(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（３）の化合物：
0003988152.tif 000012
式中：
−  Ｒ1及びＲ2は独立して水素原子、Ｃ1〜Ｃ4であるアルキル基、又はアルキルオキシメチル基を示し、
−  Ｒ3は、ＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＯ2、又はＣＯＯＣ2Ｈ5基であり、
−  Ｒ4は、アルキル基で置換されたフェニル基である。
【請求項２】
Ｒ4が二個のメチル基で置換されているフェニル基である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
二個のメチル基がフェニル基のメタ位にある請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
５-エチル-６-メチル-３-カルボエトキシ-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
５-エチル-６-メチル-３-ニトロ-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
３-アミノ-５-エチル-６-メチル-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
３-アミノ-５-メチル-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
３-アミノ-５-エチル-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オンであることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
３-アミノ-５-エトキシメチル-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ｇ）であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
５-エトキシメチル-３-ニトロ-４-（３'，５'-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式７ｇ）であることを特徴とする請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
下記式（６）
0003988152.tif 000013
のクロロニトロピリジノンをチオ-フェノールと反応させることを特徴とするＲ3がＮＯ2を示す請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の製造方法。
【請求項１２】
請求項１１に従い得られるニトロピリジノンを塩化第一スズ水和物の存在下で又は接触水素化によって還元することを特徴とするＲ3がＮＨ2である請求項１〜３のいずれかに記載の化合物の製造方法。
【請求項１３】
下記式（６）
0003988152.tif 000014
（式中Ｒ1及びＲ2は独立してエチル又はメチル基である。）
で示される化合物。
【請求項１４】
下記式（１７）
0003988152.tif 000015
（式中、Ｒ1及びＲ2は独立してエチル又はメチル基である）
で示される化合物。
【請求項１５】
請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物又は請求項１１若しくは１２に記載の製造方法によって得られる化合物の有効量を適合性の（compatible）賦形剤との混合物として含有することを特徴とする医薬組成物。
【請求項１６】
請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物又は請求項１１若しくは１２に記載の製造方法によって得られる化合物を含有することを特徴とする医薬。
【請求項１７】
請求項１〜１０のいずれかに記載の化合物又は請求項１１若しくは１２に記載の製造方法によって得られる化合物の、ＨＩＶウイルスによる個体の感染の治療のための医薬の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
本発明の目的は、４-アリール-チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン及びそれらの医薬としての用途にある。
本発明は、特に、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に関連する疾病の治療におけるそれらの使用に関する。
１-[（２-ヒドロキシエトキシ）メチル］-６-（フェニルチオ）チミン（ＨＥＰＴ）及びピリジノンの誘導体は、それらのＨＩＶ-１の逆転写酵素に対する阻害特性のために公知である。
ＨＥＰＴ及びＥ-ＥＰＵ（５-エチル-１-エトキシメチル-６-（フェニルチオ）-ウラシル）と呼ばれる同族の他の誘導体は、それぞれ図１中の式（１ａ）及び（１ｂ）で表される。逆転写酵素に関する阻害特性を有するピリジノンは図２中の式（２ａ）及び（２ｂ）で表される。
他の化合物はＨＩＶウイルスの逆転写酵素の阻害剤であり、そのピリジノンも特許出願ＥＰ-0.462.800（メルク）に記載されている。この出願には、一般的な態様で、特定の構造（即ち、環の４位の基Ｒ4がアルキルチオ又はアルキルアミノ基であり、３位の基が、ＮＨＣＯであることができないＸ-ＣＨｎＲ3鎖によってピリジノン核に結合している、置換されていてもよいアリール又はヘテロ環基で置換されていなけばならない）を有するピリジノンのグループが記載さている。にもかかわらず、Ｒ4が水素原子である化合物だけが合成されている。いずれの場合も、この文献には、該化合物がウイルス粒子に貫入することは記載されていない。
これらの化合物はＨＩＶ-１の耐性コロニーが急速に発現する原因になるという欠点を有し、そのため、ＨＩＶウイルスに関連する疾病の治療におけるヒトの長期間の単一治療（monotherapy）の間にそれらを使用することは困難である。
ＨＩＶウイルスに関連する疾病の治療において提起される他の問題は、ゲノムＲＮＡのプロウイルス性ＤＮＡ（proviral DNA）への転換、即ち、真核生物ゲノムへの組込に必須の工程を妨害することにある。最近の研究は、明らかに、このレトロ-転写が、ビリオンにおいてさえ、まだその細胞外相にあるときに起こり得ることを示す。従って、２％以下のウイルス細胞は、精液の場合、標的細胞と融合する前にそれらのレトロ-転写を完了することができる。そのため、逆転写酵素（ＩＴ）の阻害剤は、細胞に到達する前にビリオンに貫入できることが必須である。
ペールソン（Perelson）らによるウイルス動力学に関する研究（1996,Science 271.1582-1586）は、血液プラズマ中のウイルス粒子の平均寿命が８時間のオーダーであり、又はインビボにおけるＨＩＶ-１の見積もられた寿命の約四分の１のオーダーであることを示す。そのため、ビリオンは、その細胞外相において、これらの阻害剤の可能性のある標的である。
いかなる抗-ＨＩＶ-１活性をも有しない他のチオピリジノンは記載されていたとことに注目すべきである。
クロイシー-デルセイ（CROISY-DELCEY）らの論文（1983 J.Med.Chem.vol.26,No.9,1329-1333）には抗腫瘍及び殺菌剤活性を示すルカントン（lucanthone）の同族体の合成が記載されている。中間体化合物７ｂ、17ａ及び17ｂはピリジノンである。
リバレ（RIVALLE）らの論文
0003988152.tif 000002
には、いくつかがピリジノンである化合物を用いることによるピリドキノレインの合成が記載されている。最終化合物又は中間体のいずれについても活性は記載されていない。
アップトン（UPTON）の論文（（1986）J.Chem.Soc.Perk in Trans.1,No.7,1225-1229）には、特にピリジノンではないヒドロキシピリジンを使用するアントラセンの合成が記載されている。
本出願人は、強い阻害活性を示し、即ち、低い投与量で活性であり、低細胞毒性であり、ウイルス粒子に貫入する新規な分子を見出すことに興味を惹かれた。
本出願人は、置換された４-アリール-チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オンが、強い阻害作用を示し、低細胞毒性であり同時にウイルス粒子に貫入することを示した。
従って、本発明の目的は、図３に示す式（３）の化合物にあり、ここで：
−  Ｒ1及びＲ2は、独立して水素原子、脂肪族基若しくはアルキル鎖がＣ1〜Ｃ4であるアルキルオキシアルキル基又は一緒になって芳香族環を形成している；
−  Ｒ3は：
＊水素原子、
＊ＮＨＲ5基（Ｒ5は水素原子又はＣＯＲ6基、Ｒ6は脂肪族又は芳香族基）、又は
＊ＮＯ2基又は
＊ＣＯＯＲ7基（Ｒ7は脂肪族基）を示し、
−  Ｒ4は、一又は二以上の脂肪族基及び／又は一又は二以上の水酸基で置換されていることができるフェニル、ピリミジン、ベンズイミダゾール、ベンズオキサゾール、ベンゾチアゾール、チアゾリン、イミダゾール又はピリジン基である。
有利な方法では、Ｒ1及びＲ2は独立して水素原子、Ｃ1〜Ｃ4のアルキル基又はアルキルオキシメチル、好ましくはエトキシメチル基を示す。
Ｒ6は、フェニル基で置換されていることができるＣ1〜Ｃ6のアルキル基であることができ又はＲ6はベンジル基であることができる。
Ｒ7はＣ1〜Ｃ6のアルキル基、特にエチル基であることができる。
次に、Ｒ3は、好ましくはＮＨ2、ＮＨＣＯＣＨ3、ＮＯ2又はＣＯＯＣ2Ｈ5基である。
Ｒ4は有利にはアルキル基によって、好ましくは二個のメチル基によって置換されているフェニル基であり、更に好ましくは二個のメチル基によってメタ位が置換されているフェニル基である。
以下の化合物は、本発明で特に有利である：
５-エチル-６-メチル-３-ニトロ-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式７ｃ）、
５-エトキシメチル-３-ニトロ-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式７ｇ）、
３-アミノ-５-エチル-６-メチル-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ｃ）、
３-アミノ-５-メチル-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ａ）、
３-アミノ-５-エチル-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ｂ）、
３-アミノ-５-エトキシメチル-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ｇ）、
５-エチル-６-メチル-３-カルボエトキシ-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式１５）。
本発明は、本発明の化合物を得ることにも係る。従って、Ｒ3がＮＯ2である化合物（式７及び９）は、式（６）のクロロニトロピリジノンをチオフェノール又は置換されていることができる式Ｒ4ＳＨのヘテロ環化合物のメルカプト誘導体と反応させることにより得ることができる。
得られるニトロピリジノンは、Ｒ3がＮＨ2を示す化合物（式８及び10）を調製するために、塩化錫水和物により又は接触水素化により、還元することができる。
従って、本発明の式７及び８の化合物は、図４に示す反応スキームに従って対応するヒドロキシピリジン-２（１Ｈ）-オン（化合物４）から合成された。
化合物９ａ及び９ｆは、図５に示すスキームに従って得られた。
式４の化合物については、レグラベレンド（Legraverend）らによって記載されているように（Nucleosides and Nucleotides,1986,5（2）,125-134）又はエチル-２-エチル-３-アミノクロトネート（化合物12）とジエチルマロネートとを反応させて中間体13を得て、それ自体を塩酸によって加水分解することによって得られる。
ニトロピリジノン（化合物５）は、硝酸ＨＮＯ3と反応することにより調製され、次いで、シー．エッチ．ヌイエン（C.H.Nguyen）らによって記載されたように（Anti-Cancer Drug Design,1992,7,219-233）、式（５）の化合物とＰＯＣｌ3／ベンジルトリエチルアンモニウムクロライド／ＣＨ3ＣＮの混合物を還流下に加熱して反応させることによってクロロニトロピリジノン（化合物（６）に変換された。
化合物（６ａ）と３，５-ジメチルチオフェノールとを、トリエチルアミンの存在下エタノール中において室温で縮合させることによって、４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-５-メチル-３-ニトロピリジン-２（１Ｈ）-オン（化合物７ａ）に導く。塩化第一錫二水和物によって酢酸エチル中で沸点において還元することによって式８ａのアミンに導く。
化合物７ｄ、７ｅ及び８ｅは、クロロニトロピリジノセン（６ａ）をチオフェノール又はｍ-チオクレゾールと縮合させた後、（化合物８ｅの場合）ニトロ基を還元することによって得られた。
アミノピリジノン（10）は、化合物９ｄを、塩化第一錫二水和物及び酢酸エチルの存在下において還流下で還元することによって得られた。
Ｒ3がＮＨＣＯＲ6でありＲ4が置換されていることができるフェニル基である化合物は、式（Ｒ6ＣＯ）2Ｏ又はＲ6ＣＯＺ（Ｚは遊離されやすく、アミド結合を形成できる基である）の化合物をアミノピリジノンと反応させることによて得ることができる。
従って、アミド11ａ〜11ｅ及び１ｇは、図６に示す反応スキームに従って、３-アミノ-５-メチル-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ａ）又は３-アミノ-５-エチル-６-メチル-４-（３’，５’-ジメチルフェニル）チオ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（式８ｃ）のアミノ基を修飾することによって合成した。反応は、蟻酸エチル、無水酢酸、プロピオニルクロリド、無水ヘプタン酸又はフェニルアセチルクロリドの存在下で実施した。
３-Ｎ-（エトキシカルバミル）誘導体（化合物11ｆ）は、同様の条件下でエチルクロロホルメートを用いて合成した。
５-エチル-ピリジノン及び５-エチル-６-メチル-ピリジノンは、５-エチル-４-ヒドロキシ-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（化合物４ｂ）から又は５-エチル-４-ヒドロキシ-６-メチル-ピリジン-２（１Ｈ）-オン（化合物４ｃ）から出発して得た。図７は、化合物４ｃをエチル-２-エチルアミノクロトネート（化合物12）から二段階の連続によって得るための反応スキームを示す。その後、ニトロ化、モノクロロ化、３，５-ジメチルチオフェノールによる置換及びニトロ基の還元を図４の反応スキームに従って、実施して、それぞれ３-ニトロ及び３-アミノ-ピリジノン誘導体７ｂ及び８ｂ及び７ｃ及び８ｃとする。同様にして、ベンゾピリジノン同族体７ｆ及び８ｆも、出発化合物として市販され入手可能なキノレイン２，４-ジオール（化合物４ｆ）を使用して得ることができた。
Ｒ3がＣＯＯＲ7基であり、Ｒ4が置換されていることができるフェニル基である化合物は、式14の４-クロロピリジノンを置換されていることができるチオフェノールと図７の反応スキームに従って反応させることによって得た。式14の４-クロロピリジノンについては、式13のヒドロキシピリジノンをＰＯＣｌ3の存在下で図７の反応スキームに従っや反応で得ることができる。
従って、ピリジノン（４ｃ）の調製の間で中間生成物として得られる３-カルボエトキシ-５-エチル-４-ヒドロキシ-５-メチルピリジン-２（１Ｈ）-オン（化合物13）は、連続して、４-クロロピリジノン（化合物14）及び４-フェニルチオピリジノン（化合物15）に転換した。３-カルボエトキシピリジノン（化合物15）を加水分解すると、脱カルボキシル化によって、３位が置換されていないピリジノン（化合物16）となる。
本発明の化合物の調製は、上記の方法に限定されない。本発明の化合物は、当業者に公知の任意の方法によって得ることができる。
本発明の他の目的は、Ｒ1及びＲ2が独立してエチル又はメチル基であり、Ｒ3がＮＯ2又はＮＨ2である化合物の合成において生成するＲ1及びＲ2がこれらの特徴を有する式（６）に対応する化合物である。
本発明は、さらに、Ｒ1びＲ2が独立してエチル及びメチル基であり、Ｒ3がＣＯ2Ｃ2Ｈ5基である式（３）の化合物の合成において生成するＲ1及びＲ2がこれらの特徴を有する図８に示す式（17）に相当する化合物に係る。
さらに、本発明は、上記の本発明の化合物の有効量を適合性の賦形剤との混合物中に含有する医薬組成物に関する。
他の対象は、該化合物を含有する医薬である。
最後に本発明は、ＨＩＶに関連する疾病の治療のための医薬を製造するためのこれらの化合物の一つの使用に係る。
これらの化合物は、当業者知られたあらゆる公知の経路で投与することができ、好ましくは経口、注射（皮下、静脈内、筋肉内、胸骨内注射を含む）若しくは直腸経路によって又は吸入によって投与する。
本発明の組成物は、上記の投与経路の要求を満たすように配合され、例えば、錠剤、カプセル、無菌の注射可能な溶液、例えば、無菌の注射可能な水溶液又は油性懸濁液、点鼻剤又は坐薬の形態である。
経口方法で投与され、懸濁液の形態にあるとき、これらの組成物は、当業者に公知の方法に従って調製することができ、微結晶セルロースをフィラーとして、アルギン酸又はアルギン酸ナトリウムを懸濁剤として、メチルセルロースを粘度向上剤として及び香味剤を含有してもよい。
鼻経路又は吸入で投与されるとき、これらの組成物は生理食塩水溶液の形態であり、当業者に公知のベンジルアルコール又はすべての他の適当な保存料、バイオアベイラビリティーを向上させるために吸収を向上させるための物質、フルオロカーボン及びすべての他の分散又は溶解剤を含有することができる。
注射可能な溶液又は懸濁液は、非経口経路に適した非毒性の希釈剤又は溶媒、例えば、マンニトール、１，３-ブタンジオール、水、リンゲル液又は生理食塩水又はすべての他の分散液、湿潤又は懸濁剤、例えば、無菌のオイル、特にジグリセライド又は合成モノグリセライド及び脂肪酸、例えば、オレイン酸を使用して調合することができる。
本発明の組成物を直腸経路で投与する場合、即ち、坐剤の形態である場合、本発明の組成物は、本発明の化合物を適当な、非刺激性賦形剤、例えば、ココアバター、グリセロールの合成エステル又はポリエチレングリコールと混合することによって調製することができ、それらは常温で固体であり、直腸腔中で液化又は溶解して該化合物を放出する。
本発明の化合物は、経口的には、１〜100mg／kg体重の量投与することができる。しかし、具体的な投与及び治療頻度は、患者によって変化し、使用する化合物の活性、代謝安定性、作用速度及び投与する時の患者の年齢、体重及び一般的な症状、排出比率、使用する他の医薬並びに治療される患者に固有の他のすべての因子を含む種々の因子に依存し得る。
本発明の化合物は、ＨＩＶによる感染の予防及び治療に関し及び感染等の病理学的結果、例えばＡＩＤＳに関し、ＨＩＶの逆転写酵素を阻害することを目的とする。ＡＩＤＳの治療又はＨＩＶによる感染の予防又は治療は、ＨＩＶ、例えばＡＩＤＳ又はＡＲＣ（エイズ関連症候群）による感染症状の広い範囲の治療について特定することができるが、同時にこの特定は限定的ではない。
本発明を、以下の実施例により、説明するが、限定されるものではない。
以下の図面は本発明を説明する。
図１〜３は、それぞれ化合物（１）、（２）及び（３）の化学式を示す。
図４〜７は、本発明の化合物を得るための反応スキームを示す。
図８は、化合物（17）の化学式を示す。
図９は、二つのマトリックス-プライマー対の存在下におけるＨＩＶ-１及びＨＩＶ-２ウイルスの逆転写酵素の活性に対する化合物７ｃの効果を示す。
図10は、ＨＩＶ-１の逆転写酵素の阻害に対する化合物７ｃの用量効果を示す。期待される相補的ＤＮＡ、長さ１４７ヌクレオチド、をゲル（ウエル１）の左に示す。ウエル２〜５は、化合物７ｃの減少する濃度に相当する（ウエル２：400nM、ウエル３：300nM：ウエル４：100nM及びウエル５：40nM）。ウエル６は化合物７ｃを含まない。
図11は、図10の相補的ＤＮＡにプロミネンスを付与するために使用したプローブのダイアグラムである。
図12は、化合物７ｃとマトリックス-プライマー対としてのポリＣ-オリゴｄＧ及び基質としてのｄＧＰＴによるＨＩＶ-１の逆転写酵素阻害の二重逆数（ラインウィアー−バーク（Linewear-Burk））の説明である。
図13は、図９と類似の、ポリＡ-オリゴｄＴをマトリックス-プライマー対として及びｄＴＴＰを基質として使用した二重逆数の説明である。
図14は、アナポア上での濾過後の逆転写酵素活性（Ｔｉ）の測定値を示す。
図15は、アナポア上での濾過後の感染力の測定値を示す。
生成物の特徴付け：
薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、シリカゲル６０Ｆ２５４（メルク）で予め被覆されたプレート上で行われた。化合物を明らかにするため、ＴＬＣプレートは紫外線に曝された。中圧クロマトグラフィーを用いて、シリカゲル（４０−６０μｍ）カラム上で精製した。全ての融点は、「エレクトロサーマル（Electrothermal）９２００」装置で測定し、補正はしなかった。ＮＭＲ−1Ｈスペクトルは、「ブルーカー（Bruker）  ＡＣ  ２００」装置で、内部標準（★．＃＝交換できる配置（allocations））としてＣＨＣｌ3（δ＝７．２５ｐｐｍ）又はＤＭＳＯ（δ＝２．５４ｐｐｍ）を用いて、溶媒中で記録された。元素分析（表１）は、フランス，９１１９０ギフ−サーイベット（Gif-sur-Yvette）のＣＮＲＳにある微量分析サービスセンター（微量分析部）により、行われた。
実施例１：
エチル−２−エチル−３−アミノクロトネート（化合物１２）の調製
エチル−２−エチルアセトアセテート（１５０ｇ、０．９５モル）及び硝酸アンモニウム（８４ｇ、１．０４モル）を、１．１Ｌの無水テトラヒドロフランに溶解した。混合物を、アンモニアでスパージング（sparging）しながら、５日間撹拌した。室温で溶媒を留去し、１Ｌの水を加えた。この混合物を、３０分間撹拌した。濾過により、無色の固体残渣を分離し、ヘキサン中で再結晶して生成物１２（１０７ｇ、７２％）を、無色結晶の形で得た：融点６１℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＣＤＣｌ3）δ  ４．１１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、２．１７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ2ＣＨ3）、１．９３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3）、１．２４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＯＣＨ2ＣＨ3）、０．９４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）。分析Ｃ6Ｈ15ＮＯ2（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
実施例２：
４−ヒドロキシ−５−エチル−６−メチル−３−カルボエトキシ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１３）の調製
ナトリウム（４８．３４ｇ、２．１０モル、ケロセン中の小片）を、窒素雰囲気下に３時間かけて、５３０ｍｌのエタノールにゆっくりと溶解した。混合物を、還流下に加熱し、ジエチルマロネート（３３５ｍｌ、２．２０モル、新たに蒸留したもの）を、３０分間かけて滴下して加えた。引き続き還流下に、２００ｍｌエタノール中のアミノクロトネート（化合物１３）（１５０ｇ、０．９６モル）を滴下して加えた。この混合物を、７２時間還流下に撹拌して淡黄色の懸濁液を得た。この懸濁液を室温まで冷却し、沈殿を濾過により分離した。固体を水に溶解し、０℃まで冷却し、塩酸水溶液でｐＨ１まで酸性化した。沈殿を濾過により分離し、水で洗浄し、トルエン中で結晶化して生成物１３（１０９．６ｇ、５１％）を、白色結晶の形で得た：融点１９６−１９７℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．５２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ★−１）、１１．３２（１Ｈ，ｓ，ＯＨ★）、４．３４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、２．３９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、２．２３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−６）、１．３１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＯＯＣＨ2ＣＨ3）、１．０２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）。分析Ｃ11Ｈ15ＮＯ4（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
実施例３：
５−エチル−４−ヒドロキシ−６−メチル−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物４ｃ）の調製
実施例２で得たエステル（１３）（１７．２ｇ、７６．４ミリモル）を、１．２Ｌの１規定塩酸水溶液に溶解し、その混合物を３６時間還流下に加熱した。溶媒を留去した後、１００ｍｌの水を加え、その混合物をアンモニア水溶液で中和した。沈殿を濾過により分離し、水で洗浄した。生成物４ｃ（１１．２ｇ、９６％）を、白色固体の形で得た：融点３６０℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １０．７５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、５．４６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−３）、２．３２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、２．１３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−６）、０．９９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、分析Ｃ8Ｈ11Ｎ1Ｏ2（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
実施例４：
５−エチル−４−ヒドロキシ−３−ニトロピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物５ｂ）の調製
レグラベレンド（Legraverend）ら（NucleoSides and Nucleotides, 1986, 5（2）, 125-134）の記載により得られた化合物４ｂ（５．００ｇ、３６．０ミリモル）の４０ｍｌ硝酸（ｄ＝１．３３）中の懸濁液を、室温で１０分間及び７５℃で１２分間撹拌した。直ちに１５０ｍｌの氷水を加え、黄色の沈殿を濾過により分離し、水中で再結晶してニトロピリジノン５ｂ（５．４ｇ、８２％）を、黄色結晶の形で得た：融点２１３−２１４℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．８５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．３９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、２．４２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2）、１．１０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ3）、分析Ｃ7Ｈ8Ｎ2Ｏ4・０．２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
実施例５：
５−エチル−４−ヒドロキシ−６−メチル−３−ニトロピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物５ｃ）の調製
実施例４における化合物５ｂについて記載されたように、化合物４ｃ（４．００ｇ、２６．０ミリモル）の３２ｍｌ硝酸（ｄ＝１．３３）中の懸濁液を、室温で１０分間及び８０℃で１０分間撹拌した。直ちに８０ｍｌの氷水を加え、黄色の沈殿を濾過により分離し、水中で再結晶してニトロピリジノン５ｃ（４．４ｇ、８５％）を、黄色結晶の形で得た：融点２５５−２５６℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．９０  ２．４７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、２．２７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−６）、１．０３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、分析Ｃ8Ｈ10Ｎ2Ｏ4（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
実施例６
４−ヒドロキシ−３−ニトロキノリン−２（１Ｈ）−オン（化合物５ｆ）の調製
実施例４における化合物５ｂについて記載されたように、化合物４ｆ（９．００ｇ、５５．８ミリモル）の７０ｍｌ硝酸（ｄ＝１．３３）中の懸濁液を、室温で１５分間及び８０℃で１５分間撹拌した。直ちに２５０ｍｌの氷水を加え、黄色の沈殿を濾過により分離し、水で洗浄し、真空下Ｐ2Ｏ5上で乾燥してニトロピリジノン５ｆ（１１．３ｇ、９８％）を、黄色固体の形で得た：融点２５０℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．８５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、８．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−８）、７．６８（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ1＝８Ｈｚ，Ｊ2＝１Ｈｚ，Ｈ−５）、７．３７−７．２６（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６及び７）。分析Ｃ9Ｈ6Ｎ2Ｏ4（Ｃ，Ｈ，Ｎ）。
実施例７：
４−クロロ−５−エチル−３−ニトロピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物６ｂ）の調製
オキシ塩化リン（６．７ｍｌ、３９．１ミリモル）を、化合物５ｂ（３．００ｇ、１６．３ミリモル）及びベンジルトリエチルアンモニウムクロライド（１４．９０ｇ、６５．２ミリモル）のアセトニトリル（６０ｍｌ）中の溶液に、加えた。得られた混合物を、４０℃で３０分間撹拌し、還流下に１時間加熱した。溶媒を留去した後、６０ｍｌの水を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。黄色の沈殿を集め、シクロヘキサン（各６ｍｌで３回）で洗浄し、乾燥して化合物６ｂ（２．４ｇ、７４％）を、淡黄色結晶の形で得た：ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．１９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．７３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、２．５６（２Ｈ，ｑ，Ｌ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、１．１６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）。
実施例８：
４−クロロ−５−エチル−６−メチル−３−ニトロピロリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物６ｃ）の調製
実施例７における化合物６ｂについて記載されたように、オキシ塩化リン（８．３ｍｌ、８８．８ミリモル）を、化合物５ｃ（４．００ｇ、２０．２ミリモル）及びベンジルトリエチルアンモニウムクロライド（１８．４０ｇ、８０．８ミリモル）のアセトニトリル（８０ｍｌ）中の溶液に、加えた。得られた混合物を、４０℃で３０分間撹拌し、還流下に１時間加熱した。溶媒を留去した後、１５０ｍｌの水を加え、混合物を室温で４８時間撹拌した。褐色の沈殿を集め、シクロヘキサン（各１０ｍｌで３回）で洗浄し、エタノール中で再結晶して化合物６ｃ（１．５ｇ、３４％）を、淡黄色結晶の形で得た：ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．９８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、２．５８（２Ｈ，ｑ，Ｌ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、２．３８（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−６）、１．０８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）。
実施例９：
４−クロロ−３−ニトロ−２−キノレイン−２（１Ｈ）−オン（化合物６ｆ）の調製
実施例７における化合物６ｂについて記載されたように、オキシ塩化リン（４．０ｍｌ、４６．６ミリモル）を、化合物５ｆ（４．００ｇ、１９．４ミリモル）及びベンジルトリエチルアンモニウムクロライド（１７．６８ｇ、７７．６ミリモル）のアセトニトリル（８０ｍｌ）中の溶液に、加えた。得られた混合物を、窒素雰囲気下４５℃で３０分間撹拌し、還流下に２０分間加熱した。溶媒を留去した後、１２０ｍｌの氷水を加えた。その混合物を、０℃で１２ｍｌの希釈アンモニア水溶液（１４％）で中和し、この温度で１時間撹拌した。黄色の沈殿を集め、１２０ｍｌのヘキサンで１時間撹拌した。濾過後の化合物６ｆ（２．９ｇ、６７％）を、真空下Ｐ2Ｏ5上で乾燥して黄色固体を得た：ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．１０（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、８．０４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−８）、７．８４（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−５）、７．５４−７．４３（２Ｈ，ｍ，Ｈ−６及び７）。
実施例１０：
５−メチル−３−ニトロ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ａ）の調製
２０ｍｌエタノール中の、ヌグエン（Nguyen）ら（1992，前記引用）に従って得られた化合物６ａ（１．８８ｇ、１０．０ミリモル）及び２ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。３，５−ジメチルチオフェノール（１．３９ｇ、１０．１ミリモル）を滴下して加えた。１時間室温で撹拌後、沈殿を濾過で分離し、シクロヘキサン（２０ｍｌ）で洗浄した。生成物７ａ（２．６６ｇ、９２％）を、黄色固体の形で得た：融点２３５℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．２７（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．６３（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、７．０１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．９６（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、２．２７（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、１．８９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）。分析Ｃ14Ｈ14Ｎ2Ｏ3Ｓ・０．２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１１：
５−エチル−３−ニトロ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ｂ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、２０ｍｌエタノール中の化合物６ｂ（２．４２ｇ、１１．９ミリモル）及び２ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。３，５−ジメチルチオフェノール（１．６４ｍｌ、１２．１ミリモル）を滴下して加えた。４時間室温で撹拌後、沈殿を濾過で分離し、エタノール（１５ｍｌ）中で再結晶した。生成物７ｂ（１．９４ｇ、５３％）を、黄色結晶の形で得た：融点１９７℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．２９（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．５９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、７．００（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．９４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、２．３６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝８Ｈｚ  ＣＨ2ＣＨ3）、２．２６（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、１．０３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）。分析Ｃ15Ｈ16Ｎ2Ｏ3Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１２：
５−エチル−６−メチル−３−ニトロ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ｃ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、１６ｍｌエタノール中の化合物６ｃ（０．９０ｇ、４．１ミリモル）及び９ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。３，５−ジメチルチオフェノール（０．５７ｍｌ、４．２ミリモル）を滴下して加えた。３時間室温で撹拌後、沈殿を濾過で分離し、エタノール（５０ｍｌ）中で結晶化した。生成物７ｃ（１．０７ｇ、８１％）を、黄色結晶の形で得た：融点２３６−２３７℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．２８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、６．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．９４（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、２．２６（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、２．１２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）、０．８７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、ＣＨ2ＣＨ3からのシグナルとＤＭＳＯからのシグナルは互いに重なっている。分析Ｃ16Ｈ18Ｎ2Ｏ3Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１３：
５−メチル−３−ニトロ−４−フェニルチオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ｄ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、２ｍｌエタノール中の化合物６ａ（０．２０ｇ、１．１ミリモル）及び０．２ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。チオフェノール（０．１２ｇ、１．１ミリモル）を加えた。１５時間室温で撹拌後、黄色沈殿を濾過で分離し、エタノールで洗浄して、生成物７ｄ（０．１３ｇ、４７％）を、黄色固体の形で得た：融点２１４−２１６℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．８６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．６５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、７．４５−７．３６（５Ｈ，ｍ，Ｈ−２’、３’、４’、５’及び６’）、１．８９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）。分析Ｃ12Ｈ10Ｎ2Ｏ3Ｓ・０．１２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１４：
５−メチル−３−ニトロ−４−（３’−メチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ｅ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、１０ｍｌエタノール中の化合物６ａ（０．５０ｇ、２．６ミリモル）及び０．３ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。５ｍｌエタノール中のｍ−チオクレゾール（０．３５ｇ、２．８ミリモル）を滴下して加えた。１５時間室温で撹拌後、溶媒を留去し、１５ｍｌの水を加えた。懸濁液を２時間室温で撹拌した。黄色沈殿を濾過で分離し、各２ｍｌの水で６回洗浄し、乾燥し、エタノール中で再結晶して、生成物７ｅ（０．５２ｇ、７１％）を、黄色針状晶の形で得た：融点２２２−２２３℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．８５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．６４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、７．２７（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−５’）、７．２０−７．１４（３Ｈ，ｍ，Ｈ−２’、４’及び６’）、２．３１（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’）、１．８９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）。分析Ｃ13Ｈ12Ｎ2Ｏ3Ｓ・０．２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１５：
３−ニトロ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオキノレイン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ｆ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、５０ｍｌエタノール中の化合物６ｆ（１．４０ｇ、６．２ミリモル）及び１．３ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。３０ｍｌエタノール中の３’，５’−ジメチルチオフェノール（０．８６ｍｌ、６．３ミリモル）を、１５分間で滴下して加えた。ＣａＣｌ2を含むトラップをその容器に取り付けた。５０℃で２時間３０分間撹拌後、溶媒を留去し、１００ｍｌの水を加えた。混合物を希釈したアンモニア水溶液で中和し、室温で１時間撹拌した。褐色の沈殿を濾過で分離し、ヘキサンで洗浄し、エタノール（２００ｍｌ）中で結晶化した。生成物７ｆ（１．１９ｇ、５９％）を、橙−黄色結晶の形で得た：融点２９４℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．８９（１Ｈ，ブロード，ＮＨ−１）、７．９６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ、＝８Ｈｚ1Ｊ2＝１Ｈｚ，Ｈ−８）、７．７０（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ1＝８Ｈｚ、Ｊ2＝１Ｈｚ，Ｈ−５）、７．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ、Ｈ−６★）、７．３１（１Ｈ，ｔｄ，Ｊ1＝８Ｈｚ、Ｊ2＝１Ｈｚ、Ｈ−７★）、７．０５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、６．９８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、２．２３（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）。分析Ｃ17Ｈ14Ｎ2Ｏ3Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１６：
５−エトキシメチル−３−ニトロ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物７ｇ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、５ｍｌエタノール中の、Ｃ．Ｈ．ヌグエン（Nguyen）ら（1992,前記引用）に従って得られた化合物６ｇ（０．１５ｇ、０．６ミリモル）及び０．１ｍｌのトリエチルアミンの混合物を、均一になるまで撹拌した。３ｍｌエタノール中の３’，５’−ジメチルチオフェノール（０．０９ｇ、０．６ミリモル）を滴下して加えた。２時間室温で撹拌後、溶媒を留去し、１０ｍｌの水を加えた。混合物を０．５ｍｌの希釈したアンモニア水溶液（１４％）を加えて塩基性にし、懸濁液を室温で２時間撹拌した。黄色沈殿を濾過で集め、水及びヘキサンで洗浄し、乾燥して生成物７ｇ（０．１６ｇ、７４％）を、クリーム色粉末の形で得た：融点１４３−１４４℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １２．２５（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．７５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、７．０１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．９８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、４．２３（２Ｈ，ｓ，ＯＣＨ2−５）、３．３７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈ2、ＣＨ3ＣＨ2、Ｏ）、２．２６（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、１．０８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈ2，ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）。分析Ｃ16Ｈ18Ｎ2Ｏ4Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１７：
３−アミノ−５−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）−チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物８ａ）の調製
塩化第一スズ二水和物（９．７５ｇ、４３．０ミリモル）を、酢酸エチル（１５０ｍｌ）中の化合物７ａ（２．５０ｇ、８．６ミリモル）の懸濁液に加えた。その混合物を、アルゴン雰囲気中で還流下に１時間加熱した。０℃まで冷却後、氷水（１１０ｍｌ）を加え、炭酸ナトリウムの飽和溶液を塩基性ｐＨになるまで加えて得た。沈殿を濾過で除去した。濾過相を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。集めた有機相を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（各１２０ｍｌで３回）、硫酸マグネシウム上で乾燥し、留去した。残渣を、溶離液としてジクロロメタン及びエタノール（９：１）の混合物を用いたカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物８ａ（２．０２ｇ、８７％）を、淡黄色固体の形で得た：融点２０８℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．４６（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、６．８２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．７２（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、６．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、５．４６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2−３）、２．２２（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、１．９７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）。分析Ｃ14Ｈ16Ｎ2ＯＳ（Ｃ，Ｈ，Ｈ，Ｓ）。
実施例１８：
３−アミノ−５−エチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物８ｂ）の調製
実施例１７における化合物８ａについて記載されたように、塩化第一スズ二水和物（６．６７ｇ、２９．６ミリモル）を、酢酸エチル（１００ｍｌ）中の化合物７ｂ（１．８０ｇ、５．９ミリモル）の懸濁液に加えた。その混合物を、アルゴン雰囲気中で７０℃に１時間加熱した。０℃まで冷却後、溶液を炭酸ナトリウムの飽和溶液（９０ｍｌ）で中和した。沈殿を濾過で除去した。濾過相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。集めた有機相を、飽和塩化ナトリウム水溶液（各１２０ｍｌで３回）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、留去した。残渣を、ジクロロメタン及びエタノール（９：１）の混合物を用いたカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物８ｂ（１．０４ｇ、６４％）を、淡ベージュ色固体の形で得た：融点２０８−２０９℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．５１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、６．８１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．６８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、６．５６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、５．４３（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2−３）、２．４０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、２．２１（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、１．０４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）。分析Ｃ15Ｈ18Ｎ2ＯＳ・０．２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例１９：
３−アミノ−５−エチル−６−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物８ｃ）の調製
実施例１７における化合物８ａについて記載されたように、塩化第一スズ二水和物（３．１１ｇ、１３．２ミリモル）を、酢酸エチル（５０ｍｌ）中の化合物７ｃ（１．００ｇ、３．１ミリモル）の懸濁液に加えた。その混合物を、アルゴン雰囲気中で７０℃に１時間加熱した。０℃まで冷却後、溶液を炭酸ナトリウムの飽和溶液（６０ｍｌ）で中和した。沈殿を濾過で除去した。濾過相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。集めた有機相を、飽和塩化ナトリウム水溶液（各１２０ｍｌで３回）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、留去した。残渣を、溶離液としてジクロロメタン及びエタノール（９５：５）の混合物と最後に酢酸エチルを用いたカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物８ｃ（０．８０ｇ、８８％）を、淡黄色固体の形で得た：融点１８８−１８９℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．５２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、６．８０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．７０（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、５．１７（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2−３）、２．２１（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、２．１２（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−６）、０．９３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ，ＣＨ2ＣＨ3）、ＣＨ2ＣＨ3からのシグナルとＤＭＳＯからのシグナルは互いに重なっている。分析Ｃ16Ｈ20Ｎ2ＯＳ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例２０：
３−アミノ−５−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物８ｅ）の調製
実施例１７における化合物８ａについて記載されたように、塩化第一スズ二水和物（１．１２ｇ、５．０ミリモル）を、酢酸エチル（２５ｍｌ）中の化合物７ｅ（０．３６ｇ、１．３ミリモル）の懸濁液に加えた。その混合物を、アルゴン雰囲気中で８０℃に２０時間加熱した。室温まで冷却後、溶液を炭酸ナトリウムの飽和溶液（３０ｍｌ）で中和した。混合物の黄色が赤色になった。１５分間撹拌後、沈殿をセライト上の濾過で除去した。濾過相を分離し、水相をジクロロメタンで抽出した。集めた有機相を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、留去した。残渣を、溶離液として酢酸エチル及びヘプタン（２：１〜４：１）の混合物を用いたカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物８ｅ（０．１８ｇ、５６％）を、褐色粉末の形で得た：融点１７０−１７１℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １１．４８（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｈ−５）、６．９７−６．９２（３Ｈ，ｍ，Ｈ−２’、４’及び６’）、６．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、５．４９（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2−３）、２．２７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’）、１．９７（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）。分析Ｃ13Ｈ14Ｎ2Ｏ3Ｓ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例２１：
３−アミノ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）−チオ−キノレイン−２（１Ｈ）−オン（化合物８ｆ）の調製
実施例１７における化合物８ａについて記載されたように、塩化第一スズ二水和物（１．０４ｇ、４．６ミリモル）を、酢酸エチル（１０ｍｌ）中の化合物７ｆ（０．３０ｇ、０．９ミリモル）の懸濁液に加えた。その混合物を、７０℃に１時間加熱した。０℃まで冷却後、１０ｍｌの氷水を加え、溶液を炭酸ナトリウムの飽和溶液で塩基性にした。黄色の沈殿を濾過で除去した。濾過相を分離し、水相を各１０ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。集めた有機相を、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（各１０ｍｌで３回）、硫酸マグネシウム上で乾燥し、濃縮した。得られた固体を、酢酸エチル中で結晶化して、生成物８ｆ（０．１４ｇ、５２．５％）を、緑色結晶の形で得た：融点２３５−２３６℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １０．０１（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，Ｈ−８）、７．３３−７．０９（３Ｈ，ｍ，Ｈ−５、６及び７）、６．８０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．７７（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、６．０６（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2）、２．１８（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）。分析Ｃ17Ｈ16Ｎ2ＯＳ・０．２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例２２：
３−アミノ−５−エトキシメチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物８ｇ）の調製
化合物７ｇ（１５０ｍｇ、０．４５ミリモル）を、無水エタノール（５ｍｌ）に溶解した。触媒（１０％パラジウム−炭素、５０ｍｇ）を加え、混合物を水素雰囲気下室温で２４時間撹拌した。触媒を濾過で除去し、溶媒を留去した。残渣を、ジクロロメタン及びエタノール（１：０〜９６／４）の混合物を用いたカラムクロマトグラフィーで精製して、生成物８ｇ（３２ｍｇ、２３％）を、褐色結晶の形で得た：融点１４９−１５０℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＣＤＣｌ3）：  １２．２７（１Ｈ，ｓ  ブロード，ＮＨ−１）、６．９０（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、６．７６（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４’）、６．７３（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’及び６’）、４．９１（２Ｈ，ｓ，ＮＨ2−３）、４．３５（２Ｈ，ｓ，ＣＨ2Ｏ−５）、３．４８（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈ2，ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）、２．２２（６Ｈ，ｓ，ＣＨ3−３’及び５’）、１．１４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈ2，ＣＨ3ＣＨ2Ｏ）。分析Ｃ16Ｈ20Ｎ2Ｏ2Ｓ1（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例２３：
５−メチル−３−ニトロ−４−（４’，６’−ジメチルピリミジン−２−イル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ａ）の調製
実施例１０における化合物７ａについて記載されたように、１０ｍｌエタノール中の化合物６ａ（０．１４ｇ、０．７２ミリモル）及び０．２６ｍｌのトリエチルアミン（１．８０ミリモル）の混合物を、均一になるまで撹拌した。２−メルカプト−４，６−ジメチルピリミジン（０．０９ｇ、０．６７ミリモル）を加えた。３時間還流下で撹拌後、溶媒を留去した。１０ｍｌの水を加え、懸濁液を室温で１時間撹拌した。固体を濾過で分離し、真空下Ｐ2Ｏ5上で乾燥して、生成物９ａ（０．１２ｇ、５８％）を、淡黄色固体の形で得た：融点２３８−２３９℃；ＮＭＲ−1Ｈ（ＤＭＳＯ−ｄ6）δ  １３．０２（１Ｈ，ｓ，ＮＨ−１）、７．７５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６）、７．１５（１Ｈ，ｓ，Ｈ−５’）、２．３６（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−４’及び６’）、２．０３（３Ｈ，ｓ，ＣＨ3−５）。分析Ｃ12Ｈ12Ｎ4Ｏ3Ｓ・０．１２５Ｈ2Ｏ（Ｃ，Ｈ，Ｎ，Ｓ）。
実施例２４：
５−メチル−３−ニトロ−４−（４’−ヒドロキシ−６’−メチルピリミジン−２−イル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｂ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載したように、２０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．５０ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）と０．５５ｍｌのトリエチルアミン（４．０ｍｍｏｌｅ）との混合物を均質になるまで攪拌した。４−ヒドロキシ−２−メルカプト−６−メチルピリミジン（０．３８ｇ，２．７ｍｍｏｌｅ）を添加した。懸濁液を還流下で４時間３０分及び室温で１５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、１０ｍｌの水を添加した。混合物を希アンモニア水で塩基性とし、室温で２時間攪拌した。沈殿を濾過により除去した。水相を塩酸で中和し、１５０ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。有機相を濃縮し、残渣をヘキサン及び酢酸エチル（１：１から０：１）の混合物並びに酢酸エチル及びエタノール（９５：５から９：１）の混合物を溶出液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、淡緑色結晶の生成物９ｂ（０．２３ｇ，３０％）を得た：融点＞350℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 13.02（1H,s,NH-1），7.86（1H,s,H-6），6.04（1H,s,H-5'），2.22（3H,s,CH3-6'），1.90（3H,s,CH3-5）．分析．C11H10N4O4S（C,H,N,S）。
実施例２５：
５−メチル−３−ニトロ−４−（ベンズイミダゾール−２−イル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｃ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載されたように、１０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．１０ｇ，０．５ｍｍｏｌｅ）と０．１１ｍｌのトリエチルアミン（０．８ｍｍｏｌｅ）との混合物を均質になるまで攪拌した。２−メルカプトベンズイミダゾール（０．０８ｇ，０．５ｍｍｏｌｅ）を添加し、懸濁液を還流下で６時間３０分及び室温で７２時間攪拌した。懸濁液を室温で３時間攪拌した。生成した黄色固体を濾過により単離し、水で洗浄し、真空下でＰ2Ｏ5で乾燥し、黄色結晶の形態で生成物９ｃ（０．１１ｇ，６６％）を得た：融点272-275℃；NMR-1Ｈ（DMSO-d6）δ 12.93（1H,s,NH-1），7.72（1H,s,H-6），7.56（2H,m,H-5'及び8'），7.25-7.21（2H,m,H-6'及び7'），1.88（3H,s,CH3-5）
分析．C13H10N4O3S．0.25H2O．0.25C2H5OH（C,H,N）。
実施例２６：
５−メチル−３−ニトロ−４−（ベンズオキサゾール−２−イル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｄ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載されたように、２０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．５０ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）と０．５５ｍｌのトリエチルアミン（４．０ｍｍｏｌｅ）との混合物を均質になるまで攪拌した。２−メルカプトベンズオキサゾール（０．４０ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）を添加し、混合物を還流下で３時間及び室温で１５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をエタノール中で結晶化し、褐色固体の形態の生成物９ｄ（０．２２ｇ，２７％）を得た：
融点180-181℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 8.91（1H,ブロード，NH-1），7.85（1H,s,H-6），7.81-7.70（2H,m,H-5'及び8'），7.50-7.39（2H,m,H-6'及び7'），2.10（3H,s,CH3-5）．
分析．C13H9N3O4S．0.5C2H5OH（C,H,N,S）。
実施例２７：
５−メチル−３−ニトロ−４−（ベンゾチアゾール−２−イル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｅ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載したように、１０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．１０ｇ，０．５ｍｍｏｌｅ）と１０ｍｌのトリエチルアミンとの混合物を均質になるまで攪拌した。２−メルカプトベンゾチアゾール（０．０９ｇ，０．５ｍｍｏｌｅ）を添加し、混合物を室温で１５時間及び還流下で４時間攪拌した。全ての揮発物質を蒸発させ、１０ｍｌの水を添加した。黄色固体を濾過により単離し、水で洗浄し、Ｐ2Ｏ5で乾燥し、黄色結晶の形態の生成物９ｅ（０．１０ｇ，６０％）を得た：融点240℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 12.90（1H,ブロード，NH-1），8.09（1H,dd,J1=7Hz,J2=1Hz,H-8'#），7.96（1H,dd,J1=7Hz,J2=1Hz,H-5'#），7.88（1H,s,H-6），7.56（1H,td,J1=7Hz,J2=1Hz,H-7'*），7.47（1H,td,J1=7Hz,J2=1Hz,H-6'*），2.10（3H,s,CH3-5）．分析．C13H9N3O3S2．（C,H,N）。
実施例２８：
５−メチル−３−ニトロ−４−（チアゾリン−２−イル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｆ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載したように、１０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．５０ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）と２０ｍｌのトリエチルアミンとの混合物を均質になるまで攪拌した。２−メルカプトチアゾリン（０．３２ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）を添加し、混合物を還流下で８時間及び室温で１５時間攪拌した。全ての揮発性物質を蒸発させ、２０ｍｌの水を添加した。懸濁液を室温で４８時間攪拌した。固体を濾過により単離し、水で洗浄した。ジクロロメタン及びエタノール（１：０から９：１）の混合物を溶出液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、褐色結晶の形態の生成物９ｆ（０．０５ｇ，７％）を得た：融点177℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 13.10（1H,ブロード，NH-1），7.41（1H,s,H-6）,4.21（2H,t,J=8Hz,H-4'），3.45（2H,t,J=8Hz,H-5'），2.20（3H,s,CH3-5）．
分析．C9H9N3O3S2．0.25C2H5OH（C,H,N）。
実施例２９：
５−メチル−３−ニトロ−４−（Ｎ−メチルイミダゾール−２−イル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｇ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載したように、２０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．５０ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）と０．５５ｍｌのトリエチルアミン（４．０ｍｍｏｌｅ）との混合物を均質になるまで攪拌した。２−メルカプト−１−メチルイミダゾール（０．３０ｇ，２．６ｍｍｏｌｅ）を添加し、混合物を還流下で６時間及び室温で１５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、１５ｍｌの水を添加した。懸濁液を室温で１時間攪拌した。固体を濾過により単離し、水で洗浄し、真空下にてＰ2Ｏ5で乾燥し、黄色結晶の形態の生成物９ｇ（０．６０ｇ，８５％）を得た：融点260-265℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 9.45（1H,s,NH-1），7.51（1H,s,H-6），7.38（1H,t,J=1Hz,H-5'*）,7.04（1H,d,J=1Hz,H-4'*），3.61（3H,s,N-CH3），1.82（3H,s,CH3-5）．
分析．C10H10N4O3S（C,H,N,S）。
実施例３０：
５−メチル−３−ニトロ−４−（２−ピリジル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物９ｈ）の製造
実施例１０の化合物７ａについて記載されたように、１０ｍｌのエタノール中の化合物６ａ（０．１０ｇ，０．５ｍｍｏｌｅ）と１０ｍｌのトリエチルアミンとの混合物を均質になるまで攪拌した。２−メルカプトピリジン（０．０６ｇ，０．５ｍｍｏｌｅ）を添加し、混合物を室温で４８時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、１０ｍｌの水を添加した。懸濁液を室温で３時間攪拌した。固体を濾過により単離し、水で洗浄し、真空下にてＰ2Ｏ5で乾燥し、褐色結晶の形態の生成物９ｈ（０．０９ｇ，６６％）を得た：融点195-196℃；
NMR-1H（DMSO-d6）δ 12.89（1H,ブロード，NH-1），8.47-8.44（1H,m,H-6'），7.85-7.76（1H,m,H-4'），7.73（1H,s,H-6），7.41-7.28（2H,m,H-3'及び5'），1.93（3H,s,CH3-5）.分析.C11H9N3O3S（C,H,N,S）。
実施例３１：
３−アミノ−５−メチル−４（ベンズオキサゾール−２−イル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１０）の製造
実施例１７の化合物８ａについて記載したように、塩化第一スズ二水和物（４２０ｍｇ，１．９ｍｍｏｌｅ）を酢酸エチル（１０ｍｌ）中の化合物９ｄ（１１０ｍｇ，０．４ｍｍｏｌｅ）の懸濁液に添加した。混合物を還流下にて６時間加熱した。０℃まで冷却後、１０ｍｌの氷水を添加し、溶液を炭酸ナトリウムの飽和溶液で塩基性にした。二相を分離し、水相を２０ｍｌの酢酸エチルで３回抽出した。集めた有機相を塩化ナトリウムの飽和水溶液（３×１０ｍｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮した。残渣をジクロロメタンで洗浄し、褐色固体の形態の生成物１０（１０ｍｇ，１０％）を得た：融点296-297℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.36（1H,s ブロード，NH-1）,9.98（1H,s,NH2-3），9.83（1H,s,NH2-3），8.35（1H,d,J=7Hz,H-5'*），6.99（1H,s,H-6），6.94-6.82（3H,m,H-6',7'及び8'*），2.16（3H,s,CH3-5）．
分析．C13H11N3O2S．H2O（C,H,N）。
実施例３２：
３−ホルムアミド−５−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ａ）の製造
ギ酸（２ｍｌ）を（予め水素化カルシウム上で蒸留された）ギ酸エチル（８ｍｌ）中のアミン８ａ（０．１０ｇ，０．４ｍｍｏｌｅ）の溶液に添加した。混合物を還流下で１２時間加熱した。揮発性物質の蒸発後、残渣をエタノールで２回洗浄し、酢酸エチルで１回洗浄した。それをジクロロメタン及びエタノール（９５：５）の混合物を溶出液として用い最後に酢酸エチルを用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色粉末の形態の化合物１１ａ（０．０６ｇ，５８％）を得た：融点221-222℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.96（1H,s,NH-1），8.28（1H,s,NH-3）7.23（1H,s,H-6），6.88（1H,d,H-4'），6.78（2H,s,H-2'及び6'），2.23（6H,s,CH3-3'及び5'），1.85（3H,s,CH3-5）．分析．C15H16N2O2S（C,H,N,S）。
実施例３３：
３−アセトアミド−５−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ｂ）の製造
酢酸（２０ｍｌ）中のアミン８ａ（０．１０ｇ，０．４ｍｍｏｌｅ）及び無水酢酸（０．０５ｍｌ，０．３９ｍｍｏｌｅ）の溶液を還流下で１時間３０分加熱した。溶媒の蒸発後、１０ｍｌの水を添加し、混合物を希アンモニア水溶液で０℃にて中和した。濾過後、残渣をシクロヘキサン（２×５ｍｌ）で洗浄した。淡ベージュ色固体の形態の生成物１１ｂ（０．１０ｇ，８６％）を得た：融点138℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.84（1H,s,NH-1），9.41（1H,s,NH-3），7.20（1H,s,H-6），6.87（1H,s,H-4'），6.81（2H,s,H-2'及び6'），2.22（6H,s,CH3-3'及び5'），1.99（3H,s,CH3-5），1.81（3H,s,CH3CO）．
分析．C16H18N2O2S．H2O（C,H,N,S）。
実施例３４：
５−メチル−３−プロピオンアミド−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ｃ）の製造
新鮮な蒸留されたプロピオニルクロライド（０．０４ｍｌ，０．４１ｍｍｏｌｅ）（容器は塩化カルシウムを含むトラップを備える）をジクロロメタン（５ｍｌ）中のアミン８ａ（０．１０ｇ，０．４０ｍｍｏｌｅ）及びトリエチルアミン（０．０４ｍｌ，０．３８ｍｍｏｌｅ）の溶液に０℃で添加した。混合物を室温で５時間攪拌した。溶媒を蒸発させ、水を添加し、固体を濾過により単離した。残渣をジクロロメタン及びエタノール（９４：１０６）の混合物を溶出液として用い最後に酢酸エチルを用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、白色粉末の形態の化合物１１ｃ（０．１０ｇ，９０％）を得た：融点186-188℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.86（1H,s,NH-1），8.60（1H,s,NH-3），7.21（1H,s,H-6），6.88（1H,s,H-4'），6.80（2H,s,H-2'及び6'），4.04（2H,q,J=7Hz,COCH2CH3），2.22（6H,s,CH3-3'及び5'），1.82（3H,s,CH3-5），1.20（3H,t,J=7Hz,COCH2CH3）．
分析．C17H20N2O2S．1.25H2Ｏ（C,H,N,S）。
実施例３５：
３−ヘプタンアミド−５−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ｄ）の製造
トルエン（４ｍｌ）中のアミン８ａ（１００ｍｇ，０．３８ｍｍｏｌｅ）及び無水ヘプタン酸（０．１４ｇ，０．５８ｍｍｏｌｅ）の溶液を１００℃で１時間３０分加熱した。トルエンの蒸発後、５ｍｌのジエチルエーテルを添加した。沈殿が生成すると直ちにピペットを用いて溶媒を除去した。固体を、このようにして、ジエチルエーテルで２度洗浄した。濾過後、残渣を酢酸エチル中で再結晶した。黄色微結晶の形態の生成物１１ｄ（１７ｍｇ，５０％）を得た：融点212-213℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.86（1H,s,NH-1），9.34（1H,s,NH-3），7.19（1H,s,H-6），6.86（1H,s,H-4'），6.76（2H,s,H-2'及び6'），2.28（2H,t,J=7Hz,COCH2），2.22（6H,s,CH3-3'及び5'），1.81（3H,s,CH3-5），1.53（2H,dd,J=7Hz,COCH2CH2），1.28-1.21（6H,m,（CH2）3），0.86（3H,t,J=6.5Hz，（CH2）5CH3）．分析．C21H28N2O2S（C,H,N,S）。
実施例３６：
５−メチル−３−フェニルアセトアミド−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ｅ）の製造
トリエチルアミン（０．０３５ｍｌ，０．２５ｍｍｏ１ｅ）のモル当量をジクロロメタン（５ｍｌ）中のアミン８ａ（６５ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌｅ）の懸濁液に添加した。ジクロロメタン（１ｍｌ）中のフェニルアセチルクロライド（３９ｍｇ，０．２５ｍｍｏｌｅ）の蒸留された溶液を、氷水で冷却された当該混合物に一滴ずつ添加した。混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒の蒸発後、１０ｍｌの水を添加した。濾過後、残渣をジクロロメタン及びエタノール（９５：５）の混合物を溶出液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製した。緑色結晶の形態の生成物１１ｅ（５３ｍｇ，５６％）を得た：融点200-202℃；NMR-1Ｈ（DMSO-d6）δ 11.88（1H,s,NH-1），9.67（1H,s,NH-3），7.37-7.21（5H,m,C6H5），6.87（1H,s,H-4'），6.76（2H,s,H-2'及び6'），3.67（2H,s,CH2），2.22（6H,s,CH3-3'及び5'），1.80（3H,s,CH3-5）．分析．C22H22N2O2S（C,H,N）。
実施例３７：
５−メチル−３−Ｎ−エトキシカルバモイル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ｆの製造
トリエチルアミン（０．１０ｇ，０．５０ｍｍｏｌｅ）をエタノール（２ｍｌ）中のアミン８ａ（０．０５ｇ，０．２０ｍｍｏｌｅ）の溶液に添加した。新鮮な蒸留されたエチル  クロロホルメート（ethyl Chloroformate）（０．６５ｇ，６．００ｍｍｏｌｅ）を氷水で冷却された当該混合物に一滴ずつ添加した。混合物を室温で４８時間攪拌した。溶媒の蒸発後、５ｍｌの水を添加した。濾過後、赤色固体をジクロロメタン及びエタノール（９８：２）の混合物を溶出液として用いるカラムクロマトグラフィーにより精製し、アミン８ａ（０．００５ｇ，１０％）を回収し、白色固体形態の化合物１１ｆ（０．０１ｇ，２６％）を得た：融点208-210℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.83（1H,s,NH-1），8.60（1H,s,NH-3），7.21（1H,s,H-6），6.88（1H,s,H-4'），6.80（2H,s,H-2'及び6'），4.04（2H,q,J=7Hz OCH2CH3），2.22（6H,s,CH3-3'及び5'），1.82（3H,s,CH3-5），1.19（3H,t,J=7Hz,OCH2CH3）分析．C17H20N2O3S（C,H,N,S）。
実施例３８：
３−アセトアミド−５−エチル−６−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１１ｇ）の製造
酢酸（４０ｍｌ）中のアミン８ａ（０．２０ｇ，０．７ｍｍｏｌｅ）及び無水酢酸（０．０９ｍｌ，０．９ｍｍｏｌｅ）の溶液を還流下で５時間３０分加熱した。溶媒の蒸発後、２０ｍｌの氷水を添加し、混合物を希アンモニア水溶液で０℃にて中和した。混合物を室温で一晩攪拌した。濾過後、残渣をシクロヘキサン（２×１０ｍｌ）で洗浄した。淡褐色固体形態の生成物１１ｇ（０．１７ｇ，７４％）を得た：融点238-239℃；
NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.90（1H,sブロード，NH-1），9.18（1H,sブロード,NH-3），6.83（1H,s,H-4'），6.77（2H,s,H-2'及び6'），2.22（9H,s,CH3-5,3'及び5'），1.87（3H,s,CH3CO），0.85（3H,t,J=7Hz,CH3CH2）．
CH3CH2のシグナル及びDMSOのシグナルは互いに重複する。分析．Ｃ18H22N2O2S．0.45H2O（C,H,N,S）。
実施例３９：
４−クロロ−５−エチル−６−メチル−３−カルボエトキシ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１４）の製造
ニュエンら（Nguyen et al.）（1992，上記で引用された）により記載された化合物６ａの製造のための記載方法に関し、オキシ塩化リン（５．４ｍｌ，５６．８ｍｍｏｌｅ）をアセトニトリル（６０ｍｌ）中の化合物１３（３．００ｇ，１３．３ｍｍｏｌｅ）及びベンジルトリエチルアンモニウムクロライド（１２．１２ｇ，５３．２ｍｍｏｌｅ）の溶液に添加した。得られた混合物を還流下で６時間加熱し、赤色溶液を得た。溶媒の蒸発後、２０ｍｌの氷水を添加し、混合物を０℃で４時間攪拌した。沈殿を集め、シクロヘキサン（２×４ｍｌ）で洗浄し、酢酸エチル中で結晶化し、白色結晶の形態の化合物１４（２．３ｇ，７１％）を得た：融点167℃；
NMR-1H（DMSO-d6）δ 12.24（1H,s,NH-1），4.28（2H,q,J=7Hz,COOCH2CH3），2.31（3H,s,CH3-6），1.29（3H,t,J=7Hz,COOCH2CH3），1.06（3H,t,J=7Hz,CH2CH3），CH2CH3のシグナル及びDMSOのシグナルは互いに重複する．
分析．C11H14NO3Cl（C,H,N,Cl）。
実施例４０：
５−エチル−６−メチル−３−カルボエトキシ−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１５）の製造
実施例１０の化合物７ａを得るために記載された方法に関し、１０ｍｌのエタノール中の化合物１５（１．００ｇ，４．１ｍｍｏｌｅ）及び１ｍｌのトリエチルアミンの混合物を均質になるまで攪拌した。３，５−ジメチルチオフェノール（０．６１ｍｌ，４．５ｍｍｏｌｅ）を添加した。１２時間の還流後、白色沈殿を濾過により単離し、酢酸エチル中で結晶化した。白色結晶の形態の生成物１５（１．０５ｇ，８２％）を得た：融点202℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 12.17（1H,s,NH-1），7.22（1H,s,H-4'），6.92（1H,s,H-2'及び6'）4.09（2H,q,J=7Hz,COOCH2CH3），2.45（2H,q,J=7Hz,CH2CH3），2.27（3H,s,CH3-6），2.25（6H,s,CH3-3'及び5'），1.15（3H,t,j=7Hz,COOCH2CH3），0.85（3H,t,J=7Hz,CH2CH3）．分析．C19H23NO3S（C,H,N,S）。
実施例４１：
５−エチル−６−メチル−４−（３’，５’−ジメチルフェニル）チオ−ピリジン−２（１Ｈ）−オン（化合物１８）の製造
テトラヒドロフラン、Ｈ2Ｏ及びＨＣｌの３７％混合物（１８：３：４）の６ｍｌ中に化合物１５（１２０ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌｅ）を溶解した。混合物を７５℃で１０日間攪拌した。テトラヒドロフランを蒸発させ、５ｍｌの水を添加した。混合物を攪拌し、水を除去した。残渣をエタノール（２５ｍｌ）中で結晶化し、無色フレークの形態の生成物１６（５０ｍｇ，５９％）を得た：融点277-278℃；NMR-1H（DMSO-d6）δ 11.26（1H,s,NH-1），7.22（3H,s,H-2',4'及び6'），5.25（1H,s,H-3）,2.36（6H s,CH3-3'及び5'），2.21（3H,s,CH3-6），1.13（3H,t,J=7.5Hz,CH2CH3）．CH2CH3のシグナル及びDMSOのシグナルは互いに重複する。
分析．Ｃ16Ｈ19NOS．0.25H2O（C,H,N,S）。
実施例４２：
本発明化合物の生物学的活性。
１）装置及び方法
化合物の抗ウイルス活性の評価
化合物の作用を、ムーグ（Moog）ら（Antiviral Research（1994）, 24, 275-288）により記載されたように、ＨＩＶ−１ ＬＡＩで強く感染されたＣＥＭ−ＳＳ細胞（リンパ球系列の細胞子孫）におけるＨＩＶ−１の複製（表２参照）について評価した。ＣＥＭ−ＳＳおよびＩＴのコドン１８１に点突然変異を有しネビラピン（Nevirapine）（Ｎ１１９）耐性であるＨＩＶ−１が、それぞれピー．ナラ（P. NARA）及びデー．リッチマン（D. RICHMAN）から、エイズ・リサーチ・アンド・リファレンス・リージェント・プログラム、エイズ局、ＮＩＡＩＤ、ＮＩＨ（米国）（カタログ表示Ｎｏ．776及びＮｏ．1392）を介して提供された。
ウイルスの産生を、培養上澄み中に放出された、ウイルス粒子と結合した逆転写酵素（inverse transcriptase）の活性を定量することにより測定した。即ち、細胞を、１００ ＴＣＩＤ50を用いて３０分間感染させた；ウイルスの吸着後、結合していない粒子を２回洗浄することにより除去し、試験された化合物の異なる濃度の存在下、ウイルス産生を測定する前に、該細胞を５日間培養した。ウイルスの複製を５０％阻害する濃度（ＩＣ50）を、投与量効果の結果による中央値効果から計算されたグラフより得た（シュー（Chou）ら、Elsevier Science Publishers、ケンブリッジ  英国（1985）、19-28）。
並行した実験において、分子の細胞毒性を非感染細胞について測定し、該測定はこれら分子の存在下における５日間のインキュベーションの後、比色滴定（ＭＴＴにおける試験）を用いて、生きた細胞のミトコンドリアの脱水素酵素のホルマザン中の３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイドの減少能に基づいて行った（MosmannらJ. Immunol. Methods（9183）, 65, 55-63）。５０％の細胞毒性濃度（ＣＣ50）は、ＯＤ540が半分に減少した濃度であって、上記のプログラムを用いて計算される。
組換えＨＩＶ−１のＩＴ酵素の発現及び精製
サラフランク−アンドレオーラ（Sallafranque-Andreola）らに記載されたように（1989 Eur. J. Biochem. 184, 364-374）、組換えＨＩＶ−１のＩＴ酵素を精製するために、ｐＡＢ２４／ＩＴ−４ベクターにより形質転換された酵母細胞を用いた。
E. coliにおけるＨＩＶ−２のＩＴ発現のためのシステム
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が、アール．グッディ博士（Dr. R. Goody）により提供された。ＨＩＶ−２のＩＴを、ＨＩＶ−１のＩＴと同じ方法により精製した。
逆転写酵素の測定
インキュベーションを、３７℃にて１０分間、種々のマトリックスプライマーの存在下に行った。
ａ） ポリＣ−オリゴｄＧ：反応混合物は、最終量が０．０５ｍｌであって、ｐＨ８．０のトリス−ＨＣｌ ５０ｍＭ、ＭｇＣｌ2 ５ｍＭ、ジチオスレイトール ４ｍＭ、ポリＣ−オリゴｄＧ（５：１）０．４８ Ａ260／ｍｌ、［3Ｈ］ｄＧＴＰ １．０ μＣｉ（２８ Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ）、ｄＧＴＰ ２μＭ、ＫＣｌ ８０ｍＭ、ウシ血清アルブミン１μｇ及びＩＴ ２０−５０ｎＭを含有していた。
ｂ）ポリＡ−オリゴｄＴ：ポリＡ−オリゴｄＴ（５：１）０．４８ Ａ260／ｍｌ、［3Ｈ］ｄＴＴＰ ０．５ μＣｉ（４６ Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ）、ｄＴＴＰ２０μＭを用いた以外はａ）と同様の条件を用いた。
冷たい１０％のトリクロロ酢酸１ｍｌ及びピロリン酸ナトリウム０．１Ｍを加えて反応を止めた。沈殿物を、ニトロセルロース膜を通して濾過し、２％トリクロロ酢酸を用いて洗浄し、乾燥させ、ＰＰＯ／ＰＯＰＯＰ／トルエン シンチレーション混合物中でカウントした。
逆転写酵素
Ｔ７バクテリオファージのプロモーターの制御下、ｐｓＰ６４中においてＨＩＶ−１（ｐｍａｌ）のヌクレオチドフラグメント１−４００５を含有するｐｍＣＧ６プラスミドが、ジェイ．エル．ダーリックス博士（Dr. J. L. Darlix）により提供された。E.coli ＨＢ  １０１（１０３５）ｒｅｃＡのコロニーを、プラスミドを増幅するために用いた。Ｈｉｎｃ IIを用いたこのクローンの消化及びＲＮＡ Ｔ７ポリメラーゼを用いることによるインビトロでの転写の後、ｐｍａｌ配列の＋５０位からＲＮＡを得た。転写はインビトロで行い、逆転写はビー．ボーディア（B. Bordier）らに記載された方法（1992 Nucleic Acids Res. 20, 5999-6006）において行った。
阻害実験
全ての化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解させた。試験試料を、同じ最終濃度のＤＭＳＯ中にて調製した。ＩＣ50は、組換えＨＩＶ−１のＩＴの活性を５０％まで阻害するのに必要な濃度である。
２）結果
ＨＩＶ−１複製の阻害
３２の本発明化合物を、その抗ＨＩＶ−１生物学的活性について研究した。いくつかの分子は、重要な抗ウイルス特性を示した（表２参照）。２０を超える選択性指数を示す最も好ましい阻害剤の中でも、いくつかは、ネビラピンへの耐性コロニーについて試験した（表３参照）。化合物７ｃは、この耐性コロニーについてＩＣ50が２６０ｎＭの良好な抗ＨＩＶ−１活性を維持することが示された。その後この化合物を、他のコロニー及び他の細胞子孫を用いて試験した（表４）。
逆転写酵素の阻害
細胞培養物においてそれ自体はＨＩＶ−１に対する活性を示さなかった化合物を、組換えＨＩＶ−１のＩＴについて試験した。各々の化合物について、ＩＴ活性の５０％を阻害する濃度（ＩＣ50）を、表５に示す。化合物７ｃ及び８ｃは、それぞれ３０ｎＭ及び１５ｎＭのＩＣ50値であり最も好ましい阻害剤であった。ＨＥＰＴの誘導体である、１−ベンジルオキシメチル−６−（フェニルチオ）チミン又はＢＰＴ（ババ（Baba）ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 2356-2360）を同じ条件下で試験し、非ヌクレオシド阻害剤の参照化合物として使用され、４００ｎＭのＩＣ50値を与えた。
阻害の本質を解明するために補足的な研究を行った。これら研究は、主に化合物７ｃ及び８ｃを用いて行った。
ＩＴ阻害を、種々のマトリックス−プライマー対を用いて測定した。非ヌクレオシドＩＴ阻害剤は、ＩＴ活性を測定するのに用いるマトリックス−プライマーによって異なる阻害レベルを示すことが公知である（ド クラーク（De Clercq）ら（1993）Medicinal Research Reviews, 13, 229-258）。
２つの異なるマトリックス−プライマーの存在下における化合物７ｃの用量反応曲線を、図９に示す。ポリＡ−オリゴｄＴと比較して、ポリＣ−オリゴｄＧの存在下において、よりよい阻害が得られた。化合物８ｃも同じ結果を示した。ナチュラルマトリックスとしてＨＩＶ−１由来のＲＮＡを用いた場合にも、強い阻害を得た（図１０）。
今までに同定された全ての非ヌクレオシド阻害剤は、ＨＩＶ−１に対して特異的であり、ＨＩＶ−２のＩＴを阻害しない。化合物７ｃ及び８ｃをこれら２つのＩＴを用いて試験した。図９に示されるように、ＨＩＶ−１のＩＴが十分に阻害されている濃度において、ＨＩＶ−２のＩＴの活性は影響を受けていない。ＨＩＶ−２のＩＴと比較してＨＩＶ−１のＩＴに対するこの差別的な挙動は、非ヌクレオシド阻害剤に共通する性質である。
酵素の速度論的解析は、化合物７ｃ（又は８ｃ）によるＨＩＶ−１のＩＴの阻害が、ポリＣ−オリゴｄＧマトリックス−プライマー対の存在下にｄＧＴＰ基質に関して非競合的であることを示した（図１２）。ポリＡ−オリゴｄＴをマトリックス−プライマー対として用いた場合、競合型の阻害が得られる（図１３）。
実施例４３：
ＨＩＶ−１の逆転写酵素の阻害剤に対する単離ビリオンの透過性の研究
１．装置及び方法
１．１  ウイルス上澄みの調製
ＨＩＶ−ＩＬＡＩ（１０8／ｍｌ）で慢性的に感染させたＨ９細胞を、ＭＴ４細胞（１０8／ｍｌ）と共に、４８時間、ウシ胎児血清（ＣＦＳ）１０％を補充したＲＭＰＩ培地中で共生培養した。次いで、遠心分離により細胞を除去し、その後上澄み液を濾過（０．４５μｍ）して残留細胞及び細胞の残骸を除去した。
１．２  ウイルス粒子の分離
種々の阻害剤を用いてインキュベートした後、ウイルス性上澄み（２００μｌ）を、多孔度０．０２μｍのアナポール（ANAPORE）膜を備えたヴェクタスピン（VectaSp in）チューブ（ワットマン（WATMAN））の濾過部に沈積した。それらを１０分間遠心分離に供し、その加速度は、濾過膜において６０００ｇに達した。その結果得られたウイルス性残渣（１０−１５μｌ）を、同様の条件下にてＲＰＭＩ ５００μｌを用いて３回洗浄し、その後ＣＦＳを１０％含有するＲＰＭＩによりその当初の量に戻した。
１．３  細胞培養物：
ＨＴ４ＬａｃＺ−１細胞を、ゲンタマイシン（５０ｍｇ／ｌ）の存在下、ウシ胎児血清を１０％補充したＤＭＥＭ培地（グルコース４．５ｇ／ｌ）に保持した。これら細胞はＨｅｌａ細胞に由来し、該細胞は、方ではＨＩＶの感染を受けやすいようにするためにヒトＣＤ４をコードする遺伝子をクローン化し（Chesebro and Wehrly, 1988, J. Virol., 62, 3779-3788）、もう一方ではウイルス感染のためのマーカーとして提供されているＨＩＶ−１のＬＴＲに依存下に置かれているβ−ガラクトシダーゼの遺伝子をクローン化している（Rocancourtら（1990）J. Virol. 1990 64-6, 2660-2688）。細胞のゲノムに組み込んだ後にウイルスがそのような細胞に感染するとき、調節タンパク質ＴＡＴの産生が、ＨＩＶのＬＴＲを活性化させる。結果は、細胞内メディウム、特に核小体におけるその産生を導くβ−ガラクトシダーゼの遺伝子の活性化である。感染のマーカーとして働くのは、このタンパク質である。
１．４  感染力の測定：
０日目の夜、ＨＴ４ＬａｃＺ−１細胞を培地１ｍｌにつき７５０００細胞の割合に希釈した。次いで、このサスペンジョン１００μｌを９６ウェル平底プレート上に分配し、３７℃にて一晩かけて培養した（ＣＯ2５％）。
１日目の朝、上澄み液を吸引により除去した。試験されるウイルスの上澄み希釈溶液２００μｌを各々のウェルに補足した。各々の希釈は、ＣＦＳ１０％を補充したＤＭＥＭ培地（グルコース４．５ｇ/ｌ）においてなされた。プレートを、ＣＯ2 ５％の存在下、３７℃の環境に置いた。
４８時間の培養後、上澄み液を吸引し、発色バッファー（developing buffer）（トリス−ＨＣｌ ５０ｍＭ ｐＨ＝８．５、ＯＮＰＧ ５ｍｇ/ｍｌ β−メルカプトエタノール ７μｌ/ｍｌ トリトン Ｘ１００ ０．０５％）２００μｌを補足する前に、各々のウェルをＰＢＳ中で３回洗浄した。３７℃における４時間のインキュベーションの後、各々のウェルの光学密度を測定した。
２．結果
２．１  ウイルスの限外濾過の確認
上記の手順を、Ｈ９−ＭＴ４共生培養培地由来のウイルス性上澄みに適用した。各々の遠心分離の後、ウイルスの残渣を、ウシ胎児血清を１０％含有するＲＭＰＩ １６/４０培地を用いて当初の量にし、次いでアリコートを分析の目的のために利用した（連続する遠心分離の当初の量を改変し、洗液の量を各段階において再調整した）。かくして３つのウイルス濃縮液及び３つの濾液を得た。これらを、一方では（存在するウイルスの量を表す）逆転写酵素活性を測定することにより、もう一方ではそれらの感染力（各々の粒子の完全さに直接依存する）を測定することにより分析した。
２．１．１  逆転写酵素（ＩＴ）活性の測定
それらの当初の量に再調整した各々のウイルス濾液の各濃縮液を、そのＩＴ活性について分析した。これを行うために、上澄み５０μｌを、ポリｒＡ及びオリゴｄＴからなる二重のマトリックス/プライマーの存在下に、ｄＴＴＰ−Ｈ3を存在させて試験した。結果を図１４に記載する。
３つの濃縮液のＩＴ活性の測定結果は、３回の濾過の後、活性の５％オーダーの減少を示す。３つの濾液における観察値は、バックグラウンドノイズと合体し、アノポール膜の非常に優れた均質性を示す
２．１．２  感染力の測定
ウイルス粒子における段階の考えられる毒性を評価するために、感染力の測定を行った。これを行うために、ウイルス濃縮液の種々の希釈溶液を、ウシ胎児血清１０％を補充したＲＭＰＩ培地２００μｌ中のＭＴ２細胞に接触させた。３時間のインキュベーションの後、細胞を２回洗浄し、次いで９６時間の培養に戻した。この後、上澄みのサンプルを取り、遠心分離により細胞を除去し、次いで上澄み液をその逆転写酵素活性に関して試験した。図１５に示された結果は、感染力が、限外濾過工程により有意に影響を受けていないことを示す。
従って、アノポール０．０２μ膜上の限外濾過は、ウイルス粒子の急速な、効果的な、及び傷つかない分離ができる。
２．２  単離ビリオンにおけるＨＩＶ−１のＩＴの阻害剤の活性
ＨＩＶ−１のＩＴの各々の阻害剤の濃度を、ＤＭＳＯ中で５０ｍＭに調節した。後の希釈を、ＲＰＭＩ １６４０において行った。これら各々の阻害剤の好適な希釈溶液２μｌを、新鮮な凍結されていないウイルスサスペンジョン１９８μｌに添加した。外界温度における３時間のインキュベーションの後、これらサスペンジョンを０．０２μヴェクラスピン（Vecraspin）チューブに濾過し、次いでＲＰＭＩ １６４０ ５００μｌを用いて３回洗浄した。ウイルス性残渣を、次いで培養培地（ＲＰＭＩ−１０％ＣＦＳ）を用いて２００μＬに調整し、その後ＨＴ４ＬａｃＺ細胞におけるそれらの感染力について試験した。
表６に示された結果は、化合物７ｃ以外は、どの阻害剤も単離ビリオンにおいてそれ自体活性でないことを明らかに示す。これら効果が起こり得る分解によるものでないことを確かめるために、これら阻害剤の各々を、ウイルスの存在下においてＨＴ４ＬａｃＺ細胞について同時に評価した。全てが文献に記載された活性と同等の活性を示した。１０及び１μＭにおけるネビラピンについて得られた結果は、実験の現在の状況において、おそらく実験変動と結びつくであろう。さらに、感染力における有意な阻害が、ＴＩＢＯ Ｒ８２９１３を用いて濃度１００μＭにおいて観測されていることを付け加えなければならない。いずれにせよ、化合物７ｃのみが、１００ｎＭの低濃度において単離ビリオンに対しそれ自体が真に活性であることを示す。
２．３  単離ビリオンに対するＩＴの阻害
感染力の阻害が、確かに化合物７ｃの抗逆転写酵素活性によるものであったことを立証するために、我々は、単離ビリオンをこの化合物を用いて３時間インキュベーションした後、ポリｒＡ/オリゴｄＴマトリックスプライマーに対するＩＴ活性を測定した。
化合物７ｃは、それ自身がＩＴ上に固定し、その活性を妨害するために、外皮及びウイルスのカプシドを貫通しているようである。
一方、化合物７ｃの貫入の速度論の予備的実験は、４５分のインキュベーションは９８％を超える感染力の阻害を引き起こすのに充分であることを示している
３．  結論
これら結果は、ヒトの臨床的な治療において使用されている主要な阻害剤は、全体として単離ビリオンにおいて不活性であることを示す（ＡＺＴ、ｄ４Ｔ、３ＴＣ、ｄｄｌ．ＴＩＢＯ  Ｒ８２９１３、ＨＥＰＴ  ＮＥＶＩＲＡＰＩＮＥ）。化学式７ｃの化合物は、ウイルス粒子に貫入した後に、それ自体が逆転写酵素を阻害し、ウイルス活性力を抑制することができることを示した。
この化合物は、従って、単離ビリオン中に貫入できる能力に関して、完全に独創的な化合物のようにふるまう。
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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