(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−ヘプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイドである新規ジアリルヘプタノイド系化合物。
【請求項２】
（３Ｓ），（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−ヘプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイドである請求項１記載の化合物。
【請求項３】
（３Ｒ），（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−ヘプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイドである請求項１記載の化合物。
【請求項４】
請求項２記載の化合物と請求項３記載の化合物との混合物である請求項１記載の化合物。
【請求項５】
カバノキ科に属する植物から抽出、精製することを特徴とする請求項１記載の化合物の製造方法
【請求項６】
請求項１記載の化合物を配合した化粧品。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なジアリルヘプタノイド系化合物およびその製造方法に関するものであり、該化合物は、飲食品、化粧品、医薬品等に配合でき、優れた細胞増殖作用および抗酸化作用を呈する。
【０００２】
【従来の技術】
老化皮膚においては表皮および真皮の細胞活性の低下が見られ、そのため角質層の機能低下による乾燥肌や、真皮線維芽細胞の機能低下による弾力性の無い肌になる。このような老化皮膚の活性を回復させるために、細胞賦活剤、細胞増殖剤の探索がおこなわれている。しかしながら、例えばビタミン類やプラセンタ・エキスのような細胞賦活作用を持つ成分を化粧品に配合する試みがなされてきたものの、シワの発生や肌荒れを十分に抑える事はできなかった。
【０００３】
また、生体内で生成する活性酸素は、通常、カタラーゼやスーパーオキサイドジスムターゼのような酵素により消去されているが、このような働きが不十分だったり、活性酸素が過剰に存在すると様々な組織障害が起こる。活性酸素が過剰に存在するとこれにともない過酸化脂質の生成がおこり、メラニン色素の生成、シミ、シワ等の障害をおこしやすい。さらに皮膚は、紫外線など外的環境因子の刺激による酸化傷害を直接受けやすく、皮膚表面に存在する皮脂等の脂質の過酸化が特に起こりやすい器官である。また、化粧品、食品においても、過酸化脂質が品質劣化、酸敗臭を引き起こすことは重要な問題であり、酸化防止は重要な問題である。
【０００４】
上述のような各種障害を予防または治療するため、抗酸化剤を化粧品や食品に添加する試みがなされていたが、従来酸化防止のため広く用いられているブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）等の合成品は安全性の面で問題があり、また、ビタミンＣやビタミンＥのような天然物も広く用いられているが褐変、変臭、高価というような問題がある。このように従来の抗酸化剤には安全性、安定性、経済性等問題が多く、安全で、安定な天然からの抗酸化剤の開発が望まれていた。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、安心で安定な、化粧品、食品、医薬品等に配合可能な、細胞増殖促進剤および抗酸化剤として有効な新規化合物およびその製造方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記の問題点を解決すべく鋭意検討した結果、カバノキ科に属する植物等から抽出される特定のジアリルヘプタノイド系化合物がかかる効果を有することを見い出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、その第１の態様として、５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−へプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイドの新規ジアリルヘプタノイド系化合物を提供する。
本発明の新規ジアリルヘプタノイド系化合物は、立体異性体として存在しえ、本発明においては、それらの単離された異性体およびその混合物、すなわち、（３Ｓ）,（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−へプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイド、（３Ｒ）,（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−へプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイドおよびそれらの混合物を包含する。
また、本発明は、その第２の態様として、カバノキ科に属する植物から抽出、精製することを特徴とする上記化合物の製造方法を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明の新規ジアリルヘプタノイド系化合物は、各々、下式：
５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−へプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイド（以後、化合物１という）
【０００９】
【化１】
0003955655.tif 000002
【００１０】
（３Ｓ）,（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−へプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイド（以後、化合物２という）
【００１１】
【化２】
0003955655.tif 000003
【００１２】
（３Ｒ）,（５Ｓ）−５−ヒドロキシ−１,７−ビス−［４−ヒドロキシフェニル］−３−へプタノール−５−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノサイド（以後、化合物３という）
【００１３】
【化３】
0003955655.tif 000004
【００１４】
によって示され、例えば、カバノキ科カバノキ属（例えば、シラカンバ）に属する植物から抽出、単離することによって得られる。
【００１５】
本発明の化合物１は、以下に示す物理化学的性質を有している。
色・性状：白色粉末    Ｃ25Ｈ34Ｏ9
高分解能  ＦＡＢ−ＭＳ
理論値  Ｃ25Ｈ34Ｏ9Ｎａ（M+Na+）：501.2101
実測値                          ：501.2119
ＵＶλmaxMeOH(nm)：279、224
ＩＲ（ＫＢr、cm-1）：3398、830
1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤ3ＯＤ）：
7.03〜6.68（8H、arom-H）、4.31〜3.66（7H、suger-H）、3.20〜3.05（3H、allyl-H）、2.70〜2.50（4H、allyl-H）、1.95〜1.30（6H、allyl-H）
【００１６】
つぎに、本発明の化合物２は、以下に示す物理化学的性質を有している。
色・性状：白色粉末    Ｃ25Ｈ34Ｏ9
旋光度：［α］25D     -11.5°（c=0.8、MeOH）
高分解能  ＦＡＢ−ＭＳ
理論値  Ｃ25Ｈ34Ｏ9Ｎa（M+Na+）：501.2101
実測値                         ：501.2108
ＵＶλmaxMeOH［nm（logε）］：279（3.5）、224（4.1）
ＩＲ（ＫＢr、cm-1）：3398、831
1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤ3ＯＤ）：
7.01（2H、d、J=8.6、2'-H、6'-Hあるいは2''-H、6''-H）、6.99（2H、d、J=8.6、2'-H、6'-Hあるいは2''-H、6''-H）、6.69（4H、dd、J=2.3、8.6、3'-H、5'-H、3''-H、5''-H）、4.31（1H、d、J=7.6、Glu-H1）、3.87（1H、dd、J=2.1、11.7、Glu-H6）、3.83（1H、m、5-H）、3.71（1H、dd、J=5.1、11.7、Glu-H6）、3.66（1H、m、3-H）
13Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ；ＣＤ3ＯＤ）：
156.3、156.2（4'-Cあるいは4''-C）、134.7（1''-C）、134.4（1'-C）、130.4、130.4、130.3、157.3（2'-C、6'-Cあるいは2''-C、6''-C）、116.1、116.1、116.0、116.0（3'-C、5'-Cあるいは3''-C、5''-C）、103.7（Glu-C1）、79.7（5-C）、78.2（Glu-C3）、77.8（Glu-C5）、75.2（Glu-C2）、71.6（Glu-C4）、69.9（3-C）、62.8（Glu-C6）、42.9（4-C）、41.2（2-C）、38.6（6-C）、32.0（1-C）、31.4（8-C）
ＦＡＢ−ＭＳ（m／z）：
479（M+H）+、501（M+Na）+、477（M-H）-
【００１７】
そして、本発明の化合物３は、以下に示す物理化学的性質を有している。
色・性状：白色粉末    Ｃ25Ｈ34Ｏ9
旋光度  ：［α］25D    -6.1°（c=0.3、MeOH）
高分解能  ＦＡＢ−ＭＳ
理論値  Ｃ25Ｈ34Ｏ9Ｎａ（M+Na+）：501.2101
実測値                          ：501.2130
ＵＶλmaxMeOH［nm（logε）］：279（3.4）、224（4.0）
ＩＲ（ＫBr、cm-1）：3398、828
1Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ；ＣＤ3ＯＤ）：
7.03（2H、d、J=8.5、2'-H、6'-Hあるいは2''-H、6''-H）、6.99（2H、d、J=8.5、2'-H、6'-Hあるいは2''-H、6''-H）、6.68（4H、dd、J=2.7、8.5、3'-H、5'-H、3''-H、5''-H）、4.38（1H、d、J=7.6、Glu-H1）、3.94（1H、m、3-H）、3.94（1H、m、3-H）、3.91（1H、m、5-H）、3.86（1H、dd、J=2.1、11.6、Glu-H6）、3.71（1H、dd、J=5.2、11.6、Glu-H6）
13Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ；ＣＤ3ＯＤ）：
156.3、156.3（4'-Cあるいは4''-C）、134.7、134.6（1''-Cあるいは1''-C）、130.5、130.5、130.3、130.3（2'-C、6'-Cあるいは2''-C、6''-C）、116.1、116.1、116.1、116.1（3'-C、5'-Cあるいは3''-C、5''-C）、104.3（Glu-C1）、78.4（5-C）、78.3（Glu-C3）、77.9（Glu-C5）、75.5（Glu-C2）、71.7（Glu-C4）、68.4（3-C）、62.8（Glu-C6）、43.0（4-C）、41.3（2-C）、39.2（6-C）、32.3（1-C）、31.6（8-C）
ＦＡＢ−ＭＳ（m／z）：
479（M+H）+、501（M+Na）+、477（M-H）-
【００１８】
以上のような物理化学的性質およびその他の検討から、本発明に係る化合物１、化合物２および化合物３は、それぞれ式１、式２および式３で示される構造を有する新規化合物であると認められた。
【００１９】
本発明の新規ジアリルヘプタノイド系化合物は、カバノキ科の植物、例えば、シラカンバの樹皮細片を溶媒で加熱抽出し、濃縮した後、液体クロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーなどの自体公知の方法で単離、精製し得る。
【００２０】
【実施例】
以下に実施例をあげて本発明を更に詳細に説明するが、下記実施例は本発明を制限するものではない。
製造例
まず本発明の化合物の製造方法について、例を用いて説明する。
カバノキ科の植物シラカンバの樹皮細片１.５ｋｇを３.０ｌの５０％メタノールで３回、各３時間加熱抽出した。得られた抽出液についてメタノールのみを留去し、その際析出する不溶物を濾過する。得られた濾液について減圧下溶媒留去を行ない、シラカンバ樹皮のエキス１１９.２ｇを得た。
このエキスをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（２.１ｋｇ：φ１２０×４３０ｍｍ）に付し、クロロホルム−メタノール（４：１）〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親水性シリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  Ｓｉｌｉｃａ  ｇｅｌ  ６０Ｆ254）でクロロホルム：メタノール：水＝６５：３５：１０の下層を展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０.２１〜０.５９の画分を得た。この画分を減圧下溶媒留去し、ＯＤＳクロマトレックス（富士シリシア化学製、ＤＭ１０２０Ｔ）のクロマトグラフィー（３００ｇ、φ８０×１４０ｍｍ）に付し、２０％メタノール〜メタノールの直線グラジエントを用いて溶出し、２５４ｎｍ  ＵＶ光下蛍光発色型親油性アルキルシリカゲルプレート（製品名：ＨＰＴＬＣ  ＲＰ−１８  ＷＦ254S）で５０％メタノールを展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０.３９付近の画分を得た。この画分を減圧下溶媒留去し、再度同じシリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、クロロホルム：メタノール：水＝１０：３：１の下層を用いて濃縮し、同じシリカゲルプレートでクロロホルム：メタノール：水＝６５：３５：１０の下層を展開溶媒として展開した際、Ｒｆ値が０.４０付近の画分を集め、減圧下溶媒留去し、化合物２および化合物３の混合物（化合物１）８７.３ｍｇを得た。この混合物を４５％メタノールを移動相とした逆相高速クロマトグラフィー（ＹＭＣ社製、ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  ＯＤＳ  ２５０×２０ｍｍＩ.Ｄ.）により分画し、それぞれの画分を減圧下溶媒留去してそれぞれ化合物２および化合物３を得た。
【００２１】
つぎに、本発明の化合物の作用について、評価方法と共に説明する。
１．表皮細胞増殖促進作用
培養細胞：表皮細胞は培養細胞として確立されているＳＶ４０トランスフォームヒトケラチノサイトを用いた。
試験方法：クリーンベンチ内において、ＳＶ４０トランスフォームヒトケラチノサイトを、ＦＢＳ  ３％、抗生物質  １％を含むＨＥＰＥＳ含有ＭＣＤＢ１５３培地を用いて９６穴プレートに１wellあたり２０００個播種し、３７℃、ＣＯ2インキュベーター（５％ＣＯ2−air）中で培養した。２４時間後に培養液を除去し、リノール酸  ０.０００２％、１Ｍ  塩化カリウム溶液  ０.１％、抗生物質  １％、脂肪酸フリー牛血清アルブミン  ０.０１％を含むＨＥＰＥＳ含有ＭＣＤＢ１５３培地：ダルベッコ変性イーグルＭＥＭ培地（１：１）調整培地に交換し、最終濃度０.０１、０.１、１μｇ／ｍｌになるよう薬物を添加して１週間培養した。培養液を除去し、ホルムアルデヒドで固定後細胞をクリスタルバイオレットにより染色し、その後メタノールで色素を抽出した後イムノリーダーで５９０ｎｍの吸光度を測定した。式１：
【００２２】
【数１】
0003955655.tif 000005
【００２３】
により増殖比率を算出した。その結果を表１に示す。
【００２４】
【表１】
0003955655.tif 000006
【００２５】
表１に示すように、製造例で得られた化合物１、化合物２および化合物３には細胞増殖促進が認められた。
【００２６】
２．ロダン鉄法による抗酸化作用の測定
リノール酸溶液  ４.１０４ｍｌ、０.０５Ｍ  りん酸緩衝液（ｐＨ７.０）  ８.０ｍｌ、エタノール  ４.０ｍｌ、蒸留水  ３.８９６ｍｌに各濃度の検体を加えて３７℃でインキュベートし、試料とする。経日的に試料を０.０５ｍｌとり、７５％エタノール  ４.８５ｍｌ、３０％  ロダン鉄アンモニウム液０.０５ｍｌに２×１０-2Ｍ  塩化第一鉄、３.５％塩酸溶液  ０.０５ｍｌを加えよく撹拌する。正確に３分後の５００ｎｍにおける吸光度を測定した。結果を図１に示す。
【００２７】
図１から明らかなように、このように製造例で得られた化合物２と化合物３の混合物はα−トコフェロールと同等の抗酸化作用を有していると認められた。
【００２８】
３．ＴＢＡ法による抗酸化作用の測定
２．で用いた試料２.０ｍｌを、０.６７％  チオバルビツール酸  １.０ｍｌ、２０％  トリクロロ酢酸  ２.０ｍｌに加え、沸騰水浴で１０分間加熱する。流水で冷却後遠心分離（３,０００ｒｐｍ×２０分間）した後、目的層をとり、５３２ｎｍにおける吸光度を測定する。この操作をインキュベート初日と３３日目に行い、これらの吸光度差を用いて式２：
【００２９】
【数２】
0003955655.tif 000007
【００３０】
により過酸化抑制率（％）を算出した。結果を表２に示す。
【００３１】
【表２】
0003955655.tif 000008
【００３２】
表２から明らかなように、このように製造例で得られた化合物２と化合物３の混合物はα−トコフェロールと同等の過酸化脂質生成抑制作用を有していた。
【００３３】
【発明の効果】
本発明によれば、例えば、化粧品、医薬品、食品などの分野で、それぞれ角化細胞増殖促進剤、過酸化脂質生成抑制剤、抗酸化剤などの用途に利用できる新規な化合物が提供できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  本発明の化合物および既知の抗酸化剤の経日的な抗酸化作用を示す折れ線グラフである。
【図１】
0003955655.tif 000009