(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
カラー塊茎に水分を供給し、前記塊茎から芽出しをさせる工程と、
芽出しさせた前記塊茎を側芽単位に切り出し、前記側芽を有する複数の塊茎片を前記塊茎から形成する工程と、
殺菌剤に硝酸銀溶液を使用し、該硝酸銀溶液に前記塊茎片を浸し、前記塊茎片に前記硝酸銀溶液を吸収させる工程と、
前記塊茎片から茎頂部を切り取った後、その塊茎片を培地に置床して培養する工程と、
前記塊茎片に培養液を与え、前記塊茎片を多芽体に培養する工程と、
前記多芽体から切り取った茎頂部を置床して塊茎を成長させる工程と、
を含むことを特徴とするカラー塊茎類の増殖方法。
【請求項２】
前記茎頂部から成長させた前記塊茎から複数の塊茎片を形成し、この塊茎片を培養して成長させる工程を備えたことを特徴とする請求項１記載のカラー塊茎類の増殖方法。
【請求項３】
前記硝酸銀溶液に葉の付いた状態で前記塊茎片を浸すことを特徴とする請求項１記載のカラー塊茎類の増殖方法。
【請求項４】
前記塊茎片を培地に置床して前記多芽体に増殖する工程を無菌化環境で実施することを特徴とする請求項１記載のカラー塊茎類の増殖方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、球根植物であるカラー塊茎類の増殖方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
カラー（Zantedeschia）は、南アフリカ原産のサトイモ科に属する球根植物で、漏斗状の花を付け、切り花や鉢物として非常に人気が高い。このカラーには、畑地用として、カローラ、エリオチアナ、ハーベストムーン、リトルスージー、マンゴー、サマンサ、イボンヌ、アルバ・マクラタ、エレガント・ピンク、サンライト、パシフィック・ピンク、ピンク・パーセッション、ブラック・マジック、レーマニー・カーミネア、湿地用として、グリーン・ガッテス等が知られている。
【０００３】
ところで、日本では夏の高温期に軟腐病（Erwinia carotovora subsp. carotovora）が多発するため、このカラーの球根生産はほとんど行われておらず、切り花あるいは鉢物生産のための球根の大部分がニュージーランドやオランダから輸入されている。
【０００４】
従来、カラー塊茎の増殖が試みられたが、自然分球あるいは塊茎分割による増殖効率が悪いため、組織培養による増殖に取り組みつつある。しかし、ごく小さな茎頂を外植体にしても、内生菌による汚染がひどく、成功率は極めて低いことが報告されている。
【０００５】
この種の植物に関する増殖や内生菌汚染を防止する従来技術には、軟腐病について、特開平１０−３２７８４９号「軟腐病の防除に有効な微生物農薬」、特開平８−３３７５０８号「軟腐病の防除方法」、特開昭５７−１５２８１１号「花卉類植物の病害虫防止法」、硝酸銀溶液の使用について、特許第２７２００４９号「培養植物体増殖促進剤」、特開平３−２１６１２３号「培養植物体の増殖促進方法」、その他の塊茎の殺菌について、特開平２−２１５３２３号「培養植物体の無菌化方法」、また、多芽体の形成及び増殖等について、特開平９−０６５７８６号「クルクマシャロームのクローン苗の増殖方法」、特開平１０−００４８１１号「ヘメロカリス属植物の大量増殖方法」等がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
ところで、カラー塊茎の増殖は、自然分球により行われるが、軟腐病等による腐敗を除き、増殖できる数量は１〜４個程度である。即ち、生産性が非常に悪い。実験によれば、カラーの品種の増殖個数は、
サルファタ           0.86 個
カーマインレッド     3.14 個
であり、しかも、出荷中に半数が腐敗する。このため、カラーの出荷量を確保するには広大な農地が必要となり、極めて生産性が悪い。
【０００７】
カラー塊茎の増殖を妨げる原因に軟腐病がある。この軟腐病は、土壌等から伝染する病菌により、球根自体が軟化、腐敗する病気である。カラーは春から夏にかけて生育する植物で、気温が25℃以上になる地域では軟腐病により栽培ができない。カラーの増殖栽培地域がニュージーランド、オランダ等の低温性気候の所に限られるのはそのためである。
【０００８】
そこで、輸入したカラーの球根を増殖する方法が考えられるが、球根自体が軟腐病菌を保持しており、輸入して増殖しても半数は発病して腐る。このような軟腐病に対する農薬や防除技術として上記した特開平１０−３２７８４９号「軟腐病の防除に有効な微生物農薬」や特開平８−３３７５０８号「軟腐病の防除方法」等が提案されているが、カラーの増殖に効果的であるか否かは確認されていない。
【０００９】
軟腐病の菌名は「エルビニア・カロトボーラ細菌」と称され、エルビニア・カロトボーラ細菌の病原性の発現の主たる要因は、この細菌から分泌されるぺクチナーゼ、特にペクチン酸リアーゼである。これらは、植物組織の細胞間接合物質として働いているペクチン物質を分解するペクチン分解酵素であって、植物の細胞を軟腐させる。
【００１０】
この軟腐病の防除には、ストレプトマイシン等の抗生物質や、ボルドー液のような銅剤、さらにオキソリニック酸製剤の散布が行われているが、十分な防除効果がなく、病原菌以外の有益な細菌の死滅、環境汚染、薬害等の問題がある。抗生物質は、抵抗性を持った細菌の出現が問題となる。
【００１１】
また、内生菌は、球根の組織培養にあたり、組織を腐敗させる菌体であり、球根内に自生しており、植物の成育を助長する菌として知られている。しかしながら、カラー塊茎の増殖又は組織培養時には組織を腐敗させる原因になる。殺菌剤には抗生物質が使用されているが、内生菌を完全に死滅することができないため、球根内に残存する内生菌が培養時に活動し、球根組織を腐敗させることが知られている。
【００１２】
従来、主な菌体には、Alternaria、Artrobotrys 、Aureobaidium、Cladosporium、Coemansia 、Epicoccum 、Fusarium、Gliocladium 、Gliomastix、Mortierella 、Mucor 、Penicillifer、Phoma 、Rhizoctonia 、Stilbella 、Volutella があり、これら菌体の内、Alternaria、Rhizoctonia 、Stilbella は抗生物質で殺菌することができない。
【００１３】
このように、カラーの塊茎は、自然分球による増殖では軟腐病による腐敗が発生するため、軟腐病の発生しない環境、即ち、２５℃以下の環境下でしか増殖することができない。このため、温暖な日本では栽培が不可能とされてきた。日本での栽培時期は、２月中旬から６月であるが、塊茎の増殖や培養を試みると、塊茎内に潜む内生菌が活動し、塊茎自体を腐敗させるという不都合があった。
【００１４】
そこで、この発明は、軟腐病の発生や内生菌の活動を抑制し、日本等の温暖な地域でのカラー塊茎等の塊茎類の増殖を実現したカラー塊茎類の増殖方法を提供することを目的とする。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
この発明のカラー塊茎類の増殖方法は、カラー等の植物の塊茎（２）から複数の塊茎片（１０）を形成し、その塊茎片に殺菌剤（硝酸銀溶液１６）を吸収させ、塊茎片から切り取った茎頂部（１８）を培養液（培地２４）を用いて多芽体（２０）を培養し、この多芽体から切り取った茎頂部を置床して塊茎（３４）に成長させている。この結果、軟腐病の発生や内生菌の活動を抑制し、日本等の温暖な地域でのカラー塊茎等の塊茎類の増殖を実現することができる。
【００１６】
請求項１に係る本発明は、カラー塊茎（２）に水分を供給し、前記塊茎から芽出しをさせる工程と、芽出しさせた前記塊茎を側芽単位に切り出し、前記側芽を有する複数の塊茎片（１０）を前記塊茎から形成する工程と、殺菌剤に硝酸銀溶液（１６）を使用し、該硝酸銀溶液に前記塊茎片を浸し、前記塊茎片に前記硝酸銀溶液を吸収させる工程と、前記塊茎片から茎頂部を切り取った後、その塊茎片を培地（２４）に置床して培養する工程と、前記塊茎片に培養液を与え、前記塊茎片を多芽体（２０）に培養する工程と、前記多芽体から切り取った茎頂部を置床して塊茎（３４）を成長させる工程とを含むことを特徴とする。
【００１７】
このような増殖工程によれば、カラー等の植物の成長した塊茎から複数の塊茎片を形成することにより、株分けを行う。この塊茎片を液体状の殺菌剤に浸すと、塊茎片の葉による蒸散作用によって塊茎片の内部に殺菌剤が吸収される。この結果、軟腐病の発生や内生菌の活動が抑制される。このような殺菌処理が行われた後、成長した塊茎片から切り取った茎頂部を養液中で培養することにより、軟腐病や内生菌によって侵されていない多芽体が得られる。この多芽体から茎頂部を切り取り、これを置床することにより、塊茎に成長させることができ、増殖効果を高めることができる。
【００１８】
そして、この塊茎を土壌や培地に植え付けることにより、カラー栽培が可能となり、鉢物又は切り花として出荷することができる。
【００１９】
請求項２に係る本発明は、前記茎頂部から成長させた前記塊茎から複数の塊茎片を形成し、この塊茎片を培養して成長させる工程を備えたことを特徴とする。即ち、前記増殖工程で得られた塊茎は、軟腐病や内生菌によって侵されていないので、極めて良好な特性を有することから、これを株として分割することにより、増殖効率を高めることができる。
【００２０】
請求項３に係る本発明は、前記硝酸銀溶液に葉の付いた状態で前記塊茎片を浸すことを特徴とする。即ち、硝酸銀を殺菌剤に用いることにより、軟腐病や内生菌の抑制が確認されており、塊茎類の増殖を高めることができる。
【００２１】
請求項４に係る本発明は、前記塊茎片を培地に置床して前記多芽体に増殖する工程を無菌化環境で実施することを特徴とする。即ち、殺菌された塊茎の増殖を良好に行うには、自然環境でよいが、無菌化環境での実施も有効である。
【００２２】
【発明の実施の形態】
以下、この発明を図面に示した実施の形態を参照して詳細に説明する。
【００２３】
図１及び図２は、この発明のカラー塊茎類の増殖方法の第１の実施形態を示し、図１はカラー塊茎、図２はカラー塊茎の増殖を工程順に示したものである。
【００２４】
図１に示すように、さといも科の球根植物であるカラーから採取された塊茎２には、球形の茎本体４の頂部側に主芽６を包囲するようにして複数の側芽８が形成されている。
【００２５】
初期工程として塊茎２から芽出しを行う。芽出しには、塊茎２に適度な水分を与えることにより芽出しを行うことができる。この場合、塊茎２には、ホルモン剤溶液を与えても良い。また、水分の供給は噴霧し、芽出しには培地に塊茎２を植え付けて行うこともできる。この芽出しでは葉が約１０cm〜１５cmになるまで育成させる。
【００２６】
次に、芽出しをさせた塊茎２から複数の塊茎片を形成する。この塊茎片の形成は、側芽を単位として１cm四方の小片を切り出して行う。芽出しした芽のうち、塊茎中央部に発生した主芽６は内生オーキシン（成長ホルモン）が旺盛のため使用しない。主芽６の茎頂部組織を培養した場合には多芽体が形成されず、カルス（傷）が多量に発生する。そこで、主芽６の周辺に発生する側芽８の茎頂部（塊茎に葉が付いたもの）を含む約１cm四方の塊茎片１０を切り出す。
【００２７】
Ａ．塊茎片の殺菌工程
図２の（Ａ）に示すように、発芽している塊茎片１０を葉１２が付いた状態で容器１４に入れて殺菌剤である硝酸銀溶液１６に浸す。この硝酸銀溶液１６は２ｇ／リットルの濃度、浸漬時間は２４時間程度とする。塊茎片１０の葉１２からの蒸散作用によって塊茎片１０内に硝酸銀溶液１６が染み込み、内生菌を殺菌する。葉１２が無い場合には硝酸銀溶液１６が吸収されにくく、殺菌効果が低い。
【００２８】
硝酸銀溶液１６に浸漬した塊茎片１０の周囲組織は硝酸銀により破壊され、硝酸銀溶液１６に２４時間を越えて浸漬した場合、茎頂部付近の細胞も破壊されるので、茎頂部部分が破壊されない程度の時間を設定する必要がある。
【００２９】
Ｂ．茎頂部の育成
育成した塊茎片１０から茎頂部１８を切り出し、図２の（Ｂ）に示すように、培養液としての培地２４に置床し、茎頂部１８から多芽体２０を誘導する。即ち、茎頂部１８から葉１２を切除し、顕微鏡下で茎頂部１８から約３mm程度の組織を切り出し、無菌化した試験管２２内に液体状のＭＳ培地に寒天と誘芽剤のベンジルアデニン（ＢＡ）を２ppm 混入したゲル状の培地２４を入れ、切り出した茎頂部１８を培地２４に置床して培養し、この培養期間は約２ケ月である。ここで用いる茎頂部１８は側芽のものを使用する。主芽の茎頂部１８には成長ホルモンであるオーキシンが多量に含まれているため、多芽体が誘導されない。ＭＳ培地は、Murashige とSkoog によりタバコ髄組織の培養用に考案された培地の略称である。
【００３０】
このＭＳ培地の成分は次の通りである。
MgSO4 ・７H2O                370mg／リットル
CaCl2 ・２H2O                440
KNO3                         1900
NH4NO3                       1650
KH2 PO4                      170
FeSO4 ・７H2O                27.8
Na2-EDTA                     37.3
MnSO4 ・７H2O                22.3
ZnSO4 ・７H2O                8.6
CuSO4 ・５H2O                0.025                CoCl2 ・６H2O                0.025
KI                           0.83
H3BO3                        6.2
Na2MoO4-２H2O                0.25
ショ糖                       30000
ミオイシトール               100
ニコチン酸                   0.5
塩酸ピリドキシン             0.5
塩酸チアミン                 0.1−１
グリシン                     2
寒天                         10000
ｐＨ                         5.7〜5.8
【００３１】
Ｃ．多芽体の分割増殖、無菌培養
図２の（Ｃ）に示すように、多芽体２０を形成し、図２の（Ｄ）に示すように、その多芽体２０を増殖する。この培養期間は１ケ月程度である。即ち、図２の（Ｃ）で培養された多芽体２０を図３に示す。この多芽体２０から組織を分割して、再培養による多芽体２０の大量増殖を行う。図４に示すように、フラスコ２６に無菌化した液体状のＭＳ培地からなる培地２４を入れて培養する。この培養時にフラスコ２６を揺動する。これは、培養される多芽体２０の組織の天地方向の固定化を避け、多芽体２０の周面方向からの発芽を促進させる。多芽体と称する所以である。
【００３２】
Ｄ．多芽体２０の移植及び球根育成
図２の（Ｅ）の多芽体２０の分割、個体再生、（Ｆ）の馴化、及び（Ｇ）の球根育成に示すように、培養された多芽体２０を人工培地に移植して、球根を育成する。この育成期間は約１年である。形成された球根は直径１cm〜２cmの球体である。この球根を栽培用としても良いが、球根自体が小さいため、良質の花が得られないおそれがあり、再育成を行う。
【００３３】
即ち、球根の育成には、図５に示すように、ロックウール等の培地２８に多芽体２０の一部を切り出して定植するとともに、カバー３０で覆い、培地２８の下方から水分や養液３２を供給する。また、培地２８はカバー３０からなる密閉された栽培空間で包囲され、適度な湿度を確保させる。図６に示すように、多芽体２０から塊茎３４が成長して根３５が成長すると、図７に示すように、培地２８を容積の大きい培地３６の凹部３８内に挿入して定植し、その成長に応じて、図８に示すように、容器４０に設置されたスラブ４２の上に培地３６を載せて育成する。図９に示すように、容器４０には水分や養液４４を供給し、スラブ４２を通して培地３６から塊茎３４に水分や養液４４を吸収させる。そして、図１０に示すように、塊茎３４を成長させ、その成長後、養液４４の供給を停止する。この結果、葉４６、根３５が枯死して、塊茎３４を収穫することができる。
【００３４】
このような球根養成において、培地２８、３６に用いたロックウールは自然土壌でないため、軟腐病菌体が増殖されにくく、また、組織内に付着していた軟腐病菌体及び内生菌は事前に殺菌除去されているため、１００％の育成が可能である。
【００３５】
ところで、ロックウール栽培では、ロックウールブロックを配列した培地体の周囲に、ガス透過性、光透過性、低透湿性のフッ素樹脂（商品名  ネオフロン）よりなる培養容器を被せたものを使用し、培養容器４０内を高湿度に保つ（約湿度１００％）。
【００３６】
Ｅ．球根の再育成
上記工程で育成した塊茎３４は植物として栽培可能であるが、未だ小さい場合には、再成長させる必要がある。図１１は、塊茎片１０から成長させた塊茎３４であり、根３５及び葉４６を備えており、図１２は、根３５及び葉４６を取り除いた塊茎３４である。そこで、図１３に示すように、新たに用意した培地３６に植え付け、図１４に示すように、培地３６にノズル４８を以て水を滴下することにより、塊茎３４に水分を与えて根３５を成長させ、図１５に示すように、養液４４を供給することにより、根３５の育成とともに葉４６を成長させる。カラーの場合、塊茎３４は、芽と根３５が出る箇所が上側にある。このため、上方から水を点滴して芽出しと発根をさせる。即ち、根３５は、下方に延び、養液４４を吸収する。そして、塊茎３４が成長し、その容積が大きくなる。塊茎３４が十分に成長した後、水分や養液４４の供給を停止し、培地３６を乾燥させると、図１６に示すように、根３５及び葉４６が枯れるので、これらを塊茎３４から切除することにより、図１７及び図１８に示すように、栽培可能な大きな容積を持つ塊茎３４を得ることができる。得られた塊茎３４を出荷してもよい。図１８に示す塊茎３４には側部に塊茎３７が成長している。
【００３７】
そして、図２の（Ｈ）に示すように、この塊茎３４を出荷し、又は、これらを発芽育成してカラーを栽培でき、それを切り花や鉢物として出荷してもよい。
【００３８】
次に、図１９は、この発明のカラー塊茎類の増殖方法の第２の実施形態を示している。即ち、図１９の（Ｇ）に示す工程で得られた塊茎３４を図１９の（Ｉ）に示すように、分割して、図１３〜図１６に示す工程を経て再増殖してもよい。上記工程で得られた塊茎３４は、軟腐病菌体に汚染されていないので、その塊茎３４の芽出しを行い、複数に分割して増殖を行えば、優れた特性を持つ塊茎３４が短時間で増殖できる。
【００３９】
この場合、分割した塊茎３４をベンレート、トップジン等の抗生物質の２００倍希釈液に１時間浸漬して表面の雑菌を殺菌し、硝酸銀溶液に２４時間浸漬して内生菌を殺菌し、図１３以降に示した工程と同じくロックウール栽培を行い、塊茎３４を復元し、成長させることができる。
【００４０】
【実施例】
以下、本発明の実施例を詳細に説明する。
【００４１】
１．塊茎の増殖
1.1   塊茎分割による増殖
カラー塊茎の自然分球による増殖率は極めて低い（サルファタで0.86個、カーマインレッドで3.14個；軟腐病による枯死分を含む）。そこで、塊茎分割による増殖法について検討を行うため、母球塊茎の分割数が新球形成に与える影響を確認した。
【００４２】
‘サルファタ’、‘カーマインレッド’ともに２分割ではすべて発芽したが、分割数が多くなるにしたがって、発芽率が低下した。１切片当たりの子球形成数と発芽率をもとに算出した１母球あたりの子球形成数は‘サルファタ’では10分割、‘カーマインレッド’では６分割で最も多く、それぞれ6.0 、7.0 個であった。
【００４３】
このように塊茎分割で増殖できる数はせいぜい６、７個で、この方法でも増殖効率があまり良くない。
【００４４】
図２０は、母球塊茎の分割数が発芽に及ぼす影響を示し、この実施例では、塊茎を２、４、６、８、10の分割後、ロックウールキューブ（培地）に植え付け、ハウス内で底面給水法により栽培したものである。植え付けは６月２日、シュウト長が３cm以上になったものと見做した。
【００４５】
次に、図２１は、母球塊茎の分割数が１母球あたりの子球形成数に及ぼす影響を示し、１母球あたりの球形成数＝１切片あたりの子球形成数×分割数×発芽率である。
【００４６】
1.2   無菌培養による増殖
大量増殖法として、無菌下で多芽体を誘導し、それを分割して、個体再生を行う。無菌培養による増殖法があげられる。この方法は、無菌株を作るので、カラーの球根養成で重大な問題となっている軟腐病の回避にも役立つと考えられる。しかし、予備実験で無菌培養を試みたが、内生菌による汚染がひどいうえ、僅かながら生き残ったものは１つのシュートしか形成せず、多芽体の形成には至らなかった。そこで、このように非常に困難である、カラーの無菌培養による増殖法について検討を行った。
【００４７】
1.21  内生菌汚染発生の抑制（硝酸銀処理による汚染発生の抑制）
圃場から採取してきた植物体を表面殺菌しただけでは、茎頂（０．５mm程度）を外植体に用いても汚染が発生してしまい、無菌培養を行う上で第一の障害となっている。この汚染発生の要因としては、内生菌の密度が非常に高いことが考えられる。そこで、内生菌汚染の抑制法について検討を行った。
【００４８】
1.211   抗生物質処理
培地への抗生物質（streptomycin、penicilin 等）添加処理及び抗生物質混合液ＡＢＭＩによる浸漬処理（Kritzinger et al.,1998）を試みたが、ほとんど効果がみられなかった。
【００４９】
1.212   硝酸銀処理
圃場から採取してきた植物体（葉数２枚、シュート長２０cm程度）をシュートと１cm角の塊茎を残して切除し、塊茎部分を硝酸銀水溶液に浸漬した。この後は通常通り、粗調整後、洗浄、そして、無菌条件下で表面殺菌後、茎頂を摘出し、ＭＳ培地に置床した。その結果、汚染の発生が大幅に抑制された。硝酸銀水溶液での２４時間処理における汚染抑制効果を図２２に示す。
【００５０】
硝酸銀を培地に添加するのではなく、前処理として用いているので、外植体への影響はかなり小さいと考えられる。
【００５１】
1.22  多芽体形成の誘導
茎頂を外植体にしたとき、ＢＡ（１〜５ppm ）を含む培地でも茎頂由来の１本のシュートとその基部にシュートを形成するのみであった。高濃度のＢＡ（10ppm ）を含む培地では外植体の生長は著しく阻害された。内生オーキシンの生成を抑制するため、アンチオーキシンやＡＢＡをＢＡと併用してみたが、やはり多芽体の形成には至らなかった。しかし、側芽を外植体に用いると、低濃度のＢＡ（２ppm ）を含む培地で多芽体が形成された。また、同じ濃度のＢＡを含む培地に置床しても、より茎頂に近い、つまり、より若い側芽の方がより多くの芽を持った多芽体を形成した。
【００５２】
表１は、ＢＡ２ppm を含む培地における多芽体形成率を示す。
【００５３】
【表１】
0003920495.tif 000002
【００５４】
多芽体の形成を阻害している最も大きな要因は内生オーキシンであると考えられる。側芽の方が容易に多芽体を形成するのは、側芽で生成される内生オーキシンの方が茎頂で生成されるものより少ないと考えられる。
【００５５】
図２３は、多芽体の様相を示す。多芽体には、外植体由来のシュートＳ、２次、３次シュートの集まりとみられる部分Ｐ１、カルスから分化した不定芽の集まりとみられる部分Ｐ２が観察される。カルスから形成された不定芽は２次、３次シュートよりも個体変異を起こしている可能性が高いと考えられる。
【００５６】
２．ロックウール養液栽培による球根養成
球根養成を行うにあたり、第一の問題になるのは軟腐病である。軟腐病は培地中の微生物密度が高いほど発生しやすい。このことから、有機物を一切含まないロックウール培地を用いることにより、軟腐病を軽減できると考えられる。また、無菌培養で増殖した株の球根養成も、軟腐病菌への外部からの感染を避けるため、ロックウール養液栽培が適していると考えられる。そこで、本研究では、ロックウール培地が新球形成に及ぼす影響について調査を行った。
【００５７】
2.1 ロックウール培地が新球形成に与える影響（ロックウール培地による軟腐病抑制効果）
【００５８】
培地にロックウールあるいは培養土を用いて、球根養成を行ったところ、ロックウール培地では軟腐病の発生が大幅に軽減された。球根肥大はロックウール培地でやや悪くなったが、これは植付け時、塊茎の上面が露出しており、発根及び発芽が遅れたためと考えられる。
【００５９】
図２４は、培地の種類が軟腐病の発生に及ぼす影響を示している。塊茎を６分割後、ロックウールキューブあるいは培養土に植え付け、ハウス内で底面給水法により栽培した。軟腐病発生率＝軟腐病発生株数／発芽株数とし、葉柄基部あるいは塊茎の腐臭を伴う腐敗により、枯死した株を軟腐病発生株とした。
【００６０】
ロックウール培地で養成した球根を、再びロックウール培地で栽培したところ、ほとんど軟腐病が発生しなかった。このことから、軟腐病が存在する塊茎でもロックウール培地で球根養成を繰り返すことにより、軟腐病の発生をほぼ完全に抑制できることが分かった。
【００６１】
しかし、この効果は、軟腐病菌があまり存在しない塊茎においてのみ有効であり、軟腐病菌が多く存在する塊茎では、組織培養による無菌化等が必要と考えられる。
【００６２】
2.2   塊茎の大きさが開花及び新球形成に与える影響
球根養成を行い、収穫された塊茎を評価するために、塊茎の大きさが開花及び新球形成に与える影響について、圃場で収穫した様々な重量の塊茎を栽培し、調査した。
【００６３】
2.3   多芽体の増殖
多芽体の増殖について、培地の組成や培養条件等の検討を行う。特に、大量増殖が可能な、液体培地による振盪（とう）培養について検討を行う。また、多芽体からさらに多芽体を形成させるにあたり、変異の増加が懸念される。
【００６４】
2.4   ＣＰ・ロックウールシステムを用いた個体再生
ガス透過性、光透過性に優れ、低透湿性のフッ素樹脂（ネオフロン）を素材とした培養容器（カルチャーパック；ＣＰ）と液体培地支持体としてのロックウールマルチブロックを併用したＣＰ・ロックウールシステムは、小植物体の生育を促進するだけでなく、ＣＰから取り出したマルチブロックは苗毎に分離できるので、鉢上げが効率的に行える。
【００６５】
【実験例】
次に、実験結果について説明する。
【００６６】
抗生物質処理として、培地への添加を行い、圃場より採取してきた株を、葉柄基部１cmと塊茎1cm 角を残して除去し、Tween20 を数滴加えた２％アンチホルミンで１時間滅菌した後、流水で１時間すすぎ、さらに１０％エタノールで１０分、２５％アンチホルミンで３分、１０％アンチホルミンで１５分間殺菌し、滅菌水で３回すすいだ。０．５mm角の塊茎を付けた茎頂を摘出して、０、１０、２０、４０ml／ｌのＡＢＭＩ（Sigma 社製、penicillin 10000 unit 、streptomycin１０mg／ml、 amphotericin Ｂ２５μ g／ml）を含むＭＳ培地（ｐＨ５．０、寒天０．８％）に置床した。各区１２株ずつ供試した。ＡＢＭＩでは処理効果は認められなかった。
【００６７】
前処理として、圃場より採取してきた株を、葉柄基部１cmと塊茎1cm 角を残して除去し、１個体毎に５０ml／ｌのＡＢＭＩが２０ml入った１００ml三角フラスコに入れ、５日間振盪した。先の実験と同様に殺菌処理を行い、茎頂部分をＭＳ培地（ｐＨ５．６、寒天０．８％）に置床した。各区１２株ずつ供試した。このＡＢＭＩ処理区においても汚染発生率が高く、培地への添加処理の場合と同様に、効果が認められなかった。
【００６８】
硝酸銀処理として、圃場より採取してきた株を、シュートとその下の塊茎１cm角を残して除去し、塊茎部分を 0.02 、0.2 、2.0g／l の硝酸銀水溶液に２４時間浸漬した。先の実験と同様に殺菌処理を行い、茎頂部分をＭＳ培地（ｐＨ５．６、寒天０．８％）に置床した。各区１２株ずつ供試し、３反復した結果、汚染発生率は、対照区で９１．７％であったのに対し、０．０２ｇ／l 区では３７．１％、０．２ｇ／l 区では１４．０％、２．０ｇ／l 区では５．６％であり、０．２ｇ／l あるいは２．０ｇ／l の硝酸銀溶液で前処理することによって汚染の発生割合を著しく抑制することができた。これを図２５に示す。
【００６９】
次に、処理濃度を０．２ｇ／l とし、時間を１２、２４、３６時間と変えて処理した。各区６株ずつ供試し、２反復した。汚染発生率は、１２時間処理で４１．７％、２４時間処理で１６．７％まで低下した。これを図２６に示す。
【００７０】
以上の結果、塊茎を含むある程度大きな組織を外植体に用いても、０．２ｇ／l あるいは２．０ｇ／l の硝酸銀溶液の前処理により、内生菌汚染を抑制できることが分かった。
【００７１】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明によれば、次の効果が得られる。
ａ．軟腐病の発生や内生菌の活動を効果的に抑制でき、日本等の温暖な地域でのカラー塊茎等の塊茎類の増殖ができるとともに、その増殖効率を高めることができ、圃場での生産を行うことができる。
ｂ．塊茎類の増殖により、所望のカラーを土壌で育成でき、工業生産的に切り花や鉢花として出荷することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  カラーから採取された塊茎を示す斜視図である。
【図２】  この発明のカラー塊茎類の増殖方法の第１の実施形態を示す図である。
【図３】  多芽体を示す斜視図である。
【図４】  多芽体の培養を示す図である。
【図５】  移植された多芽体を示す図である。
【図６】  塊茎の増殖を示す図である。
【図７】  塊茎の増殖を示す図である。
【図８】  塊茎の増殖を示す図である。
【図９】  塊茎の増殖を示す図である。
【図１０】  育成された塊茎を示す図である。
【図１１】  育成されたカラー塊茎を示す斜視図である。
【図１２】  葉及び根を除いた塊茎を示す斜視図である。
【図１３】  塊茎の再育成の初期状態を示す図である。
【図１４】  塊茎の再育成を示す図である。
【図１５】  塊茎の再育成を示す図である。
【図１６】  再育成された収穫前の塊茎を示す図である。
【図１７】  再育成により収穫された塊茎を示す斜視図である。
【図１８】  再育成により収穫された塊茎を示す斜視図である。
【図１９】  この発明のカラー塊茎類の増殖方法の第２の実施形態を示す図である。
【図２０】  母球塊茎の分割数が発芽に及ぼす影響を示す図である。
【図２１】  母球塊茎の分割数が１母球あたりの子球形成数に及ぼす影響を示す図である。
【図２２】  硝酸銀浸漬処理の汚染発生抑制効果を示す図である。
【図２３】  多芽体の様相を示す図である。
【図２４】  培地の種類が軟腐病の発生に及ぼす影響を示す図である。
【図２５】  処理濃度が汚染発生率に及ぼす影響を示す図である。
【図２６】  処理時間が汚染発生率に及ぼす影響を示す図である。
【図１】
0003920495.tif 000003
【図２】
0003920495.tif 000004
【図３】
0003920495.tif 000005
【図４】
0003920495.tif 000006
【図５】
0003920495.tif 000007
【図６】
0003920495.tif 000008
【図７】
0003920495.tif 000009
【図８】
0003920495.tif 000010
【図９】
0003920495.tif 000011
【図１０】
0003920495.tif 000012
【図１１】
0003920495.tif 000013
【図１２】
0003920495.tif 000014
【図１３】
0003920495.tif 000015
【図１４】
0003920495.tif 000016
【図１５】
0003920495.tif 000017
【図１６】
0003920495.tif 000018
【図１７】
0003920495.tif 000019
【図１８】
0003920495.tif 000020
【図１９】
0003920495.tif 000021
【図２０】
0003920495.tif 000022
【図２１】
0003920495.tif 000023
【図２２】
0003920495.tif 000024
【図２３】
0003920495.tif 000025
【図２４】
0003920495.tif 000026
【図２５】
0003920495.tif 000027
【図２６】
0003920495.tif 000028