(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘプト−２−エン−６−インカルボキサミドナトリウム塩もしくはリジン塩または２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−シアノフェニル）アミドナトリウム塩もしくはリジン塩を有効成分とする癌疾患治療用医薬。
【請求項２】
癌疾患が白血病、Ｔ−またはＢ−細胞型の慢性白血病、ホジキンもしくは非ホジキン性のリンパ腫、癌、肺癌、卵巣癌、リンパ腺癌、肉腫、カポジ肉腫、髄膜腫、胃腸癌、脳腫瘍、乳癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌または皮膚癌である請求項１に記載の医薬。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
化学療法は今日、進んだホルモン受容体ネガティブの悪性腫瘍の治療に利用され得る。その療法は有効性が限られている上に、その治療形態は重篤の副作用を起こすことが多いという特徴を有する。化学療法薬の活性原理（増殖抑制）がその作用および副作用の原因としてみなされなければならない。しかし、腫瘍細胞のみならず通常細胞もまた分裂しているので、患者の体中の分裂しつつある通常細胞は実際の標的細胞である腫瘍細胞とまさに同じように分裂が抑制される。胃腸管および骨髄の毛嚢の迅速に分裂しつつある細胞はこの抗増殖療法の望ましくない副作用によって特に悪い影響を受ける。
【０００２】
化学療法薬の抗増殖作用は例えば、細胞の核酸代謝に介入する該療法薬により成就される。特に有効な抗増殖物質はジヒドロオロテートデヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤である。ＤＨＯＤＨはピリミジンヌクレオチドのデノボ合成における独特な酵素である（Peters et al., 1990, Biochemical Pharmacology 39：No. １, 135-144）。この酵素はミトコンドリア内膜の外側に凝縮している。活性化合物ＤＵＰ−７８５（ブレキナル；Brequinar）による酵素阻害はプリンヌクレオチドではなくピリミジンリボ−およびデオキシリボヌクレオチドの凅渇を生起させる（Schwartsmann et al., 1988, Biochem. Pharmacol. 37：3257-3266）。ｄＴＴＰおよびｄＣＴＰの凅渇はＵＴＰおよびＣＴＰのそれに比例し、ウリジンの添加により防止され得る。ブレキナルによるインビトロ細胞系における成長阻害は、デオキシチミジンまたはデオキシシチジンではなくウリジンまたはシチジンの添加により中止され得る。これによりＵＭＰ合成の阻害がインビトロ細胞系における増殖抑制作用に非常に重要であると結論され得る（Perers et al., 1987, Invest. New Drugs, ５：235-244）。
【０００３】
臨床検査に関して、ブレキナルが血漿中のウリジン値を有意に低下させることの証明は可能であった（Peters et al., 1988, Proc. Am Ass. Cancer Res. 29：350（Abstract 1392)）。（この所見は種々の細胞系のインビトロ観察と一致している）。さらに、インビボのウリジンレベルに及ぼす作用度は骨髄および胃腸管の毒性（副作用）に相関した。
これらの臨床観察から、抗腫瘍原理は例えばブレキナルの場合のような増殖の一般的な抑制に基づくのではなくて腫瘍特異的代謝経路の阻害によるような癌治療剤の早急な開発必要性のあることが指摘される。
【０００４】
今や本発明によれば式ＩおよびIIの化合物はヒトＤＨＯＤＨを非常に弱く阻害するだけであるが、極めて特異的な腫瘍細胞系を分裂中非常に効率的に遮断するということが見出された。
ＭＴＴ試験中にウリジンの漸増量を添加すると、ロボ（ＬｏＶｏ）細胞系における本発明物質のＩＣ50値はほんの僅かだけ変化するにすぎないが、これとは全く対照的に同一細胞系に関するブレキナルのＩＣ50値は大いに増加する（実施例７）。
【０００５】
これらの実験的な所見から、本発明物質の抗増殖作用はブレキナルの場合のようなＤＨＯＤＨの阻害以外の作用素因によるのであろうということが示唆される。
蛍光顕微鏡技術を用いることにより、ＰＤＧＦ受容体およびＶＥＧＦ受容体を強く過剰に発現する細胞系の分裂は本発明物質の極めて低い濃度（より低いＩＣ50値）により有効に防止されることが証明され得た（実施例６）。結果としてのこの観察は、本発明物質が例えばＰＤＧＦ受容体のような特異的受容体のチロシンキナーゼを遮断することができ、すなわち腫瘍細胞中の異常信号伝達に有利に作用し得るということを指摘している。
【０００６】
従って本発明は癌疾患治療用医薬の製造における式ＩまたはII
【化２】
0003996658.tif 000002
【０００７】
〔上記式中、
Ｒ1は
ａ）  （Ｃ3〜Ｃ5）−シクロアルキル、
ｂ）  （Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルまたは
ｃ）  （Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルであり、
Ｒ2は
ａ）  −ＣＦ3、
ｂ）  −Ｏ−ＣＦ3、
ｃ）  −Ｓ−ＣＦ3、
ｄ）  −ＯＨ、
ｅ）  −ＮＯ2、
ｆ）  ハロゲン、
ｇ）  ベンジル、
ｈ）  フェニル、
ｉ）  −ＣＮ、
ｋ）  −Ｏ−フェニルまたは
ｌ）  １）（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、２）ハロゲン、３）−Ｏ−ＣＦ3または４）−Ｏ−ＣＨ3によりモノまたはポリ置換された−Ｏ−フェニルであり、
Ｒ3は
ａ）  （Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、
ｂ）  ハロゲンまたは
ｃ）  水素原子であり、そして
Ｘは
ａ）  −ＣＨ基または
ｂ）  窒素原子である〕
で表される化合物および／または式ＩまたはIIの化合物の任意の立体異性体および／または式IIの化合物の生理学的に許容し得る塩の使用に関する。
【０００８】
この癌疾患治療用医薬製造において式中、Ｒ1がシクロプロピル、（Ｃ2〜Ｃ3）−アルケニルまたは（Ｃ3〜Ｃ5）−アルキニルであり、Ｒ2が−Ｏ−ＣＦ3、−Ｓ−ＣＦ3、−Ｏ−フェニル、−フェニル、−ＣＦ3、−ＣＮ、または（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルまたはハロゲンによりモノまたはポリ置換された−Ｏ−フェニルであり、Ｒ3が水素原子またはメチルであり、そしてＸが−ＣＨ基である式ＩまたはIIの化合物および／または式ＩまたはIIの化合物の任意の立体異性体および／または式IIの化合物のナトリウムまたはリジニウム塩の使用が好ましい。
さらにこの癌疾患治療用医薬製造において式中、Ｒ1がシクロプロピル、Ｃ3−アルケニルまたはＣ4−アルキニルであり、Ｒ2が−Ｓ−ＣＦ3、ＣＮ、２−メチル−４−クロロフェニルまたはＣＦ3であり、Ｒ3が水素原子であり、そしてＸが−ＣＨ基である式ＩまたはIIの化合物の使用が特に好ましい。
【０００９】
とりわけ、Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘキサ−２,５−ジエンカルボキサミド、２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−トリフルオロメチルフェニル）アミド、２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−チオトリフルオロメチルフェニル）アミド、２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（２−メチル−４−クロロフェニル）アミド、Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘプト−２−エン−６−イン−カルボキサミドリジン塩もしくはナトリウム塩または２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−シアノフェニル）アミドリジン塩もしくはナトリウム塩の使用が好ましい。
【００１０】
式ＩまたはIIの化合物はＥＰ１３３７６；ＥＰ４８４２２３；ＥＰ５３８７８３；ＥＰ５５１２３０またはＵＳ４０６１７６７に記載されているような知られた方法により製造される。
前記のアルキル、アルケニルまたはアルキニルはその炭素原子が直鎖または分枝鎖状であることが可能な基を意味するものと解される。アルケニルまたはアルキニル基はさらにまた２個以上の二重結合または２個以上の三重結合を含有することができる。環状アルキル基は例えば３〜５員単環式系例えばシクロプロピル、シクロブチルまたはシクロペンチルである。化学反応用の出発物質は知られているか、または文献で知られた方法により容易に製造され得る。癌疾患の例としては白血病特にＴ−またはＳ−細胞型の慢性白血病、ホジキンもしくは非ホジキン性のリンパ腫、癌、肺癌、卵巣癌、リンパ腺癌、肉腫、カポジ肉腫、髄膜腫、胃腸癌、脳腫瘍、乳癌、胃癌、膵臓癌、前立腺癌または皮膚癌を挙げることができる。
【００１１】
本発明はまた式ＩまたはIIの化合物および／または式IIの化合物の生理学的に許容し得る塩を薬学的に適当なかつ生理学的に許容し得る賦形剤および適切ならばさらに適当な活性化合物、添加剤または補助剤を使用して適当な投与形態にすることからなる癌疾患治療用医薬の製造方法にも関する。本発明による医薬は経口的に、局所的に、直腸に、静脈内にまたは非経口的に投与され得る。
適当な固体または液体の医薬投与形態は例えば顆粒、粉剤、コーティング錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル剤、坐薬、シロップ剤、ジュース、懸濁液、乳液、滴剤または注射用溶液およびまた活性化合物の遅延放出性を有する製剤であり、その製剤中には慣用の補助剤例えば賦形剤、崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨潤剤、滑沢剤もしくは潤滑剤、香味剤、甘味剤または溶解剤が使用される。頻繁に使用される補助剤としては例えば炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトールおよび他の糖、タルク、ラクトプロティン、ゼラチン、デンプン、セルロースおよびその誘導体、動物油および植物油、ポリエチレングリコールおよび溶媒例えば滅菌水および１価−または多価アルコール例えばグリセロールがある。
【００１２】
製剤は活性成分としての各単位が式ＩまたはIIの化合物および／または式IIの化合物の生理学的に許容し得る塩の一定の投与量を含有する投与量単位で調製し、投与するのが好ましい。固体投与量単位例えば錠剤、カプセル剤または坐剤の場合には、この投与量は約３００mgまで、好ましくは１０〜２００mgであることができる。
患者（７０kg）の治療において、式ＩまたはIIの化合物および／または式IIの化合物の対応する塩を初期段階では１日当たり多くて１２００mgの静脈内注入および後期のリハビリテーション段階では１日当たり３回の３００mgの経口投与が必要とされる。
【００１３】
しかし、ある種の状況下ではより多くのまたはより少ない投与量が適切である場合もある。その投与量は両方とも、１つの個別の投与量単位あるいはより少ないいくつかの投与量単位の形態での単一投与によりおよび一定の間隔での細分化された投与量の多数回投与により投与され得る。
最後に、式ＩまたはIIの化合物および／またはそれらの対応する塩はまた、前述の製剤投与形態への調製中に他の適当な活性化合物例えば抗尿酸症剤、血小板凝集阻害剤、鎮痛剤およびステロイドまたは非ステロイド抗炎症剤と一緒に組み合わせることができる。
【００１４】
【実施例】
実施例１
Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘプト−２−エン−６−インカルボキサミドナトリウム塩（化合物１）
Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘプト−２−エン−６−インカルボキサミド５０ｇ（０.１５モル）を５Ｎ水酸化ナトリウム溶液５０mlおよび酢酸エチル５００mlの二相系中に溶解し、有機相を完全に分離し、少量の水で２回洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し次いで濃縮する。油状残留物をtert−ブチルメチルエーテル５００mlを使用して取り入れ、室温で４時間撹拌して結晶化を完了させ、濾過し次いで減圧下で乾燥する。溶媒残留物を完全に除去するために、結晶性生成物をトルエン５００ml中で１０分間還流下において懸濁し、撹拌しながら冷却し、再び吸引濾去し次いで減圧下で乾燥する。
収量：４１.１ｇ（７７％）、融点 ＞２４４℃（分解）。
元素分析値〔Ｃ15Ｈ10Ｆ3Ｎ2Ｏ2Ｎａ（３３０.２４ｇ／モル）として〕：
計算値：C 54.0  H 3.5  N 8.4  Na 6.88（1.1％水としての計算値）
実測値：C 54.4  H 3.4  N 8.4  Na 6.65  水：1.1％
【００１５】
実施例２
２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−シアノフェニル）アミドナトリウム塩（化合物２）
２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−シアノフェニル）アミド１５ｇ（０.０５９モル）を水１２０mlおよびアセトン１００ml中に懸濁し、１ＮのＮａＯＨ ６０mlを添加して溶液にした。痕跡量の未溶解物質の濾過後に、溶液を回転蒸発器中で減圧濃縮して約２００mlにし、生成物を一夜０℃で結晶化させ、吸引濾去し次いで減圧下で乾燥する。
収量：１３ｇ、融点 ＞２８０℃。
元素分析値〔Ｃ14Ｈ10Ｎ3Ｏ2Ｎａ（２７５.２４）として〕：
計算値：C 60.7  H 3.7  N 15.2  （0.7％水としての計算値）
実測値：C 60.8  H 3.6  N 15.3   水：0.7％
【００１６】
実施例３
Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘプト−２−エン−６−インカルボキサミドリジン塩
Ｎ−（４−トリフルオロメチルフェニル）−２−シアノ−３−ヒドロキシヘプト−２−エン−６−インカルボキサミド３０ｇ（０.０９７モル）をＬ−リジン水和物１７.３ｇ（０.０９７モル）と共に水１リットルおよびエタノール２５ml中に溶解し、濾過し次いで凍結乾燥する。付着する残留量のエタノールを凍結乾燥の繰り返しにより除去する。
収量：４４.４ｇ（主として無定形の生成物）、融点１３５〜１３８℃。
1H-NMR（DMSO-d6）：1.23-1.77(m, 6H), 2.3-2.45(m, 2H), 2.50-2.65(m, 2H), 2.7-2.85(m, 3H), 3.25(tb, 1H), 5.7-7.4(sb, 6H), 7.55および7.73(AA′BB′,各場合2H), 12.35(s, 1H)。
【００１７】
実施例４
２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−シアノフェニル）アミドリジン塩
２−シアノ−３−シクロプロピル−３−ヒドロキシアクリル酸（４−シアノフェニル）アミド１５ｇ（０.０５４モル）をＬ−リジン水和物９.６ｇ（０.０５４モル）と共に水９００mlおよびエタノール１０ml中に溶解し、濾過し次いで凍結乾燥する。付着する残留量のエタノールを減圧下で乾燥することにより除去する。
収量：２１.８ｇ（主として無定形の生成物）、融点＞１００℃（分解）。
1H-NMR（DMSO-d6）：0.6-0.82(m, 4H), 1.27-1.75(m, 6H), 2.17(mc, 1H), 2.77(tb, 2H), 3.28(tb, 1H), 4.8-7.5(sb, 6H), 7.63および7.7(AA′BB′, 各場合2H), 12.6(s, 1H)。
【００１８】
実施例５
ヒトＤＨＯＤＨ（脾臓）酵素活性をWilliamson氏等（The Journal of Biological Chemistry, 270, (1995), pages 22467-22472）の手法により測定する。各場合においてＩＣ50価はnMで示されている。
【表１】
0003996658.tif 000003
【００１９】
実施例６
腫瘍細胞の増殖阻止（ＭＴＴ試験）
ウエル当たり１×１０4個の細胞を９６−ウエルミクロタイタープレート中に接種する。２４時間後に供試物質を種々の濃度で加える。各グループは４ウエルよりなり、対照は培地でインキュベートするだけである。６５時間後にＭＴＴ（３−（４,５−ジメチル−２−チアゾリル）−２,５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド；２.５mg／ml、ＰＢＳ中）５０μｌを加え、次いで７時間後に上澄み液を除去する。生きている細胞により形成される色を１００μｌジメチルスルホキシド／ウエルの添加により溶解する。マルティスキャン（Multiscan）光度計３４０ＣＣ（Flow社製）を用いて４９２nmで各ウエルについて吸光度を測定する。使用する細胞系はアメリカンタイプカルチャーコレクションより得ることができ、以下のとおりである。
ＨＵＶ−ＥＣ−ＣはＡＴＣＣ ＣＲＬ１７３０であり；Ａ−１７２はＡＴＣＣ ＣＲＬ１６２０であり；Ｌ１２１０はＡＴＣＣ ＣＣＬ２１９であり；ＬｏＶｏはＡＴＣＣ ＣＣＬ２２９であり；Ｃ６はＡＴＣＣ ＣＣＬ１０７およびラット神経膠芽腫細胞系である。
【００２０】
平均値は１グループの４ウエルから得られ、ＩＣ50値はソフトウエア３.０（Erithacus Software社製）を用いて投与量−応答曲線から計算する。結果は表２に示されているとおりである。
【表２】
0003996658.tif 000004
【００２１】
実施例７
手法は実施例６と同様であるが、ウリジンがさらに各バッチに加えられている。結果は表３に示されるとおりである。
【表３】
0003996658.tif 000005
表４の化合物は実施例１〜４のようにして製造される。各化合物は実施例６に記載のようにして試験する。
【００２２】
【表４】
0003996658.tif 000006
【００２３】
【表５】
0003996658.tif 000007
【００２４】
【表６】
0003996658.tif 000008
【００２５】
【表７】
0003996658.tif 000009
【００２６】
【表８】
0003996658.tif 000010