(57)【要約】【課題】アルツハイマー症予防又は治療作用を有する医薬品又は飲食品を提供する。【解決手段】ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末を有効成分として含有する、アルツハイマー症予防又は治療剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末を有効成分として含有する、アルツハイマー症予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えばアルツハイマー症予防又は治療作用を有する医薬品又は飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本又は先進諸国での寿命の延伸に伴い、高齢者の増加に伴って脳機能の老化や劣化疾患(例えば、アルツハイマー症)を有する患者が著しく増加している。ヒトとして重要な脳機能の劣化による疾病のため、介護している家族の負担は悲惨である。この疾患に対する根治的治療薬は未だ無く、この介護に関わる家族の負担、社会的経済的負担は極めて大きい。当該疾患を食品摂取で発症を予防又は軽減化できれば社会的に大きな救済となる。
【０００３】
一方、従来において、ビワ葉はビワ茶の飲料に利用されると共に、古くから漢方に配合されて利用されてきた。
【０００４】
特許文献１は、ビワ葉を用いて風味のあるねじめびわ茶を多量に製造する方法及びその製造設備を開示する。当該方法では、トルマリン石焙煎により根占ビワ茶を製造する。
【０００５】
また、ビワ葉の有する機能性が明らかにされつつあり、ビワ葉に含まれるポリフェノールのヒト口腔癌細胞に対する細胞傷害活性(非特許文献１)、ビワ葉に含まれるメガスチグマン配糖体の抗発癌プロモーション作用(非特許文献２)、ビワ葉の抗腫瘍活性(非特許文献３)及び抗酸化作用(非特許文献４)等が報告されている。
【０００６】
特許文献２は、ビワ葉又はねじめびわ茶抽出物若しくは精製物を有効成分として含有し、且つ抗高脂血症作用、高血圧抑制作用、癌細胞増殖抑制作用、癌細胞アポトーシス誘導作用、活性酸素種産生作用及び高血糖降下作用から成る群より選択される1以上の作用を有する飲食品又は医薬品を開示する。
【０００７】
特許文献３は、ねじめびわ茶抽出物の摂食投与による抗腫瘍能と肝機能改善作用を開示する。特許文献３に示される抗腫瘍効果は、少なくとも1/2はねじめびわ茶抽出物中の多糖類及びオリゴ糖に由来するが、その作用の1/2は、疎水性画分を吸着し、50％エタノールで溶出するカラム特性から、ポリフェノール画分に由来すると考えられ、実際この50％エタノール画分には多量のポリフェノール画分が存在する。また、特許文献３に示される肝機能改善効果は、抗酸化能他の研究文献の結果から、ポリフェノール類に由来する可能性が高い。
【０００８】
しかしながら、従来において、ねじめびわ茶等のビワ葉又はビワ茶が、アルツハイマー症等の脳疾患に対して予防又は治療作用を有することは知られていなかった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００９】
【特許文献１】特許第3452351号公報
【特許文献２】特許第4974116号公報
【特許文献３】特開2014-101286号公報
【非特許文献】
【００１０】
【非特許文献１】Ito，H.ら, 「Chem．Pharm．Bull．」，2000年，第48巻, pp.687-693
【非特許文献２】吉田隆志ら, 「Bio Industry」, 2003年, 第20巻, pp.27-33
【非特許文献３】Ito，H.ら， 「J. Agric. Food Chem.」, 2002年, 第50巻, pp.2400-2403
【非特許文献４】Jung, H.ら, 「Arch．Pharm. Res.」, 1999年, 第22巻, pp.213-218
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
上述したように、ビワ葉に含まれる種々の生物学的活性や活性化合物の存在が明らかにされているが、ねじめびわ茶抽出物がアルツハイマー症に代表される痴呆の発症を抑制又は当該痴呆を軽減化することは知られていなかった。食品のこのような機能が確認できれば食品成分であるねじめびわ茶抽出物を、アルツハイマー症を代表とする脳機能の劣化、老化又は痴呆の予防、軽減又は治療に使用できると考えられる。
【００１２】
そこで、本発明は、ねじめびわ茶抽出物からアルツハイマー症に代表される脳機能の老化、劣化又は痴呆を予防又は軽減化する医薬品又は飲食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
上記課題を解決するため鋭意研究を行った結果、ねじめびわ茶熱水抽出物をアルツハイマー症モデルマウスに給餌することで、アルツハイマー症の発症を抑制するか又はアルツハイマー症を軽減化できることを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は、ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末を有効成分として含有する、アルツハイマー症予防又は治療剤に関する。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、アルツハイマー症を予防又は軽減化できる。アルツハイマー症患者は日本で予備軍を含めて800万人に達し、世界的に見れば莫大な数になる。従来の医薬品において、アルツハイマー症の根治薬は報告されていないことから、食品成分であるねじめびわ茶熱水抽出物を用いて、この病気の予防又は軽減化を実現することで、高齢化社会への大きな福音となる。
【図面の簡単な説明】
【００１６】
【図１】図１は、アルツハイマー症の主原因と云われるアミロイドβ(Aβ)タンパク質産生までの過程をまとめたものである。
【図２】図２は、図１に合わせて、アルツハイマー症の2つ目の主症状である神経細胞の死滅の要因である過剰リン酸化タウタンパク質産生の過程と、ねじめびわ茶が関与する機能をまとめたものである。
【図３】図３は、アルツハイマー症モデルマウスのねじめびわ茶長期投与時の脳組織中の不溶化(高分子化)アミロイドβタンパク質を調べた電気泳動の図である。AB-Insolは不溶化アミロイドβタンパク質のバンド、Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図４】図４は、アルツハイマー症モデルマウスのねじめびわ茶長期投与時の脳組織中の不溶化(高分子化)アミロイドβタンパク質量の変動を示す。Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図５】図５は、アルツハイマー症モデルマウスのねじめびわ茶長期投与時のリン酸化タウタンパク質を調べた電気泳動の図である。p-Tauはリン酸化タウタンパク質のバンド、Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図６】図６は、アルツハイマー症モデルマウスのビワ茶長期投与時のリン酸化タウタンパク質量の変動を示す。Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図７】図７は、アルツハイマー症モデルマウスのねじめびわ茶長期投与時の脳内アミロイドタンパク質を調べた電気泳動の図である。P-GSK(ser-9)はリン酸化グリコーゲンシンターゼキナーゼのバンド、GSKはグリコーゲンシンターゼキナーゼのバンド、NEPはネプリライシンのバンド、BACEはβ-Secretaseのバンド、Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図８】図８は、p-GSK(リン酸化グリコーゲンシンターゼキナーゼ)のタンパク質量を測定した結果を示す。Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図９】図９は、GSK(グリコーゲンシンターゼキナーゼ)のタンパク質量を測定した結果を示す。Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図１０】図１０は、NEP(ネプリライシン)のタンパク質量を測定した結果を示す。Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【図１１】図１１は、BACEのタンパク質量を測定した結果を示す。Mは雄マウス、Fは雌マウス、Conは水を与えた対照区、BTはビワ茶を与えたグループである。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００１８】
本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤は、ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末を有効成分として含有するものである。
【００１９】
本発明に係るアルツハイマー症予防若しくは治療剤、又は当該予防若しくは治療剤を含む飲食品若しくは医薬品の経口投与(経口摂取)によれば、アルツハイマー症を代表とする脳機能の疾患の発症が抑制されるか又は当該疾患が軽減され、脳機能の劣化又は老化を改善又は抑制することができる。
【００２０】
１．用語の説明
１−１．アルツハイマー症(アルツハイマー病)
アルツハイマー症(アルツハイマー病)は、一般的には高齢に伴って、脳中枢機能の老化又は劣化により、認知障害(空間認識、知的認識、記憶の障害等)を生じ、進行すると周辺症状(不眠、易怒性、幻覚、妄想等)も現れ、介護上大きな困難を伴う。従って、その介護は家族はもとより、社会的経済的に大きな負担となる。
【００２１】
その病態として、大脳皮質に老人斑(アミロイドβ(Aβ)の沈着)と、神経細胞の中にアルツハイマー型線維状のもつれ(神経原線維変化、neurofibrilliary tangle：NFT；過剰リン酸化されたタウタンパク質より成る)の広範囲の出現が見出されている。
【００２２】
アミロイドβ(Aβ)関連タンパク質産生に関しては、図１に示すように、β-Secretase(BACE)がAβの前駆体(APP)に作用し、C99ペプチドを生じる。次いで、γ-Secretase(Presenilin)がC99ペプチドに作用し、Aβ(Aβ40/42)が生じ、老化色素といわれる色素が形成・沈着し、脳細胞の死滅に繋がる。
【００２３】
また、生じたAβ40/Aβ42ペプチドの分解に関わり、老化色素の減少に貢献するものがNeprilysinと、Insulin degrading enzymeであり、これらもアルツハイマー症の抑制に重要である。
【００２４】
それに対して、図１に示すように、α-Secretase(TACE, ADAM-10-17)が作用すると、Aβの中心部で切断され、害作用のあるペプチドが生産されず、むしろ健康維持に好ましい作用を及ぼすことが知られている。
【００２５】
Aβの産生を抑えるには、α-Secretase（TACE, ADAM-10-17)の活性化、β-Secretase（BACE）の活性抑制、γ-Secretaseの抑制が重要となり、またPresenilin活性の抑制もγ-Secretaseの抑制と同様の効果が得られることになる。
【００２６】
１−２．ねじめびわ茶
ビワ(枇杷、学名：Eriobotrya japonica)はバラ科の常緑高木である。本発明においては、ビワ葉として乾燥葉を使用できる。ねじめびわ茶(商品名)はトルマリン石と共に高温加熱により焙煎したものであり、特許文献１に記載の方法に準じて製造される。ねじめびわ茶(ネジメビワ茶、根占枇杷茶、根占ビワ茶とも標記される)は、鹿児島県農業生産法人有限会社十津川農場から市販されているビワ茶である。
【００２７】
２．ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末の調製
本発明におけるねじめびわ茶熱水抽出物は、ねじめびわ茶を熱水抽出に供して得ることができる。ねじめびわ茶からの熱水抽出を1回又は複数回繰り返すことでねじめびわ茶熱水抽出物を得ることができる。本発明において、ねじめびわ茶熱水抽出物には、当該抽出方法で得られた抽出液又はその希釈液が含まれる。
【００２８】
また、ねじめびわ茶熱水抽出物を、通常の濃縮又は精製手段(減圧濃縮、濾過、遠心分離等)に供することで、ねじめびわ茶熱水抽出物の濃縮物を得ることができる。
【００２９】
さらに、ねじめびわ茶熱水抽出物又はその濃縮物を、通常の乾燥手段(凍結乾燥、熱風乾燥等)に供することで、ねじめびわ茶熱水抽出物の乾燥粉末等の乾燥物を得ることができる。
【００３０】
３．アルツハイマー症予防又は治療剤の製造
以上のように説明したねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末を有効成分として用いることで、本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤を製造することができる。本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤は、飲食品又は医薬品として提供することができる。
【００３１】
ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末の有効量を、錠剤、カプセル、顆粒、ドリンク、ペットボトル等の任意の形態に添加又は封入するか、あるいは任意の食品に添加することで、本発明に係る飲食品を得ることができる。本発明に係る飲食品は、アルツハイマー症予防又は治療作用を有する飲食品、特に、健康補助食品又は特定保健用食品として使用することができる。好ましくは、錠剤、カプセル、顆粒、ドリンク、ペットボトル等の形態の健康補助食品又は特定保健用食品とするのがよい。
【００３２】
飲食品には、例えば、菓子類、レトルト食品、ジュース類、お茶類、乳製品等が含まれるが、これらに限定されない。また、飲食品には、必要に応じて甘味剤、調味料、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤等を添加してもよい。
【００３３】
本発明に係る飲食品に対するねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末の添加量は、摂取する成人体重1kg当たり0.1〜200mgに相当する範囲内の量又は1製品当たり例えば50mg〜1gであるが、この範囲に限定されない。
【００３４】
一方、本発明に係る医薬品には、ねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末以外に、さらに製薬上許容可能な担体(賦形剤若しくは希釈剤）並びに結合剤、増量剤、滑沢剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、緩衝剤、懸濁化剤、保存剤、着色剤、風味剤及び甘味剤等から適宜選択される添加剤を含有させることができる。
【００３５】
本発明に係る医薬品は、例えば経口投与用に製剤化され得る。製剤の形態としては、特に限定されないが、例えば溶液剤、錠剤、粉末剤、顆粒剤、カプセル剤及びドリンク剤等が挙げられる。
【００３６】
本発明に係る医薬品に含まれるねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末の用量は、患者の年齢、体重、性別、状態、重篤度等の要因によって変化しうる。患者に投与されるねじめびわ茶熱水抽出物、又はその濃縮物若しくは乾燥粉末の1日用量は、例えば患者の体重1kg当たり0.1〜200mg、好ましくは1〜100mgの範囲であるが、この範囲に限定されない。必要に応じて、用量を数回、例えば2〜3回に分けて分割投与してもよい。
【００３７】
４．アルツハイマー症予防又は治療剤の薬理評価
本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤は、例えば以下のように薬理評価を行うことができる。
【００３８】
具体的には、ヒトアミロイドβ(Aβ)遺伝子を導入したトランスジェニック(Tg)アルツハイマー症モデルマウス(B6.Cg-Tg(APPswe, PSEN1ΔE9))から、尾組織の一部を得て、ヒトAβタンパク質の発現を確認したマウスを、アルツハイマー症モデルマウスとして使用する。
【００３９】
当該アルツハイマー症モデルマウスに、本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤を給餌し、飼育後に、脳組織中のAβタンパク質を検出する。本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤を給餌していないマウスと比較して、Aβ(特に不溶性Aβ)の産生が有意に抑制されている場合に、本発明に係るアルツハイマー症予防又は治療剤が良好にアルツハイマー症発症の抑制又は減少作用を有すると判断できる。
【実施例】
【００４０】
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれら実施例に限定されるものではない。
【００４１】
以下の実施例で使用するねじめびわ茶は、鹿児島県農業生産法人有限会社十津川農場から市販されているものである。図中の結果は、各群の平均値又は平均値±標準誤差で示す。
【００４２】
〔実施例１〕ねじめびわ茶の脳機能劣化症発症の抑制効果
1. 材料及び方法
ねじめびわ茶乾燥葉20gに水2000mlを加え、沸騰するまで加熱し、さらに95℃で30分間加熱抽出に供した。その後、濾過により、抽出液を集め、減圧下、80〜90℃で濃縮した。さらに、この濃縮物を凍結乾燥処理に供することで、ねじめびわ茶熱水抽出物の乾燥粉末を得た。この乾燥粉末は、使用時まで-20℃で保存した。使用時には、この乾燥粉末の0.4％水溶液を作製し、実験マウスに与えた。なお、この水溶液は、3日毎に飲水ボトルを洗浄し直し、新しいものに取り換えた。本実施例では、当該水溶液を、単に「ねじめびわ茶」又は「ビワ茶」と称する。
【００４３】
ヒトアミロイドβ(Aβ)遺伝子を導入したトランスジェニック(Tg)アルツハイマー症モデルマウス(B6.Cg-Tg(APPswe, PSEN1ΔE9)；雄雌それぞれ6匹5ケ月齢；なお、これらのマウスは尾より組織を得て、遺伝子増幅を行い、ヒトアミロイドβ遺伝子が導入されていることを確認した個体)に、通常の実験飼料を与え、上記で作製した0.4％ねじめびわ茶を飲料水として与えた。ねじめびわ茶水溶液は二日毎に新しく調製した。対照区には水を与えた。飼育は24℃で、12時間暗明(7:00-19:00明)条件下で飼育した。飲食は自由摂取とし、6ケ月間投与した。
【００４４】
ねじめびわ茶を6ケ月間投与後、マウスを頸椎剥離し、安楽死させた。これらのマウスの頭部を切開し、脳を得た。前頭部の嗅球と後部の小脳を除去し、得られる大脳部を-80℃で凍結保存した。
【００４５】
次いで、凍結保存した大脳を、氷冷bufferでホモゲナイズし、さらに1 min超音波処理し、次いで10,000 rpm、4℃で遠心処理することで、上澄みを得た。得られた上澄みを一定量ずつSDS-PAGEに供し、電気泳動を行った。
【００４６】
電気泳動の終了後、ニトロセルロース膜への転写を行い、スキムミルクでブロッテイングした。洗浄後、感光反応-標識抗アミロイド抗体を結合させた。
【００４７】
得られたブロットを感光紙上に置き、適時感光させて、目的のアミロイドタンパク質のバンドを検出した。
【００４８】
2. 結果
脳のアミロイドβ(Aβ)タンパク質の中で、不溶性Aβ(高分子化しているAβ；この大部分は老人色素を形成していると推定される)の減少がビワ茶の長期摂取で減少していることから、アルツハイマー症の主要な原因タンパク質である老人色素量の減少が窺えた。従って、ねじめびわ茶摂取により、アルツハイマー症の抑制が示された(図３及び図４）。
【００４９】
また、アルツハイマー症の2番目の要因である神経細胞死を引き起こす過剰リン酸化Tauタンパク質の定量を行った。図５及び図６に示すように、リン酸化Tauタンパク質はビワ茶の長期摂取で明らかに減少しており、神経細胞の死滅は大幅に抑制されていたことが明らかである。即ち、ねじめびわ茶摂取により、アルツハイマー症の抑制が窺えた。
【００５０】
次に、マウス脳内のpGSK、Neprilysin及びBACEについて検討した(図７〜図１１)。
先ず、pGSKに関して、図２からも分かるように、pGSKがGSKに脱リン酸化されると活性型となり、タウタンパク質のリン酸化がより進行する。即ち、過剰なリン酸化Tauタンパク質の蓄積へと進行し、神経細胞の死滅へと進む。図７及び図８に示すように、ねじめびわ茶はこの一連の流れを抑制するので、アルツハイマー症のもう1つの主症状である神経細胞の死滅を抑え、アルツハイマー症の進展を抑制した。
【００５１】
pGSKの結果に対応するように、リン酸化されていないGSK量はビワ茶長期摂取で減少することが示された（図９）。このことは、Tauタンパク質がリン酸化される割合が減少することで、アルツハイマー症の発症を抑制することを意味する。
【００５２】
マウス脳内のNeprilysinの変動に関しては、図１０に示すように、ねじめびわ茶摂取によりNeprilysin量は上昇しており、これは生じたAβ40/42の分解系が進展していたことを示し、Aβ40/42の蓄積が抑制され、アルツハイマー症の発症が抑制された。
【００５３】
Aβ40/42を分解する酵素の代表はNeprilysinであるが、Insulin分解酵素も同じような作用を有するので、両者ともに重要である。Aβを分解する能力を有するInsulin分解酵素が糖質中心の食生活習慣によって多量に分泌される血中のInsulinに集中的に作用するため、脳でのInsulin分解酵素の濃度が低下し、Aβの分解に手が回らずAβが蓄積されてしまうことになる。
【００５４】
そこで、2型糖尿病(血糖値が高いため、Insulinが高濃度に分泌される)にならない生活習慣が肝要である。従って、特許文献２に記載されるように、ねじめびわ茶抽出物は高血糖降下作用を有し、併せてアルツハイマー症を代表とする痴呆症の抑制又は軽減剤として極めて有用とみなされる。
【００５５】
図１の脳でのアミロイドタンパク質の産生機構に示すように、Aβタンパク質の産生は先ずアミロイドタンパク前駆体(APP)にβSecretase(BACE)が作用することから始まる。その第1ステップの酵素であるBACE量の変化を検討した。図１１に示すように、ねじめびわ茶の長期摂取でBACE量が抑制されたことが明らかとなり、ねじめびわ茶によりAβの産生量が抑制されることが示された。
【図１】
2016132633.tif 000002
【図２】
2016132633.tif 000003
【図３】
2016132633.tif 000004
【図４】
2016132633.tif 000005
【図５】
2016132633.tif 000006
【図６】
2016132633.tif 000007
【図７】
2016132633.tif 000008
【図８】
2016132633.tif 000009
【図９】
2016132633.tif 000010
【図１０】
2016132633.tif 000011
【図１１】
2016132633.tif 000012