(57)【要約】【課題】本発明は、安全かつ有効な、新たなα−グルコシダーゼ阻害活性を有する組成物およびその組成物を含む食品又は医薬品を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、ヤンバルゴマ（Helicteres angustifolia L.）を有効成分として含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤンバルゴマ（Helicteres angustifolia L.）を有効成分として含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項２】
前記有効成分がヤンバルゴマの抽出物として含まれていることを特徴とする請求項１に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項３】
前記抽出物が水又は有機溶剤による抽出物であることを特徴とする請求項２に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項４】
前記抽出物が３０〜９０％エタノール抽出物であることを特徴とする請求項３に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有することを特徴とする医薬。
【請求項６】
カプセル、錠剤、顆粒または粉末形態であることを特徴とする請求項５に記載の医薬。
【請求項７】
請求項１〜４のいずれか１項に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有することを特徴とする食品。
【請求項８】
飲料形態であることを特徴とする請求項７に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−グルコシダーゼ阻害活性を有する組成物、及び該組成物を含む食品又は医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
α−グルコシダーゼは小腸粘膜上皮細胞の刷子縁に存在する二糖類分解酵素（マルターゼ、スクラーゼ、イソマルターゼ）であり、その働きを阻害することにより、二糖類の単糖への分解を抑制して血糖値の上昇を抑え、食後高血糖を改善できる。α−グルコシダーゼ阻害剤は食後高血糖を降下させるため、それは糖尿病予防及び治療の一つの手段である（非特許文献１参照）。
【０００３】
現在臨床で広く用いられているα−グルコシダーゼ阻害剤は、アカルボース（特許文献１参照）、ボグリボース（特許文献２参照）、ミグリトール（非特許文献２参照）など数種類しかない。そして、α−グルコシダーゼ阻害剤には肝毒性、腹痛、鼓腸、下痢、低血糖症など重大な副作用があるとの報告があり（非特許文献３参照）、安全性に問題が指摘されている。従って、安全かつ有効なα−グルコシダーゼ阻害剤が強く望まれている。
【０００４】
現在までに天然植物から多くのα−グルコシダーゼ阻害剤が開発されている。例えば、センカクソウ（特許文献３参照）、アムラ（特許文献４参照）、コタラヒムブツ（特許文献５参照）等が利用されている。しかしながら、特定保健用食品として販売されているα−グルコシダーゼ阻害剤は蕃爽麗茶、グルコデザイン、トウチエキス等の数種類しかない。
【０００５】
一方、ヤンバルゴマ（Helicteres angustifolia L.）は中国西南部および東南アジア原産のアオギリ科ヤンバルゴマ属の小低木で、山地に分布している。ヤンバルゴマの抽出物がα−グルコシダーゼ活性阻害作用を有することについては報告例がない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００６】
【特許文献１】特公昭５４−３９４７４号公報
【特許文献２】特開平０９−６７２７１号公報
【特許文献３】特開２００６−１６３８８号公報
【特許文献４】特開２００６−１０４０９４号公報
【特許文献５】特開２００８−１３７９２５号公報
【非特許文献】
【０００７】
【非特許文献１】Jo SH.et al., International Journal of Molecular Science. 12, p1359-1370, 2011
【非特許文献２】Ana T et al., Journal of Medicinal Chemistry, 55, p10345-10346, 2012
【非特許文献３】Charpentier G et al., Diabetic Medicine, 26, p73-85, 2000
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、安全かつ有効な、新たなα−グルコシダーゼ阻害活性を有する組成物およびその組成物を含む食品又は医薬品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、ヤンバルゴマの抽出物はα−グルコシダーゼ阻害活性を有し、かつ、血糖値上昇抑制作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
すなわち、本発明は以下のとおりである。
（１）ヤンバルゴマ（Helicteres angustifolia L.）を有効成分として含有することを特徴とするα−グルコシダーゼ阻害剤。
（２）前記有効成分がヤンバルゴマの抽出物として含まれていることを特徴とする（１）に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
（３）前記抽出物が水又は有機溶剤による抽出物であることを特徴とする（２）に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
（４）前記抽出物が３０〜９０％エタノール抽出物であることを特徴とする（３）に記載のα−グルコシダーゼ阻害剤。
（５）（１）〜（４）のいずれかに記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有することを特徴とする医薬。
（６）カプセル、錠剤、顆粒または粉末形態であることを特徴とする（５）に記載の医薬。
（７）（１）〜（４）のいずれかに記載のα−グルコシダーゼ阻害剤を含有することを特徴とする食品。
（８）飲料形態であることを特徴とする（７）に記載の食品。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、天然物由来であるため毒性が低く、副作用が少ない。また、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、二糖類分解酵素の働きを阻害することに起因して、血糖上昇抑制作用を示すため、糖尿病の予防または改善に有効である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
以下、本発明を詳細に説明する。
（本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤）
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、ヤンバルゴマを有効成分とすることを特徴とする。
ヤンバルゴマ（Helicteres angustifolia L.）は中国西南部および東南アジア原産のアオギリ科ヤンバルゴマ属の小低木である。本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤に有効成分として含有されるヤンバルゴマの部位としては、特に限定されないが、根、葉、茎、花および果実が挙げられ、ヤンバルゴマの根を有効成分とすることが好ましい。
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、製剤化および効力の観点から、ヤンバルゴマの抽出物を有効成分とすることが好ましい。ヤンバルゴマの抽出物としては、特に限定されないが、根、葉、茎、花および果実の抽出物が挙げられ、ヤンバルゴマの根の抽出物を有効成分とすることが好ましい。
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、小腸由来マルターゼおよび／またはスクラーゼの阻害率が、好ましくは１０％以上、１５％以上、２０％以上である。
【００１３】
（本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤の製造方法）
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、根、葉、茎、花および果実を用いる場合には、これらの部位を乾燥後、切断または粉末化したものを、そのまま、あるいは、必要に応じて薬理学的に許容される担体を添加して、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤とすることができる。薬理学的に許容される担体としては、例えば固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壊剤等が挙げられる。
【００１４】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、ヤンバルゴマの抽出物を有効成分とする場合、ヤンバルゴマの根、葉、茎、花および果実などを、水、エタノール、メタノール、酢酸エチル、アセトン、アセトニトリル、ブタノール等の水性溶媒単独で或いはこれらを組み合わせて抽出することにより得ることができる。ヤンバルゴマは、水または含水エタノールを抽出溶媒として用いると、有効成分が効率よく抽出される。さらに、抽出溶媒として含水エタノールを使用する場合、３０〜９０％エタノールを使用することが好ましい。得られたエタノール抽出液を減圧下で溶媒留去することにより、ヤンバルゴマの濃縮抽出物を得ることができ、これをヤンバルゴマの抽出物として使用することが好ましい。
得られたエタノール抽出物を酢酸エチル、ｎ−ブタノールを用いて分画することにより、高α−グルコシダーゼ阻害活性を有する画分を得ることができる。また、得られたエタノール抽出物を、樹脂ビーズを用いて、および／またはクロマトグラフィーを用いて、α−グルコシダーゼ阻害活性を有する画分を分画することができる。本発明においては、ダイヤイオン（登録商標）HP20樹脂（三菱化学）を用いて、および／またはHP20樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーを用いて分画することにより、高いα−グルコシダーゼ阻害活性を有する画分を得ることができるため、HP20樹脂を使用して分画することが好ましい。
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、上記抽出物またはその濃縮物をそのまま、あるいは、必要に応じて薬理学的に許容される担体を添加して、本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤とすることができる。薬理学的に許容される担体としては、例えば固形製剤における賦形剤、滑沢剤、結合剤及び崩壊剤、液状製剤における溶剤、溶解補助剤、及び緩衝剤等が挙げられる。
【００１５】
（本発明の医薬）
本発明の医薬は、上記α−グルコシダーゼ阻害剤を含むことを特徴とする。
本発明の医薬の製剤化には、通常製剤化に用いられる各種の成分が任意に使用されるが、その例としては、例えばデンプン、デキストリン、乳糖、コーンスターチ、無機塩類などが挙げられる。
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は毒性が極めて低く、重大な副作用が報告されていないため、直接摂取することができる。従って、上記α−グルコシダーゼ阻害剤を、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、散剤等として摂取することができる。
本発明の医薬の投与方法としては特に制限されないが、経口投与が好ましい。好ましい投与量としては、ヤンバルゴマ植物を投与する場合、例えば、患者（体重６０ｋｇとして）に対して、一日につき、乾燥重量で１ｇ〜５００ｇ、好ましくは５ｇ〜３００ｇである。一方、ヤンバルゴマの抽出物を投与する場合、本発明の医薬中の抽出物の濃度としては、例えば、乾燥重量で１０〜５００μｇ／ｍｌ、２０〜１５０μｇ／ｍｌが好ましい。
抽出物ではなくヤンバルゴマ植物そのものを使用する場合は、植物体に占める抽出物の乾物重量を考慮して、抽出物の場合と比較して９〜１１倍の量または濃度で投与し、ヤンバルゴマ植物ではなく抽出物を投与する場合はその逆とすればよい。
本発明の医薬は、α−グルコシダーゼ阻害剤であることに加えて、血糖上昇抑制阻害効果を示すため、糖尿病の予防または改善に有効である。
【００１６】
（本発明の食品）
本発明の食品は、上記α−グルコシダーゼ阻害剤を含むことを特徴とする。
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は毒性が極めて低く、重大な副作用が報告されていないため、直接摂取することができる。
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、食品として一般に用いられる原料、例えば、蛋白質、脂質、炭水化物、ビタミン類などに配合することにより、血糖上昇抑制効果を有する機能性食品、健康食品、健康補助食品、食事用補添物、栄養組成物としても用いることができる。本発明の食品は、上記α−グルコシダーゼ阻害剤を食品原料に配合することにより製造することができる。本発明の食品の好ましい例としては乳製品、調味料、菓子類
、麺類、スープ類、飲料等が挙げられ、特に、ティーバッグ、お茶等の飲料が好ましい。
本発明の食品中に含まれるα−グルコシダーゼ阻害剤の量は、特に限定されず適宜選択すればよいが、ヤンバルゴマ植物を使用する場合、例えば、食品１ｋｇ当たり１ｇ〜５００ｇ、好ましくは５ｇ〜３００ｇ、ヤンバルゴマ抽出物を使用する場合、例えば、飲料中に１０〜５００μｇ／ｍｌ、好ましくは２０〜１５０μｇ／ｍｌとするのがよい。
抽出物ではなくヤンバルゴマ植物そのものを使用する場合は、植物体に占める抽出物の乾物重量を考慮して、抽出物の場合と比較して９〜１１倍の量または濃度で投与し、ヤンバルゴマ植物ではなく抽出物を投与する場合はその逆とすればよい。
また、本発明の食品は、上記のような疾患に対する予防または治療効果を有する健康食品や特定保健用食品、栄養機能食品などとすることもできる。本発明の食品は、例えば「血糖上昇抑制効果を有する食品」、「血糖上昇抑制効果を有する成分を含有する食品」等の表示を付して販売することもできる。また、「糖尿病治療効果を有する食品」、「糖尿病治療効果を有する成分を含有する食品」などの表示を有してもよい。
【実施例】
【００１７】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
また、各実施例に伴う表中の結果は各群の平均値または平均値±標準誤差で示した。各群間の比較は一元配置分散分析（ANOVA）を行った後にDuncan's multiple range test (DMRT)にて多重比較検定を行った。（*p < 0.05、 **p < 0.01、 ***p < 0.001）。
【００１８】
実施例１：ヤンバルゴマ抽出物のα−グルコシダーゼ阻害作用
実施例１−１：ヤンバルゴマ根の抽出物および分画の調製
ヤンバルゴマ乾燥根（ラオスから入手）を粉砕し、50 gに500 mLの蒸留水を加え、100
℃で2時間熱水抽出した。抽出後、固液分離して抽出液を減圧濃縮し、さらに凍結乾燥に
よって乾燥物を得た（抽出物1）。
次に、ヤンバルゴマ乾燥根を粉砕し、70%エタノールを加えて室温で3日間抽出を行った。抽出液を合わせて40℃で減圧下溶媒留去して70％エタノール抽出物（抽出物2）を得た
。
次に、抽出物2を石油エーテル、酢酸エチル、ブタノールを用いて順次抽出し、凍結乾
燥し、画分1、画分2、画分3を得た。最後に残存水層について減圧濃縮し、さらに凍結乾
燥によって乾燥物（画分4）を得た。この画分4をダイヤイオンHP 20カラムクロマトグラ
フィー（三菱化学）に付し、10％のメタノール、50％のメタノール、100％のメタノール
を用いて分画し、画分5、画分6、画分7を得た。
最後に、抽出物2を合成吸着樹脂のダイヤイオンHP-20（三菱化学）に通液した後、まずは水で洗浄し、糖質などを得た（画分8）。その後10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、99.5%のエタノールで順次溶出し、溶出液を濃縮、乾燥し、画分9から画分18までの画分を得た。
【００１９】
実施例１−２：マルターゼ阻害作用の測定
ラット小腸由来マルターゼ酵素液の調製：ラット腸管アセトンパウダー(SIGMA社製)1 g
を 0.1 M リン酸緩衝液（pH7.0）10 mLに懸濁し、氷冷しながらホモジナイズを行った。遠心分離（3,000 rpm、10分間、4℃）の後、上清を粗酵素液（100 mg/mL）として使用し
た。粗酵素液を0.1 Mリン酸緩衝液（pH7.0）で20倍希釈したものをマルターゼ酵素液として使用した。
異なる濃度の実施例１−１で調製した抽出物及び画分0.02 mLを96穴プレートに添加し
、0.02 mLマルトース（2％）を基質として添加した後、37 ℃で5 分間予備加熱した。そ
の後、ラット小腸由来のマルターゼ酵素液0.02 mLを添加し37 ℃で60 分間正確に酵素反
応を行った後、反応液0.01 mLを別の 96穴プレートに入れ、発色試薬液（グルコースCII-テスト、和光製薬）0.2 mLを添加し、よく混合した後、37 ℃で5 分間加温した。その後
、試薬盲検を対照として試料の吸光度492 nmを分光光度計（Biotrak II plate reader,  Biochrom, Cambridge, UK）で測定し、試料のマルターゼ阻害活性を計算した。
各試料溶液の阻害活性は次式を用いて算出し、阻害率（％）として表した。
【数１】
2016222627.tif 000002
試料：試料、マルトース、マルターゼ酵素液
試料盲検：試料、マルトース、リン酸緩衝液
対照：リン酸緩衝液、マルトース、マルターゼ酵素液
対照盲検：リン酸緩衝液、マルトース、リン酸緩衝液
本実験では各試料溶液１種類につき3検体（n＝3）で酵素反応を行った。ヤンバルゴマ
の根の各抽出物の小腸由来マルターゼ阻害活性(1 mg/mL)を表１に記載した。
【表１】
2016222627.tif 000003
表１から明らかなように、HP20樹脂により精製した画分 9は1 mg/mLの濃度で46.3％の
マルターゼ阻害率を示し、糖尿病に対する予防又は改善作用を有することが明らかになった。なお、画分７が阻害率０％であったが、これは1 mg/mLの濃度では阻害活性が弱いこ
とが原因と考えられた。
【００２０】
実施例１−３：スクラーゼ阻害作用の測定
実施例１−１で作製した粗酵素液を0.1 Mリン酸緩衝液（pH7.0）で2倍希釈したものを
スクラーゼ酵素液として使用した。スクラーゼ阻害作用の測定は、マルトースをスクロースに変えて実施例１−２と同様に行った。ヤンバルゴマの根の各抽出物の小腸由来スクラーゼ阻害活性(1 mg/mL)を表２に記載した。
【表２】
2016222627.tif 000004
表２から明らかなように、HP20樹脂による精製した画分 9は1 mg/mLの濃度で51.4％の
スクラーゼ阻害率を示し、糖尿病に対する予防又は改善作用を有することが明らかになった。なお、画分４，７，８が阻害率０％であったが、これは1 mg/mLの濃度では阻害活性
が弱いことが原因と考えられた。
【００２１】
実施例２：ヤンバルゴマ（根）メタノール抽出物の血糖上昇抑制効果
実施例２−１：正常ラットにおけるマルトース負荷試験
13週齢のＳＤ系ラット（日本エスエルシー）は室温23±1°C、湿度55±8％、12時間明
暗周期（7:00−19:00明期）照明下、筑波大学動物資源センターで飼育し、固形飼料（MF.オリエンタル酵母工業）及び水（水道水）を自由摂取とした。ラットを１週間予備飼育した後、対照群（6匹）には蒸留水を、投与群（6匹）には実施例１−１で調製した抽出物2 (300 mg/kg）を経口投与した。投与30分後、各群にマルトース（2 g/kg）を胃ゾンデによって経口投与した（10 mL/kg体重）。マルトースを投与する直前（0分）及びマルトース
投与30、60、120分後、尾静脈から採血して血糖値を簡易型血糖値測定器（グルテストNeoaアルファ、三和化学研究所、名古屋）を用いて測定した。
各群にマルトースを投与後120分の血糖値の推移を表３に示した。
【表３】
2016222627.tif 000005
表３から明らかなように、ヤンバルゴマ投与群は、対照群と比較して、マルトース投与後30、60分の血糖値を有意に抑制し、糖尿病の予防又は改善作用を有することが明らかになった。
【００２２】
実施例２−２：正常ラットにおけるスクロース負荷試験
正常ラットにおけるスクロース負荷試験は、基質をスクロースに変えて実施例２−１と同様に行った。各群にスクロースを投与後120分間の血糖値の推移を表４に示した。
【表４】
2016222627.tif 000006
表４から明らかなように、抽出物２はスクロース摂取30分後の血糖上昇を有意に抑制し、糖尿病の予防又は改善作用を有することが明らかになった。
以上により、ヤンバルゴマの抽出物は血糖値の上昇を抑制できる効果を有する。
【産業上の利用可能性】
【００２３】
本発明のα−グルコシダーゼ阻害剤は、食品、健康食品、特定保健用食品、栄養機能食品および医薬品などの分野で利用可能である。