(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
0003917711.tif 000010
〔式中、Ｒはシクロヘキシル基、Ｘはヒスチジン、アルギニンまたはフェニルアラニンの残基、Ｙはフェニルアラニンの残基を示す〕で表される新規フェベスチン誘導体またはその薬理学的に許容される塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とするアミノペプチダーゼＮ阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はアミノペプチダーゼＮに対して阻害活性を有する新規合成ぺプチドに関する。アミノペプチダーゼＮは癌の転移あるいは免疫系に関与することから、アミノペプチダーゼＮの阻害活性を有する本発明のペプチドは、抗癌剤あるいは免疫賦活剤としての用途が期待される。更には、鎮痛持続および増強剤としての用途が期待される。
【０００２】
【従来の技術】
アミノペプチダーゼＮを阻害する天然物由来の低分子のぺプチドとしては、プロベスチン、ベスタチンおよびロイヒスチンなどが知られている。これらはＮ末端に３−アミノ−２−ヒドロキシ脂肪酸をもつモノアミノ酸、ジぺプチドおよびテトラぺプチドである。また、ストレプトミセス属に属する菌株からフェベスチン、すなわち（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸−Ｖａｌ−Ｐｈｅが単離され、フェベスタチンはアミノペプチダーゼＮの阻害活性を有すことが知られている（特開平９−２０７９４号公報）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
プロベスチン、ベスタチンおよびロイヒスチン等のアミノペプチダーゼＮの阻害物質は、アミノペプチダーゼＮに対する特異性が低いこと、アミノペプチダーゼＮに対する阻害活性の強さが未だ十分でないこと等の問題点を有していた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは鋭意検討の結果、一般式（１）で表わされるフェベスタチン誘導体またはその薬理学的に許容される塩が、アミノペプチダーゼＮに対する優れた阻害活性を有することを見いだした。
すなわち、本発明は、
１．式（１）
【０００５】
【化２】
0003917711.tif 000002
〔式中、Ｒは置換基があってもよい飽和または不飽和の低級炭化水素基を、ＸおよびＹはアミノ酸残基を示す。ただし、Ｒがフェニル基でありＸがバリン残基でＹがフェニルアラニン残基である組合せの場合を除く。〕で表わされる新規フェベスチン誘導体またはその薬理学的に許容される塩；
２．Ｒが、置換基があってもよいフェニル基、置換基があってもよい炭素数３〜９のシクロアルキル基、置換基があってもよい炭素数１〜８のアルキル基、または置換基があってもよい炭素数２〜８のアルケニル基である上記１記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩；
３．Ｒが、フェニル基、シクロヘキシル基、または炭素数１〜４の低級アルキル基である上記１記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩；
４．Ｘが塩基性の側鎖をもつアミノ酸残基である上記２または３に記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩；
５．Ｒがシクロヘキシル基、Ｘがバリン、ヒスチジン、アルギニンまたはフェニルアラニンの残基、Ｙがフェニルアラニン、ヒスチジンまたはプロリンの残基である上記１記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩；
６．上記１から５のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする医薬；
７．上記１から５のいずれかに記載の化合物またはその薬理学的に許容される塩を有効成分とするアミノペプチダーゼＮ阻害剤；
に関するものである。
更には、本発明化合物はアミノペプチダーゼＮに阻害活性を有すことにより、抗癌剤、免疫賦活剤、あるいは鎮痛持続および増強剤としての用途が期待されるものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】
本発明において、置換基があってもよい飽和または不飽和の低級炭化水素基とは好ましくは、置換基があってもよいフェニル、置換基があってもよい炭素数３〜９のシクロアルキル基、置換基があってもよい炭素数１〜８のアルキル基、または炭素数２〜８のアルケニル基を示す。これらの置換基としては、例えば炭素数１〜５のアルキル基、炭素数１〜５のアルコキシ基、フェニル基、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）、アミノ基、ニトロ、水酸基、メルカプト基等が挙げられる。
本発明において具体的な置換基があってもよい飽和または不飽和の低級炭化水素基の例としては、たとえば、メチル、エチル、 n- プロピル、イソプロピル、 n- ブチル、 s- ブチル、 t- ブチル、 n- ペンチル、3-メチルブチル、2-メチルブチル、2,2-ジメチルプロピル、 n- ヘキシル、2-メチルヘプチル、3-メチルヘプチル、3-エチルヘプチル、クロロメチル、ジクロロメチル、1-ブロモエチル、2-ブロモエチル、2-アミノエチル、3-ヒドロキシプロピル、2-ヒドロキシプロピル、1-ヒドロキシプロピル、2-ニトロヘキシル、2-メルカプトエチル、ベンジル、２−フェニルエチル、１−フェニルエチルなどの置換基があってもよい炭素数１〜８のアルキル基；シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、4-メチルシクロヘキシル、3-クロロシクロヘキシル、シクロヘキシルメチルなどの置換基があってもよい炭素数３〜９のシクロアルキル基；フェニル、4-イソプロピルフェニル、2,6-ジメチルフェニル、3,5-ジメチルフェニル、2-メトキシフェニル、3-メトキシフェニル、4-メトキシフェニル、2-クロロフェニル、3-クロロフェニル、4-クロロフェニル、2-ブロモフェニル、3-ブロモ-2- クロロフェニル、4-ブロモフェニル、2-ヒドロキシフェニル、3-ヒドロキシフェニル、4-ヒドロキシフェニル、2-ニトロフェニル、3-ニトロフェニル、4-ニトロフェニル、4-ヨードフェニルなどの置換基があってもよいフェニル基；ビニル、１−ブテニル、１−ペンテニル、２−ヘキセニルなどの置換基があってもよい炭素数２〜８のアルケニル基などが挙げられる。本発明においては、特に無置換のフェニル基、シクロヘキシル基、炭素数１〜４の低級アルキル基が好ましい。
式（１）の３−アミノ−２−ヒドロキシ脂肪酸部分のＲＣＨ2−が置換した３位の炭素原子、並びに−ＯＨが置換した２位の炭素原子の立体配置はＳ、ＲまたはＳＲいずれでもよいが、（２Ｓ，３Ｒ）配置が好ましい。
【０００７】
式（１）のＸまたはＹにおけるアミノ酸残基としては、一般的にはα−アミノ酸類の残基があげられるが必ずしもα−アミノ酸である必要性はない。β−アラニン等のβ−アミノ酸等でもよい。
これらのアミノ酸としては具体的には、グリシン（Ｇly）、アラニン（Ａla）、バリン( Ｖal）、ロイシン（Ｌeu）、イソロイシン（Ｉle）、セリン（Ｓer）、トレオニン（Ｔhr）、システイン（Ｃys）、メチオニン（Ｍet）、アスパラギン酸（Ａsp）、グルタミン酸（Ｇlu）、リジン（Ｌys）、アルギニン（Ａrg）、フェニルアラニン（Ｐhe）、チロシン（Ｔyr）、ヒスチジン（Ｈis）、トリプトファン（Ｔry）、ホモフェニルアラニン（Ｈph）、プロリン（Ｐro）、オキシプロリン（Ｈypro）、シクロヘキシルアラニン（Ｃha）などがあげられる。これらのアミノ酸の立体配置はＤ、ＬまたはＤＬのいずれでもよいが、Ｌ体が好ましい。
【０００８】
Ｘにおけるアミノ酸残基としては、好ましくはアルギニン、リジン、ヒドロキシリジン、ヒスチジン等の塩基性の側鎖をもつアミノ酸残基、及びバリン、フェニルアラニンの残基が好ましい。特に本発明においては、Ｘにおけるアミノ酸残基として好ましいものとしては、バリン（Ｖal）、フェニルアラニン（Ｐhe）、ヒスチジン（Ｈis）またはアルギニン（Ａrg）が、より好ましくはヒスチジン（Ｈis）またはアルギニン（Ａrg）の残基があげられる。
Ｙにおけるアミノ酸残基として好ましいものとしては、フェニルアラニン（Ｐhe）、ヒスチジン（Ｈis）またはプロリン（Ｐro）の残基が、より好ましくはフェニルアラニン（Ｐhe）の残基があげられる。
本発明のフェベスチン誘導体は酸との薬理学的に許容される塩として用いることも可能であり、これらの塩としては、塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸；ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸等との塩が挙げられる。
【０００９】
上記のアミノ酸以外で、本明細書中のアミノ酸残基、保護基およびその他で用いられている略号は以下の通りである。
ＡＰ−Ｎ：アミノペプチダーゼＮ
Ｌｅｕ−ＡＰ：ロイシンアミノペプチダーゼ
ＡＰ−Ａ：アミノペプチダーゼＡ
ＡＰ−Ｂ：アミノペプチダーゼＢ
ＡＨＰＡ：（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸
ＡＨＣＡ：（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−４−シクロヘキシル−２−ヒドロキシブタン酸
ＰｅｎＡｈｐ：（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシオクタン酸
ＥｔＡｈｐ：（２Ｓ，３Ｒ）−３−アミノ−２−ヒドロキシペンタン酸
Ｂｏｃ：ｔ−ブトキシカルボニル
Ｂｚｌ：ベンジル
Ｍｅ：メチル
Ｚ：ベンジルオキシカルボニル
Ｐｈ：フェニル
ｃＨｘ：シクロヘキシル
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
【００１０】
式（１）
【化３】
0003917711.tif 000003
で示される化合物のうち代表的な化合物について具体例を以下の表に示す。
【００１１】
【表１】
0003917711.tif 000004
【００１２】
【表２】
0003917711.tif 000005
【００１３】
【表３】
0003917711.tif 000006
【００１４】
式（１）で表される本発明化合物は、ぺプチド化学の分野において一般的に使用される方法を用いて製造される。
例えば下記反応式（Ａ）及び反応式（Ｂ）の方法により製造することができる。
【００１５】
反応式（Ａ）
【化４】
0003917711.tif 000007
【００１６】
なお上記反応式中Ｒ、ＸおよびＹは前記と同じ意味を有する。Ｐ３はアミノ基の保護基を示す。
反応式（Ａ）で示される工程をより詳しく説明する。原料化合物である式（Ａ１）で示される化合物は公知の方法により製造することができる。例えば、ＡＨＰＡ（Ｒ＝フェニル基に相当）は、Ｚ−フェニルアラニンより、文献記載の方法〔Ｊ．Ｍed．Ｃhem., ２０，５１３（１９７７）〕により製造することができる。ＡＨＣＡ（Ｒ＝シクロヘキシル基に相当）、ＰｅｎＡｈｐ（Ｒ＝ｎ−ブチル基に相当）またはＥｔＡｈｐは、アスパラギン酸より、文献記載の方法〔Ｔetrahedron  Ｌett., ３４，７５５７（１９９３）〕により製造することができる。また、上記のＰｅｎＡｈｐおよびＥｔＡｈｐは、他の文献記載の方法〔Ｊ．Ａntibiotics，４９，２８１（１９９６）またはＰeptide  Ｃhemistry  １９９５，１４５（１９９６）〕によっても製造することができる。式（Ａ１）で示される他の化合物も同様にして製造することができる。
【００１７】
式（Ａ２）で示される化合物は、式（Ａ１）で示される化合物のアミノ基を常法に従って、保護基Ｐ３で保護すればよく、例えばＰ３がＢｏｃ基のときは、トリエチルアミン存在下にジ−ｔ−ブチルジカルボナートと反応すれば良く、Ｐ３がＺ基のときは、トリエチルアミン存在下にＳ−ベンジルオキシカルボニル−４，６−ジメチル−２−チオピリミジンと反応すれば良い。他の保護基を有する式（Ａ２）の化合物も常法によって製造することができる。
【００１８】
反応式（Ｂ）
【化５】
0003917711.tif 000008
【００１９】
上記反応式中Ｒ、ＸおよびＹは前記と同じ意味を有する。Ｐ１はカルボキシル基の保護基を示し、Ｐ２およびＰ３はアミノ基の保護基を示す。Ｘ（Ｐｓ）およびＹ（Ｐｓ）は、アミノ酸残基ＸおよびＹの側鎖の官能基が必要に応じて保護基（Ｐｓ）で保護されていることを示す。
反応式（Ｂ）で示される工程をより詳しく説明する。他方の原料化合物である式（Ｂ１）で示される化合物から式（Ｂ２）で示される化合物を製造するには、式（Ｂ１）で示される化合物と保護アミノ酸（Ｐ２−Ｘ（Ｐｓ）−ＯＨ）をぺプチド結合形成反応により縮合すればよい。ぺプチド結合形成反応には、酸ハライド法、ヒドロキシコハク酸イミドエステル、置換および無置換フェニルエステル、チオフェニルエステル等を用いた活性エステル法、ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドまたはそれらと縮合補助剤、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドを用いる方法、ジフェニルリン酸アジド、Ｂｏｐ試薬、ＰｙＢｏｐ試薬、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリン等の縮合剤を用いる方法、クロロギ酸エチル、クロロギ酸イソブチル等を用いる混合酸無水物法、さらにはアジド法等ペプチド化学において使用されるアミド形成反応の中から適宜選択すればよい。
【００２０】
また、反応において使用される溶媒としても、通常のぺプチド化学において用いられる溶媒が使用できる。例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類、ジクロロメタン、クロロホルム等のハロゲン化炭化水素、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド等のアミド類、アセトニトリル等のニトリル類、酢酸エチル等のエステル類、アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類の中から単独あるいは混合溶媒として使用すればよい。
次に、式（Ｂ２）で示される化合物のアミノ基の保護基Ｐ２を除去し、式（Ｂ３）で示される化合物を製造する。保護基Ｐ２の除去は常法で行えばよく、例えば保護基Ｐ２がＢｏｃ基のときは、塩酸−ジオキサン溶液あるいはトリフルオロ酢酸等の脱保護試薬を用いて除去すればよいし、保護基Ｐ２がＺ基のときは、Ｐｄ触媒の存在下に接触水素化して除去すればよい。他の保護基の場合にも常法により除去できる。
【００２１】
次いで、式（Ｂ２）で示される化合物を得るときと同様のぺプチド結合形成法を用いて、反応式（Ａ）で製造される式（Ａ２）で示される化合物と式（Ｂ３）の化合物とを反応させ、式（Ｂ４）で示される化合物を得る。
式（１）で示される化合物は、常法に従って式（Ｂ４）で示される化合物の保護基Ｐ１、Ｐ３およびＰｓを除去することで製造することができる。例えば、保護基Ｐ３およびＰｓがＺ基で、保護基Ｐ１がベンジルエステルの時は、Ｐｄ触媒の存在下に接触水素化してすべての保護基を一度に除去すればよいし、Ｐ３がＢｏｃ基、Ｘ（Ｐｓ）＝ＸおよびＹ（Ｐｓ）＝Ｙ（即ち、アミノ酸残基ＸおよびＹの側鎖の官能基を保護する必要のないとき）、保護基Ｐ１がベンジルエステルの時は、Ｐｄ触媒の存在下に接触水素化して保護基Ｐ１を除去し、塩酸−ジオキサン溶液あるいはトリフルオロ酢酸等の脱保護試薬を用いて保護基Ｐ３のＢｏｃ基を除去すればよい。また、Ｐ１が低級アルキルエステル型保護基の時は、１Ｍ程度の水酸化ナトリウム溶液を用いてアルカリけん化することで除去すればよい。他の保護基の場合にも常法により除去することができる。
かくして得られる式（１）の化合物は、必要に応じて薬理学的に許容される塩に変換しても良い。塩への変換は、式（１）の化合物を、例えば塩酸、硝酸などの無機酸、あるいはｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸で常法により処理することによって実施できる。
【００２２】
本発明の式（１）のフェベスチン誘導体またはその薬理学的に許容される塩は、酵素阻害活性、特にアミノペプチダーゼＮに対して優れた阻害活性を示し、抗癌剤あるいは免疫賦活剤としての用途が期待される。従って本発明の更なる発明は、フェベスチン誘導体またはその薬理学的に許容される塩及び医薬用添加剤とからなる医薬、特にアミノペプチダーゼＮ阻害剤である。医薬用添加剤は特に制限はなく、一般的に使用されるのが使用できる。
上記医薬、特に阻害剤組成物中の有効成分（フェベスチン誘導体またはその塩）の割合はその剤形などにより異なるので一概にはいえないが、０．０５〜９９重量％程度まで広範囲に使用することができ、通常注射剤では０．１〜５０重量％程度であり、それ以外の製剤では１〜６０重量％程度である。残部は医薬用添加剤である。
【００２３】
フェベスチン誘導体またはその薬理学的に許容される塩を、通常、人を含む温血動物に経口投与あるいは静脈、皮内、筋肉内投与などの非経口投与でその有効量を投与することにより生体中のアミノペプチダーゼＮを阻害することができる。投与量は投与する対象、投与ルートなどによって変動するが通常、０．０５〜１５０mg/Kg/日、好ましくは０．５〜１００mg/Kg/日、より好ましくは１〜５０mg/Kg/日である。
【００２４】
投与する際の製剤としては慣用的に用いられている剤形が挙げられる。経口投与の場合には、医薬用添加剤例えばデンプンなどの通常の賦形剤などとともに成型された錠剤、顆粒剤、カプセル剤などが用いられる。非経口投与の場合には医薬用添加剤例えば生理食塩水、溶解剤などを用いて製剤化された通常の注射剤などが用いられる。
【００２５】
【発明の効果】
本発明により、酵素特異性を有する酵素阻害剤、特にアミノペプチダーゼＮ阻害作用を有し、抗癌剤あるいは免疫賦活剤の活性成分としての用途が期待される式（１）で表されフェベスチンおよびその誘導体が得られる。
【００２６】
【実施例】
以下、実施例及び試験例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれにより限定されるものではない。
参考例１
Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−バリン358.4mg(1.65mmol) 、フェニルアラニンベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホン酸塩642.2mg(1.5mmol)及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物252.5mg(1.65mmol）をＤＭＦ6.5ml に溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.235ml(1.65mmol）及び水溶性カルボジイミド・１塩酸塩317.8mg(1.65mmol）を加え２時間撹拌後、室温でさらに20時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル684.7mg を得た。この粗体にクロロホルムを加えて溶解し、これにヘキサンを加え、低温で結晶化させた。結晶を濾取し、ヘキサンで洗浄後、乾燥することで、白色結晶のＢｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル644.0mg を得た。収率94.7％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００２７】
参考例２
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル530.0mg(1.17mmol) に４Ｎ塩酸−ジオキサン5ml を加え、室温で１時間撹拌後、溶媒を留去することで、白色粉末のＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル塩酸塩を得た。このうちの250mg(0.64mmol) に、Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ  207.7mg(0.70mmol) 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物107.8mg(0.70mmol）及びＤＭＦ 2.5mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.0985ml(0.70mmol)及び水溶性カルボジイミド・１塩酸塩147.6mg(0.77mmol）を加え２時間撹拌後、室温でさらに16時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル414.6mg を得た。この粗体にクロロホルムを加えて溶解し、これにヘキサンを加え、低温で結晶化させた。結晶を濾取し、ヘキサンで洗浄後、乾燥することで、白色結晶のＢｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル380.8mg を得た。収率94.3％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ６３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００２８】
参考例３
ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニン（フェベスチン）の合成
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステ337.1mg(0.53mmol) にパラジウム黒50mg、酢酸3ml 及びメタノール3ml を加え、系内を水素置換後、室温で１時間接触還元した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニン270.8mg を得た。これに、トリフルオロ酢酸2.5ml を加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニン204.9mg を得た。これを高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）精製（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８、SHISEIDO社、20×250mm 、溶離液：アセトニトリル：0.1 ％トリフルオロ酢酸＝６：１９、流速：８ml／min.、検出波長：210nm)し、ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンを含むフラクションを濃縮乾固した。これをメタノール3ml に溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンを含むフラクションを減圧濃縮し、190.1mg の白色粉末を得た。収率88.5％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００２９】
実施例１
Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−バリン478.0mg(2.2mmol)、Ｌ−プロリンベンジルエステル・1 塩酸塩439.4mg(1.82mmol）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物337.6mg(2.2mmol)にＤＭＦ４mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.308ml(2.2mmol)及び水溶性カルボジイミド・１塩酸塩421.7mg(2.2mmol)を加え２時間撹拌後、室温でさらに20時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、アメ状の粗Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル788.0mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（100 ：１））することで、アメ状のＬ−プロリンベンジルエステル710.9mg を得た。収率96.7％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４０５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３０】
実施例２
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル343.8mg(0.85mmol）に４Ｎ塩酸−ジオキサン3.5ml を加え、室温で１時間撹拌後、溶媒を留去することで、白色粉末のＬ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル塩酸塩を得た。このＬ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル塩酸塩140.4mg(0.41mmol) に、Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ 133.4mg(0.45mmol)及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物68.9mg(0.45mmol)にＤＭＦ 1.5mlを加えて溶解し、氷冷下で水溶性カルボジイミド・１塩酸塩86.3mg(0.45mmol)を加え、15分撹拌後、トリエチルアミン0.063ml(0.45mmol）を加えて２時間撹拌した。さらに、室温で16時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル231.3mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（100 ：１））することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル203.3mg を得た。収率85.1％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ５８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３１】
実施例３
ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンの合成
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンベンジルエステル150.2mg にパラジウム黒25mg、酢酸1.5mg 及びメタノール1.5ml を加え、系内を水素置換後、室温で１時間接触還元した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで、白色粉末Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン134.4mg を得た。これにトリフルオロ酢酸１mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去することで、粗ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリン109.1mg を得た。この粗体をＨＰＬＣ精製（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８、SHISEIDO社、20×250mm 、溶離液：アセトニトリル：0.1 ％トリフルオロ酢酸= ４：２１、流速：8ml ／min.、検出波長：210nm)し、ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンを含むフラクションを濃縮乾固した。これをメタノール２mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリンを含むフラクションを減圧濃縮し、90.4mgの白色粉末を得た。収率89.1％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ３９２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３２】
実施例４
Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−バリン521.5mg(2.4mmol)、Ｌ−ヒスチジンメチルエステル・２塩酸塩518.4mg(2.0mmol)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物367.8mg(2.4mmol)及びベンゾトリアゾリル−Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩（Bop 試薬）1063.2mg(2.4mmol) をＤＭＦ7ml に溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.98ml(7.0mmol）を加え１時間撹拌後、室温でさらに１６時間撹拌した。反応終了後、４％炭酸水素ナトリウム50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回、水50mlで１回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル774.3mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（100 ：3 ））することで、白色粉末のＢｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル553.0mg を得た。収率75.0％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ３６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３３】
実施例５
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル513.6mg(1.39mmol) に４Ｎ塩酸−ジオキサン７mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒を留去することで、白色粉のＬ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル・２塩酸塩を得た。このうちの178.9mg(0.52mmol) にＢｏｃ−ＡＨＰＡ  177.5mg(0.60mmol) 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物92.1mg(0.6mmol）、ベンゾトリアゾリル−Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩266.8mg(0.6mmol)及びＤＭＦ 2mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.245ml(1.75mmol）を加え１時間撹拌後、室温でさらに１６時間撹拌した。反応終了後、４％炭酸水素ナトリウム50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで１回、及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル299.2mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（１００：６））することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル230.6mg を得た。収率81.1％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ５４６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３４】
実施例６
ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンの合成
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル216.4mg(0.40mmol) にメタノール3.96mlを加えて溶解し、１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液0.87ml(0.79mmol)を加え室温で3.5 時間撹拌後、トリフルオロ酢酸0.083ml を加え、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジン350.2mg を得た。これにトリフルオロ酢酸2.5ml を加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、粗ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジン・１トリフルオロ酢酸塩を得た。この粗体をＨＰＬＣ精製（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８、SHISEIDO社、20×250mm 、溶離液：アセトニトリル：0.1 ％トリフルオロ酢酸＝９：９１、流速：8ml ／min.、検出波長：210nm)し、ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジンを含むフラクションを濃縮乾固した。これをメタノール２mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＰＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−ヒスチジン・１トリフルオロ酢酸塩を含むフラクションを減圧濃縮し、166.8mg の白色粉末を得た。収率78.3％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４３２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３５】
実施例７
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン636.5mg(2.4mmol)、Ｌ−ヒスチジンメチルエステル・２塩酸塩518.3mg(2.0mmol)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物367.6mg(2.4mmol)及びベンゾトリアゾリル−Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩1063.2mg(2.4mmol) をＤＭＦ7ml に溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.98ml(7.0mmol）を加え１時間撹拌後、室温でさらに１６時間撹拌した。反応終了後、４％炭酸水素ナトリウム50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回、水50mlで１回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル854.4mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（100 ：３））することで、白色粉末のＢｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル779.3mg を得た。収率93.6％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４１７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３６】
実施例８
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル735.8mg(1.77mmol) に４Ｎ塩酸−ジオキサン10mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒を留去することで、白色粉末のＬ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル・２塩酸塩を得た。このうちの194.6mg(0.5mmol)にＢｏｃ−ＡＨＰＡ  177.4mg(0.6mmol)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物92.3mg(0.6mmol）、ベンゾトリアゾリル−Ｎ−ヒドロキシトリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩265.9mg(0.6mmol)及びＤＭＦ  2.5ml を加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.245ml(1.75mmol）を加え１時間撹拌後、室温でさらに１６時間撹拌した。反応終了後、４％炭酸水素ナトリウム50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで１回、及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニン−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル321.4mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（１００：５））することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル262.5mg を得た。収率88.3％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ５９４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３７】
実施例９
ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンの合成
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンメチルエステル225.2mg(0.38mmol) にメタノール3.8ml を加えて溶解し、１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液0.834ml(0.83mmol) を加え室温で3.5 時間撹拌後、トリフルオロ酢酸0.078ml を加え、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジン351.3mg を得た。これにトリフルオロ酢酸2.5ml を加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、粗ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジン・１トリフルオロ酢酸塩を得た。この粗体をＨＰＬＣ精製（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８、SHISEIDO社、20×250mm 、溶離液：アセトニトリル：0.1 ％トリフルオロ酢酸＝３：２２、流速：8ml ／min.、検出波長：210nm)し、ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジンを含むフラクションを濃縮乾固した。これをメタノール２mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＰＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ヒスチジン・１トリフルオロ酢酸塩を含むフラクションを減圧濃縮し、165.2mg の白色粉末を得た。収率73.4％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３８】
実施例１０
Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）・１水和物592.1mg(1.5mmol)、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホン酸塩705.7mg(1.65mmol) 及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物254.5mg(1.66mmol) をＤＭＦ 6.5mlに溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.235ml(1.65mmol）を加えて15分撹拌後、水溶性カルボジイミド・１塩酸塩318.4mg(1.65mmol) を加え、２時間撹拌した。さらに、室温で16時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジール（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル937.1mg を得た。この粗体に酢酸エチルを加えて溶解し、これにヘキサンを加え、低温で結晶化させた。結晶を濾取し、ヘキサンで洗浄後、乾燥することで白色結晶のＢｏｃ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル838.8mg を得た。収率91.3％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ６１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００３９】
実施例１１
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル805.1mg(1.31mmol) に４Ｎ塩酸−ジオキサン8ml を加え、室温で１時間撹拌後、溶媒を留去することで、白色粉末のＬ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・２塩酸塩・１ジオキサン877.8mg を得た。このうちの335.8mg(0.50mmol) にＢｏｃ−ＡＨＰＡ  164.8mg(0.56mmol) 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物86.0mg(0.56mmol)及びＤＭＦ  3.5ml を加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.154ml(1.1mmol)を加えて15分撹拌後、水溶性カルボジイミド・１塩酸塩108.3mg(0.56mmol) を加え、２時間撹拌した。さらに、室温で16時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル425.4mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（１００：３））することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル348.1mg(0.44mmol) を得た。収率88.0％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ７９０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４０】
実施例１２
ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニンの合成
Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル242.0mg(0.31mmol) にパラジウム黒50mg、酢酸2m及びメタノール2ml を加え、系内を水素置換後、室温で２７時間接触還元した。さらにパラジウム黒50mg及び酢酸3ml を加え、室温で２０時間接触還元した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで、白色粉末Ｂｏｃ−ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニン206.0mg を得た。これに、トリフルオロ酢酸１mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、粗ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニン・１トリフルオロ酢酸塩266.7mg を得た。この粗体をＨＰＬＣ精製（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８、SHISEIDO社、20×250mm 、溶離液：アセトニトリル：0.1 ％トリフルオロ酢酸＝９：４１、流速：８ml／min.、検出波長：210nm)し、ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニンを含むフラクションを濃縮乾固した。これをメタノール２mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＰＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニン・１トリフルオロ酢酸塩を含むフラクションを減圧濃縮し、151.8mg(0.256mmol)の白色粉末を得た。収率83.7％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４８０（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４１】
実施例１３
Ｂｏｃ−ＡＨＣＡの合成
ＡＨＣＡ 2.38g(10.0mmol)にジ−ｔ−ブチルジカルボナート2.42g(11.1mmol) 、水20mlおよびジオキサン40mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン2.94ml(21.0mmol)を加えて30分間撹拌した。室温でさらに16時間撹拌後、溶媒留去した。次いで、反応混合物を水10mlで希釈し、５％硫酸水素カリウム水溶液でｐＨ２に調整後、酢酸エチル30mlで３回抽出した。油層を飽和食塩水30mlで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ3.00g を得た。収率99.4％。
Ｒｆ  ０．５２（クロロホルム：メタノール：酢酸＝90：10：５）。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２４（Ｍ＋Ｎａ）＋。
【００４２】
実施例１４
Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
実施例２で得られたＬ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・１塩酸塩100.4mg(0.26mmol) にＢｏｃ−ＡＨＣＡ 86.8mg(0.29mmol) 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・1 水和物44.2mg(0.29mmol)及びＤＭＦ１mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.04ml(0.29mmol)及び水溶性カルボジイミド・１塩酸塩55.3mg(0.767mmol）を加え２時間撹拌後、室温でさらに16時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル165.1mg を得た。この粗体にクロロホルムを加えて溶解し、これにヘキサンを加え、低温で結晶化させた。結晶を濾取し、ヘキサンで洗浄後、乾燥することで白色結晶のＢｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル148.2mg を得た。収率89.4％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ６３８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４３】
実施例１５
ＡＨＣＡ−Ｌ−バリルーＬ−フェニルアラニンの合成
Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル109.4mg(0.17mmol) にパラジウム黒15mg、酢酸１ml及びメタノール１mlを加え、系内を水素置換後、室温で１時間接触還元した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニン106.1mg を得た。これにトリフルオロ酢酸１mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、粗ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニン72.9mg得た。この粗体にメタノールを加え溶解し、これにイソプロピルエーテルを加え、結晶化させた。結晶を濾取し、イソプロピルエーテルで洗浄後、乾燥した。さらにメタノール１mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＣＡ−Ｌ−バリル−Ｌ−フェニルアラニンを含むフラクションを減圧濃縮し、59.6mgの白色粉末を得た。収率78.3％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４４８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４４】
実施例１６
Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
実施例１４で得られたＬ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・２塩酸塩・１ジオキサン236.4mg(0.35mmol) にＢｏｃ−ＡＨＣＡ  117.4mg(0.39mmol) 、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール・１水和物61.7mg(0.39mmol)及びＤＭＦ 2.5mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.108ml(0.77mmol）を加えて15分撹拌後、水溶性カルボジイミド・１塩酸塩74.6mg(0.39mmol)を加え、２時間撹拌した。さらに室温で16時間撹拌した。反応終了後、10％クエン酸水溶液50mlを加え、酢酸エチル50mlで２回抽出した。有機層を10％クエン酸水溶液50mlで１回、４％炭酸水素ナトリウム水溶液50mlで２回及び飽和食塩水50mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル272.0mg を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（１００：２））することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル240.1mg(0.30mmol) を得た。収率86.3％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ７９６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４５】
実施例１７
ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニンの合成
Ｂｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル（Ｎπ−ベンジルオキシメチル）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル240.1mg(0.30mmol) にパラジウム黒60mg、酢酸2.5ml 及びメタノール2.5ml を加え、系内を水素置換後、室温で２５時間接触還元した。さらに、パラジウム黒60mg及び酢酸１mlを加え、室温で２８時間接触還元した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで、白色粉末のＢｏｃ−ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニアラニン223.5mg を得た。これにトリフルオロ酢酸１.5mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、粗ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニン・１トリフルオロ酢酸塩271.3mg を得た。この粗体をＨＰＬＣ精製（カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８、SHISEIDO社、20×250mm 、溶離液：アセトニトリル：0.1 ％トリフルオロ酢酸= １１：３９、流速：８ml／min.、検出波長：210nm)し、ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニンを含むフラクションを濃縮乾固した。これをメタノール２mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセファデックスＬＨ−２０(550ml）のカラムに付し、メタノールで展開した。ＡＨＣＡ−Ｌ−ヒスチジル−Ｌ−フェニルアラニン・１トリフルオロ酢酸塩を含むフラクションを減圧濃縮し、125.4mg(0.21mmol) の白色粉末を得た。収率59.7％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／Ｚ  ４８６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００４６】
実施例１８
Ｚ−ＡＨＣＡの合成
ＡＨＣＡ 2.38g(10.0mmol)にＳ−ベンジルオキシカルボニル−４，６−ジメチル−２−チオピリミジン3.30g(12.0mmol) 、水 9.0ml、ジオキサン 9.0ml及びトリエチルアミン3.50ml(25.0mmol)を加え、室温で20時間撹拌した。反応終了後、水45mlを加え、酢酸エチル40mlで２回洗浄後、水層を氷浴で冷却した。水層に６Ｎ塩酸 3.5mlを加えｐＨ２に調整後、酢酸エチル30mlで３回抽出した。油層を１Ｎ塩酸30mlで３回及び飽和食塩水30mlで 2回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、Ｚ−ＡＨＣＡ1.48g を得た。一方、先の酢酸エチル洗浄液より回収した粗Ｚ−ＡＨＣＡをカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール：酢酸＝200:2:1 〜50:2:1）することで、Ｚ−ＡＨＣＡ1.68g を得た。収率94.1％。
【００４７】
融点  １２４〜１２５°Ｃ
［α］２４／Ｄ＋５１．３°（ｃ１．０，メタノール）
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３４（Ｍ−Ｈ）−
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ）
δ：０．７５−１．３７（ｍ，６Ｈ）
１．３８−１．９０（ｍ，７Ｈ）
４．１５          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．５Ｈｚ）
４．２７          （ｍ，１Ｈ）
５．０６，５．２１（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）
５．１５          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ）
６．０９          （ｂｒ  ｄ）
７．２３−７．４０（ｍ，５Ｈ）
【００４８】
実施例１９
Ｂｏｃ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−アルギニン（Ｚ２）352.7mg(0.650mmol)、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホン酸塩292.2mg(0.683mmol)及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール175.9mg(1.302mmol)をＤＭＦ 3.0mlに溶解し、氷冷化でトリエチルアミン 0.096ml(0.686mmol) 及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩162.0mg(0.845mmol)を加え２時間撹拌後、室温でさらに６時間撹拌した。反応終了後、反応液を酢酸エチル30mlで希釈したのち、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、10％クエン酸水溶液および飽和食塩水各15mlで順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗体の白色固体を得た。次いで、この白色固体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール（１００：１））することで、白色粉末状のＢｏｃ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル492.9mg を得た。収率97.2％。
【００４９】
融点  １３８．５〜１３９．５°Ｃ
［α］２６／Ｄ＋６．６°（ｃ１．０，クロロホルム）
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７８０（Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）
δ：１．４０          （ｓ，９Ｈ）
１．４５−１．７８（ｍ，４Ｈ）
２．８１          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８，１４．０Ｈｚ）
３．００          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９，１４．０Ｈｚ）
３．７０−３．９４（ｍ，２Ｈ）
４．１９          （ｍ，１Ｈ）
４．７７          （ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９，６．８，７．８Ｈｚ）
５．０５，５．０９（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）
５．０５，５．１４（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ）
５．２１，５．２３（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）
５．５５          （ｂｒ  ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）
６．７４          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ）
６．９４          （ｍ，２Ｈ）
７．０２−７．４７（ｍ，１８Ｈ）
９．２４          （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
９．４２          （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
【００５０】
実施例２０
Ｚ−ＡＨＣＡ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル253.4mg(0.325mmol)にトリフルオロ酢酸 2mlを加え、室温で40分間撹拌後、溶媒留去し、さらにトルエン 2mlを加えて溶媒留去する操作を２回行うことでシロップ状のＬ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・トリフルオロ酢酸塩を得た。この塩にＺ−ＡＨＣＡ118.3mg(0.353mmol)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール 88.5mg(0.655mmol)及びＤＭＦ 2.5mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.050ml(0.357mmol)及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩 87.2mg(0.455mmol)を加え２時間撹拌後、室温でさらに６時間撹拌した。反応終了後、反応混合物を酢酸エチル25mlで希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、10％クエン酸水溶液及び飽和食塩水各10mlで順次洗浄した。油層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、油状の粗体を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル：メタノール（70：30：１〜60：40：２））することで、白色固体としてＺ−ＡＨＣＡ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル85.7mgを得た。収率57.3％。次いで、この白色固体をクロロホルム−ヘキサン系で結晶化させた。
【００５１】
融点  １３１〜１３３°Ｃ
［α］２６／Ｄ＋３．４°（ｃ１．１，クロロホルム）
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９９７（Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）
δ：０．７２−０．９９（ｍ，２Ｈ）
１．００−１．８８（ｍ，１５Ｈ）
２．９５          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３，１３．８Ｈｚ）
３．０６          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．１，１３．８Ｈｚ）
３．８５          （ｍ，３Ｈ）
３．９５          （ｍ，１Ｈ）
４．１０          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ）
４．４５          （ｂｒ  ｄｄｄ，１Ｈ）
４．７６          （ｂｒ  ｄｄｄ，１Ｈ）
４．９６，５．０３（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．７Ｈｚ）
５．０４，５．１０（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）
５．０５，５．１０（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ）
５．１９，５．２２（ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）
５．３２          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）
６．９４−７．０５（ｍ，３Ｈ）
７．０６−７．１９（ｍ，３Ｈ）
７．２０−７．４３（ｍ，２１Ｈ）
９．２７          （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
９．３９          （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
【００５２】
実施例２１
ＡＨＣＡ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−フェニルアラニンの合成
Ｚ−ＡＨＣＡ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル183.5mg(0.184mmol)をメタノール−酢酸−水（７：２：３）溶液６mlに溶解し、Ｐｄ−ブラック触媒の存在下に、水素雰囲気下で２日間撹拌した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで得られた粗体をカラムクロマトグラフィー精製（セファデックスＬＨ−20、１％酢酸−メタノール展開、次いでＯＤＳ、水−メタノール−酢酸（50：50：１））することで、白色粉末としてＡＨＣＡ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−フェニルアラニン・3/2 酢酸塩92.4mgを得た。
【００５３】
融点  １４１〜１４８°Ｃ
［α］２６／Ｄ＋８．３°（ｃ０．７２，メタノール）
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ５０５（Ｍ−酢酸＋１）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ）
δ：０．８６−１．０６（ｍ，２Ｈ）
１．１４−１．９２（ｍ，１５Ｈ）
１．９３          （ｓ，４．５Ｈ）
２．９４          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３，１３．９Ｈｚ）
３．１３          （ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）
３．２２          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４，１３．９Ｈｚ）
３．５４          （ｍ，１Ｈ）
４．１５          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ）
４．３３          （ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）
４．４９          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．４，８．３Ｈｚ）
７．１０−７．３０（ｍ，５Ｈ）
【００５４】
実施例２２
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニン132.9mg(0.501mmol)、Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・ｐ−トルエンスルホン酸塩224.6mg(0.525mmol)及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール135.4mg(1.002mmol)をＤＭＦ1.5ml に溶解し、氷冷化でトリエチルアミン 0.074ml(0.529mmol) 及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩124.6mg(0.650mmol)を加え２時間撹拌後、室温でさらに19時間撹拌した。反応終了後、反応液を酢酸エチル15mlで希釈したのち、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、10％クエン酸水溶液および飽和食塩水各10mlで順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗体の結晶を得た。次いで、この白色固体をカラムクロマトグラフィー精製（セファデックスＬＨ−20、メタノール展開）することで、Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル251.2mg を得た。収率99.8％。
【００５５】
融点  １２７°Ｃ
［α］２３／Ｄ＋８．８°（ｃ１．０，クロロホルム）
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ５０３（Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）
δ：１．３９          （ｓ，９Ｈ）
２．９４−３．１０（ｍ，４Ｈ）
４．３１          （ｍ，１Ｈ）
４．８１          （ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４，６．８Ｈｚ）
４．９３          （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
５．０９          （ｓ，２Ｈ）
６．２７          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）
６．８９          （ｍ，２Ｈ）
７．１０−７．４０（ｍ，１３Ｈ）
【００５６】
実施例２３
Ｚ−ＡＨＣＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル250.2mg(0.498mmol)にトリフルオロ酢酸 2mlを加え、室温で40分間撹拌後、溶媒留去し、さらにトルエン 2mlを加えて溶媒留去する操作を２回行うことで白色固体のＬ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・トリフルオロ酢酸塩を得た。この塩にＺ−ＡＨＣＡＬ175.4mg(0.523mmol)、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール135.1mg(1.000mmol)及びＤＭＦ 2.0mlを加えて溶解し、氷冷下でトリエチルアミン0.074ml(0.529mmol)及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド・塩酸塩124.1mg(0.647mmol)を加え２時間撹拌後、室温でさらに17時間撹拌した。反応終了後、反応混合物を酢酸エチル20mlで希釈し、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、10％クエン酸水溶液10ml、飽和食塩水各15mlで順次洗浄した。油層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、白色固体の粗体を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル：メタノール（60：40：１〜60：40：２））することで、白色固体としてＺ−ＡＨＣＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル 316.9mgを得た。収率88.4％。次いで、この白色固体をクロロホルム−ヘキサン系で結晶化させた。
【００５７】
融点  １２７〜１２８°Ｃ
［α］２８／Ｄ−３．７°（ｃ１．０，クロロホルム）
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７２０（Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）
δ：０．７３−１．００（ｍ，２Ｈ）
１．０２−１．４８（ｍ，５Ｈ）
１．５２−１．８４（ｍ，６Ｈ）
２．８５−３．１２（ｍ，４Ｈ）
３．９３          （ｍ，１Ｈ）
３．９８          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．９，５．９Ｈｚ）
４．５３          （ｂｒ  ｄ，１Ｈ）
４．６１          （ｂｒ  ｄｄｄ，１Ｈ）
４．７８          （ｂｒ  ｄｄｄ，１Ｈ）
４．９４−５．１３（ｍ，４Ｈ）
５．３５          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）
６．６１          （ｂｒ  ｄ，１Ｈ）
６．９２          （ｍ，２Ｈ）
７．０５−７．３９（ｍ，１９Ｈ）
【００５８】
実施例２４
ＡＨＣＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンの合成
Ｚ−ＡＨＣＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル316.5mg(0.440mmol)をメタノール−酢酸−水（６：２：１）溶液６mlに溶解し、Ｐｄ−ブラック触媒の存在下に、水素雰囲気下で24時間撹拌した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで得られた粗体をカラムクロマトグラフィー精製（セファデックスＬＨ−20、５％酢酸−メタノール展開することで、ＡＨＣＡ−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニン217.0mg を得た。収率99.6％。
【００５９】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４９６（Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ）
δ：０．７７−１．００（ｍ，２Ｈ）
１．１３−１．４０（ｍ，５Ｈ）
１．４８          （ｍ，１Ｈ）
１．６０−１．７９（ｍ，５Ｈ）
２．９６          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．６，１３．４Ｈｚ）
３．０３          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４，１３．４Ｈｚ）
３．１６          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，１３．４Ｈｚ）
３．２１          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，１３．４Ｈｚ）
４．４２          （ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４，７．０，７．０Ｈｚ）
４．１０          （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．４Ｈｚ）
４．４５          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，６．４Ｈｚ）
４．５３          （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．８，９．６Ｈｚ）
７．１０−７．３２（ｍ，１０Ｈ）
【００６０】
実施例２５
Ｚ−ＥｔＡｈｐの合成
ＥｔＡｈｐ・トリフルオロ酢酸塩5.99mmol相当にＳ−ベンジルオキシカルボニル−４，６−ジメチル−２−チオピリミジン1.97g(7.18mmol) 、水 6.0ml、ジオキサン 6.0ml及びトリエチルアミン2.10ml(15.0mmol)を加え、室温で24時間撹拌した。次いで、水40mlを加えて反応混合物を希釈したのち、１Ｎ塩酸14mlを加えｐＨ 2に調整し、酢酸エチル20mlで３回抽出した。油層を１Ｎ塩酸30mlで２回及び飽和食塩水30mlで１回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、粗Ｚ−ＥｔＡｈｐを得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：メタノール：酢酸＝96：３：１）することで、Ｚ−ＥｔＡｈｐ1.18g を得た。収率73.7％。
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【００６１】
実施例２６
Ｚ−ＥｔＡｈｐ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルの合成
Ｂｏｃ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル239.1mg(0.307mmol)にトリフルオロ酢酸 2mlを加え、室温で１時間撹拌後、溶媒留去し、さらにトルエン 2mlを加えて溶媒留去する操作を３回行うことでＬ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル・トリフルオロ酢酸塩を得た。この塩にＺ−ＥｔＡｈｐ86.2mg(0.323mmol) 、Ｂｏｐ試薬142.7mg(0.323mmol)及びクロロホルム 3.0mlを加えて溶解し、トリエチルアミン0.129ml(0.921mmol)を加え、室温で24時間撹拌した。反応混合物より溶媒留去した後、酢酸エチル15mlで希釈し、４％炭酸水素ナトリウム水溶液、10％クエン酸水溶液及び飽和食塩水各10mlで順次洗浄した。油層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去することで、油状の粗体を得た。この粗体をカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、ヘキサン：酢酸エチル：メタノール（50：50：１））することで、アモルファス状の固体192.9mg を得た。収率67.7％。この固体の一部を物性測定用にさらにカラムクロマトグラフィー精製（シリカゲル、クロロホルム：アセトニトリル（100 ：１〜10：１））することで、Ｚ−ＥｔＡｈｐ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステルを得た。
【００６２】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ９２９（Ｍ＋Ｈ）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）
δ：０．８８                （ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）
１．３０−１．９５      （ｍ，６Ｈ）
２．９５                （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３，１３．９Ｈｚ）
３．０７                （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．９，１３．９Ｈｚ）
３．７４                （ｍ，１Ｈ）
３．７９−３．９８      （ｍ，３Ｈ）
４．０９                （ｂｒ，１Ｈ）
４．４５                （ｂｒ  ｄｄｄ，１Ｈ）
４．７６                （ｂｒ  ｄｄｄ，１Ｈ）
４．８８−５．１６      （ｍ，６Ｈ）
５．１９，５．２１      （ＡＢｑ，２Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ）
５．３７                （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．３Ｈｚ）
６．９１−ｃａ．７．４１（ｍ，２６Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）
７．４２                （ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）
９．２８                （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
９．４０                （ｂｒ  ｓ，１Ｈ）
【００６３】
実施例２７
ＥｔＡｈｐ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−フェニルアラニンの合成
Ｚ−ＥｔＡｈｐ−Ｌ−アルギニル（Ｚ２）−Ｌ−フェニルアラニンベンジルエステル84.9mg(0.440mmol) をメタノール−酢酸−水（７：２：１）溶液10mlに溶解し、Ｐｄ−ブラック触媒の存在下に、水素雰囲気中で24時間撹拌した。触媒を濾別後、濾液を溶媒留去することで、ＥｔＡｈｐ−Ｌ−アルギニル−Ｌ−フェニルアラニン・酢酸塩４９．５mgを得た。収率１００％（但し１．７５酢酸塩として）。
【００６４】
ＦＡＢ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４３７（Ｍ−酢酸＋１）＋
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3 ＯＤ）
δ：１．０４                （ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）
１．４６−ｃａ．１．８７（ｍ，６Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）
２．９５                （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３，１３．７Ｈｚ）
３．０３−ｃａ．３．１７（ｍ，２Ｈ，ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ）
３．２２                （ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．０，１３．７Ｈｚ）
３．３７                （ｍ，１Ｈ）
４．２２                （ｂｒ  ｓ）
４．３２                （ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）
４．４８                （ｍ，１Ｈ）
７．０７−７．３０      （ｍ，５Ｈ）
但しδ１．９５に酢酸由来のシングレットピークあり。
【００６５】
試験例
抗アミノペプチダーゼＮ活性は、J. Antibiotics，38，1629〜1630 (1985）に記載の方法の改良法で行った。即ち、2mＭのＬ−ロイシン−β−ナフチルアミド0.05ml、0.1 Ｍのトリス−塩酸緩衝液（pH7.0 ）0.1ml 、検体を含む溶液0.035ml を加えた混合溶液を37℃で、３分間加温した後、アミノペプチダーゼＮ（ベーリンガ・マンハイム社製）溶液0.015ml を加え、37℃で１時間反応させた。10％ポリオキシエチレン（20）ソルビタンモノラウレート（和光純薬工業製）および0.2 ％ファーストガーネットGBC 塩（Sigma Chemical Company) を含む0.5 Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（pH3.78）を加えて反応を停止し、525nm における吸光度(a) を測定した。同時に検体を含まない緩衝液のみを用いた盲検の吸光度(b) を測定し、アミノペプチダーゼＮ（ＡＰ−Ｎ）阻害率を［（b-a)/b］×100 の式により計算した。50％阻害率を示す検体の濃度をIC50の値とした。
抗ロイシンアミノペプチダーゼ（Ｌｅｕ−ＡＰ）及び抗アミノペプチダーゼＡ（ＡＰ−Ａ）阻害活性はAoyagiらの方法［J. Antibiotics，31，636 （1978）］、抗アミノペプチダーゼＢ（ＡＰ−Ｂ）阻害活性はUmezawa らの方法［J. Antibiotics，29，97（1976）］によって行った。結果を表４に示す。
表４の結果から明らかなように、本発明化合物は、特にアミノペプチダーゼＮに対して優れた阻害活性を示す。
【００６６】
【表４】
0003917711.tif 000009