(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ1−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ2−Ｄ−３Ｐａｌ3−Ｓｅｒ4−ＮＭｅＴｙｒ5−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）6−Ｌｅｕ7−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）8−Ｐｒｏ9−ＤＡｌａ10ＮＨ2という構造をもつＬＨＲＨ拮抗剤を調製するための処理方法において、Ｑが、Ｎ−アセチルおよびＴＨＦ−Ｇｌｙからなる群より選択され、
ａ）Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−ＤＡｌａＮＨ2  （ＩＶ）
という化学式をもち、ここで、Ｐ1がアミノ保護基であり、また、Ｐ2とＰ3が、−ＯＨ保護基から独立に選択されているという、保護された第一のオリゴペプチド化合物を、
Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３ＰａｌＯＨ  （ＩＩＩ）
という化学式をもつ第二のオリゴペプチド化合物と共役させて、
Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｒ1）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｒ2）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2  （Ｖ）
という化学式をもち、ここで、Ｒ1またはＲ2の少なくとも一つが、−ＯＨ保護基であるという条件の下で、Ｒ1とＲ2が、水素と−ＯＨ保護基からなるグループより別個に選択されている、第三のオリゴペプチドを産生するステップ、および、
ｂ）Ｒ1またはＲ2のいずれか、または、その両方が−ＯＨ保護基であるとき、ＬＨＲＨ拮抗剤を産生するために、化学式Ｖの化合物を脱保護するステップを含む処理方法。
【請求項２】
該−ＯＨ保護基が、アリル、シクロヘキシル、メチル、メトキシメチル、メチルチオメチル、２−メトキシ−エトキシメチル、ビス−（２−クロロエトキシ）メチル、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、テトラヒドロフラニル、１−エトキシエチル、ｔ−ブチル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、トリフェニルメチル、トリメチルシリル、９−フルオレニルメチル、イソプロピルジメチルシリル、ｔ−ブチル−ジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリル、酢酸、トリクロロ酢酸、フェナシル、フェノキシ酢酸、ピバロアート、アダマントアート、ベンゾアート、メシトアート、炭酸アリル、炭酸メチル、炭酸２，２，２−トリクロロエチル、炭酸ベンジル、炭酸ｐ−ニトロベンジル、および炭酸２−ブロモベンジルからなる群より選択される、請求項１の処理方法。
【請求項３】
ＱがＴＨＦ−Ｇｌｙである、請求項１の処理方法。
【請求項４】
ＱがＮ−アセチルである、請求項１の処理方法。
【請求項５】
Ｐ2およびＰ3が、ベンジル、およびジクロロベンジルから独立して選択される、請求項１の処理方法。
【請求項６】
さらに、ａａ1が存在しないかＬｅｕである
Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2
という化学式をもつ化合物Ｉを、
Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−ＯＨ
という化学式をもつ化合物ＩＩと、ａａ1が化合物Ｉと化合物ＩＩに同時に存在することはないという条件の下で共役させることによって化合物ＩＶを調製するステップを含む、請求項１の処理方法。
【請求項７】
さらに、Ｐ5がＰ1に直交するアミノ保護基である、Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（Ｐ5）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2から、化合物Ｉを調製するステップを含む、請求項６の処理方法。
【請求項８】
Ｐ5がＦｍｏｃ、Ｂｏｃ、またはＣｂｚである、請求項７の処理方法。
【請求項９】
Ｐ4がカルボキシル保護基であり、Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−Ｏ−Ｐ4という化学式をもつ化合物Ｂ3から、化合物ＩＩを調製するステップをさらに含む、請求項６の処理方法。
【請求項１０】
Ｐ4が、９−フルオレニルメチル、メトキシメチル、ベンジル、ｐ−ニトロベンジル、２，２，２−トリクロロエチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブチル、メチル、エチル、シクロヘキシル、アリル、およびトリメチルシリルからなる群より選択される、請求項９の処理方法。
【請求項１１】
Ｐ4が、アリルまたはベンジルである、請求項１０の処理方法。
【請求項１２】
Ｐ4が、上で定義されているようにカルボキシル保護基であり、Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｐ4という化学式をもつ化合物Ｃ3から、化合物ＩＩＩを調製するステップをさらに含む、請求項１の処理方法。
【請求項１３】
ＱがＴＨＦ−Ｇｌｙである、請求項１２の処理方法。
【請求項１４】
まず、ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを、Ｐ1−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｐ4と反応させて、化合物Ｃ3を調製するステップをさらに含む、請求項１３の処理方法。
【請求項１５】
ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4からＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを調製するステップをさらに含む、請求項１４の処理方法。
【請求項１６】
テトラヒドロフロ酸のジシクロヘキシルアミン塩を、Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4のｐ−トルエンスルホン酸塩と反応させてから、その結果生じた産物に水素添加することによって、ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4を調製するステップをさらに含む、請求項１５の処理方法。
【請求項１７】
ＱがＮ−アセチルである、請求項１２の処理方法。
【請求項１８】
Ｐ1が、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル、ビフェニルイソプロピルオキシカルボニル、ｔ−アミルオキシカルボニル、イソボルニルオキシカルボニル、（アルファ，アルファ）−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジル−オキシカルボニル、ｏ−ニトロフェニルスルフェニル、２−シアノ−ｔ−ブチルオキシカルボニル、および９−フルオレニルメチルオキシカルボニルからなる群より選択される、請求項１の処理方法。
【請求項１９】
（ａ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ；
（ｂ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ；
（ｃ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ＯＨ；
（ｄ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2ＢＺｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ＯＨ；
（ｅ）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2；
（ｆ）Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2；
（ｇ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ；および
（ｈ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ
からなる群より選択される中間生成オリゴペプチド。
【請求項２０】
（ａ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｂ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｃ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｄ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｅ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｆ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ；
（ｇ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｈ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｉ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｊ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｋ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｌ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ；
（ｍ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｎ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｏ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｐ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（２Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｑ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（２Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｒ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（２Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｓ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｔ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｕ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｖ）Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｗ）Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｘ）Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｙ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｚ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ａａ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｂｂ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｃｃ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｄｄ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｅｅ）Ｃｂｚ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2；および
（ｆｆ）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2
からなる群より選択される前駆中間生成オリゴペプチド。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、化学的合成方法、および、この処理方法において有用な中間生成物である有機化合物に関する。より特定すると、本発明は、ＬＨＲＨ拮抗剤ペプチドを合成する方法、および、この処理方法において有用な中間生成オリゴペプチドに関する。
発明の背景
性腺刺激ホルモン：濾胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、および絨毛性腺刺激ホルモン（ＣＧ）は、排卵、精子形成、および性ステロイドの生合成に必要である。単一の視床下部ホルモンである、性腺刺激ホルモン放出ホルモンＧｎＲＨ（黄体形成ホルモン放出ホルモン、ＬＨＲＨとしても知られる）は、哺乳動物における、ＦＳＨとＬＨの分泌の調節に関与する。
ＬＨＲＨの構造は、Ａ．Ｖ．  Ｓｃｈａｌｌｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  １７３：  １０３６−１０３７（１９７１）によって決定された。ＬＨＲＨ様活性をもつペプチドを調製しようとの初期の試みは、ＬＨＲＨ拮抗剤である化合物の合成に集中していた。しかし、１９７６年には、ＬＨＲＨの個別投与が性腺刺激ホルモンの放出を刺激する一方で、少量のＬＨＲＨの継続的な投与、または、ＬＨＲＨ作用薬の長期的な投与は、逆効果をもつことが分かった。この発見は、哺乳動物において、性ステロイドを調節するのに有用な薬剤として、ＬＨＲＨの作用薬および拮抗剤の類似化合物の両方を発見するための研究を促した。特許、および公開文献の記事のかなりの数のものが、ＬＨＲＨ作用薬として（すなわち、ＬＨおよびＦＳＨの放出を刺激する）作用するか、またはＬＨＲＨ拮抗剤として（すなわち、ＬＨおよびＦＳＨの放出を阻害する）作用する、ＬＨＲＨの類似化合物を開示している。大抵、これらの化合物は、ＬＨＲＨの天然の配列の１個以上位置で、自然界に存在するアミノ酸残基か、自然には存在しないアミノ酸残基に置換してある、９個か１０個のアミノアシル残基をもつ。場合によっては、９残基よりも少ないアミノ酸残基をもつ、ＬＨＲＨの活性拮抗剤が報告されている。
文献には、ＬＨＲＨ類似化合物が、避妊、思春期の遅延、良性前立腺肥大、胸部および卵巣のホルモン依存性腫瘍の待期療法または寛解、前立腺のホルモン依存性腫瘍の待期療法または寛解、停留精巣、女性の多毛、胃運動障害、月経困難、および子宮内膜症などを含む、さまざまな症状の治療に有用であることが報告されている。
ＬＨＲＨ類似化合物を調製する方法については、以前説明した。この文献には、標準的な固相、および液相ペプチド化学技術を用いた、ＬＨＲＨ類似化合物の段階を追った合成が説明されている。しかし、商業的に価値のあるＬＨＲＨ類似化合物を大規模に生産する上で、固相ペプチド合成は、実用的でもなく、効率的でもなく、費用効果も悪い。液相化学法は、費用効率はよい（したがって、この方法は、規模を大きくするときのペプチド生産にとっては優れている）が、この方法も、効率的ではなく、時間がかかり、生産過程で、多数の精製段階が必要になると費用がかかるかもしれない。このように、製造業者が、時宜に適い、かつ費用効果の高い方法で、高度の精製度をもつペプチドを、高収率で生産できるような液相合成方法が必要とされている。
発明の概要
一般的に、本発明の方法は、３−７アミノ酸長の、保護された中間生成ペプチドを用いて、最終産物を高精製度で生産するために、液相合成技術を用いる。続いて、所望の化合物を保護された状態で産生するために、２個以上の保護された中間生成物を反応させてから、最終的なＬＨＲＨ拮抗剤を産生するために脱保護する。
第一の態様において、本発明は、Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ1−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ2−Ｄ−３Ｐａｌ3−Ｓｅｒ4−ＮＭｅＴｙｒ5−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）6−Ｌｕｅ7−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）8−Ｐｒｏ9−ＤＡｌａ10ＮＨ2という構造をもつＬＨＲＨ拮抗剤を調製するための処理方法を含む。ここで、処理方法には、Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2という化学式をもつ化合物ＩＶ（Ｐ1はアミノ保護基であり、Ｐ2とＰ3は独立して選択される−ＯＨ保護基である）と、Ｑ−Ｄ−２ＮａＩ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨという化学式をもつ化合物ＩＩＩ（ＱはＮ−アセチルまたはＴＨＦ−Ｇｌｙである）を共役させ、Ｑ−Ｄ−２ＮａＩ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｒ1）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｒ2）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2という化学式をもつ第三のオリゴヌクレオチド（化合物Ｖ）（ここでＲ1とＲ2は、水素および−ＯＨ保護基からなるグループより独立して選択されるが、但し、Ｒ1またはＲ2の少なくとも１つは−ＯＨ保護基である）を産生するステップが含まれる。そして、次に、所望のＬＨＲＨ拮抗剤を得るために、一ステップで、化合物Ｖを脱保護する。
本発明の別の態様において、この処理方法は、ａａ1が存在しないかＬｅｕである、Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2という化学式をもつ化合物Ｉと、Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−ＯＨという化学式をもつ化合物ＩＩとを、ａａ1が化合物Ｉと化合物ＩＩに同時に存在することはないという条件の下で共役させることによって、化合物ＩＶを調製するステップを含む。
本発明の別の態様において、この処理方法は、Ｐ5がＰ1に直交するアミノ保護基であり、Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（ｉＰ5）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2という化学式をもつ化合物Ａ2から化合物Ｉを調製するステップを含む。
本発明の別の態様において、この処理方法は、テトラヒドロフロ酸のジシクロヘキサミン塩と、ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを形成するために、Ｐ4がカルボキシル保護基であるＧｌｙ−Ｏ−Ｐ4のＰ−トルエンスルホン酸塩とを反応させるステップを含む。そして、化合物ＩＩＩを形成させるとき、Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4を、その他の前駆中間体化合物（定義は下に記されている）と反応させる。
本発明の更なる態様において、本発明の処理方法において有用な、一定の分類の、選択的に保護された前駆中間体オリゴペプチド化合物が提供されている。本発明の化合物には、ジ−、トリ−、テトラ−、ペンタ−、ヘキサ−、およびヘプタペプチド、ならびに単一のアミノ酸の誘導体で、ＬＨＲＨ類似化合物の液相合成に有用なものが含まれる。
詳細な説明と好ましい実施態様
Ａ．定義
本発明を説明する便宜上、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＩ，１７２６−１９７２で、生化学物質の命名法に関するＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会によって推奨されているところに従った、さまざまな普遍的アミノ酸に対する従来からの略号が、ペプチド技術分野で一般的に認められたものとして使用されている。これらは、アキラルなアミノ酸であるグリシン以外、および、アキラルであるか、そうでなければＤ−型と名付けられた、自然には存在しないか、または自然のアミノ酸以外は、Ｌ−型アミノ酸を表している。本明細書において言及されているペプチド配列はすべて、Ｎ−末端側のアミノ酸を左に、また、Ｃ−末端側アミノ酸を右にするという、一般的に認められている習慣に従って書き表されている。さらに、下記で示されている化学式におけるＣ−末端アミノアシル残基上の、−Ｏ−Ｐ4という表記は、特定の残基のカルボキシル官能基が、Ｐ4保護基でエステル化されていることを示している。
本発明の化合物は、非対称的に置換された炭素原子を含む。“Ｓ”および“Ｒ”配置という用語は、本明細書で使用される場合には、第４節に関するＩＵＰＡＣの１９７４年の勧告、Ｐｕｒｅ  Ａｐｐｌ．  Ｃｈｅｍ．，  （１９７６）  ４５，  １３−３０によって定義されている。さらに、本明細書で使用される場合には、”ＴＨＦ−Ｇｌｙ”という命名は、ＴＨＦ−Ｇｌｙの２Ｓ形か２Ｒ形のいずれかを意味し、ＴＨＦ−Ｇｌｙのラセミ混合物（ずなわち、２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ）を意味する。
その他、本発明を説明するうえで有用な略号は、以下の通りである。
0003888472.tif 000002
0003888472.tif 000003
0003888472.tif 000004
Ｂ．ＬＨＲＨ拮抗剤Ｑ−Ｄ２Ｎａｌ1−Ｄ４ＣｌＰｈｅ2−Ｄ３Ｐａｌ3−Ｓｅｒ4−ＮＭｅＴｙｒ5−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）6−Ｌｅｕ7−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）8−Ｐｒｏ9−Ｄ−Ａｌａ10ＮＨ2の液相合成
本発明は、液相ペプチド化学法によって、ＬＨＲＨ拮抗剤化合物を作出するための処理方法を提供する。Ｑが、Ｎ−アセチルおよびＴＨＦ−Ｇｌｙからなる群より選択される、Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ1−Ｄ４ＣｌＰｈｅ2−Ｄ３Ｐａｌ3−Ｓｅｒ4−ＮＭｅＴｙｒ5−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）6−Ｌｅｕ7−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）8−Ｐｒｏ9−Ｄ−Ａｌａ10ＮＨ2という化学式をもつＬＨＲＨ拮抗剤化合物を作出する一般的な方法は、以下のステップを含む。
（ａ）以下の化学式をもつ、保護された中間生成オリゴペプチド化合物を共役させること：
Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2  （ＩＶ）
ここで、Ｐ1はアミノ保護基であり、Ｐ2とＰ3は、以下の化学式をもつオリゴペプチドをもつＯＨ保護基であり：
Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ  （ＩＩＩ）
ここで、Ｑは、以下の化学式をもつオリゴペプチドを産出するために、上記のように定義され：
Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｒ1）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｒ2）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2  （Ｖ）
ここで、Ｒ1とＲ2は、Ｒ1またはＲ2の少なくとも一つは、ＯＨ保護基であるという条件付きで、水素、および−ＯＨ保護基からなるグループより別個に選択され、また、
（ｂ）Ｒ1とＲ2のいずれか、または両方が、−ＯＨ保護基であるとき、ＬＨＲＨ拮抗剤化合物を産出するために、化学式Ｖの化合物の保護基を外す。
一般的な処理方法は、さらに、中間生成物ＩとＩＩから中間生成物ＩＶを調製するステップを含む。中間生成物ＩとＩＩは、それぞれ、Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2という化学式（ここで、ａａ1は存在しないかＬｅｕである）、および、Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−ＯＨという化学式をもつ。化合物ＩＶを形成させるための処理方法において、化合物ＩとＩＩが用いられるときには、ａａ1が化合物Ｉと化合物ＩＩに同時に存在することはない。この処理方法は、さらに、さまざまな前駆中間体物から中間生成化合物Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩを調製するステップを含む（下述される）。次の図式（図式１）は、全体の処理手順を示している。
ＬＨＲＨ拮抗剤化合物を産生する一般的な処理方法は、収束合成によって中間生成化合物ＩＶを、第二の中間生成化合物（化合物ＩＩＩ）と共役させることである。本明細書で用いられている”収束合成”とは、アミド結合の形式に有利な条件下で、２つ以上の（望ましい長さの）ペプチドを共役させる処理方法を意味する。例えば、収束合成は、ヘプタペプチドを形成させるために、保護されたトリペプチドを、適正に保護されたテトラペプチドと（キラル中心でラセミ化を最小限にする条件下で）共役させるために用いることができる。そして、このヘプタペプチドを、第二の保護されたテトラペプチドを共役させて、本明細書において説明されているＬＨＲＨ拮抗剤の一つなどの、望ましいアンデカペプチドを得ることができる。
一般的に、化合物ＩＩＩとＩＶ（または、化合物ＩとＩＩについて）の収束合成は、当業者に既知の標準的な試薬と反応条件を用いて行われる。そのような試薬は、上記の表ＩＩＩに列挙されている。（例えば、Ｂｏｄａｎｓｋｙ，  ペプチド合成の原理、第２版、１９９３、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ社、ベルリンを参照のこと。）合成方法において特に重要なことは、最終産物の形成をもたらすための、中間生成化合物ＩＩＩとＩＶを処理する方法と順序である。例えば、第一の態様において、化合物ＩＶは、まず、アミノ保護基だけを除去するための、当業者には周知の条件下で処理される。例えば、この目的のためにＴＦＡを用いることができる。（Ｄ．Ｈ．  Ｓｃｈｌｅｓｉｎｇｅｒ，  １９８８年、高分子の配列決定と合成、精選された方法と応用、１５３〜１８４頁、Ｊａｍｅｓ  Ｐ．  Ｔａｍ，  ”ペプチド合成における、酸による脱保護反応”を参照のこと）。次に、部分的に保護されたＬＨＲＨ拮抗剤を得るために、この結果できた部分的に保護されたペプチドを、当技術分野において周知の方法で化合物ＩＩＩと共役させる。特に、この共役は、ＨＯＯＢｔ、ＥＤＣ・ＨＣｌ、およびＮＭＭ、または２，４，６−コリジン存在下でＮＭＰ中、ラセミ化抑制剤としてＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏを加えて、０−１０℃で行うことができる。次に、最終的なＬＨＲＨ拮抗剤産物を得るために、この結果できた部分的に保護された産物を、ＴＦＭＳＡなどの強有機酸、または、その代わりに、ＴＦＡなどの弱有機酸で、シリル化剤と組み合わせて処理して脱保護する。選択的なステップとして、最終産物を脱塩し、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＸＡＤ−１６での吸着クロマトグラフィーによって、トリフルオロ酢酸とトリフルオロメタンスルホン酸対イオンを、酢酸と交換してもよい。そして、アセトニトリル／水／酢酸流動相を用いた、Ｃ−１８上で逆相クロマトグラフィーなど、通常の技術をもつ当業者に既知の方法によって、この物質を精製することができる。このような逆相クロマトグラフィーが行われるとき、クロマトグラフィー産物プールを弱酸イオン交換カラムにかけることによって、このプールから、精製産物が分離される。水分を取り除くためにメタノールで、カラムを溶出してから、メタノール／酢酸混合液で、産物をカラムから溶出する。産物を含む画分をまとめて、乾燥するまで濃縮し、その結果できた油を氷酢酸に溶解し、所望のＬＨＲＨ拮抗剤を白い粉末として得るために凍結乾燥する。
また、合成処理方法で、化合物ＩＩＩとＩＶの間に起こるアシル化反応の選択性が得られることも留意することが重要である。例えば、化合物ＩＶ（特異的には、セリンのａ−アミンとイソプロピルリシンのｅ−アミン）上では、２つの反応性アミノ基が利用可能であるが、化合物ＩＩＩのＣ−末アミノアシル残基（すなわち、Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ）の反応は、主に、セリンのａ−アミン上で、約９０％以上の程度で起きる。すなわち、本発明において、化合物ＩＩＩとＩＶの収束共役により、イソプロピルリシンのｅ−アミンでアシル化された産物ではなく、所望のＬＨＲＨ拮抗剤が、約９０％以上の割合で生じる。さらに、化合物ＩとＩＩの共役においても、生じた産物の約９０％以上が、イソプロピルリシンのｅ−アミンでアシル化された産物ではなく、化合物ＩＶであるという、同様の現象が、イソプロピルリシンのａ−位とｅ−位の窒素の間で選択的に起こる。
中間生成化合物Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩは、さまざまな前駆中間体から産出される。本明細書において用いられる“前駆中間体”は、少なくとも２個のアミノ酸残基よりなるペプチドを意味し、化合物Ｉ、ＩＩ、またはＩＩＩのいずれかを作出する処理に用いられる。さまざまな前駆中間体の表示を簡単にするために、Ａ、Ｂ、およびＣと名付けた分類群にグループ化した。化合物Ｉを作出する処理において有用な前駆中間体は、グループＡのものであり、化合物ＩＩを作出する処理において有用な前駆中間体は、グループＢのものであり、化合物ＩＩＩを作出する処理において有用な前駆中間体は、グループＣに列挙されている。有用なグループＡ、Ｂ、およびＣの前駆中間体の例には、以下のものが含まれる。
グループＡ
１）Ｐ1−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2  （Ａ1）
２）Ｐ1−Ｌｙｓ（Ｐ5）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2  （Ａ2）、および
３）Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（Ｐ5）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2  （Ａ3）。
グループＢ
１）Ｐ1−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｐ4  （Ｂ1）
２）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−Ｏ−Ｐ4  （Ｂ2）、および
３）Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−Ｏ−Ｐ4  （Ｂ3）。
グループＣ
１）Ｐ1−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｐ4  （Ｃ1）
２）Ｐ1−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｐ4  （Ｃ2）、および
３）Ｑ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｐ4  （Ｃ3）。
別段の記載がない限り、ａａ1は存在いないかＬｅｕであり、Ｑは、Ｎ−アセチルまたはＴＨＦ−Ｇｌｙであり、Ｐ1は、アミノ保護基であり、Ｐ5は、Ｐ1に直交するアミノ保護基であり、Ｐ2およびＰ3は−ＯＨ保護基であり、また、Ｐ4は、カルボキシル保護基で、これらのＰグループは、下で定義されている。
通常、段階を追った処理においては、官能基、特に、第一アミノ酸のアミノ基、またはカルボキシル基が、適当な保護基によって保護されている。次に、適正に保護されている相補的な（アミノ、またはカルボキシル）基をもつ、配列中の次位のアミノ酸を、アミド結合の形成を促す条件下で、保護されているか、誘導体化されたアミノ酸に付加する。そして、この新しく付加されたアミノ酸残基から保護基を除去し（または、伸長している鎖の一つ以上の側基が保護されているところでは、選択的に除去される）、次の（適当に保護されている）アミノ酸を付加し、それを繰り返す。
連続した保護アミノ酸の共役は、当技術分野において周知の方法で行うことができる。アルファ−Ｎ−保護基の除去は、例えば、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸溶液、酢酸エチル中の塩化水素溶液、ジオキサン中の塩化水素溶液、酢酸中の塩化水素溶液、または、その他の適当な強酸溶液、好ましくは、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸溶液、もしくは酢酸エチル中の塩化水素溶液の存在下で行うことができる。同様に、その他のアルファＮ−、およびイプシロンＮ−保護基の除去を、当技術分野において周知の方法によって行うことができる。そして、脱保護されたペプチドを、適当な被保護アミノ酸と共役させる。大抵の場合、各被保護アミノ酸を過剰に（１．０１から２．０当量）導入し、適当な試薬を用いて共役を行う。共役が、カルボジイミドである、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸、または、その他の適当な試薬によって触媒される場合には、共役は、単独で、または、１−ヒドロキシベンゾトリアゾル、３−ヒドロキシ−１，２，３−ベンゾトリアジン−３（４Ｈ）−オン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、その他のスクシンイミド、またはオキシムの存在下で触媒される。あるいは、保護されたアミノ酸活性エステル（例えば、ｐ−ニトロフェニル、ペンタフルオロフェニルＮ−ヒドロスクシンイニジルなど）で、対称的な無水物、または混合無水物を用いることができる。さらに、塩化第二銅などの添加剤も、ラセミ化の抑制がさらに必要な特別の環境の下での共役反応において用いることができる。
合成過程における望ましくない反応から守るため、保護基を使用することは、当技術分野において周知であり、そのような保護基も数多く知られている（例えば、参照として本明細書に組み込まれたＴ．Ｈ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，  有機合成における保護基、第２版、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９９１を参照のこと）。ペプチド調製の液相法において、アミノ酸のアルファ−アミノ官能基は、水素化合あるいは光分解による切断に感受性のある基である、酸あるいは塩基の感受基によって、または、不安定な保護基に転換されるかもしれない基によって保護される。このような保護基は、伸長しているペプチド鎖を破壊したり、そこに含まれているキラル中心をラセミ化したりしないで、容易に除去できる一方で、ペプチド結合条件に対して安定しているという特性をもっているはずである。
酸感受基の例は、１−アダマンチルオキシカルボニル（Ａｄｏｃ）、ｔ−ブチルオキシ−カルボニル（Ｂｏｃ）、１−メチル−１−（４−ビフェニル）エトキシカルボニル（Ｂｐｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）、２−ニトロフェニルスルフェニル（Ｎｐｓ）などである。塩基感受基の例は、２，２，２トリクロロエチルオキシカルボニル（Ｔｃｅ）、９−フルオレニルメチルオキシ−カルボニル（Ｆｍｏｃ）、トリフルオロアセチル（Ｔｆａ）、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニルなどである。不安定な基に転換するか、補助的な切断が必要となりうる保護基の例は、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）、２−メチルチオエチルオキシカルボニル、２−メチル−スルフォニルエチルカルボニル、２−（ｐ−トルエンスルフォニル）エチル、１，１−ジメチル−２−シアノエチルオキシカルボニルなどである。Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、およびＦｍｏｃ保護基が好ましい。
側鎖アミノ基の保護に用いるため、保護基の部分を、上記したもののいずれかから選ぶことができるが、好ましくは、それは直交する性質を持っている。ペプチド化学法の技術分野において用いられるときには、直交する保護基とは、第二の保護基を除去する過程において選択的に保持される基であるか、または、第二の保護基を保持する過程において選択的に除去される基である。側鎖アミンにとって特に好ましい保護基は、Ｂｏｃ、Ｃｂｚ、およびＦｍｏｃである。
側鎖−ＯＨの官能性の保護に用いるために、ヒドロキシル保護基とフェノール保護基を用いることができ、本明細書において、“−ＯＨ保護基”と名付けられている。代表的な例には、アセチル基、および、置換されたカルボキシル酸のエステル、メチル、メトキシメチル、フェニルメチル、ｔ−ブトキシメチル、テロラヒドロピラニル、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、Ｐ−メチルオキシベンジル、Ｏ−ニトロベンジル、Ｐ−ニトロベンジル、ベンジル、２，６−ジクロロベンジル、トリメチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル、メチルオキシカルボニル、Ｆｍｏｃ，ｏ−ブロモベンジルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエチルオキシカルボニル基などが含まれる。特に好ましいのは、合成にとって必要なときに直交特性ももつ、ベンジル基、２，６ジクロロベンジル基、および、ｏ−ブロモベンジル−オキシカルボニル基である。
カルボキシル酸を保護するのに用いるために、９−フルオレニルメチル、メトキシメチル、ベンジルおよび置換されたベンジル、２，２，２−トリクロロエチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブチル、メチル、エチル、シクロヘキシル、アリル、トリメチルシリルなどを用いることができる。特に好ましいのは、望ましいとき、および、望ましければ、合成において、別の保護基と直交するような状態で選ばれた、メチル、エチル、ベンジル、アリル、および、９−フルオレニルメチルエステルである。
グループＡ、ＢおよびＣの前駆中間体を作出する方法は、望ましいＬＨＲＨ拮抗剤を作出する処理方法における全体的な効率にも寄与することに留意することが、特に重要である。例えば、特に好ましい方法において、化合物Ｉは、ａａ1が上記のように定義されており、Ｐ5がＰ1に直交するアミノ保護基であるときに、Ｐ1−ａａ1−Ｌｙｓ（Ｐ5）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2という化学式をもつ前駆中間体Ａ2から調製される（実施例３参照）。この方法で化合物Ｉを調製すると、伸長しているＰ1−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2鎖の中に、Ｎ−イソプロピルリシンの誘導体を取り込む必要性が回避される。Ｎ−イソプロピルリシンの誘導体は、取り扱いが困難であり、かつ、購入するのも難しいので、これは、この処理方法にとって好都合である。
別の好ましい態様において、化合物ＩＩは、ａａ1が上記のように定義されており、Ｐ4がアリル基であるときに、Ｐ1−Ｓｅｒ（Ｐ2）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−Ｏ−Ｐ4という化学式をもつ前駆中間体Ｂ3から調製される。特に好ましい態様において、前駆中間体Ｂ3は、Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｐ3）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−Ｏ−Ｐ4という化学式をもつ前駆中間体Ｂ2から、段階を追った合成方法によって作製されるが、同様に、これは、Ｐ4の保護基が再びアリル基であるときに、Ｐ1−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ａａ1−Ｏ−Ｐ4という化学式をもつ化合物Ｂ1から調製される。多くのＰ4保護基として可能なものが、この前駆中間体の調製に用いられうるが、ペプチドのＣ末端残基のａ−炭素、またはＮ−メチルチロシン残基のａ−炭素のいずれをもラセミ化しない条件下で除去されるため、アリル基の使用が好ましい。
別の好ましい態様において、化合物ＩＩＩは、ＱがＴＨＦ−Ｇｌｙである、化合物Ｃ3から調製される。化合物Ｃ3は、好ましくは、ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを、Ｐ1−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｐ4という化学式をもつ化合物Ｃ2と共役させて調製される。好ましくは、ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨは、テトラヒドロフロ酸のジシクロヘキシルアミン塩（ＴＨＦＡ・ＤＣＨＡ）を、Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4（ＴｓＯＨ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4）のｐ−トルエンスルフォン酸塩と反応させ、ＥＤＣ・ＨＣｌを加えてから、この結果生じた産物に水素添加して調製される。この方法で化合物ＩＩＩを調製すると、ＴＨＦＡをＴｓＯＨ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｐ4と反応させる前に、まず、ジシクロヘキシルアミン塩からＴＨＦＡ部分を分離するという付加的なステップが省ける。このように、液相、および／または固相ペプチド化学法によって前駆中間体化合物Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩを調製する多数の方法が、本発明の範囲に含まれるよう意図されており、また、好ましくは、このような方法は、合成処理全体における、多数の精製ステップに対する必要性を減らす。
グループＡ、Ｂ、およびＣの前駆中間体を調製するための代表的な反応図式を下に示す。示されている反応図式は、好ましい前駆中間体を作出する方法を示しただけであり、発明の範囲を制限しようと意図したものでない。
図式ＩＩ
合成図式ＩＩａは、化合物Ｉａの合成をもたらす、Ａ1およびＡ2と名付けられた、グループＡの前駆中間体化合物と、中間化合物ＩＩの合成をもたらす、Ｂ1a、Ｂ2a、およびＢ3aと名付けられたグループＢの前駆中間化合物を作出するための処理方法を示している。図式ＩＩｂは、グループＡ前駆中間化合物が、化合物Ｉｂの調製にも用いられる、代替的な処理方法を示したものである。図式ＩＩｂには、中間化合物ＩＩｂの合成をもたらす、Ｂ2b、およびＢ3bと名付けられた、グループＢの前駆中間化合物を作出するための代替的な処理方法も示されている。図式ＩＩｃは、化合物Ｉｂの合成をもたらす、Ａ3と名付けられた、グループＡの前駆中間化合物を作出するための処理方法を示したものである。
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図式ＩＩＩ
合成図式ＩＩＩは、化合物ＩＩＩの合成をもたらす、Ｃ1、Ｃ2およびＣ3と名付けられた、グループＣの前駆中間体化合物を作出するための処理方法を示している。
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本発明の代表的な前駆中間化合物には、以下のように同定された化合物が含まれる：
（ａ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｂ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｃ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｄ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｅ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｆ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ；
（ｇ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｈ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｉ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｊ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｋ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｌ）Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ；
（ｍ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｎ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｏ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｐ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（２Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｑ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（２Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｒ）Ｈ−ＮＭｅＴｙｒ（２Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｓ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｔ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｕ）Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｖ）Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｗ）Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｘ）Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｙ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｚ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ａａ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｂｂ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ａｌｌ；
（ｃｃ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ；
（ｄｄ）ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｍｅ；
（ｅｅ）Ｃｂｚ−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2；および
（ｆｆ）Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｐｒｏ−Ｄ−ＡｌａＮＨ2。
本発明の化合物と処理方法は、例示のために提示されており、発明の概念を制限するつもりではない。以下の実施例を参照することによって、よりよく理解できるであろう。別段に特記されない限り、全ての試薬は、アルドリッチケミカル社（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）（ウィスコンシン州ミルウォーキー）や、シンセテック社（Ｓｙｎｔｈｅｔｅｃｈ，  Ｉｎｃ．）（オレゴン州オールバニー）などの商業的な供給業者から購入した。
実施例１
Ｃｂｚ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
２−プロパノール（ＩＰＡ、１００ｍＬ）中にＣｂｚ−Ｐｒｏ−ＯＨ（１０．１ｇ）を含む溶液を−５℃に冷却し、そしてさらに−１０℃に冷却しながらＮＭＭ（４．４ｍＬ）を添加した。クロロ蟻酸イソ−ブチル（５．２ｍＬ）を、温度を−１０から−１５℃に維持しながら滴加した。添加を完了した後、水（５０ｍＬ）中にＨＣｌ・Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（５．０ｇ）およびＮＭＭ（４．４ｍＬ）を含む溶液を添加し、そして混合液を−１０℃で、さらに３０分間攪拌した。その後、冷却浴を取除き、そして溶液をさらに３時間攪拌した。反応液を、ＮａＨＣＯ3（５ｇ）およびＮａＣｌ（５ｇ）を含有するＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）の混合液で急冷した。層を分離し、そして水層を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、そしてその後真空下で乾固するまで濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に取り、そして溶液を水（２×５０ｍＬ）で洗浄して、全ての残渣ＩＰＡを除去した。有機溶液を、真空下で濃縮させて、約５０ｍＬにし、そしてＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）およびヘプタン（５０ｍＬ）で処理し、そして生成物を結晶化させた。固形物を濾過し、濾材で、ヘプタンを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、８．２ｇのＣｂｚ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＨＰＬＣ：９９．２ｐａ％。［ａ］Ｄ＝−１１．２（ＣＨＣｌ3）。
実施例２
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
イソプロパノール（ＩＰＡ、６０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中にＣｂｚ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（９．３ｇ）およびｐ−トルエンスルホン酸（６．０９ｇ）を含む溶液を、４０ｐｓｉｇおよび周囲温度で、５％Ｐｄ／Ｃ上で水素化した。結晶を濾取し、１０％水−ＩＰＡ（２０ｍＬ）で洗浄し、そして合わせた濾液を真空下で乾固するまで蒸発させた。アセトニトリル（ＡＣＮ、１２６ｍＬ）を残渣に添加し、そして混合液を再度、蒸発させて、真空下で約１００ｍＬにし、そしてこの工程を４回繰返した。
Ｂ．結合
上から得た懸濁液に、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−ＯＨ（１２．１７ｇ）、ＨＯＢｔ（５．３５ｇ）をＡＣＮ（１００ｍＬ）と一緒に添加した。懸濁液を０−５℃に冷却し、そしてＮＭＭ（８．５ｍＬ）を添加し、続いてＡＣＮ（５７ｍＬ）中のＥＤＣ（７．３４ｇ）の懸濁液を添加した。混合液を、０−５℃で１時間、周囲温度で一晩攪拌した。その後混合液を乾固するまで真空下で蒸発させ、そして残渣をＥｔＯＡｃ（４２０ｍＬ）、水（６０ｍＬ）および１０％Ｎａ2ＣＯ3（１００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、そして１０％クエン酸（２×５０ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（２×５３ｍＬ）および水（４０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で蒸発させて、約１１５ｍＬにした。ＥｔＯＡｃ（１３５ｍＬ）を添加し、そして溶液を再度、真空下で蒸発させて、約１１５ｍＬにし、そしてその後この工程を繰返した。ヘプタン（１３５ｍＬ）を、約２時間かけてＥｔＯＡｃ溶液に添加し、そして生成物を結晶化した。固形物を濾過し、ヘプタンで洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１４．８ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＨＰＬＣ／９９．２％、ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝５４８，（Ｍ＋ＮＨ4）+＝５６５。
実施例３
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
２−プロパノール（ＩＰＡ、８００ｍＬ）およびアセトン（１０８ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｂｚ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（８０ｇ）を含む溶液を、６０ｐｓｉ水素で、４％Ｐｄ／Ｃ上で水素化させた。触媒を濾取し、そしてＥｔＯＡｃで洗浄し、そして濾液を真空で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（７００ｍＬ）に取り、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させ、そしてこの手順をもう１度繰返した。その残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）に溶解させた後、溶液をヘプタン（２００ｍＬ）で粉砕させた。混合液を真空で蒸発させて、固形物を得た。それは、ＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で処理した時に懸濁液を形成した。懸濁液をヘプタン（１００ｍＬ）で処理し、濾過し、そして真空で乾燥させて、６４．２ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＨＰＬＣ：９８．５ｐａ％、ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝４５６。
実施例４
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
１０％Ｎａ2ＣＯ3（２５ｍＬ）およびＴＨＦ（３０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（９．１１ｇ）を含む溶液を、０℃に冷却し、そしてＴＨＦ中のＦｍｏｃ−Ｃｌ（６．４６ｇ）の溶液で処理した。０℃で１時間後、混合液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）と水（１００ｍＬ）との間に分配し、そして層を分離させた。有機層を水（１００ｍＬ）、１０％クエン酸（２×１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で洗浄し、その後Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、そして乾固するまで蒸発させて、油状物を得た。残渣をＥｔＯＡｃに溶解させ、そしてヘプタンから沈殿させて、１１．６６ｇの粗生成物を得た。この材料を、少量、ＥｔＯＡｃに溶解させ、そしてシリカゲル（２００ｇ）カラムにかけ、それをＥｔＯＡｃ／ヘプタン混合液（２／１）で、続いてＥｔＯＡｃで、そして最終的にエタノールで溶出させた。生成物含有分画を混ぜ、そして真空下で乾固するまで蒸発させて油状物を得た。その残渣を、少量のＥｔＯＡｃに溶解させ、そしてヘプタンから沈殿させて、１０．７５ｇのＢｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＨＰＬＣ：９８．１％、ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝６７８、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝６９５、［ａ］Ｄ＝−１２．２（ｃ＝１，ＨＯＡｃ）。
実施例５
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１５．０ｇ）の溶液を、飽和するまで、ＨＣｌガスがその溶液に曝気しながら、氷浴上で冷却し、その後さらに２０分間、０℃で攪拌した。その溶液を一晩窒素で散布させて、ＨＣｌを除去し、その後へプタンを添加して、脱保護ペプチドを沈殿させた。固形物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、１２．３ｇのＨＣｌ・Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
Ｂ．結合
脱保護ペプチド（セクションＡ、１１．１ｇ）をＮＭＰ（３０ｍＬ）に沈殿させ、そしてＮＭＭ（２．１ｍＬ）で中和した。その後、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（４．６９ｇ）およびＨＯＢｔ（３．３３ｇ）を添加し、そして混合物を５℃まで冷却し、そしてＥＤＣ・ＨＣｌ（３．８２ｇ）を添加した。反応を完了させるために、ＮＭＭ（２．１ｍＬ）でｐＨを７に調節した。２時間後、反応液をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と５％クエン酸（２００ｍＬ）の間に分配した。層を分離して、そして水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、そして５％クエン酸（２００ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（２×２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、そしてＭｇＳＯ4上で乾燥させた。ＥｔＯＡｃを真空下で蒸発させて、油状物を得た。この材料を少量のＥｔＯＡｃに取り、そしてシリカゲル（４００ｇ）カラムにかけて、それをＥｔＯＡｃ／ヘプタン混合液で溶出した。生成物含有画分を合わせて、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、９．９１ｇのＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＨＰＬＣ：９７．９ｐａ％、［ａ］Ｄ＝−２３．０（ｃ＝１，ＨＯＡｃ）、（Ｍ＋Ｈ）+＝７９１。
実施例６
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（５．５９ｇ）の溶液を、０±５℃で、６０分間、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ溶液（１５０ｍＬ）で処理した。ヘプタン（３０ｍＬ）を添加し、そしてその溶液を、３０分間窒素でパージし、その後真空下で元の容量の約半分に濃縮した。ＥｔＯＡｃ／ヘプタン混合液（４０ｍＬ／４０ｍＬ）を添加し、そして再度その溶液を真空下で半分の容量に濃縮した。別のＥｔＯＡｃ／ヘプタン混合液（４０ｍＬ／４０ｍＬ）を添加し、そしてその混合液を真空下で乾固するまで濃縮した。酢酸エチル（５０ｍＬ）および生じた沈殿物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、４．４３ｇのＨＣｌ・Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
Ｂ．結合
上（セクションＡ、４．２０ｇ）から得た脱保護テトラペプチドを、ＨＯＢｔ（０．９８ｇ）、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）ＯＨ（２．１３ｇ）およびＮＭＭ（１．２７ｍＬ）と一緒にＮＭＰ（３５ｍＬ）に溶解させた。その溶液を５±５℃に冷却し、そしてＥＤＣ・ＨＣｌ（１．１６ｇ）を添加した。１時間後、氷浴を外し、そしてその混合液をさらに１時間、周囲温度で攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と水（５０ｍＬ）の間に分配した。その層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。混合有機抽出物を５％クエン酸（２×５０ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（２×５０ｍＬ）および水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、その後、真空下で濃縮して、６．１５ｇの油状物を得た。その油状物をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）に溶解させ、そしてエーテル（５００ｍＬ）に添加して、沈殿物を形成させた。固形物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、５．１３ｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
実施例７
Ｂｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（６．７５ｇ）の溶液を、５±５℃で、１時間、ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ溶液（１５０ｍＬ）で、その後、周囲温度で、３０分間処理した。ヘプタン（３０ｍＬ）を添加し、そして混合液を窒素で１０分間散布させた。固形物を濾過して、真空中、４０℃で、乾燥させた。
Ｂ．結合
ＮＭＰ中に、上（セクションＡ）で得られた脱保護ペプチド、Ｂｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−）ＨおよびＨＯＢｔを含む溶液を、５±５℃に冷却し、その後、ｐＨが約５になるまで、溶液をＮＭＭ（３．２ｍＬ）で処理した。ＥＤＣ（１．３３ｇ）を添加し、そして混合液を一晩、周囲温度で攪拌させた。反応混合液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）とＨ2Ｏ（１００ｍＬ）の間に分配し、そして層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出し、そして有機層を混ぜ合わせ、そして５％クエン酸（２×１００ｍＬ）、１０％Ｋ2ＣＯ3（２×１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで濃縮した。生じた油状物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）に溶解させ、そして溶液をシリカゲル（３００ｇ）カラムにかけた。カラムを、５％ＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃ、１０％ＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃおよび１５％ＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃで連続的に溶出した。生成物含有画分を混合して、そして乾固するまで真空下で濃縮した。残渣を、少量のＥｔＯＡｃに取り、そしてヘプタン（１５０ｍＬ）およびＭＴＢＥ（１５０ｍＬ）の混合液から沈殿させて、４．５４ｇの
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を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１２９１、（Ｍ＋Ｋ）+＝１３２９。
実施例８
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ
Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ（６１．６ｇ）のトシレート塩をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および１０％Ｋ2ＣＯ3（４００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、そして水（２×５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で約２００ｍＬに濃縮した。酢酸エチル（２５０ｍＬ）を添加し、そしてその溶液を再び真空下で約２００ｍＬに濃縮し、そしてこの手順を、真空下で、最終濃度まで繰返して約１００ｍＬにした。少量のＮＭＭ（１．６ｍＬ）を、その溶液に添加し、そしてさらに処理のために保持した。
別のフラスコに、Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ＯＨ（５０．０ｇ）をＴＨＦに溶解させ、そしてその溶液を０℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン（１５．７ｍＬ）を添加し、その後、その溶液を−１０から−５℃に冷却し、そして温度を−５℃未満に維持しながら、クロロ蟻酸イソ−ブチル（１９．４ｍＬ）を滴加した。添加を完了した後、その溶液をさらに２０分間、−５℃で攪拌し、その後、温度を−５℃に維持しながら、上で得られたＬｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ溶液を添加した。周囲温度に達するまで、その混合液を一晩攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃ（３Ｌ）と１０％クエン酸（５００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして有機層を１０％クエン酸（５００ｍＬ）、１０％ＮａＨＣＯ3（２×５００ｍＬ）および水（５００ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空下で、約１Ｌに濃縮し、その後ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で処理し、そして真空下で約７５０ｍＬに濃縮した。再度、残渣をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で処理し、そして真空下で、約７５０ｍＬに蒸発させ、その後、ヘプタン（１Ｌ）で処理した。一晩攪拌した後、沈殿物を濾過し、濾材でヘプタンを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、６６．６ｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌを得た。ＨＰＬＣ：９８．７ｐａ％、［ａ］Ｄ＝１４．１（ｃ＝０．９２，ＣＨＣｌ3）、（Ｍ＋Ｈ）+＝５５５。
実施例９
ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ
Ａ．脱保護第１番
２．３ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）中にＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ（６０ｇ）を含む溶液を周囲温度で、２時間攪拌し、その後、ＨＣｌガスを溶液に１０分間、曝気した。さらに３０分間攪拌した後、溶媒を真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を一晩真空下で維持し、その後、ＤＭＦ（２２５ｍＬ）に溶解させ、そして次の工程のために保持した（セクションＢ）。
Ｂ．結合
ＴＨＦ（４８０ｍＬ）中のＢｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（４０．６ｇ）の溶液を−３から−１０℃に冷却し、そしてＮＭＭ（１３．２ｍＬ）を、続いてクロロ蟻酸イソブチル（ＩＣＢＦ、１４．９ｍＬ）を添加した。ＩＣＢＦの添加が完了した後、その混合液を３０分間攪拌し、その後、温度を−５℃未満に維持しながら、上（セクションＡ）で得た溶液を滴加した。これをすぐに、ＮＭＭ（２６．４ｍＬ）を添加することにより行い、そして、周囲温度に達成するまで、その混合液を一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（１．７Ｌ）に添加し、そして生じた溶液をｐＨ２．５のＨ3ＰＯ4（３×３００ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（３×３００ｍＬ）および水（３×３００ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃを蒸発させて、油状物を得た。
Ｃ．脱保護第２番
上（セクションＢ）から得られた油状物をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）に溶解させ、そしてこの溶液を、３．０Ｎ  ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（３．８Ｌ）およびＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）の混合液にゆっくりと添加した。３時間攪拌した後、ＭＴＢＥ（２．５Ｌ）を添加して、そして生じた沈殿物を濾過し、濾材でＭＴＢＥを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、７４．１ｇの２ＨＣｌ・ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌを得た。
Ｄ．中和
トリペプチド・ジヒドロクロライド（５０．２ｇ）をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）、１０％Ｋ2ＣＯ3（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）の間に分配した。エマルジョンが形成され、そして塩化メチレン（ＤＣＭ、１５０ｍＬ）を添加し、そしてエマルジョンは部分的に崩壊された。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、そして２回水で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）およびＤＣＭ（１５０ｍＬ）で処理し、そして真空下で乾固するまで濃縮し、そしてこの手順を２回繰返して、フラスコに固形物を得た。その固形物をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）およびヘプタン（４００ｍＬ）で処理し、濾過し、濾材でヘプタンを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、４０．６ｇのＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌを得た。ＨＰＬＣ：９６．９ｐａ％、［ａ］Ｄ＝２５．９（ｃ＝１，ＨＯＡｃ）。
実施例１０
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ
Ｂｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）ＯＨ（３０．０ｇ）、ＨＯＢｔ（１５．７ｇ）、ＴｓＯＨ・Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ（３１．３ｇ）およびＮＭＰ（２２５ｍＬ）の混合液を０±５℃に冷却し、そして水（１８ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（１７．８ｇ）の溶液を添加し、続いてＮＭＭ（２０ｍＬ）を添加し、そして溶液を０±５℃で１時間攪拌い、続いて周囲温度で、一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）と水（５００ｍＬ）の間に分配し、そして層を分離した。有機層を１０％クエン酸（２×２１０ｍＬ）、１０％Ｋ2ＣＯ3（２１０ｍＬ）および水（２×２１０ｍＬ）で洗浄した。有機溶液を、真空下で乾固するまで蒸発させ、そして生じた油状物をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に取り、そして曇るまでヘプタン（１６０ｍＬ）で処理した。混合液に種付けし、４時間攪拌し、その後追加の部分のヘプタン（１１０ｍＬ）で処理した。２時間、１０±５℃で攪拌した後、固形物を濾過し、濾材でＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１／３、８０ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、３５．３ｇのＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌを得た。ＨＰＬＣ：９４．１ｐａ％、［ａ］Ｄ＝１５．１、（ＣＨＣｌ3）、（Ｍ＋Ｈ）+＝５０５。
実施例１１
ＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ
Ａ．脱保護第１番
３．９ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ（２０ｇ）の溶液を４０分間攪拌し、そしてその後、溶液を真空下で、約２０ｍＬまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で処理し、そして再度真空下で、約３０ｍＬまで蒸発させ、そして残渣をＮＭＰ（８０ｍＬ）で希釈し、そして希釈を中止するまで、真空下で蒸発させた。生じた溶液を次の工程（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
Ｂｏｃ−ＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）ＯＨ（１６．８ｇ）とＨＯＢｔ（７．２８ｇ）との溶液と、上（セクションＡ）から得た溶液を０±５℃に冷却し、そしてＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（１１．９ｇ）のスラリーを添加して、続いて、ＮＭＭ（１３．２ｍＬ）を添加した。混合液を０±５℃で３０分間、その後、周囲温度で２時間攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）および１０％クエン酸（２４０ｍＬ）の間に分配した。水層をＥｔＯＡｃで抽出し、そして有機層抽出物を合わせて、１０％クエン酸（２４０ｍＬ）、Ｋ2ＣＯ3（２×２４０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄した。その溶液を真空下で約２００ｍＬまで蒸発させ、その後ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を添加し、そして生じた溶液を、真空下で乾固するまで蒸発させて、固形物を得た。
Ｃ．脱保護第２番
上（セクションＢ）から得た固形物をＤＣＭ（８８ｍＬ）およびＴＦＡ（８８ｍＬ）に溶解させ、そして周囲温度で４５分間攪拌した。混合液をＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）と１５％Ｋ2ＣＯ3（９００ｍＬ）の間に分配し、そして層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（４５０ｍＬ）で抽出して、そして混合ＥｔＯＡｃ層を、水（２×２４０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で６００ｍＬまで蒸発させた。別の部分のＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を添加し、そして再度その溶液を真空下で約３００ｍＬまで濃縮した。溶液を種付けし、そして一晩、周囲温度で攪拌させた。ヘプタン（６７０ｍＬ）を添加し、そして混合液をさらに５時間、周囲温度で攪拌した。生じた固形物を濾取し、そして濾材でＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１／３、２００ｍＬ）混合液を用いて洗浄し、そして真空中、４５℃で乾燥させて、２５．３ｇのＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌを得た。ＨＰＬＣ：９６．９ｐａ％、［ａ］Ｄ＝２６．７（ｃ＝１，ＨＯＡｃ）、（Ｍ＋Ｈ）+＝６７２。
実施例１２
ＮＭｅＴｒｙ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ａｌｌ
Ａ．脱保護第１番
ＥｔＯＡｃ（２２０ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ（２０．２ｇ）の溶液を、２．５ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２２０ｍＬ）で３０分間処理した。溶液を真空下で約４０ｍＬまで濃縮し、その後ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）を添加し、そして溶液を再度真空下で約４０ｍＬまで濃縮した。残渣を別の部分のＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で処理し、そして真空下で乾固するまで蒸発させ、その後、残渣をＮＭＰ（８０ｍＬ）中に溶解させ、そして希釈が中止されるまで、真空下で蒸発させた。
Ｂ．結合
Ｂｏｃ−ＮＭｅＴｒｙ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−ＯＨ（２０．０ｇ）、ＨＯＢｔ（７．３５ｇ）およびＮＭＰ２０ｍＬ）を、上で得られた残渣に添加し、そしてその混合液を０−５℃に冷却した。別のフラスコで、ＮＭＰ（８０ｍＬ）中の懸濁液ＥＤＣ・ＨＣｌ（９．２１ｇ）を０−５℃に冷却し、その後、上で製造した溶液に添加し、さらにＮＭＭ（１４．５ｍＬ）を添加した。混合液を０−５℃で、３０分間、その後、周囲温度で、一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）と１０％クエン酸（１８０ｍＬ）の間に分配し、層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、１０％クエン酸（１８０ｍＬ）、１０％Ｋ2ＣＯ3（２×１８０ｍＬ）および水（２×１８０ｍＬ）で洗浄し、その後真空下で、約２００ｍＬまで濃縮した。濃縮物をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で処理し、そしてその溶液を真空下で乾固するまで蒸発させた。
Ｃ．脱保護第２番
セクションＢから得た残渣を、塩化メチレン（ＤＣＭ、８８ｍＬ）に溶解させ、そして４５分間、ＴＦＡ（８８ｍＬ）で処理した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（９００ｍＬ）と１７％Ｋ2ＣＯ3（９００ｍＬ）の間に分配し、層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（４６０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、そして水（２×１８０ｍＬ）で洗浄し、そして界面にある少量の固形物を、濾取した。有機層を真空下で約６００ｍＬまで濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を添加し、そして溶液を、真空下で約３２０ｍＬまで濃縮した。種結晶を添加し、混合液を周囲温度で、一晩攪拌し、その後ヘプタン（６４０ｍＬ）を添加し、そしてスラリーを周囲温度で、さらに３時間攪拌した。固形物を濾過し、濾材で、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）とヘプタン（１５０ｍＬ）の混合液を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、３８．４６ｇのＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ａｌｌを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７４０。
実施例１３
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ
Ａ．結合
ＤＣＭ（２５ｍＬ）中のＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）ＯＨ（６．０ｇ）中の溶液を５℃に冷却した。ＤＣＭ（５ｍＬ）中のジシクロヘキシルカルボジイミド（２．１ｇ）の溶液を添加し、その後、反応液を７５分間、５℃で攪拌し、その後、全混合液を、周囲温度で、固形物ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ（６．０ｇ）に添加し、続いて反応フラスコをさらにＤＣＭ（５ｍＬ）洗浄した。その後、反応液を一晩周囲温度で攪拌した。沈殿したジシクロヘキシルウレアを濾取し、そして濾材でＤＣＭ（７５ｍＬ）を用いて洗浄した。合わせた濾液を５％クエン酸（２×２０ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（２×１０ｍＬ）および水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、その後、真空下で乾固するまで蒸発させて、油状物を得た。油状物をシリカゲル（２８０ｇ）カラムにかけ、そしてＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９／１）混合液で溶出した。生成物含有分画を合わせて、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、７．９ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝９９９。
Ｂ．脱保護
ＮＭＰ（１０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ｂｚｌ（３．７ｇ）を含む溶液を、１℃に冷却し、そして２ＮのＮａＯＨ（水中、１２．５ｍＬ）の溶液を、反応温度を６℃未満に維持しながら、約１５分間かけて滴加した。反応混合液を水（１００ｍＬ）で希釈し、そして生じた溶液をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で洗浄した。水層をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）で被覆し、そして混合液のｐＨを、６ＮのＨＣｌで２に調節した。層を分離して、そして水層をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液を合わせて、そして水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で濃縮して油状物にした。油状物を、ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）に溶解させ、そして生じた溶液をヘプタン（５００ｍＬ）に添加し、そして生じたスラリーを一晩攪拌した。固形物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、３．０ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨを得た。
実施例１３Ａ
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ
Ａ．結合
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）（７．９５ｇ）およびＤＣＭ（２０ｍＬ）の溶液を０℃に冷却し、そしてＤＣＭ（１０ｍＬ）中にＤＣＣ（２．７６ｇ）を含む溶液を添加した。溶液を０±１０℃で、１時間攪拌し、その後、濾過して沈殿したＤＣＵを除去した。ＤＣＭ（２５ｍＬ）中にＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌ（６．０ｇ）を含むスラリーを濾液に添加し、そして溶液を２０±５℃に加温し、一晩攪拌した。少量の沈殿ＤＣＵを濾取し、そして濾過ケークをＤＣＭ（５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（４５ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を真空下で乾固するまで蒸発させ、そして残渣をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）およびヘプタン（２５ｍＬ）に溶解させた。有機溶液を、１０％クエン酸（２×４０ｍＬ）、１０％Ｋ2ＣＯ3（２×４０ｍＬ）および水（２×４０ｍＬ）で洗浄した。有機溶液を乾固するまで真空下で蒸発させ、その後、少量のＥｔＯＡｃに溶解させ、そしてシリカゲル（１８０ｇ）クロマトグラフィーカラムにかけた。カラムをＥｔＯＡｃ／ヘプタン（５００ｍＬ／１５０ｍＬ）で、その後、ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（１２５ｍＬ／４０ｍＬ）で、そして最終的にＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で溶出した。生成物含有画分を合わせて、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｒｙ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｏ−Ａｌｌを油状物として得た。
Ｂ．脱保護
ＴＨＦ（２５ｍＬ）中にＰｄ（ＰＰｈ3）2Ｃｌ2（０．０６２ｇ）を含む溶液を、窒素でパージし、その後Ｂｕ3ＳｎＨ（０．１３０ｇ）を添加し、そして混合液を、窒素下で、１０分間攪拌した。ＴＨＦ（３３ＭＬ）中に上から得たテトラペプチドを含む溶液を添加し、続いて、モルホリン（７．０ｍＬ）を添加し、そして混合液を３０分間攪拌し、そのときに、反応液は完了した。混合液をＴＨＦ（３０ｍＬ）で希釈し、その後、真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（２１０ｍＬ）および水（２０ｍＬ）に取り、そしてその混合液のｐＨを、２ＮのＨＣｌを用いて約３に調節した。層を分離し、そして有機層を水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾固するまで真空下で約４０ｍＬまで蒸発させ、その後ヘプタン（１Ｌ）に添加し、沈殿物を形成させた。固形物を濾過し、そしてヘプタンで洗浄して、７．０ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｋ）+＝９４７、（Ｍ＋２Ｋ−Ｈ）+＝９８５。
実施例１４
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2 Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ
Ａ．結合
ＤＣＭ（２３ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（１２．０ｇ）を含む溶液を、０−５℃に冷却し、ＤＣＭ（１５０ｍＬ）中にジシクロヘキシルカルボジイミド（４．１８ｇ）を含む冷溶液で処理した。０−５℃で、１時間攪拌した後、温度を１０℃未満に維持しながら、ＤＣＭ（２３ｍＬ）中にＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ（１０．０ｇ）およびＮＭＰ（６ｍＬ）を含む混合液を添加した。混合液を、０−５℃で３０分間、その後、周囲温度で３時間攪拌した。沈殿ジシクロヘキシルウレア（ＤＣＵ）を濾取し、そしてＤＣＭ（６０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）で洗浄した。濾液を合わせて、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（４５０ｍＬ）およびヘプタン（４５ｍＬ）で溶解させ、そして０−１０℃に冷却し、そして濾過して、さらにＤＣＵを除去した。濾液を１０％クエン酸（２×６０ｍＬ）、１０％Ｋ2ＣＯ3（２×６０ｍＬ）および水（２×６０ｍＬ）で洗浄し、その後、真空下で乾固するまで蒸発させて、油状物を得た。
Ｂ．アリルエステルの精製
残渣をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解させ、そしてシリカゲル（２７５ｇ）カラムにかけた。カラムをＥｔＯＡｃ：ヘプタン混合液（１０５０ｍＬ：４５０ｍＬ）で、続いてＥｔＯＡｃ（８Ｌ）で溶出した。生成物含有画分を合わせて、そして真空下で乾固するまで濃縮して、油状物を得た。
Ｃ．アリルエステルの脱保護
上で（セクションＣ）で得られた油状物を、窒素ブランケット下で、ＴＨＦ（３５ｍＬ）に溶解させた。窒素で洗浄した別のフラスコに、（ＰＰｈ３）2ＰｄＣｌ2（０．０９５ｇ）およびＴＨＦ（３５ｍＬ）を満たした。水素化トリ−ｎ−ブチルスズ（０．１８２ｍＬ）をその溶液に添加（色が黄色から赤色に変化した）、続いて、モルホリン（１０．６ｍＬ）を添加し、その後、アリルエステルの溶液を添加した。周囲温度で２時間攪拌した後、混合液を真空下で乾固するまで濃縮し、そして残渣をＥｔＯＡｃ（３１５ｍＬ）に溶解させた。水（３０ｍＬ）を、その溶液に添加し、そして、２ＮのＨＣｌを用い、５−１５℃の温度で、水層のｐＨを１−２に調節した。周囲温度に加温した後、層を分離し、そして有機層を水（９０ｍＬ）で洗浄した。有機溶液を真空下で乾固するまで蒸発させ、そして残渣を、ＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）に再溶解させ、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。生じた油状物をＥｔＯＡｃ（８０ｍＬ）に取り、そして生成物を沈殿させ、このとき溶液に、ヘプタン（１７５０ｍＬ）を添加した。固形物を濾過し、そして濾材で、ヘプタン（２×１００ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１２．２ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝９７７。
実施例１５
Ｂｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中に２ＨＣｌ・Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ（８．４ｇ）の溶液を氷浴中で冷却し、そしてＮＭＭ（２．７５ｍＬ）で処理し、続いてＨＯＢｔ（５．０５ｇ）およびＢｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（９．４ｇ）で処理した。混合液を０−５℃に冷却し、そしてＥＤＣ・ＨＣｌ（５．２５ｇ）を添加し、さらにＤＭＦ（１０ｍＬ）およびＴＨＦ（２５ｍＬ）を添加した。反応液を０から５℃で１時間、その後周囲温度で一晩攪拌した。ＮＭＭ（２．７５ｍＬ）で、ｐＨを６に調節し、そして混合液をさらに３時間、室温で攪拌した。混合液を真空下で濃縮させ、そして残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に取り、そして水（１００ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（２×７５ｍＬ）で洗浄し、そして水でｐＨを中性にした。溶媒を真空下で蒸発させて、油状物を得、それをシリカゲル（２００ｇ）カラムにかけた。カラムをＥｔＯＡｃで溶出させ、続いて、５％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃで溶出させた。生成物含有画分を貯蔵し、そして真空下で蒸発させて、１１．５ｇのＢｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅを得た。ＦＡＢＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝６３３。
実施例１６
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ
Ａ．脱保護
ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中にＢｏｃ−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ（１０ｇ）を含む溶液を、周囲温度で１時間攪拌した。溶媒を真空下で蒸発させて、湿潤性の油状物を得、それを真空下で、ＮａＯＨペレット上で乾燥させて、１０ｇの脱保護ジペプチドを得た。
Ｂ．結合
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（３．８５ｇ）を含む懸濁溶液を氷浴中で冷却し、ＥＤＣ・ＨＣｌ（１．４０ｇ）を添加し、そして対称的な無水物を形成するために、反応液を２時間、０から５℃で攪拌した。別のフラスコに、上で得た２ＨＣｌ・ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ（２．６２ｇ）をＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解させ、そしてその溶液を０から５℃に冷却した。ＮＭＭ（０．９５ｍＬ）を添加した後、対称的無水溶液を添加し、そして反応液を、０から５℃で１時間、そしてその後、周囲温度で４時間攪拌した。溶液を、真空下で濃縮し、そして残渣を１３０ｍＬのＥｔＯＡｃに溶解させた。この溶液を水（８５ｍＬ）、５％ＮａＨＣＯ3（２×１１０ｍＬ）および水で連続的に洗浄してｐＨを中性にした。有機溶液を、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させ、そして真空下で蒸発させて、油状物を得た。油状物を、シリカゲル（５５ｇ）カラムにかけ、そして８０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタン、９０％ＥｔＯＡｃ／ヘプタンおよびヘプタンで連続的に溶出させた。生成物含有画分を合わせて、そして真空下で濃縮して、２．１９ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅを得た。
ＦＡＢＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝８１０、（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）+＝７１０。
実施例１７
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ＯＨ
トリペプチドＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｏ−Ｍｅ（０．８０９ｇ）をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、そしてその溶液を０から５℃に冷却した。充分に攪拌しながら、１ＮのＮａＯＨ（１ｍＬ＋０．５ｍＬ＋０．５ｍＬ）を、３時間かけて添加し、その後ｐＨをクエン酸水溶液で酸性にし、そしてＭｅＯＨを真空下で除去した。残渣を、水で希釈し、そしてｐＨを塩基性にした。この溶液をＥｔＯＡｃ（２×１５ｍＬ）で抽出し、そして水相を、クエン酸で、ｐＨ３まで酸性にした。混合液をＥｔＯＡｃ（４×１５ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、水で洗浄して、ｐＨを中性にし、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、０．５２ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ＯＨを得た。
ＦＡＢＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７９６．８、（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）+＝６９６．８。
実施例１８
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ
２−Ｒ，Ｓ−テトラヒドロフロ酸（２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦＡ、１．１６ｇ）、塩酸グリシンベンジルエステル（２．２２ｇ）、ＨＯＢｔ（２．１４ｇ）およびＴＨＦ（３０ｍＬ）の攪拌混合液を、約５℃に冷却した。ＥＤＣ・ＨＣｌ（２．０１ｇ）、ＴＨＦ（５ｍＬ）および水（５ｍＬ）の２相混合液を加え、続いてＮＭＭ（１．２ｍＬ）を添加する。反応液を、０から５℃で２０分間攪拌し、その後周囲温度に加温し、そして一晩攪拌した。反応混合液を水（１００ｍＬ）に注ぎ入れ、そして混合液を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、そして５％のクエン酸、１０％  Ｎａ2ＣＯ3および水で洗浄した。生じたＥｔＯＡｃ溶液を真空下で濃縮して、２．４７ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌを黄色油状物として得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２６４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝２８１。
実施例１９
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ
メタノール（２０ｍＬ）中に２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ（０．８０ｇ）を含む溶液を５％Ｐｄ／Ｃ（０．０８ｇ）上で、１０ｐｓｉで、２時間水素化した。触媒を濾取し、そして濾液を真空下で濃縮して、油状物（０．５１ｇ）を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１７４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝１９１。
実施例２０
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ
２Ｒ−ＴＨＦＡ・ブルシン塩（１８．９８ｇ）、塩酸グリシンベンジルエステル（ＨＣｌ・Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ、１３．７２ｇ）、ＨＯＢｔ（７．９３ｇ）およびＴＨＦ（１００ｍＬ）の攪拌混合液を、５℃に冷却した。水（１０ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（７．８０ｇ）を含む混合液を添加し、続いてＥＤＣ・ＨＣｌ容器を水（５ｍＬ）洗浄した。約１１℃まで初期発熱の後、混合液を、１０分間５℃に冷却し、その後、冷却浴を外し、そして混合液を一晩、周囲温度で攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）と１ＮのＨ2ＳＯ4の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で洗浄した。混合有機層を、１ＮのＨ2ＳＯ4（１×２００ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（２×２００ｍＬ）および水（２×２００ｍＬ）で洗浄した。生じたＥｔＯＡｃ溶液を真空下で濃縮して、油状物にし、その後、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に再溶解させ、そして真空下で再濃縮して、１０．３２ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌを黄色油状物として得た。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２６４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝２８１。
実施例２１
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ
２−プロパノール（９０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）中に２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ（１１．４ｇ）を含む溶液を、４０ｐｓｉで、１４時間、５％Ｐｄ／Ｃ（０．５２ｇ）上で水素化させた。触媒を濾取し、そして溶液を真空下で３２ｇに濃縮した。酢酸エチル（１００ｍｍＬ）を添加し、そして溶液を真空下で濃縮して、１０ｇを得、そして残渣を再度ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に溶解させ、そして真空下で１２．５ｇに再度濃縮した。そしてその残渣をＥｔＯＡｃ（４０ｍＬ）およびヘプタン（５０ｍＬ）で処理し、そして混合液を還流まで加熱し、その後５℃に冷却した。生じた固形物を濾取し、そして真空下で乾燥させて、４．９６ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを得た。ＭＰ：１１６−１１７℃（未補正（ｕｎｃｏｒｒ．））。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１７４、（Ｍ＋Ｈ4）+＝１９１。
実施例２２
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ
２Ｓ−テトラヒドロフロ酸（２Ｓ−ＴＨＦＡ、２．３２ｇ）、塩酸グリシンベンジルエステル（ＨＣｌ・Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ、４．４４ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ、４．２８ｇ）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、５０ｍＬ）の攪拌混合液を、約１０℃に冷却した。塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ、４．０３ｇ）、ＴＨＦ（１０ｍＬ）および水（５ｍＬ）の２相混合液を添加し、続いてＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２．４０ｍＬ）を加えた。１２℃まで初期発熱した後、混合液を５℃に冷却し、そして４５分間攪拌し、その後周囲温度に加温し、そして一晩攪拌した。反応混合液を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、１００ｍＬ）および１０％クエン酸溶液（５０ｍＬ）の間に分配した。その層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、１０％Ｋ2ＣＯ3（１×５０ｍＬ）および水（１×５０ｍＬ）で洗浄した。生じたＥｔＯＡｃ溶液を真空下で濃縮して、油状物にし、その後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）に再溶解させ、そして真空下で再濃縮して、５．３０ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌを黄色油状物として得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２２４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝２８１。
実施例２２Ａ
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ
２Ｓ−ＴＨＦＡ・ＤＣＨＡ（１８．８９ｇ）、ＴｓＯＨ・Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ（２３．５４ｇ）、ＨＯＢｔ（１３．６１ｇ）およびＴＨＦ（１９８ｍＬ）の混合液を、周囲温度で２０分間攪拌し、その後４℃に冷却した。水（２０ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（１３．２９ｇ）を含む溶液を３から５分かけて添加し、そして反応混合液の温度を１２℃に上昇させた。反応混合液を３０分間冷却しながら、その後周囲温度で一晩攪拌した。その後、混合液を５℃に冷却し、濾過して、固形物を除去し、そして濾過ケークをＥｔＯＡｃ（２２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、そしてその溶液を真空下で濃縮して、７０ｇを得た。この濃厚物をＥｔＯＡｃ（２２０ｍＬ）と１０％Ｎａ2ＣＯ3の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１４０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、そして１ＮのＨ2ＳＯ4（２×１００ｍＬ）、１０％（１００ｍＬ）および水（２×１００ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ溶液を真空下で、約３０ｇに濃縮し、その後ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で希釈し、そして真空下で乾固するまで濃縮して、１６．１２ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌを黄色油状物として得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２６４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝２８１。
実施例２３
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ
メタノール（４５ｍＬ）中の２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ（４．５１ｇ）の溶液を、４０ｐｓｉで、２５℃で、１．５時間、５％Ｐｄ／Ｃ（０．４５ｇ）上で水素化した。触媒を濾取し、そして濾液を真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解させ、そしてその溶液を再度真空下で蒸発させて、２．７０ｇの白色固形物を得た。固形物（２．０３ｇ）を加熱しながら、蒸気浴上でＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）に溶解させた。溶液を、２時間、５℃に冷却し、そして生じた固形物を濾過し、そしてヘプタン（５０ｍＬ）で洗浄し、そして４８時間、真空下で乾燥させて、１．７１ｇのＳ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを白色固形物として得た。
ＭＰ：９５．５−９６．５（未補正（ｕｎｃｏｒｒ．））。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１７４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝１９１。
実施例２３Ａ
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ
２−プロパノール（３００ｍＬ）中の２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｏ−Ｂｚｌ（３０．６ｇ）の溶液を、４０ｐｓｉで、３．５時間、５％Ｐｄ／Ｃ（０．６１２ｇ）上で水素化した。触媒を濾取し、そして溶液を真空下で、約７５ｇまで蒸発させた。トルエン（３００ｍＬ）を添加し、そして溶液を再度真空下で約１５０ｇまで濃縮した。トルエン（３００ｍＬ）を再度添加し、そしてその溶液を真空下で、約１１５ｇに濃縮し、その後、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加し、そして混合液を、蒸気浴上で加熱し、そしてＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）で洗浄させながら大きなフラスコに移した。その混合液を、８３℃に加熱し、その後、１０℃に冷却して、３０分間維持した。固形物を濾過し、そしてトルエン（８０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１６．２５ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨを得た。
ＭＰ：１１６−１１８（未補正（ｕｎｃｏｒｒ．））。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１７４、（Ｍ＋ＮＨ4）+＝１９１。
実施例２４
Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ
Ｂｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−ＯＨ（１２．５ｇ）、ＨＯＢｔ（９．５８ｇ）、２ＨＣｌ・Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（１０．５５ｇ）およびＡＣＮ（３００ｍＬ）中の混合物を、攪拌しながら、０から５℃に冷却し、そしてＮＭＭ（９．２ｍＬ）およびＥＤＣ・ＨＣｌ（８．８ｇ）を添加した。攪拌４時間後、反応混合液を５％ＮａＨＣＯ3（１．８Ｌ）に注ぎ入れ、そして生成物を沈殿させた。固形物を濾過し、濾材で、水を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１７．９ｇのＢｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。ＨＰＬＣ：９８．３ｐａ％。
実施例２５
Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ
Ａ．脱保護
３．４ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２６０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（１４．０ｇ）を含む溶液を周囲温度で攪拌した。３分後、溶液が得られ、その２０分後に沈殿が形成し始めた。酢酸エチル（８８ｍＬ）を添加し、そのときに、混合液を２時間攪拌し、そして溶媒を真空下で蒸発させて、約１２５ｍＬにした。酢酸エチル（１７６ｍＬ）を添加し、そしてその混合液を、再度真空下で蒸発させて、約１２５ｍＬにし、そしてこの手順をもう１度繰返し、そして、約１５０ｍＬの最終容量が確保されるまで、蒸発を継続した。混合液を２０℃に冷却し、そして濾過し、濾材で、ＥｔＯＡｃ（２×８０ｍＬ）を用いて洗浄し、そして、窒素のブランケット下でさらに工程を行った（セクションＢ）。収量：５．１ｇ。
Ｂ．結合
上で得られた固形物（セクションＡ、１５．１ｇ）、Ｂｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−ＯＨ（９．６ｇ）およびＨＯＢｔ（６．０ｇ）をＡＣＮ（１８０ｍＬ）に懸濁させ、そして混合液を５℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン（８．０ｍＬ）を添加し、そして溶液が得られた。この溶液に、ＡＮＣ（７５ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（６．４ｇ）のスラリーを添加し、そして反応混合液を、３５分間約５℃まで攪拌し、そして沈殿が形成した。冷却材を取除き、そして混合液を一晩攪拌した。スラリーを５℃に冷却し、１時間攪拌し、そして沈殿物を濾過し、そして濾材で、水（５０ｍＬ）を用いて洗浄した。湿潤ケークをＡＣＮ（１４０ｍＬ）および水（１４０ｍＬ）中で、１時間スラリー化し、その後、濾過し、濾材で、ＡＣＮ（１４０ｍＬ）と水（１４０ｍＬ）の混合液を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１７．１ｇのＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝６５９、（Ｍ＋Ｎａ）+＝６８１。
実施例２６
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ
Ａ．脱保護
塩化メチレン（ＤＣＭ、１０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（１．０ｇ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、８ｍＬ）を含む混合液を、周囲温度で、１．５時間攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）と１０％Ｎａ2ＣＯ3（１００ｍＬ）との間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（７５ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、１０％Ｎａ2ＣＯ3（５０ｍＬ）と水（５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで濃縮して、白色固形物を得た。その固形物をヘプタンでスラリー化し、その後濾過し、そして濾過ケークをヘプタンで洗浄し、そして濾材上で乾燥させて、約０．８４ｇのＤ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。
Ｂ．結合
Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（約０．８４ｇ）、２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．２９ｇ）、ＨＯＢｔ（０．３４ｇ）およびＮＭＰ（１０ｍＬ）の混合液を攪拌し、そして氷水浴中で冷却した。水（１ｍＬ）中のＥＤＣ（０．３２ｇ）の溶液を添加し、続いてＮＭＭ（０．２ｍＬ）を添加し、そして混合液を冷却しながら、３０分間攪拌し、続いて周囲温度で一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）と１０％クエン酸（７５ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。混合有機層を１０％Ｎａ2ＣＯ3（２×１００ｍＬ）と水（２×１００ｍＬ）で洗浄した。混合有機層を、真空下で乾固するまで濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解させ、そして真空下で再度、乾固するまで濃縮して、白色固形物を得た（１．２ｇ）。その固形物の一部（０．５ｇ）を、蒸気浴上でＤＣＭ（２ｍＬ）に溶解させ、そしてこの溶液をヘプタン（３０ｍＬ）にゆっくり添加し、そして沈殿物を形成させた。この混合物を３０分間攪拌し、そして固形物を濾過し、濾材で、ヘプタンを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、０．４ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７１４、（Ｍ＋Ｎａ）+＝３７６。
実施例２７
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（１６６ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（２０ｇ）およびＴＦＡ（８１ｍＬ）を含む溶液を、１時間攪拌し、その後反応混合液をＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）および１５％Ｋ2ＣＯ3（１００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせ、１５％Ｋ2ＣＯ3（２５０ｍＬ）および水（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で、約５００ｍＬまで濃縮した。Ｎ−メチルピロリジノン（１２０ｍＬ）をその溶液に添加し、そして、希釈が停止するまで真空下での蒸発を継続し、その後溶液を２０±５℃に冷却した。
Ｂ．結合
セクションＡから得た溶液に、Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ（５．５ｇ）、ＨＯＢｔ（７．０ｇ）およびＮＭＰ（２０ｍＬ）を添加し、そして溶液を５±５℃に冷却した。水（６．４ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（６．４ｇ）を含む溶液を、その溶液に添加し、さらに、ＮＭＭ（３．６ｍＬ）を添加した。反応液を５±５℃で３０分間、そしてその後周囲温度で、４時間攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（３２０ｍＬ）および水（３２０ｍＬ）の間に分配し、そして層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（４３０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、そして１０％Ｎａ2ＣＯ3（２×２５０ｍＬ）および水（２×３００ｍＬ）で洗浄し、そして溶媒を真空下で蒸発させて、約３００ｍＬにした。ＥｔＯＡｃの一部（３５０ｍＬ）を添加し、そして真空下での蒸発を再度継続して、約３００ｍＬにした。さらに、ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を、ＭＴＢＥ（１５０ｍＬ）と一緒に添加し、そして沈殿物を形成させた。４時間攪拌した後、固形物を濾過し、濾材で、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）−ＭＴＢＥ（１００ｍＬ）混合液を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、２０．３２ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。
ＦＡＢＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７１４。
実施例２８
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ
Ａ．脱保護
塩化メチレン（ＤＣＭ、３０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（６．１ｇ）およびトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、１５ｍＬ）を含む混合液を、周囲温度で、２．２５時間攪拌し、その後ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および１０％Ｎａ2ＣＯ3の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、１０％Ｎａ2ＣＯ3（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で、乾固するまで濃縮して、白色固形物を得た。固形物を、ＤＣＭ（４０ｍＬ）に溶解させ、そしてヘプタン（２００ｍＬ）に滴加し、そして沈殿物が形成された。ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）をその溶液に添加し、そして、そのスラリーを３０分間攪拌し、その後濾過し、そして濾過ケークをヘプタン（２０ｍＬ）で洗浄し、そして濾材上で乾燥させて、７．１ｇのＤ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。
Ｂ．結合
Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（３．３９ｇ）、２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−ＯＨ（１．１０ｇ）、ＨＯＢｔ（１．３９ｇ）およびＮ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ、３０ｍＬ）を含む混合液を、攪拌し、そして５℃に冷却した。水（３ｍＬ）中にＥＤＣ（１．２８ｇ）を含む溶液を添加し、さらに、メチルモルホリン（ＮＭＭ、０．８ｍＬ）を添加し、そして、混合液を５℃で、３０分間攪拌し、続いて周囲温度で一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および水（５０ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。混合有機層を、水（５０ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（２×７５ｍＬ）および水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を真空下で乾固するまで濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃに溶解させ、そして再度真空下で乾固するまで濃縮して、白色固形物（４．２９ｇ）を得た。その固形物を、蒸気浴上で、ＥｔＯＡｃ（３５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（３０ｍＬ）の混合物に溶解させ、そしてその溶液を、メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、１２５ｍＬ）にゆっくりと添加し、そして沈殿物を形成させた。この混合物を、ＭＴＢＥ（６０ｍＬ）およびヘプタン（８０ｍＬ）で処理し、その後、５℃で１時間攪拌した。その固形物を濾過し、真空下で乾燥させて、３．６６ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅを得た。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７１４、（Ｍ＋Ｎａ）+＝７３６。
実施例２９
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ
ＮＭＰ（１０ｍＬ）および水（１．０ｍＬ）中に２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（１．０ｇ）を含む溶液を−５℃に冷却した。１ＮのＮａＯＨ（１．５ｍＬ）の溶液を添加し、そして混合液を−５から０℃で、２時間攪拌した。反応溶液を水（５０ｍＬ）およびＡＣＮ（２０ｍＬ）の混合液に添加し、そしてｐＨを、１ＮのＨＣｌで４に調整した。一晩攪拌した後、生じた沈殿物を濾取し、そして水で洗浄した。固形物をＥｔＯＡｃ（３ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）から結晶化させて、０．４５ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７００、（Ｍ＋Ｎａ）+＝７２２、（Ｍ＋Ｈ＋２Ｎａ）+＝７４４。
実施例３０
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ
ＮＭＰ（３０ｍＬ）およびＴＨＦ（３９ｍＬ）中に２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（１０ｇ）を含む溶液を約−１０℃に冷却した。温度を−９から−１０℃に維持しながら、水およびＮＭＰ中にＮａＯＨを含む溶液をゆっくりと添加した。１時間、−１０℃で攪拌した後、反応溶液を、ＡＣＮ（７６ｍＬ）、水（２６０ｍＬ）および１ＮのＨＣｌ（２４ｍＬ）の冷溶液に添加した。ｐＨを４．０±０．２に調節し、そして周囲温度に加温し、そして沈殿物を形成させた。一晩攪拌した後、ｐＨを再度４．０±２に調節し、そして混合液をさらに２時間、攪拌した。固形物を濾取し、濾材で、ＡＣＮ（４０ｍＬ）−水（６０ｍＬ）混合液を用いて洗浄し、そして真空下で、４０℃で乾燥させて、６．７ｇの粗生成物を得た。この材料を、水（２．４ｍＬ）、ＨＯＡｃ（５１ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２７ｍＬ）の熱混合液に溶解させ、そして熱時濾過した。濾液をＨＯＡｃ（１０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で処理し、そして生成物が結晶化し始めた。５−６時間、１０−１５℃で攪拌した後、固形物を濾過し、濾材で、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、６．２ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨを得た。ＦＡＢＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７００、（Ｍ＋Ｋ）+＝７３８。
実施例３１
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ
水（１．４ｍＬ）を、ＮＭＰ（１４ｍＬ）中に２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｏ−Ｍｅ（１．４０ｇ）を含む溶液に添加し、そしてその混合液を攪拌し、そしてＮ2ブランケット下で、−１８℃に冷却した。１ＮのＮａＯＨ（２．３５ｍＬ）の溶液を１０分間かけて添加し、そして添加を完了した後、その溶液を−１８℃から−１０℃で、２時間攪拌した。別のアリコート量の１ＮのＮａＯＨ（０．２５ｍＬ）を添加し、そして混合液をさらに１．５時間、−１０℃から−３℃で攪拌した。反応混合液を水（３０ｍＬ）および１ＮのＨＣｌ（２ｍＬ）、続いてアセトニトリル（ＡＣＮ、１０ｍＬ）で希釈した。混合液のｐＨを、１ＮのＨＣｌで４．１８に調節して、粘性のある沈殿物を得た。混合物を水（１０ｍＬ）およびＡＣＮ（１０ｍＬ）で希釈し、一晩攪拌し、濾過し、そして濾材で、水（５０ｍＬ）を用いて洗浄して、白色固形物（１．３１ｇ）を得た。この固形物の一部（１．０５ｇ）を、３５℃で酢酸（ＨＯＡｃ、９ｍＬ）に溶解させ、そしてその溶液をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に、周囲温度で添加した。追加量のＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）およびＨＯＡｃ（２ｍＬ）およびその混合液を１時間攪拌し、その後、５℃に冷却し、そしてさらに１時間攪拌した。固形物を濾取し、そして真空中、５０℃で、１６時間、乾燥させて、０．８ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨを得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝７００、（Ｍ＋Ｎａ）+＝７２２。
実施例３２
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ２をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）に溶解させ、そして２．６ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ溶液に添加し、そして４５分間周囲温度で攪拌した。酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加し、そして混合液を真空下で乾固するまで濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）に取り、そして再び約１５０ｍＬに濃縮した。沈殿が形成し始めるまで、濃縮しながら、ヘプタン（総量３００ｍＬ）を添加した。生じたスラリーを周囲温度で、４５分間攪拌し、その後濾過し、濾材で、ヘプタン（２×２００ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１８．０ｇのＨＣｌ・Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
Ｂ．結合
脱保護トリペプチド（セクションＡ、１．７ｇ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ（２．４ｇ）および３−ヒドロキシ−１，２，３−ベンゾトリアジン−３（４Ｈ）−オン（ＨＯＯＢｔ、０．５４ｇ）を、ＮＭＰ（１０ｍＬ）に溶解させ、そしてその溶液を、０℃に冷却した。塩酸１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ・ＨＣｌ、０．５６ｇ）を添加し、続いてＮＭＭ（０．５８ｇ）を添加し、そして混合液を攪拌し、そして約１０℃まで、３時間かけて加温させ、その後、周囲温度で一晩攪拌した。反応溶液を、約１５分かけて５％Ｋ2ＣＯ3（２００ｍＬ）の冷（０−５℃）溶液に添加し、そして固形物を沈殿させた。スラリーを１５分間攪拌し、その後濾過し、そして濾材で、水（５００ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、３．６ｇの白色から黄色の固形物を得た。材料（３．４ｇ）を、５％増加で、５％から２５％段階勾配のＥｔＯＨ／ＥｔＯＡｃを用いて、シリカゲル（２７０ｇ）カラムで精製した。生成物含有画分を合わせて、そして真空下で濃縮して、油状物を得た。油状物を、ＥｔＯＨ（５ｍＬ）に溶解させ、そして水（２５０ｍＬ）に添加しながら沈殿物を形成させた。その固形物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、２．７ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１４６８。
実施例３２Ａ
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
テトラペプチドＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１．０ｇ）をＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ溶液で３０分間処理し、その後混合液を真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ−エーテル（１：１）混合液で粉砕させ、そして残渣を濾過し、そして真空下で乾燥させて、０．９ｇのＨＣｌ・Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
Ｂ．結合
ＤＭＦ（４ｍＬ）中にＨＣｌ・Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（０．４５６ｇ）を含む溶液を、０−５℃に冷却し、ＮＭＭ（６９ｍＬ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−ＯＨ（０．５ｇ）、ＨＯＯＢｔ（０．１５４ｇ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）を添加した。０℃で攪拌しながら、ＥＤＣ・ＨＣｌ（０．１３２ｇ）を添加し、そして混合液を、０℃で２時間攪拌し、その後、４℃で一晩放置した。溶媒を真空下で蒸発させ、そして残渣を水（１５ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、そして５％クエン酸（２×２５ｍＬ）、水、ＮａＨＣＯ3（２×２５ｍＬ）で、そして最終的に水で洗浄した。溶媒を真空下で除去し、そして残渣を、シリカゲル（３０ｇ）カラムを用いて、ＭｅＯＨで２％増加しながら、０−６％ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ段階勾配プロフィールで精製した。生成物含有画分を貯蔵し、そして真空下で濃縮して、０．７ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＦＡＢＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１４６８、（Ｍ＋Ｈ−Ｂｏｃ）+＝１３６８。
実施例３３
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
２．３ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１９８ｍＬ）の溶液を、ＤＣＭ（６０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（６．０ｇ）を含む溶液に添加した。１時間、周囲温度で攪拌した後、溶液を真空下で、約３分の１の液量に濃縮した。酢酸エチル（１００ｍＬ）を添加し、そして溶液を、再度真空下で、約３分の１の液量に濃縮した。別の部分のＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）を添加し、そして溶液を真空下で乾固するまで蒸発させた。アセトニトリル（ＡＣＮ、１０８ｍＬ）および水（１２ｍＬ）を、その残渣に添加し、そして混合液を１０分間攪拌した。Ｎ−メチルピロリジノン（９０ｍＬ）を添加し、そして、希釈を停止するまで、溶液を真空下で蒸発させ、そして結合段階（セクションＢ）のために維持した。
Ｂ．結合
上（セクションＡ）の溶液に、ＨＯＯＢｔ（２．５１ｇ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ（１０．０ｇ）、ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ（１．１４ｇ）およびＮＭＰ（１０ｍＬ）を加えた。混合液を攪拌し、そして０−５℃に冷却し、そしてＮＭＭ（４．９５ｍＬ）で、続いて水（５ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（２．６４ｇ）を含む溶液で処理した。反応混合液を一晩周囲温度で攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）、ＡＣＮ（５５ｍＬ）、１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（６５０ｍＬ）および１０％Ｋ2ＣＯ3（１００ｍＬ）の間に分配した。反応フラスコをＡＣＮ（４０ｍＬ）および水（４０ｍＬ）の混合液で洗浄し、そして洗浄液を分配混合液に添加した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（６５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせて、そして１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（２００ｍＬ）および１０％Ｋ2ＣＯ3（１００ｍＬ）で洗浄した。その後、有機層を、１０％クエン酸（３×２８０ｍＬ）で抽出した。クエン酸抽出物を合わせ、ＥｔＯＡｃ（６５０ｍＬ）およびＡＣＮ（３０ｍＬ）で被覆し、攪拌し、そして３３％Ｋ2ＣＯ3（約３５０ｍＬ）でｐＨ１０に塩基性にした。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして１０％Ｋ2ＣＯ3（２９０ｍＬ）および水（２×２９０ｍＬ）で洗浄し、その後、真空下で乾固するまで蒸発させた。酢酸エチル（２９０ｍＬ）を残渣に添加し、そして混合液を、再度真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）に取り、そして、メチルｔ−ブチルエーテル（６７０ｍＬ）に添加し、そして沈殿が形成した。ヘプタン（３８０ｍＬ）をその混合液に添加し、そして固形物を濾取し、そして真空下で乾燥させて、１１．２２ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１２４６。
実施例３４
Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中にＬｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（３．０３ｇ）を含む溶液を２．３ＮのＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（１１５ｍＬ）に添加し、そして混合液を３０分間、周囲温度で攪拌した。酢酸エチル（９０ｍＬ）を添加し、そして混合液を真空下で、約３０ｍＬに濃縮し、そして残渣をＥｔＯＡｃ（９０ｍＬ）で処理し、そして混合液を真空下で乾固するまで蒸発させた。粘着性残渣をＡＣＮ（８０ｍＬ）、水（４ｍＬ）およびＮＭＰ（３６ｍＬ）に溶解させ、その溶液を希釈を停止するまで、真空下で蒸発させ、そして残渣をＡＣＮ（８０ｍＬ）で処理し、そして再度、希釈を停止するまで、真空下で蒸発させた。残りの溶液をさらなる加工（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
ＨＯＯＢｔ（１．０８ｇ）、ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ（０．６５ｇ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−ＯＨ（５．０ｇ）、ＮＭＰ（１８ｍＬ）および上で得た溶液の混合液を、０−５℃に冷却し、そしてＮＭＭ（２．３ｍＬ）を添加した。水（２．４ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（１．１８ｇ）を含む溶液を添加し、そして反応液を、０−５℃で、３０分間、その後、一晩周囲温度で、攪拌した。反応溶液をＥｔＯＡｃ（３７５ｍＬ）、１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（３２０ｍＬ）、ＡＣＮ（２５ｍＬ）および１０％Ｋ2ＣＯ3（５０ｍＬ）の混合液の間に分配し、そして層を分離した。水層を、ＥｔＯＡｃ（３２５ｍＬ）で抽出し、そして有機抽出物を合わせ、そして、１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（２００ｍＬ）および１０％Ｋ2ＣＯ3（５０ｍＬ）の混合液で洗浄した。生成物を１０％クエン酸（２×１４０ｍＬ）に抽出し、そして混合クエン酸抽出物をＥｔＯＡｃ（３２５ｍＬ）およびＡＣＮ（４０ｍＬ）で被覆し、そして３３％Ｋ2ＣＯ3（２３０ｍＬ）を用いて、混合液のｐＨを１０に調節した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして１０％Ｋ2ＣＯ3（１４０ｍＬ）および水（２×７０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃで処理し、そして混合液を真空下で乾固するまで蒸発させ、そしてこの手順を繰返した。残渣を、ＥｔＯＡｃ（４５ｍＬ）に溶解させ、そして溶液をＭＴＢＥ（３５０ｍＬ）およびヘプタン（１７５ｍＬ）の混合液に添加し、そして沈殿物を形成した。固形物を濾過し、濾材で、ＭＴＢＥ（１００ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、５．８６ｇのＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１３１４、（Ｍ＋Ｋ）+＝１３５２。
実施例３５
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（２５ｍＬ）のＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（７．００ｇ）のスラリーを、３０分間、ＴＦＡ（２５ｍＬ）で処理した。反応混合物をＭＴＢＥ（４２０ｍＬ）に添加し、生じたスラリーを、ヘプタン（２１０ｍＬ）で処理し、そしてさらに１時間攪拌した。固形物を濾過し、そして濾材で、ヘプタンを用いて洗浄した。湿潤ケークをＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に溶解させ、そして溶液を１０％Ｎａ2ＣＯ3で抽出した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、１０％Ｎａ2ＣＯ3（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、真空下で蒸発させて、油状物にした。油状物をＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解させ、そして次の工程（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ（３．５２ｇ）、ＨＯＯＢｔ（１．０９ｇ）、ＣｕＣｌ2・Ｈ2Ｏ（０．８２ｇ）およびＮＭＰ（２５ｍＬ）の溶液をセクションＡから得た溶液と合わせ、そして混合液を、窒素ブランケット下で、５℃に冷却した。水（１．５ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（１．０１ｇ）の溶液を、続いてＮＭＭ（１．１６ｍＬ）を加え、そして反応液を４０分間冷却しながら、その後周囲温度で、１６時間攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）および１０％クエン酸（３００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして１０％クエン酸（３００ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（２×２００ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）、Ｎａ2ＥＤＴＡ（１５０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）で連続的に洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発した。残渣をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）に取り、そして再度溶液を真空下で乾固するまで蒸発させた。
Ｃ．精製
セクションＢから得た材料を、シリカゲル（８００ｇ）カラムにかけ、そしてカラムを以下の溶媒系で溶出した。
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生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）中に溶解させ、そして１０％Ｎａ2ＣＯ3（２００ｍＬ、その後１００ｍＬ）および水で洗浄し、その後真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＤＣＭ（２０ｍＬ）に溶解させ、そして溶液を、攪拌したＭＴＢＥに添加し、そして沈殿物が形成した。ヘプタン（７５ｍＬ）を添加した後、固形物を濾過し、濾材で、ヘプタン（５０ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、８．０４ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝２０４９。
実施例３６
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（３３ｍＬ）のＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１１ｇ）の溶液を、ＴＦＡ（３４ｍＬ）で処理し、そして混合液を２０分間攪拌した。反応溶液を、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と１５％Ｋ2ＣＯ3（４００ｍＬ）の間に分配し、層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、５％ＮａＣｌ（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で濃縮して、約５０ｍＬにした。酢酸エチル（２００ｍＬ）を添加し、そして再度溶液を真空下で乾燥させて、約２５ｍＬにし、そして次の工程（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
上で得られた溶液に、ＨＯＯＢｔ（１．４３ｇ）、ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（０．９５７ｇ）、２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ（５．７２ｇ）およびＮＭＰ（４４ｍＬ）を添加した。１５分間攪拌した後、全ての材料を溶解させ、そしてその溶液を０±５℃に冷却した。Ｈ2Ｏ（１．６５ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（１．６５ｇ）の溶液を反応溶液に添加し、続いてＮＭＭ（１．６５ｍＬ）を添加した。反応液を０−５℃で、３０分間、その後室温で一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（２５０ｍＬ）の間に分配し、層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（１６０ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（１６０ｍＬ）、１０％ＮａＣｌ（１７０ｍＬ）および水（１５０ｍＬ）で洗浄した。ＥｔＯＡｃ溶液を真空下で乾固するまで蒸発させて、油状物を得た。
Ｃ．精製
セクションＢから得た油状物をＤＣＭ（４５ｍＬ）に溶解させ、シリカゲル（８２５ｇ）にかけ、そしてカラムを以下の溶液で溶出した。
0003888472.tif 000011
生成物含有画分を合わせ、そして真空下で濃縮して、液量約２００ｍＬにした。残渣をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で希釈し、そしてその後、ｐＨが中性になるまで、０．５％ＮａＣｌ（２×２００ｍＬ）、１０％Ｎａ2ＣＯ3（３５０ｍＬ）および水（２×２００ｍＬ）で洗浄した。溶液を真空下で濃縮して、約２００ｍＬにし、その後、ＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）で処理し、そして再度真空下で、約２００ｍＬまで蒸発させ、そしてこの手順を繰返すと、材料は、分離し始め、液量は約２００ｍＬに達した。メタノール（５ｍＬ）を添加し、そして溶液をＭＴＢＥ（８００ｍＬ）にゆっくりと添加し、そして沈殿物が形成された。固形物を濾過し、濾材で、ヘプタンを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、１２．５５ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＥＳＩＭＳ＝２０４９．７。
実施例３７
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
トリフルオロ酢酸（３０ｍＬ）を、ＤＣＭ（３０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１０．０ｇ）を含む溶液に添加した。３０分間攪拌した後、混合液を、１０％Ｋ2ＣＯ3（３００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして有機層を水（２００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、油状物を得た。油状物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に取り、そして次の工程（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
ＨＯＯＢｔ（１．３３ｇ）、ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（０．５４ｇ）、２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ（５．２４ｇ）の溶液、セクションＡから得た溶液およびＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）を攪拌し、そして５±５℃に冷却した。混合液をＮＭＭ（１．６５ｍＬ）およびＮＭＰ（１．７ｍＬ）の溶液で、続いて水（１．４０ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（１．４１ｇ）の溶液で処理し、そして３０分間、５±５℃で攪拌した。冷却材を取除き、そして反応混合液をさらに３．５時間攪拌した。反応混合液をＮＭＰ（３０ｍＬ）で希釈し、その後、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）と１０％クエン酸（１６０ｍＬ）の間に分配した。反応フラスコのＮＭＰ洗浄液（２０ｍＬ）も、分配混合液に添加した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で抽出した。混合有機層を１０％クエン酸（１６０ｍＬ）、１％ＥＤＴＡ（１６０ｍＬ）、１５％Ｋ2ＣＯ3（２×１６０ｍＬ）および０．５％ＮａＣｌ（１６０ｍＬ）で洗浄した。生じたＥｔＯＡｃ溶液を真空下で蒸発させて、油状物を得た。
Ｃ．精製
油状物をＤＣＭ（１０ｍＬ）に溶解させ、そしてシリカゲル（１７００ｇ）カラムで、以下の段階的勾配プロフィールを用いて精製した。
0003888472.tif 000012
生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。生じた油状物を、ＥｔＯＡｃ（６００ｍＬ）に溶解させ、そして溶液を、０．５％ＮａＣｌ（２×２００ｍＬ）、１５％Ｋ2ＣＯ3（２００ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。生じた油状物を、ＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）およびＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解させ、そしてＭＴＢＥ（５００ｍＬ）に添加し、そして沈殿物を形成した。ヘプタン（５００ｍＬ）を添加し、そしてスラリーを１５分間攪拌し、その後濾過し、そして真空下で乾燥させて、１０．７ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
実施例３８
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
ＮＭＰ（６０ｍＬ）中に２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１０．５ｇ）を含む溶液をピペリジン（１２ｍＬ）で処理し、そして溶液を周囲温度で、１時間攪拌した。反応混合液を２０％クエエン酸（４００ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）の間に分配し、層を分離し、そして有機層を２０％クエン酸（４００ｍＬ）で抽出した。水層を合わせ、そして３３％Ｋ2ＣＯ3溶液でｐＨを１１に調節し、そして生じた混合液をＥｔＯＡｃ（３×４００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせ、水（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃに取り、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。最終的に、残渣をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解させ、そして溶液をＭＴＢＥ（１．２Ｌ）にゆっくりと添加し、そして沈殿物を形成した。固形物を濾過し、濾材で、ＭＴＢＥを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、９．１ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＥＳＩＭＳ＝１８２７．８（１８２８．６）。
実施例３９
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
ＮＭＰ（６０ｍＬ）中に２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１０．５ｇ）を含む溶液を窒素で洗浄し、その後ピペリジン（１２ｍＬ）を添加し、そして溶液を１時間攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）と２０％クエン酸（４００ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして有機層を一度２０％クエン酸（４００ｍＬ）で抽出した。水性抽出物を合わせ、３３％Ｋ2ＣＯ3でｐＨを１１に調節し、そしてＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。混合ＥｔＯＡｃ抽出物を、水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で蒸発させて、粘性物を得た。粘性物を、ＥｔＯＡｃで処理し、そしてその混合液を、再度真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（２５ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）に溶解させ、そして溶液をＭＴＢＥ（１Ｌ）に滴加し、そして沈殿物を形成した。固形物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、８．７０ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１８２７。
実施例４０
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（１６ｍＬ）およびＴＦＡ（１６ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（４．２８ｇ）を含む溶液を、２５分間攪拌し、その後、ＥｔＯＡｃ（２２０ｍＬ）とＡＣＮ（２０ｍＬ）および１７％Ｋ2ＣＯ3（２８０ｍＬ）の間に分配した。反応フラスコを、ＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で洗浄し、そして洗浄液を分配混合液に添加した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、そして水（１００ｍＬ）および０．５％ＮａＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）およびＡＣＮ（５０ｍＬ）に溶解させ、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させ、残渣をＮＭＰ（１５ｍＬ）に溶解させて、そしてセクションＢでの次の工程のために保持した。
Ｂ．結合
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ（２．４０ｇ）、ＨＯＯＢｔ（０．７８ｇ）、ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（０．４４ｇ）およびＮＭＰ（１６ｍＬ）の混合液を、固形物が溶解するまで１時間攪拌した。上（セクションＡ）から得た溶液をＮＭＰ（４ｍＬ）洗浄液と一緒に添加し、そして溶液を２５分間、周囲温度で攪拌した。その後、溶液を０−５℃に冷却し、そして２０分間攪拌し、その後２，４，６−コリジン（１．１ｍＬ）を添加し、そして溶液をさらに２０分間、０−５℃で攪拌した。水（１．２５ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（０．８２ｇ）を含む溶液を、滴加し、続いて水洗浄液（０．２ｍＬ）を加え、その後反応混合液を冷却しながら９０分間攪拌し、その後、一晩約５０℃に放置させた。その後、混合液を周囲温度まで加温し、そしてさらに２時間攪拌した。混合液をＥｔＯＡｃ（３４０ｍＬ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）、１７％Ｋ2ＣＯ3（６０ｍＬ）およびＮＨ4ＨＣＯ3（１４０ｍＬ）の間に分配し、そしてＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）とＡＣＮ（１０ｍＬ）と一緒に反応フラスコの洗浄液を分配混合液に添加した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、そして１７％Ｋ2ＣＯ3（６０ｍＬ）およびＮＨ4ＨＣＯ3（１４０ｍＬ）の混合液、１７％Ｋ2ＣＯ3（２００ｍＬ）、および水（１２０ｍＬ）で洗浄した。溶液を、真空下で乾固するまで蒸発させ、濃縮液をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）およびＡＣＮ（５０ｍＬ）に溶解させ、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（１２ｍＬ）、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）およびＨＯＡｃ（１ｍＬ）に溶解させ、そして精製（セクションＣ）のために保持した。
Ｃ．精製
シリカゲル（３２０ｇ）のカラムをＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で溶出し、その後セクションＢから得た溶液をかけ、そしてカラムを以下の溶媒混合液で溶出した。
0003888472.tif 000013
生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させ、そして残渣をＥｔＯＡｃ（３８０ｍＬ）およびＡＣＮ（６０ｍＬ）に溶解させた。溶液を、１７％Ｋ2ＣＯ3（２５０ｍＬ）で処理して、ｐＨ＞１０にし、そして層を分離した。水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で洗浄し、そして混合有機抽出物を１７％Ｋ2ＣＯ3（１５０ｍＬ）および水（１００ｍＬ、その後５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃで処理し、そして再度真空下で乾固するまで濃縮させた。この残渣をＥｔＯＡｃ（１６ｍＬ）およびＭｅＯＨ（４ｍＬ）に溶解させ、そしてＭＴＢＥ（３６０ｍＬ）に滴加した。沈殿物を濾過し、そして真空下で乾燥させて、５．５４ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１８２７。
実施例４１
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（１６ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（４．５１ｇ）を含む溶液を、ＴＦＡ（１６ｍＬ）で２５分間攪拌した。反応液を、ＥｔＯＡｃ（２２０ｍＬ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）および１７％Ｋ2ＣＯ3（２８０ｍＬ）の混合液中で急冷し、層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出した。有機抽出物を合わせ、１７％Ｋ2ＣＯ3（１００ｍＬ）および１％ＮａＣｌ（２×５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）およびＡＣＮ（５０ｍＬ）に溶解させ、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。生じた油状物をＮＭＰに溶解させ、窒素で洗浄し、そして後（セクションＢ）で使用するために保持した。
Ｂ．結合
Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ（２．４０ｇ）、ＨＯＯＢｔ（０．７８ｇ）、ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（０．４４ｇ）およびＮＭＰ（１６ｍＬ）の溶液を、窒素で清浄し、その後セクションＡから得た溶液と一緒に混ぜた。混合液を０−５℃に冷却し、そして２，４，６−コリジン（１．１ｍＬ）および水（０．２５ｍＬ）中のＥＤＣ・ＨＣｌ（０．８２ｇ）の溶液を添加し、そして混合液を０−１０℃で４時間攪拌し、続いて窒素下、周囲温度で一晩攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（３４０ｍＬ）、ＡＣＮ（２０ｍＬ）、１７％Ｋ2ＣＯ3（６０ｍＬ）および１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（１４０ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（１４０ｍＬ）および１７％Ｋ2ＣＯ3（６０ｍＬ）の混合液で、続いて１７％Ｋ2ＣＯ3（２００ｍＬ）で洗浄した。生成物を２０％クエン酸（２×１００ｍＬ）で抽出し、そしてクエン酸抽出液を合わせ、そして活性化炭素（０．６ｇ）およびセライト（２ｇ）で処理した。混合液をセライトの床を通して濾過し、そして濾過床を２０％クエン酸（２０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液を、ＥｔＯＡｃ（３８０ｍＬ）およびＡＣＮ（６０ｍＬ）で被覆し、そして３３％Ｋ2ＣＯ3（４９０ｍＬ）を用いて、ｐＨを１３に調節した。層を分離し・そして有機層を、１７％Ｋ2ＣＯ3（１５０ｍＬ）および水（１００ｍＬ、その後５０ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）で処理し、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１６ｍＬ）に溶解させ、そしてこの溶液をＭＴＢＥ（３６０ｍＬ）に添加し、生成物を沈殿させた。固形物を濾過し、濾材で、ＭＴＢＥ（２×４０ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、６．００ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ２Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ２を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１８９５。
実施例４２
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．Ｆｍｏｃ脱保護
ＮＭＰ（６０ｍＬ）中に２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ，Ｆｍｏｃ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（９．３５ｇ）を含む溶液を、ピペリジン（２．６０ｍＬ）で処理し、そして溶液を、周囲温度で１時間攪拌した。反応混合液を、２０％クエン酸（３５０ｍＬ）とＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）の間に分配し、層を分離し、そして有機層を２０％クエン酸（３５０ｍＬ）で抽出した。水層を合わせて、そして３３％Ｋ2ＣＯ3（８５０ｍＬ）を用いて、ｐＨを１１に調節し、生じた混合液を、ＥｔＯＡｃ（３×３００ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出液を合わせて、水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（４０ＭＬ）およびＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、そして溶液を、ＭＴＢＥ（１０００ｍＬ）にゆっくりと添加し、そして沈殿物を形成した。固形物を濾過し、濾材で、ＭＴＢＥを用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、７．６２ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
Ｂ．ベンジル脱保護
２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（７．０ｇ）、チオアニソール（１６．０ｇ）およびＴＦＡ（５６ｍＬ）の溶液を１時間周囲温度で攪拌し、その後０−５℃に冷却し、そしてトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ、１６．０ｍＬ）を加え、そして混合液を７５分間攪拌した。その後、反応液をＮＨ4ＯＡｃ（１５２ｇ）、水（８２７ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１９０ｍＬ）の混合液で急冷し、そして層を分離した。有機層をＥｔＯＡｃ（２×２００ｍＬ）で抽出し、そして有機抽出液を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、油状物を得た。
Ｃ．イオン交換クロマトグラフィー第１番
上から得た残渣を、ＭｅＯＨ（１２５ｍＬ）および水（４５ｍＬ）に溶解させ、ＮＨ4ＯＨを用いて、溶液のｐＨを５．５に調節し、その後、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０（３５０ｇ）カラムに吸着させた。カラムを７５％ＭｅＯＨ（５Ｌ）、ＭｅＯＨ（５Ｌ）、４％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ（３Ｌ）および８％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ（４Ｌ）で連続的に溶出した。生成物含有画分を合わせ、そして真空下で蒸発させて油状物にした。
Ｄ．Ｃ−１８逆相クロマトグラフィー
上で得られた油状物を、ＭｅＯＨ（２２ｍＬ）および水（１４ｍＬ）で溶解させ、そしてＣ−１８逆相（２４０ｇ）カラムにかけた。カラムをＡＣＮ／水／ＴＦＡ−２２．５／７７．５／０．１混合液で溶出した。生成物含有画分を合わせ、そして真空下で濃縮してアセトニトリルを除去した。
Ｅ．イオン交換クロマトグラフィー第２番
溶液（セクションＤから）のｐＨを６．８−７．１に調節し、そしてアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６（４７５ｇ）カラムに通して、生成物を吸着させた。カラムを２０％ＮＨ4ＯＡｃ（１．５Ｌ）および水（２．５Ｌ）で連続的に洗浄し、その後、生成物を、０．２５％ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨ溶液で溶出した。生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させて油状物を得た。
Ｆ．シリカゲルクロマトグラフィー
セクションＥから得た油状物を、ＥｔＯＡｃ（〜１５ｍＬ）に溶解させ、そしてシリカゲル（７００ｇ）カラムにかけた。カラムを以下の溶媒で溶出した。
0003888472.tif 000014
生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。
Ｇ．イオン交換クロマトグラフィー第３番
上（セクションＦ）から得た残渣を、水（２Ｌ）に溶解させ、ＮＨ4ＯＨで、ｐＨを６．８−７．０に調節し、そして溶液をＸＡＤ−１６カラム（セクションＤ）に通して、生成物を吸着させた。その後、カラムを２０％ＮＨ4ＯＡｃ（１．５Ｌ）および水（４Ｌ）で連続的に洗浄し、そして０．２５％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨを用いて、カラムから溶出させた。生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させ、そして酢酸から凍結乾燥させ、３．０５ｇの２Ｒ，Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＦＡＢＭＳ＝（Ｍ＋Ｈ）+＝１６７４（計算値：１６４６．８）、ＦＡＢＭＳによる配列＝ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2。
実施例４３
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（８．０ｇ）、２，３，６−トリメチルフェノール（ＴＭＰ、１６．０ｇ）およびＴＦＡ（５６ｍＬ）の溶液を、１時間周囲温度で攪拌し、その後、０−５℃に冷却し、そしてトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ、１６．０ｍＬ）を添加し、そして混合液を７５分間攪拌した。反応液を、０−５℃で、ＭｅＯＨ（４００ｍＬ）、水（６５０ｍＬ）および濃ＮＨ4ＯＨ（５６ｍＬ）の混合液を急冷した。その後、溶液を２０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３×３００ｍＬ）およびヘプタン（２×２００ｍＬ）で抽出し、そして水層のｐＨを６．９±０．１に調節した。
Ｂ．イオン交換クロマトグラフィー第１番
上（セクションＡ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６（５００ｇ）のイオン交換カラムに吸着させた。カラムを１０％ＮＨ4ＯＨ（１４５０ｍＬ）、水（２９００ｍＬ）、１０％ＮＨ4ＯＡｃ（１４５０ｍＬ）、水（２９００ｍＬ）および５０％ＭｅＯＨ（２０００ｍＬ）を用いて連続的に洗浄した。生成物を０．０２５％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨで溶出させ、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で蒸発させて黄色油状物を得た。
Ｃ．Ｃ−１８逆相クロマトグラフィー
上（セクションＢ）で得られた残渣を、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）および水（３ｍＬ）で溶解させ、そして２０／８０／０．１（ｖ／ｖ）ＡＣＮ／水／ＴＦＡ（２０％ＡＣＮ）混合液で平衡にしたＣ−１８逆相樹脂（１４５ｇ）のカラムにかけた。カラムを、２０％ＡＣＮと２５％ＡＣＮ混合液で連続的に溶出させた。生成物含有画分を合わせ、そして次の工程（セクションＤ）のために保持した。
Ｄ．イオン交換クロマトグラフィー第２番
上（セクションＣ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０（１４６ｇ）のカラムに吸着させ、そしてカラムを５０％ＭｅＯＨ（１５００ｍＬ）およびＭｅＯＨ（１５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。生成物を、４％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶液で溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで濃縮した。残渣を、氷酢酸に取り、そして親液性にして６．７３ｇの２Ｒ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
ＦＡＢＭＳ＝（Ｍ＋Ｈ）+＝１６４７（計算値１６４６．８）
［ａ］Ｄ＝−３９．８（ｃ＝０．５，ＨＯＡｃ）、
元素分析
実測値：Ｃ  ５８．１２、Ｈ  ６．６８、Ｎ  １１．８２、Ｃｌ  ２．０３
計算値：Ｃ  ５８．６３、Ｈ  ６．８５、Ｎ  １１．９４、Ｃｌ  １．８９
実施例４４
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（５．０ｇ）、２，３，６−トリメチルフェノール（ＴＭＰ、１０ｇ）およびＴＦＡ（３５ｍＬ）の溶液を１時間、周囲温度で攪拌し、その後０−５℃に冷却し、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ、１０ｍＬ）を添加し、そして混合液を７５分間攪拌した。反応液を、０−５℃で、ＭｅＯＨ（３５０ｍＬ）、水（３５０ｍＬ）および濃ＮＨ4ＯＨ（３６ｍＬ）の混合液で急冷した。その後、溶液を１０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３×２５０ｍＬ）で抽出した。
Ｂ．イオン交換クロマトグラフィー第１番
上（セクションＡ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０（１００ｇ）のイオン交換カラムに吸着させ、そしてカラムを７５％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／水（１Ｌ）およびＭｅＯＨ（１Ｌ）で洗浄した。生成物を、５％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ（２Ｌ）で溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で蒸発させて黄色油状物を得た。
Ｃ．Ｃ−１８逆相クロマトグラフィー
上（セクションＢ）で得られた残渣を、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解させ、そして２２．５／７７．５／０．１（ｖ／ｖ）ＡＣＮ／水／ＴＦＡ（２２．５％ＡＣＮ）混合液で平衡にしたＣ−１８逆相樹脂（１８２ｇ）のカラムにかけた。カラムを、２２．５％ＡＣＮ、２５％ＡＣＮおよび２７．５％ＡＣＮ混合液で連続的に溶出させた。生成物含有画分を合わせ、そして真空下で蒸発させて、アセトニトリルを除去し、そしてその後溶液のｐＨを、ＮＨ4ＯＨで、６．９に調節した。
Ｄ．イオン交換クロマトグラフィー第２番
上（セクションＣ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６（１６０ｇ）のカラムに吸着させ、そしてカラムを１７％（ｗ／ｗ）ＮＨ4ＯＡｃ（１．２Ｌ）、０．０５％ＮＨ4ＯＨ（１Ｌ）、１７％（ｗ／ｗ）ＮＨ4ＯＡｃ（１．２Ｌ）および０．０５％ＮＨ4ＯＨ（２Ｌ）で連続的に洗浄した。生成物を、０．２５％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶液で溶出し、そして生成物含有画分を合わせ（約１９００ｍＬ）、そして水（６００ｍＬ）で希釈した。
Ｅ．イオン交換クロマトグラフィー第３番
上（セクションＤ）から得た溶液を、第二のアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０（１００ｇ）カラムに吸着させ、そしてカラムをＭｅＯＨ（１Ｌ）で洗浄した。その後、生成物を、４％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶液で溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで濃縮した。残渣を氷酢酸に取り、そして凍結乾燥させて、４．１ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＦＡＢＭＳ＝（Ｍ＋Ｈ）+＝１６４７（計算値１６４６．８）
［ａ］Ｄ＝−５３．２（ｃ＝０．５，ＨＯＡｃ）。
実施例４４Ａ
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−ＬｙｓＮｉｃ（−）Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（２．０ｇ）、２，３，６−トリメチルフェノール（ＴＭＰ、４．０ｇ）およびＴＦＡ（１４ｍＬ）の溶液を１時間、周囲温度で攪拌し、その後０−５℃に冷却し、そしてトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ、４．０ｍＬ）を添加し、そして混合液を７５分間攪拌した。反応液を、０−５℃で、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）および濃ＮＨ4ＯＨ（１４ｍＬ）の混合液で急冷した。その後、溶液を２０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３×８０ｍＬ）およびヘプタン（８０ｍＬ）で抽出し、そして水層のｐＨを６．９±０．１に調節した。
Ｂ．イオン交換クロマトグラフィー第１番
上（セクションＡ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６（１２５ｇ）のイオン交換カラムに吸着させ、そしてカラムを１０％ＥＤＴＡ（ｐＨを６．９に調節、１９８ｍＬ）で洗浄した。カラムを、水（２６０ｍＬ）、１０％ＮＨ4ＯＡｃ（８２５ｍＬ）、水（７５０ｍＬ）、１０％−ＮＨ4ＯＡｃ（８２５ｍＬ）、水（８２５ｍＬ）および５０％ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。生成物を、０．１％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨで溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で蒸発させて黄色油状物を得た。
Ｃ．Ｃ−１８逆相クロマトグラフィー
上（セクションＢ）で得られた残渣を、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）および水（３ｍＬ）に溶解させ、そして２０／８０／０．１（ｖ／ｖ）ＡＣＮ／水／ＴＦＡ（２０％ＡＣＮ）混合液で平衡にしたＣ−１８逆相樹脂（３７ｇ）のカラムにかけた。カラムを、２０％ＡＣＮおよび２５％ＡＣＮ混合液で連続的に溶出させた。生成物含有画分を合わせ、そして次の工程（セクションＤ）のために保持した。
Ｄ．イオン交換クロマトグラフィー第２番
上（セクションＣ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０（４０ｇ）のカラムに吸着させ、そしてカラムを５０％ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。生成物を、４％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶液で溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで濃縮した。残渣を、氷酢酸に取り、そして凍結乾燥させて、１．６８ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１６４７。
実施例４４Ｂ
２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＴＦＡ（７ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（１．０ｇ）およびＴＭＰ（２．０ｇ）を含む溶液を、０−５℃に冷却し、ＴＭＳＯＴｆ）（２．０ｍＬ）を添加した。反応混合液を、０−５℃で、７５分間攪拌し、そしてその後ＭｅＯＨ（７５ｍＬ）、水（７５ｍＬ）およびＮＨ4ＯＨ（７ｍＬ）の混合液に添加した。この反応液を、２０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３×５０ｍＬ）およびヘプタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。ＮＨ4ＯＨで、水層のｐＨを７に調節し、そして、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６（６０ｇ）のカラムに吸着させた。カラムを、１７％ＮＨ4ＯＡｃ（ｗ／ｗ）（３３８ｍＬ）、０．０５％ＮＨ4ＯＨ（４００ｍＬ）、１７％ＮＨ4ＯＡｃ（ｗ／ｗ）（３３８ｍＬ）、０．０５％ＮＨ4ＯＨ（４００ｍＬ）、および最終的に５０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／水（２００ｍＬ）で連続的に洗浄した。その後、生成物を、ＭｅＯＨで溶出し、そして生成物含有画分を合わせて、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、０．８３ｇのＨ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を油状物として得る。それを、次の工程（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
ＮＭＰ（１５ｍＬ）中に脱保護ヘプタペプチド（セクションＡ、０．８３ｇ）、ＨＯＯＢｔ（０．１８３ｇ）、２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ（０．５６１ｇ）およびＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（０．１０２５ｇ）を含む溶液を、０−５℃に冷却し、そして２，４，６−コリジン（０．４５ｍＬ）を添加し、続いてＮＭＰ（５ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（０．１９２２ｇ）を含む溶液を添加した。反応液を、０−５℃で７時間攪拌し、そして同じ温度で、一晩保持した。反応混合液を、５０％ＭｅＯＨ／水（１００ｍＬ）で希釈し、そして濾過して、固形物を除去した。
Ｃ．イオン交換クロマトグラフィー第１番
ＮＨ4ＯＨで、溶液のｐＨを７−８に調節し、そしてセクションＡに使用したアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６を通してパーコレートし、そしてペプチドをカラムに吸着させた。カラムを、０．０２５％ＮＨ4ＯＨ（４００ｍＬ）、ＮＨ4ＯＨ（２１０ｍＬ）でｐＨ７に調節された５％（ｗ／ｗ）（ＮＨ4）2ＥＤＴＡ、０．０３３％ＮＨ4ＯＨ（３００ｍＬ）、１１％（ｗ／ｗ）ＮＨ4ＯＡｃ（３００ｍＬ）、０．０２５％ＮＨ4ＯＨ（４００ｍＬ）、５０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／水（３００ｍＬ）で連続的に洗浄した。生成物を、ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で、続いて１％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ（７００ｍＬ）で溶出した。生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで蒸発させて黄色みのオレンジ色油状物を得た。
Ｃ．Ｃ−１８逆相クロマトグラフィー
上（セクションＢ）で得られた残渣を、ＭｅＯＨ（４ｍＬ）および水（２ｍＬ）に溶解させ、そしてＣ１８逆相カラム（３７ｇ）にかけた。カラムを、ＡＣＮ／水／ＨＯＡｃ２０／８０／０．１（ｖ／ｖ）混合液（５００ｍＬ）で、続いて、ＡＣＮ／水／ＨＯＡｃ２５／７５／０．１（ｖ／ｖ）混合液で溶出した。生成物含有画分を、次の工程（セクションＤ）のために保持した。
Ｄ．イオン交換クロマトグラフィー第２番
上（セクションＣ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０カラム（３０ｇ）を通して溶出し、そして生成物を吸着させる。カラムを５０％（ｖ／ｖ）ＭｅＯＨ／水（４００ｍＬ）で、続いてＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で洗浄した。生成物を、４％ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨで溶出し、そして生成物含有画分を貯蔵し、そして真空下で乾固するまで蒸発させて、光沢のある黄色油状物を得た。油状物をＨＯＡｃに溶解させ、そして凍結乾燥させて、０．８０ｇの２Ｓ−ＴＨＦ−Ｇｌｙ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。
ＦＡＢＭＳ（Ｍ＋Ｈ）+＝１６４７（計算値１６４６．８）。
実施例４５
Ａｃ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（ＣＬ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中にＢｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を含む溶液を、ＴＦＡ（２０ｍＬ）で２５分間処理した。反応液を、ＥｔＯＡｃ（２６５ｍＬ）、ＡＣＮ（６０ｍＬ）および１７％Ｋ2ＣＯ3（３４０ｍＬ）の混合液で急冷し、層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（１２０ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、１７％Ｋ2ＣＯ3（１００ｍＬ）および１％ＮａＣｌ（２×５０ｍＬ、０．２５ｍＬ濃ＮＨ4ＯＨと一緒に）で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させる。残渣をＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）およびＡＣＮ（６０ｍＬ）に溶解させ、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。生じた油状物をＮＭＰ（１８ｍＬ）に溶解させ、窒素で清浄し、そして後の使用（セクションＢ）のために保持した。
Ｂ．結合
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−ＯＨ（２．４０ｇ）、ＨＯＯＢｔ（０．９３ｇ）、ＣｕＣｌ2・２Ｈ2Ｏ（０．５２ｇ）およびＮＭＰ（１９ｍＬ）の溶液を、窒素で清浄し、その後、セクションＡから得た溶液と合わせた。混合液を０−５℃に冷却し、そして２，４，６−コリジン（１．３ｍＬ）および水（１．２５ｍＬ）中にＥＤＣ・ＨＣｌ（０．９４ｇ）を含む溶液を添加し、そして混合液を、１−１０℃で、４時間攪拌し、続いて一晩周囲温度で、窒素下で攪拌した。反応混合液をＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）、ＡＣＮ（３０ｍＬ）、１７％Ｋ2ＣＯ3（６０ｍＬ）および１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（１５０ｍＬ）の間に分配した。層を分離し、そして水層をＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせ、そして１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（１４０ｍＬ）および１７％Ｋ2ＣＯ3（７０ｍＬ）の混合液で洗浄し、続いて１０％ＮＨ4ＨＣＯ3（１８０ｍＬ）で、そして１７％Ｋ2ＣＯ3（１５０ｍＬ）で洗浄した。生成物を２０％クエン酸（９０ｍＬ、その後６０ｍＬ）に抽出し、そしてクエン酸抽出物を合わせ、そして活性炭（２ｇ）およびセライト（２ｇ）で処理した。混合液を、セライトの床を通して濾過し、そして濾過床を２０％クエン酸（１０ｍＬ）および水（１０ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液をＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）およびＡＣＮ（７０ｍＬ）で被覆し、そして３３％Ｋ2ＣＯ3（２００ｍＬ）を用いてｐＨを調節した。層を分離し、そして有機層を、０．５ｍＬのＮＨ4ＯＨ（２×１５０ｍＬ）を含有する水で洗浄し、そして真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で処理し、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で処理し、そして再度真空下で乾固するまで蒸発させた。残渣をＭｅＯＨ（４ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１６ｍＬ）に溶解させ、そしてこの溶液をＭＴＢＥ（３６０ｍＬ）に添加して、生成物を沈殿させた。固形物を濾過し、濾材で、ＭＴＢＥ（２×４０ｍＬ）を用いて洗浄し、そして真空下で乾燥させて、５．９０ｇのＡｃ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（Ｃｌ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１７８２。
実施例４６
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｒｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2
Ａ．脱保護
Ａｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＮＭｅＴｙｒ（ＣＬ2Ｂｚｌ）−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2（２．４ｇ）、２，３，６−トリメチルフェノール（ＴＭＰ、４．０ｇ）およびＴＦＡ（１４ｍＬ）の溶液を、１時間、周囲温度で攪拌し、その後０−５℃に冷却し、そしてトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳＯＴｆ、４．０ｍＬ）を添加し、そして混合液を７５分間攪拌した。反応液を、ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）および濃ＮＨ4ＯＨ（１４ｍＬ）の混合液で、０−５℃で急冷した。その後、溶液を２０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３×８０ｍＬ）およびヘプタン（８０ｍＬ）で抽出し、そして水層のｐＨを６．９±０．１に調節した。
Ｂ．イオン交換クロマトグラフィー第１番
上（セクションＡ）から得た溶液を、アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＸＡＤ−１６（１２５ｇ）のイオン交換カラムに吸着させ、そしてカラムを１０％ＥＤＴＡ（ｐＨを６．９に調節、１９８ｍＬ）で洗浄した。カラムを水（２６０ｍＬ）、１０％ＮＨ4ＯＡｃ（８２５ｍＬ）、水（７５０ｍＬ）、１０％ＮＨ4ＯＡｃ（８２５ｍＬ）、水（８２５ｍＬ）および５０％ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。生成物を、０．１％ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨで溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で蒸発させて黄色油状物を得た。
Ｃ．Ｃ−１８逆相クロマトグラフィー
上（セクションＢ）で得られた残渣を、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）および水（３ｍＬ）に溶解させ、そして２０／８０／０．１（ｖ／ｖ）ＡＣＮ／水／ＴＦＡ（２０％ＡＣＮ）混合液で平衡にしたＣ−１８逆相樹脂（３７ｇ）のカラムにかけた。カラムを、２０％ＡＣＮおよび２５％ＡＣＮ混合液で連続的に溶出した。生成物含有画分を合わせ、そして次の工程（セクションＤ）のために保持した。
Ｄ．イオン交換クロマトグラフィー第２番
上（セクションＣ）から得た溶液を、カラム・アンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｙｔｅ）ＣＧ−５０（４０ｇ）に吸着させ、そしてカラムを５０％ＭｅＯＨ（５００ｍＬ）およびＭｅＯＨ（５００ｍＬ）で連続的に洗浄した。生成物を、４％（ｖ／ｖ）ＨＯＡｃ／ＭｅＯＨ溶液で溶出し、そして生成物含有画分を合わせ、そして真空下で乾固するまで濃縮する。残渣を氷酢酸に取り、そして凍結乾燥させて、１．８３ｇのＡｃ−Ｄ−２Ｎａｌ−Ｄ−４ＣｌＰｈｅ−Ｄ−３Ｐａｌ−Ｓｅｒ−ＮＭｅＴｙｒ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ2を得た。ＭＳ：（Ｍ＋Ｈ）+＝１５３４。アミノ酸分析：２Ｎａｌ  １．０、４ＣｌＰｈｅ  ０．９、３Ｐａｌ  １．０、Ｓｅｒ  ０．９、ＮＭｅＴｙｒ  ０．９、Ｌｙｓ（Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）から）１．０、Ｌｅｕ  １．０、Ｌｙｓ（ｉＰｒ）  １．１、Ｐｒｏ  １．１、Ａｌａ  １．０。