(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
0003993434.tif 000039
（式中、Ｒは、１〜２６個の炭素原子を有し、直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和のカルボン酸の残基である。）の化合物。
【請求項２】
カルボン酸が直鎖であり、モノ−およびポリ−不飽和脂肪酸から成る群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒが１〜６個の炭素−炭素二重結合を有するＣ１８〜Ｃ２４モノ−またはポリ−不飽和脂肪酸の残基である、請求項１又は２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒがネルボン酸（２４：１（ｎ−９））、ドコサヘキサエン酸（２２：６（ｎ−３））又はγ−リノレン酸（１８：３（ｎ−６））の残基（ここで、（ｎ−ｘ）中のｘは、脂肪酸の末端メチル基に対する第一の二重結合の位置を示す）である、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
１−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）−３−ヒドロキシプロパン；１−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）−３−（ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエノイルオキシ）プロパン（以後ＮＡ：ＧＬＡと言う）；１−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）−３−（ｚ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイルオキシ）プロパン（以後ＮＡ：ＤＨＡと言う）；および1，３−ジ−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（以後ＮＡ：ＮＡと言う）から選択される、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
前記化合物が水和物の形態である、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
請求項１乃至６のいずれか１項に記載の化合物の調製方法であって、
（ａ）ネルボン酸の好適な誘導体をプロパン−１，３−ジオールと反応させ、式（ＩＡ）：
【化２】
0003993434.tif 000040
の化合物を形成すること、その後、
（ｂ）式（ＩＡ）の化合物を式Ｒ１−ＯＨの対応カルボン酸と反応させ、式（ＩＢ）：
【化３】
0003993434.tif 000041
（式中、Ｒ１は１〜２６個の炭素原子を有するカルボン酸の残基である。）
の化合物を形成すること、を具備する方法。
【請求項８】
式（ＩＡ）の化合物は、塩基の存在下においてネルボン酸の酸塩化物（すなわちＣＨ３−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）１３−ＣＯＣｌ）とプロパン−１，３−ジオールとの反応により調製される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
エステル化反応（ｂ）における条件は次亜リン酸の存在を含み、任意に不活性雰囲気下において加熱還流される、請求項７または８に記載の方法。
【請求項１０】
治療に使用される請求項１乃至６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
抗炎症剤及び／又は免疫調節剤として使用される請求項１乃至６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
非毒性的有効量の請求項１乃至６のいずれか１項に記載の化合物と薬理学的に許容しうるキャリヤーを含有する薬理学的組成物。
【請求項１３】
キャリヤーがエチルオレエートを含有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
化合物がＮＡ：ＮＡ及び／又はＮＡ：ＧＬＡである、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１５】
化合物がＮＡ：ＤＨＡである、請求項１２または１３に記載の組成物。
【請求項１６】
請求項１乃至６のいずれか１項に記載の化合物をその薬学的に許容しうるキャリヤーと組み合わせることを含む、請求項１２乃至１５のいずれか１項に記載の組成物の調製方法。
【請求項１７】
請求項７乃至９のいずれか１項に記載の方法により調製された請求項１乃至６の何れか１項に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、あるいくつかの脂肪酸エステルおよびこれらの調製、およびヒトを含む哺乳動物における薬剤、例えば抗炎症剤、または免疫調節剤におけるこのような化合物またはこれらの製薬配合物の使用に関する。
【０００２】
脂肪酸には、グリセリド、例えばトリアシルグリセロールを構成するカルボン酸、植物および動物の脂肪貯蔵細胞に含まれているカルボン酸エステルが含まれることが一般に知られている。多くのこのような脂肪酸は、３から１８個の炭素原子を有する（Ｃ３〜Ｃ１８）直鎖化合物である。Ｃ３およびＣ５化合物を除いては、偶数の炭素原子を含む酸のみが、その生合成によってかなり多量に存在する。飽和および不飽和の両方の脂肪酸、例えば不飽和Ｃ１８オレイン酸、α−リノール酸、およびγ−リノレン（ＧＬＡ）脂肪酸であって、各々がそれぞれ１、２、および３個の炭素−炭素二重結合を有するものが存在する。したがって通常の表記法では、これらの酸を、それぞれ１８：１、１８：２、および１８：３脂肪酸と言う。これらの二重結合の周りの立体配置は通常シスであり、これは対応脂肪の融点を（対応飽和およびトランス化合物と比べて）低下させる。
【０００３】
これらの短鎖および中鎖脂肪酸のほかに、より長い鎖、例えばＣ１６〜Ｃ２４の脂肪酸も知られており、研究されている。特に魚油から入手しうるもの、例えばエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ、２０：５（ｎ−３））およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ、２２：６（ｎ−３））である。この場合（ｎ−ｘ）において、ｘは、脂肪酸上の末端メチル基に対する第一炭素−炭素二重結合の位置を示している。
【０００４】
いくつかの脂肪酸は、その食事代謝およびその潜在的な食事への使用と同様に、医学的状態、例えば精神分裂病（ＧＬＡおよびＤＨＡ）および双極性障害（ＥＰＡおよびＤＨＡ）に関連して研究された。あるいくつかの脂肪酸に直接あるいは間接的に生物活性剤を結合させて、生物学的に活性な薬剤（「生物活性剤」）の脂質膜を横切る輸送を改良するために、同様にいくつかの脂肪酸も提案された。例えばＰＣＴ特許明細書第ＷＯ９６／３４８４６号において、必須脂肪酸（ＧＬＡ、ＤＨＡ、およびＥＰＡが含まれる）のどれか、あるいは少なくとも２つの炭素−炭素二重結合を有するその他のあらゆるＣ１２〜３０脂肪酸も、そのように用いることができることが開示されている。その明細書に挙げられている広い範囲の可能性のある生物活性剤および（１２〜３０：≧２）脂肪酸のうちで、特にＧＬＡ−ＧＬＡが開示されており、これはプロパン−１，３−ジオール部分を介して結合された一対のＧＬＡ分子、すなわち１，３−（ジ−ｚ，ｚ，ｚ，−オクタデカ−６，９，１２−トリエノイルオキシ）プロパンである。しかしながらどの薬理学的テストにおける生物学的結果でも、これを下痢の証拠を伴なわずにラットおよびマウスに１０ｇ／ｋｇまで投与されたという報告（すなわち治療効果の存在よりもむしろ毒性が無い）以外は、ＧＬＡ−ＧＬＡに有利な証明がなされていない。
【０００５】
それにもかからわらずＧＬＡ−ＧＬＡは、炎症性疾患の治療を含む、広い範囲の列挙された用途を有する１つの可能性のあるプロパン−１，３−ジオール化合物として挙げられている。しかしながら特に例４を参照して下記に報告されているように、本発明者らは、ＧＬＡ：ＧＬＡが、抗炎症活性についての本発明者らのテストでは効果がないことを発見した。したがってプロパン−１，３−ジオール部分を介して結合された（１２〜３０：≧２）脂肪酸のその他の組合わせも、特にこのような作用が、関わっている脂肪酸部分の少なくとも１つに対して有利な証明がまだなされていない場合は、同様に抗炎症作用を示さないことが予測されるであろう。
【０００６】
さらには脂肪酸のほかの種類、例えばただ１つの炭素−炭素二重結合を有するものの使用の可能性は、第ＷＯ９６／３４８４６号において考察されていない。脂肪酸のこのような１つの異なる種類はネルボン酸である。ネルボン酸（２４：１（ｎ−９））は、シス（またはｚ）−テトラコス−１５−エン酸である。これは必須脂肪酸としては分類されておらず、ただ１つの不飽和Ｃ＝Ｃ結合を有する。これはミエリンの生合成においてある役割を果たし、大脳スフィンゴ脂質における主要な脂肪酸の１つである。したがってネルボン酸は、髄鞘除去を含む疾患、例えばアデノロイコジストロフィー（ＡＬＤ）および多発性硬化症（ＭＳ）に関係していた。したがって髄鞘除去状態を罹患している患者に、ネルボン酸またはその源を、その製薬配合物として投与すること（ＰＣＴ公告明細書第ＷＯ９１／０７９５５号に記載されているように）、または例えば赤ちゃんまたは乳幼児の食品として、あるいは妊婦または授乳中の女性に食事サプリメントとして、ネルボン酸またはこれの機能的誘導体を供給すること（ＰＣＴ公告明細書第ＧＢ９５／０１９８５号に記載されているように）が提案された。ＭＳの正確な原因はまだ知られていないが、今や強力な証拠が示唆していることは、ＭＳは、遺伝的に影響を受けやすい個人において、免疫細胞がミエリンを異質の侵入物と間違えてこれを攻撃する環境因子、おそらくは非特異的ウイルス感染によって引起こされた自己免疫プロセスの結果生じるということである。このプロセスは、ＣＮＳにおいて血管周囲の炎症を生じ、場合によってはミエリンのみならず、下部神経組織にも損傷を与える。しかしながらネルボン酸は、炎症または炎症性疾患に対して一般的な作用を有することは知られていない。
【０００７】
ミエリンおよび神経組織への損傷の結果として、血液−大脳バリヤーが粉砕され、これによって、活性化されたＴ−細胞が大脳に入り、他のリンパ球を入れる。活性化されたＴ−細胞は、リンホトキシン、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、およびその他の炎症性サイトカインを放出する。リンホトキシンは、寡突起神経膠細胞、およびＩＦＮ−γを損傷することがある。このことは、ＭＳ増悪を引き起こすことが証明されており、ＭＳを悪化させると考えられているいくつかの方法において免疫系を刺激する。寡突起神経膠細胞は、ミエリン特異的タンパク質および脂質を合成し、これらの役割は、正常なミエリン鞘形成および正常な大脳機能のどちらにとっても決定的である。
【０００８】
例えばＩＦＮ−γは、マクロファージ上の主要な組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ分子の発現を増加させ、星状細胞、小膠細胞、および内皮細胞上のこれらの発現を誘発する。これらのＭＨＣ分子に関連した抗原ミエリンペプチドは、Ｔ−細胞によって認識され、これらは抗原の提示に応えて増殖し、免疫応答を増幅させる。
【０００９】
ＩＦＮ−γによって活性化されたマクロファージもまた、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）を放出する。これは、試験管内で寡突起神経膠細胞を損傷することが証明された。さらにはサイトカイン、プロテイナーゼ、およびリパーゼが分泌され、Ｂ−細胞は、抗体を合成するようにさせられる。この応答の結果、髄鞘除去およびグリオーシスを生じ、これによって神経インパルスが遅延化されるかまたは停止され、ＭＳの症状を生じる。
【００１０】
今や驚くべきことに、ネルボン酸のあるいくつかの誘導体が、抗炎症性および／または免疫調節活性を有することが発見された。さらにはこれらの誘導体のいくつかは、血液−大脳バリヤーを横切るネルボン酸の通過を補助する。
【００１１】
したがって本発明は、式（Ｉ）：
【化４】
0003993434.tif 000002
（式中、Ｒは、水素（Ｈ）またはカルボン酸の残基である）の化合物、またはＲがＨである式（Ｉ）の化合物の塩を提供する。
【００１２】
式（Ｉ）の定義にはまた、適用可能な場合は、個々の異性体およびこれらの混合物；およびこれらの誘導体（特に生物先駆物質またはプロドラッグ）が含まれる。
【００１３】
「生物先駆物質」または「プロドラッグ」という用語は、生体内で本発明の化合物に転換される、薬理学的に許容しうる誘導体、例えばエステル（例えば−ＣＯＯＨ基の生物変化を受けやすいエステル誘導体）を意味する。適切なプロドラッグは、ＧｏｏｄｍａｎおよびＧｉｌｍａｎの「治療学の薬理学的基礎（Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）」、第８版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、Ｉｎｔ．Ｅｄ．１９９２年、特に「薬剤の生物形質転換（Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇｓ）」、１３〜１５ページを参照して決定することができる。
【００１４】
Ｒの定義において言及されたカルボン酸は好ましくは、１から２６個の炭素原子を有しており、直鎖または分枝鎖であってもよく、飽和または不飽和であってもよい。より好ましくはこのカルボン酸は直鎖であり、モノ−およびポリ−不飽和脂肪酸から成る群から選ばれる。特に好ましくは式（Ｉ）（ここにおいてＲは、１から６個の炭素−炭素二重結合を有する、Ｃ１８からＣ２４モノ−またはポリ−不飽和脂肪酸の残基である）の化合物である。特に好ましいものは、Ｒがネルボン酸（２４：１（ｎ−９））、ドコサヘキサエン酸（２２：６（ｎ−３））、またはγ−リノレン酸（１８：３（ｎ−６））の残基である時であり、この場合（ｎ−ｘ）中のｘは、この脂肪酸の末端メチル基に対する第一二重結合の位置を示している。
【００１５】
ＲがＨである式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ）のその他の化合物の合成における中間体として有用であることは、当業者によって理解されるであろう。したがって本発明は、式（Ｉ）（ここにおいてＲはカルボン酸の残基である）の化合物の調製方法であって、式（ＩＡ）の化合物、すなわち１−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）−３−ヒドロキシプロパン：
【化５】
0003993434.tif 000003
と、式Ｒ−Ｈ（ここにおいてＲは式（Ｉ）について定義されたものと同じである）の対応カルボン酸とを反応させることを含む方法を提供する。
【００１６】
このエステル化反応に適した条件は当業者に知られており、次亜リン酸の存在を含み、好ましくは、例えば窒素等の不活性雰囲気において加熱還流される。
【００１７】
式（ＩＡ）の化合物それ自体は、通常の方法で、例えばネルボン酸の酸塩化物（すなわちＣＨ３−（ＣＨ２）７−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ２）１３−ＣＯＣｌ）とプロパン−１，３−ジオールとの、塩基、例えば有機塩基、例えばトリアルキルアミン、例えばトリエチルアミンおよびトリブチルアミン、およびピリジン、２，６−ジメチルピリジン、およびキノリンの存在下において、好ましくは有機非プロトン性溶剤、例えばハロゲン化アルカン、例えばジクロロメタン、エーテル、テトラヒドロフラン、およびトルエン中における反応から調製することができる。この反応は好ましくは、不活性雰囲気、例えば窒素下において例えば０℃まで冷却されて実施される。
【００１８】
ネルボン酸の酸塩化物（ｚ−１５−テトラコセノイル塩化物）は、通常の方法で、ネルボン酸およびチオニル塩化物、三塩化リン、または特に五塩化リンから、好ましくは極性溶剤、例えば無水条件および好ましくは不活性雰囲気下におけるエーテル中で調製することができる。
【００１９】
式（Ｉ）（ここにおいてＲはネルボン酸の残基である）の化合物の調製の場合、前記２工程プロセスは、ネルボン酸、プロパン−１，３−ジオール、および例えば次亜リン酸から単一ポットにおいて実施することができる。
【００２０】
ネルボン酸は、英国のオールドリッチ・ケミカルズ社（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から商品として入手することができるが、あるいは例えば米国特許明細書第ＵＳ５，１９４，４４８号または公告されたＰＣＴ特許明細書第ＰＣＴ／ＧＢ９５／０１９８５号に記載されているように入手することもできる。
【００２１】
式（Ｉ）（ここにおいてＲはＨ以外のものである）の化合物、すなわち式（ＩＢ）：
【化６】
0003993434.tif 000004
（ここにおいてＲ１はカルボン酸の残基である）の化合物は、前記のように、驚くべきことに抗炎症性および／または免疫調節活性を有することが発見された。
【００２２】
好ましいカルボン酸残基は、Ｒの定義に関して前記のように記載されているものである。
【００２３】
したがって本発明は、式（ＩＢ）で表される下記に示した特別な化合物を提供する：
１−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）−３−（ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエノイルオキシ）プロパン（以後ＮＡ：ＧＬＡと言う）；
１−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）−３−（ｚ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイルオキシ）プロパン（以後ＮＡ−ＤＨＡと言う）；および
1，３−ジ−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（以後ＮＡ：ＮＡと言う）。
【００２４】
ここでの「抗炎症性」とは、炎症または炎症性応答を減少させるか、改良するか、あるいは妨げる能力を意味する。ここでの「免疫調節」とは、免疫応答を、例えばこのような応答を抑制または刺激することによって調節する能力を意味する。抗炎症性および免疫調節活性のどちらも、いくつかの医療的状態の治療または予防にとって望ましいであろうことは、当業者によって理解される。
【００２５】
式（ＩＢ）の化合物の抗炎症性および／または免疫調節作用は、実施例において下記により詳細に記載されている実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）テストにおいて観察することができる。ＥＡＥは、血管周囲および柔膜下炎症性浸潤および髄鞘除去障害を特徴とするＣＮＳの自己免疫炎症性疾患である。これは、アジュバントと組合わされた、全均質化脊髄または大脳物質、精製ミエリンまたは寡突起神経膠細胞、ミエリンの精製成分での免疫化によって誘発することができる。アジュバント、例えばフロイントアジュバントの使用は、究極的には結果として病気を生じる免疫応答を増強するために必要である。相対的な精製の容易さによって、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）およびプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）、およびこれらの断片が、ＥＡＥにおける脳炎誘発物質として広く研究されてきた。
【００２６】
ＥＡＥモデルは広義には、急性単相性ＥＡＥおよび慢性再発性ＥＡＥとして分類することができる。
【００２７】
急性ＥＡＥにおいて、完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）中の小用量のミエリン抗原が注射された感受性の高い動物は、１０から１４日以内に麻痺疾患で死ぬ。病気の始まりは、尾の柔軟性の喪失および／または後足の軽い麻痺として観察され、腰臀部および腰部における筋肉の消耗に進行する。重症の場合、麻痺は前肢まで広がることがある。これらの動物が瀕死にならないならば、麻痺の重症度は減少し、動物は回復する。従来の急性ＥＡＥは、ルイスラットにおいて観察することができる。このようなモデルは、急性ＣＮＳ炎症の縮小を目的とする薬剤および／または免疫療法の効果を研究するのに理想的である。
【００２８】
神経障害の臨床的等級付けおよび分類は、用いられた動物の血統および病気の経過に応じる。無症候（０）から死亡（６）までにわたる、０から６点の等級付けが一般に用いられている。
【００２９】
臨床的徴候が始まる前に、動物は体重が減少し、ＣＮＳの試験によって、特に脊髄において単核細胞の浸潤が明らかになる。臨床的徴候が始まった後、増加した数の単核細胞がＣＮＳを浸潤し、実質組織の浸潤の前に脊髄の柔膜下区域に蓄積する。免疫組織化学および細胞単離技術によって、マクロファージおよびＣＤ４＋Ｔ細胞として優勢な細胞が同定された。髄鞘除去は、急性ＥＡＥの従来の徴候ではなく、したがってこのテストは、髄鞘除去性疾患が伴なうことがある活性のみを示すのではなく、一般に抗炎症性／免疫調節活性を示していることは注目に値する。
【００３０】
慢性ＥＡＥは、急性ＥＡＥのエピソードに続く、回復を伴なわない神経障害の続行を特徴とする。
【００３１】
あるいはまた完全な回復（寛解）は、急性期後に生じ、この後に臨床的および組織学的疾患期およびさらなる寛解期が続く。これは慢性再発性（および寛解性）ＥＡＥであり、これは急性モデルよりも密接に多発性硬化症の症状に似ている。慢性再発性ＥＡＥは、多くの種において特徴決定されているが、マウスモデルは、十分に特徴決定された免疫系、およびこの疾患をプローブするための広い範囲の免疫試薬の有効性という利点を有する。
【００３２】
ＥＡＥの場合に存在する免疫作用に加えて、慢性再発性ＥＡＥ（ＣＲＥＡＥ）は、これらの炎症性区域において、特に再発期に顕著な一次髄鞘除去を示す。
【００３３】
ＮＡ：ＮＡでの急性ＥＡＥテストにおいて得られた非常に肯定的な結果は、２つの脂肪アシル部分間のリンカーとしてのプロパン−１，３−ジオールの使用が非常に重要であることを証明している。これは、グリセロールバックボーンに結合した３つの脂肪アシル部分から成るグリセリルトリネルボネート（ＧＴＮ）が、急性ＥＡＥの経過にまったく作用を示さなかったからである。しかしながらこのことは、プロパン−１，３−ジオールの単なる存在それ自体が肯定的な結果を生じるのに十分であると仮定するには十分でない。本発明者らは、ＮＡ：ＧＬＡもまた、肯定的な結果を生じたが、一方でＧＬＡ：ＧＬＡを用いたテストは、作用が無い、を示すことを発見した。このことは驚くべきことであるが、それは、前記ＰＣＴ特許明細書第ＷＯ９６／３４８４６号の開示が、ＧＬＡ：ＧＬＡが特に有利な生物学的結果を生じるであろうという予測に導くであろうからである。したがってプロパン−１，３−ジオール部分を介して単に２つの脂肪酸部分（Ｒ１）を互いに結合しても、必ずしも結果として免疫調節および／または抗炎症性活性を有する化合物を生じない。
【００３４】
したがってネルボン酸のプロパン−１，３−ジオール誘導体は、２つまたはそれ以上の不飽和Ｃ＝Ｃ結合を有する脂肪酸の活性と比べて、予測できない様々な活性を有するように見えるであろう。ＮＡ：ＮＡについての構造−活性の関係が確立され、同様に誘導体ＮＡ：ＮＡおよびＮＡ：ＧＬＡの形態にあるネルボン酸は、以前には証明されていない一般的な抗炎症活性を示すことも証明された。
【００３５】
したがって式（ＩＢ）の化合物は、下記のものの緩和に用いることができる。すなわち、慢性関節リウマチ、リウマチ様脊椎炎、骨関節症、尿酸塩関節炎、およびその他の関節炎状態；炎症関節；湿疹およびその他の炎症性皮膚状態；結膜炎を含む炎症性の目の状態；発熱および炎症に関連したその他の状態、これには慢性炎症における組織壊死の縮小、移植外科手術後の組織拒絶の抑制、クローン病、および潰瘍性大腸炎が含まれる。
【００３６】
式（ＩＢ）の化合物はまた、気道炎症状態、例えば喘息および気管支炎の治療または予防にも用いることができる。免疫調節剤による処理に適したその他の状態には、全身性エリテマトーデス；多発性硬化症；重症筋無力症；全身性進行性硬化症；アトピー性皮膚炎；高免疫グロビンＥ；Ｂ型肝炎抗原マイナス慢性活動性肝炎；橋本甲状腺炎；家族性地中海熱；バセドウ病；自己免疫性溶血性貧血：原発性胆汁性肝硬変；および炎症性腸疾患が含まれる。免疫刺激剤による治療に適したその他の状態には、例えばＡＩＤＳ患者、およびウイルス感染、例えばＨＩＶに関連した患者のように免疫系に障害があり、これが損傷され、機能異常であるようなあらゆる状態が含まれる。
【００３７】
抗炎症性および／または免疫抑制剤として用いるのに好ましい式（ＩＢ）の化合物には、ＮＡ：ＮＡおよびＮＡ：ＧＬＡ、特にＮＡ：ＧＬＡが含まれる。免疫刺激剤の用途に好ましいのはＮＡ：ＤＨＡである。
【００３８】
治療効果のために式（ＩＢ）の化合物（活性成分）に必要とされる量は、当然ながら特定の化合物、投与経路、および治療を受けている哺乳動物によって様々である。前記のような状態を罹患している哺乳動物に適した式（ＩＢ）の化合物の用量は、体重１ｋｇあたり基剤０．１から１０００ｍｇの範囲にあり、最も好ましい投薬量は、０．５から５００ｍｇ／哺乳動物体重ｋｇ、例えば１から５０ｍｇ／ｋｇ、例えば５から２５ｍｇ／ｋｇであり、１日２回または３回投与される。
【００３９】
炎症性気道状態の治療または予防の場合、式（ＩＢ）の化合物の適切な抗喘息用量は、体重１ｋｇあたり基剤１ｍｇから１０ｍｇ、最も好ましい投薬量は、１ｍｇから５ｍｇ／哺乳動物体重ｋｇ、例えば１から２ｍｇ／ｋｇである。
【００４０】
活性成分が粗化学物質として単独で投与されることも可能であるが、これを製薬配合物として提供するのが好ましい。本発明の獣医用およびヒトの医薬用の両方のための配合物は、製薬的に許容しうるそのキャリヤー、および任意にはその他の治療成分と組合わせた活性成分を含んでいる。キャリヤーは、この配合物のその他の成分と適合性があり、その受容者に有害でないという意味において「許容しうる」ものでなければならない。
【００４１】
活性成分は、この配合物の０．１から９９．９重量％を構成するのが都合がよい。適切には配合物の単位用量は、０．１ｍｇから１ｇの活性成分を含んでいる。好ましくはこの配合物は、１日あたり１から６回、例えば２から４回投与されるのに適している。局所投与の場合、活性成分は好ましくは、配合物の１から２重量％を構成するが、活性成分は、１０％ｗ／ｗになるほど多量に含まれていてもよい。鼻腔内または口腔内投与に適した配合物、例えば下記の自動推進粉末ディスペンス配合物は、０．１から２０％ｗ／ｗ、例えば約２％ｗ／ｗの活性成分を含んでいてもよい。
【００４２】
これらの配合物には、経口、眼内、直腸、非経口（皮下、膣内、腹膜内、筋肉内、および静脈内を含む）、関節内、局所用、鼻腔内、または口腔内投与に適した形態にある配合物も含まれる。
【００４３】
これらの配合物は、単位投薬形態で提供されるのが便利であろうが、製薬業においてよく知られている方法のどれかによって調製されてもよい。すべての方法は、活性成分を１つまたはそれ以上の副成分を構成するキャリヤーと組合わせる工程を含む。一般に、これらの配合物は、活性成分を液体キャリアーまたは細かく分割された固体キャリアー、あるいはその両方と、均一および均質に組合わせ、ついで必要であれば、この生成物を所望の配合物に成形することによって調製される。
【００４４】
経口投与に適した本発明の配合物は、各々が予め決定された量の活性成分を含む離散単位、例えばカプセル、カシェ剤、タブレット、またはトローチ剤の形態；粉末またはグラニュール形態；水性液体または非水性液体中の溶液または懸濁液の形態；あるいは水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンの形態であってもよい。活性成分はまた、巨丸剤、舐剤、またはペーストの形態であってもよい。このような配合物の場合、ビヒクル中の活性成分の希釈範囲、例えば１％から９９％、好ましくは５％から５０％、より好ましくは１０％から２５％の希釈が適切である。希釈レベルに応じて、この配合物は、室温（約２０℃の領域）で液体であるか、または低融解固体である。例えばＮＡ：ＧＬＡが活性成分であるような組成物は、室温ですべての割合において混和可能であるが、一方、ＮＡ：ＮＡを含む組成物は、濃度が約２５％であるかそれ以下である時に室温で液体である。
【００４５】
タブレットは、任意には１つまたはそれ以上の副成分と共に活性成分を圧縮または成形することによって製造することができる。圧縮タブレットは、任意にはバインダ、潤滑剤、不活性希釈剤、界面活性剤、または分散剤と混合された、例えば粉末またはグラニュールのような自由に流れる形態にある活性成分を適切な機械において圧縮することによって、調製することができる。成形されたタブレットは、粉末活性成分と、不活性希釈剤で湿潤された適切なキャリヤーとの混合物を、適切な機械において成形することによって製造することができる。
【００４６】
直腸投与のための配合物は、活性成分とキャリヤー例えばココアバターとを組込んでいる座薬形態、あるいは浣腸の形態にあってもよい。
【００４７】
非経口投与に適した配合物は、前記のような溶液、懸濁液、またはエマルジョン、便利には、受容者の血液と好ましくは等張性の活性成分の滅菌水性調製物を含んでいる。
【００４８】
関節内投与に適した配合物は、活性成分の滅菌水性調製物の形態にあってもよい。これは、微晶質形態、例えば水性微晶質懸濁液の形態、またはミセル分散液または懸濁液の形態にあってもよい。リポソーム配合物または生物分解性ポリマー系が同様に、特に関節内投与および眼内投与の両方のための活性成分を提供するために用いられてもよい。
【００４９】
局所投与に適した配合物には、液体または半液体調製物、例えばリニメント剤、ローション、または塗付剤；水中油または油中水エマルジョン、例えばクリーム、軟膏、またはペースト；または溶液または懸濁液、例えば滴剤が含まれる。例えば眼内投与のためには、活性成分は、水性点眼剤形態で、例えば０．１〜１．０％溶液として提供されてもよい。
【００５０】
本発明による滴剤は、滅菌水性または油性溶液を含んでいてもよく、活性成分を、殺菌剤および／または殺真菌剤および／またはその他のあらゆる適切な保存料を含む適切な水溶液中に溶解することによって調製されてもよい。ついで結果として生じる溶液を、濾過によって清澄化し、適切な容器に移し替え、ついで密封して、オートクレービングによって、または９０〜１００℃に半時間維持して滅菌されてもよい。この溶液は、濾過によって滅菌されてもよく、無菌技術によって容器に移し替えられてもよい。これらの滴剤に含めるのに適した保存料、殺菌剤、および殺真菌剤は、フェニル水銀（ＩＩ）塩（０．００２％）、塩化ベンズアルコニウム（０．０１％）、および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）である。油性溶液の調製に適した溶剤には、グリセロール、希釈アルコール、およびプロピレングリコールが含まれる。
【００５１】
本発明によるローションには、目に使用するのに適したものが含まれる。アイローションは、滴剤の調製方法と同様な方法によって調製された殺菌剤または保存料を任意に含んでいる滅菌水溶液を含んでいてもよい。皮膚への使用のためのローションまたはリニメント剤もまた、乾燥を速めるためおよび皮膚を冷やすための薬剤、例えばアルコール、または柔軟剤または保湿剤、例えばグリセロールまたは油、例えばひまし油または落花生油を含んでいてもよい。
【００５２】
本発明によるクリーム、軟膏、またはペーストは、外部塗布用の活性成分の半固体配合物であってもよい。これらは、単独でまたは溶液、または水性または非水性溶液中の懸濁液中で、適切な機械において、グラニュールまたは粉末形態の活性成分と脂肪性または非脂肪性ベースとを混合して製造することができる。このベースは、硬質、軟質、または液体パラフィン、グリセロール、蜜蝋、金属せっけんのうちの１つまたはそれ以上；粘質物；油、例えば植物油、例えばアーモンド油、とうもろこし油、落花生油、ひまし油、またはオリーブ油；ラノリンまたはその誘導体；またはアルコール例えばプロピレングリコールまたはマクロゴールと共に脂肪酸の脂肪酸エステルを含んでいてもよい。この配合物はまた、適切な界面活性剤、例えばアニオン性、カチオン性、または非イオン性界面活性剤、例えばグリコールまたはこれのポリオキシエチレン誘導体を含んでいてもよい。懸濁剤、例えば天然ゴムが、任意には無機物質、例えばシリカ質シリカ、およびその他の成分、例えばラノリンと共に組込まれていてもよい。
【００５３】
鼻腔または口腔への投与に適した配合物には、吸入または通気に適したものが含まれ、粉末、自動推進、およびスプレー配合物、例えばエーロゾルおよび噴霧器が含まれる。これらの配合物は、分散された時、好ましくは１０から２００μの範囲内の粒子サイズを有する。
【００５４】
このような配合物は、粉末吸入装置から肺に投与するための細かく粉砕された粉末、または自動推進粉末ディスペンス配合物の形態であってもよい。この場合活性成分は、細かく粉砕された粉末として、この配合物の９９．９％ｗ／ｗまでを構成していてもよい。自動推進溶液およびスプレー配合物の場合、この作用は、所望のスプレー特徴を有する（すなわち所望の粒子サイズを有するスプレーを生じうる）バルブを選択するか、あるいは活性成分を、制御された粒子サイズの懸濁粉末として組込むことによって得ることができる。したがってこの配合物は肺の中に入る代わりに、鼻腔内に大幅に保持される。これらの自動推進配合物は、粉末ディスペンス配合物であるか、あるいは溶液または懸濁液の滴剤として活性成分をディスペンスする配合物であってもよい。
【００５５】
自動推進粉末ディスペンス配合物は好ましくは、固体活性成分の分散粒子と、大気圧において１８℃未満の沸点を有する液体推進剤とを含んでいる。液体推進剤は、医薬投与に適していると知られているあらゆる推進剤であってもよく、１つまたはそれ以上の低級アルキル炭化水素、またはハロゲン化低級アルキル炭化水素、またはこれらの混合物を含んでいてもよく、塩素化およびフッ素化低級アルキル炭化水素が特に好ましい。一般にこの推進剤は、この配合物の５０から９９．９％ｗ／ｗを構成するが、一方、活性成分は、この配合物の０．１から２０％ｗ／ｗ、例えば約２％ｗ／ｗを構成する。
【００５６】
このような自動推進配合物における製薬的に許容しうるキャリヤーは、この推進剤に加えてその他の成分、特に界面活性剤または固体希釈剤またはその両方を含んでいてもよい。界面活性剤が望ましいが、それは、これらが活性成分の粒子の凝集を防ぎ、活性成分を懸濁に維持するからである。特に貴重なものは、液体非イオン性界面活性剤および固体アニオン性活性剤またはこれらの混合物である。適切な液体非イオン性界面活性剤は、特に脂肪酸のエステルおよび部分エステルと脂肪族多価アルコール、例えばそれぞれ「スパン（Ｓｐａｎ）８０」（商品名）および「スパン８５」（商品名）という商品として入手しうるソルビタンモノオレエートおよびソルビタントリオレエートとの、１０未満の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ、「化粧品化学者協会ジャーナル（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｃｏｓｍｅｔｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｓ）」、第１巻、３１１〜３２６ページ（１９４９年）参照）を有するものである。液体非イオン性界面活性剤は、この配合物の０．０１から２０％ｗ／ｗまでを構成していてもよい。ただし好ましくはこれは、この配合物の１％ｗ／ｗ未満を構成する。適切な固体アニオン性界面活性剤には、アルカリ金属、アンモニウム、およびジアルキルスルホスクシネートのアミン塩（ここにおいてアルキル基は４から１２個の炭素原子を有する）およびアルキルベンゼンスルホン酸（ここにおいてアルキル基は８から１４個の炭素原子を有する）が含まれる。固体アニオン性界面活性剤は、この配合物の０．０１から２０％ｗ／ｗまでを構成していてもよい。ただし好ましくはこれは、この組成物の１％ｗ／ｗ未満を構成する。有利には固体希釈剤が、このような自動推進配合物中に組込まれてもよい。この場合、活性成分の密度は、この推進剤の密度とは実質的に異なる。同様にこれらは、活性成分を懸濁に維持するのを助ける。固体希釈剤は、細かい粉末の形態にあり、好ましくは活性成分の粒子のサイズと同程度の粒子サイズを有する。適切な固体希釈剤には、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、および糖が含まれる。
【００５７】
本発明の配合物はまた、活性成分が溶液中に存在している自動推進配合物の形態にあってもよい。このような自動推進配合物は、活性成分、推進剤、および助溶剤、および有利には酸化防止安定剤を含んでいてもよい。この推進剤は、これらの既に上で挙げられたもののうちの１つまたはそれ以上である。助溶剤は、推進剤中のそれらの溶解性、活性成分を溶解するそれらの能力、およびこれらの前記特性と矛盾しない最低沸点を有することによって選ばれる。適切な助溶剤は、低級アルキルアルコールおよびこれらの混合物である。助溶剤は、この配合物の５から４０％ｗ／ｗまでを構成していてもよい。ただし好ましくはこれは、この配合物の２０％ｗ／ｗ未満を構成する。活性成分の劣化を阻害するために、このような溶液配合物中に酸化防止安定剤が組込まれてもよく、これらはアルカリ金属アスコルベートまたは亜硫酸水素塩であるのが都合がよい。これらは好ましくは、この配合物の０．２５％ｗ／ｗまでの量で存在する。
【００５８】
このような自動推進配合物は、この技術において知られているどの方法によって調製されてもよい。例えば活性成分（適切な液体中懸濁液の中の前記のような粒子であるか、あるいは適切なものとして、許容しうる助溶剤中の２０％ｗ／ｗまでの溶液中のもの）が、製薬的に許容しうるキャリヤーのその他のあらゆる成分と混合される。結果として生じた混合物が冷却され、適切な冷却された容器に導入され、推進剤が液体形態でこれに添加され、容器が密封される。あるいはまたこのような自動推進配合物は、前記のような粒子として、あるいは適切なものとして２〜２０％ｗ／ｗアルコールまたは水溶液としての活性成分と、推進剤以外の製薬的に許容しうるキャリヤーの残りの成分とを混合し；結果として生じた混合物を、任意にはなんらかの推進剤と共に適切な容器の中に導入し；この容器の一部を構成し、かつこの容器からの配合物の放出を制御するために用いられるバルブを通じて、周囲温度においてこの容器に推進剤を加圧下に注入することによって調製されてもよい。望ましくはこの容器は、自動推進配合物の調製において都合のよい段階で、空気をこれから除去することによってパージされる。
【００５９】
自動推進配合物に適した容器は、手動操作が可能なバルブを備えており、かつアルミニウム、ステンレス鋼、または強化ガラスから構成されたものである。当然ながらこのバルブは、バルブの各々の操作の時に、固定量の配合物、例えば各々の送出しにおいて約５０から１００マイクロリットルの配合物を送出すという粒子の所望のスプレー特徴を有するものであるべきである。計量送り出し用量の装置は、当業者によく知られている。
【００６０】
本発明の配合物はまた、ネブライザーまたは噴霧器に用いるための活性成分の水性または希釈アルコール溶液、任意には滅菌溶液の形態にあってもよい。ここにおいて、この溶液の小滴から成る細かいミストを生じるために、加速空気流が用いられている。このような配合物は通常、風味料、例えばサッカリンナトリウム、および揮発性油を含んでいる。緩衝剤、例えばナトリウムメタ二亜硫酸塩および界面活性剤も、このような配合物に含まれていてもよく、これはまた、保存料、例えばメチルヒドロキシベンゾエートも含んでいる方がよいであろう。
【００６１】
鼻への投与に適したその他の配合物は、２０から５００ミクロンの粒子サイズを有する粉末を含んでおり、これは、例えば鼻の近くに保持された粉末の容器からの鼻腔通路を通る急速吸入によって嗅ぐ方法で投与される。
【００６２】
前記成分に加えて、この発明の配合物は、１つまたはそれ以上の追加成分、例えば希釈剤、緩衝剤、風味料、バインダ、界面活性剤、増粘剤、潤滑剤、保存料、例えばメチルヒドロキシベンゾエート（酸化防止剤を含む）、乳化剤等を含んでいてもよい。この発明の配合物に用いるのに特に好ましいキャリヤーまたは希釈剤は、Ｃ１８からＣ２４モノ不飽和脂肪酸、例えばオレイン酸の低級アルキルエステル、例えばエチルオレエートである。その他の適切なキャリヤーまたは希釈剤には、カプリン酸またはカプリル酸エステルまたはトリグリセリド、またはこれらの混合物、例えば商品名ミグリオール（Ｍｉｇｌｙｏｌ）として販売されているカプリル酸またはカプリン酸トリグリセリド、例えばミグリオール８１０が含まれる。
【００６３】
その他のあらゆる治療成分は、下記のもの、すなわち抗生物質、抗真菌剤、および抗ウイルス剤のうちの１つまたはそれ以上を含んでいてもよい。
【００６４】
したがって本発明によれば、下記のものが提供される：
（ａ）式（ＩＡ）の化合物またはこれの塩および式（ＩＢ）の化合物を含む、式（Ｉ）の新規化合物；
（ｂ）式（ＩＢ）の化合物を調製するための、例えば化合物（ＩＡ）のエステル化による式（Ｉ）の化合物の調製方法；
（ｃ）非毒性的有効量の式（ＩＢ）の化合物と、製薬的に許容しうるそのキャリヤーとを含む製薬配合物；
（ｄ）このような配合物の調製方法；
（ｅ）ヒトを含む哺乳動物における炎症の予防または治療方法であって、前記哺乳動物に、非毒性的有効抗炎症量の式（ＩＢ）の化合物を投与することを含む方法；
（ｆ）ヒトを含む哺乳動物における免疫調整状態の予防または治療方法であって、前記哺乳動物に、非毒性的有効免疫調節量の式（ＩＢ）の化合物を投与することを含む方法；
（ｇ）医療、例えば炎症の阻害および／または免疫調整系の調節における使用のための式（ＩＢ）の化合物；
（ｈ）例えば炎症および／または免疫系の高刺激または低刺激と関連した状態の治療または予防のための、医薬品の調製における式（ＩＢ）の化合物の使用；
（ｉ）式（ＩＢ）の化合物の調製における式（ＩＡ）の化合物の使用。
【００６５】
下記実施例は、本発明の例証のために記載されている。下記説明および実施例において、最終生成物の構造は、ＪＥＯＬ  ＪＮＭ−ＧＸ２７０スペクトロメーターを用いて、１Ｈおよび１３Ｃ  ＮＭＲ分光法によって決定された。１Ｈおよび１３Ｃ化学シフトは、溶剤に対するＣＤＣｌ３中の溶液について測定された。Ｎｅｒは、テトラコセノイルオキシ鎖のことであり、Ｌｉｎは、γ−リノレノイルオキシ鎖、Ｄｏｃは、ドコサヘキサエノイルオキシ鎖、Ｐｏｌは、プロパン−１，３−ジオール鎖のことを言う。示されている温度はすべて、℃である。
【００６６】
説明１：出発化合物の調製：ｚ−１５−テトラコセノイル塩化物
五塩化リン（０．１２３モル、２５．６ｇ）を、乾燥エチルエーテル（２２５ｍＬ、Ｃ＝２００ｇ．Ｌ−１）中のネルボン酸（オールドリッチ・ケミカルズ社（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から入手しうるもの）（０．１２３モル、４５．０ｇ）の溶液に徐々に添加した。混合物を、室温で窒素下３時間攪拌し、濃縮して乾燥させると、ｚ−１５−テトラコセノイル塩化物が、薄い黄色のかなり粘性の油として生じた。
【００６７】
説明２：比較化合物の調製：１，３−ジ（ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエノイルオキシ）プロパン（ＧＬＡ：ＧＬＡ）
ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエン酸（シグマ・ケミカルズ社（Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から入手しうるもの）（０．１８０モル、５０．０ｇ）、プロパン−１，３−ジオール（０．０８６モル、６．５ｇ）、および次亜リン酸（０．２ｇ）を、攪拌しつつ窒素下１６０℃まで加熱した。６時間後ＴＬＣ（８０：１８：２石油エーテル−エチルエーテル−酢酸）は、反応が完了に至ったこをと示した（Ｒｆ：０．５６）。混合物を室温まで冷却し、石油エーテル（７００ｍＬ）を添加した。結果として生じた溶液を、飽和炭酸水素ナトリウム（３×７０ｍＬ）および飽和塩化ナトリウム（３×７０ｍＬ）で洗浄した。ついでこれを無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮して乾燥させた。残留モノエステルおよび脂肪酸を、真空蒸留によって除去した（１８０℃、１０−２ｍバール）。結果として生じた油を、石油エーテル中に溶解して３３％溶液をつくり、シリカカラムに通した。最後にヘキサンを除去すると、１，３−ジ（ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエノイルオキシ）プロパンが無色油として生じた。
【００６８】
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【００６９】
0003993434.tif 000006
【００７０】
説明３：１−ヒドロキシ−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパンの調製
塩化メチレン（５００ｍＬ）中の、説明１にしたがって調製されたｚ−１５−テトラコセノイル塩化物の溶液（０．１２９モル、４９．７ｇ）を、塩化メチレン（１２００ｍＬ）中のプロパン−１，３−ジオール（０．７８０モル、５８．９ｇ）とトリエチルアミン（０．３２３モル、３２．６ｇ）との混合物に、一滴ずつ（２．５〜３時間にわたって）０℃において窒素下添加した。この混合物を、ＴＬＣ（８０：１８：２石油エーテル−エチルエーテル−酢酸）が反応副生物が形成され始めたことを示すまで、さらに２時間氷浴中で攪拌に放置した（Ｒｆ生成物：０．１６、副生物：０．６３）。この溶液を、２Ｍ硫酸（２×１５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（３×３００ｍＬ）、および飽和塩化ナトリウム（２×３００ｍＬ）で洗浄した。最後にこれを、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（７：３石油エーテル−エチルエーテル）によって精製すると、１−ヒドロキシ−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパンが白色固体として生じた。
【００７１】
0003993434.tif 000007
【００７２】
0003993434.tif 000008
【００７３】
説明４：比較化合物の調製：グリセリルトリネルボネート
エタノール中のナトリウムエタノエートを用いて、ネルボン酸を対応エチルエステルに転換し、後者を１６０℃でグリセロールと反応させた。これは、触媒としてナトリウムエトキシドを用いて、溶剤を含まない条件下に行なわれた。水は形成された時に除去したので、平衡はトリグリセリドの形成の方へ容易にシフトされた。
【００７４】
下記表は、その後にＧＰＣを行なった反応の推移を示している。１０時間後、出発原料の９０％がグリセリルトリネルボネートに転換された。
【００７５】
【表１】
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最後に、２２０℃、１０−３ｍバールで、ＣＤ６薄膜実験室規模蒸発器を用いて、結果として生じた混合物を真空蒸留した。残留エチルネルボネートを首尾よく除去すると、純粋グリセリルトリネルボネートが白色固体として残された。
【００７６】
例１：１−（ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエノイルオキシ）−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（ＮＡ：ＧＬＡ）の調製
説明３にしたがって調製された１−ヒドロキシ−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（０．０４５モル、１９．０ｇ）、ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエン酸（０．０５４モル、１５．０ｇ）、および次亜リン酸（０．４ｇ）の混合物を攪拌しつつ窒素下１６０℃まで加熱した。５時間後、ＴＬＣ（８０：１８：２石油エーテル−エチルエーテル−酢酸）は、モノ−エステルの大部分が反応してしまったたことを示した（Ｒｆ：０．６０）。この混合物を室温まで冷却し、石油エーテル（８００ｍＬ）を添加した。結果として生じた溶液を、飽和炭酸水素ナトリウム（３×８０ｍＬ）、および飽和塩化ナトリウム（３×８０ｍＬ）で洗浄した。ついでこれを無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（１９：１石油エーテル−エチルエーテル）によって精製すると、１−（ｚ，ｚ，ｚ，−６，９，１２−オクタデカトリエノイルオキシ）−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパンが薄い黄色の油として生じた。
【００７７】
0003993434.tif 000010
【００７８】
0003993434.tif 000011
【００７９】
例２：１−（ｚ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイルオキシ）−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（ＮＡ：ＤＨＡ）の調製
（ａ）説明３にしたがって調製された１−ヒドロキシ−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（０．０３３モル、１４．０ｇ）、ｚ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（０．０４０モル、１３．０ｇ）、および次亜リン酸（０．３ｇ）の混合物を、攪拌しつつ窒素下１６０℃まで加熱した。５時間後、ＴＬＣ（８０：１８：２石油エーテル−エチルエーテル−酢酸）は、モノ−エステルの大部分が反応してしまったことを示した（Ｒｆ：０．５６）。この混合物を室温まで冷却し、石油エーテル（６００ｍＬ）を添加した。結果として生じた溶液を、飽和炭酸水素ナトリウム（３×６０ｍＬ）、および飽和塩化ナトリウム（３×６０ｍＬ）で洗浄した。ついでこれを無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮し、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（３２：１石油エーテル−エチルエーテル）によって精製すると、１−（ｚ−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエノイルオキシ）−３−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパンが薄い黄色の油として生じた。
【００８０】
0003993434.tif 000012
【００８１】
0003993434.tif 000013
【００８２】
例３：１，３−ジ−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパン（ＮＡ：ＮＡ）の調製
ｚ−１５−テトラコセン酸（シグマ・ケミカルズ社から入手しうるもの）（０．２８６モル、１０４．７ｇ）、プロパン−１，３−ジオール（０．１３６、１０．３ｇ）、および次亜リン酸（０．４ｇ）を、攪拌しつつ窒素下１６０℃まで加熱した。６時間後、ＴＬＣ（８０：１８：２石油エーテル−エチルエーテル−酢酸）は、反応が完了したことを示した（Ｒｆ：０．６３）。この混合物を室温まで冷却し、石油エーテル（１５００ｍＬ）を添加した。結果として生じた溶液を、飽和炭酸水素ナトリウム（３×１５０ｍＬ）、および飽和塩化ナトリウム（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。ついでこれを無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮して乾燥させた。残留モノ−エステルおよび脂肪酸を真空蒸留によって除去した（２３０℃、１０−２ｍバール）。結果として生じた油を、石油エーテル中に溶解して３３％溶液をつくり、シリカカラムに通した。最後にヘキサンを除去すると、１，３−ジ−（ｚ−１５−テトラコセノイルオキシ）プロパンが無色油として生じた。
【００８３】
0003993434.tif 000014
【００８４】
0003993434.tif 000015
【００８５】
例４：ＥＡＥにおけるＮＡ：ＮＡとＧＬＡ：ＧＬＡとの比較
ルイスラットにおける神経学的実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発現および進展に対するＧＬＡ：ＧＬＡ（説明２）およびＮＡ：ＮＡ（例３）の予防効果を、下記のように比較した。
材料および方法
（ａ）ＥＡＥの誘発
接種日に体重２３０〜２９０ｇのオスのルイスラットのそれぞれの後足の掌球に、モルモットの脊髄、リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）、および１０ｍｇ／ｍｌのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒａが補足された不完全フロイントアジュバントの等部を含むエマルジョン０．１ｍｌを注射した。
【００８６】
（ｂ）ＥＡＥの評価
動物の体重を毎日測り、接種後（ＰＩ）７日目から神経疾患について評価した。ＥＡＥの症状を示すラットを、下記のように評点した。１：弛緩した尾（ＦＴ）、２：後足緊張減退（ＨＬＨ）、３：部分的後足麻痺（ＰＨＬＰ）、４：完全な後足麻痺（ＣＨＬＰ）、５：瀕死または死亡。
【００８７】
（ｃ）用法
ＧＬＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡ（ストレート油）を、接種の５日前（４５℃で）、および接種後２５日間、１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の用量で経口投与した。対照感作動物はＰＢＳビヒクルが与えられるか、あるいは非投与であり、各々の処理は７匹の動物を含んでいた。ついで個々の大脳および血液サンプルを収集し、脂肪酸分析の前に−２０℃で保存した。２匹の動物についてのＮＡ：ＮＡ処理は、これらのラットがこの薬剤を反復して経口投与することに抵抗したので、２１日目に終了した。
【００８８】
結果
（ａ）平均体重の変化
非投与感作ラットおよびビヒクルが与えられている動物は、ＰＩの１０〜１２日で体重が減少した。ＧＬＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡで処理されたラットは、ＰＩの１０日目に始まる体重減少を示した。すべての処理における動物は、ＰＩの１８〜２０日で体重が増加した。
【００８９】
（ｂ）症状の始まりおよび消失
非投与ラットおよびビヒクル処理動物は、ＰＩの１１日および１２日の間で病気の最初の徴候を示した（表１）。ＧＬＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡラットにおける症状の始まり、徴候の消失、および病気の持続期間は、対照グループと比べて有意には異なっていなかった。興味深いことに、ＮＡ：ＮＡで処理された動物はすべて、対照およびＧＬＡ：ＧＬＡ処理グループと比べて生き延びた。
【００９０】
【表２】
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（ｃ）ＥＡＥの発病率および重症度
非投与ラットおよびビヒクル処理ラットについての平均累積神経学的評点、日々の病気の進展の図表的表現は、ＥＡＥの初期段階の間は匹敵しうるものであった。ビヒクルが与えられている動物について記録された累積データは、非投与ラットについて見られた値よりも大きくなったが、ＧＬＡ：ＧＬＡ処理グループによって示された病気プロフィールと同様であった。ＮＡ：ＮＡで処理されたＥＡＥ接種ラットは、ＰＩの１４日目に始まる非投与およびビヒクル処理よりも一貫して低い評点を有していた。
【００９１】
すべての対照、ビヒクル処理、およびＧＬＡ：ＧＬＡ投与ラットは、ＦＴおよびＨＬＨを示した（表２）。興味深いことに、ＮＡ：ＮＡで処理された動物の４／７のみが、最初の病気の症状を示した。さらにはＮＡ：ＮＡが与えられている動物は、対照、ビヒクル、およびＧＬＡ：ＧＬＡ処理グループとはまったく対照的に、ＰＨＬＰまたはＣＨＬＰを示さなかった。さらにはＮＡ：ＮＡ投与動物は、非投与ラットおよびビヒクル処理ラットに比べて、より敏捷であり、失禁が少なかった。
【００９２】
【表３】
0003993434.tif 000017
結論
ＥＡＥ接種されたラットのＧＬＡ：ＧＬＡでの処理は、非投与ラットおよびビヒクル処理のラットと比べて、神経ＥＡＥの経過を変えなかった。しかしながらＥＡＥ感作動物にＮＡ：ＮＡを投与すると、病気の全体の強度を明らかに低下させ、特にビヒクル処理と比べて部分的麻痺の発病率を有意に減少させた。これらの結果は、ＮＡ：ＮＡが、ＥＡＥの進展に対する免疫調節または抗炎症性作用態様を有することを示唆している。
【００９３】
比較例：ＥＡＥにおけるグリセリルトリネルボネート
グリセリルトリネルボネート（ＧＴＮ、説明４）の予防効果を、ルイスラットにおける急性ＥＡＥに関して評価した。ＥＡＥの誘発および評価は、例４についてと同じであった。用法は、接種の５日前、および接種後２０日間ミグリオール８１０の経口投与を含んでいた。（ＰＢＳまたはミグリオールビヒクルの使用の無意味さに関しては例８参照）。
【００９４】
結果
（ａ）体重変化
動物は１０日目まで体重が増えたが、これは食事によって投与されたＧＴＮが大きい副作用を誘発しなかったことを示している。これらの結果は、症状の始まりに先立つ対照および処理済み動物の両方における特徴的体重減少を示している。対照および処理済み動物についての値は、異なっていなかった。
【００９５】
（ｂ）神経学的評点−ＥＡＥの発病率および重症度
接種された動物はすべて、ＥＡＥに関連する神経障害を示した。ＧＴＮ処理された動物におけるこの病気の持続期間と共に、症状の始まりおよび消失は、ビヒクルまたは非投与グループと有意には異なっていなかった（表３）。
【００９６】
【表４】
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表４は、非投与およびビヒクル処理ラットの７０〜８０％が、麻痺疾患を有していたことを示しており、ＧＴＮが与えられている動物から得られたデータは、この処理が、ＥＡＥ疾患ラットにおける神経障害と関連したどのパラメーターにも有意な影響を与えなかったことを確認している。
【００９７】
【表５】
0003993434.tif 000019
結論
これらの結果は、ＮＡがこの形態において血液−大脳バリヤーを横切らないことを立証した。このことは、ＧＴＮがネルボン酸分子をグリセロールに結合するＯ−エステル結合を有するので、驚くべきことである。グリセロールは、大脳脂質の構造において広く見られ、大脳−血液バリヤーを横切ることができるキャリヤーとして作用し、例えばＮＡのような脂質のこの膜を横切る通過を容易にすると予測されたであろう。このテストは、適切な脂質キャリヤーに関する以前の考え方は、ＮＡに当てはめることができないことを示している。
【００９８】
例５：ＥＡＥにおけるＮＡ：ＮＡ（エチルオレエート配合物）
代替配合物を用いて、ルイスラットにおける神経ＥＡＥの発生および進展に対する例３の化合物（ＮＡ：ＮＡ）の予防効果を、下記のように評価した。
【００９９】
材料および方法
（ａ）ＥＡＥの誘発
接種日に体重２４０〜３６０ｇのオスのルイスラットのそれぞれの後足の掌球に、モルモットの脊髄、リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）、および１０ｍｇ／ｍｌのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒａが補足された不完全フロイントアジュバントの等部を含むエマルジョン０．１ｍｌを注射した。
【０１００】
（ｂ）ＥＡＥの評価
動物の体重を毎日測り、接種後（ＰＩ）７日目から神経疾患について評価した。ＥＡＥの症状を示すラットを、下記のように評点した。１：弛緩した尾（ＦＴ）、２：後足緊張減退（ＨＬＨ）、３：部分的後足麻痺（ＰＨＬＰ）、４：完全な後足麻痺（ＣＨＬＰ）、５：瀕死または死亡。
【０１０１】
（ｃ）用法
ＮＡ：ＮＡ（エチルオレエート中１０％ｗ／ｗ溶液Ｂ．Ｐ．）を、接種の５日前に（３５〜３７℃で）、およびＰＩの２２日間、１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の用量で経口投与した。対照感作動物はエチルオレエートビヒクルが与えられるか、あるいは非投与であり、各々の処理は１０匹の動物を含んでいた。ついでＰＩの２３日目に、個々のラットの大脳および血漿サンプルを収集し、脂肪酸分析の前に−２０℃で保存した。
【０１０２】
統計分析
神経学的評点おける有意差を評価するためにスチューデントｔテストを用い、症状の存在または不存在についてはフィッシャーの精密確率テストを用いた。
【０１０３】
結果
（ａ）平均体重の変化
非投与感作ラットおよびビヒクルあるいはＮＡ：ＮＡが与えられている動物は、ＰＩの１０日および１２日の間で特徴的な体重減少を示した。すべての処理における動物は、ＰＩの１６〜１８日で体重が増加した。
【０１０４】
（ｂ）症状の始まりおよび消失
非投与ラットおよびビヒクル処理感作動物はすべて、ＥＡＥの神経徴候を示した（表３）。これに対して、ＮＡ：ＮＡが与えられている動物の６０％のみが、病気の症状を示した。症状の始まりおよび消失の平均日は、ＮＡ：ＮＡ処理によって有意には変えられなかった。ＮＡ：ＮＡが与えられているラットにおける症状の平均持続期間は、非投与およびエチルオレエート処理グループと比べて減少していたが、有意ではなかった。
【０１０５】
【表６】
0003993434.tif 000020
（ｃ）ＥＡＥの発病率および重症度
ＮＡ：ＮＡ投与ラットについての神経学的評点は、非処理およびビヒクル処理動物について記録された値と比べて一貫して低かった。非投与ラットおよびエチルオレエートが与えられている動物についての平均累積神経学的評点は、この調査の持続期間の間と同様であった。これに対して、ＮＡ：ＮＡで処理されたラットについての累積評点は、ＰＩの１２〜１３日で減少し、この調査の残りのものについての対照値よりも顕著に低かった。
【０１０６】
ＦＴおよびＨＬＨを示すＮＡ：ＮＡ投与ラットの数は、非投与およびビヒクル処理と比べて有意に減少した（表６ＦＴ：Ｐ＜０．０５、ＨＬＨ：Ｐ＜０．０１）。さらにはＮＡ：ＮＡが与えられている動物のさらに少数しか、ＥＡＥの麻痺症状を示さなかった。さらにはＮＡ：ＮＡ処理ラットは、対照グループと比べてより敏捷であり、周囲により気を配り、より失禁が少なかった。
【０１０７】
【表７】
0003993434.tif 000021
結論
この調査は、ＮＡ：ＮＡが病気の発病率を有意に減少させ、処理済みラットすべてにおける以前の特徴的な体重減少にもかかわらず、最初の非麻痺的症状の発生を阻害することを明らかに示している。同様に日々の神経学的評点は、ＮＡ：ＮＡ処理によって顕著に減少した。
【０１０８】
ＥＡＥにおけるＮＡ：ＮＡの効力を測定するための以前の調査（例４）は、この化合物が、この病気の強度全体を低下させ、ビヒクル処理と比べて麻痺的症状を有意に抑制することを示した。現在の調査（例５）は、エチルオレエート中のＮＡ：ＮＡの再配合が、ＥＡＥにおける化合物の効力の喪失を伴なわずに投与を容易にした（その温度が３５〜３７℃まで下げられた）ことを示した。
【０１０９】
これらの結果は、ＮＡ：ＮＡが急性ラットＥＡＥにおいて免疫調節または抗炎症性活性プロフィールを有することを明らかに示している。
【０１１０】
例６：ＥＡＥテストにおけるＮＡ：ＤＨＡおよびＮＡ：ＧＬＡ
ルイスラットにおける神経ＥＡＥの発生および進展に対する例１（ＮＡ：ＧＬＡ）および例２（ＮＡ：ＤＨＡ）の化合物の予防効果を、下記のように評価した。
【０１１１】
材料および方法
（ａ）ＥＡＥの誘発
接種日に体重２３０〜２８０ｇのオスのルイスラットのそれぞれの後足の掌球に、モルモットの脊髄、リン酸塩緩衝塩水（ＰＢＳ）、および１０ｍｇ／ｍｌのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒａが補足された不完全フロイントアジュバントの等部を含むエマルジョン０．１ｍｌを注射した。
【０１１２】
（ｂ）ＥＡＥの評価
動物の体重を毎日測り、接種後（ＰＩ）７日目から神経疾患について評価した。ＥＡＥの症状を示すラットを、下記のように評点した。１：弛緩した尾（ＦＴ）、２：後足緊張減退（ＨＬＨ）、３：部分的後足麻痺（ＰＨＬＰ）、４：完全な後足麻痺（ＣＨＬＰ）、５：瀕死または死亡。
【０１１３】
（ｃ）用法
ＮＡ：ＧＬＡ（ストレート油）を、接種の５日前に経口投与し、ＰＩの２５日間、７５０ｍｇ／体重ｋｇ／日および１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の用量で続行した。ＮＡ：ＤＨＡ（ストレート油）は、５００ｍｇ／体重ｋｇ／日の用量で、同一用法によって与えられた。対照感作動物は、ＰＢＳビヒクルが与えられるか、あるいは非投与であった。非投与、ビヒクル、および低用量ＮＡ：ＧＬＡ処理は、７匹の動物を含んでいた。４匹のラットは高用量のＮＡ：ＧＬＡが与えられ、３匹のラットはＮＡ：ＤＨＡが投与された。ついで個々の大脳および血液サンプルを、分析のために収集した。
【０１１４】
結果
（ａ）平均体重の変化
非投与、感作ラット、およびビヒクルが与えられている動物は、８日および１０日の間で体重が減少した。同様に、ＮＡ：ＤＨＡで処理されたラットは、接種後の８日目に始まる体重減少を示した。しかしながらＮＡ：ＤＨＡ処理ラットは、対照および投与グループと比べて、感作後の週の間に、より大きい体重増加を有していた。低用量および高用量ＮＡ：ＧＬＡ処理された動物によって示される体重減少は、その他の処理において記録されたものよりも２日遅く始まった。
【０１１５】
（ｂ）症状の始まりおよび消失
非投与ラットおよびビヒクルが与えられている動物は、ＰＩの１０日および１１日の間で病気の最初の徴候を示した（表７）。
【０１１６】
【表８】
0003993434.tif 000022
ＮＡ：ＧＬＡ処理ラットにおける病気の始まりは遅延され、ＮＡ：ＤＨＡ投与動物において対照グループと比べて加速された。しかしながら投与動物についての値は、非投与およびビヒクル処理について記録されたデータとは有意には異なっていなかった。
【０１１７】
（ｃ）ＥＡＥの発病率および重症度
非投与ラットおよびビヒクル処理ラットについての平均累積臨床的評点、日々の病気の進展の図表的表現は、この実験全体で匹敵しうるものであった。低用量および高用量ＮＡ：ＧＬＡが与えられている動物について記録されたデータは、この調査の持続期間の間対照値よりも一貫して低かった。ＮＡ：ＤＨＡで処理されたラットについての日々の評点は、対照およびＮＡ：ＧＬＡ処理動物について見られたレベルと比べて高かった。すべての対照および薬剤処理ラットは、ＦＴおよびＨＬＨを示した（表８）。しかしながら対照およびＮＡ：ＤＨＡ処理ラットと比べて、ＮＡ：ＧＬＡが与えられている動物のより少数しか、ＰＨＬＰ（低用量：５７％／高用量：５０％）およびＣＨＬＰ（低用量：４３％／高用量：２５％）を示さなかった。同様に、ＮＡ：ＤＨＡが与えられているラットにおけるＣＨＬＰの進展はより早かった（それぞれ１１．３±１．３および１２．７±１．３）。
【０１１８】
【表９】
0003993434.tif 000023
結論
急性ＥＡＥ感作ラットへの７５０および１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日でのＮＡ：ＧＬＡの予防的投与は、対照グループと比べて病気の始まりを遅延させ、明らかに病気の発病率と重症度を減少させた。これらの結果は、この化合物が免疫抑制または抗炎症活性を有しており、これが神経抗原の免疫応答およびその後の病気の発現に影響を与えたことを示唆している。これに対してＮＡ：ＤＨＡでの処理は、おそらくはＥＡＥの誘発期の増強を通じて神経症状を強化し、このことはこの化合物が免疫強化剤として作用しうることを示唆している。
【０１１９】
例７：マウスにおけるＮＡ：ＮＡおよびＮＡ：ＧＬＡの評価
ビオッジマウスモデルにおける慢性ＥＡＥに対する、例３（ＮＡ：ＮＡ）および例１（ＮＡ：ＧＬＡ）の化合物の予防効果を評価した。
【０１２０】
材料および方法
（ａ）ＥＡＥの誘発
体重３０〜３５ｇのオスのビオッジマウスのそれぞれのわき腹に、凍結乾燥されたマウスの脊髄、リン酸塩緩衝塩水、およびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｂｕｔｙｒｉｃｕｍおよびＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＨ３７Ｒａが補足された不完全フロイントアジュバントを含むエマルジョン０．１５ｍｌを注射した。
【０１２１】
（ｂ）ＥＡＥの評価
動物の体重を毎日測り、接種後（ＰＩ）７日目から神経疾患について評価した。ＥＡＥの症状を示すマウスを、下記のように評点した。１：部分的に弛緩した尾（ＰＦＴ）、２：完全に弛緩した尾（ＣＦＴ）、３：損なわれた直立反射（ＩＲＲ）、４：運動失調性歩行（ＡＧ）、５：後足緊張減退（ＨＬＨ）、６：部分的後足麻痺（ＰＨＬＰ）、７：完全な後足麻痺（ＣＨＬＰ）、８：瀕死（Ｍ）、９：死亡（Ｄ）。
【０１２２】
（ｃ）用法
ＮＡ：ＮＡおよびＮＡ：ＧＬＡ（どちらもエチルオレエート中の１０％ｗ／ｗ溶液Ｂ．Ｐ．）を、接種の５日前に（３５〜３７℃で）、およびＰＩの４３日間、１０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の用量で経口投与した。対照感作動物はエチルオレエートビヒクルが与えられるか、あるいは非投与であった。各処理は１０匹の動物を含んでいた。ついで個々の大脳および血液サンプルを、ＰＩの４３〜４４日目に分析のために収集した。
【０１２３】
結果
（ａ）平均体重の変化
ビヒクル、ＮＡ：ＧＬＡ、またはＮＡ：ＮＡが与えられている慢性ＥＡＥ感作マウスの平均体重は、接種後の−４日および２日の間で減少した。
【０１２４】
体重の劇的減少が、接種後１６日で非投与マウスに発生したが、一方、ビヒクル、ＮＡ：ＧＬＡ、またはＮＡ：ＮＡが与えられている動物には、同様な体重減少は記録されなかった。非投与マウスおよびビヒクルおよびＮＡ：ＮＡが与えられている動物の平均体重は確実に増加し、接種後１３〜４０日で匹敵しうるものになった。しかしながらＮＡ：ＧＬＡで処理されたマウスは、同様な体重増加を示さなかった。すべてのグループが、接種後４０〜４４日で体重減少を示した。
【０１２５】
（ｂ）神経学的評点−慢性再発性ＥＡＥの発病率および重症度
急性症状の始まりが、ＰＩの約２０日で非投与マウスの８０％に現われた（表９）。これに対して、ビヒクルおよび化合物処理グループにおいて、動物のわずか２０〜３０％が急性疾患を示した。ＮＡ：ＮＡが与えられているマウスは、その他のグループの病気のマウスに比べて早期に急性疾患の徴候を無くし、その結果障害の持続期間がより短かった。
【０１２６】
【表１０】
0003993434.tif 000024
非投与動物と比べて、化合物処理マウスのより少数しか再発を起こさなかった（表１０）。しかしながらビヒクルが与えられているマウスの同様な数のものが、症状の再発を示した。興味深いことに再発の始まりは、ＮＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡが投与されている動物において遅延されたが、有意ではなかった。
【０１２７】
【表１１】
0003993434.tif 000025
表１１および１２は、急性および再発性疾患の進行性症状を示す、非投与、ビヒクル、および化合物処理マウスの％割合を記載している。これらの結果は、ビヒクル−処理動物における急性および再発性症状が、非投与マウスにおける病気の発生と比べて抑制されていることを明らかに示している。さらには、ビヒクル処理されたマウスによって示されている神経徴候は、ＮＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡが与えられている動物によって示されている症状と同様である。非投与慢性再発性ＥＡＥ−感作マウスについての平均の神経学的評点は、最初の接種後２〜３週間で特徴的に増加した。
【０１２８】
症状の軽減は感作後２５〜３３日で発生し、ついで神経障害の再発があった。急性および再発症状は、ビヒクル、ＮＡ：ＧＬＡ、およびＮＡ：ＮＡが与えられている動物において顕著に減少した。特に慢性再発性ＥＡＥの急性および再発期の間の神経症状は、ＮＡ：ＮＡで処理されたマウスにおいて完全になくなった。
【０１２９】
【表１２】
0003993434.tif 000026
【表１３】
0003993434.tif 000027
結論
これらの結果は、ビヒクルのエチルオレエートでの慢性再発性ＥＡＥ接種マウスの処理が、このテストにおいて慢性再発性ＥＡＥの急性および再発期の発生率および重症度を有意に低下させたことを示している。
【０１３０】
ビヒクル処理（このビヒクルは薬剤用の溶剤として作用し、その投与を容易にする）による慢性再発性ＥＡＥの変更は、慢性ＥＡＥにおける化合物の効力の明確な評価を妨げ、エチルオレエートも同様に用いられているラットにおける最初の調査とは対照的である（例５参照）。
【０１３１】
それにもかかわらずこれらの結果は、特にエチルオレエートと組合わされたＮＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡ処理が、急性疾患の持続期間を制限し、かつ再発症状の始まりを遅延させる可能性を有することを示唆している。これは、急性ラットＥＡＥにおける化合物の効力の前記例の結論を裏付ける。
【０１３２】
例８：マウスモデルにおける慢性再発性ＥＡＥの治療におけるビヒクルとしてのミグリオールの使用
したがってビオッジマウスにおける慢性再発性ＥＡＥの経過を変える能力を有していないビヒクルの使用を調査した。この実験は、ＰＢＳ、ミグリオール、およびエチルオレエートのみに関わっていた。これらは薬剤ビヒクルであり、ＥＡＥの経過に対するこれらの中立性を査定するために評価が行なわれた。
【０１３３】
８〜１０個の炭素原子アシル鎖を有するトリグリセリドの混合物であるミグリオール８１０に、まず、ＥＡＥ状態に対するその中立性を確かめるためにＰＢＳ（リン酸塩緩衝塩水、水溶液）での比較調査を行なった。
【０１３４】
ＰＢＳは対照ビヒクルであり、ＥＡＥの経過を変えないことが知られている。例７の方法と同様な方法にしたがっているが、ミグリオール８１０ビヒクルおよび１０ｇ／体重ｋｇ／日の用量で３０日目までの接種後処理を用いて、ビオッジマウスモデルにおける慢性再発性ＥＡＥ（ＣＲＥＡＥ）に対するミグリオール８１０の予防効果を評価した。［用法の説明：調査がテスト化合物例えばＮＡ：ＮＡに関わっている時、示されているこの用量は、投与されたテスト化合物の量のみのことであり、ビヒクル＋化合物の量のことではない。このビヒクル調査において、テスト化合物例えばＮＡ：ＮＡは存在しないので、この用量は、ビヒクルの量、すなわちマウスモデルにおけるその他のすべての調査にしたがって存在したであろうテスト化合物の量よりも１０倍高いビヒクルの量のことを言う］。
【０１３５】
これらの結果は、ＣＲＥＡＥ接種されたすべてのマウスが、確立した急性麻痺症状を示したことを明らかに示した。特にこの病気の経過は、ＰＢＳあるいはミグリオールの反復経口投与によって影響を受けなかった。
【０１３６】
したがってミグリオールは、ＣＲＥＡＥにおける化合物の効力を測定するためのその後の調査においてビヒクルとして使用するのによく適しているように思われた。したがってミグリオール８１０を新規ビヒクルとして用いて、ビオッジマウスモデルにおけるＣＲＥＡＥに対するＮＡ：ＮＡおよびＮＡ：ＧＬＡの予防効果を再評価した（９０％希釈、１０００ｍｇ／ｋｇ／日、ＰＩの４３日まで）。
【０１３７】
結果
（ａ）体重変化
ビヒクルおよびＮＡ：ＧＬＡが与えられているＣＲＥＡＥ感作マウスの平均体重は、非投与およびＮＡ：ＮＡ処理マウスとは反対に、ＰＩの１日および４日の間で減少した。
【０１３８】
症状の始まりおよび進行は、体重における劇的減少を引起こした。これは、ＰＩの１２日および２２日の間で動物のすべてのグループに発生した。しかしながら薬剤処理動物についての体重減少は、非投与およびビヒクルグループについてよりも大きくなかった。
【０１３９】
ＰＩの２３日および３１日の間で、すべてのグループの動物が体重増加を示した。これは神経障害の消失に対応していた。興味深いことに、非投与およびビヒクル処理動物とは反対に、ＰＩの３２日目から、再発期の症状の始まりおよび進行中に、ＮＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡの場合、体重は依然として上昇を続けた。
【０１４０】
（ｂ）神経学的評点−ＣＲＥＡＥの発病率および重症度
各々の処理における動物は、高度にＣＲＥＡＥの急性段階に冒されていた。ＮＡ：ＧＬＡが与えられているマウスは、ＮＡ：ＮＡ、非投与、およびビヒクル処理動物と比べて、症状のより短い持続期間を有していた（表１３）。
【０１４１】
各グループにおけるほとんどすべての動物に再発があった（表１４）。グループ間で症状の始まりの差はなかった。しかしながら症状の持続期間は、ＮＡ：ＮＡ、非投与、およびビヒクルグループと比べて、ＮＡ：ＧＬＡ処理マウスの場合有意に減少していた。
【０１４２】
驚くべきことに、ＮＡ：ＮＡ処理動物は、より長期の症状の持続期間を示した。
【０１４３】
【表１４】
0003993434.tif 000028
【表１５】
0003993434.tif 000029
表１５および１６は、急性および再発性疾患の進行性症状を示す、非投与、ビヒクル、および化合物処理マウスの％割合を記載している。これらの結果は、ＮＡ：ＧＬＡ処理動物における急性および再発性症状が、その他のマウスグループにおける疾患の発生と比べて減少していることを明らかに示している。さらにはＮＡ：ＮＡ処理マウスによって示された症状は、ビヒクルが与えられている動物または非処理の動物が示す症状に似ているように思われる。
【０１４４】
非投与およびビヒクル処理マウスについての平均の神経学的評点は、最初の接種の２週間後に特徴的に増加した。ＮＡ：ＮＡ処理で得られた評点は、この疾患の急性期にある両方の対照グループとは異なっておらず、再発期においてわずかだけ低かった。これらの結果とは反対に、ＮＡ：ＧＬＡで処理された動物は、急性期および再発期の両方においてより低い評点を有していた。
【０１４５】
【表１６】
0003993434.tif 000030
【表１７】
0003993434.tif 000031
結論
非投与およびビヒクル処理グループについて得られた結果は、異なっておらず、ミグリオール８１０がこの病気の経過を変えないことを確認した。
【０１４６】
しかしながら慢性再発性ＥＡＥ（ＣＲＥＡＥ）の神経的経過に対するＮＡ：ＮＡおよびＮＡ：ＧＬＡの作用は、当初の評価とは異なっていた。
【０１４７】
驚くべきことにＮＡ：ＮＡは、ＣＲＥＡＥの経過を有意には変えないようであった。このことは、急性ＥＡＥのラットモデルにおいて得られた結果とは対照的である。
【０１４８】
それにもかかわらずＮＡ：ＧＬＡは、急性期および再発期の両方の間、神経障害の強度を明らかに低下させた。
【０１４９】
この調査によって本発明者らは、ＮＡ：ＧＬＡが両方のモデル、すなわちラットにおける急性ＥＡＥおよびマウスにおける慢性再発性ＥＡＥにおいて有効であると決定することができた。
【０１５０】
例９：生物学的評価からの動物の大脳脂質の脂肪酸組成
あるいくつかの生物学的評価を終了した時、ラットまたはマウスの大脳を抽出し、ラット／マウスの大脳からの総極性脂質の脂肪酸組成を測定した。
【０１５１】
これらの調査の目的は、大脳の中のネルボン酸レベルが、本発明のネルボン酸誘導体での処理後に増強されたかどうかを決定するためであった。
【０１５２】
生物材料を、スコットランドのスターリング大学、水栽培研究所のＤｒ．Ｊ．Ｈｅｎｄｅｒｓｅｎへ、分析のために送った。分析は２つの実験バッチに対して実施された（それぞれ例６および７に詳細に記載されている）。結果を下記に詳細に示す。
【０１５３】
結果
（ａ）ＮＡ：ＤＨＡ／ＮＡ：ＧＬＡ処理後のラットの大脳分析
表１７は、ラットの大脳からの総極性脂質におけるネルボン酸（ＮＡ）含量を示しているが、これらの動物は急性ＥＡＥ接種されたものである。
【０１５４】
【表１８】
0003993434.tif 000032
分析は、ＮＡ：ＤＨＡ処理が、正常、非投与、およびビヒクル処理動物と比べて、ラットの大脳脂質におけるＮＡレベルを高めなかったことを示している。
【０１５５】
しかしながら低用量および高用量におけるＮＡ：ＧＬＡでの処理後、大脳脂質におけるＮＡレベルの顕著な増加がある。
【０１５６】
（ｂ）ＮＡ：ＮＡ／ＮＡ：ＧＬＡ処理後のマウスの大脳分析
表１８は、マウスの大脳からの総極性脂質におけるネルボン酸（ＮＡ）含量を示しているが、これらの動物は慢性再発性ＥＡＥ（ＣＲＥＡＥ）接種されたものである。
【０１５７】
【表１９】
0003993434.tif 000033
分析は、非投与マウスおよびビヒクル処理マウスの大脳が、その脂質において同様なＮＡレベルを有することを示している。これに対して、ＮＡ：ＧＬＡおよびＮＡ：ＮＡは、大脳脂質におけるＮＡレベルの増強を示しており、これはＮＡ：ＮＡ処理動物の場合さらに一層大きい。
【０１５８】
結論
ＤＨＡおよびＧＬＡは血液−大脳バリヤーを通過するが、大脳分析から得られた結果は、これらの２つの脂肪酸がプロパン−１，３−ジオール誘導体の形態で異なった作用を行なうことを明確に確認している。すなわち、ＮＡ：ＤＨＡでの処理とは反対に、ＮＡ：ＧＬＡでの処理は、大脳脂質におけるＮＡレベルの増加を結果として生じ、これは、ＮＡがＮＡ：ＧＬＡの形態で血液−大脳バリヤーを横切ることを意味しうる。
【０１５９】
同様に、これらの誘導体の投与によって引起こされた大脳脂質におけるＮＡレベルの最大の増加が、ＮＡ：ＮＡ処理マウスから生じたことも注目に値する。このことは、血液−大脳バリヤーを横切るための、この化合物の構造中のプロパン−１，３−ジオール単位の重要性を証明している。
【０１６０】
最後に、これまで得られた結果によって本発明者らは、それぞれ急性および慢性再発性ＥＡＥのラットおよびマウスモデルにおいて活性を示したＮＡ：ＧＬＡが、抗炎症性特性を有しており、大脳脂質中のネルボン酸含量を上昇させうるという結論に導かれる。
【０１６１】
実施例Ａ：タブレット
【表２０】
0003993434.tif 000034
活性成分、ラクトース、およびデンプンを互いに混合する。これらの粉末を、精製水中のポビドン溶液を用いてグラニュール化する。これらのグラニュールを乾燥し、ステアリン酸マグネシウムを添加し、この混合物を圧縮して、１タブレットあたり１００ｍｇのタブレットを生じる。
【０１６２】
実施例Ｂ：軟膏組成物
【表２１】
0003993434.tif 000035
活性成分を小容積のビヒクル中に分散し、ついでビヒクルのバルク中に組込んで、滑らかな均質生成物を生じる。ついでコラプシブル金属チューブにこの分散物を満たす。
【０１６３】
実施例Ｃ：局所用クリーム組成物
【表２２】
0003993434.tif 000036
ポラワックス、蜜蝋、およびラノリンを共に６０℃で加熱する。メチルヒドロキシベンゾエートの溶液を添加し、高速攪拌を用いて均質化が得られる。温度を５０℃まで下げる。ついで活性成分を添加し、分散させる。この組成物を遅速攪拌で冷却しておく。
【０１６４】
実施例Ｄ：局所用ローション組成物
【表２３】
0003993434.tif 000037
メチルヒドロキシベンゾエートおよびグリセリンを、７５℃で水７０ｍｌ中に溶解する。ソルビタンモノラウレート、ポリソルベート（Ｐｌｙｓｏｒｂａｔｅ）２０（商標）およびセトステアリルアルコールを、７５℃で共に溶解し、水溶液に添加した。結果として生じたエマルジョンを均質化し、連続攪拌を行なって冷却し、活性成分を、残りの水中の懸濁液として添加する。懸濁液を均質化するまで攪拌する。
【０１６５】
実施例Ｅ：カプセル組成物
２部分から成るハードゼラチンカプセルに、活性成分５０ｍｇ、ラクトース１１０ｍｇ、タルク３２ｍｇ、およびステアリン酸マグネシウム８ｍｇを充填して、カプセル調製する。
【０１６６】
実施例Ｆ：点眼薬組成物
【表２４】
0003993434.tif 000038
メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエートを、７０ｍｌ精製水中に溶解し、結果として生じた溶液を冷却しておく。活性成分を添加し、この溶液を、膜フィルター（０．２２μｍ細孔サイズ）を通す濾過によって滅菌し、適切な滅菌容器に詰める。
【０１６７】
実施例Ｇ：吸入による投与用組成物
１５〜２０ｍｌの用量のエーロゾル容器の場合、活性成分（１０ｍｇ）を、推進剤、例えばフレオン（Ｆｒｅｏｎ）（商標）中、好ましくは１，２−ジクロロエテンとジフルオロクロロメタンとの組合わせ中の潤滑剤、例えばポリソルベート８５（商標）またはオレイン酸またはこれらの混合物０．２〜０．２％と混合し、この混合物を、吸入投与に適合した適切なエーロゾル容器の中に入れる。
【０１６８】
実施例Ｈ：吸入による投与のための組成物（アルコール溶液）
１５〜２０ｍｌの容量のエーロゾル容器の場合、活性成分（１０ｍｇ）をエタノール（６〜８ｍｌ）中に溶解し、潤滑剤、例えばポリソルベート８５（商標）０．１〜０．２％を添加し、推進剤、例えばフレオン（商標）中、好ましくは１，２−ジクロロエテンとジフルオロクロロメタンとの組合わせ中に分散し、この混合物を、鼻腔または口腔吸入投与に適合した適切なエーロゾル容器の中に入れる。
【０１６９】
実施例Ｉ：注射可能な非経口組成物
プロピレングリコールおよび水中で活性成分１．５重量％を攪拌して、注射剤を調製する。溶液を濾過によって滅菌する。
【０１７０】
実施例Ｊ：経口組成物
活性成分（ＮＡ：ＮＡおよび／またはＮＡ：ＧＬＡ）１０部とエチルオレエート９０部とを混合し、その結果エチルオレエート中脂質の１０％希釈を生じて、経口組成物が調製される。