(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物又はその薬理学的に受容可能な塩
【化１】
0003987645.tif 000045
ここでR１は水素原子又は低級アルキル基を表す；
Ｒ２は次のものから選択された基を表す：
【化２】
0003987645.tif 000046
ここでXはハロゲン原子を表す；
又Ｒ１及びＲ２は一緒に４−メチルピペラジニル基を形成出来、それは置換され得る；
Ｒ３は次の基から選択された基を表す；
【化３】
0003987645.tif 000047
Ｒ４は水素原子又は低級アルキル基を表す。
【請求項２】
次のものから選択される化合物である、請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に受容可能な塩。
(1)Ｎ−（４−ピリジル）−２−シクロペンチルオキシニコチンアミド
(2)Ｎ−（４−ピリジル）−２−エキソノルボニルオキシニコチンアミド
(3)Ｎ−（４−ピリジル）−２−（４−フルオロフェニルオキシ）ニコチンアミド
(4)Ｎ−（４−ピリジル）−２−（３−ヒドロキシシクロヘキシルオキシ）ニコチンアミド
(5)Ｎ−（４−ピリジル）−２−（２−エキソノルボルニルアミノ）ニコチンアミド
(6)Ｎ−（４−ピリジル）−２−シクロオクチルアミノニコチンアミド
(8)Ｎ−（４−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシ−６−メチルニコチンアミド
(9)Ｎ−（３−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシニコチンアミド
(10)Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
(11)Ｎ−（５−イソキノリニル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
(12)Ｎ−（４−ピコリル）−２−（４−フルオロフェニルオキシ）ニコチンアミド
(13)Ｎ−（４−ピコリル）−２−（３−ニトロフェニルアミノ）ニコチンアミド
(14)Ｎ−（３−ピコリル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
(15)Ｎ−（３−ピコリル）−２−（３，４−ジメトキシフェニルオキシ）ニコチンアミド及び；
(16)Ｎ−（１−ベンジル−４−ピペリジル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
【請求項３】
請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に受容可能な塩の治療的又は改善的有効量及び薬理学的に受容可能な賦形剤を含む製薬組成物。
【請求項４】
ホスホジエステラーゼ拮抗が有効であるアレルギー性及び炎症性の病気を治療又は改善するための薬剤の作製に対する請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に受容可能な塩の使用。
【請求項５】
ホスホジエステラーゼ拮抗が有効であるアレルギー性及び炎症性の病気を治療するための、請求項１に記載の化合物又はその薬理学的に受容可能な塩を薬剤的有効量にて含む薬剤。
【請求項６】
前記病気が、ぜん息、慢性気管支炎、ショック、慢性関節リウマチ、卒中、再灌流障害（reperfusion injury）、脳脊髄炎及び多発硬化症である、請求項５に記載の薬剤。
【請求項７】
(a)  塩素化剤
(b)  混合酸無水物生成剤、又は、
(c)  １，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド
の何れか１つと、一般式（IV）の一級若しくは二級アミン
ＨＮＲ１Ｒ２    （IV）
（ここでＲ１及びＲ２は請求項１に記載のものと同じ意味を有する）とによる処理によって、一般式（III）の化合物
【化４】
0003987645.tif 000048
を誘導体化して一般式（II）の化合物
【化５】
0003987645.tif 000049
を調製し、
そしてその後任意に、その様に生成された一般式（II）の化合物を一般式（II）の他の化合物へと転換し、ここでＲ１乃至Ｒ４は請求項１に記載のものと同じ意味を有し、
そして一般式（II）の化合物をアルコール又はアミンによって処理して一般式（I）の化合物を与えて成る、一般式（I）の化合物の調製方法。
【請求項８】
前記塩素化剤が、塩化チオニル、塩化スルフリル、塩化オキザリル、五塩化リン、三塩化リン又はオキシ塩化リンである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記混合酸無水物生成剤が、メチルクロロホーメート又はエチルクロロホーメートである、請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は卒中、卒中後の脳浮腫及びぜん息、慢性気管支炎、ショック、慢性関節リウマチ、再灌流障害（reperfusion  injury）、脳脊髄炎及び多発硬化症の如き各種のアレルギー性及び炎症性の病気の防止、治療又は改善に対し有用な新規なニコチンアミド誘導体に関する。
【０００２】
【従来の技術】
最近、アレルギー性又は炎症性の病気にかかっている患者は著しく増加している。これらの病気はひどい症状があり、治りにくく、又再発し得る。高い有効性及び安全性を有する治療薬がない。それ故、高い有効性及び安全性を有する治療薬が強く望まれてきた。
【０００３】
環状３’，５’−アデノシンモノホスフェート（以下ＣＡＭＰと略記）はホルモン、オートコイド（autocoids）、神経伝達物質及び薬に対する細胞の機能的反応を媒介する周知の第二メッセンジャーである（Sutherland等、Pharmacol  Rev 12 265(1996)。ＣＡＭＰの細胞レベルはその合成及び衰弱を制御する機構により規制される。ＣＡＭＰの衰弱はホスホジエステラーゼ（以下ＰＤＥと略記）のファミリーにより制御される（Beavo等TiPS 11，1150，1990）。
【０００４】
ＰＤＥＩＶは気道平滑筋及び炎症細胞中のＣＡＭＰ濃度を規制するのに主要な役割を演ずることが示され（ＤＥＮＴ等British J Pharmacology 90，163 1960）、そしてＰＤＥＩＶの阻害は炎症メジエータ放出を防止することを導き得る（Veghese等 J Mol Cel Cardiol 12（Suppl II），S61（1989））ことが示された。かくしてＰＤＥＩＶを阻害する化合物は炎症性の病気の治療に対し有用であろう。
【０００５】
一方、脳毛細管内皮細胞（以下、ＥＣｓと略記）は血液脳関門（以下ＢＢＢと略記）を形成し、それは通常中枢神経系（以下ＣＮＳと略記）の正常な細胞外環境を維持するのに本質的役割を有するものとして語られている。ＢＢＢは真の分子関門であり、小さな疎水性分子、限られたセットの特に輸送された栄養素（グルコース及びある種のアミノ酸）及び制限された数のトランスフェリンの如き特に細胞を通過する（transcytosed）巨大分子のみ脳へ入ることを許す。限られた分子的輸送に対して脳毛細管ＥＣｓが説明する二つの別個の性質は：それらの液体相の飲食作用（エンドサイトーシス）の低い速度（及び対応する細胞透過フラックスの低い速度及びそれらの高い電気抵抗のタイト結合によるカップリング（それらは細胞に沿う（paracellular）フラックスをきびしく制御する）である。
【０００６】
ある時間の間、ＢＢＢは臨床的に重要であることが知られていた。卒中につづいてある時起る様にタイト結合がひどく破裂される時、その結果脳へ蛋白及びイオンが入ることはそれに結合した水の流入のため浮腫へと導く。明らかに正常なＢＢＢでさえ、あるタイプのリンパ球及び転移性細胞が入ることで生起する如く、破られ得る；かかる条件は重大な病気と組合わされる（例えば多発性硬化及び転移性脳腫瘍）。
【０００７】
培養された脳ＥＣｓの場合に於て、膜透過性の環状ＡＭＰ誘導体の添加はタイト結合透過性を減少させ、且つアクチン細胞骨格の再組織化を作りだし、ストレスファイバーの数を減少し、それにより良く規定された皮質アクチンベルトを生ずることが開示されている。それに従い、環状ＡＭＰホスホジエステラーゼ（以下ＰＤＥと略記）作用の阻害は同様な効果をつくり出し得る。これは実際ロリプラム（rolipram）の如きＰＤＥＩＶの阻害剤がタイト結合透過性を減少させるき場合である。
【０００８】
卒中の場合に於て、ＰＤＥＩＶ阻害剤はこの状態をひどく複雑化する血管原性浮腫を減少させるのに有用な剤であり得る。脳内皮細胞のタイト結合の増大された透過性を逆転させることにより、脳内へイオン及び蛋白が入ることは防止され、ＣＮＳ環境は正常に戻るであろう。血管原性浮腫は防止されるであろう。
【０００９】
多発性硬化に於て活性化されたＴ細胞は脳内皮と結合し、ＣＮＳに入る様移行する。もしＣＮＳ抗原が遭遇すると、細胞は炎症性カスケードの引き金となり、究極には髄鞘脱落を結果する。脳内皮細胞を横切る活性化されたＴ細胞の移行はＰＤＥＩＶ阻害剤により生体外で阻害され得る。阻害の機構は移行のために必要なＴ細胞で開始された内皮信号系プロセスの閉塞により得る。それに従ってＰＤＥＩＶ阻害剤は多発性硬化に於て脳内に活性化Ｔ細胞が入るのを閉塞する剤であり得て、それにより潜在的治療法を提供する。
【００１０】
これらの病気に於て、環状ＡＭＰホスホジエステラーゼ（以下ＰＤＥと略記）は重要な役割を演ずる。例えば、選択タイプＩＶＰＤＥ阻害剤であるロリプラムは潜在的抗多発性硬化薬である〔Nature Medicine, 1(3), 244−248, 1995〕。更にＰＤＥ阻害剤は実験的アレルギー性脳脊髄炎を防止し得る〔Proc. Natl, Acid, Sci, USA, 92(4), 3601−3605, 1995〕。ロリプラムは抗うつ薬であるから、眠け、集中又は反射運動能力の低下の如き逆反応は不可避である。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】
上掲の問題に関して、本発明者等は広汎な研究を進めた。結果として、式（Ｉ）で表される新規なニコチンアミド誘導体が優れた効力及び安全性を有することが見出された。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
本発明の第一の観点によれば、一般式（Ｉ）の化合物が提供される：
【００１３】
【化７】
0003987645.tif 000002
ここでＲ１は水素原子又は低級アルキル基を表す；
Ｒ２は次のものから選択された基を表す：
【００１４】
【化８】
0003987645.tif 000003
ここでＸはハロゲン原子を表す；
又Ｒ１及びＲ２は一緒に４−メチルピペラジニル基を形成出来、それは置換され得る；
Ｒ３は次の基から選択された基を表す；
【００１５】
【化９】
0003987645.tif 000004
Ｒ４は水素原子又は低級アルキル基を表す。
【００１６】
本発明は特にぜん息、慢性気管支炎、ショック、慢性関節リウマチ、卒中、再灌流障害、脳脊髄炎及び多発硬化症に対する潜在的抗アレルギー及び炎症薬を提供する。
【００１７】
上式の上記定義に関して、ハロゲン原子の特定例は塩素原子、弗素原子、臭素原子及び沃素原子を含み、中でも塩素原子が好ましい。低級アルキル基の特定例はメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、ｉ−プロピル基、ｎ−ブチル基、ｉ−ブチル基、ｔ−ブチル基、ペンチル基及びヘキシル基の如き１乃至６炭素原子を有するアルキル基を含む。
【００１８】
本発明による上記式（Ｉ）により表されるニコチンアミド誘導体のより特定の例は、次の化合物を含むが、ニコチンアミド誘導体はそれらに限定されない。
【００１９】
(1)Ｎ−（４−ピリジル）−２−シクロペンチルオキシニコチンアミド
(2)Ｎ−（４−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシニコチンアミド
(3)Ｎ−（４−ピリジル）−２−（４−フルオロフェニルオキシ）ニコチンアミド
(4)Ｎ−（４−ピリジル）−２−（３−ヒドロキシシクロヘキシルオキシ）ニコチンアミド
(5)Ｎ−（４−ピリジル）−２−（２−エキソノルボルニルアミノ）ニコチンアミド
(6)Ｎ−（４−ピリジル）−２−シクロオクチルアミノニコチンアミド
(7)Ｎ−（４−ピリジル）−２−アダマンチルアミノニコチンアミド
(8)Ｎ−（４−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシ−６−メチルニコチンアミド
(9)Ｎ−（３−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシニコチンアミド
(10)Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
(11)Ｎ−（５−イソキノリニル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
(12)Ｎ−（４−ピコリル）−２−（４−フルオロフェニルオキシ）ニコチンアミド
(13)Ｎ−（４−ピコリル）−２−（３−ニトロフェニルアミノ）ニコチンアミド
(14)Ｎ−（３−ピコリル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
(15)Ｎ−（３−ピコリル）−２−（３，４−ジメトキシフェニルオキシ）ニコチンアミド及び；
(16)Ｎ−（１−ベンジル−４−ピペリジル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
本発明は人間の患者にＰＤＥＩＶ活性を阻害するための上記一般式（Ｉ）による化合物の薬理学的に有効な量を投与することによりＰＤＥＩＶ活性を随伴するぜん息、慢性気管支炎、ショック、慢性関節リウマチ、卒中、再灌流障害、脳脊髄炎及び多発硬化症の如き各種のアレルギー性及び炎症性の病気を治療するための方法を提供する。換言すれば、ホスホジエステラーゼ拮抗が有効である病気を治療又は改善するための薬剤の作製に対し、一般式（Ｉ）による化合物又はその薬理学的に受容可能な塩の使用が提供される。
【００２０】
本発明は更に上記一般式（Ｉ）による化合物の薬理学的に有効な量及び薬理学的に受容可能な賦形剤を含む治療組成物を提供する。
【００２１】
特に本発明の化合物はぜん息、慢性気管支炎、ショック、慢性関節リウマチ、卒中、再灌流障害、脳脊髄炎及び多発硬化症の如き各種のアレルギー性及び炎症性の病気の治療、防止、寛解、改良のために有効であり得る。
【００２２】
本発明の一般式（Ｉ）の化合物がこれらの病気に対する治療又は改善に於ける製薬剤として使用される場合には、それは経口又は非経口的に投与され得る。一般にそれは静脈、皮下及び筋肉注射の如き注射、坐薬、舌下錠の形で非経口的に投与される。投与量は症状；年令、性、体重及び患者の敏感性；投与方法；投与の時間及び間隔及び製薬調合品の性質、調合及び種類；有効成分の種類等により著しく変化するであろうし、それ故投与量に関しては特別な限定はない。通常は、化合物は一日当り、成人当り約 0.1乃至1000mg、好ましくは0.5乃至500mg、より好ましくは１乃至100mgを普通は１乃至４部分で投与され得る。
【００２３】
例えば注射、坐薬、舌下錠、錠剤及びカプセルの調剤形に於ける製薬調合品は普通に当業界で受容されている方法により調製され得る。
【００２４】
注射を調製するに於ては、有効成分がもし必要ならばｐＨ変性剤、緩衝剤、懸濁剤、可溶化剤、安定剤、緊張剤、保存剤等と混合され得、続いて普通の方法による静脈、皮下又は筋肉注射の調製を行う。この場合に於て、もし必要ならば、これらの調剤は普通の方法により凍結乾燥され得る。
【００２５】
懸濁剤の例はメチルセルロース、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロース、アカシア、粉末トラガカント、カルボキシメチルセルロースソーダ塩、及びポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートを含む。
【００２６】
可溶化剤の例はポリオキシエチレン水素化ヒマシ油、ポリソルベート80、ニコチンアミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴル（Macrogol）及びヒマシ油脂肪酸のエチルエステルを含む。
【００２７】
安定剤の例は亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム及びエーテルを含み、保存剤の例はｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール及びクロロクレゾールを含む。
【００２８】
本発明の次の観点によれば、一般式（II）の化合物の調製のための方法であって、
【００２９】
【化１０】
0003987645.tif 000005
一般式（III）の任意に保護された化合物を誘導体化し、
【００３０】
【化１１】
0003987645.tif 000006
そしてその後任意にその様に生成された一般式（II）の化合物を一般式（II）の他の化合物に転換することを含み、ここでＲ1 乃至Ｒ4 は本発明の第１の観点に従って規定されたものと同じ意味を有する方法が提供される。
【００３１】
この方法に於て、一般式（III）の化合物の一般式（II）の化合物を生成するための誘導体化は次のものによる処理により遂行され得る：
(a)塩素化剤
(b)混合酸無水物生成剤又は、
(c)１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）
及び一般式（IV）の一級又は二級アミン
ＨＮＲ１Ｒ２  （IV）
ここでＲ１及びＲ２は本発明の第１の観点に従って規定されたものと同じ意味を有する。
【００３２】
塩素化剤は便宜に塩化チオニル、塩化スルフリル、塩化オキザリル、五塩化リン、三塩化リン又はオキシ塩化リンであり得る。混合酸無水物生成剤はメチルクロロホーメート又はエチルクロロホーメートであり得る。
【００３３】
本発明のこの観点に於て調製された一般式（II）の化合物は更にアルコール又はアミンで処理されて一般式（Ｉ）の化合物を与えることが出来る。
【００３４】
本発明は又Ｒ１乃至Ｒ４が請求項１に記載のものと同じ意味を有し、Ｎ−（４−ピリジル）−２−クロロニコチンアミド、Ｎ−（３−ピリジル）−２−クロロニコチンアミド及びＮ−（２−ピリジル）−２−クロロニコチンアミドが除外されるという条件での、一般式（II）の化合物にも延長する。
【００３５】
【化１２】
0003987645.tif 000007
かかる化合物のより特定の例は次のものを含む。
【００３６】
(1)Ｎ−（４−ピリジル）−２−クロロ−６−メチルニコチンアミド
(2)Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−２−クロロニコチンアミド
(3)Ｎ−（５−イソキノリル）−２−クロロニコチンアミド
(4)Ｎ−（４−ピコリル）−２−クロロニコチンアミド
(5)Ｎ−（３−ピコリル）−２−クロロニコチンアミド及び；
(6)Ｎ−（Ｎ−ベンジルピペリジン−４−イル）−２−クロロニコチンアミド
第２及びそれに続く特徴の好ましい特徴は第１の観点に対するものと同様であるので省略する。
【００３７】
【実施例】
本発明は次に添付の実施例について例示して記述されるが、これらは説明の目的で提示されるものであって、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。実施例中に於て図面の番号に言及されるが、それらの図面に於て：
図１はラットの脳の冠状切断図を示し、組織のエバンス青含有量の測定のため６個の区域への右（Ｒ）及び左（Ｌ）半球の分割を図示する。
【００３８】
Ａ−梗塞以前のレベル（ブレグマ（bregma）＋2.7mm）
Ｂ−梗塞のレベル（ブレグマ  −0.3mm）
図２は実施例２の化合物のＢＢＢ障害への効果（５時間注入）を示す。
【００３９】
エバンス青はテストに述べられる如くＭＣＡＯ後５時間で脳の６つの区域から抽出された。データは平均±ＳＥとして表現される。化合物（ｎ＝５）対ビヒクル（ｎ＝５）＊ｐ＜0.05（学生Ｔ−テスト）
図３は実施例２の化合物のＢＢＢ障害への効果（48時間注入）を示す。
【００４０】
エバンス青はテストに述べられる如くＭＣＡo後48時間で脳の６つの区域から抽出された。化合物は閉塞の開始後投与された。データは平均±ＳＥとして表現される。化合物（ｎ＝６）対ビヒクル（ｎ＝７）＊ｐ＜0.05（学生Ｔ−テスト）。
【００４１】
製造実施例
(1)合成ルート
【００４２】
【化１３】
0003987645.tif 000008
（ここでＲ１乃至Ｒ４は上記に規定したものと同じ意味を有する。）
２−クロロニコチン酸又はその６−置換誘導体が次のもので処理された：
1）塩素化剤（例えば塩化チオニル、塩化スルフリル、塩化オキザリル、五塩化リン、三塩化リン又はオキシ塩化リン）、又は
2）混合酸無水物生成剤（例えばメチルクロロホーメート又はエチルクロロホーメート）又は、
3）１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＤＣ）；
及び中間体アミド化合物を与えるための一級又は二級アミンであり、これは更にアルコール又はアミンで処理されて一般式（Ｉ）のニコチンアミド化合物を与える。
【００４３】
(2）中間体の合成
製造実施例１（中間体１）
Ｎ−（４−ピリジル）−２−クロロニコチンアミド
【００４４】
【化１４】
0003987645.tif 000009
２−クロロニコチン酸（15g，0.095モル）及び塩化チオニル（150ml）の混合物が60℃で８時間加熱され、続いて過剰の塩化チオニルの蒸発により粗酸塩化物を得た。これはエーテルで洗滌され、乾燥され、次いでジクロロメタン150ml中に溶解された。４−アミノピリジン（10g，0.1モル）及びトリエチルアミン（20ml）のジクロロメタン200ml中の溶液に対し、上記酸塩化物のジクロロメタン中の溶液を０℃で30分間添加し、10時間室温（以下ＲＴと略記）で攪拌された。
【００４５】
反応混合物水上に注がれ、ジクロロメタンで２回抽出され、結合された有機層は塩水で洗滌され、MgSO４上で乾燥された。ジクロロメタンは蒸発乾燥され、標記の化合物20gを与えた。
【００４６】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.82(brs,1H),8.52(m,3H),8.14(d-d,1H,J=7Hz,2Hz),  7.58(d,2H,J=8Hz).
製造実施例２（中間体２）
Ｎ−（４−ピリジル）−２−クロロ−６−メチルニコチンアミド
【００４７】
【化１５】
0003987645.tif 000010
２−クロロ−６−メチルニコチンアミド及び４−アミノピリジンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００４８】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.58(d,2H,J=7Hz),8.52(brs,1H),8.14(d,2H,J=7Hz), 7.60(d,2H,J=7Hz),7.29(d,2H,J=7Hz),2.60(s,3H).
製造実施例３（中間体３）
Ｎ−（３−ピリジル）−２−クロロニコチンアミド
【００４９】
【化１６】
0003987645.tif 000011
２−クロロニコチン酸及び３−アミノピリジンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００５０】
製造実施例４（中間体４）
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−２−クロロニコチンアミド
【００５１】
【化１７】
0003987645.tif 000012
２−クロロニコチン酸及び３，５−ジクロロ−４−アミノピリジンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００５２】
製造実施例５（中間体５）
Ｎ−（５−イソキノリル）−２−クロロニコチンアミド
【００５３】
【化１８】
0003987645.tif 000013
２−クロロニコチン酸及び５−アミノイソキノリンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００５４】
製造実施例６（中間体６）
Ｎ−（４−ピコリル）−２−クロロニコチンアミド
【００５５】
【化１９】
0003987645.tif 000014
２−クロロニコチン酸及び４−ピコリルアミンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００５６】
製造実施例７（中間体７）
Ｎ−（３−ピコリル）−２−クロロニコチンアミド
【００５７】
【化２０】
0003987645.tif 000015
２−クロロニコチン酸及び３−ピコリルアミンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００５８】
製造実施例８（中間体８）
Ｎ−（Ｎ−ベンジルピペリジン−４−イル）−２−クロロニコチンアミド
【００５９】
【化２１】
0003987645.tif 000016
２−クロロニコチン酸及び１−ベンジル−４−アミノピペリジンが(1)の合成に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００６０】
実施例
実施例１
Ｎ−（４−ピリジル）−２−シクロペンチルオキシニコチンアミド
【００６１】
【化２２】
0003987645.tif 000017
水素化ナトリウム（4.3g，0.09モル）50％のジメチルホルムアミド中の懸濁液に対しＲＴに於てシクロペンタノール（7.74g，0.09モル）が添加され、１時間攪拌され、次で中間体（１）が添加され、110〜120℃で４時間反応された。反応混合物は氷浴上に注がれ、酢酸エチルで抽出され（２回）、有機層は水、塩水で洗滌され、MgSO４上で乾燥された。有機相は蒸発乾固され、残渣はシリカゲルコラムクロマトグラフィーの200g上（２％エタノール−ジクロロメタン）で精製され、標記化合物の9.0gを与えた。
【００６２】
1H-NMR(D2O);δ(ppm)8.50(d,2H,J=7Hz),8.20(m,2H),8.03(d,2H,J=7Hz),  7.10(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),5.40(m,1H),1.50-2.0(m,8H).
実施例２
Ｎ−（４−ピリジル）−２−エキソノルボニルオキシニコチンアミド
【００６３】
【化２３】
0003987645.tif 000018
エキソノルボルネオル及び中間体(1)が実施例１の工程に従って反応されて、標記の化合物を与えた。
【００６４】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)10.30(brs,1H),8.52(m,3H),8.30(d-d,1H,J=7Hz,1Hz), 7.58(d,2H,J=7Hz),7.06(d-d,1H,J=7Hz),5.18(d,1H,J=5Hz),2.60(m,1H),  2.42(m,1H),1.1-2.1(m,8H),
実施例３
Ｎ−（４−ピリジル）−２−（４−フルオロフェニルオキシ）ニコチンアミド
【００６５】
【化２４】
0003987645.tif 000019
４−フルオロフェノール及び中間体(1)が実施例１の工程に従って反応されて、標記の化合物を与えた。
【００６６】
1H-NMR(HCl塩in D2O);δ(ppm)8.57(d,2H,J=7Hz),8.25(d-d,1H,J=7Hz,1Hz), 8.10(m,3H),7.30(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),7.15(d,4H,J=7Hz).
実施例４
Ｎ−（４−ピリジル）−２−（３−ヒドロキシシクロヘキシルオキシ）ニコチンアミド
【００６７】
【化２５】
0003987645.tif 000020
１，３−シクロヘキサンジオール及び中間体(1)が実施例１の工程に従って反応されて、標記の化合物を与えた。
【００６８】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)10.35(brs,1H),8.56(m,3H),8.30(d-d,1H,J=7Hz,1Hz), 7.68(d,2H,J=7Hz),7.12(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),5.48(m,1H),4.00(brs,1H),  1.42.4(m,8H).
実施例５
Ｎ−（４−ピリジル）−２−（２−エキソノルボニルアミノ）ニコチンアミド
【００６９】
【化２６】
0003987645.tif 000021
エキソ−２−ノルボニルアミン（710mg，6.4mM）及び中間体(1)（1.5g，6.4mM）のジメチルホルムアミド15ml中の溶液に対し酢酸銅(II)(58mg,0.32  mM）及びｎ−エチルモルホリン（0.8ml）が添加され、110℃で15時間加熱された。反応混合物は氷浴上に注がれ、酢酸エチルで抽出され（３回）、有機層は塩水で洗滌され、MgSO４上で乾燥され、蒸発乾固された。残渣はシリカゲルコラムクロマトグラフィー（３％エタノール−ジクロロメタン）上で精製されて、標記の化合物の1.1gを与えた。
【００７０】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.30(d,2H,J=7Hz),7.94(brs,2H),
7.70(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),7.50(brs,2H),6.51(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),  3.80(m,1H),2.30(brs,2H),1.1-2.0(m,8H).
実施例６
Ｎ−（４−ピリジル）−２−シクロオクチルアミノニコチンアミド
【００７１】
【化２７】
0003987645.tif 000022
シクロオクチルアミン及び中間体(1)が実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００７２】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.50(d,2H,J=7Hz),8.28(m,1H),8.12(brs,1H),    8.08(d,J=10Hz),7.70(d,1H,J=7Hz),7.52(d,2H,J=7Hz),6.50(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),  4.30(m,1H),1.4-2.1(m,14H).
実施例７
Ｎ−（４−ピリジル）−２−アダマンチルアミノニコチンアミド
【００７３】
【化２８】
0003987645.tif 000023
アダマンチルアミン及び中間体(1)が実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００７４】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.50(d,2H,J=7Hz),8.22(m,1H),8.13(brs,1H),  7.90(brs,1H),7.72(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),7.53(d,2H,J=7Hz),  6.48(dd,1H,J=7Hz,7Hz),1.6-2.3(m,15H).
実施例８
Ｎ−（４−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシ−６−メチルニコチンアミド
【００７５】
【化２９】
0003987645.tif 000024
エキソノルボルネオル及び中間体(1)が実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００７６】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)10.33(brs,1H),8.55(d,2H,J=7Hz),8.42(d,1H,J=7Hz), 7.59(d,2H,J=7Hz),6.92(d,1H,J=7Hz),5.21(m,1H),2.50(s,3H),1.2-2.6(m,10H).
実施例９
Ｎ−（３−ピリジル）−２−エキソノルボルニルオキシニコチンアミド
【００７７】
【化３０】
0003987645.tif 000025
エキソノルボルネオル及び中間体(3)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００７８】
1H-NMR(HCl塩in D2O);δ(ppm)9.29(s,1H),8.43(d,1H,J=7Hz),8.28(m,1H), 8.12(m,2H),7.88(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),7.01(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),4.76(m,1H), 2.38(m,1H),2.20(m,1H),1.0-1.8(m,8H).
実施例１０
Ｎ−（３，５−ジクロロ−４−ピリジル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
【００７９】
【化３１】
0003987645.tif 000026
２−オキソノルボルニルネオル及び中間体(4)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００８０】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)9.92(brs,1H),8.60(m,1H),8.57(s,2H),8.36(m,1H), 7.08(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),5.20(m,1H),1.0-2.6(m,10H).
実施例１１
Ｎ−（５−イソキノリルニル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
【００８１】
【化３２】
0003987645.tif 000027
２−エキソノルボルネオル及び中間体(5)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００８２】
1H-NMR(D6-DMSO);δ(ppm)10.65(s,1H),9.95(s,1H),8.78(d,1H,J=7Hz), 8.51(d,1H,J=7Hz),8.40(m,3H),8.10(m,2H),7.18(d-d,1H,J=7Hz,7Hz), 5.02(d,1H,J=5Hz),1.1-2.5(m,10H).
実施例１２
Ｎ−（４−ピコリル）−２−（４−フルオロフェニルオキシ）ニコチンアミド
【００８３】
【化３３】
0003987645.tif 000028
４−フルオロフェオル及び中間体(6)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００８４】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.55(m,2H),7.43(d,1H,J=7Hz),7.2-7.4(m,3H),  7.04(m,2H),6.80(t,2H,J=8Hz),6.20(t,H,J=7Hz),5.04(s,2H).
実施例１３
Ｎ−（４−ピコリル）−２−（３−ニトロフェニルアミノ）ニコチンアミド
【００８５】
【化３４】
0003987645.tif 000029
２−ニトロアニリン及び中間体(6)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００８６】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)9.08(t,1H,J=5Hz),8.87(m,1H),8.55(d,2H,J=7Hz), 8.39(m,1H),8.16(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),7.88(d,1H,J=7Hz),7.78(d,1H,J=7Hz), 7.40(t,1H,J=7Hz),7.28(d,2H,J=7Hz),6.86(d-d,1H,J=7Hz,1Hz), 4.58(d,2H,J=5Hz).
実施例１４
Ｎ−（３−ピコリル）−２−（２−エキソノルボルニルオキシ）ニコチンアミド
【００８７】
【化３５】
0003987645.tif 000030
２−エキソノルボルネオル及び中間体(6)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００８８】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.62(brs,1H),8.55(m,1H),8.50(d-d,1H,J=7Hz,1Hz), 8.40(m,1H),8.25(m,1H),7.70(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),7.28(d-d,1H,J=7Hz,7Hz), 7.03(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),5.03(m,1H),4.65(d,2H,J=5Hz),3.78(m,1H),
1.0-2.4(m,10H).
実施例１５
Ｎ−（３−ピコリル）−２−（３，４−ジメトキシフェニルオキシ）ニコチンアミド
【００８９】
【化３６】
0003987645.tif 000031
３，４−ジメトキシフェノール及び中間体(6)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００９０】
1H-NMR(HCl塩in D2O);δ(ppm)8.70(s,1H),8.60(d,1H,J=7Hz),8.45(d,1H,J=8Hz),                      8.19(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),8.12(m,1H),7.90(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),          7.22(d-d,1H,J=7Hz,7Hz),6.96(d,1H,J=7Hz),6.76(s,1H),6.62(m,1H),  4.68(s,2H), 3.76(s,3H),3.68(s,3H).
実施例１６
Ｎ−（１−ベンジル−４−ピペリジル）−２−（２−エキソノルボニルオキシ）ニコチンアミド
【００９１】
【化３７】
0003987645.tif 000032
２−エキソノルボルネオル及び中間体(8)は実施例(5)の工程に従って反応され、標記の化合物を与えた。
【００９２】
1H-NMR(CDCl3);δ(ppm)8.46(d-d,1H,J=7Hz,1Hz),8.20(m,1H),  8.08(d,1H,J=7Hz),7.2-7.3(m,5H),6.98(dd,1H,J=7Hz,7Hz),  5.08(m,1H),4.00(m,1H),3.53(s,2H),2.7-2.9(m,2H),1.1-2.5(m,16H).
薬理学的実験
(1)生体研究：豚脳内皮細胞培養の細胞透過抵抗（TER）への効果
1)材料
実施例２の化合物が本発明の代表として用いられた。ロリプラム（Rolipram）が正の対照（positive control）として用いられ、本発明の構造に近い米国特許4,861,891（EP−357,316）の実施例４及び８に開示された二つの化合物が対照として用いられた。
【００９３】
【化３８】
0003987645.tif 000033
2)方法
ミクロ脈管(micro vessel)分離及び豚脳内皮細胞（以下ＰＢＥＣと略記）培養；
本質的にRubin等、1991１）に於てウシ脳内皮細胞に対して記述される如く。豚皮質が均質化され、ミクロ脈管フラグメントが濾過により集められた。脈管断片は６日間培養され、継代（passage）され、ＰＢＥＣはコラーゲン処理したポリカーボネートのトランスウェル（Transwell）上にメッキされた。４日後媒体は50％星状細胞（astrocyte）調整媒体（ＡＣＭ）、50％規定媒体〔（以下ＤＭＥＭと略記）10μg/mlトランスフェリン、100μMプトレッシン及び30nMソジウムセレナイトと共に〕変化され、上のチャンバーに250μl、下のチャンバーに750μlの総容積１mlを用いた。ＰＢＥＣ単層を横切る細胞透過電気抵抗（以下ＴＥＲと略記）はＥＶＯＭ抵抗システム（World  Precision Instruments，Hertfordshire，UK）を用いて決定される。抵抗は空のフィルターを横切る抵抗に対し補正され、Ｏhms×cm２（Ωcm２）として表される。単層を横切る電気抵抗は試験化合物の添加前は1000hm×cm２（Ωcm２）を超える。
【００９４】
星状細胞調整媒体
95％以上純粋な星状細胞の培養物が１日令のSpraque-Dawleyラット皮質からLillien及び協同研究者（1988）２）により本質的に述べられる如く調整された。調整された媒体は融合性の培養物から２日毎に集められた。
【００９５】
ホスホジエステラーゼ阻害剤での処理
Transwell上にメッキの５日後に未処理のＴＥＲ測定が行われる。水不溶性の試験化合物が1000倍の濃度に於て下のチャンバーに１μＤＭＳＯ中に添加された。水溶性化合物は水中100倍の濃度で用いられ、2.5μlが上のチャンバーへ、又7.5μlが下のチャンバーに添加される。ＴＥＲ測定は薬の添加後1.5時間、2.5時間及び24時間でなされる。各薬の各濃度は10μMロリプラムで処理された３つ組のセットのトランスウェルと、ＤＭＳＯ（及びもし適切なら水）のみを対照として処理された他のものを含む。各Transwellに対する開始の読取からのＴＥＲのパーセント変化が計算され、結果は平均±標準偏差として表現される。
【００９６】
１）；Rubin,L.L.,Hall,D.E.,Porter,S.,Barbu,K.,Cannon,C.,Horner,H.C.,  Jantapour,M.,Liaw,C.W.,Manning,K.,Morales,J.,Tanner,L.I.,Tomaselli,  K.J.及びBard F.(1991). 血液脳関門の細胞培養モデル.J.Cell Biol.115,1725-35.
2)；Lillien,L.E.,Sendtner,M.,Rohrer,H.,Hughes,S.M.,and Raff,M.C. (1988).Type-2 ラット脳培養に於ける星状細胞の発達はタイプ−１星状細胞による産生されたＣＮＴＦ様蛋白により開始される。 Neuron,1,485-94.
2)結果
結果は表１に示される。
【００９７】
（ＴＥＲは０時間読取りの％として示され、三重のTraswellsに対する平均±標準偏差）
【００９８】
【表１】
0003987645.tif 000034
(2)生体外研究：ｃ−ＡＭＰ含有量（対照＝1.00）
1)材料−次の試験された化合物は実施例に対応する。
【００９９】
2)方法
脳内皮細胞は96のウェルプレート（well plate）上で培養された。融合（confluence）の到達後、培地は新鮮な媒体の50μlと置換され、培養物は更に２時間37℃でインキュベートされた。化合物はｐＨ平衡化された媒体中に37℃で希釈され、所望の最終濃度の２倍を与えた。次で50μlが培養物に２時間に亘り３つ組で添加された。細胞状ｃ−ＡＭＰを抽出するために、媒体は次で急速に氷冷0.1Ｍ−ＨＣｌで置換された。４℃で３０分後、抽出物は放射免疫シンチレーション近接アッセイによるアセチル化に従って分析された（Amersham RIA-SPA：RPA538）。
【０１００】
3)結果−結果は表２に示される。
【０１０１】
【表２】
0003987645.tif 000035
本発明化合物の大部分は水中に可溶であるが、一方対照１及び２は不溶である。この物理的性質は脳血管性の病気の治療に対しては非常に有利である。何故なら水溶性物質は容易に且つ安定に注射形として配合され得るし、且つＢＢＢを通過し得る。
【０１０２】
(3)生体内研究：本発明化合物のラットに於ける中大脳動脈梗塞モデル中のＢＢＢ完全性に対する効果
1)材料
実施例２の化合物が本発明の代表として用いられた。
【０１０３】
2)方法
雄のSprague−Dawleyラット（270〜320ｇ）がハロタンで麻酔され、外頸動脈を通して内頸動脈及びＭＣＡ中へポリ−Ｌ−リジン２）で被覆された内管腔ナイロン縫合糸１）の逆行性挿入による一時的ＭＣＡ０の120分に付された。温度プローブが直腸内及び左側頭筋内に挿入された。加熱ランプが直腸及び側頭筋温度を37乃至38℃に保持するため使用された。凡てのラットに於て、ポリエチレンカテーテルが右大腿動脈及び静脈中に導入され、血圧記録、血液サンプリングのため、エバンス青及び薬の注入のために用いられた。平均動脈血圧（以下ＭＡＢＰと略記）、プラズマグルコース及び血液ガスが作業の間連続的に測定された。
【０１０４】
神経系の状態が閉塞（60分）の間、凡てのグループに於て評価された；Ａ及びＢグループに於てはＭＣＡ０後３及び５時間；Ｃ及びＤグループに於ては24及び48時間。０〜12の等級スケールが閉塞の効果を査定するため使用された（正常スコアー−０；最大スコアー−12；表３）。
【０１０５】
１）；Zea Longa,E.L.,Einstein,P.R.,Carlson,S.and Cummins,R.,Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats, Stroke, 20(1989)84-91.
２）；Belayev,L.,Alonso,O.F.,Busto,R.,Zhao,W.and Ginsberg,M.D.,Middle  cerebral artery occlusion in the rat by intraluminal suture: neurological and pathological evaluation of an improved model,Stroke, 27(1996)1616-1623.
【０１０６】
【表３】
0003987645.tif 000036
3)薬注入
テストされた化合物（食塩水中実施例２，1mg/kg,i.v.）又はビヒクル（0.9％食塩水）がＭＣＡ０の開始後注入により投与された（表４）。
【０１０７】
【表４】
0003987645.tif 000037
４つの動物グループが研究された：グループＡ及びＢはビヒクル又は薬の５時間に亘る注入により処理され、又グループＣ及びＤはビヒクル又は薬の48時間に亘る注入により処理された。
【０１０８】
4)ＢＢＢ完全性の評価
ＢＢＢの完全性はUyama等による３）エバンス青溢出（extravasation）により調査された。動物は表４にリストされた様なグループに分けられた。エバンス青（ＥＢ，２％、食塩水中、４ml/kg）がグループＡ及びＢに於てはＭＣＡ０の開始３時間後に静脈注射され；又グループＣ及びＤでは46時間後に注射された。胸が次で２時間後ハルタン麻酔下に開けられた。ラットは110  mmHg圧力に於て左心室を通して食塩水で灌流され、無色の灌流液が右心房から得られるまで行った。
【０１０９】
断頭後、脳はブレグマ（bregma）＋2.7及び−0.3mmのレベルを含む２つのセグメントに封鎖された。冠状ブロックは次に右及び左半球へと分割され、そしてＥＢ染料の局所的測定のために６個の区域へと切断された（図１）。試料は秤量され、50％トリクロロ酢酸溶液中に置かれた。均質化及び遠心分離に続いて、抽出された染料はエタノール（１：３）で希釈され、その蛍光がパーキンエルマーＬＳ−５Ｂルミネッセンススピクトロメータにより決定された（620nmに於ける励起及び680nmに於ける放出）。
【０１１０】
計算は同じ溶剤中での外部標準（100〜500ng/ml）に基づいた。ＥＢの組織含有量は染料の既知量から誘導された直線標準曲線から定量され、組織のグラム当りで表現された。
【０１１１】
３）；Uyama,O.,Okamura,N.,Yanase,M.,Narita,M.,Kawabata,K.and Sugita,M.,  Quantitative evaluation of vascular permeability in the gerbil brain after transient ischemia using Evan’s blue fluorescence, J Cereb. Blood Flow Metab.,8(1988)282-284.
5)結果
この研究に於ける27動物に於ける直腸及び頭蓋（側頭筋）温度、ＭＡＢＰ、血液ガス及びプラズマグルコースはグループ間で著しい差異を示さなかった（表５−９）。
【０１１２】
表１０はＭＣＡ０後の神経系の結果を総括する。ＭＣＡ０後３ｈ及び５ｈに於ける神経系のスコアーは化合物２で処理したグループ（１mg/kg、５時間注入）に於てはビヒクル処理のグループに於けるより著しく良好であった（平均±SE；夫々6.2±0.5対8.4±0.2；5.8±0.6対8.4±0.2；Ａ対Ｂ，ｐ＜0.003）。
【０１１３】
化合物２は又化合物２で処理したグループに於ける60分、24ｈ及び48ｈに於ける神経系スコアー（１mg/kg，48時間注入）をビヒクルグループに比較して著しく改善した（平均ＳＥ；夫々7.3±0.5対9.0±０；4.7±0.4対6.7±0.4；4.5±0.3対7.0±0.4；Ｃ対Ｄ．ｐ＜0.004）。
【０１１４】
ＭＣＡ０後のＢＢＢ完全性（integrity）に対する化合物２の効果が表１１に示される。化合物２（１mg/kg、５時間注入）は染料溢出（図２）に於てビヒクル処理グループに比較して著しく減少した。皮質中へ（平均ＳＥ；9.3±2.9対24.3±5.8μg/g。試料３，ｐ＝0.05）、線条（striatum）中へ（26.4±3.1対47.3±4.7μg/g，試料５。ｐ＝0.01）及び右半球中へ（41.2±5.4対82.4±9.2μg/g，ｐ＝0.005）。全脳からの総計ＥＢは又化合物２処理ラットに於てはビヒクルグループと比較して著しく減少した（63.9±10.5対111.8±12.9μg/g；ｐ＝0.02）。
【０１１５】
化合物２（１mg/kg、48時間注入）は又染料溢出をビヒクル処理グループと比較して著しく減少した（図３）。皮質中（平均±ＳＥ；7.4±2.5対29.0±8.3μg/g、試料３。ｐ＝0.05）。線条中（17.2±2.2対50.8±12.1μg/g、試料５、ｐ＝0.03）及び右半球中（30.7±4.0対93.2±18μg/g、ｐ＝0.01）。全脳からの総計ＥＢは又化合物２処理ラットに於てはビヒクル処理グループと比較して著しく減少した（44.8±6.2対118.9±19.6μg/g；ｐ＝0.01）。
【０１１６】
４匹の動物が吾々の研究に於て死んだ（グループＣに於て２及びグループＤに於て２）。グループＡ又はＢ（ビヒクル及び化合物２処理ラット）に於ては１匹も死ななかった。
【０１１７】
【表５】
0003987645.tif 000038
【０１１８】
【表６】
0003987645.tif 000039
【表７】
0003987645.tif 000040
【０１１９】
【表８】
0003987645.tif 000041
【表９】
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【０１２０】
【表１０】
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【表１１】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  ラットの脳の冠状切断図を示し、組織のエバンス青含有量の測定のため６個の区域への右（Ｒ）及び左（Ｌ）半球の分割を図示する。
Ａ−梗塞以前のレベル（ブレグマ±2.7mm）
Ｂ−梗塞のレベル（ブレグマ−0.3mm）
【図２】  実施例２の化合物のＢＢＢ障害への効果（５時間注入）を示す。
【図３】  実施例２の化合物のＢＢＢ障害への効果（48時間注入）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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