(57)【要約】【課題】活性酸素種除去作用に優れ、副作用が少なく、且つ人体への安全性の高いアンチエイジングなどを目的とした活性酸素種除去剤、活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品，活性酸素種除去用生活雑貨を提供する。【解決手段】Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａの植物抽出物を有効成分とする活性酸素種除去剤。活性酸素種は、スーパーオキサイド、一重項酸素、ヒドロキシラジカル、ヒドロペルオキシラジカル、及び一酸化窒素からなる群から選択された少なくとも１つであると好ましい。また、この活性酸素種除去剤を含有する活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品、活性酸素種除去用生活雑貨。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａの植物抽出物を有効成分とする、活性酸素種除去剤。
【請求項２】
活性酸素種が、スーパーオキサイド、一重項酸素、ヒドロキシラジカル、ヒドロペルオキシラジカル、及び一酸化窒素からなる群から選択された少なくとも１つである、請求項１に記載の活性酸素種除去剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の活性酸素種除去剤を含有することを特徴とする、活性酸素種除去用皮膚外用剤。
【請求項４】
請求項１又は２に記載の活性酸素種除去剤を含有することを特徴とする、活性酸素種除去用健康食品。
【請求項５】
請求項１又は２に記載の活性酸素種除去剤を含有することを特徴とする、活性酸素種除去用生活雑貨。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、活性酸素種除去剤、活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品、活性酸素種除去用生活雑貨に関する。詳しくは、本発明は、Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａの抽出物を有効成分とし、安全性等に優れた、活性酸素種除去剤、活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品、活性酸素種除去用生活雑貨に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素種は、狭義にはスーパーオキシド、ヒドロキシラジカル、過酸化水素、一重項酸素であるが、広義には一酸化窒素、過酸化脂質も含まれる。好気性生物は、ミトコンドリア内の電子伝達系において酸素を消費することで生命維持に必要なエネルギーを産生しているが、その代謝過程で常に活性酸素種が生成されている。また、生体は、白血球が細菌などの異物を取り込んだ際に活性酸素種を利用することがよく知られている。しかし、紫外線や化学物質などの外的要因で活性酸素種が過剰に生成されると、活性酸素種は、ＤＮＡ損傷や脂質過酸化などの非特異的な反応を惹起し、動脈硬化などの循環器系疾患、アトピー性皮膚炎などの皮膚科系疾患、糖尿病、癌など多くの疾患の原因となる。さらに、美容的見地では、活性酸素種は、しみ・ソバカス、シワなどの皮膚の老化にも関与していると考えられている。功罪両面の作用を持つ活性酸素種に対して、生体は、スーパーオキシドを除去する酵素であるスーパーオキシド・ディスムターゼ、過酸化水素を除去する酵素であるカタラーゼを備えている。しかし、過剰に産生された活性酸素種を消去するためには充分な活性が備わっているとはいえない。そのため、以前から抗酸化能を有する物質の探索が盛んに行われてきた。上述の狭義の活性酸素種の中で、スーパーオキシドは、酸素分子が不対電子を捕獲することで最初に発生する活性酸素種であり、その後還元によってヒドロキシラジカル、過酸化水素へ順次変化する。すなわち、スーパーオキシドは、その他の活性酸素種の前駆体といえるので、その除去は非常に重要である。
【０００３】
しかし、スーパーオキシドに特異的な酵素であるスーパーオキシド・ディスムターゼ以外に、スーパーオキシドを除去する物質はビタミンＣやビリルビン（非特許文献１）などしか知られていない。従って、経口や塗布などによって摂取可能なスーパーオキシド除去剤の開発は非常に重要なものと言える。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００４】
【非特許文献１】デビット  イー．  バラナノ（Ｄａｖｉｄ  Ｅ.  Ｂａｒａnａｎｏ）、外３名著、「ビリルビン還元酵素：生理学的細胞保護（Ｂｉｌｉｖｅｒｄｉｎ  ｒｅｄｕｃｔａｓｅ:  Ａ  ｍａｊｏｒ  ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ  ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ  ｏｆ  Ａｍｅｒｉｃａ、２００２年１２月１０日、第９９巻、第２５号、ｐ．１６０９３−１６０９８
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の課題は、活性酸素種除去作用に優れ、副作用が少なく、且つ人体への安全性の高いアンチエイジングなどを目的とした活性酸素種除去剤、活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品、活性酸素種除去用生活雑貨を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、特定の植物抽出物が、スーパーオキサイド、一重項酸素、ヒドロキシラジカル、ヒドロペルオキシラジカル、一酸化窒素の活性酸素種を除去する作用に優れること、特に活性酸素種除去酵素であるスーパーオキサイド・ディスムターゼ（ＳＯＤ）活性を有すること、並びに活性酸素種の除去によってアンチエイジング効果が期待できること、同時に生体に対しては安全であることを見いだし、本発明を完成した。
【０００７】
本発明は、以下の（１）〜（５）に示す態様を含む。
【０００８】
（１）Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａの植物抽出物を有効成分とする、活性酸素種除去剤。
【０００９】
（２）活性酸素種が、スーパーオキサイド、一重項酸素、ヒドロキシラジカル、ヒドロペルオキシラジカル、及び一酸化窒素からなる群から選択された少なくとも１つである、前記（１）に記載の活性酸素種除去剤。
【００１０】
（３）前記（１）又は（２）に記載の活性酸素種除去剤を含有することを特徴とする、活性酸素種除去用皮膚外用剤。
【００１１】
（４）前記（１）又は（２）に記載の活性酸素種除去剤を含有することを特徴とする、活性酸素種除去用健康食品。
【００１２】
（５）前記（１）又は（２）に記載の活性酸素種除去剤を含有することを特徴とする、活性酸素種除去用生活雑貨。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、活性酸素種除去作用に優れ、副作用が少なく、且つ人体への安全性の高い、アンチエイジングなどを目的とした活性酸素種除去剤、活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品、活性酸素種除去用生活雑貨を提供することができる。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（１）植物の抽出物
本発明の活性酸素種除去剤の有効成分は、Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａの抽出物（以下、単に「植物抽出物」という場合がある）である。
【００１５】
前記植物において使用する部位は特に限定されず、花、根、葉、枝、茎などから抽出することができる。前記植物抽出物は通常、乾燥した植物体を必要に応じて細分化し、溶剤に浸漬したのち、濾過して得られる。細分化の程度及び細分化方法は特に制限されず、例えば、乾燥した植物体を従来公知の方法により粉砕して粉体状とする方法が挙げられる。
【００１６】
浸漬処理に用いる溶剤としては、例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の親水性有機溶剤、ジクロロメタン等の有機溶剤、又はこれらの混合物が用いられる。混合溶剤の具体例としては、水／エタノール混液（５０％エタノール、７０％エタノールなど）、水／ブチレングリコール混液（５０％ブチレングリコールなど）が挙げられる。浸漬処理における溶剤の温度は特に制限されず、通常は室温（２２〜２５℃）で処理されるが、溶剤を沸騰させ環流して抽出することもできる。浸漬時間は特に制限されないが、通常は１日〜１週間程度である。このようにして得られる植物抽出物の形態は、粉末状、ゲル状、ペースト状などいずれであってもよい。
【００１７】
（２）活性酸素種除去剤
前記植物抽出物は、そのまま活性酸素種除去剤として使用することができる。特に、前記活性酸素種としてスーパーオキサイド、一重項酸素、ヒドロキシラジカル、ヒドロペルオキシラジカル、及び一酸化窒素からなる群から選択された少なくとも１つに対し、優れた除去作用を有する。
【００１８】
（３）活性酸素種除去用皮膚外用剤
本発明の活性酸素種除去剤はそのまま、あるいは皮膚外用剤へ配合し、活性酸素種除去用皮膚外用剤として使用することができる。
活性酸素種除去用皮膚外用剤中の前記植物抽出物の配合量は、特に限定されるものではないが、乾燥固形物重量で、活性酸素種除去用皮膚外用剤の総量を基準として０．０００１〜１０．０重量％が好ましく、更に好ましくは０．０００５〜５．０重量％、特に好ましくは０．０１〜５重量％である。該配合量が前記下限以上であると、本発明の効果が充分に得られ、一方前記上限未満であると、その増量に見合った効果の向上が認められる傾向にある。
【００１９】
本発明の活性酸素種除去用皮膚外用剤の剤型は特に限定されないが、例えばローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類等の剤型とすることができる。
【００２０】
また、本発明の活性酸素種除去用皮膚外用剤には、前記植物抽出物に加え、本発明の効果を損なわない範囲で必要に応じて医薬品類、医薬部外品類、化粧品類などの製剤に使用される成分や添加剤、例えば色素（着色剤）、防腐剤、界面活性剤、香料、顔料等を任意成分として適宜配合することができる。
【００２１】
そのような任意成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボガド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ、鉱物油（ミネラルオイル）等のオイル、ワックス類、流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類；
【００２２】
イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット、水添ココグリセリル、ステアリン酸ポリグリセリル、パラオキシ安息香酸メチル（メチルパラベン）等のエステル類；
【００２３】
ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン、アミノ変性ポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類；
【００２４】
脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類、イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類、ソルビタン脂肪酸エステル類（ソルビタンモノステアレート、セスキオレイン酸ソルビタン等）、グリセリン脂肪酸類（モノステアリン酸グリセリン等）、プロピレングリコール脂肪酸エステル類（モノステアリン酸プロピレングリコール等）、硬化ヒマシ油誘導体、グリセリンアルキルエーテル、ショ糖脂肪酸エステル、アルキルグルコシド等の非イオン界面活性剤類等の界面活性剤類；
【００２５】
ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類；ステアリン酸等の高級脂肪酸類；ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類；グアガム、クインスシード、カラギーナン、ガラクタン、アラビアガム、ペクチン、マンナン、デンプン、カードラン、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸ナトリウム、トラガントガム、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、デキストラン、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸、キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー（カルボマー）、ポリアクリル酸ナトリウム等のポリアクリル酸及び／又はその塩、ポリエチレングリコール、ベントナイト、微粒子セルロースゲル等の増粘剤；
【００２６】
表面を処理されていても良い、マイカ、タルク、カオリン、合成雲母、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、無水ケイ酸（シリカ）、酸化アルミニウム、硫酸バリウム等の粉体類；
【００２７】
表面を処理されていても良い、ベンガラ、黄酸化鉄、黒酸化鉄、酸化コバルト、群青、紺青、酸化チタン、酸化亜鉛の無機顔料類；表面を処理されていても良い、雲母チタン、魚燐箔、オキシ塩化ビスマス等のパール剤類；レーキ化されていても良い赤色２０２号、赤色２２８号、赤色２２６号、黄色４号、青色４０４号、黄色５号、赤色５０５号、赤色２３０号、赤色２２３号、橙色２０１号、赤色２１３号、黄色２０４号、黄色２０３号、青色１号、緑色２０１号、紫色２０１号、赤色２０４号等の有機色素類；
【００２８】
ポリエチレン末、ポリメタクリル酸メチル、ナイロン粉末、オルガノポリシロキサンエラストマー等の有機粉体類；
【００２９】
パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類；
【００３０】
エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類；ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ６塩酸塩、ビタミンＢ６トリパルミテート、ビタミンＢ６ジオクタノエート、ビタミンＢ２又はその誘導体、ビタミンＢ１２、ビタミンＢ１５又はその誘導体等のビタミンＢ類、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類；などが好ましく例示できる。
【００３１】
本発明の活性酸素種除去剤は、上述した活性酸素種除去用皮膚外用剤以外に、サプリメントや栄養剤などの経口剤へ配合して使用することもできる。
【００３２】
本発明の活性酸素種除去用皮膚外用剤は、皮膚に塗布して、皮膚の活性酸素種を除去し、活性酸素種に起因する炎症、癌、老化、生活習慣病などを予防することができる。
【００３３】
（４）健康食品
本発明の活性酸素種除去剤は、食品に含有させて、活性酸素種除去用健康食品として使用することができる。本発明の活性酸素種除去剤を含有させる食品は、特に限定されないが、例えば、肉、魚、野菜、卵、菓子、麺、大豆、パン類、ご飯類、スープ類、ソース類、たれ、ぎょうざ、ワンタン、しゅうまい、春巻き、中華まんじゅう、揚げ物、コロッケ、ハンバーグ、天プラ、ピザ、たこ焼、お好み焼、グラタン、ふりかけ、蜂蜜が挙げられる。
【００３４】
食品に本発明の活性酸素種除去剤を含有させる方法は特に限定されないが、例えば、食品原料と混合する方法、活性酸素種除去剤を含有する溶液に食品を浸漬する方法、活性酸素種除去剤を含有する溶液を食品に塗布や噴射する方法などが挙げられる。活性酸素種除去用健康食品中の活性酸素種除去剤の含有割合は特に限定されないが、活性酸素種除去用健康食品総量を基準とした前記植物抽出物の割合として、０．０００１〜１０．０重量％が好ましく、更に好ましくは０．０００５〜５．０重量％、特に好ましくは０．０１〜５重量％である。
【００３５】
本発明の活性酸素種除去用健康食品を摂取することによって、体内の活性酸素種を除去し、活性酸素種に起因する炎症、癌、老化、生活習慣病などを予防することができる。
【００３６】
（５）生活雑貨
本発明の活性酸素種除去剤は、生活雑貨に含有させて、活性酸素種除去用生活雑貨として使用することができる。本発明の活性酸素種除去剤を含有させる生活雑貨は、特に限定されないが、例えば、食器、金物類、刃物、糸、紙、フィルム、玩具、包装材、衣料品、工具、文房具、家庭電気製品、楽器、家具、カーテンが挙げられる。
生活雑貨に本発明の活性酸素種除去剤を含有させる方法は特に限定されないが、活性酸素種除去剤を生活雑貨の材料に混合させる方法、活性酸素種除去剤を含有する溶液に生活雑貨又はその材料を浸漬する方法、活性酸素種除去剤を含有する溶液を生活雑貨又はその材料に塗布や噴射する方法などが挙げられる。
【００３７】
本発明の活性酸素種除去用生活雑貨を使用することによって、生活環境の活性酸素種を除去し、活性酸素種に起因する炎症、癌、老化、生活習慣病などを予防することができる。
【００３８】
（実施例）
以下に実施例および比較例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
【００３９】
（実施例１〜３・比較例１〜２）（ＤＰＰＨ法によるラジカル消去能の検討）
２，２−ジフェニル−１−ピクリルヒドラジル（α，α−ｄｉｐｈｅｎｙｌ−β−ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ  （ＤＰＰＨ）（シグマ社製）１９．８ｍｇを５０ｍｌのエタノールに溶解して濃度１ｍＭのＤＰＰＨ溶液を調製した。Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａを乾燥した植物粉体２００ｍｇを細分化し、エタノール１００ｍｌに２５℃で１週間浸漬したのち、濾過して２００ｍｇｅ／ｍｌ（植物粉体ミリグラム相当／ｍｌ）の植物抽出液を得た。得られた濃度２００ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出液２μｌにエタノール９９８μｌを加えて、濃度０．４ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液を調製した。濃度０．４ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液をエタノールで２倍に希釈して、濃度０．２ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液を調製した。濃度０．４ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液をエタノールで４倍に希釈して、濃度０．１ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液を調製した。ビタミンＣ（シグマ社製）を純水に溶解しての濃度が１０μｇ／ｍｌのビタミンＣ溶液を調製した。表１に示した割合で、濃度１ｍＭのＤＰＰＨ溶液、濃度０．４ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、濃度０．２ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、濃度０．１ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、濃度１０μｇ／ｍｌのビタミンＣ溶液、濃度１０ｍＭの酢酸（ナトリウム）緩衝溶液、およびエタノールを混合し、２００μｇｅ／ｍｌ、１００μｇｅ／ｍｌ又は５０μｇｅ／ｍｌの植物抽出物を含有する試料（実施例１〜３）、植物抽出物を含有しない試料（比較例１）、および５μｇ／ｍｌのビタミンＣを含有する試料（比較例２）の反応液を調製した。
【００４０】
【表１】
2016204272.tif 000002
【００４１】
室温で１０分間反応させた後、５１７ｎｍにおける吸光度を測定し、比較例１の吸光度を１００として、実施例１〜３および比較例２のラジカル安定性を算出した。結果を表２に示す。
【００４２】
【表２】
2016204272.tif 000003
【００４３】
（実施例４〜５・比較例３）（細胞内活性酸素種の除去）
ヒト白血病由来単核球株ＴＨＰ−１を、培地として１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０を用いて、細胞が必要量に達するまで培養した。細胞を細胞密度が１０×１０６個／ｗｅｌｌ（培地：２ｍｌ）なるように６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種した。
その後、培地に実施例４および５では、濃度２００ｍｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液２μｌを添加した。比較例３ではジメチルスルフォキサイド２μｌを添加した。
２４時間培養後、細胞を回収して細胞密度を３×１０５個／ｍｌになるように調整して細胞懸濁液を得た。それぞれの細胞懸濁液１ｍｌを容量１．５ｍｌのマイクロチューブに移した。細胞を１ｍｌのリン酸緩衝液で洗浄、遠心した後、濃度５μＭの蛍光発色試薬ＤＣＦＨ−ＤＡ（２’，７’−ジクロロフルオレシン  ジアセテート）（シグマ社製）溶液１ｍｌに細胞を再懸濁し、３７℃で１５分間放置した。発色試薬を細胞内に取り込ませた後、リン酸緩衝液１ｍｌで３回洗浄した。
その後、実施例４では濃度２００μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液および濃度１００μＭのクメン過酸化物を含むリン酸緩衝液１ｍｌに細胞を再懸濁した。実施例５および比較例３では、濃度１００μＭのクメン過酸化物を含むリン酸緩衝液１ｍｌに細胞を再懸濁した。
その後、それぞれの細胞懸濁液を、１時間、３７℃で放置した。反応後、フローサイトメーター（ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａ、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）で分析し、細胞内の総蛍光強度を算出した。結果を表３に示す。
【００４４】
【表３】
2016204272.tif 000004
【００４５】
（実施例６・比較例４〜５）（一酸化窒素（ＮＯ）の除去）
マウス単核球由来細胞株ＲＡＷ２６４．７を、１０％ウシ胎児血清を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）を用いて、細胞が必要量に達するまで培養した。細胞を、細胞密度が２×１０５個／ｗｅｌｌ（培地：１ｍｌ）となるように２４ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種し、４８時間培養した。
その後、実施例６では濃度２００μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液および１００ｎｇ／ｍｌのリポポリサッカライド（ＬＰＳ）を含有する培地に培地を交換した。比較例５ではダルベッコ・フォークト変法イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ）に培地を交換した。比較例６では１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳを含有する培地に培地を交換した。
さらに２４時間培養した後、培養上清中に含まれるＮＯを測定用キットＩｎｖｉｔｒｏ  ＮＯ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌａｂｓ社製）を用いて測定し、ＮＯ濃度（μＭ）を算出した。結果を表４に示す。
【００４６】
【表４】
2016204272.tif 000005
【００４７】
（実施例７〜８・比較例６〜７）（ＳＯＤ様活性）
実施例７では濃度１００μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、実施例８では濃度２０μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、比較例６では濃度５μｇ／ｍｌのビタミンＣ溶液、比較例７では濃度５０μｇ／ｍｌのビタミンＥ溶液を用い、それぞれのＳＯＤ様活性を、ＳＯＤ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ社製）をＣａｙｍａｎ社の取扱説明書に従って使用して、ＳＯＤ活性相当（Ｕ／ｍｌ）を算出した。結果を表５に示す。
【００４８】
【表５】
2016204272.tif 000006
【００４９】
（実施例９〜１０・比較例８〜９）（カタラーゼ様活性）
実施例９では濃度１００μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、実施例１０では濃度２０μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液、比較例８では濃度５μｇ／ｍｌのビタミンＣ溶液、比較例９では濃度５０μｇ／ｍｌのビタミンＥ溶液を用いて、それぞれのカタラーゼ様活性をＣａｔａｌａｓｅ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（Ｃａｙｍａｎ社製）をＣａｙｍａｎ社の取扱説明書に従って使用して、カタラーゼ活性相当（Ｕ／ｍｌ）を算出した。結果を表６に示す。
【００５０】
【表６】
2016204272.tif 000007
【００５１】
（実施例１１・比較例１０）（細胞毒性、ニュートラルレッド法）
ヒト白血病由来単核球株ＴＨＰ−１を、培地として１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０を用いて、細胞が必要量に達するまで培養した。細胞を細胞密度が５×１０４個／ｗｅｌｌ（培地：１ｍｌ）なるように９６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種した。
実施例１１では、２４時間後に、濃度２００μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液を含有する培地に培地を交換した。比較例１０では、２４時間後に、濃度０．１％のＤＭＳＯ溶液を含有する培地に培地を交換し培地を交換した。
さらに２４時間培養後、Ｎｅｕｔｒａｌ  Ｒｅｄ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（シグマ社製）をシグマ社の取扱説明書に従って使用して、細胞毒性を測定した。結果を表７に示す。
【００５２】
【表７】
2016204272.tif 000008
【００５３】
（実施例１２・比較例１１）（細胞毒性、ＭＴＴ法）
ヒト白血病由来単核球株ＴＨＰ−１を、培地として１０％ウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ１６４０を用いて、細胞が必要量に達するまで培養した。細胞を細胞密度が５×１０４個／ｗｅｌｌ（培地：１ｍｌ）なるように９６ｗｅｌｌ−ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種した。
実施例１１では２４時間後に、濃度２００μｇｅ／ｍｌの植物抽出物溶液を含有する培地に培地を交換した。比較例１０では２４時間後に、濃度０．１％のＤＭＳＯ溶液を含有する培地に培地を交換した。
さらに２４時間培養後、ＭＴＴ  ａｓｓａｙ  ｋｉｔ（シグマ社製）をシグマ社の取扱説明書に従って使用して、細胞毒性を測定した。結果を表８に示す。
【００５４】
【表８】
2016204272.tif 000009
【産業上の利用可能性】
【００５５】
本発明の、Ｓａｐｉｎｄａｃｅａｅ  Ｄｏｄｏｎａｅａ  ｖｉｓｃｏｓａの植物抽出物を有効成分とする活性酸素種除去剤は、活性酸素種に起因する炎症、癌、老化、生活習慣病などの予防に優れ、副作用が少なく、且つ人体への安全性が高い。そのため、この活性酸素種除去剤を含有させ、活性酸素種除去用皮膚外用剤、活性酸素種除去用健康食品、活性酸素種除去用生活雑貨として有用である。