(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
モズクから抽出されたフコイダンを用いて抗潰瘍剤を製造するに当たり、上記フコイダンにイオン交換処理を施してフコイダンの硫酸エステル基を遊離酸形またはアルカリ金属塩形に変換することを特徴とする抗潰瘍剤の製造法。
【請求項２】
イオン交換処理を電気透析、限外ろ過膜を用いる酸洗浄、イオン交換樹脂処理、またはこれらの処理のいずれかとそれに引き続き行われる中和処理により行う請求項１記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、モズク由来のフコイダンを有効成分とする抗潰瘍剤の製造法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
フコイダンは主としてフコースからなる分子量１０万前後の多糖類であって、フコース単位の一部は硫酸エステル化されている。フコイダンは抗潰瘍作用を示すことが確認されており、抗潰瘍剤の構成成分として利用することができる。
【０００３】
フコイダンは褐藻類に属する海藻であるモズク（Phaeophyceae Chordariales nemacystus）に豊富に含まれており、抽出も容易なので、フコイダンを有効成分とする抗潰瘍剤を製造するにはモズクを原料とするのが最も有利である（特開平７−１３８１６６号公報）。
【０００４】
モズクからフコイダンを抽出する方法としては熱水抽出法があり、特に、酸を加えた熱水による抽出が抽出能率、収率等の点で優れている。酸添加熱水抽出法によりフコイダンを抽出し、それを精製して抗潰瘍剤として利用する方法の概要は次のとおりである。
【０００５】
抽出法：モズクの藻体をその湿重量の約１〜３倍量の水に懸濁させ、希塩酸を加えてpＨを２〜４、望ましくは２〜３に調整する。次いで約５０℃以上、望ましくは約８０〜１００℃に加熱し、フコイダンを溶出させる。次いで遠心分離して沈殿物を除き、上清をカ性ソーダ溶液で中和する。
【０００６】
精製法：限外ろ過、透析等による分子量分画を行なって塩類および低分子量の不純物を除く。ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー等により精製することができる。最後に濃縮し、凍結乾燥すると、粉末状のフコイダンが得られる。
抗潰瘍剤として経口的に投与されたフコイダンは消化管に入り、患部に到達して潰瘍治癒作用を行うものと考えられている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
上述の抽出・精製法による場合に限らないが、モズクから抽出されたフコイダンの抗潰瘍活性は原料のモズクのロットによる変動が大きく、まれには全く活性を示さない場合もあることがわかった。この活性変動には原料のモズクの成熟度、収穫年度等が複雑に関係しているものと思われ、したがって、モズクを原料としては一定の品質の抗潰瘍剤を製造することが難しかった。
【０００８】
そこで本発明の目的は、モズク抽出液から抗潰瘍活性の変動幅の小さいフコイダンを得ることを可能にし、それによりフコイダンからなる抗潰瘍剤の製造を容易にすることにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成することに成功した本発明は、モズクから抽出したフコイダンを用いて抗潰瘍剤を製造するに当たり、上記フコイダンにイオン交換処理を施してフコイダンの硫酸エステル基を遊離酸形またはアルカリ金属塩形に変換することを特徴とする抗潰瘍剤の製造法を提供するものである。
【００１０】
本発明におけるイオン交換処理は、好ましくは電気透析、限外ろ過膜を用いる酸洗浄、イオン交換樹脂処理、またはこれらの処理のいずれかとそれに引き続き行われる中和処理により行うことができるが、イオン交換処理の手段がこれらに限定されるわけではない。
【００１１】
モズクから抽出されたフコイダンにイオン交換処理を施してその硫酸エステル基を遊離酸形またはアルカリ金属塩形に変換すると、この処理なしでは抗潰瘍活性を示さないか活性が微弱なフコイダンも強い活性を示すようになる。したがって、強い抗潰瘍活性を示すフコイダンはその硫酸エステル基の大部分が遊離酸またはアルカリ金属塩の形になっていること、モズクから抽出されたままのフコイダンではその硫酸エステル基の一部または大部分に多価金属が結合している場合があってそれが抗潰瘍活性の発現を阻害すること、などが考えられるが、詳細は未だ確認されていない。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明に従い抗潰瘍剤を製造する場合、モズクからフコイダンを抽出する方法は特に限定されるものではないが、前述の酸添加熱水抽出法が最も有利である。
【００１３】フコイダンを含有する抽出液が得られたならば、それから低分子量の水溶性成分、塩類等を除去する精製工程の任意の段階で、本発明によるイオン交換処理を施す。イオン交換処理は、電気透析、限外ろ過膜を用いる酸洗浄、イオン交換樹脂処理、またはこれらの処理のいずれかとそれに続く中和処理等により行うことができる。
【００１４】
電気透析は、陽イオンのみを透過させる陽イオン交換膜と陰イオンのみを透過させる陰イオン交換膜との間に被処理溶液を流し、電場をかけて被処理溶液中の陽・陰イオン中イオン半径の比較的小さいものをイオン交換膜を透過させることにより被処理溶液から除くものである。脱塩または塩分濃縮の手段として周知のものであるが、イオン交換膜が緻密であって有機物は極低分子量のもの以外はイオン化していても透過させないから、フコイダンのような高分子電解質の溶液にこの処理を施すと、不純物として共存する無機塩類が除去されるのと並行して、フコイダンに結合している金属イオンが除去される。イオン交換膜を透過しないフコイダンは、遊離酸の形で被処理溶液に残る。処理の進行状況は継続的に電気伝導度を測定することにより監視することができる。
【００１５】
限外ろ過膜を用いる酸洗浄は、限外ろ過による脱塩と分子量分画を行なう精製と組み合わせて行うことができる。すなわち、分画分子量がフコイダンの分子量よりも十分小さい限外ろ過膜を用いてフコイダン含有抽出液を限外ろ過すれば無機塩類など低分子量の不純物だけを透過させて除去することができるが、このとき、フコイダンが濃縮された非透過液に希塩酸を加えて再度限外ろ過を行えば、フコイダンから遊離した金属イオンが膜を透過し、フコイダンはその硫酸エステル基が遊離酸の形で残る。
【００１６】
イオン交換樹脂処理によるイオン交換は、Ｈ形の強酸性イオン交換樹脂を用いて常法により行うことができ、最も確実に、フコイダンの硫酸エステル基を遊離酸の形に変えることができる。
【００１７】
いずれのイオン交換手段を採用した場合も、遊離酸の形のフコイダンをカ性ソーダ、カ性カリ等のアルカリ金属水酸化物で中和すれば、アルカリ金属塩が得られる。
【００１８】
硫酸エステル基が遊離酸形であるかアルカリ金属塩の形であるかによってフコイダンの抗潰瘍活性に大きな差異が生じることはないが、塩の形のほうが保存安定性の点では優れている。
【００１９】
十分精製され且つ硫酸エステル基が遊離酸またはアルカリ金属塩の形になったフコイダンは、任意の製剤化手段により、任意の助剤もしくは他の薬剤と組み合わせて抗潰瘍剤とすることができる。
【００２０】
【実施例】
以下、実施例および比較例を示して本発明を説明する。なお、各例においてフコイダンの抽出原料としたモズクは、比較例１の方法によっては抗潰瘍活性をほとんど示さないフコイダンしか得られないことがあらかじめ確認されていたものである。
【００２１】
比較例１
モズクの塩蔵藻体１kgに水道水１リットルを加え、１Ｎ-ＨＣlを用いてpＨを３に調整し、９５℃に１時間加熱してフコイダンを抽出した。冷却後、カ性ソーダでpＨを６に調整してから10,000Ｇで１０分間遠心分離して抽出残渣を除去し、得られた抽出液を分画分子量が６,０００の限外ろ過膜を用いて濾過した。フコイダンが濃縮されている非透過液は、脱イオン水２リットルを加えて再度限外ろ過し、最後に減圧下に濃縮し、凍結乾燥した。粉末状のフコイダン２１ｇ（純度７５重量％）が得られた。
【００２２】
実施例１
比較例１で用いたモズクと同じモズクを比較例１と同様に抽出処理し、遠心分離して抽出液を得た。得られた抽出液を減圧下に約５００mlまで濃縮し、イオン交換膜・アシプレックスカートリッジＡＣ-110-400を装着した電気透析装置・マイクロアシライザーＧ３型（いずれも旭化成工業株式会社製品）で処理して、低分子電解質およびフコイダンに結合している金属イオンを除去した。処理後、減圧下に濃縮し、凍結乾燥して、粉末状のフコイダン２５ｇ（純度６０重量％）を得た。
【００２３】
実施例２
比較例１で用いたモズクと同じモズク３００kgを比較例１と同様にして抽出処理し、遠心分離して抽出液を得た。得られた抽出液を分画分子量６,０００の限外ろ過膜を用いて濾過し、低分子量不純物を除去した。次いで、フコイダンが濃縮された非透過液に脱イオン水２００リットルおよび塩酸を加えてpＨ３の希釈液とし、同じ限外ろ過膜で限外ろ過した。pＨ３の希釈液にして限外ろ過する酸洗浄処理をさらに２回繰り返した後、脱イオン水２００リットルだけを加えて限外ろ過する洗浄操作を２回繰り返し、最後に濃縮、凍結乾燥することにより、粉末状のフコイダン４.５kg（純度７６重量％）を得た。
【００２４】
実施例３
比較例１と同様にして粉末状のフコイダン２００ｇを製造し、これを脱イオン水１０リットルに溶解し、Ｈ形の強酸性陽イオン交換樹脂・ダイヤイオンＳＫ１Ｂのカラムに通液した。カラム通過液をカ性ソーダ水溶液で中和したのち減圧下に濃縮し、凍結乾燥して、硫酸エステル基がＮa塩形のフコイダン２００ｇ（純度７０重量％）を得た。
【００２５】
実施例４
実施例２で製造した粉末状フコイダン１５０ｇを脱イオン水に溶解し、カ性ソーダでpＨを６に調整したのち、濃縮し凍結乾燥して、硫酸エステル基がＮa塩形のフコイダン１５２ｇ（純度７６重量％）を得た。
【００２６】
試験例１
比較例で得られたフコイダンについて、抗潰瘍作用を酢酸誘発潰瘍を用いて試験した。試験法は次のとおりである（以下の各例においても同じ）。
【００２７】
試験法：酢酸誘発潰瘍は、８週令のＳＤラット（体重２５０〜３００ｇ；１群１０匹）をネンブタール麻酔下に開腹し、胃を取り出して胃体部粘膜下組織に２０％酢酸を０.０３ml注入することにより発生させる。上記手術の翌日から１０日目までの間、経口的に上記フコイダンを投与し、１１日目に胃を摘出して潰瘍形成部の面積（長径×短径）を測定し、これを潰瘍指数とする（平均値±標準偏差を表示）。また、次式により治癒率を算出する。なお、試験期間中、餌および水は自由摂取させる。
治癒率（％）＝（１−フコイダン投与群の潰瘍指数／対照群の潰瘍指数)×100
【００２８】
試験結果を表１に示す
【００２９】
【表１】
0003920954.tif 000002
【００３０】
試験例２
実施例１で得られたフコイダンについて、試験例１と同様の試験を行なった。その結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0003920954.tif 000003
【００３２】
試験例３
実施例２で得られたフコイダンについて、試験例１と同様の試験を行なった。その結果を表３に示す。
【００３３】
【表３】
0003920954.tif 000004
【００３４】
試験例４
実施例３で得られたフコイダンについて、試験例１と同様の試験を行なった。その結果を表４に示す。
【００３５】
【表４】
0003920954.tif 000005
【００３６】
試験例５
実施例４で得られたフコイダンについて、試験例１と同様の試験を行なった。その結果を表５に示す。
【００３７】
【表５】
0003920954.tif 000006
【００３８】
【発明の効果】
上述のように、本発明によればいかなるモズクからも抗潰瘍活性の優れたフコイダンが得られるようになり、フコイダンからなる抗潰瘍剤を安価に、且つ容易に製造することが可能になる。