(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)の化合物の製造方法であって、
【化１】
0003884492.tif 000048
式中、
ｎは、１〜150の数である；
Ｌは、オキシ、スルファニジルまたはイミノである；
BBは、互いに独立して、下記のとおりである；
【化２】
0003884492.tif 000049
および
Ｅは、OHまたはNH2である、そして
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニルまたはC2〜C6−アルキニルである；または
BBは、天然ヌクレオシド塩基の他に、また５−（ヒドロキシメチル）ウリジン、５−アミノウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、イノシン、８−アザ−７−デアザアデノシン、ツベルシジン、ネブラリン、キサントシン、２−アミノアデノシン、エテノアデノシン、７−デアザグアノシン、O4−メチルチミジン、N6−メチルアデノシン、O6−メチルグアノシンまたはピリドピリミジンヌクレオシドのような他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる;
Ｗは、互いに独立して、酸素または硫黄である；
Ｔは、それぞれ独立して、水素、−OCH3、−O−CH2CH3、−O−CH2−CH＝CH2またはOHであるが、少なくとも１つはOHである；
Y′は、オキシ、スルファニジール、イミノ、(CH2)kまたはN(CH2)kであり、ここにｋは、１から１８の整数である；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、ＮＨＲ17、NR17R18または式（OH2CH)CO(CH2)C′CH2R20のラジカルであり、ここに、
R17は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、−(CH2)d−〔NH(CH2-)d〕d′−NR19R19であり、式中、
ｄは、２から６の整数である、そして
ｄ′は、０から６の整数である、そして
R18は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは、NR17R18の場合、R17と窒素原子が一緒になって５〜６員の、Ｏ、ＳおよびNからなる系列からの他のヘテロ原子を付加的に含むことのできるヘテロ環になる；
R19は、互いに独立して、水素またはC1〜C6−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシ−C1〜C6−アルキルである；
ｃは、１から100の整数である；
ｃ′ は、０から１８の整数である：
R20は、水素またはヒドロキシル、アミノ、NHR17、COOH、CONH2、COOR21またはフッ素、塩素または臭素のような官能基であり、R21はC1〜C4−アルキルである；
C1およびC2は、同一または異なり、そして水素、C1〜C18−アルキル、C2〜C18−アルケニル、C2〜C18−アルキニル、C1〜C18−アルキルカルボニル、C2〜C18−アルケニルカルボニル、C2〜C18−アルキニルカルボニル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは式(II)のラジカルである；
【化３】
0003884492.tif 000050
ここに、
Ｗは、前記のとおりである；
ＱおよびQ′は、互いに独立して、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C22−アルコキシ、−O−(CH2)b−NR15R16；
ｂは、１から６、そして
R15およびR16は、互いに独立して水素、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシであり、ここにまたアリールはヘテロアリールでもあり、そしてアリールはカルボキシル、アミノ、ニトロ、C1〜C4−アルキルアミノ、C1〜C6−アルコキシ、ヒドロキシル、フッ素、塩素、臭素およびシアノからなる系列からの同一または異なるラジカルの１、２または３で置換されていてもよく、またはC1〜C18−アルキルメルカプト、NHR17、NR17R18(ここにR17およびR18は前記のとおり)、または窒素原子と一緒になって３〜６員環になる；もしくは
ＱおよびQ′は、式(III)のラジカルである；
【化４】
0003884492.tif 000051
ｇおよびg′＝０または１、
ｈ＝０から１０、
Ｇは、C2〜C12−アルキレン、C6〜C14−アリール−ジ−C1〜C8−アルキレン、C6〜C18−アリーレンであり、これらはフッ素、塩素、臭素、アミノ、ヒドロキシル、C1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルコキシ−カルボニル、C6〜C14−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C18−アルキルまたはC6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシにより１ないし３回置換されていてもよい、または式(CH2CH2N′)iCH2CH2または(CH2N′)iCH2の基である、ここに
ｉは、１から１１の整数であり、そして
N′は、オキシ、スルファニジール、イミノまたはメチレンであり、そして
Ｗ、ＵおよびY′は、前記のとおりである；または
ＱおよびQ′は、親油性のラジカル、天然担体システムを利用する共役体、およびオリゴヌクレオチドの受容体を介したエンドサイトーシスを誘導する対応した受容体のペプチドからなる細胞内取り込みに有利な基であるか、またはDNAプローブの標識として作用する標識基であるか、または架橋もしくは開裂を伴って、オリゴヌクレオチド類似体とのハイブリッド化によって標的核酸を攻撃する基であり、ここにまた式(Ｉ)における核酸配列は、１回またはそれ以上、式(III)の連鎖剤により分断することができ、そして共役体をリン酸ジエステルまたはリン酸チオジエステルバックボーンを介して形成することができる；
ａ) 式(IV)の化合物の３′−および５′−位を保護する工程：
【化５】
0003884492.tif 000052
式中
Ｂは、下記のとおりである；
【化６】
0003884492.tif 000053
R3は、それぞれの場合において、互いに独立して次の基である；
【化７】
0003884492.tif 000054
R4は、水素または２−（ｐ−ニトロフェニル)エチルである；
R5は、下記のとおりである；
【化８】
0003884492.tif 000055
R6は、OH、NH2、次の基である；
【化９】
0003884492.tif 000056
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニルである；または
Ｂは、天然ヌクレオシド塩基の他に、ヒドロキシル基のためのパラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびパラ−(ｔ−ブチル)ベンゾイル基ならびにアミノ基のためのベンゾイル、パラ−(ｔ−ブチル)ベンゾイル、パラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリール、パラ−(ターシャリーブチル)フェニルアセチル基のような、適当な公知の保護基によりアミノ基またはヒドロキシル基が保護された他の修飾されたヌクレオシド塩基である；
ｂ) 保護された化合物と式(V)のビニルエーテルをそれに続き反応させる工程:
【化１０】
0003884492.tif 000057
式中、
ｒは、１または２である、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、ここにアリールは、1回またはそれ以上、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)NH2、O−C(O)O−C1〜C18−アルキル、O−C(O)O−C6〜C12−アリール、O−C(O)−C1〜C18−アルキル、O−C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1＝C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されてもよい)により置換されてもよい；
ｒ＝２の場合、ＸはまたCN、Ｓ−フェニル、SO2−フェニル、Ｎ−フタルイミドまたはNO2である；
そして、その後に検査を行う。
ｃ) ５′および３′保護基を再び取り外す工程：
ｄ) R2＝ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシルまたはトリチルを有する５′保護基を導入し、式(VI)の化合物にする工程：
【化１１】
0003884492.tif 000058
式中、
R1は、−〔CH2〕r−Xであり、
ｒは、１または２、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、アリールは1回またはそれ以上、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)NH2、O−C(O)O−C1〜C18−アルキル、O−C(O)O−C6〜C12−アリール、O−C(O)−C1〜C18−アルキル、O−C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1＝C6〜C12−アリール、これは1ないし3回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい)により置換さ
れてもよい；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、Ｓ−フェニル、SO2−フェニル、Ｎ−フタルイミドまたはNO2である；
R2は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシルまたはトリチルである；
Ｂは、前記のとおりである；
ｅ) 式(VI)の化合物と式(VII）の化合物を反応させる工程：
【化１２】
0003884492.tif 000059
式中、
Z′は、OR9またはC1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルである；
R7およびR8は、同一または異なり、そしてC1〜C8−アルキルまたはC5〜C12−シクロアルキル、ベンジルまたはフェニル、またはそれらが結合する窒素原子と一緒になって、さらにヘテロ原子および置換基を有していてもよい飽和または不飽和のヘテロ環である；および
R9は、次の置換基
【化１３】
0003884492.tif 000060
またはベンジル基であり、これは置換されていないか、または１ないし４回環置換され、ここで置換基は互いに独立してフッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である；
Ｚは、塩素または臭素または式NR7R8のラジカルであり、R7およびR8は前記のとおりである；
C1〜C4−トリアルキルアミンによる塩基の存在下に、またはＺが、式NR7R8のラジカルである場合、そのときは式〔HNR12R13R14〕(+)A(-)の化合物(ここにR12、R13、R14は、同一または異なって、C1〜C4−アルキル基であり、Ａ＝フッ素、塩素、臭素)の存在下、またはテトラゾールの存在下、式(VIII)の化合物を得る。
【化１４】
0003884492.tif 000061
式中、R1、R2、R7、R8、Z′およびBは、前記のとおりである；
ｆ) ｅ)工程により得られた化合物を、１ないし１０当量のコハク酸無水物のような連鎖剤と、好適な有機溶媒中、反応させ、式(IX)の化合物を得る工程：
【化１５】
0003884492.tif 000062
ここに、R1、R2およびBは、前記のとおりであり、その後に検査を行い、ここで3′位のコハク酸残基は、合成に用いた高分子支持体に連鎖剤として作用し、そしてコハク酸連鎖剤の代替として、他の連鎖剤を用いることも可能である。
ｇ) 式(X)の化合物を固体支持体に結合する工程：
【化１６】
0003884492.tif 000063
式中、
R2およびBは、前記のとおりである；
Ｖは、水素、O−C1〜C18−アルキル、O−C1〜C18−アルケニル、O−C1〜C18−アルキニルまたはO−CH(CH3)−OR1(式中R1は前記のとおり)である；
ｈ) ５′保護基を取り外す工程；
ｉ) 得られた化合物と式(XI)の化合物を反応させる工程：
【化１７】
0003884492.tif 000064
式中、R2、R7、R8、Ｖ、Z′およびBは、前記のとおりである；
ｊ) 得られた化合物を酸化する工程：
ｋ) 所望の鎖長になるまで反応工程ｈ)〜ｊ)を繰り返す工程：
ｌ) オリゴヌクレオチドを支持体から取り外す工程、およびリン酸塩および核塩基の保護基を取り外し、式(XII)の化合物を得る工程：
【化１８】
0003884492.tif 000065
式中、ｎ、Ｌ、BB、Ｗ、Ｖ、Y′、Ｕ、C1およびC2は、前記のとおりである；
ｍ) 式(XII)の化合物をインキュベートする工程：
酸性範囲において、好適な有機溶媒中、０.５〜１０ｈ、１〜３０％のｐ−トルエンスルホン酸溶液とインキュベートし、それに続く中和、および溶媒の蒸発後および精製後、式(I)の化合物を得る、
ことからなることを特徴とする方法。
【請求項２】
式(VI)の化合物。
【化１９】
0003884492.tif 000066
式中、
R1は、−〔CH2〕r−Xであり、
ｒは、１または２、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、アリールは１回またはそれ以上、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)NH2、O−C(O)O−C1〜C18−アルキル、O−C(O)O−C6〜C12−アリール、O−C(O)−C1〜C18−アルキル、O−C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1=C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい)により置換されてもよい；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、Ｓ−フェニル、SO2−フェニル、Ｎ−フタルイミドまたはNO2である；
R2は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシル、トリチルである；
Ｂは、下記のとおりである；
【化２０】
0003884492.tif 000067
ここに、
R3は、それぞれの場合において、互いに独立して次の基である；
【化２１】
0003884492.tif 000068
R4は、水素または２−（ｐ−ニトロフェニル)エチルである；
R5は、下記のとおりである；
【化２２】
0003884492.tif 000069
R6は、OH、NH2、次の基である；
【化２３】
0003884492.tif 000070
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニルである；もしくは
Ｂは、天然ヌクレオシド塩基の他に、ヒドロキシル基のためのパラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびパラ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル基ならびにアミノ基のためのベンゾイル、パラ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル、パラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリール、パラ−(ターシャリーブチル）フェニルアセチル基のような適当な公知の保護基によりアミノ基またはヒドロキシル基が保護された他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる。
【請求項３】
R1は、−〔CH2〕r−Xであり、ここに、
ｒ＝１の場合、ＸがC6〜C12−アリールであり、ここにアリールは、１ないし３回、フッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1=C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい）により置換されていてもよい、
ｒ＝２の場合、Ｘが、４−ニトロフェニルであり；
R2が、ジメトキシトリチルである；
請求項２記載の式(VI)の化合物。
【請求項４】
式(VIII)の化合物。
【化２４】
0003884492.tif 000071
式中、
R1は、−〔CH2〕r−Xであり、
ｒは、１または２、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、アリールは1回またはそれ以上、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)NH2、O−C(O)O−C1〜C18−アルキル、O−C(O)O−C6〜C12−アリール、O−C(O)−C1〜C18−アルキル、O−C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1=C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい)により置換されることができる；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、Ｓ−フェニル、SO2−フェニル、Ｎ−フタルイミドまたはNO2でもある；
R2は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシル、トリチルである；
Ｚ′は、OR9またはC1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルである；
R7およびR8は、同一または異なり、そしてC1〜C8−アルキル、C5〜C12−シクロアルキル、ベンジルもしくはフェニル、またはそれらが結合する窒素原子と一緒になって、さらにヘテロ原子および置換基を有していてもよい飽和または不飽和のヘテロ環である；および
R9は、次の基
【化２５】
0003884492.tif 000072
またはベンジル基であり、これは置換されていないか、または１ないし４回環置換され、ここで置換基は互いに独立してフッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である；
Ｂは、下記のとおりである；
【化２６】
0003884492.tif 000073
ここに、R3は、それぞれの場合において、互いに独立して次の基である；
【化２７】
0003884492.tif 000074
R4は、水素または２−（ｐ−ニトロフェニル)エチルである；
R5は、下記のとおりである；
【化２８】
0003884492.tif 000075
R6は、OH、NH2、次の基である；
【化２９】
0003884492.tif 000076
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニルである；または
Ｂは、天然ヌクレオシド塩基の他に、ヒドロキシル基のためのパラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびパラ−（ｔ−ブチル)ベンゾイル基ならびにアミノ基のためのベンゾイル、パラ−（t−ブチル)ベンゾイル、パラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリール、パラ−(ターシャリーブチル)フェニルアセチル基のような適当な公知の保護基によりアミノ基またはヒドロキシル基が保護された他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる。
【請求項５】
R1が、−〔CH2〕r−Xであり、
ｒ＝１の場合、Ｘが、C6〜C12−アリールであり、アリールは１ないし３回、フッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1＝C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい)により置
換されることができる；
ｒ＝２の場合、Ｘが、４−ニトロフェニルである；
R2が、ジメトキシトリチルである；
Ｚ′が、OR9である；
R7およびR8が、同一または異なり、そしてイソプロピル、C5〜C8−シクロアルキル、ベンジルまたはフェニル、またはそれらが結合する窒素原子と一緒になって、さらにモルホリンのように、ヘテロ原子を有していてもよいし、およびOC(O)−C1〜C4−アルキルエステルのように、置換基を有してもよい飽和または不飽和のヘテロ環である；
および
Ｙが、水素、CH3または１−プロピニルである；
請求項４記載の式(VIII)の化合物。
【請求項６】
Ｂが、下記である請求項２〜５のいずれかに記載の式(VI)および式(VIII)の化合物。
【化３０】
0003884492.tif 000077
【請求項７】
式(XII)の化合物。
【化３１】
0003884492.tif 000078
式中、
ｎは、１〜150の数である；
Ｌは、オキシ、スルファニジルまたはイミノである；
BBは、互いに独立して、下記のとおりである；
【化３２】
0003884492.tif 000079
Ｅは、OHまたはNH2である、そして
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニルである；または
BBは、天然ヌクレオシド塩基の他、また５−（ヒドロキシメチル）ウリジン、5−アミノウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、イノシン、８−アザ−７−デアザアデノシン、ツベルシジン、ネブラリン、キサントシン、２−アミノアデノシン、エテノアデノシン、７−デアザグアノシン、O4−メチルチミジン、N6−メチルアデノシン、O6−メチルグアノシンまたはピリドピリミジンヌクレオシドのような他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる；
Ｗは、互いに独立して、酸素または硫黄である；
Ｖは、互いに独立して、水素、−O−C1〜C18−アルキル、−O−C1〜C18−アルケニル、−O−C1〜C18−アルキニルまたは−O−CH(CH3)−OR1(式中R1は前記のとおり)であるが、Ｖの少なくとも１つは、−O−CH(CH3)−OR1である；
Ｙ′は、オキシ、スルファニジール、イミノ、(CH2)kまたはN(CH2)kであり、ここにｋは、１から１８の整数である；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、NHR17、NR17R18または式(OCH2CH2)CO(CH2)C′CH2R20のラジカルである；ここに
R17は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、−(CH2)d−〔NH(CH2-)d〕d′−NHR19R19であり；式中、
ｄは、２から６の整数である、そして
ｄ′は、０から６の整数である、そして
R18は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは、NR17R18の場合、R17と窒素原子が一緒になって５〜６員の、Ｏ、ＳおよびＮからなる系列からの他のヘテロ原子を付加的に含むことのできるヘテロ環になる；
R19は、互いに独立して、水素またはC1〜C6−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシ−C1〜C6−アルキルである；
ｃは、１から100の整数である；
ｃ′は、０から１８の整数である：
R20は、水素またはヒドロキシル、アミノ、NHR17、COOH、CONH2、COOR21またはフッ素、塩素または臭素のような官能基であり、R21はC1〜C4−アルキルである；
C1およびC2は、同一または異なり、そして水素、C1〜C18−アルキル、C2〜C18−アルケニル、C2〜C18−アルキニル、C1〜C18−アルキルカルボニル、C2〜C18−アルケニルカルボニル、C2〜C18−アルキニルカルボニル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは式(II)のラジカルである；
【化３３】
0003884492.tif 000080
ここに、
Ｗは、前記のとおりである；
ＱおよびＱ′は、互いに独立して、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C22−アルコキシ、−O−(CH2)b−NR15R16；
ｂは、１から６、そして
R15およびR16は、互いに独立して水素、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシであり、ここにまたアリールはヘテロアリールでもあり、そしてアリールはカルボキシル、アミノ、ニトロ、C1〜C4−アルキルアミノ、C1〜C6−アルコキシ、ヒドロキシル、フッ素、塩素、臭素およびシアノからなる系列からの同一または異なるラジカルの１、２または３で置換されていてもよく、またはC1〜C18−アルキルメルカプト、NHR17、NR17R18であり、ここにR17およびR18は前記のとおりであるかまたは窒素原子と一緒になって３〜６員環になる；または
ＱおよびＱ′は、式(III)のラジカルである；
【化３４】
0003884492.tif 000081
ｇおよびｇ′＝０または１、
ｈ＝０から１０、
Ｇは、C2〜C12−アルキレン、C6〜C14−アリール−ジ−C1〜C8−アルキレン、C6〜C18−アリーレンであり、これらはフッ素、塩素、臭素、アミノ、ヒドロキシル、C1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルコキシ−カルボニル、C6〜C14−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C18−アルキルもしくはC6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシにより１ないし３回置換されていてもよく、または式（CH2CH2N′)iCH2CH2もしくは（CH2N′)iCH2の基である、ここに
ｉは、１から１１の整数であり、そして
Ｎ′は、オキシ、スルファニジール、イミノまたはメチレンである、
そして
Ｗ、ＵおよびＹ′は、前記のとおりである；または
Ｑ およびＱ′は、親油性のラジカル、天然担体システムを利用する共役体、およびオリゴヌクレオチドの受容体を介したエンドサイトーシスを誘導する対応した受容体のペプチドからなる細胞内取り込みに有利な基であるか、またはDNA試験の標識として作用する標識基であるか、または架橋もしくは開裂を伴って、オリゴヌクレオチド類似体とのハイブリッド化によって標的核酸を攻撃する基であり、ここにまた式(XII)における核酸配列は、１回またはそれ以上、式(III)の連鎖剤により分断することができ、そして共役体をリン酸ジエステルまたはリン酸チオジエステルバックボーンを介して形成することができる。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
モノヌクレオチドの化学重縮合は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）の重要な製造方法である。
【０００２】
ＤＮＡまたはＲＮＡの化学合成における基本的な問題は、ヌクレオシド塩基および糖残基中のアミノ基およびヒドロキシル基の好適な保護基を見出すことである。これらの保護基は、一方では、重縮合反応の条件下で、すなわち反応中、安定でなければならず、他方では、リン酸ジエステル連鎖を再切断することなく反応完結時に再び取り外しできるために十分に不安定でなければならない[H. G. Khorana; Pure Appl. Chem. 17(1968) 349]。
【０００３】
リボース糖残基が２個のヒドロキシル基を有し、両方共に保護されなければならないので、ＲＮＡの化学合成には特別の問題が存在する。５′−ヒドロキシル基の保護基は、その上選択的に、すなわち２′−ヒドロキシル基の保護基を取り外すことなしに、各重縮合段階の前に再び取り外されなければならない。対照的に２′−ヒドロキシル基の保護基は、特にリン酸ジエステル連鎖の切断または異性化を誘起しない条件下で、RNA合成の完結時にのみ取り外されるべきである[C. B. Reese,Nucleic Acids and Molecular Biology, Vol.3, F. Eckstein & D. M. Lilley eds., Springer-Verlag Berlin-Heidelberg 1989, pages 164-181]。
【０００４】
そのために固体支持物質上での有効なオリゴリボヌクレオチド合成は、オリゴリボヌクレオチド鎖の組み立てに良く機能するホスホルアミダイト法から、その有効性においてなお大きく異なっている。 全体像は、C. B. Reese [Nucleic Acids and Molecular Biology, Vol.3, F. Eckstein & D. M.Lilley eds., Springer-Verlag Berlin-Heidelberg 1989, pages 164-181]、S. L. Beaucage and R. P. Iyer [Tetrahedron 48(1992) 2223-2311]、E. Ohtsuka, S. Iwai [inSynthesis and Application of DNA and RNA, S. A. Narang, Ed., Academic Press, London 1987, pages 115-136]、およびO. Sakatsume等 [Tetra-hedron 47(1991) 8717-8728]による論文に与えられている。
【０００５】
実際上使用されたのは、特にアグリコンのアシル保護による５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−２′−Ｏ−tert−ブチルジメチルシリル−リボ−３′−Ｏ−(β−シアノエチル, Ｎ−ジイソプロピル)ホスホルアミダイトであり、これはN. Usman等 [J. Am. Soc. 109(1987) 7845]、K. K. Ogilvie等 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85(1988) 5764]による研究から導き出す。これらはまた購入することができる。しかしながら、それと共に実行したオリゴリボヌクレオチド合成は、決して満足ではなく、それで新規な解決策を探求することが必要である [M. H. Lyttle等: J. Org. Chem. 56(1991)4608, D. Gaspa-rutto等: Nucleosides & Nucleotides 9(1990) 1087, T. Wu等: J. Org. Chem.55(1990) 4717]。上述の引例に詳述されたリボース糖残基の２′−および５′−ヒドロキシル基のための他の保護基の組み合わせの全ての系統は、同様に所望の成功を収めていない。
【０００６】
２′−Ｏ−tert−ブチルジメチルシリル保護基の他にも、いくつかのアセタール基が２′位の保護基として使用されている。たとえば、Beaucage, Tetrahedron 48(1992) 223に要約されたReeseによる合成研究は、２′−ＯＨ基上の１−（２−クロロフェニル）−４−メトキシピペラジン−４−イル(Cpmp)または１−（２−フロロフェニル)−４−メトキシピペラジン−４−イル(Fpmp)ラジカルのようなアセタール基を、５′−Ｏ−ジメトキシトリチルラジカルや５′−ピクシルラジカル（９−（９−フェニル)キサンテニルエーテル)と、アセタール基が最終的に攻撃される前に後者の基が完全に弱酸で取り外せるので結合できることを、最近示している。これらのアグリコンのアシル保護を有する５′−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｏ−Fpmp−リボ−３′−(β−シアノエチル, N−ジイソプロピル)ホスホルアミダイトもまた購入できる。
【０００７】
シリル保護基と比較されるセタール保護基の大きな優位性の一つは、彼らを副反応なしに選択的に２′位に導入できることである。他の優位性は、２′位の増加により空間が満たされる時に減少する結合が、アセタールをより有効にすることである。このようにして、たとえば、２′−Ｏ−テトラヒドロピラニル（２′−Ｏ−Ｔhp）で保護されたリボヌクレオチド単量体の結合は、特に立体的に要求のある２′−OTBDMS保護基を有するそれよりもさらに有効である。
【０００８】
２′−Ｏ−１−（２−クロロエトキシ)エチル保護基(Cee)の導入についてのSakatsume等による研究[Tetra-hedron 47(1991) 8717-8728]は、アセタール保護基と５′−Ｏ−ジメトキシトリチルラジカルおよび５′−ピクシルラジカルとをかなり正確に調和させるのが賢明であることを示す。
【０００９】
驚くべきことに、ＲＮＡ合成に関して今までに明らかになっているそれらに優位性のある２′−ヒドロキシル基のための保護基を、我々は見出すことができた。この特徴は、特にブロックを積み上げる単純かつ選択的な単量体の製造および単量体の結合の効率である。この保護基は、結合サイクルの間に５′−ＯＨ基の脱保護に使用される１.５％のジクロロ酢酸に対して、たとえばCtmpよりいくぶんか安定であるべきであり、その一方で、影響を受け易すいためになお十分に酸−不安定であり合成完結時における取り外しを迅速にする。
【００１０】
これらの新規な２′−アセタール−保護オリゴリボヌクレオチド亜リン酸アミダイトによるオリゴヌクレオチド合成は、非常に首尾よく行うことができた。実際にβ取り外しに耐えることができる保護基の使用において、それに続く２′−アセタール−保護オリゴリボヌクレオチドの簡単な精製と分離により、彼らを固体支持体上でさえ取り外すことができる。また、オリゴリボヌクレオチドの安定な形としてこれらの化合物を注目でき、非保護のオリゴリボヌクレオチドとの対照において、長期間問題なく貯蔵でき、後で必要に応じて酸処理により遊離のオリゴマーに転換できる。
【００１１】
それらの保護された形の、特に３′および／または５′末端にこれらを含む１またはそれ以上のリボヌクレオチド単位を含有するオリゴヌクレオチドは、と共に、ヌクレアーゼに対して大幅に改良された抵抗性と共に、ハイブリッド形成性の極僅かな変化を示した。それ故に、この形式のオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムとしての使用に好適である。
【００１２】
したがって、本発明は、式(Ｉ)の化合物の製造方法に関する。
【化３５】
0003884492.tif 000002
式中、
ｎは、１〜150、好ましくは１〜50、さらに好ましくは８〜30、特に好ましくは８〜20の数である；
Ｌは、オキシ、スルファニジル（sulfanediyl）またはイミノ、好ましくはオキシである；
ＢＢは、互いに独立して、下記のとおりである；
【化３６】
0003884492.tif 000003
および
Ｅは、ＯＨまたはＮＨ2である、そして
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニル、好ましくは水素、CH3または１−プロピニル、特に好ましくは水素である；または
ＢＢは、天然ヌクレオシド塩基の他に、また５−（ヒドロキシメチル）ウリジン、５−アミノウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、イノシン、８−アザ−７−デアザアデノシン、ツベルシジン、ネブラリン、キサントシン、２−アミノアデノシン、エテノアデノシン、７−デアザグアノシン、Ｏ４−メチルチミジン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｏ６−メチルグアノシンまたはピリドピリミジンヌクレオシドのような他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる；
Ｗは、互いに独立して、酸素または硫黄、好ましくは酸素である；
Ｔは、それぞれ独立して、水素、-OCH3、-O-CH2CH3、-O-CH2-CH=CH2またはOHであるが、少なくとも１つはOHである；
Ｙ′は、オキシ、スルファニジール、イミノ、(CH2)kまたはN(CH2)kであり、ここにｋは、１から18、好ましくは１から６の整数であり、そして好ましいＹ′はオキシである；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、NHR17、NR17R18または式(OH2CH)CO(CH2)C′CH2R20のラジカルであり、好ましいＵはヒドロキシ、メルカプト、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキル、NHR17、NR17R18、特に好ましくはヒドロキシまたはC1〜C6−アルキルである；
ここに、
R17は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、-(CH2)d-[NH(CH2-)d]d′-NR19R19；好ましくはC1〜C8−アルキルまたはメトキシエチル、特に好ましくはC1〜C4−アルキルまたはメトキシエチルであり；式中、
ｄは、２から６の整数である、そして
ｄ′は、０から６の整数である、そして
R18は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは、NR17R18の場合、たとえば、モルホリニルおよびイミダゾリジニル環のような、R17と窒素原子が一緒になって５〜６員の、Ｏ、ＳおよびＮからなる系列からの他のヘテロ原子を付加的に含むことのできるヘテロ環になる；
R19は、互いに独立して、水素またはC1〜C6−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシ−C1〜C6−アルキルである；
ｃは、１から100、好ましくは３から20、特に好ましくは３から８の整数である；
ｃ′は、０から18、好ましくは０から15の整数である：
R20は、水素またはヒドロキシル、アミノ、NHR17、COOH、CONH2、COOR21またはフッ素、塩素または臭素のような官能基であり、R21はC1〜C4−アルキル、好ましくはメチルである；
【００１３】
C1およびC2は、同一または異なり、そして水素、C1〜C18−アルキル、C2〜C18−アルケニル、C2〜C18−アルキニル、C1〜C18−アルキルカルボニル、C2〜C18−アルケニルカルボニル、C2〜C18−アルキニルカルボニル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは式(II)のラジカルである；
【化３７】
0003884492.tif 000004
ここに、
Ｗは、前記のとおりである；
ＱおよびＱ′は、互いに独立して、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C22−アルコキシ、-O-(CH2)b-NR15R16；
ｂは、１から６そして
R15およびR16は、互いに独立して水素、C1〜C18−アルキル、好ましくはC1〜C8−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール-C1〜C8−アルキル、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシでもあり、ここにまたアリールはヘテロアリールであり、そしてアリールはカルボキシル、アミノ、ニトロ、C1〜C4−アルキルアミノ、C1〜C6−アルコキシ、ヒドロキシル、フッ素、塩素、臭素およびシアノからなる系列からの同一または異なるラジカルの１、２または３ので置換されていてもよく、またはC1〜C18−アルキルメルカプト、NHR17、NR17R18であり、ここにR17およびR18は前記のとおりであるかまたは窒素原子と一緒になって３〜６員環になる；もしくは
ＱおよびＱ′は、好ましくはヒドロキシル、メルカプト、OCH2CH3、O-i-C3H7、O-n-C6H13、O-n-C16H37、O-(CH2)3-(3-ピリジル)、O-(CH2)3-(4-ニトロフェニル)、ファーネシル、フィチル、ビタミンA、ビタミンE、テストステロン、コレステロール、CH3、O-(CH2)4-(9-アクリジン)である；または
ＱおよびＱ′は、式(III)のラジカルである；
【化３８】
0003884492.tif 000005
ｇおよびｇ′＝０または１、
ｈ＝０から１０、
Ｇは、C2〜C12−アルキレン、特にC2〜C4−アルキレン、C6〜C14−アリール−ジ−C1〜C8−アルキレン、C6〜C18−アリーレンであり、これらはフッ素、塩素、臭素、アミノ、ヒドロキシル、C1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルコキシ−カルボニル、C6〜C14−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C18−アルキルまたはC6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシにより１ないし３が置換されていてもよい、もしくは式(CH2CH2N′)iCH2CH2または(CH2N′)iCH2の基である、ここに
ｉは、１から１１、好ましくは１から５の整数であり、そしてＮ′は、オキシ、スルファニジール、イミノまたはメチレンである、そして
Ｗ、ＵおよびＹ′は、前記のとおりである；または
ＱおよびＱ′は、親油性のラジカル、天然担体システムを利用する共役体、およびオリゴヌクレオチドの受容体を介したエンドサイトーシスを誘導する対応した受容体のペプチドからなる細胞内取り込みに有利な基であるか、またはＤＮＡプローブの標識として作用する標識基であるか、または架橋もしくは開裂を伴って、オリゴヌクレオチド類似体とのハイブリッド化によって標的核酸を攻撃する基であり、ここにまた式(Ｉ)における核酸配列は、１回またはそれ以上、式(III)の連鎖剤により分断することができ、そして共役体をリン酸ジエステルまたはリン酸チオジエステルバックボーンを介して公知の方法で形成することができる；
C1およびC2は、特に好ましくは水素およびＷ＝オキシおよびＱ＝Ｑ′＝ヒドロキシルである式(II)のラジカルである；
【００１４】
この方法は、下記工程からなる。
a)  式(IV)の化合物の３′−および５′−位を保護する工程：
【化３９】
0003884492.tif 000006
式中
Ｂは、下記のとおりである；
【化４０】
0003884492.tif 000007
Ｒ3は、それぞれの場合において、互いに独立して式の基である；
【化４１】
0003884492.tif 000008
Ｒ4は、水素または２−（ｐ−ニトロフェニル)エチルである；
Ｒ5は、下記のとおりである；
【化４２】
0003884492.tif 000009
Ｒ6は、OH、NH2、式の基である；
【化４３】
0003884492.tif 000010
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニル、好ましくは水素、CH3または１−プロピニル、特に好ましくは水素；もしくは
Ｂは、天然ヌクレオシド塩基の他に、ヒドロキシル基のためのパラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびパラ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル基ならびにアミノ基のためのベンゾイル、パラ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル、パラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリール、パラ−（ターシャリーブチル）フェニルアセチル基のような、適当な公知の保護基によりアミノ基またはヒドロキシル基が保護された他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができ、ここに修飾塩基(ＢＢ)を有する下記に特定されるヌクレオシドは購入でき、そして個々の保護基の導入は、たとえばC. Lehmann等 Nucl. Acids Res. 17(1989) 2379; C. B. Reese "The Chemical Synthesis of Oligo and Polyribonuc-leotides" in Nucleic Acids and Molecular Biology, Vol. 3, F.
Eckstein & D. M. Lilley eds., Springer-Verlag Berlin-Heidelberg 1989, pages 164-181; E. Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14(1986) 274; A. Peyman, E. Uhlmann Chem. Rev. 90(1990) 543; S. L. Beaucage, R. P. Iyer, Tetrahedron 49(1993) 1925, 2223, 6123;の方法により行うことができる:
５−（ヒドロキシメチル）ウリジン、５−アミノウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、イノシン、８−アザ−７−デアザアデノシン、ツベルシジン、ネブラリン、キサントシン、２−アミノアデノシン、エタノアデノシン、７−デアザグアノシン、Ｏ４−メチルチミジン、Ｎ６−メチルアデノシン、Ｏ６−メチルグアノシンまたはピリドピリミジンヌクレオシド。
本工程は、どんなに知られた方法、好ましくは１,３−ジクロロ−１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサンとの公知の方法による [類似体中の例 Markiewicz, J. Chem. Res., Synop. 1979, 24; Nucleic Acids Res. Symp. Ser. 7(1980) 115]、たとえば０℃のピリジン中での反応により、３′−５′−Ｏ−(テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル)−保護化合物を得る。
【００１５】
b)  保護された化合物と式(Ｖ)のビニルエーテルをそれに続き反応させる工程：
【化４４】
0003884492.tif 000011
式中、
ｒは、１または２である、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、ここにアリールは、１回またはそれ以上、好ましくは１ないし３回、さらに好ましくは１ないし２回、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O-C(O)NH2、O-C(O)O−C1〜C18−アルキル、O-C(O)O−C6〜C12−アリール、O-C(O)−C1〜C18−アルキル、O-C(O)−C6〜C12−アリール、O-C(O)-[CH2]r-X1またはO-C(O)O-[CH2]r-X1(X1=C6〜C12−アリール、これは１ないし３回アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されてもよい)により置換されてもよい；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、S−フェニル、SO2−フェニル、Ｎ−フタルイミドまたはNO2である；
ｒ＝１の場合、Ｘは好ましくはC6〜C12−アリールであり、ここにアリールは、１または２回、さらに好ましくは１回、フッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシ、および所望により１回O-C(O)-[CH2]r-X1またはO-C(O)O-[CH2]r-X1(X1はC6〜C12−アリールに等しく、これは１ないし３回、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、フッ素、塩素または臭素で置換されてもよい)により置換できる；
ｒ＝２の場合、Ｘは好ましくは４−ニトロフェニルである；
ｒ＝１の場合、Ｘは特に好ましくは2,5−ジクロロ−４−ピバロイルオキシフェニル、３−クロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニル、２−クロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニル、３−フロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニル、さらに好ましくは３−フロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニルである;
公知の方法［たとえば、O. Sakatsume等; Tetrahedron 47(1991) 8717-8728およびこの中に引用した文献］との類似において、たとえば３′,５′−保護化合物は、好適な有機溶媒たとえばトルエン中、触媒、好ましくは酸の添加後、１〜２０、好ましくは１〜１０、特に好ましくは１〜５当量の式(Ｖ)のビニルエステルを加えて反応させ、中和後にその後の検査を、たとえば抽出、晶出、クロマトグラフィーのような公知の方法により同様に行う。
【００１６】
c)  公知の方法と同様に５′および３′保護基を再び取り外す工程：
ここで３′,５′−（Ｏ−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル)−保護化合物の場合、保護基を、はたとえばHNEt3+F-で取り外す。
【００１７】
d)  R2＝ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシル、トリチル、好ましくはジメトキシトリチルを有する5'保護基を、公知の方法［たとえばM. J. Gait, Oligonucleotide Synthesis-a practical approach, IRL Pres,1984］により導入する工程：
たとえばピリジン中での塩化ジメトキシトリチルとの反応によるジメトキシ  トリチル基は、式(VI)になる。
【化４５】
0003884492.tif 000012
式中、
R1は、-[CH2]r-Xであり、
ｒは、１または２、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、アリールは１回またはそれ以上、好ましくは１ないし３回、さらに好ましくは１ないし２回、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキ
ル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O-C(O)NH2、O-C(O)O−C1〜C18−アルキル、O-C(O)O−C6〜C12−アリール、O-C(O)−C1〜C18−アルキル、O-C(O)−C6〜C12−アリール、O-C(O)-[CH2]r-X1またはO-C(O)O-[CH2]r-X1(X1＝C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい）により置換されてもよい；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、Ｓ−フェニル、SO2−フェニル、Ｎ−フタルイミドまたはNO2である；
ｒ＝１の場合、Ｘは、好ましくはC6〜C12−アリールであり、アリールは１または２回、さらに好ましくは１回、フッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシおよび所望により１が、O-C(O)-[CH2]r-X1またはO-C(O)O-[CH2]r-X1(X1はC6〜C12−アリールに等しく、これは１ないし３回、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、フッ素、塩素または臭素により置換されてもよい）により置換できる；
ｒ＝２の場合、Ｘは、好ましくは４−ニトロフェニルである；
ｒ＝１の場合、Ｘは、特に好ましくは2,5−ジクロロ−４−ピバロイルオキシフェニル、３−クロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニル、２−クロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニル、3−フロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニル、さらに好ましくは３−フロロ−４−[２−(４−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ]フェニルである;
R2は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシル、トリチル、好ましくはジメトキシトリチルである；
Ｂは、前記のとおりである；
【００１８】
e)  式(VI)の化合物と式(VII)の化合物を反応させる工程：
【化４６】
0003884492.tif 000013
式中、
Ｚ′は、OR9またはC1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、好ましくはOR9、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、特に好ましくはOR9である；
R7およびR8は、同一または異なり、そしてC1〜C8−アルキル、好ましくはイソプロピル、またはC5〜C12−シクロアルキル、好ましくはC8までのベンジルまたはフェニル、または、それらが結合する窒素原子と一緒になって、さらにたとえばモルホリンのように、ヘテロ原子を有していてもよいし、およびOC(O)−C1〜C4−アルキルエステルのように、置換基を有してもよい飽和または不飽和のヘテロ環である；および
R9は、式の置換基
【化４７】
0003884492.tif 000014
またはベンジル基であり、これは置換されていないか、または１ないし４回環置換され、好ましくは置換されておらず、ここで置換基は互いに独立してフッ素、塩素、臭素、C1〜C4-アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボキシル基である；
Ｚは、塩素または臭素または式NR7R8のラジカルであり、R7およびR8は前記のとおりである；
塩基、好ましくはピリジン、またはテトラヒドロフラン(THF)、ジオキサン、ジクロロメタン(DCM)、クロロホルムおよび／またはアセトニトリルとC1〜C4−トリアルキルアミ
ン、好ましくはトリメチル−、トリエチル−またはジイソプロピルエチルアミンとの混合物、もしくはＺが、式NR7R8のラジカルである場合、そのときは式[HNR12R13R14](+)A(-)の化合物(ここにNR12、R13、R14は、同一または異なって、C1〜C4−アルキル基であり、Ａ＝フッ素、塩素、臭素、特に好ましくは塩素)、またはテトラゾールの存在下、好ましくはテトラゾールの存在下で，式(VIII)の化合物を与える。
【化４８】
0003884492.tif 000015
式中、R1、R2、R7、R8、Ｚ′およびＢは、前記のとおりである；
【００１９】
f)  公知の方法によりe)工程により得られた化合物を、１ないし１０当量、好ましくは１ないし２当量のコハク酸無水物のような連鎖剤と、好適な有機溶媒、たとえばメチレンクロライド中で、触媒たとえば4-ジメチルアミノピリジンの添加後に反応させ式(IX)の化合物を得る工程：
【化４９】
0003884492.tif 000016
ここに、R1、R2およびＢは、前記のとおりであり、たとえば抽出、晶出、クロマトグラフィーのような公知の方法により、その後に検査を同様に行い、ここで３′位のコハク酸残基は、合成に用いた高分子支持体に連鎖剤として作用し、そしてコハク酸連鎖剤の代替として、たとえばSonveaux[Bioorg. Chem. 14(1986) 274]に記載されたような、他の連鎖剤を用いることも可能である。
【００２０】
g)  式(Ｘ)の化合物を固体支持体に結合する工程：
【化５０】
0003884492.tif 000017
式中、
R2およびＢは、前記のとおりである；
Ｖは、水素、O-C1〜C18−アルキル、O-C1〜C18−アルケニル、O-C1〜C18−アルキニルまたはO-CH(CH3)-OR1(式中R1は前記のとおり)、好ましくは水素、OCH3、O-CH2CH3、O-CH2-CH=CH2またはO-CH(CH3)-OR1(式中R1は前記のとおり)である；
アミノプロピル−ＣＰＧ（ＣＰＧ＝制御された多孔質ガラス）のような固体支持体に、公知の方法、たとえばＤＣＣとｐ−ニトロフェノールとの好適な溶媒中での反応［たとえば、M. J. Gait, Oligonucleotide Synthesis-a practical approach, IRL Press, 1984]により結合する;
【００２１】
h)  公知の方法、たとえばメチレンクロライドまたはクロロホルム中の１〜４％濃度のジクロロ酢酸での処理により、５′保護基を取り外す工程；
【００２２】
i)  得られた化合物と式(XI)の化合物を反応させる工程：
【化５１】
0003884492.tif 000018
式中、R2、R7、R8、Ｖ、Ｚ′およびＢは、前記のとおりである；
【００２３】
j)  得られた化合物を公知の方法で酸化する工程：
たとえば、水性ピリジン、ルチジン(lutidine)またはコリジン(collidine)の存在下でのヨウ素との反応、ここでテトラヒドロフランのような他の有機溶媒が存在してもよく、または、たとえばアセトニトリル中でのＮ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラエチルチウラムジスルフィドとの反応、または、たとえばアルキルアミンまたはアリールアミンの存在下でのヨウ素との反応、天然または修飾オリゴヌクレオチド製造に熟練した作業者に知られた、たとえばBeaucage and Iyer[Tetrahedron 49(1993) 6123]およびUhlmann and Peyman[Chem. Rev. 90(1990) 543］に要約された種々の酸化方法により、好ましい酸化は、水性ピリジン、ルチジン(lutidine)またはコリジン(collidine)の存在下、さらにテトラヒドロフランのような他の有機溶媒の存在下でのヨウ素との反応で行う；
【００２４】
k)  所望の鎖長になるまで工程h)〜j)を繰り返す工程：
【００２５】
l)  オリゴヌクレオチドを支持体から公知の方法、たとえば５０〜６０℃のNH3で取り外す工程、およびリン酸塩および核塩基の保護基を公知の方法により同様に取り外し、式(XII)の化合物を得る工程：
【化５２】
0003884492.tif 000019
式中、ｎ、Ｌ、ＢＢ、Ｗ、Ｖ、Ｙ′、Ｕ、C1およびC2は、前記のとおりである；
【００２６】
m)  式(XII)の化合物をインキュベートする工程：
酸性範囲、好ましくはpH１〜３、さらに好ましくはpH１.５〜２.５、特に好適にはpH１.８〜２.２において、好適な有機溶媒中、たとえば０.５〜１０ｈ、好ましくは１〜３ｈ、さらに好ましくは３ｈ、メチレンクロライド／メタノール中の、１〜３０％、好ましくは２〜６％のｐ−トルエンスルホン酸溶液とインキュベートし、たとえばNH3／メタノールによる、それに続く中和、および溶媒の蒸発後および、たとえばエタノールからの沈殿、ゲルクロマトグラフィー、ゲル電気泳動およびHPLCによる精製後、式(Ｉ)の化合物を得る［E. Sonveaux, Bioorg.
Chem. 14(1986) 274参照]。
【００２７】
細胞内取り込みに有利である基の例は、たとえば−O-(CH2)x-CH3(ここにｘは６から１８の整数である)、-O-(CH2)n-CH=CH-(CH2)m-CH3(ここにｎおよびｍは独立して６から１２の整数である)、-O-(CH2CH2O)4-(CH2)9-CH3、-O-(CH2CH2O)8-(CH2)13-CH3および-O-(CH2CH2O)7-(CH2)15-CH3のような種々の親油性のラジカルであるが、コレステリルのようなステロイド残基および胆汁酸、葉酸、２−(Ｎ−アルキル−Ｎ−アルコキシ)アミノアントラキノンのような天然担体システムに利用する共役体、およびマンノースの共役体およびＥＧＦ（表皮成長因子）、ブラジキニンおよびＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）のようなオッリゴヌクレオチドの受容体−仲介した飲食作用(endocytosis)を誘導する対応した受容体のペプチドでもよい。標識基は蛍光基、たとえばダンシル（＝Ｎ−ジメチル−１−アミノナフチル−５−スルフォニル)、蛍光体またはクマリン誘導体または化学発光基、たとえばアクリジン誘導体、およびELISAにより検出できるジゴキシゲニンシステム、ビオチン／アビジンシステムで検出できるビオチン基、検出できるレポーター基、たとえばアクリジニウム活性エステルと反応したアミノアルキル連鎖剤、のその後の誘導を許容する官能基を有する連鎖ざい剤アームを意味し、化学発光試料を得る。典型的な標識基は、下記のとおりである。
【００２８】
【化５３】
0003884492.tif 000020
【００２９】
核酸または挿入体(intercalate)および／または開裂体(cleave)または架橋体(crosslink)に結合するオリゴヌクレオチド類似体は、共役体、たとえばアクリジン、プソラレン、フェナントロリン、ナフトキノン、ドーノマイシンまたはクロロエチルアミノアリールを含む。典型的な挿入または架橋するラジカルは、下記のとおりである。
【化５４】
0003884492.tif 000021
【化５５】
0003884492.tif 000022
【化５６】
0003884492.tif 000023
【００３０】
本発明は、さらに式(VI)の化合物に関する。
【化５７】
0003884492.tif 000024
式中、
R1は、−〔CH2〕r−Xであり、
ｒは、１または２、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、アリールは1回またはそれ以上、好ましくは１ないし３回、さらに好ましくは１ないし２回、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)NH2、O−C(O)O−C1〜C18−アルキル、O−C(O)O−C6〜C12−アリール、O−C(O)−C1〜C18−アルキル、O−C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1＝C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい)により置換されてもよい；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、S−フェニル、SO2−フェニル、N−フタルイミドまたはNO2である；
ｒ＝１の場合、Ｘは、好ましくはC6〜C12−アリールであり、アリールは１または２回、さらに好ましくは１回、フッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシおよび所望により１が、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1はC6〜C12−アリールに等しく、これは１ないし３回、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、フッ素、塩素または臭素により置換されてもよい)により置換できる；
ｒ＝２の場合、Ｘは、好ましくは4−ニトロフェニルである；
ｒ＝１の場合、Ｘは、特に好ましくは2,5−ジクロロ−4−ピバロイルオキシフェニル、3−クロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニル、2−クロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニル、3−フロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニル、さらに好ましくは3−フロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニルである;
R2は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシル、トリチル、好ましくはジメトキシトリチルである；
Ｂは、下記のとおりである；
【化５８】
0003884492.tif 000025
ここに、R3は、それぞれの場合において、互いに独立して次の基である；
【化５９】
0003884492.tif 000026
R4は、水素または2−(p−ニトロフェニル)エチルである；
R5は、下記のとおりである；
【化６０】
0003884492.tif 000027
R6は、OH、NH2、次の基である；
【化６１】
0003884492.tif 000028
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニル、好ましくは水素、CH3または1−プロピニル、特に好ましくは水素；もしくは
Ｂは、天然ヌクレオシド塩基の他に、ヒドロキシル基のためのパラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびパラ−(t−ブチル)ベンゾイル基ならびにアミノ基のためのベンゾイル、パラ−(t−ブチル)ベンゾイル、パラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリール、パラ−(ターシャリーブチル)フェニルアセチル基のような適当な公知の保護基によりアミノ基またはヒドロキシル基が保護された他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる。
全化合物中のＢは、好ましくは下記である。
【化６２】
0003884492.tif 000029
【００３１】
式(VI)の化合物において、糖は天然のβ立体配置の他にα立体配置と仮定できるが、β立体配置を有する化合物が好ましい。
【００３２】
本発明はまた、式(VIII)の化合物に関する。
【化６３】
0003884492.tif 000030
式中、
R1は、−〔CH2〕r−Xであり、
ｒは、１または２、および
Ｘは、C6〜C12−アリールであり、アリールは１回またはそれ以上、好ましくは１ないし３回、さらに好ましくは１ないし２回、ヒドロキシル、メルカプト、ニトロ、フッ素、塩素、臭素、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキルメルカプト、C2〜C6−アルケニル、C3〜C6−アルキニル、C(O)OH、C(O)NH2、C(O)O−C1〜C18−アルキル、C(O)O−C6〜C12−アリール、C(O)−C1〜C18−アルキル、C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)NH2、O−C(O)O−C1〜C18−アルキル、O−C(O)O−C6〜C12−アリール、O−C(O)−C1〜C18−アルキル、O−C(O)−C6〜C12−アリール、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1＝C6〜C12−アリール、これは１ないし３回、アミノ、ヒドロキシル、ニトロ、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルコキシカルボニル、フッ素、塩素または臭素により置換されていてもよい)により置換されてもよい；
ｒ＝２の場合、Ｘはまた、CN、S−フェニル、SO2−フェニル、N−フタルイミドまたはNO2である；
ｒ＝１の場合、Ｘは、好ましくはC6〜C12−アリールであり、アリールは１または２回、さらに好ましくは１回、フッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシおよび所望により１が、O−C(O)−〔CH2〕r−X1またはO−C(O)O−〔CH2〕r−X1(X1はC6〜C12−アリールに等しく、これは１ないし３回、C1〜C4−アルキル、C1〜C4−アルコキシ、フッ素、塩素または臭素により置換されてもよい)により置換できる；
ｒ＝２の場合、Ｘは、好ましくは4−ニトロフェニルである；
ｒ＝１の場合、Ｘは、特に好ましくは2,5−ジクロロ−4−ピバロイルオキシフェニル、3−クロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニル、2−クロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニル、3−フロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニル、さらに好ましくは3−フロロ−4−〔2−(4−ニトロフェニル)−エトキシカルボニルオキシ〕フェニルである；
R2は、ジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、ピクシル、トリチル、好ましくはジメトキシトリチルである；
Z′は、OR9またはC1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、好ましくはOR9、C1〜C6−アルキル、C1〜C6−アルコキシ、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、特に好ましくはOR9である；
R7およびR8は、同一または異なり、そしてC1〜C8−アルキル、好ましくはイソプロピル、またはC5〜C12−シクロアルキル、好ましくはC8までのベンジルまたはフェニル、または、それらが結合する窒素原子と一緒になって、さらにたとえばモルホリンのように、ヘテロ原子を有していてもよいし、およびOC(O)−C1〜C4−アルキルエステルのように、置換基を有してもよい飽和または不飽和のヘテロ環である；および
R9は、次の置換基
【化６４】
0003884492.tif 000031
またはベンジル基であり、これは置換されていないか、または１ないし４回環置換され、好ましくは置換されておらず、ここで置換基は互いに独立してフッ素、塩素、臭素、C1〜C4−アルキル、ニトロ、メトキシまたはカルボニル基である；
Ｂは、下記のとおりである；
【化６５】
0003884492.tif 000032
ここに、R3は、それぞれの場合において、互いに独立して次の基である；
【化６６】
0003884492.tif 000033
R4は、水素または2−(p−ニトロフェニル)エチルである；
R5は、下記のとおりである；
【化６７】
0003884492.tif 000034
R6は、OH、NH2、次の基である；
【化６８】
0003884492.tif 000035
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニル、好ましくは水素、CH3または1−プロピニル、特に好ましくは水素；または
Ｂは、天然ヌクレオシド塩基の他に、ヒドロキシル基のためのパラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル基、ベンゾイル基およびパラ−(t−ブチル)ベンゾイル基ならびにアミノ基のためのベンゾイル、パラ−(t−ブチル)ベンゾイル、パラ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリール、パラ−(ターシャリーブチル)フェニルアセチル基のような適当な公知の保護基によりアミノ基またはヒドロキシル基が保護された他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる。
【００３３】
本発明は、同様に式(XII)の化合物に関する。
【化６９】
0003884492.tif 000036
式中、
ｎは、１〜150、好ましくは４〜50、さらに好ましくは８〜30、非常に好ましくは８〜20の数である；
Ｌは、オキシ、スルファニジルまたはイミノ、好ましくはオキシである；
BBは、互いに独立して、下記のとおりである；
【化７０】
0003884492.tif 000037
および
Ｅは、OHまたはNH2である、そして
Ｙは、水素、C1〜C4−アルキル、フッ素、塩素、臭素またはC2〜C6−アルケニル、C2〜C6−アルキニル、好ましくは水素、CH3または1−プロピニル、特に好ましくは水素である；または
BBは、天然ヌクレオシド塩基の他、また5−（ヒドロキシメチル）ウリジン、5−アミノウリジン、シュードウリジン、ジヒドロウリジン、イノシン、8−アザ−7−デアザアデノシン、ツベルシジン、ネブラリン、キサントシン、2−アミノアデノシン、エテノアデノシン、7−デアザグアノシン、O4−メチルチミジン、N6−メチルアデノシン、O6−メチルグアノシンまたはピリドピリミジンヌクレオシドのような他の修飾されたヌクレオシド塩基であることができる；
Ｗは、互いに独立して、酸素または硫黄、好ましくは酸素である；
Ｖは、互いに独立して、水素、−O−C1〜C18−アルキル、−O−C1〜C18−アルケニル、−O−C1〜C18−アルキニルまたは−O−CH(CH3)−OR1(式中R1は前記のとおり)であるが、Ｖの少なくとも１つは、−O−CH(CH3)−OR1であり、好ましくは水素、−OCH3、−O−CH2CH3、−O−CH2−CH＝CH2または−O−CH(CH3)−OR1であるが、Ｖの少なくとも１つは、−O−CH(CH3)−OR1である；
Y′は、オキシ、スルファニジール、イミノ、(CH2)kまたはN(CH2)kであり、ここにkは、１から18、好ましくは１から６の整数であり、そして好ましいY′はオキシである；
Ｕは、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルキル、C
6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、NHR17、NR17R18または式(OCH2CH2)CO(CH2)C′CH2R20のラジカルであり、好ましいＵはヒドロキシ、メルカプト、C1〜C6−アルコキシ、C1〜C6−アルキル、NHR17、NR17R18、特に好ましくはヒドロキシまたはC1〜C6−アルキルである；
ここに、
R17は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、−(CH2)d−〔NH(CH2-)d〕d′−NHR19R19；好ましくはC1〜C8−アルキルまたはメトキシエチル、特に好ましくはC1〜C4−アルキルまたはメトキシエチルであり；式中、
ｄは、２から６の整数である、そして
d′は、０から６の整数である、そして
R18は、C1〜C18−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは、NR17R18の場合、たとえば、モルホリニルおよびイミダゾリジニル環のような、R17と窒素原子が一緒になって５〜６員の、Ｏ、ＳおよびＮからなる系列からの他のヘテロ原子を付加的に含むことのできるヘテロ環になる；
R19は、互いに独立して、水素またはC1〜C6−アルキルまたはC1〜C4−アルコキシ−C1〜C6−アルキルである；
ｃは、１から100、好ましくは３から20、特に好ましくは３から８の整数である；
c′は、０から18、好ましくは０から15の整数である：
R20は、水素またはヒドロキシル、アミノ、NHR17、COOH、CONH2、COOR21またはフッ素、塩素または臭素のような官能基であり、R21はC1〜C4−アルキル、好ましくはメチルである；
C1およびC2は、同一または異なり、そして水素、C1〜C18−アルキル、C2〜C18−アルケニル、C2〜C18−アルキニル、C1〜C18−アルキルカルボニル、C2〜C18−アルケニルカルボニル、C2〜C18−アルキニルカルボニル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキルまたは式(II)のラジカルである；
【化７１】
0003884492.tif 000038
ここに、
Ｗは、前記のとおりである；
ＱおよびQ′は、互いに独立して、ヒドロキシル、メルカプト、SeH、C1〜C22−アルコキシ、−O−(CH2)b−NR15R16；
ｂは、１から６そして
R15およびR16は、互いに独立して水素、C1〜C18−アルキル、好ましくはC1〜C8−アルキル、C6〜C20−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルキル、C6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシであり、ここにまたアリールはヘテロアリールでもあり、そしてアリールはカルボキシル、アミノ、ニトロ、C1〜C4−アルキルアミノ、C1〜C6−アルコキシ、ヒドロキシル、フッ素、塩素、臭素およびシアノからなる系列からの同一または異なるラジカルの１、２または３で置換されていてもよく、またはC1〜C18−アルキルメルカプト、NHR17、NR17R18であり、ここにR17およびR18は前記のとおりであるかまたは窒素原子と一緒になって３〜６員環になる；または
ＱおよびQ′は、好ましくはヒドロキシル、メルカプト、OCH2CH3、O−i−C3H7、O−n−C6H13、O−n−C16H37、O−(CH2)3−(3−ピリジル)、O−(CH2)3−(4−ニトロフェニル)、ファーネシル、フィチル、ビタミンA、ビタミンE、テストステロン、コレステロール、CH3、O−(CH2)4−(9−アクリジン)である；または
ＱおよびQ′は、式(III)のラジカルである；
【化７２】
0003884492.tif 000039
ｇおよびg′＝０または１、
ｈ＝０から10、
Ｇは、C2〜C12−アルキレン、特にC2〜C4−アルキレン、C6〜C14−アリール−ジ−C1〜C8−アルキレン、C6〜C18−アリーレンであり、これらはフッ素、塩素、臭素、アミノ、ヒドロキシル、C1〜C18−アルキル、C1〜C18−アルコキシ、C1〜C18−アルコキシ−カル
ボニル、C6〜C14−アリール、C6〜C14−アリール−C1〜C18−アルキルもしくはC6〜C14−アリール−C1〜C8−アルコキシにより１ないし３回置換されていてもよく、または式(CH2CH2N′)iCH2CH2もしくは(CH2N′)iCH2の基である、ここに
ｉは、１から11、好ましくは１から５の整数であり、そして
N′は、オキシ、スルファニジール、イミノまたはメチレンである、
そして
Ｗ、ＵおよびY′は、前記のとおりである；または
ＱおよびQ′は、親油性のラジカル、天然担体システムを利用する共役体、およびオリゴヌクレオチドの受容体を介したエンドサイトーシスを誘導する対応した受容体のペプチドからなる細胞内取り込みに有利な基であるか、またはDNA試験の標識として作用する標識基であるか、または架橋もしくは開裂を伴って、オリゴヌクレオチド類似体とのハイブリッド化によって標的核酸を攻撃する基であり、ここに式(XII)内の核酸配列は、１回またはそれ以上、式(III)の連鎖剤により分断することができ、そして共役体をリン酸ジエステルまたはリン酸チオジエステルバックボーンを介して公知の方法で形成することができる。
【００３４】
【実施例】
実施例１
1.1   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシ）エチル−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルシチジン
６７８mg（１.０ミリモル）の３′,５′−保護Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−シチジンを１０mlの無水トルエンに溶解し、回転エバポレーターで共蒸発させることを２回繰り返した。次に、泡状物を３０mlの無水トルエンに取り、３３５mg（２.５ミリモル）のベンジルビニルエーテルを加え、そして２.０ml（２０mg＝０.１１ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏの無水ＴＨＦ（１.０ｇ／１００ml）中のストック溶液を無色の溶液に加えた。それを一晩室温で撹拌した後（ＴＬＣチェック）、透明な反応溶液をＥＡで２００mlまで希釈し、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。
水相を１００mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。カラムクロマトグラフィーによりシリカゲル上でさらに精製した。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物６９０mg（０.８４ミリモル）を得た。これは理論収量の８４％に相当する。
1.2   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−シチジン５２０mg（０.６４ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−３′,５′−テトライソブロピルジシロキサン−１,３−ジイルシチジン（実施例１.１）を３２mlの０.２Ｎ ＮＨ4Ｆ溶液（６.４ミリモル）に取り、室温で一晩撹拌した。その溶液を回転エバポレーターで濃縮して殆ど乾燥し、得られる懸濁液を５mlのＣＨ2Ｃｌ2に取り、短かく超音波処理して粗生成物をカラムに負荷した。カラムは２０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで平衡にされていた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝１００／０／０、５０／５０／２.５、５０／５０／５（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション２０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物３２０mg（０.５６ミリモル）を得た。これは理論収量の８８％に相当する。
1.3   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−シチジン
９８０mg（１.７２ミリモル）の予備乾燥した２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−シチジン（実施例１.２）を回転エバポレーターでそれぞれ２０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させ、１０mlの無水ピリジンに取り、５０mlの無水トルエンで希釈し、そして７００mgのＤＭＴＲ−Ｃｌ（２.０７ミリモル）を加えた。反応溶液を一晩室温で撹拌し、そして１mlのＭｅＯＨを加えて反応を停止した。
５分後、溶液を真空下、回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得、これを２００mlのＥＡに取り、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。水相を１５０mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮して油状物を得た。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、２５に精製した。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなるクロマトグラフィーにより純粋な無色の泡状物１.４５ｇ（１.６６１ミリモル）を得た。これは理論収量の９７％に相当する。
【００３５】
実施例２
Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−５′−Ｏ−ＤＭＴＲ−２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）シチジン−３′−Ｏ−亜リン酸 β−シアノエチルエステル Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミド
４５０mg（０.５ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−シチジン（実施例１.３）を５０mlのフラスコに計り込み、それぞれ２０mlの無水トルエンを用いて２回蒸発させた。次に、７.５ml（１.２５ミリモル）の亜リン酸化試薬（β−シアノエチルＮ,Ｎ−ジイソプロピルクロロホスホラミジット）のストック溶液（０.１５モル／リットルの無水ＣＨ2Ｃｌ2）を加え、混合物を再び濃縮して油状物を得た。それを１０mlの無水アセトニトリルで希釈し、そして２３mgのテトラゾール（０.３３ミリモル）の添加後、反応溶液を室温で６時間撹拌した。１５０mlのＮａＨＣＯ3／ＥＡ（１／１）溶液中に注ぎ込むことにより反応を停止した。分液ロートで相を分離し、５０mlのＥＡを用いた振盪による抽出を繰り返し、そして合一した有機相を５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過した後、濾液を回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得た。クロマトグラフィーにより、さらに精製した。このための直径２cmのカラムは２０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで状態調整されていた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、２００／７０；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、１０ml部分のＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨで発泡させた。生成物を高真空下、室温で乾燥した。その結果、４５９mg（０.４２６ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の８５％に相当する。
【００３６】
実施例３
２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−３′−Ｏ−スクシニルシチジン
３３０mg（０.３７ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−シチジン（実施例１.３）を５０mlのフラスコに計り込み、５０mg（０.４９０ミリモル）の無水コハク酸および６０mgの４−ＤＭＡＰを加え、その混合物を１０mlの無水塩化メチレンに取った。得られる溶液を室温で１４時間撹拌した。反応溶液を１００mlのＥＡで希釈した後、５０mlのホスフェート緩衝液（pH＝６.０）で振盪して抽出することにより反応を停止した。この操作をもう一度繰り返し、有機相を緩衝液で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。１５ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径２cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／（ml））＝１００／０、２００／５０、１５０／５０（Ｐ）および１００／１００（Ｐ）；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＣＨ2Ｃｌ2に取り、そして綿が充填されたパスツールピペットを通して濾過した。濾液を再び濃縮し、ＭｅＯＨおよびＣＨ2Ｃｌ2で発泡させ、そして高真空下、乾燥した。その結果、３５７mg（０.３６１ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の９８％に相当する。
【００３７】
実施例４
4.1   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルアデノシン
１.４０ｇ（２.０ミリモル）の３′，５′−テトライソプロピルジシロキサン−保護Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシンを１０mlの無水トルエンに溶解し、回転エバポレーターで共蒸発させることを２回繰り返した。次に、泡状物を３０mlの無水トルエンに取り、３７５mg（２.８ミリモル）のベンジルビニルエーテルを加え、そして２.０ml（２０mg＝０.１１ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏの無水ＴＨＦ（１.０ｇ／１００ml）中のストック溶液を無色の溶液に加えた。それを一晩室温で撹拌した後（ＴＬＣチェック）、透明な反応溶液をＥＡで２００mlまで希釈し、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。
水相を１００mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4を通して濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。４０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径３cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝２００／０、１６０／４０、１４０／６０、１００／１００、１００／２００（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション２０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、二置換生成物の２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物として７２０mg（０.７４ミリモル＝理論収量の３７％）の副生成物を得た。
所望の生成物は理論量の５７％（９８０mg＝１.１３ミリモル）の無色の泡状物として単離した。全収量は理論量の９４％である。
4.2   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシン
２.０８ｇ（２.４０ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルアデノシン（実施例４.１）を１２０mlの０.２Ｎ ＮＨ4Ｆ溶液（２４ミリモル）に取り、一晩室温で撹拌した。溶液を回転エバポレーターで濃縮して殆ど乾燥し、得られる懸濁液を２０mlのＣＨ2Ｃｌ2に取り、簡単に超音波処理して粗生成物をカラムに付した。
カラムは１８０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて状態調整されていた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝２００／０／０、２００／２００／０、２００／２００／２０（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション３０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物１.３８ｇ（２.３２１ミリモル）を得た。これは理論収量の９７％に相当する。
4.3   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシン
１.１２０ｇ（１.８４ミリモル）の予備乾燥した２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシン（実施例４.２）を回転エバポレーターでそれぞれ２０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させ、２０mlの無水ピリジンに取り、５０mlの無水トルエンで希釈し、そして７７０mgのＤＭＴＲ−Ｃｌ（２.２７ミリモル）を加えた。反応溶液を一晩室温で撹拌し、そして１mlのＭｅＯＨを加えて反応を停止した。５分後、溶液を真空下、回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得、これを２００mlのＥＡに取り、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。水相を１５０mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮して油状物を得た。８０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径５cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝２００／０、２００／２００、２００／２００／１０、２００／２００／２０、２００／２００／４０；各フラクション３０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなるクロマトグラフィーにより純粋な無色の泡状物１.５２ｇ（１.６９ミリモル）を得た。これは理論収量の９０％に相当する。
【００３８】
実施例５
２′−Ｏ−（ベンジルオキシエチル）−５′−Ｏ−ＤＭＴＲ−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシン−３′−Ｏ−亜リン酸 β−シアノエチルエステル Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミド
４５０mg（０.５ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−Ｏ−ＤＭＴＲ−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシン（実施例４.３）を５０mlのフラスコに計り込み、それぞれ２０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させた。次に、７.５ml（１.１ミリモル）の亜リン酸化試薬のストック溶液（０.１５モル／リットルの無水ＣＨ2Ｃｌ2）を加え、混合物を再び濃縮して油状物を得た。次に、油状物を１０mlの無水アセトニトリルで希釈し、そして２４mgのテトラゾール（０.３８ミリモル）の添加後、反応溶液を撹拌した。１５０mlのＮａＨＣＯ3／ＥＡ（１／１）溶液中に注ぎ込むことにより反応を停止した。分液ロートで相を分離し、５０mlのＥＡを用いた振盪による抽出を繰り返し、そして合一した有機相を５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過した後、濾液を回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得た。クロマトグラフィーにより、さらに精製した。このための、直径２cmのカラムは２０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで状態調整されていた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、２００／７０；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、１０ml部分のＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨで発泡させた。生成物を高真空下、室温で乾燥した。その結果、３９０mg（０.３４０ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の６８％に相当する。
【００３９】
実施例６
Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−５′−ＤＭＴＲ−３′−スクシノイル−２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）アデノシン
３３０mgの２′−Ｏ−（２−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ6−ＮＰＥＯＣ−アデノシン（実施例４.３）を５０mlのフラスコに計り込み、５０mg（０.４９０ミリモル）の無水コハク酸および６０mgの４−ＤＭＡＰを加え、その混合物を１０mlの無水塩化メチレンに取った。得られる溶液を室温で１４時間撹拌した。反応溶液を１００mlのＥＡで希釈した後、５０mlのホスフェート緩衝液（pH＝６.０）で振盪して抽出することにより反応を停止した。この操作をもう一度繰り返し、有機相を緩衝液で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。１５ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡された直径２cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、１００／５０（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＣＨ2Ｃｌ2に取り、そして綿が充填されたパスツールピペットを通して濾過した。濾液を再び濃縮し、ＭｅＯＨおよびＣＨ2Ｃｌ2で発泡させ、そして高真空下、乾燥した。その結果、２９０mg（０.２９ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の７９％に相当する。
【００４０】
実施例７
7.1   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルグアノシン
３.０７ｇ（３.５４ミリモル）の３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−保護 Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−グアノシンを２０mlの無水トルエンに溶解し、回転エバポレーターで共蒸発させることを２回繰り返した。次に、泡状物を８０mlの無水トルエンに取り、５２５mg（３.９１ミリモル）のベンジルビニルエーテルを加え、そして５.０ml（５０mg＝０.２７ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏの無水ＴＨＦ（１.０ｇ／１００ml）中のストック溶液を無色の溶液に加えた。それを一晩室温で撹拌した後（ＴＬＣチェック）、透明な反応溶液をＥＡで３００mlまで希釈し、そして１５０mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。水相を２００mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。９０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡された直径３cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝２００／０、２５０／５０、２５０／１００（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション３０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物３.１３ｇ（３.２２ミリモル）を得た。これは理論収量の９１％に相当する。
7.2   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−グアノシン
２.９４ｇ（３.０２ミリモル）のＮ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＭＰＥ−２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルグアノシン（実施例７.１）を１５０mlの０.２Ｎ ＮＨ4Ｆ溶液（３０ミリモル）に取り、一晩室温で撹拌した。溶液を回転エバポレーターで濃縮して殆ど乾燥し、得られる懸濁液を２０mlのＣＨ2Ｃｌ2に取り、簡単に超音波処理して粗生成物をカラムに付した。カラムは８０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで平衡にされていた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝２００／０／０、２００／２００／０、２００／２００／２０（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション３０ml。
濃縮により、生成物を晶出させ、ブフナーロートを通して濾過し、そして５０mlのＭｅＯＨで洗浄した。２つのフラクションから、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる全部で２.１０ｇ（２.７６４ミリモル）の非晶質固体物質を得た。これは理論収量の９２％に相当する。
7.3   ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−グアノシン
１.５９０ｇ（２.０９３ミリモル）の予備乾燥した２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−グアノシン（実施例７.２）を回転エバポレーターでそれぞれ３０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させ、３０mlの無水ピリジンに取り、８０mlの無水トルエンで希釈し、そして８５０mgのＤＭＴＲ−Ｃｌ（２.５１ミリモル）を加えた。反応溶液を一晩室温で撹拌し、そして１mlのＭｅＯＨを加えて反応を停止した。５分後、溶液を真空下、回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得、これを２００mlのＥＡに取り、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。水相を１５０mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮して油状物を得た。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなるクロマトグラフィーにより純粋な無色の泡状物２.１９０ｇ（２.０６ミリモル）を得た。これは理論収量の９９％に相当する。
【００４１】
実施例８
Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−５′−Ｏ−ＤＭＴＲ−２′−（１−ベンジルオキシエチル）−グアノシン−３′−Ｏ−亜リン酸 β−シアノエチルエステル Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミド
５３０mg（０.５ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−グアノシン（実施例７.３）を５０mlのフラスコに計り込み、それぞれ２０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させた。次に、７.２５mlの亜リン酸化試薬のストック溶液（０.１５モル／リットルの無水ＣＨ2Ｃｌ2）を加え、混合物を再び濃縮して油状物を得た。次に、油状物を１０mlのアセトニトリルで希釈し、そして２８mgのテトラゾール（０.３８ミリモル）の添加後、反応溶液を撹拌した。１５０mlのＮａＨＣＯ3／ＥＡ（１／１）溶液中に注ぎ込むことにより反応を停止した。分液ロートで相を分離し、５０mlのＥＡを用いた振盪による抽出を繰り返し、そして合一した有機相を５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過した後、濾液を回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得た。クロマトグラフィーにより、さらに精製した。このための直径２cmのカラムは２０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで状態調整されていた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、２００／７０；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、１０ml部分のＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨで発泡させた。生成物を高真空下、室温で乾燥した。その結果、１５０mg（０.４０４ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の８１％に相当する。
【００４２】
実施例９
２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−３′−Ｏ−スクシノイルグアノシン
３９０mg（０.３６７ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−Ｎ2−ＮＰＥＯＣ−Ｏ6−ＮＰＥ−グアノシン（実施例７.３）を５０mlのフラスコに計り込み、５８mg（０.４９０ミリモル）の無水コハク酸および７２mgの４−ＤＭＡＰ（０.５８９ミリモル）を加え、その混合物を１０mlの無水塩化メチレンに取った。得られる溶液を室温で一晩撹拌した。反応溶液を１００mlのＥＡで希釈した後、５０mlのホスフェート緩衝液（pH＝６.０）で振盪して抽出することにより反応を停止した。
この操作をもう一度繰り返し、有機相を緩衝液で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。１５ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径２cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、２００／５０、１５０／５０（Ｐ）および１００／１００（Ｐ）；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＣＨ2Ｃｌ2に取り、そして綿が充填されたパスツールピペットを通して濾過した。濾液を再び濃縮し、ＭｅＯＨおよびＣＨ2Ｃｌ2で泡状させ、そして高真空下、乾燥した。その結果、２５０mg（０.２２ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の６１％に相当する。
【００４３】
実施例１０
10.1  ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン
４.８６ｇ（１０.９ミリモル）の３′,５′−保護ウリジンを３０mlの無水トルエンに溶解し、回転エバポレーターで共蒸発させることを２回繰り返した。次に、泡状物を８０mlの無水トルエンに取り、３.３６ｇ（２５.０ミリモル）のベンジルビニルエーテルを加え、そして１９.２ml（１９２mg＝１.０ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏの無水ＴＨＦ（１.０ｇ／１００ml）中のストック溶液を無色の溶液に加えた。それを一晩室温で撹拌した後（ＴＬＣチェック）、透明な反応溶液をＥＡで３００mlまで希釈し、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。水相を１００mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。７５ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径４cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝２００／０、２５０／５０、１５０／１００（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション５０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物５.６４ｇ（９.１０ミリモル）を得た。これは理論収量の９１％に相当する。
10.2  ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）ウリジン
３.１０ｇ（５.００ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン（実施例１０.１）を２５０mlの０.２Ｎ ＮＨ4Ｆ溶液（５０ミリモル）に取り、一晩室温で撹拌した。溶液を回転エバポレーターで濃縮して殆ど乾燥し、得られる懸濁液を５０mlのＣＨ2Ｃｌ2に取り、簡単に超音波処理して粗生成物をカラム（ｄ＝５cm）に付した。カラムは１００ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝３００／０／０、２５０／１５０／０、１５０／１５０／１５、１５０／１５０／３０（Ｐ１＋Ｐ２）；各フラクション５０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物１.８６ｇ（４.８０ミリモル）を得た。これは理論収量の９６％に相当する。
10.3  ２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−ウリジン
７８０mg（２.０６ミリモル）の予備乾燥した２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）ウリジン（実施例１０.２）を回転エバポレーターでそれぞれ１０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させ、１０mlの無水ピリジンに取り、そして７８０mgのＤＭＴＲ−Ｃｌ（２.２６ミリモル）を加えた。反応溶液を一晩室温で撹拌し、そして１mlのＭｅＯＨを加えて反応を停止した。５分後、溶液を真空下、回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得、これを１５０mlのＥＡに取り、そして５０mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振盪することにより抽出した。水相を５０mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮して油状物を得た。３０ｇのシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡された直径３cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝２００／０、１００／１００、１００／１００／５、１００／１００／１００；各フラクション３０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなるクロマトグラフィーにより純粋な無色の泡状物１.２９ｇ（１.９０ミリモル）を得た。これは理論収量の９２％に相当する。
【００４４】
実施例１１
２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−Ｏ−ＤＭＴＲ−Ｎ4−ＮＰＥＯＣ−ウリジン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）ホスフィットアミド
１.００ｇ（１.４７ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−ウリジン（実施例１０.３）を５０mlのフラスコに計り込み、それぞれ２０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させた。次に、２０.０ml（３ミリモル）の亜リン酸化試薬のストック溶液（０.１５モル／リットルの無水ＣＨ2Ｃｌ2）を加え、混合物を再び濃縮して油状物を得た。次に、油状物を２０mlのアセトニトリルで希釈し、そして１００mgのテトラゾール（１.４９ミリモル）の添加後、反応溶液を撹拌した。２５０mlのＮａＨＣＯ3／ＥＡ（１／１）溶液中に注ぎ込むことにより反応を停止した。分液ロートで相を分離し、７０mlのＥＡを用いた振盪による抽出を繰り返し、そして合一した有機相を７０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過した後、濾液を回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得た。クロマトグラフィーにより、さらに精製した。このため、直径２cmのカラムは１５ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで状態調整される。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、１００／１００；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、１０ml部分のＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨで発泡させた。生成物を高真空下、室温で乾燥した。その結果、１.２３ｇ（１.４０ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の９５％に相当する。
【００４５】
実施例１２
２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−３′−スクシノイルウリジン
２５０mg（０.３６８ミリモル）の２′−Ｏ−（１−ベンジルオキシエチル）−５′−ＤＭＴＲ−ウリジン（実施例１０.３）を５０mlのフラスコに計り込み、５０ml（０.４９０ミリモル）の無水コハク酸および６０mgの４−ＤＭＡＰを加え、その混合物を１０mlの無水塩化メチレンに取った。得られる溶液を室温で１４時間撹拌した。反応溶液を１００mlのＥＡで希釈した後、５０mlのホスフェート緩衝液（pH＝６.０）で振盪して抽出することにより反応を停止した。この操作をもう一度繰り返し、有機相を緩衝液で抽出し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。１５ｇのシリカゲルが装入され、トルエンで平衡にされた直径２cmのカラム上のクロマトグラフィーにより、さらに精製した。
移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／０、２００／５０、１５０／５０（Ｐ）および１００／１００（Ｐ）；各フラクション１０ml。
生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＣＨ2Ｃｌ2に取り、そして綿が充填されたパスツールピペットを通して濾過した。濾液を再び濃縮し、ＭｅＯＨおよびＣＨ2Ｃｌ2で発泡させ、そして高真空下、乾燥した。その結果、２６５mg（０.３４０ミリモル）の無色の泡状物を得た。これは理論収量の９３％に相当する。
【００４６】
実施例１３
13.1  ２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）ウリジン
２.０ｇ（４.１０ミリモル）の３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）ウリジンを４０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、３.０７mg（１.６３μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏおよび１.１８ｇ（６.１５ミリモル）の２−（４−ニトロフェニル）エチルビニルエーテルを加え、その混合物を室温で３０分間撹拌した。反応終了後、混合物をジクロロメタンで希釈し、それぞれ９０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出した。水性相はジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製するために、残留物をシリカゲルカラム（３.５×２１.５cm）に装荷し、トルエン（＞３００ml）、トルエン／酢酸エチル＝１２：１（４８０ml）、１１：１（２１０ml）、１０：１（２２０ml）、９：１（２００ml）、８：１（１８０ml）、７：１（１６０ml）、６：１（１４０ml）、５：１（２４０ml）および４：１（２００ml）を用いてクロマトグラフィー処理した。１５００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物する固形物を２mlのトルエン／酢酸エチル（１：１）から結晶化させ、その結晶を吸引濾過し、少量のトルエン／酢酸エチル（１：１）で洗浄し、そして高真空下、４０℃で乾燥した。２.３ｇ（３.３８ミリモル、８２％）の化合物を淡黄色の結晶として得た。融点：１４５℃。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.４７＋０.５５。
元素分析（Ｃ31Ｈ49Ｎ3Ｏ10Ｓｉ2（６７９.９２）として）
理論値：  Ｃ ５４.７６％    Ｈ ７.２６％    Ｎ ６.１８％
実測値：  Ｃ ５４.６０％    Ｈ ７.２６％    Ｎ ６.０９％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２６５（４.２８）
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：9.24(m,1H,H-N(3)); 8.12＋8.09(2d,o-H〜NO2(NPEE)); 7.94-7.88(m,1H,H-C(6)); 7.43＋7.36(2d,2H,m-H〜NO2／NPEE); 5.73-5.64(m,2H,H-C(1′),H-C(5)); 5.02-4.91(m,1H,CH(NPEE)); 4.26-3.60(m,7H,H-C(2′),α-CH2(NPEE),H-C(3′),H-C(3′),H-C(4′),CH2(5′)); 3.03-2.92(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.39＋1.33(2d,3H,CH3(NPEE)); 1.07-0.90(m,28H,イソプロピル)
13.2  ２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジン
２.０mg（２.９５ミリモル）の２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）ウリジンを８.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、２.２２ｇ（７.０６ミリモル）フッ化テトラブチルアンモニウム・３Ｈ2Ｏを加え、その混合物を室温で２５分間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製するために、残留物をシリカゲルカラム（３.５×１８.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（２５０ml）、ジクロロメタン／メタノール＝１００：１（２５０ml）、９８：１（３００ml）、９６：１（３００ml）、９４：１（３００ml）、９０：１（２５０ml）、８５：１（５００ml）、８０：１（４００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして１４００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。固体残留物を１５mlの酢酸エチルから結晶化させ、得られる沈殿物を吸引濾過し、高真空下４０℃で乾燥し、そして１.１３ｇ（２.５９ミリモル、８８％）の淡黄色結晶の化合物を単離した。融点１６２℃。ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.４２＋０.４６、ジクロロメタン／メタノール（９：１）。
元素分析（Ｃ19Ｈ23Ｎ3Ｏ9（４３７.４０）として）
理論値：  Ｃ ５２.１７％    Ｈ ５.３０％    Ｎ ９.６０％
実測値：  Ｃ ５１.７１％    Ｈ ５.４７％    Ｎ ９.２０％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２６５（４.２３）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：11.36(s,1H,H-N(6)); 8.12(d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.92-7.88(m,1H,H-C(6)); 7.47(d,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 5.89-5.84(m,1H,H-C(1′)); 5.65-5.62(m,1H,C-H(5)); 5.19-5.17(m,2H,HO-C(5′), HO-C(3′)); 4.83-4.79(m,1H,CH(NPEE))；4.16-3.50(m,7H,H-C(2′)); H-C(3′), H-C(4′), α-CH2(NPEE), CH2(5′)); 2.90-2.80(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.22-1,1,13(m,3H,CH3(NPEE))
13.3  ２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジン
３.０ｇ（６.１６ミリモル）の３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）ウリジンを６０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、氷／塩浴中で０℃まで冷却し、４.６mg（２４.１８μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏおよび１.７８ｇ（９.２４ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、その混合物を氷浴中で２〜３時間撹拌し、０.５Ｎナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物をジクロロメタンに取り、それぞれ９０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄し、水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
残留物を１３.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、４０８ｇ（０.０１３モル）のフッ化テトラブチルアンモニウム・３Ｈ2Ｏを加え、その混合物を室温で１1/4時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製するために、残留物をフラッシュシリカゲルカラム（３.０×１９.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（２５０ml）、ジクロロメタン／メタノール＝１００＝１（２５０ml）、９５：１（２８５ml）、９０：１（４５０ml）、８０：１（４８０ml）で溶離し、そして１２００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留する固形物を１５mlの酢酸エチルから再結晶した。その結晶を吸引濾過し、そして高真空下４０℃で乾燥した。２.４７ｇ（５.６６ミリモル、９２％）の所望の生成物を淡黄色の結晶として単離した。融点１６２℃。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.４２＋０.４６（ジクロロメタン／メタノール＝９：１）
元素分析（Ｃ19Ｈ23Ｎ3Ｏ9（４３７.４０）として）
理論値：  Ｃ ５２.１７％    Ｈ ５.３０％    Ｎ ９.６０％
実測値：  Ｃ ５１.７１％    Ｈ ５.４７％    Ｎ ９.２０％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２６５（４.２３）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：11.36(s,1H,H-N(6)); 8.12(d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.92-7.88(m,1H,H-C(6)); 7.47(d,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 5.89-5.84(m,1H,H-C(1′)); 5.65-5.62(m,1H,H-C(5)); 5.19-5.17(m,2H,HO-C(5′)); HO-C(3′)); 4.83-4.79(m,1H,CH(NPEE))；4.16-3.50(m,7H,H-C(2′), H-C(3′), H-C(4′), α-CH2(NPEE), CH2(5′)); 2.90-2.80(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.22-1,1,13(m,3H,CH3(NPEE))
13.4  ５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジン
０.５ｇ（１.４ミリモル）の２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジンをそれぞれ１５mlの無水ピリジンを用いて３回蒸発させ、その残留物を６０mlの無水ピリジンに溶解し、０.４６ｇ（０.３７ミリモル）の４,４′−ジメトキシトリフェニルメチルクロライドを加え、そして混合物を室温で４時間撹拌した。次に、混合物を１０mlのメタノールで希釈し、室温でさらに３０分間撹拌し、その混合物を回転エバポレーターで半分の容量まで蒸発させ、ジクロロメタンに取り、そしてそれぞれ８０mlの水で２回洗浄した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物をトルエンを用いて数回共蒸発させた。精製するために、粗生成物をシリカゲルカラム（４.０×２５.０cm）に入れ、トルエン（１００ml）、トルエン／酢酸エチル＝２：１（４５０ml）、１：１（６００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして５５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。次に、すべてのフラクションを集め、合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を４mlのジクロロメタンに溶解し、５００mlの石油エーテルに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、高真空下パラフィンシェィビング上において４０℃で乾燥した。無色の非晶質固体として０.６７ｇ（０.９１ミリモル、８０％）の化合物を得た。融点１３６℃。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.４４（ジクロロメタン／メタノール＝１５：１）
元素分析（Ｃ40Ｈ41Ｎ3Ｏ11（７３９.７８）として）
理論値：  Ｃ  ６４.９４％    Ｈ  ５.５８％    Ｎ  ５.６８％
実測値：  Ｃ  ６５.３１％    Ｈ  ６.０９％    Ｎ  ５.１０％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２０４（４.７８）、２３３（４.３３）、２６６（４.２２）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：11.4(s,1H,NH); 8.11(d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.74＋7.71(2d,1H,H-C(6)); 7.48(d,m-H〜NO2(NPEE); 7.38-7.22(m,9H,o-H〜OCH3,H(フェニル)); 6.88(d,4H,m-H〜OCH3); 5.85＋5.81(2d,1H,H-C(1′)),5.32-5.21(m,2H,H-C(5),HO-C(3′)); 4.91-4.87(m,1H),CH(NPEE); 4.24-4.12(m,2H,H-C(2′),H-C(3′)); 3.96(m,1H,H-C(4′)); 3.72-3.58(m,8H,OCH3,α-CH2(NPEE)); 3.32-3.19(m,2H,CH2(5′)); 2.89(t,2H,β-CH2(NPEE)); 1.26-1,18(m,3H,CH3(NPEE))
【００４７】
実施例１４
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）ホスフィットアミド
保護ガス雰囲気下、０.５ｇ（０.６７ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジンを１０mlの酸を含まない無水のジクロロメタンに溶解し、２３.６mg（０.３３ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールおよび０.４０７ｇ（１.３５ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）（２−シアノエトキシ）ホスフィンを加え、そして混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次いで反応混合物をジクロロメタンで希釈し、それぞれ３０mlの塩化ナトリウム／飽和炭酸水素ナトリウム溶液で振盪することにより２回抽出し、水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
粗生成物をシリカゲルカラム（３.３×１４.０cm）に装荷し、トルエン＋０.５％Ｅｔ3Ｎ（５０ml）、トルエン／酢酸エチル（２：１）＋０.５％Ｅｔ3Ｎ（３００ml）、トルエン／酢酸エチル（１：１）＋０.５％Ｅｔ3Ｎ（１００ml）で溶離し、そして２００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。すべての生成物フラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。得られる油状物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。高真空下で乾燥して３１４.０mg（０.３３ミリモル、５０％）の黄色の泡状物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.４６＋０.５５（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ49Ｈ58Ｎ5Ｏ12Ｐ（９４０.０）として）
理論値：  Ｃ  ６２.６１％    Ｈ  ６２.６１％    Ｎ  ７.４５％
実測値：  Ｃ  ６２.４２％    Ｈ    ６.２９％    Ｎ  ７.４９％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２０２（４.８９）、２３４（４.３２）、２６５（４.２６）
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：9.39(s,1H,NH); 8.1(d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 8.09-7.93(m,1H,H-C(6)); 7.40-7.20(m,11H,m-H〜OCH3,H(フェニル), m-H〜NO2(NPEE)); 6.08-5.99(m,1H,H-C(1′)); 5.29-5.25(m,1H,H-C(5)); 5.21-4.98(m,1H,CH(NPEE); 4.58-4.38(m,2H,H-C(2′),H-C(3′)); 4.27-4.20(m,1H,H-C(4′)); 4.09-3.44(m,14H,α-CH2(NPEE),P-O-CH2,OCH3,CH2(5′),N-CH); 2.98-2.90(m,2H,β-CH2(NPEE)); 2.64＋2.43(2t,2H,CH2-CN)); 1.40-1.14(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)
31P-NMR(161.70MHz, CDCl3, H3PO4, ppm): 151.24; 150.85; 150.75; 150.14
【００４８】
実施例１５
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−（４−ニトロフェニル）エチル）ホスフィットアミド
０.１５ｇ（０.２０２ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジンおよび９.６mg（０.１３７ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールを窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、４mlの酸を含まない無水のジクロロメタンに溶解し、０.２１ｇ（０.５４７ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）−２−（４−ニトロフェニル）エトキシホスフィンを加え、そして混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次に、それを回転エバポレーターで蒸発させ、そして精製のために粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×１０.０cm）に装荷した。それをトルエン（２５０ml）、トルエン／酢酸エチル＝３：１（２００ml）、２：１（６００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして５００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。高真空下で乾燥して０.１２５ｇ（０.１２ミリモル、６０％）の所望の生成物を無色の泡状物として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ54Ｈ62Ｎ5Ｏ14Ｐ（１０３６.０９）として）
理論値：  Ｃ  ６２.６０％    Ｈ  ６.０３％    Ｎ  ６.７５％
実測値：  Ｃ  ６２.５５％    Ｈ  ６.１５％    Ｎ  ６.４８％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２０２（５.０）、２３５（４.３９）、２６７（４.４３）
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：8.72(s,1H,NH); 8.12-7.98(m,5H,H-C(6),o-H〜NO2(NPEEおよびNPE)); 7.41-7.21(m,13H,H(フェニル),m-H〜NO2(NPEEおよびNPE), m-H〜OCH3); 6.81(d,4H,o-H〜OCH3); 6.15-6.0(m,1H,H-C(1′)); 5.27-5.18(m,1H,H-C(5)); 5.01-4.89(m,1H,CH(NPEE); 4.37-4.03(m,3H,H-C(2′),H-C(3′), H-C(4′)); 4.0-3.21(m,14H,α-CH2(NPEE),OCH3,P-O-CH2,CH2(5′),N-CH); 3.01-2.85(m,4H,CH2-NO2),β-CH2(NPEE); 1.30-0.99(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)
31P-NMR(161.70MHz, CDCl3, H3PO4, ppm): 150.04; 149.83; 149.39; 149.28
【００４９】
実施例１６
16.1  Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジン
０.５ｇ（０.７３ミリモル）のＮ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジンを８mlの無水ジクロロメタンに溶解し、０.５８mg（３.０５μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中で０℃まで冷却した。次に、０.２１１ｇ（１.０９５ミリモル）の４−ニトロフェニルビニルエーテルを加え、反応溶液を初めに氷浴中で撹拌し、その後ゆっくりと室温まで加温した。６時間後、反応溶液を１.０Ｎのナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×１８.０cm）に装荷し、トルエン（４００ml）、トルエン／酢酸エチル＝５：１（２４０ml）、４：１（５００ml）、３：１（８４０ml）、２：１（５００ml）で溶離し、そして１３００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして得られる油状物をジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して０.５３ｇ（０.６０７ミリモル、８３％）の所望の生成物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２７＋０.４４（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ40Ｈ57Ｎ5Ｏ13Ｓｉ2（８７２.０９）として）
理論値：  Ｃ  ５５.０９％    Ｈ  ６.５８％    Ｎ  ８.０３％
実測値：  Ｃ  ５４.９３％    Ｈ  ６.６５％    Ｎ  ７.８３％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２１１（４.５３）、２４７（４.３３）、２７６（４.３６）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.88(s,1H,NH); 8.16-8.02(m,5H,H-C(6),o-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC); 7.61-7.48(m,4H,m-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC)); 6.97(d,1H,H-C(5)); 5.67＋5.69(2s,1H,H-C(1′)); 5.05-4.92(m,1H,CH(NPEE)); 4.37-4.33(m,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.22-3.58(m,7H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′);α-CH2(NPEE),CH2(5′)); 3.09-2.90(m,4H,β-CH2(NPEOC),β-CH2(NPEE); 1.34＋1.26(2d,3H,CH3(NPEE)); 1.03-0.77(m,28H,イソプロピル)
16.2  Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジン
１.０ｇ（１.４７ミリモル）の２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジン（実施例１９から）を２０mlの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、０.５９ｇ（１.９１ミリモル）の１−メチル−３−ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルイミダゾリウムクロライドを加え、そして混合物を室温で３時間撹拌した。次に、ジメチルホルムアミドを高真空下、回転エバポレーターで蒸発させて除去し、残留物をジクロロメタンに取り、そして溶液をそれぞれ５０mlの水で２回、５０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１回振盪することにより抽出した。すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、残留物をシリカゲルカラム（２.０×１８.０cm）に装荷し、トルエン（１５０ml）、トルエン／酢酸エチル＝４：１（６５０ml）、２：１（１５０ml）、１：１（１００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして５００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、残留する油状物をジクロロメタンを用いて数回共蒸発させ、そして得られる無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥した。１.２３ｇ（１.４１ミリモル、９５％）の化合物を単離できた。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２７＋０.４４（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
Ｃ40Ｈ57Ｎ5Ｏ13Ｓｉ2（８７２.０９）
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２１１（４.５３）、２４７（４.３３）、２７６（４.３６）
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：10.88(s,1H,NH); 8.16-8.02(m,5H,H-C(6),o-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC); 7.61-7.48(m,4H,m-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC)); 6.97(d,1H,H-C(5)); 5.67＋5.69(2s,1H,H-C(1′)); 5.05-4.92(m,1H,CH(NPEE)); 4.37-4.33(m,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.22-3.58(m,7H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′); α-CH2(NPEE),CH2(5′)); 3.09-2.90(m,4H,β-CH2(NPEOC),β-CH2(NPEE));
1.34＋1.26(2d,3H,CH3(NPEE)); 1.03-0.77(m,28H,イソプロピル)
16.3  Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
２.０ｇ（２.９５ミリモル）のＮ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジンを３０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、２.３６mg（１２.４μモル）の４−トルエンスルホン酸・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中で０℃まで冷却した。この混合物に０.８５ｇ（４.４２ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、反応混合物を初めに氷浴中で撹拌し、その後ゆっくりと室温まで加温した。９時間後、混合物を１.０Ｎのナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留する油状物を７.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、１.９５ｇ（６.１９ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオライド・３Ｈ2Ｏおよび０.５mlの氷酢酸を加え、混合物を室温で４時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製するために、残留物をシリカゲルカラム（３.５×１５.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（４００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９０：１（２７０ml）、５０：１（２５０ml）、３０：１（５００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして１１００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を５mlのジクロロメタンに溶解し、１５０mlのジエチルエーテルに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下４０℃で乾燥した。１.２５ｇ（１.９８ミリモル、６８％）の所望の生成物を無色の非晶質固体として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.３８＋０.４８（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
元素分析（Ｃ28Ｈ31Ｎ5Ｏ12（６２９.５８）として）
理論値：  Ｃ  ５３.４１％    Ｈ  ４.９６％    Ｎ  １１.１２％
実測値：  Ｃ  ５３.４６％    Ｈ  ５.１３％    Ｎ  １０.８９％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２１２（４.４９）、２.４７（４.３２）、２７５（４.３４）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.79(s,1H,NH); 8.41-8.35(m,1H,H-C(6)); 8.15-8.05(m,4H,o-H〜NO2(NPEOCおよびNPE)); 7.60-7.42(m,4H,m-H〜NO2(NPEOCおよびNPEE)); 6.95(d,1H,H-C(5)); 5.87-5.79(2d,1H,H-C(1′)); 5.24-5.07(m,2H,HO-C(5′),HO-C(3′)); 4.96＋4.90(2q,1H,CH(NPEE)); 4.75(t,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.10-3.67(m,7H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′),CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 3.07(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 1.25-1.19(2d,3H,CH3(NPEE))
16.4  Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
２.７８ｇ（３.１８ミリモル）のＮ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジンを８.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、２.５１ｇ（７.９７ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオライド・３Ｈ2Ｏおよび０.６mlの氷酢酸を加え、反応溶液を室温で４時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製するために、得られる油状物をシリカゲルカラム（３.０×１５.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（３００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９５：１（３８０ml）、９０：１（３６０ml）、８０：１（２４０ml）、７０：１（３３０ml）、６０：１（９００ml）、５５：１（６６０ml）で溶離し、そして１３００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして得られる残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して１.９５ｇ（３.０９ミリモル、９７％）の所望の生成物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.３８＋０.４８（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
Ｃ28Ｈ31Ｎ5Ｏ12（６２９.５８）
分光分析データは実施例１６.３と同一である。
16.5  Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
０.５ｇ（１.１４ミリモル）の２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジンおよび０.４６ｇ（１.４９ミリモル）の１−メチル−３−ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニルイミダゾリウムクロライドを１０mlの無水ジメチルホルムアミドに溶解し、室温で３時間撹拌した。次に、ジメチルホルムアミドを高真空下、回転エバポレーターで蒸発させて除去し、残留物をジクロロメタンに取り、そして溶液をそれぞれ３０mlの水で２回、３０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１回洗浄した。すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製のために、残留物をシリカゲルカラム（３.０×１７.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（２００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９８：１（１００ml）、９６：１（９５ml）、９４：１（１９０ml）、９２：１（９０ml）、９０：１（３６０ml）、８５：１（３４０ml）、８０：１（１６０）、７６：１（７５ml）、７０：１（７０ml）、６０：１（６０ml）、５０：１（１００ml）、４０：１（８０ml）、３０：１（１８０ml）、２５：１（２５０ml）で溶解し、そして１２００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、得られる残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して０.５２％（０.８２ミリモル、７３％）の化合物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２５＋０.３３（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
Ｃ20Ｈ31Ｎ5Ｏ12（６２９.５８）
分光分析データは実施例１６.３と同一である。
16.6  ５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
１.９５ｇ（３.０９ミリモル）のＮ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジンをそれぞれ１０mlの無水ピリジンを用いて３回共蒸発させ、残留物を６０mlの無水ピリジンに溶解し、１.３６ｇ（４.０２ミリモル）の４,４′−ジメトキシトリフェニルメチルクロライドを加え、そして反応溶液を室温で一晩撹拌した。次に、１０mlのメタノールを加え、混合物をさらに３０分間室温で撹拌し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物をトルエンを用いて数回共蒸発させた。精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×１２.０cm）に装荷し、トルエン（４００ml）、トルエン／酢酸エチル＝３：１（４００ml）、２：１（１２００ml）で溶離し、そして８５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を２mlのジクロロメタンに溶解し、２５０mlのジエチルエーテルに滴加し、沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃で乾燥した。２.６１ｇ（２.８０ミリモル、９１％）の化合物を無色の非晶質固体として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.４８（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ49Ｈ51Ｎ5Ｏ15・Ｈ2Ｏ（９４９.９７）として）
理論値：  Ｃ  ６１.９５％    Ｈ  ５.１９％    Ｎ  ７.３７％
実測値：  Ｃ  ６１.４２％    Ｈ  ５.３５％    Ｎ  ７.０９％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２１１（４.７２）、２３６（４.５５）、２７４（４.４０）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.71(s,1H,NH); 8.28-8.22(m,1H,H-C(6)); 8.16-8.06(m,4H,o-H〜NO2(NPEOCおよびNPEE)); 7.60-7.22(m,13H,m-H〜NO2(NPEOCおよびNPEE)); H(フェニル),m-H〜OCH3)); 6.90-6.87(m,4H〜OCH3); 6.78-6.71(m,1H,H-C(5)); 5.75-5.74(2s,1H,H-C(1′)); 5.41-5.19(2d,1H,HO-C(3′)); 5.09-4.95(2q,1H,CH(NPEE)); 4.34(t,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.28-3.63(m,13H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′),α-CH2(NPEE),OCH3,CH2(5′)); 3.07(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 2.92(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.28-1.22(2d,3H,CH3(NPEE))
【００５０】
実施例１７
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）ホスフィットアミド
０.４ｇ（０.４３ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジンおよび１８.０mg（０.２５ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールを窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、反応物を８mlの無水アセトニトリルに溶解した（残留物分析）。次に、０.３１ｇ（１.０３ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）（２−シアノエトキシ）ホスフィンを加え、混合物を窒素雰囲気下、室温で一晩撹拌した。反応溶液を酢酸エチルで希釈し、それぞれ４０mlの塩化ナトリウム／炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出し、水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製のために、油状残留物をシリカゲルカラム（２.５×２０.０cm）に装荷し、トルエン（１００ml）、トルエン／酢酸エチル＝３：１（２００ml）、２：１（７５０ml）、１：１（２００ml）で溶離し、そして４５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物を泡状物が生成するまで酢酸エチルを用いて数回共蒸発させ、高真空下で乾燥した。０.４２ｇ（０.３７ミリモル、８６％）の化合物を無色の泡状物として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７３＋０.７６（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ58Ｈ66Ｎ7Ｏ15Ｐ（１１３２.１８）として）
理論値：  Ｃ  ６１.５３％    Ｈ  ５.８７％    Ｎ  ８.６５％
実測値：  Ｃ  ６０.８８％    Ｈ  ６.２４％    Ｎ  ８.５０％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２０３（４.９１）、〔２１４（４.６６）〕、２３５（４.４８）、２７５（４.３３）
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：8.58-8.49(m,1H,H-C(6)); 8.20-8.06(m,5H,o-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC),NH); 7.42-7.21(m,13H,m-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC),H(フェニル),m-H〜OCH3); 6.87-6.58(m,5H,o-H〜OCH3,H-C(5)); 6.10-5.91(m,1H,H-C(1′)); 5.29-5.12(m,1H,CH(NPEE)); 4.49-4.39(m,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.32-4.10(m,3H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′)); 4.0-3.78(m,8H,α-CH2(NPEE),OCH3); 3.70-3.40(m,8H,P-O-CH2,CH2(5′),N-CH,β-CH2(NPEOC)); 3.18-2.90(m,4H,CH2-CN,β-CH2(NPEE)); 1.33-0.92(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)31P-NMR(161.70MHz, CDCl3, H3PO4, ppm): 151.63, 150.34, 150.22, 149.54
【００５１】
実施例１８
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−（４−ニトロフェニル）エチル）ホスフィットアミド
０.４ｇ（０.４３ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジンおよび２０.３１ml（０.２９ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールを窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、９mlの無水アセトニトリルに溶解し（残留物分析）、０.４６ｇ（１.５ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）−２−（４−ニトロフェニル）エトキシホスフィンを加え、反応溶液を保護ガス雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次に、それを酢酸エチルで希釈し、それぞれ４０mlの塩化ナトリウム／炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄し、水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製のために、得られる油状物をシリカゲルカラム（２.５×１９.０cm）に装荷し、トルエン（１００ml）、トルエン／酢酸エチル＝４：１（２５０ml）、３：１（１２００ml）で溶離し、そして４００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物を泡状物が生成するまで酢酸エチルを用いて共蒸発させた。高真空下で乾燥して０.４８ｇ（０.３９ミリモル、９１％）の無色の泡状物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.１９＋０.３２＋０.３８（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ63Ｈ70Ｎ7Ｏ12Ｐ（１２２８.２７）として）
理論値：  Ｃ  ６１.６０％    Ｈ  ５.７４％    Ｎ  ７.９８％
実測値：  Ｃ  ６１.３１％    Ｈ  ５.９３％    Ｎ  ７.７５％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕(log ε)＝２０４（５.０）、〔２１１（４.８５）〕、２３６（４.５７）、２７４（４.５７）
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：8.52-8.41(m,1H,H-C(6)); 8.20-7.97(m,7H,o-H〜NO2(NPEOC,NPEEおよびNPE),NH); 7.43-7.19(m,15H,m-H〜NO2(NPEOC,NPEEおよびNPE),H(フェニル),m-H〜OCH3); 6.84-6.55(m,5H,o-H〜OCH3,H-C(5)); 6.02-5.90(m,1H,H-C(1′)); 5.21-5.12(m,1H,CH(NPEE)); 4.44-4.42(m,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.25-4.13(m,3H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′)); 3.92-3.61(m,10H,P-O-CH2,α-CH2(NPEE),OCH3); 3.51-3.39(m,4H,CH2(5′),N-CH); 3.15-2.81(m,6H,β-CH2(NPEE)); 1.34-1.02(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)
31P-NMR(161.70MHz, CDCl3, H3PO4, ppm): 150.28, 149.21, 148.97, 148.35
【００５２】
実施例１９
19.1  ２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′，５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジン
２.０ｇ（３.７９ミリモル）のＮ4−アセチル−３′，５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジンを４０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、０.３１ｇ（１.６４ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏおよび１.０９ｇ（５.６８ミリモル）の４−ニトロフェニルビニルエーテルを加え、混合物を室温で２.５時間撹拌し、９.５Ｎのナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物をジクロロメタンに取り、それぞれ７０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出し、すべての相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.５×２１.０cm）に装荷した。それをトルエン（２００ml）、トルエン／酢酸エチル＝１：１（２００ml）、１：２（６００ml）、１：３（６００ml）、１：４（２５０ml）、１：５（４８０ml）、１：８（１８０ml）で溶離し、そして１５００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得た。すべての生成物フラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留する油状物をジクロロメタンを用いて数回共蒸発させ、得られる無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥した。１.６４ｇ（２.４１ミリモル、６４％）の化合物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.５１（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ31Ｈ50Ｎ4Ｏ9Ｓｉ2（６７８.９３）として）
理論値：  Ｃ ５４.８４％    Ｈ ７.４２％    Ｎ ８.２５％
実測値：  Ｃ ５４.７６％    Ｈ ７.３５％    Ｎ ８.０５％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２７１（４.２７）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：8.19-8.08(m,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.71-7.57(m,1H,H-C(6)); 7.54-7.48(m,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 7.22(s,2H,NH2)); 5.06-5.04(2q,1H,CH(NPEE)); 4.19-3.60(m,7H,H-C(2′),H-C(3′),α-CH2(NPEE), H-C(4′),CH2(5′)); 2.93-2.9(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.32-1.25(2d,3H,CH3(NPEE)); 1.02-0.78(m,28H,イソプロピル)
19.2  ２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
２.０ｇ（３.７９ミリモル）のＮ4−アセチル−３′，５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジンを４０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、０.３１ｇ（１.６４ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏおよび１.０９ｇ（５.６８ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを反応溶液に加え、混合物を室温で２.５時間撹拌し、０.５Ｎのナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物をジクロロメタンに取り、それぞれ７０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出した。すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を３.０mlの無水テトラヒドロフランに取り、２.８７ｇ（９.０９ミリモル）のフッ化テトラブチルアンモニウム・３Ｈ2Ｏを加え、混合物を室温で２０分間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、得られる油状物をシリカゲルカラム（３.７×１７.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（２００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９０：１（２７０ml）、８０：１（１６０ml）、７０：１（１４０ml）、５０：１（１００ml）、４０：１（８０ml）、２０：１（１５０ml）、１０：１（４４０ml）、９：１（１００ml）で溶離し、そして１０００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得た。すべての生成物フラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物を１００mlのジクロロメタンから再結晶した。沈殿固体を吸引濾過し、高真空下、４０℃で乾燥した。１.０３ｇ（２.３６ミリモル、６２％）の無色の結晶性生成物を得たが、これは再結晶したにも関わらず、まだフッ化テトラブチルアンモニウムで汚染されていた。融点１４５℃。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.３４＋０.４（クロロホルム／メタノール＝１：１）
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２７１（４.１６）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：8.10(2d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.88-7.85(2d,1H,H-C(6)); 7.49(2d,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 7.28-7.20(2s,2H,NH2); 5.89-5.82(2d,1H,H-C(1′)); 5.72-5.70(2d,1H,H-C(5)); 5.20-4.99(m,2H,HO-C(5′),HO-C(3′)); 4.35(m,1H,CH(NPEE)); 4.08-3.48(m,7H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′),CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 2.95-2.78(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.18＋1.14(2d,3H,CH3(NPEE))
19.3  Ｎ4−アセチル−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
３.３ｇ（６.２５ミリモル）のＮ4−アセチル−３′，５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）シチジンを６０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、氷／塩浴中で０℃まで冷却し、０.５１ｇ（２.７０ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏおよび１.８０ｇ（９.３７ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、混合物を冷浴中で２時間撹拌し、そしてそれぞれ７０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回分液ロート中で振盪することにより抽出した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を１４.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、４.３ｇ（１３.６３ミリモル）のフッ化テトラブチルアンモニウム・３Ｈ2Ｏを加え、混合物を室温で３０分間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、残留する油状物をシリカゲルカラム（４.０×１３.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（６００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９５：１（５７０ml）、９０：１（８１０ml）、８５：１（５７０ml）、８０：１（４８０ml）、７０：１（５６０ml）、６０：１（４８０ml）、５５：１（２８０ml）、５０：１（５００ml）、４５：１（６４０ml）、４０：１（９８０ml）でクロマトグラフィー処理し、そして４０００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。すべての生成物を含有するフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を３mlのジクロロメタンに溶解し、３００mlのジエチルエーテルに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃で乾燥した。２.６２ｇ（５.４７ミリモル、８８％）の生成物を無色の非晶質固体として得た。融点１５７℃。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.５６＋０.６３（クロロホルム／メタノール＝９：１）
元素分析（Ｃ21Ｈ26Ｎ4Ｏ9（４７８.４６）として）
理論値：  Ｃ  ５２.７１％    Ｈ  ５.４７％    Ｎ  １１.７０％
実測値：  Ｃ  ５２.７０％    Ｈ  ５.５９％    Ｎ  １１.０９％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２１２（４.３５）、２５０（４.２６）、２７９（４.０８）
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.89(s,1H,NH); 8.41(t,1H,H-C(6)); 8.12-8.02(m,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.47(t,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 7.16(d,1H,H-C(5)); 5.88-5.79(2d,1H,H-C(1′)); 5.18(m,HO-C(5′)); 5.08(m,1H,HO-C(3′)); 4.99-4.91(2q,1H,CH(NPEE)); 4.10-3.57(m,7H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′),CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 2.92-2.83(m,2H,β-CH2(NPEE)); 2.08(s,3H,CH3(アセチル)); 1.25-1.20(2d,3H,CH3(NPEE))
19.4  Ｎ4−アセチル−５′−Ｏ−〔４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジン
１.０ｇ（２.０９ミリモル）のＮ4−アセチル−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジンをそれぞれ１０mlの無水ピリジンを用いて３回共蒸発させ、残留物を４０mlの無水ピリジンに取り、０.７７ｇ（２.３ミリモル）の４,４′−ジメトキシトリフェニルメチルクロライドを加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を１０mlのメタノールで希釈し、室温でさらに３０分間撹拌し、濃縮して半分の容量とし、ジクロロメタンに取り、そしてそれぞれ５０mlの水で２回振盪することにより抽出した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物をトルエンを用いて数回共蒸発させた。
精製のために、残留する油状物をシリカゲルカラム（３.２×２３.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（１００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝１００：１（２００ml）、９８：１（２００ml）、９５：１（４８０ml）、９０：１（２７０ml）、８５：１（２５０ml）、８０：１（２４０ml）、７０：１（１４０ml）でクロマトグラフィー処理し、そして１２００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。すべての生成物を含有するフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を２mlのジクロロメタンに溶解し、２５０mlのジエチルエーテルに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃で乾燥した。１.２９ｇ（１.６５ミリモル、８０％）の化合物を無色の非晶質固体として得た。融点１６０℃。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.４８（ジクロロメタン／メタノール＝１５：１）
元素分析（Ｃ42Ｈ44Ｎ4Ｏ11（７８０.８３）として）
理論値：  Ｃ  ６４.６０％    Ｈ  ５.６７％    Ｎ  ７.１７％
実測値：  Ｃ  ６４.８５％    Ｈ  ６.００％    Ｎ  ６.８７％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２０４（４.８４）、２３６（４.４８）、２７４（４.１７）、〔２９６（４.０６）〕
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.90(s,1H,NH); 8.34-8.24(m,1H,H-C(6)); 8.09′(d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.52-7.23(m,11H,m-H〜NO2(NPEE),H(フェニル),m-H〜OCH3); 6.98-6.95(m,1H,H-C(5)); 6.90-6.87(m,4H,o-H〜OCH3); 5.88-5.76(2s,1H,H-C(1′)); 5.25-5.15(m,1H,HO-C(3′)); 5.08-4.95(2q,1H,CH(NPEE)); 4.27-3.97(m,3H,H-C(2′),H-C(3′),H-C(4′)); 3.89-3.68(m,10H,CH2(5′),α-CH2(NPEE),OCH3); 2.92(m,2H,β-CH2(NPEE)); 2.08(s,3H,CH3(アセチル)); 1.29-1.22(m,3H,CH3(NPEE))
【００５３】
実施例２０
20.1  Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）アデノシン
０.５ｇ（０.７１１ミリモル）のＮ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）アデノシンを９mlの無水ジクロロメタンに溶解し、９.５６mg（２.９４μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中で０℃まで冷却した。次に、０.２０ｇ（１.０６ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、反応溶液を初めに氷浴中で撹拌し、その後ゆっくりと室温まで加温し、そして一晩撹拌した。それをそれぞれ５０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.５×１４.０cm）に装荷し、トルエン（５００ml）、トルエン／酢酸エチル＝５：１（３００ml）、４：１（５００ml）、３：１（８００ml）、２：１（５００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして１４００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。すべてのフラクションを連続して集め、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して、０.４１２ｇ（０.４６ミリモル、６５％）の所望の生成物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.３９（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ41Ｈ57Ｎ7Ｏ12Ｓｉ2（８９６.１２）として）
理論値：  Ｃ  ５４.９５％    Ｈ  ６.４１％    Ｎ  １０.９４％
実測値：  Ｃ  ５４.７１％    Ｈ  ６.４８％    Ｎ  １０.６２％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２０３（４.９３）、２６７（４.５８）、〔２７６（４.５１）〕
1H-NMR (250 MHz, CDCl3, TMS, ppm)：8.69-8.61(2s,1H,H-C(8)); 8.30-8.22(2s,1H,H-C(2)); 8.21(s,1H,NH); 8.15(d,2H,o-H〜NO2(NPEOC)); 8.05-7.99(2d,2H,o-H〜NO2(NPEE); 7.43-7.29(m,4H,m-H〜NO2(NPEOCおよびNPEE)); 6.02-6.0(2s,1H,H-C(1′)); 5.06-5.01(2q,1H,CH(NPEE)); 4.57-3.68(m,9H,H-C(2′),α-CH2(NPEOC),H-C(3′),α-CH2(NPEE),H-C(4′),CH2(5′)); 3.13(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 2.98-2.90(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.45-1.38(2d,3H,CH3(NPEE)); 1.07-0.84(m,28H,イソプロピル)
20.2  Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン
０.３ｇ（０.３３４ミリモル）のＮ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）−２′−Ｏ−１−（ｐ−ニトロフェニルエトキシ）エチルアデノシンを１.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、０.２６ｇ（０.８３６ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオライド・３Ｈ2Ｏおよび０.０９ml（１.６７ミリモル）の氷酢酸を加え、混合物を室温で４時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、残留物をシリカゲルカラム（３.０×１２.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（４００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９５：１（６７０ml）、９０：１（３６０ml）、８５：１（３４０ml）、８０：１（２４０ml）、７５：１（７５０ml）、７０：１（７００ml）、６５：１（６５０ml）、６０：１（６１０ml）で溶離し、そして２２００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。すべての生成物を含有するフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して、０.２０１ｇ（０.３０７ミリモル、９２％）の化合物を単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.５＋０.５７（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
元素分析（Ｃ29Ｈ31Ｎ7Ｏ11×1/2 Ｈ2Ｏ（６６２.６１）として）
理論値：  Ｃ  ５２.５６％    Ｈ  ４.８６％    Ｎ  １４.７９％
実測値：  Ｃ  ５２.４１％    Ｈ  ４.９８％    Ｎ  １４.５２％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２１２（４.５５）、２６７（４.５４）、〔２７３（４.４０）〕
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.65-10.63(2s,1H,NH); 8.72-8.69(2s,1H,H-C(8)); 8.61-8.59(2s,1H,H-C(2)); 8.13(d,2H,o-H〜NO2(NPEOC)); 8.03(d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.61(d,2H,m-H〜NO2(NPEOC)); 7.25-7.23(2d,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 6.11-6.08(2s,1H,H-C(1′)); 5.24(m,2H,HO-C(5′),HO-C(3′)); 4.81-4.74(m,2H,CH(NPEE),H-C(2′)); 4.38(t,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.38-4.26(m,1H,H-C(3′)); 3.99(m,1H,H-C(4′)); 3.72-3.42(m,4H,CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 3.10(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 2.63-2.49(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.18-1.10(2d,3H,CH3(NPEE))
20.3  Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニル）エチル〕アデノシン
０.５ｇ（０.７１１ミリモル）のＮ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）アデノシンを９mlの無水ジクロロメタンに溶解し、０.５６mg（２.９４μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中０℃まで冷却した。この溶液に０.２０ｇ（１.０６ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、反応混合物を初めに氷浴中で撹拌し、その後ゆっくりと室温まで加温し、そして一晩撹拌した。それをそれぞれ５０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出し、すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を１.８mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、０.５６ｇ（１.７７８ミリモル）のフッ化テトラブチルアンモニウム・３Ｈ2Ｏおよび０.２ml（３.５５ミリモル）の氷酢酸を加え、混合物を室温で４時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、得られる油状物をシリカゲルカラム（３.０×１０.９cm）に装荷し、ジクロロメタン（５００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝９５：１（４８５ml）、８０：１（４１０ml）、７０：１（７１０ml）、６５：１（６５０ml）で溶離し、そして１４５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得、その後のすべての生成物フラクションを合一し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させ、高真空下、４０℃で乾燥した。０.３１ｇ（０.４７４ミリモル、６７％）の所望の生成物を無色の泡状物として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.５＋０.５７（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
Ｃ29Ｈ31Ｎ7Ｏ11×１／２ Ｈ2Ｏ（６６２.６１）
分光分析データは実施例２０.２と同一である。
20.4  ５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン
５.０ｇ（０.７６ミリモル）のＮ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシンをそれぞれ１０mlの無水ピリジンを用いて３回共蒸発させ、残留物を３０mlの無水ピリジンに溶解し、０.３６ｇ（１.０７ミリモル）の塩化４,４′−ジメトキシトリフェニルメチルを加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。次に、それを酢酸エチルで希釈し、それぞれ飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出した。水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物をトルエンを用いて数回共蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×１６.０cm）に装荷し、トルエン（２００ml）、トルエン／酢酸エチル＝３：１（４００ml）、２：１（３００ml）、１：１（４００ml）、１：２（６００ml）で溶離し、そして１１００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。得られる残留物を３mlの酢酸エチルに溶解し、７５mlのｎ−ヘキサンに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃においてパラフィン肩上で乾燥した。０.７ｇ（０.７３ミリモル、９６％）の化合物を無色の非晶質固体として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）： Ｒf＝０.４４（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ50Ｈ49Ｎ7Ｏ13（９５５.９８）として）
理論値：  Ｃ  ６２.８２％    Ｈ  ５.１６％    Ｎ  １０.２５％
実測値：  Ｃ  ６２.２８％    Ｈ  ５.２６％    Ｎ  １０.２３％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（log ε）＝２０２（５.０１）、２３６（４.４２）、２６７（４.５９）、〔２７５（４.５２）〕。
1H-NMR (250 MHz, d6-DMSO, ppm)：10.55(s,1H,NH); 8.55-8.49(m,2H,H-C(8)、 H-C(2)); 8.13(d,2H,o-H〜NO2(NPEOC)); 8.03-7.97(m,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.60(d,2H,m-H〜NO2(NPEOC)); 7.37-7.20(m,11H,m-H〜NO2(NPEE),H(フェニル),m-H〜OCH3); 6.48-6.78(m,4H,o-H〜OCH3); 6.13-6.11(m,1H,H-C(1′)); 5.28-5.26(m,1H,HO-C(3′)); 4.94-4.87(m,1H,CH(NPEE)); 4.85-4.78(m,1H,H-C(2′)); 4.41-4.36(m,3H,α-CH2(NPEOC),H-C(3′)); 4.12-4.10(m,1H,H-C(4′)); 3.70(s,6H,OCH3); 3.62-3.39(m,2H,CH2(5′)); 3.10(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 2.64-2.52(m,2H,β-CH2(NPEOC)); 1.20-1.13(2d,3H,CH3(NPEE))
【００５４】
実施例２１
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）ホスフィットアミド
０.４ｇ（０.４６ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシンを２１.８mg（０.３１ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールと一緒に窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、８mlの無水アセトニトリルに溶解し（残留物分析）、そして０.３７ｇ（１.２４ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）（２−シアノエトキシ）ホスフィンを加えた。反応溶液を保護ガス雰囲気下、室温で一晩撹拌し、酢酸エチルで希釈し、そしてそれぞれ４０mlの塩化ナトリウム／炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄した。すべての水相を酢酸エチルで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、残留物をシリカゲルカラム（２.５×１８.０cm）に装荷し、トルエン／酢酸エチル＝３：１（４００ml）、２：１（６００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして５５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得、その後のすべてのフラクションを合一し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を酢酸エチルを用いて共蒸発させ、無色の泡状物を高真空下で乾燥して０.４５ｇ（０.３９ミリモル、８５％）の化合物を得た。
ＴＬＣ(シリカゲル)：Ｒf＝０.１４＋０.２３(トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ59Ｈ66Ｎ9Ｏ14Ｐ（１１５６.２０）として）
理論値：Ｃ  ６１.２９％    Ｈ  ５.７５％    Ｎ  １０.９０％
実測値：Ｃ  ６０.６１％    Ｈ  ６.０１％    Ｎ  １０.７６％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 204(4.98), 236(4.47), 226(4.56),〔276(4.48)〕
1H-NMR(250 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 8.66-8.63(m,1H,H-C(8)); 8.21-7.98(m,6H,H-C(2),o-H〜N02(NPEOCおよびNPEE),NH); 7.46-7.11(m, 13H, m-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC),H-フェニル,m-H〜OCH3); 6.83-6.76(m,4H, o-H〜OCH3); 6.21-6.11(m,1H,H-C(1′)); 5.23-5.08(m,1H,H-C(2′)); 4.98-4.73(m,1H,CH(NPEE)); 4.61-4.50(m,3H,α-CH2(NPEOC),H-C(3′)); 4.41-4.28(m,1H,H-C(4′));3.93-3.16(m,8H,OCH3,α-CH2(NPEE)); 3.76-3.42(m,4H,P-O-CH2,CH2(5′)); 3.45-3.27(m,2H,n-CH); 3.16(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 2.72-2.57(m,4H,β-CH2-CN),CH2-CN); 1.35-1.15(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)
31P-NMR(161,70 MHz,CDCl3,H3PO4,ppm): 151.56, 150.98, 150.79, 150.53
【００５５】
実施例２２
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−（４−ニトロフェニル）エチル）ホスフィットアミド
０.４ｇ（０.４１ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシンを１９.７８mg（０.２８２ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールと一緒に窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、９mlの無水アセトニトリルに溶解し（残留物分析）、そして０.４５ｇ（１.１３ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）−２−（４−ニトロフェニル）エトキシホスフィンを加えた。反応溶液を保護ガス雰囲気下、室温で一晩撹拌し、酢酸エチルで希釈し、そしてそれぞれ４０mlの塩化ナトリウム／炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄した。すべての水相を酢酸エチルで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、残留物をシリカゲルカラム（２.５×１８.０cm）に装荷し、トルエン（１００ml）、トルエン／酢酸エチル＝５：１（３００ml）、４：１（３００ml）、３：１（４００ml）、２：１（３００ml）溶離し、そして７００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを集めた。すべての生成物を含有するフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、得られる残留物を酢酸エチルを用いて数回共蒸発させ、そして得られる無色の泡状物を高真空下で乾燥した。０.４３１ｇ（０.３３ミリモル、８０％）の所望の化合物を単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.２６＋０.３０（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ64Ｈ70Ｎ9Ｏ16Ｐ（１２５２.２９）として）
理論値：Ｃ  ６１.３８％    Ｈ  ５.６８％    Ｎ  １０.０６％
実測値：Ｃ  ６０.８１％    Ｈ  ５.８２％    Ｎ    ９.５４％
UV（メタノール）: λmax〔nm〕(logε): 207(5.23),〔214(5.09)〕, 269(4.70)
1H-NMR(250 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 8.66-8.60(m,1H,H-C(8)); 8.19-7.96(m,(H,H-C(2),o-H〜N02(NPEOC,NPEおよびNPEE),NH); 7.44-7.07(m, 15H, m-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC),H(フェニル),m-H〜OCH3); 6.76+6.75(2d,4H, o-H〜OCH3); 6.25-6.08(m,1H,H-C(1′)); 5.21-4.68(m,2H,H-C(2′), CH(NPEE)); 4.54-4.42(m,3H,H-C(3′),α-CH2(NPEOC)); 4.38-4.28(m,1H,H-C(4′));4.0-3.70(m,8H,α-CH2(NPEE),OCH3); 3.60-3.40(m,4H,P-O-CH2(5′)); 3.35-3.22(m,2H,N-CH); 3.14(t,2H,CH2(NPEOC)); 3.05-2.52(m,4H,β-CH2(NPEE)),β-CH2(NPE); 1.29-0.97(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)
31P-NMR(161,70 MHz,CDCl3,H3PO4,ppm): 150.58, 149.89, 149.32, 149.25
【００５６】
実施例２３
23.1  Ｎ6−ベンゾイル−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニル）エトキシ〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）アデノシン
１.０ｇ（１.６３ミリモル）のＮ6−ベンゾイル−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）アデノシンを１６mlの無水ジクロロメタンに溶解し、３２.６mg（０.１７ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏおよび０.４６ｇ（２.４ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、混合物を室温で２.５時間撹拌し、０.５Ｎのナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物をジクロロメタンに取り、それぞれ５０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回抽出した。すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（８３.５×１６.０cm）に装荷し、トルエン（２００ml）、トルエン／酢酸エチル＝４：１（４００ml）、３：１（６００ml）、２：１（５００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして５００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを集めた。すべての生成物を含有するフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。淡黄色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して１.０ｇ（１.２４ミリモル、７６％）の化合物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.４０（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ39Ｈ54Ｎ6Ｏ9Ｓｉ2（８０７.０７）として）
理論値：Ｃ  ５８.０４％    Ｈ  ６.７４％    Ｎ  １０.４１％
実測値：Ｃ  ５８.０５％    Ｈ  ６.７８％    Ｎ  １０.２６％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 276(4.41)。
1H-NMR(250 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 9.01(s,1H,NH); 8.71-8.63(2s,1H,H-C(8)); 8.27-8.20(2s,1H,H-C(2)); 8.10-7.94(m, 4H, o-H〜NO2(NPEE),o-H(ベンゾイル); 7.57-7.07(m,5H,m-H〜NO2(NPEE),m-およびp-H(ベンゾイル); 6.01-5.99(2s,1H, H-C(1′)); 5.06-4.97(m,1H,CH(NPEE)); 4.60-4.49(m,1H,H-C(2′)); 4.40-4.32(m,1H,H-C(3′)); 4.23-3.64(m,5H,H-C(4′),CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 2.97-2.86(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.41-1.34(2d,3H,CH3(NPEE)); 1.02-0.88(m,28H,イソプロピル)
23.2  Ｎ6−ベンゾイル−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン
２.０ｇ（３.２５ミリモル）のＮ6−ベンゾイル−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）アデノシンを４０mlの無水ジクロロメタンに溶解し、５.６mg（２９.４μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中０℃まで冷却した。この溶液に２.０ｇ（１０.６ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、反応混合物を初めに氷浴中で撹拌し、その後ゆっくりと室温まで加温し、そして１.５時間後反応混合物を０.５Ｎのナトリウムメタノラート／メタノール溶液で中和し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物をジクロロメタンに取り、それぞれ６０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出した。すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を８.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、２.４６ｇ（７.８２ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオライド・３Ｈ2Ｏを加え、混合物を室温で３０分間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、得られる油状物をシリカゲルカラム（３.０×１７.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（２００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝５０：１（２００ml）、４５：１（３７０ml）、４０：１（１４０ml）、３５：１（１８０ml）で溶離し、そして５５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得、その後のすべての生成物フラクションを合一し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を２mlのジクロロメタンに溶解し、２５０mlのジエチルエーテルに滴加し、そして得られる無色の沈殿物を吸引濾過し、高真空下、４０℃で乾燥した。１.２６ｇ（２.２３ミリモル、６８％）の所望の生成物を無色の非晶質固体として得た。融点１７０℃。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.５４＋０.６０（ジクロロメタン／メタノール＝９：１）
元素分析（Ｃ27Ｈ28Ｎ6Ｏ8（６５３.６１）として）
理論値：Ｃ  ５７.４４％    Ｈ  ４.９９％    Ｎ  １４.８８％
実測値：Ｃ  ５７.０６％    Ｈ  ５.２６％    Ｎ  １４.６２％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 277(4.44)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 11.23(s,1H,NH); 8.75-8.74(2s,1H,H-C(8)); 8.72-8.71(2s,1H,H-C(2)); 8.08-8.01(m, 4H, o-H〜NO2(NPEE),o-H(ベンゾイル)); 7.64-7.51(m,3H,m-およびp-H(ベンゾイル)); 7.31-7.28(2d,2H, m-H〜NO2(NPEE)); 6.15(d,1H,H-C(1′)); 6.15(d,1H,H-C(1′)); 5.37-5.13(m,2H,HO-C(5′),HO-C(3′)); 4.93-4.72(m,2H,CH(NPEE),H-C(2′)); 4.35-4.17(m,1H,H-(3′)); 4.0(m,1H,H-C(4′); 3.79-3.40(m,4H,CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 2.68-2.60(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.18-1.134(2d,3H,CH3(NPEE))
23.3  Ｎ6−ベンゾイル−５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン
０.９ｇ（１.５９ミリモル）のＮ6−ベンゾイル−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシンをそれぞれ１０mlの無水ピリジンを用いて３回共蒸発させ、残留物を４０mlの無水ピリジンに溶解し、０.５９ｇ（１.７５ミリモル）の塩化４,４′−ジメトキシトリフェニルメチルを加え、そして反応溶液を室温で一晩撹拌した。次に、１０mlのメタノールを加え、混合物を室温でさらに３０分間撹拌し、濃縮して半分の容量とし、ジクロロメタンに取り、そしてそれぞれ５０mlの水で２回振盪することにより抽出した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物をトルエンを用いて数回共蒸発させた。
精製のために、粗生成物ををシリカゲルカラム（３.２×１７.０cm）に装荷し、トルエン（１００ml）、トルエン／酢酸エチル＝２：１（６００ml）、１：１（３００ml）、１：２（９００ml）、１：３（４００ml）で溶離し、そして１１００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得、その後のすべてのフラクションを合一し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を２mlのジクロロメタンに溶解し、２００mlのジエチルエーテルに滴加し、そして得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃で乾燥した。１.１ｇ（１.２７ミリモル、８０％）の所望の生成物を無色の非晶質固体として得た。融点１２０℃。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.６３（ジクロロメタン／メタノール＝１５：１）
元素分析（Ｃ48Ｈ40Ｎ6Ｏ10（８６６.９３）として）
理論値：Ｃ  ６６.５０％    Ｈ  ５.３４％    Ｎ  ９.６９％
実測値：Ｃ  ６５.８２％    Ｈ  ５.２１％    Ｎ  ９.７７％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 203(4.91); 233(4.49); 276(4.45)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 11.25(s,1H,NH); 8.65-8.61(m,2H,H-C(2)); 8.07-8.02(m,4H,o-H〜NO2(NPEE),o-H(ベンゾイル)); 7.64-7.51(m,3H,m-およびp-H(ベンゾイル)); 7.36-7.15(m,11H, m-H〜OCH3,H(フェニル),m-H〜NO2(NPEE)); 6.84-6.81(m,4H,o-H〜OCH3)); 6.17-6.16(m,1H,H-C(1′)); 5.35-5.33(m,1H,HO-C(3′)); 5.05-4.91(m,1H,CH(NPEE)); 4.87-4.83(m,1H,H-C(2′)); 4.48-4.31(m,1H,H-(3′)); 4.13(m,1H,H-C(4′)); 3.70-3.48(m,10H,OCH3,CH2(5′)),α-CH2(NPEE)); 2.70-2.61(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.25-1.13(2d,3H,CH3(NPEE))
【００５７】
実施例２４
Ｎ6−ベンゾイル−５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）ホスフィットアミド
１.０ｇ（１.５ミリモル）のＮ6−ベンゾイル−５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシンおよび５４.６４mg（０.７８ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールを窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、反応物を２０mlの無水で酸を含まないジクロロメタンに溶解し、０.８３ｇ（３.１１ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）（２−シアノエトキシ）ホスフィンを加え、そして反応溶液を保護ガス雰囲気下で一晩撹拌した。次に、それをジクロロメタンで希釈し、それぞれ５０mlの塩化ナトリウム／炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出し、水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物ををシリカゲルカラム（３.０×１５.０cm）に装荷し、トルエン（２００ml）、トルエン／酢酸エチル＝３：１（４００ml）、２：１（６００ml）で溶離し、そして５５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得、その後のフラクションを合一し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。得られる残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下で乾燥して１.０７ｇ（１.０ミリモル、８７％）の所望の生成物を単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.５４＋０.６６（トルエン／酢酸エチル＝１：３）
元素分析（Ｃ57Ｈ63Ｎ8Ｏ11Ｐ（１０６７.１５）として）
理論値：Ｃ  ６４.１５％    Ｈ  ５.９５％    Ｎ  １０.５０％
実測値：Ｃ  ６４.５２％    Ｈ  ６.２７％    Ｎ    ９.９６％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 204(4.93); 233(4.52); 276(4.46)
1H-NMR(250 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 9.10(s,1H,NH); 8.70-8.68(m,1H,H-C(8)); 8.28-8.21(m,1H,H-C(2)); 8.04-7.99(m,4H,o-H〜NO2(NPEE),o-H(ベンゾイル); 7.62-7.16(m,14H,H(フェニル),m-およびp-H(ベンゾイル),m-H〜NO2(NPEE),m-H〜OCH3)); 6.83-6.67(m,4H,o-H〜OCH3)); 6.23-6.11(m,1H,H-C(1′)); 5.39-5.11(m,1H,H-C(2′)); 4.98-4.72(m,1H,CH(NPE)); 4.3-4.53(m,1H,H-C(4′)); 3.93-3.82(m,2H,α-CH2(NPEE)); 3.77+3.76(2s,6H,OCH3); 3.68-3.21(m,6H,P-O-CH2,CH2(5′),N-CH); 2.70-2.62(m,4H,CH2-CN,β-CH2(NPEE)); 1.38-1.02(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)
31P-NMR（161.70 MHz, CDCl3, H3PO4, ppm): 151.60, 151.05, 150.87, 150.54
【００５８】
実施例２５
25.1  Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）グアノシン
０.５ｇ（０.５７５ミリモル）のＮ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）グアノシンを７mlの無水ジクロロメタンに溶解し、０.６mg（７.１μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中０℃まで冷却した。次に、０.２２ｇ（１.１５ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、反応溶液を初めに氷浴中で撹拌し、２時間後、ゆっくりと加温し、そして一晩室温で連続的に撹拌した。それをジクロロメタンで希釈し、それぞれ４０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回振盪することにより抽出し、水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、油状残留物をシリカゲルカラム（３.０×１１.０cm）に装荷し、トルエン（５００ml）、トルエン／酢酸エチル＝２０：１（６３０ml）、１５：１（３２０ml）、１０：１（４４０ml）、５：１（３６０ml）、４：１（３５０ml）でクロマトグラフィー処理し、そして１９００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得、すべての生成物を含有するフラクションを合一し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。油状残留物をジクロロメタンを用いて数回共蒸発させ、無色の泡状物を得た。泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して、０.５５ｇ（０.５１８ミリモル、９０％）の所望の生成物を単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.５３（トルエン／酢酸エチル＝１：１）。
元素分析（Ｃ49Ｈ64Ｎ8Ｏ15Ｓｉ2（１０６１.２７）として）
理論値：Ｃ  ５５.４５％    Ｈ  ６.０７％    Ｎ  １０.５５％
実測値：Ｃ  ５５.９１％    Ｈ  ６.３９％    Ｎ    ９.８３％
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 10.31-10.30(2s,1H,NH); 8.20-8.10(m,5H,H-C(8),o-H〜NO2(NPEおよびNPEOC); 7.93-7.74(2d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.64-7.56(m,4H, m-H〜NO2(NPEおよびNPEOC)); 7.37-7.23(2d,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 5.91-5.88(2d,1H,H-C(1′)); 5.04-4.93(2q,1H,CH(NPEE)); 4.76-4.41(m,4H,α-CH2(NPEOC),H-C(2′),H-C(3′)); 4.34(m,2H,α-CH2(NPE)); 4.18-3.53(m,5H,HC(4′),α-CH2(NPEE),CH2(5′)); 3.28(t,2H,β-CH2(NPEOC)); 3.07(m,2H,β-CH2(NPE)); 2.82-2.72(2t,2H,β-CH2(NPEE)); 1.29-1.25(2d,3H,CH3(NPEE)); 0.99-0.83(m,28H,イソプロピル)
25.2  Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシン
０.４ｇ（０.４６ミリモル）のＮ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル）−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）グアノシンを２.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、０.３５mg（１.１０ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオライド・３Ｈ2Ｏおよび０.１２ml（２.２１ミリモル）の氷酢酸を加え、混合物を室温で５時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（２.５×１４.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（３００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝１００：１（４００ml）、９０：１（５４０ml）、８０：１（４００ml）、７０：１（３５０ml）で溶離し、そして８００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物を含有するフラクションを得、生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。得られる残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させ、無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して０.２８８ｇ（０.３５１ミリモル、９５％）の化合物を単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.２５＋０.３（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
元素分析（Ｃ37Ｈ38Ｎ8Ｏ14（８１８.７６）として）
理論値：Ｃ  ５４.２８％    Ｈ  ４.６７％    Ｎ  １３.６８％
実測値：Ｃ  ５４.２５％    Ｈ  ５.１６％    Ｎ  １３.２６％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 202(4.60), 215(4.60), 268(4.60)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 10.53-10.34(2s,1H,NH); 8.48-8.43(2s,1H,H-C(8)); 8.15-8.10(m,4H,o-H〜NO2(NPEおよびNPEOC); 8.0-7.92(2d,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.62-7.57(m,4H, m-H〜NO2(NPEおよびNPEOC)); 7.23-7.19(2d,2H,m-H〜NO2(NPEE)); 6.0-5.97(2d,1H,H-C(1′)); 5.23-5.18(2d,1H,HO-C(3′)); 5.07-5.00(m,1H,HO-C(5′)); 4.78-4.60(m,4H,α-CH2(NPEOC),H-C(2′),CH(NPEE)); 4.36(t,2H,α-CH2(NPE)); 4.28-4.18(m,1H,HC(4′)); 3.72-3.49(m,4H,CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 3.36-3.26(m,2H,β-CH2(NPEOC)); 3.09(t,2H,β-CH2(NPE)); 2.66-2.52(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.17-1.11(2d,3H,CH3(NPEE))
25.3  Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシン
２.０ｇ（２.３ミリモル）のＮ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−３′,５′−Ｏ−（１,１,３,３−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイル）グアノシンを２５mlの無水ジクロロメタンに溶解し、２.８mg（１４.２２μモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏを加え、そして混合物を氷浴中０℃まで冷却した。この溶液に０.９９ｇ（４.６ミリモル）の４−ニトロフェニルエチルビニルエーテルを加え、混合物を始めに氷浴中で撹拌し、２時間後、ゆっくりと室温まで加温し、そして一晩撹拌した。反応溶液をジクロロメタンで希釈し、それぞれ５０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄した。すべての水相をジクロロメタンで逆抽出し、合一した有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。得られる油状物を６.０mlの無水テトラヒドロフランに溶解し、１.６７ｇ（５.３ミリモル）のテトラブチルアンモニウムフルオライド・３Ｈ2Ｏおよび０.６ml（０.０１ミリモル）の氷酢酸を加え、混合物を室温で５時間撹拌し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×１３.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（４００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝１００：１（５００ml）、９０：１（３６０ml）、８０：１（８００ml）、７０：１（３５０ml）で溶離し、そして１１００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。その後のすべての生成物を含有するフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物を泡状物が生成するまでジクロロメタンを用いて数回共蒸発させた。無色の泡状物を高真空下、４０℃で乾燥して、１.７５ｇ（１.８４ミリモル、９３％）の所望の化合物を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.２５＋０.３（ジクロロメタン／メタノール＝９５：５）
Ｃ37Ｈ38Ｎ8Ｏ14（８１８.７６）
分光分析データは実施例25.2と同一である。
25.4  ５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシン
１.８ｇ（２.１９ミリモル）のＮ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシンをそれぞれ１０mlの無水ピリジンを用いて３回共蒸発させ、残留物を３５mlの無水ピリジンに取り、０.９６ｇ（２.８５ミリモル）の４,４′−ジメトキシトリフェニルメチルクロライドを加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。次に、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、それぞれ５０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄し、水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を合一し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させ、そして残留物をトルエンを用いて数回共蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×１４.０cm）に装荷し、トルエン（２００ml）、トルエン／酢酸エチル＝５：１（３００ml）、４：１（７５０ml）、３：１（８００ml）、２：１（１２００ml）でクロマトグラフィー処理し、そして１３００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得、その後のすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を５mlのジクロロメタンに溶解し、２００mlのｎ−ヘキサンに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃においてパラフィンシェイビング上で乾燥した。２.３６ｇ（２.１ミリモル、９６％）の化合物を無色の非晶質固体として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.６（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ58Ｈ56Ｎ8Ｏ16（１１２１.１３）として）
理論値：Ｃ  ６２.１３％    Ｈ  ５.０３％    Ｎ    ９.９９％
実測値：Ｃ  ６１.６１％    Ｈ  ５.０３％    Ｎ  １０.１８％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 201(5.01),〔214(4.77)〕, 236(4.49), 268(4.65)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 10.33(2s,1H,NH); 8.31(s,1H,H-C(8)); 8.15-8.11(m,4H,o-H〜NO2(NPEOCおよびNPE)); 7.98-7.92(2d,2H〜NO2(NPEE)); 7.64-7.55(m,4H,m-H〜NO2(NPEOCおよびNPE)); 7.33-7.15(m,1H,m-H〜NO2(NPEE)), H(フェニル),m-H〜OCH3); 6.80-6.70(m,4H,o-H〜OCH3); 6.02(m,1H,H-C(1′)); 5.20(d,1H,HO-C(3′)); 4.84-4.70(m,4H,H-C(2′),CH(NPEE),α-CH2(NPEOC)); 4.84-4.30(m,3H,H-C(3′),α-CH2(NPE)); 4.01(m,1H,HC(4′)); 3.688-3.685-3.680-3.673(4s,6H,OCH3); 3.66-3.26(m,4H,CH2(5′),α-CH2(NPEE)); 3.34-3.19(m,2H,β-CH3(NPEOC)); 3.07(t,2H,β-CH2(NPE)); 2.71-2.50(m,2H,β-CH2(NPEE)); 1.19-1.14(2d,3H,CH3(NPEE))
【００５９】
実施例２６
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシン−３′−Ｏ−（Ｎ,Ｎ−ジイソプロピル−２−シアノエチル）ホスフィットアミド
０.４ｇ（０.３５ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシンおよび１５.０mg（０.２１ミリモル）の１Ｈ−テトラゾールを窒素ガスで満たされたフラスコに計り込み、反応物を８mlの無水アセトニトリルに溶解し（残留物分析）、そして０.２５ｇ（０.８５ミリモル）のビス（ジイソプロピルアミノ）（２−シアノエトキシ）ホスフィンを加え、反応混合物を保護ガス雰囲気下、室温で一晩撹拌した。次に、それを酢酸エチルで希釈し、それぞれ４０mlの塩化ナトリウム／炭酸水素ナトリウム溶液で３回洗浄した。水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（２.５×２１.０cm）に装荷し、トルエン（１００ml）、トルエン／酢酸エチル＝４：１（１２５ml）、３：１（４００ml）、２：１（１５０ml）、１：１（１００ml）で溶離し、そして３５０mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを集めた。その後のすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を酢酸エチルを用いて共蒸発させ、そして無色の泡状物を高真空下で乾燥して０.３４ｇ（０.２５ミリモル、７５％）のグアノシンホスフィンアミドを得た。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.４３＋０.５２（トルエン／酢酸エチル＝１：１）
元素分析（Ｃ67Ｈ73Ｎ10Ｏ17Ｐ（１３２１.３５）として）
理論値：Ｃ  ６０.９０％    Ｈ  ５.５６％    Ｎ  １０.６０％
実測値：Ｃ  ６０.８５％    Ｈ  ５.７４％    Ｎ  １０.１８％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 203(50.5),〔214(4.85)〕, 236(4.51), 268(4.63)
1H-NMR(250 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 8.14-7.96(m,7H,H-C(8),o-H〜NO2(NPE,NPEOCおよびNPEE)); 7.52-7.08(m,15H,m-H〜NO2(NPE,NPEOCおよびNPEE),m-H〜OCH3,H(フェニル)); 6.75-6.74(2d,4H, o-H〜OCH3)); 6.13-5.98(m,1H,H-C(1′)); 5.28-5.08(m,1H,CH(NPEE)); 4.91-4.69(m,3H,H-C(2′),α-CH2(NPEOC)); 4.58-4.43(m,1H,H-C(3′)); 4.41-4.19(m,3H,H-C(4′),α-CH2(NPEE)); 4.08-3.53(m,2H,P-O-CH2); 3.738-3.73(2s,6H,OCH3); 3.68-3.46(m,4H,CH2(5′),N-CH)); 3.35-3.25(m,4H,α-CH3(NPE),β-CH2(NPEOC)); 3.08-2.98(m,3H,β-CH2(NPE)); 2.75-2.58(m,4H,CH2-CN,β-CH2(NPEE)); 1.34-0.96(m,15H,CH3(NPEE),C(CH3)2)31P-NMR（161.70 MHz, CDCl3, H3PO4, ppm): 151.58, 151.02, 150.82, 150.48
【００６０】
実施例２７
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′−Ｏ−スクシノイルウリジン
２２１.９２mg（０.３ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕ウリジンをそれぞれ５mlの無水ピリジンを用いて２回共蒸発させた。残留物を７mlの無水ジクロロメタンに溶解し、４８.８６mg（０.４ミリモル）の４−ジメチルアミノピリジンおよび４０.０７mg（０.４ミリモル）の無水コハク酸を加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。反応溶液をジクロロメタンで希釈し、それぞれ２５mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回、２５mlの１０％濃度のクエン酸溶液で３回、３０mlの水で５回振盪することにより抽出した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×６.０cm）に装荷し、ジクロロメタン（２００ml）、ジクロロメタン／メタノール＝１００：１（２００ml）、９０：１（４５０ml）、８０：１（８００ml）、７０：１（５６０ml）、６０：１（３００ml）、５０：１（３００ml）で溶離し、そして１０００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。油状残留物を泡状物が生成するまで酢酸エチルを用いて数回共蒸発させ、そして高真空下、４０℃で乾燥した。０.１８４ｇ（０.２１９ミリモル、７３％）の所望の生成物を淡黄色の泡状物として単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.５４（ジクロロメタン／メタノール＝９：１）
元素分析（Ｃ44Ｈ45Ｎ3Ｏ14（８３９.８６）として）
理論値：Ｃ  ６２.９２％    Ｈ  ５.４０％    Ｎ  ５.００％
実測値：Ｃ  ６２.２１％    Ｈ  ５.２２％    Ｎ  ５.６２％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 202(4.87), 233(4.36), 266(4.28)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 11.49(s,1H,NH); 8.11-8.08(m,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.72-7.66(m,1H,H-C(6)); 7.45-7.20(m,11H,m-H〜NO2(NPEE),H(フェニル),m-H〜OCH3)); 6.87(d,4H,o-H〜OCH3)); 5.87-5.84(m,1H,H-C(1′)); 5.48-5.42(m,1H,H-C(5)); 5.27-5.23(m,1H,H-C(3′)); 4.82-4.73(m,1H,CH(NPEE)); 4.58-4.53(m,1H,H-C(2′)); 4.14-4.12(m,1H,H-C(4′)); 3.71(s,6H,OCH3); 3.69-3.25(m,4H,α-CH2(NPEE),CH2(5′)); 2.88-2.81(m,2H,β-CH2(NPEE)); 2.50-2.48(m,4H,CH2(スクシネート)); 1.19-1.13(2d,3H,CH3(NPEE))
【００６１】
実施例２８
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′−Ｏ−スクシノイルシチジン
２７９.６mg（０.３ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ4−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕シチジンをそれぞれ５mlの無水ピリジンを用いて２回共蒸発させ、残留物を７mlの無水ジクロロメタンに取り、４８.８６mg（０.４ミリモル）の４−ジメチルアミノピリジンおよび４０.０７mg（０.４ミリモル）の無水コハク酸を加え、そして反応溶液を室温で一晩撹拌した。次に、それをジクロロメタンで希釈し、それぞれ３０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回、３０mlの１０％濃度のクエン酸溶液で３回、３０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１回、３０mlの水で１回連続洗浄した。水相をジクロロメタンで逆抽出し、すべての有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。
精製のために、粗生成物をシリカゲルカラム（３.０×８.０cm）に装荷し、ジクロロメタン／メタノール＝１００：１（３００ml）、９０：１（５７０ml）、８５：１（２５０ml）、８０：１（２４０ml）、７０：１（２８０ml）、６０：１（５４０ml）、５０：１（６００ml）で溶離し、そして２０００mlの移動相を使用した後に、最初の生成物フラクションを得た。生成物を含有するすべてのフラクションを合一し、回転エバポレーターで蒸発させた。残留物を泡状物が生成するまで酢酸エチルを用いて数回共蒸発させ、そして高真空下、４０℃で乾燥した。０.２８８ｇ（０.２８ミリモル、９３％）の生成物を淡黄色の泡状物として単離した。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.６３（ジクロロメタン／メタノール＝９：１）
元素分析（Ｃ53Ｈ55Ｎ5Ｏ18×Ｈ2Ｏ（１０５０.０４）として）
理論値：Ｃ  ６０.６２％    Ｈ  ５.２７％    Ｎ  ６.６６％
実測値：Ｃ  ６０.８９％    Ｈ  ５.５９％    Ｎ  ６.１９％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 202(4.99), 236(4.56), 274(4.42)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 10.90(s,1H,NH); 8.20-8.02(m,5H,H-C(6),o-H〜NO2(NPEOCおよびNPEE)); 7.58-7.21(m,13H,m-H〜NO2(NPEEおよびNPEOC),H(フェニル),m-H〜OCH3)); 6.83-6.78(m,5H,H-C(5),o-H〜OCH3)); 5.90(m,1H,H-C(1′)); 5.22(m,1H,H-C(3′)); 4.97-4.73(m,1H,CH(NPEE)); 4.50-4.35(m,3H,α-CH2(NPEOC),H-C(2′)); 4.19(m,1H,H-C(4′)); 3.72(s,6H,OCH3); 3.61-3.34(m,4H,α-CH2(NPEE),CH2(5′)); 3.07(m,2H,β-CH2(NPEOC)); 2.82(m,2H,β-CH2(NPEE)); 2.59-2.49(m,4H,CH2(スクシネート)); 1.20-1.09(2d,3H,CH3(NPEE))
【００６２】
実施例２９
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′−Ｏ−スクシノイルアデノシン
２３９.０mg（０.２５ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕アデノシンを５mlの無水ピリジンを用いて２回共蒸発させ、残留物を５mlの無水ジクロロメタンに溶解し、４０.７２mg（０.３３ミリモル）の４−ジメチルアミノピリジンおよび３３.３５mg（０.３３ミリモル）の無水コハク酸を加え、そして混合物を室温で一晩撹拌した。次に、反応混合物を酢酸エチルで希釈し、それぞれ３０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で３回、３０mlの１０％濃度のクエン酸溶液で３回、３０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１回、３０mlの水で１回連続して振盪することにより抽出した。水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。得られる油状物を３mlの酢酸エチルに溶解し、７０mlのｎ−ヘキサンに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃においてパラフィンシェイビング上で乾燥した。０.２０１ｇ（０.１９ミリモル、７６％）の所望の生成物を無色の非晶質固体として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.６２（ジクロロメタン／メタノール＝９：１）
元素分析（Ｃ54Ｈ55Ｎ7Ｏ17×Ｈ2Ｏ（１０７４.０７）として）
理論値：Ｃ  ６０.３８％    Ｈ  ５.１６％    Ｎ  ９.１２％
実測値：Ｃ  ５９.９１％    Ｈ  ４.９１％    Ｎ  ９.１４％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 202(5.02), 236(4.44), 267(4.58),〔275(4.51)〕
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 12.28(s,1H,OH-(スクシネート)); 10.70(s,1H,NH); 8.62(s,1H,H-C(8)); 8.46-8.43(2s,1H,H-C(2)); 8.13(d,2H,o-H〜NO2(NPEOC)); 8.03-7.97(m,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.60(d,2H,m-H〜NO2(NPEOC)); 7.39-7.09(m,11H,m-H〜NO2(NPEE),H(フェニル),m-H〜OCH3)); 6.84-6.79(m,4H,o-H〜OCH3)); 6.18-6.12(m,1H,H-C(1′)); 5.42-5.38(m,2H,H-C(2′),H-C(3′)); 4.78-4.66(m,1H,CH(NPEE)); 4.38(t,2H,α-CH2(NPEOC)); 4.27(m,1H,H-C(4′)); 3.70(s,6H,OCH3); 3.35-3.22(m,3H,H-C(5′)); α-CH2(NPEE)); 3.12-3.02(m,3H,H-C(5″),β-CH2(NPEOC)); 2.59-2.39(m,6H,β-CH2(NPEE)),CH2(スクシネート));
1.10-1.01(2d,3H,CH3(NPEE))
【００６３】
実施例３０
５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕−３′−Ｏ−スクシノイルグアノシン
１６８.１７mg（０.１５ミリモル）の５′−Ｏ−（４,４′−ジメトキシトリフェニルメチル）−Ｎ2−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニル〕−Ｏ6−〔２−（４−ニトロフェニル）エチル〕−２′−Ｏ−〔１−（４−ニトロフェニルエトキシ）エチル〕グアノシンをそれぞれ５mlの無水ピリジンを用いて３回共蒸発させ、残留物を２５mlの無水ジクロロメタンに取り、２４.４３mg（０.２ミリモル）の４−ジメチルアミノピリジンおよび２０.０１mg（０.２ミリモル）の無水コハク酸を加え、そして反応溶液を室温で一晩撹拌した。次に、それを酢酸エチルで希釈し、それぞれ２０mlの１０％濃度のクエン酸溶液で３回、２０mlの飽和炭酸水素ナトリウム溶液で２回、２０mlの水で２回連続して振盪することにより抽出した。水相を酢酸エチルで逆抽出し、すべての有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させた。油状残留物を２mlの酢酸エチルに溶解し、４０mlのｎ−ヘキサンに滴加し、得られる沈殿物を吸引濾過し、そして高真空下、４０℃においてパラフィンシエィビング上で乾燥した。０.１１６ｇ（０.０９５ミリモル、６４％）の所望の生成物を無色の非晶質固体として得た。
ＴＬＣ（シリカゲル)：Ｒf＝０.４６（トルエン／酢酸エチル／メタノール＝５：４：１）
元素分析（Ｃ62Ｈ60Ｎ8Ｏ19（１２２１.２１）として）
理論値：Ｃ  ６０.９７％    Ｈ  ４.９５％    Ｎ  ９.１７％
実測値：Ｃ  ６０.２８％    Ｈ  ４.９６％    Ｎ  ９.１５％
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 202(5.07),〔214(4.88)〕, 236(4.48),268(4.64)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, ppm): 12.28(s,1H,OH-(スクシネート)); 10.32-10.28(2s,1H,NH); 8.39-8.37(2s,1H,H-C(8)); 8.16-8.10(m,4H,o-H〜NO2(NPEおよびNPEOC)); 8.01-7.96(m,2H,o-H〜NO2(NPEE)); 7.63-7.57(m,4H,m-H〜NO2(NPEおよびNPEOC)); 7.31-7.10(m, 11H, m-H〜NO2(NPEE),H(フェニル),m-H〜OCH3)); 6.78-6.70(m,4H,o-H〜OCH3); 6.08-6.0(m,1H,H-C(1′)); 5.48-5.30(m,2H,H-C(2′),H-C(3′)); 4.78-4.60(m,3H,α-CH2(NPEOC),CH(NPEE)); 4.37(m,2H,α-CH2(NPEE)); 4.13(m,1H,H-C(4′),3.68(s,6H,OCH3); 3.60-3.05(m,8H,CH2(5′),α-CH2(NPEE),β-CH2(NPEOCおよびNPE)); 2.55-2.49(m,6H,β-CH2(NPEE),CH2(スクシネート)); 1.09-1.01(2d,3H,CH3(NPEE))
【００６４】
実施例３１
４−アルコキシカルボニルオキシベンジルビニルエーテルおよび４−アシルオキシベンジルビニルエーテル誘導体の一般的な製造法
31.1  ３−フルオロ−４−ヒドロキシベンジルアルコール
２２.８ｇ（０.２モル）の２−フルオロフェノールを６０mlの２０％ＫＯＨ（０.２１４モル）に溶解し、黄色がかった溶液を油浴中で６０℃まで加熱した。次に、３０mlの３７％濃度のホルムアルデヒド溶液（０.３７０ミリモル）に水を加えて１００mlとし、これを３時間にわたって滴加した。ＴＬＣチェックは２つの主要な生成物の生成を示し、さらに移動する方が所望のモノアルキル化生成物に相当する。赤味がかった溶液をさらに３時間６０℃に維持し、冷却溶液を０.５リットルの氷水／３００mlの酢酸エチル（ＥＡ）に注ぎ込んだ。約２０mlの濃ＨＣｌを用いてpHを５〜６に調整した。有機相を分液ロートで分離し、それぞれ３００mlのホスフェート緩衝液（pH６）で２回、次に３００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、集めた水相を１５０mlのＥＡで２回逆抽出し、再びホスフェート緩衝液／ＮａＣｌ溶液で洗浄した。合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物（約２３ｇ）を得た。さらに、クロマトグラフィーにより処理した。このため、カラム（直径６cm）は２００ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされ、そして粗生成物の添加後、次の勾配（トルエン／ＥＡ、ml）：２００／０、４５０／５０、４００／１００、３５０／１５０、３００／２００に付される。溶離液をそれぞれ１００mlのフラクションで集め、生成物フラクション（約５００ml）を合一し、回転エバポレーターで濃縮して約１００mlとした。ガラス棒でかき取った後、溶液を冷蔵庫で一晩保存して結晶化させた。無色の塊の結晶を吸引濾過し、２０mlの冷石油エーテルで２回洗浄し、そして高真空下５０℃で乾燥した。
このようにして、１０.３ｇ（７.２５ミリモル、３６％）の３−フルオロ−４−ヒドロキシベンジルアルコールを得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
融点：１０１℃
UV(メタノール): λmax〔nm〕(logε): 222(3.98), 272(3.22)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, TMS, ppm): 9.80(s,1H,フェニル-OH); 7.05(s,1H,H-(C2)); 6.95-6.80(m,2H,H-(C6),H-(C5)); 5.12(s,1H, ベンジル-OH); 4.35(d,2H,CH2)
31.2  ４−メトキシトリチル２,５−ジクロロ−４−ヒドロキシベンジルエーテル
６ｇ（３１.１ミリモル）の２,５−ジクロロ−４−ヒドロキシベンジルアルコールを７０mlの無水ピリジンに溶解し、１１.０ｇ（３５.６２ミリモル）の塩化モノメトキシトリチルクロライドを加えた。黄色がかった溶液を室温で数時間撹拌した。ＴＬＣチェックが完全な変換を示した後、２０mlのＭｅＯＨを用いて約３０分間撹拌して反応を停止した。無色の反応溶液を回転エバポレーターで濃縮して約３０mlとし、３００mlのＥＡで希釈し、そしてそれぞれ３００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で３回洗浄した。合一した水相を２００mlのＥＡで２回逆抽出し、後者を２００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で１回洗浄した。ＥＡ相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物（約１７ｇ）を得た。５０mlのトルエンを用いて２回共蒸発させた後、粗生成物をクロマトグラフィーにより精製した。溶離液をそれぞれ７５mlのフラクションで集め、生成物フラクションを合一し（約３００ml）、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。生成物を３０mlの蒸留ＭｅＯＨを用いて２回共蒸発させ、蒸留してＣＨ2Ｃｌ2を用いて泡状物に変換し、そして泡状物を高真空下、２５℃で乾燥し、徐々に樹脂化した。その収量は１３.５１ｇ（２７.２７ミリモル）であり、理論量の８８％であった。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.３２（トルエン／ＥＡ＝１０／１）
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, TMS, ppm): 10.65(bs,1H,フェニル-OH); 7.48-7.10(m,13H,フェニル-H,H-(C6)); 7.00-6.81(m,3H,H-(C3),o-H〜OCH3); 4.05(s,2H,CH2); 3.68(s,3H,-OCH3)
【００６５】
31.3  ３−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルアルコール
無水トルエンを用いて共蒸発させた４−メトキシトリチル３−クロロ−４−ヒドロキシベンジルエーテル（１２.１ｇ、２８.０８ミリモル）を５０mlの無水ＣＨ3ＣＮに取り、そして９.３５ｇ（３０.０ミリモル）の２−（ｐ−ニトロフェニル）エトキシカルボニル−１−メチルイミダゾリウムクロライドを加えた。次に、７００mgのＤＭＡＰを懸濁液に加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。沈殿物は数分で溶解した。反応溶液を回転エバポレーターで濃縮して約半分の容量とし、３００mlのＥＡで希釈し、それぞれ２００mlの飽和ＮａＨＣＯ3／ＮａＣｌ溶液で洗浄し、集めた水相を１００mlのＥＡで２回逆抽出し、そして再びＮａＨＣＯ3／ＮａＣｌ溶液で洗浄した。合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して黄色がかった油状物（約２４ｇ）を得た。粗生成物は次の酸性エーテル分解に対して十分に純粋であった。油状物を５０mlのＣＨＣｌ3／ＭｅＯＨ（４／１）に取り、１.０ｇ（３.１７ミリモル）のｐ−トルエンスルホン酸を加え、そして混合物を室温で２〜３時間撹拌した。反応溶液を２００mlのＣＨＣｌ3で希釈し、冷飽和ＮａＨＣＯ3溶液に注ぎ込んだ。有機相を分液ロートで分離し、再び２００mlのＮａＨＣＯ3溶液および２００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、水相を５０ml部分のＣＨＣｌ3で逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物（約２５ｇ）を得た。さらに、クロマトグラフィーにより精製した。このため、カラム（直径６cm）は２５０ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされ、そして粗生成物の添加後、次の勾配（トルエン／ＥＡ、ml）；３００／０、４５０／５０、４００／１００、３５０／１５０、３００／２００に付される。溶離液をそれぞれ５０mlのフラクションで集め、生成物フラクションを合一し（約３００ml）、回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。ＭｅＯＨを用いて共蒸発させた後、ＣＨ2Ｃｌ2を用いて樹脂を泡状物に変換し、そして高真空下、室温で乾燥した。７.４１ｇ（２１.０７ミリモル、７４％）の無色の樹脂を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２４（トルエン／ＥＡ＝３／１)
31.4  ２,５−ジクロロ−４−ピバロイルオキシベンジルアルコール
無水トルエンを用いて共蒸発させた４−メトキシトリチル２,５−ジクロロ−４−ヒドロキシベンジルエーテル（１２.０ｇ、２４.２２ミリモル）を１５０mlの無水ＣＨ3ＣＮに取り、１５ml（１３.７７ｇ、７３.９３ミリモル）の無水ピバル酸（分析用）を加えた。次に、７８０mgのＤＭＡＰを加え、混合物を室温で３０分間撹拌した。約３０分後に反応は完了した。反応溶液を回転エバポレーターで濃縮して約５０mlとし、２００mlのＥＡで希釈し、それぞれ２００mlの飽和ＮａＨＣＯ3／ＮａＣｌ溶液で洗浄し、集めた水相を１００mlのＥＡで２回逆抽出し、そして再びＮａＨＣＯ3／ＮａＣｌ溶液で洗浄した。合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して黄色がかった油状物を得た。31.3の方法(メトキシトリチル保護基の除去)と同様にして、６.０１ｇ（２１.６８ミリモル）の無色の樹脂を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２９（トルエン／ＥＡ＝３／１)
1H-NMR(250 MHz, CDCl3, TMS, ppm): 7.58(s,1H,H-(C3)); 7.12(s,1H,H-(C5)),4.70(s,2H,CH2); 1.38(s,9H,-CH3)
31.5  ２−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルビニルエーテル
７.４８ｇ（２０.１２ミリモル）の２−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルアルコールを１２０mlのエチルビニルエーテルに溶解し、６８０mgの水銀(II)ビストリフルオロアセテートを加え、そして混合物を室温で６時間撹拌した。３００mlのＥＡで希釈し、２００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液に注ぎ込むことにより反応を停止した。１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液を用いて、有機相の洗浄を繰り返した。集めた水相を１００mlのＥＡで２回逆抽出した。合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで濃縮して約１５mlとした。さらに、クロマトグラフィーにより精製した。このため、カラム（直径４cm）は１５０ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされ、そして粗生成物の添加後、５００mlのトルエンで溶離される。溶離液をそれぞれ５０mlのフラクションで集め、生成物フラクションを合一し（約２５０ml）、そして回転エバポレーターで濃縮して油状物を得た。２０ml部分の蒸留ＭｅＯＨを用いて共蒸発させた後、粘稠な油状物を高真空下、２５℃で乾燥した。その収量は６.７８ｇ（１７.９５ミリモル）であり、理論量の８２％であった。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７８（トルエン／ＥＡ＝１０／１)
1H-NMR(250 MHz, d6-DMSO, TMS, ppm): 8.18(m,2H,o-H〜-NO2); 7.50(d,1H,H-(C6)); 7.42(d,2H,o-H〜-NO2),7.20(d,1H,H-(C3)); 7.05(dd,1H,H-(C5)); 6.53(dd,1H,ビニル-H); 4.78(s,2H,-CH2); 4.48(t,2H,α-CH2(NPEE)); 4.30(dd,1H,トランス-ビニル-H); 4.12(dd,1H,シス-ビニル-H); 3.18(t,2H,β-CH2(NPEE))
同様にして次の化合物を製造した：
【００６６】
31.1.a  ３−クロロ−４−ヒドロキシベンジルアルコール
収率：２３％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
融点：１２５℃
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：10.05(bs,1H,フェニル-OH); 7.28(s,1H,H-(C2)); 7.08(d,1H,H-(C6)); 6.9(d,1H,H-(C5)); 5.12(bs,1H,ベンジル-OH); 4.35(s,2H,CH2)
31.1.b  ２−クロロ−４−ヒドロキシベンジルアルコール
収率：２８％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
融点：１２７℃
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：9.72(s,1H,フェニル-OH); 7.29(s,1H,H-(C3)); 6.83-6.65(m,2H,H-(C3),H-(C5)); 5.13(t,1H,ベンジル-OH); 4.45(d,2H,CH2)
31.1.c  ２,５−ジクロロ−４−ヒドロキシベンジルアルコール
収率：３３％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
融点：１４４℃
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：10.52(s,1H,フェニル-OH); 7.40(s,1H,H-(C6)); 6.95(s,1H,H-(C3)); 5.31(t,1H,ベンジル-OH); 4.44(d,2H,CH2)31.2.a  ４−メトキシトリチル ２−フルオロ−４−ヒドロキシベンジルエーテル
収率：９５％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.３８（トルエン／ＥＡ＝１０／１）
31.2.b  ４−メトキシトリチル ３−クロロ−４−ヒドロキシベンジルエーテル
収率：８９％（泡状物／樹脂）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.３５（トルエン／ＥＡ＝１０／１）
31.2.c  ４−メトキシトリチル ２−クロロ−４−ヒドロキシベンジルエーテル
収率：９３％（泡状物／樹脂）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
31.2.d  ４−メトキシトリチル ４−ヒドロキシベンジルエーテル
収率：９３％（泡状物／樹脂）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：7.50-7.05(m,14H,フェニル-H,m-H〜フェニル-OH); 6.83-6.65(m,4H,o-H〜フェニル-OH,o-H〜OCH3); 4.8-4.7(bs,1H,ベンジル-OH); 4.03(s,2H,CH2); 3.73(s,3H,-OCH3)
【００６７】
31.3.a  ３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルアルコール
収率：７８％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２２（トルエン／ＥＡ＝３／１）
融点：１０５℃
31.3.b  ２−クロロ−４−〔２−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルアルコール
収率：７６％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２３（トルエン／ＥＡ＝３／１）
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：8.18(m,2H,o-H〜-NO2); 7.48(d,1H,H-(C6)); 7.40(m,2H,m〜NO2); 7.14(d,1H,H-(C3)); 7.05(d,1H,H-(C5)); 4.72(s,2H,-CH2); 4.46(t,2H,α-CH2(NPEE)); 3.13(t,2H,β-CH2(NPEE)); 1.88(bs,1H,ベンジル-OH ?)
31.3.c  ２,５−ジクロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルアルコール
収率：６２％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.２６（トルエン／ＥＡ＝３／１）
元素分析：（Ｃ16Ｈ13ＮＯ6Ｃｌ2（３５１.７４）として）
理論値：Ｃ  ４９.７６％    Ｈ  ３.３９％    Ｎ  ３.６３％
実測値：Ｃ  ５０.００％    Ｈ  ３.５８％    Ｎ  ３.６０％
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：8.18(m,2H,o-H〜-NO2); 7.65-7.52(m,4H,m-H〜-NO2,H-(C3),H-(C6)); 5.63(t, 1H,ベンジル-OH); 4.58-4.46(m,4H,ベンジル-CH2,α-CH2(NPEE)); 3.15(t,2H,β-CH2(NPEE))
31.3.d  ４−〔２−４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルアルコール
収率：６７％（樹脂）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５２（トルエン／ＥＡ＝１／２）
元素分析：（Ｃ16Ｈ15ＮＯ6（３５１.７４）として）
理論値：Ｃ  ６０.５７％    Ｈ  ４.７６％    Ｎ  ４.４１％
実測値：Ｃ  ６０.９３％    Ｈ  ４.８１％    Ｎ  ４.５９％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝４.０２（２６８）
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：8.20(d, 2H,o-H〜-NO2); 7.68(d,1H,m-H〜OCO); 7.30(d,2H,m〜NO2); 7.05(d,2H,m-H〜OCO); 5.2(t,1H,ベンジル-OH); 4.50-4.25(m,4H,-CH2,α-CH2(NPEE)); 3.13(t,2H,p-CH2(NPEE))
【００６８】
31.5.a  ３−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルビニルエーテル
収率：７５％（油状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７０（トルエン／ＥＡ＝１０／１）
元素分析：（（Ｃ18Ｈ16ＮＯ6Ｃｌ（３７７.３８）として）
理論値：Ｃ％  １２.３３％    Ｈ  ３.１２％    Ｎ  ２.３４％
実測値：Ｃ％  １２.４３％    Ｈ  ３.２３％    Ｎ  ４.３４％
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：8.15(m,2H,o-H〜-NO2); 7.45-7.73(m,3H,m〜-NO2,H-(C2)); 7.29-7.20(dd,1H,H-(C6)); 7.13(d,1H,H-(C5)); 4.70(s,2H,-CH2); 4.50(t,2H,α-CH2(NPEE)); 4.27(dd,1H,トランス-ビニル-H); 4.10(dd,1H,シス-ビニル-H); 3.13(t,2H,β-CH2(NPEE))
31.5.b  ３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルビニルエーテル
収率：８７％（油状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７２（トルエン／ＥＡ＝１０／１）
元素分析：（Ｃ18Ｈ16ＮＯ6Ｆ（３６１.３３）として）
理論値：Ｃ  １２.３３％    Ｈ  ３.１２％    Ｎ  ２.３４％
実測値：Ｃ  １２.４３％    Ｈ  ３.２３％    Ｎ  ４.３４％
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：8.18(d,2H,o-H〜-NO2); 7.40(m,2H,m〜-NO2); 7.21-7.06(m,3H,H-(C2),H-(C5),H-(C6)), 6.52(dd,1H,ビニル-H); 4.72(s,2H,-CH2); 4.50(t,2H,α-CH2(NPEE)); 4.28(dd, 1H,トランス-ビニル-H); 4.09(dd,1H,シス-ビニル-H); 3.13(t,2H,β-CH2(NPEE))
【００６９】
31.5.c  ２,５−ジクロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルビニルエーテル
収率：８４％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７８（トルエン／ＥＡ＝１０／１）
融点：４８℃
元素分析：（Ｃ18Ｈ15ＮＯ6Ｃｌ2（４１２.２３）として）
理論値：Ｃ  ５２.４５％    Ｈ  ３.６７％    Ｎ  ３.４０％
実測値：Ｃ  ５２.０７％    Ｈ  ３.７３％    Ｎ  ３.８３％
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：8.18(d,2H,o-H〜NO2); 7.57(s,1H,H-(C6)); 7.41(d,2H,m-H〜-NO2); 7.21(s,1H,H-(C6)); 6.53(s,1H,(CH(Cl2BnNPEOC); 4.78(s,2H,ベンジル-CH2); 4.53(t,2H,α-CH2(NPEE)); 4.37/4.29(d,1H,トランス-ビニル-H); 4.13(dd,1H,シス-ビニル-H); 3.17(t,2H,β-CH2(NPEE))
31.5.d  ４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルビニルエーテル
収率：８９％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.８８（トルエン／ＥＡ＝３／１）
融点：６４℃
元素分析：（Ｃ18Ｈ17ＮＯ6（３４３.３３）として）
理論値：Ｃ  ６２.９７％    Ｈ  ４.９９％    Ｎ  ４.０８％
実測値：Ｃ  ６２.９２％    Ｈ  ５.００％    Ｎ  ４.０４％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６８（４.０１）
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：8.18(d,2H,o-H〜NO2); 7.47-7.31(m,4H,m-H〜-NO2,m-H〜-OCO); 7.12(m,2H,o-H〜-OCO); 6.52(q,1H,CH(BnNPEOC)); 4.73(s,2H,ベンジル-CH2)); 4.48(t,2H,α-CH2(NPEE)); 4.31/4.28(d,1H,トランス-ビニル-H); 4.08(dd,1H,シス-ビニル-H)); 3.15(t,2H,β-CH2(NPEE))
31.5.e  ２,５−ジクロロ−４−ピバロイルオキシベンジルビニルエーテル
収率：５８％（油状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.８１（トルエン／ＥＡ＝２０／１）
元素分析：（Ｃ14Ｈ16Ｏ3Ｃｌ2（３０３.１９）として）
理論値：Ｃ  １２.３３％    Ｈ  ３.１２％    Ｎ  ２.３４％
実測値：Ｃ  １２.４３％    Ｈ  ３.２３％    Ｎ  ４.３４％
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：7.53(s,1H,H-(C6)); 7.15(s,1H,H-(C3)); 6.53(q,CH(Cl2BnOEE); 4.78(s,2H,ベンジル-CH2); 4.36/4.28(d,1H,トランス-ビニル-H); 4.13(dd,1H,シス-ビニル-H); 1.38(s,9H,-CH3)
【００７０】
32.1  ２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンゾイルオキシ｝−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン
３.５０ｇ（７.１９ミリモル）の３′,５′−保護ウリジンをそれぞれ３０mlの無水トルエンに溶解し、回転エバポレーターで共蒸発させることを２回繰り返した。次に、泡状物を８０mlの無水トルエンに取り、６４mlの無水トルエンに溶解した３.２０ｇ(８.８６ミリモル）のビニルエーテルを加え、そして１０ml（１００mg＝０.５２ミリモル）のｐ−ＴｓＯＨ・Ｈ2Ｏの無水ジオキサン（１.０ｇ／１００ml）中のストック溶液を無色の溶液に加えた。
混合物を一晩室温で撹拌した後（ＴＬＣチェック）、透明な反応溶液をＥＡで３００mlまで希釈し、そして１００mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振とうすることにより抽出した。水相を１００mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、そして回転エバポレーターで蒸発させた。１２０ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径４cmのカラム上のクロマトグラフィー〔移動相勾配（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ（ml））＝２００／０、２００／２０、２５０／５０、１０／１００(Ｐ１＋Ｐ２)；各フラクション５０ml〕により、さらに精製した。生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。
このようにして、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物４.６７ｇ（５.５１ミリモル、７７％）を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６０／０.６５（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ39Ｈ54Ｎ3Ｏ13Ｓｉ2Ｆ（８４８.０４）として）
理論値：Ｃ  ５５.２４％    Ｈ  ６.４２％    Ｎ  ４.９６％
実測値：Ｃ  ５５.０６％    Ｈ  ６.４８％    Ｎ  ５.０７％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６５（４.３３）
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：8.93/8.73(bs,1H,-NH); 8.19(m,2H,o-H〜NO2); 7.93/7.84(d,1H,H-(C6)); 7.18-6.87(m,3H,H-(C2),H-(C5),H-(C6)); 5.78/5.68(s,1H,H-(C1′)); 5.68-5.59(m,1H,H-(C5)); 5.14(m,1H,CH(2FPNPE); 4.78-4.46(m,4H,ベンジル-CH2,α-CH2(NPEE)); 4.29-3.41(m,5H,H-(C2′),H-(C3′),H-(C4′),H-(C5′),H-(C5″)); 3.14(t,2H,β-CH2(NPEE));1.49(t,2H,CH3(2FPNPE)
【００７１】
32.1.a  ２′−Ｏ−１−｛３−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン
収率：８６％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６４／０.６８（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ39Ｈ54Ｎ3Ｏ13Ｓｉ2Ｃｌ（８６４.５０）として）
理論値：Ｃ  ５４.１９％    Ｈ  ６.３０％    Ｎ  ４.８６％
実測値：Ｃ  ５４.１４％    Ｈ  ６.３９％    Ｎ  ４.８８％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６４（４.２８）
32.1.b  ２′−Ｏ−１−｛２−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン
収率：７９％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６５／０.６９（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ39Ｈ54Ｎ3Ｏ13Ｓｉ2Ｃｌ（８６４.５０）として）
理論値：Ｃ  ５４.１９％    Ｈ  ６.３０％    Ｎ  ４.８６％
実測値：Ｃ  ５４.１３％    Ｈ  ６.４４％    Ｎ  ４.８２％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６５（４.２９）
32.1.c  ２′−Ｏ−１−｛２,５−ジクロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル)エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン
収率：７６％（泡状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６６／０.６９（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ39Ｈ53Ｎ3Ｏ13Ｓｉ2Ｃｌ（８９８.９４）として）
理論値：Ｃ  ５２.１１％    Ｈ  ５.９４％    Ｎ  ４.６７％
実測値：Ｃ  ５２.０６％    Ｈ  ５.０５％    Ｎ  ４.５７％
32.1.d  ２′−Ｏ−１−｛４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン
収率：４４％（泡状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.８２／０.８４（トルエン／ＥＡ＝１／３）
元素分析：（Ｃ39Ｈ55Ｎ3Ｏ13Ｓｉ2（８３０.０５）として）
理論値：Ｃ  ５６.４３％    Ｈ  ６.６８％    Ｎ  ５.０６％
実測値：Ｃ  ５６.３２％    Ｈ  ６.７１％    Ｎ  ５.０４％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６４（４.３０）
32.1.e  ２′−Ｏ−１−（２,５−ジクロロ−４−ピバロイルオキシベンジルオキシ）−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジン（泡状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７２／０.７９（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ35Ｈ54Ｎ2Ｏ10Ｓｉ2Ｃｌ2（７８９.９０）として）
理論値：Ｃ  ５３.２２％    Ｈ  ６.８９％    Ｎ  ３.５５％
実測値：Ｃ  ５３.８７％    Ｈ  ７.０９％    Ｎ  ３.６１％
【００７２】
32.2  ２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチルウリジン
４.３３ｇ（５.１１ミリモル）の２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチル−３′,５′−テトライソプロピルジシロキサン−１,３−ジイルウリジンをジオキサン（無水）中におけるＴＢＡＦ・３Ｈ2Ｏ（５０mg／ml）／ＡｃＯＨ(５０mg／ml）のストック溶液８０mlに取り、室温で一晩撹拌した。溶液を回転エバポレーター（４５℃）で濃縮して残りの容量を約２０mlとし、粗生成物をカラム（ｄ＝５cm）に装荷した。カラムは１５０ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされる〔移動相勾配：（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ(ml)）＝２００／０、２００／２０、２５０／５０、２００／１００、１５０／１５０、１５０／１５０／１５、１５／１５０／３０、１５０／１５０／３０(Ｐ１＋Ｐ２)；各フラクション５０ml〕。生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。
このようにして、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなる無色の泡状物２.７５ｇ（４.５４ミリモル、８９％）を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.４５／０.４７（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ＝５／４／１）
元素分析：（Ｃ27Ｈ28Ｎ3Ｏ12Ｓｉ2Ｆ（６０５.５３）として）
理論値：Ｃ  53.56％    Ｈ  4.66％    Ｎ  6.94％
実測値：Ｃ  52.86％    Ｈ  4.83％    Ｎ  6.91％
理論値：Ｃ  52.77％    Ｈ  4.76％    Ｎ  6.84％（×0.5H2O）
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６４（４.３０）
1H-NMR(250MHz,d6-DMSO,TMS,ppm)：11.28(bs,1H,-NH); 8.18(m,2H,o-H〜NO2); 7.95/7.80(m,1H,H-(C6)); 7.63-7.09(m,5H,m-H〜NO2,H-(C2′′′),H-(C5′′′),H-(C6′′′)); 5.91(m,1H,H-(C1′)); 5.53(m,1H,H-(C5)); 5.29-5.09(m,2H,HO-(C3′),HO(C5′)); 4.95(m,1H,CH(2FPNPE)); 4,70-4.36(m,4H,ベンジル-CH2,α-CH2(NPEE)); 4.26(t,1H,H-(C2′)); 4.06(m,1H,H-(C3′)); 3.87(m,1H,H(C4′)); 3.78-3.48(m,2H,H-(C5′),H-(C5″)); 3.12(t,2H,β-CH2(NPEE)); 1.46/1.38(d,3H,CH3(2FPNPE))
【００７３】
32.2.a  ２′−Ｏ−１−｛３−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチルウリジン
収率：９７％（泡状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６４／０.６８（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ＝５／４／１）
元素分析：（Ｃ27Ｈ28Ｎ3Ｏ12Ｃｌ（６２１.８８）として）
理論値：Ｃ  ５２.１４％    Ｈ  ４.５４％    Ｎ  ６.７６％
実測値：Ｃ  ５１.７７％    Ｈ  ４.５６％    Ｎ  ６.５３％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６５（４.２７）
32.2.b  ２′−Ｏ−１−｛２−クロロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチルウリジン
収率：８２％
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６１／０.６３（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ＝５／４／１）
元素分析：（Ｃ27Ｈ28Ｎ3Ｏ12Ｃｌ（６２１.８８）として）
理論値：Ｃ  ５２.１４％    Ｈ  ４.５４％    Ｎ  ６.７６％
実測値：Ｃ  ５１.９１％    Ｈ  ４.７０％    Ｎ  ６.７６％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（１０ｇε）＝２６４（４.２５）
32.2.c  ２′−Ｏ−１−｛２,５−ジクロロ−４−〔２−(４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチルウリジン
収率：６９％（泡状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６６／０.６９（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ27Ｈ27Ｎ3Ｏ12Ｃｌ2（６５６.４３）として）
理論値：Ｃ  ４９.４０％    Ｈ  ４.１５％    Ｎ  ６.４０％
実測値：Ｃ  ４８.９９％    Ｈ  ４.３１％    Ｎ  ６.２９％
32.2.d  ２′−Ｏ−１−｛４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝−エチルウリジン
収率：８０％（黄色の結晶）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６５／０.６６（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ＝５／４／１）
元素分析：（Ｃ27Ｈ29Ｎ3Ｏ12（５８７.５４）として）
理論値：Ｃ  ５５.２０％    Ｈ  ４.９７％    Ｎ  ７.１５％
実測値：Ｃ  ５４.９１％    Ｈ  ５.０３％    Ｎ  ７.１３％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６４（４.３０）
32.2.e  ２′−Ｏ−１−（２,５−ジクロロ−４−ピバロイルオキシベンジルオキシ）−エチルウリジン（泡状物）
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.７２／０.７９（トルエン／ＥＡ＝１／１）
元素分析：（Ｃ23Ｈ28Ｎ2Ｏ9Ｃl2（５４７.３９）として）
理論値：Ｃ  ５０.４７％    Ｈ  ５.１６％    Ｎ  ５.１２％
実測値：Ｃ  ５０.３１％    Ｈ  ５.４２％    Ｎ  ５.１１％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６１（３.９９）
【００７４】
32.3.  ２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−(４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝エチル−５′−ＤＭＴＲ−ウリジン
２.４４ｇ（４.０３ミリモル）の予備乾燥した２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝エチルウリジンを回転エバポレーターでそれぞれ１０mlの無水トルエンを用いて２回共蒸発させ、２０mlの無水ピリジンに取り、２.０５ｇ（６.０６ミリモル）のＤＭＴＲ−Ｃｌを加えた。反応溶液を一晩室温で放置し、そして１０mlのＭｅＯＨを加え、さらに２０分間撹拌して反応を停止した。次に、溶液を真空下、回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得、それを２５０mlのＥＡに取り、そして１５０mlの飽和ＮａＨＣＯ3溶液および１５０mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回振とうすることにより抽出した。水相を１５０mlのＥＡで逆抽出し、合一した有機相をＮａ2ＳＯ4で乾燥し、濾過し、そして濃縮して油状物を得た。１３０ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンを用いて平衡にされた直径４cmのカラム上のクロマトグラフィー〔移動相勾配：（トルエン／ＥＡ（ml））＝３００／０、３００／３０、３００／５０、２５０／５０、２７０／７０、１５０／５０、１５０／１００、１５０／１５０、１００／２００；各フラクション１００ml〕により、さらに精製した。生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2を用いて数回共蒸発させた。その結果、２つのジアステレオマー（Ｐ１＋Ｐ２）からなるクロマトグラフィーにより純粋な無色の泡状物３.７６ｇ（３.９８ミリモル、９８％）を得た。
ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.５７／０.５９（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ＝５／４／１）
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：8.5(bs,1H,-NH); 8.18(m,2H,o-H〜-NO2); 7.96/7.87(d,1H,H-(C6)); 7.42-7.00(m,14H,フェニル-H,m-H〜-OCH3,m-H〜-NO2,H-(C2′′′), H-(C′5′′′),H-(C6′′′); 6.88-6.79(m,4H,o-H〜-OCH3); 6.04/5.95(d,1H,H-(C′); 5.27(m,1H,H-(C5)); 5.14(m,1H,CH(2FPNPE)); 4.78-4.29(m,ベンジル-CH2,β-CH2(NPEE),H-(C2′),H-(C3′)); 4.07(m,1H,H′-(C4′)); 3.78(s,6H,-OCH3); 3.51(m,2H,H-(C5′), H-(C5″)); 2.74/2.58(d,1H,HO-(C3′)); 1.46/1.40(d,3H,CH3(2FPNPE))
【００７５】
32.4  ２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−(４−ニトロフェニル)エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝エチル−５′−Ｏ−ＤＭＴＲ−ウリジン３′−Ｏ−亜リン酸β−シアノエチルエステル Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルアミド
６００mg（０.６６ミリモル）の乾燥２′−Ｏ−１−｛３−フルオロ−４−〔２−（４−ニトロフェニル）エトキシカルボニルオキシ〕ベンジルオキシ｝エチル−５′−ＤＭＴＲ−ウリジンを５０mlのフラスコに入れ、高真空下で一晩乾燥し、そして２０mlの無水ＣＨ3ＣＮに取った。これに６ml（２.７ミリモル）の亜リン酸化試薬のストック溶液（０.４５ミリモル／mlの無水ＣＨ2ＣＮ）および６mlのテトラゾールのストック溶液（１０mg／ml）を加え、そして混合物を室温でさらに１２時間撹拌した。３００mlのＮａＨＣＯ3／ＥＡ（１／１）溶液中に注ぎ込むことにより反応を停止した。分液ロートで相を分離し、１５０mlのＥＡを用いた振とうによる抽出を繰り返し、そして合一した有機相をそれぞれ１００mlの飽和ＮａＣｌ溶液で２回洗浄した。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥し、濾過し、回転エバポレーターで蒸発させて油状物を得た。クロマトグラフィーにより、さらに精製した。このため、直径２cmのカラムは２０ｇのフラッシュシリカゲルが装入され、トルエンで状態調整される〔移動相勾配（トルエン／ＥＡ（ml））＝１００／２０、２１０／７０；各フラッシュ１０ml〕。生成物フラクションを回転エバポレーターで蒸発させ、１０ml部分のＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨを用いて泡状物に変換した。生成物を高真空下、室温で乾燥した。
その結果、６５０mg（０.５８７ミリモル、８９％）の無色の泡状物を得た。ＴＬＣ（シリカゲル）：Ｒf＝０.６５／０.５７（トルエン／ＥＡ／ＭｅＯＨ＝５／４／１）
元素分析：（Ｃ57Ｈ64ＰＮ3Ｏ15Ｆ（１１０９.１３）として）
理論値：Ｃ  ６１.７３％    Ｈ  ５.８２％    Ｎ  ６.３１％
実測値：Ｃ  ６１.５６％    Ｈ  ５.８２％    Ｎ  ５.６７％
ＵＶ（メタノール）：λmax〔nm〕（logε）＝２６４（４.３０）
1H-NMR(250MHz,CDCl3,TMS,ppm)：8.18(m,2H,o-H〜-NO2)); 8.09-7.84(bs/m,2H,-NH,H-(C6)); 7.46-7.00(m,14H,フェニル-H,m-H〜-OCH3,m-H〜-NO2,H-(C2′′′),H-(C5′′′),H-(C′′′6)); 6.87-6.76(m,4H,o-H〜-OCH3); 6.08/5.96(m,1H,H-(C1′)); 5.27(m,1H,H-(C％)); 5.14(m,1H,CH(2FPNPE); 4.77-4.42(m,ベンジル-CH2,α-CH2(NPEE),H-(C2′),H-(C3′)); 4.29-4.13(m,1H,H′-(C4′)); 3.97-3.33(m,12H,-OCH3,POCH2,N-CH,H-(C5′),H-(C5″)); 3.15(t,β-CH2(NPEE)); 2.64-2.33(m,2H,CH2-CN); 1.50/0.98(m,15H,CH3(2FPNPE),CH(CH3)231P-NMR(400MHz,CDCl3,H3PO4,ppm): 151.18, 150.87, 150.61, 150.36
【００７６】
実施例３３
均一な配列及び無傷の２′−Ｏ−ＮＰＥ保護基を持つオリゴリボヌクレチドの合成
33.1  ホスフェート保護基としてシアノエチル基を持つヌクレオシドホスフィットアミドの使用
支持体に結合したウリジン(実施例２７)は合成されるオリゴヌクレチドの３′末端を形成し、すなわちＤＭＴＲ基除去後最初のウリジンホスフィットアミド（実施例１４）への縮合が可能である。逐次縮合収率は４９８nmのジメトキシトリチルカチオンの吸収を測定することにより決められる。ヌクレオシドホスフィットアミドは無水アセトニトリル中０.１Ｍ溶液として調製される。
5′-HO-(UUU UUU UUU UUU)＊-OH
＊＝2′-O-〔1-(4-ニトロフェニルエトキシ)エチル〕(2′-O-NPEE)保護体
１２量体ウリジン合成のための縮合時間は１２００秒である。
最後の５′−Ｏ−ＤＭＴＲ基が消失した後、１００％の平均縮合収率を算出することが可能であった。支持体からオリゴマーを除去した後、約４６ ＯＤ265の１２量体ウリジンが得られた。生成物の全収率の計算値は１００％である。
33.2  5′-HO-(AAA AAA AAA A)′＊-OH（＊＝2′-O-NPEE-保護体）
無傷の２′−Ｏ−ＮＰＥＥ基（実施例２１の使用）を持つ１０量体アデノシンの合成は３′−Ｏ−スクシネートを介して支持材料に結合するアデノシン（実施例２９）を用いて開始する。縮合時間は１２００秒である。２回縮合後の平均縮合収率は１００％である。１０量体アデノシンリボヌクレオチドは無傷の５′−Ｏ−ＤＭＴＲを用いて手動的に支持体から除かれる。結果は２４ ＯＤ260（トリチル基付加）である（光度測定法により決定）。得られるトリチル付加粗生成物はＯＰＣ（オリゴヌクレオチド精製カートリッジ）を使用して精製する。正しくない配列をすべて除いた所要のオリゴマーはそのトリチル除去体（２％濃度のトリフルオロ酢酸でＤＭＴＲ基除去後）として得られる。
ＯＰＣ精製には１８.７ ＯＤ260を使用し、そして１０ ＯＤ260の精製したオリゴヌクレオチドが得られ、これは５４％の収率に相当する。
33.3  5′-HO-(CCC CCC CCC C)＊-OH（＊＝2′-O-NPEE-保護体）
実施例１７及び２８から
１０量体シチジンリボヌクレオチドの縮合時間は１２００秒である。リボヌクレオチドは支持体から除去後トリチル付加体として得られるから、平均縮合収率を求めるには８回の縮合のみを用いることができる。収率は９１％である。生成物の計算された収率は第一の縮合に対して７４％である。アンモニアで支持体から除去後、１７.５ ＯＤ270の粗生成物が得られる。粗生成物はＯＰＣ精製にかける。その後に、そのトリチル除去体として得られる。
33.4  5′-HO-(GGG GGG GGG G)＊-OH（＊＝2-O-NPEE保護体）
実施例３０及び２６から
この合成においては、第５縮合から縮合時間を７００秒に減らす。平均縮合収率は９３％である。
第１縮合から開始して、生成物の５２％収率が得られる。
支持体から除去後２０〜２３ＯＤ271のトリチル付加リボヌクレオチドが得られる。粗生成物はＯＰＣを用いて精製する。トリチル除去オリゴマーは６０％の収率で得られる（１２.８ ＯＤ271）。
【００７７】
実施例３４
ホスフェート保護基としてＮＰＥ基を持つヌクレオシドホスフィットアミドの使用
ＮＰＥホスフェート保護基を持つヌクレオシドホスフィットアミドを後文に記述するすべての合成に使用する。
34.1  5′-HO-(UUU UUU UUU U)＊-OH
5′-HO-(UUU UUU UUU UUU)＊-OH（＊＝2′-O-NPEE-保護体）
実施例２７及び１８を使用
上に示す２つの配列につき、１２００秒の縮合時間は使用する。
平均縮合収率は、１０量体ウリジンでは９８％、１２量体ウリジでは９９％である。生成物の計算された収率はそれぞれ８３％及び８８％である。
両オリゴマーは支持体から除去後トリチル除去体として得られる。１０量体ウリジの粗収得は３１.６ ＯＤ265、そして１２量体のそれは３３.８ ＯＤ265である。
34.2  5′-HO-(AAA AAA AAA A)＊-OH
5′-HO-(AAA AAA AAA A)＊-OH
5′-HO-(AAA AAA AAA A)＊-OH（＊＝2′-O-NPEE保護体）
３つの１０量体アデノシンリボヌクレオチドをアデノシンホスフィットアミドの３つの異なるバッチを用いて合成した。実施例２９及び２２を使用した。平均縮合収率は９５％（化合物２）及び９８％（化合物１＋３）である。
各々の場合、縮合時間は、１２００秒である。最終配列はＯＰＣを用いて精製した。
34.3  5′-OH-(CCC CCC CCC C)＊-OH（＊＝2′-O-NPEE保護体）
実施例２８及び１８使用
８回縮合後の平均縮合収率は８９％である。粗生成物は支持体からアンモニアで除去後そのトリチル付加体として得られる。１８.１ ＯＤ273が得られ、そしてＯＰＣ精製にかける。精製されたトリチル除去シチジンリボヌクレオチドが７７％（１４.０ ＯＤ273）収率で得られる。
【００７８】
実施例３５
２′−Ｏ−ＮＰＥＥ−保護ＲＮＡ配列のポリアクリルアミドゲル電動泳動（ＰＡＧＥ）
分析用ポリアクリルアミドゲル（ＰＡＧＥ）は変性条件下で実行する。
ゲル電気泳動板は最初にジクロロメタン中２０％濃度トリメチルシリルクロリドを用いてシリル化する。
２０％ＰＡＧＥを調製するため、０.２１ミリモルのウレア１mlの水、３mlのゲル電気泳動用緩衝液及び１５mlの４０％濃度のアクリルアミド溶液を熱水浴中で溶解し、その後氷浴中で冷却する。１mlの１.６％濃度の過硫酸アンモニウム及び２０mlのテトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）を添加後、重合のため溶液をガラス板に注ぐ。１０倍希釈したゲル電気泳動用緩衝液を電解質として使用する。
ゲル電気泳動用緩衝液は０.８９モルのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、０.８９モルのホウ酸及び２３ミリモルのＮａ2ＥＤＴＡ・２Ｈ2Ｏを１リッターの水に溶解し、pH８に調節する。
試料をこの目的のために準備したチェンバーに加え、ゲルを３００ボルトで３時間展開する。オリゴヌクレオチドのバンドは完全染色法(Stains all method）により染色し目に見えるようにする。
２′−Ｏ−ＮＰＥＥ−保護オリゴヌクレオチドのＨＰＬＣクロマトグラム（ＲＰ−１８カラム）はそれらの純度について明白な情報を与えないので、個々のリボヌクレオチドのＰＡＧＥをこの点で論議する。
【００７９】
0003884492.tif 000040
配列１、２及び５はＮＰＥ基をホスフェート保護基として持つヌクレオシドホスフィットアミドを使用して合成した。３及び４はシアノエチル基をホスフェート保護基として持つそれである。配列１〜４の平均縮合収率から既に期待されるように、正しくない配列は、ほとんどないか又はまったくないはずである。配列５についても９５％縮合収率はやや劣るか同様である。
配列１〜５は支持体から除去後粗生成物（トリチル除去）を含む。１〜５についてはさらに精製段階を実行することはなかった。
【００８０】
0003884492.tif 000041
配列６はＮＰＥ基をホスフェート保護基として持つホスフィットアミドを使用して合成した。配列７〜９はシアノエチル基をホスフェート保護基として持つホスフィットアミドを使用して調製した。６〜９はアンモニアで支持体から除いた後、ＯＰＣを用いて精製した、それらはそのトリチル除去体として得られた。
この場合については、ＰＡＧＥは再び合成されたオリゴリボヌクレオチド６〜９が極めて高純度であることを示している。すべての場合１つのバンドのみが得られており、すなわち６〜９には正しくない配列はない。
【００８１】
実施例３６
混合された配列を持つオリゴリボヌクレオチドの合成
5′-HO-(CUC CGG UUC GAU UCC GGA CUC GUC CAC CAU)＊-OH
5′-HO-(UUG GCG UGG AGA GGU CUC CGG UUC GAU UCC GGA CUC GUC CAC CAG)＊-OH（＊＝2′-O-NPEE保護体）
実施例２７、３０、１４、２１、１７、２６を使用
縮合時間は両配列において７００秒である。各々の場合、９９％の平均縮合収率が得られた。４５％の生成物収率が両合成で得られる。
３０量体オリゴマーが支持体から除去後そのトリチル除去体として９５ ＯＤ264で得られ、そして４５量体がトリチル付加化合物として８５〜９３ ＯＤ263で得られる。
４５量体オリゴリボヌクレオチド（１７.０ ＯＤ263）はＯＰＣ精製にかける。精製された生成物はトリチル除去体として８.６ ＯＤ263で得られた（５１％収率）。
【００８２】
実施例３７
合成されたＲＮＡ配列から２′−Ｏ−ＮＰＥＥ保護基の除去
1.  １.０ ＯＤのオリゴリボヌクレオチド当たり１００mlの４％濃度ｐＴｓＯＨ（塩化メチレン／メタノール ４：１）を添加する。２時間の反応時間の後、特定の試料を０.８４Ｍアンモニア／メタノール溶液で中和し、そしてSpeed vac回転蒸発器で蒸発させる。
2.  第一の精製段階において、遊離のＲＮＡ断片を酢酸ナトリウムを用いてエタノールからＮａ+塩として沈殿させる。１.０ ＯＤのオリゴリボヌクレオチド当たり１０〜２０μｌのpH７の０.１Ｍ酢酸ナトリウム溶液を添加する。ＲＮＡを４〜５倍量のエタノールを用いて−４０℃で一晩置いて沈殿させる。
3.  得られるＲＮＡのＮａ+塩をＲＰ−１８クロマトグラフィーにより精製する。
生成物ピークを集め、Speed vac回転蒸発器で蒸発させる。次いで、この除去工程の後得られる遊離のオリゴリボヌクレオチドにつき、ＨＰＬＣ（ＲＰ−１８）及びＰＡＧＥによりその純度をチェックする。
遊離オリゴヌクレオチドの研究
完全に脱保護したオリゴリボヌクレオチドの分析研究を逆相材料(ＲＰ−１８)を用いて行う。
移動相は、アセトニトリル／緩衝系（１：１）及び０.１Ｍトリエチル−酢酸アンモニウム緩衝液（pH７.０）からなる。
ＲＰ−１８カラムは、５２分間にわたる２.５％〜５０％アセトニトリルのリニアグラジエントにより溶離する。緩衝系は滅菌水で調製する。
【００８３】
実験常数：Merck-Hitachi-I-6200インテリジェントポンプ
１００ ＲＰ−１８、 ５μｍ、長さ＝１２５mm、直径＝４mm
0003884492.tif 000042
次の配列を脱保護した。
【００８４】
0003884492.tif 000043
ＨＰＬＣクロマトグラムはすべての場合は単一ピークを示し、これは精製された完全に脱保護されたＲＮＡ断片は高純度を持つという結論を暗示する。
【００８５】
実施例３８
安定性試験
安定性を試験するため、次のウリジン誘導体を０.０５Ｎ ＨＣｌ／ＭｅＯＨ（１：２）、３０ミリモル溶液、２０℃、pH２.０（表１）及び８０％酢酸、３０ミリモル溶液、２０℃（表２）の条件でインキュベートし、そして脱保護の半減期を求めた。
【００８６】
【表１】
0003884492.tif 000044
【００８７】
【表２】
0003884492.tif 000045
【００８８】
【表３】
0003884492.tif 000046
【００８９】
【表４】
0003884492.tif 000047
【００９０】
略語：
４−ＤＭＡＰ  ４−デメチルアミノピリジン
ＤＭＴＲ      ジメトキシトリチル
ＮＰＥ        ｐ−ニトロフェニルエトキシ
ＮＰＥＥ      １−（ｐ−ニトロフェニルエトキシ）エチル
ＮＰＥＯＣ    ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル
ＴＢＤＭＳ    Tert.−ブチルジメチルシリル