(57)【要約】【課題】日常の食生活の中でなんら問題なく摂取でき、アレルギー性の疾患の予防、改善等に有効な食品由来抗アレルギー剤を提供する。【解決手段】クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する抗アレルギー剤。【選択図】図３
2016098191.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも１種を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
【請求項２】
有効成分がクリタケ抽出物またはデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【請求項３】
有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、請求項２に記載の抗アレルギー剤。
【請求項４】
有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物である、請求項１に記載の抗アレルギー剤。
【請求項５】
デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体が、該菌体の生菌体、死菌体および菌体処理物からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。
【請求項６】
Ｉ型アレルギー用である請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。
【請求項７】
受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体。
【請求項８】
請求項７に記載の酵母菌体を含有する組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギーの患者が容易に摂取することができる天然食品素材由来の抗アレルギー剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、日本国内において食習慣の欧米化が進み、それに伴い食物アレルギー症状を有する患者が増えている。なかでも0歳〜5歳くらいまでの乳幼児のアレルギー患者数は近年増加傾向にあり、現在では50万人いると言われている。食物アレルギー患者のうち5歳以下が全患者数の70％以上を占めており、幼児全体の5％がアレルギーを有すると言われている。また、原因となる食べ物は鶏卵が38％、牛乳が16％、小麦が8％と続いており、これら3種類だけでも全アレルギーの原因の60％を超える（非特許文献１）。これら乳幼児の患者における食物アレルギーは即時型アレルギーまたはＩ型アレルギーと呼ばれ、肥満細胞や血中の好塩基球の表面にあるＦｃεレセプターにアレルゲン特異的ＩｇＥ抗体が結合し、食物由来のアレルゲンがIgEに結合するとヒスタミンやロイコトリエンなどのケミカルメディエーターが過剰に放出され、喘息や蕁麻疹などのアレルギー症状が誘発される。
【０００３】
このような患者に対し、遊離したヒスタミンがレセプターに結合するのを阻害する抗ヒスタミン剤や、炎症を抑制するステロイド等が医薬品として用いられており、効果はあるものの副作用の恐れがあり、日常的に摂取することは難しい。
【０００４】
一方で近年、緑茶成分（特許文献１）、ビールのホップ成分（特許文献２）などの食物素材が抗アレルギー作用を有することが知られてきており、花粉症を抑える緑茶などの商品が出回っていて一定の評価を受けている。植物素材の場合はこれまでの研究成果から、マスト細胞にIgE抗体が結合した後に、それが抗原と結合する際のヒスタミン遊離を抑制することが明らかとなっている。これら植物素材は食品であるので日常摂取しても問題ないが、医薬品と比較して概して効果は弱いため、必ずしもすべての食物アレルギー患者に有効とは限らず、効果はその患者の体質や体調などに左右される。
【０００５】
さらに近年、プロバイオティクス等の研究が盛んになるに伴い、乳酸菌やビフィズス菌の腸内環境改善効果が明らかになり、実際にアレルギー症状を抑えたとの報告もある。そのためラクトバシルス  アシドフィルス（L.acidophilus）（特許文献３）、ビフィドバクテリウム  ロンガム (B.longum)（特許文献４）といった菌を含むヨーグルトやサプリメントが売られるようになった。また、漬物などから単離された植物性乳酸菌は過酷な環境でも生息できるため、生きたまま腸まで到達できることが知られ、これを含有する清涼飲料等も開発されている（特許文献５）。また、活性を強力にするために乳酸菌と酵母菌（特許文献６）、酒粕と乳酸菌など複数の抗アレルギー成分を含む食品素材（特許文献７）も開発されている。
乳酸菌等の菌体素材は、そのメカニズムの詳細は不明な点が多いが、Th1/Th2バランスが崩れTh2細胞優位な状態を戻す機構や、マスト細胞がIgE抗体と結合するのを阻害する等によりヒスタミンを遊離させない、などと言われている。
【０００６】
これら従来の菌体素材の問題点は、乳酸菌やビフィズス菌は腸まで到達するまでに多くが死滅する。さらにこれら乳酸菌やビフィズス菌等を含む食品素材は乳成分を含むため、牛乳アレルギー患者は摂取できないという問題点があった。また、植物性乳酸菌素材は乳成分を含まず、腸まで生きたまま到達するが、哺乳動物の腸内には定着せず、すぐに体外に排出されてしまう。また、菌を生きた状態で食品製造に応用するとなると、殺菌工程や他の食品製造へのコンタミ等の問題もあり、様々な食品に応用しにくいという問題点もあった。
【０００７】
したがって、乳成分を含まず、腸内で効果が期待でき、応用範囲が広く、日常的に摂取できる、副作用の少ない抗アレルギー作用を有する食品素材は現在も求められている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００８】
【特許文献１】特開２００８−１７３１３０号公報
【特許文献２】特開２０１１−７４０６２号公報
【特許文献３】特許第４４７９１６２号公報
【特許文献４】特開２００６−２７３８５２号公報
【特許文献５】特開２０１１−２５４７７３号公報
【特許文献６】特開２０１０−２０９０１５号公報
【特許文献７】特開２０１０−５１３１１号公報
【非特許文献】
【０００９】
【非特許文献１】『食物アレルギー診療の手引き２０１１』厚生労働科学研究班
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明はアレルギー性の症状や疾患、特にI型アレルギー性疾患の予防や改善に有効な、日常的に摂取可能な食品由来の抗アレルギー剤を提供することである。特に食物アレルギー患者のうちの多数を占める乳幼児が摂取しやすい安全で副作用のない抗アレルギー剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、種々検討の結果、クリタケ抽出物、好塩性酵母であるデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物に即時型アレルギー抑制活性があることを初めて見出した。さらにこれらを組み合わせた場合に、相乗効果的に該抑制活性が上昇することを見出し、本発明を完成した。
【００１２】
すなわち本発明は、以下を包含する。
[１]クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも1種を有効成分として含有する抗アレルギー剤。
[２]有効成分がクリタケ抽出物またはデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、[１]に記載の抗アレルギー剤。
[３]有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体である、[２]に記載の抗アレルギー剤。
[４]有効成分がデバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物である、[１]に記載の抗アレルギー剤。
[５]デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体が、該菌体の生菌体、死菌体および菌体処理物からなる群から選択される少なくとも１種である[１]〜[４]のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。
[６]Ｉ型アレルギー用である[１]〜[５]のいずれか１項に記載の抗アレルギー剤。
[７]受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体。
[８]［７］に記載の酵母菌体を含有する組成物。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、安全で副作用もなく、日常的に摂取可能な、安価で保存性に優れ、且つ味、食感、風味に優れ、利便性の良い抗アレルギー剤、およびそれを含有する飲食品をアレルギー患者に提供できる。
本発明によれば、食物アレルギー患者の寛解を早め、一般の飲食品をより早く摂取可能にすることができる。
本発明によれば、牛乳アレルギー患者にも投与することができ、小児患者にも安全に提供できる。
本発明によれば、アレルギーの発症する前に摂取することでアレルギー症状を抑制または軽減することができる。
本発明によれば、有効成分が天然由来の成分のため長期に摂取しても安全である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】図１は、デバリョマイセス・ハンセニ菌体のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率測定結果を示す。
【図２】図２は、クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物のβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率測定結果を示す。
【図３】図３は、クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体（Debaryomyces hansenii）のオボアルブミン感作マウスの色素滲出抑制効果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１５】
本発明は、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも1種を有効成分として含有する抗アレルギー剤に関する（以下本発明の抗アレルギー剤とも略する）。
【００１６】
本発明において、クリタケ抽出物は、ハラタケ目モエギタケ科クリタケ属に属するキノコであるクリタケの抽出物であり、クリタケをそのままでまたは乾燥させたものを溶媒で抽出して得られるものである。
【００１７】
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、グリセリン、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等のアルコール類、またはアセトンなどのケトン類、酢酸エチル、酢酸メチル、ヘキサン、ジクロロメタン、ジエチルエーテルなどの溶媒を単独でも２種類以上を混合して使用してもよい。食品に適用されるという点で水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、またはこれらの混合溶剤を用いるのが好ましく、水、エタノールがより好ましい。
【００１８】
抽出する際のクリタケと溶媒との比率は、特に限定されるものではないが、通常クリタケ乾燥物１に対して溶媒０．５〜１０００重量倍であり、１〜２００重量倍が好ましく、２〜１００重量倍がより好ましい。
【００１９】
抽出温度は、通常０〜１００℃であり、４〜５０℃が好ましく、１０〜４０℃がより好ましい。抽出時間は、抽出温度等によって異なるが、通常０．５〜２４０時間であり、５〜１２０時間が好ましく、１２〜７２時間がより好ましい。
【００２０】
得られた抽出物は、溶媒を含んだ状態、あるいは溶媒除去、洗浄、濃縮等の慣用の工程を経てクリタケ抽出物として使用することができる。また凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥あるいは天日干し等の慣用の乾燥工程により乾燥させて使用することができる。さらに乾燥物を粉砕等の慣用の方法で粉末状または顆粒状にして使用することができる。
【００２１】
本発明の抗アレルギー剤において、クリタケ抽出物の有効成分としての１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、クリタケ抽出物の乾燥重量として、通常０．１ｍｇ〜１００ｇであり、好ましくは０．１ｇ〜６０ｇであり、より好ましくは、１ｇ〜２０ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常７０μｇ〜７０ｇであり、好ましくは７０ｍｇ〜４０ｇであり、より好ましくは、０．７ｇ〜１４ｇである。
【００２２】
クリタケ抽出物の抗アレルギー剤の配合量としては、適用対象物により異なり一概には規定できないが、抗アレルギー剤の総量に対して、クリタケ抽出物の乾燥重量として、通常１０〜１００重量％であり、３０〜７０重量％が好ましく、４０〜６０重量％がより好ましい。
【００２３】
本発明において、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）菌体は、子嚢菌門デバリョマイセス属に属する酵母であり、市販のものであっても、単離されたものであってもよい。
【００２４】
本発明に用いるデバリョマイセス・ハンセニ菌体としては、例えばデニッシュブルーチーズ（Danish blue cheese）から採取され、他の公知菌株との比較により菌学的性質から、デバリョマイセス・ハンセニ（Debaryomyces hansenii）属に属する新規な酵母菌体と同定されたものが好ましく挙げられる。本酵母菌体は、２０１４年１０月１５日に独立行政法人製品評価技術基盤機構  特許微生物寄託センターに寄託されて受託番号  ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１が付与されている。
【００２５】
上記受託番号ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体の菌学的性質は以下のとおりである。
（ａ）培養的・形態的性質
YM寒天培地に接種し、25℃〜30℃で2日から3日間、好気培養すると、白色〜茶色がかった白色のコロニーを形成する。細胞は球形であり、直径は3〜6μｍである。
（ｂ）胞子の形成
培養条件によって子嚢を形成し、子嚢の中に１個か２個の胞子を内生する。胞子の形状は、球形〜だ円形である。
（ｃ）生理学的性質
食塩１０％で生育できる耐塩性があり、グルコース、ガラクトース、サッカロース、マルトース、ラクトース、エタノールを資化できる。
【００２６】
本発明に用いるデバリョマイセス・ハンセニ菌体は、酵母菌の培養の常法に従って、例えば、グルコース、ペプトン、酵母エキス等を含む液体培地を使用し、温度１０〜４０℃、好ましくは１５〜３５℃、より好ましくは２０〜３０℃、ｐＨ３〜１０、好ましくはｐＨ４〜９、より好ましくはｐＨ５〜８で行われ、通常１〜４日間培養を行って得られたものでもよい。培地のｐＨ調整には、希塩酸や水酸化ナトリウム溶液等が用いられる。培養物から遠心分離などの固−液分離手段によって集菌し、１〜２回、生理食塩水などで洗浄し、本発明の目的に使用することが出来る。
【００２７】
本発明に用いるデバリョマイセス・ハンセニ菌体は、該菌体の生菌体、死菌体および菌体処理物であってもよいが、該菌体の培養生菌体、培養死菌体および培養死菌体処理物が好ましく、培養死菌体、培養死菌体処理物等がより好ましく、培養死菌体処理物が特に好ましい。
菌体処理物としては、菌体の乾燥物、冷凍物、冷蔵物、凍結乾燥物、加熱物、加圧物、超音波破砕物、界面活性剤処理物、有機溶剤処理物、溶媒抽出物、溶菌酵素処理物、固定化菌体或いは菌体から精製した酵素等に加え、該菌株の培養液の濃縮物、乾燥物、冷凍物、冷蔵物、凍結乾燥物、加熱物、加圧物、超音波破砕物、界面活性剤処理物、有機溶媒処理物、溶媒抽出物、溶菌酵素処理物等が挙げられる。菌体処理物の中でも、該菌株の培養液の濃縮物、該菌株の培養液の凍結乾燥物等が好ましく、該菌株の培養液の凍結乾燥物がより好ましい。
【００２８】
本発明の抗アレルギー剤において、デバリョマイセス・ハンセニ菌体の有効成分としての１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、デバリョマイセス・ハンセニ菌体の乾燥重量として、通常９０μｇ〜９０ｇであり、好ましくは９０ｍｇ〜５５ｇであり、より好ましくは、０．９ｇ〜１８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常６０μｇ〜６０ｇであり、好ましくは６０ｍｇ〜３５ｇであり、より好ましくは、０．６ｇ〜１３ｇである。
【００２９】
デバリョマイセス・ハンセニ菌体の抗アレルギー剤の配合量としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、抗アレルギー剤の総量に対して、デバリョマイセス・ハンセニ菌体の乾燥重量として通常１０〜１００重量％であり、３０〜７０重量％が好ましく、４０〜６０重量％がより好ましい。
【００３０】
本発明において、キダチコミカンソウ抽出物は、トウダイグサ科コミカンソウ属に属する植物であるキダチコミカンソウの抽出物であり、キダチコミカンソウをそのままでまたは乾燥させたものを溶媒で抽出して得られるものである。
【００３１】
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、グリセリン、１−プロパノール、イソプロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等のアルコール類、またはアセトンなどのケトン類、酢酸エチル、酢酸メチル、ヘキサン、ジクロロメタン、ジエチルエーテルなどの溶媒を単独でも２種類以上を混合して使用してもよい。食品に適用されるという点で水、エタノール、メタノール、アセトン、酢酸エチル、またはこれらの混合溶剤を用いるのが好ましく、水、エタノールがより好ましい。
【００３２】
抽出する際のキダチコミカンソウと溶媒との比率は、特に限定されるものではないが、通常キダチコミカンソウ乾燥物１に対して溶媒０．５〜１０００重量倍であり、１〜２００重量倍が好ましく、２〜１００重量倍がより好ましい。
【００３３】
抽出温度は、通常０〜１００℃であり、４〜５０℃が好ましく、１０〜４０℃がより好ましい。抽出時間は、抽出温度等によって異なるが、通常０．５〜２４０時間であり、５〜１２０時間が好ましく、１２〜７２時間がより好ましい。
【００３４】
得られた抽出物は、溶媒を含んだ状態、あるいは溶媒除去、洗浄、濃縮等の慣用の工程を経てキダチコミカンソウ抽出物として使用することができる。また凍結乾燥、減圧乾燥、噴霧乾燥あるいは天日干し等の慣用の乾燥工程により乾燥させて使用することができる。さらに乾燥物を粉砕等の慣用の方法で粉末状または顆粒状にして使用することができる。
【００３５】
本発明の抗アレルギー剤において、キダチコミカンソウ抽出物の有効成分としての１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、キダチコミカンソウ抽出物の乾燥重量として、通常０．１ｍｇ〜１００ｇであり、好ましくは０．１ｇ〜６０ｇであり、より好ましくは、１ｇ〜２０ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常７０μｇ〜７０ｇであり、好ましくは７０ｍｇ〜４０ｇであり、より好ましくは、０．７ｇ〜１４ｇである。
【００３６】
キダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合量としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、抗アレルギー剤の総量に対して、キダチコミカンソウ抽出物の乾燥重量として通常１０〜１００重量％であり、３０〜７０重量％が好ましく、４０〜６０重量％がより好ましい。
【００３７】
本発明の抗アレルギー剤においては、クリタケ抽出物およびデバリョマイセス・ハンセニ菌体を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常４０μｇ〜４０ｇおよび４０μｇ〜４０ｇであり、好ましくは４０ｍｇ〜２５ｇおよび４０ｍｇ〜２５ｇであり、より好ましくは、０．４ｇ〜８ｇおよび０．４ｇ〜８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常２８μｇ〜２８ｇおよび２８μｇ〜２８ｇであり、好ましくは２８ｍｇ〜１６ｇおよび２８ｍｇ〜１６ｇであり、より好ましくは、０．２８ｇ〜５．５ｇおよび０．２８ｇ〜５．５ｇである。
【００３８】
クリタケ抽出物およびデバリョマイセス・ハンセニ菌体の抗アレルギー剤の配合割合としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、それぞれの乾燥重量として、クリタケ抽出物１重量部に対してデバリョマイセス・ハンセニ菌体が通常１〜１０重量部、３〜７重量部が好ましく、４〜６重量部がより好ましい。
【００３９】
デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常４０μｇ〜４０ｇおよび４０μｇ〜４０ｇであり、好ましくは４０ｍｇ〜２５ｇおよび４０ｍｇ〜２５ｇであり、より好ましくは、０．４ｇ〜８ｇおよび０．４ｇ〜８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常２８μｇ〜２８ｇおよび２８μｇ〜２８ｇであり、好ましくは２８ｍｇ〜１６ｇおよび２８ｍｇ〜１６ｇであり、より好ましくは、０．２８ｇ〜５．５ｇおよび０．２８ｇ〜５．５ｇである。
【００４０】
デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合割合としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、それぞれの乾燥重量として、デバリョマイセス・ハンセニ菌体１重量部に対してキダチコミカンソウ抽出物が通常１〜１０重量部、３〜７重量部が好ましく、４〜６重量部がより好ましい。
【００４１】
クリタケ抽出物およびキダチコミカンソウ抽出物を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常４０μｇ〜４０ｇおよび４０μｇ〜４０ｇであり、好ましくは４０ｍｇ〜２５ｇおよび４０ｍｇ〜２５ｇであり、より好ましくは、０．４ｇ〜８ｇおよび０．４ｇ〜８ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
非経口投与では、通常２８μｇ〜２８ｇおよび２８μｇ〜２８ｇであり、好ましくは２８ｍｇ〜１６ｇおよび２８ｍｇ〜１６ｇであり、より好ましくは、０．２８ｇ〜５．５ｇおよび０．２８ｇ〜５．５ｇである。
【００４２】
クリタケ抽出物およびキダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合割合としては、適用対象により異なり一概には規定できないが、それぞれの乾燥重量として、クリタケ抽出物１重量部に対してキダチコミカンソウ抽出物が通常１〜１０重量部、３〜７重量部が好ましく、４〜６重量部がより好ましい。
【００４３】
クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物を有効成分として含むときには、１日当たりの投与量は、対象、年齢、性別、症状等によって異なるが、それぞれ乾燥重量として、経口投与（成人、体重６０ｋｇ）では、通常２７μｇ〜２７ｇ、２７μｇ〜２７ｇおよび２７μｇ〜２７ｇであり、好ましくは２７ｍｇ〜１７ｇ、２７ｍｇ〜１７ｇおよび２７ｍｇ〜１７ｇであり、より好ましくは、０．２７ｇ〜５ｇ、０．２７ｇ〜５ｇおよび０．２７ｇ〜５ｇである。
非経口投与では、通常１９μｇ〜１９ｇ、１９μｇ〜１９ｇおよび１９μｇ〜１９ｇであり、好ましくは１９ｍｇ〜１１ｇ、１９ｍｇ〜１１ｇおよび１９ｍｇ〜１１ｇであり、より好ましくは、０．１９ｇ〜４ｇ、０．１９ｇ〜４ｇおよび０．１９ｇ〜４ｇである。上記１日あたりの量を一度にもしくは数回に分けて投与することができる。食前、食後、食間を問わない。また投与期間は特に限定されない。
【００４４】
クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物の抗アレルギー剤の配合割合としては、上記各配合割合を勘案して決めることができる。
【００４５】
本発明の抗アレルギー剤は、その剤型に制限はなく、経口製剤、非経口製剤のいずれでもよい。その剤型としては、例えば錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、エリキシル剤、シロップ剤、マイクロカプセル剤、ドリンク剤、乳剤、あるいは懸濁液剤等の経口投与剤、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、液剤、ローション剤、パック剤、入浴剤などの皮膚外用剤、注射剤などとすることができる。
【００４６】
経口的に投与する場合には、本発明の抗アレルギー剤は、必要に応じて、担体、賦形剤、結合剤、膨化剤、潤滑剤、甘味剤、香味剤、防腐剤、乳化剤、被覆剤等を含有することができ、これらとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で用いることができる。本発明の抗アレルギー剤におけるクリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物は指示された範囲の適当な用量が得られるようにすればよい。
【００４７】
本発明の抗アレルギー剤において、含有することができる具体的な成分としては、例えばトラガント、アラビアゴム、コーンスターチ及びゼラチンのような結合剤；微晶性セルロース、結晶セルロースのような賦形剤；コーンスターチ、前ゼラチン化デンプン、アルギン酸、デキストリンのような膨化剤；ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤；微粒二酸化ケイ素、メチルセルロースのような流動性改善剤；グリセリン脂肪酸エステルのような滑沢剤；ショ糖、乳糖及びアスパルテームのような甘味剤；ペパーミント、ワニラ香料及びチェリー又はオレンジのような香味剤；モノグリセリド、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、レシチンなどの乳化剤等が挙げられる。
【００４８】
調剤単位形態がカプセル剤である場合には上記のタイプの材料にさらに油脂のような液状担体を含有することができる。
【００４９】
また、種々の他の材料を、調剤単位の物理的形態を変化させるために含有させることができる。錠剤の被覆剤としては、例えば、シェラック、砂糖又はその両方などが挙げられる。シロップ剤又はエリキシル剤は、例えば、甘味剤としてショ糖、防腐剤としてメチルパラベン及びプロピルパラベン、色素及びチェリー又はオレンジ香味等などを含有することができる。その他、各種ビタミン類、各種アミノ酸類を含有しても良い。
【００５０】
腸溶性製剤とするときは、例えばヒドロキシルフェニルメチルセルロースの水溶液を被覆前処理剤とし、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートの水溶液及びポリアセチンの水溶液を被覆剤として常法により腸溶性製剤とすればよい。
【００５１】
本発明の抗アレルギー剤は、有効成分として、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物またはそれらの混合物を含有するが、更に任意の他の有効成分を含有してもよい。
【００５２】
非経口的に投与する場合には、例えば、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体またはキダチコミカンソウ抽出物を含有する溶液を点鼻噴霧することや注射剤として投与すること等ができる。又は本発明の抗アレルギー剤を皮膚外用剤とする場合には、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体またはキダチコミカンソウ抽出物を種々の基剤に分散させて常法により製剤化すればよく、かかる基剤としては、ワセリン、流動パラフィン、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシルなどの高級脂肪酸エステル、スクワラン、ラノリン、セタノールなどの高級アルコール、シリコーン油、動植物油脂などの油脂性基剤、エタノールなどの低級アルコール類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコールなどの多価アルコール類、α−モノグリセリルエーテル、レシチン、ソルビタン脂肪酸エステル、デキストリン脂肪酸エステル、脂肪酸モノグリセリド、脂肪酸金属塩、硫酸マグネシウムなどの乳化又は乳化安定剤、芳香剤、防腐剤、色素、増粘剤、酸化防止剤、紫外線防御剤、創傷治癒剤、抗炎症剤、保湿剤などの各種薬効剤、水などが挙げられる。
【００５３】
本発明の抗アレルギー剤を医薬品として使用する場合には、本発明の抗アレルギー剤そのものであってもよく、また他の添加物等を含有するものであってもよい。
【００５４】
本発明の抗アレルギー剤を食品として使用する場合には、本発明の特定の機能に着目して摂取される健康食品の他、保健機能食品制度に規定される特定保健用食品や栄養機能食品を意味し、さらにダイエタリーサプリメントも包含される。あるいはクッキー、ビスケット、ボーロ等の乳幼児用の焼き菓子や、チョコレート、キャンディー、ケーキ、ガム等の菓子類、調味料、麺類、米飯類、味噌、豆腐、茶飲料、炭酸飲料、スポーツ飲料、コーヒー、ココア飲料、牛乳、豆乳等に添加した形態であってもよい。
【００５５】
食品に含まれるクリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体またはキダチコミカンソウ抽出物の量は、特に限定されないが、１日あたりの飲食量が本発明の抗アレルギー剤における上記の投与量の範囲内となるようにするのが好ましい。本発明の抗アレルギー剤の保健機能食品の形態は、特に限定されない。
【００５６】
本願における食品は、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物またはそれらの混合物が１食当たりの摂取単位量の形態で包装された形態や、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物またはそれらの混合物が懸濁あるいは溶解した飲料が１食あたりの飲み切りの形態で瓶等に充填された形態などが挙げられる。１食あたりの用量は上記に示した１日の投与量であってもよい。
【００５７】
具体的には、１食当たりの単位包装形態において、該単位のクリタケ抽出物の１回の摂取量としては、通常０．１ｍｇ〜１００ｇが好ましく、１００ｍｇ〜６０ｇがより好ましく、１ｇ〜２０ｇが特に好ましい。また例えば１日２回以上摂取する場合には上記の量を回数で勘案した量が単位包装形態の量として挙げられる。
【００５８】
同様に、１食当たりの単位包装形態において、該単位のデバリョマイセス・ハンセニ菌体の１回の摂取量としては、通常９０μｇ〜９０ｇが好ましく、９０ｍｇ〜５５ｇがより好ましく、０．９ｇ〜１８ｇが特に好ましい。また例えば１日２回以上摂取する場合には上記と同様である。
【００５９】
同様に、１食当たりの単位包装形態において、該単位のキダチコミカンソウ抽出物の１回の摂取量としては、通常０．１ｍｇ〜１００ｇが好ましく、１００ｍｇ〜６０ｇがより好ましく、１ｇ〜２０ｇが特に好ましい。また例えば１日２回以上摂取する場合には上記と同様である。
【００６０】
１食当たりの単位包装形態において、該単位の本発明における有効成分を２種又は３種と組み合わせる場合には、上記配合割合を勘案して適宜配合することができる。
【００６１】
本発明の抗アレルギー剤は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、ラット、マウス等の哺乳動物に対して、優れた抗アレルギー作用を示す。
抗アレルギー作用とは、アレルギーの改善、抑制、治療および予防作用を意味する。
アレルギーとは免疫反応が、特定の抗原に対して過剰に起こることと定義され、その発生機序によりＩ〜Ｖ型に分類される。本発明のアレルギー剤は、いずれの分類のアレルギーにも適用可能であるが、Ｉ型アレルギーに適用するのが好ましい。
【００６２】
Ｉ型アレルギーは、免疫グロブリンIgEが関与するアレルギーである。IgEが肥満細胞や血中の好塩基球の表面にあるＦｃεレセプターに結合し、そこに外部からのアレルゲンが結合するとこれらの細胞がヒスタミン、ロイコトルエン、セロトニンなどのケミカルメディエーターを放出する。それにより血管拡張や血管透過性亢進などが起こり、浮腫、掻痒などの症状があらわれる。この反応は抗原が体内に入るとすぐに生じ、Ｉ型アレルギーは即時型アレルギーとも呼ばれる。Ｉ型アレルギー性疾患としては、蕁麻疹、食物アレルギー、花粉症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性胃腸炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、湿疹、アナフィラキシーショック等が挙げられる。本発明の抗アレルギー剤は、上記疾患に有効であるが、なかでもアナフィラキシーショック、食物アレルギーに好ましく使用され、食物アレルギーにより好ましく使用される。
【００６３】
さらに本発明の抗アレルギー剤は、ヒスタミンの発生そのものを抑えることができるので、アレルギーの予防に有効である。アレルギーの予防のために投与する場合は、乾燥重量として、上記クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物の１日の投与量の１／２〜１／１０程度を長期間投与することも可能である。
例えば、食物アレルギーの場合には、アレルゲン完全除去期間中は毎日食前に服用し、部分解除中も完全解除後も同様に服用し続けるという投与方法が挙げられる。これにより食物アレルギーの主な症状が抑制または軽減される。
【００６４】
本発明において、クリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体およびキダチコミカンソウ抽出物からなる群から選択される少なくとも1種を有効成分として含有するアレルギー疾患の予防または治療剤も本発明の別の態様である。
有効成分およびその含量、疾患の定義等は上述と同様である。
【００６５】
発明の抗アレルギー剤は飼料に添加することができる。飼料としては、愛玩動物用のペットフードや家畜用の飼料などが挙げられる。
【００６６】
本発明において、受託番号  ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体も本発明に包含される。
また受託番号  ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１を有する、デバリョマイセス属に属する酵母菌体を含有する組成物も本発明に包含される。当該組成物は、上述のように医薬品、医薬部外品および食品として使用することができる。投与量、その他については既述に準ずる。
【００６７】
以下に、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【実施例】
【００６８】
（製造例１）
＜キダチコミカンソウ抽出物の調製法＞
キダチコミカンソウ乾燥物をオスターブレンダーで粉砕し、粉末状とした。７．６gをとり、５０％エタノール水溶液４０mLを加え３０℃にて２０時間振とうした。次いで遠心（２０００g、２分）後、上清を別容器に移し、遠心エバポレーター（SPD２０１０、SpeedVac Systems Thermo-Savant社、ローターRH２６-５０）遠心濃縮後、真空ポンプで乾固させ、抽出物粉末０．３１gを得た。
【００６９】
（製造例２）
＜クリタケ抽出物の調製法＞
クリタケ乾燥物をオスターブレンダーで粉砕し、粉末状とした。１．５gをとり、５０％エタノール水溶液３５mLを加え３０℃にて２０時間振とうした。次いで遠心（２０００g、２分）後、上清を別容器に移し、遠心エバポレーター（SPD２０１０、SpeedVac Systems Thermo-Savant社、ローターRH２６-５０）遠心濃縮後、真空ポンプで乾固させ、抽出物粉末０．２９gを得た。
【００７０】
（製造例３）
＜デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルの調製法＞
デバリョマイセス・ハンセニ（Danish blue cheese 由来）株（受託番号  ＮＩＴＥ  Ｐ−０１９５１）を、YM寒天プレート（YMブロス（Becton, Dickinson and Company社）に寒天１.５％を添加し、オートクレーブ滅菌後、固化した）に塗布し、２８℃で、２４時間培養した。プレート上に増殖した菌体を、YMブロス５０ｍLの入った坂口フラスコに１白金耳植菌し、２８℃で４８時間、振とう培養した。次いでこの培養液を、YPD（グルコース２％、ペプトン２％、酵母エキス１％）ブロス５０ｍLの入った坂口フラスコ１７０本に、それぞれ０．５ｍLずつ添加し、３０℃で７２時間振とう培養した。８．５L分の培養液を遠心分離し（１２,０００ｇ、15分）、沈殿した菌体を回収し、蒸留水で３回洗浄し、７０℃で３０分間、加熱処理した。次いで遠心分離し（１２,０００ｇ、１０分、８℃）、沈殿した菌体を回収し凍結乾燥し、乳鉢で粉末化し１２ｇの乾燥菌体サンプルを得、これを被験サンプルとした。
【００７１】
（実施例１）
＜ヒスタミン遊離抑制活性測定法＞
製造例１〜３によって得たサンプルのヒスタミン遊離抑制活性を測定した。
Ｉ型アレルギーのメカニズムは、マスト細胞のFcεRＩに結合したIgE抗体にアレルゲンが架橋結合するとマスト細胞が活性化されてヒスタミン等のメディエーターが遊離し、それが好酸球を遊走し、炎症が起きる。細胞株は通常用いられているラット好塩基球性白血病細胞（RBL−２H３細胞）株を用いた。細胞内のヒスタミンが遊離されると、同時にβ−ヘキソサミニダーゼが遊離される。このβ−ヘキソサミニダーゼの放出を指標として、その抑制活性（脱顆粒抑制活性）を以下の方法で測定した。
【００７２】
デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルはマスト細胞がIgE抗体との結合を阻害する等でヒスタミンが遊離しなくなると考えられているので、RBL-2H3細胞にIgE抗体を添加する前に被験サンプルを添加した。一方クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物の場合はマスト細胞にIgE抗体が結合した後に、それが抗原と結合する際のヒスタミン遊離を抑制すると考えられるので、RBL-2H3細胞にIgE抗体を添加した後に被験サンプルを添加した。
【００７３】
デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルは１００ｍｇ／ｍＬとなるようにMT buffer（Modified Tyrode buffer、１３７ｍｍｏｌ/L NaCl、２．７ｍｍｏｌ/L  KCl、１．８ｍｍｏｌ/L  CaCl2、１ｍｍｏｌ/L  MgCl2、５．６ｍｍｏｌ/L  glucose、２０ｍｍｏｌ/L  HEPES、０．１%  BSA、pH６．８)を添加し、懸濁液を調製した。必要に応じてMT bufferで希釈した。
クリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物は１５．０ｍｇを秤量し、MT buffer  ０．３ｍＬに溶解した。メンブランフィルター（孔径：０．４５μm）でろ過し、５０ｍｇ/ｍLとした。必要に応じてMT bufferで希釈した。
【００７４】
陽性対照物質として、wortmannin(シグマアルドリッチジャパン)をMT bufferにて、１μMに希釈して使用した。
【００７５】
凍結保存されたRBL-2H3細胞（ヒューマンサイエンス研究資源バンクJCRB0023）を解凍し、培養液（１０%FBS含有E-MEM培地）に懸濁した。細胞懸濁液を遠心分離し、沈渣を培養液に懸濁後、培養ディッシュに播種した。細胞がコンフルエントになる前に、D-PBS及びトリプシン溶液を用いて、細胞をディッシュから剥離して継代培養した。同様の操作を測定終了まで繰り返した。継代培養時、９６well plateディッシュに測定用のRBL-2H3細胞を２．５×１０4 cells/wellで播種した（２５×１０4 cells/ｍL、１００μL/well）。
【００７６】
（試験例1）
被験サンプルがデバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルの場合の培養上清分取方法は、Microbiol Immunol 2010; 54: 54-57（Bifidobacterium suppresses IgE-mediated degranulation of rat basophilic leukemia (RBL-2H3)cells.  Gaku Harata et al）に従って行った。
細胞播種翌日に培養液を捨て、被験サンプルを２５μL/well添加し、３７℃で１０分間培養した（３７℃、５% CO2、水蒸気飽和状態）。被験サンプル添加１０分後、MT bufferを２２５ μL/well添加し、３７℃で３時間培養した。MT buffer添加３時間後、MT bufferで1回洗浄（１００μL/well）し、well内を空にした。抗DNP-IgE抗体（５０nｇ/ｍL、Sigma社）を１００μL添加し、３７℃で２時間培養した。なお、被験サンプルを含まないMT bufferを添加し、同様に反応させたものをコントロールとした。抗DNP-IgE抗体添加２時間後、MT bufferで1回洗浄（１００μL/well）し、well内を空にした。MT buffer及びDNP-HSA（DNP-labeled human serum albumin、１００ｎｇ/ｍL、Sigma社)をそれぞれ５０μL/well添加し、３７℃で３時間培養した。DNP-HSA添加3時間後、１０分間氷冷し、培養上清全量を空のwellに分取した。
【００７７】
（試験例2）
被験サンプルがクリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物の場合の培養上清分取方法は、日本食品科学工学会誌、 Vol. 55(2008)、 No. 11、 P535-540（RBL-2H3細胞を用いた食品成分の脱顆粒抑制作用簡易スクリーニング法  堀籠  悟ほか）に従って行った。
細胞播種翌日に培養液を捨て、抗DNP-IgE抗体（５０ｎｇ/ｍL、Sigma社）を１００μL添加し、３７℃で２時間培養した。抗DNP-IgE抗体添加２時間後、MT bufferで1回洗浄（１００μL/well）し、well内を空にした。被験サンプルを５０μL/well添加し、３７℃で１０分間培養した。なお、被験サンプルを含まないMT bufferを添加し、同様に反応させたものをコントロールとした。また、細胞を播種していないwellに、上記と同様な操作を行い、被験サンプルによる吸光度への影響を評価するためのブランクを作成した。被験サンプル添加１０分後、DNP-HSA（１００ｎｇ/ｍL、Sigma社）を５０μL/well添加し、３７℃で３時間培養した。DNP-HSA添加３時間後、１０分間氷冷し、培養上清全量を空のwellに分取した。
【００７８】
培養上清分取後、Lysis Buffer （Promega社、Passive Lysis ５×bufferをMT bufferで５倍希釈した）を１００μL/well添加し、室温で１０分間反応させた。１０分間反応後、培養上清及び細胞溶解液を３７℃で５分間加温した。培養上清及び細胞溶解液を加温後、基質溶液｛4-Nitrophenyl N-Acetyl-β-D-glucosaminide  東京化成工業株式会社、１００ｍｍｏｌ/Lクエン酸緩衝液（pH４．５）で３．３ｍｍｏｌ/Lに調製した｝を５０μL/well添加し、３７℃で２５分間反応させた。次いでGlycine buffer（２ｍｏｌ/L Glycine、ｐＨ１０．４）を５０μL/well添加し、反応を停止した。反応停止後、４０５nm（参照波長：６５０nm）の吸光度をプレートリーダーで測定した。
【００７９】
＜β−ヘキソサミニダーゼの遊離率＞
以下の式によりβ−ヘキソサミニダーゼの遊離率を求め、コントロールの遊離率を100%として、被験サンプル及び陽性対照のβ−ヘキソサミニダーゼの相対遊離率を計算した。
β−ヘキソサミニダーゼ遊離率（％）＝｛（培養上清の吸光度A）／（A＋細胞溶解液の吸光度B）｝×１００
【００８０】
試験例1のデバリョマイセス・ハンセニ菌体アッセイに関しては、
A＝培養上清の吸光度 
B＝細胞溶解液の吸光度
とした。
【００８１】
試験例２のクリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物のアッセイ時の吸光度については、以下のようにA及びBを求めた。
A＝培養上清の吸光度 − 被験サンプル添加のみwell上清の吸光度(細胞なし)
B＝細胞溶解液の吸光度 − 被験サンプル添加のみwell細胞溶解液の吸光度(細胞なし)
【００８２】
コントロールのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率を１００%とし、陽性対照物質及び被験サンプルの相対遊離率を図１及び図２に示した。
【００８３】
図１に示す通り、試験例1での相対遊離率は陽性対照物質のwortmannin（１μM）が79%であったのに対し、デバリョマイセス・ハンセニ菌体サンプルのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率は、その濃度が１０〜１００ｍｇ/ｍLの濃度において、９０%（１０ｍｇ/ｍL）〜５７%（１００ｍｇ/ｍL）であった。濃度依存的に強い活性を示した。
【００８４】
図２に示す通り、試験例2での相対遊離率は陽性対照物質のwortmannin（１μM）が３１．２%であったのに対し、各サンプルのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率は、クリタケ抽出物５ｍｇ/ｍLにおいて２８%と、陽性対象物質よりも強い活性を示した。キダチコミカンソウ抽出物においては０．５ｍｇ/ｍLでも強い活性を示し、５及び５０ｍｇ/ｍLのβ−ヘキソサミニダーゼ遊離率は０であった。 
【００８５】
（実施例２）
＜実験動物を用いた抗アレルギー活性評価＞
オボアルブミン感作マウスを用いて即時型アレルギー抑制試験を実施した。試験方法は概ね特開２０００−２３９１７５号公報に従った。
【００８６】
＜試料の調製＞
・アレルゲン原液
OVA（Albumin from chicken egg white、 A7641、 SIGMA）を生理食塩水に２．０ｍｇ/ｍＬの濃度で溶解し、０．４５μｍの滅菌済みフィルターで濾過し、アレルゲン原液とした。
・感作用アレルゲンエマルジョン
アレルゲン原液とフロイント不完全アジュバント（コスモバイオ株式会社）を１：１の体積比で混合して乳化させ、感作用アレルゲンエマルジョンとした。
・誘発用アレルゲン溶液
アレルゲン原液を生理食塩水で２０倍に希釈して、誘発用アレルゲン溶液とした。
・被験サンプル投与液
各被験サンプルは、１８６ｍｇ量り取り蒸留水に溶解して１．２４ｍＬとすることで経口投与液を調製した。これらの調製は投与日に用時調製した。
・ヒドロコルチゾン投与液
ポジティブコントロールとしてヒドロコルチゾンを用いた。ヒドロコルチゾン（和光純薬株式会社）は、５ｍｇ量り取り蒸留水に懸濁して５ｍＬとすることで経口投与液を調製した。これらの調製は投与日に用時調製した。
【００８７】
＜アレルギー抑制評価試験＞
実験動物はICR系マウス雄５週齢(日本SLC株式会社)を用いた。
１週間の馴化飼育後のマウス体重に基づき、各群の平均体重が均等になるように体重別層化法により、１群６匹の７群に群分けした（平均体重約３３．６ｇ）。
マウス下腹部の腹腔内に、感作用アレルゲンエマルジョンを１匹当たり５０μＬ注射し、オボアルブミン感作を行なった。感作日から２０日間、各被験サンプル投与液を０．２ｍＬ/匹の用量（３０ｍｇ分、混合サンプルの場合は各１５ｍｇ）で１日１回毎日反復強制経口投与した。コントロール群には蒸留水を０．２ｍＬ/匹投与した。なお、感作日は感作の６０分前、誘発日は誘発の６０分前に投与した。各群のマウスの尾静脈にエバンスブルー溶液を１匹当たり１００μＬ投与した。次いでイソフルラン麻酔下で速やかに腹部の皮膚を剥離し腹壁を露出させ、エバンスブルー溶液の投与から６分後に、腹壁内に誘発用アレルゲン溶液５０μＬを投与した。腹壁内注射から７分後にマウスを頚椎脱臼により屠殺し、色素滲出部位を含んだ腹壁を切り取り、色素滲出部位の長径と短径を計測し、面積を計算した。各群の色素滲出面積データについて、平均値と標準誤差（S.E.M.）を算出し、Studentのt-検定を用いて、２群間の平均値の差を検定した。いずれの解析についても検定は両側検定を行い、Ｐ＜０．０５の場合を有意と判定した。
【００８８】
その結果、図３に示す通り、コントロール群と比較して、クリタケ抽出物投与群、クリタケ抽出物＋デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群、キダチコミカンソウ抽出物投与群、キダチコミカンソウ抽出物＋デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群、デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群、いずれの被験物質も色素滲出を抑制する傾向にあったが、特にキダチコミカンソウ抽出物＋デバリョマイセス・ハンセニ菌体投与群（ｐ＝０．０１７３）、デバリョマイセス・ハンセニ菌体単独投与群（ｐ＝０．０３２４）において有意な色素滲出面積の低値が認められた。
【００８９】
以上の結果からクリタケ抽出物、キダチコミカンソウ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体はオボアルブミン感作マウスにおいて即時型アレルギー反応を抑制することが明らかとなった。
【産業上の利用可能性】
【００９０】
本発明のクリタケ抽出物、デバリョマイセス・ハンセニ菌体、キダチコミカンソウ抽出物からなる抗アレルギー剤はヒスタミン遊離を抑制し、即時型アレルギー反応を抑制し、Ｉ型アレルギー性疾患の食物アレルギー、花粉症、気管支喘息、アトピー性皮膚炎等の症状の改善、治療および予防に適用できる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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