(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
0003899440.tif 000005
（式中、Ｒは５−メチルウラシル、２−クロロアデニンおよびシトシンよりなる群から選ばれた塩基であり、Ｒ"は水素、アシル、アルキル、またはモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートエステルである。）のＬ−ヌクレオシド化合物。
【請求項２】
２'−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノシルウリジンである請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒが２−クロロアデニンまたはシトシンから選ばれる請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒが５−メチルウラシルである請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｒ"がホスフェートエステルである請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ"が水素である請求項１の化合物。
【請求項７】
Ｒ"がアルキルである請求項１の化合物。
【請求項８】
Ｒ"がアシルである請求項１の化合物。
【請求項９】
Ｒ"がホスフェートエステルである請求項４の化合物。
【請求項１０】
Ｒ"がアルキルである請求項４の化合物。
【請求項１１】
Ｒ"がアシルである請求項４の化合物。
【請求項１２】
Ｌ体が少なくとも９５％まで富化された対応するＤ−エナンチオマーを含まない請求項１ないし１１のいずれかの化合物。
【請求項１３】
Ｌ体が少なくとも９８％まで富化された対応するＤ−エナンチオマーを含まない請求項１ないし１１の化合物。
【請求項１４】
式
0003899440.tif 000006
（式中：Ｒは２−クロロアデニンまたはシトシンであり、Ｒ"は水素、アルキル、アシル、またはモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートエステルである。）のＬ−ヌクレオシド化合物。
【請求項１５】
式
0003899440.tif 000007
（式中、Ｒは５−メチルウラシルであり、Ｒ"は水素、アルキル、アシル、またはモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートエステルである。）のＬ−ヌクレオシド化合物。
【請求項１６】
ＨＢＶを処置するのに有効量の２'−フルオロ−５−メチル−β−アラビノフラノシルウリジンまたは薬剤学的に許容し得る塩と、薬剤学的に許容し得る担体とを含んでいるＨＢＶ処置用薬剤組成物。
【請求項１７】
式
0003899440.tif 000008
（式中、Ｒは５−メチルラウシル、２−クロロアデニンまたはシトシンであり、Ｒ"は水素、アルキル、アシル、またはモノホスフェート、ジホスフェートもしくはトリホスフェートエステルである。）の化合物、またはその薬剤学的に許容し得る塩のＨＢＶを処置するのに有効量と、薬剤学的に許容し得る担体とを含んでいるＨＢＶ処置用薬剤組成物。
【請求項１８】
Ｒが５−メチルウラシルである請求項１７の薬剤組成物。
【請求項１９】
Ｒが２−クロロアデニンである請求項１７の薬剤組成物。
【請求項２０】
Ｒがシトシンである請求項１７の薬剤組成物。
【請求項２１】
Ｒ"がホスフェートエステルである請求項１７の薬剤組成物。
【請求項２２】
Ｒ"がアルキルである請求項１７の薬剤組成物。
【請求項２３】
Ｒ"がアシルである請求項１７の薬剤組成物。
【請求項２４】
該化合物は、Ｌ体が少なくとも９５％富化された対応するＤ−エナンチオマーを含まない請求項１７ないし２３のいずれかの薬剤組成物。
【請求項２５】
該化合物は、Ｌ体が少なくとも９８％富化された対応するＤ−エナンチオマーを含まない請求項１７ないし２３のいずれかの薬剤組成物。
【請求項２６】
薬剤学的に許容し得る担体は、経口投与に適している請求項１７ないし２５のいずれかの薬剤組成物。
【請求項２７】
薬剤学的に許容し得る担体は、リポソーム懸濁液である請求項１７ないし２５のいずれかの薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、ここに開示された活性化合物又はこれらの化合物のうち何れかの薬剤学的に許容し得る誘導体若しくはプロドラッグの有効量を投与することを含む、Ｂ型肝炎ウイルス（「ＨＢＶ」ともいわれる）及びＥＢウイルス（「ＥＢＶ」ともいわれる）の治療のための方法の分野に属する。
発明の背景
Ｂ型肝炎ウイルスは、世界的流行のレベルに達している。感染に宿主が気づかない２乃至６か月の潜伏期間の後、ＨＢＶは急性の肝炎及び肝臓損傷を引起し、それは腹痛、黄疸、及び特定の酵素の血中レベルの上昇をもたらす。ＨＢＶは、激症肝炎（急速に進行し肝の大部分が破壊される、しばしば致命的な形の疾患である）を引起し得る。患者は、典型的には、急性のウイルス性肝炎から回復する。しかしながら患者によっては、高レベルのウイルス抗原が長期間または無期限に血中に持続し、慢性の炎症を引き起こす。慢性の感染は、慢性の持続性肝炎に至り得る。慢性の持続性ＨＢＶ感染患者は、途上国において非常に一般的である。１９９１年までに、アジアだけで約２億2500万人のＨＢＶ慢性キャリアが、そして全世界では殆ど３億人のキャリアが存在した。慢性の持続性肝炎は、疲労、肝硬変、及び、主要な肝癌である肝細胞癌を引き起こし得る。
西洋産業国家においては、ＨＢＶ感染の高リスクグループとしては、ＨＢＶキャリアに又は彼らの血液サンプルに接触する人々が含まれている。ＨＢＶの疫学は、実際、後天性免疫不全症候群のそれと非常に類似しており、そのことは、ＨＢＶ感染がＡＩＤＳ又はＨＩＶ関連感染を有する患者になぜ一般的であるのか、という理由を説明している。しかしながら、ＨＢＶはＨＩＶに比して一層伝染性である。
ＨＢＶは、ヒトの癌の一因としてタバコに次いで第２位である。ＨＢＶが癌を誘発させるメカニズムは知られていないが、それが癌発生を直接に開始させる、又は慢性炎症、肝硬変及び感染と関連づけられる細胞変性を通じて、腫瘍の発生を間接的に開始させると仮定されている。
ＥＢウイルス（ＥＢＶ）は、Lymphocryptovirus属の一員であり、そしてこれは亜科gammaherpesvirinaeに属する。それは顕著にリンパ趨向性である。ＥＢＶは、ヘルペスウイルスの古典的構造を有している、すなわち、その２本鎖ＤＮＡゲノムは、25面体ヌクレオキャプシド内に収められており、それはウイルス性糖タンパク質を散りばめた脂質エンベロープに取り巻かれている。無定形の被包タンパク質が、エンベロープとヌクレオキャプシドとの間の隙間を占めている。
全てのヒトヘルペスウイルスは、ある程度までリンパ球に感染しそしてその中で複製するが、ＥＢＶは、効率的にそうする。最も重要なことに、発病及びＥＢＶによる感染に対する宿主の応答は、他のヒトヘルペルウイルスについて明らかにされているよりも、一層リンパ球感染に依存している。
ＥＢＶは、今や、急性Ｂ細胞リンパ球増殖性疾患として認識されており、稀な進行性単核症様症候群及びＡＩＤＳ患者における口内ヘアリー白板症を含む、種々の他の重症の及び慢性の疾患に関連付けられている。ＥＢＶが慢性疲労の主要な原因であるという示唆は、調査に耐えていない。
ＥＢＶは主として、唾液を介して伝染するが、感染のあるものは輸血によって伝染している。感染性単核症の急性相にある患者の85％より多くが、ＥＢＶを分泌する。
ＥＢＶは、癌と関連付けられている。少なくとも２つのグループの患者が、ＥＢＶ関連リンパ腫の発生の危険を有している。すなわち、免疫抑制療法の下に腎臓、心臓、骨髄、肝臓、又は胸腺の移植を受けた患者、及びＡＩＤＳを有する患者である。ＥＢＶ関連癌としては、バーキットリンパ腫及びシュミンケ腫瘍が含まれる。
Ｂ型肝炎ウイルス及びＥＢウイルスが、重症のそしてしばしば悲劇的効果を感染患者に与えるという事実に照らし、これらのウイルスに感染したヒトを治療するための、宿主に対する毒性の低い、新しい効果的な薬剤を提供することに対する需要がある。
従って、本発明の一目的は、Ｂ型肝炎ウイルスの治療のための化合物、組成物及び方法を提供することである。
ＥＢウイルスの治療のための化合物、組成物及び方法を提供することは、本発明の別の一目的である。
本発明の要約
ＨＢＶ又はＥＢＶ治療量の式：
0003899440.tif 000002
〔式中、Ｒは、プリン又はピリミジン塩基である。〕のＬ−ヌクレオシドを投与することを含む、ＨＢＶ又はＥＢＶに感染した宿主、そして特にヒトを治療するための方法が提供される。好ましい一具体例においては、該ヌクレオシドは、指定の鏡像体としてそして実質的にその対応鏡像体が存在しない形で（すなわち鏡像体的に純粋な形で）提供される。
好ましい一具体例においては、該活性化合物は２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノシルウリジン（Ｌ−ＦＭＡＵともいわれる）である。この化合物は、ＨＢＶ及びＥＢＶに対する強力な抗ウイルス剤であり、そして低い細胞毒性しか示さない。活性化合物の他の具体例としては、Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−エチルウラシル、Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン、及びＮ1−（２’−デオキシ−（２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシルが含まれる。
代わりの具体例においては、ＨＢＶ又はＥＢＶの治療において使用するための、２’−アラビノ−ヒドロキシ基を含んだＬ−ヌクレオシド、例えば、図１に図解したようなＬ−アラチミジン、Ｌ−フルダラビン、Ｌ−アラグアノシン、及びＬ−アライノシン等が提供される。
ここに開示されたＬ−ヌクレオシド及びそれらの薬剤学的に許容し得る誘導体又はそれらの化合物を含有する薬剤学的に許容しうる処方物は、ＨＢＶ感染及び他の関連した状態例えば抗ＨＢＶ抗体陽性及びＨＢＶ陽性状態、ＨＢＶによって引き起こされる慢性肝炎、肝硬変、急性肝炎、激症肝炎、慢性持続性肝炎及び疲労等の予防及び治療において有用である。該化合物は、ＥＢＶ関連疾患の治療において同様に使用することができる。これらの化合物又は処方物は、抗ＨＢＶ若しくは抗ＥＢＶ抗体陽性の、又はＨＢＶ若しくはＥＢＶ抗原陽性の、又はＨＢＶ若しくはＥＢＶに暴露された個人において、臨床的疾患の進行を阻止し又は遅らせるために予防的に使用することができる。
別の一具体例においては、該活性化合物又はその誘導体又は塩は、上に掲げたものを含む他の抗ＨＢＶ剤又は抗ＥＢＶ剤、又は抗ＨＩＶ剤と組み合わせてまたはそれらに代えて投与することができる。一般に、交代療法においては、各薬剤の効果的な投与量が連続して投与されるが、これに対し組み合わせ療法においては、２種又はより多くの薬剤の有効投与量が一まとめにして投与される。投与量は、該薬物の吸収、不活性化、及び排泄の速度に、並びに当業者に既知の他の要因に依存している。投与量は緩和すべき状態の重症度によっても変化するということも、また認識すべきである。如何なる具体的な患者においても、具体的投与の方法及びスケジュールは、その個人の必要性、及び該化合物を投与する又はその投与を監督する者の専門的判断に従って調整すべきである。
ここに開示された化合物と組み合わせて使用することのできる抗ウイルス剤の例しては、２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（ＦＴＣ）の（−）−鏡像体、２−ヒドロキシメチル−５−（シトシン−１−イル）−１，３−オキサチオラン（３ＴＣ）の（−）−鏡像体、カルボビル、アシクロビル、インターフェロン、ＡＺＴ、ＤＤＩ（２’，３’−ジデオキシイノシン）、ＤＤＣ（２’，３’−ジデオキシシチジン）、Ｌ−ＤＤＣ、Ｌ−５−Ｆ−ＤＤＣ及びＤ４Ｔが挙げられるがこれらに限られない。
図面の簡単な記述
図１は、本発明の範囲に入る選ばれたＬ−ヌクレオシドすなわち、Ｌ−ＦＭＡＵ（２’−フルオロ−５−メチル−β−Ｌ−アラビノフラノシルウリジン）、Ｌ−ＦＩＡＵ（２’−フルオロ−５−ヨード−β−Ｌ−アラビノフラノシルウリジン）、Ｌ−ＦＣ（２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシルシトシン）、Ｌ−ＦＩＡＣ（２’−フルオロ−５−ヨード−β−Ｌ−アラビノフラノシルトシン）、Ｌ−２−Ｃ１−２’−Ｆ−２’−デオキシアデニン、Ｌ−ＦＥＡＵ（２’−フルオロ−５−エチル−β−Ｌ−アラビノフラノシルウリジン）、Ｌ−アラチミジン、Ｌ−フルダラビン、Ｌ−アラグアノシン、及びＬ−アライノシンの図解である。
図２は、Ｈ１細胞におけるＬ−ＦＭＡＵ濃度に対する生存細胞のパーセントのグラフである。
図３は、１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（化合物１０）の製造の概念的図解である。
図４は、１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（化合物１０）の代わりの製造の概念的図解である。
図５は、１，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−２−デオキシ−２−フルオロ−α−Ｌ−アラビノフラノース（化合物１３）の製造のための方法の概念的図解である。
図６は、Ｎ9−〔３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル〕−２，６−ジクロロプリン（化合物１５）及びＮ9−〔２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル〕−２，６−ジクロロプリン（化合物１６）の製造のための方法の概念的図解である。
図７は、多くの２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル〕−ピリミジン類（化合物１７〜２４）の製造のための方法の図解である。
図８は、Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（化合物２２）の製造のための方法の図解である。
図９は、９−β−Ｌ−アラビノフラノシルアデニンの製造のための方法の図解である。
図１０は、１−Ｏ−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（化合物１０）の製造のための、１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−キシロフラノース（化合物３）からの代わりの経路の図解である。
図１１は、マウスにおける経口投与後の、経時的なＬ−（−）−ＦＭＡＵの血漿濃度のグラフである（十字：薬物動力学試験に先立つ29日間毎日２回10ｍｇ／ｋｇを投与し、次いで30日目に同じ濃度の投与の下に試験を実施した。黒丸：試験に先立って50ｍｇ／ｋｇを29日間投与し、次いで同じ濃度の投与の下に試験を実施した。白丸：試験の初日に初めて50ｍｇ／ｋｇの投与を行った。）。
図１２は、経口投与後のマウス肝臓における経時的なＬ−（−）−ＦＭＡＵの濃度のグラフである。（十字：薬物動力学試験に先立つ30日間毎日２回10ｍｇ／ｋｇを投与し、次いで同じ濃度の投与の下に31日目に試験を実施した。黒丸：試験に先立つ30日間毎日２回50ｍｇ／ｋｇを投与し、次いで31日目に同じ濃度の投与の下に試験を実施した。白丸：試験の初日に初めて50ｍｇ／ｋｇの投与を行った。）
図１３ａは、対照ＢＤＦ１雌性マウスの30日間にわたる体重変化を図解する。
図１３ｂ及び１３ｃは、Ｌ−（−）−ＦＭＡＵの１日２回10ｍｇ／ｋｇ（１３ｂ）及び50ｍｇ／ｋｇ（１３ｃ）の投与を受けたＢＤＦ１雌性マウスの30日間にわたる体重変化を図解する。示されている体重は、５乃至７匹のマウスの体重の平均及び標準偏差である。
図１４〜２０は、30日間の１日２回の10ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）又は50ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）のＬ−（−）−ＦＭＡＵの投与後の、マウス血漿の臨床化学を提供する。図１４は、ｍｇ／ｄＬで表したマウス血漿中の総ビリルビン濃度の棒グラフである。図１５は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中のアルカリ性ホスファターゼ濃度の棒グラフである。図１６は、ｍｇ／ｄＬで表したマウス血漿中のクレアチニン濃度の棒グラフである。図１７は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中のＡＳＴ（ＳＧＯＴ、血清グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ）濃度の棒グラフである。図１８は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中のＡＬＴ（ＳＧＰＴ、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）濃度の棒グラフである。図１９は、ｍｍｏｌ／Ｌで表したマウス血漿中の乳酸濃度の棒グラフである。図２０は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中の乳酸デヒドロゲナーゼ濃度の棒グラフである。
本発明の詳細な記述
ここに用いるものとして語「鏡像体的に濃厚化された」は、そのヌクレオシドの単一の鏡像体の少なくとも約95％、及びより好ましくは約97％、98％、99％又は100％を含むヌクレオシド組成物をいう。
ここに用いるものとして、語「アルキル」は、具体的には、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、イソペンチル、アミル、ｔ−ペンチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルを含むＣ１乃至Ｃ10アルキル基を含むが、これに限られない。
ここに用いるものとして、語「アシル」は、具体的には、アセチル、プロピオニル、ブチリル、ペンタノイル、３−メチルブチリル、ハイドロゲンサクシネート、３−クロロベンゾエート、ベンゾイル、アセチル、ピバロイル、メシレート、プロピオニル、バレリル、カプロイック、カプリリック、カプリック、ラウリック、ミリスチック、パルミチック、ステアリック、及びオレイックを含むが、これらの限られない。
ここに用いるものとして、別に特記しない限り、語「アリール」はフェニルをいう。
ここに用いるものとして、語「保護された」は、別に定義しない限り、酸素又は窒素が位置している分子の他の部分の誘導体化の過程での更なる反応を防止するために、酸素又は窒素原子に取り付けられる基をいう。広範な種々の酸素及び窒素保護基が有機合成の当業者に知られている。
語「プリン又はピリミジン塩基」としては、アデニン、Ｎ6−アルキルプリン、Ｎ6−アシルプリン（ここにアシルは、Ｃ（Ｏ）（アルキル、アリール、アルカリール、又はアラルキルである）、Ｎ6−ベンジルプリン、Ｎ6−ハロプリン、Ｎ6−ビニルプリン、Ｎ6−アセチレンプリン、Ｎ6−アシルプリン、Ｎ6−ヒドロキシアルキルプリン、Ｎ6−チオアルキルプリン、チミン、シトシン、６−アザピリミジン、２−メルカプトピリミジン、ウラシル、Ｎ5−アルキルピリミジン、Ｎ5−ベンジルピリミジン、Ｎ5−ハロピリミジン、Ｎ5−ビニルピリミジン、Ｎ5−アセチレンピリミジン、Ｎ5−アシルピリミジン、Ｎ5−ヒドロキシアルキルプリン、Ｎ6−チオアルキルプリン、５−アザシチジニル、５−アザウラシリル、トリアゾロピリジニル、イミダゾロピリジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリミジニルを含むがこれらに限られない。塩基の官能性の酸素及び窒素基は、必要又は所望に応じて保護することができる。適当な保護基は当業者に周知であり、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、及びｔ−ブチルジフェニルシリル、トリチルメチル、アルキル基、アセチル、プロピオニル、ブチル、メチルスルホニル、及びｐ−トルイルスルホニルのようなアシル基が含まれる。それは具体的には、５−メチルウラシル（チミン）、５−ヨードウラシル、シトシン、及び５−エチルウラシルを含む。
ここに開示の本発明は、上記のＬ−ヌクレオシド又はその生理学的に許容し得る誘導体若しくは生理学的に許容し得る塩の１種又は２種以上の有効量を投与することを含む、ＨＢＶ感染、ＥＢＶ感染及び、ＨＩＶのようにヒト又は他の宿主動物において同様な仕方で複製する他のウイルスに対する治療のための方法及び組成物である。本発明の化合物は、抗ＨＢＶ活性、抗ＥＢＶ活性を有し、又は抗ＨＢＶ活性、抗ＥＢＶ活性を示す化合物へと代謝される。ここに開示の化合物はまた、ＨＢＶ及びＥＢＶ関連疾患を治療するためにも使用することができる。
活性化合物は、患者に投与されたとき直接に又は間接的に親化合物を提供する能力を有するか又はそれ自身活性を示す如何なる誘導体としても投与することができる。限定的でない例としては、活性化合物の薬剤学的に許容し得る塩（代わりとして「生理学的に許容し得る塩」ともいう）及び、活性化合物の５’及びプリン若しくはピリミジンのアシル化又はアルキル化誘導体が挙げられる（代わりとして「生理学的に活性な誘導体」ともいう）。一具体例においては、アシル基は、カルボン酸エステル（すなわち、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’）であり、ここに、該エステル基の非カルボニル部分（Ｒ’）は、直鎖の、分枝のある又は環状のＣ１乃至Ｃ10のアルキル、メトキシメチルを含むアルコキシアルキル、ベンジルを含むアラルキル、フェノキシメチル等を含むアリールオキシアルキル、所望によりハロゲン、Ｃ１乃至Ｃ４アルキル又はＣ１乃至Ｃ４アルコキシで置換さされていてよいフェニルを含むアリール、メタンスルホニルを含むアルキル又はアラルキルスルホニル等のようなスルホネートエステル、モノ、ジ又はトリホスフェートエステル、トリチル又はモノメトキシトリチル、置換ベンジル、トリアルキルシリル（例えば、ジメチル−ｔ−ブチルシリル）、又はジフェニルメチルシリルである。該エステル中のアリール基は、フェニル又はベンジル基を含む。アルキル基は、直鎖の、分枝のある、又は環状のものであることができ、そして所望によりＣ１乃至Ｃ10の基である。
Ｉ．  Ｌ−ヌクレオシドの合成
ここに開示のＬ−ヌクレオシドは、下記に詳述したようにして、又は当業者に既知の他の方法を用いて製造することができる。
下記の合成スキームにおいて、示されたものに代えて等価の酸、塩基、及び溶媒を含む他の標準的試薬を、当業者に知られているようにして使用してもよい。酸素又は窒素のための広範な種々の保護基が使用でき、そして例えばGreene et al, "Protective Groups in Organic Synthesis," John Wiley and Sons, Second Edition, 1991．に開示されている。適した酸素及び窒素保護基としては、例えば、トリメチルシリル、ジメチルヘキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル等のような、３置換されたシリル基、トリチル、アルキル基、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、ｐ−ＮＯ2−ベンゾイル等のアシル基、ベンジル、トルイル、メチルスルホニル、又はｐ−トルイルスルホニルが含まれる。複素環塩基上の官能性の酸素及び窒素基は、糖との縮合より前に保護すべきである。
適した還元剤としては、ＮａＢＨ4、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ−Ｈ）、水素化ホウ素リチウム（ＬｉＢＨ4）、及び水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウム（Ｒｅｄ−Ａｌ）が含まれる。適した酸化剤としては、水性酸性クロム酸（ＣｒＯ3）、重クロム酸ナトリウム（Ｎａ2ＣｒＯ7）、クロロ蟻酸ピリジニウム（ＰＣＣ）：重クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ）、過マンガン酸カリウム（ＫＭｎＯ4）、四酢酸鉛／ピリジン、プラチナ／活性炭触媒上の酸素、ＲｕＯ4、ＲｕＯ4／ＮａＩＯ4、ジメチルスルホキシド／ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＭＳＯ／ＤＣＣ）及びプロトン供与体である炭酸銀、炭酸トリフェニルビスマス、オッペンナウアー酸化（アセトン中アルミニウムアルコキシド）及び二酸化マンガン（他のアルコールの存在下におけるアリル又はベンジルアルコールの選択的酸化に適する）が含まれる。
この縮合反応において使用することのできるフリーデル−クラフツ触媒（ルイス酸）としては、ＳｎＣｌ4、ＺｎＣｌ4、ＴｉＣｌ4、ＡｌＣｌ3、ＦｅＣｌ3、ＢＦ3−ジエチルエーテル、及びＢＣｌ3が挙げられる。水の存在はそれらの活性を低下させるため、これらの触媒は無水条件を必要とする。これらの触媒はまた、アルコール類及び有機酸などのような活性水素を有する有機溶媒の存在下においても不活性化される。これらの触媒は、典型的には、二硫化炭素、塩化メチレン、ニトロメタン、１，２−ジクロロエタン、ニトロベンゼン、テトラクロロエタン、クロロベンゼン、ベンゼン、トルエン、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、又はアセトニトリル等のような溶媒中で使用される。無水塩化アルミニウムは、二硫化炭素には溶解しない。Niedballa et al, J. Org. Chem. 39, 25（1974）．好ましい触媒は、ＳｎＣｌ4である。好ましい溶媒は、１，２−ジクロロエタンである。トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルが、フリーデル−クラフツ触媒について上に記述したのと同じ条件下に使用できる。反応は、−10℃乃至200℃の温度範囲において進行する。脱シリル化は、酢酸、トリフルオロ酢酸、フッ化水素、フッ化水素酸ｎ−テトラブチルアンモニウム、フッ化カリウム及び塩酸ピリジニウムを含む種々の試薬によって行うことができる。
図３を参照して、Ｌ−キシロース（１ａ）から出発して、要となる中間体である１−Ｏ−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（１０）が、総収率20％で合成された（L.Vargha, Chem. Ber., 1954, 87, 1351; Holy, A. et al., Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, V1, 163-67）。図４に示されているように、化合物１０はまた、より高価な出発物質であるＬ−リボースからも合成することができる（Holy, A. et al., Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, V1, 163-67）。図３は、化合物１０の代わりの合成を図解しており（収率53％）、それは続いて、１，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−２−デオキシ−２−フルオロ−Ｌ−アラビノフラノース（１３）を得るためにＣ2においてフッ素化され（J. Org. Chem., 1985, 50 3644-47）、これは、臭素化糖を介して異なった塩基と縮合されて２’−デオキシ−２’−フルオロ−アラビノフラノシルヌクレオシドを種々の収率で与えた。
１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−キシロフラノース（３）
650ｍｌの無水アセトンに、４ｍｌの濃硫酸、５ｇのモレキュラーシーブ（４Ａ）、80ｇの無水硫酸銅及び50ｇのＬ−キシロースを加え、混合物を室温にて36時間攪拌した。反応混合物を濾過し、アセトンで徹底して洗浄し、合わせた濾液を水酸化アンモニウムで中和し、次いで蒸発乾固させた。酢酸エチル（200ｍｌ）を加え、次いで濾過しそして蒸発させて油状物を得、これを250ｍｌの0.2％ＨＣｌ溶液に溶解させて室温にて2.5時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ3でｐＨを８に調節し、次いで蒸発乾固させ、残渣を酢酸エチルで抽出した。溶媒を除去して、化合物３の黄色油状物を得た（41.7ｇ，82.3％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ5.979（d, J=3.78Hz, 1H, H-1）, 4.519（d, J=3.6Hz, 1H, H-2）, 4.308（bd, 1H, H-3）, 4.080（m, 3H, H-4及びH-5）, 1.321（s, 3H, CH3）, 1.253（s, 3H, CH3）。
１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−３，５−ジ−Ｏ−ｏ−トルイルスルホニル−α−Ｌ−キシロフラノース（４）
100ｍｌのＣＨＣｌ3に溶解させたＴｓＣｌ（75ｇ，393mmol）を滴下して加えつつ、化合物３（40ｇ，210mmol）を500ｍｌの無水ピリジン中０℃にて攪拌した。３時間後、50ｍｌのＣＨＣｌ3中のＴｓＣｌの別の一部分（50ｇ，262ｍｌ）を上記と同じようにして加えた。混合物を室温にて24時間攪拌し、次いで０℃に冷却し、水（10ｍｌ）を加え、次いで室温にて30分間攪拌した。反応混合物を500ｍｌの氷水中に注ぎ、ＣＨＣｌ3（150×４）で抽出し、1.5ＭのＨ2ＳＯ4（150ｍｌ×４）、飽和ＮａＨＣＯ3（200ｍｌ×２）で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の除去により褐色のシロップが得られ、これはエタノールからの結晶化により、４を白色血漿として与えた（103.8ｇ，99％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.282, 7.836（m, 8H, OTs）, 5.849（d, J=3.51Hz, 1H, H-1）, 4.661, 4.779（m, 2H, H-3及びH-4）, 4.193（dd, 1H, H-2）, 4.011（d, 2H, H-5）, 2.448, 2.478（2s, 6H, -OTs）, 1.261, 1.320（2s, 6H, CH3）
１，２−ジ−Ｏ−アセチル−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルイルスルホニル−α，β−キシロフラノース（５）
化合物４（70ｇ，140.5mmol）を、０℃にて50ｍｌの濃硫酸を滴下して加えつつ700ｍｌの氷酢酸及び100ｍｌの無水酢酸中に溶解させた。得られた溶液を室温にて終夜攪拌し、次いで１Ｌの氷水中に注ぎ、ＣＨＣｌ3（200ｍｌ×４）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。真空下に溶媒を除去した後、５がシロップとして得られた（84.2ｇ、粗収率110％）。
メチル−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルイルスルホニル−α，β−キシロフラノース（６）
粗製の５（80ｇ）を、500ｍｌの１％ＨＣｌ／ＣＨ3ＯＨ中で室温にて30時間攪拌した。減圧下に溶媒を除去し、残渣を300ｍｌのＣＨＣｌ3に溶解させ、飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を除去して６をシロップとして得た（60ｇ，「４」から90％）。
メチル−２−ベンゾイル−３，５−ジ−Ｏ−ｐ−トルイルスルホニル−α，β−キシロフラノシド（７）
シロップ６（60ｇ，127mmol）を、塩化ベンゾイル（40ｍｌ、345mmol）を滴下して加えながら、200ｍｌのピリジンに溶解させて０℃にて攪拌し、得られた溶液を室温にて17時間攪拌した。これを約50ｍｌにまで濃縮し、次いで300ｍｌの氷水中に注ぎ、ＣＨＣｌ3で抽出し、３ＮのＨ2ＳＯ4そして飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を蒸発させて、７をシロップとして得た（71ｇ，97％）。
メチル−２，３，５−Ｏ−ベンゾイル−α，β−Ｌ−リボフラノシド（９）
シロップ７（70ｇ）及び安息香酸ナトリウム（100ｇ，694mmol）を1200ｍｌのＤＭＦ中に懸濁させ、還流下に16時間機械的に攪拌した。これを室温まで冷却し、次いで１Ｌの氷水中に注ぎ、エーテルで抽出し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を蒸発させて、シロップを得（50ｇ，８ａ及び８ｂ）、これを180ｍｌのピリジン中に溶解させ、そして室温にて17時間ベンゾイル化（ＢｚＣｌ，20ｍｌ，172mmol）させた。処理の後、９が褐色のシロップとして得られた（48ｇ，「７」から83％）。
１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（１０）
化合物９（26ｇ，54.6mmol）を275ｍｌの氷酢酸、55ｍｌの無水酢酸及び16ｍｌの濃硫酸で、室温にて17時間処理した。次いで１Ｌの氷水中に注ぎ、クロロホルムで抽出した（200ｍｌ×４）。合わせた抽出液を、飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を除去して、褐色のシロップを得、これをエタノールで処理して10を白色固体として得た（8.8ｇ，32％）。融点124.7℃、文献129〜130℃、Ｄ体：130〜131℃、〔α〕D＝−45.613（ｃ  1.0，ＣＨＣｌ3）、Ｄ体：〔α〕D＝＋44.2。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.317, 8.134（m, 15H, OBz）, 6.437（s, 1H, H-1）, 5.835（m, 2H, H-2及びH-3）, 4.649（m, 3H, H-4及びH-5）, 2.003（s, 3H, CH3COO-）
１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（Ｌ−リボースから）
Ｌ−リボース（５ｇ，33.3mmol）を120ｍｌの１％ＨＣｌ／ＭｅＯＨ中に懸濁させ、室温にて３時間攪拌し、このとき澄明な溶液が得られた。30ｍｌの無水ピリジンを加えることによって反応を停止させ、次いで減圧下に蒸発させた。得られたシロップをピリジン（30ｍｌ×２）と同時蒸発させ、次いで80ｍｌの無水ピリジンに溶解させ、そして、塩化ベンゾイル（20ｍｌ，172mmol）を滴下して加えつつ、０℃にて攪拌した。室温にて17時間攪拌の後、反応が完了した。水（10ｍｌ）を加えて混合物を室温にて0.5時間攪拌し、次いで約50ｍｌにまで濃縮し、150ｍｌの氷水中に注ぎ、クロロホルムで抽出し（50ｍｌ×４）、３ＮのＨ2ＳＯ4（30ｍｌ×２）、飽和ＮａＣＯ3（30ｍｌ×２）で洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を除去して、13ｇの９をシロップとして得た。
粗製の９を、80ｍｌのＨＢｒ／ＡｃＯＨ（45％，Ｗ／Ｖ％）に溶解させ、室温にて1.5時間攪拌した。この混合物に、氷酢酸（50ｍｌ）を加え、得られた溶液を、温度を７℃より下に維持するよう、34ｍｌの水を徐々に加えながら０℃にて攪拌した。これを次いで室温にて１時間攪拌し、200ｍｌの氷水に注ぎ、クロロホルムで抽出した（50ｍｌ×５）。合わせた抽出液を飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を除去してシロップを得（13ｇ）、これを40ｍｌの無水ピリジンに溶解させ、０℃にて攪拌した。次いで無水酢酸（14ｍｌ，148.4mmol）を滴下して加えた。反応完了後、150ｍｌの氷水に注ぎ、クロロホルムで抽出し（50ｍｌ×４）、３ＮのＨ2ＳＯ4（30ｍｌ×２）そして飽和ＮａＣＯ3（50ｍｌ×２）で連続して洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の除去及びメタノール処理により、10を白色固体として得た（9.2ｇ，Ｌ−リボースから53.7％）。
１，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−α−Ｌ−リボフラノース（１１）
化合物１０（９ｇ，17.84mmol）を、ＨＢｒ（3.2ｇ，30.5mmol）を含有する70ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2を一度に加えつつ、０℃にて100ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中で攪拌した。混合物を０℃にて3.5時間攪拌し、水（55ｍｌ）を加え、そして混合物を室温にて18時間攪拌した。有機層を分離し、飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒を蒸発させて、泡状物を得、これをＣＨ2Ｃｌ2及びｎ−ヘキサンから再結晶させて、１１を白色固体として得た（6.2ｇ，75.5％）。融点137〜138℃、文献140〜141℃、〔α〕D＝−81.960（ｃ  0.55，ＣＨＣｌ3）、Ｄ体：〔α〕D＝＋83.71。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.312, 8.182（m, 15H, OBz）, 6.691（d, J=4.59Hz, H-1）, 5.593（dd, J4-3=6.66Hz, J2-3=1.8Hz, 1H, H-30）, 4.637, 4.796（m, 4H, H-2, H-4及びH-5）, 2.3（b, OH）．
１，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−２−Ｏ−イミダソスルフリル−α−Ｌ−リボフラノース（１２）
化合物１１（5.94ｇ，12.84mmol）を、50ｍｌの無水ＣＨ2Ｃｌ2中で−15℃（ドライアイス−ＣＣｌ4）にて攪拌した。無水ＤＭＦ（15ｍｌ）及び塩化スルフリル（3.2ｍｌ，3.98mmol）を順次加えた。溶液を−15℃にて30分間攪拌し、次いで室温にて４時間放置した。反応混合物を氷浴で冷却しつつ、イミダゾール（8.7ｇ，12.78mmol）を３つの部分に別けて加えた。これを次いで室温にて17時間攪拌した。混合物を150ｍｌの氷水に注ぎ、そして水相をＣＨ2Ｃｌ2（50ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。カラム（ヘキサン：酢酸エチル／５：１−１：１）によって精製して１２を白色固体として得た（3.7ｇ，49％）。融点124.5〜125.5℃、文献129℃、〔α〕D＝−68.976、Ｄ体：＋66.154。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ6.9, 8.2（m, 18H, Ar-H）, 6.67（d, J=4,4Hz, 1H, H-1）, 5.59（dd, 1H, H-3）, 5.21（dd, 1H, H-2）, 4.5, 4.8（m, 3H, H-4及びH-5）．
１，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−２−デオキシ−２−フルオロ−α−Ｌ−アラビノフラノース（１３）
30ｍｌの２，３−ブタンジオール中の１２（3.33ｇ，5.62mmol）、ＫＨＦ2（1.76ｇ，22.56mmol）の懸濁液をアルゴン下に攪拌した。１ｍｌのＨＦ／Ｈ2Ｏ（48％，27.6mmol）を加えつつ150℃に加熱し、そして混合物を160℃にて1.5時間攪拌した。反応を停止させるために食塩−氷を加え、次いで溶液を塩化メチレン（50ｍｌ×４）で抽出した。合わせた抽出液を食塩水、水、飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、無水ＭｇＳＯ4及び活性炭上（Darco-60）で乾燥させた。シリカゲルパッド（５ｃｍ×５ｃｍ）上に注ぎ、塩化メチレンで、次いで酢酸エチルで洗浄してシロップを得、これを95％エタノールから結晶化させて１３を得た（1.3ｇ，49.8％）。融点77〜78℃、文献82℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.314, 8.146（m, 15H, OBz）, 6.757（d, J=9,1Hz, 1H, H-1）, 5.38（d, J=48.5Hz, 1H, H-2）, 5.630（dd, J=22.5Hz, 1H, H-3）, 4.768（m, 3H, H-4及びH-5）
Ｎ9−〔３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル〕−２，６−ジクロロプリン（１５）
化合物１３（464ｍｇ，１mmol）を、1.4ｍｌのＨＢｒ／ＡｃＯＨ（45％Ｗ／Ｖ）を加えつつ10ｍｌの塩化メチレンに溶解させた。溶液を室温にて24時間攪拌し、次いで、蒸発乾固させた。次いで残渣を20ｍｌの塩化メチレンに溶解させ、水、飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。濾過し蒸発させて、臭素化糖１４を得た（ＴＬＣによると100％）。
同時に、２，６−ジクロロプリン（378ｍｇ，２mmol）を15ｍｌのＨＭＤＳ及び２ｍｇの硫酸アンモニウム中に懸濁させ、次いで２時間還流させた。Ｎ2下にＨＭＤＳを高真空によって蒸発させて白色のシリル化塩基を得た。
臭素化糖１４を25ｍｌの無水１，２−ジクロロエタンに溶解させた。得られた溶液を、シリル化された塩基にＮ2下に加えた。混合物を還流下に２日間攪拌した。クロロホルム（30ｍｌ）を加え、次いで水（20ｍｌ×２）、飽和ＮａＣＯ3（20ｍｌ×２）、飽和ＮａＣｌ（20ｍｌ×２）で連続的に洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。ＣＨＣｌ3より、化合物１５を結晶化させた（105ｍｇ，19.7％）。融点158℃、Ｄ体：158℃、ＵＶ（メタノール）：λmax：238.50nm，273.0nm．
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.82（d, J=1,5Hz, 1H, H-8）, 7.49, 8.33（m, 10H, OBz）, 6.767（dd,JH-H=4HZ, JF-H=13.8Hz, 1H, H-1'）, 5.854（dq, J=67.4Hz, 1H, 1-2'）, 5.910（m, 1H, H-3'）, 4.751（m, 3H, H-4'及びH-5'）
Ｎ9−〔２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル〕−２，６−ジクロロプリン（１６）
化合物１５（70ｍｇ，0.13mmol）を、シールされた鋼製のボンベ中で25ｍｌの飽和ＮＨ3／ＣＨ3ＯＨに溶解させ、そして90℃に６時間加熱した。減圧下に溶媒を除去して黄色の半固形物を得、これを調製用ＴＬＣ（９：１／ＣＨＣｌ3：ＣＨ3ＯＨ）によって精製した。水及び１，４−ジオキサンから凍結乾燥させて白色粉末１６（30ｍｇ，75％）を得た。ＵＶ（Ｈ2Ｏ）ｐＨ２，λmax212.00ｎｍ，263.50ｎｍ（ε6711）、ｐＨ７、λmax213.50ｎｍ、263.00ｎｍ（ε7590）、ｐＨ11、λmax213.5ｎｍ，263.00ｎｍ（ε5468）
1Ｈ−ＮＭＲ（300MHz，DMSO-d6）：δ8.279（d, J=1.5Hz, 1H, H-8）, 7.908（bs, 2H, NH2）, 6.321（dd, JH-H=4.4Hz,JF-H=13.8Hz, 1H, H-1'）, 5.986（t, 1H, 5'-OH）, 5.230（dt, JF-H=52.6Hz, 1H, H-2'）, 5.115（d, 1H, 3'-OH）, 4.425（dq, JF-H=19Hz, 1H, H=3'）, 3.841（m, 1H, H-4'）, 3.636（d, 2H, H-5'）
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンジル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）チミン（１７）
無水ＣＨ2Ｃｌ2（10ｍｌ）中の１３（400ｍｇ，0.86mmol）の溶液に、酢酸中の臭化水素（45％Ｗ／Ｖ，1.5ｍｌ）を加え、得られる溶液を室温にて17時間攪拌した。溶媒を蒸発させそしてトルエンと同時蒸発させて、化合物１４を得た。
同時に、チミン（215ｍｇ，1.72mmol）を、窒素下にＨＭＤＳ（25ｍｌ）中で17時間還流させて、均質な溶液を得た。溶媒の除去により、シリル化されたチミンが得られた。
ジクロロメタン（50ｍｌ）中の１４の溶液をこのシリル化されたチミンに加え、得られた溶液を窒素下に３日間還流させた。水を加え、次いでＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を水、食塩水で洗浄し、乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の蒸発により粗生成物が得られ、これを２％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3を用いて調製用ＴＬＣで精製して１７を得た（235ｍｇ，58％）。融点99〜101℃、ＵＶ（メタノール）：230，264ｎｍ  〔α〕D＝＋22.397
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.343−8.389（m, 12H, Ar-H, NH）, 6.34（dd, JH-H=2.97Hz, JF-H=28.32Hz, 1H, H-1'）, 5.383（dd, JH-H=2.7Hz, JF-H=63.27Hz. 1H, H-2'）, 5.565（dd, 1H, H-3'）, 4.812（d, 2H, H-5'）, 4.466（m, 1H, H-4'）, 1.775（s, 3H, CH3）．元素分析（Ｃ24Ｈ21Ｎ2Ｏ7Ｆ）、Ｃ：61.01，Ｈ：4.58，Ｎ：5.73，Ｆ：3.92
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）チミン（１８）
化合物１７（145ｍｇ，0.309mmol）を、室温にて18時間ＮＨ3／ＣＨ3ＯＨで処理した。溶媒を蒸発させ調整用ＴＬＣ（15％ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ3）で精製して、18を得た（70ｍｇ，87.5％）。融点174〜175℃。ＵＶ：274ｎｍ、〔α〕D＝−104.36
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ11.401（s, 1H, NH）, 7.575（s, 1H, H-6）, 6.093（dd, JH-H=15.6Hz, H-1'）, 5.844（d, 1H, 3'-OH）, 5.019（dt, JF-H=53.3Hz, 1H, H-2'）, 5.087（t, 1H, 5'-OH）, 4.194（dq, 1H, H-3'）, 3.647（m, 3H, H-4'及びH-5'）, 1.781（s, 3H, CH3）．元素分析（Ｃ10Ｈ13Ｎ2ＦＯ5）、Ｃ：44.80，Ｈ：4.97；Ｎ：10.04；Ｆ：7.03、
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−エチルウラシル（１９）
無水ジクロロメタン（10ｍｌ）中の１３の溶液に、酢酸中の臭化水素（45％ｗ／ｖ，0.97ｍｌ，5.385mmol）加えた。溶液を室温にて18時間攪拌し、溶媒を蒸発させトルエンとともに同時蒸発させて、１４が得られた。
同時に、５−エチルウラシル（0.75ｇ，5.39mmol）をＨＭＤＳ（10ｍｌ）に硫酸アンモニウム（５ｍｇ）と共に懸濁させ、そして窒素下に５時間還流させて均質な溶液を得た。
シリル化された塩基の溶液を、湿気との接触を避けつつ蒸発乾固させた。得られたシロップに、無水１，２−ジクロロエタン（10ｍｌ）中の１４の溶液を加えた。反応混合物を窒素下に95℃にて20時間攪拌し、次いで真空下に蒸発乾固させて、黄色の固体を得、これを５ｍｌのＣＨ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3（１：１）と混合しそして濾過した。濾液を蒸発させて残渣を得、これをシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーにかけ（ＣＨ3ＯＨ／ＣＨＣｌ3、０〜１％）、白色の固体１９を得た（0.557ｇ，100％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ11.55（s, 1H, NH）, 7.51, 8.08（m, 10H, Ar-H9, 7.32（s, 1H, H-6）, 6.29, 6.37（dd, JH-H=3.7Hz, JF-H=20Hz, 1H, H-1'）, 5.68-5.75（dd, JF-H=54Hz, 1H, H-3'）, 5.47-5.65（dd,JF-H=54Hz, 1H, H-2'）, 4.62-4.83（m, 3H, H-4'及びH-5'）, 2.01, 2.09（q, 2H, CH2-CH3）, 0.85（t, 3H, CH3）
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−エチルウラシル（２０）
化合物１９（500ｍｇ）をメタノール性アンモニア（50ｍｌ）中に溶解させ、室温にて44時間攪拌した。この溶液を蒸発乾固させて白色の固体を得（0.4ｇ）、これをシリカゲルカラムによりクロマトグラフィーにかけて（メタノール／クロロホルム、０〜５％）白色固体２０（240ｍｇ，84％）を得た。融点158〜161℃、ＵＶ（メタノール）：λmax260ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ11.42（s, 1H, NH）, 7.57（s, 1H, H-6'）, 6.10（dd,JH-H=5.0Hz, JF-H=14Hz, 1H, H-1'）, 5.88（bs, 1H, 3'-OH）, 5.14, 5.19（m, 2H, H-2'及び5'-OH）, 4.98（t, 1H, H-3'）, 4.22, 4.28（m, 1H, H-4'）,3.55, 3.78（m, 2H, H'-5）．元素分析（Ｃ11Ｈ15Ｎ2Ｏ5Ｆ）：Ｃ：47.93，Ｈ：5.56，Ｎ：10.06，Ｆ．6.68
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−Ｎ4−ベンゾイル−５−ヨードシトシン（２１）
無水塩化メチレン（５ｍｌ）中の１３（150ｍｇ，0.323mmol）の溶液に、酢酸中の臭化水素（45％ｗ／ｖ，0.29ｍｌ，1.615mmol）を加えた。反応混合物を室温にて9.5時間攪拌した。溶媒を蒸発させそしてトルエンと同時蒸発させて、１５を黄色シロップとして得た。
同時に、Ｎ4−ベンゾイル−５−ヨードシトシン（550ｍｇ，1.615mmol）を、硫酸アンモニウム（３ｍｇ）と共にＨＭＤＳ（８ｍｌ）中に懸濁させ、そして窒素下に５時間還流させて、均質な溶液を得た。
このシリル化された塩基の溶液を、湿気との接触を避けつつ蒸発乾固させた。得られたシロップに、無水１，２−ジクロロエタン（10ｍｌ）中の１４の溶液を加えた。反応混合物を窒素下に23時間還流させ、次いで蒸発乾固させて褐色のシロップを得、これをクロロホルム（30ｍｌ）で粉砕した。得られた析出物を濾去しクロロホルムで洗浄した。濾液及び洗液をあわせ、蒸発させて褐色シロップを得た。この混合生成物をシリカゲルカラムによるクロマトグラフィー（メタノール／クロロホルム、０〜１％）によって分離し、白色固体２１を得た（100ｍｇ，45％）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ11.40（bs, 1H, NH）, 7.26, 8.20（m, 17H, Ar-H, H-6及びNH）, 6.36, 6.44（dd, JH-H 2.8Hz, JF-H 21Hz, 1H, H-1'）, 5.62, 5.68（dd, 1H, H-3'）, 5.39, 5.56（dd, 1H, H-2'）, 4.58, 4.85（m, 3H, H-4'及びH-5'）
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（２２）
化合物２１（100ｍｇ，0.27mmol）を、室温にて飽和ＮＨ3／メタノール（60ｍｌ）で24時間処理した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜10％メタノール／クロロホルム）により化合物２２（35ｍｇ，71％）が白色固体として得られた。〔α〕D＝−65.4（ｃ  0.34，ＣＨ3ＯＨ）；ＵＶ（メタノール）：λmax＝293ｎｍ．
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ8.04（s, 1H, H-6）, 6.74, 7.94（s, 1H, NH）, 6.01, 6.08（dd, JH-H=3.9Hz, JF-H=16.6Hz, 1H, H-1'）, 5.85（d, 1H, 3'-OH）, 5.17（t, 1-H, 5'-OH）, 5.08（t, 1H, H-2'）, 4.89（t, 1H, H-3'）, 4.15-4.23（m, 1H, H-4'）, 3.63-3.79（m, 2H, H-5'）．
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−３’，５’−ジ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（２３）
10ｍｌの無水ＣＨ2Ｃｌ2中の１３（260ｍｇ，0.56mmol）の溶液に、ＨＢｒ／ＡｃＯＨ（45％ｗ／ｖ，0.5ｍｌ，2.8mmol）を加えた。反応混合物を室温にて36時間攪拌し、次いで蒸発乾固させた。残渣を20ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2に溶解させ、水（10ｍｌ）、飽和ＮａＣＯ3（10ｍｌ）で洗浄し、そして乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。濾過しそして蒸発させて、臭素化糖１４をシロップとして得た。
同時に、５−ヨードウラシル（270ｍｇ，1.12mmol）を10ｍｌのＨＭＤＳに懸濁させて36時間還流させて均質な溶液を得た。これを真空下に蒸発乾固させた。これに無水１，２−ジクロロエタン中の１４の溶液を加え、得られた溶液を窒素下に1.5日間還流させた。ＣＨＣｌ3（20ｍｌ）を加え、溶液を水（10ｍｌ）、食塩水（10ｍｌ）及び飽和ＮａＣＯ3（10ｍｌ）で連続的に洗浄し、次いで乾燥させた（ＭｇＳＯ4）。溶媒の除去によりシロップが得られ、これをＣＨ2Ｃｌ2中で結晶化させて２３を黄色固体として得た（237ｍｇ，73％）。この一部（70ｍｇ）を２−イソプロパノールから再結晶して白色固体（67ｍｇ）を得た。ＵＶ（メタノール）：λmax230.0ｎｍ，276.0ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.4, 7.3（m, 12H, Ar-H）, 6.29（dd,JH-H=2.43Hz,JF-H=21.6Hz, 1H, H-1'）, 5.377（dd, JH-H=2.8Hz, JF-H=61.3Hz, 1H, H-2'）, 5.55（dd, 1H, H-3'）, 4.865, 4.793（d, 2H, H-5'）, 4.588, 4.502（m, 1H, H-4'）．
Ｎ1−（２’−デオキシ−２’−フルオロ−β−Ｌ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（２４）
化合物２３（40ｍｇ，0.069mmol）を25ｍｌの飽和ＮＨ3／メタノールに溶解させ、室温にて24時間攪拌し、次いで蒸発乾固させた。得られたシロップを調製用ＴＬＣ（５：１／ＣＨＣｌ3：メタノール）で精製して２４が固体として得られた（19ｍｇ，74％）。ＵＶ（メタノール）：λmax280.5ｎｍ
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ11.82（bs, CHNH）, 8.24（s, 1H, H-6）, 6.082（dd, JH-H=4.45Hz, JF-H=13.7Hz, 1H, H-1'）, 5.947（d, 1H, 3'-OH）, 5.296（t, 1H, 5'-OH）, 5.07（dt, JF-H=53Hz, 1H, H-2'）, 4.24（bd, JF-H=21Hz, 1H, H-3'）, 3.81, 3.55（m, 3H, H-4', H-5'）
２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−アラビノース
図９に図解されているように、30ｇ（0.2mol）の粉末化したＬ−アラビノース（５）及び次いで0.4ｍｌの濃硫酸を600ｍｌ（14.8mol）の無水メタノールに加えた。澄明な溶液が得られるまで懸濁液を穏やかに２時間加熱した。1.5ｇの炭酸水素ナトリウムで反応混合物を中和し、乾燥させ（ＮａＳＯ4）、次いで真空下に粘稠なシロップ６になるまで蒸発させ、これを50ｍｌの新たに精製したテトラヒドロフランで希釈し、残存メタノールを除去するために再濃縮した（35〜40℃浴）。新たに精製したテトラヒドロフラン（400ｍｌ）を加え、次いで混合物を30ｇのDrierite、156ｇ（2.78mol）の水酸化カリウム、及び200ｍｌ（1.74mol）の塩化ベンジルで処理した。混合物を還流下に終夜穏やかに加熱し、冷却し、セライトの薄い層を通して濾過し、そして真空下に、次いで高真空下に100℃にて濃縮した。この粗製のシロップ状のメチル２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−アラビノシド（７）を400ｍｌの氷酢酸に溶解させた。加水分解混合物を65〜70℃に２時間加熱し、その体積の３分の１へと濃縮し、そして混合物を2.5Ｌの氷水に注いだ。結晶核（核となる結晶は、ジクロロメタンによるクロマトグラフィーによって得られた）を加えた後、混合物を終夜５℃に維持した。部分的に結晶化した塊から水層を傾捨し、塊を200ｍｌのジクロロメタンに溶解させた。溶液を冷たい、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、脱色活性炭の薄いベッドを通して濾過し、そして真空下に薄いシロップにまで濃縮し、これを200ｍｌのシクロヘキサンに溶解させた。結晶核を加えた後、溶液を室温にて１時間、そして５℃にて終夜維持して、27.7ｇ（33.2％）の２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−アラビノース（８）を得た。融点68〜73℃。〔α〕25D＝−1.69〔ｃ  2.01，９：１（ｖ／ｖ  ｐ−ジオキサン−水）〕  ＵＶ（メタノール）λmax220，300−ＭＨｚ  1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ3.48-3.62（m, 2H, H-5）, 3.94-4.18（m, 3H, H-2,3,4）, 5.33（d, 1H, J=4.07, H-1）, 5.29（s, H-1）, 7.25-7.33（m, 15, H-芳香族）
２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−（ｐ−ニトロベンジル）−Ｌ−アラビノース（９）
化合物８（図９）を7.5ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、この溶液に、５ｍｌのジクロロメタンと1.5ｍｌのピリジンとの混合物中の0.95ｇ（5.1mmol）の塩化ｐ−ニトロベンゾイルを加えた。反応混合物を室温にて終夜維持し、次いで１Ｎの塩酸（２×10ｍｌ）、炭酸水素ナトリウム水溶液（２×10ｍｌ）、及び水（３×30ｍｌ）で順次洗浄した。水分をＮａ2ＳＯ4で除去し、そして溶液を真空下に濃縮して、化合物９のアノマー混合物2.67ｇ（98.4％）を得た。融点68〜82℃。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：アセトン、８：１）による更なる精製により融点が89〜93℃に上昇する。〔α〕24D＝13.04（ｃ6.8，ＣＨ2Ｃｌ2）、ＵＶ（メタノール）λmax215.5及び258.5、250ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ3.45-3.69（m, 2H, H-5）, 4.06（m, 1H, H-4'）, 4.22（m, 1H, H-3'）, 4.33（m, 1H, H-2'）, 4.38-4.78（m, 6H,ベンジルCH2）, 6.50（d, 1H, J=2.35, H-1）, 7.23-7.36（m, 15H,ベンジル基の芳香族-H）, 8.01-8.25（m, 4H,ニトロベンジル基の芳香族-H）
１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｌ−アラビノシル）チミン（１２）
チミン0.444ｇ（3.52mmol）及び硫酸アンモニウム（２ｍｇ）を、ヘキサメチルジシラザン10ｍｌに懸濁させ、これをアルゴン下に終夜還流（140℃）させて澄明な溶液を得た。湿気との接触を避けつつ過剰のヘキサメチルジシラザンを真空下に除去してシロップ１１を得た。
化合物９（１ｇ，1.76mmol）を、無水の塩化水素飽和した17ｍｌのジクロロメタンに０℃にて加えた。０℃にて２時間の後、析出したｐ−ニトロ安息香酸（0.25ｇ）を濾去し、濾液を真空下に薄いシロップまで濃縮し、次いで室温にて高真空２時間維持して塩化２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−アラビノシル（１０）を得た。
こうして製造した化合物１０を15ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解させ、この溶液に、シリル化したチミン（１１）と３ｇの４Ａモレキュラーシーブとの混合物を加えた。反応混合物をアルゴン下に室温にて18時間攪拌した。反応混合物を50ｍｌのジクロロメタンで希釈し、そして２ｍｌの飽和ＮａＣＯ3水溶液に激しく攪拌しつつ注いだ。白色の析出物（酸化錫）が現れ、これをセライトのベッドにより濾過した。有機層を水から分離し、水（３×30ｍｌ）で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出しそして合わせたジクロロメタン層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、そして真空下に蒸発させてシロップを得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール、100：１）により精製して0.68ｇ（73％）の１２をシロップとして得た。〔α〕25D＝−56.71（ｃ  0.6，ＣＨ2Ｃｌ2）．ＵＶ（メタノール）λmax218及び265、300ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ1.67（d, 3H, J=1.11, CH3）, 3.66-3.70（m, 2H, H-5'）, 4.06（m, 1H, H-4'）, 4.13（t, 1H, J=4.7, H-3'）, 4.24（t, 1H, J=4.7, H-2'）, 4.41, 4.54, 4.56（m, 6H,ベンジルCH2）, 6.28（d, 1H, J=5.24, H-1'）, 7.15-7.33（m, 15H,芳香族-H）, 7.43（d, 1H, J=1.31, H-6）．
１−β−Ｌ−アラビノフラノシルチミン（１３）
塩化パラジウム（680ｍｇ，3.835mmol）を100ｍｌのメタノールに懸濁させ、そして震盪しつつ室温にて水素で還元した。25ｍｌのメタノール中の450ｍｇの12の溶液をパラジウムブラックの酸性懸濁液に加えた。反応混合物を室温にて水素と共に38時間震盪した。触媒を除去した後、溶液をDowex（HCO3-）でｐＨ７に中和し、そして真空下に白色固体にまで濃縮し、これをエタノールにより再結晶して１３を得た（105ｍｇ，47.7％）。融点244〜249℃。〔α〕25D＝−91.48（0.25，Ｈ2Ｏ）、ＩＲ（ＫＢｒ）：1750、1600ｃｍ-1（ＣＯ）、ＵＶ（メタノール）：λmax268、300ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ1.76（S, 3H, CH3）, 3.62（t, 2H, J=4.56, H-5'）, 3.69（m, 1H, H-4'）, 3.90（t, 1H, J=3.88, H-3'）, 3.99（t, 1H, J=4.10, H-2'）, 5.08（brs, 1H, C'5-OH,交換可能）、5.42（d, 1H, J=4,24, C'2-OH又はC'3-OH,交換可能）, 5.54（d, 1H, J=5,23, C'2-OH又はC'3-OH,交換可能）, 5.97（d, 1H, J=4.64, H-1'）, 7.51（d, 1H, J=0.97, H-6）, 11.26（s, 1H, NH,交換可能）．元素分析、Ｃ10Ｈ14Ｎ2Ｏ6：理論値：Ｃ，46.51；Ｈ，5.46；Ｎ，10.85；実測値：Ｃ，46.67；Ｈ，5.63；Ｎ，10.56．
１−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｌ−アラビノシル）シトシン（１５）
シトシン0.61ｇ（６mmol）及び硫酸アンモニウム（２ｍｇ）をヘキサメチルジシラザン15ｍｌに懸濁させ、これを窒素下に２時間還流（140℃）させて澄明な溶液を得た。シリル化したシトシン混合物を、湿気との接触を避けつつ真空下に蒸発乾固させてシロップ１４を得た。
化合物９（2.82ｇ，５mmol）を、無水塩化水素で予め飽和させた47ｍｌの乾燥ジクロロメタンに０℃にて加えた。０℃にて２時間の後、析出したｐ−ニトロ安息香酸（0.807ｇ）を濾去し、そして濾液を真空下に濃縮してシロップ状の塩化２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−アラビノシル（１０）を得た。
こうして製造した化合物１０を28.5ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解させ、この溶液に、シリル化シトシン（１４）と8.3ｇの４Ａモレキュラーシーブとの混合物を加えた。反応混合物を窒素下に室温にて５日間攪拌した。次いで反応混合物を50ｍｌのジクロロメタン及び20ｍｌの水で希釈し、そして２ｍｌの飽和ＮａＣＯ3水溶液中に激しく攪拌しつつ注いだ。白色に析出物（酸化錫）が現れ、これをセライトのベッドで濾去した。有機層を水から分離し、水（３×30ｍｌ）で洗浄した。水層をジクロロメタンで抽出し、そして合わせたジクロロメタン層をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、そして真空下に蒸発させてシロップを得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール、96：４）により精製して１５を白色固体として得、これを２−プロパノールにより再結晶して1.53ｇ（60％）を得た。融点146〜148℃、〔α〕25D＝−105.2（Ｃｌ、ＣＨ2Ｃｌ2）、ＵＶ（メタノール）：λmax211.5，λmin272.5，ｐＨ１，ｐＨ７；λmax211.5，λmin284，ｐＨ９．300ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ3.65（d, 2H, J=4.85, H-5'）, 4.00（t, 1H, J=3.72, H-3'）, 4.11（m, 1H, H-4'）, 4.28（m, 1H, H-2'）, 4.38-4.55（m, 6H,ベンジルCH2）, 5.56（d, 1H, J=7.5, H-5）, 6.39（d, 1H, J=4.59, H-1'）, 7.12-7.31（m, 15H,芳香族-H）, 7.63（d, 1H, J=7.5, H-6）．
１５の接触水素添加による１−β−Ｌ−アラビノフラノシルシトシン塩酸塩（１６）
塩化パラジウム（315ｍｇ，1.78mmol）を160ｍｌのメタノールに懸濁させ、震盪しつつ室温にて水素によって還元した。パラジウムブラックの酸性懸濁液に、次いで、54ｍｌのメタノール中の300ｍｇの１５の溶液を加えた。反応混合物を水素と共に室温にて３時間震盪した。触媒を除去した後、溶液をDowex（HCO3-）で中和し、真空下に濃縮し、次いで調製用ＴＬＣ（メタノール：クロロホルム、３：５）によって精製してシロップを得、これを３ｍｌのメタノールの溶解させ、メタノール中の１％のＨＣｌ溶液を加えてｐＨ１とし、蒸発乾固させ、そして２−プロパノールで粉砕して36ｍｇ（22％）の１６を得た。融点190〜194℃、〔α〕25D＝−115.47（ｃ  0.07，Ｈ2Ｏ）、ＵＶ（Ｈ2Ｏ）λmax275，ｐＨ７：λmax209.5，273，ｐＨ11；λmax280，ｐＨ１；300ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ3.61（d, 2H, H-5'）, 3.82（m, 1H, H-4'）, 3.93（m, 1H, H-2'又はH-3'）, 4.04（br s, 1H, H-2'又はH-3'）, 5.18（br s, 1H, C5'-OH,交換可能）, 5.61（br s, 1H, C2'-OH又はC3'-OH,交換可能）, 5.67（br s, 1H, C2'-OH又はC3'-OH,交換可能）, 6.00（d, 1H, J=4.02, H-1'）, 6.01（d, 1H, J5,6=7.8, H-6）, 8.49（br s, 1H, NH,交換可能）, 9.38（br s, 1H, NH,交換可能）．
三塩化ホウ素による化合物１５の処理による１−β−Ｌ−アラビノフラノシルシトシン塩酸塩（１６）
ジクロロメタン中の１Ｍの三塩化ホウ素５ｍｌを−72℃（ドライアイス−アセトン）に冷却した。３ｍｌのジクロロメタン中の１５（180ｍｇ，0.351mmol）の溶液をこの三塩化ホウ素溶液に徐々に加えた。2.72時間という合計反応時間の後、冷却浴を除去し、溶媒及び気体を真空下に除去した。残渣を冷ジクロロメタン（10ｍｌ）に溶解させ、そして溶液を蒸発乾固させ（白色固体が得られるまで、３回）、冷やした飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えてｐＨを６〜７に調節した。混合物をエタノールで希釈し、沸騰するまで加熱し、活性炭処理して濾過した。濾液を蒸発乾固してシロップとし、これを３ｍｌのメタノールに溶解させ、メタノール中の１％ＨＣｌ溶液を加えてｐＨを１とし、濃縮乾固させ、２−プロパノールで粉砕して１６を得た（66ｍｇ，78.4％）。
９−（２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｌ−アラビノシル）アデニン（１８）
完全に乾燥させた化合物９（５ｇ，8.8mmol）を、無水塩化水素で予め飽和させた82ｍｌのジクロロメタンに０℃にて加えた。０℃にて２時間反応の後、析出したｐ−ニトロ安息香酸（1.53ｇ）を濾去し、濾液を真空下に濃縮してシロップとし、これを室温にて完全な真空下に２時間維持した。こうして製造した塩化２，３，５−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−アラビノシル（１０）を50ｍｌのジクロロメタンに溶解させ、溶液を、4.5ｇ（18.8mmol）の乾燥したＮ−ベンゾイルアデニン（１７）と14.5ｇの４Ａモレキュラーシーブとの混合物に加えた。反応混合物を室温にて１週間攪拌し、セライトのベッドを通して濾過し、そして真空下に濃縮してシロップとし、これを、ヘキサン−アセトン（３：１）を用いてシリカゲル上のクロマトグラフィーに付した（Ｒｆ＝0.22）。生成物を分離して真空下に濃縮してシロップとし、これを、ステンレス鋼のボンベ中でメタノール性アンモニア（20ｍｌ）に溶解させて攪拌し、そして終夜50〜55℃に加熱した。次いで溶液を減圧下に濃縮して半固形物を得、これを温イソプロピルアルコールから再結晶して2.4ｇ（50.7％）の１８を得た。融点128〜129℃。〔α〕27D＝−20.04（1.04，ＣＨ2Ｃｌ2）、ＵＶ（ＣＨ2Ｃｌ2）：λmax213，258.5、250ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ1.95（br s, 1H, NH,交換可能）, 3.69（d, 2H, J=4.82, H-5'）, 4.18-4.30（m, 6H,ベンジルCH2）, 4.51−4.64（m, 3H, H-2', 3', 4'）, 5.73（br s, 1H, NH,交換可能）, 6.52（d, 1H, J=4.00, H-1'）, 6.89-6.93, 7.17-7.37（m, 15H,ベンジル基の芳香族-H）, 3.17（s, 1H, H-2又はH-8）, 8.32（s, 1H, H-2又はH-8）．
９−β−Ｌ−アラビノフラノシルアデニン（１９）
ジクロロメタン中の三塩化ホウ素（１Ｍ、５ｍｌ）を−72℃（ドライアイス−アセトン）に冷却した。５ｍｌのジクロロメタン中の１８（150ｍｇ，0.279mmol）の溶液を、この三塩化ホウ素溶液に徐々に加えた。3.5時間という合計反応時間の後、冷却浴を除去し、溶媒及び気体を真空下に除去した。残渣を冷ジクロロメタン（10ｍｌ）に溶解させ、そして溶液を蒸発乾固させた（黄色残渣が得られるまで、６回）。冷えた飽和炭酸水素ナトリウム溶液を加えて、ｐＨを７〜８に調節した。混合物をエタノールで希釈し、沸騰するまで加熱し、セライトを通して懸濁液を濾過し、濾液を真空下に濃縮してシロップとし、これを水で再結晶した。55ｍｇ（74％）の１９が得られた。融点256〜258℃、ＵＶ（Ｈ2Ｏ）：λmax259；300ＭＨｚ 1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ3.62-3.66（m, 2H, H-5'）, 3.77（br s, 1H, H-4'）, 4.13（br s, 2H, H-2', 3'）, 5.12（t, 1H, J=5.4, C'5-OH,交換可能）, 5.54（d, 1H, J=3.78, C'2-OH又はC'3-OH,交換可能）, 5.63（d, 1H, J=4.32, C'2-OH又はC3'-OH,交換可能）, 6.25（d, 1H, J=4.02, H-1'）, 7.25（br s, 2H, NH2,交換可能）, 8.13（s, 1H, H-2又はH-8）, 8.18（s, 1H, H-2又はH-8）．
図１０は、１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−キシロフラノース（化合物３）からの１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（化合物１０）の製造のための代わりの経路の図解である。
１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−キシロフラノース（３）
650ｍｌの無水アセトンに、４ｍｌの濃硫酸、５ｇのモレキュラーシーブ（４Ａ）、80ｇの無水硫酸銅及び40ｇのＬ−キシロースを加えた。混合物を室温にて36時間攪拌した。反応混合物を次いで濾過し、そしてアセトンで徹底的に洗浄し、濾液を合わせ、水酸化アンモニウムで中和し、次いで蒸発乾固させた。酢酸エチル（200ｍｌ）を加え、次いで濾過しそして蒸発させて油状物を得、これを250ｍｌの0.2％ＨＣｌに溶解させ、溶液を室温にて2.5時間攪拌した。飽和ＮａＣＯ3でｐＨを８に調節し、次いで蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチルで抽出した。溶媒を除去して黄色油状物３を得た（41.7ｇ，82.3％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ5.979（d, J=3.78Hz, 1H, H-1）, 4.519（d, J=3.6Hz, 1H, H-2）, 4.308（bd, 1H, H-3）, 4.080（m, 3H, H-4及びH-5）, 1.321（s, 3H, CH3）, 1.253（s, 3H, CH3）．
５−Ｏ−ベンゾイル−１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−キシロフラノース（２５）
化合物３（41ｇ，251.6mmol）を、０℃にてピリジン（150ｍｌ）及びＣＨ2Ｃｌ2（150ｍｌ）中で攪拌した。30ｍｌのピリジンに溶解させたＢｚＣｌ（27.5ｍｌ，237mmol）を滴下して加えた。30分後、水（５ｍｌ）を加え、混合物を蒸発乾固させ、酢酸エチルに溶解させ、飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、次いで乾燥させた（Ｎａ2ＳＯ4）。溶媒を蒸発させて橙色のシロップを得、これをジエチルエーテル中で結晶化させて化合物２５を得た（36ｇ）。母液を蒸発乾固させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（１％メタノール／クロロホルム）により精製して別のバッチの化合物２５（12ｇ，総収率76％）を得た。融点82〜83℃、文献Ｄ体：83.5〜84.5℃、1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.43, 8.07（m, 5H,芳香族-H）, 5.97（d, 1H, J=3.6Hz, H-1）, 4.80（q, 1H, H-4）, 4.60（d, 1H, J=3.6Hz, H-2）, 4.40, 4.20（m, 3H, H-5, H-5', H-3）, 3.50（bs, 1H, D2O交換, 30H）, 1.51, 1.32（2s, 6H, 2CH3）．
５−Ｏ−ベンゾイル−１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−エリスロペントフラノース−３−ウロース（２６）
化合物２５（40ｇ，136mmol）を450ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中で攪拌した。これに重クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ，30.7ｇ，81.6mmol）及び無水酢酸（42.3ｍｌ，448.8mmol）を加えた。混合物を2.5時間還流させた。溶液をその最初の液量の１／５までに濃縮し、次いで酢酸エチル（50ｍｌ）を加え、そして溶液を濾過した。濾液をシリカゲルパッド（10ｃｍ×５ｃｍ）上に注ぎ、酢酸エチルで溶出させ、合わせた溶出液を濃縮し、そしてトルエンと共に蒸発させた（50ｍｌ×２）。ヘキサン及び酢酸エチルから結晶化させて、２１を白色固体として得た（38ｇ，96％）。融点91〜93℃、〔α〕D：−132°（ｃ，1.0，ＣＨＣｌ3），文献Ｄ体：融点93〜94℃、〔α〕D：＋135℃（ｃ，1.0，ＣＨＣｌ3），ＩＲ（ＫＢｒ）：1773ｃｍ-1（ＡｒＣＯ），1730ｃｍ-1（ＣＯ），1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.97, 7.42（m, 5H,Ar-H）, 6.14（d, 1H, J=4.4Hz, H-1）, 4.74, 4.68（m, 2H, H-4, H-2）, 4.50, 4.44（m, 2H, H-5, H-5'）, 1.52 1.44（2s, 6H, 2CH3）．元素分析（Ｃ15Ｈ16Ｏ6）：計算値：Ｃ，61.64；Ｈ，5.52；実測値：Ｃ，61.42；Ｈ，5.53．
５−Ｏ−ベンゾイル−１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−エリスロ−ペントフラノース−３−ウロース（２６）
化合物２５（40ｇ，136mmol）を450ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2中で攪拌した。。これに、重クロム酸ピリジニウム（ＰＤＣ，30.7ｇ，81.6mmol）及び無水酢酸（42.3ｍｌ、448.8mmol）を加えた。混合物を2.5時間還流させた。溶液を最初の液量の１／５にまで濃縮し、次いで酢酸エチル（50ｍｌ）を加えた。溶液を濾過し、濾液をシリカゲルパッド（10ｃｍ×５ｃｍ）上に注ぎ、酢酸エチルで溶出させ、合わせた溶出液を濃縮し、そしてトルエンと共に蒸発させた（50ｍｌ×２）。ヘキサン及び酢酸エチルから結晶化させて２６を白色固体として得た（38ｇ，96％９。融点91〜93℃、〔α〕D：−132°（ｃ  1.0，ＣＨＣｌ3），文献Ｄ体：融点93〜94℃、〔α〕D：＋135°（ｃ  1.0，ＣＨＣｌ3），ＩＲ（ＫＢｒ）：1773ｃｍ-1（ＡｒＣＯ），1730ｃｍ-1（ＣＯ）．1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.97, 7.42（m 5H, Ar-H）, 6.14（d, 1H, J=4,4Hz, H-1）, 4.74, 4.68（m, 2H, H-4, H-2）, 4.50, 4.44（m, 2H, H-5, H-5'）, 1.52, 1.44（2s, 6H, 2CH3）．元素分析（Ｃ15Ｈ16Ｏ6）：Ｃ，61.64；Ｈ，5.52；実測値：Ｃ，61.42；Ｈ，5.53．
１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−リボフラノース（２７）
化合物２６（37ｇ，127mmol）を、ＮａＢＨ4（23.3ｇ，612mmol）を少量宛加えながら０℃にてエタノール／水（400ｍｌ／100ｍｌ）に溶解させた。懸濁液を室温にて４時間攪拌した。それを濾過し、濾液を蒸発乾固させ、そしてメタノールと同時蒸発させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（０〜15％メタノール／ＣＨ2Ｃｌ2）及び酢酸エチル／ヘキサンからの結晶化の後、２７が白色針状晶として得られた（19ｇ，79％）。融点86〜87℃、〔α〕D−31.5℃（ｃ，0.62，ＣＨＣｌ3）；文献Ｄ体：融点86〜87°、〔α〕D：＋37℃（ｃ，0.59，ＣＨＣｌ3）；ＩＲ（ＫＢｒ）：3356ｃｍ-1（ＯＨ）、1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ5.83（d, 1H, J=3.98Hz, H-1）, 4.595（t, 1H, H-2）, 4.055（m, 4H, H-3, H-4, H-5, H-5'）, 2.38（d, 1H, D2O交換, 3-OH）, 1.83（t, 1H, D2O交換, 5-OH）, 1.58, 1.38（2s, 6H, 2CH3）.元素分析（Ｃ3Ｈ14Ｏ5）：理論値：Ｃ，50.50；Ｈ，7.42；実測値Ｃ，50.62；Ｈ，7.46．
３，５−ジ−Ｏ−ベンゾイル−１，２−ジ−Ｏ−イソプロピリデン−α−Ｌ−リボフラノース（２８）
化合物２７（19ｇ，100mmol）を、ＢｚＣｌ（40ｍｌ，348mmol）を滴下して加えつつ０℃にて300ｍｌのピリジンに加え、次いで４℃にて３時間攪拌した。溶媒を蒸発乾固させた。残渣を酢酸エチルで抽出し、飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、溶媒を蒸発させてエーテル中で結晶化させて39ｇ（98％）の２３を白色固体として得た。融点83〜85℃。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ8.07, 7.36（m, 10H, Ar-H）, 5.94（d, 1H, J=3.6Hz, H-1）, 5.05, 5.00（m, 1H, H-2）, 4.73, 4.63（m, 3H, H-4, H-5, H-5'）, 1.58, 1.35（2s, 6H, 2CH3）．元素分析（Ｃ22Ｈ22Ｏ7）：理論値：Ｃ，66.50；Ｈ，5.64；実測値：Ｃ，66.32；Ｈ，5,57．
１−Ｏ−アセチル−２，３，５−トリ−Ｏ−ベンゾイル−β−Ｌ−リボフラノース（３１）
化合物２８（38ｇ，95mmol）を、300ｍｌの１％ＨＣｌ／メタノール中で室温にて30時間攪拌した。ピリジン（20ｍｌ）を加え、次いで溶液を蒸発乾固させた。残渣をピリジン（30ｍｌ×２）と共に同時蒸発させ、次いで、ＢｚＣｌ（17ｍｌ、146mmol）を滴下して加えつつ０℃にて100ｍｌの無水ピリジンに溶解させ、次いで室温にて３時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣を酢酸エチルに溶解させ、0.5Ｎの塩酸及び飽和ＮａＣＯ3で洗浄し、次いで乾燥させた（Ｎａ2ＳＯ4）。溶媒を蒸発させて粗製３０をシロップとして得た。
この粗製３０を氷酢酸（400ｍｌ）中にて攪拌し、次いで、濃硫酸（10ｍｌ）を滴加して加えつつ無水酢酸（100ｍｌ）を０℃にて加えた。この溶液を室温にて終夜攪拌した。混合物を氷水に注ぎ、クロロホルムで抽出し、ＮａＣＯ3で中和し、ついで乾燥させた（Ｎａ2ＳＯ4）。溶媒を蒸発させると淡黄色のシロップが得られ、これをメタノール中で結晶化させて23.89ｇ（49.6％、28から31）の３１を白色固体として得た。融点124.7℃、〔α〕D＝45.613（ｃ  1.0，クロロホルム）、文献：融点129〜130℃、〔α〕D＝−43.6（ｃ  1.0，クロロホルム）．1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ7.317, 8.134（m, 15H, OBz）, 6.437（s, 1H, H-1）, 5.835（m, 2H, H-2及びH-3）, 4.649（m, 3H, H-4及びH-5）, 2.003（s, 3H, CH3 COO-）．
ＩＩ．  生物学的活性
ここに開示された化合物は、ＨＢＶ及びＥＢＶに対する活性につき以下に開示されているようにして、又は当業者に知られている他の方法によって、評価することができる。
実施例１    ＨＢＶに対する生物学的活性
ＨＢＶを有するヒト肝癌細胞（2.2.15細胞）をアッセイに使用した。これらの細胞は、10％の牛血清アルブミンを補った最少必須培地中でコンルフエントになるまで培養した。培地は、３日間隔で交換した。コンルフエントになった時点で、薬物による処理を開始し、次いで３日間続けた。同じ濃度の薬物のもう一回の添加が、培養物からの培地の除去の後にこの時点において行われ、そして培養物は更なる３日間維持された。この６日処理の後の培地を回収し、ウイルス粒子をポリエチレングリコール法により沈殿させた。続いて粒子を消化し、次いでサザン分析のために処理した。ブロットをＨＢＶ特異的プローブにハイブリダイズさせ、薬物処理を受けなかった培養物からのＤＮＡレベルとの比較によりウイルスＤＮＡ量を評価した。ゲノムＤＮＡをHind IIIで消化し、サザン分析に付した。エピソーム性ＤＮＡのレベルをＨＢＶＤＮＡとの関連において決定した。対照と比較したときＤＮＡの50％阻害を引き起こす薬物濃度（ＩＤ50）を計算した。結果は表Ｉに纏められている。
0003899440.tif 000003
実施例２    ＥＢＶに対する生物学的活性
Ｈ１細胞は、処置を開始する前の２日間、対数相増殖に維持した。予め存在しているウイルス粒子を含んだ培地を細胞から分離するために、細胞を室温にて600×ｇで10分間遠心した。Ｈ１細胞を、薬物を含有する又は含有しない２ｍｌの新鮮な培地中１×105個／ウェルの濃度に24ウェルのプレートに播種し、37℃にて５日間インキュベートした。ビリオンを含有する培地をとっておき、ウイルス産生及びバイオアッセイを用いた感染性に対する薬物の阻害効果の評価のために使用した。ＳＷ−50Ｔｉローター（Beckman）中における45,000ｒｐｍでの90分間遠心により、ビリオンを細胞不含培地からペレット化した。ビリオンを１ｍｌの増殖培地中に再懸濁させ、次いで１×106のＲａｊｉ細胞を48時間感染させるのに使用した。超感染後のＲａｊｉ細胞におけるＥＢＶ  ＤＰ活性は、加えられたビリオンの数に比例することから、誘発されたＥＢＶ特異的ＤＰ活性が測定できる。阻害性の薬物効果は、ＥＢＶ  ＤＰ活性を多数希釈対照と比較することによって計算された。細胞が１ｍＭのＬ−ＦＭＡＵで６日間処理されたとき、Ｈ１細胞中のミトコンドリアＤＮＡ含量の阻害は観察されなかった。
スロットブロットアッセイ
ミトコンドリアＤＮＡの量は、スロットブロット法（２）によって測定した。２×105の処理された及び無処理のＨ１細胞を、200μｌの10ｍＭトリス塩酸（ｐＨ7.5）溶液中で凍結／融解法によって溶解させた。細胞溶解物を10μｇ／ｍｌのＲＮａｓｅＡで37℃にて30分間処理し、次いでプロテインキナーゼＫ（100μｇ／ｍｌ）で55にて２時間処理した。等しい量の20×ＳＳＣ緩衝液を各細胞溶解物に加えた。10分間の煮沸の後、サンプルをナイロン膜（Hybond-N, Amersham Corp.）上にスポットした。放射性標識したヒトミトコンドリアＤＮＡフラグメントをＤＮＡハイブリダイゼーションのためのプローブとして使用した。同じ膜を、ミトコンドリアＤＮＡプローブを除去した後にヒトＡｌｕＤＮＡで再プローブした。処理された及び無処理のＨ１細胞中のミトコンドリアＤＮＡ量は、濃度計（Ultroscan XL）によって定量した。
結果は表２に示されている。
0003899440.tif 000004
実施例３    血漿及び肝臓からのＬ−（−）−ＦＭＡＵのクリアランス
経口投与後のマウスの血漿及び肝臓からのＬ−（−）−ＦＭＡＵのクリアランスにつき評価した。マウスには、トリチウム標識したＬ−（−）−ＦＭＡＵ（9.3μｍｏｌ／μＣｉの比放射能）を注射した。
図１１は、マウスにおける経口投与後のＬ−（−）−ＦＭＡＵの血漿濃度の経時的グラフであり、図１２は、マウスにおける経口投与後のＬ−（−）−ＦＭＡＵの肝臓濃度の経時的グラフである（十字：薬物動力学試験に先立つ30日間毎日２回10ｍｇ／ｋｇを投与し、次いで同じ濃度の投与の下に31日目に試験を実施した。黒丸：試験に先立つ30日間毎日２回50ｍｇ／ｋｇを投与し、次いで31日目に同じ濃度の投与の下に試験を実施した。白丸：試験の初日に初めて50ｍｇ／ｋｇの投与を行った。）
示されている各時点において（図１０及び１１を参照）、ヘパリン処理毛細管を用いてマウスを後眼窩洞より出血させた。トリクロロ酢酸で血漿を抽出し、そしてフレオン／トリオクチルアミンで中和した。上澄を直接カウントし濃度を計算した。
図１０及び１１に示されているように、血漿及び肝臓中におけるＬ−（−）−ＦＭＡＵのピーク濃度は、およそ１時間の時点で起こった。その後化合物は、１時間後には血漿と肝臓双方から実質的に消失した。
実施例４      ＢＤＦ１雌性マウスにおけるＬ−（−）−ＦＭＡＵの毒性
図１３ａは、対照ＢＤＦ１雌性マウスの30日間にわたる体重変化を図解している。図１３ｂ及び１３ｃは、Ｌ−（−）−ＦＭＡＵを毎日２回10ｍｇ／ｋｇ（１３ｂ）及び50ｍｇ／ｋｇ（１３ｃ）投与されたＢＤＦ１雌性マウスの30日間にわたる体重変化を図解している。示された体重は、５乃至７匹のマウスの体重の平均及び標準偏差を表している。図１３ｂ及び１３ｃに示されているように、Ｌ−（−）−ＦＭＡＵは30日間にわたってマウスの体重に有意な影響を与えなかったように見え、それは該化合物が十分耐容性のあるものであることを示している。
実施例５      Ｌ−（−）−ＦＭＡＵ処置の後のマウス血漿の臨床化学
図１４〜２０は、１日２回30日間にわたって10ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）又は50ｍｇ／ｋｇ（マウス３匹）のＬ−（−）−ＦＭＡＵを投与された後のマウス血漿の臨床化学を提供している。
図１４は、ｍｇ／ｄＬで表したマウス血漿中の総ビリルビン濃度の棒グラフである。図１５は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中のアルカリ性ホスファターゼ濃度の棒グラフである。総ビリルビン及びアルカリ性ホスファターゼは、肝機能の指標である。マウスのビリルビン値は、正常のヒトの範囲（1.2ｍｇ／ｄＬ未満）内にはいるが、アルカリ性ホスファターゼの値は、正常のヒトのレベル（30〜114Ｕ／Ｌ）よりも幾分高い。
図１６は、ｍｇ／ｄＬで表したマウス血漿中のクレアチニン濃度の棒グラフである。クレアチニンは腎臓機能の一指標である。マウス50−２を例外として、処置を受けたマウスのクレアチニンレベルは、対照マウスのそれと差がない。
図１７は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中のＡＳＴ（ＳＧＯＴ、血清グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ）濃度の棒グラフである。図１８は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中のＡＬＴ（ＳＧＰＴ、血清グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ）濃度の棒グラフである。ＳＧＯＴ及びＳＧＰＴは、肝機能の指標である。マウス50−２（ＳＧＯＴ及びＳＧＰＴの双方について）及びマウス10−２（ＳＧＯＴのみについて）を例外として、処置を受けたマウスの酵素レベルは、対照マウスのそれと差がない。
図１９は、ｍｍｏｌ／Ｌで表したマウス血漿中の乳酸濃度の棒グラフである。図２０は、Ｕ／Ｌで表したマウス血漿中の乳酸デヒドロゲナーゼ濃度の棒グラフである。乳酸は、解糖に際して筋肉で作られる。乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）は、種々の組織中に種々のイソ酵素として存在する。血漿中へのＬＤＨの遊離は、組織損傷の指標である。処置を受けたマウスの乳酸及び乳酸デヒドロゲナーゼレベルは、対照マウスのそれと差がなかった。
III．    オリゴヌクレオチド
所望の配列のオリゴヌクレオチドが、オリゴヌクレオチド中のヌクレオシドについてここに開示されたＬ−ヌクレオシドの１つ又はより多くの置換によって変性させることができる。好ましい一具体例においては、該Ｌ−ヌクレオシドは、オリゴヌクレオチドの末端のうちの一つに配置される。変性されたオリゴヌクレオチドは例えばアンチセンス法において使用することができる。
アンチセンス法とは、一般に、転写又は複製（標的配列がＤＮＡである場合）を阻害するために、翻訳（標的配列がＲＮＡである場合）を阻害するために、又はプロセシング（標的配列がプレＲＮＡである場合）を阻害するために、合成オリゴヌクレオチドを相補的核酸配列にハイブリダイズさせる方法によって遺伝子の発現を調節することをいう。この方法を使って、広範な種々の細胞活性が調節できる。簡単な例は、ｍＲＮＡに結合するアンチセンスオリゴヌクレオチドによる、タンパク質の生合成の阻害である。別の一具体例においては、合成オリゴヌクレオチドが二本鎖ＤＮＡ中の特定の遺伝子配列にハイブリダイズされ、遺伝子配列の発現を阻害する三本鎖複合体（トリプレックス）を形成する。アンチセンスオリゴヌクレオチドはまた、天然のリプレッサーの生合成を阻害することによって間接的に遺伝子発現を活性化させるために使用することができる。ＡＯＴは、病原性遺伝子、例えば、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）及びヘルペスウイルスを含むウイルス、癌特に神経膠腫、乳癌及び黒色腫等の固形腫瘍塊の遺伝子の増殖を促進する遺伝子の発現を阻害するために使用することができる。
選択されたオリゴヌクレオチドのヌクレアーゼに対する安定性は、生体内適用において重要な一要素である。３’−エキソヌクレアーゼ活性は、大部分の未変性アンチセンスオリゴヌクレオチドの血清中における分解を担っていることが知られている（Vlassov, V.V., Yakubov, L.A., Prospects for Antisense Nucleic Acid Therpy of Cancers and AIDS, 1991, 243-266, Wiley-Liss, Inc., New York; Nucleic Acid Res., 1993, 21, 145.）。一具体例においては、ここに開示のＬ−ヌクレオシドは、アンチセンス居り尾後ヌクレオチドの３’−エンドヌクレアーゼ分解を最小限にするために使用することができる。
ポリリボ核酸又はポリデオキシリボ核酸に結合する能力のある本発明のオリゴヌクレオチドは、慣用のアンチセンス剤と同じ仕方でアンチセンス剤として有用である。一般的には、Antisense Molecular Biology and S-oligos, Synthesis 1（Oct. 1988）（発行者、Synthecell Corp., Rockvill,メリーランド州）、2 Discoveries in Antisense Nucleic Acids（C. Brakel and R. Fraley eds. 1989）、Uhlmann, et al., "Antisense Oligonucleotides: A New Therapeutic Technique," Chem. Rev. 90（4）, 1990、及びMilligan, J.F., Matteucci, M.D., Martin, J.C., J. Med. Chem., 1993, 36, 1923-1937.を参照。本発明のアンチセンス剤は、所定のポリデオキシリボ核酸配列又はポリリボ核酸配列に選択的に結合する能力のあるアンチセンス剤を構成することによって、そのような配列を含んだ細胞に対して、該アンチセンス剤が細胞内に取り込まれ、その所定の配列に結合し、そしてそれらの転写、翻訳及び複製を阻害するよう（例えば該アンチセンス剤をそのような細胞を含んだ培地に加えることによって）用いることができる。アンチセンス剤の選択的結合のための要件は既知である（例えば、ヒトゲノム内に選択的に結合するための17塩基対の長さ）。
ＩＶ．    薬剤組成物の調製
ここに開示の化合物及びそれらの薬剤学的に許容し得る塩、プロドラッグ、及び誘導体は、ＨＢＶ及びＥＢＶ感染及び他の関連した状態例えばＨＢＶ又はＥＢＶ抗体陽性並びにＨＢＶ又はＥＢＶ陽性状態、ＨＢＶによって引き起こされる慢性肝炎、肝硬変、急性肝炎、激症肝炎、慢性持続性肝炎及び疲労等の予防及び治療において有用である。これらの化合物又は処方物は、抗ＨＢＶ若しくは抗ＥＢＶ抗体陽性の又はＨＢＶ若しくはＥＢＶ抗原陽性の又はＨＢＶ若しくはＥＢＶに暴露された個人において、臨床的疾患の進行を防止し又は遅らせるために予防的に使用することができる。
これらの状態の何れを罹っているヒトも、該患者に、ここに開示した活性化合物又は薬剤学的に許容し得るそれらの誘導体若しくは塩のうちの一つ又は混合物のＨＢＶ又はＥＢＶ治療有効量を、好ましくは薬剤学的に許容し得る担体又は希釈剤にいれて投与することによって治療することができる。活性材料は、如何なる適当な経路、例えば経口、非経口、静脈内、皮内、皮下、又は局所などの経路で、液体又は固体の形で投与することができる。
活性化合物は薬剤学的に許容し得る担体又は希釈剤中に、治療を受ける患者に重大な毒性作用を起こすことなく所望の治療結果を達成するために放出するに十分な量に含められる。
上記の全ての状態についての活性化合物の好ましい投与量は、１日あたり約１乃至60ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１乃至20ｍｇ／ｋｇ体重、より一般的にはは0.1乃至約100ｍｇ／ｋｇであろう。薬剤学的に許容し得る誘導体の有効投与量範囲は、放出されるべき親ヌクレオチドの重量に基づいて計算することができる。もしも誘導体がそれ自身活性を示すならば、有効投与量は、誘導体の重量を用いて上記のようにして、又は当業者に既知の他の手段で推定できる。一具体例においては、活性化合物は、製品添付文書又はＨＩＶ適応に関する３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシイノシン（ＤＤＩ）、２’，３’−ジデオキシシチジン（ＤＤＣ）、又は２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロチミジン（Ｄ４Ｔ）についてのPhysician's Desk Referenceの記載に従って投与される。
該化合物は、単位投与形態あたり７乃至3000ｍｇ、好ましくは70乃至1400ｍｇの活性成分を含有する形態を含むがこれらに限られない如何なる適当な単位投与形態の形でも便利に投与される。50〜1000ｍｇという経口投与量が、通常便利である。
理想的には、活性成分は、活性化合物のピーク血漿濃度約0.2乃至70μＭ，好ましくは約1.0乃至10μＭを達成するように投与されるべきである。これは、例えば、活性成分の、所望により食塩水中の、又は活性成分のボーラスとしての0.1乃至５％溶液の静脈内注射によって達成できる。
活性化合物は、薬剤学的に許容し得る塩の形で提供することができる。ここに用いるものとして、薬剤学的に許容し得る塩又は複合体とは、親化合物の所望の生物学的活性を保持しそして、もしあるとしても、望ましからざる毒性作用を最小限にしか有しない、ヌクレオシドの塩又は複合体をいう。そのような塩の限定的でない例としては、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸その他）と形成された酸付加塩、及び、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パモイン酸（pamoic acid）、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、及びポリガラクツロン酸等の有機酸と形成された塩、（ｂ）ナトリウム、カリウム、亜鉛、カルシウム、ビスマス、バリウム、マグネシウム、アルミニウム、銅、コバルト、ニッケル、カドミウム、ナトリウム、カリウムその他のような陽イオンと、又はＮ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、アンモニア若しくはエチレンジアミンより形成された有機陽イオンと形成された塩基付加塩、又は（ｃ）（ａ）と（ｂ）との組み合わせ、例えば、タンニン酸亜鉛塩その他が挙げられる。
活性化合物の変性（特にＮ6又はＮ4及び５’−Ｏ位置における）は、活性種の生物学的利用性及び代謝速度に影響を与えることができ、それにより活性種の放出の制御を提供する。
薬物組成物中の活性化合物の濃度は、薬物の吸収、不活性化、及び排泄の速度並びに当業者に既知の他の因子に依存するであろう。投与量の値がまた緩和すべき状態の重症度によっても変化するであろうということを認識しなければならない。如何なる特定の患者についても、具体的投与方法は、その個人の必要性、及び該組成物を投与する又はその投与を監督する者の専門的判断に従って経時的に調整されるべきであるということ、及びここに提示した濃度範囲は単に模範であって請求に係る組成物の範囲及び実施を制限することを意図したものでないということを、更に理解しなければならない。本活性化合物は、一度に投与されてもよく、又は種々の時間間隔で投与すべき多くの少ない投与量に分割されてもよい。
活性化合物の好ましい投与モデルは、経口である。経口組成物は、一般に、不活性な希釈剤又は食べられる担体を含む。それらは、ゼラチンカプセルに封入されても、又は錠剤の形に圧縮されてもよい。経口の治療的投与のためには、活性化合物は、賦形剤と共に導入されて錠剤、トローチ剤、又はカプセル剤の形で使用されることができる。
薬剤学的に適合性のある結合剤及び／又は補助材料を、組成物の一部として含むことができる。
錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤その他は、以下の成分又は類似の性質の化合物の何れをも含むことができる：微結晶セルロース、トラガントゴム又はゼラチン等のような結合剤；デンプン又は乳糖等のような賦形剤；アルギン酸、Primogel又はコーンスターチ等のような崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はSterotes等のような滑沢剤；コロイド性シリカ等のような潤滑剤；ショ糖又はサッカリン等のような甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料等のような香味剤。投与量単位形態がカプセルである場合、上記のタイプの材料に加えて、脂肪油等のような液体担体を含むことができる。加えて、投与量単位形態は、投与量単位の物理的形態を修正する、例えば糖衣、シェラック（shellac）又は他の腸溶剤などのような種々の他の材料を含むことができる。
活性化合物又は薬剤学的に許容し得るそれらの塩は、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエファー、チューインガムその他の成分として投与することができる。シロップ剤は、活性化合物に加えて、甘味剤としてのショ糖及びある種の保存剤、染料および着色剤及び香料を含むことができる。
活性化合物及び薬剤学的に許容し得るそれらの誘導体又は塩はまた、所望の作用を損なうことのない他の活性材料と、又は、抗生物質、抗真菌剤、抗炎症剤、又は別の抗ＨＢＶ、抗ＥＢＶ、抗サイトメガロウイルス、又は抗ＨＩＶ又は抗ＥＢＶ剤を含む抗ウイルス剤等のような所望の作用を補う他の材料と混合することもできる。
非経口、皮内、皮下又は局所適用のために使用される溶液又は懸濁液は、次の成分を含有することができる：注射用水、食塩水、不揮発油、ポリエチレングリコール類、グリセリン、プロピレングリコールその他の合成溶媒等のような滅菌希釈剤、ベンジルアルコール又はメチルパラベン等のような抗菌剤、アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム等のような抗酸化剤、エチレンジアミン四酢酸等のようなキレート剤、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩等のような緩衝剤、及び塩化ナトリウム又はブドウ糖等のような浸透圧調節剤。非経口製剤は、アンプル、使い捨てシリンジ又はガラス又はプラスチック製の多回投与バイアル。
静脈内に投与される場合には、好ましい担体は生理的食塩水又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）である。好ましい一具体例においては、活性化合物は、化合物を身体からの急速な排除から保護する担体、例えば、埋め込み物及びマイクロカプセル封入放出系等のような徐放性調製物と共に調製される。エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等のような生分解性の、生体適合性のポリマーを使用することができる。そのような処方物の調製のための方法は、当業者に明らかであろう。それらの材料はまた、Alza Corporation及びScios-Nova Pharmaceuticals, Inc.から商業的に入手することもできる。
リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する感染細胞に狙いを定めたリポソームを含む）がまた、薬剤学的に許容し得る担体として好ましい。これらは当業者に既知の方法、例えば米国特許第4,522,811号（これを参照によりここに導入する）に従って調製できる。例えば、リポソーム調製物は、適当な脂質（ステアリン酸ホスファチジルエタノールアミン、ステアリン酸ホスファチジルコリン、アラキドン酸ホスファチジルコリン、及びコレステロール等のような）を無機溶媒に溶解させ次いで蒸発させ、後に乾燥した脂質の薄いフィルムを容器の表面に残すことによって製造できる。活性化合物またはその活性化合物又はその１リン酸、２リン酸及び／又は３リン酸誘導体の水溶液が、次いで容器中に導入される。脂質材料を容器側壁から遊離させて脂質凝縮物を分散させるために、容器が次いで手で回され、それによりリポソーム懸濁液が形成される。
本発明はその好ましい具体例を参照してここに記述された。本発明の変更及び修正は、本発明についての以上の詳細な記述から当業者に明らかであろう。これらの変更及び修正の全てが添付の請求の範囲に包含されることが意図されている。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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