(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
0003993643.tif 000010
の化合物であるコダイスタチンＡ／Ｂ、その立体異性体形態、またはそれらの医薬的に許容し得る塩。
【請求項２】
微生物Aspergillus terreus Thom HIL-051652（DSM 11247）を、炭素源および窒素源、無機塩および場合によっては微量元素を含有する栄養培地中で培養しそして慣用の方法で細胞集団および（または）培養ブロスから化合物を単離しそして精製することによって得ることのできる分子式C35H34O11の化合物であるコダイスタチンＡ／Ｂ。
【請求項３】
式II
0003993643.tif 000011
の化合物であるコダイスタチンＣ／Ｄ、その立体異性体形態、またはそれらの医薬的に許容し得る塩。
【請求項４】
微生物Aspergillus terreus Thom HIL-051652（DSM 11247）を、炭素源および窒素源、無機塩および場合によっては微量元素を含有する栄養培地中で培養しそして慣用の方法で細胞集団および（または）培養ブロスから化合物を単離しそして精製することによって得ることのできる分子式C35H34O12の化合物であるコダイスタチンＣ／Ｄ。
【請求項５】
微生物Aspergillus terreus Thom HIL-051652（DSM 11247）を、炭素源および窒素源、無機塩および場合によっては微量元素を含有する栄養培地中で好気性条件下で培養しそして慣用の方法で細胞集団および（または）培養ブロスから化合物を単離しそして精製することからなる請求項１記載のコダイスタチンＡまたはＢ、または請求項３記載のコダイスタチンＣまたはＤの製法。
【請求項６】
培養を25〜30℃の間の温度および６〜８の間のpHにおいて実施する請求項５記載の方法。
【請求項７】
培養を25℃（±１℃）および7.0のpHにおいて実施する請求項５または６記載の方法。
【請求項８】
培養を液内発酵として実施する請求項５〜７の何れかの項記載の方法。
【請求項９】
薬剤の製造に対して慣用の補助剤および（または）賦形剤と一緒にした請求項１〜４の何れかの項記載の化合物からなる薬剤。
【請求項１０】
グルコース−６−リン酸トランスロカーゼ阻害活性を有する薬剤を製造するための請求項１〜４の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項１１】
抗糖尿病作用を有する薬剤を製造するための請求項１〜４の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項１２】
Aspergillus terreus Thom HIL-051652（DSM 11247）。
【発明の詳細な説明】
本発明は、コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤと称する新規な化合物、これらの化合物の製法およびこれらの化合物の使用に関するものである。
肝グルコース排出量の割合の増加は、糖尿病の一般的特徴である。特に、インスリン非依存型糖尿病（NIDDM）における空腹時血漿グルコースレベルと肝グルコース排出量との間に強固な相互関係がある。グルコースが肝臓において産生される二つの経路は、糖新生およびグリコーゲン分解である。両経路の終末工程は、血糖レベルの恒常性調節における重要な酵素であるミクロソームのグルコース−６−ホスファターゼによって触媒される。この酵素のレベルは、また糖尿病の実験的および病理学的状態において上昇することが知られている。それ故に、この酵素系の妨害は、結果として肝グルコース産生の減少を生ずる筈である。
肝グルコース−６−ホスファターゼは、少なくとも三つの機能活性：グルコース−６−リン酸トランスロカーゼ（T1）、グルコース−６−リン酸ホスホヒドロラーゼおよびホスフェート／ピロホスフェートトランスロカーゼ（T2）からなる多成分系である。グルコース−６−リン酸トランスロカーゼは、小胞体（ER）のルーメンへのグルコース−６−リン酸の輸送を容易にする。ERのルーメン表面上にその活性部位が位置しているホスホヒドロラーゼは、グルコース−６−リン酸を加水分解しそしてグルコースおよびリン酸を上記ルーメンに放出する。リン酸の流出はホスフェート／ピロホスフェートトランスロカーゼによって容易なものとされるけれども、グルコース流出の正確な機序はまだ明らかでない。
グルコース−６−リン酸トランスロカーゼの高度な基質特異性は、糖尿病の治療において薬理学介入のための可能性のある目標となる。すなわち、生理学的に存在する糖リン酸のうち、グルコース−６−リン酸のみがトランスロカーゼによって輸送される。対照的に、ホスファターゼは、非特異的でありそして種々の有機リン酸エステルを加水分解することが知られている。
（Ａ）グルコース−６−ホスファターゼの一連の非特異的阻害剤が、文献に記載されている。例えば、フロリジン〔J. Biol. Chem. 242, 1955〜1960（1967）〕、5,5′−ジチオ−ビス−２−ニトロ安息香酸〔Biochem. Biophys. Res. Commun. 48, 694〜699（1972）〕、2,2′−ジイソチオシアナトスチルベンおよび２−イソチオシアナト−2′−アセトキシスチルベン〔J. Biol. Chem. 255, 1113〜1119（1980）〕が文献に記載されている。グルコース−６−ホスファターゼ系の最初の治療的に利用することのできる阻害剤は、欧州特許公開No.587087（出願No.93 114 260.8）および587088（出願No.93 114 261.6）において提案されている。
コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤが特にグルコース−６−リン酸トランスロカーゼに関して酵素阻害活性を有していることが見出された。
したがって、本発明は、
（１）分子式C35H34O11の化合物であるコダイスタチンＡおよびコダイスタチンＢおよびそれらの医薬的に許容し得る塩、エステル、エーテルおよび自明な化学的等価物に関するものである。
コダイスタチンＢは、Ｏ−ヒドロキノン、フェノール、不飽和γ−ラクトン、ジヒドロキシ−シクロペンテノンおよびα,β,γ,δ−不飽和カルボニル部分によって形成された、これまで報告されていない新規な構造を有しそしてコダイスタチンＡのジアステレオマーである。
コダイスタチンＡおよびＢは、以下の式Ｉの化合物である。
0003993643.tif 000002
本発明は、また
（２）分子式C35H34O12の化合物であるコダイスタチンＣおよびコダイスタチンＤおよびそれらの医薬的に許容し得る塩、エステル、エーテルおよび自明な化学的等価物に関するものである。
コダイスタチンＣは、Ｏ−ヒドロキノン、不飽和γ−ラクトン、ジヒドロキシ−シクロペンテノンおよびα,β,γ,δ−不飽和カルボニル部分によって形成されたこれまで報告されていない新規な構造を有している。コダイスタチンＤは、コダイスタチンＣのジアステレオマーである。
コダイスタチンＣおよびＤの構造式は、多分末端フェニルＡの６−位における−0H基の付加によって、上述した構造式Ｉと異なっている。
したがって、本発明は、コダイスタチンのすべての立体異性体形態ならびにそれらの混合物に関するものである。単一の立体異性体形態は、既知の方法、例えば順相クロマトグラフィー、陰イオン−交換クロマトグラフィー、HPLCまたは選択的結晶化によって単離することができる。
生理学的に許容し得る塩（例えば、Na、Ｋ、アンモニウム塩）、エステル（例えば有機酸とのエステル）ならびに化学的等価物（酸化生成物、付加生成物、例えば水和物）は、当業者に知られている方法で製造することができる。
本発明の他の目的は、培養菌番号HIL-051652、その突然変異体および変異体から新規な化合物コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤを製造する方法を提供せんとするものである。該方法は、炭素および窒素の源、栄養無機塩を含有する栄養培地中において好気性条件下で培養菌HIL-051652、その突然変異体および変異体を培養し次いで培養濾液から上記化合物を単離および精製することからなる。
栄養培地は、炭素源および窒素源、無機塩および場合によっては微量元素の源を含有する。炭素源は、例えば澱粉、グルコース、スクロース、デキストリン、フラクトース、糖蜜、グリセロール、ラクトースまたはガラクトース、好ましくは澱粉である。窒素源は、例えば大豆粉、落花生粉、酵母エキス、肉エキス、ペプトン、トリプトン、麦芽エキス、コーン・ステープ・リカー、ゼラチンまたはカザミノ酸、好ましくはトリプトンおよび酵母エキスである。栄養無機塩は、例えばリン酸水素ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、硝酸カリウム、硫酸アンモニウムまたは硫酸マグネシウム、好ましくは、塩化ナトリウムおよび炭酸カルシウムである。
培養菌番号HIL-051652の培養は、25〜30℃の間の温度および6.0〜8.0の間のpHにおいて実施することができる。好ましくは、培養菌番号HIL-051652は25℃（±１℃）および約7.0のpHで培養される。
発酵は、本発明の化合物の最適の収率を得る場合、好ましくは40〜90時間実施される。特に、例えば振盪フラスコならびに実験室の発酵槽中で液内条件下で45〜70時間発酵を実施することが好ましい。必要に応じて、Desmophen▲Ｒ▼（ポリプロピレンオキシド、Bayer AG, Leverkusen, Germany）のようなあわ消剤を、発酵方法に使用することができる。発酵の進行およびコダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤの形成は、若干変形されたMethodsin Enzymology 174, 58-67（1989）に記載されている比色検定を使用して、室温でマイクロタイタープレート中で未処理のおよびトライトンX-100▲Ｒ▼破壊したラットの肝臓ミクロソーム中のグルコース−６−リン酸活性を測定することによっておよびHPLCによって検出することができる。得られた培養ブロスにおいて、コダイスタチンＢ、ＣおよびＤは小量の化合物として存在しそしてコダイスタチンＡは主要な化合物として存在する。すなわち、粗製活性物質は、水混和性溶剤、例えばメタノール、エタノールおよびアセトンによる菌糸体の抽出およびpH５〜８における水不混和性溶剤、例えば酢酸エチル、ジクロロメタン、クロロホルムまたはブタノールによる培養濾液の抽出によってまたは重合体樹脂、例えば“Diaion HP-20▲Ｒ▼”（三菱化成工業、日本）、“Amberlite XAD▲Ｒ▼”（Rohm and Haas Industries, U.S.A）、活性炭を使用した疎水性相互作用クロマトグラフィーまたはpH５〜８におけるイオン交換クロマトグラフィーによって採取することができる。好ましい方法は“Diaion HP-20▲Ｒ▼”上の吸着次いで水、メタノール、アセトンまたはアセトニトリルまたはこれらの組み合わせのような溶離剤を使用した化合物の脱着である。活性溶離液の濃縮および凍結乾燥によって粗製の化合物が得られる。
この粗製の物質は、次の技術の何れかを使用してさらに精製することができる：順相クロマトグラフィー（固定相としてアルミナまたはシリカゲルを使用しそして酢酸エチル、クロロホルム、メタノールまたはこれらの組み合わせのような溶離剤を使用する）、逆相クロマトグラフィー（固定相としてRP-18とも称されるジメチルオクタデシルシリルシリカゲルまたはRP-8とも称されるジメチルオクチルシリルシリカゲルのような逆相シリカゲルを使用しそして水、緩衝液、すなわち、リン酸、酢酸、クェン酸緩衝液（pH２〜８）、および有機溶剤、例えばメタノール、アセトニトリルまたはアセトンまたはこれらの溶剤の組み合わせのような溶離剤を使用する）、メタノール、クロロホルムまたは酢酸エチルまたはこれらの組み合わせのような溶剤中の“Sephadex LH-20▲Ｒ▼”（Pharmacia Chemical Industries, Sweden）、TSKgel“Toyopearl HW-40F▲Ｒ▼”（TosoHaas, Tosoh Corporation,Japan）または水中の“Sephadex▲Ｒ▼”、“G-10”およびG-25のような樹脂を使用したゲル浸透クロマトグラフィーまたはイオン交換クロマトグラフィー、好ましくは陰イオン交換クロマトグラフィーまたは水およびクロロホルムのような２種またはそれ以上の溶剤から製造された２相溶離剤系を使用した向流クロマトグラフィー。これらの技術は、反復して使用することができるし、また異なる技術の組み合わせを使用することができる。好ましい方法は、Toyopearl上のクロマトグラフィー次いで逆相変性シリカゲル（RP-18）上のクロマトグラフィーである。
コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤを製造するために使用される以下HIL-051652と称する微生物、培養菌番号Y-93,02839（HIL-051652）は、Kodaikanal Tamil Nadu, Indiaにおいて採取した土壌試料から単離した。微生物HIL-051652はAspergillus terreus Thomとして同定した。この微生物は、1996年10月21日にドイツのブラウンシュワイクのthe GermanCollection of Microorganisms and Cell Culturesに寄託した（受託番号DSM No.11247）。
コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤは、ラットの肝臓ミクロソームのグルコース−６−リン酸トランスロカーゼの活性を強力に阻害する。おおよそのIC50値を以下に示す。
コダイスタチンＡ：0.2μg／ml（約300nM）
コダイスタチンＢ：0.3μg／ml
コダイスタチンＣ：0.09μg／ml
コダイスタチンＤ：0.5μg／ml
対照的に、コダイスタチンＡは、約200μg／ml（約300μM）のIC50をもってデタージェント−破壊されたミクロソームにおけるホスファターゼ活性を阻害し、トランスロカーゼに対する高度な特異性を示す。さらに、コダイスタチンＡは、ホスフェート／ピロホスフェートトランスロカーゼの活性に影響を与えない。コダイスタチンＡは、グルコース−６−リン酸トランスロカーゼの可逆的なおよび競合的な阻害剤である。
さらに、コダイスタチンＡを、グルコース排出量に対する作用について単離されたラットの肝細胞において評価した。それは、それぞれ約25μg／mlおよび50μg／mlのIC50値をもって、フルクトース−誘発糖新生およびグルカゴン−誘発グリコーゲン分解の両方を阻害する。
したがって、本発明の他の目的は、薬剤としてのコダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤの使用および抗糖尿病作用を有する薬剤を製造するためのコダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤの使用である。本発明の他の目的は、それぞれコダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤの活性量を含有する薬剤の提供である。
コダイスタチンのガレヌス処方物、投与方法ならびに投与量範囲は、治療される疾患の種類およびそれぞれの疾患の程度に依存しそして当該技術において知られている方法を使用して最適なものとすることができる。この点に関して、上記（Ａ）において述べた引用文献を参照する。コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤは、経口的に、筋肉内にまたは静脈内に投与することができる。これらの組成物は、化合物を１種または２種以上の医薬的に許容し得る補助剤および（または）賦形剤、例えば充填剤、乳化剤、滑沢剤、マスキング着香剤、着色剤または緩衝物質と混合することによって製造しそして適当な医薬形態、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセルまたは非経口的投与に適した懸濁液または溶液に変換することができる。
あげることのできる補助剤および（または）賦形剤の例は、トラガントゴム、ラクトース、タルク、寒天、ポリグリコール、エタノールおよび水である。水中の懸濁液または溶液は、非経口的投与に適しておりそして好ましい。また、ベヒクルまたは稀釈剤なしに、適当な形態例えばカプセル中で活性物質それ自体を投与することもできる。
化合物は、医薬的に許容し得る誘導体、例えばエステルおよびエーテルに変換することができる。エステルは、触媒の存在下において化合物をカルボン酸と反応させることによって、または化合物をアシル化剤、例えば酸塩化物と反応させることによって製造することができる。エステルを製造する他の方法は、文献、例えばAdvanced Organic Synthesis, 4thEdition, J. March, John Wiley & Sons, 1992に記載されている。エーテルは、塩基性条件下におけるアルキル化剤との反応によって、化合物から製造することができる。エーテルを製造する他の方法は、文献、例えばAdvanced Organic Synthesis, 4th Edition, J. March, John Wiley & Sons, 1992に記載されている。
以下の実施例は、本発明の例示でありそして本発明の範囲を限定するものではない。
実施例  Ｉ
土壌からの培養菌HIL-051652の単離
（ａ）栄養単離培地（サブロー寒天）の組成
ヘプトン  ：10.0ｇ
グルコース：40.0ｇ
寒  天    ：13.0ｇ
脱塩水    ：1.0Ｌ
pH        ：7.0
（ｂ）土壌平板培養および単離
Kodaikanal, Tamil Nadu, Indiaから採取した土壌10ｇを、250mlの三角フラスコ中の滅菌された脱塩水90mlに加え、そしてそれから、これを回転振盪機（220rpm）上で２時間振盪した。それから、上記の土壌懸濁液を、10の工程で10-5まで連続的にうすめた。最後の希釈から、懸濁液１mlを滅菌したペトリプレート（直径15cm）の中央に置きそしてそれから、クロラムフェニルコール50μg／mlおよび0.5％プロピオン酸ナトリウムを補給した上記の単離培地約50mlを注加した。培地を45℃に冷却しそしてプレートを十分に旋回した。土壌懸濁液および培地の混合物を、固定しそして25℃（±１℃）で７日間インキュベートした。ペトリプレートを定期的に観察しそして培養菌番号HIL-051652を、増殖している微生物の間から単離した。
実施例  II
培養菌HIL-051652の維持
培養菌番号HIL-051652は、実施例Ｉに述べたサブロー寒天培地上に維持した。
上述した成分を加熱によって十分に溶解した後に、それを試験管に分配し、そしてそれから121℃で20分滅菌した。それから、試験管を冷却しそして傾斜した位置において固化させた。寒天斜面を白金耳によって培養菌番号HIL-051652の増殖物で画線しそして良好な増殖が観察されるまで25℃（±１℃）でインキュベートした。よく増殖した培養菌を８℃の冷蔵庫中で貯蔵した。
実施例  III
振盪フラスコ中における培養菌HIL-051652の発酵
種子培地の組成
澱粉            ：15.0ｇ
グルコース      ： 5.0ｇ
大豆粉          ：15.0ｇ
酵母エキス      ： 2.0ｇ
コーン・スティープ・リカー： 1.0ｇ
NaCl            ： 5.0ｇ
CaCO3           ： 2.0ｇ
脱塩水          ： 1.0Ｌ
pH              ： 6.8
上記の種培地を、500mlの三角フラスコに、80mlの量ずつ分配しそして121℃で20分オートクレーブ処理した。フラスコを室温に冷却しそしてそれから、それぞれのフラスコに実施例IIの上述したよく増殖した培養菌の１白金耳量を接種しそして回転振盪機上で25℃（±１℃）において240rpmで72時間振盪した。
生産培地の組成
澱粉            ：24.0ｇ
グルコース      ：15.0ｇ
トリプトン      ： 5.0ｇ
酵母エキス      ： 5.0ｇ
肉エキス        ： 3.0ｇ
CaCO3           ： 4.0ｇ
脱塩水          ： 1.0Ｌ
pH              ： 6.5
上記生産培地を、500mlの三角フラスコに60mlの量ずつ分配しそして121℃で20分オートクレーブ処理した。フラスコを室温に冷却しそしてそれから、上述した種培養菌（１v／v％）を接種した。発酵を、回転振盪機上で、240rpmおよび25℃（±１℃）の温度で、40〜48時間実施した。
グルコース−６−リン酸トランスロカーゼの阻害を測定することによって、活性化合物の生産をモニターした。採収後に、培養ブロスを遠心分離しそしてコダイスタチンＡ、Ｂ、Ｃおよび（または）Ｄを、実施例Ｖに記載したようにして、培養濾液から単離しそして精製した。
実施例  IV
発酵槽中における培養菌番号HIL-051652の発酵
工程１：振盪フラスコ中における種培養菌の製造
実施例IIIの種培地を、１Ｌの三角フラスコに、160mlの量ずつ分配しそして20分オートクレーブ処理した。種培養菌は、実施例IIIに記載したようにしてこれらのフラスコ中で増殖した。
工程２：発酵槽中における種培養菌の製造
100Ｌのマルビシ発酵槽中の実施例IIIに記載したような種培地75Ｌを、121℃で45分滅菌し、25℃±１℃に冷却しそして上述した種培養菌３Ｌを接種した。
発酵は、次のパラメーターを使用して実施した。
温度          ：25℃（±0.5℃）
撹拌          ：80rpm
通気          ：50 lpm
採収時間      ：50時間
工程３：大規模な発酵
あわ消剤としてのDesmophen▲Ｒ▼（ポリプロピレンオキシド）175mlと一緒にした1000Ｌのマルビシ（Marubishi）発酵槽中の実施例IIIに記載したような生産培地750Ｌを、121℃で45分滅菌し、25℃±１℃に冷却しそして工程２からの種培養菌75Ｌを接種した。
発酵は、次のパラメーターを使用して実施した。
温度          ：25℃（±0.5℃）
撹拌          ：50rpm
通気          ：350 lpm
採収時間      ：40〜44時間
グルコース−６−リン酸トランスロカーゼの阻害を測定することによって、活性化合物の生産をモニターした。発酵を中止した場合、培養ブロスのpHは、6.0〜7.0であった。採収後、以下の実施例Ｖに記載したようにして培養ブロスを遠心分離しそしてグルコース−６−リン酸トランスロカーゼ阻害剤であるコダイスタチンＡ、Ｂ、Ｃおよび（または）Ｄを培養濾液から単離した。
実施例  Ｖ
コダイスタチンＡ、Ｂ、Ｃおよび（または）Ｄの単離および精製
培養ブロス約1000Ｌを採収しそして遠心分離によって菌糸体（110kg）から分離した。コダイスタチンＡ、Ｂ、ＣおよびＤは、菌糸体ならびに培養濾液中に存在することが見出された。培養濾液（830Ｌ）を、水中の30％メタノール（330Ｌ）による細胞集団の抽出液と合し、Diaion HP-20▲Ｒ▼（35Ｌ、３v／v％）のカラム中を通過させた。このカラムを、脱塩水（50Ｌ）で十分に洗浄しそしてそれから、水中のCH3CNの段階勾配で溶離した。すなわち、溶離は、10％CH3CN（90Ｌ）および30％CH3CN（90Ｌ）を使用して実施した。フラクションは、15Ｌの分量で集めた。30％CH3CNで得られた活性溶離液（３×15Ｌ）を合し、35℃で10〜100mmHgの減圧下で濃縮しそして凍結乾燥して25μg／mlのIC50を示すコダイスタチンＡである粗製活性物質（225ｇ）を得た。
このようにして得られた粗製物質は、ゲルに対する基質の比を変化してTSKgel Toyopearl HW-40F▲Ｒ▼上の２回の連続ゲル浸透クロマトグラフィーによって連続的に精製した。すなわち、上記の粗製物質を、
0003993643.tif 000003
M6-48ガラスカラムに充填したToyopearl HW-40F▲Ｒ▼（1.5Ｌ）を通してそれぞれ15ｇの15のロットで別個に通過させた。移動相は、水中の10％CH3CNでありそして流量は３〜５バールで10ml／分に維持した。フラクションは250mlの量で集めた。活性溶離液を合し、35℃で10〜100mmHgの減圧下で濃縮しそして凍結乾燥して１〜1.5μg／mlのIC50を有するコダイスタチンＡである濃縮活性物質（3.0ｇ）を得た。
さらに、上記の濃縮物質は、
0003993643.tif 000004
M4-48カラムに充填したTSKgel Toyopearl HW-40F▲Ｒ▼（500ml）中を通過させることによって、それぞれ300mgの10のロットで分別した。移動相は水中のlO％CH3CNでありそして流量は1.5〜2.0ml／分に維持した。フラクションは20mlの分量で集めた。すべての活性フラクションを集め、35℃で10〜100mmHgの減圧下で濃縮しそして凍結乾燥して、主要な化合物としての0.375μg／mlのIC50を有するコダイスタチンＡおよび小量の化合物としてのコダイスタチンＢ、Ｃおよび（または）Ｄの活性物質を含有する半−純粋な物質（0.85ｇ）を得た。
コダイスタチンＢ、ＣおよびＤは、８ml／分の流量および294nmでの検出における移動相としてコダイスタチンＡから最終的に分離して、純粋なコダイスタチンＢ（0.004ｇ）、コダイスタチンＣ（0.011ｇ）およびコダイスタチンＤ（0.004ｇ）を得た。
コダイスタチンＢ、ＣおよびＤの純度は、１ml／分の流量および40℃における294nmでのUV検出において、20分のCH3CNに対する0.1％水性オルトリン酸（pH2.5）の勾配を使用するLiChrocart-250-4RP Select B（５μ）カラム上のHPLC（高圧液体クロマトグラフィー）によって検査した。
このようにして得られた半−純粋なコダイスタチンＡを、８ml／分の流量および294nmでの検出において、移動相として水中の20％CH3CNを使用する16×250mmのEurosphere C-18（10μ）カラム上の分取HPLCによって最終的に精製することによって、0.2μg／mlのIC50を有する純粋なコダイスタチンＡ（0.14ｇ）を得た。
コダイスタチンＡの物理−化学的およびスペクトル性質は、表１および１Ａに、コダイスタチンＣのこれらの性質は表２に、コダイスタチンＢのこれらの性質は表３に、そしてコダイスタチンＤのこれらの性質は表４に要約した。
0003993643.tif 000005
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【図１】
0003993643.tif 000012
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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