(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤、ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤および薬学的に許容しうる担体を含む、アテローム硬化症の治療若しくは予防または血漿コレステロール濃度を減少させるための薬剤組成物であって、該β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤が、構造式：
【化１】
0003992728.tif 000014
〔式中、
Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｂ；
−Ｃ≡Ｃ−Ｂ；
−（ＣＨ2）p−Ｘ−Ｂ（式中、ｐは、０、１または２であり、Ｘは、結合、−ＮＨ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−である）；
ヘテロアリール、ベンゾ縮合ヘテロアリール、Ｗ−置換ヘテロアリール若しくはＷ−置換ベンゾ縮合ヘテロアリール｛但し、ヘテロアリールは、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、イミダゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、チエニル、オキサゾリルおよびフラニル、並びに窒素含有ヘフロアリールに関してはそれらのＮ−オキシドから成る群より選択され、Ｗは、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、低級アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシ、（低級アルコキシ−イミノ）低級アルキル、低級アルカンジオイル、低級アルキル低級アルカンジオイル、アリルオキシ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、ベンジル、Ｒ14−ベンジル、ベンジルオキシ、Ｒ14−ベンジルオキシ、フェノキシ、Ｒ14−フェノキシ、ジオキソラニル、ＮＯ2、−ＮＲ10Ｒ11、ＮＲ10Ｒ11（低級アルキル）−、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、ＯＨ、ハロゲノ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ5、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ5、Ｒ6Ｏ2ＳＮＨ−、（Ｒ6Ｏ2Ｓ）2Ｎ−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2、−Ｓ（Ｏ）0-2Ｒ10、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ12および
【化２】
0003992728.tif 000015
から成る群より選択される環員炭素原子上の１〜３個の置換基であり、そして該置換ヘテロアリール環の窒素原子上に置換基が存在する場合、該置換基は、低級アルキル、低級アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、ＯＨ、ＮＲ10Ｒ11（低級アルキル）−、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2および２−（トリメチルシリル）エトキシメチルから成る群より選択される｝；
−Ｃ（Ｏ）−Ｂ；または
【化３】
0003992728.tif 000016
（式中、ｋは、１または２である）
であり；
Ｄは、Ｂ’−（ＣＨ2）mＣ（Ｏ）−（式中、ｍは、１、２、３、４または５である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）q−（式中、ｑは、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）e−Ｚ−（ＣＨ2）r−（式中、Ｚは、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、フェニレン、−ＮＲ8−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり、ｅは、０、１、２、３、４または５であり、そして、ｒは、１、２、３、４または５である、但し、ｅとｒの合計は、１、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−；
Ｂ’−（Ｃ4〜Ｃ6アルカジエニレン）−；
Ｂ’−（ＣＨ2）t−Ｚ−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−（式中、Ｚは、先に定義した通りであり、そして、ｔは、０、１、２または３である、但し、ｔと該アルケニレン鎖中の炭素原子数との合計は、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）f−Ｖ−（ＣＨ2）g−（式中、Ｖは、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレンであり、ｆは、１、２、３、４または５であり、そして、ｇは、０、１、２、３、４または５である、但し、ｆとｇの合計は、１、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）t−Ｖ−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−若しくはＢ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−Ｖ−（ＣＨ2）t−（式中、Ｖおよびｔは先に定義した通りである、但し、ｔと該アルケニレン鎖中の炭素原子数との合計は、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）a−Ｚ−（ＣＨ2）b−Ｖ−（ＣＨ2）d−（式中、ＺおよびＶは先に定義した通りであり、そして、ａ、ｂおよびｄは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である、但し、ａ、ｂおよびｄの合計は、０、１、２、３、４、５または６である）；
Ｔ−（ＣＨ2）s−（式中、Ｔは、３〜６個の炭素原子のシクロアルキルであり、ｓは１、２、３、４、５または６である）；または
ナフチルメチル、ヘテロアリールメチル若しくはＷ−置換ヘテロアリールメチル（ヘテロアリールおよびＷは先に定義した通りである）であり；
Ｂは、
【化４】
0003992728.tif 000017
であり；
Ｂ’は、ナフチル、ヘテロアリール若しくはＷ−置換ヘテロアリール（ヘテロアリールおよびＷは先に定義した通りである）または
【化５】
0003992728.tif 000018
であり；
Ｒは、水素、フルオロ、Ｃ1〜Ｃ15アルキル、Ｃ1〜Ｃ15アルケニル、Ｃ1〜Ｃ15アルキニルまたはＢ−（ＣＨ2）h−（式中、ｈは、０、１、２または３である）であり；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、ＨおよびＷから成る群より独立して選択される（但し、Ｗがハロゲノである場合、それはｏ−ハロゲノまたはｍ−ハロゲノである）か；または、Ｒ1が水素であり且つＲ2およびＲ3がそれらが結合している隣接炭素原子と一緒にジオキソラニル環を形成し；
Ｒ1'、Ｒ2'およびＲ3'は、ＨおよびＷから成る群より独立して選択されるか；または、Ｒ1'が水素であり且つＲ2'およびＲ3'がそれらが結合している隣接炭素原子と一緒にジオキソラニル環を形成し；
Ｒ4は、
【化６】
0003992728.tif 000019
（式中、ｎは、０、１、２または３である）、インダニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキソリル、テトラヒドロナフチル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニルまたはキノリルであり；
Ｒ5は、低級アルキル、フェニル、Ｒ14−フェニル、ベンジルまたはＲ14−ベンジルであり；
Ｒ6は、ＯＨ、低級アルキル、フェニル、ベンジル、Ｒ14−フェニルまたはＲ14−ベンジルであり；
Ｒ7は、低級アルキル、低級アルコキシ、ＯＨ、ハロゲノ、−ＮＲ10Ｒ11、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ5、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ5、ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）0-2−（低級アルキル）、ＣＯＯＲ9、−ＣＯＮＲ10Ｒ11、−ＣＯＲ12、フェノキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＦ3、またはｔ−ブチルジメチルシリルオキシであり、そして、ｎが２または３である場合、Ｒ7の基は同じであっても異なっていてもよく；
Ｒ8は、Ｈ、低級アルキル、フェニル低級アルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｒ9であり；
Ｒ9は、Ｈ、低級アルキル、フェニル、またはフェニル低級アルキルであり；
Ｒ10およびＲ11は、Ｈおよび低級アルキルから独立して選択され；
Ｒ12は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、
【化７】
0003992728.tif 000020
−ＮＲ10Ｒ11、低級アルキル、フェニルまたはＲ14−フェニルであり；
Ｒ13は、−Ｏ−、−ＣＨ2−、−ＮＨ−、または−Ｎ（低級アルキル）−であり；そして
Ｒ14は、低級アルキル、低級アルコキシ、−ＣＯＯＨ、ＮＯ2、−ＮＲ10Ｒ11、ＯＨまたはハロゲノから成る群より独立して選択される１〜３個の基である〕
によって表されるか、またはその薬学的に許容しうる塩である、薬剤組成物。
【請求項２】
Ａが、−（ＣＨ2）p−Ｘ−Ｂ｛式中、ｐは０であり、Ｘは結合であり、そして、Ｂは
【化８】
0003992728.tif 000021
（式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、Ｈ、低級アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシ、低級アルキル低級アルカンジオイル、アリルオキシ、フェノキシ、ｍ−ハロゲノおよび一Ｃ（Ｏ）Ｒ12から成る群より選択される）である｝であり；
Ｄが、Ｂ’−（ＣＨ2）q−（式中、Ｂ’はフェニルであり、ｑは３または４である）、
Ｂ’−（ＣＨ2）2−（式中、Ｂ’はｐ−フルオロフェニルまたはｐ−メトキシフェニルである、
３−フェニル−１−プロペニル、または
Ｂ’−（ＣＨ2）−Ｖ−（式中、Ｂ’はフェニルであり、Ｖはシクロプロピレンである）であり；
Ｒ4が、
【化９】
0003992728.tif 000022
（式中、ｎは１であり、Ｒ7は、低級アルキル、低級アルコキシ、ＯＨ、ハロゲノまたは−ＯＣＦ3である）であり；そして
Ｒ12がアルコキシである、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤が、（３Ｒ−４Ｓ）−１，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−２−アゼチジノンである、請求項１〜２のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
ＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害剤が、ロバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、シムバスタチン及びアトルバスタチンカルシウムからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
アテローム硬化症を治療するか若しくは予防するかまたは血漿コレステロール濃度を減少させるのに組み合わせて使用するための薬剤組成物を単一包装中の別個の容器中に含んでなるキットであって、一方の容器中に有効量のＨＭＧＣｏＡレダクターゼ阻害剤を薬学的に許容しうる担体中に含み、そして第二容器中に有効量のβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤を薬学的に許容しうる担体中に含むキットであって、該β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤が、構造式：
【化１０】
0003992728.tif 000023
〔式中、
Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｂ；
−Ｃ≡Ｃ−Ｂ；
−（ＣＨ2）p−Ｘ−Ｂ（式中、ｐは、０、１または２であり、Ｘは、結合、−ＮＨ−または−Ｓ（Ｏ）0-2−である）；
ヘテロアリール、ベンゾ縮合ヘテロアリール、Ｗ−置換ヘテロアリール若しくはＷ−置換ベンゾ縮合ヘテロアリール｛但し、ヘテロアリールは、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、イミダゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、チエニル、オキサゾリルおよびフラニル、並びに窒素含有ヘフロアリールに関してはそれらのＮ−オキシドから成る群より選択され、Ｗは、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、低級アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシ、（低級アルコキシ−イミノ）低級アルキル、低級アルカンジオイル、低級アルキル低級アルカンジオイル、アリルオキシ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、ベンジル、Ｒ14−ベンジル、ベンジルオキシ、Ｒ14−ベンジルオキシ、フェノキシ、Ｒ14−フェノキシ、ジオキソラニル、ＮＯ2、−ＮＲ10Ｒ11、ＮＲ10Ｒ11（低級アルキル）−、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、ＯＨ、ハロゲノ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ5、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ5、Ｒ6Ｏ2ＳＮＨ−、（Ｒ6Ｏ2Ｓ）2Ｎ−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2、−Ｓ（Ｏ）0-2Ｒ10、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ12および
【化１１】
0003992728.tif 000024
から成る群より選択される環員炭素原子上の１〜３個の置換基であり、そして該置換ヘテロアリール環の窒素原子上に置換基が存在する場合、該置換基は、低級アルキル、低級アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、ＯＨ、ＮＲ10Ｒ11（低級アルキル）−、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2および２−（トリメチルシリル）エトキシメチルから成る群より選択される｝；
−Ｃ（Ｏ）−Ｂ；または
【化１２】
0003992728.tif 000025
（式中、ｋは、１または２である）
であり；
Ｄは、Ｂ’−（ＣＨ2）mＣ（Ｏ）−（式中、ｍは、１、２、３、４または５である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）q−（式中、ｑは、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）e−Ｚ−（ＣＨ2）r−（式中、Ｚは、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、フェニレン、−ＮＲ8−または−Ｓ（Ｏ）0-2−であり、ｅは、０、１、２、３、４または５であり、そして、ｒは、１、２、３、４または５である、但し、ｅとｒの合計は、１、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−；
Ｂ’−（Ｃ4〜Ｃ6アルカジエニレン）−；
Ｂ’−（ＣＨ2）t−Ｚ−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−（式中、Ｚは、先に定義した通りであり、そして、ｔは、０、１、２または３である、但し、ｔと該アルケニレン鎖中の炭素原子数との合計は、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）f−Ｖ−（ＣＨ2）g−（式中、Ｖは、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレンであり、ｆは、１、２、３、４または５であり、そして、ｇは、０、１、２、３、４または５である、但し、ｆとｇの合計は、１、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）t−Ｖ−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−若しくはＢ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−Ｖ−（ＣＨ2）t−（式中、Ｖおよびｔは先に定義した通りである、但し、ｔと該アルケニレン鎖中の炭素原子数との合計は、２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）a−Ｚ−（ＣＨ2）b−Ｖ−（ＣＨ2）d−（式中、ＺおよびＶは先に定義した通りであり、そして、ａ、ｂおよびｄは、独立して、０、１、２、３、４、５または６である、但し、ａ、ｂおよびｄの合計は、０、１、２、３、４、５または６である）；
Ｔ−（ＣＨ2）s−（式中、Ｔは、３〜６個の炭素原子のシクロアルキルであり、ｓは１、２、３、４、５または６である）；または
ナフチルメチル、ヘテロアリールメチル若しくはＷ−置換ヘテロアリールメチル（ヘテロアリールおよびＷは先に定義した通りである）であり；
Ｂは、
【化１３】
0003992728.tif 000026
であり；
Ｂ’は、ナフチル、ヘテロアリール若しくはＷ−置換ヘテロアリール（ヘテロアリールおよびＷは先に定義した通りである）または
【化１４】
0003992728.tif 000027
であり；
Ｒは、水素、フルオロ、Ｃ1〜Ｃ15アルキル、Ｃ1〜Ｃ15アルケニル、Ｃ1〜Ｃ15アルキニルまたはＢ−（ＣＨ2）h−（式中、ｈは、０、１、２または３である）であり；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、ＨおよびＷから成る群より独立して選択される（但し、Ｗがハロゲノである場合、それはｏ−ハロゲノまたはｍ−ハロゲノである）か；または、Ｒ1が水素であり且つＲ2およびＲ3がそれらが結合している隣接炭素原子と一緒にジオキソラニル環を形成し；
Ｒ1'、Ｒ2'およびＲ3'は、ＨおよびＷから成る群より独立して選択されるか；または、Ｒ1'が水素であり且つＲ2'およびＲ3'がそれらが結合している隣接炭素原子と一緒にジオキソラニル環を形成し；
Ｒ4は、
【化１５】
0003992728.tif 000028
（式中、ｎは、０、１、２または３である）、インダニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキソリル、テトラヒドロナフチル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニルまたはキノリルであり；
Ｒ5は、低級アルキル、フェニル、Ｒ14−フェニル、ベンジルまたはＲ14−ベンジルであり；
Ｒ6は、ＯＨ、低級アルキル、フェニル、ベンジル、Ｒ14−フェニルまたはＲ14−ベンジルであり；
Ｒ7は、低級アルキル、低級アルコキシ、ＯＨ、ハロゲノ、−ＮＲ10Ｒ11、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ5、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ5、ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）0-2−（低級アルキル）、ＣＯＯＲ9、−ＣＯＮＲ10Ｒ11、−ＣＯＲ12、フェノキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＦ3、またはｔ−ブチルジメチルシリルオキシであり、そして、ｎが２または３である場合、Ｒ7の基は同じであっても異なっていてもよく；
Ｒ8は、Ｈ、低級アルキル、フェニル低級アルキル、または−Ｃ（Ｏ）Ｒ9であり；
Ｒ9は、Ｈ、低級アルキル、フェニル、またはフェニル低級アルキルであり；
Ｒ10およびＲ11は、Ｈおよび低級アルキルから独立して選択され；
Ｒ12は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、
【化１６】
0003992728.tif 000029
−ＮＲ10Ｒ11、低級アルキル、フェニルまたはＲ14−フェニルであり；
Ｒ13は、−Ｏ−、−ＣＨ2−、−ＮＨ−、または−Ｎ（低級アルキル）−であり；そして
Ｒ14は、低級アルキル、低級アルコキシ、−ＣＯＯＨ、ＮＯ2、−ＮＲ10Ｒ11、ＯＨまたはハロゲノから成る群より独立して選択される１〜３個の基である〕
によって表されるか、またはその薬学的に許容しうる塩である、キット。
【発明の詳細な説明】
背景
本発明は、血漿コレステロール濃度の減少に有用なコレステロール生合成阻害剤およびβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤の組合せ、並びに前記組合せを投与することを含むアテローム硬化症を治療するまたは予防する方法に関する。
血漿コレステロール濃度は、冠状動脈性心臓病に関係した臨床例の発症率に明確に相関している。ヒトおよび動物体内の全身コレステロールホメオスタシスの調節には、コレステロール生合成、胆汁酸生合成およびコレステロール含有血漿リポタンパク質の異化の調節が関係する。肝は、コレステロール生合成および異化に関与する主要器官であり、そしてこの理由のためにそれは血漿コレステロール濃度の主要な決定因子である。肝は、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）の合成および分泌部位であり、ＶＬＤＬは循環中において引続き低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）に代謝される。ＬＤＬは、血漿中に優先的に存在するコレステロール運搬リポタンパク質であり、それらの濃度の増加は、増加したアテローム硬化症と関係している。
コレステロールホメオスタシスを決定するもう一つの主要因子は、小腸におけるコレステロールの吸収である。西洋風の食事をしている平均的なヒトは、一日基準で３００〜５００ｍｇのコレステロールを摂取している。更に、６００〜１０００ｍｇのコレステロールが腸管を毎日通過しうる。この後者のコレステロールは胆汁の成分であり且つ肝から分泌される。コレステロール吸収過程は複雑で且つ多方面にわたる。腸管腔中の総コレステロールの約５０％は、腸管の内層細胞（すなわち、エンテロサイト）によって吸収されることが報告されている。このコレステロールは、食物由来および胆汁すなわち肝由来コレステロール両方を含む。エンテロサイトにおいて新たに吸収されたコレステロールの大部分は、酵素アシル−ＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）によってエステル化される。次に、これらのコレステリルエステルは、トリグリセリドおよび他の成分（すなわち、リン脂質、アポタンパク質）と一緒に別のリポタンパク質クラスであるキロミクロンに包括される。
キロミクロンは腸内細胞によってリンパ中に分泌された後、そこから血液に輸送されることができる。腸内で吸収されたコレステロールはほとんど全てこの経路によって肝に送られる。どのような手段によるものであっても、腸管におけるコレステロール吸収が減少した場合、少量のコレステロールしか肝に送られない。この作用の結果が、減少した肝リポタンパク質（ＶＬＤＬ）生産および主としてＬＤＬとしての血漿コレステロールの肝クリアランスの増加である。したがって、腸内コレステロール吸収阻害の最終的な効果は、血漿コレステロール濃度の減少である。
β−ラクタム、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ９２／０５９７２号明細書に開示される（３Ｒ−４Ｓ）−１，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−２−アゼチジノンは、腸内コレステロール吸収の有力な阻害剤であり、いくつかの動物種（ハムスター、ラット、ウサギ、サル）において減少した血漿コレステロール濃度をもたらす。
３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａレダクターゼ（ＥＣ１．１．１．３４）阻害剤によるコレステロール生合成の阻害は、血漿コレステロールを減少させ（ウィツム（Ｗｉｔｚｕｍ）、１９８９年）且つアテローム硬化症を減少させる有効な方法であることが分かった。ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤および胆汁酸封鎖剤（ｓｅｑｕｅｓｔｒａｎｔ）の併用療法は、ヒト高脂血症患者において単独療法でのどちらの薬剤よりも有効であると実証された（イリングワース（Ｉｌｌｉｎｇｗｏｒｔｈ）、１９８８年）。
本発明者は、意外にも、β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤およびＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤ロバスタチン（ｌｏｖａｓｔａｔｉｎ）（ＭＥＶＡＣＯＲTM）の組合せが、チャウ飼料飼養犬およびアカゲザルにおいて並びにコレステロール飼養ハムスターおよびウサギにおいて、どちらか単独の薬剤よりも大きく血漿コレステロールを減少させることを発見した。これらの知見は、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤単独ではハムスターおよびサルの血漿コレステロール濃度を低下させないので意外であった。
発明の概要
本発明は、血漿コレステロール濃度を減少させる方法であって、このような処置を必要としている哺乳動物に対してコレステロール生合成阻害剤およびβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤の組合せの有効量を投与することを含む上記方法に関する。本発明は、更に、アテローム硬化症を治療するまたは予防する方法であって、このような処置を必要としている哺乳動物に対してコレステロール生合成阻害剤およびβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤の組合せの有効量を投与することを含む上記方法に関する。すなわち、本発明は、アテローム硬化症を治療する若しくは予防するためにまたは血漿コレステロール濃度を減少させるために、コレステロール生合成阻害剤と併用するためのβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤の使用（および同様に、β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤と併用するためのコレステロール生合成阻害剤の使用）に関する。
第三の態様において、本発明は、有効量のコレステロール生合成阻害剤、β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤および薬学的に許容しうる担体を含む薬剤組成物に関する。更にもう一つの態様において、本発明は、一つの容器中に薬学的に許容しうる担体中の有効量のコレステロール生合成阻害剤および別の容器中に薬学的に許容しうる担体中のβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤を含むキットに関する。
詳細な説明
本発明の組合せで用いるためのコレステロール生合成阻害剤としては、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤、例えば、ロバスタチン、プラバスタチン（ｐｒａｖａｓｔａｔｉｎ）、フルバスタチン（ｆｌｕｖａｓｔａｔｉｎ）、シムバスタチン（ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｎ）およびＣｌ−９８１；ＨＭＧ  ＣｏＡシンターゼ阻害剤、例えば、Ｌ−６５９，６９９（（Ｅ，Ｅ−１１−［３’Ｒ−（ヒドロキシメチル）−４’−オキソ−２’Ｒ−オキセタニル］−３，５，７Ｒ−トリメチル−２，４−ウンデカジエン酸）；スクアレン合成阻害剤、例えば、スクアレスタチン（ｓｑｕａｌｅｓｔａｔｉｎ）１；およびスクアレンエポキシダーゼ阻害剤、例えば、ＮＢ−５９８（（Ｅ）−Ｎ−エチル−Ｎ−（６，６−ジメチル−２−ヘプテン−４−イニル）−３−［（３，３’−ビチオフェン−５−イル）メトキシ］ベンゼン−メタナミン塩酸塩）がある。好ましいＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤は、ロバスタチン、プラバスタチンおよびシムバスタチンである。
β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤としては、１９９２年７月２１日出願され且つ１９９３年２月４日にＷＯ９３／０２０４８号として公開されたＰＣＴ／ＵＳ９２／０５９７２号明細書の式Ｉの新規の化合物として定義されたもの、並びにコレステロールを低下させる場合に用いるための当該ＰＣＴ出願の式ＩＩで定義されたものがある。前記ＰＣＴ出願は、本明細書中に参考として包含される。式Ｉおよび式ＩＩ化合物を本明細書中において下記の通り示す。
0003992728.tif 000002
［式中、Ａは、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｂ；
−Ｃ≡Ｃ−Ｂ；
−（ＣＨ2）p−Ｘ−Ｂ（式中、ｐは０、１または２であり、Ｘは結合、−ＮＨ−または−Ｓ（Ｏ）0〜2−である）；
ヘテロアリール、ベンゾ縮合ヘテロアリール、Ｗ−置換ヘテロアリール若しくはＷ−置換ベンゾ縮合ヘテロアリール（但し、ヘテロアリールは、ピロリル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、イミダゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、チエニル、オキサゾリルおよびフラニル、並びに窒素含有ヘテロアリールに関してはそれらのＮ−オキシドから成る群より選択され、Ｗは、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、低級アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルコキシカルボニルアルコキシ、（低級アルコキシ−イミノ）低級アルキル、低級アルカンジオイル、低級アルキル低級アルカンジオイル、アリルオキシ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、ベンジル、Ｒ14−ベンジル、ベンジルオキシ、Ｒ14−ベンジルオキシ、フェノキシ、Ｒ14−フェノキシ、ジオキソラニル、ＮＯ2、−ＮＲ10Ｒ11、ＮＲ10Ｒ11（低級アルキル）−、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、ＯＨ、ハロゲノ、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ5、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ5、Ｒ6Ｏ2ＳＮＨ−、（Ｒ6Ｏ2Ｓ）2Ｎ−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2、−Ｓ（Ｏ）0〜2Ｒ10、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシメチル、−Ｃ（Ｏ）Ｒ12および
0003992728.tif 000003
から成る群より選択される環炭素原子上の１〜３個の置換基であり、そして置換ヘテロアリール環窒素原子上の置換基は、存在する場合、低級アルキル、低級アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ5、−Ｃ（Ｏ）Ｒ5、ＯＨ、ＮＲ10Ｒ11（低級アルキル）−、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、−Ｓ（Ｏ）2ＮＨ2および２−（トリメチルシリル）エトキシメチルから成る群より選択される）；
−Ｃ（Ｏ）−Ｂ；または
0003992728.tif 000004
（式中、ｋは１または２である）であり；
Ｄは、Ｂ’−（ＣＨ2）mＣ（Ｏ）−（式中、ｍは１、２、３、４または５である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）q−（式中、ｑは２、３、４、５または６である）；
Ｂ’−（ＣＨ2）e−Ｚ−（ＣＨ２）ｒ−（式中、Ｚは、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、フェニレン、−ＮＲ8−または−Ｓ（Ｏ）0〜2−であり、ｅは０、１、２、３、４または５であり、そしてｒは１、２、３、４または５であり、但し、ｅおよびｒの合計は１、２、３、４、５または６であるという条件付きである）；
Ｂ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−；
Ｂ’−（Ｃ4〜Ｃ6アルカジエニレン）−；
Ｂ’−（ＣＨ2）t−Ｚ−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−（式中、Ｚは前記に定義の通りであり、そしてｔは０、１、２または３であり、但し、アルケニレン鎖中の炭素原子数とｔの合計は２，３，４，５または６であるという条件付きである）；
Ｂ’−（ＣＨ2）f−Ｖ−（ＣＨ2）g−（式中、ＶはＣ3〜Ｃ6シクロアルキレンであり、ｆは１、２、３、４または５であり、そしてｇは０、１、２、３、４または５であり、但し、ｆおよびｇの合計は１、２、３、４、５または６であるという条件付きである）；
Ｂ’−（ＣＨ2）t−Ｖ−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−若しくは
Ｂ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−Ｖ−（ＣＨ2）t−（式中、Ｖおよびｔは前記に定義の通りであり、但し、アルケニレン鎖中の炭素原子数とｔの合計は２，３，４，５または６であるという条件付きである）；
Ｂ’−（ＣＨ2）a−Ｚ−（ＣＨ2）b−Ｖ−（ＣＨ2）d−（式中、ＺおよびＶは前記に定義の通りであり、そしてａ、ｂおよびｄは独立して０、１、２、３、４、５または６であり、但し、ａ、ｂおよびｄの合計は０、１、２、３、４、５または６であるという条件付きである）；
Ｔ−（ＣＨ2）s−（式中、Ｔは、３〜６個の炭素原子を有するシクロアルキルであり、ｓは１、２、３、４、５または６である）；または
ナフチルメチル、ヘテロアリールメチル若しくはＷ−置換ヘテロアリールメチル（但し、ヘテロアリールおよびＷは前記に定義の通りである）であり；
Ｂは、
0003992728.tif 000005
であり；
Ｂ’は、ナフチル、ヘテロアリール若しくはＷ−置換ヘテロアリール（但し、ヘテロアリールは前記に定義の通りである）または
0003992728.tif 000006
であり；
Ｒは、水素、フルオロ、Ｃ1〜Ｃ15アルキル、Ｃ1〜Ｃ15アルケニル、Ｃ1〜Ｃ15アルキニルまたはＢ−（ＣＨ2）h−（式中、ｈは０、１、２または３である）であり；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、ＨおよびＷから成る群より独立して選択され、但し、Ｗがハロゲノである場合、それはｏ−ハロゲノまたはｍ−ハロゲノであるという条件付きであり；またはＲ1は水素であり且つＲ2およびＲ3は、それらが結合している隣接する炭素原子と一緒にジオキソラニル環を形成し；
Ｒ1’、Ｒ2’およびＲ3’は、ＨおよびＷから成る群より独立して選択されるか；またはＲ1’は水素であり且つＲ2’およびＲ3’は、それらが結合している隣接する炭素原子と一緒にジオキソラニル環を形成し；
Ｒ4は、
0003992728.tif 000007
（式中、ｎは０、１、２または３である）、インダニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキソリル、テトラヒドロナフチル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニルまたはキノリルであり；
Ｒ5は、低級アルキル、フェニル、Ｒ14−フェニル、ベンジルまたはＲ14−ベンジルであり；
Ｒ6は、ＯＨ、低級アルキル、フェニル、ベンジル、Ｒ14−フェニルまたはＲ14−ベンジルであり；
Ｒ7は、低級アルキル、低級アルコキシ、ＯＨ、ハロゲノ、−ＮＲ10Ｒ11、−ＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ5、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ5、ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＳＨ、−Ｓ（Ｏ）0〜2−（低級アルキル）、ＣＯＯＲ9、−ＣＯＮＲ10Ｒ11、−ＣＯＲ12、フェノキシ、ベンジルオキシ、−ＯＣＦ3またはｔ−ブチルジメチルシリルオキシであり、そしてｎが２または３である場合、基Ｒ7は同じであるかまたは異なっていてもよく；
Ｒ8は、Ｈ、低級アルキル、フェニル低級アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）Ｒ9であり；
Ｒ9は、Ｈ、低級アルキル、フェニルまたはフェニル低級アルキルであり；
Ｒ10およびＲ11は、Ｈおよび低級アルキルから独立して選択され；
Ｒ12は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、
0003992728.tif 000008
−ＮＲ10Ｒ11、低級アルキル、フェニルまたはＲ14−フェニルであり；
Ｒ13は、−Ｏ−、−ＣＨ2−、−ＮＨ−または−Ｎ（低級アルキル）−であり；そして
Ｒ14は、低級アルキル、低級アルコキシ、−ＣＯＯＨ、−ＮＯ2、−ＮＲ10Ｒ11、ＯＨまたはハロゲノから成る群より独立して選択される１〜３個の基である］
またはその薬学的に許容しうる塩。
0003992728.tif 000009
［式中、Ｒ20は、フェニル、Ｗ−置換フェニル、ナフチル、Ｗ−置換ナフチル、ベンゾジオキソリル、ヘテロアリール、Ｗ−置換ヘテロアリール、ベンゾ縮合ヘテロアリールおよびＷ−置換ベンゾ縮合ヘテロアリールであり、ここにおいてヘテロアリールは前記に定義の通りであり；
Ｒ21、Ｒ22およびＲ23は、ＨまたはＲ20から独立して選択され；
Ｗは、前記に定義のように独立して選択される１〜３個の置換基であり；
Ｅ、ＦおよびＧは独立して、結合；Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレン；Ｃ1〜Ｃ10アルキレン；Ｃ1〜Ｃ10アルケニレン；Ｃ1〜Ｃ10アルキニレン；フェニル、Ｗ−置換フェニル、ヘテロアリールおよびＷ−置換ヘテロアリール（但し、ヘテロアリールは前記に定義の通りである）から成る群より独立して選択される１個またはそれ以上の置換基によって置換された定義のアルキレン鎖、アルケニレン鎖若しくはアルキニレン鎖；−Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ2−、−ＮＲ8、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ3〜Ｃ6シクロアルキレン、フェニレン、Ｗ−置換フェニレン、ヘテロアリーレンおよびＷ−置換ヘテロアリーレンから成る群より独立して選択される１個またはそれ以上の基によって中断される定義のアルキレン鎖、アルケニレン鎖若しくはアルキニレン鎖；またはフェニル、Ｗ−置換フェニル、ヘテロアリールおよびＷ−置換ヘテロアリールから成る群より独立して選択される１個またはそれ以上の置換基によって置換された定義の中断されたアルキレン鎖、アルケニレン鎖若しくはアルキニレン鎖であるか；或いはＲ21−ＥおよびＲ22−Ｆの一方が、ハロゲノ、ＯＨ、低級アルコキシ、
−ＯＣ（Ｏ）Ｒ5、−ＮＲ10Ｒ11、−ＳＨまたは−Ｓ（低級アルキル）から成る群より選択され；そして
Ｒ5、Ｒ6およびＲ8〜Ｒ14は前記に定義の通りであり；
但し、Ｇが結合である場合、Ｒ23はＨではないという条件付きであり、そしてＲ23がＷ−置換フェニルである場合、Ｗはｐ−ハロゲノではないという条件付きである］
またはその薬学的に許容しうる塩。
好ましいのは、ＲがＨである式Ｉを有する化合物である。式Ｉを有する好ましい化合物のもう一つの群は、Ｄが、Ｂ’−（ＣＨ2）q−、Ｂ’−（ＣＨ2）e−Ｚ−（ＣＨ2）r−、Ｂ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−またはＢ’−（ＣＨ2）f−Ｖ−（ＣＨ2）g−（式中、Ｂ’、Ｚ、Ｖ、ｑ、ｅ、ｒ、ｆおよびｇは前記に定義の通りである）であるものである。式Ｉを有する好ましい化合物の第三の群は、Ｒ4がフェニル、Ｒ7−置換フェニルまたはインダニルであるものである。式Ｉを有する好ましい化合物の更にもう一つ都の群は、Ａが−（ＣＨ2）p−Ｘ−Ｂ（式中、Ｘ、Ｂおよびｐは前記に定義の通りである）であるものである。
特に好ましいのは、Ｄが、Ｂ’−（ＣＨ2）q−（式中、Ｂ’はフェニルであり且つｑは３または４である）；Ｂ’−（ＣＨ2）e−Ｚ−（ＣＨ2）r−（式中、Ｂ’はｐ−フルオロフェニルまたはｐ−メトキシフェニルであり、ｅは０であり、Ｚは−Ｏ−であり、そしてｒは２である）；Ｂ’−（Ｃ2〜Ｃ6アルケニレン）−は３−フェニル−１−プロペニルである；または
Ｂ’−（ＣＨ2）f−Ｖ−（ＣＨ2）g−（式中、Ｂ’はフェニルであり、ｆは１であり、Ｖはシクロプロピレンであり、そしてｇは０である）である式Ｉを有する化合物である。更に特に好ましいのは、Ａが−（ＣＨ2）p−Ｘ−Ｂ（式中、ｐは０であり且つＸは結合である）である式Ｉを有する化合物である。好ましくは、式Ｉ中のＲ1、Ｒ2およびＲ3は、Ｈ、ＯＨ、−ＮＯ2、低級アルコキシ、アルコキシアルコキシ、低級アルキル低級アルカンジオイル、ｍ−ハロゲノ、ＮＲ10Ｒ11（低級アルコキシ）−、アリルオキシ、フェノキシ、アルコキシカルボニルアルコキシおよび−Ｃ（Ｏ）Ｒ12から選択される。Ｒ1およびＲ3がそれぞれＨであり且つＲ2がパラ位にある式Ｉを有する化合物が更に好ましい。
式Ｉ中のＲ7は、好ましくは、低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲノ、−ＯＣＦ3、低級アルキルチオ、−ＮＲ10Ｒ11、−ＣＮ、ＯＨおよび−ＣＯＲ12から選択される。更に好ましいのは、ｎが１であり且つＲ7がパラ位にある式Ｉを有する化合物である。
好ましいβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤は、（３Ｒ−４Ｓ）−１，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−２−アゼチジノンである。
血漿コレステロール濃度の減少についての本発明の組合せの有効性を下記の試験法によって実証する。該方法において、β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤は（３Ｒ−４Ｓ）−１，４−ビス−（４−メトキシフェニル）−３−（３−フェニルプロピル）−２−アゼチジノン（以下コンパウンドＡ）であり、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤はロバスタチンである。
実験１−コレステロール飼養ハムスターにおけるコンパウンドＡおよびロバスタチンの組合せの低コレステロール血効果：
方法：
体重１００〜１２５ｇの雄のゴールデン・シリアン（Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎ）ハムスター（チャールズ・リバー・ラブズ（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ）、ウィルミントン、ＭＡ）に、ウェイン（Ｗａｙｎｅ）齧歯類動物用チャウ飼料を実験開始まで与えた。実験開始時（第１日）に、被験動物を群（ｎ＝４〜６匹／群）に分け、そして０．５重量％のコレステロール（リサーチ・ダイエツ・インコーポレーテッド（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ  Ｉｎｃ．）、ニューブランズウィック、ＮＪ）を補足したプリナ・チャウ（Ｐｕｒｉｎａ  Ｃｈｏｗ）＃５００１を与えた。コンパウンドＡを３ｍｇ／ｋｇでおよびロバスタチンを１０ｍｇ／ｋｇで、トウモロコシ油０．２ｍｌ中の経口強制飼養によって第１日に開始して毎日１回７日間投与した。第７日に被験動物を斬首によって屠殺し、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）が入っている試験管中に血液を採取し、そして４℃での低速遠心分離によって血漿を調製した。
非絶食血漿コレステロール濃度は、アレイン（Ａｌｌａｉｎ）ら（Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，２０（１９７４）４７０〜４７５頁）のコレステロールオキシダーゼ法の変法によって決定されたが、ここにおいて試薬は、ワコー・ピュア・ケミカルズ・インダストリーズ・リミテッド（Ｗａｋｏ  ｐｕｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｌｔｄ．）（大阪、日本）製のキットの形で入手可能であった。血清１０μｌの総コレステロールを、ｐ−クロロフェノール（０．１％）、コレステロールオキシダーゼ（０．１３Ｕ／ｍｌ）、コレステロールエステルヒドロラーゼ（０．１３Ｕ／ｍｌ）、ペルオキシダーゼ（２．４Ｕ／ｍｌ）および４−アミノアンチピリン（０．０１５％）を含む０．１５Ｍトリス緩衝液、ｐＨ７．０の１ｍｌ中で検定した。検定は、コレステロール標準と共に３７℃で１０分間行なわれ、得られた赤色キノン色素の吸光度を吸光分光分析によって５０５ｎｍで決定した。
結果：
０．５％コレステロール含有規定飼料で７日間飼養されたハムスターは、血漿コレステロールが２倍に増加した。血漿コレステロールの増加は、主としてＶＬＤＬおよびＬＤＬにおいてである（シュニッツァー（Ｓｃｈｎｉｔｚｅｒ）−ポロコフ（Ｐｏｌｏｋｏｆｆ）ら、Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，９９Ａ（１９９１）６６５〜６７０頁）。コンパウンドＡは、３ｍｇ／ｋｇ／日で血漿コレステロール濃度を１５％減少させたが、ロバスタチンは１０ｍｇ／ｋｇ／日で効果がなかった（表１）。コンパウンドＡおよびロバスタチンを組合せて与えた場合、３１％の血漿コレステロール濃度の減少が見られ、それはどちらか単独の処置よりも有意に大であった（表１）。
0003992728.tif 000010
実験２−コレステロール飼養ウサギにおけるロバスタチンとの組合せのコンパウンドＡの低コレステロール血効果：
方法：
体重２．４〜２．６ｋｇの雄のニュージーランドホワイト（Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ）ウサギに、１％コレステロールおよび６％ピーナツ油を含む規定飼料を１週間試験投与した。血清コレステロール濃度の平均との差が１標準偏差より大きい過および低応答ウサギを除外し、そして同等の血清コレステロール濃度を有するウサギの４群を作った（ｎ＝８羽／群）。次に、ウサギに、０．５％コレステロールおよび６％ピーナツ油を単独でまたは０．０３％コンパウンドＡ；０．０１５％ロバスタチン；若しくは０．０３％コンパウンドＡおよび０．０１５％ロバスタチンと一緒に含む規定飼料を与えた。非絶食血清試料を週１回４週間採取し、血清コレステロール濃度を実験１に記載のように決定した。
結果：
１％コレステロール／６％ピーナツ油規定飼料による１週間の試験投与は、約１０００ｍｇ／ｄｌの平均血清コレステロール濃度を生じた（表２）。４群のウサギの間で同様の食物消費および体重増加が４週間の実験期間にわたって見られた。規定飼料の０．０３％のコンパウンドＡ投与量は、１４ｍｇ／ｋｇ／日であると計算され、０．０１５％のロバスタチン投与量は７ｍｇ／ｋｇ／日であった。対照群における血清コレステロール濃度は、第４週の時点で１０１５〜１３５８ｍｇ／ｄｌまで上昇し続けた（表２）。コンパウンドＡ単独では、第４週の血清コレステロールが第０週と比較して２９％減少し、ロバスタチン単独では、４週間にわたって３３％減少したが、これらの経時減少は、ＡＮＯＶＡによって統計学的に有意ではなかった。コンパウンドＡとロバスタチンとの組合せは、全時点において血漿コレステロール濃度を統計学的に有意に減少させ、第０週と比較して第４週に６１％減少させた（表２）。血清コレステロール濃度の相対的な減少は、第４週の値を対照群と比較した場合に一層大きく、コンパウンドＡ単独では４７％の減少、ロバスタチン単独では５１％の減少、そして併用されたコンパウンドＡおよびロバスタチン療法では７２％の減少であった。
0003992728.tif 000011
実験３−コレステロール不含規定飼料飼養アカゲザルにおけるロバスタチンとの組合せのコンパウンドＡの低コレステロール血効果：
方法：
体重４．４〜８．５ｋｇのアカゲザル２０頭（雄１７頭、雌３頭）に、５％トウモロキシ油を含む脂肪不含サル用チャウ飼料（プリナ＃５０３８−７）を２週間与えた。同等の血清コレステロール濃度および体重のサルから４群を作った（ｎ＝５頭／群）。次に、サルに、５％トウモロキシ油を単独でまたは３ｍｇ／ｋｇ／日のコンパウンドＡ；２０ｍｇ／ｋｇ／日のロバスタチン；若しくはコンパウンドＡ（３ｍｇ／ｋｇ／日）およびロバスタチン（２０ｍｇ／ｋｇ／日）と一緒に含む脂肪不含チャウ飼料を継続した。絶食血清試料を週１回３週間採取し、そして血清コレステロール濃度を実験１に記載のように測定した。血清コレステロール濃度の変化についての統計学的な差は、ＡＮＯＶＡおよびデュネット（Ｄｕｎｎｅｔｔ）ｔ試験によって決定された。Ｐ＜０．０５の確率レベルを有意とみなした。
結果：
５％トウモロキシ油を含む脂肪不含チャウ飼料飼養対照サルは、３週間の実験期間にわたって一定濃度の血清コレステロールを維持した（表３）。３ｍｇ／ｋｇ／日のコンパウンドＡおよび２０ｍｇ／ｋｇ／日のロバスタチンは、それぞれ、第３週の血清コレステロール濃度を僅かに減少させたが、これらの変化は、第３週対照群と比較して統計学的に有意ではなかった。コンパウンドＡおよびロバスタチンの組合せは、全時点においてどちらか単独の処置よりも血漿コレステロールを有意に大きく減少させ、第３週に２５％減少に達した（表３）。
0003992728.tif 000012
実験４−チャウ規定飼料飼養犬におけるロバスタチンとの組合せのコンパウンドＡの低コレステロール血効果：
方法：
１５頭の雄ビーグル犬を、同等の血清コレステロール濃度および体重を有する３群に分けた（ｎ＝５頭／群）。犬には、マルトデキストリンおよび、０．０２３４％コンパウンドＡ；または０．０２３４％ロバスタチン；またはコンパウンドＡ（０，０２３４％）およびロバスタチン（０．０２３４％）の組合せを含むプリナドッグチャウ（＃５００６）を７日間与えた。血清試料を第０日、第３日および第７日に入手し、そして血清総コレステロール濃度を実験１に記載のように測定した。統計学的な差はＡＮＯＶＡによって決定され、Ｐ＜０．０５の確率レベルを有意とみなした。
結果：
０．０２３４％（５ｍｇ／ｋｇ／日）のコンパウンドＡまたは０．０２３４％（５ｍｇ／ｋｇ／日）のロバスタチンを含むチャウ規定飼料飼養犬は、ベースライン濃度（第０日）から第３日または第７日に変化していない血清コレステロール濃度を生じた（表４）。５ｍｇ／ｋｇ／日のコンパウンドＡおよび５ｍｇ／ｋｇ／日のロバスタチンの組合せは、第７日の血清濃度を第０日のベースラインと比較して３３％減少させた（表４）。組合せ群における血清コレステロール濃度は、更に、コンパウンドＡまたはロバスタチンを単独投与されたどちらの群の濃度よりも有意に低かった（表４）。
0003992728.tif 000013
本発明は２種類の成分の組合せの投与を含む治療法に関するため、該成分は同時にまたは逐次的に同時投与することができるし、またはコレステロール生合成阻害剤およびβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤を薬学的に許容しうる担体中に含む単一薬剤組成物を投与することができる。組合せの成分は、任意の慣用的な経口用若しくは非経口用剤形、例えば、カプセル剤、錠剤、散剤、カシェ剤、懸濁剤または液剤で別個にまたは一緒に投与することができる。製剤は、慣用的な医薬品賦形剤および添加剤を用い、慣用的な技法を用いて製造することができる。このような薬学的に許容しうる賦形剤および添加剤としては、無毒性相溶性の充填剤、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、保存剤、酸化防止剤、滑沢剤、着香剤、増粘剤、着色剤、乳化剤等がある。
β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤を含む代表的な製剤は、前記に引用されたＰＣＴ／ＵＳ９２／０５９７２号明細書に開示されている。コレステロール生合成阻害剤を含む代表的な製剤は当該技術分野において周知である。２種類の活性成分を単一組成物として投与する場合、前述のＰＣＴ出願に開示されたような剤形は、当業者の知識を用いて容易に変更しうると考えられる。
血漿コレステロール濃度を減少させるための本発明の組合せにおける化合物の日用量は以下の通りである。すなわち、コレステロール生合成阻害剤についての典型的な投薬量は、１回または分割用量で、通常１日１回または２回投与される０．１〜８０ｍｇ／ｋｇ（哺乳動物体重）／日であり；β−ラクタムコレステロール吸収阻害剤についての典型的な投薬量は、１回または分割用量で０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ（哺乳動物体重）／日である。投与される組合せの任意の成分の正確な用量は、担当医師によって決定され、投与される化合物の効力、患者の年齢、体重、症状および反応に依る。
概して、血漿コレステロール濃度を減少させる処置を必要としている哺乳動物において血漿コレステロール濃度を減少させるためには、本発明の組合せの化合物を患者に対して以下の投薬量範囲で投与することができる。すなわち、ＨＭＧ  ＣｏＡレダクターゼ阻害剤については約１０〜約４０ｍｇ／用量を１日１〜２回与え、全日用量約１０〜８０ｍｇ／日を与え、そして他のコレステロール生合成阻害剤については約１〜１０００ｍｇ／用量を１日１〜２回与え、全日用量約１ｍｇ〜約２ｇ／日を与える。約１〜約１０００ｍｇ／用量のβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤は１日１〜４回与えられる。組合せの成分を別個に投与する場合、１日に与えられる各成分の投与回数は必ずしも同じでなくてよく、例えば、一つの成分がより長い活性期間を有しうる場合は、したがって、より少ない回数で投与される必要がある。
本発明は、活性成分を別個に投与することができる該活性成分の組合せを用いる処置による血漿コレステロール濃度の減少に関するため、本発明は、更に、別個の薬剤組成物のキットの形の組合せに関する。すなわち、コレステロール生合成阻害剤薬剤組成物およびβ−ラクタムコレステロール吸収阻害剤薬剤組成物である２種類の別個の単位が組合わされているキットが考えられる。キットは、好ましくは、別個の成分の投与のための指示を含む。キットの形は、別個の成分を異なる剤形（例えば、経口および非経口）で投与する必要があるかまたは異なる投与間隔で投与する場合に特に好都合である。