(57)【要約】      （修正有）【課題】強い抗菌活性を有し副作用を低減する抗菌剤の提供。【解決手段】（Ａ）式［１］で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、（Ｂ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤、との組み合わせとする医薬。2016199500.tif 000052【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）式［１］
【化１】
2016199500.tif 000046
で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｂ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシン
からなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤、
との組み合わせを特徴とする医薬。
【請求項２】
（Ｃ）式［２］
【化２】
2016199500.tif 000047
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｄ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシン
からなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤、
との組み合わせを特徴とする医薬。
【請求項３】
前記（B）、（Ｄ）のカルバペネム系抗菌剤がイミペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネムからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項４】
前記（B）、（Ｄ）のセファロスポリン系抗菌剤がセフタジジム、セフェピム、セフォゾプラン、セフトリアキソン、セフトロザン、セフタロリンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項５】
前記（B）、（Ｄ）のペニシリン系抗菌剤がペニシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、ピペラシリンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項６】
前記（B）、（Ｄ）のキノロン系抗菌剤がシプロフロキサシン、パズフロキサシン、レボフロキサシンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項７】
前記（B）、（Ｄ）のアミノグリコシド系抗菌剤がアミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アルベカシンからなる群より選ばれる１種以上である請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項８】
前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がメロペネムである、請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項９】
前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がピペラシリンである、請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】
前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がセフタジジム、セフェピム、セフトリアキソンからなる群より選ばれる１種以上である、請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がシプロフロキサシンである、請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】
前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がアミカシンである、請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１３】
（Ａ）式［１］
【化３】
2016199500.tif 000048
で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｂ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、
同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬。
【請求項１４】
（Ｃ）式［２］
【化４】
2016199500.tif 000049
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｄ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシン
からなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、
同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬。
【請求項１５】
メロペネムと併用するための、
式［２］
【化５】
2016199500.tif 000050
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物を含む、細菌感染症の予防又は治療用医薬。
【請求項１６】
ピペラシリンと併用するための、
式［２］
【化６】
2016199500.tif 000051
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物を含む、細菌感染症の予防又は治療用医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細菌感染症の治療に有用な医薬に関するものである。さらに詳しくは、本発明はＬｐｘＣ阻害剤と１種以上の抗菌剤を組み合わせてなる医薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
グラム陰性菌には、グラム陽性菌には存在しない脂質二重層からなる外膜が存在するため、薬剤透過性の問題からグラム陽性菌と比較して薬剤抵抗性が強い傾向にある。また、グラム陰性菌は複数の薬剤排出蛋白を持つことが知られており、これも薬剤抵抗性に関与していることが知られている（非特許文献１）。更に、外膜の主要な構成成分の一つであるリポポリサッカライド（ＬＰＳ）は、エンドトキシンとして毒性に大きく関与している。
【０００３】
グラム陰性菌の中でも、特に緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）は各種の抗菌薬に自然耐性を示す傾向が強いことが知られている。緑膿菌は自然環境や生活環境中に広く常在するが、健常者には通常病原性を示さない弱毒細菌である。しかし、重篤な基礎疾患を持つ患者や、移植等により免疫抑制剤を使用するいわゆるコンプロマイズドホストといわれる患者、医療用カテーテルや気管挿管、外科手術等の医療行為を行っている患者に対しては、敗血症等の重篤な急性感染症を引き起こす病原菌となるため、緑膿菌は日和見感染症や院内感染症の重要な起因細菌の一つである。さらに近年は、医療現場において、本来緑膿菌に効果が期待される第３世代セフェム系薬、カルバペネム系薬、あるいはアミノ配糖体系薬等に耐性を獲得した緑膿菌がしばしば臨床分離されており（非特許文献２）、さらに前記３系薬全てに耐性を獲得した多剤耐性緑膿菌も分離されている（非特許文献３）。多剤耐性緑膿菌に感染すると有用な治療剤が殆どないことから、難治性の感染症疾患として世界的に大きな問題となっており、新規作用機序を有する薬剤の開発が切望されている。
【０００４】
ＵＤＰ−３−Ｏ−アシル−Ｎ−アセチルグルコサミンデアセチラーゼ（ＬｐｘＣ）は、リピドＡ（外膜の構成成分であるＬＰＳの疎水性アンカー）の合成を担う酵素である。リピドＡ生合成は１０段階の反応からなるが、ＬｐｘＣはその生合成反応の第２段階を触媒し、ＵＤＰ−３−Ｏ−アシル−Ｎ−アセチルグルコサミンのアセチル基を離脱させる（非特許文献４）。リピドＡは外膜形成に必須な成分であり、結果的にグラム陰性菌の生存に必須である（非特許文献５）。ＬｐｘＣは、リピドＡ生合成過程において律速となる重要な酵素の一つであり、リピドＡ生合成に必須な酵素である。従って、ＬｐｘＣの活性を阻害する薬剤は、緑膿菌を含むグラム陰性菌、特に従来薬剤と異なる作用機序を有することから薬剤耐性緑膿菌に対して有効な抗菌剤になり得ることが強く期待される。
【０００５】
ＬｐｘＣ阻害剤と１種以上の抗菌化合物を組み合わせてなる医薬に関する発明は、報告されている。（特許文献１〜３）腸炎エルシニア、肺炎桿菌、大腸菌、緑膿菌においてＬｐｘＣ阻害剤およびバンコマイシン、テイコプラニン、ダプトマイシン、リネゾリド、クリンダマイシン、エリスロマイシン、アジスロマイシン、リファンピシン、オキサシリン、レボフロキサシン、セフトビプロール、セフォタキシム、ゲンタマイシン、ノボビオシン、テラバンシン、イミペネムからなる群から選ばれる１種の抗菌剤との組み合わせによるインビトロにおける併用効果について述べている。さらに、肺炎桿菌または緑膿菌大腿感染モデルにおけるＬｐｘＣ阻害剤およびバンコマイシン、リファンピシン、エリスロマイシンからなる群から選ばれる１種の抗菌剤との組み合わせによるインビボにおける併用効果、肺炎桿菌大腿感染モデルにおけるＬｐｘＣ阻害剤およびバンコマイシンとの組み合わせによる耐性出現抑制についても述べている。
大腸菌においてＬｐｘＣ阻害剤およびエリスロマイシンとの組み合わせによるインビトロにおける併用効果についての発明も報告されている。（特許文献４）
さらに、特許文献５〜７においてＬｐｘＣ阻害剤と既存抗菌薬との併用および配合剤についての請求項に記載があるが、いずれも明細書中には具体的な組み合わせに関する実施例は何ら示されていない。
ＬｐｘＣ阻害剤はアシネトバクター・バウマニーに対する抗菌作用が弱く、ＬｐｘＣ阻害剤と既存抗菌薬との併用効果に関する報告もなされていない。
【０００６】
セフェム系抗菌薬は、単独で緑膿菌に対する抗菌活性を持たないか、若しくは抗菌活性が弱いところ、セフェム系抗菌薬とＬｐｘＣ阻害剤との併用効果に関する報告もなされていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】国際公開第２０１１／００５３５５号
【特許文献２】米国特許出願公開第２０１０／０３３９１０号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２０１２／０２８３１７５号明細書
【特許文献４】国際公開第２００４／０６２６０１号
【特許文献５】国際公開第２０１０／０３１７５０号
【特許文献６】国際公開第２００８／１５４６４２号
【特許文献７】国際公開第２００９／１５８３６９号
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ（２００２）Ｍａｒ  １，３４，ｐ．６３４−６４０．
【非特許文献２】Ｊ．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．（２００３）Ｊａｎ  １４，５１，ｐ．３４７−３５２．
【非特許文献３】Ｊｐｎ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（２００６），５９（５），ｐ．３５５−３６３．
【非特許文献４】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）Ｄｅｃ  ２２，２７０，ｐ．３０３８４−３０３９１．
【非特許文献５】Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．（１９８７），１６９，ｐ．５４０８−５４１５
【非特許文献６】塩野義製薬株式会社 医薬情報センター、医薬品インタビューフォーム、カルバペネム系抗生物質製剤、注射用ドリペネム水和物、２０１３年４月改訂（改訂第１３版）Ｐ．４０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の課題は、複数の医薬を組み合わせてなる、緑膿菌、アシネトバクターをはじめとするグラム陰性細菌及びその薬剤耐性菌に対して強い抗菌活性を有し、耐性菌出現を抑制する新規で有用な医薬を提供することである。
【００１０】
本発明の課題はまた、複数の医薬を組み合わせることで、感染症患者への投与量を軽減したり、副作用を低減したり、抗菌スペクトルを広げる効果を有する新規で有用な医薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、ジエチニル末端部分にアキラルな置換基である１−アミノシクロプロピル基を有する、下記式［１］
【００１２】
【化１】
2016199500.tif 000002
で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミド若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物、及び／又は下記式［２］
【００１３】
【化２】
2016199500.tif 000003
で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミド若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物に対して、１種以上の抗菌活性を有する医薬を組み合わせることで、強い抗菌活性を有し、副作用を低減する新規で有用な医薬が、上記課題を解決し得ることを見出し本発明を完成するに至った。
【００１４】
ここで、本発明で用いる化合物を、以下化合物Ａと記載することもある。化合物Ａは、式［２］で表される化合物又はそれらの薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物である場合を含む意味で用いる。
【００１５】
本発明は、以下のとおりである。
（１）（Ａ）式［１］
【００１６】
【化３】
2016199500.tif 000004
で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｂ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシン
からなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤、
との組み合わせを特徴とする医薬。
（２）（Ｃ）式［２］
【００１７】
【化４】
2016199500.tif 000005
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｄ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシン
からなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤、
との組み合わせを特徴とする医薬。
【００１８】
（３）前記（B）、（Ｄ）のカルバペネム系抗菌剤がイミペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネムからなる群より選ばれる１種以上である（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００１９】
（４）前記（B）、（Ｄ）のセファロスポリン系抗菌剤がセフタジジム、セフェピム、セフォゾプラン、セフトリアキソン、セフトロザン、セフタロリンからなる群より選ばれる１種以上である（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２０】
（５）前記（B）、（Ｄ）のペニシリン系抗菌剤がペニシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、ピペラシリンからなる群より選ばれる１種以上である（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２１】
（６）前記（B）、（Ｄ）のキノロン系抗菌剤がシプロフロキサシン、パズフロキサシン、レボフロキサシンからなる群より選ばれる１種以上である（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２２】
（７）前記（B）、（Ｄ）のアミノグリコシド系抗菌剤がアミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アルベカシンからなる群より選ばれる１種以上である（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２３】
（８）前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がメロペネムである、（１）又は（２）のいずれかに載の医薬。
【００２４】
（９）前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がピペラシリンである、（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２５】
（１０）前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がセフタジジム、セフェピム、セフトリアキソンからなる群より選ばれる１種以上である、（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２６】
（１１）前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がシプロフロキサシンである、（１）又は（２）のいずれかに記載の医薬。
【００２７】
（１２）前記（B）、（Ｄ）の抗菌剤がアミカシンである、請求項１又は請求項２のいずれかに記載の医薬。
（１３）（Ａ）式［１］
【００２８】
【化５】
2016199500.tif 000006
で表される２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｂ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、
同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬。
（１４）（Ｃ）式［２］
【００２９】
【化６】
2016199500.tif 000007
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と、
（Ｄ）カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシン
からなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、
同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬。
（１５）
メロペネムと併用するための、
式［２］
【００３０】
【化７】
2016199500.tif 000008
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物を含む、細菌感染症の予防又は治療用医薬。
（１６）
ピペラシリンと併用するための、
式［２］
【００３１】
【化８】
2016199500.tif 000009
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである化合物、若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物を含む、細菌感染症の予防又は治療用医薬。
【発明の効果】
【００３２】
本発明の前記式［１］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物、及び／又は前記式［２］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物に対して、１種以上の抗菌活性を有する医薬を組み合わせてなる医薬は、それぞれ単剤と比較して優れた抗菌活性が示された。また、併用により少なくともどちらか一方の薬剤の効果を上げることが示された。
【発明を実施するための形態】
【００３３】
以下、本発明を実施するための形態について以下詳細に説明する。なお、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。
【００３４】
本発明において、「薬学的に許容される塩」とは、細菌感染症の化学療法及び予防において使用される塩を意味する。
【００３５】
「薬学的に許容される塩」としては、例えば、酢酸、プロピオン酸、酪酸、ギ酸、トリフルオロ酢酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、ステアリン酸、コハク酸、エチルコハク酸、マロン酸、ラクトビオン酸、グルコン酸、グルコヘプトン酸、安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸（トシル酸）、ラウリル硫酸、リンゴ酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、アジピン酸、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、ヨウ化水素酸、ニコチン酸、シュウ酸、ピクリン酸、チオシアン酸、ウンデカン酸、アクリル酸ポリマー及びカルボキシビニルポリマー等の酸との塩、モルホリン及びピペリジン等の有機アミンとの塩、並びにアミノ酸との塩などが挙げられる。
【００３６】
「薬学的に許容される塩」としては、無機塩基との塩であってもよい。無機塩基との塩としては、例えば、リチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩及びカルシウム塩などが挙げられる。
【００３７】
本発明において、「抗菌剤」とは、グラム陽性細菌やグラム陰性細菌といった細菌に作用してその生育を抑制又は殺菌する能力を持つ物質を意味する。菌の繁殖を抑えたり、一部の菌を殺してその数を減少させたりするようなものでもよい。
【００３８】
グラム陽性細菌としては、例えば、ブドウ球菌属（黄色ブドウ球菌及び表皮ブドウ球菌等）、連鎖球菌属（化膿連鎖球菌、Ｂ群連鎖球菌及び肺炎球菌等）、腸球菌属（エンテロコッカス・フェカーリス及びエンテロコッカス・フェシウム等）などが挙げられる。
【００３９】
グラム陰性細菌としては、例えば、シュードモナス属（緑膿菌等）、大腸菌属（大腸菌等）、クレブシエラ属（肺炎桿菌及びクレブシエラ・オキシトカ等）、ヘモフィルス属（インフルエンザ菌及びパラインフルエンザ菌等）、ボルデテラ属（百日咳菌及び気管支敗血症菌等）、セラチア属（セラチア・マルセッセンス等）、プロテウス属（プロテウス・ブルガリス及びプロテウス・ミラビリス等）、エンテロバクター属（エンテロバクター・エアロジェネシス及びエンテロバクター・クロアカ等）、カンピロバクター属（カンピロバクター・ジェジュニ等）、シトロバクター属（シトロバクター・フレウンディ等）、プロビデンシア属（プロビデンシア・スチュアーティ等）、ステノトロフォモナス属（ステノトロフォモナス・マルトフィリア等）、ビブリオ属（腸炎ビブリオ及びコレラ菌等）、モルガネラ属（モルガネラ・モルガニ等）、サルモネラ属（チフス菌及びパラチフス菌等）、シゲラ属（赤痢菌等）、アシネトバクター属（アシネトバクター・バウマニー及びアシネトバクター・カルコアセチカス等）、レジオネラ属（レジオネラ・ニューモフィラ等）、バクテロイデス属（バクテロイデス・フラジリス等）、ナイセリア属（淋菌及び髄膜炎菌等）、モラキセラ属（モラキセラ・カタラーリス等）、クラミジア属（クラミジア・トラコマティス及びクラミジア・シッタシー等）及びヘリコバクター属（ヘリコバクター・ピロリ等）などが挙げられる。
【００４０】
本発明の前記式［１］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物、及び／又は前記式［２］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物は、グラム陰性細菌への抗菌剤として好ましく使用することができる。
【００４１】
本発明においては、前記式［１］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物、及び／又は前記式［２］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物が、それぞれ単剤では抗菌活性を有さないアシネトバクター属（アシネトバクター・バウマニー、及びアシネトバクター・カルコアセチカス等）に対しても、前記式［１］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物、及び／又は前記式［２］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物と他の１種以上の抗菌剤とを組み合わせて使用することができる。
【００４２】
本発明の前記式［１］で表される化合物には光学異性体が存在しうるが、それら光学異性体及び光学異性体の混合物が含まれる。医薬組成物や抗菌剤は、特定の光学異性体を含有してもよいし、光学異性体の混合物、とりわけラセミ体を含有してもよい。
【００４３】
本発明の医薬に用いる化合物として、前記式［１］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物、前記式［２］で表される化合物若しくはその薬学的に許容される塩、又はそれらの水和物若しくはそれらの溶媒和物について説明する。
【００４４】
式［１］で表される化合物及びその薬学的に許容される塩並びにそれらの各種水和物及び溶媒和物には、これらの結晶多形も含まれる。
【００４５】
本発明の医薬に用いる式［１］で表される化合物の好ましい光学異性体は、下記式［２］
【００４６】
【化９】
2016199500.tif 000010
で表される（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミドである。
【００４７】
本発明の医薬には、式［２］で表される化合物及びその薬学的に許容される塩の各種水和物及び溶媒和物が含まれ、式［２］で表される化合物及びその薬学的に許容される塩並びにそれらの各種水和物及び溶媒和物には、これらの結晶多形も含まれる。
【００４８】
以下に、化合物Ａの製造方法を説明する。また製造方法は、適宜、変化させてもよい。
【００４９】
ＭＳ（マススペクトル）はＬＣＭＳ−ＩＴ−ＴＯＦ（島津製作所製）の装置にて測定した。イオン化法としては、ＥＳＩ（Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、エレクトロスプレーイオン化）法又は、ＥＳＩとＡＰＣＩ（Ａｔｍｏｓｐｈｅｒｉｃ  Ｐｒｅｓｓｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ、大気圧化学イオン化）法とのデュアルイオン化法を用いた。データは実測値（ｆｏｕｎｄ）を記載した。通常、分子イオンピークが観測されるが、水酸基（−ＯＨ）を有する化合物の場合、フラグメントピークとしてＨ２Ｏが脱離したピークが観測されることもある。塩の場合は、通常、フリー体の分子イオンピーク若しくはフラグメントイオンピークが観測される。
【００５０】
高速液体クロマトグラフィーマススペクトル（ＬＣＭＳ）は、以下の条件を用いた。
測定機械：Ａｇｉｌｅｎｔ社製  Ａｇｉｌｅｎｔ１２９０及びＡｇｉｌｅｎｔ社製  Ａｇｉｌｅｎｔ６１３０
カラム：Ｗａｔｅｒｓ社製  Ａｃｑｕｉｔｙ  ＵＰＬＣ（登録商標）  ＣＳＨ(登録商標)Ｃ１８  １．７μｍ  ２．１ｘ５０ｍｍ
イオン化法：電子衝撃イオン化法（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｓｐｒａｙ Ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ： ＥＳＩ）
溶媒：Ａ液；０．１％ぎ酸含有水、Ｂ液；０．１％ぎ酸含有アセトニトリル
（条件１）
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ
グラジエント：０分（Ａ液／Ｂ液＝８０／２０）、１．２分（Ａ液／Ｂ液＝８０／２０）、１．４分（Ａ液／Ｂ液＝１／９９）
（条件２）
流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ（０分−１．２分）、１．０ｍＬ／ｍｉｎ（１．２分−１．３８分）
グラジエント：０分（Ａ液／Ｂ液＝９５／５）、１．２分（Ａ液／Ｂ液＝５０／５０）、１．３８分（Ａ液／Ｂ液＝３／９７）
ＮＭＲスペクトルはプロトンＮＭＲを示し、内部基準としてテトラメチルシランを用いて、δ値をｐｐｍで示した。
【００５１】
元素分析はｖａｒｉｏ  ＭＩＣＲＯ  ｃｕｂｅ（ｅｌｅｍｅｎｔａｒ製）の装置にて測定した。
【００５２】
ＯＨ型シリカゲルクロマトグラフィー及びＮＨ型シリカゲルクロマトグラフィーにおける担体は、グレースジャパン株式会社製のＲＥＶＥＬＥＲＩＳ（登録商標）などのパックドカラムを用いた。フェーズセパレーターは、バイオタージ株式会社製のものを用いた。
【００５３】
実施例中の略号を以下に示す。
ＡｃＯＥｔ：酢酸エチル
ＡＰＣＩ：大気圧化学イオン化法
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ：Ｎ、Ｎ−ヂメチルホルムアミド
ＥＳＩ：エレクトロスプレーイオン化法
ＩＰＥ：ジイソプロピルエーテル
ＬＣ：液体クロマトグラフィー
ＭｅＩ：ヨウ化メチル
ＭｅＮＨ２：メチルアミン
ＭｅＯＨ：メタノール
ｎ−ＢｕＮＨ２：ノルマルブチルアミン
ｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ２Ｏ：ｐ−トルエンスルホン酸一水和物
ＴＥＡ：トリエチルアミン
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ｓ：シングレット
ｂｒ．ｓ．：ブロードシングレット（幅広いシングレット）
ｄ：ダブレット
ｄｄ：ダブルダブレット
ｍ：マルチプレット
ｔ：トリプレット
ｑ：カルテット
ｂｒ．ｑ．：ブロードカルテット（幅広いカルテット）
本発明において、「ｐ−」は、パラを意味する。「ｎ−」はノルマルを、「ｔ−」はターシャリーを意味する。また、室温とは１０〜３０度を意味し、場合によっては１〜３０度を意味する。
【００５４】
化合物Ａの製造方法
（スキーム１）
【００５５】
【化１０】
2016199500.tif 000011
参考例に記載の方法で得られた（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパンジアミド（中間体１、２２．６ｇ）をＭｅＯＨ（２２６ｍＬ）に溶かして氷浴攪拌した。そこへｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１３．９ｇ）を５分かけて分割投入して、室温で４５分攪拌した。反応液に対し、別途に炭酸水素ナトリウム（６．５１ｇ）と水（６９ｍＬ）で調製した炭酸水素ナトリウム水溶液を加えた後、クロロホルム（１Ｌ）で２回、クロロホルム（４００ｍＬ）とメタノール（１００ｍＬ）の混媒で１回、抽出を行った。有機層をフェーズセパレーターに通して、溶媒を減圧下留去した。得られた残留物を珪藻土に吸着させて、ＯＨ型シリカゲルクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／０→８０／２０）にて精製して、カラムフラクションを濃縮した。溶媒が少なくなったところにアセトニトリル（６０ｍＬ）を加えて更に濃縮した。５０ｍＬくらい留去したところで析出し始めたので濃縮を止め、アセトニトリル（６０ｍＬ）を追加した。そこへイソプロピルエーテル（１４０ｍＬ）を１時間以上かけてゆっくり滴下しながら終夜攪拌した。析出物をろ過して、イソプロピルエーテル（８０ｍＬ）でケーキ洗浄して乾燥して、（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ’，２−ジメチルプロパンジアミド（化合物Ａ、１２．２ｇ、肌色固体、６６％）の結晶を得た。
ＬＣＭＳ保持時間：０．５８分（条件２）
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝３８１（Ｍ−Ｈ）−
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0.85 - 0.89 (m, 2 H) 0.95 - 1.00 (m, 2 H) 1.61 (s, 3 H) 2.62 - 2.65 (m, 3 H) 2.98 (s, 3 H) 7.47 - 7.68 (m, 4 H) 8.50 (d, J=4.5 Hz, 1 H) 8.96 (br. s., 1 H) 10.95 (br. s., 1 H)
【００５６】
ここで、中間体１は、以下の参考例で示される方法によって合成する事が可能である。
【００５７】
（参考例１）
（スキーム２）
【００５８】
【化１１】
2016199500.tif 000012
【００５９】
（１）２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）マロン酸ジエチル（２５・７ｇ）のＤＭＦ（２５０ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム１２２ｇを加えた後、水浴下でヨウ化メチル（２３．２ｍＬ）を滴下した。滴下終了後、反応系を密閉系にして室温で５日間攪拌した。反応液に水を加え、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝４／１溶液（７００ｍＬ）を加えて抽出後、有機層を飽和塩化アンモニウム水溶液及び飽和食塩水で順次洗浄した。有機層に無水硫酸マグネシウム及び活性炭（２ｇ）を加えて１時間攪拌し、セライト（登録商標）濾過した。濾液を減圧下濃縮して、２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−２−メチルマロン酸ジエチルを得た（２５．０ｇ、淡黄色油状物、８８％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝３２６（Ｍ＋Ｎａ）＋
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.27 (6H, t, J=7.0 Hz), 1.38 - 1.47 (9H, m), 1.68 (3H, s), 2.87 (3H, s) 4.22 (4H, q, J=7.0 Hz)
（スキーム３）
【００６０】
【化１２】
2016199500.tif 000013
【００６１】
（２）参考例１−（１）で得られた化合物（２２．８ｇ）に、リン酸バッファー水溶液（６８０ｍＬ）を加え、これにＰＬＥ（Ｐｉｇ Ｌｉｖｅｒ  Ｅｓｔｅｒａｓｅ、豚肝臓エステラーゼ）（３４２ｍｇ）を加えて室温で２６時間攪拌した。リン酸バッファー水溶液は、０．２ｍｏｌ／Ｌのリン酸二水素ナトリウム水溶液（６５ｍＬ）及び０．２ｍｏｌ／Ｌのリン酸水素二ナトリウム水溶液（４３５ｍＬ）の混合物を水で希釈して１０００ｍＬにしたものを用いた。反応液に１ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム水溶液（７５ｍＬ）を加えてｐＨ８〜９に調整した後、トルエン（０．５Ｌ）を用いて抽出した。この際に混合液が泡状になったため、セライト（登録商標）濾過を２度実施した。抽出後得られた水層にリン酸（２０ｍＬ）を加えてｐＨ２〜３に調整し、酢酸エチル（１Ｌ）を用いて抽出した。この際にも混合液が泡状になったため、セライト（登録商標）濾過を実施した。得られた有機層に無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥した後に乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去した。残留物を酢酸エチル（０．２Ｌ）に溶かして活性炭（１．８ｇ）を加えて１時間攪拌した。活性炭を濾別し溶媒を減圧下留去して、（Ｒ）−２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−３−エトキシ−２−メチル−３−オキソプロパン酸を得た（１８．０ｇ、淡黄色シロップ状物、８７％、ｅｅ＞９９％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝２９８（Ｍ＋Ｎａ）＋
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.11 - 1.19 (3H, m), 1.32 (9H, br. s.), 1.54 (3H, s), 2.73 (3H, s), 4.02 - 4.13 (2H, m)
参考例１−（２）で得られた化合物のキラル分析は、以下の要領で実施した。
【００６２】
測定機器は、島津製作所製高速液体クロマトグラフィーを用いた。各機器の型番は以下の通りである。
ポンプ：ＬＣ−３０ＡＤ、オートサンプラー：ＳＩＬ−３０ＡＣ、カラムオーブン：ＣＴＯ−２０ＡＣ、光ダイオードアレイ検出器：ＳＰＤ−Ｍ２０Ａ、デガッサー：ＤＧＯ−２０Ａ５Ｒ。
【００６３】
キラルカラムは、株式会社ダイセル製ＡＤ３を、４．６×１５０ｍｍと４．６×２５０ｍｍを直列連結して用いた。展開溶媒はｎ−ヘキサン／エタノール＝９８／２、流速は１．０ｍＬ／毎分であった。
【００６４】
２１０ｎｍにおける吸収波長で検出し、２−（（ｔ−ブトキシカルボニル）（メチル）アミノ）−３−エトキシ−２−メチル−３−オキソプロパン酸のラセミ体のピークの保持時間は、（Ｓ）体が２６．５分、（Ｒ）体が３７．９分であった。
【００６５】
上記条件のもとで実施例１−（７）で得られた化合物の分析を実施した結果、（Ｒ）体のみが検出され、（Ｓ）体は検出限界以下であった。鏡像体過剰率（ｅｅ）は＞９９％であった。
（スキーム４）
【００６６】
【化１３】
2016199500.tif 000014
【００６７】
（３）参考例１−（２）で得られた化合物（１３．３ｇ）のトルエン（１２１ｍＬ）溶液に氷冷下で塩化チオニル（１０．５ｍＬ）を滴下し、室温に昇温して１６時間撹拌した。反応混合物を減圧濃縮して（Ｓ）−３−クロロ−２−メチル−２−（メチルアミノ）−３−オキソプロパン酸エチルを粗精製物として得た（９．３７ｇ、褐色固体）。
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.30 (3H, t, J=7.8 Hz), 1.72 (3H, s), 2.93 (3H, s), 4.23 - 4.33 (2H, m)
Anal.cald for C7H12ClNO3 : C, 43.42; H, 6.25; N, 7.23; 
Found : C, 45.49; H, 6.09; N, 6.75;
（スキーム５）
【００６８】
【化１４】
2016199500.tif 000015
【００６９】
（４）Ｏ−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）ヒドロキシルアミン（１．００ｇ）をトルエンで２回共沸乾燥後、トルエン（５．０ｍＬ）を加えた溶液にＴＥＡ（３．５７ｍＬ）を加え、氷冷下で参考例１−（３）で得られた化合物（１．９５ｇ）のトルエン（２５ｍＬ）／ＴＨＦ（５．０ｍＬ）混合物を５分間かけて滴下し、室温に昇温して１６時間撹拌した。反応混合物に酢酸エチル（１０ｍＬ）を加えた懸濁液をろ過し、ろ液を濃縮して得られた粗精製物をＯＨ型シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０→０／１００）にて精製して、（２Ｒ）−２−メチル−２−（メチルアミノ）−３−オキソ−３−（（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）アミノ）プロパン酸エチルを得た（１．７８ｇ、淡褐色油状物、７６％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝２７５（Ｍ＋Ｈ）＋，２７３（Ｍ−Ｈ）−
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.25 - 1.30 (3H, m), 1.43 - 1.90 (6H, m), 1.53 (3H, s), 2.30 (3H, s), 3.58 - 3.67 (1H, m), 3.88 - 4.00 (1H, m), 4.13 - 4.34 (2H, m), 4.82 - 5.02 (1H, m), 9.68 (1H, br. s.)
（スキーム６）
【００７０】
【化１５】
2016199500.tif 000016
【００７１】
（５）参考例１−（４）で得られた化合物（５４０ｍｇ）に、４０％のメチルアミンメタノール溶液（６．０ｍＬ）を室温で加え、４９時間攪拌した。反応液を減圧下濃縮し、得られた残渣をＯＨ型シリカゲルクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝５０／５０→０／１００→クロロホルム／メタノール＝１９／１）にて精製して、（２Ｓ）−Ｎ，２−ジメチル−２−（メチルアミノ）−Ｎ’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）マロンアミドを得た（４３３ｍｇ、淡黄色油状物、８５％）。
ＬＣＭＳ保持時間：０．２８分（条件２）
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝２６０（Ｍ＋Ｈ）＋
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.48 - 1.94 (6H, m), [1.529] 1.532 (3H, s), 2.29 (3H, d, J=4.5 Hz), 2.84 (3H, dd, J=5.0, 1.2 Hz), 3.62 - 3.70 (1H, m), 3.93 - 4.06 (1H, m), 4.93 - 5.03 (1H, m), 7.60 - 7.91 (1H, m), 10.72 (1H, br. s.)
（スキーム７）
【００７２】
【化１６】
2016199500.tif 000017
【００７３】
（６）１−エチニルシクロプロピルアミン塩酸塩（１０．０ｇ）のメタノール（１００ｍＬ）溶液に、ＴＥＡ（１４．２ｍＬ）を室温で加え、５分撹拌した。反応液にエチルトリフルオロアセテート（１１．２ｍＬ）を室温で加えて終夜撹拌した。反応液を減圧下濃縮し、水を加えて酢酸エチルにて２回抽出した。得られた有機層を合わせて、飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄した後、得られた有機層に無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥した後に乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去した。残渣よりＮ−（１−エチニルシクロプロピル）−２，２，２−トリフルオロアセトアミドを得た（１４．９ｇ、淡黄色固体、９９％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝２００（Ｍ＋Ｎａ）＋
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.19 - 1.23 (2H, m), 1.35 - 1.43 (2H, m), 2.23 (1H, s), 6.74 (1H, br. s.)
（スキーム８）
【００７４】
【化１７】
2016199500.tif 000018
【００７５】
（７）塩化銅（Ｉ）（４４ｍｇ）を３０％ブチルアミン水溶液（７４ｍＬ）に溶解し、ヒドロキシルアミン塩酸塩（３６．７ｍｇ）を加えた。反応液に、参考例１−（６）で得られたＮ−（１−エチニルシクロプロピル）−２，２，２−トリフルオロアセトアミド（４．３ｇ）を加えた後、直ちに反応液を氷冷し、５分撹拌した。反応液に４−ブロモエチニル安息香酸（５．０ｇ）を加えて室温に昇温したのち、ヒドロキシルアミン塩酸塩（２２．０ｍｇ）を加えて３０分撹拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えて、酢酸エチルで２回抽出した。得られた有機層に無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥した後に乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去した。得られた淡黄色固体をＩＰＥで洗浄、乾燥して４−（（１−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）シクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル）安息香酸を得た（１．８ｇ、淡紫色固体、２５％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝３４４（Ｍ＋Ｎａ）＋
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.18 - 1.29 (2H, m), 1.32 - 1.43 (2H, m), 7.62 (2H, d, J=8.3 Hz), 7.83 - 7.97 (2H, m), 10.23 (1H, s)
（スキーム９）
【００７６】
【化１８】
2016199500.tif 000019
【００７７】
（８）参考例１−（７）で得られた４−（（１−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）シクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル）安息香酸（２．０ｇ）のテトラヒドロフラン（１６ｍＬ）溶液に、氷冷下、塩化オキサリル（５９０μＬ）、ＤＭＦ（１５μＬ）を加えて、氷冷下で３時間撹拌した。反応液にトルエン（２０ｍＬ）を加えて、１０ｍＬまで減圧濃縮し、更にトルエン（１５ｍＬ）を加えて１５ｍＬまで減圧濃縮した。得られた懸濁液に、ノルマルヘプタン（１５ｍＬ）を加えて、室温で２時間撹拌した。得られた固体を濾別して、塩化 ４−（（１−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）シクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル）ベンゾイルを得た（２．０ｇ、淡茶色固体、９３％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝３３８（Ｍ−Ｈ）−
1H NMR (500 MHz, ACETONE-d6) δ ppm 1.32 - 1.53 (4 H, m) 7.77 (2 H, d, J=8.9 Hz) 8.15 (2 H, d, J=8.9 Hz) 9.24 (1 H, br. s.)
（スキーム１０）
【００７８】
【化１９】
2016199500.tif 000020
【００７９】
（９）参考例１−（８）で得られた塩化４−（（１−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）シクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル）ベンゾイル（２．００ｇ）の酢酸エチル（４０ｍＬ）溶液に、参考例１−（５）で得られた（２Ｓ）−Ｎ，２−ジメチル−２−（メチルアミノ）−Ｎ’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）マロンアミド（１．７５ｇ）、ＤＩＰＥＡ（１．２３ｍＬ）の酢酸エチル（２０ｍＬ）溶液を１５分かけて滴下して、室温で２時間撹拌した。反応液に水（５０ｍＬ）を加えて、分層した後、有機層を０．２ｍｏｌ／Ｌクエン酸水溶液（５０ｍＬ）、５％炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で順次洗浄した。得られた有機層を、無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥した後に乾燥剤を濾別し、溶媒を減圧下留去した。得られた残渣を酢酸エチル（６０ｍＬ）に溶解し、アミノシリカゲル（６．０ｇ）を加えて、室温で２時間撹拌した。これを濾別し、酢酸エチル（８０ｍＬ）で洗浄した。得られた溶液を減圧留去し、酢酸イソプロピル（６ｍＬ）に溶解させ、メチル−ｔ−ブチルエーテル（３２ｍＬ）とノルマルヘプタン（８ｍＬ）の混液に滴下して、室温で３時間撹拌した。得られた固体を濾取し、（２Ｓ）−Ｎ，２−ジメチル−２−（Ｎ−メチル−４−（（１−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）シクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル）ベンズアミド）−Ｎ’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）マロンアミドを得た（２．６６ｇ、淡黄色固体、８０％）。
ＭＳ（ＥＳＩ／ＡＰＣＩ  ｄｕａｌ）：ｍ／ｚ＝５８５（Ｍ＋Ｎａ）＋
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1.27 - 1.34 (2H, m), 1.41 - 1.51 (2H, m), 1.49 - 1.90 (9H, m), 2.84 (3H, m), 3.15 (3H, m), 3.50 - 3.74 (1H, m), 3.83 - 4.09 (1H, m), 4.86 - 5.06 (1H, m), 6.94 - 7.62 (6H, m), 9.98 - 10.57 (1H, m)
（スキーム１１）
【００８０】
【化２０】
2016199500.tif 000021
【００８１】
（１０）参考例１−（９）で得られた（２Ｓ）−Ｎ，２−ジメチル−２−（Ｎ−メチル−４−（（１−（２，２，２−トリフルオロアセトアミド）シクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル）ベンズアミド）−Ｎ’−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イル）オキシ）マロンアミド（２．８５ｇ）のメタノール溶液（２９ｍＬ）に１ｍｏｌ／Ｌ炭酸カリウム水溶液（２９ｍＬ）を室温で加えて１７時間室温で撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム水溶液を加えてｐＨ７〜８に調製し、クロロホルムで抽出した。有機層をフェーズセパレーターに通し、濾液を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過により除去した後、濾液を減圧下濃縮した。残渣の酢酸エチル溶液をクエン酸水溶液（ｐＨ３〜４）で４回抽出し、水層を酢酸エチル/ｎ−ヘキサンで洗浄した。水層に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨ７〜８に調整後、酢酸エチルで４回抽出し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。乾燥剤をろ過により除去した後、濾液を減圧下濃縮して得た残渣を酢酸エチルに溶かし、ＮＨ型シリカゲル（３．０ｇ）を加え５分間室温で撹拌した。混合物をろ過し、濾液を減圧下濃縮して、（２Ｓ）−２−［｛４−［４−（１−アミノシクロプロピル）ブタ−１，３−ジイン−１−イル］ベンゾイル｝（メチル）アミノ］−Ｎ，２−ジメチル−Ｎ’−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロパンジアミド（中間体１、１．８４ｇ、淡黄色固体、７８％）を得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ＝４６７（Ｍ＋Ｈ）＋，４６５（Ｍ−Ｈ）−
1H NMR (600 MHz, CHLOROFORM-d) δ  ppm 1.00 - 1.02 (2H, m), 1.06 - 1.08 (2H, m), 1.39 - 2.13 (6H, m), [1.79], 1.80 (3H, s), 2.83 - 2.85 (3H, m), [3.13], 3.16 (3H, s), 3.55 - 3.66 (1H, m), 3.84 - 4.02 (1H, m), 4.89 - 5.00 (1H, m), 7.41 - 7.55 (4H, m), [6.97], 7.61 (1H, br. s.), [10.07], 10.48 (1H, br. s.)
【００８２】
本発明の１つの態様は、化合物Ａと１種以上の抗菌剤とを組み合わせてなる医薬である。当該医薬は、感染症の予防又は治療のための医薬、好ましくは薬剤耐性菌による感染症の予防又は治療のための医薬である。
【００８３】
化合物Ａと組み合わせる抗菌剤としては、カルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシンが挙げられる。
【００８４】
本発明のカルバペネム系抗菌剤としては、イミペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネムが挙げられる。好ましくは、メロペネムが挙げられる。
【００８５】
本発明のセファロスポリン系抗菌剤としては、セフタジジム、セフェピム、セフォゾプラン、セフトリアキソン、セフトロザン、セフタロリンが挙げられる。好ましくは、セフタジジム、セフェピム、セフトリアキソンが挙げられる。さらに好ましくはセフェピムが挙げられる。
【００８６】
本発明のペニシリン系抗菌剤としては、ペニシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、ピペラシリンが挙げられる。好ましくは、ピペラシリンが挙げられる。
【００８７】
本発明のキノロン系抗菌剤としては、シプロフロキサシン、パズフロキサシン、レボフロキサシンが挙げられる。好ましくは、シプロフロキサシンが挙げられる。
【００８８】
本発明のアミノグリコシド系抗菌剤としては、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アルベカシンが挙げられる。好ましくは、アミカシンが挙げられる。
【００８９】
本発明のマクロライド系抗菌剤としては、アジスロマイシン、エリスロマイシン、クラリスロマイシンが挙げられる。好ましくは、クラリスロマイシンが挙げられる。
【００９０】
本発明のテトラサイクリン系抗菌剤としては、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、チゲサイクリンが挙げられる。
【００９１】
本発明のグリコペプチド系抗菌剤としては、テイコプラニン、テラバンシン、バンコマイシンが挙げられる。
【００９２】
本発明の好ましい態様は、化合物Ａと、抗菌剤としてイミペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネム、セフタジジム、セフェピム、セフォゾプラン、セフトリアキソン、セフトロザン、セフタロリン、ペニシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、ピペラシリン、シプロフロキサシン、パズフロキサシン、レボフロキサシン、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アルベカシン、クラリスロマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、バンコマイシン、ダプトマイシン、リネゾリドからなる群から選ばれる１種類以上を組み合わせた医薬である。
本発明の特に好ましい態様は、化合物Ａと、抗菌剤としてメロペネム、ピペラシリン、セフェピムからなる群から選ばれる１種類以上を組み合わせた医薬である。
【００９３】
本発明は、一つ又は二つ以上の医薬的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤と組み合せて医薬組成物とすることができる。
【００９４】
上記担体、賦形剤及び希釈剤として、例えば、水、乳糖、デキストロース、フラクトース、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、デンプン、ガム、ゼラチン、アルギネート、ケイ酸カルシウム、リン酸カルシウム、セルロース、水シロップ、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルキルパラヒドロキシベンゾソルベート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、グリセリン及び各種油（ゴマ油、オリーブ油及び大豆油等）などが挙げられる。
【００９５】
医薬組成物には、上記担体、賦形剤又は希釈剤に加えて、必要に応じて一般に使用される増量剤、結合剤、崩壊剤、ｐＨ調整剤、溶解剤及び着香剤等の添加剤を混合してもよい。
【００９６】
医薬組成物は、常用の製剤技術によって錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、粉剤、液剤、乳剤、懸濁剤、軟膏剤、注射剤（筋肉内注射剤及び静脈内注射剤を含む）、点滴静注剤及び皮膚貼付剤などの経口又は非経口用医薬として調製することができる。
【００９７】
特に、水性組成物とする際には、ｐＨ調節剤としては、特に制限されないが、例えば塩酸、硫酸、クエン酸、酢酸、リン酸、コハク酸、乳酸、酒石酸、安息香酸等の酸性物質、また必要に応じて水酸化ナトリウム、クエン酸三ナトリウム等の塩基性物質を用いることができる。ｐＨ調節剤は、好ましくは、塩酸、クエン酸である。
【００９８】
注射剤に用いられる容器としては、ガラス製、プラスチック製が好ましく、プラスチック製の具体例としては、環状ポリオレフィン、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリエチレンテレフタレート等が挙げられる。
【００９９】
特に、注射剤とする際には、無菌充填にて容器に注射液を充填する他、加熱滅菌、高圧蒸気滅菌等、注射液に対する種々の公知の滅菌方法を採用することができる。
【０１００】
注射剤として液体組成物等（水性組成物を含む）の溶液を調製する際には、例えば滅菌蒸留水を用い滅菌状態の溶液とすることもできるし、メンブランフィルターろ過等の滅菌処理を行う等の操作を行うこともできる。
【０１０１】
一度、液体組成物とした溶液を各種の乾燥手段により、乾燥物とする方法等が挙げられる。乾燥手段としては、凍結乾燥法、スプレードライ法、減圧乾燥法等があるが、特に凍結乾燥法が好ましい。このようにして得られた液体組成物又は乾燥組成物は、注射剤、経口剤、坐剤、経粘膜投与剤及び外用剤等の製剤として使用できる。
【０１０２】
特に注射剤とする場合には、注射液でも注射用凍結乾燥製剤でもよく、これら有効成分を単一の製剤として配合剤とすることもできるし、または別々に製剤化して得られる２種以上の製剤とすることができる。
【０１０３】
注射剤とする場合の好ましい投与形態は、点滴静脈内注射又は静脈内注射であり、より好ましい投与形態は点滴静脈内注射である。投与量は治療対象となる疾病の種類、患者の年齢、体重及び症状などに応じて、適宜増減することが可能である。
【０１０４】
別々に製剤化して２種以上の製剤とした場合には、個々の製剤を同時または一定の時間間隔を空けて投与することが可能である。当該２種以上の製剤は、１日にそれぞれ異なる回数で投与することもできる。本発明に係る医薬は、全身的または局所的に、経口投与または非経口投与することができる。これらの有効成分を別々に製剤化して２種以上の製剤とした場合には、個々の製剤を異なる経路で投与することもできる。
【０１０５】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとカルバペネム系抗菌剤、セファロスポリン系抗菌剤、ペニシリン系抗菌剤、キノロン系抗菌剤、アミノグリコシド系抗菌剤、マクロライド系抗菌剤、テトラサイクリン系抗菌剤、グリコペプチド系抗菌剤、ホスホマイシン、コリスチン、ダプトマイシン、リネゾリド、リファンピシンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１０６】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとカルバペネム系抗菌剤がイミペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネムからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１０７】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとセファロスポリン系抗菌剤がセフタジジム、セフェピム、セフォゾプラン、セフトリアキソン、セフトロザン、セフタロリンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１０８】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとペニシリン系抗菌剤がペニシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、ピペラシリンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１０９】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとキノロン系抗菌剤がシプロフロキサシン、パズフロキサシン、レボフロキサシンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１０】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとアミノグリコシド系抗菌剤がアミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アルベカシンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１１】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとメロペネムとが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１２】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとピペラシリンとが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１３】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとセフタジジム、セフェピム、セフトリアキソンからなる群より選ばれる１種以上の抗菌剤とが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１４】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとシプロフロキサシンとが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１５】
本発明の１つの態様は、化合物Ａとアミカシンとが、同時又は別々に患者に投与されることを特徴とする細菌感染症の予防又は治療用である医薬である。
【０１１６】
化合物Ａに対して、イミペネム、メロペネム、ビアペネム、ドリペネム、セフタジジム、セフェピム、セフォゾプラン、セフトリアキソン、セフトロザン、セフタロリン、ペニシリン、アモキシシリン、スルタミシリン、ピペラシリン、シプロフロキサシン、パズフロキサシン、レボフロキサシン、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、アルベカシン、クラリスロマイシン、テイコプラニン、テラバンシン、バンコマイシン、ダプトマイシン、リネゾリドからなる群より選ばれる１種以上を組み合わせて、それぞれ含む製剤からなるキットとするのも好ましい。
【０１１７】
本発明の医薬の投与量は投与対象、投与方法等により異なるが、例えば注射剤として感染症患者に対して１日に、化合物Ａを１種以上の抗菌剤と同時または一定の時間間隔を空けて、化合物Ａと抗菌剤を１：０．１２５〜８として投与することができる。また、この一般的な配合比とは別に、個別の抗菌剤については次のような配合比率で投与することもできる。
（１）化合物Ａとメロペネムを１：０．０１５〜３３
（２）化合物Ａとピペラシリンを１：０．５〜１２８
（３）化合物Ａとセフトリアキソンを１：０．５〜２１３３、好ましくは１：０．５〜１０６７
（４）化合物Ａとセフォタキシムを１：１〜１０６７、好ましくは１：１〜５３３
（５）化合物Ａとセフェピムを１：０．１２５〜２６７
（６）化合物Ａとセフタジジムを１：０．２５〜６４
（７）化合物Ａとシプロフロキサシンを１：０．０３〜８
（８）化合物Ａとアミカシンを１：０．２５〜３３
【実施例】
【０１１８】
以下に、実施例及び試験例により本発明をさらに詳細に説明する。本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【０１１９】
ＭＩＣ測定
ＣＬＳＩに準じた微量液体希釈法にて実施した。ハートインフュージョン寒天培地で一晩培養した菌株を掻き取り、カチオン調整ミューラーヒントン培地に懸濁してマクファーランド０．５相当となるように調製した。得られた懸濁液をカチオン調整ミューラーヒントン培地で１０倍希釈し、接種用菌液とした。調製した試験物質含有カチオン調整ミューラーヒントン培地及び試験物質不含有カチオン調整ミューラーヒントン培地を９０μＬ/ウェル分注した９６ウェルプレートに、接種用菌液を５μL/ウェル接種した。試験物質不含有カチオン調整ミューラーヒントン培地と接種用菌液を含むウェルを発育コントロールとした。プレートを３５℃、１８時間好気培養した後、目視判定により培養終了時に菌の発育が認められない最小の薬剤濃度をＭＩＣ（最小発育阻止濃度）とした。
【０１２０】
＜試験例１＞インビトロ抗菌作用における併用効果
化合物Ａおよびメロペネム、ピペラシリン、セフタジジム、セフトリアキソン、セフォタキシム、セフェピム、シプロフロキサシン、アミカシンからなる群から選ばれる１種の抗菌剤との組み合わせで、ＣＬＳＩに準じた微量液体希釈法によるチェッカーボードアッセイを行った。単独および併用時のＭＩＣからＦＩＣインデックス（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）を算出した。
【０１２１】
計算式；
ＦＩＣ ｉｎｄｅｘ＝ａ／ａ０＋ｂ／ｂ０
ａ：併用時の化合物ＡのＭＩＣ
ａ０：化合物Ａ単独のＭＩＣ
ｂ：併用時の各抗菌剤のＭＩＣ
ｂ０：各抗菌剤単独のＭＩＣ
併用による相乗効果の有無を判定するための基準；
ＦＩＣ ｉｎｄｅｘ＞１：拮抗作用
１≧ＦＩＣ ｉｎｄｅｘ＞０．５：相加作用
ＦＩＣ ｉｎｄｅｘ≦０．５：相乗作用
【０１２２】
表２０および２１に最小ＦＩＣインデックスを提供する。
アシネトバクター・バウマニー  ７３６３および７３９７（臨床分離株）に対し、化合物Ａとメロペネムおよびピペラシリンのいずれかとの組み合わせは、ＦＩＣインデックスによれば、インビトロで相乗的であった（表１〜４および２０）。
ステノトロフォモナス・マルトフィリア  ＡＴＣＣ１３６３６に対し、化合物Ａとメロペネムおよびピペラシリンのいずれかとの組み合わせは、ＦＩＣインデックスによれば、インビトロで相加的であった（表５、６および２１）。
【０１２３】
緑膿菌  ＴＳ８８（臨床分離株）に対し、化合物Ａとメロペネム、ピペラシリン、セフタジジム、セフトリアキソン、セフォタキシム、セフェピム、シプロフロキサシンおよびアミカシンからなる群から選ばれる１種の抗菌剤との組み合わせは、ＦＩＣインデックスによれば、インビトロで相加的であった（表７〜１４および２１）。
【０１２４】
緑膿菌  ＡＴＣＣ２７８５３に対し、化合物Ａとメロペネムおよびセフェピムのいずれかとの組み合わせはインビトロで相乗的であり、セフタジジム、セフトリアキソンおよびセフォタキシムからなる群から選ばれる１種の抗菌剤との組み合わせでは、ＦＩＣインデックスによれば、インビトロで相加的であった（表１５〜１９および２１）。
【０１２５】
以下の表１〜２１における略号は以下のように定義する。
ＭＥＰＭ：メロペネム
ＰＩＰＣ：ピペラシリン
ＣＡＺ：セフタジジム
ＣＴＲＸ：セフトリアキソン
ＣＴＸ：セフォタキシム
ＣＦＰＭ：セフェピム
ＣＰＦＸ：シプロフロキサシン
ＡＭＫ：アミカシン
ｎ．ｄ．：ｎｏｔ−ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ
【０１２６】
【表１】
2016199500.tif 000022
【０１２７】
【表２】
2016199500.tif 000023
【０１２８】
【表３】
2016199500.tif 000024
【０１２９】
【表４】
2016199500.tif 000025
【０１３０】
【表５】
2016199500.tif 000026
【０１３１】
【表６】
2016199500.tif 000027
【０１３２】
【表７】
2016199500.tif 000028
【０１３３】
【表８】
2016199500.tif 000029
【０１３４】
【表９】
2016199500.tif 000030
【０１３５】
【表１０】
2016199500.tif 000031
【０１３６】
【表１１】
2016199500.tif 000032
【０１３７】
【表１２】
2016199500.tif 000033
【０１３８】
【表１３】
2016199500.tif 000034
【０１３９】
【表１４】
2016199500.tif 000035
【０１４０】
【表１５】
2016199500.tif 000036
【０１４１】
【表１６】
2016199500.tif 000037
【０１４２】
【表１７】
2016199500.tif 000038
【０１４３】
【表１８】
2016199500.tif 000039
【０１４４】
【表１９】
2016199500.tif 000040
【０１４５】
【表２０】
2016199500.tif 000041
【０１４６】
【表２１】
2016199500.tif 000042
【０１４７】
＜試験例２＞インビトロ殺菌作用における併用効果
化合物Ａとメロペネムを組み合わせた場合の増殖曲線に対する影響について検討した。細菌として、緑膿菌  ＴＳ８８（臨床分離株）を用いた。ハートインフュージョン寒天培地で一晩培養した菌株を掻き取り、カチオン調整ミューラーヒントン培地に懸濁してマクファーランド０．５相当となるように調製した。得られた懸濁液をカチオン調整ミューラーヒントン培地で更に２００倍に希釈し、３５℃にて２時間振盪培養を行った。菌培養液に抗菌剤またはｖｅｈｉｃｌｅ単独（陰性対照として）を添加し、再び３５℃で振盪培養を開始した。抗菌剤添加後、１、２、４、６および８時間経過時の培養液中の生菌数を測定した。
【０１４８】
図１において示すように、１／２ｘＭＩＣ（０．１２μｇ／ｍＬ）の化合物Ａおよび１／４ｘＭＩＣ（０．１２μｇ／ｍＬ）のメロペネムを単独で作用させた培養液中の８時間後の生菌数は、７．０ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍＬおよび６．４ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍＬであり、抗菌剤添加時（経過時間０）の生菌数（６．２ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍＬ）からほとんど菌量を減少させなかったのに対し、化合物Ａおよびメロペネムを併用した培養液中の８時間後の生菌数は３．２ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍＬであり、抗菌剤の単独作用時の生菌数と比較して大幅な生菌数減少が認められた。また、化合物Ａおよびメロペネムを併用した培養液中の８時間後の生菌数は抗菌剤添加時（経過時間０）の生菌数（６．２ｌｏｇ  ＣＦＵ／ｍＬ）に比べ３．０ｌｏｇ以上減少しており、併用により殺菌効果が認められた。
【０１４９】
（図１）
2016199500.tif 000043
脚注：ｖｅｈｉｃｌｅ；カチオン調整ミューラーヒントン培地
【０１５０】
＜試験例３＞全身感染動物試験における併用効果
化合物Ａとメロペネム／シラスタチンを組み合わせた場合、および化合物Ａとピペラシリンを組み合わせた場合について、マウス全身感染モデルを用いて検討した。尚、メロペネムは、マウスにおいてデヒドロペプチダーゼ（ＤＨＰ−Ｉ）に対して不安定であることから、ＤＨＰ−Ｉ阻害剤であるシラスタチンを併用した(非特許文献６)。細菌として、緑膿菌ＴＳ８８（臨床分離株）を用いた。ハートインフュージョン寒天培地で一晩培養した菌体を掻き取り、生理食塩液に懸濁してマクファーランド４．０相当となるように調製した。得られた懸濁液を３ｗ／ｖ％ムチン含有生理食塩液にて約１ｘ１０＾６ＣＦＵ／ｍＬとなるよう希釈し、接種菌液とした。マウス（ＩＣＲ系、雄性、４週齢）に接種菌液０．５ｍＬを腹腔内接種して感染させ、接種１時間後に化合物Ａおよび抗菌剤を単独または共投与（皮下投与）した。
【０１５１】
化合物Ａの３．１３ｍｇ／ｋｇ単独投与、メロペネム／シラスタチンの０．６２５ｍｇ／ｋｇ単独投与およびシラスタチン１０００ｍｇ／ｋｇ単独投与の生存率は０％であるのに対し、化合物Ａ（３．１３ｍｇ／ｋｇ）＋メロペネム／シラスタチン（０．６２５ｍｇ／ｋｇ）共投与および化合物Ａ（３．１３ｍｇ／ｋｇ）＋ピペラシリン（１０００ｍｇ／ｋｇ）共投与の生存率は１００％となり、化合物Ａは抗菌剤との共投与によりインビボ併用効果を示した（表２２および２３）。
【０１５２】
【表２２】
2016199500.tif 000044
【０１５３】
【表２３】
2016199500.tif 000045
【産業上の利用可能性】
【０１５４】
本発明により、緑膿菌をはじめとするグラム陰性細菌及びその薬剤耐性菌に強い抗菌活性を有する、ＬｐｘＣ阻害剤と他の１種以上の抗菌剤との組み合わせを特徴とする感染症の予防又は治療用である医薬を得ることができる。