(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式〔１〕
【化１】
0003957552.tif 000013
［式中、Ｒ１は低級アルキル基、または低級アルコキシ基で置換されることのある低級アルコキシ基を、Ｒ２はハロゲン原子を、Ｒ３は置換基として低級アルコキシ基およびハロゲン原子から選ばれる基を有することのあるベンゾイル基をそれぞれ示し、Ｒ２の置換位置が４位であり、Ｒ３の置換位置が３位である。］で表されるチオ尿素誘導体。
【請求項２】
Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素、Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−クロロフェニル）チオ尿素、Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−［４−クロロ−３−（４−メトキシベンゾイル）フェニル）］チオ尿素、Ｎ−（２−メトキシエトキシカルボニル）−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素、Ｎ−（２−メトキシエトキシカルボニル）−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−クロロフェニル）チオ尿素およびＮ−（２−メトキシエトキシカルボニル）−Ｎ’−［４−クロロ−３−（４−クロロベンゾイル）フェニル］チオ尿素からなる化合物群より選ばれる請求項１に記載のチオ尿素誘導体。
【請求項３】
Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素またはＮ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−クロロフェニル）チオ尿素である請求項２に記載のチオ尿素誘導体。
【請求項４】
請求項１から３のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物および製剤学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
【請求項５】
請求項１から３のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物を有効成分として含有する脱共役蛋白質−３発現促進剤。
【請求項６】
請求項１から３のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物を有効成分として含有する抗肥満剤。
【請求項７】
請求項１から３のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物を有効成分として含有する糖尿病の予防・治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は医薬用途を有する新規なチオ尿素誘導体に関する。さらに詳しくは、本発明は、余剰エネルギーを消費し、熱産生することによって、肥満を防ぐ働きを持つ脱共役蛋白質−３（ＵＣＰ３）のｍＲＮＡの発現を増加させる作用を有する、チオ尿素誘導体を有効成分とする脱共役蛋白質−３発現促進剤および医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、我が国においても肥満患者が増大し、大きな社会問題になりつつある。食物摂取の増大（過食）、運動の減少（運動不足）、体熱発生の変動などの要因によって肥満になると、体脂肪が多く蓄積することによって動脈硬化、高血圧症、糖尿病、心臓病を引き起こし、血管障害、神経障害、抵抗力低下などの合併症を併発することがある。成人病の予防などの観点から、肥満を解消する手段について多方面から研究が行われている。
【０００３】
一方、脱共役とは、生体内の酸化的リン酸化において、電子伝達で得られたエネルギーがＡＴＰ合成反応に共役することを阻害することをいい、ＡＴＰ合成に共役される化学エネルギーを熱エネルギーに変換する点で重要な生体機能の一つである。かかる脱共役機能の重要性から、多くの脱共役剤が見出されており、生体内に存在する脱共役蛋白質として、例えばミトコンドリアに存在する脱共役蛋白質が知られている。脱共役蛋白質には、褐色脂肪組織に存在する脱共役蛋白質−１（ＵＣＰ１）、白色脂肪組織など多くの組織に広く分布する脱共役蛋白質−２（ＵＣＰ２）、主として骨格筋に存在する脱共役蛋白質−３（ＵＣＰ３）がある。
【０００４】
かかる脱共役蛋白質の発現を誘導することができれば、ＡＴＰ合成に共役される化学エネルギーの熱エネルギーへの変換効率が向上すると考えられるが、これまで脱共役蛋白質発現促進剤についてはほとんど知られておらず、その開発が求められていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は医薬品特に、余剰エネルギーを消費し、熱産生することによって、肥満を防ぐ働きを持つ脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現を増加させる作用を有し、医薬として有用な新規化合物を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、脱共役蛋白質の発現誘導効果について鋭意検討を行った結果、一連の新規なチオ尿素誘導体の合成に成功すると共に、これらの新規な誘導体が優れた脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現を増加させる作用を有することを見出し、さらに検討を重ねて本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、
（１）一般式〔１〕
【化２】
0003957552.tif 000002
［式中、Ｒ１は低級アルキル基、または低級アルコキシ基で置換されることのある低級アルコキシ基を、Ｒ２はハロゲン原子を、Ｒ３は置換基として低級アルコキシ基およびハロゲン原子から選ばれる基を有することのあるベンゾイル基をそれぞれ示し、Ｒ２の置換位置が４位であり、Ｒ３の置換位置が３位である。］で表されるチオ尿素誘導体、
（２）  Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素、Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−クロロフェニル）チオ尿素、Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−［４−クロロ−３−（４−メトキシベンゾイル）フェニル）］チオ尿素、Ｎ−（２−メトキシエトキシカルボニル）−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素、Ｎ−（２−メトキシエトキシカルボニル）−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−クロロフェニル）チオ尿素およびＮ−（２−メトキシエトキシカルボニル）−Ｎ’−［４−クロロ−３−（４−クロロベンゾイル）フェニル］チオ尿素からなる化合物群より選ばれる前記（１）に記載のチオ尿素誘導体、
（３）  Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素またはＮ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−クロロフェニル）チオ尿素である前記（２）に記載のチオ尿素誘導体、
（４）  前記（１）から（３）のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物および製剤学的に許容される担体を含有する医薬組成物、
（５）  前記（１）から（３）のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物を有効成分として含有する脱共役蛋白質−３発現促進剤、
（６）  前記（１）から（３）のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物を有効成分として含有する抗肥満剤、
（７）  前記（１）から（３）のいずれかに記載のチオ尿素誘導体から選ばれる化合物を有効成分として含有する糖尿病の予防・治療剤、
に関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】
〔置換基の定義〕
低級アルキル基としては、炭素数１〜６のものが好ましく、具体的には例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ヘキシル基などの直鎖又は分枝鎖状アルキル基が好ましい。
【０００９】
低級アルコキシ基としては、炭素数１〜６のものが好ましく、具体的には例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ基などが挙げられる。
【００１０】
低級アルコキシ基で置換されることのある低級アルコキシ基としては、炭素数１〜６のものが好ましく、具体的には例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ基などの低級アルコキシ基に加え、メトキシメチル、エトキシメチル、プロポキシメチル、ブトキシメチル、ペンチルオキシメチル、ヘキシルオキシメチル、１−メトキシエチル、２−メトキシエチル、３−メトキシプロピル、４−メトキシブチル、５−メトキシペンチル、６−メトキシヘキシル、２−エトキシエチル、６−ヘキシルオキシヘキシル基などが挙げられる。
【００１１】
ハロゲン原子としては、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素原子などが挙げられる。
【００１２】
ハロゲン置換低級アルキル基としては、炭素数１〜６のものが好ましく、具体的には例えば、トリフルオロメチル、テトラフルオロエチル、ヘプタフルオロプロピル、ノナフルオロブチル、ウンデカフルオロペンチル、トリデカフルオロヘキシル基などの、フッ素で置換されている低級アルキル基が好ましい。
【００１３】
本発明に係わる前記一般式〔１〕で表されるチオ尿素誘導体は、脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現を増加させる作用を有しており、脱共役蛋白質−３発現促進剤として、特に抗肥満剤、糖尿病の予防・治療剤として有用である。
本発明化合物は、自体公知の方法を含む種々の方法により製造することができる。その例を以下に反応工程式を挙げて説明する。
【００１４】
【化３】
0003957552.tif 000003
[式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は前記に同じ。]
本発明化合物〔１〕は、上記反応工程式において、アニリン誘導体〔２〕とイソチオシアナート誘導体〔３〕とを反応させることにより製造することができる。なお、原料化合物であるアニリン誘導体〔２〕とイソチオシアナート誘導体〔３〕は、公知方法または自体公知の方法によって容易に製造できる。
【００１５】
すなわち、上記反応は、例えばベンゼン、トルエン、キシレン、石油エーテルなどの芳香族ないし脂肪族炭化水素類、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサンなどの鎖状ないし環状エーテル類、アセトン、エチルメチルケトン、アセトフェノンなどのケトン類、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類などの不活性溶媒中、約０℃〜室温の温度条件にて、約１０分〜約２時間程度処理することにより行うことができる。アニリン誘導体〔２〕とイソチオシアナート誘導体〔３〕との使用割合は、前者に対し後者を少過剰〜約５倍モル量程度とするのが好ましい。
【００１６】
上記反応工程に示した目的化合物は、通常の分離手段により容易に単離精製できる。該手段としては、例えば吸着クロマトグラフィー、プレパラィブ薄層クロマトグラフィー、再結晶、溶媒抽出などが挙げられる。
【００１７】
本発明化合物〔１〕は、これを適当な無毒性製剤担体と共に用いて、一般的な医薬製剤の形態として使用できる。上記製剤担体としては、製剤の使用形態に応じて通常使用される充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などの希釈剤あるいは賦形剤などが挙げられ、これは得られる製剤の投与単位形態に応じて適宜選択される。
本発明化合物〔１〕が使用される医薬製剤の投与単位形態としては、各種の形態が利用目的に応じて選択でき、その代表的なものとしては、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤）、軟膏剤などが挙げられる。また、これらの各種製剤は自体公知の手段に従って徐放性製剤としてもよい。
【００１８】
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤担体として例えば乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ぶどう糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、燐酸カリウムなどの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ぶどう糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン糖などの結合剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウムなどの崩壊剤；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリドなどの界面活性剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基；ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、デンプンなどの保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などが使用可能である。
さらに錠剤は必要に応じて通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包剤、腸溶被錠、フィルムコーティング錠剤あるいは二重錠、二重錠とすることができる。
【００１９】
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として例えばぶどう糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン、カンテンなどの崩壊剤などが使用可能である。
【００２０】
坐剤の形態に成形するに際しては、製剤担体として例えばポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどが使用可能である。
カプセル剤は常法に従って、通常、本発明化合物〔１〕を上記で例示した各種の製剤担体と混合して硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセルなどに充填して調整することができる。
【００２１】
液剤、乳剤、懸濁剤などの注射剤として調整する場合、これらは殺菌されかつ血液と等張であるのが好ましい。注射剤の調整に際しては、希釈剤として例えば水、エチルアルコール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類などが使用可能である。なお、この場合、等張性の溶液を調整するのに十分な量の食塩、ぶどう糖、グリセリンなどを含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝材、無痛化剤などを添加してもよい。
【００２２】
さらに、上記医薬製剤中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を含有させることができる。
ペースト、クリーム、ゲルなどの軟膏剤の形態に調整するに際しては、希釈剤として例えば白色ワセリン、パラフィン、グリセリン、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイトなどが使用可能である。
上記医薬製剤中に含有されるべき本発明化合物〔１〕の量は、特に制限されず、広範囲より適宜選択されるが、通常、医薬製剤中に約１〜約８５重量％程度含有させるのがよい。
【００２３】
上記医薬製剤の投与方法は特に制限がなく、製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じて適宜決定される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤は経口投与され、注射は単独またはぶどう糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内投与され、さらに必要に応じて単独で筋肉内、皮内、皮下もしくは腹腔内投与され、坐剤は直腸内投与される。
【００２４】
上記医薬製剤の投与量は、その用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じて適宜決定されるが、通常、本発明化合物〔１〕の１日当たりの投与量が体重１ｋｇあたり約０．５〜約２０ｍｇ、好ましくは約１〜約１０ｍｇ程度とするのがよい。また、上記医薬製剤は１日１〜４回に分けて投与することができる。
なお、本発明化合物〔１〕は所望により他の医薬成分、例えば他の抗肥満剤、糖尿病の予防・治療剤と併用することもできる。
【００２５】
【実施例】
以下に本発明化合物の製造例を実施例として挙げる。
また、本発明化合物を用いた脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現増加量の測定及び製剤例を挙げる。各実施例で得られた化合物は、その構造、融点及び１Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータを下記表として記載する。
さらに、下記実施例における１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、内部基準としてＴＭＳ（テトラメチルシラン）を用いて測定し、測定溶媒は、ＣＤＣｌ３を用いた。
【００２６】
〔実施例１〕  Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ’−（３−ベンゾイル−４−ブロモフェニル）チオ尿素の合成
１．０ｇ（３．６ｍｍｏｌ）の２−ブロモ−５−アミノベンゾフェノンをアセトン５ｍｌに溶かし、室温下、この溶液に０．６２ｇ（４．７ｍｍｏｌ）のエトキシカルボニルイソチオシアナートを滴下した。さらに室温で３０分間撹拌した後、析出した結晶を濾取し、水およびメタノールで順次洗浄して、目的物の結晶１．４０ｇを得た（収率９５％）。
得られた化合物の融点及び１Ｈ−ＮＭＲデータを下記表に示す。
【００２７】
〔実施例２〜８、１０、１４、１７、１８、および参考例９、１１〜１３、１５、１６、１９〕
適当な出発原料を用い、実施例１と同様にして目的化合物を合成した。
【００２８】
実施例２〜８、１０、１４、１７、１８、および参考例９、１１〜１３、１５、１６、１９で得られた化合物の融点及び１Ｈ−ＮＭＲデータを下記表に示す。
【化４】
0003957552.tif 000004
【表１】
0003957552.tif 000005
【表２】
0003957552.tif 000006
【表３】
0003957552.tif 000007
【表４】
0003957552.tif 000008
【表５】
0003957552.tif 000009
【表６】
0003957552.tif 000010
【表７】
0003957552.tif 000011
【００２９】
〔試験例〕  脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現増加量の測定
ＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）から購入したマウス骨格筋細胞であるC2C12細胞を、２４ウェルプレート（Falcon社製）に１〜２×１０４個／ウェルの割合で細胞播種し、２日毎に培地を換えた。細胞がコンフルエント状態になってから分化培地に切り替え、さらに２日毎に培地を換えた。培地を分化培地に切り替えてから４日目に、本発明化合物の溶解液（濃度１０−５Ｍ又は３×１０−６Ｍ；０．１％ジメチルスルホキシド−分化培地）を加え、２４時間薬物暴露を行った。
次に、被検細胞より、RNeasy96 kit （QIAGEN社製） もしくはMFX-9600 （東洋紡社製）を用いて全ＲＮＡを単離精製した。
得られた全ＲＮＡより、TaqMan One-Step RT-PCR Master Mix Reagents Kit （Applied Biosystems社製）を用い、ＰＣＲ装置としてPRISM7700（Applied Biosystems社製）を用いてTaqMan RT-PCRを行って、脱共役蛋白質−３ｍＲＮＡの定量を行った。
尚、本発明化合物の溶解液の代わりに０．１％ジメチルスルホキシドのみを加えたものをコントロールとし、コントロール細胞における脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現量を１として、被検細胞における発現量の比率を求めた。
結果を下記表に示す。
【００３０】
下記表より、本発明化合物は、脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現量を大きく増加させた。
【表８】
0003957552.tif 000012
【００３１】
〔製剤例１〕  錠剤の製造
有効成分として実施例１で得た化合物を、１錠当たり３００ｍｇ含有する錠剤（２０００錠）を、次の処方により製造した。
実施例１で得た本発明化合物                            ６００ｇ
乳糖（日本薬局方品）                                    ６７ｇ
コーンスターチ（日本薬局方品）                          ３３ｇ
カルボキシメチルセルロースカルシウム（日本薬局方品）    ２５ｇ
メチルセルロース（日本薬局方品）                        １２ｇ
ステアリン酸マグネシウム（日本薬局方品）                  ３ｇ
即ち、上記処方に従い、実施例１で得た本発明化合物、乳糖、コーンスターチ及びカルボキシメチルセルロースカルシウムを充分に混合し、メチルセルロース水溶液を用いて混合物を顆粒化し、２４メッシュの篩を通し、これをステアリン酸マグネシウムと混合して、錠剤にプレス成型した。
【００３２】
〔製剤例２〕  カプセル剤の製造
有効成分として実施例４で得た化合物を、１カプセル当たり２００ｍｇ含有する硬質ゼラチンカプセル（２０００カプセル）を、次の処方により調整した。
実施例４で得た本発明化合物                            ４００ｇ
結晶セルロース（日本薬局方品）                          ６０ｇ
コーンスターチ（日本薬局方品）                          ３４ｇ
タルク（日本薬局方品）                                    ４ｇ
ステアリン酸マグネシウム（日本薬局方品）                  ２ｇ
即ち、上記処方に従い、各成分を細かく粉末にし、均一な混合物となるように混合した後、所望の寸法を有する経口投与用ゼラチンカプセルに充填した。
【００３３】
【発明の効果】
本発明が提供する上記一般式〔１〕で示されるチオ尿素誘導体は、余剰エネルギーを消費し、熱産生することによって、肥満を防ぐ働きを持つ脱共役蛋白質−３のｍＲＮＡの発現を増加させる作用を有し、脱共役蛋白質−３の発現促進により、肥満の予防・治療剤及び糖尿病の予防・治療剤として有用である。