(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
壁材料がα，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルから作られた超音波診断のための気体含有粒子を製造するための方法であって、
（ｉ）各々のポリエステル及び必要に応じて表面活性物質を、その少くとも１つの溶媒が直ちに水と混和することができる有機溶媒又は溶媒混合物に溶かし、次に過フッ化化合物又は水をその溶液中に分散し、次にその分散液を、撹拌機構を用いて表面活性物質を含む水中に分散し、ここでその溶媒を気体中にポンピングし、真空を適用することにより除去し、そして最後にその得られた懸濁液を適切な医薬として許容される凍結乾燥保護物質と混合して凍結乾燥するか、又は
（ii）要求されるポリエステル及び必要に応じてアミノ酸を少くとも１つの有機溶媒に溶かし、そしてその溶液を、超臨界ガスで満たされ又はそれが流れるカラム内にノズルを通して噴霧し、ここでその溶媒が超臨界ガスにより取り込まれる
ことを特徴とする方法。
【請求項２】
前記壁材料が、ポリグリコリド（PGA）、及びそのＬ−ラクチド（PGA/PLLA）とのコポリマー、もしくはポリラクチド（PLA）及びそのステレオコポリマー、又はポリ−β−ヒドロキシブチレート（PHBA）、並びにそのβ−ヒドロキシバレレート（PHBA/HVA）とのコポリマー又はポリ−β−ヒドロキシプロピオネート（PHPA）又はポリ−ρ−ジオキサノン（PDS）又はポリ−δ−バレロラクトン又はポリ−ξ−カプロラクトンからなることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ステレオポリマーが、ポリ−Ｌ−ラクチド（PLLA）、ポリ−DL−ラクチド又はＬ−ラクチド／DL−ラクチドであることを特徴とする請求項２に記載の方法。
【請求項４】
乳酸及びグリコール酸からのコポリマーの場合、その混合比が85：15〜50：50の範囲であることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ジクロロメタン、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル、トリアセチン、トリエチルクエン酸、乳酸エチル、酢酸イソプロピル、ギ酸プロピル、ギ酸ブチル、ギ酸エチル、及び／又は乳酸メチルが用いられることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
過フッ化化合物として、ペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロ−１，３−ジメチルシクロヘキサン、ペルフルオロシクロヘキサン、ペルフルオロデカイン、及び／又はペルフルオロエーテルが用いられることを特徴とする請求項１（ｉ）に記載の方法。
【請求項７】
表面活性物質として、ポロキサマーもしくはポロキサミン、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、ポリソルベート、サッカロースエステル、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、脂肪アルコールポリグリコシド、Chaps、Chap、Chapso、デシル−β−Ｄ−グリコピラノシド、デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、又はそれらの混合物の群からの物質が用いられることを特徴とする請求項１（ｉ）に記載の方法。
【請求項８】
アミノ酸として、Ｌ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン、及び／又はＤ，Ｌ−フェニルアラニンが用いられることを特徴とする請求項１（ｉ）に記載の方法。
【請求項９】
超臨界ガスとして一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、飽和もしくは不飽和気体状炭化水素、二酸化窒素、及び／又はアンモニアが用いられることを特徴とする請求項１（ii）に記載の方法。
【請求項１０】
前記溶液が、ノズル直径0.5mm及び噴霧角10°の慣用的単一部品のノズルにより、94〜96barの超過圧力で噴霧されることを特徴とする請求項１（ii）に記載の方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法に従って製造された超音波診断のための微粒子。
【請求項１２】
請求項１に記載の方法に従って製造された、気体として、空気、窒素、酸素、希ガス、一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、飽和もしくは不飽和気体状炭化水素、二酸化窒素、及び／又はアンモニアを含む超音波診断のための微粒子。
【発明の詳細な説明】
本発明は、請求項の記載を特徴とするもの、即ちその壁材料がα−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルから作られた超音波診断のための気体含有微粒子を製造するための方法、該方法により作られ得る粒子、及び医療診断におけるそれらの使用に関する。
超音波診断は、困難のない単純な取扱いのため医学において極めて広範囲に用いられている。超音波は、異なるタイプの組織のインターフェースにおいて反射される。この場合に作られるエコーシグナルは電気的に増強され視覚化される。
超音波を用いる血管及び内部器官の視覚化は、一般に、その中に存在する血流の視覚化を許容しない。液体、特に血液は、周囲の領域と比較して、密度及び圧縮率の差がある場合にのみ超音波コントラストを作る。医学の超音波診断においては、例えば気体を含み又は気体を作り出す物質は、気体と周囲の血液との間のインピーダンスの差が液体又は固体と血液とのそれよりかなり大きいので、造影剤として用いられる〔Levine, R. A., J. Am. Coll .Cardiol. 3(1989)28; Machi, I. J. CV 11 (1983)3〕。
Roelandtら〔Ultrasound Med. Biol. 8 (1982) 471-492〕は、心臓のエコーコントラストが細かい気泡を含む溶液の末梢の注入により達成され得ることを記載する。これらの気泡は、例えば振とうし、他に撹拌し又は二酸化炭素を添加することによって、生理的に適合可能な溶液中で作られる。しかしながらそれらは数又はサイズに関して標準化されておらず、不十分にのみ再現され得る。また、それらは、それらの役立つ寿命が短いので、一般に安定でない。ほとんどの場合それらの平均直径は、それらが左心、肝臓、腎臓又は脾臓のような器官を後に造影すると共に、肺の毛細管を通過することができないように、赤血球の径を超える。更に、それらは、形成された超音波エコーが泡形成、融合、溶解のような互いから分離することができないいくつかの過程からなるので、定量に適さない。これにより、例えばこれらの超音波造影剤の助けにより、心筋層中の造影剤の跡を測定することにより遷移時間に基づく情報を得ることができない。このため、その散乱因子が十分な安定性を有する造影剤が必要とされる。
EP 0 131 540は、糖による気泡の安定化を記載する。これは、コントラスト効果の再現性及び均一性を改善するが、これらの気泡は肺を通過して生き残らない。
EP 0 122 624及び0 123 235は、糖、糖アルコール、及び塩の気泡安定化効果が表面活性物質の添加によって改良されることを記載する。肺の毛管の通過並びに大腿動脈血管及び肝臓又は脾臓のような種々の器官を視覚化する可能性は、これらの超音波造影剤で供される。しかしながらこの場合、気泡は細胞細胞により吸収されないので、コントラスト効果は脈管腔に限定される。
長期間体内で変化しない超音波造影剤は記載されていない。静脈内投与後の選択的濃縮による十分なシグナル強度での器官の視覚化又は定量は、これらの媒体では可能でない。
例えば超音波造影剤として空気のような気体の被包がEP 0 224 934に記載される。この場合に用いられる壁材料は、変性により生ずる細胞毒性効果も伴い得る蛋白質、特に周知であるアレルギー特性を有するヒト血清アルブミンからなる。
特許  EP 0 327 490は、生分解性合成材料に基づく超音波診断のための気体状微粒子を記載する。生分解性ポリマーとして、例えばα−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸も開示される。これらの薬剤は、十分な生体内作用寿命を有し、そして静脈内投与の後、それらは網内細胞系においてこれにより肝臓又は脾臓においても細胞内に濃縮するが、本願の実施例により製造され、ヒドロキシカルボン酸に基づく粒子は、比較的小さな後方散乱係数を有するだけである。それゆえ、それらから調製されたコントラスト媒体調製物は全ての場合に満足いかない。
それゆえ本発明の目的は、先行技術の粒子より優れた後方散乱係数を有する粒子を得ることが可能になる、α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルに基づく粒子を製造するための改良された方法を提供することであった。
粒子及びそれから調製される造影剤調製物は、例えば大きな気体の損失及び基本的な定量を行うことなく、静脈内投与後に心臓の左心に到達し、アレルギーの可能性なく優れた適合性を有し、そして水性媒体中で集塊しないのに十分に小さくかつ安定であるような近年の造影剤に求められる他の要求に更に合致すべきである。
この目的は本発明により達成される。
各々のポリエステル及び必要に応じて表面活性物質を、その少くとも１つの溶媒が容易に水と混和することができる有機溶媒又は溶媒混合物に溶かし、次に液体過フッ化化合物又は水をこの溶液に分散させ、そして次に、この分散液を撹拌機構により表面活性物質を含む水に分散し、それにより、ガス中にポンピングし、真空を適用することにより溶媒を除去することにより、α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸からポリエステルに基づく微粒子を作ることができることが見い出された。この場合、最初の水又は液体過フッ化化合物を含む粒子が析出する。次に、粒子を含む懸濁液は、適切な医薬として許容される凍結保護物質と混合され、凍結乾燥されて、それにより粒子中に含まれる液体はかなり逃れ、そして凍結乾燥装置を要求される気体（一般に空気）でエレーションした後に置換される。乾燥時間により、必要に応じて少量の液体（水又は過フッ化化合物）が粒子中に蒸気として残る。
過フッ化化合物としては、好ましくはペルフルオロペンタン、ペルフルオロヘキサン、ペルフルオロ−１，３−ジメチルシクロヘキサン、ペルフルオロシクロヘキサン、ペルフルオロデカリン、又はペルフルオロエーテルを用いれる。
本発明による方法に用いられるポリマーとしては次にものが挙げられる：
ポリグリコリド（PGA）、並びにそのＬ−ラクチド（PGA/PLLA）とのコポリマー、又はポリラクチド（PLA）、並びにそのステレオコポリマー、例えばポリ−Ｌ−ラクチド（PLLA）、ポリ−DL−ラクチドもしくはポリ−Ｌ−ラクチド／DL−ラクチド又はポリ−β−ヒドロキシブチレート（PHBA）、並びにそのβ−ヒドロキシバレレートとのコポリマー（PHBA/HVA）、ポリ−β−ヒドロキシプロピオネート（PHPA）、ポリ−ρ−ジオキサノン（PDS）、ポリ−δ−バレロラクトン又はポリ−ξ−カプロラクトン。
乳酸（LA）とグリコール酸（GA）との間のコポリマーにおいて、そのモノマーに関するモル比は85：15〜50：50の範囲、好ましくは75：25である。
ポリマーのための有機溶媒又は溶媒混合物としては、ジクロロメタン、アセトン、酢酸エチル、酢酸メチル、トリアセチン、クエン酸トリエチル、乳酸エチル、酢酸イソプロピル、ギ酸プロピル、ギ酸ブチル、ギ酸エチル及び／又は乳酸メチルが好ましくは用いられる。
表面活性物質（界面活性剤）としては、ポロキサマー▲Ｒ▼もしくはポロキサミン▲Ｒ▼、ポリエチレングリコールアルキルエーテル、ポリソルベート、サッカロースエステル（Sisterna The Netherlands）サッカロースエステル〔Ryoto糖エステル（Tokyo）〕、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、脂肪アルコールポリグリコシド、Chaps（Serva）、Chap（Calbiochem）、Chapso（Calbiochem）、デシル−β−Ｄ−グリコピラノシド、デシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、ドデシル−β−Ｄ−マルトピラノシド、オレイン酸ナトリウム、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール又はそれらの混合物の群からの物質が用いられる。
気体としては、空気、窒素、酸素、希ガス、一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、気体形態における飽和もしくは不飽和炭化水素、二酸化窒素及び／又はアンモニアが用いられる。
α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルに基づく微粒子を製造するための他の方法は、要求されるポリマー及び任意にアミノ酸を少くとも１の有機溶媒中に溶かし、そしてこの溶液を超臨界ガスで満たされ又はそれが流れるカラム内にノズルを通して噴霧し、それによりその溶媒が超臨界ガスにより取り込まれることからなる。
ポリマー又はコポリマーとしては、最初に言及される製造方法に言及されるのと同じ物質がこの変形方法に用いられる。それと同じものがコポリマーの混合比のために適用される。好ましくは、各々の場合に用いられる溶解されたポリマー（ポリエステル）中の界面活性剤のかわりにアミノ酸が供される。アミノ酸としては、好ましくはＬ−リシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファン、及びＤ，Ｌ−フェニルアラニンが用いられる。
溶媒又は溶媒混合物としては、最初の変形方法において言及された溶媒が適している。
過フッ化化合物の添加はこの場合必要ない。
超臨界気体としては、一酸化二窒素、二酸化炭素、ハロゲン化炭化水素、飽和もしくは不飽和炭化水素、二酸化窒素及び／アンモニアが用いられるが、二酸化炭素が好ましい。超臨界気体は、必要に応じて例えばエタノールのような低級アルコール、エステル又は窒素のような気体のような10％までの添加物を含むことができる。
結果として生ずる粒子の大きさは、注入ノズルのタイプ、大きさ及び形状、カラム内の作動圧及び温度により制御され得る。静脈内投与された超音波造影剤のために必要な粒径（10μｍ未満）は90〜100bar、好ましくは94〜96barの間の作動圧及び36℃の温度で0.5mmのノズル径の10°の噴霧角のノズルを用いることによって得ることができる。
本発明の他の態様は、上述の方法に従って製造することができる超音波診断のための微粒子に関する。
本発明の他の態様は、上述の方法に従って製造される微粒子を含む超音波診断のための造影剤に関する。
これらの薬剤は、乾燥させた微粒子を医薬として許容される懸濁媒体中に懸濁することにより、得ることができる。
医薬として許容される懸濁媒体としては、例えば水（p. i.）１以上の無機塩の水溶液、例えば生理電界質溶液及び緩衝液、例えばタイロード溶液、グルコースもしくはラクトースのようなモノーもしくはジサッカリドの水溶液、例えばポリソルベートもしくはポリサッカリドの群からの表面活性物質を更に任意に有するマンニトールのような糖アルコール、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、サッカロースモノー及びジエステルもしくはポロキサマーもしくはポロキサミンの群からの物質又はそれらの混合物及び／又はグリセリンのような生理的に適合する多価アルコールが適する。しかしながら、注入目的のために適した水が好ましい。
投与の信頼性を増加させるために、懸濁液は注入直前にろ過することができる。
α−，β−又はγ−ヒドロキシカルボン酸のポリエステルに基づく本発明の方法により製造された微粒子又はそれから調製された造影剤は、超音波媒体にセットされる全ての要求に合致する。薬剤内に含まれる粒子は、以下の利点により区別される：
○それらは生体内で迅速に分解され、
○デグラデーション産物は毒物学的に無害であり、
○それらは血液循環内に十分な長期間、循環し、
○それらは超音波診断の全てのモード、特に非線形的効果が用いられるモードにも用いることができ、
○それらは十分に許容され、
○それらは均一な制御可能な大きさの分布を示し、
○それらは製造するのが容易であり、
○ポリマー粒子はせまい分子量分布を有し、
○それらは肺を通過して生き残るのに十分に安定であるので、左心を造影するのにも適しており、そして、
○それらは網内細胞系により取り込まれるので、肝臓及び脾臓を造影するのにも適している。
本発明の方法により製造される粒子は、特に、α−，β−，γ−ヒドロキシカルボン酸から作られるEP 0 327 490に開示される粒子より大きな後方散乱係数を有する。これは、比較テストにも示した。これにより、５分後のEP 0 327 490に記載される水中の粒子の新しく調製された懸濁液（実施例１）（濃度18.6mg／ml）については、トランスミッター周波数５MHzにおいてαs＝４×10-4〔dB／cm〕の後方散乱係数が測定されたのに対して、他は同一条件下である本発明による調製物（水中に懸濁した実施例１による粒子／濃度0.18mg／ml）については、αs＝2.7×10-1〔dB／cm〕の後方散乱が測定された。本発明による調製物の濃度は比較調製物より100倍小さいこと、即ち５倍の後方散乱係数の増加を生じたことが考慮される。像形成効果は後方散乱係数に直接依存するので、本発明により製造された粒子は相当により有効な造影剤を表す。
後方散乱係数の測定は、脈管内に存在する造影剤により生ずる後方散乱シグナルを測定する生体内実験装備において行われる（“Standardization of the Measurement of Acoustical Parameters of Ultrasound Contrast Agents”(First European Symposium on Ultrasound Contrast Imaging, January 25-26, 1996, Rotterdam）も参照のこと）。
以下の実施例は、本発明の対象物をより詳細に説明するために用いられ、これらの実施例に限定することを意図するものではない。
実施例１
３ｇのポリマーResomer▲Ｒ▼ RG-502
0003943130.tif 000002
を40mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比50：50）に溶かす。10mlのベルフルオロペンタンを、２分間、Ultraturrax（10,000rpm）を用いてポリマー溶液中に分散させる。作られた混濁液（O/O）を、０℃に温度平衡化された１％ゼラチン溶液中に、30分間、機械撹拌メカニズム（Dispermat-FT, VMA-Getzmann GmbH）（1000rpm）を用いて分散させる。そのエマルション（O/O/W）を、撹拌メカニズム（300rpm）を備えた２１３つ首フラスコ内に移し、そしてその溶媒を、Ｎ2中にポリピングすることにより20℃で３時間、及び真空により25℃で３時間、除去する。次に、その懸濁液を凍結保護物質と混合して凍結乾燥させる。
水で再懸濁した凍結乾燥物は微粒子（直径0.2〜８μｍ）を含み、優れた試験管内後方散乱係数〔トランスミッター周波数５mHzでαs＝2.7×10-1〔dB／cm〕及びＣ＝４×106の粒子数〕を有する。粒径の測定は、光散乱及びフラウンホーファー回析の組合せを行うCoulter Electronics GmbH companyのLS-130で行った。粒子数の測定はCoulter Counterで行った。
実施例２
ペルフルオロペンタンをペルフルオロデカリンで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例３
ペルフルオロペンタンをペルフルオロヘキサンで置換して実施例１の通り手順を行う。0.9％NaCl溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例４
ペルフルオロペンタンをペルフルオロ−１，３−ジメチルシクロヘキサンで置換して実施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁された凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例５
ペルフルオロペンタンをペルフルオロヘプタンで置換して実施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例６
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼RG-503で置換して実施例１の通り手順を行う。0.9％NaCl溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例７
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼RG-504で置換して、45mlのメチルクロライド／アセトン（容量比55：45）に溶かして実施例１の通り手順を行う。0.9％NaCl溶液で取った凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例８
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-562をResomer▲Ｒ▼RG-756で置換して、50mlのメチルクロライド／アセトン（容量比60：40）に溶かして、実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例９
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼RG-858で置換して、65mlのメチルクロライド／アセトン（容量比63：37）に溶かして、実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例10
ペルフルオロペンタンをペルフルオロヘキサンで置換してポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼RG-858で置換し、65mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比63：37）に溶かして、実施例１の通り手順を行う。水で取った凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例11
ペルフルオロペンタンをペルフルオロデカリンで置換してポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼RG-858で置換し、65mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比63：37）に溶かして、実施例１の通り手順を行う。水でとった凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例12
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼R-208で置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例13
アセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例14
アセトンを酢酸メチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例15
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502をResomer▲Ｒ▼RG-858で置換してアセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例16
ペルフルオロペンタンを10mlの20％グルコース溶液で置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁された凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む
実施例17
３ｇのポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502のかわりに２ｇのみを用いて実施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液でとった凍結乾燥物は、直径0.1〜８μｍの超音波活性微粒子を含む
実施例18
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502を１ｇのPHB/PHNコポリマー（12％PHV,biopol. ICI）で置換し、ゼラチン溶液を200mlの１％PVA溶液（MW９〜10×103ダルトン）で置換し、そしてポリマーを30mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比66：34）に溶かして実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.4〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例19
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502を１ｇのPHB/PVBコポリマー（18％PHV,biopol. ICI）に置換し、ゼラチン溶液をメチレンクロライド／アセトン（容量比66：34）30ml中１％PVA溶液で置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.4〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例20
ポリマーResomer▲Ｒ▼RG-502を１ｇのポリカプロラクトン〔固有粘度：30℃でCHCl3中1.26dl/g（Birmingham Polymers NC, US〕で置換し、ゼラチンを200mlの１％PVA溶液（MW9〜10kダルトン）で置換し、そしてポリマーを30mlのメチレンクロライド／アセトン（容量比70：30）中に溶かして実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.2〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例21
ゼラチンを400mlの30％Pluronic▲Ｒ▼F68溶液で置換して実施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.4〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例22
ゼラチンを400mlの0.5％オレイン酸ナトリウム溶液で置換して実施例１の通り手順を行う。５％マンニトール溶液で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.5〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例23
ゼラチンを400mlの１％オクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド溶液で置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜８μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例24
ゼラチン溶液を400mlの１％サッカロースパルミテートＰ−1570（Ryoto Sugar esters）により混合して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例25
ゼラチン溶液を400mlの１％サッカロースステアレート（Ryoto Sugar esters）Ｓ−1670により置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例26
ゼラチン溶液のかわりに、400mlの１％サッカロースジエステル、SP70（Sisternen, the Netheylands）を用いて実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜7μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例27
メチレンクロライド／アセトン溶液混合物を70mlの酢酸エチルで置換して18mlのペルフルオロペンタンを10mlのペルフルオロペンタンのかわりに用いて実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径0.1〜５μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例28
アセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水でとった凍結乾燥物は、直径0.1〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例29
アセトンを酢酸メチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径１〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例30
アセトンを酢酸メチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径１〜６μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例31
アセトンを酢酸エチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水でとった凍結乾燥物は、直径0.1〜６μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例32
アセトンをトリアセチンで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径１〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例33
アセトンをクエン酸トリエチルで置換して実施例１の通り手順を行う。水で再懸濁した凍結乾燥物は、直径１〜７μｍの超音波活性微粒子を含む。
実施例34
0.375ｇのＬ−リシン（Aldrich）を25mlの水酢酸（Merck）に溶かし；2.5ｇのResomer▲Ｒ▼RG-756
0003943130.tif 000003
を75mlのジクロロメタン（Merck）に溶かす。その組み合わされた溶液を図１に示されるような置換で更に処理する。
その組み合わされた溶液を最初にタンク（17）に加え、そしてそのユニットを保管ボトルからバルブ（２）及びライン（30）を通して満たす。往復運動ポンプ（16）を用いて、熱交換器（15）、ライン（54）、バルブ（20）及び最後のライン（55）にライン（52）を通して流した後に、溶液をタンク（17）からノズル（118）に供給する。94〜96barの圧力において、そのコポリマーを含む溶液を、慣用的な一部品のノズル（118）〔Schlick 121Vタイプ〕によりカラム内に噴霧し、それにより、同時に、超臨界状態のCO2を入口（８）を通して平行に流して、90bar/36℃で8.9kg／ｈの処理量でカラムを通す。ノズルは0.5mmの直径を有し、噴霧角は10°である。
溶媒についての超臨界CO2の高アフィニティに対応して、主に形成された液滴から溶媒を除去する。球形の固体ポリマー粒子が残る。
基本的に溶媒交換CO2を精製して再生するが、もはや粒子の生産を行わないように更なるステップを用いる。CO2の作動を次に通り行うことができる。溶媒が交換された気体は２つの磁気バルブ（７及び９）により制御されたライン（42）及び（40）を通してカラムの端に流れ出て、60barまで加圧される。単位時間当りにカラム内に流れる液状ガスの量が、カラムの作動圧を維持するよう流れることができるよう、バルブをスイッチする。60barまで加圧することにより冷却され、溶媒が交換されたCO2を、21℃に温度平衡化された分離器（10）内にライン（62）により送る。ここでその溶媒混合物は、これらの条件下で強く減少した溶解度のため、CO2に分離する。溶媒混合物がそれから除去されるCO2を、圧力及び温度を上昇（３及び４）させることによりライン（64及び32）を用いて超臨界状態（90bar，36℃）にもどし、そして形成された粒子を更に乾燥させるために、入口（８）を通して、ライン（34）、ラインガスポンプ（４）、ライン（36）、熱交換器（５）、ライン（38）を通して再びカラムに供給する。
分離器（10）をバルブ（６）及び（13）により回路から分離した後、及びバルブ（72）により大気圧までの減圧を行った後、分離器（10）内で分離された溶媒混合物の除去を行う。
リザーバー内に含まれる溶解されたポリマーの全量を噴霧した後（圧力による時間、20〜50分）、溶媒ラジカルがもはや分離器（10）内に回収され得ないまで、CO2をカラムに通す。
乾燥工程を終了した後、カラムへのCO2の流れを止め、バルブ（11）及び（14）上のカラムを大気圧まで減圧し、そして粒子を下側カラム端（19）で除去する。
直径５〜10μｍの超音波活性気体含有微粒子を得る。
実施例35
0.375ｇのＬ−リシン（Aldrich）及び2.5ｇのポリマー（RG-756）を25mlの氷酢酸（Merck）及び75mlのジクロロメタン（Merck）に溶かし、透明な溶液が形成されるまで撹拌する。実施例34と同様に残りの反応を行う。
直径５〜10μｍの超音波活性気体含有微粒子を得る。
実施例36〜41
更なる微粒子の生産を実施例34と同様に行う。各々の場合に用いたポリマー及び更なるデータを表１に要約する。
全ての場合において、超音波活性気体含有微粒子を得る。得られた超音波活性中空微粒子は滅菌状態で、溶媒残物、重合触媒又はイニシエーター分子を含まない。それらは５〜10μｍの平均−粒径分布を有する。
各々の場合において、ポリマーを75mlのジクロロメタン（Merck）及び25mlの氷酢酸に溶かし、そして各々の量のアミノ酸を加える。Ｄ，Ｌ−フェニルアラニンは50mlまでのメタノール（Merck）に予め適切に溶かす。
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【図１】
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