(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
パストリア（Ｐａｓｔｅｕｒｉａ）属細菌を内包する線虫に寄生された植物の根を（ａ）水を加えて粉砕し、遠心分離器を用いて大部分の夾雑する植物根の粉砕物、土壌を除き、パストリア属細菌を含む懸濁液を得る、または（ｂ）乾燥後、粉砕器を用いて粉化し、水を加えて懸濁した後、遠心分離器を用いて大部分の夾雑する植物根の粉砕物、土壌を除き、パストリア属細菌を含む懸濁液を得る、このようにして得られたパストリア属細菌を含む懸濁液を遠心分離器で濃縮し、蔗糖、セルロース、界面活性剤より選ばれる一種以上、またはヘキサメタ燐酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、タルク、焼成珪藻土、ベントナイトより選ばれる一種以上と界面活性剤との組み合わせからなる分散剤を添加混合して、６５℃以下で乾燥させた後、解砕したことを特徴とする、再分散性と保存安定性に優れた線虫寄生細菌の水懸濁用乾燥製剤。
【請求項２】
前記した界面活性剤として、陰イオン界面活性剤および／または非イオン界面活性剤を使用した請求項１記載の再分散性と保存安定性に優れた線虫寄生細菌の水懸濁用乾燥製剤。
【請求項３】
陰イオン界面活性剤として、リグニンスルホン酸塩および／またはポリカルボン酸塩を使用した請求項２記載の再分散性と保存安定性に優れた線虫寄生細菌の水懸濁用乾燥製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は作物に被害をもたらす植物寄生線虫に寄生して、作物の線虫害を抑制するパストリア（Ｐａｓｔｅｕｒｉａ）属細菌の水懸濁用乾燥製剤技術に関する。
【０００２】
【従来の技術】
パストリア属細菌は、線虫の産卵抑制能力をもった線虫の絶対寄生菌であり、他の生物に影響を与えない、形成する芽胞は環境変化に強い等の理由から作物の線虫被害を抑制する微生物として検討されている。
従来、パストリア属細菌を作物の線虫被害抑制に用いる場合、本微生物を内包する線虫の寄生した植物の根を乾燥粉末にして土壌に混合する方法が行われてきた。また、特開平７−２０６６１９号公報にはパストリア属細菌を含む線虫が寄生した新鮮な植物根を粉砕して、濾別し、大部分の夾雑物を除き、水懸濁製剤として用いることが示されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
パストリア属細菌は線虫の絶対寄生菌であり、生産性が極めて悪い微生物である。同時に、本微生物は運動能力を持たないため、土壌に混和して対象とする線虫に接触させるためには大量に土壌に施こす必要がある。
従来行われてきた、パストリア属細菌を含む植物根を乾燥粉末にして土壌に混合する方法は、乾燥により、本微生物が植物組織や本微生物間で付着を起こし、分散性の低下を招いて、土壌に混和した時、線虫への寄生率を高めることは非常に困難であった。また、特開平７−２０６６１９号公報に記載されている水懸濁製剤は土壌中での分散性の向上を果たしたが、長期間保存する間に夾雑する他の微生物により、少しずつパストリア属細菌の分解を生じたり、他の微生物の生産する粘質物によって再分散性の低下や、臭気の発生といった好ましくない状態を生じた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは水に容易に分散可能で、パストリア属細菌に影響を与えない乾燥製剤を得ようとして検討を重ねた結果本発明を完成した。即ち、本発明は、パストリア（Ｐａｓｔｅｕｒｉａ）属細菌を内包する線虫に寄生された植物の根を粉砕してパストリア以外の大部分の夾雑物を除いたものに蔗糖、セルロース、界面活性剤より選ばれる一種以上、またはヘキサメタ燐酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、タルク、焼成珪藻土、ベントナイトより選ばれる一種以上と界面活性剤との組み合わせからなる分散剤を添加混合して乾燥させたことを特徴とする再分散性と保存安定性に優れた線虫寄生細菌の水懸濁用乾燥製剤であり、さらには、界面活性剤として、陰イオン界面活性剤および／または非イオン界面活性剤を使用した再分散性と保存安定性に優れた線虫寄生細菌の水懸濁用乾燥製剤であり、陰イオン界面活性剤として、リグニンスルホン酸塩および／またはポリカルボン酸塩を使用した再分散性と保存安定性に優れた線虫寄生細菌の水懸濁用乾燥製剤である。
【０００５】
本発明は、パストリア属細菌を含む植物の根に水を加えて粉砕し、遠心分離器を用いて大部分の夾雑する植物根の粉砕物、土壌を除き、パストリア属細菌を含む懸濁液を得る。または、パストリア属細菌を含む根を乾燥後、粉砕器を用いて粉化し、水を加えて懸濁した後、遠心分離器を用いて大部分の夾雑する植物根の粉砕物、土壌を除き、パストリア属細菌を含む懸濁液を得る。このようにして得たパストリア属細菌の懸濁液を遠心分離器で濃縮し、パストリア属細菌密度の調整、分散を促すため、蔗糖、セルロース、界面活性剤より選ばれる一種以上、またはヘキサメタ燐酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、タルク、焼成珪藻土、ベントナイトより選ばれる一種以上と界面活性剤との組み合わせからなる分散剤を添加混合して乾燥させ、解砕したものである。
【０００６】
特開平７−２０６６１９号公報には非イオン界面活性剤がパストリア属細菌に影響を与えず適していると記載されている。乾燥製剤ではこれら非イオン界面活性剤はもとより陰イオン界面活性剤の使用も可能である。分散剤としての界面活性剤の含有量はパストリア属細菌を含む乾燥製剤品総量の１から９０重量％であり、好ましくは１０から５０重量％である。具体的な非イオン系界面活性剤としてポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリルエーテル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリアルキルグリコール類があげられる。
【０００７】
陰イオン系界面活性剤としてはアルキルサフェート、アルキルアリルサルフェート、フェニールアルキルアリルエーテルサルフェート、ジアルキルエステルサルフェート、ポリオキシエチレンアリルエーテルサルフェート、ポリオキシエチレンアルキルアリルエーテルサルフェート、アルケニルサルフェート、ナフタレンサルフェートホルマリン縮合物、リグニンスルホン酸ナトリウム、スルホコハク酸アルキルナトリウム、ポリオキシエチレンスルホコハク酸アルキルナトリウム、スルホコハク酸ジアルキルナトリウム、アルキルホスフェート、ポリオキシエチレンアルキルエーテルホスフェート、ポリカルボン酸塩等があげられる。リグニンスルホン酸塩、ポリカルボン酸塩の界面活性剤はパストリア属細菌の分散性に寄与するだけでなしに製剤形状の保持の面においてもすぐれている。
また、これら陰イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤は単独であるいは混合して用いることもできる。
【０００８】
また、他の有機質分散剤としては、蔗糖、セルロースが適している。さらに、前記界面活性剤と組み合わせて使用できる無機質分散剤として、ヘキサメタ燐酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、タルク、焼成珪藻土、ベントナイトが適している。これらのうちベントナイト、タルクはパストリア属細菌の分散が特に優れている。一方、珪酸の粉末はパストリア属細菌の再分散を強く阻害するので不適である。
【０００９】
パストリア属細菌を含む水懸濁液を乾燥するにあたってはパストリア属細菌の熱に対する感受性の把握が重要である。パストリア属細菌の高温耐性、低温耐性は一般に知られている。しかし、多くはパストリア属細菌の線虫への付着性を見たものであり、再生産を含めて定量的に検討された物ではない。我々は、乾燥剤を容易に調整できる温度におけるパストリア属細菌の生存性検討した。その結果、６５℃、１時間の加熱によって一部が死滅し、８５℃、３０分の加熱で大部分が死滅することを認めた。従って、パストリア属細菌に影響を与えない低温での乾燥法としては自然乾燥、凍結乾燥、減圧乾燥等がある。又、６５℃以上では短時間で乾燥可能な噴霧乾燥装置等を使うことが可能である。これらの中で、減圧乾燥は乾燥による消失もなく、装置も安価であり優れている。パストリア属細菌の含有量は分散剤の添加の前に調整しておけば要求する密度を含む乾燥製剤を容易に得ることができる。
【００１０】
【実施例】
実施例１  加熱時間とパストリア属細菌の生存性
パストリア  ペネトランス（Pasteuria penetrans）を２＊１０8／ｇを含む懸濁液１０ｍｌをガラス容器に入れ、各温度に設定した恒温槽に一定時間浸漬後直ちに冷却した。各処理を行ったパストリア  ペネトランスを、２＊１０6個／ｇに調整した懸濁液５０ｍｌに、サツマイモネコブ線虫（Meloidogyne incognita）の幼虫１０万頭を加え１８時間放置してパストリア  ペネトランスを付着させた。  この線虫を本葉が３枚展開したトマト苗５千頭接種し、２５℃で２ケ月間栽培した。根を回収して、水とともにホモジナイザーで粉砕、１００ミクロンの網でろ別した。光学顕微鏡と細菌計数板を用いて生産されたパストリア  ペネトランスの数を定量した。再生産性は２反復で行った。その平均値を表１に示す。
【００１１】
【表１】
0004004589.tif 000002
【００１２】
実施例２  乾燥製剤と再分散性
パストリア  ペネトランスを４＊１０8個／ｇ、固形物総量１．５％を含む懸濁液４０ｇに分散剤を１５ｇ添加混合した。複数の分散剤を使用した場合、分散剤中の界面活性剤は５ｇ使用した。この懸濁液を下記の条件で減圧乾燥した。その１部は噴霧乾燥した。その処方を表２に示す。
【００１３】
【表２】
0004004589.tif 000003
調製した乾燥粉末１００ｍｇを１００ｍｌ容の三角フラスコにとり水５０ｍｌを加えて３０回撹拌した。光学顕微鏡と細菌計数板を用いてパストリア  ペネトランスの数を定量し、原液から推定される密度に比較しての再分散率を算出した。結晶水を有するもの、水など揮発性溶剤を含む界面活性剤は補正して算出した。定量は３回行い、その平均値を［表３］に示す。
【００１４】
【表３】
0004004589.tif 000004
【００１５】
実施例３  製剤処方とパストリア属細菌の生存性
調整した製剤を室温で１年間保存した後、実施例１、２と同様にして再分散性を調査した。さらに、パストリア属細菌を、２＊１０6 個／ｇに調整した懸濁液５０ｍｌに、サツマイモネコブ線虫（Meloidogyne incognita） の幼虫１０万頭を加え１８時間放置して線虫にパストリアペネトランスを付着させ、本葉が３枚展開したトマト苗に１万頭接種し、２５℃で２ヶ月間栽培した。根を回収して、水と共にホモジナイザーで粉砕、１００ミクロンの網で濾別した。光学顕微鏡と細菌計数板を用いて生産されたパストリアペネトランスの数を定量した。
対照に特開平７−２０６６１９号公報に記載される如く、根を粉砕し、ろ別調整した水懸濁剤、（対照１）およびその水懸濁剤を−２０℃で保存しておいたもの（対照２）を使用した。再分散性は３反復、パストリア製剤の再生産性は２反復で行った。その平均値を表４に示す。
【００１６】
【表４】
0004004589.tif 000005
【００１６】
【発明の効果】
植物寄生線虫の寄生菌パストリア属細菌の乾燥製剤は保存安定性を増加させ、分散剤の添加によって水懸濁処理を可能にして土壌分散性を向上させ土壌線虫への寄生率を高める。