(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡ、または配列番号１の塩基配列において1若しくは数個の塩基が挿入、置換、欠失、若しくは両末端に付加された塩基配列からなり、かつプロモーター活性を有するＤＮＡ。
【請求項２】
構造遺伝子ＤＮＡと、該構造遺伝子が発現するような様式で該構造遺伝子ＤＮＡの５’部位に組み込まれた請求項１記載のＤＮＡを含んでなる、ＤＮＡ鎖。
【請求項３】
さらに、翻訳エンハンサー、翻訳終止コドン、ターミネーター、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される構成要素を含む請求項２記載のＤＮＡ鎖。
【請求項４】
請求項２または３記載のＤＮＡ鎖で形質転換された宿主。
【請求項５】
宿主が植物細胞である請求項４記載の宿主。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、Agrobacterium tumefaciensのT-DNAに存在する転写を活性化する塩基配列、すなわちプロモーター（promoter）として機能するＤＮＡ配列およびその使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
外来の遺伝子を発現させるためには適当なプロモーターを使用する必要がある。植物で一般に使われているものとしてカリフラワーモザイクウィルス35Sのプロモーター、アグロバクテリアT-DNA上にあるオピン合成遺伝子であるノパリン合成酵素、マンノピン合成酵素などのプロモーターが知られている。しかしこれらを単に連結しただけでは有効な（発現量が高い）ものが得られる場合は限られている。このため5'非翻訳領域の改良、イントロンの使用や遺伝子を再合成するなどをして発現量を高める工夫がされている(Plant Mol. Biol. 32 (1996) 393-405)。また、単子葉植物ではカリフラワーモザイクウィルス35Sプロモーター自身の活性が低いため、イネ・アクチンやトウモロコシ・ユビキチンのプロモーターを新たに取得し、使用を試みている (Plant Cell Rep. 11 (1992) 586-591, Plant. Phsiol. 100 (1992) 1503-1507, Plant. Phsiol. 102 (1992) 1077-1084)。
【０００３】
一方、キクではいくつかの形質転換植物を取得している報告があるが、他の植物での発現と比較して低い発現であったり、発現が確認できない報告がある(Plant Cell Rep. 14 (1995) 649-698)。この原因として上げられるのは、キクにおいては、植物で最もよく使われているカリフラワーモザイクウィルス35Sプロモーターの活性が高くないことが上げられる。
【０００４】
そこで我々はあらたにキク植物で活性の高いプロモーターをアグリバクテリアのT-DNAより取得することを試みた。Agrobacterium tumefaciens A281株はsupervirlence株で非常に広い宿主域を持ち(J.Bacteriol. 169 (1987) 4417-4425)、キクではノパリン型やオクトピン型のアグロバクテリアよりも、より強く感染し病状であるクラウンゴールを作る(Plant Cell Rep. 9 (1991) 505-508)。そこでこのT-DNAにあるプロモーターは広い宿主域にわたって発現が得られるプロモーターになる可能性をもっていると考えられる。しかし、植物ホルモン関係の遺伝子として知られており、すでに報告されているA281株のT-DNA上のisopentenyl transferase遺伝子のプロモーター(Mol. Gen. Genet. 216 (1989) 388-394)と6b遺伝子のプロモーター(Plant. Mol. Biol. 29 (1995) 1299-1304)を試したところ、高い活性は得られなかった。
【０００５】
【発明の解決しようとする課題】
従って、本発明は、構造遺伝子の５’側に挿入された場合、この構造遺伝子の発現を誘導する、プロモーター配列を提供することを目的とする。
また、本発明は、構造遺伝子と前記プロモーター配列とを含んでなるＤＮＡ鎖を提供することも目的とする。
さらに、本発明は、上記ＤＮＡ鎖で形質転換された宿主、およびこの宿主を利用して構造遺伝子の発現を誘導ないしは構造遺伝子を高発現させる方法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、Agrobacterium tumefaciens A281株のT-DNA 配列中に、新規の読み枠（ORF）が存在し、その５’上流配列が植物体内で有効に働くプロモーターとして機能することを形質転換キク、及びカーネーションの一過的発現の実験でレポーター遺伝子の発現の様式を解析することにより見いだし、本発明を完成させるに至った。
【０００７】
従って、本発明は、配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡ、またはプロモーター活性を有するその等価物を提供する。また、本発明は、構造遺伝子ＤＮＡと、該構造遺伝子が発現するような様式で該構造遺伝子ＤＮＡの５’部位に組み込まれた上記のＤＮＡまたはその等価物とを含んでなる、ＤＮＡ鎖を提供する。このＤＮＡ鎖は、さらに、翻訳エンハンサー、翻訳終止コドン、ターミネーター、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される構成要素を含んでもよい。さらに、本発明は、上記のＤＮＡ鎖で形質転換された宿主を提供する。宿主は植物細胞であるとよい。さらにまた、本発明は、上記のＤＮＡ鎖で形質転換された植物細胞を前記構造遺伝子が発現可能なように培養または栽培することを特徴とする、植物で構造遺伝子の発現を誘導する方法を提供する。この方法において、構造遺伝子は外来遺伝子であってもよい。
【０００８】
【発明の実施の形態】
プロモーター配列
本発明のＤＮＡ（プロモーター配列）は、配列番号１の塩基配列からなる。この配列は、構造遺伝子の翻訳開始点の５’側に挿入されることにより、該構造遺伝子の発現を誘導ないしは該構造遺伝子を高レベルで発現させる。従って、構造遺伝子、とりわけ外来遺伝子の発現を誘導ないしは発現の効率を高めるために利用することができる。
配列番号１の塩基配列を用いた場合には、そのプロモーター配列は翻訳されず、その直後の開始コドンから翻訳される。
【０００９】
また、本発明のプロモーター配列であるＤＮＡには、配列番号１の塩基配列の等価配列も含まれる。ここで、「配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡの等価物」または「配列番号１の塩基配列の等価配列」とは、配列番号１の塩基配列において、いくつかの塩基の挿入、置換、または欠失、若しくは両末端への付加がなされたものであって、かつその翻訳活性化の活性（プロモーター活性）を依然として保持するものをいうものとする。その等価物または等価配列における翻訳活性化の活性の保持とは、その活性を利用した実際の使用態様において、配列番号１の配列を全て有する塩基配列と、同一の条件でほぼ同様の利用が可能な程度の活性が維持されていることをいうものとする。このような「等価物」または「等価配列」は、配列番号１の塩基配列を参照すれば、Molecular Cloning (Sambrook ら編集 (1989) Cold Spring Harbor Lab. Press, New York)等の文献の記載に従って、当業者であれば格別の困難性なしに選択し、製造可能であることは明らかである。
【００１０】
本発明のプロモーター配列が好ましく利用される宿主細胞は植物細胞である。その好ましい具体例としては、本発明のプロモーター配列が単離されたA281株が感染し、クラウンゴールを形成する植物であり、タバコが属するナス科の植物、例えばトマト、ジャガイモ、ナス、ピーマン、さらには形質転換が報告されている他の科の有用植物、例えばキク、ワタ、ダイズ、ナタネ、イネ、ムギ、トウモロコシなどの植物細胞が挙げられる。
【００１１】
本発明によれば、さらに、構造遺伝子ＤＮＡと、該構造遺伝子が発現するような様式で該構造遺伝子ＤＮＡの５’部位に組み込まれた配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡまたはその等価物とを含んでなる、ＤＮＡ鎖が提供される。
構造遺伝子ＤＮＡとしては、βグルカンエリシター受容体 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94 (1997) 1029-1034) をコードするＤＮＡなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
【００１２】
本発明のＤＮＡ鎖の具体的形態は、例えばプラスミドまたはファージＤＮＡの中に構成員の一部としてこの配列番号１の配列が挿入された形態であってよい。さらに、プラスミドまたはファージあるいはゲノムＤＮＡの中に挿入された形で微生物（特に細菌）またはファージ粒子あるいは植物の中に存在する形態であってもよい。なお、ここで、細菌が大腸菌やアグロバクテリアを含むことはいうまでもない。
【００１３】
本発明のＤＮＡ鎖の好ましい存在形態は、タンパク質などの遺伝子産物を発現させようとしている構造遺伝子が、植物体中で安定に発現しうるように、配列番号１の配列またはその等価配列、翻訳エンハンサー、構造遺伝子ＤＮＡ鎖、翻訳終止コドン、およびターミネーターとが一体に結合して、これがゲノムに挿入された形態で植物中に存在するものである。翻訳エンハンサー、翻訳終止コドン、ターミネーターとしては、公知のものを適宜組み合わせて用いる事ができる。利用可能と考えられるそれらの具体例としては、翻訳エンハンサーとして、例えばタバコモザイクウイルス、アルファルファモザイクウイルスＲＮＡ４、ブロモモザイクウイルスＲＮＡ３、ポテトウイルスＸ、およびタバコエッチウイルスで知られている(Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 44 (1993) 985-994)リーダー配列などが挙げられ、またターミネーターとしては、ノパリン合成酵素のターミネーター、オクトピン合成酵素のターミネーターなどが挙げられる。
【００１４】
ＤＮＡ鎖の取得
本発明の配列番号１の塩基配列からなるＤＮＡは、核酸合成の方法に従って化学合成することで得ることができる。また一部の核酸のみをプライマーとして合成し、ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって、Agrobacterium tumefaciens A281株の全DNAを鋳型として容易に得られる。さらに、これらの配列を含んでなる上記ＤＮＡ鎖は、遺伝子工学の分野で慣用されている手法を用いて製造することができる。
【００１５】
塩基配列の利用／形質転換
配列番号１の塩基配列は、プロモーター配列としての用途を有する。これらの配列は、上記した本発明のＤＮＡ鎖の形態とされて利用されるのが好ましい。
このようなＤＮＡ鎖によって宿主細胞を形質転換し、宿主細胞を培養または栽培することにより、外来遺伝子を含む構造遺伝子の発現を誘導ないしは該遺伝子を高い効率で発現させることができる。
【００１６】
宿主の好ましい例としては上記した種類の植物の細胞が挙げられ、さらに具体的な植物材料としては、葉片、茎片、塊茎片、プロトプラスト、カルス、花粉、花粉管などが挙げられる。
宿主への遺伝子導入法としては、既に報告され確立されている種々の方法を利用することができる。その好ましい例としては、例えばアグロバクテリアのＴｉプラスミドをベクターとして用いる方法や、植物プロトプラストにエレクトロポレーションで遺伝子を導入する方法などが挙げられる（“Plant genetic transformation and gene expression; a laboratory manual”、Draper, J. et. al. eds., Blackwell Scientific Publication, 1988 参照）。
【００１７】
誘導ないしは高発現された遺伝子の発現産物は、それ自体を単離して利用したい場合には、培養物からその発現産物に適した方法によって単離精製されてよい。さらに、発現産物の存在により宿主細胞の成長または生育、さらにはその細胞の性質が改質される場合には、そのような宿主を培養し、もしくは宿主が脱分化した植物体である場合にはその植物体を栽培することで、目的遺伝子の発現産物を誘導ないしは高発現させる。
【００１８】
【実施例】
以下の実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕新規ORFの発見とそのプロモーター領域の決定
ISOPLANT (ニッポンジーン社製)を用いて、Agrobacterium tumefaciens A281株（J. Bacteriol. 129 (1977) 101-107)菌体より、全DNAを抽出した。既報である６ｂ遺伝子の配列(Mol. Plant Microbe Interact. 8 (1995) 534-548)とIS1312配列(J. Bacteriol. 177 (1995) 2554-2559)の一部のDNAをDNA合成機（パーキンエルマー社型）で合成した。その配列を以下に示す。
5'-ATAAAGCTTAGGACTGTGACTGGT-3'（配列番号2）
5'-GCACTAGTCGCAATTTTCGTATTTAC-3'（配列番号3）
【００１９】
先に抽出した全DNAを鋳型とすることにより、PCRを行い、既報（ J. Bacteriol. 177 (1995) 2554-2559）の模式図で予想されるRight Borderを含むと予想される断片（約2.0 kbps)よりも、大きいDNA断片（約3.0 kbps）の増幅のみを確認できた。この増幅された断片を、HindIII 、BglII 、SpeI、EcoRV の制限酵素を組み合わせて用いて、切断したＤＮＡ断片をpBluescript SK+（Stratagene社製）にサブクローンし単離した。このＤＮＡ断片の構造を蛍光シークエンサー（パーキンエルマー社型）により解析し一次構造を決定した。
【００２０】
Dangら(Mol. Plant Microbe Interact. 8 (1995) 534-548)はこの領域には明確なRight Borderは発見できないと報告しているが、我々が得たDNA断片にはRight Borderとして報告されている配列 (Crit. Rev. Plant Sci. 10 (1991) 1-32)と極めて高い相同性を示す領域があり、この部分がRight Borderであることが推定された。その配列は図１および配列番号１１に示されるとおりであった。
【００２１】
図１中、５、７、ｉａａＨ、ｉａａＭ、ｉｐｔおよび６ｐは、それぞれ、５遺伝子、７遺伝子、ｉａａＨ遺伝子、ｉａａＭ遺伝子、ｉｐｔ遺伝子および６ｐ遺伝子を表す。ＬＢ、ＲＢおよびＩＳは、それぞれ、left border 、right borderおよびinsertion sequenceを表す。
得られた配列のRight Borderと６ｂ遺伝子の間には６ｂ遺伝子と反対方向の読み枠（1001 bps）が存在することを新たに発見するに至った。
【００２２】
この得られた配列は既報(Plant. Mol. Biol. 29 (1995) 1299-1304)の６ｂ遺伝子のプロモーター配列と極めて似た部分を含んでいた。既報の配列（826塩基対）とそれに対応する我々が新たに決定した配列との間には10塩基対の違いがあった（プロモーター領域では373塩基対中5塩基対の違い）。このことにより既報の著者らは上記読み枠を発見できなかったと想像される。
【００２３】
またこのプロモーター領域には図２に示されるプロモーター活性に有効なOCS配列(EMBO J. 8 (1989) 4197-4204)に似た配列が存在することがわかった。
図２中、CONSENSUS は、EMBO J. 8 (1989) 4197-4204に記載されているCONSENSUS(共通部分を抽出した) 配列である。また、ocs 、mas1' 、mas2' およびnos は、上記の文献の表から抜粋したアグロバクテリアのT-DNA 上にあるOCS 配列であり、NEW はこれらのOCS 配列に類似する我々が新たに見いだした配列である。
【００２４】
〔実施例２〕プロモーター領域の単離とキメラＧＵＳ遺伝子の構築
レポーター遺伝子であるベータグルクロニダーゼ（ＧＵＳ）と、新規プロモーターとのキメラ遺伝子、具体的には図３に示されるキメラ遺伝子発現プラスミドpBINEW-EIGを構築した。
【００２５】
まずpBI35S-EIGは、タバコのフェレドキシン結合性サブユニットの翻訳エンハンサー（J. Biol. Chem. 270 (1995) 12466-12470)を付加する目的で、pIG121(名古屋大学中村研三教授より譲渡：Plant Cell Physiol. 31 (1990) 805-813)のGUS遺伝子（トウゴマのカタラーゼ遺伝子のイントロンを含む）の5'近傍にあるXbaI部位とBamHI部位を制限酵素XbaIとBamHIで切断して、自動核酸合成機（アプライドバイオシステム社製）を用いて合成した下記に示す合成リンカー用DNAをアニーリング・ライゲーションした。これによってカリフラワーモザイクウィルス35Sプロモーターで誘導される翻訳エンハンサーを付加したイントロンを含むGUS遺伝子をもったプラスミドpBI35S-EIGを得た。
5'-CTAGACTTCTCTCAATCCAACTTTTCTATGGCCATGGCA-3'（配列番号4）
5'-GATCTGCCATGGCCATAGAAAAGTTGGATTGAGAGAAGT-3'（配列番号5）
【００２６】
pBINEW-EIGの作成は次のように行った。まず、以下の２種のオリゴヌクレオチドプライマーを合成しAgrobacterium tumefaciens A281株菌体より抽出した全DNAを鋳型としてPCRを行った。
5'-ATAAAGCTTCGCAATTTTCGTATTTAC-3'（配列番号6）
5'-GCACTAGTTTCTTATTATGAGCCCTC-3'（配列番号7）
【００２７】
このように増幅したDNA断片（新規プロモーター）をアガロースゲルより精製し制限酵素ＨｉｎｄIIIとSpeIにより切り出して、プラスミドpBI35S-EIGを制限酵素ＨｉｎｄIIIとXbaIで処理して３５Ｓプロモーターと置換し、プラスミドpBINEW-EIGを作成した。
対照となるpBIipt-EIGの作成は次のように行った。既報(Mol. Gen. Genet. 216 (1989) 388-394)を基に以下の２種のオリゴヌクレオチドプライマーを合成しAgrobacterium tumefaciens A281株菌体より抽出した全DNAを鋳型としてPCRを行った。
【００２８】
5'-ATAAAGCTTACAAGTATTGCACGTT-3'（配列番号8）
5'-GCACTAGTCGGTCTTGCGATATGTTG-3'（配列番号9）
このように増幅したDNA断片（iptプロモーター）をアガロースゲルより精製し制限酵素ＨｉｎｄIIIとSpeIにより切り出して、プラスミドpBI35S-EIGを制限酵素ＨｉｎｄIIIとXbaIで処理して３５Ｓプロモーターと置換し、プラスミドpBIipt-EIGを作成した。
【００２９】
対照となるpBI6b-EIGの作成は次のように行った。既報(Plant. Mol. Biol. 29 (1995) 1299-1304)を基に配列番号3と以下のオリゴヌクレオチドプライマーを合成しAgrobacterium tumefaciens A281株菌体より抽出した全DNAを鋳型としてPCRを行った。
5'-ATAAAGCTTGACGATCTCACGGCCAA-3'（配列番号１０）
【００３０】
このように増幅したDNA断片（６ｂプロモーター）をアガロースゲルより精製し制限酵素ＨｉｎｄIIIとSpeIにより切り出して、プラスミドpBI35S-EIGを制限酵素ＨｉｎｄIIIとXbaIで処理して３５Ｓプロモーターと置換し、プラスミドpBI6b-EIGを作成した。
【００３１】
〔実施例３〕キクの形質転換とＧＵＳ活性の測定
実施例２で得られたキメラＧＵＳ遺伝子を有するバイナリープラスミドをエレクトロポ−レ−ション法によりAgrobacterium tumefaciens AGL0 (California 大学Santa Cruz校Ludwig博士より譲渡：Bio/Technology 9 (1991) 963-967)へ導入し、これを3mlのYEB-km培地に接種し、28℃で16時間培養した後、遠心により集菌し10mlの感染培地に懸濁して、これを感染液とした。YEB-km培地及び感染培地の培地組成を以下に記載する。
【００３２】
YEB-km培地；5g/lビ−フエキス、1g/l酵母エキス、5g/lペプトン、5g/lスクロ−ス、2mM硫酸マグネシウム、50mg/lカナマイシン
感染培地； 1/2濃度のMS（Murashige & Skoog, Physiol. Plant. 15 (1962) 473-497) 培地の無機塩及びビタミン類、15g/lスクロ−ス、10g/lグルコ−ス、10mM MES(pH5.4)
【００３３】
キク（Dendranthema grandiflora）の栽培品種レ−ガンの無菌個体の葉を5-7mm角に切断し、各種ベクタ−を導入したアグロバクテリア感染液に10分間浸し、過剰な感染液を濾紙上でふき取った後、共存培養培地に移植し25℃暗所で培養した。3日間培養した後、選択培地に移植した。2週間後に新鮮な選択培地に移植し、さらに2週間培養した。培養は25℃、16時間照明・8時間無照明の条件下で行った。得られたカルスを葉より切り出し、GUS活性測定に用いた。
培養に用いた培地の成分を以下に記載する。
共存培養培地；MS（Murashige & Skoog , Physiol. Plant. 15 (1962) 473-497)培地の無機塩及びビタミン類、30g/lスクロ−ス、1mg/lナフタレン酢酸、2mg/lベンジルアデニン、8g/l寒天、5mM MES(pH5.8)、200μＭアセトシリンゴン
選択培地； MS培地の無機塩及びビタミン類、30g/lスクロ−ス、1mg/lナフタレン酢酸、2mg/lベンジルアデニン、8g/l寒天、5mM MES(pH5.8)、100mg/lカナマイシン、300mg/lセフォタキシム
【００３４】
蛍光基質を用いたＧＵＳ活性測定は50-100mgのカルスを用いCastle & Morris の方法(Plant Molecular Biology Manual, B5 (1994) 1-16 (Ed.)S.B.Gelvin&R.A.Schilperoort, Kluwer Academic Publishers) に従い行った。タンパク量を、ブラッドフォードの方法に従って測定し、ＧＵＳ活性をタンパク量当たりに換算した(Anal. Biochem. 72 (1976) 248-254)。その結果は表１に示されるとおりであった。
【００３５】
驚くべきことに下表から明らかなように、ＧＵＳ活性を、夫々のキメラ遺伝子を導入したキクのカルス毎に測定したところコントロール（ＣａＭＶ35S：：ＧＵＳ，ｉｐｔ：：ＧＵＳおよび６ｂ：：ＧＵＳ）に比べて新規のプロモーターを持つもの（ＮＥＷ：：ＧＵＳ）では、高いＧＵＳ活性が検出された。
【００３６】
【表１】
0003905607.tif 000002
【００３７】
〔実施例４〕カーネーションでの一過的発現とＧＵＳ活性の測定
実施例２で得られたキメラＧＵＳ遺伝子を有するバイナリーベクターをエレクトロポ−レ−ション法によりAgrobacterium tumefaciens AGL0 へ導入し、これを3mlのYEB-km培地に接種し、28℃で16時間培養した後、遠心により集菌し10mlの感染培地に懸濁して、これを感染液とした。YEB-km培地及び感染培地の培地組成を以下に記載する。
【００３８】
YEB-km培地；5g/lビ−フエキス、1g/l酵母エキス、5g/lペプトン、5g/lスクロ−ス、2mM硫酸マグネシウム、50mg/lカナマイシン
感染培地； 1/2濃度のMS（Murashige & Skoog , Physiol. Plant. 15:473-497(1962))培地の無機塩及びビタミン類、15g/lスクロ−ス、10g/lグルコ−ス、10mM MES(pH5.4)
【００３９】
カ−ネ−ション（Dianthus caryophyllus）の品種スケニア(scania)の無菌個体の葉を5-7mm角に切断し、各種ベクタ−を導入したアグロバクテリア感染液に10分間浸し、過剰な感染液を濾紙上でふき取った後、共存培養培地に移植し25℃暗所で培養した。3日間培養した後、組織化学的なGUS活性測定に用いた。
培養に用いた共存培養培地の成分を以下に記載する。
MS培地（Physiol. Plant. 15 (1962) 473-497)の無機塩及びビタミン類、30g/lスクロ−ス、0.1mg/lナフタレン酢酸、1mg/lベンジルアデニン、8g/l寒天、5mM MES(pH5.8)、200μＭアセトシリンゴン
【００４０】
組織化学的なＧＵＳ活性の測定はCastle & Morris の方法(Plant Molecular Biology Manual, B5 (1994) 1-16 (Ed.)S.B.Gelvin&R.A.Schilperoort, Kluwer Academic Publishers) に従い行った。37℃で1晩インキュベ−トした後、70％メタノ−ルで脱色し、組織の青い染色を観察することによりGUS活性を測定した。その結果、 ipt遺伝子、6b遺伝子のプロモーターを用いた場合と同様に新規プロモーターでもGUS活性による青い染色を確認することができた。
【００４１】
【発明の効果】
本発明により、植物における転写を活性化するＤＮＡ（プロモーター配列）が提供された。本発明のＤＮＡを利用することにより、植物において、構造遺伝子の発現を誘導したり、構造遺伝子を高発現させることができる。
【００４２】
【配列表】
配列番号：１
配列の長さ：３７３
配列の型：核酸
鎖の数：２本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
起源：
生物名：Agrobacterium tumefaciens
株名： A281
配列
0003905607.tif 000003
【００４３】
配列番号：２
配列の長さ：２４
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
ATAAAGCTTA GGACTGTGAC TGGT                                          24
【００４４】
配列番号：３
配列の長さ：２６
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
GCACTAGTCG CAATTTTCGT ATTTAC                                        26
【００４５】
配列番号：４
配列の長さ：３９
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
CTAGACTTCT CTCAATCCAA CTTTTCTATG GCCATGGCA                          39
【００４６】
配列番号：５
配列の長さ：３９
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
GATCTGCCAT GGCCATAGAA AAGTTGGATT GAGAGAAGT                          39
【００４７】
配列番号：６
配列の長さ：２７
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
ATAAAGCTTC GCAATTTTCG TATTTAC                                       27
【００４８】
配列番号：７
配列の長さ：２６
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
GCACTAGTTT CTTATTATGA GCCCTC                                        26
【００４９】
配列番号：８
配列の長さ：２５
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
ATAAAGCTTA CAAGTATTGC ACGTT                                         25
【００５０】
配列番号：９
配列の長さ：２６
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
GCACTAGTCG GTCTTGCGAT ATGTTG                                        26
【００５１】
配列番号：１０
配列の長さ：２６
配列の型：核酸
鎖の数：１本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；他の核酸  合成ＤＮＡ
配列
ATAAAGCTTG ACGATCTCAC GGCCAA                                        26
【００５２】
配列番号：１１
配列の長さ：２６
配列の型：核酸
鎖の数：２本鎖
トポロジー：直鎖状
配列の種類；Ｇｅｎｏｍｉｃ  ＤＮＡ
起源：
生物名：Agrobacterium tumefaciens
株名： A281
配列
TGGCAGGATA TATTGGGGTG TCAATT
【図面の簡単な説明】
【図１】Agrobacterium tumefaciensA281株のTL-DNA領域と新規ORFおよびそのプロモーター領域を示す。
【図２】本発明のプロモーター配列と他のプロモーターで知られているOCS配列との相同性を示す。
【図３】レポーター遺伝子であるベータグルクロニダーゼ（ＧＵＳ）と新規プロモーターのキメラ遺伝子の構築法を概説した図である。
【図１】
0003905607.tif 000004
【図２】
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【図３】
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