(57)【要約】      （修正有）【課題】食品に添加することで睡眠障害に対して予防または改善する機能を食品に付加することのできる食品添加用原料の提供。【解決手段】大豆蛋白加水分解物を含有する、睡眠障害を予防または改善するための食品添加用組成物。大豆蛋白加水分解物中の分子量５００未満のペプチド含量がペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して５０重量％以上である食品添加用組成物。食品に添加することにより、睡眠障害を予防または改善する機能を食品に付与するための、大豆由来の蛋白加水分解物の使用方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
大豆蛋白加水分解物を含有する、睡眠障害を予防または改善するための食品添加用組成物。
【請求項２】
大豆蛋白加水分解物中の分子量５００未満のペプチド含量がペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して５０重量％以上である、請求項１記載の食品添加用組成物。
【請求項３】
食品に添加することにより、睡眠障害を予防または改善する機能を食品に付与するための、大豆由来の蛋白加水分解物の使用方法。
【請求項４】
大豆蛋白加水分解物中の分子量５００未満のペプチド含量がペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して５０重量％以上である、請求項３記載の大豆蛋白加水分解物の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、睡眠障害を予防または改善するための食品添加用組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
睡眠は、疲労回復，身体組織の修復，ストレスの軽減，あるいは情報や記憶の整理と定着などに関係しており、食事や運動などと同様に体と心の健康を維持するための重要な因子の1つである。しかし近年の日本では、５人に１人が何らかの不眠状態を有するといわれている（非特許文献１）。不眠症は正常時と比較して睡眠時間が短くなることにより、身体や精神に不調が現れる病気である睡眠障害の一種である。その症状は「寝つきが悪い」（入眠困難）、「夜中に目が覚める」（中途覚醒）、「眠りが浅い」（熟眠困難）、「朝早く目が覚める」（早朝覚醒）などに分類される。
【０００３】
このような症状を訴える患者に処方される睡眠導入剤は、現在ベンゾジアゼビン系の睡眠薬が主流である。これは、従来の睡眠薬に比べて副作用等が低くなるように開発されたものだが、「ねむけ」、「ふらつき」、「めまい」などの副作用や、長期間服用後の依存症状や離脱症状の問題などがあることが知られている（非特許文献２）。
【０００４】
また、食品素材として、カゼイン加水分解物及びミネラルを含有する睡眠改善用組成物の技術が開示されている（特許文献１）。しかし当該特許の睡眠改善用組成物に含まれるデカペプチドはベンゾジアゼピン型の活性があることから、大量摂取により上記の睡眠薬と同様の副作用の恐れが考えられる。
以上のことから、睡眠障害に対して改善効果を示し、安全性の高い植物由来食品原料の開発が強く望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００９−１３１４３号公報
【非特許文献】
【０００６】
【非特許文献１】Kim K, Uchiyama M, Okawa M, Liu X, Ogihara R. An epidemiological study ofinsomnia among the Japanese general population. Sleep 2000; 23: 41-47.
【非特許文献２】北村正樹, 景山茂. ベンゾジアゼピン系睡眠薬の主な副作用および薬物相互作用 1998; 41: 631-634.
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、食品に添加することで睡眠障害に対して予防または改善する機能を食品に付加することのできる食品添加用の原料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は上記課題を解決するために、鋭意検討した結果、天然物由来で安全性の高い大豆蛋白加水分解物が睡眠障害に対して予防または改善する機能を有することを見出し本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、
（１）大豆蛋白加水分解物を含有する、睡眠障害を予防または改善するための食品添加用組成物、
（２）大豆蛋白加水分解物中の分子量５００未満のペプチド含量がペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して５０重量％以上である、（１）記載の食品添加用組成物、
（３）食品に添加することにより、睡眠障害を予防または改善する機能を食品に付与するための、大豆由来の蛋白加水分解物の使用方法、
（４）大豆蛋白加水分解物中の分子量５００未満のペプチド含量がペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して５０重量％以上である、（３）記載の大豆蛋白加水分解物の使用方法、
である。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の大豆蛋白加水分解物を有効成分として摂取することにより、自覚的に睡眠に問題のある対象者に対して特異的に睡眠障害を予防または改善することができる。これにより、不眠症がもたらす日常生活への悪影響及び様々なリスク（肥満、寿命縮小、高血圧、2型糖尿病、うつ病）に対する予防効果に役立てることができる。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
【００１２】
（大豆蛋白加水分解物）
本発明の大豆蛋白加水分解物は、分離大豆蛋白質等の大豆由来の蛋白質原料を加水分解することにより得られる。大豆蛋白加水分解物を得る方法としては、例えば、酸で加水分解する方法、蛋白質加水分解酵素（プロテアーゼ）で分解する方法等が挙げられる。
【００１３】
（蛋白質原料）
蛋白質原料として、丸大豆や脱脂大豆等から蛋白質成分を水で抽出し、オカラ成分を除去した全脂豆乳や脱脂豆乳が挙げられる。大豆蛋白質原料の別の一例として、これら豆乳から、限外ろ過膜による処理や酸を用いた等電点沈殿等により蛋白質を濃縮した分離大豆蛋白質が挙げられる。大豆蛋白質原料のさらに別のとして、大豆から酸洗浄やエタノール洗浄によりホエー成分を除去してタンパク質を濃縮した濃縮大豆蛋白質や、大豆を粉砕した大豆粉が挙げられる。これらの大豆蛋白質原料は殺菌・乾燥した物でもよい。尚、最終的に得られる大豆蛋白質原料は、タンパク質を乾燥重量で80重量％以上含むことが好ましく、例えば分離大豆蛋白質が好ましい。
分離大豆蛋白質は一般には以下の方法で調製されるものである。すなわち、脱脂大豆に水を加え、中性付近にて抽出を行い、オカラを分離して豆乳を得る。次に豆乳をpH4.5付近に調整し、等電点沈殿物を回収する。沈殿物に水及びアルカリ剤を加え、固形分濃度5〜15重量%、pH5.7〜8.0好ましくはpH6.8〜7.5付近の水溶液を得る。この様にして得られた分離大豆蛋白質は、溶液をそのまま以下の工程に用いても良い。ただし、分離大豆蛋白質は上記製法に限定されるものではなく、該製法を種々改変したものであってもよい。
【００１４】
以下、酵素分解法により大豆蛋白加水分解物を得る態様について説明する。
酵素分解の程度は、全ての分子が遊離アミノ酸にまで分解されないことが適当であり、かつ分解度がより高いことが好ましい。
特に、大豆蛋白加水分解物中、分子量５００未満のペプチド画分の含量が、ペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して好ましくは５０重量％以上、より好ましくは６０重量％以上、さらに好ましくは６２重量％以上、最も好ましくは６５重量％以上のものがよい。
【００１５】
この分子量５００未満のペプチドは、アミノ酸が２〜３分子結合したジペプチドおよびトリペプチドから実質的に構成されるものである。大豆蛋白加水分解物の分子量が大きすぎると吸収速度の優位性が少なくなり、睡眠障害改善効果が減殺される場合がある。
なお、分子量５００未満のペプチドの含量は、ゲルろ過クロマトグラフィーにより大豆蛋白加水分解物における分子量５００未満のペプチド及び遊離アミノ酸画分の割合を測定した後、アミノ酸分析により算出した蛋白質加水分解物中の遊離アミノ酸含量を差し引くことにより算出するものとする。
【００１６】
また、上記のように特定される大豆蛋白加水分解物は分子量５００未満のペプチド以外のペプチド及び遊離アミノ酸の割合ができるだけ低減されたものが好ましい。すなわち、大豆蛋白加水分解物中の遊離アミノ酸の含量は、ペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して好ましくは１２重量％以下、より好ましくは５重量％以下である。
【００１７】
さらに、該大豆蛋白加水分解物中のペプチド体はより低分子であることが望ましいことから、大豆蛋白加水分解物中の分子量５００以上の画分の割合がペプチド及び遊離アミノ酸の合計量に対して４０重量％以下であることが好ましく、３８重量％以下であることがより好ましく、３５重量％以下がさらに好ましい。
【００１８】
大豆蛋白加水分解物を得るために酵素分解に使用されるプロテアーゼは、動物起源、植物起源又は微生物起源を問わず、プロテアーゼの分類において「金属プロテアーゼ」，「酸性プロテアーゼ」，「チオールプロテアーゼ」，「セリンプロテアーゼ」に分類されるプロテアーゼ、好ましくは「金属プロテアーゼ」，「チオールプロテアーゼ」，「セリンプロテアーゼ」に分類されるプロテアーゼの中から適宜選択することができる。
【００１９】
特に２種類以上、あるいは３種類以上の異なった分類に属する酵素を、順次若しくは同時に併用して作用させる分解方法が分子量５００未満のペプチドの割合を増加させることができ、効率的で好ましい。
さらに、遊離アミノ酸の含量を減らすにはエキソプロテアーゼ活性の少ない酵素を使用することが好ましい。
【００２０】
このプロテアーゼの分類は、酵素科学の分野において通常行なわれている活性中心のアミノ酸の種類による分類方法である。
各々の代表として「金属プロテアーゼ」にはBacillus由来中性プロテアーゼ，Streptomyces由来中性プロテアーゼ，Aspergillus由来中性プロテアーゼ，サモアーゼ等が挙げられ、「酸性プロテアーゼ」にはペプシン，Aspergillus由来酸性プロテアーゼ，スミチームＦＰ等が挙げられ、「チオールプロテアーゼ」にはブロメライン，パパイン等が挙げられ、「セリンプロテアーゼ」にはトリプシン，キモトリプシン，ズブチリシン，Streptomyces由来アルカリプロテアーゼ，アルカラーゼ，ビオプラーゼ等が挙げられる。
【００２１】
これら以外の酵素でも作用ｐＨや阻害剤との反応性により、その分類を確認することができる。
活性中心が異なる酵素間では、基質への作用部位が大きく異なるため、「切れ残り」を減らし、効率よく酵素分解物を得ることができる。
また、異なった起源の（起源生物）の酵素を併用することで、更に効率よく酵素分解物を製造することができる。
同分類でも起源が異なれば、基質である蛋白質への作用部位も異なり、結果として分子量５００未満のペプチドの割合を増やすことができる。
【００２２】
プロテアーゼ処理の反応ｐＨや反応温度は、用いるプロテアーゼの特性に合わせて設定すれば良く、通常、反応ｐＨは至適ｐＨ付近、反応温度は至適温度付近が良い。
概ね反応温度は２０〜８０℃、好ましくは４０〜６０℃である。反応後は酵素を失活させるのに十分な温度（６０〜１７０℃程度）まで加熱し、残存酵素活性を失活させる。
【００２３】
プロテアーゼ処理後の反応液は、そのまま又は濃縮して用いることもできるが、通常、殺菌し、噴霧乾燥、凍結乾燥等して乾燥粉末の状態で利用する。
殺菌は、加熱殺菌が好ましく、加熱温度は１１０〜１７０℃が好ましく、１３０〜１７０℃が更に好ましく、加熱時間は３〜２０秒間が好ましい。また、反応液を任意のｐＨに調整してもよい。
【００２４】
プロテアーゼ処理時やｐＨ調整時に発生する不溶物（沈殿物や懸濁物）を遠心分離やろ過等により除去してもよく、この不溶物の除去は大豆蛋白加水分解物中の有効成分の力価を向上させることができるため、好ましい。更に活性炭や吸着樹脂により精製してもよい。
【００２５】
（大豆蛋白加水分解物を含有する、睡眠障害を予防または改善するための食品添加用組成物）
本発明の食品添加用組成物は、食品の製造時に原料として特定の機能を付与する目的で添加されるものであり、食品素材あるいは食品原料などと称しても良い。また、本発明の食品添加用組成物は、法律上規定されている物質に限定されるものではない。
当業者は本発明の食品添加用組成物を、睡眠障害を予防または改善する機能を付与する目的で種々の調理食品や加工食品の製造時に添加することにより、睡眠障害を予防または改善する機能を付与することができる。
ここで、「睡眠障害」とは、寝つきが悪い、夜中に目が覚める、眠りが浅い、または朝早く目が覚めることをいう。
【００２６】
食品添加物の形態は粉末、顆粒、シロップ、液状等に調製して使用してもよい。この食品添加用組成物を添加する食品は、特に制限はなく、種々の調理食品や加工食品が挙げられ、例えば、飲料，タブレット，フードバー，肉製品，デザート，菓子類及び栄養補助食品などを挙げることができる。また、食品への添加時期は特に限定されず、該食品の製造の前、途中、後のいずれの段階でもよい。
本発明における食品添加用組成物の食品への配合量は、食品の種類によっても異なるが、一般に０．１〜８０重量％、特に１〜５０重量％が好ましい。
【００２７】
（遊離アミノ酸及びペプチド含量の測定方法）
大豆蛋白加水分解物の分子量分布は、以下のゲルろ過カラムを用いたHPLC法により測定するものとする。
ゲルろ過カラムを用いたHPLCシステムを組み、分子量マーカーとなる既知のペプチドをチャージし、分子量と保持時間の関係において検量線を求める。なお、分子量マーカーは、オクタペプチドとして[β-Asp]-Angiotensin IIのβ-Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe（分子量1046）、ヘキサペプチドとしてAngiotensin IVのVal-Tyr-Ile-His-Pro-Phe（分子量775）、ペンタペプチドとしてLeu-EnkephalinのTyr-Gly-Gly-Phe-Leu（分子量555）、トリペプチドとしてGlu-Glu-Glu（分子量405）、遊離アミノ酸としてPro（分子量115）を用いる。
【００２８】
大豆蛋白加水分解物（１％）を10,000rpm、10分間遠心分離して得られた上清を、ゲルろ過用溶媒で２倍に希釈し、その５μlをHPLCにアプライする。
大豆蛋白加水分解物中の遊離アミノ酸及び分子量500未満のペプチド画分の割合（％）は、全体の吸光度のチャート面積に対する、分子量５００未満の範囲（時間範囲）の面積の割合によって求める（使用カラム：Superdex Peptide 7.5／300GL（ＧＥヘルスケア・ジャパン(株)製）、溶媒：１％SDS／10mMリン酸緩衝液、pH8.0、カラム温度25℃、流速0.25ml／min、検出波長：220nm）。
【００２９】
また蛋白質加水分解物中の分子量５００以上のペプチド画分の割合（％）は、上記と同様に、全体の吸光度のチャート面積に対する、分子量５００以上の範囲の面積の割合によって求める。
【００３０】
次に、アミノ酸分析により大豆蛋白加水分解物中の遊離アミノ酸含量の測定を行う。大豆蛋白加水分解物（４mg／ml）を等量の３％スルホサリチル酸に加え、室温で１５分間振とうする。10,000rpmで１０分間遠心分離し、得られた上澄みを0.45μｍフィルターでろ過し、アミノ酸分析器「JLC500V」（日本電子(株)製）にて、遊離アミノ酸を測定する。
蛋白質加水分解物中の遊離アミノ酸含量はケルダール法にて得られた蛋白質含量に対する割合として算出する。
以上より得られる、「遊離アミノ酸及び分子量５００未満のペプチド画分の割合」から「遊離アミノ酸含量」を差し引いた値を、大豆蛋白加水分解物中の「分子量５００未満のペプチドの含量」とする。
【実施例】
【００３１】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、これは本発明を単に説明するだけのものであって、本発明を限定するものではない。
【００３２】
（実施例１）
大豆蛋白加水分解物の睡眠の質に対する改善効果を評価するために、表１に示した配合からなる被験品を作製し、睡眠に問題があることを自覚している健常な被験者（３名）とコントロールとして自覚的に睡眠に問題のない被験者（２名）を対象にして、二重盲検によるクロスオーバー比較試験を行った。
なお、ここでいう「睡眠に問題がある」とは、「寝つきが悪い」、「夜中に目が覚める」、「眠りが浅い」、または「朝早く目が覚める」などの症状を有することをいう。なお、不眠治療をしている（睡眠薬等を使用）や外部要因で夜間の睡眠が阻害されているなどを除外項目として掲げた。
【００３３】
被験品は就寝１時間前に１００〜２００ｍｌの水に溶かして摂取してもらった。月曜日から木曜日（就寝時間が０時を超える場合は翌日になる）の就寝１時間前に大豆蛋白加水分解物もしくはプラセボ飲料を摂取してもらい、翌週月曜日から木曜日は被験品を変えて摂取してもらった。
【００３４】
（表１）被験品の成分及び含有量
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【００３５】
表２に、プラセボまたはペプチドを摂取した場合の入眠潜時について、５名の被験者の平均値（各4回測定の平均値をさらに平均した値）を示した。なお、入眠潜時とは、就床（消灯から）から入眠までの時間（睡眠時間が５分間以上持続した場合を入眠とする）である。
入眠潜時の評価は脳波測定によって行った。脳波測定は、携帯型脳波計（SleepWell社 SLEEP SCOPE）を用いて被験者自身で装着と操作を行った。なお、携帯型脳波計とは、額と耳裏の２点に電極を装着し脳波を測定する機器であり、小型かつ軽量で可搬性が高いとともに、装着が簡単なため、従来、実験室での計測が主流であった脳波測定を自宅で可能としたものである。
【００３６】
結果として、プラセボ摂取に対し、大豆蛋白加水分解物を摂取した場合、入眠潜時が短くなる傾向であり、本発明の効果が確認された。
そこで各被験者について、入眠潜時を比較したところ、睡眠に問題があると自覚している被験者（Ａ〜Ｃ）で、入眠潜時が短くなる傾向になり、大豆蛋白加水分解物の摂取による本発明の効果が確認された。しかし、睡眠に問題のない被験者（Ｄ、Ｅ）では、影響がなかった（表３）。
これらの結果は、大豆蛋白加水分解物の睡眠障害改善効果を示すものである。
また、大豆蛋白加水分解物は市販の睡眠導入剤と異なりめまい等の副作用が少なく、さらに、食経験のある大豆由来のものであることから、食品に睡眠障害改善機能を付与することのできる、安全な食品素材であるといえる。
【００３７】
（表２）群間での入眠潜時の比較
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【００３８】
（表３）各被験者の入眠潜時の比較
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