(57)【要約】【課題】生育が早く、他の微細藻類の混入に耐性を示し、脂質の含有率が高く、少なくとも脂質の組成がバイオ燃料の産生に適している、新規な微細藻類、及び該微細藻類を用いたバイオ燃料の産生方法を提供する。【解決手段】棘状突起を有し、かつ２細胞群体を形成する、デスモデスムス属（Desmodesmus）に属する微細藻類であって、該微生物に含有される脂肪酸の８０％以上がＣ16及びＣ18脂肪酸から構成されることを特徴とする、微細藻類。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
棘状突起を有し、かつ２細胞群体を形成する、デスモデスムス属（Desmodesmus）に属する微細藻類であって、該微細藻類に含有される脂肪酸の８０％以上がＣ16及びＣ18脂肪酸から構成されることを特徴とする、微細藻類。
【請求項２】
下記の組成を有する改変ＭＤＭ培地（ｐＨ８．５）：
ＫＮＯ3                                   １００  ｍｇ
Ｋ2ＨＰＯ4                                  ２０  ｍｇ
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                          １０  ｍｇ
ＮａＣｌ                                   ２．５  ｍｇ
ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                             １  ｍｇ
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                         ０．１  ｍｇ
Ｎａ2ＥＤＴＡ・２Ｈ2Ｏ                     ０．１  ｍｇ
水道水                                       ９８  ｍｌ
において、８４〜１６８μｍｏｌ／ｍ2／ｓの光環境下、２０〜２８℃で培養した場合、２日以下の倍加時間を示すことを特徴とする、請求項１に記載の微細藻類。
【請求項３】
他の微細藻類との共生性を有する、請求項１又は２に記載の微細藻類。
【請求項４】
他の微細藻類が、アンキストロデスムス属（Ankistrodesmus）、セネデスムス属（Scenedesmus）、クロレラ属（Chlorella）、クラミドモナス属（Chlamydomonas）及びモノラフィディウム属（Monoraphidium）に属する微細藻類からなる群から選択される、請求項３に記載の微細藻類。
【請求項５】
特許生物寄託センターに受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３で寄託されている、微細藻類。
【請求項６】
微細藻類を用いたバイオ燃料の産生方法であって、該微細藻類が、棘状突起を有し、かつ２細胞群体を形成する、デスモデスムス属（Desmodesmus）に属する微細藻類であって、該微生物に含有される脂肪酸の８０％以上がＣ16及びＣ18脂肪酸から構成されることを特徴とする、方法。
【請求項７】
前記微細藻類が、下記の組成を有する改変ＭＤＭ培地（ｐＨ８．５）：
ＫＮＯ3                                   １００  ｍｇ
Ｋ2ＨＰＯ4                                  ２０  ｍｇ
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                          １０  ｍｇ
ＮａＣｌ                                   ２．５  ｍｇ
ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                             １  ｍｇ
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                         ０．１  ｍｇ
Ｎａ2ＥＤＴＡ・２Ｈ2Ｏ                     ０．１  ｍｇ
水道水                                       ９８  ｍｌ
において、８４〜１６８μｍｏｌ／ｍ2／ｓの光環境下、２０〜２８℃で培養した場合、２日以下の倍加時間を示すことを特徴とする、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記微細藻類が、他の微細藻類との共生性を有する、請求項６又は７に記載の方法。
【請求項９】
他の微細藻類が、アンキストロデスムス属（Ankistrodesmus）、セネデスムス属（Scenedesmus）、クロレラ属（Chlorella）、クラミドモナス属（Chlamydomonas）及びモノラフィディウム属（Monoraphidium）に属する微細藻類からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記微細藻類が、特許生物寄託センターに受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３で寄託されている、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生育が早く、他の微細藻類との共生性を有し、脂質の含有率が高く、かつ該脂質の組成がバイオ燃料の産生に適した新規な微細藻類、及び該微細藻類を用いたバイオ燃料の産生方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
化石燃料の枯渇や大気汚染などの問題への対策として、再生可能エネルギーの持続可能な生産は、政府や産業界において極めて重要な課題となっている。近年、微細藻類を利用した再生可能なバイオ燃料の開発がバイオディーゼル燃料（ＢＤＦ）を中心に試みられている。微細藻類は、光合成による有機炭素の生産効率が、高等植物類と比較して極めて高く、また、短期間での高密度培養が可能であるため、資源系バイオマスと呼ばれる間伐材、林地残材、作物植物などを用いた場合と比較して、生物燃料の産生における時間やコストを大幅に削減することが可能となる。
【０００３】
これまでに、微細藻類を効率よく増殖させるために、微細藻類の光合成反応に必要な光を培養液中に均一に分散照射するための光源及び攪拌器を備えたバイオリアクターやこれを用いた微細藻類の培養方法（特許文献１）、微細藻類の増殖に適した波長を発する光源を備えた培養装置やこれを用いた微細藻類の培養方法（特許文献２）、ならびに従属栄養条件で微細藻類の呼吸によって発生する二酸化炭素を微細藻類の光合成に活用するために、従属栄養条件でも微細藻類の光合成における光反応系に有効な光質及び光量子を照射するための光源を備えた連続培養装置やこれを用いた微細藻類の連続培養方法（特許文献３）が知られている。
【０００４】
バイオ燃料の原料としてユーグレナを使用できることが報告されているが（非特許文献１）、ユーグレナは、食品・飼料としての需要があるため、食料としての需要と競合しない持続可能なバイオ燃料の原料が依然として必要とされる。経済性と事業性を確保できる増殖速度を有し、かつバイオ燃料の原料と脂質の含有率が高い微細藻類としては、アンキストロデスムス（ＦＥＲＭ  ＢＰ−２２０９０）が知られている（特許文献４）。また、デスモデスムス属に属する微細藻類としては、特定の窒素含量を有する培養液で培養した場合に脂肪酸系炭化水素を藻体内に蓄積しうるデスモデスムス属プレイオモルファス種（ＳＵＨＬ０７０８株；ＦＥＲＭ  Ｐ−２１９６０）やデンプンを高蓄積するデスモデスムス属に属する微細藻類が知られている（特許文献６）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２０１０／１００７９５号
【特許文献２】国際公開第２０１１／０６５４４５号
【特許文献３】特開２０１２−１８３００２号公報
【特許文献４】特許第５６１１４２９号公報
【特許文献５】特開２０１２−４４９２３号公報
【特許文献６】特開２０１２−２３９４５２号公報
【特許文献７】特開２００６−０２８１４６号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Techno Inovation, Vol.21、No.1（通巻79号）2011, （株）筑波バイオテック研究所, 前川孝昭
【非特許文献２】J. Phycol. 42, 142-154 （2005）, EVALUATING THE MORPHOSPECIES CONCEPT IN THE SELENASTRACEAE （CHLOROPHYCEAE, CHLOROPHYTA）, Marvin W. Fawley et al.
【非特許文献３】Fottea 10（1） 2010, Phylogenetic position of Ooplanctella planoconvexa, gen. et comb. nova and Echinocoleum elegans （Oocystaceae, Trebouxiophyceae, Chlorophyta, Marie Pazoutova et al.
【非特許文献４】J. Phycol. 35, 838-843 （1999）, THE RELATIONSHIP BETWEEN PSEUDOSCOURFIELDIA MARINA AND PYCNOCOCCUS PROVASOLII （PRASINOPHYCEAE, CHLOROPHYTA）: EVIDENCE FROM 18S rDNA SEQUENCE DATA, Marvin W. Fawley et al.
【非特許文献５】Toshiyuki Kimura, Chen Liu, Xiaohong Li, Takaaki Maekawa and Satio Asaoka （2012） Conversion of Isoprenoid Oil by Cataystic Cracking and Hydrocracking over Nanoporous Hybrid Catalysts．Journal of Biomedicine and Biotechnology． Article ID 637125．9 pages
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
バイオ燃料産生のために実用化された施設の圃場においては、目的の微細藻類以外の微細藻類の混入が問題となっており、このような環境下においても駆逐されず、しかも他の微細藻類と共生しながら脂質を産生できる藻体の選抜が必要とされる。本発明の課題は、生育が早く、他の微細藻類の混入に耐性を示し、脂質の含有率が高く、少なくとも脂質の組成がバイオ燃料の産生に適している、新規な微細藻類、及び該微細藻類を用いたバイオ燃料の産生方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、この度、鋭意検討した結果、生育が早く、他の微細藻類との共生性を有し、脂質の含有率が高く、かつ該脂質の組成がバイオ燃料の産生に適した新規な微細藻類を単離・培養することに成功した。かかる新規微細藻類をＡＬＧＣＩ−ＴＭ１と命名し、２０１４年１２月１２日付で独立行政法人  製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センター（千葉県木更津市かずさ鎌足２−５−８）に受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３で寄託した。
【０００９】
本願は以下の発明を包含する：
［１］  棘状突起を有し、かつ２細胞群体を形成する、デスモデスムス属（Desmodesmus）に属する微細藻類であって、該微細藻類に含有される脂肪酸の８０％以上がＣ16及びＣ18脂肪酸から構成されることを特徴とする、微細藻類。
［２］  下記の組成を有する改変ＭＤＭ培地（ｐＨ８．５）：
ＫＮＯ3                                   １００  ｍｇ
Ｋ2ＨＰＯ4                                  ２０  ｍｇ
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                          １０  ｍｇ
ＮａＣｌ                                   ２．５  ｍｇ
ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                             １  ｍｇ
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                         ０．１  ｍｇ
Ｎａ2ＥＤＴＡ・２Ｈ2Ｏ                     ０．１  ｍｇ
水道水                                       ９８  ｍｌ
において、８４〜１６８μｍｏｌ／ｍ2／ｓの光環境下、２０〜２８℃で培養した場合、２日以下の倍加時間を示すことを特徴とする、１に記載の微細藻類。
［３］  他の微細藻類との共生性を有する、１又は２に記載の微細藻類。
［４］  他の微細藻類が、アンキストロデスムス属（Ankistrodesmus）、セネデスムス属（Scenedesmus）、クロレラ属（Chlorella）、クラミドモナス属（Chlamydomonas）及びモノラフィディウム属（Monoraphidium）に属する微細藻類からなる群から選択される、３に記載の微細藻類。
［５］  特許生物寄託センターに受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３で寄託されている、微細藻類。
［６］  微細藻類を用いたバイオ燃料の産生方法であって、該微細藻類が、棘状突起を有し、かつ２細胞群体を形成する、デスモデスムス属（Desmodesmus）に属する微細藻類であって、該微生物に含有される脂肪酸の８０％以上がＣ16及びＣ18脂肪酸から構成されることを特徴とする、方法。
［７］  前記微細藻類が、下記の組成を有する改変ＭＤＭ培地（ｐＨ８．５）：
ＫＮＯ3                                   １００  ｍｇ
Ｋ2ＨＰＯ4                                  ２０  ｍｇ
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                          １０  ｍｇ
ＮａＣｌ                                   ２．５  ｍｇ
ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                             １  ｍｇ
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                         ０．１  ｍｇ
Ｎａ2ＥＤＴＡ・２Ｈ2Ｏ                     ０．１  ｍｇ
水道水                                       ９８  ｍｌ
において、９５〜７８０μｍｏｌ／ｍ2／ｓの光環境下、２０〜２８℃で培養した場合、２日以下の倍加時間を示すことを特徴とする、６に記載の方法。
［８］  前記微細藻類が、他の微細藻類との共生性を有する、６又は７に記載の方法。
［９］  他の微細藻類が、アンキストロデスムス属（Ankistrodesmus）、セネデスムス属（Scenedesmus）、クロレラ属（Chlorella）、クラミドモナス属（Chlamydomonas）及びモノラフィディウム属（Monoraphidium）に属する微細藻類からなる群から選択される、８に記載の方法。
［１０］  前記微細藻類が、特許生物寄託センターに受託番号ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３で寄託されている、方法。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、効率的かつ持続的にバイオ燃料を供給することが可能となり、バイオ燃料の製造において十分な経済性・事業性を確保することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】左図は、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の外観的特徴を示す顕微鏡写真である（明視野；倍率２０倍）。右図は、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の細胞内における、ナイルレッドで染色された脂質を示す蛍光顕微鏡写真である。
【図２】分光光度計によって測定したＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の相対濃度の時間変化を示すグラフである。
【００１２】
本発明の微細藻類は、細胞の形態的特徴に基づき、デスモデスムス（Desmodesmus）属に属する新規微細藻類であると推定された（藻類の系統解析については、例えば非特許文献２〜４を参照のこと）。デスモデスムスは、イカダモの仲間に分類され、細胞は楕円形、長方形、三日月形、披針形などの形状を有する。デスモデスムスは、通常、４又は８個、稀に２又は１６個の細胞が一列又は二列に並んだ板状の定数群体を形成する。群体の両端の細胞に長い棘状突起を持つ種もあり、本発明の微細藻類も２細胞群体であり細胞の両端に棘状突起が確認されている。また、デスモデスムス属プレイオモルファス種（ＳＵＨＬ０７０８株；ＦＥＲＭ Ｐ−２１９６０）がバイオマス原料となることが知られているが、これは、特定の窒素含量を有する培養液で培養した場合に脂肪酸系炭化水素を藻体内に蓄積しうるものであり（特許文献５）、本発明の微細藻類とは明確に区別される。さらに、デンプンを高蓄積するデスモデスムス属に属する微細藻類も知られている（特許文献６）。しかしながら、バイオ燃料の産生に十分に適したデスモデスムス属に属する微細藻類についてはこれまでほとんど知られていない。
【００１３】
本発明の新規微細藻類は生育が早く、有意な増殖速度を示す。藻類の乾物基準での生産性が１ｋｇ−ｄ．ｍ．／ｍ3／日以上を確保できれば、一般に事業性が期待できるものと考えられている。また、本発明の新規微細藻類は、有意な脂質含有率を有しているものと推測され、微細藻類の乾燥重量に対して、６０重量％以上、好適条件下では７０重量％以上の脂質を含有するものと考えられる。さらに、本発明の微細藻類は、他の微細藻類（例えば、アンキストロデスムス属、セネデスムス属、クロレラ属、クラミドモナス属、及び／又はモノラフィディウム属）と共生性を示すため、目的の微細藻類以外の微細藻類が混入したとしても駆逐されずに、生存できるため、これらの他の微細藻類と共に混合培養してもよい。藻類培養においては、特に開放系で培養する場合、いろいろな藻類が混入する。すなわち、水田跡地・プール等の開放系培養装置を利用して事業を展開するときには、いろいろな藻類が混入し混合培養状態となるため、混合培養においては藻類間の競争に強い藻類種を利用することが望ましい。この点においても、本発明は、バイオ燃料の製造において更に十分な経済性・事業性を確保できるものと考えられる。また、本発明の新規微細藻類に含有される脂肪酸は、炭素鎖数としてＣ16及びＣ18を有するものが主体であり、バイオディーゼル燃料（ＢＤＦ：脂肪酸メチルエステル、学術用語ではＦＡＭＥと表す。以下ＢＤＦで示す）や航空機燃料といったバイオ燃料の原料として極めて有用である。微細藻類に含有される脂肪酸は、多くの藻類では８０％以上、好適と言われる藻類では９０％以上、最適と思われる藻類では９５％以上がＣ16及びＣ18脂肪酸から構成される。本発明の微細藻類ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１（ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３）は、好適から最適の範疇に入る。また、本発明の新規微細藻類は、上記の所望の性質を有する限り、野生型に限らず、突然変異体や遺伝子改変体などの変異体も含む。
【００１４】
バイオディーゼル燃料（ＢＤＦ）は、バイオマス由来の脂質に対して、ディーゼルエンジンに適合するように化学処理することにより改質した燃料の総称である。脂質は粘度が高いなどの特徴を有しており、そのままディーゼルエンジンの燃料として使用した場合、噴射ポンプや噴射ノズルに析出物が付着して不具合が発生することが懸念される。このため、ＢＤＦの産生は、原料となる脂質からグリセリンをエステル交換により取り除き粘度を下げる等の化学処理を施すことにより、脂質を軽油に近い物性に変換することにより行われる。具体的には、脂質にメタノールと触媒を加えてエステル交換反応を起こし、これに酸を加えて中和させたうえで、脂肪酸メチルエステルとグリセリンに分離させる。分離した脂肪酸メチルエステルを水洗処理してアルカリ触媒を取り除き、さらに蒸留処理をすることでメタノールを除去したものが、ＢＤＦとなり、例えば、自動車や船舶などのディーゼルエンジンの燃料として用いることが可能である。一般には、バイオディーゼルとして国際的に規格化されているものは、脂肪酸メチルエステルのみであるが、必ずしもこれに限定されない。脂肪酸メチルエステルは、水素と触媒下にて高温で反応させて炭化水素化させることにより、更に良質なバイオディーゼル・航空機燃料に変換できる。バイオディーゼル燃料品質規制については、欧州ではＥＮ１４２１４において軽油に混合しない状態での性状を規定しており、日本においても、揮発油等の品質の確保等に関する法律施行規則の改正により、ＦＡＭＥ混合軽油について満たすべき基準が設けられている。また、民間航空機用の航空機燃料規格は、国際的にＡＳＴＭ  Ｄ１６５５によって規定されており、２００９年にＣＴＬ／ＧＴＬの５０％混合燃料がＡＳＴＭ  Ｄ１６５５と同等な規格としてＡＳＴＭ  Ｄ７５６６で承認された。そして２０１１年にはバイオ合成パラフィンケロシン（Ｂｉｏ−ＳＰＫ）５０％混合燃料がＤ７５６６の規格に追加承認されている。
【００１５】
本発明の新規微細藻類を培養するための培地としては、特に制限されないが、微細藻類の培養に通常使用されている培地を用いることができ、各種栄養塩、微量金属塩、ビタミン等を含んでよい。栄養塩としては、例えば、ＮａＮＯ3、ＫＮＯ3、ＮＨ4Ｃｌ、尿素などの窒素源、Ｋ2ＨＰＯ4、ＫＨ2ＰＯ4、グリセロリン酸ナトリウムなどのリン源が挙げられる。また、微量金属としては、鉄、マグネシウム、マンガン、カルシウム、銅、亜鉛等が挙げられる。ビタミン類は基本的にはなくても良いが、存在していても問題は生じない。このようなビタミンとしてはビタミンＢ1、ビタミンＢ2、ビタミンＢ6、ビタミンＢ12等が挙げられる。従って、具体的には、市販の液体肥料、例えば、花工場（住友化学園芸）又はメネデール芝肥料（メネデール）の２０００倍希釈液を用いることができる。特に好ましい培地は、改変ＭＤＭ培地であり、その具体的な組成は下記の例１に示されている。また、培地中に存在するバクテリアによる微細藻類の増殖阻害を防ぐために、培地を加熱滅菌（好適には７５〜１２１℃で１５〜６０分間）又は０．２μｍ以下のフィルターでろ過することが好ましい。
【００１６】
本発明の新規微細藻類の培養は、典型的には１２〜３２℃、好適には２０〜２８℃、最適には２５℃で行われる。また、微細藻類の光合成能力を高めるために、藻類の光合成における光反応系に必要な光を微細藻類に均一に照射して行われる。培養液を攪拌することにより、光を微細藻類に均一に照射することが好ましい。光は、自然光であっても人工光であってもよいが、９５μｍｏｌ／ｍ２／ｓ以上の光量を有することが好ましい。しかし、８００μｍｏｌ／ｍ2／ｓ程度以上だと強光阻害が起こる可能性がある。また、自然の明暗周期下および連続照射下どちらでもよく生育する。
【００１７】
このようにして培養した本発明の新規微細藻類を用いて、バイオ燃料が産生される。一般に、藻体からバイオ燃料を産生する場合には、藻体を乾燥させてから細胞膜を破砕し、その後、ヘキサンやエーテルなどの非極性有機溶媒を用いて脂質を抽出することによって行うことができる。あるいは、藻体を収穫し、冷凍保存した後、藻体を直接メチルエステル化処理にかけてもよい。メチルエステル化処理には、例えば過熱メタノール蒸気法を用いることができる。過熱メタノール蒸気法は、常圧付近で過熱メタノール蒸気を脂質中に吹き込むことによりメチルエステルを生成する無触媒メチルエステル化反応である（特開２００６−０２８１４６号：特許文献７）。具体的には、脂質を満たした反応槽の底部より過熱状態のメタノール蒸気を供給することにより行う。生成したメチルエステル（ＦＡＭＥ）は、未反応のメタノール蒸気およびグリセリンとともに反応槽から流出し、冷却器で凝集・回収される。未反応のメタノールを除去することにより、ＦＡＭＥとグリセリンは二相に分離する。この反応においては、触媒は一切用いられない。
【００１８】
また、本発明のバイオ燃料の産生方法においては、本発明の微細藻類とその他の微細藻類とを一緒に混合培養した培養液を直接用いてもよい。混合培養には、上述の培地を用いることができる。その他の微細藻類としては、例えば、アンキストロデスムス属、セネデスムス属、クロレラ属、クラミドモナス属及びモノラフィディウム属に属する微細藻類が挙げられる。
【００１９】
得られたＢＤＦは、更に精製されることが好ましい。精製は、沈殿分離、カラム分離、液相分離、比重分離、蒸留分離など、種々の分離方法を使用することができる。
【００２０】
このように、本発明の新規微細藻類により、商業的ベースにおいて経済性を確保する水準でバイオ燃料を産生することが可能となる。
【００２１】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明する。
【実施例】
【００２２】
例１．新規株ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の単離・培養
千葉県内の河川からガラス瓶により採水した藻体サンプルをハイポネックス液体肥料２０００倍希釈液で培養し、その後スカーマン式簡易マニュピュレーターを用いて、寒天培地に藻の培養液を滴下し、藻を顕微鏡下で１個体のみ掻き取ることにより、目的の微細藻類を単離し、これをＡＬＧＣＩ−ＴＭ１と命名した。その後、Ｌ字管に下記の組成を有する改変ＭＤＭ培地１０ｍｌを取り、そこに単離したＡＬＧＣＩ−ＴＭ１を植え付け、ＬＥＤ照明照射（約１４０μｍｏｌ／ｍ2／ｓ）下において、２５℃で２週間振とう培養を行った。
改変ＭＤＭ培地（ｐＨ８．５）
ＫＮＯ3                                   １００  ｍｇ
Ｋ2ＨＰＯ4                                  ２０  ｍｇ
ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                          １０  ｍｇ
ＮａＣｌ                                   ２．５  ｍｇ
ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ                             １  ｍｇ
ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ                         ０．１  ｍｇ
Ｎａ2ＥＤＴＡ・２Ｈ2Ｏ                     ０．１  ｍｇ
水道水                                       ９８  ｍｌ
【００２３】
例２．顕微鏡観察
Ｎｉｋｏｎ  ＣＯＯＬＰＩＸ９９０により、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の顕微鏡撮影を行った（図１）。撮影は、明視野（倍率２００倍）にて行った。
具体的には、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１は以下の外観的特徴を有する。
細胞の外観的特徴：棘状突起を有する
細胞の形状：楕円形
群体の形成の有無：２細胞群体を形成
群体長（細胞長）：約２０μｍ
細胞幅：約４〜５μｍ
【００２４】
また、藻体をスライドガラスに採り、その上にナイルレッド１０μｍを滴下して染色したところ、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の細胞内には有意な量の脂質が蓄積されていることが確認された。
【００２５】
例３．増殖試験
Ｌ字管に改変ＭＤＭ培地１０ｍｌを取り、そこへＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の種藻を植付け、振とう培養を行った。培養は、ＬＥＤ照明照射（約１４０μｍｏｌ／ｍ2／ｓ）下において、２５℃で行い、島津ボシュロム分光光度計  スペクトロニック２０Ａによって、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の相対濃度の時間変化を測定した（図２）。
また、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の倍加時間を測定したところ、約１．０日であった。これは一般的な微細藻類である、ボトリオコッカス・ブラウニーの倍加時間（５．７〜１７．３日）よりも有意に短かった。
【００２６】
例４．脂質の抽出
日立遠心機ＣＦ−１５Ｒ，Ｔ１１Ａ３１ローターを用いた遠心分離（９，０００ｒｐｍ，４℃，５分間）により、例１で得られた培養液からＡＬＧＣＩ−ＴＭ１の藻体を収穫した。藻体ペレットを脱イオン水にて洗浄および再懸濁後、ナス型フラスコ中で凍結し、真空乾燥処理した。その後、下記の手法により凍結乾燥藻体から脂質を抽出した。
（１）ろ紙を細切してビーカーに入れ、アセトンを添加して３０分ほど放置する。
（２）上清のみをピペットで取り、遠沈管に移して遠心分離し、ナス型フラスコに移す。
（３）同様の操作を２回繰り返した後、残渣にメタノール／クロロホルム（２：１）を添加し、上と同様な操作を行う。
（４）ナス型フラスコ中で凍結し、真空乾燥処理を行う。
（５）メタノール／クロロホルム（２：１）を加えた後、８０℃に加温し、抽出液が黄色く着色し、脂溶性成分が十分抽出されたことを確認する。
（６）この加熱抽出を３回繰り返し、得られた全ての上清を前述のアセトン抽出物と合一する。
（７）溶媒をロータリーエバポレーターにより留去する。
その後、抽出した脂質を水酸化カリウム／エタノールでケン化し、二層分配により遊離脂肪酸を回収し、三フッ化メタノール錯体によりメチルエステル化を行い、ＧＣ−ＭＳにて脂肪酸分析をした。
主な脂質の成分を以下に示す：
パルミチン酸（Ｃ１６：０）        ２３．４％
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）      ７．５％
オレイン酸（Ｃ１８：１）          ４３．３％
リノール酸（Ｃ１８：２）          １０．６％
リノレン酸（Ｃ１８：３）            ６．８％
【００２７】
例５．混合培養
水道水３００Ｌが入った５００Ｌ水槽に種藻（アンキストロデスムス、セネデスムス、デスモデスムス、クロレラ、クラミドモナス、モノラフィディウムの混合藻）を３０Ｌ加え、タイマーをセットし、１時間おきに５分間二酸化炭素ガスを供給し、水中ポンプにて水を循環させながら下記の条件下で１２時間培養した。
培養条件：
培地：メネデール芝肥料（メネデール株式会社）の２０００倍希釈液
温度：１２〜３２℃
期間：３０日
種藻の量：培地の１０％を種藻
光量：自然光（２２０〜３６０μｍｏｌ／ｍ2／ｓ）
混合培養では、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１は、他の微細藻類とともによく共生した。水温の変化や日照時間によって藻の出現率が変化し、それぞれの条件に適した藻が優勢になることはあるが、ＡＬＧＣＩ−ＴＭ１が絶えてしまうことはなかった。
【受託番号】
【００２８】
ＦＥＲＭ  Ｐ−２２２８３
【図２】
2016174565.tif 000002
【図１】
2016174565.tif 000003