(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の表：
【表１】
0003868008.tif 000013
（表中、ｄは面間隔を表し、Ｉ／Ｉ０  は相対強度百分率を表す）で示される粉末結晶Ｘ線回折パターンをもつ、温度及び湿度に安定な７−［α−（２−アミノチアゾール−４−イル）−α−（Ｚ）−メトキシイミノアセトアミド］−３−［（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル］−３−セフェム−４−カルボキシレート２塩酸塩２水和物の結晶。
【請求項２】
請求項１記載の結晶と、無毒性の弱いアニオンと結合したナトリウム塩、Ｎ−メチルグルカミン及びＬ（＋）アルギニンからなる群から選ばれる薬理学的に許容し得る無毒性の有機又は無機塩基との真空乾燥した物理的混合物であり、該混合物を注射可能な濃度に水で希釈するとｐＨ３．５〜７になる割合での真空乾燥した物理的混合物。
【請求項３】
薬理学的に許容し得る無毒性の有機塩基がＬ（＋）アルギニンである請求項２記載の真空乾燥した物理的混合物。
【請求項４】
請求項１記載の結晶及び／又はその物理的混合物及び請求項２又は３に記載の薬理学的に許容し得る無毒性の有機又は無機塩基を従来の担体及び／又は佐薬と共に含むことを特徴とする抗菌用医薬組成物。
【請求項５】
７−アミノ−３−［（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル］−セフ−３−エム−４−カルボキシレート又はそのシリル化誘導体を不活性有機溶媒中で２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノ酢酸又はそのアシル化均等物によってアシル化し、得られた反応混合物に水を加え、水性相を分離し、該水性相を塩酸で処理し、そしてアセトンで処理し、所望化合物の結晶化を生ずることを特徴とする請求項１記載の結晶を製造する方法。
【請求項６】
請求項１記載の結晶に請求項２記載の薬理学的に許容し得る無毒性の有機又は無機塩基を混合し、そして該混合物を真空乾燥することを特徴とする請求項２記載の物理的混合物を製造する方法。
【請求項７】
請求項１記載の結晶又は請求項２又は３の物理的混合物に従来の薬理学的に許容し得る担体及び／又は佐薬を混合することを特徴とする請求項４記載の医薬組成物を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、セファロスポリン抗生物質、セフエピム２塩酸塩の新規な温度及び湿度に対して安定な結晶性２水和物を提供する。本発明は又セフエピム２塩酸塩の温度及び湿度に安定な結晶性２水和物と、薬理学的に許容される無毒性の塩基との混合物をも提供する。
【０００２】
【従来の技術】
抗生物質セフエピムは、１９８３年９月２７日に出版された米国特許第４，４０６，８９９号に油木らによって開示されており、化学名は７−〔α−（２−アミノチアゾール−４−イル）−α−（Ｚ）−メトキシイミノアセトアミド〕−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕−３−セフエム−４−カルボキシレートである。そこに記載されているセフエピムは両性イオン型であり、このものは室温で不安定で、温度が上昇した（４５℃以上）状態で一週間の保存でもその活性は３０％以上失われる。
【０００３】
カプラン（Ｋａｐｌａｎ）らに付与された米国特許第４，９１０，３０１号中には一連のセフエピムの結晶性の酸付加塩の製造法が開示されている。硫酸塩、２硝酸塩、１塩酸塩、２塩酸塩、及びジ−及びセスキオルトリン酸塩又はそれらの溶媒和が開示されており、そしてそれらは前述の油木らの両性イオン型と比較して温度に対する安定性がすぐれていることを報告している。更に、好適なセフエピムの２塩酸塩は、１水和物又は２水和物の擬多型態で保存することが報告されている。残念ながらセフエピムの２塩酸塩１水和物は高湿度のもとでは容易に２水和物に転換し、又得られたセフエピムの２塩酸塩２水和物は真空下又はデシケータ中で乾燥すると１モルの水を失うことが発見された。驚くべきことには、セフエピムの新しい特有の多様態結晶２塩酸塩２水和物が発見され、この新規な２水和物は温度及び湿度の両方に対して安定である。
【０００４】
カプランらに、１９９１年２月１９日に付与された米国特許第４，９９４，４５１号には、カプランらによって米国特許第４，９１０，３０１号中で請求された結晶性セフエピム酸付加塩と、薬理学的に許容される無毒性の有機又は無機塩基との物理的な混合剤が請求されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
当技術分野において周知のセフエピム２塩酸塩２水和物は湿度に対して不安定である。製剤及び貯蔵上温度及び湿度に対し安定なセフエピムを得ることが一層望まれることである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、セファロスポリン抗生物質、セフエピムの新規な結晶性２塩酸塩２水和物を提供する。特に本発明は、すぐれた安定性、及び本明細書中に記載されている特有の粉末結晶Ｘ線回折パターンをもつ温度及び湿度に安定な結晶性のセフエピム２塩酸塩２水和物を提供する。本発明は又新規な結晶性セフエピムの２塩酸塩２水和物と、薬理学的に許容される無毒性の有機又は無機塩基との物理的な混合物をも提供する。特に本発明は、本明細書記載の特徴のある粉末結晶Ｘ線回折パターンをもつ、温度及び湿度に安定な結晶性セフエピムの２塩酸塩２水和物と、水で稀釈し注射可能な濃度にすればｐＨ３．５〜７になるようなＬ（＋）アルギニンとの混合剤を提供する。
【０００７】
本発明は、カプランらによって米国特許第４，９１０，３０１号中に開示されているセフエピムの２水和物よりも、温度及び湿度に対して安定なセフエピムの塩酸塩の結晶性２水和物を提供するものであり、該化合物は以下の化１で示される：
【０００８】
【化１】
0003868008.tif 000002
【０００９】
本発明は、薬理学的に許容出来る無毒性の有機又は無機塩基と、セフエピムの２塩酸塩の結晶性２水和物との減圧下乾燥した物理的混合物をも提供する。
【００１０】
本発明による安定な２水和物の結晶は、脆い長い髪の毛のような針状或いは細い棒状の結晶であり、このものは容易に砕けて“微”粒となる。この新しい２水和物は非常に安定な水和物であり、高湿又は低湿度中でも水が加わったり脱離したりすることはない。本発明の２水和物の結晶の形態は厳しい条件のもとでも変化しない、例えば、減圧下Ｐ２Ｏ５と５０℃、４８時間；７０℃、９６時間オーブン乾燥；７０℃で２ケ月以上放置しても変化しない。本発明の結晶２水和物の水の安定性は、前記の、カプランらにより報告された不安定型セフエピムの２塩酸塩・２水和物、このものは粒状やプレート状や、いろいろな密度の高い球状結晶である、とは形の点でも性質の点でも著しく異なるものである。
【００１１】
本明細書中及び特許請求の範囲中で用いられている「安定」な２水和物、「不安定」な２水和物なる語は、本主題の結晶のそれぞれの結晶形態の第２番目の水の分子についての安定、不安定を意味するものであると言うことを当業者は理解すべきである。「安定」、「不安定」なる語は化学的な安定又は不安定を意味するものではなく又いろいろなセフエピムの結晶形の化学的な安定性の欠如、即ち分解を包含することを意味するものではない。
【００１２】
本発明による結晶性安定型２水和物の物理的性質は、いろいろな標準的方法及び技術で試験すると、先行技術である不安定型２水和物とは著しく異なっていることが判明した。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）による本発明の２水和物は、１４０−１６０℃で蒸発吸熱ピークがあり、その後すぐ分解による発熱ピークが１７０℃にみられた。カプランらの不安定型セフエピム２塩酸塩・２水和物は、弱く結合している第２の水分子を失うことを示す７５℃でわずかな吸熱が認められた。
【００１３】
本発明による結晶性安定型２水和物は、熱重量分析（ＴＧＡ）により蒸気の損失を示す事実を確認した。安定型２水和物のＴＧＡによる分析は、７５−１１５℃で加熱したとき６．９％の質量損失が認められ、この値はカールフィッシャー法による水含量が６．２５％であることとよく一致している。カプランらの不安定型２水和物については２段階の質量損失が観察されることが記載されているのに対し、安定型２水和物については１段階の重量損失遷移であることが対照的である。
【００１４】
本発明による新規な温度、湿度に安定なセフエピム２塩酸塩の２水和物は、図１に示されているような粉末Ｘ線回折パターンによって特徴づけられる。該Ｘ線回折パターンはリガクガイガーフレックスＸ線回折計によって、ニッケルフィルターを用いた平均波長１．５４２５Å  ＣｕＫα線を使用し、走査範囲２θ°５．０〜４０．０で測定されたスペクトルが図１に示され、その有意なピークは次の表１にまとめられている。表中ｄは面間隔を表し、Ｉ／Ｉ０は相対的回折強度を表している。
【００１５】
【表２】
0003868008.tif 000003
【００１６】
これに対応して、米国特許第４，９１０，３０１号に記載の不安定型セフエピム塩酸塩の２水和物は、図２に示したような粉末Ｘ線回折パターンを示している。図２の有意なピークは表２にまとめられている。本発明による安定型２水和物と、先行技術の不安定型２水和物のＸ線回折パターンの相違は、これらの２つの型が多様態であることを示唆している。
【００１７】
【表３】
0003868008.tif 000004
【００１８】
本発明による新しい、温度及び湿度に安定な結晶セフエピム２塩酸塩２水和物と、先行技術の不安定型２水和物の間の相違は、赤外線吸収スペクトルによっても又特徴づけることが出来る。そのＦＴ−ＩＲの拡散反射スペクトルは、拡散反射の装置を使用することにより、ニコレット（Ｎｉｃｏｌｅｔ）２０ＳＸ型測定器によって６００ｃｍ−１〜４０００ｃｍ−１の間で測定された。ＦＴ−ＩＲ用試料は、５．０ｍｇの試料と４００ｍｇのＫＢｒとを瑪瑙乳鉢で穏やかに混合して調整し、１３ｍｍの試料カップに移しそして平らにした。試料カップを装置に設置し、それぞれの試料を４ｃｍ−１分解能で１００回走査を行って測定し、ブランクのＫＢｒ試料に対して補正した。
【００１９】
本発明による結晶セフエピム２塩酸塩２水和物の赤外線吸収スペクトルは図３に示されており、他方米国特許第４，９１０，３０１号にカプランらによって開示された不安定型セフエピムの２水和物の赤外線吸収スペクトルは図４に示されている。これらのスペクトルを比較することによって判るように、この２つの水和物の赤外線吸収は明らかに相違している。特に本発明の結晶性２水和物は、図３のＦＴ−ＩＲ拡散反射スペクトルによって示されているように３５７４ｃｍ−１及び３４３２ｃｍ−１にピークを示している。
【００２０】
これに加えて本発明は、水分のとり込みについての高い又は低い湿度の効果について、先行技術のセフエピム２塩酸塩２水和物と本発明によるセフエピム２塩酸塩２水和物との間に、水和の程度、可逆性の程度及び結晶の構造に大きな相違があることを発見した。
【００２１】
いろいろな結晶性水和物について湿度が影響するのかどうかを観察するために、飽和塩溶液を密閉したガラス容器に入れ、温度調節が出来る装置に設定することによるいろいろな湿度環境のもとでそれぞれの結晶型を試験した。相対湿度（ＲＨ）は４２％ＲＨで目盛設定したルフトモデルＨＴＡＢ湿度計を用いて測定した。以下の湿度環境が用いられた：
８７％  ＲＨ／２５℃，ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ；  ５５％  ＲＨ／２５℃，Ｃａ（ＮＯ３）２；  ３３％  ＲＨ／２５℃，ＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ及び８０％  ＲＨ／３７℃（市販のフオルマ科学的「環境ステーション」）。
【００２２】
カプランらによって米国特許第４，９１０，３０１号中に記述された結晶セフエピム２塩酸塩１水和物の吸湿性は、抗生物質の２０〜３０ｍｇの試料を、１０ｍｌタイプＩガラスバイアル中で２５℃／５５％ＲＨ，２５℃／８７％ＲＨ又は３７℃／８０％ＲＨに開放的に曝すことにより測定した。定期的にバイアルを取り出し、栓をし、シールしてカールフィッシャー滴定法（ホトボルト社製、アクアテストＩＶ滴定器使用）で測定した。
【００２３】
【表４】
0003868008.tif 000005
【００２４】
上記の表３に記載した結果より理解出来るように、結晶セフエピム塩酸塩１水和物は、５５％相対湿度（ＲＨ）の環境下に１４日間曝されたのちも基本的には変化しなかった。しかしながら同じ結晶１水和物が８７％ＲＨ、及び８０％ＲＨ、３７℃に曝されると、１水和物は２時間以内に第２の水分子を容易にとり込み、図２に示した粉末Ｘ線回折パターン及び図４に示したＦＴ−ＩＲ吸収スペクトルによって特徴づけられる不安定型セフエピム２塩酸塩２水和物となった。
【００２５】
更にセフエピム２塩酸塩１水和物の短時間での水和反応、脱水和反応を重量的に研究した。セフエピム塩酸塩１水和物（ＫＦ＝３．５％水）の１５０ｍｇを大きなガラス皿に薄く広げ、２５℃／８７％ＲＨの所に設置した。水和化をモニターするために試料は定期的に重量を測定し、水の増加を測定した。２５℃／８７％ＲＨで２０時間後、固体は２５℃／３３％ＲＨチャンバーに移し、表４に示したように設定された時間間隔で試料の重量を測定しながら脱水和反応を行った。
【００２６】
【表５】
0003868008.tif 000006
【００２７】
上記の表４に示した水和化／脱水和化実験の結果は、１水和物の結晶及び先行技術である不安定型２水和物は明らかに環境の相対湿度に依存していることを示している。
【００２８】
これに対照的に本発明による結晶セフエピム２塩酸塩２水和物は、非常に低い（減圧）又は高い湿度環境の両者に対しても安定である。本発明による結晶２水和物の３つの異なった試料を表５に記載したようにいろいろの乾燥した条件下に置いた。いろいろの分析法によって測定された水和のレベルから判るように、それぞれの試料の含水％は、実験誤差以内で約６％であり、基本的には不変であった。表５に示されている結果は、本発明によるセフエピム２塩酸塩２水和物中の２モルの水は針状結晶中に強く結合していることを実証している。他の試料についての顕微鏡観察及びＸ線回折パターンは結晶を堅持していることを示していた。
【００２９】
【表６】
0003868008.tif 000007
【００３０】
本発明の結晶セフエピム２塩酸塩２水和物の吸湿性は、２０〜３０ｍｇの試料を、口の開いた１０ｍｌタイプＩガラスバイアル中に入れ２５℃／５５％ＲＨ、２５℃／８７％ＲＨ又は３７℃／８０％ＲＨの湿度チャンバー中に曝すことにより実験した。定期的時間間隔でバイアルをとり出し、栓をし、シールしてカールフィッシャー法で滴定評価した。表６の結果が示すように、４週間後でも両試料は、基本的には含水量は増加しなかった。かくの如く高湿度条件下に於いても本発明による結晶２水和物については吸湿の様子は全く観察されなかった。
【００３１】
【表７】
0003868008.tif 000008
【００３２】
所望の広い抗菌スペクトルをもつ抗生物質、アンチ異性体及びΔ２異性体を実質的に含まないセフエピム２塩酸塩２水和物は、Δ２を実質的に含まない７−アミノ−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレートヨウ素酸塩（化合物Ｉ）を、実質的にアンチ異性体を含まない２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（化合物ＩＩ）のシン異性体でＮ−アシル化することにより得られよう。化合物ＩはＳ．Ｐ．ブルンデイジ（Ｂｒｕｎｄｉｄｇｅ）らによって米国特許第４，８６４，２９４号中に記載されている一般法によって製造出来るであろうし、又、化合物ＩＩは本明細書中、実施例１に記載されている一般的工程によって製造できるであろう。
【００３３】
アシル化の工程に従って、セファロスポリン中間体（化合物Ｉ）は、不活性溶媒中、好ましくはアセトニトリル又はジクロロメタン中で有利にシリル化され、そのまま溶解性のシリル化誘導体の溶液になるであろう。しかしながら、該無水溶液を化合物ＩＩと反応させる前に、そして有利には実施例４及び５記載の一般的な工程に従って十分なシリル化試薬を加え、もし必要であるならばセファロスポリン中間体（化合物Ｉ）を溶解させるために塩基を加えることが重要である。使用出来るシリル化試薬は当業者に周知のものである。好ましくはトリメチルクロロシラン、又はトリメチルクロロシラン及びヘキサメチルジシラザンの混合物であり、最も好ましくトリメチルクロロシランとヘキサメチルジシラザンの混合物をアシル化工程に使用することである。
【００３４】
反応には少なくとも１当量のシリル化剤と、少なくとも１当量の塩基が必要とされるが、実際には約２当量のシリル化剤及び約２当量又はそれ以下の塩基を使用するのが、可溶性のシリル化された中間体の溶液を得るには有利である。しかし、シリル化の試薬がトリメチルクロロシラン及びヘキサメチルジシラザンである場合には、可溶性のシリル化誘導体を調製するためにはいかなる塩基も用いない方が好適である。当業者にはよく理解されるであろう事柄ではあるが、シリル化剤としてのヘキサメチルジシラザンは塩基性の副生成物を生じ、これが生成する酸性物質を中和するのに十分である。全くΔ２異性体を含まない所望の抗生物質を得るためには、過剰の塩基は有害であるので、トリメチルクロロシランとヘキサメチルジシラザンの混合物の使用は本発明にとって最も好適である。セファロスポリン骨核のΔ３からΔ２への異性化の量はシリル化された誘導体の調製及びそのＮアシル化を酸クロリド塩酸塩（化合物ＩＩ）で行ってセフエピム２塩酸塩水和物を得るときに用いられる反応条件に敏感である。異性化の量は加える塩基の量及び種類、溶媒及びその工程で使用する温度などの要素に依存している。最も注意しなければならないことは、過剰の塩基の使用、又はシリル化剤を加える前又は酸クロリド塩酸塩（化合物ＩＩ）を加える前の塩基の付加によって塩基性になる状態は、セフエムの二重結合がΔ３からΔ２への異性化を増加させることになるであろうことである。それ故無水条件下のアシル化反応の間、非塩基性反応条件を保つことが最も重要である。
【００３５】
その場で生成した可溶性のシリル化誘導体は酸クロリド塩酸塩（化合物ＩＩ）で処理し、好ましくは当量、最も好ましくはやや過剰の化合物ＩＩである酸クロリド塩酸塩で処理し、つづいて化合物ＩＩに対して当量の塩基、好ましくは当量より少ない塩基で処理して所望の抗生物質を含んだ混合物を得る。好ましくは、酸クロリド塩酸塩（化合物ＩＩ）と塩基を少量づつゆっくり加える。もっとも、温度や塩基のない反応条件がうまく調節出来る場合は反応試薬を一度に加えてもよいが、反応を十分に完結させるためには反応試薬を２部分又は３部分に分けて加える方が得策である。
【００３６】
可溶性のシリル化された誘導体のＮ−アシル化反応の完結が、本分野で利用できる周知の検出方法、例えば薄層クロマトグラフ法、高速液体クロマトグラフ法、光学スペクトル法などによって確認されれば次に、もし所望ならば、存在する固体を溶解するに十分な水を反応混合物に加えて有機層と水層の２層とする。反応混合物に加えるべき水の量は、この工程に使用する不活性な有機溶媒の選択又は量によって定まり、層が分かれるに十分な量でなければならない。層が分かれれば分離するのが容易になり、有機層は捨て、所望の抗生物質を多く含んだ水層を得る。
【００３７】
それから溶液は十分な量の塩酸で処理し、随意に水易溶性の有機溶媒を加えて好ましい結晶性のセフエピム２塩酸塩水和物を結晶させる。最も好ましくは、無水条件でのアシル化反応より得られた、生成物を多く含んだ水溶液を、十分な量の塩酸で処理し、アセトンのような水易溶性の有機溶媒を加えることにより、該抗生物質、セフエピム２塩酸塩水和物の結晶化を確実にする。加える水易溶性の有機溶媒の量は、該抗生物質の結晶化を完全にするのに十分な量でなければならないし、又、好適には水層の２倍から９倍の量を加えることにより温度に安定な結晶性のセフエピム２塩酸塩１水和物が、又は２水和物が得られ、これらのものは全くアンチ異性体及びΔ２異性体を含まない。
【００３８】
セフェピム２塩酸塩１水和物のみを得たい場合は、無水アシル化反応より得られた生成物を多く含む水溶液を十分な量の塩酸で処理し、本明細書中で述べた水易容性有機溶媒の適宜な量で希釈して、所望の１水和物の結晶化を確実にする。これとは別に、安定型セフェピム２塩酸塩２水和物を所望する場合は、生成物を多く含む水溶液に、より多くの、当量の濃度の塩酸と、水易容性有機溶媒を加えて、溶液が濁る程度に結晶化させ、それから更に有機溶媒を加えて結晶化を完結させるとよい。しかし、生成物を多く含む水溶液より単離するときには、結晶性セフェピム２塩酸塩２水和物にその１水和物が混入した混合物が得られる場合があるが、この場合には、明細書に記載した再結晶によって、それらの水和物の混合物から所望の１つの水和物を得ることが出来る。
【００３９】
これとは別に、アンチ異性体及びΔ２異性体を全く含まない、広い抗菌スペクトルをもつ抗生物質、セフエピム２塩酸塩２水和物は、化合物Ｉの水−有機溶媒中で、シン異性体の酸クロリド塩酸塩（化合物ＩＩ）でのＮ−アシル化により、実施例３記載のように合成することが出来る。
【００４０】
水性アシル化工程で使用出来るであろう適宜な溶媒は、水とメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジオキサン、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミドなどのような水易溶性有機溶媒であり、好ましくは、水性アセトンである。この工程のｐＨは、適宜な無機塩基、又は有機塩基、好適にはアンモニウムヒドロキシド、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン又はそのようなもので滴定することにより調節される。
【００４１】
アシル化反応は有利にはｐＨ５〜７．５、好ましくは６．２〜６．８で行われる。この工程は−５０℃〜室温で、好ましくは−１０℃〜−４０℃で進めることができよう。アシル化反応が終了したのち、反応混合物は適宜な酸、好ましくは十分な量の塩酸で酸性にし、アセトンのような水易溶性有機溶媒を加えて該抗生物質、セフエピム２塩酸塩水和物の結晶化を確実にする。加える水易溶性有機溶媒の量は、該抗生物質の結晶化を完全に行わせるに十分なものでなければならないし、好ましくは水−有機溶媒の反応混合物の水の量の２倍〜９倍を加えることにより、アンチ異性体及びΔ２異性体を全く含まない温度に安定な結晶性セフエピム２塩酸塩１水和物又は２水和物が得られる。
【００４２】
本アシル化工程によって合成された結晶セフエピム２塩酸塩１水和物は、溶媒と塩酸の濃度、及び本明細書で述べた懸濁（結晶の出はじめ）の保持時間を調節しながら行う再結晶によって得られる安定型結晶性セフエピム２塩酸塩２水和物の製造に使用することが出来るであろう。これとは別に本発明による結晶性セフエピム２塩酸塩２水和物は、本明細書に記載されているように無水又は水性条件下のアシル化によって製造することが出来るであろう。
【００４３】
セフエピムの有用性は油木らによって米国特許第４，４０６，８９９号に示されている。本工程又は１水和物の再結晶による変換によって製造される安定型セフエピム２塩酸塩２水和物は、米国特許第４，４０６，８９９号に示されているセフエピムの抗生物質活性を示し、又その有用性も示している。
【００４４】
本発明者が結晶性の安定型セフエピム２塩酸塩２水和物とＬ（＋）アルギニンより実施例８、方法Ａ記載の典型的な製造方法により物理的混合物を製造したとき、この混合体は、温度が４０℃〜５０℃になった場合固体状態での安定性がよくないことが分かった。表７の結果から理解出来るように、４０℃及び５０℃で３ケ月後には混合物はそれぞれ１０．４％及び３６．３％のセフエピムの活性を失った。該活性は、μ−ホンダパックＣ−１８カラムを用い、移動相５〜７％アセトニトリル及び０．０１５Ｍペンタンスルホン酸ナトリウム塩、ｐＨ４、流速２ｍｌ／分の逆相ＨＰＬＣ法で測定した。
【００４５】
しかし、本発明者らは、安定型セフエピム２塩酸塩２水和物とＬ（＋）アルギニンの物理的混合物を、実施例８に記載したように、熱及び減圧源として凍結乾燥器を使用することを含む種々の条件下で減圧乾燥したものは、表７の物理的混合物が５０℃で２週間後９．１％の活性が失われるものと比較して、著しく固体安定性が改善されていることを見出した。このことにより本発明者らは、結晶性の安定型セフエピム２塩酸塩２水和物とＬ（＋）アルギニンの物理的混合物を調製し、そしてそれらのバイアルを凍結乾燥器中４０℃で３日間減圧乾燥した。表９に於ける長期間の安定性データより理解出来るように、該物理的混合物は４０℃及び５０℃の温度での固体状態の安定性を示し、本発明の物理的混合物より余分な水分を除く必要があることが確認された。
【００４６】
【表８】
0003868008.tif 000009
【００４７】
【表９】
0003868008.tif 000010
【００４８】
【表１０】
0003868008.tif 000011
【００４９】
更に、無水のＬ（＋）アルギニンは極端に吸湿性（強力な乾燥剤）であり、２モルの水をとり込み、結晶となり、高湿度中でも結晶を保つことが出来ることを当業者は理解すべきである。一言付け加えると、この２分子の水は全く不安定で、容易に除去されるものであり、例えば減圧下２４℃〜４０℃で除去される。
【００５０】
結晶性安定型セフエピム２塩酸塩２水和物（セフエピムの活性として５００ｍｇ）とＬ（＋）アルギニン２水和物（Ｌ（＋）アルギニンとして６９０ｍｇ）の物理的混合物は、実施例８の方法Ａ記載の一般法によって調製し、最初の含水度は９．２１％ＫＦであった。この混合物をバイアルに充填し、異なった温度で貯蔵した。２週間の貯蔵後混合物は、本明細書に記載したＨＰＬＣ法によって分析すると活性成分であるセフエピムは広範囲に亘って分解していることが分かった。例えば４０℃及び５０℃で２週間貯蔵した後ＨＰＬＣで分析すると、セフエピムの残存はそれぞれ８７．６％、２２．９％であった。しかし、同じロットの３バイアルを２４℃で６時間減圧乾燥し、つづいて高真空ポンプに連結したデシケータを用いて４０℃で４８時間乾燥した場合は、含水％３．８％ＫＦであった減圧乾燥混合物の、５０℃にて２週間貯蔵した後のセフエピムの残存率（ＨＰＬＣで測定）は、９９．６％であった。上記の実験の結果を追加として示し、本発明による減圧乾燥した物理的混合物の固体状態での安定性を確認する。
【００５１】
本明細書に記述された安定型結晶性セフエピム２塩酸塩２水和物は滅菌水で稀釈し、ｐＨが３．５−７になるように緩衝し、両性イオン物質の濃度が１ｍｇ／ｍｌ〜４００ｍｇ／ｍｌの注射濃度になるような注射用組成をもつ製剤にする。適宜な緩衝剤は、例えばオルトリン酸三ナトリウム、重炭酸ソーダ、クエン酸ナトリウム、Ｎ−メチルグルカミン及びＬ（＋）アルギニンである。成人に対する筋肉内又は静脈内投与のためには、総用量として７５０〜６０００ｍｇ／日を分割投与することで通常十分である。
【００５２】
本明細書で記述した安定型結晶セフエピム２塩酸塩２水和物はただ単に滅菌水を加えるだけでは好ましい注射剤にはならない。と言うのは該安定な結晶セフエピム２塩酸塩２水和物は溶解すると非常に低いｐＨの組成（１．８−２．５）となり、投与すると非常に痛いものとなるからである。この欠点を、安定型結晶セフエピム２塩酸塩２水和物を、薬理学的に許容され、通常固体の非毒性の有機塩基又は無機塩基をｐＨが３．５〜７、好ましくは４〜６を保つような割合で混合され、減圧乾燥した混合物を水に溶解すると注射可能な、両性イオン物質１ｍｇ／ｍｌ〜４００ｍｇ／ｍｌの濃度、例えばＨＰＬＣで評価すると両性イオンの活性が２５０ｍｇ／ｍｌになる、そのような物理的な固体混合物にすることによって上記の欠点が克服できることを見出した。
【００５３】
抗生物質の純度がロット毎に異なるので物理的な混合物中の有効成分の含有率が異なることになる。有効成分の含有率は、ｐＨが前述した範囲内になるようにサンプルをあらかじめ滴定することによってある特定のロットについて定められる。
【００５４】
物理的混合物は、安定型結晶セフエピム２塩酸塩２水和物と塩基を、例えば乾燥大気中で標準Ｖ型混合装置を用いて均一に混合することによって調製される。混合物はバイアル又は他の容器に充填される前に減圧乾燥されるか、又は好ましくは混合物はバイアルに充填されてから、実施例８記載のように減圧乾燥される。
【００５５】
混合物に加えられる塩基は、例えばオルトリン酸三ナトリウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、Ｎ−メチルグルカミン及びＬ（＋）アルギニンを包含する。Ｌ（＋）アルギニンは、混合物を注射用製剤に再構築し、動物に注射した際痛みが少ないであろうことから最も好適である。Ｌ（＋）アルギニンは、混合物を両性イオンの活性が２５０ｍｇ／ｍｌ（ＨＰＬＣで検定）になるように水に溶解したとき、ｐＨが３．５〜６になるので便宜に使用される。
【００５６】
本明細書に記載した安定型セフエピム２塩酸塩２水和物抗生物質及び該抗生物質を含有する実質的に減圧乾燥した物理的混合物は、冷却したり密封することなく貯蔵することが出来、そのままで高い活性を保つことが出来る。
【００５７】
【実施例】
〔実施例１〕
シン型２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩
ジクロロメタン（５７０ｍｌ）中のシン２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノ酢酸（８４．７ｇ，４２１ｍｍｏｌ）を窒素気流下ブレンダー中で２０分粉砕する。得られた微粉拡散溶液をジクロロメタン（１００ｍｌ）で稀釈し、窒素気流下１Ｌのブッキ（Ｂｕｃｈｉ）のジャケットのついた反応装置に移した。反応装置は窒素ガスで加圧（５ｐｓｉ）し、混合物は３７５ｒｐｍで攪拌し、−２℃に冷却した。塩酸ガス（１５．３ｇ，４２１ｍｍｏｌ）を反応釜の上部から０．２ｇ／分の速さで導入した。温度は２℃に上昇した。混合物は更に３０分０℃で撹拌し、ブレンダー中で３分粉砕し、−３５℃に冷却し、窒素気流下５分間でよく攪拌されたビルスマイヤー試薬のスラリー中に−３５℃で導入した。ビルスマイヤー試薬のスラリーは、オキザリルクロリド（５６．１ｇ，４３９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（８８０ｍｌ）中のジメチルホルムアミド（３３．８ｇ，４６２ｍｍｏｌ）の溶液中に０℃で滴下し、つづいて−３５℃に冷却することによって調製した。導入の間反応温度は−２８℃に上昇した。導入が終わった後、反応混合物に生成物の種を加えた。−２８℃〜−３５℃で２．５時間の後反応混合物を濾過し、濾過ケーキはジクロロメタン（３５０ｍｌ）で窒素気流下で洗った。窒素ガスを３０分間ケーキに通し、それから固体を減圧下、室温で１２時間乾燥した。標記の化合物が黄白色の粉末として得られた。（９５．２ｇ，８９％，収率未補正）。
【００５８】
0003868008.tif 000012
【００５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）  δ：４．０６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ３）、７．１２（ｓ，１Ｈ，Ｃ−５Ｈ）。
【００６０】
酸の塩酸塩（約４％）に起因するシグナルが７．１８（ｓ，Ｃ−５Ｈ）及びアンチ異性体（約２％）に起因するシグナルが７．８０（ｓ，Ｃ−５Ｈ）に観察された。アセトニトリル中ジエチルアミンで誘導体化し、ＨＰＬＣで分析すると、標記化合物（ジエチルアミンの誘導体として）保持時間（Ｒｔ）９．６分、出発物質の酸：Ｒｔ２．８分、アンチ異性体（ジエチルアミンの誘導体として）：Ｒｔ１６．４分であった。シン異性体：出発物質の酸：アンチ異性体の比は９０：４：２であった。
【００６１】
〔実施例２〕
７−〔２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−（Ｚ）−メトキシイミノアセトアミド〕−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレート２塩酸塩水和物の製造
アセトン（１２０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の冷却（−２２℃）した溶液に、７−アミノ−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレート塩酸塩（１４．６７ｇ，活性成分として；０．０３４５ｍｏｌ）とシン−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（９．９３ｇ，活性成分として；０．０３８８ｍｏｌ）を同時に又固体は固体のまま２５分で加えた。トリエチルアミンを充填し、ｐＨの終末点を６．５にセットしたラジオメータＡＢＵ８０自動滴定装置を用いて反応のｐＨを５．０〜７．０に保ち、又、反応温度は−２０℃〜−３０℃に保った。試薬の滴下が終わった所で得られた不透明なスラリーを０〜５℃に温め、固体が溶解するまで攪拌した。溶解した時点では高速液体クロマトグラフはアシル化反応が完了していることを示した。反応混合物は濾過して不溶物を除き、等量に２分した。
【００６２】
方法Ａ：
上記の濾液の１部を１２Ｎ塩酸（８．８ｍｌ；０．１０６ｍｏｌ）で酸性にし、アセトン（１１４ｍｌ）で溶液が濁るまで稀釈した。濾液に安定なセフエピム２塩酸塩２水和物の結晶（０．５ｇ）を種として加え、スラリーを４０℃にて３時間温めた。混合物は０〜５℃に１時間冷却し、濾過した。生成物はアセトンで洗い、室温で減圧乾燥した。表題の化合物の塩酸塩は結晶し、純度は９３．３％（７．３４ｇ；６７．３％化学量論的収量）であった。カールフィッシャー法による含水は４．１％であり、ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ、拡散反射）による分析は、３５７４ｃｍ−１及び３４３２ｃｍ−１に吸収が認められることより該生成物が１水和物（粒状様結晶）と２水和物（針状様結晶）の混合物であることを示唆した。
【００６３】
方法Ｂ：
第２番目の濾液分を１２Ｎ塩酸（８．８ｍｌ；０．１０６ｍｌ）で酸性にし、アセトン（２０６ｍｌ）で１時間かけて稀釈した。スラリーは結晶が観察されるまで放置し、それから１時間０〜５℃に冷却した。スラリーは濾過し、生成物はアセトンで洗い、４５℃で減圧乾燥した。表題化合物の２塩酸塩は９５．３％の純度で結晶（８．６ｇ；８５．３％化学量論的収量）した。カールフィッシャー法による水分は４．６％であり、ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ）は０．４％以下の２水和物を含有する１水和物であることを示唆した。
【００６４】
〔実施例３〕
７−〔２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−（Ｚ）−メトキシイミノアセトアミド〕−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレート２塩酸塩２水和物の製造
アセトン（１２０ｍｌ）と水（４０ｍｌ）の冷却（−２２℃）した溶液に、７−アミノ−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレートヨウ素酸塩（１４．６１ｇ活姓；０．０３４４ｍｏｌ）及びシン−２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（９．９３ｇ活性；０．０３８８ｍｏｌ）をそれぞれ固体のまま同時に２５分で加えた。反応のｐＨは、トリエチルアミンを充填し、ｐＨを６．５に設定したラジオメータＡＢＵ８０自動滴定装置を用いて５．０〜７．５を維持し、温度は−２０℃〜−３０℃を維持した。添加が終了した時点で得られた不透明なスラリーを０℃〜５℃に温め、固体が溶解するまで攪拌した。固体が溶解した時点ではＨＰＬＣはアシル化反応が完了していることを示唆した。反応混合物を濾過し、濾液は等量に２分した。
【００６５】
方法Ａ：
上記の濾液の１部を１２Ｎ塩酸（１１．７ｍｌ；０．１４０４ｍｏｌ）で酸性にし、アセトンを攪拌しながら濾液が濁るまで加えた。濾液に、安定型セフエピム２塩酸塩２水和物結晶（０．３ｇ）を種として加え、スラリーを１時間５０℃に温めた。混合物を室温にまで冷却し、アセトンで稀釈し、１５時間攪拌した。スラリーは再び４０℃１時間温め、アセトンで稀釈した。合計２８０ｍｌのアセトンを結晶化に使用した。混合物をゆっくり０〜５℃に１時間かけて冷却し、スラリーを濾過し、アセトン（１２５ｍｌ）で洗い、生成物は４５℃で減圧乾燥した。表題化合物、セフエピム２塩酸塩２水和物は純度９７．８％（８．１９ｇ；８０．９％化学量論的収量）で単離した。カールフィッシャー法による水分は６．５％であり、ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ）は３５７４ｃｍ−１及び３４３２ｃｍ−１に吸収を示し、該生成物が２水和物（針状様結晶）であることを確認した。
【００６６】
方法Ｂ：
第２の濾液部を１２Ｎ塩酸（１４．６ｍｌ；０．１７５２ｍｏｌ）で酸性にし、攪拌しながら濾液が濁るまでアセトンを加えた。濾液に安定型セフエピム２塩酸塩２水和物結晶（０．３ｇ）を種として加え、該スラリーを１．５時間室温で攪拌した。混合物はアセトンで更に稀釈し、室温で１５時間攬拌し、４０℃で１時間加熱した。アセトンを更に加えて混合物を稀釈し、合計２３１ｍｌのアセトンを使用した。０〜５℃に１時間徐々に冷却したのち生成物は濾過して集め、１２５ｍｌのアセトンで洗い、４５℃で減圧乾燥した。表題の化合物セフエピム２塩酸塩２水和物は純度９６．３％（８．６８ｇ；８５．７％化学量論的収量）で単離した。カールフィッシャー分析による水分は６．７％であり、ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ，拡散反射）分析は３５７４ｃｍ−１及び３４３２ｃｍ−１に吸収を示し、この生成物が２水和物（針状様結晶）であることを確認した。
【００６７】
〔実施例４〕
７−アミノ−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレートＨＩ塩の、２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（シン−異性体）を使用した無水条件でのアシル化
窒素雰囲気下、５００ｍｌアセトニトリル中の７−アミノ−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレートＨＩ塩（５０ｇ，０．１１７６ｍｏｌ）を−２０℃に冷却した。トリメチルクロロシラン（３９ｍｌ，２．５当量）及びトリエチルアミル（３８ｍｌ，２．３当量）を温度を−１０℃以下に保ちながら加えた。−１０℃で該シリル混合物を１．５時間攪拌したのち、２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（実施例１より得られたシン−異性体）を２回に分けて（それぞれ１５ｇ，０．５０当量）加えた。別にトリエチルアミン８ｍｌ（０．５当量）と２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（シン−異性体）７．５ｇ（０．２５当量）を加えた。スラリーを−１０℃で１５分撹拌し、それから１５０ｍｌの水を加え、すべての固体が溶解するまで室温で撹拌した。アセトニトリル層を、生成物を多く含む水層より分離し、アセトニトリル４００ｍｌ中の６Ｎ  ＨＣｌ（２．５当量）を該水層に加えた。溶液に種を加え、１５分間結晶を生成させた。更にアセトン１０００ｍｌを加え結晶の生成を完結させた。スラリーを１時間攪拌し、濾過し、４００ｍｌのアセトンで洗い、４０℃で乾燥した。セフエピムの収量５６．５１ｇ（８４．１％化学量論的収量）、純度９８．６％（セフエピム２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏとして、ＨＰＬＣ）。このものはカプランらによる米国特許第４，９１０，３０１号（１９９０年３月２０日出版）中記載のセフエピム・２ＨＣｌ・２Ｈ２Ｏと同じであった。
【００６８】
〔実施例５〕
７−〔２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−（Ｚ）−メトキシイミノアセトアミド〕−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレート２塩酸塩２水和物の製造
不活性ガス気流下室温で、７−アミノ−３−〔（１−メチル−１−ピロリジニオ）メチル〕セフ−３−エム−４−カルボキシレートヨウ素酸塩（１４．６７ｇ；０．０３４５モル）をジクロロメタン（１５０ｍｌ）中に懸濁した。トリメチルクロロシラン（４．７ｍｌ）及びヘキサメチルジシラザン（７．７ｍｌ）をスラリーに加え、混合物を２５〜３０℃に１．５時間温めた。反応物を−５０℃に冷却し、シン２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩（７．２４ｇ；０．０２８３ｍｌ）を３部に分けて３５分で加え、温度は徐々に上昇し、−３０℃になった。トリエチルアミン（１．４７ｍｌ）及びシン２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキシイミノアセチルクロリド塩酸塩１．７８ｇ（０．００６９ｍｏｌ）を加え、アシル化反応を−２０℃〜−２５℃で約１時間行った。反応が終了した時点（ＨＰＬＣで判定）で、混合物は−５℃に温め、水５６ｍｌ、ジメチルアセトアミド１０ｍｌを加えた。反応スラリーは２５℃で固体が溶解するまで攪拌した。相を分離し、水層を濾過した。水層は活性炭（３ｇ）で脱色し、濾過し、そして濾液は２部分に分けた。
【００６９】
方法Ａ：
生成物を多く含む水層の１部を１２Ｎ塩酸（１１．７ｍｌ；０．１４ｍｏｌ）で酸性にした。スラリーは安定型セフエピム２塩酸塩水和物（０．５ｇ）を種として加え、スラリーを４０℃１時間加温し、それから室温にて１夜保った。混合物は更にアセトン（１２６ｍｌ）で稀釈し、室温で０．５時間撹拌し、それから０〜５℃で１時間冷却した。生成物は濾過して集め、アセトンで洗い、４５℃で減圧乾燥した。表題化合物の２塩酸塩２水和物（針状様結晶）を純度９６．３％（９．１１ｇ；８７．６％化学量論的収量）として得た。カールフィッシャー分析による水分は６．３％であり、ＦＴ−ＩＲ（ＫＢｒ，拡散反射）分析では３５７４ｃｍ−１及び３４３２ｃｍ−１に吸収を示した。
【００７０】
方法Ｂ：
第２の生成物リッチな水性濾液を６Ｎ塩酸（１５ｍｌ；０．０９ｍｏｌ）で酸性にし、アセトン（２８０ｍｌ）を２０分に亘って加え、０〜５℃で１時間冷却した。スラリーは濾過し、アセトンで洗い、４５℃で減圧乾燥した。表題化合物の２塩酸塩１水和物（顆粒状様結晶）が純度９５．５％（８．３８ｇ，８３．１％化学量論的収量）で得られた。カールフィッシャー分析による水分は３．９％であった。
【００７１】
〔実施例６〕
安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の製造
安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の結晶は典型的には、セフエピム２塩酸塩１水和物を塩酸２〜４モル当量を含む水で１００ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し、結晶性セフエピム２塩酸塩２水和物を生成させることにより製造した。５〜１０倍量のアセトン（約２４℃）を０．５〜１時間で攪拌しながら加えた。更に１〜２時間撹拌を続けた後結晶を濾過して集め、アセトンで洗い、４０℃〜５０℃で２４〜４８時間減圧乾燥した。種々の分析（例えばカールフィッシャーによる水分の定量、顕微鏡、ＮＭＲ，ＦＴ−ＩＲ，ＤＳＣ，ＴＧＡ，粉末Ｘ線回折）は本生成物が安定型セフエピム２塩酸塩２水和物であることを立証し、このものは本明細書中に記載されている方法によって製造した安定型セフエピム２塩酸塩２水和物と同じであった。
【００７２】
〔実施例７〕
セフエピム２塩酸塩１水和物より安定型セフエピム２塩酸塩２水和物への転換
セフエピム２塩酸塩１水和物（３００ｇ，純度９９．９％ＨＰＬＣ，ＫＦ３．８％）を脱イオン水（１２００ｍｌ）に溶解した。６Ｎ塩酸（１３２ｍｌ，１．５当量）を加えた。溶液を濾過し残渣を脱イオン水（３００ｍｌ）で洗った。
アセトン（１５００ｍｌ）を濾液に加えた。更にアセトン（４０００ｍｌ）を２０分かけて滴下した。溶液は重い２水和物の結晶（顕微鏡観察で針状；所望ならば懸濁時点で結晶種を入れる）が形成されるまで懸濁を保った。更にアセトン（８０００ｍｌ）を２５分に亘って加えた。濃いスラリーを２５℃で１時間撹拌した。
結晶形は基準試料の結晶と顕微鏡下比較して安定型２水和物（針状結晶）であることを確認した。スラリーは濾過しアセトン（２×１５００ｍｌ）で洗った。ケーキは４０℃で１５時間減圧乾燥した。結晶性安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の収量は３０５．１０ｇ（９８．６％）、純度９９．０％（ＨＰＬＣ）、ＫＦ６．５％であった。
【００７３】
〔実施例８〕
安定型セフエピム２塩酸塩２水和物／Ｌ（＋）アルギニン付加物の製造
安定型セフエピム２塩酸塩２水和物１５０ｇ、Ｌ（＋）アルギニン８６．２５ｇを秤り、Ｖ型混合器に入れた。混合物は３２分間ブレンドした。混合物を４０メッシュ米国標準篩に通し、もとの混合器に戻し、更に３２分ブレンドした。
【００７４】
方法Ａ：
ブレンドした混合物を１５ｃｃのＴｙｐｅ  Ｉフリントガラス製バイアルに充填（バイアル毎０．９６６ｇの混合物，これはバイアル毎０．５ｇのセフエピムの活性に対応する）した。バイアルはＷｅｓｔ１８１６ストッパーで栓をし、シールして種々の安定性検定条件で貯蔵した。本操作中の相対湿度は３５％以下であった。
【００７５】
方法Ｂ：
ブレンドは１５ｃｃＴｙｐｅ  Ｉフリントガラス製バイアルに充填した。バイアルは表８及び表９に記載した方法の１つで減圧乾燥した。例えばデシケータを用いて又は用いないで２４℃〜５０℃で１〜３日減圧乾燥、凍結乾燥で２５℃〜５０℃で１〜３日減圧乾燥、凍結乾燥装置で−４０℃で３時間凍結減圧乾燥、２５℃で４日間乾燥などである。バイアルはＷｅｓｔ１８１６ストッパーで栓をし、シールしそして色々な安定性検定の条件下に貯蔵した。典型的な混合物製造工程中の相対湿度は一般的には３５％以下であった。
【００７６】
方法Ｃ：
ブレンドは表８及び表９中などのように本明細書中に記載されている方法の１つであるトレイ上で減圧乾燥する。例えばデシケータを使用するか又はしないで２４℃〜５０℃で１〜３日減圧乾燥、凍結乾燥装置中で２５℃〜５０℃で１〜３日減圧乾燥、凍結乾燥装置で−４０℃で３時間凍結減圧乾燥、２５℃で４日間乾燥などである。ブレンドは１５ｃｃＴｙｐｅ  Ｉフリントガラス製バイアルに充填（バイアルにつき０．９９６ｇ充填、これはバイアルにつきセフエピム活性０．５ｇに相当する）する。バイアルはウエスト１８１６ストッパーで栓をし、密閉し、種々の安定性検定条件下で貯蔵した。典型的な製造工程中の相対湿度は通常３５％以下であった。
【図面の簡単な説明】
【図１】温度及び湿度安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図２】湿度不安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の粉末Ｘ線回折パターンを示す。
【図３】温度及び湿度安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ，拡散反射）を示す。
【図４】湿度不安定型セフエピム２塩酸塩２水和物の赤外線吸収スペクトル（ＦＴ−ＩＲ，拡散反射）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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