(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラフィノースを有効成分として含有すること、を特徴とするアレルギー体質改善剤（アトピー性皮膚炎を除く）。
【請求項２】
ラフィノースを有効成分として含有すること、を特徴とするＩｇＥ抗体産生低減剤（ＩｇＥ抗体が関与するアレルギーからアトピー性皮膚炎を除く）。
【請求項３】
請求項１の体質改善がＩＦＮ−γ及び／又はＩＬ−１２の産生増強によるものであることを特徴とする請求項１のアレルギー体質改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、アレルギーの予防及び治療に有効な、ＩｇＥ抗体産生低減剤並びにアレルギー体質改善剤に関するものであり、詳細には、ラフィノースを有効成分とするＩｇＥ抗体産生低減剤、ＩｇＥ抗体産生低減性食品組成物、アレルギー体質改着剤、アレルギー体質改善性食品組生物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
アレルギーとは、本来、外敵（異物）を攻撃し、自己の防衛機能として働く免疫系が異常に過敏状態に陥り、自身の組織を攻撃することにより起こる疾患である。アレルギーの例には、アナフィラキシー、気管支喘息、アレルギー性鼻炎、じんま疹、薬物アレルギー、食物アレルギー、花粉症などの病態がある。このようなアレルギー病態の発症には、イムノグロブリンＥ（ＩｇＥ）と呼ばれる抗体が中心的役割を担っている。
【０００３】
ＩｇＥ抗体が関与するアレルギーの発症機序は以下のように考えられている。すなわち、卵、牛乳、大豆などの食物抗原やダニ、花粉などの吸入坑原など各種外来抗原が体内に侵入し、これ抗原提示細胞が取り込み、ＣＤ４＋Ｔ（ヘルパーＴ）細胞に対して抗原提示する。抗原提示細胞によって提示された抗原を認識したヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞と相互作用し、Ｂ細胞を抗体産生細胞へ分化増殖させる。
【０００４】
ヘルパーＴ細胞は、その産生するサイトカインの種類によって、主に細胞性免疫を誘導するＩ型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１細胞）と液性免疫を誘導するII型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２細胞）の２種類に分類される（Mosmann, T.R. et al.: J.Immunol., 136, 2348〜2357, 1986）。Ｔｈ１細胞の産生するサイトカインは、インターロイキン２（ＩＬ−２）、インターフェロンγ（ＩＦＮ−γ）、ＴＧＦ−βであり、Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３を産生する。抗原未感作なナイーブＴ細胞は、抗原提示細胞とＩＬ−１２を作用させるとＴｈ１細胞に、抗原提示細胞とＩＬ−４を作用させるとＴｈ２細胞に分化することが知られている。
【０００５】
アレルギー反応に関わるＴｈ２細胞の相互作用を受けたＢ細胞は、抗体産生細胞に成熟・増殖し、ＩｇＭ抗体次いでＩｇＧ１抗体を産生し、最終的にＩｇＥ抗体を産生するようになる。一方、Ｔｈ１細胞の相互作用を受けたＢ細胞は、ＩｇＭ抗体、ＩｇＧ２a抗体、ＩｇＧ２b抗体、ＩｇＧ３抗体を産生する抗体産生細胞へ成熟・増殖するが、Ｔh１細胞の最も重要な働きは、その産生するＩＦＮ−γの作用によってマクロファージを活性化し、細胞性免疫を誘導することにある。産生されたＩｇＥ抗体は肥満細胞（マスト細胞）の表面に結合し、特異抗原がこのＩｇＥ抗体に結合すると、肥満細胞が活性化し、ヒスタミンなどの炎症性物質が放出され、アレルギー症状が誘発する。さらに肥満細胞から放出された走化性因子は、炎症作用を有する好酸球を誘引し、炎症が増幅するほか、同様に肥満細胞が産生したインターロイキン４（ＩＬ−４）やＩＬ−１３はＢ細胞によるＩｇＥ抗体産生をさら促進する。
【０００６】
Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞は互いの働きを抑制しあう側面があり、例えはＴｈ１細胞が産生するＩＦＮ−γは、ＩｇＥ抗体の産生を抑制することが知られている。健康な状態ではＴｈ１／Ｔｈ２細胞のバランスが保たれ、侵入した抗原に対してＩｇＥ抗体は産生されないが、アレルギー患者では、Ｔｈ１/Ｔｈ２細胞のバランスが乱れ、侵入した抗原に対して、Ｔｈ１細胞よりもＴｈ２細胞が優位に応答する状態にあり、ＩｇＥ抗体が関与するアレルギーが誘発されやすい体質になっていると考えられている。
【０００７】
アレルギーの治療には、薬物療法として抗ヒスタミン薬や、ステロイド剤、抗アレルギー剤などが用いられる。また抗原の侵入自体を抑制するために、原因食物の摂取を制限する食事療法や吸引抗原に対しては、マスクの着用などの対策がある。しかしなながら、安全に満足すべき対策は、予防及び治療のいずれの面においても、未だ開発されていないのが技術の現状である。
【０００８】
一方、オリゴ糖は２〜１０個の単糖類が結合した糖であり、消化吸収されずに消化管下部に到達し、そこに生息するビフィズス菌を増殖させ、腸の働きを助ける性質がある。最近では乳酸菌飲料、清涼飲料水、缶コーヒーなどに使用されている。ラフィノースはビフィズス菌・乳酸桿菌に資化される３種類のオリゴ糖で、ビートをはじめ植物界に広く分布し、白色で針状の結晶形態をしている。ラフィノースは、ビフィズス菌の増殖を誘導し、有害菌である大腸菌やウェルシュ菌などの増殖を抑制し、腸内菌叢を改善することが知られている。
【０００９】
しかしながら、抗原に対する免疫応答において、ラフィノースがＩｇＥ抗体の産生を低減することや、Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞バランスの乱れを是正し、それらよりアレルギーを改善または予防することは従来知られていなかった。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
近年、アレルギー患者が増加する傾向にあり、日本人の約３割がアレルギー罹患しているとされており、その対策が強く求められている。しかしながら、前述の薬物療法は、何れも対処療法であり、根本的なアレルギー体質を改善するものではなく、また薬物ゆえに少なからず副作用がある。また食事療法などの対策は患者やその家族に相当な負担をかける。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するために各方面から検討した結果、アレルギー疾患の原因が、食習慣、住環境及び自然環境等環境の変化、ストレスの増加、大気汚染物質の増加、感染症罹患率の低下など多種多様に亘っており、原因を確定するまでに至っていない点に鑑み、生体内のアレルギー発症因子を低減させるだけではなく、アレルギー体質を根本から改善させる必要性を痛感するに至った。
【００１２】
そこで本発明者らは、アレルギー発症において、中心的働きを担うＩｇＥ抗体に着目し、ＩｇＥ抗体を低減させることを目的として、ＩｇＥ抗体低減剤の有効成分について鋭意スクリーニングを行った。その結果、数多くの天然物の内、オリゴ糖、特にラフィノースが経口投与によりＩｇＥ抗体の産生を低下させるという有用な新知見を得た。
【００１３】
そして更に、アレルギー体質の改善という面からラフィノースによるＩｇＥ抗体の低減について、広く研究を行った結果、ラフィノースがＩＬ−１２及びＩＦＮ−γの産生を高めること、をもはじめて発見した。つまり、ラフィノースの経口投与により、マクロファージや樹状細胞など抗原提示細胞のＩＬ−１２産生が増加すること、さらにこのＩＬ−１２が作用してナイーブヘルパーＴ細胞のＴｈ１細胞への分化を誘導し、Ｔｈ１細胞のＩＦＮ−γ産生を高めることが確認された。また、このＩＦＮ−γの作用によりマクロファージが活性化して、ＩＬ−１２の産生がさらに高まることも確認された。ＩＦＮ−γはＴｈ２細胞の作用によるＢ細胞のＩｇＥ抗体産生を抑制する働きがある。
【００１４】
つまり、ラフィノースはアレルギーの発症における重要因子であるＩｇＥ抗体産生を低減するだけではなく、Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞バランスにおいて、抗原に対してＴｈ２細胞の応答が優位な状態にあるアレルギー体質を是正し、Ｔｈ１細胞の応答を優勢に誘導できるという新規にしてきわめて有用な知見を得た。
【００１５】
本発明は、上記した有用新知見に基づき、更なる研究の結果、完成されたものであって、ラフィノースを有効成分とするＩｇＥ産生低減剤およびＴｈ１／Ｔｈ２細胞バランスの是正によるアレルギー体質の改善をその基本的技術思想とするものであって、本発明によれば、安全性が高く、ＩｇＥ抗体産生を低減でき、さらにアレルギー体質の改善もできる、経口投与も可能な予防剤及び／又は治療剤、及び食品組成物を提供することである。
【００１６】
本発明に係わるＩｇＥ抗体産生低減剤並びにアレルギー体質改善剤は、ラフィノースを有効成分としてこれに常用される無機又は有機の担体ないし医薬用賦形剤を加えて、常法に従い、固体、半固体又は液体の形で、経口投与剤のほか、経腸剤その他外用剤等の非経口投与剤に製剤化する。
経口投与剤の場合、その投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ割、うがい薬等が挙げられる。これらの各種製剤は、主薬に賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの医薬の製剤技術分野において通常使用しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。また、食品とする場合は、ジュースなどと混合して液状組成物とすることや、ビスケットなどに混入して固状組成物とすることもできる。
【００１７】
その使用量は、症状、年令、体重、投与方法および剤形等によって異なるが、通常、成人１日当たり０．５〜２０ｇ、好ましくは３〜１０ｇを経口投与することができる。
本発明に係わる有効成分は、天然起源でありしかも食品として使用されているものを起源とするため、毒性については格別の問題もなく、ラットに対して１日当たり6,000ｍｇ/（Ｋｇ体重）の量を経口投与しても急性毒性は全く認められなかった。従って、必要あれば上記範囲より多量に使用してもさしつかえないが、ラフィノースは難消化性糖類であるため、１日１０ｇ以上投与した場合、人によっては浸透圧性の下痢を伴うこともある。
【００１８】
そして有効成分についても、精製されたラフィノースを使用するのが最適ではあるが、例えば所望するのであれば、一部の経口投与剤や食品の場合においては、甜菜糖の製造工程で副生するシロップの加工品といった精製度は多少低下したものや、大豆ホエーから製造されるラフィノースを含むオリゴ糖混合物なども使用することが可能である。
以下、本発明の実施例について述べる。
【００１９】
【実施例１】
動物試験において、卵白アルブミン（ＯＶＡ）投与によって誘導される血中抗体価に対する、ラフィノースの経口投与の影響を調査した。試験動物には、ＯＶＡを特異的に認識するＴ細胞レセプター遺伝子（ＯＶＡ323-339特異的Ｉ−Ａd拘束性Ｔ細胞クローン７−３−７のＴＣＲα鎖、β鎖両遺伝子）が導入され、遺伝的背景がＢＡＬＢ／ｃマウスとほぼ同一であるトランスジェニックマウス（以下Ｔｇマウス）を用いた。
【００２０】
（１）方法  ６週令のＴｇマウス２２匹を２群（１群１１匹に付き雄５雌６）に分け、コントロール群には基本飼料（カゼイン２０％、コーンスターチ４８．１７％、α−スターチ９％、スクロース５％、セルロース５％、大豆油６％、ミネラルミクスチャー５％、ビタミンミクスチャー１．３％、塩化コリン０．２３％、メチオニン０．３％）を、ラフィノース群には、ラフィノース添加飼料（基本飼料の内、コーンスターチを４３．１７％に変更し、ラフィノース５％添加したもの）を給餌した。２週間後、飲水を水道水から２％ＯＶＡ添加水溶液に切り換え、８週目まで継続した。試験開始８週目以降は飲水を水道水とし、１２週目よりそれぞれの試験飼料の８％カゼイン分をＯＶＡに置き換えたものを給餌した。試験期間中、経時的に尾静脈より採血し、血清中の総ＩｇＥ抗体濃度、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体価、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１抗体側をＥＬＩＳＡ法で測定した。
【００２１】
（２）結果  図１、２、３に示すように１２週目以降において、血清中の総ＩｇＥ抗体濃度、ＯＶＡ特異的ＩｇＥ抗体価、ＯＶＡ特異的ＩｇＧ１抗体価が顕著に上昇したが、ラフィノース群ではコントロール群よりいすれの分析項目も低値に推移した。よってラフィノースはアレルギー発症の中心的役割を担う抗原特異的なＩｇＥ抗体の産生を抑制することが明らかとなった。ＩｇＧ１抗体は、Ｔｈ２細胞の作用を受けて分化増殖した抗体産生細胞がＩｇＥ抗体とともに産生する抗体である。ラフィノース群では、ＯＶＡ特異的なＩｇＧ１抗体並びにＩｇＥ抗体が低下していたことから、ラフィノースを投与したＴｇマウスでは、ＯＶＡ特異的なＩｇＥ抗体産生性の抗体産生細胞の細胞数あるいは抗体産生能が低下していると考えられる。
【００２２】
【実施例２】
マウス試験において、ラフィノースの経口投与が、卵白アルブミンによって誘導される免疫反応にどのような影響を及ぼすか、マウス免疫細胞が産生するＩＬ−１２およびＩＦＮ−γを調査した。ＩＬ−１２はマクロファージや樹状細胞などの抗原提示細胞が分泌し、抗原に感作されていないナイーブヘルパーＴ細胞をＴｈ１細胞に分化させる働きがある。さらに、Ｔｈ１細胞が産生するＩＦＮ−γは、マクロファージを活性化し、またＴｈ２細胞の働きを抑制して、ＩｇＥの産生を抑制することが知られている。
【００２３】
（１）方法  ６週令雌のＢＡＬＢ／ｃマウス１０匹を２群に分け、コントロール群には基本飼料（実施例１参照）、ラフィノース群にはラフィノース添加飼料（実施例１参照）をそれぞれ給餌した。
【００２４】
２週間飼育後、屠殺し、各マウスから小陽のバイエル板組織を摘出した。バイエル板は１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ培地（ニッスイ製薬）にコラゲナーゼ（Ｓｉｇｍａ）を１ｍｇ／ｍｌ濃度で添加した溶液と約１時間撹拌反応させ、バイエル板細胞の単細胞浮遊液を調製し、数回１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ培地で洗浄したものを抗原提示細胞とした。
【００２５】
また、基本飼料で飼育された１０週令雌のＴｇマウス（実施例１参照）２匹を同様に屠殺し、脾臓を摘出した。脾臓は１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ培地中ですりつぶし、２匹分を合わせ、数回洗浄し、単細胞浮遊液を調製した。この脾臓単細胞浮遊液からＣＤ４分子を表出しているヘルパーＴ細胞を磁気細胞分離システム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ｂｉｏｔｅｃ）を用いて分画し、これをヘルパーＴ細胞とした。得られたヘルパーＴ細胞は抗原未感作なナイーブＴ細胞である。
【００２６】
４８穴細胞培養プレートの各穴に抗原提示細胞、ヘルパーＴ細胞、抗原（ＯＶＡ）を表１のように添加し、５％ＣＯ2、３７℃環境下で４８時間培養した。培養終了後、培養上清を採取し、ＥＬＩＳＡ法を用いてサイトカイン濃度を測定した。
【００２７】
0004024454.tif 000002
各穴に各細胞、抗原を添加し、総量を１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩで１ｍｌとした。
「○」は添加、「−」は未添加を示す。
【００２８】
（２）結果  図４に示すようにコントロール群よりラフィノース群の方が、試験区Ａ、Ｂ、ＣのＩＬ−１２の濃度が有意に高かった。試験区Ｃにおいて、ラフィノース群のＩＬ−１２濃度が有意に高かったことから、ラフィノースの投与により、抗原提示細胞のＩＬ−１２の産生が高まることが明らかとなった。
また図５に示すように、ＩＦＮ−γ濃度も試験区Ａにおいて、ラフィノース群で有意に高かった。このＩＦＮ−γは、抗原提示細胞の産生したＩＬ−１２の作用により、提示されたＯＶＡ抗原に対してナイーブＴ細胞がＴｈ１細胞に分化増殖し、このＴｈ１細胞が産生するＩＦＮ−γを反映している。つまり、ラフイノース群では、抗原提示細胞のＩＬ−１２の産生が高まり、このＩＬ−１２の作用によりＴｈ１細胞が優位に分化増殖し、ＩＦＮ−γの産生が高まったことを示している。
【００２９】
また図４中の試験区ＡのＩＬ−１２濃度が、試験区Ｂ及びＣより高いことは、Ｔｈ１細胞が産生するＩＦＮ−γが抗原提示細胞であるマクロファージを活性化し、よってマクロファージのＩＬ−１２産生が高まっていることを示している。
【００３０】
つまり、経口投与されたラフィノースは、抗原提示細胞の１Ｌ−Ｉ２産生を高め、従って、卵白アルブミン抗原に対してＴｈ２細胞よりもＴｈ１細胞の分化増殖を支持し、ＩｇＥの産生を抑制するＩＦＮ−γの産生を有意に高めることが明らかとなった。
【００３１】
アレルギー患者では、Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞バランスがＴｈ２細胞優位になっており、ＩｇＥが関与するアレルギーが誘発されやすい体質になっていると考えられているが、ラフィノースの投与はＴｈ１細胞の分化増殖を支持し、Ｔｈ１／Ｔｈ２細胞バランスを是正し、アレルギー体質の改善に有効であることが明らかとなつた。
【００３２】
【実施例３】
結晶グルコース４００重量部、ラフィノース１０重量部、クエン酸７重量部、Ｎａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ７重量部、アスコルビン酸５重量部、硬化油３重量部を用い、常法にしたがってＩｇＥ抗体産生低減用錠薬を製造した。
【００３３】
【実施例４】
ラフィノース５０重量部、精製炭酸カルシウム２０重量部、ラクトース１７８重量部、ステアリン酸マグネシウム２重量部を用い、これらの混合物を２５０ｍｇずつ１号カプセルに充填し、１カプセル内に５０ｍｇのラフィノースを含有するアレルギー体質改善用カプセル剤を製造した。
【００３４】
【発明の効果】
本発明によれば、ラフイノースを用いることにより、すぐれたＩｇＥ抗体産生低減効果、アレルギー体質改善効果が奏され、アレルギー性疾患の予防または治療が有効に行われる。また本発明に係わる組成物は、特に安全性が高いので、乳幼児にも安心して投与するこができ、しかも長期間の投与も可能であるので、アレルギー性疾患の予防を目的として保健用医薬品又は食品組成物として長期間利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＯＶＡを投与したＴｇマウスにおける血清中の総ＩｇＥの変化を示す。
【図２】ＯＶＡを投与したＴｇマウスにおける血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＥの変化を示す。
【図３】ＯＶＡを投与したＴｇマウスにおける血清中のＯＶＡ特異的ＩｇＧ１の変化を示す。
【図４】ＩＬ−１２産生の比較を示す。但し、＊は群間に５％水準で有意差有りを示す。
【図５】ＩＦＮ−γ産生の比較を示す。但し、＊は群間に５％水準で有意差有りを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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