(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0003907218.tif 000024
で示される化合物を水とアセトニトリルの混合溶媒中に分散してなる水性液剤の形態のマツノザイセンチユウ防除剤。
【請求項２】
式（Ｉ）の化合物を０.１〜２０重量％含有する請求項１に記載の防除剤。
【請求項３】
水とアセトニトリルの混合割合が水／アセトニトリルの重量比で１／１〜１／１．５の範囲内にある請求項１に記載の防除剤。
【請求項４】
有効成分が、ストレプトマイセス・シアネオグリセウス・ノンシアノゲヌス（Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus）ＬＬ−２８２４９（ＮＲＲＬ １５７７３）の好気的発酵により得られる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を含有する発酵培養液である請求項１に記載の防除剤。
【請求項５】
請求項１に記載の防除剤の有効量を松の樹幹に注入することを特徴とするマツノザイセンチユウの防除方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は新規なマツノザイセンチユウ防除剤に関し、さらに詳しくは、低薬量で優れた防除効果を発揮するマツノザイセンチユウ防除剤及びマツノザイセンチユウの防除方法に関する。
【０００２】
松枯れ現象は、マツノマダラカミキリを媒介としてマツノザイセンチユウ［pine wood nematode；Bursaphelenchus xylophilus（Steiner et Buhrer）Nickle］が健全な松に侵入し、松に生理異常を引きおこさせ枯死させることによつて起る、いわゆる「松の材線虫病」といわれる病害である。
【０００３】
この病害の防除対策として従来運び屋であるマツノマダラカミキリを駆除することに重点がおかれたが、媒介昆虫の駆除には殺虫剤を広範囲に散布しなければならず、環境衛生及び安全性等の面から大きな制約がある。
【０００４】
一方、ゴルフ場、名勝旧跡、公園、神社仏閣等の環境保存上重要な松に対しては、樹幹注入などの単木処理により松の樹体内に侵入したマツノザイセンチユウそのものを駆除するという方法が提案され、既にそのための防除薬剤も市販されている。例えば、フアイザー製薬（株）からは「グリーンガード・エイト」なる商標名で酒石酸モランテル液剤が市販されており、また、保土谷化学工業（株）からは「センチユリー注入剤」なる商標名で塩酸レバミゾール液剤が市販されている。
【０００５】
これら市販のマツノザイセンチユウ防除薬剤（液剤）は、松の樹体内に侵入したマツノザイセンチユウの防除にかなりの効果を発揮するが、その防除効果は充分ではなく、樹幹に大量かつ長時間にわたつて注入しなければならないという欠点がある。
【０００６】
そこで、本発明者らは、比較的少量の注入で高い効果を発揮する有効成分化合物を求めて鋭意検討を重ねた結果、ストレプトマイセス属の微生物の発酵によつて生産される或る種のマクロライド化合物及びその誘導体がマツノザイセンチユウに対して極めて高い活性を示すことを見い出し本発明を完成するに至つた。
【０００７】
かくして、本発明は下記式
【０００８】
【化２】
0003907218.tif 000002
【０００９】
式中、Ｒ1はヒドロキシル基であり且つＲ2は水素原子であるか、或いはＲ1とＲ2は一緒になつて＝Ｎ−ＯＣＨ3を表わす、
で示される化合物を有効成分として含有することを特徴とするマツノザイセンチユウ防除剤を提供するものである。
【００１０】
Ｒ1がヒドロキシル基であり且つＲ2が水素原子である上記式（Ｉ）の化合物は、ストレプトマイセス・シアネオグリセウス・ノンシアノゲヌス（Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus）ＬＬ−Ｆ２８２４９（ＮＲＲＬ １５７７３）を好気的に発酵させることによつて生産される下記の理化学的性質：
（１）  分子量：６１２（ＦＡＢ−ＭＳ）
（２）  分子式：Ｃ36Ｈ52Ｏ8
（３）  比旋光度：［α］D26＝＋１３３±３°（ｃ０.３、アセトン）
（４）  紫外線吸収スペクトル：ＵＶmax CH3OH＝２４４ｎｍ(ε２８,０００)
（５）  赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ ｄｉｓｃ）：３４３９、２９６０、２９２５、１７１４、１４５４、１３７４、１３３８、１１７１、１１２０、９９６、９６７ｃｍ-1
（６）  Ｃ13核磁気共鳴スペクトル（ＣＤＣｌ3）：
0003907218.tif 000003
(1)  ＴＭＳから低磁場；ＣＤＣｌ3溶液
(2)  ｑ＝４級炭素
(3)、(4)  ２つの未解像シグナル
（７）  電子衝撃質量スペクトル：
m／Z    元素組成 
612.3705        C36H52O8
594.3543        C36H50O7
576.3472        C36H48O6
484.3211        C30H44O5
482.2648        C29H38O6
466.3097        C30H42O4
448.2987        C30H40O3
442.2375        C26H34O6
425.2327        C26H33O5
354.2181        C23H30O3
314.1877        C20H26O3
278.1144        C15H18O5
265.1786        C16H25O3
248.1405        C15H20O3
247.1705        C16H23O2
237.1838        C15H25O2
219.1740        C15H23O
151.0753        C9H11O2
を有する物質であり、その製造方法の詳細は特開昭６１−１０５８９号公報に記載されている（同公報ではＲ1がヒドロキシル基であり且つＲ2が水素原子である上記式（Ｉ）の化合物は“ＬＬ−Ｆ２８２４９α”化合物と称されており、本明細書においてもそのように称することとする）ので、ここではその引用を以つて詳細な記述に代える。
【００１１】
ストレプトマイセス・シアネオグリセウス・ノンシアノゲヌスの好気的発酵によれば、上記特開昭６１−１０５８９号公報に記載されているとおり、ＬＬ−Ｆ２８２４９α化合物のみならず、外部及び内部寄生虫撲滅性抗生物質活性を有する以下に示すＬＬ−Ｆ２８２４９β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν及びωと指称される化合物のいずれか１種又はそれ以上も同時に生成する。
【００１２】
【化３】
0003907218.tif 000004
【００１３】
【表１】
0003907218.tif 000005
【００１４】
【化４】
0003907218.tif 000006
【００１５】
従つて、本発明の防除剤における有効成分であるＬＬ−Ｆ２８２４９α化合物は、発酵培養液から抽出、単離された実質的に純粋な形態で使用することができ、或いはまた、上記のＬＬ−Ｆ２８２４９β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν及びω化合物の１種もしくはそれ以上との混合物の形態、又はこれらを含有する発酵培養液もしくはマツシユ（mash）の形態で使用することもできる。通常、ＬＬ−Ｆ２８２４９α化合物と、ＬＬ−Ｆ２８２４９β、γ、δ、ε、ζ、η、θ、ι、κ、λ、μ、ν及びω化合物の１種もしくはそれ以上とを含むマツシユの形態のものが好適に使用される。
【００１６】
他方、Ｒ1とＲ2が一緒になつて＝Ｎ−ＯＣＨ3を表わす前記式（Ｉ）の化合物は、「モキシデクチン（moxidectin）」なる一般名で呼ばれているそれ自体既知の化合物であり（特開昭６３−５４３７５号公報）、例えば、前記のＬＬ−Ｆ２８２４９α化合物を酸化した後、メトキシアミン又はその塩と反応させることにより製造することができる。
【００１７】
式（Ｉ）の化合物をマツノザイセンチユウの防除に使用する場合、該化合物は、松の樹幹に注入しやすく且つ樹体内移行速度の大きい剤型に製剤化することができる。例えば、式（Ｉ）の化合物は、適当な溶媒と共に液体とすることができ、特に水をベースとする水性液剤とすることが好ましい。該水性液剤のための溶媒としては、水単独又は好ましくは、水と水混和性有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトニトリル、ブトキシエタノール等との混合溶媒が挙げられる。特に水混和性有機溶媒としてアセトニトリルを使用すると、液剤の樹体内への浸透移行速度が著るしく向上するので好適である。
【００１８】
該混合溶媒中の水混和性有機溶媒の割合は、水／水混和性有機溶媒の重量比で、一般に１／０.１〜１／２、特に１／１〜１／１.５の範囲内が適当である。
【００１９】
また、上記水性液剤における式（Ｉ）の有効成分化合物の濃度は、厳密に制限されるものではなく、該化合物の種類、溶媒の種類等に応じて変えることができるが、通常、０.１〜２０重量％、好ましくは１.８〜５.４重量％の範囲内とすることができる。
【００２０】
また、式（Ｉ）の化合物を含む液剤には、さらに必要に応じて、適当な補助剤、例えば、界面活性剤［例：ポリオキシエチレンアルキルフエニルエーテル（エチレンオキサイド付加モル数８〜２０）、ポリオキシエチレンアリルフエニルエーテル（エチレンオキシド付加モル数８〜２０）、ポリオキシエチレンスチリルフエニルエーテル及びその縮合物（エチレンオキシド付加モル数８〜２０）、ポリオキシエチレングリコール型界面活性剤、アルキルベンゼンスルホネート型界面活性剤、ジオクチルサクシネート］等を含ませることもできる。
【００２１】
本発明の防除剤の松への適用時期及び適用方法は、現在市販されているものと同様とすることができ、例えば、適用時期は媒介昆虫であるマツノマダラカミキリの成虫発生約３ケ月前までが好ましく、また、適用方法としては、例えば、樹幹の地際から高さ約０.５〜約１ｍまでの間に、ドリル等でやや斜め下方に向けて深さ約５〜約９ｃｍ、直径６〜８ｍｍの注入孔をあけ、液剤を注入器を用いて注入する方法が挙げられる。１樹あたりの注入孔数は樹幹の太さや高さ等に応じて変えることができるが、通常胸高直径１０〜２０ｃｍの松で１〜２孔／樹程度とすることができる。
【００２２】
また、本発明の防除剤の使用量は、対象とする松の樹幹部の胸高直径等に応じて変えることができ、例えば、式（Ｉ）の化合物を３.６重量％含有する水性液剤の場合には、下記に示す量を標準的な使用量とすることができる。
【００２３】
0003907218.tif 000007
【００２４】
注入は通常大気圧下に行なわれるが、場合によつては加圧注入してもよい。加圧注入の場合の圧力は２ｋｇ／ｃｍ2以下とすることが望ましい。
【００２５】
以上述べた本発明のマツノザイセンチユウ防除剤は、マツノザイセンチユウに対して、現在市販されている防除剤に比べてはるかに高い活性を有しており、従つて、低薬量で高い殺マツノザイセンチユウ効果を期待することができる。
【００２６】
また、本発明の水性液剤は樹体内移行速度が大きく、松に対する薬害もなく、マツノザイセンチユウ防除剤として実用的に極めて有用である。
【００２７】
以下、製剤例及び試験例によつて本発明をさらに具体的に説明する。
【００２８】
0003907218.tif 000008
以上の各成分を充分に混合し、有効成分濃度３.６重量％の水性液剤を得た。
【００２９】
0003907218.tif 000009
以上の各成分を充分に混合し有効濃度１.８重量％の水性液剤を得た。
【００３０】
0003907218.tif 000010
以上の各成分を充分に混合し、有効濃度３.６重量％の水性液剤を得た。
【００３１】
0003907218.tif 000011
以上の各成分を充分に混合し、有効濃度３.６重量％の水性液剤を得た。
【００３２】
0003907218.tif 000012
以上の各成分を充分に混合し、有効濃度３.６重量％の水性液剤を得た。
【００３３】
0003907218.tif 000013
以上の各成分を充分に混合し、有効濃度３.６重量％の水性液剤を得た。
【００３４】
0003907218.tif 000014
以上の各成分を充分に混合し、有効濃度３.６重量％の水性液剤を得た。
【００３５】
試験例１：マツノザイセンチユウに対する増殖抑制効果の in vitro テスト
（１）  試験方法
供試動物：マツノザイセンチユウＳ−１０系統
区制    ：各区２反復
処理方法：ＰＳＡ培地に灰色カビの菌系（マツノザイセンチユウの栄養分）を繁殖させたシヤーレ（直径９０ｍｍ）に所定の濃度の薬液を注入し、１分間放置した後、薬液を捨てた。薬剤処理を行なつたシヤーレにマツノザイセンチユウの懸濁液０.２ｃｃを滴下し、２５℃の温度条件下においた。懸濁液０.６ｃｃ中のセンチユウ数を顕微鏡下で計測し０.２ｃｃ中の平均センチユウ数を求め、これを滴下センチユウ数（初期個体数）とした。接種７日後にシヤーレに水２０ｃｃを注入し１５秒間撹拌した後、その水を回収した。回収した水のうち各０.２ｃｃをとり３回顕微鏡下で観察し、生存センチユウ数を測定しシヤーレ内の生存個体数（７日後個体数）を推定し、下記式により増殖率を算出した。
【００３６】
【数１】
0003907218.tif 000015
【００３７】
使用薬剤：ＬＬ−Ｆ２８２４９αの４重量％メタノール溶液
比較のための薬剤として
保土谷化学工業（株）の「センチユリー注入剤」（塩酸レバミゾール４％含有）
及び
フアイザー製薬（株）の「グリンガード・エイト」（酒石酸モランテル８％含有）
を使用。
【００３８】
なお、使用薬剤には、薬液の拡散をよくするため、界面活性剤（ベタリンＡ、５０００倍希釈）を添加した。
【００３９】
（２）  試験結果
【００４０】
【表２】
0003907218.tif 000016
【００４１】
試験例２：薬害試験
（１）  試験方法
供試薬剤：ＬＬ−Ｆ２８２４９α
注入日時：１月３０日
供試植物：クロマツ３年生
区制    ：１区１樹３反復
処理方法：各試験木に１ケ所ドリルで直径２.５ｍｍの孔を開け、薬液を加圧注入し、２５℃の人工気象室にいれた。
【００４２】
試験に用いた薬剤と注入量は第２表に示す。
【００４３】
0003907218.tif 000017
試験例３：フイールドテスト（その１）
１．試験方法
（１）  試験実施場所
試験はアカマツ１８〜３０年生林で行つた。試験地周辺は５、６年前からマツノザイセンチユウ被害が発生し、現在では１０％程度の枯損率である。
【００４４】
（２）  供試薬剤
供試薬剤としてＬＬ−Ｆ２８２４９αを用い、前記製剤例１で調製した水性液剤（３.６％ＡＳ）
（３）  処理方法および処理月日
薬剤処理方法は、地上高５０〜８０ｃｍ部にストレートドリルで直径６ｍｍ、深さ５ｃｍ程度の注入孔をあけ、ここに容器を挿入して自然圧注入を行つた。施用量はｍ3当り１２５ｍｌと２５０ｍｌの２処理で、各供試木の処理量は第４表に示すとおりである。
【００４５】
薬剤処理は２月２２日に行つた。
【００４６】
なお、いずれの薬剤とも注入孔周辺の腐朽を防止するため、トツプジンＭペースト剤を注入孔に注入した。
【００４７】
（４）  供試木
供試木は胸高直径１０〜１４ｃｍ、樹高１０〜１２ｍのアカマツ小径木である。各処理の供試本数はいずれも１０本で、これ以外に無処理区１０本と薬害区５本を使用した。
【００４８】
（５）  線虫接種
線虫接種は７月２日に行つた。接種方法は供試木の地上高４ｍ部の樹幹部にストレートドリルで直径９ｍｍ、深さ６ｃｍ程度の地上孔を１ケ所あけ、ここに１ｃｃ当り１.５万頭に調整したマツノザイセンチユウの懸濁液を２ｃｃ（３万頭）注入した。なお、供試した線虫は森林総研で培養したものを使用した。
【００４９】
（６）  調査方法
▲１▼  薬剤効果
線虫接種後、樹脂量調査（８月、１１月）を行い、供試木の異常状況を調べるとともに、１１月中旬に枯損調査を行い、これらの結果から薬剤の処理効果を判定した。なお、樹脂流出量は５段階にわけ「＋＋＋、＋＋」は正常木、「＋、−、０」は異常木とした。ただ、この場合外見上健全でも樹脂流出量が少ないものは異常木とし、逆に一部変色部分が見られても樹脂流出量が正常なものは正常木として扱つた。
【００５０】
▲２▼  薬害調査
薬害区は供試木１本につきｍ3当り５００ｍｌを注入し、その後の枯損状態にいて調査した。
【００５１】
▲３▼  注入孔周辺の形成層障害
薬害区の処理木を枯損調査時に注入孔部を剥皮し、形成層部の変色状況を調査した。
【００５２】
２．結果と考察
（１）  薬剤効果
試験結果は第４表、第５表に示すとおりである。
【００５３】
まず、無処理区の枯損率は線虫接種後３２日目の８月５日が９０％、さらに１００日経過後の１１月１５日には１００％となつた。
【００５４】
これに対し式（Ｉ）の化合物による処理は、１２５ｍｌ及び２５０ｍｌ処理ともいずれも樹脂量が＋＋＋で、枯損率が０％、それに全く線虫が検出されなかつたことから、この薬剤処理の著しい効果が認められた。また、１２５ｍｌと２５０ｍｌ処理間に効果の違いが見られなかつたので、実用化に当つては１２５ｍｌ／ｍ3処理で十分と思われる。
【００５５】
それにこの薬剤は施用量が少ないので運搬、注入処理等の現場での取り扱いが容易であることと、注入時間が極めて速い（この試験の場合はすべて１時間以内に完了）ので、薬剤効果も含めれば実用性の高い防除技術と考えられる。
【００５６】
（２）  薬害調査
調査結果は第６表に示すとおりである。供試木５本とも、葉の変色、異常落葉等の症状は見られなかつた。
【００５７】
（３）  注入孔周辺の形成層障害
いずれの供試木とも注入孔の周りがわずかに変色していたが、明らかに形成層障害と思われるような変色部（１ｃｍ以上）は見られなかつた。
【００５８】
３．摘要
（１）  マツノザイセンチユウに対するＬＬ−Ｆ２８２４９αの著しい効果が認められた。
【００５９】
（２）  本薬剤は施用量が少なく、注入時間が極めて速いので実用性の高い防除技術と考えられる。
【００６０】
（３）  薬量はｍ3当り１２５ｍｌでよいものと考えられる。
【００６１】
（４）  本薬剤の薬害は認められなかつた。
【００６２】
（５）  注入孔周辺における大きな形成層障害は認められなかつた。
【００６３】
【表３】
0003907218.tif 000018
【００６４】
【表４】
0003907218.tif 000019
【００６５】
【表５】
0003907218.tif 000020
【００６６】
試験例４：フイールドテスト（その２）
１．試験地の概況
（１）  立地条件
沿岸部に植栽された防潮林で、標高５ｍ前後、一部に５％未満の傾斜があることを除けばほぼ平坦地、土質は表層は砂、その下は砂礫土で深部は礫がほとんどである。
【００６７】
（２）  林況
クロマツ２５〜２７年生、立木本数はｈａ当たり３,０００本程度、樹高８〜１５ｍ、胸高直径６〜１８ｃｍ。
【００６８】
２．処理条件
（１）  処理日時
２月２７日
（２）  処理方法・薬剤名・処理量等
薬剤処理は樹脂流出量を調査し、正常と認められた供試木に樹幹注入法により、地上約５０ｃｍの樹幹にφ９ｍｍ、深さ３ｃｍの穴をあけアンプルにより自然圧により注入した。供試薬剤は試験例３で用いたと同じもの、処理区分および供試本数は次のとおりである。
【００６９】
５００ｍｌ／ｍ3区  （薬害区）    ５本
２５０    〃   区              １０本
１２５    〃   区              １０本
対      照     区              １０本
３．線虫接種
６月３０日、供試木の樹脂流出量を調査し、正常と認められたものについて線虫接種を行つた。線虫は森林総合研究所から送付されたものを培養・増殖し、１ｍｌ当たり３０,０００頭に調整した懸濁液を１供試木あたり１ｍｌ接種した。接種部位は地上高４〜５ｍの樹幹部とし、可能なものはその付近の枝を切断してその切り口にφ９ｍｍ、深さ３ｃｍの穴をあけ接種した。
【００７０】
４．調査方法および調査結果
効果調査は小田式判定法により、樹脂流出量をもつて行つた。調査日は線虫接種後３ケ月の９月２８日と、同５ケ月の１１月１９日の２回とし、最終調査時点で枯死木あるいは異常木については、樹幹胸高部からドリルで材を採取し、線虫の再検出を行つた。
【００７１】
調査結果は第７表のとおりであつた。
【００７２】
５．結果の考察
対照区の枯損率は９０％、異常木率は１００％であり、今回使用した線虫の病原性は高かつたものと考えられる。
【００７３】
これに対して薬剤処理区は全てが健全であり、当薬剤のマツノザイセンチユウに対する防除効果は非常に高いものと考えられた。なお、薬害区も全て健全であり、外観上の異常も見られなかつた。
【００７４】
【表６】
0003907218.tif 000021
【００７５】
【表７】
0003907218.tif 000022
【００７６】
試験例５：マツノザイセンチユウに対する増殖抑制効果の in vitro テスト
（１）  試験方法
供試動物：マツノザイセンチユウＳ−１０系統
区制    ：各区、２反復
処理方法：前記試験例１と同じ
使用薬剤：モキシデクチンの１重量％メタノール溶液
比較のための薬剤として
保土谷化学工業（株）の「センチユリー注入剤（塩酸レバミゾール４％含有）
及び
フアイザー製薬（株）の「グリンガード・エイト（酒石酸モランテル８％含有）
を使用。
【００７７】
なお、使用薬剤には、薬剤の拡散をよくするため、界面活性剤（ベタリンＡ、５０００倍希釈）を添加した。
【００７８】
（２）  試験結果
【００７９】
【表８】
0003907218.tif 000023