(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
バラ科ピラカンタ属（Rosaceae pyracantha）植物から水、メタノール、エタノール又はこれらの混合物により抽出される抽出物であって、芳香族系合成吸着剤に吸着される成分を除去したものを有効成分とする経口投与用美白組成物。
【請求項２】
前記抽出が常温〜当該抽出溶媒の沸点の範囲の何れかの温度により行われる、請求項１に記載の経口投与用美白組成物。
【請求項３】
前記植物がバラ科ピラカンタ属の果実である、請求項１又は２に記載の経口投与用美白組成物。
【請求項４】
前記バラ科ピラカンタ属（Rosaceae pyracantha）植物が、火棘（Pyracantha fortuneana）又はタチバナモドキ（Pyracantha angusutrifolia）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の経口投与用美白組成物。
【請求項５】
前記抽出物が火棘の熱水抽出物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の経口投与用美白組成物。
【請求項６】
火棘の熱水抽出物を、芳香族系合成吸着剤を用いる吸着クロマトグラフィーに負荷し、カラムを通過した画分及びカラムを水で洗浄して得られる画分を含有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の経口投与用美白組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、飲食品等による経口投与に適した美白組成物に関する。また、本発明は、該組成物を含有する経口投与用美白剤およびその使用に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より白い肌は美しい肌と認識されており、シミ・ソバカス等を予防又は治療し、白い肌を得ることを目的として、ハイドロキノンおよびその配糖体（例えば、アルブチン）、コウジ酸およびその誘導体、アスコルビン酸およびその誘導体、チオール系化合物、種々の動植物抽出物等のチロシナーゼ阻害活性を有する物質を配合した美白用化粧料が提案されてきた。
【０００３】
また、火棘（Pyracantha fortuneana ）やタチバナモドキ（Pyracantha angusutifolia）の抽出物がチロシナーゼ阻害活性を有しており、美白効果の優れた美白用化粧料組成物であることも知られていた（特許第2749218 号公報）。
近年、美白に対する意識がより一層高まり、従来の化粧料によるものだけでなく、飲食品等により簡便に経口摂取できる美白剤の提供が望まれるようになってきた。
【０００４】
しかしながら、従来より美白用化粧料に使用されてきた物質が、経口摂取でも化粧料と同等の効果を有するかどうかは不明であり、経口摂取により美白効果を有するものとしては、わずかにビタミンＣ製剤やチオール化合物が知られているのみであった。しかも、これらも安定性や吸収性の問題から、十分な効果を発揮しているとは言い難かった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らは、このような状況下、経口投与で有効でかつ安全な美白用組成物を提供することを課題とした。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、安全性の面からこれまでに食経験があるものの中から、経口投与で美白作用を発揮する植物を鋭意研究した結果、バラ科ピラカンタ属（Rosaceae Pyracantha ）植物が有効であることを見出した。具体的には、バラ科ピラカンタ属植物として火棘（Pyracantha fortuneana ）およびタチバナモドキ（Pyracantha angusutifolia）の果実の水、エタノール、またはそれらの混液での抽出物が、経口投与で美白作用を発揮することを見出し、本発明を完成した。
【０００７】
なお、美白効果を有する物質の化粧料等による皮膚への直接の塗布と、飲食物による経口投与という投与形態の違いにより、その有効性が異なることは明らかであるが、以下に簡単にその違いについて述べておく。
化粧料は皮膚表面に直接塗布され、化粧料成分の大部分は、皮膚表面に留まって、皮膚の生理機能を損なわずに、化粧料本来の機能を果たしている。
【０００８】
一方、経口投与においては、美白効果を有する物質はまず消化管内液に溶解し、胃または小腸から吸収される。小腸から吸収されたものは、主として門脈から肝臓、そして静脈内に入り、さらに心臓を通って全身に循環し体内各部位に到達し、各組織の細胞内に取り込まれる。
従って、化粧料で有効な物質が、経口投与においても化粧料と同様の効果を示すかどうかは不明である。
【０００９】
事実、アルブチンやアスコルビン酸はチロシナーゼ阻害活性を有しており、従来より優れた美白用化粧料として使用されているが、経口投与においては美白効果が低いことからも、経口投与と化粧料ではその効果が異なることは明らかである。
また、本発明においても、火棘抽出物の分画物のうち、試験管内でのチロシナーゼ阻害活性が強い画分では経口投与による美白活性は弱く、逆に試験管内でのチロシナーゼ阻害活性が弱い画分が経口投与で美白活性を発揮することを見出して本発明を完成している。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明で用いた中国名「火棘」（Pyracantha fortuneana ）は、その果実が漢方名「赤陽子」として、脾臓を健やかに保つ、消化不良を治す等の効能・効果が知られている。また、タチバナモドキ（Pyracantha angusutifolia）は火棘と同じピラカンタ属の中国原産の潅木で、日本では庭木として用いられている。
本発明においては、これらの植物の溶媒抽出物が使用されるが、これらの植物の果実の溶媒抽出物を用いるのが好ましい。
【００１１】
これらの植物からの有効成分の抽出に際して使用する溶媒は、有効成分が効果的に抽出される溶媒であれば、特に限定されるものではないが、水またはメタノール、エタノールなどの低級アルコール、あるいはそれらの混液が好ましく、安全性の面で、水もしくはエタノールまたはそれらの混液を用いるのがより好ましい。
【００１２】
水により抽出を行う場合、常温の水を使用することもできるが、熱水、例えば６０℃〜１００℃の熱水を使用するのが好ましい。また、メタノール、エタノール等の有機溶媒を使用する場合、常温で抽出してもよく、あるいは該有機溶媒の沸点以下の温度にて熱抽出を行ってもよい。また、メタノール、エタノール等の有機溶媒と水との混液を使用する場合、常温で抽出してもよく、あるいは該溶媒の沸点以下の温度にて熱抽出を行ってもよい。
【００１３】
また、有効成分を高濃度に配合するために、抽出物を、濃縮、液液分配、吸着クロマトグラフィー等の手段により精製して用いることも可能である。例えば、本発明の抽出物について吸着クロマトグラフィーを行う場合の吸着剤としては、合成吸着剤、例えばスチレン−ジビニルベンゼンのごとき芳香族系合成吸着剤を使用することができる。芳香族系合成吸着剤の具体例として、例えばダイヤイオンHP−２０（商品名、三菱化成工業社製）が挙げられる。さらに、ダイヤイオンHP−２１（商品名、三菱化成工業社製）、アンバーライトXAD ２およびXAD ４（共に商品名、ロームアンドハース社製）などが使用できるが、これらに限定されるものではない。
【００１４】
ダイヤイオンHP−２０を使用する場合、この吸着剤を充填したカラムに抽出液を適用し、流過した液およびカラムを水で洗浄して得られる画分を使用するのが好ましい。また、有機溶剤を使用して溶出する場合は、有機溶剤と水との混合物、例えば２０〜８０v/v ％のメタノール又はエタノール水溶液で溶出して得られる画分を使用することができる。
【００１５】
このようにして得られる本発明の経口投与用美白組成物は、シミ、ソバカス等の予防または治療に有効で、優れた美白効果を有する経口投与用組成物であって、錠剤、カプセル剤あるいは顆粒としてそのまま摂取するか、飴、グミ、飲料などの飲食品に配合して摂取することができるが、その形態は限定されるものではない。
また、本発明において使用される抽出物の成人一人当たりの１日の摂取量は、年齢、健康状態、体重等にもよるが、粗抽出物の固形分換算で０．０１ｇ〜２０．０ｇ、好ましくは０．１ｇ〜１０．０ｇを摂取することが望ましい。
【００１６】
【実施例】
次に、実施例によって本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらのみに限定されるものではない。
実施例１．火棘果実の熱水抽出物
火棘の乾燥果実５．００ｇを、９０℃の熱水５０ｍｌに浸漬し、３時間煮沸の後に濾過し、得られた抽出液を減圧濃縮して粗抽出物（固形分換算１．３３ｇ）を得た。
【００１７】
実施例２．火棘果実の水／エタノール混液抽出
火棘の乾燥果実５．００ｇを、５０％エタノール水溶液５０ｍｌに１週間浸漬の後に濾過し、得られた抽出液を減圧濃縮して粗抽出物（固形分換算１．０８ｇ）を得た。
【００１８】
実施例３．タチバナモドキ果実の熱水抽出
タチバナモドキ乾燥果実５．００ｇを９０℃の熱水５０ｍｌに浸漬し、３時間煮沸の後に濾過し、得られた抽出物を減圧濃縮して粗抽出物（固形分換算１．２１ｇ）を得た。
【００１９】
実施例４．火棘果実の熱水抽出物の分画
実施例１の方法により得られた火棘果実の粗抽出物（固形分換算６．０９ｇ）を水６００ｍｌに溶解し、ダイヤイオンＨＰ−２０のカラム（Φ３ｃｍ×１１ｃｍ、Ｖｔ＝８０ｍｌ）に負荷後、８００ｍｌの水で洗浄した。通過液と洗浄液を集めて減圧濃縮の後、凍結乾燥して固形物５．１３ｇを得た（第１画分）。
次いでカラムを４００ｍｌの２０％エタノール水溶液で溶出し、溶出液を減圧濃縮の後、凍結乾燥して固形物０．２２ｇを得た（第２画分）。
【００２０】
次いでカラムを４００ｍｌの４０％エタノール水溶液で溶出し、溶出液を減圧濃縮の後、凍結乾燥して固形物０．４９ｇを得た（第３画分）。
次いでカラムを４００ｍｌの８０％エタノール水溶液で溶出し、溶出液を減圧濃縮の後、凍結乾燥して固形物４ｍｇを得た（第４画分）。
なお、第１〜４画分の回収率は合計で９６％であった。
【００２１】
実施例５．チロシナーゼ阻害活性の測定
チロシナーゼ阻害活性は次のように測定した。
５０ｍM カリウム−ナトリウムリン酸緩衝液（ｐH ６．８）  １．００ｍｌ
L −チロシン（ナカライテスク社製）０．５ｍｇ／ｍｌ水溶液（１）  ０．２５ｍｌ
試料水溶液（２）（実施例１〜４の試料およびアルブチンについて各々種々の濃度に調整した試料）  １．００ｍｌ
【００２２】
これらをよく混合し、３０℃で１０分間放置した後、マッシュルーム由来のチロシナーセ（シグマ社製）０．１ｍｇ／ｍｌ水溶液を０．２５ｍｌ加え、３０℃で１２分程度（コントロールの吸光度が０．５程度）反応させた後、４７５ｎｍで吸光度Ａを測定した。同時に、試料水溶液（２）の代わりに等量の水を加えた時の吸光度Ｂ、Ｌ−チロシン水溶液（１）の代わりに水を用いた時の吸光度Ｃを測定した。阻害率はＡ，Ｂ及びＣの吸光度より、次の式で計算した。
阻害率（％）＝（Ｂ−（Ａ−Ｃ））／Ｂ×１００
この測定法で各試料について、チロシナーゼ阻害活性を測定し、阻害率が５０％になる時の試料濃度（ＩＣ５０）を表１に示す。表１より明らかなように、実施例４の第１画分以外は、全てチロシナーゼ阻害活性を有していた。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
実施例６．マウスを用いた美白作用の検討（１）
実施例１で得られた粗抽出物０．０４ｍｇ、０．１２ｍｇ、０．４０ｍｇ又は１０ｍｇを水（０．２ml）に溶解し、各々を１日１回マウス（各群6 匹）に経口投与した後に１８０ｍJ/cm2 の紫外線（UVB ）を照射した。コントロール群としては火棘抽出物の代わりに水を投与した。また、比較例として、アスコルビン酸０．６７ｍｇを用いた。これを１０日間継続した後にマウスの耳介を採取し、表皮をドーパ染色してスライド標本を作成した。各標本５ヶ所についてドーパ陽性メラノサイト数をカウントした結果を表２に示す。
【００２５】
表２に示すように、火棘抽出物はドーパ陽性メラノサイト数を減少させた（０．１２ｍｇ以上でコントロールに対してP<0.05の有意差あり）。この結果から、火棘抽出物の経口摂取による美白作用が明らかとなった。なお、従来より美白用化粧料に使用されているアスコルビン酸は、ドーパ陽性メラノサイト数の減少は見られたが、コントロールに対する有意差は見られなかった。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
実施例７．マウスを用いた美白作用の検討（２）
実施例４で得られた火棘の分画物を粗抽出物中のおおよその存在比（10:1:1）で、すなわち第１画分１０ｍｇ、第２画分１ｍｇ、第３画分１ｍｇを水（０．２ml）に溶解し、１日１回マウス（各群ともｎ＝６）に経口投与した後に１８０ｍJ/cm2 のUVB を照射した。コントロール群は火棘の各分画物の代わりに水を投与した。比較例として、アルブチン１２ｍｇを用いた。これを１０日間継続した後にマウスの耳介を採取し、表皮をドーパ染色してスライド標本を作成した。各標本５ヶ所についてドーパ陽性メラノサイト数をカウントした結果を表３に示す。
【００２８】
実施例５においてチロシナーゼ阻害活性のなかった火棘抽出物の第１画分がドーパ陽性メラノサイト数を有意に減少させた（P<0.05の有意差あり）。一方、チロシナーゼ阻害活性の強い第２画分、第３画分およびアルブチンはドーパ陽性メラノサイト数を減少させる傾向はあるものの、有意差はみられなかった。
この結果から、火棘抽出物の経口摂取による美白作用の本体は、主に第一画分に含まれることが明らかとなった。また、チロシナーゼ阻害活性の強さと、経口による美白活性の強さは一致しないことも明らかとなった。
【００２９】
また、実施例６における火棘粗抽出物（１０ｍｇ／日）と実施例７における火棘粗抽出物の第１画分（１０ｍｇ／日）はほぼ同等の活性を有していることから、第１画分以外の画分が経口による美白活性を妨げるものでないと考えられたので、以後の実施例では、実施例１で得られた抽出物を用いることとした。
【００３０】
【表３】
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【００３１】
実施例８．火棘抽出物の粉末化
実施例１の方法に従い濾過して得られる抽出液の固形分１重量部に対して、デキストリン２重量部を加え噴霧乾燥することによって、火棘抽出物の粉末品を得た。また、１カプセルあたり火棘粉末品を０．５ｇ含むように00号のハードカプセルに充填した。
【００３２】
実施例９．錠剤の作成
実施例８で得られた火棘粉末７０重量部、結晶性セルロース２６重量部及びショ糖脂肪酸エステル４重量部をよく混合し、打錠機（ハタ製作所）によって、１粒あたり２５０ｍｇの錠剤を作成した。
【００３３】
実施例１０．飴の作成
砂糖９８ｇ、水飴（固形分７５％）９０．７ｇ及び実施例１の方法に従い濾過して得られる抽出液を固形分４０％になるよう減圧濃縮して得られる火棘濃縮液（固形分４０％）７５ｇを良く混合し、水分が２％になるまで煮詰め、１粒あたり２ｇの飴（固形分換算で０．３ｇの火棘抽出物を含有）を作成した。
【００３４】
実施例１１．人を用いた美白作用の検討
健康な成人男性５名に実施例８で得られたカプセルを毎日朝昼晩２錠ずつ摂取してもらい、8 日目に背部左下部分に紫外線照射を行なった。紫外線は医療用紫外線照射装置（デルマレイ製）を用いて１６８．６ｍJ/cm2 のUVB を、直径１８ｍｍの円形に照射した。対照として、同じ被験者が検体摂取しない期間に、同量の紫外線を背部右下部分に照射した。照射してから７日後に、ダーマスペクトロメーター（Cortex-Technology 製）を用い、照射部位のメラニン値を求め、色素沈着抑制効果の指標とし、火棘摂取期間のメラニン値が対照期間のメラニン値より２以上下がったものを○、差がないものを△として判定した。結果を表４に示す。
表４に示すとおり、本発明の組成物は皮膚色の改善に経口投与で有効であることが判明した。
【００３５】
【表４】
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【００３６】
【発明の効果】
本発明により、飲食品等により簡便に経口摂取でき、シミ・ソバカス等を予防または治療し、色素の沈着を抑制することにより、優れた美白効果を有する経口投与用美白組成物を提供することができる。