(57)【要約】【課題】少ない粘弾性溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することが可能な粘弾性溶液の濃度評価方法を提供する。【解決手段】この濃度評価方法は、ヒアルロン酸溶液などの粘弾性溶液の濃度を評価する濃度評価方法であって、流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成された流路に粘弾性溶液を流す流入ステップＳ１１と、その粘弾性溶液が流路に流れる状態を観測する観測ステップＳ１２と、観測された状態に応じて粘弾性溶液の濃度を評価する評価ステップＳ１３とを含む。【選択図】図１１Ａ
2016042053.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
粘弾性溶液の濃度を評価する濃度評価方法であって、
流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成された流路に前記粘弾性溶液を流す流入ステップと、
前記粘弾性溶液が前記流路に流れる状態を観測する観測ステップと、
観測された前記状態に応じて前記粘弾性溶液の濃度を評価する評価ステップと
を含む粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項２】
前記流入ステップでは、
流速およびレイノルズ数のうちの何れか一方をパラメータとして用いる場合に、前記パラメータにおける互いに異なる数値ごとに、当該数値のパラメータで前記粘弾性溶液を流し、
前記観測ステップでは、前記数値ごとに、当該数値のパラメータで前記粘弾性溶液が流れる状態を観測し、
前記評価ステップでは、
前記観測ステップで観測される状態の遷移が現れる前記パラメータの数値を観測臨界値として特定し、特定された前記観測臨界値に予め対応付けられている濃度を、前記粘弾性溶液の濃度として導出することによって、当該粘弾性溶液の濃度を測定する
請求項１に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項３】
前記評価ステップでは、
前記粘弾性溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、当該濃度と、当該濃度に対応付けられた臨界値とを示す参照データを参照し、当該参照データにおいて、前記観測臨界値と同じ値を示す臨界値に対応付けられている濃度を、前記粘弾性溶液の濃度として導出する
請求項２に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項４】
前記濃度評価方法は、さらに、
前記試料溶液の既知の濃度ごとに、当該既知の濃度の試料溶液に対する臨界値を測定する前処理を行うことにより、前記参照データを生成する参照データ生成ステップを含む
請求項３に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項５】
前記参照データ生成ステップにおける前記前処理では、
前記パラメータにおける互いに異なる数値ごとに、当該数値のパラメータで前記既知の濃度の試料溶液を前記流路に流し、
前記数値ごとに、当該数値のパラメータで前記既知の濃度の試料溶液が流れる状態を観測し、
観測される状態の遷移が現れる前記パラメータの数値を、前記既知の濃度の試料溶液に対する臨界値として特定することにより、前記既知の濃度の試料溶液に対する臨界値を測定する
請求項４に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項６】
前記流入ステップでは、
予め定められた基準濃度に対応付けられた流速またはレイノルズ数で前記粘弾性溶液を流し、
前記評価ステップでは、
観測された前記状態が不安定な流れを示す場合には、前記粘弾性溶液の濃度は前記基準濃度よりも高いと判定し、観測された前記状態が安定な流れを示す場合には、前記粘弾性溶液の濃度は前記基準濃度よりも低いと判定する
請求項１に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項７】
前記評価ステップでは、
ヒアルロン酸ナトリウムを溶質として含む前記粘弾性溶液の濃度を評価する
請求項１〜６の何れか１項に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項８】
前記流路は、途中部分の内寸が他の部分よりも小さい矩形管によって形成され、前記矩形管のうち最も大きい内寸は４００μｍ以下である
請求項１〜７の何れか１項に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項９】
前記粘弾性溶液は、１ｍ秒以上の緩和時間を有する
請求項１〜８の何れか１項に記載の粘弾性溶液の濃度評価方法。
【請求項１０】
粘弾性溶液の濃度を評価する濃度評価装置であって、
流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成された流路に前記粘弾性溶液を流す流入部と、
前記粘弾性溶液が前記流路に流れる状態を観測する観測部と、
観測された前記状態に応じて前記粘弾性溶液の濃度を評価する評価部と
を備える粘弾性溶液の濃度評価装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、粘弾性溶液の濃度評価方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、粘性物質溶液の濃度を測定する方法が提案されている（例えば、特許文献１参照）。上記特許文献１の濃度測定方法は、管路中を流動する粘性物質溶液の濃度を測定する方法である。具体的には、管路中を粘性物質溶液が流動する際に発生する圧力損失を測定する。さらに、測定された圧力損失と、既知である管路の半径および長さと、管路の両端形状に関する係数と、粘性物質溶液の流量、平均流速、温度、および温度係数とから、その粘性物質溶液の濃度を算出する。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００３】
【特許文献１】特開２００３−７５３１９号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
しかしながら、上記特許文献１の濃度測定方法であっても、溶液の濃度を適切に評価するためには多くの溶液が必要になるという問題がある。
【０００５】
そこで、本発明は、かかる問題に鑑みてなされたものであって、少ない粘弾性溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することが可能な粘弾性溶液の濃度評価方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上記目的を達成するために、本発明に係る粘弾性溶液の濃度評価方法は粘弾性溶液の濃度を評価する濃度評価方法であって、流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成された流路に前記粘弾性溶液を流す流入ステップと、前記粘弾性溶液が前記流路に流れる状態を観測する観測ステップと、観測された前記状態に応じて前記粘弾性溶液の濃度を評価する評価ステップとを含む。例えば、前記評価ステップでは、ヒアルロン酸ナトリウムを溶質として含む前記粘弾性溶液の濃度を評価する。また、前記粘弾性溶液は、例えば１ｍ秒以上の緩和時間を有する。
【０００７】
これにより、流路に流れる状態（例えば、安定な状態または不安定な状態）に応じて粘弾性溶液の濃度が評価されるため、流路を小さくするほど、評価に必要とされる粘弾性溶液の量を減らすことができる。したがって、少ない粘弾性溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することができる。また、被検体である粘弾性溶液が、ヒアルロン酸ナトリウムを溶質として含むヒアルロン酸溶液であって、生体液として人体に含まれている場合には、評価のために人体から抽出されるヒアルロン酸溶液の量を減らすことができ、人に対する負担を軽減することができる。具体的には、人体の関節や眼などから抽出されるヒアルロン酸溶液が少なくても、正確にそのヒアルロン酸溶液の濃度を適切に評価することができる。
【０００８】
また、前記流入ステップでは、流速およびレイノルズ数のうちの何れか一方をパラメータとして用いる場合に、前記パラメータにおける互いに異なる数値ごとに、当該数値のパラメータで前記粘弾性溶液を流し、前記観測ステップでは、前記数値ごとに、当該数値のパラメータで前記粘弾性溶液が流れる状態を観測し、前記評価ステップでは、前記観測ステップで観測される状態の遷移が現れる前記パラメータの数値を観測臨界値として特定し、特定された前記観測臨界値に予め対応付けられている濃度を、前記粘弾性溶液の濃度として導出することによって、当該粘弾性溶液の濃度を測定してもよい。
【０００９】
これにより、例えば、観測される粘弾性溶液が流れる状態が、安定な状態と不安定な状態との間で遷移した場合には、その状態の遷移が現れるパラメータの数値が観測臨界値として特定される。そして、状態の遷移が現れるパラメータの数値と粘弾性溶液の濃度とが一対一に対応する関係を用いることにより、その特定された観測臨界値に基づいて、被検体である粘弾性溶液の濃度を正確に測定することができる。
【００１０】
また、前記評価ステップでは、前記粘弾性溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、当該濃度と、当該濃度に対応付けられた臨界値とを示す参照データを参照し、当該参照データにおいて、前記観測臨界値と同じ値を示す臨界値に対応付けられている濃度を、前記粘弾性溶液の濃度として導出してもよい。
【００１１】
これにより、参照データにおける各臨界値と各濃度とが一対一に正確に対応付けられているほど、被検体である粘弾性溶液の濃度を正しく測定することができる。
【００１２】
また、前記濃度評価方法は、さらに、前記試料溶液の既知の濃度ごとに、当該既知の濃度の試料溶液に対する臨界値を測定する前処理を行うことにより、前記参照データを生成する参照データ生成ステップを含んでもよい。例えば、前記参照データ生成ステップにおける前記前処理では、前記パラメータにおける互いに異なる数値ごとに、当該数値のパラメータで前記既知の濃度の試料溶液を前記流路に流し、前記数値ごとに、当該数値のパラメータで前記既知の濃度の試料溶液が流れる状態を観測し、観測される状態の遷移が現れる前記パラメータの数値を、前記既知の濃度の試料溶液に対する臨界値として特定することにより、前記既知の濃度の試料溶液に対する臨界値を測定する。
【００１３】
これにより、各臨界値と各濃度とを一対一に正確に対応付ける参照データを生成することができる。
【００１４】
また、前記流入ステップでは、予め定められた基準濃度に対応付けられた流速またはレイノルズ数で前記粘弾性溶液を流し、前記評価ステップでは、観測された前記状態が不安定な流れを示す場合には、前記粘弾性溶液の濃度は前記基準濃度よりも高いと判定し、観測された前記状態が安定な流れを示す場合には、前記粘弾性溶液の濃度は前記基準濃度よりも低いと判定してもよい。
【００１５】
これにより、予め定められた基準濃度に対応付けられた流速またはレイノルズ数で粘弾性溶液を流路に一度流すだけで、その粘弾性溶液の濃度が基準濃度よりも高いか、または低いかを簡単に判定することができる。例えば、被検体である粘弾性溶液がヒアルロン酸溶液であって生体液として人体に含まれるものであり、基準濃度より高い濃度のヒアルロン酸溶液が健常者にとって必要な場合には、人体から抽出されるヒアルロン酸溶液が少量であっても、その溶液の濃度の良否、つまり生体液が正常か異常かを簡単に判定することができる。
【００１６】
また、前記流路は、途中部分の内寸が他の部分よりも小さい矩形管によって形成され、前記矩形管のうち最も大きい内寸は４００μｍ以下であってもよい。
【００１７】
これにより、最も大きい内寸が４００μｍ以下であるため、より少ない粘弾性溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することができる。
【００１８】
なお、これらの包括的または具体的な態様は、装置、システム、方法、集積回路、コンピュータプログラムまたはコンピュータ読み取り可能なＣＤ−ＲＯＭなどの記録媒体で実現されてもよく、システム、方法、集積回路、コンピュータプログラムおよび記録媒体の任意な組み合わせで実現されてもよい。
【発明の効果】
【００１９】
本発明の粘弾性溶液の濃度評価方法は、少ない粘弾性溶液であってもその溶液の濃度を適切に評価することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】図１は、実施の形態１における濃度評価システムの構成図である。
【図２】図２は、実施の形態１におけるマイクロ流路の形状および大きさの一例を示す図である。
【図３】図３は、実施の形態１における、ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路に流れる状態の例を示す図である。
【図４】図４は、実施の形態１における濃度評価方法を示すフローチャートである。
【図５】図５は、実施の形態１における参照データの一例を示す図である。
【図６】図６は、参照データの生成方法を示すフローチャートである。
【図７】図７は、実施の形態２における濃度評価方法を示すフローチャートである。
【図８】図８は、変形例１に係る参照データの一例を示す図である。
【図９】図９は、変形例２に係る参照データの一例を示す図である。
【図１０】図１０は、変形例３に係る、縮小比が互いに異なるマイクロ流路のそれぞれに対して生成された参照データを示す図である。
【図１１Ａ】図１１Ａは、本発明の粘弾性溶液の濃度評価方法を示すフローチャートである。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、本発明の粘弾性溶液の濃度評価装置の構成を示すブロック図である。
【発明を実施するための形態】
【００２１】
以下、本発明の実施の形態について、図面を参照しながら説明する。
【００２２】
なお、以下で説明する実施の形態は、いずれも包括的または具体的な例を示すものである。以下の実施の形態で示される数値、形状、材料、構成要素、構成要素の配置位置及び接続形態、ステップ、ステップの順序などは、一例であり、本発明を限定する主旨ではない。また、以下の実施の形態における構成要素のうち、最上位概念を示す独立請求項に記載されていない構成要素については、任意の構成要素として説明される。
【００２３】
（実施の形態１）
図１は、本発明の実施の形態における濃度評価システムの構成図である。
【００２４】
本実施の形態における濃度評価システム１００は、粘弾性溶液であるヒアルロン酸溶液を被検体として扱い、そのヒアルロン酸溶液の濃度を評価するシステムであって、シリンジポンプ１２０、シリンジ１２１、プランジャ１２３、ポンプ制御装置１１０、レンズ１３１を有する顕微鏡装置１３０、マイクロ流路１４０、およびモニタ１５０を備える。本実施の形態におけるヒアルロン酸溶液は、ヒアルロン酸ナトリウムを、溶媒であるリン酸水素二ナトリウム−塩化ナトリウム溶液（いわゆるリン酸緩衝生理食塩水（Phosphate buffered saline）、 略称: ＰＢＳ）に溶解させたものである。つまり、ヒアルロン酸溶液の濃度とは、ヒアルロン酸溶液に含まれるヒアルロン酸ナトリウムの濃度である。
【００２５】
シリンジ１２１は、例えば注射器に用いられる筒状の容器である。つまり、そのシリンジ１２１の先端側の開口は、シリンジ１２１の後端側の開口よりも十分小さく形成されている。
【００２６】
マイクロ流路１４０は、略ダンベル状の透明な矩形管によって形成されている。マイクロ流路１４０の一端は、チューブ１２２を介して、シリンジ１２１の先端に接続されている。つまり、シリンジ１２１内に液体が入れられた場合には、その液体がシリンジ１２１からチューブ１２２を介してマイクロ流路１４０に流れるように、シリンジ１２１、チューブ１２２およびマイクロ流路１４０が接続されている。
【００２７】
シリンジポンプ１２０は、ポンプ制御装置１１０による制御に応じて、シリンジ１２１の後端側から先端側に向けてプランジャ１２３をシリンジ１２１内に押し込む。ポンプ制御装置１１０は、シリンジポンプ１２０の動作を制御する。つまり、ポンプ制御装置１１０は、ユーザによるプランジャ１２３の移動速度の入力を受け付け、その移動速度でプランジャ１２３が移動してシリンジ１２１内に押し込まれるように、シリンジポンプ１２０を制御する。
【００２８】
ここで、被検体であるヒアルロン酸溶液は、シリンジ１２１に注入される。そして、ポンプ制御装置１１０による制御によって、シリンジポンプ１２０は、入力された移動速度でプランジャ１２３をシリンジ１２１内に押し込む。これにより、プランジャ１２３が押し込まれている間、シリンジ１２１内のヒアルロン酸溶液は、チューブ１２２を介してマイクロ流路１４０に一定の流量または流速で流れる。
【００２９】
顕微鏡装置１３０は、レンズ１３１を用いて、被写体となるマイクロ流路１４０と、そのマイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液とを光学的に拡大してそれらを撮影する。さらに、顕微鏡装置１３０は、その撮影によって得られる画像（例えば静止画像または動画像）を示す映像信号をモニタ１５０に出力する。モニタ１５０は、顕微鏡装置１３０から出力された映像信号を受信し、その映像信号に応じた画像を表示する。この画像には、マイクロ流路１４０の画像と、そのマイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液の画像とが含まれる。具体的には、マイクロ流路１４０における、チューブ１２２が接続されている端から、その反対側の端に向かって、つまり、図１における左側から右側に向かって、マイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液の画像が表示される。
【００３０】
図２は、マイクロ流路１４０の形状および大きさの一例を示す図である。
【００３１】
マイクロ流路１４０は、縦方向の内寸Ｄおよび横方向の内寸Ａを有する大矩形管部１４１，１４２と、大矩形管部１４１，１４２よりも小さい横方向の内寸Ｂを有する小矩形管部１４３とが一体に連結されることによって形成されている。なお、大矩形管部１４１，１４２および小矩形管部１４３の縦方向の内寸は同じである。ここで、小矩形管部１４３は、大矩形管部１４１と大矩形管部１４２との間に挟み込まれるように、大矩形管部１４１，１４１のそれぞれに連結されている。また、大矩形管部１４１，１４１の内寸Ａは例えば４００μｍであり、小矩形管部１４３の内寸Ｂは例えば２５μｍである。したがって、マイクロ流路１４０は、途中部分の内寸が他の部分よりも小さい略ダンベル状の透明な矩形管によって形成されているといえる。なお、小矩形管部１４３の長さＣは例えば１００μｍであり、縦方向の内寸Ｄは例えば５０μｍである。
【００３２】
本実施の形態では、例えば、大矩形管部１４１から大矩形管部１４２に向かってマイクロ流路１４０にヒアルロン酸溶液が流される。この場合には、大矩形管部１４１と小矩形管部１４３との連結部分において、流路断面が急縮小し、小矩形管部１４３と大矩形管部１４２との連結部分において、流路断面が急拡大する。なお、急縮小または急拡大は、流路断面が流れの方向に沿って連続的に変化することなく、流路断面が流路中の一点で不連続に縮小または拡大することである。
【００３３】
図３は、ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態の例を示す図である。なお、図３および図３以降の各図において、Ｒｅはレイノルズ数を示す。また、図３において示される状態は、大矩形管部１４１から大矩形管部１４２に向かってヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態である。
【００３４】
マイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液のレイノルズ数が低い場合、ヒアルロン酸溶液はマイクロ流路１４０の縁に沿って流れるため、ヒアルロン酸溶液が安定して流れている状態がモニタ１５０に映し出される。ここで、レイノルズ数を高くすると（例えば、Ｒｅ＝１．８２の場合）、図３の（ａ）に示すような安定した渦がモニタ１５０に映し出される。渦のサイズはレイノルズ数の増加とともに大きくなり、さらにレイノルズ数を高くすると渦は左右に揺れはじめる。そして、レイノルズ数をより高くすると（例えば、Ｒｅ＝５．２の場合）、図３の（ｂ）に示すように渦は消失し、ヒアルロン酸溶液の不安定で乱れた流れ（いわゆる弾性乱流）がモニタ１５０に映し出される。
【００３５】
つまり、ヒアルロン酸溶液のレイノルズ数が閾値（以下、この閾値を臨界レイノルズ数という）よりも低い場合には、ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態として、安定に流れている状態が現れる。さらに、ヒアルロン酸溶液のレイノルズ数が臨界レイノルズ数よりも高い場合には、不安定に流れている状態（つまり弾性乱流）が現れる。言い換えれば、ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態の遷移が、臨界レイノルズ数で現れる。なお、臨界レイノルズ数は、ヒアルロン酸溶液などの粘弾性溶液の種別および濃度によって一意に定まる数値である。また、本実施の形態では、モニタ１５０に映し出されるヒアルロン酸溶液の流れがより分かりやすくなるように、直径２μｍのポリスチレン粒子に例示される微小分散体を被検体であるヒアルロン酸溶液に含めてもよい。
【００３６】
本実施の形態では、レイノルズ数をパラメータとして用い、シリンジポンプ１２０を制御することにより、互いに異なるレイノルズ数ごとに、そのレイノルズ数でヒアルロン酸溶液をマイクロ流路１４０に流す。そして、そのレイノルズ数ごとに、当該レイノルズ数でヒアルロン酸溶液が流れる状態を、顕微鏡装置１３０およびモニタ１５０を用いて観測する。その結果、観測される状態の遷移が現れるレイノルズ数を観測臨界レイノルズ数として特定する。なお、観測臨界レイノルズ数は、上述の臨界レイノルズ数と同義であるが、顕微鏡装置１３０およびモニタ１５０による被検体の観測によって特定される臨界レイノルズ数を、観測臨界レイノルズ数という。例えば、図３に示す例の場合には、観測臨界レイノルズ数は例えば３．５として特定される。そして、特定された観測臨界レイノルズ数に予め対応付けられている濃度を、ヒアルロン酸溶液の濃度として導出することによって、そのヒアルロン酸溶液の濃度を測定する。
【００３７】
なお、レイノルズ数Ｒｅは、Ｒｅ＝ρ×Ｕ×Ｄ／η＝２ρ×Ｑ／（（Ｗ＋Ｈ）×η）によって示される。ρは、被検体である粘弾性溶液の溶液密度［ｋｇ／ｍ３］であり、Ｕは、流路断面の平均流速［ｍ／ｓ］であり、Ｄは、流路の相当直径（等価直径）［ｍ］であり、ηは、被検体である粘弾性溶液のゼロせん断粘度［Ｐａ・ｓ］である。また、Ｑは、被検体である粘弾性溶液の流量［ｍ３／ｓ］であり、Ｗは流路の幅［ｍ］であり、Ｈは流路の深さ［ｍ］である。
【００３８】
このように、レイノルズ数Ｒｅは、Ｒｅ＝ρ×Ｕ×Ｄ／ηによって示される。また、ρとηは、粘弾性溶液の濃度に関わらず略一定であって、粘弾性溶液の種類および温度などに応じた既知の物性値である。さらに、Ｄは、マイクロ流路１４０の大きさおよび形状によって定まる一定の数値である。したがって、マイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液のレイノルズ数は、マイクロ流路１４０（具体的には、小矩形管部１４３）に流れるヒアルロン酸溶液の流速Ｕによって調整される。
【００３９】
つまり、本実施の形態では、ポンプ制御装置１１０は、プランジャ１２３の移動速度の設定値を調整することによって、マイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液の流速Ｕの設定値を変更する。その結果、マイクロ流路１４０に流れるヒアルロン酸溶液のレイノルズ数が各値に設定される。なお、上述の流路の幅Ｗは、図２に示す幅Ａに相当し、上述の流路の深さＨは、図２に示す縦方向の内寸Ｄに相当する。
【００４０】
図４は、本実施の形態における濃度評価方法を示すフローチャートである。
【００４１】
まず、ポンプ制御装置１１０に対する入力操作を行うことにより、ヒアルロン酸溶液のレイノルズ数を初期値に設定する（ステップＳ１０１）。つまり、その初期値のレイノルズ数に対応するプランジャ１２３の移動速度を設定する。次に、ポンプ制御装置１１０は、シリンジポンプ１２０を制御することにより、設定されたレイノルズ数でヒアルロン酸溶液をマイクロ流路１４０に流す（ステップＳ１０２）。ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態を、顕微鏡装置１３０およびモニタ１５０を用いて観測する（ステップＳ１０３）。
【００４２】
ここで、その状態の遷移が現れたか否かを判別する（ステップＳ１０４）。遷移が現れていないと判別したときには（ステップＳ１０４のＮｏ）、ポンプ制御装置１１０に対する入力操作を行うことにより、設定されているレイノルズ数を変更する。つまり、設定されているヒアルロン酸溶液のレイノルズ数を調整値α１だけ増加させる（ステップＳ１０６）。そして、変更されたレイノルズ数に対して、ステップＳ１０２〜Ｓ１０４の処理を繰り返し実行する。
【００４３】
一方、ステップＳ１０４で遷移が現れたと判別したときには（ステップＳ１０４のＹｅｓ）、観測臨界レイノルズ数を特定する（ステップＳ１０５）。例えば、最後にステップＳ１０６で設定されたレイノルズ数（以下、最終レイノルズ数という）を臨界レイノルズ数として特定する。または、その最終レイノルズ数が設定される直前にステップＳ１０１またはＳ１０６で設定されていたレイノルズ数と、最終レイノルズ数との平均値を、臨界レイノルズ数として特定する。そして、参照データを参照することにより、その参照データにおいて、観測臨界レイノルズ数に対応付けられている濃度を、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度として導出する（ステップＳ１０７）。これにより、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度が測定される。
【００４４】
図５は、参照データの一例を示す図である。
【００４５】
この参照データは、例えば図５の実曲線のように、被検体であるヒアルロン酸溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、その濃度と、その濃度に対応付けられた臨界レイノルズ数とを示す。つまり、図４に示すステップＳ１０７では、この参照データにおいて、観測臨界レイノルズ数と同じ値を示す臨界レイノルズ数に対応付けられている濃度を、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度として導出する。例えば、観測臨界レイノルズ数が１．００であれば、その１．００に対応付けられている濃度３．６ｍｇ／ｍｌを、ヒアルロン酸溶液の濃度として導出する。
【００４６】
図６は、参照データの生成方法を示すフローチャートである。
【００４７】
参照データの生成には、被検体であるヒアルロン酸溶液と同種であり、それぞれ互いに異なる既知の濃度の幾つかの試料溶液が用いられる。つまり、ｎ個の既知の濃度のヒアルロン酸溶液である試料溶液、言い換えれば、Ｉ＝１番目〜ｎ番目の既知の濃度の試料溶液が用いられる。
【００４８】
参照データの生成では、まず、Ｉ＝１番目の濃度の試料溶液を選択する（ステップＳ１１１）。次に、ポンプ制御装置１１０に対する入力操作を行うことにより、試料溶液のレイノルズ数を初期値に設定する（ステップＳ１１２）。つまり、その初期値のレイノルズ数に対応するプランジャ１２３の移動速度を設定する。なお、参照データの生成時には、多量の試料溶液を用いて、その試料溶液の溶液密度ρおよびゼロせん断粘度ηなどの物性値を計測し、計測されたそれらの物性値を考慮した移動速度を設定してもよい。例えば、ゼロせん断粘度ηはレオメータによって計測される。
【００４９】
次に、ポンプ制御装置１１０は、シリンジポンプ１２０を制御することにより、設定されたレイノルズ数で、選択された濃度の試料溶液をマイクロ流路１４０に流す（ステップＳ１１３）。選択された濃度の試料溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態を、顕微鏡装置１３０およびモニタ１５０を用いて観測する（ステップＳ１１４）。
【００５０】
ここで、その状態の遷移が現れたか否かを判別する（ステップＳ１１５）。遷移が現れていないと判別したときには（ステップＳ１１７のＮｏ）、ポンプ制御装置１１０に対する入力操作を行うことにより、設定されているレイノルズ数を変更する。つまり、設定されているレイノルズ数を調整値α２だけ増加させる（ステップＳ１１６）。そして、変更後のレイノルズ数に対してステップＳ１１３〜Ｓ１１５の処理を繰り返し実行する。
【００５１】
一方、ステップＳ１１５で遷移が現れたと判別したときには（ステップＳ１１５のＹｅｓ）、臨界レイノルズ数を特定する（ステップＳ１１７）。例えば、最後にステップＳ１１６で設定されたレイノルズ数（以下、最終レイノルズ数という）を臨界レイノルズ数として特定する。または、その最終レイノルズ数が設定される直前にステップＳ１１２またはＳ１１６で設定されていたレイノルズ数と、最終レイノルズ数との平均値を、臨界レイノルズ数として特定する。これにより、Ｉ番目の濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数が測定される。そして、その濃度と臨界レイノルズ数とに対応するグラフ上の位置に対して点（例えば図５の黒四角）をプロットする。
【００５２】
次に、ステップＳ１１７で臨界レイノルズ数が特定された後、全ての濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数を特定したか否かを判別する（ステップＳ１１８）。つまり、Ｉ＝ｎ番目の濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数を特定したか否かを判別する。ここで、全ての濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数を特定していないと判別したときには（ステップＳ１１８のＮｏ）、Ｉ＝Ｉ＋１番目の濃度の試料溶液を選択する（ステップＳ１１９）。そして、選択された濃度の試料溶液に対してステップＳ１１２〜Ｓ１１８の処理を繰り返し実行する。
【００５３】
これにより、ｎ個の濃度の試料溶液ごとに、その試料溶液の濃度と臨界レイノルズ数との関係を示す点（例えば図５の黒四角）がプロットされたグラフが生成される。さらに、これらの点に基づいて例えば近似曲線を描くことにより、図５に示す参照データが生成される。
【００５４】
このように本実施の形態の濃度評価方法は、流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成されたマイクロ流路１４０にヒアルロン酸溶液を流し、ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態を観測する。そして、観測された状態に応じてそのヒアルロン酸溶液の濃度を評価する。これにより、マイクロ流路１４０に流れる状態（例えば、安定な状態または不安定な状態）に応じてヒアルロン酸溶液の濃度が評価されるため、マイクロ流路１４０を小さくするほど、評価に必要とされるヒアルロン酸溶液の量を減らすことができる。したがって、少ないヒアルロン酸溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することができる。また、生体液として人体に含まれているヒアルロン酸溶液の濃度を評価する場合には、評価のために人体から抽出されるヒアルロン酸溶液の量を減らすことができ、人に対する負担を軽減することができる。具体的には、人体の関節や眼などから抽出されるヒアルロン酸溶液が少なくても、正確にそのヒアルロン酸溶液の濃度を適切に評価することができる。
【００５５】
また、本実施の形態では、ヒアルロン酸溶液を流す際には、レイノルズ数をパラメータとして用い、互いに異なるレイノルズ数ごとに、当該レイノルズ数でヒアルロン酸溶液を流す。そして、観測する際には、そのレイノルズ数ごとに、当該レイノルズ数でヒアルロン酸溶液が流れる状態を観測する。この場合、観測される状態の遷移が現れるレイノルズ数を観測臨界レイノルズ数として特定し、特定された観測臨界レイノルズ数に予め対応付けられている濃度を、ヒアルロン酸溶液の濃度として導出することによって、当該ヒアルロン酸溶液の濃度を測定する。これにより、例えば、観測されるヒアルロン酸溶液が流れる状態が、安定な状態と不安定な状態との間で遷移した場合には、その状態の遷移が現れるレイノルズ数が観測臨界値として特定される。そして、状態の遷移が現れるレイノルズ数とヒアルロン酸溶液の濃度とが一対一に対応する関係を用いることにより、その特定された観測臨界レイノルズ数に基づいて、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度を正確に測定することができる。例えば、人体の関節に含まれるヒアルロン酸溶液の濃度を測定する場合には、従来の測定方法では、約１ｍｌのヒアルロン酸溶液を関節から抽出する必要がある。しかし、上記実施の形態における濃度評価方法では、その量の１／１０〜１／５だけでもヒアルロン酸溶液を抽出することができれば、そのヒアルロン酸溶液の濃度を適切に測定することができる。したがって、人体に対する負担を大幅に減らすことができる。
【００５６】
また、本実施の形態では、濃度を評価する際には、ヒアルロン酸溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、当該濃度と、当該濃度に対応付けられた臨界レイノルズ数とを示す参照データを参照する。そして、当該参照データにおいて、観測臨界レイノルズ数と同じ値を示す臨界レイノルズ数に対応付けられている濃度を、ヒアルロン酸溶液の濃度として導出する。これにより、参照データにおける各臨界値と各濃度とが一対一に正確に対応付けられているほど、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度を正しく測定することができる。
【００５７】
さらに、本実施の形態では、試料溶液の既知の濃度ごとに、当該既知の濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数を測定する前処理を行うことにより、上述の参照データを生成する。つまり、その前処理では、異なるレイノルズ数ごとに、当該レイノルズ数で既知の濃度の試料溶液をマイクロ流路１４０に流す。そして、そのレイノルズ数ごとに、当該レイノルズ数で既知の濃度の試料溶液が流れる状態を観測する。さらに、観測される状態の遷移が現れるレイノルズ数を、既知の濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数として特定することにより、既知の濃度の試料溶液に対する臨界レイノルズ数を測定する。これにより、各臨界レイノルズ数と各濃度とを一対一に正確に対応付ける参照データを生成することができる。
【００５８】
（実施の形態２）
上記実施の形態１における濃度評価方法では、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度を測定したが、本実施の形態における濃度評価方法では、そのヒアルロン酸溶液の濃度を測定することなく、その濃度の良否を判定することに特徴がある。つまり、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度が基準濃度よりも高いか、または低いかを判定する。
【００５９】
図７は、本実施の形態における濃度評価方法を示すフローチャートである。なお、本実施の形態においても実施の形態１と同様の濃度評価システムを用いる。
【００６０】
まず、ポンプ制御装置１１０に対する入力操作を行うことにより、被検体であるヒアルロン酸溶液のレイノルズ数を、図５に示す参照データにおいて基準濃度に対応付けられた値に設定する（ステップＳ１２１）。なお、被検体であるヒアルロン酸溶液が生体液である場合、基準濃度は、例えば、その生体液の濃度の良否、つまりその生体液が正常か否かを判定するための閾値である。また、そのステップＳ１２１における設定では、具体的には、プランジャ１２３の移動速度を適切な値に設定することによって、そのヒアルロン酸溶液のレイノルズ数を、基準濃度に対応付けられた値に設定する。
【００６１】
次に、ポンプ制御装置１１０は、シリンジポンプ１２０を制御することにより、設定されたレイノルズ数でヒアルロン酸溶液をマイクロ流路１４０に流す（ステップＳ１２２）。ヒアルロン酸溶液がマイクロ流路１４０に流れる状態を、顕微鏡装置１３０およびモニタ１５０を用いて観測する（ステップＳ１２３）。
【００６２】
ここで、その状態が安定しているか否かを判別する（ステップＳ１２４）。つまり、被検体であるヒアルロン酸が流れる状態が、図３の（ａ）に示すような安定な状態であるか否かを判別する（ステップＳ１２２）。安定していると判別したときには（ステップＳ１２４のＹｅｓ）、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度は基準濃度よりも低いと判定する（ステップＳ１２５）。ここで、被検体であるヒアルロン酸溶液が生体液であって、基準濃度が上述の正常か否かを判定するための閾値であれば、被検体であるヒアルロン酸溶液は異常であると判定する。
【００６３】
一方、安定していないと判別したときには（ステップＳ１２４のＮｏ）、つまり、被検体であるヒアルロン酸が流れる状態が、図３の（ｂ）に示すような不安定な状態である場合には、そのヒアルロン酸溶液の濃度は基準濃度よりも高いと判定する（ステップＳ１２６）。ここで、被検体であるヒアルロン酸溶液が生体液であって、基準濃度が上述の正常か否かを判定するための閾値であれば、被検体であるヒアルロン酸溶液は正常であると判定する。
【００６４】
このように本実施の形態では、予め定められた基準濃度に対応付けられたレイノルズ数でヒアルロン酸溶液を流す。そして、濃度を評価する際には、観測された状態が不安定な流れを示す場合には、ヒアルロン酸溶液の濃度は基準濃度よりも高いと判定し、観測された状態が安定な流れを示す場合には、ヒアルロン酸溶液の濃度は基準濃度よりも低いと判定する。これにより、予め定められた基準濃度に対応付けられたレイノルズ数でヒアルロン酸溶液をマイクロ流路１４０に一度流すだけで、そのヒアルロン酸溶液の濃度が基準濃度よりも高いか、または低いかを簡単に判定することができる。例えば、被検体であるヒアルロン酸溶液が生体液として人体に含まれるものであり、基準濃度より高い濃度のヒアルロン酸溶液が健常者にとって必要な場合には、人体から抽出されるヒアルロン酸溶液が少量であっても、その溶液の濃度の良否、つまり生体液が正常か異常かを簡単に判定することができる。
【００６５】
以下、上記実施の形態１および２の変形例について説明する。
【００６６】
（変形例１）
上記実施の形態１および２では、レイノルズ数をパラメータとして用いたが、流速をパラメータとして用いてもよい。
【００６７】
つまり、実施の形態１では、図４に示すように、ヒアルロン酸溶液のレイノルズ数を変更しながら、そのレイノルズ数で流れるヒアルロン酸溶液の状態を観測した。本変形例では、レイノルズ数の代わりに、ヒアルロン酸溶液の流速を変更しながら、その流速で流れるヒアルロン酸溶液の状態を観測する。なお、ヒアルロン酸溶液の流速は、具体的にはマイクロ流路１４０の小矩形管部１４３の流速である。これにより、本変形例では、図４のステップＳ１０４で、その状態の遷移が現れたと判別された場合（ステップＳ１０４のＹｅｓ）には、ステップＳ１０５において、観測臨界レイノルズ数の代わりに観測臨界流速が特定される。
【００６８】
図８は、本変形例に係る参照データの一例を示す図である。
【００６９】
この参照データは、例えば図８の実曲線のように、被検体であるヒアルロン酸溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、その濃度と、その濃度に対応付けられた臨界流速とを示す。つまり、本変形例における図４に示すステップＳ１０７では、この参照データにおいて、特定された観測臨界流速と同じ値を示す臨界流速に対応付けられている濃度を、被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度として導出する。
【００７０】
また、この図８に示す本変形例に係る参照データを生成するときには、図６に示すレイノルズ数の代わりに流速を設定または変更しながら、図６に示す各ステップの処理を実行する。
【００７１】
また、本変形例では、図７に示すレイノルズ数の代わりに流速を、基準濃度に対応付けられた値に設定して、その設定された流速でヒアルロン酸溶液をマイクロ流路１４０に流す。そして、図７に示すステップＳ１２３〜Ｓ１２６の各処理を実行することにより、そのヒアルロン酸溶液の良否を判定する。
【００７２】
このように本発明では、レイノルズ数の代わりに、簡単に調整可能な流速をパラメータに用いるため、ヒアルロン酸溶液の濃度を簡単に評価することができる。なお、本発明は、レイノルズ数および流速以外のパラメータを用いてもよく、例えば、ワイゼンベルグ数をパラメータとして用いてもよい。
【００７３】
（変形例２）
上記実施の形態１および２では、ヒアルロン酸ナトリウムがＰＢＳに溶解されたヒアルロン酸溶液を被検体に用いたが、ヒアルロン酸ナトリウムが水に溶解されたヒアルロン酸溶液を被検体に用いてもよい。
【００７４】
つまり、本変形例では、溶媒に水が用いられたヒアルロン酸溶液の濃度を実施の形態１または２と同様の方法で評価する。
【００７５】
図９は、本変形例に係る参照データの一例を示す図である。
【００７６】
この参照データは、例えば図９の実曲線のように、溶媒に水が用いられた被検体であるヒアルロン酸溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、その濃度と、その濃度に対応付けられた臨界レイノルズ数とを示す。したがって、このような参照データを用いて図４に示す各処理を実行することにより、溶媒に水が用いられた被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度を適切に測定することができる。
【００７７】
さらに、上述の変形例１と同様に、流速をパラメータとして用いてもよい。この場合、参照データは、溶媒に水が用いられた被検体であるヒアルロン酸溶液と同種の試料溶液の濃度ごとに、その濃度と、その濃度に対応付けられた臨界流速とを示す。つまり、本変形例における図４に示すステップＳ１０７では、この参照データにおいて、観測臨界流速と同じ値を示す臨界流速に対応付けられている濃度を、溶媒に水が用いられた被検体であるヒアルロン酸溶液の濃度として導出する。
【００７８】
また、この参照データを生成するときには、溶媒に水が用いられたヒアルロン酸溶液である各濃度の試料溶液に対して、図６に示すレイノルズ数の代わりに流速を設定または変更しながら、図６に示す各ステップの処理を実行する。
【００７９】
また、本変形例では、図７に示すレイノルズ数の代わりに流速を、基準濃度に対応付けられた値に設定して、その設定された流速で、溶媒に水が用いられたヒアルロン酸溶液をマイクロ流路１４０に流す。そして、図７に示すステップＳ１２３〜Ｓ１２６の各処理を実行することにより、その溶媒に水が用いられたヒアルロン酸溶液の良否を判定する。
【００８０】
このように本発明では、溶媒に水が用いられたヒアルロン酸溶液の濃度を適切に測定することができる。また、濃度が評価される対象となる被検体は、粘弾性溶液であればどのような溶液であってもよい。なお、粘弾性溶液は、粘弾性を有する溶液であって、具体的には、１ｍ秒以上の緩和時間を有する溶液である。ここで、緩和時間は、物体に一定のひずみを与えると応力が低下する過程において特定の応力（１／ｅ）に到達したときの経過時間であって、粘性係数と弾性係数との比であらわされる。
【００８１】
（変形例３）
上記実施の形態１および２では、図２に示す形状および大きさのマイクロ流路１４０を用いたが他の形状および大きさのマイクロ流路を用いてもよい。
【００８２】
例えば、図２に示すマイクロ流路１４０における大矩形管部１４１，１４２の内寸Ａと小矩形管部１４３の内寸Ｂとの比（以下、縮小比という）は１６：１である。これに対して、本変形例では、その縮小比が８：１であるマイクロ流路を用いる。つまり、本変形例におけるマイクロ流路における小矩形管部の内寸は、内寸Ｂ（例えば２５μｍ）よりも２倍だけ大きい。
【００８３】
図１０は、縮小比が互いに異なるマイクロ流路のそれぞれに対して生成された参照データを示す図である。なお、図１０の実曲線および菱形の点によって示されるデータと、点曲線および三角形の点によって示されるデータとはそれぞれ、溶媒に水が用いられたヒアルロン酸溶液のデータである。
【００８４】
図１０の実曲線は、縮小比が１６：１のマイクロ流路１４０を用いてプロットされた菱形の点に基づいて生成された近似曲線であって、縮小比が１６：１の場合の参照データを示す。なお、この図１０の菱形の点および実曲線によって示されるデータは、図９の菱形の点および実曲線によって示されるデータと同一である。図１０の点曲線は、縮小比が８：１のマイクロ流路を用いてプロットされた三角形の点に基づいて生成された近似曲線であって、縮小比が８：１の場合の参照データを示す。
【００８５】
この点曲線によって示されるように、縮小比が８：１であっても、臨界レイノルズ数と試料溶液の濃度との間では一対一の関係が見られる。したがって、縮小比が８：１であっても、実施の形態１および２と同様に、ヒアルロン酸溶液の濃度を適切に評価することができる。
【００８６】
このように本発明では、流路の形状および大きさは、マイクロ流路１４０のものに限定されず、流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成されていればどのような形状および大きさであってもよい。また、マイクロ流路の縮小比が大きい（流路断面の差異が大きい）ほど適切に濃度を測定することができる。逆に、マイクロ流の縮小比が小さい（流路断面の差異が小さい）ほど、臨界レイノルズ数が低くなる傾向にあるため、少量のヒアルロン酸溶液の濃度を測定することができる。
【００８７】
以上、本発明に係る粘弾性溶液の濃度評価方法について、実施の形態１および２とそれらの変形例を用いて説明したが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００８８】
例えば、図４のステップＳ１０６および図６のステップＳ１１６では、レイノルズ数を増加させたが、レイノルズ数を減少させてもよい。また、レイノルズ数を常に一定の調整値α１またはα２だけ増加または減少させることなく、図４のステップＳ１０６または図６のステップＳ１１６の処理が行われるごとに、その調整値を変えてもよい。
【００８９】
また、本発明は、以下の図１１Ａに示す濃度評価方法であってもよい。
【００９０】
図１１Ａは、本発明の粘弾性溶液の濃度評価方法を示すフローチャートである。
【００９１】
この濃度評価方法は、粘弾性溶液の濃度を評価する濃度評価方法であって、流入ステップＳ１１、観測ステップＳ１２、および評価ステップＳ１３を含む。流入ステップＳ１１では、流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成された流路に前記粘弾性溶液を流す。観測ステップＳ１２では、前記粘弾性溶液が前記流路に流れる状態を観測する。評価ステップでは、観測された前記状態に応じて前記粘弾性溶液の濃度を評価する。例えば、粘弾性溶液の濃度の評価は、粘弾性溶液の濃度の測定、または、その濃度が基準濃度よりも高いか低いかを判定することである。
【００９２】
これにより、流路に流れる状態（例えば、安定な状態または不安定な状態）に応じて粘弾性溶液の濃度が評価されるため、流路を小さくするほど、評価に必要とされる粘弾性溶液の量を減らすことができる。したがって、少ない粘弾性溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することができる。
【００９３】
また、本発明は、図１１Ａに示す濃度評価方法によって粘弾性溶液の濃度を評価する装置であってもよい。
【００９４】
図１１Ｂは、本発明の粘弾性溶液の濃度評価装置の構成を示すブロック図である。
【００９５】
この濃度評価装置１０は、粘弾性溶液の濃度を評価する濃度評価装置であって、流入部１１、観測部１２、および評価部１３を備える。流入部１１は、流路断面が急縮小し且つ急拡大するように形成された流路に前記粘弾性溶液を流す。観測部１２は、前記粘弾性溶液が前記流路に流れる状態を観測する。評価部１３は、観測された前記状態に応じて前記粘弾性溶液の濃度を評価する。ここで、濃度評価装置１０は、人の判断および処理を必要とせず自動的に濃度を評価する装置である。具体的には、流入部１１は、図１に示すシリンジ１２１、プランジャ１２３、およびポンプ制御装置１１０を含む機材によって構成され、図１に示すマイクロ流路１４０に、例えばヒアルロン酸溶液などの粘弾性溶液を流す。観測部１２および評価部１３は、図１に示すレンズ１３１を有する顕微鏡装置１３０と、その顕微鏡装置１３０から出力される映像信号を処理する信号処理部とから構成される。信号処理部は、その顕微鏡装置１３０から出力される映像信号によって示される画像を解析することにより、粘弾性溶液が流れる状態を観測し、その粘弾性溶液の濃度を評価する。つまり、信号処理部は、映像信号によって示される、観測された流れの状態を示す画像（以下、観測画像という）と、標本となる安定な流れの状態を示す画像（以下、標本画像という）とを、例えばパターンマッチングの手法によって比較する。その結果、信号処理部は、観測画像と標本画像とが一致する場合には、粘弾性溶液が流れる状態は安定な状態であると判断し、一致しない場合には、粘弾性溶液が流れる状態は不安点な状態であると判断する。そして、信号処理部は、その状態が安定な状態であるか不安定な状態であるかに応じて粘弾性溶液の濃度を評価する。
【００９６】
以上、本発明に係る粘弾性溶液の濃度評価方法について、実施の形態および変形例に基づいて説明したが、本発明は、これらの実施の形態などに限定されるものではない。本発明の趣旨を逸脱しない限り、当業者が思いつく各種変形を本実施の形態に施したものや、異なる実施の形態における構成要素を組み合わせて構築される形態も、本発明の範囲内に含まれてもよい。
【産業上の利用可能性】
【００９７】
本発明にかかる粘弾性溶液の濃度評価方法は、少ない粘弾性溶液でもその溶液の濃度を適切に評価することができるという効果を奏し、例えば、ヒアルロン酸溶液などの生体液の濃度を評価する方法および装置などに適用することができる。
【符号の説明】
【００９８】
１００    濃度評価システム
１１０    ポンプ制御装置
１２０    シリンジポンプ
１２１    シリンジ
１２２    チューブ
１２３    プランジャ
１３０    顕微鏡装置
１３１    レンズ
１４０    マイクロ流路
１５０    モニタ
【図１】
2016042053.tif 000003
【図２】
2016042053.tif 000004
【図３】
2016042053.tif 000005
【図４】
2016042053.tif 000006
【図５】
2016042053.tif 000007
【図６】
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【図７】
2016042053.tif 000009
【図８】
2016042053.tif 000010
【図９】
2016042053.tif 000011
【図１０】
2016042053.tif 000012
【図１１Ａ】
2016042053.tif 000013
【図１１Ｂ】
2016042053.tif 000014