(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒアルロン酸のｐＨ３．５以下の水溶液を凍結し、次いで解凍して形成され、かつ次の（ａ）、（ｂ）の要件を満たすヒアルロン酸単独で形成されたゲルを含有することを特徴とする化粧料。
（ａ）中性の３７℃の水溶液中で１２時間での溶解率が５０％以下である、（ｂ）ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下でヒアルロン酸ゲルを処理することで可溶化されたヒアルロン酸が分岐構造を有し、該可溶化されたヒアルロン酸中に、分岐度が０．５以上の分子量フラクションを部分的に含む。
【請求項２】
ヒアルロン酸単独で形成されたゲルが、シート状、フィルム状、破砕状、及び流動状からなる群より選択した１種であることを特徴とする請求項１記載の化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸単独で形成されたゲルを含有する化粧料に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の水分を適正な範囲に保つことは、美容の面から非常に大切なことであり、保湿を目的とした化粧料は多くみられる。皮膚の保湿に関与する物質について研究もされ、プロピレングリコールやソルビトール等の多価アルコールをはじめとして数多くの保湿剤が使用されるに至った。特に最近、注目を集めているのがヒアルロン酸である。ヒアルロン酸は皮膚の天然保湿因子であり、保湿剤として優れた性質を有しているので、皮膚細胞を賦活化し、老化皮膚の代謝を速め、肌荒れ改善効果、角質改善効果に著効を呈すると共に、皮膚にしっとり感、なめらか感、張り及び艶を付与し、皮膚を美しくする効果があるとされている。
【０００３】
かかる効果を持つヒアルロン酸を配合した各種化粧用クリーム、乳液、化粧水、美容液等の多くの化粧料が提供されている。さらにヒアルロン酸に美白効果を有する物質を配合した化粧料や肌荒れ改善効果のある物質を配合した化粧料も提供されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
ヒアルロン酸は肌荒れ改善効果、角質改善効果、保湿効果等の美容効果を有することは前記の通りであるが、さらに皮膚での滞留性を向上させることでその美容効果は著しく改善されることが期待される。ワンポイント化粧料として、瞼、目尻、額、口許、首等にヒアルロン酸のシートを塗布することや、滞留性の向上のためにヒアルロン酸を化学的に架橋することがさまざま試みられている（特開平３−１１２９１４号公報、米国特許第４，５８２，８６５号明細書、特公平６−３７５７５号公報、特開平７−９７４０１号公報、特開昭６０−１３０６０１号公報）。
【０００５】
しかしながら、ヒアルロン酸のシートは水や化粧水に対して溶解性が高く、架橋剤による架橋ヒアルロン酸はもはや本質的にヒアルロン酸そのものではない。架橋剤の残存を完全に否定することが難しいことも考慮すると、皮膚への安全性を無条件に保証することはできない。我々は、架橋剤を用いない本質的にヒアルロン酸単独で形成された中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルを見出しＰＣＴ／ＪＰ９８／０３５３６号）、今回、この難水溶性ヒアルロン酸ゲルの化粧料への適用の可能性を鋭意検討し、その有用性を見出し本発明を完成するに至った。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
すなわち、本発明は、（１）ヒアルロン酸のｐＨ３．５以下の水溶液を凍結し、次いで解凍して形成され、かつ次の（ａ）、（ｂ）の要件を満たすヒアルロン酸単独で形成されたゲルを含有することを特徴とする化粧料。
（ａ）中性の３７℃の水溶液中で１２時間での溶解率が５０％以下である、（ｂ）ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下でヒアルロン酸ゲルを処理することで可溶化されたヒアルロン酸が分岐構造を有し、該可溶化されたヒアルロン酸中に、分岐度が０．５以上の分子量フラクションを部分的に含む。
（２） ヒアルロン酸単独で形成されたゲルが、シート状、フィルム状、破砕状、及び流動状からなる群より選択した１種であることを特徴とする（１）記載の化粧料である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明でいうヒアルロン酸ゲルとは、三次元網目構造をもつ高分子及びその膨潤体である。三次元網目構造はヒアルロン酸の架橋構造によって形成されている。
【０００８】
その一例としては、ヒアルロン酸のｐＨ３．５以下の水溶液を凍結し、次いで解凍することでシート状、フィルム状、破砕状、又は流動状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルを得ることができる。より具体的には以下に述べる。
【０００９】
本発明に用いられるヒアルロン酸は、動物組織から抽出したものでも、また発酵法で製造したものでもその起源を問うことなく使用できる。
発酵法で使用する菌株は自然界から分離されるストレプトコッカス属等のヒアルロン酸生産能を有する微生物、又は特開昭６３−１２３３９２号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第9027号) 、特開平２−２３４６８９号公報に記載したストレプトコッカス・エクイＦＭ−３００（微工研菌寄第2319号) のような高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が望ましい。上記の変異株を用いて培養、精製されたものが用いられる。
【００１０】
本発明に用いられるヒアルロン酸の分子量は、約１×１０5 〜約１×１０7 ダルトンの範囲内のものが好ましい。また、上記範囲内の分子量をもつものであれば、より高分子量のものから、加水分解処理等をして得たものでも同様に好ましく使用できる。
なお、本発明にいうヒアルロン酸は、そのアルカリ金属塩、例えば、ナトリウム、カリウム、リチウムの塩をも包含する概念で使用される。
【００１１】
本発明でいうヒアルロン酸単独とは、ヒアルロン酸以外に化学的架橋剤や化学的修飾剤等は使用しないことまた、カチオン性の高分子と複合体化しないことを意味するものである。
【００１２】
本発明でいうヒアルロン酸ゲルは、ヒアルロン酸の促進酸加水分解反応条件下でヒアルロン酸ゲルを処理することで分解、可溶化することができる。可溶化されたヒアルロン酸が架橋構造を保持している場合、分岐点を有するヒアルロン酸として高分子溶液論的に直鎖状のヒアルロン酸と区別することができる。
【００１３】
本発明でいうヒアルロン酸の促進酸加水分解反応条件としては、水溶液のｐＨ１．５、温度６０℃が適当である。ヒアルロン酸のグリコシド結合の加水分解による主鎖切断反応が、中性の水溶液中と比較して、酸性やアルカリ性の水溶液中で著しく促進される。更に酸加水分解反応は、反応温度が高い方が促進される。
【００１４】
本発明ではＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ法を用い、ＧＰＣで分離された分子量フラクションの分子量と分岐度をオンラインで連続的に測定した。本発明では、同一溶出体積のフラクションの可溶化されたヒアルロン酸の分子量と対照となる直鎖状ヒアルロン酸の分子量を比較して分岐度を計算する溶出体積法を使って分岐度の測定を行った。分岐度は可溶化されたヒアルロン酸の高分子鎖１コ当たりに存在する分岐点の数であり、可溶化されたヒアルロン酸の分子量に対してプロットされる。
【００１５】
可溶化されたヒアルロン酸は、ＧＰＣ溶媒で希釈して濃度を調製し、０．２μｍのメンブランフィルターでろ過した後測定に供した。
本発明でいうヒアルロン酸ゲル中に、ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下でも安定に存在する架橋構造がある場合、可溶化されたヒアルロン酸に分岐構造が高分子溶液論的に確認される。本発明でいうヒアルロン酸ゲルの分岐度は、０．５以上である。
【００１６】
ヒアルロン酸の水溶液のｐＨを調整するために使用する酸は、ｐＨ３．５以下に調整できる酸であれば、いずれの酸も使用することができる。酸の使用量を低減するために、好ましくは強酸、例えば、塩酸、硝酸、硫酸等を使用することが望ましい。
【００１７】
流動状ゲルを調整する場合には、０．１〜１０重量％の金属塩を添加する。金属塩としては塩化ナトリウム、塩化カリウム等を使用することができる。
【００１８】
ヒアルロン酸の水溶液のｐＨは、ヒアルロン酸のカルボキシル基が充分な割合でプロトン化するｐＨに調整する。調整されるｐＨはヒアルロン酸塩の対イオンの種類、ヒアルロン酸の分子量、水溶液濃度、凍結及び解凍の条件、並びに生成するゲルの強さ等の諸特性により適宜決められるが、本発明では、ｐＨ３．５以下、好ましくは、ｐＨ２．５以下に調整することである。
【００１９】
凍結、解凍はヒアルロン酸の調整された酸性水溶液を、任意の容器に入れた後、所定の温度で凍結させ、凍結が終わった後、所定の温度で解凍させる操作を少なくとも１回行う。凍結、解凍の温度と時間は、容器の大きさ、水溶液量によりヒアルロン酸の酸性水溶液が凍結、解凍する温度と時間の範囲内で適宜決められるが、一般には、氷点以下の凍結温度、氷点以上の解凍温度が好ましい。
凍結、解凍時間を短くできることから、更に好ましくは−５℃以下の凍結温度、５℃以上の解凍温度が選ばれる。また、時間は、その温度で凍結、解凍が終了する時間以上であれば特に制限されない。
【００２０】
ヒアルロン酸の調整された酸性水溶液を凍結し、次いで解凍する操作の繰り返し回数は、使用するヒアルロン酸の分子量、水溶液濃度、水溶液のｐＨ、凍結及び解凍の温度と時間、並びに生成するゲルの強さ等の諸特性により適宜決められる。通常は１回以上繰り返すことが好ましい。
また、凍結、解凍の操作を繰り返すごとに、その凍結、解凍の温度及び時間を変えても構わない。
【００２１】
ヒアルロン酸の調整された酸性溶液の凍結解凍により得られたヒアルロン酸ゲルは、ヒアルロン酸の酸加水分解を避けるために、酸性に調整するために用いた酸等の成分を除く必要がある。酸等の成分を除くためには、通常は水性溶媒による洗浄か透析をする。
流動状のゲルを調整する場合には、透析が主に用いられる。
使用する溶媒は、ヒアルロン酸ゲルの機能を損なわないものであれば特に制限はないが、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝液等が用いられるが、好ましくは、生理食塩水、リン酸緩衝液等が用いられる。
【００２２】
また、洗浄・透析方法は、特に制限はないが、通常は、バッチ法、濾過法、カラム等に充填して通液する方法等が、また、透析の場合、透析膜、限外ろ過膜による方法等が好適に用いられる。これらの条件は、液量、回数等を含めて、除きたい成分を目標の濃度以下にできる条件であればよく、ヒアルロン酸ゲルの形態や用途により適宜選択することが可能である。
【００２３】
この洗浄・透析されたヒアルロン酸ゲルは、その使用目的に応じて、溶媒中に浸漬した状態、溶媒を含ませた湿潤状態、風乾、減圧乾燥あるいは凍結乾燥等の処理を経た乾燥状態で化粧料として供される。
【００２４】
ヒアルロン酸ゲルの成形加工等の処理は、作製時には、ヒアルロン酸の調整された酸性溶液の凍結時の容器や手法の選択によりシート状、フィルム状、破砕状及び流動状の所望の形態のヒアルロン酸ゲルの作製が可能である。例えば、板上にキャスティングして凍結することによりフィルム状及びシート状の形態が得られるし、水と混和しない有機溶剤と激しく混合撹拌しながら凍結解凍することにより破砕状の形態が得られる。
【００２５】
これらの中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルは、皮膚での滞留性がヒアルロン酸溶液に比べ著しく向上することで、ヒアルロン酸による肌荒れ改善効果、角質改善効果、保湿効果、さらには美白効果を有する物質の配合による美白効果、又は肌荒れ改善効果を有する物質の配合による肌荒れ改善効果の持続性が増強されるものである。
【００２６】
美白効果を有する物質としては、Ｌ−アスコルビン酸、コウジ酸、及びその誘導体（脂肪酸、硫酸、リン酸エステル等）、システイン、又はグルタチオンとその誘導体、ビタミンＥ誘導体、アルブチン、ヒドロキノン等が挙げられる。
【００２７】
肌荒れ改善効果を有する物質としては、ドコサヘキサエン酸、エイコペンタエン酸、アラントイン、アロエ抽出物、人参抽出物、胎盤抽出物、牛血液徐蛋白物、発酵代謝物等が挙げられる。
【００２８】
化粧料は、ワンポイント化粧料、各種化粧用クリーム、乳液、化粧水、美容液、パック剤、アンダーメークアップ、ファンデーション、ゼリー剤、及び軟膏等に使用できる。また、適用部位に応じ、その形状をシート状、フィルム状、破砕状、又は流動状から選択することができる。
【００２９】
【実施例】
以下、実施例にて本発明を詳細に説明するが、これらに限定されるものではない。
【００３０】
実施例１：シート状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料の作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを蒸留水に溶解し、１重量％のヒアルロン酸水溶液を調製した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に調整し、ヒアルロン酸酸性水溶液を得た。このヒアルロン酸酸性水溶液３０ｍｌを、１８０ｍｍ×１８０ｍｍの角型プラスチック製シャーレに入れ、−２０℃に設定した冷凍庫に入れた。２２時間の凍結と２５℃で２時間の解凍を２回繰り返し、スポンジ状のヒアルロン酸ゲルが得られた。次にこれを生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝成分を加えて調整したｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩水１００ｍｌに５℃で２４時間浸漬し中和した後、蒸留水で十分に洗浄した。そして、これを凍結乾燥し、１８０ｍｍ×１８０ｍｍ大のシート状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料を得た。
【００３１】
実施例２：フィルム状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料の作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを蒸留水に溶解し、１重量％のヒアルロン酸水溶液を調製した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に調整し、ヒアルロン酸酸性水溶液を得た。このヒアルロン酸酸性水溶液３０ｍｌを、１８０ｍｍ×１８０ｍｍの角型プラスチック製シャーレに入れ、−２０℃に設定した冷凍庫に入れた。２２時間の凍結と２５℃で２時間の解凍を２回繰り返し、スポンジ状のヒアルロン酸ゲルが得られた。次にこれを生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝成分を加えて調整したｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩水１００ｍｌに５℃で２４時間浸漬し中和した後、蒸留水で十分に洗浄した。そして、これをオーブンにより４０℃で３時間乾燥し、１８０ｍｍ×１８０ｍｍ大のフィルム状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料を得た。
【００３２】
実施例３：破砕状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料の作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを蒸留水に溶解し、１重量％のヒアルロン酸水溶液を調製した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に調整し、ヒアルロン酸酸性水溶液を得た。このヒアルロン酸酸性水溶液３０ｍｌを、１８０ｍｍ×１８０ｍｍの角型プラスチック製シャーレに入れ、−２０℃に設定した冷凍庫に入れた。２２時間の凍結と２５℃で２時間の解凍を２回繰り返し、スポンジ状のヒアルロン酸ゲルが得られた。次にこれを生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝成分を加えて調整したｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩水１００ｍｌに５℃で２４時間浸漬し中和した後、蒸留水で十分に洗浄した。そして、マイクロホモジナイザーを用い破砕処理をし、破砕状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料を得た。
【００３３】
実施例４：流動状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料の作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを１．０重量％の塩化ナトリウム溶液に溶解し、１．０重量％のヒアルロン酸水溶液を調製した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に調整し、ヒアルロン酸酸性水溶液を得た。このヒアルロン酸酸性水溶液５０ｍｌを金属容器に入れ、−２０℃に設定した冷凍庫に入れた。１２０時間後に取り出し、２５℃で解凍し、流動状ゲルが得られた。次にこれを蒸留水で十分透析し、過剰の酸を除いた。続いてｐＨ７の２５ｍＭリン酸を含む緩衝生理的食塩水で十分に透析中和し、流動状の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料を得た。
【００３４】
比較例１：加熱乾燥ヒアルロン酸シートの作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを蒸留水に溶解し、１重量％のヒアルロン酸水溶液を調製した。この溶液３０ｍｌを、１８０ｍｍ×１８０ｍｍの角型プラスチック製シャーレに入れ、−２０℃に設定した冷凍庫に入れ凍結した。そして、これを凍結乾燥し、１８０ｍｍ×１８０ｍｍ大のヒアルロン酸シートを得た。
【００３５】
比較例２：凍結乾燥ヒアルロン酸フィルムの作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを蒸留水に溶解し、１重量％のヒアルロン酸水溶液を調製した。この溶液３０ｍｌを、１８０ｍｍ×１８０ｍｍの角型プラスチック製シャーレに入れ、これをオーブンにより４０℃で３時間乾燥し、１８０ｍｍ×１８０ｍｍ大のヒアルロン酸フィルムを得た。
【００３６】
比較例３：ヒアルロン酸溶液の作製
分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウムを生理食塩液に溶解し、１重量％のヒアルロン酸溶液を得た。
【００３７】
実施例５：シート状のリン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウム含有の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料の作製
実施例１で調製した中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルシートを、２％リン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウム５ｍｌに浸漬し、再度凍結乾燥してフィルム状のリン酸−Ｌ−アスコルビルマグネシウム含有の中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲル化粧料を得た。
【００３８】
実施例６：中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルの溶解性試験
生理食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝成分を加え、ｐＨ７のリン酸緩衝生理食塩水を調製した。実施例１〜実施例５、及び比較例１〜２で作製したシート（３０×３０ｍｍ）、フィルム（３０×３０ｍｍ）、破砕状ゲル５ｍｌ及び流動状ゲル５ｍｌを５０ｍｌのリン酸緩衝生理食塩水に浸漬し緩やかに攪拌した。３７℃でリン酸緩衝生理食塩水中に溶出するヒアルロン酸の割合を、リン酸緩衝生理食塩水中のヒアルロン酸濃度から求めた。
【００３９】
ヒアルロン酸濃度の測定
リン酸緩衝生理食塩水中のヒアルロン酸濃度は、ＧＰＣを使って、示差屈折率検出器のピーク面積から求めた。結果を表１に示す。
【００４０】
【表１】
0003982937.tif 000002
【００４１】
表１より、実験Ｎｏ．５〜７の対照試料が溶解しやすいの比べ、実験Ｎｏ．１〜４のヒアルロン酸ゲルは、中性水溶液に難溶性であることがわかった。
【００４２】
実施例７：中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルの分岐度測定
実施例１と実施例２で得られた中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸ゲルを、ｐＨ１．５の塩酸水溶液１５ｍｌに浸漬し、６０℃、６時間の加水分解を行った。ゲルは加水分解により可溶化され、これをＧＰＣ溶媒で２倍に希釈して濃度を０．０５重量％に調製し、０．２μｍのメンブレンフィルターで濾過した後、０．１ｍｌ注入してＧＰＣ−ＭＡＬＬＳの測定を行った。
実施例１と実施例２で得られた難水溶性ヒアルロン酸ゲルの分岐度は、いずれも０．５以上であった。
【００４３】
実施例８：女性パネラーの実使用試験
実施例１〜実施例５、及び比較例１〜比較例３で作製した化粧料、シート、及びフィルムの作用効果について、１０名の女性パネラーによる実使用試験で判定、評価を行った。シート及びフィルムは目、鼻、口の部分をくり抜き顔面マスク状に成形して使用した。溶液はそのまま使用した。
試験は、毎日夜の就寝前、洗顔後、生理食塩水等の水分を適量、顔の全体に塗布し、その上に上記の形成したシート及びフィルムを貼り付けた。溶液は適量を顔全体にたっぷりとつけ、よくなじませた。一晩、その状態で保ち、翌朝は水で洗顔した。
試験は２ヶ月間行い、シートの有効性を肌の潤い、肌の張り、肌の荒れ、美白効果の４項目について、女性パネラー本人が評価した。結果を表２に示す。
【００４４】
【表２】
0003982937.tif 000003
【００４５】
表２より、中性水溶液に難溶性であるヒアルロン酸単独で形成されたゲルを含有する化粧料である実施例１〜５は、ヒアルロン酸をシート状、フィルム状、溶液にした比較例１〜３と比べ、肌の潤い、肌の張り、肌の荒れ、美白効果に改善効果を示すものであった。
【００４６】
【発明の効果】
本発明によれば、ヒアルロン酸単独で形成された難水溶性ヒアルロン酸ゲルを含有する化粧料を提供することができる。かかる本発明の化粧料は、架橋剤を使用していないため生体内に存在する本来のヒアルロン酸の構造を維持しており、安全性及び生体適合性に優れ、更に皮膚での滞留性を向上させることで美容効果を増進させるものである。