(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩化リゾチーム、ポリエチレンイミンおよびトブラマイシンからなる群より選択された化合物を有効成分として含有してなる糖尿病患者に対して有効な血管再狭窄防止薬。
【請求項２】
ポリエチレンイミンがゲル濾過法による測定により分子量５００〜１０００００を示すポリエチレンイミンである請求項１に記載の血管再狭窄防止薬。
【請求項３】
請求項１に記載された血管再狭窄防止薬がコーティングされた血管内埋め込み器具。
【請求項４】
血管内埋め込み器具が、ステントである請求項３に記載の血管内埋め込み器具。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、血管再狭窄防止薬及び該防止薬が表面にコーティングされた血管内埋め込み器具に関する。さらに詳しくは、本発明は、冠動脈インターベンション後の血管再狭窄を防止するために用いられる血管再狭窄防止薬及び該防止薬が表面にコーティングされた血管内埋め込み器具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
狭心症や心筋梗塞など冠動脈の狭窄が原因となって引き起こされる虚血性心疾患の治療方法として、侵襲度の高い冠動脈バイパス手術に代わり、冠動脈インターベンションが近年急速に普及している。
【０００３】
代表的な冠動脈インターベンションとして、先端に膨張可能なバルーンを設けたカテーテルを、冠動脈の狭窄部位で膨張させて血管内腔を拡張する、経皮経管的冠動脈形成術（ＰＴＣＡ：Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  Ｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）がある。しかし、ＰＴＣＡによる治療のみでは、術後約４０％という高頻度で再狭窄が発生しており、再治療が必要なことから、患者に与える精神的及び肉体的苦痛が大きかった。
【０００４】
この問題を解決するため、近年、金属やプラスチック製の、コイル又は網からなるステントと呼ばれる略円筒状の支持体を、拡張した狭窄部位に留置する、所謂ステント留置術が広く行われるようになり、その結果、血管再狭窄の発生率は半減した。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、ステント留置術は弾性反跳（ｅｌａｓｔｉｃ  ｒｅｃｏｉｌ）や、血管再構築（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ）は防止できるものの、慢性期における血管再狭窄を完全に防ぐことは難しく、ステント内再狭窄（ＩＳＲ：Ｉｎ−Ｓｔｅｎｔ  Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ）が術後約２０％の確率で生じており、特に糖尿病患者においてＩＳＲの発生頻度が高いことが知られている。
【０００６】
前記したＩＳＲは、ステント留置によって血管壁が炎症を起こし、その結果、平滑筋細胞が内膜側に遊走して内膜が過形成されることが原因で発生すると考えられている。
【０００７】
従って、現在ＩＳＲ防止の研究は新生内膜の増殖抑制に主眼をおいて進められており、トラニラスト、パクリタキセル、プロブコール、シロスタゾール、ラパマイシンなどの薬剤の有用性が示唆されており、それらをステントにコーティングして用いる治療方法も報告されているが、それらが顕著なＩＳＲ防止効果を有しているという定まった見解はない（例えば、特許文献１、２参照。）。
【０００８】
また、β線あるいはγ線を冠動脈病変部に照射し、新生内膜の増殖を抑制する放射線治療も実用化されており好成績を納めているが、エッジ効果（ｅｄｇｅ  ｅｆｆｅｃｔ）や晩期血栓症（ｌａｔｅ  ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ）といった合併症が存在し、また被爆量及び線源の管理が難しいという問題があるため、多く普及するには至っていない。
【０００９】
従って、冠動脈インターベンション後の血管再狭窄の予防において、十分に満足できる効果を有する薬剤又は医療器具の開発が待たれているのが現状である。
【００１０】
【特許文献１】
特開２０００−９５７０６号公報（第３頁）
【特許文献２】
特開２０００−２４９７０９号公報（第３頁）
【００１１】
【課題を解決するための手段】
そこで、本発明者は、前記課題を解決するべく鋭意研究した結果、ＩＳＲの発生機序は、ステント表面に付着したフィブリンに血管平滑筋が遊走することから始まり、最初のフィブリンがステント表面に付着する段階において血清中のα１−プロテアーゼインヒビター、α１−アンチキモトリプシン、α２−マクログロブリンが重要な関連因子となっていることを知見した。
【００１２】
そこで、本発明者が実際にステント留置術を施行した症例における前記諸因子の血中濃度とＩＳＲとの関連を調べた結果、α１−プロテアーゼインヒビターと、α２−マクログロブリンは血管径の減少と相関関係があるが、α１−アンチキモトリプシンについては相関関係がないこと、即ち、α１−プロテアーゼインヒビターと、α２−マクログロブリンがＩＳＲ関連因子であることをつきとめた。
【００１３】
さらに、本発明者は前記知見に基づいてさらに鋭意研究をした結果、所定の物質を用い前記α１−プロテアーゼインヒビターと、α２−マクログロブリンを不活性化することによりＩＳＲを有効に防止できることを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち本発明は、
（１）  塩化リゾチーム、ポリエチレンイミンおよびトブラマイシンからなる群より選択された化合物を有効成分として含有してなる糖尿病患者に対して有効な血管再狭窄防止薬；
（２）  ポリエチレンイミンがゲル濾過法による測定により分子量５００〜１０００００を示すポリエチレンイミンである前記（１）に記載の血管再狭窄防止薬；
（３）  前記（１）に記載された血管再狭窄防止薬がコーティングされた血管内埋め込み器具；
（４）  血管内埋め込み器具が、ステントである前記（３）に記載の血管内埋め込み器具；等に関する。
【００１５】
【化４】
0003990972.tif 000002
【００１６】
〔式中、Ｒ４は水素原子又はアミノ基を、Ｒ５は水素原子、置換されていてもよいＣ１−５アルキル基又は置換されていてもよいカルバモイル基を、ｐは１〜３の整数を、Ｙは酸根をそれぞれ示し、Ｒ４はＲ５と相あわさって式
【００１７】
【化５】
0003990972.tif 000003
【００１８】
（式中、ｍは１〜６の整数を示す。）で表わされる基を形成していてもよく、その場合α２−マクログロブリンを不活性化する化合物は式
【００１９】
【化６】
0003990972.tif 000004
【００２０】
（式中、ｎは１０〜２５００の整数を示す。）に表されるように開環重合していてもよい。〕で表わされる化合物又はその塩である前記（１）に記載の血管再狭窄防止薬；
（３）  α２−マクログロブリンを不活性化する化合物がアンモニア、メチルアミン、エチルアミン、それらの塩、尿素、トブラマイシン、ポリリジン及び塩化リゾチームからなる群から選ばれる少なくとも一つである前記（２）に記載の血管再狭窄防止薬；
（４）  α２−マクログロブリンを不活性化する化合物がゲル濾過法による測定により分子量５００〜１０００００を示すポリエチレンイミンである前記（２）に記載の血管再狭窄防止薬；
（５）  α２−マクログロブリンを不活性化する化合物が硫酸アンモニウムである前記（２）に記載の血管再狭窄防止薬；
（６）  前記（１）又は（５）に記載された血管再狭窄防止薬がコーティングされた血管内埋め込み器具；
（７）  血管内埋め込み器具が、ステントである前記（６）に記載の血管内埋め込み器具；等に関する。
【００２１】
Ｒ４で示される「アミノ基」としては、例えば第一アミノ基、第二又は第三アミノ基が挙げられる。Ｒ５で示される「置換されていてもよいアルキル基」の「アルキル基」としては、メチル，エチル，プロピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，ｓ−ブチル，ｔ−ブチル，ペンチル等のＣ１−５アルキル基が挙げられる。
【００２２】
また、Ｒ５で表わされるアルキル及びカルバモイル基は、置換可能な位置に同一又は相異なる置換基を１個ないし複数個有していてもよい。該置換基の好ましい具体例としては、例えばシクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチル，シクロヘキシル等のＣ３−１０シクロアルキル基、例えばビニル，アリル，２−メチルアリル，２−ブテニル，３−ブテニル，３−オクテニル等のＣ２−１０アルケニル基、例えばエチニル，２−プロピニル，３−ヘキシニル等のＣ２−１０アルキニル基、例えばシクロプロペニル，シクロペンテニル，シクロヘキセニル等のＣ３−１０シクロアルケニル基、例えばフェニル，ナフチル等のＣ６−１０アリール基、例えばベンジル，フェニルエチル等のＣ７−１１アラルキル基、ニトロ基、ニトロソ基、水酸基、メルカプト基、シアノ基、オキソ基、チオキソ基、カルバモイル基、例えばメチルカルバモイル，ジメチルカルバモイル等のモノ−又はジ−Ｃ１−６アルキル−カルバモイル基、例えばフェニルカルバモイル等のＣ６−１４アリール−カルバモイル基、カルボキシル基、例えばメトキシカルボニル，エトキシカルボニル等のＣ１−４アルコキシ−カルボニル基、例えばフェノキシカルボニル等のＣ６−１４アリールオキシ−カルボニル基、スルホ基、例えばフッ素，塩素，臭素，ヨウ素等のハロゲン原子、例えばメトキシ，エトキシ，プロポキシ，イソプロポキシ，ブトキシ，イソブトキシ，ｓ−ブトキシ，ｔ−ブトキシ等のＣ１−４アルコキシ基、例えばフェノキシ等のＣ６−１０アリールオキシ基、例えばメチルチオ，エチルチオ，プロピルチオ，イソプロピルチオ，ブチルチオ，イソブチルチオ，ｓ−ブチルチオ，ｔ−ブチルチオ等のＣ１−４アルキルチオ基、例えばフェニルチオ等のＣ６−１０アリールチオ基、例えばメチルスルフィニル，エチルスルフィニル，プロピルスルフィニル，イソプロピルスルフィニル，ブチルスルフィニル，イソブチルスルフィニル，ｓ−ブチルスルフィニル，ｔ−ブチルスルフィニル等のＣ１−４アルキルスルフィニル基、例えばフェニルスルフィニル等のＣ６−１０アリールスルフィニル基、例えばメチルスルホニル，エチルスルホニル，プロピルスルホニル，イソプロピルスルホニル，ブチルスルホニル，イソブチルスルホニル、ｓ−ブチルスルホニル、ｔ−ブチルスルホニル等のＣ１−４アルキルスルホニル基、例えばフェニルスルホニル等のＣ６−１０アリールスルホニル基、例えばメトキシスルホニル，エトキシスルホニル，プロポキシスルホニル，イソプロピルオキシスルホニル，ブトキシスルホニル，イソブチルオキシスルホニル，ｓ−ブトキシスルホニル，ｔ−ブトキシスルホニル等のＣ１−４アルコキシスルホニル基、例えばフェノキシルスルホニル等のＣ６−１０アリールオキシスルホニル基、アミノ基、例えばアセチルアミノ，プロピオニルアミノ，ベンゾイルアミノ等のＣ１−１１カルボン酸アシルアミノ基、例えばメチルアミノ，エチルアミノ，プロピルアミノ，イソプロピルアミノ，ブチルアミノ，ジメチルアミノ，ジエチルアミノ等のモノ−又はジ−Ｃ１−４アルキルアミノ基、例えばシクロヘキシルアミノ等のＣ３−６シクロアルキルアミノ基、例えばアニリノ等のＣ６−１０アリールアミノ基、例えばトリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル，トリフェニルシリル，ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル等のトリ置換シリル基、例えばホルミル，アセチル，ベンゾイル等のＣ１−１０カルボン酸アシル基、例えば２−又は３−チエニル，２−又は３−フリル，１−，２−又は３−ピロリル，２−，３−又は４−ピリジル，２−，４−又は５−オキサゾリル，２−，４−又は５−チアゾリル，１−，３−，４−又は５−ピラゾリル，１−，２−，４−又は５−イミダゾリル，３−，４−又は５−イソオキサゾリル，３−，４−又は５−イソチアゾリル，１，２，３−又は１，２，４−トリアゾリル，２−，４−又は５−ピリミジニル，ベンゾチアゾリル，ベンゾオキサゾリル，トリアジニル，オキシラニル，アジリジニル，ピロリジニル，ピペリジニル，モルホリニル，ベンゾイミダゾリル，キノリル，イソキノリル等の酸素原子、硫黄原子、窒素原子などのヘテロ原子を１〜５個含む３〜６員複素環基又はその縮合環基から選ばれる基、例えば、アラニル基，β−アラニル基，アルギニル基，シスタチオニル基，シスチル基，グリシル基，ヒスチジル基，ホモセリル基，イソロイシル基，ランチオニル基，ロイシル基，リシル基，メチオニル基，ノルロイシル基，ノルバリル基，オルニチル基，プロリル基，サルコシル基，セリル基，トレオニル基，チロニル基，チロシル基，バリル基等の アミノ酸残基などが用いられる。また、前記置換基は、置換可能な位置に同一又は相異なる更なる置換基を１個ないし複数個有していてもよく、そのときの更なる置換基は前記置換基と同意義である。二つ以上の置換基が用いられる場合、これらのうち二つの置換基が相あわさって、例えばＣ１−６アルキレン（例、メチレン，エチレン，トリメチレン，テトラメチレン，プロペニレン）、３−オキサペンタメチレン、ビニレン、ベンジリデン、メチレンジオキシ、２−チアトリメチレン、オキザリル、マロニル、スクシニル、マレオイル、フタロイル、酸素、硫黄、イミノ、アゾ、ヒドラゾ等の二価の基を形成していてもよい。これらの置換基が、例えばアリール、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリールオキシ、アリールチオ、アリールスルフィニル、アリールスルホニル、アリールカルバモイル、アリールオキシカルボニル、アリールオキシスルホニル、アリールアミノ、シクロアルキルアミノ、カルボン酸アシル、カルボン酸アシルアミノ、トリ置換シリル、複素環基、二価の基等である場合にはさらに例えばフッ素，塩素，臭素，ヨウ素等のハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、例えばメチル，エチル，プロピル，イソプロピル，ブチル，イソブチル，ｓ−ブチル，ｔ−ブチル等のＣ１−４アルキル基、例えばビニル，アリル等のＣ２−４アルケニル基、例えばエチニル，２−プロピニル等のＣ２−４アルキニル基、フェニル基、例えばメトキシ，エトキシ等のＣ１−４アルコキシ基、フェノキシ基、例えばメチルチオ，エチルチオ等のＣ１−４アルキルチオ基、フェニルチオ基等で１〜５個置換されていてもよい。また置換基がアルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、アルキルカルバモイル、アルコキシカルボニル、アルコキシスルホニル、アミノ、アルキルアミノ等である場合にはさらに上記のようなハロゲン原子、水酸基、ニトロ基、シアノ基、Ｃ１−４アルコキシ基、Ｃ１−４アルキルチオ基等で１〜５個置換されていてもよい。
【００２３】
Ｙで表わされる酸根としては、例えば塩素基、炭酸基、炭酸水素基、硫酸基、硝酸基、ホウ酸基が挙げられるが、好ましくは硫酸基である。
【００２４】
【発明の実施の形態】
まず、本発明の血管再狭窄防止薬について説明する。
【００２５】
α２−マクログロブリンを不活性化する化合物は、α２−マクログロブリンを不活性化するものであれば特に限定されないが、α２−マクログロブリンの活性中心にあるグルタミン酸にアミノ基が共有結合することによりα２−マクログロブリンの活性が失われると考えられるため、アミノ基を有する化合物が好適に採用可能である。このような化合物として、例えばアンモニア、アンモニアの水素原子がＣ１−５アルキル基で置換されたアミン化合物又はその塩、アンモニアの水素原子１個がカルバモイル基で置換された尿素、アンモニアの水素原子１個がアミノ基で置換されたヒドラジン又はその塩、アンモニウム塩、アンモニアの水素原子２個が２価の炭化水素基で置換された環状第２アミン、即ちイミン又はその塩等が挙げられる。
【００２６】
前記アミン化合物としては第１アミンが好ましいが、とりわけメチルアミン、エチルアミンが好ましく、中でもメチルアミンが特に好ましい。なお、それらのアミンは塩の形でも用いることができる。また、アンモニウム塩としては、例えば塩酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、炭酸水素アンモニウム、硝酸アンモニウム、ホウ酸アンモニウムが挙げられるが、硫酸アンモニウムが最も好適である。また、アンモニアの水素原子２個が２価の炭化水素基で置換された環状第２アミンは、一般に式
【００２７】
【化７】
0003990972.tif 000005
【００２８】
〔式中、ｋは１〜６の整数を示す。〕で表わされるイミンであり、例えばエチレンイミン、ピロリジン、ピペリジン等が挙げられるが、エチレンイミンが好適である。またエチレンイミンは開環重合して
【００２９】
【化８】
0003990972.tif 000006
【００３０】
〔式中、ｎは１０〜２５００の整数を示す。〕で表わされるポリエチレンイミンとなっていてもよく、その場合、ゲル濾過法による測定により分子量５００〜１０００００を示すポリエチレンイミンが好適である。なお、これらの薬剤を単独でも２種類以上組み合わせて使用しても構わない。
【００３１】
また、置換基を有しているＣ１−５アルキル基が、さらに置換基を有していている場合、このような化合物の具体例として、トブラマイシン、ポリリジン、エルカトニン、塩化リゾチーム等が挙げられる。
【００３２】
本発明のα２−マクログロブリンを不活性化する化合物の投与方法は、原末のままでもよいが、通常は他の添加剤、例えば賦形剤（例えば、炭酸カルシウム、乳糖、結晶セルロース、澱粉類、多孔性物質等）、崩壊剤（例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等）、結合剤（例えば、デキストリン、ゼラチン、プルラン等）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム等）、コーティング剤（例えば、メチルセルロース、エチルセルロース等）、界面活性剤（例えば、ポリエキシエチレン硬化ヒマシ油類、ポリソルベート類等）、可塑剤（例えば、クエン酸トリエチル、トリアセチン等）、抗酸化剤（例えば、クエン酸、α−トコフェロール等）、保存剤（例えば、パラベン類等）等の中から選ばれた成分を投与形態に応じて適宜選択し、その適量を用いて所望の剤形に製剤化した後に投与される。剤形としては、例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、シロップ剤、注射剤、懸濁剤、脂肪乳剤、吸入剤、軟膏剤等が挙げられ、いずれも例えば日本薬局方などに記載された常法により製剤化されるが、注射剤、懸濁剤、脂肪乳剤等、非経口的かつ局所的に投与するのに適した剤形が好適である。より好ましいのはドラッグデリバリーカテーテルや、血管内埋め込み器具にコーティングして患部に直接適用させる投与方法であり、最も好ましいのは、後述するように、血管再狭窄防止薬をコーティングしたステントを患部に留置する投与方法である。ステントを用いる方法は、その挿入作業が簡易であるため特殊な手技を必要とせず、しかも患部に適用するための取り付け時間が短くて済む。また、血管再狭窄防止薬をコーティングしたステントを患部に局所的に適用するため、通常成人に対する１回の投与量は微量となり、副作用等の副次的問題が生じない。
【００３３】
また、本発明の血管再狭窄防止薬の投与量は、投与経路、症状、患者の年齢あるいは体重等によっても異なるが、例えば、血管狭窄部位における化合物の局所濃度が１〜１００ｍＭになるように投与することが好ましい。濃度が１ｍＭよりも低いと得られる効果が低くなり、１００ｍＭよりも高いと副作用が生じるおそれがあるからである。血管再狭窄防止薬の有効成分の局所濃度は、さらに好ましくは７０〜９０ｍＭ、最も好ましくは８０ｍＭ前後である。この局所濃度を前記した範囲に保つため、血管再狭窄防止薬は、非経口的かつ局所的に投与されることが好ましく、その具体的な例としては、前述したように本発明の血管再狭窄防止薬をコーティングした血管内埋め込み器具、とりわけステントを患部に留置することによる除放による投与方法である。
【００３４】
本発明に係る血管再狭窄防止薬の各成分や調製法等の詳細は、特開２０００−２４９７０９号公報、特開２０００−９５７０６号公報、特許第３１４６００９号公報に開示されており、これらはここに援用されるものとする。
【００３５】
以上、本発明の血管再狭窄防止薬について説明してきたが、冠動脈インターベンション後に本発明の血管再狭窄防止薬を、例えばドラッグデリバリーバルーンや、コーティングしたステントを用いて局所投与することにより、血管再狭窄が有効に防止される。
【００３６】
次に、本発明に係る血管埋め込み器具を、ステントを例にとって説明する。
本発明の血管埋め込み器具の好ましい実施形態であるステントは、前記血管再狭窄防止薬が表面にコーティングされていることを特徴とする。一般に前記ステントの形状は円筒状であり、径方向に拡張可能なように、その胴部は複数のスロットを有した網状、又はスプリングコイル状となっているが、血管の狭窄部を拡張した後にその血管内径を保持するものであれば、その形状は特に限定されない。また、その拡張機構は、自己拡張型（ｓｅｌｆ  ｅｘｐａｎｄａｂｌｅ）であってもバルーン拡張型（ｂａｌｌｏｏｎ  ｅｘｐａｎｄａｂｌｅ）であってもよい。
【００３７】
また、ステントの素材としては、ステンレス、チタン、タンタル、アルミニウム、タングステン、ニチノールなどの金属材料や、ポリアミド、ポリエチレン、ポリプロピレン又は加水分解されにくいエーテル系ポリウレタンなどのプラスチック材料が挙げられるが、生体適合性があり医療用材料として使用実績のあるものであれば特に限定されない。
【００３８】
このようなステントの具体例として、ジョンソン・エンド・ジョンソン社のパルマッツーシャッツ（Ｐａｌｍａｚ−Ｓｃｈａｔｚ）（登録商標）ステント。アドバンスド・カーディオバスキュラー・システムズ社のマルチ−リンク（ＭＵＬＴＩ−ＬＩＮＫ）（商標）ステント、コーディス社のコーディス（登録商標）ステント、メドトロニック社のマイクロステント−ＧＦＸ（登録商標）ステントなどが挙げられ、いずれも好適に採用可能である。
【００３９】
前記ステントに従来公知の方法に従って、本発明に係る血管再狭窄防止薬を含むコーティング混合物をコーティングすることにより本発明のステントが得られる。ステントへのコーティング方法の詳細は、特開２０００−３５０７８６号、特開２０００−５１３６７号に開示されており、これらはここに援用することができるが、このコーティング方法はステント以外の他の血管埋め込み器具にも適用可能である。以下に、ステントへの血管再狭窄防止薬のコーティング方法を具体的に説明する。
【００４０】
血管再狭窄防止薬をステントにコーティングするには、（１）血管再狭窄防止薬を各種ポリマー材料と混合しコーティング混合物とした後に、このコーティング混合物をステントにスプレーしたり、ステントをこのコーティング混合物に浸漬するか、（２）ステント表面を各種ポリマー材料等で親水性コーティングした後に、血管再狭窄防止薬をステントにスプレーしたり、ステントを血管再狭窄防止薬に浸漬して得られる。血管再狭窄防止薬は、各種ポリマー材料と混合し易くするために、液体又は粉体等の適当な剤形に製剤化された後に用いられる。なお、粉末状の血管再狭窄防止薬をポリマー材料と混合する場合、粒度（１次粒子並びに凝集体及び集合体等の２次粒子）を十分に小さくし、コーティング後の表面が滑らかで、かつステントのスロットを塞がないようにする必要がある。
【００４１】
前記コーティング混合物は、血管再狭窄防止薬の放出プロフィールを制御する等の目的で、所望により１以上の添加物、例えば希釈剤、キャリア、賦形剤、安定化剤等の添加剤を含んでもよい。例えば、生物学的適合性フィルム形成ポリマーから選択される親水性ポリマーを、生物学的適合性疎水性コーティング剤に添加して放出プロフィールを変えてもよい（又は、疎水性ポリマーを親水性コーティング剤に添加して放出プロフィールを変えてもよい）。一例として、ポリエチレンオキサイド、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース及びこれらの組み合わせからなる群から選択される親水性ポリマーを脂肪族ポリエステルコーティング剤に添加して放出プロフィールを変えることが挙げられる。疎水性コーティング剤に対する親水性ポリマーの適切な添加量又は親水性コーティング剤に対する疎水性ポリマーの適切な添加量は、血管再狭窄防止薬についてのインビトロ（ｉｎ  ｖｉｔｒｏ）又はインビボ（ｉｎ  ｖｉｖｏ）における放出プロフィールにより決定される。
【００４２】
本発明で用いられるポリマーは、生物学的適合性物質であれば特に限定されないが、例えばポリアミド、ポリオレフィン（ポリプロピレン、ポリエチレンなどを含む。）、非吸収性ポリエステル（ポリエチレンテレフタレートなどを含む。）及び生物学的吸収性脂肪族ポリエステル（乳酸、グリコール酸、ラクチド、グリコリド、パラ−ジオキサン、トリメチレンカルボネート、ε−カプロラクトンなど及びこれらの混合物のホモポリマー及びコポリマーなどを含む。）が挙げられる。
【００４３】
さらに、コーティング層に柔軟性を持たせるために、ポリマーに柔軟性の高い高分子エラストマーを加えてもよい。例えば、ポリスチレン系、ポリオレフィン系、ポリエステル系、ポリアミド系、シリコーン系、ウレタン系、フッソ系樹脂、天然ゴム系などの各種エラストマー及びそれらの共重合体又はそれらのポリマーアロイを用いることができる。それらの中で特に、柔軟性が高くて強度も強い、セグメント化ポリウレタン系ポリマーフィルムが最適である。
【００４４】
本発明で用いられるセグメント化ポリウレタン系ポリマーフィルムとは、ソフトセグメントとして柔軟なポリエーテル部分と、ハードセグメントとして芳香族とウレア結合とが豊富な部分とを有し、このソフトセグメントとハードセグメントが相分離して微細構造を作っているものであるのが好ましい。このようなセグメント化ポリウレタン系ポリマーフィルムは十分な強度を持っていると共に、抗血栓性にも優れている。つまり生体適合性があり、しかも破断することなく十分に拡張できる。
【００４５】
また、ステントへの血管再狭窄防止薬のコーティング量は、投与経路、症状、患者の年齢あるいは体重等によっても異なるが、例えば、血管再狭窄防止薬の使用量は前記コーティング混合物の全量に対して約０．００１ｗ／ｖ％〜約７０ｗ／ｖ％であり、より一般的には約０．００１ｗ／ｖ％〜約６０ｗ／ｖ％であり、最も一般的には約０．００１ｗ／ｖ％〜約４５ｗ／ｖ％である。
【００４６】
以上、本発明に係るステントについて説明してきたが、本発明のステントによれば、冠動脈インターベンション後に、短時間で侵襲度の低い血管再狭窄防止手段を提供でき、かつ血管再狭窄を有効に防止できるため、患者に与える精神的及び肉体的負担が軽減される。
【００４７】
なお、本発明に係る血管再狭窄防止薬及び該防止薬がコーティングされた血管内埋め込み器具の適用対象となる、術後の血管再狭窄発生の可能性がある冠動脈インターベンションとしては、前記したＰＴＣＡ及びステント留置術以外に、方向性アテレクトミー冠動脈形成術（ＤＣＡ：Ｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｔｈｅｒｅｃｔｏｍｙ）、吸引型アテレクトミー冠動脈形成術（ＴＥＣ：Ｔｒａｎｓｌｕｍｉｎａｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｃａｔｈｅｔｅｒ）、回転型アテレクトミー冠動脈形成術（ローターブレ−ター）、レーザー冠動脈形成術（Ｌａｓｅｒ  Ａｎｇｉｏｐｌａｓｔｙ）などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００４８】
【実施例】
以下に示す試験例に則して本発明を具体的に説明する。
なお、各々の試験例の試験結果に対する有意差検定は、特に断らない限りサス・インスティチュート・ジャパン（ＳＡＳ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｊａｐａｎ）社製、ＳＡＳ（登録商標）システム  Ｖｅｒ．６．１２を用い、ピアソン検定によって行った。また、試験例中の各記号は特に断らない限り次の意味を表わす。ａ１ＰＩ：α１−プロテアーゼインヒビター、ａ２Ｍ：α２−マクログロブリン、ａ１ＡＣＴ：α１−アンチキモトリプシン、ｐ：棄却率、Ｒ：相関係数、Ｍ：モル濃度（ｍｏｌ／Ｌ）、ｍＭ：ミリモル濃度（ｍｍｏｌ／Ｌ）、ｍｇ：ミリグラム、ｗ／ｖ％：質量対容量百分率、ＩＳＲ：ステント内再狭搾。
【００４９】
まず、ステント留置術を施行した症例において、α１−プロテアーゼインヒビター及びα２−マクログロブリンがＩＳＲ関連因子であることを示す試験結果について記載する。
【００５０】
〔試験例１〕  α１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリンの血清中濃度が血管内径の減少におよぼす影響
冠動脈疾患を持ち、冠動脈インターベンションの適応となる症例のうち、初回病変（ｄｅ  ｎｏｖｏ  ｌｅｓｉｏｎ）で、かつステント留置術を施行した症例を対象とした。急性及び亜急性血栓性閉塞を防止するため、前処置としてアスピリン（８１ｍｇ又は１６２ｍｇ）及びチクロピジン２００ｍｇ又はシロスタゾール２００ｍｇを施術の７日前より投与した。病変長の制限はなく、ステントの選択は術者の裁量の範囲とした。９１例１１０病変にステント留置が成功し、そのうち、１０７病変に６カ月後のフォローアップ冠動脈造影を行い、この１０７病変を対象として、α１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリンの血中濃度と血管内径の関係を検証した。ステントを留置する前後及び６カ月後の血管内径を、ＣＭＳ社製、心血管解析ソフトウェアＱＣＡ−ＣＭＳを用いて測定し、急性期獲得（ａｃｕｔｅ  ｇａｉｎ）と後期内径損失（ｌａｔｅ  ｌｏｓｓ）とから血管再狭窄の度合いを示す減少指数（ｌｏｓｓ  ｉｎｄｅｘ）を算出した。
【００５１】
各症例の血清を施術から２４時間後に採取し、そのα１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリン及び、対照物質としてα１−アンチキモトリプシンをネフェロメトリー法にて測定した。測定は、α１−プロテアーゼインヒビター及びα２−マクログロブリンはデイド・ベーリング・マールブルグ（Ｄａｄｅ  Ｂｅｈｒｉｎｇ  Ｍａｒｂｕｒｇ）社製を、α１−アンチキモトリプシンはヘキスト・ジャパン（Ｈｏｅｃｈｓｔ  Ｊａｐａｎ）社製の測定キットをそれぞれ用い所定の方法によって行った。
結果を図１に示す。図１のＡはα１−プロテアーゼインヒビターの血清中濃度と減少指数との関係を、Ｂはα２−マクログロブリンの血清中濃度と減少指数との関係を、Ｃはα１−アンチキモトリプシンの血清中濃度と減少指数との関係を示す。それぞれのグラフにおいて、縦軸は減少指数を、横軸は諸因子の血清中濃度を示している。
【００５２】
図１に示したように、各症例における、α１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリン、α１−アンチキモトリプシンの血清中濃度の平均値はいずれも正常範囲であったが、上記図１に示した結果から明らかなように、α１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリンと減少指数との間については正の相関が認められたが、α１−アンチキモトリプシンと減少指数との間については相関関係が認められなかった。すなわち、α１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリンとＩＳＲとの間に統計学的に関連性があることが確認された。
【００５３】
また、症例を糖尿病群と非糖尿病群に群分けしたときの、α２−マクログロブリンの血清中濃度とＩＳＲとの関係を図２に示す。図中、黒丸はＩＳＲありを、白丸はＩＳＲなしをそれぞれ示す。なお、血管内径を定量的冠動脈造影法を用いた測定による５０％以上の狭窄率をもってＩＳＲありとした。
【００５４】
図２で示したように、α２−マクログロブリンの血清中濃度は糖尿病群が非糖尿病群よりも高かった。また、非糖尿病群ではα２−マクログロブリンの血清中濃度とＩＳＲに相関が認められないものの、糖尿病群では、α２−マクログロブリンの血清中濃度が高いとＩＳＲの発生率が高くなる傾向にあり、明らかに相関が認められた。例えば糖尿病群では、α２−マクログロブリンの血清中濃度の正常上限値である０．３５×１０−５Ｍ以上の場合ＩＳＲ発症率が７５％であるのに対し、０．３５×１０−５Ｍ未満の場合ＩＳＲ発症率は０％であり、α２−マクログロブリンの血清中濃度は、糖尿病群におけるＩＳＲ発症率と極めて強い相関関係があることが明らかとなった。
すなわち本発明に係る血管再狭窄防止薬は、糖尿病患者にとって、大変有効な薬剤であるといえる。
【００５５】
従って、α１−プロテアーゼインヒビターとα２−マクログロブリンを阻害することで、血管再狭窄の防止が期待されることがわかる。
なお、世界中の研究者が血管再狭窄と関連のある血清因子を調べているが、このような相関を認める血清因子については未だ報告されていない。
【００５６】
〔試験例２〕  フィブリン中におけるＮ−クロルコハク酸イミドが血管平滑筋の遊走頻度におよぼす影響
血管平滑筋はヒト大動脈より採取され、細胞株（ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）として確立されているＨＮＢ１８Ｅ６Ｅ７を用いた。血管平滑筋を６ウェルプレート中で合流段階（ｃｏｎｆｌｕｅｎｔ）まで培養した後、その上清を温めたリン酸緩衝生理食塩溶液（ＰＢＳ）で３回洗い、３ｍｇ／ｍＬのフィブリノーゲンと１０ｗ／ｖ％ヒト血清を含むウエイマウス（Ｗａｙｍｏｕｔｈ）培養液０．８ｍＬを静かに加え、最終濃度が０．０８ｍＭ、０．８ｍＭ、８ｍＭ、８０ｍＭとなるようにＮ−クロルコハク酸イミドを加えた後、さらにトロンビンを加え上清をゲル化させた。次いで、ゲル化した上清を３７℃にて２４時間培養し、ゲル中に遊走した平滑筋細胞の数を位相差顕微鏡にてカウントした。各濃度につきｎ＝３となるよう試験した。結果を図３に示す。縦軸は血管平滑筋がフィブリン中で遊走する頻度を、横軸はＮ−クロルコハク酸イミドの濃度をそれぞれ示している。
【００５７】
図３に示したように、遊走する血管平滑筋の数はＮ−クロルコハク酸イミドの濃度が高くなるにつれて、明らかに血管平滑筋の遊走頻度が減少し、８０ｍＭにおいては、完全に消失した。この結果からα１−プロテアーゼインヒビターの阻害薬であるＮ−クロルコハク酸イミドは血管再狭窄予防に有効であることが示された。
なお、本試験例ではＮ−クロルコハク酸イミドを用いたが、α１−プロテアーゼインヒビターの活性中心は酸化物によって保護されているため、この酸化物を攻撃するために、塩素基を持っておりかつ酸化作用を有している式
【００５８】
【化９】
0003990972.tif 000007
【００５９】
のような部分構造を有している化合物であれば任意に採用可能である。
【００６０】
〔試験例３〕  Ｎ−クロルコハク酸イミドが、血管内傷害モデルにおける新生内膜形成におよぼす影響
動物は２カ月齢のＮ２Ｗ系雄性ウサギ一群５匹を使用した。ペントバルビタール麻酔下、動脈塞栓除去用バルーンカテーテルである、バクスター（Ｂａｘｔｅｒ）社製、フォガティー・カテーテル、型式ｅ−０６０−２Ｆを右大腿動脈より右総腸骨動脈に挿入し、バルーンを膨らませた状態（バルーン圧：０．５〜１．０ａｔｍ）で右総腸骨動脈を３回擦過し、血管内傷害モデルを作成した。内皮傷害後、ボストン・サイエンティフィック（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）社製、ハイドロフィーリックバルーンを、Ｎ−クロルコハク酸イミド処置群として８０ｍＭのＮ−クロルコハク酸イミドに浸したものと、対照群としてＰＢＳに浸したものを、それぞれを右総腸骨動脈で拡張し薬剤を傷害部位に局所投与した。４週間後、動脈を摘出し１０ｗ／ｖ％中性緩衝ホルマリンで固定し、動脈リング組織切片を作成した。ＥＶＧ（Ｅｌａｓｔｉｃ  Ｖａｎ  Ｇｉｅｓｏｎ）染色によって弾性繊維染色組織標本を作成後、内膜面積（Ｉ）及び中膜面積（Ｍ）を測定し、両者の比（Ｉ／Ｍ）を算出し、内膜肥厚度とした。結果を図４に示す。縦軸は内膜肥厚度（Ｉ／Ｍ  ｒａｔｉｏ）を、横軸は処置群名を示している。
【００６１】
図４に示したように、Ｎ−クロルコハク酸イミド投与群では極めて明らかに新生内膜の増殖を抑制し、血管再狭窄に有効であることが示された。
【００６２】
次いで、化合物（III−１）の薬理効果を示す試験結果について記載する。
〔試験例４〕  メチルアミン、エチルアミン並びに分子量６００及び分子量１００００のポリエチレンイミン、トブラマイシン、アンモニア、塩化リゾチーム、ポリリジンのα−２マクログロブリンの不活性化効果
α−２マクログロブリンがトリプシンを阻害させることと、トリプシンが発色基質Ｓ２２２２を分解し黄色く発色させることを利用して、メチルアミン、エチルアミン並びに分子量６００及び分子量１００００のポリエチレンイミン、トブラマイシン、アンモニア、塩化リゾチーム、ポリリジンがα−２マクログロブリンを不活性化する効果を検証した。以下に具体的方法を示す。
【００６３】
まず、メチルアミン、エチルアミン並びに分子量６００及び分子量１００００のポリエチレンイミン、トブラマイシン、アンモニア、塩化リゾチーム、ポリリジンを希釈し、０．０００１ｗ／ｖ％、０．００１ｗ／ｖ％、０．０１ｗ／ｖ％、０．１ｗ／ｖ％、１ｗ／ｖ％の希釈系列を作成し、試料溶液とした。それぞれの試料溶液について５０μＬをとり、２．５×１０−４ｗ／ｖ％α−２マクログロブリンを５０μＬ加え、室温で５分間放置した。次いで５ｗ／ｖ％トリプシンＥＤＴＡ溶液を５０μＬ加え室温で５分間放置し、発色基質Ｓ２２２２を１０μＬ加えた。さらに室温で２０分間放置した後、１０ｗ／ｖ％酢酸溶液を５０μＬ加え反応を停止させ、ｐＨ８．０の５０ｍＭトリス緩衝液をブランクとして波長４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。試料及び試薬の希釈には全てｐＨ８．０の５０ｍＭトリス緩衝液を使用した。結果を図５に示す。なお、縦軸はα−２マクログロブリンの不活性率を、横軸は種々の化合物の濃度を示している。
【００６４】
図５に示したように、いずれの化合物もその濃度が高くなるにつれて、α−２マクログロブリンを不活性化することがわかる。ポリリジン及び塩化リゾチームは、濃度０．１ｗ／ｖ％でほぼ１００％のα２−マクログロブリン不活性化率を示し、メチルアミンは、濃度が１ｗ／ｖ％でほぼ１００％のα−２マクログロブリン不活性化率を示した。また、分子量１００００のポリメチレンイミンは、濃度が０．１ｗ／ｖのとき約６０％のα−２マクログロブリン不活性化率を示した。いずれの化合物もアミノ基を有しており、そのアミノ基がα−２マクログロブリンの活性中心に共有結合することにより、α−２マクログロブリンを不活性化していると考えられる。
【００６５】
【発明の効果】
本発明に係る血管再狭窄防止薬及び該防止薬がコーティングされた血管内埋め込み器具は、欠陥再狭窄の発生と密接に関連している因子であるα１−プロテアーゼインヒビターや、α２−マクログロプリンを不活性化し、冠動脈インターベンションにより欠陥の拡張が行われた後の血管再狭窄を有効に予防及び治療することができる。なお、前記防止薬は、低濃度でも十分効果を発揮し、副作用もほとんどなく、特に糖尿病患者に対して有効に作用する。また、前記防止薬を血管内埋め込み器具、特にステントにコーティングして局部的に適用することにより、効果は増大し、副作用のおそれはさらに少なくなる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  血管再狭窄の度合いを示す減少指数と血清中のα１−プロテアーゼインヒビター、α２−マクログロブリン、α１−アンチキモトリプシンの濃度との関係を示す図である。
【図２】  糖尿病群と非糖尿病群の、血管再狭窄の有無と血清中のα２−マクログロブリンの濃度との関係を示す図である。
【図３】  フィブリン中におけるＮ−クロルコハク酸イミド濃度と、血管平滑筋の遊走頻度との関係を示す図である。
【図４】  Ｎ−クロルスクシンイミド処置群と対照群の、内膜肥厚度（Ｉ／Ｍ  ｒａｔｉｏ）を示す図である（右総腸骨動脈３回擦過モデル）。
【図５】  メチルアミン、エチルアミン並びに分子量６００及び１００００のポリエチレンイミン、トブラマイシン、アンモニア、塩化リゾチーム、ポリリジンがα−２マクログロブリンを不活性化する効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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