(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
６−〔４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−テトラゾール−５−イル)ブトキシ〕−３,４−ジヒドロカルボスチリルまたはその塩を有効成分とする肝実質細胞増殖因子産生増加剤（ただし、腎疾患治療剤を除く）。
【請求項２】
有効成分が６−〔４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−テトラゾール−５−イル)ブトキシ〕−３,４−ジヒドロカルボスチリルまたはその塩を有効成分とする肝実質細胞増殖因子産生増加による急性肝炎、慢性疾患、肝硬変および劇症肝炎から選ばれる肝疾患の治療薬、肝手術後の肝再生促進薬、抗癌剤または創傷治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は肝実質細胞増殖因子（hepatocyte growth factor：ＨＧＦ）産生増加剤、さらに詳しくは、一般式(１)
【化２】
0003944257.tif 000002
[式中、Ａは低級アルキレン基、Ｒはシクロアルキル基、カルボスチリル骨格の３位と４位間の結合は１重結合または２重結合を示す]
で示されるカルボスチリル誘導体またはその塩、好ましくは、６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−ジヒドロカルボスチリルまたはその塩を有効成分とする肝実質細胞増殖因子産生増加剤に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】
肝細胞は、肝障害が起こると増殖できる最終分化細胞であり、既に、１９５０年代には、肝細胞の増殖を促進し、肝再生を駆動する液性因子の存在が示唆されていた。肝実質細胞増殖因子（ＨＧＦ）は、１９８４年中村らによって７０％部分肝切除ラット血清中に見出された因子である（Ｂiochem. Ｂiophys. Ｒes. Ｃommun. １２２：１４５０−１４５９，１９８４参照）。ヒトのＨＧＦについては、合田らにより、劇症肝炎患者の血清から分離精製されている（Ｅ．Ｇohda et al., Ｅxp. Ｃell Ｒes., １６６，栄３９−１５６，１９８６；Ｈ．Ｎakayama et al., Ｂiomed. Ｒes., ６，２３１−２３７，１９８５；特願昭６１−１６６４９５号等参照）。
かかるＨＧＦは、肝細胞の増殖を著明に促進する活性を有し、血中におけるその活性は、劇症肝炎の病態、特に昏睡度の変動に密接に関連して変動し、回復期には低下することが知られている。その後、ＨＧＦの研究において、ＨＧＦが前記の肝細胞の増殖作用以外に多様な生物活性を有することが知られている。多様な生物活性としては、１）腎尿細管細胞、ヒト表皮ケラチノサイト、ヒト表皮メラノサイト、マウスケラチノサイト（ＰＡＭ２１２），血管内皮細胞およびミンク肺上皮細胞（ＭｖｌＬｕ）等の細胞の増殖を促進；２）マウスメラノーマ（Ｂ６／Ｆ１）、ヒト偏平上皮癌（ＫＢ）、ヒト肝癌（ＨｅｐＧ２）およびラット肝癌（ＦａＯ細胞）等の癌細胞の増殖を抑制；３）ヒト表皮ケラチノサイト、イヌ腎上皮細胞（ＭＤＣＫ）、ヒト肝癌（ＨｅｐＧ２）、マウスケラチノサイト（ＰＡＭ２１２）、ヒト肺上皮細胞（Ｌｕ９９）およびヒト表皮癌（Ａ４３１）等の種々の細胞の運動性を促進；４）イヌ腎上皮細胞（ＭＤＣＫ）において管腔形成等が知られている（中村、日本臨床、５０巻８号、２２６−２３３、１９９２；中村、日本臨床、５１巻２号、１８３−１９１、１９９３等参照）。
ＨＧＦは、一次構造が明らかにされており、遺伝子組換え技術等の技術で製造されているが、製造、精製工程は、極めて厖大かつ複雑であり、ＨＧＦの入手は容易でない。一方、生体内でのＨＧＦの産生を促進できれば、ＨＧＦの前記生物活性に基づいて種々の疾病の治療に有効であるが、これまで、そのようなＨＧＦの産生を増加させる薬剤は殆ど知られていない。しかして、ＨＧＦの産生を増加させる薬剤の開発が望まれている。
なお、本発明で用いる前記一般式（１）で示されるカルボスチリル誘導体またはその塩は、特公昭６３−２０２３５号に開示されており、その詳細な製造法のほか、これらの化合物が抗血栓剤、脳循環改善剤、消炎剤、抗潰瘍剤、降圧剤、抗喘息剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤などとして有用なことが記載されている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、ＨＧＦの産生を増加させる薬物を見い出すべく、種々研究を重ねるうちに、前記一般式(１)で示されるカルボスチリル誘導体、なかんずく、６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−ジヒドロカルボスチリルまたはその塩がＨＧＦの産生を増加する作用を有し、ＨＧＦ産生増加剤として有用であることを見い出し、本発明を完成するに至った。
本発明のカルボスチリル誘導体（１）を有効成分とするＨＧＦ産生増加剤は、ＨＧＦを増加させることにより、ＨＧＦ生物活性が関連する種々の疾患、例えば、急性肝炎、慢性肝炎、肝硬変および劇症肝炎等の各種肝疾患の治療薬、肝切除等の肝手術後の肝再生促進薬、腎不全等の腎疾患治療薬、抗癌剤、創傷治療薬およびＤＣＡ（derectional coronary atherectomy）等施行後の血管内皮細胞増殖促進剤などとして有用である。
【０００４】
【発明の実施の形態】
前記一般式(１)における低級アルキレン基としては、メチレン、エチレン、トリメチレン、テトラメチレン、ペンタメチレン、ヘキサメチレン、２−メチル−トリメチレンなどの炭素数１〜６のアルキレン基が挙げられ、とくにテトラメチレンが好ましい。シクロアルキル基としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルなどの炭素数３〜８のシクロアルキル基が挙げられ、とくにシクロヘキシルが好ましい。
【０００５】
本発明のＨＧＦ産生増加剤は、前記一般式(１)で示されるカルボスチリル誘導体またはその塩を一般的な医薬製剤の形態に調製される。そのような製剤は通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形剤を用いて調製される。この医薬製剤としては各種の形態が治療目的に応じて選択でき、その代表的なものとして錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、各種経口用液剤（溶液剤、乳剤、懸濁剤）等の経口剤、坐剤、注射剤(液剤、懸濁剤等)等の非経口剤などが挙げられる。
【０００６】
錠剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸などの賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラミック、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖などの崩壊剤、白糖、ステアリン、カオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤、第四級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤、グリセリン、デンプンなどの保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ホン酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などが例示できる。さらに錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フイルムコーティング剤あるいは二重錠、多層錠とすることができる。
【０００７】
丸剤の形態に成形するに際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤、ラミナラン、カンテンなどの崩壊剤などが例示できる。坐剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを挙げることができる。
【０００８】
坐剤の形態に成形するに際しては、担体として従来公知のものを広く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを挙げることができる。
【０００９】
注射剤としては、液剤、乳剤および懸濁剤の形で用いられ、それらは殺菌され、かつ血液と等張であるのが好ましい。これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形するのに際しては、希釈剤としてこの分野において慣用されているものをすべて使用でき、例えば水、エチルアルコール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などを挙げることができる。なお、この場合等張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖あるいはグリセリンを該治療剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを、更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を該治療剤中に含有せしめてもよい。
【００１０】
本発明のＨＧＦ産生増加剤中に含有されるべきカルボスチリル誘導体(Ｉ)またはその塩の量はとくに限定されず広範囲に選択されるが、通常全組成物中１〜７０重量％、好ましくは５〜５０重量％である。
【００１１】
本発明のＨＧＦ産生増加剤の投与方法にはとくに制限はなく、各種製剤形態、患者の年令、性別その他の条件、疾患の程度などに応じた方法で投与される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場合には経口投与される。また注射剤の場合には単独であるいはブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与され、さらには必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直腸内投与される。
【００１２】
本発明のＨＧＦ産生増加剤の投与量は用法、患者の年令、性別その他の条件、疾患の程度などにより適宜選択されるが、通常カルボスチリル誘導体(Ｉ)またはその塩の量が１日当り体重１kg当り０．６〜５０mgとするのがよい。また、投与単位形態中に有効成分を１０〜１０００mg含有せしめるのがよい。とくに、有効成分のカルボスチリル誘導体（Ｉ）が６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−ジヒドロカルボスチリルまたはその塩であるときは、大人（５０ｋｇ）で１００〜４００ｍｇ／日の用量で１〜数回に分けて投与するのがよく、また投与単位形態中に有効成分を５０〜１００ｍｇ含有せしめるのがよい。
【００１３】
【実施例】
つぎに製剤例および薬理実験例を挙げて本発明のＨＧＦ産生増加剤をさらに具体的に説明する。
【００１４】
製剤例１
６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−
テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−
ジヒドロカルボスチリル                        １５０g
アビセル(商品名,旭化成(株)製)                   ４０g
コーンスターチ                                  ３０g
ステアリン酸マグネシウム                          ２g
ヒドロキシプロピルメチルセルロース              １０g
ポリエチレングリコール−６０００                  ３g
ヒマシ油                                        ４０g
メタノール                                      ４０g
本発明の活性化合物、アビセル、コーンスターチおよびステアリン酸マグネシウムを混合研磨後、糖衣Ｒ１０mmのキネで打錠する。得られた錠剤をヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリエチレングリコール−６０００、ヒマシ油およびメタノールからなるフイルムコーティング剤で被覆を行いフイルムコーティング錠を製造する。
【００１５】
製剤例２
６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−
テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−
ジヒドロカルボスチリル                        １５０g
クエン酸                                      １．０g
ラクトース                                  ３３．５g
リン酸二カルシウム                          ７０．０g
プルロニックＦ−６８                        ３０．０g
ラウリル硫酸ナトリウム                      １５．０g
ポリビニルピロリドン                        １５．０g
ポリエチレングリコール
(カルボワックス１５００)                      ４．５g
ポリエチレングリコール
(カルボワックス６０００)                    ４５．０g
コーンスターチ                              ３０．０g
乾燥ラウリル硫酸ナトリウム                    ３．０g
乾燥ステアリン酸マグネシウム                  ３．０g
エタノール                                    適  量
本発明の活性化合物、クエン酸、ラクトース、リン酸二カルシウム、プルロニックＦ−６８およびラウリル硫酸ナトリウムを混合する。
上記混合物をＮo．６０スクリーンでふるい、ポリビニルピロリドン、カルボワックス１５００および６０００を含むアルコール性溶液で湿式粒状化する。必要に応じてアルコールを添加して粉末をペースト状塊にする。コーンスターチを添加し、均一な粒子が形成されるまで混合を続ける。Ｎo．１０スクリーンを通過させ、トレイに入れ１００℃のオープンで１２〜１４時間乾燥する。乾燥粒子をＮo．１６スクリーンでふるい、乾燥ラウリル硫酸ナトリウムおよび乾燥ステアリン酸マグネシウムを加え混合し、打錠機で所望の形状に圧縮する。
上記の芯部をワニスで処理し、タルクを散布し湿気の吸収を防止する。芯部の周囲に下塗り層を被覆する。内服用のために十分な回数のワニス被覆を行う。錠剤を完全に丸くかつ滑らかにするためにさらに下塗層および平滑被覆が適用される。所望の色合が得られるまで着色被覆を行う。乾燥後、被覆錠剤を磨いて均一な光沢の錠剤にする。
【００１６】
製剤例３
６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−
テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−
ジヒドロカルボスチリル                            ５g
ポリエチレングリコール
(分子量:４０００)                             ０．３g
塩化ナトリウム                                ０．９g
ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレエート                                ０．４g
メタ重亜硫酸ナトリウム                        ０．１g
メチル−パラベン                            ０．１８g
プロピル−パラベン                          ０．０２g
注射用蒸留水                                １０．０ml
上記パラベン類、メタ重亜硫酸ナトリウムおよび塩化ナトリウムを撹拌しながら８０℃で上記の約半量の蒸留水に溶解する。得られた溶液を４０℃まで冷却し、本発明の活性化合物、つぎにポリエチレングリコールおよびポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートをその溶液中に溶解した。次にその溶液に注射用蒸留水を加えて最終の容量に調製し、適当なフィルターペーパーを用いて滅菌濾過することにより滅菌して、注射剤を調製する。
【００１７】
薬理試験
シロスタゾール[６−[４−(１−シクロヘキシル−１,２,３,４−テトラゾール−５−イル)ブトキシ]−３,４−ジヒドロカルボスチリルの一般名]のＨＧＦ産生増加作用：
方法：
市販のヒトの大動脈内皮細胞（ＥＣ）およびヒトの大動脈平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）（倉敷紡績（株）社製）を用い、これにシロスタゾール（１０-6モル／ｍｌまたは１０-7モル／ｍｌ）を添加し、無血清培地（detimed serum free medium：ＤＳＦ）で４８時間培養したのち、培養上清中のＨＧＦの産生量（ＨＧＦ濃度：ｎｇ／ｍｌ）を、ＨＧＦ測定用キット（特殊免疫研究所製）を用いて酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法）〔Ｅngvall, Ｅ．Ｍeth., Ｅnzymol., ７０ ４１９−４３９（１９８０）〕によって測定した。
結果：
その結果を表１（ＥＣ使用）および表２（ＶＳＭＣ使用）に示す。
【００１８】
【表１】
0003944257.tif 000003
【００１９】
【表２】
0003944257.tif 000004