(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(I) に相当する有機金属エストロゲン錯体：
【化１】
0003886545.tif 000012
〔上記式中
・ＡはＣ１‐Ｃ７アルキレン基又はＣ２‐Ｃ７アルケニレンもしくは
アルキニレン基を表す；
・Ｍｘは１以上の同一又は異なる遷移金属を表す；
・Ｌ´ｙは上記金属Ｍｘを錯体化する１以上の同一又は異なるリガンドを表す；
・ＬはＡに共有結合されたＭｘに関するリガンドを表し、フェニル及びシクロペンタジエニル基からなる群より選択される；
・ＲはＨ又は１以上のハロゲンで場合により置換されたＣ１‐Ｃ７アルキル
もしくはアルコキシを表す〕。
【請求項２】
ＭｘがＲｅ及びＴｃから選択される金属の１以上の原子を表す、請求項１に記載の錯体。
【請求項３】
Ａが‐ＣＨ２‐又は‐Ｃ≡Ｃ‐を表す、請求項１又は２に記載の錯体。
【請求項４】
ＲがＨ、‐ＣＨ２Ｃｌ、‐ＯＣＨ３又は‐（ＣＨ２）ｎ‐ＣＨ３（ｎ＝１〜４）を表す、請求項１に記載の錯体。
【請求項５】
Ｒが‐ＣＨ２Ｃｌである、請求項４に記載の錯体。
【請求項６】
ＭｘＬ´ｙがＲｅ（ＣＯ）３、Ｒｅ２（ＣＯ）７及びＴｃ２（ＣＯ）７から選択され、ＬがＣｐを表す、請求項２に記載の錯体。
【請求項７】
金属が画像化に適した放射性同位元素である、請求項１に記載された錯体からなる画像化剤。
【請求項８】
金属が 99mＴｃ、 186Ｒｅ及び 188Ｒｅから選択される、請求項７に記載の画像化剤。
【請求項９】
請求項１に記載された化合物を含んでなる癌治療用医薬組成物。
【請求項１０】
金属がレニウムである請求項１に記載された化合物を含んでなる、請求項９に記載の癌治療用医薬組成物。
【請求項１１】
金属が 186Ｒｅ及び 188Ｒｅから選択される放射性同位元素である、請求項９又は１０に記載の癌治療用医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明はステロイドホルモンの新規有機金属錯体、特にエストロゲン錯体に関する。本発明はステロイドホルモンレセプター、特にエストロゲンレセプターに対する特異的リガンドであるという本発明の錯体により有される性質の使用、画像化剤が画像化に適した放射性同位元素を含有する場合に画像化剤としての適用又は特にホルモン依存性癌の治療用医薬品としての使用にも関する。後者のケースにおいて、金属が適切な放射性同位元素である場合に、その錯体は標的化現場放射線療法の概念の関係から用いてもよい。
ステロイドホルモンはエストロゲンのケースにおいて標的細胞の核に局在するタンパク質レセプターと高親和性で結合する。ホルモンの結合後、それらをＤＮＡに結合させることができて、ホルモンに特徴的な生理活性をコントロールするゲノムの部分の転写の活性化を引き起こす活性化現象が生じる。ステロイド‐レセプター複合体はＤＮＡの近くにくるという事実からみて、ステロイドにより保持される放射性同位元素はＤＮＡにかなりのダメージを与え、標的細胞で致死効果を有する。
【０００２】
現在、いくつかの癌はエストロゲンに特異的なレセプターを高濃度で保有する。特に乳房、子宮、卵巣及び前立腺の癌の場合である。例えば、乳癌の６５％は検出しうるレベルのエストロゲンレセプターを保有する（５０００〜５０，０００レセプター分子／細胞）。
ステロイドに結合された適切な放射性同位元素は癌細胞を特異的に破壊する。加えて、適切な放射性同位元素は腫瘍を放射線画像化で視覚化させることができる。事実、これらのリガンドは放射性核種である実際の活性成分のための標的剤を形成する。
ホルモンレセプターのような細胞内結合部位にとっては、そのレセプターに対して高い親和性及び血漿中の結合タンパク質に対して低い親和性を有するホルモンアナログが最も適切な標的剤である。
【０００３】
本発明の目的は、特にエストロゲンレセプターに対して高い親和性及び良好な安定性を有するレニウム及びテクネチウム錯体を、特に前記適用のためこれらの錯体をこれら金属の放射性同位元素で標識する目的で、提供することであった。
【０００４】
本発明の主題は実質的に下記式(I) に相当する有機金属エストロゲン錯体である：
【化２】
0003886545.tif 000002
上記式中
・ＡはＣ１‐Ｃ７アルキレン基又はＣ２‐Ｃ７アルケニレンもしくは
アルキニレン基を表す；
・Ｍｘは１以上の同一又は異なる遷移金属を表す；
・Ｌ´ｙは上記金属Ｍｘを錯体化する１以上の同一又は異なるリガンドを表す；
・ＬはＡと共有結合したＭｘに関するリガンドを表す；又は
Ｌは“無”を表し、Ｍｘはアルキニレン基を表すＡのＣ三Ｃの３重結合の炭素に直接結合されている；及び
・ＲはＨ又は特に１以上のハロゲンで場合により置換されたＣ１‐Ｃ７アルキルもしくはアルコキシを表す；特に、Ｒは‐ＣＨ２Ｃｌ、‐ＯＣＨ３又は
‐（ＣＨ２）ｎＣＨ３（ｎ＝１〜４）を表すことができる。
Ｃ‐３及びＣ‐１７位におけるヒドロキシル官能基はこれらのリガンドにエストロゲンレセプターに対する高い親和性を付与する。
１１β‐クロロメチル官能基は適宜にレセプター‐ホルモン複合体の安定性を高め、それにより細胞核近くでその濃度を増加させる。１１β位におけるこの官能基は実際にエストロゲンレセプターと事実上不可逆的結合を形成する。
これらの複合体はそれらの使用にとり必要な条件、即ち安定性及びエストロゲンレセプターによる良好な認識性を満足する。
【０００５】
エストロゲンレセプターに対するステロイド錯体の親和性に関する改善は金属錯体ＬＭｘＬ´ｙがリンカーＡによりＤ環から分離された場合に観察される。特に、エストロゲンレセプターに対するステロイド‐シクロペンタジエニル‐Ｒｅ（ＣＯ）３錯体の親和性に関して、シクロペンタジエニルがリンカー、特にＣＨ２基又はエチニレン基によりＤ環から分離された場合に改善が認められる。１７α位でＤ環に直接結合されたステロイド‐シクロペンタジエニル‐Ｒｅ（ＣＯ）３誘導体の親和性は低い。
【０００６】
本発明による有機金属化合物の適切な金属としては、元素の周期律分類のVI、VII 、VIII及びIX族から選択される金属が挙げられる。
これら有機金属化合物のリガンドＬ´ｙとしてはＣＯ、ＣＳ、ＣＳｅ、ＣＮＲ１、フェニル、Ｐ（Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４）、シクロペンタジエニル（Ｃｐ）が例として挙げられ、Ｒ１は特にアルキル基又は‐ＣＯＲ５であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は特に置換又は非置換フェニル又はフェノキシ基、置換又は非置換Ｃ１‐Ｃ７アルキル又はアルコキシ基あるいは一方ハロゲン原子であり、Ｒ５に関して‐Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２であることが可能である。
化合物ＭｘＬ´ｙはいくつかの金属、特に２種の金属と１２以内のリガンド、特に３〜７のリガンドを含むことができる。
前記のように、金属ＭｘはＲｅ及びＴｃから選択される１以上の金属原子を表すことが好ましい。
【０００７】
特に、本発明による錯体において、Ａは‐（ＣＨ２）‐又は‐（Ｃ三Ｃ）‐を表す。このケースにおいて、錯体は下記例で記載された場合と同様のプロセスにより製造される。
式(I) の親和性標識において、Ｌはフェニル及びシクロペンタジエニル基から選択されることが好ましい。
特に、
・ＭｘＬ´ｙはＲｅ（ＣＯ）３、Ｒｅ２（ＣＯ）７、Ｔｃ（ＣＯ）３及び      Ｔｃ２（ＣＯ）７から選択され、その場合にＬは好ましくはＡに共有結合され、
更に好ましくはＬはＣｐ又はＣ６Ｈ５を表す；又は
・ＭｘＬ´ｙはＴｃ（ＣＯ）５又はＲｅ（ＣＯ）５から選択され、その場合に  Ｌは好ましくは“無”を表し、これらの有機金属錯体はアルキニレン基を表すＡのＣ三Ｃの３重結合の炭素に直接結合されている；
本発明による錯体が挙げられる。
【０００８】
本発明による化合物は特にエストロゲン化合物の誘導体に対する対応有機金属誘導体の作用から公知プロセスにより製造される。当然、必要であれば、エストロゲン化合物の官能基の一部、特に３位におけるヒドロキシルが保護され、これも同様に公知プロセスを用いて行われる。
【０００９】
このためＡが‐Ｃ三Ｃ‐を表す場合に、下記反応：
【化３】
0003886545.tif 000003
又は下記反応：
【化４】
0003886545.tif 000004
を用いることができる。
この後者のプロセスによれば以前用いられた場合と比較して進展を得ることができる。時を得たこの利得は放射能標識が関与する場合に非常に重要である。
【００１０】
Ａが‐（ＣＨ２）ｎ‐を表す場合に、下記反応が用いられる：
【化５】
0003886545.tif 000005
【００１１】
前記のように、本発明による錯体は、本発明による錯体を標識化などすることが可能なので、特にホルモン依存性癌用の医薬品として、又はそれらが金属として適切な放射性同位元素を含む場合には医療画像化に際して用いられる。
金属が、医療画像化のとき 186Ｒｅ、 188Ｒｅ又は 99mＴｃであり、標的現場放射線療法のとき 186Ｒｅ又は 188Ｒｅである錯体が特に挙げられる。
【００１２】
本発明の他の利点及び特徴は下記例から明らかになるであろう。
例１：１７α‐エチニルシクロペンタジエニルレニウム誘導体
これは下記式(I) のレニウムのホルモン錯体を示す：
【化６】
0003886545.tif 000006
0003886545.tif 000007
【００１３】
Ｉ．合成方法
下記経路１による下記合成方法を採択した：
経路１
【化７】
0003886545.tif 000008
ホルモン錯体はリチウム誘導体Ｌｉ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３（２）によるエストロン誘導体（１）の還元から得てよい。
【００１４】
１．化合物Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３の合成
化合物Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３はスズ誘導体Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＳｎＢｕ３とヨウ化物ＩＣｐＲｅ（ＣＯ）３とのカップリング方法に従いStilleらにより製造された(C.Lo Sterzo及びJ.K.Stille,Organometallics,1990,9,687-694)。この反応剤を製造するため同方法に従った。
Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＳｎＢｕ３はアセチリドＨ‐Ｃ三Ｃ‐Ｌｉ・ＥＤＡと塩化物ＣｌＳｎＢｕ３との反応により得る。次いでＨ‐Ｃ三Ｃ‐ＳｎＢｕ３とＩＣｐＲｅ（ＣＯ）３とのカップリングを触媒（ＭｅＣＮ）２ＰｄＣｌ２の存在下で実施する。
【００１５】
２．ホルモン錯体２の合成
その方法の実施可能性を試験する目的で、３位においてベンジル基で保護されたエストロン（１）をまず用いた。この保護によればフェノール官能基とリチウム誘導体との擬似反応を排除することができる。
リチウム誘導体Ｌｉ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３を最初に化合物Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３でsec-ＢｕＬｉの作用により−７０℃で形成させる。次いで保護エストロンを−７０℃で維持されたリチウム誘導体の溶液に加える。処理及び精製後、錯体２を収率２９％で得る。
ホルモン錯体１を得るためにホルモン錯体２を脱保護することは明らかに可能であるが、但しこの化合物をエストロンで直接得ることがより実用的である。
【００１６】
３．ホルモン錯体１の合成
このタイプの反応におけるエストロンの直接使用はフェノール官能基の反応性と低温でのその低溶解度によりハンディがある。しかしながら、事前にフェノール官能基をフェノレートに変換して反応媒体を希釈することでエストロンにおいて直接反応を実施することにより成功した。
ホルモン錯体１を最後に収率６１％で得る。
【００１７】
４．ホルモン錯体３の合成
１１β‐クロロメチル‐β‐エストラジオールはエストラジオールレセプターに関する親和性の観点から非常に大きな利点を有する。そのＲＢＡ値は１０００のオーダー程度と非常に高い。このため１１β‐クロロメチル‐β‐エストラジオール錯体も大きなＲＢＡ値を保有すると予想される。
その錯体はエストロンに関して用いた場合と同様の操作に従い得てもよい。１１β‐クロロメチル‐β‐エストラジオールの入手困難性とその非常に高いコストのため、フェノレートへの事前の変換なしにそのホルモンを過剰のリチウム誘導体に直接加えることがより賢明であろう。この状況下で、リチウム誘導体Ｌｉ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３の一部はフェノール官能基と反応するが、但しこの変換は再生されたＨ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３が反応の最後に回収できるため損失を意味しない。
ホルモン錯体３を非常に良い収率７８％で得る。
こうして良好な安定性を保有するＲｅのホルモン錯体を製造することができる。ＣｐＲｅ（ＣＯ）３基は標識に要される条件を満たす。
この標識法はテクネチウム標識化にも適用できる。
一般的に言えば、レニウム及びテクネチウム化合物は化学反応に関して同様に挙動する。この類似性によればレニウム化合物を要する反応をテクネチウムの化学に移し替えることができる。
【００１８】
II．実験の部
１．Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＳｎＢｕ３
アセチリドＨ‐Ｃ三Ｃ‐Ｌｉは安定形のＨ‐Ｃ三Ｃ‐Ｌｉ・ＥＤＡで市販されている。このため我々はこの反応剤を合成に用いるために選択する。Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐Ｌｉ・ＥＤＡ３．５ｇ（０．０３８mol)をＴＨＦ４０mlに懸濁させる。ＴＨＦ（２０ml）中ＣｌＳｎＢｕ３の溶液を最初の溶液に滴下する。攪拌を一夜維持する。溶媒の濾過及び蒸発後、得られた油状物を真空蒸留に付す。Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＳｎＢｕ３４．３ｇを無色油状物の形で最後に得たが、これは７０℃、０．１mmHgで留出する（文献７６℃／０．２mmHg；Nesmeyanov A.N.et al.,Dokl.Akad.Nauk.SSSR,1976,174,96)。収率：３６％．１Ｈ  ＮＭＲ（２００MHz,ＣＤＣｌ３，δppm) 2.21(s,1H,CH),0.92(t,9H,Me).
【００１９】
２．Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３
これはStille(C.Lo Sterzo及びJ.K.Stille,Organometallics,1990,9,687-694)により記載された方法に従い製造する。
（η５‐ＩＣ５Ｈ４）Ｒｅ（ＣＯ）３（０．６９ｇ、１．５mmol）、Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＳｎＢｕ３（０．４７ｇ、１．５mmol）及び（ＭｅＣＮ）２ＰｄＣｌ２（０．０１ｇ、０．０２mmol）をＤＭＦ１５mlに溶解する。一夜攪拌後、エーテル２０ml及び５０％ＫＦ水溶液１０mlを加える。混合液を１時間激しく攪拌しながら、アルゴン流を同時にそれに通す。次いでそれを分液漏斗に注ぐ。生成物を最初にエーテル５０mlで抽出する。エーテル溶液を水洗する（２回）。水性洗液を前の水相と合わせ、生成物を再びエーテルで抽出する（２回）。次いでエーテル分画を一緒に合わせ、水洗する。ＭｇＳＯ４乾燥、濾過及び蒸発後に固体物を得、固体物をシリカゲルプレート上で溶出液としてＣＨ２Ｃｌ２／ペンタン１：１０によりクロマトグラフィーに付す。化合物Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３を最後にベージュ色固体物の形で得る。０．４０ｇ、収率７３％．１Ｈ  ＮＭＲ（２００MHz,ＣＤＣｌ３，δppm) 2.83(s,1H,CH),5.67(t,2H,Cp,J=2.3Hz),5.30(t,2H,Cp,J=2.3Hz)．ＩＲ（ＣＨ２Ｃｌ２）νco：2028 S,1932 S.この化合物は文献(Stille)の場合とのＩＲ及びＮＭＲデータ比較により同定される。
【００２０】
３．ホルモン錯体２
Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３０．２１６ｇ（０．６mmol）をＴＨＦ４mlに溶解する。溶液が−７０℃に冷却された後、sec-ＢｕＬｉ（１mmol）の１．３Ｍ溶液０．７７mlを上記溶液に加える。混合液を−７０℃で２０分間攪拌する。次いで３‐ベンジルオキシエストロン（０．２１６ｇ、０．６mmol）のＴＨＦ溶液（３ml）を滴下する。添加に１／２時間要する。攪拌を一夜維持しながら、温度を室温までゆっくりと上昇させる（１５時間）。加水分解、エーテル抽出及び溶媒の蒸発後、得られた粗生成物をシリカゲルプレート上で溶出液としてエーテル／ペンタン１：２によりクロマトグラフィーに付す。未反応Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３０．０７０ｇを最初に回収し、しかる後ベージュ色油状物の形でホルモン錯体２  ０．１２０ｇを得たが、これはペンタンで固化する。収率は２９％、Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３を考慮すれば４２％である。１Ｈ  ＮＭＲ（２００MHz,ＣＤ３ＣＯＣＤ３，δppm) 7.40(m,5H,Ph),7.19(d,1H,H-1,J=8.4Hz),6.77(dd,1H,H-2,J=8.4及び2.8Hz),6.71(d,1H,H-4,J=2.8Hz),5.90(t,2H,Cp,J=2.2Hz),5.59(t,2H,Cp,J=2.2Hz),5.07(s,2H,CH2 -Ph),4.49(s,1H,OH-17),2.80(m,2H,H-6),0.91(s,3H,Me-13).ＩＲ（ＣＨ２Ｃｌ２）νco：2025 S,1930 S.質量（ＥＩ，７０eV）m/z 720[M]+ ,692[M-CO]+ ，636[M-3CO]+ .
【００２１】
４．ホルモン錯体１
Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３０．２１６ｇ（０．６mmol）をＴＨＦ４mlに溶解する。−５０℃に冷却した後、sec-ＢｕＬｉ（１mmol）の１．３Ｍ溶液０．７７mlを上記溶液に加える。攪拌を１時間続ける。もう１つのシュレンク(Schlenk) チューブ内でエストロン０．２７０ｇ（１mmol）をＴＨＦ１０mlに溶解する。溶液を−５０℃に冷却し、sec-ＢｕＬｉ０．７７ml（１mmol）を加える。溶液は透明無色のままである。次いでこの溶液を−５０℃（１時間）に維持された最初の溶液にゆっくりと加える。その後の操作は錯体２の場合と同一である。プレート上で精製（溶出液：エーテル／ペンタン１：１）後、錯体１を無色固体物の形で得る。０．２２５ｇ、収率６１％．M.p.１６１℃（エーテル／ペンタン）．
１Ｈ  ＮＭＲ（２５０MHz,ＣＤ２Ｃｌ２，δppm) 7.14(d,1H,H-1,J=8.4Hz),6.61(dd,1H,H-2,J=8.4及び2.1Hz),6.55(d,1H,H-4,J=2.1Hz),5.71(s,1H,OH-3),5.63(t,2H,Cp,J=2.2Hz),5.32(t,2H,Cp,J=2.2Hz),2.78(m,2H,H-6),0.89(s,3H,Me-13).13Ｃ  ＮＭＲ（62.89 MHz,ＣＤ２Ｃｌ２，δppm) 193.29(CO),153.23(C3),137.92(C5),132.07(C10),126.06(C1),114.80(C4),112.27(C2),92.71(C17),87.52,87.45,84.04 及び83.95(Cpの4C),85.49 及び79.84(Cpの1C及びC 三）,76.54(C三）,49.31(C14),47.46(C13),43.07(C9),39.12(C8),38.52(C16),32.64(C12),29.24(C6),26.75(C7),26.11(C11),22.42(C15),12.31(Me-13) ．ＩＲ（ＣＨ２Ｃｌ２）νco：2025 S,1930 S.質量（ＥＩ，７０eV）m/z 630[M]+ ,612[M-H2 O]+ ,602[M-CO]+ ，546[M-3CO]+ .
【００２２】
５．ホルモン錯体３
操作は錯体１の場合と同一である。
このケースにおいて、過剰のＬｉ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３を用いてその場でフェノール官能基を中和する。１１β‐（クロロメチル）エストロン：０．０６４ｇ、０．２mmol（ＴＨＦ１０ml）；Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３：０．２１６ｇ、０．６mmol（ＴＨＦ８ml）；sec-ＢｕＬｉ：０．５４ml、０．７mmol（１．３Ｍ）。反応は−６０℃で実施する。
一夜反応後、ＴＨＦ２０ml及び水０．５mlを加える。次いで混合液をシリカゲルで濾過し、溶媒を留去する。エーテル又はジクロロメタン中で形成される生成物の低溶解度からみて、このプロセスによれば水相からの生成物抽出問題を解消することができる。次いで得られた粗生成物をシリカゲルプレート上で溶出液としてＴＨＦ／ペンタン１：３によりクロマトグラフィーに付す。錯体３は無色固体物の形で最後に単離される。０．１０５ｇ、収率７８％．M.p.２１９℃．１ＨＮＭＲ（２５０MHz,ＣＤ３ＣＯＣＤ３，δppm) 8.17(s,1H,OH-3),7.06(d,1H,H-1,J=8.5Hz),6.67(dd,1H,H-2,J=8.2及び2.7Hz),6.14(d,1H,H-4,J=2.7Hz),5.94(t,2H,Cp,J=2.2Hz),5.59(t,2H,Cp,J=2.2Hz),4.63(s,1H,OH-17),3.57(m,2H, CH2 Cl),2.70(m,2H,H-6),1.08(s,3H,Me-13).ＩＲ（ＣＨ２Ｃｌ２）νco：2025 S,1930 S.質量（ＥＩ，７０eV）m/z 678[M]+ ,650[M-CO]+ ．Ｈ‐Ｃ三Ｃ‐ＣｐＲｅ（ＣＯ）３０．１４５ｇ及び１１β‐（クロロメチル）エストロン０．００７ｇも回収される。
【００２３】
例２：
これらの錯体はレセプターアッセイ及び画像化の双方にとり標識の観点から非常に大きな関心がある。しかしながら、画像化での使用には標識化を実施する上で簡潔さを要する。下記反応は下記プロセスで実施することもできる：
【化８】
0003886545.tif 000009
この操作では前ケースで用いられた場合と比較して進展を得ることができる。時を得たこの利得は放射能標識のケースで非常に重要である。
【００２４】
例３：
実施される生物学的試験方法及び結果
相対的結合親和性（ＲＢＡ）値は下記プロトコールに従い温度（０及び２５℃）で調べた：雌ヒツジ子宮のサイトゾル分画（１０５，０００ｇ上澄）を２nMトリチウム化エストラジオール（３Ｈ‐Ｅ２）の存在下で試験生成物のモル濃度（１０-9〜１０-8Ｍの９種のモル濃度）を増加させながらインキュベートする（０℃で３時間；２５℃で３時間３０分）。インキュベート期間の終了時に、ホルモンの遊離及び結合分画の分離をA.Vessieres et al.,Biochemistry,1988,27,6659の論文で記載されたように硫酸プロタミン沈降技術により実施する。次いでエストラジオールのそのレセプターに対する特異的結合を５０％置換する非放射性エストラジオールの濃度／この結合を５０％置換する改質ホルモンのモル濃度の比率×１００であるＲＢＡ値を決定する。ＲＢＡ値が高くなるほど、エストラジオールレセプターに対する試験ホルモンの親和性は大きくなる。
【００２５】
結果：
３種のホルモン錯体をＲＢＡ値の測定に付した。下記値を得た：
0003886545.tif 000010
３位にヒドロキシル基を有しない錯体２はレセプターにより認識されない。レニウム錯体の場合、試験が行われた温度に従い挙動上大きな差異がある。０℃において、ＲＢＡ値は１１β‐クロロメチルを有する又は有しない錯体（各々錯体３及び１）に関して非常に匹敵している。逆に、２５℃において、錯体１のＲＢＡ値はわずかに減少するが、一方錯体３の場合にこの値は１７２％に上昇する。この値はその錯体がエストラジオール自体よりも良くレセプターで認識されることを示す。それは有機金属ステロイドに関してこれまでにみられた最高の値である。
【００２６】
例４：
１７α‐メチルシクロペンタジエニルレニウム誘導体
合成方法は下記経路２に従い実施する：
経路２
【化９】
0003886545.tif 000011
ブチルリチウム（ヘキサン中１．６Ｍ；０．３３ml）を無水ＴＨＦ（５ml）中ＣｐＲｅ（ＣＯ）３（１７７mg、５．２８×１０-4mol)の−７８℃に冷却された溶液にゆっくりと加える。−７８℃で１時間攪拌後、無水ＴＨＦ（２ml）に溶解されたエポキシド１（５０mg、１．７６×１０-4mol)を加える。室温で６時間後、反応媒体を水１０mlで加水分解し、エーテル（５×１０ml）で抽出し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、しかる後減圧下で濃縮する。生成物２をプレート上でクロマトグラフィーに付してエーテル／ペンタン４：６で溶出させたところ、収率６５％である。
【００２７】
例５：
Ｌが“無”を表すケースにおける錯体の合成
Ｌが“無”を表すケースにおいて、ＭｘＬ´ｙはＲｅ（ＣＯ）５でもよい。ホルモンへのこれら基の結合は基ＣｐＭ（ＣＯ）３に関して採択された方法、即ちカルバニオン‐Ｃ三Ｃ‐Ｍ（ＣＯ）５によるエストロンの還元に従い実施してもよい。後者は当業者に公知である合成の下記可能性に従い得られる：
H-C三C-I ＋ NaM(CO)5       −−−＞   H-C三C- M(CO)5 
H-C三C- M(CO)5 ＋ n-BuLi   −−−＞  Li-C三C- M(CO)5 
又は
Me3 SiC 三CLi ＋CF3 SO3 Re(CO)5   −−−＞  Me3 SiC 三C-Re(CO)5 
Me3 SiC 三C-Re(CO)5 ＋Bu4 NF  −−−＞  Bu4 N +-C 三C-Re(CO)5 ＋Me3 SiF