(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸の薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
一般式（Ｉ）：
【化１】
0004025019.tif 000004
（式中、Ｘはそれぞれ独立して水素原子またはナトリウム原子であり、うち少なくとも１個はナトリウム原子である）で示される２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩。
【請求項３】
Ｘの２個がナトリウム原子である、請求の範囲第２項記載のナトリウム塩。
【請求項４】
２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸、その薬学的に許容しうる塩およびそれらの水和物の少なくとも１種を含むリンパ球処理剤。
【請求項５】
２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸の薬学的に許容しうる塩が、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩である、請求の範囲第４項記載のリンパ球処理剤。
【請求項６】
さらにインターロイキン−２を含む、請求の範囲第４項記載のリンパ球処理剤。
【請求項７】
さらにインターロイキン−２を含む、請求の範囲第５項記載のリンパ球処理剤。
【請求項８】
請求の範囲第４項記載のリンパ球処理剤で処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞。
【請求項９】
請求の範囲第５項記載のリンパ球処理剤で処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞。
【請求項１０】
請求の範囲第６項記載のリンパ球処理剤で処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞。
【請求項１１】
請求の範囲第７項記載のリンパ球処理剤で処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞。
【請求項１２】
２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸、その薬学的に許容しうる塩およびそれらの水和物の少なくとも１種を含むリンパ球処理剤で処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を含む医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は、新規な有機ピロリン酸系化合物の塩に関し、また、該有機ピロリン酸系化合物またはその塩を含み、抗腫瘍作用の誘導および増強に有効なリンパ球処理剤、ならびに該リンパ球処理剤によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞およびそれを含む医薬に関する。
【０００２】
背景技術
ヒトリンパ球における抗腫瘍作用の誘導および増強方法としては、インターロイキン−２を用いたＬＡＫ療法が知られている。すなわち、８００Ｕ／ｍｌ前後のインターロイキン−２をリンパ球に作用させ、それにより誘導された抗腫瘍活性を有する細胞群を抗腫瘍エフェクターとして利用できることが知られている。しかしながら、この方法では、ＬＡＫ細胞の有する非特異的細胞障害性のために、血管内皮細胞などの自己細胞が破壊されたり、インターロイキン−２による非特異的なＴ細胞の活性化による自己免疫が誘導されたりといった副作用が多大であり、実際の臨床への応用は困難であった。
【０００３】
Ｖγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を特異的に活性化する化合物としては、マイコバクテリア由来のイソペンテニルピロリン酸や、有機合成によって得られたモノエチルリン酸などが知られている。しかし、この方法では、Ｖγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を活性化するために数百μＭから数ｍＭの化合物濃度が必要であり、このような化合物濃度では細胞に毒性を呈する危険性があるため、ラージスケールにおけるリンパ球の抗腫瘍作用の誘導・増強に用いることは困難であった。いずれにしても、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞に対して数百ｎＭから数百μＭの濃度範囲で作用し、それらの細胞群を特異的に増殖させる合成化合物は、これまで知られていなかった。
【０００４】
本発明は、上記の従来技術の問題点を解決しようとしてなされたもので、その目的は、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を特異的に刺激・増殖する新規な化合物、ならびにヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞抗腫瘍作用を誘導および／または増強するリンパ球処理剤、それによって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞およびそれを含む医薬を提供することである。
【０００５】
発明の開示
本発明者らは、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を特異的に刺激・増殖し、その抗腫瘍作用を誘導・増強させる化合物について検討した結果、新規な有機ピロリン酸系化合物である２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸の薬学的に許容しうる塩、特にナトリウム塩を見出した。すなわち、このような有機ピロリン酸系化合物によって、ヒト血液、たとえば末梢血、またはリンパ液中のリンパ球を処理すると、特異的にＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を刺激・増殖し、その抗腫瘍作用を誘導・増強することを見出し、これらの事実に基づいて本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち、本発明は、新規なピロリン酸系化合物である２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸の薬学的に許容しうる塩、特にナトリウム塩に関し、また２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸およびその薬学的に許容しうる塩、特にナトリウム塩、ならびにその水和物の少なくとも１種を含むリンパ球処理剤に関する。さらに、本発明は、該リンパ球処理剤によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞、およびそれを含む医薬に関する。
【０００７】
発明を実施するための最良の形態
本発明の新規なピロリン酸系化合物は、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸の薬学的に許容しうる塩であり、代表的にはナトリウム塩である。該ナトリウム塩は、一般式（Ｉ）：
【０００８】
【化２】
0004025019.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｘはそれぞれ独立して水素原子またはナトリウム原子であり、うち少なくとも１個はナトリウム原子である）で示され、生体細胞への適合性から、２個のＸがナトリウム原子であることが好ましい。また、結晶水を含んでいてもよい。薬学的に許容される塩としては、上記のナトリウム塩のほか、カリウム塩、アンモニウム塩、トリエチルアンモニウム塩など、さらにリシン塩のようなアミノ酸塩が例示される。
【００１０】
本発明の２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩は、たとえば次のような方法で合成できる。すなわち、２−メチル−３−ブテニル−１−オールを、アセトニトリルのような溶媒中で、トリクロロアセトニトリルを触媒として、ビス（トリエチルアンモニウム）リン酸と反応させる。得られた反応生成物を、ジエチルエーテルとアンモニア水溶液によって分液し、ジエチルエーテル層に抽出された生成物を陰イオン交換カラムクロマトグラフィーにかけ、重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液から濃度勾配法によって溶出させて、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸を得る。ついで、これをＮａ型陽イオン交換樹脂で処理して、ナトリウム塩を得ることができる。他の薬学的に許容しうる塩も、上記に準じて合成できる。
【００１１】
このようにして得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸のナトリウム塩は、潮解性を有する白色粉末であり、水分を含むと白色の粘性物質となる。これを中性の水性液に溶解した場合、たとえばｐＨ６〜７では、室温で１週間以上、−２０℃で１年以上、安定に保存できる。ただし、ｐＨ４以下の酸性領域では、数分以内で無機ピロリン酸の遊離が認められる。
【００１２】
２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸およびその薬学的に許容しうる塩、特にナトリウム塩およびそれらの水和物は、末梢血のようなヒト血液中、またはヒトリンパ液中に存在するヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を特異的に刺激し、増殖するとともに、それら細胞の抗腫瘍作用の誘導・増強を促す。該薬学的に許容しうる塩としては、前述の塩が例示される。
【００１３】
したがって、上記の有機ピロリン酸誘導体の少なくとも１種を含む本発明のリンパ球処理剤によって、ヒト血液またはヒトリンパ液を処理すると、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を特異的に刺激し、増殖するとともに、それらの抗腫瘍作用を誘導・増強することができる。その際、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞クローンを用いた解析から、該２−メチル−３−ブテニル−１−有機ピロリン酸系化合物、特に新規な上記ナトリウム塩は、数百ｎＭ〜数十μＭという微量の範囲でも刺激が可能であり、数百ｎＭの微量の存在でヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を増殖し、その抗腫瘍活性を誘導・増強することが可能である。
【００１４】
本発明のリンパ球処理剤に有効成分として含まれる有機ピロリン酸系化合物としては、上記の２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸およびその生理学的に許容しうる塩、ならびにそれらの水和物が挙げられ、生体細胞への適合性からナトリウム塩が好ましく、上記の一般式（Ｉ）において、Ｘのうち２個がナトリウム原子であるナトリウム塩が特に好ましい。これらは単離することなく、用途に応じて適切なｐＨの範囲、好ましくはｐＨが６〜７の範囲の混合物として用いることができる。
【００１５】
上記の有機ピロリン酸系化合物を含むリンパ球処理剤を、ヒト血液、特に末梢血に作用させる際、補助因子としてインターロイキン−２を１〜２０Ｕ／ｍｌの濃度で加えると、Ｖγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の特異的増殖が顕著になる。インターロイキン−２の濃度を２０Ｕ／ｍｌ以下に抑制しているかぎり、ＬＡＫ細胞のように非特異的なリンパ球の活性化が起こることはない。また、インターロイキン−１５など、他の補助因子を用いてもよい。ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞は、一種のナチュラルキラー活性を有している。本発明は、それら一群の細胞を抗原特異的に増殖させる点で、従来の抗腫瘍作用の導出方法とは全く異なる。
【００１６】
すなわち、ＬＡＫ療法およびＴＩＬ療法は、インターロイキン−２などの細胞増殖因子を過剰に加えることにより、末梢血でナイーブな細胞群を強制的に活性化させるものであり、そのために自己の細胞をも障害するというような副作用が生ずる。しかし、上記の有機ピロリン酸系化合物は、元来ナチュラルキラー活性を有するＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞のポピュレーションを増加させるために用いるものであって、過剰な抗原を用いて、強制的に抗腫瘍活性を過剰に増強しているわけではない。上記の有機ピロリン酸系抗原２０μＭという濃度は、１０〜５０Ｕの活性に相当し、濃度として適度である。したがって、本発明によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖、活性化と抗腫瘍作用の誘導・増強は、免疫化学的に適切であって、自己細胞の破壊などにはつながらない。以上のことにより、本発明のリンパ球処理剤は、ＬＡＫ療法、ＴＩＬ療法などと比較して、より特異性が高く、副作用が少ないため、抗腫瘍作用のより有利な誘導・増強用処理剤である。
【００１７】
さらに、本発明のリンパ球処理剤を用いることが、ＬＡＫ療法およびＴＩＬ療法よりも有利な点として、処理した細胞の凍結が可能であることが挙げられる。すなわち、適当な時期にリンパ球を含む血液および／またはリンパ液を採取して、凍結保存しておき、必要に応じて上記の有機ピロリン酸系化合物によってリンパ球を刺激する。このようにしてＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖、およびその抗腫瘍作用の誘導・増強を行うことにより、末梢血リンパ球供与者の負担を少なくすることが可能である。
【００１８】
また、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞は、ナチュラルキラー活性を有するので、抗腫瘍作用の誘導・増強を行ったあと凍結保存しても、解凍直後に抗腫瘍活性が発揮できる。このことにより、いつでもその細胞の使用が可能となる。一方、ＬＡＫ療法およびＴＩＬ療法においては新鮮な細胞が常に必要であり、抗腫瘍作用を誘導・増強する毎にリンパ球の採取と増殖因子の添加を行わなければならない。上記の事実により、本発明のリンパ球処理剤を用いる療法は、ＬＡＫ療法やＴＩＬ療法によるよりも明らかに有利である。したがって、本発明によって、抗腫瘍活性を誘導・増強されたヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を含む医薬を用いて、実際の医療の現場において、幅広い抗腫瘍治療を行うことが可能である。
【００１９】
本発明のリンパ球処理剤によって処理されて、増殖されるとともに抗腫瘍活性が誘導・増強されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞は、末梢血などとして該細胞の原細胞をヒトに投与することによって、その抗腫瘍活性を発揮することができる。投与方法としては、局所への注射、静脈注射、経皮吸収などの方法をとることができる。
【００２０】
このようにして処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞は、ＭＨＣ拘束がないので、他人に投与することも可能である。
【００２１】
したがって、本発明には、本発明のリンパ球処理剤によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞、およびそれを含む医薬が包含される。
【００２２】
本発明の化合物、およびそれを含むリンパ球処理剤を医薬として投与する場合には、通常の製剤化技術を用いて製剤化することができ、錠剤、カプセル剤、粉剤、顆粒剤、坐剤、クリーム剤、軟膏剤、水溶剤、乳剤、油性剤もしくは懸濁剤などの固体または液体の剤型として使用することができる。
【００２３】
さらに、この場合、製剤のｐＨを４以下にするものを除き、製剤化において通常使用される添加成分である、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、結合剤、保存剤、安定剤、浸透圧調整剤、基剤などを必要に応じて使用することができる。
【００２４】
これらの添加成分の例としては、グルコース、乳糖、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、流動パラフィン、ポリビニルアルコール、植物油、ポリアルキレングリコールなどを挙げることができる。また、これ以外に医薬成分を含有することもできる。
【００２５】
実施例
以下、実施例および試験例によって、本発明をさらに詳細に説明する。本発明は、これらの例によって限定されるものではない。
なお、試験例中、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸またはそのナトリウム塩による末梢血の処理は、特にことわらないかぎり次のようにして行った。すなわち、健常人ボランティアに由来する末梢血に含まれるリンパ球を、該ピロリン酸系化合物が最終濃度２０μＭになるように処理し、イッセル培地中、３７℃、二酸化炭素濃度５％の条件で培養した。２、４、６、８および１０日後に、補助因子としてインターロイキン−２を１０Ｕ／ｍｌずつ添加した。１２日後に細胞を回収した。
【００２６】
実施例  （２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩の合成）  ２−メチル−３−ブテニル−１−オール１ｍｏｌに、触媒としてトリクロロアセトニトリル１ｍｏｌを添加し、温度２５℃で撹拌しながら、アセトニトリル２０ｍｌに溶解したビス（トリエチルアンモニウム）リン酸４ｍｏｌを４時間かけて滴下し、さらに２時間撹拌を続けて反応させた。反応生成物にジエチルエーテル１００ｍｌを添加し、分液ロートに移し、０．８８％アンモニア水溶液１００ｍｌを添加して振盪し、得られた有機ピロリン酸系化合物を有機相に抽出した。有機相から減圧によりジエチルエーテルを揮発させた後、残留液を直径２．５ｃｍ、長さ８ｃｍのＱセファロースＨＰ陰イオン交換カラムクロマトグラフィーにかけ、ついで水で洗浄した。
次に、重炭酸トリエチルアンモニウム緩衝液を用いて、０から５００ｍＭの濃度勾配法により、有機ピロリン酸系化合物を溶出した。８２０ｎｍにおける吸収をパラメーターとするカラムクロマトグラフィーの溶出曲線を、第１図に示す。ここで、１５０〜２００ｍＭ付近に溶出する画分が、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸であった。この画分を凍結乾燥した後、水２ｍｌに溶解し、溶液をＮａ型のＤｏｗｅｘ５０Ｗ陽イオン交換樹脂（Ｄｏｗ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ社商品名）で処理することにより、若干の水分を含む２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を、白色の粘性物質として得た。これを乾燥して、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を、白色粉末として得た。
【００２７】
試験例１
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用いて、健常人ボランティアＡ、ＢおよびＣに由来するヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強を、前述の方法によって行い、増強されたヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を含む末梢血をダウディ細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。その結果を第２図に示す。第２図において、横軸にエフェクター／ターゲット比（以下、Ｅ／Ｔ比という）、すなわちヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞とダウディ細胞の存在比を、縦軸に比細胞障害率を示す。
第２図から明らかなように、Ａ、Ｂ両者の末梢血の場合、Ｅ／Ｔ比が１：１でも細胞障害性がプラトーに達し、高い細胞障害効果を示した。Ｃの末梢血の場合、Ｅ／Ｔ比が５：１で細胞障害性が同様のプラトーに達した。
【００２８】
試験例２
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用いて、実施例１と同様、Ａ、ＢおよびＣに由来するヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強を、前述の方法によって行い、増強されたヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を含む末梢血をＥＪ−１細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。その結果を第３図に示す。第３図において、横軸にＥ／Ｔ比、縦軸に比細胞障害率を示す。
第３図から明らかなように、Ａ、Ｂ両者の末梢血の場合、Ｅ／Ｔ比が５：１で細胞障害性がプラトーに達し、Ｃの末梢血の場合、Ｅ／Ｔ比が１０：１で細胞障害性がほぼプラトーに達した。
【００２９】
試験例３
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用いて、ヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強を、前述の方法によって行い、増強されたヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を含む末梢血をＴ２４細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。その結果を第４図に示す。第４図において、横軸にＥ／Ｔ比、縦軸に比細胞障害率を示す。
第４図から明らかなように、Ａ、Ｂ、Ｃの末梢血とも、Ｅ／Ｔ比が２０：１で細胞障害性がほぼプラトーに達した。
【００３０】
試験例４
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用い、ボランティアＡおよび別の健常人ボランティアＤ、Ｅの末梢血を用いて、ヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強を、前述の方法によって行った。このようにして得られた処理末梢血を、１年間、−２０℃に凍結保存した。解凍した処理保存血をダウディ細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。その結果を第５図に示す。第５図において、横軸にＥ／Ｔ、縦軸に比細胞障害率を示す。
第５図に示されるように、Ａ、Ｅ両者の凍結保存末梢血の場合、Ｅ／Ｔ比が２０：１で細胞障害性がほぼプラトーに達し、Ｄの凍結保存末梢血の場合も、程度の違いはあるが、Ｅ／Ｔ比が２０：１で細胞障害性がプラトーに達した。この結果、処理されたリンパ球は、冷凍保存した後でも十分な抗腫瘍活性が保持されることが明らかである。
【００３１】
試験例５
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用い、実施例４と同様に、ヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強、ならびに凍結保存および解凍を行った。この処理保存血をＥＪ−１細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。その結果を第６図に示す。第６図において、横軸にＥ／Ｔ比、縦軸に比細胞障害率を示す。
第６図から明らかなように、程度の差はあるが、いずれもＥ／Ｔ比が２０：１で細胞障害性がほぼプラトーに達し、冷凍保存後でも抗腫瘍活性が保持されることが認められた。
【００３２】
試験例６
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用い、実施例４と同様に、ヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強、ならびに凍結保存および解凍を行った。この処理保存血をＴ２４細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。その結果を第７図に示す。第７図において、横軸にＥ／Ｔ比、縦軸に比細胞障害率を示す。
第７図から明らかなように、程度の差はあるが、いずれもＥ／Ｔ比が２０：１で細胞障害性がほぼプラトーに達し、冷凍保存後でも抗腫瘍活性が保持されることが認められた。
【００３３】
試験例７
実施例で得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩を用い、ボランティアＡの末梢血を用いて、ヒト末梢血の処理によるヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖および誘導・増強を、前述の方法によって行った。実施例４と同様に、凍結保存および解凍した処理保存血をダウディ細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。一方、別の健常人ボランティアＦの末梢血の処理を、前述の方法によって行い、同様にダウディ細胞に作用させて、細胞障害性を調査した。これらの結果を第８図に示す。また、同様にＡに由来する凍結保存および解凍した処理保存血、ならびにＦに由来する処理末梢血を用いて、Ａの正常末梢血細胞に対する細胞障害性を調査した。その結果を第９図に示す。これらの図において、横軸にＥ／Ｔ比、縦軸に比細胞障害率を示す。
第８図から明らかなように、Ａ（凍結保存および解凍後）、Ｆ両者の末梢血とも、Ｅ／Ｔ比が２０：１で細胞障害性がほぼプラトーに達した。
一方、第９図におけるＡ（凍結保存および解凍後）およびＦの末梢血の結果から、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩によって抗腫瘍活性の誘導・増強を受けたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞は、そのまま用いても、冷凍保存および解凍を行った後でも、正常細胞は障害しないことが明らかである。
【００３４】
試験例８
健常人ボランティアＧより採取した末梢血１０ｍｌを、フィコール・ペイクの比重遠心法にかけて末梢血単核球を精製し、イッセル培地中に懸濁させた。細胞数が２５０万個／１．５ｍｌ／穴の濃度になるように２４穴プレートに分注し、前述の方法に準じて第１表に示す処理１〜５をそれぞれ行った。うち、処理１は培地のみによる処理、処理２はインターロイキン−２を単独に用いた、いずれも比較のための処理であり、処理３〜５が、実施例によって得られた２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩とインターロイキン−２を併用する、本発明による処理である。処理を行って１１日後の、存在するＣＤ３細胞中のＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の比率を求めた。その結果を第１表に示す。
【００３５】
【表１】
0004025019.tif 000003
【００３６】
第１表から明らかなように、インターロイキン−２単独では、Ｖγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の比率は、培地のみによる処理とほぼ同じ水準であった。これに対して、本発明による処理３〜５では、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩によって、Ｖγ２Ｖδ２型Ｔ細胞の増殖が顕著であり、またその結果は、該ピロリン酸化合物の添加量とともに増大した。
【００３７】
産業上の利用可能性
以上説明したように、２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸、その薬学的に許容される塩、特に本発明の２−メチル−３−ブテニル−１−ピロリン酸ナトリウム塩、および／またはそれらの水和物を有効成分として含む本発明のリンパ球処理剤は、ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を刺激・増殖するとともに、その抗腫瘍活性を誘導・増強する特異な効果を示し、かつ自己細胞に対する障害性などがない。ヒトＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞のようなナチュラルキラー細胞を、低い抗原濃度で特異的に活性化できる。
【００３８】
本発明のリンパ球処理剤は、さまざまな臨床応用が可能である。具体例としては、癌患者または健常者の末梢血を採取し、本発明のリンパ球処理剤を作用させてＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を刺激することにより、ポリクローナルに増殖するとともに、それらの抗腫瘍活性を誘導・増強する。そして、それらリンパ球を体内に再循環させることにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでの抗腫瘍活性を期待できる。その際、リンパ球の凍結保存が可能であることから、適当な段階で凍結保存し、需要に応じて患者に投与することも可能である。
【図面の簡単な説明】
【図１】  第１図は、実施例によって合成された、２−メチル−３−ブテニル−１−リン酸ナトリウム塩のＱセファロースＨＰカラムクロマトグラフィーによる溶出曲線を、８２０ｎｍの吸収をパラメーターとして示すクロマトグラムである。
【図２】  第２図は、試験例１によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、ダウディ（Ｄａｕｄｉ）細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図３】  第３図は、試験例２によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、ＥＪ−１細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図４】  第４図は、試験例３によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、Ｔ２４細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図５】  第５図は、試験例４によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、凍結保存および解凍の後、ダウディ細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図６】  第６図は、試験例５によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、凍結保存および解凍の後、ＥＪ−１細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図７】  第７図は、試験例６によって処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、凍結保存および解凍の後、Ｔ２４細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図８】  第８図は、試験例７によって、Ａの末梢血から採取・処理され、凍結保存および解凍されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞、およびＦの末梢血から採取・処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、それぞれダウディ細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図９】  第９図は、試験例７によって、Ａの末梢血から採取・処理され、凍結保存および解凍されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞、およびＦの末梢血から採取・処理されたＶγ２Ｖδ２型Ｔ細胞を、それぞれＡの正常末梢血細胞に作用させた際の、Ｅ／Ｔ比に対する比細胞障害率の関係を示すグラフである。
【図１】
0004025019.tif 000005
【図２】
0004025019.tif 000006
【図３】
0004025019.tif 000007
【図４】
0004025019.tif 000008
【図５】
0004025019.tif 000009
【図６】
0004025019.tif 000010
【図７】
0004025019.tif 000011
【図８】
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【図９】
0004025019.tif 000013