(57)【要約】      （修正有）【課題】老化抑制効果、美白効果を有する化粧料、医薬等に応用することができる新規なＣ−配糖体化合物、及び該化合物を含有する老化抑制剤、コラーゲン遺伝子であるＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤、美白剤並びにメラニン産生抑制剤。【解決手段】下式の化合物を代表例とする新規なＣ−配糖体化合物、及び該化合物を含有する老化抑制剤、ＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤、美白剤並びにメラニン産生抑制剤。2016222571.tif 000020【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、及び（Ｂ−２）で表されるＣ−配糖体化合物。
【化１】
2016222571.tif 000019
（式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、及び（Ｂ−２）中、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はヒドロキシル基の保護基を、ｋは１〜３の整数を表す。）
【請求項２】
請求項１に記載のＣ−配糖体化合物を含有する老化抑制剤。
【請求項３】
請求項１に記載のＣ−配糖体化合物を含有するＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤。
【請求項４】
請求項１に記載のＣ−配糖体化合物を含有する美白剤。
【請求項５】
請求項１に記載のＣ−配糖体化合物を含有するメラニン産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ−配糖体化合物に関し、より詳しくは老化抑制剤や美白剤として利用することができる特定のＣ−配糖体化合物に関する。
【背景技術】
【０００２】
チャフロサイドは、フラボン誘導体の一種であるフラボンＣ−配糖体であり、抗酸化作用、抗アレルギー作用、抗炎症作用などが知られている。チャフロサイドは、ウーロン茶から単離される化合物であることが知られており、その構造式も決定されている（特許文献１参照）。
【０００３】
また、チャフロサイド類を製造するために経由する前駆体として、硫酸化Ｃ−配糖体が報告されており、加熱処理によりチャフロサイドへ変換可能であることが開示されている（特許文献２参照）。
【０００４】
一方でチャフロサイドの新たな用途が提案されており、チャフロサイドＢが美白効果、メラニン生成抑制効果を有し、化粧料や飲料などに適用可能であることが開示されている（特許文献３参照）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開２００４／００５２９６パンフレット
【特許文献２】国際公開２０１０／０７６８７９パンフレット
【特許文献３】国際公開２０１２／１４１２５５パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
チャフロサイドのように茶葉等に含まれる化合物の中には、工業的価値を秘めた未知の化合物が依然として存在するものと考えられる。
本発明は、新規な化合物、特に化粧料等に応用することができる新規な化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、茶等の植物に新規なＣ−配糖体化合物が含まれていることを明らかとするとともに、この化合物が老化抑制作用や美白作用に優れていることを見出し、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、本発明は以下の通りである。
＜１＞ 下記式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、又は（Ｂ−２）で表されるＣ−配糖体化合物。
【化１】
2016222571.tif 000002
（式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、及び（Ｂ−２）中、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はヒドロキシル基の保護基を、ｋは１〜３の整数を表す。）
＜２＞ ＜１＞に記載のＣ−配糖体化合物を含有する老化抑制剤。
＜３＞ ＜１＞に記載のＣ−配糖体化合物を含有するＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤
＜４＞ ＜１＞に記載のＣ−配糖体化合物を含有する美白剤。
＜５＞ ＜１＞に記載のＣ−配糖体化合物を含有するメラニン産生抑制剤。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、優れた老化抑制剤及び美白剤を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】実施例１で得られた目的物１の1Ｈ−ＮＭＲチャートである。
【図２】実施例１で得られた目的物１の13Ｃ−ＮＭＲチャートである。
【図３】実施例１で得られた目的物１のＤＥＰＴのチャートである。
【図４】実施例１で得られた目的物１のＨＭＢＣのチャートである。
【図５】実施例２で得られたメチル化体２の1Ｈ−ＮＭＲチャートである。
【図６】実施例２で得られたメチル化体２の13Ｃ−ＮＭＲチャートである。
【図７】実施例２で得られたメチル化体２のＨＭＢＣのチャートである。
【図８】実施例１で得られた目的物１、カラベニエキス（濃度：５０μｇ／ｍＬ）、コガネミドリエキス（濃度：５０μｇ／ｍＬ）、ＤＭＳＯを添加したときのＣＯＬ４Ａ１のｍＲＮＡ発現量を比較したグラフである。
【図９】実施例１で得られた目的物１、カラベニエキス（濃度：１００μｇ／ｍＬ）、コガネミドリエキス（濃度：１００μｇ／ｍＬ）、ＤＭＳＯを添加したときのＣＯＬ４Ａ１のｍＲＮＡ発現量を比較したグラフである。
【図１０】実施例１で得られた目的物１、カラベニエキス、コガネミドリエキスを各濃度で添加したときのメラニン量を比較したグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
以下、本発明について説明するが、本発明の技術的範囲は、以下の具体的な実施形態にのみ限定されるものではない。
【００１２】
＜Ｃ−配糖体化合物＞
本発明の一態様であるＣ−配糖体化合物（以下、「本発明の化合物」と略す場合がある。）は、下記式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、又は（Ｂ−２）で表される化合物である。
【化２】
2016222571.tif 000003
（式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、及び（Ｂ−２）中、Ｒはそれぞれ独立して水素原子又はヒドロキシル基の保護基を、ｋは１〜３の整数を表す。）
本発明者らは、化粧料等に応用することができる有用な新規化合物を求めて検討を重ねた結果、茶等の植物に式（Ａ−１）等で表される新規なＣ−配糖体化合物が含まれることを明らかとし、さらにこの化合物がコラーゲン遺伝子であるＣＯＬ４Ａ１の発現亢進作用やメラニン産生抑制作用を奏し、老化抑制剤や美白剤として利用することができることを見出したのである。
なお、式（Ａ−１）で表される化合物及び式（Ａ−１）’で表される化合物は、２つのベンゼン環の間にエノール構造を、（Ａ−２）で表される化合物はβ−ジケトン構造を有しており、式（Ａ−１）で表される化合物及び式（Ａ−１）’で表される化合物と式（Ａ−２）で表される化合物とは、ケト−エノール互変異性体の関係にある化合物である。また、式（Ｂ−１）で表される化合物及び式（Ｂ−２）で表される化合物は、式（Ａ−１）
で表される化合物、式（Ａ−１）’で表される化合物、又は式（Ａ−２）で表される化合物内の環化付加反応によって生成する化合物であり、閉環（環化）反応と開環反応が可逆的に生じるため、式（Ａ−１）で表される化合物、式（Ａ−１）’で表される化合物、及び式（Ａ−２）で表される化合物と互換可能な化合物なのである。
【化３】
2016222571.tif 000004
【００１３】
本発明の化合物は、式（Ａ−１）、（Ａ−１）’、（Ａ−２）、（Ｂ−１）、又は（Ｂ−２）で表される化合物であるが、具体的な種類は特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができる。以下、具体例を挙げて説明する。
式中のＲは、水素原子又はヒドロキシル基の保護基を表しているが、保護基の種類は特に限定されず、ヒドロキシル基の保護基として公知のものを適宜選択することができる。具体的には、メチル基、ベンジル基、ｐ−メトキシベンジル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、テトラヒドロピラン等のエーテル系保護基；アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基等のアシル系保護基；トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル基等のシリルエーテル系保護基；トシル基等のスルホン酸エステル系保護基等が挙げられる。
本発明の化合物として、下記式で表される化合物が例示できる。
【化４】
2016222571.tif 000005
【００１４】
本発明の化合物の調製方法は、特に限定されず、公知の有機合成反応を組み合わせて合成するほか、植物等から抽出することが挙げられる。
以下、本発明の化合物の合成方法及び抽出方法について、具体例を挙げて詳細に説明する。
合成方法としては、下記式で表されるように、グルコース構造とアセトフェノン構造を有するＣ−配糖体を準備し、これとアルコキシベンゾイルクロライドを反応させる方法が挙げられる。
【化５】
2016222571.tif 000006
【００１５】
抽出方法としては、浸漬法、向流抽出法、超臨界抽出法等が挙げられる。
抽出に使用する植物としては、ツバキ科ツバキ属チャ、タデ科ソバ属ソバ、ショウブ科ショウブ属ショウブ等が挙げられる。なお、抽出に使用する部位は、特に限定されず、例えばツバキ科ツバキ属チャから抽出する場合、葉、芽等が挙げられる。また、茶葉を使用する場合、茶葉は原料茶葉に限られず、発酵茶や半発酵茶を使用することもできる。発酵茶の品種としては、ダージリン、ウバ、キーマン、カラベニ、インド等が、半発酵茶の品種としては、鉄観音、色種、黄金桂、水仙、武威水仙、武夷岩茶、鳳凰水仙、白葉、蜜蘭香、芝蘭香、四季春、宋種等が挙げられる。
抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、プロパノール等の低級アルコール類、オレイルアルコール、ステアリルアルコール、オクチルドデカノール等の高級アルコール類、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール類、酢酸エチル、酢酸ブチル、プロピオン酸メチル等のエステル類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類、エチルエーテル、イソプロピルエーテル等のエーテル類、ｎ−ヘキサン、トルエン、クロロホルム等の炭化水素系溶媒等が挙げられる。
抽出温度は、通常１℃以上、好ましくは２℃以上であり、通常１００℃、好ましくは８０℃以下である。
抽出時間は、通常１時間以上、好ましくは１５時間以上であり、通常７日間以下、好ましくは１日以下である。
【００１６】
本発明の化合物の用途は、特に限定されないが、後述する実施例の結果からも明らかなように、本発明の化合物はコラーゲン遺伝子ＣＯＬ４Ａ１（コラーゲンＩＶのｍＲＮＡ）の発現亢進作用とメラニン産生抑制作用を示す。従って、本発明の化合物を含有する組成物は、ＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤（以下、「本発明のＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤」と略す場合がある。）、より具体的な用途として老化抑制剤（以下、「本発明の老化抑制剤」と略す場合がある。）として利用することが挙げられる。また、本発明の化合物を含有する組成物は、メラニン産生抑制剤（以下、「本発明のメラニン産生抑制剤」と略す場合がある。）、より具体的な用途として美白剤（以下、「本発明の美白剤」と略す場合がある。）として利用することが挙げられる。
【００１７】
本発明のＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤、老化抑制剤、メラニン産生抑制剤、及び美白剤は、前述のＣ−配糖体化合物を含有するものであれば、その他は特に限定されず、化粧料等に利用される公知の成分を含有するものであってもよい。化粧料等に利用される公知の成分としては、例えば、マカデミアナッツ油、アボカド油、トウモロコシ油、オリーブ油、ナタネ油、ゴマ油、ヒマシ油、サフラワー油、綿実油、ホホバ油、ヤシ油、パーム油、液状ラノリン、硬化ヤシ油、硬化油、モクロウ、硬化ヒマシ油、ミツロウ、キャンデリラロウ、カルナウバロウ、イボタロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、ホホバロウ等のオイル、ワックス類；流動パラフィン、スクワラン、プリスタン、オゾケライト、パラフィン、セレシン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類；オレイン酸、イソステアリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、ウンデシレン酸等の高級脂肪酸類；オクチルドデカノール、ミリスチルアルコール、セトステアリルアルコール等の高級アルコール類；イソオクタン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、イソステアリン酸ヘキシルデシル、アジピン酸ジイソプロピル、セバチ
ン酸ジ−２−エチルヘキシル、乳酸セチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ジ−２−エチルヘキサン酸エチレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジ−２−ヘプチルウンデカン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセリン、トリ−２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ−２−エチルヘキサン酸ペンタンエリトリット等の合成エステル油類；ジメチルポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、ジフェニルポリシロキサン等の鎖状ポリシロキサン；オクタメチルシクロテトラシロキサン、デカメチルシクロペンタシロキサン、ドデカメチルシクロヘキサンシロキサン等の環状ポリシロキサン；アミノ変性ポリシロキサン、アルキル変性ポリシロキサン、フッ素変性ポリシロキサン等の変性ポリシロキサン等のシリコーン油等の油剤類；脂肪酸セッケン（ラウリン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム等）、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル等のアニオン界面活性剤類；塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤類；イミダゾリン系両性界面活性剤（２−ココイル−２−イミダゾリニウムヒドロキサイド−１−カルボキシエチロキシ２ナトリウム塩等）、ベタイン系界面活性剤（アルキルベタイン、アミドベタイン、スルホベタイン等）、アシルメチルタウリン等の両性界面活性剤類；ポリエチレングリコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、エリスリトール、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ジグリセリン、イソプレングリコール、１，２−ペンタンジオール、２，４−ヘキサンジオール、１，２−ヘキサンジオール、１，２−オクタンジオール等の多価アルコール類；ピロリドンカルボン酸ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム等の保湿成分類；パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤；２−（２’−ヒドロキシ−５’−ｔ−オクチルフェニル）ベンゾトリアゾール、４−メトキシ−４’−ｔ−ブチルジベンゾイルメタン等の紫外線吸収剤類；エタノール、イソプロパノール等の低級アルコール類；ビタミンＡ又はその誘導体、ビタミンＢ6塩酸塩、ビタミンＢ6トリパルミテート、ビタミンＢ6ジオクタノエート、ビタミンＢ2又はその誘導体、ビタミンＢ12、ビタミンＢ15又はその誘導体等のビタミンＢ類；α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ピロロキノリンキノン等のビタミン類等；フェノキシエタノール等の抗菌剤、保湿剤、水溶性高分子、皮膜剤、金属イオン封鎖剤、アミノ酸、有機アミン、高分子エマルジョン、ｐＨ調整剤、皮膚栄養剤、酸化防止剤、酸化防止助剤、防腐剤、香料等が挙げられる。
【００１８】
本発明のＣＯＬ４Ａ１発現亢進剤、老化抑制剤、メラニン産生抑制剤、及び美白剤におけるＣ−配糖体化合物を含有量は、特に限定されず、目的に応じて適宜選択することができるが、通常０．０１質量％以上、好ましくは０．１質量％以上、より好ましくは１質量％以上であり、通常１０質量％以下、好ましくは８質量％以下、より好ましくは５質量％以下である。
【実施例】
【００１９】
以下に実施例及び比較例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の趣旨を逸脱しない限り適宜変更することができる。従って、本発明の範囲は以下に示す具体例により限定的に解釈されるべきものではない。
【００２０】
＜実施例１：Ｃ−配糖体化合物の抽出１と目的物１の化学構造の決定＞
ツバキ科ツバキ属チャの茶葉（品種：カラベニ）の微粉末１００ｇに５０％メタノール水溶液を加えて、５０℃で１５分間加熱下攪拌して、茶葉の抽出物を得た。得られた抽出物を芳香族系ダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィー（４００ｍＬ，５５％メタノール水溶液）を用いて分画とし、得られた目的物質が多く含まれる分画
をＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（２０×１５０ｃｍ，４７１ｍＬ，メタノール）を用いて精製した。さらに精製した分画から高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ  Ｃ３０−ＵＧ−５（２５０×２０ｍｍ，１６％ＣＨ3ＣＮ−２０ｍＭ ＨＣＯ2ＮＨ4（４：２１））を用いて目的物１を約０．５ｍｇ得た。なお、目的物質の分離精製は、分離の各段階で得た分画の中で、それらの一定量に少量の蟻酸を添加した後加熱でビテキシンとイソビテキシンが多く生成するものを次の分離に供する方法で行った。
【００２１】
（１）得られた目的物１の化学構造を決定するために、ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅで高分解能質量分析を行ってまず分子式を決定した。結果、理論値：４４９．１０８９４（実測値：４４９．１０９６）となり、分子式はＣ21Ｈ22Ｏ11（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ
ｆｏｒ  Ｃ21Ｈ21Ｏ11-）と決定できた。
（２）次に得られた目的物１に対して、酸処理（希塩酸を含むメタノール溶液に溶解）を行った。結果、水の生成を確認するとともに、公知の化合物であるビテキシンとイソビテキシンが生成していることが確認された。なお、得られた目的物１からは、酸処理を行わなくても室温下で徐々にビテキシンとイソビテキシンが生成することも確認した。
【化６】
2016222571.tif 000007
（３）次に溶媒として重メタノール（ＣＤ3ＯＤ）を使用して、低温条件（−６０℃）にてＮＭＲ測定（1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＤＥＰＴ、ＨＭＢＣ、ＮＯＥＳＹ）を行った。1Ｈ−ＮＭＲのチャートを図１に、13Ｃ−ＮＭＲのチャートを図２に、ＤＥＰＴのチャートを図３に、ＨＭＢＣのチャートを図４に示す。
ＮＭＲ測定の結果から、メタノール中では下記式で表される４種類（２位のヒドロキシル基（−ＯＨ）に関する立体異性体を含めた４種類）のＣ−配糖体化合物が混合した状態で存在するものと考えられる。なお、化学シフト値と帰属結果を表１、２に示す。
【化７】
2016222571.tif 000008
【表１】
2016222571.tif 000009
【表２】
2016222571.tif 000010
【００２２】
なお、確認できた帰属は、下記式の太線部分の構造にとどまり、例えば３位のメチレン基に該当するプロトンと一部の炭素のシグナルピークは確認することができなかった。
【化８】
2016222571.tif 000011
これは、下記式に示すように閉環（環化）反応と開環反応が可逆的に生じ、ＮＭＲ測定
の温度条件である−６０℃においても、この互変異性化反応が高速で進行しているためであると考えられる。
【化９】
2016222571.tif 000012
また、開環した状態の化合物のケト−エノール互変異性により、ＮＭＲの測定用サンプル内でメチレン基の水素原子が重メタノールの重水素原子に置換され、その結果、環化した生成物の３位に重水素が導入されるためであると考えられる。
【化１０】
2016222571.tif 000013
なお、（２）の酸処理では、下記式に示されるように、環化した生成物の２位のヒドロ
キシル基が脱離する脱水反応により、ビテキシンとイソビテキシンがそれぞれ生成したものと考えられる。
【化１１】
2016222571.tif 000014
【００２３】
＜実施例２：Ｃ−配糖体化合物のメチル化とメチル化体２の化学構造の決定＞
次に目的物１（約４ｍｇ）をメタノールとエーテルの混合溶媒中で過剰量のジアゾメタン（ＣＨ2Ｎ2）に室温で一夜さらし、目的物１のフェノール性のヒドロキシル基をメチル化したメチル化体２を得た。尚、精製は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）Cadenza CD C−１８（２５０×１０ｍｍ，ＣＨ3ＯＨ−０．１％ＨＣＯ2Ｈ（５：４ to ８：２））で行った。
【００２４】
（１）得られたメチル化体２の化学構造を決定するために、ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ高分解能質量分析を行って分子式を決定した。結果、理論値：４９１．１５５９（実測値：４９１．１５４７）となり、分子式はＣ24Ｈ28Ｏ11（ｎｅｇａｔｉｖｅ  ｍｏｄｅ  ｆｏｒ  Ｃ24Ｈ27Ｏ11-）と決定した。
（２）次に溶媒として重ＤＭＳＯ（（Ｄ3Ｃ）2Ｓ＝Ｏ）を使用して、室温条件にてＮＭＲ測定（1Ｈ−ＮＭＲ、13Ｃ−ＮＭＲ、ＨＭＢＣ、ＮＯＥＳＹ）を行った。1Ｈ−ＮＭＲのチャートを図５に、13Ｃ−ＮＭＲのチャートを図６に、ＨＭＢＣのチャートを図７に示す。
ＮＭＲ測定の結果から、下記式で表される２種類のＣ−配糖体化合物が混合した状態で存在するものと考えられる。なお、化学シフト値と帰属結果を表３、４に示す。
【化１２】
2016222571.tif 000015
【表３】
2016222571.tif 000016
【表４】
2016222571.tif 000017
以上の解析の結果から、実施例１で得られた目的物１には、下記式で表されるＣ−配糖体化合物群が含まれているものと結論した。
【化１３】
2016222571.tif 000018
なお、上側と下側のＣ−配糖体化合物は互換可能であり、さらに下側のＣ−配糖体化合物の方がより安定で、目的物１の主成分であると考えられる。これは、メチル化体２におけるメチル化されていないフェノール性のヒドロキシル基の位置から推測することができる。即ち、閉環（環化）した下側のＣ−配糖体化合物の状態においてメチル化されたため、閉環（環化）に利用されたフェノール性のヒドロキシル基のみがメチル化されず、その後の開環反応によってフェノール性のヒドロキシル基に回帰してメチル化体２が得られたものと考えられる。
【００２５】
＜実施例３：Ｃ−配糖体化合物の抽出２＞
有限会社田島農園のタデ科ソバ属ソバスプラウト（３日目）を乾燥させ、粉末にしたもの２０ｇを、５０％メタノールに４０℃で２０分間撹拌し、抽出を行った。得られた目的物を多く含む分画のみを芳香族系ダイヤイオン（登録商標）ＨＰ−２０カラムクロマトグラフィー（４００ｍＬ，５５％メタノール水溶液）を用いて精製後、さらに得た目的物高含有分画のみをＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラムクロマトグラフィー（２０×1５０ｃｍ，４７１ｍＬ，メタノール）用いて精製した。このようにして得た高純度の目的物を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）ＵＫＣ１８（２５０×１０ｍｍ，ＣＨ3ＣＮ−ＭｅＯＨ−２０ｍＭ  ＨＣＯ2ＮＨ4（１：１：８ to ２：２：６，１７ｍｉｎ））を用いて精製し、上記と同じ化合物を約２ｍｇ得た。なお、目的物質は、蟻酸の存在下の加熱でビテキシンとイソビテキシンを与える化合物とした。
【００２６】
＜老化抑制作用の評価＞
実施例１で得られた目的物１の老化抑制作用を評価するため、以下の試験を行った。
表皮角化細胞に、目的物１、ツバキ科ツバキ属チャの茶葉のエキスであるカラベニエキス、コガネミドリエキスをそれぞれ５０μｇ／ｍＬの濃度で添加し、２４時間培養した後、加齢により減少することが知られているコラーゲンIVのｍＲＮＡ（ＣＯＬ４Ａ１）の発現量を測定した。なお、この濃度では、細胞毒性がないことを確認している。また、ｍＲＮＡ発現量は、内在性コントロールＳＤＨＡのｍＲＮＡ発現量で補正し、溶媒対照群(ＤＭＳＯ)を１として相対値を算出した。結果を図８に示す。
同様に、表皮角化細胞に目的物１を５０μｇ／ｍＬ、カラベニエキス、コガネミドリエキスをそれぞれ１００μｇ／ｍＬの濃度で添加し、２４時間培養した後、それぞれのＣＯＬ４Ａ１のｍＲＮＡ発現量を測定した結果を図９に示す。
図８、９より、目的物１、カラベニエキス、及びコガネミドリエキスは、対照群であるＤＭＳＯと比較して、高いＣＯＬ４Ａ１のｍＲＮＡ発現量を示し、老化抑制作用が期待で
きることが明らかとなった。また、目的物１は、カラベニエキス及びコガネミドリエキスに比べ、低濃度で同程度の高いＣＯＬ４Ａ１のｍＲＮＡ発現量を示した。
【００２７】
＜メラニン産生抑制作用の評価＞
２４ウェルプレートにヒトメラノサイト（ＮＨＥＭ（Ｄ）；クラボウ製）を６×１０4ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種し、ＣＯ2インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ2、水蒸気飽和）に入れ培養した。１日経過後、目的物１、また比較例としてカラベニエキス、コガネミドリエキスをそれぞれ含む培地を作製し、培地交換することでこれらの成分を添加した。次に２−〔２−14Ｃ〕チオウラシルを０．２５μＣｉ／ｗｅｌｌ添加した。３日経過後、ＷＳＴ−８試薬を用いて細胞数を測定した後に細胞を回収し、細胞内に取り込まれた２−［２−14Ｃ］チオウラシルの放射活性を測定することでメラニン量とした。また、細胞数およびメラニン量は、溶媒対照群（０μｇ／ｍＬ）を１として相対値を算出した。結果を図１０に示す。
図１０より目的物１は、カラベニ及びコガネミドリのエキスよりも高いメラニン産生抑制作用が認められた。特に、１００μｇ／ｍＬ添加時のメラニン産生抑制作用は顕著に目的物１で高い値を示した。
【産業上の利用可能性】
【００２８】
本発明の化合物は、化粧料、医薬、食品への応用することが可能である。
【図１】
2016222571.tif 000021
【図２】
2016222571.tif 000022
【図３】
2016222571.tif 000023
【図４】
2016222571.tif 000024
【図５】
2016222571.tif 000025
【図６】
2016222571.tif 000026
【図７】
2016222571.tif 000027
【図８】
2016222571.tif 000028
【図９】
2016222571.tif 000029
【図１０】
2016222571.tif 000030