(57)【要約】【課題】高い精度で感度良く、早期に腎疾患を検出できる手段を提供すること。【解決手段】腎疾患のマーカーとして、尿中のＭＲＰ８モノマーを用いること。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する抗体を含有する、腎疾患診断薬。
【請求項２】
ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する抗体を含有する、腎疾患診断用キット。
【請求項３】
（１）被験者から採取された尿におけるＭＲＰ８モノマー量（被検ＭＲＰ８モノマー量）を測定する工程、
（２）被検ＭＲＰ８モノマー量を、非腎疾患患者の尿におけるヒトＭＲＰ８モノマー量（対照ＭＲＰ８モノマー量）と対比する工程、及び
（３）対照ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８モノマー量が高い場合に、被験者が腎疾患であると判定する工程
を含む、腎疾患の診断方法。
【請求項４】
腎疾患が、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、腎硬化症、及びＡＮＣＡ関連腎炎からなる群より選択される少なくとも１種である、請求項３に記載の診断方法。
【請求項５】
さらに、
（４）被験者から採取された尿におけるＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量（被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量）を測定する工程、
（５）被検ＭＲＰ８モノマー量を、被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量と対比する工程、及び
（６）被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が高い場合に前記腎疾患が膜性増殖性糸球体腎炎であると判定し、被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が低い場合に、前記腎疾患がＡＮＣＡ関連腎炎であると判定する工程
を含む、請求項３又は４に記載の診断方法。
【請求項６】
工程（１）、又は工程（１）及び工程（４）における測定方法がウェスタンブロッティング法である、請求項３〜５のいずれかに記載の診断方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、尿中のミエロイド関連タンパク質（Myeloid-related protein 8；ＭＲＰ８；Ｓ１００Ａ８）をマーカーとする腎疾患の診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
慢性腎臓病（ＣＫＤ）は、腎臓の病気が慢性化して、腎臓の能力が徐々に低下する疾患である。初期には自覚症状が少ないため、無症状のうちに腎機能が低下して透析が必要となることも少なくない。透析が必要となる患者数は、我が国では年間３万８０００人前後であり、社会問題にもなっている。このため、慢性腎臓病を早期に発見できるマーカーが必要とされている。
【０００３】
現在、慢性腎臓病のマーカーとしては、推定糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）と蛋白尿（あるいはアルブミン尿）の２つが用いられており、これら２つのマーカーでステージ分類を行い、予後を予測することがグローバルスタンダードとなっている。しかし、蛋白尿（あるいはアルブミン尿）については、一部の腎疾患においてサロゲートマーカーとしての有用性を問う報告がなされている（非特許文献１）。
【０００４】
そこで、別のマーカーとして、血中に存在するタンパク質複合体ＭＲＰ８／１４を用いることが検討されている（非特許文献２）。しかし、本発明者らの研究によれば、血清ＭＲＰ８／１４濃度が腎疾患とは独立して、糖尿病や高脂質症などの全身性疾患の影響によっても増加することが明らかとなっており（非特許文献３）、腎疾患の病態のマーカーとしては不十分と考えられる。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２０１４年４月９日、第８６巻、ｐ．５０‐５７
【非特許文献２】Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｙ、２００９年２月２０日、第８巻、第１０号
【非特許文献３】桑原ら、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ、２０１２年５月１９日、第５５巻、ｐ．２２５６−２２６６
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
したがって、本発明の課題は、高い精度で感度良く、早期に腎疾患を検出できる手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そこで、本発明者らは腎疾患のマーカーを鋭意探索した結果、血液中ではヘテロダイマーとしてのみ存在するＭＲＰ８／１４が、思いがけないことに、腎疾患患者では尿中でＭＲＰ８モノマーとしても検出されることを見出し、本発明を完成させるに至った。即ち、本発明は、以下の態様を包含する。
【０００８】
項１．  ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する抗体を含有する、腎疾患診断薬。
【０００９】
項２．  ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する抗体を含有する、腎疾患診断用キット。
【００１０】
項３．  （１）被験者から採取された尿におけるＭＲＰ８モノマー量（被検ＭＲＰ８モノマー量）を測定する工程、
（２）被検ＭＲＰ８モノマー量を、非腎疾患患者の尿におけるヒトＭＲＰ８モノマー量（対照ＭＲＰ８モノマー量）と対比する工程、及び
（３）対照ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８モノマー量が高い場合に、被験者が腎疾患であると判定する工程
を含む、腎疾患の診断方法。
【００１１】
項４．腎疾患が、膜性増殖性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、腎硬化症、及びＡＮＣＡ関連腎炎からなる群より選択される少なくとも１種である、項３に記載の診断方法。
【００１２】
項５．  さらに、
（４）被験者から採取された尿におけるＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量（被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量）を測定する工程、
（５）被検ＭＲＰ８モノマー量を、被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量と対比する工程、及び
（６）被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が高い場合に前記腎疾患が膜性増殖性糸球体腎炎であると判定し、被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が低い場合に、前記腎疾患がＡＮＣＡ関連腎炎であると判定する工程
を含む、項３又は４に記載の診断方法。
【００１３】
項６．  工程（１）、又は工程（１）及び工程（４）における測定方法がウェスタンブロッティング法である、項３〜５のいずれかに記載の診断方法。
【発明の効果】
【００１４】
本発明によれば、採尿により得られる非侵襲的な試料のみから、被検者が腎疾患であるか否かを診断することができる。さらに、本発明によれば、尿中のＭＲＰ８モノマー量とＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量とを比較することによって、腎疾患の種類をも特定することが可能になる。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】血清試料および尿試料についてのウエスタンブロッディングの結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
１．用語の定義
ＭＲＰ８モノマーは、Ｓ１００ファミリーに属し、Ｓ１００カルシウム結合タンパクＡ８（Ｓ１００−Ａ８）、カルグラニュリンＡとも呼ばれる分子量約１０ｋＤａのタンパク質である。ＭＲＰ８モノマーは、生体内で発現しているＭＲＰ８タンパク質の内、他のタンパク質と結合することなく、単量体として存在しているものである限り特に限定されない。ＭＲＰ８タンパク質として、具体的には、例えば配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるヒトＭＲＰ８タンパク質（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ： ＮＰ＿００２９５５．２）が挙げられる。生体内で発現している限りにおいて、ヒトＭＲＰ８タンパク質には、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性、好ましくは９５％以上の同一性、より好ましくは９８％以上の同一性、よりさらに好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質も包含される。
【００１７】
ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーはカルプロテクチンとも呼ばれるカルシウム結合性蛋白複合体であり、分子量は約２４ｋＤａ、好中球の細胞質ゾルの主要なタンパク質として知られている。ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーは、生体内で発現しているＭＲＰ８タンパク質と生体内で発現しているＭＲＰ１４タンパク質とが結合して、二量体として存在しているものである限り特に限定されない。ＭＲＰ１４タンパク質として、具体的には、例えば配列番号２に示されるアミノ酸配列からなるヒトＭＲＰ１４タンパク質（ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ： ＮＰ＿００２９５６．１）が挙げられる。生体内で発現している限りにおいて、ヒトＭＲＰ１４タンパク質には、配列番号２に示されるアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性、好ましくは９５％以上の同一性、より好ましくは９８％以上の同一性、よりさらに好ましくは９９％以上の同一性を有するアミノ酸配列からなるタンパク質も包含される。
【００１８】
本発明でいう「抗体」には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体、一本鎖抗体、またはFabフラグメントやFab発現ライブラリーによって生成されるフラグメントなどのように抗原結合性を有する上記抗体の一部が包含される。抗体は、特異性、感度の高さの面から、モノクローナル抗体であることが好ましい。
【００１９】
さらに本発明において「診断薬」とは、腎疾患の有無、またはその程度を診断するために、直接または間接的に利用されるものをいう。これには、腎疾患に関連して尿中で量が増加するＭＲＰ８モノマーを特異的に認識することのできる抗体が包含される。この抗体は、上記性質に基づいて、尿中のＭＲＰ８モノマーを検出するためのプローブとして有効に利用することができる。
【００２０】
２．腎疾患診断薬
本発明は、診断薬として、ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する抗体を提供する。ここで、「ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する」とは、ＭＲＰ８モノマーは特異的に認識し、且つＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーは認識しないことを意味する。
【００２１】
本発明は、腎疾患患者の尿においてＭＲＰ８モノマーが特異的に検出されるという知見をもとに、被験者について尿中ＭＲＰ８モノマーの有無やその程度を検出することによって、当該被験者が腎疾患であるか否か、またその程度を特異的に検出することができるという発想に基づくものである。
【００２２】
従って、上記抗体は、被験者における上記尿中ＭＲＰ８モノマー量の有無またはその程度を検出することによって、該被験者が腎疾患であるか否かまたはその程度を診断することのできるツール(診断薬)として使用される。
【００２３】
本発明の抗体は、常法に従って製造することができる。具体的には、本発明の抗体がポリクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製したＭＲＰ８タンパク質を用いて、あるいは常法に従って当該ＭＲＰ８タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを合成して、家兎等の非ヒト動物に免疫し、該免疫動物の血清から、ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーを認識せず、且つＭＲＰ８モノマーを認識する抗体を精製することによって得ることができる。一方、モノクローナル抗体の場合には、常法に従って大腸菌等で発現し精製したＭＲＰ８タンパク質、あるいはＭＲＰ８タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドをマウス等の非ヒト動物に免疫し、得られた脾臓細胞と骨髄腫細胞とを細胞融合させて調製したハイブリドーマ細胞の中から、ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーを認識せず、且つＭＲＰ８モノマーを認識する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を選別し、該細胞から得ることができる。上記精製や選別の際に用いるＭＲＰ８モノマーやＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーは、生体中に存在するものを精製して得たものでもよいし、リコンビナントタンパク質であってもよい。
【００２４】
抗体の製造のために用いられるオリゴ（ポリ）ペプチドは、機能的な生物活性を有することは要しないが、ＭＲＰ８タンパク質と同様な免疫原特性を有するものであることが望ましい。好ましくはこの免疫原特性を有し、且つＭＲＰ８タンパク質のアミノ酸配列において少なくとも連続する８アミノ酸、好ましくは１５アミノ酸、より好ましくは２０アミノ酸からなるオリゴ（ポリ）ペプチドを例示することができる。
【００２５】
ＭＲＰ８タンパク質、あるいはＭＲＰ８タンパク質の部分アミノ酸配列を有するオリゴペプチドを免疫する際には、宿主に応じて種々のアジュバントを用いてもよい。限定はされないが、そのようなアジュバントには、フロイントアジュバント、水酸化アルミニウムのようなミネラルゲル、並びにリゾレシチン、プルロニックポリオル、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、キーホールリンペットヘモシアニン及びジニトロフェノールのような表面活性物質、ＢＣＧ（カルメット−ゲラン桿菌）やコリネバクテリウム-パルヴムなどのヒトアジュバントが含まれる。
【００２６】
３．診断用キット
本発明は、上記診断薬を含む、腎疾患の検出や診断に使用する診断用キットを提供するものでもある。当該キットは、上記抗体を少なくとも１つ含むものである。当該キットには上記抗体の他、必要に応じて上記抗体によるＭＲＰ８モノマーの検出に必要な試薬、器具等を適宜含んでいてもよい。
【００２７】
例えば、上記抗体を１次抗体とした場合に、２次抗体として使用されるものを含んでいてもよい。２次抗体の例としては、蛍光標識された２次抗体、ＨＲＰ（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）またはＡＰ（アルカリフォスファターゼ）で標識された２次抗体が挙げられる。
【００２８】
また、ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマーを特異的に認識する抗体をさらに含んでいてもよい。この抗体も、上記「ＭＲＰ８モノマーを特異的に認識する抗体」と同様の方法に従って得ることができる。
【００２９】
４．腎疾患の診断方法（検出方法）
本発明の腎疾患の診断方法は次の（１）〜（３）の工程を含む：
（１）被験者から採取された尿におけるＭＲＰ８モノマー量（被検ＭＲＰ８モノマー量）を測定する工程、
（２）被検ＭＲＰ８モノマー量を、非腎疾患患者の尿におけるヒトＭＲＰ８モノマー量（対照ＭＲＰ８モノマー量）と対比する工程、及び
（３）対照ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８モノマー量が高い場合に、被験者が腎疾患であると判定する工程。
【００３０】
本発明において、腎疾患としては、例えば慢性腎臓病、好ましくは腎組織局所での炎症を有する疾患が挙げられる。腎疾患として、具体的には、慢性糸球体腎炎、糖尿病性腎症、腎硬化症、ＡＮＣＡ関連腎炎等が挙げられる。また、慢性糸球体腎炎としては、例えば、膜性増殖性糸球体腎炎、巣状糸球体硬化症・巣状糸球体炎、メザンギウム増殖性糸球体腎炎、膜性糸球体腎炎、硬化性糸球体腎炎等が挙げられ、好ましくは膜性増殖性糸球体腎炎が挙げられる。
【００３１】
本発明において、「被検者」とは腎臓を有する動物であれば特に制限はないが、ヒトが特に好ましい。
【００３２】
被検者の尿は、細胞等を除去するためフィルターを通すかまたは遠心分離を行い、その上清を用いることが好ましい。遠心分離の条件の例としては、室温、３０００ｒｐｍ、５分が挙げられる。
【００３３】
ＭＲＰ８モノマーの測定方法は、ＭＲＰ８モノマーとＭＲＰ８／１４ヘテロダイマーとを区別して認識できる方法である限り特に限定されない。例えば、ウェスタンブロッティング法、ＥＬＩＳＡ法、質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦＭＳ等）、ＨＰＬＣ、二次元ゲル電気泳動、これらの組み合わせ等が挙げられる。これらの中でも、感度の高さから、好ましくはウェスタンブロッティング法、ＥＬＩＳＡ法等が挙げられ、より好ましくはウェスタンブロッティング法が挙げられる。ウェスタンブロッティング法は、抗体としてＭＲＰ８モノマー及びＭＲＰ８／１４ヘテロダイマーの両方を認識する抗体を用いても、分子量によって両者を区別することができるので、好ましい。
【００３４】
非腎疾患患者は、上記腎疾患に罹患していない限りにおいて特に限定されないが、健常人であることが好ましい。
【００３５】
被験者が腎疾患であるかどうかは、対照ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８モノマー量が高いことを指標として判定される。具体的には、例えば対照ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８モノマー量が２倍以上、好ましくは４倍以上、より好ましくは８倍以上であることを指標として行うことができる。
【００３６】
本発明者らは、ＭＲＰ８モノマーが腎組織の中でも局所的に発現が誘導されていて、従来の指標（尿蛋白、推定ＧＦＲ）で定義される慢性腎臓病の中でも疾患によって腎組織局所でのＭＲＰ８産生の有無やその程度は様々であるため、慢性腎臓病の中でも尿中ＭＲＰ８モノマーの検出に差が生じると考えている。すなわち、本発明の方法は、慢性腎臓病の病態反映マーカーとしても利用できる可能性がある。
【００３７】
また、本発明においては、ＭＲＰ８モノマー量とＭＲＰ８／１４ヘテロダイマー量とを対比する工程をさらに含むことが好ましい。これにより、慢性腎臓病における糸球体局所での病態を一層明確に評価できる。ＭＲＰ８モノマー量とＭＲＰ８／１４ヘテロダイマー量とを比較する方法の例としては、ウエスタンブロッディングのそれぞれのバンドの強さに基づいて評価する方法や、ＥＬＩＳＡの測定値に基づいて定量的に評価する方法等が挙げられる。
【００３８】
より具体的には、本発明の診断方法は、さらに次の（４）〜（６）の工程を含むことが好ましい：
（４）被験者から採取された尿におけるＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量（被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量）を測定する工程、
（５）被検ＭＲＰ８モノマー量を、被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量と対比する工程、及び
（６）被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が高い場合に前記腎疾患が膜性増殖性糸球体腎炎であると判定し、被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が低い場合に、前記腎疾患がＡＮＣＡ関連腎炎であると判定する工程。
【００３９】
ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量の測定は、上記したＭＲＰ８モノマー量の測定と同様に行うことができる。
【００４０】
被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が高いことを指標として、被験者が罹患している腎疾患が膜性増殖性糸球体腎炎であると判定される。具体的には、例えば被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が１．５倍以上、好ましくは２倍以上、より好ましくは３倍以上であることを指標とすることができる。
【００４１】
被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が低いことを指標として、被験者が罹患している腎疾患がＡＮＣＡ関連腎炎であると判定される。具体的には、例えば被検ＭＲＰ８モノマー量に比べて被検ＭＲＰ８／ＭＲＰ１４ヘテロダイマー量が１／１．５以下、好ましくは１／２以下、より好ましくは１／３以下であることを指標とすることができる。
【実施例】
【００４２】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する。
【００４３】
（実施例１）
腎生検により膜性増殖性糸球体腎炎と診断された患者から同意を得て提供を受けた尿について、ウエスタンブロット法を用いてＭＲＰ８およびＭＲＰ８／１４を測定した。また、非特異的結合によりアルブミンも検出された。ウエスタンブロットは以下の手順にて行った。
【００４４】
患者から提供を受けた尿を室温、３０００ｒｐｍにて５分、遠心分離して得た上清について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥを行い、ゲル内のタンパク質を湿式のブロッティング装置（ＢＩＯＲＡＤ社製）でポリビニリデンジフロライド（ＰＶＤＦ）膜に転写した。転写後、この膜を０．２質量％のスキムミルクを含むＴＢＳＴ（５０ｍＭトリス、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５体積％Ｔｗｅｅｎ２０を含む、ｐＨ７．６）中で１時間振盪し、ブロッキングした。ブロッキング後、膜を１次抗体を含む溶液中で４℃にて一晩振盪し、次いで、膜を室温に移して１時間振盪した。なお、１次抗体はマウス抗ヒトＳ１００ａ８抗体（ＢＭＡバイオメディカルズ社＃Ｔ１０３０）を、０．２質量％のスキムミルクを含むＴＢＳＴで５００倍に希釈して使用した。次いで、膜をＴＢＳＴで３回洗浄した後、２次抗体を含む溶液中で室温にて２時間振盪した。なお、２次抗体はＨＲＰ標識抗マウスＩｇＧ抗体（ＧＥヘルスケア・ライフサイエンス社製）を０．２質量％のスキムミルクを含むＴＢＳＴで２０００倍に希釈して使用した。次いで、膜をＴＢＳＴで３回洗浄した後、ＥＣＬ  Ｐｒｉｍｅウエスタンブロッティング検出試薬（ＧＥヘルスケア・ライフサイエンス社製、ＲＰＮ２１３２）を用いて発色させた。
【００４５】
結果を図１の右側Ｂレーンに示す。
【００４６】
なお、当該尿試料中の尿蛋白をピロガロール・レッド法により定量した結果、８０００ｍｇ／ｇＣｒであった。
【００４７】
（実施例２）
試料として、膜性増殖性糸球体腎炎と診断された患者から提供を受けた尿に代えて、糖尿病、高血圧および高脂血症を併発した患者から提供を受けた尿を用いたこと以外は実施例１と同様にしてウエスタンブロッディングを行った。結果を図１の右側Ｃレーンに示す。なお、当該尿試料中の尿蛋白は２７００ｍｇ／ｇＣｒであった。
【００４８】
（実施例３）
試料として、膜性増殖性糸球体腎炎と診断された患者から提供を受けた尿に代えて、ＡＮＣＡ関連腎炎患者から提供を受けた尿を用いたこと以外は実施例１と同様にしてウエスタンブロッディングを行った。結果を図１の右側Ｄレーンに示す。なお、当該尿試料中の尿蛋白は１４０ｍｇ／ｇＣｒであった。
【００４９】
（比較例１）
試料として、膜性増殖性糸球体腎炎と診断された患者から提供を受けた尿に代えて、健常人から提供を受けた尿を用いたこと以外は実施例１と同様にしてウエスタンブロッディングを行った。結果を図１の右側Ａレーンに示す。
【００５０】
（比較例２〜５、血清試料の測定）
試料として、被験者から提供を受けた尿に代えて、被験者から提供を受けた血清を、１００ｋＤａ以下を通すメンブレンフィルター（Ｍｅｒｃｋ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社製、Ａｍｉｃｏｎ  Ｕｌｔｒａ １００Ｋ）を用いてろ過し、血清ＩｇＧを除去した試料を用いたこと以外は、それぞれ比較例１及び実施例１〜３と同様にしてウエスタンブロッディングを行った。結果を図１の左側に示す。
【００５１】
Ａ〜Ｄはそれぞれ同一人由来の試料であり、Ａは健常人、Ｂは膜性増殖性糸球体腎炎患者、Ｃは糖尿病、高血圧および高脂血症を併発した患者、ＤはＡＮＣＡ関連腎炎患者から提供を受けた試料についての結果である。
【００５２】
図１のウエスタンブロッティング測定結果を４段階で評価し、まとめた結果を表１に示す。
【００５３】
【表１】
2016121937.tif 000002
【００５４】
図１および表１に示す結果から、尿試料中では健常人、腎疾患患者の別にかかわらず、ＭＲＰ８／１４ヘテロダイマーが確認されるのに対し、ＭＲＰ８モノマーは、膜性増殖性糸球体腎炎患者、糖尿病・高血圧・高脂血症併発患者、ＡＮＣＡ関連腎炎患者などの腎疾患患者のみに確認されることが明らかである。
【００５５】
また、ＭＲＰ８モノマーの発生は、疾病によっては尿蛋白の発生とは明らかに異なっていることから、尿中ＭＲＰ８モノマーの発生が、腎組織局所の病態を反映している可能性が考えられる。
【００５６】
血清中では、ＭＲＰ８／１４ヘテロダイマーは、疾病にかかわらず尿蛋白（アルブミン尿）と同様の発生態様を示すのに対し、ＭＲＰ８モノマーは、尿蛋白の程度とは明らかに異なる結果であった。尿中モノマーと尿中ヘテロダイマーとを対比することで、モノマーが優位に尿中排泄される疾患をより鋭敏に検出できる可能性がある。例えば、症例ＤのＡＮＣＡ関連腎炎では、症例Ｂの膜性増殖性糸球体腎炎やＣの糖尿病・高血圧・高脂血症の併発と比較してより糸球体局所での炎症機序が強い病態であることが知られている。図１、表１に示す結果も、尿中モノマー／ヘテロダイマー比はＤ＞Ｂ，Ｃとなっており、測定値の違いは糸球体局所での病態の違いを反映している可能性が考えられる。
【００５７】
以上の結果から、本発明によれば、被験者の慢性腎臓病についての知見が得られることが明らかとなった。また、本発明によれば、慢性腎臓病の病態に関する知見が得られる可能性もある。
【図１】
2016121937.tif 000003
【配列表】
2016121937000001.app