(57)【要約】【課題】ノイズ成分の影響を抑制し、微粒子による検出対象の検出精度を向上させる分析装置及び分析方法を提供する。【解決手段】分析装置１は光走査部４とパルス波形分析部３０とを備えている。光走査部４は微粒子１６と結合された検出対象１２が表面に固定された基板２を光学的に走査し、基板２から検出信号を取得する。パルス波形分析部３０は、検出信号のパルス波形のピーク値が所定の範囲内に存在するか否かを判定する振幅判定部３２と、パルス波形のパルス幅が所定の範囲内か否かを判定するパルス幅判定部３３と、を備え、検出信号のパルス波形を分析する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
微粒子と結合された検出対象が表面に固定された基板を光学的に走査し、前記基板から検出信号を取得する光走査部と、
前記光走査部が取得した前記検出信号のパルス波形を分析するパルス波形分析部と、
を備え、
前記パルス波形分析部は、
前記パルス波形のピーク値が所定の範囲内に存在するか否かを判定する振幅判定部と、
前記パルス波形のパルス幅が所定の範囲内か否かを判定するパルス幅判定部と、
を有することを特徴とする分析装置。
【請求項２】
前記パルス波形分析部は、前記ピーク値が所定の範囲内に存在し、かつ、前記パルス幅が所定の範囲内であるパルス波形を検出することを特徴とする請求項１記載の分析装置。
【請求項３】
微粒子と結合された検出対象が表面に固定された基板を光学的に走査し、前記基板から検出信号を取得する検出信号取得ステップと、
前記検出信号のパルス波形のピーク値が所定の範囲内に存在するか否かを判定する振幅判定ステップと、
前記パルス波形のパルス幅が所定の範囲内か否かを判定するパルス幅判定ステップと、
を含むことを特徴とする分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体、抗原等の生体物質を分析するための分析装置及び分析方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
疾病に関連付けられた特定の抗原または抗体をバイオマーカーとして検出することで、疾病の発見や治療の効果等を定量的に分析する免疫検定法（immunoassay）が知られている。酵素により標識された抗原または抗体を検出するＥＬＩＳＡ法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）は免疫検定法の一つであり、コスト等のメリットから広く普及している。ＥＬＩＳＡ法は、前処理、抗原抗体反応、Ｂ／Ｆ（bond/free）分離、酵素反応等を合計した時間が数時間から１日程度であり、長時間を要する。
【０００３】
これに対して、光ディスクに固定された抗体と試料中の抗原を結合させ、抗原と抗体を有する粒子とを結合させ、光ヘッドで走査することにより、光ディスク上に捕捉された粒子を短時間に計数する技術が提案されている（特許文献１）。また、光ディスクのトラッキング構造が形成される面に生体試料や粒子を付着させ、光ピックアップで信号の変化を検出する技術が提案されている（特許文献２）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開平５−５７４１号公報
【特許文献２】特表２００２−５３０７８６号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
光ディスクを用いた分析装置では、検出対象であるバイオマーカーを検出するときに、光ディスクの基板の表面の微細な傷がノイズ成分となる。
【０００６】
また、光ディスクを用いた分析装置では、光ディスクの基板の表面上で抗原抗体反応が行われるため、反応に起因するノイズが発生する。具体的には、基板の表面への抗体の固定、スキムミルクや牛血清アルブミン等の溶液によるブロッキング処理、及び塩を含んだ緩衝液を用いて行うアッセイ等の工程における残渣や残留物が、洗浄後に残ってしまうことでノイズ成分となる。残渣や残留物に起因するノイズレベルは、基板の表面の微細な傷に起因するノイズレベルと比較して１桁以上大きく、バイオマーカーの検出精度を悪化させる大きな要因となる。
【０００７】
本発明はこのような問題点に鑑み、ノイズ成分の影響を抑制し、微粒子による検出対象の検出精度を向上させる分析装置及び分析方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、微粒子と結合された検出対象が表面に固定された基板を光学的に走査し、前記基板から検出信号を取得する光走査部と、前記光走査部が取得した前記検出信号のパルス波形を分析するパルス波形分析部と、を備え、前記パルス波形分析部は、前記パルス波形のピーク値が所定の範囲内に存在するか否かを判定する振幅判定部と、前記パルス波形のパルス幅が所定の範囲内か否かを判定するパルス幅判定部と、を備えていることを特徴とする分析装置を提供する。
【０００９】
また、本発明は、微粒子と結合された検出対象が表面に固定された基板を光学的に走査し、前記基板から検出信号を取得する検出信号取得ステップと、前記検出信号のパルス波形のピーク値が所定の範囲内か否かを判定する振幅判定ステップと、前記パルス波形のパルス幅が所定の範囲内に存在するか否かを判定するパルス幅判定ステップと、を含むことを特徴とする分析方法を提供する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の分析装置及び分析方法によれば、ノイズ成分の影響を抑制し、微粒子による検出対象の検出精度を向上させることができる。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】実施形態の分析装置を示すブロック図である。
【図２】抗原抗体反応によりバイオマーカーである抗原をビーズと基板とでサンドイッチ捕獲して標識させ、これを検出する方法の一例を説明するための模式図である。
【図３】検出信号のパルス波形データの一例である。
【図４】実施形態の分析方法を示すフローチャートである。
【図５】パルス波形と各パラメータとの関係を示す模式図である。
【図６】各基準値の設定方法を説明するためのパルス波形図である。
【図７】基準値の設定方法を説明するためのパルス波形図である。
【図８】ビーズカウント数とバイオマーカー量との関係を示す相関図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
図１を用いて、本実施形態の分析装置を説明する。
【００１３】
図１に示すように、分析装置１は、基板２と、基板２を回転させるモータ等からなる駆動部３と、基板２の表面を光学的に走査する光走査部４と、駆動部３及び光走査部４を制御し、光走査部４によって検出された検出信号のパルス波形を分析する制御部５と、を備えている。
【００１４】
基板２は、例えば、コンパクトディスク（ＣＤ）、ＤＶＤ、ブルーレイディスク（ＢＤ）等の光ディスクと同等の寸法を有する円盤状である。基板２は、例えば、一般的に光ディスクに用いられるポリカーボネート樹脂やシクロオレフィンポリマー等の疎水性を有する樹脂材料からなる。
【００１５】
基板２は、表面に光走査部４が走査可能なトラック構造を有する。トラック構造は、グルーブ、ランド、ピット等からなり、内周側から外周側にスパイラル状に形成されている。基板２の表面には必要に応じて、薄膜形成やシランカップリング剤などによる表面処理を施すこともできる。
【００１６】
図２に示すように、基板２の表面には、検出対象の生体物質である抗原１２と特異的に結合する抗体１１が固定されている。後述するように、抗原１２は、微粒子であるビーズ１６の表面に固定された抗体１５、及び基板２の抗体１１と特異的に結合する。ビーズ１６と基板２とでサンドイッチ捕獲された抗原１２は、基板２上で標識される。抗原１２は、抗体１１及び抗体１５と特異的に結合することにより、疾病等の指標となるバイオマーカーとして用いられる。
【００１７】
図２（ａ）に示すように、基板２の表面には抗体１１が予め固定されている。抗体１１は疎水結合や共有結合により基板２の表面に結合される。抗体１１はアビジン等の結合力の強い物質を介して基板２の表面に固定されてもよい。
【００１８】
図２（ｂ）に示すように、抗原１２を含む試料液１３が基板２の表面に滴下される。抗原１２は、ブラウン運動により試料液１３中を移動して抗体１１と接触し、抗原抗体反応によって抗体１１と特異的に結合する。
【００１９】
図２（ｃ）に示すように、基板２に滴下された試料液１３を、純水等を用いて洗浄することにより、抗体１１と結合しない余剰の抗原１２を含む試料液１３は基板２から除去される。
【００２０】
図２（ｄ）に示すように、ビーズ１６を含む緩衝液１４が基板２の表面に滴下される。緩衝液１４は試料液１３が残存する状態で基板２に滴下されてもよい。
バイオマーカーである抗原１２は、抗原抗体反応により、ビーズ１６の抗体１５と特異的に結合し、基板２の抗体１１と特異的に結合することで、ビーズ１６と基板２とでサンドイッチ捕獲され、基板２上で標識される。
【００２１】
ビーズ１６は、例えば、フェライト等の磁性体を内包するポリスチレン等の合成樹脂により略球形に形成されている。ビーズ１６の直径は、数十ｎｍ〜２００ｎｍ程度である。ビーズ１６は、緩衝液１４が滴下される際に基板２の反対側に磁石が配置されることによって迅速に基板２の表面に集めることもできる。それにより、ビーズ１６と抗原１２との反応が促進される。また、抗原１２とビーズ１６とが同時に投入されることにより、基板２に固定された抗原１２を標識するまでの時間を数分程度に短縮することができる。
【００２２】
抗体１１及び抗体１５は、抗原１２と特異的に結合する特異性生体物質であればよく、それぞれが別の部位と結合する組み合わせを選択することもできる。
【００２３】
例えば、複数の種類の抗原１２が表面に発現しているエキソソーム等の膜小胞を検出対象とする場合は、抗体１１及び抗体１５は異なる種類とすることにより、２種類の抗原１２を有する生体試料を分析することができる。これに限らず、エキソソーム等は通常の抗原とは異なり、表面に同種のたんぱく質である抗原が複数存在していることから、抗体１１及び抗体１５は、同じ種類としてもよい。
【００２４】
図２（ｅ）に示すように、基板２に滴下された緩衝液１４を、純水等を用いて洗浄することにより、抗原１２と結合しない余剰のビーズ１６を含む緩衝液１４が除去される。
【００２５】
図２（ｆ）に示すように、基板２が光走査部４により光学的に走査され、ビーズ１６が検出されることにより、ビーズ１６に標識された抗原１２（バイオマーカー）を分析することができる。例えば、バイオマーカーの量（濃度）を定量することができる。
【００２６】
図１に戻り、光走査部４は、レーザ発振器２１と、コリメータレンズ２２と、ビームスプリッタ２３と、アクチュエータ２４と、対物レンズ２５と、集光レンズ２６と、光検出部２７と、を備えている。光走査部４は、基板２を光学的に走査する光ピックアップである。
【００２７】
レーザ発振器２１は、制御部５の制御に応じて、コリメータレンズ２２に向けてレーザ光を出射する。レーザ発振器２１は、例えば、波長がＢＤの再生用波長と同一の４０５ｎｍであり出力が１ｍＷ程度のレーザ光を出射する半導体レーザ発振器である。
【００２８】
コリメータレンズ２２は、レーザ発振器２１から出射されたレーザ光を平行にする。
ビームスプリッタ２３は、コリメータレンズ２２により平行にされたレーザ光を対物レンズ２５に向けて反射する。
【００２９】
対物レンズ２５は、制御部５の制御に応じたアクチュエータ２４の駆動により、ビームスプリッタ２３を経由したレーザ光を、抗体１１が固定された基板２の表面に集光してスポットＳを結像させる。対物レンズ２５は例えば開口数が０．８５である。集光されたレーザ光は、基板２において反射し、ビームスプリッタ２３に入射する。
【００３０】
ビームスプリッタ２３に入射したレーザ光は、ビームスプリッタ２３を透過し、集光レンズ２６を介して光検出部２７に入射する。集光レンズ２６は、基板２において反射したレーザ光を光検出部２７に集光させる。光検出部２７は、例えばフォトダイオードからなり、基板２において反射したレーザ光の光量に対応する検出信号を制御部５に出力する。
【００３１】
制御部５は、駆動部３を制御する駆動系制御部２８と、レーザ発振器２１及びアクチュエータ２４をそれぞれ制御する光学系制御部２９と、光検出部２７から出力された検出信号のパルス波形を分析するパルス波形分析部３０と、を備えている。
【００３２】
駆動部３は、駆動系制御部２８の制御により、線速度一定（ＣＬＶ）方式で基板２を回転させる。
【００３３】
アクチュエータ２４は、光学系制御部２９の制御により、回転する基板２の表面をスパイラル状に走査するように、光走査部４を基板２の半径方向に移動させる。光学系制御部２９は、光検出部２７から出力された検出信号から、フォーカスエラー（ＦＥ）やトラッキングエラー（ＴＥ）等のエラーを検出する。光学系制御部２９は、検出したエラーに応じて、基板２の表面を適正に走査するようにアクチュエータ２４等を制御する。
【００３４】
パルス波形分析部３０は、パルス検出部３１と、振幅判定部３２と、パルス幅判定部３３と、を備えている。振幅判定部３２は振幅フィルタで構成することができる。
【００３５】
図３〜図８を用いて、光検出部２７から出力された検出信号のパルス波形をパルス波形分析部３０で分析する方法を説明する。
【００３６】
オペレータの操作により、駆動系制御部２８が駆動部３を制御して基板２を所定の線速度、例えば４．９２ｍ／秒で回転させる。また、光学系制御部２９が光走査部４を制御して、レーザ光を基板２の表面に集光してスポットＳを結像させる。
抗原抗体反応により抗原１２及びビーズ１６が表面に固定された基板２は、駆動部３により線速度一定に回転され、光走査部４により光学的に走査される。
【００３７】
光走査部４は、レーザ発振器２１から出射され基板２の表面で反射したレーザ光を、光検出部２７で検出する。光検出部２７は、検出したレーザ光の光量に応じた検出信号をパルス検出部３１へ出力する。
【００３８】
光検出部２７では、例えば図３に示すパルス波形（検出信号）が検出される。図３の横軸は時間であり、縦軸は電圧である。図３には下側にピークを有する４つのパルス波形が表れている。
【００３９】
図４のステップＳ１において、パルス検出部３１は、光検出部２７から出力された検出信号を取得し、取得した検出信号のパルス波形の立ち下がりを検出する。パルス検出部３１は、予め設定されている閾値レベル（電圧）Ｖｔｈを下回る時点をパルス波形の立ち下がりとして検出する。
【００４０】
なお、光検出部２７で検出されたビーズ１６のパルス波形の半値幅の平均値が事前に算出されており、半値幅の平均値に対応する電圧が閾値レベルＶｔｈとして予め設定されている。
【００４１】
ステップＳ２において、パルス検出部３１は、立ち下がりが検出された場合（ＹＥＳ）にはステップＳ３へ処理を進め、立ち下がりが検出されなかった場合（ＮＯ）には処理を終了する。
【００４２】
ステップＳ３において、パルス検出部３１は、パルス波形が閾値レベルＶｔｈを下回る時点の時刻ｔ１を取得し、カウンタフラグＣ１、第１基準レベル（電圧）Ｖ１のフラグＬ１、及び第２基準レベル（電圧）Ｖ２のフラグＬ２をリセット（Ｌｏｗ；０）して、ステップＳ４へ処理を進める。
【００４３】
ステップＳ４において、振幅判定部３２は、パルス波形のピーク値（ボトム電圧）Ｖｐを検出し、検出したピーク値Ｖｐが、予め設定されている第１基準レベルＶ１よりも小さいか否かを判定する。
【００４４】
振幅判定部３２は、検出したピーク値Ｖｐが第１基準レベルＶ１よりも小さい場合（ＹＥＳ）にはステップＳ５へ処理を進め、大きい場合（ＮＯ）にはステップＳ８へ処理を進める。
【００４５】
ステップＳ５において、振幅判定部３２はフラグＬ１をＨｉｇｈ；１にセットして、ステップＳ６へ処理を進める。
【００４６】
ステップＳ６において、振幅判定部３２はパルス波形のピーク値Ｖｐが、予め設定されている第２基準レベルＶ２よりも小さいか否かを判定する。
振幅判定部３２は、ピーク値Ｖｐが第２基準レベルＶ２よりも小さい場合（ＹＥＳ）にはステップＳ７へ処理を進め、大きい場合（ＮＯ）にはステップＳ８へ処理を進める。
【００４７】
ステップＳ７において、振幅判定部３２はフラグＬ２をＨｉｇｈ；１にセットして、ステップＳ８へ処理を進める。
【００４８】
ステップＳ８において、振幅判定部３２は、フラグＬ１がＨｉｇｈ；１、かつ、フラグＬ２がＬｏｗ；０である検出信号を有効な検出信号と判定（ＹＥＳ）し、ステップＳ９へ処理を進める。また、振幅判定部３２は、有効な検出信号と判定しなかった（ＮＯ）場合には処理を終了する。
【００４９】
ステップＳ９において、パルス幅判定部３３は、パルス波形の立ち上がりを検出する。パルス幅判定部３３は、立ち下がり検出で用いた閾値レベルＶｔｈを上回る時点をパルス波形の立ち上がりとして検出する。
【００５０】
ステップＳ１０において、パルス幅判定部３３は、立ち上がりが検出された場合（ＹＥＳ）にはステップＳ１１へ処理を進め、検出されなかった場合（ＮＯ）には処理を終了する。
【００５１】
ステップＳ１１において、パルス幅判定部３３は、パルス波形が閾値レベルＶｔｈを上回る時点の時刻ｔ２を取得し、取得した時刻ｔ２とステップＳ３で取得した立ち下りの時刻ｔ１とからパルス波形のパルス幅Ｔ（略半値幅に相当する）を取得し、ステップＳ１２へ処理を進める。
【００５２】
ここで、パルス波形のピーク値（ボトム電圧）Ｖｐと第１基準レベルＶ１及び第２基準レベルＶ２との関係、並びに、パルス波形のパルス幅Ｔと閾値レベルＶｔｈ、立ち下りの時刻ｔ１及び立ち上りの時刻ｔ２との関係を図５に示す。
【００５３】
図５に示すように、閾値レベルＶｔｈ、第１基準レベルＶ１、及び第２基準レベルＶ２は、Ｖｔｈ＞Ｖ１＞Ｖ２の関係を有している。
図５に示す検出信号のパルス波形は、ピーク値Ｖｐが第１基準レベルＶ１から第２基準レベルＶ２までの範囲に存在する。従って、図５に示す検出信号は、ステップＳ８において有効な検出信号と判定される。
【００５４】
ピーク値Ｖｐが第１基準レベルＶ１から第２基準レベルＶ２までの範囲に存在しないパルス波形の検出信号は、非特異吸着を抑制するために用いるブロッキング剤等、検出対象以外のたんぱく質凝集によるノイズ成分と判定される。
【００５５】
例えば図３に示す４つの検出信号のうち、左側の３つの検出信号はパルス波形のピーク値Ｖｐが第１基準レベルＶ１から第２基準レベルＶ２までの範囲に存在したので、有効な検出信号と判定される。一方、右端の検出信号はパルス波形のピーク値Ｖｐが第１基準レベルＶ１から第２基準レベルＶ２までの範囲に存在しなかったので、ノイズ成分と判定される。
【００５６】
ここで、第１基準レベルＶ１及び第２基準レベルＶ２の設定方法について説明する。
まず、図２を用いて説明した基板抗体形成、ブロッキング処理、塩を含んだ緩衝液の滴下等の処理を行わずに、光ディスクの素板に測定ビーズを分散、乾燥させた校正用ディスクを準備する。
【００５７】
次に、図１に示す分析装置１の光走査部４で校正用ディスクを光学的に走査し、検出信号のパルス波形をオシロスコープ等で観察しながら、パルス波形のピーク値（ボトム電圧）を測定する。
測定したピーク値に対して分散を計算し、例えば３σをレンジとして第１基準レベルＶ１及び第２基準レベルＶ２を設定する。
【００５８】
本設定方法によれば、実際に分析を行う分析装置１を用いて、実際に使用するビーズの検出信号に基づいて第１基準レベルＶ１及び第２基準レベルＶ２を設定するため、容易に、かつ、適切に第１基準レベルＶ１及び第２基準レベルＶ２を設定することができる。
【００５９】
［実験結果１］
信号強度（振幅変調度）の平均値が０．５の特性を有するビーズの検出信号に対して、Ｖｔｈ＝０．７５、Ｖ１＝０．６、Ｖ２＝０．３に設定して振幅判定部により検出信号のフィルタ処理を実施した。その結果、約２％の検出信号が除去された。ビーズの検出信号の信号強度のばらつきは１０％以下、即ちピーク値（ボトム電圧）で０．５５〜０．４５の範囲と考えられる。従って、振幅判定部によって除去された検出信号はノイズ成分と考えられる。これにより、バイオマーカーの検出精度を約２％向上させることができる。
【００６０】
［実験結果２］
検出対象の抗原（バイオマーカー）を含む試料液を滴下せずにアッセイを行い、ノイズ成分のみが固定された光ディスクを準備した。この光ディスクに対して、Ｖ１＝０．６５、Ｖ２＝０．３５に設定して振幅判定部により検出信号のフィルタ処理を実施した。その結果、振幅判定部を用いない場合に対して、約５０％のノイズ成分を除去することができた。
【００６１】
［実験結果３］
実験結果２で用いた光ディスクと同じ光ディスクに対して、Ｖ１＝０．５７、Ｖ２＝０．４５に設定して振幅判定部により検出信号のフィルタ処理を実施した。その結果、振幅判定部を用いない場合に対して、約８０％のノイズ成分を除去することができた。しかしながら、検出対象の抗原（バイオマーカー）を含む試料液を滴下してアッセイを行い、同じ条件でフィルタ処理を実施すると、本来カウントされるべき検出信号の一部がノイズ成分として除去された。
【００６２】
実験結果１〜３のようにフィルタ処理の条件を変えて実験した結果から、第１基準レベルＶ１及び第２基準レベルＶ２を設定することで、適切なフィルタ処理を行うこともできる。
【００６３】
図４に戻って、ステップＳ１２において、パルス幅判定部３３は、取得したパルス幅Ｔが、予め設定されている第１基準幅Ｔ１よりも大きいか否かを判定する。
パルス幅判定部３３は、パルス幅Ｔが第１基準幅Ｔ１よりも大きい場合（ＹＥＳ）にはステップＳ１３へ処理を進め、小さい場合（ＮＯ）には処理を終了する。
【００６４】
ステップＳ１３において、パルス幅判定部３３は、パルス幅Ｔが、予め設定されている第２基準幅Ｔ２（Ｔ２＞Ｔ１）よりも小さいか否かを判定する。
パルス幅判定部３３は、パルス幅Ｔが第２基準幅Ｔ２よりも小さい場合（ＹＥＳ）にはパルス信号Ｓを出力（ステップＳ１５）し、大きい場合（ＮＯ）にはステップＳ１４へ処理を進める。
【００６５】
ステップＳ１４において、パルス幅判定部３３は、パルス幅Ｔが、予め設定されている第３基準幅Ｔ３（Ｔ３＞Ｔ２）よりも小さいか否かを判定する。
パルス幅判定部３３は、パルス幅Ｔが第３基準幅Ｔ３よりも小さい場合（ＹＥＳ）にはパルス信号Ｌを出力（ステップＳ１６）し、大きい場合（ＮＯ）には処理を終了する。
【００６６】
即ち、パルス波形分析部３０は、ピーク値（ボトム電圧）が第１基準レベルよりも小さくて第２基準レベルよりも大きく、かつ、パルス幅が所定の範囲内であるパルス波形を検出し、検出された場合にパルス信号Ｓまたはパルス信号Ｌを出力する。
【００６７】
パルス幅判定部３３から出力されるパルス信号Ｓ及びパルス信号Ｌを、図示しない計数部でカウントすることにより、検出対象のバイオマーカーの量（濃度）を精度よく分析することができる。なお、計数部は制御部５の一部として構成されてもよく、制御部５の後段に構成されてもよい。
【００６８】
また、パルス信号Ｓとパルス信号Ｌとを別々にカウントし、これらを比較することでビーズの凝集状態がわかる。例えば、パルス信号Ｌに対するパルス信号Ｓの比率が大きければ、ビーズは凝集された状態にあり、小さければビーズは分散された状態にあることがわかる。
【００６９】
ここで、図６及び図７を用いて、第１基準幅Ｔ１、第２基準幅Ｔ２、及び第３基準幅Ｔ３の設定方法について説明する。図６及び図７の横軸はスポット位置であり、縦軸は信号強度（振幅変調度）である。図６では、１つのビーズが孤立した状態のパルス波形Ｄ１を実線で表し、２つのビーズが隣接した状態のパルス波形Ｄ２を１点鎖線で表し、３つのビーズが隣接した状態のパルス波形Ｄ３を破線で表している。図７は説明をわかりやすくするために、図６のパルス波形Ｄ１のみを表している。
【００７０】
図６に示すように、パルス波形Ｄ２の半値幅とパルス波形Ｄ３の半値幅とはほぼ等しいため、複数のビーズが隣接状態のパルス波形の半値幅を第１基準幅Ｔ１としている。第２基準幅Ｔ２は第１基準幅Ｔ１にαを加算した値に設定されている。αは分析装置のジッター値等を鑑みて設定されている。
【００７１】
図７に示すように、第３基準幅Ｔ３はパルス波形Ｄ１の半値幅にαを加算した値に設定されている。αは分析装置のジッター値等を鑑みて設定されている。
【００７２】
上述した分析装置及び分析方法によれば、検出信号のピーク値（ボトム電圧）を振幅判定部で分析することでノイズ成分を除去し、さらに検出信号のパルス幅をパルス幅判定部で分析することで、振幅判定部で除去し切れなかったノイズ成分を除去することができる。従って、従来よりもノイズ成分の影響を抑制し、検出対象であるバイオマーカーの検出精度を向上させることができる。
【００７３】
図８を用いて、上述した分析装置１を用いた実施例を説明する。図８の横軸はバイオマーカー量（濃度）であり、縦軸はビーズカウント数である。なお、振幅判定部による処理をせずにパルス幅の判定のみを行った場合を比較例として示している。
【００７４】
図８の破線はバックグラウンドであり、ノイズ成分に相当する。図８に示すように、バイオマーカー量に対するビーズカウント数の傾きは実施例、比較例ともほぼ同じである。一方、バックグラウンドは、実施例が比較例よりも大幅に下がっている。即ち、実施例は比較例よりもノイズ成分が除去されている。その結果、検出対象であるバイオマーカーの検出精度が向上し、微量なバイオマーカーの検出も可能になる。
【００７５】
なお、本発明に係る実施形態は、上述した構成に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において種々変更可能である。
【符号の説明】
【００７６】
１  分析装置
２  基板
４  光走査部
１２  抗原（検出対象）
１６  ビーズ（微粒子）
３０  パルス波形分析部
３２  振幅判定部
３３  パルス幅判定部
【図１】
2016070782.tif 000003
【図２】
2016070782.tif 000004
【図３】
2016070782.tif 000005
【図４】
2016070782.tif 000006
【図５】
2016070782.tif 000007
【図６】
2016070782.tif 000008
【図７】
2016070782.tif 000009
【図８】
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