(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃで表されるオリゴ糖。
（ただし、式中Ｒｈａはラムノース残基、Ｇａｌはガラクトース残基、Ｇｌｃはグルコース残基をそれぞれ示す。また式中の数値はそれぞれの結合部位を示す）
【請求項２】
構造式α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃで表されるオリゴ糖を有効成分とする歯垢形成予防剤。
（ただし、式中Ｒｈａ，Ｇａｌ，Ｇｌｃ及び数値の意味は請求項１のそれと同じである）
【請求項３】
構造式α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃで表されるオリゴ糖を有効成分とする歯垢分解剤。
（ただし、式中Ｒｈａ，Ｇａｌ，Ｇｌｃ及び数値の意味は請求項１のそれと同じである）
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なオリゴ糖に関する。また、本発明は、新規なオリゴ糖を有効成分とする歯垢形成予防剤及び歯垢分解剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、種々の構成糖からなるオリゴ糖が多数知られており、これらのオリゴ糖は、難消化性、低う蝕性、ビフィズス菌増殖活性等の特性を有するので、医薬、飲食品、飼料等の有効成分として使用されている。
【０００３】
先に、酪農乳酸菌であるストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcus lactis) もしくはラクトコッカス・ラクチス(Lactococcus lactis) 、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris) もしくはラクトコッカス・クレモリス(Lactococcus cremoris) 等の一部の菌株が、下記の構造式 (Ｉ) で表されるリン酸化多糖類を生産することが報告されている (特開平3-229702号公報, Nakajima et al., Carbohydr. Res., vol.224, pp.245-253, 1992)。
【０００４】
【化１】
0003985976.tif 000002
（ただし、式中Ｇｌｃはグルコース残基を、Ｇａｌはガラクトース残基を、Ｒｈａはラムノース残基をそれぞれ示す。また式中の数値はそれぞれの結合部位を、ｍは０〜３の整数をｎは繰り返し単位をそれぞれ示し、通常、 1,000〜5,000 である）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明者らは、ストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcus lactis) もしくはラクトコッカス・ラクチス(Lactococcus lactis) 、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris) もしくはラクトコッカス・クレモリス(Lactococcus cremoris) 等の一部の菌株が生産するリン酸化多糖類について注目し、その生合成経路を解明するべく鋭意研究を進めていた。そして、このリン酸化多糖類の生合成における脂質結合型中間体、すなわち、次の式(II)で表される化合物（ただし、式中、Ｐはリン酸基を示す）を分析する目的で、リン酸化多糖類を産生する菌株の菌体から脂質抽出物を調製し、これを酸で加水分解して糖質部分と脂質部分を分離した後、糖質部分の精製を進めていたところ、ラムノース、ガラクトース及びグルコースを構成糖とする新規なオリゴ糖を見出した。
【０００６】
【化２】
0003985976.tif 000003
【０００７】
さらに、このオリゴ糖の性質について検討を進めたところ、口腔内細菌であるアクチノマイセス (Actinomyces)属菌やストレプトコッカス (Streptococcus)属菌の凝集を阻止する効果及び凝集物を解離する効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
したがって、本発明は、ラムノース、ガラクトース及びグルコースを構成糖とする新規なオリゴ糖を提供することを課題とする。また、本発明は、この新規なオリゴ糖を有効成分とする歯垢形成予防剤及び歯垢分解剤を提供することを課題とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
本発明の新規なオリゴ糖は、構造式α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃで表される。
（ただし、式中Ｒｈａはラムノース残基、Ｇａｌはガラクトース残基、Ｇｌｃはグルコース残基をそれぞれ示す。また、式中の数値はそれぞれの結合の部位を示す以下、同じ）
本発明のオリゴ糖は、リン酸化多糖類を産生する乳酸菌の菌体から抽出される脂質結合型オリゴ糖中間体あるいはこれを含む脂質成分抽出物を酸で加水分解し、遊離する糖質部分 (オリゴ糖) を水溶性画分として回収し、さらに必要に応じて精製する。
【００１０】
本発明の新規なオリゴ糖を製造する際に使用するリン酸化多糖類を産生する乳酸菌は、ストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcus lactis) もしくはラクトコッカス・ラクチス(Lactococcus lactis) 、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris) もしくはラクトコッカス・クレモリス(Lactococcus cremoris) 等の一部の菌株であり、例えば、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris) SBT 0495 (FERM P-10053) やストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcus lactis) SBT 1209 (FERM P-8308)等を例示することができる。
【００１１】
これらのリン酸化多糖類を産生する菌株を通常の乳酸菌の培養に使用される培地で培養した後、遠心分離や膜濾過等の処理により菌体のみを回収する。なお、菌株の培養に使用する培地は対象とする菌株が増殖することができるものであればいかなる培地であってもよく、その培養条件も対象とする菌株が増殖することができるものであればいかなる条件であってもよい。また、培養した菌体を回収するに際しては、菌体における代謝が進行しないよう低温で処理することが望ましく、さらに、回収した菌体は、例えば、50mMリン酸カリウム緩衝液 (pH 7.0) 等、菌体の浸透圧と等張性の高い中性の緩衝液で２〜３回洗浄することが望ましい。そして、このようにして得られた菌体を凍結乾燥し乾燥菌体とする。
【００１２】
この乾燥菌体を菌体1g当たり 100mlの割合でクロロホルム：メタノール：水＝１：２：0.3 からなる溶媒に分散させた後、適宜、ホモジナイザーや超音波等の処理を併用して、菌体から脂質成分を抽出する。また、抽出後の菌体残渣を濾紙で濾過して回収し、再び、同量の溶媒で同様の操作により脂質成分を抽出する。そして、これらの抽出液を一つにまとめ、蒸留や真空乾燥等の処理を施して完全に乾燥した脂質成分抽出物を得る。なお、この脂質成分抽出物中には、リン酸化多糖類の中間生成物である脂質結合型オリゴ糖中間体が含まれている。
【００１３】
この脂質成分抽出物に、脂質成分抽出物1g当たり 500mlの割合で10mM塩酸を作用させて加水分解(100℃、10分間) することにより、糖質部分と脂質部分とに分離することができる。なお、加水分解が完了したら直ちに冷却し、水酸化ナトリウムで中和した後、等量のクロロホルムと十分に混合して静置することにより、糖質部分と脂質部分をそれぞれ水相とクロロホルム相に分離することができる。したがって、脂質結合型オリゴ糖中間体から遊離したオリゴ糖は糖質部分として水相に移行するので、水相を回収して濃縮する。
【００１４】
この濃縮液をゲル濾過クロマトグラフィーに供する。このゲル濾過クロマトグラフィーには極めて低分子量の化合物を分離することができるカラムを使用することが望ましく、例えば、 Superdex 30 (16×600mm;ファルマシア) 等を例示することができる。溶出液は中性から弱アルカリ性の緩衝液が望ましく、特に、酢酸アンモニウムや炭酸アンモニウム等の揮発性の緩衝液を使用すると、溶出したオリゴ糖を凍結乾燥する際に水分と共に塩類が蒸発するので、純度の高いオリゴ糖を得ることができる。なお、本発明の新規なオリゴ糖は、例えば、マルトトリオースのような三糖類の標準物質の溶出時間とほぼ同じ時間で溶出する。したがって、溶出液中の糖質を屈折計により検出し、三糖類の溶出時間付近のピークに相当する溶出液を回収することにより、本発明の新規なオリゴ糖を回収することができる。なお、この溶出液を凍結乾燥した乾燥粉末中には本発明の新規なオリゴ糖が60〜70重量％含まれている。
【００１５】
さらに、本発明の新規なオリゴ糖の純度を高めるためのクロマトグラフィーとしては、アミノ基や金属イオンとの親和性に基づいた方法、強アルカリ条件での陰イオン交換クラマトグラフィー等を応用することができる。以下にアミノ基親和性クロマトグラフィーによる方法を例示する。ゲル濾過クロマトグラフィーで得られたオリゴ糖含有画分をアミノ基親和性カラムPolymeric NH2 (4.6×250mm;アステック) に供し、アセトニトリル：水＝75：25からなる溶媒により溶出して屈折計により検出する。この方法でも、マルトトリオースのような三糖類の標準物質の溶出時間を参考とし、それとほぼ同じ溶出時間のピークに相当する溶出液を回収することにより、本発明の新規なオリゴ糖を回収することができる。なお、この溶出液を凍結乾燥した乾燥粉末中には95％以上の純度で本発明の新規なオリゴ糖が含まれている。
【００１６】
次に、本発明の新規なオリゴ糖の歯垢の形成を予防する効果及び形成した歯垢を分解する効果について説明する。
歯垢は口腔内細菌同士が凝集することにより形成される。すなわち、この口腔内細菌同士は、互いに細胞表層の化合物、特に、ペプチドグリカン、糖たんぱく質、リポ多糖類、莢膜性多糖類等の糖鎖部分の構造を識別して癒着し合い、凝集物として歯垢を形成する。そして、口腔内細菌はそれぞれある一定の構造を有する糖鎖部分を認識し、その構造を有する化合物を細胞表層に有する細菌と特異的に凝集するが、口腔内には様々な種類の細菌が存在するため、細菌同士の凝集が複雑に重合して歯垢を形成している。近年、口腔内細菌の中でもアクチノマイセス (Actinomyces)属菌とストレプトコッカス (Streptococcus)属菌との凝集に関する研究が進んでおり、ストレプトコッカス (Streptococcus)属菌の細胞表層にある化合物のガラクトース残基や乳糖（ガラクトシルグルコース）残基が、アクチノマイセス (Actinomyces)属菌に識別されて結合することが明らかにされている。また、その糖鎖構造を識別して結合するアクチノマイセス (Actinomyces)属菌の細胞表層の化合物は、レクチン様たんぱく質であることも明らかにされている。さらに、ガラクトース残基やガラクトシルグルコース残基を有する化合物の存在下では、アクチノマイセス (Actinomyces)属菌とストレプトコッカス (Streptococcus)属菌との凝集が阻止されると共に、形成された凝集物が解離されることも確認されている。
【００１７】
一方、元来植物から見出されたレクチンとは、糖鎖構造を識別して結合するたんぱく質の総称であり、様々な種類のものが分離されているが、その多くは、マンノース残基と特異的に結合するコンカナバリン類及びガラクトース残基と特異的に結合するものの２種類に大別される。後者のガラクトース残基特異性は、先に述べた口腔内細菌の凝集における特異性と類似していることから、この種のレクチンと結合する化合物は、アクチノマイセス (Actinomyces)属菌とストレプトコッカス (Streptococcus)属菌との凝集を阻止又は解離する効果を有することが期待できる。したがって、本発明者らは、まず、本発明の新規なオリゴ糖がある種のレクチンと結合する性質を有するか否かについて調べた。
【００１８】
【参考例１】
乳糖濃度を 5.0％としたOttoら(FEMS Microbiol. Lett., vol.16, pp.69-74, 1990) の完全合成培地 20lに、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris) SBT 0495 (FERM P-10053) を接種し、3.0N水酸化カリウムを自動滴定することにより培養液のpHを 6.3に維持する定pH培養を行った。約50時間培養した後、回収した培養液を遠心分離 (50,000×g 、60分間) し菌体を回収した。そして、この回収した菌体を50mMリン酸カリウム緩衝液（pH 7.0) で懸濁し、再び遠心分離 (50,000×g 、60分間) して回収する操作を２回繰り返すことにより菌体を洗浄した後、凍結乾燥して乾燥菌体約 28gを得た。
【００１９】
この乾燥菌体約 28gをクロロホルム：メタノール：水＝１：２：0.3 からなる溶媒 600mlに分散させ、超音波処理を併用することにより、菌体から脂質成分を溶媒中に抽出した。また、抽出後の菌体残渣を濾紙で濾過して回収し、再び、同量の溶媒で同様の操作により脂質成分を抽出した。そして、これらの抽出液を一つにまとめ、蒸留及び真空乾燥を行うことにより乾燥した脂質成分抽出物約3.2gを得た。
【００２０】
この脂質成分抽出物約3.2gを10mM塩酸1.5l中で加水分解(100℃、10分間) し、オリゴ糖を含む糖質部分と脂質部分とに分離した。加水分解が完了したら直ちに冷却し、水酸化ナトリウムで中和した後、等量のクロロホルムと十分に混合して静置し、オリゴ糖を含む糖質部分を水相に回収して濃縮した。
【００２１】
この濃縮液について、 Superdex 30 (16×600mm;ファルマシア) を使用したゲル濾過カラムクロマトグラフィーに供し、50mM酢酸アンモニウム緩衝液(pH 7.0)で溶出した後、Polymeric NH2 (4.6×250mm;アステック) を使用したアミノ基親和性カラムクロマトグラフィーに供し、アセトニトリル：水＝75：25からなる溶媒で溶出して、本発明のオリゴ糖約20mgを得た。なお、このオリゴ糖は、糖組成分析、メチル化分析及び核磁気共鳴分析により、次の構造式α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃで表される新規なオリゴ糖であることを確認した。
【００２２】
【試験例１】
ガラクトースと親和性を有するレクチンとして、熱帯性マメ科植物トウアズキ(Abrus precatorius)の種子から得られるアグルチニンとシュードモナス・アエルギノサ(Pseudomonas aeruginosa) 由来のレクチンPA-Iを使用し、参考例１で得られた本発明の新規なオリゴ糖との親和性を調べた。すなわち、アグルチニン又はレクチンPA-Iを50mMトリス−塩酸緩衝液(pH 8.0)に0.1mg/mlの濃度で溶解した後、各レクチン溶液に 50mg/mlの濃度となるよう本オリゴ糖を添加した。４℃で約１時間ゆっくりと撹拌しながら反応を行った後、分画分子量10,000の限外濾過膜を使用して反応液を濃縮した。そして、この濃縮と上記の緩衝液による希釈を繰り返し、レクチンを濃縮液中に、レクチンと結合しなかった本発明のオリゴ糖を濾液中にそれぞれ回収した。なお、レクチンと結合した本発明のオリゴ糖は、レクチンと共に濃縮液側に回収されることになる。
【００２３】
次に、このようにして回収した濃縮液中のたんぱく質含量及び糖質含量を測定し、たんぱく質（レクチン）１mg当たりの糖質（オリゴ糖）結合量を算出した。また、本発明のオリゴ糖に代えてガラクトースを使用して同様の試験を行い、たんぱく質（レクチン）１mg当たりの糖質（ガラクトース）結合量を算出した。そして、ガラクトースを使用した場合の結合量を 100とし、本発明のオリゴ糖を使用した場合の結合量を相対値で表した数値を親和性指数とした。その結果を表１に示す。
このように、本発明の新規なオリゴ糖は、ガラクトースとの親和性を有する２種類のレクチンと高い親和性を示すことから、本発明のオリゴ糖中のガラクトース残基がレクチンにより認識されていることが判った。
【００２４】
【表１】
0003985976.tif 000004
【００２５】
【試験例２】
アクチノマイセス (Actinomyces)属菌として、アクチノマイセス・ナエスランディ(Actinomyces naeslundii) ATCC 12104、アクチノマイセス・ナエスランディ(Actinomyces naeslundii) ATCC 19039及びアクチノマイセス・イスラエリィ(Actinomyces israelii) ATCC 12102を使用し、また、ストレプトコッカス (Streptococcus)属菌として、ストレプトコッカス・サンガイス(Streptococcus sanguis) ATCC 49295 及びストレプトコッカス・サンガイス(Streptococcus sanguis) NCFB 2106を使用して、参考例１で得られた本発明の新規なオリゴ糖の凝集抑制及び凝集解離の効果を調べた。すなわち、アクチノマイセス (Actinomyces)属菌及びストレプトコッカス (Streptococcus)属菌を Schaedler液体培地で嫌気的に培養後、遠心分離 (10,000×g 、10分間) して菌体を回収した。次に、 150mM塩化ナトリウム、 0.1mM塩化カルシウム、 0.1mM塩化マグネシウム及び0.02％アジ化ナトリウムを含む１mMトリス−塩酸緩衝液(pH 8.0)で回収した菌体を懸濁した後、再び遠心分離 (10,000×g 、10分間) して菌体を回収するという操作を３回繰り返すことにより菌体を洗浄した。そして、顕微鏡下で計数した菌体濃度が 109個/ml となるようこの菌体を上記の緩衝液で懸濁した。このようにして調製した各菌体の懸濁液をそれぞれの組み合わせで混合することにより菌体を凝集させた。
【００２６】
なお、本発明のオリゴ糖の凝集抑制及び凝集解離の効果について試験するのに先立って、全ての組み合わせにおける凝集の発生とガラクトースの凝集解離効果を調べた。すなわち、各菌体の懸濁液を等量混合し、凝集の発生状況を次のような４段階の判定基準で評価した。
Ａ：直ちに凝集が起こり、大きな凝集物が生成すると共に、ほぼ透明な上清が得られる。
Ｂ：直ちに凝集が起こるが、上清には濁りが残る。
Ｃ：混合後ゆっくりと凝集物が生成し、上清には濁りが見られる。
Ｄ：目に見えるほどの凝集が起こらず、菌体懸濁液の濁度に変化がない。
【００２７】
また、凝集物が生成した組み合わせにおいては、50mM濃度となるようにガラクトースを添加し、ガラクトースの添加により凝集物が解離した場合は（＋）、凝集物が解離しなかった場合は（−）とした。その結果を表２に示す。
【００２８】
【表２】
0003985976.tif 000005
【００２９】
上記の通り、凝集を起こす菌株の組み合わせは７通りあり、その中、ガラクトースにより凝集物が解離する組み合わせは４通りあった。そこで、本発明のオリゴ糖を使用して以下のような実験を行った。すなわち、凝集を起こした７通りの組み合わせにつき、各菌体懸濁液を混合するに先立ち、各菌体懸濁液中に本発明のオリゴ糖を50mMの濃度となるよう添加した後、十分に混合してから20分間静置し、静かに菌体懸濁液の上清をピペットで採取した。そして、この上清の濁度と混合する前の各菌体懸濁液の濁度を分光光度計(650nm) で測定し、各菌体懸濁液の濁度の平均値を 100とし、本発明のオリゴ糖を添加した菌体懸濁液の上清の濁度を相対値で表した数値を凝集阻止率とした。その結果を図１に示す。
【００３０】
一方、各菌体懸濁液を混合してから20分間静置して十分凝集させたものに、本発明のオリゴ糖を50mMの濃度となるよう添加して、ゆっくり20分間撹拌した後、再び20分間静置し、静かに菌体懸濁液の上清をピペットで採取した。そして、この上清の濁度を分光光度計(650nm) で測定し、各菌体懸濁液の濁度の平均値を 100とし、本発明のオリゴ糖を添加した菌体懸濁液の上清の濁度を相対値で表した数値を凝集解離率とした。その結果を図２に示す。
【００３１】
【発明の実施の形態】
本発明のオリゴ糖は、構造式α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃで表される新規物質である。このオリゴ糖は、菌体の凝集抑制及び凝集解離の効果を有するので、歯垢形成予防剤又は歯垢分解剤の有効成分として利用することができる。本発明のオリゴ糖は水溶性であり、乾燥粉末としてのみならず、シロップ状の濃縮液としても使用することができる。さらに、本発明のオリゴ糖は、食品用の乳酸菌が生産する糖質の一つであり、安全な物質であるので、チューイングガムやキャンディー等の食品や歯磨き粉、口腔洗浄剤、口臭予防剤等の製品に配合して使用することもできる。
これらの用量は、その製品の形態等によって相違するが、通常は、１回当りの用量が 0.5mg〜100mg 程度の範囲で使用される。この用量は、特に厳密なものでなく、製品の風味その他の品質を損なわない範囲で、その効果が奏せられる量使用される。
【００３２】
次に実施例を示し、本発明を詳しく説明する。
【実施例１】
乳糖濃度を 5.0％としたOttoら(FEMS Microbiol. Lett., vol.16, pp.69-74, 1990) の完全合成培地200lに、ストレプトコッカス・クレモリス(Streptococcus cremoris) SBT 0495 (FERM P-10053) を接種し、3.0N水酸化カリウムを自動滴定することにより培養液のpHを 6.3に維持する定pH培養を行った。約50時間培養した後、回収した培養液を遠心分離 (50,000×g 、60分間) し菌体約300gを回収した。そして、この回収した菌体を50mMリン酸カリウム緩衝液（pH 7.0) で懸濁し、再び遠心分離 (50,000×g 、60分間) して回収する操作を２回繰り返すことにより菌体を洗浄した後、凍結乾燥して乾燥菌体を得た。この乾燥菌体をクロロホルム：メタノール：水＝１：２：0.3 からなる溶媒に分散させ、超音波処理を併用することにより、菌体から脂質成分を溶媒中に抽出した。また、抽出後の菌体残渣を濾紙で濾過して回収し、再び、同量の溶媒で同様の操作により脂質成分を抽出した。そして、これらの抽出液を一つにまとめ、蒸留及び真空乾燥を行うことにより乾燥した脂質成分抽出物約 40gを得た。
【００３３】
この脂質成分抽出物を10mM塩酸中で加水分解(100℃、10分間) し、オリゴ糖を含む糖質部分と脂質部分とに分離した。加水分解が完了したら直ちに冷却し、水酸化ナトリウムで中和した後、等量のクロロホルムと十分に混合して静置し、オリゴ糖を含む糖質部分を水相に回収して濃縮した。
この濃縮液について、 Superdex 30 (16×600mm;ファルマシア) を使用したゲル濾過カラムクロマトグラフィーに供し、50mM酢酸アンモニウム緩衝液(pH 7.0)で溶出して、本発明のオリゴ糖 (粗製物) 約2gを得た。
なお、このオリゴ糖は、糖組成分析、メチル化分析及び核磁気共鳴分析により、次の構造式で表される新規なオリゴ糖であることを確認した。
α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ
【００３４】
【実施例２】
乳糖濃度を 5.0％としたOttoら(FEMS Microbiol. Lett., vol.16, pp.69-74, 1990) の完全合成培地 20lに、ストレプトコッカス・ラクチス(Streptococcuslactis) SBT 1209 (FERM P-8308)を接種し、3.0N水酸化カリウムを自動滴定することにより培養液のpHを 6.3に維持する定pH培養を行った。約50時間培養した後、回収した培養液を遠心分離 (50,000×g 、60分間) し菌体を回収した。そして、この回収した菌体を50mMリン酸カリウム緩衝液（pH 7.0) で懸濁し、再び遠心分離 (50,000×g 、60分間) して回収する操作を２回繰り返すことにより菌体を洗浄した後、凍結乾燥して乾燥菌体を得た。
この乾燥菌体をクロロホルム：メタノール：水＝１：２：0.3 からなる溶媒に分散させ、超音波処理を併用することにより、菌体から脂質成分を溶媒中に抽出した。また、抽出後の菌体残渣を濾紙で濾過して回収し、再び、同量の溶媒で同様の操作により脂質成分を抽出した。そして、これらの抽出液を一つにまとめ、蒸留及び真空乾燥を行うことにより乾燥した脂質成分抽出物を得た。
【００３５】
この脂質成分抽出物を10mM塩酸中で加水分解(100℃、10分間) し、オリゴ糖を含む糖質部分と脂質部分とに分離した。加水分解が完了したら直ちに冷却し、水酸化ナトリウムで中和した後、等量のクロロホルムと十分に混合して静置し、オリゴ糖を含む糖質部分を水相に回収して濃縮した。
この濃縮液について、 Superdex 30 (16×600mm;ファルマシア) を使用したゲル濾過カラムクロマトグラフィーに供し、50mM酢酸アンモニウム緩衝液(pH 7.0)で溶出した後、Polymeric NH2 (4.6×250mm;アステック) を使用したアミノ基親和性カラムクロマトグラフィーに供し、アセトニトリル：水＝75：25からなる溶媒で溶出して、本発明のオリゴ糖（精製物）約16mgを得た。
得られたオリゴ糖を、部分メチル化アセチルアルジトール修飾法により、ガスクロマトグラフィーで分析した結果、オリゴ糖の組成とグリコシド結合に関する以下の結果を得た。
【００３６】
【表３】
0003985976.tif 000006
【００３７】
さらに、このオリゴ糖を核磁気共鳴分析に供し、構成糖のα、β配置やグリコシド結合様式の特定を図った結果、本発明のオリゴ糖は以下の構造をもつことが明らかとなった。
α−Ｌ−Ｒｈａ−（１→２）−β−Ｄ−Ｇａｌ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇｌｃ
【００３８】
【実施例３】
実施例１で得られた本発明のオリゴ糖の粗製物を0.05重量％配合し、常法に従って歯磨き粉を製造した。
【００３９】
【実施例４】
実施例２で得られた本発明のオリゴ糖の精製物を 0.1重量％配合し、常法に従ってチューイングガムを製造した。
【００４０】
【発明の効果】
本発明の新規なオリゴ糖は、ガラクトースや乳糖等と同様に、一部の口腔内細菌の凝集を防止又は解離する効果を有する。したがって、本発明の新規なオリゴ糖は、歯垢形成予防剤及び歯垢分解剤の有効成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】試験例２における本発明のオリゴ糖の凝集阻止率を示す。
【図２】試験例２における本発明のオリゴ糖の凝集解離率を示す。
【図１】
0003985976.tif 000007
【図２】
0003985976.tif 000008