９％  →  ７５％
１５−２０分
移動相Ａ：２５％  →  ９０％、移動相Ｂ：  ７５％  →  １０％
２０−２５分
移動相Ａ：９０％、            移動相Ｂ：  １０％
２５−３０分
移動相Ａ：９０％  →  １％、  移動相Ｂ：  １０％  →  ９９％
３０−４０分
移動相Ａ：１％、              移動相Ｂ：  ９９％
【００１１】
本発明に用いる米糠抽出物は、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％含有する。
γ−オリザノールは、米糠の脂質に含有されるフェルラ酸とステロールのエステルであり、またフェルラ酸２４−メチレンシクロアルテニル、フェルラ酸シクロアルテニル、フェルラ酸カンペステリル、フェルラ酸β−シトステリル等の混合物である。
【００１２】
本発明に用いる米糠抽出物中のγ−オリザノールの含有量は、高速液体クロマトグラフィーにて、逆相カラムを用い、紫外線検出器で検出することができる。
【００１３】
本発明に用いる米糠抽出物は、ステアロ・オレオ・レシチン（ステアロイルオレオイルホスファチジルコリン）換算でリン脂質を１８〜２８質量％含有する。
【００１４】
本発明に用いる米糠抽出物中のリン脂質の含量はモリブデンブルー吸光光度法により、リンの濃度を測定し、ステアロ・オレオ・レシチン量に換算して求めることができる。具体的には、米糠抽出物からＦｏｌｃｈ法で脂質を抽出し、灰化後、モリブデンブルー吸光光度法により、リンの濃度を測定する。
【００１５】
本発明に用いる米糠抽出物は、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸を含有する。
【００１６】
前記した加水分解後のリノール酸、オレイン酸、パルミチン酸の量は、以下の方法により測定できる。米糠抽出物に０．５ｍｏｌ／Ｌ水酸化ナトリウムのメタノール溶液を加えてケン化し、三フッ化ホウ素メタノール錯体メタノール溶液を添加してメチルエステル化する。ヘキサンと飽和食塩水を加えて脂肪酸のメチルエステル化物を分配抽出し、ガスクロマトグラフィーで水素炎イオン検出器を用いて定量分析する。
【００１７】
本発明に用いられる米糠抽出物は、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有する。植物ステロールの主成分は、β−シトステロール、スチグマステロール、カンペステロールである。
【００１８】
加水分解後の植物ステロールの量は、以下の方法により測定できる。米糠抽出物に塩化ナトリウム水溶液、ピロガロール−エタノール溶液、水酸化カリウム水溶液、水酸化カリウムを順次加えて、ケン化する。塩化ナトリウム水溶液とヘキサン、酢酸エチル混液を添加して、不ケン化物を分配抽出する。不ケン化物からシリカカートリッジカラムを用いて植物ステロール画分を分離し、植物ステロール画分中の植物ステロールをガスクロマトグラフィーで水素炎イオン検出器を用いて定量分析する。
【００１９】
本発明に用いる米糠抽出物の抽出方法としては、溶媒抽出法、超臨界抽出法、カラムクロマトグラフィー等が挙げられる。
また、具体的な抽出操作を以下に示す。
【００２０】
＜抽出方法＞
市場に流通している米糠を選別した後に、ノルマルヘキサンなどの溶媒を用いて脱脂する。得られた油、脱脂糠等の粗原料を蒸留装置により脱溶媒し、さらにノルマルヘキサン、アセトン、エタノール、水などの溶媒によって抽出する。かくして得られた抽出液を、脱溶剤装置を用いて再度脱溶剤することで米糠抽出物を得ることができる。
【００２１】
本発明のアシル化ステロール配糖体を２．７〜４．１質量％、γ−オリザノールを１．４〜２．１質量％、ステアロ・オレオ・レシチン換算で、リン脂質を１８〜２８質量％含有し、加水分解したときに、加水分解前の質量に対して２０〜３０質量％のリノール酸、２４〜３７質量％のオレイン酸、１１〜１７質量％のパルミチン酸、１．７〜２．６質量％の植物ステロールを含有することを特徴とする米糠抽出物を含有する皮膚外用剤は、本発明に用いる米糠抽出物を０．０００１質量％〜０．１質量％含有することが好ましく、０．００１質量％〜０．０１質量％含有することが特に好ましい。
【００２２】
本発明の皮膚外用剤は老化防止用のスキンケア製剤とすることが好ましく、医薬、医薬部外品、化粧品として提供することができる。剤型は化粧水、乳液、クリーム、ジェル等が好ましいが、軟膏剤、メイクアップ化粧料として提供しても良い。また、スキンケア製剤に限らず、育毛剤等に使用しても良い。
本発明の皮膚外用剤には、一般的に皮膚外用剤に用いられる保湿剤、油剤、界面活性剤、増粘剤、抗菌剤等の成分を用いることができる。
【実施例】
【００２３】
以下に、製造例を示し、本発明をさらに詳細に説明する。
【００２４】
＜製造例１：米糠抽出物の調製（溶媒抽出）＞
市場に流通している米糠を選別し胚乳や異物を除いた米糠を得た。得られた選別済みの米糠１０kgに対して５０Ｌのノルマルヘキサンを用い脱脂した。この脱脂作業を１回繰り返し、脱脂米糠を得た。得られた脱脂米糠から蒸留装置により溶媒を除去した。
得られた脱脂米糠８kgに対し、５０Ｌの割合でエタノールを用いて７０±３℃の温度条件にて１時間還流抽出した。これを３回繰り返し、得られた抽出液について、脱溶剤装置を用いてエタノールを除去した。米糠抽出物中のアシル化ステロール配糖体、γ−オリザノール、ステアロ・オレオ・レシチン換算のリン脂質の濃度並びに、加水分解前の質量に対する、加水分解後のリノール酸、オレイン酸、パルミチン酸、植物ステロールの濃度を下記の表１に示す。
【００２５】
【表１】
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【００２６】
＜血管内皮細胞  増殖試験＞
試料
製造例１の米糠抽出物
米胚芽油（米胚芽油ガンマ３０Ｎ（トリグリセライドを７０質量％、γ−オリザノール３０質量％含有  築野食品工業（株）製））
ＤＭＳＯ（実施例１の米糠抽出物および米胚芽油ガンマ３０Ｎ希釈用、並びに対照試料）
【００２７】
試験方法
正常ヒト微小血管内皮細胞（ＨＭＶＥＣ）をｈＦＧＦ−Ｂ不含培地を用いて播種後、翌日各試料含有培地を追添加し、さらに３日培養を行った。
試料は、製造例１の米糠抽出物と米胚芽油それぞれ、培地中の濃度が０．００１％、０．０１％となるように添加した。製造例１の米糠抽出物と米胚芽油はＤＭＳＯに溶解して培地に添加した。ＤＭＳＯの培地中の濃度は１％とした。ＤＭＳＯのみ、培地中に１％添加したものをコントロールとした。各試料の検体数は３（n=3）とした。
３日培養後、Hoechst33342試薬によって細胞のＤＮＡを染色し、蛍光強度（Ex=355nm, Em=460nm）を測定した。蛍光強度はＤＮＡ量すなわち細胞の量に比例する。
【００２８】
結果
コントロールの蛍光強度を１００としたときの、各検体の蛍光強度の相対値を図１に示す。製造例１の米糠抽出物は濃度依存的に正常ヒト微小血管内皮細胞の増殖を促進した。製造例１の米糠抽出物と米胚芽油を比較すると、０．０１％添加時において、４倍（（１３５．５−１００）÷（１０８．７−１００））の細胞増殖効果を示した。製造例１の米糠抽出物を０．０１％添加した試験結果のコントロールに対するＴ−Ｔｅｓｔはｐ＜０．０５であった。
【実施例１】
【００２９】
乳液
（成分）                                                          （質量％）
１．  トコフェリルリン酸ナトリウム                                    １．２
２．  ポリオキシブチレンポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリセリルエーテル
（３Ｂ．Ｏ．）（８Ｅ．Ｏ．）（５Ｐ．Ｏ．）                            ３
３．  グリセリン                                                      ３
４．  精製水                                                          ０．２
５．  オクタン酸セチル                                              １２
６．  製造例１の米糠抽出物                                            ０．０１
７．  ジプロピレングリコール                                          ４
８．  １，３−ブチレングリコール                                      ４
９．  ベタイン                                                        ３
１０． キサンタンガム                                                  ０．１
１１．ローカストビーンガム                                            ０．１
１２．カルボキシビニルポリマー                                        ０．１
１３．水酸化カリウム                                                  ０．０３  
１４．フェノキシエタノール                                            ０．２
１５．精製水                                                          残余
（製法）
８０℃で混合した成分１〜４の中に、８０℃で混合した成分５、６を徐々に加えて混合し、次に８０℃に加熱した成分７〜１５を加え、冷却して乳液とする。  
得られた乳液を１か月連用した結果、血色が改善し、肌が明るくなった。
【実施例２】
【００３０】
クリーム
（成分）                                                    （質量％）
１．  マカデミアナッツ油                                        ５
２．  トリオクタノイン                                          ５
３．  ホホバ油                                                  ３
４．  製造例１の米糠抽出物                                      ０．１
５．  ベヘニルアルコール                                        １
６．  モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）  １．５
７．  モノステアリン酸グリセリル                                １
８．  グリセリン                                                ４
９．  ジプロピレングリコール                                    ４
１０．１，３−ブチレングリコール                                ４
１１．ベタイン                                                  ３
１２．キサンタンガム                                            ０．２
１３．フェノキシエタノール                                      ０．２
１４．精製水                                                    残余
（製法）
成分１〜７を８０度で撹拌混合して油相を調製する。成分８〜１４を８０度で撹拌混合して水相を調製する。８０度で油相に水相を添加してホモミキサーで乳化し、クリームを調製する。
得られたクリームを１か月連用した結果、血色が改善し、肌が明るくなった。
【図１】
2016138046.tif 000004