(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0003990477.tif 000006
（式中、Ｒ1は炭素数１〜３のアルキル基またはＲ2と一緒になってメチリデン基を示し、Ｒ2は水酸基、炭素数１〜２０のアルコキシ基またはニトロオキシ基もしくはフェニル基で置換された炭素数１〜１０のアルコキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または炭素数１〜２０のアルキル基を示し、Ｒ4はシアノ基、炭素数１〜３のアルコキシカルボニル基、炭素数２〜１０のアルカノイル基または水酸基により置換された炭素数２〜１０のアルカノイル基を示す。）で示されるピロリドン誘導体を有効成分とする神経分化誘導剤。
【請求項２】
３−アセチル−１−ヘキサデシル−４−メチル−５−ビニリデン−２−ピロリドンを有効成分とする医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、ピロリドン誘導体を有効成分とする神経分化誘導剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、抗腫瘍剤はその多くがＤＮＡの構造や機能に作用する核酸合成系を阻害するものであり、生体の中でも骨髄細胞など増殖の盛んな正常細胞に対する副作用が問題となっている。
【０００３】
人体を構成する細胞は、Ｇ１期、Ｓ期、Ｇ２期、Ｍ期という一連の過程からなる細胞周期を回転することにより分裂、増殖を繰り返すことが知られている。この細胞周期の制御機構に異常が起こると恒常性に乱れが生じ、腫瘍や免疫疾患が発生する。最近では、細胞周期の調節が分子レベルで解明されつつあり、細胞周期を調節することにより抗腫瘍作用、免疫抑制作用などを示すことが解っている。
【０００４】
一方、癌細胞を分化誘導すると細胞周期進行が停止し、増殖性を喪失し、アポトーシス（細胞死）が誘発されるとともに、移植性や造腫瘍性が喪失することなどが明らかになりつつある。そこで、腫瘍細胞に対して特異的に分化を誘導させる化合物は、従来にはない新しい制癌剤になることが考えられる。現在まで、血球系の腫瘍に対する分化誘導療法の検討は数多くなされているが、神経系の腫瘍に対する分化誘導療法については報告されていない。
【０００５】
また、近年の老人人口の増加に伴って老人性痴呆症などの脳疾患における有効な治療法の確立が急務である。ここで近年、神経分化を誘導することが脳疾患の治療に有効であると提唱されている。しかしながら、現在まで有効な神経分化誘導剤は、知られていないのが現状である。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、新規の神経分化誘導剤の提供を目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題の解決のために鋭意検討した結果、ある種のピロリドン誘導体が神経分化誘導作用を有することを見出し本発明を完成した。
【０００８】
すなわち本発明は、式
【０００９】
【化２】
0003990477.tif 000002
【００１０】
（式中、Ｒ1は炭素数１〜３のアルキル基またはＲ2と一緒になってメチリデン基を示し、Ｒ2は水酸基、炭素数１〜２０のアルコキシ基またはニトロオキシ基もしくはフェニル基で置換された炭素数１〜１０のアルコキシ基を示し、Ｒ3は水素原子または炭素数１〜２０のアルキル基を示し、Ｒ4はシアノ基、炭素数１〜３のアルコキシカルボニル基、炭素数２〜１０のアルカノイル基または水酸基により置換された炭素数２〜１０のアルカノイル基を示す。）で示されるピロリドン誘導体を有効成分とする神経分化誘導剤である。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明の神経分化誘導剤の有効成分であるピロリドン誘導体の一部は、特開平２−２４７１６６号公報に血小板凝集阻害作用を有する化合物として記載されている化合物であり、同公報記載の方法に準じて製造することができる。また別の一部の化合物はジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサイアティ［Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．第８１巻、第４３５５頁（１９５９年）］に記載の方法に準じて、２，３−ジオキソブタンと式
【００１２】
【化３】
Ｒ4ＣＨ2ＣＯＮＨＲ3
（式中Ｒ3およびＲ4は前述と同義である。）で示される化合物を縮合させて得られる化合物を、酸で処理することによって合成することができる。
【００１３】
酸処理に使う酸としては塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸などの鉱酸、１０−カンファースルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸などの有機酸などを使用することができる。また、溶媒を用いてもよく、好ましいものとしてジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、塩化メチレン、クロロホルム、アセトン、トルエン、ベンゼンなどをあげることができる。
【００１４】
本発明において炭素数１〜３のアルキル基とは直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、例えばメチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基などである。
【００１５】
炭素数１〜２０のアルコキシ基とは直鎖状または分岐鎖状のアルコキシ基であり、例えばメトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基、イソプロピルオキシ基、オクタデシルオキシ基などである。
【００１６】
ニトロオキシ基もしくはフェニル基で置換された炭素数１〜１０のアルコキシ基とは、例えばベンジルオキシ基、フェネチルオキシ基、３−ニトロオキシプロポキシ基などである。
【００１７】
炭素数２〜１０のアルカノイル基とは例えばアセチル基、エチルカルボニル基、プロピルカルボニル基などである。
【００１８】
水酸基により置換された炭素数２〜１０のアルカノイル基とは、２−ヒドロキシ，２−メチル  ヘプチルカルボニル基などである。
【００１９】
本発明化合物を神経分化誘導剤として用いるには、化合物をそのまま、または常法に従い製剤化することにより、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤、乳剤、懸濁剤、注射剤などに調製し、経口的または非経口的に投与することができる。
【００２０】
投与量は、成人の患者に対して、通常経口投与の場合、１〜１０００ｍｇ、非経口投与の場合、０．０１〜１００ｍｇを１日１回〜数回に分けて投与することができる。この投与量は疾病の種類、患者の年齢、体重、症状などにより適宜増減することができる。
【００２１】
【発明の効果】
本発明の神経分化誘導剤は神経系の疾患、特に抗腫瘍剤、抗痴呆剤、免疫抑制剤、細胞死抑制剤、手術後などの組織の回復剤などとして有用である。
【００２２】
【実施例】
以下、製造例および実施例により本発明をさらに詳細に説明する。
【００２３】
製造例１
３−アセチル−１−ヘキサデシル−４−メチル−５−ビニリデン−２−ピロリドン
（１）２，３−ジオキソブタン（４．３ｇ）、Ｎ−ヘキサデシルアセトアセトアミド（１６．２ｇ）、水（６ｍｌ）、エタノール（５０ｍｌ）とクロロホルム（１０ｍｌ）の混合物に１０％水酸化ナトリウム液（０．２５ｍｌ）を加え反応混合物を１．５時間撹拌した。反応混合物に飽和食塩水を加えクロロホルムで抽出した。クロロホルム層を１０％水酸化ナトリウム液、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開液：クロロホルム）に付した後エーテルで再結晶して３−アセチル−１−ヘキサデシル−５−ヒドロキシ−４，５−ジメチル−２−ピロリドン（融点８３．５〜８５℃）を得た。
【００２４】
（２）（１）で得られた化合物（１．０ｇ）および１０−カンフルスルホン酸（０．０７ｇ）を塩化メチレン（１０ｍｌ）に溶解し室温で１６時間撹拌した。反応混合物に水を加え分離した塩化メチレン層を飽和炭酸水素ナトリウム液、続いて飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開液クロロホルム：メタノール＝９５：５）に付して３−アセチル−１−ヘキサデシル−４−メチル−５−ビニリデン−２−ピロリドン（化合物３）を得た。
【００２５】
融点６６〜６７℃。
【００２６】
製造例１と同様にして得られた化合物を表１に示した。
【００２７】
【表１】
0003990477.tif 000003
【００２８】
実施例１（神経分化誘導能試験）
マウス神経芽腫細胞Ｎｅｕｒｏ２Ａは、神経分化誘導剤により神経分化特有の樹状突起を形成することが知られている（J.Antibiotics,44,113,1991）。一方、ヒト神経芽腫細胞ＳＨ−ＳＹ５ＹおよびＰＣ１２においても公知の神経分化誘導剤により神経分化特有の樹状突起を形成した。そこで、表１に示した化合物について、化合物１〜６についてはＳＨ−ＳＹ５Ｙ、化合物７および８についてはＰＣ１２を用い、神経芽種細胞に対する樹状突起形成能を測定した。
【００２９】
神経芽種細胞３０００個が１００μＬ中に懸濁している懸濁液を、コラーゲン塗布した９６穴プレートにいれ、細胞を３７℃で２４時間培養した。被験化合物を表２に示した濃度になるようにＤＭＳＯ溶液として１０％加え、２日間培養した後の樹状突起の成長を顕微鏡で観測した。樹状突起した細胞の数が全体の細胞数に対して５〜２０％のものを＋、２０〜４０％のものを＋＋、４０％以上のものを＋＋＋として評価した結果を表２に示した。
【００３０】
【表２】
0003990477.tif 000004
【００３１】
試験例２（細胞周期阻害活性）
細胞周期調節蛋白質であるｐ３４ｃｄｃ２キナーゼが温度感受性に変異したマウス乳癌細胞ｔｓＦＴ２１０細胞を用いた。ｔｓＦＴ２１０細胞は、３２℃でランダム培養すると約１４時間サイクルで細胞周期が一回転づつ進行する。そこで、ｔｓＦＴ２１０細胞に被験化合物を表３に示した濃度で添加し、３２℃で１７時間培養し、細胞周期のどの段階で停止するかをフローサイトメーターを用いて検討した（方法１）。
【００３２】
また、ｔｓＦＴ２１０細胞は、３９℃で培養すると細胞周期がＧ２期で停止し、これをシフトダウンすると再び細胞分裂期を経てＧ１期に移行する。シフトダウンと同時に被験化合物を添加して、フローサイトメーターと顕微鏡観察により細胞周期の進行を解析した（方法２）。これらの結果を表３にまとめて示した。
【００３３】
【表３】
0003990477.tif 000005
【００３４】
表３の結果から明らかなように、被験化合物が細胞分化発現の条件である細胞増殖停止作用を有することが明らかとなった。