(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（１）
【化１】
0003957952.tif 000015
〔式中、Ｒはセスキテルペン残基を示す。〕
で表されるマクロカルパール誘導体からなるセラミド産生促進剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の属する技術分野】
本発明は、マクロカルパール誘導体及びこれからなるセラミド産生促進剤に関する。
【０００１】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
スフィンゴ脂質の一つであるセラミドは、生体全体の中では微量な脂質であるが、皮膚の最も外側の層である角質層中では、脂質の半分以上を占め、皮膚の保湿機構、バリア機構に重要な役割を果たしている。このセラミドは表皮細胞中において産生、分泌された後に角質層中の細胞間においてラメラ構造を構築することにより機能する。
しかし、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬等の皮膚疾患においては、セラミドの健全な代謝が妨げられ、角質層中のセラミド量が減少し、皮膚の保湿能やバリア能の低下等を引き起こしていることが数多く報告されている。斯かる皮膚疾患に対しては、減少したセラミドを外部から補給する方法が試みられているが、長期的な効果が認められない、安定性が低い等の問題があった。
【０００２】
本発明は、生体の有するセラミド産生機構を健常に戻すことにより、減少した角質層中のセラミドを増加させ、皮膚のバリア機能及び保湿機能を回復し得るセラミド産生促進剤を提供することを目的とする。
【０００３】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、安全性の高い医薬又は化粧料を得るべくユーカリ属植物の成分について検討した結果、下記の一般式（１）で表されるマクロカルパール誘導体が、優れたセラミド産生促進作用を有することを見出した。
【０００４】
即ち、本発明は、下記一般式（１）
【０００５】
【化３】
0003957952.tif 000002
【０００６】
〔式中、Ｒはセスキテルペン残基を示す。〕
【０００７】
で表されるマクロカルパール誘導体からなるセラミド産生促進剤を提供するものである。
【００１０】
【発明の実施の形態】
一般式（１）で表されるマクロカルパール誘導体は、ユーカリ属植物に含まれる生理活性物質であり、これまでにマクロカルパールＡ、Ｂ、Ｃ（＝Ｇ）、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、ａｍ−１、ユーカリプトンの化学構造が決定され、これらにアルドースリダクターゼ阻害作用、グラム陽性菌や歯周病原因菌に対する抗菌作用等があることが報告されている（特開平５−３０６２５２号公報、特開平８−１０９１１８号公報等）。しかし、角質層中のセラミドを増加させる作用を有することは全く知られていない。
一方、一般式（１）で表されるマクロカルパール誘導体のうち式（２）〜（５）で表される化合物は、これまでにその化学構造が明らかにされていない新規化合物である。
【００１１】
一般式（１）で示されるマクロカルパール誘導体において、Ｒで示されるセスキテルペン残基とは、３個のイソプレン単位からなるファルネシルピロホスフェートを共通の前駆体として生合成される化合物群であるセスキテルペンから結合部位の水素原子１個を除去した基を意味し、具体的には以下のものが挙げられる。
【００１２】
【化５】
0003957952.tif 000003
【００１３】
上記のセスキテルペン残基を含め、本発明のマクロカルパール誘導体（１）及び（２）〜（５）には、不斉炭素原子の存在により立体異性体が存在し得るが、これらの異性体もまた本発明に包含されるものである。
【００１４】
本発明のマクロカルパール誘導体は、新規化合物を含め、ユーカリ属植物からの抽出によって得ることができる。
抽出に供される部分は、植物体のどの部分でも利用できるが、葉が好ましく、そのまま又は適宜粉砕して用いることができる。抽出方法は特に限定されず、加温抽出でも常温抽出でも構わない。尚、予め水蒸気蒸留や低極性溶媒処理により精油成分を除去してから抽出に伏すこともできる。
抽出溶剤には、メタノール、エタノール、プロパノール、１，３−ブタンジオール、アセトン、テトラヒドロフラン、ジオキサン、水等の極性溶剤が用いられ、これらは単独又は混合して用いてもよい。
【００１５】
抽出過程においては、適宜濃縮、希釈、濾過等の処理をしてもよく、得られた抽出物を更にカラムクロマトグラフィ、イオン交換クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等の適当な分離精製手段を用いて分離精製することができる。クロマトグラフィーの充填剤としては、シリカゲル、アルミナ、セルロース、デキストラン等を用いることができ、展開溶媒としては、ｎ−ヘキサン、クロロホルム、メタノール、酢酸、アセトニトリル等を単独又は混合して用いることができる。
斯かる抽出によれば、マクロカルパール誘導体は、単独若しくは数種の混合物として取得されるが、本発明のセラミド産生促進剤においては、これらの何れをも包含するものである。
【００１６】
かくして得られるマクロカルパール誘導体は、培養細胞におけるセラミドを増加させ、皮膚のバリア機能及び保湿機能を回復することにより肌荒れの改善・予防効果を発揮する。
従って、本発明におけるマクロカルパール誘導体（１）は、セラミド産生促進剤として、肌荒れ予防・改善等の医薬又は化粧料に配合できる。
【００１７】
本発明のマクロカルパール誘導体をセラミド産生促進剤として配合する対象は、医薬及び化粧料の何れでもよい。
医薬として使用するする場合には、錠剤、カプセル剤、軟膏等とすることができ、中でも外用医薬品としての使用が好ましい。例えば薬効成分を含有する各種軟膏剤とする場合には、油性基剤をベースとするもの、水中油型又は油中水型の乳化系基剤をベースとするもののいずれであってもよく、油性基剤としては、例えば植物油、動物油、合成油、脂肪酸及び天然又は合成のグリセライド等が挙げられる。また、薬効成分としては、例えば鎮痛消炎剤、鎮痒剤、殺菌消毒剤、収斂剤、皮膚軟化剤、ホルモン剤等を必要に応じて適宜使用することができる。
【００１８】
化粧料として使用する場合は、マクロカルパール誘導体の他に、化粧料成分として一般に使用されている油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、美白剤、しわ改善剤、アルコール類、キレート剤、pH調整剤、防腐剤、増粘剤、色素類、香料等を任意に組合せて配合することができる。
【００１９】
また、化粧料は、種々の形態、例えば、油中水型又は水中油型の乳化化粧料、クリーム、化粧乳液、化粧水、油性化粧料、口紅、ファンデーション、マッサージ剤、パック、入浴剤等とすることができる。
【００２０】
医薬又は化粧料におけるセラミド産生促進剤の配合量は、マクロカルパール誘導体（１）として通常全組成の０．０００１〜１０重量％、特に０．００１〜１重量％が好ましい。
【００２１】
【実施例】
製造例
（１）ユーカリノキ（Eucalyptus globulus Labillardiere)の葉１kgを細切し、エタノールと水との混液（２５：７５）１０Lを加え、室温下、７日間浸漬し、濾過した。得られた濾液をダイヤイオンＨＰ２０を用いたカラムに吸着させ、エタノールで溶出したところ、混合物Ａ２０ｇを得た。
【００２２】
（２）（１）で得られた混合物Ａ１０ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、クロロホルム−メタノール（１：０〜０：１）混液にて溶出したところ、マクロカルパール誘導体を含有する混合物Ｂ１．３ｇが得られた。
【００２３】
（３）（２）で得られた混合物Ｂを高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ，メタノール：水：酢酸＝９０：３：５）に供し、得られた画分を更に高速液体クロマトグラフィー（ＯＤＳ，アセトニトリル：水：酢酸＝１００：１０：５）で繰り返し精製したところ、化合物１〜９が得られた。
【００２４】
▲１▼化合物１：マクロカルパールＡ
【００２５】
【化６】
0003957952.tif 000004
【００２６】
▲２▼化合物２：マクロカルパールＢ
【００２７】
【化７】
0003957952.tif 000005
【００２８】
▲３▼化合物３：一般名なし
【００２９】
【化８】
0003957952.tif 000006
【００３０】
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(pyridine-d5) δ：
10.51(1H,s), 10.51(1H,s), 6.06(1H,s), 3.68(1H,dd,J=12.6,3.8), 3.25(1H,ddd,J=10.5,3.3,3.3), 2.62(1H,m),2.61(1H,m), 2.45(1H,br d,J=10.5), 2.09(1H,m), 2.05(1H,m), 2.01(1H,m), 1.96(1H,dd,J=11.9,7.4), 1.82(1H,q,J=13.6), 1.69(1H,ddd,J=12.0,12.0,4.1), 1.54(1H,m), 1.53(3H,s), 1.47(3H,s), 1.43(3H,s), 1.40(1H,m), 1.30(1H,m), 1.28(1H,m), 1.05(3H,d,J=6.3), 1.02(3H,d,J=6.3), 0.93(3H,d,J=6.8).
【００３１】
13C-NMR(pyridine-d5) δ：
192.0(d), 191.9(d), 172.4(s), 172.3(s), 151.3(s), 124.5(d), 107.2(s), 107.0(s), 72.8(s), 54.0(s), 53.0(d), 41.9(d), 38.5(t), 36.9(t), 36.9(d), 35.0(t), 29.3(t), 27.9(q), 27.8(q), 27.3(d), 27.0(t), 25.0(q), 24.0(q), 21.9(q), 18.3(q).
【００３２】
▲４▼化合物４：一般名なし
【００３３】
【化９】
0003957952.tif 000007
【００３４】
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(MeOH-d4) δ：
10.04(1H,s), 10.03(1H,s), 3.42(1H,m), 2.30(1H,m), 1.79-1.86(2H,m), 1.65-1.71(2H,m), 1.62(1H,m), 1.41(1H,ddd,J=12.4,12.4,2.9), 1.29(1H,ddd,J=12.8,4.8,12.8), 1.21(1H,m), 1.13-1.18(2H,m), 1.12(3H,s), 1.02(3H,s), 1.01(1H,d,J=7.0), 0.96(3H,s), 0.87(3H,s), 0.79(3H,d,J=6.6), 0.78(3H,d,J=6.6), 0.73(1H,m), 0.52-0.58(2H,m).
【００３５】
13C-NMR(pyridine-d5) δ：
192.2(d), 192.0(d), 173.4(s), 172.1(s), 170.8(s), 108.5(d), 107.2(s), 107.0(s), 71.8(s), 53.5(d), 51.9(d), 44.9(t), 44.4(t), 38.8(t), 38.6(s), 31.9(d), 29.7(q), 27.4(d), 25.3(t), 24.5(q), 24.0(q), 22.0(q), 21.8(d), 18.8(d), 17.4(s), 16.7(t),16.1(q), 15.8(q),.
【００３６】
▲５▼化合物５：一般名なし
【００３７】
【化１０】
0003957952.tif 000008
【００３８】
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(pyridine-d5）δ：
10.51(1H,s), 10.48(1H,s), 3.72(1H,dd,J=13,4.0), 2.74(1H,ddd,J=17,9.5,6.0), 2.62(1H,J=13,13,4.0), 2.52(1H,ddd,J=17,9.7,5.6), 2.35-2.40(2H,m), 2.30(1H,m), 2.28(1H,d,J=11), 2.21(1H,m), 1.78(1H,m), 1.55-1.65(2H,m), 1.32(1H,ddd,J=13,13,4.0), 1.11(3H,s), 1.08(3H,s), 1.06(3H,s), 0.94(3H,d,J=6.6), 0.92(3H,d,J=6.6), 0.65(1H,m), 0.52(1H,dd,J=11,9.3).
【００３９】
13C-NMR(pyridine-d5) δ：
220.3(s), 208.6(s), 191.9(d), 191.8(d), 173.2(s), 172.3(s), 172.0(s), 107.1(s), 107.1(s), 105.9(s), 53.0(d), 47.7(s), 44.4(t), 37.0(d), 36.3(t), 35.3(t), 31.4(t), 29.7(q), 29.2(q), 27.5(d), 26.6(d), 26.4(d), 24.7(q), 22.2(q), 22.2(q), 21.1(t), 17.9(s), 16.7(t).
【００４０】
▲６▼化合物６：ユーカリプトン、マクロカルパールａｍ−１
【化１１】
0003957952.tif 000009
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(pyridine-d5)δ：
10.48(1H,s), 10.47,(1H,s), 3.48(1H,dd,J=12, 4), 2.68(1H,m), 1.36(1H,ddd,J=12, 4), 2.65,(1H,m), 2.52(1H,m), 2.62(1H,m), 2.34(1H,ddd,J=12, 12, 4), 2.46(1H,m), 2.29(1H,m), 1.75(1H,m), 2.14(1H,m), 1.70(1H,m), 2.05(3H,s), 1.53(1H,m), 1.34(3H,s), 1.10(3H,s), 1.09(3H,s), 0.90(3H,d,J=7), 0.87(3H,d,J=7), 0.60(2H,m).
【００４１】
13C-NMR(pyridine-d5)δ：
221.4(s), 208.4(s), 191.9(d), 191.8(d), 173.8(s), 173.3(s), 172.6(s), 107.3(s), 107.2(s), 105.3(s), 54.9(d), 47.7(s), 44.5(t), 39.8(d), 36.4(t), 35.9(t), 32.5(t), 29.6(q), 28.9(q), 27.5(d), 27.4(d), 26.6(d), 24.5(q), 21.7(q), 21.7(q), 20.8(t), 18.2(s), 16.1(q).
▲７▼化合物７：一般名なし
【化１２】
0003957952.tif 000010
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(pyridine-d5)δ：
10.48(1H,s), 10.45(1H,s), 3.73(1H,brd,J=12), 2.56(1H,m), 2.35(1H,ddd,J=12, 12, 3), 2.27(1H,dd,J=13, 8), 2.162(1H,m), 1.87-1.96(2H,m), 1.73-1.83(2H,m), 1.50-1.58(2H,m), 1.53(3H,s), 1.39(1H,ddd,J=12, 3, 3), 1.34(1H,d,J=6), 1.19(3H,s), 1.148(3H,d,J=7), 1.052(3H,s), 0.950(3H,d,J=7), 0.941(3H,s), 0.872(1H,dd,J=9, 6), 0.778(1H,ddd,J=13, 13, 7), 0.567(1H,dd,J=9, 9).
【００４２】
13C-NMR(pyridine-d5)δ：
198.4(d), 198.4(d), 172.2(s), 171.7(s), 169.5(s), 113.1(s), 107.5(s), 106.9(s), 71.8(s), 52.9(d), 52.0(d), 44.6(t), 39.4(t), 38.9(s), 37.7(t), 30.1(d), 29.6(q), 27.1(d), 25.0(q), 24.0(t), 23.9(q), 22.3(q), 21.9(d), 19.0(d), 17.6(s), 16.7(t), 15.7(q), 15.1(q).
▲８▼化合物８：マクロカルパールＤ
【化１３】
0003957952.tif 000011
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(pyridine-d5)δ：
10.52(1H,s), 10.49(1H,s), 6.17(1H,s), 3.98(1H,dd,J=13, 4), 2.99(1H,m), 2.71(1H,ddd,J=13, 13, 3), 2.47(1H,m), 2.45(1H,m), 2.17(1H,m), 2.06(1H,m), 2.03(1H,m), 1.81(1H,m), 1.74(1H,m), 1.59(1H,m), 1.54(1H,m), 1.52(1H,m), 1.49(3H,s), 1.43(3H,s), 1.42(1H,m), 1.37(1H,ddd,J=13, 13, 5), 1.22(3H,s), 1.06(3H,d,J=7), 1.00(3H,d,J=7), 0.98(3H,d,J=7).
【００４３】
13C-NMR(pyridine-d5)δ：
192.2(d), 192.0(d), 171.9(s), 171.7(s), 171.6(s), 152.2(s), 122.1(d), 107.8(s), 107.0(s), 106.8(s), 72.7(s), 52.6(s), 51.9(d), 46.2(d), 40.6(d), 35.6(t), 35.6(t), 35.2(t), 34.1(d), 29.3(t), 28.0(q), 27.7(q), 27.5(q), 27.4(d), 27.1(t), 24.9(q), 22.0(q), 18.3(q).
▲９▼化合物９：マクロカルパールＥ
【化１４】
0003957952.tif 000012
性状：淡黄色粉末
1H-NMR(pyridine-d5)δ：
10.52(1H,s), 10.51(1H,s), 5.86(1H,d,J=3.2), 3.88(1H,ddd,J=11.8, 4.9, 4.4), 2.71(1H,ddd,J=12.4, 11.8, 2.9), 2.53(1H,ddq,J=5.0, 2.0, 7.5), 2.38(1H,ddd,J=6.9, 5.0, 3.2), 2.15(1H,ddd,J=13.2, 11.1, 3.0), 2.05(1H,dddd,J=13.1, 7.5, 6.9, 3.0), 1.90-1.99(4H,m), 1.65-1.73(2H,m), 1.50-1.61(3H,m), 1.43(6H,s), 1.38(3H,s), 1.14(3H,d,J=7.5), 1.03(3H,d,J=6.3), 0.91(3H,d,J=6.3).
【００４４】
13C-NMR(pyridine-d5)δ：
192.2(d), 192.0(d), 171.9(s), 171.8(s), 107.5(s), 151.1(s), 122.7(d), 108.9(s), 107.0(s), 106.8(s), 72.4(s), 52.1(d), 46.9(d), 44.3(t), 40.3(s), 39.9(d), 37.34(t), 34.7(t), 32.4(d), 28.2(q), 28.1(q), 27.5(d), 24.5(q), 23.7(q), 22.8(q), 22.7(t), 22.0(q), 20.9(t).
【００４５】
試験例１  セラミド産生促進試験（細胞系）
６ウェルプレートを用い、[14C]−セリン（第一化学薬品社製）を含む培養液（ＧＩＢＣＯ  ＳＦＭ／−ＢＰＥ，ＥＧＦ）中にて、ヒトケラチノサイト（ＨＫ−ｆ；極東製薬工業社製）を、３７℃、５％ＣＯ2下で２４時間培養した。次いで、混合物Ａ，Ｂ、化合物１〜９を固形分換算で０．００５重量％又は０．０００５重量％添加し、更に２４時間培養した。培養液を除去し、ＢＰＳにて１回洗浄した後、セルスクレーパーにより細胞を掻き取り、試験管に集めた。このヒトケラチノサイトに、水３．６mL、クロロホルム４mL及びメタノール４mLを添加して混合した後、クロロホルム層を単離、乾固した。抽出した脂質をＨＰＴＬＣプレート〔シリカゲルＧ６０（２０×１０cm）Ａｒｔ．５６４１；メルク社製〕にて、溶媒１（クロロホルム：メタノール：酢酸＝１９０：９：１）でｔｏｐまで２回、更に溶媒２（クロロホルム：メタノール：アセトン＝７６：２０：４）で下から３cm展開した。ＴＬＣ上のセラミド及びグルコシルセラミドのカウントをオートラジオグラフ（ＢＡＳ２０００；富士フィルム社製）により測定した。
サンプル不添加のコントロールを１．０としてセラミド産生促進率を算出した結果を表１に示す。
【００４６】
【表１】
0003957952.tif 000013
【００４７】
表１から明らかなように、混合物Ｂ、化合物１〜９のいずれにおいても、混合物Ａに比べて１０倍近いヒトケラチノサイトのセラミド産生促進効果が認められた。
【００４８】
試験例２
表２に示す組成の皮膚化粧料（本発明品、比較品）を調製し、健常女性２０名を用い、本発明品と比較品を顔面の左右それぞれに１日２回ずつ１ケ月間塗布した。試験終了時に肌荒れ改善度を以下の評価基準に基づき目視判定した。
【００４９】
【表２】
0003957952.tif 000014
【００５０】
＜評価基準＞
１：本発明品の皮膚化粧料のほうが改善された。
２：本発明品の皮膚化粧料のほうがやや改善された。
３：左右同等である。
４：比較品の皮膚化粧料のほうがやや改善された。
５：比較品の皮膚化粧料のほうが改善された。
【００５１】
＜結果＞
「１」が９名、「２」が７名、「３」が４名、「４」が０名、「５」が０名であり、本発明品が肌荒れ改善化粧料として有効であることが確認された。
【００５２】
【発明の効果】
本発明のセラミド産生促進剤は、生体の有するセラミド産生機構を健常に戻すことにより、減少した角層中のセラミドを増加させ、皮膚のバリア機能及び保湿機能を回復させることができる。