(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体分子を担体に固定化する方法であって、生体分子の溶液を担体上にスポットする工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長２８０ｎｍの成分を含む紫外線を照射する工程を含み、前記担体は合成樹脂製又は天然樹脂製であることを特徴とする方法。
【請求項２】
前記合成樹脂は、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂及び共重合体から選ばれる請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記合成樹脂が、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート、アクリロニトリルブタジエンスチレン共重合体、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリフェノール、ポリスチレン、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニル、及びアラミドから選ばれる請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記紫外線の照射量は１００ｍＪ／ｃｍ2以上である請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記生体分子は核酸、タンパク質、糖、抗原、抗体、ペプチド、酵素から選ばれる請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
生体分子が担体上に固定化された生体分子固定化担体の製造法であって、生体分子の溶液を担体上にスポットする工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長２８０ｎｍの成分を含む紫外線を照射し、前記生体分子を担体に固定化する工程を含む方法。
【請求項７】
前記生体分子は核酸であって、核酸固定化担体はハイブリダイゼーションによる核酸の分析に用いられるものである請求項６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、核酸等の生体分子を担体に固定化する方法に関する。本発明の方法は、ハイブリダイゼーションによる核酸の分析等の操作に有用である。
【０００２】
【従来の技術】
従来、ハイブリダイゼーションによる核酸の分析や、イムノアッセイ等においては、核酸やタンパク質を膜や平板などの担体に固定化する技術が利用されている。このような生体分子の固定化法として、核酸では、以下のものが知られている。
【０００３】
（１）5’末端にチオール基を有する核酸とチオール基を含むビーズ状基材間のジスルフィド結合による固定（P.J.R.Day, P.S.Flora, J.E.Fox, M.R.Walker, Biochem.J., 278, 735-740(1991)）等のような、修飾基を導入した核酸を化学結合させる方法。
【０００４】
（２）核酸を、紫外線（UV）照射又は加熱処理により、ニトロセルロース、ナイロンメンブレン、又はポリ−Ｌ−リジン等のカチオンポリマーで被覆されたガラス等の担体等に、吸着固定させる方法（J.Sambrok, E.F.Fritsch and T.Maniatis, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Pres, Second Edition, pages 2.109-2.113 and pages 9.34-9.46、特表平10-503841号）。
【０００５】
（３）ポリリジン溶液で処理されたマイクロプレートのウェル中に核酸を注入し、37℃に加熱することにより、物理吸着させることにより固定する方法（G.C.N.Parry and A.D.B.Malcom, Biochem. Soc.Trans., 17, 230-231(1989)）。
【０００６】
（４）基材上に結合させたヌクレオチドを用い、基材上でＤＮＡを合成する方法（WO97/10365）。
【０００７】
（５）カルボジイミド基を有する高分子化合物を担持させたガラス等の基材に核酸を固定する方法（特開平８−２３９７５）。
【０００８】
しかし、上記の（１）の方法は、極めて特殊な機械と試薬を必要とする。また、（２）及び（３）の方法においては、ハイブリダイゼーションを行った場合、特に操作過程で担体から核酸が剥がれ落ち、結果として検出感度が下がったり、再現性が得られない等の欠点がある。また、この方法では、長い核酸は固定できるが、オリゴマー等約５０mer以下の短い核酸になると、効率よく固定化できないという欠点がある。尚、これらの方法では、UV照射量は数十mJ/cm2程度である。さらに、（４）の方法は、基材上でＤＮＡを合成するために、極めて特殊な機械と試薬を必要とし、さらに、合成できる核酸も２５mer程度までに限られるという欠点がある。また、（５）の方法は、基材の材料が限られ、表面のコーティング工程が必要である。
【０００９】
ところで、ポリスチレンフィルムに真空紫外線を照射して、表面を親水化する技術が報告されている（穂積ら、「表面技術」vol.52, No.12, p.97-98, 2001）。しかし、波長280nm程度の紫外線の照射によって、核酸を合成樹脂担体に固定化することができることは、開示されていない。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記従来技術の状況に鑑み、生体分子、例えば核酸、特に短鎖長の核酸を担体に、簡便、かつ、効率よく固定する方法を提供することを課題とする。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決するために鋭意検討を行った結果、核酸溶液を合成樹脂製の担体上にスポットした後に、紫外線を担体に照射することによって、核酸を担体に効率よく固定化することができることを見い出し、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、以下のとおりである。
【００１２】
（１）生体分子を担体に固定化する方法であって、生体分子の溶液を担体上にスポットする工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長２８０ｎｍの成分を含む紫外線を照射する工程を含み、前記担体は合成樹脂製であることを特徴とする方法。
（２）前記合成樹脂は、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂及び共重合体から選ばれる(1)に記載の方法。
（３）前記合成樹脂が、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート、アクリロニトリルブタジエンスチレン共重合体、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリフェノール、ポリスチレン、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニル、及びアラミドから選ばれる(2)に記載の方法。
（４）前記紫外線の照射量は１００ｍＪ／ｃｍ2以上である(1)〜(3)のいずれかに記載の方法。
（５）前記生体分子は核酸、タンパク質、糖、抗原、抗体、ペプチド、酵素から選ばれる(1)〜(4)のいずれかに記載の方法。
（６）生体分子が担体上に固定化された生体分子固定化担体の製造法であって、生体分子の溶液を担体上にスポットする工程と、前記生体分子溶液をスポットした担体に波長２８０ｎｍの成分を含む紫外線を照射し、前記生体分子を担体に固定化する工程を含む方法。
（７）前記生体分子は核酸であって、核酸固定化担体はハイブリダイゼーションによる核酸の分析に用いられるものである(6)に記載の方法。
【００１３】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に用いる担体は、生体分子を固定化するためのものであり、合成樹脂製であることを特徴とする。合成樹脂としては、紫外線照射により生体分子を固定化することができるものであれば特に制限されず、具体的には、熱可塑性樹脂、熱硬化性樹脂及び共重合体等を挙げることができる。
【００１４】
より具体的には、熱可塑性樹脂としては、アイオノマー（スチレン系、オレフィン系）、ポリノルボルネン、ポリアセタール、ポリアリレート、ポリエーテルエーテルケトン、ポリエチレンオキサイド、ポリオキシメチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリスチレン、ポリスルホン、ポリパラメチルスチレン、ポリアリルアミン、ポリフェニレンエーテル、ポリフェニレンサルファイド、ポリブタジエン、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレン、ポリメチルペンテン、ポリエーテルスルホン、ポリフェニレンスルフィド、ポリオキシベンゾイル、ポリオキシエチレン、酢酸セルロース、ポリジメチルシロキサン、ポリイソブチレン、セルローストリアセテート、ポリ−ｐ−フェニレンテレフタラミド、ポリイソプレン、ポリアクリロニトリル、ポリメチルペンテン、塩素プラスティック（ポリ塩化ビニル、ポリ塩化エチレン、塩素化ポリプロピレン、ポリ塩化ビニリデン）、フッ素プラスチック（テトラフルオロエチレン、ポリクロロトリフルオロエチレン、ポリフッ化ビニリデン）、ポリアミド（ナイロン6、ナイロン66）、ポリアミドイミド、ポリイミド（熱可塑性ポリイミド、ポリエーテルイミド）、ポリエチレンプラスティック（塩素化、高密度、低密度）、ポリビニルプラスティック（ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ポリパラビニルフェノール、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルブチラール、ポリビニルホルマール）、液晶ポリマー（ポリエステル系液晶高分子）、アクリレートプラスティック（アミノポリアクリルアミド、ポリアクリル酸メチル、ポリメチルメタクリレート、エチルポリメタクリレート、ブチルポリメタクリレート）、熱可塑性エラストマー（スチレン系、オレフィン系、ウレタン系、ポリエステル系、ポリアミド系、1，2−ポリブタジエン系、塩化ビニル系、フッ素系、ポリアイオノマー系、塩素化ポリエチレン系、シリコーン系）等が挙げられる。
【００１５】
また、熱硬化性樹脂としては、エポキシ、ポリキシレン、ポリグアナミン、ポリジアリルフタレート、ポリビニルエステル、ポリフェノール、不飽和ポリエステル、ポリフラン、ポリイミド、ポリウレタン、ポリマレイン酸、メラミン、ユリア、アルキド、ベンゾグアナミン、ポリシアナート、ポリイソシアナート等が挙げられる。
【００１６】
さらに、共重合体としては、イソブチレン無水マレイン酸共重合体、アクリロニトリルアクリレートスチレン共重合体、アクリロニトリルEPDMスチレン共重合体、アクリロニトリルスチレン共重合体、アクリロニトリルブタジエンスチレン共重合体、ブタジエンスチレンメチルメタクリレート共重合体、エチレン塩化ビニル共重合体、エチレン酢酸ビニル共重合体、エチレン−エチルアクリレート共重合体、アクリロニトリル−ブタジエンスチレン共重合体、ポリエーテルエーテルケトン共重合体、フッ化エチレンポリプロピレン共重合体、テトラフルオロエチレンパーフロロアルキルビニルエーテル共重合体、テトラフルオロエチレンエチレン共重合体等が挙げられる。
【００１７】
上記の合成樹脂のうち、特に好ましいものとしては、ポリカーボネート、ポリメチルメタクリレート、アクリロニトリルブタジエンスチレン共重合体、ポリエチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリフェノール、ポリスチレン、ポリアクリロニトリル、ポリ塩化ビニル、アラミド等が挙げられる。
【００１８】
また、上記合成樹脂に、染料、発色剤、可塑剤、顔料、重合禁止剤、表面改質剤、安定剤、密着性付与剤、熱硬化剤、分散剤、紫外線劣化防止剤等を必要に応じて添加した合成樹脂を用いることができる。さらに、前記合成樹脂は、形状を保持するために異なる種類の前記合成樹脂が積層しても良く、単一合成樹脂であっても良い。また、前記合成樹脂を２種類以上混合したポリマーアロイであっても良い。さらに、上記合成樹脂に、葉脈繊維、果実繊維、獣毛繊維、繭繊維、羽毛繊維、キチン、キトサン、石綿（アスベスト）等の線維を混合してもよい。
【００１９】
上記担体の形状は、特に問われないが、繊維状、平板状、フィルター状、ビーズ状等が挙げられる。また、マイクロタイタープレートのような形状であってもよい。さらに、得られる結果の保存を容易にするため、平板等の裏面をシール等に使用できる材料（接着剤等）を塗布、コート等をすることによって、シールとしても使用することもできる。
【００２０】
上記担体の所定の位置に、生体分子の溶液をスポットする。生体分子としては、核酸、タンパク質、糖、抗原、抗体、ペプチド、酵素などが挙げられる。以下、生体分子として核酸を例として説明するが、固定の際に紫外線を照射する以外は、他の物質でも通常固定化に用いられている方法や条件を採用することができる。
核酸としては、通常の固相化核酸を用いた核酸同士のハイブリダイゼーションに用いられる固相化核酸と特に変わるところはなく、ハイブリダイゼーションが可能な核酸であれば特に制限されず、例えば、天然又は合成のＤＮＡ（オリゴヌクレオチドを含む）もしくはＲＮＡ（オリゴヌクレオチドを含む）が挙げられる。また、上記核酸は１本鎖であっても、２本鎖であっても構わない。核酸の鎖長は、ハイブリダイゼーションが可能な長さであれば特に制限されないが、通常５〜５００００塩基、好ましくは２０〜１００００塩基である。また、核酸の５'末端あるいは３'末端にチミジン等、紫外線によって反応活性基を有するオリゴヌクレオチドの重合体を有しても良い。
【００２１】
核酸を溶解する溶媒も特に制限されず、蒸留水、又は通常核酸溶液の調製に用いられる緩衝液、例えばTE緩衝液（10mM Tris塩酸, pH8.0／1mM EDTA）等のTris緩衝液、食塩を含む水溶液、カルボン酸塩を含む水溶液（クエン酸ナトリウム、クエン酸アンモニウム、酢酸ナトリウム等）、スルホン酸塩を含む水溶液（ドデシル硫酸ナトリウム、ドデシル硫酸アンモニウム等）、ホスホン酸塩を含む水溶液等（リン酸ナトリウム、リン酸アンモニウム等）等を挙げることができる。また、一般に市販されている溶媒、Micro Spotting Solution(TeleCHem International, Inc.社製)等も挙げることができる。また、核酸溶液の濃度も特に制限されないが、通常1mmol/ml〜1fmol/ml、好ましくは100pmol/ml〜100fmol/mlの濃度である。
【００２２】
核酸溶液を担体上にスポットする方法としては、ピペットで核酸溶液を担体上に滴下する方法、又は市販のスポッタを用いる方法等が挙げられる。スポットの形状及びスポット量としては、核酸溶液をスポットした位置を把握することができる程度であれば、特に制限されないが、形状としては点状又は円状が好ましい。また、好ましいスポット量は10nl〜10mlである。核酸溶液は、担体上に１箇所又は複数箇所にスポットされる。スポットされる核酸溶液は、１種類でも２種類又はそれ以上であってもよい。尚、担体に核酸が固定されたことを示す陽性コントロールとして、標識した核酸を固定化しておいてもよい。
【００２３】
本発明の好ましい形態においては、核酸溶液を担体上にスポットした後に、２８０nmの波長を含む紫外線を照射することである。また、前記核酸溶液をスポット後紫外線照射前に乾燥させることができる。前記核酸溶液の乾燥方法としては、自然に乾燥させてもよく、加熱して乾燥させてもよい。加熱する場合の温度は、通常３０〜１００℃、好ましくは３５〜４５℃である。
【００２４】
次に、担体、少なくとも担体の核酸を固定した部位に、波長280nmの成分を含む紫外線を照射する。具体的には、波長280nmを含むブロードな波形を有する紫外線であっても良い。照射量は、累積照射量として通常100mJ/cm2以上、好ましくは200mJ/cm2以上である。
【００２５】
上記のようにして、核酸を担体上に固定化することにより、核酸固定化担体が製造される。本発明の方法により得られる核酸固定化担体は、例えば、ハイブリダイゼーションによる核酸の分析に用いることができる。本発明の方法により担体に固定化された核酸は、通常のハイブリダイゼーションの条件下で担体から脱離しにくいため、紫外線照射を行わない場合に比べて検出感度が良好で、再現性も良い。ハイブリダイゼーション及びその検出は、通常の固相化核酸を用いたハイブリダイゼーションと同様にして行うことができる。
【００２６】
本発明では、核酸を固定化するのに用いる担体として、安価な合成樹脂を用いているため、低コスト化が可能である。また、合成樹脂は軽量で形成が容易なため、様々な形態のＤＮＡマイクロアレイの作製が容易となる。また、長期保存が可能であり、保存安定性に優れている。さらに、本発明の方法は、担体表面のコーティング工程が不要であり、操作が簡便である。
【００２７】
【実施例】
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
【００２８】
【実施例１】
核酸の平板への固定化
常法に従い、オリゴヌクレオチド合成機（Perkin-elmer Applied biosystems）を用いて、配列番号１、２に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド(21mer)を合成した。また、プローブとして、配列番号３に示す塩基配列を有するＤＮＡ（262bp）を調製した。尚、配列番号１に示すオリゴヌクレオチド及びプローブは、５’末端をビオチン化した。また、配列番号２に示すオリゴヌクレオチドはビオチン化プローブと相補性を持っている。これらのオリゴヌクレオチドを1pmol/μlになるように1×TE緩衝液（10mM Tris塩酸, pH 8／1mM EDTA）に溶解した。
【００２９】
市販品のポリ（メチルメタクリレート）製の平板の所定の位置に、上記オリゴヌクレオチド溶液それぞれを、３箇所づつスポットした（図１）。スポットの量は0.5μlづつであり、スポットの大きさは直径約１mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から200mJ/cm2照射した。照射時間は８０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００３０】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００３１】
【比較例１】
予め、ポリ（メチルメタクリレート）製の平板に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含むnmの紫外線を16cmの距離から200mJ/cm2照射した。実施例１に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ポリ（メチルメタクリレート）製の平板の所定の位置に、３箇所づつスポットした（図１）。スポットの量は0.5μlづつであり、スポットの大きさは直径約１mmであった。照射時間は80秒であった。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００３２】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００３３】
【実施例２】
ハイブリダイゼーション及びその検出
（１）ハイブリダイゼーション
実施例１及び比較例１のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、3pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）60μlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００３４】
（２）ポストハイブリダイゼーション
上記ハイブリダイゼーションの後、以下の条件でポストハイブリダイゼーション洗浄を行い、オリゴヌクレオチド固定化平板に非特異的に吸着したプローブを除去した。
【００３５】
〔ポストハイブリダイゼーション洗浄の条件〕
１）2×SSC, 0.1%SDS; 室温、５分間、２回
２）0.2×SSC, 0.1%SDS; 40℃、５分間、２回
３）2×SSC; 室温１分間、３回
【００３６】
（３）平板に固定化されたオリゴヌクレオチド及びハイブリダイゼーションの検出
平板のハイブリダイゼーション溶液を乗せた部分に、乳タンパクを含むブロッキング溶液（ブロックエース  雪印乳業製）1.5mlをのせ、室温で３０分間ブロッキングを行った。ブロッキング溶液を除いた後、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼコンジュゲート溶液（VECTOR社製）を1.5mlのせ、室温で30分間反応させた。つぎに、平板をTBST（50mM Tris-HCl(pH7.5), 0.15M NaCl, 0.05% Tween 20）溶液に浸し、５分間振とうして反応しなかったコンジュゲートを除去した。最後に、平板のハイブリダイゼーション溶液を乗せた部分に基質溶液（TMB）を1.5mlのせて、３０分間放置し、発色反応を行った。
【００３７】
その結果を、次に示す比較例１の結果とともに、表１に示す。表１中の記号の意味は、表２以下でも同様である。配列番号１のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルは固定化されたオリゴヌクレオチドの量を、配列番号２のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルはハイブリダイゼーションの強度を、それぞれ示す。
【００３８】
【表１】
0003888947.tif 000002
◎：大部分のシグナルが非常に高感度かつ非常に明瞭に現れた。
○：大部分のシグナルが高感度かつ明瞭に現れた。
△：一部のシグナルが低感度または不明瞭に現れた。
×：大部分のシグナルが低感度または不明瞭に現れた。または    シグナルが全く現れなかった。
【００３９】
表１の結果から明らかなように、実施例１のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例１のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例１のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。なお、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にはシグナルはまったく現れなかった。
【００４０】
【実施例３】
核酸の平板への固定化
常法に従い、オリゴヌクレオチド合成機（Perkin-elmer Applied biosystems）を用いて、配列番号４、５及び６に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチド(31mer)を合成した。尚、配列番号４に示すオリゴヌクレオチドは、５’末端をビオチン化した。また、配列番号４及び５に示すオリゴヌクレオチドは、実施例１に記載の配列番号１及び２に示すオリゴヌクレオチドの５’末端に１０個のチミジンが連結した配列を有している。配列番号５のオリゴヌクレオチドは、前記ビオチン化プローブと相補性を持っており、配列番号６に示すオリゴヌクレオチドは、配列番号５に示すオリゴヌクレオチドと１塩基配列が異なるため相補性を持っていない。これらのオリゴヌクレオチドを100pmol/mlになるように３×SSCに溶解した。
【００４１】
市販品のポリカーボネート製の平板の所定の位置に、上記オリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。スポットの大きさは直径約0.3mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から300mJ/cm2照射した。照射時間は１２０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００４２】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００４３】
【比較例２】
予め、ポリカーボネート製の平板に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から300mJ/cm2照射した。実施例３に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ポリカーボネート製の平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。照射時間は120秒であった。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００４４】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００４５】
【実施例４】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例３及び比較例２のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、3pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００４６】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例２の結果とともに、表２に示す。配列番号４のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルは固定化されたオリゴヌクレオチドの量を、配列番号５のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルはハイブリダイゼーションの強度を、それぞれ示す。
【００４７】
【表２】
0003888947.tif 000003
【００４８】
表２の結果から明らかなように、実施例３のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例２のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例３のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）及び配列番号６にはシグナルはまったく現れなかった。
【００４９】
【実施例５】
核酸の平板への固定化
アラミド不織布/テトロンクロス/アラミド不織布の３層（表面はアラミド不織布）から構成される平板（相模ピーシーアイ（株）社製）の所定の位置に、上記オリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。尚、テトロン（帝人（株）の登録商標）はポリエチレンテレフタレートである。スポットの大きさは直径約0.3mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から400mJ/cm2照射した。照射時間は１６０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００５０】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００５１】
【比較例３】
予め、アラミド不織布/テトロンクロス/アラミド不織布の３層（表面はアラミド不織布）から構成される平板（相模ピーシーアイ（株）社製）の平板に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から400mJ/cm2照射した。実施例３に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、アラミド不職布/テトロンクロス/アラミド不職布製の平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。照射時間は160秒であった。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００５２】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００５３】
【実施例６】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例５及び比較例３のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、3pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００５４】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例３の結果とともに、表３に示す。
【００５５】
【表３】
0003888947.tif 000004
【００５６】
表３の結果から明らかなように、実施例５のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例３のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例５のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）及び配列番号６にはシグナルはまったく現れなかった。
【００５７】
【実施例６】
核酸の平板への固定化
実施例１に記載の配列番号１及び２のオリゴヌクレオチドを70pmol/mlになるように5×ＳＳＣ水溶液に溶解した。
市販のポリエチレン製平板の所定の位置に、上記オリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。スポットの大きさは直径約0.2mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から250mJ/cm2照射した。照射時間は１００秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００５８】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００５９】
【比較例４】
予め、ポリエチレン製平板に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から250mJ/cm2照射した。実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ポリエチレン製平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。照射時間は100秒であった。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００６０】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００６１】
【実施例７】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例６及び比較例４のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、3pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００６２】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例４の結果とともに、表４に示す。配列番号１のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルは固定化されたオリゴヌクレオチドの量を、配列番号２のオリゴヌクレオチドを固定化した位置のシグナルはハイブリダイゼーションの強度を、それぞれ示す。
【００６３】
【表４】
0003888947.tif 000005
【００６４】
表４の結果から明らかなように、実施例６のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例４のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例６のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にはシグナルはまったく現れなかった。
【００６５】
【実施例８】
核酸の平板への固定化
市販のフェノール樹脂製平板の所定の位置に、実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。スポットの大きさは直径約0.4mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から600mJ/cm2照射した。照射時間は２４０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００６６】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００６７】
【比較例５】
予め、フェノール樹脂製平板に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から６００mJ/cm2照射した。実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ポリエチレン製平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。照射時間は２４０秒であった。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００６８】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００６９】
【実施例９】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例８及び比較例５のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、5pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００７０】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例５の結果とともに、表５に示す。
【００７１】
【表５】
0003888947.tif 000006
【００７２】
表５の結果から明らかなように、実施例８のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例５のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例８のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にはシグナルはまったく現れなかった。
【００７３】
【実施例１０】
核酸の平板への固定化
市販のポリスチレン製平板の所定の位置に、実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。スポットの大きさは直径約0.4mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から600mJ/cm2照射した。照射時間は２４０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００７４】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００７５】
【比較例６】
予め、ポリスチレン製平板に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から６００mJ/cm2照射した。実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ポリエチレン製平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。照射時間は２４０秒であった。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００７６】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００７７】
【実施例１１】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例１０及び比較例６のオリゴヌクレオチド固定化平板の核酸を固定化した部分に、３pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００７８】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及び平板に固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例６の結果とともに、表６に示す。
【００７９】
【表６】
0003888947.tif 000007
【００８０】
表６の結果から明らかなように、実施例１０のオリゴヌクレオチド固定化平板は、比較例６のオリゴヌクレオチド固定化平板に比べて、オリゴヌクレオチドが確実に平板上に固定化されていることがわかる。また、実施例１０のオリゴヌクレオチド固定化平板では、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にはシグナルはまったく現れなかった。
【００８１】
【実施例１２】
核酸のマイクロタイタープレートへの固定化
ポリスチレン製２４穴マイクロタイタープレート（NUNC（株）社製）の所定の位置に、実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、３箇所づつスポットした。スポットの量は0.5mlづつであり、スポットの大きさは直径約１mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から1200mJ/cm2照射した。照射時間は４８０秒であった。その後、前記マイクロタイタープレートの所低の位置に水を１ｍｌ加え、３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００８２】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様にマイクロタイタープレートにスポットし、固定化の操作を行った。
【００８３】
【比較例７】
予め、ポリスチレン製２４穴マイクロタイタープレート（NUNC（株）社製）に、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から１２００mJ/cm2照射した。実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、ポリエチレン製平板の所定の位置に、３箇所づつスポットした。スポットの量は0.5mlづつであり、スポットの大きさは直径約１mmであった。照射時間は４８０秒であった。このマイクロタイタープレートを乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記マイクロタイタープレートの所低の位置に水を１ｍｌ加え、３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００８４】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【００８５】
【実施例１３】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例１２及び比較例７のオリゴヌクレオチド固定化マイクロタイタープレートの核酸を固定化した部分に、３pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）100mlをのせ、水が浸入しないようにフタをした後、ウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００８６】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及びマイクロタイタープレートに固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例７の結果とともに、表７に示す。
【００８７】
【表７】
0003888947.tif 000008
【００８８】
表７の結果から明らかなように、実施例１２のオリゴヌクレオチド固定化マイクロタイタープレートは、比較例７のオリゴヌクレオチド固定化マイクロタイタープレートに比べて、オリゴヌクレオチドが確実にマイクロタイタープレート内に固定化されていることがわかる。また、実施例１２のオリゴヌクレオチド固定化マイクロタイタープレートでは、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にはシグナルはまったく現れなかった。
【００８９】
【実施例１４】
核酸のポリスチレンビーズへの固定化
ポリスチレン製ビーズ（大日本インキ化学工業（株）社製、三菱化学（株）社製など）を石英セル内に入れ、実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液をそれぞれ５００μｌ石英セル内に加えた。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から1200mJ/cm2照射した。照射時間は４８０秒であった。その後、前記ビーズに水を加え、３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【００９０】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に固定化の操作を行った。
【００９１】
【比較例８】
予め、ポリスチレン製ビーズ（大日本インキ化学工業（株）社製、三菱化学（株）社製など）を石英セル内に入れ、Uvstratalinker 2400(STRATAGENE社製)を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から1200mJ/cm2照射した。照射時間は４８０秒であった。次いで、実施例６に記載のオリゴヌクレオチド溶液それぞれを、５００μｌ石英セル内に加えた。このビーズを石英セルから取り出した後、乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記ビーズに水をえ、３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【００９２】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に固定化の操作を行った。
【００９３】
【実施例１５】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例１４及び比較例８のオリゴヌクレオチド固定化ビーズに、３pmolビオチン化プローブ（262bp）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.）100mlを加え、水が浸入しないようにフタをした後、ウォーターバスに沈め、45℃で２時間加熱した。
【００９４】
以下、実施例２と同様にしてポストハイブリダイゼーション、及びビーズに固定化されたオリゴヌクレオチドならびにハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を、次に示す比較例８の結果とともに、表８に示す。
【００９５】
その結果を、次に示す比較例８の結果とともに、表８に示す。配列番号１のオリゴヌクレオチドを固定化したビーズからのシグナルは固定化されたオリゴヌクレオチドの量を、配列番号２のオリゴヌクレオチドを固定化したビーズからのシグナルはハイブリダイゼーションの強度を、それぞれ示す。
【００９６】
【表８】
0003888947.tif 000009
【００９７】
表８の結果から明らかなように、実施例１４のオリゴヌクレオチド固定化ビーズは、比較例８のオリゴヌクレオチド固定化ビーズに比べて、オリゴヌクレオチドが確実にビーズ表面に固定化されていることがわかる。また、実施例１４のオリゴヌクレオチド固定化ビーズでは、ハイブリダイゼーションシグナルも明瞭に現れた。ここで、コントロールのビーズ（核酸を含まない溶液に浸したビーズ）にはシグナルはまったく現れなかった。
【００９８】
【実施例１６】
核酸の平板への固定化
常法に従い、配列番号７及び８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをプライマーとして、λＤＮＡ断片（A）を増幅した。得られた断片をアガロース電気泳動し、エチジウムブロマイド染色により検出した結果、その断片の長さは約３００ｂであった。また、前記λDNAと相補的でないλDNA断片（B）（約３００ｂ）も同様に増幅した。
【００９９】
市販品のポリカーボネート製の平板の所定の位置に、上記λDNA溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。スポットの大きさは直径約0.3mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から600mJ/cm2照射した。照射時間は２４０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【０１００】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【０１０１】
【比較例９】
実施例１６記載のλDNA溶液（濃度1pmol/ul）それぞれを、ポリカーボネート製の平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【０１０２】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【０１０３】
【実施例１７】
ハイブリダイゼーション及びその検出
（１）ハイブリダイゼーション
配列番号７に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドの５’末端にビオチンを標識したオリゴヌクレオチド及び配列番号８に示す塩基配列を有するオリゴヌクレオチドをプライマーとして、λＤＮＡ断片（C）を増幅した。このλDNA断片（C）の配列は、実施例１６で作製したλDNA断片（A）の配列と同一である。
実施例１６及び比較例９のλDNA固定化平板を９５℃に暖めた水中に５分間浸し、４℃に冷やした水中に５分間浸した。次いで、λDNA固定化平板の核酸を固定化した部分に、前記1pmolビオチン化λDNA（C）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.)60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、60℃で２時間加熱した。
【０１０４】
（２）ポストハイブリダイゼーション
上記ハイブリダイゼーションの後、以下の条件でポストハイブリダイゼーション洗浄を行い、λDNA固定化平板に非特異的に吸着したプローブを除去した。
【０１０５】
〔ポストハイブリダイゼーション洗浄の条件〕
１）2×SSC, 0.1%SDS; 室温、５分間、２回
２）0.2×SSC, 0.1%SDS; 40℃、５分間、２回
３）2×SSC; 室温１分間、３回
【０１０６】
（３）ハイブリダイゼーションの検出
平板のハイブリダイゼーション溶液を乗せた部分に、乳タンパクを含むブロッキング溶液（ブロックエース  雪印乳業製）1.5mlをのせ、室温で３０分間ブロッキングを行った。ブロッキング溶液を除いた後、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼコンジュゲート溶液（VECTOR社製）を1.5mlのせ、室温で30分間反応させた。つぎに、平板をTBST（50mM Tris-HCl(pH7.5), 0.15M NaCl, 0.05% Tween 20）溶液に浸し、５分間振とうして反応しなかったコンジュゲートを除去した。最後に、平板のハイブリダイゼーション溶液を乗せた部分に基質溶液（TMB）を1.5mlのせて、３０分間放置し、発色反応を行った。
【０１０７】
その結果を表９に示す。
【０１０８】
【表９】
0003888947.tif 000010
【０１０９】
表９の結果から明らかなように、ハイブリダイゼーションシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例１６のλDNA断片固定化平板はλDNA断片が確実に平板上に固定化されていることがわかる。一方、比較例９のλDNA断片固定化平板には、シグナルはまったく現れなかった。さらに、実施例１６のλDNA断片固定化平板及び比較例９のλDNA断片固定化平板のコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。
【０１１０】
【実施例１８】
核酸の平板への固定化
市販品のポリメチルメタクリレート製の平板の所定の位置に、実施例１６に記載のλDNA溶液それぞれを、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。スポットの大きさは直径約0.3mmであった。この平板を乾燥機に入れ、４２℃で２０分乾燥した。次にUvstratalinker 2400（STRATAGENE社製）を用い、波長280nmを含む紫外線を16cmの距離から1200mJ/cm2照射した。照射時間は４８０秒であった。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄した後、乾燥させた。
【０１１１】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【０１１２】
【比較例１０】
実施例１６記載のλDNA溶液（濃度1pmol/ul）それぞれを、メタクリレート製の平板の所定の位置に、スポッター（Pyxsis5500  CARTESIAN社製）を用いて３箇所づつスポットした。この平板を乾燥機に入れ４２℃で２０分乾燥した。その後、前記平板を水中で３０分間振とうして洗浄し、乾燥させた。
【０１１３】
一方、コントロールとして核酸を含まない溶液（1×TE緩衝液）も同様に平板にスポットし、固定化の操作を行った。
【０１１４】
【実施例１９】
ハイブリダイゼーション及びその検出
実施例１８及び比較例１０のλDNA固定化平板を９５℃に暖めた水中に１０分間浸し、４℃に冷やした水中に５分間浸した。次いで、λDNA固定化平板の核酸を固定化した部分に、実施例１７に記載の1pmolビオチン化λDNA（C）を含むハイブリダイゼーション溶液（Arrayit UniHyb (TeleCHem International, Inc.)60mlをのせ、平板を水が浸入しないケース（ハイブリカセット）に入れてそのケースごとウォーターバスに沈め、60℃で２時間加熱した。
【０１１５】
以下、実施例１７と同様にしてポストハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションの検出を行った。その結果を表１０に示す。
【０１１６】
【表１０】
0003888947.tif 000011
【０１１７】
表１０の結果から明らかなように、ハイブリダイゼーションシグナルが特異的かつ明瞭に現れたことから、実施例１８のλDNA断片固定化平板はλDNA断片が確実に平板上に固定化されていることがわかる。一方、比較例１０のλDNA断片固定化平板には、シグナルはまったく現れなかった。さらに、実施例１８のλDNA断片固定化平板及び比較例１０のλDNA断片固定化平板のコントロールの位置（核酸を含まない溶液をスポットした箇所）にもシグナルはまったく現れなかった。
【０１１８】
【発明の効果】
本発明の方法により、生体分子、例えば核酸、特に鎖長の短い核酸を、合成樹脂製担体に簡便、かつ、効率よく固定することができる。
【０１１９】
【配列表】
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【図面の簡単な説明】
【図１】  実施例で作製したオリゴヌクレオチド固定化平板を用いたハイブリダイゼーションの結果を示す図。
点線は、実施例１及び比較例１でオリゴヌクレオチドを固定化した領域、及びコントロールである1×TE緩衝液をスポットした領域を示す。
【図１】
0003888947.tif 000017