(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）１５〜３５％容量/容量の第三級ブチルアルコールの存在下、１重量部のＰＧＥ-１を１０，０００〜４０，０００重量部のラクトースに分散させ、
ｂ）得られた製剤のｐＨをクエン酸または酢酸緩衝液で３．５〜６に調整し；
ｃ）該製剤を、−５０℃に凍結し、２時間で−２５℃まで加温し、次いで−５０℃に再凍結することにより、アニーリングプロセスに付し；次いで
ｄ）該調剤を乾燥する
工程を含むプロセスにより得られた、１乾燥重量％未満のできるだけ低レベルの水分含量および０．５〜３乾燥重量％の第三級ブチルアルコール含量を有する、性的機能不全の治療のためのＰＧＥ−１の凍結乾燥製剤。
【請求項２】
該緩衝液が、クエン酸ナトリウムである請求項１記載の製剤。
【請求項３】
該ｐＨが４〜５に調整される請求項１または２記載の製剤。
【請求項４】
ラクトース中に２５〜１００ｐｐｍのＰＥＧ−１を含有する請求項１〜３のいずれか１記載の製剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１記載の工程を含む、ＰＧＥ−１の安定化した凍結乾燥製剤の製法。
【発明の詳細な説明】
発明の背景
プロスタグランジンＥ1（ＰＧＥ-１）は本来不安定な化合物である。ＰＧＥ-１は、化学的には（１１α，１３Ｅ，１５Ｓ）-１１，１５-ジヒドロキシ-９-オキソプロスト-１３-エン-１-酸；または３-ヒドロキシ-２-（３-ヒドロキシ-１-オクテニル）-５-オキソ-シクロペンタンヘプタン酸であり；一般的にはアルプロスタジルまたはＰＧＥ-１と称される。ＰＧＥ-１は、精製した生物学的抽出物から容易に結晶化される主なプロスタグランジンである。本発明の目標は、ＰＧＥ-１の室温にて安定な処方の開発であった。より好ましくは、勃起性不全の治療に使用するのに適当なＰＧＥ-１の低用量（５-２０μｇ）処方を安定化させる方法であろう。
ＰＥＧ-１を凍結-乾燥させようとする種々の試行は、米国特許第３，９５２，００４号および第３，９２７，１９７号に記載されている。第一の特許「００４号」には、第三級ブチルアルコールおよび塩化ナトリウム中におけるＰＧＥ-１の安定化、ならびにラクトースまたは他の「単純糖」がＰＧＥ-１を不安定化させることが記載されている。第二の特許「１９７号」には、第三級ブチルアルコールで安定化したＰＧＥ-１が記載されている。
ＰＧＥ-１を安定化させようとする種々の試行にも拘わらず、貯蔵寿命を向上させ有効性を維持するための、より優れかつより有効な方法が望まれている。ラクトース中のＰＧＥ-１処方は、固形状態のＰＧＥ1濃度に関する見掛けの二次の機構を通して分解するようである。最高の安定性は、適当なラクトース希釈剤中のＰＧＥ-１濃度を最低化するか、または二次の速度定数に影響し得る他のパラメーターを最適化することによって達成できる。二次の速度定数は、固溶体状態のｐＨ、緩衝液含量、水分含量、加工の間の第三級ブチルアルコールの使用、凍結速度、および乾燥速度によって影響される。これら全てのパラメーターを最適化することにより、二次の速度定数の値が最小化された。
発明の概要
１つの態様において、主題の発明は、
ａ）ラクトースおよび第三級ブチルアルコールの溶液にＰＧＥ-１を溶解させ、ここに、該第三級ブチルアルコールは約１５％〜３３％容量/容量の量で存在し、かつ、ラクトースのＰＧＥ-１に対する比は約４０，０００対１〜約１０，０００対１重量/重量（ラクトース中２５〜１００ｐｐｍ）であり、それによってラクトース中に分散したＰＧＥ-１処方が形成され；
ｂ）該処方のｐＨを有機酸緩衝液（好ましくはクエン酸ナトリウム）で約３．５〜約６に調整し維持し；
ｃ）該処方を約-５０℃に凍結し；次いで
ｄ）該処方を乾燥して、１％乾燥重量未満の水分含量であって、３％乾燥重量未満の第三級ブチルアルコール含量とする；
ことよりなるプロセスにより製造されるＰＧＥ-１の凍結乾燥処方である。好ましくは、該処方中のＰＧＥ-１は、約２５〜１００ｐｐｍのラクトース量であって、ｐＨは緩衝液の存在により４〜５に調整され維持されている。好ましくは、凍結工程（ｃ）には、該処方を約-５０℃に凍結し、約２時間で約-２５℃まで加温し、次いで約-５０℃に再凍結することによるアニーリング（annealing）プロセスが含まれる。
もう１つの態様において、主題の発明は、前記の工程よりなるＰＧＥ-１の安定化され、凍結乾燥した処方の製法である。
さらにもう１つの態様において、本発明は、勃起性不全の治療に使用するＰＧＥ-１の凍結乾燥処方である。該処方の典型的な投与量は（５-２０μｇの）ＰＧＥ-１の処方である。これらの処方は、約４０，０００対１〜約１０，０００対１重量/重量（ラクトース中の２５〜１００ｐｐｍ）のＰＧＥ-１に対するラクトースの比に相当する。すなわち、５μｇは４０，０００対１に相当し；
１０μｇは２０，０００対１に相当し、２０μｇは１０，０００対１に相当する。
発明の詳細な説明
主題の発明は、２０％ｖ/ｖの第三級ブチルアルコール（ＴＢＡ）を含有し、かつ約４の見掛けのｐＨを有するバルクの無菌濾過溶液から製造した凍結乾燥ＰＧＥ-１組成物である。水およびＴＢＡは共に、凍結-乾燥プロセスの間に除去される。凍結乾燥後に残った残存水およびＴＢＡは、各々、乾燥ケーキマスの＜０．５％および０．５-２％である。１つの処方において、バイアル投与量には：２３μｇのＰＧＥ-１（アルプロスタジル）、１９３．８ｍｇの無水ラクトースおよび５３μｇのクエン酸ナトリウムが凍結乾燥完了後に含有されている。この凍結-乾燥粉末を１．０ｍｌの注射用水または注射用静菌水のいずれかで復元した後には、２０μｇ/ｍｌのＰＧＥ-１を含有する溶液が得られる。凍結-乾燥粉末は、５ｍｌバイアルに充填され、凍結-乾燥チャンバー内の凍結乾燥型のクロージャーで密閉され、次いで、アルミニウム・オーバーシールでキャップされる。ＰＧＥ-１の化学安定性は、アレニウス式および加速安定性データを使用することにより予想できる。初期速度動力学分析（すなわち、主な分解産物であるＰＧＡ1の形成速度のモニター）を用いて、化学安定性を評価することができる。該生成物を最適化した処方およびプロセスで適当に製造した場合に、該生成物を２５℃またはそれ未満にて保存した場合の貯蔵期間が２４ヶ月以上となるはずであることを、計画した安定性分析は示している。
初期の研究では、ラクトース希釈剤、および第三級ブチルアルコール（ＴＢＡ）-水/共-溶媒系からの凍結乾燥の使用に集中されていた。製造した凍結-乾燥処方は、固溶体の特性を有するようであった。この型の処方中のＰＧＥ-１の分解は、二次の機構によって最もよく説明することができた。安定性は、ラクトース希釈剤の量を最大化するか、または存在するＰＧＥ-１の量を最小化することにより向上することができた。固溶体状態の二次の動力学は、アレニウス型の温度関係によく適合する。残存水分は、安定性に対して有害な影響を有することが示された。ケーキのｐＨも安定性に影響した。最適な安定性は、約ｐＨ４-５にて達成された。最小容量のクエン酸緩衝液を該処方に添加してｐＨを制御した。ＴＢＡ/水共-溶媒混合液からの凍結乾燥は、水のみに比して、処方の安定性を改善した。典型的には、標準的な凍結乾燥技術を用いて、安定化されたＰＧＥ-１を調製することができる。さらに好ましくは、アニーリング技術により、凍結乾燥生成物中の残渣第三級アルコールの低減およびさらなる均一性制御を行うことができる。最適な安定性は、１７-２５％のＴＢＡ/水混合液から凍結乾燥した場合に達成された。
ＰＧＥ-１の安定化した凍結乾燥処方の製法は、以下のものを包含する生成物安定物に影響するキー・パラメーターを制御する：存在するラクトース希釈剤のレベル、凍結乾燥ケーキの見掛けのｐＨ、水分含量、加工の間の共-溶媒第三級ブチルアルコールの使用、凍結速度および凍結乾燥前の方法論、凍結-乾燥速度、ならびに、生成物を製造するのに用いるバイアルのサイズ。
第三級ブチルアルコール（ＴＢＡ）/水混合液からのＰＧＥ-１の緩衝化ラクトース処方の凍結乾燥により、水性系のみから凍結-乾燥した場合よりも優れた生成物安定性が得られる。生成物に最高の安定性を供するＴＢＡのレベルは、ＴＢＡ量が１７-２５％（ｖ/ｖ）の範囲にある場合のようであった。ＰＧＥ-１処方用の共-溶媒量としては、それが最適な共-溶媒範囲に入るため、２０％のＴＢＡレベルを選択した。用いるＴＢＡのレベルが低下するほど、可燃性も低下し、凍結乾燥後に生じるであろうＴＢＡ消費量も減少し、生成物中のイソプロピルアルコール（ＴＢＡ中のプロセス不純物）のレベルも減少し、共-溶媒系からラクトースを製造する間の沈殿性も低下した。安定性データは、ＰＧＥ-１の緩衝化ラクトース処方をＴＢＡ/水共-溶媒系から凍結乾燥することにより、水性系から凍結-乾燥するよりも顕著に安定となるであろうことを明らかに示した。ＴＢＡを用いる場合の安定性の改善の機構は知られていないが、製造物の凍結および凍結乾燥の間に、ＰＧＥ-１分子をさらに離して維持できるようである。従って、２０％ｖ/ｖのＴＢＡを含有する共-溶媒系から最終処方を凍結乾燥することが推奨される。最終処方中の低レベルの
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は、少なくとも２０％のＴＢＡを用いる場合よりも安定性がはるかに劣る生成物を製造するであろうため、このレベルのＴＢＡを用いることが重要である。
最終生成物中に生じる残存ＴＢＡは、ケーキ重量の約０．５〜２％と予想される。ＴＢＡおよびその不純物（イソプロピルアルコール、２-ブチルアルコールおよびイソブチルアルコール）の安全性評価により、ＴＢＡレベルが２００ｍｇの凍結-乾燥ケーキの３％以下であれば許容されること、および他の残存有機溶媒が２００ｍｇ凍結-乾燥ケーキの０．５％以下であるべきと結論された。
ラクトースへの熱の適用は、生成物の安定性に有害な影響を与え得る。安定性データは、凍結-乾燥サイクルの緻密な制御（第一および第二乾燥の両方）が、均等な安定性を有する製造ロットを再現するのに非常に重要であることを明らかに示している。従って、安定性は、加工パラメーターの関数とすることができる。
ＰＧＥ-１分解動力学は二次の機構に（少なくとも経験的には）適合するため、ラクトースでＰＧＥ-１を単に希釈することによって安定性を改善できる。このことは、与えられた量のＰＧＥ-１に対してラクトース量を最大化することにより、最適の安定性が供されるであろうことを示すであろう。ＰＧＥ-１の２０μｇ/ｍl処方には、最適な処方を処方化するのに選択するラクトース量は、２０４ｍｇのラクトース一水和物である。凍結乾燥後に、５％の水が除去され、バイアル中に存在する得られたラクトースは１９３．８ｍｇである。１９３．８ｍｇの無水ラクトースに対するケーキ容量は約０．１３ｍlである。従って、１．０ｍlで復元した後のラクトースの理論溶液濃度は、（１９３．８ｍｇ/１．１３ｍl）または１７２ｍｇ/ｍlである。１．０ｍlで復元した後に２０μｇ/ｍl溶液を作製するのに要するＰＧＥ-１量は、（１．１３ｍl×２０μｇ/ｍl）または２２．６μｇである。
ケーキのｐＨも生成物の安定性に影響すると判断されている。最高の安定性は、ケーキｐＨをｐＨ４〜５付近に保持した場合に達成される。クエン酸および酢酸緩衝液の両方を用いることができるが；それが非経口生成物用の一般的な緩衝液であるため、ＰＧＥ-１処方用の選択緩衝液としては、クエン酸緩衝液を選択した。ＰＧＥ-１は酸および塩基の加水分解の双方に感受性であるため、ＰＧＥ-１分子のある程度の緩衝液触媒作用が起き得ることがありそうである。最終処方に選択したクエン酸緩衝液の量は、ｐＨを十分に制御するのに十分な量とそれ自体別の触媒作用経路を有意に供しないものとの間の妥協に基づいて選択した。最終処方に選択したクエン酸のレベルは、５３μｇのクエン酸ナトリウム／２３μｇのＰＧＥ-１（３．１７モルのクエン酸/モルＰＧＥ-１）であった。このレベルのクエン酸は、分解速度定数における比較的僅かな上昇（＜７％）しか理論的には引き起こさないであろう。生成物の貯蔵期間にｐＨを制御するのに十分な緩衝液が存在するかを判断するために、この量の緩衝液が存在する試料を加速条件下にて初期能力の９０％未満まで分解させた。ｐＨは、最初と起こった能力における＞１０％低下後に測定した。ｐＨにおける有意な変化は起こらなかった。このことは、１０％未満の分解しか起こらないであろう生成物の正常な貯蔵期間の間にｐＨを維持するのに十分な緩衝液が存在したことを証明している。
生成物中の水分の存在は、生成物の安定性にマイナスの影響を有するであろう。従って、該処方が加工の間に可能な限り低い水分レベルを有し、該生成物の貯蔵期間を通してそのレベルが維持されることが好ましい。
凍結速度も生成物の安定性に作用する。分解経路のユニークな動力学は、２個のＰＧＥ-１分子の相互作用を最小限化するために当該２個のＰＧＥ-１分子を可能な限り離して維持することが肝要であることを示している。典型的には、該凍結乾燥サイクルは、第一乾燥の間に凍結溶液の融点を超えることなく、可能な限り迅速に進行するよう設計される。従って、第一乾燥相の間に再溶解が起こらない限り、第二乾燥相の間に十分に低いレベルまで水分含量が低下すれば、生成物は通常許容されるであろう。しかしながら、該ＰＧＥ-１処方は正常な状態とは極めて異なり得る。なぜなら、該処方中の主成分がラクトースであるからである。刊行物は、ラクトースは-３１℃オーダーである非常に低いガラス転移温度（Ｔｇ）を有することを報告している。バルク溶液の融点を超えることなく、ラクトースのごとき賦形剤のガラス転移温度より高い温度で凍結乾燥することは可能である。該生成物温度がＴｇを超えた場合、該凍結溶液の粘度が顕著に低下し、該ＰＧＥ-１分子の可動性が実質的に上昇するであろうゴム系となる。このタイプに事象により、ＰＧＥ-１分子を凝集させるか、ミセル形成させるか、または凍結溶液をＴｇ以下に維持した場合よりもより隣接させるかのいずれかとできる状態に誘導できた。従って、乾燥サイクルを最適化してかかるできごとの発生を予防することが重要である。
典型的には、標準的な技術を用いて、ラクトース処方中のＰＧＥ-１を凍結乾燥する。さらに好ましくは、アニーリングプロセスを用いて、残存第三級ブチルアルコールを減少し制御することができる。アニーリングプロセスにおいて、ＰＧＥ-１処方を約-５０℃に凍結し、それを約２時間で約-２５℃まで加温し、次いでそれを約-５０℃に再凍結することによって、凍結乾燥プロセスの最初の段階を行う。次いで、凍結乾燥を続けて、１乾燥重量％未満の水分含量であって、３乾燥重量％未満の第三級ブチルアルコール含量とする。
結論は、適当な生成物の安定性を達成するためには、処方を注意深く選択しなければならないのみならず、製造プロセスが適当に最適化されていなければならないことである。現時点の理論基礎では該機構を十分に理解し得ないが、説明した効果は再現性がある。従って、保存サイクルを用いて、最高の生成物安定性が一定して達成されることが要求される。
プロトタイプのラクトースベースのＰＧＥ-１処方は、安定性がアレニウス型の温度関係とよく相関することを示した。アレニウス関係に対するこの適合は、速度定数を、ＰＧＥ-１の分解速度に対してプロットしようと、または主要分解生成物ＰＧＡ1の形成速度に対してプロットしようと明らかであった。従って、ＰＧＥ-１に対するラクトース処方の安定性は、初期速度型の動力学分析により（すなわち、ＰＧＡ1形成の速度をモニターすることにより）正確に評価できる。
凍結-乾燥処方ＰＧＡ-１（アルプロスタジル・エス・ポ（Ａsprostadil Ｓ.Ｐo.））および好ましくは勃起性不全の治療におけるごとき注射用に用いるよう設計された当該ＰＧＡ-１の最適化は、前記に説明したごとく決定した。該処方は、固溶体状態のＰＧＥ-１濃度に関する見掛けの二次の機構を通して分解するようである。最高の安定性は、ラクトース希釈剤中のＰＧＥ-１濃度を最低化するか、または二次の速度定数に影響するこれらのパラメーターを最適化することによって達成できる。最適化処方に選択したラクトース希釈剤の量は、ラクトースの溶解性の限界および刺激能に基づいた。１つの具体例において、存在するＰＧＥ-１量は、１ｍlまたはそれ未満の注射容量として提唱された臨床用量に基づいた。二次の速度定数は、固溶状態のｐＨ、緩衝定数、水分含量、加工の間の第三級ブチルアルコールの使用、凍結速度、ならびに乾燥速度によって影響される。これら全てを最適化して、二次の速度定数の値を最適化した。２０％ｖ/ｖ第三級ブチルアルコール（ＴＢＡ）を含有し、約４の見掛けのｐＨを有するバルクの無菌濾過溶液から生成物を凍結乾燥する。残渣水およびＴＢＡは双方とも、凍結-乾燥プロセスの間に除去される。凍結乾燥後に残った残存水およびＴＢＡは、各々、乾燥ケーキマスの＜０．５％および０．５〜２％である。例えば、凍結乾燥完了後に含有されるバイアル当たりの最終処方には：２３μｇのＰＧＥ-１（アルプロスタジル）、１９３．８ｍｇの無水ラクトース、および５３μｇのクエン酸ナトリウムが含有される。この凍結-乾燥粉末を注射用水または注射用静菌水のいずれか１．０ｍlで復元した後に、２０μｇ/ｍlのＰＧＥ-１を含有する溶液が得られるであろう。あるいは、例えば、該最終処方には、凍結乾燥完了後に：１１．９ｇのＰＧＥ-１（アルプロスタジル）、１９３．８ｍｇの無水ラクトース、および５３μｇのクエン酸ナトリウムがバイアル当たりに含有される。この凍結-乾燥粉末を注射用水または注射用静菌水のいずれか１．０ｍlで復元した後に、１０μｇ/ｍlのＰＧＥ-１を含有する溶液が得られるであろう。あるいは、最終処方には、例えば、凍結乾燥完了後にバイアル当たり：６．１μｇのＰＧＥ-１（アルプロスタジル）、１９３．８ｍｇの無水ラクトース、および５３μｇのクエン酸ナトリウムが含有される。この凍結-乾燥粉末を１．０ｍlの注射用水または注射用静菌水で復元した後には、５μｇ/ｍlのＰＧＥ-１を含有する溶液が得られるであろう。該凍結-乾燥粉末は、例えば、これらの例当たりとして、５ｍlのバイアル中に充填され、凍結-乾燥チャンバー内で凍結乾燥型クロージャーで密閉され、次いで、アルミニウム・オーバーシールでキャップされる。ＰＧＥ-１の化学安定性は、アレニウス式および加速安定性データを使用することによって予想することができる。初期速度動力学分析（すなわち、主分解生成物であるＰＧＡ1の形成速度をモニターすること）を用いて化学安定性を評価することもできる。計画した安定性分析は、最適化した処方およびプロセスで製造物を適当に製造した場合に、該生成物を２５℃以下にて保存した場合の２４カ月よりも貯蔵期間が延びるであろうことを示している。
前記の条件下にて凍結乾燥した種々の強度のＰＧＥ-１安定化生成物に関するロットを調製し、その安定性を測定した。結果を以下の表に示す：
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表は、優れた安定性が凍結生成物の耐用期間を通して維持されたことを示している。