(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体、その立体化学異性体または薬学的に許容されるその塩。
化学式1
【化１】
0003999515.tif 000117
上記式で、
R1は、H、ハロゲン、CF3、NO2、CN、ORa、-O(C=O)Ra、COORa、NH2、 NHS(O)mRa、-NH(C=O)RaまたはS(O)mRaを表わし、この時Raは、C1〜C4の直鎖または枝分れしたアルキルまたはアリールを表わし、 mは0〜2の整数であり;
R2は、C1〜C4の直鎖または枝分れしたアルキルを表わし;
R3は、CH2ORa
【化２】
0003999515.tif 000118
または
【化３】
0003999515.tif 000119
を表わし、
この時Raは、上記で定義したのと同じであり、Rb及びRcは、各々独立的にC1〜C4の直鎖または側鎖アルキルを表わし、Zは、C1〜C5の直鎖または側鎖アルキルを表わし;
R4は、OH、H、ハロゲン、ONO2または-O(C=O)Raを表わし、この時Raは、上記で定義したのと同じであり;
R5及びR6は、各々独立的にH、ハロゲン、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキル、 ORa、CX3、NO2、CO2Ra、-(C=O)Ra またはSO3Raを表わし、この時Raは、上記で定義したのと同じであり；そしてXは、ハロゲンであり;
nは、0〜2の整数である。
【請求項２】
R1は、NO2、CN、NH2またはS(O)mRaを表わし、この時 Raは、C1〜C2の直鎖または枝分れしたアルキルまたはアリールを表わし、mは、0〜2の整数であり;
R2はCH3を表わし;
R3は、
【化４】
0003999515.tif 000120
または、
【化５】
0003999515.tif 000121
を表わし、
この時Rb及びRcは、各々独立的にC1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキルを表わし、Zは、C1〜C5の直鎖または枝分れしたアルキルを表わし;
R4は、OH、Hまたは-O(C=O)Raを表わし、この時Raは、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキルを表わし;
R5及びR6は、各々独立的にH、ハロゲン、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキル、 ORa、CX3またはNO2を表わし、この時Raは、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキルを表わし、Xはハロゲンを表わし;
nは、0〜2の整数である、ことを特徴とする請求項1に記載のベンゾピラニルグアニジン誘導体、その立体化学異性体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項３】
化学式1の化合物は、
1) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
2) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
3) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
4) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
5) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-ニトロフェニル)グアニジン;
6) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
7) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
8) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
9) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
10) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
11) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
12) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
13) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
14) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
15) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
16) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
17) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
18) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メチルフェニル)グアニジン;
19) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メチルフェニル)グアニジン;
20) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
21) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
22) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
23) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
24) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
25) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
26) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
27) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
30) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
31) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
32) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロフェニル)グアニジン;
33) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロフェニル)グアニジン;
34) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
35) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
36) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロベンジル)グアニジン;
37) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロベンジル)グアニジン;
38) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-アセトキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
39) (2S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
40) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
41) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アセトキシアミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
42) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルアミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
43) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
44) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
45) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
46) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
47) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ブロモ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
48) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジン;
49) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジン;
50) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
51) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
52) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-ニトロベンジル)グアニジン;
53) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルベンジル)グアニジン;
54) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルベンジル)グアニジン;
55) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
56) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
57) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
58) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
59) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
60) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
61) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
62) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
63) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
64) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
65) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
66) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
67) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
68) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
69) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
70) (3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
71) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン; または
72) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン
であることを特徴とする請求項1に記載の、ベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項４】
(2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンまたは(2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンであるベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩。
【請求項５】
下記反応式1のように、アミノアルコール化合物(III )とチオ尿素化合物(IV)を縮合剤存在下で反応させて化合物(I')を得ることを特徴とする、請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法:
反応式 1
【化６】
0003999515.tif 000122
(上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6 及びnは、前に定義したのと同じである)。
【請求項６】
縮合剤は、1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-3-エチルカルボジイミドヒドロクロライドである水溶性カルボジイミド縮合剤及びN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミドから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項5に記載の請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法。
【請求項７】
反応溶媒は、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項5に記載の請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法。
【請求項８】
1) アミノアルコール化合物(III )とジフェニルシアノカーボンイミデート(Ｘ)を塩基存在下で反応させ、化合物(V)を製造する段階(段階1); 及び
2) 化合物(V)をアミン化合物(VI)と反応させ、化合物(I')を製造する段階(段階2);を含んで成ることを特徴とする請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法:
反応式 2
【化７】
0003999515.tif 000123
(上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6 及びnは、前で定義したのと同じである)。
【請求項９】
段階1で塩基は、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、1,8-ジアザビサイクロ（登録商標）[5.4.0]ウンデク-7-エン、4-(ジメチルアミノ)ピリジンを含む第三アミンであることを特徴とする、請求項8に記載の請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法。
【請求項１０】
段階1または段階2の反応溶媒は、エタノール、イソプロパノールを含むアルコール系溶媒、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)及びクロロホルムから成るグループから選択されることを特徴とする、請求項7に記載の請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法。
【請求項１１】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む、脂質過酸化阻害用薬学的組成物。
【請求項１２】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む、NO生成阻害用薬学的組成物。
【請求項１３】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む、虚血−再灌流による脳損傷保護用薬学的組成物。
【請求項１４】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む、新生血管生成を抑制することにより癌または糖尿性網膜症を予防または治療するための薬学的組成物。
【請求項１５】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分に含む、脂質過酸化及び反応性酸素物質を抑制することによりアルツハイマー病及び老人性痴呆症を含む退行性神経疾患またはアテローム硬化症を予防または治療するための薬学的組成物。
【請求項１６】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分に含む、神経細胞を保護することにより新生児低酸素症、緑内障、糖尿性神経症、脳外傷を予防または治療するための薬学的組成物。
【請求項１７】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む、細胞増殖を抑制することにより冠状血管再狭窄を予防または治療するための薬学的組成物。
【請求項１８】
請求項1又は4のベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分に含む、心臓、腎臓、肝臓、組織を含む、保存器官の保護または心血管系の大手術時における器官の保護のための薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
１．発明の分野
本発明は、下記化学式1で表示される新規のベンゾピラニルグアニジン誘導体に関するものである。また、本発明は、新規の上記化合物の製造方法および上記化合物を一つ以上有効成分に含む薬学的組成物に関するものである。
【０００２】
本発明は、また上記ベンゾピラニルグアニジン誘導体の薬学的用途に関するものである。特に、本発明は、心臓保護剤、神経細胞保護剤、脳損傷保護剤または保管用臓器保護剤に薬学的に有用であり、NO生成阻害剤、抗脂質過酸化剤、新生血管生成抑制剤または血管再狭窄(restenosis)抑制剤として使用できる。
【０００３】
化学式 1
【０００４】
【化８】
0003999515.tif 000002
【０００５】
上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6、n 及び*は、明細書内に記載したのと同じである。
２．従来技術の説明
虚血性心疾患は、心筋の酸素要求量と酸素供給量の均衡状態がこわれて供給量が要求量に比べて顕著に不足する時、心筋虚血(myocardial ischemia)の結果として現れる。大部分の場合、冠状動脈疾患が虚血性心疾患を起こす主原因である。冠状動脈の内径が狭くなると充分な量の血液が供給できなくなり、酸素要求量を充足させられないで狭心症、心筋梗塞、急性心臓痲痺、不整脈等を招来することになる [G.J. Grover, Can. J. Physiol. 75, 309(1997); G.D. Lopaschuk et al., Science & Medicine 42 (1997)]。また、虚血性心血管疾患は、冠状動脈疾患の他にその他の複合的な要因によっても発病する為、冠状動脈成形術などの手術療法だけではなく、他の薬物療法も必要である。虚血性心血管疾患の治療の為には、抗血栓剤、動脈硬化治療剤等の薬物が使用され、代表的な薬物には、ベータ遮断剤、硝酸塩(nitrate)、ニフェジピン等のカルシウム拮抗剤、血栓溶解剤、アスピリン、アンジオテンシン変換酵素（ACE)阻害剤等が使用されている。
【０００６】
一方、アトワール等によって、下記化学式2の構造式を持つピラニルシアノグアニジン系化合物(BMS-180448)が既存のカリウム通路開放剤とは違って心臓に存在するKATP (ATP-感受性カリウムチャネル)に選択的に作用することが報告されている [K.S. Atwal et al., J. Med. Chem. 36, 3971 (1993); K.S. Atwal et al., J. Med. Chem. 38, 1966 (1995)]。この化合物は、血管を弛緩させる効果が比較的に少なく血圧を減少させずに虚血心臓を保護するので、新しい虚血心臓疾患治療剤としての開発可能性を提示した。
【０００７】
化学式 2
【０００８】
【化９】
0003999515.tif 000003
【０００９】
心臓痲痺等によって脳に行く全血流が一時的に遮断されたり、血栓等によって一部領域で血流が詰まる等の脳虚血が発生すれば、脳が損傷される[M.D. Ginsberg, Neuroscientist 1, 95 (1995)]。また、血栓が消失して再潅流が起きることによっても相当な領域の脳が損傷される。脳虚血-再潅流による脳損傷を防止して治療する為には、脳虚血-再潅流による病的過程を遮断して虚血部位が損傷されないようにして損傷された部位の機能を正常化することができなければならない。現在このような目的で興奮性アミノ酸拮抗剤(excitatory amino acid antagonist)、抗酸化剤等の神経保護剤等を使用している。
【００１０】
神経細胞の損傷または死滅は、脳卒中、脳外傷、アルツハイマー病、パーキンソン病、新生児低酸素症、緑内障、糖尿性神経症にいたる色々な神経系疾患の主原因として知られている[G.J. Zoppo et al., Drugs 54, 9 (1997); I. Sziraki et al., Neurosci. 85, 1101 (1998)]。神経細胞を損傷させる代表的な要因には、神経細胞内鉄 濃度の増加、活性酸素の増加、酸化物質の増加等をあげられる[M.P. Mattson et al., Methods Cell Biol. 46, 187 (1995); Y. Goodman et al., Brain Res. 706, 328 (1996)]。
【００１１】
神経細胞内に鉄濃度が増加するとNO等の酸素遊離基(oxygen free radical)が形成される。酸素遊離基が過度に多く生成されるとそれによって脂質過酸化が促進され、酸化物質が増加して細胞内に蓄積される。細胞内に蓄積された酸化物質は、上記のような老化及び痴呆等の退行性神経系疾患の他に関節炎等の炎症性疾患、動脈硬化症、心筋梗塞症等を起こすだけではなく、虚血性疾患において再潅流時組織が損傷されたり細菌に感染して臓器が内毒素によって損傷される等の各種急性慢性組織または臓器の損傷を起こすものと知られている。
【００１２】
したがって、神経細胞内鉄濃度の増加による神経細胞の損傷を防止して脂質過酸化を防止し内毒素などによるNOの生成及び活性酸素を抑制する物質を開発することによって、神経細胞の損傷または死滅に起因した色々な疾病を予防または治療できる。現在抗酸化物質が神経細胞内鉄による神経細胞の損傷と死滅を緩和させるという結果が報告され、酸化的ストレスによる神経細胞の損傷を防ぐ薬物を開発しようとする研究が進行中である [Y. Zhang et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 378 (1993)]。
【００１３】
分娩時酸素欠乏によって発生する胎児の低酸素性脳損傷は、エネルギー生成減少、酸素遊離ラジカルによる細胞膜損傷、興奮性神経伝達物質の遊離及びこれらと連関した細胞内カルシウムと亜鉛の変化等が相互作用して招来されると報告されている。新生児低酸素症は、ひどい場合には死亡率が高く(約1/3)、運動障害、学習能力障害、癇疾、異緊張症 (dystonia)、精神肢体障害、痙攣等の一生を通じての深刻な障害を起こし得るため、全世界的に深刻な疾患の一つとなっている[C. F. Loid et. al.  Physiology and Behavior 68; 263-269 (2000)]。これによって抗酸化酵素、アルロプリノール(allopurinol)、ビタミンC及びE、遊離ラジカル除去剤、興奮性神経物質の抑制剤、ニモジピン(nimodipine)やフルナリジン(flunarizine)等のカルシウム通路遮断剤、NO生成抑制剤、高血糖及び低体温療法等による脳保護効果に対する研究が行なわれているが、実際の臨床では行われずにいる。臨床での実際適用のためには、さらに多くの研究が必要である。
【００１４】
眼神経の変化と共に眼神経の損傷によって発生する緑内障は、失明の最も大きな原因の一つである。人の眼神経は、約百万個の軸索で構成されていて、大部分は、神経節、残りは内核層の内側に存在する。緑内障に現れる眼神経の掘削現象(excavated appearance)は、神経死滅及び神経節細胞と軸索の損失から発生するものと考えられる[N.N. Osborne, et. Al. Survey of Ophthalmology, 43; suppl. S102-S128 (1999)]。神経保護剤は、緑内障の網膜神経、特に神経節細胞の死滅を直間接的に保護できる。したがって、NMDA(N-Acetyl aspartate)受容体の拮抗剤、ベータ遮断剤、カルシウム拮抗剤、抗酸化剤等が虚血によって誘発される神経細胞の死滅を保護するのに有用である。
【００１５】
また、糖尿性神経症を起こす原因とメカニズムもまだ確実に糾明されていないが、二つの仮説が提示されている。一つは、異常の代謝で、もう一つは、周辺神経での血液流れが円滑でないことである[K. Naka et Al. Diabetes  Research and Clinical Practice, 30; 153-162 (1995)]。現在脂肪酸の代謝及び神経再生を促進させるアセチル-L-カルニチン(Acetyl-L-Carnitine, ALC)、向神経性因子 (Neurotrophic factor)を遊離させるプロサプチド(Prosaptide)等が各々臨床進行中であり、最近ではNMDA(N-methyl-D-Aspartate)受容体を調節して血管性痴呆に良い効果が見られるメマンチン(Memantine)が糖尿性神経症の臨床試験を計画していて、多様なメカニズムの神経保護剤が糖尿性神経症の治療剤として開発される可能性が高い。
【００１６】
一方、人体疾患中で癌が占める比率は、漸次増加している趨勢である。新生血管形成(angiogenesis)で知られている微細な血管の形成が固形癌増殖と転移活性の核心過程として認識されている[Folkma, J. et al., (1992) J. Biol. Chem. 267: 10931-10934]。新生血管形成は、血管新生誘導因子と抑制剤の均衡によって調節されるが、このような因子が不均衡をなす時、新生血管が多量形成される。血管形成は、多様な生理的現象、すなわち胚発生(embryonic development)、傷の治癒、慢性炎症、血管腫(hemangiomas)、糖尿病性網膜症(diabetic retinopathy)、リューマチ性関節炎 (rheumatoid arthritis)、乾癬(psoriasis)、AIDS合併症及び悪性腫瘍の成長、転移等と密接な関連がある[Forkman, J., Klagsbrun. M. (1987) Science 235: 442-447]。血管形成は、血管内皮細胞の移動と増殖、血管細胞への分化によりなされる一連の作用を含み、このような血管形成は癌の成長と転移において重要な先行過程として知られている。つまり、癌の進行性成長は、宿主細胞からの血管形成を必要とするため、腫瘍から由来した血管形成促進因子が血管内皮細胞を刺激して腫瘍かたまりに新しい血管形成を誘発させる。その次に悪性腫瘍周辺に多く形成された血管によって癌細胞の転移も容易に起こる。したがってこのような新生血管形成の抑制は、癌の成長及び転移の抑制を誘導でき、新生血管形成誘導因子を発見してこの作用メカニズムを明らかにし新生血管形成を抑制する因子を発見することは、抗癌剤開発の為の重要な研究として注目されている。
【００１７】
現在まで知られている血管形成抑制因子としては、プロスタミン(prostamine)、腫瘍壊死因子(tumor necrosis factor)のような蛋白質、血管が無い組織の軟骨から由来した因子、止血性ステロイド(angiostatic steroids)と呼ばれるコルチゾン (cortisone)と幾らかの種類のステロイド誘導体があり、ハイドロコルチゾン(hydrocortisone)の場合は、ヘパリン(heparin)と一緒に処理する時、抗血管形成効果を現わすものと知られている[Lee, A.  et al., (1983) Science 221: 1185-1187; Crum, R. et al., (1985) Science 230: 1375-1378]。しかし、このような物質は、細胞毒性の為に効果的な癌治療剤として使用するには難しさがある。
【００１８】
血管の内膜(intima)に沈着物(placque)が増加することによって血管内径が狭くなり発生する冠状血管狭窄症患者に対して現在外科的施術(PCI, percutaneous coronary intervention)が95%以上の成功率を見せているが、施術を受けた患者の20〜50%に施術後6個月以内に血管内径が再び狭くなる再狭窄(restenosis)が発生して問題提起されている[Bult, H, (2000) Tips 21 279]。再狭窄は、その原因が確実に糾明されていないが、血管の内膜の損傷による血栓の生成、平滑筋細胞の移動及び増殖が再狭窄を起こす主要細胞メカニズムであると知られていて、動脈硬化とは異り血漿脂質の濃度や組成に比例するものではない。
【００１９】
再狭窄症の治療は、まだ正確な発病の原因が糾明されておらず適当な動物疾患モデルが確立されていないため、難しさがあるが、グリコプロテイン(glycoprotein) IIb/IIIa 拮抗剤、抗酸化剤プロブコール(probucol)等が臨床で肯定的な結果を示している[Bult, H, (2000) Tips 21 279]。また、再狭窄は、細胞増殖が速く起こり発生するため細胞増殖を抑制する薬物の開発も推進されている。
【００２０】
そこで、本発明者は、上記のような薬理効果を示す化合物の開発に努力して、上記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体を合成して、これらの化合物が虚血性心血管疾患に対する心臓保護効果が優秀なだけではなく、脳虚血-再潅流 及び低酸素性脳損傷を防止し、神経細胞保護作用、NO生成阻害作用、脂質過酸化抑制作用及び活性酸素生成抑制作用の抗酸化作用、虚血網膜に対する保護作用、糖尿性神経症に対する保護作用、新生血管形成抑制作用、細胞増殖抑制作用等多様な薬理効果を示すことによって心筋梗塞、狭心症、心不全症の心血管系疾患; 脳卒中; 神経細胞の損傷または死滅による新生児低酸素症、緑内障、糖尿性神経症、脳外傷の神経細胞の損傷と関連した疾患; 退行性神経疾患及び動脈硬化の酸素ラジカルと関連した疾患; 癌、糖尿性網膜症の新生血管形成に関連した疾患; 血管再狭窄(restenosis)等、色々な疾患の予防及び治療剤として、また心臓、腎臓、肝臓、組織の保管及び心血管系手術時、臓器(organs)の保護剤に使用できることを明らかにすることによって本発明を完成した。
発明の要旨
本発明の目的は、上記化学式1で表示される新しいベンゾピラニルグアニジン誘導体及び薬学的に許容されるその塩を提供することである。
【００２１】
また本発明の目的は、上記化学式1で表示される新しいベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法を提供することである。
【００２２】
また本発明の目的は、上記化学式1で表示される新しいベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む心臓保護剤、神経細胞保護剤、脳損傷保護剤、保管用及び心血管系手術時の臓器保護剤、NO生成阻害剤、及び脂質過酸化阻害剤等の抗酸化剤、新生血管生成抑制剤または血管再狭窄(restenosis)抑制剤用薬学的組成物を提供することである。
【００２３】
上記目的を達成する為に、本発明では、下記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体及び薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００２４】
化学式 １
【００２５】
【化１０】
0003999515.tif 000004
【００２６】
上記式で、
R1はH、ハロゲン、CF3、NO2、CN、ORa、-O(C=O)Ra、COORa、NH2、 NHS(O)mRa、-NH(C=O)RaまたはS(O)mRaで、この時RaはC1〜C4の直鎖または枝分れしたアルキルまたはアリールで mは0〜2の整数で;
R2は、C1〜C4の直鎖または枝分れしたアルキルで;
R3はCH2ORa、
【００２７】
【化１１】
0003999515.tif 000005
【００２８】
または
【００２９】
【化１２】
0003999515.tif 000006
【００３０】
であり、この時Raは上記で定義した
と同じで、Rb及びRcは各々独立的にC1〜C4の直鎖または枝分れしたアルキルで、ZはC1〜C5の直鎖または枝分れしたアルキルで;
R4はOH、H、ハロゲン、ONO2または-O(C=O)Raで、この時Raは上記で定義したのと同じで;
R5及びR6は各々独立的にH、ハロゲン、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキル、 ORa、CX3、NO2、CO2Ra、-(C=O)Ra またはSO3Raで、この時Raは上記で定義したのと同じでXはハロゲンで;
nは、0〜2の整数である。
【００３１】
また、*は、キラル中心を示す。
【００３２】
さらに望ましくは、上記化学式1の化合物で
R1は、NO2、CN、NH2またはS(O)mRaで、この時 Raは、C1〜C2の直鎖または枝分れしたアルキルまたはアリールで、mは0〜2の整数で;
R2は、CH3で;
R3は、
【００３３】
【化１３】
0003999515.tif 000007
【００３４】
または
【００３５】
【化１４】
0003999515.tif 000008
【００３６】
で、この時Rb及びRcは、各各独立的に
C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキルで、Zは、C1〜C5の直鎖または枝分れしたアルキルで;
R4は、OH、H、-O(C=O)Raで、この時Raは、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキルで;
R5及びR6は各々独立的にH、ハロゲン、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキル、 ORa、CX3またはNO2で、この時Raは、C1〜C3の直鎖または枝分れしたアルキルで、Xはハロゲンで;
nは、0〜2の整数である。
【００３７】
また本発明は、上記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体、薬学的に許容されるその塩だけではなくそれから製造できる可能な溶媒化物及び水和物を全て含む。
【００３８】
本発明の上記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体はラセミ混合物だけではなく2、3、4位の一つ以上にキラル中心をもつ全ての立体化学異性体を含む。上記化学式1で2、3、4位全てにキラル中心を持つ場合、本発明による3,4-ジヒドロベンゾピラン形態の化合物は、下記化学式3で表示される(I1)、(I2)、(I3)及び(I4)と同じ立体化学異性体で存在する。
【００３９】
化学式 3
【００４０】
【化１５】
0003999515.tif 000009
【００４１】
上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6 及びnは、先に定義したのと同じである。
【００４２】
上記化学式1の化合物中、特に望ましい化合物を、具体的に下記に示す。
1) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
2) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
3) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
4) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
5) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-ニトロフェニル)グアニジン;
6) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
7) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
8) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
9) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
10) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
11) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
12) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
13) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジン;
14) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
15) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
16) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
17) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジン;
18) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メチルフェニル)グアニジン;
19) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メチルフェニル)グアニジン;
20) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
21) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
22) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
23) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
24) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
25) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
26) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
27) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
28) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
29) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
30) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
31) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
32) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロフェニル)グアニジン;
33) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロフェニル)グアニジン;
34) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
35) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)グアニジン;
36) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロベンジル)グアニジン;
37) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロベンジル)グアニジン;
38) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-アセトキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
39) (2S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
40) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
41) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アセトキシアミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
42) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルアミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
43) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
44) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジン;
45) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
46) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
47) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ブロモ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
48) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジン;
49) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジン;
50) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
51) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジン;
52) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-ニトロベンジル)グアニジン;
53) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルベンジル)グアニジン;
54) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルベンジル)グアニジン;
55) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
56) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
57) (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
58) (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
59) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
60) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
61) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
62) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
63) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
64) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
65) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
66) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
67) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
68) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
69) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
70) (3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン;
71) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン; または
72) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン
上記化学式1の化合物中からさらに望ましい化合物を下記に示す。
(2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン
(2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン
(2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-アセトキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジン
本発明の化学式1の化合物は、薬学的に許容可能な塩の形態で使用でき、塩としては、薬学的に許容可能な遊離酸(free acid)によって形成された酸付加塩が有用である。遊離酸には、有機酸と無機酸を使用でき、無機酸としては、塩酸、臭素酸、硫酸、亜硫酸、燐酸等を使用でき、有機酸としては、クエン酸、酢酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、メタンスルホン酸、グリコール酸、コハク酸、酒石酸、4-トルエンスルホン酸、ガラクツロン酸、エンボン酸、グルタミン酸、アスパラギン酸等を使用できる。
【００４３】
本発明による酸付加塩は、通常の方法、例えば化学式1の化合物を過量の酸水溶液中に溶解させて、この塩を水混和性有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトンまたはアセトニトリルを使用して沈澱させて製造できる。同量の化学式1の化合物及び酸水溶液またはアルコール(例、グリコールモノメチルエーテル)を加熱して、続けてこの混合物を蒸発させて乾燥させるかまたは析出された塩を吸引濾過させて製造することもできる。
【００４４】
また、本発明の化合物は、塩基によって形成された薬学的に許容可能な金属塩であることも可能である。本発明による化学式1で表示される化合物のアルカリ金属 またはアルカリ土類金属塩は、例えば化学式1の化合物を過量のアルカリ金属水酸化物 またはアルカリ土類金属水酸化物溶液中に溶解して非溶解物質を濾過後濾液を蒸発、乾燥させて得られる。ナトリウム、カリウムまたはカルシウム塩が製薬上適合する。対応する銀塩は、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩を適当な銀塩(例、硝酸銀)と反応させて得られる。
【００４５】
また本発明では、上記化学式1のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法を提供する。
【００４６】
具体的に本発明は、下記反応式1で表示される化学式1のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法を提供する(製造方法Ｉ)。
【００４７】
反応式 1
【００４８】
【化１６】
0003999515.tif 000010
【００４９】
上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6 及びnは、先に定義したのと同じである。
【００５０】
また本発明は、下記反応式2で表示される化学式1のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法を提供する(製造方法II)。
【００５１】
反応式 2
【００５２】
【化１７】
0003999515.tif 000011
【００５３】
上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6 及びnは、先に定義したのと同じである。
【００５４】
また、本発明では上記反応式1または反応式2によって製造された化合物(I')を使用して、下記反応式3によって化学式1の化合物を製造する方法を提供する。
【００５５】
反応式 3
【００５６】
【化１８】
0003999515.tif 000012
【００５７】
上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6 及びnは、先に定義したのと同じである。
【００５８】
この反応を通じて上記式で、R1、R2、R3、R4、R5、R6の置換基は修飾されていてよく、または上記反応式3により代表される反応を介して3位と4位の間に二重結合が形成されていてよい。
【００５９】
本発明では、出発物質として各々の光学異性体を使用することによって化学式1の化合物を各々の光学活性異性体として製造できる。また、出発物質に光学異性体の混合物を使用することによって化学式1の化合物を光学異性体の混合物に製造して混合物を分離して各各の光学異性体を得ることができる。光学異性体の分離は、通常的なカラムクロマトグラフィーまたは再結晶方法を実施して分離できる。
【００６０】
以下、本発明による化学式1のベンゾピラニルグアニジン誘導体の製造方法をより詳細に説明する。上記反応に使用される反応試薬及び物質に対して適切な溶媒下で、置換反応が進行する。
I. 出発物質の製造
上記反応式1または反応式2で出発物質に使用したアミノアルコール化合物(III )は、下記反応式4によって製造できる。
【００６１】
反応式 4
【００６２】
【化１９】
0003999515.tif 000013
【００６３】
上記式で、R1、R2及びR3は、先に定義したのと同じで、(OZ)は離脱基を示し Halは、ハロゲン原子を示す。
【００６４】
上記反応式4でエポキシ化合物(II)の製造は、本発明者達によって獲得された米国特許第5,236,935号及び大韓民国特許第094,546号に記述されている方法に因るものである。
【００６５】
また上記エポキシ化合物(II)は、公知された方法によってプロパジルエーテル誘導体から製造できる(J. Med. Chem. 26, 1582 (1983))。
(1) オレフィン化合物(VIII)の製造
上記反応式4でオレフィン化合物(VIII)は、下記化学式4のような鏡像異性体(VIII1)及び(VIII2)で存在する。
【００６６】
化学式 4
【００６７】
【化２０】
0003999515.tif 000014
【００６８】
上記式で、R1、R2及びR3は、先に定義したのと同じである。
【００６９】
オレフィン化合物(VIII)は、各各化学式4のオレフィン化合物(VIII1)とオレフィン化合物(VIII2)に個別的に分離して得られる。本発明者による大韓民国特許出願番号第96-7399号に記載された方法にしたがってオレフィン化合物(VIII)を製造でき、上記反応式4でアルコール化合物(VII )からオレフィン化合物(VIII)の光学異性質体を製造する方法を、具体的に下記反応式5に示す。
【００７０】
反応式 5
【００７１】
【化２１】
0003999515.tif 000015
【００７２】
上記式で、R1、R2 及びR3は、先に定義したのと同じである。
(2) エポキシ化合物(II)の製造
上記反応式5で製造された化合物(VIII1)と化合物(VIII2)を各各出発物質に使用して反応させることによって、下記反応式6におけるのと同様に化合物(VIII1)からはエポキシ化合物(II1)と(II2)を製造でき、化合物(VIII2)からは、エポキシ化合物(II3)と(II4)を製造できる。
【００７３】
反応式 6
【００７４】
【化２２】
0003999515.tif 000016
【００７５】
上記式で、R1、R2 及びR3は、先に定義したのと同じである。
【００７６】
この反応で製造されたエポキシ化合物(II1)と(II2)は、個別的に分離でき、この化合物を分離して次の反応に使用することもでき、分離しないで次の反応に使用することもできる。またエポキシ化合物(II3)と(II4)も個別的に分離でき、この化合物を分離して次の反応に使用することもでき、分離しないで次の反応に使用することもできる。
【００７７】
エポキシ化合物(II1)と(II2)及びエポキシ化合物(II3)と(II4)は、本発明者によって獲得された米国特許第5,236,935号及び大韓民国特許第094,546号に記述されている方法によってオレフィン化合物(VIII1)とオレフィン化合物(VIII2)から製造できる。
【００７８】
また他の方法として、Mn(III )サレン(salen)エポキシ化触媒を使用してオレフィン化合物(VIII1)または(VIII2)からエポキシ化合物の光学異性質体(II1)、(II2)、(II3)または(II4)を各各独立的に製造できる[E.N. Jacobsen et al., Tetrahedron Lett. 38, 5055 (1991)]。この時、(R,R)-Mn(III )サレン触媒を使用すれば、オレフィン化合物(VIII1)からエポキシ化合物(II1)を製造して、オレフィン化合物(VIII2)からエポキシ化合物(II3)を製造できる。また(S,S)-Mn(III )サレン触媒を使用すれば、オレフィン化合物(VIII1)からエポキシ化合物(II2)を製造して、オレフィン化合物(VIII2)からエポキシ化合物(II4)を製造できる。この反応で酸化剤には、NaOClを使用し、反応溶媒には塩化メチレンと水の混合溶媒を使用する。
(3) アミノアルコール化合物(III )の製造
上記反応式4で適切な溶媒下でエポキシ化合物(II)をアンモニアガス(NH3)またはアンモニウムヒドロキシド(NH4OH)と反応させ、アミノアルコール化合物(III )を製造する。この時、反応溶媒は、メタノール、エタノールまたはイソプロピルアルコール等のアルコール系溶媒を使用するのが望ましく、反応温度は5℃から溶媒の沸騰点の間が望ましい。
【００７９】
この反応で出発物質にエポキシ化合物(II1)、(II2)、(II3)及び(II4)を各々個別的に使用した場合には、下記化学式5及び化学式6のアミノアルコール化合物(III 1)、(III 2)、(III 3)及び(III 4)を個別的に収得できる。また、この反応でエポキシ化合物(II1)及び(II2)の混合物を出発物質に使用した場合、アミノアルコール化合物(III 1)及び(III 2)を得た。エポキシ化合物(II3)及び(II4)の混合物を出発物質に使用した場合には、アミノアルコール化合物(III 3)及び(III 4)を得た。
【００８０】
化学式 5
【００８１】
【化２３】
0003999515.tif 000017
【００８２】
上記式で、R1、R2、及びR3は、先に定義したのと同じである。
【００８３】
化学式 6
【００８４】
【化２４】
0003999515.tif 000018
【００８５】
上記式で、R1、R2、及びR3は、先に定義したのと同じである。
II. 製造方法Ｉ
上記反応式1で表示される化学式1の化合物の製造方法は、適切な溶媒でアミノアルコール化合物(III )とチオ尿素化合物(IV)を適切な縮合剤存在下で反応させることによって成される。この反応で化学式1の化合物中、R4がOHの化合物(I')を製造できる。
【００８６】
この時、縮合剤には、水溶性カルボジイミド縮合剤の1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-3-エチルカルボジイミドヒドロクロライドまたはN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミドを使用することが望ましい。さらに望ましくは、水溶性カルボジイミド縮合剤を使用する。
【００８７】
縮合剤は、アミノアルコール化合物(III )に対して1〜3当量添加するのが望ましく、チオ尿素化合物(IV)は、アミノアルコール化合物(III )に対して1〜2当量添加するのが望ましい。
【００８８】
反応溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、テトラヒドロフラン、1,2-ジクロロエタン、ジオキサンを使用するのが望ましく、反応温度は、5〜40℃にするのが望ましい。
【００８９】
上記反応でアミノアルコール化合物(III )の光学異性質体を各々個別的に出発物質として使用した場合には、出発物質に使用した化合物各々の光学活性をそのまま持った化合物を光学異性質体として個別的に得られる。つまり、アミノアルコール化合物(III 1)、(III 2)、(III 3)及び(III 4)から各々化学式1の化合物(I1)、(I2)、(I3)及び(I4)を得られる。また、アミノアルコール化合物(III 1)と(III 2)の混合物から各々化学式1の化合物(I1)と(I2)の混合物を得、アミノアルコール化合物(III 3)と(III 4)の混合物から各々化学式1の化合物(I3)及び(I4)が得られる。光学異性質体の混合物として得れる化学式1の化合物は、反応終了後、光学異性質体を分離して各々個別的に得られる。光学異性質体は、通常のカラムクロマトグラフィーまたは再結晶方法で分離できる。
【００９０】
一方、上記反応に使用したチオ尿素化合物(IV)は、下記反応式7のイソシアネート化合物(IX)をエタノール溶媒下でナトリウムシアナミド(NaNHCN)と反応させ製造できる。 この時、反応温度は溶媒の沸騰点付近にするのが望ましい。
【００９１】
反応式 7
【００９２】
【化２５】
0003999515.tif 000019
【００９３】
上記式で、R5、R6 及びnは、先に定義したのと同じである。
III . 製造方法II
上記反応式2で表示される化学式1の化合物の製造方法は、
1) 適切な溶媒にアミノアルコール化合物(III )とジフェニルシアノカーボンイミデート(Ｘ)を塩基存在下で反応させ化合物(V)を製造する段階(段階1); 及び
2) 適切な溶媒に化合物(V)をアミン化合物(VI)と反応させ、化学式1の化合物(I')を製造する段階(段階2)で成り立つ。
【００９４】
この反応で化学式1の化合物中、R4がOHの化合物(I')を製造できる。
【００９５】
段階1で塩基には、無機塩基と有機塩基を使用できる。つまり、炭酸カルシウム (CaCO3)、水酸化ナトリウム(NaOH)、水酸化カリウム(KOH)、炭酸ナトリウム(Na2CO3)、炭酸水素ナトリウム(NaHCO3)等の無機塩基、ナトリウムメトキシド(CH3ONa)、ナトリウムエトキシド(CH3CH2ONa)等のアルコールの金属塩、アセト酸ナトリウム(CH3COONa)、アンモニアの金属塩、1,8-ジアザビサイクロ[5.4.0]ウンデク-7-エン(1,8-diazabicyclo〔5.4.0〕undec-7-ene, DBU)、1,5-ジアザビサイクロ[4.3.0]ノン-5-エン(1,5-diazabicyclo〔4.3.0〕non-5-ene, DBN)のようなバイシクリックアミジン(bicyclic amidine)、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、ルチジン、N,N-ジメチルアニリン、4-(ジメチルアミノ)ピリジン、1,4-ジアザビシクロ[2.2.2]オクタン(DABCO)等の有機塩基を使用できる。さらに望ましくは、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、1,8-ジアザビサイクロ[5.4.0]ウンデク-7-エン、4-(ジメチルアミノ)ピリジン等の三次アミンを使用することが望ましい。
【００９６】
塩基は、アミノアルコール化合物(III )を基準にして、1〜3当量添加するのが望ましく、ジフェニルシアノカーボンイミデート(Ｘ)は、1〜2当量添加するのが望ましい。
【００９７】
反応溶媒としては、エタノール、イソプロパノールのようなアルコール系溶媒、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、クロロホルム等を使用することが望ましい。
【００９８】
反応温度は、5℃から溶媒の沸騰点の間が望ましい。
【００９９】
段階2でアミン化合物(VI)は、アミノアルコール化合物(III )を基準にして1〜5当量添加するのが望ましい。
【０１００】
反応溶媒としては、エタノール、イソプロパノールのようなアルコール系溶媒、ジメチルホルムアミド(DMF)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、クロロホルム、塩化メチレン、テトラヒドロフラン(THF)等を使用することが望ましい。反応温度は、5℃から溶媒の沸騰点の間が望ましい。
【０１０１】
また、この時、追加的に塩基をさらに添加して反応させることもできる。 塩基は、上記で言及したものを使用することが望ましい。
【０１０２】
上記反応でアミノアルコール化合物(III )の光学異性質体を個別的に使用した場合、化合物(I')を各々の光学異性質体として得られる。また、アミノアルコール化合物(III 1)と(III 2)の混合物またはアミノアルコール化合物(III 3)と(III 4)の混合物を出発物質に使用した場合には、各々化合物(I1)と(I2)の混合物または化合物(I3)と(I4)の混合物が得られる。この時には、反応終了後、混合物を分離して化合物(I')の光学異性質体を各々 得られる。光学異性質体は、通常のカラムクロマトグラフィーまたは再結晶方法で分離できる。
IV. 化合物(I')から化合物(I)の製造
上記反応式1または反応式2を通して製造された化合物(I')を使用して、上記反応式3のように反応させることによって、R1、R2、R3、R4、R5及びR6 の置換基種類を替えることができ、3位と4位の間に二重結合を導入できる。
【０１０３】
反応式3の反応に使用される化合物及び反応条件は、製造しようとする化合物の構造、つまりR1、R2、R3、R4、R5及びR6 の種類と3位と4位の間の二重結合の有無によって決定される。したがって、本発明は、上記反応式3によって化合物(I')から化学式1の化合物を製造できる全ての可能な反応、反応試薬及び反応条件を含む。また、反応式3による化学式1の製造方法中でいくつかの製造方法を下記に具体的に説明するが、これは、一つの例示であってその製造方法、反応試薬及び反応条件がこれに限定されるものではない。
(1) R4にアセトキシ基の導入
適切な塩基と適切な触媒存在下で下記反応式8におけると同じように化合物(I')をアセト酸無水物と反応させることによってR4にアセトキシ基を導入できる。
【０１０４】
反応式 8
【０１０５】
【化２６】
0003999515.tif 000020
【０１０６】
上記式で、R1、R2、R3、R5、R6及びnは、先に定義したのと同じである。
【０１０７】
この時、塩基には、上記で言及した塩基を使用することが望ましい。さらに望ましくは、トリエチルアミン、ピリジンまたは、N,N-ジイソプロピルエチルアミンを使用する。
【０１０８】
触媒には、4-(ジメチルアミノ)ピリジンを使用することが望ましい。
【０１０９】
塩基は、化合物(I')に対して1〜3当量添加するのが望ましく、触媒は、化合物(I')に対して0.05〜0.5 当量添加するのが望ましい。
【０１１０】
反応溶媒は、塩化メチレン、クロロホルム、テトラヒドロフラン(THF)、アセトニトリル等を使用するのが望ましく、反応温度は、0〜40℃にするのが望ましい。
(2) 3位と4位の間に二重結合の導入
上記反応式8で製造したアセテート化合物(Ia)を適切な溶媒下、適切な塩基を添加して、下記反応式9の反応させることによって、R4には水素を、そして3位と4位の間には、二重結合を導入できる。
【０１１１】
反応式 9
【０１１２】
【化２７】
0003999515.tif 000021
【０１１３】
上記式で、R1、R2、R3、R5、R6及びnは、先に定義したのと同じである。
【０１１４】
この時、塩基には、上記で言及したものを使用することが望ましい。さらに望ましくは、1,8-ジアザビサイクロ[5.4.0]ウンデク-7-エン、1,5-ジアザビサイクロ[4.3.0]ノン-5-エン、1,4-ジアザビサイクロ[2.2.2]オクタンを使用する。塩基は、化合物(Ia)に対して1〜3 当量使用することが望ましい。
【０１１５】
反応溶媒は、トルエン、ベンゼン、キシレン、ジオキサン等を使用することが望ましい。反応温度は、5℃から溶媒の沸騰点の間が望ましい。
(3) R1にNH2の導入
R1がNO2の化合物(Ic)を下記反応式10によって還元させることによって、化学式1の化合物中R1がNH2の化合物(Id)を製造できる。
【０１１６】
反応式 10
【０１１７】
【化２８】
0003999515.tif 000022
【０１１８】
上記式で、R2、R3、R5、R6及びnは、先に定義したのと同じである。
【０１１９】
この時、ニトロ基は、適切な溶媒で白金、パラジューム付着木炭(Pd/C; palladium on carbon)またはラニ-ニッケル等のような金属触媒を利用して水素化反応を通して還元させられる。反応溶媒は、メタノールまたはエタノール等のアルコール系溶媒やエチルアセテートを使用できる。
【０１２０】
また他の方法としては、CuSO4、Cu(OAc)2、CoCl2、SnCl2、またはNiCl2等の存在下にNaBH4等の還元剤で還元させることもできる。この時、溶媒としては水とメタノールの混合溶媒を使用するのが望ましく、反応温度は常温にするのが望ましい。
(4) R1に-NH(C=O)Raの導入
上記反応式10によって製造された化合物(Id)を適切な溶媒で塩基存在下でアシルクロライドまたは酸無水物と反応させR1がNH(C=O)Ra の化学式1の化合物を製造できる。この時、塩基は、上記で言及したもの使用することが望ましい。さらに望ましくは、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、4-(ジメチルアミノ)ピリジンを使用する。溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサンを使用することが望ましい。
(5) R1に-NHS(O)mRaの導入
上記反応式10によって製造された化合物(Id)を適切な溶媒で塩基存在下でアルキルスルホニルクロライドまたはアリルスルホニルクロライドと反応させR1が-NHS(O)mRa の化学式1の化合物を製造できる。この時、塩基は、上記で言及したものを使用することが望ましい。さらに望ましくは、トリエチルアミン、N,N-ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、4-(ジメチルアミノ)ピリジンを使用する。溶媒としては、塩化メチレン、クロロホルム、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド 、テトラヒドロフラン、ジオキサンを使用することが望ましい。
【０１２１】
また本発明では、上記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む心臓保護剤、神経細胞保護剤、脳損傷保護剤、NO生成阻害剤、脂質過酸化抑制剤または新生血管生成及び血管再狭窄(restenosis)抑制剤用薬学的組成物を提供する。
【０１２２】
ラット摘出血管を使用した実験で本発明の化合物は、従来の虚血心臓治療剤のクロマカリムまたはBMS-180448に比べて顕著に低い血管弛緩作用を示した。本発明による化合物が心臓にあるKATPに作用すると心臓を保護するようになり、末梢血管にあるKATPに作用すると血管を弛緩させ血圧を下げるようにさせる。つまり、心臓保護作用において、血管弛緩作用は、一つの副作用であると言える。このように、本発明の化合物は、血管弛緩作用が少ないのでそれによる副作用が無く、心臓に対して選択的に作用して心臓保護機能が優秀であることが分かる。
【０１２３】
ラットを利用した虚血心筋損傷モデルでは、本発明の化合物は、優秀な抗虚血作用を示し、BMS-180448のものと類似かまたはさらに優秀な抗虚血作用を示した。ことに、本発明の化合物は、BMS-180448とは異り、血管弛緩作用が顕著に弱いため、心臓選択性抗虚血作用がさらに優秀であることが分かる。また、ビーグル犬(beagle dog)を 利用した虚血心筋損傷モデルでは、本発明の化合物は、危険領域に対する心筋梗塞率が有意的に減少された数値を示し、特に、対照物質のBMS-180448よりさらに優秀な抗虚血作用を示した。
【０１２４】
このように本発明の化合物は、血管弛緩作用を現わさず、血圧を減少させずに中間サイズの動物においても優秀な抗虚血作用を示すので、虚血性心臓疾患による心筋収縮機能低下等、虚血性心血管疾患と関連した疾病の予防剤または治療剤及び心筋梗塞、狭心症、心臓痲痺の予防及び治療のための心臓保護剤として使用できる。
【０１２５】
また本発明の化合物は、神経細胞を保護する作用を示す。具体的に鉄による神経細胞の損傷を濃度依存的に保護した。ラットの目を利用した生体内(in vivo)網膜虚血モデルで細胞死滅を濃度依存的に保護した。糖尿性神経症動物モデルでも神経伝達速度及び疼痛反応測定で神経保護効果を示した。また新生ラットの局所的低酸素性モデルで磁気共鳴分光変化の分析結果、アポトーシスの重要な指標になるLipid/NAA (N-acetyl aspartate)及びLipid/Cr(creatine)の比を有意的に低下させることによって脳保護効果を示した。したがって、本発明の化合物は、神経細胞保護剤として使用でき、神経細胞の損傷または壊死によって誘発される脳卒中、痴呆、新生児低酸素症、緑内障、糖尿性神経症、脳外傷のような神経疾患にも有用に使用できる。
【０１２６】
また本発明の化合物は、鉄及び銅による脂質過酸化を抑制して、血管平滑筋細胞のA7r5細胞でも低密度脂質蛋白(low density lipoprotein)の酸化を抑制する。この時、過酸化水素で酸化的ストレスを加えた場合に、抗酸化効果がさらに明瞭だった。  また、過酸化水素によって誘発されたA7r5及びHUVEC細胞内活性酸素を阻害し、過酸化ラジカル発生剤にAAPH(2,2'-アゾビス(2-アミノプロパン)ジヒドロクロライド)を使用した ORAC(酸素ラジカル吸収能)実験で、ラジカル吸収効果を示した。したがって、本発明の化合物は、脂質過酸化抑制剤に使用でき、活性酸素によって脂質過酸化が促進され、神経細胞内に酸化物質が蓄積して誘発される脳卒中、痴呆等の退行性神経疾患及び動脈硬化等の疾患に有用に使用できる。
【０１２７】
また、本発明の化合物は、LPS(リポポリサッカライド)のような内毒素によってNO (酸化窒素)の生成が促進されることを阻害する。特に、NO生成を濃度依存的に阻害する。したがって、本発明の化合物は、NO生成阻害剤に使用でき、NOが多量生成され発生する神経細胞の損傷及び組織または臓器が損傷されて誘発される関節炎等の炎症性疾患、動脈硬化症、心筋梗塞、脳卒中、痴呆等のような疾患に有用に使用できる。
【０１２８】
また、本発明の化合物は、脳虚血-再潅流による脳損傷を保護する効果が非常に優秀である。特に、従来の脳損傷保護物質のMK801よりも脳損傷保護効果が優秀で、MK801処理群では、ラットの運動性が減少する等の副作用が現れたが、本発明の化合物を投与した場合には、運動性を含むいかなる行動の変化も現わさない等、副作用が少ない長所がある。したがって、本発明の化合物は、脳虚血-再潅流による脳損傷保護剤に使用でき、血栓によって誘導される虚血性脳血管障害等、脳が損傷され誘発されるいろいろな疾患に有用に使用できる。
【０１２９】
アンジオテンシン(angiotensin)IIを投与して新生血管形成を誘導した場合、本発明の化合物は、新生血管形成を非常に効果的に抑制する。特に、新生血管形成を濃度依存的に抑制する。本発明の化合物の投与濃度にしたがって、新生血管の形成をほとんど完璧に抑制できる。したがって、本発明の化合物は、新生血管形成抑制剤として使用できる。新生血管形成をはじめとするリューマチ性関節炎、乾癬、エイズ合併症及び癌等の色々な疾病治療に有用に使用できる。
【０１３０】
また、[3H]-チミジンを利用して血管平滑筋細胞増殖抑制実験を実施した結果、アンジオテンシンIIによって促進されたDNA合成を有意性を持って抑制することによって細胞増殖を防ぎ冠状血管施術後の再狭窄(restenosis)を予防、治療するのに有用に使用できる。
【０１３１】
また、本発明の化合物は、心臓、腎臓、肝臓、組織の保管用及び心血管系手術時臓器(organ)保護に有用に使用できる。
【０１３２】
本発明は、非毒性であり安定で薬学的に適当な添加剤及び本発明による一つ以上の有効性分を含む薬学的組成物及び上記組成物の製造方法を提供する。
【０１３３】
また、本発明は、薬学的組成物の服用形態を含む。例えば、錠剤、コーティング錠、カプセル、丸剤、坐薬剤及びアンプル等の各組成物の服用単位は、一回服用または多数服用に一つ以上の有効性分を含む。例えば、服用単位は、1、2、3または4倍を含むことができるが、一回服用の1/2、1/3、または1/4の有効性分を含むことができる。望ましくは、有効量を含む服用単位は、一回服用または一日服用量の全体、1/2、1/3または1/4に該当することである。
【０１３４】
非毒性で安定で薬学的に適当な受容体には、固体、半固体(semi-solid)または液状稀釈剤(liquid diluents)、充填剤(fillers)及び全ての有形の組成物添加剤を含む。
【０１３５】
望ましい薬学的な組成物には、錠剤(tablets)、コーティング錠(coated tablets)、カプセル、丸剤(phills)、顆粒(granules)、坐薬剤(suppositories)、液剤(solutions)及びエマルジョン、ペースト(pastes)、軟膏(ointments)、ゲル、クリーム、ローション、パウダー(dusting   powder)及びスプレー(sprays)である。
【０１３６】
錠剤(tablets)、コーティング錠(coated tablets)、カプセル、丸剤(phills)及び顆粒(granules)は、有効性分以外に一つ以上を追加に含むことができる。例えば、(a)澱粉、ラクトース、スクロース、グルコース、マニトール及び珪酸(silicic    acid)等のような充填剤及び稀釈剤、(b)カルボキシルチルセルロース(carboxymethylcellulose)、アルギネート(alginates)、ゼラチン及びポリビニルヒロリドン(polyvinylpyrrolidone)のような結合剤、(c)グリセロールのような湿潤剤、(d)アガー、カルシウムカーボネイト及び炭酸ナトリウムのような崩壊剤(disintegrants)、(e)パラフィンのような溶液遅延剤(solution retarders) 及び (f) 四級アンモニウム化合の吸収促進剤(absorption accelerators)、(g) セチルアルコール及びグリセロールモノステアレートのような湿潤剤、(h)カオリン(kaolin)及びベントナイト(bentonite)のような吸着剤、及び(i)タルク、カルシウムステアラート、マグネシウムステアラート(stearate)及び固体ポリエチレングライコールのような潤滑剤、または  (a)から(i)の混合形態で含むことができる。
【０１３７】
錠剤(tablets)、コーティング錠(coated tablets)、カプセル、丸剤(phills)及び顆粒(granules)は、通常的なコーティング及びシェル(shells)の形態で提供でき、選択的に不透明体を含むことができ、一つまたはそれ以上の有効性分を望ましくは高分子物質及びワックスに詰めて序放形方式で腸内の特定部位に有効性分だけを放出できる組成を含められる。
【０１３８】
また、必要に応じて一つまたはそれ以上の有効性分は、上記で記述した一つ以上の賦形剤(excipients)を含んだ微細顆粒形態で存在することができる。
【０１３９】
坐薬剤は、一つまたはそれ以上の有効性分以外にポリエチレンクロライド、ココナッツ脂肪等の脂肪及びC16の脂肪酸を含むC14-アルコールの高エステル等の通常水溶液、非水性溶剤の賦形剤または上記物質等の混合形態を追加に含むことができる。
【０１４０】
軟膏、ペースト、クリーム及びゲルは、一つまたはそれ以上の有効性分以外に動植物の脂肪酸、ワックス、パラピン、澱粉、トラガカントゴム(tragacanth)、セルロース誘導体、ポリエチレングライコール、シリコン、ベントナイト、珪酸(silicic   acid)及びポリアミドパウダーまたは上記物質の混合形態を追加に含むことができる。スプレーは、クロロフルオルハイドカーボン等の通常的な推進剤を追加に含むことができる。
【０１４１】
液剤(solutions)及びエマルジョンは、一つまたはそれ以上の有効性分以外に溶媒、溶解剤及びエマルジョン化剤等の通常の賦形剤を追加に含むことができる。例えば、水、エタノール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネイト、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾレート、プロピレングライコール、1,3-ブチレングライコール、ジメチルホルムアミド、棉実油、落花生油、とうもろこし油、オリーブ油、ケスターオイル及び胡麻油等のオイル、グリセロール、グリセロールフォーマル(formal)、テトラヒドロトピュミルアルコール、ポリエチレングライコール及びソルビタン(sorbitan)の脂肪酸エステルまたは上記物質の混合形態を追加に含むことができる。
【０１４２】
非経口投与時、液剤及びエマルジョンは、血液と等張(isotonic)状態の滅菌形態である。
【０１４３】
懸濁液は、一つまたはそれ以上の有効性分以外に水、エタノール及びプロピレンアルコール等の液体稀釈制及びエトキシレートイソステアニルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステル、微細結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキサイト、ベントナイと、アガ-アガ及びトラガカンス等の懸濁剤または、上記物質の混合形態を追加に含む事ができる。
【０１４４】
また、上記で言及した組成形態は、色素、防腐剤及びペパーミントオイルとユーカリ(eucalyptus)油等の香りと味を向上させる添加剤及びサッカリン等を含む甘味料を含むことができる。
【０１４５】
望ましくは、治療目的の薬学的組成物は、上記で言及した薬学的組成物を0.1〜99.5%の濃度で存在しなければならず、さらに望ましくは、全体混合物の重量に対して0.5〜95%を含まなければならない。
【０１４６】
また、上記言及した薬学的組成物は、本発明による化合物以外、異る薬学的な活性を持った化合物を含むことができる。
【０１４７】
上記言及した薬学的組成物は、公知された通常の方法で製造される。例えば、有効性分または受容体を持った成分を混合することによって製造される。
【０１４８】
上記組成物は、人間及び動物に経口、直腸、非経口(静脈、筋肉内、または皮下内の投与)、腸内の、膣内の、腹膜内または局部的(ダスチングパウダー、軟膏、水薬(drop))、空き空間及び人体空洞の感染治療用のいかなる形態でも使用できる。
【０１４９】
経口治療用に適切な組成物は、注射液、溶液、及び懸濁液で、局部的な治療用途には、ゲル、注入組成物、エマルジョン、軟膏または水薬、眼科学及び皮膚病学の組成物、銀塩及び異る形態の塩、耳薬、目薬、ダスチングパウダーまたは溶液の形態が可能である。
【０１５０】
さらに、ゲル、パウダー、ダスチングパウダー、錠剤、序放性放出形錠剤、プレ混合形態(premixes)、濃縮液、顆粒、丸剤、ボリ(boli)、カプセル、エーロゾル(aerosol)、スプレー及び吸入剤は、人間及び動物に使用できる。
【０１５１】
またさらに、本発明の化合物は、プラスチック(局部治療用途のプラスチック体)、コラーゲンまたは骨充填剤(bone  cement)等の他の受容体物質内に挿入できる。
【０１５２】
一般的に、本発明による一つまたはそれ以上の有効性分を24時間毎に体重にしたがって全体重量の0.1〜100mg/kg、さらに望ましくは0.1〜20mg/kgで投与して医薬品として有用に使用される。
【０１５３】
必要に応じて、個別的な服用の形態を異らせて、いろいろな方途の求める結果を得られる。しかし、上記服用量は、製剤の特性、投与対象の体重及び状態、病の重症程度、薬の組成及び投与特性及び投与後時間または間隔によって変えることができる。
【０１５４】
それで、有効性分の上記言及された量を超過する場合がある反面、上記有効量の未満でも充分に扱うことができる。有効性分を要求する特定形態の最大服用量及び投与方式は、専門知識を持った専門家によって決定できる。
【０１５５】
本発明では、赤外線分光法、ＵＶ分光法、核磁気共鳴スペクトル、質量分光法、液体クロマトグラフィー法、X-線構造決定法、旋光度測定法と代表的な化合物の元素分析計算値と実測値の比較によって分子構造を確認した。
製造例
反応式1または反応式2の出発物質(III )は、下記製造例を通して製造された。<製造例1> (2R, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン75g(0.28 mol)をアセトン1Lに溶かした後、1Lの水を加えた。ここに炭酸水素ナトリウム84g (0.99 mol)を入れて10分間撹拌させた後、オキソン174g(0.28mol)を入れて強く撹拌させた。炭酸水素ナトリウムとオキソンを上記と同じ方法で15分間隔毎に三回さらに加えた。 反応が完結後、固体を濾過して減圧下でアセトンを除去した後、濾液をエチルアセテート(500ml x 2)で抽出した。 無水硫酸ナトリウムで有機層を乾燥させ濾過して減圧下で溶媒を除去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で精製して、白色固体の目的化合物76g(収率95%)を異性質体混合物で得た。
【０１５６】
(段階2) (2R, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン及び(2R, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1で製造したエポキシド化合物8.8gを飽和アンモニアエタノール溶液250mlに溶かして常温で撹拌させ7日間反応させた。溶媒を除去してシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)して出発物質2.58gを回収して上記目的化合物5.6g(収率: 60%)を異性質体混合物で得た。
<製造例2> (2S, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン及び(2S, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン5g(19mmol)をアセトン100mlに溶かした後、水100mlを加えた。 ここに炭酸水素ナトリウム5.6g(66mmol)を入れて10分間撹拌させた後、オキソン11.6g(19mmol)を入れて強く撹拌させた。炭酸水素ナトリウムとオキソンを上記と同一の方法で15分毎に二回さらに添加した。反応が完結後、固体を濾過して減圧下でアセトンを除去した。濾液は、エチルアセテート(100ml x 2)で抽出して無水硫酸ナトリウムで有機層を乾燥させ濾過した後、減圧下で溶媒を除去した。残渣は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で精製して白色固体の目的化合物5.1g(収率97%)を異性質体混合物で得た。
【０１５７】
(段階2) (2S, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2S, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1で製造したエポキシド化合物5.1gを飽和アンモニアエタノール溶液100mlに溶かして常温で7日間撹拌して反応させた。溶媒を除去してシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)して目的化合物4.4g(収率80%)を異性質体混合物で得た。
<製造例3> (2R, 3R, 4S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン400mg(1.82mmol)をDMSO  1mlに溶かした後、蒸溜水82μｌを加えた。反応混合物を0℃で冷却させた後、N-ブロモスクシンイミド(N-Bromosuccinimide)647mgを少しずつ加えた。30分経過後、水1mlを加え、エチルアセテートで抽出して無水硫酸マグネシウムで有機層を乾燥させ濾液を濾過して減圧蒸溜した。残渣は、再びジオキサン-水(3:1)混合溶液1mlに溶かして水酸化ナトリウム146mgを加えて常温で24時間撹拌させた。反応終了後、反応混合物をエチルアセテートで抽出して無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濾過して減圧蒸溜した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=10:1)で精製して目的化合物358mg(収率83%)を異性質体混合物で得た。
【０１５８】
(段階2) (2R, 3R, 4S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1で製造したエポキシド化合物560mg(2.37mmol)を飽和アンモニアエタノール溶液20mlに溶かして常温で7日間撹拌して反応させた。反応終了後溶媒は、除去して残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で分離して目的化合物340mg(収率57%)を異性質体混合物で得た。
<製造例4> (2R, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質に(2R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-1-ベンゾピラン 708mg(3.20mmol)を使用したことを除いては、上記製造例1の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 2:1)で分離して目的化合物625mg(収率82%)を異性質体混合物で得た。
【０１５９】
(段階2) (2R, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1で得たエポキシド化合物625mg(2.63mmol)を飽和アンモニアエタノール溶液10mlに溶かして常温で7日間撹拌して反応させた。反応終了後、溶媒を除去してシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:5)で分離して目的化合物328mg(収率49%)を異性質体混合物で得た。
<製造例5> (2R, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-メトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-メトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2R)-6-ニトロ-2-メチル-2-メトキシメチル-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ -2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質に(2R)-6-ニトロ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン580mg(2.47mmol)を使用したことを除いては、上記製造例1の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 2:1)で分離して目的化合物607mg(収率98%)を異性質体混合物で得た。
【０１６０】
(段階2) (2R, 3R, 4S)-6-ニトロ-2-メチル-2-メトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン 及び(2R, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-メトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1で得たエポキシド化合物607mg(2.42mmol)を飽和アンモニアエタノール溶液10mlに溶かして常温で7日間撹拌して反応させた。溶媒を除去してシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して目的化合物345mg(収率53%)を異性質体混合物で得た。
<製造例6> (2S, 3S, 4R)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3, 4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2S)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン1.2g (4.90mmol)を出発物質に使用したことを除いては、製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=4:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物0.65g(収率48%)を得た。
<製造例7> (2S, 3R, 4S)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3, 4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記製造例6と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物0.30g(収率22%)を得た。
<製造例8> (2S, 3S, 4R)-6-ブロモ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2S)-6-ブロモ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン1.6g(5.35mmol)を出発物質に使用したことを除いては、製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物1.28g(収率72%)を得た。
<製造例9> (2S, 3S, 4R)-4-アミノ-6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
(2S)-6-メタンスルホニルオキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン2.52g(8.45mmol)を出発物質に使用したことを除いては、製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:5)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物1.74g(収率62%)を得た。
<製造例10> (2R, 3S, 4R)-4-アミノ-6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
(2R)-6-メタンスルホニルオキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン0.79g(2.65mmol)を出発物質に使用したことを除いては、製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:5)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物0.60g(収率68%)を得た。
<製造例11> (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2S)-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピラン1g(3.77mmol)、エチルレングリコール0.63ml(11.31mmol)及びp-トルエンスルホン酸71.7mg (0.377mol)をトルエン20mlに溶かした後、5時間の間還流させた。反応終了後反応混合物を飽和NaHCO3水溶液で洗浄して水とエチルアセテートで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濾過して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=6:1)で精製して目的化合物0.93g(収率93%)を得た。
【０１６１】
0003999515.tif 000023
(段階2) (2S, 3S, 4S)-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-6-ニトロ-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
100mlフラスコ(one-neck flask)に0.55M NaOCl溶液25.6ml(14.08mmol)と0.05 M Na2HPO4  9.6mlを入れて０℃で冷却した。ここに上記段階1で得た化合物0.93g(3.52mmol)とヤコブソン触媒(Jacobsen's catalyst (S, S)) 96.22mg(0.176mmol)を塩化メチレン7mlに薄めて加え、室温で8時間の間撹拌させた。反応終了後反応溶液をセライト濾過(Celite filter)してヤコブソン触媒を除去した。 塩化メチレン層と水層を分離させ塩化メチレン層を塩水で洗浄してNa2SO4で乾燥させ濾過して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で精製して目的化合物470mg(収率48%)を得た。
【０１６２】
0003999515.tif 000024
(段階3) (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
100mlフラスコに上記段階2で得た化合物470mg(1.68mmol)を入れ、エタノール15mlに溶かした後、25%NH4OH 2.36ml(16.3mmol)を加えて、25℃で5日間撹拌させた。反応終了後エタノールを除去して、残渣をエチルアセテートで抽出して塩水で洗った後、NaSO4で乾燥させ濾過して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物400mg(収率80%)を得た。
<製造例12> (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2S)-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(2S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピラン1g(3.77mmol)と1,3-プロパンジオール2.73mlを使用して、上記製造例11の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 6:1)で分離して目的化合物1g(収率96%)を得た。
【０１６３】
(段階2) (2S, 3S, 4S)-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1の化合物を出発物質に使用したことを除いては、製造例11の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で分離して目的化合物0.57g(収率54%)を得た。
【０１６４】
(段階3) (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階2の化合物を出発物質に使用したことを除いては、製造例11の段階3と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で分離して目的化合物0.46g(収率76%)を得た。
<製造例13> (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2S)-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質として(2S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピラン1g(3.77mmol)と2,2-ジメチル-1,3-プロパンジオール2.80mlを使用したことを除いては、上記製造例11の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=6:1)で分離して目的化合物1.01g(収率88%)を得た。
【０１６５】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1の化合物を出発物質に使用したことを除いては、製造例11の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で分離して目的化合物0.62g(収率58%)を得た。
【０１６６】
(段階3) (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階2の化合物を出発物質に使用したことを除いては、製造例11の段階3と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で分離して目的化合物0.53g(収率82%)を得た。
<製造例14> (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジエトキシメチル-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
(段階1) (2S)-2-メチル-2-ジエトキシメチル-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質として(2S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-ニトロ-2H-1-ベンゾピラン1g(3.77mmol)とエタノール3.0 mlを使用したことを除いては、上記製造例11の段階1と同じ方法で反応させた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 6:1)で分離して目的化合物1.01g(収率91%)を得た。
【０１６７】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジエトキシメチル-6-ニトロ-3,4-エポキシ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階1の化合物を出発物質に使用したことを除いては、製造例11の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート= 4:1)で分離して目的化合物0.71g(収率67%)を得た。
【０１６８】
(段階3) (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジエトキシメチル-6-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
上記段階2の化合物を出発物質に使用したことを除いては、製造例11の段階3と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で分離して目的化合物0.65g(収率86%)を得た。
<製造例15> (2S, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-メトキシカルボニル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質に(2S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-メトキシカルボニル-2H-1-ベンゾピラン1.41g(5.32mmol)を使用したことを除いては、上記製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して目的化合物0.86g(収率52%)を得た。
<製造例16> (2R, 3S, 4R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-メトキシカルボニル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質に(2R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-6-メトキシカルボニル-2H-1-ベンゾピラン1.27g(4.79mmol)を使用したことを除いては、上記製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して目的化合物0.85g(収率57%)を得た。
<製造例17> (3S, 4R)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-8-ニトロ-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピランの製造
出発物質に(2S)-2-メチル-2-ジメトキシメチル-8-ニトロ-2H-1-ベンゾピラン 1.82g(6.86mmol)を使用したことを除いては、上記製造例1の段階1及び段階2と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して目的化合物1.31g(収率64%)を得た。
【０１６９】
本発明による化学式1の化合物は、下記実施例によって製造した。
<実施例1> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
DMF  5mlに、N-シアノ-N'-(4-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩 508mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500mg(1.68mmol)を溶かして、ここに1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド418mgを加えた。 反応混合物を常温で5時間の間撹拌して反応させた後、1N HCl  10mlを加えて エチルアセテート(30ml x 2)で抽出した。エチルアセテート層を水と食塩水で洗浄した。無水MgSO4で有機層を乾燥させて濃縮させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物260mg(収率33%)を得た。
【０１７０】
0003999515.tif 000025
<実施例2> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例1と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物200mg(収率25%)を得た。
【０１７１】
0003999515.tif 000026
<実施例3> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジンの製造
DMF 5mlにN-シアノ-N'-(3-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩508 mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500mgを溶かして、ここに1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド418mgを加えた。反応混合物を常温で6時間の間撹拌して反応させた後、1N HCl 10mlを加えてエチルアセテート(30ml x 2)で抽出した。エチルアセテート層は、水と食塩水で洗浄して無水MgSO4で乾燥させ濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物230mg (収率29%)を得た。
【０１７２】
0003999515.tif 000027
<実施例4> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例3と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物200mg(収率25%)を得た。
【０１７３】
0003999515.tif 000028
<実施例5> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-ニトロフェニル)グアニジンの製造
DMF 5mlにN-シアノ-N'-(4-ニトロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩532 mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500mgを溶かして、ここに1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド418mgを加えた。反応混合物を常温で6時間の間撹拌して反応させた後、1N HCl 10mlを加えてエチルアセテート(30ml x 2)で抽出した。エチルアセテート層は、水と食塩水で洗浄して無水MgSO4で乾燥させ濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物210mg (収率26%)を得た。
【０１７４】
0003999515.tif 000029
<実施例6> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジンの製造
DMF  5mlに、N-シアノ-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)チオ尿素のナトリウム塩500mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500mgを溶かして、ここに1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド418mgを加えた。反応混合物を常温で5時間の間撹拌して反応させた後、1N HCl 10mlを加えてエチルアセテート(30 ml x 2)で抽出した。 エチルアセテート層は、水と食塩水で洗浄して無水MgSO4で乾燥させて濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物250mg(収率29%)を得た。
【０１７５】
0003999515.tif 000030
<実施例7> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジンの製造
上記実施例6と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物200mg(収率23%)を得た。
【０１７６】
0003999515.tif 000031
<実施例8> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジンの製造
DMF  5mlにN-シアノ-N'-(4-メトキシフェニル)チオ尿素のナトリウム塩500 mgと上記製造例1で得たアミノアルコール化合物500mgを溶かして、ここに1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド418mgを加えた。反応混合物を常温で5時間の間撹拌して反応させた後、1N HCl 10mlを加えてエチルアセテート(30ml x 2)で抽出した。エチルアセテート層は、水と食塩水で洗浄して無水MgSO4で乾燥させ濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物49mg(収率6%)を得た。
【０１７７】
0003999515.tif 000032
<実施例9> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジンの製造
上記実施例8と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物190mg(収率24%)を得た。
【０１７８】
0003999515.tif 000033
<実施例10> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
DMF 5mlにN-シアノ-N'-(4-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩508mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを溶かして、ここに1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド418mgを加えた。反応混合物を常温で5時間の間撹拌して反応させた後、1N HCl 10mlを加えてエチルアセテート(30ml x 2)で抽出した。エチルアセテート層は、水と食塩水で洗浄して無水MgSO4で乾燥して濃縮させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物260mg (収率33%)を得た。
【０１７９】
0003999515.tif 000034
<実施例11> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例10と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物200mg(収率25%)を得た。
【０１８０】
0003999515.tif 000035
<実施例12> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(3-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩508mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物188mg(収率24%)を得た。
【０１８１】
0003999515.tif 000036
<実施例13> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例12と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物270mg(収率34%)を得た。
【０１８２】
0003999515.tif 000037
<実施例14> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)チオ尿素のナトリウム塩582mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物220mg(収率26%)を得た。
【０１８３】
0003999515.tif 000038
<実施例15> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルフェニル)グアニジンの製造
上記実施例14と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物320mg(収率37%)を得た。
【０１８４】
0003999515.tif 000039
<実施例16> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(4-メトキシフェニル)チオ尿素のナトリウム塩500mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物170mg(収率21%)を得た。
【０１８５】
0003999515.tif 000040
<実施例17> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシフェニル)グアニジンの製造
上記実施例16と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を 持った目的化合物270mg(収率34%)を得た。
【０１８６】
0003999515.tif 000041
<実施例18> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メチルフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(4-メチルフェニル)チオ尿素のナトリウム塩465mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物158mg(収率21%)を得た。
【０１８７】
0003999515.tif 000042
<実施例19> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メチルフェニル)グアニジンの製造
上記実施例18と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物250mg(収率33%)を得た。
【０１８８】
0003999515.tif 000043
<実施例20> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(4-メトキシベンジル)チオ尿素のナトリウム塩530mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物134mg(収率16%)を得た。
【０１８９】
0003999515.tif 000044
<実施例21> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジンの製造
上記実施例20と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物140mg(収率17%)を得た。
【０１９０】
0003999515.tif 000045
<実施例22> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
N-シアノ-N'-ベンジルチオ尿素のナトリウム塩465mgと製造例1で得たアミノアルコール化合物500 mgを使用したことを除いては、上記実施例1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物260mg(収率34%)を得た。
【０１９１】
0003999515.tif 000046
<実施例23> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記実施例22と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物200mg(収率26%)を得た。
【０１９２】
0003999515.tif 000047
<実施例24> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
N-シアノ-N'-ベンジルチオ尿素のナトリウム塩508mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物170mg(収率22%)を得た。
【０１９３】
0003999515.tif 000048
<実施例25> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記実施例24と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物190mg(収率25%)を得た。
【０１９４】
0003999515.tif 000049
<実施例26> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(4-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩508mgと製造例3で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、上記実施例1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物170mg(収率23%)を得た。
【０１９５】
0003999515.tif 000050
<実施例27> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例26と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物190mg(収率26%)を得た。
【０１９６】
0003999515.tif 000051
<実施例28> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(4-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩289mgと製造例4で得たアミノアルコール化合物210 mgを使用したことを除いては、上記実施例1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物40mg(収率11%)を得た。
【０１９７】
0003999515.tif 000052
<実施例29> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ヒドロキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例28と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物40mg(収率11%)を得た。
【０１９８】
0003999515.tif 000053
<実施例30> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(4-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩800mgと製造例5で得たアミノアルコール化合物200mgを使用したことを除いては、上記実施例1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物108mg(収率32%)を得た。
【０１９９】
0003999515.tif 000054
<実施例31> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-メトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例30と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物107mg(収率32%)を得た。
【０２００】
0003999515.tif 000055
<実施例32> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(2-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩508mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物188mg(収率24%)を得た。
【０２０１】
0003999515.tif 000056
<実施例33> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロフェニル)グアニジンの製造
上記実施例32と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物270mg(収率34%)を得た。
【０２０２】
0003999515.tif 000057
<実施例34> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)チオ尿素のナトリウム塩582 mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物220mg(収率26%)を得た。
【０２０３】
0003999515.tif 000058
<実施例35> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-トリフルオロメチルフェニル)グアニジンの製造
上記実施例34と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物320mg(収率37%)を得た。
【０２０４】
0003999515.tif 000059
<実施例36> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロベンジル)グアニジンの製造
N-シアノ-N'-(2-クロロベンジル)チオ尿素のナトリウム塩540mgと製造例2で得たアミノアルコール化合物500mgを使用したことを除いては、実施例10と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3R, 4S)の立体化学構造を持った目的化合物73mg(収率9%)を得た。
【０２０５】
0003999515.tif 000060
<実施例37> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(2-クロロベンジル)グアニジンの製造
上記実施例36と同じ方法で反応させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物100mg(収率12%)を得た。
【０２０６】
0003999515.tif 000061
<実施例38> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-アセトキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
メチレンクロライド3mlに実施例25で得た化合物68mg(0.15mmol)を溶かして、ここにアセト酸無水物21μｌ、トリエチルアミン42μｌ及びDMAP (4-(Dimethylamino)pyridine)2mgを加えた。反応混合物は、常温で5時間の間撹拌して反応させた後、水5mlを加えてエチルアセテート(10ml x 2)で抽出した。有機層は、水と食塩水で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して目的化合物を67mg(収率90%)を得た。
【０２０７】
0003999515.tif 000062
<実施例39> (2S)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例38で得た化合物54mg(0.11mmol)をトルエン2mlに溶かして、DBU 24 μｌ(0.1628mol)を加えて常温で24時間の間撹拌した。 反応混合物は、エチルアセテートと水で抽出して無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濾過した後、減圧下で溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で精製して目的化合物31mg(収率64%)を得た。
【０２０８】
0003999515.tif 000063
<実施例40> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記実施例24で得た化合物1.11gをメタノール20mlに溶かして飽和酢酸銅溶液10mlを加えた。ここにナトリウムボロハイドライド276mgを徐々に加えて常温で3時間の間撹拌させた。反応混合物に水50mlを加えてエチルアセテート100mlで抽出した後、MgSO4で乾燥させ溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物576mg(収率56%)を得た。
【０２０９】
0003999515.tif 000064
<実施例41> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アセトキシアミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例40で得た化合物50mgを塩化メチレン2mlに溶かしてトリエチルアミン25 μｌを加えた後、アセチルクロライド10μｌを加えた。反応混合物を常温で1時間の間撹拌させた後、水10mlを加えてエチルアセテート20mlで抽出した。有機層は、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物51mg(収率92%)を得た。
【０２１０】
0003999515.tif 000065
<実施例42> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルアミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例40で得た化合物91mgを塩化メチレン2mlに溶かしてトリエチルアミン45μｌを加えた後、メタンスルホニルクロライド20μｌを加えた。反応混合物を常温で2時間の間撹拌させた後、水10mlを加えてエチルアセテート20mlで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物90mg(収率85%)を得た。
【０２１１】
0003999515.tif 000066
<実施例43> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
製造例6で得た(2S, 3S, 4R)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン100mgをDMF3mlに溶かして、ここに N-シアノ-N'-(4-クロロフェニル)チオ尿素のナトリウム塩92mgと1-[3-(ジメチルアミノ)プロピル]-2-エチルカルボジイミドヒドロクロライド89mgを加えた。反応 混合物を常温で6時間の間撹拌させ 1N HCl 5mlを加えてエチルアセテート30mlで抽出した。 有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濃縮させて、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で精製して目的化合物70mg(収率43%)を得た。
【０２１２】
0003999515.tif 000067
<実施例44> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-クロロフェニル)グアニジンの製造
製造例7で得た(2S, 3R, 4S)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン99mg(0.35mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例43と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で精製して目的化合物68mg(収率42%)を得た。
【０２１３】
0003999515.tif 000068
<実施例45> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピラン-6-カルボニトリルの製造
製造例6で製造した(2S, 3S, 4R)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン150mgをイソプロパノール-DMF混合溶媒(2:1)3mlに溶かして、ジフェニルシアノカーボンイミデート141mgとトリエチルアミン97μｌを加えた。反応混合物を常温で18時間の間撹拌させて、水10mlを加えてエチルアセテート30mlで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させて溶媒を除去した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物182mg(収率80%)を得た。
【０２１４】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記段階1で得た化合物182mgをDMF2mlに溶かしてベンジルアミン0.42mlを加えて室温で12時間の間撹拌させた。反応混合物に水20mlを入れエチルアセテート50mlで抽出した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濾過して溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物163mg(収率68%)を得た。
【０２１５】
0003999515.tif 000069
<実施例46> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-シアノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
製造例7で製造した(2S, 3R, 4S)-6-シアノ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン150mgを出発物質に使用したことを除いては、上記実施例45の段階1及び段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物160mg(収率69%)を得た。
【０２１６】
0003999515.tif 000070
<実施例47> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ブロモ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
製造例8で得た(2S, 3S, 4R)-6-ブロモ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン98mgを出発物質に使用したことを除いては、上記実施例45の段階1及び段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物86mg(収率83%)を得た。
【０２１７】
0003999515.tif 000071
<実施例48> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例2で得た化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して(2S, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン400mgを分離した。
【０２１８】
このように分離した(2S, 3S, 4R)-6-ニトロ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-3-ヒドロキシ-4-アミノ-3,4-ジヒドロ-2H-1-ベンゾピラン400mg(1.34mmol)をDMF 3 mlに溶かして、ジフェニルシアノカーボンイミデート352mg(1.48mmol)とトリエチルアミン243μｌ(1.74mmol)を加えた。反応混合物を常温で12時間の間撹拌させ、水20mlを加えてエチルアセテート30mlで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させて溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物498mg(収率84%)を得た。
【０２１９】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジンの製造
上記段階1で得た化合物327mg(0.74mmol)をDMF 3mlに溶かして(3,4-ジメトキシベンジル)アミン371mg(2.22mmol, 3eq)を加えた。反応混合物を常温で12時間の間撹拌させて、水20mlを加えてエチルアセテート30mlで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ濾過した後、溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物338mg(収率89%)を得た。
【０２２０】
0003999515.tif 000072
<実施例49> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3,4-ジメトキシベンジル)グアニジンの製造
実施例48で得た化合物209mg(0.41mmol)をメタノール5mlに溶かしてCu(OAc)2 水溶液0.5ml(0.4 M 水溶液, 0.2mmol, 0.5eq)を加えた。反応混合物にナトリウムボロハイドライド155mg(4.1mmol, 10eq)を30分に渡って常温でゆっくりと加えた後、1時間の間撹拌させた。反応終了後、反応混合物にエチルアセテート10mlを加えて、沈澱した黒色固体を濾過して除去した。濾過された溶液に飽和NaHCO3水溶液10mlを加えてエチルアセテート30mlで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥させ減圧下で溶媒を除去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(エチルアセテート:n-ヘキサン=9:1)で精製して目的化合物169mg(収率85%)を得た。
【０２２１】
0003999515.tif 000073
<実施例50> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジンの製造
実施例48の段階1で得た化合物360mg(0.81mmol)を出発物質に使用して(3,4-ジメトキシベンジル)アミンのかわりに 4-メトキシベンジルアミン333mg(2.43mmol)を使用したことを除いては、上記実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物343mg(収率87%)を得た。
【０２２２】
0003999515.tif 000074
<実施例51> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(4-メトキシベンジル)グアニジンの製造
実施例50で得た化合物304mg(0.62mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で精製して目的化合物241mg(収率85%)を得た。
【０２２３】
0003999515.tif 000075
<実施例52> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-ニトロベンジル)グアニジンの製造
実施例48の段階1で得た化合物358mg(0.81mmol)を出発物質にして(3,4-ジメトキシベンジル)アミンのかわりに 3-ニトロベンジルアミン塩酸塩458mg(2.43mmol)とトリエチルアミン339μｌを使用したことを除いては、上記実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物302mg(収率74%)を得た。
【０２２４】
0003999515.tif 000076
<実施例53> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルベンジル)グアニジンの製造
上記実施例48の段階1で得た化合物443mg(1.0mmol)を出発物質にして(3,4-ジメトキシベンジル)アミンのかわりに(3-トリフルオロメチル)ベンジルアミン525mg(3.0mmol)を使用したことを除いては、上記実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。  残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物497mg(収率95%)を得た。
【０２２５】
0003999515.tif 000077
<実施例54> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-(3-トリフルオロメチルベンジル)グアニジンの製造
実施例53で得た化合物278mg(0.53mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で精製して目的化合物192mg(収率73%)を得た。
【０２２６】
0003999515.tif 000078
<実施例55> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例9で得た化合物58mg(0.18mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例48の段階1と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で分離して目的化合物64mg(収率74%)を得た。
【０２２７】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記段階1で製造した化合物64mg(0.13mmol)とベンジルアミン28μｌ(0.26mmol)を使用して、上記実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で精製して目的化合物32mg(収率49%)を得た。
【０２２８】
0003999515.tif 000079
<実施例56> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2R, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例10で得た化合物63mg(0.19mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例55の段階1と同じ方法によって反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で分離して目的化合物75mg(収率79%)を得た。
【０２２９】
(段階2) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メタンスルホニルオキシ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記段階1で製造した化合物75mg(0.15mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例55の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物57mg(収率74%)を得た。
【０２３０】
0003999515.tif 000080
<実施例57> (2S, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記実施例24で得た化合物884mg(1.94mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物313mg(収率38%)を得た。
【０２３１】
0003999515.tif 000081
<実施例58> (2R, 3R, 4S)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例22で得た化合物1.2g(2.7mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物547mg(収率48%)を得た。
【０２３２】
0003999515.tif 000082
<実施例59> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例23で得た化合物1.07g(2.3mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物589mg(収率60%)を得た。
【０２３３】
0003999515.tif 000083
<実施例60> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例11で得た化合物400mg(1.35mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例48の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物400mg(収率67%)を得た。
【０２３４】
0003999515.tif 000084
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記段階1で得た化合物400mg(0.1mmol)を出発物質に使用して(3,4-ジメトキシベンジル)アミンのかわりにベンジルアミン0.3ml(2.7mmol)を使用したことを除いては、上記実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物350mg(収率85%)を得た。
【０２３５】
0003999515.tif 000085
<実施例61> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキソラン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例60で得た化合物200mg(0.44mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物90mg(収率48%)を得た。
【０２３６】
0003999515.tif 000086
<実施例62> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例12で得た化合物700mg(2.26mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例60の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:1)で分離して目的化合物840mg(収率83%)を得た。
【０２３７】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ -2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
上記段階1の化合物840mg(1.85mmol)を出発物質に使用して(3,4-ジメトキシベンジル)アミンのかわりにベンジルアミン0.61ml(5.56mmol)を使用したことを除いては、上記実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物750mg(収率87%)を得た。
【０２３８】
0003999515.tif 000087
<実施例63> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]ジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例62で得た化合物350mg(0.75mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物278mg(収率85%)を得た。
【０２３９】
0003999515.tif 000088
<実施例64> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例13で得た化合物1.1g(3.60mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例60の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物1g(収率86%)を得た。
【０２４０】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ -2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
出発物質として上記段階1で得た化合物1g(2.1mmol)とベンジルアミン0.69ml (6.23mmol)を使用したことを除いては、実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。  残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物900mg(収率87%)を得た。
【０２４１】
0003999515.tif 000089
<実施例65> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-([1,3]-5,5-ジメチルジオキサン-2-イル)-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例64で得た化合物400mg(0.81mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物350mg(収率93%)を得た。
【０２４２】
0003999515.tif 000090
, 5H)
<実施例66> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例14で得た化合物234mg(0.72mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例48の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物237mg(収率70%)を得た。
【０２４３】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
出発物質として上記段階1で得た化合物217mg(0.46mmol)とベンジルアミン0.2 ml(1.84mmol)を使用したことを除いては、実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。  残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物200mg(収率90%)を得た。
【０２４４】
0003999515.tif 000091
<実施例67> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジエトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例66で得た化合物122mg(0.25mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例49と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:3)で精製して目的化合物91mg(収率80%)を得た。
【０２４５】
0003999515.tif 000092
<実施例68> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2S, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ-6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例15で得た化合物399mg(1.28mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例48の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物397mg(収率68%)を得た。
【０２４６】
(段階2) (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
出発物質として上記段階1で得た化合物397mg(0.93mmol)とベンジルアミン 0.21ml(1.98mmol)を使用したことを除いては、実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物270mg(収率67%)を得た。
【０２４７】
0003999515.tif 000093
<実施例69> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (2R, 3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ-6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例16で得た化合物121mg(0.39mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例48の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物131mg(収率74%)を得た。
【０２４８】
(段階2) (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(6-メトキシカルボニル-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
出発物質として上記段階1で得た化合物131mg(0.31mmol)とベンジルアミン60 μｌ(0.61mmol)を使用したことを除いては、実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。  残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物107mg(収率79%)を得た。
【０２４９】
0003999515.tif 000094
<実施例70> (3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ- 2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
(段階1) (3S, 4R)-4-[[(シアノイミノ)フェノキシメチル]アミノ]-8-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-1-ベンゾピランの製造
製造例17で得た化合物0.97g(3.24mmol)を出発物質に使用したことを除いては、上記実施例48の段階1と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で精製して目的化合物1.16g(収率81%)を得た。
【０２５０】
(段階2) (3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-ニトロ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ- 2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
出発物質として上記段階1で得た化合物1.16g(2.6mmol)とベンジルアミン 0.85 ml(7.8mmol)を使用したことを除いては、実施例48の段階2と同じ方法で反応させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:2)で分離して(2S, 3S, 4R)-と(2R, 3S, 4R)-光学異性質体混合物として目的化合物0.94g(収率79%)を得た。
【０２５１】
0003999515.tif 000095
<実施例71> (2S, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例70で得た光学異性質体混合物298mg(0.66mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例49と同じ方法で反応させて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して(2S, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物117mg(収率42%)を得た。
【０２５２】
0003999515.tif 000096
<実施例72> (2R, 3S, 4R)-N"-シアノ-N-(8-アミノ-3,4-ジヒドロ-3-ヒドロキシ-2-メチル-2-ジメトキシメチル-2H-ベンゾピラン-4-イル)-N'-ベンジルグアニジンの製造
実施例70で得た光学異性質体混合物298mg(0.66mmol)を出発物質に使用したことを除いては、実施例49と同じ方法で反応させて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー(n-ヘキサン:エチルアセテート=1:4)で分離して(2R, 3S, 4R)の立体化学構造を持った目的化合物106mg(収率38%)を得た。
【０２５３】
0003999515.tif 000097
上記実施例を通して製造された本発明の化合物を下記表1a、表1b及び表1cに示した。
【０２５４】
【表１】
0003999515.tif 000098
【０２５５】
【表２】
0003999515.tif 000099
【０２５６】
【表３】
0003999515.tif 000100
【０２５７】
実験例
本発明による化学式1の化合物に対して下記の実験を実施して色々な薬理作用を調査した。
<実験例1> ラット摘出血管に対する弛緩作用
本発明による化学式1の化合物が血管を弛緩させる作用をするかどうかを調べるために下記の実験を行った。
【０２５８】
ラット(350〜450g、韓国化学研究所実験動物室)の後頭部を強打して気絶させて、頚動脈を通して失血させた後、胸部を切開した。胸廓大動脈を迅速に摘出して脂肪組織等を除去して、長さ3mmの大動脈環(aortic ring)を得た。内皮を除去する為に大動脈を生理液(Krebs Henseleit buffer)を含ませた綿棒で軽く擦った。血管組織を生理液を入れた水槽(organ bath)内に掛けて2gの静止張力(resting tension)を加えた。37 ℃で95%O2-5%CO2混合気体(carbogen)を供給しながらこの状態で1時間程度安定化させた。以後、10-5Mフェニルエプリン(phenylephrine)を加え、血管組織を収縮させて、生理液で2回洗浄して血管平滑筋の収縮弛緩反応が再現性を持って誘発されるようにした。
【０２５９】
一方、血管平滑筋は、3×10-6M メトキサミン(Methoxamine)を加えて強く収縮するようにさせた。メトキサミンによって血管の収縮反応が頂点に到達してそのまま維持される時、各々の水槽に試験物質及び対照物質を積み重なるように(1, 3, 10, 30μM) 加えて薬物による血管の弛緩作用を誘導させた。この時、対照群の物質には、各々血管弛緩作用が大きい1世代KATP開放剤のクロマカリム(Cromakalim)とBMS社のBMS-180448(化学式2の化合物)を使用した。
【０２６０】
薬物を投与する前にメトキサミンによる最高収縮力の変化率を計算して濃度-弛緩反応曲線を求め、線形回帰(linear regression)分析を通して薬物投与による50%弛緩濃度のIC50を算出した。結果を下記表2に示した。
【０２６１】
表2
化学式1の化合物の血管弛緩作用及び抗心臓虚血作用(心臓保護作用)
【０２６２】
【表４】
0003999515.tif 000101
【０２６３】
クロマカリムは、IC50が0.067μMで、メトキサミン(3μM)で収縮されたラット摘出大動脈に対して、強力な弛緩作用を示し、BMS-180448は、IC50が1.38μMと現れ、クロマカリムに比べて約20倍程度弱い血管弛緩作用を示した。反面、本発明の化合物は、IC50が9.78μM〜30μM以上まで高く現れ、対照薬物に使用したクロマカリムやBMS-180448より血管弛緩作用が顕著に低かった。
【０２６４】
本発明による化合物は、心臓にあるKATPに作用すると心臓を保護するようになり、末梢血管にあるKATPに作用すると血管を弛緩させ血圧を下げるように働く。したがって、本発明の化合物は、血管弛緩作用が少ないため心臓保護機能が大きいということが分かった。
【０２６５】
このように本発明の化合物は、血管を弛緩させる作用が非常に少ないため心臓保護機能の選択性が非常に向上されていることが分かる。
<実験例2> ラットの虚血心臓モデルに対する心臓保護作用
本発明による化学式1の化合物が虚血心臓を保護する作用を示すかどうかを調べるために、ラットに対する抗虚血効果(Antiischemic effects)を下記の実験を行った。
【０２６６】
雄のラット(350〜450g、韓国化学研究所実験動物室)にペントバルビタール (pentobarbital)を75mg/kgで腹腔注射してラットを痲酔した。気管切開術(tracheotomy)を実施した後、10ml/kgの一回心拍出量(stroke volume)、1分当り60心拍数で人工呼吸を実施した。大腿静脈と大腿動脈にカニューレを挿入して各々薬物投与及び血圧測定に利用した。一方、虚血性心筋損傷モデルで体温は結果に重要な影響をおよぼすため、直腸に挿入した体温測定用探針(probe)と恒温被覆調節ユニット(Homeothermic blanket control unit)を使用してラットの体温を37℃に一定に維持させた。以後、実験の間ラットの平均動脈圧(mean arterial blood pressure)と心拍度数(HR)を継続して測定した。この時、血圧測定には、スタタムP23XL圧力変換機(Statham P23XL pressure transducer, Grass Ins., MA, 米国)を使用して心拍度数測定には、血流速度計(tachometer, Biotachometer, Gould Inc., OH, 米国)を使用した。またゴウルド2000チャートレコーダー(Gould 2000 chart recorder, Gould Inc.)を使用して全ての変化を連続的に記録した。
【０２６７】
左冠状動脈は、セリー(Selye H.)の方法によって下記のようにオクルージョンさせた。つまり、左開胸術(left thoracotomy)によってラットの胸の一部を開いて左手の中指 (長指)で痲酔されたラットの右側の胸に圧力を加えて心臓を外部に押出した。手術糸(5-0 silk ligature)が付着した縫合用(suture)針で注意深く左心室下行性冠状動脈(left anterior desending coronary artery, LAD)を縫った後、すばやく心臓を胸廓腔 (thoracic cavity)に再位置させて、手術糸両端を外部に位置させた。手術糸両端は、 PEチューブ(PE100, 2.5cm)に通過させた後、20分間そのままおいて安定化させた。その後、大腿静脈に挿入されたカニューレを通して溶媒(vehicle)または薬物を投与した。薬物の効果が充分に現れるように30分間そのままにした。この時、対照群の薬物には、BMS-180448を使用し、試験薬物及び対照薬物は、0.3mg/kgの濃度で投与した。
【０２６８】
以後、糸にはめておいたPEチューブを心臓に押し入れチューブの端部分の糸を止血(hemostatic)ピンセットで引張って張りPEチューブを冠状動脈に垂直に密着させ 圧力を加えた。45分間そのまま置いて冠状動脈をオクルージョン (occlusion)させた後、止血ピンセットを除去して90分間再潅流させた。
【０２６９】
上記方法によって冠状動脈を再オクルージョン (reocclusion)させ、1% エバンスブルー 溶液(Evans blue)2mlを静脈投与した。以後、ペントバルビタールを過量静脈投与してラットを屠殺させて、心臓を取出し右心室と両側心房を除去した。左心室は、心尖から5〜6個の切片(slice)に水平切断して、切片各々の重さを測定した。心臓切片各々の表面は、ハイ-スコープ(Hi-scope)と画像分析用コンピュータプログラム(Image pro plus)を利用してコンピュータに入力して、それから各切片で青い色に着色された正常血流組織の面積と着色されなかった領域の面積を測定した。各切片の総面積に対して着色されなかった領域の面積比を求めて、ここに各切片の重さ掛けて各切片の危険領域のAAR(area at risk)を計算した。このように求めた各切片に対するAARを全て合わせてこれを全体左心室重さで割って、下記数学式1によってAAR(%)を求めた。
【０２７０】
数学式1
AAR (%) = (各切片に対するAARの合計)/(全体左心室の重さ) × 100
また、心臓切片を1%  2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライド燐酸緩衝溶液(2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライド(TTC) ホスフェートバッファー, 37 ℃, pH 7.4)で15分間培養させて、10%ホルマリン(formalin)溶液で20〜24時間の間固定させた。このようにすることによって心筋の脱水素酵素(dehydrogenase)と補助因子(cofactor)のNADHによって2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライドが還元されホルマザン染料 (formazan dye)になることによって、組織の正常部位は、赤いレンガ色(brick-red color)を帯びるようになる。反面、組織の梗塞部位には、脱水素酵素と補助因子がないため2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライドが還元されず、したがって、赤いレンガ色を帯びないようになる。
【０２７１】
上記のように、2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライドによって組織部位が着色されるかどうかによって各切片の正常領域及び梗塞領域(Infarct zone)の面積を測定した。このように求めた各切片に対する梗塞領域を全て合わせてこれを全体AAR重さまたは全体左心室重さで割って、下記数学式2によってIZ(%)を求めた。この実験モデルに置いては、IZ(%)が低くなるほど試験物質の抗虚血効果が強いものと判定した。 結果は、上記表2に示した。
【０２７２】
数学式2
IZ (%) = (各切片に対する梗塞領域の合計)
/(全体左心室または全体AARの重さ) × 100
上記表2から分かるように、痲酔されたラットを利用した虚血心筋損傷モデルで溶媒投与群は、危険領域(AAR)に対する心筋梗塞率(IZ/AAR, %)が、60.78%で虚血による心臓筋損傷が非常にひどいことが分かる。BMS-180448を投与した場合、心筋梗塞率は、39.14%で対照物質のBMS-180448が有意性ある抗虚血作用を示すことが分かる。反面、本発明の化合物は、心筋梗塞率自体だけを比較した場合、BMS-180448とほぼ同じかさらに優秀だった。しかし、本発明の化合物は、BMS-180448とは異り、血管弛緩作用が顕著に弱いため心臓選択性抗虚血作用がさらに優秀であることが分かった。特に、実施例40の化合物は、血管弛緩作用が非常に少ないながらも (IC50 > 30μM)心筋梗塞率は、30.25%と低く現れ、血管弛緩作用に対する心臓選択性が BMS-180448よりずっと優秀であることが分かる。また、上記実験で本発明の化合物は、血圧を減少させる作用をすることも無かった。このように本発明の化合物は、虚血性心血管疾患に対する保護作用が優秀であるので、これと関連した疾患の治療剤として使用できる。
<実験例3> ビーグル犬虚血心臓モデルに対する心臓保護作用
本発明による化学式1の化合物が、中動物以上でも虚血心臓を保護する作用を示すかどうか調べるために、ビーグル犬に対する抗虚血効果を下記の実験を通して調査した。ビーグル犬に対する実験は、グローバー(Grover)等の方法にしたがって下記のように行った[G.J. Grover et al., J. Cardiovasc. Pharmacol. 25, 40 (1995)]。
【０２７３】
雄性実験犬(beagle dog, 8〜12kg)にペントバルビタールナトリウム (pentobarbital sodium)35mg/kgを投与(i.v.)して痲酔させて、ペントバルビタールナトリウム3〜4mg/kgを実験が終わる時まで右側頭静脈(cephalic vein)に点滴注射(i.v.)して痲酔状態が一定に持続されるようにした。実験の間、呼吸を維持させるために気管支カテーテル(tracheal catheter)を気道内に挿入して、pCO2が30〜35mmHgに維持されるように室内空気と酸素を利用して呼吸器(SAR-830 model, CWE Inc, PA, 米国)を用いて呼吸させた。大腿動脈に挿入したカテーテルを通じて毎時間0.5mlの血液を採取して血中酸素量測程器(Blood gas analyzer 280, Ciba-Corning, MA, 米国)で血中酸素量を測定した。また直腸内体温測定を通して実験台の温度が調節されるようにして犬の体温を一定に(38±1℃)維持した。血圧及び心拍度数を測定するためにヘパリン (heparin)で処理したカテーテルを右側大腿動脈内に挿入した。この時、血圧測定には、スタタムP23XL圧力変換機(Statham P23XL pressure transducer, Grass Ins., MA, 米国)を使用して心拍度数測定には、血流速度計(tachometer, Biotachometer, Gould Inc., OH, 米国)を使用した。また、ゴウルド2000チャートレコーダー(Gould 2000 chart recorder, Gould Inc.)を使用して全ての変化を連続的に記録した。
【０２７４】
第5肋間部分を切開して胸廓を開いて周囲組織から左心室下行性冠状動脈(LAD)を分離して、後でLADをオクルージョンするために絹糸を掛けておいた。絹糸を掛けておいたすぐ上部分のLADを周囲組織から分離して、血流量を測定するためのドップラ-フロウプローブ(Doppler flow probe, Crystal Biotech, MA, 米国)を装着した後、チャートレコーダー(chart recorder, 1400 Thermal chart recorder, MFE Ins, MA, 米国)で血流量を記録した。一方、ポリグラフ(Grass model 7E polygraph)を利用して心電図を測定、記録した(Lead II)。試験物質を静脈内に点滴注射するために左側頭動脈にカテーテルを挿入固定した。手術後、全ての変数(parameter)が安定的な数値を維持した時、試験物質及び溶媒を下記のように静脈内注射した。
【０２７５】
LADをオクルージョンする前、実験動物は、対照群(PEG400)と試験物質投与群 (KR-31372, 50μｇ/kg/min)に分けた。試験物質は、LADをオクルージョンする10分前に静脈内に点滴注射し始めた。試験物質及び溶媒は、40分間投与した(総用量2mg/kg、総容積 PEG400 4ml以下)。試験物質を投与し始めてから10分経過後にLADを完全にオクルージョンした。90分経過後再び再潅流(reperfusion)させ、5時間の間痲酔状態を維持した。5時間後 LADにカニューレを通してリンガー液(Ringer's solution)を投与(cannulation)して、動物の血圧と同じ圧力で潅流させた。一方、ブルーバイオレット染料(blue violet dye) (1mg/kg, 10mg/ml)溶液を左心房内に注射した後、心臓を電気ショックさせて、摘出した。心房は、切取り、心室を0.5cm間隔で横断面で切断した次に、AARを測定するためにデジタルカメラで映像を読み取った。IZを測定するために組織を1%2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライド燐酸緩衝溶液に浸けて37℃で30分間培養してもう一度デジタルカメラで映像を呼び込んだ。AARとIZは、映像分析プログラム(Image-Pro Plus ver 3.0.1, Media Cybernetics, Maryland, 米国)を使用して測定して 分析した。IZは、AARに対する百分率で表した(数学式2参照)。この比率が低くなるほど本モデルに対する試験物質の効果が強いものと判定した。結果を上記表2に示した。
【０２７６】
上記表2から分かるように、痲酔されたビーグル犬を利用した虚血心筋損傷モデルでも本発明の化合物は、危険領域に対する心筋梗塞率が有意的に減少した数値を示した。具体的に溶媒投与群の場合、心筋梗塞率が52.39%と高く現れ、虚血による心臓筋損傷が非常に激しく、BMS-180448投与群の場合、心筋梗塞率が38.02%で抗虚血作用があった。反面、本発明による化合物を投与した場合、心筋梗塞率が28.03% (実施例24の化合物)まで低く現れた。また、上記実験で本発明の化合物は、血圧を減少させる作用をすることも無かった。
【０２７７】
このように、本発明の化合物は、中動物でも優秀な抗虚血作用を示す。特に、対照物質のBMS-180448より更に優秀な抗虚血作用を持っていることが分かった。  したがって、本発明の化合物は、虚血性心血管疾患に関連した治療剤として使用出来る。
<実験例4> 神経細胞保護作用
本発明による化学式1の化合物が、鉄による神経細胞の損傷及び壊死を抑制する作用を調べるために下記の実験を行った。
【０２７８】
17〜18日経った胎児ラットの脳から大脳皮質神経細胞(cortical neuron)を分離して5%CO2培養器(incubator)で37℃で7〜9日間培養した。神経細胞をMEM (Minimum essential medium)培地で二回洗って血清(serum)の濃度を0.2%に下げて試験物質を10、30μMになるように添加して30分間前処理した。この時、試験物質はDMSOに溶かした後、培地に稀釈して使用した。DMSOの最終濃度は0.1%を越えないようにした。対照群には、溶媒だけを添加したものを使用した。
【０２７９】
上記と同じ前処理過程後、最終濃度50μMになるようにFeSO4を添加してCO2 培養器で24時間の間培養した。培養過程で鉄によって乳酸塩脱水素酵素(lactate dehydrogenase, LDH)の量が増加した。培地に遊離されたLDHの量を測定して鉄の酸化毒性によって細胞が死滅した程度を評価した。試験物質の神経細胞保護効果は、対照群のLDH量を基準にした時、LDHの量が減少された程度で判断した。結果は、下記表3に示した。
【０２８０】
表3
化学式1化合物の神経細胞保護効果
【０２８１】
【表５】
0003999515.tif 000102
【０２８２】
上記表3から分かるように、本発明の化合物は、鉄による神経細胞損傷を濃度依存的に保護した。 特に、実施例38の化合物は、10μMの低濃度でも56%の抑制率を示し、実施例40の化合物は、30μMで97%の抑制率を示し、鉄による神経細胞の損傷を抑制する効果が非常に強力であることが分かった。
【０２８３】
このように、本発明の化合物は、優秀な神経細胞保護作用を示すため、神経細胞の損傷または壊死によって誘発される脳卒中、痴呆等のような神経系疾患だけではなく関節炎等の炎症性疾患、心筋梗塞症、急慢性組織損傷の予防剤または治療剤に有用に使用できる。
<実験例5> 脂質過酸化抑制効果
(1) 鉄によって誘発される脂質過酸化に対する抑制効果
本発明による化学式1の化合物が鉄によって誘発される脂質過酸化を抑制する効果を調べるために下記の実験を行った。
【０２８４】
ラット(rat)の脳をクレブス(Krebs)緩衝液(15mM HEPES, 10mM glucose, 140 mM NaCl, 3.6mM KCl, 1.5mM CaCl2, 1.4mM KH2PO4, 0.7mM MgCl2, pH7.4)に入れ均質化した後、12,000rpmで10分間遠心分離して上澄み液の脳均質物を脂質の原料に使用した。脳均質物に最終濃度400μMになるようにFeCl2を加えて37℃で30分間放置して酸化を促進させた。この時、試験物質は、100μMずつ添加した。対照群には、溶媒だけを添加したものを使用した。
【０２８５】
脳均質物に鉄が添加されると酸化が促進され脂質過酸化産物のマロンアルデヒド(Malonaldehyde, MDA)の量が増加して、MDA定量法で脂質過酸化程度を判断した。試験物質の脂質過酸化抑制効果は、対照群のMDA量を基準にした時MDAの量が減少した程度で計算した。
【０２８６】
一方、MDA定量法は、試料をTBA(2-thiobarbituric acid)と反応させ530nmでの吸光度を測定するのが一般的であるが、ゆでる段階が含まれる為に大容量の試料を処理するには不適合である。したがって、本発明では、TBAかわりに発色試薬のN-メチル-2-フェニルインドール(N-methyl-2-phenylindole)を使用した。この場合MDA一分子とN-メチル-2-フェニルインドールニ分子が反応して発色体を形成し、この発色体は、586nmで最大吸光度を示し、ゆでる過程を必要としない(BioxytechR LPO-586 Kitで吸光度測定)。実験結果は、下記表4aに示した。
【０２８７】
表4a
鉄によって誘発される脂質過酸化に対する抑制効果
【０２８８】
【表６】
0003999515.tif 000103
【０２８９】
上記表4aから分かるように、本発明の化合物は、鉄による脂質過酸化を抑制した。特に、実施例7、実施例32及び実施例40の化合物は、各々70%、85%及び79%の抑制率を示し、鉄による脂質過酸化を抑制する効果が非常に強力であることが分かった。
(2) 銅によって誘発される脂質過酸化に対する抑制効果
本発明による化学式1の化合物が、銅によって誘発される低密度脂質蛋白 (LDL, low density lipoprotein)の酸化を抑制する効果を調べるために下記の実験を行った。
【０２９０】
人の低密度脂質蛋白(human LDL, low density lipoprotein, sigma)を1mg/mlの濃度で蒸溜水に溶かして、EDTA(ethylenediamine tetraacetate)を除去するために4℃燐酸塩緩衝液で18時間の間透析する。この時、緩衝液は、3回替えた。EDTAを除去したLDL(100μg LDL蛋白/ml)にEDTAが除去された燐酸塩緩衝液を加えて、酸化剤にCuSO4(10μM)を加えた後、試験物質に実施例40の化合物または対照物質のトコフェロール(tocopherol)の最終濃度が、各々10-9、10-7及び10-5Mになるように入れた。  CuSO4を加えていない群を空試験群に、CuSO4は入れ、試験物質のかわりに溶媒を加えた群を溶媒群にした。上記混合物を37℃で18時間培養して、4℃でEDTA(200μM)を加えることによって酸化反応を終了させた。
【０２９１】
上記実験例5の(1)と同様に、銅(Cu+2)による酸化によってLDLの酸化産物のマロンアルデヒド(Malonaldehyde, MDA)の量が増加することによって、MDA定量法で脂質過酸化程度を判断した。MDA定量法は、試料をTBA(2-thiobarbituric acid)と反応させ530nmでの吸光度を測定した。1,1,3,3-テトラメトキシプロパン (1,1,3,3-tetramethoxypropane, Sigma社)を標準物質に使用した。試験物質の脂質過酸化抑制効果は、蛋白質mg当りMDAのnmol量を求めて、対照群のMDA量を基準にした時MDAの量が減少した程度で計算した。
【０２９２】
実験結果は、下記表4bに示した。
【０２９３】
表4b
銅によって誘発される脂質過酸化に対する抑制効果
【０２９４】
【表７】
0003999515.tif 000104
【０２９５】
上記表4bから分かるように、実施例40の化合物は、10-7及び10-5Mの濃度で銅によるLDLの酸化を対照物質のトコフェロールと類似な程度の有意性を持って抑制した。
(3) A7r5によって媒介される脂質過酸化に対する抑制効果
本発明による化学式1の化合物が、血管平滑筋細胞のA7r5(Rat thoracic aorta smooth muscle cell line, ATCC)によって媒介されるLDLの酸化を抑制する効果があるかどうかを調べるために下記の実験を実施した。
【０２９６】
A7r5細胞を10%FBS(牛胎児血清, fetal bovine serum)と1%抗生剤を含んだDMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)培地を使用して、24ウェルプレート(well plate)で培養した。燐酸塩緩衝液で細胞層を洗浄した後、10%FBSと1%抗生剤を含むDMEM培地を0.5ml/wellになるように加えた。細胞(2 x 10-5cells/ml)に試験物質 (10-6-10-4M)または対照物質のトコフェロールを各々(10-6-10-4M)を添加して、37℃で30分間前処理した後、A7r5単独またはA7r5にH2O2(10-7M)を加えてLDL(100μg/ml)に24時間の間露出させた。試験物質の脂質過酸化抑制効果は、上記実験例5の(2)と同様に対照群のMDA量を基準にした時 MDAの量が減少した程度で計算した。
【０２９７】
実験結果は、下記表4cに示した。
【０２９８】
表4c
A7r5細胞によって媒介される脂質過酸化の抑制効果
【０２９９】
【表８】
0003999515.tif 000105
【０３００】
上記表4cに見られるように実施例40及びトコフェロールは、実施された全ての濃度群でA7r5細胞でのLDL酸化を有意性を持って減少させた。特に、実施例40の化合物は、H2O2で酸化的ストレスを加えた場合にLDLの酸化抑制がさらに明瞭だった。
【０３０１】
実験例5の(1)、(2)及び(3)のように本発明の化合物は、優秀な脂質過酸化抑制効果を示し、脂質過酸化が促進され神経細胞内に酸化物質が蓄積されて誘発される脳卒中、痴呆のような退行性神経系疾患及び関節炎のような炎症性疾患、動脈硬化、心筋梗塞症、急慢性組織損傷の予防剤または治療剤に有用に使用できる。
<実験例6> NO生成阻害効果
本発明による化学式1の化合物が 、一酸化窒素(nitric oxide, NO)の生成を阻害する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３０２】
10%FBS(fetal bovine serum)を含むRPMI1640培地を使用してラットマクロファージ細胞株(Murine macrophage cell line)のRAW264.7細胞(米国, American Type Culture Collection社)を37℃の5%CO2培養器で維持させた。0.5%FBSを含むRPMI1640培地を使用して上記RAW264.7細胞の濃度を5×105細胞数/mlに調節して、96 ウェルプレート(well plate)に接種(5×104細胞数)して、CO2培養器で20時間の間培養した。以後、培地を除去して試験物質を含んだ培地を33、100μMになるように添加して、1時間の間前処理した。この時、試験物質は、DMSOに溶かした後、培地を使用して各々の濃度に稀釈して使用した。各ウェルに含まれたDMSOがRAW264.7細胞の一酸化窒素生成に影響を与えないようにするためにDMSOの濃度を0.1%以下にした。
【０３０３】
1時間の前処理過程が終わった後、最終濃度1μｇ/mlになるようにリポポリサッカライド(Lipopolysaccharide, LPS, E. coli serotype 055:B5)を添加して、細胞を活性化させて、CO2培養器で24時間の間培養した。この反応によってNOが生成され、培地に遊離されたNOは、亜硝酸イオン(NO2-)の形態でグリース(Griess)試薬を使用して定量した。対照群には、試験薬物の代わりに同量の溶媒(vehicle)を処理したものを使用した。一方、亜硝酸塩標準試薬(Nitrite standard)を使用して調査した結果、試験薬物自体がNOの定量を妨害しないものと現れた。
【０３０４】
試験物質のNO生成阻害効果は、対照群でLPSによって増加されたNOの量を基準にした時、NOの量が減少した程度で計算した。その結果を、下記表5に示した。
【０３０５】
表5
化学式1化合物がNO生成を阻害する効果
【０３０６】
【表９】
0003999515.tif 000106
【０３０７】
上記表5から分かるように、本発明の化合物は、LPSのような内毒素によってNOの生成が促進されることを濃度依存的に阻害した。特に、実施例38の化合物は、33μMの低濃度でも56%の抑制率を示し、100μMでは、85%の高い抑制率を示した。また、実施例7及び実施例32の化合物は、100μMで各々88%、83%の高い抑制率を示し、本発明による化学式1の化合物は、NO生成を阻害する効果が非常に強力であることが分かった。
【０３０８】
このように、本発明の化合物は、優秀なNO生成阻害効果を示すため、NOが多量生成され神経細胞が損傷または壊死することによって誘発される脳卒中、痴呆等の神経系疾患だけではなく関節炎等の炎症性疾患、心筋梗塞症、急慢性組織損傷の予防剤または治療剤に有用に使用できる。
<実験例7> 脳虚血-再潅流による脳損傷保護効果
本発明による化学式1の化合物が、脳虚血-再潅流による脳損傷を保護する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３０９】
ペントバルビタールナトリウム40mg/kgを注射して雄SDラット (Sparague-Dawley Rat, 350±50g、三育)を痲酔させた後、大腿静脈と動脈に細管 (PE-10 tubing)を挿入して左頚動脈を露出させた。手術5分前に硫酸ヘパリン(heparin sulfate)20μｇを腹腔内注射した。大腿動脈に血圧測定素子を挿入して持続的に動脈圧を測定した。大腿静脈から約10mlの血液を取出し血圧を30mmHgまで下げた。もし、7ml程度の採血がなされるまで時まで血圧が100mmHg以下に下がらなければ、交感状態 (sympathetic tone)がとても高いものと判断できる。この場合には、血圧30mmHgまで下げることができないかまたは成功しても手術後ラットの死亡率(mortality)が高いため実験から除外した。
【０３１０】
血圧30mmHgに維持しながら動脈用クランプ(aneurysm clamp)で左頚動脈を20分間閉鎖して虚血を起こし、抜いておいた血液と0.84%重炭酸ナトリウムの塩水 (bicarbonate saline)5mlを使用して再潅流した。虚血を起こさせる間、熱毛布(thermal blanket)と白熱電灯を利用してラットの体温を37±0.5℃に一定に維持させた。手術後回復する間、2時間以上体温を一定に維持させた後、完全に回復したら動物観察室に移した。動物観察室は室温(27℃)、湿度(60%)、明暗週期(light cycle) (12-12時間)等を一定に維持させた。
【０３１１】
手術後24時間経過後、ラットを断頭して犠牲にして、はやい時間(3分)内に脳を摘出した。摘出された脳は、氷上で脳マトリックス(brain matrix)を利用して2mm間隔に切って冠状切断片(coronal section)6個を得た。切断片は、2%2,3,5-トリフェニルテトラゾリウムクロライド溶液を使用して、37℃で30分間染色した。染色された切断片を写真に撮して現象し印画した後、映像分析器(Image Analyzer)を使用して全体脳の面積に対する壊死面積を%で示した。
【０３１２】
一方、試験物質は、手術する30分前と頚動脈閉鎖2、4、16時間後に各々の用量で投与して全部で4回腹腔注射した。総投与量は、30mg/kgであった。対照群には、試験物質の代わりに溶媒(vehicle)だけを投与したものを使用し、比較群には、非競争的な(noncompetitive)NMDA(N-methyl-D-aspartate)拮抗剤(antagonist)のMK801(RBI, (SR,10S)-(+)-5-Methyl-10,11-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyclohepten-5,10-imine hydrogen maleate)を同量投与したものを使用した。
【０３１３】
試験物質が脳虚血-再潅流による脳損傷を保護する効果は、対照群で脳の%壊死面積を基準にした時の壊死面積が減少される程度(reduction)で計算した。その結果を、下記表6に示した。
【０３１４】
表6
化学式1化合物が脳虚血-再潅流による脳損傷を保護する効果
【０３１５】
【表１０】
0003999515.tif 000107
【０３１６】
比較群の30mg/kgのMK801処理群では、梗塞部位(infarct volume)が29.8%と現れ、対照群に比べて梗塞部位を24.8%減少させた。反面、実施例40の化合物を同量処理した場合には、梗塞部位が23.0%で、対照群に比べて梗塞部位を42.0%減少させ、従来の物質のMK801より脳虚血-再潅流による脳損傷を保護する効果が約2倍優秀であることが分かった。
【０３１７】
またMK801処理群では、ラットの運動性が減少する等の副作用が現れたが、 実施例40の化合物を投与した場合には、運動性を含むいかなる行動の変化も示さなかった。
【０３１８】
このように、本発明の化合物は、脳虚血-再潅流による脳損傷を保護する効果が優秀であるため、脳卒中、痴呆等の脳が損傷されて誘発される色々な疾患に有用に使用できる。
<実験例8> 新生血管形成を抑制する効果
本発明による化学式1の化合物が、新生血管の形成を抑制する効果を調べる為に下記の実験を行った。
(1) 99mTc-DTPA(Technetium-diethylenetriamine pentaacetic acid)除去(clearance)効果
厚み5mm、直径12mmのポリエステルスポンジを血管成長のためのマトリックス(matrix)に使用した。各々のスポンジ内部に長さ5mmのポリエチルレンチューブを糸で固定した。クロラール水和物(Chloral hydrate)300mg/kgを腹腔内注射してスプラッグ-ダウリー(Sprague-Dawley)系ラットを痲酔させた。ラットの首と背中の間の毛を刈った後、10mmを切開して皮下にスポンジが入る程度の空間を確保して、空いた空間にスポンジを入れてチューブが揺れないように固定した。チューブの穴は、感染を防止する為に薬物を投与する時を除いて常に塞いでおいた。
【０３１９】
新生血管が形成されるように誘導する為の薬物としては、エンジオテンシンII (AII)を使用した。エンジオテンシンIIは、PBS緩衝液(phosphate buffered saline)に溶かして使用し、100nmolの溶液50μｌを注射した。試験物質の本発明の化合物は、PBSに溶かして投与量が各々0.1、0.3、1.0mg/kgになるようにチューブを通して注入した。 対照群としては、溶媒のPBSだけを同量注入したものとエンジオテンシンIIだけを注入したものを使用した。新生血管形成抑制効果は、試験物質を投与して7日経過後に測定した。
【０３２０】
移植されたスポンジの血流状態は、99mTc-DTPA (Technetium-diethylenetriamine pentaacetic acid)除去率(clearance)を比較して知ることができた。試験物質投与後7日が経過すると、ラットを再びクロラール水和物30 mg/kgで痲酔させて、消毒したPBSに溶かした99mTc-DTPA溶液50μｌ(0.5mCi)をチューブを通して注意深く注射した。99mTc-DTPAの量は、ガンマー閃光検出器で 60分間測定した。低エネルギー高分解能装置(Low Energy High Resolution)が装着されたガンマーカメラ(ADAC VERTEX/SOLUS Gamma Camera)でフレーム当り60秒ずつ60フレームを撮して連続映像をコンピュータ(Pegasys sun computer)に収録して分析した。
【０３２１】
99mTc-DTPAの除去率は、下記数学式3で計算して、その結果を、下記表7aに示した。
【０３２２】
数学式3
99mTc-DTPA除去率 (%)=(最初の放射能-6番目の放射能)/(最初の放射能)×100
表7a
化学式1化合物が新生血管形成を抑制する効果
【０３２３】
【表１１】
0003999515.tif 000108
【０３２４】
溶媒だけを投与した対照群では、99mTc-DTPAの除去率が30.3%である反面、エンジオテンシンIIを投与した場合には、除去率が44.71%と現れ、エンジオテンシンIIによって新生血管の形成が誘導されたことが分かった。反面、実施例24の化合物を0.1mg/kg投与した場合には、除去率が26.90%と現れ、本発明の化合物がエンジオテンシンIIによって新生血管の形成が誘導されることを抑制することが分かった。また、実施例24の化合物を各々0.3、1.0mg/kg投与した場合には、除去率が18.22%、3.38%で、エンジオテンシンIIによる新生血管形成を濃度依存的に抑制した。特に、実施例24化合物を1.0mg/kg投与した場合には、除去率が3.38%と現れ、新生血管の形成がほぼ完璧に抑制された。
(2) HUVEC細胞での管形成(Tube Formation)抑制効果
試験物質の血管新生抑制活性を細胞段階で測定するために次のような実験を実施した。人のへその緒の血管内皮細胞のHUVEC(Human Umbilical Vein Endothelial Cell)を培養してマトリゲル(matrigel)上で毛細血管と同じ構造の管形成をさせて、各化合物が管形成におよぼす影響を溶媒だけ処置した対照群と比較観察することによって血管新生抑制作用を間接的にインビトロ(in vitro)で確認した。結果は、下記表7bに示した。
【０３２５】
表7b
HUVEC細胞での管(tube)形成抑制効果
【０３２６】
【表１２】
0003999515.tif 000109
【０３２７】
上記表7bのように実施例2、10、40及び52の化合物は、10μMの濃度で管形成阻害効果が確認された。100μMの濃度では、管形成が強く阻害される濃度依存的効果を示した。
【０３２８】
このように、本発明の化合物は、新生血管の形成を抑制する効果が優秀であるため、新生血管形成をはじめとするリューマチ性関節炎、乾癬、エイズ合併症、癌、糖尿性網膜症等の色々な疾病治療に有用に使用できる。
<実験例9> 過酸化水素によって誘発される細胞内活性酸素の生成抑制効果
本発明による化学式1の化合物が、過酸化水素によって誘発された細胞内活性酸素を抑制する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３２９】
細胞内活性酸素(reactive oxygen species)による酸化程度は、H2DCFDA(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, Molecular Probes, Eugene, OR, USA)を使用して測定した。非極性のH2DCFDAは、細胞膜を通過すれば細胞内 エストラーゼによって膜非透過性のH2DCF(2',7'-dichlorodihydrofluorescein)に変わる。H2DCFは、低蛍光性であるが、細胞内活性酸素によって高蛍光性の2',7'-dichlorofluorescein(DCF)に変わる。H2DCFDAの酸化程度は、DCFの生成程度から分かる。実験に使用した細胞は、内皮細胞のHUVEC(正常人の静脈endothelial cell line, ATCC)または血管平滑筋細胞のA7r5(Rat thoracic aorta smooth muscle cell line, ATCC)である。HUVECは、10%FBS(牛胎児血清、fetal bovine serum)、ヘパリンナトリウム塩(0.1mg/ml)、内皮細胞成長補助剤(0.03-0.05mg/ml)及び1%抗生剤を含むカインズ（Kaighn's）F12K培地で、A7r5は、10%FBS(牛胎児血清、fetal bovine serum)及び1%抗生剤を含むDMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)培地を使用して培養した。 細胞単一層の培地を除去して、各濃度の試験物質(10-7-10-5M)、対照物質のトコフェロール(10-7-10-5M)またはプロブコール(10-7-10-5M)を添加して、37℃で30分間 前処理した後、最終濃度10-6及び10-5MになるようにH2O2を添加して、20分間処理した。H2DCFDAを5μM含む50mM燐酸塩緩衝液で37℃で2時間の間、光を遮断して処理した後、蛍光分析器(Fluorescence reader, FL600, Biotek Instruments)でH2DCFDAの酸化程度を測定した(485nm excitation, 530nm emission)。実験結果は、下記表8に示した。
【０３３０】
表8
過酸化水素によって誘発された細胞内活性酸素の生成抑制効果
【０３３１】
【表１３】
0003999515.tif 000110
【０３３２】
上記表8のように実施例40の化合物は、過酸化水素(H2O2)によって誘発されるHUVEC細胞での活性酸素生成をトコフェロールと類似か、若干優秀な程度に抑制した。実施例24の化合物は、10-6M以上の濃度では、A7r5細胞での過酸化水素による活性酸素生成を完全に抑制するだけではなく除去する結果を得た。
【０３３３】
このように、本発明の化合物は、活性酸素生成を抑制または除去する抗酸化効果かあるため、老化、痴呆等の退行性神経系疾患だけではなく関節炎等の炎症性疾患、動脈硬化、心筋梗塞症、急慢性組織損傷の予防剤または治療剤に有用に使用できる。
<実験例10> 酸素ラジカル吸収力(ORAC)測定
本発明による化学式1の化合物が、酸素ラジカルを吸収、消滅させる効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３３４】
ORAC(oxygen radical absorbance capacity)実験は、水溶液で試験物質によるラジカル吸収力を測定できるインビトロ(in vitro)実験方法である。β-フィコエリトリン(β-phycoerythrin,β-PE)を指示剤にAAPH(2,2'-azobis(2-amidinoprapane) dihydrochloride)を過酸化ラジカル発生剤に使用した。反応液は、75mM燐酸塩緩衝液 (pH7)に10-6及び10-4Mの試験物質、1.76 x 10-8Mのβ-PE及び3 x 10-3MのAAPHを含み、最終量を2mlにして、24ウェルプレートで反応させた。試験物質は、アセトンに溶かした後、反応液に加えた。AAPHを加えた後、37℃で反応させて5分毎に蛍光分析器(Fluorescence reader, FL600, Biotek Instruments)で蛍光度を測定した(485nm excitation, 590nm emission)。ORACユニット(unit)は、試験物質存在時のβ-PEの曲線下面積 (area under the curve)をトロロックス(Trolox)による面積と比較して計算した。つまり、1 ORACユニットは、トロロックス 1μMによる保護効果(ラジカル吸収力)を示す。試験結果を、下記表9に示した。
【０３３５】
表9
酸素ラジカル吸収効果
【０３３６】
【表１４】
0003999515.tif 000111
【０３３７】
上記表9に見られるように実施例40の化合物は、10-6及び10-4Mの濃度で対照物質のプロブコールまたはトコフェロールより約2倍程度の高いORACユニット値を示し、優秀な酸素ラジカル吸収力を示した。
【０３３８】
このように、本発明の化合物は、酸素ラジカルを吸収する作用による抗酸化作用があり、老化、痴呆等のような退行性神経系疾患だけではなく関節炎等の炎症性疾患、動脈硬化、心筋梗塞症、急慢性組織損傷の予防剤または治療剤に有用に使用できる。
<実験例11> 虚血網膜に対する細胞保護効果
本発明による化学式1の化合物が、虚血網膜細胞を保護する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３３９】
試験物質は、DMSOに100mMになるように溶かした溶液を作っておいた後、高圧滅菌(autoclave)した生理食塩水で100、50、30μMの濃度に稀釈して、虚血誘発30分前に10μｌを眼球内に注射した。
【０３４０】
成人ラットをクローラル水和物(chloral hydrate)400mg/kgで痲酔させた後、血圧計を変形して作った圧力計に30ゲージ(gauge)注射針を連結させて、シリンダー内の圧力を血圧(約140mmHg)より高い160-180mmHgに維持させた。右目を1%トロピカマイド(tropicamide)で3〜5分間隔で三回処理して散瞳させ、次に30ゲージ注射針を挿入して前房に圧力が加わるようにした。手術顕微鏡で網膜の血管に血液供給が遮断されたことを確認して30分間、前房内の圧力を160-180mmHgに維持させた。虚血誘発24時間後に眼球を摘出して網膜を分離し、細胞の損傷過程を調査した。神経節(Ganglion)細胞層では、250μm×25μm内の細胞の数を、内核層(Inner nuclear layer)では、150μm×25μm内の細胞の数を数えて、正常を100%として、本発明の化合物の細胞保護効果(%)を現わした。
【０３４１】
対照群には、施術を受けていない左目を使用した。試験結果を、下記表10に示した。
【０３４２】
表10
虚血網膜に対する細胞保護効果
【０３４３】
【表１５】
0003999515.tif 000112
【０３４４】
上記表10から分かるように、実施例40の化合物は、網膜の神経節(ganglion)細胞層及び内核細胞層全てにおいて、虚血による細胞死滅を濃度依存的に保護した。このように、本発明の化合物は、網膜虚血による細胞死滅を抑制する効果があるため、虚血によって神経節細胞が損傷される緑内障に有用に使用できる。
<実験例12> 糖尿ラットにおける神経伝達速度改善効果
本発明による化学式1の化合物が、糖尿ラットの損傷された神経伝達速度を改善する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３４５】
糖尿は、ラットの腹腔にストレプトゾトシン(Streptozotocin, 65mg/kg)を注射して誘発させた。試験物質は、生理食塩水:エタノール:トゥイン80(8:1:1)溶液2mlに溶かし、1日1回経口投与した。刺激による活動電圧は、糖尿ラットをペントータルで痲酔させた後、脊椎神経を露出させ、2個の刺激電極を神経の基部面端(proximal ends)と末端端(distal ends)に付けて、測定電極を後ろ足の指の筋肉に付けて測定した。各刺激から活動電圧までの潜伏期の差異で二つの刺激電極間の距離を過ぎる神経伝達速度(MNCV, Motor Nerve Conduction Velocity)を計算した。既存の知られている糖尿で損傷された神経伝達速度改善剤にリポ酸(lipoic acid)を100mg/Kg投与した群を対照群として、本発明の化合物の神経伝達速度回復率を比較した。糖尿で損傷された神経伝達速度の回復率は、下記数学式4で計算して、その結果を下記表11に示した。
【０３４６】
数学式4
神経伝達回復率(%)=(薬物投与群のMNCV-糖尿群のMNCV)/(正常群のMNCV-糖尿群のMNCV)×100
表11
糖尿ラットの神経伝達速度の回復効果
【０３４７】
【表１６】
0003999515.tif 000113
【０３４８】
上記表11から分かるように、糖尿群は、正常群に比べて神経伝達速度が顕著に減少し、リポ酸100mg/Kg投与群は、完璧に糖尿ラットの神経伝達速度を回復させた。実施例40の化合物も30mg/Kg投与で糖尿によって遅延した神経伝達速度を有意性を持って回復させた。
<実験例13> 糖尿性神経症に対する疼痛反応回復効果(高温プレート(Hot Plate) 試験)
本発明による化学式1の化合物が、糖尿ラットの損傷された疼痛反応を改善する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３４９】
上記実験例12と同じ方法で糖尿を誘発させた糖尿ラットを50℃高温プレートに入れ、なめる(licking)等の回避反射が起こるまでの潜伏期を測定して、疼痛反応に対する実験物質の効果を測定した。疼痛反応の改善率(%)は、下記数学式5で計算して、その結果を下記表12に示した。
【０３５０】
数学式5
疼痛反応の改善率(%)=(薬物投与群の疼痛反応-糖尿群の疼痛反応)/(正常群の疼痛反応-糖尿群の疼痛反応)×100
表12
糖尿ラットでの疼痛反応に対する効果
【０３５１】
【表１７】
0003999515.tif 000114
【０３５２】
高温プレート実験でリポ酸は、有意性ある効果を示した反面、実施例40の化合物は、完璧に糖尿によって低下した疼痛反応を回復させた。
【０３５３】
実験例12及び13の結果から抗酸化作用、神経細胞壊死保護作用等が確認された本発明の化合物は、糖尿ラットにおいて神経伝達速度及び疼痛反応を改善させるので、本発明の化合物は、糖尿性神経症または糖尿性末梢神経障害の予防または治療剤に使用できる。
<実験例14> 低酸素性脳損傷に対する保護効果
本発明による化学式1の化合物が、低酸素性新生ラットモデルにおいて脳損傷を保護する効果を調べるために磁気共鳴法(MRS, magnetic resonance spectrum)を利用して下記の実験を行った。
【０３５４】
新生ラットの局所的低酸素性脳損傷モデルは、新生児の脳と良く似た成熟度を持っていて、効果判定に必要なn数の実験が容易な長所がある為、現在低酸素性脳損傷に対するメカニズム及び治療効果判定に関する研究に最も多く使用されている。このモデルで組織学的検査結果と磁気共鳴分光の変化との間に有意義な相関関係があることを明らかにした研究結果を利用して、生体内低酸素性脳損傷に対する保護効果を判定した[Van der A. Toorn et al.(1996) Magnetic Resonamce in Medicine, 36 , 914-922]。虚血によって脳細胞が損傷されると血管-脳障壁(BBB, blood-brain barrier)を含んだ脳細胞膜の破壊によって磁気共鳴スペクトルで脂質濃度が増加して、脂質濃度の増加と細胞死滅(apoptosis)が相関性があると報告されている[A. Bizzi et al.(1996)Magnetic Resonance Imaging, 14  581-592]。したがって、脂質の量と神経細胞の標識物質のNAA(N-acetylaspartate)及びクレアチン(creatine)の量を比較した  Lipid/NAA及びLipid/Crの値は、虚血による脳損傷の形態学的変化及び細胞死滅と相関性があることが確認されている。
【０３５５】
体重10〜15gの生後7日以内の新生ラットに薬物を腹腔内投与して、薬物投与1 時間後に2時間の間低酸素症を誘発した後、薬物を投与しない溶媒群と低酸素性脳損傷の保護効果を比較して薬物の効果を測定した。
【０３５６】
水素磁気共鳴分光は、損傷後1日目組織学的検査直前に得て、Lipid/NAA(N-acetyl aspartate)またはLipid/Cr(creatine)を計算した。Lipid/NAA及びLipid/Crは、細胞損傷の重要な指標であり、値が小さいほど脳保護効果が大きいことを意味する。
【０３５７】
表13
水素磁気共鳴分光を利用した低酸素性脳損傷保護効果
【０３５８】
【表１８】
0003999515.tif 000115
【０３５９】
上記表13から分かるように、実施例40の化合物は、低酸素性新生ラットモデルで、水素磁気共鳴分光を測定した結果、Lip/NAA及びLip/Cr値を対照群と比較時、有意性を持って低下させ、脳保護効果があることを示唆した。このように、低酸素性脳損傷に対する保護効果がある本発明の化合物は、新生児低酸素症の予防及び治療に有用に使用できる。
<実験例15> 血管平滑筋細胞増殖抑制効果(DNA合成抑制効果)
本発明による化学式1の化合物が、平滑筋細胞の増殖を抑制する効果を調べる為に下記の実験を行った。
【０３６０】
ラットの大動脈平滑筋細胞を24ウェルプレートで10%牛胎児血清(FBS, fetal bovine serum)を含むDMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)培地を使用して3 日間培養した。 培養された細胞が融合を成せば、DMEM-10%FBSを除去して無血清 DMEM培地で48時間もう一度培養して休眠状態(quiescent)で製作した。試験物質(1μM)を前処理して15分後に細胞増殖を促進するアンジオテンシンII(angiotensin II, 10-7 M)を処置して72時間の間培養した後、DNA合成を測定するために[3H]-チミジン([3H]-Thymidine)1μCi/mlを各ウェル(well)に処理し、4時間の間培養した。 DMEM細胞を3回洗って(2x1ml)細胞に結合されない同位元素を除去した後、0.25%トリプシン-EDTA (ethylenediamine tetraacetate)0.1mlを30分間処置して細胞を取り除いた。0.2N NaOHを0.25mlずつ処置して90分間放置した後、15% TCA(trichloroacetic acid)を1ml添加して2時間以上37℃、5%CO2下で、もう一度放置した。全ての試料を真空下で濾過紙 (GF/B Whatman glass microfiber filter)で濾過した次に濾過紙を5%TCA 2mlで3回ずつ洗浄し、濾過紙をバイアルに入れ放射線同位元素の活性を液体閃光分析器(Liquid Scintillation Analyzer, Packard, TRI-CARB 2100TR)で測定し、合成されたDNAに結合された[3H]-チミジンを計算して下記表14に示した。
【０３６１】
表14
血管平滑筋細胞増殖抑制効果
【０３６２】
【表１９】
0003999515.tif 000116
【０３６３】
上記表14から分かるように、実施例2、5及び7の化合物は、60%以下の[3H]-チミジンの結合率を示し、DNA合成が有意性を持って抑制された。特に、実施例7の化合物は、37.8%の低い結合率を示した。したがって、本発明の化合物は、血管平滑筋細胞の増殖を抑制する効果があり、狭心症、心筋梗塞、動脈硬化等による冠状血管狭窄の施術後に高い比率で再び再発される再狭窄症(Restenosis)の予防及び治療に応用できる。
<実験例16> ラットに対する経口投与急性毒性実験
一方、化学式1の化合物の急性毒性を調べる為に下記の実験を行った。
【０３６４】
6週齢の特定病源不在(SPF)SD系ラットを使用して急性毒性実験を実施した。一群当り2匹ずつの動物に実施例1、2、3、5、7、8、9、10、13、14、15、19、22、23、24、25、26、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、44、46、47、48、49、51、52、57、58、60、62、64、67、68、69、71、72から得た化合物を各々0.5%メチルセルロース溶液に懸濁して、1g/kg/15mlの用量で単回経口投与した。試験物質投与後、動物の斃死有無、臨床症状及び体重変化等を観察して血液学的検査と血液生化学的検査を実施した。剖検して肉眼で腹腔臓器と胸腔臓器の異常の有無を観察した。
【０３６５】
試験結果、試験物質を投与した全ての動物で特記に値する臨床症状は無く、斃死した動物も無かった。また、体重変化、血液検査、血液生化学検査、剖検所見等にも毒性変化は、観察されなかった。以上の結果と実験された化合物は、全てのラットで1g/kgまで毒性変化を示さなかったため、経口投与最小致死量(LD50)は、1g/kg以上の安全な物質であると判断された。
【０３６６】
上記で詳しく見たように、本発明による化学式1の化合物は、血管を弛緩させないため、血圧の降下を起こさずに虚血心臓に対する保護作用をあらわし、活性酸素による神経細胞損傷を防止してNOの生成及び脂質過酸化を抑制する。また本発明の化合物は、脳虚血-再潅流による脳損傷及び新生ラットの低酸素性脳損傷を保護して、虚血網膜及び糖尿性神経症に対する細胞保護作用を現わす。この他にも、新生血管形成を抑制する作用と血管平滑筋細胞の増殖を抑制する作用等の非常に多様で幅広い薬理作用を示し、副作用も少ない長所がある。したがって、本発明による上記化学式1で表示されるベンゾピラニルグアニジン誘導体または薬学的に許容されるその塩を有効性分として含む薬学的組成物は、心臓保護剤、神経細胞保護剤、脳損傷保護剤、保管用臓器保護剤、NO生成阻害剤、抗酸化剤、新生血管生成抑制剤または血管再狭窄抑制剤に使用できる。