(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネートを含み、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ活性誘導を呈し、解毒代謝機能を向上して発癌を抑制し、かつ、酸化ストレス軽減作用をも呈することを特徴とする固形状、半流動状または流動状の食品。
【請求項２】
請求項１の６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネートがアブラナ科植物、またはこの抽出物である請求項１に記載の食品。
【請求項３】
請求項２のアブラナ科植物が沢わさびまたはクレソンである請求項２に記載の食品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は生体異物代謝における第二相異物代謝酵素の一つであるグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（以下、「ＧＳＴ」という。）を活性化、あるいは増量する活性誘導物質を含む食品に係り、特に強力な活性誘導を呈するＧＳＴの活性誘導物質を含む食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
今日、我々の生活している環境には、生体にとって有害な作用を持つ化学物質等の生体異物が氾濫している。この中には発癌物質もあり、我々はこのような発癌物質が日常的に人体内に取り込まれる生活を余儀なくされている。
【０００３】
一方、我々の人体には、これら発癌物質を含む生体異物の代謝のための防御機能として、主に第一相および第二相の二段階からなる解毒代謝機能が、生体異物との直接的な接触機会の多い肝臓、胃、腸、肺等の器官に備わっている。
【０００４】
上述第一相では、酸化反応、還元反応、加水分解反応等によって生体異物の極性を上げ、水溶性を高める。さらに、上述第二相では、各種抱合反応等により生体異物（第一相で代謝された異物も含む）の水溶性を一層高め、無毒化して体外に排出しやすくする。
【０００５】
ＧＳＴは還元型グルタチオンと種々の親電子化合物を抱合させる酵素、具体的には、生体異物とグルタチオンとの抱合反応を触媒する酵素であって、第二相異物代謝酵素の一つであり、一群の機能を異にする分子種からなる多機能酵素である。すなわち、これは解毒酵素としての機能、例えば、様々な外因性有機化合物をグルタチオン抱合する機能を保持するほか、胆汁酸、ビリルビン、ステロイドホルモン等を結合する結合タンパクとしての機能をも保持している。
【０００６】
また、生体を構成する脂質、あるいは食餌として摂取している脂質は体内で自動的に酸化されて過酸化物となり、この過酸化物がさらに酸化されて４−ハイドロキシノネナール等の酸化生成物となる。これらの脂質過酸化物や酸化生成物、特に酸化生成物はＤＮＡや生体組織を損傷して動脈硬化やアルツハイマー等の様々な疾病を誘発したり、生体の老化を促進させたりする原因物質であることもわかっている。これはいわゆる酸化ストレスと称されるものである。ＧＳＴはこれらの脂質過酸化物や酸化生成物についても抱合化を触媒し、無毒化して体外に排出しやすくする。
【０００７】
このようなＧＳＴは活性が一層向上されたり、増量されたりすれば、上述の第二相抱合反応が一層活発化され、この結果、発癌物質等の生体異物の解毒代謝機能が向上されて発癌の危険性が低減することになる。
【０００８】
さらに、ＧＳＴの活性向上や増量により、脂質酸化生成物による酸化ストレスを一層低減させることもでき、この結果、脂質酸化生成物が原因となって生じる動脈硬化やアルツハイマー等を有効に防止することになる。
【０００９】
ＧＳＴの活性化を向上したり増量させる物質として、従来、ブロッコリーに含まれるスルホラフアン（４−メチルスルフイニルブチルイソチオシアネート）が他のイソチオシアネート類に比して特に強いＧＳＴ活性誘導を呈することが確認されている。さらに、化学発癌剤によるラットの発癌がスルホラフアンの作用によって有効に抑制されることも確認されている。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、上述のスルホラフアンは相当に強いＧＳＴ活性誘導を呈するものの、未だ不充分であり、有害な化学物質や生体異物が益々氾濫し、かつ脂質酸化生成物による酸化ストレスも一層の増大を余儀なくされる昨今では、一層強力なＧＳＴ活性誘導物質、あるいはこれを含む食品の開発が強く望まれている。
【００１１】
そこで、本発明の目的は一層強力なＧＳＴ活性誘導を呈し、これにより解毒代謝機能が向上されて発癌抑制作用を呈し、かつ酸化ストレス軽減作用をも呈し、上述の公知技術に存する欠点を改良したＧＳＴ活性誘導物質およびこれを含む固形状、半流動状または流動状の食品を提供することにある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】
上述の目的を達成するため、本発明のＧＳＴ活性誘導物質によれば、６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネートからなることを特徴とする。
【００１３】
さらに、上述の目的を達成するため、本発明のＧＳＴ活性誘導物質を含む固形状、半流動状または流動状の食品によれば、ＧＳＴ活性誘導物質として６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネートを含むことを特徴とする。
【００１４】
【発明の実施の態様】
以下、本発明を具体的に詳述する。
【００１５】
本発明にかかる上述のＧＳＴ活性誘導物質である６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネートは化学的に合成された物質であってもよく、また、アラブナ科植物からの抽出物であってもよい。
【００１６】
上述ＧＳＴ活性誘導物質の合成方法を説明すると、次のとおりである。
【００１７】
原理的には Kiaer等の方法に従う。(Kiaer etal. Acta chem.Scand ・11、1298 、1957年）。出発物質としてω−クロロアルケノールを用い、ＣＨ3 −ＳＮａと還流してω−メチルチオアルケノールを得、これにＳＯＣｌ2 を作用させてω−クロロアルケノールメチルサルフアイドを得る。
【００１８】
次に、Gabriel 法を用いてアミノ基を導入し、Ｎ−（ω−メチルチオアルキル）−フタルイミドを生成し、これにヒドラジン水化物を加えて還流し、ω−メチルチオアルキルアミンを得る。さらに、Li等の方法（Lietal.J.Org.Chem., 62，4539、1997年）に従い、チウラムジスルフイドを経て得られたω−メチルチオアルキルイソチオシアネートをｍＣＰＢＡでメチルチオ基を酸化し、ω−メチルスルフイニルアルキルイソチオシアネートを得る。
【００１９】
アブラナ科植物としては各種の野菜、果物が挙げられるが、特に沢わさび（  Eutrema wasabiもしくはWasabia japonica) およびクレソンが強いＧＳＴ活性誘導を呈するので好ましい。
【００２０】
ω−メチルスルフイニルアルキルイソチオシアネートの沢わさびおよびクレソンからの抽出に当たっては、沢わさびおよびクレソンを水や有機溶媒で抽出するか、水蒸気蒸溜や分子蒸溜等の蒸溜法で抽出することが好ましいが、特にこれらの方法に限定されるものではない。
【００２１】
例えば、沢わさびの有機溶剤での具体的抽出方法を示すと、沢わさびをすりおろした後、酢酸エチル溶媒で抽出し、この抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水の後、エバポレータで濃縮し、ω−メチルスルフイニルアルキルイソチオシアネートを得る。（後述の実施例１を参照。）この方法は特に６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネートの抽出に最適である。
【００２２】
ω−メチルスルフイニルアルキルイソチオシアネートのクレソンからの抽出に当たっても沢わさびと同様に抽出される。例えば、クレソンをすりつぶした後、酢酸エチル溶媒で抽出し、この抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水の後、エバポレータで濃縮し、ω−メチルスルフイニルアルキルイソチオシアネートを得る。この方法は特に、７−メチルスルフイニルヘプチルイソチオシアネートや８−メチルスルフイニルオクチルイソチオシアネートの抽出に最適である。
【００２３】
なお、上述抽出液は抽出、濃縮の後、液液分配法、クロマトグラフイー法、分子蒸溜、精留等、任意の方法によって精製される。
【００２４】
このようにして得られた本発明にかかるＧＳＴ活性誘導物質である６−メチルスルフィニルヘキシルイソチオシアネートは強力なＧＳＴ活性誘導作用を有するものであり、これを医薬品としてあるいは後述のとおり食品として、人体内や動物体内に投与することにより解毒代謝機能が強力に向上されて発癌が抑制され、かつ酸化ストレスが軽減される。
【００２５】
上述のＧＳＴ活性誘導物質は食品として人体内や動物体内に投与しても上述と同様、解毒代謝機能が強力に向上されて発癌が抑制され、酸化ストレスも軽減される。
【００２６】
本発明にかかる上述の食品としては、社会通念上食品として認知されている固形状、半流動状、流動状等の食品が挙げられる。これら食品の中にはもちろん、社会通念上健康食品として認知されている固形状、半流動状、流動状等の食品も含まれる。
【００２７】
固形状食品としては、例えば、ビスケット状、シート状、錠剤、顆粒粉末等の形態の一般食品および健康食品が挙げられる。半流動状食品としては、例えば、ペースト状、練り状、ゼリー状、ゲル状等の形態の一般食品および健康食品が挙げられる。流動状食品としては、例えば、ジュース、茶、清涼飲料、ドリンク剤等の形態の一般食品および健康食品が挙げられる。なお、これら健康食品には厚生省許可にかかる特定保健用食品、具体的には、整腸、コレステロール調節、血圧調節、高吸収性ミネラル、歯の健康維持（虫歯予防）、血糖調節、食後の血中中性脂肪抑制等の各機能を有する成分がそれぞれ配合された食品も含まれる。
【００２８】
また、上述のＧＳＴ活性誘導物質そのものからなる単味食品やアブラナ科植物由来の食品であってもよく、あるいはこれに賦型剤、調味料、香料等を適宜配合して可食性や嗜好性を向上ささたものであってもよい。
【００２９】
さらに、上述のＧＳＴ活性誘導物質あるいはこれを含むアブラナ科植物を、粉わさび、練りわさび、練りカラシ等の香辛調味料、畜肉製品、魚肉製品、缶詰、フリーズドライ食品、レトルトパウチ食品、冷凍食品等の加工食品や、麺類、惣菜、調味液、マヨネーズ、ドレッシング、だし汁、たれ、ソース、パン、和洋菓子、漬物等、広範囲の食品に任意の割合で添加したものであってもよい。
【００３０】
【発明の実施例】
以下、本発明を実施例によって説明するが、本発明はこれら実施例によって制限されるものではない。
【００３１】
実施例１
沢わさびをすりおろした後、これに２倍重量の酢酸エチル溶媒を加えて一晩放置した。次いで、酢酸エチル層を分離し、無水硫酸ナトリウムで脱水後、エバポレータで濃縮して抽出物を得た。
【００３２】
次に得られた沢さわび抽出物について次のようにして成分の分離、同定を行った。
【００３３】
まず、沢さわび抽出物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーに供し、ヘキサン／酢酸エチル混合溶媒（酢酸エチル含量を０、２５、５０、７５、１００％と段階的に上昇）、アセトンで順次溶出した。得られたアセトン溶出画分をエバポレータで濃縮して分画物を得た。この分画物をさらに高速液体クロマトグラフイー（カラム：Develosil ODS-HG-5、溶出溶媒；メタノール／水＝４０／６０、流速；2.０ml／分）を用いて精製し、６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネートを得た。得られた６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネートはＮＭＲ、ＩＲ、ＭＳの機器分析の結果からそのものであることが確認された。
【００３４】
次いで、６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネートをマウスに投与してＧＳＴ活性誘導作用を測定した。投与方法およびＧＳＴ活性度の測定は以下に示した方法にて行った。
【００３５】
投与実験
実験動物には４週齢のＩＣＲマウス（雌）（日本Slc 社製) を用い、４週間普通食（２０％カゼイン食）を自由摂取させた。その後、経口ゾンデ（ＮＩＳ式フレキシブルゾンデ、夏目製作所製）を用いて、ゴマ油１００μｌ中に１５μモル／マウス／日となるように６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネートおよび４−メチルスルフイニルブチルイソチオシアネート（スルホラフアン）をそれぞれ別々に溶解、調製した。これらを別々の群のマウスにそれぞれ毎朝１０時に胃内強制投与を５日間連続して行った。対照としてゴマ油のみを投与した群と、何も投与しなかった群を作成した。なお、各群には５匹のマウスを使用した。
【００３６】
５日目の投与終了後、２４時間後に採血して屠殺し、肝臓を切除し液体窒素下で急速冷凍して−８０℃で保存した。その後、得られた肝臓は４倍重量のＴＥＤ緩衝液を加え、氷冷しながらホモジネートした。ホモジネート液は予備遠心分離した後、上清をさらに１０0,０００Ｇで１時間超遠心分離した。ＧＳＴ活性測定には得られた各上清を１００倍に希釈したものを試料として用い、以下の測定法にて測定した。
【００３７】
ＧＳＴ活性度測定
原理的にはW.H.Habig (J.Biol.Chem.249、713 、1974年) 等の方法に従った。すなわち、0.２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ6.５）0.５ｍｌ、１０ｍＭ還元型グルタチオン水溶液0.１ｍｌ、精製水0.２ｍｌの混合液に、上述で得られた試料を0.１ｍｌ加え、攪拌の後、１０ｍＭ  ＣＤＮＢ（１−クロロ−２，４−ジニトロベンゼン）１００μｌを添加し、反応を開始させ、次いで、３４０ｎｍの吸光度を３分間１５秒毎に樹定し、検量線より活性を測定した。
【００３８】
タンパク質量の測定
上清のタンパク質量の測定はＢＣＡ  プロテイン  アッセイリエージエントキット（PIERCE社型）を使用し、上清１０μｌに測定用混合試薬２００μｌを加え、３０分間インキュベートし、５６２ｎｍの吸光度を測定してタンパク量を定量することにより行った。
【００３９】
ＧＳＴ活性値は以下の算術式で求めた。
ＧＳＴ活性値（ユニット／ｍｇ  プロテイン）＝（３４０ｎｍでの吸光度／３×１０×１００）／（9.６×タンパク質量）
【００４０】
測定結果を図１に示す。図１から、本発明にかかる６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネート投与にかかるマウスのＧＳＴ活性が従来のスルホラフアン投与のものよりも相当に高いことがわかる。
【００４１】
【発明の効果】
以上のとおり、本発明にかかるω−メチルスルフイニルアルキルイソチオシアネート、特に６−メチルスルフイニルヘキシルイソチオシアネート、あるいはアブラナ科植物、特に沢わさびやクレソンの抽出物（抽出エキス）は高いＧＳＴ活性誘導を呈し、これらを医薬品として、あるいは食品として生体内に投与することにより解毒機能が向上されて発癌抑制作用を呈し、かつ酸化ストレス軽減作用をも呈し、実用上有用な発明である。
【図面の簡単な説明】
【図１】マウス投与実験におけるＧＳＴ活性度を表したグラフである。
【図１】
0003899210.tif 000002