(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（1）で表される化合物、またはその塩、溶媒和物、水和物、もしくはＮ−オキシド。
0003872101.tif 000013
（この化学式において、
Ｙはハロゲン原子またはＲ1がＣ1-6アルキル基またはＣ1-6ハロアルキル基である基−ＯＲ1であり、
Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−またはＲ8が水素原子またはＣ1-6アルキル基である−Ｎ（Ｒ8）−であり、
Ｒ2は（ｉ）ハロゲン原子、ヒドロキシル基およびＣ1-6アルコキシ基から選択された最大三つの置換基により随意に置換されたＣ1-6アルキル基またはＣ2-6アルケニル基、または（ｉｉ）ハロゲン原子、ヒドロキシル基、Ｃ1-6アルキル基およびＣ1-6アルコキシ基から選択された最大三つの置換基により随意に置換されたＣ3-8シクロアルキル基またはＣ3-8シクロアルケニル基であり、
Ｒ4は基−(ＣＨ2)nＡｒであり、この式のＡｒは酸素、硫黄または窒素原子から選択した１つ以上のヘテロ原子を随意に含む単環または二環式アリール基であり、ｎはゼロまたは整数１、２または３であり、
Ｒ5は、ハロゲンもしくはＣ1-6アルキル基により置換された、または置換されていない、ピロリドン基、チアゾリドン基、ピペリドン基、ピリドン基、キノロン基、イソキノロン基、オキサゾロン基、ピラゾロン基、チアゾロン基またはイソオキサゾロン基である。）
【請求項２】
請求項１に記載の化合物において、Ｙが、Ｒ1がＣ1-3アルキル基またはＣ1-3ハロアルキル基である基−ＯＲ1である化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物において、Ｒ1が−ＣＨ3基である化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれかに記載の化合物において、Ｘが−Ｏ−である化合物。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物において、Ｒ2がシクロペンチル基である化合物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の化合物において、Ｒ4が基−ＣＨ2ＡｒまたはＡｒであり、Ａｒが酸素、硫黄または窒素原子から選択された最大４個のヘテロ原子を随意に含む単環式アリール基であることを特徴とする化合物。
【請求項７】
請求項６に記載の化合物において、Ｒ4が随意に置換されたピリジル、フェニル、チエニルまたはフリル基である化合物。
【請求項８】
化合物：
（±）−３−［２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−４,５−ジヒドロ−５−イソオキサゾロン、
（±）−３−［２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−１−メチル−４,５−ジヒドロ−５−ピラゾロン、
（±）−３−［２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−４,５−ジヒドロ−５−ピラゾロン、
（±）−４−［２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−２−ピリドン、または
その分割した鏡像異性体、またはその塩、溶媒和物、水和物もしくはＮ−オキシド。
【発明の詳細な説明】
本発明は、一連の新規な三置換フェニル誘導体、それらの調製方法、それらを含有する医薬品組成物、および医学におけるそれらの使用に関するものである。
多くのホルモンおよび神経伝達物質は、サイクリックアデノシン３',５'−一リン酸（ｃＡＭＰ）の細胞内レベルを上昇させることによって組織機能を調節する。ｃＡＭＰの細胞内レベルは、合成および分解を制御する機構によって調節される。ｃＡＭＰの合成はアデニル(adenylyl)シクラーゼによって制御されるが、これはフォルスコリンのごとき薬剤によって直接に活性化することもできるし、あるいはアデニル(adenylyl)シクラーゼと結合する細胞表面受容体に特異的なアゴニストを結合させることによって間接的に活性化することもできる。ｃＡＭＰの分解は一群のホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）アイソエンザイムによって制御されるが、これはまたサイクリックグアノシン３',５'−一リン酸（ｃＧＭＰ）の分解をも制御する。現在まで、この群に属する７種が記載されているが、(ＰＤＥＩ〜VII)、それらの分布状態は組織に応じて異なっている。これは、ＰＤＥアイソエンザイムの特異的な阻害剤が様々な組織中において相異なるｃＡＭＰの上昇をもたらす可能性のあることを示唆している［ＰＤＥの分布、構造、機能および調節に関する総説としては、ビーボおよびリーフスナイダー(Beavo & Reifsnyder)（１９９０）ＴＩＰＳ、１１：１５０〜１５５並びにニコルソン（Nicholson）等（１９９１）ＴＩＰＳ、１２：１９〜２７を参照されたい］。
炎症性白血球中におけるｃＡＭＰの上昇はそれらの活性化の抑制をもたらすことを示す明確な証拠がある。さらにまた、気道平滑筋中におけるｃＡＭＰの上昇は鎮痙効果を有している。これらの組織においては、ＰＤＥIVはｃＡＭＰの加水分解に関して重要な役割を演じる。それ故、ＰＤＥIVの選択的阻害剤は抗炎症作用および気管支拡張作用を及ぼすことによって喘息のごとき炎症性疾患に対する治療効果を示すものと期待することができる。
ＰＤＥIV阻害剤の設計は、現在までのところ限られた成功しか収めていない。すなわち、合成された可能なＰＤＥIV阻害剤の多くは効力が足りなかったり、および／または２種以上のＰＤＥアイソエンザイムを非選択的に阻害し得るものであったりした。生体内におけるｃＡＭＰの広範な役割を考えると、選択的作用の欠如は特に大きな問題であった。それ故、他のＰＤＥアイソエンザイムに対してほとんどもしくは全く作用を及ぼすことなしにＰＤＥIVに対して阻害作用を及ぼす強力な選択的ＰＤＥIV阻害剤が要望されているのである。
この度本発明者等は、それぞれが既知の構造的に類似した化合物と比較して他のＰＤＥアイソエンザイムに対してほとんどもしくは全く阻害作用を及ぼさない濃度においてＰＤＥIVの強力な阻害剤を成す一連の新規な三置換フェニル誘導体を発見した。これらの化合物はヒトの組換えＰＤＥIVエンザイムを阻害すると共に、単離された白血球中においてｃＡＭＰを上昇させる。本発明の化合物は従って医学に、特に喘息の予防と治療において有用である。
このように、本発明の一側面に従えば、次の化学式（1）で表される化合物、ならびにその塩、溶媒和物、水和物、およびＮ−オキシドが提供される
0003872101.tif 000002
この化学式において、
Ｙはハロゲン原子またはＲ1が随意に置換されたアルキル基である−ＯＲ1基であり、
Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−またはＲ8が水素原子またはアルキル基である−Ｎ(Ｒ8)−であり、
Ｒ2は随意に置換されたアルキル、アルケニル、シクロアルキルまたはシクロアルケニル基であり、
Ｒ3は水素またはハロゲン原子、またはＲ9が水素原子、または随意に置換されたアルキル、アルケニル、アルコキシアルキル、あるいはアルカノイル基、またはフォルミル、カルボキシアミドあるいはチオカルボキシアミド基である−ＯＲ9基であり、
Ｒ4は−(ＣＨ2)nＡｒであり、この式のＡｒは酸素、硫黄または窒素原子から選択した１つ以上のヘテロ原子を随意に含む単環または二環式アリール基であり、ｎはゼロまたは整数１、２または３であり、
Ｒ5は酸素、硫黄または窒素原子から選択した１つ以上のヘテロ原子を随意に含むＣ3-9炭素環式ケトンであり、
Ｒ6が水素原子または随意に置換したアルキル基であり、
Ｒ7は水素原子、または随意に置換されたアルキル基である。
ここで化学式（1）の化合物はＲ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7基の性質によって、１つまたは複数個のキラル中心を有することがある。１つまたは複数個のキラル中心が有るとき、鏡像異性体またはジアステレオマーが存在することがあり、本発明は、ラセミ化合物を含む、上記全ての鏡像異性体、ジアステレオマーおよびその混合物も含まれるものとする。
化学式（1）の化合物において、Ｙがハロゲン原子である場合、それは例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子であり得る。
化学式（1）の化合物中のＹが−ＯＲ1基であるとき、Ｒ1は例えば、随意に置換された直鎖状または枝分かれ鎖状のアルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピルまたはｉ−プロピル基などの随意に置換されたＣ1-6アルキル基であり得る。Ｒ1基上に存在し得る随意の置換基としては、例えばフッ素または塩素原子などの１個以上のハロゲン原子が挙げられる。特定の置換アルキル基には、例えば、−ＣＨ2Ｆ、−ＣＨ2Ｃｌ、−ＣＨＦ2、−ＣＨＣｌ2、−ＣＦ3または−ＣＣｌ3基が含まれる。
化学式（1）の化合物中のＲ2、Ｒ6またはＲ7で表されるアルキル基は随意に置換された直鎖状または枝分かれ鎖状のＣ1-6アルキル基、例えばメチルまたはエチル基などのＣ1-3アルキル基を含むことができる。これらの基の上の随意の置換基としてフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子などのハロゲン原子、またはヒドロキシルあるいはメトキシまたはエトキシ基などのＣ1-3アルコキシなどのＣ1-6アルコキシから選択した１個、２個または３個の置換体を含むことができる。
化学式（1）の化合物中のＲ2によって表されるアルケニル基はエテニル、プロペン−１−イルおよび２−メチルプロペン−１−イルなどの随意に置換された直鎖状または枝分かれ鎖状のＣ2-6アルケニル基を含む。随意の置換基には、Ｒ2、Ｒ6またはＲ7基との関連において先に述べたものが含まれる。
化学式（1）の化合物中のＲ2が随意に置換されたシクロアルキルまたはシクロアルケニル基であるとき、それは例えばシクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル基などのＣ3-8シクロアルキル基あるいは２−シクロブテン−１−イル、２−シクロペンテン−１−イル、３−シクロペンテン−１−イル、２,４−シクロペンタジエン−１−イル、２−シクロヘキセン−１−イル、３−シクロヘキセン−１−イル、２,４−シクロヘキサジエン−１−イルまたは３,５−シクロヘキサジエン−１−イル基などの例えば１つか２つの二重結合を含むＣ3-8シクロアルケニル基であり得るが、ここで各々のシクロアルキルまたはシクロアルケニル基はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子などのハロゲン原子、メチルまたはエチルなどのＣ1-3アルキルなどの直鎖または枝分かれ鎖状Ｃ1-6アルキル、ヒドロキシル、またはメトキシまたはエトキシ基などのＣ1-3アルコキシなどのＣ1-6アルコキシの中から得ればれた１個、２個または３個の置換基によって随意に置換されていても良い。
化学式（1）の化合物中のＲ8で表されるアルキル基はメチルまたはエチル基などのＣ1-3アルキル基などの直鎖または枝分かれ鎖状Ｃ1-6アルキル基を含む。従って、例えば化学式（1）の化合物中のＸが−Ｎ(Ｒ8)−であるとき、それは−Ｎ(ＣＨ3)−または−Ｎ(ＣＨ2ＣＨ3−基とすることができる。あるいはまた、Ｘは−ＮＨ−基とすることができる。
化学式（1）の化合物中のＲ3基がハロゲン原子であるとき、それは例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子とすることができる。
化学式（1）の化合物中のＲ3基が−ＯＲ9基であるとき、それは例えばヒドロキシル基とすることができる；または基−ＯＲ9であり、ここでＲ9は随意に置換された直鎖または枝分かれ鎖状Ｃ1-6アルキル基、例えばメチルまたはエチル基などのＣ1-3アルキル基、エテニルまたは２−プロペン−１−イル基などのＣ2-6アルケニル基、メトキシメチル、エトキシメチル、またはエトキシエチル基などのＣ1-3アルコキシＣ1-3アルキル基、例えばアセチル基などのＣ1-3アルカノイルなどのＣ1-6アルカノイル、またはフォルミル［ＨＣ(Ｏ)−］またはカルボキシアミド(ＣＯＮＲ11Ｒ12)またはチオカルボキシアミド(ＣＳＮＲ11Ｒ12)基であり、それぞれの場合のＲ11とＲ12は同一でも異なっていてもよく、またそれぞれ水素原子またはメチルまたはエチル基などのＣ1-3アルキル基などの随意に置換された直鎖または枝分かれ鎖状Ｃ1-6アルキルとすることができる。かかるＲ9基の上に存在することのある随意の置換基にはアルキル基Ｒ2、Ｒ6またはＲ7との関連において先に述べたものが含まれる。
化学式（1）の化合物の中で、基Ｒ4は基−Ａｒ、−ＣＨ2Ａｒ、−(ＣＨ2)2Ａｒまたは−(ＣＨ2)3Ａｒとすることができる。
化学式（1）の化合物中の基Ａｒで表される単環式または二環式アリール基としては例えば随意に置換されたＣ6-12アリール基、例えば、随意に置換されたフェニル、１−または２−ナフチル、インデニルまたはイソインデニル基が挙げられる。
単環式または二環式アリール基Ａｒが１個以上のヘテロ原子を含有するとき、それは例えば酸素、硫黄または窒素原子から選ばれた例えば１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含有する随意に置換されたＣ1-9ヘテロアリール基であり得る。一般に、Ａｒヘテロアリール基は例えば単環式または二環式ヘテロアリール基であり得る。単環式ヘテロアリール基としては酸素、硫黄または窒素原子から選択された１個、２個、３個または４個のヘテロ原子を含む例えば５員または６員ヘテロアリール基が挙げられる。
Ａｒによって表されるヘテロアリール基の例としてはピロリル、フリル、チエニル、イミダゾリル、Ｎ−メチルイミダゾリル、Ｎ−エチルイミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、１,２,３−トリアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,２,５−オキサジアゾリル、１,３,４−オキサジアゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、１,３,５−トリアジニル、１,２,４−トリアジニル、１,２,３−トリアジニル、ベンゾフリル、イソベンゾフリル、ベンゾチエニル、イソベンゾチエニル、インドリル、イソインドリル、ベンジミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾキサゾリル、キナゾリニル、ナフチリジニル、ピリド［３,４−ｂ］ピリジル、ピリド［３,２−ｂ］ピリジル、ピリド［４,３−ｂ］ピリジル、キノリニル、イソキノリニル、テトラゾリル、５,６,７,８−テトラヒドロキノリニルおよび５,６,７,８−テトラヒドロイソキノリニルが挙げられる。
Ａｒによって表されるヘテロアリール基は適当な任意の環内炭素またはヘテロ原子を介して化学式（1）の分子の残部に結合されていればよい。このように、例えば、基Ａｒがピリジル基であるとき、それは２−ピリジル、３−ピリジルまたは４−ピリジル基であり得る。それがチエニル基であるとき、それは２−チエニルまたは３−チエニル基であり得る、また、同様にそれがフリル基であるとき、それは２−フリルまたは３−フリル基であり得る。
化学式（1）の化合物内のＡｒ基が窒素含有へテロ環であるとき、それは第四塩、例えばＮ−アルキル第四塩を形成することが可能であり、本発明はそのような塩をも含むものと理解される。従って、例えば基Ａｒがピリジル基であるとき、ピリジニウム塩、例えばＮ−メチルピリジニウムなどのＮ−アルキルピリジニウム塩が形成される。
化学式（1）の化合物中のＡｒで表されるアリールまたはヘテロアリール基は各々随意に１個、２個、３個またはそれ以上の置換基［Ｒ10］によって置換され得る。置換基Ｒ10は原子または基Ｒ13または−Ａｌｋ1(Ｒ13)mから選択可能で、ここでＲ13はハロゲン原子、またはアミノ(−ＮＨ2)、置換されたアミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル(−ＯＨ)、置換されたヒドロキシル、シクロアルコキシ、フォルミル[ＨＣ(Ｏ)−]、カルボキシル(−ＣＯ2Ｈ)、エステル化カルボキシル、チオール(−ＳＨ)、置換されたチオール、−Ｃ(Ｏ)Ａｌｋ1、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2Ａｌｋ1、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨＡｌｋ1、−ＳＯ2Ｎ[Ａｌｋ1]2、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨＡｌｋ1、−ＣＯＮ［Ａｌｋ1］2、−ＮＨＳＯ2Ｈ、−ＮＨＳＯ2Ａｌｋ1、−Ｎ[ＳＯ2Ａｌｋ1]2、−ＮＨＳＯ2ＮＨ2、−ＮＨＳＯ2ＨＮＡｌｋ1、−ＮＨＳＯ2Ｎ[Ａｌｋ1]2、−ＮＨＣ(Ｏ)Ａｌｋ1、または−ＮＨＣ(Ｏ)ＯＡｌｋ1基である；Ａｌｋ1は直鎖状または枝分かれ鎖状のＣ1-6アルキレン、Ｃ2-6アルケニレン、または１個、２個または３個の−Ｏ−、または−Ｓ−原子または−Ｓ(Ｏ)ｐ−、[ここでｐは整数１または２]または−Ｎ(Ｒ8)−基によって随意に断続したＣ2-6アルキニレン鎖であり；またｍはゼロまたは整数１、２または３である。
基−Ａｌｋ1(Ｒ13)mの中でｍが整数１、２または３であるとき、１個または複数の置換基Ｒ13は−Ａｌｋ1中の任意の適切な炭素原子上にあり得る。複数のＲ13置換基があるときそれらは同一または異なることができ、Ａｌｋ1中の同一または異なる炭素原子上に存在することができる。もちろん、ｍがゼロであり置換基Ｒ13がまったくないとき、またはＡｌｋ1が−ＳＯ2Ａｌｋ1などの基の一部であるとき、Ａｌｋ1で表されるアルキレン、アルケニレンまたはアルキニレン鎖はアルキル、アルケニルまたはアルキニル基になる。
Ｒ13が置換されたアミノ基であるとき、それは基−ＮＨ[Ａｌｋ1(Ｒ13a)m]［ここでＡｌｋ1とｍは先に定義したとおりでＲ13aはＲ13について先に定義したとおりであるが置換されたアミノ、置換されたヒドロキシルまたは置換されたチオール基ではない］または基−Ｎ[Ａｌｋ1(Ｒ13a)m]2であり、各々の−Ａｌｋ1(Ｒ13a)m基は同一または異なっている。
Ｒ13がハロゲン原子であるとき、それは例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子であり得る。
Ｒ13がシクロアルコキシ基であるとき、それは例えばシクロペンチルオキシまたはシクロヘキシルオキシ基などのＣ5-7シクロアルコキシ基であり得る。
Ｒ13が置換されたヒドロキシルまたは置換されたチオール基であるとき、それは各々基−ＯＡｌｋ1(Ｒ13a)mまたは−ＳＡｌｋ1(Ｒ13a)mであり得る、ここでＡｌｋ1、Ｒ13aおよびｍは先に定義したとおりである。
基Ｒ13で表されるエステル化カルボキシル基は化学式−ＣＯ2Ａｌｋ2の基から成り、ここでＡｌｋ2はメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチルまたはｔ−ブチル基などの直鎖状または枝分かれ鎖状の随意に置換されたＣ1-8アルキル基；随意に置換されたベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、１−ナフチルメチルまたは２−ナフチルメチル基などのＣ6-12アリールＣ1-8アルキル基；随意に置換されたフェニル、１−ナフチルまたは２−ナフチル基などのＣ6-12アリール基；随意に置換されたフェニルオキシメチル、フェニルオキシエチル、１−ナフチルオキシメチル、または２−ナフチルオキシメチル基などのＣ6-12アリールオキシＣ1-8アルキル基；随意に置換されたＣ1-8アルカノイルオキシＣ1-8アルキル基、例えばピバロイルオキシメチル、プロピオニルオキシエチルまたはプロピオニルオキシプロピル基；または随意に置換されたベンゾイルオキシエチルまたはベンゾイルオキシプロピル基などのＣ6-12アロイルオキシＣ1-8アルキル基である。Ａｌｋ2基上に存在する随意の置換基としては上述のＲ10置換基が挙げられる。
Ａｌｋ1が中にまたは置換基Ｒ10として存在するとき、Ｒ10は例えば１個、２個または３個の−Ｏ−、または−Ｓ−、原子または−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)2−または−Ｎ(Ｒ8)−基によって随意に断続したメチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、ｉ−プロピレン、ｎ−ブチレン、ｉ−ブチレン、ｓ−ブチレン、ｔ−ブチレン、エテニレン、２−プロペニレン、２−ブテニレン、３−ブテニレン、エチニレン、２−プロピニレン、２−ブチニレンまたは３−ブチニレン鎖であり得る。
Ｒ10で表される特に有用な原子または基としてはフッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子、またはＣ1-6アルキル、例えばメチルまたはエチル、Ｃ1-6アルキルアミノ、例えばメチルアミノまたはエチルアミノ、Ｃ1-6ヒドロキシアルキル、例えばヒドロキシメチルまたはヒドロキシエチル、Ｃ1-6アルキルチオール、例えばメチルチオールまたはエチルチオール、Ｃ1-6アルコキシ、例えばメトキシまたはエトキシ、Ｃ5-7シクロアルコキシ、例えばシクロ−ペンチルオキシ、ハロＣ1-6アルキル、例えばトリフルオロメチル、Ｃ1-6アルキルアミノ、例えばメチルアミノまたはエチルアミノ、アミノ(−ＮＨ2)、アミノＣ1-6アルキル、例えばアミノメチルまたはアミノエチル、Ｃ1-6ジアルキルアミノ、例えばジメチルアミノまたはジエチルアミノ、ニトロ、シアノ、ヒドロキシル(−ＯＨ)、フォルミル[ＨＣ(Ｏ)−]、カルボキシル(−ＣＯ2Ｈ)、−ＣＯ2Ａｌｋ2［ここでＡｌｋ2は先に定義したとおり］、Ｃ1-6アルカノイル、例えばアセチル、チオール(−ＳＨ)、チオＣ1-6アルキル、例えばチオメチルまたはチオエチル、スルフォニル(−ＳＯ3Ｈ)、Ｃ1-6アルキルスルフォニル、例えばメチルスルフォニル、アミノスルフォニル(−ＳＯ2ＮＨ2)、Ｃ1-6アルキルアミノスルフォニル、例えばメチルアミノスルフォニルまたはエチルアミノスルフォニル、Ｃ1-6ジアルキルアミノスルフォニル、例えばジメチルアミノスルフォニルまたはジエチルアミノスルフォニル、カルボキシアミド(−ＣＯＮＨ2)、Ｃ1-6アルキルアミノカルボニル、例えばメチルアミノカルボニルまたはエチルアミノカルボニル、Ｃ1-6ジアルキルアミノカルボニル、例えばジメチルアミノカルボニルまたはジエチルアミノカルボニル、スルフォニルアミノ(−ＮＨＳＯ2Ｈ)、Ｃ1-6アルキルスルフォニルアミノ、例えばメチルスルフォニルアミノまたはエチルスルフォニルアミノ、Ｃ1-6ジアルキルスルフォニルアミノ、例えばジメチルスルフォニルアミノまたはジエチルスルフォニルアミノ、アミノスルフォニルアミノ(−ＮＨＳＯ2ＮＨ2)、Ｃ1-6アルキルアミノスルフォニルアミノ、例えばメチルアミノスルフォニルアミノまたはエチルアミノスルフォニルアミノ、Ｃ1-6ジアルキルアミノスルフォニルアミノ、例えばジメチルアミノスルフォニルアミノまたはジエチルアミノスルフォニルアミノ、Ｃ1-6アルカノイルアミノ、例えばアセチルアミノ、Ｃ1-6アルカノイルアミノ、Ｃ1-6アルキル、例えばアセチルアミノメチル、またはＣ1-6アルコキシカルボニルアミノ、例えばメトキシカルボニルアミノ、エトキシカルボニル−アミノまたはｔ−ブトキシカルボニルアミノ基が挙げられる。
所望の場合、２個のＲ10置換基を一緒に連結して環式エーテルなどの循環群、例えばエチレンジオキシなどのＣ2-6アルキレンジオキシ基を形成することができる。
ここで注意するのは、２個以上のＲ10置換基が存在するとき、それらは必ずしも同一の原子および／または基である必要はないことである。Ｒ10置換基は化学式（1）の分子の残部に結合されているものから離れた任意の環内炭素原子に存在することができる。このように、例えば、Ａｒで表されるフェニル基においてどの置換基も分子の残部に結合された環内炭素原子に対して２−、３−、４−、５−または６−位置に存在することができる。
化学式（1）の化合物において、エステル基、例えば基−ＣＯ2Ａｌｋ2が存在するとき、これは好適には代謝的に不安定なエステルとすることができる。
Ｒ5で表されるＣ3-9炭素環式ケトン基はＣ3-9環式脂肪族、例えばＣ3-9シクロアルキルまたはＣ3-9シクロアルケニル、酸素、硫黄または窒素原子から選択した１個以上のヘテロ原子を随意に有するケトンを含む。ヘテロ原子が存在するとき、炭素環式基は特にＣ3-5ヘテロ環式ケトンとすることができる。
Ｒ5基の具体的な例としては、ピロリドン、例えば２−ピロリドン、チアゾリドン、例えば４−チアゾリドン、ピペリドン、例えば４−ピペリドン、ピリドン、例えば２−、３−、または４−ピリドン、キノロン、例えば２−または４−キノロン、イソキノロン、例えば１−イソキノロン、オキサゾロン、例えば４−オキサゾロン、ピラゾロン、例えば５−ピラゾロン、チアゾロン、例えば４−チアゾロンおよびイソオキサゾロン、例えば５−イソオキサゾロン基が含まれる。
Ｒ5炭素環式ケトン基は、例えば、上述の如く１つ以上の置換基Ｒ10によって置換できる。置換基Ｒ10は化学式（1）の分子の残部に付いたものから離れた炭素または窒素原子に存在することができる。例えば、Ｒ5がピラゾロンであるとき、Ｒ10置換基は分子の残部に結合された環内炭素に対して１−、２−または３−位置の炭素または窒素原子に存在することができる。
基Ｒ5は適切に環内炭素またはヘテロ原子を介して化学式（1）の分子の残部に結合することができる。
化学式（1）の化合物中にある種の置換基が存在すると、該化合物の塩を生成することが可能になる場合がある。適当な塩としては薬理学的に許容される塩、例えば無機酸または有機酸から誘導される酸付加塩並びに無機塩基および有機塩基から誘導される塩が挙げられる。
酸付加塩としては塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、アルキルスルホン酸塩、例えばメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、またはイセチオン酸塩、アリールスルホン酸塩、例えばｐ−トルエンスルホン酸塩、ベシル酸塩またはナプシル酸塩、リン酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、酒石酸塩および安息香酸塩が挙げられる。
無機塩基または有機塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属塩、例えばナトリウム塩またはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばマグネシウム塩またはカルシウム塩、および有機アミン塩、例えばモルホリン塩、ピペリジン塩、ジメチルアミン塩またはジエチルアミン塩が挙げられる。
本発明による化合物の特に有用な塩としては薬理学的に許容される塩、特に酸付加の薬理学的に許容される塩が含まれる。
化学式（1）の化合物において、基Ｙは−ＯＲ1基であることが好ましい、特にＲ1が随意に置換されたエチル基または、特に随意に置換されたメチル基である場合が好ましい。Ｒ1基上に存在し得る特に有用な置換基としては１個、２個または３個のフッ素または塩素原子が挙げられる。
化学式（1）の化合物内の基Ｘは−Ｏ−であることが好ましい。
化学式（1）の化合物の特に有用な基は次の化学式（2）を有し、並びにその塩、溶媒和物、水和物およびＮ−オキシドである：
0003872101.tif 000003
この化学式において、Ｒ2は随意に置換されたシクロアルキル基であり；Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は化学式（1）について定義したとおりである。
化学式（1）または（2）の化合物中のＲ2は、随意に置換されたメチルまたはシクロペンチル基であることが望ましい。特にＲ2はシクロペンチル基である。
化学式（1）または（2）の化合物中の基Ｒ3は好適には水素原子である。
化学式（1）または（2）の化合物中の基Ｒ6は好適にはメチル基、また特に水素原子である。
化学式（1）または（2）の化合物中の基Ｒ7は好適にはメチル基、また特に水素原子である。
１つの好適例において、化学式（1）の化合物内のＲ6およびＲ7はそれぞれメチル基である。別の好適例において、Ｒ6またはＲ7のどちらか一方がメチル基であり、他方は水素原子である。しかし、一般的に、Ｒ6とＲ7はそれぞれ特に水素原子である。
化学式（1）または（2）の化合物中の基Ｒ4は好適には−ＣＨ2Ａｒ基、または、特に−Ａｒ基である。
化学式（1）または（2）の化合物中の特に有益なＲ4基はＡｒが酸素、硫黄または、特に、窒素原子から選択された１個以上のヘテロ原子を随意に有し、１、２、３またはそれ以上のＲ10置換基によって随意に置換された単環式アリール基であるＲ4基を含む。これらの化合物において、Ａｒで表される基がヘテロアリール基であるとき、好適には窒素含有単環式ヘテロアリール基、特に６員窒素含有ヘテロアリール基である。このように、一つの推奨実施態様において、基Ｒ4は６員窒素含有ヘテロアリール基である。別の好適例において、Ｒ4は酸素または硫黄原子を有する単環式アリール基または単環式ヘテロアリール基とすることができる。これらの実施例において、６員窒素含有ヘテロアリール基は随意に置換されたピリジル、ピリダジニル、ピリミジニルまたはピラジニル基とすることができる。具体的な例には随意に置換された２−ピリジル、３−ピリジルまたは、特に、４−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、２−ピラジニルまたは３−ピラジニルが含まれる。単環式アリール基はフェニル基または置換されたフェニル基とすることができる、また酸素または硫黄原子を含有する単環式ヘテロアリール基は随意に置換された２−フリル、３−フリル、２−チエニル、または３−チエニル基とすることができる。
化学式（1）または（2）の化合物の特に有用な基はＲ4がピリジルまたは、特に、一置換ピリジル、または好適には二置換ピリジル基、またはＲ4がフェニル、チエニル、フリル、または置換されたフェニル、チエニルまたはフリル基である基である。
化合物のこの特定の基において、また一般的に化学式（1）または（2）の化合物において、Ｒ4が置換されたフェニル基であるとき、それは例えば、置換基が原子または上記に定義された基Ｒ10である一、二、または三置換フェニル基とすることができる。Ｒ4基が一置換フェニル基であるとき、置換基は分子の残部に結合された環内炭素原子に対して２−または好適には３−、また特に４−位置に存在することができる。
化学式（1）または（2）の化合物において、Ｒ4が置換されたピリジル基であるとき、それは例えば一、または二置換ピリジル基、例えば、１個または２個の原子または上記に定義された基Ｒ10によって、特に１個または２個のハロゲン原子、例えばフッ素または塩素原子、あるいはメチル、メトキシ、ヒドロキシルまたはニトロ基によって置換された一置換、または二置換２−ピリジル、３−ピリジルまたは特に４−ピリジル基とすることができる。これらのタイプの特に有益なピリジル基は３−一置換−４−ピリジルまたは３,５−二置換−４−ピリジル、または２−または４−一置換−３−ピリジル、または２,４−二置換−３−ピリジル基である。
化学式（1）または（2）の化合物中の基Ｒ5は好適にはＣ3-5ヘテロ環式ケトン、特にイソオキサゾロン、ピラゾロンまたは特に、ピリドン基である。このタイプの特に有用な基は５−イソオキサロン、５−ピラゾロン、または、特に、２−ピリドン基である。
本発明による化合物の特に有用な基はＲ3、Ｒ6およびＲ7がそれぞれ水素原子であり、Ｒ2、Ｒ4とＲ5が式（1）について定義したとおりである式（2）；またはその塩、溶媒化合物、水和物およびＮ−酸化物を有する。Ｒ2がシクロアルキルまたは置換シクロアルキル基、特に置換シクロペンチルまたは特にシクロペンチル基であるこのタイプの化合物は特に有用である。化合物のこの基の中で、Ｒ4は好適には単環式アリール基、特にフェニルまたは置換フェニル基である、またはＲ4は６員窒素含有単環式ヘテロアリール基、特にピリジルまたは置換ピリジル基である。Ｒ5は好適にはＣ3-5ヘテロ環式ケトン、特にイソオキサロン、特に５−イソオキサゾロニル、ピラゾロン、特に５−ピラゾロニルまたは、特に、ピリドン、特に２−ピリドン、基である。
本発明による特に有用な化合物は、
（±）−３−［２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−４,５−ジヒドロ−５−イソオキサゾロン、
（±）−３−「２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−１−メチル−４,５−ジヒドロ−５−ピラゾロン、
（±）−３−「２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−４,５−ジヒドロ−５−ピラゾロン、
（±）−４−「２−（３−シクロペンチルオキシ−４−メトキシフェニル）−２−フェニルエチル］−２−ピリドン、または
その分割した鏡像異性体；およびその塩、溶媒和物、水和物およびＮ−オキシドである。
上に詳述した化合物は２つの鏡像異性体の形で存在する。それぞれの鏡像異性体は有益であり、両方の鏡像異性体の混合物も有益である。
本発明による化合物はＰＤＥIVの選択的かつ強力な阻害剤である。このような作用を示す該化合物の能力は、後記の実施例中に記載される試験によって簡単に測定することができる。
それ故、本発明による化合物は不要の炎症反応または筋痙縮（例えば膀胱または消化系の平滑筋痙縮）が存在すると共にｃＡＭＰレベルの上昇が炎症を防止もしくは軽減しかつ筋肉を弛緩させるものと期待し得るようなヒトの疾患の予防および治療のために特に有用である。
本発明の化合物を適用し得る特定の用途としては、喘息、特に喘息に付随した肺の炎症、あるいは炎症性気道疾患、慢性気管支炎、好酸球性肉芽腫、乾癬やその他の良性および悪性の増殖性皮膚疾患、エンドトキシンショック、敗血症性ショック、潰瘍性大腸炎、クローン病、心筋と脳の再灌流による障害、炎症性関節炎、慢性糸球体腎炎、アトピー性皮膚炎、蕁麻疹、成人呼吸窮迫症候群、尿崩症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、春季結膜炎、動脈再狭窄および関節硬化症の治療が挙げられる。
本発明の化合物はまた求心性(sensory)ニューロン中のｃＡＭＰの上昇を通じて神経性の炎症を抑制する。それ故、それらは炎症と痛みを伴う炎症性疾患の鎮痛薬、鎮咳薬および抗痛覚過敏薬である。
本発明による化合物はまた、リンパ球中におけるｃＡＭＰを上昇させ、それによって慢性関節リウマチ、強直性脊椎炎、移植片に対する拒絶反応および移植片宿主反応のごとき免疫性疾患における不要のリンパ球活性化を抑制することもできる。
本発明による化合物は胃酸分泌も減少させ、それ故分泌過多に付随する症状を治療するのにも使用できることが判った。
本発明の化合物は免疫または感染刺激に応じて炎症を起こした細胞によるサイトキン合成を抑制する。それ故、それらは腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)などのサイトキンがキーメディエイタになる細菌性、真菌性またはウィルス性誘発性敗血症および敗血症ショックの治療に有益である。さらに本発明の化合物はサイトキンによる炎症および発熱を抑制する、またそれ故、リウマチや骨関節症などの疾患において発生する炎症およびサイトキン介在性の慢性組織変性の治療に有用である。
細菌性、真菌性またはウィルス性感染症または癌などの疾患におけるＴＮＦなどのサイトキンの過剰生産は悪液質および筋肉浪費に至る。本発明の化合物はこれらの徴候を改善し、その結果生活の質を高める。
本発明の化合物は脳の特定領域のｃＡＭＰを上昇させ、それによって鬱病および記憶障害を緩和する。
本発明の化合物は特定の腫瘍細胞中で細胞増殖を抑制する、従って、腫瘍の増大および正常細胞侵襲を防止するのに使用することができる。
疾患の予防または治療のためには、本発明による化合物は医薬品組成物として投与することができる、また本発明のさらに別の側面に従えば、化学式（1）の化合物と１種類以上の薬理学的に許容される担体、賦形剤または希釈剤とを含む医薬品組成物が提供される。
本発明による医薬品組成物は、経口投与、口腔内投与、非経口投与、鼻内投与、局所投与、または直腸内投与のために適した形態、あるいは吸入または吹込みによる投与のために適した形態を有し得る。
経口投与のために、かかる医薬品組成物は例えば錠剤、トローチまたはカプセル剤の形態を有し得る。これらの錠剤、トローチまたはカプセル剤は結合剤（例えば、予めゼラチン化したトウモロコシデンプン、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）充填剤（例えば、乳糖、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルクまたはシリカ）、崩壊剤（例えば、デンプンまたはグリコール酸ナトリウム）あるいは湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）のごとき薬理学的に許容され得る賦形剤を使用しながら通常の手段によって製造することができる。かかる錠剤には、当業界において公知の方法によってコーティングを施すことができる。経口投与用の液状製剤は例えば水剤、シロップ剤または懸濁剤の形態を有することができるし、あるいは使用前に水またはその他の適当な媒質を用いて再構成するための乾燥製品として提供することもできる。かかる液状製品は、懸濁化剤、乳化剤、非水性媒質および保存剤のごとき薬理学的に許容され得る添加剤を使用しながら通常の手段によって製造することができる。かかる製剤はまた、所望に応じて緩衝塩、着香剤、着色剤および甘味剤を含有することもできる。
経口投与の製剤は、活性化合物の制御放出をもたらすよう適宜に配合することができる。
口腔内投与のためには、組成物は通常の如くに処方された錠剤またはトローチの形態を有し得る。
化学式（1）の化合物は例えばボーラス注射または注入などの注射による非経口投与のために処方することもできる。注射用の製剤は例えばガラスアンプルまたは複数用量容器（例えば、ガラスバイアル）入りの単位剤形を成して提供することができる。注射用の組成物は油性または水性の媒質中における懸濁液、溶液または乳濁液のごとき形態を有することができ、また懸濁化剤、安定化剤、保存剤および／または分散剤のごとき処方用の添加剤を含有することもできる。あるいはまた、活性成分が使用前に適当な媒質、例えば発熱性物質を含まない無菌水、を用いて構成するための粉末状を成していても良い。
上記のごとき製剤に加えて化学式（1）の化合物をデポ製剤として処方することもできる。かかる長時間作用型の製剤は植込みまたは筋肉内注射によって投与することができる。
鼻内投与または吸入による投与のためには、本発明による使用のための化合物は適当な推進剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、またはその他の適当なガスもしくはガス混合物を使用して加圧包装用または噴霧器用のエーロゾル噴霧剤として提供するのが簡便である。
所望ならば、かかる組成物は活性成分を含有する１個以上の単位剤形を含んだ包装または分配装置に入れて提供することができる。かかる包装または分配装置には投与のための指示を添付することができる。
特定の炎症状態の予防または治療のために必要な本発明の化合物の量は、選ばれた化合物および処置すべき患者の状態に応じて変化する。とは言え、日用量は一般に約１００ng/kgないし１００mg/kgの範囲内にあればよいのであって、例えば経口投与または口腔内投与のためには約０．０１mg/kg〜４０mg/kg体重、非経口投与のためには約１０ng/kg〜５０mg/kg体重、そして鼻内投与あるいは吸入または吸込みによる投与のためには約０．０５mg〜約１０００mg例えば約０．５mg〜約１０００mgの範囲内にあればよい。
本発明による化合物は下記の方法によって製造することができる。下記の化学式に用いられる記号Ｙ、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7とＸは特記事項なき限り化学式（1）に関連して先に述べた基を表すものと理解される。下記の反応において、ヒドロキシ、アミノ、チオ、またはカルボキシ基などの反応性官能基が最終製品内で所望であるとき、それらの反応への不所望の参加を防止するために、それらを保護するのが必要になることがある。通常の慣行に従って［参照：例えば、Green, T.W. in "Protective Groups in Organic Synthesis" John Wiley and Sons, 1981.］通常の保護基を使用することができる。保護解除が化学式（1）の化合物の合成の最終過程になるだろう。
このように本発明の更に別の側面に従えば、Ｒ3が水素原子またはヒドロキシル基でありＲ6とＲ7がそれぞれ水素原子である化学式（1）の化合物は化学式（3）：
0003872101.tif 000004
［ここで、Ｒ3はいま定義したとおり、Ｒはカルボキシル酸［−ＣＯ2Ｈ］基、またはその反応性誘導体、またはニトリル［−ＣＮ］またはイミン塩］の化合物を二官能基試薬Ｗ1Ｒ5aＷ2と、または必要なら化合物Ｒ5bＷ3で環化して一般的に調製できる［ここで、同一でも異なっていてもよいＷ1、Ｗ2とＷ3はそれぞれ反応性官能基またはその保護された誘導体；またＲ5aとＲ5bは化学式（3）の化合物内でＷ1、Ｗ2とＷ3とともに基Ｒと一緒に添加したとき、結果として生じた基−ＲＷ1Ｒ5aＷ2または−ＲＷ1Ｒ5aＷ2Ｒ5bＷ3が基Ｒ5を構成するような基Ｒ5の構成成分である］。
反応はＲ3が水素原子である化学式（3）の対応する化合物から、Ｒ3が水素原子であり、Ｒ5がヘテロ環式ケトンである化学式（1）の化合物を調製するのに特に適している。
この反応に使用するカルボキシル酸の反応性誘導体には酸ハロゲン化物（例えば、酸塩化物）、チオアミノなどのアミド、チオエステルなどのエステルが含まれる。イミン塩には例えば化学式−Ｃ（ＯＡｌｋ）＝ＮＨ2+Ａ-の塩などが含まれる[この式でＡｌｋはＣ1-4アルキル基であり、Ａ-は塩化物イオンなどの対立イオンである]。
この一般的反応において、Ｗ1、Ｗ2またはＷ3で表される反応性官能基は適切な炭素、窒素、硫黄または酸素求核原子とすることができる。具体的な例には、カルボアニオン［例えば、アルキル基と有機金属化合物の結合によって発生する］、アミノ、チオールおよびヒドロキシル基などの単純な求核原子が含まれる。
一般的に、環化反応は最初に、エタノールなどのアルコールを始めとする溶媒内で、再還流温度などの高温で、必要ならば塩基またはLawessonの試薬などのthiation試薬の存在の下に実施される。
化学式（3）の酸の活性誘導体と、Ｒがニトリルまたはイミン塩である化学式（3）の他の化合物は後述の実施例に記載されたものを始めとする、カルボキシル酸をかかる化合物に転換するための従来の方法を使用して対応する酸［ここでＲは−ＣＯ2Ｈ］から調製することができる。
Ｒ3が水素原子でありＲが−ＣＯ2Ｈである化学式（3）の酸は、ＡｌｋがＣ1-4アルキル基、例えばエチル基である化学式（4）：
0003872101.tif 000005
のジエステルを、ジオキサンなどの溶媒中で、再還流温度などの高温で、水酸化ナトリウムなどの塩基によって加水分解し、ついで高温で酸性にすることによって調製することができる。
化学式（4）のジエステルは化学式（5）
0003872101.tif 000006
のジエステルを有機金属試薬で反応させて調製することができる。
適切な有機金属試薬には、Ｒ4ＭｇＢｒなどのGrignard試薬、またはＲ4Ｌｉなどの有機リチウム試薬が含まれる。Grignardおよびリチウム試薬は既知の化合物とするか、既知の化合物の合成に使用されるものと同様に調製することができる。
反応はテトラヒドロフランなどの環式エーテルを始めとするエーテルなどの溶媒内で、−７０℃から室温の低温で実施することができる。
化学式（5）の中間物質は化学式（6）：
0003872101.tif 000007
のアルデヒドを、必要ならばピペリジンや酢酸などの触媒の存在の下に、トルエンなどの不活性溶媒内で、再還流温度などの高い温度で、ジエチルマロン酸塩などのマロン酸塩と濃縮して調製することができる。
化学式（6）のアルデヒドは、化学式（10）の中間物質のアルキル化について以下に述べる試薬と条件を使用して化合物Ｒ2Ｈａｌ［ここでＨａｌは臭素原子などのハロゲン原子］を用いて化学式（7）：
0003872101.tif 000008
の対応する化合物をアルキル化して調製することができる。
化学式（7）の中間体は既知の化合物とするか、既知の化合物の製造に使用したのと同様の方法で既知の初期物質から製造し得る。
Ｒ3がヒドロキシル基である化学式（3）の中間体は化学式（8）：
0003872101.tif 000009
のケトンを、
Ｚがリチウム原子などの金属原子である有機金属試薬ＲＣＨ2ＣＯＣＨ2Ｚと反応させて得ることができる。
反応はテトラヒドロフランなどの環式エーテルを始めとするエーテルなどの溶媒内で、−７０℃から室温の低温で実施することができる。
試薬ＲＣＨ2ＣＯＣＨ2Ｚは既知の化合物とするか、必要ならば、上述の条件の下で、ジイソプロピルアミンなどのアミンを始めとする塩基の存在の下で、できれば上述の過程の間に現場で、化合物ＡｌｋＣＨ2Ｚ［ここでＡｌｋはｎ−プロピル基などのアルキル基］を化合物ＲＣＨ2ＣＯＣＨ3と反応させて調製することができる。
化学式（8）のケトンは、環境温度でジクロロメタンなどの溶剤内で二酸化マンガンなどの酸化剤を用いて化学式（9）：
0003872101.tif 000010
の対応するアルコールを酸化させることによって調製することができる。
化学式（9）のアルコールは、化学式（4）のジエステルの調製について先に述べた如く、化学式（6）のアルデヒドをGrignard試薬Ｒ4ＭｇＢｒなどの有機金属試薬あるいは有機リチウム化合物Ｒ4Ｌｉと反応させて調製することができる。
本発明の別の方法によれば、化学式（1）の化合物は、Ｌが遊離基である試薬Ｒ2Ｌを用いて化学式（10）：
0003872101.tif 000011
の化合物をアルキル化することによって調製することができる。
Ｌで表される遊離基にはヨウ素または塩素または臭素原子などのハロゲン原子またはｐ−トルエンスルホニルオキシなどのアリールスルホニルオキシ基を始めとするスルホニルオキシ基が含まれる。
アルキル化反応は炭酸塩などの無機塩基、たとえば炭酸セシウム(caesium)やカリウム、アルコキシド、たとえばカリ−ｔ−ブトキシド、または水素化物、たとえば水素化ナトリウムなどの塩基の存在の下に、両性の非プロトン性溶液、例えばジメチルホルムアミドなどの置換アミドなどのアミド、またはテトラヒドロフランなどの環式エーテルなどのエーテル内で、およそ４０℃から５０℃の環境温度以上の温度で実施することができる。
化学式（10）の中間体は化学式（11）の対応する保護された化合物から得ることができる：
0003872101.tif 000012
ここでＸ1は従来の手順を使用する保護されたヒドロキシ、チオ、またはアミノ基［参照：Green T.W.前掲］である。従って、例えば、Ｘ1がｔ−ブチルジメチルシリルオキシ基であるとき、要求されたヒドロキシル基は保護中間体をフッ化テトラブチルアンモニウムで処理して得ることができる。化学式（11）の保護中間体は本書に記載の反応と適切に保護された中間体を用いて化学式（1）の化合物と同様の仕方で調製することができる。
本発明のさらに別の方法によれば、Ｒ5がピリド−２−一基である化学式（1）の化合物は化学式（1）の対応する２−ハロピリジンからハロゲン原子を転位することによって調製することができる。反応は塩基、例えばアルカリ金属塩基、例えば水酸化ナトリウムを用いて、好適には高温で、グリコール、例えばジエチレングリコールなどの溶媒内で実施することができる。この反応のためのハロピリジン開始物質は既知の化合物とするか（参照：例えば、欧州特許明細書第626939号）または既知の化合物の調製に使用されたのに類似の方法によって調製できる。
化学式（1）の化合物は、化学式（1）の他の化合物の相互転換によっても調製できる。従って、例えば、化学式（1）の化合物内のＲ4によって表される基は、化学式（1）の対応する非置換化合物とＲ10を含む求核原子または親電子物質を用いる適切な置換反応によって基Ｒ10のアリールまたはヘテロアリール部分内で置換することができる。
相互転換過程の別の実例において、Ｒ4内のアリールまたはヘテロアリール基が−ＣＨ2ＮＨ2置換物質を含む化学式（1）の化合物は、ジエチルエーテルなどのエーテルなどの溶媒内で水素化リチウムアルミニウムなどの水素化複合金属などを用いて、Ｒ4がニトリル基を含有する対応する化合物を還元して調製することができる。
別の実例において、Ｒ4内のアリールまたはヘテロアリール基がアルカノイルアミノまたはアルカノイルアミノアルキル置換物質を含む化学式（1）の化合物は、ジクロロメタンなどの溶媒内で例えばトリエチルアミンである第３アミンなどの塩基の存在の下に、ハロゲン化アシルとの反応によって、Ｒ4が−ＮＨ2またはアルキルアミノ基を含む対応する化合物をアシル化して調製することができる。
相互転換過程のさらに別の実例において、Ｒ4がエタノエステル(ethanoate)などのエステル［ＣＯ2Ａｌｋ2］によって置換された化学式（1）の化合物は、再還流温度などの高温で、エタノールなどのアルコール内で、塩化アセチルなどの酸塩化物を始めとする酸ハロゲン化物を用いて、Ｒ4がカルボキシル酸を含有する対応する化合物のエステル化によって調製することができる。
Ｒ4がカルボキシル酸によって置換された化学式（1）の化合物は、室温で、第三ブタノールを始めとするアルコールなどの溶媒内で過マンガン酸カリなどの酸化剤による酸化によって、Ｒ4がフォルミル基を含有する対応する化合物合物から調製することができる。
さらに相互転換反応において、Ｒ4がジメチル−アミノメチルなどのアミノアルキル基によって置換された化学式（1）の化合物は、室温において、メタノールなどのアルコールを始めとする溶媒内で、必要ならばエタノール性ＨＣｌなどの触媒の存在の下に、シアノボロ水素化(cyanoborohydride)ナトリウムなどの還元剤の存在下に、ジメチルアミンなどのアミンを用いて、Ｒ4がフォルミル基を含有する対応する化合物の還元性アミン化によって調製することができる。
相互転換反応のさらに別の実例において、Ｒ4がフォルミル基によって置換された化学式（1）の化合物は、およそ２０℃から環境温度までの温度で、エタノールなどのアルコールをはじめとする溶媒内で、水素化硼素ナトリウムなどの還元剤を用いて、Ｒ4がヒドロキシ−メチル基を含有するとき、対応するアルコールに還元することができる。このとき生じたアルコールは次に、化学式（8）の中間体のアルキル化について先に述べた方法と試薬を用いてアルキルハロゲン化物またはアルキルスルホン酸塩との反応によって、メトキシメチルなどの対応するアルコキシ誘導体に転換することができる。
相互転換過程のさらに別の実例において、Ｒ4がカルボキシアミド(−ＣＯＮＨＲ11)またはアミノカルボニル(−ＮＨＣＯＲ11)基を含有する化学式（1）の化合物は、およそ−２０℃から室温までの温度で、ジクロロメタンなどの溶媒内、またはテトラヒドロフランとジメチルフォルムアミドなどの溶媒の混合物内で、トリエチルアミンまたはＮ−メチルモルフォリンを始めとするアミンなどの塩基の存在の下に、クロロギ酸イソブチルまたはクロロギ酸エチルなどのカルバミン酸塩との反応によって、Ｒ4がそれぞれ−ＣＯ2Ｈまたは−ＮＨ2基を含有する対応する化合物の反応によって調製できる。
さらに別の相互転換反応において、Ｒ4が−ＮＨＣＯＮＨＲ11基で置換された化学式（1）の化合物は、環境温度で、ジクロロメタンなどの溶媒内で、エチルイソシアン酸塩などのイソシアン酸塩と、Ｒ4がアミノ(−ＮＨ2)基によって置換された対応する化合物との反応によって調製することができる。
相互転換過程のさらに別の実例において、Ｒ7がアルキル基である化学式（1）の化合物は、０℃などの低温で、テトラヒドロフランなどの溶媒内で、リチウムジイソプロピルアミドなどの塩基の存在の下に、Ｌが塩素を始めとする、例えばハロゲン原子などの遊離基である化合物Ｒ7Ｌとの反応によって、Ｒ7が水素原子である化学式（1）の化合物の相互転換によって調製できる。
Ｒ3がＲ9がアルキル、アルコキシアルキル、フォルミルまたはアルカノイル基であるＯＲ9基である化学式（1）の化合物はＲ3が−ＯＨ基である化学式（1）の化合物を、室温で、ジクロロメタンまたはテトラヒドロフランなどの溶媒内で、トリエチルアミンまたは第三ブトキシカリ(potassium tert-butoxide)などの塩基の存在の下に（Ｒ9が先に定義した通りで、Ｌが先に定義した遊離基である）化合物Ｒ9Ｌとの反応によって、相互転換過程の別の実施例によって調製できる。
相互転換過程の別の実例において、Ｒ9がカルボキシアミド(−ＣＯＮＨＲ11)またはチオカルボキシアミド(−ＣＳＮＨＲ11)基である化学式（1）の化合物は室温で、ジイソプロピルエチルアミンなどの塩基の存在の下に、クロロフォルムなどの溶媒内で、Ｒ3がヒドロキシル基である化学式（1）の化合物をイソシアン酸塩Ｒ11ＮＣＯまたはイソチオシアン酸塩Ｒ11ＮＣＳと反応させて調製することができる。イソシアン酸塩Ｒ11ＮＣＯとイソチオシアン酸塩Ｒ11ＮＳＣは既知の化合物であるか、従来の仕方で調製することができる。
別の実施例で、Ｒ9がＣＯＮＲ11Ｒ12基である化学式（1）の化合物は０℃程度の低温で、テトラヒドロフランなどの溶媒内で、水素化ナトリウムなどの塩基の存在の下にＲ9がＣＯＮＨＲ11基である化学式（1）の化合物を試薬Ｒ12Ｌ（Ｌは先に定義した遊離基）と反応させて調製することができる。
さらに別の実施例で、Ｒ9が−ＣＳＮＲ11Ｒ12である化学式（1）のイソチオシアン酸塩は、再還流温度などの高温で、トルエンなどの無水溶媒内で、Ｒ9が(−ＣＯＮＲ11Ｒ12)基である化学式（1）の化合物をLawesson試薬などの、thiation試薬と反応させて調製することができる。
化学式（1）の化合物のＮ−酸化物はおよそ７０℃から８０℃の高温で、酢酸などの酸の存在の下に、過酸化水素などの酸化剤を使用して対応する窒素の塩基を酸化するか、あるいは、環境温度で、ジクロロメタンなどの溶媒内で、過酢酸などの過酸との反応によって調製することができる。
化学式（1）の化合物の塩は通常の手順を用いてエーテルをはじめとする有機溶剤などの適切な溶剤中で適切な酸または塩基と化学式（1）の化合物の反応によって製造することができる。
化学式（1）の化合物の特定の鏡像異性体を得ることが望ましいときは、鏡像異性体を分割するのに適切な従来の手順を用いて、対応する鏡像異性体混合物から製造することができる。
従って、例えば塩などのジアステレオマー誘導体は化学式（1）の鏡像異性体、例えばラセミ体と、適切なキラル化合物、例えばキラル酸または塩基などの混合物を反応によって製造することができる。適切なキラル酸には、例えば酒石酸およびその他の酒石酸塩、例えば酒石酸塩ジベンゾイル及び酒石酸塩ジトルオイル、スルホン酸塩樟脳のようなスルホン酸塩、マンデル酸とその他のマンデル酸塩および燐酸塩、例えば１,１'−ビナフタレン(binaphthalene)−２,２'−ジイル燐酸水素が含まれる。次にジアステレオマーは適切な方法、例えば結晶化によって分離され、ジアステレオマーが塩であるときは酸または塩基内で処理することによって所望の鏡像異性体が回収できる。
他の分割過程の場合、化学式（1）のラセミ体はキラル高性能液体クロマトグラフィーを用いて分離できる。代案として、所望ならば、上述の方法の１つに適切なキラル中間体を用いて特定の鏡像異性体を得ることができる。
下記の実施例は本発明を説明するものである。
下記の略号が使用される：
ＤＭＦ−ジメチルホルムアミド；
ＴＨＦ−テトラヒドロフラン；
ＤＭＥ−ジメトキシエタン；
ＥｔＯＡｃ−酢酸エチル；
Ｅｔ2Ｏ−ジエチルエーテル；
Ｅｔ3Ｎ−トリエチルアミン；
ＢｕＬｉ−ブチルリチウム；
ＬＤＡ−リチウムジイソプロピルアミド；
ＥｔＯＨ−エタノール；
ＲＴ−室温；
全ての1Ｈｎｍｒスペクトルは特記事項なき限り３００MHzで得られた。
中間体１
3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシベンズアルデヒド
Ｃｓ2ＣＯ3(214ｇ，0.66モル)を、無水ＤＭＦ(500ml)中の３−ヒドロキシ−４−メトキシベンズアルデヒド(100ｇ，0.66モル)と臭化シクロペンチル(98ｇ，0.66モル)の混合物に添加した。反応混合物をＲＴで１６時間撹拌し、さらに追加の臭化シクロペンチル(98ｇ，0.66モル)とＣｓ2ＣＯ3(214ｇ，0.66モル)で処理した。ＲＴでさらに６時間後、混合物を濾過し、そして真空中で濃縮した。残留物をＣＨ2Ｃｌ2(300ml)中に溶解し、水酸化ナトリウム溶液(10％；２×150ml)で洗浄した。有機層を乾燥し(ＭｇＳＯ4)、真空中で濃縮し、そして蒸留(150℃，１０-2mbar)したところ表題化合物(130ｇ)が粘稠な無色の油として得られた。
δH(CDCl3)1.5-2.0(8H,br m,CH2)4),3.87(3H,s,OMe),4.80(1H,br m,OCHCH2),6.90(1H,d,J 8.7Hz,OMeに対してオルト位のArH),7.30-7.45(2H,m,OMeに対してメタ位の2×ArH),および9.77(1H,s,ArCHO)。
中間体２
エチル3-（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）-2-エトキシカルボニルプロペン酸塩
トルエン(700ml)中の中間体１(109.8，499.1ミリモル)、マロン酸ジエチル(79.96，499.1ミリモル)、ピペリジン(2.5ml)およびＣＨ3ＣＯ2Ｈ(12ml)の混合物をDean-Stark装置内で２０時間にわたって還流温度まで加熱した。
さらにマロン酸ジエチル(9.6ｇ，59.9ミリモル)、ピペリジン(2.5ml)およびＣＨ3ＣＯ2Ｈ(12ml)を添加し、前と同様に１５時間にわたって加熱した。反応混合物を真空中で濃縮して表題化合物(217ｇ)が黄色の油として得られた。
δH(CDCl3)1.33(6H,t,J 7.1Hz,2×CO2CH2Me),1.5-2.05(8H,br m,(CH2)4,3.88(3H,s,OMe),4.30(2H,q,J 7.1Hz,CO2CH2Me),4.36(2H,q,J 7.1Hz,CO2CH2Me),4.73(1H,br m,OCH),6.85(1H,d,J 8.1Hz,OMeに対してオルト位のArH),7.0-7.1(2H,m,OMeに対してメタ位の2×ArH)および7.63(1H,s,HC=CCO2Et)。
中間体３
ジエチル２−［（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）フェニルメチ(phenylmethy)］プロパン−1−3−ジオエート
臭化フェニルマグネシウム(ＴＨＦ中に1.0Ｍ；340ml，340ミリモル，1.29eq)を−６０℃でＴＨＦ(200ml)中の中間体２(95.6ｇ，264ミリモル)の溶液に１.５時間にわたって添加し、この温度でさらに５時間攪拌した。
反応混合物を−２０℃まで加熱し、ＮＨ4Ｃｌの１０％水溶液(200ml)で急冷し、ついでＥｔＯＡｃ(3×100ml)で抽出した。抽出物を乾燥し(ＭｇＳＯ4)、真空中で濃縮して残った黄色の油をＥｔＯＨ中に溶解して一晩結晶させて表題化合物(74.9ｇ)が白色の固体として得られた。m.p.９７−９８℃。δH(CDCl3)1.01(6H,t,J 7.1Hz,CO2CH2Me),1.05(3H,t.J 7.1Hz,CO2CH2Me),1.5-2.0(8H,br m,(CH2)4),3.77(3H,s,OMe),3.9-4.1(4H,m,2×CO2CH2Me),4.26(1H,d,J 12.1Hz,CHCHCO2Et),4.67(1H,d,J 12.1Hz,CHCHCO2Et),4.71(1H,br m, OCH),6.7-6.85(3H,m,C6H3),および7.15-7.35(5H,m,C6H5)。
中間体４
3−（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）−3−フェニルプロパン酸
水酸化ナトリウム溶液（８Ｍ；600ml）とジオキサン(600ml)中の中間体３(70.3ｇ，0.160モル)の機械的に攪拌した溶液を、７時間にわたって還流温度まで加熱した。反応混合物を冷却して、濃縮塩酸(約400ml)をpH４まで滴下して一晩加熱し、均一な溶液が得られた。ジオキサンを真空中で除去し、混合物をＣＨ2Ｃｌ2(500ml)とＨ2Ｏ(500ml)に分配した。有機層を分離し、さらにＣＨ2Ｃｌ2抽出物(3×150ml)と組み合わせた。抽出物を乾燥し(ＭｇＳＯ4)そして真空中で濃縮して表題化合物(55ｇ)が黄色の固体として得られた。δH(CDCl3)1.5-2.0(8H,br m,(CH2)4),3.04(2H,d,J 7.9Hz,CHCH2CO2H),3.80(3H,s,OMe),4.45(1H,t,J 7.9Hz,CHCH2CO2H),4.70(1H,br m,OCH),6.7-6.8(3H,m,C6H3)および7.15-7.35(5H,m,C6H5)(注:CO2Hは認められなかった)。
中間体５
塩化3−（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）−3−フェニルプロパノイル
ＣＨ2Ｃｌ2(250ml)中の中間体４(23.0ｇ；67.5ミリモル)の溶液にＳＯＣｌ2(14.8ml；24.1ｇ；3eq)を添加して還流温度まで６時間にわたって加熱した。反応混合物をＲＴで一晩攪拌して、真空中で濃縮し、表題化合物(23.7ｇ)が褐色の油として得られた。δH(CDCl3)1.5-2.0（8H,br m,CH2)4),3.62(2H,d,J 8.0Hz, CHCH2COCl),3.82(3H,s,OMe),4.56(1H,t,J 8.0Hz,CHCH2COCl),4.73(1H,br m,OCH),6.7-6.85(3H,m,C6H3)および7.15-7.4(5H,m,C6H5)。
中間体６
エチル5−（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）−3−オキソ−5-フェニル−ペンタン酸塩
ＴＨＦ(60ml)中のマロン酸エチルカリ(2.95g；22.3ミリモル；2.1eq)の溶液に−５０℃でn-BuLi(ヘキサン中に1.6Ｍ；29.3ml；46.9ミリモル；4.2eq)を滴下した。反応混合物を−１０℃に加熱してから１０分間にわたって撹拌し、再度−６５℃に冷却し、ＴＨＦ(20ml)中のあらかじめ冷却した中間体５(4.0g,11.1ミリモル)の溶液で滴下して処理した。反応混合物を−６５℃で２０分間攪拌し、ついでＥｔ2Ｏ(100ml)と水性ＨＣｌ(１Ｍ；150ml)の攪拌混合物内に注いだ。０.５時間後、有機層を分離し、さらにＥｔ2Ｏ抽出物(2×75ml)と組み合わせた。抽出物を乾燥させ(ＭｇＳＯ4)、真空中で濃縮し残留油をクロマトグラフィー(ＳｉＯ2；40％Ｅｔ2Ｏ−ヘキサン)にかけて得られた無色の油(3.4g)を自然に結晶させて表題化合物が白色の固体として得られた。m.p.５６−５８℃(ＥｔＯＨ)。
δH(CDCl3)1.24(3H,t,J 7Hz,CO2CH2Me),1.5-1.9(8H,br m,(CH2)4),3.27(2H,d,J 7.5Hz,CHCH2CO),3.33(2H,s,CH2CO2Et),3.79(3H,s,OMe),4.14(2H,q,J 7Hz,CO2CH2Me),4.52(1H,t,J 7.5Hz,CHCH2CO),4.69(1H,m,OCH),6.7-6.8(3H,m,C6H3)および7.1-7.35(5H,m,C6H5)。
実施例１
ａ）  （±）−3−［2−（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）−2−フェニルエチル］−4,5−ジヒドロ−5−イソオキサゾロン
ＥｔＯＨ(20ml)中の中間体６(800mg；1.95ミリモル)と塩酸ヒドロキシルアミン(203mg；2.91ミリモル)の混合物を４時間にわたって還流温度まで加熱し、ＲＴに一晩おいた。反応混合物を真空中で濃縮し、Ｅｔ3Ｎ(0.5ml)を含む水(20ml)中に溶解した。上澄みを取り、油状の固体を水(20ml)で洗浄した。クロマトグラフィー(ＳｉＯ2；5％までのＣＨ2Ｃｌ2ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2)にかけて得られた薄黄色の固体(500mg)をＥｔＯＨ(25ml)から再結晶させて表題化合物(305mg)が薄黄色の微小針として得られた。m.p.137-139℃(実測値Ｃ，73.02;Ｈ,6.65;Ｎ,3.55．Ｃ23Ｈ25ＮＯ4としての要求値Ｃ，72.80;Ｈ,6.64;Ｎ,3.69％)：δH(CDCl3)1.5-1.95(8H,br m,(CH2)4),3.0(2H,s,CH2CO),3.20)(2H,d,J 8.3Hz,CH2CHPh),3.81(3H,s,OMe),4.18(1H,t,J 8.3Hz,CH2CHPh),4.71(1H,br m,OCH),6.7-6.85(3H,m,C6H3)および7.2-7.35(5H,m,C6H5)。
下記の化合物は実施例１ａの化合物と同様の仕方で調製した。
ｂ）  （±）−3−［2−（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）−2−フェニルエチル］−1−メチル−4,5−ジヒドロ−5−ピロゾロン
ＥｔＯＨ(20ml)中の中間体６(750mg，1.83ミリモル)とメチルヒドラジン(101mg，120μＬ，2.2ミリモル)から。Ｅｔ2Ｏ(20ml)、ＥｔＯＡｃ(3ml)とヘキサン(5ml)の混合物を粉砕し得られた固体をフィルタにかけて、低温のＥｔ2Ｏ(5ml)で洗浄して、真空中で乾燥して、表題化合物(485mg)が白色の固体として得られた。m.p.105-108℃(実測値Ｃ，73.56;Ｈ,7.06;Ｎ,6.98．Ｃ24Ｈ28Ｎ2Ｏ3としての要求値Ｃ，73.44;Ｈ,7.19);Ｎ,7.14％)；δH(CDCl3)1.5-1.9(8H,br m,(CH2)4),2.87(2H,s,CH2CO),3.13(2H,d,J 8.2Hz,CH2CHPh),3.23(3H,s,NMe),3.81(3H,s,OMe),4.18(1H,t,J 8.2Hz,CH2CHPh),4.7(1H,br m,OCH),6.7-6.8(3H,m,C6H3)および7.15-7.35(5H,m,C6H5)。
実施例２
（±）−4−［2−（3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル）−2−フェニルエチル］−2−ピリドン
（＋）−２−クロロ−4−［2−(3-シクロペンチルオキシ-4-メトキシフェニル)−2−フェニルエチル］ピリジン[4.69mg，1.15ミリモル;欧州特許明細書第626939号の実施例の26]水溶液と水酸化ナトリウム(2ｇ；50ミリモル)をジエチレングリコール(10ml)中で１７０℃で２時間加熱した。反応混合物をＲＴに冷却し、得られた茶色のゲルをＥｔ2Ｏ(80ml)と水(60ml)に分けた。有機層を飽和食塩水(50ml)で洗浄、乾燥させ(ＭｇＳＯ4)、蒸発させて褐色のガムを得た。シリカでクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ2Ｃｌ2中で１−＞４％メタノールで溶出して表題化合物が薄茶色のガム(40mg)として得られた。δH(CDCl3)1.55-1.90(8H,m,CH2C),3.17(2H,d,J 8Hz,CH2Py),3.78(3H,s,OMe),4.14(1H,t,J 8Hz,CHCH2Py),4.67(1H,m,CO),5.97(1H,d,J 7Hz,HaPy),6.25(1H,s,HcPy),6.68-6.77(3H,m,Ar Hd-f),7.13-7.29(6H,m,Ph+Hb)。
処方例
本発明の化合物は適切な賦形剤を使用する数多くの形で医薬品用途のために調合することができる。その故に、例えば、経口用の場合、実施例の化合物のような本発明の化合物は、例えば、白色の半透明の固いゼラチンカプセルサイズ３のような適切なサイズのカプセルに充填するために、適切な重量（例えば５０ｍｇ）の化合物をトウモロコシのでんぷん（５０−９９％ｗ／ｗ）、無水コロイド状シリカ（０−１０％ｗ／ｗ）および有機または無機酸（最大１％ｗ／ｗ）と混合して、固体の服用剤形として調合し得る。所望ならば、同じ混合物を圧縮して錠剤とすることもできる。
本発明に係わる化合物の活性および選択性は下記の試験において実証された。これらの試験においてＦＭＬＰは、ペプチドＮ−フォルミル−ｍｅｔ−ｌｕｅ−ｐｈｅの略号である。
単離された酵素
下記のごとき相異なるＰＤＥアイソエンザイムを用いて、本発明の化合物の効力および選択性を測定した。
i.ＰＤＥ I、ウサギ心臓
ii.ＰＤＥ II、ウサギ心臓
iii.ＰＤＥ III、ウサギ心臓、Ｊｕｒｋａｔ細胞
iv.ＰＤＥ IV、ＨＬ６０細胞、ウサギの脳、ウサギの腎臓とヒトの組換ＰＤＥ IV
v.ＰＤＥ V、ウサギの肺臓、モルモットの肺臓
遺伝子暗号化ヒトＰＤＥ ＩＶはヒトの単球からクーロン化された（Livi, et al.,1990, Molecular and Cellular Biology,10,2678）。同様な方法を用いて出願人は好酸球、好中球、リンパ球、単球、脳および神経組織を始めとする数多くのソースからヒトＰＤＥ ＩＶ遺伝子をクーロン化した。これらの遺伝子を誘導媒介を用いて酵母にトランスフェクションし、ＰＤＥ ＩＶの生化学特性を有する各種の組換え蛋白が発現された（Beavo and Reifsnyder,1990,TIPS,11,150）。これらの組換え酵素、特にヒトの好酸球組換えＰＤＥ ＩＶを効力のある、選択的ＰＤＥ ＩＶ阻害剤の鑑別の基礎に使用した。
標準的なクロマトグラフィー技術を用いてこれらの酵素を均質なアイソエンザイムになるまで精製した。
ホスホジエステラーゼ活性は次のようにして定量した。（最終濃度として）５０ｍＭの２−[[トリス（ヒドロキシメチル）メチル]アミノ]−１−エタン−スルホン酸(ＴＥＳ)−ＮａＯＨ緩衝液(ＰＨ７.５)、１０ｍＭのＭｇＣｌ2、０.１μＭ[3H]−ｃＡＭＰおよび賦形剤または各種濃度の試験化合物を含有する１５０μｌの標準混合物中において反応を実施した。かかる反応は酵素の添加によって開始され、そして３０℃で５〜３０分間にわたって実施された。かかる反応はまた、生成物の回収率を測定するために[14C]−５'ＡＭＰを含有する２％トリフルオロ酢酸５０μｌを添加することによって停止させた。次いで、一定量の試薬を中性アルミナカラム上に載せ、１０mlの０.１ＴＥＳ−ＮａＯＨ緩衝液(ｐＨ８)を用いて[3H]−ｃＡＭＰを溶出した。２mlの２Ｍ ＮａＯＨを用いて[3H]−５'ＡＭＰ生成物を溶出し、１０mlのシンチレーションカクテルを含んだシンチレーションバイアル内に集めた。[3H]−５'ＡＭＰの回収率は[14C]−５'ＡＭＰを用いて測定し、また全ての定量は反応の直線範囲内で行った。
実施例の化合物を始めとする本発明による化合物は、濃度が１００μＭまでではＰＤＥ Ｉ,II,IIIまたはＶにほとんどあるいは全く活性のない、０.１−１０００ｎＭでの組換えＰＤＥ ＩＶの濃度依存抑制を引き起こす。
２.白血球中におけるｃＡＭＰの上昇
ヒトの好中球またはモルモットの好酸球を用いて、細胞内ｃＡＭＰに対する本発明の化合物の効果を調べた。ヒトの好中球を末梢血液から分離し、ジヒドロサイトカラシン(dihydrocytochalasin)Ｂおよび試験化合物と共に１０分間にわたり培養(インキュベート)し、次いでＦＭＬＰを用いて刺激した。他方、ヒト血清の腹腔内注射で予め処理した動物の腹腔洗浄によってモルモットの好酸球を集めた。腹腔滲出液から好酸球を分離し、イソプレナリンおよび試験化合物と共に培養した。いずれの種類の細胞についても、培養の終了後に懸濁液を遠心し、細胞ペレットを緩衝液中に再懸濁し、そして１０分間にわたり煮沸した後、特定のラジオイムノアッセイ法[デュポン]によってｃＡＭＰを測定した。
実施例によるもっとも強力な化合物は、０.１ｎＭ〜１μＭの濃度で、好中球および／または好酸球中におけるｃＡＭＰの濃度依存性上昇を誘起した。
３.白血球機能の抑制
好中球および好酸球のスーパーオキシド生成、走化性、および粘着に対する本発明の化合物の効果を調べた。単離した白血球を、スーパーオキシド生成専用のジヒドロサイトカラシンＢおよび試験化合物と共に培養し、次いでＦＭＬＰを用いて刺激した。実施例の最も強力な化合物は、０.１ｎＭ〜１μＭの範囲内の濃度において、スーパーオキシド生成、走化性および粘着の濃度依存性抑制を誘起した。
ヒトの末梢血液単球(ＰＢＭ)による腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)のリポ多糖(ＬＰＳ)誘導合成は０.０１ｎＭ〜１０μＭの濃度で実施例の化合物によって抑制された。
４.副作用
一般的に、我々の試験において、本発明の化合物は薬理学的有効用量を動物に投与したとき毒性は認められなかった。