(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
生理活性を有するポリペプチドをコードするDNAを同定する方法であって、下記（ａ）から（ｄ）の工程を含む方法。
（ａ）少なくとも２種のポリペプチドをコードするDNAを非ヒト哺乳動物の静脈から非ヒト哺乳動物に導入し、該非ヒト哺乳動物体内で発現させる工程
（ｂ）該非ヒト哺乳動物における生理的変化を検出する工程
（ｃ）工程（ｂ）において生理的変化が検出された場合に、工程（ａ）において用いたDNAを分画し、分画されたそれぞれのDNAにつき、工程（ｂ）と同様にして、該非ヒト哺乳動物における該生理的変化を検出する工程
（ｄ）該非ヒト哺乳動物に該生理的変化をもたらす分画されたDNAを同定する工程
【請求項２】
さらに、（ｅ）該非ヒト哺乳動物に該生理的変化をもたらす単一のDNAが同定されるまで、（i）DNAの分画、（ii）分画されたそれぞれのDNAにつき該非ヒト哺乳動物における該生理的変化の検出、および（iii）該非ヒト哺乳動物に該生理的変化をもたらす分画されたDNAの同定、を繰り返す工程、を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
静脈が尾静脈である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
非ヒト哺乳動物がげっ歯類動物である、請求項１から３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
工程（ａ）において、少なくとも10種のポリペプチドをコードするDNAを非ヒト哺乳動物に導入する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項６】
工程（ａ）において、少なくとも100種のポリペプチドをコードするDNAを非ヒト哺乳動物に導入する、請求項１または２に記載の方法。
【請求項７】
工程（ａ）において、少なくとも1000種のポリペプチドをコードするDNAを非ヒト哺乳動物に導入する、請求項1または2記載の方法。
【請求項８】
DNAが動物細胞、動物組織、または動物細胞株由来である、請求項1または2に記載の方法。
【請求項９】
DNAが癌細胞、癌組織、または癌細胞株由来である、請求項1または2に記載の方法。
【請求項１０】
非ヒト哺乳動物に対する一回のDNAの総導入量が100μｇ以下である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
非ヒト哺乳動物に対する一回のDNAの総導入量が10μｇ以下である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１２】
請求項１または２に記載の方法に用いるためのキットであって、ポリペプチドをコードするDNAを非ヒト哺乳動物体内で発現させるためのベクターを含むキット。
【請求項１３】
ベクターが、挿入されたDNAを非ヒト哺乳動物で発現させるためにサイトメガロウイルスのエンハンサーおよびニワトリβアクチンプロモーターを含む、請求項１２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、生理活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物体内で同定する方法および該同定に用いるためのキットに関する。
背景技術
従来、組織や細胞から生理活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを同定するためには、タンパク質の精製という方法が必須であった。また、逆にバイオインフォマティックスによって遺伝子の塩基配列を予想し、実際の機能をノックアウトマウスやトランスジェニックマウスを作製し解析することによって明らかにする方法も考えられる。
しかしながら、例えば、生理活性物質を産生するヒト腫瘍細胞などの一部は、試験管内や免疫不全動物（例えば、ヌードマウスやＳＣＩＤマウスなど）で増殖させることができなかったり、あるいは培養途中で細胞の性質が変化して生理活性物質を産生しなくなる場合もあり、そうした場合には従来の方法では生理活性物質の同定ができなかった。
また、多数の遺伝子プールの中から生理活性を持つものを同定する場合、それぞれの遺伝子に対してノックアウト動物やトランスジェニック動物を作成して、生理活性を検出するのは多大な労力と時間を要し、現実的ではない。
発明の開示
本発明は、このような状況に鑑みてなされたものであり、その目的は、複数種のＤＮＡのプールから、生理活性を有するＤＮＡを効率的に同定する方法および該同定に用いるためのキットを提供することにある。
本発明者らは、上記課題を解決すべく、哺乳動物体内を利用して、複数種のＤＮＡプールの中から特定の生理活性を有するＤＮＡを同定することが可能であるか否かの検討を行った。
具体的には、サイトメガロウイルスのエンハンサーおよびニワトリのβアクチンプロモーターを有し、哺乳動物細胞で挿入遺伝子を強発現させることができるベクターに、ＥＰＯ遺伝子およびＩＬ−６遺伝子をそれぞれ組み込み、これにより構築されたベクターを空のベクターと伴にマウスの尾静脈より導入し、該マウスにおける、ＥＰＯおよびＩＬ−６の効果の検討を行った。
その結果、驚くべきことに、該マウス体内で、ＥＰＯおよびＩＬ−６の作用が互いに干渉しあうことなく、それぞれの作用が独立に検出された。このＥＰＯおよびＩＬ−６の作用は、ベクターのプール中に、ＥＰＯ遺伝子発現ベクターあるいはＩＬ−６遺伝子発現ベクターに対し、１０００倍量の空のベクターが存在する場合でも認められた。
即ち、本発明者らは、多種多量のＤＮＡプールが導入された哺乳動物体内において、特定のＤＮＡの生理作用を独立に検出することが可能であることを見出した。この知見は、哺乳動物体内での特定の生理作用を指標に、多種多量のＤＮＡプールを順次分画していくことにより、特定の生理作用を有するＤＮＡを同定することが可能であることを意味する。このようなスクリーニングは、哺乳動物体内を利用するため、試験管内や免疫不全動物で増殖させることができない細胞や培養途中で性質が変化してしまう細胞が産生する生理活性物質であっても、同定することができるという利点を有する。また、従来のトランスジェニックやノックアウトを利用したスクリーニングのような多大な労力や時間を要しないという点も、このスクリーニングのさらなる利点である。
本発明は、哺乳動物体内（ｉｎ  ｖｉｖｏ）において、生理活性を有するＤＮＡを効率的に同定する方法および該同定に用いるためのキットに関し、より詳しくは、
（１）  生理活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを同定する方法であって、下記（ａ）から（ｄ）の工程を含む方法、
（ａ）少なくとも２種のポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入し、該哺乳動物体内で発現させる工程
（ｂ）該哺乳動物における生理的変化を検出する工程
（ｃ）工程（ｂ）において生理的変化が検出された場合に、工程（ａ）において用いたＤＮＡを分画し、分画されたそれぞれのＤＮＡにつき、工程（ｂ）と同様にして、該哺乳動物における該生理的変化を検出する工程
（ｄ）該哺乳動物に該生理的変化をもたらす分画されたＤＮＡを同定する工程
（２）  さらに、（ｅ）該哺乳動物に該生理的変化をもたらす単一のＤＮＡが同定されるまで、（ｉ）ＤＮＡの分画、（ｉｉ）分画されたそれぞれのＤＮＡにつき該哺乳動物における該生理的変化の検出、および（ｉｉｉ）該哺乳動物に該生理的変化をもたらす分画されたＤＮＡの同定、を繰り返す工程、を含む、（１）に記載の方法、
（３）  ＤＮＡが哺乳動物の静脈から導入される、（１）または（２）に記載の方法、
（４）  静脈が尾静脈である、（３）に記載の方法、
（５）  哺乳動物がげっ歯類動物である、（１）から（４）のいずれかに記載の方法、
（６）  工程（ａ）において、少なくとも１０種のポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入する、（１）または（２）に記載の方法、
（７）  工程（ａ）において、少なくとも１００種のポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入する、（１）または（２）に記載の方法、
（８）  工程（ａ）において、少なくとも１０００種のポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入する、（１）または（２）記載の方法、
（９）  ＤＮＡが動物細胞、動物組織、または動物細胞株由来である、（１）または（２）に記載の方法、
（１０）  ＤＮＡが癌細胞、癌組織、または癌細胞株由来である、（１）または（２）に記載の方法、
（１１）  哺乳動物に対する一回のＤＮＡの総導入量が１００μｇ以下である、（１）または（２）に記載の方法、
（１２）  哺乳動物に対する一回のＤＮＡの総導入量が１０μｇ以下である、（１）または（２）に記載の方法、
（１３）  複数の抗原ポリペプチドに対する抗体を同時に作製する方法であって、下記（ａ）から（ｃ）の工程を含む方法、
（ａ）少なくとも２種の抗原ポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入し、該哺乳動物体内で発現させ、該抗原ポリペプチドに対して免疫させる工程
（ｂ）該抗原ポリペプチドに対する抗体を選抜する工程
（ｃ）選抜された抗体のハイブリドーマを作製する工程
（１４）  該哺乳動物を免疫するために、それぞれのＤＮＡを繰り返し該哺乳動物に導入する工程を含む、（１３）に記載の方法、
（１５）  抗原ポリペプチドが同じ動物細胞、動物組織、または動物細胞株由来の抗原ポリペプチドである、（１２）または（１３）に記載の方法、
（１６）  抗原ポリペプチドが同じ癌細胞、癌組織、または癌細胞株由来の抗原ポリペプチドである、（１２）または（１３）に記載の方法、
（１７）  （１）または（２）に記載の方法に用いるためのキットであって、ポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物体内で発現させるためのベクターを含むキット、
（１８）  ベクターが、挿入されたＤＮＡを哺乳動物で発現させるためにサイトメガロウイルスのエンハンサーおよびニワトリβアクチンプロモーターを含む、
（８）に記載のキット、
を提供するものである。
本発明は、生理活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物体内で同定する方法を提供する。
本発明の方法においては、まず、少なくとも２種のポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入し、該哺乳動物体内で発現させる（工程（ａ））。
本発明において哺乳動物に導入するためのＤＮＡとしては、特に制限はなく、生理活性を同定することを望む任意のポリペプチドをコードするＤＮＡを用いることができる。例えば、動物細胞、動物組織、または動物細胞株由来のＤＮＡを好適に用いることができる。具体的には、例えば、血液疾患や自己免疫疾患に関連するＤＮＡを同定する場合には、Ｔ細胞、血液細胞、または血液幹細胞由来のＤＮＡを用い、また、癌の形成に関与するＤＮＡを同定する場合には、癌細胞、癌組織、または癌細胞株由来のＤＮＡを用いるなど、実験の目的に応じて任意のＤＮＡを用いればよい。
本発明者らにより、異なる生理活性を有するポリペプチドをコードする複数種のＤＮＡが哺乳動物体内で同時に発現した場合でも、それぞれの生理活性を独立に検出することができることが明らかとなった。従って、本発明においては、少なくとも２種のポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入することを特徴としている。哺乳動物には、１０種以上（例えば、１００種以上、１０００種以上）のポリペプチドをコードするＤＮＡを導入することができる。
哺乳動物へのＤＮＡの一回投与量は、該ＤＮＡの発現産物の生理活性を検出しうる限り、特に制限はないが、好ましくは１００μｇ以下である。本発明においては、哺乳動物に導入する全ＤＮＡ量が１０μｇであっても、発現したポリペプチドの生理活性を検出することができたため、１０μｇ以下のＤＮＡの投与も可能である。ＤＮＡの哺乳動物への投与は、必要に応じて、複数回行うことができる。
哺乳動物へ導入されるＤＮＡは、通常、哺乳動物細胞用発現ベクターに挿入されている。哺乳動物細胞用発現ベクターとしては、哺乳動物細胞において挿入されたＤＮＡの発現を保証するものであれば特に制限はない。例えば、ニワトリβアクチンプロモーターを使用するベクター（例えば、ｐＣＡＧＧＳ；Ｎｉｗａ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ１０８：１９３−２００（１９９１））、ＣＭＶプロモーターを使用するベクター（例えば、ｐＣＭＶ−Ｓｃｒｉｐｔ；ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ）、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＥＦ−１αプロモーターを使用するベクター（例えば、ｐＥＦ１／Ｈｉｓ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＳＲαプロモーターを使用するベクター（例えば、ｐＭＥ１８ＳＦＬ３；Ｍａｒｕｙａｍａ  Ｋ  ＆  Ｓｕｇａｎｏ  Ｓ．Ｇｅｎｅ  １３８，１７１（１９９４））を用いることができる。サイトメガロウイルスのエンハンサーおよびニワトリβアクチンプロモーターを含むｐＣＡＧＧＳは、本発明において特に好適に用いることができる。哺乳動物細胞用発現ベクターを哺乳動物に導入する際に、該ベクターをポリマー、リポソーム、あるいはＰＥＩ（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ）などと混合させることにより、ＤＮＡの発現効率を向上させることも可能である。また、哺乳動物細胞用発現ベクターに代えて、例えば、既知のレトロウイルスベクターやアデノウイルスベクターに代表するウイルスベクターを利用することも可能である。
本発明の方法に用いる哺乳動物としては、特に制限はなく、例えば、ラットやマウスなどのげっ歯類を好適に用いることができる。哺乳動物へのＤＮＡの導入は、例えば、静脈投与、筋肉内投与、経口投与、皮下若しくは皮内投与、経鼻投与、肝臓若しくは心臓への直接的な臓器投与など、種々の方法が利用可能である。マウスやラットなどのげっ歯類を用いる場合には、尾静脈投与が好適である。投与の際にＧｅｎｅ  Ｇｕｎ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ社）を用いたり、電気的な刺激をかけることによって、発現効率が向上させ得る。
本発明の方法においては、次いで、該哺乳動物における生理的変化を検出する（工程（ｂ））。
検出すべき生理的変化としては制限はないが、例えば、血液細胞の変化（例えば、赤血球数、白血球数、血小板数などの変化）、血液の生化学値の変化（例えば、ＧＯＴやＧＴＰの数値、グルコース、カルシウム、リンなどの量の変化）、尿中の尿素量の変化などを例示することができる。目的の生理的変化は、予め実験者らにより設定されていてもよい。また、哺乳動物へのＤＮＡの導入後に、興味ある生理的変化を見出してもよい。
本発明の方法においては、次いで、工程（ｂ）において生理的変化が検出された場合に、工程（ａ）において用いたＤＮＡを分画し、分画されたそれぞれのＤＮＡにつき該哺乳動物における該生理的変化を検出する（工程（ｃ））。
本工程は、例えば、以下のようにして行うことができる。哺乳動物体内へ導入するＤＮＡのライブラリーが大腸菌を宿主として構築されている場合、まず、生理活性が検出されたＤＮＡ分画に対応する大腸菌のプールを特定し、このプールをプレートにまき、個々の大腸菌をクローン化する。クローン化した大腸菌を分画し、それぞれの大腸菌の分画からＤＮＡ（ベクター）を調製する。このようにして調製されたＤＮＡ分画をそれぞれ哺乳動物に導入し、目的の生理的変化を検出する。
本発明の方法においては、次いで、該哺乳動物に該生理的変化をもたらす分画されたＤＮＡを同定する（工程（ｄ））。
この工程において同定されたＤＮＡ分画に複数種のＤＮＡが含まれている場合には、必要に応じて、さらに、該哺乳動物に該生理的変化をもたらす単一のＤＮＡが同定されるまで、（ｉ）さらなるＤＮＡの分画、（ｉｉ）分画されたそれぞれのＤＮＡが該哺乳動物における該生理的変化をもたらすか否かの検出、および（ｉｉｉ）該哺乳動物に該生理的変化をもたらすＤＮＡの同定、を繰り返すことができる（工程（ｅ））。同定されたＤＮＡは、その後の実験の必要に応じて、塩基配列を決定してもよい。
また、本発明は、上記同定に用いるためのキットであって、ポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物体内で発現させるためのベクターを含むキットを提供する。ベクターは、哺乳動物体内で挿入されたＤＮＡの発現を保障するものであれば特に制限はない。サイトメガロウイルスのエンハンサーおよびニワトリβアクチンプロモーターを含むベクターは好適な一例である。
本発明を応用すれば、複数の抗原ポリペプチドに対する抗体を同時に作製することができる。即ち、本発明は、複数の抗原ポリペプチドに対する抗体を同時に作製する方法であって、（ａ）少なくとも２種の抗原ポリペプチドをコードするＤＮＡを哺乳動物に導入し、該哺乳動物体内で発現させ、該抗原ポリペプチドに対して免疫させる工程、（ｂ）該抗原ポリペプチドに対する抗体を選抜する工程、（ｃ）選抜された抗体のハイブリドーマを作製する工程、を含む方法を提供する。
この方法は、モノクローナル抗体の作製（Ｇ．Ｋ・ｈｌｅｒとＣ．Ｍｉｌｓｔｅｉｎらの方法）に準じて、例えば、以下のように実施すればよい。少なくとも２種の抗原ポリペプチドをコードするＤＮＡが導入されたマウスの脾臓を摘出して細胞浮遊液を作る。例えば、血液疾患や自己免疫疾患の治療に用いる抗体を作成することを望む場合には、Ｔ細胞、血液細胞、または血液幹細胞由来の抗原を用い、また、抗癌活性を有する抗体を作成することを望む場合には、癌細胞、癌組織、または癌細胞株由来の複数種の抗原をコードするＤＮＡを用いるなど、実験の目的に応じて任意の抗原をコードするＤＮＡを用いればよい。抗原は、好ましくは同一の細胞、組織、または細胞株由来である。マウスへのＤＮＡの導入は、効果的な免疫応答を誘導するために、繰り返し行うことが好ましい。得られた脾細胞と培養骨髄腫細胞（例えば、Ｐ３  Ｘ  ６３−Ａｇ８・Ｕ１など）とをポリエチレングリコールを用いて融合させ、ＨＡＴ培地を含む培地中で培養する。培養中に生き残った細胞を、最終的に限界希釈によってクローン化し、抗体産生ハイブリドーマライブラリーとする。このハイブリドーマライブラリーに抗体を産生させ回収することにより、複数の抗原ポリペプチドに対する抗体を得ることができる。
発明を実施するための最良の形態
以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
［実施例１］  マウス体内を利用したＤＮＡのスクリーニング法
機能未知の遺伝子１００あるいは１０００プールを一度にマウスに導入し、何らかの生理作用が観察されたときに、このプールを小分けにし再導入することを繰り返すことで、生理活性を有する遺伝子にたどりつく方法を検討した。
この方法は宮崎ら（Ｎｉｗａ  Ｈ．ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｅ  １０８：１９３−２００，１９９１）が開発したｐＣＡＧＧＳベクターを用いて、マウスの生体内で遺伝子を過剰に発現させる方法である。ｐＣＡＧＧＳベクターは、サイトメガロウイルスのエンハンサーに、ニワトリのβアクチンプロモーターを組み合わせており、哺乳動物の細胞でベクターに挿入された遺伝子を強く発現させることができる。本発明者らは、発現させたい遺伝子をベクターに組み込み、ｉｎ  ｖｉｖｏ遺伝子導入キット（商品名  ＴｒａｎｓＩｔ  Ｉｎ  Ｖｉｖｏ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ，ＴＡＫＡＲＡ社）の溶液に懸濁させ、マウスの尾静脈から投与した。
（１）マウス体内でのＤＮＡの発現の検討
ＧＦＰを組み込んだベクターを投与すると（通常、１０μｇのベクターを１匹のマウスに投与している）、投与６日後にマウスの肝臓でＧＦＰの強い発現が確認できた。同様に、マウスＥＰＯ、あるいはマウスＩＬ−６を組み込んだベクターを投与することによって、血液中にこれらのサイトカインが検出され（図１）、また肝臓ではこれらのサイトカインのｍＲＮＡの発現が確認できた（図２）。
（２）スクリーニングへの応用
遺伝子のスクリーニングに際しては、遺伝子を挿入したベクター（クローン）１つ１つを、マウス１匹ずつ投与することは、数をこなさなければならないスクリーニングとしては、時間的・労力的に現実的ではない。従ってスクリーニングには、少なくとも１００個（種類）のベクターを混ぜて、１匹のマウスに投与してもそのうちの１つのベクターの効果を見いだせる必要があると考えられた。そこで、どの程度までＤＮＡが薄まっても（すなわち目的の遺伝子以外のベクターが過剰に混ざった状態でも）、その遺伝子の効果が見いだされるか否かを、ＩＬ−６とＥＰＯのベクターを混ぜて検討を行うことにした。実験系は次の通りである（表１）。
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１群にＩＣＲ１２週令のオスｎ＝４ｏｒ５を用いて、投与翌日（ｄａｙ１）と、一週間後（ｄａｙ７）にサンプリングを行った。以下に表示してあるクローン数とは、スクリーニングの際の想定ミックスクローン数を示している。例えば、群２では全体のＤＮＡの１／１０００を、ＥＰＯ、あるいはＩＬ−６のベクターが占める。従って、この場合においても、なおＥＰＯ、あるいはＩＬ−６の効果が見られたとき、１クローンあたり０．１μｇあれば、十分効果を見いだせる可能性があるということになる。しかも目的のベクター以外のものが、例え９９．８μｇ存在しても（すなわち、１０００個のベクターが混ざっていても）、雑多なものに邪魔されることなく、目的の遺伝子の効果が認められるということになる。
群１はＤＮＡが投与されたときのバックグラウンドの影響を調べるもの。群４は通常のＥＰＯやＩＬ−６のベクターを単独でマウスに投与していた用量であるが、ＥＰＯやＩＬ−６のベクターを混ぜると単独では見られなかった効果や、あるいはそれぞれの効果を相殺する可能性があるので、それらを確認するためのものである。群５は投与するＤＮＡの全量（１０μｇ）を通常マウスに投与している量にあわせたコントロールで、群６は目的以外の蛋白質が多く発現した時（この場合ＧＦＰ）の影響を想定したコントロールである。群７は未処置のマウスのコントロールである。
結果を図３および図４に示す。それぞれのベクターを１０μｇ投与した検討（図１）によると、ｄａｙ７でＥＰＯベクター投与群は赤血球数の増加が認められ、ＩＬ−６ベクター投与群は体重減少（ＩＬ−６はｃａｃｈｅｘｉａの一因子）が顕著に認められることが明らかになっている。これらを遺伝子の効果の指標にして、データを解釈すると以下のようになる。
通常行われる機能未知の遺伝子のスクリーニングで想定される群３の１００クローンプール分（ＣＡＧ  ９８μｇ，ＥＰＯ  １μｇ，ＩＬ−６  １μｇ）で、コントロール群（群１）に比してＨＣＴ値が顕著に増加しており、また体重増加も抑制される傾向にあった。また、群５（ＣＡＧ  ９．８μｇ，ＥＰＯ  ０．１μｇ，ＩＬ−６  ０．１μｇ）でも、ほとんど同じ程度の効果が見られることから、全ＤＮＡ量を１０μｇにして、１クローン当たり０．１μｇに減量することも可能であることが明らかになった。
以上のことから、多種の遺伝子プールを一度に導入しても、互いに干渉しあうことなく、それぞれの作用が検出できることが確認され、さらにターゲットとする遺伝子の効果を反映する系さえあれば、本方法によるｉｎ  ｖｉｖｏスクリーニングは、例え１，０００クローンプールでも機能するものと考えられた。
産業上の利用の可能性
これまでは活性物質（タンパク質）を、例えば産生する細胞の培養上清から精製するという方法が一般的であった。配列が既知で機能が未知の遺伝子ならば、ＣＨＯ細胞などでリコンビナントタンパク質を調製し、それをマウスなどの動物に免疫することで抗体も作製できる。そうして作製したリコンビナントタンパク質と抗体を組み合わせることで、その遺伝子の機能解析を行うことができる。また、コンピューター上で遺伝子の配列を予想し、それを利用してその遺伝子のトランスジェニック動物を作製し機能解析に利用することもできる。最近では、一連のＳａｔｕｒａｔｉｏｎ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓの手法によって、変異マウスのライブラリーを作製し、例えば目的の病態を示すマウスからその原因遺伝子（変異）を同定することも可能になってきた。しかし、こうした方法はいずれもタンパク質の精製や、抗体や動物の作製などの過程において、多大な労力と時間がかかってきた。また、ＤＮＡチップなどを利用することによって、ある細胞特異的に発現する遺伝子を決定することは可能であるものの、発現情報のみでは機能解析の標的や創薬の標的として絞り込むことは困難であった。本発明の方法は、特に▲１▼ｉｎ  ｖｉｔｒｏで適当な評価系がなく、ｉｎ  ｖｉｖｏでしか有効な評価系がない場合、▲２▼活性物質を産生する細胞や組織が限られている場合や、継代によって活性がなくなる恐れがある場合にも有効で、しかも従来の方法に比べて、例えばタンパク質の精製や動物の作製などの過程を省けることで、迅速にその機能遺伝子を単離することが可能である。また、本方法を繰り返すことによって、複数の抗原に対する抗体を一時に取得できると考えられるので、例えば癌細胞が発現する遺伝子プールを繰り返し導入することで、癌に対する抗体ライブラリーを作製することも可能である。従って、その中から癌細胞に対して有効な抗体を選別し、その抗体が結合する抗原を同定することも可能となる。
【図面の簡単な説明】
図１は、マウスに導入した遺伝子の発現効果を示すグラフである。
図２は、マウス肝臓における導入遺伝子の発現を示す写真である。６μｇ  ｐｏｌｙＡ＋ＲＮＡをノーザンブロットに使用した。
図３は、マウス体内で発現したＥＰＯの効果を示すグラフである。
図４は、マウス体内で発現したＩＬ−６の効果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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