(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(I)
【化１】
0004000263.tif 000027
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される化合物を、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物であって、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、及びロドトルラ(Rhodotorula)属から選択される属に属する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて還元することを特徴とする下記式(IＶ)
【化２】
0004000263.tif 000028
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される化合物の製造方法。
【請求項２】
下記式(II)
【化３】
0004000263.tif 000029
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される化合物を、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物であってメシニコウィア（Metschnikowia）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、シテロマイセス(Citeromyces)属、 ヤロウィア(Yarrowia)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、エキソフィアラ（Exophiala）属、トリゴノプシス(Trigonopsis)属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、ウィケルハミエラ(Wickerhamiella)属、サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属、サイトエラ（Saitoella）属、ピキア(Pichia)属、サッカロマイセス(Saccharomyces)属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、アシネトバクター(Acinetobacter)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属、セルロモナス(Cellulomonas)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属及びクルトバクテリウム（Curtobacterium）属からなる群から選択される微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて還元することを特徴とする下記式(IＶ)
【化４】
0004000263.tif 000030
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される化合物の製造方法。
【請求項３】
下記式（III）
【化５】
0004000263.tif 000031
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される化合物を、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物であってクリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、フィロバシディウム（Filobasidium）属及びピキア(Pichia)属から選択される属に属する微生物の菌体及び／または該菌体
処理物を作用させて還元することを特徴とする下記式(IＶ)
【化６】
0004000263.tif 000032
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される化合物の製造方法。
【請求項４】
式（II）及び式（III）で表される化合物が、それぞれ下記式（II'）
【化７】
0004000263.tif 000033
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）及び下記式（III'）
【化８】
0004000263.tif 000034
（式中、Ｒは水素原子またはアルキル基を示す）で表される光学活性体であることを特徴とする請求項２または３記載の製造方法。
【請求項５】
式（II'）及び式（III'）で表される化合物が、それぞれ式（I）で表される化合物から得られたものであることを特徴とする請求項４に記載の製造方法。
【請求項６】
微生物がメシニコウィア（Metschnikowia）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、シテロマイセス(Citeromyces)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、ウィケルハミエラ(Wickerhamiella)属、サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属、サイトエラ（Saitoella）属、ピキア(Pichia)属、サッカロマイセス(Saccharomyces)属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属又はコリネバクテリウム(Corynebacterium)属に属するものであることを特徴とする請求項２記載の製造方法。
【請求項７】
下記式(I)
【化９】
0004000263.tif 000035
（式中、Ｒはアルキル基を示す）で表される化合物を、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物であって、ヤロウィア(Yarrowia)属及びトリゴノプシス(Trigonopsis)属から選択される属に属する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて還元することを特徴とする下記式(IＶ)
【化１０】
0004000263.tif 000036
（式中、Ｒは水素原子を示す）で表される化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、（３Ｒ，５Ｓ）−（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類の新規な製造方法に関する。該化合物は、血中コレステロール低下剤として有用であるとして、特開平１−２７９８６６号公報に記載された、「3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリルCoA還元酵素阻害剤」の合成中間体として有用である。
【０００２】
【従来の技術】
（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類を化学的に製造する方法としては、例えば、特開平１−２７９８６６号公報に以下に示す製造ルートが知られている。
【０００３】
【化１０】
0004000263.tif 000002
また、特開平８−９２２１７号公報には、光学活性なシッフ塩基を用いて製造する方法も報告されている。
【０００４】
またさらに、特開平８−１２７５８５号公報には、(R)-3-tert-ブチルジメチルシリルオキシ−６−ジメトキシホスフィニルー５−オキソヘキサン酸メチルエステルを用いて極低温にて製造する方法も報告されている。
【０００５】
一方、微生物の菌体及び／または該菌体処理物を用いてケト基を有する化合物を立体選択的に還元し、光学活性なアルコール体を生成する方法としては、例えば、ケト基の側鎖にキノリン骨格を有する化合物を用いるものとして、Appl. Microbiol. Biotechnol.(1998)49:ｐ．709-717に、以下に示す反応をミクロバクテリウム  キャンポクエマドエンシス（Microbacterium campoquemadoensis）MB5614株を用いて行えることが記載されている。
【０００６】
【化１１】
0004000263.tif 000003
また、Bioorg. Med. Chem. Lett., vol8, p1403-(1998)には、以下に示す反応をパン酵母を用いて行えることが記載されている。
【０００７】
【化１２】
0004000263.tif 000004
しかしながら、（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジオキソヘプト−６−エン酸エステル類のように、カルボニル基のα位にオレフィンが存在する上に、カルボニル基が連続して存在する化合物については、微生物を用いて立体選択的に還元できるという例は知られていなかった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って、（３Ｒ，５Ｓ）−（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類を工業的に安価に製造できる新規な製造方法を新たに開発することが望まれていた。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために、微生物反応を利用したケト基の立体選択的還元反応による、（３Ｒ，５Ｓ）−（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類の製造方法について、鋭意、検討した結果、下記化合物（Ｉ）〜（ＩＩＩ）および（ＩＩ'）〜（ＩＩＩ'）で示される化合物を原料として用いた場合に、高い光学純度で目的物が得られることを見い出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明の要旨は、下記式(I)
【００１０】
【化１３】
0004000263.tif 000005
（式中、Ｒは水素原子、アルキル基またはアリール基を示す）で表される化合物、下記式(II)
【００１１】
【化１４】
0004000263.tif 000006
（式中、Ｒは前記と同義である）で表される化合物、及び、下記式（III）
【００１２】
【化１５】
0004000263.tif 000007
（式中、Ｒは前記と同義である）で表される化合物からなる群より選ばれる化合物を、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて還元することを特徴とする下記式(IＶ)
【００１３】
【化１６】
0004000263.tif 000008
（式中、Ｒは前記と同義である）で表される化合物の製造方法に存する。
【００１４】
以下に、本発明を詳細に説明する。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明の（３Ｒ，５Ｓ）−（Ｅ）−７−［2−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類の製造方法は、下記式(I)
【００１６】
【化１７】
0004000263.tif 000009
（式中、Ｒは水素原子、アルキル基またはアリール基を示す）
で表される化合物、下記式(II)
【００１７】
【化１８】
0004000263.tif 000010
（式中、Ｒは前記と同義である）
で表される化合物、及び、下記式（III）
【００１８】
【化１９】
0004000263.tif 000011
（式中、Ｒは前記と同義である）
で表される化合物からなる群より選ばれる化合物を、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物の菌体及び／または該菌体処理物を作用させて還元することを特徴とする。
【００１９】
本発明の製造方法に用いられる原料である、上記式（I）〜（III）で表される化合物において、Ｒは、水素原子、アルキル基またはアリール基を示す。
【００２０】
アルキル基としては、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｔ−ブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、フェネチル基等の、アルキル基またはアリール基で置換されていてもよい直鎖、分岐若しくは環状のアルキル基である。
【００２１】
アリール基としては、フェニル基、メシチル基、ナフチル基等の、アルキル基で置換されていても良いフェニル基又はナフチル基が挙げられる。
【００２２】
上記Ｒとして好ましくは、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル基、ベンジル基又はフェニル基であり、より好ましくはＣ1〜Ｃ4のアルキル基であり、特に好ましくはメチル基又はエチル基である。
【００２３】
本発明の製造方法において、上記式（II）および（III）で表される化合物は下記式（II'）および下記式（III'）で表される光学活性体であってもよい。
【００２４】
【化２０】
0004000263.tif 000012
（式中、Ｒは前記と同義である）
【００２５】
【化２１】
0004000263.tif 000013
（式中、Ｒは前記と同義である）
式（Ｉ）〜（III）及び（II'）〜（III'）で表される化合物は、特開平１−２７９８６６号公報、特開平８−１２７５８５号公報、特開平５−１７８８４１号公報等に記載された方法と公知の方法を組み合わせることによって、任意に製造することができる。
【００２６】
本発明では、上記式（I）〜（III）で表される化合物を微生物の菌体及び／又は該菌体処理物を用い、ケト基を立体選択的に還元することを特徴とする。
【００２７】
本発明に用いられる微生物としては、ケト基を立体選択的に還元しうる能力を有する微生物であれば特に限定されない。
【００２８】
具体的には、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）、メシニコウィア  ビクスピダタ（Metschnikowia bicuspidata）、メシニコウィア  レウカウフィ（Metschnikowia reukaufii）及びメシニコウィア  ルナタ(Metschnikowia lunata)等のメシニコウィア（Metschnikowia）属に属する微生物；
クリプトコッカス  クルバタス（Cryptococcus curvatus）、クリプトコッカス  フラバス（Cryptococcus flavus）、クリプトコッカス  フミコラス（Cryptococcus humicolus）及びクリプトコッカス  ロウレンティ（Cryptococcus   laurentii）等のクリプトコッカス（Cryptococcus）属に属する微生物；
キャンディダ  アルビカンス（Candida albicans）、キャンディダ  アジマ（Candida azyma）、キャンディダ  インターメディア（ Candida  intermedia）、キャンディダ  ソラニ（Candida solani）、キャンディダ  ファマタ（Candida  famata）、キャンディダ  ギリエモンディ（Candida guilliermondii）、 キャンディダ  パラプシロシス（Candida parapsilosis）、キャンディダ  ルゴサ（Candida rugosa）、キャンディダ  トロピカリス（Candida tropicalis）及びキャンディダ  モリシアナ（Candida molischiana）等のキャンディダ（Candida）属に属する微生物；
フィロバシディウム  カプサリゲナム（Filobasidium capsuligenum）等のフィロバシディウム（Filobasidium）属に属する微生物；
オガタエア  グリコザイマ（Ogataea glucozyma）及びオガタエア  ミヌタ（Ogataea minuta）等のオガタエア（Ogataea）属に属する微生物；
シテロマイセス  マトリテンシス（Citeromyces  matritensis）等のシテロマイセス(Citeromyces)属に属する微生物；
ヤロウィア  リポティカ（Yarrowia lipolytica）等のヤロウィア(Yarrowia)属に属する微生物；
ロドトルラ  グルティニス（Rhodotorula glutinis）、ロドトルラ  オウランティアカ（Rhodotorula aurantiaca）及びロドトルラ  ムシラギノサ（Rhodotorula mucilaginosa）等のロドトルラ(Rhodotorula)属に属する微生物；
エキソフィアラ  デルマティティヂス（Exophiala dermatitidis）等のエキソフィアラ（Exophiala）属に属する微生物；
トリゴノプシス  バリアビリス（Trigonopsis variabilis）等のトリゴノプシス(Trigonopsis)属に属する微生物；
シゾサッカロマイセス  ポンベ（Shizosaccharomyces pombe）等のシゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属に属する微生物；
ウィケルハミエラ  ドメルキー（Wickerhamiella domercqii）等のウィケルハミエラ(Wickerhamiella)属に属する微生物；
ピキア  ピタルソニ（Pichia petersonii）及びピキア  アノマラ（Pichia anomala）等のピキア(Pichia)属に属する微生物；
サッカロマイコプシス  フィブリゲラ(Saccharomycopsis fibuligera)及びサッカロマイコプシス  クラタエゲンシス(Saccharomycopsis crataegensis)等のサッカロマイコプシス (Saccharomycopsis)属に属する微生物；
サイトエラ  コンプリカタ(Saitoella complicata) 等のサイトエラ(Saitoella)属に属する微生物；
サッカロマイセス  セルビシエ(Saccharomyces cerevisiae) 等のサッカロマイセス (Saccharomyces)属に属する微生物；
ロドスポリジウム  トルロイデス(Rhodosporidium  toruloides) 等のロドスポリジウム (Rhodosporidium)属に属する微生物；
アシネトバクター  カルコアセティカス(Acinetobacter calcoaceticus)等のアシネトバクター属(Acinetobacter) に属する微生物；
ブレビバクテリウム  リネンス(Brevibacterium linens) 及びブレビバクテリウム  サッカロリティカム(Brevibacterium sacchrolyticum)等のブレビバクテリウム(Brevibacterium)属に属する微生物；
セルロモナス  ゲリダ(Cellulomonas gelida)、セルロモナス  フラビゲナ(Cellulomonas flavigena) 、セルロモナス  ウダ(Cellulomonas uda)等のセルロモナス(Cellulomonas) 属に属する微生物；
コリネバクテリウム  アンモニアジェネス (Corynebacterium ammoniagenes)、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)、コリネバクテリウム  アセトアシドフィラム(Corynebacterium acetoacidophilum)、コリネバクテリウム  ビタルミニス (Corynebacterium vitaeruminis)及びコリネバクテリウム  バリアビル (Corynebacterium variabile)等のコリネバクテリウム (Corynebacterium)属に属する微生物；
クルトバクテリウム  フラカムファシエンス(Curtobacterium flaccumfaciens) 等のクルトバクテリウム(Curtobacterium)属に属する微生物が挙げられる。
【００２９】
上記微生物の好ましい具体例としては、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）ＩＦＯ  ０８６３株、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）ＩＡＭ  １２１９６株、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）ＩＡＭ  １２１９７株、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）ＩＦＯ  １４０７株、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）ＩＦＯ  １０７９６株、メシニコウィア  ビクスピダタ（Metschnikowia bicuspidata）ＩＦＯ  １４０８株、メシニコウィア  レウカウフィ（Metschnikowia reukaufii）ＩＦＯ  １０７９８及びメシニコウィア  ルナタ(Metschnikowia lunata) ＩＦＯ  １６０５株；
クリプトコッカス  クルバタス（Cryptococcus curvatus）ＩＦＯ  １１５９株、クリプトコッカス  フミコラス（Cryptococcus humicolus）ＩＦＯ  １０２５０株、クリプトコッカス  フラバス（Cryptococcus flavus）ＩＦＯ  ０４０７株、クリプトコッカス  ロウレンティ（Cryptococcus laurentii）ＩＦＯ  ０６０９株、クリプトコッカス  ロウレンティ（Cryptococcus laurentii）ＩＦＯ１３７６株、クリプトコッカス  変種ロウレンティ（Cryptococcus laurentii var laurentii）ＣＢＳ  ５５３９株、クリプトコッカス  ロウレンティ変種ロウレンティ（Cryptococcus laurentii var laurentii）ＣＢＳ  ２１７４株、クリプトコッカス  ロウレンティ変種ロウレンティ（Cryptococcus laurentii var laurentii）ＣＢＳ  ５７４６株、クリプトコッカス  ロウレンティ変種ロウレンティ（Cryptococcus laurentii var laurentii）ＣＢＳ  ７１４０株及びクリプトコッカス  ロウレンティ変種ロウレンティ（Cryptococcus laurentii var laurentii）ＣＢＳ  ７２３５株；
キャンディダ  アルビカンス（Candida albicans）ＩＦＯ  １５９４株、キャンディダ  アジマ（Candida azyma）ＪＣＭ  １６９１株、キャンディダ  インターメディア（Candida  intermedia）ＩＦＯ  ０７６１株、キャンディダ  ソラニ（Candida solani）ＩＦＯ  ０７６２株、キャンディダ  ファマタ（Candida  famata）ＲＩＦＹ  ７４５５株（同菌株はＩＦＯ  ０８５６株としても入手できる）、キャンディダ  ギリエモンディ（Candida guilliermondii）ＩＦＯ  ０５６６株、キャンディダ  パラプシロシス（Candida parapsilosis）ＣＢＳ  ０６０４株、キャンディダ  ルゴサ（Candida rugosa）ＩＦＯ  ０５９１株、キャンディダ  トロピカリス（Candida tropicalis）ＩＦＯ  ０６１８株、キャンディダ  トロピカリス（Candida tropicalis）ＩＦＯ  １４０４株、キャンディダ  トロピカリス（Candida tropicalis）ＩＦＯ  １６４７株及びキャンディダ
モリシアナ（Candida molischiana）ＩＦＯ  １０２９６株；
フィロバシディウム  カプサリゲナム（Filobasidium capsuligenum）ＩＦＯ１１１９株及びフィロバシディウム  カプサリゲナム（Filobasidium capsuligenum）ＩＦＯ  １１８５株；
オガタエア  グリコザイマ（Ogataea glucozyma）ＩＦＯ  １４７２株及びオガタエア  ミヌタ  変種ノンファーメンタス（Ogataea minuta var nonfermentans）ＩＦＯ  １４７３株；
シテロマイセス  マトリテンシス（Citeromyces matritensis）ＩＦＯ  ０６５１株及びシテロマイセス  マトリテンシス（Citeromyces  matritensis）ＩＦＯ  ０９５４株；
ヤロウィア  リポティカ（Yarrowia lipolytica）ＩＦＯ  １２０９株；
ロドトルラ  グルティニス変種ダイレネンシス（Rhodotorula glutinis var dairenensis）ＩＦＯ  ０４１５株、ロドトルラ  グルティニス変種グルティニス（Rhodotorula glutinis var glutinis）ＩＦＯ  ０３９５株、ロドトルラ  オウランティアカ（Rhodotorula aurantiaca）ＩＦＯ  ０７５４株、ロドトルラ  ムシラギノサ（Rhodotorula mucilaginosa）ＩＦＯ  ０００３株；
エキソフィアラ  デルマティティヂス（Exophiala dermatitidis）ＩＦＯ  ６４２１株及びエキソフィアラ  デルマティティヂス（Exophiala dermatitidis）ＩＦＯ  ８１９３株；
トリゴノプシス  バリアビリス（Trigonopsis variabilis）ＣＢＳ  １０４０株及びトリゴノプシス  バリアビリス（Trigonopsis variabilis）ＩＦＯ  ０６７１株；
シゾサッカロマイセス  ポンベ（Shizosaccharomyces pombe）ＩＦＯ  ０３４４株及びシゾサッカロマイセス  ポンベ（Shizosaccharomyces pombe）ＩＦＯ  １６２８株；
ウィケルハミエラ  ドメルキー（Wickerhamiella domercqii）ＩＦＯ  １８５７株；
ピキア  ピタソニー（Pichia petersonii）ＩＦＯ  １３７２株及びピキア  アノマラ（Pichia anomala）ＩＦＯ  ０１１８株；
サッカロマイコプシス  フィブリゲラ(Saccharomycopsis fibuligera)ＩＦＯ０１０５株及びサッカロマイコプシス  クラタエゲンシスＩＦＯ  １７０８株(Saccharomycopsis crataegensis)；
サイトエラ  コンプリカタ(Saitoella complicata) ＩＡＭ  １２９６３株；
サッカロマイセス  セルビシエ(Saccharomyces cerevisiae) ＪＣＭ  １８１８株、サッカロマイセス  セルビシエ(Saccharomyces cerevisiae) ＩＦＯ  ０５６５株及びサッカロマイセス  セルビシエ(Saccharomyces cerevisiae) ＩＦＯ  ０３０５株；
ロドスポリジウム  トルロイデス(Rhodosporidium toruloides)ＩＦＯ  ０５５９株；
アシネトバクター  カルコアセティカス(Acinetobacter calcoaceticus)ＩＦＯ  １２５５２株；
ブレビバクテリウム  リネンス(Brevibacterium linens)ＪＣＭ  １３２８株及びブレビバクテリウム  サッカロリティカム(Brevibacterium sacchrolyticum) ＡＴＣＣ  １４０６６株；
セルロモナス  ゲリダ(Cellulomonas gelida)ＪＣＭ  １４８９株、セルロモナス  フラビゲナ(Cellulomonas flavigena）ＪＣＭ  １４９０株及びセルロモナス  ウダ(Cellulomonas uda)ＪＣＭ  １４９２株；
コリネバクテリウム  アンモニアジェネス (Corynebacterium ammoniagenes)ＪＣＭ  １３０５株、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum) ＪＣＭ  １３０７株、コリネバクテリウム  グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ＡＴＣＣ  １２８１３株、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ＡＴＣＣ  １３０３２株、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ＡＴＣＣ  １３８２６株、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)ＡＴＣＣ  １４０６７株、コリネバクテリウム  アセトアシドフィラム(Corynebacterium acetoacidophilum) ＡＴＣＣ  １３８７０株、コリネバクテリウム  ビタルミニス (Corynebacterium vitaeruminis)ＪＣＭ  １３２３株及びコリネバクテリウム  バリアビル (Corynebacterium variabile)ＪＣＭ  ２１５４株；
クルトバクテリウム  フラカムファシエンス(Curtobacterium flaccumfaciens) ＡＴＣＣ  １２８１３株が挙げられる。
【００３０】
上記微生物として好ましくは、メシニコウィア（Metschnikowia）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、シテロマイセス(Citeromyces)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、エキソフィアラ（Exophiala）属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、ウィケルハミエラ（Wickerhamiella）属、ピキア(Pichia)属、サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属、サイトエラ(Saitoella)属、サッカロマイセス(Saccharomyces)属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属又はコリネバクテリウム(Corynebacterium)属に属するものである。
【００３１】
また、上記メシニコウィア（Metschnikowia）属に属する微生物として好ましくは、メシニコウィア  プルケリマ（Metschnikowia pulcherrima）、及びメシニコウィア  レウカウフィ（Metschnikowia reukaufii）が挙げられる。
【００３２】
クリプトコッカス（Cryptococcus）属に属する微生物として好ましくは、クリプトコッカス  フラバス（Cryptococcus flavus）、クリプトコッカス  フミコラス（Cryptococcus humicolus）、及びクリプトコッカス  ロウレンティ（Cryptococcus laurentii）が挙げられる。
【００３３】
キャンディダ（Candida）属に属する微生物として好ましくは、キャンディダインターメディア（Candida intermedia）、キャンディダ  ソラニ（Candida solani）、キャンディダ  ファマタ（Candida famata）及びキャンディダ  モリシアナ（Candida molischiana）が挙げられる。
【００３４】
フィロバシディウム（Filobasidium）属に属する微生物として好ましくは、フィロバシディウム  カプサリゲナム（Filobasidium capsuligenum）が挙げられる。
【００３５】
オガタエア（Ogataea）属に属する微生物として好ましくは、オガタエア  グリコザイマ（Ogataea glucozyma）及びオガタエア  ミヌタ（Ogataea minuta）が挙げられる。
【００３６】
シテロマイセス(Citeromyces)属に属する微生物として好ましくは、シテロマイセス  マトリテンシス（Citeromyces  matritensis）が挙げられる。
【００３７】
ロドトルラ(Rhodotorula)属に属する微生物として好ましくは、ロドトルラ  グルティニス（Rhodotorula glutinis）、ロドトルラ  オウランティアカ（Rhodotorula aurantiaca）及びロドトルラ  ムシラギノサ（Rhodotorula mucilaginosa）が挙げられる。
【００３８】
エキソフィアラ  （Exophiala）属に属する微生物として好ましくは、エキソフィアラ  デルマティティヂス（Exophiala dermatitidis）が挙げられる。
【００３９】
シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属に属する微生物として好ましくは、シゾサッカロマイセス  ポンベ（Shizosaccharomyces pombe）が挙げられる。
【００４０】
ウィケルハミエラ（Wickerhamiella）属に属する微生物として好ましくは、ウィケルハミエラ  ドメルキー（Wickerhamiella domercqiae）が挙げられる。
【００４１】
ピキア(Pichia)属に属する微生物として好ましくは、ピキア  ピタルソニ（Pichia petersonii）及びピキア  アノマラ（Pichia anomala）が挙げられる。
【００４２】
サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属に属する微生物として好ましくは、サッカロマイコプシス  フィブリゲラ(Saccharomycopsis fibuligera)が挙げられる。
【００４３】
サイトエラ(Saitoella)属に属する微生物として好ましくは、サイトエラ  コンプリカタ(Saitoella complicata) が挙げられる。
【００４４】
サッカロマイセス (Saccharomyces)属に属する微生物として好ましくは、サッカロマイセス  セルビシエ(Saccharomyces cerevisiae)が挙げられる。
【００４５】
ロドスポリジウム（Rhodosporidium）属に属する微生物として好ましくは、ロドスポリジウム  トルロイデス（Rhodosporidium toruloides）が挙げられる。
【００４６】
ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属に属する微生物として好ましくは、ブレビバクテリウム  サッカロリティカム(Brevibacterium sacchrolyticum)が挙げられる。
【００４７】
コリネバクテリウム(Corynebacterium)属に属する微生物として好ましくは、コリネバクテリウム  アンモニアジェネス(Corynebacterium ammoniagenes)、コリネバクテリウム グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)、コリネバクテリウム  アセトアシドフィラム(Corynebacterium acetoacidophilum)及びコリネバクテリウム  ビタルミニス (Corynebacterium vitaeruminis)等が挙げられる。
【００４８】
又、原料として、式（I）で表される化合物を用いて式（IＶ）で表される化合物を製造する場合には、その製造中間体として、式（II'）で表される化合物を経由する場合と、式（III'）で表される化合物を経由する場合がある。
【００４９】
ついては、式（Ｉ）で表される化合物から、あらかじめ式（II'）で表される化合物及び式（III'）で表される化合物を製造し、それを単離してから、さらに式（IＶ）で表される化合物へ誘導してもよいし、式（II'）で表される化合物及び式（III'）で表される化合物を単離することなく、そのまま式（IＶ）で表される化合物を製造してもよい。
【００５０】
加えて、原料として、式（Ｉ）で表される化合物を用いる場合には、１種の微生物を用いて式（IＶ）で表される化合物を製造してもよいし、２種以上の微生物を組み合わせて製造してもよい。
【００５１】
原料として、式（Ｉ）で表される化合物を用いる場合に特に好ましい微生物としては、
クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、ヤロウィア(Yarrowia)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、エキソフィアラ（Exophiala）属及びトリゴノプシス(Trigonopsis)属に属する微生物であり、さらに好ましくはクリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属及びロドトルラ(Rhodotorula)属に属する微生物であり、最も好ましくはオガタエア（Ogataea）属に属する微生物である。
【００５２】
原料として、式(II)で表される化合物を用いる場合に特に好ましい微生物としては、
メシニコウィア（Metschnikowia）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、シテロマイセス(Citeromyces)属、ヤロウィア(Yarrowia)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、エキソフィアラ（Exophiala）属、トリゴノプシス(Trigonopsis)属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、ウィケルハミエラ(Wickerhamiella)属、サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属、サイトエラ（Saitoella）属、ピキア(Pichia)属、サッカロマイセス(Saccharomyces)属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、アシネトバクター(Acinetobacter)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属、セルロモナス(Cellulomonas)属、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属及びクルトバクテリウム（Curtobacterium）属に属する微生物である。
【００５３】
上記微生物のうちより好ましくはメシニコウィア（Metschnikowia）属、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、オガタエア（Ogataea）属、シテロマイセス(Citeromyces)属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、ウィケルハミエラ(Wickerhamiella)属、サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属、サイトエラ（Saitoella）属、ピキア(Pichia)属、サッカロマイセス(Saccharomyces)属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属又はコリネバクテリウム(Corynebacterium)属に属する微生物であり、さらに好ましくはメシニコウィア（Metschnikowia）属、キャンディダ（Candida）属、オガタエア（Ogataea）属、ロドトルラ(Rhodotorula)属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、ウィケルハミエラ(Wickerhamiella)属、サッカロマイコプシス(Saccharomycopsis)属、サイトエラ（Saitoella）属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属又はコリネバクテリウム(Corynebacterium)属に属する微生物である。最も好ましくはメシニコウィア（Metschnikowia）属、キャンディダ（Candida）属、オガタエア（Ogataea）属、シゾサッカロマイセス(Shizosaccharomyces)属、サイトエラ（Saitoella）属、ロドスポリジウム(Rhodosporidium)属、ブレビバクテリウム(Brevibacterium)属及びコリネバクテリウム(Corynebacterium)属に属する微生物である。
【００５４】
原料として、式(III)で表される化合物を用いる場合に特に好ましい微生物としては、
クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属、フィロバシディウム（Filobasidium）属、ロドトルラ(Rhodotorula)属及びピキア（Pichia）属に属する微生物であり、より好ましくは、クリプトコッカス（Cryptococcus）属、キャンディダ（Candida）属及びロドトルラ(Rhodotorula)属に属する微生物である。
【００５５】
尚、上記微生物のうち、ＩＦＯ番号の付された微生物は（財）発酵研究所（ＩＦＯ）発行のインターネットカタログ（http://www.ifo.or.jp）に記載されており、該ＩＦＯから入手することができる。
【００５６】
ＣＢＳ番号の付された微生物はThe Centraalbureau voor Schimmelcultures（ＣＢＳ）のインターネットカタログ（http://www.cbs.knaw.nl）に記載されており、該ＣＢＳから入手することができる。
【００５７】
ＡＴＣＣ番号の付された微生物はAmerican Type Culture Collection（ATCC）のインターネットカタログ（http://www.atcc.org）に記載されており、該ＡＴＣＣから入手することができる。
【００５８】
ＩＡＭ番号の付された微生物は、IAM Culture Collection（IAM）のインターネットカタログ（http://www.iam.u-tokyo.ac.jp/misyst/ColleBOX/IAMcollection.html）に記載されており、該IAMから入手することができる。
【００５９】
ＪＣＭ番号の付された微生物はJapan Collection of Microorganism（JCM）のインターネットカタログ（http://www.jcm.riken.go.jp）に記載されており、該ＪＣＭから入手することができる。
【００６０】
ＲＩＦＹ番号の付された微生物はResearch Institute of Fermentation, Yamanashi Univ. Kofu Japan（RIFY）のカタログに記載されており、該ＲＩＦＹから入手することができる。
【００６１】
上記微生物は野生株だけでなく、ＵＶ照射やＮＴＧ処理等の通常の変異処理により得られる変異株を用いてもよい。
【００６２】
あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺伝学的手法により誘導される組換え株などのいずれの株であってもよい。
【００６３】
また、組換え株の発現株としては、もとの菌株の他、大腸菌等のバクテリアや酵母などを用いてもよく、これらの組換え株も上記微生物という概念に含まれる。
【００６４】
本発明の製造方法においては、上記微生物の１種あるいは２種以上が、菌体及び／または菌体処理物として反応に供される。
【００６５】
具体的には、上記微生物を培養して得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理したもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができる。また、これらの菌体または菌体処理物から還元能力を有する酵素画分を粗製物あるいは精製物として取り出して用いることも可能である。さらには、このようにして得られた菌体、菌体処理物、酵素画分等を通常の固定化技術を用いて、すなわち、ポリアクリルアミド、カラギーナンゲル等の担体に固定化したもの等を用いることも可能である。そこで本明細書において、「菌体及び／または該菌体処理物」の用語は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及びそれらの固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００６６】
次に、本発明の製造方法について具体的に説明する。
【００６７】
本発明の製造方法において微生物は、通常、培養して用いられるが、この培養については定法通り行うことができる。本微生物の培養の為に用いられる培地には本微生物が資化しうる炭素源、窒素源、及び無機イオン等が含まれる。炭素源としては、グルコース、フルクトース、サッカロース等の炭水化物、グリセロール、マンニトール、キシリトール等のポリアルコール類、有機酸その他が適宜使用される。窒素源としては、ＮＺアミン、トリプトース、酵母エキス、ポリペプトン、肉エキス、大豆抽出物などの有機窒素源、あるいは硫酸アンモニウム塩、硝酸アンモニウム塩などの無機窒素源、その他などが適宜使用される。無機イオンとしては、リン酸イオン、マグネシウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、モリブデンイオンその他が必要に応じ適宜使用される。更に、イノシトール、パントテン酸、ニコチン酸アミドその他のビタミン類を必要に応じ添加することは有効である。
【００６８】
培地中における上記炭素源、窒素源、無機イオン及びビタミンの量としては、菌株培養において一般的に用いられる範囲であれば特に限定されないが、炭素源及び窒素源は、それぞれ通常０．００１〜５０ｗｔ％、好ましくは０．１〜５ｗｔ％添加される。無機イオンは、通常０．０００１〜５ｗｔ％、好ましくは０．００１〜１ｗｔ％添加される。ビタミンは、通常０．００００１〜１０ｗｔ％、好ましくは０．００１〜１ｗｔ％添加される。
【００６９】
培養は、好気的条件下で、ｐＨ約３〜１１、温度約４〜５０℃の適当な範囲に制御しつつ、１〜１００時間行う。
【００７０】
反応方法としては、本微生物を培養し、それにより得られた菌体及び／または該菌体処理物を含有する水性媒体に式（I）〜（III）で表される化合物またはそれらの混合物を添加し、目的とする式（IV）で表される化合物を得る方法、培地に式（I）〜（III）で表される化合物またはそれらの混合物を添加し微生物を培養しながら反応を行う方法、培養終了後、そのままの培地に、式（I）〜（III）で表される化合物またはそれらの混合物を添加して、引き続いて反応を行う方法、あるいは、式（Ｉ）で表される化合物を上述のいずれかの方法に供し、ある程度反応が進んだところで、系内の式（I）〜（III）で表される化合物の含有量に応じ、別途培養した微生物を追添加する方法等を適宜用いることができる。
【００７１】
上記水性媒体としては、リン酸ナトリウムやリン酸カリウムなどを用いた緩衝液、及び、その緩衝液に有機溶媒や界面活性剤などを適宜加えたものを示す。
【００７２】
有機溶媒としては、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）やテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）等の水溶性溶媒や酢酸ブチルやヘキサン等の非水溶性有機溶媒などが挙げられる。界面活性剤としてはＴｗｅｅｎ８０やシュガーエステルなどが挙げられる。
【００７３】
緩衝液の濃度としては１Ｍ以下、好ましくは０．２Ｍ以下の濃度で用いるのがよい。
【００７４】
反応は温度４〜７０℃、好ましくは１５〜５０℃の範囲で行い、ｐＨは２〜９、好ましくは４〜８の範囲で行う。
【００７５】
式（I）〜（III）で表される化合物またはそれらの混合物の濃度としては、反応液に対して、０．０００１〜１０ｗｔ％、好ましくは０．００１〜５ｗｔ％の範囲が望ましく、必要ならば、式（I）〜（III）で表される化合物またはそれらの混合物は、反応の間、追補添加してもよい。
【００７６】
また、反応を促進するために補酵素、補酵素とその再生システム、あるいは炭素源を適宜添加してもよい。
【００７７】
補酵素としては、通常、β-Nicotinamide Adenine Dinucleotide, Reduced Form(以下ＮＡＤＨと略す)あるいはβ-Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate, Reduced Form（以下ＮＡＤＰＨと略す）が挙げられる。添加量としては反応基質の１００万分の１当量〜１０当量、好ましくは１万分の１当量〜１０当量である。
【００７８】
補酵素の再生システムとしては、蟻酸脱水素酵素等のβ-Nicotinamide Adenine Dinucleotide(以下ＮＡＤと略す)をＮＡＤＨに還元する能力を有する酵素とその酵素基質（蟻酸）の組み合わせやグルコース脱水素酵素等のβ-Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate（以下ＮＡＤＰと略す）をＮＡＤＰＨに還元する能力を有する酵素とその酵素基質（グルコースなど）の組み合わせ等が挙げられる。補酵素を再生するこれらの酵素は市販のものでもよいし、補酵素の再生能を有する微生物の菌体及び／または該菌体処理物でもかまわない。これらシステムの添加量は反応基質の量にあわせて適宜決定される。
【００７９】
上記反応を促進するための炭素源としては、反応に用いる菌体及び／または該菌体処理物が補酵素を再生するために利用しうる炭素源であればいずれでもかまわないが、例えばグルコース、フルクトース、サッカロース等の炭水化物、グリセロール、マンニトール、キシリトール等のポリアルコール類、有機酸その他が適宜使用される。添加量としては０．０００１〜５０ｗｔ％、好ましくは０．０１〜１０ｗｔ％である。
【００８０】
上記の通り、反応は水性媒体を用いて行われるが、式（I）〜（III）で表される化合物は、水に対しての溶解度が低いため、有機溶媒や界面活性剤等にあらかじめ溶解あるいは懸濁して添加する事により反応系中に均一に分散させる方が好ましい。
【００８１】
上記製造方法で得られる式（IV）で表される化合物は、通常、反応液から有機溶媒で抽出した後に、通常の精製方法、すなわちクロマトグラフィーや晶析技術を用いて不純物を除去することにより、精製された式（IV）で表される化合物を得ることができる。具体的には、式（IV）で表される化合物を有機溶媒などで可溶化した後に微生物などの固形分を遠心分離、フィルタープレス、限外濾過などの通常の分離装置により除去することで、式（IV）で表される化合物を含有する液体を得る。得られた液体を通常の方法で、すなわちクロマトグラフィーや晶析技術を用いることで不純物を除去し、精製された式（IV）で表される化合物を得ることができる。
【００８２】
【実施例】
以下に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、その要旨を越えない限り本発明の技術分野における通常の変更をすることができる。
【００８３】
尚、（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類（以後、「ＤＯＬＥ」と略記する）は、目的とする３Ｒ，５Ｓ体の他に異性体として、３Ｓ，５Ｒ体、３Ｒ，５Ｒ体及び３Ｓ，５Ｓ体が存在し、その構造式は以下の通りである。
【００８４】
３Ｓ，５Ｒ−ＤＯＬＥ及び３Ｒ，５Ｓ−ＤＯＬＥはシン（Ｓｙｎ）体のＤＯＬＥであり、 ３Ｓ，５Ｓ−ＤＯＬＥ及び３Ｒ，５Ｒ−ＤＯＬＥはアンチ（ａｎｔｉ）体のＤＯＬＥである。
【００８５】
実施例中、目的生成物である３Ｒ，５Ｓ体の純度をジアステレオマー過剰率及びエナンチオマー過剰率で示すことがあるが、本明細書では、ジアステレオマー過剰率を（syn-DOLE − anti-DOLE）／（syn-DOLE ＋ anti-DOLE）で、エナンチオマー過剰率を（3R,5S体 − 3S,5R体）／（3R,5S体 ＋ 3S,5R体）で示した。
【００８６】
【化２２】
0004000263.tif 000014
〈製造例１〉（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジオキソヘプト−６−エン酸エチルエステル（以後、ＤＯＸＥと略す）の合成
攪拌機、滴下ロートおよび温度計を付けた５００ｍＬの四つ口フラスコに、（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−５−ヒドロキシ−３−オキソヘプト−６−エン酸エチルエステル（以後、５−ＭＯＬＥと略す）５．０２ｇ（１１．２２ｍｍｏｌ）およびアセトン４２０ｍＬを加え攪拌する。調製されたＪｏｎｅｓ酸化剤（濃硫酸３ｍＬと酸化クロム３．３５ｇを混合させた後、水で２５ｍＬまで希釈することにより得られた試剤）１０．５ｍＬを０℃で２０分を要して滴下し、氷冷下で２時間攪拌を行った後、メタノール１０ｍＬをゆっくり加えて反応を停止した。次に反応混合液を減圧下、アセトンを留去させた後、酢酸エチル２５０ｍＬを加え、得られた溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液６０ｍＬで２回、引き続き飽和食塩水溶液６０ｍＬで２回抽出・分液した後、酢酸エチル溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲルクロマトグラフィー（溶出溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製して、標記化合物３．０３ｇ（収率：６０．６％）を得た。
【００８７】
1H-NMR(300MHz, CDCl3, δppm): 7.79-7.19(8H, m), 7.71(1H, d), 6.03(1H, d), 5.51(1H,s), 4.21(2H, q), 3.40(2H, s), 2.35-2.40(1H, m), 1.39-1.41 (2H, m), 1.28(3H, t) ,1.07-1.09(2H, m).
〈製造例２〉５Ｓ-（Ｅ）-７-［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−５−ヒドロキシ−３−オキソヘプト−６−エン酸エチルエステル（以後、５Ｓ−ＭＯＬＥと略す）の合成
減圧下加熱乾燥した後に窒素ガスを導入したシュレンク管に、（Ｓ）−２−［Ｎ−（３，５−ｄｉ−ｔｅｒｔ−ブチルサリチリデン）アミノ］−３−メチル−１−ブタノ−ル０．８７ｇ（３．３ｍｍｏｌ）、塩化メチレン５ｍｌおよびチタンテトラエトキシド０．６３ｍｌ（６．０ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で１時間攪拌混合した。該シュレンク管を−５０℃に冷却後、（Ｅ）−３−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−プロプ−２−エン−１−ア−ル０．９５ｇ（３．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン２ｍｌに溶解して滴下し、５分間攪拌した後、更にジケテン０．５１ｇ（６ｍｍｏｌ）を添加し、−５０℃を保ちながら２２時間攪拌して反応させた。得られた反応混合液を、塩化メチレン２５ｍｌと０．２４Ｍ重曹水２５ｍｌの混合溶液中に添加し、２時間、室温で激しく攪拌し２層溶液を得た。得られた２層溶液は分液し、水層については塩化メチレン１０ｍｌで抽出を２回行った。塩化メチレン層と塩化メチレン抽出液とを合わせて塩化メチレン溶液を得た。該塩化メチレン溶液を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去した後、シリカゲルクロマトグラフィ−（溶出溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝３：２）で精製して、５Ｓ-（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−５−ヒドロキシ−３−オキソヘプト−６−エン酸エチルエステル０．７５ｇを得た（光学純度：７３％ｅｅ、（Ｅ）−３−[２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル]−プロプ−２−エン−１−ア−ルに対する収率：５６％）。
【００８８】
〈実施例１〉ＤＯＸＥからのＤＯＬＥの製造
イーストエキス（Ｄｉｆｃｏ社製）５ｇ／Ｌ、ポリペプトン（日本製薬社製）５ｇ／Ｌ，麦芽エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）３ｇ／Ｌ、グルコース（日本食品加工社製）２０ｇ／Ｌの組成からなる液体培地２．５ｍＬに、表１に示した各種の菌株を接種し、３０℃で２１時間好気的に培養した。得られた培養液を１ｍＬづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に化合物（Ｉ）（式中、Ｒ＝エチル基の化合物：ＤＯＸＥ）を含む反応液を０．２５ｍＬ加え、３０℃で２０時間好気的に反応させた。
【００８９】
尚、上記反応液の組成は、ＤＯＸＥを０．３ｇ／Ｌ、グルコース（日本食品加工社製）２０ｇ／Ｌ、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（キシダ化学社製）２０ｍＬ／Ｌ、１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）である。
【００９０】
反応終了後、反応液に酢酸エチルを０．５ｍＬ加え激しく混合し、遠心分離にて有機層と水層とに分離した。有機層を別の容器に移し、溶媒を濃縮遠心機で留去し、乾固された生成物を酢酸エチル０．０１ｍＬで溶解し、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）をおこなった。ＴＬＣはシリカゲルプレート（メルク社製silica gel 60 F 254)を用い、展開溶媒はヘキサン／酢酸エチル＝１／１を用いた。
【００９１】
展開終了後、ＵＶランプにて生成物の確認をした。化合物（Ｉ）はＲｆ＝０．７６〜０．８６、化合物（II）および化合物（III）は０．５４〜０．６１、化合物（IV）（式中、Ｒ＝エチル基の化合物：ＤＯＬＥ）はＲｆ＝０．３３である。ＤＯＬＥのＴＬＣ上のスポットを掻き取りイソプロパノール０．２５ｍＬで溶出し、遠心分離後上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度およびＴＬＣ掻き取りサンプルの濃度を分析した。
【００９２】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：CHIRALCEL AD（ダイセル化学工業株式会社製）
溶離液：ヘキサン／エタノール＝９／１
流速  ：0.5ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：室温
結果を表１に示す。
【００９３】
【表１】
0004000263.tif 000015
〈実施例２〉ＤＯＸＥからのＤＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２．５ｍＬに、オガタエア  ミヌタ変種ノンファーメンタス  IFO1473を接種し、２７℃で２４時間と４８時間とそれぞれ時間を変えて好気的に培養した。得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．２ｍｌを加え完全に懸濁後、５０％（ｗ／ｖ）のグルコース溶液を２０μl、５ｇ／ＬのＤＯＸＥ（ＤＭＳＯ溶液）を５０μl添加し、よく攪拌後、２７℃で２０時間反応させた。
【００９４】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出およびＴＬＣを行い、ＤＯＬＥのＴＬＣのスポットを掻き取りイソプロパノール２００μlで溶出し、遠心分離後、上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度およびＤＯＬＥの生成量を分析した。
【００９５】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：CHIRALCEL AD（ダイセル化学工業株式会社製）
溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５
流速  ：１ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：室温
結果を表２に示す。
【００９６】
【表２】
0004000263.tif 000016
また、上記ＴＬＣを行った際に、５−ＭＯＬＥもしくは３−ＭＯＬＥに相当するＲｆのスポットがあったので、２４時間培養のものについてのみ同様に掻き取り、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて生成量の分析を行った。
【００９７】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：ＭＣＩＧＥＬ  ＣＨＰ２ＭＧＭ（４．６ｘ１５０ｍｍ）（三菱化学社製）
溶離液：メタノール／アセトニトリル／水／リン酸＝８００／１００／１００／０．５
流速  ：０．６ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：６０℃
本ＨＰＬＣ条件では５−ＭＯＬＥはリテンションタイムは４．７３であり、３−ＭＯＬＥは５．４７であったところ、５−ＭＯＬＥの上記ＴＬＣ掻き取りサンプル濃度は、２５．２ｍｇ／Ｌであり、３−ＭＯＬＥのサンプル濃度は２．２ｍｇ／Ｌであった。
ちなみに、上記分析条件におけるＤＯＬＥのリテンションタイムは４．０２であり、ＤＯＸＥは８．０２である。
【００９８】
〈実施例３〉ＤＯＸＥからのＭＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２．５ｍＬに、ロドトルラ  オウランティアカ IFO 0754及びロドトルラ  グルティニス変種ダイレネンシス IFO 0415をそれぞれ接種して、２７℃で、ロドトルラ  オウランティアカは２４時間、ロドトルラ  グルティニス変種ダイレネンシスは４８時間、それぞれ好気的に培養した。それぞれ得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．２ｍｌを加え完全に懸濁後、５０％（ｗ／ｖ）のグルコース溶液を２０μl、２ｇ／ＬのＮＡＤＰとＮＡＤ混合液を２０μl、１０ｇ／ＬのＤＯＸＥ（ＤＭＳＯ溶液）を３０μl添加し、よく攪拌後、２７℃で１２時間好気的に反応させた。
【００９９】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行い、５−ＭＯＬＥもしくは３−ＭＯＬＥに相当するＲｆのスポット部分とＤＯＬＥに相当するＲｆのスポット部分とをそれぞれ掻き取った。
【０１００】
その後、ＤＯＬＥについては、
カラム：CHIRALCEL AD（ダイセル化学工業株式会社製）
溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５
流速  ：１ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：室温
の条件で、ＭＯＬＥについては、
カラム：ＭＣＩＧＥＬ  ＣＨＰ２ＭＧＭ（４．６ｘ１５０ｍｍ）（三菱化学社製）
溶離液：メタノール／アセトニトリル／水／：リン酸＝８００／１００／１００／０．５
流速  ：  ０．６ml/min
検出  ：  ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：  ６０℃
の条件でそれぞれ高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による分析を行った。
【０１０１】
結果を表３に示す。
【０１０２】
【表３】
0004000263.tif 000017
〈実施例４〉ＤＯＸＥからの３−ＭＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２．５ｍＬに、キャンディダ  インターメディア  IFO 0761を接種して、２７℃で２４時間培養後、実施例２と同様の操作でＤＯＸＥと反応させ、反応後同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行い、スポットのＨＰＬＣ分析を行ったところ、３−ＭＯＬＥのＴＬＣ掻き取りサンプルの濃度は156.9mg/Lであった。
【０１０３】
〈実施例５〉ＤＯＸＥからの３−ＭＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２Ｌに、フィロバシディウム  カプサリゲナム（Filobasidium capsuligenum）ＩＦＯ  １１８５株を接種し、３０℃で２１時間好気的に培養した。得られた培養液を遠心分離し、菌体を集めた。１０％（ｗ／ｖ）の菌体懸濁液を１０ｍＭのリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７）を用いて作製し、この懸濁液１２ｍＬを３０φの試験管６本に取り、それぞれに１０％（ｗ／ｖ）のＤＯＸＥ（ＤＭＳＯ溶液）０．１ｍＬおよび５０％（ｗ／ｖ）のグルコース溶液０．１５ｍＬを加え、３０℃で２０時間好気的に反応させた。
【０１０４】
反応終了後、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。抽出物は、実施例１と同条件でＴＬＣを行い、化合物（III）を含む部分を掻き取り、掻き取ったシリカゲルから酢酸エチルにて抽出し、サンプルを1Ｈ−ＮＭＲにて分析した。
【０１０５】
1H-NMR(４00MHz, CDCl3, δppm):１．０２（ｄｔ，Ｊ＝６．４，３．２Ｈｚ，２Ｈ）、１．２１（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）、１．３３（ｄｔ，Ｊ＝６．４，３．２Ｈｚ，２Ｈ）、２．２６（ｍ，１Ｈ）、２．４３（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）、２．６０−２．６６（ｄｄ，Ｊ＝６．４，６．４Ｈｚ，２Ｈ）、３．３７（ｍ，１Ｈ）、４．１１（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）、４．３４−４．４１（ｍ，１Ｈ）、６．２７（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．０６−７．３６（ｍ，６Ｈ）、７．５２−７．６２（ｍ，１Ｈ）、７．６０（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ）、７．９０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）
この結果から３−ＭＯＬＥが生成したことが確認された。
【０１０６】
さらに、以下の条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度を分析したところ、化合物（III'）が光学純度は８７．３％ｅｅで得られたことがわかった。
【０１０７】
なお、本例におけるＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：CHIRALCEL AD（ダイセル化学工業株式会社製）
溶離液：ヘキサン／エタノール／トリフルオロ酢酸＝９００／１００／１
流速  ：１ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：室温
〈実施例６〉ＤＯＸＥからのＤＯＬＥ及び３Ｒ−ＭＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地が５０ｍＬ入った５００ｍｌフラスコを１２０℃で２０分滅菌した。このフラスコ８本に、オガタエア  ミヌタ変種ノンファーメンタス  IFO1473を接種し、２８℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液をイーストエキス（Ｄｉｆｃｏ社製）１０ｇ／Ｌ、ポリペプトン（日本製薬社製）１０ｇ／Ｌ，麦芽エキス（Ｄｉｆｃｏ社製）６ｇ／Ｌ、グルコース（日本食品加工社製）（別殺菌）２０ｇ／Ｌの組成からなる液体培地２０Ｌが入った３０Ｌジャーファーメンター２台に４本分づつ植菌し、２８℃で２４時間培養した。培養後、培養液を遠心分離し、菌体を集めた。
【０１０８】
この菌体を１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）９Ｌに加え完全に懸濁後、３等分し、それぞれ５Ｌジャーファーメンターに入れた。各ファーメンターにグルコース（日本食品加工社製）を５３ｇ、ＮＡＤＰＨ（オリエンタル酵母社製）を２ｇ、１．６６ｇのＤＯＸＥを１３０ｍｌのＤＭＳＯに溶かした溶液を添加し、４０℃で６時間好気的に反応させた。ＮＡＤＰＨはさらに２ｇづつ、反応１時間後に再添加した。反応後、各ファーメンターの反応液を一部取り、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて生成量を分析したところＤＯＬＥは全部で３．４３ｇ生成されていた。（収率７１％）
反応液をそれぞれ遠心分離し、沈殿物を集めた。沈殿物に各６００ｍｌのアセトニトリルを添加し、十分に攪拌後、遠心を行い上清と沈殿に分け、沈殿側にはさらに２００ｍｌのアセトニトリル２００ｍｌで再懸濁と遠心を行った。上清をすべてあわせてエバポレーターにて濃縮を行い、濃縮後、酢酸エチル６００ｍｌを加え溶解後水５０ｍｌで２回洗浄した。
【０１０９】
酢酸エチル層を濃縮し、シリカゲルクロマトによる精製を行った。シリカゲル４００ｍｌ分をカラムに入れ、ヘキサン：酢酸エチル＝２：１の液で予め平衡化しておいた。濃縮されたサンプルをアプライしヘキサン：酢酸エチル＝２：１の展開溶媒を２Ｌ流した後、ヘキサン：酢酸エチル＝３：２に展開溶媒を変更しさらに２Ｌ流しながら溶出させた。
【０１１０】
溶出された液は２００ｍｌづつの画分とし（全２０）、各画分をＴＬＣで確認した。ＤＯＬＥが検出された画分を集め濃縮したところ３．４ｇのオイル状のＤＯＬＥが得られ、純度換算したところ２．５ｇのＤＯＬＥが得られた。
【０１１１】
光学純度を上記実施例２に記載の条件でＨＰＬＣ分析した所、面積比で３Ｓ，５Ｒ体：３Ｒ，５Ｒ体：３Ｒ，５Ｓ体：３Ｓ，５Ｓ体＝０．３：０．２：９８．９：０．６であった。（98.4%de、99.4%ee）
一方、カラム精製の画分で３−ＭＯＬＥが主成分として検出された所を集めたところ、１．５ｇのオイル状のものが得られたので、再度シリカゲルカラムにかけ、再精製したところ、０．７ｇの３Ｒ−ＭＯＬＥが得られた。
【０１１２】
光学純度を実施例２と同様に分析したところ９８％eeであった。
【０１１３】
〈実施例７〉５−ＭＯＬＥからのＤＯＬＥの製造
表４に示した各種の菌株を用い、反応基質としてＤＯＸＥの代わりにＲ−５ＭＯＬＥとＳ−５ＭＯＬＥが１：１の比で含まれる５−ＭＯＬＥを用いた以外は実施例１と同様の操作で反応を行った。
【０１１４】
ここで、生成物のＤＯＬＥのうち、３Ｓ，５Ｒ体及び３Ｒ，５Ｒ体は５Ｒ−ＭＯＬＥから生成され、３Ｒ，５Ｓ体及び３Ｓ，５Ｓ体は５Ｓ−ＭＯＬＥから生成される。
【０１１５】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行った後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行った。
【０１１６】
結果を表４に示す。
【０１１７】
【表４】
0004000263.tif 000018
〈実施例８〉５−ＭＯＬＥからのＤＯＬＥの製造
イーストエキス（Ｄｉｆｃｏ社製）１０ｇ／Ｌ、ポリペプトン（日本製薬社製）８ｇ／Ｌ，大豆エキス  ハイニュートＳＭＳ（不二製油社製）７ｇ／Ｌ、グルコース（日本食品加工社製）５ｇ／Ｌ、グリセロール（キシダ化学社製）１０ｇ／Ｌ、リン酸一カリウム（和光純薬社製）１ｇ／Ｌ、リン酸２カリウム（和光純薬社製）３ｇ／Ｌ、硫酸マグネシウム（キシダ化学社製）０．５ｇ／Ｌ、塩化マンガン（和光純薬社製）１０ｍｇ／Ｌの組成からなる液体培地２．５ｍＬに、表５に示した各種の菌株を接種し、３０℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．２ｍｌを加え完全に懸濁後、５０％（ｗ／ｖ）のグルコース溶液を１０μl、２ｇ／ＬのＮＡＤＰ（オリエンタル酵母社製）とＮＡＤ（オリエンタル酵母社製）の混合液を１０μl、Ｒ−５ＭＯＬＥとＳ−５ＭＯＬＥが１：１の比で含まれる５−ＭＯＬＥの５ｇ／Ｌ  ＤＭＳＯ溶液を１０μl添加し、よく攪拌後、３０℃で２０時間好気的に反応させた。
【０１１８】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行った。ＤＯＬＥのＴＬＣのスポットを掻き取りイソプロパノール２００μlで溶出し、遠心分離後上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量を分析した。
【０１１９】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：CHIRALCEL AD（ダイセル化学工業株式会社製）
溶離液：ヘキサン／エタノール＝９５／５
流速  ：１ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：室温
結果を表５に示す。
【０１２０】
【表５】
0004000263.tif 000019
〈実施例９〉５−ＭＯＬＥからのＤＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２．５ｍＬに、表６に示した各種の菌株を接種し、２７℃で４８時間好気的に培養した。得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．２ｍｌを加え完全に懸濁後、５０％（ｗ／ｖ）のグルコース溶液を２０μl、Ｒ−５ＭＯＬＥとＳ−５ＭＯＬＥが１：１の比で含まれる５−ＭＯＬＥの５ｇ／Ｌ  ＤＭＳＯ溶液を５０μl添加し、よく攪拌後、２７℃で２０時間反応させた。
【０１２１】
反応終了後、実施例８と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行った後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行った。
【０１２２】
結果を表６に示す。
【０１２３】
【表６】
0004000263.tif 000020
〈実施例１０〉５−ＭＯＬＥからのＤＯＬＥの製造
酵母エキス（ＤＩｆｃｏ社製）１０ｇ／Ｌ、ニュートリエントブロス（ＤＩｆｃｏ社製）５ｇ／Ｌ，大豆エキス  ハイニュートＳＭＳ（不二製油社製）３ｇ／Ｌ、グルコース（日本食品加工社製）１５ｇ／Ｌの組成からなる液体培地２ｍＬに、表７に示した各種の菌株を接種し、３０℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に反応基質としてＤＯＸＥの代わりにＲ−５ＭＯＬＥとＳ−５ＭＯＬＥが１：１の比で含まれる５−ＭＯＬＥを用いた以外は実施例１と同様の操作で反応を行った。
【０１２４】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行った後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行った。結果を表７に示す。
【０１２５】
【表７】
0004000263.tif 000021
〈実施例１１〉５Ｓ−ＭＯＬＥからのＤＯＬＥの製造
表８に示した各種の菌株を実施例１と同様に培養を行い、得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体にグルコース（日本食品加工社製）を５ｇ／Ｌ、ＮＡＤＰ（オリエンタル酵母社製）を６０μｇ／Ｌ、グルコースデヒドロゲナーゼ（アマノ製薬社製：７３unit/mg）を２０μｇ／Ｌ含む１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．５）を０．２５ｍｌ加え、よく懸濁した。
この懸濁液に製造例２で得られた光学純度が７３．０％eeの５Ｓ−ＭＯＬＥを１０ｇ／Ｌ含むＤＭＳＯを１０μl添加し、３０℃で２０時間好気的に反応させた。
【０１２６】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行った後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行った。
【０１２７】
結果を表８に示す。
【０１２８】
【表８】
0004000263.tif 000022
【０１２９】
反応終了後、実施例８と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行い、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行った。
【０１３０】
結果を表９に示す。
【０１３１】
【表９】
0004000263.tif 000023
〈実施例１３〉３Ｒ−ＭＯＬＥからのＤＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２．５ｍＬに、表１０に示した各種の菌株を接種し、２７℃で４８時間好気的に培養した。得られた培養液を１ｍｌづつとり遠心分離し、菌体を集めた。この菌体に１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．２ｍｌを加え完全に懸濁後、２ｇ／ＬのＮＡＤＰ（オリエンタル酵母社製）とＮＡＤ（オリエンタル酵母社製）混合液を１０μl、イソプロパノールを２０μl、実施例６で得られた３Ｒ−ＭＯＬＥの５ｇ／Ｌ  ＤＭＳＯ溶液を２０μl添加し、よく攪拌後、２７℃で２０時間反応させた。
【０１３２】
反応終了後、実施例８と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行い、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行った。
【０１３３】
結果を表１０に示す。
【０１３４】
【表１０】
0004000263.tif 000024
〈実施例１４〉ＤＯＸＥからのＤＯＬＥの製造
実施例１と同組成の液体培地２．５ｍＬに、ロドトルラ  グルティニス変種ダイレネンシス IFO 0415を接種し、２７℃で４８時間好気的に培養した。得られた培養液１ｍｌを遠心分離し、菌体を集めた。
【０１３５】
また、実施例８と同組成の液体培地２．５ｍＬに、コリネバクテリウム  グルタミカムATCC13826を接種し、３０℃で２４時間好気的に培養した。得られた培養液１ｍｌを遠心分離し、菌体を集めた。
【０１３６】
両者をあわせ１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．０）０．２ｍｌを加え完全に懸濁後、２ｇ／ＬのＮＡＤＰ（オリエンタル酵母社製）とＮＡＤ（オリエンタル酵母社製）混合液を１０μl、５０％（ｗ／ｖ）のグルコース溶液を１０μl、２０ｇ／ＬのＤＯＸＥ（ＤＭＳＯ溶液）を３０μl添加し、よく攪拌後、２７℃で１８時間反応させた。
【０１３７】
反応終了後、実施例１と同様に酢酸エチル抽出及びＴＬＣを行った後、実施例８と同様の条件で、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度および生成量の分析を行ったところ、本反応では３Ｒ，５Ｓ−ＤＯＬＥのみが得られ、ＴＬＣ掻き取りサンプルの濃度は９．５ｍｇ／Ｌであった。
【０１３８】
〈実施例１５〉ＤＯＸＥからのＤＣＯＯＨの製造
表１１に示した各種の菌株を実施例１と同様に培養と反応を行い、ＴＬＣ上の化合物（IV）（式中、Ｒ＝水素の化合物：以下、ＤＣＯＯＨと略す）に相当するスポット（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ＝０）を掻き取り、イソプロパノール０．２５ｍＬで溶出し、遠心分離後、上清を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて分析した。
【０１３９】
ＨＰＬＣの条件は以下の通りである。
カラム：CHIRALCEL AD（ダイセル化学工業株式会社製）
溶離液：ヘキサン／エタノール／トリフルオロ酢酸＝９００／１００／１
流速  ：１ml/min
検出  ：ＵＶ２５４ｎｍ
温度  ：室温
結果を表１１に示す。
【０１４０】
【表１１】
0004000263.tif 000025
〈実施例１６〉５−ＭＯＬＥからのＤＣＯＯＨの製造
表１２に示した各種の菌株を実施例１と同様に培養を行い、ＤＯＸＥの代わりに５−ＭＯＬＥを用いて同様に反応を行い、ＴＬＣ上の化合物（IV）（式中、Ｒ＝水素の化合物：以下、ＤＣＯＯＨと略す）に相当するスポット（展開溶媒；ヘキサン：酢酸エチル＝１：１、Ｒｆ＝０）を掻き取り、イソプロパノール０．２５ｍＬで溶出し、遠心分離後、上清を実施例１５と同様の条件で高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて光学純度を分析した。結果を表１２に示す。
【０１４１】
【表１２】
0004000263.tif 000026
【０１４２】
【発明の効果】
本発明によれば、３Ｒ，５Ｓ−（Ｅ）−７−［２−シクロプロピル−４−（４−フルオロフェニル）−キノリン−３−イル］−３，５−ジヒドロキシヘプト−６−エン酸エステル類を光学純度よく、かつ、効率的に製造することができる。