(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
貝類肉を抽出して得られ、電気泳動法による分子量測定において単一バンドを有するコラーゲンを配合することを特徴とする化粧品。
【請求項２】
前記コラーゲンを加水分解、アテロ化、アシル化の１種以上の加工を加えたものを配合することを特徴とする請求項１記載の化粧品。
【請求項３】
前記加水分解が酸またはアルカリによる加水分解であることを特徴とする請求項２記載の化粧品。
【請求項４】
前記貝類肉がアコヤ貝肉であることを特徴とする請求項１、請求項２または請求項３記載の化粧品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、皮膚に有用であるコラーゲンを配合することを特徴とする化粧品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
コラーゲンは牛皮、豚皮、魚皮など動物の皮膚を形成する主要タンパク質である。コラーゲンは、真皮の７０％を占める重要な結合組織の蛋白質で肌のハリや皺の生成に関与しており、また高い保湿性を有し肌のみずみずしさなどにも影響を与えている。  皮膚に存在するコラーゲンはそのほとんどが１型であり、残りは３型である。しかし、加齢や日光などで損傷を受ける。これを防ぐために化粧品の原料として多量に利用されてきた。また、医薬品、医療用具にもそれらは優れた生体適合性を有することから利用されている。さらに、近年食品素材としても注目を浴びている。これまで使用されてきたコラーゲンは主に牛皮や豚皮由来であったが、近年はそれらに含まれるウイルス等の影響もあり、またコラーゲンは起源によって構造が異なり、種々の起源のコラーゲンが開発されている。
しかしながら、現在利用されている牛、豚、魚の皮など、いずれも１型（α１）2α２ヘテロ分子構造を持ったコラーゲンである。
また、貝類肉でも、ホタテ貝や真珠の養殖に用いられるアコヤ貝はその貝肉に関しては貝柱以外は廃棄物として処理が問題になっていた。すでに、特許登録第１８５３３４１号、１８０５１８７号、１９２９８１５号各公報にその利用した特許は公開されているが、現状は廃棄物として捨てられている部分が多い。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは以上のような現状を鑑み、有効性が高く、安全性も高いコラーゲンを開発し、医薬品、医薬部外品、化粧品および食品に応用することを試みた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
コラーゲンは上記のように皮膚にとって非常に有用であることはすでにわかっているが、哺乳動物を由来とするコラーゲンは、一部の人にとっては利用したくないものであり、様々なニーズにも答えるべく、鋭意検討した結果、貝類肉より得られる１型（α１）3ホモ分子構造をもつコラーゲンが本発明の主旨に合致することがわかった。１型（α１）3ホモ分子構造をもつコラーゲンは鶏胚腱からも得られるが最も経済的にも優位に得られるのは貝類肉からであり、なお且つ、カキ、アワビ、アサリ等は貝肉は食料として利用されているがアコヤ貝の場合は真珠養殖が終了した時点で廃棄物として投棄されているのが現状であり、アコヤ貝を本発明の原料として用いるのが最も効果的である。
この１型（α１）3ホモ分子構造をもつコラーゲンは皮膚中に多い１型であり、以下の記述するように今まで利用されていた牛やカツオの皮より得た１型（α１）2α２ヘテロ分子構造を持ったコラーゲンより保湿性等がよく、この結果の作用機序は明確には不明であるが、この構造の違いより発生しているものと思われる。
【０００５】
アコヤ貝は真珠養殖が終わって、真珠を取り出すときに、ホタテ貝は貝柱を除いたあとの貝肉を集める。これに水を加えて攪拌し不溶物を集める。他の貝肉の場合は必要により貝柱などを除いた貝肉を用いる。コラーゲンの抽出の方法は、公知の方法で行えばよい。すなわち例えば、、水を加えたあと、攪拌したのち、遠心分離機で分離する方法や静置して上澄みを捨てる方法など選択すればよい。この不溶物よりさらに不純物を除くために、塩化ナトリウム、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム等の塩溶液や、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、アンモニア水等の塩基性溶液或いは、エチレンジアミン四酢酸塩等のキレート剤を加えて攪拌して不溶物を集める。これにさらにエタノール等の水溶性有機溶媒で不純物を除いたのち、酢酸、クエン酸、乳酸、塩酸、リン酸などを用いて酸抽出することによりコラーゲンが得られる。濃度は酸の種類や各種の条件によって異なるが０．０１〜２モルの濃度で行う。この液を加えて２〜４８時間攪拌すると抽出される。なお、温度は３０℃以下、好ましくは２〜１０℃である。
このほか、酵素を用いたのち、酸で抽出する方法等公知の方法で抽出すればよい。また、用途によってはさらに精製した方がよい場合があり、親水性有機溶媒や塩析法などを用いて精製する。
１型（α１）3ホモ分子構造をもつコラーゲン以外のコラーゲンや蛋白質などが場合によっては含まれるが実際に使用する場合に問題になることはない。用途によって経済的側面や安全性の面から精製度を変化させることも可能である。
【０００６】
以上のようにして得られたコラーゲンをそのまま用いてもよいがさらに利用の範囲を広げるために、用途等によって加水分解、アテロ化、アシル化などの処理を加える。
加水分解の方法はコラーゲナーゼ、パパイン、ペプシン等の蛋白分解酵素、塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸、酢酸、乳酸、コハク酸などの有機酸、これらを単独或いは２種以上用いて分解し、必要に応じて不要な酵素や酸を除去する。また、酵素や酸以外のアルカリ等の分解方法を用いてもなんら問題はない。
酵素のみを用いる場合、コラーゲナーゼ以外を用いるてもコラーゲンは分解されないため、コラーゲナーゼと併用するか酸で分解したあと用いる。
【０００７】
アテロ化はコラーゲンの螺旋構造の末端に存在するテロペプタイドを除去することであり、このテロペプタイドは抗原生を有しているため、用途によってはアテロ化が必要である。その方法はコラーゲナーゼ以外の蛋白分解酵素を用いることによって、コラーゲンの本体である螺旋構造部分は分解されず、テロペプタイドのみを除去できる。
【０００８】
アシル化はコラーゲンの側鎖アミノ基の一部または全部を炭素数２〜２２の飽和或いは不飽和の脂肪酸や炭素数２〜８のジカルボン酸を用いてアシル化する。アシル化すると、用いた脂肪酸またはジカルボン酸によって異なるが溶解性や乳化性がが向上する。
また、アシル化するときに複数の脂肪酸或いはジカルボン酸を用いる方法や一部アシル化したのち、最初に用いた脂肪酸或いはジカルボン酸と異なる脂肪酸或いはジカルボン酸で再度アシル化する方法等もある。
アシル化するときに用いる脂肪酸或いはジカルボン酸を例示すれば酢酸、酪酸、プロピオン酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ヘプタン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リシノール酸、オレイン酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、アラキジン酸、ベヘニル酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、２−メチルマレイン酸、２，３−ジメチルマレイン酸、フタル酸等があるが勿論これ以外の脂肪酸、ジカルボン酸も当然利用できる。
特にコハク酸を用いてする場合をサクシニル化といい、この処理は特に有効である。
アシル化の方法はコラーゲンのｐＨを８〜１４に調整し、低温（２５度以下）を保ちつつ、脂肪酸或いはジカルボン酸の無水物を必要量攪拌しつつ添加して必要なものを得る。
以上の加水分解、アテロ化、アシル化を必要に応じて組み合わせて必要なコラーゲンを得る。
【０００９】
これを医薬品、医薬部外品、化粧品および食品に配合する。コラーゲン或いはコラーゲン誘導体がすでに用いられている分野や製品であれば特に限定なく本発明のコラーゲン或いはコラーゲン誘導体を用いることができる。
剤形は特に問わないので、医薬品、医薬部外品、化粧品の場合、クリーム類、軟膏類、パック類、ゲル、錠剤、散剤、液剤、錠剤、散剤、顆粒、糖衣錠、カプセル、懸濁液、アンプル、注射剤等の任意の剤形を選択し、化粧水，乳液，クリーム等の皮膚用化粧料、メイクアップベースローション，メイクアップベースクリーム，液状又はクリーム状或いは軟膏型のファンデーション，アイカラー，チークカラーといったメイクアップ化粧料、シャンプー，リンス，ヘアートリートメント、パーマネント液、整髪料、染毛料、ヘアートニック類、育毛・養毛料等の毛髪用化粧料、ハンドクリーム，レッグクリーム，ボディローション等の身体用化粧料などに利用する。
食品の場合もスープ、果実ジュース、野菜ジュース、乳清飲料、清涼飲料などの飲料、アイスクリーム、ガム、キャンデー、、飴、洋菓子類、和菓子類、ジャム、マーマレード、チーズ、バター、ヨーグルト、その他、錠剤、カプセル剤形状の健康食品など一般的な飲食品類へ配合できる。
また、配合の割合は任意であるが、０．０１〜１００％の範囲で配合する。
【００１０】
医薬品、医薬部外品、化粧品の場合、これらの剤型を処方化するために、天然動植物油脂例えば、オリーブ油、ミンク油、ヒマシ油、パーム油、牛脂、月見草油、ヤシ油、ヒマシ油、カカオ油、マカデミアナッツ油等；蝋例えば、ホホバ油、ミツロウ、ラノリン、カルナウバロウ、キャンデリラロウ等；高級アルコール例えば、ラウリルアルコール、ステアリルアルコール、セチルアルコール、オレイルアルコール等；高級脂肪酸例えば、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘニン酸、ラノリン脂肪酸等；高級脂肪族炭化水素例えば、流動パラフィン、固形パラフィン、スクワラン、ワセリン、セレシン、マイクロクリスタリンワックス等；合成エステル油例えば、ブチルステアレート、ヘキシルラウレート、ジイソプロピルアジペート、ジイソプロピルセバケート、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソプロピルミリステート、イソプロピルパルミテートイソプロピルミリステート、セチルイソオクタノエート、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール；シリコーン誘導体例えば、メチルシリコーン、メチルフェニルシリコーン等のシリコーン油
【００１１】
界面活性剤としては、アニオン性界面活性剤例えば、アルキル硫酸塩、脂肪酸塩、アルキルリン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルのリン酸塩や硫酸塩等；非イオン性界面活性剤例えば、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリグリセリン脂肪酸エステル等；両面活性剤例えば、アルキルベタイン、ホスホベタイン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール及びこれらのリゾ体の他、ホスホファチジン酸とその塩
【００１２】
多価アルコール例えば、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、それ以上のポリエチレングリコール類、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、それ以上のポリプロピレングリコール類、１，３−ブチレングリコール、１，４−ブチレングリコール等のブチレングリコール類、グリセリン、ジグリセリン、それ以上のポリグリセリン類、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、マルチトール等の糖アルコール類、グリセリン類のエチレンオキシド（以下、ＥＯと略記）、プロピレンオキシド（以下、ＰＯと略記）付加物、糖アルコール類のＥＯ、ＰＯ付加物、ガラクトース、グルコース、フルクトース等の単糖類とそのＥＯ、ＰＯ付加物、マルトース、ラクトース等の多糖類とそのＥＯ、ＰＯ付加物などの多価アルコール
【００１３】
薬剤としてトコフェロール、酢酸トコフェロール、ビタミンＣ、アラントイン、胎盤抽出物、エラスチン、アルブチン、コラーゲン、トリクロサン、トリクロロカルバン、グリチルリチン酸ジカリウム、メチルパラベン、ブチルパラベン
【００１４】
これらの原料を組み合わせて必要な製剤を得る。ただし、界面活性剤は特開平３−８３９０９号、特開平５−４３４１６号、特開平６−９３３３号公報に記載があるように配合しないことによってもひとつの利点があり、目的によっては配合しない。勿論他の原料も必要に応じて配合する。
食品の場合も同様に任意の原料を用いて目的の飲食品を作成する。
【００１５】
以下に本発明の実際の利用方法である製造例、実施例等を記載するが、本発明はこれらの製造例、実施例に何ら限定されるものではない。
【００１６】
製造例１（アコヤ貝１型(α1)3ホモ分子コラーゲン）
アコヤ貝は真珠養殖が終わって、真珠を取り出したあとの貝肉を集める。得られたアコヤ貝肉８８０gを食塩で塩もみし、ぬめりを除去したのち、０．６M KCl１２００mL中にて２時間ホモジナイズし、デカンテーションにより貝肉を集める。その後、０．４５M NaCl １２００mL中にて２時間攪拌したのち、デカンテーションにより貝肉を集め、１４６gの断片アコヤ貝肉が得られた。さらに、この断片貝肉を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液にて溶解し、pH６〜７に中和後、上清を透析膜（和光純薬：ダイアライシスメンブラン３６）に付し、外液を精製水とし一夜透析を行った。
【００１７】
製造例２（アサリ貝１型(α1)3ホモ分子コラーゲン）
アサリの剥き身を用いて製造例１と同様な操作を行った。
【００１８】
製造例３（アコヤ貝１型(α1)3ホモ分子アテロ化コラーゲン）
製造例１の精製コラーゲンを作成する行程中、０．４５M NaCl １２００mL中にて処理したのち得られる断片アコヤ貝肉１４．６ｇを０．１M酢酸１０００mL中、一夜攪拌したのち、遠心分離（３０００×g、２０分）を行い、沈降物（６８g）を集める。得られた沈降物を０．０１N HCl １２００mL中に分散させ、ペプシン１．０〜１．５gを加え、一夜攪拌したのち、遠心分離（９５００×g、２時間）を行い、上清を透析膜（和光純薬：ダイアライシスメンブラン３６）に付し、外液を精製水とし一夜透析を行った。
【００１９】
製造例４（アコヤ貝１型(α1)3ホモ分子サクシニル化コラーゲン）
製造例１で得た１０ｇに精製水５００mlを加え、１０℃とＮａＯＨでｐＨ１０に保ちながら、無水コハク酸を０．５ｇを徐々添加した。これを凍結乾燥した。
【００２０】
製造例５（アコヤ貝１型(α1)3ホモ分子アテロ化コラーゲン加水分解物）
製造例３の凍結乾燥物１gを６N HCl １０mL中に加え、１００℃で２時間加熱を行い、冷却後、凍結乾燥し得られた粗反応物を１型(α1)3ホモ分子コラーゲンの加水分解物とする。
【００２１】
実施例−１ ローション                                        （重量部）
オリーブ油                                                      ０．５
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．０）ソルビタンモノステアレート      ２．０
ポリオキシエチレン（６０Ｅ．０）硬化ヒマシ油                    ２．０
エタノール                                                    １０．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                            ５．０
製造例１                                                        ５．０
精製水                                                        ７５．５
常法にしたがって作成した。
【００２２】
実施例−２ クリーム                                          （重量部）
スクワラン                                                    ２０．０
オリーブ油                                                      ２．０
ミンク油                                                        １．０
ホホバ油                                                        ５．０
ミツロウ                                                        ５．０
セトステアリルアルコール                                        ２．０
グリセリンモノステアレート                                      １．０
ソルビタンモノステアレート                                      ２．０
精製水                                                        ４７．９
製造例２                                                        ０．５
ポリオキシエチレン（２０Ｅ．０）ソルビタンモノステアレート      ２．０
ポリオキシエチレン（６０Ｅ．０）硬化ヒマシ油                    １．０
グリセリン                                                      ５．０
１．０％ヒアルロン酸ナトリウム水溶液                            ５．０
パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．１
常法にしたがって作成した。
【００２３】
実施例−３  ヘアーシャンプー                                  （重量部）
Ｎ−ヤシ油脂肪酸アシル−Ｌ−グルタミン酸
トリエタノールアミン３０％水溶液                            １０．０
ラウリン酸ジエタノールアミド                                    ５．０
ラウロイルメチルタウリンナトリウム                              ６．０
１，３ブチレングリコール                                        ３．０
フェノキシエタノール                                            １．０
パラオキシ安息香酸メチル                                        ０．５
塩化[２−ヒドロキシ−３−トリメチルアンモニオプロピル]
ヒドロキシエチルセルロース                                    ０．２
製造例３                                                        ２．０
精製水                                                        ７２．３
常法にしたがって作成した。
【００２４】
実施例−４  育毛ローション                                  （重量部）
エタノール                                                  ２０．０
パラオキシ安息香酸メチル                                      ０．１
ヒノキチオール                                                ０．０１
酢酸ｄｌ−α−トコフェノール                                  ０．１
ポリオキシエチレン（６０Ｅ．０）硬化ヒマシ油                  ０．５
精製水                                                      ７１．７９
製造例４                                                      １．０
センブリエキス                                                ３．０
ニンジンエキス                                                ３．０
パントテニルエチルエーテル                                    ０．５
常法にしたがって作成した。
【００２５】
実施例−５  錠剤                                              （重量部）
製造例５                                                      ４０．０
乳糖                                                          ２０．０
コーンスターチ                                                １６．０
結晶セルロース                                                ２０．０
ポリビニルピロリドン                                            ３．０
ステアリン酸Ｍｇ                                                １．０
常法にしたがって上記各成分を用いて顆粒化し、圧縮成形して１錠５００ｍｇ錠剤１０００錠を調整した。
【００２６】
実施例−６  飲料
製造例１                                                        １ｇ
キシリトール                                                  １０g
ビタミンＢ1塩酸塩                                             ０．５mg
ビタミンＢ2                                                   ０．２mg
ビタミンＣ                                                    ５００mg
ナイアシン                                                    １．０mg
パントテン酸Ｃa                                               １．０mg
精製水                                                        １００ｇ
【００２７】
上記の有効性を確認するために以下の使用テストを行った。
使用テスト１
女性１６名づつの顔面を左右に分け、一方を実施例、もう一方を比較例として毎日、１回以上使用し、１年後アンケートした。なお、比較例は実施例より製造例を水にかえたものである。（比較例１，２）
判定基準は以下のようでアンケートの結果をまとめたのが以下の表である。
実施例の方が非常によい    ３
実施例の方がかなりよい    ２
実施例の方がややよい      １
差がない                  ０
比較例の方がややよい    −１
比較例の方がかなりよい  −２
比較例の方が非常によい  −３
【００２８】
実験の方法は表２のように行った。
0003929369.tif 000002
【００２９】
結果は表３のようになった。
0003929369.tif 000003
【００３０】
使用テスト２
使用テスト１と同様な試験を行った。但し、比較例は実施例より製造例
を同等の牛由来のコラーゲンに置き換えてテストを行った。
【００３１】
実験の方法は表４のように行った。
0003929369.tif 000004
【００３２】
結果は表５のようになった。
0003929369.tif 000005
【００３３】
使用テスト３（官能評価）
製造例１と製造例１と同濃度の牛由来コラーゲン水溶液を用いて官能評価を行った。選抜した官能パネラー３名に前腕内側部で評価を行ったところ、以下の評価を得た。なお、評価基準は製造例１の方が非常によいが５、製造例１と比較例と同程度が３、比較例の方が非常によいが１として、その中間は０．５刻みで評価点をつけてもらった。３人の平均点を以下の表６に示す。
【００３４】
0003929369.tif 000006
【００３５】
以上のように本発明の１型（α１）3ホモ分子構造をもつコラーゲン、およびその配合した実施例の有効性が高いことがわかった。製造例が１型(α1)3ホモ分子コラーゲンの構造であることを確かめるために、製造例１をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動を行った。結果を図１に示す。
【００３６】
【図１】
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【００３７】
図のＡは分子量マーカーを、Ｂは牛由来アテロコラーゲンを、Ｃは牛由来コラーゲンを、Ｄは製造例１を示す。このようにＢとＣはコラーゲンを構成する３つの鎖が大きく分けて２種類の分子量のものから構成されているが、製造例１は同一のほぼ同一の３つの鎖から構成されており、１型(α1)3ホモ分子構造をとるコラーゲンであることがわかる。
【００３８】
【効果】
１型(α1)3ホモ分子コラーゲン（貝類肉より得た）を配合することを特徴とする皮膚外用剤はシワの減少、肌のつや、肌のはりを改善し、その結果、貝類肉が廃棄物のして海洋汚染を引き起こすことを防ぐ。また、１型(α1)3ホモ分子コラーゲンを加水分解、アテロ化、アシル化などの処理を行うことによって安全性が増し、溶解性が改善され、よリ多くの用途に用いることができた。