(57)【要約】【課題】本発明の課題は、関節リウマチを処置および／または予防するための医薬を提供することである。【解決手段】ＰＰＡＲγ発現誘導剤および式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物の組合せを含む、対象の関節リウマチの予防および／または処置剤、関節リウマチの予防および／または処置剤の製造における当該組合せの使用、および、当該予防および／または処置剤を投与することを含む関節リウマチの処置および／または予防方法を提供する。【選択図】図１
2016060721.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ａ）少なくとも１種のＰＰＡＲγ発現誘導剤、および、
Ｂ）少なくとも１種の式（Ｉ）
【化１】
2016060721.tif 000010
（式中、ｍ１およびｍ２は、０、１、２または３の整数を表す）
または、式（ＩＩ）
【化２】
2016060721.tif 000011
（式中、ｎ１、ｎ２およびｍ３は、０、１、２または３の整数を表す）
の化合物またはその医薬的に許容し得る塩もしくは溶媒和物
の組合せを含む、対象の関節リウマチの予防および／または処置剤であって、
該組合せが、成分Ａ）およびＢ）を含む医薬組成物、または、成分Ａ）およびＢ）を相互に分離して含む組合せパックである、関節リウマチの予防および／または処置剤。
【請求項２】
ＰＰＡＲγ発現誘導剤がステロイド系抗炎症薬である、請求項１に記載の医薬。
【請求項３】
ＰＰＡＲγ発現誘導剤がデキサメタゾンである、請求項１または請求項２に記載の医薬。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物がマグノロールである、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の医薬。
【請求項５】
式（ＩＩ）の化合物がアルテピリン−Ｃである、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の医薬。
【請求項６】
該組合せが成分Ａ）およびＢ）を含む医薬組成物である、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の医薬。
【請求項７】
該組合せが成分Ａ）およびＢ）を相互に分離して含む組合せパックである、請求項１ないし請求項５のいずれかに記載の医薬。
【請求項８】
該組合せパックが、成分Ａ）およびＢ）を同時に、連続的に、または、異なる時点で投与するものである、請求項７に記載の医薬。
【請求項９】
対象が関節リウマチに罹患している、請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１０】
対象が関節リウマチの寛解期にある、請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
対象が関節リウマチを発症していない、請求項１ないし請求項８のいずれかに記載の医薬。
【請求項１２】
対象が抗ＣＣＰ抗体を発現している、請求項１ないし請求項１１のいずれかに記載の医薬。
【請求項１３】
さらなる有効成分と併用される、請求項１ないし請求項１２のいずれかに記載の医薬。
【請求項１４】
さらなる有効成分が、抗リウマチ薬、生物学的製剤、ステロイド系抗炎症薬または非ステロイド系抗炎症薬である、請求項１３に記載の医薬。
【請求項１５】
さらなる有効成分がメトトレキサートである、請求項１３または請求項１４に記載の医薬。
【請求項１６】
対象の関節リウマチの処置および／または予防剤を製造するための、
Ａ）少なくとも１種のＰＰＡＲγ発現誘導剤、および、
Ｂ）少なくとも１種の式（Ｉ）
【化３】
2016060721.tif 000012
（式中、ｍ１およびｍ２は、０、１、２または３の整数を表す）
または、式（ＩＩ）
【化４】
2016060721.tif 000013
（式中、ｎ１、ｎ２およびｍ３は、０、１、２または３の整数を表す）
の化合物またはその医薬的に許容し得る塩もしくは溶媒和物
の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、関節リウマチの処置および／または予防用の化合物の組合せ、当該組合せを含む関節リウマチの処置および／または予防剤、当該組合せを使用することを含む関節リウマチの処置および／または予防用医薬の製造方法、関節リウマチの処置および／または予防用医薬の製造における当該組合せの使用、および、当該組合せを投与することを含む関節リウマチの処置および／または予防方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
関節リウマチは、滑膜細胞の異常増殖に伴って関節破壊を生じる慢性的な病態である。関節の骨の先端は弾力性のある軟骨であり、向かい合う軟骨の間には隙間があって関節液で満たされ、関節全体は関節包で覆われ、その内側滑膜があり、関節液を分泌している。この滑膜に炎症が起こると、滑膜が増殖して軟骨や骨を浸食し破壊する。関節リウマチは自己免疫疾患の１つであり、増殖した滑膜組織は炎症性サイトカインや各種のプロテアーゼ（細胞外マトリックスメタロプロテアーゼ：ＭＭＰ）を分泌し、これが軟骨の破壊に深く関与していることが知られている。
【０００３】
関節リウマチの第１選択薬として、メトトレキサートが世界中で用いられているが、重篤な副作用として骨髄抑制および間質性肺炎が知られており、７５歳以上の高齢者への投与は推奨されていない。メトトレキサートなどの抗リウマチ薬の他に、ステロイド系抗炎症薬、非ステロイド系抗炎症薬、抗ＴＮＦ−α抗体や抗ＩＬ−６受容体抗体等の生物学的製剤が関節リウマチの処置に使用されている。
【０００４】
核ホルモン受容体であるペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）は、様々な生物学的過程の調節に関与することが示唆されてきた。本願発明者は、以前に、関節リウマチの患者から単離した線維芽滑膜細胞（ＦＬＳ）で発現されるＰＰＡＲγの機能的重要性を調べた（非特許文献１−３）。ＦＬＳを合成ＰＰＡＲγリガンドであるトログリタゾンと共にインキュベートすると、細胞のアポトーシスは誘導されずに、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＩＬ−８並びにマトリックスメタルプロテアーゼ−３（ＭＭＰ−３）の産生が阻害された。また、トログリタゾンにより、ＦＬＳ培養培地のゼラチナーゼ（ＭＭＰ−２）活性も阻害された。トログリタゾンで処理したＦＬＳでは、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１βに応答するＮＦ−κＢのＤＮＡ結合活性の有意な低下が見られた。さらに、ＦＬＳをトログリタゾンと長期にわたり培養すると、顕著な脂肪蓄積を伴う細胞の形態変化をもたらした。これらの結果は、ＰＰＡＲγが、炎症性サイトカインおよびＭＭＰ産生に対する負の調節機能を有し、リウマチ性の滑膜細胞におけるサイトカイン介在性炎症反応を阻害することを示す。これらの結果は、また、ＦＬＳが、ＰＰＡＲγを含む適切な刺激シグナルの存在下で、脂肪細胞様の細胞に分化し得ることも示唆した。
【０００５】
従って、ＰＰＡＲγアゴニストを関節リウマチの処置に用いることが検討された。しかしながら、トログリタゾンには肝毒性が、ピオグリタゾンには発癌性が疑われるなど、現在利用可能なＰＰＡＲγアゴニストには欠点が指摘されており、長期にわたって投与する必要がある関節リウマチの処置には不適当であり、また、予防的に使用することも推奨されない。
【０００６】
ブラジル産プロポリスの成分の１つであるアルテピリン−Ｃは、ＰＰＡＲγアゴニストであり、前駆脂肪細胞を脂肪細胞に分化させる作用を有するが、その活性は低いことが知られている（特許文献１）。また、アルテピリン−Ｃは、インビトロでＭＴ１−ＭＭＰ、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−７を阻害することが報告されたが、そのＩＣ５０は非常に高い（特許文献２）。コウボク（朴葉）抽出物に含まれるマグノロールは、脂肪細胞の分化促進作用を有することが報告されている（特許文献３）。しかしながら、アルテピリン−Ｃまたはマグノロールが滑膜細胞または線維芽滑膜細胞を脂肪細胞に分化させることは知られていない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００７】
【特許文献１】特開２０１２−７２１３６
【特許文献２】特開２００６−１４３６８５
【特許文献３】特開２０１０−２０２５３６
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】S. Yamasaki et al., Functional changes in rheumatoid fibroblast-like synovial cells through activation of peroxisome proliferator-activated receptor γ-mediated signaling pathway, Clin Exp Immunol 2002; 129: 379-384
【非特許文献２】S. Yamasaki et al., Cytokines regulate fibroblast-like synovial cell differentiation to adipocyte-like cells, Rheumatology, 2004; 43: 448-452
【非特許文献３】A. Okada et al., Adipogenesis of the mesenchymal stromal cells and bone oedema in rheumatoid arthritis, Clinical and Experimental Rheumatology, 2012; 30: 332-337
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明の目的は、関節リウマチを処置および／または予防し得る安全性の高い医薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、対象の関節リウマチを処置および／または予防するための、
Ａ）少なくとも１種のＰＰＡＲγ発現誘導剤、および、
Ｂ）少なくとも１種の式（Ｉ）
【化１】
2016060721.tif 000003
（式中、ｍ１およびｍ２は、０、１、２または３の整数を表す）
または、式（ＩＩ）
【化２】
2016060721.tif 000004
（式中、ｎ１、ｎ２およびｍ３は、０、１、２または３の整数を表す）
の化合物またはその医薬的に許容し得る塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ
の組合せ（以下、本発明の組合せと称する）を提供する。
【００１１】
ある態様では、本発明は、
Ａ）少なくとも１種のＰＰＡＲγ発現誘導剤、および、
Ｂ）少なくとも１種の式（Ｉ）
【化３】
2016060721.tif 000005
（式中、ｍ１およびｍ２は、０、１、２または３の整数を表す）
または、式（ＩＩ）
【化４】
2016060721.tif 000006
（式中、ｎ１、ｎ２およびｍ３は、０、１、２または３の整数を表す）
の化合物またはその医薬的に許容し得る塩もしくは溶媒和物
の組合せを含む、対象の関節リウマチの予防および／または処置剤であって、
該組合せが、成分Ａ）およびＢ）を含む医薬組成物、または、成分Ａ）およびＢ）を相互に分離して含む組合せパックである、関節リウマチの予防および／または処置剤を提供する。
【００１２】
さらなる態様において、本発明は、対象の関節リウマチを処置および／または予防するための医薬を製造するための、本発明の組合せの使用を提供する。
【００１３】
さらなる態様において、本発明は、関節リウマチの処置および／または予防方法であって、それを必要とする対象に治療上有効量の本発明の組合せを投与することを含む方法を提供する。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の組合せを用いて滑膜細胞を脂肪細胞に分化させることにより、関節リウマチを処置および／または予防することができる。また、本発明の組合せの成分として食品に含まれる成分を使用する場合、安全性が高い。
【図面の簡単な説明】
【００１５】
【図１】図１は、デキサメサゾン（ＤＸＭ）、ＤＸＭ＋アルテピリン−Ｃ（ＡＲＴ）、または、ＤＸＭ＋マグノロール（ＭＧＮ）で処理したＦＬＳの Oil Red O染色を示す。
【図２】図２は、ＤＸＭ、ＤＸＭ＋ＡＲＴ、または、ＤＸＭ＋ＭＧＮで処理したＦＬＳに含まれる脂質を定量した結果を示す。
【図３】図３は、ＤＸＭ、ＤＸＭ＋ＡＲＴ、または、ＤＸＭ＋ＭＧＮで処理したＦＬＳにおける、ＭＭＰ−２の定量的リアルタイムＰＣＲの結果を示す。
【図４】図４は、様々な濃度のＤＸＭと、ＡＲＴまたはＭＧＮの組合せで処理したＦＬＳの Oil Red O染色を示す。
【図５】図５は、様々な濃度のＤＸＭで処理したＦＬＳを、抗ＰＰＡＲγ抗体でウェスタンブロッティングした結果を示す。
【発明を実施するための形態】
【００１６】
定義
特に具体的な定めのない限り、本明細書で使用される用語は、有機化学、医学、薬学、分子生物学、微生物学等の分野における当業者に一般に理解されるとおりの意味を有する。以下にいくつかの本明細書で使用される用語についての定義を記載するが、これらの定義は、本明細書において、一般的な理解に優先する。
【００１７】
本発明に関して、「組合せ」は、全ての成分を含む医薬組成物、または、相互に分離した成分を含む組合せパックであり得る。組合せパックは、関節リウマチの予防および／または処置に用いられる限り、同時に、連続的に、または、異なる時点で投与され得る。
【００１８】
本発明の組合せは、少なくとも１種の成分Ａ）および少なくとも１種のＢ）を含む。成分Ｂ）は式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物またはその医薬的に許容し得る塩、溶媒和物もしくはプロドラッグであり、本発明の組合せは、成分Ｂ）として、式（Ｉ）および（ＩＩ）の化合物（またはその医薬的に許容し得る塩、溶媒和物もしくはプロドラッグ）を、両方とも含んでもよい。
【００１９】
「ＰＰＡＲγ発現誘導剤」は、本明細書において使用するとき、ＰＰＡＲγの発現を誘導する作用を有する化合物を意味する。本発明で使用し得るＰＰＡＲγ発現誘導剤には、ステロイド系抗炎症薬が含まれる。「ステロイド系抗炎症薬」は、本明細書において使用するとき、ステロイドである抗炎症薬を意味し、糖質コルチコイドまたはその誘導体、例えば、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、フルチカゾン、ヒドロコルチゾンおよびトリアムシノロンなどが含まれる。他のＰＰＡＲγ発現誘導剤には、例えば、タクロリムスが含まれる。本発明のＰＰＡＲγ発現誘導剤は、公知の方法またはそれに準ずる方法によって製造し得るか、または、購入し得る。本発明のある実施態様では、ＰＰＡＲγ発現誘導剤は、例えば、ステロイド系抗炎症薬、特にデキサメタゾンである。
【００２０】
本発明の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、公知の方法またはそれに準ずる方法によって製造し得るか、または、購入し得る。あるいは、本発明の式（Ｉ）または（ＩＩ）の化合物は、植物または動物由来の天然物質から、公知の方法またはそれに準ずる方法により精製し得る。
【００２１】
「アルケニル」は、２個ないし６個の炭素原子、例えば２個ないし４個の炭素原子を有し、少なくとも１個、例えば１個または２個の炭素−炭素二重結合（Ｃ＝Ｃ）を有するヒドロカルビル基を意味する。言及し得る例は、ビニル、アリル、イソプロペニルおよびｎ−ブト−２−エン−１−イルである。
【００２２】
「化合物」は、本明細書において使用するとき、本明細書に記載の式（Ｉ）または式（ＩＩ）に含まれる化合物、または、ＰＰＡＲγ発現誘導剤として使用される化合物、並びに、それらのエステル、プロドラッグ、医薬的に許容し得る塩および溶媒和物を意味する。該用語はさらに、化合物の立体異性体および互変異性体を含む。
【００２３】
本発明の化合物は、置換パターンによっては、像および鏡像をとるか（エナンチオマー）、または、像および鏡像をとらない（ジアステレオマー）立体異性体で存在し得る。エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の両方が含まれる。ジアステレオマーのようなラセミ体は、既知方法で立体異性的に純粋な成分に分離できる。ある種の化合物は、互変異性体でも存在し得る。これは当業者に知られており、そのような化合物は同様に含まれる。
【００２４】
生理的に許容し得る、即ち、医薬的に許容し得る塩は、本発明の化合物の無機または有機酸との塩であり得る。好ましい塩は、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸または硫酸とのもの、または、有機カルボン酸またはスルホン酸、例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、安息香酸またはメタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸またはナフタレンジスルホン酸との塩である。
【００２５】
また、言及し得る医薬的に許容し得る塩は、常套の塩基との塩、例えばアルカリ金属塩（例えばナトリウムまたはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えばカルシウムまたはマグネシウム塩）、または、アンモニアまたは有機アミン（例えば、ジエチルアミン、トリエチルアミン、エチルジイソプロピルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、ジヒドロアビエチルアミンまたはメチルピペリジン）から誘導されるアンモニウム塩である。
【００２６】
「溶媒和物」は、本発明に関して、固体または液体状態で溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明の化合物である。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の一形態である。
【００２７】
「プロドラッグ」は、それら自体は生物学的に活性であっても不活性であってもよいが、対応する生物学的に活性な形態に（例えば代謝的に、加溶媒分解的に、またはその他の方法で）変換され得る本発明の化合物の形態を表す。例えば、プロドラッグは本発明の化合物のエステルである。
【００２８】
本明細書において使用するとき、用語「エステル」は、インビボで加水分解されるエステルを意味し、人体で容易に分解されて親化合物またはその塩を放出するものを含む。好適なエステル基は、例えば、医薬的に許容し得る脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカン二酸に由来するもの（ここで、各アルキルまたはアルケニル基は有利には６個以下の炭素原子を有する）を含む。具体的なエステルの例は、ギ酸エステル、酢酸エステル、プロピオン酸エステル、ブチル酸エステル、アクリル酸エステルおよびエチルコハク酸エステルを含む。
【００２９】
本発明のある実施態様では、ＰＰＡＲγ発現誘導剤は、下記の構造
【化５】
2016060721.tif 000007
を有するデキサメタゾン、またはそのエステル、プロドラッグ、医薬的に許容し得る塩もしくは溶媒和物である。
【００３０】
ある実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、式
【化６】
2016060721.tif 000008
で表されるマグノロールまたはそのエステル、プロドラッグ、医薬的に許容し得る塩もしくは溶媒和物である。
【００３１】
ある実施態様において、式（ＩＩ）の化合物は、式
【化７】
2016060721.tif 000009
で表されるアルテピリン−Ｃまたはそのエステル、プロドラッグ、医薬的に許容し得る塩もしくは溶媒和物である。
【００３２】
マグノロールおよびアルテピリン−Ｃは、食品として消費されている植物または動物由来の成分であり、経口摂取時の安全性が高い。マグノロールおよびアルテピリン−Ｃは、公知の方法またはそれに準ずる方法によって製造し得るか、または、購入し得る。あるいは、マグノロールはコウボクから、アルテピリン−Ｃはプロポリスから、公知の方法またはそれに準ずる方法により精製し得る。
【００３３】
本発明のある実施態様では、本発明の組合せは、デキサメタゾンおよびマグノロールを含む。本発明の別の実施態様では、本発明の組合せは、デキサメタゾンおよびアルテピリン−Ｃを含む。
【００３４】
投与および医薬製剤
本発明の組合せは、対象の関節リウマチの予防および／または処置剤として使用できる。
【００３５】
対象の疾患に関して用いる用語「予防する」または「予防」は、罹患しやすいかまたは疾患の症状を未だ示していない対象における疾患発症の予防を意味する。対象の疾患に関して用いる用語「処置する」または「処置」は、１）疾患の阻止またはその進行の停止；または２）疾患の寛解または退行の発生を意味する。
【００３６】
本明細書で使用するとき、用語「対象」は、動物を表す。典型的には、動物は、哺乳動物である。対象は、また、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚類、鳥類などを含む。ある実施態様では、対象は霊長類である。他の実施態様では、対象はヒトである。また他の実施態様では、対象は愛玩動物、例えばイヌである。
【００３７】
本発明のある実施態様では、対象は関節リウマチに罹患している。即ち、対象は関節リウマチと診断され、治療を必要としている。別の実施態様では、対象は関節リウマチの寛解期にある。即ち、対象は過去に関節リウマチと診断されたが、症状は寛解しており、寛解維持のために処置を必要としている。別の実施態様では、対象は関節リウマチを発症していない。即ち、対象は過去に関節リウマチと診断された経験がない。関節リウマチを発症していない対象は、関節リウマチを発症するリスクがあると診断された対象であってもよい。ある実施態様では、対象は、抗ＣＣＰ抗体の発現により関節リウマチ発症のリスクがあると診断され、予防的処置を必要としているものである。
【００３８】
本発明は、非毒性、不活性の医薬的に適する補助剤および／または担体と共に、１種またはそれ以上の本発明の組合せの成分を、単独で、または、組み合わせて含む医薬製剤、および、これらの製剤の製造方法を含む。医薬製剤は、常套法で、既知方法により、例えば、組合せの成分を担体と混合することにより、製造できる。
【００３９】
上述の医薬製剤は、成分Ａ）およびＢ）を含む医薬組成物であり得る。あるいは、上述の医薬製剤は、成分Ａ）およびＢ）を別々に含む複数の医薬製剤であり、これらを含む組合せパックの形態で提供され得る。また、本発明は、成分Ａ）を含む関節リウマチの予防および／または処置用の医薬製剤であって、成分Ｂ）と共に使用される医薬製剤を提供し得る。あるいは、本発明は、成分Ｂ）を含む関節リウマチの予防および／または処置用の医薬製剤であって、成分Ａ）と共に使用される医薬製剤であり得る。
【００４０】
本発明の組合せは、上述の医薬製剤中に、製剤の総重量の約０.１ないし９９.５、好ましくは約０.５ないし９５％の濃度で存在し得る。
【００４１】
本発明の組合せの成分Ａ）の治療上有効量は、例えば、２４時間につき、約０.００１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.０１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇ、約０.０１ないし１ｍｇ／体重ｋｇである。本発明の組合せの成分Ｂ）が式（Ｉ）の化合物である場合、治療上有効量は、例えば、２４時間につき、約０.００１ないし２０００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.００１ないし１０００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.００１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、または、約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。本発明の組合せの成分Ｂ）が式（ＩＩ）の化合物である場合、治療上有効量は、例えば、２４時間につき、約０.００１ないし２０００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.００１ないし１０００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.００１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、または、約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００４２】
それにも拘わらず、必要に応じて、特に、体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤のタイプおよび投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり得、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。比較的大量に投与する場合、これらを１日に亘る複数の個別用量に分配するのが望ましいことがある。
【００４３】
本発明の組合せは、全身的および／または局所的作用を有し得る。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口で、非経腸で、肺に、鼻腔に、舌下に、舌に、頬側に、直腸に、皮膚に、経皮で、結膜もしくは耳の経路で、またはインプラントもしくはステントとして、投与できる。本発明の組合せの成分を、これらの投与経路に適する投与形で投与できる。
【００４４】
経口投与に適するのは、先行技術に準じて機能し、本発明の組合せの成分を迅速に、かつ／または、改変された方法で送達し、本発明の組合せの成分を結晶形および／または無定形および／または溶解形で含有するものであり、例えば、錠剤（非被覆および被覆錠剤、例えば、胃液耐性であるか、または、不溶であるかもしくは遅延して溶解し、本発明の組合せの成分の放出を制御する被覆を有する錠剤）、口中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、粉末剤、乳剤、懸濁剤、エアゾル剤または液剤である。
【００４５】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、関節内、吸入、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、とりわけ、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤形態の注射および点滴用製剤である。
【００４６】
他の投与経路に適するのは、例えば、吸入用医薬形態（とりわけ、粉末吸入器、噴霧器エアロゾル）、点鼻薬、液、スプレー；舌、舌下または頬側投与用の錠剤、フィルム／オブラートまたはカプセル剤、坐剤、耳および眼用製剤、膣用カプセル剤、水性懸濁剤（ローション、振盪混合物）、親油性懸濁剤、軟膏、クリーム、経皮治療システム（例えば、パッチ）、ミルク、ペースト、フォーム、散布用粉末剤、インプラントまたはステントである。
【００４７】
本発明の組合せの成分を、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、とりわけ、担体（例えば結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の隠蔽剤が含まれる。
【００４８】
本発明の組合せを、さらなる有効成分と組み合わせることも可能である。さらなる有効成分には、例えば、メトトレキサート、スルファサラジン、ブシラミン、タクロリムス、トファシチニブ、イグラチモド、レフルノミド、ミゾリビン、ヒドロキシクロロキン、ミノサイクリン、アザチオプリンおよびシクロスポリンなどの抗リウマチ薬、ＴＮＦα阻害剤（例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、セルトリズマブ）、ＩＬ−１阻害剤（例えば、アナキンラ、リロナセプト、カナキヌマブ）、抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキシマブ）、Ｔ細胞活性化抑制性剤（例えば、アバタセプト）およびＩＬ−６阻害剤（例えば、トシリズマブ）などの生物学的製剤、デキサメタゾン、プレドニゾロン、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、フルチカゾン、ヒドロコルチゾンおよびトリアムシノロンなどのステロイド系抗炎症薬、または、アセチルサリチル酸、イブプロフェン、ロキソプロフェン、ジクロフェナクおよびアセトアミノフェンなどの非ステロイド系抗炎症薬が含まれる。
【００４９】
さらなる有効成分およびその治療上有効量は、通常の臨床医の技術および判断の範囲内で決定され得る。さらなる有効成分は、本発明の組合せの成分と同一の医薬製剤中に存在してもよく、本発明の組合せの成分とは別に提供されてもよい。
【００５０】
本発明に関して、成分を「組み合わせる」または「併用する」ことは、全成分を含有する投薬形の使用および各成分を別個に含有する投薬形の組合せの使用のみならず、それらが関節リウマチの予防および／または処置に使用される限り、各成分を同時もしくは連続的に、または、いずれかの成分を遅延して投与することも意味する。２種またはそれ以上のさらなる有効成分を組み合わせて使用することも可能である。
【実施例】
【００５１】
下記実施例は本発明を説明するが、その範囲を限定するものではない。
【００５２】
実施例１：アルテピリン−Ｃおよびマグノロールによる線維芽滑膜細胞の脂肪細胞への分化誘導
細胞：Articular Engineering より購入した関節リウマチ患者由来滑膜細胞（fibroblast-like synoviocyte：ＦＬＳ）を、１０％のウシ胎児血清および１％ペニシリンストレプトマイシンを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）で培養した。
【００５３】
脂肪細胞分化誘導法：ファルコン社の２４ウェルマルチウェルプレートにＦＬＳを播種し、上記培地による培養を継続した。コンフルエントに至った時点で、デキサメサゾン（ＤＸＭ、１μＭ）、ＤＸＭ（１μＭ）＋アルテピリン−Ｃ（ＡＲＴ、３０μＭ）、または、ＤＸＭ（１μＭ）＋マグノロール（ＭＧＮ、３μＭ）を含む培地による培養を開始した。１週間に２回培養液を交換し、培養を２１日間継続した。インスリン（ＩＮＳ、１０μｇ／ｍＬ）、ＩＮＳ（１０μｇ／ｍＬ）＋ＡＲＴ（３０μＭ）またはＩＮＳ（１０μｇ／ｍＬ）＋ＭＧＮ（３μＭ）を含む培地でも、同様に培養した。ＡＲＴはブラジル産プロポリスから精製した。ＭＧＮはコウボクから精製した。
【００５４】
脂肪細胞分化誘導の確認：コスモ・バイオ社のリピットアッセイキットによる Oil Red O染色を用いて、脂質の蓄積を確認した。キットに付属している Oil Red O の抽出液５００μＬにより脂質を溶出させ、分光高度計で波長５４０ｎｍにおける吸光度を測定することにより、脂質を定量した。また、脂肪酸結合タンパク質（Fatty acid binding protein）の発現によっても脂肪細胞への分化を確認した。
【００５５】
結果：図１は、各物質で処理したＦＬＳの Oil Red O染色を示す。ＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮを組み合わせた場合にのみ、脂質の蓄積を示す顕著な染色が確認された。図２は、各物質で処理したＦＬＳに含まれる脂質を定量した結果を示す。ＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮを組み合わせた場合にのみ、多量の脂肪が定量された。これらの結果は、ＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮの組合せにより、ＦＬＳの脂肪細胞への分化が誘導されたことを示す。
【００５６】
実施例２：脂肪細胞への分化誘導によるＭＭＰ−２発現の抑制
方法：実施例１のＤＥＸのみで処理したＦＬＳ細胞、および、ＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮの組合せで処理したＦＬＳ細胞を、ＴＮＦα（１００μｇ／ｍＬ）またはＩＬ−１β（１０μｇ／ｍＬ）で刺激し、１２時間培養した。その後、Invitrogen 社の Trizol Reagent により全ＲＮＡを抽出し、４００ｎｇのＲＮＡを用いて、TOYOBO社の RevatraAce qPCR RT kit によりｃＤＮＡを合成した。定量的リアルタイムＰＣＲにより、ＭＭＰ−２の発現を調べた。定量的ＰＣＲには、QIAGEN 社の QuantiFast SG PCR master mix を使用し、バイオ・ラッド社のＣＦＸ９６リアルタイムＰＣＲ解析システムにより解析した。転写産物の比較は、内在コントロールとしてβ−アクチンを用いて、サイクル比較法（ΔΔＣｔ法）により実施した。定量的ＰＣＲのプライマーとして、β−アクチンフォワードプライマー：ＡＧＣＣＴＣＧＣＣＴＴＴＧＣＣＧＡ、β−アクチンリバースプライマー：ＣＴＧＧＴＧＣＣＴＧＧＧＧＣＧ、ＭＭＰ２フォワードプライマー：ＣＡＣＣＣＡＴＴＴＡＣＡＣＣＴＡＣＡＣＣＡＡ、および、ＭＭＰ２リバースプライマー：ＡＧＡＧＣＴＣＣＴＧＡＡＴＧＣＣＣＴＴＧＡを使用した。
【００５７】
結果：図３は、定量的リアルタイムＰＣＲの結果を示す。ＭＭＰ−２は、ゼラチナーゼと呼ばれるマトリックスメタロプロテーゼの１種であり、関節リウマチの病態に関与すると考えられる。ＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮの組合せで処理したＦＬＳ細胞では、ＤＥＸのみで処理したＦＬＳ細胞と比較して、無刺激時のＭＭＰ−２発現が低い。炎症促進性サイトカインであるＴＮＦαまたはＩＬ−１βで細胞を刺激した場合でも、同様の結果であった。これらの結果は、ＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮの組合せが、ＭＭＰ−２の発現を抑制することを示す。
【００５８】
実施例３：デキサメタゾン濃度の決定
方法：実施例１と同様の方法で、１０−９、１０−８、１０−７、１０−６または１０−５ＭのＤＸＭと、ＡＲＴ（３０μＭ）またはＭＧＮ（３μＭ）を組み合わせた培地で、ＦＬＳを培養し、脂肪細胞への分化を調べた。
結果：図４は、各物質で処理したＦＬＳの Oil Red O染色を示す。１０−７Ｍ以上のＤＥＸとＡＲＴまたはＭＧＮを組み合わせた場合に、脂質の蓄積を示す顕著な染色が確認された。これにより、ＦＬＳの脂肪細胞への分化には、少なくとも１０−７Ｍのデキサメサゾンが必要であることが判明した。
【００５９】
実施例４：デキサメタゾンによるＰＰＡＲγの発現誘導
ＡＲＴおよびＭＧＮの作用分子としてＰＰＡＲγが想定されるため、ＦＬＳをデキサメサゾンで処理する事によりＰＰＡＲγの発現が誘導されるか否かを検討した。
方法：実施例１と同様にＦＬＳ細胞を培養し、１０−９、１０−８、１０−７、１０−６または１０−５ＭのＤＸＭを含む培地で２４時間処理した。蛋白サンプルを抽出し、抗ＰＰＡＲγ抗体を用いたウェスタンブロッティングによりＰＰＡＲγの発現の変化を調べた。
結果：図５は、ＤＸＭで処理したＦＬＳを、抗ＰＰＡＲγ抗体でウェスタンブロッティングした結果を示す。この結果は、デキサメサゾンが濃度依存性にＰＰＡＲγの発現を誘導することを示す。
【産業上の利用可能性】
【００６０】
以上の実験結果により、本発明の組合せが、関節リウマチの患者に由来する滑膜細胞を脂肪細胞に分化させ、ＭＭＰ−２の発現を抑制する作用を有することが立証された。従って、本発明の組合せを関節リウマチの処置および／または予防に利用できることが理解される。また、特に、本発明の組合せの成分として、マグノロールまたはアルテピリン−Ｃなどの食品に含まれる成分を使用する場合、長い食経験から確保された安全性があり、長期にわたり投与できる関節リウマチ処置剤としての利用が期待される。
【図２】
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【図３】
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【図１】
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【図４】
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【図５】
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【配列表】
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