(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で表されるインドール誘導体：
【化１】
0003943661.tif 000006
（式中、Ｒは、炭素数が２以上４以下のアルキレン基を表す）。
【請求項２】
アルキレン基であるＲがエチレン基である、請求項１記載のインドール誘導体。
【請求項３】
下記式（II）で表されるインドール誘導体：
【化２】
0003943661.tif 000007
（式中、Ｒは存在しないか、又は炭素数が１以上４以下のアルキレン基を表す）。
【請求項４】
アルキレン基であるＲがエチレン基である、請求項３記載のインドール誘導体。
【請求項５】
下記式（Ｉ）で表されるインドール誘導体：
【化３】
0003943661.tif 000008
（式中、Ｒは存在しないか、又は炭素数が１以上４以下のアルキレン基を表す）。
を有効成分とする、発根誘導剤。
【請求項６】
アルキレン基であるＲがエチレン基である、請求項５記載の発根誘導剤。
【請求項７】
請求項３又は請求項４記載のインドール誘導体（II）を有効成分とする、発根誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定の構造を有するインドール誘導体及びこのインドール誘導体を有効成分とする発根誘導剤に関する技術分野の発明である。
【０００２】
【従来の技術】
植物を種子で繁殖させようとする場合、通常その種子が純系であることが要求される。これは純系の種子を用いないと繁殖植物の形質が区々になってしまうからであるが、種子繁殖で純系の種子を得ることは困難を伴う。また、種子繁殖では、種子を容易に採れる植物に対象が限定されてしまう。
そのため、上記の種子による繁殖の他に、繁殖させる植物の栄養器官の一部を母体から切り離して，これを砂又は土壌中に挿し，発根・発芽させ独立した植物体とする栄養繁殖法である「さし木」が広く行われている。
ところが、これらの栄養繁殖法を行っても発根が困難である植物も多く（例えば，マツ，モミ，ツガ，スギ，チャ，ホウノキ，ユリノキ，エノキ，クリ，カシ，クマシデ，クルミ，ヤマモモ等）、これらの植物における「さし木」に際しては、ルートン（成分：１−ナフチルアセトアミド）やオキシベロン（成分：インドール酪酸）等のオーキシン系の発根誘導剤を用いることが必須となっている。
【０００３】
【発明が解決すべき課題】
オーキシン系の発根誘導剤を用いても、上に列挙した植物の発根はなお困難である場合が多い。そのため、必然的にその使用量が多くなり、クリ等のように多量の発根誘導剤を使用することにより、環境汚染を惹き起こすことが懸念される場合もある。また、発根剤を使用する際に、硝酸銀，過マンガン酸カリウム，石灰水，エタノール等による前処理が必要である場合が多く、このことも発根剤の使用を繁雑にする一因となっている点は否めない。
そこで、本発明が解決すべき課題は、既存の発根誘導物質に比べて発根作用に優れ、かつ発根を誘導可能な植物が幅広い新規の発根誘導物質を見出し、この発根誘導物質を有効成分とする発根誘導剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた。その結果、ブプレウルム属（Bupleurum ）に属するミシマサイコ（Bupleurum  falcatum  L.）の根から抽出されるその３位にラクトン環を有するインドール誘導体に強力な発根誘導活性が認められ、これを有効成分とすることで所望の発根誘導剤を提供可能であることを見出し本発明を完成した。
なお、本発明は、上記インドール誘導体を製造する上での中間体である、その３位にヒドロキシアルキル基を有するインドール誘導体をも提供するものである。
【０００５】
すなわち、本発明者は、第１に、下記式（Ｉ）で表されるインドール誘導体を提供する発明である。なお、このインドール誘導体（Ｉ）は、下記式（Ｉ）におけるＲが、エチレン基であることが好ましい。
【化４】
0003943661.tif 000002
（式中、Ｒは、炭素数が２以上４以下のアルキレン基を表す）。
【０００６】
本発明は、第２に、下記式（II）で表されるインドール誘導体を提供する発明である。なお、このインドール誘導体（II）は、下記式（II）におけるＲが、エチレン基であることが好ましい。
【化５】
0003943661.tif 000003
（式中、Ｒは存在しないか、又は炭素数が１以上４以下のアルキレン基を表す）。
【０００７】
本発明は、第３に、下記式（Ｉ）で表されるインドール誘導体：
【化６】
0003943661.tif 000004
（式中、Ｒは存在しないか、又は炭素数が１以上４以下のアルキレン基を表す）。
を有効成分とする発根誘導剤と、上記のインドール誘導体（II）を有効成分とする発根誘導剤を提供する発明である。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施の形態について説明する。
Ａ．本発明インドール誘導体について
本発明インドール誘導体（Ｉ）及び（II）において、炭素数が１以上４以下のアルカン鎖の両端の炭化水素から１個ずつの遊離原子のある２価基である「アルキレン基」Ｒとしては、メチレン基，エチレン基，トリメチレン基，テトラメチレン基を例示できるが、発根誘導活性の強度等を考慮すると、このアルキレン基Ｒは、エチレン基であることが好ましい。
なお、前記のように、このＲが存在しない場合のインドール誘導体（Ｉ）及び（II）も、本発明に関わるインドール誘導体の範囲に含まれる〔以下、このような態様の本発明インドール誘導体（Ｉ）及び（II）を、便宜上「アルキレンの炭素数は０である（Ｒ＝０）」と扱うこともある。〕。
【０００９】
少なくとも、アルキレン基Ｒがエチレン基である場合とアルキレン基Ｒの炭素数が０である場合の、本発明インドール誘導体（Ｉ）及び（II）（これらのインドール誘導体を「本発明インドール誘導体」と総称することもある）は、ブプレウルム属（Bupleurum ）に属する植物、特にミシマサイコ（Bupleurum  falcatum  L.）の根部を原材料として生産することができる。
すなわち、このブプレウルム属に属する植物の根を、▲１▼アルキレン基の炭素数が０である本発明インドール誘導体はインドール酢酸（ＩＡＡ）を，▲２▼Ｒがエチレン基である本発明インドール誘導体はインドール酪酸（ＩＢＡ）を、含む培養培地中で培養し、その培養物に対して有機溶媒抽出、例えばクロロホルム抽出，酢酸エチル抽出，ブタノール抽出等の通常行われる有機溶媒抽出等を行い、有機層を留去することによって粗目的物を得ることができる。
【００１０】
これを洗浄・濃縮後、ＯＤＳ（オクタデシルシラン）等の逆相分配カラムクロマトグラフィー用のカラムを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にかけて、移動層にＴＦＡ等で強酸性にした溶媒を用いて分離精製することにより、所望のアルキレン基Ｒの炭素数が０であるか，又は同Ｒがエチレン基である本発明インドール誘導体（II）を得ることができる。また、この本発明インドール誘導体（II）をエタノールやメタノール等の極性溶媒に溶解して放置することにより、それぞれの本発明インドール誘導体（Ｉ）を得ることができる。
また、移動層において上記のように強酸性の溶媒を用いなければ、本発明インドール誘導体（Ｉ）をそれぞれ容易に得ることができる。
【００１１】
なお、必要に応じて通常公知の他の分離手段、例えば限外濾過，ゲル濾過クロマトグラフィー等を組み合わせて用いることも勿論可能である。
また、本発明インドール誘導体は、化学的に合成することも可能である。
【００１２】
すなわち、例えば▲１▼インドールに塩化ホスホリルの存在下、Ｎ，Ｎ'-ジメチルホルムアミドを反応させること等により得られる、インドール−３−カルボキシアルデヒドとハロエステルとを亜鉛の存在下反応させることによって、側鎖１' 位に水酸基を有するインドールカルボン酸エステル誘導体を経て、所望の本発明インドール誘導体（Ｉ）を製造し、さらにこの本発明インドール誘導体（Ｉ）を三フッ化ホウ素等で酸性化することで、ラクトン環を形成させ、本発明インドール誘導体（II）を得ることも可能である。また、▲２▼インドールカルボン酸を、tert- ブトキシドカリウム等の塩基存在下で直接酸素酸化することにより、側鎖１' 位に水酸基を有するインドールカルボン酸塩誘導体を経て、所望の本発明インドール誘導体（Ｉ）を製造し、さらにこの本発明インドール誘導体（Ｉ）を三フッ化ホウ素等で酸性化することで、ラクトン環を形成させ、本発明インドール誘導体  （II）を得ることも可能である。
【００１３】
これら▲１▼及び▲２▼の反応工程図を下記に示す。
【化５】
0003943661.tif 000005
【００１４】
本発明インドール誘導体（Ｉ）と（II）は、互いに可逆的に変換し得る物質であり、本発明インドール誘導体（Ｉ）を酸性条件下に置くと、３位の側鎖がラクトン環を形成して本発明インドール誘導体（II）に変換し、逆に本発明インドール誘導体（II）を中性又は塩基性条件下に置くと、３位のラクトン環が開環して本発明インドール誘導体（Ｉ）に変換し得る。
これらの本発明インドール誘導体（Ｉ）と（II）は共に、優れた発根誘導活性を有する。
【００１５】
Ｂ．本発明発根誘導剤について
本発明発根誘導剤は、発根誘導活性が認められる本発明インドール誘導体
（Ｉ）及び／又は（II）を有効成分として含んでなる発根誘導剤である。
【００１６】
本発明インドール誘導体をほぼそのまま本発明発根誘導剤として用いることも、植物に適用可能な所望の剤型、例えば液剤，固形剤，粉剤，乳剤等として用いることも可能であるが、何れの剤型においても、本発明インドール誘導体が安定であることが好ましい〔少なくとも本発明インドール誘導体（II）が直接接触する要素は酸性（ｐＨ１〜ｐＨ５，好ましくはｐＨ２〜ｐＨ３）であるのが好ましい。〕。
【００１７】
このように本発明インドール誘導体の安定性が担保される限りにおいて、所望の剤型に応じた通常公知の担体成分や製剤用補助剤等を適宜配合することができる。
すなわち、担体成分としては、タルク，クレー，バーミキュライト，珪藻土，カオリン，炭酸カルシウム，水酸化カルシウム，白土，シリカゲル等の無機質や小麦粉，澱粉等の固体担体；水、キシレン等の芳香族炭化水素類、エタノール，エチレングリコール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、ジオキサン，テトラヒドロフラン等のエーテル類、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル等の液体担体を用いることができる。また、ｐＨを一定に保つための、種々の緩衝液を用いることもできる。
【００１８】
さらに、製剤用補助剤としては、例えばアルキル硫酸エステル類，アルキルスルホン酸塩，アルキルアリールスルホン酸塩，ジアルキルスルホコハク酸等の陰イオン性界面活性剤、高級脂肪族アミンの塩類等の陽イオン性界面活性剤、ポリオキシエチレングリコールアルキルエーテル，ポリオキシエチレングリコールアシルエステル，ポリオキシエチレングリコール多価アルコールアシルエステル，セルロース誘導体等の非イオン性界面活性剤、ゼラチン，カゼイン，アラビアゴム等の増粘剤、増量剤、結合剤等を適宜配合することができる。
【００１９】
さらに、必要に応じて、植物生長調節剤、例えば安息香酸，ニコチン酸，ニコチン酸アミド，ピペコリン酸等を本発明発根誘導剤の所期の効果を損なわない範囲で配合することができる。
【００２０】
本発明発根誘導剤は、その剤型に応じた方法で種々の植物に用いられる。例えば、粉剤を発根を誘導する植物の栄養器官の切り口につけたり、液剤をその植物の切り口に浸漬して用いることができる。
【００２１】
本発明発根誘導剤を適用可能な植物の種類は特に限定されず、双子葉植物、単子葉植物の両者に対して本発明発根誘導剤は有効である。
本発明発根誘導剤は、上記の既存の発根誘導剤が無効である植物に対して投与することによって、かかる植物の発根を誘導することができる。
【００２２】
【実施例】
以下、実施例等により本発明をさらに具体的に記載するが、これらの実施例等に本発明の技術的範囲が限定されるものではない。
【００２３】
〔製造例〕
（１）Ｒがエチレン基である本発明インドール誘導体の製造
細切りしたミシマサイコ（Bupleurum  falcatum  L.）の根８g を、無菌処理したＢ５培地〔KNO3(2500mg/L),(NH4)2SO4(134mg/L),NH2PO4・H2O(150mg/L),CaCl2・2H2O(150mg/L),MgSO4・7H2O(185mg/L),FeSO4・7H2O(27.8mg/L),Na2EDTA(37.3mg/L),MnSO4・H2O(10mg/L),ZnSO4・7H2O(2.0mg/L),H3BO3(3.0mg/L),CuSO4・5H2O(0.025mg/L),Na2MoO2・2H2O(0.25 mg/L),KI(0.75 mg/L),CoCl2・6H2O(0.025mg/L),ミオイノシトール(100mg/L),チアミン塩酸(10mg/L), ピリドキシン塩酸(1mg/L),ニコチン酸(1mg/L) ：１L フラスコ３０本に各々４００ml〕にインドール酪酸（ＩＢＡ）を８ppm 添加して、２３℃で２４時間培養を行った。
培養終了後、ミシマサイコの根を培地から濾取して取り除き、得られた濾液をクロロホルム抽出した。
有機層を減圧下で溶媒を留去して、粗目的物を得た。
【００２４】
次いで、高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫ  Ｃ１８，10mmφ×250 mm，溶媒：70％water, 30 ％ acetonitrile(0.1 ％TFA を含む),  検出：ＵＶ 214nm〕で分離精製した。その結果、１１．５分程で本発明インドール誘導体（II）のピークが現れたので、それを分取した。
この結果、本発明インドール誘導体（II）を１２mg得た（アルキレン基Ｒはエチレン基である。）。
さらに、得られたこの本発明インドール誘導体（II）を２mgとり、これをメタノール２mlに溶解し、室温で７日間攪拌した後、エバポレーターでメタノールを留去した。
この結果、アルキレン基Ｒがエチレン基である本発明インドール誘導体（Ｉ）を得た。
【００２５】
上記製造例において得られた、本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕の構造について解析を行った。
すなわち、この本発明インドール誘導体（II）は、その赤外線吸収スペクトル（ＩＲスペクトル）から水酸基（3405cm-1）及び５員環ラクトン(1750 cm-1) が認められ、1Ｈ核磁気共鳴スペクトル〔1ＨＮＭＲ（400MHz,CD3OD, δ)]及び13Ｃ核磁気共鳴スペクトル〔13ＣＮＭＲ（100MHz,CD3OD, δc)] において、１個の一級水酸基〔δ5.89(dd,J ＝7.0,8.3),δc79.2]、２個のメチレン側鎖〔δ2.60,2.75(both m),2.73(m) ，δc 30.4,29.5 〕、カルボニル（δc 180.3 ）及びインドール環〔[δ 7.04(dd,J＝7.0,7.8)，δc 119.9]，[δ 7.14(dd,J＝8.3,7.0)，δc 122.5]，[δ 7.33(s)，δc 124.2]，[δ 7.37(d,J＝7.3)，δc 112.6]，[δ 7.59(d,J＝7.8)，δc 120.1]，δc 115.6,127.2,138.5 〕に基づく各シグナルが認められた。また、インドール酪酸（ＩＢＡ）とのＮＭＲデータの比較検討や、２次元ＮＭＲスペクトル（ＨＨＣＯＳＹ，ＨＳＱＣ，ＨＭＢＣ）の解析結果により、ラクトン環を有する化学構造が推定された。さらに、極性溶媒中に放置したことにより得られた開環体〔本発明インドール誘導体（Ｉ）〕とのＮＭＲデータ（後述する）の比較検討により、１' 位のプロトンシグナルが〔δ 4.53(t-like,J＝6.3)〕から，δ5.89に高磁場シフトしていることや、上記開環体〔本発明インドール誘導体（Ｉ）〕を酸性溶媒中に分離精製することにより再び上記と同じデータのインドール誘導体が得られることから、本発明インドール誘導体（Ｉ）及び（II）〔Ｒ：エチレン基〕の化学構造が上述した構造であることが支持された。
【００２６】
また、この本発明インドール誘導体（II）のpos.ＦＡＢ-ＭＳスペクトルにおいて、m/z 202 に(M＋H)+ に基づく擬似分子イオンピークが認められ、またさらにneg.ＦＡＢ-ＭＳスペクトルにおいても上述の構造を支持する結果[m/z 200(M-H) - ] が得られたことから、この本発明インドール誘導体（II）の構造は上述の通りであることが明確になった。
【００２７】
また、上記製造例において得られた、本発明インドール誘導体（Ｉ）〔Ｒ：エチレン基〕の構造について解析を行った。
すなわち、この本発明インドール誘導体（Ｉ）は、その赤外線スペクトル（ＩＲスペクトル）から、水酸基（3400,3200 cm-1) 並びにカルボニル(1720 cm-1) の存在が認められた。また、1Ｈ核磁気共鳴スペクトル〔1ＨＮＭＲ（400MHz,CD3OD, δ)]及び13Ｃ核磁気共鳴スペクトル〔13ＣＮＭＲ（100MHz,CD3OD, δc)] において、１個の一級水酸基〔δ4.53(t-like,J ＝6.3),δc78.3]、２個のメチレン側鎖〔δ2.31(m),δc31.7,δ2.13,2.31(both m),δc32.5 〕、カルボニル（δc 177.3 ）並びにインドール環〔[δ 6.99(dd,J＝7.0,8.0)，δc 120.7]，[δ 7.09(dd,J＝7.0,8.5)，δc 123.4]，[δ 7.17(s)，δc 124.2]，[δ 7.34(d,J＝8.5)，δc 113.2]，[δ 7.65(d,J＝8.0)，δc 121.2]，δc 115.6,127.2,138.6 〕に基づく各シグナルが認められた。
【００２８】
また、ＩＢＡとのＮＭＲデータの比較検討や、２次元ＮＭＲスペクトル（ＨＨＣＯＳＹ，ＨＳＱＣ，ＨＭＢＣ）の解析結果により、ＩＢＡのインドール環側鎖１’位に水酸基が結合した、この本発明インドール誘導体（Ｉ）は上述した構造をとることが明確になった。
【００２９】
（２）Ｒ＝０である本発明インドール誘導体の製造
オートクレーブにかけた、上記Ｂ５培地が４００mlの入った１l フラスコに、濾過により無菌処理された２０００μg/mlのインドール酢酸（ＩＡＡ）を２．６ml添加したものを、５０本用意した。
これらのフラスコに細切りしたミシマサイコの根８g を植え込み、２３℃で２日間振盪培養を行った。培養後、ミシマサイコの根を濾紙で系から除き、培地を酢酸エチルで抽出した。抽出後、酢酸エチルを減圧下で乾固し、乾固物をあらためてメタノールで溶かしてから高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分離精製した。
【００３０】
なお、このＨＰＬＣでの分離条件は、上記の製造例（１）において、インドール誘導体（II）（Ｒはエチレン基）を分離精製したときと同じ条件である。約８．３分に溶出されてくるピークを分取し、減圧下で乾固した。この操作により、約１mgのインドール誘導体（II）（Ｒ＝０）を得ることができた。
このＨＰＬＣで得られたチャートを第２図に示す〔ただし、このチャートは、確認のための分析用カラム（４．５mmΦ×２５０mm）を用いて、１ml/minの流量で溶出したものである。図中のピークIIが、所望するインドール誘導体（II）（Ｒ＝０）に相当するピークである。〕。
【００３１】
〔試験例〕  発根誘導活性の検討
（１）ミシマサイコにおける発根試験
試験方法
３０mlのＢ５培地（基本組成は前述の通り、シュークロース１重量％を含む）を入れ、さらにこれにエタノールに溶かした１０００ppm のＩＢＡ又は上記製造例において製造した本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕を０．２４ml添加した１００mlフラスコを３本ずつ用意した。これらのフラスコにミシマサイコの培養根を０．２g 植え込み、２３℃下で振盪培養をおこなって、その発根の程度を検討した。
【００３２】
試験結果
その結果、振盪培養８日目に本発明インドール誘導体（II）の実験区のうち、２本で発根が観察された。９日目では、ＩＢＡ実験区の全て及び本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕の実験区の残りの１本で発根が認められた。その後も発根数は増え続け、振盪培養２週間目ではいずれの実験区においてもほぼフラスコ全体に渡り同程度に密な発根が確認された。
【００３３】
次に、一般的に発根が困難な植物を用いた例について述べる。従来技術の欄において記載したように、一般に発根が困難な植物の挿し木は、発根剤の従来品を多量に用いたり、硝酸銀等を用いたドラスティックな前処理をすることが普通である。そのために、環境を汚染する等の深刻な問題をもたらしている。
【００３４】
（２）キンモクセイにおける発根試験(1)
キンモクセイの小枝を切取り、１５本ずつ、試験区▲１▼ではシュークロースを含まない上記Ｂ５培地（コントロールとして用いた。以下の実験区は全てＢ５培地に溶かした。），同▲２▼ではＩＢＡ２０μg/ml，同▲３▼ではインドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕２０μg/ml，同▲４▼ではＩＢＡ１０μg/ml＋インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕１０μg/mlの溶液に浸し、３日間，２５℃の暗室に置いた。その後、バーミキュライトに移植して、育成箱で２．５カ月間培養した（１２時間照明，１２時間暗黒のサイクル，２５℃）。
その結果、試験区▲１▼では全て枯れてしまった。同▲２▼では５本だけ枯れずに残り、うち２本が発根した。同▲３▼では１１本が枯れずに残り、うち８本が発根した。同▲４▼では９本が枯れずに残り、うち５本が発根した。
【００３５】
（３）キンモクセイにおける発根試験(2)
コントロールとして、Ｂ５培地に代えて水を用いた以外、実施例２と同じ試験を行った。その結果、試験区▲１▼では全て枯れた。同▲２▼では４本生き残り，そのうち２本が発根した。同▲３▼では１２本が枯れずに残り，試験終了時点で９本が発根していた。同▲４▼では８本が生き残り、４本が発根していた。
【００３６】
（４）クルミにおける発根試験
クルミの小枝を切取り、上記試験例（２）と同じ発根試験を行った。この結果、試験区▲１▼では全て枯れてしまった。同▲２▼でも全て枯れてしまった。同▲３▼では３本だけ枯れずに残り，２本が発根した。同▲４▼では５本が枯れずに残り，うち２本が発根した。
これらの結果により、本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕には、少なくともＩＢＡと同等以上の発根誘導活性がミシマサイコにおいて認められることが明らかになり、さらに従来は挿し木においては発根が困難であるといわれている系においても、本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕は、明らかに発根を誘導，促進することが明らかになった。
よって、本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕の発根誘導成分としての有用性が明らかになり、本発明インドール誘導体（II）を有効成分とした、本発明発根誘導剤の有用性も明らかになった。
【００３７】
（５）本発明インドール誘導体（Ｉ）における発根誘導試験
インドール誘導体（Ｉ）〔Ｒ：エチレン基〕の発根誘導効果を検討するために、上記試験例（２）と同様の〔ただし、インドール誘導体（II）の代わりに、上記製造例（１）において得た本発明インドール誘導体（Ｒ：エチレン基）を用いた〕、キンモクセイに対する試験を行った。この試験においては、試験区▲１▼では１本が生き残ったが、試験終了時点では、まだ発根していなかった。同▲２▼では枯れずに残った４本のうち２本が発根した。同▲３▼では１０本が枯れずに残り、うち６本が発根した。同▲４▼では８本が生き残り，４本が発根した。
【００３８】
よって、本発明インドール誘導体（Ｉ）〔Ｒ：エチレン基〕の発根誘導成分としての有用性が明らかになり、本発明インドール誘導体（Ｉ）を有効成分とした、本発明発根誘導剤の有用性も明らかになった。
【００３９】
（６）本発明インドール誘導体（II）のＩＢＡとの発根作用における干渉試験
本発明インドール誘導体（II）が、発根に際してＩＢＡが作用するうえでも不可欠なものであるか否かを示すために、以下にインドール誘導体（II）に対する抗体を用いた干渉試験を行った。
【００４０】
▲１▼本発明インドール誘導体（II）に対する抗体の製造
まず、上記製造例（１）において得られた、本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕をpoly-L-Lysine （ハプテン）と反応させて、結合させ抗原化した。
免疫動物は、家兎（ヘルシーJW種）を用い、アジュバント（ＦＣＡ）と共に２週間毎に計１０回、この抗原を０．５mgずつ皮内投与した。
免疫終了後、この免疫動物の血清を分離し、この血清から免疫グロブリンを分離して、所望する本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕に対するポリクローナル抗体を、抗血清として得た。なお、免疫動物において、所望する抗体が産生されているか否かの確認は、ＥＬＩＳＡ法により行った。
【００４１】
▲２▼干渉試験
３０mlの上記のＢ５培地（シュークロース１重量％を含む）１００ml三角フラスコに入れ、オートクレーブを用いて滅菌した。これに、エタノールに溶かした１０００μg ／mlのＩＢＡを２４０μl 、又は同量のＩＢＡと上記▲１▼で得たインドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕に対する抗体を含む血清を１２０μl 加えた。各々３本ずつの三角フラスコを用意し、これらのフラスコにミシマサイコの培養根を０．２g 植え込み、２３℃下で振盪培養を行った。適時、培地中のＩＢＡとインドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕の含量を測定し、２週間後に培養を止め、発根の状態を確認した。
その結果、第３図に示したように〔第３図（イ）が抗体無添加の系であり，同（ロ）が抗体を添加した系である。それぞれ、縦軸はインドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕又はＩＢＡの量を示した図面である。〕、ＩＢＡで培養すると培養液中にインドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕が検出され、これはＩＢＡから、インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕に変換したものの一部が培地中に漏れてきたものと推測された〔第３図（イ）〕。
【００４２】
一方、インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕に対する抗体を同時に添加した試験区のフラスコでは、インドール誘導体（II）が全く検出されなかった。また、この系ではＩＢＡの消費が著しく遅くなった〔第３図（ロ）〕。
さらに、２週間後の発根の様子を見ると、コントロール（ＩＢＡのみ添加）では、正常に発根が認められたのに対し、インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕に対する抗体を同時に添加した試験区では、ほとんど発根が認められなかった。
このように、すくなくともミシマサイコにおいては、ＩＢＡがその発根において作用する際に、ＩＢＡがインドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕に変換されることが本質的に重要であることが強く示唆された。
【００４３】
【発明の効果】
本発明により、強力な発根誘導活性を有するインドール誘導体が得られ、かつこの強力な発根誘導活性を有するインドール誘導体を有効成分とする発根誘導剤が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ：エチレン基〕についての高速液体クロマトグラフィーのチャートである。
【図２】本発明インドール誘導体（II）〔Ｒ＝０〕についての高速液体クロマトグラフィーのチャートである。
【図３】インドール誘導体に対する抗体を添加した系における、系中のインドール誘導体とＩＢＡの濃度における挙動を示した図面である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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