(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（1）：
0003996648.tif 000071
（式中、基：
0003996648.tif 000072
は、
0003996648.tif 000073
よりなる群から選ばれた基である）で表されるアミノ酸とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を塩基性条件下で縮合させたのち、生成したカルバミン酸誘導体を中性から酸性条件下で脱炭酸させて、一般式（2）：
0003996648.tif 000074
（式中、基：
0003996648.tif 000075
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸とし、さらにその薬理的に許容される塩とする方法において、前記反応および薬理的に許容される塩を形成するまでの一連の操作または前記反応および薬理的に許容される塩を取り出すまでの一連の操作を水性液中で行なうことにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000076
（式中、基：
0003996648.tif 000077
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制することを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の製造方法。
【請求項２】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成反応において、アミノ酸（1）および必要に応じてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を含有する水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を逐次添加しながら、該水性液のpHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、脱炭酸することにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000078
（式中、基：
0003996648.tif 000079
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体、一般式（4）：
0003996648.tif 000080
（式中、基：
0003996648.tif 000081
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸および式（5）：
0003996648.tif 000082
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）をうることを特徴とする請求の範囲第1項記載の製造方法。
【請求項３】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を1／4時間以上かけて逐次添加する請求の範囲第2項記載の製造方法。
【請求項４】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対してアミノ酸（1）を2モル当量以上用いる請求の範囲第1項、第2項または第3項記載の製造方法。
【請求項５】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成反応において、塩基性塩を成すアミノ酸（1）をN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して2モル当量以上含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を添加して反応を開始し、当該水性液のpHが9〜12の範囲となってから塩基性pH調整剤を逐次添加して、pHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、脱炭酸することにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000083
（式中、基：
0003996648.tif 000084
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体、一般式（4）：
0003996648.tif 000085
（式中、基：
0003996648.tif 000086
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸および式（5）：
0003996648.tif 000087
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）をうることを特徴とする請求の範囲第１項記載の製造方法。
【請求項６】
pH9〜12の水性液のpHがpH10.5±1.0の範囲に維持される請求の範囲第2項または第5項記載の製造方法。
【請求項７】
水性液が、有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる請求の範囲第1項、第2項、第3項、第4項、第5項または第6項記載の製造方法。
【請求項８】
有機溶剤が水との相溶性の低い有機溶剤である請求の範囲第7項記載の製造方法。
【請求項９】
有機溶剤がハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類およびエーテル類よりなる群から選ばれる少なくとも1種である請求の範囲第7項または第8項記載の製造方法。
【請求項１０】
アミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物との縮合反応において、撹拌強度0.1kW／ｍ3以上で撹拌、混合する請求の範囲第2項、第3項、第4項、第5項、第6項、第7項、第8項または第9項記載の製造方法。
【請求項１１】
反応後の反応混合物よりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を水との相溶性の低い有機溶剤と水からなる2相系においてどちらか一方の相へ移行させて分離したN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する、有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる媒体中で、その薬理的に許容される塩とする請求の範囲第1項、第2項、第3項、第4項、第5項、第6項、第7項、第8項、第9項または第10項記載の製造方法。
【請求項１２】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成およびその薬理的に許容される塩とする操作において、反応および薬理的に許容される塩を形成するまでの一連の操作または反応および薬理的に許容される塩を取り出すまでの一連の操作を実質的に水中で行なう請求の範囲第1項、第2項、第3項、第4項、第5項、第6項または第7項記載の製造方法。
【請求項１３】
アミノ酸（1）がL-プロリンであり、えられるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンである請求の範囲第1項、第2項、第3項、第4項、第5項、第6項、第7項、第8項、第9項、第10項、第11項または第12項記載の製造方法。
【請求項１４】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを、水との相溶性の低い有機溶剤と水からなる2相系の液体を20℃以上の温度で分液した該有機溶剤相中、または20℃より低い温度で分液した該水相中に移行させ、該有機溶剤相または該水相中でその薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じて取り出す請求の範囲第13項記載の製造方法。
【請求項１５】
薬理的に許容される塩がマレイン酸塩である請求の範囲第13項または第14項記載の製造方法。
【請求項１６】
塩を形成し、晶出させる過程を、無機塩が共存する実質的に水系で行なう請求の範囲第15項記載の製造方法。
【請求項１７】
マレイン酸を含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する水性液を逐次添加することにより該マレイン酸塩とする請求の範囲第15項または第16項記載の製造方法。
【請求項１８】
塩を形成し、晶出させる過程を40〜70℃で行なう請求の範囲第15項、第16項または第17項記載の製造方法。
【請求項１９】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を生成する反応からその薬理的に許容される塩の形成までの一連の操作または、反応からその薬理的に許容される塩を取り出すまでの一連の操作において、生成するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）に対して等モル量以上の水が存在する請求の範囲第1項、第2項、第3項、第4項、第5項、第6項、第7項、第8項、第9項、第10項、第11項、第12項、第13項、第14項、第15項、第16項、第17項または第18項記載の製造方法。
【請求項２０】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよびマレイン酸を含有する水性液中で塩を形成させ、晶出させる過程を実質的に水系で行なう方法を、無機塩共存下、および／または40〜70℃で実施する、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の製造方法。
【請求項２１】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン生成後の反応混合物を用いて行なう請求の範囲第20項記載の製造方法。
【請求項２２】
一般式（2）：
0003996648.tif 000088
（式中、基：
0003996648.tif 000089
は、
0003996648.tif 000090
よりなる群から選ばれた基である）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸生成後の反応混合物中の該N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）からその薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じ薬理的に許容される塩を取り出す方法において、有機溶剤および水からなり、その重量比が96：4より水を多く含む媒体中で操作することにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000091
（式中、基：
0003996648.tif 000092
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制することを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の製造方法。
【請求項２３】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物を抽出もしくは洗浄してえられる水の共存する有機溶剤相中でその薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じ薬理的に許容される塩を取り出す請求の範囲第22項記載の製造方法。
【請求項２４】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩を形成し、および必要に応じ取り出す操作において、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）に対して等モル量以上の水が存在する請求の範囲第22項または第23項記載の製造方法。
【請求項２５】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンである請求の範囲第22項、第23項または第24項記載の製造方法。
【請求項２６】
薬理的に許容される塩がマレイン酸塩である請求の範囲第22項、第23項、第24項または第25項記載の製造方法。
【請求項２７】
塩を形成し、晶出させる過程を40〜70℃で行なう請求の範囲第22項、第23項、第24項、第25項または第26項記載の製造方法。
【請求項２８】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する水との相溶性の低い有機溶剤と水の2相系を、20℃以上の温度で分液し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該有機溶剤相に移行させるか、または、20℃より低い温度で分液し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該水相に移行させることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの分離方法。
【請求項２９】
有機溶剤が酢酸エステルである請求の範囲第28項記載の分離方法。
【請求項３０】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該有機溶剤相に移行させる方法において、水相を無機塩で飽和することなく移行させる請求の範囲第28項または第29項記載の分離方法。
【請求項３１】
L-プロリンおよびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを生成する方法において、L-プロリンおよび必要に応じてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を含有する水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を逐次添加しながら、該水性液のpHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、中性から酸性条件下で、脱炭酸することにより、式（6）：
0003996648.tif 000093
で表わされるジケトピペラジン誘導体、式（7）：
0003996648.tif 000094
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000095
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの製造方法。
【請求項３２】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を1／4時間以上かけて添加する請求の範囲第31項記載の製造方法。
【請求項３３】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対してL-プロリンを２モル当量以上用いる請求の範囲第31項または第32項記載の製造方法。
【請求項３４】
L-プロリンおよびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを生成する反応において、塩基性塩を成すL-プロリンをN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して２モル当量以上含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を添加して反応を開始し、当該水性液のpHが9〜12の範囲となってから塩基性pH調整剤を逐次添加して、pHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、中性から酸性条件下で脱炭酸することにより、式（6）：
0003996648.tif 000096
で表わされるジケトピペラジン誘導体、式（7）：
0003996648.tif 000097
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000098
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの製造方法。
【請求項３５】
水性液が有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる請求の範囲第31項、第32項、第33項または第34項記載の製造方法。
【請求項３６】
L-プロリンとN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物との反応において、撹拌強度0.1kW／ｍ3以上で撹拌、混合する請求の範囲第31項、第32項、第33項、第34項または第35項記載の製造方法。
【請求項３７】
有機溶剤がハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類およびエーテル類よりなる群から選ばれる少なくとも1種である請求の範囲第35項または第36項記載の製造方法。
【請求項３８】
前記N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの生成反応が、実質的に水中で行なわれる請求の範囲第31項、第32項、第33項、第34項、第35項または第36項記載の製造方法。
【請求項３９】
一般式（2）：
0003996648.tif 000099
（式中、基：
0003996648.tif 000100
は、
0003996648.tif 000101
よりなる群から選ばれた基である）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸の薬理的に許容される塩を精製する方法において、水性液中で精製することにより一般式（3）：
0003996648.tif 000102
（式中、基：
0003996648.tif 000103
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制しつつ、一般式（4）：
0003996648.tif 000104
（式中、基：
0003996648.tif 000105
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸および式（5）：
0003996648.tif 000106
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）およびその薬理的に許容しうる塩をうることを特徴とする精製方法。
【請求項４０】
水性液が有機溶剤および水の重量比96：4より水を多く含む媒体からなる請求の範囲第39項記載の精製方法。
【請求項４１】
薬理的に許容される塩の精製を40〜70℃で行なう請求の範囲第39項または第40項記載の精製方法。
【請求項４２】
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の精製を実質的に水系で実施する方法において、無機塩共存下、および／または40〜70℃で該マレイン酸塩を精製することにより、式（6）：
0003996648.tif 000107
で表わされるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制しつつ、式（7）：
0003996648.tif 000108
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000109
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩をうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の精製方法。
【請求項４３】
精製方法が、再結晶またはリスラリー洗浄である請求の範囲第39項、第40項、第41項または第42項記載の精製方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、一般式（2）：
0003996648.tif 000002
（式中、基：
0003996648.tif 000003
は、たとえば、式：
0003996648.tif 000004
で表される基である）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-アミノ酸またはその薬理的に許容される塩を高品質、高収率かつ経済的に商業的規模で有利に製造する方法に関する。N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）およびその薬理的に許容される塩は、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）やそのマレイン酸塩（エナラプリル・マレイン酸塩）など、種々の血圧降下剤としてきわめて有用な化合物である。
背景技術
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）またはその薬理的に許容される塩を取得する方法としては、一般式（1）：
0003996648.tif 000005
（式中、基：
0003996648.tif 000006
は前記に同じ）で表されるアミノ酸と式（8）：
0003996648.tif 000007
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・Ｎ−カルボキシ無水物よりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を形成し、さらにそれから薬理的に許容される塩を取得する方法が知られており、たとえば、特開昭62-48696号公報に記載されるように、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンまたはそのマレイン酸塩を製造する方法が知られている。
前記特開昭62-48696号公報では、以下に示す方法が記載されている。
１．N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物とその1〜1.5モル当量のL-プロリンとを水との相溶性の高いまたは低い有機溶剤と水との混合系中で塩基性条件下（好ましくはｐＨ9〜10）に縮合させた後、脱炭酸させてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する反応混合物を取得する。尚、該公開特許公報には、アセトンなどの水との相溶性の高い有機溶剤と水との混合系において、高い反応収率がえられることが記載されている。
２．前記反応混合物からアセトンなどの水との相溶性の高い有機溶剤を留去し、水との相溶性の低い有機溶剤である酢酸エチルに交換し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを抽出する。尚、その際、水層を塩化ナトリウムで飽和させて、水溶性の高いN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの抽出効率を高める。
３．抽出液を無水硫酸ナトリウムを用いて脱水した後、溶媒を濃縮除去して、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを取得する。
４．N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンとアセトニトリルを混合し、70℃に加温下、マレイン酸を添加して徐々に冷却し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩を取得する。
５．N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩をアセトニトリルから再結晶して精製する。
しかしながら、前記公報記載の方法をはじめ、アミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物よりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を形成し、さらにその薬理的に許容される塩を取得する方法は、収率および品質に不利を招く、一般式（3）：
0003996648.tif 000008
（式中、基：
0003996648.tif 000009
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体、一般式（4）：
0003996648.tif 000010
（式中、基：
0003996648.tif 000011
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（以下、カルボキシ誘導体（4）ともいう）および式（5）：
0003996648.tif 000012
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの副生といった問題を潜在的に含んでいることが判った。とくに、操作時間を要する商業的規模での製造においては、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生が顕著となり、所望する化合物の収率を予想外に低下させる要因となる。また、カルボキシ誘導体（4）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）が副生した場合、これらの除去は非常に難しく、精製面での負荷の増大を招く。
さらに、特開昭62-48696号公報に記載の方法では、大量の抽出溶剤の使用や多種類の溶剤の使用、反応溶剤と抽出溶剤の交換、無機塩による水層の飽和などのプロセスの煩雑さ、またそれに伴う時間の消費、設備の大型化、コストアップなどの問題もある。
このようにN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）またはその薬理的に許容される塩を商業的規模で高品質、高収率かつ経済的に製造する簡便な方法を開発することは非常に重要である。
本発明の目的は、前記ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の副生を抑制し、商業的規模で高品質、高収率かつ経済的にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）およびその薬理的に許容される塩をきわめて簡便に製造する方法を提供することである。
本発明の目的は、とりわけ、前述の問題を克服し、商業的規模で高品質、高収率かつ経済的にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよびそのマレイン酸塩をきわめて簡便に製造する方法を提供することである。
まず、アミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からのN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成およびその薬理的に許容される塩の形成といった一連の操作を水存在下に実施することにより、水が本来持つ脱水抑制効果に加え、プロトン性溶媒としての溶媒和による環化反応からの保護効果により、さらにまた、反応系中に生成するN-カルバミン酸を塩基性塩に維持する条件を選択することにより、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生を抑制できることが見出された。
また、アミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からのN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成を水存在下、特定の反応条件下に実施することにより、ジケトピペラジン誘導体（3）だけでなく、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がえられることが見出された。
さらに、前記の2つの方法を組み合わせることにより、高収率で高品質のN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）およびその薬理的に許容される塩をきわめて簡便なプロセスで製造できることが見出された。
さらにまた、とくに水溶性が高く、抽出・分離操作が煩雑となるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンに関して、抽出・分離操作を特定の温度条件下に行なうことにより、水相を無機塩で飽和することなく、また、大量の抽出溶剤を使用することなく、きわめて簡便かつ効率的にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを分離できることも見出された。
発明の開示
本発明は、
（1）一般式（1）：
0003996648.tif 000013
（式中、基：
0003996648.tif 000014
は、
0003996648.tif 000015
よりなる群から選ばれた基である）で表されるアミノ酸と式（8）：
0003996648.tif 000016
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を塩基性条件下で縮合させたのち、生成したカルバミン酸誘導体を中性から酸性条件下で脱炭酸させて、一般式（2）：
0003996648.tif 000017
（式中、基：
0003996648.tif 000018
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸とし、さらにその薬理的に許容される塩とする方法において、前記反応および薬理的に許容される塩を形成するまでの一連の操作または前記反応および薬理的に許容される塩を取り出すまでの一連の操作を水性液中で行なうことにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000019
（式中、基：
0003996648.tif 000020
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制することを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の製造方法、
（2）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成反応において、アミノ酸（1）および必要に応じてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を含有する水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性ｐＨ調整剤を逐次添加しながら、該水性液のpHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、脱炭酸することにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000021
（式中、基：
0003996648.tif 000022
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体、一般式（4）：
0003996648.tif 000023
（式中、基：
0003996648.tif 000024
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸および式（5）：
0003996648.tif 000025
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）をうることを特徴とする前記（1）項記載の製造方法、
（3）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を1／4時間以上かけて逐次添加する前記（2）項記載の製造方法、
（4）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対してアミノ酸（1）を2モル当量以上用いる前記（1）、（2）または（3）項記載の製造方法、
（5）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成反応において、塩基性塩を成すアミノ酸（1）をN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して2モル当量以上含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を添加して反応を開始し、当該水性液のpHが9〜12の範囲となってから塩基性ｐＨ調整剤を逐次添加して、pHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、脱炭酸することにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000026
（式中、基：
0003996648.tif 000027
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体、一般式（4）：
0003996648.tif 000028
（式中、基：
0003996648.tif 000029
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸および式（5）：
0003996648.tif 000030
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）をうることを特徴とする前記（1）項記載の製造方法、
（6）pH9〜12の水性液のpHがpH10.5±1.0の範囲に維持される前記（2）または（5）項記載の製造方法、
（7）水性液が、有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる前記（1）、（2）、（3）、（4）、（5）または（6）項記載の製造方法、
（8）有機溶剤が水との相溶性の低い有機溶剤である前記（7）項記載の製造方法、
（9）有機溶剤がハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類およびエーテル類よりなる群から選ばれる少なくとも1種である前記（7）または（8）項記載の製造方法、
（10）アミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物との縮合反応において、撹拌強度0.1kW／ｍ3以上で撹拌、混合する前記（2）、（3）、（4）、（5）、（6）、（7）、（8）または（9）項記載の製造方法、
（11）反応後の反応混合物よりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を水との相溶性の低い有機溶剤と水からなる2相系においてどちらか一方の相へ移行させて分離したN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する、有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる媒体中で、その薬理的に許容される塩とする前記（1）〜（10）項のいずれか１つに記載の製造方法、
（12）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成およびその薬理的に許容される塩とする操作において、反応および薬理的に許容される塩を形成するまでの一連の操作または反応および薬理的に許容される塩を取り出すまでの一連の操作を実質的に水中で行なう前記（1）、（2）、（3）、（4）、（5）、（6）または（7）項記載の製造方法、
（13）アミノ酸（1）がL-プロリンであり、えられるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンである前記（1）〜（12）項のいずれか１つに記載の製造方法、
（14）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを、水との相溶性の低い有機溶剤と水からなる2相系の液体を20℃以上の温度で分液した該有機溶剤相中、または20℃より低い温度で分液した該水相中に移行させ、該有機溶剤相または該水相中でその薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じて取り出す前記（13）項記載の製造方法、
（15）薬理的に許容される塩がマレイン酸塩である前記（13）または（14）項記載の製造方法、
（16）塩を形成し、晶出させる過程を、無機塩が共存する実質的に水系で行なう前記（15）項記載の製造方法、
（17）マレイン酸を含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する水性液を逐次添加することにより該マレイン酸塩とする前記（13）、（14）、（15）または（16）項記載の製造方法、
（18）塩を形成し、晶出させる過程を40〜70℃で行なう前記（15）、（16）または（17）項記載の製造方法、
（19）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を生成する反応からその薬理的に許容される塩の形成までの一連の操作または、反応からその薬理的に許容される塩を取り出すまでの一連の操作において、生成するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）に対して等モル量以上の水が存在する前記（1）〜（18）項のいずれか１つに記載の製造方法、
（20）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよびマレイン酸を含有する水性液中で塩を形成させ、晶出させる過程を実質的に水系で行なう方法を、無機塩共存下、および／または40〜70℃で実施する、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の製造方法、
（21）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン生成後の反応混合物を用いて行なう前記（20）項記載の製造方法、
（22）一般式（2）：
0003996648.tif 000031
（式中、基：
0003996648.tif 000032
は、
0003996648.tif 000033
よりなる群から選ばれた基である）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸生成後の反応混合物中の該N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）からその薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じ薬理的に許容される塩を取り出す方法において、有機溶剤および水からなり、その重量比が96：4より水を多く含む媒体中で操作することにより、一般式（3）：
0003996648.tif 000034
（式中、基：
0003996648.tif 000035
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制することを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の製造方法、
（23）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物を抽出もしくは洗浄してえられる水の共存する有機溶剤相中でその薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じ薬理的に許容される塩を取り出す前記（22）項記載の製造方法、
（24）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩を形成し、および必要に応じ取り出す操作において、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）に対して等モル量以上の水が存在する前記（22）または（23）記載の製造方法、
（25）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンである前記（22）、（23）または（24）項記載の製造方法、
（26）薬理的に許容される塩がマレイン酸塩である前記（22）、（23）、（24）または（25）項記載の製造方法、
（27）塩を形成し、晶出させる過程を40〜70℃で行なう前記（22）、（23）、（24）、（25）または（26）項記載の製造方法、
（28）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する水との相溶性の低い有機溶剤と水の2相系を、20℃以上の温度で分液し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該有機溶剤相に移行させるか、または、20℃より低い温度で分液し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該水相に移行させることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの分離方法、
（29）有機溶剤が酢酸エステルである前記（28）項記載の分離方法、
（30）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該有機溶剤相に移行させる方法において、水相を無機塩で飽和することなく移行させる前記（28）または（29）項記載の分離方法、
（31）L-プロリンおよびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを生成する方法において、L-プロリンおよび必要に応じてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を含有する水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を逐次添加しながら、該水性液のpHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、中性から酸性条件下で、脱炭酸することにより、式（6）：
0003996648.tif 000036
で表わされるジケトピペラジン誘導体、式（7）：
0003996648.tif 000037
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000038
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの製造方法、
（32）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を1／4時間以上かけて添加する前記（31）項記載の製造方法、
（33）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対してL-プロリンを2モル当量以上用いる前記（31）または（32）項記載の製造方法。
（34）L-プロリンおよびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを生成する反応において、塩基性塩を成すL-プロリンをN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して2モル当量以上含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を添加して反応を開始し、当該水性液のpHが9〜12の範囲となってから塩基性pH調整剤を逐次添加して、pHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、中性から酸性条件下で脱炭酸することにより、式（6）：
0003996648.tif 000039
で表わされるジケトピペラジン誘導体、式（7）：
0003996648.tif 000040
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000041
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの製造方法、
（35）水性液が有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる前記（31）、（32）、（33）または（34）項記載の製造方法、
（36）L-プロリンとN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物との反応において、撹拌強度0．1ｋＷ／ｍ3以上で撹拌、混合する前記（31）、（32）、（33）、（34）または（35）項記載の製造方法、
（37）有機溶剤がハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類およびエーテル類よりなる群から選ばれる少なくとも1種である前記（35）または（36）項記載の製造方法、
（38）前記N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの生成反応が、実質的に水中で行なわれる請求項（31）、（32）、（33）、（34）、（35）または（36）項記載の製造方法、
（39）一般式（2）：
0003996648.tif 000042
（式中、基：
0003996648.tif 000043
は、
0003996648.tif 000044
よりなる群から選ばれた基である）で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸の薬理的に許容される塩を精製する方法において、水性液中で精製することにより一般式（3）：
0003996648.tif 000045
（式中、基：
0003996648.tif 000046
は前記に同じ）で表されるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制しつつ、一般式（4）：
0003996648.tif 000047
（式中、基：
0003996648.tif 000048
は前記に同じ）で表されるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸および式（5）：
0003996648.tif 000049
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）およびその薬理的に許容しうる塩をうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の精製方法、
（40）水性液が有機溶剤および水の重量比96：4より水を多く含む媒体からなる前記（39）項記載の精製方法、
（41）薬理的に許容される塩の精製を40〜70℃で行なう前記（39）または（40）項記載の精製方法、
（42）N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の精製を実質的に水系で実施する方法において、無機塩共存下、および／または40〜70℃で該マレイン酸塩を精製することにより、式（6）：
0003996648.tif 000050
で表わされるジケトピペラジン誘導体の副生を抑制しつつ、式（7）：
0003996648.tif 000051
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000052
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩をうることを特徴とするN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の精製方法、および
（43）精製方法が、再結晶またはリスラリー洗浄である前記（39）、（40）、（41）または（42）項記載の精製方法
に関する。
発明を実施するための最良の形態
本発明における一般式（1）：
0003996648.tif 000053
で表されるアミノ酸は、式中の基：
0003996648.tif 000054
がイミノ酸残基、好ましくは環状イミノ酸残基の群から選ばれる基であるアミノ酸である。イミノ酸残基の場合は、Ｒ1は5〜10の環員を有する脂環式単環または二環状系列であり、Ｒ2は水素原子である。前記イミノ酸残基の代表的な例は、たとえば、式：
0003996648.tif 000055
で表される基などである。
環状イミノ酸残基の場合は、Ｒ1とＲ2は一緒になって、Ｒ1とＲ2の結合する窒素原子および炭素原子とともに5〜10の環員を有する複素環式単環または二環状系列を形成する。該環状イミノ酸残基は、たとえば、プロリンもしくはプロリン類似体の残基、またはこれから誘導される基であり、前記基において、ピロリジン環は、たとえば、ピペリジン環、キヌクリジン環、イソインドリン環、N-アルキルイミダゾリジン環、オクタヒドロインドール環、オクタヒドロイソインドール環、デカヒドロキノリン環、デカヒドロイソキノリン環、1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン環やこれに類似した環などに置きかわることができ、これらの環はオキソ基、ヒドロキシ基、メルカプト基、アルキルメルカプト基、アルコキシ基、アルキル基などにより置換または架橋されていてもよい。前記環状イミノ酸残基の代表的な例は、式：
0003996648.tif 000056
で表される基などである。
これらのアミノ酸類については、たとえば、L-プロリンおよび1,2,3,4-テトラヒドロ-3-イソキノリンカルボン酸は市販されているものを用いることができる。1,2,3,4-テトラヒドロ-6,7-ジメトキシ-3-イソキノリンカルボン酸はたとえば米国特許第4912221号明細書、1,4-ジチア-7-アザスピロ[4,4]ノナン-8-カルボン酸はたとえば米国特許第4468396号明細書に記載された方法によりえられたものを用いることができる。また、1-メチル-2-オキソ-4-イミダゾリジンカルボン酸は、たとえばインターナショナル・ジャーナル・オブ・ペプチド・アンド・プロテイン・リサーチ（Int. J. Pept. Protein Res.）、33（6）、403-11（1989）、オクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピロール-2-カルボン酸はたとえばテトラヘドロン・レターズ（Tetrahedron Lett.）、34（41）、6603-6（1993）、2-アザビシクロ［2,2,2］オクタン-3-カルボン酸はたとえばテトラヘドロン・レターズ、33（48）、9369-72（1992）に記載された方法によりそれぞれえられたものを用いることができる。
本発明に使用するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物は、たとえば、特開昭62-48696号公報や米国特許第4686295号明細書や同第5359086号明細書などに記載された方法を用いて調製することができる。たとえば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）やその塩酸塩などの無機酸塩に、有機溶媒中で、加温下、ホスゲン溶液を添加またはホスゲンガスを導入して反応させることにより容易にほぼ定量的に調製することができる。反応により生成したN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物は、普通、残存するホスゲンや塩化水素を除去した後、とくに精製することなくえられた反応溶液のまま使用することもできるし、または、結晶化したものを使用することもできる。反応溶液を用いる場合は、本発明にそのまま好適に利用できるように水との相溶性の低い有機溶剤を反応溶剤として用いるのが有利である。結晶化して使用する場合は以後の本発明を有機溶剤を全く使用することなく実施することもできる。
本発明の一般式（2）：
0003996648.tif 000057
で表されるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸において、基：
0003996648.tif 000058
は、前記と同じである。前記イミノ酸残基や環状イミノ酸残基が良好な血圧降下作用の発現に寄与する。一般式（2）においてカルボキシル基の結合した炭素原子が不斉炭素原子の場合にはその炭素原子がＳ配置を有する化合物（2）が、一般に血圧降下剤として有用である。なお、その他の不斉炭素原子がある場合には、その不斉炭素原子に関し所望の立体配置のものを使用しうる。前記基：
0003996648.tif 000059
で表される基である場合は、たとえば、
0003996648.tif 000060
がとくに望ましい立体配置である。
前記環状イミノ酸残基がプロリン残基、とくにＬ型（すなわちＳ配置）のプロリン残基である場合、生成物（2）はエナラプリルであり、とくに有用な血圧降下剤である。
本発明によりえられるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩としては、塩酸塩、硫酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩などの有機酸塩、グリシン、フェニルアラニンなどのアミノ酸付加物をあげることができる。
水性液は、水の共存する溶液のことであるが、水性液としては、有機溶剤と水との混合物または水があげられる。前記有機溶剤は、水との相溶性の高い有機溶剤であっても、水との相溶性の低い有機溶剤であってもよい。
水との相溶性の高い有機溶剤としては、たとえば、アセトン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジオキサンおよびこれらの混合物などがあげられる。これらのうち、取り扱い易さ、溶剤の安全性などの観点からアセトンおよびテトラヒドロフランが好ましい。前記水との相溶性の高い有機溶剤とは、一般に1気圧において温度20℃で、同容量の純水と緩やかにかき混ぜた場合に、流動がおさまったのちも当該混合物が均一な外観を有するものをいう。
また、水との相溶性の低い有機溶剤としては、たとえば、塩化メチレン、クロロホルム、1、2-ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸n-プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸n-ブチル、酢酸イソブチル、プロピオン酸メチル、プロピオン酸エチルなどの脂肪酸エステル類、メチルエチルケトン、メチルn-プロピルケトン、ジエチルケトン、メチルイソブチルケトンなどのケトン類、トルエン、n-ヘキサンなどの炭化水素類、ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ジイソプロピルエーテル、ジブチルエーテル、メチルtert-ブチル−エーテルなどのエーテル類およびこれらの混合物などがあげられる。これらのうち、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物の溶解性などの観点からハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類、エーテル類が好ましく、なかでも、取り扱い易さ、溶剤の安全性、溶剤の価格、抽出時や塩形成時の溶剤としての使用有利性、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の高い安定化効果（ジケトピペラジン誘導体（3）の副生抑制効果）などの観点から、脂肪酸エステル類、とくに酢酸エステル類、とりわけ酢酸エチルが好ましい。前記水との相溶性の低い有機溶剤とは前述の水との相溶性の高い有機溶剤以外の有機溶剤をいう。
また前記有機溶剤は併用することもできる。たとえば、水との相溶性の高い有機溶剤と水との相溶性の低い有機溶剤とを併用することもできる。
前記水性液の有機溶剤と水との量比は、反応物（1）や生成物（2）などの溶解性によって異なる。重量比は、96：4〜0：100であるが、一般に20：1〜0：100、生産性などの観点から、普通10：1〜0：100が選ばれる。アミノ酸（1）がL-プロリンであり、生成物（2）がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の場合も、有機溶剤と水との重量比は96：4〜0：100でよいが、生産性の観点から、20：1〜0：100、とくに10：1〜0：100が好ましい。なお、前記水性液は、実質的に水であってもよいものである。
本発明における「実質的に水」とは、反応や塩形成において得られる効果が、水単独中で実施した場合と概して差異がない範囲で有機溶剤を含んでいてもよい水系を意味する。含まれる水の割合は用いる有機溶剤の種類や工程により異なる。
水の量としては、生成物（2）に対して普通等モル以上、好ましくは2倍モル以上、より好ましくは3倍モル以上、さらに好ましくは4倍モル以上の水を共存させるのが、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生を抑制するのでよい。たとえば、後述する実施例8、10のごとく、副生物（3）の生成は、1／2〜1／3以下、好ましくはほとんど無視できるレベルに抑制できる。
本発明の方法では、まずN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物とアミノ酸（1）とを塩基性条件下にて水性液中で縮合反応させて、カルバミン酸誘導体をうる。
縮合反応を塩基性条件下で行なうために本発明で使用する塩基性pH調整剤としては、たとえば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の水酸化物、炭酸塩および炭酸水素塩などの無機塩基、ならびに2級アミン、3級アミンおよび4級アンモニウムヒドロキシドなどの有機塩基をあげることができる。具体的な例としては、たとえば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムなどのアルカリ金属水酸化物、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸リチウムなどのアルカリ金属炭酸塩、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウムなどのアルカリ金属炭酸水素塩、水酸化マグネシウム、水酸化カルシウムなどのアルカリ土類金属水酸化物、ジメチルアミン、ジエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ジシクロヘキシルアミンなどの2級アミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、トリブチルアミン、トリアミルアミン、ピリジン、N-メチルモルホリンなどの3級アミン、テトラメチル、テトラエチル、テトラプロピル、テトラブチル、テトラアミル、テトラヘキシル、ベンジルトリメチルのそれぞれの4級アンモニウムヒドロキシドなどがあげられるが、これらに限定されるものではない。
前記塩基性pH調整剤としては、安価であること、取り扱い易さ、廃水処理の容易さなどの観点から、無機塩基、とくに、水酸化ナトリウム、水酸化カリウムおよび水酸化リチウムなどのアルカリ金属水酸化物が好ましく、とりわけ水酸化ナトリウム、水酸化カリウムが好ましい。前記無機塩基は、操作性などの観点から水溶液として使用するのが好ましく、普通、たとえば、2〜20Ｎ、好ましくは5〜20Ｎのアルカリ金属水酸化物の水溶液として使用するのが有利である。なお、前記塩基性pH調整剤は、単独で使用してもよく、2種以上併用してもよい。
前記塩基性pH調整剤の使用量は、水性液を所定の塩基性に維持するための必要量である。
水性液は前記塩基性pH調整剤によって塩基性にされるが、特別に前記水性液を塩基性にするために塩基を加える必要はない。しかし、リン酸水素二ナトリウム、塩酸、ホウ酸などを添加してpH緩衝性のある水性液にしたものを水性液として用いることもできるし、界面活性剤や相間移動触媒などを必要に応じて添加してもよい。
本反応における安定した高収率、高品質確保のためには、さらに、反応時の加水分解によるカルボキシ誘導体（4）やN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の副生などの副反応を抑制し、主反応を円滑に進行させることが重要である。このためには、アミノ酸（1）および必要に応じてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を逐次添加しつつ、pH9〜12で縮合を行なえばよい。これにより、たとえば後述する実施例7のごとく、副生物の生成を全体として1／2〜1／3以下に抑制して、生成物（2）における副生物（3）〜（5）の含有量を少なく、具体的には5重量％未満、好ましくは2重量％未満とすることができる。したがって目的生成物（2）の収率を95％以上のレベルとすることができる。
この場合、用いるアミノ酸（1）量を多くすることも、加水分解などの副反応を抑制しながら主反応を円滑に進めるためには効果的であり、具体的には、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して2モル当量以上のアミノ酸（1）の使用が、効果をより大きくする点から好ましい。
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤の添加時間は、全量が添加される時間として、一般に1／4時間以上、普通1／3時間以上、好ましくは1／2時間以上であり、上限に制限はないが、生産性などの観点から、一般に20時間以下、普通15時間以下、好ましくは10時間以下である。逐次添加する方法としては、たとえば一定速度で添加する方法、分割添加する方法などを採用でき、とくに、収率、品質の向上、操作性などの観点から一定速度で添加する方法が好ましく用いられる。N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物は、たとえば、前記反応に用いる溶媒に混合または溶解して添加することもできるし、粉体のまま添加することもできる。
これにより、一般に、水との相溶性の高い有機溶剤と水の混合系のみならず、水との相溶性の低い有機溶剤と水の混合系においても、好適に反応を実施することができるが、用いる水性液の水の比率を高め、とくにジケトピペラジン誘導体（3）の副生抑制の効果を最大とする、実質的に水中での反応では、主反応速度が低下して反応時間遅延による副反応の影響が大きくなる傾向にあることから、用いるアミノ酸（1）の活性種としての塩基性塩を成す比率を高め、具体的には該活性種がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して2モル当量以上が存在する水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を添加して反応することが、懸かる問題解決には好適である。この場合、反応開始時の水性液のpHは12を超える場合も含まれるが、主反応の円滑な進行に伴いpHは速やかに低下し、以後pH9〜12の範囲になったのち反応液に塩基性pH調整剤を逐次添加しながらpHを9〜12の範囲に維持して縮合すれば、生成するN-カルバミン酸基を塩基性塩に保持するとともに、該アミノ酸（1）の活性種が常に最大量に維持されて、反応時間を短縮して加水分解によるカルボキシ誘導体（4）やN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の副生を最小化することができる。これにより、実質的に反応場が水である場合においても、とくに好適に反応を実施することができる。
前記、維持するpH9〜12の範囲は、好ましくはpH10.5±1.0の範囲、より好ましくはpH10.5±0.5の範囲であるのが有利である。
反応pHが上記範囲外の場合、副生成物の総量が増加する傾向がある。pHが低いほど主反応が進行し難く、カルボキシ無水物部分の加水分解によりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）が副生しやすい。また、pHが高いほどエトキシカルボニル部分の加水分解によりカルボキシ誘導体（4）が副生しやすい。
反応に際しては、とくに、水との相溶性の低い有機溶剤と水の混合系や実質的に水中においては、反応系が液−液もしくは固−液の不均一系となる傾向があるので、充分な分散がえられるように、適切に撹拌、混合するのが好ましい。この場合、一般に撹拌強度0.1kW／ｍ3以上、品質、収率の向上の点から好ましくは0.2kW／ｍ3以上、より好ましくは0.5kW／ｍ3以上で実施するのが有利である。上限はとくにないが、攪拌機の実用面から5kW／ｍ3以下である。したがって一般には0.1〜5kW／ｍ3、普通、0.5〜3kW／ｍ3の範囲内で好ましく選択できる。
本発明において、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対するアミノ酸（1）のモル比は、一般に0.5〜5であるが、えられるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の品質、生産性の面からは、一般に0.7以上、普通1以上であり、先にも述べたように、本発明の効果を最大限に発揮させるには2以上であるのが好適である。上限に特に制限はないが、経済性、廃水処理面の負荷などの観点から、一般に5以下、普通4以下であり、とくに3以下とするのが有利である。
アミノ酸（1）は最初から全量加えておくのが、高収率を確保する、操作性を簡便にするなどの点から好ましい。
アミノ酸（1）の仕込み濃度は、水性液に対するアミノ酸（1）の総量として、アミノ酸（1）の種類にもよるが、一般に5〜200％（ｗ／ｖ）程度である。収率、品質、反応速度や生産性の点からは高濃度の方が有利であり、水との相溶性の高い有機溶剤と水の混合系に比べて、水との相溶性の低い有機溶剤と水の混合系や実質的に水では水溶性物質の溶解度が高いので、前記水性液の溶媒として、水との相溶性の低い有機溶剤と水の混合系または実質的に水を用いる場合は、10％（ｗ／ｖ）以上、好ましくは20％（ｗ／ｖ）以上、より好ましくは30％（ｗ／ｖ）以上の高濃度で有利に実施できることが判った。たとえば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を製造する場合、水性液に対するL-プロリンの総量として、100％（ｗ／ｖ）以上の高濃度反応も可能である。
反応温度は、普通60℃以下、好ましくは50℃以下、より好ましくは40℃以下の、反応液が氷結しない温度である。反応温度が高すぎると副反応が増加して、収率、品質が低下しやすい。たとえば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の製造は、一般に25±15℃の範囲の温度で良好に実施できる。
つぎに、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物とアミノ酸（1）との縮合反応の後、生成したカルバミン酸誘導体を中性から酸性条件下で分解（脱炭酸）してN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を生成させる。
脱炭酸は水性液中で行なわれ、反応混合物に酸を混合することにより容易に進行する。脱炭酸は、普通60℃以下、好ましくは50℃以下、より好ましくは40℃以下の、反応液が氷結しない温度で実施される。脱炭酸温度が高すぎると副反応が増加して、収率、品質が低下しやすいので、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生を少なくするためには、たとえば、20℃以下、好ましくは10℃以下といった低温側で実施するのが一般的に有利である。
反応濃度にもよるが、発熱、発泡に注意しつつ、中性から酸性条件下で脱炭酸するのが好ましい。反応液のpHは、脱炭酸速度の点から、普通pH8以下、好ましくはpH7以下にするのが有利である。ことさら強酸性にする必要はなく、一般にpH1〜6の範囲内で自由に選択できる。最終的にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の等電点付近であるpH4〜5に調整することにより、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を形成させる。
脱炭酸反応に使用する酸は、とくに制限はないが、実用性の点から、強酸が好ましい。普通、塩酸や硫酸などの鉱酸が好ましい。とくに塩酸が好ましく、濃塩酸が最も好ましい。これらは単独で用いてもよく、2種以上を併用してもよい。用いる酸の量は塩基成分を中和し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の等電点とするのに必要な量である。酸は、発熱、発泡に注意しつつ、反応混合物を含有する水性液に添加することができ、または、酸に反応混合物を含有する水性液を添加することもできる。
前記縮合反応〜脱炭酸反応における好ましい塩基成分と酸成分の使用は、廃棄しやすい無機塩の生成、生成した無機塩の塩析効果によるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の抽出効率の向上に寄与する。塩化ナトリウム、塩化カリウムなどの無機塩による塩析効果が優れている。
えられた反応混合物は、水の存在によりジケトピペラジン誘導体（3）の副生が抑制され、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）が安定化されているが、好ましくは、速やかに次工程に用いるのがよい。
本発明の反応方法により、従来、好適な溶媒系とされる水との相溶性が高い有機溶剤と水の混合系のみならず、水との相溶性の低い有機溶剤と水の混合系または実質的に水中での反応においても副生物の生成が抑制されることから、生成物（2）の収率の大きな向上が期待でき、たとえば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の製造においては、上記いずれの溶媒系においても、約95モル％以上の反応収率が期待できる。このような高収率の達成（不純物の低減）は、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）またはその薬理的に許容される塩の高品質化に大きく寄与する。また、後述するように、この水との相溶性の低い有機溶剤と水の混合系または実質的に水が好適に用いられることにより、その後の抽出操作における溶剤の交換を不要とするなどの抽出操作の簡便化または抽出操作の省略が可能となる。
ここでN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を製造する場合について述べる。
L-プロリンおよびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を生成する場合、L-プロリンおよび必要に応じてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を含有する水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤を逐次添加しながら、該水性液のpHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、中性から酸性条件下で、脱炭酸することにより、式（6）：
0003996648.tif 000061
で表わされるジケトピペラジン誘導体、式（7）：
0003996648.tif 000062
で表わされるN-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよび式（5）：
0003996648.tif 000063
で表わされるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニンの含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをうることができる。
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物および／または塩基性pH調整剤は1／4時間以上かけて添加することが望ましい。上限はとくにないが、生産性などの観点から20時間以下である。
また、とくにジケトピペラジン誘導体（3）の副生抑制の効果を最大とする、実質的に水中での反応では、塩基性塩を成すL-プロリンをN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対して2モル当量以上含有する水性液に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を添加して反応を開始し、当該水性液のpHが9〜12の範囲となってから塩基性pH調整剤を逐次添加して、pHを9〜12の範囲に維持しつつ縮合したのち、脱炭酸することにより、ジケトピペラジン誘導体（6）、N-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（7）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをより好適にうることができる。
前記水性液は有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100、好ましくは20：1〜0：100、より好ましくは10：1〜0：100からなる媒体である。前記有機溶剤は、前述した水との相溶性の高い有機溶剤または水との相溶性の低い有機溶剤から適宜選択されるが、とりわけ、ハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類、エーテル類が好ましい。前記水性液は実質的に水であってもよい。
縮合反応において水性液の維持するpHは9〜12の範囲であるが、好ましくは10.5±1.0の範囲、さらに好ましくは10.5±0.5の範囲である。pHの範囲を前記範囲とすることにより、えられるエナラプリルにおける副生物（5）〜（7）の含有量を少なく、具体的には5重量％未満、好ましくは2重量％未満とすることができる。
縮合反応においては撹拌強度0.1kW／ｍ3以上で撹拌、混合するのが好ましい。上限はとくにないが、撹拌機の実用面から5kW／ｍ3以下である。
そのほかの、エナラプリルに対する水の量、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物に対するL-プロリンの量、L-プロリンの仕込み濃度、塩基性pH調整剤の種類および量、ならびに脱炭酸反応に用いる酸、反応条件および反応方法などは、前述した化合物（2）の生成反応の場合と同様である。
こうしてえられる前記脱炭酸反応後のN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物は、そのまま薬理的に許容される塩の生成に使用することもできるが、水溶性不純物の除去を考慮して、一旦、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を分離した後、薬理的に許容される塩を生成させることができる。
つぎに前記脱炭酸反応後の反応混合物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を分離するプロセスについて説明する。
脱炭酸後の反応混合物中に存在するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の分離にあたって、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の等電点pH付近において、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を有機溶剤と水の2相系で有機溶剤に抽出する。N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の等電点は各々多少異なるが、普通pH4〜5付近であり、等電点pHにおいて、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の水溶液中への溶解度は最小になる。抽出効率を高めるには、等電点±2の範囲、好ましくは等電点±1の範囲、より好ましくは等電点±0.5の範囲のpHで抽出するのがよい。抽出は、水相と有機溶剤相の2相系で実施され、残存するアミノ酸（1）や生成した無機塩などの水溶性不純物を水相に移行させて除去し、一方、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を有機溶剤相に移行させるのがよい。
抽出に用いる有機溶剤は、前記水相と2相を成す有機溶剤相を形成する溶剤であり、普通、前記化合物（2）の生成反応に使用しうる水との相溶性の低い有機溶剤が好ましく用いられる。水との相溶性の低い有機溶剤としては、前述したごとき、ハロゲン化炭化水素類、脂肪酸エステル類、ケトン類、エーテル類が好ましく、なかでも、取り扱い易さ、溶剤の安全性、溶剤の価格、薬理的に許容される塩の形成時の溶剤としての使用有利性、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の高い安定化効果（ジケトピペラジン誘導体（3）の副生抑制効果）などの観点から、脂肪酸エステル類、とくに酢酸エステル類、とりわけ酢酸エチルが好ましい。
したがって、本発明における化合物（2）の生成反応を、水との相溶性の低い有機溶剤と水との2相系で実施すれば、脱炭酸しつつ、または脱炭酸した後に、水相を分離し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成反応に使用した該有機溶剤からなる溶液をうることができる。これにより、簡便かつ効率的にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する有機溶剤相をうることができる。水相に残存するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）は、必要に応じ、前記有機溶剤を用いて抽出回収することができる。また、えられた有機溶剤相は、必要に応じ、水洗することができる。
この抽出・分離の操作を通して、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する水性液中の水の存在量を、有機溶剤：水の重量比が全体として96：4またはそれより水の割合が多くなるような割合にすれば、ジケトピペラジン誘導体（3）などの副生物の生成を抑制することができる。これにより副生物の生成は後述する実施例8、10のごとく少なくとも1／2〜1／3以下に抑制することができる。いうまでもなく水の存在量が高いもの、有機溶剤と水との重量比が好ましくは96：4より水の割合が高いものほど、この抑制効果は高くなる。
前記の抽出操作や洗浄操作は、溶剤の種類や操作時間にもよるが、溶剤の沸点以下で溶剤が氷結しない温度の間で行なう。ことさら高温にする必要はなく、実用的には、一般に60℃以下、普通50℃以下、好ましくは40℃以下の、溶液が氷結しない温度で実施される。ジケトピペラジン誘導体（3）の副生を最小化するためには、前記の操作は、たとえば、20℃以下、好ましくは10℃以下といった低温側で実施するのが一般的に有利である。
しかし、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がとくに水溶性の高いN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）である場合、前記操作を高温側の温度で実施することで、きわめて効率よく有機溶剤相に分配できることを見出した。たとえば、水相と有機溶剤相の2相系中でのN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の分配率は温度依存性が大きく、20℃以上、好ましくは25℃以上、より好ましくは30℃以上の温度領域で有機溶剤相への高い分配率がえられる。この高温側での有機溶剤相への分配率改善は、とくに有機溶剤量が少ない場合やN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の抽出効率が必ずしも良いとはいえない有機溶剤、たとえば、酢酸エチルなどの酢酸エステル類などを使用する場合に大きな効果を発揮する。
前記操作温度の上限は、連続抽出や回分式抽出などの操作方法にもよるのでとくに限定されないが、ことさら高温にする必要はなく、実用的には、一般に60℃以下、普通50℃以下、好ましくは40℃以下である。
従来、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の抽出に際して、その高い水溶性のために、塩析効果の利用や大量の抽出溶剤の使用など非常に手間がかかっていたが、本発明により、大量の塩を用いて水相を飽和させる処理もなく、また、大量の有機溶剤を用いて多数回の抽出を行なわずとも、前記温度条件下で操作することにより簡便かつ効率的に、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を含有する有機溶剤の溶液を収率、品質良くうることができる。
水との相溶性の高い有機溶剤を用いて反応させた場合は、有機溶剤の除去後水との相溶性の低い有機溶剤におきかえ、水で洗浄等、同様の操作を同条件下で行なう。
また、前記分配挙動を利用して、水との相溶性の低い有機溶剤と水との2相系において低温、普通20℃より低い温度、好ましくは10℃より低い温度で操作することにより、逆にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を効率的に水相に分配することができるし、水相を有機溶剤で洗浄してジケトピペラジン誘導体（3）などの水溶性の低い不純物を効果的に有機相に抽出することができる。この場合、前記水溶性不純物を除去したN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を含有する有機溶剤の溶液から、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を水に抽出する方法が好ましく用いられる。
要するに、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する水との相溶性の低い有機溶剤と水の2相系を20℃以上の温度で分液すれば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該有機溶剤相に移行させることができ、または、前記2相系を20℃をより低い温度で分液すれば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを該水相に移行させることができ、これによりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを分離することができる。とりわけ、前記有機溶剤が酢酸エステルである場合が、取扱いやすさ、溶媒の安全性、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの高い安定化効果の点で好ましい。さらに前記2相系を20℃以上の温度で分液した場合でも水相を無機塩で飽和する必要なく、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを有機溶剤相に移行させることができる。
つぎに、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物、抽出液または洗浄液などのN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）からその薬理的に許容される塩にする操作を水共存下に実施することについて説明する。
水の存在は、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）からのジケトピペラジン誘導体（3）の副生の抑制のみならず、えられたその薬理的に許容される塩からのジケトピペラジン誘導体（3）の副生抑制にも寄与する。
ほかの処方によりえられるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物、抽出液または洗浄液を薬理的に許容される塩の形成に用いることもできる。
この塩の形成および分離操作のあいだ、有機溶剤と水の重量比は、前述の反応・分離の操作と同様96：4〜0：100の範囲に該当するように行なう。したがって、乾燥剤の添加や濃縮操作によるN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する溶液の脱水は、むしろ、ジケトピペラジン誘導体（3）副生の不利を招く。
本発明においては
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応後の反応混合物から、生成物（2）を水との相溶性の低い有機溶剤と水からなる2相系で前述したようにして抽出することにより、どちらか一方の相へ移行させて分離したN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる媒体中で、その薬理的に許容される塩とすること、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物を、有機溶剤および水からなり、有機溶剤：水の重量比が96：4〜0：100である媒体を用いて抽出または洗浄してえられる水の共存する有機溶剤相中またはN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物を前記媒体を用いて抽出または洗浄してえられる水相中で、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩を形成し、必要に応じ薬理的に許容される塩を取り出すこと、および
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを、水との相溶性の低い有機溶剤と水からなる2相系の液体を用いて、20℃以上の温度で分液して有機溶剤相中に移行させ、または20℃より低い温度で分液して水相中に移行させ、前記有機溶剤相中または水相中でその薬理的に許容される塩とし、分離することもできる。
前記薬理的に許容される塩の形成に使用する溶媒は、原則的には化合物（2）の生成反応の場合と同じである。好ましい溶媒の種類や有機溶剤と水の量比は、使用するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の溶解性により異なる。しかし、概して、反応の説明で述べた溶媒であれば使用できる。また有機溶剤：水の割合や生成物（2）と水のモル比も化合物（2）の生成反応の場合と同じである。
前記薬理的に許容される塩の形成は、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）と塩酸、硫酸もしくはリン酸などの無機酸、酢酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸もしくはクエン酸などの有機酸またはグリシン、フェニルアラニンなどのアミノ酸を水性液中で混合することにより容易に行なうことができる。混合法としては、とくに限定されず、たとえば、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する水性液に前記無機酸、有機酸やアミノ酸を添加する方法、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する水性液を前記無機酸、有機酸またはアミノ酸の水性液に添加する方法などがあげられる。
前記の無機酸、有機酸、アミノ酸の使用量はとくに限定されないが、一般にとくに悪影響を及ぼす物質が存在しない場合、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）に対しておよそ必要理論量あればよく、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の溶解度が比較的高い溶媒中などでは過剰量使用することで塩形成の平衡をずらして析出率を高めることができる。たとえば、理論量の0.9〜2.5倍量、好ましくは0.95〜2.0倍量、より好ましくは0.95〜1.2倍量使用するのが経済性などの点から有利である。
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）が異性体を含む場合、たとえば、一般式（2）中のエトキシカルボニル基の結合した炭素原子が不斉炭素原子の場合には、前記無機酸、有機酸またはアミノ酸は、その炭素原子がＳ配置を有する好ましい血圧降下作用を有する異性体に対しておよそ必要理論量、たとえば理論量の0.9〜1.2倍量、好ましくは0.95〜1.1倍量使用することができる。
前記薬理的に許容される塩の形成を実質的に水中で実施すると、とくにジケトピペラジン誘導体（3）の副生の抑制効果が格段に高く、また、人体にとって好ましくない有機溶剤の最終製品への持ち込みが解消されることからも好ましい。しかし、とくにN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）がN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンであり、薬理的に許容される塩がマレイン酸塩である場合には、該マレイン酸塩の水への溶解度が低温で概して高めであることから高い収率をえがたく、またえられた結晶性状が悪くなり、濾過性、乾燥性に悪影響を及ぼすなど工業的規模での生産には問題があることがわかった。また、従来満足できる解決法は知られていなかった。
しかし、このような問題点は、塩析効果の高い無機塩、とくに塩化ナトリウム、塩化カリウムなどを添加および／または共存させることにより、また塩形成、晶出の過程を40〜70℃の範囲で行なうことにより、またこれらは単独で、あるいは組み合わせて用いることで好適に解決しうることが判った。
とくに、実質的に水中でアミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を縮合させた反応液から薬理的に許容される塩の形成を行なう場合には、ことさら無機塩をあらたに添加しなくとも、pH調整剤に由来する無機塩の塩析効果によって、薬理的に許容される塩の収量を高めることができる。とくに反応濃度10％（ｗ／ｖ）以上、好ましくは20％（ｗ／ｖ）以上、より好ましくは30％（ｗ／ｖ）以上の高濃度で縮合した反応液では、pH調整剤に由来する無機塩の濃度も必然的に高まり、より高い塩析効果が期待できる。
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩（エナラプリル・マレイン酸塩）の形成において、化合物（2）の生成反応によって生じる水溶性無機塩などが大量に溶解している水性液中から塩形成する場合、該水性液に対するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−Ｌ−プロリンやマレイン酸の溶解度が低くなり、マレイン酸塩の形成が不完全となって収率が低下したり、不溶分のマレイン酸の残存、混入につながる傾向にある。また、えられる結晶の性状も概して良くなく、濾過性、乾燥性にも悪影響を示す。このように、マレイン酸塩が形成され、晶出する過程における無機塩濃度は高めすぎないことが重要である。なお、塩形成、晶出時の無機塩濃度の上限値は、操作の濃度、温度や方法、また無機塩の種類などにも依存することから、一概に規定することはできないが、一般的には15重量％以下、好ましくは10重量％以下とすることで好適に実施できる。
前記のような観点から、これらの問題をより好ましく解決するには、マレイン酸を含有する水性液に無機塩の共存するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）の水性液を逐次添加するという方法を用いることができる。この方法によって、意外にも大量のマレイン酸を用いることなく、収率および品質よく塩形成することができる。この方法によれば、塩形成初期は無機塩濃度を低めとしながら、最終的には無機塩濃度が高まることによる塩析効果の増大により、晶出量を優位に高めることができる。なお、通常はこの操作により充分な晶出量をえることができるが、必要に応じてあらたに無機塩を添加して、さらに晶出量を高めることも可能である。また、不純物除去性に関していえば、N-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（７）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）を優位に除去することができ、これら不純物の含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンをうることができる。
無機塩の共存するエナラプリルの水性液の添加時間は、とくに制限されないが、一般に全量が添加される時間として、1／4時間以上、普通1／3時間以上、好ましくは1／2時間以上である。用いるマレイン酸の量は、エナラプリルに対して0.9〜3.0モル当量、好ましくは0.95〜2.0モル当量、より好ましくは0.95〜1.2モル当量である。
本発明の前記薬理的に許容される塩の形成の操作温度は、溶剤の種類、形成する塩の種類、操作方法などにもよるのでとくに限定できないが、40〜70℃での実施が好ましく、より好ましくは50〜70℃、とりわけ60℃前後で好適に実施される。なお水が共存しない系での加温は、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生につながることから、水が共存することがとりわけ重要である。低い温度での塩形成は、微細な結晶が析出しホイップ状のスラリーとなって流動性や濾過性が悪くなり、えられた結晶の含液率が高くなって乾燥しにくいなど好ましくない。しかし、前述のように、塩形成温度を高めることでこれら問題点は優位に改善されるが、さらには不純物除去性向上にも好ましいことが判った。塩形成温度を高める有利な方法としては、前述のように、マレイン酸の水性液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）を逐次添加する方法が、塩形成前のエナラプリルへの熱履歴を低減できる点からも好ましい。また、用いる水性液の水の比率を増すことも、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生抑制効果をより高める点から有利である。最終的に、20℃以下、好ましくは10℃以下に冷却して晶出量を増大させることができる。
とりわけ、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（エナラプリル）をそのマレイン酸塩とする方法においては、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンおよびマレイン酸を含有する水性液中に塩化ナトリウムまたは塩化カリウムなどの無機塩を添加および／または共存させることにより、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩の晶出量を高めることができる。前記水性液は、有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる媒体が好ましく、前記有機溶剤は、前述したごとき化合物（2）の生成反応に用いうるものを適宜用いることができる。エナラプリルに対する水の量は、前述した化合物（2）の場合と同様でよい。マレイン酸の量はエナラプリルに対して0.9〜3.0モル当量、好ましくは0.95〜2.0モル当量、より好ましくは0.95〜1.2モル当量である。
こうしてえられたN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩は、必要に応じて、たとえば再結晶やリスラリー洗浄などの方法にて精製することができる。リスラリー洗浄とは、結晶を媒体中に入れてスラリー状態で撹拌し、濾取することによって精製する方法をいう。塩として安定化されているN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）からも若干のジケトピペラジン誘導体（3）を副生するが、この精製操作を水性液中で行なうことによりジケトピペラジン誘導体（3）の副生を抑制することができる。すなわち、この精製操作においても水の存在はジケトピペラジン誘導体（3）の副生を抑制する。
また前述のように、収率を向上させるうえで、無機塩を添加することも好適に実施することができ、さらに、えられるスラリーや結晶の性状を良好とする点から、再結晶やリスラリー洗浄の操作温度を高めて、前記と同様、40〜70℃の範囲で実施することが好ましく、より好ましくは50〜70℃、とりわけ60℃前後で好適に実施することができる。
このような操作により、N-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）を優位に低減することができ、これら不純物の含有量の少ないN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-アミノ酸（2）をうることができる。この不純物除去効果は精製操作法や溶剤種によって異なり、一概にいうことはできないが、たとえば後述する実施例9のごとく、不純物の量を1／10以下、好ましくはえられる塩における含有量が無視できるレベルにまで低減できる。前記水性液は、有機溶剤および水の重量比96：4〜0：100からなる媒体が好ましい。前記有機溶剤は前述したごとき化合物（2）の生成反応に用いうるものを適宜用いることができる。
なお、脱水された溶液中での操作によって、一旦副生したジケトピペラジン誘導体（3）は、その後に水分を共存させても、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）およびその薬理的に許容される塩を再生し難い。
最も好ましい本発明の態様の1つは、実質的に水中でアミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を前述の条件下反応させ、えられたN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する反応混合物から生成物（2）を抽出することなく、引き続き、その薬理的に許容される塩を形成するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の製造方法である。
もう1つは、水との相溶性の低い有機溶剤と水との混合系もしくは実質的に水中でアミノ酸（1）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物を前述の特定条件下反応させ、えられた反応混合物からN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を抽出・分離によりN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）を含有する水飽和有機溶剤相をえ、その後、その薬理的に許容される塩を形成するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩の製造方法である。
このようにしてえられたN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の薬理的に許容される塩は、遠心分離、加圧または減圧濾過などの方法を用いて結晶を分離、洗浄し、常圧または減圧下に乾燥することができる。
以下に実施例をあげて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明は、これら実施例のみに限定されるものではない。
なお、ＨＰＬＣ分析は以下の条件で行なった。
カラム  ：ファインパック（FINEPAK）SIL C18-5（商品名、4.6mm×25cm、日本分光（株）製）
溶  媒  ：0.1Ｍ  ＫＨ2ＰＯ4（pH2.8）／ＣＨ3ＣＮ（70：30（容量比））
流  速  ：1.0ml／分
温  度  ：45℃
検出条件：ＵＶ210nm
実施例1
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）に酢酸エチル20mlとＨ2Ｏ22mlを加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液でpHを10.5に調整した。内温を19〜20℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）を酢酸エチル156mlに含有する溶液を4時間かけてゆっくり滴下した。滴下中は、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±0.5に維持するとともに、内温19〜20℃、撹拌強度1kW／ｍ3に維持した。滴下終了後、1時間、同条件下、撹拌を続けた。内温を30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.5±0.2に調整した。同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。有機相を30℃で分液した後、さらに水相を30℃で酢酸エチル20mlで1回抽出した。えられた有機相を混合し、30℃で有機相の5％容量のＨ2Ｏで1回洗浄した。水飽和の有機相をＨＰＬＣ分析した結果、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを14重量％含有する溶液がえられた。反応率は97％、抽出回収率は96％であった（いずれもＨＰＬＣ絶対検量線法により算出した。以下同様）。各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.5重量％、カルボキシ誘導体（4）0.4重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.5重量％であった。
さらに内温30℃で撹拌下、この溶液にマレイン酸10.49ｇ（90mmol）を添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却し、さらに2時間撹拌を続けた。析出した結晶を減圧濾過により採取し、5℃に冷却した酢酸エチル80mlで2回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩42.54ｇ（86mmol）をえた。純度99％以上、ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、90％であった。
実施例2
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）をＨ2Ｏ40mlに加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液でpHを10.5に調整した。内温を19〜20℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物の結晶29.20ｇ（96mmol）を6時間かけてゆっくり添加した。添加中は、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±0.5に維持するとともに、内温19〜20℃、撹拌強度1.2kW／ｍ3に維持した。添加終了後、1時間、同条件下、撹拌を続けた。内温30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.2±0.2に調整し、その後、同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。反応混合物をＨＰＬＣ分析した結果、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを21重量％含有する溶液がえられた。反応率は97％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.05重量％以下、カルボキシ誘導体（4）0.4重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.6重量％であった。
マレイン酸10.66ｇ（92mmol）をＨ2Ｏ20mlに溶解した溶液に、このN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する溶液を内温60℃で撹拌下、1時間かけて添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却した。さらに2時間撹拌を続け、析出した結晶を減圧濾過により採取し、0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ80mlで速やかに3回洗浄した。えられた結晶は濾過性の良い、光沢のある良好な性状であった（内温30℃で塩を形成した場合は、ホイップ状のスラリーとなり、濾過性も悪く、また微細な結晶性状であった）。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩42.05ｇ（85mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、89％であった。
実施例3
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）をＨ2Ｏ22mlに加え、このL-プロリン水溶液にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）を酢酸エチル176mlに含有する溶液を加えた。内温を19〜20℃にし、撹拌下、5時間、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±1.0に維持するとともに、撹拌強度1kW／ｍ3に維持した。内温30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.5±0.2に調整し、その後、同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。有機相を30℃で分液し、さらに水相を30℃で酢酸エチル20mlで1回抽出した。有機相を混合し、30℃で有機相の5％容量のＨ2Ｏで1回洗浄した。水飽和の有機相をＨＰＬＣ分析した結果、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを14重量％含有する溶液がえられた。反応率は96％、抽出率は96％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.4重量％、カルボキシ誘導体（4）0.5重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.6重量％であった。
さらに内温30℃で撹拌下、この溶液に、マレイン酸10.25ｇ（88mmol）をＨ2Ｏ20mlに溶解した溶液を添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却し、さらに2時間撹拌を続けた。析出した結晶を減圧濾過により採取し、5℃に冷却した酢酸エチル80mlで2回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩41.67ｇ（85mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、88％であった。
実施例4
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）とN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）にＨ2Ｏ60mlを加えた。内温を19〜20℃にし、撹拌下、6時間、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±1.0に維持するとともに、撹拌強度を0.9kW／ｍ3に維持した。内温30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.2±0.2に調整した。pH調整後、同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。反応混合物をＨＰＬＣ分析した結果、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを18重量％含有する溶液がえられた。反応率は96％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.05重量％以下、カルボキシ誘導体（4）0.4重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.7重量％であった。
この溶液に、内温30℃で撹拌下、マレイン酸21.09ｇ（182mmol）をＨ2Ｏ40mlに溶解した溶液を添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却し、さらに2時間撹拌を続けた。析出した結晶を濾過により採取し、0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ20mlで速やかに2回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩41.29ｇ（84mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、87％であった。
実施例5
Ｌ−プロリン22.02ｇ（191mmol）をＨ2Ｏ60mlに加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液25.47ｇ（191mmol）を撹拌下加えた。このとき、溶液のpHは12.9であった。内温を14〜15℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・Ｎ−カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）を30分かけて添加した。添加終了後、30分で反応液のpHは10付近となり、この時点から8時間、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.0±0.5に維持するとともに、撹拌強度0.9kW／ｍ3に維持して反応を完結させた。内温15℃に維持したまま、35重量％ＨＣｌにてpHを4.0±0.2に調整した。pH調整後、同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。反応混合物をＨＰＬＣ分析した結果、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを18重量％含有する溶液がえられた。反応率は99％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.05重量％、カルボキシ誘導体（4）0.1重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.6重量％であった。
マレイン酸11.31ｇ（97mmol）をＨ2Ｏ20mlに溶解した溶液に、このN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを含有する溶液を内温60℃で撹拌下、1時間かけて添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を５℃に冷却し、さらに１時間撹拌を続けた。析出した結晶を濾過により採取し、0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ80mlで速やかに2回洗浄した。えられた結晶は濾過性の良い、光沢のある良好な性状であった（内温30℃で塩を形成した場合は、ホイップ状のスラリーとなり、濾過性も悪く、また微細な結晶性状であった）。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩42.52ｇ（86mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、90％であった。
実施例6
実施例1にしたがい、表1に示す各種溶媒系で、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを合成し、各種溶媒の適用性を調べた。各種溶媒系での反応率を表1に示す。
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実施例7
実施例1にしたがい、表2に示すpHに変更して、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを合成し、pHの影響を調べた。各pHでの反応率ならびにジケトピペラジン誘導体（3）、N-（1（S）-カルボキシ-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン（カルボキシ誘導体（4））およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（ＡＬＥ（5））の生成量（重量％）を表2に示す。なお、pHのコントロールは、±1.0の範囲で実施した。
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実施例8
実施例1にしたがい、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの酢酸エチル溶液を取得した。この有機相129.40ｇを飽和食塩水30mlで2回洗浄し、硫酸マグネシウムで脱水した。さらに溶媒濃縮後真空乾燥させ、オイル状の反応生成物をえた。それを表3に示す量の水分を含有する酢酸エチルまたは水に溶解させ、約13重量％濃度の溶液とし、30℃に加温して、6時間撹拌した。ＨＰＬＣにて、ジケトピペラジン誘導体（3）の生成量を分析し、水分量と時間当たりのジケトピペラジン誘導体（3）の平均増加量の関係を調べた。結果を表3に示す。なお、表3中のモル比は、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン1モルに対する水のモル数のことである。
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実施例9
実施例1にしたがい、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩をえた。これに0.1％の水分を含有する酢酸エチルまたはＨ2Ｏを加え、濃度が16重量％になるようにし、60℃に加温して、6時間撹拌した。ＨＰＬＣにて、ジケトピペラジン誘導体（3）の生成量を分析し、水分量と時間当たりのジケトピペラジン誘導体（3）の平均増加量の関係を調べた。結果を表4に示す。
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実施例10
1,2,3,4−テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸5.00ｇ（28.2mmol）に酢酸エチル20mlとＨ2Ｏ10mlを加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液でpHを10.5に調整した。内温を20℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物の結晶4.31ｇ（14.1mmol）を5時間かけてゆっくり添加した。添加中は、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±1.0に維持するとともに、内温20℃、撹拌強度1.3kW／ｍ3に維持した。添加終了後、2時間、同条件下、撹拌を続けた。5℃に冷却し、35重量％ＨＣｌにてpHを4.5±0.2に調整し、その後、同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了した。析出物を減圧濾過で除去し、有機相を5℃で分液し、さらに水相を10℃で酢酸エチル20mlで1回抽出した。有機相を混合し、5℃で有機相の5％容量のＨ2Ｏで3回洗浄した。有機相を減圧濃縮し、油状物6.43ｇをえた。油状物を、表5に示す量の水分を含有する酢酸エチルに溶解させ、約12重量％の溶液とし、えられた溶液を10℃にて6時間撹拌した。ＨＰＬＣにて、ジケトピペラジン誘導体（3）の生成量を分析し、水分量と時間当たりのジケトピペラジン誘導体（3）の平均増加量の関係を調べた。結果を表5に示す。
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実施例11
実施例1にしたがい、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの酢酸エチル溶液を取得した。その酢酸エチル溶液50mlにＨ2Ｏを10％容量（対  酢酸エチル）加えた。表6に示す各温度で10分間撹拌し、10分間静置後、分液した。水飽和有機相中のN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの量をＨＰＬＣにて分析し、温度と有機相への分配率との関係を調べた。結果を表6に示す。
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実施例12
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）に酢酸エチル20mlとＨ2Ｏ22mlを加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液でpHを10.5に調整した。内温を19〜20℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）を酢酸エチル156mlに含有する溶液を4時間かけてゆっくり滴下した。滴下中は、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±1.0に維持するとともに、内温19〜20℃、撹拌強度0.7kW／ｍ3に維持した。滴下終了後、1時間、同条件下、撹拌を続けた。内温30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.5±0.2に調整し、その後、同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。有機相を30℃で分液した後、さらに水相を30℃で酢酸エチル20mlで1回抽出した。有機相を混合し、0〜3℃に冷却し、Ｈ2Ｏ250mlで逆抽出した。反応率は98％、抽出回収率は94％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.3重量％、カルボキシ誘導体（4）0.6重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.4重量％であった。
えられた12重量％N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリン水溶液を内温30℃に加温し、撹拌下、マレイン酸10.73ｇ（93mmol）を添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却し、ＮａＣｌ  62.05ｇを添加した。さらに2時間撹拌を続け、析出した結晶を減圧濾過して採取し、0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ80mlで速やかに3回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1ｍｍＨｇ）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩40.35ｇ（82mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、86％であった。
実施例13
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）に酢酸エチル20mlとＨ2Ｏ22mlを加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液でpHを10.5に調整した。内温を19〜20℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）を酢酸エチル156mlに含有する溶液を4時間かけてゆっくり滴下した。滴下中は、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±0.5に維持するとともに、内温19〜20℃、撹拌強度0.5kW／ｍ3に維持した。滴下終了後、1時間、同条件下、撹拌を続けた。内温30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.5±0.2に調整した。同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。反応率は98％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.5重量％、カルボキシ誘導体（4）0.4重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.6重量％であった。
この2相溶液を内温30℃で撹拌し、マレイン酸10.88ｇ（94mmol）を添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却し、さらに2時間撹拌を続けた。析出した結晶を減圧濾過により採取し、0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ80mlで1回、5℃に冷却した酢酸エチル80mlで1回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩41.54ｇ（84mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量はそれぞれ0.05重量％であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、86％であった。
実施例14
L-プロリン22.02ｇ（191mmol）に塩化メチレン20mlとＨ2Ｏ22mlを加え、30重量％ＮａＯＨ水溶液でpHを10.5に調整した。内温を19〜20℃にし、撹拌下、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物29.20ｇ（96mmol）を塩化メチレン156mlに溶解した溶液を4時間かけてゆっくり滴下した。滴下中は、30重量％ＮａＯＨ水溶液を滴下しつつ反応混合物をpH10.5±1.0に維持するとともに、内温19〜20℃、撹拌強度1kW／ｍ3に維持した。滴下終了後、1時間、同条件下、撹拌を続けた。内温30℃に加温して、35重量％ＨＣｌにてpHを4.5±0.2に調整した。同条件下、10分間撹拌を続け、脱炭酸を終了させた。有機相を25℃で分液した後、水相を25℃で塩化メチレン20mlで1回抽出した。えられた有機相を混合し、25℃で有機相の5％容量のＨ2Ｏで1回洗浄した。水飽和の有機相をＨＰＬＣ分析した結果、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを10重量％含有する溶液がえられた。反応率は97％、抽出回収率99％、各副生成物の生成量は、ジケトピペラジン誘導体（3）0.6重量％、カルボキシ誘導体（4）0.5重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.5重量％であった。
さらに内温30℃で撹拌下、この溶液にマレイン酸10.87ｇ（94mmol）を添加した。1時間、同条件下、撹拌を続けた後、3時間かけて内温を5℃に冷却し、さらに2時間撹拌を続けた。析出した結晶を減圧濾過により採取し、5℃に冷却した塩化メチレン80mlで1回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1ｍｍＨｇ）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩43.41ｇ（88mmol）をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有はそれぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、92％であった。
実施例15
実施例2にしたがい、30％ＮａＯＨ水溶液の代わりに30％ＫＯＨ水溶液を用いてN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンを取得した。反応率は96％、各副生成物の生成量は、ジトケピペラジン誘導体（3）0.05重量％以下、カルボキシ誘導体（4）0.4重量％、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）0.6重量％であった。
さらに、実施例2にしたがい、マレイン酸の量を10.66ｇ（92mmol）から13.85ｇ（119mmol）に増やし、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩をえた。純度99％以上。ジケトピペラジン誘導体（3）、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含量は、それぞれ0.05重量％以下であり、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン・N-カルボキシ無水物からの取得収率は、90％であった。
実施例16
ＮａＣｌの添加を省略すること以外は、実施例12にしたがい、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩をえた。実施例12と比較することで、ＮａＣｌの塩析効果を調べた。結果を表7に示す。なお、表7中の晶析収率は、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンに対する、析出したマレイン酸塩の割合（モル換算）のことである。
0003996648.tif 000070
実施例17
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）を3.0重量％含有するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩20.0ｇ（40.6mmol）にＨ2Ｏ300mlを添加し、この混合物を60℃に加熱し、溶解させた。撹拌下、4時間かけて5℃まで冷却し、ＮａＣｌ  38ｇを添加してさらに1時間撹拌を続け、析出物を濾過にて採取した。0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ100mlで2回洗浄した。えられた結晶は濾過性の良い、光沢のある良好な結晶性状であった。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩17.2ｇ（34.9mmol）をえた。純度99％以上。N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有量は、0.05重量％以下であった。操作の間、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生は確認されなかった。
実施例18
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）を3.0重量％含有するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩20.0ｇ（40.6mmol）にＨ2Ｏ300mlを添加し、この混合物を30℃に加温した。撹拌下、4時間かけて5℃まで冷却し、ＮａＣｌ  38ｇを添加してさらに1時間撹拌を続け、析出物を濾過にて採取した。0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ100mlで2回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩17.2ｇ（34.9mmol）をえた。純度99％以上。N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有量は、0.05重量％以下であった。操作の間、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生は確認されなかった。
実施例19
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）を3.0重量％含有するN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩20.0ｇ（40.6mmol）にＨ2Ｏ300mlを添加し、この混合物を撹拌下、5℃に4時間保ち、ＮａＣｌ  38ｇを添加してさらに1時間撹拌を続け、析出物を濾過にて採取した。0〜3℃に冷却したＨ2Ｏ100mlで2回洗浄した。えられた湿結晶を真空乾燥（20〜50℃、30→1mmHg）し、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのマレイン酸塩17.2ｇ（34.9mmol）をえた。純度99％以上。N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有量は、0.05重量％以下であった。操作の間、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生は確認されなかった。
比較例1
N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンのジケトピペラジン誘導体（6）10.0ｇ（27.9mmol）に酢酸エチル50mlとＨ2Ｏ50mlを加え、60℃で8時間撹拌したところ、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンの生成は認められなかった。
産業上の利用可能性
本発明により、高品質、高収率かつ経済的にN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸およびその薬理的に許容される塩を簡便に有利に製造できる。
具体的には、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル−アミノ酸（2）の生成反応およびその薬理的に許容される塩の形成反応、必要に応じて塩を取り出すまでの一連の操作を水性液中で行なうことにより、ジケトピペラジン誘導体（3）の副生を抑制できるため、化合物（2）を高収率でうることができる。また、本発明においては前記一連の操作を同一の溶媒で行なうことができるため、溶媒交換などが不要であり、したがってより簡便に操作を行なうことができる。
さらには、化合物（2）の生成反応を特定条件下実施することにより、ジケトピペラジン誘導体（3）のほか、カルボキシ誘導体（4）およびN-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニン（5）の含有量の少ない化合物（2）をうることができる。
また、N-（1（S）-エトキシカルボニル-3-フェニルプロピル）-L-アラニル-L-プロリンに関して抽出・分離操作を特定の温度条件下に行なうことにより、効率的に分離できる。