(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療上有効量のアミリンアゴニストアナログを含む、ＩＩ型糖尿病対象における高血糖症を治療するための医薬組成物であって、
該対象がインスリンを使用せず、該アミリンアゴニストアナログが、デス-1Lys-h-アミリン，28Pro-h-アミリン，25,28,29Pro-h-アミリン，25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン、25Pro26Val28Pro-h-アミリン、デス-1Lys25,28,29Pro-h-アミリン、23Leu25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン、23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン、デス-1Lys23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン、18Arg25,28Pro-h-アミリン、18Arg25,28,29Pro-h-アミリン、18Arg23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン、18Arg23Leu25,28,29Pro-h-アミリン、18Arg23Leu25,28Pro-h-アミリン、デス-1Lys18Arg25,28Pro-h-アミリン、デス-1Lys18Arg25,28,29Pro-h-アミリン、17Ile23Leu25,28,29Pro-h-アミリン、17Ile25,28,29Pro-h-アミリン、17Ile18Arg23Leu-h-アミリン、17Ile18Arg23Leu26Val29Pro-h-アミリン、17Ile18Arg23Leu25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン、デス-1Lys17Ile23Leu25,28,29Pro-h-アミリン、13Thr21His23Leu26Ala28Leu29Pro31Asp-h-アミリン、13Thr21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-アミリン、デス-1Lys13Thr21His23Leu26Ala28Pro31Asp-h-アミリン、13Thr18Arg21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-アミリン、13Thr18Arg21His23Leu28,29Pro31Asp-h-アミリン、および13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28,29Pro31Asp-h-アミリンよりなる群から選択される該組成物。
【請求項２】
治療上有効量のアミリンアゴニストアナログを含む、ＩＩ型糖尿病対象における血中グルコースを低下させるための医薬組成物であって、
該対象がインスリンを使用せず、該アミリンアゴニストアナログが、デス-1Lys-h-アミリン，28Pro-h-アミリン，25,28,29Pro-h-アミリン，25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン、25Pro26Val28Pro-h-アミリン、デス-1Lys25,28,29Pro-h-アミリン、23Leu25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン、23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン、デス-1Lys23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン、18Arg25,28Pro-h-アミリン、18Arg25,28,29Pro-h-アミリン、18Arg23Leu25Pro26Val28Pro-h-アミリン、18Arg23Leu25,28,29Pro-h-アミリン、18Arg23Leu25,28Pro-h-アミリン、デス-1Lys18Arg25,28Pro-h-アミリン、デス-1Lys18Arg25,28,29Pro-h-アミリン、17Ile23Leu25,28,29Pro-h-アミリン、17Ile25,28,29Pro-h-アミリン、17Ile18Arg23Leu-h-アミリン、17Ile18Arg23Leu26Val29Pro-h-アミリン、17Ile18Arg23Leu25Pro26Val28,29Pro-h-アミリン、デス-1Lys17Ile23Leu25,28,29Pro-h-アミリン、13Thr21His23Leu26Ala28Leu29Pro31Asp-h-アミリン、13Thr21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-アミリン、デス-1Lys13Thr21His23Leu26Ala28Pro31Asp-h-アミリン、13Thr18Arg21His23Leu26Ala29Pro31Asp-h-アミリン、13Thr18Arg21His23Leu28,29Pro31Asp-h-アミリン、および13Thr18Arg21His23Leu25Pro26Ala28,29Pro31Asp-h-アミリンよりなる群から選択される該組成物。
【請求項３】
該対象が６．０％またはそれ以上のＨｂＡｌｃ値を有する請求項１記載の医薬組成物。
【請求項４】
該対象が７．５％またはそれ以上のＨｂＡｌｃ値を有する請求項３記載の医薬組成物。
【請求項５】
該対象が８％またはそれ以上のＨｂＡｌｃ値を有する請求項４記載の医薬組成物。
【請求項６】
該対象が６．０％またはそれ以上のＨｂＡｌｃ値を有する請求項２記載の医薬組成物。
【請求項７】
該対象が７．５％またはそれ以上のＨｂＡｌｃ値を有する請求項６記載の医薬組成物。
【請求項８】
該対象が８％またはそれ以上のＨｂＡｌｃ値を有する請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
該アミリンアゴニストアナログが25,28,29Pro-h-アミリンである請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１０】
該アミリンアゴニストアナログが25,28,29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンである請求項２記載の医薬組成物。
【請求項１１】
該組成物が筋肉内投与または皮下投与される請求項１記載の医薬組成物。
【請求項１２】
該組成物が筋肉内投与または皮下投与される請求項２記載の医薬組成物。
【請求項１３】
該組成物が筋肉内投与または皮下投与される請求項９記載の医薬組成物。
【請求項１４】
該組成物が筋肉内投与または皮下投与される請求項１０記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
発明の分野
本発明は、医薬、より詳細にはアミリンアゴニストに関し、さらにアミリンアゴニストを投与することによるＩＩ型糖尿病の治療方法に関する。
発明の背景
本明細書の説明に用いる特許および特許出願を包含する刊行物を、参照により本明細書に記載されているものとみなす。
アミリン
アミリンは３７個のアミノ酸の蛋白ホルモンである。該蛋白は、単離され、精製され、ヒト・ＩＩ型糖尿病患者のランゲルハンス島におけるアミロイド沈着物の主要成分として化学的に特徴づけられた（Cooper et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA 84:8628〜8632（1987））。アミリン分子は２つの重要な翻訳後修飾を有する。すなわち、Ｃ−末端がアミド化され、位置２および７のシステインが架橋されてＮ−末端ループを形成する。アミリンは、１９８７年４月２７日出願の英国特許出願第８７０９８７１号および１９９４年１１月２２日付与の対応米国特許第５,３６７,０５２号の主題である。
アミリンは、ＣＧＲＰおよびカルシトニンを包含する関連ペプチドのファミリーの一員である（Rink et al.,Trends Pharmacol.Sci.14:113〜118（1993））。アミリンは主に膵臓ベータ細胞において合成され、グルコースおよびアルギニンのごとき栄養刺激に応じて分泌される。Moore et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.179:1〜9（1991）;Kanatsuka et al.,FEBS Lett.259:199〜201（1989）;Ogawa et al.,J.Clin.Invest.85:973〜976（1990）;Gedulin et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.180:782〜789（1991）。
正常なヒトにおいては、絶食時のアミリンレベルは１ないし１０ｐＭであり、食後のレベルは５ないし２０ｐＭであると報告されている（例えば、Harter et al.,Diabetologia 34:52〜54（1991）;Sanke et al.,Diabetologia 34:129〜132（1991）;Koda et al.,The Lancet 339:1179〜1180（1992））。しかしながら、肥満でインスリン耐性の個体においては、食後のアミリンレベルが高くなる可能性があり、例えば、約５０ｐＭにまで達する。比較のために、健康人において、絶食時および食後のインスリン値は、それぞれ２０ないし５０ｐＭ、および１００ないし３００ｐＭであり、おそらく、インスリン耐性の人におけるレベルよりも３ないし４倍高い。ベータ細胞が破壊されているＩ型糖尿病において、アミリンレベルは検出レベルまたはそれ以下であり、グルコースに応答して上昇しない（Koda et al.,The Lancet 339:1179〜1180（1992））。正常マウスおよびラットにおいて、基底アミリンレベルは３０ないし１００ｐＭであるが、齧歯類のある種のインスリン耐性糖尿病株においては６００ｐＭまでの値が測定されたことが報告されている（例えば、Huang et al.,Hypertension 19:I-101-I-109（1991）;Gill et al.,Life Sciences 48:703〜710（1991））。
最初に発見されたアミリンの作用は、ラットの骨格筋においてインスリンにより刺激されるグルコースのグリコーゲン中への取り込みであった（Leighton et al.,Nature 335:632〜635（1988））。筋肉は「インスリン耐性」になっていた。ラット・ヒラメ筋を用いるエクスビボおよびインビボでの引き続いての研究により、アミリンがグリコーゲン合成活性を低下させ、グリコーゲンホスホリラーゼの不活性ｂ形態から活性ａ形態への変換を促進し、正味のグリコーゲン損失を促進し（インスリン存在下または不存在下で）、グルコース−６−ホスフェートレベルを上昇させ、ラクテート排出量を増加させうることが示された（例えば、Deems et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.181:116〜120（1991）;Young et al.,FEBS Letts.281:149〜151（1991）参照）。
アミリンは細胞質膜に存在する受容体を介して作用すると考えられている。Beaumont et al.,Mol.Pharmacol.44:493〜497（1993）。アミリンアゴニストおよびアンタゴニスト化合物についてのスクリーニングおよびアッセイのための種々の方法におけるアミリン受容体およびそれらの使用が、１９９３年１１月２３日付与の米国特許第５,２６４,３７２号に記載されている。
燃料代謝に関するアミリンの生物学的作用はYoung et al.,J.Cell.Biochem.555:12〜18（1994）において議論されている。アミリンはインビボにおける肝臓の燃料代謝に著しい影響力を有するが、単離肝細胞または灌流されている肝臓においてどのようなアミリンの作用が見られるかについては広く一致した見解が得られていない。利用可能なデータによっては、アミリンが肝臓のグリコーゲン分解を促進する、すなわち、グルカゴンのようには作用しないという考えは支持されない（例えば、Stephens et al.,Diabetes 40:395〜400（1991）;Gomez-Foix et al.,Biochem.J.276:607〜610（1991））。アミリンが肝臓に作用して、ラクテートのグリコーゲンへの変換を促進し、グルカゴンにより遊離されうるグルコースの量を増加させる可能性があることが示唆されている（Roden et al.,Diabetologia 35:116〜120（1992）参照）。かくして、そこでアミリンは、その筋肉における異化作用とは逆に、肝臓においてはインスリンに対する同化促進パートナーとして作用する可能性がある。
脂肪細胞においては、その筋肉における作用とは逆に、アミリンは、インスリンにより刺激されるグルコース摂取、グルコースのトリグリセリドへの取り込み、ＣＯ2生成（Cooper et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.85:7763〜7766（1988））、エピネフリンにより刺激される脂質分解、または脂質分解のインスリン阻害（LupienおよびYoung,Diabetes Nutrition and Metabolism-Clinical and Experimental,第６巻（１）,13〜18頁（1933））に対する検出可能な作用を有していない。かくして、アミリンは、骨格筋に対する直接的作用、肝臓に対する著しい間接的（基質の供給を介して）およびおそらく直接的な影響を伴う組織特異的効果を発揮するが、脂肪細胞はアミリンの存在または不存在に対して「盲目」であるように思われる。腎臓組織に対するアミリンの直接的効果は報告されていない。
アミリンはインスリン分泌に著しい影響を及ぼしうることも報告されている。単離ランゲルハンス島（Ohsawa et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.160:961〜967（1989））、灌流されている膵臓（Silvestre et al.,Reg.Pept.31:23〜31（1991））、および無処理ラット（Young et al.,Mol.Cell.Endocrinol.84:R1〜R5（1992））における種々の実験により、アミリンがインスリン分泌をダウンレギュレート（down-regulate）することが示されている。灌流されている膵臓の実験は、アルギニンに対する応答の節約を伴うグルコースに対する分泌応答の選択的ダウンレギュレーションを指摘する。しかしながら、他の研究者は、単離ベータ細胞、単離ランゲルハンス島、または動物全体に対するアミリンの影響を検出できていない（Broderick et al.,Biochem.Biochem.Res.Commun.177:932〜938（1991）およびその中の引用文献参照）。
齧歯類におけるインビボでの医薬的投与量のアミリンの著しい効果は、血漿ラクテートの鋭い上昇の刺激、次いで、血漿グルコース上昇の刺激である（Young et al.,FEBS Letts.281:149〜151（1991）。証拠は、増加したラクテートはグルコース産生用基質を提供し、アミリンの作用はインスリンまたはグルカゴンの変化にかかわらず生じうることを示す。「グルコースクランプ（glucose clamp）」実験において、アミリン輸液は、末梢グルコース消費を抑制することにより、そしてイオンスリンにより媒介される肝グルコース排出抑制を制限することにより、「インスリン耐性」を引き起こす（例えば、Frontoni et al.,Diabetes 40:568〜573（1991）;Koopmans et al.,Diabetologia 34:218〜224（1991））。
アミリンアゴニストは胃が空になるのを遅らせうるということが示されており（Young et al.,Diabetologia（１９９５年６月、印刷中））、それらの食後の高血糖症抑制能に貢献すると考えられている（MoysesおよびKolterman,Drugs and Future（1995年5月））。アミリンアゴニストを投与することからなる胃の運動性を低下させて胃が空になるのを遅らせる方法は、１９９３年９月７日出願の米国特許出願第０８／１１８,３８１号（および対応ＰＣＴ出願であって１９９５年３月１６日公開の国際公開ＷＯ９５／０７０９８）の主題である。
アミリンの非代謝的作用は、ＣＧＲＰ血管受容体との相互作用により媒介されうる血管拡張効果を包含する（Brain et al.,Eur.J.Pharmacol.183:2221（1990））。血圧の変化を回避する方法で皮下注射した場合、アミリンは無処理ラットにおいて血漿レニン活性を著しく上昇させることも報告されている。アミリンでのレニン関連疾患の治療方法は、１９９４年１２月２７日付与の米国出願第５３７６６３８号に記載されている。
脳に注入した場合、アミリンは食物摂取を抑制することが報告されており（例えば、Chance et al.,Brain Res.539:352〜354（1991））、ＣＧＲＰおよびカルシトニンと共有している作用である。この作用を伝達する細胞中の有効濃度は知られていない。アミリンは、細胞休止を引き起こした単離破骨細胞に対して、さら、にパジェット病のラット、ウサギおよびヒトにおける２０％までの血漿カルシウム低下が報告されているインビボ状態に対して影響を有することも報告されている（例えば、Zaidi et al.,J.Bone Mineral Res.5（Suppl.2）576（1990）参照）。利用可能なデータから、アミリンは、これらの作用に関して、ヒト・カルシトニンよりも１０ないし３０倍有効でないと思われる。興味深いことに、アミリンは破骨細胞のｃＡＭＰ産生を増加させるが細胞質ゾルのＣａ2+を増加させないと思われるが、カルシトニンは両方を増加させると報告されている（Alam et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.179:134〜139（1991））。カルシトニンは２種の受容体タイプを介して作用でき、アミリンはこれらのうち１つのみと相互作用しうることが示唆されているが、確かなものではない。
糖尿病
糖尿病は、慢性的に上昇した血中グルコースレベルの存在により定義される重大な代謝疾患である。成人における糖尿病の古典的な徴候は、多尿症、多渇症、ケトン尿症、血漿グルコースレベルの上昇を伴う急激な体重減少である。正常な絶食時の血漿グルコース濃度は１デシリットルあたり１１５ミリグラムより低い。糖尿病患者においては、絶食時濃度は１デシリットルあたり１４０ミリグラム以上であることがわかっている。一般的には、糖尿病は膵臓のベータ細胞のダメージに対応して進行する。このダメージは、ベータ細胞が自己免疫系により破壊されている１次的な糖尿病から起こる可能性があり、あるいは膵臓疾患、インスリン作用の欠乏以外のホルモン異常、薬剤または化学的誘導、インスリン受容体異常、遺伝学的症候群等のごとき他の１次的な疾患に対する２次的な糖尿病の応答として起こる可能性がある。１次的な糖尿病はＩ型糖尿病（インスリン依存性糖尿病またはＩＤＤＭとも呼ばれる）およびＩＩ型糖尿病（インスリン非依存性糖尿病またはＮＩＤＤＭとも呼ばれる）に分類することができる。
Ｉ型（若年性またはインスリン依存性）糖尿病はよく知られたホルモン欠乏状態であり、膵臓ベータ細胞は自己免疫防御機構により破壊されたように見える。Ｉ型糖尿病の患者は、内在するインスリン分泌能がごくわずかであるかまたは存在しない。これらの患者は極度の高血糖症を起こす。Ｉ型糖尿病は、インスリン置換療法が導入される７０年前までは致命的なものであった。最初は動物起源のインスリンが用いられ、より最近になって組み換えＤＮＡ技術により製造されたヒト・インスリンが使用されている。上述のごとく、Ｉ型糖尿病におけるベータ細胞の破壊が、随伴する２種のホルモンの欠乏、すなわちインスリンおよびアミリンの欠乏を招くことが現在明らかとなっている。膵臓細胞が破壊された場合、インスリンおよびアミリン分泌能が失われる。Ｉ型糖尿病対象は、アミリンレベルが検出不可能または検出下限いずれかのレベルであり、グルコースの攻撃に対応して増加しないことが報告されている（Koda,The Lancet 339:1179（1992））。
ＩＩ型糖尿病における膵臓ベータ細胞の損傷の性質は明らかでない。Ｉ型糖尿病における膵臓ベータ細胞とは異なり、ＩＩ型糖尿病のベータ細胞はインスリンおよびアミリンの合成および分泌能を保持している。
ＩＩ型糖尿病はインスリン耐性、すなわち、インスリン作用に対する末梢組織の正常な代謝応答が起こらないことにより特徴づけられる。換言すると、インスリン耐性は、循環インスリンが正常以下の生物学的応答を生じる症状である。臨床的に見ると、正常または上昇したインスリンレベルにもかかわらず正常または上昇した血中グルコースレベルが存続する場合にインスリン耐性が存在する。ＩＩ型糖尿病に関連した高血糖症は、時々、インスリンに対する末梢組織の感受性を回復するに十分な治療食または体重の減少により逆転または改善されうる。実際、ＩＩ型糖尿病は、しばしば、正常レベルよりも高いレベルの血漿インスリンの存在下での高血糖症により特徴づけられる。ＩＩ型糖尿病の進行は血中グルコース濃度上昇に関連しており、グルコースにより誘導されるインスリン分泌速度の相対的低下に連動している。よって、例えば、後期ＩＩ型糖尿病において、インスリン欠乏が存在しうる。
すべての形態の糖尿病における主要な治療目的は同じであり、すなわち、血中グルコース濃度をできるだけ正常付近まで低下させ、そのことにより短期および長期の疾病の合併症を最小にすることである（Tchobroutsky,Diabetologia 15:143〜152（1978））。糖尿病患者における高血糖症の程度と続いて起こる長期の合併症との間の関連が、National Institutes of Healthにより着手され最近完成されたDiabetes Control and Complications Trial（DCCT）においてさらに確認された（The Diabetes Control and Complications Trial Research Group,N.Eng.J.Med.329:977（1993））。米国およびカナダ周辺の２９の臨床センターにおいて１０年以上の期間にわたりＤＣＣＴが行われ、Ｉ型糖尿病における平均血中グルコース濃度を低下させることが終末小体の合併症を減少させることが示された。網膜障害の発生は７６％減少し、網膜障害の進行は５４％減少し、腎臓疾患のマーカー（蛋白尿、アルブミン尿）の改善があった。有意な神経障害性変化の発生も減少した。
Ｉ型糖尿病の治療は、非経口的経路により投与される置換量のインスリンの投与を必然的に包含する。正しい食事および自己血中グルコースモニタリングとの組み合わせにおいて、大部分のＩ型糖尿病については、あるレベルの血中グルコースのコントロールが可能である。
Ｉ型糖尿病とは対照的に、ＩＩ型糖尿病の治療は、しばしば、インスリンの使用を必要としない。ＩＩ型糖尿病の治療の慣例は、通常には、まず第一に、６〜１２週間の食事療法およびライフスタイルの改変の試みを含む。糖尿病治療食の特徴は、通常食での十分であるが過剰でないカロリー摂取、飽和脂質含量の制限、随伴する多価不飽和脂肪酸含量の増加、および食物繊維の摂取増加を包含する。ライフスタイルの改変は、体重コントロールの助けおよびインスリン耐性の程度の減少の助けにもなる規則的な運動の維持を包含する。治療食およびライフスタイル改変を十分に試みた後に絶食時の高血糖症が継続する場合には、「１次治療食の失敗」と診断してもよく、血中グルコースのコントロールを行い、そのことにより疾病の合併症を最小にするためには、経口的血糖値低下療法またはインスリン療法の直接的遂行のいずれかが必要であろう。治療食および体重減少に応答しないＩＩ型糖尿病患者は、スルホニル尿素またはビグアニドのごとき経口血糖値低下剤を用いる療法に応答するかもしれない。しかしながら、ＩＩ型糖尿病の他の患者、特に、１次治療食が失敗し、かつ肥満でない患者、あるいは１次治療食および２次経口血糖値低下療法のいずれにも失敗した患者を治療するために、インスリン療法が用いられる。
糖尿病の治療におけるアミリンアゴニストの使用が、米国特許第５,１２４,３１４号および第５１７５１４５号に記載されている。過剰なアミリン作用は、ＩＩ型糖尿病の鍵となる特徴を模倣するものであり、アミリン遮断が新規治療戦略として提案されている。１９９３年１１月３０日付与の米国特許第５,２６６,５６１号および１９９４年１月２５日付与の米国特許第５,２８１,５８１号には、アミリンアンタゴニストでのＩＩ型糖尿病およびインスリン耐性の治療が開示されている。
アミリンアゴニスト25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンの輸液がＩ型糖尿病患者の食後のグルコース濃度を低下させたことがすでに報告されている（Moyses & Kolterman,Drugs of the Future（１９９５年５月））。Ｉ型糖尿病の６人の男性対象におけるシングルブラインドクロスオーバー研究（single blind crossover study）において、アミリンアゴニスト25 28 29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンの流速１５０μｇ／時での２時間にわたる輸液は、混合食摂取後の高血糖症を有意に減少させることが報告された。Ｉ型糖尿病の９人の対象における流速５０μｇ／時での５時間にわたる輸液を用いる第２の研究において、この効果が確認された。栄養によるチャレンジが、経口的（Sustacal▲Ｒ▼meal）または静脈からのグルコース３００ｍｇ／ｋｇ負荷のいずれかとして行われた。アミリンアゴニスト25 28 29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンの投与は、経口的Sustacal▲Ｒ▼meal食後のグルコース値の逸脱の有意な減少を導いたが、グルコースの静脈投与後には導かなかったことが報告され、胃を空にするのを遅らせる効果と矛盾せず、よって、栄養分の胃腸での吸収と矛盾しなかった。さらなるダブルブラインドプラセボ対照研究（double-blind placebo controlled study）において、毎日食事前に自己注射した25 28 29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンも、試験食後のグルコース値逸脱の抑制を誘導した。患者は通常のインスリン投与規則を継続した。３番目の研究において、３０μｇのアミリンアゴニストの投与で、満足のいく有意な効果が見られた。
発明の概要
意外にも、我々は、非インスリン投与ＩＩ型糖尿病患者（non-insulin-taking Type II diabetic patient）をアミリンアゴニストの投与により治療して彼らの血中グルコース濃度を低下させることができることを見いだした。さらに我々は、非インスリン投与ＩＩ型糖尿病患者のアミリンアゴニストでの治療は、正常以上のＨｂＡｌｃ値を有する患者に対して特に有益であることを見いだした。
１の態様において、本発明は、治療上有効量のアミリンアンタゴニストを投与することからなる非インスリン投与ＩＩ型糖尿病対象の治療方法に指向される。「非インスリン投与ＩＩ型糖尿病対象」とは、ＩＩ型糖尿病を有する対象であるが、目下のところその糖尿病がインスリンを使用せずに、例えば、治療食の組み合わせ、運動、ライフスタイルの改変、またはビグアニドおよびスルホニル尿素のごとき経口血糖値低下剤の使用により管理されている対象を意味する。ＩＩ型糖尿病にかかっている患者の診断は十分に当業者の知識の範囲内である。例えば、血漿グルコース濃度の上昇に連動しているがケトアシドーシスの既往症を伴わない多渇症、多尿症、多食症（体重減少を伴う、あるいは伴わないもの）の徴候を有する３５歳以上の個体は、一般的にはＩＩ型糖尿病の診断に属する。肥満の存在、ＩＩ型糖尿病のはっきりとした家族歴および正常または上昇した絶食時の血漿インスリンおよびｃ−ペプチド濃度は、ＩＩ型糖尿病の大部分の患者のさらなる特徴である。「治療上有効量」とは、ＩＩ型糖尿病にかかっている対象における血漿グルコース濃度を有益に低下させる１回または複数回の服用量を意味する。
好ましい具体例において、本発明は、対象が正常対象のＨｂＡｌｃ値の範囲の上限以上のＨｂＡｌｃ値を有する場合において治療上有効量のアミリンアゴニストを投与することからなる非インスリン投与ＩＩ型糖尿病対象の治療方法に指向される。ＨｂＡｌｃは、非酵素的プロセスにより起こるヘモグロビンの翻訳後修飾を示し、それにより、グルコースがヘモグロビンＡに結合するようになり、典型的には、平均赤血球寿命である１２０日にわたり平均血漿グルコース濃度に影響する。ＨｂＡｌｃ値の正常範囲の上限、すなわち、正常非糖尿病対象についての上限は、一般的には、約６.０ないし約７.５％であると理解されている。もう１つの好ましい具体例において、対象は少なくとも約８％のＨｂＡｌｃ値を有する。
もう１つの具体例において、本発明は、対象に血中グルコース低下量のアミリンアゴニストを投与することからなる、非インスリン投与ＩＩ型糖尿病対象における血中グルコース低下方法に指向される。好ましくは、グルコース低下量のアミリンアゴニストは約０.０５μｇ／ｋｇ／日ないし約１０μｇ／ｋｇ／日の間、より好ましくは約０.０５μｇ／ｋｇ／日ないし約６μｇ／ｋｇ／日の間、さらにより好ましくは約１.０μｇ／ｋｇ／日ないし約４μｇ／ｋｇ／日の間である。例えば、25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン（ＡＣ１３７）の有効な血中グルコース低下量は、一般的には約０.０５μｇ／ｋｇ／日ないし約１０μｇ／ｋｇ／日、好ましくは０.１μｇ／ｋｇ／日ないし約６.０μｇ／ｋｇ／日で変化させられるであろう。約１.０μｇ／ｋｇ／日ないし約４.０μｇ／ｋｇ／日の用量が好ましい。好ましい具体例において、対象は、正常対象のＨｂＡｌｃ値の正常範囲の上限以上のＨｂＡｌｃ値を有する。本発明のもう１つの好ましい具体例において、対象は少なくとも約８％のＨｂＡｌｃ値を有する。
本発明の好ましい具体例において、アミリンアゴニストは25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン（ＡＣ１３７）、ｓ−カルシトニンおよびｈ−アミリンからなる群より選択される。25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン（ＡＣ１３７）が特に好ましい。
アミリンアゴニストの投与は、皮下、筋肉内、鼻腔内または経皮を包含する種々の経路であってよい。
【図面の簡単な説明】
添付図面を参照して本発明をさらに説明する。
図１は、ＡＣ１３７により誘導された食後の高血糖症の減少と、インスリン治療または非インスリン治療患者におけるＨｂＡｌｃの状況との間の相関関係を示す。患者はＨｂＡｌｃレベルに関してランク付けされている。非インスリン治療患者において相関（ｒ2）は０.５６、インスリン治療患者において０.１０、患者全体について０.３３であった。
発明の詳細な説明
受容体結合および下記ヒラメ筋アッセイにおける活性によりアミリンアゴニスト剤を同定することができる。化合物のアミリンアゴニスト活性を、下記のごとく、哺乳動物における高カルシウム血症および／または高血糖症を減少させる能力により、あるいは食後の血漿グルコースレベルを低下させる能力により評価してもよい。
本発明において有用な種々のアミリンアゴニスト化合物についての命名法を用いて、ヒト・アミリンのごときいずれかの基本的なペプチドアミリンに配列が基づいているペプチドおよびそれらに対する修飾物の両方を示すことができる。上つき番号が前にあるアミノ酸は、そのアミノ酸が、基本となるアミノ酸配列中の上つき数字の位置のアミノ酸位置に通常存在するアミノ酸を置換するものであることを示す。例えば、「18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン」は、「ｈ−アミリン」または「ヒト・アミリン」を基本とするペプチドであって、Ａｒｇが残基１８におけるＨｉｓを置換し、Ｐｒｏが残基２５におけるＡｌａを置換し、Ｐｒｏが残基２８におけるＳｅｒを置換する置換を有するペプチドをいう。用語「ｄｅｓ−1Ｌｙｓ−ｈ−アミリン」は、ヒト・アミリン配列を基本とするペプチドであって、１番目またはＮ末端のアミノ酸が欠失しているペプチドをいう。
好ましいアミリンアゴニスト化合物ｄｅｓ−1Ｌｙｓ−ｈ−アミリン、28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリンおよびｄｅｓ−1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリンはすべて治療した試験動物においてインビボアミリン活性を示し、高乳酸血症、次いで、高血糖症を著しく誘導する。アミリンに特徴的な活性を有する以外に、ある種の好ましい化合物は、ヒト・アミリンと比較した場合に、より望ましい溶解性および安定性を有することも分かっている。これらの好ましい化合物は、25Ｐｒｏ26Ｖａｌ28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン（本明細書においてＡＣ−０１３７ともいう）、および18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリンを包含する。
本発明方法は、アミリンまたはアミリンアゴニストアナログ、例えば、18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、18Ａｒｇ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンおよび25Ｐｒｏ26Ｖａｌ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリンのごときアミリン受容体アゴニストアナログを包含するアミリンアゴニストを使用する。他の適当なアミリンアゴニストアナログの例は下記のものを包含する。
0004009319.tif 000002
アミリンアゴニストアナログを包含する、さらなるアミリンアゴニスト並びにアミリンアゴニストの製造および使用方法は、１９９５年５月３０日出願の共有の米国特許出願「新規アミリンアゴニストペプチドおよびその使用」（処理番号２１３／０８０）および１９９３年５月２７日公開の対応ＰＣＴ出願公開ＷＯ９３／１０１４６にさらに詳述されており、それらの開示を参照により本明細書に記載されているものとみなす。これらのアゴニストは、非インスリン使用ＩＩ型糖尿病における血中グルコース濃度の低下に有用である。
下記の特定の生物学的アッセイを用いてアミリンアゴニストの活性を評価することができる。受容体結合アッセイは、候補となるアミリンアゴニストおよびアンタゴニストの両方を同定することができ、結合を評価するために使用できるが、ヒラメ筋アッセイを用いてアミリンアゴニストおよびアンタゴニストを識別することもできる。好ましくは、アゴニスト化合物は、約１ないし５ｎＭ未満、好ましくは約１ｎＭ未満、より好ましくは約５０ｐＭ未満のオーダーでの受容体結合アッセイにおいて活性を示す。ヒラメ筋にアッセイにおいて、好ましくは、これらの化合物は約１ないし１０マイクロモラー未満のオーダーのＥＣ50値を示す。
受容体結合アッセイは、１９９３年１１月２３日付与の米国特許第５,２６４,３７２号に記載されており、その開示を参照により本明細書に記載されているものとみなす。受容体結合アッセイは、膜結合アミリン受容体に特異的に結合する化合物の能力を測定する競争アッセイである。アッセイに用いる膜調製物の好ましいソースは、坐核（nucleus accumbens）および周辺領域由来の膜からなる基底前脳である。アッセイされる化合物は、これらの受容体調製物への結合に関して、125I Bolton Hunterラットのアミリンと競争する。結合量（Ｂ）をリガンド濃度の対数に関数としてプロットした競争曲線を、４−パラメーターロジスティック等式（4-parameter logistic equation）（Inplot program;GraphPAD Software,San Diego,California）に対する非線形回帰分析またはDeLeanらのＡＬＬＦＩＴプログラム（NIH,Bethesda,MD20892）による分析を用いてコンピューターにより分析する（Munson,P. and Rodbard,D.,Anal.Biochem.107:220〜239（1980））。
以前に記載された方法（Leighton,B.and Cooper,G.J.S.,Nature,335:632〜635（1988）;Cooper,G.J.S.,et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:7763〜7766（1988））を用いて、アミリンアゴニストアナログ調製物を包含するアミリンアゴニストの生物学的活性のアッセイをヒラメ筋において行う。要約すると、インスリンにより刺激されるヒラメ筋におけるグリコーゲン合成に対する阻害を測定することによりアミリンアゴニスト活性を評価する。１００ｎＭのラット・アミリンおよびアミリンアンタゴニストの存在下でインスリンにより刺激されるグリコーゲン合成の回復を測定することによりアミリンアンタゴニスト活性を評価する。担体不含バッファーに溶解したペプチド濃度を、本明細書記載の定量的アミノ酸分析により決定する。このアッセイにおいてアゴニストとして作用する化合物の能力をＥＣ50値を測定することにより決定する。４パラメーターロジスティック等式（DeLean,A.,Munson,P.J.,Guardabasso,V and Rodbard,D.（1988）ALLFIT,Version 2.7,National Institute of Child Health and Human Development,N.I.H. Bethesda,MD, １ディスケット）を用いるＳ字状用量応答曲線のフィッテイングにより標準偏差を決定する。これらの生物学的アッセイを用いてアミリンアゴニストの数が特徴づけられている。化合物18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、18Ａｒｇ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンおよび25Ｐｒｏ26Ｖａｌ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリンはすべて、受容体結合アッセイにおいてアミリンと競争することが見いだされた。これらの化合物は、ヒラメ筋アッセイにより測定した場合に無視できるアンタゴニスト活性を有し、アミリンアゴニストとして作用することが示された。
１９９３年９月７日出願の米国特許出願第０８／１１８,３８１号および１９９４年９月７日出願の米国特許出願第０８／３０２,０６９号（ＰＣＴ出願公開ＷＯ９５／０７０９８に対応）記載の方法（それらの開示を参照により本明細書に記載されているものとみなす）、あるいは胃の運動性を測定するための他のよく知られた方法を用いて、胃の運動性に対するアミリンまたはアミリンアゴニストの効果を同定し、評価し、あるいはスクリーニングすることができる。胃の運動を遅くする化合物の能力の同定あるいは評価に用いる１のかかる方法は、（ａ）試験試料および試験系を一緒にし（該試験試料は１またはそれ以上の試験化合物からなり、該試験系は胃の運動性を評価するための系からなり、例えば、該系は、系へのグルコースまたは食事の導入に応答した血漿グルコースの上昇を示すことにより特徴づけられる）、次いで、（ｂ）該系における血漿グルコース上昇の存在または量を測定することからなる。所望により、前以て決定された量のアミリンアンタゴニスト（例えば、8〜32サケ・カルシトニン）を試験系に添加してもよい。
標準的な固相ペプチド合成法および好ましくは自動または半自動ペプチド合成装置を用いて、上記のごときアミリンアゴニストを製造する。典型的には、ジイソプロピルエチルアミンのごとき塩基の存在下で、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのごときカップリング剤の存在下で、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノンまたは塩化メチレンのごとき不活性溶媒中で、室温において、α−Ｎ−カルバモイル保護アミノ酸と、伸長しているペプチド鎖に結合したアミノ酸とをカップリングさせる。トリフルオロ酢酸またはピペリジンのごとき試薬を用いて、得られたペプチド−樹脂からα−Ｎ−カルバモイル保護基を除去し、ペプチド鎖に加えるべき次の所望Ｎ−保護アミノ酸を用いてカップリング反応を繰り返す。適当なＮ−保護基は当該分野においてよく知られており、本発明においてはｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔＢｏｃ）およびフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）を含む。
特記しないかぎり、ペプチド合成に用いる溶媒、アミノ酸誘導体および４−メンチルベンゾヒドリル−アミン樹脂をApplied Biosystems Inc.（Foster City,PCA）から購入する。側鎖保護アミノ酸をApplied Biosystems Inc.から購入し、それらは、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｒｚ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＢＺｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）およびＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）を包含する。Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＢＯＭ）をApplied Biosystems,Inc.またはBachem Inc.（Torrance,CA）から購入する。アニソール、メチルスルフィド、フェノール、エタンジオールおよびチオアニソールをAldrich Chemical Company（Milwaukee,WI）から得る。Air Products and Chemicals（Allentown,PA）はＨＦを提供する。エチルエーテル、酢酸およびメタノールをFisher Scientific（Pittsburgh,PA）から購入する。
ＮＭＰ／ＨＯＢｔ（オプション１）システムおよびＴｂｏｃまたはＦｍｏｃ化学試薬（Applied BiosystemsのABI 430Aペプチド合成装置に関するユーザー用マニュアル、バージョン１.３Ｂ、１９８８年、セクション６、４９〜７０頁、Applied Biosystems Inc.,Foster City,CA参照）をキャッピングとともに用い、自動ペプチド合成装置（430A型、Applied Biosystems Inc.,Foster City,CA）を用いて固相ペプチド合成を行う。Ｂｏｃ−ペプチド−樹脂をＨＦで開裂する（−５℃ないし０℃、１時間）。水および酢酸を交互に用いてペプチドを樹脂から抽出し、濾液を凍結乾燥させた。標準的方法（Introduction to Cleavage Techniques,Applied Biosystems,Inc.,1990,pp6〜12）に従ってＦｍｏｃ−ペプチド樹脂を開裂する。また、Advanced Chem Tech Systhesizer（ＭＰＳ３５０型、Louisville,Kentucky）を用いていくつかのペプチドを合成する。Waters Delta Prep3000システムを用いるＲＰ−ＨＰＬＣ（調製用および分析用）によりペプチドを精製する。Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８調製用カラム（１０μｍ,２.２ｘ２５ｃｍ；Vydac,Hesperia,CA）を用いてペプチドを単離し、Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８分析用カラム（５μｍ,０.４６ｘ２５ｃｍ;Vydac）を用いて純度を検定する。溶媒（Ａ＝０.１％ＴＦＡ／水、およびＢ＝０.１％ＴＦＡ／ＣＨ3ＣＮ）を流速１.０ｍｌ／分で分析用カラムに流し、１５ｍｌ／分で調製用カラムに流す。アミノ酸分析をWaters Pico Tagシステムを用いて行い、Maximaプログラムを用いてプロセッシングする。気相酸加水分解（１１５℃、２０〜２４時間）によりペプチドを加水分解する。標準的方法（Cohen,S.A.,Meys,M.,and Tarrin,T.L.（1989）,The Pico Tag Method:A Manual of Advanced Techniques for Amino Acid Analysis,pp.11〜52,Millipore Corporation,Milford,MA）により加水分解物を誘導体とし、分析する。M-Scan,Incorporated（West Chester,PA）により高速原子衝撃分析が行われる。ヨウ化セシウムまたはヨウ化セシウム／グリセロールを用いて質量キャリブレーションを行う。フライトディテクション（flight detection）の時間を用いるプラズマ脱着イオン化分析を、Applied Systems Bio-Ion20質量スペクトル計にて行う。
また、現在当該分野で知られている方法を用いる組み換えＤＮＡ法を用いて、クレイムされた方法において有用なペプチド化合物を合成する。例えば、Sambrook et al.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2d ed.,Cold Spring Harbor（1989）参照。
上記化合物は種々の無機酸および有機酸並びに塩基と塩を形成する。かかる塩は、有機および無機酸、例えば、ＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ2ＳＯ4、Ｈ3ＰＯ4、トリフルオロ酢酸、酢酸、ギ酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、マレイン酸、フマル酸およびショウノウスルホン酸とともに製造される塩を包含する。塩基とともに製造される塩は、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウムおよびカリウム塩、ならびにアルカリ土類金属塩、例えば、カルシウムおよびマグネシウム塩を包含する。酢酸、塩酸およびトリフルオロ酢酸塩が好ましい。塩が不溶性である溶媒または媒体中、あるいは水のごとき溶媒中で、遊離の酸または塩基の形態の生成物を１当量またはそれ以上の適当な塩基または酸と反応させ、次いで、減圧もしくは凍結乾燥により溶媒を除去し、あるいは存在する塩のイオンをイオン交換樹脂に適した別のイオンと交換することによる慣用的手段により塩を得ることができる。
便利には、本発明において有用な組成物を、非経口（筋肉内および皮下を包含する）または鼻腔内または経皮に適した処方形態として提供してもよく、さらに／あるいは適当にはカプセル封入してもよく、あるいは経口投与のために別の知られた方法により製造してもよい。最良には、適当な投与フォーマットは医療担当者により個々の患者について決定される。適当な医薬上許容される担体およびそれらの処方は標準的な処方についての論文、例えば、E.W.MartinによるRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。Wang,Y.J.およびHanson,M.A.の"Parenteral Formulations of Proteins and Peptides:Stability and Stabilizers",Journal of Parenteral Science and Technology,Technical Report No.10,Supp.42:2S（1988）」も参照。
本発明において有用な化合物を、注射または輸液用非経口組成物として提供することができる。好ましくは、それらを水性担体、例えば、ｐＨ約４.３ないし７.４の等張バッファー溶液に溶解する。慣用的な滅菌方法によりこれらの組成物を滅菌してもよく、あるいは濾過により滅菌してもよい。組成物は、ｐＨ緩衝剤のごとき処方を安定化するのに必要な医薬上許容される補助的物質を含有してもよい。有用なバッファーは、例えば、酢酸ナトリウム／酢酸バッファーを包含する。沈着性形態または「デポット（depot）」除放調合物を用いて、治療上有効量の調合物が経皮注射または送達後何時間または何日にもわたって血流中に送達されるようにしてもよい。
塩化ナトリウムまたはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、ポリオール（マンニトールおよびソルビトールのごとき）、または他の無機もしくは有機溶質のごとき他の医薬上許容される剤を用いて所望の等張性を達成してもよい。塩化ナトリウムはナトリウムイオン含有バッファーに特に好ましい。所望ならば、上記組成物の溶液を、メチルセルロースのごとき増粘剤を用いて増粘させてもよい。
一般的に許容されている方法に従って成分を混合することにより、本発明において有用な組成物を製造する。例えば、選択された成分をブレンダーまたは他の標準的装置で混合して濃縮混合物を得て、次いで、水または増粘剤を添加することにより最終濃度および粘度に調節し、次いで、可能ならば、バッファーを添加してｐＨを調節し、あるいはさらなる溶質を添加して等張性を調節してもよい。
医師による使用のために、１回または複数回の投与で血中グルコースを選択されたレベルにコントロールする量のアミリンアゴニストを含有する単位投与形態として組成物が提供されよう。治療上有効量のアミリンアゴニストは、好ましくは、食後の血中グルコースレベルを高くとも約５ないし６ｍＭにまで低下させ、あるいは血中グルコースレベルを望みどおりに低下させる量である。糖尿病またはグルコース不耐症の個体において、血漿グルコースレベルは正常個体よりも高い。かかる個体において、食後の血中グルコースレベルの有益な低下または「平滑化」を得ることができる。当業者により認識されるように、個々の患者における有効量の決定の際、患者のサイズ、年齢および全身的健康状態、疾病の困難性または重篤性、個々の患者の応答、投与される個々の化合物、投与方法、投与される調合物の生体利用特性、選択される投与規則および共使用される医薬のごとき多くの因子が考慮される。
18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、18Ａｒｇ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ18Ａｒｇ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリン、ｄｅｓ−1Ｌｙｓ25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンおよび25Ｐｒｏ26Ｖａｌ25'28Ｐｒｏ−ｈ−アミリンを包含するアミリンアゴニストの効果的な１日の用量は、典型的には、０.０５μｇ／ｋｇ／日ないし約１０μｇ／ｋｇ／日の範囲、好ましくは約０.０５μｇ／ｋｇ／日ないし約６.０μｇ／ｋｇ／日の範囲、より好ましくは約１.０μｇ／ｋｇ／日ないし約４.０μｇ／ｋｇ／日の範囲であり、１回または何回かに分けて投与される。投与すべき正確な用量は担当医により決定され、個々の化合物が上記範囲の中のどの位置にあるのか、並びに個体の年齢、体重および症状に依存する。徴候の最初の兆候が現れたとき、あるいは糖尿病であるとの診断から間もなく投与を開始すべきである。注射、好ましくは皮下注射または筋肉内注射により投与を行うことができる。また、投与を鼻腔内または経皮的に行うこともできる。経口的に活性のある化合物を経口的に投与できるが、それらの効能および生体利用性に基づいて用量を適宜調節すべきである。
ペプチドアミリンアゴニスト、例えば、25 28 29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンを、１回または複数回、例えば１日２回（ＢＩＤ）、３回（ＴＩＤ）および／または４回（ＱＩＤ）投与することができる。好ましくは、ＢＩＤ用量は約３０μｇを１日２回ないし約１５０μｇを１日２回の範囲、より好ましくは約５０μｇを１日２回ないし約６０μｇを１日２回の範囲である。また、好ましくは、ＴＩＤ用量は約３０μｇを１日３回ないし約１５０μｇを１日３回の範囲、より好ましくは約６０μｇを１日３回である。好ましくは、ＱＩＤ用量は約３０μｇを１日４回ないし約６０μｇを１日４回の範囲、より好ましくは約３０μｇを１日４回である。好ましくは、種々のヒトの臨床試験において有効であることが示されたこれらの用量を皮下注射する。
下記実施例は説明的なものであり、本発明方法を限定するものではない。クレイムされた方法における使用のために修飾または適合されていてもよい他の適当なアミリンアゴニスト化合物も適切であり、本発明の精神および範囲内である。
実施例
一重盲検、プラセボ対照ランダム化ツーピリオドクロスオーバー臨床試行（single-blind,placebo-controlled randomized,two-period crossover clinical trial）を行って、標準化された経口試験食後のＩＩ型糖尿病患者に対するアミリンアゴニスト25'28'29Ｐｒｏ−ｈ−アミリンのマイクロインフュージョン（microinfusion）の効果を評価した。
スクリーニングの必要事項を満たした患者はランダム化され、新環境順応日とその後の２日の処置日（研究２および３日目）からなる調査期間に参加させられた。１４人の男性および１０人の女性患者を試験に登用した。１２人の患者をプラセボ／ＡＣ１３７にランダム化し、１２人の患者をＡＣ１３７／プラセボにランダム化した。各研究薬剤群は６人のインスリン治療患者および６人の非インスリン治療患者を含んでいた。１２人のインスリン治療患者のうち１０人にインスリンのみを与え、２人に経口血糖値低下剤を与えた。１２人の非インスリン治療患者のうち７人を経口血糖値低下剤で治療した。かくして、６人の患者からなる４群を得た。群１および２の患者にはインスリンを与えた。群３および４の患者にはインスリンを与えなかった。群１および３の患者には、研究２日目に１００μｇ／時のＡＣ１３７を５時間輸液して治療し、次いで、１５時間のwash-out時間をおいて、研究３日目に５時間のプラセボ輸液を行った。群２および４の患者には、研究２日目にプラセボを５時間輸液し、次いで、１５時間のwash-out時間をおいて、研究３日目に１００μｇ／時のＡＣ１３７を５時間輸液して治療した。ＡＣ１３７およびプラセボの両方を静脈マイクロフュージョンポンプで投与した。すべての患者は、両治療日において研究薬剤輸液開始６０分後に標準化されたSustacal▲Ｒ▼試験食（７ｋｃａｌ／ｋｇ）を食べた。Sustacal▲Ｒ▼試験食は市販栄養補助食であり、２４％蛋白、２１％脂質および５５％炭水化物からなるカロリー成分で１.０１ｋｃａｌ／ｍｌを含む。大豆蛋白とともにカゼイン酸ナトリウムおよびカゼイン酸カルシウムが蛋白カロリーを提供し、部分的に水素添加された大豆油が脂質カロリーを提供し、蔗糖およびコーンシロップが炭水化物カロリーを提供する。
スクリーニングにやって来ている間に記録された各患者の通常のインスリンおよび／または経口血糖値低下剤ならびにカロリー摂取を２４時間の新環境順応期間（研究１日目）において安定化した。午前８時に朝食を、正午１２時に昼食を、そして午後６時に夕食を患者に与えた。患者の通常のインスリンおよび／または経口血糖値低下剤の用量を、食事３０分前に与えた。患者の通常の治療食に基づいて夜食を与えた。必要に応じて水を与えた。すべての患者は、調査期間中ずっとこのインスリン／経口血糖値低下剤および治療食規則に従った。
Sustacal▲Ｒ▼試験食後１時間ないし５時間までの平均血漿グルコースレベルを表１に示す。
0004009319.tif 000003
プラセボを与えられたインスリン治療患者の場合と比較した場合、ＡＣ１３７を与えられたインスリン治療患者の場合は１時間から５時間までの平均血漿グルコースレベルが統計学的に有意に低かった。ＡＣ１３７を輸液されたインスリン治療患者において２３％のグルコースレベルの平均低下があった。
プラセボ治療患者と比較した場合、ＡＣ１３７輸液された非インスリン治療患者においては平均グルコースレベルに統計学的に有意な相違はなかった。
Sustacal▲Ｒ▼試験食後のインスリン治療および非インスリン治療患者における血漿グルコースに関するゼロ−時間ＡＵＣglucose(1〜5)（血漿グルコース濃度曲線下の面積、ベースラインの血漿グルコース濃度の上または下、試験期間１時間目ないし５時間目の間において台形規則を用いて計算）およびゼロ−時間Ｃmax（最大血漿グルコース濃度）を表２にまとめる。
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Sustacal▲Ｒ▼試験食後のインスリン治療および非インスリン治療患者における血漿グルコースに関するＡＵＣ(1〜5)およびＣmaxを表３にまとめる。
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プラセボを与えられたインスリン治療患者の場合と比較すると、ＡＣ１３７を与えられたインスリン治療患者の場合にはグルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)、ゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxは統計学的に有意に低かった。その効果はゼロ−時間パラメーターに関して最も顕著であった。ＡＣ１３７を与えられたインスリン治療患者の場合、ゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)において９３％の平均低下があり、ゼロ−時間Ｃmaxにおいて６６％の平均低下があった。
非インスリン治療患者において、ＡＣ１３７輸液を用いた場合、グルコースゼロ−時間ＣmaxおよびＣmaxのみが統計学的に有意に低かったが、ゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)の低下は臨床的に有意であると思われる。
インスリン治療患者および非インスリン治療患者からの結果を比較した（ＡＮＯＶＡ）。プラセボ輸液後、インスリン治療患者においてグルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)は、非インスリン治療患者におけるよりも２.３倍高かった（ｐ＝０.０１３）。インスリン治療プラセボ患者におけるグルコースゼロ−時間Ｃmaxは、非インスリン治療プラセボ患者におけるよりも１.８倍高かった（ｐ＝０.０１２）。グルコースＡＵＣ(1〜5)およびＣmaxもインスリン治療プラセボ患者において高かった（それぞれｐ＝０.０２８および０.０２３）。
ＡＣ１３７輸液後においてインスリン治療および非インスリン治療患者からの結果を比較した場合、グルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)、ゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxに関して統計学的に有意な差異はなかった。
患者選択基準はグリコシレーションされたヘモグロビン（ＨｂＡlc）レベルが１３％までのＩＩ型糖尿病患者を包含しており、ＡＣ１３７により誘導された食後高血糖症の減少とエントリーしたＨｂＡlcレベルとの間の相関関係が決定された。プラセボ輸液のゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)からＡＣ１３７輸液のグルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)を差し引くことにより食後の高血糖症の減少を計算した。患者をＨｂＡlcレベルについてランクづけして、結果を図１に示す。
食後の高血糖症の減少は、非インスリン治療患者におけるＨｂＡlcレベルに伴って程度が大となるように思われる。非インスリン治療患者において相関（ｒ2）は０.５６、インスリン治療患者において０.１０、患者全体について０.３３であった。
ＨｂＡlcレベルに対する食後の高血糖症の減少の関係をさらに評価するために、Sustacal▲Ｒ▼試験食後のグルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)、ゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxをＨｂＡlcレベル≧８％および＜８％のインスリン治療および非インスリン治療患者において評価した。
ＨｂＡlcレベル≧８％の患者について、Sustacal▲Ｒ▼試験食後のインスリン治療および非インスリン治療患者における血漿グルコースに関するゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)およびゼロ−時間Ｃmaxを表４にまとめる。
0004009319.tif 000006
ＨｂＡlCレベル≧８％の患者について、Sustacal▲Ｒ▼試験食後のインスリン治療および非インスリン治療患者における血漿グルコースに関するＡＵＣ(1〜5)およびＣmaxを表５にまとめる。
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ＨｂＡlCレベル≧８％のインスリン治療および非インスリン治療双方の患者について、プラセボを与えられた患者の場合と比較すると、ＡＣ１３７を与えられた患者の場合には、グルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)、ゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxが統計学的に有意に低かった。ＨｂＡlCレベル≧８％の非インスリン治療患者に関する差異は統計学的に有意であり、ＨｂＡlCレベルに関係なくすべての非インスリン治療患者についての差異よりも大きかった。
ＨｂＡlCレベル＜８％の患者について、Sustacal▲Ｒ▼試験食後のインスリン治療および非インスリン治療患者における血漿グルコースに関するゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)およびゼロ−時間Ｃmaxを表６にまとめる。
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ＨｂＡlCレベル＜８％の患者について、Sustacal▲Ｒ▼試験食後のインスリン治療および非インスリン治療患者における血漿グルコースに関するＡＵＣ(1〜5)およびＣmaxを表７にまとめる。
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ＨｂＡlcレベル＜８％のインスリン治療患者について、プラセボを与えられた患者の場合と比較すると、ＡＣ１３７を与えられた患者の場合には、グルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)のみ統計学的に有意に低かったが、グルコースゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxに関する差異は臨床的に有益であるかもしれない。ＨｂＡlCレベルとは関係なくすべてのインスリン治療患者について、プラセボを与えられた患者の場合と比較すると、ＡＣ１３７を与えられた患者の場合にはグルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)、ゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxは統計学的に有意に低かった。ＨｂＡlCレベル＜８％の非インスリン治療患者について、プラセボを与えられた患者の場合と比較すると、ＡＣ１３７を与えられた患者の場合にグルコースゼロ−時間ＡＵＣ(1〜5)、ゼロ−時間Ｃmax、ＡＵＣ(1〜5)、およびＣmaxは有意には異ならなかった。
かくして、アミリンアゴニストの投与は、ＩＩ型糖尿病患者がインスリンを投与されない場合でさえも、すなわち、例えば、かかる患者が１次食事療法を経験しなかった場合でさえも、ＩＩ型糖尿病患者、特に正常ＨｂＡｌｃ値以上の値を有するＩＩ型糖尿病患者における血中グルコース濃度を有益に低下させる。
【図１】
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