(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式：
0003880067.tif 000013
［式中、
R1はOCOR3基（ここで、R3は直鎖状もしくは分岐鎖状のC1〜C5アルキル、あるいは芳香族又は部分的もしくは全体的に水素化され、O、N及びSから独立して選択された1以上のヘテロ原子を含む、単一の5又は6員のヘテロ環の残基である）であり、
R2は水素、水酸基、ハロゲン、炭素数1〜4の直鎖状又は可能なとき分岐鎖状のアルキル、炭素数1〜4の直鎖状又は可能なとき分岐鎖状のアルコキシ、炭素数1〜4の直鎖状又は可能なとき分岐鎖状のパーフルオロアルキル、ニトロ、アミノ、炭素数1〜4のアルキルのモノもしくはジアルキルアミノであるか、又は
R1及びR2は一緒になってメチレンジオキシ基であり、
R3は前記のとおりであり、
XはO、NH、NR1c（ここで、R1cは炭素数1〜10の直鎖状又は可能なとき分岐鎖状のアルキルである）、又は
0003880067.tif 000014
（ここで、R2aはH又はCH3であり、m及びnは1〜6の整数である）であり、
X1は、式：
−ＹＯ−
（ここで、Ｙは直鎖状又は可能なとき分岐鎖状のC1〜C20のアルキレン及び任意に置換されていてもよい炭素数5〜7のシクロアルキレンから選択される）、及び式：
0003880067.tif 000015
（ここで、R2a、Yおよびnは前記のとおりであり、rは0又は1である）
から選択される2価の結合橋であり、
nIは0又は1である、
但し、XがNHのとき、Yはエチレンであり、R2はHである；R3がメチルのとき、
R1は2位においてOCOR3とはなり得ない］
である化合物又はその塩。
【請求項２】
-OCOR3が-COX-に対してオルト位にある、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
Rが、
0003880067.tif 000016
（式中、
0003880067.tif 000017
は-CH2-ONO2、-CH2CH2CH2CH2ONO2、-CH2CH2ONO2、-CH2CH2OCH2CH2ONO2又は-CH2CH2OCH2ONO2である）
である請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
請求項１〜３のいずれか一つに記載の化合物及び医薬的に許容な賦形剤を含有する医薬組成物。
【請求項５】
抗炎症剤又は抗血栓剤として用いられる請求項４に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
本発明は、抗炎症、鎮痛性及び抗血栓活性を有する新規化合物に関する。
特に、一般に、アスピリン、つまり、アセチルサリチル酸又はその誘導体の群のシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の阻害剤に関する。
ＮＳＡＩＤ（非ステロイド抗炎症剤）の抗炎症性及び抗血栓性効力は、ＦＡＮＳとしても知られているが、とりわけそれらの認容性は、炎症部位並びに健康な組織におけるシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）のそれらの阻害活性によって著しく影響されるようである。例えば、ＦＡＳＥＢジャーナル  １，８９，１９８７；Ｂｉｏｃｈ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０８３，１，１９９１を参照。一般に、ＣＯＸ阻害が強力になると、より有効であると信じられている。
それら製品の欠点は、それらが有毒であることである。
さらに、ＣＯＸ−阻害特性は、例えば酸性官能のような分子自体の物理化学的及び構造的特徴に結びついたいくつかの因子に依存していることも知られている。Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐ．１９６，２２６，１９７６；Ａｒｃｈ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．６０，２６１，１９８７を参照。
公知のシクロオキシゲナーゼ阻害剤は、一般に、一般構造を思い出させることができる酸であり、
−例えば、アスピリン及びトリフルサールのようなアセチル化、例えばサリチラート、ジフルニサール、サルサラートのような非アセチル化のカルボン酸、
−例えば、ジクロフェナク、インドメタシン、トルメチン、サリンダック、エトドラック、ケトロラックの酢酸、
−例えば、イブプロフェン、ナプロキセン、ピルプロフェン、チアプロフェン酸、ロキソプロフェン、インドプロフェン、オキサプロジン、ケトプロフェン、フェノプロフェン、フェンブフェン、フルビプロフェン、カルプロフェン、スプロフェン等のプロピオン酸を含む。
例えば、上記製品の先行技術を記載している本出願人名の先の特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９５／０１２３３号を、参考文献としてここに導入する。
上述したように、これら製品の欠点は、それらは非常に有効であるが、毒性が高いことである。
酸性官能の重要性は、ＣＯＸ阻害剤におけるこの官能のマスキングが、そのプロスタノイド(prostanoid)−阻害特性の実質的に完全な損失をもたらすという事実にある。Ｄｒｕｇｓ  ３５、５０４、１９８８を参照。
また、シクロオキシゲナーゼの阻害において非常に有効であり、それらの分子中に酸性官能を含んでいない場合でさえ、低い毒性を有する製品も知られている。
これら製品は、非酸性末端を有する硝酸エステルとして知られている。例えば、周知の市販品ジクロフェナクを含む化合物の特定のグループを記載している特許ＷＯ９４／０４４８４号、市販品フルルビプロフェン及びインドプロフェンを含む化合物の他の特定のグループを記載しているＷＯ９４／１２４６３号、市販品ナプロキセン及びケトロラックを含む化合物の他の特有な基を記載しているＰＣＴ／ＥＰ９４／０３１８２号を参照。
本特許出願人名での先の特許出願ＰＣＴ／ＥＰ９５／０１２３３号において、非酸性末端を有する他の硝酸エステルが、以下に明記したように、種々の結合基Ｘ1とともに記載されている。
そこで述べられた新しい結合基は、薬理及び製薬の観点からの、特に薬物動態及び薬力学の観点からの利点を示した。上記特許出願において述べた製品は、リポサッカライド（ＬＰＳ）によって誘発される炎症の阻害効果を発揮することも可能であり、よって、敗血症性ショックに有効である。一般に、抗炎症剤はラットにおいてリポポリサッカライドによって誘発されるニトロシンセターゼの活性を顕著に修飾しないことがよく知られ、よって、それらは敗血症性ショックに有効ではないため、この結果は予測外であった。
本発明によって解決すべき技術的な問題は、アラキドン酸及びトロンビンによって誘発される血小板(piastrine)凝集を阻害する点においてより有効であるＣＯＸの阻害剤に関し、後者は、アラキドン酸や他の凝集刺激物質よりも一層優れた周知の初期の病因性役割を有し、上記製品は、処理された動物における胃腸粘膜の接着を誘発することなく、高い胃許容性を同時に有している。
出願人は、予測外及び意外にも、以下に示すように、低毒性と結びついて改善されたＣＯＸの阻害活性を有する抗炎症剤の特定の群を発見した。
本発明の目的は、薬剤、特に、抗炎症及び抗血栓剤としての使用のための、一般式：
Ａ−Ｘ1−ＮＯ2
の化合物、それらの組成物又はそれらの塩であり、アラキドン酸及び／又はトロンビンによって誘発される血小板凝集の阻害において改善された有効性を有する。
式中、ＡはＲ（ＣＯＸ）t、ここでｔは０又は１；
ＸはＯ、ＮＨ、ＮＲ1c、ここでＲ1cは炭素数１〜１０、好ましくは炭素数１〜４の線状又は分岐のアルキル又は
0003880067.tif 000002
（ｍ及びｎは１〜６の整数、好ましくはｍは１〜３、ｎは２〜４；Ｒ2aはＨ、ＣＨ3）；Ｘ1との結合は、環のいずれの位置でもよく、好ましくは２位；−ＯＣＯＲ3は−ＣＯＸ0−に対して好ましくはオルト位；
Ｘ0はＸ；
Ｒは、
0003880067.tif 000003
［式中、Ｒ1はＯＣＯＲ3基、ここで、Ｒ3はメチル、エチル又は線状又は分岐のＣ3〜Ｃ5アルキル、あるいは芳香族又は部分的あるいは全体的に水素化され、Ｏ、Ｎ及びＳから独立に選択された１以上のヘテロ原子を含む、単一の５又は６員環のヘテロ環の残基であり、
Ｒ2は水素、水酸基、ハロゲン、炭素数１〜４の線状又は可能なとき分岐のアルキル、炭素数１〜４の線状又は可能なとき分岐のアルコキシ、炭素数１〜４の線状又は可能なとき分岐のパーフルオロアルキル、例えばトリフルオロメチル；ニトロ、アミノ、モノ又はジアルキルアミン（アルキルアミンは炭素数１〜４を有する）；
ＸがＮＨ、Ｙがエチレン及びＲ2がＨのとき、Ｒ1及びＲ2は一緒になってジオキシメチレン基；Ｒ3がメチルのとき、Ｒ1は２位においてＯＣＯＲ3にはなり得ない；ｎＩは０又は１である］から選択され、
式Ａ−Ｘ1−ＮＯ2におけるＸ1は、以下から選択される２価の結合橋：
−ＹＯ−
ここでＹは、
−線状又は可能なとき分岐状のＣ1〜Ｃ20のアルキレン、好ましくは炭素数１〜３；
−任意に置換されていてもよい炭素数５〜７のシクロアルキレン；
0003880067.tif 000004
（式中、ｎは１〜６、好ましくは２〜４の整数；Ｒ2aは上記と同義；ｒは０又は１；Ｙは上記と同義、好ましくはＣ1〜Ｃ10、好ましくはＣ2〜Ｃ6）である。
本発明の好ましい物は、ｔが０、Ｘ０が酸素；ＮＯ2を有する基が−ＣＯＸ0に対して２位；ｎＩが０；Ｒ3がＣＨ3である。特に、本発明の好ましい物は、以下である。
0003880067.tif 000005
（式中
0003880067.tif 000006
は−ＣＨ2−ＯＮＯ2、
−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＯＮＯ2、
−ＣＨ2ＣＨ2ＯＮＯ2、
−ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2ＣＨ2ＯＮＯ2、
−ＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ2ＯＮＯ2である。）
本発明の化合物を得るための方法は、例えば、メルクインデックス、１１版、１９８９、１６頁、ｎ．９５又はドイツ特許第２３６．１９６号に記載された方法、あるいは種々の位置に基を導入するための化学者によく知られた方法である。一般式の化合物の修飾は特許ＷＯ９２／０１６６８号に引用された方法を使用することによって得ることができる。
上述された結合基Ｘ1を有する一般式Ａ−Ｘ1−ＮＯ2の本発明の物は、上述した先行技術の方法を用いることにより、又は引用した特許において述べられた結合基に差異がある場合、結合基Ｘ1を導入するために公知の方法を変更することによって得ることができる。
同様のことが、−ＣＯＸ0−基の導入のためにも有効である。
一般に、ＡとＸ1との間の結合は、一般に見られるように、エステル又はアミド型（Ｘにおいて示したように、ＮＨ又はＮＲ1C）である。これら結合を形成するためのすべてのよく知られた合成経路が、この結合を形成するために使用することができる。
エステルの場合、最も直接的な合成経路は、当該分野で実験的な条件においてよく知られた、アシルクロライドＲ−ＣＯ−Ｃｌと、ハロゲンアルコール、例えばＨＯ−Ｙ−Ｃｌ、ＨＯ−Ｙ−Ｂｒ、ＨＯ−Ｙ−Ｉとの反応を含む。
反応生成物は、文献で知られたことに従って、アセトニトリル中でＡｇＮＯ3と反応させることにより最終生成物に変換される。
一般的な経路は、以下のとおりである。
Ｒ−ＣＯ−Ｃｌ＋ＨＯ−Ｙ−Ｂｒ→
Ｒ−ＣＯ−Ｏ−Ｙ−Ｂｒ＋ＡｇＮＯ3→
Ａ−Ｘ1−ＮＯ2
（式中、Ｘ1はＹＯ）
アミドの場合、合成経路は、公知の方法に従って、一般式
Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ−ＯＨ及び
Ｒ−ＣＯ−ＮＨ1C−Ｙ−ＯＨのアミンを得るため、上記アシルクロライドＲＣＯＣｌと一般式ＮＨ2−Ｙ−ＯＨ、ＮＨＲ1C−Ｙ−ＯＨのアミノアルコールとの反応を含む。
上記アミドと、例えば、ＰＣｌ5、ＰＢｒ3、ＳＯＣｌ2等のようなハロゲン化剤との反応は、一般式
Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−Ｙ−Ｂｒ（Ｃｌ）及び
Ｒ−ＣＯ−ＮＲ1C−Ｙ−Ｂｒ（Ｃｌ）のハロゲン誘導体を導く。
公知文献の方法に従うアセトニトリル中でのＡｇＮＯ3との反応による後者の方法は、最終生産物Ａ−Ｘ1−ＮＯ2を導く。
経路は、以下のように概説することができる。
Ｒ−ＣＯ−Ｃｌ＋ＮＨＲ1C−Ｙ−ＯＨ→ＰＢｒ3
Ｒ−ＣＯ−ＮＲ1C−Ｙ−ＯＨ−−−→
Ｒ−ＣＯ−ＮＲ1C−Ｙ−Ｃｌ＋ＡｇＮＯ3→
Ｒ−ＣＯ−ＮＲ1C−Ｙ−ＯＮＯ2
（式中、ＹＯはＸ1）
エステルを形成する別の経路は、酸のナトリウム又はカリウム塩と一般式
ＮＯ2−Ｏ−Ｙ−Ｃｌ（Ｂｒ、Ｉ）
のハロゲンアルコールの硝酸エステルとの反応であり、本発明の物を直接得る。
反応経路は、以下のとおりである。
Ｒ−ＣＯ−ＯＮａ＋Ｂｒ−Ｙ−ＯＮＯ2→
Ｒ−ＣＯ−Ｏ−Ｙ−ＯＮＯ2
（式中、ＹＯはＸ1）
以下の実施例は、実例を説明するためのものとしてのみ与えられるものであり、本発明を限定するものではない。
実施例１：比較−製品の製造
市場で入手可能なアセチルサリチル酸ＡＳＡ、バイエルのアスピリンを用いた。
実施例２：比較−化合物Ａ−Ｘ1−ＮＯ（Ｒはアスピリンの以下の式を有し、Ｘ1は−（ＣＨ2）4Ｏ−である）、ここでＡＮＢＥと称され、一般式：
２−アセトキシ安息香酸（４−ニトロオキシ）ブチルエステル
0003880067.tif 000007
を有する。
式：
２−アセトキシ安息香酸（４−ブロミン）ブチルエステル
0003880067.tif 000008
を有する中間体の製造
窒素流下０℃で保持したアセリルサリチル酸１５．０ｇとジメチルホルムアミド５０ｍｌとの溶液に、何回かに分けて、ＮａＩ２．６ｇ（流動パラフィン中に８０重量％で懸濁）を加える。
混合物を１時間攪拌下で放置し、次いで、２，２’−ジブロモブタン２７．０ｇとジメチルホルムアミド５０ｍｌとの攪拌した溶液に、２５℃にて５時間で滴下した。
混合物を３時間攪拌下で放置し、減圧下で乾燥した。残渣を水５０ｍｌとジクロロメタン５０ｍｌとで処理した。
相を分離し、水相をさらにジクロロメタン１０ｍｌで抽出した。
プールされた有機相を水（３×２５ｍｌ）で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、動物性活性炭（１ｇ）で脱色し、真空下で乾燥した。
残渣（２６．０ｇ）を次の反応の粗生成物として用いた。
ＡＮＢＥの製造
室温に保持し、遮光したＡＳＡ−（ＣＨ2）4Ｂｒ２６．０ｇとアセトニトリル６５ｍｌとの溶液に、硝酸銀２１．０ｇを加えた。
２日間攪拌した後、硝酸銀４．３ｇを加えた。
同じ条件下でさらに２日間後、不溶性塩を濾過し、ろ液から減圧下で溶媒を取り除いた。
１８．０ｇの残渣を得、トルオール／酢酸エチル  ９５／５ｖ／ｖ混合液で溶出するシリカゲルカラム（５００ｇのシリカ）でクロマトグラフィーに付した。
画分をＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）分析のために均一とし、プールし、乾燥し、ＡＮＢＥ１５．０ｇを得た。
1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）（８０ＭＨｚ）分析は、以下のデータを示す。
2.28(3H,s);1.2(4H,m);4.30(2H,t);4.50(2H,t);7.3(3H,m);95(1H,dd)。
ＩＲ分析(Nujol)は以下の結果を与える。
υOCO=1780cm-1;υCOO=1725cm-1;υONO2=1641 e 1287cm-1.
質量分析は、２９７の値の分子量を与えた。
実施例３：−化合物Ａ−Ｘ1−ＮＯ（Ｒは以下の式を有し、Ｘ1は−（ＣＨ2）Ｏである）、ここでＡＮＭＰＥと称され、
式：
２−アセトキシ安息香酸（３−ニトロキシメチル）フェニルエステル
0003880067.tif 000009
を有する。
式：
0003880067.tif 000010
の中間体の製造
１リットルフラスコに、３−ＯＨ−ベンジルアルコール２８．１ｇ（０．２２６モル）、メチレンクロライド８５ｍｌ、ＨＢｒ（水中に４８重量％）１４０ｍｌを加え、室温下で１時間半攪拌下で保持した。
最後に、相を分離し、水相をさらにメチレンクロライド（約５０ｍｌ）で抽出した。
プールされた有機相を蒸留水１００ｍｌ、５％（ｗ／ｖ）のＮａＨＣＯ3の溶液５０ｍｌで２回洗浄した。
次いで、ＭｇＳＯ4で無水化し、乾燥して３４．１３ｇの結晶固体に相当する残渣を得た。
生産物を、溶離液としてトルオール／酢酸エチル  ７／３ｖ／ｖ混合液を用いて、ＴＣＬ分析で確認した。
そのように得られた生産物をすぐに以下の反応に用いた。
攪拌機、サーモメータ、滴下システムを具備した１リットルフラスコに、先の反応残渣３４ｇ、アセトニトリル１００ｍｌを加えた。滴下システムに硝酸銀３８．５ｇ、アセトニトリル６０ｍｌの溶液を満たし、フラスコを遮光し、水浴上で冷却しながら２時間滴下した。
温度は２０〜３０℃に保持した。
約１５時間反応のために放置した。
次いで、濾過し、ろ液を乾燥し、残渣に酢酸エチル、約５００ｍｌを、次いでシリカ（５０ｇ）及び石炭（３ｇ）を加えた。
ろ液を再度乾燥し、上述したクロマトグラフィシステムを用いることにより、トルオールを溶離剤として用いてシリカ約３００ｇにおいてクロマトグラフィーに付した。
生産物１１．７ｇを得（黒油）、ＴＣＬで特性化した。
ＡＮＭＰＥの製造
0003880067.tif 000011
攪拌機、サーモメータ、滴下システムを具備した２５０ｍｌのフラスコに、３−ヒドロキシベンジルニトレート４．９５ｇ、炭酸カリウム７．０ｇ、酢酸エチル５０ｍｌを導入した。
０℃に冷却し、アセチルサリチロイルクロライド５．０１ｇ、酢酸エチル２０ｍｌの溶液を１５分間窒素流下で滴下した。
滴下の終了時に、２０℃で約４時間反応させるために放置した。
反応は、ＴＬＣ（トルオール  酢酸エチル  ９／１ｖ／ｖ）中でおこなった。
終了時に、７０ｍｌの蒸留水を加えた。
相を分離し、水相を再度３０ｍｌの酢酸エチルで抽出し、プールされた有機相を、水酸化ナトリウム（１０ｇ）を含む水（３０ｍｌ）で洗浄した。
有機相を、次いで、硫酸マグネシウムで無水化し、乾燥し、０℃で冷却して固体化した８．９ｇの残渣を得た（黄色油）。イソプロピルエーテルからの結晶化により、ＡＮＭＰＥ６．５ｇを純粋な状態で得た。
1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）（８０ＭＨｚ）分析は、以下のデータを与える。
2.34(3H,s);5.45(2H,s);7.05-7.75(7H,m);8.24(1H,dd)。
実施例４：薬理試験
上記で製造した生成物を薬理学的観点によって特性化した。
インビボ試験（例えば毒性）において、上記で得た生成物をカルボキシメチルセルロース１〜２重量％にて懸濁液の状態で投与した。
インビトロ試験（血小板試験）のために、ニトロ誘導体１ミリモルをジメチルスルホキシドに溶解し、次いで、表に示した濃度に希釈した。
アスピリンＡＳＡ  ３０ミリモルを１：１０の重量割合のエタノール：水の混合液に溶解し、次いで、表に示した濃度に希釈した。
被験物質（ＡＳＡ、ＡＮＢＥ、ＡＮＭＰＥ）を添加しないで得られたサンプルは、いずれの優位な応答も示さなかった。
毒性
急性毒性を、１０匹の小ラットの群に生成物を、単回容量１、３、１０、３０、１００、２００ｍｇ／ｋｇで経口投与して評価した。
致死率及び毒性症状の発現を１４日間にわたって注意した。また、２００ｍｇ／ｋｇの容量の投与後、動物はＡＮＭＰＡ、ＡＮＢＥのいずれでも毒性の発現は示さなかった。
許容性
胃許容性を、ラットにおける経口投与により、ワランス（wallance）ら（Am.J.Physiol.259,G642,1990）によって示された判断基準に従って、誘発される胃疾患の重篤さを測定して評価した。
血小板試験
−抗血小板凝集活性（抗血栓活性）
抗血小板凝集活性を、バーテル（Bertele）ら（Science 220,517,1983）に記載された方法に従って、トロンビン又はアラキドン酸によって刺激されたヒト血小板において、インビトロで評価した。
−ＣＯＸ阻害（抗炎症活性）
シクロオキシゲナーゼの阻害活性を、パトロノ（Patrono）ら（Thrombosisi Res.17,317,1980）に記載された方法に従ってヒト血小板において測定した。酵素的活性をトロンボキサンＢ２（ＴｘＢ２）のレベルとして表し、ｎｇ／ｍｌで測定した。
−血小板接着
血小板接着の阻害活性を、ベラビート（Bellavit e）ら（Ana Biochem.216,444,1994）に記載された方法に従って評価した。
−細胞内血小板カルシウム
血小板内のカルシウム濃度における本発明の化合物又は比較化合物の効果を、ポロック（Pollock）ら（Biochem.j.235,869,1986）の方法に従って評価した。
0003880067.tif 000012
結果
表の結果から、ＡＮＭＰＥ（本発明の化合物）は、ＡＳＡ及びＡＮＢＥに対して、アラキドン酸によって誘発される血小板凝集阻害においてより有効であることが認められる。ＡＮＭＰＥの場合、ＡＮＢＥより高く、ＡＳＡと同等である。
にもかかわらず、アラキドン酸又は他の凝集刺激剤に対してより高い病因性の値が知られているトロンビンによって誘発される血小板凝集においては、ＡＮＭＰＥは、ＡＳＡ及びＡＮＢＥのいずれに対してもかなり高い値を与えた。
ＣＯＸ阻害特性について、本発明の生産物ＡＮＭＰＥはＡＳＡと同様の活性を示したが、ＡＮＢＥよりかなり高かった。
これは、非常に意外である。もし、我々が、ＡＮＭＰＥ並びにＡＮＢＥ、しかしＡＳＡとは異なって、胃粘膜において非常に耐性がある。
−現実に、胃の許容性試験は、５０〜１００ｍｇ／ｋｇの容量でＡＳＡは処置動物の胃内粘膜に重篤なダメージを誘発したことをすでに示している。
一方、ＡＮＭＰＥ及びＡＮＢＥは、２５０〜５００ｍｇ／ｋｇの容量で投与した場合、関連したダメージを誘発しない。
−他の血小板試験に関して、
血小板接着及び細胞内血小板カルシウムは、ＡＮＭＰＥにおいてのみ優位な阻害に及び病的な経過の双方に容量依存的に（１０-5〜１０-4Ｍ）有効であった。
一方、試験下では他の化合物でいずれの阻害効果も見ることができなかった。