(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水道原水や下・排水処理プロセスの流入水中の化学物質を計測するバイオセンサを利用した水質計測器に使用される硝化細菌固定化膜の保存液であって、該保存液がオキサル酢酸を含有することを特徴とする、硝化細菌固定化膜の保存液。
【請求項２】
オキサル酢酸濃度が０．５〜２ｍＭである、請求項１に記載の硝化細菌固定化膜の保存液。
【請求項３】
前記硝化細菌はアンモニア酸化細菌である、請求項１又は２に記載の硝化細菌固定化膜の保存液。
【請求項４】
水道原水や下・排水処理プロセスの流入水中の化学物質を計測するバイオセンサを利用した水質計測器に使用されるアンモニア酸化細菌固定化膜を保存する際に、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を２．５×１０6〜１．０×１０9個／ｍｍ2に調整するとともに、該アンモニア酸化細菌固定化膜の保存液のオキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭに調整することを特徴とする、アンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法。
【請求項５】
アンモニア酸化細菌をテトラゾリウム塩により染色し、該アンモニア酸化細菌中に生成するホルマザンの吸光度を測定することにより、培養液中のアンモニア酸化細菌の培養令の判定及び生菌個数濃度の測定を行ない、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を調整する、請求項４に記載のアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、上下水道の各処理プロセスの水や河川水、湖沼水などの環境水を対象として、水中の化学成分をモニタリングすることを目的としたバイオセンサ応用水質計測器に用いられる硝化細菌固定化膜の保存液及びアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
バイオセンサは、溶液中の測定対象物質を認識する分子識別素子として、酵素や抗体などの生体機能高分子や、微生物や細胞など生体そのものを利用し、これらの生体材料を多孔性高分子膜に包括又は共有結合させることにより固定化した膜と、電気化学的検出器などのトランスデューサとを組み合わせて試料液中の化学成分の測定を行うセンサであり、試料液を上記生体材料を固定化した膜に接触させ、これによって生じる生化学反応により生成又は消費される物質の濃度変化を、検出器の出力（電流、電圧など）変化に変換して測定し、試料液に対するセンサ出力から、既知の濃度の被測定物質の標準液によって得られた検量線を用いて、試料液中の目的物質の濃度を算出するものである。
【０００３】
例えば、特公平７−８５０７２号公報には、生体材料として有害物質に極めて弱い微生物である硝化細菌をアルギン酸ゲルによってセルロース膜上に包括固定化した硝化細菌固定化膜を用い、トランスデューサとして溶存酸素電極を用いた水中の毒物検出用バイオセンサが開示されている。このバイオセンサでは、硝化細菌の呼吸速度を連続モニタリングして、検水中に毒物が混入した時の硝化細菌の呼吸速度低下率を基に毒物検出を行なうことができる。
【０００４】
図４にはバイオセンサの一例が示されている。このバイオセンサ１０は、試料液の流路１２ａが設けられたフローセル１２と、硝化細菌を固定化した硝化細菌固定化膜２０と、溶存酸素電極１１とから構成されている。そして、硝化細菌固定化膜２０の一方の面は、流路１２ａ中の試料液と接するように配置され、もう一方の面は溶存酸素電極１１と接するように配置されている。
【０００５】
上記のような硝化細菌を用いたバイオセンサにおいては、センサ出力の安定性を確保するとともに、毒物に対する応答の変動を回避するため、硝化細菌固定化膜を１ヶ月に１回交換する必要がある。そのため、通常、新しい硝化細菌固定化膜は、使用するまでの間、硝化細菌用の培地とともにビニールパックの中に封入して５〜１０℃程度の低温で保存されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
硝化細菌固定化膜の保存性は、▲１▼硝化細菌の活性、▲２▼硝化細菌固定化膜の菌体固定化量、▲３▼硝化細菌固定化膜の保存液組成という、３つのパラメータに左右される。例えば、硝化細菌の活性及び菌体固定化量は、硝化細菌の培養状態に左右されるが、一般に微生物の培養状態は、図５に示す増殖曲線のように培養時間の推移に伴って、培養令が誘導期・加速期・対数増殖期・定常期・死滅期の順に変化し、微生物の活性は対数増殖期において最も高く、生菌個数濃度は定常期において最も高くなる。
【０００７】
しかしながら、亜硝酸態窒素（ＮＯ2-−Ｎ）濃度、濁度、ＭＰＮ法などの従来の硝化細菌の培養状態の判定指標・方法では、培養状態（培養令及び生菌個数濃度）を正確かつ迅速に把握することができないため、生産日時、すなわちロットの異なる硝化細菌固定化膜間で、硝化細菌の活性及び菌体固定化量にバラツキが出てしまい、硝化細菌固定化膜の保存性にバラツキがでてしまうという問題があった。
【０００８】
また、硝化細菌用の培地中で硝化細菌固定化膜を保存した場合、保存期間が１〜２ヶ月程度と短く、２ヶ月以上の保存は困難であった。
【０００９】
したがって、本発明の目的の一つは、より長期間の保存が可能な硝化細菌固定化膜の保存液を提供することにある。また、本発明のもう一つの目的は、アンモニア酸化細菌固定化膜の保存性を均質に保つことができ、より長期間の保存が可能なアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するため、本発明の一つは、水道原水や下・排水処理プロセスの流入水中の化学物質を計測するバイオセンサを利用した水質計測器に使用される硝化細菌固定化膜の保存液であって、該保存液がオキサル酢酸を含有することを特徴とする、硝化細菌固定化膜の保存液である。
【００１１】
本発明の硝化細菌固定化膜の保存液においては、オキサル酢酸濃度が０．５〜２ｍＭであることが好ましい。また、前記硝化細菌はアンモニア酸化細菌であることが好ましい。
【００１２】
本発明の硝化細菌固定化膜の保存液は、オキサル酢酸を含有することにより、硝化細菌固定化膜の保存性を高めることができ、従来に比べて保存期間をより長くすることができる。また、オキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭとすることにより、硝化細菌の培養令に左右されることなく、安定した高い保存性を得ることができる。
【００１３】
本発明のもう一つは、水道原水や下・排水処理プロセスの流入水中の化学物質を計測するバイオセンサを利用した水質計測器に使用されるアンモニア酸化細菌固定化膜を保存する際に、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を２．５×１０6〜１．０×１０9個／ｍｍ2に調整するとともに、該アンモニア酸化細菌固定化膜の保存液のオキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭに調整することを特徴とする、アンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法である。
【００１４】
本発明のアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法においては、アンモニア酸化細菌をテトラゾリウム塩により染色し、該アンモニア酸化細菌中に生成するホルマザンの吸光度を測定することにより、培養液中のアンモニア酸化細菌の培養令の判定及び生菌個数濃度の測定を行ない、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を調整することが好ましい。
【００１５】
本発明の保存方法によれば、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を特定の範囲内に調整することにより、アンモニア酸化細菌固定化膜の保存性の均質化を図ることができる。また、保存液のオキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭに調整することにより、アンモニア酸化細菌の培養令に左右されることなく安定した高い保存性を得ることができる。
【００１６】
更に、アンモニア酸化細菌をテトラゾリウム塩により染色し、該アンモニア酸化細菌中に生成するホルマザンの吸光度を測定して、培養液中のアンモニア酸化細菌の培養令の判定及び生菌個数濃度の測定を行なうことにより、アンモニア酸化細菌の培養状態を正確かつ迅速に把握することが可能となり、容易にアンモニア酸化細菌固定化膜の保存性の均質化を図ることができる。
【００１７】
【発明の実施の形態】
本発明の硝化細菌固定化膜の保存液（以下、単に保存液という。）に用いられるオキサル酢酸は、硝化細菌のような独立栄養細菌におけるＣＯ2固定化反応の一種である、還元的カルボン酸回路に関与する物質である。なお、本発明でいう硝化細菌とは、アンモニア酸化細菌（亜硝酸菌）及び亜硝酸酸化細菌（硝酸菌）を意味する。
【００１８】
本発明の保存液は、アンモニア酸化細菌又は亜硝酸酸化細菌を培養する際に用いられる培地にオキサル酢酸を添加することにより調製できる。例えば、アンモニア酸化細菌用培地としては、通常、Pramer培地（Lewis & Pramer: Isolation of Nitrosomonas in Pure Culture.; J. Bacteriol., 76, 524-528 (1958)）が好ましく用いられるが、Pramer培地に類似した組成の培地（例えば、Pramer培地における各種塩の代替塩を用いた培地等）を用いることもできる。また、亜硝酸酸化細菌用培地としては、例えば、Watson, S. W., Taxonomic considerations of the family Nitrobacteraceae Buchanan, Int. J. Syst. Bacteriol. 21 p.254 (1971)に記載された培地（ＮａＮＯ2：１０００ｍｇ／Ｌ、Ｋ2ＨＰＯ4：５００ｍｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ：５００ｍｇ／Ｌ、ＮａＣｌ：３００ｍｇ／Ｌ、Ｆｅ2ＳＯ4：５ｍｇ／Ｌ、ＭｎＳＯ4・ｎＨ2Ｏ：２ｍｇ／Ｌ）等を用いることができるが、それに類似した組成の培地を用いることもできる。
【００１９】
保存液中のオキサル酢酸の濃度は、固定化された硝化細菌の活性及び菌体量に応じて適宜調整することができる。本発明においては、オキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭとすることが好ましい（通常、１〜２ｍＭとすることが特に好ましい）。オキサル酢酸の濃度が上記範囲外であると、硝化細菌の培養状態によっては充分な保存性が得られない場合がある。
【００２０】
本発明の保存液は、硝化細菌の中でもアンモニア酸化細菌を固定化した膜（アンモニア酸化細菌固定化膜）の保存液として特に好ましく用いられる。
【００２１】
次に、本発明のアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法について説明する。なお、以下の説明において、特に断りのない限り「％」は「質量％」を意味する。
【００２２】
本発明のアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法は、アンモニア酸化細菌固定化膜を保存する際に、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を２．５×１０6〜１．０×１０9個／ｍｍ2に調整するとともに、該アンモニア酸化細菌固定化膜の保存液のオキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭに調整するものである。
【００２３】
本発明においては、アンモニア酸化細菌をテトラゾリウム塩により染色し、該アンモニア酸化細菌中に生成するホルマザンの吸光度を測定することにより、培養液中のアンモニア酸化細菌の培養令の判定及び生菌個数濃度の測定を行ない、菌体固定化量を決定することが好ましい。
【００２４】
具体的には、以下の方法によりアンモニア酸化細菌の培養令の判定及び生菌個数濃度の測定を行なうことができる。
【００２５】
（１）アンモニア酸化細菌の培養期間中、菌体を含む培養液をサンプルとして毎日採取（培養液１００ｍＬ当たり１ｍＬ）して培養終了時まで５〜１０℃で冷蔵保存する。なお、アンモニア酸化細菌の培養は公知の液体培地を用いた継代培養法に従って行なうことができる。例えば、５〜１０℃で適当な期間保存された前培養液を新しいPramer培地に、通常、５〜２０％（v/v）接種して、温度３０℃で４〜６日間振とう培養（振とう機回転数１５０〜１８０ｒｐｍ）すればよい。
【００２６】
本発明において、アンモニア酸化細菌としては、Nitrosomonas europaea（ATCC25978、ATCC19718）等が例示できる。
【００２７】
（２）採取・保存したサンプル１．２ｍＬ当たり、０．２５％テトラゾリウム塩水溶液を０．１５ｍＬ、及びアンモニア態窒素含有水溶液（例えば、アンモニア態窒素を５ｇ／Ｌ含有するように調製されたＮＨ4Ｃｌ水溶液等）を０．１５ｍＬ添加して、３０℃で２４時間静置した後、遠心分離して上澄みを除去し、菌体に１０％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）／０．１Ｎ−ＨＣｌを１ｍＬ添加してよく混合し、菌体中に生成したホルマザンを抽出・溶解して分光光度計でその吸光度を測定する。
【００２８】
また、各サンプルに含まれる菌体を染色して、血球計算盤を用いて計測し、各サンプル（培養液）１ｍＬ当たりの生菌個数（生菌個数濃度）を求める。なお、菌体の染色方法は、特に限定されず、公知の方法を採用することができるが、上記のようにテトラゾリウム塩を用いた方法が好ましく採用される。
【００２９】
テトラゾリウム塩としては、例えば、2-(4-indophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H-tetrazolium chloride（ＩＮＴ）、2,3-bis(2-Methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxyanilide inner salt（ＸＴＴ）、3-(4,5-dimethylthyazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide（ＭＴＴ）等を用いることができる。テトラゾリウム塩は、生菌のミトコンドリアの脱水素酵素によって還元されてホルマザンを生成する。例えば、テトラゾリウム塩としてＩＮＴを用いた場合は赤紫色のホルマザンが生成するので、５００ｎｍにおける吸光度を測定すればよく、ＸＴＴやＭＴＴを用いた場合は、それぞれ生成するホルマザンに最適な波長の吸光度を測定すればよい。
【００３０】
（３）各サンプルにおけるホルマザン吸光度を培養日数に対してプロットして増殖曲線を作成する。また、生菌個数濃度をホルマザン吸光度に対してプロットしてホルマザン吸光度−生菌個数濃度検量線を作成する。
【００３１】
そして、上記増殖曲線及びホルマザン吸光度−生菌個数濃度検量線に基いて、得られたホルマザンの吸光度からアンモニア酸化細菌の培養令の判定及び生菌個数濃度の測定を行なう。
【００３２】
通常、上記（１）に例示した培養条件で培養を行なった場合、対数増殖期〜定常期におけるホルマザン吸光度は０．１〜０．４、生菌個数濃度は１×１０7〜１×１０8個／ｍＬの範囲で変動する。本発明においては、ホルマザン吸光度０．２〜０．４の培養液を用いてアンモニア酸化細菌固定化膜を製膜することが好ましい。なお、培養開始から６日目までにホルマザン吸光度が０．２に達しない場合は、培養不良と判定し、菌株の入換え・再培養を行なう。
【００３３】
（４）上記（３）の結果に基いて、菌体固定化量が２．５×１０6〜１．０×１０9個／ｍｍ2となるようにアンモニア酸化細菌固定化膜を製膜する。
【００３４】
図１には、アンモニア酸化細菌固定化膜の一例が示されており、以下、図１に基いてアンモニア酸化細菌固定化膜の製膜方法について説明する。
【００３５】
アンモニア酸化細菌固定化膜２０は、円形の多孔質のセルロース膜２１、２２が、両面テープ２３によって貼り合わされたものであり、その中心部には、アンモニア酸化細菌が固定化された所定の大きさの円形の菌体固定化部２４を有している。なお、両面テープ２３は、菌体固定化部２４と重ならないように、中心部が所定の大きさにくりぬかれたドーナツ状をなしている。
【００３６】
まず、上記のようにして培養令の判定及び生菌個数濃度を測定したアンモニア酸化細菌の培養液を遠心分離して上澄みを除去した後、１％アルギン酸ナトリウム水溶液を適量加えて懸濁し、所定の生菌個数濃度に調整した菌体濃縮液を得る。
【００３７】
そして、セルロース膜２２の中心部に、上記特定の菌体固定化量となるように菌体濃縮液を滴下して、余剰のアルギン酸ナトリウム水溶液を吸引除去した後、更に塩化カルシウム水溶液（３０ｇ／Ｌ）を適量滴下して、余剰の塩化カルシウム水溶液を吸引除去し、菌体を固定化した側を内側にして、ドーナツ状の両面テープ２３を介してセルロース膜２１と貼り合わせる。
【００３８】
そして、最後に塩化カルシウム水溶液（３０ｇ／Ｌ）に１５分間浸漬し、アルギン酸ナトリウムを完全にゲル化させて菌体を固定化する。
【００３９】
（５）上記のようにして得られたアンモニア酸化細菌固定化膜を、０．５〜２ｍＭのオキサル酢酸（特に好ましくは１〜２ｍＭ）を含有するアンモニア酸化細菌培養用リン酸緩衝液とともにビニールパックの中に封入して５〜１０℃で保存する。
【００４０】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明する。なお、以下の例においては、アンモニア酸化細菌Nitrosomonas europaea（ATCC25978）を用い、菌の培養はすべて無菌的に操作した。
【００４１】
実施例１
（１）アンモニア酸化細菌固定化膜の製膜
以下の方法により、図１に示す構成のアンモニア酸化細菌固定化膜を製膜した。なお、多孔質のセルロース膜として商品名「HCWG 047S3」、「HVLP 02500」（いずれもミリポア社製）、両面テープとして商品名「No.532 TO.125」（日東電工社製）を用いた。
【００４２】
表１に示す組成のPramer培地を用いて、常法にしたがってアンモニア酸化細菌を培養して得られた培養液（培養令：対数増殖期、生菌個数濃度：１．２×１０7個／ｍＬ）を遠心分離して上澄みを除去して菌体を回収した。得られた菌体に１％アルギン酸ナトリウム水溶液を加えて懸濁し、菌体濃縮液（生菌個数濃度１．２×１０9個／ｍＬ）を調製した。
【００４３】
【表１】
0003882677.tif 000002
【００４４】
そして、直径（Ｌ２）１８ｍｍの円形のセルロース膜の菌体を固定化する側に、中心部が円形（直径Ｌ１：５ｍｍ）にくりぬかれた、直径１８ｍｍの両面テープを貼り、その中心部に、菌体固定化量が６．０×１０7個／ｍｍ2（培養液量５ｍＬ分）となるように上記菌体濃縮液を所定量滴下して、余剰のアルギン酸ナトリウム水溶液を吸引除去した後、更に塩化カルシウム水溶液（３０ｇ／Ｌ）をパスツールピペットで１滴滴下して、余剰の塩化カルシウム水溶液を吸引除去した。
【００４５】
そして、その上にもう１枚のセルロース膜を貼り合わせた後、塩化カルシウム水溶液（３０ｇ／Ｌ）に１５分間浸漬してアルギン酸ナトリウムを完全にゲル化させてアンモニア酸化細菌固定化膜を得た。
【００４６】
（２）オキサル酢酸を含有する保存液中でのアンモニア酸化細菌固定化膜の保存安定性試験
表１に示す組成のPramer培地において、アンモニア態窒素濃度を６０ｍｇ／ｍＬに低減したものに、それぞれオキサル酢酸濃度が０、０．５、１、２、５ｍＭとなるように加えて各保存液を調製した。
【００４７】
そして、上記アンモニア酸化細菌固定化膜を、適量の各保存液とともにビニールパックに封入して５℃で所定期間保存した後、バイオセンサに装着して、センサ出力規格値（０．３５ｍＶ）到達時間を測定し、保存性を評価した。なお、保存性の評価は、センサ出力規格値到達時間が２４時間以内である場合を「保存可能」、２４時間を超えた場合を「保存不可」であると判断した。その結果を表２に示す。
【００４８】
【表２】
0003882677.tif 000003
【００４９】
表２の結果から、オキサル酢酸濃度が０．５ｍＭ又は２ｍＭの場合で２．５ヶ月間保存可能、１ｍＭ又は５ｍＭの場合では３ヶ月間保存可能であり、オキサル酢酸無添加の場合と比較して１〜１．５ヶ月の膜保存期間延長効果が確認された。なお、この結果では、膜の保存期間がオキサル酢酸濃度に完全に依存していないが、センサ出力規格値到達時間は、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化部における膜保存時の菌体濃度分布変化や、バイオセンサにアンモニア酸化細菌固定化膜を装着した際の溶存酸素電極との接触状態にも若干依存するためであると考えられる。
【００５０】
また、培養令が定常期の菌体を用いた場合、オキサル酢酸２ｍＭ以上で過剰の菌体活性化による早期膜活性失活現象が見られた。
【００５１】
実施例２
表１に示す組成の培地（Pramer培地）を用いて、常法にしたがってアンモニア酸化細菌の培養を行なった。なお、培養条件は、前培養液１０（v/v）％接種／温度３０℃／振とう機回転数１５０ｒｐｍとし、６日間振とう培養を行った。
【００５２】
培養期間中（０〜６日）、培養液をテストチューブに毎日４本ずつサンプリングし、培養終了時まで５℃で冷蔵保存しておいた。
【００５３】
各サンプル１．２ｍＬ当たり、０．２５％ＩＮＴ水溶液０．１５ｍＬ、ＮＨ4Ｃｌ水溶液（アンモニア態窒素５ｇ／Ｌ含有）０．１５ｍＬを加えて混合して、３０℃で２４時間静置した。
【００５４】
そして、各日ごとの１サンプルを用いて、その菌数を血球計算盤により計測し、サンプル（培養液）１ｍＬ当たりの生菌個数（生菌個数濃度）を求めた。
【００５５】
また、残りの３つのサンプルは、遠心分離して上澄みを除去した後、１０％ＳＤＳ／０．１Ｎ−ＨＣｌを１ｍＬ添加してよく混合してホルマザンを抽出・溶解させた後、３つのサンプルを合わせて、分光光度計で５００ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００５６】
そして、生菌個数濃度及びホルマザン吸光度の測定結果を培養日数に対してプロットして、図２に示す増殖曲線を作成した。
【００５７】
図２から、培養日数に対するホルマザン吸光度及び生菌個数濃度との関係はよく一致していることが分かる。ちなみに、図２においては、培養２〜３日目が対数増殖期であり、培養６日目（培養終了時）は定常期と判定される。
【００５８】
更に、別途、同様の実験を２回行ない、生菌個数濃度をホルマザン吸光度の測定結果に対してプロットして、図３に示すホルマザン吸光度−生菌個数濃度検量線を作成したところ、ホルマザン吸光度と生菌個数濃度との相関係数が非常に高い（０．９８）ことから、ホルマザン吸光度を測定することによりアンモニア酸化細菌の培養令及び生菌個数濃度を正確に把握することが可能であることが分かる。
【００５９】
実施例３
表３に示す組成でアンモニア酸化細菌固定化膜の保存液を調製した。
【００６０】
【表３】
0003882677.tif 000004
【００６１】
【発明の効果】
以上説明したように本発明の硝化細菌固定化膜の保存液は、オキサル酢酸を含有することにより、硝化細菌固定化膜の保存性を高めることができ、従来に比べて保存期間をより長くすることができる。
【００６２】
また、本発明のアンモニア酸化細菌固定化膜の保存方法によれば、アンモニア酸化細菌固定化膜の菌体固定化量を特定の範囲内に調整することにより、アンモニア酸化細菌固定化膜の保存性の均質化を図ることができ、また、保存液のオキサル酢酸濃度を０．５〜２ｍＭに調整することにより、アンモニア酸化細菌の培養令に左右されることなく安定した高い保存性を得ることができる。
【００６３】
その結果、ロットの異なるアンモニア酸化細菌固定化膜の保存性の均質化を図ることができるとともに、アンモニア酸化細菌固定化膜の保存期間を３ヶ月程度まで長期化することができ、利便性の高い、品質の安定したアンモニア酸化細菌固定化膜の生産が可能となり、より実用性の高いバイオセンサ応用水質計を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  アンモニア酸化細菌固定化膜の構成の一例を示す模式図である。
【図２】  生菌個数濃度及びホルマザン吸光度の測定結果を培養日数に対してプロットして得られた増殖曲線を示す図である。
【図３】  生菌個数濃度をホルマザン吸光度の測定結果に対してプロットして得られたホルマザン吸光度−生菌個数濃度検量線を示す図である。
【図４】  バイオセンサ（微生物センサ）の構成例を示す模式図である。
【図５】  一般的な微生物の増殖曲線を示す図である。
【符号の説明】
２０  アンモニア酸化細菌固定化膜
２１、２２  セルロース膜
２３  両面テープ
２４  菌体固定化部
【図１】
0003882677.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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