(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式１で表される化合物、又はその治療的に許容される酸付加塩。
0003911293.tif 000015
式中、ＸはＲ3ＯＣ（Ｏ）、Ｒ3Ｃ（Ｏ）又はＲ3ＮＨＣ（Ｏ）であり、
Ｒ3は
（ｉ）低級アルキル、
（ii）低級シクロアルキル、
（iii）フェニル；ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されたフェニル；又はハロゲン、アミノ及び低級アルキルからなる群から選択された、同一又は異なる置換基で二又は三置換されたフェニル；
（iv）フェニル（低級）アルキル、又は芳香族部分がハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されたフェニル（低級）アルキル、
（ｖ）フェニル（低級）アルケニル、
（vi）１−ナフチル又は２−ナフチル、
（vii）Ｈｅｔ又はＨｅｔ−（低級アルキル）、ここで、Ｈｅｔは、窒素、酸素及び硫黄から選択される異種原子を１個又は２個含有する、５員環又は６員環の単環式基又は９員環又は１０員環の二環式基、前記ヘテロ環式基は、置換されていないか、又は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル又は低級アルコキシからなる群から選択される同一又は異なる置換基を１個又は２個有する；
ＸはＲ3AＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Aは低級アルキル又はフェニル、又はＸはＲ3BＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Bはフェニル、ハロゲン又は低級アルキルで一置換されているフェニル、又はハロゲン及び低級アルキルからなる群から選択される同一又は異なる置換基で二置換又は三置換されているフェニル；
Ａは存在しないか、又は二価の基ＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ4は水素又は低級アルキルであり、Ｒ5は低級アルキル、１−カルボキシシクロブト−１−イル、１−カルボキシシクロペント−１−イル、又はカルボキシ、カルバミル、（低級アルコキシ）カルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ヒドロキシ、シアノ又はベンジルオキシで単置換されている低級アルキルであり；Ｒ5を有する炭素原子が（Ｓ）配置を有し；
Ｒ1は低級アルキルであり、Ｒ2は水素であり、又はＲ1は水素であり、Ｒ2は低級アルキルであり、又はＲ1及びＲ2はそれらが結合している炭素原子と一緒になって１，２−シクロヘキサンジイルを形成する；
Ｑは水素、ヒドロキシ、ハロゲン又は低級アルコキシであり；及び
Ｙは炭素原子１〜８個のアルキルアミノ、炭素原子１〜８個のアルコキシ、フェニルアミノ、又はフェニル部分が低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ又は低級アルキルアミノからなる群から選択される１個又は２個の同一又は異なる置換基を有するフェニルアミノである。
【請求項２】
Ｘが
（ｉ）Ｒ3ＯＣ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル、低級シクロアルキル、フェニル、フェニル（低級）アルキル、又はフェニル部分の４位がハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシで置換されているフェニル（低級）アルキルであり；
（ii）Ｒ3Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル；低級シクロアルキル；フェニル；ハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているフェニル；塩素、フッ素、アミノ又はメチルからなる群から選択される同一又は異なる置換基で二又は三置換されているフェニル；フェニル（低級）アルキル；フェニル部分の４位がハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているフェニル（低級）アルキル；フェニル（低級）アルケニル；１−ナフチル；２−ナフチル；Ｈｅｔ、Ｈｅｔ−ＣＨ2、又はＨｅｔ−ＣＨ2ＣＨ2であり、Ｈｅｔは上記で定義された通りであり；又は（フェニルアミノ）メチルであり；又は
（iii）Ｒ3ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル；低級シクロアルキル；フェニル、ハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているフェニル；ベンジル又はフェニル部分の４位がハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているベンジルであり；又は
ＸはＲ3AＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Aは低級アルキル又はフェニルであり、又はＸはＲ3BＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Bはフェニル又は２、４及び６位からなる群から選択される位置又は部分が低級アルキル又はハロゲンで一、二又は三置換されているフェニルであり；
Ａは存在しないか、又は二価の基ＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ4は水素又はメチルであり、Ｒ5は上記で定義された通りであり；
Ｒ1は１−メチルエチル、１，１−ジメチルエチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル、４−メチルペンチル、４，４−ジメチルペンチルであり、Ｒ2は水素であり、又はＲ1は水素でありＲ2は１−メチルエチル、１，１−ジメチルエチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル、４−メチルペンチル又は４，４−ジメチルペンチルであり、又はＲ1及びＲ2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって１，２−シクロヘキサンジイルを形成する；
Ｑ及びＹは請求の範囲第１項に定義した通りである、請求の範囲第１項に記載の化合物又はその治療的に許容される酸付加塩。
【請求項３】
Ｘが（ｉ）Ｒ3ＯＣ（Ｏ）であり、式中、Ｒ3がイソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル又は２−フェニルエチルであり、（ii）Ｒ3Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｒ3はメチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、シクロヘキシル、フェニル、４−クロロフェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２，６−ジクロロフェニル、２，３，６−トリクロロフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、２，６−ジメチルフェニル、３−アミノ−２−メチルフェニル、ベンジル、（４−フルオロフェニル）メチル、（４−メトキシフェニル）メチル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチル、５一フェニルペンチル、２−（４−フルオロフェニル）エチル、２−（４−ヒドロキシフェニル）ブチル、（４−メチルフェニル）ブチル、３−（４−メトキシフェニル）プロピル、１−オキソ−３−フェニル−２−プロペニル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フリル、２−チエニル、２−ピリジニル、４−ピリジニル、４−チアゾリル、４−イソキサゾリル、２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、６−キノリル、８−キノリル、４−メトキシ−２−キノリル、１−イソキノリル、３−イソキノリル、２−キノキサリニル、１−メチル−２−インドリル、２，３−ジヒドロインドール２（Ｒ又はＳ）−イル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−３（Ｒ又はＳ）−イル、２−ピリジニルメチル、２−モルホリノエチル、２−ピペリジノエチル、３−（４−チアゾリル）プロピル、又は（フェニルアミノ）メチルであり；
（iii）Ｒ3ＮＨＣ（Ｏ）であり、式中、Ｒ3は低級アルキル、ベンジル又は芳香族部分がフッ素、メチル又はメトキシで一置換されているベンジルであり；
ＸはＲ3AＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｒ3Aはメチル又はフェニルであるか、又はＸはＲ3BＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、式中、Ｒ3Bはフェニル、２−メチルフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，６−ジメチルフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、４−クロロフェニル又は４−フルオロフェニルであり；
Ａは存在しないか、ＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）であり、式中Ｒ4は水素又はメチルであり、Ｒ5は１メチルエチル、１，１−ジメチルエチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１−カルボキシシクロペント−１−イル、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ、（Ｒ）−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＭｅ、（Ｒ）−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）ＯＢｚｌ、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3又はＣＨ2ＣＮであり；
Ｒ1は１，１−ジメチルエチル、２，２−ジメチルプロピル、１−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル又は４，４−ジメチルペンチルであり、Ｒ2は水素であり、又はＲ1は水素でありＲ2はｔｅｒｔ−ブチル、２，２−ジメチルプロピル、１−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル又は４，４−ジメチルペンチルであり、Ｑは水素、ヒドロキシ又はメトキシであり、Ｙはイソプロピルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、１−メチルプロピルアミノ、２−メチルプロピルアミノ、１−エチルプロピルアミノ、１−イソプロピル−２−メチルプロピルアミノ、１−エチルブチルアミノ、１−プロピルブチルアミノ、イソプロポキシ、１−エチルプロポキシ、フェニルアミノ、又はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ヒドロキシ、フッ素又は塩素から選択される１又は２個の同一又は異なる置換基を有するフェニルアミノである、請求の範囲第２項に記載の化合物又はその治療的に許容される酸付加塩。
【請求項４】
Ｘがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、（２−フェニルエトキシ）カルボニル、アセチル、ベンゾイル、（２，４−ジクロロフェニル）カルボニル、（２，３，６−トリクロロフェニル）カルボニル、（２−メチルフェニル）カルボニル、（２，５−ジメチルフェニル）−カルボニル、（２，６−ジメチルフェニル）カルボニル、（３−アミノ−２−メチルフェニル）カルボニル、フェノキシメチルカルボニル、２−キノリルカルボニル、３−キノリルカルボニル、４−キノリルカルボニル、６−キノリルカルボニル、８−キノリルカルボニル、４−メトキシ−２−キノリルカルボニル、１−イソキノリルカルボニル、３−イソキノリルカルボニル、２−キノキサリニルカルボニル、１−メチル−２−インドリルカルボニル、２，３−ジヒドロインドール−２（Ｒ又はＳ）−イルカルボニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−３（Ｒ又はＳ）−イルカルボニル、１−オキソ−３−ピペリジノプロピル、（フェニルアミノ）メチルカルボニル又は（ベンジルアミノ）カルボニルであり；Ａがｖａｌ、Ｎ−Ｍｅｖａｌ、Ｔｂｇ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ａｓｐ（ｃｙＰｎ）、Ａｓｐ、βＭｅＡｓｐ、Ｇｌｕ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、βＭｅＡｓｐ（ＯＢｚｌ）、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ又はβＣＮ−Ａｌａであり；Ｒ1が１，１−ジメチルエチルであり；Ｒ2が水素であり；Ｑが水素又はヒドロキシであり；Ｙが１−エチルプロピルアミノ、１−イソプロピル−２−メチルプロピルアミノ、１−プロピルブチルアミノ、イソプロポキシ、１−エチルプロポキシ、フェニルアミノ（２，６−ジメチルフェニル）アミノ、（２，６−ジエチルフェニル）アミノ又は（２，６−ジイソプロピルフェニル）アミノであり；Ｒ1を有する不斉炭素が（Ｒ）配置を有する、請求の範囲第３項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｘが（２−メチルフェノキシ）アセチル、（２，４−ジメチルフェノキシ）−アセチル、（２，６−ジメチルフェノキシ）アセチル又は（２，４，６−トリメチルフェノキシ）アセチルであり、Ａが存在しないか、又はＲ1が１，１−ジメチルエチルであり、Ｒ2が水素であり、Ｑが水素又はヒドロキシであり、Ｙが最後に定義された通りであり；Ｒ1を有する不斉炭素が（Ｒ）配置を有する、請求の範囲第３項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｘがベンジルオキシカルボニル、２−キノリルカルボニル又は２−キノキシアニリルカルボニルであり、Ａがｖａｌ、Ｔｂｇ、Ａｓｎ又はＴｈｒであり、Ｒ1が１，１−ジメチルエチルであり、Ｒ2が水素であり、Ｑが水素又はヒドロキシであり、Ｙが１−エチルプロピルアミノ又は（２，６−ジメチルフェニル）アミノであり、Ｒ1を有する不斉炭素が（Ｒ）配置を有する、請求の範囲第１項に記載の化合物。
【請求項７】
下記（ｉ）〜（xiii）からなる群から選択される、請求の範囲第１項に記載の化合物。
（ｉ）Ｒ1を有する炭素原子が（Ｒ）配置を有し、Ｒ1が１，１−ジメチルエチルであり、Ｒ2及びＱがそれぞれ水素であり、ＹがＮＨＣＨＥｔ2であり、Ｘ及びＡが下記組み合わせの１つにより定義される、一般式１の化合物：
0003911293.tif 000016
0003911293.tif 000017
（ii）Ｒ1を有する炭素原子が（Ｒ）が配置を有しており、Ｘが２−キノリルカルボニルであり、Ｒ1が１，１−ジメチルエチルであり、Ｒ2及びＱがそれぞれ水素であり、Ａ及びＹが下記組み合わせの１つにより定義される、一般式１の化合物：
0003911293.tif 000018
（iii）Ｒ2及びＱがそれぞれ水素であり、Ｘ、Ａ、Ｒ1及びＹが下記組み合わせの１つにより定義され、Ｒ1を有する不斉炭素原子に関して（Ｒ）又は（Ｓ）のジアステレオマー化合物である、一般式１の化合物：
0003911293.tif 000019
（iv）ＸがＺであり、Ａがｖａｌであり、Ｒ1がＨであり、Ｒ2が（ＣＨ3）3ＣＣＨ2であり、ＱがＨでありＹがＮＨＣＨＥｔ2であり、Ｒ2を有する不斉炭素原子に関して化合物が（Ｒ）又は（Ｓ）ジアステレオマーである、一般式１の化合物。
（ｖ）ＸがＺであり、ＡがＶａｌであり、Ｒ1及びＲ2がそれらが結合している炭素原子と一緒になって１，２−シクロヘキサンジイルを形成しており、ＱがＨであり、ＹがＮＨＣＨ2ＣＭｅ3、ＮＨＣＨＰｒ2又はＮＨＣＨＥｔ2であり、Ｒ1及びＲ2を有する炭素原子に関して化合物がシス異性体である、一般式１の化合物。
（vi）３（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−４−｛２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニル−３（Ｓ）−｛［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）スレオニル］−アミノ｝ブチルアミノ｝−４−オキソブタン酸イソプロピルエステル；
（vii）３（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチル−４−｛２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニル−３（Ｓ）−｛［Ｎ−２−キノリルカルボニル］アスパラギニル｝アミノ｝−ブチルアミノ｝−４−オキソブタン酸１−エチルプロピルエステル；
（viii）Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛［Ｎ（ベンジルオキシカルボニル）−ｔｅｒｔ−ブチルグリシル］アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル｝−Ｎ1−（１−エチルプロピル）−３（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブチルブタンジアミド；
（ix）Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛［Ｎ（ベンジルオキシカルボニル）バリル］アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル｝−Ｎ1−（１−エチルプロピル）−２（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルブタンジアミド；
（ｘ）Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）一｛［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）スレオニル］アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）ブチル｝−３（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルブタンジアミド；
（xi）Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，６−ジメチルフェノキシ｝アセチル｝−アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）ブチル｝−３（Ｒ）−ｔｅｒｔ−ブチルブタンジアミド；
（xii）Ｒ1を有する炭素原子が（Ｒ）配置を有し、Ａがなく、Ｒ1がｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ2及びＱがそれぞれ水素であり、ＹがＮＨＣＨＥｔ2であり、Ｘが（１−メチル−２−インドリル）カルボニル、（４−クロロフェニル）カルボニル、（２，４−ジクロロフェニル）−カルボニル、（２，３，６−トリクロロフェニル）カルボニル、（２−メチルフェニル）カルボニル、（３−アミノ−２−メチルフェニル）−カルボニル、（２，４，６−トリメチルフェノキシ）アセチル又は（２，６−ジメチルフェニル）アセチルである、一般式１の化合物；及び
（xiii）Ｒ1を有する炭素原子が（Ｒ）配置を有し、Ａがなく、Ｒ1がｔｅｒｔ−ブチルであり、Ｒ2及びＱがそれぞれ水素であり、Ｙが（２，６−ジメチルフェニル）アミノであり、Ｘがベンジルオキシカルボニル、（２，６−ジメチルフェノキシ）アセチル又は（２，５−ジメチルフェニル）カルボニルである、一般式１の化合物。
【請求項８】
請求の範囲第１項に記載の化合物又はその治療的に許容される酸付加塩、及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項９】
ヒトにおけるＨＩＶ感染を治療する薬を製造するための、請求の範囲第１項に記載の化合物又はその治療的に許容される酸付加塩の使用。
【請求項１０】
ＨＩＶの病原に対してヒト細胞を保護する薬を製造するための、請求の範囲第１項に記載の化合物又はその治療的に許容される酸付加塩の使用。
【請求項１１】
アミド結合により、もしくはＣ末端アルコキシ又はアリールオキシ残基の場合にはエステル結合により連結された４又は５個の構造断片（即ち、Ｎ−末端アシル残基；存在するか又はしないアミノ酸又はアミノ酸残基誘導体；１，３−（Ｓ）−ジアミノ−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノール残基；スクシニル残基及びＣ−末端アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ又はアリールオキシ残基）を有する、請求の範囲第１項で定義される一般式１の化合物又はその治療的に許容される酸付加塩の製造方法であって、
ａ）下記の工程で連続的段階的に断片をカップリングする工程：
（ｉ）もし存在する場合は、反応性側鎖基を、保護基が最終的に除去されるまで、化学反応部位で化学反応が起こらないようにする適当な保護基で保護し、
（ii）断片のα−アミノ基を、その断片の遊離のカルボキシ基が第２の断片の遊離のα−アミノ基とカップリングする間、α−アミノ保護基で保護し；該α−アミノ保護基が該α−アミノ基のところでそれに続くカップリング工程を許容するために選択的に除去され；及び、必要であれば、
ｂ）請求の範囲第１項の化合物を得るために、カップリングが完了したときに保護基を取り除く工程：
及び所望であれば、化合物を治療的に許容される酸付加塩に変換する工程：を特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、特定のレトロウイルスに対して活性を示す化合物、該化合物の製造方法、その医薬調製物、及びレトロウイルスによって引き起こされる感染と戦うための化合物の使用方法に関する。
発明の背景
１９８３年、ヒト免疫不全ウイルスタイプ１（ＨＩＶ−１）として知られるウイルスが後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因物質として証明された（R.C.Gallo及びL.Montagnier, Scientific American, 259（4）, 40（1988）参照）。このウイルスは、不安を抱かせるほどの伝染病になった。更に最近、近い関係のウイルス、ヒト免疫不全ウイルスタイプ２（ＨＩＶ−２）がＡＩＤＳの第２の原因物質として同定された。
原因物質としてのヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の同定、及びウイルスを大量に増殖する方法の開発は、in vitroにおけるＨＩＶの複製を阻害する化合物の発見を結果として生じた。この方法で同定された阻害剤化合物の最も重要なグループは、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ジドブジン(zidovudine)又はＡＺＴとして知られている）のジデオキシヌクレオシドのグループであり、更に最近、２’，３’−ジデオキシイノシン（ジダノシン(didanosine)又はＤＤＩとして知られる）が症候群ＨＩＶに感染した特定の患者を治療的に管理するために用いられている。化合物のこのクラスは、逆転写を阻害することによりＨＩＶのライフサイクルを阻害することが見いだされている。この酵素はウイルスＲＮＡを二本鎖デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）に変換し、それ自体、ＨＩＶ複製のために欠くことのできない酵素である。更に、逆転写酵素を阻害するために、抗ＡＩＤＳ薬剤を開発するためのＨＩＶのライフサイクルの他の段階が標的として確認された。注意が増加している１つの標的は、ＨＩＶプロテアーゼとして知られるＨＩＶがコードする酵素である。逆転写酵素様のこの酵素はPol遺伝子によってコードされ、ＨＩＶの増殖に不可欠である。成熟ウイルス粒子中に見いだされる構造遺伝子、例えばp17及びp24、及び酵素（それ自身を含む）、構造タンパク質を遊離することがgag(p55)又はgag-pol(p160)中の特定の切断に影響を及ぼす原因となる。従って、ＨＩＶプロテアーゼの阻害剤はＨＩＶのライフサイクルを遮断し得る。
最近の２，３年の間のＨＩＶプロテアーゼに対して与えられた増加した注意が、酵素を遮断する試薬の発見に関する報告の増加に反映されている。例えば、Annual Reports In Medicinal Chemistry, 29, 133(1994)のS.ThaisrivongsによるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤に関する最近の評論を参照されたい。後者の論評で言及されるように、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤のいくつかの有力なシリーズは、p17/p24基質開裂部位配列を有するペプチド中のヒドロキシエチルアミン転移状態アナログ（ＴＳＡ）の配置によって現実となった。
本明細書は、ヒドロキシエチルアミンＴＳＡをその中に有するコハク酸誘導体を開示する。該誘導体はＨＩＶプロテアーゼの有力な阻害剤である。更に、ヒト細胞内でＨＩＶが引き起こす細胞変性効果を阻害する能力が該化合物によって証明された。相対的選択的作用の特性及び毒性の明らかな不足と共に、このような特性は、試薬としてＨＩＶ感染と戦うための有用な化合物を与える。
ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤の構造中のヒドロキシエチルアミンＴＳＡとスクシニル部分の結合はユニークに見え、この構造上の特徴は、レニン(renin)阻害剤と関係があるある特許出願、例えば、
1990年６月27日に公開されたP.Ham及びS.A.Smithの欧州特許出願375 451,
1990年12月13日に公開されたS.A.Smith及びP.Hamのオーストラリア特許出願9056256及び
1991年３月13日に公開されたS.A.Smithらの欧州特許出願416 740からの最も広い開示から構築することができる。
発明の要約
本発明を記述するのに使用するそれほどありふれていない用語及びシンボルのいくつかの説明に対しては、「発明の詳細な説明」の項を参照されたい。
本発明の化合物は一般式Ｉによって表される化合物、又はその治療的に許容される酸付加塩である。
0003911293.tif 000002
式中、ＸはＲ3ＯＣ（Ｏ）、Ｒ3Ｃ（Ｏ）又はＲ3ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ3は
(i)低級アルキル、
(ii)低級シクロアルキル、
(iii)フェニル；ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル又は低級アコキシで一置換されたフェニル；ハロゲン、アミノ及び低級アルキルからなる群から選択された、同一又は異なる置換基で二又は三置換されたフェニル；
(iv)フェニル（低級）アルキル、又は芳香族部分がハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されたフェニル（低級）アルキル、
(v)フェニル（低級）アルケニル、
(vi)１−ナフチル又は２−ナフチル、
(vii)Het又はHet-（低級アルキル）であり、ここで、Hetは、窒素、酸素及び硫黄から選択される異種原子を１個又は２個含有する、５員環又は６員環の単環式基又は９員環又は１０員環の二環式基を意味し、前記ヘテロ環式基は、置換されていないか、又は、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキル又は低級アルコキシからなる群から選択される同一又は異なる置換基を１個又は２個有する；又は、
ＸはＲ3AＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Aは低級アルキル又はフェニル、又はＸはＲ3BＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Bはフェニル、ハロゲン又は低級アルキルで一置換されているフェニル、又はハロゲン及び低級アルキルからなる群から選択される同一又は異なる置換基で二置換又は三置換されているフェニル；
Ａは存在しないか、二価の基ＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ4は水素又は低級アルキルであり、Ｒ5は低級アルキル、１−カルボキシシクロブト−１−イル、１−カルボキシシクロペント−１−イル、又はカルボキシ、カルバミル、（低級アルコキシ）カルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ヒドロキシ、シアノ又はベンジルオキシで一置換されている低級アルキルであり；
Ｒ1は低級アルキルでありＲ2は水素であり、又はＲ1は水素でありＲ2は低級アルキルであり、又はＲ1及びＲ2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって１，２−シクロヘキサンジイルを形成する；
Ｑは水素、ヒドロキシ、ハロゲン又は低級アルコキシであり；Ｙは炭素原子１〜８個のアルキルアミノ、炭素原子１〜８個のアルコキシ、フェニルアミノ、又はフェニル部分が低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、ハロゲン、アミノ又は低級アルキルアミノからなる群から選択される１個又は２個の同一又は異なる置換基を有するフェニルアミノである。
本発明の化合物の好ましいグループは、一般式１で表される化合物、又はその治療的に許容される酸付加塩であり、
式中、Ｘは
(i)Ｒ3ＯＣ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル、低級シクロアルキル、フェニル、フェニル（低級アルキル）、又はフェニル部分の４位がハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシで置換されているフェニル（低級）アルキルであり；
(ii)Ｒ3Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル；低級シクロアルキル；フェニル；ハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているフェニル；塩素、フッ素、アミノ又はメチルからなる群から選択される同一又は異なる置換基で二又は三置換されているフェニル；フェニル（低級）アルキル；フェニル部分がハロゲン、ヒドロキシ、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているフェニル（低級）アルキル；フェニル（低級）アルケニル；１−ナフチル；２−ナフチル；Het、Het-CH2，又はHet-CH2CH2であり、Hetは上記で定義された通りであり；又は（フェニルアミノ）メチルであり；又は
(iii)Ｒ3ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル；低級シクロアルキル；フェニル、ハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているフェニル；ベンジル又はフェニル部分の４位がハロゲン、低級アルキル又は低級アルコキシで一置換されているベンジルであり；又は
ＸはＲ3AＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Aは低級アルキル又はフェニルであり、又はＸはＲ3BＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Bはフェニル又は２、４及び６位からなる群から選択される位置又は部分が低級アルキル又はハロゲンで一、二又は三置換されているフェニルであり；
Ａはないか、二価の基ＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ4は水素又はメチルであり、Ｒ5は上記で定義された通りであり；
Ｒ1は１−メチルエチル、１，１−ジメチルエチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル、４−メチルペンチル、４，４−ジメチルペンチルであり、Ｒ2は水素であり、又はＲ1は水素でありＲ2は１−メチルエチル、１，１−ジメチルエチル、１，１−ジメチルプロピル、２，２−ジメチルプロピル、３−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル、４−メチルペンチル又は４，４−ジメチルペンチルであり、又はＲ1及びＲ2は、それらが結合している炭素原子と一緒になって１，２−シクロヘキサンジイルを形成する；
Ｑ及びＹは上記で定義した通りである。
化合物の更に好ましいグループは一般式１で表される化合物又はその治療的に許容される酸付加塩であり、
Ｘは
(i)Ｒ3ＯＣ（Ｏ）であり、Ｒ3はイソプロピル、tert-ブチル、ベンジル又は２−フェニルエチルであり；
(ii)Ｒ3Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3はメチル、エチル、プロピル、シクロプロピル、シクロヘキシル、フェニル、４−クロロフェニル、２−フルオロフェニル、２，４−ジクロロフェニル、２，６−ジクロロフェニル、２，３，６−トリクロロフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，５−ジメチルフェニル、２，６−ジメチルフェニル、３−アミノ−２−メチルフェニル、ベンジル、（４−フルオロフェニル）メチル、（４−メトキシフェニル）メチル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチル、５一フェニルペンチル、２−（４−フルオロフェニル）−エチル、２−（４−ヒドロキシフェニル）ブチル、（４−メチルフェニル）−ブチル、３−（４−メトキシフェニル）プロピル、１−オキソ−３−フェニル−２−プロペニル、１−ナフチル、２−ナフチル、２−フリル、２−チエニル、２−ピリジニル、４−ピリジニル、４−チアゾリル、４−イソキサゾリル、２−キノリル、３−キノリル、４−キノリル、６−キノリル、８−キノリル、４−メトキシ−２−キノリル、１−イソキノリル、３−イソキノリル、２−キノキサリニル、１−メチル−２−インドリル、２，３−ジヒドロインドール−２（Ｒ又はＳ）−イル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−３（Ｒ又はＳ）−イル、２−ピリジニルメチル、２−モルホリノエチル、２−ピペリジノエチル、３−（４−チアゾリル）プロピル、又は（フェニルアミノ）メチルであり、
(iii)Ｒ3ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ3は低級アルキル、ベンジル、芳香族部分がフッ素、メチル又はメトキシで一置換されているベンジルであり；又は
ＸはＲ3AＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Aはメチル又はフェニルであり、又はＸはＲ3BＯＣＨ2Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ3Bはフェニル、２−メチルフェニル、２，４−ジメチルフェニル、２，６−ジメチルフェニル、２，４，６−トリメチルフェニル、４−クロロフェニル又は４−フルオロフェニルであり；
ＡはないかＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）であり、Ｒ4は水素又はメチルであり、Ｒ5は１−メチルエチル、１，１−ジメチルエチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１−カルボキシシクロペント−１−イル、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ、（Ｒ）−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＮＨ2、ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｏメチル、（Ｒ）−ＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）Ｏベンジル、ＣＨ2ＯＨ、ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ3又はＣＨ2ＣＮであり；
Ｒ1は１，１−ジメチルエチル、２，２−ジメチルプロピル、１−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル又は４，４−ジメチルペンチルでありＲ2は水素であり、又はＲ1は水素でありＲ2はtert-ブチル、２，２−ジメチルプロピル、１−メチルブチル、３，３−ジメチルブチル又は４，４−ジメチルペンチルであり；Ｑは水素、ヒドロキシ又はメトキシであり；Ｙはイソプロピルアミノ、tert-ブチルアミノ、１−メチルプロピルアミノ、２−メチルプロピルアミノ、１−エチルプロピルアミノ、１−イソプロピル−２−メチルプロピルアミノ、１−エチルブチルアミノ、１−プロピルブチルアミノ、イソプロポキシ、１−エチルプロポキシ、フェニルアミノ、又はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ヒドロキシ、フッ素又は塩素からなる群から選択される１又は２の同一又は異なる置換基を有するフェニルアミノである。
最も好ましいグループは式１で表されるか又はその治療的に許容される酸付加塩であり、
Ｘはtert-ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、（２−フェニルエトキシ）カルボニル、アセチル、ベンゾイル、（２，４−ジクロロフェニル）カルボニル、（２，３，６−トリクロロフェニル）カルボニル、（２−メチルフェニル）カルボニル、（２，５−ジメチルフェニル）カルボニル、（２，６−ジメチルフェニル）−カルボニル、（３−アミノ−２−メチルフェニル）カルボニル、フェノキシメチルカルボニル、２−キノリルカルボニル、３−キノリルカルボニル、４−キノリルカルボニル、６−キノリルカルボニル、８−キノリルカルボニル、４−メトキシ−２−キノリルカルボニル、１−イソキノリルカルボニル、３−イソキノリルカルボニル、２−キノキサリニルカルボニル、１−メチル−２−インドリルカルボニル、２，３−ジヒドロインドール−２（Ｒ又はＳ）−イルカルボニル、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノール−３（Ｒ又はＳ）−イルカルボニル、１−オキソ−３−ピペリジノプロピル、（フェニルアミノ）メチルカルボニル又は（ベンジルアミノ）カルボニルであり、Ａがバリン、Ｎ−メチルバリン(N-MeVal)、Ｔｂｇ、イソロイシン(Ile)、ロイシン(Leu)、アスパラギン酸(cyPn)、アスパラギン酸(Asp)、βメチルアスパラギン酸(βMeAsp)、グルタミン酸、アスパラギン(Asn)、グルタミン(Gln)、β−メチルアスパラギン酸(βMeAsp)(OBzl)、セリン(Ser)、スレオニン(Thr)又はβＣＮ−アラニン(Ala)であり；Ｒ1は１，１−ジメチルエチルであり；Ｒ2は水素であり；Ｑは水素又はヒドロキシであり；Ｙは１−エチルプロピルアミノ、１−イソプロピル−２−メチルプロピルアミノ、１−プロピルブチルアミノ、イソプロポキシ、１−エチルプロポキシ、フェニルアミノ、（２，６−ジメチル−フェニル）アミノ、（２，６−ジエチルフェニル）アミノ又は（２，６−ジイソプロピルフェニル）アミノであり；Ｒ1を有する不斉炭素原子は（Ｒ）配置を有する。
本発明の化合物の他の最も好ましいグループは式１で表され、Ｘは（２−メチルフェノキシ）アセチル、（２，４−ジメチルフェノキシ）アセチル、（２，６−ジメチルフェノキシ）アセチル又は（２，４，６−トリメチルフェノキシ）アセチルであり、Ａはなく、Ｒ1は１，１−ジメチルエチルであり、Ｒ2は水素であり、Ｑは水素又はヒドロキシであり、Ｙは最後の例で定義された通りであり、Ｒ1を有する不斉炭素原子は（Ｒ）配置を有する。
好ましい化合物の更に特定のグループは式１で表され、Ｘがベンジルオキシカルボニル、２−キノリルカルボニル又は２−キノキサリニルカルボニルであり、Ａがバリン、Tbg、アスパラギン又はスレオニルであり、Ｒ1は１，１−ジメチルエチルであり、Ｒ2は水素であり、Ｑは水素又はヒドロキシであり、Ｙは１−エチルプロピルアミノ又は（２，６−ジメチルフェニル）アミノであり、Ｒ1を有する不斉炭素原子は（Ｒ）配置を有する。
好ましくは、Ａが基ＮＲ4ＣＨＲ5Ｃ（Ｏ）である式１の化合物に関して、Ｒ5を有する不斉炭素原子は（Ｓ）配置である。
本発明の範囲内において、ヒトにおいてＨＩＶ感染を治療するための一般式１の化合物、又はその薬学的に許容される酸付加塩、及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が含まれる。
また、本発明の範囲は、式１の化合物又はその薬学的に許容される酸付加塩を有効量投与することを含む、ヒトにおけるＨＩＶ感染の治療方法を含む。
また、本発明の範囲は、抗−ＨＩＶに有効な量の式１の化合物又はその薬学的に許容される酸付加塩でヒト細胞を処理することを含む、ＨＩＶ病原に対して上記細胞を保護するための方法を含む。
式１の化合物の製造方法についても以下に詳述する。
発明の詳細な説明
一般
一般に、アミノ酸及び保護基を示すために本明細書で用いられる略語は、生化学命名のIUPAC-IUB委員会の推薦に基づく。European Journal of Biochemistry 138，９(1984)を参照されたい。例えば、Val、Ile、Leu、Asp、Glu、Asn、Gln、Ser及びThrは、それぞれ、Ｌ−バリン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−セリン及びＬスレオニン残基を表す。
アミノ酸に関する「残基」なる用語は、対応するアミノ酸からカルボキシル基のヒドロキシ及びα−アミノ基の水素を１個取り除くことによって由来する基を意味するものとする。
本明細書において単独又は基との組み合わせで用いられる「低級アルキル」なる用語は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖アルキル基及び３〜６個の炭素原子を含む分岐鎖アルキル基を意味するものとし、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ヘキシル、１−メチルエチル、１−メチルプロピル、２−メチルプロピル、１−エチルプロピル及び１，１−ジメチルエチル（tert-ブチルとしても知られている）を含む。
本明細書において単独又は基との組み合わせで用いられる「低級シクロアルキル」なる用語は、３〜６個の炭素原子を含む環状炭化水素基を意味するものとし、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルを含む。
本明細書において用いられる「低級アルコキシ」なる用語は、１〜６個の炭素原子を含む直鎖アルコキシ基及び３〜４個の炭素原子を含む分岐鎖アルコキシ基を意味するものとし、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ヘキソキシ、１−メチルエトキシ、ブトキシ及び１，１−ジメチルエトキシを含む。後者の基は、一般にtert-ブチルオキシとして知られている。「（１−８Ｃ）アルコキシ」なる用語は、１〜８個の炭素原子を含むアルコキシ基を意味するものとし、例えば、メトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、１−エチルプロポキシ及び１−プロピルブトキシを含む。
本明細書において用いられる「アミノ」なる用語は一般式−ＮＨ2の基を意味するものとする。本明細書において用いられる「低級アルキルアミノ」なる用語は、１〜６個の炭素原子を含むアルキルアミノ基を意味するものとし、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、１−メチルエチルアミノ及び２−メチルブチルアミノを含む。本明細書において用いられる「（１−８Ｃ）アルキルアミノ」なる用語は、１〜８個の炭素原子を含むアルキルアミノ基を意味するものとし、例えば、メチルアミノ、プロピルアミノ、１−エチルプロピルアミノ及び１−プロピルブチルアミノを含む。
本明細書において用いられる「ハロゲン(halo)」なる用語は、臭素、塩素、フッ素及びヨウ素から選択されるハロゲン基を意味するものとする。
「１，２−シクロヘキサンジイル」なる用語は、基の隣接している炭素原子から２個の水素原子を除去することにより生ずる二価のシクロヘキサン基を意味するものとする。本発明の実施例においては、２個の炭素原子がＲ1及びＲ2を有しているものである。
本発明において用いられる「Het」なる用語は、窒素、酸素及び硫黄から選択される異種原子を含む、５員環又は６員環の単環式基、又は９員環又は１０員環の二環式基は、１又は２個の置換基を有する飽和又は不飽和ヘテロ環式基から水素原子を除去して得られる一価の基を意味するものとする。任意には、ヘテロ環式基は１又は２個の、例えば低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲン、アミノ又は低級アルキルアミノ等の置換基を有していてもよい。適当なヘテロ環式基、及び任意の置換ヘテロ環式基は、ピロリジン、テトラヒドロフラン、チアゾリジン、ピロール、１Ｈ−イミダゾール、１−メチル−１Ｈ−イミダゾール、ピラゾール、フラン、チオフェン、オキサゾール、イソキサゾール、チアゾール、２−メチルチアゾール、２−アミノチアゾール、２−（メチルアミノ）チアゾール、ピペリジン、１，４−ジオキサン、４−モルホリン、ピリジン、ピリミジン、２，４−ジメチルピリミジン、インドール、１−メチルインドール、２，３−ジヒドロインドール、キノリン、４−メトキシキノリン、イソキノリン、キノキサリン及び１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリンを含む。
本明細書において用いられる「薬学的に許容される担体」なる用語は、非毒性であり、一般に成分に対して逆の作用をしない、活性成分に対して不活性な賦形剤を意味するものとする。
本明細書において用いられる「有効量」なる用語は、in vivoにおいてＨＩＶに対して効果的であるのに十分な本発明の予定された量を意味するものとする。
本発明において用いられる他の記号：
0003911293.tif 000003
製法
式１の化合物は、４又は５個の構造単位又は断片から構成される。２つの末端単位は、アシル残基（Ｎ末端）と、アルキルアミノ、アルコキシ又はアリールアミノ残基の何れか（Ｃ末端）とである。中央の単位は、存在するか又はしないアミノ酸又はアミノ酸から誘導される残基（一般式１の残基Ａを参照）、及び２つの非ペプチド性断片（１，３（Ｓ）−ジアミノ−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノール残基及びスクシニル残基）である。
断片は、アミド結合によって、又はＣ末端がアルコキシ基である場合には、エステル結合によって結合している。事実上この特徴によって、適当な断片の段階的なカップリングを含むペプチド合成において通常に用いられている方法で適宜調製することができる。このような方法は、一般的な教科書、例えば、"Annual Reports In Organic Synthesis - 1990", K.turnbullら編, Academic Press, Inc., San Diego, CA, USA, 1990（及びそれに先立つ年報）, "Vogel's Textbook Of Practical Organic Chemistry", B. S. Furnissら編, Longman Group Limited, Essex, UK, 1986,及び"The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", E.Grassら編, Academic Press, New York, USA, 1979-1987, Volumes １〜9等に記載されている。
従って、一般に、式１の化合物は、適当な断片、即ち存在するか又はしないアミノ酸又はアミノ酸残基誘導体、及び化合物の非ペプチド性断片（Ｎ末端アシル及びＣ末端アミノ又はオキシ残基を含む）の逐次段階的なカップリングを含む方法によって調製することができ、もし必要であれば競争反応部位を除去するために適当に保護され、もし存在するのであれば式１の化合物を得るための段階的カップリングの完了後、保護基を除去する。
前述した方法の一般的な特徴は、適当な保護基を用いた多種のアミノ酸又はアミノ酸誘導体残基（又は、必要であれば非ペプチド性断片）の反応側鎖基の保護であり、上記保護基は最終的に保護基が除去されるまで、反応部位で化学反応が起こらないようにする。上記断片の遊離のカルボキシ基が第二の断片の遊離のα−アミノ基とカップリングする間、α−アミノ保護基による断片のα−アミノ基の保護も一般的である。α−アミノ保護基は、α−アミノ基のところで生じるという次のカップリング工程を許容するために選択的に除去することができるものである。
反応物質の遊離のカルボキシ基と、他の反応物質の遊離のアミノ基との脱水カップリングを促進するためのカップリング剤の使用が知られており、例えば、前述した"The Peptides:Analysis, SSynthesis, Biology", Volumes 1〜8を参照されたい。適当なカップリング剤の例は、１，１’−カルボニルジイミダゾール又はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドである。他の例は、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド又はＮ−エチル−Ｎ’−〔（３−ジメチルアミノ）プロピル〕カルボジイミドの存在下の１−ヒドロキシベンゾトリアゾールである。非常に実用的で有用なカップリング剤は、商業的に入手できる（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート単独、又は１−ヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下での使用である。他の非常に実用的で有用なカップリング剤は、商業的に入手できる２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートである。
カップリング剤を不活性溶媒、例えば２塩化メチレン、アセトニトリル又はジメチルホルムアミド中で処理する。過剰量の有機アミン、例えば、ジイソプロピルエチルアミン又はＮ−メチルモルホリンを反応混合物にｐＨを約８に維持するように加える。反応温度は、通常、−２０℃〜約３０℃であり、反応時間は２〜１８時間である。
反応を、下記反応図に説明し、式中、Ａ、Ｒ1、Ｒ2、Ｑ及びＹは上記に定義した通りであり、ＰＧはアミノ保護基（例えばBoc又はＺ）を表す。
0003911293.tif 000004
−２の必要な出発物質は、３（Ｓ）−（ジベンジルアミノ）−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブタンニトリルの水素化アルミニウムリチウム還元によって製造される。前者の化合物は、M.T.ReetzらのTetrahedron Lett., 29, 3295(1988)に既に開示されている。
式３の出発物質は、公知の出発物質から公知の方法によって製造することができる。例えば、適当な置換コハク酸無水物（化合物３のスクシナモイル部分に相当する）と適当なアミン又はアルコール（化合物３のＹ部分に相当する）との低温（−４０〜２０℃）でのピリジン溶液中における反応は、容易に所望のスクシナモイル誘導体又は式３のコハク酸モノエステルを提供する。光学的に純粋な置換コハク酸無水物の製造方法は、T.Polonaki,らのJ.Chem.Soc. Perkin Trans. I, 629(1988)に記載されている。コハク酸無水物の他の製造方法については、Comprehensive Organic Chemistry, D. Barton及びW.D.Ollis編, Pergamon Press, Oxford, UK, 1979, vol. 2, pp. 661-694を参照されたい。また、前述の適当なアミン又はアルコール（フェノールを含む）は商業的に入手できるか、標準方法で製造することができる。例えば、Comprehensive Organic Chemistry, ibid, Vol. 1, pp. 579-662及びVol. 2, pp. 1-184を参照されたい。
Hetを含んでいるものを含む、アシル部分（即ち、式１のＸ基）についての適当な必須の酸性出発物質は良く知られているか、公知の方法で製造することができる。例えば、Comprehensive Organic Chemistry, ibid, Vol. 2, pp. 593-622を参照されたい。
本発明の式１の化合物は、治療的に許容される酸付加塩の形態で得られる。この様な塩の例は、タンニン酸又はカルボキシメチルセルロース等の重合体酸だけでなく、酢酸、乳酸、コハク酸、安息香酸、サリチル酸、メタンスルホン酸又はｐ−トルエンスルホン酸等の有機酸、例えば塩酸、硫酸又はリン酸等のハロゲン化水素酸等の無機酸との塩である。望むなら、特定の酸付加塩は、R.A.BoissonnasらのHelv. Chim. Avta, 43, 1849(1960)に記載された方法で適当なイオン交換樹脂と処理することにより、例えば非毒性の薬学的に許容される塩である他の酸付加塩に変換される。
一般に、式１のペプチドの治療的に許容される塩はペプチド自身と生物学的に全く同等であり、本発明の範囲に含まれる。
生物学的側面
式１の化合物、又はその治療的に許容される塩のＨＩＶプロテアーゼ阻害特性及びＨＩＶ病原に対する保護効果は、生物化学的、微生物学的及び生物学的手段によって証明することができる。
式１の化合物、又はその治療的に許容される塩のＨＩＶプロテアーゼ阻害特性を証明するための特に有用な手段は、「組換えＨＩＶプロテアーゼＨＰＬＣ検定」である。この方法は、ＨＩＶポリプロテインの公知のＨＩＶプロテアーゼ切断部位を含むアミノ酸配列を有するデカププチド（基質）のＨＩＶプロテアーゼによる酵素的切断を阻害することの試験化合物の能力に基づく。H.G.Krausslichら, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 86, 807(1989)を参照されたい。式１の例となる化合物について得られた結果を伴うこの検定の詳細が、後述する実施例において詳述される。
式１の化合物、又はその治療的に許容される塩のＨＩＶ感染に対する細胞を保護する能力は、ヒトＴ４細胞系内でのＨＩＶの細胞変性における試験化合物の阻害活性を評価するための微生物学的方法によって証明することができる。このような方法の典型は、S.Harada及びN.YamamotoのJpn.J.Cancer Res (Gann), 76, 432(1985)及びS.HaradaらのScience, 229, 563(1985)に記載されたものである。後者の方法に基づく検定は、後述する実施例に記載されている。
ヒトにおけるＨＩＶ感染と戦うために本発明の化合物又はその治療的に許容される塩を用いる時、ペプチドは１又はそれ以上の薬学的に許容される担体を含む媒体中で、経口、局所又は非経口的に投与され、担体割合は、化合物の溶解性及び性質、投与経路及び生物学的プラクティスの選択により決定される。経口投与としては、化合物又はその治療的に許容される塩は、それぞれ薬学的に許容される担体中に活性成分を予定量、５〜１５０ｍｇの範囲で含むカプセル又は錠剤等の単位投与形態で処方される。局所投与としては、活性薬剤を0.０１〜２％、好ましくは0.０５〜１％含む薬学的に許容される媒体中で処方される。このような処方は、クリーム、ローション、舌下投与の形態で処方され、又は好ましくは経皮パッチ又は頬パッチである。非経口投与としては、式１の化合物は、薬学的に許容される媒体又は担体を含む組成物として、静脈、皮下又は筋肉投与で投与される。注射による投与としては、無菌水性媒体中の水溶液中の化合物を用いることが好ましく、媒体はバッファー又は保存剤等の他の溶剤を含んでいてもよく、溶液を等張にするための薬学的に許容される塩又はグルコースを十分量含んでもよい。
上記処方のための適当な媒体又は担体は、標準の薬学のテキスト、例えば"Remington's Pharmaceutical Sciences", 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1990に見られる。
化合物の投与量は、投与形態及び特に選択した活性薬剤によって変化するだろう。更に、投与量は、特に治療に置かれる宿主によって変化するだろう。一般に、治療はペプチドの最適投与量より実質的に低い投与量で開始する。従って、投与量は、環境下における最適な効果に到達するまで小さい増加によって増加する。一般に、化合物は、有害又は有毒な副作用を起こさないで抗ウイルスの効果的な結果を提供する濃度で投与するのが最も好ましい。
経口投与としては、化合物又はその治療的に許容される塩は、0.５〜１５ｍｇ／体重ｋｇ／日投与され、好ましくは0.５〜５ｍｇ／ｋｇ投与される。全身の投与に関しては、前述した変化が生ずるが、一般式１の化合物は１μｇ〜１００μｇ／ｋｇ／日の濃度で投与される。
上記に開示した処方はＨＩＶ感染の治療に対して効果的かつ比較的安全な薬物であるが、有益な結果を得るために、他の抗ウイルス薬物又は薬剤と上記処方を同時に投与する可能性は排除されない。このような他の抗ウイルス薬物又は薬剤は、可溶性ＣＤ４、ジドブジン(zidovudine)、ジダノシン(didanosine)、ネビラピン(nevirapine)、セキナビル(sequinavir)、２’，３’−ジデオキシシチジン、トリソジウムホスホノホルメート(trisodium phosphonoformate)、リババリン(ribavarin)、アシクロビア(acyclovir)又は抗ウイルスインターフェロン（例えば、α−インターフェロン又はインターロイキン−２）を含む。
以下の実施例は、本発明を更に説明する。溶液の百分率又は比は、特に断らない限り容量対容量の関係を表す。温度は、摂氏を意味する。核磁気共鳴（ＮＭＲ）は、Bruker 200MHz又は400MHzスペクトロメーターで記録した（４００ＭＨｚのスペクトルは、スペクトルの序文でそういうものとして知られている）。ＭＮＲスペクトルの化学シフトは、内部標準としてのテトラメチルシランに対するppmとして報告される。本明細書で用いられる略語又は記号は、以下のものを含む。Boc:tert-ブチルオキシカルボニル；tert-Bu：tert-ブチル；Bzl：ベンジル；DMF:ジメチルホルムアミド；HEPES:Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸；Et: エチル；Et2O: ジエチルエーテル；EtOAc:酢酸エチル；HPLC: 高速液体クロマトグラフィー；Me: メチル；MeOH: メタノール；Ph:フェニル；PhO:フェノキシ；Pr: プロピル；TBTU: ２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート；TFA:トリフルオロ酢酸；Ｚ：ベンジルオキシカルボニル。
実施例１
４−〔（１−エチルプロピル）アミノ〕−２（Ｒ）−tert−ブチル−４−オキソブタン酸
２（Ｒ）−tertのブチルジヒドロ−２，５−フランジオン（１0.０ｇ，６４mmol；T.Polonski, J.Chem.Soc.Perkin Trans. I, 629(1988)に記載された）のピリジン溶液（２３０ｍｌ）を−４０℃に冷却した。１−エチルプロピルアミン（6.７ｇ，７７mmol）のピリジン（２０ｍｌ）溶液を２０分以上かけて上記冷却した溶液に滴下した。反応混合液を室温（１０〜２２℃）まで温め、3.５日間攪拌した。減圧下に揮発成分を除去し、油状残留物を得、酢酸エチル（２００ｍｌ）に溶解し１０％クエン酸水溶液で洗浄した。水相を酢酸エチルで逆抽出し有機層を一緒にして食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥させた。溶媒を減圧下に除去し、半固体物質を得、ジエチルエーテル（１００ｍｌ）で共沸蒸留(coevaporationし、白色固体を得た（１5.４ｇ、収率９９％）。融点：104-108℃、〔α〕24D -3.2°(c=1, MeOH). 〔α〕24Hg365 -22.2°(c=1, MeOH). 1H NMR(CDCl3, 400MHz)δ0.86(t, J=7.6Hz, 3H), 0.88(t, J=7.3Hz, 3H), 1.02(s, 9H), 1.35(m, J=7.0Hz, 2H), 1.51(m,J=7.0Hz, 2H), 2.40(dd, J=14.5, 3.3Hz, 1H), 2.53(dd, J=14.3, 11.4Hz, 1H), 2.78(dd, J=11.3, 3.3Hz, 1H), 3.75(m, 1H), 5.37(d, J=8.9Hz, 1H).FAB-MS(m/z): 243(M+H)+。
実施例２
１−アミノ−３（Ｓ）−（ジベンジルアミノ）−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノール
M.T.Reetzら, Tetrahedron Lett., 29, 3295（1988）に記載された３（Ｓ）−（ジベンジルアミノ）−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブタンニトリル（５0.８２ｇ, １４３mmol）の無水ジエチルエーテル溶液（２５０ｍｌ）を、冷却したLiAlH4（8.１０ｇ, ２１３mmol）と無水ジエチルエーテル（５００ml）との混合物に加えた。混合物を、4.５時間攪拌しながら室温まで温めた。混合物を再び０°に冷却した。酢酸エチル（１００ml）を１５分かけてゆっくりと加えた。攪拌を０°で１５分続けた。２Ｎ NaOHの冷却した（０°）溶液（２５０ml）を反応混合物に滴下して加え、白色の懸濁液／乳濁液を得た。濁った有機層上清を分離し、懸濁液／乳濁液の残留物を４５μｍのフィルターに通した。ろ液を酢酸エチルで抽出し、抽出物を一緒にして最初の有機層に加えた。NaCl/Na2SO4で乾燥した後、溶液を約１００mlの容量の濃縮し、５°に１８時間放置した。沈殿した物質を分離し、ヘキサン（３００ml）で砕き、ろ過で集め減圧下に乾燥し標題の化合物を白色固体で得た（３４ｇ，収率６６％）。融点：72-76°〔α〕24D -1.9°(c=1, MeOH). 〔α〕24HG365 -24.0°(c=1, MeOH). 1H NMR(CDCl3, 400MHz)δ2.68(dd, J=12.6, 7.6, 7.2Hz, 1H), 2.81(dd, J=12.6, 3.8, 3.5Hz, 1H), 2.86-3.00(m, 2H), 3.08(dd, J=14.1, 7.6, 7.3Hz, 1H), 3.59(d, J=13.7Hz, 2H), 3.69(m, 1H), 3.71(d, J=13.7Hz, 2H), 7.16-7.35(m, 15H). FAB-MS(m/z): 361(M+H)+。
実施例３
Ｎ4−［３（Ｓ）−（ジベンジルアミノ）−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル］−Ｎ1−（１−エチルプロピル）−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンアミド
実施例２に記載した１−アミノ−３（Ｓ）−（ジベンジルアミノ）−４−フェニル−２（Ｒ）−ブタノール（5.００ｇ，１3.9mmol）の溶液、実施例１に記載した４−（１−エチルプロピルアミノ）−２（Ｒ）−tert−ブチル−４−オキソブタン酸（3.７０ｇ，１5.２mmol）、TBTU（5.３０ｇ，１6.５mmol）及びＮ−メチルモルホリン（６ｍｌ，５4.５mmol）のアセトニトリル溶液（６０ml）を室温で18時間攪拌した。反応混合物を減圧下濃縮した。残留物を酢酸エチルに溶解した。溶液を１Ｎアンモニア水（４×）及び食塩水（２×）で洗浄した。脱色した炭及びNa2SO4で乾燥した後、溶媒を減圧下除去した。残留物を、溶出液として8:2（ヘキサン／酢酸エチル(8:2)、続いてヘキサン／酢酸エチル(1:1)を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。適当な分画を一緒にした後溶媒を除去し、得られた黄色の残留物をヘキサンで砕き、減圧下に乾燥し標題の化合物を白色固体で得た（4.４３ｇ，収率５５％）。融点：110-112°〔α〕24D +6°(c=1, MeOH). 1H NMR(CDCl3, 400MHz)δ0.82(s, 9H), 0.86(t, J=7.3Hz, 3H), 0.88(t, J=7.3Hz, 3H), 1.23-1.38(m, 2H), 1.43-1.58(m, 2H), 1.95(dd, J=11.6, 3.2, 2.9Hz, 1H), 2.26(dd, J=13.7, 2.9Hz, 1H), 2.40(dd, J=13.4, 11.8Hz, 1H), 2.93(m,1H), 3.02(m, 1H), 3.18(dd, J=14.0, 4.1Hz, 1H), 3.33(dt, J=14.6, 4.7Hz, 1H), 3.42(d, J=13.4Hz, 2H), 3.58(broad s, 1H), 3.70(d, J=13.4Hz, 2H), 3.70-3.81(m, 3H), 5.00(broad t, J=5.5Hz, 1H), 5.20(d, J=9.2Hz, 1H), 7.15(d, J=7.0Hz, 3H), 7.20-7.37(m, 12H). FAB-MS(m/z): 586(M+H)+。
実施例４
Ｎ4−［３（Ｓ)−アミノ−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル］−Ｎ1−（１−エチルプロピル）−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド
実施例３の標題の化合物（6.４３ｇ，１0.９７mmol）をメタノール（１００ml）に溶解した。２０％Pb(OH)2/C（２００mg）及び氷酢酸（５ｍｌ）を溶液に加えた。混合液をH2雰囲気中で1.５時間攪拌した。その後、混合液を４５μｍの膜でろ過し、ろ液を減圧下濃縮した。残留物を酢酸エチルに溶解した。溶液をNa2CO3の飽和水溶液（３×２０ml）及び食塩水（２×）で連続的に洗浄し、Na2SO4で乾燥し濃縮して固体を得た。固体をジエチルエーテルで砕き、表題の化合物を白色粉末で得た（3.５３ｇ，収率７９％）。融点  155-158°〔α〕24D -14.0°(c=1, MeOH). 1H NMR(CDCl3, 400MHz)δ0.85(t, J=7.3Hz, 3H), 0.87(t, J=7.3Hz, 3H), 1.01(s, 9H), 1.26-1.41(m, 2H), 1.41-1.58(m, 2H), 2.36(dd, J=13.8, 2.9, 2.6Hz, 1H), 2.43-2.50(m, 2H), 2.60(dd, J=13.8, 11.4Hz, 1H), 2.98-3.09(m, 2H), 3.15(m, 1H), 3.52-3.60(m, 2H), 3.72(m, 1H), 5.40(d, J=8.9Hz, 1H), 6.50(broad t, J=5.4Hz, 1H), 7.18-7.33(m, 5H). FAB-MS(m/z): 406(M+H)+。
実施例５
Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛［Ｎ−（２−キノリルカルボニル）スレオニル］アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド
a)  Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛［Ｎ−（tert−ブチルオキシカルボニル）スレオニル］アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド：
Ｎ−Boc-Thr-OH（0.６５ｇ，2.９６mmol）及び実施例４の表題の化合物（1.０９ｇ，2.６９mmol）を、DMF（２５ml）中のTBTU（0.９５ｇ，2.９６mmol）及びＮ−メチルモルホリン（0.９０ml，8.１８mmol）でカップリングした。３時間後、溶液を減圧下に除去した。残留物を酢酸エチルに溶解した。溶液を１Ｎアンモニア水溶液及び食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、減圧下に濃縮し半固形物を得た。５％メタノールを含む酢酸エチル溶液を溶出液として用いたフラッシュクロマトグラフィーによる精製により、所望の化合物を白色固体として得た（1.４３ｇ，収率８８％）。この白色固体を、更なる精製なしで、以下の工程に用いた。
b)  Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−［（スレオニル）アミノ］−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド：
本実施例の(a)の項の生成物（1.４３ｇ，2.３５mmol）をTFA/CH2Cl2（3:7，１００ml）に溶解した。溶液を室温で２０分間攪拌した。揮発成分を減圧下に除去して所望の化合物を固体として得た（1.６５ｇ）。該固体を以下の工程に用いた。
c)本実施例の表題の化合物：
(b)の項の粗生成物（1.６５ｇ）及び２−キノリルカルボン酸（0.４５ｇ，2.６０mmol）を、DMF（２５ml）中のTBTU（0.８３ｇ，2.５８mmol）及びＮ−メチルモルホリン（1.３ml，１1.８mmol）を用いてカップリングした。室温で４時間後、溶媒を減圧下に除去した。残留物を酢酸エチルに溶解し、溶液を１Ｎアンモニア水溶液及び食塩水で洗浄した。Na2SO4で乾燥した後、溶媒を減圧下に除去した。残留物を、酢酸エチル／ヘキサン／メタノール(70:25:5)を用いたフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。得られた物質を逆相ＨＰＬＣ（移動相としてTFAの0.０６％アセトニトリル溶液／0.０６％TFA水溶液を使用）により更に精製し、本実施例の表題の化合物を白色固体として得た（凍結乾燥後、0.９７ｇ，収率６２％）。融点  110-125°〔α〕24D +21.4°(c=1, MeOH). 1H NMR(CDCl3, 400MHz)δ0.83(t, J=7.6Hz, 3H), 0.86(t, J=7.6Hz, 3H), 1.05(s, 9H), 1.20(d, J=6.4Hz, 3H), 1.24-1.38(m, 2H), 1.4-1.57(m, 2H), 2.43(d, J=11.5Hz, 1H), 2.55-2.73(m, 3H), 3.11(dd, J=13.3, 4.5Hz, 1H), 3.20(m, 1H), 3.63(m, 1H), 3.70(m, 2H), 4.27(m, 1H), 4.4-4.7(m, 4H), 5.65)d, J=8.9Hz, 1H), 6.83(q, J=7.3Hz, 1H), 6.87-6.98(m, 3H), 7.01(t, J=5.9Hz, 1H), 7.08(d, J=7.0Hz, 2H), 7.66(dt, J=7.0, 1.0Hz, 1H), 7.82(dt, J=8.3, 1.3Hz, 1H), 7.92(d, J=8.0Hz, 1H), 8.19(d, J=8.6Hz, 1H), 8.25(d, J=8.6Hz, 1H), 8.36(d, J=8.6Hz, 1H), 8.85(d, J=8.3Hz, 1H). FAB-MS(m/z): 662(M+H)+, 684(M+Na)+。
実施例６
Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，６−ジメチルフェノキシ）アセチル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−フェニルブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミドの調製
実施例４の表題の化合物（0.０２０ｇ，0.０４９mmol）、（２，６−ジメチルフェノキシ）酢酸（0.０１ｇ，0.０５３mmol）及びTBTU（0.０２０ｇ，0.０６mmol）をDMF（1.５ml）に溶解した。Ｎ−メチルモルホリン（１００μｌ，0.９mmol）を溶液に加えた。反応混合液を室温で2.５時間攪拌し、次いで１ＮNH4OH水溶液を加えることにより急冷した。混合液を、0.０６％TFA水溶液−0.０６％TFAアセトニトリル溶液のグラジエントを用いたC-18逆相カラム上でＨＰＬＣに直接かけた。適当な分画を一緒にし、凍結乾燥後、表題の化合物を非晶質固体として得た（0.０１２ｇ）。1H NMR(CDCl3, 400MHz)δ0.86(t, J=7.3Hz, 3H), 0.88(t, J=7.3Hz, 3H), 1.09(s, 9H), 1.25-1.4(m, 2H), 1.44-1.58(m, 2H), 2.12(s, 6H), 2.41(d, J=10.8Hz, 1H), 2.59(m, 1H), 2.89(dd, J=14.3, 8.9Hz, 1H), 3.04(dt, J=14.0, 4.8Hz, 1H), 3.27(dd, J=14.3, 3.8Hz, 1H), 3.66(m, 1H), 3.73(m, 1H), 3.87(ddd, J=17.2, 7.0, 2.6Hz, 1H), 4.08(d, J=15.0Hz,1H), 4.22(d, J=15.0Hz, 1H), 4.32(dq, J=8.4, 5.1Hz, 1H), 5.45(d, J=9.5Hz, 1H), 6.88(d, J=8.6Hz, 1H), 6.93-7.02(m, 3H), 7.2-7.32(m, 5H). FAB-MS(m/z): 568(M+H)+, 590(M+Na)+。
本実施例で用いた（２，６−ジメチルフェノキシ）酢酸は、以下のように調製した。２，６−ジメチルフェノール（５００ｇ，4.０９mol）、エチルブロモアセテート（４８０ml，4.３０mol）及び無水K2CO3（６９０ｇ，5.０mol）をアセトン（２リットル）中に懸濁し、混合液を室温で５６時間攪拌し、次いで還流させて２４時間加熱した。１ＮNaOH（１リットル）を加え、加熱を更に４時間続けた。その後、固体のNaOH（１５０ｇ，3.７５mol）を加え、加熱を更に４８時間続けた。室温まで冷却した後、アセトンを減圧下に除去した。残留物を濃塩酸でｐＨ１に調整した。得られた黄褐色の沈殿を集め、水で洗浄し、空気乾燥しイソプロパノールで結晶化し、４８０ｇの物質を得た。後者の物質を酢酸エチルから再結晶することにより精製し、（２，６−ジメチルフェノキシ）酢酸を白色針状結晶として得た（３８６ｇ，収率５２％）。融点  137.5-13°1H NMR(CDCl3)δ2.30(s, 6H), 4.50(s, 2H), 7.0(m, 3H), 10.35(broad s, 1H). MS(C/Iイソオクタン）m/z: 181(M+1).比較できる純度の生成物（７3.７ｇ）の第二の生産物が、母液を濃縮することにより得られた。生成物の全収量は４５9.７ｇ（収率６２％）であった。
後者の方法に従い、出発物質として２，６−ジメチルフェノールを適当なフェノールに置換することにより、他のフェノキシ酢酸誘電体を得ることができる。例えば、２，４−ジメチルフェノールは（２，４−ジメチルフェノキシ）酢酸を与える。
実施例１〜６の方法に従い、適当な中間体を用いることにより、以下の実施例の表に例示する、一般式１の化合物の他の例を得ることができる。
実施例７
以下の表１〜８は、1991年８月28日に公開された、P.C.Anderson, S.Rakhit及びC.Yoakimの欧州特許出願443 560に記載された組換えＨＩＶプロテアーゼＨＰＬＣ検定による試験をした場合の式１の例示された化合物について得られた結果を挙げる。この検定により得られた検定は、IC50として報告されて、ＨＩＶプロテアーゼの５０％阻害を生ずる試験化合物の濃度を表す。
更に、表１〜８は、既に上述したHaradaらによって開示された細胞培養検定を基礎とする、後述するプロトコールに従った抗ウイルス（抗−ＨＩＶ）について検定した時の式１の例示された化合物について得られた結果を挙げる。ＨＩＶが細胞内で迅速に複製するので、形質転換細胞が用いられた。
細胞培養検定
1.  試験化合物を、５mg/mlの濃度になるようにジメチルスルホキシドに溶解した。得られた溶液は、使用するまで４°に保存することができる。
2.  得られた溶液をPRMI 1640（Gibco Laboratories, St. Lawrence, MA, USA）で４倍（４×）希釈し、試験するための最終濃度にした。いったんPRMI 1640で希釈すると、溶液は４時間以内に細胞培養検定に用いた。
3.  後者の溶液（５０μｌ）を９６穴の平底マイクロタイタープレートに３つづつ加えた。また、PRMI（５０μｌ）をコントロールウエルに加えた。
4.  C8166細胞（５×１０4）、１０％加熱不活性牛胎児血清（ＦＣＳ）、１2.５μｌ／ｍｌゲンタマイシンを含むHEPEAバッファー入りRPMI 1640（ｐＨ＝7.２）（完全培地）（５０μｌ）を全てのウエルに加えた。
5.  １００μｌの完全培地に含まれる５０倍のH9/HTLC-IIIBストック（５０％ＦＣＳ中に細胞培養上清として液体窒素中に保存）のTCID50を全てのウエルに加えた。ウイルスストックの感染力価は、C8166細胞におけるエンドポイント希釈によって前もって決定しておいた。ストックの力価は、−１９３°で保存した時６〜１２ヶ月間安定である。
6.  次いで、マイクロタイタープレートを、３７°、５％ＣＯ2の湿らせたインキュベエーターの水平な棚に７２時間おいた。
7.  次いで、プレートを除去し、融合細胞(syncytia)の中心を低位相差光顕微鏡でカウントした。どのような融合細胞の形成の証拠を示す各々の細胞のクラスターが、融合細胞の１つのセンターと見られる。コントロールウエルは、ウエル当たり２５〜７５の融合細胞のセンターを有する。
8.  融合細胞形成の阻害の割合は、以下の式によって計算される。
0003911293.tif 000005
細胞融合形成の５０％阻害を生ずる試験化合物の濃度、即ちEC50は、希釈溶液の連続的な３段階の希釈及び試験化合物の種々の濃度に対する細胞融合形成の阻害割合をグラフにプロットする技術を用いて決定する。
下記の表において、検定結果が、見出しのIC50（ｎＭ）の下における前述した組換えＨＩＶプロテアーゼＨＰＬＣ検定及び見出しのEC50（ｎＭ）の下における細胞培養検定からの例示された化合物について挙げられる。表に挙げられた化合物のいくつかについて、EC50は決定されていない（ＮＤ）ことに注意されたい。
0003911293.tif 000006
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0003911293.tif 000014
更に、他の化合物は以下の通りである。：
Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛（２，５−ジメチルフェニル）カルボニル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−ブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド、
Ｎ1−（２,６−ジメチルフェニル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，５−ジメチルフェニル）カルボニル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−ブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド、
Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，６−ジメチルフェニル）−カルボニル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−ブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド、
Ｎ1−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，６−ジメチルフェニル）カルボニル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−ブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド、
Ｎ1−（１−エチルプロピル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，６−ジメチル）−アセチル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−ブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド、及び
Ｎ1−（２，６−ジメチルフェニル）−Ｎ4−｛３（Ｓ）−｛｛２，６−ジメチルフェノキシ）アセチル｝アミノ｝−２（Ｒ）−ヒドロキシ−４−（４−ヒドロキシフェニル）−ブチル｝−３（Ｒ）−tert−ブチルブタンジアミド。