(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコールまたはこれらの混合物を抽出溶媒とする抽出により得られたチレッタセンブリの抽出物を有効成分としてなる抗アレルギー剤。
【請求項２】
水、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコールまたはこれらの混合物を抽出溶媒とする抽出により得られたチレッタセンブリの抽出物を有効成分としてなる美白剤。
【請求項３】
請求項１記載の抗アレルギー剤または（および）請求項２記載の美白剤を含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、皮膚化粧料に配合するのに適した抗アレルギー剤、美白剤、およびこれら皮膚の炎症や黒化の予防と改善に有効な成分を配合してなる皮膚化粧料に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚のかぶれ、湿疹、アトピー症など、アレルギーによる皮膚の各種炎症は、体内におけるヒスタミン遊離、血小板凝集などのほか、スーパーオキサイド、一重項酸素、ヒドロキシラジカル等の活性酸素が原因となって発症する。
【０００３】
ヒスタミン遊離は、Ｉ型アレルギー反応に伴って肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象で、遊離されたヒスタミンがアレルギー症状の起炎物質となる。このヒスタミンの遊離を阻害することによりアレルギー症の一部を抑制するのに有効な物質としては、トラニラスト、クロモグリク酸ナトリウム、バイカリン、バイカレイン、塩酸プロメタジン等がある。しかしながら、これらの物質は必ずといってよいほど副作用があり、一般的な皮膚化粧料に配合するには安全性の点で問題があった。
【０００４】
血小板凝集はアラキドン酸カスケードのホスホリパーゼＡ２の活性化を招き、それによりロイコトリエンＢやプロスタグランジンＥ２等が放出されて起炎物質となる。
【０００５】
活性酸素は、体内で過剰に産生されたり分解酵素・ＳＯＤによる消去が不十分であったりして濃度が高くなると、アレルギー性炎症を生じさせるだけでなく、様々な組織障害の原因となる。皮膚は紫外線など環境因子の刺激を直接受けるため活性酸素が発生しやすい器官であるから、しばしば活性酸素濃度が上昇し、過酸化脂質が生成してシミ、ソバカス、小ジワ等を増やす。
【０００６】
そこで、上述の障害を回避するため、活性酸素の濃度が過大になるのを防ぐのに有効な活性酸素消去性物質を皮膚化粧料に配合すること、および、そのための活性酸素消去性物質を安全性の点で有利な天然物から得る試みがなされ、その結果、ウワミズザクラのプルヌソールＡ、ユーカリ等のエラグ酸、大麦、黒米、黒インゲン等の穀類のフラボノイド類、茶のカテキン、ゴマのセサミン類、セージ、ローズマリー等のハーブ類に含まれるカルノソールやロズマノール等の有効性が確認されている。
【０００７】
活性酸素が生じさせた過酸化脂質が原因のシミ、ソバカス、その他全般的な皮膚黒化は、過酸化脂質によって活性化されたメラノサイトがチロシナーゼを異常産生させ、そのチロシナーゼが黒色色素・メラニンを多量に生じさせることによって起こる。したがって、シミ、ソバカス、全般的な皮膚黒化等の発生と進行を防ぐには、上述のような活性酸素対策のほかに、異常に産生されたチロシナーゼによるメラニンの産生をなんらかの手段により抑制するのも有効である。そのために使用可能な物質としては、アスコルビン酸、ハイドロキノン、コウジ酸等が知られている。しかしながら、これらの薬剤は皮膚刺激性、安定性等に問題があったり効果が少なかったりして、皮膚化粧料に含有させる生理活性成分とするには不十分なものであった。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、抗アレルギー作用を有し皮膚化粧料構成成分としての適性も備えた物質を植物体から見いだし、抗アレルギー剤として提供することにある。
本発明の他の目的は、メラニン産生阻害に基づく美白作用を有し皮膚化粧料構成成分としての適性も備えた物質を植物体から見いだし、新規な美白剤として提供することにある。
【０００９】
本発明のさらに別の目的は、安全性の高い天然物系の抗アレルギー作用物質およびメラニンの産生を阻害する物質を配合することにより抗炎症作用および美白作用を強化した皮膚化粧料を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成することに成功した本発明は、メタノール、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の親水性有機溶媒、水、またはこれらの混合物を抽出溶媒とする抽出によりチレッタセンブリより得られる抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤および美白剤、ならびにこれらを配合することにより抗炎症作用および美白作用を強化したことを特徴とする皮膚化粧料を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】
チレッタセンブリ（Ｓｗｅｒｉｔｉａ  ｃｈｉｒａｔａ）はヒマラヤ地方の標高１２００〜１５００メートル付近の山麓地帯に自生するりんどう科の植物であって、利用されるのは主としてその地上部である。古代ヒンズー教徒の医学・アユルベーダでは胃痛、下痢などに有効であるとされている。しかしながら、その場合の有効成分や薬理作用の詳細は解明されていない。チレッタセンブリに抗アレルギー作用や美白作用を有する物質が含まれていることももちろん知られていなかった。
【００１２】
チレッタセンブリに含まれていて抗アレルギー作用および（または）美白作用を示す物質は、水溶性であり、また多くの化粧料に配合しても安定であり、さらに経皮的に人体内によく吸収される性質のものである。しかも、皮膚に塗布しても皮膚を刺激したり炎症を起こさせたりすることがない。したがって、皮膚化粧料に配合してその有用作用を活用するのにきわめて好都合な性質を備えている。
【００１３】
チレッタセンブリから上記有用作用を示す物質を抽出するには各種の親水性有機溶媒、水、またはこれらの混合物を使用することができるが、特に好ましい抽出溶媒はメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール等、炭素数１〜４の脂肪族アルコール；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；水；またはこれらの混合物である。
【００１４】
抽出条件および抽出に用いる装置は特に限定されないが、好適には重量比で５〜１５倍量の抽出溶媒にチレッタセンブリの粉砕物を浸漬し、常温ないし１００℃程度の加熱下にゆるやかに撹拌しながら可溶性成分を溶出させる。濾過または遠心分離して得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、さらに乾燥すれば約５〜１０数％の収率で淡褐色の抽出物が得られるが、抗アレルギー剤または（および）美白剤として利用するチレッタセンブリ抽出物は固形の抽出物である必要はなく、上記抽出液またはその濃縮液の状態のものであってもよい。また、その有用作用を損なわない限り、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理、液−液向流分配等により精製してから用いてもよい。
【００１５】
製剤化する場合は、上述の抽出物またはその精製物を、必要に応じて任意の助剤と混合して、錠剤、散剤、液剤等、任意の剤形のものとする。
【００１６】
本発明による抗アレルギー剤および美白剤を配合した皮膚化粧料を製造するのに特別の配慮は不要であって、化粧料製造に通常使用される原料を常法により処理して乳液、ローション、クリーム、ゼリー、パック等各種形態の化粧品を製造する工程の任意の段階でこれを添加すればよい。
【００１７】
皮膚化粧料に対する好適配合率は、皮膚化粧料の種類によっても異なるが、標準的なチレッタセンブリ抽出物としておおむね０．００１〜１０重量％（特に好ましくは０．０５〜２重量％）である。
【００１８】
添加対象となる皮膚化粧料の基本的な構成成分の選択が制限されることはなく、たとえばアボガド油、コメヌカ油、コメ胚芽油、ラノリン、蜜ロウ、スクワラン、ワセリン、流動パラフィン等の油性成分；グリセリン、１，３−ブチレングリコール、コラーゲン、ヒアルロン酸およびその塩、コンドロイチン硫酸およびその塩、キトサン、キチン等の保湿剤；グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、グリセロ糖脂質、スフィンゴ糖脂質等の複合脂質；ＳＯＤ、カタラーゼ、β−カロチン、イチョウ葉抽出物、ビタミンＣおよびその誘導体、ビタミンＥおよびその誘導体、オウゴン抽出物、クジン抽出物等の活性酸素消去作用物質；グアイアズレン、カマアズレンおよびその誘導体；グリチルリチン酸、グリチルレチン酸およびその塩、グリチルレチン酸誘導体、酸化亜鉛等の抗炎症剤；その他各種植物抽出物、増粘剤、防腐剤、紫外線吸収剤、香料、酸化防止剤、水、アルコール等、皮膚化粧料製造に通常使用される成分を任意に使用することができる。
【００１９】
【実施例】
チレッタセンブリ抽出例
乾燥したチレッタセンブリの地上部５００ｇを抽出溶媒３０００ｍｌに投入し、７０℃に加熱しながら２時間撹拌する。その後、濾過して得られた抽出液を減圧下に濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥して抽出物を得る。
抽出溶媒を種々変更して上記抽出を行なった場合の抽出物収率は表１のとおりであった。
【００２０】
【表１】
0003889894.tif 000002
【００２１】
試験例１
上記各抽出例で得られたチレッタセンブリ抽出物について、スーパーオキサイド消去作用およびＤＰＰＨ（ジフェニルピクリルヒドロラジカル）に対するラジカル消去作用を試験した。試験法は次のとおりである。
【００２２】
スーパーオキサイド消去作用（ＮＢＴ法）：３ｍＭキサンチン、０．０５Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ１０．２）、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、ＢＳＡ溶液および０．７５ｍＭ  ＮＢＴ  ０．１ｍｌを試験管にとり、これに試料溶液０．１ｍｌを添加し、２５℃で１０分間放置する。次いでキサンチンオキシダーゼ溶液を加えて素早く撹拌し、２５℃で２０分間静置する。その後６ｍＭ塩化銅を加えて反応を停止させ、５６０ｎｍにおける吸光度を測定する。同様の操作と吸光度測定を、酵素溶液を添加せずに行う。さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行い、次式によりスーパーオキサイド消去率を求める。
【００２３】
消去率（％）＝〔１−（Ｓｔ−Ｓｏ）／（Ｂｔ−Ｂｏ）〕×１００
但し
Ｓｔ：試料溶液添加，酵素溶液添加時の吸光度
Ｓｏ：試料溶液添加，酵素溶液無添加時の吸光度
Ｂｔ：試料溶液無添加，酵素溶液添加時の吸光度
Ｂｏ：試料溶液無添加，酵素溶液無添加時の吸光度
【００２４】
試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記抑制率の測定を行い、活性酸素産生の抑制率が５０％になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。
【００２５】
ＤＰＰＨに対するラジカル消去作用：１．５×１０−４Ｍ  ＤＰＰＨメタノール溶液３ｍｌに試料溶液３ｍｌを加え、直ちに容器を密栓して振り混ぜ、３０分間静置する。その後、５２０ｎｍの吸光度を測定する。対照試験として、試料溶液の代わりにその溶媒を用いて同様に操作し、５２０ｎｍの吸光度を測定する。また、空試験として、メタノールに試料溶液３ｍｌを加えたのち直ちに５２０ｎｍの吸光度を測定する。測定された各吸光度より、次式によりラジカル消去率を算出する。
【００２６】
消去率（％）＝〔１−（Ｂ−Ｃ）／Ａ〕×１００
但し
Ａ：対照試験の吸光度
Ｂ：試料溶液を添加した場合の吸光度
Ｃ：空試験の吸光度
【００２７】
試料溶液の試料濃度を段階的に変更して上記消去率の測定を行い、ＤＰＰＨラジカルの消去率が５０％になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。
試験結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
0003889894.tif 000003
【００２９】
試験例２
前記抽出例１〜５による各抽出物について下記の方法によりヒスタミン遊離抑制作用を調べた（細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価する方法である。）。
【００３０】
試験法：２５ｍｌのフラスコに入れた１５％ＦＢＳ添加ＭＥＭ培地にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０６個を播種し、５％ＣＯ２下、３７℃で４日間培養する。その後トリプシン処理および遠心処理（１０００ｒｐｍ，２分間）を行なって細胞を沈殿物として得る。これを上記培地と同じ培地に４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍｌ懸濁させ、そこにマウスモノクロナール抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ＩｇＥ）を５μｌ添加し、濃度を０．５μｇ／ｍｌとする。得られた細胞浮遊液を９６穴プレートに８０μｌ播種し、５％ＣＯ２下３７℃で２４時間培養する。培養終了後、各穴中の培地を除去し、シリガリアン緩衝液で洗浄する。次に上記緩衝液３０μｌおよび試料溶液１０μｌを加え、３７℃で１０分間インキュベートする。次にジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μｌを加え、さらに３７℃で１５分間インキュベートする。その後、氷冷下で上清液１０μｌを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍＭ  ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μｌを加え、３７℃で１時間インキュベートする。反応終了後、０．１Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３・ＮａＨＣＯ３溶液２５０μｌを加え、マイクロプレートリーダーにて４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定する。試料溶液を添加しない細胞浮遊液についても同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度をＢとする）。また、細胞浮遊液のかわりに上記緩衝液を用いて同様の処理と吸光度測定を行う（このとき測定される吸光度をＣとする）。そして、次式によりヘキソサミニダーゼ遊離抑制率を算出する。
ヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝〔１−（Ａ−Ｃ）／（Ｂ−Ｃ）〕×１００
【００３１】
試料溶液の濃度を段階的に変更して上記方法により抑制率を測定し、抑制率が５０％になる試料溶液の濃度を内挿法により求める。
試験結果は表３のとおりであった。
【００３２】
【表３】
抽出物 ５０％抑制濃度（ｐｐｍ）
抽出例１      ６４．５
抽出例２      ５８．７
抽出例３      ５５．５
抽出例４      ６０．５
抽出例５      ５９．４
【００３３】
試験例３
前記抽出例１〜５による各抽出物について、下記の方法でメラニン産生抑制作用を試験した。
【００３４】
試験法：  培地（１０％ＦＢＳ添加ＤＵＲＢＥＣＣＯ培地；以下同じ）５ｍｌを入れた２５ｍｌのフラスコにＢ−１６メラノーマ細胞１．０×１０６個を播種し、ＣＯ２濃度を５％に調整した３７℃のインキュベーターで５日間前培養する。次いでトリプシン処理し、遠心分離して細胞を集める。得られた細胞４×１０６個を、培地５ｍｌを入れた直径６０ｍｍのシャーレに播種し、２４時間培養する。その後、培地だけを吸引して除去し、替わりに所定の濃度に試料を溶解した１ｍＭテオフィリン添加培地を加えて３日間培養する（別に、試料無添加の培地を用いる同様の培養も行い、以下、同様に操作する）。培養後、トリプシン処理しさらに遠心分離して細胞を集め、培地２ｍｌを加えて細胞浮遊液を得る。得られた細胞浮遊液中の細胞数を血球計算盤を用いて測定し、試料無添加時の細胞数を基準として試料添加時の細胞生存率を算出する。また、細胞数を測定した細胞浮遊液より５×１０６個の細胞を採取し、１０％ＤＭＳＯ添加１Ｎ−ＮａＯＨ溶液３ｍｌを加えて超音波処理および遠心分離を行なった後、上清について４７０ｎｍにおける吸光度を測定し、下記の計算式によりメラニン産生抑制率を算出する。
【００３５】
抑制率（％）＝〔（Ａ−Ｂ）／Ａ〕×１００
但しＡは試料無添加培養区の吸光度、Ｂは試料添加培養区の吸光度である。
【００３６】
試験結果は表４に示したとおりであって、すべての試料がＢ−１６メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用を示し、また、細胞に対する毒性は見られなかった。
【００３７】
【表４】
抽出物 ５０％抑制濃度（ｐｐｍ）
抽出例１    １８２．６
抽出例２    １４８．８
抽出例３    １５６．５
抽出例４    １７９．５
抽出例５    ２００．６
【００３８】
実施例１
抽出例１のチレッタセンブリ水抽出物を配合した下記組成の乳液を乳液製造の常法に従い製造した（「部」は重量部を意味する。以下の各例において同じ。）。
【００３９】
ステアリン酸                                  ２部
スクワラン                                    ２部
オリーブ油                                    ２部
セタノール                                    ７部
ホホバ油                                      ２部
ポリオキシエチレン（４０ＥＯ）硬化ひまし油    １部
グリセリン                                  １０部
チレッタセンブリ抽出物                        ３部
精製水                                  残部（全量を１００部とする）
【００４０】
実施例２
抽出例２のチレッタセンブリ８０％エタノール抽出物を配合した下記組成の化粧水を、化粧水製造の常法により製造した。
【００４１】
グリセリン                                          ３部
１，３−ブチレングリコール                          ３部
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）  ３部
パラオキシ安息香酸メチル                            ０．５部
クエン酸                                            ０．１部
クエン酸ソーダ                                      １部
香料                                                ０．０５部
チレッタセンブリ抽出物                              ３部
精製水                                    残部（全量を１００部とする）
【００４２】
実施例３
抽出例５によるチレッタセンブリ１，３−ブチレングリコール抽出物を配合した下記組成のクリームを、クリーム製造の常法により製造した。
【００４３】
流動パラフィン                                      ５部
サラシミツロウ                                      ４部
セタノール                                          ３部
スクワラン                                        １０部
ラノリン                                            ２部
ステアリン酸                                        １部
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０ＥＯ）  ３部
モノステアリン酸グリセリル                          ３部
１，３−ブチレングリコール                          ５部
パラオキシ安息香酸メチル                            ０．５部
香料                                                ０．０５部
チレッタセンブリ抽出物                              ３部
精製水                                    残部（全量を１００部とする）
【００４４】
試験例４
実施例２の化粧水について、下記の塗布試験を行なった。
試験法：肌荒れ状態の女性１０名（年齢２９〜４８歳）からなる被験者群２群の一方に実施例２の化粧水を、他方にはチレッタセンブリ抽出物を含まないほかは実施例２と同じ組成の比較例化粧水を、それぞれ１日２回、朝夕に、３カ月間、顔面頬部に塗布させる。
【００４５】
使用開始前と使用３カ月後の肌の状態について各被験者に感想を述べさせた結果は表５，６のとおりで、チレッタセンブリ抽出物を含有させることにより乳液の使用効果が顕著に向上することが確認された。
【００４６】
【表５】
0003889894.tif 000004
【００４７】
【表６】
0003889894.tif 000005