(57)【要約】【課題】コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および治療用薬剤学的組成物、並びに健康機能食品を提供すること。【解決手段】コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および治療用薬剤学的組成物、並びに健康食品組成物。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および治療用薬剤学的組成物。
【請求項２】
前記コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液は、薬剤学的組成物総重量に対して０．１〜９９重量％で含有されることを特徴とする請求項１に記載の薬剤学的組成物。
【請求項３】
前記コンパウンドＫの含量は、０．５〜１．５ｍｇ／ｇの範囲に強化されたことを特徴とする請求項１に記載の薬剤学的組成物。
【請求項４】
コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する健康機能食品。
【請求項５】
前記コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液は、健康食品総重量に対して０．１〜９９重量％で含有されることを特徴とする請求項４に記載の健康機能食品。
【請求項６】
前記コンパウンドＫの含量は、０．５〜１．５ｍｇ／ｇの範囲に強化されたことを特徴とする請求項１に記載の健康機能食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および治療用薬剤学的組成物、並びにコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および改善用健康機能食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
薬用人参（Ｐａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇ Ｃ．Ａ．Ｍｅｙｅｒ、オタネニンジンとも呼ばれる。）は、ウコギ科トチバニンジン属に属する植物であり、中国では紀元前から薬用として用いられてきており、韓国では三国時代から交易、薬用として用いられてきており、これまでも種々の分野において漢方薬材や健康食品として広く用いられてきている。
【０００３】
薬用人参には、ジンセノシド（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）と呼ばれるプロサポニンが約３〜６％含有されており、前記ジンセノシドは薬用人参の代表的な生理活性物質であり、約３３種のジンセノシドが報告されている。薬用人参のジンセノシドは高分子構成成分と連結されているため摂取後に体内に吸収され難く、そのため、腸内に棲息する微生物により分解された後に体内に吸収される。すなわち、ジンセノシドに結合された糖が分解されたジンセノシドの形が最終的に体内に吸収され、ジンセノシドのそれぞれは異なる生理活性を示す。
【０００４】
一方、２０−Ｏ−β−グルコピラノシル−２０（Ｓ）−プロトパナキサジオール（以下、コンパウンドＫと称する。）は、ジンセノシドの基本骨格であるアグリコンの２０番の炭素に一つのグルコースが結合されているプロトパナキサジオール（ＰＰＤ）系サポニンの一種であり、ジンセノシドＲｂ１、Ｒｃ、Ｒｂ２から腸内細菌により生成された転換体である（例えば、下記の非特許文献１参照）。コンパウンドＫは、癌細胞の増殖および転移の抑制、抗老化、抗アレルギーおよび免疫増強作用を有することが知られているが、薬用人参または紅参そのものには含有されておらず、腸内細菌による体内代謝産物としてしか得られないが、個人ごとに腸内微生物の種類および代謝能力が異なるため、個人ごとに吸収差および効能差があることが報告されている（例えば、下記の非特許文献２参照）。
【０００５】
このような薬用人参サポニンをコンパウンドＫに転換する方法としては、熱処理（例えば、下記の非特許文献３、４および５参照）、酸処理（例えば、下記の非特許文献６および７参照）、アルカリ処理（例えば、下記の非特許文献８および９参照）、有機合成（例えば、下記の非特許文献１０参照）および微生物の酵素による転換法などが報告されている。これらのうち、酵素を用いる酵素転換法は、反応副産物をほとんど生成せず、基質に特異的に働いて選択的に転換可能である点、比較的に安定した条件下で反応が行える点、高い効率性を示す点などのため、最も効率よい薬用人参サポニン転換法であるといえる。
【０００６】
また、本研究の先行研究として、例えば、下記の特許文献１に示すように、酵素転換法を用いてコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を製造する最適な製造方法が報告されている。
【０００７】
肝は身体で解毒作用をするだけではなく、主な栄養素である炭水化物、たんぱく質、脂質などの合成、代謝、保管および再分配代謝過程を担当しており、これにより身体の代謝恒常性を維持する機能をしている。ところが、肝の機能は、ウィルス、炎症、過度なアルコール摂取、薬物、過労など様々な原因により損傷を受けることがある。
【０００８】
肝機能損傷および肝疾患の主な原因であると思われる症状としては、最近西欧化した食生活習慣および飲酒とストレスなどの影響でその頻度が急増しつつある脂肪肝が挙げられる。脂肪肝は、飲酒や過度な脂肪摂取およびストレスなどの影響で肝に中性脂肪が過度に蓄積（肝の重量の５％以上）される症状であるといえる。脂肪肝は他の疾患に発展せず、健康に大きな影響を与えない状態で長く維持されるが、たまに肝炎症および肝硬化などの疾病に発展することがあるため持続的な注意および管理が必要である。
【０００９】
脂肪肝症（Ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）は、過度なアルコールの摂取によるアルコール性脂肪肝症（ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）と、そうではない非アルコール性脂肪肝症（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  ｆａｔｔｙ ｌｉｖｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ、ＮＡＦＬＤ）とに分けられる。
【００１０】
非アルコール性脂肪肝症は、飲酒とは無関係に肝内に中性脂肪が蓄積される疾患であり、肝細胞に脂肪のみが過度に蓄積される単純脂肪症（ｓｉｍｐｌｅ ｓｔｅａｔｏｓｉｓ）と、肝細胞壊死と炎症および繊維化を伴う非アルコール性脂肪肝炎（ｎｏｎ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ ｓｔｅａｔｏｈｅｐａｔｉｔｉｓ、ＮＡＳＨ）およびこれよりさらに進んだ肝硬変症（ｌｉｖｅｒ ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ、ＬＣ）をはじめとする一連の疾患群を意味する。
【００１１】
非アルコール性脂肪肝症の有病率は、最近、西欧の諸国家だけではなく、韓国でも増加しており、これは、成人と小児の肥満の増加と関連があり、国家によるが、先進国家では全体の人口の約２０〜３０％であると報告している。
【００１２】
近年、非アルコール性脂肪肝症は、インシュリン抵抗性に基づく肥満、高血圧、第２型糖尿病、脂質代謝異常のように肝に現れる代謝症候群の一様相であると見なされている。非アルコール性脂肪肝症は単純な脂肪症であり得るが、非アルコール性脂肪肝症患者の中で約１０〜２０％は非アルコール性脂肪肝炎が発生し、これらの患者の中で約９〜２５％は肝硬変症に進むという問題がある。
【００１３】
非アルコール性脂肪肝症は、ほとんどの場合、栄養成分の適切な摂取と関係のある代謝性疾患の調節により回復可能であるが、放置すれば予後が不良になる。このため、非アルコール性脂肪肝症が肝硬変症に進むことを遮断するために肝に脂肪が蓄積されることを予防しなければならないが、これまで肝への脂肪の蓄積を予防するためにカロリーの摂取を減らしたりカロリーの消耗を増したりする方法の他にはこれといった方案が提示されていないのが現状である。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１４】
【特許文献１】大韓民国公開特許第１０−２０１３−００８５９７０号公報
【非特許文献】
【００１５】
【非特許文献１】Ｈａｓｅｇａｗａ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，  ６２：４５３−４５７（１９９６）
【非特許文献２】Ｈａｓｅｇａｗａ，  Ｈ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ，  ６３（５）：４３６−４４０（１９９７）
【非特許文献３】Ｋｉｔａｇａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｙａｋｕｇａｋｕ  Ｚａｓｓｈｉ．，  １０３：６１２−６２２（１９８３）
【非特許文献４】Ｋｗｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ  Ａ．，  ９２１：３３５−３３９（２００１）
【非特許文献５】Ｐａｒｋ，  Ｆｏｏｄ  Ｉｎｄ．  Ｎｕｔｒ．，  ９：２３−２７（２００４））
【非特許文献６】Ｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ．，  ４４：１４６−１４９（１９８２）
【非特許文献７】Ｂａｅ  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．  ２７（１）：６１−６７（２００４）
【非特許文献８】Ｃｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｈｅｍ．  Ｐｈａｒｍ．  Ｂｕｌｌ．  ３５：１６５３−１６５５（１９８７）
【非特許文献９】Ｉｍ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｋｏｒ  Ｊ  Ｇｉｎｓｅｎｇ  Ｓｃｉ．  １９：２９１−２９４（１９９５）
【非特許文献１０】Ａｎｕｆｒｉｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ  Ｒｅｓ．  ３０４：１７９−１８２（１９９７）
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
そこで、本発明者らは、非アルコール性脂肪肝症を予防および治療し得る組成物を提供するために鋭意努力したところ、酵素転換技術を用いて薬用人参由来のコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を製造し、これを含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および治療用組成物が動物実験において高脂肪食餌により誘起された脂肪肝症における肝内への脂肪の蓄積を抑える効果を有するということを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１７】
本発明の目的は、前記コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症予防および治療用薬剤学的組成物を提供することである。
【００１８】
本発明の他の目的は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および改善用健康食品組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
前記目的を達成するために、本発明は、前記コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症予防および治療用薬剤学的組成物を提供する。
【００２０】
また、本発明は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および改善用健康食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【００２１】
本発明は、水および酒精のみを用いて抽出することにより安定性が増加したコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症予防および治療用薬剤学的組成物、並びに健康機能食品組成物を提供するという効果があり、前記組成物は、血液および肝組織における中性脂質（ＴＧ）の含量の減少などを通して非アルコール性脂肪肝症を抑える効果を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】酵素転換技術を用いてコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を製造する過程を示す図である。
【図２Ａ】ＡおよびＢは、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の脂肪肝動物モデルにおける、正常食餌対照群（ＮＤ）、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）、高脂肪食餌＋シリマリン処理群（ＨＦＤ＋ｓｉｌｙ）および高脂肪食餌＋本発明による濃度別のコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液処理群（ＨＦＤ＋Ｇｘ１００、Ｇｘ２５０、Ｇｘ５００）の実験動物の組織病理学的な変化を示すものである。Ａは、それぞれオイルレッドＯ染色後の写真撮影の結果を示す。
【図２Ｂ】ＡおよびＢは、生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の脂肪肝動物モデルにおける、正常食餌対照群（ＮＤ）、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）、高脂肪食餌＋シリマリン処理群（ＨＦＤ＋ｓｉｌｙ）および高脂肪食餌＋本発明による濃度別のコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液処理群（ＨＦＤ＋Ｇｘ１００、Ｇｘ２５０、Ｇｘ５００）の実験動物の組織病理学的な変化を示すものである。Ｂは、それぞれ ヘマトキシリンエオジン染色後の写真撮影の結果を示す。
【図３】生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の脂肪肝動物モデルにおける、正常食餌（ＮＤ）対照群、高脂肪食餌（ＨＦＤ）対照群、高脂肪食餌（ＨＦＤ）＋シリマリン投与および高脂肪食餌（ＨＦＤ）＋本発明による濃度別のコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液の投与に伴う実験動物の血中生化学的指標のうち中性脂質の変化を示すものである。  正常食餌（ＮＤ）対高脂肪食餌（ＨＦＤ）：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１／高脂肪食餌（ＨＦＤ）対高脂肪食餌＋サンプル（ＨＦＤ＋ｓａｍｐｌｅｓ）：＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１
【図４】生体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）の脂肪肝動物モデルにおける、正常食餌（ＮＤ）対照群、高脂肪食餌（ＨＦＤ）対照群、高脂肪食餌（ＨＦＤ）＋シリマリン投与および高脂肪食餌（ＨＦＤ）＋本発明による濃度別のコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液の投与に伴う実験動物の肝組織内の中性脂質の含量の変化を示すものである。  正常食餌（ＮＤ）対高脂肪食餌（ＨＦＤ）：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１／高脂肪食餌（ＨＦＤ）対高脂肪食餌＋サンプル（ＨＦＤ＋ｓａｍｐｌｅｓ）：＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１
【図５】肝組織における脂質代謝と関連するタンパク質（ＳＲＥＢＰ−１ｃ、ＬＸＲ、ＦＡＳおよびＡＣＣ）の遺伝子発現の分析結果を示すものである。  正常食餌（ＮＤ）対高脂肪食餌（ＨＦＤ）：＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１／高脂肪食餌（ＨＦＤ）対高脂肪食餌＋サンプル（ＨＦＤ＋ｓａｍｐｌｅｓ）：＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１
【発明を実施するための形態】
【００２３】
以下、本発明について詳細に説明する。
【００２４】
本発明の第一の態様として、本発明は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症予防および治療用薬剤学的組成物を提供する。
【００２５】
本発明において用いられるコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液は、抽出溶媒として水または酒精を用いて紅参エキスを得るステップと、酵素転換技術を用いてコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を得るステップと、を含む方法を用いて製造することができる。例えば、上記の特許文献１に記載の方法を用いて製造することができる。
【００２６】
本発明は、抽出溶媒として、韓国食品衛生法上に許容される溶媒である水または酒精を用いる。このため、抽出溶媒として有機溶媒を用いる従来の方法とは異なり、本発明によるコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液は、食品・医薬品として製造するに当たって安全に使用可能である。
【００２７】
前記酒精は、７０〜９０％の酒精であることが好ましく、さらに好ましくは、８０％の酒精を用いる。
【００２８】
本発明は、紅参エキスをコンパウンドＫに転換するために、抽出された紅参エキス中の薬用人参サポニンを多糖類または酒精分解酵素と反応させる。前記多糖類または酒精分解酵素は、セルラーゼ、ペクチネックスまたはβ−グリコシダーゼ力価を有する多糖類または酒精分解酵素であってもよく、好ましくは、ジンセノシドコンパウンドＫの転換歩留まりが非常に高いアスぺルギルスニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）由来のシトラーゼＰＣＬ５（ｃｙｔｏｌａｓｅ ＰＣＬ５）である。
【００２９】
前記分解酵素は、酵素分解基質の量に対して２％の量で用いることが好ましい。
【００３０】
本発明において、コンパウンドＫの含量は、０．５〜１．５ｍｇ／ｇのレベルに強化されることが好ましい。
【００３１】
前記コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液は、好ましくは、薬剤学的組成物の総重量に対して０．１〜９９重量％で含有される。
【００３２】
本発明による前記薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容可能な担体をはじめとして様々な形態、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、乳剤、シロップ剤、エアロゾールなどの固形製剤剤形、外用剤、座剤および滅菌注射溶液の剤形に製剤化可能である。特に好ましくは、固形製剤剤形に製剤化可能である。
【００３３】
前記薬剤学的に許容可能な担体の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、澱粉、アカシアゴム、アルギネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微晶質セルロース、ポリビニールピロリドン、水、ヒドロキシ安息香酸メチル、ヒドロキシ安息香酸プロピル、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱物油などが挙げられる。
【００３４】
また、本発明による前記薬剤学的組成物は、充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤または賦形剤を含む。
【００３５】
経口用固形製剤は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などを含み、このような固形製剤は、少なくとも一つ以上の賦形剤、例えば、澱粉、炭酸カルシウム、スクロースまたはラクトース、ゼラチンなどを含んでいてもよく、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤などを含んでいてもよい。
【００３６】
経口用液状製剤は、懸濁剤、内用液剤、乳剤、シロップ剤などを含み、水、流動パラフィンなどの希釈剤、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などを含んでいてもよい。
【００３７】
非経口用製剤は、滅菌済み水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、座剤を含み、非水性溶剤、懸濁剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物性油、オレイン酸エチルなどの注射可能なエステル類などを含む。
【００３８】
座剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、ツイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどが使用可能である。
【００３９】
本発明において、実験動物を１１週間高脂肪食餌だけで飼育した実験動物では、肝細胞内の脂肪蓄積が大幅に増加する。しかしながら、高脂肪食餌で飼育する間に本発明によるコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する薬剤学的組成物を毎日投与した実験動物では、高脂肪食餌だけで飼育した実験動物に比べて肝細胞内の脂肪蓄積が顕著に減少する。このため、本発明によるコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する薬剤学的組成物は、実験動物において高脂肪食餌により誘起された非アルコール性脂肪肝症の発生を抑えることを確認することができる。
【００４０】
本発明の第二の態様として、本発明は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を有効成分として含有する非アルコール性脂肪肝症の予防および改善用健康食品組成物を提供する。
【００４１】
前記コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液は、好ましくは、健康食品組成物総重量に対して０．１〜９９重量％で含有される。
【００４２】
本発明の健康食品組成物は、健康機能食品として使用可能である。前記用語「健康機能食品」とは、大韓民国健康機能食品に関する法律第６７２７号による人体に有用な機能性を有する原料や成分を用いて製造および加工した食品を意味し、「機能性」とは、人体の構造および機能に対して栄養素を調節したり、生理学的作用などの保健用途に有用な効果を得たりする目的で摂取することを意味する。
【００４３】
本発明の健康食品組成物は、通常の食品添加物を含んでいてもよく、前記「食品添加物」としての適否は、特に断りのない限り、大韓民国食品医薬安全庁により承認を受けた大韓民国食品添加物公典の総則および一般試験法などにより当該品目に関する規格および基準により判定する。
【００４４】
前記「食品添加物公典」に収載された品目としては、例えば、ケトン類、グリシン、クエン酸カリウム、ニコチン酸、ケイヒ酸などの化学的合成物、柿色素、甘草エキス、結晶セルロース、ソルガム果皮色素(コウリャン色素)、グアガムなどの天然添加物、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム製剤、麺類添加アルカリ剤、保存料製剤、タール色素製剤などの混合製剤類などが挙げられる。
【００４５】
本発明の健康食品組成物は、飲料、カプセル、丸、顆粒よりなる群から選ばれるいずれか一種に製造可能である。
【００４６】
飲料状の健康機能食品の場合、必要に応じて、食品添加物に含まれる保存剤、安定剤、乳化剤、分散剤、着香料、着色剤などを含有してもよい。
【００４７】
カプセル状の健康機能食品の場合、硬質カプセル剤は、通常の硬質カプセルに生薬エキスと賦形剤などの添加剤の混合物またはその粒状物または製被した粒状物を充填して製造することができ、軟質カプセル剤は、生薬エキスと賦形剤などの添加剤の混合物をゼラチンなどカプセル基剤に充填して製造することができる。前記軟質カプセル剤は、必要に応じて、グリセリンまたはソルビトールなどの可塑剤、着色剤、保存剤などを含有していてもよい。
【００４８】
丸状の健康機能食品は、生薬エキスに賦形剤、結合剤、崩解剤などの混合物を適当な方法を用いて成形して調製することができ、必要に応じて、白糖や他の適当な製被剤で製被をしてもよく、澱粉、タルクまたは適当な物質で丸衣を施してもよい。
【００４９】
顆粒状の健康機能食品は、前記生薬エキスに賦形剤、結合剤、崩解剤などの混合物を適当な方法を用いて粒状に製造してもよく、必要に応じて、着香剤、矯味剤などを含有してもよい。本発明の前記賦形剤、結合剤、崩解剤、滑沢剤、矯味剤、着香剤などに関する用語の定義は、当業界における公知の文献に記載されており、その機能などが同一または類似のものを含む（大韓薬典解説編、ムンソン社、韓国薬学大学協議会、第５改正版、ｐ３３−４８，１９８９）。
【００５０】
以下、本発明を下記の実施例および実験例を挙げてさらに詳細に説明する。しかしながら、これらの実施例および実験例は本発明への一助となるために提供されるものであり、いかなる意味にせよ本発明の範囲がこれらにより制限されることはない。
【００５１】
［実施例］
実施例１：コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液の製造
本研究に用いられた薬用人参は、干し紅参（４年根）であり、原料の１０倍（ｗ／ｖ）の水または酒精を入れ、７０〜８０℃で２００ｒｐｍにて１５時間ずつ３回還流抽出して紅参エキスを製造した後、これを常温または低温で湯煎・冷却してろ過した後、減圧濃縮して７０ｂｒｉｘ以上の濃縮物を製造した。
【００５２】
前記濃縮物を再び１０倍（ｗ／ｖ）の水で希釈し、クエン酸を添加してｐＨ４．３に調節した後、酵素シトラーゼ（Ｃｙｔｏｌａｓｅ）ＰＣＬ５（フランスＤＳＭ社製）を２％（ｖ／ｖ）添加し、５６℃で２００ｒｐｍにて２４〜８５時間反応させた。
【００５３】
次いで、濃縮物を沸騰水浴槽で３０分間加熱することにより酵素を不活性させてそれ以上の反応が起こらないようにした後、７５ｂｒｉｘになるように減圧濃縮してコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液を製造した。上記の過程を図１に示す。
【００５４】
実験例１：生体内（Ｉｎ  ｖｉｖｏ）の脂肪肝動物モデルを用いた効能の検証
コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液の非アルコール性脂肪肝の改善に対する機能を研究するために、雄性５週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスを用いて高脂肪食餌により誘起された動物モデルを構築して生体内の実験を行った。
【００５５】
このモデルは齧歯類において主として用いられており、高脂肪食餌を通して肥満を誘起した後、実験しようとする試料を投与してその効果を調べてみることが一般的に行われているのが現状である。このため、前記実施例１において製造されたコンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液に対して動物実験を通じてその効能を詳細に検討しようとした。
【００５６】
下記表１に示すように、実験動物は、合計６群に分けて１１週間定められた食餌および試料を投与した。対照群としては、正常食餌（Ｎｏｒｍａｌ ｄｉｅｔ、ＮＤ）または高脂肪食餌（Ｈｉｇｈ Ｆａｔ Ｄｉｅｔ、ＨＦＤ）を、陽性対照群としては高脂肪食餌＋シリマリン（ＨＦＤ＋Ｓｉｌｙ）（２００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）を、実験群としては高脂肪食餌＋コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液（ＨＦＤ＋Ｇｘ）を低濃度、中濃度および高濃度（１００、２５０、５００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙ）に分けて経口投与した。
【００５７】
ここで、シリマリンは、肝を治療するあらゆる種類の成分のうち最も卓越した効能を有しているものであり、特に、脂肪肝、肝炎、肝硬変症などに効能があることが知られている。
【００５８】
【表１】
2016094414.tif 000003
【００５９】
１−１．実験動物の体重および肝の重さの変化
１１週間の飼育期間中に動物の体重を毎週１回の周期で測定し、統計学的な分析のためにスチューデントのＴ検定を行った。高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）は正常食餌対照群（ＮＤ）と比較したのに対し、高脂肪食餌＋シリマリン処理群（ＨＦＤ＋Ｓｉｌｙ）または高脂肪食餌＋コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液処理群（ＨＦＤ＋Ｇｘ）は高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）と比較した。実験群別の平均体重の変化の推移を下記表２に示す。
【００６０】
【表２】
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【００６１】
実験を始めたときには実験動物の平均体重は全ての実験群の間に有意差がなかったが、実験期間中に高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）の体重は正常食餌対照群（ＮＤ）に比べて急峻な増加を示した。このような結果は、高脂肪食餌のエネルギー効率が非常に高いことを意味し、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）の場合、過度な体重になる場合に脂肪肝を形成する可能性も高いことを意味する。
【００６２】
前記表２に示すように、最終的な平均体重の場合、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）が３５．３±１．９ｇであって、正常食餌対照群（ＮＤ）の２４．０±１．０ｇに比べて約４７％ほど高く現れた。コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液実験群（ＨＦＤ＋Ｇｘ）の場合、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）と比較したとき、最終的な平均体重がＨＦＤ＋Ｇｘ１００（３２．９±２．７ｇ）は約６．８％、ＨＦＤ＋Ｇｘ２５０（３２．５±５．１ｇ）は約７．９％、ＨＦＤ＋Ｇｘ５００（３３．３±２．７ｇ）は約５．７％であって有意差はないが、平均体重が減少する傾向を確認することができた。
【００６３】
１１週間の実験が終わった後、動物を犠牲にして全ての動物から肝を摘出して重さを測定して群別の違いに対する統計分析を行い、統計学的な分析のためにスチューデントのＴ検定を行った。高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）は正常食餌対照群（ＮＤ）と比較したのに対し、高脂肪食餌＋シリマリン処理群（ＨＦＤ＋Ｓｉｌｙ）または高脂肪食餌＋コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液処理群（ＨＦＤ＋Ｇｘ）は高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）と比較した。その結果を下記表３に示す。
【００６４】
【表３】
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【００６５】
体重による肝の重さの違いを考慮するために、肝の重さを各実験動物の体重で割って肝／体重（ｗ／ｗ％）に換算した後、再び群別に平均値を計算した。
【００６６】
動物を犠牲にしたときに摘出した肝の重さを測定して比較したところ、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）の肝の平均重さは０．８８±０．０５ｇであり、正常食餌対照群（ＮＤ）の肝の平均重さ（０．７８±０．０７ｇ）に比べて約１３％ほど有意的に増加することを示した。これは、高脂肪食餌の摂取により肝に脂肪が蓄積されて肝の肥大現象が現れたものと認められる。
【００６７】
１−２．組織病理学的な変化
高脂肪食餌（ＨＦＤ）の１１週間の処理による脂肪肝を誘起した。目視したところ、正常食餌（ＮＤ）対照群に比べて高脂肪食餌（ＨＦＤ）対照群の肝の色は相対的に黄色を帯びていた。これは、高脂肪食餌により肝組織にかなりの脂肪の蓄積が生じたものと認められる。
【００６８】
１１週間の実験が終わった後、肝組織の組織病理学的な変化を確認した。
【００６９】
肝組織の組織病理学的な変化を確認するために、動物を犠牲にしたときに摘出した肝試料をスライドに固定し、細胞内の脂質を確認するためのオイルレッドＯ染色および脂肪組織の組織学的な分析のためのヘマトキシリンエオジン染色（Ｈ＆Ｅ染色）を行った後、顕微鏡を用いて確認した。その結果を図２Ａおよび図２Ｂに示す。
【００７０】
図２Ａに示すように、オイルレッドＯ染色後に顕微鏡を用いて確認したところ、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）において赤色に染色された脂質液滴が細胞内に散在していた。
【００７１】
図２Ｂにおいて、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）の肝においは肝細胞内の脂質蓄積を意味する円形の巨大細胞が多数出現し、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液実験群（ＨＦＤ＋Ｇｘ）の場合、脂質液滴の大きさが高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）における脂質液滴のそれよりも顕著に減少した。なお、中性脂質の蓄積度が高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）に比べて減ることを確認することができた。
【００７２】
１−３．血中の生化学的な指標の変化
脂肪肝により肝機能の一部が損傷されれば、血液内の関連のある生化学的指標に変化が生じる。この実験では、脂肪肝の診断と関連して使用可能な主な肝機能指標を選定して群別にその違いを分析した。
【００７３】
図３に示すように、血中中性脂質であるＴＧ含量の場合、高脂肪食餌（ＨＦＤ）対照群が正常食餌（ＮＤ）対照群に比べて約２．１倍以上有意的に高い数値を示し、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液実験群（ＨＦＤ＋Ｇｘ）では、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液の濃度とは無関係に、高脂肪食餌（ＨＦＤ）対照群に比べて中性脂質の含量が全て有意的に減少することを示した。
【００７４】
この結果は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液が血中脂質代謝に直接的な影響を及ぼすものと解釈される。
【００７５】
１−４．肝組織内の中性脂質の含量の変化
肝組織内の中性脂質（Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ、ＴＧ）の含量を分析し、その結果を図４に示す。
【００７６】
図４に示すように、高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）は正常食餌対照群（ＮＤ）に比べて平均的なＴＧ含量が２倍以上増加し、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液実験群（ＨＦＤ＋Ｇｘ１００、ＨＦＤ＋Ｇｘ２５０、ＨＦＤ＋Ｇｘ５００）ではＴＧ含量が再び減少する傾向を示した。
【００７７】
このような結果は、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液が血液と肝組織内の中性脂質代謝を調節する機能があることを意味する。
【００７８】
実験例２：肝組織における脂質代謝と関連するタンパク質の遺伝子発現の分析
コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液が肝組織において脂質代謝を調節する機序を研究するために、まず、肝組織において脂質の生合成（Ｌｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ）および分解（Ｌｉｐｏｌｙｓｉｓ）に与る主なタンパク質の遺伝子発現をリアルタイム逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）法を用いて分析し、その結果を図５に示す。
【００７９】
肝細胞において脂質の新生合成（ｄｅ ｎｏｖｏ Ｌｉｐｏｇｅｎｅｓｉｓ）を調節するタンパク質では、ＳＲＥＢＰ−１ｃ（ステロール調節エレメント結合タンパク質１）、ＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）、ＡＣＣ（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ）、ＬＸＲα（肝臓Ｘ受容体α）を分析した。
【００８０】
遺伝子発現分析の内部標準物質としては、ハウスキーピング遺伝子遺伝子である３６Ｂ４（リボソーム酸性リンタンパク質Ｐ０）のＰＣＲが用いられた。
【００８１】
ＳＲＥＢＰ−１ｃ（ステロール調節エレメント結合タンパク質１）は、肝細胞においてＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）やＡＣＣ（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ）などの脂質生合成遺伝子の発現を調節する転写因子であるが、肝細胞内の脂質センサーとして働くＬＸＲα（肝臓Ｘ受容体α）の主な標的遺伝子でもある。このため、ある外部信号によりＬＸＲα（肝臓Ｘ受容体α）が活性化されれば、ＳＲＥＢＰ−１ｃ（ステロール調節エレメント結合タンパク質１）の発現を促してＦＡＳ（脂肪酸合成酵素）およびＡＣＣ（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ）など脂質生合成酵素遺伝子の発現が活性化される。
【００８２】
図５に示すように、リアルタイム逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）実験を行ったところ、肝細胞内の脂肪生成遺伝子の発現はＨＦＤ食餌により有意的に活性化されるが、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液の処理により再びその発現が抑えられるということが分かる。このような結果から、コンパウンドＫ成分の強化された紅参濃縮液がＬＸＲα（肝臓Ｘ受容体α）媒介性のＳＲＥＢＰ−１ｃ（ステロール調節エレメント結合タンパク質１）の誘導機序を抑えて高脂肪食餌対照群（ＨＦＤ）により活性化されていた脂質の生合成を制御する働きをするものと推論することができる。
【図１】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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