(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
分子量３５００以上で分子量の最頻値が１００００であるフィブロインペプチドからなり、その内のアミノ酸中のセリン残基、スレオニン残基及び／又はチロシン残基中の一部の水酸基が、縮合により下記一般式で表される基で置換されていることを特徴とする医療用フィブロイン粉末。
0003999667.tif 000007
（式中、ｎは０又は１０以下の整数、Ｘ及びＹは水素原子又は炭素数１０以下のアルキル基もしくはアリール基であり、ＸとＹとは互いに同一であっても異なっていてもよく、Ｘの炭素数とＹの炭素数とｎの合計は１０以下である。）
【請求項２】
請求項１に記載の医療用フィブロイン粉末からなる臓器癒着防止剤。
【請求項３】
請求項１に記載の医療用フィブロイン粉末からなる生体用封止剤。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、医療分野において利用可能なフィブロイン粉末及びフィブロイン水溶液に属する。
背景技術
絹フィブロインは、生体適合性の良いタンパク質であり、そのため従来より外科手術時の縫合糸として利用されている。また、フィブロインをペプチドに低分子化して得られるフィブロイン粉末は、水溶性を示し、食品や化粧品の分野において提案されあるいは用いられている（例えば特開２０００−４８２８）。さらに近年、医療分野において、縫合糸以外でのフィブロインの利用が検討されている（特開平９−１９２２１０、特開平１１−１０４２２８）。特に、手術後に切開部を接着させたり、創傷部を塞いだりするための封止剤、及び臓器同士が癒着するのを防ぐための癒着防止剤として利用することが求められている。
しかし、封止剤又は癒着防止剤として利用するためには、人体表面に塗布可能で流出しないという条件を満たす必要がある。この条件を満たすためには、フィブロイン粉末を水に溶解して、粘性の高い水溶液を作製しなければならない。
ところが、従来のフィブロイン粉末では、ペプチドの分子量が低いので、水に溶解しても粘性が高くならない。粘性を高くするには高分子量のフィブロインペプチドを溶解する必要があるが、フィブロインペプチドは、グリシンとアラニンとが交互に並んでβシート構造をとることから非常にゲル化しやすい。よって分子量が高いと、水に対して不溶性となる。従って、粘性の高いフィブロイン水溶液を得るのは容易ではない。
それ故、本発明の課題は、生体用封止剤及び癒着防止剤といった医療用基材として利用可能なフィブロイン粉末及びフィブロイン水溶液を提供することにある。
発明の開示
その課題を解決するために、この発明の医療用フィブロイン粉末は、分子量３５００以上のフィブロインペプチドからなることを特徴とする。分子量が３５００未満であると、水に溶解したときに適度な粘性が得られず、生体に塗布しても流失することが判明したからである。また、分子量を３５００以上とすることにより、フィブロインペプチドに重合性の官能基を付与した場合、重合してゲル化しやすく、生体上に安定に止まるとともに接着性、封止性及び癒着防止性が得られるからである。
好ましいのは、前記フィブロインペプチドの分子量の最頻値が６０００−１５０００の範囲にあるものである。最頻値がこの範囲にあるものは、水に対して非常に良く溶けるとともに、粘性が生体用封止剤や癒着防止剤に好適である上、水溶液が安定で扱いやすいからである。
前記フィブロインペプチドは、その内のアミノ酸中の一部の官能基（α）と、炭素−炭素不飽和基又はカルボキシル基を有する炭素数２−１３、好ましくは炭素数２−１０の二官能性化合物（β）とが縮合したものであると、フィブロインペプチドが重合性を有し、重合によりゲル化する上、生体に対して毒性を示さない。従って、生体用封止剤や癒着防止剤に最適である。特に好ましい化合物（β）は、炭素数２−１０のものである。尚、二官能性化合物（β）の二官能基とは、一つは重合に用いられる炭素−炭素不飽和基又はカルボキシル基で、もう一つはアミノ酸中の一部の官能基（α）との縮合に用いられる官能基のことを意味している。
前記官能基（α）がセリン残基、スレオニン残基及び／又はチロシン残基中の水酸基であり、前記化合物（β）が下記の一般式で表されるものであると好ましい。
0003999667.tif 000002
（式中、Ａは水酸基との縮合により除去されうる原子又は原子団、ｎは０又は１０以下の整数、Ｘ及びＹは水素原子又は炭素数１０以下のアルキル基もしくはアリール基であり、ＸとＹとは互いに同一であっても異なっていてもよく、Ｘの炭素数とＹの炭素数とｎの合計は１０以下、好ましくは７以下である。）
この重合性フィブロインペプチドの製造過程で化合物（β）のＡを除いた残基例えばアクリロイル基やケイ皮酸エステル基が選択的に水酸基と置換し、リンパ球を活性化させるアミノ基を残しておくことができるからである。
上記課題を解決するために、この発明の医療用フィブロイン水溶液は、分子量３５００以上のフィブロインペプチドが溶かされており、フィブロインペプチドの濃度が３３％（ｗ／ｗ）以上であることを特徴とする。分子量と濃度をこのように制御することにより、封止剤や癒着防止剤として最適の粘性を有する水溶液となる。
この発明のフィブロイン粉末を製造する適切な方法は、絹フィブロインを濃塩酸で加水分解した後、中和、脱塩し、透析により分子量３５００未満の物質を除去し、残った溶液を遠心分離した後、上澄みを凍結乾燥することを特徴とする。この方法において特に重要な過程は、濃塩酸による加水分解である。これによって絹フィブロインが分子量数万以下の水溶性フィブロインペプチドとなる。濃塩酸以外の他の酸やアルカリでは十分な加水分解が起こらず、回収量が悪くなる。
加水分解温度としては４０−８０℃が望ましく、処理時間としては５分−１時間が望ましい。最も好ましい加水分解条件は、１２Ｎの濃塩酸を用いて、６０℃で１５分間処理することである。この条件により加水分解をすると、水に良く溶けてしかもその水溶液が高い粘性を示すフィブロイン粉末を高収率で得ることができる。
本発明において、フィブロインペプチドの分子量は、以下のようにして求められる。まず、フィブロイン粉末を含む溶液をゲル濾過により分画し、さらに分子量既知のマーカーを含む溶液も同条件で分画する。そして、それらの溶液の各フラクションの吸光度を測定し、その結果から、フィブロイン溶液のフラクションに含まれるペプチドの分子量を推定する。
また本発明において、フィブロイン水溶液の粘度は、キャピラリー式自動粘度測定装置を用いて、２５℃の温度で測定される。
発明を実施するための最良の形態
−実施例１−
カイコ繭を小さな断片にカットし、０．５％（Ｗ／Ｖ）重炭酸アンモニウム水溶液中で４０分間沸騰させて、セリシンを除去した。そして温水で洗浄後、風乾することにより、再生フィブロインを得た。続いて、３通りの方法で再生フィブロインからフィブロイン粉末を製造し、これらをフィブロイン粉末１−３とした。フィブロイン粉末１−３の製造方法は、以下の通りである。
フィブロイン粉末１：ナス型フラスコ中で、再生フィブロイン５０ｇに１２Ｎの濃塩酸８０ｍｌを加え、８０℃で３０分間加熱することにより、加水分解を行った。加水分解後、水で４倍に希釈し、１２Ｎの水酸化ナトリウムで中和した。その後、分子量カット１０００の透析チューブを使って流水で４日間透析した。そして、遠心分離器（ＨＩＴＡＣＨ  ｈｉｍａｃ  ＳＣＲ２０Ｂ）を用いて遠心分離（８，０００ｒｐｍ，４℃，４０分間、以下の実施例においても条件は同じ。）により沈殿を除去した後に、凍結乾燥した。これによって、フィブロインペプチドからなるフィブロイン粉末１を３．２７ｇ（収率６．６４％）得た。
フィブロイン粉末２：加水分解時に６０℃で１５分間加熱し、透析時に分子量カット３５００の透析チューブを用いた以外は、フィブロイン粉末１と同様に製造した。それによって、フィブロインペプチドからなるフィブロイン粉末２を１０．８ｇ（収率２２％）得た。
フィブロイン粉末３：加水分解時に４０℃で１５分間加熱し、透析時に分子量カット１５０００の透析チューブを用いた以外は、フィブロイン粉末１と同様に製造した。それによって、フィブロインペプチドからなるフィブロイン粉末３を１７．５ｇ（収率３５％）得た。
次に、フィブロイン粉末１−３が水に溶解するかどうかを調べた。そして溶解する場合には、最大濃度を求めた。さらにその飽和溶液が、人体表面に塗布しても流出しないぐらいの高い粘性を備えているか否かを調べた。
表１に結果を示すように、フィブロイン粉末１は７０％（ｗ／ｗ）まで水に溶けたが、粘性が低かった。また、フィブロイン粉末３は、水に溶けなかった。これらに対して、フィブロイン粉末２は、６０％（ｗ／ｗ）まで水に溶け、しかも十分に高い粘性を示した。これより、フィブロイン粉末２は医療用接着剤、被覆剤及び癒着防止剤として使用され得るということが判った。
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−実施例２−
実施例１で得られたフィブロイン粉末１−３を、５０ｍＭリン酸緩衝液でｐＨ７．０に調製された０．３Ｍ塩化ナトリウム溶液に１％（Ｗ／Ｖ）、３００μｌになるように溶かした。続いて、セルロファインＧＣＬ２０００ｓｆ（０．９×１００ｃｍ）カラムでゲル濾過し、試験管一本当たり０．５ｍｌずつ１２０本分画した。これらを早く溶出されたものから順にフラクション１−１２０とし、フラクション毎に吸光度を測定した。また、マーカータンパク質についても同様にゲル濾過して吸光度を測定した。そして、その結果より検量線を作成し、これに基づいて各フラクションに含まれるフィブロインペプチドの分子量を推定した。マーカータンパク質としては、ａｌｂｕｍｉｎｅ  ｅｇｇ（４５ｋＤａ）、ｃｈｙｍｏｔｒｙｐｓｉｎ（２５ｋＤａ）、ｌｙｓｏｚｙｍｅ（１４．３ｋＤａ）を使用した。
図１に、フィブロイン粉末２の吸光度（波長２８０ｎｍ及び２２０ｎｍ）の結果を示す。図１に見られるように、フラクション８８−１０１において吸光度が高く、いずれも波長２２０ｎｍで０．７以上であった。さらに、フラクション８８に含まれるフィブロインペプチドの分子量は約１５０００であり、フラクション１０１に含まれるフィブロインペプチドの分子量は約６０００であった。これより、分子量６０００−１５０００のフィブロインペプチドが、フィブロイン粉末２の主成分であると言える。そのうち、分子量の最頻値（フラクション９５、波長２２０ｎｍでの吸光度１．６以上）は約１００００であった。また、フィブロイン粉末１の分子量の最頻値は約２０００であり、フィブロイン粉末３の分子量の最頻値は２００００以上と推定された。
−実施例３−
実施例１で得られたフィブロイン粉末２を、種々の濃度になるように水に溶解した。そして、作製された各水溶液の粘度を測定した。粘度の測定は、２５℃の温度条件下で、キャピラリー式自動粘度測定装置（独ショット社、ＡＶＳ−３１０）を用いて行われた。また各水溶液について、人体表面に塗布に塗布したときに流出しないかどうかを基準にして、医療用接着剤、被覆剤及び癒着防止剤として適しているか否かを判断した。
表２に結果を示すように、フィブロイン粉末２が３３％（ｗ／ｗ）以上の濃度で溶かされた水溶液は、医療用の封止剤（接着剤、被覆剤等）及び癒着防止剤として適しているということが判った。また、それらの水溶液の粘度は、３００ｍｍ２／ｓ以上であった。
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−比較例−
ナス型フラスコ中で、再生フィブロイン１０ｇに１２Ｎの酢酸、蟻酸、硫酸又は水酸化ナトリウム２０ｍｌを加え、６０℃で加熱し、加水分解を試みた。分解後、水で４倍に希釈し、１２Ｎの水酸化ナトリウム又は塩酸で中和後、分子量カット３５００の透析チューブを使い流水で４日間透析した。遠心分離により沈殿を除去した後に、凍結乾燥することによって、フィブロインペプチドを得た。
その結果、酢酸及び蟻酸では３０分以上経過しても加水分解しなかった。硫酸でも加水分解せず、硫酸量を１００ｍｌにしてようやく１時間で加水分解した。但し、濃縮前の収率は１０％であった。水酸化ナトリウムでは３０分で加水分解したが、未分解量が多く、濃縮前の収率は３％しかなかった。
−実施例４−
［水溶性フィブロインペプチドのアクリロイル化］
実施例１のフィブロイン粉末２と同一条件で生成したフィブロインペプチドを実施例２と同一条件で水に溶かした。そして、以下の操作によって、フィブロインペプチド中のセリン残基の水酸基へアクリロイル基を導入した。
３００ｍｌのナス型フラスコを用いて、１ｇのフィブロインペプチドを１０ｍｌのジメチルホルムアミド中に懸濁し、氷浴中で冷却した。その懸濁液に１．３７ｍｌのトリエチルアミンを加えた後、５ｍｌのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドで希釈した１．５７ｍｌの塩化アクリロイルを滴下し、氷浴中で６時間、撹拌した。反応を止めるため、３．６７ｍｌのジメチルホルムアミドに溶かした１．３７ｍｌのトリエチルアミンと０．９５ｍｌの２−プロパノールを加え、氷浴中で２０分間撹拌した。反応液を室温に戻した後、２５ｍｌの水に滴下し、続いて、分子量３５００カットの透析チューブで流水に対して、７日間透析した。遠心分離後、上清を凍結乾燥することによって、アクリロイル化フィブロインペプチドを得た。
［アクリロイル基の導入確認］
上記の操作でアクリロイル基をフィブロインペプチドのセリン残基に導入できたかどうかを、プロトンＮＭＲ（Ｂｒｕｃｋｅｒ  ＡＣ３００）によって以下の要領で確認した。上記で得られたアクリロイル化フィブロインペプチドを２％（Ｗ／Ｖ）の濃度になるように、０．５ｍｌの重水に溶かして測定試料とした。アクリロイル基の導入量はアクリロイル基のビニル結合のプロトン（５．８ｐｐｍと６．６ｐｐｍ）とチロシン残基のａｒｏｍａｔｉｃプロトン（６．９ｐｐｍと７．２ｐｐｍ）の面積比から計算した。その結果、アクリロイル基がフィブロインペプチド１分子に対して１０モル％導入されていることが判った。これはセリン残基中の水酸基の全量に対応する。
［アクリロイル化フィブロインペプチドのラジカル重合］
アクリロイル化フィブロインペプチド（セリン残基がアクリロイル化されたもの）の３３％（Ｗ／Ｗ）または５０％（Ｗ／Ｗ）水溶液に、アクリロイルモノマーに対し１０ｍｏｌ％になるように、重合開始剤として０．１ｍｌの蒸留水に溶かした過硫酸アンモニウムとＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミンを加えた。室温で１５分間反応させ、アクリロイル化フィブロインペプチドを重合させた。重合反応によってフィブロインペプチドはゲル化した。最後にゲルを水で洗浄した。
［ゲル化率及びゲルの水膨潤度の測定］
ゲル化前のアクリロイル化フィブロインペプチドの乾燥重量（Ｗｓ）と、生成したゲルの平衡吸水時および乾燥時における重量（ＷｗおよびＷｇ）を測定し、式（１）および（２）からゲル化率（ＧＹ：アクリロイル化水溶性フィブロインペプチドの乾燥重量の不溶化率）およびゲルの水膨潤度（ＤＳ：ゲルの乾燥重量に対する平衡吸水量の比）を算出した。
ＧＹ（％）＝  Ｗｇ／Ｗｓ×１００  −−−−−−−（１）
ＤＳ＝（Ｗｗ−Ｗｇ）／Ｗｇ  −−−−−−−−−−（２）
その結果、フィブロイン濃度３３％（Ｗ／Ｗ）％および５０％（Ｗ／Ｗ）水溶液は、それぞれ、ＧＹが２０％と４５％、ＤＳが７と３であった。
［生体実験］
ラットの肺上部を切除し、アクリロイル化フィブロインペプチドを塗布し、ゲル化させ、肺切除部に対する接着性、生体適合性を検討した。対照としては、市販のポリエチレングリコール糊（商品名：登録商標「アドバシール」）を用いた。その結果、アクリロイル化フィブロインペプチドは生体適合性が良く、接着性にも優れていることが分かった。
（１）使用動物
体重２５０−３００ｇ（週齢１０週程度）のＷｉｓｔａｒ  ｒａｔ（各群ｎ＝５）
（２）麻酔
エトレンにて鎮静し、ケタラール０．６ｍｌ（１００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に投与した。１６Ｇサーフロー針の外筒を用いて顕微鏡下に気管内挿管を行った。人工呼吸器の設定条件は、ＮＯ２１Ｌ、Ｏ２１Ｌ、一回換気量３ｍｌ、呼吸回数８０／分とし、吸入麻酔薬としてハロセンを導入、維持ともに２％の濃度で使用し、閉胸開始時に中止し、純酸素換気とした。
（３）手術前操作
右側臥位で皮膚切開部位を剃毛し、アルコールで脱脂後、イソジン消毒した。
（４）手術操作
第五肋間に相当する部位の皮膚をメッチェンにて切開した。可及的に皮下を剥離し、筋層を電気メスにて止血しながら切開し、胸壁に達した。第五肋間を確認し、第六肋骨上縁で開胸した。換気停止後、肺の一部を切除した。切除断端からの出血を電気メスで焼灼止血した。切除断端にアクリロイル化フィブロインペプチド又はポリエチレングリコール糊を塗布し、可視光波長：４５０−５５０ｎｍ、光源：キセノン光を５分間照射して各々重合させた。胸腔ドレーンを開胸肋間から一肋間下より挿入し、出血及び残物のないことを確認して閉胸した。閉胸後、加圧しながら胸腔ドレーンを抜いた。創部をイソジン消毒し、フラセンパウダーを散布し、その上にノベクタンスプレーを噴霧した。自発呼吸回復後、気管内チューブを抜いた。
（５）評価
術後、１，４，７，１４，２１日目に犠牲死させ、開胸部と肺切除部位との癒着の有無を目視で観察した。また、ＨＥ染色で組織学的検討を行った。その結果、癒着は全く無く、創傷治癒効果もポリエチレングリコール糊に比べて良好であった。
−実施例５−
実施例４と同じアクリロイル化フィブロインペプチドをあらかじめ脱気した水に溶かしてフィブロイン濃度３３％（Ｗ／Ｗ）又は５０％（Ｗ／Ｗ）とし、この水溶液に水溶性カンファキノンをアクリロイルモノマー濃度に対して１ｍｏｌ％になるように加えた。混合溶液にトクソーパワーライト（株式会社トクヤマ製歯科用可視光線照射器、波長：４００−５２０ｎｍ、光源：ハロゲンランプ）を使い、室温で１０分程度可視光を照射し、アクリロイル化フィブロインペプチドを重合させた。重合反応によってフィブロインペプチドはゲル化した。反応後、ゲルを水で洗浄した。実施例４と同様にＧＹ及びＤＳを測定したところ、フィブロイン濃度４４（Ｗ／Ｖ％）から重合したものがＧＹ＝１８、ＤＳ＝７であった。また、フィブロイン濃度６３（Ｗ／Ｖ％）から重合したものがＧＹ＝３９、ＤＳ＝４であった。
−実施例６−
実施例４と同じアクリロイル化フィブロインペプチドをあらかじめ脱気した水に溶かしてフィブロイン濃度５０％（Ｗ／Ｗ）とし、この水溶液に、アクリロイルモノマーに対し１ｍｏｌ％になるように、光重合開始剤としてエオシンＹを加えた後、還元剤としてアスコルビン酸をエオシンＹの１／１０ｍｏｌになるように加えた。室温でキセノンランプを使って波長４５０−５５０ｎｍの可視光を２分間照射し、アクリロイル化フィブロインペプチドを重合させた。重合反応によってフィブロインペプチドはゲル化した。反応後にゲルを水で洗浄した。実施例４と同様にＧＹ及びＤＳを測定したところ、ＧＹは６４％、ＤＳが３であった。
−実施例７−
［水溶性フィブロインペプチドのメタクリロイル（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌ）化］
以下の操作によって、水溶性フィブロインペプチド中のグルタミン酸残基とアスパラギン酸残基のカルボキシル基へメタクリロイル基（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌ基）を導入した。
実施例１のフィブロイン粉末２と同一条件でフィブロイン粉末を生成した。そして、フィブロイン粉末１ｇ中のカルボキシル基の１０倍モル等量のＷＳＣを２０ｍｌのＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ  ｂｕｆｆｅｒ  ｓａｌｉｎｅ）に溶かし、上記フィブロイン粉末１ｇを加え、ｐＨを７．０付近に保った。室温で１時間撹拌した後、２０ｍｌのイオン交換水に１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド）（以下、ＷＳＣ）、及びこれと等量の２−Ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ  ｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅを溶かした溶液（あらかじめ１０％ＮａＨＣＯ３でｐＨを７．０に調整しておいたもの）を室温で滴下した。１７時間撹拌後、分子量３５００カットの透析チューブに入れ、流水で３日間透析した。遠心分離後、上清を凍結乾燥することによって、メタクリロイル化フィブロインペプチドを得た。
［メタクリロイル基（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌ基）の導入確認］
上記の操作でメタクリロイル基（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌ基）をフィブロインペプチドのカルボキシル基に導入できたかどうかを、プロトンＮＭＲ（Ｂｒｕｃｋｅｒ  ＡＣ３００）によって以下の要領で確認した。上記で得られたフィブロインペプチドを２％（Ｗ／Ｖ）の濃度になるように、０．５ｍＬの重水に溶かして測定試料とした。メタクリロイル基の導入量は、メタクリロイル基（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌ基）のビニル結合のプロトン（５．８ｐｐｍと６．６ｐｐｍ）とチロシン残基のａｒｏｍａｔｉｃプロトン（６．９ｐｐｍと７．２ｐｐｍ）の面積比から計算した。その結果メタクリロイル基（ｍｅｔｈａｃｒｙｌｏｙｌ基）がフィブロインペプチド１分子に含まれる全てのカルボキシル基に導入されたことが判った。
［メタクリロイル化フィブロインペプチドの光重合］
上記のメタアクリロイル化フィブロインペプチド５０％（Ｗ／Ｖ）に、アクリロイルモノマーに対し１ｍｏｌ％になるように、光重合開始剤としてエオシンＹを加えた後、還元剤としてアスコルビン酸をエオシンＹの１／１０ｍｏｌになるように加えた。室温でキセノンランプを使って波長４５０−５５０ｎｍの可視光を２分間照射し、アクリロイル化フィブロインペプチドを重合させた。重合反応によってフィブロインペプチドはゲル化した。最後にゲルを水で洗浄した。
ゲルのＧＹ及びＤＳを実施例４と同様に測定したところ、ＧＹが２３％、ＤＳが７であった。
−実施例８−
［水溶性フィブロインペプチドのケイ皮酸エステル化］
以下の操作によって、水溶性フィブロインペプチド中のセリン残基、スレオニン残基、チロシン残基の水酸基へケイ皮酸エステル基を導入した。
実施例１のフィブロイン粉末２と同一条件でフィブロイン粉末を生成した。３００ｍｌのナス型フラスコを用いて、上記フィブロイン粉末１ｇを１０ｍｌのジメチルホルムアミド中に懸濁し、氷浴中で冷却した。その懸濁液に０．９２ｍｌのトリエチルアミンを加えた後、５ｍｌのジメチルホルムアミドに溶かした２ｇのケイ皮酸クロリドを滴下し、氷浴中６時間、撹拌した。反応を止めるため、４．５ｍｌのジメチルホルムアミド溶かした０．９２ｍｌのトリエチルアミンと０．４８ｍｌの２−プロパノールを加え、氷浴中で３０分間撹拌した。反応液を室温に戻した後、２０ｍｌの水に滴下し、続いて、分子量３５００カットの透析チューブで流水に対して、７日間透析した。遠心分離後、上清を凍結乾燥することによって、ケイ皮酸エステル化フィブロインペプチドを得た。
［ケイ皮酸エステル基の導入確認］
上記の操作でケイ皮酸エステル基をフィブロインペプチドの水酸基に導入できたかどうかを、ＩＲ（日本分光）によって以下の要領で確認した。上記で得られた２ｍｇのフィブロインペプチドと２００ｍｇのＫＢｒを混合し作成したＫＢｒディスクを測定試料とした。修飾前フィブロインペプチド、修飾後のフィブロインペプチド、ケイ皮酸クロリドの測定結果を比較することによってケイ皮酸エステル基が導入されたかどうかを確認した。修飾前後でケイ皮酸エステル基のベンゼン環由来の３０００−３１００ｃｍ−１吸収が大きくなっていることからケイ皮酸エステル基の導入が確認された。
［ケイ皮酸エステル化フィブロインペプチドの光重合］
得られたケイ皮酸エステル化フィブロインペプチドの５０％（Ｗ／Ｖ）水溶液を作成し、室温で５００Ｗのキセノンランプを使って紫外光を２分間照射しケイ皮酸エステル化フィブロインペプチドを重合させた。重合反応によってフィブロインペプチドはゲル化した。最後にゲルを水で洗浄した。ゲルのＧＹ及びＤＳを実施例４と同様に測定したところ、ＧＹ＝２６％、ＤＳ＝８であった。
産業上の利用可能性
本発明によると、医療用の封止剤及び癒着防止剤といった医療用基材として利用可能なフィブロイン粉末及びフィブロイン水溶液を得ることができる。
【図面の簡単な説明】
図１は本発明のフィブロイン粉末の吸光度を示す図である。
【図１】
0003999667.tif 000008