(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
モノクローン抗体に対する結合部位を機能的に模倣する単離されたペプチドであって、該モノクローン抗体が、ヒト血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識する、Ｃ−３４と命名されているものであり、該単離されたペプチドが、下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチド。
0003979448.tif 000192
【請求項２】
モノクローン抗体に対する結合部位を機能的に模倣する単離されたペプチドであって、該モノクローン抗体が、ヒト血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識する、ＳＺ−２と命名されているものであり、該単離されたペプチドが、配列番号８３：WHWRSSWKSGであるアミノ酸配列からなるペプチド。
【請求項３】
請求項１記載のペプチドに結合することができる単離された分子であって、該単離された分子が、配列番号９４：RHVAWWRQGVであるアミノ酸配列から単離された分子。
【請求項４】
血小板の接着、集合、または凝集をイン・ビトロで調節する方法であって、血小板を選択する工程および該血小板を請求項３記載の分子に接触させ、それによりフォン・ウイルブラント因子と血小板との相互作用に糖タンパクＩｂ／ＩＸ受容体を介して影響を与える工程、および該血小板の接着、集合、または凝集を調節する工程を含んで成る方法。
【請求項５】
モノクローン抗体Ｃ−３４に結合することができる単離されたペプチドであって、下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチド。
0003979448.tif 000193
【請求項６】
請求項５のペプチドに結合することができる単離された分子であって、該分子は、配列番号９４：RHVAWWRQGVであるアミノ酸配列からなるペプチドである単離された分子。
【請求項７】
血小板の接着、集合、または凝集をイン・ビトロで調節する方法であって、血小板を選択する工程および該血小板を請求項５記載のペプチドに接触させ、それにより糖タンパクＩｂ／ＩＸ受容体を介して血小板とフォン・ウイルブラント因子との相互作用に影響を与える工程および該血小板の接着、集合、または凝集を調節する工程を含んで成る方法。
【請求項８】
モノクローン抗体ＳＺ−２に結合することができる単離されたペプチドであって、配列番号８３：WHWRSSWKSGであるアミノ酸配列からなるペプチド。
【発明の詳細な説明】
本出願は１９９５年、３月１７日に出願された米国特許出願第０８／４０６，３３０号の一部継続出願であり、その内容は参照により本明細書にインコーポレートされる。
発明の分野
本発明はヒト血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識するモノクローン抗体（すなわち、ミモトープ（mimotope））の結合部位を機能的に模倣することができるペプチドに関する。そしてこのペプチド（すなわち、抗−ミモトープ）に結合することができる単離された分子に関する。
本発明の背景
本明細書を通じ、様々な文献を多くは括弧書きで参照する。これらの文献の完全な引用は詳細な説明の終わりに提供する。これらの文献の開示はそっくりそのまま本明細書に参照によりインコーポレートされる。
フォン・ウイルブラント因子（ｖＷｆ）に対する血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ（ＧＰＩｂ／ＩＸ）受容体はＧＰＩｂ（１６０ｋＤａ）とＧＰＩＸ（１７ｋＤａ）の間の非共有結合会合における１：１ヘテロダイマー複合体（デューら１９８７）より成ると信じられている。ＧＰＩｂは今度はジスルフィド結合した１４０ｋＤａのα鎖（ＧＰＩｂ・α）と２２ｋＤａのβ鎖（ＧＰＩｂ・β）とから成っている（フィッツジェラルドおよびフィリップス１９８９）。
ＧＰＩｂ／ＩＸ複合体は血液血小板上の主要な膜貫通受容体複合体の一つであり（ロート１９９１、ロペス１９９４、クレメツォンおよびクレメツォン１９９５）、フォン・ウイルブラント因子（ｖＷｆ）−依存性の血小板接着を媒介する。血小板型フォン・ウイルブラント病（ＰＴ−ｖＷＤ）と呼ばれるヒト常染色体の優性出血病は高レベルに調節されたＧＰＩｂ／ＩＸ受容体の天然に生ずるモデルを表している（ミラーおよびカステラ１９８２、ミラーら１９８３）。この疾患では、化学的調節物質であるリストセチンの異常に低い濃度でもｖＷｆとＧＰＩｂ／ＩＸの相互作用を促進することができる。さらに、このような患者の血小板は正常な血小板に要求されるよりも低い剪断力で凝集する（ムラタら１９９３）。ＰＴ−ｖＷＤ患者の血縁の一人がＧＰＩｂ・α鎖の残基２３３におけるグリシンのバリンへの置換をもたらす１個の点突然変異を持つことが発見された（ミラーら１９９１）。非常に近い近所で第２の点突然変異（残基２３９におけるメチオニンのバリンへの置換（ラッセルおよびロート１９９３、タカハシら１９９５））がＰＴ−ｖＷＤ表現型を表すさらに二人の血縁者について記述された（ワイスら１９８２、タカハシ１９８０）。
１９８０年代に、ミラーらはｖＷｆに対するＧＰＩｂ／ＩＸ複合体受容体に対する一連のモノクローン抗体（ｍａｂ）を開発した。特に、モノクローン抗体Ｃ−３４は詳細に性質決定がなされ、ｍａｂＣ−３４が血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識することが決定された（ミラーら１９９０）。この研究およびその後の研究でミラーらはモノクローン抗体Ｃ−３４、ＡＳ−２およびＡＳ−７がフォン・ウイルブラント因子に依存する正常血小板のリストセチンに誘発される凝集の強い阻害剤であることを示した。ミラーらは３種のモノクローン抗体すべてに対するエピトープがＧＰＩｂ／ＩＸ複合体の内部にあることをも示した。ミラーらはＡＳ−２およびＡＳ−７に対するモノクローン抗体結合部位をＧＰＩｂ・αのアミノ末端の４５ｋＤａに局在化することができた。Ｃ−３４に対するエピトープは最近チャイニーズハムスター卵巣細胞の表面上で発現したＧＰＩｂ・α鎖の細胞外部分に局在化された（チェムバーズら１９９５）。Ｃ−３４がウエスタン・ブロットで変性ＧＰＩｂ・αに結合できなかったこと（ワードおよびバーント１９９５、クレメツォンおよびハグリー１９９５）、またはＣ−３４が様々な実験条件の下で血小板から取り出したＧＰＩｂ・αの細胞外領域と免疫沈降することができなかったこと（ミラーら１９９０）はＣ−３４により認識されるエピトープが高度にコンホーメーション依存性であることを強く示唆する。しかしながら、最近、ワードとバーントは125Ｉ標識グリコカリチン（glycocalicin）の精製分子のトリプシンの消化後の１・Ｈｉｓ−Ａｒｇ・２９３のアミノ末端断片とＣ−３４との免疫沈降に今度は成功したと報告した（ワードおよびバーント１９９５）。
様々なモノクローン抗体に対する結合部位を確定しようとする試みはエピトープライブラリーの開発をもたらした。パームリおよびスミスは外来エピトープをその表面に表示することができるバクテリオファージ発現ベクターを開発した（パームリおよびスミス１９８８）。このベクターを使用すれば、事実上考えられるすべての短いペプチド（例えば、６−アミノ酸）を含み得るバクテリオファージの大きなコレクションを構築することができよう。彼らも特異的抗体を用い外来エピトープを表示するファージをアフィニティ精製する方法であるバイオパンニング（biopanning）を開発した（パームリおよびスミス１９８８、クゥイラら１９９０、スコットおよびスミス１９９０、クリスチャンら１９９２、スミスおよびスコット１９９３を参照）。
エピトープライブラリーの開発の後、スミスらは、次に、バクテリオファージ発現ベクターおよびパームリおよびスミスのバイオパンニング法を使用すれば所与の長さの考えられる全ての配列からエピトープを同定することが可能となるはずだと示唆した。これはエピトープライブラリーをバイオパンニングすることにより抗体に対するペプチドリガンドを同定するというアイデアに導き、これは次いでワクチン設計、エピトープマッピング、遺伝子の同定、そして他の多くの応用に使用することができるであろう（パームリおよびスミス１９８８、スコット１９９２）。
エピトープライブラリーおよびバイオパンニングを用いて、エピトープ配列を研究している研究者はその代わりにエピトープを模倣したペプチドは発見した、すなわち、連続した線状の天然の配列とは同一でない配列または天然のタンパク配列内には必然的にはほとんど生じない配列である。これらの模倣性のペプチドはミモトープと呼ばれる。このようにして、タンパクに対し様々な結合部位のミモトープが発見された。ラロッカら（１９９２）はヒト胸上皮ムチン・タンデム反復のミモトープを大腸菌で発現した。バラスら（１９９３）はアセチルコリン受容体のコンホーメーション依存性の結合部位を模倣するヘキサペプチドを同定した。ホバートら（１９９３）はＣ６エピトープ（補体の第６成分に対するエピトープ）を模倣するミモトープを単離した。
これらのミモトープの配列は、定義により、連続した線状の天然の配列またはいずれにしても天然に生ずる分子、すなわち、天然に生ずるタンパクの中で必然的に起こる配列とは同一ではない。ミモトープの配列は天然に生ずるタンパクの結合部位を機能的に模倣するペプチドを単に形成する。例えば、バラスら（１９９３）のミモトープはアセチルコリン受容体の結合部位を模倣する。
これらのミモトープの多くは、短いペプチドである。容易に大量合成できそして天然に生ずる配列（すなわち、結合部位）を模倣することができる短いペプチドの入手可能性により、大きな潜在的応用の途が開ける。
従って、有用なミモトープを解明する必要が継続して存在する。
発明の概要
この必要性は本発明のミモトープにより満たされる。このようにして本発明はヒト血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識するモノクローン抗体に対する結合部位を機能的に模倣する単離されたペプチドを提供する。この単離されたペプチドはミモトープである。モノクローン抗体がペプチドに結合することができるならば、そのペプチドはそのモノクローン抗体に対する結合部位を機能的に模倣する。
本発明はさらに、このペプチドに結合することができる単離された分子を提供する。この分子は、例えば、抗体、第２のペプチド、炭水化物、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、または化学的に合成された分子であることができる。この単離された分子は抗−ミモトープである。受容体に結合する抗−ミモトープはその受容体の機能的活性を媒介するために使用することができる。
本発明は、このようにして、血小板の接着、集合（aggregation）、または凝集（agglutination）を調節する方法をも提供する。これらの現象はそれぞれ、糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体受容体を通じて血小板とフォン・ウイルブラント因子との相互作用に依存している。この方法は、血小板の接着、集合、または凝集を調節するために血小板を上記の分子（抗−ミモトープ）に接触させる。
本発明はさらにモノクローン抗体Ｃ−３４に結合することができる単離されたペプチドを提供し同時にこのようなペプチドに結合することができる単離された分子をも提供する。また、血小板をこの分子（抗−ミモトープ）に接触させることにより血小板の接着、集合、または凝集を調節する方法を提供する。
好ましい態様では、モノクローン抗体Ｃ−３４に結合することができる単離されたペプチドは配列番号：３８、ＷＮＷＲＹＲＥＹＶに対応するアミノ酸配列を含んでいる。
本発明はさらに、モノクローン抗体ＳＺ−２に結合することができる単離されたペプチド並びにこのペプチドに結合することができる単離された分子を提供する。また、この分子（抗−ミモトープ）に血小板を接触させることにより血小板の接着、集合、または凝集を調節する方法を提供する。
【図面の簡単な説明】
本発明のこれらのそして他の特徴と長所は好ましい態様に関する下記の詳細な説明を下記の図面と関連付けて読むことから明らかとなる。
図１はフォン・ウイルブラント因子の存在下においてリストセチンに誘導された血小板の完全な集合を例示する。
図２はモノクローン抗体Ｃ−３４の２０μｇ／ｍｌによるリストセチン誘導血小板集合の阻害を例示する。
図３は配列番号：１のＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶを持つ合成ペプチド・ミモトープの０．１４μＭの存在下においてもｍａｂＣ−３４の２０μｇ／ｍｌによる血小板のリストセチン誘導集合の継続する阻害を例示する。
図４は配列番号：１のＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶを持つ合成ペプチド・ミモトープの０．２７μＭの存在下におけるｍａｂＣ−３４の２０μｇ／ｍｌによる血小板のリストセチン誘導集合の阻害の部分的中和を例示する。
図５は配列番号：１のＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶを持つ合成ペプチド・ミモトープの０．５５μＭの存在下におけるｍａｂＣ−３４の２０μｇ／ｍｌによる血小板のリストセチン誘導集合の阻害の部分的中和を例示する。
図６は配列番号：１のＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶを持つ合成ペプチド・ミモトープの１．１μＭの存在下におけるｍａｂＣ−３４の２０μｇ／ｍｌによる血小板のリストセチン誘導集合の阻害の部分的中和を例示する。
図７は配列番号：１のＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶを持つ合成ペプチド・ミモトープの２．３μＭの存在下におけるｍａｂＣ−３４の２０μｇ／ｍｌによる血小板のリストセチン誘導集合の阻害の完全中和を例示する。
図８は抗−ミモトープバクテリオファージの候補クローンの機能スクリーニングを例示する。示されたバクテリオファージクローンの１５０μｌをクエン酸化されたＰＲＰ２５０μｌと共に２２℃で１時間インキュベートした後、３７℃で攪拌しながらリストセチン０．８ｍｇ／ｍｌの添加により集合を開始させた。
図９〜図１１はホルマリン固定血小板のリストセチン誘導集合に対する合成ペプチドの効果を例示する。そして
図１２ａ〜図１２ｃは血小板糖タンパクＩｂ・αにおける構造的相関関係を探るために使用したミモトープおよび抗−ミモトープの図式的スケッチである。
詳細な説明
本発明はヒト糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識するモノクローン抗体に対する結合部位を機能的に模倣する単離されたペプチドを提供する。このペプチドはミモトープと呼ばれる。
一つの好ましい態様では、モノクローン抗体はＣ−３４と名付けられ、そしてこのペプチドには下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列が含まれる。
0003979448.tif 000002
0003979448.tif 000003
0003979448.tif 000004
これらのペプチドとしては、配列番号：３８のＷＮＷＲＹＲＥＹＶというコンセンサス配列に対応するアミノ酸配列を含むことが最も好ましい。
これらのペプチドはそれぞれ配列番号：１〜２１、配列番号：２３〜３７、配列番号：３９〜７５および配列番号：７７〜８１により表されるが、これらはｍａｂＣ−３４に対するＧＰＩｂ／ＩＸ内の結合部位を模倣する。このようにしてｍａｂＣ−３４はこれらのペプチドのそれぞれと結合する。しかしながら、これらのペプチドそれぞれの配列はＧＰＩｂ／ＩＸ複合体のどの鎖（すなわち、ＧＰＩｂ・α、ＧＰＩｂ・β、ＧＰＩＸ）の中の連続した線状天然配列とも同一でなく、これらの鎖に必然的に生じるものでは全くない。このように、これらのペプチドはｍａｂＣ−３４の結合部位を模倣しているのであり、従って、ミモトープである。本発明のペプチドにはＣ−３４などのモノクローン抗体に対する結合部位を機能的に模倣する能力を保持している上に例示したペプチドの断片も含まれる。配列番号：３８に対応するアミノ酸配列を持つペプチドはそのような断片の１例であり、それは配列番号：１に対応するアミノ酸配列を含むペプチドの断片である。
別の態様では、モノクローン抗体はＳＺ−２と命名される。このペプチドには下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列が含まれる。
0003979448.tif 000005
0003979448.tif 000006
これらのペプチドはそれぞれ、配列番号：８３〜９３、配列番号：７６、配列番号：８２、および配列番号：１０９〜１５６により表され、ｍａｂＳＺ−２に対するＧＰＩｂ／ＩＸ内の結合部位を模倣する。ｍａｂＳＺ−２はこのようにしてこれらのペプチドのそれぞれに結合する、従ってこれらのペプチドはミモトープということができる。本発明のペプチドには、上に例示したペプチドの断片であってモノクローン抗体ＳＺ−２に対する結合部位を機能的に模倣する能力を保持するものは含まれる。
本発明によれば、モノクローン抗体（その結合部位が本発明のペプチドにより模倣されている、すなわち、Ｃ−３４またはＳＺ−２）はヒト糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識する。
本発明はこのペプチドに結合することができる単離された分子をも提供する。この単離された分子は抗−ミモトープと呼ばれる。抗−ミモトープ分子は、例えば、抗体、第２のペプチド、炭水化物、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子、または化学的に合成された分子などの如何なる適当な分子であることもできる。ミモトープに結合することができるこのようなペプチド、タンパク、または他の生物学的、合成的、または半合成的分子は、ミモトープに対する抗体を産生させることにより、バクテリオファージ・ライブラリー、化学的ライブラリー、ハイブリドーマ細胞ライブラリー、またはミモトープ配列に対し高い親和性を持つと思われる１セットまたはサブセットの分子を創りだす他のタイプのライブラリー、細胞、または化学的合成から選択することにより、またはミモトープ配列に対し高い親和性を持つと思われる分子をコンピュータの助けまたは他の理論的取り組みを用いて設計することにより同定することができる。適当な抗−ミモトープはペプチドミモトープに結合することができる核酸のイン・ビトロの展開を用いて開発することもできる（ジョイス１９９４を参照）。
一つの態様では、本発明の抗−ミモトープは、下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドを構成要素とする。
0003979448.tif 000007
これらの特定の抗−ミモトープペプチドはモノクローン抗体Ｃ−３４に対する結合部位を模倣するミモトープに対して創られた。
このような抗−ミモトープはアンチトロンビン薬として役立つことができよう。例えば、ｍａｂＣ−３４のＧＰＩｂ／ＩＸに対する結合はリストセチン−誘導血小板集合を阻害する。ミモトープペプチドはＧＰＩｂ／ＩＸの結合部位を模倣し、そして抗−ミモトープ分子はミモトープペプチドに結合する。従って、ペプチドであり得る抗−ミモトープはミモトープペプチドをそれ自体相補するはずである。そのようなものとして、抗−ミモトープは血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸ複合体内のｍａｂＣ−３４またはｍａｂＳＺ−２の元のエピトープに結合することができる筈であり、それによりｍａｂＣ−３４またはｍａｂＳＺ−２がするのと同様な効果、すなわち、フォン・ウイルブラント因子に依存する血小板のリストセチン−誘導集合の阻害を誘発する。
本発明はこのようにして、血小板の接着、集合、または凝集を調節する方法を提供する。この方法は血小板を選択する工程、そしてその血小板を本発明の抗−ミモトープ分子に接触させる工程を含んで成るものである。そのような接触は糖タンパクＩｂ／ＩＸ受容体を介するフォン・ウイルブラント因子と血小板の相互作用に影響を与え、それにより血小板の接着、集合、または凝集を調節する。
本発明はモノクローン抗体Ｃ−３４に結合することができる単離されたペプチド、すなわち、下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドを提供する。
0003979448.tif 000008
0003979448.tif 000009
0003979448.tif 000010
さらに、上記のペプチドのいずれかの断片であって、モノクローン抗体Ｃ−３４に結合する能力を保持している断片が提供される。そのような断片としては、配列番号：１の断片である配列番号：３８が例示される。
本発明はまた、上記のペプチド、抗−ミモトープとしても知られているペプチドに結合することができる単離された分子を提供する。適当な分子としては、抗体、別のペプチド、ＤＮＡ分子またはＲＮＡ分子、炭水化物、または化学的に合成された分子が挙げられる。
上記のように、本発明はこうして血小板の接着、集合、または凝集を調節する方法を提供する。この方法は血小板を選択する工程および血小板を抗−ミモトープ分子に接触させる工程を含んで成る。このような接触は糖タンパクＩｂ／ＩＸ受容体を介する血小板とフォン・ウイルブラント因子の相互作用に影響を与え、それにより血小板の接着、集合、または凝集を調節する。
一つの好ましい態様では、本発明はモノクローン抗体Ｃ−３４に結合することができかつ配列番号：３８：ＷＮＷＲＹＲＥＹＶに対応するアミノ酸配列を含む単離されたペプチドを提供する。
本発明はさらに、モノクローン抗体ＳＺ−２に結合することができる単離されたペプチドであって、下記のものより成る群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドを提供する。
0003979448.tif 000011
0003979448.tif 000012
さらに、上記のペプチドのいずれかの断片であって、モノクローン抗体ＳＺ−２に結合する能力を保持する断片を提供する。本発明は上記のペプチドに結合することができる単離された分子（抗−ミモトープ）をも提供し、そして血小板をこの抗−ミモトープ分子に接触させることにより血小板の接着、集合、または凝集を調節する方法をも提供する。
本発明をさらに以下に詳細に説明する。
Ｃ−３４エピトープ
ミラーら（１９９０）により報告されたように、血小板糖タンパクＩｂのα鎖における突然変異２３０・ＷＫＱ（Ｇ→Ｖ）233Ｖ・２３４のための雑種形成による血小板型フォン・ウイルブラント病（ＰＴ−ｖＷＤ）を患う患者由来の血小板をネズミモノクローン抗体の生産のための免疫原として使用した。一つのそのようなモノクローン抗体であるＣ−３４は患者の血小板または正常な血小板のリストセチン誘導集合を阻害したが、他の凝集剤により誘導される集合は阻害しなかった。交差免疫電気泳動により明らかにされたように、モノクローン抗体Ｃ−３４はＧＰＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープを認識した。新鮮な血小板についての間接的免疫蛍光研究では、４種の異なる抗−ＧＰＩｂモノクローン抗体比は相互に、正常人および患者の両者に対し共にほとんど１（０．８８〜１．１４）であった。対照的に、モノクローン抗体Ｃ−３４のそのようなモノクローン抗体（ＡＰ−１）に対する結合の比は正常な血小板に対し０．３１±０．０２（平均値±ＳＥ）でありそして患者の血小板に対しては０．５４±０．０１まで有意に増加した（Ｐ＜０．００１）。3Ｈ−標識された血小板のＮＰ−４０溶解液についての免疫沈降では、モノクローン抗体Ｃ−３４の飽和濃度がＡＳ−２または他の抗−ＧＰＩｂモノクローン抗体が作るよりも遙かに微弱なバンドを形成した。他の抗−ＧＰＩｂモノクローン抗体とは対照的に、Ｃ−３４はＧＰＩｂの125Ｉ−標識化グリコカリチン断片の精製標品にまたは交差−免疫電気泳動により同定されたグリコカリチン誘導体には結合しなかった。トリプシンまたはキモトリプシン消化に付した3Ｈ−標識化血小板の免疫沈降研究では、Ｃ−３４は、モノクローン抗体ＡＳ−２またはモノクローン抗体ＡＳ−７により免疫沈降されたＧＰＩｂ・αのグリコカリチン断片をも、アミノ−末端４５ｋＤａ断片をも同一視しなかった。
こうして、３種の独立の技術（完全な血小板の放射標識化およびこれらの糖タンパクのその後のタンパク分解酵素による消化に続く血小板糖タンパクの免疫沈降、放射標識化精製グリコカリチンの免疫沈降、血小板糖タンパクの交差免疫電気泳動）（ミラーら１９９０）を用いて、Ｃ−３４はＧＰＩｂ／ＩＸ複合体内のエピトープと認識するが、このエピトープはグリコカリチン内には存在するようには見えないことが明らかにされた。
これらの研究はモノクローン抗体ＡＳ−２およびＡＳ−７をＧＰＩｂ・αの４５ｋＤａ領域にエピトープマッピングすることに成功した比較的単純な方法を報告したが、本研究はモノクローン抗体Ｃ−３４がグリコカリチンのどの単一のトリプシンまたはキモトリプシンドメインにもマップされ得ないことを明らかにした。さらに、モノクローン抗体Ｃ−３４は、ＧＰＩＸを認識するモノクローン抗体のものに類似の免疫沈降パターンを生じない。
バクテリオファージ表示ライブラリーでのモノクローン抗体Ｃ−３４のバイオパニング
スコットとスミス（１９９０）は、無差別に合成されたペプチド挿入物をバクテリオファージに使用することによるペプチドリガンドを明らかにする方法を提出した。関連する方法がクゥイラら（１９９０）およびデブリンら（１９９０）により出版された。この時以来、元のヘキサペプチド挿入物およびそれ以上の大きな挿入物の両方がモノクローン抗体により認識されるエピトープを同定する際に使用された文献が現れた。この技術はＧＰＩｂ／ＩＸとして知られる血小板ｖＷＦ受容体内の重要なエピトープの検出のためには大きな可能性を秘めている。本明細書に開示された研究はモノクローン抗体Ｃ−３４に焦点を絞っているが、本明細書においてモノクローン抗体Ｃ−３４に対し開示された方法によりＧＰＩｂ／ＩＸ内の結合部位（エピトープ）を有する他のモノクローン抗体にも適用することができる。
アルベルタ、カナダのブルース  マルコム博士からの十分にバランスのとれたデカペプチド（１０−マー）ライブラリー（クリスチャンら１９９２により記載されたもの）およびクロンテック・ラボラトリーズ（パロ  アルト、ＣＡ）からのドデカペプチド（１２−マー）ライブラリーを使用した。ドデカペプチドライブラリーでは、各コドンの最初の二つの位置にアデノシンが現れる頻度が減少しているため、１文字略号により示すと次のアミノ酸の出現が低いという特徴を生じている。すなわち、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｎ、Ｋ、Ｙ、Ｈ、Ｑ、Ｄ、およびＥである。これらのライブラリーは両方とも、バクテリオファージの小成分ウイルス・コートタンパクｐIIIに融合した無差別デカペプチド（または修飾された−無差別ドデカペプチド）と共に、合成オリゴヌクレオチドの混合物の挿入により、融合物５ベクター（Fuse 5 vector）（スコットおよびスミス１９９０）の中に構築された。ライブラリーはそれぞれ約３×１０8の独立のクローンの複雑さを持ちそして１０12〜１０14／ｍｌの力価を有していた。マルコム・ライブラリーは部分的デカペプチド・ライブラリーを構成するにすぎないが、それはヘキサペプチドとしては完全である。
これらのライブラリーを使用するための戦略は、ほとんどスコット（１９９２）によって最近著された総説に従っており、そしてスミスとスコット（１９９３）により最近記述されたこの系の使用のための詳細な方法論を修正して採用する。本明細書で用いられた戦略は以下に記すようなものである。
具体的には、バイオパニングの第１ラウンドで、６０ｍｍのストレプトアビジン被覆ペトリ皿をブロック溶液（０．５％ＢＳＡ、０．１ＭのＮａＨＣＯ3、０．１μｇ／ｍｌストレプトアビジン、０．２％ＮａＮ3）で２時間満たし、次いでＴＢＳ−０．５％トゥイーンで３回洗浄する。次に、ビオチン化モノクローン抗体の１μｇと共に４℃で一晩インキュベートされたライブラリー（約１×１０11ファージ）の１μｌをＴＢＳ−トゥイーンのｌｍｌで希釈し、そしてこの混合物をついでペトリ皿に加えて室温で１５分間揺り動かす。このペトリ皿をＴＢＳ−トゥイーンで１０回洗浄し、そして結合したファージを０．１ＮのＨＣｌ（グリシンでｐＨ２．２に調整）−１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡの８００μｌをピペッティングすることによりこの皿中に溶出させる。この溶出液をついでそのｐＨを約８まで上げるため２Ｍトリスの４８μｌを含むミクロフュージ筒中にピペットする。
この溶出液を濃縮しそしてアミコン・セントリコン−３０フィルター（アミコン・インク、ビバリー、ＭＡ）を用いてＴＢＳ中で２回洗浄する。この最終産物について、濃縮された溶出液の少量からＴＢＳ−０．１％ゼラチン中に希釈し、そして作られた各希釈液の１μｌを１９μｌのＴＢＳ−ゼラチンに加え、次いで飢餓させたＫ９１大腸菌細胞の２０μｌを加えそして室温で１０分間インキュベートすることにより力価検定を行う。０．２μｇ／ｍｌのテトラサイクリン（Ｔｃ）を含むＮＺＹ培地２００μｌを添加しそして３７℃で１時間インキュベートした後、この混合物を４０μｇ／ｍｌのテトラサイクリンを含むＮＺＹ寒天プレート上に蒔き、そして３７℃で一晩成長させる。
力価検定をした後、バイオパニングの第１ラウンドから得た濃縮溶出液全体（約５０μｌ）を新鮮な飢餓Ｋ９１細胞の等量に添加し、そしてスミスおよびスコット（１９９３）により記述されたように増幅を行う。最初のＰＥＧ／ＮａＣｌ沈澱に続き、得られるペレットを１ｍｌのＴＢＳに溶解する。ついで、ファージをＰＥＧ／ＮａＣｌで２回沈澱させ、少なくとも１時間４℃に放置し、続いて４℃で遠心分離して沈殿物を集める。その上清をすべて慎重に除去した後、ペレットを１００μｌのＴＢＳに溶解する。この増幅された産物について次に力価を検定する。
バイオパニングの第１ラウンドの結果は５×１０-7％の収率を生ずる。第２回目のバイオパニングもビオチン化Ｃ−３４の１μｇと１×１０11ファージを用いて４×１０-3％の収率を得る。バイオパニングの第２ラウンドは第１ラウンドの場合と同様に濃縮しそして増幅する。第３ラウンドでは、０．０１μｇのビオチン化Ｃ−３４を２．５×１０11ファージに対してバイオパニングし、結果として３×１０-4％の収率を得た。第３ラウンドはペトリ皿から結合ファージを溶出した後中止する。この溶出液を濃縮せず増幅もしない。力価検定を各ラウンドの前と後に行い、そして収率％を最初のバクテリオファージ数に対する溶出画分で得られたバクテリオファージの数の比として計算する（クリスチャンら１９９２）。収率は一般にバックグラウンドを越え１０-5よりも大きくなるはずであり、典型的には１０-4から１０-1の値が観察される。バイオパニングの次のラウンドの収率％が増加することは、特に、親和性の増加したクローンが選択されていることを示唆する。
ミモトープペプチド（配列番号：１：ＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶ）に結合するペプチドの発見に向けられた研究のために、元のデカペプチド・ライブラリーに対する２ラウンドのバイオパニングが行われた。第１ラウンドではビオチン化ミモトープペプチドの１μｇを用いそして第２ラウンドでは０．０１μｇを用いた。得られた収率はそれぞれ３×１０-6％および２×１０-3％であった。
実験の一部では、約５００穴−分離コロニーを含むＮＺＹ＋Ｔｃ寒天プレートを用いて、クリスチャンら（１９９２）により記述されたように免疫学的スクリーニング試験を行うことができる。このコロニーをニトロセルロース膜フィルター（バイオラド・ラボラトリーズ、ハーキュリーズ、ＣＡ）に移し、そしてフィルターを直ちにＴＮＴ緩衝液（１０ｍＭトリス、ｐＨ８．０、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％トゥイーン２０）で２回洗浄し、ＴＮＴ緩衝液中の２０％正常ヤギ血清中で穏和に攪拌しながら室温で３０分間ブロックし、次いでブロック用緩衝液中に１：１０００倍希釈した第１モノクローン抗体中で室温で２時間インキュベートする。このフィルターを逐次的に洗浄する。各洗浄はそれぞれ室温で１０分間で、緩衝液Ａ（ＴＮＴ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ）での洗浄、緩衝液Ｂ（ＴＮＴ緩衝液＋０．１％ＢＳＡ＋０．１％ＮＰ−４０）での洗浄、そして次いで再び緩衝液Ａでの洗浄であり、ついで第２のペルオキシダーゼ−結合ヤギ抗−マウスＩｇＧの中で１〜１／２時間室温でインキュベートする。このフィルターを前のように洗浄し、次いでＴＮ（１０ｍＭのトリス、ｐＨ７．５、１５０ｍＭのＮａＣｌ）で最終の洗浄を行う。発色はフィルターをＡＢＴＳ基質中に置いた後に観察する。
次いで、個々のコロニーの小さな培養を、ａ）免疫学的スクリーニングで陽性であったコロニーを選択すること、またはｂ）スクリーニング工程を飛ばし無差別にコロニーを選択（約１００個）することのいずれかにより、一晩成長させる。各コロニーを２０μｇ／ｍｌテトラサイクリンを含むＮＺＹ培地２ｍｌ中に接種し、そしてこれらの小さな培養を激しく攪拌しながら３７℃で一晩成長させる。次の日培養物を遠心分離し細胞をペレットにし、上清を除去する。次いで、この上清１ｍｌに１５０μｌのＰＥＧ／ＮａＣｌを添加しそしてファージを４℃で一晩沈澱させる。次の遠心分離そして上清を除去した後、ペレットを１ｍｌのＴＢＳに溶解する。
ＤＮＡ配列決定のために、溶解したペレット４００μｌをフェノールで１回抽出し、そして得られる水相（約３００μｌ）を５００μｌのＴＥおよび８０μｌの３Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液に添加する。次いで、エタノール１ｍｌを添加し、一本鎖ＤＮＡを４℃で一晩沈澱させる。ついで各試料を４℃で３０分間ミクロフュージ（microfuge）し、このＤＮＡペレットを７０％エタノールで１回洗浄し、乾燥し、そして７μｌの水に再懸濁する。この鋳型は使用するまで−２０℃で貯蔵することができる。
挿入領域の両側にある極めてＧＣリッチなＳｆｉＩクローン部位により（クリスチャンら１９９２）、配列決定反応はシ−クエナーゼ７−デアザｄＧＴＰ・ＤＮＡシ−クエンシング・キット（アマシャム−ＵＳ・バイオケミカルズ、アーリントン・ハイツ、ＩＬ）を用い、32Ｐ−ｄＡＴＰおよび挿入部位のほぼ４０ヌクレオチド３’側に位置するアンチセンスプライマー（プライマーは配列番号：１００：５’−ＣＴＣＡＴＡＧＴＴＡＧＣＧＴＡＡＣＧ−３’を持つ）を使用して行う。ＩＢＩ・ＳＴＳ４５シークエンシング装置（イーストマン・コダック社、ロチェスター、ＮＹ）を使用して、試料を標準の６％シークエンシングゲル上に流す。
ＧＣＧソフトウェア（ジェネティクス・コンピュータ・グループ・インク、マジソン、ＷＩ）はコンセンサス配列を探すために多種のクローンから得られる配列を整列させるのに助けになる。結合部位を探している新規なモノクローン抗体の場合には、そしてモノクローン抗体Ｃ−３４の場合でさえも、ＧＰＩｂ・αの中だけでなく、ＧＰＩｂ・β、ＧＰＩＸの中、そして実際、入手可能なデータベース（スイス・プロット、ゲン・バンク、ＥＭＢＬ、その他）に寄託されている他の血小板タンパクの中の配列を調査することは興味があることは確かである。実際、この分析は特定のモノクローン抗体のエピトープがＧＰＩｂ／ＩＸ複合体の多重成分から構成されており、従って空間的に近接しているに違いないということを示唆する重要な新規の情報を与えてくれることもある。
この点で、ＥＬＩＳＡ試験は、クローンの数が多いときは、個々のクローンを評価するために使用することができる。簡単に述べると、２回のＰＥＧ沈澱を受け、続いて力価検定のために調整されたファージをビオチン化モノクローン抗体と共に一晩インキュベートし、続いてモノクローン抗体−ファージ混合物を予めホルマリン固定血小板（またはモノクローン抗体により認識される他の適当な固定化標的）で被覆されたミクロタイタープレートの穴に加えることができる。一連の洗浄工程の後、アビジン−ペルオキシダーゼを添加し、穴を再度洗浄し、発色原基質を添加し、そして最後に穴をＥＬＩＳＡプレート・リーダー上で読みとる。この試験でシグナル強度の相対的減少はさらに研究するための最も有望なクローンに関する指標を与える。このようにして同定されたコンセンサスペプチドは化学的に合成し元の抗体に結合する能力について決定される。ついで、この抗体に対する高い結合親和性を示すペプチドをマウスおよび／またはウサギの免疫原として使用することができる。
モノクローン抗体Ｃ−３４のエピトープマッピング研究
上に論じた二つのファージ表示ライブラリーをモノクローン抗体Ｃ−３４を用いるマッピング研究で採用した。バランスのとれた１０−マーペプチドライブラリーで得られた結果はバイオパニングの２ラウンドまたは３ラウンドの後に選択されたクローンの中の強いコンセンサスの形成に関して極めて決定的であった。９−マー配列、配列番号：３８：ＷＮＷＲＹＲＥＹＶに対する明らかなコンセンサスがあるばかりでなく、アミノ末端のアラニンを持つこの配列（配列番号：１）を含む１０−マーペプチドはバイオパニングにおいて最大の選択用の長所を持つように見えた。それはこの配列を持つクローンが最も高頻度で発見されたからである。
一連のクローニングされた配列は以下の形に整列して記述する。二重の下線はコンセンサスアミノ酸を表し、そして一本の下線を付したアミノ酸はこのコンセンサスに顕著なホモロジーを示すものである。
0003979448.tif 000013
そのアミノ酸レパートリにおいて部分的に制限されている第２のペプチド表示ライブラリーで得られた結果は、ミモトープ・コンセンサス配列、配列番号：３８の外観を全く持たないでＣ−３４に結合する一連のクローンを明らかにした。第２のライブラリーから得られたこの一連のクローニングされた配列には下記に配列した形が含まれている。配列番号：２２はＧＰＩｂ・αのアミノ酸４８４から４９９までの天然の配列であり、そして第２のライブラリーから単離されたクローンにより明らかにされたおそらく天然のエピトープ配列を表している。’はキモトリプシン切断の可能性のある部位を表す。上記のように、二重下線はこの第２のライブラリーの中の天然のものと思われる配列（配列番号：２２）を表し、そして一本下線を付したアミノ酸は天然のものと思われる配列に顕著なホモロジーを示している。
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下記のクローニングされた配列も第２のペプチド表示ライブラリーから得られたものであった。
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コンセンサス配列と天然の配列との比較
上記のペプチド（配列番号：３８）のコンセンサス配列とスイス・プロテインまたはＮＣＢＩデータバンク中のＧＰＩｂ・αまたは他の既知のタンパクの中の天然の配列とを関連付けようとする試みに相当の努力が払われた。そのような関係は発見されなかった。この配列は、従って、「ミモトープ」、すなわち、一次的アミノ酸配列レベルでは見掛けのホモロジーが欠如するにもかかわらず、天然のエピトープ（モノクローン抗体に対する結合部位）を模倣するペプチドを表している（ミモトープについては、モッティら１９９４、ラロッカら１９９２、レンストラら１９９２、バラスら１９９３、ホバートら１９９３、およびルッツァゴら１９９３を参照）。上記の配列番号：１〜２１および配列番号：６６を精査すれば気が付くように、選択されたクローンの全てがこのコンセンサスグループの一部であるようには見えない、そして天然エピトープに関するさらなる配列の手掛かりについて前進することが可能である。
そのアミノ酸レパートリが一部制限されている第２のペプチド表示ライブラリーを使用することにより、ミモトープ・コンセンサス・ペプチドの外観なしにＣ−３４に結合する別の一連のクローン（「Ｃ−３４ｂ」シリーズ）が得られた。これらのクローンの配列決定の後、このグループのクローンについてＦＡＳＴＡ分析（ピアソンおよびリップマン１９８８、ピアソン１９９０）を行った。この分析はＧＰＩｂ・αの配列に沿って７−アミノ酸ウインドウを動かし、一時に１個のアミノ酸を進め、そしてＧＰＩｂ・α分子中の位置の関数としてグループスコアを決定することにより行う。
その結果は、一般に、クローン内のコンセンサス形成という意味での強い調和を与えるものではない。しかしながら、この分析により明らかにされた天然のＧＰＩｂ’・α配列と思われる配列は配列番号：２２により表される。
集合研究
クエン酸添加のヒト血小板リッチな血漿（ＰＲＰ）は標準的方法で調製した（ミラーら１９８３）。ミモトープペプチドによるＣ−３４中和の研究のために、１５０，０００血小板／μｌを含むＰＲＰ３５０μｌをリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）、Ｃ−３４モノクローン抗体２０μｇ／ｍｌ、または種々の濃度のペプチドと予め２２℃で３０分間インキュベートしておいたＣ−３４の２０μｇ／ｍｌと共に２２℃で１０分間インキュベートした。ついでこのＰＲＰを３７℃に加温しそしてクロノ−ログ・ルミ−アグレゴメーター（クロノ−ログ・コーポレーション、ハバータウン、ＰＡ）中で１２００ｒｐｍで攪拌した。集合は１ｍｇ／ｍｌのリストセチン（ヘレナ・ラボラトリーズ、ボーモント、ＴＸ）の添加により開始した。潜在的抗−ミモトープペプチドを表示するバクテリオファージクローンのスクリーニングのために、ＰＥＧ／ＮａＣｌで沈澱させたファージ１５０μｌをクエン酸添加ＰＲＰ２５０μｌと共に２２℃で１時間インキュベートし、アグレゴメーターに移し、その後にリストセチンを最終濃度が０．８ｍｇ／ｍｌになるように添加した。ｖＷＦ−依存性血小板集合に対する合成ペプチドの阻害能力の研究は、ｐＨ６．０のＰＢＳに溶解した種々の希釈度のペプチド１５０μｌをホルマリン固定（マクファーランら１９７５）血小板（１．５×１０5／ｍｌ）と共に２２℃で２〜４時間プリインキュベートし、その後この混合物をアグレゴメーター中で３７℃まで加温し、精製したｖＷＦ（ミラーら１９８３）（１Ｕ／ｍｌ）を添加し、そして０．９ｍｇ／ｍｌリストセチンの添加により集合を開始させることにより行った。
合成されたペプチド
コンセンサス配列（配列番号：３８）を含むペプチドを化学的に合成した（ゲノシス・バイオテクノロジーズ、ウッドランド、テキサス）。この合成されたペプチドは配列番号：１：ＡＷＮＷＲＹＲＥＹＶに対応するアミノ酸配列を持っていた。このペプチドのアミノ末端のアラニンにビオチンを結合させた修飾化合物（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド・ヘキサン酸長鎖スペーサーアーム・ビオチン化）も合成した。化学的に合成されたビオチン化ペプチド１ｍｇを２０μｌのＤＭＳＯを含む水１ｍｌ中に溶解した。最終濃度２０μｇ／ｍｌでＣ−３４はクエン酸添加血小板リッチ血漿（ＰＲＰ）中でのリストセチン誘導集合の強力な阻害剤であり、この合成ペプチドの強さはこの条件の下でペプチドがＣ−３４の阻害活性を中和することができるか否かを試験することにより評価された。従って、種々の濃度の供試ペプチドまたは対照ペプチドと共にＣ−３４の約１０μｇを２２℃で３０分間インキュベートし、その後に混合物をＰＲＰに最終容量が約０．５ｍｌになるように添加し、２２℃でさらに１０分間インキュベートした。その結果得られる集合曲線（図１〜７）から見られるように、この合成ペプチドはＣ−３４を完全に中和し、約１．０μｇ／ｍｌでＣ−３４の１／２最大中和を生じ、これはビオチン化ペプチドの場合約０．５５μＭである。Ｃ−３４抗体中和の同様のパターンが、ペプチドの非ビオチン化型（配列番号：３８を持つもの）を使用したときに観察され、１／２最大中和が約３．０μＭであった。このペプチド（元のものまたはビオチン化されたもの）それ自体は血小板集合を誘導せず、またＡＤＰ−誘導集合に影響を与えない限り、非特異的効果を持つようには見えなかった。
より具体的には、図１はフォン・ウイルブラント因子の存在下における血小板のリストセチン誘導完全集合を示す。図２はモノクローン抗体Ｃ−３４の２０μｇ／ｍｌによる血小板のリストセチン誘導集合の阻害を示す。図３〜７は血小板のリストセチン誘導集合のモノクローン抗体Ｃ−３４の２０μｇ／ｍｌによる阻害の、配列番号：１を持つ合成ビオチン化ペプチドミモトープの０．１４、０．２７、０．５５、１．１、および２．３μＭの存在下におけるそれぞれの中和の種々の程度を示す。図３では、このペプチドの０．１４μＭはＣ−３４の阻害を中和しない。図７では、このペプチドの２．３μＭはＣ−３４阻害を完全に中和し、そして図４〜６はＣ−３４阻害の種々の程度の中和を示す。
合成ペプチドの別の使用
化学的に合成されたペプチドはウシ血清アルブミンに結合させることができ、そしてウサギでポリクローン抗体を高めるために使用することができる。標準的手順を用いてウサギを免疫化し、以下に述べるように血清を集めることができる。ポリクローン抗体は正常な血小板に並びに組換えＧＰＩｂ・αの野生型およびバリン２３３突然変異型に結合するその能力についてテストすることができる。血小板に結合する高い親和性を示すポリクローン抗体に対しては、次いで機能の研究をすることができる。これらの研究には、接着、集合、凝集、およびｖＷＦ結合が含まれる。立体障害がこの抗体のより具体的な調節効果の正確な評価を妨げているように見えるときは、ポリクローン抗体のＦ（ａｂ）’2およびＦａｂ断片を作成することができる（ベッカーおよびミラー１９８９、クピンスキーおよびミラー１９８６、およびミラーら１９８６）。ｖＷＦに結合する親和性の増強または低下に関連するコンホーメーションを認識したりまたは安定化する、合成ペプチドに対するポリクローン抗体を９５％以上の純度で得ることができ、そしてウシ血清アルブミンまたは別の担体タンパクに結合させてネズミのモノクローン抗体の生産に使用することができる。
合成ペプチドに対する抗体の生産
マウス：  モノクローン抗体生産はＢＡＬＢ／ｃマウスを用いて行うことができる。Ｂ−細胞ドナーマウスの免疫化はそれらを以下のようにタイターマックスTMアジュバントと混合した抗原で免疫化することを含むことができる。すなわち、１日目に、後横腹のそれぞれに５０μｇ抗原／２０μｌエマルジョン×２注射を筋肉内注射により投与する。２８日目および５６日目に血液試料を尾部採血により抜き出し、ＥＬＩＳＡ試験により力価をチェックする。力価のピーク時に（通常５６日）、マウスをＣＯ2吸入で麻酔をかけることができ、その後に脾摘出を行うことができ、そして脾臓細胞を収穫し標準的方法でハイブリドーマの調製を行う。
ウサギ：  ニュージーランド白ウサギ中でポリクローン抗体を生産させることができる。耳の動脈を介してケタミン／ロムプン（２０ｍｇ／ｋｇＩＭでケタミン塩酸塩および４ｍｇ／ｋｇＩＭでキシラジン塩酸塩）で鎮静化したウサギから予め免疫化した血清を集めることができる。全血容積の１０〜１５％を各採血時に集めることができる。耳の上の毛は＃４０クリッパーブレードで剃り、７０％アルコールで拭き、そして滅菌２２ゲージ・バターフライを用いて血液を集めることができる。この抗原をＲＩＢＩアジュバントまたはタイターマックスTMアジュバントと混合し、製造業者の指示に従って使用することができる。次いで、背中を剃り、７０％アルコールで拭き、そして抗原／アジュバント混合物の入った滅菌２５ゲージ針を用いて製造業者の推奨するように皮下および筋肉内に投与することができる。免疫血清試料を予め免疫された試料について記述されたように集めることができる。十分な力価に達したとき、動物の後部耳血管を介して深い麻酔がかかるまでペントバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ体重）で麻酔を掛けることができる。心臓穿刺を介してプラスチック遠心分離管中に血液を直ちに集めそして凝固させることができる。その後、この血液を遠心分離し、血清を吸引して−７０℃で凍結させることができる。安楽死のために、６０ｍｇ／ｋｇの投与量でペントバルビタールナトリウム麻酔下にウサギを心臓穿刺を介して瀉血することができる。
Ｃ−３４抗−ミモトープペプチドの開発
次いで、ミモトープデカペプチドそれ自体をプローブとして用いて「抗−ミモトープ」ペプチドの探索を行った。具体的には、幾つかのペプチドが溶液中で接触したミモトープペプチドのある部分と相互作用するかも知れないけれども、「抗−ミモトープ」ペプチドはバイオパニングの数ラウンドで選択されるものであるばかりでなく、天然のエピトープとの機能的相互作用のある尺度をも提供し、それにより元のモノクローン抗体に似るものとして定義されるであろう。図８に示すように、精製され続いてテストされた４６のバクテリオファージクローンの中の１個のクローンが機能的血小板試験でバックグラウンドレベルを越える阻害活性を示した。この「抗−ミモトープ」クローンは配列番号：９４：ＲＨＶＡＷＷＲＱＧＶを持つ配列を示した。この配列はそのカルボキシ末端半分はＧＰＩｂ・αの残基２３０〜２３４と同一であり、残基２３１に保存性（Ｌｙｓ→Ａｒｇ）置換だけを有していた。（ＧＰＩｂ・α配列の２２５〜２３７（配列番号：１０１）およびＧＰＩｂ・α配列の２２５〜２３４（配列番号：１７３：ＥＮＶＹＶＷＫＱＧＶ）を参照）。最終的に決定された５７のユニーク配列の中で、さらに５個の配列が以下に示すように種々の程度の構造的ホモロジーを示した。以下のものには付加的な抗−ミモトープ配列も含まれている。
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配列番号：９４：ＲＨＶＡＷＷＲＱＧＶを有する化学的に合成されたペプチドについてさらに研究が行われた。このデカペプチドはリストセチン−誘導集合を完全に阻害することができた。そのＩＣ50は２００〜４００μｇ／ｍｌの間に生じた（図９）。９位における一つの置換（Ｇｌｙ→Ｖａｌ）（配列番号：１０４）、これはＰＴ−ｖＷＤで観察された突然変異に対応するものであるが、これがほとんど完全な阻害は再び７１５μｇ／ｍｌで見られたが、このＩＣ50を僅かに下げた。天然の構造にもっと近く接近させるために、７位に一つの置換（Ａｒｇ→Ｌｙｓ）を持つペプチドを次に研究した。図１０に示すように、Ｌｙｓ含有ペプチドのＧｌｙ型とＶａｌ型の間により劇的な相違が観察された。ペプチドＲＨＶＡＷＷＫＱＶＶ（配列番号：１０５）は強い阻害活性を保持していたが、ペプチドＲＨＶＡＷＷＫＱＧＶ（配列番号：１０６）はテストされた最高濃度を除き僅かな阻害しか示すことができなかった。最後に、残基２３３にＧｌｙを含む野生型ＧＰＩｂ・αの２２８〜２３７ペプチド（配列番号：１０８）およびこの位置のＧｌｙをＶａｌに置換しているＰＴ−ｖＷＤ変異型（配列番号：１０７）の両方を合成した。図１１に示すように、この野生型ペプチドは実際に阻害活性を持たなかった。対照的に、ＰＴ−ｖＷＤ変異体に相当するペプチドは約４００μｇ／ｍｌのＩＣ50でリストセチン誘導集合を完全に阻害することができた。アグレゴメトリー（凝集度測定）の前に、凍結乾燥したペプチドをｐＨ６．０のＰＢＳ中で再構成し、そして種々の希釈度の１５０μｌを２５０μｌのホルマリン−固定血小板（１．５×１０5／ｍｌ）と共に２２℃で２〜４時間インキュベートした。アグレゴメトリーは１Ｕ／ｍｌの精製ｖＷＦを添加しその後に０．９ｍｇ／ｍｌのリストセチンを添加して行った。
ミモトープ／抗−ミモトープの三次元的記述
図１２ａ〜１２ｃはミモトープおよび抗−ミモトープの提案された三次元的記述を示す。図１２ａでは、モノクローン抗体Ｃ−３４を認識することができる元のエピトープ１０を含む血小板糖タンパクＩｂ・αの細胞外ドメイン内の領域を示す。図１２ｂはミモトープペプチド１２の構造を示す。これは元のエピトープのアミノ酸一次配列を共有せず、元のエピトープ（図１２ａに示す１０）を三次元空間で模倣している。このミモトープペプチド１２はモノクローン抗体Ｃ−３４を認識し、またはそれに結合する。
図１２ｃは抗−ミモトープペプチド１４の構造との関連でミモトープペプチド１２の構造を例示する。抗−ミモトープペプチド配列は、モノクローン抗体Ｃ−３４が元のエピトープに対してそうであったように、三次元空間でミモトープペプチドの表面に相補的である（図１２ａを参照）。
モノクローン抗体ＳＺ−２のエピトープマッピング研究
エピトープマッピング研究はモノクローン抗体ＳＺ−２を用いても行った。モノクローン抗体ＳＺ−２（ルアンら１９８７）を選択したのは、そのエピトープがＧＰＩｂ・αの４５ｋＤａ内にあることが知られており（フォックスら１９８８、モリノら１９９３）、ＳＺ−２がニトロセルロースに移す前にＳＤＳで変性させたＧＰＩｂ・α、グリコカリチンまたはＧＰＩｂ・α４５ｋＤａ断片に強くブロットするのでこのエピトープが比較的コンホーメーションに依存しないようであり（モリノら１９９３）、そしてこのモノクローン抗体が市販されておりそして広範かつ多様な基礎的研究および臨床的研究において世界中で使用されているように見えるからこのモノクローン抗体のエピトープの位置決定には広範囲の関心があるからである。
良くバランスのとれた、１０−マーの無差別ペプチド表示ライブラリーをＳＺ−２について使用した。２または３ラウンドのバイオパニングの後、その第３ラウンドでは免疫スクリーニングを行ったが、バクテリオファージクローンの配列決定を行い、そしてその結果予言されたペプチド配列を、成熟ＧＰＩｂ・α分子の最初の約３００アミノ酸の中に含まれると希望する明確なパターンに収斂させるため分析した。得られた表示配列を血小板表面に存在することが知られている入手可能な一連の糖タンパク配列、例えば、ＧＰＩａ、ＧＰＩｂ・α、ＧＰＩｂ・β、ＧＰIIｂ、ＧＰIIIａ、ＧＰIV、ＧＰIX、および血小板ＦＣγ2受容体などと比較した。
多重ファージ配列と天然の血小板配列との最も確かな対応は、ＧＰＩｂ・αの残基とよりも血小板ＦＣγ2受容体の残基とであり得る。これは以下の観察に基づく。すなわち、第一に、ＧＰＩｂ・αの残基１〜３００と比較したときのファージ配列のＧＣＧ  ＦＡＳＴＡ分析およびワードサーチ（ＷＯＲＤＳＥＡＲＣＨ）分析は幾つかの好ましい領域での類似性を確かに示すが、明確な適合として確信できるような形で現れる天然の分子中のアミノ酸の１個の短い鎖が存在しない。第二に、高度に精製したＰＥＧ沈澱物を調製し力価を検定した最初の５０クローンを用いてＥＬＩＳＡ試験を行ったが、その結果、ビオチン化ＳＺ−２へのファージの結合はそれに続くＳＺ−２の固定化グリコカリチンへの結合を阻害することである。５０クローンの中の僅か１個が配列番号：８３：ＷＨＷＲＳＳＷＫＳＧを持つ配列を示し、ＳＺ−２を完全に中和することができることが明らかになったが、その時使用可能であった他のクローンは中和能力において近付くものさえなかった。しかしながら、このクローンは一連のクローンの明らかな収斂パターンを代表するようには見えず、また、その時使用可能であった他のクローンよりもＧＰＩｂ・α内の配列に、より広い適合を提供するものでもなかった。しかしながら、他の血小板表面タンパクのコンピュータ支援分析では、この配列は以下に示す血小板ＦＣγ2受容体の領域に対する最高のＦＡＳＴＡスコアを持っていた。以下のリストではそれは提案されたコンセンサス配列リストで第２のペプチドとして示してある。さらに幾つかのクローンの配列を決定し、このシリーズの最初に示したペプチド−配列番号：８４：ＨＲＰＬＳＷＫＧＲＡが得られた。このペプチドもＳＷＫ配列を持つがＳＷＫのアミノ側に余分にＲと３残基を持つことに注意すべきである。
血小板ＦＣγ2受容体にマップされた収斂配列の下に、提案されたコンセンサスセットに最も近く適合するＧＰＩｂ・α内の配列が示してある。
0003979448.tif 000018
本明細書においては、好ましい態様が図示されそして詳細に記述されたが、関連分野における熟練者には、本発明の精神から逸脱することなく多様な修飾、付加、置換および同様なことがなし得ること、従ってこれらは以下の請求の範囲に記載したように本発明の範囲内にあるものと解すべきであることは明らかであろう。
引用文献リスト
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配列表
（1）一般情報
（i）出願人：ニューヨーク州立大学研究財団
（ii）発明の名称：ヒト血小板糖タンパクＩｂ／ＩＸのミモトープおよび抗−ミモトープ
（iii）配列の数：１７３
（iv）通信宛て名：
（A）名宛人：ニクソン、ハーグレイブ、デバンスおよびドイル  エルエルピー
（B）街：クリントン  スクェア、私書箱１０５１
（C）市：ロチェスター
（D）州：ニューヨーク
（E）国：アメリカ合衆国
（F）郵便番号：１４６０３
（v）コンピューター解読可能形式：
（A）媒体型：フロッピーディスク
（B）コンピュータ：IBM PC  互換機
（C）オペレイティングシステム：PC-DOS/MS-DOS
（D）ソストウエア：パテントイン  リリース＃1.0，
バージョン＃1.30
（vi）本出願データ：
（A）出願番号：PCT of Serial No．08/556,597
1995年11月13日出願
（B）出願日：上記
（C）分類：
（vii）代理人情報：
（A）氏名：スーザン  ジェイ．ブラマン
（B）登録番号：34,103
（C）照会先／ドケット番号：20884/102
（viii）テレコミュニケーション情報
（A）電話番号：（716）263-1636
（B）テレファックス：（716）263-1600
（2）配列番号：1に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：1
0003979448.tif 000019
（2）配列番号：2に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：2
0003979448.tif 000020
（2）配列番号：3に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：3
0003979448.tif 000021
（2）配列番号：4に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：4
0003979448.tif 000022
（2）配列番号：5に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：5
0003979448.tif 000023
（2）配列番号：6に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：6
0003979448.tif 000024
（2）配列番号：7に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：7
0003979448.tif 000025
（2）配列番号：8に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：8
0003979448.tif 000026
（2）配列番号：9に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：9
0003979448.tif 000027
（2）配列番号：10に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：10
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（2）配列番号：11に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：11
0003979448.tif 000029
（2）配列番号：12に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：12
0003979448.tif 000030
（2）配列番号：13に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：13
0003979448.tif 000031
（2）配列番号：14に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：14
0003979448.tif 000032
（2）配列番号：15に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：15
0003979448.tif 000033
（2）配列番号：16に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：16
0003979448.tif 000034
（2）配列番号：17に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：17
0003979448.tif 000035
（2）配列番号：18に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：18
0003979448.tif 000036
（2）配列番号：19に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：19
0003979448.tif 000037
（2）配列番号：20に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：20
0003979448.tif 000038
（2）配列番号：21に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：21
0003979448.tif 000039
（2）配列番号：22に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：16
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：22
0003979448.tif 000040
（2）配列番号：23に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：23
0003979448.tif 000041
（2）配列番号：24に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：24
0003979448.tif 000042
（2）配列番号：25に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：25
0003979448.tif 000043
（2）配列番号：26に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：26
0003979448.tif 000044
（2）配列番号：27に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：27
0003979448.tif 000045
（2）配列番号：28に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：28
0003979448.tif 000046
（2）配列番号：29に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：29
0003979448.tif 000047
（2）配列番号：30に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：30
0003979448.tif 000048
（2）配列番号：31に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：31
0003979448.tif 000049
（2）配列番号：32に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：32
0003979448.tif 000050
（2）配列番号：33に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：33
0003979448.tif 000051
（2）配列番号：34に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：34
0003979448.tif 000052
（2）配列番号：35に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：35
0003979448.tif 000053
（2）配列番号：36に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：36
0003979448.tif 000054
（2）配列番号：37に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：37
0003979448.tif 000055
（2）配列番号：38に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：9
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：38
0003979448.tif 000056
（2）配列番号：39に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：39
0003979448.tif 000057
（2）配列番号：40に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：40
0003979448.tif 000058
（2）配列番号：41に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：41
0003979448.tif 000059
（2）配列番号：42に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：42
0003979448.tif 000060
（2）配列番号：43に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：43
0003979448.tif 000061
（2）配列番号：44に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：44
0003979448.tif 000062
（2）配列番号：45に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：45
0003979448.tif 000063
（2）配列番号：46に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：46
0003979448.tif 000064
（2）配列番号：47に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：47
0003979448.tif 000065
（2）配列番号：48に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：48
0003979448.tif 000066
（2）配列番号：49に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：49
0003979448.tif 000067
（2）配列番号：50に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：50
0003979448.tif 000068
（2）配列番号：51に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：51
0003979448.tif 000069
（2）配列番号：52に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：52
0003979448.tif 000070
（2）配列番号：53に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：53
0003979448.tif 000071
（2）配列番号：54に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：54
0003979448.tif 000072
（2）配列番号：55に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：55
0003979448.tif 000073
（2）配列番号：56に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：56
0003979448.tif 000074
（2）配列番号：57に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：57
0003979448.tif 000075
（2）配列番号：58に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：58
0003979448.tif 000076
（2）配列番号：59に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：59
0003979448.tif 000077
（2）配列番号：60に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：60
0003979448.tif 000078
（2）配列番号：61に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：61
0003979448.tif 000079
（2）配列番号：62に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：62
0003979448.tif 000080
（2）配列番号：63に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：63
0003979448.tif 000081
（2）配列番号：64に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：64
0003979448.tif 000082
（2）配列番号：65に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：65
0003979448.tif 000083
（2）配列番号：66に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：66
0003979448.tif 000084
（2）配列番号：67に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：67
0003979448.tif 000085
（2）配列番号：68に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：68
0003979448.tif 000086
（2）配列番号：69に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：69
0003979448.tif 000087
（2）配列番号：70に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：70
0003979448.tif 000088
（2）配列番号：71に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：71
0003979448.tif 000089
（2）配列番号：72に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：72
0003979448.tif 000090
（2）配列番号：73に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：73
0003979448.tif 000091
（2）配列番号：74に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：74
0003979448.tif 000092
（2）配列番号：75に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：75
0003979448.tif 000093
（2）配列番号：76に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：76
0003979448.tif 000094
（2）配列番号：77に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：77
0003979448.tif 000095
（2）配列番号：78に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：78
0003979448.tif 000096
（2）配列番号：79に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：79
0003979448.tif 000097
（2）配列番号：80に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：80
0003979448.tif 000098
（2）配列番号：81に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：81
0003979448.tif 000099
（2）配列番号：82に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：82
0003979448.tif 000100
（2）配列番号：83に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：83
0003979448.tif 000101
（2）配列番号：84に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：84
0003979448.tif 000102
（2）配列番号：85に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：85
0003979448.tif 000103
（2）配列番号：86に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：86
0003979448.tif 000104
（2）配列番号：87に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：87
0003979448.tif 000105
（2）配列番号：88に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：88
0003979448.tif 000106
（2）配列番号：89に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：89
0003979448.tif 000107
（2）配列番号：90に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：90
0003979448.tif 000108
（2）配列番号：91に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：91
0003979448.tif 000109
（2）配列番号：92に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：92
0003979448.tif 000110
（2）配列番号：93に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：93
0003979448.tif 000111
（2）配列番号：94に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：94
0003979448.tif 000112
（2）配列番号：95に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：95
0003979448.tif 000113
（2）配列番号：96に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：96
0003979448.tif 000114
（2）配列番号：97に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：97
0003979448.tif 000115
（2）配列番号：98に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：98
0003979448.tif 000116
（2）配列番号：99に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：99
0003979448.tif 000117
（2）配列番号：100に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：18
（B）配列の型：核酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：cDNA
（xi）配列：配列番号：100
0003979448.tif 000118
（2）配列番号：101に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：13
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：101
0003979448.tif 000119
（2）配列番号：102に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：15
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：102
0003979448.tif 000120
（2）配列番号：103に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：19
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：103
0003979448.tif 000121
（2）配列番号：104に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：104
0003979448.tif 000122
（2）配列番号：105に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：105
0003979448.tif 000123
（2）配列番号：106に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：106
0003979448.tif 000124
（2）配列番号：107に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：107
0003979448.tif 000125
（2）配列番号：108に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：108
0003979448.tif 000126
（2）配列番号：109に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：109
0003979448.tif 000127
（2）配列番号：110に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：110
0003979448.tif 000128
（2）配列番号：111に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：111
0003979448.tif 000129
（2）配列番号：112に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：112
0003979448.tif 000130
（2）配列番号：113に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：113
0003979448.tif 000131
（2）配列番号：114に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：114
0003979448.tif 000132
（2）配列番号：115に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：115
0003979448.tif 000133
（2）配列番号：116に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：116
0003979448.tif 000134
（2）配列番号：117に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：117
0003979448.tif 000135
（2）配列番号：118に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：118
0003979448.tif 000136
（2）配列番号：119に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：119
0003979448.tif 000137
（2）配列番号：120に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：120
0003979448.tif 000138
（2）配列番号：121に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：121
0003979448.tif 000139
（2）配列番号：122に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：122
0003979448.tif 000140
（2）配列番号：123に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：123
0003979448.tif 000141
（2）配列番号：124に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：124
0003979448.tif 000142
（2）配列番号：125に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：125
0003979448.tif 000143
（2）配列番号：126に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：126
0003979448.tif 000144
（2）配列番号：127に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：127
0003979448.tif 000145
（2）配列番号：128に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：128
0003979448.tif 000146
（2）配列番号：129に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：129
0003979448.tif 000147
（2）配列番号：130に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：130
0003979448.tif 000148
（2）配列番号：131に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：131
0003979448.tif 000149
（2）配列番号：132に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：132
0003979448.tif 000150
（2）配列番号：133に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：133
0003979448.tif 000151
（2）配列番号：134に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：134
0003979448.tif 000152
（2）配列番号：135に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：135
0003979448.tif 000153
（2）配列番号：136に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：136
0003979448.tif 000154
（2）配列番号：137に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：137
0003979448.tif 000155
（2）配列番号：138に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：12
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：138
0003979448.tif 000156
（2）配列番号：139に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：139
0003979448.tif 000157
（2）配列番号：140に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：140
0003979448.tif 000158
（2）配列番号：141に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：141
0003979448.tif 000159
（2）配列番号：142に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：142
0003979448.tif 000160
（2）配列番号：143に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：143
0003979448.tif 000161
（2）配列番号：144に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：144
0003979448.tif 000162
（2）配列番号：145に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：145
0003979448.tif 000163
（2）配列番号：146に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：146
0003979448.tif 000164
（2）配列番号：147に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：147
0003979448.tif 000165
（2）配列番号：148に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：148
0003979448.tif 000166
（2）配列番号：149に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：149
0003979448.tif 000167
（2）配列番号：150に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：150
0003979448.tif 000168
（2）配列番号：151に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：151
0003979448.tif 000169
（2）配列番号：152に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：152
0003979448.tif 000170
（2）配列番号：153に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：153
0003979448.tif 000171
（2）配列番号：154に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：154
0003979448.tif 000172
（2）配列番号：155に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：155
0003979448.tif 000173
（2）配列番号：156に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：156
0003979448.tif 000174
（2）配列番号：157に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：157
0003979448.tif 000175
（2）配列番号：158に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：158
0003979448.tif 000176
（2）配列番号：159に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：159
0003979448.tif 000177
（2）配列番号：160に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：160
0003979448.tif 000178
（2）配列番号：161に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：161
0003979448.tif 000179
（2）配列番号：162に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：162
0003979448.tif 000180
（2）配列番号：163に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：163
0003979448.tif 000181
（2）配列番号：164に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：164
0003979448.tif 000182
（2）配列番号：165に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：165
0003979448.tif 000183
（2）配列番号：166に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：166
0003979448.tif 000184
（2）配列番号：167に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：167
0003979448.tif 000185
（2）配列番号：168に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：168
0003979448.tif 000186
（2）配列番号：169に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：169
0003979448.tif 000187
（2）配列番号：170に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：170
0003979448.tif 000188
（2）配列番号：171に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：171
0003979448.tif 000189
（2）配列番号：172に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：172
0003979448.tif 000190
（2）配列番号：173に関する情報：
（i）配列の特徴：
（A）配列の長さ：10
（B）配列の型：アミノ酸
（C）鎖の数：一本鎖
（D）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：ペプチド
（xi）配列：配列番号：173
0003979448.tif 000191
【図１】
0003979448.tif 000194
【図２】
0003979448.tif 000195
【図３】
0003979448.tif 000196
【図４】
0003979448.tif 000197
【図５】
0003979448.tif 000198
【図６】
0003979448.tif 000199
【図７】
0003979448.tif 000200
【図８】
0003979448.tif 000201
【図９】
0003979448.tif 000202
【図１０】
0003979448.tif 000203
【図１１】
0003979448.tif 000204
【図１２ａ】
0003979448.tif 000205
【図１２ｂ】
0003979448.tif 000206
【図１２ｃ】
0003979448.tif 000207