(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトインターロイキン−６レセプター（ヒトＩＬ−６Ｒ）をコードするｍＲＮＡのループ構造を形成しうる部分の塩基配列を含む少なくとも９個の連続する塩基配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体（ただし、オリゴヌクレオチド誘導体であって、該誘導体を構成するヌクレオチド間のリン酸ジエステル結合の少なくとも１つがカルバメート結合またはチオカルバメート結合により置換されたオリゴヌクレオチド誘導体を除く）を有効成分とするヒトＩＬ−６Ｒの発現阻害剤。
【請求項２】
配列番号：１における塩基配列中ループ構造を形成しうる部分の塩基配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を含んで成る請求項１に記載の発現阻害剤。
【請求項３】
塩基配列がAGCCTCCTTCCCATGCCAGC（配列番号：２）である請求項２に記載の発現阻害剤。
【請求項４】
塩基配列がCTCACAAACAACATTGCTGA（配列番号：３）である請求項２に記載の発現阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ヒトインターロイキン−６レセプター（ヒトＩＬ−６Ｒ）の発現を阻害する医薬として有用なアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヒトインターロイキン−６（ヒトＩＬ−６）はＢ細胞の抗体産生細胞への最終段階の分化を誘導する因子としてクローニングされたサイトカインであり（Kishimoto T ら、Blood 74, 1-10, 1989) 、現在では肝臓における急性期蛋白の誘導などさまざまな作用を持つことが知られている（Kishimoto T ら、Blood 74, 1-10, 1989) 。
【０００３】
またヒトＩＬ−６はリンパ系細胞のみにかぎらず、線維芽細胞、血管内皮細胞、膀胱癌細胞株Ｔ２４やグリオブラストーマなどにおいても産生されていることが報告され（Kohase M. ら、J. Cell Physiol. 132, 271-278, 1978; Meir EVら、Cancer Res. 50, 6683-6688, 1990)、さらにその標的細胞も多種類にわたっている（Kishimoto T ら、Blood 74, 1-10, 1989) 。
【０００４】
近年Kawano MらによりヒトＩＬ−６が骨髄腫細胞ではautocrine growth factor として機能していることが報告され（Kawano Mら、Nature, 332, 83-85, 1988) 、さらに腎細胞癌においても同様のことが報告された（Miki Sら、FEBS Letter 250, 607-610, 1989）。
【０００５】
一方、ヒトＩＬ−６による細胞の増殖あるいは分化のシグナルは細胞表面に存在するヒトＩＬ−６Ｒ及び糖蛋白質ｇｐ１３０を介して細胞に伝達されることが知られている。（Taga T. ら、Cell 58, 573-581, 1989; Hibi Mら、Cell 68, 1149-1157, 1990) 。
近年、病態の原因となっている遺伝子の働きを抑制する方法として、ＤＮＡから転写されたｍＲＮＡに相補的なオリゴヌクレオチド（アンチセンスオリゴヌクレオチド）を用いて、該蛋白質の発現を抑制することが提案されている（村上、化学、４６巻６８１−６８４頁、１９９１）。
【０００６】
さらには、アンチセンスオリゴヌクレオチドの寿命、安定性、細胞への取り込み効率などの問題点を解消する方法としてヌクレオチドのリン酸基の酸素をメチル基に置換したメチルホスホネート型誘導体やイオウに置換したホスホロチオエート型誘導体などの修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドが知られており（村上、前述）、実際これらのアンチセンスオリゴヌクレオチドがウィルスの蛋白質合成を阻害することが認められている（Agris, C.H. ら、Biochemistry, 25, 6268-6275, 1986)。
【０００７】
このような考えをもとにLevy Yらは、ヒトＩＬ−６のｍＲＮＡの翻訳をアンチセンスオリゴヌクレオチドによって阻害することにより、ヒトＩＬ−６を増殖因子としている骨髄腫細胞株の増殖が抑制されることを確認した（Levy Yら、J.Clin. Invest., 88, 696-699, 1991) 。
しかしながら、ヒトＩＬ−６Ｒが発現する種々の細胞においてＩＬ−６Ｒの発現を有意に抑制するようなアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体については知られていない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
従って本発明は、ヒトＩＬ−６Ｒの発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を提供しようとするものである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
さらに詳しくは、本発明は、ヒトＩＬ−６ＲをコードするｍＲＮＡのループ構造を形成しうる可能性の高い部分の塩基配列を含む少なくとも９個の連続する塩基配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を含んで成るヒトＩＬ−６Ｒの発現阻害剤を提供する。
【００１０】
【具体的な説明】
本発明者は、市販の自由エネルギー計算用コンピューターソフト（たとえばGenetyx 、ソフトウエア開発（株）社製のSecondary Structure SearchおよびHairpin Loop-Stem Parts Searchなど）を用いてヒトＩＬ−６ＲｍＲＮＡの中で自由エネルギー及び構造上からループ構造を形成しやすいと考えられる塩基配列を探り、そのループ構造を含む塩基配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を合成したところ、ヒト可溶性ＩＬ−６Ｒ（ｓＩＬ−６Ｒ）の発現を抑制することを見い出し本発明を完成した。
本発明の好ましい態様においては、ヒトＩＬ−６ＲをコードするｍＲＮＡのループ構造を形成しうる塩基配列を含む９〜３０個、より好ましくは１２〜２５個の連続する塩基配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体を用いる。
【００１１】
ここでいう「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、ＤＮＡ又はｍＲＮＡの所定の領域を構成するヌクレオチドに対応するヌクレオチドがすべて相補的であるもののみならず、ＤＮＡ又はｍＲＮＡとオリゴヌクレオチドとが安定にハイブリダイズできる限り、多少のミスマッチが存在してもよい。
ヒトＩＬ−６ＲのｃＤＮＡの塩基配列は次の通りである（たとえば特開平２−２８８，８９８号公報または、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４１，８２５−８２８（１９８８）参照）（配列番号：１）。
【００１２】
このうち、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体の塩基配列は、上記の方法によって見い出されたループ構造を形成しうる、連続する塩基配列から適宜選択できるものである。
ここでいうｍＲＮＡのループ構造を形成しうる部分とは、ｍＲＮＡの分子内水素結合が存在しにくく、一本鎖の状態になりやすい部分をいう。
具体的には、上記のコンピューターソフトを用いてｍＲＮＡの安定な構造をとった時においても一本鎖の状態になりやすい部分を見つけ出すことができる。
本発明において、前記のループ構造を形成しうる部分は、配列番号１に示す塩基配列において、例えば、６４０−６８５，７７０−８１０，１３４０−１３７５，４６０−４７５，５３５−５６０及び９２５−９６０，８１５−８４０付近が挙げられる。
【００１３】
従って、本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば上記の領域中の連続する少なくとも９個のヌクレオチドから成るオリゴヌクレオチドである。
本発明の１つの態様によれば、発現阻害オリゴヌクレオチドは、配列番号：１における例えば第７５位のAla から第８１位のLeu までをコードするコドンの塩基配列に相補的なヌクレオチド配列、すなわち、５′−AGCCTCCTTCCCATGCCAGC−３′（配列番号：２）を有するものである。
【００１４】
他のオリゴヌクレオチドの例として第１２７位のLeu から第１３３位のGlu までをコードするコドンの塩基配列に対して相補的な塩基配列、すなわち５′−CTCACAAACAACATTGCTGA−３′（配列番号：３）を有するもの、第７０位のHis から第７７位のMet までをコードするコドンの塩基配列に対して相補的な塩基配列、すなわち５′−TGCCAGCCCATCTGCTGGGG−３′（配列番号：４）を有するもの、第３４位のVal から第４１位のAsp までをコードするコドンの塩基配列に対して相補的な塩基配列、すなわち５′−CTCCTGGCAGACTGGTCAGC−３′（配列番号：５）を有するもの、
【００１５】
第１１８位のGln から第１２４位のLys までをコードするコドンの塩基配列に対し相補的な塩基配列、すなわち５′−TTCCGGAAGCAGGAGAGCTG−３′（配列番号：６）を有するもの及び第１６４位のPro から第１７０位のGlu までをコードするコドンの塩基配列に対して相補的な塩基配列、すなわち5 ′−TCCTGGGAATACTGGCACGG−３′（配列番号：７）を有するもの、第７５位のAla から第８２位のLeu までをコードするコドンの塩基配列に相補的なヌクレオチド配列、すなわち、５′−GCAGCCTCCTTCCCATGCCA−３′（配列番号：９）を有するもの、第７４位のTrp から第８０位のArg までをコードするコドンの塩基配列に相補的なヌクレオチド配列、すなわち、５′−CTCCTTCCCATGCCAGCCCA−３′（配列番号：１０）を有するものが挙げられる。
【００１６】
本発明において使用されるオリゴヌクレオチド誘導体がデオキシリボヌクレオチドの場合それぞれの構造は、化１に示したとおりであるが、Ｘは独立して酸素（Ｏ）、イオウ（Ｓ）、低級アルキル基あるいは一級アミンまたは二級アミンのいずれでもよい。Ｙは独立して酸素（Ｏ）あるいはイオウ（Ｓ）のいずれでもよい。Ｂはアデニン、グアニン、チミン、あるいはシトシンのいずれかから選ばれ、主としてヒトＩＬ−６ＲをコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡの相補的オリゴヌクレオチドである。Ｒは独立して水素またはジメトキシトリチル基あるいは低級アルキル基である。ｎは７−２８である。
【００１７】
好ましいオリゴヌクレオチド誘導体としては修飾されていないオリゴヌクレオチドだけでなく、修飾されたオリゴヌクレオチドでもよい。この様な修飾体として、例えば前述のメチルホスホネート型又はエチルホスホネート型のような低級アルキルホスホネート修飾体、その他ホスホロチオエート修飾体あるいはホスホロアミデート修飾体等が挙げられる（化２参照）。
【００１８】
【化１】
0003868021.tif 000002
【００１９】
【化２】
0003868021.tif 000003
【００２０】
これらのオリゴヌクレオチド誘導体は次のとおり常法によって得ることができる。
化１のＸ及びＹがＯであるオリゴヌクレオチドは市販のＤＮＡ合成装置（例えばApplied Biosystems社製など）によって容易に合成される。
合成法はホスホロアミダイトを用いた固相合成法、ハイドロジェンホスホネートを用いた固相合成法などで得ることができる。
【００２１】
例えば、T. Atkinson, M. Smith, in Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, ed. M. J. Gait, IRL Press, 35-81(1984); M. H. Caruthers, Science, 230, 281(1985); A. Kume, M. Fujii, M. Sekine, M. Hata, J. Org. Chem., 49, 2139(1984); B. C. Froehler, M. Matteucci, Tetrahedron Lett., 27, 469(1986); P. J. Garegg, I. Lindh, T. Regberg, J. Stawinski, R. Stromberg, C. Henrichson, ibid., 27, 4051(1986);
【００２２】
B. S. Sproat, M. J. Gait, in Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, ed. M. J. Gait. IRL Press, 83-115(1984); S. L. Beaucage and M. H. Caruthers, Tetrahedron Lett., 22, 1859-1862(1981); M. D. Matteucci and M. H. Caruthers, Tetrahedron Lett., 21, 719-722(1980); M. D. Matteucci and M. H. Caruthers, J. Am. Chem. Soc., 103, 3185-3191(1981)を参照のこと。
【００２３】
Ｘが低級アルコキシ基であるリン酸トリエステル修飾体は、常法、例えば化学合成で得られたオリゴヌクレオチドをトシルクロリドのＤＭＦ／メタノール／２，６−ルチジン溶液で処理することにより得ることができる（Moody H. M., et al., Nucleic Acids Res., 17, 4769-4782(1989)) 。
Ｘがアルキル基であるアルキルホスホネート修飾体は、常法、例えばホスホアミダイトを用いて得ることができる（M. A. Dorman, et. al., Tetrahedron, 40, 95-102(1984); K. L. Agarwal and F. Riftina, Nucleic Acids Res., 6, 3009-3024(1979)) 。
【００２４】
ＸがＳであるホスホロチオエート修飾体は、常法、例えばイオウを用いた固相合成法（C. A. Stein, et. al., Nucleic Acids Res., 16, 3209-3221(1988))あるいはテトラエチルチウラム  ジスルフィドを用いて、固相合成法により得ることができる（H. Vu and B. L. Hirschbein, Tetrahedron Letters, 32, 3005-3008(1991)) 。
Ｘ，ＹがともにＳであるホスホロジチオエート修飾体は、例えばビスアミダイトをチオアミダイトに変換しイオウを作用させることにより固相合成法により得ることができる（W. K. -D. Brill, et. al., J. Am. Chem. Soc., 111, 2321-2322(1989))。
【００２５】
Ｘが一級アミンあるいは二級アミンであるホスホロアミデート修飾体は、例えばハイドロジェンホスホネートを一級あるいは二級アミンで処理することにより固相合成法で得ることができる（B. Froehler, et. al. Nucleic Acids Res., 16, 4831-4839(1988)) 。あるいは、アミダイトをｔｅｒｔ−ブチルハイドロパーオキサイドで酸化しても得ることができる（H. Ozaki, et. al., Tetrahedron Lett., 30, 5899-5902(1989))。
【００２６】
精製および純度確認は、高速液体クロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で行うことができる。分子量の確認は、Electrospray Ionization Mass Spectrometry 又はFast Atom Bonbardment-Mass Spectrometry で行うことができる。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体はヒトＩＬ−６ＲをコドするＤＮＡ又はｍＲＮＡの塩基配列にハイブリダイズする配列を有するものであれば、その合成法や由来はいずれでもよい。
【００２７】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は、ヒトＩＬ−６Ｒの産生細胞に作用して、ヒトＩＬ−６ＲをコードするＤＮＡ又はｍＲＮＡに結合することにより、その転写又は翻訳を阻害し、ヒトＩＬ−６Ｒの発現を抑制することによって結果的にヒトＩＬ−６の作用を抑制する効果を有する。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体により抑制されるヒトＩＬ−６の作用としては、血小板増多作用、抗体産生増強作用、急性期蛋白誘導作用、腫瘍細胞増殖作用、神経細胞分化作用等が挙げられる。
【００２８】
従って、これらの作用に起因する疾患、例えば腎癌、ミエローマ、レンネルトＴリンパ腫、カポジ肉腫などの癌、慢性関節リウマチ等の自己免疫疾患、メサンギウム増殖性腎炎、乾癬、癌性悪液質、感染症におけるエンドトキシンショック等の治療において本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は有効であると考えられる。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は、それらに対して不活性な適当な基剤と混和して塗布剤、パップ剤などの外用剤とすることができる。
【００２９】
また、必要に応じて、賦形剤、等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、無痛化剤等を加えて錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、リポソームカプセル剤、注射剤、液剤、点鼻剤など、さらに凍結乾燥剤とすることができる。これらは常法に従って調製することができる。
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体は患者の患部に直接適用するか、または血管内に投与するなどして結果的に患部に到達し得るように患者に適応させる。さらに持続性、膜透過性を高めるアンチセンス封入素材を用いることもできる。例えば、リポソーム、ポリ−Ｌ−リジン、リピッド、コレステロール、リポフェクチン又はこれらの誘導体が挙げられる。
【００３０】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体の投与量は、患者の状態に応じて適宜調整し好ましい量を用いることができる。例えば、０．１〜１００mg／kg好ましくは０．１〜５０mg／kgの範囲で投与することができる。
以下本発明を実施例において詳しく説明する。
【００３１】
【実施例】
合成例１．５′−AGCCTCCTTCCCATGCCAGC−３′（配列番号：２）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
３′−水酸基が支持体に結合した５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシシチジン（１μmol ）のジメトキシトリチル基をトリクロロ酢酸によって脱保護し、その５′−水酸基に５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシグアノシンβ−シアノエチルホスホアミダイト誘導体をテトラゾールにより縮合し、テトラエチルチウラム  ジスルフィドによってリンをイオウ化した後、未反応の５′−水酸基を無水酢酸とジメチルアミノピリジンでアセチル化する。
【００３２】
同様に脱保護、縮合、イオウ化、アセチル化を繰り返す。最後の５′−ジメトキシトリチル−２′−デオキシアデノシン  β−シアノエチルホスホアミダイト誘導体を縮合し、イオウ化して得られた２０−ｍｅｒのホスホロチオエート修飾体（以上までの工程はApplied Biosystems社製３８１Ａ型ＤＮＡ合成装置により行った。）を濃アンモニア水２mlによって支持体から切り出すと共に、リンからシアノエチル基をはずし、さらにアデニン、グアニン、シトシンに付いている保護基をはずす。
【００３３】
得られた５′−ジメトキシトリチルオリゴヌクレオチドホスホロチオエートは未精製のまま、または高速液体クロマトグラフィーにより精製した後、あるいは、合成ＤＮＡ精製用カートリッジカラム（例えば、日本ミリポア社製オリゴパックＳＰなど）に保持した後、トリフルオロ酢酸によって５′−ジメトキシトリチル保護基をはずす。得られたオリゴヌクレオチドホスホロチオエートを必要があれば高速液体クロマトグラフィーで精製し、目的５′−AGCCTCCTTCCCATGCCAGC−３′（配列番号：２）（ホスホロチオエート修飾体）約１．３７mgを得る。
【００３４】
合成例２．５′−CTCACAAACAACATTGCTGA−３′（配列番号：３）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−CTCACAAACAACATTGCTGA−３′（配列番号：３）（ホスホロチオエート修飾体）約０．６５mgを得る。
【００３５】
合成例３．５′−TGCCAGCCCATCTGCTGGGG−３′（配列番号：４）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−TGCCAGCCCATCTGCTGGGG−３′（配列番号：４）（ホスホロチオエート修飾体）約０．９８mgを得る。
【００３６】
合成例４．５′−CTCCTGGCAGACTGGTCAGC−３′（配列番号：５）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−CTCCTGGCAGACTGGTCAGC−３′（配列番号：５）（ホスホロチオエート修飾体）約１．６１mgを得る。
【００３７】
合成例５．５′−TTCCGGAAGCAGGAGAGCTG−３′（配列番号：６）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−TTCCGGAAGCAGGAGAGCTG−３′（配列番号：６）（ホスホロチオエート修飾体）約１．４７mgを得る。
【００３８】
合成例６．５′−TCCTGGGAATACTGGCACGG−３′（配列番号：７）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−TCCTGGGAATACTGGCACGG−３′（配列番号：７）（ホスホロチオエート修飾体）約１．６４mgを得る。
【００３９】
合成例７．５′−GCAGCCTCCTTCCCATGCCA−３′（配列番号：９）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−GCAGCCTCCTTCCCATGCCA−３′（配列番号：９）（ホスホロチオエート修飾体）約２．４７mgを得る。
【００４０】
合成例８．５′−CTCCTTCCCATGCCAGCCCA−３′（配列番号：１０）（ホスホロチオエート修飾体）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−CTCCTTCCCATGCCAGCCCA−３′（配列番号：１０）（ホスホロチオエート修飾体）約２．０６mgを得る。
【００４１】
参考例１．５′−CCCCAGCAGATGGGCTGGCA−３′（配列番号：８）（ホスホロチオエート修飾体：配列番号：４のセンス配列）の合成
合成例１と同様にして目的の５′−CCCCAGCAGATGGGCTGGCA−３′（配列番号：８）（ホスホロチオエート修飾体）約０．５３mgを得る。
【００４２】
参考例２．５′−GCTGGCATGGGAAGGAGGCT−３′（配列番号：１１）（ホスホロチオエート修飾体：配列番号：２のセンス配列）の合成
合成例１と同様にして、目的の５′−GCTGGCATGGGAAGGAGGCT−３′（配列番号：１１）（ホスホロチオエート修飾体）約１．９１mgを得る。
【００４３】
実験例１．ヒト可溶性ＩＬ−６Ｒ（ｓＩＬ−６Ｒ）の発現抑制効果
（１）ＣＯＨ．ＳＲ３４４細胞の作製
ｐＢＳＦ２Ｒ．２３６（Science, 241, 825-828(1988))をＳｐｈＩで切断し、１２０５ｂｐのＩＬ−６ＲｃＤＮＡ断片をｍｐ１８（Ａｍｅｒｓｈａｍ社製）に挿入した。ｓＩＬ−６ＲｃＤＮＡは５′−ATATTCTAGAGAGCTTCT−３′の合成オリゴヌクレオチドを作製し、in vitro mutagenesis system （Ａｍｅｒｓｈａｍ社製) を用いて調製した。その結果、termination cordonはアミノ酸配列の３４５番目となった。
【００４４】
ｄｈｆｒ−ｃＤＮＡはplasmid pECE（Cell, 45, 721-735(1986))のＰｖｕ II ｓｉｔｅに挿入し、plasmid pECEdhfrを作製した。ｓＩＬ−６ＲのＨｉｎｄ III−ＳａｌＩ断片をplasmid pECEdhfrに挿入し、可溶性ＩＬ−６Ｒ発現ベクターplasmid pECEdhfr３４４を作製した。
【００４５】
ｐＥＣＥｄｈｆｒ３４４をｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞ＤＸＢ−１１（Pro. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 77, 4216-4220(1980))にリン酸カルシウム法により導入し、ＭＴＸにて増幅した。最終的に２００ｎＭＭＴＸ耐性ｓＩＬ−６Ｒ産生ＣＨＯ細胞（ＣＨＯ．ＳＲ３４４）を作製した（J. Biochem., 108, 673-676(1990))。細胞の通常の培養は５％ＦＣＳ（Xavier Investments社製）および２００ｎＭＭＴＸを含むＩＭＤＭ培地（Ｇｉｂｃｏ）で行った。
【００４６】
（２）ＣＨＯ．ＳＲ３４４細胞のｓＩＬ−６Ｒ産生に対するＩＬ−６Ｒアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果
ＣＨＯ．ＳＲ３４４細胞はｔｒｙｐｓｉｎ−ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ社製）で培養ｄｉｓｈから剥がし、培養液で洗浄後、更に無血清培地ノンセラム（日本全薬工業製）で洗浄し、２００ｎＭＭＴＸを含む無血清培地ノンセラムに懸濁した。９６穴の培養プレートにＣＨＯ．ＳＲ３４４細胞懸濁液１００μｌ（５ｘ１０4 個／ml）に２μＭのＩＬ−６Ｒアンチセンスオリゴヌクレオチド１００μｌを加え、３７℃、５％ＣＯ2 下でインキュベーターで培養した。
【００４７】
２４時間培養後、その培養上清の可溶性ＩＬ−６Ｒ量をマウス抗ＩＬ−６Ｒモノクローナル抗体（ＭＴ１８）（特開平２−２８８８９８）及びウサギ抗ＩＬ−６Ｒポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法によって測定した。
なお、対照（コントロール）としては、配列番号：４に対するセンスオリゴヌクレオチド誘導体（配列番号：８）または配列番号：２に対するセンスオリゴヌクレオチド誘導体（配列番号：１１）を用いて測定した。
ヒトＩＬ−６Ｒアンチセンスオリゴヌクレオチドは可溶性ＩＬ−６Ｒの発現抑制効果を示した（図１、図２）。
【００４８】
【配列表】
0003868021.tif 000004
【００４９】
0003868021.tif 000005
【００５０】
0003868021.tif 000006
【００５１】
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【００５２】
0003868021.tif 000008
【００５３】
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【００５４】
0003868021.tif 000010
【００５５】
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【００５６】
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【００５７】
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【００５８】
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【００５９】
0003868021.tif 000015
【００６０】
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【００６１】
0003868021.tif 000017
【００６２】
0003868021.tif 000018
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は実験例１における本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド誘導体（配列番号２及び３）が可溶性ＩＬ−６Ｒの発現を抑制することを示すグラフである。
【図２】図２は実験例１における本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号２，９及び１０）が可溶性ＩＬ−６Ｒの発現を抑制することを示すグラフである。
【図１】
0003868021.tif 000019
【図２】
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