(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）
【化１】
0003999861.tif 000006
（式中、Ｒは直鎖若しくは分岐状の低級アルキル基若しくは低級アルケニル基、低級シクロアルキル基又は低級シクロアルキルメチル基を示し、Ｘは酸素原子又は硫黄原子を示す）
で表わされるピリダジン誘導体又はその塩。
【請求項２】
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−エチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−イソプロピル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−イソブチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、２−アリル−５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−チオン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロペンチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン又は５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロペンチルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンである請求項１記載のピリダジン誘導体又はその塩。
【請求項３】
請求項１又は２記載のピリダジン誘導体又はその塩を有効成分とする医薬。
【請求項４】
インターロイキン−１β産生抑制剤である請求項３記載の医薬。
【請求項５】
インターロイキン−１β産生亢進に起因する疾患の治療剤である請求項３記載の医薬。
【請求項６】
免疫系疾患、炎症性疾患、虚血性疾患、骨粗鬆症又は敗血症の予防・治療剤である請求項３記載の医薬。
【請求項７】
リウマチの予防・治療剤である請求項３記載の医薬。
【請求項８】
関節炎又は炎症性大腸炎の予防・治療剤である請求項３記載の医薬。
【請求項９】
虚血性心疾患、虚血性脳障害又は虚血性腎炎又は虚血性肝炎の予防・治療剤である請求項３記載の医薬。
【請求項１０】
請求項１又は２記載のピリダジン誘導体又はその塩を有効成分とするインターロイキン−１β産生抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、優れたインターロイキン−１β産生抑制作用を有し、免疫系疾患、炎症性疾患、虚血性疾患等の予防及び治療に有用な新規ピリダジン誘導体及びこれを有効成分とする医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
多くの疾患、例えばリウマチ、関節炎、骨粗鬆症、炎症性大腸炎、免疫不全症候群、敗血症、肝炎、腎炎、虚血性疾患、インスリン依存性糖尿病、動脈硬化、パーキンソン病、アルツハイマー病、白血病などにおいては、炎症性サイトカインであるインターロイキン−１βの産生亢進が認められる。このインターロイキン−１βは、コラーゲナーゼやＰＬＡ２のような炎症に関与すると考えられている酵素の合成を誘導し、また動物において関節内注射をするとリウマチ様関節炎に非常に似た関節破壊をもたらす。一方、インターロイキン−１βは、インターロイキン−１レセプター、可溶性インターロイキン−１レセプター、インターロイキン−１レセプターアンタゴニストによりその活性が制御されている。
【０００３】
各種疾患モデルに対し、それら生体活性抑制物質の遺伝子組換え体、抗インターロイキン−１β抗体及び抗レセプター抗体を用いた研究やノックアウトマウスを用いた研究からインターロイキン−１βが生体内で重要な役割を演じていることが明らかにされ、インターロイキン−１βの抑制作用を有する物質が、それら疾患の治療薬として期待されるようになった。
【０００４】
例えば、それら多くの疾患のうち、リウマチの治療に使用されている免疫抑制剤やステロイドがインターロイキン−１βの産生を抑制することが報告されている。現在開発中の薬物においても、例えばベンゾイルプロピオン酸誘導体であるKE298(日本炎症学会(11回)、1990年) は免疫調整剤であるがインターロイキン−１β産生抑制作用も有することが報告されている。また、COX-２選択的阻害剤と言われる一群の化合物、例えばフェノキシスルホンアニリド誘導体であるニメスリド(DE 2333643)や、フェノキシベンゾピラン誘導体であるT-614(US 4954518) 、また、デュアルインヒビター(COX−１／５−LO) であるテニダップ( オキシインドール誘導体) においても、インターロイキン−１β産生抑制作用が認められている。
しかしながら、これらの化合物はいずれも、インターロイキン−１β産生抑制作用が主作用ではなく、本来の作用に比べ低い活性しか有していない。
【０００５】
近年、インターロイキン−１β産生抑制作用を目的にした化合物の合成研究が増大している。このような研究で合成される産生抑制剤としては、炎症シグナルの細胞核への伝達過程および転写翻訳段階を抑制する化合物群と、インターロイキン−１βの前駆体をプロセッシングする酵素ICE を阻害する化合物群に分類される。前者の作用を有すると推定される化合物としては、SB203580（特表平7 −503017）、FR167653(Eur.J.Pharm.,327,1997,169-175.)、E−5090(EP 376288) 、CGP47969A(Gastroenterology,1995,109,812-818.) 、ヒドロキシインドール誘導体(Eur.J.Med.Chem.1996,31,187-198.) 、およびトリアリルピロール誘導体(WO97/05878)などが；後者の作用を有すると推定される化合物としては、ペプチド化合物であるVE−13,045(Cytokine,8(5),1996,377-386.)などが知られている。
しかしながら、これらの化合物はいずれも、十分なインターロイキン−１β産生抑制効果が得られるものではなかった。
【０００６】
一方、種々の５，６−ジフェニルピリダジン誘導体が、鎮痛・消炎作用を有することが知られている（EUR.J.MED.CHEM.,1979,14,53-60)。しかしながら、これらの５，６−ジフェニルピリダジン誘導体は、インターロイキン−１β産生抑制作用については、全く知られていなかった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明の目的は、優れたインターロイキン−１β産生抑制作用を有する化合物及びこれを有効成分とする医薬を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
かかる実情において、本発明者らは鋭意研究を行った結果、後記一般式（１）で表わされるピリダジン誘導体が、優れたインターロイキン−１β産生抑制作用を有し、免疫系疾患、炎症性疾患、虚血性疾患等の予防及び治療に有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、一般式（１）
【００１０】
【化２】
0003999861.tif 000002
【００１１】
（式中、Ｒは直鎖若しくは分岐状の低級アルキル基若しくは低級アルケニル基、低級シクロアルキル基又は低級シクロアルキルメチル基を示し、Ｘは酸素原子又は硫黄原子を示す）
で表わされるピリダジン誘導体又はその塩を提供するものである。
【００１２】
また、本発明は、当該ピリダジン誘導体（１）又はその塩を有効成分とする医薬を提供するものである。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明のピリダジン誘導体は、前記一般式（１）で表わされるものである。式中、Ｒで示されるもののうち、低級アルキル基としては、炭素数１〜６、好ましくは炭素数１〜４の直鎖又は分岐状のもので、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ｎ−ヘキシル基等が挙げられる。低級アルケニル基としては、炭素数２〜６、好ましくは炭素数２〜４で二重結合を１〜２個有する直鎖又は分岐状のもので、例えばエテニル基、プロペニル基、ブテニル基、イソブテニル基、ブタジエニル基等が挙げられる。低級シクロアルキル基としては、炭素数３〜６のもので、例えばシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。低級シクロアルキルメチル基の低級シクロアルキル基としては、前記と同様のものが挙げられる。
【００１４】
Ｒとしては、特に炭素数１〜４のアルキル基、炭素数２〜４のアルケニル基、炭素数３〜６のシクロアルキル基又はシクロアルキルメチル基が好ましい。
【００１５】
ピリダジン誘導体（１）の好ましいものとしては、５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−エチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−イソプロピル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−イソブチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、２−アリル−５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−チオン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロペンチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン、５, ６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロペンチルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンが挙げられる。
【００１６】
また、本発明のピリダジン誘導体（１）の塩としては、薬理学上許容される塩であれば特に制限されない。
【００１７】
また、本発明化合物は、水和物に代表される溶媒和物の形態やケト−エノールの互変異性体の形態でも存在し得るが、かかる溶媒和物及び異性体も本発明に包含される。
【００１８】
本発明のピリダジン誘導体（１）は、例えば次の反応工程に従って製造することができる。
【００１９】
【化３】
0003999861.tif 000003
【００２０】
（式中、Ｒは前記と同じ意味を示す）
【００２１】
すなわち、２−（４−メトキシフェニル）−４’−メトキシアセトフェノン（２）に、酸性条件下酒石酸に過ヨウ素酸ナトリウムを作用させて生成させたグリオキサール酸を塩基性条件下に反応させて、２−ヒドロキシ−４−オキソブタン酸誘導体（３）を得た後、これに低級アルコール溶媒中ヒドラジン水和物を反応させて４，５−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−２Ｈ−ピリダジン−３−オン誘導体（４）とし、これを溶媒中酸触媒下、脱水反応に付すことにより、化合物（５）を製造することができる。次に、化合物（５）に溶媒中、式Ｒ−Ｙ（Ｒは前記と同じ意味を示し、Ｙはハロゲン原子を示す）で表わされる化合物を反応させることにより、一般式（１）中、Ｘが酸素原子であるピリダジン誘導体（１ａ）を得ることができる。更に、ピリダジン誘導体（１ａ）を溶媒中、Lawesson's試薬（２，４−ビス（４−メトキシフェニル）−１，３−ジチア−２，４−ジホスフェタン−２，４−ジスルフィド）でチオケトン化することにより、一般式（１）中、Ｘが硫黄原子であるピリダジン誘導体（１ｂ）を得ることができる。
【００２２】
ここで、原料として用いられる２−（４−メトキシフェニル）−４’−メトキシアセトフェノン（２）は、例えば公知の方法（薬学雑誌，74,495-497(1954)）により製造することができる。
【００２３】
化合物（２）と反応させるグリオキサール酸としては、酒石酸に過ヨウ素酸ナトリウムを作用させて生成させたグリオキサール酸のほか、市販されているグリオキサール酸水和物を用いることもできる。グリオキサール酸生成時に用いられる酸としては、硫酸、塩酸、リン酸等の無機酸が挙げられる。グリオキサール酸の合成反応は、一般には−１５〜５０℃で２０〜１８０分間、好ましくは０〜２５℃付近で３０〜６０分間反応させることによって終了する。
また、化合物（２）とグリオキサール酸との反応で用いられる塩基としては、苛性ソーダ、苛性カリ等の無機塩基；１，８−ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）等の有機塩基が挙げられる。化合物（２）とグリオキサール酸との反応は、０〜１２０℃が好ましく、好ましくは、２０〜４０℃で５〜２５時間、次いで７０℃で０．５〜２時間反応させることにより終了する。溶媒としては、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノール、ｉｓｏ−プロパノール等の低級アルコール；テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサン等を使用することができる。
【００２４】
化合物（３）とヒドラジン水和物との反応は、ヒドラジン水和物のほか、無水ヒドラジンでもよく、反応は５０〜１５０℃で５〜３０時間、好ましくは８０〜１００℃で５〜１５時間で終了する。溶媒としては、エタノール、メタノール、ｎ−プロパノール、ｉｓｏ−プロパノール等の低級アルコール；テトラヒドロフラン、１，４−ジオキサンなどを使用することができる。
【００２５】
化合物（４）の脱水反応は、触媒としてパラ−トルエンスルホン酸水和物等を使用することができる。反応は５０〜１５０℃で３〜５０時間、好ましくは８０〜１３０℃で５〜３０時間で終了する。溶媒としては、トルエン、ベンゼンなどを使用することができる。
【００２６】
化合物（５）と式Ｒ−Ｙで表わされる化合物との反応においては、溶媒としてＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド等を使用することができ、反応は３０〜１５０℃で０．５〜３０時間、好ましくは６０〜１００℃で１〜１０時間で終了し、ピリダジン誘導体（１ａ）を得ることができる。
【００２７】
化合物（１ａ）から２Ｈ−ピリダジン−３−チオン誘導体（１ｂ）の製造において、使用するLawesson's試薬は、化合物（１ａ）に対して０．５〜３当量、特に１〜１．５当量が好ましく、反応は、３０〜１５０℃で１〜１０時間、好ましくは５０〜１００℃で２〜８時間で終了する。溶媒としては、トルエン、キシレンなどを使用することができる。
【００２８】
前記の各反応で得られた中間体及び目的化合物は、有機合成化学で常用される精製法、例えば、濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマトグラフィー等に付して単離、精製することができる。また、中間体においては、特に精製することなく次の反応に供することができる。また、反応溶媒、再結晶溶媒などの溶媒の溶媒和物、特に水和物として得ることもある。
【００２９】
このようにして得られる本発明のピリダジン誘導体（１）又はその塩は、優れたインターロイキン−１β産生抑制作用を有し、インターロイキン−１β産生亢進に起因する疾患、例えば免疫系疾患、炎症性疾患、虚血性疾患、骨粗鬆症、敗血症等の予防・治療剤、特にリウマチ、免疫不全症候群、関節炎、炎症性大腸炎、虚血性心疾患、虚血性脳障害、虚血性腎炎、虚血性肝炎、インスリン依存性糖尿病、動脈硬化、パーキンソン病、アルツハイマー病、白血病等の予防・治療剤などの医薬あるいはインターロイキン−１β産生抑制剤として有用である。
【００３０】
本発明の医薬は、前記ピリダジン誘導体（１）又はその塩を有効成分とするものであり、この投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などによる経口投与又は静脈内注射剤、筋肉注射剤、坐薬、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤などによる非経口投与が挙げられる。またこのような種々の剤型の医薬製剤を調製するにあたっては、この有効成分を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、矯味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組合わせて用いることができる。
【００３１】
本発明の医薬の投与量は年令、体重、症状、投与形態及び投与回数などによって異なるが、通常は成人に対して１日０．０１〜１０００mg、好ましくは０．１〜１００mgを１回又は数回に分けて経口投与又は非経口投与するのが好ましい。
【００３２】
【発明の効果】
本発明のピリダジン誘導体（１）又はその塩は、優れたインターロイキン−１β産生抑制作用を有し、免疫系疾患、炎症性疾患、虚血性疾患等の予防・治療剤などの医薬として有用である。
【００３３】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００３４】
実施例１
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−エチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−ピリダジン−３−オン４６３mg（１．５ミリモル) と炭酸カリウム３１１mg（２．２５ミリモル) のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ml）懸濁液にヨウ化エチル２８０mg（１．８ミリモル) を加え、７０℃で９．５時間加熱攪拌した。反応液に水を加えた後、酢酸エチルで抽出し、水、飽和食塩水で順次洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：１１ｇ）で分離精製し、黄色結晶４６６mgを得た。これを酢酸エチル−ｎ−ヘキサンで再結晶し、淡黄色プリズム晶として標題化合物３６０mg（７８．３％）を得た。
【００３５】
融点：１４２．８−１４３．４℃
1H-NMR(CDCl3）δ：
1.46(3H,t,J=7.08 Hz), 3.80(3H,s), 3.81(3H,s), 4.31(2H,q,J=7.08 Hz),
6.79(2H,d,J=9.03 Hz), 6.81(2H,d,J=8.79 Hz), 6.89(1H,s),
7.04(2H,d,J=8.79 Hz), 7.14(2H,d,J=9.03 Hz)．
IR(KBr)cm-1：3447，1656，1608，1513，1294，1249，1183，1023，840 ．
【００３６】
実施例２
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−メチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率１００％で得た。
【００３７】
無色油状物
1H-NMR(CDCl3）δ：
3.79(3H,s), 3.80(3H,s), 3.88(3H,s), 6.79(2H,d,J=8.79 Hz),
6.81(2H,d,J=8.79 Hz), 6.91(1H,s), 7.04(2H,d,J=8.78 Hz),
7.14(2H,d,J=9.03 Hz)．
IR(film)cm-1：3479，2972，2937，2839，1660，1609，1514，1296，1247，
1180，1032，997 ，834 ．
【００３８】
実施例３
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−イソプロピル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率１００％で得た。
【００３９】
淡黄色アモルファス
1H-NMR(CDCl3）δ：
1.44(6H,d,J=6.54 Hz), 3.80(3H,s), 3.81(3H,s),
5.39(1H,seplet,J=6.60 Hz), 6.79(2H,d,J=8.79 Hz),
6.83(2H,d,J=8.79 Hz), 6.87(1H,s),
7.06(2H,d,J=8.79 Hz), 7.50(2H,d,J=9.04 Hz)．
IR(KBr)cm-1：1656，1609，1513，1295，1248，1176，1026，833 ．
【００４０】
実施例４
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−イソブチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率６８．１％で得た。
【００４１】
無色プリズム晶( 酢酸エチル−エーテル)
融点：１２８．３−１２９．１℃
1H-NMR(CDCl3）δ：
1.00(3H,s), 1.02(3H,s), 2.35-2.40(1H,m), 3.79(3H,s), 3.81(3H,s),
4.08(2H,d,J=7.57 Hz), 6.79(2H,d,J=8.79 Hz), 6.81(2H,d,J=8.79 Hz),
6.89(1H,s), 7.05(2H,d,J=8.79 Hz), 7.12(2H,d,J=9.04 Hz)．
IR(KBr)cm-1：2958，1660，1606，1515，1248，1177，1027，837 ．
【００４２】
実施例５
２−アリル−５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして標題化合物を収率４０．２％で得た。
【００４３】
淡黄色針状晶（酢酸エチル−ｎ−ヘキサン）
融点：１１４．０−１１５．０℃
1H-NMR(CDCl3）δ：
3.79(3H,s), 3.81(3H,s), 4.86(2H,d,J=5.86 Hz), 5.28(1H,d,J=10.25 Hz),
5.33(1H,d,J=17.09 Hz), 6.10(1H,tdd,J=5.86,10.25,17.09 Hz),
6.78(2H,d,J=8.79 Hz), 6.81(2H,d,J=8.79 Hz), 6.90(1H,s),
7.04(2H,d,J=9.03 Hz), 7.12(2H,d,J=8.79 Hz)．
IR(KBr)cm-1：1662, 1608, 1511, 1296, 1250, 1022, 836.
【００４４】
実施例６
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率２．３％で得た。
【００４５】
淡黄色油状物
Mass(m/e):３４８（Ｍ+）．
1H-NMR(CDCl3）δ：
1.00-1.18(2H,m), 1.20-2.25(2H,m), 3.79(3H,s), 3.81(3H,s),
4.20-4.30(1H,m), 6.77(2H,d,J=9.28 Hz), 6.81(2H,d,J=8.79 Hz),
6.89(1H,s), 7.05(2H,d,J=9.03 Hz), 7.14(2H,d,J=9.03 Hz)．
IR(KBr)cm-1：1733, 1661, 1652, 1609, 1515, 1296, 1250, 1179, 1111,
1026, 834．
【００４６】
実施例７
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率８９．６％で得た。
【００４７】
淡黄色結晶性粉末( クロロホルム−エーテル−ｎ−ヘキサン)
融点：１２８．８−１２９．３℃
1H-NMR(CDCl3）δ：
0.46-0.62(4H,m), 1.38-1.54(1H,m), 3.80(3H,s), 3.81(3H,s),
4.12(2H,d,J=7.08 Hz), 6.79(2H,d,J=9.04 Hz), 6.81(2H,d,J=8.79 Hz),
6.90(1H,s), 7.06(2H,d,J=8.79 Hz), 7.10(2H,d,J=8.79 Hz)．
IR(KBr)cm-1：1656, 1609, 1566, 1514, 1247, 1183, 1028, 838．
【００４８】
実施例８
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−チオンの製造：
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロプロピルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オン１６５mg（０．４６ミリモル) のトルエン（６ml）溶液にLawesson's試薬１８４mg（０．４６ミリモル) を加え、窒素ガス雰囲気下７０℃で１時間攪拌した。溶媒を留去して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー( シリカゲル；１８ｇ，ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（４／１））により分離精製後、酢酸エチル−エーテルから結晶化し、黄色鱗片状晶として標題化合物１２７mg（７２．９％) を得た。
【００４９】
融点：１４７．５−１４８．５℃
1H-NMR(CDCl3）δ：
0.56-0.62(4H,m), 1.68-1.75(1H,m), 3.81(3H,s), 3.82(3H,s),
4.64(2H,d,J=7.33 Hz), 6.81(2H,d,J=9.04 Hz), 6.82(2H,d,J=9.03 Hz),
7.09(2H,d,J=8.79 Hz), 7.19(2H,d,J=9.03 Hz), 7.82(1H,s)．
IR(KBr)cm-1：1609 ,1513 ,1416 ,1248 ,1186 ,1181 ,1122 ,1021 ,834 ．
【００５０】
実施例９
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロペンチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率６５．４％で得た。
【００５１】
淡黄色プリズム晶( クロロホルム−ｎ−ヘキサン)
融点：１４１．２−１４２．２℃
Mass(m/e) ：３７６（Ｍ+）．
1H-NMR(CDCl3）δ：
1.60-1.80(2H,m), 1.80-2.20(6H,m), 3.80(3H,s), 3.81(3H,s),
5.25(2H,quintet,J=6.60 Hz), 6.78(2H,d,J=8.79 Hz),
6.82(2H,d,J=8.79 Hz), 6.86(1H,s), 7.06(2H,d,J=9.03 Hz),
7.14(2H,d,J=9.03 Hz)．
IR(KBr)cm-1：1661, 1611, 1512, 1295, 1255, 1175, 1020, 833．
【００５２】
実施例１０
５，６−ビス（４−メトキシフェニル）−２−シクロペンチルメチル−２Ｈ−ピリダジン−３−オンの製造：
実施例１と同様にして、標題化合物を収率５７．１％で得た。
【００５３】
無色鱗片状晶( 酢酸エチル−エーテル)
融点：１３０．３−１３１．４℃
1H-NMR(CDCl3）δ：
1.37-1.79(8H,m), 2.56(1H,quintet,J=7.57 Hz), 3.80(3H,s),
3.81(3H,s), 4.21(2H,d,J=7.82 Hz), 6.79(2H,d,J=8.79 Hz),
6.81(2H,d,J=8.54 Hz), 6.89(1H,s), 7.05(2H,d,J=9.04 Hz),
7.13(2H,d,J=9.04 Hz)．
IR(KBr)cm-1：1664, 1609, 1513, 1292, 1250, 1179, 1023, 831．
【００５４】
試験例１
（インターロイキン−１β産生抑制作用）
１０％牛胎仔血清(FＢＳ) を加えたＲＰＭＩ１６４０培地で４日間培養し、コンフルエントになったＨＬ−６０細胞を用いた。ＨＬ−６０細胞を遠心分離し、上清を除き、細胞を３％ＦＢＳ加ＲＰＭＩ１６４０培地に１×１０6cells ／mlになるように浮遊させ、リポポリサッカライドを最終濃度１０μｇ／mlになるように添加して２４穴プレートに１ml／穴ずつ播種した。これに、薬物を１μｌ／穴添加して、３日間培養した。３日後に培養液中のインターロイキン−１β量をＥＬＩＳＡにて測定した。ＩＣ50値は薬物無添加の場合の産生量との比較で求めた。代表的化合物についての結果を表１に示す。
【００５５】
【表１】
0003999861.tif 000004
【００５６】
試験例２
（ＴＮＦ−α産生抑制作用）
１０％胎仔血清（ＦＢＳ）を加えたＤＭＥＭ培地でコンフルエントになるまで培養したＲＡＷ２６４．７細胞を１×１０6cells／mlになるように同培地で調整して９６穴プレートに１００μｌ／穴ずつ播種した。これに、同培地で希釈した薬物５０μｌ／穴と４μｇ／mlの濃度のリポポリサッカライド５０μｌ／穴を添加して２０時間培養した後、培養液を採取した。
得られたＲＡＷ２６４．７細胞培養液中のＴＮＦ−α量は、ＴＮＦ−α感受性細胞Ｌ−９２９細胞に対する細胞障害性を利用して次のように測定した。即ち、１０％ＦＢＳを加えたＭＥＭ培地で培養したＬ−９２９細胞を同培地で２×１０5cells／mlになるよう調製し、９６穴プレートに１００μｌ／穴ずつ播種して一晩培養した後、６００Ｕ／mlから倍々希釈したＴＮＦ−α標準溶液、又は、前述のＲＡＷ２６４．７細胞培養液の１００倍、２００倍、４００倍希釈液５０μｌ／穴及びアクチノマイシンＤ（４μｇ／ml）５０μｌ／穴を添加して更に２０時間培養した。２０時間後にＰＢＳで各穴を洗浄後、生存する細胞をクリスタルバイオレット染色して、ＴＮＦ−αの標準曲線よりＴＮＦ−α産生抑制活性の有無を調べた。結果を表２に示す。
【００５７】
（ＩＬ−６産生抑制作用）
１０％牛胎仔血清（ＦＢＳ）を加えたＤＭＥＭ培地でコンフルエントになるまで培養したＲＡＷ２６４．７細胞を１×１０6cells／mlになるように同培地で調整し、９６穴プレートに１００μｌ／穴ずつ播種した。これに、同培地で希釈した薬物５０μｌ／穴と４μｇ／mlの濃度のリポポリサッカライド５０μｌ／穴を添加して20時間培養した後、培養液を採取した。
得られたＲＡＷ２６４．７細胞培養液中のＩＬ−６量は、ＥＬＩＳＡにより測定し、ＩＬ−6 の標準曲線よりＩＬ−6 産生抑制活性の有無を調べた。結果を表２に示す。
【００５８】
【表２】
0003999861.tif 000005