(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式を有するホスホジエステル化合物を調製するためのプロセス：
0004014231.tif 000012
ここで、RおよびR1は同じであるかまたは異なっているものであり得、そして直鎖、分岐、もしくは環状脂肪族、アリール、複素環式、ペプチド、ペプトイド、デオキシリボ-もしくはリボ-ヌクレオチドもしくはヌクレオシド、または環式もしくは非環式の有機キレート化剤の群からなる群より選択され、それら全ては必要に応じて１個以上の窒素、酸素、硫黄、ハロゲン、脂肪族、アミド、エステル、スルホンアミド、アシル、スルホネート、ホスフェート、ヒドロキシル、または有機金属置換基で置換され、
該プロセスは、１個の反応容器中で起こり、そして以下の工程を包含する：
(a)溶媒の存在下、アルコールROHをPCl3と反応して以下の式を有するジクロロホスフィン化合物を形成する工程；
0004014231.tif 000013
(b)溶媒の存在下、該工程(a)で形成されたジクロロホスフィン化合物をアミン塩基とカップリングして、以下の式を有するビス(アミノ)ホスフィノ化合物を形成する工程；
0004014231.tif 000014
(c)溶媒の存在下、該工程(b)で形成されたビス(アミノ)ホスフィノ化合物を第二のアルコールR1OH(ここで、該第二のアルコールは工程(a)のアルコールと同じであるかまたは異なるものであり得る)とカップリングして、以下の式を有する(アミノ)ホスフィノ化合物を形成する工程；
0004014231.tif 000015
(d)および、該工程(c)で形成された(アミノ)ホスフィノ化合物を加水分解および酸化にかける工程。
【請求項２】
前記工程(a)で形成されたアルコキシジクロロホスフィン化合物を約５〜約６当量の前記アミン塩基と反応させる、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
前記アミン塩基が約5.0〜約11.0のpKa値を有する、請求項１または２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４】
前記塩基がイミダゾール、2,4-ジメチルイミダゾール、1H-テトラゾール、ジアルキルアミン(メチル、エチル、ブチル)、ピリジン、ピペラジン、ピペリジン、ピロール、1H-1,2,3-トリアゾール、および1,2,4-トリアゾールからなる群より選択される、請求項３に記載のプロセス。
【請求項５】
前記塩基がイミダゾールである、請求項４に記載のプロセス。
【請求項６】
約１当量のROHが約１当量のPCl3と反応する、請求項１に記載のプロセス。
【請求項７】
前記工程(a)、(b)、および(c)で使用される溶媒が同じであるか異なるものであり得、そしてエーテルおよび炭化水素溶媒からなる群より選択される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項８】
前記溶媒が、ヘプタン、メチル-t-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、1,3-ジオキソラン、ジグリム、ジエチルエーテル、ジアルキルエーテル、およびエチレングリコールジアルキルエーテルからなる群より選択される、請求項７に記載のプロセス。
【請求項９】
前記溶媒がテトラヒドロフランである、請求項８に記載のプロセス。
【請求項１０】
前記工程(b)で形成されるアルコキシ(アミノ)ホスフィノ化合物が約１当量のR1OHとカップリングされる、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１１】
前記工程(c)で形成されるジアルコキシ(アミノ)ホスフィノ化合物の加水分解および酸化が、溶媒中約-15℃〜約25℃の温度範囲で10〜24時間の間、水および酸化剤で行われる、請求項１に記載のプロセス。
【請求項１２】
前記酸化剤が過ヨウ素酸ナトリウムを含む、請求項１１に記載のプロセス。
【請求項１３】
前記溶媒がテトラヒドロフラン、ヘプタン、およびトルエンの混合物を含む、請求項１１に記載のプロセス。
【請求項１４】
以下の工程を含む、ホスホジエステル化合物を調製するためのプロセス：
(a)4,4-ジフェニルシクロヘキサノール化合物をPCl3と反応して、以下の式を有する4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシジクロロホスフィンを得る工程；
0004014231.tif 000016
(b)該工程(a)で形成された4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ-ジクロロホスフィンをアミン塩基とカップリングして、以下の式を有する4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシジアミノホスフィンを得る工程：
0004014231.tif 000017
(c)該工程(b)で形成された4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ-ジアミノホスフィンをヒドロキシメチル-DTPAペンタtert-ブチルエステルとカップリングして、以下の式を有する4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ(ヒドロキシメチル-DTPA-オキシ,ペンタtert-ブチルエステル)アミノホスフィノを得る工程；
0004014231.tif 000018
(d)該工程(c)で形成された4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ(ヒドロキシメチル-DTPAオキシ,ペンタtert-ブチルエステル)アミノホスフィノを、希HClおよび酸化剤で加水分解および酸化して、以下の式を有する[(4,4-ジフェニルシクロヘキシル)ホスホノオキシメチル]ジエチレントリアミン,ペンタt-ブチルエステルを形成する工程；
0004014231.tif 000019
【請求項１５】
以下の工程を含む、[(4,4-ジフェニルシクロヘキシル)ホスホノオキシメチル]ジエチレントリアミン五酢酸を調製するためのプロセス：
(a)1.0当量の4,4-ジフェニルシクロヘキサノールを約１当量の三塩化リン(phosphorous trichloride)でリン酸化して、以下の式を有する4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシジクロロホスフィンを得る工程；
0004014231.tif 000020
(b)該工程(a)で形成された4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ-ジクロロホスフィンを約５〜約６当量のイミダゾールとカップリングして、以下の式を有する4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシジイミドホスフィンを得る工程；
0004014231.tif 000021
(c)該工程(b)で形成された4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ-ジイミドホスフィンを約0.75〜約1.0当量のヒドロキシメチル-DTPAペンタtert-ブチルエステルとカップリングして、以下の式を有する4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ(ヒドロキシメチル-DTPA-オキシ,ペンタtert-ブチルエステル)イミド-ホスフィノを得る工程；
0004014231.tif 000022
(d)該工程(c)で形成された4,4-ジフェニルシクロヘキシルオキシ(ヒドロキシメチル-DTPAオキシ,ペンタtert-ブチルエステル)イミドホスフィノを、希HClおよび約0.5〜約2.0当量の過ヨウ素酸ナトリウムで加水分解および酸化して、以下の式を有する[(4,4-ジフェニルシクロヘキシル)ホスホノオキシメチル]ジエチレントリアミン,ペンタt-ブチルエステルを形成する工程；
0004014231.tif 000023
【請求項１６】
前記工程(d)で形成された[(4,4-ジフェニルシクロヘキシル)ホスホノオキシメチル]ジエチレントリアミン,ペンタt-ブチルエステルをHCl中で加水分解して、以下の式を有する[(4,4-ジフェニルシクロヘキシル)ホスホノオキシメチル]ジエチレントリアミン五酢酸を形成する工程をさらに含む、請求項１５に記載のプロセス：
0004014231.tif 000024
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、ホスホジエステル化合物生成のための改良されたプロセスに関する。詳細には、本発明は、画像診断法のための造影剤として有用であるホスホジエステル化合物を調製するための、より詳細にはホスホジエステルを含むジエチレントリアミン五酢酸(「DTPA」)化合物を調製するための改良されたプロセスに関する。
発明の背景
リン脂質、オリゴヌクレオチド、デオキシヌクレオシド、ヌクレオチド、およびヌクレオシドを含む、多くの重要な生物学的物質は、対称および非対称ホスホジエステルとして存在する。医薬的適用におけるそのようなホスホジエステル化合物の有用性は周知である。例えば、Desseauxら、「Synthesis of Phosphodiester and Triester Derivatives of AZT with Tethered N-Methyl Piperazine and N,N,N' trimethylethylenediamine」Bioorg & Med. Chem. Letters、第３巻、第８号、1547〜50頁(1993)；PCT公開広報第WO 96/27379号を参照のこと。最近では、PCT公開広報第WO 96/23526号(本明細書中で参考として援用される)が画像診断法のための造影剤として有用であるホスホジエステル化合物を記載している。
P(III)の化学に基づいた、多数のホスホジエステル化合物の作成法が知られている。一般に、リン酸化はホスホジエステル化合物の合成において、重要な役割を務める。しかし、公知のホスホジエステル合成法は全て、どのようにリン酸化が達成されるかということを含めて多数の問題を欠点として持つ。
ホスホジエステルを作成するための１つの方法は、ホスホラミダイト化学の使用を含む。例えば、Bannwarthら、「A Simple and Effective Chemical Phosphorylation Procedure for Biomolecules」Helvetica Chimica Acta、第70巻175〜186頁(1987)；Bannwarthら、「Bis(allyloxy)(diisopropylamino)phosphine as a New Phosphinylation Reagant of the Phosphorylation of Hydroxy Functions」Tetrahedron Letters、第30巻、第32号、4219〜２２頁(1989)；Mooreら、「Conceptual Basis of the Selective Activation of Bis(dialkylamino)methoxyphosphines by Weak Acids and Its Application toward the Preparation of Deoxynucleoside Phosphoramidites in Situ」J. Org. Chem.、第50巻、2019〜2025頁(1985)；Hebertら、「A New Reagant for the Removal of the 4-Methoxybenzyl Ether: Application to the Synthesis of Unusual Macrocyclic and Bolaform Phosphatidycholines」J. Org. Chem.、第57巻、1777〜83頁(1992)；Desseauxら、「Synthesis of Phosphodiester and Triester Derivatives of AZT with Tethered N-Methyl Piperazine and N,N,N' trimethylethylenediamine」Bioorg. & Med. Chem. Letters、第３巻、第８号、1547〜50頁(1993)；Pirrungら、「Inverse Phosphotriester DNA Synthesis Using Photochemically-Removable Dimethoxybenzoin Phosphate Protecting Groups」J. Org. Chem.、第61巻、2129〜36頁(1996)を参照のこと。
しかしながら、そのようなホスホラミダイト法は、ホスホラミダイトが典型的には(化学的および動力学的の両方で)不安定な化合物であり、そして蒸留による精製において発火するかまたは爆発を引き起こし得るという事実を欠点として持つ。さらに、ホスホラミダイト法は一般に、商業ベースでのホスホジエステル化合物の製造に適さない。これは、ホスホラミダイト出発材料が非常に高価でありかつ容易に入手可能ではないことにより、そしてホスホラミダイトを使用する方法がさらなるプロセス工程(例えば、リン酸化後保護基を切断するさらなる工程)ならびに中間体の複数の単離および／または精製工程を含む傾向があることによる。
リン酸化剤としてのホスホジクロリデート(phosphodichloridate)の使用を含む方法は、同様な問題を欠点として持つ。例えば、Martinら、「General Method for the Synthesis of Phospholipid Derivatives of 1,2-O-Diacyl-sn-glycerols」J. Org. Chem.、第59巻、4805〜20頁(1994)；Martinら、「A General Protocol for the Preparation of Phospholipids via Phosphate Coupling」Tetrahedron Letters、第29巻、第30号、3631〜34頁(1988)；Lammersら、「Synthesis of Phospholipids via Phosphotriester Intermediates」J. Roya Netherlands Chem. Soc'y、98/4、243〜250頁(1979、４月)；Martinら、「Synthesis and Kinetic Evaluation of Inhibitors of the Phosphatidylinositol-Specific Phospholipase C from Bacillus cereus」J. Org. Chem.、第61巻、8016〜23頁(1996)を参照のこと。
ホスホジエステル化合物を作成するために使用される別の方法は、水素-ホスホネート中間体を生成するためのPCl3の使用を含む。例えば、Lindhら、「A General Method for the Synthesis of Glycerophospholipids and Their Analogues via H-Phosphonate Intermediates」J. Org. Chem.、第54巻、1338〜42頁(1989)；Garciaら、「Synthesis of New Ether Glycerophospholipids Structurally Related to Modulator」Tetrahedron、第47巻、第48号、10023〜34頁(1991)；Garigapatiら、「Synthesis of Short Chain Phosphatidylinositols」Tetrahedron Letters、第34巻、第５号、769〜72(1993)を参照のこと。しかしながら、この方法は、購入され得るかまたは独立して合成され得るかのいずれかであるカップリング試薬の使用を必要とし、従ってそのような方法を高価なまたはより複雑なものにする。さらに、しばしばH-ホスホネート中間体のための面倒な乾燥条件を伴う複数の中間体単離および精製工程が必要とされる。
その結果として、保護基またはカップリング剤のどちらの使用も必要としない広範な置換基を有する可能性を持つホスホジエステル化合物の、高収率での生成のための、安全、効率的、かつ安価なプロセスに対する要求が依然としてある。特に、１個の反応容器中で行われ得、そして複数の中間体形成による複数の単離および精製工程を必要としないプロセスに対する要求が依然としてある。
発明の要旨
本発明は、ホスホジエステル化合物、およびより詳細には以下の式を有するホスホジエステルを調製するための、より安全で、より効率的で、そしてより安価なプロセスに関する：
0004014231.tif 000002
本発明に従い、このプロセスは以下の工程を包含する：
(a)PCl3をアルコールとカップリングして置換ジクロロホスフィンを得る工程；
(b)前述のジクロロホスフィンをアミン塩基とカップリングしてビス(アミノ)ホスフィノを得る工程；
(c)前述のビス(アミノ)ホスフィノを第二のアルコール(これは工程(a)で使用されたアルコールと同じであるかまたは異なるものであり得る)とカップリングして二置換(アミノ)ホスフィノを得る工程；
(d)および、前述の(アミノ)ホスフィノを水および酸化剤と反応させて所望のホスホジエステル化合物を得る工程。
本発明によるプロセスは、不安定なリン酸化剤の使用ならびに保護基またはカップリング剤を使用することの必要性を回避している。それ故、本発明の方法は脱保護およびカップリング試薬の合成のような不必要なプロセスの工程を回避する。本発明の好適な実施態様において、ホスホジエステル合成プロセスは１個の反応容器中で行われ、複数の単離および／または精製工程の必要性を回避する。
発明の詳細な説明
本明細書中で記載される発明がより完全に理解され得るために、以下の詳細な説明を記述する。
本発明は、以下の一般式のホスホジエステル化合物を調製するための改良されたプロセスを提供する：
0004014231.tif 000003
ここで、RおよびR1は同じであるかまたは異なっているものであり得、そして直鎖、分岐、もしくは環状脂肪族、アリール、複素環式、ペプチド、ペプトイド、デオキシリボ-もしくはリボ-ヌクレオチドもしくはヌクレオシド、または環式もしくは非環式の有機キレート化剤からなる群より選択され、それら全ては必要に応じて１個以上の窒素、酸素、硫黄、ハロゲン、脂肪族、アミド、エステル、スルホンアミド、アリール、アシル、スルホネート、ホスフェート、ヒドロキシル、または有機金属置換基で置換され得る。
本発明の好適な局面において、全ての合成工程は、１個の反応容器中で行われ、複数の単離および／または精製工程の必要性を防止している。本発明は、高価なまたは不安定な出発物質に頼らない、および保護基またはカップリング剤のいずれの使用も必要としない、ホスホジエステル化合物を生成するための、効率的かつ高収率のプロセスを実証する。その上さらに、前述のプロセスは広範な置換基の間のホスホジエステル結合の生成のために効率的である。
プロセスのスキーム
本発明に従い、アルコールROH(ここでRは上記で記載されたのと同じ意味を有する)を、好ましくは１：１のモル比で、PCl3と反応させて、ジクロロホスフィン反応生成物(I)を形成する：
0004014231.tif 000004
この反応は、エーテルまたは炭化水素溶媒の存在下で起こり、そして約-50℃〜約15℃、好ましくは約-10℃〜約-5℃の温度で、約30分〜約３時間、好ましくは約１〜約1.5時間の間行われる。溶媒は、任意のエーテルまたは炭化水素溶媒であり得、そして好ましくはヘプタン、メチル-t-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、およびエチレングリコールジアルキルエーテルからなる群より選択され得る。より好ましくは、溶媒はテトラヒドロフランである。
次いで、ジクロロホスフィン(I)を約５〜約６当量のアミン塩基と反応させて、ビス(アミノ)ホスフィノ反応生成物(II)を形成する：
0004014231.tif 000005
この反応もまた、上記で記載されるように、エーテルまたは炭化水素溶媒の存在下で起こり、そして約-50℃〜約15℃、好ましくは約-10℃〜約-5℃の温度で、約30分〜約３時間、好ましくは約15〜約30分の間行われる。反応生成物(II)を形成するために使用される塩基は、任意のアミン塩基、好ましくは約５〜約11のpKa値を有する塩基であり得、そしてより好ましくはイミダゾール、2,4-ジメチルイミダゾール、1H-テトラゾール、ジアルキルアミン(メチル、エチル、ブチル)、ピリジン、ピペラジン、ピペリジン、ピロール、1H-1,2,3-トリアゾール、および1,2,4-トリアゾールからなる群より選択される。より好ましい実施態様では、塩基はイミダゾールである。
次いで、ビス(アミノ)ホスフィノ化合物(II)を約0.75〜約1.0当量の第二のアルコールR1OH(ここでR1は上記で記載されるのと同じ意味を有する)と反応させて、(アミノ)ホスフィノ反応生成物(III)を形成する：
0004014231.tif 000006
この反応は、エーテルまたは炭化水素溶媒の存在下で起こり、そして約-50℃〜約15℃、好ましくは約-10℃〜約-5℃の温度で、約30分〜約３時間、好ましくは約1.0〜約1.5時間の間行われる。溶媒は、任意のエーテルまたは炭化水素溶媒であり得、そして好ましくはヘプタン、メチル-t-ブチルエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフラン、1,3-ジオキソラン、ジグリム、ジエチルエーテル、ジアルキルエーテル、およびエチレングリコールジアルキルエーテルからなる群より選択され得る。より好ましくは、溶媒はテトラヒドロフランである。
最後に、(アミノ)ホスフィノ化合物(III)を約１当量の、好ましくは約2.5〜約５のpHを有する酸性水、および約１当量以上の酸化剤と反応させて、所望のホスホジエステル化合物(IV)を形成する：
0004014231.tif 000007
酸化剤は、任意の過酸化型酸化剤であり得、そして好ましくは過ヨウ素酸塩類からなる群より選択される。より好ましくは、酸化剤は過ヨウ素酸ナトリウムである。
上記の加水分解および酸化は、溶媒混合物中、約-15℃〜約25℃、好ましくは約0℃〜約２℃の温度で、約10〜約24時間、好ましくは約10〜約15時間の間行われる。溶媒混合物は、エーテルまたは炭化水素溶媒からなる群より選択される溶媒の任意の組合せを含む。好ましくは、溶媒混合物は、テトラヒドロフラン、ヘプタン、およびトルエンを10：10：１の体積比で含む。
プロセス生成物の使用
上記のプロセスが画像診断法のための造影剤の調製において特に有用であることが見いだされている。この改良されたプロセスにより調製され得るホスホジエステル造影剤の例は、以下に示される化合物、ならびにPCT公開公報第WO 96/23526号において記載される他のものを含む。
0004014231.tif 000008
そのような場合において、本明細書中で定義されるとおり、２つのアルコール(ROH、R1OH)のうちの少なくとも１つは、環式または非環式有機キレート化配位子を、そのようなキレート上に適切な基(例えばt-ブチル基)で保護された任意の敏感な官能基(例えば、カルボキシレート)とともに、さらに含むことを意図する。適したキレート化配位子は当該分野で周知である。例えば、ホスホジエステル化合物が磁気共鳴画像法のための造影剤として使用されるものである場合、好適なキレート化配位子は以下を含む：
0004014231.tif 000009
キレート上の任意の保護基の除去ならびに所望の金属とのキレートの錯体化は、本発明のホスホジエステル合成プロセスを行った後、当該分野で周知の方法により行われ得る。例えば、Groteら、「Stereocontrolled Synthesis of DTPA Analogues Branged in the Ethylene Unit」J. Org. Chem.、第60巻、6987〜97頁(1995)；Kangら、「Synthesis, Characterization, and Crysral Structure of the Gadolinium(III) Chelate of (1R,4R,7R)- α,α',α"-Trimethyl-1,4,7,10-tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetic Acid(DO3MA)」Inorg. Chem.、32：2912-18(1993)、およびそれらに引用された参考文献を参照のこと。
そのようなホスホジエステル造影剤について、アルコール(ROHまたはR1OH)が、生成する薬剤の、画像とされることが望まれる組織、細胞、タンパク質、レセプター、または領域への局在化を促進するように設計される部分を含み得ることもまた意図される。そのような部分の例は、親油性または両親媒性物質、レセプター、配位子、抗体、または抗体フラグメント、ペプチド、または画像とされることが望まれる特定の生物学的成分に集まることが公知の他の生体分子を含む。
本発明がよりよく理解され得るために、以下の実施例を記載する。この実施例は例示の目的のみのためであり、そしていかなる方法においても本発明の範囲を制限することを意図しない。
実施例
[(4,4-ジフェニルシクロヘキシル)ホスホノオキシメチル]ジエチレントリアミン五酢酸の調製を以下のスキームIに示す：
0004014231.tif 000010
三塩化リン(phosphorous trichloride)(13.2mL、0.151mol)のテトラヒドロフラン(202ml)溶液を含む単一の反応容器に、1.5時間、撹拌しそして内部温度を-6.2℃〜-5.3℃に維持しながら、4,4-ジフェニル-シクロヘキサノール(１)(38.34ｇ、0.152mol)のテトラヒドロフラン(243ml)溶液を加えた。次いで、混合物をさらに34分間撹拌し、174.28ppmの31P NMRケミカルシフトを有するジクロロホスフィン反応生成物(２)を得た。
この溶液に、37分間、撹拌しそして内部温度を-7.8℃〜-3.6℃に維持しながら、テトラヒドロフラン(243ml)中のイミダゾール(51.34ｇ、0.753mol)を加えた。次いで、生成する混合物をさらに20分間撹拌し、106.36ppmの31P NMRケミカルシフトを有するビス(アミノ)ホスフィノ反応生成物(３)の溶液を得た。
この混合物に、2-(R)-ヒドロキシメチルジエチレントリアミン五酢酸、ペンタ-t-ブチルエステル(4)(160.0ｇ、0.128mol、純度56.32重量％)からなるヘプタン(114ml)溶液を、１時間６分間、撹拌しそして内部温度を-6.8℃〜-4.8℃に維持しながら、加えた。次いで、この混合物をさらに23分間撹拌し、123.8ppmの31P NMRケミカルシフトを有する溶液(５)を得た。
最後に、内部温度を-6.5℃〜6.5℃に維持しながら、約１分間にわたり水(202ml)を加えた。混合物を５分間撹拌し、続いて内部温度を1.0℃〜12.1℃に維持しながら、５分間にわたりヘプタン(620ml)、トルエン(70ml)、および５Ｎの水性塩酸(202ml)を加えた。次いで、過ヨウ素酸ナトリウム(22.6g、0.106mol)を、内部温度を10.5℃に維持しながら、３分間にわたり加えた。反応混合物を35分にわたり室温まで昇温し、そしてさらに2.5時間撹拌して4.27ppmの31P NMRケミカルシフトを持つ溶液(６)を得た。層を分離し、そして有機層を10％の水性チオ硫酸ナトリウムで洗った(２×809mL)。
上記の有機層に、テトラオクチルアンモニウムブロミド(8.21ｇ、0.015mol)を加えた。次いで、内部温度を22.8℃〜25.0℃に維持しながら、22分間にわたり濃塩酸(11.51Ｍ、405mL)を加えた。この混合物を16.0時間撹拌して7.78ppmの31P NMRケミカルシフトを持つ化合物(７)を得た。層を分離し、そして有機層を捨てた。
上記の水層に、pH6.56が記録されるまで、８Ｍの水性水酸化ナトリウム(630mL)を加えた。溶液を、400mLの溶媒が収集されるまで(ほぼ１時間)減圧下濃縮した(50℃〜55℃、真空度85mmHg)。溶液を室温まで冷却し、そしてアンバーライトXAD-4樹脂(92.0ｇ)を加えた。懸濁液を室温で50分間撹拌し、そして濾過して淡黄色の水性溶液(1.1Ｌ)を得た。
上記の溶液をC-18逆相シリカゲル(271ｇ、メタノールに湿らせて詰め、次いで800mLのメタノール、800mLのメタノール／水(1：1)、および800mLの水で洗う)上にロードし、そして水で溶出した。最初に収集された1.0Ｌの溶離液を捨て、そして次に収集した1.3Ｌを保持した。保持した溶液に、６Ｎの水性塩酸を加え(60mLでpH=2.15に)そして３Ｎの水性塩酸を加えた(30mLでpH=1.63に)。スラリーを1.25時間撹拌し、そして濾過した。固体をpH1.67の水性溶液(500mL)で洗い、そして恒量になるまで(18.0時間)乾燥して(48〜50℃、４〜６mmHg)、オフホワイトの固体、以下の式の化合物を得た：
0004014231.tif 000011
(65.5ｇ、収率：68.89％、純度：99.45重量％、98.95領域％、3.02％の水および97.81％のキレート可能物)。