(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
セルロース原料をアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産するセルラーゼを用いて分解することを特徴とする、セルロース原料の分解方法。
【請求項２】
セルロース原料をアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産するセルラーゼを用いて糖化することを特徴とする、糖類の製造方法。
【請求項３】
セルロース原料が、古紙類である請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
古紙類が、シュレッデイング処理または解離処理からなる前処理を施されたものである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
古紙類が、乾燥物基準で、有機物比率が９０％以上、リグニン含有率が２０％以下、ヘミセルロース含有量が２０％以下のものである請求項３又は４に記載の方法。
【請求項６】
古紙類がオフィス古紙又は段ボール古紙である請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
セルラーゼ生産能が高く、かつセロビオースを炭素源として良好な生育を示す、アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）。
【請求項８】
アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）を培地に培養し、培養物からセルラーゼを採取することを特徴とするセルラーゼの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、極めてセルラーゼ生産能の高い新規なアクレモニウム属に属する微生物を用いたセルロース原料の分解方法および糖化方法、セルラーゼの製造方法、並びにこれら方法に用いる新規なアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）自体に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
セルラーゼは、セルロースを、グルコース、セロビオースやセロオリゴトースに加水分解する酵素反応系を触媒する酵素群の総称であり、その作用様式により、Ｃ１酵素（アビセラーゼ、セロビオヒドラーゼ、ＦＰアーゼ、エキソ−βーグルカナーゼ等とも呼称されている。）、Ｃｘ酵素（ＣＭＣアーゼ、エンド−β−グルカナーゼともいう。）およびβ−グルコシダーゼ（セロビアーゼともいう。）など種々の名称で呼ばれる酵素が存在する。セルラーゼはこれら酵素の相互作用により、セルロースを最終的にはグルコースまで分解する。
近年、このセルラーゼは、バイオマス資源の有効利用の観点から注目され、さかんに研究されている。特に、オフィスで使用された古紙や段ボール古紙等の古紙類を加水分解してグルコースや還元糖を得るための研究が注目されている。
しかしながら、従来からセルラーゼ生産菌として、よく研究されてきたトリコデルマ・レーゼイ（Trechoderuma reesei）、トリコデルマ・ビリデ（T. viride）やアスペルギルス（Aspergillus）属、ペニシリウム（Penicillium）属等に属する微生物のセルラーゼ生産能は必ずしも十分でなかった。また、セルラーゼ自体の分解力も十分でないため、セルロースを完全にグルコースまで分解することができず、セロビオースやセロオリゴ糖を多量に生成残存する等の問題があった。
【０００３】
かかる問題を解決するため、セルラーゼ生産能が高く、かつ生産するセルラーゼ自体の分解力も高い微生物を、広く自然界から検索する試みがなされてきており、その結果、土穣から分離したアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）に属する微生物が産生するセルラーゼは、セルロースをほとんど完全にグルコースにまで分解できることが見いだされている。さらに、この微生物の突然変異株であるアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６８５）が、セルラーゼ生産能をさらに顕著に増大していることも見出されているが（特公平２−３８号公報）、このＴＮ株の生産するセルラーゼは、ＦＰアーゼ、セロビアーゼ活性において満足できるものではなく、このＴＮ株においては、セルロース原料を加水分解してグルコースや還元糖に変換する実際の能力なそれほど高くはない。
さらに、従来の微生物が生産するセルラーゼは、上記ＣＭＣアーゼ（Ｃｘ酵素）の活性が必ずしも十分でないため、酸やアルカリを用いた薬剤処理や機械的破砕等の前処理を行わなければ、繊維が裁断され難く、流動性が良くならず、このためセルロース原料を高基質濃度で用いる場合、これら薬剤の使用あるいは攪拌動力の削減が困難であるという問題を有していた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、上記従来技術の問題点を解消しようとするものであり、具体的にはセルラーゼの生産能が高いとともに、生産するセルラーゼ自体活性が高く、かつセルロース原料の加水分解に際して上記酸アルカリ等の薬剤処理を必要とせず、また攪拌動力を削減しうるセルラーゼ生産菌を見いだし、セルロース原料を効率的かつ安価にグルコースや還元糖に分解し得る手段を提供しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究した結果、上記アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株の突然変異株が、該ＴＮ株に比べ特にＦＰアーゼおよびセロビアーゼ活性が２倍以上で、極めて高いセルラーゼ活性および該生産能を有することを見いだすとともに、この突然変異株を使用することにより、極めて効率的かつ安価にセルロース原料をグルコースや還元糖に分解し得るとの知見を待て本発明を完成させたものである。
すなわち、本発明は以下の（１）〜（８）からなるものである。
（１）セルロース原料をアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産するセルラーゼを用いて分解することを特徴とする、セルロース原料の分解方法。
（２）セルロース原料をアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産するセルラーゼを用いて糖化することを特徴とする、糖類の製造方法。
（３）セルロース原料が、古紙類である（１）または（２）に記載の方法。
（４）古紙類が、シュレッデイング処理または解離処理からなる前処理を施されたものである（３）に記載の方法。
（５）古紙類が、乾燥物基準で、有機物比率が９０％以上、リグニン含有率が２０％以下、へミセルロース含有量が２０％以下のものである（３）又は（４）に記載の方法。
（６）古紙類がオフィス古紙又は段ボール古紙である請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。
（７）セルラーゼ生産能が高く、かつセロビオースを炭素源として良好な生育を示す、アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）。
（８）アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）を培地に培養し、培養物からセルラーゼを採取することを特徴とするセルラーゼの製造方法。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明において用いるセルロース原料としては、紙類のほか、バガズ、イネワラ、もみがら等の植物繊維質等が挙げられ、セルロースを含むものであればその種類を問わないが、本発明の有用性が最も効果的に発揮されるのは、オフィス等で使用された古紙あるいは段ボール古紙、古新聞紙等の古紙類である。
また、本発明において使用する微生物は、アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６８５）に対しＵＶ照射、ＮＴＧ処理を行って得たものであり、結晶セルロース５０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌを主成分とする培地で７日間培養した培養液のセルラーゼ活性が同じ条件で培養したアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６８５）と比較して、ＦＰアーゼ活性及びセロビアーゼ活性が２倍以上である。
以下に、本発明の使用微生物について詳述する。
【０００７】
（１）本菌株の取得方法
親株として、アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ  ＢＰ−６８５）を用い、これをセルロースパウダー４０ｇ／Ｌ、バクトペプトン１０ｇ／Ｌ、硝酸カリウム６ｇ／Ｌ、尿素２ｇ／Ｌ、塩化カリウム１．６ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム１．２ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム１２ｇ／Ｌを含む培地（ｐＨ４．０）に接種し、３０℃で１０日間好気的に培養した後、生理食塩水で１×１０−３〜１×１０−４に希釈し、紫外線照射（東芝殺菌ランプ、距離３０ｃｍ、３０分間）した。処理した菌株をセロビオース１０ｇ／Ｌ、バクトヘプトン１０ｇ／Ｌ、硝酸カリウム６ｇ／Ｌ、尿素２ｇ／Ｌ、塩化カリウム１．６ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム１．２ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム１２ｇ／Ｌ、Ｌ−（−）ソルボース１０ｇ／Ｌ、寒天２０ｇ／Ｌを含む平板培地（選択培地Ａとする）に塗布し、３０℃でインキュベートした。５〜１０日間培養後、生育したコロニーから、以下の性質を有する本菌株をスクリーニングした。
【０００８】
（２）培養的・形態的性質
選択培地Ａを含む３種類の培地を用いて、本菌株とＴＮ株を培養し、その形態を観察した。結果を以下に示す。
▲１▼選択培地Ａにより培養した場合
選択培地Ａにおける目視での観測では、ＴＮ株、本菌株のコロニーともに、やや赤みを帯びた茶褐色でゆるく盛り上がり羊毛状を呈しているが、本菌株のコロニーはセロビオースを炭素源とした当培地での生育がＴＮ株より速く、良好で、また、中心部に孔のあるドーナツ状に盛り上がる点で異なっている。すなわち、本菌株のコロニーは三角形に近く、寒天培地への浸潤がＴＮ株より深い。また、盛り上がりも本菌株の方が高く、２ｍｍ程の盛り上がりを示す。径はコロニーによって差があるが、ＴＮ株、本菌株とも、７〜１４日の培養で５〜１０ｍｍになる。裏面からコロニーを観察するとＴＮ株、本菌株とも赤褐色であるが、本菌株は周辺部がより深く浸潤する。
【０００９】
▲２▼選択塔地Ｂを用いた場合
以下の選択培地Ｂで３０℃、７〜１４日間培養した。そのときのコロニー形態は、ＴＮ株が表面に放射線状のくぼみを呈し、選択培地Ａの場合と類似した形態を呈するのに対し、本菌株ではくぼみは見られず、白い羊毛状の菌糸が発達する。
選択培地Ｂ；選択培地Ａの窒素源からバクトペプトン、硝酸カリウム、尿素を除き、代わりにコーンステイープリカー５ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌを添加し、さらにセロビオース１０ｇ／Ｌをセルロースパウダーｌ０ｇ／Ｌに替えた培地。
【００１０】
▲３▼ポテトデキストロース寒天培地を用いた場合
ＴＮ株のコロニーは平坦のまま広がり、集落は最初白色で後にやや黄色みをおびるのに対し、本菌株の場合は盛り上がりが大きく、培地下部への浸潤も大きい。しかし、広がりはＴＮ株より小きい。また、本菌株は、１０〜２０日で赤褐色集落上に白色の菌糸束を形成する。
【００１１】
（３）菌糸及び分生糸の形態
菌糸の形態は、ＴＮ株と類似しており、菌糸の直径は０．５〜２．５μｍ、無色で菌糸には隔壁が認められる。また、菌糸表面は滑面である。
本菌株は分生糸形成能がＴＮ株よりやや安定しているものの、本菌株の分生糸はツアペツク寒天およびポテトデキストロース寒天培地による総体培養により消滅しやすい。分生子の形態はＴＮ株と類似しており、分生子柄は気生菌糸側面より突出し、無色である。また、形は亜球形［（２．５〜５μｍ）×（２〜４．５μｍ）］で滑面、無色で連鎖は非常にゆるく分散しやすい。
（４）生理学的性質
本菌株の生育ｐＨ範囲は、ＴＮ株と同様、３．５〜６．０で、最適ｐＨ４付近である。生育温度範囲は１５℃〜４３℃で、最適生育温度は３０℃付近である。
【００１２】
上記菌学的性質について、W. Gams の「Cephalosporiumartige Schimmelpilge」P84、G. Fisher （1971年）及びC. H. Dickinson、Mycol. Papers 115 P10 （1968年）を参照した結果、本菌株は、アクレモニウム（Acremonium）に属すると認められる。そして、最も類縁の菌株として、アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株が挙げられる（特公昭６１−１７４７６号公報）。しかしながら、本菌株は、以下に示すように、セルラーゼ生産能がＴＮ株の２倍以上であること、セロビオースを炭素源とした培地での生育がＴＮ株より良好であること、及び上記▲１▼〜▲３▼の３種類の培地で培養したときのコロニー形態が上記のように異なることから、本菌株は新菌株に属するものであり、アクレモニウム・セルロリティカスＣ１と命名して、産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所の特許微生物寄託センターに寄託した（ＦＥＲＭ  Ｐ−１８５０８）。
【００１３】
本菌株は、ＦＰアーゼ、ＣＭＣアーゼ、セロビアーゼ等のセルラーゼ生産能が極めて高い。
本発明のアクレモニウム・セルロリティカスＣ１株は、培地に該菌株を接種し、常法に従って培養することができる。培地は、炭素源として結晶性セルロース５０ｇ／Ｌ、窒素源として硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌを含有していることが好ましく、他の資化し得る炭素源及び窒素源を適当量含有せしめておくことが好ましい。
本発明において、セルロース原料を分解あるいは糖化するためには、上記培養して得た菌体または培養物をセルロース原料含有培地に加えて培養してもよく、また、培養液、下記粗酵素液あるいは精製したセルラーゼ等を、セルロース原料に加えいわゆる酵素法により分解、糖化を行ってもよい。
【００１４】
本発明におけるセルラーゼは、上記アクレモニウム・セルロリティカスＣ１株を上記のように培養して得られた培養物中から一般の酵素の採取法及び精製手段を使用して得ることができる。すなわち、遠心分離又はろ過等の通常の固液分離手段により、菌体を培養液から除去し、粗酵素液を得る。
この粗酵素液は、セルロース原料の分解あるいは糖化にそのまま使用することもできるが、さらに、塩折法、沈殿法、限外ろ過法等の分離手段により粗酵素を得、公知の方法により精製結晶化してセルラーゼを得る。
【００１５】
本発明のセルラーゼは、ＦＰアーゼ、ＣＭＣアーゼおよびセロビアーゼ等からなる複合酵素系を形成しており、これらの酵素学的性質を以下に示す。
Ａ．ＦＰアーゼ
（１）作用
濾紙、セルロース末、アビセル、脱胎線など結晶性の高い不溶性セルロースに作用してグルコース、セロビオース等の還元糖を生成する。
（２）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ
本酵素の作用ｐＨ範囲は２〜８、最適作用ｐＨは約４．５である。
（３）安定ｐＨ
クエン酸−リン酸塩緩衝液の下で４５℃で２０時間放置したときの安定ｐＨ範囲は約３．５〜約８である。
（４）作用温度範囲及び最適作用温度
本酵素は約９０℃までの高温で作用するが、１％アビセル、０．０５Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ４．８）の下で１０分間反応させたときの最適作用温度は約６５℃である。
（５）熱安定性
０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ＰＨ４．８）中、温度を種々変えて１０分間処理した結果、本酵素は約６０℃までの温度ではほとんど失活せず、６５℃、１０分間の加熱で約５０％、７０℃、１０分間の加熱で約８０％それぞれ失活する。
（６）阻害剤
各種重金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオンおよび銅イオンにより強く阻害される。
【００１６】
Ｂ．ＣＭＣアーゼ
（１）作用
カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等の可溶性セルロース誘導体に作用し、これをグルコース及びセロビオース等に分解する作用を有するが、本発明のＣＭＣアーゼにおいては、ＣＭＣアーゼＩ、II、IIIおよびIVが混在する。なお、ＣＭＣアーゼＩおよびIIは、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等の可溶性セルロース誘導体をグルコース及びセロビオース等に分解する作用を有し、ＣＭＣアーゼIIIおよびIVは、グルコースを極くわずかしか生成せずセロビオース以上のオリゴ糖に分解する作用を有する。
（２）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ
ＣＭＣアーゼ複合体の作用ｐＨ範囲は、約２〜８にわたり、最適作用ｐＨは約４．５である。
（３）安定ｐＨ
クエン酸−リン酸塩緩衝液中において２０時間放置したときのＣＭＣアーゼ複合体の安定ｐＨ範囲は約３．５〜６である。
（４）作用温度範囲及び最適作用温度
このＣＭＣアーゼ複合体は約９０℃までの高温で作用するが、１％ＣＭＣ、０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中において１０分間反応させたときの最適作用温度は約６５℃である。
（５）熱安定性
０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中、温度を種々変えて１０分間加熱処理した結果、約６０℃までの温度ではほとんど失活せず、８５℃、１０分間の加熱で約４０％、７０℃、１０分間の加熱で約７０％それぞれ失活する。
（６）阻害剤
各種金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオンおよび銅イオンにより強く阻害される。
【００１７】
Ｃ．セロビアーゼ
（１）作用
サリシン、セロビオース、セロトリオース、セロテトラオース、セロペンタオース、セロヘキサオースのようなセロオリゴ糖に作用して、グルコースに分解する。
また、本酵素はアビセルのような高分子セルロースにも作用するが、ＣＭＣやＨＥＣ（ヒドロキシエチルセルロース）にはほとんど作用しない。
（２）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ
本酵素の作用ｐＨ範囲は２〜８、最適作用ｐＨは約４．５である。
（３）安定ｐＨ
クエン酸−リン酸緩衝液中で４５℃で２０時間放置したときの安定ｐＨ範囲は約３．５〜５である。
（４）作用温度範囲及び最適作用温度
本酵素は約９０℃までの高温に作用するが、１％セロビオース、０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中において１０分間反応させたときの最適作用温度は約８５℃である。
（５）熱安定性
０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中において、温度を種々変えて１０分間加熱処理した結果、本酵素は約６０℃までの温度ではほとんど失活せず、７０℃、１０分間の加熱で約４０％、８０℃、１０分間の加熱で９０％以上それぞれ失活する。
（６）阻害剤
各種重金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオン及び銅イオンにより強く阻害される。
【００１８】
次に、本発明によるセルロース原料の糖化工程について説明する。
本発明においては、セルロース原料の面倒な前処理を特に必要としない。例えば、古紙類の糖化は、以下のようにして行うことができる。
予め、古紙類を前処理しておくが、一般的には、古紙類の前処理には、繊維を切断しない簡単な前処理と、形態を変えたり、繊維を短くするような前処理の２種類がある。
前者には、水を加えて単にミキシングし、繊維をほぐすだけの離解や、裁断のみを行うシュレッデイング等があり、また、後者には、酸、アルカリ等による薬剤処理法、叩解（リフアイニング）法、凍結粉砕、ボールミルやロールミル等による機械的破砕法等がある。
本発明においては、かかるシュレツデイング処理又は解離処理しておくだけで、効率的に古紙類を加水分解、糖化することができる。本発明においては、後者の前処理を行ってもよいが、薬剤、設備、消費電力等に係るコスト増や処理の煩雑さに比して、得られる効果は、上記簡単な前処理法を採用する場合と比べ格別優れるわけではない。このため、本発明において行う前処理は、シュレッデイング処理又は離解処理等の簡単な前処理である方がより有利である。
【００１９】
上記のように前処理された古紙類は、窒素源および補助栄養源を加えた培養槽、あるいは糖化槽に供給し、見かけの粘度を適宜調整した後、培養槽に本発明のアクレモニウム・セルロリティカスＣ１株の菌体あるいはその培養物を加えて培養するか、あるいは糖化槽に該培養液、粗酵素液またはセルラーゼを酵素源として加えて、古紙類の分解、糖化を行う。培養によるときは、培地のｐＨは３．５〜６．０、特にｐＨ４付近、温度は１５℃〜４３℃で、特に３０℃付近に調整するのがよく、酵素法によるときは、緩衝剤として、例えば酢酸ナトリウムと酢酸の混合溶液を０．１ｍｏｌ／Ｌを加えてｐＨ３〜７、温度範囲は３０℃〜９０℃、特に４０〜８０℃に調整するのが好ましい。
前処理をした古紙類に対するセルラーゼの使用量は、２〜３０ＦＰＵ／ｇ（古紙）が好ましく、５〜１０ＦＰＵ／ｇ（古紙）がさらに好ましい。
【００２０】
本発明においては、前処理した古紙類とセルラーゼを間欠的に供給する方法（流加式）、前処理した古紙類とセルラーゼを大量に一括して供給し、反応させる方法（一括法）のいずれでもよい。流加式を採用する場合、前処理した古紙類とセルラーゼを供給する時期として、見かけの粘度状態に応じて供給する方法、見かけの粘度状態にかかわらず、一定時間毎に供給する方法のいずれを採用してもよい。
培養法による場合も、原料あるいは菌体、培養物の添加手段には特に制限はない。
【００２１】
本発明において、セルロース原料として古紙類を用いる場合、乾燥重量基準で、有機物比率が９０％以上、リグニン含有量が２０％以下、ヘミセルロース含有量が２０％以下である場合に、特に効果的である。すなわち、リグニン含有量が２０％以下、ヘミセルロース含有量が２０％以下であると、セルロース成分が多くなるため、前処理として、薬剤処理や機械的破砕処理等を行わなくとも、本発明により、古紙類を十分に分解、糖化することができる。このような組成を有する古紙類の具体例としては、例えばオフィス古紙や段ボール古紙等が挙げられる。また、セルロース原料として、上記の条件を満たすものは、古紙類に限らず極めて効果的に分解、糖化できる。
【００２２】
実施例１
本発明のアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株とその親株であるアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株とのセルラーゼ活性を比較した。
結晶性セルロース５０ｇ／Ｌ、コーンステイープリカー１０ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌ、尿素３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム１．２ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム１２ｇ／Ｌ、硫酸亜鉛１０ｍｇ／Ｌ、硫酸マンガン１０ｍｇ／Ｌ、硫酸銅１０ｍｇ／Ｌからなる培地（ｐＨ４．０）を定法により殺菌後、本菌株またはその親株であるＴＮ株を接種し、３０℃で７日間好気的に培養した。培養後、遠心分離して得た上澄み液について、生産されたセルラーゼのＦＰＵ活性（ＦＰアーゼ活性）を測定した。
本菌株のＦＰＵは１７Ｕ／ｍＬであるのに対して、ＴＮ株のＦＰＵは８Ｕ／ｍＬであり、本菌株のセルラーゼ生産能は、親株に比べ、ＦＰＵが約２．１倍に増大していた。
【００２３】
なお、上記酵素活性の測定法は、以下のとおりである。
［セルラーゼ活性測定法］
濾紙洩紙（ワットマンＮｏ．１）５０ｍｇを基質とし、これに酵素液０．５ｍＬとクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８、０．０５Ｍ）１．０ｍＬを加え、５０℃で１．０時間酵素反応を行った後、ジニトロサリチル酸試薬３．０ｍＬを加え、１００℃で５分間加熱し発色させる。冷却後、これにイオン交換水または蒸留水２０ｍＬを加え、５４０ｎｍの波長で比色定量する。１分間に１μｍｏｌのゲルコースに相当する還元糖を生成する酵素基を１ユニット（ＦＰＵ）とした。
【００２４】
実施例２
基質として、乾式粉砕機（大阪ケミカル社製）で離解したオフィス古紙（乾燥重量でセルロース６５％以上、リグニン１５％以下）を用いた。該オフィス古紙２．５ｇに対して、本菌株の５日間培養液を１０ＦＰＵ／ｇ（古紙）相当、及び０．２Ｎ酢酸緩衝液を入れて合計５０ｍＬとし、４５℃で１００ｒｐｍで振とう反応させた。
比較例１として、本菌株の代わりに、トリコデルマ・リーセイＲＵＴＣ−３０の培養液を１０ＦＰＵ／ｇ（古紙）相当使用し、他は実施例１と同様に処理した。反応開始から１時間後、４時間後、２４時間後、４８時間後に得られた還元糖及びグルコースの濃度測定した。実施例２および比較例１の結果を図１に示す。使用した酵素単位量（ＦＰＵ）は同量であったが、実施例２の方が、比較例１よりも還元糖の生成速度が遠く、反応開始４時間後の還元糖生成量が、実施例２は比較例１の約１．５倍であった。また、最終的なグルコース生成量は、実施例２が比較例１の約１．４倍であった。
【００２５】
【発明の効果】
本発明のアクレモニウム・セルロリティカスＣ１株は、セルラーゼ産生能が高く、また得られるセルラーゼは、グルコースや還元糖に分解する活性が非常に高い。したがって、本発明によれば、セルロース原料、特に古紙類から、効率均かつ安価にグルコースや還元糖を得ることができる。
また、本発明のセルロース原料、特に古紙類の分解、糖化に際しては、前処理がシュレッディング処理又は離解処理を施すだけでよく、薬剤処理あるいはより高度な破砕処理等を省略することが可能であり、より効率的、経済的である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本菌株とトリコデルマ・リーセイＲＶＴＣ−３０を用いた場合の反応時間と糖化率との関係を示す図である。
【図１】
0004025848.tif 000002