(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを有効成分とする感冒治療薬。
【請求項２】
イブプロフェン１重量部に対して、乾燥重量として２〜１５重量部の柴胡桂枝湯エキスを配合してなる請求項１に記載の感冒治療薬。
【請求項３】
イブプロフェン１重量部に対して、乾燥重量として５〜７重量部の柴胡桂枝湯エキスを配合してなる請求項１に記載の感冒治療薬。
【請求項４】
イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを、水不溶性のポリマーおよび水膨潤性のポリマー中に分散させてなる、イブプロフェンの苦味をマスキングした固形製剤である請求項１〜請求項３のいずれか１項に記載の感冒治療薬。
【請求項５】
固形製剤が顆粒剤である請求項４に記載の感冒治療薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は感冒治療薬に関する。更に詳しくは、イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを有効成分とする感冒治療薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
イブプロフェンは抗炎症作用、鎮痛作用および解熱作用を有し、炎症性、疼痛性の疾患、例えば感冒等に用いられているが、経口投与した場合、副作用として胃腸障害をおこすことが知られている。
【０００３】
イブプロフェンの経口投与による胃腸障害を軽減する方法として、坐剤としたり［応用薬理、24巻、549〜560頁(1982)]、イブプロフェンにアセトアミノフェンとマグネシウム系制酸剤を併用したり(特開平5-148139号)することが知られているが、必ずしも満足な結果は得られていない。
【０００４】
イブプロフェン［化学名；2-(4-イソブチルフェニル）プロピオン酸］には、Ｒ（−）およびＳ（＋）のエナンチオマー（以下、それぞれＲ体、Ｓ体という）が存在するが、活性本体はＳ体であることが知られている。また、イブプロフェンは、通常ラセミ体で投与（服用）されるが、投与後、Ｒ体は体内でＳ体に変換される[Br.J.Clin.Pharmac.、19巻、669〜674頁、(1985)]。
【０００５】
柴胡桂枝湯は、腹痛を伴う胃腸炎、微熱、寒け、頭痛、吐き気等のある感冒、風邪の後期の症状に用いられているが、イブプロフェンとの併用効果については知られていない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者等はイブプロフェンを有効成分とする感冒治療薬において、イブプロフェンの抗炎症作用、鎮痛作用および解熱作用を増強させるとともにイブプロフェンの胃腸障害の軽減をはかることを目的として種々検討を行った。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、種々検討を行った結果、柴胡桂枝湯エキスがイブプロフェンの抗炎症作用、鎮痛作用および解熱作用を増強させるとともにイブプロフェンの胃腸障害を軽減させることを見いだし、この知見に基づき本発明を完成した。
【０００８】
以下、本発明のイブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを有効成分とする感冒治療薬について詳細に説明する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられる柴胡桂枝湯エキスは重量比で、柴胡２．５〜８．５、半夏１．３〜６．５、桂枝あるいは桂皮１．０〜４．０、芍薬１．０〜６．０、黄ごん１．０〜３．０、大棗１．０〜５．０、人参０．７〜３．０、甘草０．３〜２．２および生姜０．５〜２．０からなる混合生薬、または、好ましくは柴胡４．０〜６．０、半夏４．０〜５．０、桂枝あるいは桂皮１．５〜３．０、芍薬１．５〜３．０、黄ごん１．５〜２．５、大棗１．５〜２．５、人参１．５〜２．５、甘草１．０〜２．０および生姜０．５〜１．０からなる混合生薬、または、更に好ましくは柴胡５．０、半夏４．０、桂皮３．０、芍薬３．０、黄ごん２．０、大棗２．０、人参２．０、甘草２．０および生姜１．０からなる混合生薬から得られる。
【００１０】
柴胡桂枝湯エキスは通常、濃縮エキスまたは乾燥エキス末として用いられ、これらの柴胡桂枝湯エキスは以下のようにして製造することができる。
【００１１】
即ち、まず上記混合生薬に対して重量比で５〜２５倍、好ましくは８〜２０倍の水、水溶性有機溶剤あるいはこれらの混合溶剤を加え、これを通常８０〜１００℃で３０分〜２時間加熱して柴胡桂枝湯を煎出する。上記水溶性有機溶剤としてはエタノ−ルが好ましい。
【００１２】
次に、煎出終了後、煎出液を濾過あるいは遠心分離して煎出滓を除去し、次いで、通常の濃縮手段、例えば減圧濃縮により濃縮エキスとするか、あるいは通常の乾燥手段、例えば減圧乾燥、噴霧乾燥あるいは凍結乾燥により乾燥エキス末とする。
【００１３】
本発明の感冒治療薬（以下、本発明薬剤という）は、イブプロフェン１重量部に対して、乾燥重量として２〜１５重量部、または、好ましくは５〜７重量部の柴胡桂枝湯エキスを配合することによって製造される。
【００１４】
本発明薬剤はイブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを有効成分として含有するカプセル剤、錠剤、顆粒剤、細粒剤あるいは散剤等の各種固形製剤を包含する。
これら各種固形製剤は賦形剤、崩壊剤等の通常の医薬品添加物、例えば、乳糖、ヒドロキシプロピルセルロ−ス、トウモロコシでんぷん、結晶セルロ−ス、カルメロースカルシウム、無水ケイ酸、合成ケイ酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム等を適宜加えて常法により製造することができる。
【００１５】
また、本発明薬剤においては、イブプロフェンが特有の苦みを有することから、該苦みをマスキングした製剤が服用上好ましい。
【００１６】
マスキングの方法としては、薬物を被覆剤で被覆する方法（フィルムコーティング法）あるいは薬物を基剤中に分散させてマトリックス状にする方法（マトリックス法）等の公知のマスキング方法が用いられる。
【００１７】
即ち、フィルムコーティング法は前記のようにして得られる錠剤、顆粒剤、細粒剤あるいは散剤に、例えば胃溶性、腸溶性ポリマーまたは水溶性、水不溶性ポリマー等の被覆剤を用いて皮膜を施すことによって容易に行うことができる。
【００１８】
上記被覆剤の具体例としては、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、ポリビニルアセチルジエチルアミノアセテート、セルロースアセテートフタレート、メタアクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース  ２９１０、メチルセルロース、エチルセルロース等が挙げられる。
【００１９】
マトリックス法はイブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを、水不溶性のポリマ−および／または水膨潤性のポリマ−よりなる基剤と練合し、造粒して、イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとが、該ポリマ−よりなる基剤中に分散されたマトリックス状とした後、常法により錠剤、顆粒剤、細粒剤あるいは散剤に調製することによって行うことができる。
【００２０】
上記水不溶性のポリマ−の具体例としては、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート等が挙げられる。また、水膨潤性のポリマ−の具体例としては、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、アミノアルキルメタアクリレートコポリマー、カルメロースカルシウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、カルボキシビニルポリマー等が挙げられる。
【００２１】
また、上記基剤中にヒドロキシプロピルセルロース等の水溶性のポリマ−、硬化油、ステアリン酸等の高級脂肪酸および／または蔗糖脂肪酸エステル等の医薬添加物を適宜、添加することができる。
【００２２】
上記固形製剤の中で、苦みを効果的にマスキングし、かつ、薬効が速やかに発現する等の点で、イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを、低置換度ヒドロキシプロピルセルロースとエチルセルロースとに分散させてマトリックス状にして得られる顆粒剤が服用上特に好ましい。
【００２３】
上記顆粒剤はイブプロフェン１重量部に対して、乾燥重量として２〜１５重量部、または、好ましくは５〜７重量部の柴胡桂枝湯エキスを配合し、これらにイブプロフェン１重量部に対して、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、１〜１．５重量部およびエチルセルロース０．３〜０．４重量部を加えて混合した後、エタノールを添加して練合し、造粒、乾燥、篩過することにより製造することができる。
【００２４】
本発明薬剤は、感冒治療薬として投与される。本発明薬剤の投与量は、患者の病態、年齢、体重等によって一定しないが、通常、成人に対して１日当たり有効成分として０．１〜１０ｇであり、これを１度にまたは２〜３回に分けて経口投与する。
【００２５】
【発明の効果】
本発明薬剤においては、イブプロフェンの血漿中濃度がイブプロフェン単独投与時に比して増加する（試験例１）ことから、イブプロフェンの抗炎症作用が増強される。本発明薬剤においては、イブプロフェンの鎮痛作用（試験例２）ならびに解熱作用（試験例３）がイブプロフェン単独投与時に比して増強される。
【００２６】
また、柴胡桂枝湯エキスが抗潰瘍作用を有すること（試験例４）から、本発明薬剤においては、イブプロフェンの胃腸障害が軽減される。
【００２７】
更に、本発明薬剤は、低毒性である（試験例５）。
【００２８】
以下に試験例を挙げて本発明を説明する。
【００２９】
以下の試験例において、イブプロフェンはラセミ体（Ｒ体／Ｓ体＝５５／４５）を用いた。また、柴胡桂枝湯エキスは後記製造例１に準じて調製した乾燥エキス末を用いた。なお、本発明薬剤は上記、イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを適宜配合して用いた。
【００３０】
試験例１
イブプロフェンの血漿中濃度：
（１）検体
▲１▼  本発明薬剤（イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスの配合比は1対6.11)
▲２▼  イブプロフェン
（２）試験方法
一夜絶食したウイスター(Wistar)系雄性ラット(体重220〜250g、1群5匹)の右大腿動脈にエ−テル麻酔下カニュ−レを施し、随時採血できるようにした。各検体を蒸留水−5%アラビアゴムエマルジョンに溶解または懸濁させて、［本発明薬剤は106.7mg/kg（イブプロフェン15mg/kgに相当）、イブプロフェンは15mg/kg]経口投与し、投与後経時的に採血して、この血液を１００００×ｇ、１０秒間遠心分離後、血漿を得た。
【００３１】
このようにして得られた血漿５０μｌに1%塩酸５０μｌ、ヘキサン／2-プロパノ−ル(9/1)１８０μｌとヘキサン／2-プロパノ−ル(100/1)に溶解した内部標準物質（m-トルイル酸40μg/ml)20μlを加え、攪拌、遠心分離後、上清を試料溶液とした。これを以下の測定条件を用いた高速液体カラムクロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法によって測定し、内部標準物質に対するＲ体およびＳ体のピ−ク高さ比からＲ体およびＳ体の濃度をそれぞれ算出した。
【００３２】
ＨＰＬＣ測定条件：
カラム：キラルセルＴＭＯＤ（ダイセル化学工業社製、4.6mm × 250mm)
カラム温度：35℃
移動相：ヘキサン／2-プロパノ−ル／1%トリクロロ酢酸(100/1/0.01)
流速：1.0ml/min
検出：UV220nm
（３）試験結果
ラット血漿中Ｓ体（活性本体）の濃度推移を図１に、Ｒ体の濃度推移を図２に示した。
【００３３】
図１から明らかなように、本発明薬剤投与群のＳ体（活性本体）の血漿中濃度は、イブプロフェン投与群のそれと比べて投与直後から増加傾向が認められ、特に投与１０〜１５分においては有意な増加が認められた。
【００３４】
また、図２から明らかなように、本発明薬剤投与群のＲ体の血漿中濃度は、Ｒ体が体内でＳ体に変換されることから、Ｓ体に比べて低値を示したが、上記のＳ体の場合と同様に、イブプロフェン投与群のそれと比べて投与直後から増加傾向が認められ、特に投与１０〜１５分においては有意な増加が認められた。
【００３５】
試験例２
鎮痛作用：
（１）検体
▲１▼  本発明薬剤（イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスの配合比は1対6.67)
▲２▼  イブプロフェン
▲３▼  柴胡桂枝湯エキス
（２）試験方法
一夜絶食した５週齢のｄｄＹ系雄性マウス(体重20〜26g、1群11〜16匹)に、各検体を蒸留水−5%アラビアゴムエマルジョンに溶解または懸濁させて図３に示す用量(0.1ml/10g)を経口投与した。投与１時間後に、0.7%酢酸0.1ml/10gを腹腔内投与した。次に、酢酸投与５分後から２０分後までの１５分間のマウスのライシング(writhing)数を測定し、これと対照群［蒸留水−5%アラビアゴムエマルジョンのみを経口投与した群（検体非投与群）］のライシング数より次式に従って抑制率を算出した。また、対照群の平均ライシング数の５０％以下の個体を有効とし、プロビット(Probit)法によってED50値を求めた。
【００３６】
【数１】
0003985874.tif 000002
（３）試験結果
結果を図３および表１に示した。
【００３７】
【表１】
0003985874.tif 000003
本発明薬剤のED50値は359.8mg/kgであるが、イブプロフェン量で比較すると、イブプロフェンのみを投与した場合よりも約１．３倍効力が増加した。
【００３８】
試験例３
解熱作用：
（１）検体
試験例２に同じ。
（２）試験方法
ウイスター系雄性ラット(体重182〜222g)の背部皮下に20%乾燥酵母生理食塩液10ml/kgを注射した。酵母注射後一夜絶食し、１７時間後に直腸温が１．２℃以上上昇したラット(1群6匹)に、各検体を蒸留水−5%アラビアゴムエマルジョンに溶解または懸濁させて、［本発明薬剤は11.5mg/kg（イブプロフェン1.5mg/kgに相当）、イブプロフェンは1.5mg/kg、柴胡桂枝湯エキスは12.5mg/kg]経口投与した。次いで、検体投与後１時間毎に５時間後まで直腸温を測定した。
【００３９】
また、対照群［蒸留水−5%アラビアゴムエマルジョンのみを経口投与した群（検体非投与群）］について、上記と同様に直腸温を測定した。
（３）試験結果
結果を図４および図５に示した。
【００４０】
図４から明らかなように、イブプロフェン投与群は投与１時間後に有意な直腸温の低下が見られたが、２時間目以降対照群との間で差は見られなかった。これに対し、本発明薬剤投与群は投与１〜３時間まで有意な直腸温の低下が見られ、イブプロフェンの解熱作用の増強が示された。
【００４１】
また、図５に示す通り柴胡桂枝湯エキス投与群の直腸温はほとんど変化しなかった。
【００４２】
試験例４−（１）
抗潰瘍作用：
（１）検体
▲１▼  柴胡桂枝湯エキス
（２）試験方法
一夜絶食したSD系雄性ラット(体重174〜206g、1群8〜9匹)に、検体を蒸留水に懸濁させて、図６に示す用量を経口投与した。経口投与３０分後にアスピリン200mg/kgを経口投与してアスピリン潰瘍を誘発させた。その４時間後にラットを屠殺し、直ちに胃を摘出し、ホルマリンで固定した。大湾部を切開した後、損傷の長さ(mm)を実体顕微鏡で測定し、一匹当りの損傷の長さの総計を潰瘍係数(ulcer index)とした。
【００４３】
また、対照群［蒸留水−5%アラビアゴムエマルジョンのみを経口投与した群（検体非投与群）］について、上記と同様に潰瘍係数を求めた。
（３）試験結果
結果を図６に示した。
【００４４】
図６から明らかなように、柴胡桂枝湯エキス投与によりアスピリンによる胃粘膜障害が抑制された。従って、イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを含有する本発明薬剤においては、イブプロフェンの胃腸障害が柴胡桂枝湯エキスによって軽減される。
【００４５】
試験例４−（２）
抗潰瘍作用：
（１）検体
▲１▼  柴胡桂枝湯エキス
（２）試験方法
一夜絶食したSD系雄性ラット(体重184〜208g、1群5〜6匹)に、検体を蒸留水に懸濁させて、図７に示す用量を経口投与した。経口投与３０分後にイブプロフェン100mg/kgを経口投与してイブプロフェン潰瘍を誘発させた。その４時間後にラットを屠殺し、直ちに胃を摘出し、ホルマリンで固定した。大湾部を切開した後、損傷の長さ(mm)を実体顕微鏡で測定し、一匹当りの損傷の長さの総計を潰瘍係数(ulcer index)とした。
【００４６】
また、対照群［蒸留水のみを経口投与した群（検体非投与群）］について、上記と同様に潰瘍係数を求めた。
（３）試験結果
結果を図７に示した。
【００４７】
図７から明らかなように、柴胡桂枝湯エキス投与により、イブプロフェンによる胃粘膜障害が有意に抑制された。従って、イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスとを含有する本発明薬剤においては、イブプロフェンの胃腸障害が柴胡桂枝湯エキスによって軽減される。
【００４８】
試験例５
急性毒性：
（１）検体
▲１▼  本発明薬剤（イブプロフェンと柴胡桂枝湯エキスの配合比は1対6.44)
（２）試験方法
F344/Du Crj系雄性ラット(体重76〜81g、1群5匹)に検体を蒸留水に懸濁させて、2000mg/kgを経口投与し、７日間、死亡の有無、一般状態、体重の変化を観察した。また、観察期間終了時に全身諸臓器の異常の有無を肉眼的に観察した。
（３）試験結果
本発明薬剤2000mg/kgを経口投与しても死亡の発現は見られなかった(LD50値>2000mg/kg)。また、観察期間中、一般状態に異常はなく、体重も順調な増加を示した。
【００４９】
観察期間終了時の剖検においても、主要臓器の肉眼的な変化は観察されなかった。
【００５０】
【実施例】
以下に製造例および実施例を挙げて本発明を説明する。
【００５１】
製造例１
柴胡桂枝湯エキス末の製造：
柴胡１．２５ｋｇ、半夏１．０ｋｇ、桂皮０．７５ｋｇ、芍薬０．７５ｋｇ、黄ごん０．５ｋｇ、大棗０．５ｋｇ、人参０．５ｋｇ、甘草０．５ｋｇおよび生姜０．２５ｋｇよりなる混合生薬に精製水６０ｌを加えて約１００℃で１時間加熱した。煎出液を濾過し、減圧濃縮後、噴霧乾燥して柴胡桂枝湯乾燥エキス末１．４７ｋｇを得た（収率；２４．５％  ）。
【００５２】
実施例１
顆粒剤：
（処方）
イブプロフェン                        １０重量部
柴胡桂枝湯乾燥エキス末                ６４重量部
乳糖                                    ９重量部
低置換度ヒドロキシプロピルセルロ−ス  １３重量部
エチルセルロース                        ３重量部
ステアリン酸マグネシウム                １重量部
イブプロフェン以下エチルセルロースまでの各成分を充分混合し、無水エタノ−ル３０重量部を加えて練合し、湿式押し出し造粒法により造粒し、乾燥して整粒篩別し、造粒物を得る。この造粒物にステアリン酸マグネシウムを加えて混合し顆粒剤を得る。
【００５３】
実施例２
顆粒剤：
（処方）
イブプロフェン                        １０重量部
柴胡桂枝湯乾燥エキス末                ６７重量部
乳糖                                    ５重量部
低置換度ヒドロキシプロピルセルロ−ス  １４重量部
ヒドロキシプロピルセルロース            ３重量部
ステアリン酸マグネシウム                １重量部
イブプロフェン以下ヒドロキシプロピルセルロースまでの各成分を充分混合し、無水エタノ−ル３０重量部を加えて練合し、湿式押し出し造粒法により造粒し、乾燥して整粒篩別し、造粒物を得る。この造粒物にステアリン酸マグネシウムを加えて混合し顆粒剤を得る。
【００５４】
実施例３
顆粒剤：
（処方）
イブプロフェン                        １０重量部
柴胡桂枝湯乾燥エキス末                ６７重量部
乳糖                                  １２重量部
低置換度ヒドロキシプロピルセルロ−ス    ７重量部
ヒドロキシプロピルセルロース            ３重量部
ステアリン酸マグネシウム                １重量部
イブプロフェン以下ヒドロキシプロピルセルロースまでの各成分を充分混合し、無水エタノ−ル３０重量部を加えて練合し、湿式押し出し造粒法により造粒し、乾燥して整粒篩別し、造粒物を得る。この造粒物にステアリン酸マグネシウムを加えて混合し顆粒剤を得る。
【００５５】
実施例４
顆粒剤：
（処方）
イブプロフェン                        １０重量部
柴胡桂枝湯乾燥エキス末                ６７重量部
乳糖                                  １４重量部
カルメロースカルシウム                  ５重量部
ヒドロキシプロピルセルロース            ３重量部
ステアリン酸マグネシウム                １重量部
イブプロフェン以下ヒドロキシプロピルセルロースまでの各成分を充分混合し、無水エタノ−ル３０重量部を加えて練合し、湿式押し出し造粒法により造粒し、乾燥して整粒篩別し、造粒物を得る。この造粒物にステアリン酸マグネシウムを加えて混合し顆粒剤を得る。
【００５６】
実施例５
細粒剤：
（処方）
イブプロフェン                        １２重量部
柴胡桂枝湯乾燥エキス末                ７２重量部
結晶セルロ−ス                          ７重量部
合成ケイ酸アルミニウム                  ７重量部
ステアリン酸マグネシウム                ２重量部
上記の各成分を充分混合し、この混合物を圧縮成形機により板状物とした後、オシレ−タで破砕粒状とし、整粒篩別して細粒剤を得る。
【００５７】
実施例６
錠剤：
（処方）
イブプロフェン                          ８重量部
柴胡桂枝湯乾燥エキス末                ４８重量部
乳糖                                  ２０重量部
トウモロコシでんぷん                    ６重量部
合成ケイ酸アルミニウム                  ８重量部
カルメロースカルシウム                  ６重量部
ステアリン酸マグネシウム                １重量部
ヒドロキシプロピルメチルセルロース
２９１０                                ３重量部
上記のイブプロフェン、柴胡桂枝湯乾燥エキス末、乳糖、トウモロコシでんぷんおよび合成ケイ酸アルミニウムに99%エタノール２８重量部を加え充分練合した後、ハンマーミル型の破砕造粒機にて破砕造粒し、乾燥して造粒物を得る。この造粒物にカルメロースカルシウム、ステアリン酸マグネシウムを加えて混合し、この混合物を１錠３００ｍｇに打錠して錠剤を得る。次いで、この錠剤にヒドロキシプロピルメチルセルロース  ２９１０からなる皮膜を施し、フィルムコーティング錠とする。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明薬剤あるいはイブプロフェンをラットに経口投与したときのＳ体の血漿中濃度の推移を示す図である。
【図２】本発明薬剤あるいはイブプロフェンをラットに経口投与したときのＲ体の血漿中濃度の推移を示す図である。
【図３】本発明薬剤、柴胡桂枝湯エキスおよびイブプロフェンをマウスに経口投与したときの酢酸ライシング抑制率の用量反応曲線を示す図である。
【図４】本発明薬剤、イブプロフェンを酵母投与発熱ラットに経口投与した時の直腸温の経時的な変化を示す図である。
【図５】柴胡桂枝湯エキスを酵母投与発熱ラットに経口投与した時の直腸温の経時的な変化を示す図である。
【図６】柴胡桂枝湯エキスをラットに経口投与した時の胃粘膜障害（アスピリン潰瘍）の用量反応曲線を示す図である。
【図７】柴胡桂枝湯エキスをラットに経口投与した時の胃粘膜障害（イブプロフェン潰瘍）の用量反応曲線を示す図である。
【符号の説明】
●：本発明薬剤投与群
○：イブプロフェン投与群
△：柴胡桂枝湯エキス投与群
□：対照群
＊  ：対照群に対してｐ＜０．０５で有意差有り(Dunnett's test)
＊＊：対照群に対してｐ＜０．０１で有意差有り(Dunnett's test)
＃  ：イブプロフェン投与群に対してｐ＜０．０５で有意差有り（Dunnett's       test)
＃＃：イブプロフェン投与群に対してｐ＜０．０１で有意差有り（Dunnett's       test)
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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