(57)【要約】      （修正有）【課題】がん細胞の移動を阻害することにより、効果的にがんを予防又は治療することが可能な化合物を有効成分として含む、がんの予防又は治療用薬学組成物の提供。【解決手段】下式で示される（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がんの予防又は治療用薬学組成物。該組成物は、ＤＮＡアルキル化剤、抗がん性抗生物質及び植物アルカロイド等の他の抗がん剤をさらに含むことが好ましい。2016094389.tif 000008【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（１）で表される（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がんの予防又は治療用薬学組成物。
【化１】
2016094389.tif 000006
【請求項２】
前記組成物が、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項３】
前記組成物が、がん細胞の移動又は浸潤を抑制する、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項４】
前記がんが、大腸がん、膵臓がん、胃がん、肝がん、乳がん、子宮頸がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、肺がん、非小細胞性肺がん、前立腺がん、胆嚢がん、胆道がん、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、血液がん、膀胱がん、腎臓がん、卵巣がん、黒色腫、結腸がん、骨がん、皮膚がん、頭部がん、子宮がん、直膓がん、脳腫瘍、肛門周囲腺がん、卵管がん、子宮内膜がん、膣がん、外陰がん、食道がん、小腸がん、内分泌腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、尿管がん、腎臓細胞がん、腎盂がん、中枢神経系（central nervous system、CNS）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫又は脳下垂体腺腫である、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項５】
前記黒色腫が、皮膚、眼球、粘膜、又は中枢神経系に発生するものである、請求項４に記載の薬学組成物。
【請求項６】
前記組成物が、少なくとも１種の抗がん剤をさらに含む、請求項１に記載の薬学組成物。
【請求項７】
前記抗がん剤が、ＤＮＡアルキル化剤（DNA alkylating agents）、抗がん性抗生物質（anti-cancer antibiotics）及び植物アルカロイド（plant alkaloids）からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項６に記載の薬学組成物。
【請求項８】
前記抗がん剤が、メクロレタミン（mechlorethamine）、クロラムブシル（chlorambucil）、フェニルアラニン（phenylalanine）、マスタード（mustard）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）、イホスファミド（ifosfamide）、カルムスチン（carmustine: BCNU）、ロムスチン（lomustine: CCNU）、ストレプトゾトシン（streptozotocin）、ブスルファン（busulfan）、チオテパ（thiotepa）、シスプラチン（cisplatin）、カルボプラチン（carboplatin）、アクチノマイシンＤ（dactinomycin: actinomycin D）、ドキソルビシン（doxorubicin: adriamycin）、ダウノルビシン（daunorubicin）、イダルビシン（idarubicin）、ミトキサントロン（mitoxantrone）、プリカマイシン（plicamycin）、マイトマイシンＣ（mitomycin C）、ブレオマイシン（Bleomycin）、ビンクリスチン（vincristine）、ビンブラスチン（vinblastine）、パクリタキセル（paclitaxel）、ドセタキセル（docetaxel）、エトポシド（etoposide）、テニポシド（teniposide）、トポテカン（topotecan）及びイリノテカン（irinotecan）からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項６に記載の薬学組成物。
【請求項９】
下記化学式（１）で表される（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がん予防又は改善用飼料組成物。
【化２】
2016094389.tif 000007
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンのがん予防又は治療用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
がん死亡者数は全世界の死亡者数の１７％に相当する７６０万人であり、２０１５年には９００万人、２０３０年には１１４０万人にまで急増するものと予想されている。韓国内でもがんは死亡原因の１位を固守しており、それによる社会的費用が莫大であるため、効果の高い抗がん剤を開発する必要性がますます高まっている。
【０００３】
がんが生命を脅かす最も大きな原因はがん細胞の転移性にある。現在、普遍的ながん治療方法としては外科手術があるが、がん細胞は原発がん部位以外の様々な部位に転移するので、初期時期にしか手術による完治は期待できない。
【０００４】
一方、がん転移もがん発生と同様に、様々な遺伝子とがん細胞の移動、浸潤などに関与する要素が複合的に作用して起こる（非特許文献１）。
【０００５】
がん転移において細胞の移動は重要な役割を果たす。例えば、がん細胞が初期の原発がん位置から細胞外マトリックス（extracellular matrix; ECM）を介して血管に移動したり、第２の転移組織から血管外に移動する際や、新生血管から血管内皮細胞（vascular endothelial cell）が移動する際に関与する。移動する細胞は、細胞移動誘導物質により活性化された信号受容体により極性（polarity）が誘導される。また、アクチン（actin）の重合により細胞前方の細胞膜が前方に拡張され、細胞はインテグリン（integrin）により細胞外マトリックスに付着する。ここで、アクチンポリマーに結合されたミオシン（myosin）によりアクチンポリマー間に強い収縮力が生じ、細胞全体に強い収縮力が加わる。よって、細胞の前部と後部の付着力の差により細胞移動の方向が決まり、細胞が移動する（非特許文献２）。よって、細胞移動抑制剤は、それ以上の転移が拡散しないようにがん細胞の移動を抑制し、移動が抑制された状態でがん細胞の死滅を誘導する抗がん剤を投与できるようにするので、がん患者の生命を延長できる現実的なアプローチ方法であるとみなされている。
【０００６】
一方、１−［１−メチル−２−［２−（フェニルメチル）フェノキシ］−ピペリジン（1-[1-(2-benzyl phenoxy)propan-2-yl]piperidine）の化学名を有するベンプロペリン（benproperine）は、咳（cough）や空咳（nonproductive cough）の鎮咳剤（antitussive activity）として用いられ、毒性が少なく、経口投与可能な薬剤として知られている（非特許文献３）。
【０００７】
また、本発明者らは、ベンプロペリンががん細胞の移動を遮断して新生血管の形成を阻害することにより、がん転移を効果的に抑制できることを見出した（特許文献１、２など）。
【０００８】
しかし、ベンプロペリンの鏡像異性体における優れたがん予防又は治療効果については全く明らかにされておらず、Ｓｉｗｅｉ Ｃｈｅｎらはベンプロペリンの鎮咳効果における鏡像異性体間の効果の差はほとんどないと報告している（非特許文献４）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】韓国登録特許第１０−１３２３７２８号公報
【特許文献２】米国特許第８７１６２８８号明細書
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Marina Bacac and Ivan Stamenkovic. Annual Review of Pathology: Mechanism of Disease, 3, 221-247, 2008
【非特許文献２】Peter Friedl他, Nature Cancer Review, 2003, 3: 362
【非特許文献３】Siwei Chen他, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 56, 277-280, 2004
【非特許文献４】J. Pharmacy and Pharmacology, 56(2): 277-280, 2004.02
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、がん細胞の移動を阻害することにより効果的にがんを予防又は治療できる手段を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
こうした背景の下、本発明者らは、がん細胞の移動を阻害することにより効果的にがんを予防又は治療できる方法を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンがラセミ体に比べてがん細胞の移動及び浸潤を抑制する優れた効果があることを確認し、本発明を完成するに至った。
【００１３】
本発明は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がん予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００１４】
また、本発明は、前記薬学組成物を有効量で必要とする個体に投与するステップを含むがんの予防又は治療方法を提供する。
【００１５】
さらに、本発明は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がん予防又は改善用飼料組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩は、様々ながん細胞の移動及び浸潤を抑制し、特にベンプロペリンのラセミ体に比べて優れた抗がん効果を示すので、がんの予防又は治療用薬学組成物、及びそれを用いたがんの予防又は治療方法に有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１７】
【図１】（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの１Ｈ−ＮＭＲデータである。
【図２】（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）の大腸がん細胞株ＤＬＤ−１、膵臓がん細胞株ＡｓＰｃ−１、黒色腫細胞株Ｂ１６−ＢＬ６に対する細胞毒性を測定した図である。
【図３ａ】５μＭのベンプロペリンのラセミ体、（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリン（R-Benp）、及び（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）で処理した場合の大腸がん細胞ＤＬＤ−１の細胞移動抑制効果を示す図である。
【図３ｂ】ベンプロペリンのラセミ体と（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）による細胞移動抑制効果を処理濃度別（０．５μＭ，１μＭ，２μＭ）に比較して示す図である。
【図４】ベンプロペリンのラセミ体、（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリン（R-Benp）、及び（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）による正常細胞ＭＣＦ１０Ａの細胞移動抑制効果を示す図である。
【図５ａ】５μＭのベンプロペリンのラセミ体、（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリン（R-Benp）、及び（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）で処理した場合の大腸がん細胞株ＤＬＤ−１の浸潤抑制効果を示す図である。
【図５ｂ】ベンプロペリンのラセミ体と（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）によるがん細胞浸潤抑制効果を処理濃度別（１μＭ，２μＭ，５μＭ）に示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１８】
本発明の一態様は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がん予防又は治療用薬学組成物を提供する。
【００１９】
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、下記化学式（１）で表される化合物である。
【００２０】
【化１】
2016094389.tif 000002
【００２１】
前記（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、当業者が公知の合成方法で化学的に合成することにより容易に作製して用いることができる。一例として、Ｋ２ＣＯ３とＮ,Ｎ-ジメチルホルムアミド（N,N-dimethylformamide、DMF）の添加下で、２−ベンジルフェノール（2-benzylphenol）及び（Ｒ）−（−）−プロピレンオキシド（(R)-(-)-propylene oxide）を出発物質として作製してもよい。他の例として、（Ｒ）−１−（３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−オール［(R)-1-(3-benzylphenoxy)propan-2-ol］又は（Ｒ）−（＋）−１−（３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−イル ４−メチルベンゼンスルホネート［(R)-(+)-1-(3-benzylphenoxy)propan-2-yl 4-methyl benzene sulfonate］を出発物質として作製してもよい。あるいは、商業的に製造された商品を購入して用いてもよい。
【００２２】
前記（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの薬学的に許容される塩とは、投与される（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの生物学的活性や物性を損なわない剤形を意味する。
【００２３】
前記薬学的に許容される塩は、一例として、薬学的に許容される陰イオンを含有する遊離酸（free acid）によって形成された無毒性酸付加塩が挙げられる。前記遊離酸としては、例えば、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸などの無機酸；酒石酸、ギ酸、クエン酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、グルコン酸、安息香酸、乳酸、フマル酸、マレイン酸、サリチル酸などの有機カルボン酸；メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸などにより形成された酸付加塩が挙げられるが、これらに限定されるものではない。薬学的に許容されるカルボン酸塩は、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどにより形成された金属塩又はアルカリ土類金属塩、リシン、アルギニン、グアニジンなどのアミノ酸塩、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン、ジエタノールアミン、コリン、トリエチルアミンなどの有機塩などであってもよい。
【００２４】
前記酸付加塩は、通常の方法により、例えば（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンを過剰量の酸水溶液に溶解させ、その塩を水混和性有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトン又はアセトニトリルを用いて沈殿させて作製したものであってもよい。また、同モル量の（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン及び水中の酸又はアルコール（例えば、グリコールモノメチルエーテル）を加熱し、次に前記混合物を蒸発させて乾燥させるか、又は析出した塩を吸引濾過して作製したものであってもよい。
【００２５】
また、前記薬学的に許容される塩は、塩基を用いて作製した薬学的に許容される金属塩であってもよい。アルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩は、例えば化合物を過剰量のアルカリ金属水酸化物又はアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解させ、非溶解化合物塩を濾過し、その後濾液を蒸発、乾燥させて得たものであってもよい。
【００２６】
前記薬学的に許容される塩は、前述した塩以外に、前記（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの任意の全ての有機又は無機付加塩であってもよい。
【００２７】
本発明の一実施例において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンには代表的ながん細胞株である大腸がん細胞、膵臓がん細胞、黒色腫細胞の細胞移動を抑制する活性があることが確認され、特に（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンはラセミ体に比べて２倍以下の低濃度でも有意ながん転移抑制活性を示すことを示唆する結果が確認された（図３ａ，図３ｂ）。また、本発明の他の実施例において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンはがん細胞の浸潤を抑制する効果がラセミ体に比べて低濃度で非常に優れることが確認された（図５ａ及び図５ｂ）。よって、本発明の薬学組成物は、がん細胞の移動又は浸潤を抑制することができるので、様々ながんの予防又は治療に有用である。
【００２８】
前記がんとは、細胞の正常な分裂、分化及び死滅の調節機能に問題が生じて異常に過剰増殖することにより、周囲の組織や臓器に浸潤して塊りを形成し、既存の構造を破壊したり、変形させる状態を意味する。前記がんは、発生した部位に存在する原発がんと、前記発生部位から身体の他の部位に拡散した転移がんに区分される。
【００２９】
前記がんは、例えば大腸がん、膵臓がん、胃がん、肝がん、乳がん、子宮頸がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、肺がん、非小細胞性肺がん、前立腺がん、胆嚢がん、胆道がん、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、血液がん、膀胱がん、腎臓がん、卵巣がん、黒色腫、結腸がん、骨がん、皮膚がん、頭部がん、子宮がん、直膓がん、脳腫瘍、肛門周囲腺がん、卵管がん、子宮内膜がん、膣がん、外陰がん、食道がん、小腸がん、内分泌腺がん、副腎がん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、尿管がん、腎臓細胞がん、腎盂がん、中枢神経系（central nervoussystem、CNS）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫又は脳下垂体腺腫を意味するが、これらに限定されるものではない。前記黒色腫は、皮膚、眼球、粘膜又は中枢神経系に発生するものであってもよい。
【００３０】
前記がん細胞の移動（migration）とは、がん細胞が血液循環やリンパ循環により拡散することであり、ほとんどは血液循環に乗って他の臓器に運ばれ、その後新しい腫瘍を形成する。
【００３１】
前記がん細胞の浸潤（invasion）とは、がんが最初に発生した部位の周辺組織に入り込んでがん細胞が増殖することであり、がん細胞が周辺組織に直接移動して侵入することを意味する。
【００３２】
本発明における「予防」とは、本発明による（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を個体に投与することにより、がんの発病を抑制又は遅延させるあらゆる行為を意味する。
【００３３】
本発明における「治療」とは、本発明の前記組成物をがん発病の疑いのある個体に投与することにより、がんの症状を好転させたり、好適に変更させるあらゆる行為を意味する。
【００３４】
本発明の薬学組成物は、単位投与量（unit）が１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇであってもよい。本発明の薬学組成物は、少ない単位投与量においても同じ単位投与量のラセミ体に比べて有意な効果を示す。
【００３５】
本発明の薬学組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤又は希釈剤をさらに含んでもよい。
【００３６】
本発明における「薬学的に許容される担体」とは、生物体を刺激することなく、注入される化合物の生物学的活性及び特性を損なわない担体又は希釈剤を意味する。本発明に使用される前記担体の種類は特に限定されるものではなく、当該技術分野において通常用いられて薬学的に許容される担体であれば、いかなるものでも用いることができる。前記担体の例としては、食塩水、滅菌水、リンゲル液、緩衝食塩水、アルブミン注射液、グルコース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセリン、エタノールなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。また、必要に応じて、抗酸化剤、緩衝液及び／又は静菌剤など他の通常の添加剤を添加して用いてもよい。
【００３７】
前記薬学的組成物は、製剤化することにより単位用量形態に製造されてもよく、多用量容器内に収納して製造されてもよい。例えば、前記薬学的組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌水溶液剤、非水性溶剤、凍結乾燥剤及び坐剤からなる群から選択されるいずれかの剤形を有し、経口又は非経口の様々な剤形であってもよい。製剤化する場合は、普通用いる充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤又は賦形剤を用いて調製される。経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、これらの固形製剤は、少なくとも１つの化合物に少なくとも１つの賦形剤、例えばデンプン、炭酸カルシウム、スクロース（sucrose）又はラクトース（lactose）、ゼラチンなどを混合して調製される。また、通常の賦形剤以外に、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も用いられる。経口用液体製剤としては、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などが挙げられ、通常用いられる通常の希釈剤である水、液体パラフィン以外にも種々の賦形剤、例えば湿潤剤、甘美剤、芳香剤、保存剤などが用いられる。非経口用製剤としては、滅菌水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤、坐剤が挙げられる。非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール（propylene glycol）、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステルなどが用いられる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（witepsol）、マクロゴール、ツイーン（tween）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが用いられる。
【００３８】
本発明の薬学組成物は、単一製剤として用いてもよい。また、一種類以上の抗がん剤をさらに含む複合製剤に製造して用いてもよい。
【００３９】
前記抗がん剤は、ＤＮＡアルキル化剤（DNA alkylating agents）、抗がん抗生物質（anti-cancer antibiotics）及び植物アルカロイド（plant alkaloids）からなる群から選択される少なくとも１つであるが、これらに限定されるものではない。例えば、前記抗がん剤は、メクロレタミン（mechlorethamine）、クロラムブシル（chlorambucil）、フェニルアラニン（phenylalanine）、マスタード（mustard）、シクロホスファミド（cyclophosphamide）、イホスファミド（ifosfamide）、カルムスチン（carmustine: BCNU）、ロムスチン（lomustine: CCNU）、ストレプトゾトシン（streptozotocin）、ブスルファン（busulfan）、チオテパ（thiotepa）、シスプラチン（cisplatin）、カルボプラチン（carboplatin）、アクチノマイシンＤ（dactinomycin: actinomycin D）、ドキソルビシン（doxorubicin: adriamycin）、ダウノルビシン（daunorubicin）、イダルビシン（idarubicin）、ミトキサントロン（mitoxantrone）、プリカマイシン（plicamycin）、マイトマイシンＣ（mitomycin C）、ブレオマイシン（Bleomycin）、ビンクリスチン（vincristine）、ビンブラスチン（vinblastine）、パクリタキセル（paclitaxel）、ドセタキセル（docetaxel）、エトポシド（etoposide）、テニポシド（teniposide）、トポテカン（topotecan）及びイリノテカン（irinotecan）からなる群から選択される少なくとも１つであってもよい。
【００４０】
本発明の他の態様は、前記薬学組成物を有効量で必要とする個体に投与するステップを含むがんの予防又は治療方法を提供する。
【００４１】
前記薬学組成物とは、前述した（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がん予防又は治療用薬学組成物を意味する。
【００４２】
本発明における「個体」とは、がんが発症したか、発症する可能性のあるヒトを含むあらゆる動物を意味する。前記動物は、ヒトだけでなく、それに類似する症状の治療を必要とするウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラクダ、カモシカ、イヌ、ネコなどの哺乳動物であってもよいが、これらに限定されるものではない。
【００４３】
本発明の前記予防又は治療方法は、具体的には、がんが発症したか、発症する可能性のある個体に前記組成物を有効量で投与するステップを含んでもよい。
【００４４】
前記「有効量」とは、薬学的に有効な量であって、医学的治療に適用できる合理的な利益／リスク比で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効量レベルは、個体の種類及び重症度、年齢、性別、薬物の活性、薬物に対する感受性、投与時間、投与経路及び排出率、治療期間、同時に用いられる薬物を含む要素、並びにその他医学分野で公知の要素により決定される。例えば、０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．０５〜２００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を１日１回又は数回に分けて投与する。本発明の組成物は、単独の治療剤として投与してもよく、他の治療剤と併用して投与してもよく、従来の治療剤と順次又は同時に投与してもよい。また、単一又は多重投与してもよい。
【００４５】
上記要素を全て考慮して副作用なく最小限の量で最大限の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者により容易に決定される。本発明の組成物の好ましい投与量は、患者の状態及び体重、疾患の程度、薬物の形態、投与経路及び期間によって異なる。投与は、１日に１回投与することもでき、数回に分けて投与することもできる。また、具体的な組成物と併用又は同時投与される薬物をはじめとする様々な因子と医薬分野で周知の類似因子に応じて異なる量を適用することが好ましい。前記組成物は、マウス、家畜、ヒトなどの様々な哺乳動物に様々な経路で投与することができ、投与方法は当業界の通常の方法であれば限定されるものではないが、経口投与することが好ましい。
【００４６】
本発明における「投与」とは、任意の適切な方法で患者に本発明の薬学的組成物を導入することを意味し、本発明の組成物の投与経路は、標的組織に送達できるものであれば、経口又は非経口の様々な経路で投与することができる。
【００４７】
本発明による薬学組成物の投与方法は特に限定されるものではなく、当該技術分野において通常用いる方法を採用することができる。前記投与方法の例として、組成物を経口投与又は非経口投与方法で投与することができるが、これらに限定されるものではない。本発明による薬学組成物は、目的とする投与方法で様々な剤形に作製することができる。
【００４８】
本発明の組成物の投与頻度は、特にこれらに限定されるものではないが、１日１回投与してもよく、用量を数回に分けて投与してもよい。
【００４９】
本発明の一実施例において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、代表的ながん細胞株である大腸がん細胞、膵臓がん細胞、黒色腫細胞の細胞移動を抑制する活性があることが確認され、特に（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、ラセミ体に比べて２倍以下の低濃度でも有意ながん転移抑制活性を示すことを示唆する結果が確認された（図３ａ，図３ｂ）。また、本発明の他の実施例において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、がん細胞の浸潤を抑制する効果がラセミ体に比べて優れることが確認された（図５ａ及び図５ｂ）。よって、本発明の薬学組成物は、がん細胞の移動又は浸潤を抑制することができるので、ヒトを含む動物において様々ながんの予防又は治療に有用である。
【００５０】
本発明のさらに他の態様は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を有効成分として含む、がん予防又は改善用飼料組成物を提供する。
【００５１】
本発明における「飼料」とは、動物が食べて摂取し、消化させるための、又はそれに適した任意の天然又は人工の規定食、一食など、又は前記一食の成分を意味する。前記飼料組成物は、飼料添加剤を含んでもよい。前記飼料添加剤は、飼料管理法上の補助詞料に該当する。
【００５２】
前記飼料の種類は特に限定されるものではなく、当該技術分野において通常用いられる飼料を用いることができる。前記飼料の例としては、穀物類、堅果類、食品加工副産物類、藻類、繊維質類、製薬副産物類、油脂類、デンプン類、ウリ科の植物類、穀物副産物類などの植物性飼料と、タンパク質類、無機物類、油脂類、ミネラル類、単細胞タンパク質類、動物性プランクトン類、飲食物などの動物性飼料が挙げられるが、これらに限定されるものではない。これらは単独で用いてもよく、２種以上を混合して用いてもよい。
【００５３】
本発明における（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン、がん、予防又は改善については前述した通りである。
【００５４】
本発明の一実施例において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、代表的ながん細胞株である大腸がん細胞、膵臓がん細胞、黒色腫細胞の細胞移動を抑制する活性があることが確認され、特に（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、ラセミ体に比べて２倍以下の低濃度でも有意ながん転移抑制活性を示すことを示唆する結果が確認された（図３ａ，図３ｂ）。また、本発明の他の実施例において、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、がん細胞の浸潤を抑制する効果がラセミ体に比べて優れることが確認された（図５ａ及び図５ｂ）。よって、本発明の飼料組成物は、がん細胞の移動及び浸潤を抑制することができるので、動物に発生し得る様々ながんの予防又は改善に有用である。
【００５５】
以下、本発明を下記例により詳細に説明する。しかし、下記例は本発明を例示するものにすぎず、本発明の範囲が下記例に限定されるものではない。
【実施例】
【００５６】
実施例１：（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの合成
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンを下記反応式１のように合成した。
【００５７】
［反応式１］
【００５８】
【化２】
2016094389.tif 000003
【００５９】
（１）化合物１［(R)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−オール］の合成
Ｋ２ＣＯ３（１．２ｇ，８．６８ｍｍｏｌ）を Ｎ,Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（０．８５Ｍ，５ｍＬ）に添加して攪拌した。５分後、常温で２−ベンジルフェノールを４００ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）添加した。３０分後、（Ｒ）−（−）−プロピレンオキシド ０．９ｍＬ（１３．９１ｍｍｏｌ）を注射器で手早く加えた。その後、これを１２０℃に加熱しながら１７時間攪拌した。これを常温になるまで冷却し、その後水を加えて反応を終了させ、次に酢酸エチルと水を用いて３回抽出した。その後、有機層を水で３回洗浄し、次に塩水で再び洗浄した。これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に濾過して減圧下で濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＥＡ：Ｈｅｘ＝１：９）を用いて精製することにより、化合物１［(R)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−オール，９７０ｍｇ，９２．４％，鮮黄色油（bright yellow oil）］を得た。化学物１の１Ｈ−ＮＭＲ分析結果は次の通りである。
1HNMR (300MHz, CDCl3)δ7.30-7.15 (m, 7H), 6.94 (td, J = 7.2, 1.2 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.7Hz, 1H), 4.06-4.03 (m, 1H), 4.00 (d, J =5.4 Hz, 2H), 3.89 (dd, J = 9.3, 3.0Hz, 1H), 3.66 (dd, J = 9.3, 7.8Hz, 1H), 1.78 (d, J = 3.6Hz, 1H), 1.18 (d, J = 6.0Hz, 3H, ) ;
13CNMR (75MHz, CDCl3)δc 156.34, 141.22, 131.00, 129.18, 128.45, 128.26, 127.77, 126.01, 120.81, 111.20, 78.08, 66.10, 37.10, 18.36
【００６０】
（２）化合物２［(R)-(+)-1-（３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−イル４−メチルベンゼンスルホネート］の合成
化合物１（４００ｍｇ，１．７３ｍｍｏｌ）を０．２５Ｍのメチレンクロライド（methylene chloride、MC）７ｍＬに溶解した。その後、トリエチルアミン（triethylamine、TEA）０．５９ｍＬ（４．２１ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン（p-dimethylanimopyridine、DMAP）１０６ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（p-toluenesulfonyl chloride、ＴｓＣｌ）４１０ｍｇ（２．２５ｍｍｏｌ）を順に加え、次に常温で１６時間攪拌した。その後、水を加えて反応を終了させ、次にメチレンクロライド（ＭＣ）と水を用いて３回抽出した。その後、ＭＣ層を水で２回洗浄し、塩水で再び洗浄した。これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に濾過して減圧下で濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＥＡ：Ｈｅｘ＝１：９）を用いて精製することにより、化合物２［(R)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−イル ４−メチルベンゼンスルホネート，５０５ｍｇ，７３．５％，褐色油（brown oil）］を得た。化学物２の１Ｈ−ＮＭＲ分析結果は次の通りである。
【００６１】
[a]25D+78.7°(c 1, EtOH); 1H NMR (300 MHz) δ 7.78 (d, 2H, J = 8.1Hz), 7.27-7.11 (m, 8H), 7.03 (dd, J = 7.2, 1.2Hz, 1H), 6.88 (t, J = 7.2Hz, 1H), 6.70 (d, 1H, J = 8.7Hz), 4.87 (m, 1H), 4.01 (dd, 1H, J = 10.5, 5.4Hz), 3.89 (dd, 1H, J = 10.5, 5.4 Hz), 3.80 (s, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.34 (d, 3H, J = 6.9Hz) 
13CNMR (75MHz) δc 155.6, 144.7, 140.7, 134.0, 130.5, 129.9, 129.7, 128.9, 128.2, 127.7, 127.3, 125.8, 121.1, 111.1, 76.9, 69.7, 35.7, 21.5, 17.8
【００６２】
（３）（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの合成
化合物２（４３５ｍｇ，１．０９ｍｍｏｌ）をピペリジン（０．６５ｍＬ，６．５９ｍｍｏｌ）に溶解し、次に１２０℃で５時間還流した。その後、常温で１２時間攪拌した。攪拌した反応混合物をメタノールで希釈し、その後減圧濃縮した（過剰量のピペリジン除去）。その後、１Ｍの水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）４３ｍＬを加えて塩基条件を作成し、次にエーテルと水を用いて３回抽出した。その後、エーテル層を塩水で拭き取った。これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に濾過して減圧下で濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＥＡ：Ｈｅｘ=１：１）を用いて精製することにより、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（２２２ｍｇ，６５．９％，褐色油（brown oil）)を得た。（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの１Ｈ−ＮＭＲ分析結果は次の通りである。
【００６３】
[a]25D- 121.8°(c1,EtOH); 1H NMR (300 MHz) δ 7.29-7.07 (m, 7H), 6.87 (t, J = 7.2Hz, 2H), 4.07 (dd, 1H, J = 9.3, 4.8Hz), 4.00 (s, 2H), 3.85 (dd, 1H, J = 9.0, 6.6Hz), 2.97 (m, 1H), 2.55 (m, 4H), 1.56 (m, 4H), 1.42 (m, 2H), 1.11 (d, 3H, J = 6.6Hz); 13CNMR (75MHz) δc 156.6, 141.0, 130.4, 129.5, 128.8, 128.1, 127.4, 125.7, 120.3, 111.1, 69.9, 58.9, 50.4, 36.1, 26.5, 24.7, 13.2.
【００６４】
前述したように合成されたベンプロペリンの１Ｈ−ＮＭＲデータを図１に示す。
【００６５】
比較例１：（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリンの合成
他の鏡像異性体（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリンの合成は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの合成方法と出発物質を変更して反応式２の方法で合成した。
【００６６】
［反応式２］
【００６７】
【化３】
2016094389.tif 000004
【００６８】
（１）化合物３［(S)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−オール］の合成
Ｋ２ＣＯ３（１．２ｇ，８．６８ｍｍｏｌ）をＮ,Ｎ-ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（０．８５Ｍ，５ｍＬ）に添加して攪拌した。５分後、常温で２−ベンジルフェノールを４００ｍｇ（２．１７ｍｍｏｌ）添加した。３０分後、（Ｓ）−（−）−プロピレンオキシド ０．９ｍＬ（１３．９１ｍｍｏｌ）を注射器で手早く加えた。その後、これを１２０℃に加熱しながら１７時間攪拌した。これを常温になるまで冷却し、その後水を加えて反応を終了させ、次に酢酸エチルと水を用いて３回抽出した。その後、有機層を水で３回洗浄し、次に塩水で再び洗浄した。これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に濾過して減圧下で濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＥＡ：Ｈｅｘ=１：１４）を用いて精製することにより、化合物３［(S)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−オール，３４０ｍｇ，６４．８％，鮮黄色油（bright yellow oil）］を得た。化合物３の１Ｈ−ＮＭＲ分析結果は次の通りである。  
1HNMR (300MHz) δ 7.31-7.16 (m, 7H), 6.94 (td, J = 7.2, 1.2Hz, 1H), 6.82 (d, J = 8.1Hz, 1H), 4.06-4.04 (m, 1H), 4.00 (d, J = 5.4Hz, 2H) 3.89 (dd, J = 9.9, 3.0Hz, 1H), 3.67 (dd, J = 9.0, 7.2Hz, 1H), 1.78 (d, J = 2.4Hz, 1H), 1.18 (d, J = 6.6Hz, 3H) ) ; 13CNMR(75MHz) δc 156.3, 141.2, 131.0, 129.1, 128.4, 128.2, 127.7, 126.0, 120.8, 111.2, 78.0, 66.1, 37.1, 18.3
【００６９】
（２）化合物４［(S)-(-)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−イル ４-メチルベンゼンスルホネート］の合成
化合物３（３４０ｍｇ，１．４０ｍｍｏｌ）を０．２５Ｍのメチレンクロライド（ＭＣ）７ｍＬに溶解した。その後、トリエチルアミン（ＴＥＡ）０．５９ｍＬ（４．２１ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン （ＤＭＡＰ）１０６ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（ＴｓＣｌ）４１０ｍｇ（２．２５ｍｍｏｌ）を順に加え、次に常温で１６時間攪拌した。その後、水を加えて反応を終了させ、次にメチレンクロライド（ＭＣ）と水を用いて３回抽出した。その後、ＭＣ層を水で２回洗浄し、塩水で再び洗浄した。これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に濾過して減圧下で濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＥＡ：Ｈｅｘ=１：１２）を用いて精製することにより、化合物４［(S)-1-(３−ベンジルフェノキシ）プロパン−２−イル ４−メチルベンゼンスルホネート，３９０ｍｇ，７０．２％，褐色油（brown oil）］を得た。化合物４の１Ｈ−ＮＭＲ分析結果は次の通りである。
【００７０】
[a]25D-9.00°(c1,EtOH); 1H-NMR (300MHz) δ 7.79-7.76 (m, 2H), 7.27-7.11 (m, 8H), 7.03 (dd, J = 7.8, 1.8Hz, 1H), 6.88 (m, 1H), 6.70 (d, 1H, J = 8.1Hz), 4.87 (m, 1H), 3.96 (dd, 1H, J = 9.9, 5.4Hz), 3.89 (dd, 1H, J = 10.5, 4.8Hz), 3.81 (s, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.34 (d, 3H, J = 6.0Hz) ; 13C-NMR (75MHz) δc 155.6, 144.7, 140.7, 134.0, 130.5, 129.9, 129.7, 128.9, 128.2, 127.7, 127.3, 125.8, 121.1, 111.1, 76.9, 69.8, 35.7, 21.5, 17.8
【００７１】
（３）（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリンの合成
化合物４（３９０ｍｇ，０．９６ｍｍｏｌ）をピペリジン（０．５７ｍＬ，５．７６ｍｍｏｌ）に溶解し、次に１２０℃で５時間還流した。その後、常温で１２時間攪拌した。攪拌した反応混合物をメタノールで希釈し、その後減圧濃縮した（過剰量のピペリジン除去）。その後、１Ｍの水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）４３ｍＬを加えて塩基条件を作成し、次にエーテルと水を用いて３回抽出した。その後、エーテル層を塩水で拭き取った。これをＭｇＳＯ４で乾燥させ、次に濾過して減圧下で濃縮した。濃縮液をカラムクロマトグラフィー（ＥＡ：Ｈｅｘ=１：１）を用いて精製することにより、（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリン（２１０ｍｇ，７２．４％，褐色油（brown oil））を得た。（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリンの１Ｈ−ＮＭＲ分析結果は次の通りである。
【００７２】
[a]25D+ 15.94°(c1,EtOH); 1HNMR (400MHz) δ 7.27-7.14 (m, 7H), 7.08 (dd, J = 7.2, 1.2Hz, 1H), 6.87 (m, 2H), 4.07 (dd, 1H, J = 8.8, 4.4Hz), 3.99 (s, 2H), 3.85 (dd, 1H, J = 9.2, 6.4Hz), 2.97 (m, 1H), 2.55 (m, 4H), 1.55 (m, 4H), 1.41 (m, 2H), 1.11 (d, 3H, J = 6.8Hz)
13CNMR (100MHz) δc 156.6, 141.0, 130.48, 129.6, 128.8, 128.1, 127.4, 125.7, 120.3, 111.1, 69.9, 58.9, 50.4, 36.1, 26.5, 24.7, 13.2
【００７３】
実験例１：（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンと（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリンの細胞毒性分析
実施例１で作製した（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンの細胞毒性を検証するために、ヒト大腸がん細胞株であるＤＬＤ−１細胞（ＡＴＣＣ−ＣＣＬ−２２１）、膵臓がん細胞株であるＡｓＰｃ−１細胞（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１６８２）、黒色腫細胞株であるＢ１６−ＢＬ６細胞（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−６４７５）、正常細胞であるＭＣＦ１０Ａ（ＡＴＣＣ−ＣＲＬ−１０３１７）を、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）が含まれるＲＰＭＩ培地で３７℃、５％ＣＯ２を維持して培養し、その後０．０５％トリプシン−ＥＤＴＡを用いて細胞を剥離した。１０％ＦＢＳ含有培地を含む９６ウェルプレートの各ウェルに血球計（hematocytometer）で計算した４×１０３個の細胞をそれぞれ接種し、５％ＣＯ２を含む３７℃の培養器で培養した。
【００７４】
２４時間経過後、各ウェルの培地を対照群（０．１％ＤＭＳＯ）と実施例１又は比較例１で作製したベンプロペリン５μＭを含む新しい培地に交換した。その後、３７℃、５％ＣＯ２の培養器で４８時間培養した。その後、各ウェルにＷＳＴ−１（Roche）を１０μｌずつ添加して２時間培養し、次にＥＬＩＳＡリーダー（ELISA Reader, Bio-Rad）を用いて４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００７５】
その結果、図２に示すように、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンはがん細胞だけでなく、正常細胞であるＭＣＦ１０Ａにおいても細胞毒性を示さなかった。
【００７６】
実験例２：がん細胞の移動及び浸潤阻害活性の分析
実施例１で作製した（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンのがん細胞の移動及び浸潤阻害活性を分析するために、ＰＲＬ−３が過剰発現した大腸がん細胞株であるＤＬＤ−１細胞（ＡＴＣＣ−ＣＣＬ−２２１）において、トランスウェル（trans-well）を用いた細胞移動及び浸潤アッセイを下記の通り行った。
【００７７】
まず、ＲＰＭＩ培地を含む培養皿でＤＬＤ−１細胞（ＡＴＣＣ−ＣＣＬ−２２１）を約９０％成長させ、その後培地を除去してＰＢＳで洗浄した。洗浄した細胞をトリプシン−ＥＤＴＡで処理し、ＣＯ２培養器にて３７℃で１５時間培養して細胞を剥離した。その後、これに１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ培地を添加してファルコンチューブ（falcon tube）に入れ、次に遠心分離を行って培地を除去した。得られた細胞にＦＢＳ非含有ＲＰＭＩ培地を添加して遠心分離により培地を除去する過程を２回繰り返した。こうして得られた細胞にＦＢＳ非含有ＲＰＭＩ培地を添加して懸濁させ、その後血球計を用いて細胞数を測定した。
【００７８】
その後、２４ウェルプレートにトランスウェルを設置し、８×１０４細胞／２００μＬの細胞を添加した。ウェルプレート上にトランスウェルが設置された空間を用いて、実施例１で作製した（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンを含み、ＦＢＳを含まない５００μＬのＲＰＭＩ培地を添加し、ＣＯ２培養器にて３７℃で１２〜１６時間培養した。培養後、ハンドタオル上でトランスウェルを逆さにして培地を除去し、その後２４ウェルプレートの各ウェルに５００μＬのクリスタルバイオレット（crystal violet，２０％ＭｅＯＨ中に５ｍｇ／ｍＬ）を添加し、トランスウェルをＣＯ２培養器内に３０分間静置した。染色したトランスウェルをＰＢＳで洗浄し、ハンドタオル上で逆さにして残った溶液をしみ込ませた。細胞が移動しない方向を上にして膜をカバースリップ（cover slip）上に設置し、移動（migration）しない細胞を綿棒で拭き取った。カバースリップの縁部にマニキュアを少量塗布し、スライドガラスにかぶせて固定した。このように準備したサンプルをデジタルカメラが装着された倒立顕微鏡（TE 300, Nikon, Japan）で写真撮影し、移動した細胞数を計数した。
【００７９】
その後、下記数式１により細胞移動阻害度を計算した。
【００８０】
【数１】
2016094389.tif 000005
【００８１】
数式１において、「試料で処理した部分の 細胞移動数」とは、実施例１の（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）、比較例１の（Ｒ）−（＋）−ベンプロペリン（R-Benp）、又はそれらを１：１の重量比で混合したラセミ体（Benp）で処理して測定した、移動した細胞の数を意味し、「対照試料の細胞移動数」とは、前記ベンプロペリンの代わりに１％ジメチルスルホキシド（dimethyl sulfoxide, DMSO）のみで処理して測定した、移動した細胞数を意味する。
【００８２】
その結果、図３ａに示すように、大腸がん細胞株ＤＬＤ−１細胞において、ラセミ体（Benp）は細胞移動をＤＭＳＯ処理対照試料の７１％阻害するのに対して、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）は細胞移動を８９％阻害することが確認された。また、図３ｂに示すように、０．５μＭの処理濃度では、ラセミ体（Benp）は細胞移動をＤＭＳＯ処理対照試料の３％しか阻害しないのに対して、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）は３２％阻害することが確認された。特に、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）は、１μＭの処理濃度で細胞移動を５２％も阻害するのに対して、ラセミ体（Benp）は、その２倍の濃度である２μＭで５３％の細胞移動阻害活性を示すことが確認された。よって、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンはラセミ体に比べて２倍以上の細胞移動阻害活性を示すことになる。これらの結果は、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンがラセミ体の２倍以下の低濃度でも有意ながん転移抑制活性を示すことを示唆するものである。
【００８３】
一方、図４に示すように、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは正常細胞であるＭＣＦ１０Ａの細胞移動は抑制しないことが確認された。
【００８４】
また、図５ａに示すように、大腸がん細胞株ＤＬＤ−１細胞において、ラセミ体（Benp）は細胞浸潤をＤＭＳＯ処理対照試料の７３％阻害するのに対して、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）は細胞移動を９０％阻害することが確認された。
【００８５】
また、図５ｂに示すように、１μＭの処理濃度では、ラセミ体（Benp）は細胞浸潤をＤＭＳＯ処理対照試料の２１％阻害するのに対して、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）は３６％阻害することが確認された。特に、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン（S-Benp）は２μＭの低い処理濃度で細胞浸潤を５７％も阻害するのに対して、ラセミ体（Benp）は著しく低い細胞浸潤阻害率（３６％）を示すことが確認された。これは、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンがラセミ体に比べて細胞浸潤を非常に強く阻害することを示唆するものである。
【００８６】
前述したように、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、がん細胞の移動だけでなく、がん細胞の浸潤も効果的に抑制することが確認された。これは、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン又はその薬学的に許容される塩を含む組成物が様々ながんの予防又は治療に有用であることを示唆するものである。
【００８７】
実験例３：ラットに対する経口投与急性毒性実験
６週齢の特定病原体不在（ＳＰＦ）ＳＤ系ラットを１群当たり２匹ずつに分け、各ラットに実施例１で作製した（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンを注射用蒸留水に溶解して１０００ｍｇ／ｋｇの用量で単回経口投与した。試験物質投与後、動物の斃死の有無、臨床症状、体重変化を観察して血液学的及び血液生化学的検査を行い、剖検して肉眼で腹腔臓器及び胸腔臓器における異常の有無を観察した。
【００８８】
その結果、試験物質を投与した全ての動物において特記するほどの臨床症状や斃死はなく、体重変化、血液学的及び血液生化学的検査、剖検所見などでも毒性変化は観察されなかった。
【００８９】
よって、（Ｓ）−（−）−ベンプロペリンは、全てのラットにおいて１０００ｍｇ／ｋｇまで毒性変化を示さないので、経口投与の最小致死量（ＬＤ５０）が１０００ｍｇ／ｋｇ以上の安全な物質であると判定された。
【００９０】
製剤例１：散剤の製造
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン＊……………………………２０ｍｇ
ラクトース………………………………………………………１００ｍｇ
タルク………………………………………………………………１０ｍｇ
（＊は(Ｓ)−(−)−ベンプロペリン、その薬学的に許容される塩又はその誘導体を意味する。以下同様）
【００９１】
通常の散剤製造方法で上記成分を混合し、気密包に充填して散剤を製造した。
【００９２】
製剤例２：錠剤の製造
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン＊……………………………１０ｍｇ
トウモロコシデンプン…………………………………………１００ｍｇ
ラクトース………………………………………………………１００ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム…………………………………………２ｍｇ
【００９３】
通常の錠剤製造方法で上記成分を混合し、その後打錠して錠剤を製造した。
【００９４】
製剤例３：カプセル剤の製造
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン＊………………………１０．０ｍｇ
結晶性セルロース………………………………………………３．０ｍｇ
ラクトース……………………………………………………１４．８ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム……………………………………０．２ｍｇ
【００９５】
通常のカプセル剤製造方法で上記成分を混合し、ゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
【００９６】
製剤例４：注射剤の製造
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン＊……………………………１０ｍｇ
マンニトール……………………………………………………１８０ｍｇ
注射用滅菌蒸留水……………………………………………２９７４ｍｇ
Ｎａ２ＨＰＯ４・１２Ｈ２Ｏ……………………………………２６ｍｇ
【００９７】
通常の注射剤製造方法で注射用滅菌蒸留水に上記成分を混合し、その後１アンプル当たり（２ｍＬ）前述した成分含有量となるように注射剤を製造した。
【００９８】
製剤例５：液剤の製造
（Ｓ）−（−）−ベンプロペリン＊……………………………１０ｍｇ
異性化糖………………………………………………………………１０ｇ
マンニトール……………………………………………………………５ｇ
精製水…………………………………………………………〜１００ｍＬ
【００９９】
通常の液剤製造方法で精製水に上記成分を混合し、その後精製水を加えて総体積を１００ｍＬに調節して茶色のビンに充填し、滅菌して液剤を製造した。
【０１００】
以上の説明から、本発明の属する技術分野の当業者であれば、本発明がその技術的思想や必須の特徴を変更することなく、他の具体的な形態で実施できることを理解するであろう。なお、上記実施例はあくまで例示的なものであり、限定的なものでないことを理解すべきである。本発明の範囲は、明細書ではなく特許請求の範囲の意味及び範囲とその等価概念から導かれるあらゆる変更や変形された形態を含むものであると解釈すべきである。
【図１】
2016094389.tif 000009
【図２】
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【図３ａ】
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【図３ｂ】
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【図４】
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【図５ａ】
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【図５ｂ】
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