(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＧＦを有効成分として含有することを特徴とするメサンギウム細胞の増殖を促進することなく、糸球体内皮細胞を増殖させる腎糸球体疾患治療剤。
【請求項２】
腎糸球体疾患が、メサンギウム細胞の増殖を主体とする腎糸球体疾患である請求項１記載の腎糸球体疾患治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は腎糸球体疾患の治療及び予防に有用な薬剤に関する。より詳細には、ＨＧＦ（Hepatocyte Growth Factor）を有効成分として含有する腎糸球体疾患治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
腎臓は多数のネフロンとよばれる機能単位と原尿を集める集合管から形成された臓器である。ネフロンの盲端部は丸く膨らんだ嚢状の構造、ボーマン嚢とこれに毛細血管が入り込んだ糸球体が存在し、腎小体を形成している。扁平な上皮細胞と基底膜からなるボーマン嚢に包まれた糸球体には、輸入細動脈および輸出細動脈とよばれる小血管が出入りし、糸球体で濾過された原尿が近位尿細管へと流れる。糸球体は、大別すると、糸球体表面を覆う糸球体上皮細胞、糸球体毛細血管の基底膜、内皮細胞、メサンギウム細胞とメサンギウム基質から構成される。腎疾患は尿細管に病変を起こしたものと糸球体に病変を起こしたものに大別される。糸球体に病変を起こした糸球体腎炎は、臨床的に急性糸球体腎炎、急速進行性糸球体腎炎、慢性糸球体腎炎に分類できる。慢性疾患である糸球体疾患・糸球体腎炎としては、IgA腎症、全身性エリテマトーデスに伴うループス腎炎、グッドパスチャー症候群、ハイマン腎炎、悪性腫瘍、糖尿病性腎症などが知られている。これらの疾患の発生機序に関しては不明の点が多いが、免疫機序が関与していることが解明されつつあり、流血中の抗原と抗体の免疫複合体、腎組織内での抗原・抗体反応などにより、腎炎が惹起されると考えられている。  近年、剖検、腎生検による検査により、臨床病理学的には慢性糸球体腎炎の進行に伴い、メサンギウム細胞の増殖並びにメサンギウム基質の増加により糸球体硬化の進展が起こることが知られている。糸球体硬化の病変において、メサンギウム細胞等から産生されるTGF-β、PDGFなどが悪性因子、メディエーターとして関与することが推定されている（例えば、腎と透析３７、１９９４年増刊号、「専門医のための糸球体障害のすべて」Ｐ１６７−１７２をなど参照）。PDGFはメサンギウム細胞の増殖を促進し、TGF-βがメサンギウム細胞からの細胞外マトリックスの合成、分泌を促進し、細胞外マトリックス分解酵素の活性を抑制することが想定されている。これらの悪性因子に対する抗体や、悪性因子と結合する高分子を用いて、糸球体腎炎の動物モデルに対する作用の検討が行われているが、治療薬としての開発には至っていない。  一方、糖尿病性腎症の発症機序に関しても不明の点が多いが、高血糖の直接の効果とは別に、糖化最終産物のメサンギウム細胞に対するメサンギウム基質の産生増加作用などが報告されている。実際、糖尿病患者に対する腎生検や糖尿病モデル動物の解析から、糖尿病性腎症の病変の特徴として糸球体基底膜の肥厚やメサンギウム領域の拡大などが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
糸球体腎症を治療する為に、生活規制や食事制限に加えて、副腎皮質ステロイド、血圧降下剤、免疫抑制剤、抗凝固剤などの種々の治療法が試みられているが、糸球体硬化の進行そのものを抑制したり、回復させるような根本的な治療には至っていない。そして、腎糸球体疾患の進行を防ぐことができないまま、透析に至る場合が多い。糖尿病患者に関しても、一度糖尿病性腎症が発症してしまえば、その治療の現状は慢性糸球体腎炎と同様である。特に近年、食生活の向上や社会的ストレスの増加などにより糖尿病患者の増加が著しく、糖尿病を治療できずに糖尿病性合併症を併発し、糖尿病性腎症により透析に至る患者は年間約１万人と推定されている。従って、腎糸球体疾患に対する新たな予防・治療薬の開発が切望されている。  一方、近年、糸球体腎症における糸球体内皮細胞の重要性が注目されており、糸球体内皮細胞の障害はメサンギウム細胞との相互作用等を通して糸球体障害の進展と関わっていることが指摘されている（例えば、腎と透析３７、１９９４年増刊号、「専門医のための糸球体障害のすべて」Ｐ６７−７４を参照）。また、ネフローゼ症候群は、高度な蛋白尿及び低蛋白血症、浮腫、高脂血症等を伴う症候群であるが、その原因は糸球体基底膜による濾過機能の異常に求められている。  本発明者等は、前述の発症機序に基づき、糸球体内皮細胞を迅速に修復でき、メサンギウム細胞の増殖を抑制し、メサンギウム細胞と糸球体内皮細胞との相互作用を正常化して、メサンギウム細胞の増殖を主体とする病変を予防・治療することが可能であることを想定したが、現在までそのような作用を持つ因子はほとんど報告されていない。  本発明者等は、かかる観点から、メサンギウム細胞の増殖を促進することなく、内皮細胞のみを増殖させる因子について鋭意研究した結果、ＨＧＦがかかる作用を有することを見出し、ＨＧＦが内皮細胞の修復・増殖を促進させ、サンギウム細胞と糸球体内皮細胞との相互作用を正常化させることによって、メサンギウム細胞の増殖、メサンギウム基質の増加による糸球体硬化を病変とする腎糸球体疾患の予防・治療に有用であることが判明した。
【０００４】
上記のＨＧＦは肝実質細胞を in vitro で増殖させる因子として見出されたタンパク質である(Biochem Biophys Res Commun, 122, 1450, 1984  、Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 83, 6489, 1986、FEBS Letter, 22, 311, 1987  、Nature, 342, 440, 1989、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 3200, 1990) 。  ＨＧＦは、腎尿細管上皮細胞の増殖を促進し、腎尿細管の損傷を軽減できることが知られている（例えば、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 4357, 1994、特開平４−４９２４６号公報など参照）。また、ラットの培養糸球体上皮細胞株に対し、ＨＧＦが増殖促進効果を示すことが報告されている（第３７回日本腎臓学会学術大会、Ｐ−９１、平成６年１２月１６日）。  上述のようにＨＧＦに関しては多くの知見が集積されつつあり、ＨＧＦが腎臓を構成する上皮細胞にも作用することが知られているが、糸球体腎炎などの腎硬化の進展にとって重要なメサンギウム細胞の増殖、メサンギウム基質の増加についての知見や、糸球体疾患の治療に必要と考えられる内皮細胞に対する効果、メサンギウム細胞と他の細胞との相互調節機構に関する知見は全く得られていない。  本発明者等は、ＨＧＦが腎糸球体を構成するメサンギウム細胞の増殖に作用を示さず、内皮細胞の増殖を促進することを明らかにした。さらに、メサンギウム細胞がＨＧＦを産生・分泌して、内皮細胞の増殖を促進すること、糸球体硬化の病変に関与する悪性因子と考えられるアンジオテンシンII、TGF-βがメサンギウム細胞からのＨＧＦの産生・分泌を抑制することを見出した。また、本発明者等は、内皮細胞がメサンギウム細胞の増殖を抑制すること、内皮細胞からＨＧＦが産生・分泌されており、オートクライン的に増殖を促進していることを明らかにした。そして、内皮細胞からのＨＧＦの産生・分泌も、TGF-βにより抑制されることを示した。これらの知見から、ＨＧＦが糸球体を構成する内皮細胞、メサンギウム細胞間の相互調節において生理的に重要な役割を示していること、糸球体硬化の病態においてＨＧＦの産生が低下していること、メサンギウム細胞の増殖を促進せずに内皮細胞の増殖を促進するＨＧＦにより有効な治療ができることが明確となった。これらの知見は従来知られていない新規の知見である。本発明はかかる知見に基づいてなされたもので、本発明は新規な腎糸球体疾患治療剤を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
上記の課題を解決するためになされた本発明は、
（１）ＨＧＦを有効成分として含有することを特徴とする腎糸球体疾患治療剤、（２）腎糸球体疾患が、メサンギウム細胞の増殖、メサンギウム基質の増加を主体とする腎糸球体疾患である（１）記載の腎糸球体疾患治療剤、
（３）腎糸球体疾患が、内皮細胞とメサンギウム細胞との相互作用の障害によって惹起される糸球体の濾過機能の異常を呈する腎糸球体疾患である（１）記載の腎糸球体疾患治療剤、および
（４）腎糸球体疾患が、糸球体腎症、糖尿病性腎症である（１）記載の腎糸球体疾患治療剤に関する。
【０００６】
本発明で使用されるＨＧＦとしては、医薬として使用できる程度に精製された物であれば、種々の方法で調製されたものを用いることができる。ＨＧＦを産生する初代培養細胞や株化細胞を培養し、培養物（培養上清、培養細胞等）から分離精製してＨＧＦを得ることもできる。あるいは遺伝子工学的手法によりＨＧＦをコードする遺伝子を適切なベクターに組み込み、これを適当な宿主に挿入して形質転換し、この形質転換体の培養上清から目的とする組み換えＨＧＦを得ることができる（例えば、Nature, 342, 440, 1989、特開平5-111383号公報、Biochem. Biophys. Res. Commun., 163, 967, 1989など参照）。上記の宿主細胞は特に限定されず、従来から遺伝子工学的手法で用いられている各種の宿主細胞、例えば大腸菌、古草菌、酵母、糸状菌、植物又は動物細胞などを用いることができる。かくして得られたＨＧＦは、ＨＧＦと実質的に同効である限り、そのアミノ酸配列の一部が欠失又は他のアミノ酸により置換されていたり、他のアミノ酸配列が一部挿入されていたり、Ｎ末端及び／又はＣ末端に１又は２以上のアミノ酸が結合していたり、あるいは糖鎖が同様に欠失又は置換されていてもよい。
【０００７】
本発明の治療剤は上記のＨＧＦを有効成分とし、ＨＧＦは後記試験例に示されるように、糸球体内皮細胞を増殖させ、メサンギウム細胞を増殖させる作用を示さない。糸球体内皮細胞は、増殖抑制作用を示す因子や血管拡張作用を示す因子を種々産生・分泌していることが知られており、内皮細胞の機能不全や内皮細胞の減少がメサンギウム細胞の増殖を伴う糸球体疾患の引き金となることが考えられている。従って、本発明の治療剤は、腎糸球体疾患、特にメサンギウム細胞の増殖、メサンギウム基質の増加を主体とする病変の治療・予防に有効であり、これらには例えば糸球体腎症、糖尿病性腎症が包含される。
慢性糸球体疾患・糸球体腎炎としては、IgA腎症、全身性エリテマトーデスに伴うループス腎炎、グッドパスチャー症候群、ハイマン腎炎、悪性腫瘍などが含まれる。本発明の治療剤は、急性糸球体腎炎、急速進行性糸球体腎炎、ネフローゼを伴う腎糸球体疾患に対しても有効である。
【０００８】
本発明の治療剤は、ヒトの他、哺乳動物（例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、イヌ、ネコ等）における腎糸球体疾患の治療・予防に適用される。
【０００９】
【発明の効果】
本発明において、有効成分であるＨＧＦは、メサンギウム細胞の増殖を促進せず、さらに内皮細胞の増殖を促進し、修復された内皮細胞を介してメサンギウム細胞の異常な増殖を抑える作用をも有している。従って、本発明剤は、前述した腎糸球体疾患、特にメサンギウム細胞の増殖とメサンギウム基質の増加を主体とする障害に起因する各種疾患、内皮細胞とメサンギウム細胞との相互作用の障害によって惹起される糸球体の濾過機能の異常を呈する腎糸球体疾患などの治療・予防に有用である。
【００１０】
【実施例】
以下、実験例及び実施例に基づいて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。なお、以下の実験で使用した材料及び方法は以下のとおりである。
【００１１】
実験材料及び方法
細胞培養
ラットのメサンギウム細胞（以下、メサンギウム細胞をＭＣという）の単離・培養は、基本的には既報（J. Clin. Invest. 78, 1443, 1986）に従って行った。ウシの糸球体内皮細胞およびラット内皮細胞（以下、内皮細胞をＥＣという）の単離・培養は、ボーラーマンらの方法（Am. J. Physiol., 256, C182, 1989）に従って行った。メサンギウム細胞の培養は、１０％ウシ血清、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）を含むＤＭＥＭ培地を使用した。糸球体内皮細胞の培養は、１０％ウシ血清、ペニシリン（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍｌ）を含むＤＭＥＭ培地を使用した。因子を添加する試験では、無血清培地または０．５％ウシ血清を加えた培地を用いた。細胞は、摂氏３７度Ｃにて水蒸気に満たされた９５％空気−５％二酸化炭素の条件下に培養し、２日に１度培地の交換を行った。
【００１２】
生存細胞数の測定法
生存細胞数の測定は、ＷＳＴ−細胞数測定キット（ワコー社製）を用いて行った。
【００１３】
ＤＮＡ合成の測定法
糸球体内皮細胞は、９６穴組織培養用プレート上にまいた。細胞が隙間なく付着した状態において、ＭＣは０．５％ウシ血清を含むＤＭＥＭ培地にて４８時間培養しても増殖しなかった。細胞の相対的なＤＮＡ合成速度は、２４時間のトリチウムラベル化チミジン（〔 3Ｈ〕ＴｄＲ）の細胞中トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）沈殿物質中への取り込みを測定することで評価した。
【００１４】
共細胞培養
メサンギウム細胞の増殖に対する内皮細胞の効果を検討する試験では、内皮細胞を細胞培養用インサート（コースター社、孔径０．４５μｍ）にまき、１０％ウシ血清を加えたＤＭＥＭ培地にて増殖させた。メサンギウム細胞は、６穴プレートにまき、１０％ウシ血清を加えたＤＭＥＭ培地にて増殖させた。細胞が６０％から８０％コンフルエントに増殖した状態で、内皮細胞を含有したインサートを、同様に６０％から８０％コンフルエントに増殖したメサンギウム細胞を入れたウェル中に入れた。内皮細胞とメサンギウム細胞は、０．５％のウシ血清を加えたＤＭＥＭ培地中にて２４時間培養し、６穴プレートのメサンギウム細胞の生存数をＷＳＴ法にて測定した。内皮細胞の増殖に対するメサンギウム細胞の効果を検討する試験では、メサンギウム細胞を細胞培養用インサートにまき、内皮細胞を６穴プレートにまいて、同様に実験した。
【００１５】
材料
ＨＧＦは組換えヒトＨＧＦを用いた。アンジオテンシンIIはシグマ社より、TGF-βはジェンザイム社より入手した。
【００１６】
ＨＧＦの測定法
培養上清中のＨＧＦ濃度は、抗ＨＧＦモノクローナル抗体を使用したELISAのキット（特殊免疫研究所）により測定した。
【００１７】
逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲ
ラット・メサンギウム細胞、糸球体内皮細胞よりＲＮＡをＲＮＡゾル（Tel-Test Inc, Texas）を用いて抽出した。ＨＧＦ及びｃ−ｍｅｔ（ＨＧＦレセプター）メッセンジャー（ｍ）ＲＮＡのレベルは、ＲＴ−ＰＣＲ法（Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 8474, 1993）にて測定した。なお、プライマーとしては下記の配列のものを使用した。
ＨＧＦ：
５’側プライマー：５’ーＡＴＧＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＴＧＧＴー３’
３’側プライマー：５’ーＧＣＣＴＧＧＣＡＡＧＣＴＴＣＡＴＴＡー３’
ｃ−ｍｅｔ：
５’側プライマー：５’ーＣＡＧＴＧＡＴＧＡＴＣＴＣＡＡＴＧＧＧＣＡＡＴー３’
３’側プライマー：５’ーＡＡＴＧＣＣＣＴＣＴＴＣＣＴＡＴＧＡＣＴＴＣー３’
増幅したＤＮＡは２％アガロース電気泳動にかけ、エチジウムプロマイドにて染色した。
【００１８】
統計解析
すべての値は、平均値±標準誤差にて現した。すべての実験は最低３回繰り返した。測定値の統計的解析、有意差検定には、ダンカン法を用いた。
【００１９】
試験例１
糸球体内皮細胞の増殖に対するメサンギウム細胞の効果
ウシ糸球体内皮細胞の増殖に対するメサンギウム細胞の効果を、ＭＣを糸球体内皮細胞に添加する共培養法におけるＷＳＴを用いた糸球体内皮細胞の生存細胞数の測定で試験した。その結果を図１に示す。図中、（−）はＭＣ細胞なしを、（＋）はＭＣ細胞有りを示す。１群８ウェルで実験を行った。図１に示されるように、糸球体内皮細胞の細胞数が有意に増加しており、ＭＣは糸球体内皮細胞の増殖を促進していることが認められた。ＭＣは増殖因子を分泌してＭＣの機能を維持していることが示唆された。
【００２０】
試験例２
ＥＣの増殖に対するＭＣの効果と抗ＨＧＦ抗体の作用
試験例１に記載のようにＭＣにＥＣの増殖を促進する効果が認められたことから、この効果におけるＨＧＦの関与を検討するため、抗ＨＧＦ抗体（２ｎｇ／ｍｌ）の存在下にＭＣをＥＣに添加する共培養において、ＷＳＴを用いてＥＣの生存細胞数の測定を行った。その結果を図２に示す。左図中、（−）はＭＣ細胞なしを、（＋）はＭＣ細胞有りを示す。１群８ウェルで実験を行った。図２に示されるように、ＥＣの細胞数が有意に増加が再現された。さらに、このＥＣ細胞増加の割合は、抗ＨＧＦ抗体の添加により８０±５％まで有意に減少した。
【００２１】
試験例３
ＭＣからのＨＧＦの分泌及びそれに対するアンジオテンシンII、TGF-βの影響
試験例２に記載のように、抗ＨＧＦ抗体はＭＣによるＥＣ細胞の増殖促進効果を抑制したことから、ＭＣの培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定した。さらに、アンジオテンシンII（１０−６Ｍ）、TGF-β（１０ｎｇ／ｍｌ）存在下におけるＭＣの培養上清中のＨＧＦ量を測定し、無添加の時と比較した。その結果を図３に示す。図中、DSFは対照群を示す。１群８ウェルで実験を行った。図３に示されるように、ＭＣの培養上清中にはＨＧＦが検出された。ＭＣにより確かにＨＧＦが分泌されていることが分かった。以上の結果及び試験例２の結果からして、ＭＣはＨＧＦを分泌してＥＣの増殖を促進し、ＥＣの機能を維持していることが示された。さらに、アンジオテンシンII、TGF-βの添加したＭＣの培養上清中のＨＧＦ量は、無添加の時のよりも有意に減少した。アンジオテンシンII、TGF-βにより、ＭＣからのＨＧＦの分泌が抑制されることが明らかになった。
【００２２】
試験例４
ＭＣの増殖に対するＥＣの効果
ＭＣの増殖に対するＥＣの効果をＥＣをＭＣに添加する共培養法におけるＷＳＴ法を用いたＭＣの生存細胞数の測定で試験した。その結果を図４に示す。図中、（−）はＥＣ細胞なしを、（＋）はＭＣ細胞有りを示す。１群８ウェルで実験を行った。  図４に示されるように、ＭＣの細胞数が有意に減少しており、ＥＣはＭＣの増殖を抑制していることが認められた。
【００２３】
試験例５
ＥＣの増殖における抗ＨＧＦ抗体の作用
ＥＣの増殖速度に対する抗ＨＧＦ抗体（２ｎｇ／ｍｌ）の影響をＩｇＧ（１０ｎｇ／ｍｌ）をコントロールとして、ＷＳＴ法により検討した。その結果を図５に示す。図中、DSFは対照群を示す。１群８ウェルで実験を行った。図５に示されるように、ＥＣ細胞の増殖速度はＩｇＧにより影響を受けないが、抗ＨＧＦ抗体により有意に減少した。
【００２４】
試験例６
ＥＣからのＨＧＦの分泌及びそれに対するTGF-βの影響
ＥＣの培養上清中のＨＧＦ量をＥＬＩＳＡ法により測定したところ、１．１６±０．０１ｎｇ／ｍｌであった。ＥＣにより確かにＨＧＦが分泌されていることが明らかになった。また、ＲＴ−ＰＣＲ法により、培養したＥＣからＨＧＦの受容体であるｃ−ｍｅｔのｍＲＮＡが検出された。以上の結果及び試験例５の結果からして、ＥＣは自らＨＧＦを分泌してオートクライン的にＥＣの増殖を促進し、ＥＣの機能を維持していることが示された。  さらに、TGF-β（１０ｎｇ／ｍｌ）存在下におけるＥＣの培養上清中のＨＧＦ量を測定し、無添加の時と比較した。その結果、TGF-β存在下のＥＣの培養上清中には０．７７±０．０３ｎｇ／ｍｌのＨＧＦが検出され、無添加のときと比べて有意に（Ｐ＜０．０５）減少した。TGF-βにより、ＭＣからのＨＧＦの分泌が抑制されることが明らかになった。
【００２５】
試験例７
ＲＴ−ＰＣＲ法によるＨＧＦ
ｍＲＮＡレベルの測定  ラットＭＣ、ＥＣよりｍＲＮＡを抽出し、ＨＧＦ特異的プライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。ＭＣ、ＥＣでＨＧＦのｍＲＮＡの発現が確認された。
【００２６】
試験例８
糸球体内皮細胞の細胞増殖に対するＨＧＦの効果
ウシ糸球体内皮細胞の増殖に対するＨＧＦの効果を、〔 3Ｈ〕ＴｄＲ取り込み量で試験した。その結果を図７に示す。１群８ウェルで実験を行った。図７に示されるように、ＨＧＦの添加により、糸球体内皮細胞の細胞数が有意に増加していることが認められた。
【００２７】
試験例９
ＭＣの細胞増殖に対するＨＧＦの効果
ＭＣの増殖に対するＨＧＦの効果を、ＷＳＴを用いたＭＣの生存細胞数の測定で試験した。その結果を図８に示す。１群８ウェルで実験を行った。図８に示されるように、ＨＧＦの添加（１００ｎｇ／ｍｌ）によっては、ＭＣの細胞数は影響を受けないことが認められた。
【００２８】
実施例１
生理食塩水１００ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇ、マンニトール１ｇ及びポリソルベート８０  １０ｍｇを含む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た。
【００２９】
実施例２
０．０２Ｍリン酸緩衝液（０．１５Ｍ  ＮａＣｌ及び０．０１％ポリソルベート８０含有、ｐＨ７．４）１００ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇとヒト血清アルブミン１００ｍｇを含む水溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た。
【００３０】
実施例３
注射用蒸留水１００ｍｌ中にＨＧＦ１ｍｇ、ソルベート２ｇ、グリシン２ｇ及びポリソルベート８０  １０ｍｇを含む溶液を無菌的に調製し、１ｍｌずつバイアルに分注した後、凍結乾燥して密封することにより凍結乾燥製剤を得た。
【図面の簡単な説明】
【図１】糸球体内皮細胞の細胞増殖に対するＭＣの効果を示す図である。
【図２】ＭＣのＥＣ細胞増殖促進作用に対する抗ＨＧＦ抗体の効果を示す図である。
【図３】ＭＣからのＨＧＦの分泌量およびそれに対するアンジオテンシンII、TGF-βの効果を示す図である。
【図４】ＭＣの細胞増殖に対するＥＣの効果を示す図である。
【図５】ＥＣの細胞増殖に対する抗ＨＧＦ抗体の効果を示す図である。
【図６】ＥＣからのＨＧＦの分泌量およびそれに対するTGF-βの効果を示す図である。
【図７】糸球体内皮細胞の細胞増殖に対するＨＧＦの効果を示す図である。
【図８】ＭＣの細胞増殖に対するＨＧＦの効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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