(57)【要約】      （修正有）【課題】２型糖尿病やメタボリック・シンドロームを始めとする疾患の発症につながるインスリン抵抗性を、安全かつ効果的に改善できる製剤の提供。【解決手段】リンゴ果実圧搾残渣及びローズマリー抽出物を含有する組成物。ローズマリー抽出物としては、ローズマリーの葉の抽出物が好ましく、また抽出溶媒としてＣ1-4アルコールを用いて抽出されたものが好ましいインスリン抵抗性改善剤。ローズマリー抽出物に対する質量比で５〜１５倍のリンゴ果実圧搾残渣を含む組成物を１日当り１０〜５０ｍｇ／ｋｇ投与するインスリン抵抗性改善剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンゴ果実圧搾残渣およびローズマリー抽出物を含有することを特徴とするインスリン抵抗性改善剤。
【請求項２】
ローズマリー抽出物に対する質量比で５倍以上、１５倍以下のリンゴ果実圧搾残渣を含む請求項１に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項３】
ローズマリー抽出物が、ローズマリーの葉に由来するものである請求項１または２に記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項４】
ローズマリー抽出物が、抽出溶媒としてＣ1-4アルコールを用いて抽出されたものである請求項１〜３のいずれかに記載のインスリン抵抗性改善剤。
【請求項５】
１日当たり１０ｍｇ／ｋｇ体重以上、５０ｍｇ／ｋｇ体重以下投与するものである請求項１〜４のいずれかに記載のインスリン抵抗性改善剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全にインスリン抵抗性を改善することができる製剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
２型糖尿病の患者は全糖尿病患者の９０〜９５％を占めている。この病気は極めてゆっくりと進行し、発症時にはこれといった自覚症状もみられない。生活習慣病検査の定期検診で高血糖や耐糖能異常が見つかるか、進行してから自覚症状として多尿や口渇に気が付き指摘されることも多い。
【０００３】
２型糖尿病の原因としては様々なものが指摘されているが、その一つとしてインスリン抵抗性がある。インスリン抵抗性とは、インスリンが分泌されているにもかかわらずインスリンへの反応が鈍化し、上昇した血糖値が低下しない状態をいう。インスリン抵抗性は肥満者に多くみられるが、分子レベルでの原因は不明である。
【０００４】
多くの研究結果をみると、インスリン抵抗性ではインスリン受容体以降のシグナル伝達だけでなく、インスリン受容体自体の異常も明らかにされている。インスリン抵抗性の初期における不具合は、膵臓のβ細胞からのより多いインスリン分泌によって代償されている。その為、明らかな糖尿病になるまではその進行に気が付かない。最終インスリンの需要にβ細胞からの分泌が追い付かなくなった時にやっと糖尿病だと気が付く。
【０００５】
β細胞のアポトーシスの増加や再生されるβ細胞の減少によって必要量のインスリンの供給が困難となり、インスリン抵抗性によってより多くのインスリンが必要となっても補給できなくなると、肝臓や脂肪組織に貯留してある糖質や脂質が血中に放出され、また脂肪組織で脂肪分解が進むことで遊離脂肪酸が血中に放出され、高血糖や脂質異常症だけでなく、遊離脂肪酸が非脂肪組織（肝臓、骨格筋、膵臓、心臓、腎臓など）に取り込まれ、脂肪毒性（細胞の機能異常）となる。
【０００６】
インスリン抵抗性はもっぱら糖尿病との関連性が主張されていたが、近年の研究により、その他多くの疾患の発症にも深く関連することがわかってきた。中でもメタボリック・シンドロームとの関連性が注目されている。そして、その予防と治療の鍵となるのがインスリン抵抗性の改善と内臓脂肪への対応である。
【０００７】
内臓脂肪の蓄積と深い関連のあるメタボリック・シンドロームの一つに、非アルコール性脂肪肝がある。甘味料としてあっさりとした甘味を有し、また安価であることなどから、果糖・ブドウ糖液糖やコーンシロップ、また果糖単品が砂糖に代わって食品へ広く添加されるようになった。これが非アルコール性脂肪肝の誘発原因の一つとされている。本発明者はこれまで、非アルコール性脂肪肝発症の予防や治療に対して天然物の活用を考え、内臓脂肪対処への研究を進めその成果を発表してきた（非特許文献１〜３）。
【０００８】
インスリン抵抗性の治療には、α−グルコシダーゼ阻害薬、ＰＰＡＲγ活性化薬、ＡＭＰ活性化プロテインキナーゼ活性化薬などを複数組み合わせて用いられることが多い。しかしこれら合成医薬品は強い副作用を伴い、また、インスリン抵抗性は生活習慣と深く結び付いており恒常的な治療が必要であることから、インスリン抵抗性改善物質が天然由来の化合物から探索されている。
【０００９】
例えば特許文献１には、リンゴペクチンなどのアセトゲン繊維を含む組成物であって、インスリン抵抗性に伴う代謝機能不全を治療、予防、改善するものが開示されている。
【００１０】
また特許文献２には、抗酸化剤としてローズマリー抽出物を含んでいてもよく、インスリン抵抗性の低減において機能的であってもよい食物製品が開示されており、特許文献３には、特定構造の苦味受容体リガンドを含む組成物であって、ローズマリー抽出化合物をさらに含んでいてもよく、インスリン抵抗性などを治療できるとされている組成物が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１１】
【特許文献１】特表２００９−５１３５０５号公報
【特許文献２】特表２００８−５０９２１３号公報
【特許文献３】特表２０１４−５０１７８７号公報
【非特許文献】
【００１２】
【非特許文献１】Ｇａｏ  Ｈら，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ５７０９４８，ｐ．１２（２０１２）
【非特許文献２】Ｗａｎｇ  Ｊら，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．２０１２，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ５９０３７６，ｐ．１２（２０１２）
【非特許文献３】Ｌｉｕ  Ｃら，Ｅｖｉｄｅｎｃｅ−Ｂａｓｅｄ  Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ  ａｎｄ  Ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｖｏｌ．２０１３，Ａｒｔｉｃｌｅ  ＩＤ  ５３４０８４，ｐ．１１（２０１３）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
上述したように、様々なメタボリック・シンドロームへの予防や治療を考える際、内臓脂肪の低減と同時に、インスリン抵抗性の改善が重要となるが、安全かつ効果的にインスリン抵抗性を改善できる合成医薬品はない。そこで、毎日気軽に摂取することにより、治療の困難な２型糖尿病に陥る前にインスリン抵抗性の予防や改善が達成でき、可能であれば古くから食用実績のある安全な天然物は常に求められている。ここで、特許文献１〜３に開示されている発明のように、リンゴに含まれる繊維やローズマリー抽出物がインスリン抵抗性の改善に効果があるとされているものはあるが、本発明者の実験的知見によれば、これらの効果はまったく満足できるものではなかった。
【００１４】
かかる状況下、本発明は、２型糖尿病やメタボリック・シンドロームを始めとする疾患の発症につながるインスリン抵抗性を、安全かつ効果的に改善できる製剤を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた。その結果、リンゴ果実圧搾残渣とローズマリーエキスとの混合物が、インスリン抵抗性を効果的に改善できることを見出して、本発明を完成した。
【００１６】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤は、リンゴ果実圧搾残渣およびローズマリー抽出物を含有することを特徴とする。
【００１７】
本発明のインスリン抵抗性改善剤において、ローズマリー抽出物に対するリンゴ果実圧搾残渣の質量比は、５倍以上、１５倍以下が好ましい。リンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物とをかかる割合で含むインスリン抵抗性改善剤の効果は、本発明者の実験的知見により確認されている。
【００１８】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤の有効成分の一つであるローズマリー抽出物としては、ローズマリーの葉に由来するもの、および、抽出溶媒としてＣ1-4アルコールを用いて抽出されたものが好ましい。かかるローズマリー抽出物を含む本発明のインスリン抵抗性改善剤の効果は、本発明者の実験的知見により確認されている。
【００１９】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤の投与量としては、１日当たり１０ｍｇ／ｋｇ体重以上、５０ｍｇ／ｋｇ体重以下が好ましい。
【発明の効果】
【００２０】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤は、糖尿病などメタボリック・シンドロームをはじめとする生活習慣病の発症へと進行し得るインスリン抵抗性を改善することができる。また、その有効成分はリンゴ果実圧搾残渣とローズマリーエキスの混合物であるので、例えば、１日あたり複数回、恒常的に摂取することもできる。それにより、インスリン抵抗性の予防や軽減が可能になる。よって本発明は、近年における食生活の欧米化などにより問題となっている生活習慣病の原因の一つと言われているインスリン抵抗性を改善できるものとして、非常に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００２１】
【図１】図１は、食餌に加えて水のみを与えた対照群ラット（第１群，水対照群）、水の代わりに１０％果糖水を与えたラット（第２群，果糖対照群）、１０％果糖水に加えて本発明混合物１００ｍｇ／ｋｇ（第３群）または５００ｍｇ／ｋｇ（第４群）を経口投与したラット、１０％果糖水に加えてリンゴ果実圧搾残渣４５０ｍｇ／ｋｇを経口投与したラット（第５群）および１０％果糖水に加えてローズマリーエキス５０ｍｇ／ｋｇを経口投与したラット（第６群）の体重増加を示すグラフである。
【図２】図２は、上記第１〜６群ラットの空腹時血糖値（１）、空腹時インスリン値（２）および空腹時遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）値（３）を示すグラフである。図２中の「＊」は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）による有意差検定によりｐ＜０．０５で有意差が認められた場合を示す。
【図３】図３は、上記第１〜６群ラットの肝臓のインスリン抵抗性指数（ＨＯＭＡ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ、Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−ｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎｄｅｘ）（１）、および脂肪組織のインスリン抵抗性指数（Ａｄｉｐｏ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ、Ａｄｉｐｏｓｅｔｉｓｓｕｅｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ  ｉｎｄｅｘ）（２）を示すグラフである。図３中の「＊」は、分散分析（ＡＮＯＶＡ）による有意差検定によりｐ＜０．０５で有意差が認められた場合を示す。
【図４】図４は、上記第１〜６群ラットの肝臓の重量（１）、心臓の重量（２）および腎臓の重量（３）の変化を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００２２】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤は、有効成分として、リンゴ果実圧搾残渣およびローズマリー抽出物を含有することを特徴とする。
【００２３】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤の有効成分の一つであるリンゴ果実圧搾残渣の原料であるリンゴは、特に制限されないが、例えば、より一般的に食用に付されている西洋リンゴ（Ｍａｌｕｓ  ｐｕｍｉｌａ）の果実のみならず、和リンゴ（Ｍａｌｕｓ  ａｓｉａｔｉｃａ）の果実も用いることができる。また、使用するリンゴ果実の形態も特に制限されず、例えばカワ付きのまま用いることができるし、或いはカワを除去したもの、さらにカワと芯を除去したものなども用いることができる。
【００２４】
本発明において「リンゴ果実圧搾残渣」とは、リンゴを圧搾して果汁を除去した残り滓をいい、例えば、リンゴジュースの製造で得られる残り滓を利用することができる。ポリフェノールなど水溶性成分の大部分は果汁と共に除去されるため、その主要成分は不溶性の食物繊維である。「食物繊維」とは、食物に含まれているものであり、ヒトの消化酵素で分解されない不消化性または難消化性の成分をいい、主に、植物食物や菌類植物の細胞壁を構成する多糖類からなるものいう。なお、リンゴ果実圧搾残渣は、リンゴファイバーやアップルファイバーなどの製品名で、乾燥物などとして市販されていることがある。
【００２５】
本発明におけるリンゴ果実圧搾残渣は、リンゴを圧搾して果汁を除去した残り滓であればよく、例えば、リンゴ由来の食物繊維の他に水分、タンパク質、脂質、ミネラル、糖類、セラミド、ウルソール酸およびポリフェノールを含むものであってもよい。また、果汁を完全に除去することは難しいので、本発明で使用するリンゴ果実圧搾残渣に果汁の一部やその乾燥物が残留していてもよいものとする。本発明のリンゴ果実圧搾残渣によるインスリン抵抗性改善作用には、食物繊維以外の成分が寄与している可能性もあるので、リンゴ果実圧搾残渣における食物繊維の割合としては９０質量％以下が好ましく、８０質量％以下がより好ましく、７０質量％以下がさらに好ましく、６０質量％以下がさらに好ましく、５０質量％以下がさらに好ましい。一方、当該割合としては、１０質量％以上が好ましく、２０質量％以上がより好ましく、２５質量％以上がさらに好ましい。
【００２６】
リンゴ果実圧搾残渣の製造方法は特に制限されないが、例えば、リンゴジュースの製造などのためにリンゴ果実を圧搾した残渣を用いることができる。さらに、当該残渣を乾燥し、水分量を４質量％以上、１０質量％以下にしたものを用いてもよい。当該水分量は、例えば、常圧加熱乾燥法により測定することができる。
【００２７】
ローズマリー（Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，シソ科）は小型の常緑灌木で、厚い芳香性のある葉を持つ高さ約２ｍ程度のスパイス原料としてよく知られた植物である。地中海地方が原産とされ、アメリカ、イギリス、フランス、スペインなど世界中で栽培されている。ローズマリーに含まれる成分としては、油脂やフラボノイド類の他、フェノール性化合物、ウルソール酸などのトリテルペノイド化合物など多くの成分の報告が知られている。また、その抽出物による胆汁管や小腸への作用や、冠動脈の血流増加作用なども報告されている。ヨーロッパの植物療法では、ローズマリーの葉は消化不良やリウマチ、循環器系疾患に外用もされている。浴用剤としても用いられている。食品では、アルコール飲料、焼き菓子、冷凍乳製品、肉や肉製品調味料、薬味、加工野菜、スナック菓子、グレービーソースなど、多方面で使用されている。また、ハーブティーとして健胃効果を期待して用いられている薬草でもある。中国では葉や枝の抽出物が頭痛にも用いられている。
【００２８】
ローズマリー抽出物の原料部位としては、葉および／または枝が好ましく、葉がより好ましい。また、ローズマリーは香りの強い油脂成分を含むので、原料としてローズマリーの葉などを直接用いると、得られる抽出物の香りが強く服用し難いものになる場合があり得る。よって、ローズマリーオイルを製造した後の残渣など、油脂成分を水蒸気蒸留などで除去した後の残渣を原料として用いてもよい。
【００２９】
抽出溶媒としては、水溶性有機溶媒および水と水溶性有機溶媒との混合溶媒が好ましい。水溶性有機溶媒は特に制限されず、例えば、リンゴ圧搾残渣との組合せで優れたインスリン抵抗性改善作用を発揮できるローズマリー抽出物が得られるものを適宜選択すればよいが、例えば、メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、ｎ−ブタノール、イソブタノール、ｓ−ブタノール、ｔ−ブタノールのＣ1-4アルコール；ジエチルエーテルやテトラヒドロフランなどの水溶性エーテル系溶媒；ジメチルホルムアミドやジメチルアセトアミドなどの水溶性アミド系溶媒；ジメチルスルホキシドなどの水溶性スルホキシド溶媒を挙げることができる。これらの中でも、安全性などの面からＣ1-4アルコールが好ましく、Ｃ1-2アルコールがより好ましく、エタノールがさらに好ましい。
【００３０】
水と水溶性有機溶媒との混合溶媒を用いる場合、全体に対する水溶性有機溶媒の濃度は適宜調整すればよいが、例えば、５０ｖ／ｖ％以上とすることができ、６０ｖ／ｖ％以上が好ましく、７０ｖ／ｖ％以上がより好ましく、８０ｖ／ｖ％以上がさらに好ましく、９０ｖ／ｖ％以上が特に好ましい。上限は特に制限されないが、例えば、９９ｖ／ｖ％以下とすることができる。
【００３１】
抽出溶媒の使用量は特に制限されず、適宜調整すればよい。例えば、ローズマリーに対して、２質量倍以上、２０質量倍以下程度とすることができる。当該割合としては、５質量倍以上が好ましく、７質量倍以上がより好ましく、また、１５質量倍以下が好ましく、１２質量倍以下がより好ましい。
【００３２】
抽出温度も適宜調整することができ、例えば、１０℃以上、８０℃以下とすることができる。なお、溶媒の沸点以上で抽出する場合には、抽出容器を密閉するか、加圧することが好ましい。また、抽出溶媒を加熱還流してもよい。さらに、抽出温度は段階的に変更してもよい。
【００３３】
抽出時間も適宜調整することができ、例えば、合計で１時間以上、５０時間以下程度とすることができる。
【００３４】
抽出後の混合液は、そのまま用いることができるが、通常の後処理を行ってもよい。例えば、抽出残渣と抽出溶媒を濾過や遠心分離などにより分離したり、また、分離した抽出液を、加熱乾燥、減圧乾燥、凍結乾燥などを適宜組み合わせて乾燥してもよい。なお、加熱により乾燥する場合には、有効成分が分解しないよう６０℃以下、好ましくは５０℃以下で、減圧しつつ濃縮することが好ましい。
【００３５】
ローズマリー抽出物としては、ローズマリー由来の油脂成分を多く含むローズマリーオイルが有名であり一般的に市販もされているが、本発明者の実験的知見によれば、油脂成分を含まないローズマリー抽出物をリンゴ果実圧搾残渣と組み合わせることにより、顕著なインスリン抵抗性改善効果が得られた。よって、本発明で用いるローズマリー抽出物としては、油脂成分を含まないものが好ましい。
【００３６】
油脂成分を含まないローズマリー抽出物は、ローズマリーから水蒸気蒸留などにより油脂成分を除去した残渣を原料として抽出したり、また、特に油脂成分を除去しないまま抽出を行った場合には、主に油脂成分を除去するために部分精製してもよい。例えば、抽出液を濃縮したり、抽出液に貧溶媒を加えるなどして析出する不溶成分を濾別して洗浄すれば、主な油脂成分は常温で液体であるので除去することができる。但し、油脂成分を完全に除去するのは難しい場合があるので、本発明で用いるローズマリー抽出物に含まれる油脂成分の割合は、０．００１質量％以上、１０質量％以下とすることができ、０．０１質量％以上、５質量％以下が好ましく、０．１質量％以上、２質量％以下がより好ましく、１質量％以下がさらに好ましい。なお、本発明において「油脂成分」とは、一般的な脂肪酸とグリセリンとのエステルの他、リン脂質、長鎖脂肪酸、高級アルコールなどの水不溶性成分をいう。ローズマリーオイルには、ピネン、カンフェン、リモネンなどのモノテルペン炭化水素類が多く含まれる。
【００３７】
本発明におけるリンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物との割合は、インスリン抵抗性改善作用が発揮される範囲で適宜調整すればよいが、例えば、ローズマリー抽出物に対するリンゴ果実圧搾残渣の質量比を５倍以上、１５倍以下とすることができる。当該質量比としては、６倍以上が好ましく、７倍以上がより好ましく、８倍以上がさらに好ましく、また、１４倍以下が好ましく、１３倍以下がより好ましく、１２倍以下がさらに好ましい。なお、上記質量比は、リンゴ果実圧搾残渣またはローズマリー抽出物の乾燥度合いにより変化するので、リンゴ果実圧搾残渣およびローズマリー抽出物の水分含量を５質量％以上、６質量％以下に調整した上で算出するものとする。
【００３８】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤の剤形は特に問わない。例えば、リンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物の乾燥体を単に混合したものであってもよいし、リンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物が水に分散または溶解しているものであってもよい。また、ローズマリーの葉が入浴剤として用いられたり、ローズマリー由来の精油や抽出物が外用剤や、石鹸、化粧品などの香料として用いられることもあるが、後記の実施例のとおり本発明に係るインスリン抵抗性改善剤は経口投与で高い効果を示し、また、摂取や服用のし易さからも、経口剤とすることが好ましい。
【００３９】
経口製剤としては、特に制限されないが、例えば、錠剤、散剤、カプセル剤、糖衣錠、顆粒剤などを挙げることができる。本発明に係るインスリン抵抗性改善剤には、剤形に合わせ、薬学上許容される添加剤を用いてもよい。かかる添加剤としては、例えば、賦形剤、基剤、防腐剤、助剤、安定化剤、湿潤剤、ｐＨ調整剤、酸化防止剤、着色剤、甘味料などを挙げることができる。但し、本発明に係るインスリン抵抗性改善剤の有効成分であるリンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物の乾燥体は、賦形剤などを添加しなくても造粒可能である。また、懸濁液を飲料にしてもよいし、一般的な食餌に添加してもよい。
【００４０】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤は、ヒトに加えて、ヒト以外の動物にも投与可能である。但し、好適にはヒトに対して用いる。
【００４１】
本発明に係るインスリン抵抗性改善剤の投与頻度や投与量は、患者の症状、年齢、性別、状態などに応じて適宜調整すればよい。後記の動物実験データに基づけば、例えばヒトに対する投与量は、乾燥状態のリンゴ果実圧搾残渣−ローズマリー抽出物混合物で、１日当たり１０ｍｇ／ｋｇ体重以上、５０ｍｇ／ｋｇ体重以下程度とすることが好ましく、１５ｍｇ／ｋｇ体重以上、４０ｍｇ／ｋｇ体重以下程度とすることがより好ましい。また、一日当たりの投与回数としては、１回以上、５回以下が好ましく、１回以上、３回以下がより好ましい。
【実施例】
【００４２】
以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はもとより下記実施例によって制限を受けるものではなく、前・後記の趣旨に適合し得る範囲で適当に変更を加えて実施することも勿論可能であり、それらはいずれも本発明の技術的範囲に包含される。
【００４３】
実施例１：  本発明に係るリンゴ圧搾残渣：ローズマリー抽出物混合物の調製
和リンゴ（Ｍａｌｕｓ  ａｓｉａｔｉｃａ）および西洋リンゴ（Ｍａｌｕｓ  ｐｕｍｉｌａ）の果実を圧搾してリンゴジュースを製造する際に生じる圧搾残渣（株式会社秋田ニューバイオファームより恵与）を常圧下、９０℃で３日間温風乾燥し、水分量を５〜６質量％の範囲に調整することによりリンゴ果実圧搾残渣を得た。
【００４４】
得られたリンゴ果実圧搾残渣の組成分析を、一般財団法人日本食品分析センターに依頼した。結果を表１に示す。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
上記結果のとおり、得られたリンゴ果実圧搾残渣には食物繊維が約３０質量％含まれていた。また、ペクチンが約１０〜２０質量％含まれていた。
【００４７】
また、健康食品素材として市販されている粉末状ローズマリー抽出物（サビンサジャパン・コーポレーション製，製品名「Ｒｏｓｅｍａｒｙ  ｅｘｔｒａｃｔ」）を購入して用いた。当該抽出物は、溶媒としてエタノールを用いてローズマリー葉から加温抽出されたものであり、油脂成分が除去されたものである。
【００４８】
マウスを使った予備実験の結果、食餌内容や運動量などを特に指定や制限することなく飼育した場合には、リンゴ果実圧搾残渣：ローズマリー抽出物の混合割合が質量比で１０：１の混合物が最もインスリン抵抗性改善作用が優れていることが認められた。よって、上記リンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物を１０：１（質量比）で混合した混合物を、以下の実験で用いた。
【００４９】
実施例２：  実験動物を用いたインスリン抵抗性改善作用試験
体重約１７０ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（以下「ＳＤラット」という）（重慶医科大学実験動物センター（中国）より入手）を、室温２１±１℃、湿度５５±５％の条件下、１２時間毎明暗の飼育室中、通常飼料（重慶医科大学動物センター（中国）より入手）と水を自由に摂取させつつ１週間予備飼育した。
【００５０】
上記のとおり予備飼育した５１匹のＳＤラットを任意に６匹と４５匹に分け、６匹は水対照群（第１群）とし、予備飼育と同様の条件で飼育を継続した。残り４５匹は、水の代わりに１０％果糖水を用いた以外は同様の条件で１３週間飼育した。次いで、果糖水を用いて飼育した４５匹を９匹ずつの５グループに任意に分けて第２〜６群とした。第２群（果糖対照群）には１０％果糖水を継続して与えた。第３群には、１０％果糖水に加え、上記実施例１の本発明混合物１００ｍｇ／ｋｇを与えた。第４群には、１０％果糖水に加え、本発明混合物５００ｍｇ／ｋｇを与えた。第５群（リンゴ果実圧搾残渣対照群）には、１０％果糖水に加え、上記リンゴ果実圧搾残渣のみを４５０ｍｇ／ｋｇ（本発明混合物５００ｍｇ中の含有量に相当）与えた。第６群（ローズマリーエキス対照群）には、１０％果糖水に加え、上記ローズマリーエキスのみを５０ｍｇ／ｋｇ（本発明混合物５００ｍｇ中の含有量に相当）与えた。本発明混合物、リンゴ果実圧搾残渣およびローズマリーエキスは、５％アラビアゴム水溶液に懸濁し、ラット用ゾンテを用いて４週間にわたり毎日経口投与した。
【００５１】
各群のＳＤラットには、上記飼育期間中、固形飼料と水または１０％果糖水を自由に摂取させた。ストレスを避け、より精密に果糖の摂取を監視するため、１ゲージあたり２匹または１匹ずつ飼育した。飼育中、水または果糖水と飼料の摂取量を毎日測定した。４週目の終わりに一晩絶食させたが、水は自由に摂取させた。
【００５２】
上記飼育後、各ＳＤラットをエーテルで麻酔し、ヘパリンで抗凝固し、血液サンプルを採取した。血液サンプルから血漿を分離し、血糖値、インスリン値および遊離脂肪酸（ＮＥＦＡ）値を測定した。血糖値の測定は中国上海科欣生物技術研究所に依頼し、インスリン値の測定は株式会社森永生化学研究所に依頼し、遊離脂肪酸値は和光純薬工業株式会社に依頼した。また、肝臓のインスリン抵抗性指数はＨＯＭＡ−ＩＲ（Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ  ｍｏｄｅｌ  ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ−Ｉｎｓｕｌｉｎ  Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）Ｉｎｄｅｘ：［空腹時インスリン値（μＩＵ／ｍＬ）×空腹時血糖値（ｍｍｏｌ／Ｌ）］／２２．５を用いて求めた。脂肪組織のインスリン抵抗性指数は、Ａｄｉｐｏ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ：空腹時インスリン値（ｍｍｏｌ／Ｌ）×空腹時遊離脂肪酸値（ｐｍｏｌ/Ｌ）を用いて求めた。上記測定後、水、果糖水および検体投与を再開し、１週間後に水のみ自由摂取させつつ一晩絶食させ、各ラットの体重を測定し、エーテル麻酔のもと殺し、各臓器の重量を測定した。
【００５３】
図１に飼育期間中の体重変化を示す。図２（１）に空腹時血糖値、図２（２）に空腹時インスリン値、図２（３）に空腹時ＮＥＦＡ値を示す。図３（１）に肝臓のインスリン抵抗性指数（ＨＯＭＡ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ）、図３（２）に脂肪組織のインスリン抵抗性指数（Ａｄｉｐｏ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ）を示す。図４に各臓器の重量の変化を示す。なお、各実験データ分析における有意差検定は、統計ソフトＳｔａｔＶｉｅｗ（ＳＡＳ社，Ｖｅｒｓｉｏｎ５．０．１）を用いてＡＮＯＶＡで求めた。各図中における「＊」は、ＡＮＯＶＡによる有意差検定によりｐ＜０．０５で有意差が認められた場合を示す。
【００５４】
図１のとおり、各群において体重増加に有意な差は見られなかった。図２（１）のとおり、絶食後の空腹時血糖値は果糖対照群（第２群）に対し、本発明混合物５００ｍｇ／ｋｇ投与群（第４群）では有意に低減した。本発明混合物１００ｍｇ／ｋｇ投与群（第３群）、リンゴ果実圧搾残渣４５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第５群）、ローズマリーエキス５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第６群）では有意な変化は見られなかった。また、図２（２）のとおり、空腹時インスリン値は、水対照群（第１群）に対して果糖対照群（第２群）では有意に上昇した。本発明混合物１００ｍｇ／ｋｇ投与群（第３群）または５００ｍｇ／ｋｇ投与群（第４群）のラットでは、どちらも果糖対照群（第２群）に対してインスリン値を有意に低減させた。一方、リンゴ果実圧搾残渣４５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第５群）およびローズマリーエキス５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第６群）では、果糖対照群（第２群）に対し、有意な作用は見られなかった。図２（３）のとおり、空腹時ＮＥＦＡ値は水対照群（第１群）に対して果糖対照群（第２群）では有意に上昇した。本発明混合物、リンゴ果実圧搾残渣のみ、ローズマリーエキスのみのいずれも、ＮＥＦＡ値には影響を与えなかった。図３（１〜２）のとおり、肝臓のインスリン抵抗性指数を表すＨＯＭＡ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘの値は、水対照群（第１群）に対し果糖対照群（第２群）では有意に上昇したが、本発明混合物１００ｍｇ／ｋｇ投与群（第３群）および本発明混合物５００ｍｇ／ｋｇ投与群（第４群）のラットではいずれもＨＯＭＡ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘが有意に下降した。ＨＯＭＡ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ値は、日本人では２．５以上であればインスリン抵抗性があるということになり、１．６未満が正常値である。従って、本発明混合物を投与したラットでは正常値近くまでＨＯＭＡ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘ値が低減したということになる。一方、リンゴ果実圧搾残渣４５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第５群）およびローズマリーエキス５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第６群）では果糖対照群に対し有意な作用が見られなかった。また、図３（２）のとおり脂肪組織のインスリン抵抗性を表すＡｄｉｐｏ−ＩＲ  Ｉｎｄｅｘの値は、水対照群（第１群）に対して果糖対照群（第２群）では有意に上昇したが、本発明混合物１００ｍｇ／ｋｇ投与群（第３群）および本発明混合物５００ｍｇ／ｋｇ投与群（第４群）のラットでは、いずれも果糖対照群に対して有意に低減された。一方、リンゴ果実圧搾残渣４５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第５群）およびローズマリーエキス５０ｍｇ／ｋｇのみ投与群（第６群）では果糖対照群（第２群）に対し有意な作用が見られなかった。
【００５５】
以上の結果から、本発明混合物は、リンゴ果実圧搾残渣のみまたはローズマリー抽出物のみでは効果が見られないのに対して、果糖による肝臓および脂肪組織のインスリン抵抗性を改善することが分かった。従って、インスリン抵抗性に対し、リンゴ果実圧搾残渣とローズマリー抽出物との組み合わせは相乗効果があるといえる。また、図４のとおり、肝臓の重量（１）、心臓の重量（２）、腎臓の重量（３）の変化に有意差はなかった。
【００５６】
以上の結果のとおり、本発明によりリンゴ果実圧搾残渣とローズマリーエキスとの混合物を投与した場合には、果糖負荷による血中インスリン濃度の上昇や、肝臓および脂肪組織のインスリン抵抗性の値の上昇に対し、正常値（対照群）に近い値まで有意に低減し、改善させた。しかしリンゴ果実圧搾残渣のみの投与およびローズマリーエキスのみの投与では、上記の値にほとんど影響は見られなかった。かかる結果から、インスリン抵抗性の改善のためには、あくまでリンゴ果実圧搾残渣とローズマリーエキスの両方を含む混合物を用いることが有効であることが見出された。従って、本発明に係るインスリン抵抗性改善剤では、リンゴジュースに用いた果実の圧搾残渣やローズマリーオイルの抽出物残渣のアルコールエキスといういわば産業廃棄物の組み合わせが、インスリン抵抗性を正常値近くまで有意に低減させることが実験的に証明され、産業有用性の高い発明と言える。
【００５７】
実験動物での結果から、インスリン抵抗性改善効果の期待される本発明品に係る混合物の用量は、従来の医薬品開発の動物実験における基礎データとヒトへの臨床試験への移行数値を考えると、ヒトでは５００ｍｇ以上、１０００ｍｇ以下、１日２回程度で有効と推定される。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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