(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（１）で表される環状デプシペプチド又はその医薬として許容される塩を含有することを特徴とするビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシン、ダウノマイシン及びアクチノマイシンＤから選択される制癌剤の効果増強剤。
【化１】
0003874372.tif 000025
〔式中、Ｘ１はＨｍｐ又はＨｍｂ（Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸、Ｈｍｂは２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸を示す）であり、Ｘ３はＭｅＰｈｅ又はβＨＯＭｅＰｈｅ（ＭｅＰｈｅはＮ−メチルフェニルアラニン、βＨＯＭｅＰｈｅはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルフェニルアラニンを示す）であり、Ｘ５はａＩｌｅ、Ｖａｌ又はＬｅｕであり、Ｘ８はβＨＯＭｅＶａｌ（βＨＯＭｅＶａｌはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンを示す）又はＭｅＶａｌである〕
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、制癌剤に有効である、新規な効果増強剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明で使用される化合物及びその医薬として許容される塩は、優れた抗真菌活性を有し、カンジダ症、クリプトコッカス症を始めとする真菌感染症の治療に有用であることが知られている（特開平２−１３８２９６号、同３−２２９９５号、同３−４４３９８号、同３−２２０１９９号、同５−２７９３８４号、特願平４−３０３１７７号、欧州特許公開第０５８１４２９号）。配列表の配列番号２で表されるオーレオバシジンＡは下記式（２）の構造を有しており、その中で特に優れた活性と低い毒性を有している。
【０００３】
【化２】
0003874372.tif 000002
【０００４】
〔式中、D-Ｈｍｐは２（Ｒ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−メチルペンタン酸を示す〕
ところで、抗生物質等の化学療法剤を比較的長期に投与した場合、感染微生物が耐性を獲得し、化学療法剤の効果が減少することはよく知られている。また、癌の成長又は転移を縮小、阻害又は制限する手段として、制癌剤を用いる癌化学療法においても時間の経過と共に投与した制癌剤に耐性を示す癌が出現し、癌化学療法の治療効果が低下することが一般に知られている。それは癌細胞内の制癌剤の蓄積、維持能低下が原因であることが多いと言われている。この耐性の機作が分子レベルで解明されつつあり、これに対する治療方法も検討されてきている。すなわち、最近、多剤耐性を担う遺伝子が単離され、この遺伝子が多剤耐性細胞に発現する膜蛋白質、Ｐ糖蛋白質（Ｐ−glycoprotein) の遺伝子であることが明らかとなった。Ｐ糖蛋白質は制癌剤の細胞外排出の機能をもった蛋白質であることが推定され、癌の多剤耐性機構において中心的役割を担う蛋白質であると考えられる。また、Ｐ糖蛋白質は癌細胞のほかにも、真菌を始めとする真核生物、細菌にも存在し、真菌において薬剤耐性に関与していることが知られている〔Ｋ．ニシ（Ｋ．Nishi)ら、モレキュラー  ミクロバイオロジー（Molecular Microbiology) 、第６巻、第７６１〜７６９頁（１９９２）〕。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
新規な化学療法剤の開発が困難な今日、既存の化学療法剤の効果増強を試みることは極めて重要である。
本発明の目的は、優れた制癌剤の効果増強作用を有することが見出された化合物を含有する、制癌剤の効果増強剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明を概説すれば、本発明は、下記式（１）で表される環状デプシペプチド又はその医薬として許容される塩を含有することを特徴とする、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシン、ダウノマイシン及びアクチノマイシンＤから選択される制癌剤の効果増強剤に関する。
【０００７】
【化３】
0003874372.tif 000003
【０００８】
〔式中、Ｘ１はＨｍｐ又はＨｍｂ（Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸、Ｈｍｂは２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸を示す）であり、Ｘ３はＭｅＰｈｅ又はβＨＯＭｅＰｈｅ（ＭｅＰｈｅはＮ−メチルフェニルアラニン、βＨＯＭｅＰｈｅはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルフェニルアラニンを示す）であり、Ｘ５はａＩｌｅ、Ｖａｌ又はＬｅｕであり、Ｘ８はβＨＯＭｅＶａｌ（βＨＯＭｅＶａｌはβ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルバリンを示す）又はＭｅＶａｌである〕
【０００９】
なお、本明細書において用いた特殊なα−アミノ酸、Ｎ−メチル−α−アミノ酸、又はα−オキシ酸の略号は、次表にまとめて示すとおりである。
0003874372.tif 000004
0003874372.tif 000005
【００１０】
本発明者らは、鋭意研究の結果、意外にも抗真菌剤として知られている下記式（３）で表される環状デプシペプチド（配列表の配列番号１）の中で、特に前記の式（１）で表される化合物が、細胞内における制癌剤の蓄積、維持に強い効果を示すと共に、制癌剤の効果を著しく増強させる効果を有することを見出し、本発明を完成した。
なお、下記式（３）中、Ｘ１はＨｍｐ、Ｈｍｂ又はＤｈｍｐ（Ｈｍｐは２−ヒドロキシ−３−メチルペンタン酸、Ｈｍｂは２−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸、Ｄｈｍｐは２，４−ジヒドロキシ−３−メチルペンタン酸を示す）であり、
Ｘ２はＰｈｅ、ｏＦＰｈｅ、ｍＦＰｈｅ、ｐＦＰｈｅ又はＣｈａであり、
Ｘ３はＭｅＰｈｅ、ｏＦＭｅＰｈｅ、ｍＦＭｅＰｈｅ、ｐＦＭｅＰｈｅ、ＭｅＧｌｙ、ＭｅＡｌａ、ＭｅＶａｌ、ＭｅＴｙｒ、βＨＯＭｅＰｈｅ又はβＲ1 ＯＭｅＰｈｅ｛但し、Ｒ1 は炭素数１〜４の低級アシル基であり、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯ−Ｒ2 （Ｒ2 は炭素数１〜４の低級アルキル基である）、−ＮＨ2 又は−ＮＨ−Ｒ3 （Ｒ3 は炭素数１〜４の低級アシル基である）で置換されていてもよい｝、
Ｘ４はＰｒｏ、４Ｈｙｐ、ＳＰｒｏ又はＰｉｐであり、
Ｘ５はａＩｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｎｌｅ、Ｇｌｕ、ＧｌｕＯＲ4 （Ｒ4 はベンジル基、炭素数１〜１２のアルキル基又は炭素数１〜１２のアルケニル基である）、ＨＯＮｖａ又はＲ5 ＯＮｖａ（Ｒ3 はベンジル基又は炭素数１〜１２のアシル基である）であり、
Ｘ６はＶａｌ、ＭｅＶａｌ、ＭｅａＩｌｅ、ＭｅＬｅｕ、Ｈｍｂ、ＨＯＭｅＮｖａ又はＲ6 ＯＭｅＮｖａ（Ｒ6 はベンジル基又は炭素数１〜１２のアシル基である）であり、
Ｘ７はＬｅｕ、Ｎｖａ、ａＩｌｅ、ＨＯＮｖａ又はＧｌｕＯＲ7 （Ｒ7 はベンジル基、炭素数１〜１２のアルキル基又は炭素数１〜１２のアルケニル基である）であり、
Ｘ８はβＨＯＭｅＶａｌ、γＨＯＭｅＶａｌ、ＭｅＶａｌ、Ｖａｌ、Ｎ，βＭｅＡｓｐ、βＨＯＭｅＰｈｅ、ＭｅＤＨ2,3 Ｖａｌ、ＭｅＤＨ3,4 Ｖａｌ又はＭｅＴｈｒである。
また、下記式（３）で表される代表的化合物を後記表１〜表３に示す。
【００１１】
【化４】
0003874372.tif 000006
【００１２】
【表１】
0003874372.tif 000007
【００１３】
【表２】
0003874372.tif 000008
【００１４】
【表３】
0003874372.tif 000009
【００１５】
なお、表１〜表３中、・印はオーレオバシジンＡ（化合物１）と同一のアミノ酸又はオキシ酸であることを示す。
【００１６】
本発明で用いられる環状デプシペプチドは、オーレオバシジウム  プルランス（Aureobasidium pullulans) No.Ｒ１０６〔微工研条寄第１９３８号（ＦＥＲＭＢＰ−１９３８）〕の培養物より、特開平２−１３８２９６号、同３−２２９９５号、同３−２２０１９９号、同５−２７９３８４号各公報又は特願平４−３０３１７７号明細書記載の方法により採取される。
【００１７】
例えば、グルコース、グリセリン等の炭素源、ペプトン、アンモニウム塩、アミノ酸等の窒素源、その他無機塩等を含有する液体培地で上記生産菌を培養し、得られた培養液によりエタノール等の有機溶媒で抽出し、抽出物を吸着性樹脂で精製し、更に６０〜７０％のアセトニトリル／水の混合溶媒等を用いた逆相ＨＰＬＣやヘキサン／アセトニトリル／２−プロパノールの混合溶媒を用いたシリカゲルＨＰＬＣ等により精製すれば、環状デプシペプチドを分離、生産することができる。なお、化合物１（オーレオバシジンＡ）については特開平２−１３８２９６号公報に、化合物２、１０、１１、２０、２１、２８、３９、４０、４１、４２については特開平３−２２９９５号公報に、化合物４、９、１５、１６、１９、３４については特開平３−２２０１９９号公報に、化合物３については特開平５−２７９３８４号公報に、化合物２９、３０、３５については特願平４−３０３１７７号明細書、欧州特許公開第０５８１４２９号公報中にそれぞれ記載されている。
【００１８】
また、培養物より得られたものを原料として、特開平３−４４３９８号、同３−２２０１９９号各公報記載の化学的な方法により誘導体として採取される。
なお、化合物１２、１３、１４については特開平３−４４３９８号公報に、化合物６については特開平３−２２０１９９号公報にそれぞれ記載されている。
【００１９】
更に、特願平４−３０３１７７号明細書、欧州特許公開第０５８１４２９号公報、特願平５−３４６８７３号明細書記載の方法により化学的に全合成により得ることができる。なお化合物１、１７、１８、２２、２９、３０、３１、３２、３３、３５、３８、４３については特願平４−３０３１７７号明細書及び欧州特許公開第０５８１４２９号公報に、化合物２３、２４、２５、２６、２７、３６、３７については欧州特許公開第０５８１４２９号公報に、化合物５、７、８、４４については特願平５−３４６８７３号明細書にそれぞれ記載されている。なお、化合物５、７、８、４４の製造法については参考例として後述する。
【００２０】
式（１）で表される化合物の医薬として許容される塩としては、無毒の、医薬として許容される慣用の塩であり、例えばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、例えばカルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、例えばトリエチルアミン塩、Ｎ−ベンジル−Ｎ−メチルアミン塩等のアミン塩のような無機又は有機塩基との塩が挙げられる。
【００２１】
本発明において化学療法とは、例えば、細菌、ウイルス、真菌又は原生動物等に対し、抗生物質を投与することによって感染症の予防若しくは治療を行うこと、並びに癌細胞に対し制癌剤を投与することによって癌の予防若しくは治療を行うこと等を意味し、化学療法剤とはこれらの目的に使用される抗生物質、制癌剤等を意味する。
【００２２】
本発明の制癌剤の効果増強剤により、その効果が増強されうる制癌剤としては、後述のように式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩が、細胞内の制癌剤の濃度を上昇させうることから考えて、少なくとも細胞膜を通じて細胞内に輸送され効果を発揮する制癌剤であればよく、そのような制癌剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、アドリアマイシン、ダウノマイシン及びアクチノマイシンＤから選択される、抗生物質、抗癌剤、植物成分を含む天然物抗癌物質由来の制癌剤がある。
【００２３】
本発明の化学療法剤効果増強剤の耐性癌に対する制癌剤効果増強作用は、例えばヒト卵巣癌細胞のアドリアマイシン耐性株２７８０ＡＤ、又はヒト骨髄性白血病のアドリアマイシン耐性株Ｋ５６２／ＡＤＭを用い、その細胞内への制癌剤取り込み増強効果及び制癌剤の作用増強効果によって説明される。
【００２４】
本発明の制癌剤の効果増強剤は、式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩を外用、内服又は非経口投与に適した有機又は無機の担体若しくは賦形剤と混合して、例えば固体状、半固体状若しくは液状の医薬製剤の形で投与することができる。この医薬製剤は、錠剤、ペレット剤、カプセル剤、坐剤、液剤、懸濁液及びその他の適切な形で使用でき、例えば通常の無毒で、医薬として許容される担体と混合してもよい。使用しうる担体は、水、グルコース、ラクトース、アラビアゴム、ゼラチン、マンニトール、でんぷんペースト、ステアリン酸マグネシウム、タルク、コーンスターチ、ケラチン、コロイドシリカ、及び他の固体状、半固体状又は液状の製剤を製造するのに適した担体があり、更に、賦形剤、安定化剤、粘稠化剤、着色剤、香料を使用してもよい。式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩は、疾患の経過又は状態により、所望の効果を発揮するのに十分な量が医薬製剤中に含有される。
この医薬製剤をヒトに用いる場合は、非経口投与又は内服で使用することが望ましい。
本発明の制癌剤の効果増強剤を用いてヒト又は動物を治療する際には、公知の制癌剤と組合せて使用する。その際には、前記のようにして製剤化した本発明の制癌剤の効果増強剤と制癌剤とを同時に投与してもよいし、又は予め式（１）の化合物又はその医薬として許容される塩と制癌剤とを、例えば散剤、細粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤等に製剤化したものを投与してもよい。
【００２５】
本発明の制癌剤の効果増強剤として用いられる式（１）の化合物の用量は、年令、体重等の患者の状態、投与経路、病気の性質と程度等を考慮した上で、調整することが望ましいが、通常は、成人に対して有効成分量として、一日当り、１０〜２０００mgの範囲が一般的である。場合によっては、これ未満で足りるし、また逆にこれより以上の容量を必要とすることもある。多量に投与するときは、一日数回に分割して投与することが望ましい。
なお化合物１〜４４を各１００mg／kgずつマウスに腹腔内投与したが何ら毒性を示さない。
【００２６】
以下、化合物５、７、８、４４についてその製造例を参考例をもって示す。
参考例１    シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ）（化合物７）の合成
ａ）  Ｂｏｃ−D-ＭｅＡｌａ−ＯＨ（Ｂｏｃはｔ−ブトキシカルボニル基を示す）
Ｂｏｃ−D-Ａｌａ−ＯＨ（３．０ｇ、１５．９mmol）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、４８ml）溶液に、氷冷下、６０％水素化ナトリウム（１．９ｇ、４７．６mmol）を加え、１０分間かくはん後、ヨウ化メチル（７．９ml、１２７mmol）を加え、室温で２２時間かくはんした。減圧濃縮後、氷冷下、１０％クエン酸水溶液を加え酸性とした後、酢酸エチルで抽出した。これを飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量３．０７ｇ（収率９４．８％）。
【００２７】
ｂ）  Ｂｏｃ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（Ｐａｃはフェナシル基を示す）
Ｂｏｃ−D-ＭｅＡｌａ−ＯＨ（１．５０ｇ、７．３８mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．５３ｇ、５．６８mmol）の塩化メチレン（１２ml）溶液に、氷冷下ブロモ−トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン化物塩（ＰｙＢｒｏＰ、３．４４ｇ、７．３８mmol）、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ、３．９６ml、２２．７mmol）を加え、氷冷下３時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、クロロホルム、クロロホルム−メタノール１００：１により溶出）で精製した。更に、溶出液を減圧濃縮後、ヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．９０ｇ（収率７８．０％）。
【００２８】
ｃ）  ＨＣｌ・Ｈ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．７ｇ、４．０６mmol）に４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（３０ml）を加え、室温に４０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．３８ｇ（収率９５．８％）。
【００２９】
ｄ）  Ｂｏｃ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｐｈｅ−ＯＨ（１．２６ｇ、４．７６mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．３０ｇ、３．６６mmol）、の塩化メチレン（１０ml）溶液に、氷冷下、ＰｙＢｒｏＰ（２．２２ｇ、４．７６mmol）、ＤＩＥＡ（９２１μｌ、５．２９mmol）を加え、氷冷下２時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、トルエン−酢酸エチル３：１，１：１により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１．７６ｇ（収率８４．９％）。
【００３０】
ｅ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．７０ｇ、３．０１mmol）に４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（３０ml）を加え、室温に３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．６３ｇ（収率１００％）。
【００３１】
ｆ）  Ｂｏｃ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（８９８mg、３．８８mmol）の塩化メチレン（９ml）溶液に、氷冷下ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．４５ｇ、２．９９mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（１．８１ｇ、３．８８mmol）を加え、更にＤＩＥＡ（２．０８ml、１２．０mmol）を加え、氷冷下１６時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、トルエン−酢酸エチル２：１、１：１により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１．６７ｇ（収率８２．３％）。
【００３２】
ｇ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１．００ｇ、１．４７mmol）に４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１８．４ml）を加え、室温に５０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量８３８mg（収率９２．７％）。
【００３３】
ｈ）  Ｂｏｃ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（Ｂｚｌはベンジル基を示す）
Ｈ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ（３８．６mg、０．２６４mmol）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、０．５７ml）懸濁液に、氷冷下ビストリメチルシリルトリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ、０．５６ml、２．１１mmol）を加え、室温で１時間かくはんした。これに氷冷下、ジ−ｔ−ブチル−ジカーボナート（７２．８μｌ、０．３１７mmol）を加え、室温で１．５時間かくはんした。減圧濃縮後、１０％クエン酸水溶液を加え、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた油状物を酢酸エチル（０．５ml）に溶解し、氷冷下トリエチルアミン（５５．０μｌ、０．３９６mmol）、臭化ベンジル（６２．８μｌ、０．５２８mmol）を加え、氷冷下、５分間かくはん後、室温で４８時間かくはんした。減圧濃縮後、調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール１９：１で展開）により精製し、標記化合物を得た。収量６０．７mg（収率６８．１％）。
【００３４】
ｉ）  ＨＣｌ−Ｈ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ
Ｂｏｃ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（４７２mg、１．４０mmol）に５．５Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（２９．５ml）を加え、室温に１．５時間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、エーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量３６７mg（収率９５．７％）。
【００３５】
ｊ）  Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ
Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−ＯＨ・Ｈ2 Ｏ（１．３４ｇ、５．３９mmol）の塩化メチレン（１０ml）溶液に、氷冷下、ＨＣｌ・Ｈ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（９８１．１mg、３．５９mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（２．５２ｇ、５．３９mmol）を加え、更にＤＩＥＡ（２．５０ml、１４．４mmol）を加え、氷冷下１時間かくはん、更に室温で８時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル４０ｇ、トルエン−酢酸エチル３：１により溶出）で精製した。更に、溶出液を減圧濃縮後、ヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量１．０５ｇ（収率６５．２％）。
【００３６】
ｋ）  Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＢｚｌ（４３．５mg、９６．５μmol ）のメタノール（４０ml）溶液に、パラジウム−黒（４０mg）を加え、室温で水素ガスを５０分間吹込んだ。触媒をろ去後、減圧濃縮し、標記化合物を得た。収量３０．６mg（収率８７．９％）。
【００３７】
ｌ）  Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ（７４４mg、２．１５mmol）、２（Ｒ）−ヒドロキシ−３（Ｒ）−メチルペンタン酸フェナシルエステル（D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃ）（５８９mg、２．３６mmol）、４−ピロリジノピリジン（９５．６mg、０．６５mmol）をＴＨＦ（４．３ml）に溶解し、氷冷下、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、４８７mg、２．３６mmol）を加え、氷冷下１時間かくはん後、徐々に室温に戻して１８時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、不溶物をろ去した後、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル８０ｇ、トルエン−酢酸エチル５：１により溶出）で精製し、Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃを得た（収量１．００ｇ、収率７８．７％）。更に、中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｇ、トルエン−酢酸エチル１５：１、１０：１により溶出）で、ジアステレオマーを分離し、標記化合物を得た。収量３５７mg（収率５６．２％：Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ-DL-βＨＯＭｅＶａｌ−ＯＨ中の L-L体を基準にした）。
【００３８】
ｍ）  Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−ＯＰａｃ（２２０mg、０．３７mmol）を９０％酢酸水溶液（１８．５ml）に溶解し、氷冷下、超音波かくはんしながら亜鉛末（３．６０ｇ、５５．５mmol）を加え、氷冷下７．５時間超音波かくはんした。不溶物をろ去後、減圧濃縮した。これに１０％クエン酸水溶液を加えた後、酢酸エチルを抽出した。抽出物を飽和食塩水洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル１０ｇ、クロロホルム−メタノール−酢酸５０：１：０．５により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１３３mg（収率７３．７％）。
【００３９】
ｎ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（４．９４ｇ、２１．４mmol）のアセトン（５０ml）溶液に、氷冷下、トリエチルアミン（３．３０ml、２３．８mmol）、臭化フェナシル（４．７７ｇ、２４．０mmol）を加え、氷冷下１時間かくはん後、更に室温で２時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。これに５．５Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（７７．８ml、０．４２８mmol）を加え、室温に３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルより結晶化し、集めた結晶をエーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量６．０８ｇ（収率９９．３％）。
【００４０】
ｏ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ
ＨＣｌ・Ｈ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ（１．１２ｇ、４．１８mmol）を塩化メチレン（１０ml）に溶解し、氷冷下Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−ＯＨ（１．０６ｇ、４．５９mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（２．５７ｇ、５．４９mmol）、ＤＩＥＡ（２．６５ml、１５．２mmol）を加え、氷冷下３０分間かくはんし、更に室温で１７時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル８０ｇ、クロロホルムにより溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量７６４mg（収率３６．０％）。
【００４１】
ｐ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＰａｃ（６５７mg、１．４２mmol）を９０％酢酸水溶液（７０ml）に溶解し、氷冷下、超音波かくはんしながら亜鉛末（４．６４ｇ、７１．０mmol）を加え、氷冷下７．５時間超音波かくはんした。不溶物をろ去、減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣をヘキサンより結晶化し、ヘキサンで洗浄し、標記化合物を得た。収量３２５mg（収率６６．５％）。
【００４２】
ｑ）  Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−ＯＨ（６０．０mg、０．１２３mmol）の塩化メチレン（４００μｌ）溶液に、氷冷下、ＨＣｌ・Ｈ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１１４mg、０．１８４mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（７４．６mg、０．１６mmol）を加え、更にＤＩＥＡ（８６．０μｌ、０．４９１mmol）を加え、氷冷下２時間かくはん、更に室温で１３時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２０ｇ、トルエン−酢酸エチル２：１、３：２により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量９７．４mg（収率７５．５％）。
【００４３】
ｒ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（８５mg、８１．０μmol)に氷冷下、トリフルオロ酢酸（５００μｌ、６．４８mmol）を加え、氷冷下３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルを加え、氷冷下４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（４１μｌ、１６２μmol)を加え、室温に３０分間放置した。析出した結晶をエーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量５９．２mg（収率７４．２％）。
【００４４】
ｓ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（２９．０mg、８３．７μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（５５．０mg、５５．８μmol ）をＤＭＦ（２００μｌ）に溶解し、氷冷下、ＨＯＯＢｔ（１１．０mg、６７．０μmol ）を加え、更にＮ−エチル−Ｎ′−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＥＤＣ、１２．９μｌ、７２．５μmol ）を加え、氷冷下２時間かくはんした。室温で１７時間かくはん後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（ベンゼン−アセトン  ３：１展開、酢酸エチル抽出）で精製し、標記化合物を得た。収量６０．６mg（収率８５．１％）。
【００４５】
ｔ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（５０．０mg、３９．２μmol ）を９０％酢酸水溶液（２．０ml）に溶解し、氷冷下、亜鉛末（５１３mg、７．８４mmol）を加え、氷冷下１時間超音波かくはんした。不溶物をろ去後、減圧濃縮し、１０％クエン酸水溶液を加え、酢酸エチルを抽出した。抽出物を飽和食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、標記化合物を得た。収量４８．３mg。
【００４６】
ｕ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（４８．３mg、３９．２μmol)に氷冷下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、６０４μｌ、７．８４mmol）を加え、氷冷下３０分間放置した。減圧濃縮後、エーテルを加え、氷冷下４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（２９．５μｌ、１１８μmol)を加え、氷冷下３０分間放置した。析出した結晶をエーテルで洗浄し、標記化合物を得た。収量３３．３mg（収率７８．７％）。
【００４７】
ｖ）  シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−Ｐｒｏ）（化合物７）
ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（２３．０mg、２１．３μmol)、ＤＩＥＡ（７．４μｌ、４２．６μmol ）を塩化メチレン（１１ml）に溶解し、これをＰｙＢｒｏＰ（４９．４mg、１０６μmol ）、ＤＩＥＡ（１８．６μｌ、１０６μmol ）を塩化メチレン（１１ml）溶液に室温で４時間かけて滴下し、更に室温で２０時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール  １９：１展開、抽出）で精製し、標記化合物を得た。収量１２．１mg（収率５５．５％）。
【００４８】
標記化合物の理化学的性質を示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、２７０ＭＨｚ）：δ８．６２、７．９５、７．６７（計  ３Ｈ、ＮＨ）、７．３５〜７．１１（計  ５Ｈ、芳香族Ｈ）、５．７９、５．４４〜５．２２、４．９７、４．８８、４．７３〜４．５６、４．３０、４．０４、３．４４（計  １０Ｈ）、３．３３、３．３２、３．２０、２．８５（計  １２Ｈ、ＮＣＨ3 ）、１．０９〜０．７１（ＣＨ3 ）ほか。
【００４９】
参考例２    シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ）（化合物８）の合成
ａ）  Ｈ−L-Ｐｈｅ−L-ＭｅＰｈｅ−L-Ｐｒｏ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号４）
オーレオバシジンＡ（６．０ｇ、５．４５mmol）にドライアイス−メタノール浴冷却下、無水フッ化水素（２００ml）を導入後、室温で１．５時間かくはんした。減圧下、フッ化水素を留去した後、残渣をジオキサンで凍結乾燥した。これを高速液体クロマトグラフィー（カラム：Soken Pack C-18 ６０×５００mm、５０−１００％アセトニトリル／０．０５％ aq.ＴＦＡで溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１．８１ｇ（収率２９．７％）。
【００５０】
ｂ）  Ｚ−L-Ｐｈｅ−L-ＭｅＰｈｅ−L-Ｐｒｏ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号５、Ｚはベンジルオキシカルボニル基を示す）
Ｈ−L-Ｐｈｅ−L-ＭｅＰｈｅ−L-Ｐｒｏ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号４、２００mg、０．１７９mmol）のＤＭＦ（３．６ml）懸濁液に氷冷下、トリエチルアミン（５０．２μｌ、０．３５８mmol）、ベンジルオキシカルボニルスクシンイミド（５３．５mg、０．２１５mmol）を加え、氷冷下、１．５時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、不溶物をろ去した後、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を中圧シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム−メタノール−酢酸
１００：２：２により溶出）で精製し、標記化合物を得た。収量１８３mg（収率８１．５％）。
【００５１】
ｃ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号６）
Ｚ−L-Ｐｈｅ−L-ＭｅＰｈｅ−L-Ｐｒｏ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号５、１００mg、７９．８mmol）のエタノール（１０ml）溶液を５０mMカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（８９ml）に加えた。３０℃，１０分間静置した後、プロリルエンドペプチダーゼ（６００単位、生化学工業社製）を溶解した５０mMカリウム−リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）（１．２ml）を加え、かくはんした後、不溶物を遠心（７０００r.p.m 、１０分）して除去し、上清を減圧濃縮した。残渣を高速液体クロマトグラフィー〔カラム：ＹＭＣ  C-18  ＯＤＳ、（株）山村化学研究所製、３０〜９０％アセトニトリル／０．０５％  aq. ＴＦＡで溶出〕で精製し、標記化合物を得た。収量５９．１mg（収率１００％）。
【００５２】
ｄ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列表の配列番号７）
ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号６、５７．７mg、８１．０μmol ）のジオキサン／水（２：１）溶液にトリエチルアミン（１４．６μｌ、１０５μmol ）、ジ−ｔ−ブチル−ジカーボナート（２４．０μｌ、１０５μmol ）を加え、室温で３．５時間かくはんした。減圧濃縮後、酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液、飽和食塩水で順次洗浄した。硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、残渣を調製用シリカゲル薄層クロマトグラフィー〔クロロホルム−メタノール−酢酸  １００：１：２展開、クロロホルム−メタノール  １０：１抽出）で精製し、標記化合物を得た。収量５１．２mg（収率７７．８％）。
【００５３】
ｅ）  Ｂｏｃ−D-ＭｅＶａｌ−ＯＨ
Ｂｏｃ−D-Ｖａｌ−ＯＨ（２．０ｇ、９．２１mmol）、６０％水素化ナトリウム（１．１ｇ、２７．６mmol）、ヨウ化メチル（６．５８ml、１０５．７mmol）を用い参考例１−ａ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１．５４ｇ（収率７２．５％）。
【００５４】
ｆ）  Ｂｏｃ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−D-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（３００mg、１．３０mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（２９１mg、１．０８mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（６０６mg、１．３０mmol）、ＤＩＥＡ（７５３μｌ、４．３２mmol）を用い参考例１−ｂ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３７２mg（収率７７．２％）。
【００５５】
ｇ）  ＨＣｌ・Ｈ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３５０mg、０．７８４mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（５．８８ml）を用い参考例１−ｃ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量２９２mg（収率９７．３％）。
【００５６】
ｈ）  Ｂｏｃ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｐｈｅ−ＯＨ（１８０mg、０．６７９mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（２００mg、０．５２２mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（３１７mg、０．６７９mmol）、ＤＩＥＡ（３６４μｌ、２．０９mmol）を用い参考例１−ｄ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量２８１mg（収率９０．７％）。
【００５７】
ｉ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１９０mg、０．３２０mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（４．２ml）を用い参考例１−ｅ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１６９mg（収率９９．４％）。
【００５８】
ｊ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号７、３５．０mg、４３．１μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３４．２mg、６４．６μmol ）、３−ヒドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯｂｔ、８．７mg、６４．６μmol ）、ＥＤＣ（１１．４μｌ、６４．６μmol ）を用い参考例１−ｓ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３４．６mg（収率６２．３％）。
【００５９】
ｋ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３１．０mg、２４．１μmol ）、９０％酢酸水溶液（１．２ml）、亜鉛末（３１３mg、４．８２mmol）を用い参考例１−ｔ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３０．０mg。
【００６０】
ｌ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（３０．０mg、２５．７μmol ）、ＴＦＡ（３９６μｌ、５．１４mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１２．９μｌ、５１．４μmol ）を用い参考例１−ｕ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１９．６mg（収率７３．６％）。
【００６１】
ｍ）  シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ）（化合物８）
ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｈｅ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（１５．０mg、１３．６μmol ）、ＤＩＥＡ（４．７μｌ、２７．２μmol ）の塩化メチレン（６．８ml) 溶液、ＰｙＢｒｏＰ（３１．７mg、６７．９μmol ）、ＤＩＥＡ（１１．８μｌ、６７．９μmol ）の塩化メチレン（６．８ml）溶液を用い参考例１−ｖ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量５．０mg（収率３５．０％）。
【００６２】
標記化合物の理化学的性質を示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、２７０ＭＨｚ）：δ８．７８、８．１０、７．４８（計  ３Ｈ、ＮＨ）、７．３５〜７．０９（計  ５Ｈ、芳香族Ｈ）、５．７８、５．３９、５．２０、４．９８〜４．９４、４．８０、４．５３、４．３７〜４．３１、４．１３、３．４５（計  １０Ｈ）、３．３３、３．２２、２．７８（計  １２Ｈ、ＮＣＨ3 ）、１．１１〜０．７０（ＣＨ3 ）ほか。
【００６３】
参考例３    シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−Ｐｒｏ）（化合物５）の合成
ａ）  Ｂｏｃ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｃｈａ−ＯＨ（１３７mg、０．５０７mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１５０mg、０．４２３mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（２３６mg、０．５０７mmol）、ＤＩＥＡ（２５８μｌ、１．４８mmol）を用い参考例１−ｄ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１９８mg（収率８２．１％）。
【００６４】
ｂ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｃｈａ−L-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１８０mg、０．３１５mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（３．１５ml）を用い参考例１−ｅ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１４８mg（収率９３．１％）。
【００６５】
ｃ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
参考例２−ａ）〜ｄ）記載の方法で調製したＢｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号７、３５．０mg、４３．１μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＶａｌ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３２．８mg、６４．６μmol ）、ＨＯＯｂｔ（８．７mg、６４．６μmol ）、ＥＤＣ（１１．４μｌ、６４．６μmol ）を用い参考例１−ｓ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４８．６mg（収率８９．２％）。
【００６６】
ｄ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−L-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（４５．４mg、３５．８μmol ）、９０％酢酸水溶液（１．６ml) 、亜鉛末（４６６mg、７．１６mmol）を用い参考例１−ｔ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４６．０mg。
【００６７】
ｅ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−L-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（４２．５mg、３７．０μmol ）、ＴＦＡ（５７０μｌ、７．４０mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１８．５μｌ、７４．０μmol ）を用い参考例１−ｕ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３１．７mg（収率９０．３％）。
【００６８】
ｆ）  シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−L-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ）（化合物５）
ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｃｈａ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（２５．０mg、２１．１μmol ）、ＤＩＥＡ（７．３μｌ、４２．２μmol ）の塩化メチレン（１０．６ml）溶液、ＰｙＢｒｏＰ（４９．２mg、１０５．５μmol ）、ＤＩＥＡ（１８．４μｌ、１０５．５μmol ）の塩化メチレン（１０．６ml）溶液を用い参考例１−ｖ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量６．８mg（収率２８．６％）。
【００６９】
標記化合物の理化学的性質を示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、２７０ＭＨｚ）：δ８．６２、８．５５、７．９２、７．８７、７．７５（計  ３Ｈ、ＮＨ）、５．８２、５．４４〜５．２０、５．０２〜４．８６、４．６７、４．５６、４．２０、４．０３、３．３７（計１０Ｈ）、３．２９、３．２８、３．２７、３．２５、３．２４（計  １２Ｈ、ＮＣＨ3 ）、１．０３〜０．７６（ＣＨ3 ）ほか。
【００７０】
参考例４    シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ）（化合物４４）の合成
ａ）  Ｂｏｃ−L-ｐＦＰｈｅ−D ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ｐＦＰｈｅ−ＯＨ（１００mg、０．３５３mmol）、ＨＣｌ・Ｈ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１０５mg、０．２９４mmol）、ＰｙＢｒｏＰ（１６５mg、０．３５３mmol）、ＤＩＥＡ（１７９μｌ、１．０３mmol）を用い参考例１−ｄ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１５３mg（収率８９．２％）。
【００７１】
ｂ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
Ｂｏｃ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（１４０mg、０．２４０mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（２．４ml）を用い参考例１−ｅ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量１２０mg（収率９６．８％）。
【００７２】
ｃ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ
参考例２−ａ）〜ｄ）記載の方法で調製したＢｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−ＯＨ（配列番号７、３５．０mg、４３．１μmol ）、ＨＣｌ・Ｈ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（３３．６mg、６４．６μmol ）、ＨＯＯｂｔ（８．７mg、６４．６μmol ）、ＥＤＣ（１１．４μｌ、６４．６μmol ）を用い参考例１−ｓ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４８．８mg（収率８８．７％）。
【００７３】
ｄ）  Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−L-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−L-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＰａｃ（４５．３mg、３５．４μmol ）、９０％酢酸水溶液（１．７ml) 、亜鉛末（９２０mg、１４．１mmol）を用い参考例１−ｔ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量４７．２mg。
【００７４】
ｅ）  ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ
Ｂｏｃ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（４４．０mg、３７．９μmol ）、ＴＦＡ（５８４μｌ、７．５８mmol）、４．０Ｎ塩化水素／ジオキサン溶液（１８．９μｌ、７５．８μmol ）を用い参考例１−ｕ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量３４．９mg（収率９６．１％）。
【００７５】
ｆ）  シクロ（L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ）（化合物４４）
ＨＣｌ・Ｈ−L-ａＩｌｅ−L-ＭｅＶａｌ−L-Ｌｅｕ−L-βＨＯＭｅＶａｌ−D-Ｈｍｐ−L-ＭｅＶａｌ−L-ｐＦＰｈｅ−D-ＭｅＡｌａ−L-Ｐｒｏ−ＯＨ（２８．０mg、２５．５μmol ）、ＤＩＥＡ（８．９μｌ、５１．１μmol ）の塩化メチレン（１２．８ml）溶液、ＰｙＢｒｏＰ（５９．４mg、１２８μmol ）、ＤＩＥＡ（２２．２μｌ、１２８μmol ）の塩化メチレン（１２．８ml）溶液を用い参考例１−ｖ）と同様の操作を行い、標記化合物を得た。収量７．９４mg（収率２９．８％）。
【００７６】
標記化合物の理化学的性質を示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 、２７０ＭＨｚ）：δ８．６５、７．９８、７．６６（計  ３Ｈ、ＮＨ）、７．０９〜７．０５（計  ４Ｈ、芳香族Ｈ）、５．８４、５．３１、５．１９、４．９７、４．８８、４．７３〜４．５７、４．１７、４．０４、３．４４（計  １０Ｈ）、３．３３、３．３２、３．１９、２．９４（計  １２Ｈ、ＮＣＨ3 ）、１．０７〜０．７３（ＣＨ3 ）ほか。
【００７７】
参考例１〜４で得られた化合物の理化学的性質を表４及び表５に示す。
【００７８】
【表４】
0003874372.tif 000010
【００７９】
【表５】
0003874372.tif 000011
【００８０】
* アミノ酸分析は、日本電子（株）製ＪＣＬ−３００を用いて、ニンヒドリン反応により検出した。
【００８１】
参考例１〜４で得られた化合物の真菌類に対する最小生育阻止濃度（ＭＩＣ、μｇ／ml）を後記表６に示す。測定はサブローデキストロース寒天培地（グルコース２％、ポリペプトン１％、寒天１．５％、以上の濃度はすべてＷ／Ｖ）を用いた寒天平板希釈法（３０℃、２日間培養）により行い、ＭＩＣを求めた。なお、対照として化合物１、オーレオバシジンＡ（ＡｂＡ）を用いた。
【００８２】
化合物５、７、８、４４は、３．１２〜１２．５μｇ／mlの濃度でアスペルギルスに対して活性を示した。特に、化合物５は、アスペルギルスに対し３．１２μｇ／mlの低濃度で活性を示し、更に、クリプトコッカスに対しても強い抗真菌活性を示し、オーレオバシジンＡより強い活性を示した。
【００８３】
【表６】
0003874372.tif 000012
【００８４】
以上、参考例１〜４で得られた化合物は、カンジダばかりでなく、クリプトコッカス及び／又はアスペルギルスに対しても優れた活性を示し、抗真菌剤として有用性が高い。
【００８５】
【実施例】
以下、実施例により本発明を説明するが、本発明はこれら実施例に限定されない。
【００８６】
実施例１    薬剤耐性癌細胞内への制癌剤取り込み増強効果
本発明の効果を示すため、式（１）の化合物の代表例について、薬剤耐性癌細胞に対する制癌剤ビンクリスチンの取り込み増強作用を検討した。
ヒト卵巣癌細胞Ａ２７８０のアドリアマイシン耐性株２７８０ＡＤ〔Ａ．Ｍ．ローガン（Rogan)ら、サイエンス（Science)、第２２４巻、第９９４〜９９６頁（１９８４）〕を５％牛胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液中に１×１０6 個／mlを懸濁し、直径１６mm、２４穴のマルチウエル培養プレートに１穴当り１mlの癌細胞懸濁液を入れ、５％ＣＯ2 、３７℃で培養した。２４時間後に培養液を２０nM 3Ｈ−ビンクリスチン（６Ci/mmol)、５％牛胎児血清、１０mMヘペス緩衝液を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液０．５mlと交換した。ジメチルスルホキシドに溶解後、生理リン酸緩衝液で希釈した被験化合物を５μｌ加え（反応液中の濃度は１．０又は１０．０μｇ／ml）、５％ＣＯ2 、３７℃で２時間培養を続けた後、氷冷した生理リン酸緩衝液で細胞を洗浄した。これに０．５mlの０．２Ｎ  ＮａＯＨを加え、バイアルに移し、５６℃で３０〜６０分間温浴し、細胞を溶解させた。水溶液シンチレーター（ＡＣＳII、アマーシャム社製）を４ml加え、液体シンチレーションカウンターで細胞内に取り込まれた 3Ｈ−ビンクリスチンの量を測定した。
効果は薬物無処理の対照群に取り込まれた 3Ｈ−ビンクリスチンの量を１００として、薬物処理群に取り込まれた 3Ｈ−ビンクリスチンの量を百分率（％）で表した。結果を表７に示す。
【００８７】
【表７】
0003874372.tif 000013
【００８８】
実施例２
界面活性剤ＨＣＯ−５０の１ｇを６５℃に加熱して溶融させ、これに化合物１を１ｇ及びポリエチレングリコール４０００を１０ｇ加えて溶融させる。充分混合後、室温にて凝固させ顆粒剤となるように調製する。
【００８９】
【発明の効果】
以上説明したとおり、本発明の制癌剤の効果増強剤により細胞内の制癌剤の濃度を増加させることができる。また、耐性細胞の感受性を増強させることが判明した。したがって、本発明化合物は、制癌剤に対して低感受性の癌細胞や、制癌剤に対して耐性を獲得した癌細胞に対して有効であり、制癌剤の使用量を減少させる手段としても有用であり、その結果、制癌剤が有する毒性等の副作用を低減させることができる。
【００９０】
【配列表】
【００９１】
0003874372.tif 000014
0003874372.tif 000015
0003874372.tif 000016
0003874372.tif 000017
0003874372.tif 000018
【００９２】
0003874372.tif 000019
【００９３】
0003874372.tif 000020
【００９４】
0003874372.tif 000021
【００９５】
0003874372.tif 000022
【００９６】
0003874372.tif 000023
【００９７】
0003874372.tif 000024