(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
α１，３フコース転移酵素測定試薬を含有し、血清又は血漿のα１，３フコース転移酵素活性が健常者のそれより有意に低ければ精神分裂病とする診断に用いられる精神分裂病診断薬。
【請求項２】
α１，３フコース転移酵素測定試薬が、糖受容体及び糖供与体を含有するものである請求項１記載の精神分裂病診断薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は精神分裂病の診断に有用な試薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
精神分裂病は、ストレスの多い現代社会において、多様化し、また増加しつつある疾患であり、その診断法及び治療法は困難とされている。
【０００３】
精神分裂病の多くは青年期に発症し、妄想、幻覚のほか、自我、感情、意欲、行動等の障害からなる特有の症状を呈し、再燃と寛解を繰り返す。しばしば、神経衰弱様状態から発症し、しだいに特有の一次妄想（妄想気分、妄想知覚、妄想着想）、対話形式の幻聴、自我障害（させられ体験、思考吹入、思考奪取、思考察知等）、感情障害（感情鈍麻、両価性、疎通性障害）、能動性低下、行動障害（独語、空笑等）等の特徴的な症状が明瞭になる。
【０００４】
精神病の診断の意義を十分に考慮し作成されたのが、米国精神医学会のＤＳＭ−III−Ｒ（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders(Third edition-revised), 1987）であり、その基本理念は、将来、精神障害の生物学的、心理学的または社会学的な病因が解明されるのを待ち、さしあたりより同質な症候群を「記述」し、研究途上にある原因・病理所見との対比をはかり、疾患単位の確立を目指そうとするものであるとされている〔精神分裂病−基礎と臨床−、457-464頁、朝倉書店発行、1990年〕。
【０００５】
このような考えに従い精神分裂病の生物学的マーカーの研究が進んでおり、例えば、脳脊髄液におけるホモバニリン酸（ＨＶＡ）やノルアドレナリン；血漿における３−メトキシ−４−ヒドロキシフェニルグリコール（ＭＨＰＧ）、アポモルフィン刺激による成長ホルモン反応、ホスホリパーゼＡ2 及びプロスタグランジンＥ2；血小板におけるプロスタグランジンＥ1 刺激によるｃＡＭＰ生成、イノシトールリン酸代謝、ＡＤＰ刺激による血小板凝集に対するプロスタグランジンＥ1 抑制効果及びアンフェタミンに対する臨床反応；血清ドーパミンベータ水酸化酵素、血清アミン酸化酵素、血小板モノアミン酸化酵素等の各種生物学的マーカー候補が提案されている〔前記、精神分裂病−基礎と臨床−1990年〕。
【０００６】
しかして、精神分裂病に特有の生物学的マーカーの発見によれば、新たな臨床診断基準として有用であり、また、臨床症状、予後、経過及び治療反応等との関係が確立すれば、薬物療法の客観的な指標あるいは予後の予測として治療に貢献するものと期待される。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、前記所望の精神分裂病に特有の生物学的マーカーを提供しようとするものであり、しかして客観的な精神分裂病の診断を可能とする技術を提供することにある。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
そこで本発明者は、上記課題を解決すべく種々検討してきた結果、全く意外にも、従来から広く担癌に関連して酵素活性の上昇が認められている血漿のα１，３フコース転移酵素活性が健常者に比べて精神分裂病患者では明確に低い値を示すことを見出し、従って、その測定によれば精神分裂病の診断が可能であることを確認し本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち、本発明はα１，３フコース転移酵素測定試薬を含有し、血清又は血漿のα１，３フコース転移酵素活性が健常者のそれより有意に低ければ精神分裂病とする診断に用いられる精神分裂病診断薬を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明は、被検者のα１，３フコース転移酵素を精神分裂病の生物学的マーカーとして測定することにより、その測定結果を精神分裂病の診断に利用することに特徴を有する。従って、本発明診断薬に用いられるα１，３フコース転移酵素測定試薬としては、これを測定するための試薬を含有しその利用によって当該測定ができる限りにおいて特に制限されず広範囲より選択することができる。該測定試薬は、好ましくは、血清、血漿等の血液中のα１，３フコース転移酵素活性を測定するための試薬であることができる。
【００１１】
糖転移酵素の活性測定は、血液型判定や癌診断等の医学的分野において重要な技術となっており、その測定手法は当業者によく知られている。かかる活性測定は、測定対象の酵素活性に従い適宜選択された糖供与体と糖受容体との組合わせを用いて、被検体中に含まれる酵素活性によって糖供与体から単糖を糖受容体に転移させ、その転移量を測定することにより行なわれている（例えば特開平３−１５７６１号公報参照）。
【００１２】
本発明にかかるα１，３フコース転移酵素の活性測定もよく知られており〔例えば、Glycoconjugate J., 13：1021-1029, 1996；Cancer Res., 55：1473-1478, 1995等〕、本発明においてもかかる公知方法に従うことにより当該測定を良好に実施できる。従って、本発明診断薬は、これらα１，３フコース転移酵素活性の測定系において採用される試薬、好ましくは糖受容体及び糖供与体を含む同測定試薬を含有するものであることができる。
【００１３】
ここで、糖供与体としてはＧＤＰ−フコースを、糖受容体としてはα１，３フコース転移酵素の基質、好ましくは下記式（１）で表されるＨタイプII糖鎖（2'Fucosyllactosamine：Fucα1,2Ga1β1,4GlcNAc）やそのガラクトース残基の２位が人為的に保護された誘導体（例えば、N-acety1-2'-O-methyllac tosamine：2'OMeGalβ1,4GlcNAc等）等の同酵素の特異的基質として知られている糖鎖構造を有するものを例示することができる。糖受容体としてこれらα１，３フコース転移酵素の特異的基質を使用する場合には、被検体中に共存する他のフコース転移酵素の影響を排除することができ、α１，３フコース転移酵素活性のより正確な測定を可能とする。
【００１４】
【化１】
Fucα1→2Galβ1→4GlcNAcβ−      （１）
【００１５】
上記糖受容体は、例えば、オリゴ糖、糖脂質及び糖蛋白質等であることができ、所望により、基質の還元末端部位は、例えばベンジル基（Bn）やニトロフェニル基等の任意の疎水基により修飾されていてもよい。
【００１６】
本発明にかかるα１，３フコース転移酵素の活性測定は、より具体的には、被検体中に含まれる同酵素活性により、糖受容体のＮ−アセチルグルコサミン残基に糖供与体であるＧＤＰ−フコースのフコースがα（１→３）位で結合する（転移する）ことにより、その転移量を測定することにより行なわれる。ここで、前記ＨタイプII糖鎖のＮ−アセチルグルコサミン残基にフコースが転移した目的の酵素反応生成物は、次式（２）で表されるルイスＹ糖鎖として特徴付けられる。
【００１７】
【化２】
0003943689.tif 000002
【００１８】
上記被検体と糖供与体及び糖受容体との反応は、通常の酵素反応条件、例えば室温から３７℃、１〜２４時間程度、にて行なうことができる。
【００１９】
上記酵素反応後のフコース転移量の測定は、常法に従い実施でき、例えば、生成した目的の酵素反応生成物を例えば免疫学的手法等により定量することにより、また3Ｈや14Ｃ等で糖を標識した糖供与体を利用した測定系においては目的の酵素反応生成物における標識活性を測定することにより、良好に行なうことができる。尚、反応生成物（ルイスＹ糖鎖構造）の免疫学的定量は公知であり、本発明においても、例えば抗ルイスＹ抗体を使用する常法に従い行なうことができる。
【００２０】
上記測定系において、反応生成物は反応系により適宜分離することができ、これは電気泳動や種々のクロマトグラフィー等の慣用の分離手段にて、また、固相化試薬を採用した場合には洗浄等により行なうことができる。尚、糖受容体として還元末端部位に疎水基を有する前記糖受容体を用いる場合には、逆相Ｓｅｐ−Ｐａｋカートリッジ（ウォーターズ社）を利用して容易に酵素反応生成物を分離、回収することができ簡便である〔Jpn. J. Cancer Res., 84：989-995, 1993〕。また、反応生成物の分離に際しては、例えば抗体やレクチン等を利用することもできる。
【００２１】
本発明において、一部の試薬は、その採用する測定系に応じて、適宜に標識化や固相化等の修飾をすることができる。より具体的には、糖供与体は、所望により、例えば3Ｈや14Ｃ等により糖を標識化したものであることができ、反応生成物（転移量）の測定に利用される。糖受容体は、例えば、前記した疎水基を有するものであることができ、あるいはポリスチレンやポリプロピレン等の各種担体に固相化されたものであることができ、反応生成物の分離を容易とする。これら測定系の改変とそれに応じた試薬の調製は当業者に周知であり、それら試薬は市販品としても入手可能である。
【００２２】
しかして、本発明診断薬に含有される上記測定試薬は、所望により、一部標識化あるいは固相化等の修飾された試薬であることができ、また、測定の利便を考慮して、更に、反応生成物を検出するための抗体や、同抗体検出試薬、反応生成物の分離用試薬、あるいは酵素反応液等も任意成分として含ませることができる。
【００２３】
本発明にかかる診断に用いられる被検体としては、好ましくは、血清及び血漿である。
【００２４】
本発明においては、上記手段により被検体のα１，３フコース転移酵素活性を測定し、健常者のそれと対比し、これが有意に低ければ精神分裂病と診断できる。
【００２５】
【実施例】
次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれにより何等制限されるものではない。
【００２６】
実施例１
健常者２０例及び精神分裂病患者３５例（未投薬患者３例を含む）より常法に従って得た血漿を用い、α１，３フコース転移酵素活性を測定した。
【００２７】
（反応液：全量５０μｌ）
・血漿                                  １０μｌ
・HEPES-NaOH Buffer（pH７．０）           ４μmol／１０μｌ
・MnCl2                                   １μmol／１０μｌ
・糖受容体（2'FucLacNAcβBn：Anal. Biochem., 152：22-28, 1986）
（Fucα1→2Galβ1→4GlcNAcβBn）      １０nmol／１０μｌ
・糖供与体
（GDP-[3H]Fucose；デュポン社製）      78,000dpm／１０μｌ
【００２８】
反応液を３７℃で１６時間保温後、１００μｌエタノールを加えて反応を止め遠心上清（反応液）を得た。反応液中の生成物：
【００２９】
【化３】
0003943689.tif 000003
【００３０】
をSep-Pak plus C18（ウォーターズ社製）を用いて分離・抽出した。
液体シンチレーションカウンターで放射活性を測定し、α１，３フコース転移酵素活性とした。
結果を図１に示す。
健常者のα１，３フコース転移酵素活性は、７，９７２．９４±３，０９２．８（mean±S.D.）ｄｐｍであったのに対し、精神分裂病では、１，７１４．０±１，０３９．７（mean±S.D.）ｄｐｍであり、同患者血漿中のα１，３フコース転移酵素活性が極めて低いことが明らかとなった。
【００３１】
【発明の効果】
本発明によれば精神分裂病を的確に診断できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】健常者及び精神分裂病患者の血漿中のα１，３フコース転移酵素活性を示す図である。
【図１】
0003943689.tif 000004