(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
水を吸収して膨潤した大豆を摩砕した後、水性抽出溶媒中で加熱抽出処理および加熱殺菌処理をしてダイズエキスを製造する方法において、
前記加熱抽出処理が、ｐＨ１．０〜１２．０の水性抽出溶媒中で、大豆エキス中に含まれるトリプシン阻害作用を有するタンパク質を失活性させない、温度６０〜１００℃、０．１〜６０分間の範囲内で行われ、
前記加熱抽出処理後の加熱殺菌処理が、大豆エキスをｐＨ１．０〜２．０およびｐＨ１１．０〜１２．０の何れかに調節した後に、大豆エキス中に含まれるトリプシン阻害作用を有するタンパク質を失活性させず、かつ実質的に当該大豆エキスを無菌とする、温度６０〜１００℃、０．１〜６０分間の範囲内で行われることを特徴とする、大豆エキスの製造方法。
【請求項２】
水を吸収して膨潤した大豆を摩砕した後、ｐＨ１．０〜２．０およびｐＨ１１．０〜１２．０の何れかの水性抽出溶媒中で、大豆エキス中に含まれるトリプシン阻害作用を有するタンパク質を失活性させない、温度６０〜１００℃、０．１〜６０分間の範囲内で行われる加熱抽出処理を含むことを特徴とする、大豆エキスの製造方法。
【請求項３】
前記水性抽出溶媒または大豆エキスのｐＨ値が、塩酸、ホウ酸、クエン酸、酢酸、酪酸、酒石酸、リンゴ酸、リン酸、フタル酸、無水酢酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミンおよび安息香酸から選択される少なくとも１種の酸性化合物を添加して酸性に調節されることを特徴とする、請求項１または２に記載の大豆エキスの製造方法。
【請求項４】
前記水性抽出溶媒または大豆エキスのｐＨ値が、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、アンモニア、トリエタノールアミン、リジン、アルギニンおよびヒスチジンから選択される少なくとも１種の塩基性化合物を添加して塩基性に調節されることを特徴とする、請求項１または２に記載の大豆エキスの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の技術分野】
本発明は、水性抽出溶媒に大豆中の可溶成分を抽出して大豆エキスを製造するに際して、この可溶成分に含まれたトリプシンの活性阻害作用を有するタンパク質の活性を失活させない大豆エキスの製造方法に関する。
【０００２】
【発明の技術的背景】
おむつを使用している乳幼児あるいは老人は、排泄物が長い間にわたって皮膚に接触しており、これによって肛門部および陰部周辺にかぶれ、ただれ、かゆみ等の症状、所謂おむつかぶれとなっている人が少なくない。おむつかぶれは、糞便自体の皮膚への直接的刺激、あるいは雑菌の繁殖等が原因となっており、患部の清浄化がその治療および予防に有効である。
【０００３】
患部の清浄化は、水を用いた洗浄が面倒であるため、アルコールあるいは界面活性剤等を含む様々な清浄剤をエアゾール状およびオイル状として患部に塗布し、あるいはティッシュ等に浸込ませて拭き取ることで行なわれている。しかしながら、これら従来の清浄剤は、洗浄力は優れているものの、刺激が強く、これ自体がかぶれの原因とならないよう注意が必要であった。したがって、おむつかぶれの原因を有効に除去でき、かつ患部あるいは患部となる肛門および陰部周辺への刺激が少ない洗浄剤の開発が要請されていた。
【０００４】
ところで、おむつかぶれの一因である糞便自体の刺激が、糞便に残存する腸内のタンパク質分解酵素、特にトリプシン様のタンパク質分解活性を有するプロテアーゼ（以下トリプシン様プロテアーゼと記す）によるものであることが最近の研究によって分かってきた。このトリプシン様プロテアーゼの活性を低下させることは、おむつかぶれを予防あるいは治療する上で非常に有効な手段となり得る。
【０００５】
また、近年、大豆には、トリプシンの活性阻害作用を有するタンパク質（以下ＳｂＩと記すこともある）が含まれていることが分かった（Rosmarie Vogel et al., Natuerliche Proteinasen-Inhibitoren (1966), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 参照）。
【０００６】
大豆は、昔から、その食用価値を有効に生かすために大豆エキスに加工され、これをそのまま、あるいは凝固させて豆腐等として食されてきた。このような大豆エキスは、具体的には、大豆を水に付けて膨潤させ、磨砕し、大量の水で加熱した後にろ過して製造される。また、得られた大豆エキスをそのまま飲料として用いる場合には、別途殺菌処理し、腐敗を防止するのが一般的である。
【０００７】
このような大豆エキスには、大豆中のタンパク質の大部分、ミネラルおよびビタミン等が抽出されており、かつ皮膚に対する刺激が少なく、したがってＳｂＩを含みかつ上記活性阻害作用を有すれば、おむつかぶれの治療および予防用の医薬部外品、例えば清浄剤の活性成分として有効であろうと本発明者等は考察した。しかしながら、従来法によって製造された大豆エキスは、トリプシンの活性阻害作用が著しく低く、おむつかぶれの原因となる糞便自体の刺激の除去という観点からは特に有効ではないことが判明した。
【０００８】
本発明者等は、このような従来技術の問題点を解決し、トリプシンの活性阻害作用を有する大豆エキスを製造すべく鋭意検討・研究した結果、従来の大豆エキス中にもＳｂＩは抽出されているものの、従来法の過酷な抽出条件または抽出後の加熱殺菌条件によって、ＳｂＩが変性されて失活するため大豆エキスにトリプシン活性阻害作用がなくなるとの知見を得、本発明を完成した。
【０００９】
【発明の目的】
本発明は、このような従来技術に伴う問題点を解決するためになされたものであり、皮膚に対する刺激が少なく、かつＳｂＩによるトリプシンの活性阻害作用を有する大豆エキスを容易かつ大量に製造できる大豆エキスの製造方法を提供することを目的としている。
【００１０】
【発明の概要】
本発明に係る大豆エキスの製造方法は、水を吸収して膨潤した大豆を磨砕した後、水性溶媒中で加熱抽出処理して大豆エキスを製造する方法において、
前記加熱抽出処理が、ｐＨ１．０〜１２．０の水性抽出溶媒中で、大豆エキス中に含まれるトリプシン阻害作用を有するタンパク質を失活性させない温度にて行なわれ、所望により
前記加熱抽出処理後の加熱殺菌処理が、大豆エキスをｐＨ１．０〜２．０およびｐＨ１１．０〜１２．０の何れかに調節した後に、大豆エキス中に含まれるトリプシン阻害作用を有するタンパク質を失活性させず、かつ実質的に大豆エキスを無菌とする温度にて行なわれることを特徴とする。
【００１１】
本発明では、前記水性抽出溶媒は、水をそのまま用いた略中性であってもよいが、例えば、水に有機酸および無機酸から選択される少なくとも１種の酸性化合物を添加して、上記ｐＨ範囲における酸性とすることができる。また、水性抽出溶媒は、水に塩基性有機および無機化合物から選択される少なくとも１種の塩基性化合物を添加して、上記ｐＨ範囲における塩基性としてもよい。
【００１２】
酸性化合物としては、具体的には、塩酸、ほう酸などの無機酸、クエン酸、酢酸、酪酸、酒石酸、リンゴ酸、リン酸、フタル酸、無水酢酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、安息香酸などの有機酸等を例示できる。
【００１３】
また、塩基性化合物としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、リン酸二水素ナトリウムなどの塩基性無機化合物、アンモニア、トリエタノールアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジンなどの塩基性有機化合物を例示することができる。
【００１４】
また、前記加熱抽出処理を行なう場合には、前記大豆エキスは、適宜上記酸性化合物あるいは塩基性化合物を用いて、酸性あるいは塩基性に調節される。この際、加熱抽出処理は、ｐＨ３．０〜ｐＨ１２．０の水性抽出溶媒中で行なってもよい。
【００１５】
また、本発明では、加熱殺菌処理は、温度６０〜１００℃、好ましくは煮沸温度にて、０．１〜６０分間行なわれることが望ましい。さらに本発明に係る大豆エキスの製造方法では、加熱抽出処理は、ｐＨ１．０〜２．０またはｐＨ１１．０〜１２．０の何れかで行なってもよく、このような場合には、加熱殺菌処理を行わなくてもよい。また、この際、加熱抽出処理は、温度６０〜１００℃、好ましくは煮沸温度で行なわれることが望ましい。
【００１６】
【発明の具体的説明】
以下、本発明に係る大豆エキスの製造方法をさらに具体的に説明する。
本発明に係る大豆エキスの製造方法では、水を吸収して膨潤した大豆を、特定のｐＨ値に調節した水性抽出溶媒中で加熱抽出処理して大豆エキスを得、所望により、これを殺菌が可能な特定のｐＨ値に調製して加熱殺菌処理している。
【００１７】
以下、本発明の加熱抽出処理および加熱殺菌処理について、さらに詳細に説明する。
本発明の加熱抽出処理において、抽出原料として用いられる大豆は、水を吸収して膨潤したものであり、その抽出効率を向上させるために、石うすあるいは粉砕機を用い、水を加えながら磨砕されることが望ましい。
【００１８】
このようにして得られた大豆原料は、ｐＨ１．０〜ｐＨ１２．０、好ましくはｐＨ１．０〜２．０またはｐＨ１１．０〜１２．０に調節した水性抽出溶媒を用い、加熱抽出される。
【００１９】
このようなｐＨ範囲の水性抽出溶媒中で、大豆原料を加熱することにより、大豆に含まれるトリプシンの活性阻害作用を有するタンパク質（以下ＳｂＩと記す）を失活させることなく、他の可溶成分とともに抽出溶媒中に抽出することができる。
【００２０】
また、特に、ｐＨ１．０〜２．０、またはｐＨ１１．０〜１２．０の水性抽出溶媒を用いた場合には、該溶媒の殺菌作用により、得られた大豆エキスを実質的に無菌とすることができるため、加熱殺菌処理を行わなくてもよいという利点がある。さらに、ＳｂＩは、それが溶解する溶液がｐＨ１．０〜２．０であると、加熱によって特に変性し難くなり、したがってより高温にて長時間加熱できるようになる。
【００２１】
本発明で用いられる水性抽出溶媒は、水に適当な酸あるいは塩基を加えて、上記範囲の酸性あるいは塩基性に調節することができる。
例えば、酸性の水性抽出溶媒は、塩酸、ほう酸などの無機酸、およびクエン酸、酢酸、酪酸、酒石酸、リンゴ酸、リン酸、フタル酸、無水酢酸、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、安息香酸などの有機酸等の酸性化合物を水に加えて調製できる。なお、本発明に適用される酸性化合物は、ＳｂＩを変性させにくく、かつヒト皮膚に対する刺激性を有さないことが望ましい。したがって、このような観点から、例えば硝酸、硫酸、石炭酸、デヒドロ酢酸、ソルビン酸およびプロピオン酸などは、その使用を控えることが望ましい。
【００２２】
また、塩基性の水性抽出性溶媒は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、リン酸二水素ナトリウム、アンモニアなどの塩基性無機化合物、トリエタノールアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジンなどの塩基性有機化合物等の塩基性化合物を水に加えて調製できる。また、本発明に適用される塩基性化合物は、ＳｂＩを変性させにくく、かつヒト皮膚に対する刺激性を有さないことが望ましい。したがって、このような観点から、例えば次亜塩素酸塩、塩化イソシアヌル酸塩、クロラミンＴ、晒粉などは、その使用を控えることが望ましい。
【００２３】
これら酸性化合物および塩基性化合物は、各々単独で用いても、組み合わせて用いてもよく、かつその調製すべきｐＨによって、その添加量を適宜選択して用いられる。
【００２４】
このような水性抽出溶媒は、原料を均一に加熱でき、トプシン活性阻害作用を有する適度な粘性の大豆エキスが得られれば特にその使用量を特に限定されないが、通常、磨砕された大豆原料１００重量部に対して、５０〜１００００重量部、好ましくは１００〜１０００重量部の量で用いられる。
【００２５】
以上説明した水性抽出溶媒を用いる本発明の加熱抽出処理は、ＳｂＩが失活しない温度および時間で行なえばよく、具体的には６０〜１００℃、好ましくは煮沸温度で、通常０．１〜６０分間、好ましくは１〜３０分間行なうことが望ましい。
【００２６】
このような加熱抽出処理で得られた大豆エキスは、これを含む混合物としてそのまま、或いはろ過によって分離した後に、次の加熱殺菌処理を施される。なお、上述したように、加熱抽出処理をｐＨ１．０〜２．０またはｐＨ１１．０〜１２．０のいずれかで行なった場合には、加熱殺菌処理は行わなくてもよく、ろ過後、適宜ｐＨを調節、例えば略中性に調節して製品とすることができる。
【００２７】
本発明における加熱殺菌処理は、ＳｂＩを失活させずに、大豆エキスを殺菌し、実質的に無菌とする条件で行なう。このような加熱殺菌処理では、得られた大豆エキスを、ｐＨ１．０〜２．０またはｐＨ１１．０〜１２．０として行なわれる。
【００２８】
大豆エキスのｐＨの調節は、水性抽出溶媒の調製に用いた上記酸性化合物または塩基性化合物を添加して行うことができる。
このような加熱殺菌処理は、６０〜１００℃、好ましくは煮沸温度で、０．１〜６０分間、好ましくは１〜３０分間行なわれる。
【００２９】
このようにして得られた大豆エキスは、所望によりろ過した後、適宜ｐＨを調節、例えば略中性に調節して製品とされる。
以上説明した本発明に係る大豆エキスの製造方法によれば、ＳｂＩによるトリプシンの活性阻害作用を有し、かつ実質的に無菌である大豆エキスを容易かつ大量に製造することができる。
【００３０】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明に係る大豆エキスの製造方法によれば、トリプシンの活性阻害作用を有する大豆エキスを、容易かつ大量に製造することができる。このようなトリプシン活性阻害作用を有する大豆タンパク質は、皮膚に対する刺激が少ないため、トリプシンのタンパク質分解活性による刺激に起因する皮膚疾患、例えばおむつかぶれの予防あるいは治療するための医薬部外品に有利に用いることができる。
【００３１】
【実施例】
以下、本発明に係る大豆エキスの製造方法を、実施例に基づき更に具体的に説明する。
【００３２】
【実施例１】
大豆エキスの製造
大豆を、２４時間、室温にて水に浸漬して吸水させ、粉砕機を用い、水を加えながら磨砕して大豆原料を調製した。
【００３３】
この大豆原料１０００ｇ（乾燥重量：３６５ｇ）を、２リットルの抽出溶媒としての水に投入し、攪拌しながら、温度１００℃にて１０分間抽出した。
この加熱抽出処理で得れた混合物をろ過して、約２リットルの粗製大豆エキスを得た。
【００３４】
得られた大豆エキスを１００ｍｌ毎に分けて複数のサンプルを作り、１１のグループ１〜１１に分けた。これらの内のグループ１〜４は、塩酸を添加する量を変えて、各々ｐＨ１．０、ｐＨ２．０、ｐＨ３．０およびｐＨ６．０とした。
【００３５】
また、サンプルの内のグループ５は、何も加えずにｐＨ７．０とし、グループ６〜１１は、水酸化ナトリウムを添加する量を変えて、各々ｐＨ８．０、ｐＨ１０．０、ｐＨ１１．０、ｐＨ１２．０、ｐＨ１３．０およびｐＨ１３．７とした。
【００３６】
各グループ１〜１１のサンプルを、煮沸温度（１００℃）にて、５分間加熱殺菌処理した。
各グループ１〜１１のサンプルを、適宜塩酸、水酸化ナトリウムまたはトリエタノールアミンの添加によってｐＨ７．８に調節した後、トリプシンによるタンパク質分解活性の阻害能力、および殺菌状態に関して、以下の方法でアッセイした。
大豆エキスによるタンパク質分解活性の阻害
０．００１Ｎ塩酸中に濃度１μｇ／ｍｌの量でトリプシンを含む酵素溶液を調製した。
【００３７】
この酵素溶液０．２ｍｌに、トリエタノールアミン緩衝液（ｐＨ７．８）１．６ｍｌおよびベンゾイル−Ｌ−アルギニン−Ｐ−ニトロアニリド（BAPA）水溶液（濃度１μｇ／ｍｌ）１ｍｌと、サンプル１〜９の何れかから分取した液０．２ｍｌとを加え、緩やかに震盪しながら温度３７℃にて１０分間インキュベートした後、３０％酢酸水溶液を１ｍｌ加えて試験溶液とした。
【００３８】
得られた試験溶液の、波長４０５ｎｍでの吸光度を測定した。得られた結果を表１に示す。
また、酵素溶液に、上述のトリエタノールアミン緩衝液１．６ｍｌおよびBAPA水溶液１ｍｌと、蒸留水０．２ｍｌとを加えた対照サンプルを調製し、上記実験サンプル１〜１１と同様にしてインキュベートし、波長４０５ｎｍでの吸光度を測定したところ１．７５８であった。得られた吸光度値を、トリプシンの酵素活性１００％の値とし、各サンプルのトリプシン活性阻害率（％）を以下の式で算出した。得られた結果を表１に示す。
【００３９】
【数１】
0003945544.tif 000002
【００４０】
殺菌状態
寒天に、肉エキスおよびペプトンを加え、直径９０ｍｍのシャーレに導入して細菌用培地を調製した。また、寒天に、ブトウ等およびペプトンを加え、直径９０ｍｍのシャーレに導入して真菌用培地を調製した。
【００４１】
実験サンプル１〜９から、０．１ｍｌの液を分取し、上記培地の表面に接種した。そして、細菌用培地は温度３７℃で４８時間、真菌用培地は温度２５℃で７日間培養した。
【００４２】
各々の培地を観察し、細菌或いは真菌が繁殖したかどうかを判定した。得られた結果を表１に示す。
【００４３】
【表１】
0003945544.tif 000003