(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルシアン・グリーンとピロニン染料とを含む水性液体であることを特徴とする尿沈渣検査用試薬。
【請求項２】
ピロニン染料が、カラー・インデックスＮｏ．４５００５のピロニン及び／又はカラー・インデックスＮｏ．４５０１０のピロニンである、請求項１に記載の尿沈渣検査用試薬。
【請求項３】
さらに防腐剤及び／又は防黴剤を含む、請求項１又は２に記載の尿沈渣検査用試薬。
【請求項４】
前記水性液体を構成する溶媒が緩衝液である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の尿沈渣検査用試薬。
【請求項５】
前記緩衝液がリン酸緩衝生理食塩水又はトリス緩衝生理食塩水である、請求項４に記載の尿沈渣検査用試薬。
【請求項６】
前記緩衝液が１０倍濃度のリン酸緩衝生理食塩水である、請求項４に記載の尿沈渣検査用試薬。
【請求項７】
尿沈渣に、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の試薬を、尿沈渣：試薬＝１〜５０：１（容積比）の割合で加え、顕微鏡下で尿沈渣の一部又は全部を観察することを含む、尿沈渣の検査方法。
【請求項８】
前記観察を、尿沈渣に試薬を添加してから１時間以内に行う、請求項７に記載の尿沈渣の検査方法。
【請求項９】
前記観察を、１００倍の倍率で全視野について行う、請求項７又は８に記載の尿沈渣の検査方法。
【請求項１０】
前記観察を、４００倍の倍率で必要に応じて２０以上の視野について行う、請求項７又は８に記載の尿沈渣の検査方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規の尿沈渣検査用試薬及びその試薬を用いる尿沈渣の検査方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人間ドックを初めとする健康診断では、尿路疾患、腎炎、癌等の諸疾患発見のための一次スクリーニングとして、尿沈渣を調べる。より具体的には、新鮮尿を遠心分離にかけて得られる沈澱（尿沈渣）を染色試薬で染色し、顕微鏡下で赤血球、白血球、上皮細胞、円柱結晶成分等の有無を観察する。この方法に適用されている染色方法は、１９７５年にＳｔｅｒｎｈｅｉｍｅｒによって発表されたステンハイマー染色（Ａ  ｓｕｐｒａｖｉｔａｌ  ｃｙｔｏｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓｔａｉｎ  ｆｏｒ  ｕｒｉｎａｒｙ  ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ，Ｊ．Ａ．Ｍ．Ａ．，２３１：８２６−８３２，１９７５）をその原理とする。
【０００３】
このステンハイマー染色（以下、「Ｓ染色原法」という）では、核を青色に染色する色素として、フタロシアニン系塩基色素であるナショナル・ファースト・ブルーが、また、細胞質を赤紫色に染色する色素として、キサンテン系塩基色素であるピロニンＢが使用されている。ところが、日本国においては、従来より、ナショナル・ファースト・ブルーに代わって、同じくフタロシアニン系塩基色素であるアルシアン・ブルーが使用されてきた。この日本国独特の方法（以下、「Ｓ染色変法」という）は、日本国において、尿沈渣の染色方法として広く普及している。このＳ染色変法は、尿中の円柱の主成分であるムコタンパクをも染色できるという点において、Ｓ染色原法よりも優れた方法である。
【０００４】
ところが、昨年、諸事情により、アルシアン・ブルー（Ｃｏｌｏｒ  Ｉｎｄｅｘ  Ｎｏ．７４２４０、Ｃ．Ｉ．Ｉｎｇｒａｉｎ  Ｂｌｕｅ  １、市販品の一例として、Ａｔｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社製アルシアン・ブルー８ＧＸが挙げられる）の製造が中止された。従って、アルシアン・ブルーの在庫が底をついた時点で、より具体的には２〜３年後には、アルシアン・ブルーを含むＳ染色変法用試薬は入手できなくなる。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
上述したように、Ｓ染色変法は、尿沈渣の鏡検を行うための、前処理としての染色には欠かせない方法である。したがって、アルシアン・ブルー以外の色素を用いた、Ｓ染色変法用試薬に代わり得る染色試薬の探索、提供が、臨床検査の現場において渇望されている。
【０００６】
本発明は、このような状況を踏まえてなされたものであり、尿沈渣の染色に使用される新規の尿沈渣検査用試薬及びその試薬を用いる尿沈渣の検査方法の提供を目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記課題の解決のため、本発明者は、鋭意研究を行い、その結果、本発明を完成させた。
【０００８】
即ち、本発明は、アルシアン・グリーンとピロニン染料とを含む水性液体であることを特徴とする尿沈渣検査用試薬を提供する。
【０００９】
ピロニン染料として、カラー・インデックスＮｏ．４５００５のピロニン及び／又はカラー・インデックスＮｏ．４５０１０のピロニンを用いることが好ましい。
【００１０】
上記試薬は、さらに、防腐剤及び／又は防黴剤を含むことが好ましい。
【００１１】
前記水性液体を構成する溶媒として、緩衝液が好ましく、リン酸緩衝生理食塩水及びトリス緩衝生理食塩水がより好ましく、１０倍濃度のリン酸緩衝生理食塩水が特に好ましい。
【００１２】
また、本発明は、尿沈渣に、上記の本発明の尿沈渣検査用試薬を、尿沈渣：試薬＝１〜５０：１（容積比）の割合で加え、顕微鏡下で尿沈渣の一部又は全部を観察することを含む、尿沈渣の検査方法を提供する。
【００１３】
前記観察は、尿沈渣に試薬を添加してから１時間以内に行うのが好ましい。
【００１４】
前記観察は、１００倍の倍率で全視野について行うのが好ましい。
【００１５】
前記観察は、４００倍の倍率で必要に応じて２０以上の視野について行うのが好ましい。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下に、本発明について、詳細に説明する。
【００１７】
本発明の試薬に用いる色素は、アルシアン・グリーンとピロニン染料である。
【００１８】
アルシアン・グリーンは、フタロシアニン系の色素である。アルシアン・グリーンの市販品の例として、Ｉｍｐｅｒｉａｌ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（ＩＣＩ）社の「アルシアン・グリーン３ＢＸ（Ｃｏｌｏｒ  Ｉｎｄｅｘ  Ｉｎｇｒａｉｎ  Ｇｒｅｅｎ  １）」とＡｔｉｃ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ社の「アルシアン・グリーン２ＧＸ（Ｃｏｌｏｒ  Ｉｎｄｅｘ  Ｉｎｇｒａｉｎ  Ｇｒｅｅｎ  ２）」とが挙げられる。
【００１９】
ピロニン染料は、キサンテン（又はザンセン）染料の一種の紅色塩基性染料である。Ｃｏｌｏｒ  Ｉｎｄｅｘ  Ｎｏ．４５０００〜４５０２０の色素が、ピロニン染料に分類される。本発明では、Ｃｏｌｏｒ  Ｉｎｄｅｘ（カラー・インデックス）Ｎｏ．４５００５のピロニン、及び／又は、Ｃｏｌｏｒ  Ｉｎｄｅｘ（カラー・インデックス）Ｎｏ．４５０１０のピロニンの使用が好ましい。Ｃ．Ｉ．Ｎｏ．４５００５のピロニンの市販品の例として、Ｂａｙｅｒ社製ピロニンＧが、また、Ｃ．Ｉ．Ｎｏ．４５０１０のピロニンの市販品の例として、Ｂａｙｅｒ社製ピロニンＢが挙げられる。
【００２０】
本発明の試薬は、水性液体の形態をとる。この水性液体を構成する溶媒は、例えば、水（イオン交換水、蒸留水）及び各種緩衝液である。
【００２１】
緩衝液の例としては、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４付近）、ＰＢＳ（−）、１０×ＰＢＳ（試薬濃度が１０倍濃いＰＢＳ）、トリス塩酸緩衝液（ｐＨ約７．２〜約９．０）、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ、ｐＨ７．４付近）、リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ約５．７〜約８．０）、クエン酸緩衝液（ｐＨ約３．０〜約５．８）、酢酸緩衝液（ｐＨ約３．６〜約５．６）、グリシン−ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ約８．６〜約１０．６）、ホウ砂緩衝液（ｐＨ約９．０〜約１０．６、４０℃）、ホウ酸・ホウ砂緩衝液（ｐＨ約７．６〜約９．２）、炭酸・重炭酸緩衝液（ｐＨ約９．２〜約１０．７）、ＳｄｒｅｎｓｅｎとＰａｌｉｔｒｓｃｈの緩衝液、Ｗａｌｐｏｌｅの緩衝液（ｐＨ約３．６〜約５．６）、ＭｅＩｌｖａｉｎｅの緩衝液（ｐＨ約２．２〜約８．９）、アメジオール緩衝液（ｐＨ約７．８〜約９．２）及びバルビタール緩衝液（ｐＨ約７．０〜約８．９）等が挙げられる。
【００２２】
ｐＨが５．０〜９．０、好ましくは６．０〜８．０、より好ましくは７．０付近の緩衝液を用いることが好ましい。
【００２３】
緩衝液の中では、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）及びトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）が好ましく、１０倍濃度のリン酸緩衝生理食塩水（１０×ＰＢＳ）を用いると、赤血球の溶血が少ないので、特に好ましい。
【００２４】
本発明の試薬は、さらに、防腐剤及び／又は防黴剤を含むことが好ましい。これらを含むことにより、細菌やカビによる試薬の汚染及びそれから派生する検査結果の誤りを防止できる。
【００２５】
本発明の試薬に用いる防腐剤の例としては、ソルビン酸、サリチル酸、デヒドロ酢酸及びそのＮａ塩、パラヒドロキシ安息香酸エステル類及びウンデシレン酸等の酸類、フェノール、クレゾール、ｐ−クロロフェノール、ベンジルアルコール、ｐ−クロロ−ｍ−キシレノール、ｐ−クロロ−ｍ−クレゾール、チモール、フェネチルアルコール、０−フェニルフェノール、イルガサン（商標）類、ヘキサクロロフェン及びクロルヘキシジン等のフェノール類、エタノール及びクロロブタノール等のアルコール類、及び、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ミリスチルジメチルベンジルアンモニウム等のカチオン界面活性剤類が挙げられる。
【００２６】
また、本発明の試薬に用いる防黴剤の例としては、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ミリスチルジメチルベンジルアンモニウム等のカチオン界面活性剤類が挙げられる。
【００２７】
本発明の試薬（水性液体）は、アルシアン・グリーンを、例えば０．２〜１０重量％、一般的には０．３〜５重量％、好ましくは０．５〜２．５重量％、より好ましくは１．０〜１．６重量％、さらにより好ましくは１．１〜１．５重量％、最も好ましくは１．２〜１．４重量％含有する。本発明の試薬は、ピロニン染料を、例えば０．１〜５重量％、一般的には０．１５〜３重量％、好ましくは０．２〜１．５重量％、より好ましくは０．２〜０．８重量％、さらにより好ましくは０．３〜０．７重量％、最も好ましくは０．４〜０．６重量％含有する。本発明の試薬がカラー・インデックスＮｏ．４５００５のピロニン（ピロニンＧ）とカラー・インデックスＮｏ．４５０１０のピロニン（ピロニンＢ）の両者を含有する場合は、本発明の試薬（水性液体）は、これらのピロニンを、各々、例えば０．０５〜２．５重量％、一般的には０．０７５〜１．５重量％、好ましくは０．１〜０．７５重量％、より好ましくは０．１〜０．４重量％、さらにより好ましくは０．１５〜０．３５重量％、最も好ましくは０．２〜０．３重量％含有する。カラー・インデックスＮｏ．４５００５のピロニン（ピロニンＧ）とカラー・インデックスＮｏ．４５０１０のピロニン（ピロニンＢ）の両者を用いると、細胞質の染色性に特に優れる。
【００２８】
防腐剤、防黴剤の含有量は、用いる化合物（防腐剤、防黴剤）の種類による。各防腐剤、防黴剤の適正含有量は、本技術分野で公知であるが、一例を挙げると、塩化ベンゼトニウムの場合は、一般的には０．０２〜０．０８重量％、好ましくは０．０３〜０．０７重量％、より好ましくは０．０４〜０．０６重量％であり、０．０５重量％付近が最も好ましい。また、アジ化ナトリウムの場合は、０．１重量％付近が最善である。
【００２９】
本発明の試薬は、水性液体に、色素類と、必要に応じて防腐剤、防黴剤を溶解させることで製造することができる。しかし、各色素のストック溶液（溶媒に色素一種類を溶解させたもの）を用意して、それらを適当な比率で混合し、要すれば得られた混合物に防腐剤、防黴剤を溶解させるという方法で製造するのが好ましい。
【００３０】
本発明は、尿沈渣に、上記の本発明の尿沈渣検査用試薬を、尿沈渣：試薬（容積比）＝１〜５０：１、好ましくは３〜３０：１、より好ましくは５〜２０：１、さらにより好ましくは８〜１８：１、最も好ましくは１０〜１６：１の割合で加え、顕微鏡下で尿沈渣の一部又は全部を観察することを含む、尿沈渣の検査方法を提供する。
【００３１】
染色された尿沈渣の顕微鏡による観察は、尿沈渣中に含まれている成分の細胞質や核が染色された後に行う。本発明の試薬は、染色性が良好で、しかも濃染し難いので、前記観察を、尿沈渣に試薬を添加した直後から２時間後位までの間に行うことができる。なお、前記観察は、尿沈渣に試薬を添加してから１時間以内に行うのが好ましい。
【００３２】
前記観察は、顕微鏡の倍率を１００〜４００倍に設定して行うのが好ましく、１００倍又は４００倍の倍率で行うのが特に好ましい。例えば１００倍の倍率で観察する場合には、全視野について観察を行い、また、例えば４００倍の倍率で観察する場合には、必要に応じ、２０以上の視野について観察を行うのが好ましい。１００倍の倍率では、通常は、作製した尿沈渣標本に偏りがないか、沈渣の塊が入っていないか等を判定する。４００倍の倍率では、各種成分の有無の判定及び数の算定を行う。
【００３３】
従来は、無染色の尿沈渣検体と、検体の状況によってはＳ染色変法によって染色した検体について、顕微鏡下での観察を行い、一視野内の赤血球の数、白血球の数、上皮細胞の量、異型上皮細胞の数、円柱の数、結晶成分の量等を判定していた。本発明の検査方法においては、染色した尿沈渣検体を観察するが、無染色の検体の観察は、検体の状況に応じて行っても行わなくてもよい。
【００３４】
【実施例】
以下に、実施例を示し、本発明をより具体的に説明する。
【００３５】
（実施例１）
（１）尿沈渣が赤血球、白血球、円柱等の固形成分を含むことが確認された尿を、１０ｍｌずつ遠心分離用チューブに入れ、室温にて、５００ｇで５分間遠心分離した。このようにして得られた尿沈渣各々を、表１に示す色素で染色し、鏡検し、染色性を比較した。染色液は、青色系のＡｌｃｉａｎ  Ｇｒｅｅｎ（アルシアン・グリーン）３ＢＸ、Ｖｉｃｔｏｒｉａ  Ｂｌｕｅ（ビクトリア・ブルー）Ｂ、Ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ  Ｂｌｕｅ（トルイジン・ブルー）Ｎ、Ｃｒｅｓｙｌ  Ｖｉｏｌｅｔ（クレジル・バイオレット）、Ａｎｉｌｉｎ  Ｂｌｕｅ（アニリン・ブルー）水溶性、Ｗａｔｅｒ  Ｂｌｕｅ（ウォーター・ブルー）及びＡｓｔｒａ  Ｂｌｕｅ（アストラ・ブルー）の各色素については１．３３重量％の、赤色系のＯｒａｎｇｅ（オレンジ）Ｇ、Ｐｙｒｏｎｉｎｅ（ピロニン）Ｇ及びＰｙｒｏｎｉｎｅ（ピロニン）Ｂの各色素については０．５重量％の水溶液とした。尿沈渣２００μｌにつき、色素水溶液１５μｌを使用し、尿沈渣に色素水溶液を添加した５分後に、顕微鏡下で４００倍の倍率で観察を行った。結果を表１に示す。
【００３６】
【表１】
0003875916.tif 000002
【００３７】
以上の結果より、アルシアン・グリーン３ＢＸ、アストラ・ブルー、ピロニンＧ及びピロニンＢが、尿沈渣染色用試薬に用いる色素として使用可能であると考えられた。
【００３８】
（２）次に、アルシアン・グリーン３ＢＸとピロニンＧとの混合物及びアストラ・ブルーとピロニンＧとの混合物の水溶液を用いて、尿沈渣の染色を行った。ピロニンＢについては、表１から明らかなようにピロニンＧとほぼ同様の結果であったので、ここでは試験を行わなかった。染色液は、アルシアン・グリーン３ＢＸ又はアストラ・ブルーを１．３３重量％と、ピロニンＧを０．５重量％含む水溶液とした。染色及び観察は、（１）に記載したものと同様の条件で行った。結果を表２に示す。
【００３９】
【表２】
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【００４０】
以上の結果より、尿沈渣染色用試薬に用いる色素の候補として、アルシアン・グリーン３ＢＸ、ピロニンＧ及びピロニンＢが選択された。
【００４１】
（実施例２）
尿沈渣染色用試薬に用いる色素の最適な組合わせの検討のため、▲１▼アルシアン・グリーン３ＢＸとピロニンＧ、▲２▼アルシアン・グリーン３ＢＸとピロニンＢ及び▲３▼アルシアン・グリーン３ＢＸ、ピロニンＧ及びピロニンＢを含み、防腐剤としての塩化ベンゼトニウム（和光純薬工業株式会社製、Ｌｏｔ．ＤＷＬ−５０５７、粉末、純度９８％以上）をも含む水溶液を調製した。より具体的には、先ず、アルシアン・グリーン３ＢＸの２重量％水溶液、ピロニンＧの１．５重量％水溶液、ピロニンＢの１．５重量％水溶液及び塩化ベンゼトニウムの１０重量％水溶液を用意し、表３に記載の割合でこれらの水溶液を混合した。
【００４２】
【表３】
0003875916.tif 000004
【００４３】
これら３種の色素水溶液▲１▼〜▲３▼を用いて、尿沈渣の染色を行った。染色及び観察は、実施例１（１）に記載したものと同様の条件で行った。結果を表４に示す。
【００４４】
【表４】
0003875916.tif 000005
【００４５】
表４に示すとおり、尿沈渣の染色用試薬として、色素水溶液▲１▼〜▲３▼のいずれも使用可能であるが、細胞及び円柱の染色性及び背景のきれいさの点において、色素水溶液▲３▼が優れていた。
【００４６】
次に、水の代わりに１０×ＰＢＳを用いた以外は色素水溶液▲２▼と同様にして、色素水溶液▲２▼−ｂを調製した。この色素水溶液▲２▼−ｂを用いて、尿沈渣の染色及び観察を同様に行った。その結果、細胞質と核との染め分け及び円柱の染色性などを含む尿沈渣成分の染色性及び背景のきれいさに関し、色素水溶液▲３▼を用いた場合よりもさらに優れていた。
【００４７】
（実施例３）
（１）尿沈渣が赤血球、白血球、円柱等の固形成分を含むことが確認された尿（検体１〜３）を用意した。検体１のｐＨは約５．０であった。検体２のｐＨは約７．０であった。検体３のｐＨは約９．０であった。検体１〜３各々の比重を比重計（屈折法によるもの）を用いて測定したところ、いずれも１．０１５〜１．０２０の範囲内であった。
【００４８】
検体１を、１０ｍｌずつ遠心分離用チューブに入れ、室温にて、５００ｇで５分間遠心分離した。このようにして得られた検体１に由来する尿沈渣各々（２００μｌ）に、表５に示す染色液のいずれかを、１５μｌ添加した。
【００４９】
【表５】
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【００５０】
尿沈渣に染色液を添加した５分後に、顕微鏡下で２００倍もしくは４００倍の倍率で溶血しなかった残存赤血球数を数えた。より具体的には、染色液添加尿沈渣１μｌ中の赤血球数を算定するために、Ｎｅｕｂａｕｅｒ計算盤を用い、大区画５区画について各々赤血球数を数え、それらの平均値を求めた。
【００５１】
検体２及び３についても、検体１と同様の処理及び観察を行った。
【００５２】
結果を図１及び図２に示す。図１は、溶血しなかった残存赤血球数を示す棒グラフであり、図２は、無染色の場合の残存赤血球数に対する各サンプルの残存赤血球数を百分率で表した結果を示す棒グラフである。
【００５３】
これらの図から明らかなように、発明例ａを用いると、酸性尿（ｐＨ約５．０）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合と同等の、中性尿（ｐＨ約７．０）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合よりは少ない、そしてアルカリ尿（ｐＨ約９．０）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合よりもやや多い、溶血が見られた。これらの結果を総合的に判断すると、発明例ａは、市販のステンハイマー染色変法用試薬と同等以上の性能を示すといえる。特に尿が中性の場合には、発明例ａを用いて染色しても無染色と同等の赤血球数であったので、ｐＨが中性の検体では、無染色での観察を不要とできる可能性がある。
【００５４】
（２）尿沈渣が赤血球、白血球、円柱等の固形成分を含むことが確認された尿（ｐＨ約７．０）３種（検体４〜６）を用意した。これらの検体の比重を比重計（屈折法によるもの）を用いて測定したところ、検体４は１．００５、検体５は１．０２０、検体６は１．０３０であった。
【００５５】
これ以降は、（１）に記載の方法と同様の方法により、尿沈渣中の残存赤血球数を数えた。
【００５６】
結果を図３及び図４に示す。図３は、溶血しなかった残存赤血球数を示す棒グラフであり、図４は、無染色の場合の残存赤血球数に対する各サンプルの残存赤血球数を百分率で表した結果を示す棒グラフである。
【００５７】
これらの図から明らかなように、発明例ａを用いると、低比重尿（比重１．００５）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合よりはかなり少ない、中比重尿（比重１．０２０）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合よりはやや多い、そして高比重尿（比重１．０３０）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合と同等か又はそれよりもやや少ない、溶血が見られた。これらの結果を総合的に判断すると、発明例ａは、市販のステンハイマー染色変法用試薬と同等以上の性能を示すといえる。特に低比重尿の場合には、発明例ａを用いて染色しても無染色と同等の赤血球数であったので、無染色での観察を不要とできる可能性がある。
【００５８】
（実施例４）
（１）発明例ａの代わりに、以下に示す発明例ｂを用いた以外は、実施例３（１）と同様の実験を行った。
【００５９】
発明例ｂ：［アルシアン・グリーン３ＢＸ（２重量％）の１０×ＰＢＳ溶液２．０ｍｌ］＋［ピロニンＧ（１．５重量％）の１０×ＰＢＳ溶液０．５ｍｌ］＋［ピロニンＢ（１．５重量％）の１０×ＰＢＳ溶液０．５ｍｌ］＋［塩化ベンゼトニウム（１０重量％）の水溶液３０μｌ］
【００６０】
結果を図５に示す。図５は、無染色の場合に溶血せずに残存した赤血球数に対して、各サンプルの残存赤血球数を百分率で表した結果を示す棒グラフである。
【００６１】
図５から明らかなように、発明例ｂを用いると、酸性尿（ｐＨ約５．０）及び中性尿（ｐＨ約７．０）では、既存のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合はもとより、無染色の場合よりも溶血が少なかった。また、アルカリ尿（ｐＨ約９．０）の場合も、溶血は既存のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合と同等であった。これらの結果を総合的に判断すると、発明例ｂは、市販品をはじめとする既存のステンハイマー染色変法用試薬よりも溶血性が低く、より優れるといえる。特に尿が酸性〜中性の場合には、発明例ｂを用いて染色したものは、無染色よりも赤血球数が多かったので、ｐＨが酸性〜中性の検体については、無染色での観察を不要とできる可能性がある。
【００６２】
（２）発明例ａの代わりに発明例ｂを用いた以外は、実施例４（２）と同様の実験を行った。
【００６３】
結果を図６に示す。図６は、無染色の場合に溶血せずに残存した赤血球数に対して、各サンプルの残存赤血球数を百分率で表した結果を示す棒グラフである。
【００６４】
図６から明らかなように、発明例ｂを用いると、低比重尿（比重１．００５）では既存のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合と同等又はそれよりも少ない、中比重尿（比重１．０２０）では既存のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合よりも少ない、そして高比重尿（比重１．０３０）では市販のステンハイマー染色変法用試薬を用いた場合とほぼ同等の、溶血が見られた。従って、発明例ｂは、市販品をはじめとする既存のステンハイマー染色変法用試薬よりも溶血性が低く、より優れるといえる。また、発明例ｂを用いて染色した場合、いずれの比重の尿も無染色の場合の７０％以上の残存赤血球数を示したので、無染色での観察を不要とできる可能性がある。
【００６５】
【発明の効果】
本発明の試薬の製造に用いられるアルシアン・グリーンは、Ｓ染色変法で使用されていたアルシアン・ブルーと比べて、水性液体への溶解性に優れる。従って、尿沈渣の染色用試薬の製造が容易となると共に、当該試薬の製造に費やされるエネルギーが大いに節約される。
【００６６】
本発明の試薬を用いると、既存のＳ染色変法用試薬を用いた場合に比べて、被検体が濃染しにくい。そのため、染色された成分の検出がより容易となる。また、同様の理由により、染色された部分とそうでない部分とのコントラストが大きく且つその状態がより長く持続されるため、無染色の検体と染色した検体の両者を観察する必要性が小さい。即ち、検査は、染色した検体の鏡検のみでもよいということになり、検査効率が上昇する。
【００６７】
本発明の尿沈渣の検査方法では、既存のカラー・アトラスをそのまま用いることができる。従って、臨床検査に携わる者は、尿沈渣の検査のための新たな技術の習得等を行う必要がない。
【００６８】
アルシアン・グリーンに加え、カラー・インデックスＮｏ．４５００５のピロニン（ピロニンＧ）とカラー・インデックスＮｏ．４５０１０のピロニン（ピロニンＢ）の両者を含有する本発明の試薬を用いると、核の染色性に特に優れるため、核内構造の観察がより容易となる。
【００６９】
溶媒として約１０倍濃度のＰＢＳ溶液を用いた本発明の試薬を用いると、赤血球の溶血が生じ難く、また、染色性も特に優れる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、３種類のｐＨ値の尿（比重：１．０１５〜１．０２０）から得られた尿沈渣各々について、既存のステンハイマー染色変法用試薬と本発明の試薬（水性媒体：水）を用いて染色を行った後の残存赤血球数を示す棒グラフである。
【図２】図２は、図１のデータを、無染色の場合の残存赤血球数を１００％として表した棒グラフである。
【図３】図３は、３種類の比重の尿（ｐＨ約７．０）から得られた尿沈渣各々について、既存のステンハイマー染色変法用試薬と本発明の試薬（水性媒体：水）を用いて染色を行った後の残存赤血球数を示す棒グラフである。
【図４】図４は、図３のデータを、無染色の場合の残存赤血球数を１００％として表した棒グラフである。グラフである。
【図５】図５は、３種類のｐＨ値の尿（比重：１．０１５〜１．０２０）から得られた尿沈渣各々について、既存のステンハイマー染色変法用試薬と本発明の試薬（水性媒体：１０×ＰＢＳ）を用いて染色を行った後の残存赤血球数を、無染色の場合の残存赤血球数を１００％として表した棒グラフである。
【図６】図６は、３種類の比重の尿（ｐＨ約７．０）から得られた尿沈渣各々について、既存のステンハイマー染色変法用試薬と本発明の試薬（水性媒体：１０×ＰＢＳ）を用いて染色を行った後の残存赤血球数を、無染色の場合の残存赤血球数を１００％として表した棒グラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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