(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記特徴をそれぞれ有するポリアクリルアミドプレキャストゲルと泳動用緩衝液を用いたＤＮＡの電気泳動方法。
１）前記ポリアクリルアミドプレキャストゲルに含まれるゲル緩衝液は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、グリシンを必須とする一種以上の両性電解質、及び一価の酸を含有し、ｐＨが６．５〜７．５の範囲に調整されている。
２）前記泳動用緩衝液は、トリス( ヒドロキシメチル) アミノメタン及び両性電解質を含有し、ｐＨが７．８〜８．３の範囲に調整されている。
【請求項２】
前記ゲル緩衝液に含有される前記両性電解質は、塩基解離定数の範囲が８．３＜ｐＫｂ≦９．６であり分子内にカチオン性基とアニオン性基を同数有するグリシンを必須とする一種以上のアミノ酸を含有していることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡの電気泳動方法。
【請求項３】
前記ゲル緩衝液は、前記一価の酸として塩酸又は酢酸の少なくとも一つを含有し、ｐＨが６．５〜７．０の範囲に調整されていることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡの電気泳動方法。
【請求項４】
前記泳動用緩衝液に含有される前記両性電解質は、グリシンであることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡの電気泳動方法。
【請求項５】
前記泳動用緩衝液に含有される前記両性電解質はグリシンであり、前記泳動用緩衝液は更にドデシル硫酸塩を含有していることを特徴とする請求項１に記載のＤＮＡの電気泳動方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
この発明は、生化学、医学の分野におけるＤＮＡの分離分析に利用されるＤＮＡの電気泳動法に関する。更に詳しくは、この発明は、保存安定性の良いポリアクリルアミドゲルを用いて高い分析精度でＤＮＡを分析することができ、電気泳動用プレキャストゲルの利用分野に広く応用することが可能なＤＮＡの電気泳動方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
電気泳動法は主としてタンパク質の分析方法として発展してきたが、分子生物学が進展するに従ってＤＮＡやＲＮＡの分析調製が必要とされるようになってきた。ＤＮＡやＲＮＡのような核酸の分析には、アガロース電気泳動法及びポリアクリルアミドゲル電気泳動法が繁用されている。核酸は中性緩衝液中では強い陰性荷電を示し、 その移動度は支持体としてのゲルの分子篩効果によるため、対象とする核酸の大きさにより０．３％〜２％程度のアガロースゲルまたは３．５％〜２０％程度のポリアクリルアミドゲルが繁用されている。
【０００３】
アガロースゲルは、比較的大きな孔径を有しているため、高分子の核酸の分離分析を対象とする場合に用いられている。アガロースには、電気浸透の強弱、ゲル強度、融点等の性質の異なる多くの種類がある。また、アガロースは天然物であるため、同一会社の同一製品であってもロットによりしばしば性状に差が見られる。更に、アガロースゲル電気泳動法を調製に用いてＤＮＡを精製する場合、しばしばアガロース中の不純物が混入し、制限酵素、ＤＮＡポリメラーゼ、ＤＮＡリガーゼ等の酵素の活性を阻害する。このため、アガロースゲルを用いたＤＮＡの精製には、フェノール抽出などによる精製法を加味する必要がある。
【０００４】
一方、ポリアクリルアミドゲルは、比較的小さな孔系を有しているため、中分子〜低分子の核酸の分離分析を対象とする場合に用いられている。ポリアクリルアミドゲルは、合成品であるため、化学的に高純度であり、アガロースゲルに見られるような性状の不均一の問題点はない。また、処方を変えることによって、分離特性の異なるポリアクリルアミドゲルを容易に調製することができる。そのため、 様々な分離能を持つように量産されたプレキャストゲルを予め用意しておき、その中から適切なプレキャストゲルを選択して用いることにより、分析の手間を大幅に省くことができる。ポリアクリルアミドゲルは、均一で再現性の良いことから当該分野における生産及び品質管理に貢献するところが大である。量産されたポリアクリルアミドゲルを供給するに際しては、保存安定性が良好であることが期待される。
【０００５】
アガロースゲル、ポリアクリルアミドゲルと共にＤＮＡの電気泳動に使用される緩衝液は、主にｐＨ７．５〜８．３のエチレンジアミン四酢酸（以下ＥＤＴＡと称す）又はエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（以下ＥＴＡと称す）を含むトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（以下トリスと称す）−酢酸緩衝液（以下ＴＡＥと称す）、トリス−硼酸緩衝液（以下ＴＢＥと称す）、又はトリス−リン酸緩衝液（以下ＴＰＥと称す）であり、ゲル緩衝液と泳動用緩衝液の組成が等しい連続緩衝液系である。
【０００６】
一方、タンパク質の分離分析で汎用されている、オルンスタイン（Ｌ．Ｏｒｎｓｔｅｉｎ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１２１，３２１−３４９（１９６４））とデービス（Ｂ．Ｊ．Ｄａｖｉｓ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１２１，４０４−４２７（１９６４））によって提案された方法によって、ＤＮＡの分離分析を行うことも可能である。この方法では、ゲル緩衝液としてトリスー塩酸緩衝液（オルンスタイン−デービスのゲル緩衝液）、泳動用緩衝液としてトリスーグリシン緩衝液（オルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液）が使用されており、使用される緩衝液は、ゲル緩衝液と泳動用緩衝液とで組成の異なる不連続緩衝液系である。不連続緩衝液系は、連続緩衝液系に比べ少量の試料添加で良好な解像力をもたらすことが特徴である。
【０００７】
しかし、公知の電気泳動システムにおいては、通常、ポリアクリルアミドゲルの内包するゲル緩衝液のｐＨは７．５〜８．８であり、ポリアクリルアミド中のアミド基は経時的に加水分解反応を受ける。加水分解反応は、低温条件下でも進行して部分的にアニオン基を有するゲルを生じ、その結果、ＤＮＡの泳動距離が短くなり、 分離像が不鮮明になる。従って、ポリアクリルアミドゲルは、時間が経過するほど加水分解反応が進行するため、長期間に渡って保存して使用することが困難である。ポリアクリルアミドの加水分解を抑制するために、ゲル緩衝液中のトリス中和率を高めてｐＨを下げると、連続緩衝液系の場合、泳動時間が非常に長くなり分析効率が低下する。不連続緩衝液系の場合、ゲル緩衝液中のトリスの中和率を高めると、泳動時間が長くなるだけでなく分離能も劣り、使用に耐えないものとなる。
【０００８】
ポリアクリルアミドゲルの安定性を改善する方法として、トリス、両性電解質及び酸から成るゲル緩衝液を内包した、長期保存安定性に優れ且つ測定可能な分子量範囲を著しく拡大したポリアクリルアミドゲルの製造方法が、特開平４−１８４１６３号公報に開示されている。この製造方法によって製造されたポリアクリルアミド電気泳動ゲルは、オルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液又はレムリー（Ｕ．Ｋ．Ｌａｅｍｍｌｉ，Ｎａｔｕｒｅ  ２２７，６８０（１９７０））によって提案された泳動用緩衝液（レムリーの泳動用緩衝液）を使用して分析に供することができる。このポリアクリルアミド電気泳動ゲルは、両性電解質を含有するｐＨが４．０〜７．５のゲル緩衝液を内包することを特徴とし、その実施例においてｐＨが６．９〜７．４のゲルの製造が例示され、冷蔵保存で４ヶ月はタンパク質の移動度に変化なく安定であるとされている。レムリーの泳動用緩衝液とは、トリス、グリシン及びドデシル硫酸ナトリウム（以下ＳＤＳと称す）を含有する緩衝液である。
【０００９】
このポリアクリルアミドゲルは、タンパク質の分離分析を対象としているが、オルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液を使用してＤＮＡの分離分析も可能である。特開平４−１８４１６３号公報に実施例として記載されている条件で製造したゲルは、ＤＮＡの分離分析に使用するに当たり、移動度、染色状態の観点から見て、冷蔵保存で2 ヶ月間安定である。しかし、量産されたポリアクリルアミドゲルを供給するに際しては、２ヶ月の保存有効期限では不十分である。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
上記のように、公知のタンパク質分析に用いられる電気泳動法では、ゲルのｐＨが７．８〜８．８の範囲にあり、泳動用緩衝液はオルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液やレムリー法による泳動バッファを使用している。この方法はＤＮＡの分析にも適用可能であるが、ポリアクリルアミドゲルの長期保存性は低下する。ゲルのｐＨがより低い６．５〜７．５の範囲にあるときには、泳動時間が長くなると共に測定分子量範囲が狭くなり、ＤＮＡの良好な分析を行うことが困難である。そこで、ポリアクリルアミドゲルの加水分解をある程度抑制し、冷蔵保存で４ヶ月以上安定であるタンパク質分析用として使用可能な電気泳動用ポリアクリルアミドゲルと、タンパク質分析用の泳動用緩衝液とを使用して、ＤＮＡの鮮明な分離分析を行う点について解決すべき課題がある。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
この発明の目的は、上記の課題を解決することであり、保存安定性に優れたタンパク質分析用として電気泳動ポリアクリルアミドゲルと、タンパク質の電気泳動方法として汎用されている泳動用緩衝液とを使用することで、保管有効期限が長くなり、プレキャストゲルとして予め様々な分離特性を持つように量産でき、経済的かつ効率的に分析を行うことができるＤＮＡの電気泳動方法を提供することである。
【００１２】
この発明は、下記特徴をそれぞれ有するポリアクリルアミドプレキャストゲルと泳動用緩衝液を用いたＤＮＡの電気泳動方法に関する。
１）前記ポリアクリルアミドプレキャストゲルに含まれるゲル緩衝液は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、グリシンを必須とする一種以上の両性電解質、及び一価の酸を含有し、ｐＨが６．５〜７．５の範囲に調整されている。
２）前記泳動用緩衝液は、トリス( ヒドロキシメチル) アミノメタン及び両性電解質を含有し、ｐＨが７．８〜８．３の範囲に調整されている。
【００１３】
このＤＮＡの電気泳動方法によれば、ゲルのｐＨが酸性領域に設定されるので、ポリアクリルアミドゲルの加水分解がある程度抑制され、保存安定性が良好な電気泳動ゲルとなり、保管有効期限を長く設定することが可能となる。また、タンパク質分析を目的として使用されている電気泳動ポリアクリルアミドゲルと泳動用緩衝液をＤＮＡの分離分析に適用しても、ゲル緩衝液中に両性電解質を共存させることにより、泳動時間が長くなることも測定分子量範囲が狭くなることもなく、ＤＮＡの良好な分析を行うことが可能になる。更に、プレキャストゲルとして予め様々な分離特性を持つように量産することができる。
【００１４】
このＤＮＡの電気泳動方法において、前記ゲル緩衝液に含有される前記両性電解質は、塩基解離定数の範囲が８．３＜ｐＫｂ≦９．６であり分子内にカチオン性基とアニオン性基を同数有するグリシンを必須とする一種以上のアミノ酸を含有している。また、前記ゲル緩衝液は、前記一価の酸として塩酸又は酢酸の少なくとも一つを含有し、ｐＨが６．５〜７．０の範囲に調整されている。また、前記泳動用緩衝液に含有される前記両性電解質は、グリシンである。更に、前記泳動用緩衝液に含有される前記両性電解質はグリシンであり、前記泳動用緩衝液は更にドデシル硫酸塩を含有している。
【００１５】
【発明の実施の形態】
この発明によるＤＮＡの電気泳動法は、好ましくは、次に述べる特徴をそれぞれ有するポリアクリルアミドプレキャストゲルと泳動用緩衝液とを用いている。即ち、ポリアクリルアミドプレキャストゲルに含まれるゲル緩衝液は、トリス、グリシンを含む一種又は二種以上の両性電解質及び一価の酸を含有し、好ましくはグリシンと、塩基解離定数の範囲が８．３＜ｐＫｂ＜９．６である分子内にカチオン性基とアニオン性基を同数有するアミノ酸を含有し、一価の酸として、塩酸及び酢酸を含有している。
【００１６】
グリシンを含む一種又は二種以上の両性電解質を含有しなければ、ゲル緩衝液のｐＨを酸性側に設定することでトリスの中和率が高まり、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分の境界付近で電位勾配の変化が非常に大きくなる。このため、境界付近に分離対象が収斂しやすくなり、分画分子量範囲が非常に狭くなる。また、泳動時間が非常に長くなるため作業効率上好ましくない。
【００１７】
グリシンは、ゲル緩衝液のｐＨを下げても、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分の境界付近における電位勾配の変化を緩やかにし、ＴＢＥやオルンスタイン−デービスのゲル緩衝液を使用したゲルと同様の分画分子量範囲を持たせるために、必要である。しかし、ゲル緩衝液のｐＨを酸性側にするほど、グリシン単独では電位勾配の変化を調節する力が十分でなくなる。そこで、ゲル緩衝液中に、グリシンと塩基解離定数の範囲が８．３＜ｐＫｂ＜９．６である分子内にカチオン性基とアニオン性基を同数有するアミノ酸を共存させることにより、泳動ゲル中の電位勾配を一層緩やかにすることが可能となる。
【００１８】
グリシンと共存させるアミノ酸のｐＫｂの範囲は、８．３＜ｐＫｂ＜９．６であり、好ましくは９．０＜ｐＫｂ＜９．６である。アミノ酸のｐＫｂの範囲がｐＫｂ＜８．３である場合、ｐＫｂがトリスよりも低いことになるため、ゲル緩衝液のｐＨが変化し、 また分画分子量範囲が大幅に広くなってしまう。ｐＫｂ＞９．６である場合、アミノ酸のｐＫｂがグリシンよりも高くなってしまうため、 ゲル内の電位勾配の変化を緩やかにする作用に寄与しない。９．０＜ｐＫｂ＜９．６であるアミノ酸を使用すると、ｐＫｂの低いものから順に陽極側に移動し、泳動ゲル内の電位勾配は緩やかなものとなる。９．０＜ｐＫｂ＜９．６であるアミノ酸としては、セリン、トリプトファン、フェニルアラニン等があるが、好ましくはセリンである。
【００１９】
更に、グリシンと共存させるアミノ酸は、分子内にアニオン性基とカチオン性基を同数有するものが望ましい。ｐＫｂよりやや低いｐＨでは、全てのアニオン性基と全てのカチオン性基とが解離して電気的に中性となり、ｐＫｂより高いｐＨでは、アニオン性基のみが解離しカチオン性基の解離が抑制されるため、負に帯電する。このため、上記アミノ酸は、実質的に一価の弱酸としての挙動を示し、疑似弱酸として使用することができる。予めゲル緩衝液中に疑似弱酸を添加しておくことにより、泳動ゲル中のトリス弱酸部分の電気抵抗値が低下し、 更に強酸根の存在下ではｐＨが低いため、 電気的に中性であり電気伝導に寄与しない。
【００２０】
また、ゲル緩衝液のｐＨは、６．５〜７．５、好ましくは６．５〜７．０である。ゲル緩衝液のｐＨが７．５より高い場合、ポリアクリルアミドゲルは経時的に加水分解を受け、プレキャストゲルとしての保管有効期限を長くもたせることができない。ゲル緩衝液のｐＨが６．５より低い場合、ポリアクリルアミドゲルとしての安定性は良好となるが、泳動像が不鮮明で使用に耐えないものとなる。
【００２１】
この発明によるＤＮＡの電気泳動方法で使用する泳動用緩衝液は、トリス、グリシンを含有したオルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液である。オルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液の組成は、０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス、０．１９２ｍｏｌ／ｌグリシンであり、ｐＨが８．３である。上記組成の緩衝液は、タンパク質の分離分析において広く使用されている泳動用緩衝液であるため、作業者は、効率よく分析を行うことができ、また、非常に鮮明な泳動像を得ることができる。
【００２２】
また、泳動用緩衝液の組成が０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス、０．１９２ｍｏｌ／ｌグリシン、０．１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳであるタンパク質分析法として汎用されているレムリーの泳動用緩衝液も、この発明によるＤＮＡの電気泳動方法における泳動用緩衝液として使用可能である。ＤＮＡの分離分析とタンパク質の分離分析で同一の泳動用緩衝液が使用可能であるので、作業効率が向上し、またコスト削減にも寄与する。
【００２３】
【実施例】
以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１
横幅１２ｃｍ、縦１０ｃｍの長方形のガラス板と上部に凹状の切り込みの入った同寸法のガラス板との間に、厚さ1 ｍｍのスペーサを挟んでガラスプレートを組み立てる。アクリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、Ｎ, Ｎ′−メチレンビスアクリルアミド（以下ＢＩＳと称す）濃度５％（％Ｃ）、並びに表１に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー溶液に対し、 過硫酸アンモニウム（以下ＡＰＳと称す）４００ｐｐｍ及びテトラメチルエチレンジアミン（以下ＴＥＭＥＤと称す）４００ｐｐｍを添加混合後、プレート内に注入し、 常法で重合させ、電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを得た。
【００２４】
このポリアクリルアミドゲルを用いて分子量既知の市販マーカーＤＮＡを電気泳動し、 移動距離とバンドの鮮明さを確認した。マーカーＤＮＡは、３０％（ｗ／ｖ）ショ糖、着色する程度のブロムフェノールブルー（以下ＢＰＢと称す）を含んだ１０ｍ  ｍｏｌ／ｌトリス、１ｍ  ｍｏｌ／ｌＥＴＡ、２０ｍ  ｍｏｌ／ｌ塩化ナトリウム溶液を塩酸でｐＨ７．９に調整した緩衝液で１００倍希釈して試験に使用した。泳動用緩衝液については、０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス、 ０．１９２ｍｏｌ／ｌグリシンであるオルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液を使用した。
【００２５】
電気泳動は２０ｍＡ定電流で行い、上部電極槽にＢＰＢで着色した電極液を入れた。ＢＰＢの泳動末端がスペーサの下端に来た時点で通電を中止した。染色には、銀染色法が用いられた。泳動後のゲルを５０％（ｖ／ｖ）メタノール、５％（ｗ／ｖ）トリクロロ酢酸、３．５％（ｗ／ｖ）スルホサリチル酸水溶液中で２０分間浸透させてＤＮＡを固定し、 その後、精製水で１５分間の水洗を２回行った。その後、８％炭酸ナトリウム水溶液と１％（ｗ／ｖ）けいタングステン酸、０．０２％（ｗ／ｖ）硝酸銀、０．０２％（ｗ／ｖ）硝酸アンモニウム、０．２８％（ｖ／ｖ）ホルムアルデヒド水溶液を１：１の割合で混合させた液に浸透させ、染色した。 ７分後にバンドが出現したため染色液を捨て、 １％（ｖ／ｖ）酢酸に１５分浸して停止させた。 その結果、鮮明なＤＮＡのバンドが検出された。
【００２６】
ＢＰＢ泳動距離に対する各ＤＮＡフラグメントの泳動距離の相対位置を移動度（下記の式で定義される）として表２に記載する。
移動度（％）＝（ウェル下端から各バンドの位置までの距離）／（ウェル下端からＢＰＢの泳動末端までの距離）×１００
また、各ゲルの泳動時間を表３に記載する。
【表１】
0003967517.tif 000002
【表２】
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【表３】
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【００２７】
表１、表２及び表３に示したように、ゲル緩衝液のｐＨが７．５、６．８である各ポリアクリルアミドゲルをオルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液で泳動した場合、いずれも鮮明な泳動像が得られ、 ＤＮＡフラグメントの移動度や泳動時間も、ｐＨ８．８のオルンスタイン‐デービスのゲル緩衝液を使用したゲルと同程度であった。
【００２８】
比較例
実施例１と同様のガラスプレートを用い、アクリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｃ）並びに表４に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー溶液に対し、 実施例１と同様に電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを製造した。このポリアクリルアミドゲルを用いて分子量既知の市販マーカーＤＮＡを電気泳動し、 移動距離とバンドの鮮明さを確認した。泳動用緩衝液の組成は０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス、 ０．１９２ｍｏｌ／ｌグリシンであるオルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液を使用した。ＢＰＢ泳動距離に対する各ＤＮＡフラグメントの泳動距離の比を移動度として表５に、泳動時間を表６に示す。
【表４】
0003967517.tif 000005
【表５】
0003967517.tif 000006
【表６】
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【００２９】
表４、表５及び表６に示したように、 ゲル緩衝液中にグリシンを含有させず、トリス、塩酸でｐＨ７．５に調整されている場合、泳動ゲル中のトリス強酸部分とトリス弱酸部分の電位勾配が上昇し、 分離対象が境界付近に収斂し易くなったため、分画分子量範囲が非常に狭くなってしまった。また、泳動時間も非常に長くなり、分析効率が悪くなった。
【００３０】
実施例２
実施例１と同様のガラスプレートを用い、アクリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｃ）並びに実施例１の表１に記載する試料−Ｂ、試料−Ｃの濃度の緩衝液組成から成るモノマー溶液に対し、 実施例１と同様に電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを製造した。この電気泳動ゲルを用いて分子量既知の市販マーカーＤＮＡを電気泳動し、 移動距離とバンドの鮮明さを確認した。泳動用緩衝液としては、組成が０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス、 ０．１９２ｍｏｌ／ｌグリシン、０．１％（重量／容量）ＳＤＳであるレムリーの泳動用緩衝液を使用し、電気泳動は２０ｍＡ定電流で行なった。ＢＰＢ泳動距離に対する各ＤＮＡフラグメントの泳動距離の比を、移動度として表７に記載する。また、泳動時間を表−８に記載する。
【表７】
0003967517.tif 000008
【表８】
0003967517.tif 000009
【００３１】
表７及び表８に示したように、泳動用緩衝液中にＳＤＳを含有するタンパク質分析用に汎用されているレムリーの泳動用緩衝液を使用しても、ＤＮＡの鮮明な分離分析を行なうことが可能である。
【００３２】
比較例２
実施例１と同様のガラスプレートを用い、アクリルアミド濃度１０％（％Ｔ）、ＢＩＳ濃度５％（％Ｃ）並びに表９に記載する濃度の緩衝液組成から成るモノマー溶液に対し、 実施例１と同様に電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを製造した。このポリアクリルアミドゲルを用いて分子量既知の市販マーカーＤＮＡを電気泳動し、 移動距離とバンドの鮮明さを確認した。泳動用緩衝液としては、組成が０．０２５ｍｏｌ／ｌトリス、 ０．１９２ｍｏｌ／ｌグリシン、０．１％（重量／容量）ＳＤＳであるレムリーの泳動用緩衝液を使用した。ＢＰＢ泳動距離に対する各ＤＮＡフラグメントの泳動距離の比を移動度として表１０に、また、泳動時間を表１１に示す。
【表９】
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【表１０】
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【表１１】
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【００３３】
表９、表１０及び表１１に示したように、 ゲル緩衝液中にグリシンを含有させず、トリス、塩酸でｐＨ７．５に調整されている泳動ゲルをレムリーの泳動用緩衝液で泳動した場合、オルンスタイン−デービスの泳動用緩衝液を使用した場合と同様に分画分子量範囲が非常に狭くなった。また、泳動時間も非常に長くなり、分析効率が悪くなった。
【００３４】
【発明の効果】
この発明は、タンパク質分析に使用可能な電気泳動ポリアクリルアミドゲルと泳動用緩衝液を使用してＤＮＡの鮮明な分離分析を行う方法に関するものである。即ち、この発明の電気泳動方法によれば、ゲル緩衝液がトリス、 グリシンを含む一種又は二種以上の両性電解質及び一価の酸を含有する水溶液であることを特徴とした電気泳動ゲルを使用し、トリス、両性電解質を含有する泳動用緩衝液でＤＮＡの鮮明な分離分析が行われる。ゲルｐＨを酸性〜中性領域に設定すればポリアクリルアミドゲルの加水分解をある程度抑制することが可能であり、保存安定性が良好な電気泳動ゲルとなる。従って、保管有効期限を長く設定することが可能となり、プレキャストゲルとして予め様々な分離特性を持つように量産し、広範囲に供給することが可能となる。更に、タンパク質分析を目的として使用されている電気泳動ポリアクリルアミドゲルと泳動用緩衝液がＤＮＡの分離分析にも使用可能であれば、新たにゲルや緩衝液を調製したり購入したりする必要もない。従って、使用者が経済的かつ効率的に分析を遂行することができる。