(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記（１）〜（３）の工程からなるガングリオシド高含有組成物の製造法。
（１）ガングリオシド含有物質にエタノールを30〜70％濃度となるよう添加し、沈澱したガングリオシド含有画分を回収する工程。
（２）回収したガングリオシド含有画分にエタノールを70〜90％濃度となるよう添加し、沈澱したタンパク質を除去する工程。
（３）タンパク質を除去したガングリオシド含有画分を膜処理する工程。
【請求項２】
膜処理する工程をエタノール濃度30％以下で行う請求項１記載の製造法。
【請求項３】
ガングリオシド含有物質が乳又は乳製品である請求項１又は２記載の製造法。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ガングリオシド高含有組成物を製造する方法に関する。本発明の方法により製造したガングリオシド高含有組成物は、ガングリオシドを高い割合で含有するので、種々の飲食品、医薬品、化成品等の素材として有用である。
【従来の技術】
ガングリオシドは、シアル酸を含有するスフィンゴ糖脂質の総称であり、種々の分子種が存在することが知られている。そして、乳由来のガングリオシドについては、永井らが形態を明らかにしている(J. Biol. Chem., vol.261, pp.5625-5630, 1986) 。
近年、ガングリオシドに関する生化学的な研究が盛んに行われるようになってきており、例えば、細胞分化、細胞増殖、神経機能、癌化、ウイルスの感染防御等、多様なガングリオシドの生理機能が明らかになりつつある。
このガングリオシドは、乳脂肪球皮膜や動物細胞の細胞膜、あるいは脳等に多く存在している。なお、乳脂肪球皮膜は、クリームやクリーム加工品等の乳製品中に多量に含まれているので、ガングリオシドを多量に含有する素材は、一般にトリグリセリドやリン脂質等の脂質を多量に含有していると考えられる。
従来、ガングリオシド高含有組成物の製造法としては、バターミルクから脂肪球皮膜を得る方法（特開昭60-72819号公報) やイオン交換樹脂を使用してガングリオシド含有物質から得る方法（特開平2-207090号公報) が知られている。しかし、前者の方法では、工業的規模でガングリオシド高含有組成物を製造することは困難であり、また、後者の方法では、ガングリオシドを高い割合で含有する組成物を得ることができるという利点はあるが、イオン交換樹脂を使用するので、大量処理という点では問題がある。したがって、効率良く、かつ迅速にガングリオシド高含有組成物を大量製造することができる方法が求められていた。
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、上述したガングリオシド高含有組成物の製造に関する問題を解決するべく、鋭意研究を進めていたところ、乳又は乳製品等のガングリオシド含有物質を出発原料とし、エタノール処理した後、膜処理することにより、効率良く、かつ迅速にガングリオシド高含有組成物を大量製造することができることを見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本発明は、飲食品、医薬品、化成品等の素材として利用可能なガングリオシド高含有組成物を製造する方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
本発明のガングリオシド高含有組成物の製造法は、下記の工程よりなる。
（１）ガングリオシド含有物質にエタノールを30〜70％濃度となるよう添加し、沈澱したガングリオシド含有画分を回収する工程。
（２）回収したガングリオシド含有画分にエタノールを70〜90％濃度となるよう添加し、沈澱したタンパク質を除去する工程。
（３）タンパク質を除去したガングリオシド含有画分を膜処理する工程。
本発明で使用することのできるガングリオシド含有物質としては、乳やバターミルク、バターカード、ホエータンパク濃縮物（ＷＰＣ）等の乳製品、動物の脳やその他の臓器等を例示することができる。そして、これらのガングリオシド含有物質を濃縮して使用するか、又は乾燥した後、溶解して使用すれば良い。
【発明の実施の形態】
まず、このガングリオシド含有物質にエタノールを30〜70％濃度となるよう添加し、沈澱したガングリオシド含有画分を遠心分離等の処理により回収する。このようにエタノールを30〜70％濃度となるよう添加することにより、ガングリオシド含有画分とその他の画分とを効率的に分離することができる。
次に、このガングリオシド含有画分にエタノールを70〜90％濃度となるよう添加し、沈澱したタンパク質を遠心分離、フィルタープレス、デカンテーション等の処理により除去する。
そして、限外濾過膜や精密濾過膜等の膜で処理し、エタノール、塩類、その他の低分子物質を除去して、ガングリオシド高含有組成物を得る。なお、膜処理に際しては、加水してエタノール濃度を30％以下とすることが好ましい。エタノール濃度が30％以上であると、ガングリオシドが形成するミセルが破壊され、ガングリオシドが膜から漏出して収率が低下する。
このようにして得られたガングリオシド高含有組成物は、適宜、乾燥して粉末化し、種々の飲食品、医薬品、化成品等の素材として使用することができる。
以下に実施例を示し、本発明を具体的に説明する。なお、各実施例のガングリオシド量については、川上らが報告している方法(Biosci. Biotech. Biochem., vol.58, pp.1314-1315, 1994) に従って定量した。
【実施例１】
ＨＰバターを80℃で溶解し、遠心分離してバターオイルを除去した後、凍結乾燥することにより得られたバターカード粉１kgを水100lに溶解した。このバターカード溶液にエタノール220lを添加し、撹拌した後、室温で遠心分離(2,500rpm)してガングリオシドを含有する沈澱物を回収した。次に、この沈澱物を水 10lに溶解した後、エタノール 90lを添加し、フィルタープレスで沈澱したタンパク質を除去した。そして、タンパク質を除去した溶液に水を添加してエタノール濃度が30％以下となるよう調整して全液量を400lとし、分画分子量 500,000の限外濾過膜（セフィルト、日本ガイシ製）を使用して限外濾過した。なお、限外濾過の条件は、80倍濃縮、３倍加水濃縮、温度25℃とした。
このようにして、ガングリオシドを含有する濃縮液5lを回収し、凍結乾燥してガングリオシド５重量％を含むガングリオシド高含有組成物粉末 50gを得た。なお、このガングリオシド高含有組成物は、リン脂質50％、中性脂肪２％、タンパク質２％及び灰分２％を含有していた。また、ガングリオシドの回収率は98％であり、ガングリオシドの濃縮率は20倍であった。
【実施例２】
ＷＰＣ粉末（アラセン 475、ニュージーランド製）５kgを水250lに懸濁した。このＷＰＣ溶液にエタノール550lを添加し、撹拌した後、室温で遠心分離(2,500rpm)してガングリオシドを含有する沈澱物を回収した。次に、この沈澱物を水5lに溶解した後、エタノール 45lを添加し、デカンテーションして沈澱したタンパク質を除去した。そして、タンパク質を除去した溶液に水を添加してエタノール濃度が30％以下となるよう調整して全液量を200lとし、孔径 0.2μm の精密濾過膜（カーボセップ M20、テクセップ製) を使用して精密濾過した。なお、精密濾過の条件は、 100倍濃縮、３倍加水濃縮、温度40℃とした。
このようにして、ガングリオシドを含有する濃縮液2lを回収し、凍結乾燥してガングリオシド 7.2重量％を含むガングリオシド高含有組成物粉末 39gを得た。なお、このガングリオシド高含有組成物は、リン脂質70％、中性脂肪２％、タンパク質２％及び灰分３％を含有していた。また、ガングリオシドの回収率は95％であり、ガングリオシドの濃縮率は 120倍であった。
【実施例３】
バター製造時に副産物として得られるバターミルク 30lにエタノール 50lを添加し、撹拌した後、室温で遠心分離(2,500rpm)してガングリオシドを含有する沈澱物を回収した。次に、この沈澱物を水2lに溶解した後、エタノール 18lを添加し、室温で遠心分離(3,000rpm)して沈澱したタンパク質を除去した。そして、タンパク質を除去した溶液に水を添加してエタノール濃度が30％以下となるよう調整して全液量を180lとし、分画分子量 500,000の限外濾過膜（セフィルト、日本ガイシ製）を使用して限外濾過した。なお、限外濾過の条件は、 100倍濃縮、３倍加水濃縮、温度30℃とした。
このようにして、ガングリオシドを含有する濃縮液1.8lを回収し、凍結乾燥してガングリオシド６重量％を含むガングリオシド高含有組成物粉末 40gを得た。なお、このガングリオシド高含有組成物は、リン脂質55％、中性脂肪５％、タンパク質１％及び灰分２％を含有していた。また、ガングリオシドの回収率は96％であり、ガングリオシドの濃縮率は60倍であった。
【発明の効果】
本発明の方法によると、ガングリオシド高含有組成物を効率良く、迅速に、工業的規模で製造することができる。したがって、飲食品、医薬品、化成品等の素材として利用できるガングリオシド高含有組成物を安価に提供することが可能となる。