(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
次式IIで表されるフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【化１】
0004025817.tif 000011
（式中、Ｒ１３はプレニル基を表し、Ｒ１０，Ｒ１１，Ｒ１２は各々独立に水素原子、炭素原子数１〜１０のアルキル基またはグリコシル基を表す。）
【請求項２】
上記式II中、Ｒ１０，Ｒ１１，Ｒ１２が各々独立に水素原子、炭素原子数１〜５のアルキル基、またはグリコシル基であり、且つＲ１０〜Ｒ１２の少なくとも１個が水素原子であり、Ｒ１３がプレニル基である請求項１記載のフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項３】
上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０が水素原子であり、Ｒ１１が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１２が水素原子またはグリコシル基である請求項１記載のフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項４】
上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１１が水素原子であり、Ｒ１２が水素原子またはグリコシル基である請求項１記載のフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項５】
上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０が水素原子であり、Ｒ１１が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１２が水素原子である請求項１記載のフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項６】
上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１１が水素原子であり、Ｒ１２が水素原子である請求項１記載のフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項７】
上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０がグリコシル基であり、Ｒ１１が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１２がグリコシル基である請求項１記載のフラバン化合物またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を含有する粥状動脈硬化の予防または治療用医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物を含有する健康食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は新規なフラバン化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
桑は養蚕飼料として広く栽培され、利用されてきた。生薬としても用いられており、根皮は桑白皮として利尿・鎮咳・降圧の目的に用いられている。葉も桑葉と呼ばれ解熱などに用いられる生薬であるが桑白皮に比べて利用は少ない。本発明の発明者は、既に、桑葉抽出液のブタノール画分が血清脂質低下作用を有することを見出している（土井佳代、小島尚、原田昌興、堀口佳哉、藤本康雄(1999)コレステロール食摂餌ウサギにおける桑葉抽出画分の脂質代謝に及ぼす影響，日本栄養・食料学会誌52）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の発明者らは、桑葉抽出画分の成分について研究を重ねた結果、ＬＤＬ酸化防止作用を有する新規な化合物を見出し、本発明を完成した。ＬＤＬの酸化が粥状動脈硬化の発症と関連することが知られており、ＬＤＬの酸化防止により粥状動脈硬化の予防を図ることができる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
第１に、本発明は、下記の一般式Ｉで表される化合物及びその薬理学的に許容される塩に関する。
【０００５】
【化３】
0004025817.tif 000002
【０００６】
Ｒ１〜Ｒ９は、各々独立に水素原子、水酸基、炭素原子数１〜１０、好ましくは１〜５のアルコキシ基；炭素原子数１〜１０、好ましくは１〜５のアルキルカルボニルオキシ基；またはグリコシルオキシ基、好ましくはグルコシルオキシ基；またはプレニル基もしくはゲラニル基、好ましくはプレニル基を表す。さらに好ましくは、Ｒ１〜Ｒ９は水素原子、水酸基または炭素原子数１〜５のアルコキシ基であり、Ｒ１〜Ｒ９の少なくとも１個は水酸基であり、Ｒ１〜Ｒ９のいずれか１個、好ましくはＲ９がプレニル基またはゲラニル基である。
本発明は、特に、下記式IIの化合物及びその薬理学的に許容される塩に関する。
【０００７】
【化４】
0004025817.tif 000003
【０００８】
（式中、Ｒ１３はプレニル基またはゲラニル基を表し、Ｒ１０，Ｒ１１，Ｒ１２は各々独立に水素原子、炭素原子数１〜１０、好ましくは炭素原子数１〜５のアルキル基またはグリコシル基、例えばグルコシル基を表す。）
上記式II中、特に好ましいのは、Ｒ１０，Ｒ１１，Ｒ１２が各々独立に水素原子、炭素原子数１〜５のアルキル基、またはグリコシル基、例えばグルコシル基であり、且つＲ１０〜Ｒ１２の少なくとも１個が水素原子であり、Ｒ１３がプレニル基またはゲラニル基、好ましくはプレニル基である化合物である。
さらに好ましいのは、上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０が水素原子であり、Ｒ１１が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１２が水素原子またはグリコシル基、例えばグルコシル基である化合物、または上記式II中、Ｒ１３がプレニル基であり、Ｒ１０が炭素原子数１〜５のアルキル基であり、Ｒ１１が水素原子であり、Ｒ１２が水素原子またはグリコシル基、例えばグルコシル基である化合物である。
【０００９】
本発明は、上記化合物またはその薬理学的に許容される塩を薬理学的に許容されうる担体その他の補助剤と共に含有する医薬組成物に関する。
本発明は、上記化合物またはその薬理学的に許容される塩を薬理学的に許容されうる担体その他の補助剤と共に含有する健康食品に関する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
一般式Ｉにおいて、Ｒ１〜Ｒ９としての炭素原子数１〜１０のアルコキシ基は、直鎖でも分岐鎖状でもよく、例として、−Ｏ−アルキル（アルキル基は、メチル基、エチル基または各々直鎖または分岐鎖のプロピル基、イソプロピル基、ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基もしくはデシル基である）が挙げられる。
一般式Ｉにおいて、Ｒ１〜Ｒ９としての炭素原子数１〜１０のアルキルカルボニルオキシ（−Ｏ−ＣＯ−アルキル）は直鎖でも分岐鎖状でもよく、アルキル部分は上記でアルコキシ基のアルキル部分として挙げたものであり得る。
【００１１】
一般式IIにおいて、Ｒ１０〜Ｒ１２としてのアルキル基は直鎖でも分岐鎖状でもよく、例えば、上記アルコキシ基のアルキル部分として挙げたものであり得る。
本発明の化合物には光学異性体が存在し得る。従って、本発明の化合物は、（＋）または（−）の別々の光学活性体として、およびラセミ体として存在し得る。
【００１２】
（単離方法）
本発明の化合物のうち、下記式：
【００１３】
【化５】
0004025817.tif 000004
【００１４】
【化６】
0004025817.tif 000005
【００１５】
【化７】
0004025817.tif 000006
（ＧｌｃはＤ−グルコースを表す）
【００１６】
で表される化合物は、桑葉のブタノール抽出液を分画し、精製することにより得られる。桑葉はクワ科の植物の葉であればよいが、好ましくはMorus alba L.またはその近縁の品種である。例えば養蚕用に栽培されている品種である。分画は、カラムクロマトグラフィーにより、例えば展開溶媒として水−メタノールを用いて行うことができる。上記式III及びIVで表される化合物は、１００％メタノールで溶出される。これを、さらに逆相ＨＰＬＣで、水−メタノール（例えば２０：８０）を溶離液として用いて分画し、最初に得られる画分が上記式IIIの化合物であり、続いて得られる画分が上記式IVの化合物である。また、上記式Ｖで表される化合物は、ブタノール抽出液を分画し、６０％メタノール画分を精製することにより得られる。
本発明の一般式ＩまたはIIで表される化合物は、上記式III, IV, Ｖの化合物から当業者に周知の方法により誘導することができる。例えば、−ＯＣＨ３基を慣用の試薬により加水分解することができる。また、−ＯＨ基を慣用のアルキル化剤によりアルコキシ基とすること、また慣用のアシル化剤によりアルキルカルボニルオキシ基とすることができる。
本発明のフラバン化合物は、高活性及び低毒性なので医療に安全に用いることができる。
【００１７】
本発明のフラバン化合物の薬理学的に許容される塩は、前記化合物を化学量論量の金属水酸化物、アルコキシドまたは、アミンと水溶液中または適当な有機溶媒中で接触させ、生成した塩を沈澱させることにより、または溶媒を蒸発させることにより得ることができる。
【００１８】
（医薬組成物）
本発明の医薬組成物は、ヒトまたは他の動物の疾病、特に粥状動脈硬化の予防または治療用の医薬組成物である。
本発明の医薬組成物は、有効量の化合物を、薬理学的に許容しうる担体と均一に混合して製造することができる。
本発明の医薬組成物は、経口投与される薬剤、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、糖衣錠、溶液、乳濁液または懸濁液の形態の薬剤として、坐薬として、非経口投与される薬剤、例えば静脈注射、筋肉内注射用の注射剤として、製剤化されたものであり得る。
投与量は、患者の年齢、体重、状態及び投与経路によるが、例えば成人に経口的に投与する場合の投与量は、例えば、一日に１〜５回、一回当り有効成分量が約10mgから約1000mgとなる量である。
【００１９】
本発明の化合物を含有する医薬用組成物は、通常、常法に従って調製され、目的に適する形態で製剤化される。医薬品組成物は、本発明の化合物と、医薬の製剤技術分野で使用し得るとして知られている補助剤を含有し得る。
固形の製剤は、例えば、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、糖衣錠等であり、有効成分としての本発明の化合物と、希釈剤（例えば乳糖、デキストロース、ショ糖、セルロース、コーンスターチ、馬鈴薯澱粉等）、滑沢剤（例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール等）、結合剤（例えば澱粉類、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン等）、離散剤（例えば澱粉、アルギン酸、アルギン酸塩等）、飽和剤、着色料、甘味料、湿潤剤（例えばレシチン、ポリソルベート、硫酸ラウリル塩等）等を含有することができる。これらは、既知の方法例えば混合、粒状化、錠剤化、糖衣化等の方法により製剤化することができる。
液状の製剤は、例えばシロップ、溶液、乳濁液及び懸濁液の形態とすることができる。
懸濁液及び乳濁液は、担体として、例えば天然ゴム、寒天、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール等を含有することができる。
【００２０】
筋肉内注射用懸濁液又は溶液は、薬理学的に許容され得る担体として、例えば滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール類、例えばプロピレングリコール、及び必要に応じて適量のリドカイン塩酸塩を含有することができる。静脈注射もしくは注入用溶液は、担体として例えば滅菌水を含有することができるが、好ましくは滅菌等張食塩水溶液の形である。
座薬は、薬理学的に許容され得る担体として、例えばココアバター、ポリエチレングリコール、レシチン等を含有することができる。
本発明の健康食品は、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、糖衣錠、溶液、乳濁液、懸濁液等の経口摂取可能な任意の形態のものであり、例えば上記で例示した補助剤と共に製剤化したものである。また、所望により他の活性を有する成分を含んでいてもよい。本発明の健康食品は当該業界に周知の方法により製造することができる。
【００２１】
【実施例】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明する。しかしながら、これらは本発明を限定するものではない。
なお、下記の実施例において、１３Ｃ−ＮＭＲは、内部標準としてＴＭＳを含有するCDCl３中、JEOL JNM-Lambda-500を用いて測定した。ＭＳスペクトルは、Hitachi RMU-6Mで記録した。旋光度は、JASCO DIP-370で測定した。
【００２２】
実施例１：化合物の単離
神奈川県で採集した桑葉（Morus alba L.)を、製茶機を用いて６０〜８０℃で９５分間乾燥した。この乾燥葉２ｋｇを２リットルのヘキサンで３回抽出し、その後、１リットルのブタノールで３回抽出した。１−ブタノール抽出液を５００ｍｌの水で３回洗浄し、その後、減圧下、４０℃で濃縮し、油状残留物８０ｇを得た。これをDiaion HP-20カラムのクロマトグラフィにかけ、Ｈ２Ｏ、２０％メタノール、３０％メタノール、４０％メタノール、６０％メタノール、８０％メタノール、１００％メタノール及びアセトン各々１．５リットルをこの順に用いて溶出した。画分１（３．８３ｇ）、画分２（１．７５ｇ）、画分３（１．０３ｇ）、画分４（１．９０ｇ）、画分５（１．６５ｇ）、画分６（画分０．７４ｇ）、画分７（３．０ｇ）及び画分８（１．８２ｇ）の八つの画分が得られた。
【００２３】
画分２は、Sephadex LH20カラムにより、水−メタノールでメタノールの量を増加させながら二つの画分（画分2-1（１．５７ｇ）及び画分2-2（０．１７ｇ））に分けた。画分2-1をさらに逆相ＨＰＬＣ（Inertsil perp ODS (GL Science Ltd.), 20 x 250 mm (以下、カラム１と記す), 水：メタノール＝68:32)により分離し、画分2-1-1（０．１６ｇ）、画分2-1-2（０．２７ｇ）、画分2-1-3（０．０８ｇ）、画分2-1-4（０．４２ｇ）、画分2-1-5（０．５８ｇ）の５つの画分を得た。画分2-1-2を逆相ＨＰＬＣ（カラム１，Ｈ２Ｏ：メタノール＝７３：２７）で精製し、スコポリン（７ｍｇ）及びスキムミン（２５ｍｇ）を得た。画分2-1-4を逆相ＨＰＬＣ（カラム１，Ｈ２Ｏ：メタノール＝３：１）で精製し、ベンジルアルコールグルコピラノシド（１５ｍｇ）を得た。画分2-1-5を逆相カラムクロマトグラフィ（Wakogel RP 18, 溶離液Ｈ２Ｏ、Ｈ２Ｏ−メタノール（２：１）、Ｈ２Ｏ−メタノール（１：１）及びメタノールで画分2-1-5-1、画分2-1-5-2、画分2-1-5-3、画分2-1-5-4の四つの画分に分けた。さらに、画分2-1-5-2を逆相ＨＰＬＣ（Mightysil ODS (関東化学株式会社), 20 x 300 mm (以下、カラム２と記す）, Ｈ２Ｏ−メタノール(７７:２３)で精製し、ロセオシド(roseoside)II（２４ｍｇ）を得た。
【００２４】
画分４を、逆相ＨＰＬＣ（カラム１，溶離液：段階的にＨ２Ｏ−メタノール（７：３）、Ｈ２Ｏ−メタノール（２：３）、メタノール）により画分4-1（０．６９ｇ）、画分4-2（０．５１ｇ）、画分4-3（０．４３ｇ）、画分4-4（０．２８ｇ）の４つの画分に分画した。画分4-2をメタノールから再結晶してイソケルシトリン（３６０mg）を得た。画分4-3を逆相ＨＰＬＣ（カラム１，Ｈ２Ｏ：メタノール＝３：１及び２：３）で精製しアストラガリン（２１２mg）を得た。
画分５を、逆相ＨＰＬＣ（カラム２，溶離液：Ｈ２Ｏ−メタノール（４４：５５）、流速１０ml／分）で画分5-1（保持時間９．０分間）及び画分5-2（保持時間１５．０分間）の二つの画分に分画した。画分5-2をさらに逆相ＨＰＬＣ（カラム２，溶離液：Ｈ２Ｏ−メタノール（４９：５１）、流速９．０ml／分）で精製し、化合物３（２５mg、保持時間３９分間）を得た。
【００２５】
画分７を、逆相ＨＰＬＣ（カラム２，溶離液：Ｈ２Ｏ−メタノール（２０：８０）、流速７．０ml／分）で画分7-1（保持時間１６．０分間），画分7-2（保持時間２３．０分間）の二つの画分に分離した。画分7-1をさらに逆相ＨＰＬＣ（Inertsil prepODS(GL Science Ltd.), 10 x 250 mm(以下、カラム３と記す），溶離液：Ｈ２Ｏ−メタノール（２８：７２）、流速５．０ml／分）で精製し、化合物１（３５mg、保持時間８．０分間）を得た。画分7-2をさらに逆相ＨＰＬＣ（カラム３，溶離液：Ｈ２Ｏ−メタノール（２５：７５）、流速５．０ml／分）で精製し、化合物２（６mg、保持時間１２．０分間）を得た。
化合物１、２及び３の１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，δ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）の結果を表１に、１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，δ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）の結果を表２に示す。
【００２６】
【表１】
0004025817.tif 000007
【００２７】
【表２】
0004025817.tif 000008
【００２８】
化合物１は、非晶形粉末である（[α]Ｄ−5．5°（ｃ＝1．0，MeOH））。高分解能EI-MSスペクトルは、m/z 340.1684に[M] ＋イオンピークを示した（分子式Ｃ２１Ｈ２４Ｏ４(340.1675)に相当する）。１Ｈ-１Ｈ COSYスペクトルは、プレニル基[δ1.67,1.86(3H, brs, H-4", H-5"), δ5.80(1H, brt, J=7.3Hz, H-2"),δ3.85,3.91(1H, dd, 7.3, 13.7Hz, H-1")]、メトキシ基[δ3.69(3H,s)]、及び炭素原子数２〜４の炭素鎖[δ2.71,2.94(1H, m, H-4), δ2.08,2.42(1H, m, H-3), δ5.80(1H, dd, J=2.1, 9.5Hz, H-2)]、1,2,3,4-四置換ベンゼン環[δ6.84, 6.91(1H, ABq, J=8.2Hz, H-6, H-5)]及び1,2,4-三置換ベンゼン環[δ6.66(1H, dd, J=2.4, 8.5Hz, H-5'), δ6.85(1H, d, J=2.4Hz, H-3'), δ7.70(1H, d, J=8.5Hz, H-6')]の存在を示唆した。
【００２９】
ベンゼン環の置換様式は、ＨＭＢＣスペクトルにより調べた。δ3.85と3.91(H-1")のメチレンプロトンシグナルはδ116.5(C-8)の炭素シグナル及び酸素が結合した二つの芳香族炭素シグナル[δ155.4(C-7), δ154.7(C-8a)]と相関性を示し、これはC-8のプレニル基を示唆する。H-4によるプロトンシグナル[δ2.71, 2.94(1H)]は、δ127.3(C-5), 113.4(C-4a)及び154.7(C-8a)の炭素シグナルとクロスピークを示していることから、フラボン骨格が明らかになった。さらに、δ5.80のH-2シグナルは、トリ置換ベンゼン環のC-1'(δ122.6),C-2'(δ156.3)及びC-6'(δ127.9)の炭素シグナルとロングレンジ相関性を示す。さらに、C-4'のメトキシ基の位置をＮＯＥスペクトルの測定により確認した。δ3.69のメトキシ基のプロトン照射は、δ6.85(H-3')及びδ6.66(H-5')のプロトンシグナルの有意な増強をもたらした。従って、化合物１が上記式IIIで表される化合物であることがわかる。
【００３０】
化合物２は、非晶質黄色粉末として得られた；[α]Ｄ−1．6°（c＝1．0，MeOH）。ＣＩ−ＭＳスペクトルは、m/z341に[M+H]＋疑似イオンオンピークを示した（分子式Ｃ２１Ｈ２５Ｏ４に相当する）。化合物２の１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを化合物１と比較したところ、化合物２は化合物１と同一骨格を有するフラボンであり、メトキシ基の位置が異なる異性体であることが推定された。化合物２のＨＭＢＣスペクトルにおいて、δ3.74のメトキシ基のプロトンシグナルは芳香環のδ157.0（C-7）の炭素シグナルとクロスピークを示した。この炭素シグナルには、プレニル基のδ3.63-3.74（H-1"）のプロトンシグナルとも相関性が見られた。さらに、ＮＯＥスペクトルの測定実験において、δ３．７４のメトキシ基のプロトンの照射は、δ6.57(H-6)プロトンシグナルの面積増強をもたらした。従って、化合物２の構造が上記式IVで表されることがわかる。
【００３１】
化合物３は、非晶質粉末として得られる；[α]Ｄ−91.1°（ｃ＝0.25，MeOH）。ＦＡＢ−ＭＳスペクトルはm/z687に[M+Na]＋イオンピークを与えた（分子式Ｃ３３Ｈ４４Ｏ１４Ｎａに相当する）。１Ｈ及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルは、化合物３が化合物１の配糖体であることを示唆した。化合物３をＤ−グルコシダーゼで加水分解すると、Ｄ−グルコース及び化合物１が得られた。NOESYスペクトルは、δ7.32（H-3'）とδ5.54（2'-O-GlcのH-1）、δ7.21（H-6）とδ5.59（7-O-GlcのH-1）、δ3.72（CH３O-4'）とδ6.80（H-5'）の間にＮＯＥが観察された。さらに、ＨＭＢＣスペクトルにおいて、ロングレンジ相関が、ＨＭＢＣスペクトルのδ5.54（2'-O-GlcのH-1）とδ155.9（C-2'）、δ5.59（7-O-GlcのH-1）とδ155.7（C-7）の間にロングレンジ相関が見られた。これにより、化合物３が化合物１の2',7−ジ−Ｏ−グルコシド、すなわち上記式Ｖで表される化合物であることが確認された。
【００３２】
試験例１：ＬＤＬ酸化抑制作用
化合物１，２，３のヒトＬＤＬに対する抗酸化活性を調べた。
本試験例において、EDTA-2Na、ブチルヒドロキシトルエン、硫酸銅、アジ化ナトリウム及びジイソプロピルフルオロホスフェート（ＤＦＰ）は和光純薬（株）製のものを使用した。
（ヒトＬＤＬの単離）
ＥＤＴＡ−２Ｎａ（０．２Ｍ）の存在下で新鮮な血液を低速遠心分離して血清を得た。これを使用まで−２０℃で保存した。ベックマン型70.1 TiローターのベックマンモデルL-70を用い、超遠心分離により、ヒトＬＤＬを血清から単離した。ＬＤＬ中のタンパク質含有量を、ＢＣＡタンパク質キット（Pierce, IL, U.S.A)を用いて測定し、ＬＤＬ濃度をタンパク質含有量として示した。ＬＤＬは使用するまで４℃で保存した。０．１６Ｍの塩化ナトリウムを含有する１００倍容量の１０mM脱水素リン酸塩緩衝液で４℃で２４時間３回透析し、ＥＤＴＡ−２Ｎａを除去した。これにより、ヒトＬＤＬが単離された。
（ＬＤＬからの共役ジエン形成の連続的モニター）
【００３３】
上記で透析して得たＬＤＬを、ＰＢＳで２．０５ｍｇタンパク質／ｍｌに希釈した。ＬＤＬの酸化の間の共役ジエン形成は、スペクトルフォトメトリック法により２３４ｎｍにおける吸光度の変化の測定をベースとして連続的にモニターした。ＬＤＬ及び銅の濃度は、各々０．０５ｇ／ｍｌ、１．６６μＭであった。酸化は、試験化合物の存在下または不存在下、３７℃で、新たに調製した硫酸銅水溶液を添加することにより開始し（最終濃度：１．６６μＭ）、日立製作所製のHitachi spectrophotometerを用いて２３４ｎｍの吸光度を測定することにより連続的にモニターした。試験化合物としては実施例１で得られた化合物１，２，３を各々、０．５ｎｍｏｌ／ｍｌ、０．５ｎｍｏｌ／ｍｌ及び１０．０ｎｍｏｌ／ｍｌの濃度で用いた。評価は酸化の遅延時間を、対照物質としてのケルセチン（Extrasynthese（フランス）から購入）を０．５ｎｍ／ｍｌ添加した場合を１．０として平均値±標準偏差として示した。
【００３４】
結果を表３に示す。
【表３】
0004025817.tif 000009
表３に示されるように、特に化合物１は強いＬＤＬ酸化防止作用を示した。
【００３５】
試験例２：ラジカル捕捉作用
各試験化合物のＤＰＰＨラジカルに対する捕捉効果を、５１７ｎｍにおける吸収の減少をモニターすることにより調べた。各試料のエタノール溶液（１ｍｌ）を２００μＭのＤＰＰＨ溶液に添加した（ＤＰＰＨの最終濃度：４０μＭ）。ボルテックスミキサーで１０秒間混合した後、溶液を３０分間放置し、得られた溶液の５１７ｎｍにおける吸光度を測定した。ＤＰＰＨラジカルの捕捉作用は    ＥＣ５０として示した。結果を表４に示す。
【００３６】
【表４】
0004025817.tif 000010
【００３７】
【発明の効果】
本発明の化合物により、血中のＬＤＬの酸化防止を図ることができ、これにより粥状動脈硬化を予防することが可能になる。