(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗酸化活性成分として
（ａ）下記一般式（Ｉ）：
0004024848.tif 000039
［式中、Ｒ1は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル基；
Ｒ2は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル基；ただし、Ｒ1およびＲ2のうち少なくとも一つは水素である；
Ｒ3は−（ＣＨ2）nＣＯＲ4；
Ｒ4は−ＯＲ8；−ＮＨＲ5、−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＳＯ3-Ｙ+、−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）3Ｘ-、
0004024848.tif 000040
Ｒ5は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル；
Ｒ8は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル；
ｎ＝２；
Ｘ-は化粧品中に許容しうる酸のアニオン；
Ｙ+は化粧品中に許容しうる塩基のカチオン ］で示される４−位（または５−位）で置換された少なくとも１の２−メルカプトイミダゾール誘導体、式（Ｉ）中のＲ8が水素であるときに化粧品中に許容しうるその塩基付加塩、または式（Ｉ）中のＲ5 が水素であるときに化粧品中に許容しうるその酸付加塩、および化粧品中に許容しうる担体を含む抗酸化活性を有する化粧品組成物。
【請求項２】
上記２−メルカプトイミダゾール誘導体 が、最終組成物の全重量に基づいて０.１〜５重量％の量で含まれる、請求項１に記載の化粧品組成物。
【請求項３】
上記２−メルカプトイミダゾール誘導体が、３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル、３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸、３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパンアミド、Ｎ−２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパノイルオキシ］エチル−Ｎ'−メチルピペラジン、２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパンアミド］エタンスルホン酸、および３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸コリンクロライド よりなる群から選ばれる、請求項１または２に記載の化粧品組成物。
【請求項４】
抗酸化活性成分として
（ａ）下記一般式（Ｉ）：
0004024848.tif 000041
［式中、Ｒ1は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル基；
Ｒ2は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル基；ただし、Ｒ1およびＲ2のうち少なくとも一つは水素である；
Ｒ3は−（ＣＨ2）nＣＯＲ4；
Ｒ4は−ＯＲ8；−ＮＨＲ5、−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＳＯ3-Ｙ+、−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）3Ｘ-、
0004024848.tif 000042
Ｒ5は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル；
Ｒ8は水素、またはＣ1−Ｃ6の低級アルキル；
ｎ＝２；
Ｘ-は食品中に許容しうる酸のアニオン；
Ｙ+は食品中に許容しうる塩基のカチオン ］で示される４−位（または５−位）で置換された少なくとも１の２−メルカプトイミダゾール誘導体、式（Ｉ）中のＲ8が水素であるときに食品中に許容しうるその塩基付加塩、または式（Ｉ）中のＲ5 が水素であるときに食品中に許容しうるその酸付加塩、および食品中に許容しうる担体を含む抗酸化活性を有する食品組成物。
【請求項５】
上記２−メルカプトイミダゾール誘導体 が、最終組成物の全重量に基づいて０.１〜５重量％の量で含まれる、請求項４に記載の食品組成物。
【請求項６】
上記２−メルカプトイミダゾール誘導体が、３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル、３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸、３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパンアミド、Ｎ−２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパノイルオキシ］エチル−Ｎ'−メチルピペラジン、２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパンアミド］エタンスルホン酸、および３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸コリンクロライド よりなる群から選ばれる、請求項４または５に記載の食品組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、４位（または５位）で置換された２−メルカプトイミダゾール誘導体の酸化防止剤としての使用、その調製法およびそれを適用した医薬、化粧品または食品組成物に関する。
技術背景
４位または５位がカルボニル含有基（ケトン、カルボキシルまたはアミド基）で置換された幾つかの２−メルカプトイミダゾール誘導体が抗酸化作用（スミス（Ｒ.Ｃ.ＳＭＩＴＨ）ら、Ｂiochem.Ｐharmacol.,（１９８７）、３６、９、１４５７〜１４６０頁参照）および抗炎症作用（マエダ（Ｓ.ＭＡＥＤＡ）ら、Ｃhem.Ｐharm.Ｂull.,（１９８４）、３２、２５３６〜２５４３頁参照）を有することがわかっている。
本発明の主題を構成する新規な２−メルカプトイミダゾール誘導体の抗酸化特性は、Ｌ−（＋）−エルゴチオネイン［（αＳ）−α−カルボキシ−２,３−ジヒドロ−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチル−２−チオキソ−１Ｈ−イミダゾール−４−エタナミニウム内部塩］（該誘導体の一部を構成する）のものと同様である。
Ｌ−（＋）−エルゴチオネインは２−メルカプトイミダゾール構造を有する天然分子であり、クラビセプス・プルプレア（Ｃlaviceps purpurea）などのある種のライ麦麦芽真菌によって生合成される（タンレット（Ｃ.ＴＡＮＲＥＴ）、Ｃ.Ｒ.Ａcad.Ｓci.,（１９０９）、１４９、２２２〜２２４頁参照）。Ｌ−（＋）−エルゴチオネインの化学構造は、２−メルカプトイミダゾール環およびベタインからなる限りにおいて生命界では稀である（スケレルン（Ｇ.Ｇ.ＳＫＥＬＬＥＲＮ）、「Ｓulfur-containing drugs and related organic compounds: Ｃhemistry,Ｂiochemistry and Ｔoxicology」、ダマニ（Ｌ.Ａ.ＤＡＭＡＮＩ）編、エリス・ホーウッド・リム（Ｅllis Ｈorwood Ｌim）、（１９８９）、vol.１、Ｂ部、３章、４９〜８９頁参照）。ヒトに関してはエルゴチオネインに対して栄養要求性であり、ヒトはこれをもっぱら食物から得ている。エルゴチオネインの生理学的濃度は、赤血球、肝臓、腎臓、精液および白内障のない水晶体において０.１〜２.０ミリモルの範囲である。エルゴチオネインの生物学的役割についてはまだ確かではないが、抗酸化特性については広く記載されている（ハートマン（Ｐ.Ｅ.Ｈartman）、Ｍeth.Ｅnzymol.,（１９９０）、１８６、３１０〜３１８頁、およびアカンム（Ｄ.ＡＫＡＮＭＵ）ら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９１）、２８８、１０〜１６頁参照）。生理学的条件（濃度およびｐＨ）下では、エルゴチオネインは過酸化水素Ｈ2Ｏ2ともスーパーオキシドアニオンＯ2-とも反応しない（アカンムら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９１）、２８８、１０〜１６頁参照）。対照的に、エルゴチオネインはパルス放射線分離（ルージー（Ｍ.ＲＯＵＧＥＥ）ら、Ｐhotochem.Ｐhotobiol.,（１９８８）、４７、４８５〜４８９頁参照）やフェントン反応（アカンムら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９１）、２８８、１０〜１６頁参照）によって生成したＯＨラジカルとは反応し、その速度は拡散の最大速度に近い。エルゴチオネインは次亜塩素酸ＨＯＣｌと反応し、それゆえα１−アンチトリプシン（α１−antitrypsine）の不活化を防ぎ（アカンムら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９１）、２８８、１０〜１６頁参照）、ローズベンガルなどの光増感剤の励起状態を消滅させることにより一重項酸素の光生成を抑制する（スパイサー（Ｓ.Ｓ.ＳＰＩＣＥＲ）ら、Ｐroc.Ｓoc.Ｅxp.Ｂiol.Ｍed.,（１９５１）、７７、４１８頁参照）。さらに、大部分の２−メルカプトイミダゾール誘導体と同様に、エルゴチオネインはＣｕ++、Ｈｇ++、Ｚｎ++、ＣＯ++およびＮｉ++などの２価金属と非常に安定な錯体を形成する（ハンロン（Ｄ.Ｐ.ＨＡＮＬＯＮ）、Ｊ.Ｍed.Ｃhem.,（１９７１）、１４、１０８４頁、およびモトハシ（Ｎ.ＭＯＴＯＨＡＳＨＩ）ら、Ｃhem.Ｐharm.Ｂull.,（１９７４）、２２、６５４〜６５７頁参照）。たとえばグルタチオンやシステインなどの多くのアルキルメルカプタンとは対照的に、エルゴチオネインは金属塩（Ｆｅ++）の存在下でのポリ不飽和脂肪酸の過酸化を刺激せず（アカンムら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９１）、２８８、１０〜１６頁参照）、このことは不活性化するキレート剤としての特性および主としてチオン構造であることと一致している。２−メルカプトイミダゾール構造を有する酸化防止剤を使用する他の利点は、空気を含ませた水溶液中で非常に安定であることである。実際、２−メルカプトイミダゾール誘導体の互変異性平衡は溶液中で完全にチオン形の方へ傾いているので（ボジャースカ−オレジュニク（Ｅ.ＢＯＪＡＲＳＫＡ−ＯＬＥＪＮＩＫ）ら、Ｍag.Ｒes.Ｃhem.,（１９８５）、２３、１６６〜１６９頁参照）、２−メルカプトイミダゾール環の硫黄原子は実際に溶解している酸素と反応しない。２−メルカプトイミダゾール構造を有する酸化防止剤を使用するうえでのさらに他の利点は、そのジスルフィドが他のメルカプタン、たとえば、システイン、システアミン、グルタチオンまたはリポ酸の存在下で不安定であることである。
エルゴチオネインおよび幾つかの２−メルカプトイミダゾール誘導体は、マイクロモル濃度にて、インビトロで亜硝酸ナトリウムの存在下でインキュベートしたオキシヘモグロビンからのメトヘモグロビンの生成を効果的に抑制する（スミス（Ｒ.Ｃ.ＳＭＩＴＨ）ら、Ｂiochem.Ｐharmacol.,（１９８７）、３６、９、１４５７〜１４６０頁、およびモーテンセン（Ｒ.Ａ.ＭＯＲＴＥＮＳＥＮ）、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９５３）、４６、２４１〜２４３頁参照）。エルゴチオネインは、生理学的ｐＨにおいて過酸化水素Ｈ2Ｏ2の存在下で生成するフェリル形（formes ferryl）のヘムタンパク質を還元する（アードゥイニ（Ａ.ＡＲＤＵＩＮＩ）ら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９０）、２８１、４１〜４３頁参照）。フェリルミオグロビン（ＭｂIV）の急速な還元は、酸化的ストレスとりわけ虚血後の再灌流の間において、エルゴチオネインが一般に筋肉組織を、とりわけ心臓組織を保護する本質的なメカニズムでありうる。単離ラット心臓の虚血後再灌流モデルにおいて、虚血の１５分後にエルゴチオネイン（１００μモル）が流出液の乳酸脱水素酵素活性の測定によって評価される細胞壊死の程度を制限することが示されている（アードゥイニら、Ａrch.Ｂiochem.Ｂiophys.,（１９９０）、２８１、４１〜４３頁参照）。
化学的な観点から、２−メルカプトイミダゾール誘導体は２つの主要な経路から得られている；すなわち、
＊α−アミノケトン誘導体をチオシアン酸カリウムと反応させるか（マエダ（Ｓ.ＭＡＥＤＡ）ら、Ｃhem.Ｐharm.Ｂull.,（１９８４）、３２、２５３６〜２５４３頁、イソムラ（Ｙ.ＩＳＯＭＵＲＡ）ら、Ｃhem.Ｐharm.Ｂull.,（１９８４）、３２、１５２〜１６５頁、およびフェルナンデス−ボラノス（Ｊ.ＦＥＲＮＡＮＤＥＺ−ＢＯＬＡＮＯＳ）ら、Ａnales de Ｑuimica、（１９７４）、７０、９４〜９５頁参照）またはα−ハロケトン誘導体をチオ尿素またはその誘導体と反応させることにより２−メルカプトイミダゾール環を生成させ、ついで＊求電子性イミダゾール環への硫黄含有誘導体の求核付加（イトー（Ｓ.ＩＴＯ）、Ｊ.Ｏrg.Ｃhem.、（１９８５）、５０、３６３６〜３６３８頁参照）または求核性イミダゾール環への硫黄の求電子付加（ベナク（Ｂ.Ｌ.ＢＥＮＡＣ）ら、Ｏrg.Ｓynthesis,coll.vol.ＶＩＩ、１９５〜１９６頁参照）のいずれかによるイミダゾール環の２−位への硫黄の導入。
発明の記載
本発明の目的は、良好な抗酸化活性および好ましくは良好な細胞保護活性をも有する新規化合物を提供し、それによって医薬、化粧品または食品組成物の形態で価値ある活性成分を調製することを可能にするという新規な技術的課題を解決することにある。
本発明の他の目的は、これら化合物を良好な収率で直接的に調製する方法を提供する解決手法によって上記新規な技術的課題を解決することにある。
本発明は上記新規な技術的課題を初めて、簡単な解決手法により、良好な収率の比較的直接的な調製法および極めて高い純度（とりわけ光学純度）の生成物によって同時に解決するものである。
実際、本発明は、イミダゾール環の２−位に硫黄を導入するための新規な方法を提唱するものであり、その機構は求核付加−開環−閉環（ＮＡＲＯＲＣ）タイプの機構と共通するところがある。この新規方法の操作条件は、キラル中心、とりわけアミノ酸のα−炭素のキラル中心の完全さを保持するに充分なほど穏やかである。
それゆえ、第一の特徴によれば、本発明は、下記一般式（Ｉ）：
0004024848.tif 000002
［式中、Ｒ1は水素、低級アルキル、アラルキル基または置換アラルキル基；Ｒ2は水素、低級アルキル、アラルキル基または置換アラルキル基；ただし、Ｒ1およびＲ2のうち少なくとも一つは水素である；
Ｒ3は−（ＣＨ2）nＣＯＲ4、−（ＣＨ2）nＮ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-または−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＲ4）Ｎ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-；
Ｒ4は−ＯＲ8、−ＮＨＲ5、−α−アミノ酸、好ましくは天然の−α−アミノ酸，−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＳＯ3-Ｙ+、−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2-Ｙ+、−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）3Ｘ-、
0004024848.tif 000003
Ｒ5は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ6は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ7は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ8は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
ｎ＝１または２；
Ｘ-は化粧品、医薬または食品中に許容しうる酸のアニオン；
Ｙ+は化粧品、医薬または食品中に許容しうる塩基のカチオン；
Ｌ−エルゴチオネインを除く］で示される４−位（または５−位）で置換された２−メルカプトイミダゾール誘導体の酸化防止剤としての使用に関する。
明細書および請求の範囲において、
−アルキル、低級アルキル、アルコキシ、低級アルコキシ、アシル、アミノアシルまたはカルボキシル基は、好ましくは１〜６個の炭素を有する直鎖または分枝鎖基を意味するものと理解される；
−アリール基またはアラルキル基に用いる置換なる語は、これら基が低級アルキル、低級アルコキシ、ヒドロキシル、アミノおよびカルボキシルより選ばれる１もしくは２以上の同一または異なる基によって、または１もしくは２以上の水素原子によって、芳香族残基上で置換されていることを示す；
−Ｒ8が水素原子である場合は、本発明はまた、医薬、化粧品または食品中に許容しうる塩基との式（Ｉ）で示される上記化合物の付加塩をも包含する；
一Ｒ5、Ｒ6またはＲ7が水素原子である場合は、本発明はまた、医薬、化粧品または食品中に許容しうる酸との式（Ｉ）で示される上記化合物の付加塩をも包含する。  医薬、化粧品または食品中に許容しうる酸としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、酒石酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸などが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
医薬、化粧品および食品中に許容しうる塩基であって、Ｒ8が水素原子である該化合物を塩にするために適当に加えうるものとしては、水酸化ナトリウムおよびカリウム、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の炭酸塩、またはトリエチルアミンまたはアルギニンなどの有機塩基が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
一つの有利な態様において、本発明は、とりわけ酸化性のフリーラジカルの過剰産生および／または鉄、銅またはマンガンなどの遷移金属のプールの細胞内脱区画
0004024848.tif 000004
に伴う酸化的ストレスが関与する病的状態を治療するための、抗酸化活性を有する医薬組成物を製造するための式（Ｉ）で示される上記化合物の使用に関する。
他の有利な態様において、本発明は、虚血または虚血後再灌流によって引き起こされた組織変性を予防するための、とりわけ心筋梗塞を予防するための、心室細動の原因である虚血後心不整脈を予防するための、とりわけ、たとえばパラカート、ダイクォット、アントラサイクリン類またはニトロフラン類などの生体異物による中毒の治療を含むフリーラジカルの過剰産生に伴う浮腫、壊死および線維症などの組織変性を予防するための、またはとりわけ鎌状赤血球貧血、サラセミア、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症およびマラリアにおける赤血球の酸化的ストレスに伴う病的状態、またはイオン化するＸ線またはガンマ線並びに紫外線による照射に対して保護するための、または臓器移植者において保存媒体中でたとえば心臓、肝臓、腎臓または肺などの移植片を保護するための、医薬組成物を製造するための式（Ｉ）で示される上記化合物の使用に関する。
他の有利な態様において、本発明は、とりわけ紫外線に対して保護するための抗酸化活性を有する化粧品組成物の製造のための、式（Ｉ）で示される化合物の使用に関する。
他の有利な態様において、本発明は、抗酸化活性を有する食品組成物を製造するための、式（Ｉ）で示される化合物の使用に関する。
他の有利な態様において、上記式（Ｉ）で示される２−メルカプトイミダゾール誘導体は、最終組成物の全重量に基づいて０.１〜５重量％、好ましくは０.１〜１重量％の量で含まれる。
他の有利な態様において、本発明は、適すれば薬理学的に許容しうる賦形剤、ビヒクルまたは担体中に２−メルカプトイミダゾール誘導体を１〜５００ｍｇ含有する単位剤型の形態の組成物の使用に関する。
第二の特徴によれば、本発明はさらに、とりわけ抗酸化活性を有する医薬、化粧品または食品組成物を提供するものであり、該組成物は活性成分として、適すれば医薬、化粧品または食品中に許容しうる賦形剤、担体またはビヒクル中に下記一般式（Ｉ）
0004024848.tif 000005
［式中、Ｒ1は水素、低級アルキル、アラルキル基または置換アラルキル基；
Ｒ2は水素、低級アルキル、アラルキル基または置換アラルキル基；ただし、Ｒ1およびＲ2のうち少なくとも一つは水素である；
Ｒ3は−（ＣＨ2）nＣＯＲ4、−（ＣＨ2）nＮ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-または−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＲ4）Ｎ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-；
Ｒ4は−ＯＲ8、−ＮＨＲ5、−α−アミノ酸、好ましくは天然の−α−アミノ酸，−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＳＯ3-Ｙ+、−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2-Ｙ+、−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）3Ｘ-、
0004024848.tif 000006
Ｒ5は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ6は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ7は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ8は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
ｎ＝１または２；
Ｘ-は化粧品、医薬または食品中に許容しうる酸のアニオン；
Ｙ+は化粧品、医薬または食品中に許容しうる塩基のカチオン；
Ｌ−エルゴチオネインを除く］で示される少なくとも一つの２−メルカプトイミダゾール化合物を含む。
この組成物の他の特別の態様は上記記載から明らかであり、また実施例を含む以下の記載からも当業者には明らかであろう。
第三の特徴により、本発明はまた、下記一般式（Ｉ）
0004024848.tif 000007
［式中、Ｒ1は水素、低級アルキル、アラルキル基または置換アラルキル基；
Ｒ2は水素、低級アルキル、アラルキル基または置換アラルキル基；ただし、Ｒ1およびＲ2のうち少なくとも一つは水素である；
Ｒ3は−（ＣＨ2）nＣＯＲ4、−（ＣＨ2）nＮ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-または−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＲ4）Ｎ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-；
Ｒ4は−ＯＲ8、−ＮＨＲ5、−α−アミノ酸、好ましくは天然の−α−アミノ酸，−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＳＯ3-Ｙ+、−ＮＨＣＨ2ＣＨ2ＣＯ2-Ｙ+、−ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）3Ｘ-、
0004024848.tif 000008
Ｒ5は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ6は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ7は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
Ｒ8は水素、低級アルキル、アラルキルまたは置換アラルキル；
ｎ＝１または２；
Ｘ-は化粧品、医薬または食品中に許容しうる酸のアニオン；
Ｙ+は化粧品、医薬または食品中に許容しうる塩基のカチオン］で示される２−メルカプトイミダゾール誘導体の製造法をも包含するものであり、該方法は以下の必須工程からなることを特徴とする：
（ａ）４−位（または５−位）で置換され、必要に応じて光学活性な任意に保護されたイミダゾール誘導体を使用または調製し、
（ｂ）このイミダゾール誘導体を塩基性媒体中、極性溶媒中のアルキル、アルケニルまたはアリールハロチオキソホルメートで処理し、ついで
（ｃ）特定の場合に応じて、
（i）上記式（Ｉ）においてＲ3が上記の定義の通りであり、ただしＲ5、Ｒ6およびＲ6は同時には水素以外であることはない化合物を調製する場合には、カルボニウムイオン捕捉剤の存在下、塩基性媒体中または酸性媒体中で加水分解し、
（ii）上記式（Ｉ）においてＲ5、Ｒ6およびＲ6が同時に水素以外である化合物を調製する場合には、硫黄含有置換基を保護し、ついで該保護化合物をトリアルキルアンモニウム化合物に変換し、カルボニウムイオン捕捉剤の存在下で塩基性媒体中または酸性媒体中、すでに存在するキラル中心の光学活性を保持するのが望まれる場合には好ましくはカルボニウムイオン捕捉剤の存在下で酸性媒体中にて加水分解する。
この方法の一つの有利な態様において、該方法における上記カルボニウムイオン捕捉剤は、メルカプタン、好ましくはアルキルまたはアリールメルカプタン、さらに好ましくはβ−メルカプトプロパン酸である。
さらに他の有利な態様において、上記塩基は、好ましくは重炭酸ナトリウム、アミンまたはたとえばジエチルアミンやトリエチルアミンなどのアルキルアミンである。
他の特別の態様において、上記極性溶媒は、たとえばエチルエーテルやテトラヒドロフランなどのエーテル溶媒、またはたとえばメタノールなどのアルコールから選ばれてよい。
さらに別の有利な態様において、上記塩基性加水分解は、好ましくは水／アルコール（とりわけメタノール）混合物を含む極性溶媒中の溶液中にて、たとえば水酸化ナトリウムや水酸化リチウムなどの無機塩基、またはアミンやアルキルアミンなど、とりわけジエチルアミンやトリエチルアミンなどの有機塩基を用いて行う。
別の有利な態様において、上記酸性加水分解は、好ましくは大過剰のカルボニウムイオン捕捉剤、とりわけメルカプタンの存在下、２以下のｐＨの強酸の濃縮液を用いて行う。
他の有利な態様において、上記硫黄含有置換基は、ハロギ酸エステル、好ましくはハロギ酸アルキルまたはハロギ酸フェニル、たとえばクロロギ酸エチルまたはクロロギ酸フェニルにより保護し、トリアルキルアンモニウム化合物への変換をたとえばハロゲン化アルキルまたは硫酸アルキル、とりわけヨウ化メチルまたは硫酸ジメチルなどのアルキル化剤を用いて行う。
他の特に有利な特徴により、光学活性な出発物質を用い、これを大過剰のカルボニウムイオン捕捉剤、好ましくはメルカプタンの存在下、２以下のｐＨの濃縮酸性溶液で加水分解することにより、光学活性な最終誘導体が調製される。
第四の特徴に従い、本発明は、一般式：
0004024848.tif 000009
［式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は請求項１と同じでｎ＝２、ただし、
（ａ）Ｒ4＝−ＯＲ8である場合は、Ｒ1およびＲ2は同時に水素ではない；
（ｂ）Ｒ1およびＲ2が同時に水素でありＲ4＝ＯＲ8である場合は、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は同時に水素ではない；
（ｃ）Ｒ3＝−ＣＨ2ＣＨ（ＣＯＲ4）Ｎ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-でＲ4＝ＯＨまたはＯＭｅである場合は、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は同時にメチル基ではない；
（ｄ）Ｒ3＝−（ＣＨ2）2Ｎ+（Ｒ5Ｒ6Ｒ7）Ｘ-である場合は、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は同時に水素ではない］で示される４−位（または５−位）で置換された新規な２−メルカプトイミダゾール誘導体が提供される。
すでに記載したように、上記式（Ｉ）で示される４−位（または５−位）で置換された２−メルカプトイミダゾール化合物は、価値のある酸化防止剤である。
この点で、該化合物は、治療目的において価値のある活性な剤である。
一般的な意味において、一般構造（Ｉ）で示される化合物の治療的応用には、酸化性のフリーラジカルの過剰産生および／またはたとえば鉄、銅またはマンガンなどのある種の遷移金属のプールの細胞内脱区画に伴う酸化的ストレスが関与する病的状態が含まれる。
さらに詳しくは、該応用には、
＊虚血および／または虚血後再灌流によって引き起こされた組織変性の予防、とりわけ心筋梗塞の予防、および心室細動の原因である虚血後心不整脈の予防；
＊フリーラジカルの過剰産生に伴う浮腫、壊死および線維症などの組織変性の予防：この応用には、とりわけ、たとえばパラカート、ダイクォット、アントラサイクリン類またはニトロフラン類などの生体異物による中毒の治療を含む；
＊とりわけ鎌状赤血球貧血、サラセミア、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症およびマラリアにおける赤血球の酸化的ストレスに伴う病的状態；
＊イオン化するＸ線またはガンマ線並びに紫外線による照射に対する保護；および
＊臓器移植者における保存媒体中でのたとえば心臓、肝臓、腎臓または肺などの移植片の保護。
これら治療的応用において、上記式（Ｉ）で示される本発明の誘導体は、適すれば薬理学的に許容しうる賦形剤、ビヒクルまたは担体中に２−メルカプトイミダゾール誘導体を１〜５００ｍｇ含有する単位剤型の形態で有利にも提供されるであろう。
かかる薬理学的に許容しうる賦形剤、ビヒクルまたは担体は当業者によってよく知られているので、本明細書においては詳細には記載しない。
上記式（Ｉ）で示される４−位（または５−位）で置換された２−メルカプトイミダゾール誘導体の抗酸化活性および治療学的または薬理学的活性は、以下に示す当業者によってよく認識された安全で信頼性の高い試験によって示された：
（ａ）フェリルミオグロビン還元試験；
（ｂ）次亜塩素酸によるグルタチオンペルオキシダーゼの不活化を防ぐ試験；
（ｃ）系Ｃｕ（II）／アスコルビン酸／Ｏ2によるグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼの不活化を防ぐ試験；
（ｄ）系Ｆｅ（II）−クエン酸／Ｈ2Ｏ2／アスコルビン酸によるＤＮＡの分解を防ぐ試験；
（ｅ）所定期間の虚血−再灌流により引き起こされる心臓壊死を抑制する試験；
（ｆ）所定期間虚血に供された心臓の機械的（心室）機能を保護する試験。
このような抗酸化活性および治療学的および／または薬理学的活性により、上記一般式（Ｉ）で示される４−位（または５−位）で置換された２−メルカプトイミダゾール誘導体は上記治療的応用、さらに詳しくは、
＊虚血および／または虚血後再灌流によって引き起こされた組織変性の予防、とりわけ心筋梗塞の予防、および心室細動の原因である虚血後心不整脈の予防；
＊フリーラジカルの過剰産生に伴う浮腫、壊死および線維症などの組織変性の予防：この応用には、とりわけ、たとえばパラカート、ダイクォット、アントラサイクリン類またはニトロフラン類などの生体異物による中毒の治療を含む；
＊とりわけ鎌状赤血球貧血、サラセミア、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ欠損症およびマラリアにおける赤血球の酸化的ストレスに伴う病的状態；
＊イオン化するＸ線またはガンマ線並びに紫外線による照射に対する保護；および＊臓器移植者における保存媒体中でのたとえば心臓、肝臓、腎臓または肺などの移植片の保護
を行うことを可能にする。
本発明の他の目的、特徴および利点は、種々の実施例に言及する以下の説明的記載により明らかとなるであろう。これら実施例は、単に説明のために記載したものにすぎず、それゆえ本発明の範囲をなんら制限するものではない。実施例中のパーセントはすべて、特に断らない限り重量パーセントである。
−図１は、フェリルミオグロビン還元の曲線を、横軸に時間（分）、縦軸に５９０ｎｍにおける吸光度をとって示したものである；
−図２は、虚血−再灌流に供した単離灌流ラット心臓における乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）およびクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）の放出に対する本発明の化合物ＢＸＴ５２０２１の効果を示すものであり、横軸にはコントロールおよび本発明の化合物ＢＸＴ５２０２１のそれぞれについての期間をＬＤＨは黒でＣＰＫは白で示し、縦軸には単位／リットルとして得られた酵素活性を示す。コントロールについては、Ｉ、IIおよびIIIの数字はそれぞれ以下のことを示す：
−Ｉ＝安定化の終了；
−II＝再灌流後５分；
−III＝再灌流後１５分。
化合物ＢＸＴ５２０２１については、期間ＩＡ、IIＡ、IIIＡおよびIVＡはそれぞれ以下のことを示す：
−ＩＡ＝安定化の終了；
−IIＡ＝化合物ＢＸＴ５２０２１（２μＭ）を用いて灌流後１２分；
−IIIＡ＝化合物ＢＸＴ５２０２１（２μＭ）を用いて虚血後再灌流後５分；
−IVＡ＝化合物ＢＸＴ５２０２１（２μＭ）を用いて虚血後再灌流後１５分。
−図３は、虚血−再灌流に供した単離灌流ラット心臓におけるクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）の放出に対する本発明の一つの化合物ＢＸＴ５２０５３の効果を示すものであり、縦軸には放出されたＣＰＫの全量（１分当たり１ｍｇの心臓当たりの酵素活性のミリ単位として表す）を示す。加えて、化合物ＢＸＴ５２０５３の効果をアルブミン（ＢＳＡ）およびＬ−（＋）−エルゴチオネインの効果と比較してある。
−図４は、所定の期間虚血に供した単離ラット心臓の再灌流の間に展開した
0004024848.tif 000010
血圧の回復パーセントに対する本発明の化合物ＢＸＴ５２０５１およびＢＸＴ５２０５２の効果を示すものであり、横軸には再灌流時間（分で表す）、縦軸には展開した血圧の回復パーセントを示す。
実験部門
特に断らない限り、反応はすべて不活性な窒素雰囲気下で行った。
マススペクトルは、Ｎermag Ｒ１０−１０Ｂ装置で記録した。使用したイオン化モードは、７０電子ボルトでの電子衝撃（ＥＩ）か、またはアンモニア中での化学イオン化（ＣＩ）か、またはグリセリンマトリックス上での高速原子衝撃（ＦＡＢ）のいずれかである。
1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトルは、Ｖarian Ｇemini−２００装置で記録した。ケミカルシフトは、テトラメチルシランに対するｐｐｍで表してある。多重度は以下のようにして表してある：「ｓ」は一重項、「ｂｓ」はブロードな一重項、「ｄ」は二重項、「ｔ」は三重項、「ｑ」は四重項、および「ｍ」は多重項。
融点（ｍ.ｐ.℃）は、Ｇallenkamp装置で記録し、補正しなかった。
旋光度（αD）は、Ｐerkin Ｅlmer ２４１装置で２５℃におけるナトリウムＤ線で測定した。
カラム液体クロマトグラフィーによる精製は、場合に応じてＭerckRＳｉ６０Ｆ254シリカまたはＭerckR微結晶セルロースを用いて行った。
Ｉ／一般式（Ｉ）で示される化合物合成の実施例
実施例１：３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル：ＢＸＴ５２０２１の調製
Ａ／ウロカニン酸のエチルエステルの調製
ウロカニン酸（アルドリッチ；５.５２ｇ；４０ミリモル）を無水エタノール（１００ｍｌ）中に懸濁する。パラトルエンスルホン酸一水和物（ジャンセン；８.３６ｇ；４４ミリモル）を加える。この混合物を１２時間還流する。溶媒を減圧下で蒸発させて除く。残渣をＮａＨＣＯ3の飽和水溶液（５０ｍｌ）および酢酸エチル（７５ｍｌ）中に取る。有機相を分離し、同容量のＮａＣｌの飽和水溶液（２×５０ｍｌ）で洗浄する。有機相をＭｇＳＯ4で乾燥させ濾過した後、溶媒を減圧下で蒸発させて除く。かくして白色固体の形態で得られる残渣は純粋である（８５％）。
物理特性：
＊融点：７９℃
0004024848.tif 000011
Ｂ／３−（イミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチルの調製
無水エタノール（２５ｍｌ）中に溶解した上記化合物（１.４０ｇ；８.４ミリモル）を圧力下（２ｂ）、１０％パラジウム／炭素（アルドリッチ；１００ｍｇ）の存在下、室温で２時間水素化する。ついで、懸濁液をフリット上で濾過し、溶媒を減圧下で蒸発して除く。かくして油状物の形態で得られる化合物をそのまま次工程に用いる（収率：９９％）。
物理特性：
0004024848.tif 000012
Ｃ／３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル：ＢＸＴ５２０２１の調製
３−（イミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル（１.３０ｇ；７.７ミリモル）を脱イオン水（２０ｍｌ）および酢酸エチル（２０ｍｌ）中の重炭酸ナトリウム（３.９０ｇ；４６.４ミリモル）と室温にて混合する。激しく攪拌しながらクロロチオキソギ酸フェニル（ランカスター；２.７０ｍｌ；１９.５ミリモル）を加える。この反応混合物を室温にて５時間攪拌する。有機相をデカントし、ついでＮａＣｌの飽和溶液（２×２０ｍｌ）で洗浄し、溶媒を減圧下で蒸発して除く。残渣をメタノール（２０ｍｌ）中に取り、得られた溶液をトリエチルアミン（ジャンセン；３.３５ｍｌ；２４.０ミリモル）で室温にて１６時間処理する。溶媒を蒸発させ、シリカカラム上のクロマトグラフィー（溶出液：ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン ３／２）により精製した後に所望の生成物を得る（収率：７５％）。
物理特性：
＊融点：１５２〜１５４℃（ＣＨ3ＣＯ2Ｅｔ）
0004024848.tif 000013
実施例２：３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸：ＢＸＴ５２０２０の調製
ＴＨＦ／水混合物（１／１）（１０ｍｌ）中に溶解した３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル（２００ｍｇ；１ミリモル）を水酸化リチウム（アルドリッチ；８４ｍｇ；２ミリモル）で室温にて１６時間けん化する。反応混合物を中和し蒸発乾固した後、無水エタノールから再結晶させて所望の生成物を得る（収率：９３％）。
物理特性：
＊融点：２０４.５〜２０６.５℃（Ｈ2Ｏ）
0004024848.tif 000014
実施例３：３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパンアミド：ＢＸＴ５２０２９の調製
３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル（３２０ｍｇ；１４５ミリモル）を水酸化アンモニウムの水溶液（２０％）（１０ｍｌ）で室温にて２０時間処理する。溶媒を減圧下で蒸発させて除く。シリカカラム上の液体クロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル／エタノール３／１）により精製した後に所望の生成物を得る（１６１ｍｇ；５８％）。
物理特性：
＊融点：２１３〜２１５℃（ＣＨ3ＣＨ2ＯＨ）
0004024848.tif 000015
実施例４：２−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）エチルアミン：ＢＸＴ５２０２２の調製
Ａ／２−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）−Ｎα−カルボキシエチルエチルアミンの調製
通常の方法で得た２−（イミダゾール−４'−イル）−Ｎα−カルボキシエチルエチルアミンを実施例１の工程Ｃと同様にして処理する。かくして得られた生成物をそのまま次工程に用いる。
Ｂ／２−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）エチルアミン：ＢＸＴ５２０２２の調製
上記で得た化合物を濃塩酸溶液中で１２時間加熱還流することにより加水分解する。メタノールから再結晶した後に所望の生成物を得る。
物理特性：
＊融点：２４９〜２５１℃（Ｈ2Ｏ）
0004024848.tif 000016
実施例５：２−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルエチルアミン：ＢＸＴ５２０２６の調製
２−（イミダゾール−４'−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルエチルアミンの調製
脱イオン水（１５０ｍｌ）中のヒスタミン二塩酸塩（アルドリッチ；９.１ｇ；５０ミリモル）の溶液に、ホルムアルデヒド（３７％；１１１ｍｌ）および１０％パラジウム／炭素（０.２９ｇ）の水溶液を加える。この混合物を水素圧下（５ｂａｒ）で６時間激しく攪拌する。触媒を濾過して除き、ついで脱イオン水で濯ぐ。溶媒を減圧下で蒸発して除く。所望の生成物を油状物（１２.７ｇ）の形態で得、これをそのまま次工程に用いる。
物理特性：
0004024848.tif 000017
３−（２−メルカプトイミダゾール−４−イル）−Ｎ,Ｎ−ジメチルエチルアミン：ＢＸＴ５２０２６の調製
上記生成物を実施例１の工程Ｃに記載した手順で処理すると所望の化合物が得られる（３４％）。
物理特性：
0004024848.tif 000018
実施例６：２'−メルカプト−Ｎα,Ｎα−ジメチル−Ｌ−（＋）−ヒスチジン：ＢＸＴ５２０４０の調製
以下の調製法により２'−メルカプト−Ｎα,Ｎα−ジメチル−Ｌ−（＋）−ヒスチジンメチルエステルを調製する。
Ａ−Ｌ−（＋）−Ｎα,Ｎα−ジメチルヒスチジンメチルエステル二塩酸塩の調製
脱イオン水（１５０ｍｌ）中のＬ−（＋）−ヒスチジンメチルエステル二塩酸塩（ジャンセン；１８.１６ｇ；７５ミリモル）の溶液にホルムアルデヒド（ジャンセン；１２.２９ｇ；１５０ミリモル）の３７％水溶液を加える。この混合物を１０％パラジウム／炭素（アルドリッチ；１.０ｇ）の存在下、室温にて５時間、加圧下（７ｂ）で水素化する。触媒を濾過して除き、ついで水で濯ぐ。濾液を真空下で蒸発乾固して所望の生成物を油状物（２０.３ｇ）の形態で得、これを直接次工程に用いる。
物理特性：
0004024848.tif 000019
Ｂ−Ｌ−（＋）−２'−メルカプト−Ｎα,Ｎα−ジメチルヒスチジンメチルエステルの調製
Ｌ−（＋）−Ｎα,Ｎα−ジメチルヒスチジンメチルエステル二塩酸塩（６０.０ｇ；２２２ミリモル）を脱イオン水（７５０ｍｌ）中に溶解する。固体の重炭酸ナトリウム（ラボシ；１３０.５ｇ；１.５５ミリモル）をゆっくりと加え、ついでＴＨＦ（７５０ｍｌ）を加える。クロロチオキソギ酸フェニル（ランカスター；７６ｍｌ；５５５ミリモル）を激しく攪拌しながら５〜１０℃の温度にて３０分かけて加える。この反応混合物を室温にて２６０時間攪拌する。水相をデカントし、ついでメチレンクロライド（３×１５０ｍｌ）で抽出する。有機相をコンバインし、ついで減圧下、室温にて蒸発乾固させる。ついで、残渣を溶出勾配（ＡｃＯＥｔ−ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ＝１００％−９５／５）を用いてシリカカラム上のクロマトグラフィーにより精製して純粋な生成物（２４.０ｇ）を得る。この生成物（５.０ｇ）をメチレンクロライド（１５０ｍｌ）中に懸濁し、ついで懸濁液を濾過する。この濾液から溶媒を蒸発させて得られる残渣からエナンシオマーとして純粋な生成物（４.４２ｇ）が得られる（収率：４２％）。
エナンシオマーの純度は、３ｍｇの試料および１０ｍｇのＥｕ（ｔｆｃ）3を用いてＣＤＣｌ3中の1Ｈ ＮＭＲにより決定する。
物理特性：
0004024848.tif 000020
ついで、かくして得られる２'−メルカプト−Ｎα,Ｎα−ジメチル−Ｌ−（＋）−ヒスチジンメチルエステルを通常の方法により水酸化リチウムでけん化する（収率：８０％）。
物理特性：
＊融点：２７４℃（分解）
0004024848.tif 000021
実施例７：Ｎ−２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパノイルオキシ］エチル−Ｎ'−メチルピペラジン：ＢＸＴ５２０５５の調製
Ａ／Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ'−メチルピペラジンの調製：
Ｎ−メチルピペラジン（１０ｇ；１００ミリモル）および２−クロロエタノール（８.０５ｇ；１００ミリモル）を１００℃にて４時間攪拌する。この非常に粘性の反応媒体にアセトン（２５０ｍｌ）を加え、得られた懸濁液をトリエチルアミン（１５ｍｌ）で中和する。トリエチルアミン塩酸塩を濾過した後、溶媒を減圧下で蒸発させる。アルミナカラム上のクロマトグラフィー（ＭerckR；酸化アルミニウム９０；６３〜２００μｍ、溶出液：酢酸エチル）により精製した後に所望の生成物を無色油状物の形態で得る（収率：７５％）。
物理特性：
0004024848.tif 000022
Ｂ／Ｎ−２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパノイルオキシ］エチル−Ｎ'−メチルピペラジン：ＢＸＴ５２０５５の調製
実施例１に記載の手順により得た３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸メチル（０.３５ｇ；１.８８ミリモル）を細かく砕き、シアン化カリウム（０.１２ｇ；１.８８ミリモル）の存在下、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ'−メチルピペラジン（５.０ｇ；３５ミリモル）中に入れる。この反応媒体を１００℃にて１５時間攪拌する。減圧下（ｐ＝０.５ｍｍＨｇ；Ｔ°＝１００℃）で過剰のＮ−（２−ヒドロキシエチル）−Ｎ'−メチルピペラジンを蒸留した後、残渣をアルミナカラム上のクロマトグラフィー（ＭerckR；酸化アルミニウム９０；６３〜２００μｍ、溶出液：酢酸エチル／メタノール ６／１）にかける。酢酸エチルから再結晶させた後に所望の化合物を８０％の収率で得る。
物理特性：
0004024848.tif 000023
実施例８：２−［３'−（２”−メルカプトイミダゾール−４”−イル）プロパンアミド］エタンスルホン酸：ＢＸＴ５２０５３の調製
無水ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸ＢＸＴ５２０２０（０.６９ｇ；４ミリモル）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（０.４６ｇ；４ミリモル）の溶液に、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中のＮ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（０.８４ｇ；４ミリモル）の溶液を０〜５℃にて攪拌しながら滴下する。この温度で攪拌をさらに１６時間続ける。減圧下で溶媒を蒸発させた後、固体の残漬を無水アセトン（３０ｍｌ）中に取る。Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシル尿素を濾去し、濾液を１０℃に冷却して、重炭酸ナトリウム（０.３４ｇ；４ミリモル）を含有する脱イオン水（１０ｍｌ）中のタウリン（０.５ｇ；４ミリモル）の溶液を加える。この反応混合物を室温にて１時間攪拌する。減圧下で溶媒を蒸発させ、水／メタノール溶出液 ９／１を用いたグラフトシリカカラム（ＭerckR；ＲＰ−８；４０〜６３μｍ）上のクロマトグラフィーにより精製した後に所望の化合物を得る。これをメタノール／エタノール混合物から再結晶させる（収率：６０％）。
物理特性：
0004024848.tif 000024
実施例９：３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸コリンクロライド：ＢＸＴ５２０５４の調製
Ａ／３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸 ２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチルの調製：
２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エタノール（１２０ｍｌ）中の３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸エチル（実施例１参照）（１.４０ｇ；７ミリモル）の溶液を、シアン化カリウム（０.７５ｇ；３.９ミリモル）の存在下、８０℃にて４時間加熱する。減圧下で２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エタノールを蒸発させた後、所望の生成物が得られ、これをそのまま次工程に用いる。
Ｂ／３−（１'−tert−ブトキシカルボニル−２'−tert−ブトキシカルボニルチオイミダゾール−４'−イル）プロパン酸 ２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチルの調製：
メチレンクロライド（５０ｍｌ）中の上記生成物の溶液に、ピロ炭酸ジ−tert−ブチル（３.３ｇ；１５ミリモル）およびトリエチルアミン（５ｍｌ；３６ミリモル）並びに４−ジメチルアミノピリジン（１０ｍｇ）を加える。この反応混合物を室温で２時間攪拌する。水（３０ｍｌ）を加えた後、有機相をデカントし、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過する。減圧下で溶媒を蒸発させる。かくして得られた残渣をシリカカラム上のクロマトグラフィー（溶出液：アセトン）によって精製して所望の生成物を無色油状物の形態で得る。
これら２工程の全収率：７５％
物理特性：
0004024848.tif 000025
Ｃ／３−（１'−tert−ブトキシカルボニル−２'−tert−ブトキシカルボニルチオイミダゾール−４'−イル）プロパン酸コリンヨーダイドの調製：
ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の３−（１'−tert−ブトキシカルボニル−２'−tert−ブトキシカルボニルチオイミダゾール−４'−イル）プロパン酸 ２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチル（０.８１ｇ；１.８ミリモル）の溶液をヨウ化メチル（０.６ｍｌ；９.６ミリモル）で室温にて２時間処理する。過剰のヨウ化メチル並びに溶媒を減圧下で蒸発させて所望の生成物を得る。このものは充分に純粋であり、そのまま次工程に使用することができる。
収率：１００％
物理特性：
0004024848.tif 000026
Ｄ／３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸コリンクロライドの調製：
上記化合物（１.０７ｇ；１.８ミリモル）をメチレンクロライド（７.５ｍｌ）中に溶解し、ついでトリフルオロ酢酸（７.５ｍｌ）で室温にて２時間処理する。溶媒および過剰のトリフルオロ酢酸を減圧下で蒸発させた後、残渣をシリカカラム上のクロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル−メタノール ２／１）にかけて所望の生成物を得る。
収率：７７％
物理特性：
0004024848.tif 000027
実施例１０：３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸カルニチン：ＢＸＴ５２０５２の調製
ＴＨＦ（８０ｍｌ）中の３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸（実施例２参照）（０.８６ｇ；５ミリモル）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（０.６０ｇ；５.２ミリモル）の溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（１.１ｇ；５.３ミリモル）を加える。この反応混合物を室温にて５時間攪拌する。溶媒を減圧下で蒸発させて所望の活性化エステルとＮ,Ｎ'−ジシクロヘキシル尿素との混合物を得、これをそのまま次工程に用いる。
無水ＤＭＦ（３０ｍｌ）中のカルニチン（０.８１ｇ；５ミリモル）およびｐ−メトキシベンジルクロライド（０.７９ｇ；５ミリモル）から８０℃にて５時間かけて調製したカルニチンｐ−メトキシベンジルエステルを、上記で調製した３−（２'−メルカプトイミダゾール−４'−イル）プロパン酸の活性エステルと混合する。ついで、この反応混合物をジイソプロピルエチルアミン（１.０ｍｌ；５.８ミリモル）で室温にて１６時間処理する。Ｎ,Ｎ'−ジシクロヘキシル尿素を濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させる。かくして得られた残渣を３−メルカプトプロパン酸（７.５ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（７.５ｍｌ）で室温にて２時間処理する。トリフルオロ酢酸を減圧下で蒸発させる。残渣を水（３０ｍｌ）中に取る。過剰の３−メルカプトプロパン酸を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出する。この水溶液を重炭酸ナトリウムで中和し、ついで凍結乾燥する。酢酸エチル−メタノール溶出液１／３を用いたグラフトシリカカラム（ＭerckR；ジオール；４０〜６３μｍ）上のクロマトグラフィーにより精製した後、所望の化合物を得る。
全収率：３０％
物理特性：
0004024848.tif 000028
実施例１１：２'−メルカプトヒスチジン ２−（トリメチルアンモニウム）エチルエステルクロライド：ＢＸＴ５２０５８の調製
Ａ／Ｎ,Ｎ−ビス−tert−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステルの調製：
水−ＴＨＦ混合物（２０／４０）中のＬ−ヒスチジンメチルエステル二塩酸塩（４.８４ｇ；２０ミリモル）の混合物に炭酸ナトリウム（９.３３ｇ；８８ミリモル）を加える。得られた混合物を激しく攪拌しながらピロ炭酸ジ−tert−ブチル（１０ｇ；４６ミリモル）を加える。室温で１.５時間攪拌した後、反応媒体をデカントする。水相を酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出する。デカントおよび抽出からの有機相をコンバインし、溶媒を減圧下で蒸発させる。粗製の生成物をシリカカラム上の液体クロマトグラフィー（溶出液：酢酸エチル−シクロヘキサン１／１）により精製する。
収率：７８％
物理特性：
0004024848.tif 000029
Ｂ／２'−メルカプト−Ｎα−tert−ブチルオキシカルボニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステルの調製：
実施例１の工程Ｃに記載の手順と同様の手順に従って所望の生成物を得る。
収率：３２％
物理特性：
0004024848.tif 000030
Ｃ／３−（１'−tert−ブチルオキシカルボニル−２'−tert−ブチルオキシカルボニルチオイミダゾール−４'−イル）−２−tert−ブチルオキシカルボニルアミノプロパン酸の２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エチルエステルの調製：
２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エタノール（５ｍｌ）中の上記生成物（７６０ｍｇ；１.９ミリモル）の溶液にシアン化カリウム（０.２５ｇ；１.３ミリモル）を加える。この反応混合物を８０℃にて２時間加熱する。過剰の２−（Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ）エタノールを留去する。蒸留残渣をメチレンクロライド（１０ｍｌ）中に取る。この溶液にピロ炭酸ジ−tert−ブチル（１.０９ｇ；５ミリモル）およびトリエチルアミン（０.８３ｍｌ；６ミリモル）を加える。かくして得られた混合物を４−ジメチルアミノピリジン（５ｍｇ）で室温にて１時間処理する。溶媒を減圧下で蒸発させる。
粗製の生成物をシリカカラム上の液体クロマトグラフィー（溶出液：アセトン）により精製する。
収率：３８％
物理特性：
0004024848.tif 000031
Ｄ／２'−メルカプトヒスチジン２−（トリメチルアンモニウム）エチルエステルクロライド：ＢＸＴ５２０５８の調製：
ＴＨＦ（８ｍｌ）中の上記生成物（５６０ｍｇ；１.０ミリモル）の溶液をヨウ化メチル（０.１０ｍｌ；１.６ミリモル）で室温にて２時間処理する。過剰のヨウ化メチルおよび溶媒を減圧下で蒸発させる。かくして得られた残渣のメチレンクロライド（１０ｍｌ）中の溶液に塩化水素ガスを室温にて１時間通す。溶媒を減圧下で蒸発させる。得られた生成物をエチルエーテル−エタノール混合物から再結晶させる。
収率：８０％
物理特性：
0004024848.tif 000032
II／治療学的／薬理学的作用を示す試験
以下に記載する操作プロトコールにより、上記式（Ｉ）で示される本発明の化合物の治療学的／薬理学的作用を示すことが可能になる。
実施例１２：フェリルミオグロビンの捕捉
本発明の分子がフェリルミオグロビンを捕捉する能力を、５９０ｎｍ、ｐＨ７.３および２５℃におけるフェリルミオグロビンの消失の動力学的測定により示す。
０.１ｍＭジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）を含有する５０ｍＭリン酸カリウムを滴定することによりｐＨ７.３の緩衝液を得る。
フェリルミオグロビンは、５０μＭメトミオグロビン（ウマ心臓から精製）を上記緩衝液中の２００μＭ過酸化水素（Ｈ2Ｏ2）とともに２５℃にて４分間インキュベートすることにより生成する。
ついで、この反応媒体に約２２０Ｕ／ｍｌのカタラーゼを加えることにより過剰のＨ2Ｏ2を破壊する。
Ｈ2Ｏ2を添加してから５分後、本発明による分子（２５または１００μＭの最終濃度）を加え、フェリルミオグロビンの消失の動力学を５９０ｎｍの波長にて５分間モニターする。
この研究で得られた実験動力学の例をＢＸＴ５２０２１の場合について図１に示す。
被験分子の効果を、２分後に捕捉されたフェリルミオグロビンのパーセントを決定することにより測定する。１００％の値は、同じ実験条件下で該分子の不在下で決定されたものである。
得られた結果を表１に示す。
これら結果は、本発明により記載された分子がフェリルミオグロビンを非常に効率よく捕捉することを示している。
実施例１３：次亜塩素酸によるグルタチオンペルオキシダーゼの不活化に対する防御
０.１ｍＭ ＤＴＰＡを含有するｐＨ７.０の５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液中、所定量のウシ由来赤血球グルタチオンペルオキシダーゼを１０μＭ次亜塩素酸の存在下、本発明に記載した分子（２５μＭ）の存在下および不在下で、１.５Ｕ／ｍｌの最終濃度にて３７℃で２分間インキュベートする。
２分間インキュベートした後、ついで、この反応媒体（１００μｌ）を、０.１ｍＭ ＤＴＰＡ、０.１６５ｍＭ β−ＮＡＤＰＨ、２.２ｍＭ還元型グルタチオンおよびグルタチオンジスルフィドレダクターゼ（１.１Ｕ／ｍｌ）を含有するｐＨ７.６の５０ｍＭトリス緩衝液（１.５ｍｌ）（３７℃）に加える。
ついで、６.６ｍＭ ｔ−ブチルヒドロペルオキシド（５０μｌ）を加えた後、３４０ｎｍにおける吸光度の減少を２分間測定することによりグルタチオンペルオキシダーゼ活性を３７℃にて決定する。
得られた結果を表２に示す。これら結果は、次亜塩素酸および被験分子の不在下で同じ実験条件下で決定したグルタチオンペルオキシダーゼ活性のパーセントとして示してある。
これら結果は、本発明に記載した分子が次亜塩素酸によるグルタチオンペルオキシダーゼの不活化を非常に有効に阻害することを示している。
実施例１４：系Ｃｕ（II）／アスコルビン酸／Ｏ2によるグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼの不活化に対する防御
ｐＨ７.０の５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液中、所定量のグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（レウコノストク・メセンテロイデス（Ｌeuconostoc mesenteroides）から精製）を４.５μＭ硫酸銅および３６０μＭアスコルビン酸の存在下、本発明に記載した分子（２５μＭ）の存在下および不在下で、１.２Ｕ／ｍｌの最終濃度にて３７℃で５分間インキュベートする。
５分間インキュベートした後、ついで、この反応媒体（２０μｌ）を、０.３８０ｍＭ β−ＮＡＤＰ+、３.３ｍＭグルコース−６−リン酸および６.３ｍＭ塩化マグネシウムを含有するｐＨ７.５の５０ｍＭトリス緩衝液（９８０μｌ）（３７℃）に加える。
ついで、３４０ｎｍにおける吸光度の増加を７分間測定することによりグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ活性を３７℃にて決定する。
得られた結果を表３に示す。これら結果は、系Ｃｕ（II）／アスコルビン酸／Ｏ2および被験分子の不在下で同じ実験条件下で決定したグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ活性のパーセントとして示してある。
これら結果は、本発明に記載した分子が系Ｃｕ（II）／アスコルビン酸／Ｏ2によるグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼの不活化を非常に有効に阻害することを示している。
実施例１５：系Ｆｅ（II）クエン酸／Ｈ2Ｏ2／アスコルビン酸によるＤＮＡの分解に対する防御
ｐＨ７.３の５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液中、二本鎖ＤＮＡ（ファージラムダから精製）（１０μｇ／ｍｌ）を本発明に記載した分子（１００μＭ）の存在下または不在下で２０μＭＦｅII−クエン酸錯体、２００μＭ Ｈ2Ｏ2および２００μＭアスコルビン酸とともに３７℃で１時間インキュベートする。
１時間インキュベートした後、ついで、この反応媒体にカタラーゼ（２２０Ｕ／ｍｌ）を加え、反応媒体に臭化エチジウムの５ｍＭ溶液（１０μｌ）を加えた後にＤＮＡの完全性について分光光度計により測定する（励起波長：５１０ｎｍ；発光波長：５９０ｎｍ）。
完全なＤＮＡのパーセントを決定することにより被験分子の効果を測定する。１００％の値は、系Ｆｅ（II）−クエン酸／Ｈ2Ｏ2／アスコルビン酸および被験分子の不在下で同じ実験条件下で決定されたものである。
得られた結果を表４に示す。
これら結果は、本発明の分子が系Ｆｅ（II）−クエン酸／Ｈ2Ｏ2／アスコルビン酸によるＤＮＡの分解を非常に有意に防御することを示している。
実施例１６：所定期間の虚血−再灌流によって引き起こされた心臓壊死の抑制：化合物ＢＸＴ５２０２１の場合
本発明により記載される分子の心臓保護効果を、灌流単離心臓の実験モデルにおいて示した。
体重２５０〜３５０ｇの雄スプラーグ−ドーリーラットにヘパリンナトリウム（４０単位／１００ｇ）の溶液を腹腔内注射する。これらラットを３０分後にエーテル麻酔する。ついで、心臓を素早く取り出し、ランゲンドルフ（Ｌangendorff）法
0004024848.tif 000033
により３００／分の頻度で電気刺激を与えて灌流する。灌流溶液（９５％酸素および５％二酸化炭素で平衡化）は、以下の組成の改変クレブス−ヘンセライト（Ｋrebs−Ｈenseleit）緩衝液（ｐＨ７.４）からなる：ＮａＣｌ １１８ｍＭ、ＫＣｌ ４.７ｍＭ、ＭｇＳＯ4１.２ｍＭ、ＣａＣｌ2 １ｍＭ、ＫＨ2ＰＯ4 １.２ｍＭ、ＮａＨＣＯ3 ２５ｍＭおよびグルコース１１ｍＭ。全構成がサーモスタットにより３７℃で制御されている。
以下の血流力学パラメータの測定により心臓の機能状態をモニターする：心拍数、収縮期および拡張期の心室圧（これら圧力の差は展開圧を表す）および時間の関数としての該圧力変数の最小および最大勾配。
これら血流力学パラメータが安定化されたら（すなわち、灌流の開始から約３０分）、灌流および電気刺激を停止させることにより心臓を所定期間の虚血に供する。ついで、心室圧が最大値に達したときに（虚血による心筋拘縮のピーク）電気刺激を再開して再灌流を開始する。
虚血の期間の前に１２分間、および再灌流の間に２μＭ ＢＸＴ５２０２１を含有する灌流媒体で心臓を灌流することにより、この実験モデルにおいてＢＸＴ５２０２１を調べる。
上記血流力学パラメータを記録することにより得られた結果を調べたところ、心臓を虚血−再灌流に供した場合、拡張期の圧力が増加し収縮期の圧力は減少するのに対し、ＢＸＴ５２０２１の存在下では後者は保持されることが示される。
加えて、灌流媒体中に放出された２つの細胞質ゾル酵素、すなわちクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）および乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の灌流液中の濃度を決定することにより心筋組織の変性を評価する。これら２つの酵素の濃度は、灌流液１リットル当たりの酵素単位として表してある。
それゆえ、これら２つのパラメータを経時的に測定することにより、心筋組織の変性（虚血−再灌流による）またはその防御（ＢＸＴ５２０２１の効果）が、それぞれ灌流液中のＣＰＫおよびＬＤＨの濃度の増加または減少によって示される。
これら結果を図２に示す。
これら結果は、本発明による分子が虚血または再灌流による壊死から心筋細胞を非常に有効に保護することを可能にすることを示している。
実施例１７：所定期間の虚血−再灌流によって引き起こされた心臓壊死の抑制：化合物ＢＸＴ５２０５３の場合
実施例１６に記載したものと同じ実験モデルにおいて、２.５ｍＭ ＣａＣｌ2および２.４ｍＭ ＭｇＣｌ2を含有するように（他はすべて同じ）灌流溶液の組成を変えた。ついで、ＢＸＴ５２０５３の効果をアルブミンおよびＬ−エルゴチオネインの効果と比較する。
この研究は、虚血の前１２分間、ついで虚血後再灌流の最初の３０分間に、２０μＭ ＢＸＴ５２０５３、または６００μＭアルブミン（ＢＳＡ）、または１００μＭ Ｌ−エルゴチオネインを含有する灌流溶液で心臓を灌流することにより行う。
虚血および／または再灌流による心筋組織の分解の評価は、再灌流の間に灌流液中に放出されるクレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）の全量を決定することにより行う。これら結果は、心臓１ｍｇ当たり、１分間当たりの酵素活性のミリ単位として表してある。
ついで、３０分間の再灌流の間に灌流液中に放出されたＣＰＫ全量の減少により心筋組織の保護を示す。
これら結果を図３に示す。
これら結果は、アルブミンまたはＬ−エルゴチオネインが何ら有意の効果有しないのに対して、本発明による分子は心臓筋細胞を非常に有効に保護し、それゆえ虚血および／または虚血後再灌流による心臓壊死の程度を減少させることを可能にすることを示している。
実施例１８：所定期間の虚血−再灌流に供した心臓の展開圧の回復における改善
実施例１７に記載したものと同じ実験モデルにおいて、所定期間の虚血の前１２分間および再灌流の間に１０μＭ ＢＸＴ５２０５１または２μＭ ＢＸＴ５２０５２を含有する灌流媒体で心臓を灌流することによりＢＸＴ５２０５１およびＢＸＴ５２０５２の研究を行う。
心臓機能の低下の評価を、虚血の直前に記録したもの（安定化した展開圧）と比較して、血流力学パラメータ（収縮期および拡張期の心室圧）の測定から、再灌流の間の展開圧（収縮期および拡張期の圧力の差）の回復パーセントを経時的に測定することにより行う。
これら結果を図４に示す。
得られた結果を調べたところ、心臓が虚血−再灌流に供された場合に、心室の展開圧が閾値までゆっくりと上昇するのに対して、ＢＸＴ５２０５１またはＢＸＴ５２０５２の存在下では遙かに迅速に回復し一層高い値に達することが示される。
これら結果は、本発明による分子が、心臓が虚血に供されついで再灌流された場合に心臓の心室機能の回復を改善することを可能することを示している。
0004024848.tif 000034
0004024848.tif 000035
0004024848.tif 000036
0004024848.tif 000037
0004024848.tif 000038
【図１】
0004024848.tif 000043
【図２】
0004024848.tif 000044
【図３】
0004024848.tif 000045
【図４】
0004024848.tif 000046