(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の乳由来のリン脂質を有効成分として含有する脂質代謝改善剤。
【請求項２】
単離されたリン脂質である請求項１に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項３】
哺乳動物がウシである請求項１または２に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項４】
脂質代謝改善作用が血中の総コレステロールの低下作用及び／又は肝臓へのトリグリセリド蓄積抑制作用である請求項１に記載の脂質代謝改善剤。
【請求項５】
総コレステロールの低下作用がＬＤＬコレステロールの低下作用である請求項４に記載の脂質代謝改善剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は、哺乳動物の乳由来のリン脂質を有効成分として含有する脂質代謝改善経口性組成物および該組成物を含む食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】
高脂血症は、高血圧、糖尿病、喫煙などと並んで動脈硬化症疾患の重要な危険因子の一つである。我が国においても、食生活の欧米化に伴って、虚血性心疾患をはじめとする動脈硬化性疾患の急増が大きな問題となっているが、その背景に脂質代謝異常、とくに血清コレステロール値の上昇が指摘されている。一方、食生活の欧米化による過栄養状態に基づく合成亢進型の高脂血症、特に高トリグリセリド血症が、内臓脂肪蓄積によるmultiple risk factor clustering syndromeの一つとして、動脈硬化性疾患の基盤となることが明らかになりつつある。
【０００３】
高コレステロール血症および高トリグリセリド血症の治療の基本は、食事療法と適度な運動であるが、なお症状が改善されない場合に薬物療法が行われる。しかしながら、長期間の食事療法は食べる楽しみを奪われ好ましいものではない。
【０００４】
そこで、高コレステロール血症および高トリグリセリド血症の予防、改善、あるいは治療に有効で、かつ通常の食生活のなかで食品として摂取可能な脂質代謝改善作用を有する経口性組成物の登場が望まれている。
【０００５】
例えば、粗大豆レシチンに含まれるリン脂質を有効成分とする脂質代謝促進作用を有するリン脂質組成物が提案されている（特開平10-84879; 特開平10-84880）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、脂質代謝改善作用を有し、食品に添加可能で、日常の食生活のなかでその添加食品を摂取することにより、脂質代謝が促進あるいは改善されるような、新たな経口性組成物を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、牛乳由来リン脂質（以下、単に「リン脂質」ともいう）は、乳腺の脂肪球膜由来であるため水溶性であることに着目し鋭意検討した結果、牛乳由来リン脂質に、優れた強い血中コレステロール低下作用、およびトリグリセリド低下作用、ならびに肝臓における中性脂肪の蓄積抑制作用があることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
すなわち、本発明は、
（１）  哺乳動物の乳由来のリン脂質を有効成分として含有する脂質代謝改善作用を有する経口性組成物、
（２）  単離されたリン脂質である（１）の経口性組成物、
（３）  哺乳動物がウシである（１）または（２）の経口性組成物、
（４）  脂質代謝改善作用が血中の総コレステロールの低下作用及び／又は肝臓へのトリグリセリド蓄積抑制作用である（１）の経口性組成物、
（５）  総コレステロールの低下作用がＬＤＬコレステロールの低下作用である（４）の経口性組成物、
（６）  （１）〜（４）のいずれかの経口性組成物の有効量を含有する食品、
（７）  一般飲食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品（Dietary Supplements）、特別用途食品、または治療食である（６）の食品、
（８）   （７）の食品製造のための有効量の哺乳動物の乳由来のリン脂質の使用、
（９）  哺乳動物がウシである（８）の乳由来のリン脂質の使用、
に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
リン脂質は、その構成成分により、グリセロール骨格を有するグリセロシン脂質（ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノオシト−ル）と、スフィンゴシンを骨格とするスフィンゴリン脂質（スフィンゴミエリン）に分類される。
【００１０】
牛乳中のリン脂質含量は、牛乳１リットル当たり０.３〜０.４ｇで、これは、全脂質の１％に当たる。その組成は、ホスファチジルコリン３４.５％、ホスファチジルエタノールアミン３１.８％、スフィンゴミエリン２５.２％、ホスファチジルセリン３.１％、ホスファチジルイノシトール４.７％で、その特徴は、スフィンゴミエリンの比率が高く、リン酸コリン物質が全体の５２〜６０％を占めていることである。［（菅野長右エ門, “ミルク総合事典”, 山内邦男,横山健吉 編, p41, (株)朝倉書店(1992）］である。
【００１１】
本発明の目的に用いられるリン脂質は、市販のものを用いてもよいが、例えば、乳、乳製品、特にバターミルク粉、ホエータンパク濃縮物、あるいは脱脂粉乳などを出発物質として、公知の方法［“脂質の化学(生化学実験講座３）”,日本生化学会編, p23, 東京化学同人, 1974; “脂質II リン脂質(新生化学実験講座４）”,日本生化学会編, p7, 東京化学同人, 1991］に準じて、溶媒抽出、各種クロマトにより分画して得ることができる。
【００１２】
これらの出発物質から脂質を抽出するには、非極性溶媒と極性溶媒の混合溶媒系を用いる。混合溶媒系としては、例えば、エーテル−エタノール（１：３）、クロロホルム−メタノール（２：１）、クロロホルム−メタノール−水（１：２：０.８）、ブタノール−水（６５：３５）、などが代表的なものである。ここで溶媒の組成は、容量比（ｖ/ｖ％）を示す。
【００１３】
得られた脂質画分は、溶媒を除去した後、そのまま本発明に用いることもできる。抽出した脂質画分から、リン脂質を分離するには、リン脂質がアセトンに不溶であるという性質を利用する。例えば、溶媒抽出物は、濃縮した後、有機溶媒、例えば、エーテルで抽出し、中性脂質およびリン脂質を含むエーテル可溶分を採取する。つぎにアセトン抽出を行い、中性脂質を含むアセトン可溶分とリン脂質を含むアセトン不溶分とに分画し、このリン脂質を含むアセトン不溶分を得る。
【００１４】
このリン脂質画分は本発明に用いることができるが、さらに、このリン脂質画分から、各種カラムクロマトグラフィー、にて分離したリン脂質を用いることもできる。リン脂質分離には、例えば、吸着クロマトグラフィーとイオン交換クロマトグラフィーが用いられる。吸着剤としては、例えば、ケイ酸、フロリジル（ケイ酸マグネシウム）、アルミナなどが、また、イオン交換体としては、例えば、ＤＥＡＥ（ジエチルアミノエチル）−セルロース、ＴＥＡＥ（トリエチルアミノエチル）−セルロース、などが用いられる。また、リン脂質分離には、遠心液液分配クロマトグラフィー（特開平3−47192）を用いることもできる。
【００１５】
リン脂質の分離により得られた分画物のホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、あるいはスフィンゴミエリンは、単独で用いても、あるいは組み合わせて用いてもよい。好ましい組み合わせは、例えば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、およびスフィンゴミエリンの組成が、哺乳動物由来の乳のリン脂質組成と同じかそれに類似しているものを包含する。
【００１６】
哺乳動物の乳由来リン脂質は、後述する試験例で示されるように、血中の総コレステロールの低下作用、とくに低比重リポタンパク（ＬＤＬ）を低下させ、逆に、高比重リポタンパク（ＨＤＬ）を上昇させる作用、血中や臓器中のトリグリセリド（中性脂肪）の低下作用、および肝臓への中性脂肪蓄積抑制作用を有することから、脂質代謝改善、高脂血症の予防、改善、あるいは治療を目的として、その有効量を、食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品（Dietary Supplements）、特別用途食品、あるいは治療食などに添加することができる。ここで「特別用途食品」とは、例えば、糖尿病患者用の食品など限定された用途について、表示許可されたものであり、病者用、妊産婦・授乳婦用、乳児用高齢者用、特定保健用食品などである。
【００１７】
本発明の哺乳動物の乳由来のリン脂質は、血中のコレステロールおよび中性脂肪の低下作用、ならびに肝臓への中性脂肪の蓄積を抑制する作用を有することから、油脂を含む食品へ添加することが可能である。例えば、肉、魚、ナッツ等の、油脂を含む天然食品、中華料理、ラーメンスープ等の調理時に油脂を加える食品、天ぷら、フライ、油揚げ、チャーハン、ドーナッツ、カリン糖等の熱媒体として油脂を用いた食品、バター、マーガリン、マヨネーズ、ドレッシング、チョコレート、即席ラーメン、キャラメル、ビスケット、アイスクリーム等の油脂食品又は加工時油脂を加えた加工食品、おかき、ハードビスケット、あんパン等の加工仕上時油脂を噴霧又は塗布した食品等を挙げることができる。乳由来リン脂質は本来脂肪中に含まれていた有効成分及びその抽出物であるため、油脂への添加は容易である。
【００１８】
また、本発明のリン脂質は、他の物質と併用することにより、機能性因子としての効果を高めることができる。例えば、１〜６個の二重結合を炭素鎖中に有する炭素数１６〜２２個を有する脂肪酸、好ましくは、γ−リノレン酸（6,9,12−オクタデカトリエン酸）、ジホモ−γリノレン酸（8,11,14−エイコサペンタエン酸）、ＥＰＡ（5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸）、あるいはＤＨＡ（4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸）との併用が望まれる。さらに、併用する際の形態は、脂肪酸をそのままの形か、あるいはナトリウム、カリウム、アンモニム等の塩又はメチルエステル、エチルエステル等のエステルが挙げられる。また、これらの脂肪酸を含有する油脂累も挙げられる。
【００１９】
本発明において、乳由来リン脂質の使用量については、とくに制限はないが、含有する食品に対して、０.１％以上、３０％以下が好ましい。０.１％未満では脂質代謝改善効果が低く、３０重量％を越えると食品によっては、風味の上で好ましくない場合もある。
【００２０】
また、本発明のリン脂質は、薬学的に許容できる担体にその有効量を含ませて、脂質代謝改善剤として、あるいは該脂質代謝改善剤の製造のためにリン脂質の有効量を使用することができる。さらに、その他の脂質代謝改善剤や高脂血剤との併用も可能であり、相乗効果も期待できる。医薬として好ましい形態は、公知の剤型の経口剤である。
【００２１】
ここで「有効量」とは、経口摂取により、血清コレステロールの有意な低下作用、および内臓（例えば肝臓）における脂質蓄積抑制作用を持続的に示し、かつ病態を改善する量をいう。その量は当業者であれば、検査値および臨床症状などから決定することができる。
【００２２】
【試験例】
以下、試験例により本発明を具体的に説明する。
材料及び方法
試験例１および２は、雄性Sprague-Dawley IGSラット（日本チャールスリバー社）を５週齢で購入しての実験に用い、試験例３は同ラットを６週齢で購入して用いた。試験例１および２は、合成飼料AIN-93M（表１）（オリエンタル酵母社）に１％コレステロール、１０％ラード、および０.２％コール酸を添加した高コレステロール飼料（表２）を１週間自由に摂食させた後、血清コレステロール値を測定し、その値が等分散となるように１群６匹で群分けを行い、実験に供した。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
【表２】
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【００２５】
試験例３は、合成飼料AIN-93Mを１週間自由に摂食させた後、血清コレステロール値を測定し、その値が等分散となるように１群６匹で群分けを行い、実験に供した。
【００２６】
ラットは、予備飼育期間中、および実験期間中は、通常の日照サイクルで飼育し、高コレステロール飼料、あるいは、合成飼料AIN-93M、および飲水は自由摂取させた。
【００２７】
牛乳由来リン脂質（New Zealand Dairy Ingredients Limited社製）は、リン脂質８５重量％を含み、その内訳は、ホスファチジルコリン４０.４%、ホスファチジルエタノールアミン１２.０%、スフィンゴミエリン２０.９%である。比較対照として、大豆由来ホスファチジルコリン（日本油脂（株））（大豆由来ホスファチジルコリンを水素で還元することにより、飽和化したもので、９６.７%がホスファチジルコリンを含む）、豊年レシチンPW（豊年（株）、リン脂質含量８６％）、エルキンTS（光洋商事（株）、リン脂質含量４２％）、および卵黄レシチン（ナカライテスク（株）、リン脂質含量９９％）を用いた。
【００２８】
試験試料を添加する場合、試験試料の添加量（％）と、それに相当する、高コレステロール飼料、あるいは合成飼料AIN-93M中のコーンスターチとを置換した。
【００２９】
血清中の総コレステロール、トリグリセリド、およびリン脂質は、酵素法（湘南和光（株））により測定した。ＨＤＬコレステロールは、選択阻害法（第一化学薬品（株））、ＬＤＬコレステロールは、酵素法（第一化学薬品（株））により測定した。
【００３０】
肝臓の脂質（トリグリセリド）の分析は、Folchらの方法に従いクロロホルム：メタノール溶液で抽出し、脂質分析装置（イアトロスキャン（ヤトロン））を用いて分析した。分析の際の１次展開溶媒は、クロロホルム：メタノール：水=５０：２０：２.５、２次展開溶媒は、ヘキサン：ジエチルエーテル：蟻酸=６５：５：０.１５を用いた。有意差検定は、Studentのt検定およびTukey-Kramerの多重検定法により行った。
【００３１】
［試験例１］  乳由来リン脂質の脂質代謝改善作用
牛乳由来リン脂質の脂質代謝改善効果を調べるために、高コレステロール飼料（表１）に、乳由来リン脂質、あるいは該リン脂質に含まれるホスファチジルコリンと同量の大豆由来ホスファチジルコリンを添加した混餌を用いて実験を行った。
【００３２】
高コレステロール飼料（対照区）、１％乳由来リン脂質添加（１％リン脂質添加）、４％リン脂質添加、１０％リン脂質添加、および４％大豆由来ホスファチジルコリン添加（４％ホスファチジルコリン添加）、の各試験飼料摂取群を設定した。
【００３３】
試験（投与）開始（Ｄａｙ１）後９日目（Ｄａｙ９）に、ラットをエーテル麻酔下で開腹し、動脈から採血し、遠心分離により血清を得た。血清中の総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、およびトリグリセリドを測定した。実験期間中、各試験群間において、飼料、水の摂取量、および体重の増加量に差は認められなかった。血清中の総コレステロール値を図１−ａに、ＨＤＬコレステロール値を図１−ｂに、ＬＤＬコレステロールを図１−ｃに、およびトリグリセリドを図１−ｄに示す。
【００３４】
血清中の総コレステロールは、対照群に比較して、４〜１０％リン脂質添加飼料摂取群（４〜１０％リン脂質添加群）において有意に低下したのに対し、４％大豆由来ホスファチジルコリン添加群においては、有意ではないが増加傾向を示した。
【００３５】
血清中のＬＤＬコレステロールは、対照群に対して、４〜１０％リン脂質添加群において有意に低下した。一方、４％大豆由来ホスファチジルコリン添加群においては、有意ではないが増加した。
【００３６】
血清中のＨＤＬコレステロールは、対照群に対して、１〜１０％リン脂質添加群において添加量依存的に上昇し、〜１０％では有意な上昇を示した。一方、４％大豆由来ホスファチジルコリン添加群においては、対照群との間に差は認められなかった。
【００３７】
血清中のトリグリセリドは、対照群に対して、１〜１０％リン脂質添加群間で有意な差は認められなかった。一方、４％大豆由来ホスファチジルコリン添加群においては、増加する傾向が認められた。
【００３８】
血清総コレステロールは、これまでも、脂質代謝異常の代表的な指標として取り上げられてきたが、近年は動脈硬化性疾患の危険因子として注目されている。しかし、血清総コレステロールは、ＨＤＬコレステロールや超低比重リポタンパク（ＶＬＤＬコレステロール）を含んでいるため、必ずしもよい指標とはいえない。ＬＤＬコレステロールは動脈硬化起因性リポタンパクであることは確立されており、一方、ＨＤＬコレステロールは虚血性心疾患に予防的に作用することは、多くの疫学調査から、明らかにされている。また、血清トリグリセリドの高値は動脈硬化性疾患の基盤となることが明らかになりつつある。
【００３９】
本試験の結果は、乳由来のリン脂質が、血清総コレステロールにおける悪玉のＬＤＬコレステロールを低下させ、逆に善玉のＨＤＬコレステロールを上昇させる作用を有し、また、血清トリグリセリド低下作用を有することから、乳由来のリン脂質は、脂質代謝改善の経口性組成物として極めて有用であることが明らかとなった。
【００４０】
［試験例２］  牛乳由来リン脂質とその他のリン脂質との脂質代謝効果の比較
牛乳由来リン脂質と、大豆由来リン脂質、卵黄由来リン脂質の脂質代謝効果について、比較検討した。
【００４１】
高コレステロール飼料に５％コーンスターチを添加（対照区）、５％リン脂質添加、５％豊年レシチンPW添加、５％エルキンTS添加、５％卵黄レシチン添加、の各試験飼料摂取群を設定した。
【００４２】
投与開始１０日後（Ｄａｙ１０）にラットを開腹し、動脈から採血し、遠心分離により血清を得た。総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、およびトリグリセリドを測定した。血清中の総コレステロール値を図２−ａに、ＨＤＬコレステロール値を図２−ｂに、ＬＤＬコレステロール値を図２−ｃに、およびトリグリセリド値を図２−ｄに示す。
【００４３】
また、肝臓へのトリグリセリド蓄積抑制作用を調べた（図３）。
実験期間中、体重、試験群間において、飼料、水の摂取量、および体重の増加量に差は認められなかった。肝重量は、乳由来リン脂質添加群で減少する傾向が認められたが有意差はなく、群間の差は認められなかった。
【００４４】
血清中の総コレステロールは、リン脂質添加および卵黄レシチン添加群において、有意（ｐ＜０.０５）に低下し、乳由来リン脂質による血清中の総コレステロールの低下作用が再確認された。
【００４５】
血清中のＬＤＬ-コレステロールは、乳由来リン脂質添加群のみが有意（ｐ＜０.０５）に低下した。ＨＤＬ-コレステロールは、有意ではないものの、乳由来リン脂質添加群で増加傾向を示した。
【００４６】
血清中のトリグリセリドは、有意ではないものの、エルキンTS添加群および卵黄レシチン添加群で低下傾向を示した。
【００４７】
肝臓へのトリグリセリドの蓄積は、乳由来リン脂質添加群が有意ではないが抑制作用を示し、卵黄レシチンはわずかであるが抑制作用が認められた。エルキンＴＳ、および大豆由来のリン脂質である豊年レシチンには抑制作用は認められなかった。
【００４８】
以上の結果から、牛乳由来リン脂質は、大豆由来、あるいは卵黄由来のリン脂質と比較して、より顕著な血中コレステロール低下作用があることが明らかとなった。また、乳由来リン脂質には、肝臓への中性脂肪脂質の蓄積を抑制する作用があることが明らかとなった。
【００４９】
［試験例３］
高コレステロール飼料（表２）の代わりに、合成飼料AIN-93Mを用いた場合の、血清コレステロールおよびトリグリセリドの低下作用、ならびに肝臓へのトリグリセリドを低下作用蓄積の抑制作用を調べた。
【００５０】
合成飼料（対照区）、４％リン脂質を添加、１０％リン脂質添加、４％大豆由来ホスファチジルコリン添加、の各試験飼料摂取群を設定した。
【００５１】
試験開始９日目（Ｄａｙ９）にラットから血清を得た。血清中の総脂質、総コレステロール、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール、およびトリグリセリドを測定した（表３）。また、肝臓のトリグリセリドを測定した（図４）。
【００５２】
【表３】
0003891536.tif 000004
【００５３】
実験期間中、飼料、水の摂取量、体重の増加量、肝重量ともに群間の差は認められなかった。
血清中の総脂質は、対照区に対して、１０％乳由来リン脂質添加群で有意（p＜０.０５）に減少した。大豆由来ホスファチジルコリン添加群では差は認められなかった。総脂質中のトリグリセリドは、有意ではないもの、４〜１０％乳由来リン脂質添加群で最も顕著に低下していた。総コレステロール、ＬＤＬコレステロール、およびＨＤＬコレステロールはほとんど変化が認められなかった（表２）。
【００５４】
肝臓へのトリグリセリド蓄積は、対照群に比べ、乳由来リン脂質添加群および４％大豆由来ホスファチジルコリン添加で有意（p＜０.０５）に減少していた（図４）。
以上の結果より、合成飼料AIN-93Mに乳由来リン脂質を添加した試験区において、血清中の総脂質およびトリグリセリド低下作用があり、また、肝臓におけるトリグリセリドの蓄積を顕著に抑制する作用があることから、常人においても、乳由来リン脂質の経口摂取により、脂質代謝を促進し、生活習慣病といわれる高脂血症の予防が期待できる。
【００５５】
【発明の効果】
本発明により、哺乳動物の乳由来リン脂質の経口摂取は、総コレステロールの低下作用、とくにＬＤＬの低下とＨＤＬの上昇作用、血中の中性脂肪の低下作用、および肝臓への中性脂肪蓄積抑制作用といった脂質代謝を改善する効果を示し、また、水溶性であることから、脂質代謝改善のために、その有効量を、食品、健康食品、機能性食品、栄養補助食品（Dietary Supplements）、特別用途食品、あるいは治療食などに添加することができる。
さらにまた、哺乳動物の乳由来リン脂質の日常的な食生活での経口摂取により、常人においても、脂質代謝を促進し、生活習慣病といわれる高脂血症の予防が期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】  雄性Sprague-Dawley IGSラットに対する、高コレステロール飼料（対照区）、１％乳由来リン脂質添加飼料、４％乳由来リン脂質添加飼料、１０％乳由来リン脂質添加飼料、および４％大豆由来ホスファチジルコリン添加飼料、の経口投与９日目における血清中の総コレステロール（図１−ｂ）、ＨＤＬコレステロール（図１−ｂ）、ＬＤＬコレステロール（図１−ｃ）、およびトリグリセリド（図１−ｄ）を示す図である。各バーは平均±標準誤差を示す（ｎ＝６）。*：ｐ＜０.０５（Studentのt検定）
【図２】  同上ラットに対する、高コレステロール飼料に５％コーンスターチを添加した飼料（対照区）、５％乳由来リン脂質添加飼料、５％豊年レシチンPW添加飼料、５％エルキンTS添加飼料、および５％卵黄レシチン添加飼料、の経口投与１０日目における総コレステロール（図１−ｂ）、ＨＤＬコレステロール（図１−ｂ）、ＬＤＬコレステロール（図１−ｃ）、およびトリグリセリド（図１−ｄ）を示す図である。各バーは平均±標準誤差を示す（ｎ＝６）。ｐ＜０.０５共通の肩文字なしの値は有意差を示す（ｐ＜０.０５：Tukey-Kramerの多重検定）。
【図３】  同上における肝臓へのトリグリセリド蓄積抑制作用を示す図である。各バーは平均±標準誤差を示す（ｎ＝６）。
【図４】  同上ラットに対する、合成飼料AIN-93M（対照区）、合成飼料AIN-93Mに４％リン脂質を添加した飼料、１０％リン脂質添加飼料、４％大豆由来ホスファチジルコリン添加飼料、の経口投与９日目における肝臓へのトリグリセリド蓄積抑制作用を示す図である。各バーは平均±標準誤差を示す（ｎ＝６）。共通の肩文字なしの値は有意差を示す（ｐ＜０.０５：Tukey-Kramerの多重検定）。
【図１】
0003891536.tif 000005
【図２】
0003891536.tif 000006
【図３】
0003891536.tif 000007
【図４】
0003891536.tif 000008