(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
含有イオン濃度が単独で３ppm 以上である燐酸イオン及びナトリウムイオンから選ばれたイオンを含む多糖から誘導した多糖誘導体からなる分離剤を、アミン類を含む溶媒で洗浄した後、分離剤中に存在するアミン類を洗浄除去することを特徴とする分離剤の製造方法。
【請求項２】
前記分離剤の洗浄が、アミン類の濃度が０．０１〜５vol％であるアミン類を含む溶媒を用いる方法である請求項１記載の分離剤の製造方法。
【請求項３】
前記分離剤の洗浄が、前記分離剤を充填したカラムに対して、前記カラム体積の10〜100倍量の前記アミンを含む溶媒を通液して洗浄する方法である請求項１記載の分離剤の製造方法。
【請求項４】
前記分離剤の洗浄が、アミン類の濃度が０．０１〜５vol％であるアミン類を含む溶媒を用い、前記分離剤を充填したカラムに対して、前記カラム体積の10〜100倍量の前記アミンを含む溶媒を通液して洗浄する方法である請求項１記載の分離剤の製造方法。
【請求項５】
アミン類がアンモニア、ジメチルアミン、ジエチルアミン及びトリエチルアミンからなる群から選ばれたものである請求項１〜４のいずれか一項に記載の分離剤の製造方法。
【請求項６】
分離剤が光学異性体分離に用いられるものである請求項１〜５のいずれか一項に記載の分離剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は分離剤の製造方法に関し、特に燐酸イオン等のイオンを多く含む多糖から誘導した多糖誘導体からなる分離剤を、アミン類を含む溶媒で洗浄することからなる、ラセミ体の光学分割に有用な分離剤の製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
多糖誘導体からなる分離剤は、光学異性体用分離剤として有用であることは、従来から知られている（Y. OKAMOTO, M. KAWASHITA  AND  K. HATADA, J. Am. Chem. Soc., 106, 53−57，1984、特公昭63−12850 号公報など）。この多糖誘導体は、通常、シリカゲル担体に担持させて用いられ、ラセミ体に対する光学分割能が非常に高く、光学異性体の分析や分取に広く使われている。
【０００３】
しかしながら、多糖類には塩素イオン、硝酸イオン、燐酸イオン、硫酸イオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、カルシウムイオン、マグネシウムイオン等のイオンを発生させる無機塩が多く含まれており、これらのイオンを発生させる無機塩が多く含まれている多糖、特に燐酸イオンを発生させる無機塩が多く含まれている多糖から誘導した多糖誘導体からなる分離剤をカラム等に充填した場合、分析対象の化合物、特に塩基性化合物がテーリングを起こし、良好な分離が得られないという問題があった。
【０００４】
したがって、本発明の目的は、多糖誘導体からなる分離剤において、分析対象の化合物のテーリングがなく、良好な分離が得られる分離剤の製造方法を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、多糖誘導体のもつ有用な性質を最大限に発揮でき、かつ上記の問題を克服した分離剤を得るべく鋭意研究した結果、本発明に到達した。
即ち、本発明は、含有イオン濃度が単独で３ppm 以上である燐酸イオン及びナトリウムイオンから選ばれたイオンを含む多糖から誘導した多糖誘導体からなる分離剤を、アミン類を含む溶媒で洗浄することを特徴とする分離剤の製造方法を提供するものである。
【０００６】
本発明において、多糖の含有イオンは、燐酸イオン、ナトリウムイオンから選ばれたイオンである。尚、本発明において、多糖の含有イオン濃度は、下記の実施例において記載したような、イオンクロマトグラフィー分析法を用いて算出することができる。
【０００７】
本発明における多糖とは、合成多糖、天然多糖、及び天然物変性多糖のいずれかを問わず、光学活性であればいかなるものでも良いが、好ましくは結合様式の規則性の高いものである。例示すれば、β−1,4 −グルカン（セルロース）、α−1,4 −グルカン（アミロース、アミロペクチン）、α−1,6 −グルカン（デキストラン）、β−1,6 −グルカン（ブスッラン）、β−1,3 −グルカン（カードラン、シゾフィラン）、α−1,3 −グルカン、β−1,2 −グルカン（Crown Gall多糖）、β−1,4 −ガラクタン、β−1,4 −マンナン、α−1,6 −マンナン、β−1,2 −フラクタン（イヌリン）、β−2,6 −フラクタン（レバン）、β−1,4 −キシラン、β−1,3 −キシラン、β−1,4 −キトサン、β−1,4−N−アセチルキトサン（キチン）、ブルラン、アガロース、アルギン酸、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンなどであり、アミロースを含有する澱粉等も含まれる。この中、好ましいものは、高純度の多糖を容易に得ることのできるセルロース、アミロース、β−1,4 −キトサン、キチン、β−1,4 −マンナン、β−1,4 −キシラン、イヌリン、カードランなどであり、さらに好ましくは、セルロース、アミロースである。
【０００８】
本発明における多糖誘導体とは、多糖の水酸基に、該水酸基と反応し得る官能基を有する化合物を、公知の方法で、エステル結合、ウレタン結合などにより結合させ、誘導体化したものである。ここで、水酸基と反応し得る官能基を有する化合物とは、脂肪族、脂環族、芳香族、ヘテロ芳香族などのイソシアン酸誘導体、カルボン酸、エステル、酸ハライド、酸アミド、ハロゲン化物、エポキシド、アルデヒド、アルコール、その他脱離基を有する化合物などである。
多糖誘導体として特に好ましいものは、エステル誘導体またはカルバメート誘導体である。
【０００９】
本発明における多糖の平均重合度（１分子中に含まれるピラノース又はフラノース環の平均数）は５以上、好ましくは10以上であり、特に上限はないが、500 以下であることが取り扱いの容易さにおいて好ましい。
本発明における多糖誘導体の重量平均分子量（ポリスチレン換算）は、1,000 〜500,000 が好ましく、さらに好ましくは20,000〜500,000 である。
本発明における多糖誘導体の分子量分布（ポリスチレン換算）は、１〜３であることが好ましく、さらに好ましくは1.1 以下である。
【００１０】
本発明においては、上記のような多糖であって、その含有イオン濃度が単独で３ppm 以上であるイオンを含む多糖、即ち、上記のようなイオンを発生させる無機塩を多く含む多糖から誘導した多糖誘導体からなる分離剤を、アミン類を含む溶媒で洗浄して、無機塩の含有濃度を低減させる。
洗浄方法としては、含有イオン濃度が単独で３ppm 以上であるイオンを含む多糖から誘導した多糖誘導体をそのままアミン類を含む溶媒で洗浄してもよいが、この多糖誘導体を液体クロマトグラフィー用のカラムに以下に示すような方法で充填した後、カラムをアミン類を含む溶媒で通液して洗浄するのが好ましい。洗浄溶媒量はカラム体積の３倍以上であればいくらでも良く、好ましくはカラム体積の10〜 100倍である。
【００１１】
本発明に用いられるアミン類としては、具体的には、アンモニア、ジメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン等が挙げられ、特にジエチルアミンが好ましい。
本発明に用いられる洗浄溶媒としては、多糖誘導体を溶解しない単一もしくは混合溶媒で、具体的にはペンタン、ヘキサン、ヘプタンなどの炭化水素類、メタノール、エタノール、２−プロパノール等のアルコール類の単一もしくは混合溶媒にアミン類を0.01〜50 vol％、好ましくは0.01〜５ vol％混合した溶媒が挙げられる。
【００１２】
本発明で得られる分離剤は特に液体クロマトグラフィー用に用いることが好ましく、本発明における多糖誘導体を液体クロマトグラフィー用充填剤として使用するには、これをそのままカラムに充填するか、担体に担持させてから充填する。
そのままカラムに充填するときには、充填剤は粒状であることが好ましいことから、多糖誘導体を破砕するか、ビーズ状にすることが好ましい。粒子の大きさは、使用するカラムの大きさによって異なるが、１μm 〜10mmであり、好ましくは１μm 〜300μmで、粒子は多孔質であることが好ましい。
【００１３】
さらに、分離剤の耐圧能力の向上、移動相に用いる溶媒による膨潤、収縮の防止、理論段数の向上のために、担体に担持させることが好ましい。用いる担体の大きさは使用するカラムの大きさにより変わるが、一般に粒径１μm 〜10mmであり、好ましくは１μm 〜300μmである。担体は多孔質であることが好ましく、平均孔径は10Å〜100μmであり、好ましくは50Å〜50,000Åである。
【００１４】
担体材質としては、多孔性有機担体または多孔性無機担体があり、多孔性有機担体として適当なものは、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアクリレートなどからなる高分子物質が挙げられ、多孔性無機担体として適当なものは、シリカゲル、アルミナ、マグネシア、酸化チタン、ガラス、ケイ酸塩、カオリンなどのような合成もしくは天然の物質が挙げられる。好ましくは多孔性無機担体であり、特に好ましくはシリカゲルである。これらの担体には多糖誘導体との親和性を良くするために表面処理を施しても良い。表面処理の方法としては有機シラン化合物を用いたシラン化処理やプラズマ重合による表面処理法などがある。
【００１５】
多糖誘導体を担体に担持させる量は、担体に対して１〜100 重量％、好ましくは５〜50重量％である。
多糖誘導体を担体に担持させる方法としては化学的方法でも物理的方法でも良い。化学的な方法としては多糖を誘導体化する際に一部の水酸基を保護しておき、誘導体化したのち、脱保護し、これとシリカゲルとを化学的に結合するという方法がある（Y. Okamoto  et al., J. Liq. Chromatogr., 10(８＆９), 1613, 1987)）。
物理的方法としては、多糖誘導体を可溶性の溶剤に溶解させ、担体と良く混和し、減圧下、加温下または気流下により溶剤を留去させる方法などがある。
【００１６】
液体クロマトグラフィーを行う場合の溶離液としては、本発明の分離剤を溶解またはこれと反応する液体を除いて特に制約はなく、また本発明の分離剤を化学的に担体に結合した場合には反応性液体を除いては制約はないが、好ましくはｎ−ヘキサン、各種アルコール、テトラヒドロフランなどの混合溶液が用いられる。
【００１７】
本発明の分離剤は、特にラセミ体を光学分割して光学活性体を得る際に有用である。
【００１８】
【発明の効果】
本発明の方法で得られる分離剤を用いると、分析対象の化合物のテーリングがなく、良好な分離が得られる。
【００１９】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明がこれらに限定されるものではないことはいうまでもない。
但し、実施例中で用いられるパラメーターk'（容量比）、N(理論段数）、α（分離係数）及びRs（分離度）は以下のように定義される。
【００２０】
【数１】
0003905564.tif 000002
【００２１】
実施例１
＜多糖誘導体の合成＞
含有イオン濃度が表１に示すような値である合成単分散アミロース((株）中埜酢店製, Mw／Mn＜1.1(ポリスチレン換算),  Mw＝54,300（光散乱法・超遠心沈降平衡法から算出))２ｇをピリジン中で、3,5 −ジメチルフェニルイソシアネート17ｇと30時間加熱反応させた。反応生成物をメタノール攪拌下に注ぎ込んで沈澱させ、Ｇ４グラスフィルターで濾取して、メタノールで２回洗浄した後、80℃で５時間真空乾燥した。得られた生成物にピリジンを加え完全に溶解させて、再びメタノール攪拌下に注ぎ込み沈澱させ、Ｇ４グラスフィルターで濾取して、メタノールで２回洗浄した後、80℃で５時間真空乾燥し、精製された生成物アミローストリス（3,5 −ジメチルフェニルカルバメート）を得た。
【００２２】
【表１】
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【００２３】
尚、表１の含有イオン濃度は、下記に示すイオンクロマトグラフィー分析法を用いて算出した。
イオンクロマトグラフィー分析法
(1) イオンクロマトグラフィー分析用試料の作成方法
合成単分散アミロース１ｇをビーカーに秤取り、純水50mlを添加した後、スターラーで５分程度攪拌し、アミロース懸濁水溶液とした。次のこの懸濁水溶液をクロマトディスク（0.22μm 、日本ミリポアリミテッド製）で濾過し、イ
オンクロマトグラフィー分析用試料とした。
【００２４】
(2) イオンクロマトグラフィー分析条件
・使用機器
ＩＳ 7000 （横河アナリティカルシステムズ）
・陰イオン分析条件
本カラム  ：YOKOGAWA ICS−A23 （φ4.6×75mm)
プレカラム：YOKOGAWA ICS−A2G （φ2.7×25mm)
溶離液    ：3.0mM Na2CO3
除去液    ：15mM  H2SO4 
流  速    ：溶離液、除去液共に 1.0ml／min.
検出器    ：導電率検出器
カラム温度：40℃
注入量    ：50μl
・陽イオン分析条件
本カラム  ：YOKOGAWA ICS−C25 （φ4.6×125mm)
プレカラム：YOKOGAWA ICS−C2G （φ2.7×25mm)
溶離液    ：1.0mM  2,6−ピリジンジカルボン酸＋５mM酒石酸
流  速    ：1.0ml ／min.
検出器    ：導電率検出器
カラム温度：40℃
注入量    ：50μl
＜多糖誘導体をシリカゲルへ担持させた分離剤の調製＞
上記のアミローストリス（3,5 −ジメチルフェニルカルバメート）をクロロホルム／ N,N−ジメチルアセトアミドに溶解し、この溶液を、カルバモイル処理を施したシリカゲルに均一にふりかけた後、溶媒を留去してアミローストリス（3,5 −ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲル（ダイソー製、粒径７μm 、孔径1,000 Å）へ担持させた分離剤を得た。
【００２５】
＜光学分割カラムの作製＞
上記のアミローストリス（3,5 −ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲルへ担持させた分離剤を、長さ25cm、内径0.46cmのステンレススチール製カラムにスラリー充填法で充填して光学分割カラムを作製した。
【００２６】
＜光学分割カラムのアミン通液処理＞
上記光学分割カラムをｎ−ヘキサン／２−プロパノール／ジエチルアミン＝90／10／0.1(ｖ／ｖ／ｖ）、流速 1.0ml／min.、温度25℃で 120ml通液した後、カラム内に存在するジエチルアミンを除去するために、ｎ−ヘキサン／２−プロパノール＝90／10（ｖ／ｖ）、流速 1.0ml／min.、温度25℃で 4,000ml通液した。
【００２７】
＜光学分割カラムの性能評価＞
上記の光学分割カラムを用いて、下記式（Ｉ）で表されるベラパミル、下記式（II）で表されるジメトチアジン及び下記式(III) で表されるクロルフェニラミンの光学分割実験を行った。性能評価には日本分光製JASCO 875-UVを使用し、溶離液はヘキサン／２−プロパノール＝90／10（ｖ／ｖ）、流速は1.0 ml／min.、温度は25℃の条件で行った。結果を表２に示す。
【００２８】
【化１】
0003905564.tif 000004
【００２９】
比較例１
＜光学分割カラムの作製＞
実施例１で調製したアミローストリス（3,5 −ジメチルフェニルカルバメート）をシリカゲルへ担持させた分離剤を、長さ25cm、内径0.46cmのステンレススチール製カラムにスラリー充填法で充填して光学分割カラムを作製した。
【００３０】
＜光学分割カラムの性能評価＞
上記の光学分割カラムを用いて、実施例１と同様にして、ベラパミル、ジメトチアジン及びクロルフェニラミンの光学分割実験を行った。結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0003905564.tif 000005