(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式(I):
【化１】
0003965455.tif 000015
〔式中のR1はメチル基を示し、R2はtert-ブチルジフェニルシリル基を示し、かつR3はアセチル基を示す〕で表されるビニル化デオキシグアノシン誘導体又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明はビニル化デオキシグアノシン誘導体又はその塩に関する。より詳細にいうと、本発明は、核酸のクロスリンク剤あるいはクロスリンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸の製造に有用なビニル化デオキシグアノシン誘導体又はその塩に関する。
【０００２】
【従来の技術】
特定の遺伝子やメッセンジャーRNA (m-RNA) などの核酸に対して、その核酸配列と相補的な塩基配列を有するアンチセンスオリゴ核酸を特異的に結合させ、遺伝子発現を抑制する方法が知られている。この方法は、生化学的な実験ツールとして利用されるばかりではなく、本格的な遺伝子治療に応用できる可能性があることから、生化学及び医学・薬学の分野において大きな関心がもたれている。
【０００３】
この方法を効率的に行うためには、相補的結合により生成する二重鎖又は三重鎖複合体の安定化が必要とされており、安定化のための種々の手段が提案されている。その代表的なものとして、例えば、アルキル化能を有する官能基をオリゴ核酸中に導入し、遺伝子DNA やm-RNA などの標的核酸と共有結合しうる能力（クロスリンク能）を付与したアンチセンスオリゴ核酸が知られている（例えば、Volssov, V.V. et al., Nucleic Acid Res., 14, 4065, 1986; Webb, T.R. et al., J. Am. Chem. Soc., 108, 2764, 1986; Baker, B.F. et al., J. Am. Chem. Soc., 111, 2700, 1989などを参照）。
【０００４】
しかしながら、このように修飾されたアンチセンスオリゴ核酸の多くは、クロスリンク速度が遅いという問題があり、また反応性が高いものは化学的安定性が低いという欠点を有している。このようなアンチセンスオリゴ核酸を生体に適用することは望ましくない(Rokita, S.E. et al., J. Am. Chem. Soc., 116, 1690, 1994）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、標的核酸に効率的にクロスリンクする性質を有するアンチセンスオリゴ核酸中の製造に有用な化合物を提供することにある。また、本発明の課題は、上記のような化合物であって、化学的に安定な化合物を提供することにある。さらに本発明の別な課題は、上記の特徴を有する化合物であって、生体に適用可能なアンチセンスオリゴ核酸の製造に有用な化合物を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記の課題を解決すべく鋭意検討を重ねた結果、下記構造のビニル化グアノシン誘導体が化学的に安定であり、かつ求核性ヌクレオチドと容易に反応して強固なクロスリンクを形成できることを見い出した。また、上記の化合物が、標的遺伝子核酸に対して効率的にクロスリンクする性質を有するアンチセンスオリゴ核酸の製造に有用であることを見い出した。本発明はこれらの知見を基にして完成されたものである。
【０００７】
すなわち本発明は、下記式(I):
【化３】
0003965455.tif 000002
で示される化合物；上記化合物からなるアンチセンスオリゴ核酸製造用中間体；及びクロスリンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸の製造に用いる上記製造用中間体を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
上記式(I) 中のR1、R2、及びR3は、下記の(1) 〜(3) のいずれかにより定義される。
(1)R1 は水素原子を示し、R2は水素原子、tert- ブチルジフェニルシリル基、若しくは下記の式：
【化４】
0003965455.tif 000003
（式中、R4は水素原子若しくはジ（p-メトキシフェニル）フェニルメチル基を示す）で示される基を示し、かつR3はアセチル基を示す；
(2) R1はメチル基を示し、R2はtert- ブチルジフェニルシリル基を示し、かつR3はアセチル基を示す；又は
(3) R1はトリメチルシリル基を示し、R2はtert- ブチルジフェニルシリル基を表し、かつR3は水素原子、アセチル基、若しくは-P(O)(OH)Hを示す。
【０００９】
上記化合物は、酸付加塩又は塩基付加塩を形成する場合があるが、このような塩も本発明の範囲に包含される。本発明の化合物自体をクロスリンク剤として生体に適用する場合や、生体に適用可能なアンチセンスオリゴ核酸の製造のための製造中間体として用いる場合には、塩としては生理的に許容されるものが好ましい。塩基付加塩としては、例えば、トリエチルアミン、ジメチルアミン、アンモニア、トリエチルアミン、若しくはジエチルアミン等のアミン類の塩；又はナトリウム、カリウム、カルシウム、若しくはマグネシウム等の金属類の塩を挙げることができる。酸付加塩としては、例えば、塩酸、硫酸、若しくは過塩素酸等の鉱酸類の塩；又はシュウ酸、フマル酸、マレイン酸、酢酸、プロピオン酸、メタンスルホン酸、若しくはp-トルエンスルホン酸等の有機酸等との塩を挙げることができる。
【００１０】
本発明の化合物を以下の表１に具体的に示す。表中、R2として「化４」と示されている場合には、R2がチミジル酸誘導体の基（上記〔化４〕で示される基）であり、該基におけるR4がそれぞれ表中に示されたものであることを示す。また、表中、Ac、Me、Et、TBDPS 、TMS 、及びDMTrは、それぞれ、アセチル基、メチル基、エチル基、tert- ブチルジフェニルシリル基、トリメチルシリル基、及びジ (p-メトキシフェニル）フェニルメチル基を表す（以下、本明細書中において同様である）。
【００１１】
【表１】
0003965455.tif 000004
【００１２】
本発明化合物の製造方法の例を下記スキームに従って説明するが、本発明の化合物の製造方法はこれらの方法に限定されることはない。スキーム中、X は塩素原子、臭素原子、p-トルエンスルホニルオキシ基、又はトリフルオロメタンスルホニルオキシ基などの脱離基を表し、Met はトリブチルスズ、マグネシウムハライド等の金属を表す（以下のスキームにおいて同様である）。
【００１３】
【化５】
0003965455.tif 000005
【００１４】
化合物(2):
ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、又はジメチルホルムアミド若しくはジメチルスルホキシド等の非プロトン性極性溶媒等の適当な溶媒中、2'- デオキシグアノシン(1) をトリエチルアミン、イミダゾール等の塩基の存在下で0.2 〜10当量の塩化 tert-ブチルジフェニルシランと反応させることにより化合物(2) を製造することができる。通常の場合、反応は-20 ℃〜+150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００１５】
化合物(3):
ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、又はそれらの混合溶媒中で、化合物(2) を0.2 〜 100当量の無水酢酸若しくは塩化アセチルなどのアセチル化剤とピリジン若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に反応させるか、あるいは上記アセチル化剤を溶媒兼用で用いて、必要により上記塩基存在下に反応させることにより、化合物(3) を製造することができる。通常の場合、反応は０〜 150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００１６】
化合物(4):
ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中で、化合物(3) を例えば、0.2 〜 100当量のp-トルエンスルホニルクロリド、メタンスルホニルクロリド、若しくはトリフルオロメタンスルホニルクロリド、又はp-トルエンスルホン酸無水物、メタンスルホン酸無水物、若しくはトリフルオロメタンスルホン酸無水物などのスルホニル化剤とピリジン若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に反応させるか、あるいは上記スルホニル化剤を溶媒兼用で用いて、必要により上記塩基存在下に反応させることにより、化合物(4) を製造することができる。通常の場合、反応は０〜 150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。上記反応において、ジメチルアミノピリジン等の反応促進剤を0.01〜10当量共存させてもよい。
【００１７】
また、ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中、あるいは溶媒の非存在下に、化合物(3) を0.2 〜 100当量のオキシ塩化リン、オキシ臭化リン、五塩化リン、若しくは塩化チオニル等のハロゲン化剤で処理することによっても化合物(4) を製造することができる。通常の場合、反応は０〜 150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００１８】
化合物(Ia):
ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン若しくはジオキサン等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中で、ビニルトリブチル錫若しくはビニルマグネシウムブロミド等のビニル金属化合物(5) 0.2 〜 100当量と化合物(4) とを0.0001〜１当量の触媒の存在下に反応させることにより化合物(Ia)を製造することができる。触媒としては、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム若しくは塩化ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム等のパラジウム触媒、又は塩化ビス（アセチルアセトナート）ニッケル等のニッケル触媒を用いることができる。上記反応をピリジン若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に行ってもよい。通常の場合、反応は０〜 150℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００１９】
化合物(Ib):
テトラヒドロフラン若しくはエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中で、化合物(Ia)をフッ化テトラブチルアンモニウム若しくはフッ化カリウム等の含フッ素化合物 0.2〜 100当量と反応させることにより化合物(Ib)を製造することができる。通常の場合、反応は０〜 100℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００２０】
化合物(Ic):
アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、若しくはジメチルスルホキシド等の適当な溶媒中、化合物(Ib)を0.2 〜 100当量の1-テトラゾール存在下に0.2 〜10当量のβ−シアノエチルホスホラミダイトデオキシチミン(6) と０〜 100℃で５分間〜24時間反応させた後、得られた生成物とt-ブチルハイドロペルオキシド若しくはクメンペルオキシド等の過酸化物とを反応させることにより、化合物(Ic)を製造することができる。通常の場合、反応は -20〜50℃で５分間〜24時間程度行えばよい。
【００２１】
化合物(Id):
ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中、あるいは溶媒の非存在下に、化合物(Ic)を0.2 〜 100当量のトリフルオロ酢酸若しくはジクロロ酢酸等の有機酸、又は塩酸若しくは硫酸等の鉱酸で処理することにより化合物(Id)を製造することができる。反応は一般的に -20〜50℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００２２】
【化６】
0003965455.tif 000006
【００２３】
化合物(IIa):
スキーム１中の化合物(4) と化合物(5) から化合物(Ia)を製造する反応の条件に準じて、化合物(4) と化合物(7) とを反応させることにより、化合物(IIa) を製造することができる（上記スキーム２を参照）。
【００２４】
【化７】
0003965455.tif 000007
【００２５】
化合物(IIIa)及び化合物(IIIb):
スキーム１中の化合物(4) と化合物(5) から化合物(Ia)を製造する反応の条件に準じて、化合物(4) と化合物(8) とを反応させることにより、化合物(IIIa)を製造することができる（上記スキーム３を参照）。テトラヒドロフラン若しくはエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド、水、若しくはメタノール等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中で、化合物(IIIa)を 0.2〜 100当量の水酸化ナトリウム若しくは水酸化カリウム等の金属水酸化物と反応させることにより、化合物(IIIb)を製造することができる。反応は、一般的に０〜100 ℃の温度で５分間〜24時間行えばよい。
【００２６】
化合物(IIIc):
ベンゼン若しくはトルエン等の芳香族炭化水素系溶媒、ジクロロメタン若しくはクロロホルム等のハロゲン化炭化水素系溶媒、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル等のエーテル系溶媒、ジメチルホルムアミド等の極性溶媒、又はそれらの混合溶媒中、0.5 〜50当量のN-メチルモルホリン若しくはトリエチルアミン等の塩基存在下に、化合物(IIIb)をリン化合物(9) と反応させた後、生成物にトリエチルアミンを作用させることにより化合物(IIIc)を製造することができる。リン化合物(9) は、例えば0.5 〜10当量の三塩化リンと0.5 〜10当量の1,2,4-トリアゾールを -20〜50℃で５分間〜24時間反応させることにより調製することができる。通常の場合、上記反応は-100〜50℃の温度で５分間〜48時間行えばよい。
【００２７】
本発明の化合物は、シチジンやグアノシンと速やかに付加体を形成することができるので、本発明の化合物を製造中間体として用いることにより、遺伝子DNA やm-RNA などの標的核酸に対して相補的に結合し、かつ共有結合によるクロスリンクを形成するアンチセンスオリゴ核酸を製造することができる。従って、本発明の別の態様により、本発明の化合物からなるアンチセンスオリゴ核酸製造用中間体、好ましくはクロスリンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸製造用中間体が提供される。また、上記化合物を製造用中間体として用いて製造されたアンチセンスオリゴ核酸、好ましくはクロスリンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸も、本発明の範囲に包含される。もっとも、本発明の上記化合物の用途は、これらの用途に限定されることはない。
【００２８】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。また、上記の一般的な製造方法の説明及び下記の実施例に記載した試薬や反応条件には適宜の修飾や改変が可能であることはいうまでもない。なお、実施例中の化合物番号は上記スキーム中の化合物番号に対応している。
【００２９】
【実施例】
例１：5'-O-tert-ブチルジフェニルシリル-2'-デオキシグアノシン(2)
アルゴン気流下、2'- デオキシグアノシン (2.0 g 、7.2 mmol) の無水 DMF (30 ml)懸濁液に t- ブチルクロロジフェニルシラン (3.0 ml、12 mmol)とイミダゾール (1.5 g 、21 mmol)を加え、室温にて５時間攪拌した。５時間後、反応層に水 (30 ml)を加えて得られた結晶を濾取し、酢酸エチルで洗浄した。メタノールから再結晶し、化合物(2) を無色粉末状結晶として得た (1.5 g 、3.0 mmol、収率 41%) 。m.p.: 163-166 ℃。
【００３０】
1H-NMR (DMSO-d6)  δ 10.60 (1H,brs), 7.80 (1H,s), 7.7-7.3 (10H,m), 6.48 (2H,s), 6.14 (1H,t,J=6.6Hz), 5.38 (1H,d,J=4.0Hz), 4.50-4.40 (1H,m), 3.95-3.65 (2H,s), 2.65-2.45 (1H,m), 2.35-2.20 (1H,m), 0.99 (9H,s)
IR (cm-1, neat) : 3600-2700, 1680, 1630
FABMS (m/z) : 506(M+1)+ , 528(M+23) + 
0003965455.tif 000008
【００３１】
例２：3'-O- アセチル-5'-O-tert- ブチルジフェニルシリル-2'-デオキシグアノシン(3)
アルゴン気流下、化合物(2) (870 mg 、1.7 mmol) の無水ピリジン (35 ml)溶液に無水酢酸 (0.8 ml、8.5 mmol) を加え、85℃で攪拌を行った。５時間後、反応層を酢酸エチル (50 ml)で希釈し、水 (20 ml ×2)及び飽和食塩水 (20 ml)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をアセトニトリルから再結晶し  化合物(3) を無色粉末状結晶として得た (651 mg、1.2 mmol、収率 70%) 。m.p.: 226-229 ℃。
【００３２】
1H-NMR (CDCl3)  δ 12.01 (1H,brs), 7.80-7.30 (10H,m), 6.23 (3H,dd,J=8.7, 5.8Hz), 5.53 (1H,d,J=5.9Hz), 4.20 (1H,m), 3.89 (2H,d,J=3.6Hz), 2.85-2.70 (1H,m), 2.60-2.45 (1H,m), 2.10 (3H,s), 0.99 (9H,s)
IR (cm-1, neat) : 3500-2600, 1740, 1680, 1600
FABMS (m/z) : 548(M+1)+ , 570(M+23) + 
0003965455.tif 000009
【００３３】
例３：3'-O- アセチル-5'-O-tert- ブチルジフェニルシリル -6-O-p-トルエンスルホニル-2'-デオキシグアノシン(4)
アルゴン気流下、化合物(3) (625 mg 、1.14 mmol)の無水ジクロロメタン (15 ml)溶液を０℃に冷却し、トリエチルアミン (0.5 ml、3.59 mmol)、p-トルエンスルホニルクロリド (1.08 g、5.65 mmol)及びジメチルアミノピリジン (43.3 mg 、0.355 mmol) を加えて攪拌を行った。20時間後、反応層をクロロホルム (15 ml)で希釈し、有機層を水 (10 ml)で洗浄、水層をクロロホルム (10 ml ×2)で逆抽出した。有機層を合わせて、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、クロロホルム−酢酸エチル 9:1→4:1)にて精製し  化合物(4) を無色カラメル状物質として得た (800 mg、1.14 mmol 、収率 100%)。
【００３４】
1H-NMR (CDCl3)  δ 8.02 (2H,d,J=8.3Hz), 7.87 (1H,s), 7.70-7.60 (4H,m), 7.50-7.30 (8H,m), 6.26 (1H,dd,J=8.7, 5.4Hz), 5.55 (1H,m), 4.91 (2H,s), 4.25-4.15 (1H,m), 3.90 (2H,m), 2.90-2.75 (1H,m), 2.60-2.40 (1H,m), 2.45 (3H,s), 2.11 (3H,s), 1.06 (9H,s)
IR (cm-1, neat) : 3600-3000, 1740, 1620
FABMS (m/z) : 702(M+1)+ , 644(M-57) + 
0003965455.tif 000010
【００３５】
例４：9-(3-O- アセチル-5-O-tert-ブチルジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-ビニルプリン(Ia)
アルゴン気流下、化合物(4) (320 mg 、0.46 mmol)の無水ジオキサン (5 ml) 溶液に塩化リチウム (40 mg 、0.94 mmol)及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(0) (110 mg 、0.095 mmol) を加えて室温にて攪拌した。30分後、ビニルトリ (n-ブチル）錫 (760 μl 、2.3 mmol) を加えて、加熱還流した。90分後、反応層を酢酸エチル-10%アンモニア水 (30 ml: 3 ml)にあけ、有機層を 10%アンモニウム水 (3 ml) 、飽和食塩水 (3 ml×2)  で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム−酢酸エチル 4:1) にて精製し化合物(Ia)を淡黄色カラメル状物質として得た (150 mg、0.27 mmol 、収率 59%) 。
【００３６】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.93 (1H,s), 7.75-7.30 (10H,m), 7.13 (1H,dd,J=17.6, 10.7Hz), 6.86 (1H,dd,J=17.6, 1.9Hz), 6.34 (1H,dd,J=8.9, 5.6Hz), 5.85 (1H,dd,J=10.7, 1.9Hz), 5.56 (1H,m), 4.87 (2H,s), 4.20 (1H,m), 3.90 (2H,m), 2.95-2.75 (1H,m), 2.60-2.50 (1H,m), 2.12 (3H,s), 1.07 (9H,s)
IR (cm-1, neat) : 3600-3100, 1740, 1600
FABMS (m/z) : 558(M+1)+ , 500(M-57) + 
0003965455.tif 000011
【００３７】
例５：9-(3-O- アセチル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-ビニルプリン(Ib)
アルゴン気流下、化合物(Ia) (25 mg 、46μmol)の無水テトラヒドロフラン (0.1 ml) 溶液を０℃に冷却し、テトラブチルアンモニウムフルオリド(100μl 、100 μmol 、THF 中 1M 溶液）を滴下した。１時間後、反応層をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、ヘキサン−酢酸エチル 9:1) にて精製し化合物(Ib)を無色油状物質として得た (14 mg 、44μmol 、収率 98%) 。
【００３８】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.77 (1H,s), 7.12 (1H,dd,J=17.5, 10.9Hz), 6.89 (1H,dd,J=17.6, 1.8Hz), 6.21 (1H,dd,J=9.9, 5.6Hz), 5.89 (1H,dd,J=10.6, 2.0Hz), 5.53 (1H,d,J=5.6Hz), 5.07 (2H,brs), 4.25 (1H,m), 3.20 (1H,dd,J=9.2, 5.0Hz), 2.38 (1H,dd,J=14.0, 5.4Hz), 2.13 (3H,s)
IR (cm-1,neat) : 3350, 3200, 1730
FABMS (m/z) : 320(M+1)+ , 550(M-31) + 
【００３９】
例６：5'-O- ジ（パラメトキシフェニル）フェニルメチルチミジリル-(3'-5')-9-(3-O-アセチル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-ビニルプリン-3'-[P- β-(シアノエチル）エステル(Ic)
アルゴン気流下、化合物(Ib) (24 mg 、75μmol)とT-ベータアミダイト(84 mg、110 μmol)の無水アセトニトリル (0.5 ml) 溶液に、1-テトラゾール(6) (73 mg、90μmol)を加えて室温にて攪拌を行った。２時間攪拌後、反応層を０℃に冷却し、t-ブチルヒドロパーオキサイド (16μl 、86μmol 、トルエン中 5.4M 溶液）を加えて攪拌を続けた。２時間後、不溶物を濾去し減圧下溶媒留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、クロロホルム−メタノール 99:1 →95:5) にて精製し化合物(Ic)を無色油状物質として得た (29 mg 、30μmol 、収率 40%) 。
【００４０】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.86 (1H,s), 7.53 (0.5H,d,J=0.99Hz), 7.46 (0.5H,d,J=13Hz), 7.42-7.17 (10H,m), 7.10 (1H,ddd,J=17.5, 10.9, 2.6Hz), 6.90-6.77 (4H,m), 6.44-6.33 (1H,m), 6.30-6.23 (1H,m), 5.84 (1H,ddd,J=10.9, 3.6, 1.98Hz), 5.47 (1H,dd,J=15.8, 5.3Hz), 5.35-5.25 (3H,m), 5.22-5.10 (1H,m), 4.60-4.05 (6H,m), 3.79 (6H,s), 3.55-3.27 (3H,m), 2.72-2.24 (5H,m), 2.12 (1.5H,s), 2.11 (1.5H,s), 1.41 (1.5H,d,J=0.99Hz), 1.38 (1.5H,d,J=0.99Hz)
IR (cm-1,neat) : 3480, 3340, 3200, 1740, 1690, 1600
FABMS (m/z) : 979(M+1)+ 
【００４１】
例７：チミジリル-(3'-5')-9-(3-O-アセチル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-ビニルプリン-3'-[P- β-(シアノエチル）エステル(Id)
化合物(Ic) (2.0 mg、2.0 μmol)に、 CHCl3 0.1 ml 中のトリフルオロ酢酸 (0.2 ml、3 μmol)を滴下した。５分後、反応層にエーテル (ca. 1 ml) を加えて、析出する結晶を濾取し、化合物(Id)を無色粉状物質として得た (0.6 mg、0.9 μmol 、収率 45%) 。
【００４２】
1H-NMR (CDCl3)  δ 8.36 (0.5H,s), 8.32 (0.5H,s), 7.44 (0.5H,s), 7.43 (0.5H,s), 7.12-7.03 (1H,m), 6.35-6.26 (1H,m), 6.22-6.13 (1H,m), 6.06-5.96 (1H,m), 5.58-5.48 (1H,m), 5.22-5.03 (1H,m), 4.63-4.17 (7H,m), 3.91-3.73 (3H,m), 3.54-3.19 (3H,m), 2.82-2.72 (2H,m), 2.60-2.36 (2H,m), 2.16 (1.5H,s), 2.15 (1.5H,s), 1.91 (1.5H,d,J=0.99Hz), 1.89 (1.5H,d,J=0.99Hz)
FABMS (m/z) : 677(M+1)+ 
【００４３】
例８：9-(3-O- アセチル-5-O-tert-ブチルジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ -6-メチルビニルプリン(IIa)
アルゴン気流下、化合物(4) (350 mg 、0.5 mmol) の無水ジオキサン (5 ml) 溶液に塩化リチウム (42 mg 、1.0 mmol) 及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(0) (116 mg 、0.1 mmol) を加え室温にて攪拌した。30分後、メチルビニルトリ (n-ブチル）錫 (800 μl 、2.5 mmol、cis/trans=2.5/1)を加えて、加熱還流した。６時間後、反応層を酢酸エチル (100 ml) にあけ、有機層を 10%アンモニウム水 (30 ml)、飽和食塩水(30 ml×2)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム−メタノール = 99:1)にて精製し化合物(IIa) を淡黄色カラメル状物質として得た (238 mg、0.42 mmol 、収率 84%) 。
【００４４】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.90 (1H,s), 7.68-7.63 (4H,m), 7.51-7.32 (6.6H,m), 6.87 (0.4H,dq,J=11.2, 2.0Hz), 6.83 (0.6H,dq,J=15.5, 1.6Hz), 6.28 (0.4H,dq,J=11.5, 7.2Hz), 6.38 (1H,t,J=6.3Hz), 5.55 (1H,d,J=4.6Hz), 4.83 (1H,bs), 4.19 (1H,dd,J=3.3, 2.0Hz), 3.91-3.89 (2H,m), 2.94-2.81 (1H,m), 2.56-2.51 (1H,m), 2.25 (3H,dd,J=1.7, 7.6Hz), 2.02 (3H,dd,J=1.7, 6.9Hz), 2.02 (3H,s), 1.06 (9H,s)
IR (cm-1,neat) : 3500, 1740, 1600
FABMS (m/z) : 572(M+1)+ , 514(M-57) + 
【００４５】
例９：9-(3-O- アセチル-5-O-tert-ブチルジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ-6-(2-トリメチルシリルビニル）プリン(IIIa)
アルゴン気流下、化合物(4) (104 mg 、0.15 mmol)の無水ジオキサン (2 ml) 溶液に塩化リチウム (13 mg 、0.3 mmol) 及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム(0) (35 mg、0.03 mmol)を加え室温にて攪拌した。30分後、トリメチルシリルビニルトリ (n-ブチル）錫 (1.7 ml、1.5 mmol) を加えて、加熱還流した。１時間後、反応層を酢酸エチル (50 ml)にあけ、有機層を 10%アンモニウム水 (10 ml)、飽和食塩水 (10 ml ×2)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (ヘキサン−酢酸エチル 20:1 →10:1) にて精製し化合物(IIIa)を淡黄色カラメル状物質として得た (80 mg 、0.13 mmol 、収率 87%) 。
【００４６】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.95 (1H,s), 7.73 (1H,d,J=19.1Hz), 7.68-7.64 (4H,m), 7.45-7.33 (6H,m), 7.36 (1H,d,J=19.1Hz), 6.34 (1H,dd,J=8.9, 5.3Hz), 5.57 (1H,bd,J=6.3Hz), 4.97 (2H,b), 4.91 (1H,d,J=2.0Hz), 3.92-3.90 (2H,m), 2.88-2.79 (1H,m), 2.56-2.49 (1H,m), 2.12 (3H,s), 1.08 (9H,s), 0.21 (9H,s)
IR (cm-1,neat) : 3300, 1740, 1595, 1570
FABMS (m/z) : 630(M+1)+ 
【００４７】
例10：9-(5-O-tert-ブチルジフェニルシリル -2-デオキシ -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ-6-(2-トリメチルシリルビニル）プリン(IIIb)
化合物(IIIa) (72 mg 、0.11 mmol)のメタノール (1.0 ml) 溶液に炭酸カリウム (110 mg、0.8 mmol) を加え室温にて30分間攪拌した。反応層を塩化メチレン(30 ml) で希釈し飽和塩化アンモニウム水溶液 (10 ml)、飽和食塩水 (10 ml)で洗浄、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム−メタノール = 98:2 → 95:5)にて精製し化合物(IIIb)を淡黄色油状物質として得た (67 mg 、0.11 mmol 、収率 100%)。
【００４８】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.90 (1H,s), 7.71 (1H,d,J=19.1Hz), 7.68-7.64 (4H,m), 7.45-7.33 (6H,m), 7.34 (1H,d,J=19.1Hz), 4.81 (2H,bs), 4.70 (1H,dt,J=3.0, 2.6Hz), 4.10 (1H,dd,J=7.3, 4.3Hz), 3.87 (1H,dd,J=10.9, 5.3Hz), 3.81 (1H,dd,J=11.2, 4.3Hz), 2.70 (1H,dt,J=13.5, 7.3Hz), 2.44 (1H,ddd,J=13.2, 5.9, 3.3Hz), 1.07 (9H,m), 0.20 (9H,s)
IR (cm-1,neat) : 3500, 1605, 1590
FABMS (m/z) : 588(M+1)+ , 530(M-57)
【００４９】
例11：9-(5-O-tert-ブチルジフェニルシリル -2-デオキシ -3-O-H-ホスホネート -β-D- リボフラノシル)-2-アミノ-6-(2-トリメチルシリルビニル）プリン・トリエチルアンモニウム塩(IIIc)
アルゴン気流下、三塩化リン (4.4 μl 、0.05 mmol)を塩化メチレン (1.5 ml) に溶かし、室温中で N- メチルモルホリン (4.4 μl 、0.05 mmol) 1,2,4- トリアゾールを加え室温で30分間攪拌した。反応液を -78℃に冷却し、化合物(IIIb) (11 mg 、0.03 mmol)の塩化メチレン (0.5 ml) 溶液を滴下し -60℃で10時間攪拌後、TEABバッファー(10 ml) 中に注ぎ分離、水層を塩化メチレン (30 ml)で４回抽出、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (クロロホルム−トリエチルアミン = 98:2 →クロロホルム−メタノール−トリエチルアミン = 88:10:2) にて精製し化合物(IIIc)を淡黄色油状物質として得た (14 mg 、0.02 mmol 、収率 73%) 。
【００５０】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.91 (1H,s), 7.68 (1H,d,J=19.1Hz), 7.68-7.64 (4H,m), 7.45-7.33 (6H,m), 7.33 (1H,d,J=19.1Hz), 6.37 (1H,dd,J=8.2, 6.3Hz), 5.12-5.10 (1H,m), 4.93 (2H,bs), 4.30 (1H,dd,J=6.3, 3.6Hz), 3.91 (1H,dd,J=11.2, 4.3Hz), 3.82 (1H,dd,J=11.2, 4.0Hz), 3.05-2.73 (2H,m), 3.07 (6H,q,J=7.3Hz), 1.34 (9H,t,J=7.3Hz), 1.03 (9H,s), 0.18 (9H,s)
IR (cm-1,neat) : 3500, 1605, 1590
FABMS (m/z) : 652(M+1)+ , 594(M-57)
【００５１】
例12：本発明の化合物のクロスリンク剤としての機能
本発明のビニル化デオキシグアノシン誘導体のクロスリンク剤としての機能評価を行った。下記のスキームに従い、本発明の化合物(IIa) 及び(IIIa)を用いて、ビニル化デオキシグアノシン誘導体とヒドロキシルアミンとを反応させ、ビニル化デオキシグアノシン誘導体の半減期(t1/2)を求めた。反応条件の詳細は以下のとおりである。その結果、化合物IIa のt1/2は１時間であり、化合物(IIIa)のt1/2は18時間以上であった。
【００５２】
【化８】
0003965455.tif 000012
【００５３】
例13：化合物(IIa) とヒドロキシルアミン塩酸塩との付加体(10)
化合物(IIa) (30 mg、70μmol)のエタノール (7.0 ml) 溶液にヒドロキシルアミン塩酸塩 (24 mg 、350 μmol)を加え、室温にて攪拌した。24時間後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、クロロホルム→クロロホルム−メタノール 95:5)にて精製して付加体(10)を黄色油状物質として得た (16 mg 、26μmol 、収率 38%) 。
【００５４】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.93 (1H,s), 7.68-7.63 (4H,m), 7.51-7.32 (6H,m), 6.33-6.27 (1H,m), 5.75 (2H,bs), 5.53 (1H,d,J=5.9Hz), 4.18 (1H,t,J=1.7Hz), 3.92-3.85 (3H,m), 3.52 (1H,d,J=16.5Hz), 3.36-3.28 (1H,m), 2.78-2.71 (1H,m), 2.57-2.49 (1H,m), 2.11 (3H,s), 1.52 (3H,d,J=6.6Hz), 1.02 (9H,s),
IR (cm-1,neat) : 3500, 1720, 1600
FABMS (m/z) :  605(M+ +1) 、 572(M+ -33)
0003965455.tif 000013
【００５５】
例14：化合物(IIIa)とヒドロキシルアミン塩酸塩との付加体(11)
化合物(IIIa) (10 mg 、1.6 μmol)のエタノール (1 ml) 溶液にヒドロキシルアミン塩酸塩 (5.5 mg、8 μmol 、エタノール 0.5 ml 中) を加え、室温にて攪拌した。24時間後、溶媒を減圧下留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー (FL-60D、クロロホルム→クロロホルム−メタノール 95:5)にて精製し付加体(11)を無色油状物質(cis体＋trans 体混合物) として得た (4.0 mg、0.68μmol 、収率 44%) 。
【００５６】
1H-NMR (CDCl3)  δ 7.92 (1H,s), 7.18 (1H,t,J=4.9Hz), 7.75 (1H,t,J=5.9Hz,minor), 7.68-7.63 (4H,m), 7.51-7.32 (6H,m), 6.31 (1H,dd,J=5.6, 8.9Hz), 5.56 (1H,d,J=5.9Hz), 5.01 (2H,bs), 4.19 (1H,dd,J=3.3, 2.0Hz), 4.15 (2H,d,J=4.9Hz), 3.94 (2H,d,J=6.3Hz,minor), 3.91-3.89 (2H,m), 2.94-2.81 (1H,m), 2.56-2.51 (1H,m), 2.12 (3H,s), 1.07 (9H,s),
IR (cm-1,neat) : 3600-3300, 1605, 1590
FABMS (m/z) :  589(M+ +1) 、 573(M+ -15)
0003965455.tif 000014
【００５７】
【発明の効果】
本発明の化合物は化学的に安定であり、かつシチジンやグアノシンなどの求核性分子と容易に反応して共有結合を形成する性質を有している。本発明の化合物を製造用中間体として用いると、クロスリンク能を有するアンチセンスオリゴ核酸を製造することができる。