(57)【要約】      （修正有）【課題】白髪の発生の防止又は改善効果に優れるとともに、安定性及び安全性に優れた毛髪化粧料及び白髪改善化粧料の提供。【解決手段】ユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物に、優れたチロシナーゼ活性促進作用及びメラニン産生促進作用とともに白髪防止（または白髪の黒化）作用を示すことを見出し、スカシユリの抽出物を含有する白髪防止剤又は前記白髪防止剤を含む白髪改善化粧料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物を含有することを特徴とするチロシナーゼ活性促進剤。
【請求項２】
ユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物を含有することを特徴とするメラニン産生促進剤。
【請求項３】
ユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物を含有することを特徴とする白髪防止又は白髪改善化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チロシナーゼ活性促進剤及びメラニン産生促進剤、白髪防止又は白髪改善化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
白髪は、毛母色素細胞の変化によって発生する生理的老化現象の一つである。白髪の発生メカニズムの原因については、メラノサイト（色素形成細胞）の数の減少、メラニン形成酵素の減少、メラノサイトから角化細胞へのメラニン色素顆粒移動障害などが挙げられるが、未だ、根本的な原因は解明されていないのが現状である。
【０００３】
これまで白色化した髪を黒髪へと変化させる方法として、白髪を防止又は改善する成分等の報告が数多くなされているものの、いずれも有効性や安全性の点で十分なものは得られておらず、染毛剤による染毛が中心となっている。
【０００４】
しかしながら、染毛剤による染毛は髪や地肌へのダメージが大きい為、染毛以外の方法で白髪の発生予防、生じた白髪を少しでも改善したいという要望は老若男女を問わず極めて高く、より効果的で安価な白髪改善化粧料の登場が切望されている。
【０００５】
毛髪の色調は、毛髪の色素メラニンの量によって決定される。メラニンは、皮膚や毛髪の毛球部に存在する色素細胞（メラノサイト）において、酵素チロシナーゼによってチロシンから生合成される。特許文献１、２、３、非特許文献１では、メラノサイト又はチロシナーゼの活性化により、人の毛髪を黒色化することができると報告している。
【０００６】
このため、白髪予防及び白髪改善を図る目的を達成すべく、メラニン色素の形成機序に有効なチロシナーゼ活性促進成分やメラニン産生促進成分を検討することは有効な手段である。
従って、メラノサイトに直接作用してその増殖を高めたり、チロシナーゼの活性を促進すること等によりメラニン量を増加させる成分を見出されば、本来メラニンが持つ生体防御能を促進させて、白髪の防止又は改善が実現できる。
【０００７】
これまで、チロシナーゼ活性促進剤およびメラニン産生促進剤に関して種々の提案がなされている。例えば、特許文献４では、ジヒドロルペオール誘導体を含有するチロシナーゼ活性促進剤が提案されている。特許文献５では、コショウの葉又はその抽出物を含有するメラニン産生促進剤及びチロシナーゼ活性促進剤が提案されているが、未だに有効性や安全性の点で十分なものが得られていない状況である。
【０００８】
従来、ユリ科の植物は美白剤として認知されていた。特許文献６では、有効成分として、ユリ科植物（Liliaceae）を含有することを特徴とする美白化粧料組成物が提案されている。また、特許文献７、８では、マドンナリリー（Lilium Candidum）やカサブランカ（Lilium Casa Blanca）などユリ科ユリ属の植物を含有することを特徴とする美白剤として提案されている。
【０００９】
一方、特許文献９では、ユリ科ユリ属のスカシユリ（Lilum macculatum Thunb.）はヒアルロニダーゼ活性阻害剤及び保湿化粧料として提案されている。特許文献１０では、皮膚の荒れや皺、毛髪の黄ばみ、枝毛、千切れ等を予防し、皮膚や毛髪を本質から改善することができる化粧料の例として、素材にユリ科生薬「百合」が開示されている。しかし、白髪の発生減少効果が確認されているのは、ニンジンでのみであり、百合にどんな効果があるかは全く確認されていない。
【００１０】
このように、スカシユリにチロシナーゼ活性促進効果及びメラニン産生促進効果を有していることはこれまで知られておらず、スカシユリに白髪改善効果を有していることはこれまで知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特開２００１−２８８０５２号公報
【特許文献２】特開２００１−２８８０９８号公報
【特許文献３】特開２００７−８８８８号公報
【特許文献４】特開２００２−３３８１号公報
【特許文献５】特開２００３−２２６６４９号公報
【特許文献６】特開平５−３４５７１８号公報
【特許文献７】特開２０１３−２０３７２５号公報
【特許文献８】特開２０１１−２２５５６４号公報
【特許文献９】特開２００３−０１２４８９号公報
【特許文献１０】特開２００３−０５５１３９号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】吉田隆著、「アンチエイジングシリーズ１  白髪・脱毛・育毛の実際」、ｐ４９−６１、ＮＴＳ（２００５）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本発明は、白髪の発生の防止又は改善効果に優れるとともに、安全性に優れた白髪防止又は白髪改善化粧料の提供を課題としている。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明者らは上述の課題解決のために鋭意研究した結果、ユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物に、優れたチロシナーゼ活性促進作用及びメラニン産生促進作用とともに白髪防止及び改善作用を見出した。すなわち、本発明は、ユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物を含有するチロシナーゼ活性促進剤及びメラニン産生促進剤、白髪防止又は白髪改善化粧料を提供するものである。
【発明の効果】
【００１５】
本願発明のユリ科ユリ属に属するスカシユリの抽出物は優れたチロシナーゼ活性効果、メラニン産生促進効果、白髪発生の防止及び改善効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
本発明に用いるスカシユリ（Lilum macculatum Thunb.）は、ユリ科ユリ属の植物で、別名は、イワトユリ、イワユリ、ミヤマカシユリ、ヤマスカシユリ、ハマユリ等と称される。使用部位は特に限定されず、全草の他、地上部である花、葉、茎、蕾、新芽等や、地下部である球根、根等が使用できるが、特に球根が好ましい。尚、本発明で述べる球根とは、短縮した茎に肥大した葉っぱや葉の一部（鱗片葉）が重なり合ったものをいい、新芽とは新しく出た芽（若芽）のことをいい、地上部とは球根より上の部位全体をいう。
【００１７】
スカシユリ抽出物の調製方法は特に限定されないが、例えば種々の適当な有機溶媒を用いて、低温下から加温下で抽出される。抽出溶媒としては、例えば、水；メチルアルコール、エチルアルコール等の低級１価アルコール；グリセリン、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール等の液状多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン；酢酸エチルなどのアルキルエステル；ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素；ジエチルエーテル等のエーテル類；ジクロルメタン、クロロホルム等のハロゲン化アルカン等の１種または２種以上を用いることができる。就中、水、エチルアルコール、１，３−ブチレングリコールの１種または２種以上の混合溶媒が特に好適である。
【００１８】
スカシユリ抽出物の抽出方法は特に限定されないが、例えば乾燥したものであれば質量比で１〜１０００倍量、特に１０〜１００倍量の溶媒を用い、０℃以上、特に２０℃〜４０℃で１時間以上、特に３〜７日間行うのが好ましい。また、６０〜１００℃で１時間、加熱抽出しても良い。
【００１９】
以上のような条件で得られるスカシユリ抽出物は、抽出された溶液のまま用いても良いが、さらに必要により、濾過等の処理をして、濃縮、粉末化したものを適宜使い分けて用いることができる。
【００２０】
本発明を白髪防止又は白髪改善化粧料として用いる場合におけるスカシユリ抽出物の配合量は、有効量存在すれば良い。一般的には白髪防止又は白髪改善化粧料の組成物に対して蒸発乾燥分に換算して０．０００１〜１００質量％が好ましく、特に０．０１〜１０．０質量％の範囲が最適である。
【００２１】
本発明の白髪防止又は白髪改善化粧料は、本発明の効果を損なわない範囲で、たとえば、油脂、ロウ類、炭化水素油、エステル油、高級アルコール、シリコーン油、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、保湿剤、界面活性剤、水溶性高分子、増粘剤、粉体、各種有効成分、皮膚保護剤、老化防止剤、植物抽出物、防腐剤、消炎剤、ｐＨ調整剤、金属イオン封鎖剤、酸化防止剤などを配合することができる。
【００２２】
本発明の白髪防止又は白髪改善化粧料の剤型は、たとえば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、おしろい、エッセンス、パック、ゲル、ヘアミスト、ヘアトニック、ヘアリキッド、リニメント、ヘアーリンス、ヘアーシャンプー、ヘアートリートメント、ヘアーコンディショナー、エアゾール、ムース等、毛髪あるいは頭皮に適用可能なものであればいずれでもよく、剤型は特に問わない。
【実施例】
【００２３】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。また、特記しない限り配合量は質量％で示す。
【００２４】
＜スカシユリ抽出物の調製＞
スカシユリ抽出物は、スカシユリ（根、球根、地上部）の乾燥物を用いて調製した。植物原体１ｇに５０（Ｗ／Ｖ）％エタノール水溶液を１０ｇ加えて６０℃、３時間加熱抽出した。抽出後、ろ過をし、植物原体を取り除いた後、減圧留去し固形抽出物をスカシユリ抽出物とした。
【００２５】
＜細胞増殖率の測定＞
ヒト表皮ケラチノサイト細胞（ＨａＣａＴ細胞）５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬを１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ改変イーグル培地に分散し、２４ウェルプレートに０．５ｍＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で２４時間培養した。２４時間後、スカシユリ（球根）抽出物（乾燥残分）を１０ｐｐｍ、１００ｐｐｍの濃度となるように添加した。細胞播種から７２時間後、Ｃｅｌｌ  Ｃｏｕｎｔｉｎｇ  Ｋｉｔ−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ）を用いてＷＳＴアッセイを行い、細胞増殖率を評価した。その結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
2016121113.tif 000002
表１の結果から、スカシユリ抽出物（１００ｐｐｍ、２００ｐｐｍ）を添加したとき、細胞毒性は認められなかった。
【００２７】
＜チロシナーゼ活性の測定＞
マックルバイン緩衝液（ｐＨ６．８）１．０ｍＬ、Ｌ−チロシン水溶液（０．３ｍｇ／１．０ｍＬ）１．０ｍＬ、精製水０．９ｍＬを混合した。この混合液を９６ウェルプレートに１８０μＬ、スカシユリ抽出物を表２に示す終濃度になるように添加し、４７５ｎｍ、６５５ｎｍの吸光度（Ａ４７５ｎｍ、Ａ６５５ｎｍ）を測定した。吸光度測定後、チロシナーゼ溶液（シグマ製、マッシュルーム由来、０．５ｍｇ／ｍＬ）を２０μＬ添加し、３７℃下で１５分間反応後、４７５ｎｍ、６５５ｎｍの吸光度（Ｂ４７５ｎｍ、Ｂ６５５ｎｍ）を測定した。得られた吸光度から下記式によりチロシナーゼ活性の促進率を算出し、結果を表２に示す。
＜チロシナーゼ活性促進率の計算式＞
（１）チロシナーゼ活性量＝（Ｂ４７５ｎｍ−Ｂ６５５ｎｍ）−（Ａ４７５ｎｍ−Ａ６５５ｎｍ）
（２）チロシナーゼ活性促進率（％）＝｛（Ｓ−Ｂ）／（Ｃ−Ｂ）｝×１００
Ｓ：サンプル（チロシナーゼ添加）のチロシナーゼ活性
Ｂ：ブランク（チロシナーゼ無添加）のチロシナーゼ活性
Ｃ：コントロール（サンプルの代わりに蒸留水）のチロシナーゼ活性
【００２８】
【表２】
2016121113.tif 000003
表２の結果から、使用部位に関係なくスカシユリ抽出物においてチロシナーゼ活性の促進効果を有することが認められたが、中でも球根が高い効果を示した。
尚、上記実施例では、根、球根、地上部について５０（Ｗ／Ｖ）％エタノール水溶液での抽出物における結果を示したが、他の部位や抽出溶媒においても同様の傾向が確認された。
【００２９】
＜細胞内のメラニン量の測定＞
マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６ｍｅｌａｎｏｍａ細胞）５．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬを１０％ＦＢＳ含有ダルベッコ改変イーグル培地に分散し、１２ウェルプレートに１ｍＬ播種し、３７℃、５％ＣＯ２下で培養した。２４時間後、スカシユリ抽出物（乾燥残分）を１００ｐｐｍ濃度となるように添加した。細胞播種から９６時間培養後、培地を捨てＰＢＳ（−）で洗浄し、２Ｎ  ＮａＯＨを５００μＬ添加した。１００℃下で３０分間煮沸し、３５００ｒｐｍで１分間遠心分離した。この上清を９６ウェルプレートに３５０μＬ移し、４０５ｎｍ、６５５ｎｍ（Ａ４０５ｎｍ、Ａ６５５ｎｍ）の吸光度を測定した。さらに、この上清４０μＬを９６ウェルプレートに移し、ＢＣＡ法に従い、５４０ｎｍ、６５５ｎｍ（Ｂ５４０ｎｍ、Ｂ６５５ｎｍ）の吸光度を測定しタンパク量を測定した。得られた吸光度から下記式によりメラニン産生促進率を算出し、結果を表３に示す。
【００３０】
＜メラニン産生促進率＞
（１）タンパク当たりのメラニン量＝（Ａ４０５ｎｍ−Ｂ６５５ｎｍ）／（Ｂ５４０ｎｍ−Ｂ６５５ｎｍ）  
（２）メラニン産生促進率（％）＝Ｓ／Ｃ×１００
Ｓ：サンプル（エキス添加）のタンパク当たりのメラニン量
Ｃ：コントロール（エキス無添加）のタンパク当たりのメラニン量
【００３１】
【表３】
2016121113.tif 000004
表３の結果から、スカシユリ抽出物においてメラニン産生促進効果を有することが認められた。
尚、上記実施例では球根について５０（Ｗ／Ｖ）％エタノール水溶液での抽出物における結果を示したが、他の部位や抽出溶媒においても同様の傾向が確認された。
【００３２】
以下、本発明に係る白髪防止又は白髪改善化粧料の処方例を示す。なお、含有量は質量％である。製法は、常法による。
【００３３】
＜処方例１＞  化粧水
１，３−ブチレングリコール                              １０．００
グリセリン                                              ２．００
モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．Ｏ．）   ０．１５
エタノール                                              ５．００
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０８
防腐剤                                                  適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                    １００
【００３４】
＜処方例２＞乳液
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０７
スクワラン                                              ８．０
ワセリン                                                ２．０
ミツロウ                                                ０．５
ソルビタンセスキオレエート                              ０．８
ポリオキシエチレンオレイルエーテル（２０Ｅ．０．）       １．２
カルボキシビニルポリマー                                ０．２
プロピレングリコール                                    ０．５
水酸化カリウム                                          ０．１
エタノール                                              ７．０
防腐剤・酸化防止剤                                      適  量
香料                                                    適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                    １００
【００３５】
＜処方例３＞クリーム
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０９
ミツロウ                                                ２．０
ステアリルアルコール                                    ５．０
ステアリン酸                                            ８．０
スクワラン                                              １０．０
自己乳化型グリセリルモノステアレート                    ３．０
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０．）         １．０
プロピレングリコール                                    ５．０
水酸化カリウム                                          ０．３
防腐剤・酸化防止剤                                      適  量
香料                                                    適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                    １００
【００３６】
＜処方例４＞おしろい
流動パラフィン                                          ２．０
ワセリン                                                １．０
リンゴ酸ジイソステアリル                                １．０
ポリオキシブチレンポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリセリルエーテル（３Ｂ．Ｏ．）（８Ｅ．Ｏ．）（５Ｐ．Ｏ．）                                                   ０．２
ラウリルＰＥＧ−９ポリジメチルシロキシエチルジメチコン  ０．５
ＰＥＧ−９  ポリジメチルシロキシエチルジメチコン        ０．２
デカメチルシクロペンタシロキサン                        ４．０
メトキシケイヒ酸オクチル                                ２．６
ジエチルアミノヒドロキシベンゾイル安息香酸ヘキシル      １．０
セリサイト                                              ２０．０
ラウリン酸亜鉛                                          ２．０
窒化ホウ素                                              ８．０
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０１
防腐剤                                                  適  量
タルク                                                  残  部
合計                                                    １００
【００３７】
＜処方例５＞パック剤
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．００２
酢酸ビニル樹脂エマルジョン                              １５．０
ポリビニルアルコール                                    １０．０
ホホバ油                                                ３．０
グリセリン                                              ５．０
酸化チタン                                              ８．０
カオリン                                                ７．０
エタノール                                              ５．０
香料                                                    適  量
防腐剤・酸化防止剤                                      適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                    １００
【００３８】
＜処方例６＞軟膏
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．００１
レゾルシン                                              ０．５
パラジメチルアミノ安息香酸オクチル                      ４．０
ブチルメトキシベンゾイルメタン                          ４．０
ステアリルアルコール                                    １８．０
モクロウ                                                ２０．０
グリセリンモノステアリン酸エステル                      ０．３
ワセリン                                                ３３．０
香料                                                    適  量
防腐剤・酸化防止剤                                      適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                    １００
【００３９】
＜処方例７＞ヘアトニック
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０１
硬化ヒマシ油ＥＯ（４０）                                ２．０
エタノール                                              ７０．０
香料                                                    適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                   １００
【００４０】
＜処方例８＞  ヘアトニック
ポリエチレングリコール２０００                          ２．０
Ｌ−メントール                                          ０．２
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０２
エタノール                                              ５０．０
香料                                                    適  量
精製水                                                  残  部 
合計                                                   １００
【００４１】
＜処方例９＞ヘアリキッド
ポリオキシプロピルブチルエーテル（４０ＰＯ）            １５．０
ポリオキシプロピルブチルエーテルリン酸（４０ＰＯ）      １５．０
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０５
エタノール                                              ５０．０
香料                                                    適  量
精製水                                                  残  部
合計                                                   １００
【００４２】
＜処方例１０＞ヘアジェル
カルボキシビニルポリマー                                ０．５
ポリビニルピロリドン                                    ２．０
グリセリン                                              ４．０
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０３
ポリオキシエチレンオクチルドデシルエーテル              適  量
水酸化ナトリウム                                        ０．１５
エタノール                                              ２０．０
香料                                                    適  量
精製水                                                  残  部 
合計                                                   １００
【００４３】
＜処方例１１＞スカルプトリートメント
１，３−プロピレングリコール                            ０．５
ペンタエリスリトールテトラ−２−エチルヘキサネート      １．２
エタノール                                              ６０．０
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．０２
香料                                                    適  量
ＤＭＥ／ＬＰＧ（９５／５）                              適  量 
合計                                                   １００
【００４４】
＜処方例１２＞ヘアスプレー
（原液）
アクリル樹脂アルカノールアミン塩（５０％）              ７．０
セチルアルコール                                        ０．１
シリコーン油                                            ０．３
エタノール                                              ９２．４
スカシユリ抽出物（球根；乾燥残分量）                    ０．００２
香料                                                    適  量
（充填）
原液                                                    ５０．０
ジメチルエーテル                                        ４５．０
ＬＰＧ                                                  ５．０
合計                                                   １００
【００４５】
上記処方例においても白髪防止効果、白髪改善効果が確認された。尚、上記処方例では地上部、球根、根について５０（Ｗ／Ｖ）％エタノール水溶液抽出した場合の抽出物の結果を示したが、他の部位や抽出溶媒においても同様の傾向が確認された。