(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナリンゲニン配糖体を含む組成物であって、ナリンゲニン配糖体全量のうち、６０重量％以上が３"-α-モノグルコシルナリンジンであり、３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量が、１０重量％以下であり、該組成物の示すさわやかな苦味は同一重量％濃度のナリンジンと比較して増強され、飲食物または医薬品の風味を改善する添加物として、あるいは飲食物、医薬品または化粧品の品質保持のための添加物として、使用されることを特徴とする３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物。
【請求項２】
３"-α-モノグルコシルナリンジンがナリンゲニン配糖体全量の６０重量％以上であり、ナリンジンが１０重量％〜３０重量％、３",４'-α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量が１０重量％以下であることを特徴とする請求項１に記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物。
【請求項３】
酸化防止、退色防止および水溶性に優れることを特徴とする、請求項１または２に記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物。
【請求項４】
澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られるα-グルコシルナリンジン配糖体含有溶液に、α-グルコシダーゼ活性またはグルコアミラーゼ活性を有する酵素を添加して作用させて３"-α-モノグルコシルナリンジンを得ることを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法。
【請求項５】
澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られるα-グルコシルナリンジン配糖体含有溶液に、α-グルコシダーゼ活性を有する酵素とグルコアミラーゼ活性を有する酵素とを添加して作用させて３"-α-モノグルコシルナリンジンを得ることを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法。
【請求項６】
澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られるα-グルコシルナリンジン配糖体含有溶液に、α-グルコシダーゼ活性を有する酵素、あるいはこのα-グルコシダーゼ活性を有する酵素とグルコアミラーゼ活性を有する酵素とを添加して作用させて得られる３"-α-モノグルコシルナリンジンを含有する酵素処理液を、
多孔性吸着樹脂と接触させて３"-α-モノグルコシルナリンジンを含有する配糖体混合物を該樹脂に吸着させ、次いで、
有機溶媒で３"-α-モノグルコシルナリンジンを溶出して３"-α-モノグルコシルナリンジンを得ることを特徴とする請求項１〜３の何れかに記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法。
【請求項７】
請求項１〜３の何れかに記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、飲食物または医薬品に添加することを特徴とする飲食物または医薬品の風味改良方法。
【請求項８】
請求項１〜３の何れかに記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、色素あるいは色素含有物に添加することを特徴とする色素あるいは色素含有物の褪色防止方法。
【請求項９】
請求項１〜３の何れかに記載の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、飲食物、医薬品または化粧品に含有させることを特徴とする飲食物、医薬品または化粧品の酸化防止方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】
本発明は、３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物、その製造方法およびその利用方法に関する。さらに詳しくは、すっきりした強い苦味を呈し、抗酸化能を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物、その製造方法およびその利用方法に関する。
【０００２】
【発明の技術的背景】
ナリンジン（naringin）は、下記式［Ｉ］：
【０００３】
【化１】
0003967563.tif 000002
【０００４】
で示されるように、ナリンゲニン（５，７，４'-トリヒドロキシフラバノン）の７位の水酸基に、Ｌ-ラムノシル-（α１→２）-グルコースがβ-結合したものをいう。このナリンジンは柑橘類の未熟な果皮に含まれ、毛細血管の強化、出血予防、血圧調整、コレステロール低下等の生理作用のほか、生体の恒常性を維持するＴＮＦの誘導活性も有することが見出されている。ナリンジンの用途は、苦味剤、抗酸化剤、ビタミンＰ強化剤等として飲食物などに使用され、循環器系疾患等の予防剤として医薬品に用いられ、また抗酸化剤、紫外線吸収剤等として化粧品に配合されている。
【０００５】
しかしながら、このナリンジンはアルカリ性水溶液には可溶であるが、水、酸に難溶であり、室温では、１リットルの水に僅かに１ｇ（約0.1W/V%）程度しか溶けないため、その利用分野が限定される。
そこで、ナリンジンの水溶性を高めるための種々の方法が提案されており、例えば、特開平４-１３６９１号公報には、澱粉部分分解物（α-グルコシル糖化合物）共存下でナリンジンに糖転移酵素（α-グルコシル転移活性を有する酵素、例えば、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase）など）を作用させて、下記式［II］で示されるα-グルコシルナリンジンを生成させ、これを分取することによる、α-グルコシルナリンジンの製造方法が開示されている。
【０００６】
【化２】
0003967563.tif 000003
【０００７】
かかる酵素処理により得られるα-グルコシルナリンジンについては、これまで式［Ｉ］で示されるナリンジンのグルコースの３"位の位置にグルコース（Ｇ）がα-１，４結合していることが確認されていた（THE FIRST INTERNATIONAL CONGRESS ON "VITAMINS AND BIOFACTORS IN LIFE SCIENCE" Kobe, September 19,1991, Oral Session, 4-IV-5）。
【０００８】
また、通常の酵素反応では、上記式［II］に示されるように、ナリンジンのグルコースの３"位の位置にグルコース（Ｇ）がα-１，４結合で順次ｎ個（ｎ＝１〜２０個）結合した化合物、またはこれらグルコース結合数の異なるα-グルコシルナリンジンの混合物（「酵素処理ナリンジン」とも言われる。）が生成していると考えられていた。
【０００９】
しかしながら、最近、このようにして得られた酵素処理ナリンジンには、３"  -α-グルコシルナリンジンの他に、新規配糖体として、その４'位もα-グルコシル化された３"，４'-α-グルコシルナリンジンや、ナリンジンの４'位のみがα-グルコシル化された４'-α-グルコシルナリンジンが含まれており、これら４'位がα-グルコシル化された化合物は、酵素処理ナリンジン全体の12％（モル比）ほど含有されていることが報告された（日本農芸化学会大会講演要旨集、２０００年度、６６頁）。
【００１０】
本発明者らは、上記α-グルコシルナリンジン含有物の苦味、性質などについて鋭意研究を重ねたところ、上記酵素処理ナリンジンに含まれる成分のうち、３"-α-モノグルコシルナリンジンは、元のナリンジンに比べてその苦味が著しく強化されており、ナリンジンと同様に抗酸化能も示すのに対して、上記新規配糖体の３",４'-α‐グルコシルナリンジンならびに４'-α-グルコシルナリンジンは、苦味の増強が認められず、また、抗酸化能もほとんど示さないことを見出した。さらに澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られる、主成分の３"-α-グルコシルナリンジンと、３"，４'-α-グルコシルナリンジン、４'-α-グルコシルナリンジン、未反応ナリンジンなどとを含有する溶液に、α-グルコシダーゼ、あるいはα-グルコシダーゼとグルコアミラーゼとを作用させれば、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含み、すっきりした強い苦味を呈し、抗酸化能を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物が、簡単かつ収率よく調製できることなどを見出して本発明を完成するに至った。
【００１１】
【発明の目的】
本発明は、上述のように抗酸化能を保持するとともに、水への溶解性が改良され、苦味がさらに増強された新規なナリンゲニン配糖体組成物を提供し、ナリンジンまたはその誘導体の利用・用途を拡大することを目的とする。すなわち、３"-α-モノグルコシルナリンジンの含量を高めることによって、すっきりした強い苦味を呈し、抗酸化能を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を提供することを目的としている。
【００１２】
また本発明は、上記酵素処理ナリンジンに、さらに別異の簡単な酵素処理を施すことにより、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含み、すっきりした強い苦味を呈し、抗酸化能を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を簡単かつ収率よく調製できる、３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法を提供することを目的としている。
【００１３】
さらに本発明は、上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の利用方法を提供することを目的としている。
【００１４】
【発明の概要】
本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、ナリンゲニン配糖体を含む組成物であって、ナリンゲニン配糖体全量のうち、６０重量％以上が、３"-α-モノグルコシルナリンジンであり、３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量が１０重量％以下であることを特徴としている。
【００１５】
上記組成物の好ましい態様においては、３"-α-モノグルコシルナリンジンがナリンゲニン配糖体全量の６０重量％以上であり、ナリンジンが１０重量％〜３0重量％、３",４'-α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量が１０重量％以下であることが望ましい。
さらに、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、３"-α-モノグルコシルナリンジンを主成分とするナリンジン配糖体組成物の示す苦味が、同一重量％濃度のナリンジンと比較して増強されていることを特徴としている。
【００１６】
本発明に係る上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法は、澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られるα-グルコシルナリンジン配糖体含有溶液に、α-グルコシダーゼ活性またはグルコアミラーゼ活性を有する酵素を添加して作用させて３"-α-モノグルコシルナリンジンを得ることを特徴としている。
【００１７】
上記組成物のより好ましい製造方法は、澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られるα-グルコシルナリンジン配糖体含有溶液に、α-グルコシダーゼ活性を有する酵素とグルコアミラーゼ活性を有する酵素とを添加して作用させて３"-α-モノグルコシルナリンジンを得ることを特徴としている。
【００１８】
上記組成物のさらに好ましい製造方法は、澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られるα-グルコシルナリンジン配糖体含有溶液に、α-グルコシダーゼ活性を有する酵素、あるいはこのα-グルコシダーゼ活性を有する酵素とグルコアミラーゼ活性を有する酵素とを添加して作用させることにより得られる３"-α-モノグルコシルナリンジンを含有する酵素処理液を、多孔性吸着樹脂と接触させて３"-α-モノグルコシルナリンジンを含有する配糖体混合物を該樹脂に吸着させ、次いで、
有機溶媒で３"-α-モノグルコシルナリンジンを溶出して３"-α-モノグルコシルナリンジンを得ることを特徴としている。
【００１９】
本発明による飲食物または医薬品の風味の改良方法は、上記の３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、飲食物または医薬品に添加することを特徴としている。
また、本発明による色素あるいは色素含有物の褪色防止方法は、上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、色素あるいは色素含有物に添加することを特徴としている。
【００２０】
さらに本発明による飲食物、医薬品または化粧品の酸化防止方法は、上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、飲食物、医薬品または化粧品に含有させることを特徴としている。
本発明によれば、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含み、すっきりした強い苦味を呈し、抗酸化能を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物が提供される。
【００２１】
また本発明によれば、いわゆる酵素処理ナリンジンに、さらに別異の簡単な酵素処理を施すことにより、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含み、すっきりした強い苦味を呈し、抗酸化能を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物が、簡単かつ収率よく調製できる。
また本発明によれば、上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の利用方法が提供される。
【００２２】
【発明の具体的説明】
以下、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物、その製造方法およびその利用方法について具体的に説明する。
本明細書では、「酵素処理ナリンジン」とは、ナリンジンおよび澱粉部分分解物、例えばデキストリンとを含有する液に糖転移酵素、例えば、シクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（CGTase）を作用させることにより得られるものを言い、ナリンジンの３"位置にグルコースが複数個付加した生成物である３"-α-グルコシルナリンジンを主成分として含み、その他に、その４'位もα-グルコシル化された３"，４'-α-グルコシルナリンジンや、ナリンジンの４'位のみがα-グルコシル化された４'-α-グルコシルナリンジンをも含むことが多い。
【００２３】
また、「酵素処理モノグルコシルナリンジン」とは、上記「酵素処理ナリンジン」の溶液をさらに別異の酵素（例：α-グルコシダーゼ、グルコアミラーゼ）で処理して得られるものを言い、主成分の３"-α-モノグルコシルナリンジンと、少量の未反応ナリンジンとを含有し、３"，４'-α-グルコシルナリンジンまたは、４'-α-グルコシルナリンジンをほとんど含まない。この「酵素処理モノグルコシルナリンジン」は、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物に包含される。
【００２４】
[３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物]
本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、ナリンゲニン配糖体を含む組成物であって、ナリンゲニン配糖体全量のうちの６０重量％以上が、３"-α-モノグルコシルナリンジンであり、３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量が、ナリンゲニン配糖体の１０重量％以下であることを特徴としている。
【００２５】
上記組成物の好ましい態様においては、３"-α-モノグルコシルナリンジンがナリンゲニン配糖体全量の６０重量％以上であり、ナリンジンが１０重量％〜３0重量％、３",４'−α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量が１０重量％以下であることが望ましい。
本発明の上記組成物において、具体的にはナリンゲニン配糖体全量のうちの６０重量％以上、好ましくは７０重量％以上が３"-α-モノグルコシルナリンジンであることがとくに望ましい。
【００２６】
また、このような３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物では、３"-α-グルコシルナリンジンの４'位がα-グルコシル化された成分である３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよびナリンジンの４'位がα-グルコシル化された成分である４'-α-グルコシルナリンジンの量が、ナリンゲニン配糖体の１０重量％以下であることが望ましい。換言すると、上記組成物では、３"-α-モノグルコシルナリンジンが、３"-α-グルコシルナリンジン、３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよび４'-α-グルコシルナリンジンの合計量の９０重量％以上を占め、好ましくは９５〜１００重量％を占めている。
【００２７】
本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含み、しかもすっきりしたその苦味が強化されている。すなわち、本発明に係る組成物は、３"-α-モノグルコシルナリンジンを主成分とするナリンジン配糖体組成物の示す苦味が、同一重量％濃度のナリンジンと比較して1.3〜1.5倍に増強されている。
【００２８】
さらに詳説すると、本発明者らの研究結果によれば、３"-α-モノグルコシルナリンジンが、元のナリンジンに比べて苦味をきわめて強く呈し、ナリンジンと同様に抗酸化能も示す。これと対照的に、上記酵素処理ナリンジンに含まれる成分の新規配糖体の３"，４'-α-グルコシルナリンジンまたは４'-α-グルコシルナリンジンは、苦味の増強が認められず、また、抗酸化能もほとんど示さないことが見出されている。本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物において、これら３",４'-α‐グルコシルナリンジンおよび／または４'-α-グルコシルナリンジンの含有割合が多いと、組成物の単位重量当りに示す苦味の程度および抗酸化能は、著しく低下することになる。したがって、ナリンジン誘導体組成物の有用性をさらに増すには、ナリンジンの生理的諸作用および抗酸化能を保持するとともに、水などへの溶解性が改良され、しかも強化されたさわやかな苦味を発揮させる配合を有する組成物が好適であり、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物がこの目的に適うものと言える。
【００２９】
このため、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、組成物の具える諸特性に基づき、多様な用途に利用することが可能である。例えば、苦味料、飲食物（健康食品、機能性食品等も含む）および医薬品の風味改善剤、色素の退色防止剤、感受性疾患の予防剤、治療剤（抗感受性疾患剤）、美肌剤、美白剤等の用途に好適に使用できる。
【００３０】
上述した知見のもとに完成された本発明に係る上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物（すなわち、上記「酵素処理モノグルコシルナリンジン」を包含する組成物）を以下、別の観点から説明する。
本発明の組成物には、主成分の３"-α-モノグルコシルナリンジンと、少量の未反応ナリンジンとが含まれている。したがって、従来の酵素処理ナリンジンと比べると、本発明の組成物中に含まれるナリンゲニン配糖体の種類は少なく、分子組成が比較的一様であることも特徴である。すなわち、この組成物に高含量で含有される３"-α-モノグルコシルナリンジンは、ナリンジンの７-Ｏ-ネオヘスペリドシドのグルコース３"位にのみにグルコースが１個だけ付加したもので、ナリンゲニンの４'位はフェノール性水酸基である（式[II]において、Ｇがｎ＝１に相当）。このために、３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、抗酸化作用や苦味を示すのであろうと考えられる。これに対して、上記３"，４'-α-グルコシルナリンジンや４'-α-グルコシルナリンジンでは、何れも、ナリンジンの４'位のＯＨ基がグルコシル基により塞がれているために抗酸化能を示さないのであろうと考えられる。
【００３１】
また、従来の酵素処理ナリンジン、すなわち、ナリンジンとデキストリンなどとを含有する液に糖転移酵素のCGTaseなどを作用させて得られるものは、種々の糖鎖からなる配糖体（３"-α-グルコシルナリンジンなど）の混合物であるのに対して、本発明に係る組成物の主成分である３"-α-モノグルコシルナリンジンは単一化合物であるために、その物理的化学的性質を利用しやすく、産業利用の観点から好都合である。
【００３２】
[３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法]
次に、このような本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法について説明する。
本発明において使用する原料および酵素標品の規格、性状ならびに使用量、酵素反応の条件、酵素処理後の精製法などにより、得られる組成物の組成、収量などは大きく変化する。とくに未反応物として残存するナリンジン量、抗酸化能のない３"，４'-α-グルコシルナリンジン量、４'-α-グルコシルナリンジン量などをなるべく少なくするような製造工程の設計と管理が望ましい。
【００３３】
本発明においては、上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を製造するに際して、澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られる溶液（酵素処理ナリンジン溶液）に、α-グルコシダーゼ活性を有する酵素、またはグルコアミラーゼ活性を有する酵素を添加して作用させ、あるいは、α-グルコシダーゼとグルコアミラーゼの各活性を有する酵素類を同時にまたは別々に作用させている。
【００３４】
その際に用いられる「酵素処理ナリンジン」についてまず始めに説明する。
＜酵素処理ナリンジン＞
α-グルコシダーゼなどの酵素処理の対象となる溶液としては、通常、澱粉部分分解物の共存下でナリンジンに糖転移酵素を作用させて得られる溶液（酵素処理ナリンジン溶液）が用いられる。このような酵素処理ナリンジンは、主成分の３"-α-グルコシルナリンジンを含有し、さらに３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよび／または４'-α-グルコシルナリンジン、未反応ナリンジンなどを含有していることが多い。本発明では、このような成分すなわち３"-α-グルコシルナリンジンを含有し、さらに必要により３"，４'-α-グルコシルナリンジンおよび／または４'-α-グルコシルナリンジン、未反応ナリンジンなどを含有するものであれば、その含量比、濃度などは特に限定されない。好ましくは、処理すべき溶液中の３"-α-グルコシルナリンジン濃度が、０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量％であり、ナリンジン濃度が、０．０２〜１５重量％、好ましくは０．２〜５重量％であり、３"-α-グルコシルナリンジン／ナリンジン（重量比）が、１０〜１５００／１〜７５０、好ましくは５〜５０／１〜２５であるものが望ましい。
【００３５】
上記３"-α-グルコシルナリンジンなどを含有する溶液としては、例えば、次に示すものが挙げられる。
特開平４-１３６９１号公報に記載されているように、ナリンジンに澱粉部分分解物（α-グルコシル糖化合物）共存下で糖転移酵素（α-グルコシル転移活性を有する酵素）を作用させてなり、α-グルコシルナリンジン（３"-α-グルコシルナリンジン、３"，４'-α-グルコシルナリンジン、あるいは４'-α-グルコシルナリンジン）と未反応のナリンジンとを含有しているもの、すなわち、「酵素処理ナリンジン」の溶液である。
＜グルコアミラーゼ、α-グルコシダーゼの各活性を有する酵素類＞
グルコアミラーゼ活性を有する酵素（３"-位のグルコースを切断する酵素）としては、具体的には、例えば、グルコアミラーゼ（グルクザイムＮＬ４，２，天野製薬（株）製）、セルラーゼＡ＜アマノ＞３［天野製薬（株）製］、グルコチーム（長瀬産業（株）製）、ユニアーゼ３０（（株）ヤクルト製）、ナリンギナーゼ（田辺製薬（株）製）等のように、α-１，４グルコシル結合をグルコース単位で切断しうる酵素が挙げられる。
【００３６】
α-グルコシダーゼ活性を有する酵素（ナリンジンの主に４'-位のグルコースを切断する酵素）としては、具体的には、例えば、セルラーゼＡ＜アマノ＞３、トランスグルコシダーゼ、＜アマノ＞（天野製薬（株）製）等が挙げられる。
これらの酵素のうちグルコアミラーゼ活性を有する酵素、例えば、グルコチームは、上記「酵素処理ナリンジン」溶液中のα-グルコシルナリンジン１００重量部当たり、好ましくは0.01〜10重量部、さらに好ましくは0.2〜１重量部程度の量で用いられる。
【００３７】
またα-グルコシダーゼ活性を有する酵素、例えばトランスグルコシダーゼ＜アマノ＞は、上記「酵素処理ナリンジン」溶液中のナリンジン１００重量部当たり、好ましくは0.001〜10重量部、さらに好ましくは0.01〜１重量部程度の量で用いられる。
また、これらの酵素を、上記「酵素処理ナリンジン」溶液中のα-グルコシルナリンジンなどに作用させるには、通常、ｐＨ３〜７、好ましくはｐＨ４〜５で、通常４０〜７０℃、好ましくは５０〜６０℃の温度で、通常0.5〜４８時間、好ましくは６〜２４時間程度保持すればよい。
【００３８】
α-グルコシルナリンジンは、グルコアミラーゼ活性を有する酵素の加水分解作用を受けて、このα-グルコシルナリンジンのナリンゲニン骨格７位にβ−結合しているグルコース基の３"位にさらにα-１，４結合でｎ個順次結合（ｎ＝１〜２０個）しているグルコースが、３"位の１個を残して加水分解され、上記式［II］中、ｎ＝１の３"-α-モノグルコシルナリンジンになる。
【００３９】
α-グルコシダーゼをα-グルコシルナリンジン（モノグルコシルナリンジンも含む。）に作用させても、その３"位にα−結合しているグルコースのうち、３"位の１個目のグルコースはほとんど加水分解されない。しかし、α-グルコシダーゼは、酵素処理ナリンジンに少量成分として含有されている４'位にグルコースがα−結合したα-グルコシルナリンジンの当該グルコースを加水分解する。またモノグルコシルナリンジンにおいてナリンゲニン骨格の７位にβ−結合しているグルコースを加水分解することはない。
【００４０】
本発明では、上記「酵素処理ナリンジン」溶液への上記各酵素の作用は、α-グルコシダーゼ、グルコアミラーゼのいずれかを単独で作用させてもよく、またα-グルコシダーゼとグルコアミラーゼの両者を作用させてもよい。このようにα-グルコシダーゼとグルコアミラーゼの両者を作用させる場合には、グルコアミラーゼとα-グルコシダーゼを任意の順序に、または各活性を有する酵素を同時に添加してもよい。またこれらの各酵素は一度にあるいは少量ずつ添加することができる。本発明では、これらのうち、グルコアミラーゼとα-グルコシダーゼの各活性を有する酵素を、同時に、上記「酵素処理ナリンジン」溶液に添加する方法が、酵素処理効率が高い上に、簡便で好ましい。
【００４１】
なお、グルコアミラーゼ活性、α-１，２-ラムノシダーゼ活性、α-グルコシダーゼ活性のうち２つ以上の活性を有する酵素（例：セルラーゼＡ＜アマノ＞３［天野製薬（株）製］）も用いることができる。
＜精製＞
本発明では、上述した方法で得られる３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物をそのまま使用することもできるが、多孔性吸着樹脂を用いて３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物から、３"-α-モノグルコシルナリンジン以外のα-グルコシル糖化合物などの夾雑成分を除いて用いてもよい。さらにイオン交換樹脂（Ｈ型、ＯＨ型）などで脱塩、脱色して用いてもよい。
【００４２】
これらの方法を適用することにより、上記組成物において、さわやかな苦味を強く呈する３"-α-モノグルコシルナリンジンの比率が高められる。
また、上記３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物から、例えばクロマトグラフィーによって分離するなどの公知方法によって３"-α-モノグルコシルナリンジンを分取してもよい。すなわち、多孔性吸着樹脂に３"-α-モノグルコシルナリンジンとナリンジンを吸着させた後、溶出させる含水アルコール等の含水溶出剤の溶剤含有率を変えて、３"-α-モノグルコシルナリンジンとナリンジンを分離する方法などにより３"-αーモノグルコシルナリンジン含有組成物から３"-α-モノグルコシルナリンジンを分取して用いてもよい。このように３"-α-モノグルコシルナリンジンを純粋に近い状態にまで精製することも可能であるが、その精製に要するコストと実際の利用上の要件との兼ね合いにより選択されるであろう。
【００４３】
[組成物の利用態様]
上記の製造方法により得られた３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、水難溶性のナリンジンと同等の抗酸化能を有するとともに、水への溶解が良好であり、しかもさわやかな苦味がナリンジンよりも強化されている特徴を有する。そうした特徴は、上記組成物が、ナリンジンと同等の苦味を呈するが抗酸化能を発揮しない３"，４'-α-グルコシルナリンジン、あるいは４'-α-グルコシルナリンジンをきわめて低い含量としていることに基づく。
【００４４】
この組成物が有する性質、とくにすっきりした苦味、抗酸化能などに着目して、多方面において種々の利用形態が可能である。以下、このものが最も有用に利用される態様を例として挙げるが、該組成物の用途がこれらに限定されるわけではない。
３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物中の３"-α-モノグルコシルナリンジンは、食品等から体内に摂取吸収されると生体内酵素の作用を受けて元のナリンジンに戻り、ビタミンＰとしての諸機能を発揮することができる。したがって、例えば、ビタミンＰ強化剤、循環器系疾患、感受性疾患等の予防剤、治療剤（抗感受性疾患剤）などの医薬品に、ナリンジンに代わって３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を利用することができる。さらに３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、コレステロール低下作用、血圧低下作用、抗アレルギー作用などを有するので、健康食品あるいは機能性食品等に３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を利用することができる。
【００４５】
また、ナリンジンが示す苦味は、ラムノースとグルコースとの１→２結合の点にあると言われる。３"-α-モノグルコシルナリンジンは、ナリンジンに比較してすっきりとした苦味をさらに強く呈する。後述するように、同一モル濃度において３"-α-モノグルコシルナリンジンは、ナリンジン、３",４'-グルコシルナリンジン、４'-α-グルコシルナリンジンよりも約2倍の苦味を示すことが本発明者らの本研究により明らかとなった。本発明に係る組成物においては、３"-α-モノグルコシルナリンジンをナリンゲニン配糖体全量の60重量％以上に相当する量を含む。したがって、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の示す苦味は、同一重量％濃度のナリンジンと比較して1.3〜1.5倍に増強されている。このため苦味料として飲食物に添加することにより、その味覚に深みを与えて洗練された風味とすることができ、しかもナリンジンを用いる場合に比べより少量ですむ。したがって、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含む組成物は、飲食物（健康食品、機能性食品等を含む）、あるいは医薬品など人や動物が経口摂取するものに少量添加することにより、飲食物、医薬品などの苦味を補強したり、また酸味、塩から味、渋味、青臭み、エグ味を低減するなどして、風味を大きく改善できる。
【００４６】
例えば、上記組成物をマーマレード、ジャム、果汁飲料などの飲食物に適量添加することによりさわやかな苦味を付与できる。さらに苦味を賞味する飲食物のみならず、柑橘系のゼリー、ジュース、アイスクリーム、ジャム、缶詰等に添加することによりその本物らしさを高めることができる。また、甘味料に少量の本組成物を併用すれば、飲食物に平板な甘味ではなくまろやかな甘味を付与する効果がある。
【００４７】
本発明に係るこの組成物は、上記したように、飲食物（健康食品、機能性食品等を含む）、あるいは医薬品など広範に使用することができるが、該組成物中に高含量で含まれる３"-α-モノグルコシルナリンジンが有する抗酸化能が、これらの配合された物品の品質保持にも有用である。たとえば、経口投与される医薬品などの食味改善と抗酸化性の強化にも使用できる。そのような医薬品としては、たとえば、経腸栄養剤、補助栄養剤、水薬、シロップ剤などが挙げられる。さらに、飲食物（健康食品、機能性食品等を含む）などにおいても、その添加により脂質の酸敗、香料または色素の酸化変質、光による劣化変質などに対して防止する効果を発揮することが期待される。
【００４８】
本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、医薬部外品、外用医薬品、化粧品などに配合すれば、抗酸化作用の発揮が期待できる。すなわち、この３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物を、色素に添加して用いることにより、あるいは染料、画材、香料、食品、ペンキなどの色素含有物に添加（配合）して用いることにより、例えばこの色素で染色された衣料などの退色を防止できる。
【００４９】
ナリンジンは特有の紫外部吸収スペクトルを持ち、可視部に目立った吸収がないためほとんど無色であり、従来から、紫外線で退色の起きやすい色素、とくに天然色素の退色防止に利用が試みられてきたが、ナリンジンは水への溶解度が低いために使いづらいという欠点があった。
これに対して本発明に係る、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含む組成物は、沈澱を生じにくい水溶性のものであるため、色素の退色防止に幅広く利用できる。特にパプリカ、クチナシ、β-カロチン、アスタキサンチン等のカロチノイド系色素に有効であるが、赤キャベツ、ムラサキイモ等のアントシアニン色素、ブドウ果皮、ベニバナ黄、ベニバナ赤、赤ダイコン等のフラボノイド色素、ビートレッド、ウコン色素、クチナシ青、紅麹色素等にも効果的に使うことができる。
【００５０】
このような３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含む組成物を色素の退色防止に用いる場合、色素で着色された試料重量当たり、0.001〜0.2重量％、好ましくは0.005〜0.1重量％、より好ましくは0.01〜0.05重量％の量で使用することが望ましい。
この場合、酵素処理ルチン、酵素処理ヘスペリジン、Ｌ-アスコルビン酸（またはＬ-アスコルビン酸ソーダ）の何れか１つまたは２つ以上を使用することにより、上記色素の退色防止に相乗効果が得られる。天然物由来の本組成物は、色素を使用する幅広い組成物、製剤に添加することができるが、色素を使用する化粧品にも好適である。 たとえば、口紅、歯磨き、リップクリーム、白粉、香水などに好ましく使用することができる。
【００５１】
また、このように３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含む本発明の組成物は、特有の紫外部吸収特性を持つとともに、色が極めて薄いなどの特質を持つため、たとえばＵＶカット剤などの化粧品においては、特に有用である。
【００５２】
【発明の効果】
本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、３"-α-モノグルコシルナリンジンを高含量で含むため、ナリンジンと同様に抗酸化能を有するとともに、ナリンジンに比べて、さわやかな苦味が著しく強化され、水溶性に優れ、白濁（結晶析出）が生じにくいなどナリンジンの諸特性が改善されている。
【００５３】
また、本発明による３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法によれば、かかる優れた特性を有する３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物が、前記「酵素処理ナリンジン」から収率よく簡単に得られる。
さらに、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物は、飲食物、医薬品、化粧品、添加物などに広範に使用できる。本組成物は、増強された苦味を活かして飲食物などの風味を改善することのほか、ナリンジンと同様、添加された色素や香料の酸化による品質劣化または光による劣化を防止する効果を発揮する。
【００５４】
本発明の組成物は、飲食物、医薬品、化粧品などにおいて天然物由来の添加物として位置付けられるので、生体親和性が高く安全であり、しかも製造コストは、上昇しないなどの利点も有する。
【００５５】
【実施例】
以下、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物の製造方法について実施例に基づいてさらに具体的に説明するが、本発明は、このような実施例により何ら限定されるものではない。
なお、以下の例において、「％」は、特にその趣旨に反しない限り「重量％」の意味である。
【００５６】
【実施例１】
ナリンジン50.0ｇとＤＥ８のデキストリン200ｇを500ｍＬの水に加熱溶解し、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ7.0に調整し、バチルス・ステアロサーモフィルス由来のシクロデキストリングルカノトランスフェラーゼ（株式会社  林原生物化学研究所製）をデキストリン１ｇ当たり15単位加えて、68℃で48時間反応させた。反応終了後、酵素を加熱失活させてから、ろ過して「酵素処理ナリンジン溶液」（Ａ液）を得た。
【００５７】
Ａ液を下記条件にてＨＰＬＣ分析し、次式に基づいて計算すると、ナリンジンの反応率は74％であり、未反応のナリンジンは、26％であった。ＨＰＬＣクロマトグラムを図１に示す。
【００５８】
【数１】
0003967563.tif 000004
【００５９】
<ＨＰＬＣ分析条件>
カラム：Ｃ１８
溶離液：水／アセトニトリル＝80／20（ｖ／ｖ）
検出：280ｎｍ
温度：40℃
流速：1.0ｍＬ／分
<グルコアミラーゼ反応>
Ａ液の一部をｐＨ4.5に調整しグルコアミラーゼ（グルコチーム（天野製薬（株）製））を1.0ｇ加えて、55℃で24時間反応させた。反応終了後、酵素を加熱失活させてから、ろ過してグルコアミラーゼ処理ナリンジン溶液（Ｂ液）を得た。Ｂ液を上記条件にてＨＰＬＣによる分析をおこなった。ＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。
【００６０】
この図２によれば、Ａ液をグルコアミラーゼ反応処理することにより、図１の酵素処理ナリンジンのピーク群は、３"‐α-モノグルコシルナリンジンと未反応ナリンジンおよび３"，４'-α-ジグルコシルナリンジンと４'-α-モノグルコシルナリンジンのピークに集約されていることが分かる。したがって、Ｂ液にはこれらの配糖体が含まれており、３"位置に２個以上のグルコースが付加した配糖体は実質的に含まれない。
【００６１】
なお、モノグルコシルナリンジンの確認は、該ピークのクロマトグラフィー分取画分について酸性条件下で加水分解し、ナリンゲニンと単糖とのモル比が１：３であることを確認することで行った。
＜α-グルコシダーゼ反応>
Ｂ液の一部をｐＨ4.5に調整し、α-グルコシダーゼ（トランスグルコシダーゼＬ<アマノ>）を１ｍＬ加えて、55℃で24時間反応させた。反応終了後、酵素を加熱失活させてから、ろ過して「酵素処理モノグルコシルナリンジン」の溶液（Ｃ液）を得た。Ｃ液を上記条件にてＨＰＬＣ分析した。ＨＰＬＣクロマトグラムを図３に示す。
【００６２】
この図３によれば、Ｂ液をα-グルコシダーゼ反応処理することによって、図２のグルコアミラーゼ処理ナリンジンのピーク群中に存在していた３"，４'-α-ジグルコシルナリンジンと４'-α-モノグルコシルナリンジンのピークはほぼ消失しており、モノグルコシルナリンジンと未反応ナリンジンとの２ピークに集約されていることが分かる。このＣ液は、「酵素処理モノグルコシルナリンジン」の溶液に相当するものであり、Ｃ液中の混合物は、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物に包含されるものである。
【００６３】
Ａ液、Ｂ液、Ｃ液について行ったＨＰＬＣクロマトグラムのピークの濃度比から求めた配糖体骨格のナリンゲニン比の分析結果を表１に示す。この表１の値とナリンジン配糖体のそれぞれの分子量から算出したＡ液、Ｂ液、Ｃ液のナリンゲニン配糖体比を表２に示す。さらに、表１から算出したＢ液、Ｃ液のナリンジン配糖体比の結果を表３に示す。
【００６４】
【表１】
0003967563.tif 000005
【００６５】
【表２】
0003967563.tif 000006
【００６６】
【表３】
0003967563.tif 000007
【００６７】
【苦味試験１】
上記のＡ液（「酵素処理ナリンジン」の溶液に相当）およびＣ液（「酵素処理モノグルコシルナリンジン」の溶液に相当）を凍結乾燥してそれぞれ粉末にした後に、各0.10％水溶液を調製した。パネル８名にてこの２つの水溶液の苦味強度を比較したところ、全員がＡ液からの調製液に較べ、明らかにＣ液からの調製液の方が苦味が強いと判定した。
【００６８】
【苦味試験２】
上記Ｂ液から３"-α-モノグルコシルナリンジン、３"，４'-α-ジグルコシルナリンジン、４'-α-モノグルコシルナリンジン画分を分取し、試薬ナリンジンを対照にして同一モル濃度にてパネル８名による苦味の官能検査を行った。その結果、もとのナリンジンと比較して、３"-α-モノグルコシルナリンジンは、苦味度がほぼ２倍に増強されていた。これに対して、３"，４'-α-ジグルコシルナリンジン、４'-α-モノグルコシルナリンジン画分には苦味の増強は見られなかた。
【００６９】
【実施例２】
実施例１と同様に「酵素処理ナリンジン」溶液（Ａ液相当）を調製し、ｐＨ4.5に調整後、グルコアミラーゼ（グルコチーム（天野製薬（株）製））1.0ｇおよびα-グルコシダーゼ（トランスグルコシダーゼL＜アマノ＞）１ｍL加えて、55℃で24時間反応させた。反応終了後、酵素を加熱失活させてから、ろ過して「酵素処理モノグルコシルナリンジン」の溶液（Ｃ液相当）を得た。
【００７０】
次いで、1.5Lの中間極性多孔性吸着樹脂（ＸＡＤ−７）が充填され、高濃度のエタノール水溶液で活性化しておいたカラムに上記酵素処理モノグルコシルナリンジン溶液（Ｃ液相当）を通過させ、次いでカラム容量の２倍量の水で洗浄してから50％（ｖ/ｖ）エタノール水溶液３Ｌで樹脂への吸着成分を溶離させた。
溶離液のエタノールを除いてから、乾燥し酵素処理モノグルコシルナリンジン58ｇを得た。本品を実施例１と同様の条件でHPLC分析したところ、含まれている成分は３"-α-モノグルコシルナリンジンとナリンジンのみで、その他の成分はほとんど検出されなかった。本品は、本発明に係る３"-α-モノグルコシルナリンジン含有組成物に包含されるものである。
【００７１】
【実施例３】
実施例２で調製した酵素処理モノグルコシルナリンジンを用いて、表４に示した配合組成の低カロリータイプのグレープフルーツジュース(配合品Ａ)を調製した。なお、対照として、この酵素処理モノグルコシルナリンジンを配合しなかった以外は配合品Ａと同様であるグレープフルーツジュース（比較品）も調製した。
【００７２】
酵素処理モノグルコシルナリンジンを加えた配合品Ａは、比較品に較べてグレープフルーツ本来の苦味が保たれており、味に深みがあり好ましい風味であった。
【００７３】
【表４】
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【００７４】
【実施例４】
野菜ジュース（人参、レタス、パセリ、セロリ、水がらし、キャベツ、ほうれん草）100ｇに対し、実施例２で調製した「酵素処理モノグルコシルナリンジン」を20ｍｇ（0.02％）添加混合し（試験区）、無添加のジュース（対照区）と呈味比較した。
【００７５】
対照区と比較して、試験区は青くさ味が少なくなるとともに、ほど良いさわやかな苦味が全体の味をまとめ上げ、スッキリした味になり、飲みやすくなっていた。
【００７６】
【実施例５】
0.05重量％のクチナシ黄色素溶液（クエン酸緩衝液、ｐＨ3.3）に、酵素処理モノグルコシルナリンジン（実施例２で得られた「酵素処理モノグルコシルナリンジン」）を最終含有量が0.02〜0.04重量％となるように添加してから、表５に示すような酵素処理ルチン（成分組成：α-モノグルコシルルチン77.5重量％、イソケルシトリン14.5重量％、糖類5.2重量％、水分2.8重量％含有、商品名「αＧルチンＰＳ」東洋精糖株式会社製）、およびＬ-アスコルビン酸のいずれか一方、または両方を同時に添加した。次いで、密閉容器中で加熱殺菌処理をした後、５℃、蛍光灯照射（照度７，０００ルクス）下で保持し、一日おきにクチナシ黄色素の残存率（％）を、分光光度計で442ｎｍの波長にて色素溶液の吸光度を測定することにより算出した。
【００７７】
試験条件およびその結果を表５に示した。なお、無添加の区を対照区（試験番号９）として、併せて表５に示した。また、酵素処理ルチンのみ添加した区を試験番号１０とし、Ｌ-アスコルビン酸のみ添加した区を試験番号１１として、併せて表５に示した。
表５によれば、酵素処理モノグルコシルナリンジンをクチナシ黄色素溶液に添加することにより、クチナシ色素残存率は大幅に向上したことが分かる。また、酵素処理モノグルコシルナリンジンとともに酵素処理ルチン、Ｌ-アスコルビン酸のいずれか一方を単独で用いるか、あるいは両方を併用することにより相乗効果が得られたことが分かる。
【００７８】
【表５】
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【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、実施例１で得られた酵素処理ナリンジン溶液（Ａ液）のＨＰＬＣクロマトグラムである。横軸は溶出時間（分）を表す。
【図２】図２は、実施例１で得られたグルコアミラーゼ処理ナリンジン溶液（Ｂ液）のＨＰＬＣクロマトグラムである。横軸は溶出時間（分）を表す。
【図３】図３は、実施例１で得られた酵素処理モノグルコシルナリンジン溶液（Ｃ液）のＨＰＬＣクロマトグラムである。横軸は溶出時間（分）を表す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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