(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
0003917680.tif 000068
〔式中、ｎは０〜１００の数であり；
Ｂは相互に独立して、水素、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ20）−アルキル、（Ｃ1〜Ｃ20）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ20）−アルキルチオ、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオ、芳香族基またはヘテロ環基であり、ここでアルキル、アリールおよび／または芳香族またはヘテロ環基は場合により、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、−ＮＲ9Ｒ10、−Ｃ(Ｏ)ＯＨ、オキソ、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ8、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ9Ｒ10、−ＣＮ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＮＯ2、（Ｃ2〜Ｃ6）−アルコキシアルキル、−Ｓ(Ｏ)mＲ8、−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル−Ｓ(Ｏ)mＲ8、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ8、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ8、−ＮＲ9Ｃ（＝Ｏ）Ｒ8、＝ＮＯＲ8、ＮＲ9Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ10、−ＯＣ（＝Ｏ）ＮＲ9Ｒ10および−ＮＲ9Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ9Ｒ10で１回以上置換されていてよく；または、Ｂは相互に独立して、天然のヌクレオ塩基、非天然のヌクレオ塩基またはレポーターリガンドであり;
Ａ−Ｂはまた、カルボキシル基を介して縮合したＤ−またはＬ−アミノ酸、または、アミノ酸残基５個までの長さを有する上記アミノ酸よりなるペプチドであり；
Ｌは相互に独立してＮまたはＲ1Ｎ+であり、そして、
Ｒ1は水素またはヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオまたはアミノで置換されていてもよい（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり；
Ａは相互に独立して単結合、メチレン基または式IIａまたはIIｂ：
【化２】
0003917680.tif 000069
の基であり；
ここでＹ′は＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＣＨ2、＝Ｃ（ＣＨ3）2または＝ＮＲ1であり、ここでＲ1は前で定義した通りであり；
Ｍは単結合、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ1−であり、ここでＲ1は前で定義した通りであり；
Ｒ2およびＲ3は相互に独立して、水素、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオ、アミノ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン、または、場合によりヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシまたは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオで置換された（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり；
ｐおよびｑは相互に独立して０〜５であり；
ｒおよびｓは相互に独立して０〜５であり；
ＤおよびＧはＣＲ5Ｒ6であり；
Ｒ5およびＲ6は相互に独立して水素、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオであり、そして、アルキルおよびアリールは場合によりＳＲ1またはＮＲ1Ｒ1′で置換されていてもよく、ここでＲ1は上記した通りであり、そしてＲ1′はＲ1とは別個にＲ1と同じ意味を有し；
Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ1−であり、ここでＲ1は前で定義した通りであり；
Ｙは＝Ｏまたは＝Ｓであり；
Ｚは−ＯＲ8、−ＮＲ9Ｒ10またはＸ′Ｑ″であり、ここでＸ′はＸに定義された通りであり、Ｑ″はＱに定義された通りであり；
Ｒ8は水素、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ18）−アルケニル、（Ｃ3〜Ｃ18）−アルキニル、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、ここでアルキルは、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒで１回以上置換されていてよく、そしてアリールはヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ2、−ＮＲ9Ｒ10、−Ｃ(Ｏ)ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルまたは−Ｃ(Ｏ)ＮＲ9Ｒ10で１〜３回置換されていてよく；
Ｒ9およびＲ10は相互に独立して、水素、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルキル、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルケニル、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルキニル、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、ここでアルキルはヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒで１回以上置換されていてよいか、Ｒ9およびＲ10は一緒になって、それらを有しているＮ原子と一緒に４〜７員の環を形成し；
ＱおよびＱ′は相互に独立して水素またはＲ8であるか、または、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは３重螺旋形成オリゴヌクレオチドの特性に好ましく影響するか、または、ＤＮＡプローブの標識として機能するか、あるいは、標的核酸へのオリゴヌクレオチド類縁体のハイブリダイゼーションにおいて結合または交叉結合によりこれを攻撃するようなコンジュゲートであるか、または、未修飾または修飾しうるオリゴヌクレオチドである〕を有する化合物。
【請求項２】
ｎが０〜５０の数であり；
Ｂは相互に独立して天然のヌクレオ塩基または非天然のヌクレオ塩基であり;
ＬはＮであり；
Ａは式IIｂの基であり、式中ｒ＝１であり、ｓは０であり、そしてＲ2、Ｒ3＝Ｈであり、そしてＹ′＝Ｏであり、そしてＭは単結合であり；
ＤおよびＧは相互に独立してＣＨＲ5であり；
Ｒ5は水素であり；
Ｘは−Ｏ−であり；
Ｙは＝Ｏであり；
Ｚはヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、（４−ニトロフェニル）エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、フェノキシまたはアリルオキシであり；
ＱおよびＱ′は相互に独立して、水素、Ｒ8または未修飾または修飾されたオリゴヌクレオチドであり；
ここで
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋は完全にまたは部分的にホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ4Ｒ4′−ホスホロアミデート、ホスフェートＯ−メチルエステル、ホスフェートＯ−エチルエステル、ホスフェートＯ−イソプロピルエステル、メチルホスホネートまたはフェニルホスホネート架橋で置き換えられており；
ｂ）  ピリミジンの位置にあり、５′末端および／または３′末端の３′−または５′−リン酸ジエステル架橋の１、２または３個がホルムアセタールおよび／または３′−チオホルムアセタールで置き換えられており；
ｃ）  糖リン酸エステル骨格が完全にまたは部分的に“ＰＮＡ”またはＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドで置き換えられており；
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位が完全にまたは部分的に２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルリボース、２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルリボースまたは２′−ＮＨ2−２′−デオキシリボースで置き換えられており；
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基が完全にまたは部分的に５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ブロモシトシン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンで置き換えられている、
請求項１記載の式Ｉを有する化合物。
【請求項３】
ｎが０〜３０の数であり；
ＱおよびＱ′は相互に独立して、水素、Ｒ8、ただしＲ8はＨ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルまたは２−（４−ニトロフェニル）エチルであるか、または未修飾または修飾しうるオリゴヌクレオチドであり、ここで、
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋は完全にまたは部分的にホスホロチオエート、ホスホロジチオエートまたはメチルホスホネート架橋で置き換えられており；
ｂ）  ３′−または５′−リン酸ジエステル架橋の１、２または３個が５′−および３′−末端で置き換えられており；
ｃ）  糖リン酸エステル骨格が完全にまたは部分的に“ＰＮＡ”またはＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドで置き換えられており；
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位が完全にまたは部分的に２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ4）アルキルリボース、２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ4）アルケニルリボースまたは２′−ＮＨ2−２′−デオキシリボースで置き換えられており；
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基が完全にまたは部分的に５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルシトシン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンで置き換えられている、
請求項１または２に記載の式Ｉの化合物。
【請求項４】
ｎが０〜２５の数であり；
Ｂは相互に独立して天然のヌクレオ塩基であり；
Ｚはヒドロキシル、エトキシ、（４−ニトロフェニル）エトキシまたはフェノキシであり；
ＱおよびＱ′は相互に独立して水素、Ｒ8であり、ここでＲ8はＨ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルまたは２−（４−ニトロフェニル）エチルであるか、または未修飾または修飾しうるオリゴヌクレオチドであり；
ここで、
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋は完全にまたは部分的にホスホロチオエート架橋で置き換えられており；
ｃ）  糖リン酸エステル骨格は完全にまたは部分的に“ＰＮＡ”またはＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドで置き換えられており；
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位は完全にまたは部分的に２′−Ｏ−メチル−、２′−Ｏ−アリル−または２′−Ｏ−ブチルリボースで置き換えられており；
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基は完全にまたは部分的に５−ヘキシニルシトシン、５−ヘキシニルウラシル、５−ヘキシニルシトシン、７−デアザ−７−プロピニルグアニン、７−デアザ−７−プロピニルアデニン、７−デアザ−７−メチルグアニン、７−デアザ−７−メチルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンで置き換えられている、
請求項１〜３のいずれかに記載の式Ｉの化合物。
【請求項５】
ａ）  式III：
【化３】
0003917680.tif 000070
〔式中、Ｄ、Ｇ、ＬおよびＸは請求項１〜４のいずれかで定義した通りであり、そしてＳ1はジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、トリチル、ピクシル、ｔ−ブトキシカルボニルまたはフルオレニルメトキシカルボニルのような適当な保護基である〕を有する化合物を、式IV：
【化４】
0003917680.tif 000071
〔式中Ｒ5およびＲ6は請求項１〜４のいずれかで定義した通りである〕を有する化合物と、適当な有機溶媒中、０℃〜１００℃の温度で反応させて、式ＶａまたはＶｂ
【化５】
0003917680.tif 000072
を有する化合物を得；
ｂ）  式ＶａまたはＶｂの化合物を、式VIａまたはVIｂ
【化６】
0003917680.tif 000073
〔式中、Ｙは請求項１〜４のいずれかで定義した通りであり、Ｘ′およびＸ″は相互に独立してＸと同様に定義され、Ｓ2およびＳ3は相互に独立して保護基であり、そしてＬ1は脱離基である〕の化合物と、適当な有機溶媒中、０〜１００℃の温度で、適切には塩基、複合塩基または未荷電の過アルキル化ポリアミノホスファゼン塩基を添加して、反応させて、式VII
【化７】
0003917680.tif 000074
〔式中Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは請求項１〜４のいずれかに定義した通りである〕の化合物を得；
ｃ1)  式VIIの化合物を式VIII
【化８】
0003917680.tif 000075
〔式中Ａは請求項１〜４のいずれかに定義した通りであり、ＢPRはＢと同じ意味を有するが、場合により保護された形態で存在し、そして、Ｌ2は当該分野で知られた脱離基であるか、または、Ａが式IIｂの意味を有する場合はＯＨであってもよい〕の化合物と、適当な有機溶媒中、−２０℃〜１００℃の温度で、適切には、塩基、複合塩基または未荷電の過アルキル化ポリアミノホスファゼン塩基を添加して、または、塩基を添加することなく、そして、ペプチド結合のカップリングで慣用のカップリング試薬を添加して、反応させて、式IX
【化９】
0003917680.tif 000076
〔式中Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得；
ｄ1)  知られた方法により式IXの化合物から保護基Ｓ3を除去して、式Ｘ
【化１０】
0003917680.tif 000077
〔式中Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得；
ｅ1)  知られた方法により式IXの化合物から保護基Ｓ1を除去して、式XI
【化１１】
0003917680.tif 000078
〔式中Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得；
ｆ1)  オリゴヌクレオチド化学で知られている「ホスホトリエステル法」に従って、式XIの化合物を式Ｘの化合物と、適当な有機溶媒中、−２０℃〜１００℃の温度で、カップリング試薬または式XII
【化１２】
0003917680.tif 000079
〔式中、Ｒ15は（Ｃ6〜Ｃ12）−アリールであり、これは場合により（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、ニトロ、塩素または臭素で１〜４回置換されており、そして、炭素原子１〜３個は場合によりヘテロ原子で置換されており、そしてＲ16は脱離基である〕の化合物を添加して、場合により、触媒も添加して反応させ、その際カップリング試薬の調製は容器内で行なうか、または、別途行い、そして、活性化された物質の溶液を適当な溶媒中で添加することができ、これにより、式XIII
【化１３】
0003917680.tif 000080
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得；
ｇ1)  式XIIIの化合物を出発物質とし、所望の鎖長になるまで工程ｅ1）およびｆ1）を反復し、式XIV
【化１４】
0003917680.tif 000081
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りであり、そしてｎは請求項１〜４のいずれかに定義した通りである〕の化合物を得；
ｈ1)  保護基Ｓ1、Ｓ2およびＳ3およびＢPR上の保護基を知られた方法で除去し；
そして、場合により、当該分野で知られた方法で基ＱおよびＱ′を導入し、そして、場合により得られた化合物を環化して式Ｉの化合物を得る、
ことからなる請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉを有する化合物の調製方法。
【請求項６】
式XVおよびXVI：
【化１５】
0003917680.tif 000082
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは請求項１〜４のいずれかで定義した通りであり、ｏおよびｐは相互に独立して０〜５０であり、そしてｏ＋ｐ＋１＝ｎである〕を有する化合物において；
ａ2)  式XVの化合物の場合は、請求項５ｅ1）において記載した通り保護基Ｓ1を除去し、ｂ2)  式XVIの化合物の場合は、請求項５ｄ1）において記載した通り保護基Ｓ3を除去し、そして
ｃ2)  請求項５ｆ1）において記載した通り得られた化合物を相互にカップリングさせて、式XIV：
【化１６】
0003917680.tif 000083
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″、Ｙおよびｎは上に定義した通りである〕の化合物を得；
ｄ2)  そして請求項５ｈ1）において記載した通りこれらを反応させることにより式Ｉの化合物を得る
ことからなる、ｎが１〜１００である請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉを有する化合物の調製方法。
【請求項７】
ａ3)  式Ｘ
【化１７】
0003917680.tif 000084
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは請求項１〜４のいずれかに定義した通りである〕の化合物を知られた方法でＳＰＡＣＥＲを介して固体支持体にカップリングさせて、式XVII：
【化１８】
0003917680.tif 000085
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りであり、ＳＳは固相合成に適する固体支持体であり、そしてＳＰＡＣＥＲは当該分野で知られる合成後に支持体から除去できるような基であるか、または、ＳＰＡＣＥＲは知られた除去可能な基を介して固体支持体に結合される２官能性のコンジュゲート分子Ｑである〕の化合物を得；
ｂ3)  請求項５ｅ1）において記載の通り、式XVII：
【化１９】
0003917680.tif 000086
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、ＳＳ、ＳＰＡＣＥＲ、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物から保護基Ｓ1を除去し；
ｃ3)  請求項５ｆ1）において記載の通り、得られた化合物を、式Ｘ
【化２０】
0003917680.tif 000087
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物と反応させ；
ｄ3)  所望の鎖長が得られるまで工程ｂ3)〜ｃ3)を反復し；
ｅ3)  場合により知られた方法でコンジュゲートＱ′をカップリングし；
ｆ3)  知られた方法で固体支持体から上記の通り得られた化合物を分離し、その際保護基の除去は支持体からの分離の前に行なうこともでき、そして、場合により知られた方法でコンジュゲートＱをカップリングし、これによりＱおよびＱ′のカップリング〔ｅ3)、ｆ3)〕の順序を変更してもよく、そして、場合により得られた化合物を環化する
ことからなる、請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉを有する化合物の調製方法。
【請求項８】
請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉを有する化合物を有効成分とする遺伝子発現の抑制剤。
【請求項９】
請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉを有する化合物を有効成分とする診断薬、ウィルスにより誘発されるか、インテグリンまたは細胞−細胞接着受容体による影響を受けるか、または、ＴＮＦαにより誘発される疾患、ガンまたは再狭窄の治療剤。
【請求項１０】
式：
５′−ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ；
５′−ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ；
５′−ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ；
５′−ＯＬＩＧＯ−（ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ)a；
５′−ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ；
５′−ＰＭＥＮＡ−（ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ)a
〔式中ａは１〜２０であり、ＯＬＩＧＯは場合により修飾されたオリゴヌクレオチドであり、そしてＰＭＥＮＡはＱおよびＱ′が水素である請求項１〜４のいずれかに記載の式Ｉの化合物である〕の１つを有する化合物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は有用な物理的、生物学的および薬理学的特性を有する新しいオリゴヌクレオチド類縁体、およびその調製方法に関する。これらの用途は、遺伝子発現の抑制剤（アンチセンスオリゴヌクレオチド、リボザイム、センスオリゴヌクレオチドおよび３重鎖形成オリゴヌクレオチド）として、核酸検出のためのプローブとして、そして、分子生物学の補助的試薬としての使用に関するものである。
【０００２】
オリゴヌクレオチドは遺伝子発現の抑制剤としてますます広範に適用されている（J. F. Milligan, M. D. MatteucciおよびJ. C. Martin, J. Med, Chem. 36（1993）1923；E. UhlmannおよびA. Peyman, Chemical Reviews 90（1990）543；S. T. Crooke, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32（1992）329)。
【０００３】
アンチセンスオリゴヌクレオチドはその塩基配列が抑制するべきｍＲＮＡに相補的である核酸フラグメントである。この標的ｍＲＮＡは細胞、ウィルス、または他の病原体に由来するものであってよい。考えられる細胞性標的配列は、例えば、受容体、酵素、生長因子、免疫調節物質、イオンチャンネルまたは腫瘍遺伝子に由来するものである。アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたウィルス複製の抑制は、例えばＲＳＶ（ラウス肉腫ウィルス）、ＨＳＶ−１および−２（単純ヘルペスウィルスＩおよびII型）、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウィルス）およびインフルエンザウィルスについて記載されている。この例では、ウィルス核酸に相補的なオリゴヌクレオチドが使用されている。
【０００４】
しかしながら、センスオリゴヌクレオチドの配列は、それらが、例えば、核酸結合蛋白または核酸プロセシング酵素に結合（「捕獲」）するように、即ち、その生物学的活性を抑制するように設計されている（C. HeleneおよびJ. J. Toulme, Biochim, Biophys, Acta 1049（1990）99）。ここで示されるウィルス性標的は、例えば、逆転写酵素、ＤＮＡポリメラーゼおよびトランスアクティベーター蛋白である。一般的に、３重鎖形成オリゴヌクレオチドは標的としてＤＮＡを有し、これに結合した後、３重螺旋構造を形成する。
【０００５】
アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることによりｍＲＮＡのプロセシング（スプライシング等）またはその蛋白への翻訳は一般的に抑制されるが、３重鎖形成オリゴヌクレオチドはＤＮＡの転写または複製を抑制する（N. T. ThuongおよびC. Helene, Angew. Chem. 105（1993）697；UhlmannおよびPeyman, Chemical Reviews 90（1990）543）。しかしながら、１重鎖核酸をアンチセンスオリゴヌクレオチドに結合することにより第１のハイブリダイゼーションにおいて２重鎖を形成し、次にこれから３重鎖構造を第２のハイブリダイゼーションにおいて３重鎖形成オリゴヌクレオチドを用いて形成することも可能である。この場合アンチセンスおよび３重鎖結合領域は、２つの別個のオリゴヌクレオチドに適合させるか、または、１つのオリゴヌクレオチドに適合させることができる。
【０００６】
合成オリゴヌクレオチドの別の適用例は、いわゆるリボザイムであり、これはそのリボヌクレアーゼ活性の結果標的ＲＮＡを破壊する（D. Castanotto, J. J. Rossi, J. O. Deshler, Critical Rev. Eukar. Gene Expr. 2（1992）331）。
【０００７】
ＤＮＡ診断では、適当な標識を施した核酸フラグメントを検出すべき核酸の特定のハイブリダイゼーションのためのいわゆるＤＮＡプローブとして用いる。新しい２重鎖の特定の形成は、この場合、好ましくは非放射性の標識を用いてモニターする。この方法により、遺伝性、悪性、ウィルス性またはその他の病原体により誘発された疾患を検出できる。
【０００８】
上記した殆どの応用例では、その天然の形態のオリゴヌクレオチドは必ずしも適しているとはいえず、または、全く、不適当であった。それらは特定の条件を満足することができるように化学修飾する必要があった。オリゴヌクレオチドが生物学的な系で、例えばウィルス複製の抑制のために用いられることができるためには、以下の条件を満足しなければならない。
【０００９】
１．それらはin vivo条件下で、即ち血清中および細胞内の両方で十分高い安定性を有していなければならない。
２．それらは細胞と核膜を通過できるように構築されなければならない。
３．それらは抑制作用を示すためには生理学的条件下で塩基特異的な態様でその標的核酸に結合しなければならない。
【００１０】
しかしながら、これらの条件はＤＮＡプローブに必須のものではなく、これらのオリゴヌクレオチドは、例えば、蛍光、化学発光、比色または特異的染色のような方法で検出が可能であるように誘導しなければならない（BeckおよびKoester, Anal. Chem. 62（1990）2258）。
【００１１】
未修飾のオリゴヌクレオチドよりも上記条件にさらに適合するように合成されたオリゴヌクレオチドの化学的変異体が多数知られている。オリゴヌクレオチドの化学修飾は通常は、ホスフェート骨格、リボース単位またはヌクレオ塩基を適切に修飾することにより行われる（UhlmannおよびPeyman, Chemical Review 90（1990）543）。修飾はまた、ホスフェート架橋および糖単位の両方をその他の基、例えば、「モルホリノヌクレオシド」オリゴマー(E. P. Stirchak等、Nucleic Acids Res. 17（1989）6129)または「ＰＮＡｓ」（P. E. Nielsen等，Bioconj. Chem. 5（1994）3）で置き換えたようなものも包含する。特にＰＮＡは標的ＲＮＡに対する異常に高い親和性を有するという特徴を有するが、溶解性が無く細胞通過が不十分であるというような望ましくない別の特徴も有する(W. Wang等, Tetrahedron Letters 36（1995）1181；M. Egholm等., Innovation and Perspective in Solid Phase Synthesis, Peptides, Proteins, Nucleic Acids, Roger Epton編, Mayflower Worldwode Limited, Birmingham, 1994, 145-148）。
【００１２】
従って、本発明は好ましい特性を有する新しいオリゴヌクレオチド類縁体に関する。
【００１３】
本発明は、式Ｉ
【化２１】
0003917680.tif 000002
〔式中、ｎは０〜１００の数であり；
Ｂは相互に独立して、水素、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ20）−アルキル、（Ｃ1〜Ｃ20）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ20）−アルキルチオ、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオ、芳香族基またはヘテロ環基であり、ここでアルキル、アリールおよび／または芳香族またはヘテロ環基は場合により、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、−ＮＲ9Ｒ10、−Ｃ(Ｏ)ＯＨ、オキソ、−Ｃ(Ｏ)ＯＲ8、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ9Ｒ10、−ＣＮ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−ＮＯ2、（Ｃ2〜Ｃ6）−アルコキシアルキル、−Ｓ(Ｏ)mＲ8、−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル−Ｓ(Ｏ)mＲ8、−ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨＲ8、−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨＲ8、−ＮＲ9Ｃ（＝Ｏ）Ｒ8、＝ＮＯＲ8、ＮＲ9Ｃ(＝Ｏ)ＯＲ10、−ＯＣ(＝Ｏ)ＮＲ9Ｒ10および−ＮＲ9Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ9Ｒ10で１回以上置換されていてもよい；または、Ｂは相互に独立して、天然のヌクレオ塩基、非天然のヌクレオ塩基またはレポーターリガンドであり；
Ａ−Ｂはまた、カルボキシル基を介して縮合したＤ−またはＬ−アミノ酸、または、アミノ酸残基５個までの長さを有する上記アミノ酸よりなるペプチドであり；
Ｌは相互に独立してＮまたはＲ1Ｎ+であり、そして、
Ｒ1は水素またはヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオまたはアミノで置換されていてもよい（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、好ましくは水素またはメチルであり；
Ａは相互に独立して単結合、メチレン基または式IIａまたはIIｂ
【化２２】
0003917680.tif 000003
の基であり；
ここでＹ′は＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＣＨ2、＝Ｃ（ＣＨ3）2または＝ＮＲ1であり、ここでＲ1は前に定義した通りであり；
Ｍは単結合、−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ1−であり、ここでＲ1は前で定義した通りであり；
Ｒ2およびＲ3は相互に独立して、水素、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオ、アミノ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒのようなハロゲン、または、場合によりヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシまたは（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオで置換された（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであるが、好ましくは水素であり；
ｐおよびｑは相互に独立して０〜５であり；
ｒおよびｓは相互に独立して０〜５であり；
ＤおよびＧは相互に独立してＣＲ5Ｒ6であり；
Ｒ5およびＲ6は相互に独立して水素、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ6
）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルチオであり、そして、アルキルおよびアリールは場合によりＳＲ1またはＮＲ1Ｒ1′で置換されていてもよく、ここでＲ1は上に定義した通りであり、そしてＲ1′はＲ1とは別個にＲ1と同じ意味を有するが、好ましくはＲ5およびＲ6は水素であり；
Ｘは−Ｏ−、−Ｓ−または−ＮＲ1−であり、ここでＲ1は前に定義した通りであり；
Ｙは＝Ｏまたは＝Ｓであり；
Ｚは−ＯＲ8、−ＮＲ9Ｒ10またはＸ′Ｑ″であり、ここでＸ′はＸに定義された通りであり、Ｑ″はＱに定義された通りであり；
Ｒ8は水素、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルキル、（Ｃ2〜Ｃ18）−アルケニル、（Ｃ3〜Ｃ18）−アルキニル、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、ここでアルキルは、ヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒで１回以上置換されていてよく、そしてアリールはヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＮＯ2、−ＮＲ9Ｒ10、−Ｃ(Ｏ)ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルまたは−Ｃ(Ｏ)ＮＲ9Ｒ10で１〜３回置換されていてよいが、好ましくは水素、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリールまたは（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、ここでアリールは（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキル、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＮＯ2でモノ置換されていてもよく、そして、特に好ましくは、水素、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルまたは２−（４−ニトロフェニル）エチルであり；
Ｒ9およびＲ10は相互に独立して、水素、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルキル、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルケニル、（Ｃ1〜Ｃ18）−アルキニル、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ12）−アリール−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、ここでアルキルはヒドロキシル、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ、Ｆ、ＣｌまたはＢｒで１回以上置換されていてもよいか、Ｒ9およびＲ10は一緒になって、それらを有しているＮ原子と一緒に４〜７員の環を形成し；
ＱおよびＱ′は相互に独立して水素またはＲ8であるか、または、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは３重螺旋形成オリゴヌクレオチドの特性に好ましく影響するか、または、ＤＮＡプローブの標識として機能するか、あるいは、標的核酸へのオリゴヌクレオチド類縁体のハイブリダイゼーションにおいて結合または交叉結合によりこれを攻撃するようなコンジュゲートであるか、または、未修飾または修飾されることのできるオリゴヌクレオチドであるが、ここで幾つかの修飾の例としては後述するような変法が挙げられる（例えばE. UhlmannおよびA. PeymanのChemical Reviews 90（1990）543；“Protocols for Oligonucleotides and Analogs”，“Synthesis and Properties & Synthesis and Analytical Techniques”, S. Agrawal編，Humana Press, Totowa, USA 1993）の化合物に関する。
【００１４】
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋の、例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ4Ｒ4′−ホスホロアミデート、ボラノホスフェート、ホスフェート−（Ｃ1〜Ｃ21）−Ｏ−アルキルエステル、ホスフェート−〔（Ｃ6〜Ｃ12）アリール−（Ｃ1〜Ｃ21）−Ｏ−アルキル〕エステル、２,２,２−トリクロロジメチルエチルホスホネート、（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルホスホネートまたは（Ｃ6〜Ｃ12）−アリールホスホネート架橋による完全なまたは部分的な置き換え。ただしここでＲ4およびＲ4′は相互に独立して、水素、（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキル、（Ｃ6〜Ｃ20）−アリール、（Ｃ6〜Ｃ14）−アリール（Ｃ1〜Ｃ8）アルキルまたは−(ＣＨ2)c−〔ＮＨ(ＣＨ2)c〕d−ＮＲ7Ｒ7であり、ここでｃは２〜６の整数であり、そしてｄは０〜６の整数であり、そして、Ｒ7は相互に独立して、水素、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルまたは（Ｃ1〜Ｃ4）−アルコキシ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルであり、好ましくはＲ4およびＲ4′は水素、（Ｃ1〜Ｃ8）−アルキルまたはメトキシエチルであり、特に好ましくは水素、（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルまたはメトキシエチルであるか、またはＲ4およびＲ4′はそれらを有している窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＳおよびＮよりなる群から選択される更に別のヘテロ原子を更に含むことのできる５員または６員のヘテロ環を形成することもできる。
【００１５】
ｂ）  ３′−または５′−リン酸ジエステル架橋の「デホスホ」架橋（例えばUhlmannおよびPeymanの“Methods in Molecular Biology”, Vol. 20, “Protocols for Oligonucleotides and Analogs", S. Agrawal編, Humana Press, Totowa 1993, 16章355ff参照）例えばホルムアセタール、３′−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシアミン、オキシム、メチレンジメチルヒドラゾ、ジメチレンスルホンまたはシリル基による完全なまたは部分的な置き換え。
【００１６】
ｃ）  糖リン酸エステル骨格の、例えば「モルホリノヌクレオシド」オリゴマー(E. P. Stirchak等, Nucleic Acid Res. 17（1989）6129）または“ＰＮＡｓ”（P. E. Nielsen等, Bioconj. Chem. 5（1994）3）または例えばＤＥ−Ｐ ４４ ０８ ５２８.１およびＥＰ−Ａ ０ ６７２ ６７７（ＨＯＥ ９４／Ｆ ０５７）に記載のＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドによる完全なまたは部分的な置き換え。
【００１７】
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位の、例えばα−Ｄ−２′−デオキシリボース、Ｌ−２′−デオキシリボース、２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルリボース、２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルリボース、２′−ＮＨ2−２′−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロフラノース、α−アラビノフラノース、２,４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロヘキソピラノースおよび炭素環（例えばFrooehler, J. Am, Chem. Soc., 114（1992）8320）、および開鎖糖類縁体（例えばVandendriessche等，Tetrahedron 49（1993）7223）またはビシクロ糖類縁体（例えばM. Tarkov等, Helv. Chim. Acta 76（1993）481）による完全なまたは部分的な置き換え。
【００１８】
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基の、例えば５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−アミノウラシル、シュードウラシル、ジヒドロウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルウラシル（例えばGutierrez等, J. Am, Chem. Soc., 116（1994）540またはSagi等, Tetrahedron Lett. 34（1993）2191）、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルシトシン（Gutierrez等, J. Am, Chem. Soc., 116（1994）540またはSagi等, Tetrahedron, Lett. 34（1993）2191）、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ブロモシトシンまたは７−デアザ−７−置換プリン（例えばSeelaのNucl. Acids Res. 20（1992）2297；Heterocycles 34（1992）229に記載のもの）による完全なまたは部分的な置き換え。
【００１９】
ＱおよびＱ′はまた、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは３重鎖形成オリゴヌクレオチドの性質に好都合に影響（例えば細胞貫通、ヌクレアーゼ分解、標的ＲＮＡ／ＤＮＡに対する親和性、薬物動態）するか、あるいは、ＤＮＡプローブの標識として作用するか、または標的核酸へのオリゴヌクレオチド類縁体のハイブリダイゼーションにおいてこれを結合または交叉結合により攻撃するコンジュゲートであってもよい。これらの例は、ポリリジンとのコンジュゲート、ピレン、アクリジン、フェナジン、フェナントリジンのような挿入体とのコンジュゲート、フルオレセインのような蛍光化合物とのコンジュゲート、ソラレン、アジドプロフラビンのような交叉結合剤とのコンジュゲート、（Ｃ12〜Ｃ20）−アルキルのような親油性分子とのコンジュゲート、１,２−ジヘキサデシル−rac−グリセロールのような脂質とのコンジュゲート、コレステロールやテストステロンのようなステロイドとのコンジュゲート、ビタミンＥのようなビタミンとのコンジュゲート、ポリ−またはオリゴエチレングリコールとのコンジュゲート、（Ｃ12〜Ｃ18）−アルキルホスフェートジエステルとのコンジュゲート、−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ（ＯＨ）−Ｏ−（Ｃ12〜Ｃ18）−アルキルとのコンジュゲートである。好ましいコンジュゲートは（Ｃ12〜Ｃ20）−アルキルのような親油性分子とのコンジュゲート、コレステロールまたはテストステロンのようなステロイドとのコンジュゲート、ポリ−またはオリゴエチレングリコールとのコンジュゲート、ビタミンＥとのコンジュゲート、ピレンのような挿入体とのコンジュゲート、（Ｃ14〜Ｃ18）−アルキルホスフェートジエステルとのコンジュゲート、または−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ（ＯＨ）−Ｏ−（Ｃ12〜Ｃ16）−アルキルとのコンジュゲートである。
【００２０】
この種のオリゴヌクレオチドコンジュゲートの調製方法は当該分野においては知られている（例えばUhlmann & PeymanのChem. Rev. 90（1990）543；M. Manoharanの“Antisense Research and Applications", CrookeおよびLebleu編, CRC Press, Boca Raton, 1993, 17章, p303ffおよびＥＰ−Ａ ０ ５５２ ７７６参照）。更にオリゴヌクレオチドは３′または５′未満に３′−３′−および５′−５′−逆位を有することができる（例えばM. Koga等のJ. Org. Chem. 56（1991）3757に記載）。
【００２１】
芳香族基は、例えばフェニル、ナフチル、ピレニル、アントラセニル、フェナントリル、ビフェニル、ビナフチル、テトラセニル、ペンタセニル、ヘキサセニル、トリフェニレニル、クリセニルまたはベンゾピレニルである。
【００２２】
ヘテロ環基は、例えばクロマニル、クロメニリウム−１−イル、フラニル、イソクロマニル、イソクロメニル、イソキノリル、ピペラジニル、キノリニル、ピリジニル、ピロリジニル、イミダゾリル、テトラヒドロフラニル、アジリジニル、オキシラニル、チオフェニル、ピリミジニル、チオラニル、チアゾリル、アゼピニル、ピロリル、テトラヒドロピロリル、ベンゾフラニル、インドリル、イソインドリル、イサチニル、ジオキシインドリル、インドリリル、クマリニル、クマロニル、カルバゾリル、ピラゾリル、ピロリル、インダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,３−トリアゾリル、テトラゾリル、ペンタゾリル、ピペリジニル、ピリダジニル、フェナジニル、フェノキサジニル、フェノチアジニル、モルホリニル、チアジニル、ベンゾジアゼピニル、プリニル、キサンチニル、ヒポキサンチニル、テオフィリニル、テオブロミニル、カフェイニル、プテリジニル、プテリニル、プテリジニル、アロキサジニルおよびノルトロピニルを指すものとする。
【００２３】
天然のヌクレオ塩基とは、例えば、ウラシル、シトシン、５−メチルウラシル、アデニンおよびグアニンを指すものとし、そして、非天然のヌクレオ塩基とは例えば、５−ニトロインドール、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−アミノウラシル、シュードウラシル、ジヒドロウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ブロモシトシンおよび７−デアザ−７−置換プリン、例えば７−デアザ−７−（Ｃ3〜Ｃ7）−アルキニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ3〜Ｃ7）−アルキニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニンおよび７−デアザ−７−ブロモアデニンを指すものとする。
【００２４】
好ましくは、非天然のヌクレオ塩基は、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ブロモシトシンまたは７−デアザ−７−置換プリン、例えば７−デアザ−７−（Ｃ3〜Ｃ7）−アルキニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ3〜Ｃ7）−アルキニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニンおよび７−デアザ−７−ブロモアデニン、特に好ましくは、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキニルシトシンまたは７−デアザ−７−置換プリンであり、そして特に好ましくは、５−ペンチニルシトシン、５−ヘキシニルウラシル、５−ヘキシニルシトシン、７−デアザ−７−プロピニルグアニン、７−デアザ−７−プロピニルアデニン、７−デアザ−７−メチルグアニン、７−デアザ−７−メチルアデニン、７−デアザ−７−プロピニルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンである。
【００２５】
レポーターリガンドは、例えば、フルオレセイン、ビオチン、アクリジン、フェナントロリン、フェナントリジンおよびエオシンである。
【００２６】
Ｄ−およびＬ−アミノ酸の中では、特段の記載が無い限り、特に以下のものを挙げることができる。(Schroder, Lueke, Petides, Volume 1, New York 1965, XXII〜XXIIIページ；Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie XV／１および２巻，Stuttgart 1974参照）、
Ａａｄ、Ａｂｕ、γＡｂｕ、ＡＢｚ、２ＡＢｚ、εＡｃａ、Ａｃｈ、Ａｃｐ、Ａｄｐｄ、Ａｈｂ、Ａｉｂ、βＡｉｂ、Ａｌａ、βＡｌａ、ΔＡｌａ、Ａｌｇ、Ａｌｌ、Ａｍａ、Ａｍｔ、Ａｐｅ、Ａｐｍ、Ａｐｒ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ａｓｕ、Ａｚｅ、Ａｚｉ、Ｂａｉ、Ｂｐｈ、Ｃａｎ、Ｃｉｔ、Ｃｙｓ、Ｃｙｔａ、Ｄａａｄ、Ｄａｂ、Ｄａｄｄ、Ｄａｐ、Ｄａｐｍ、Ｄａｓｕ、Ｄｊｅｎ、Ｄｐａ、Ｄｔｃ、Ｆｅｌ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｇｕｖ、ｈＡｌａ、ｈＡｒｇ、ｈＣｙｓ、ｈＧｌｎ、ｈＧｌｕ、Ｈｉｓ、ｈｌｌｅ、ｈＬｅｕ、ｈＬｙｓ、ｈＭｅｔ、ｈＰｈｅ、ｈＰｒｏ、ｈＳｅｒ、ｈＴｈｒ、ｈＴｒｐ、ｈＴｙｒ、Ｈｙｌ、Ｈｙｐ、３Ｈｙｐ、Ｉｌｅ、Ｉｓｅ、Ｉｖａ、Ｋｙｎ、Ｌａｎｔ、Ｌｃｎ、Ｌｅｕ、Ｌｓｇ、Ｌｙｓ、βＬｙｓ、ΔＬｙｓ、Ｍｅｔ、Ｍｉｍ、Ｍｉｎ、ｈＡｒｇ、Ｎｌｅ、Ｎｖａ、Ｏｌｙ、Ｏｒｎ、Ｐａｎ、Ｐｅｃ、Ｐｅｎ、Ｐｈｅ、Ｐｈｇ、Ｐｉｃ、Ｐｒｏ、ΔＰｒｏ、Ｐｓｅ、Ｐｙａ、Ｐｙｒ、Ｐｚａ、Ｑｉｎ、Ｒｏｓ、Ｓａｒ、Ｓｅｃ、Ｓｅｍ、Ｓｅｒ、Ｔｈｉ、βＴｈｉ、Ｔｈｒ、Ｔｈｙ、Ｔｈｘ、Ｔｉａ、Ｔｌｅ、Ｔｌｙ、Ｔｒｐ、Ｔｒｔａ、Ｔｙｒ、Ｖａｌ等、ただしここで立体配置を示す記載のない上記略号はＬ型の基を表わすか、あるいは、環状アミノ酸、例えばピロリジン−２−カルボン酸；ピペリジン−２−カルボン酸；１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸；デカヒドロイソキノリン−３−カルボン酸；オクタヒドロインドール−２−カルボン酸；デカヒドロキノリン−２−カルボン酸；オクタヒドロシクロペンタ〔ｂ〕ピロール−２−カルボン酸；２−アザビシクロ〔２.２.２〕オクタン−３−カルボン酸；２−アザビシクロ〔２.２.１〕ヘプタン−３−カルボン酸；２−アザビシクロ〔３.１.０〕ヘキサン−３−カルボン酸；２−アザビシクロ〔４.４〕ノナン−３−カルボン酸；２−アザビシクロ〔４.５〕デカン−３−カルボン酸；スピロ〔（ビシクロ〔２.２.１〕ヘプタン）−２,３−ピロリジン−５−カルボン酸；スピロ〔（ビシクロ〔２.２.１〕オクタン）−２,３−ピロリジン−５−カルボン酸〕；２−アザトリシクロ〔４.３.０.１6.9〕デカン−３−カルボン酸；
デカヒドロシクロヘプタ〔ｂ〕ピロール−２−カルボン酸；デカヒドロシクロオクタ〔ｂ〕ピロール−２−カルボン酸；オクタヒドロシクロペンタ〔ｃ〕ピロール−２−カルボン酸；オクタヒドロイソインドール−１−カルボン酸；２,３,３ａ,４,６ａ−ヘキサヒドロシクロペンタ〔ｂ〕ピロール−２−カルボン酸；２,３,３ａ,４,５,７ａ−ヘキサヒドロインドール−２−カルボン酸；テトラヒドロチアゾール−４−カルボン酸；イソキサゾリジン−３−カルボン酸；ピラゾリジン−３−カルボン酸；ヒドロキシピロリジン−２−カルボン酸である。ただしこれらは場合によりすべて置換されていてもよい；
【化２３】
0003917680.tif 000004
ＵＳ−Ａ ４,３４４,９４９、ＵＳ−Ａ ４,３７４,８４７、ＵＳ−Ａ ４,３５０,７０４、ＥＰ−Ａ ２９ ４８８、ＥＰ−Ａ ３１ ７４１、ＥＰ−Ａ ４６ ９５３、ＥＰ−Ａ ４９ ６０５、ＥＰ−Ａ ４９ ６５８、ＥＰ−Ａ ５０ ８００、ＥＰ−Ａ ５１ ０２０、ＥＰ−Ａ ５２ ８７０、ＥＰ−Ａ ７９ ０２２、ＥＰ−Ａ ８４ １６４、ＥＰ−Ａ ８９ ６３７、ＥＰ−Ａ ９０ ３４１、ＥＰ−Ａ ９０ ３６２、ＥＰ−Ａ １０５ １０２、ＥＰ−Ａ １０９ ０２０、ＥＰ−Ａ １１１ ８７３、ＥＰ−Ａ ２７１ ８６５およびＥＰ−Ａ ３４４ ６８２参照。
【００２７】
アルキルおよびこれから誘導される基、例えばアルコキシおよびアルキルチオは、分枝鎖、未分枝鎖または環状の、飽和または一置換または多置換されていてよい。
【００２８】
式Ｉの好ましい化合物は、ｎが０〜５０の数であり；
Ｂは相互に独立して天然のヌクレオ塩基または非天然のヌクレオ塩基であり;
ＬはＮであり；
Ａは式IIｂの基であり、式中ｒ＝１であり、ｓは０であり、そしてＲ2、Ｒ3＝Ｈであり、そしてＹ′＝Ｏであり、そしてＭは単結合であり；
ＤおよびＧは相互に独立してＣＨＲ5であり；
Ｒ5は水素であり；
Ｘは−Ｏ−であり；
Ｙは＝Ｏであり；
Ｚはヒドロキシル、メトキシ、エトキシ、（４−ニトロフェニル）エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ペントキシ、フェノキシまたはアリルオキシであり；
ＱおよびＱ′は相互に独立して、水素、Ｒ8または未修飾または修飾されたオリゴヌクレオチドであり；
ここで
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋は完全にまたは部分的にホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ4Ｒ4′−ホスホロアミデート、Ｎ３′→Ｐ５′−ホスホロアミデート（例えばGryaznov等, J. Am. Chem. Soc. 116（1994）3143に記載のもの）、ホスフェートＯ−メチルエステル、ホスフェートＯ−エチルエステル、ホスフェートＯ−イソプロピルエステル、メチルホスホネートまたはフェニルホスホネート架橋で置き換えられており；
ｂ）  ピリミジンの位置にあり、５′末端および／または３′末端またはの３′−または５′−リン酸ジエステル架橋の１、２または３個がホルムアセタールおよび／または３′−チオホルムアセタールで置き換えられており；
ｃ）  糖リン酸エステル骨格が完全にまたは部分的に“ＰＮＡ”またはＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドで置き換えられており；
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位が完全にまたは部分的に２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルリボース、２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルリボースまたは２′−ＮＨ2−２′−デオキシリボースで置き換えられており；
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基が完全にまたは部分的に５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−フルオロシトシン、５−クロロウラシル、５−クロロシトシン、５−ブロモウラシル、５−ブロモシトシン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンで置き換えられている
化合物である。
【００２９】
式Ｉの特に好ましい化合物は、ｎが０〜３０の数であり；
ＱおよびＱ′は相互に独立して、水素、Ｒ8、ただしＲ8はＨ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルまたは２−（４−ニトロフェニル）エチルであるか、または未修飾または修飾されていてよりオリゴヌクレオチドであり、ここで、
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋は完全にまたは部分的にホスホロチオエート、ホスホロジチオエートまたはメチルホスホネート架橋で置き換えられており；
ｂ）  ３′−または５′−リン酸ジエステル架橋の１、２または３個が５′−および３′−末端で置き換えられており；
ｃ）  糖リン酸エステル骨格が完全にまたは部分的に“ＰＮＡ”またはＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドで置き換えられており；
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位が完全にまたは部分的に２′−Ｆ−２′−デオキシリボース、２′−Ｏ−（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルリボース、２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ4）アルケニルリボースまたは２′−ＮＨ2−２′−デオキシリボースで置き換えられており；
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基が完全にまたは部分的に５−（Ｃ3〜Ｃ6）−アルキルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルウラシル、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルウラシル、５−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニルシトシン、５−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキニルシトシン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルキニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ2〜Ｃ7）−アルケニルアデニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルグアニン、７−デアザ−７−（Ｃ1〜Ｃ7）−アルキルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンで置き換えられている
化合物である。
【００３０】
特に好ましい式Ｉの化合物は、０〜２５の数であり；
Ｂは相互に独立して天然のヌクレオ塩基であり；
Ｚはヒドロキシル、エトキシ、（４−ニトロフェニル）エトキシまたはフェノキシであり；
ＱおよびＱ′は相互に独立して水素、Ｒ8であり、ここでＲ8はＨ、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、フェニルまたは２−（４−ニトロフェニル）エチルであるか、または未修飾または修飾しうるオリゴヌクレオチドであり；
ここで、
ａ）  ３′−および／または５′−リン酸ジエステル架橋は完全にまたは部分的にホスホロチオエート架橋で置き換えられており；
ｃ）  糖リン酸エステル骨格は完全にまたは部分的に“ＰＮＡ”またはＰＮＡ−ＤＮＡハイブリッドで置き換えられており；
ｄ）  β−Ｄ−２′−デオキシリボース単位は完全にまたは部分的に２′−Ｏ−メチル−、２′−Ｏ−アリル−または２′−Ｏ−ブチルリボースで置き換えられており；
ｅ）  天然のヌクレオシド塩基は完全にまたは部分的に５−ヘキシニルシトシン、５−ヘキシニルウラシル、５−ヘキシニルシトシン、７−デアザ−７−プロピニルグアニン、７−デアザ−７−プロピニルアデニン、７−デアザ−７−メチルグアニン、７−デアザ−７−メチルアデニン、７−デアザ−７−ブロモグアニン、７−デアザ−７−ブロモアデニンで置き換えられている；
化合物である。
【００３１】
本発明は更にＱおよびＱ′が連結した、即ち環状分子を形成する式Ｉの化合物に関し、ここでは、ＱおよびＱ′が一緒になって単結合を形成する可能性を有する。このような化合物の合成は例えばGao等のNucl. Acids Res. 23（1995）2025またはWangおよびKoolのNucl. Acids Res. 22（1994）2326に記載の方法と同様に実施できる。
【００３２】
本発明は更に、式Ｉの化合物が３′−末端または５′−末端で、または５′−末端と３′−末端で組み込まれているような、例えばＰＮＡのような、オリゴヌクレオチドまたは修飾オリゴヌクレオチドに関する。
【００３３】
オリゴヌクレオチドと式Ｉの化合物の連結は、好ましくは、ホスホニック酸モノエステル結合を介する場合と同様、ヌクレオチド単位の５′−または３′−ヒドロキシル基を介して行なう。オリゴヌクレオチドとの連結は、式XVIIIおよびXIXの場合を例として示す。
【化２４】
0003917680.tif 000005
Ｒ17はＨ、ＯＨ、Ｆ、２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキルまたは２′−Ｏ−（Ｃ2〜Ｃ6）−アルケニル、好ましくはＨまたはメトキシまたはＯ−アリルであり、特に好ましくはＨである。その他の全ての変化しうる記号は前記の通りである。
【００３４】
これらの変化しうる記号が前記した意味を有する式XXおよび式XXIの化合物を例にとってＰＮＡとの結合を示す。
【化２５】
0003917680.tif 000006
【００３５】
本発明の式Ｉの化合物（ＱおよびＱ′＝Ｈである略号ＰＭＥＮＡ）とオリゴヌクレオチドまたは修飾オリゴヌクレオチド、例えばｐＮＡ、または前記したその他の修飾体との組み合わせを再度模式的に示す（ＯＬＩＧＯは未修飾または修飾オリゴヌクレオチドである）。
【００３６】
このような組み合わせの例を以下に示す。
５′−ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ
５′−ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ
５′−ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ
５′−ＯＬＩＧＯ−（ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ)a（ａ＝１〜２０）
５′−ＰＭＥＮＡ−ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ
５′−ＰＭＥＮＡ−（ＯＬＩＧＯ−ＰＭＥＮＡ)a（ａ＝１〜２０）
【００３７】
これらの組み合わせた化合物の合成は、分子に応じて後述するＰＭＥＮＡ単位の合成が最初に行われ、次にこれをオリゴヌクレオチド単位とカップリングするような方法で実施する。この方法では、オリゴヌクレオチドをモノマー単位として、または、固相合成によるブロック縮合により、または、溶液合成により当該分野で知られた方法でカップリングする(Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14（1986）274 ff）。あるいは、縮合はアミダイト方法、Ｈ−ホスホネート法、またはホスホロトリエステル法により実施する（Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14（1986）274 ff）。逆にＰＭＥＮＡ単位をＯＬＩＧＯ単位にカップリングする場合は、これは好ましくはｆ1）に記載する方法で行なう。ＰＮＡ単位とのコンジュゲート形成は、同様の方法で行なうか、または、（モノマーまたはオリゴマーの）ＰＮＡ単位をＰＭＥＮＡ単位とカップリングする場合は、当該分野で知られるペプチド合成またはエステル合成の方法を用いる。
【００３８】
本発明は更にまた、
ａ）  式III
【化２６】
0003917680.tif 000007
〔式中、Ｄ、Ｇ、ＬおよびＸは上記した意味を有し、そしてＳ1はジメトキシトリチル、モノメトキシトリチル、トリチル、ピクシル、ｔ−ブトキシカルボニルまたはフルオレニルメトキシカルボニルのような適当な保護基、好ましくはモノメトキシトリチルまたはｔ−ブトキシカルボニルである〕の化合物を、式IV
【化２７】
0003917680.tif 000008
〔式中Ｒ5およびＲ6は上記した意味を有する〕の化合物と、適当な有機溶媒中、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトニトリル、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、クロロホルム、ベンゼン、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジエチルエーテル、酢酸エチル（ＥＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ−チメルピロリドン、石油エーテル、キシレンまたはトルエンまたは適当な溶媒の混合物中、好ましくはメタノールまたはエタノール中、０℃〜１００℃の温度で、好ましくは１０〜５０℃の温度で反応させて、式ＶａまたはＶｂ
【化２８】
0003917680.tif 000009
の化合物を得る、ただし、当該分野で知られた反応条件を選択（例えばS. R. Sandler, W. Karoの“Organic Functional Group Preparations", II巻、第２版、Academic Press, London, 1986, 第12章（イミン類））する際には、それらが保護基Ｓ1に適合するものであるようにすることが必要であり、即ち、例えばモノメトキシトリチル保護基のような酸反応性の保護基を選択する場合は、反応中酸の添加を行わない；
ｂ）  式ＶａまたはＶｂの化合物を、式VIａまたはVIｂ
【化２９】
0003917680.tif 000010
〔式中、Ｙは上に定義した通りであり、Ｘ′およびＸ″は相互に独立してＸに定義した通りであり、Ｓ2およびＳ3は相互に独立して保護基、例えば、メチル、エチル、フェニル、２−クロロフェニル、２,５−ジクロロフェニル、２,４−ジクロロフェニル、４−ニトロフェニル、４−メトキシフェニル、２−シアノエチル、２−（４−ニトロフェニル）エチル、アリル、ベンジル、２,２,２−トリクロロ−１,１−ジメチルエチル、４−メトキシベンジル、２,２,２−トリクロロエチル、８−ヒドロキシキノリンまたはその他の当該分野で知られるようなホスフェート保護基(Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14（1986）274 ff）であるが、好ましくは、メチル、エチル、フェニル、２−（４−ニトロフェニル）エチル、アリルまたは２,２,２−トリクロロエチルであり、そして
Ｌ1は脱離基、好ましくは（Ｃ1〜Ｃ4）−アルキルである〕の化合物と、適当な有機溶媒中、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール、アセトニトリル、ベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、ＥＡ、クロロホルム、ジエチルエーテル、ＴＨＦ、Ｎ−メチルピロリドン、石油エーテル、キシレンまたはトルエンまたは適当な溶媒の混合物中、好ましくはＴＨＦ中、０〜１００℃、好ましくは５０〜８０℃の温度で、適切には塩基、例えばトリ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルアミン、Ｎ−アルキルモルホリン、ピリジン、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）、水素化ナトリウム、ナトリウムアミド、炭酸カリウム、炭酸セシウム、カリウムｔ−ブトキシド、または複合塩基、例えばナトリウムアミド−Ｒ11ＯＮａ（式中、Ｒ11は（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキルまたはＣＨ3ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ3）または未荷電の過アルキル化ポリアミノホスファゼン塩基（Schwesinger, Nachr, Chem. Techn. Lab. 38（1990）1214：Angew. Chem. 99（1987）1212）を添加して、ただし好ましくは塩基を添加しないで反応させて、式VII
【化３０】
0003917680.tif 000011
〔式中Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは上に定義した通りである〕の化合物を得；
ｃ1)  式VIIの化合物を式VIII
【化３１】
0003917680.tif 000012
〔（上記物質の合成は、例えばDueholm等が、J．Org. Chem. 59（1994）5767に記載されている）式中、Ａは前に定義された通りであり、ＢPRはＢと同じ意味を有するが、場合により保護された形態で存在し、即ち、Ｂが天然または非天然のヌクレオ塩基である場合は、ＢPRはそのアミノまたはヒドロキシル基が適当な知られた保護基、例えば、ヒドロキシル基の場合はｐ−ニトロフェニルエチル基、ベンゾイル基、アリル基およびｐ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル基により、そして、アミノ基の場合はアセチル、ベンゾイル、ｐ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル、ｐ−（メトキシ）ベンゾイル基、ｐ−ニトロフェニルエトキシカルボニル基、イソブチリル基、ｐ−（ｔ−ブチル）フェニルアセチル基、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミジノ基、フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基またはフェノキシアセチル基、またはオリゴヌクレオチド化学においてヌクレオ塩基のために慣用的に用いられているその他の保護基(Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14（1986）274 ff；Beaucage, Tetrahedron 49（1993）2223ff）で保護されているヌクレオ塩基であり、好ましくは下記の基
【化３２】
0003917680.tif 000013
（式中、Ｒ12は水素、１−プロピニル、１−ブチニル、１−ペンチニルまたは１−ヘキシニル、特に水素、１−プロピニルまたは１−ヘキシニルであり;そしてＲ13は水素、ジフェニルカルバモイルまたは２−（４−ニトロフェニル）エチルであり、そして、
Ｒ14はアセチル、ベンゾイル、ｐ−（ｔ−ブチル）ベンゾイル、ｐ−（メトキシ）ベンゾイル、ｐ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニル、イソブチリル、ｐ−（ｔ−ブチル）フェニルアセチル、ベンジルオキシカルボニルまたはフェノキシアセチルである）を挙げることができ；
そして、Ｌ2は当該分野で知られる脱離基、例えばＣｌ、Ｂｒ、Ｏ−ＳＯ2メチル、Ｏ−ＳＯ2トリフルオロメチル、Ｏ−トシレートまたはＯ−Ｃ6Ｆ5であるか、または、Ａが式IIｂの意味を有する場合はＯＨであってもよい〕の化合物と、適当な有機溶媒中、例えばアセトニトリル、ベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、ＥＡ、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラメチル尿素、ＴＨＦ、Ｎ−メチルピロリドン、石油エーテル、キシレンまたはトルエンまたは適当な溶媒の混合物中、好ましくはＤＭＦ中、−２０℃〜１００℃、好ましくは０〜５０℃の温度で、適切には、塩基、例えばトリ−（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキルアミン、Ｎ−アルキルモルホリン、ピリジン、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）、水素化ナトリウム、ナトリウムアミド、炭酸カリウム、炭酸セシウム、カリウムｔ−ブトキシド、または複合塩基、例えばナトリウムアミド−Ｒ11ＯＮａ（式中Ｒ11は（Ｃ2〜Ｃ6）−アルキルまたはＣＨ3ＣＨ2−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ3）または未荷電の過アルキル化ポリアミノホスファゼン塩基（Schwesinger, Nachr, Chem. Techn. Lab. 38（1990）1214：Angew. Chem. 99（1987）1212）を添加して、そしてＡが式IIｂでありＬ2がＯＨである場合は、好ましくはトリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−エチルモルホリンを添加して、または、塩基を添加しないで、そして、ペプチド結合のカップリングで慣用的なカップリング試薬を添加して、反応させて、式IX
【化３３】
0003917680.tif 000014
〔式中Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得、
ｄ1)  知られた方法（例えばGreene, Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley & Sons, New York 1991）により、例えばＳ2およびＳ3が２−（４−ニトロフェニル）エチルである式IXの化合物の場合は、室温でピリジンまたはアセトニトリル中０.１Ｍ １,８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕ウンデク−７−エン（ＤＢＵ）で処理することにより、またはＳ2およびＳ3がフェニルまたはエチルである式IXの化合物の場合は、水性アンモニアで処理することにより、または、Ｓ2が２−（４−ニトロフェニル）エチルでありＳ3がアリルである式IXの化合物の場合は、ＤＣＭ中Ｐｄ〔Ｐ（Ｃ6Ｈ5）3〕4およびトリフェニルホスフィンによる処理により(Hayakawa等, J. Org. Chem. 58（1993）5551）、またはＳ2が２−（４−ニトロフェニル）エチルでありＳ3がアリルである式IXの化合物の場合は、ピリジンまたはアセトニトリル中０.５Ｍ ＤＢＵによる処理により、または、Ｓ2が２−シアノエチルでありＳ3がアリルである式IXの化合物の場合は、ピリジン中トリエチルアミンによる処理により、または、Ｓ2が２−（４−ニトロフェニル）エチルでありＳ3が２,２,２−トリクロロ−１,１−ジメチルエチルである式IXの化合物の場合は、トリブチルホスフィンによる処理により、式IXの化合物から保護基Ｓ3を除去して、式Ｘ：
【化３４】
0003917680.tif 000015
〔式中Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得：
ｅ1)  知られた方法（例えばGreene, Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley & Sons, New York 1991, Sonveaux, Bioorganic Chemistriy 14（1986）274ff))により式IXの化合物から保護基Ｓ1を除去し、即ち、例えばモノメトキシトリチル保護基を、酸による処理により、例えば80％酢酸、塩化メチレンまたはクロロホルム中１〜４％ジクロロ酢酸、ＤＣＭ／メタノール中２％ｐ−トルエンスルホン酸による処理により、または、クロロホルム中１％トリフルオロ酢酸による処理により除去して、式XI
【化３５】
0003917680.tif 000016
〔式中Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得；
ｆ1)  オリゴヌクレオチド化学で知られている「ホスホトリエステル法」（Sonveaux, Bioorganic Chemistriy 14（1986）274ff, Reese, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1993, 2291ff）に従って、式XIの化合物を式Ｘの化合物と、適当な有機溶媒中、例えばアセトニトリル、ベンゼン、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＤＣＭ、ＥＡ、クロロホルム、ジエチルエーテル、テトラメチル尿素、ＴＨＦ、Ｎ−メチルピロリドン、石油エーテル、キシレンまたはトルエンまたは適当な溶媒の混合物中、好ましくはピリジン中、−２０℃〜１００℃、好ましくは０〜５０℃の温度で、カップリング試薬、例えば６−ニトロベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（NBOP, Hashmi, Nucleosides & Nucleotides 13（1994）1059）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（BOP, B. Castro, J. R. Dormoy, G. EvinおよびC. Selve, Tetrahedron Lett. 1975, 1219〜1222）、ベンゾトリアゾル−１−イルオキシトリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（PyBOP, J. Coste D. Le-NguyenおよびB. Castro, Tetrahedron Let. 1990, 205〜208）、Ｏ−（７−アザ）ベンゾトリアゾル−１−イルテトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（HATU, L. Carpino, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397)、Ｎ,Ｎ−ビス〔２−オキソ−３−オキサゾリジニル〕ジアミノホスホリルクロリド（Katti, Tetrahedron Lett. 26（1985）2547）、２−クロロ−５,５−ジメチル−２−オキソ−１,２,３−ジオキサホスホリナン(Stawinski, Nucl. Acido Res., Symp. Ser. 24, 1991, 229）または式XII
【化３６】
0003917680.tif 000017
〔式中、Ｒ15は（Ｃ6〜Ｃ12）−アリールであり、これは場合により（Ｃ1〜Ｃ6）−アルキル、（Ｃ1〜Ｃ6）−アルコキシ、ニトロ、塩素または臭素で１〜４回置換されており、そして、炭素原子１〜３個が場合によりヘテロ原子、好ましくは窒素で置換されており、即ち、例えば、フェニル、トリル、２,４,６−トリメチルフェニル、２,４,６−トリイソプロピルフェニル、２,３,５,６−テトラメチルベンゼン(Losse, Liebigs Ann. Chem. 1989, 19ff）、４−ブロモベンゼン、２−ニトロベンゼン、４−ニトロベンゼンまたは８−キノリルであり、好ましくは２,４,６−トリメチルフェニルまたは２,４,６−トリプロピルフェニルであり、
そしてＲ16は脱離基、例えば塩素、臭素、イミダゾール、トリアゾール、４−ニトロイミダゾール、１,２,３,４−テトラゾールまたは３−ニトロ−１,２,４−トリアゾールである〕の化合物を添加して、
好ましくは式XIIの化合物またはＢＯＰ、ＰｙＢＯＰまたはＨＡＴＵのカップリング剤を用いて、場合により、触媒、例えばＮ−メチルイミダゾール、ピリジン−Ｎ−オキシド、例えば４−メトキシピリジン−Ｎ−オキシドまたは４−エトキシピリジン−Ｎ−オキシド、４,６−ジニトロ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、１−ヒドロキシ−５−フェニルテトラゾール、１−ヒドロキシ−５−（４−ニトロフェニル）テトラゾール、３−ニトロ−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール、５−（３−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（３,５−ジニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、５−（１−メチルイミダゾール−２−イル）−１Ｈ−テトラゾール、５−〔（１−メチルイミダゾール−２−イル）メチル〕−１Ｈ−テトラゾールまたは１−ヒドロキシ−４−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）ベンゾトリアゾール、好ましくは４−エトキシピリジン−Ｎ−オキシドまたは４−メトキシピリジン−Ｎ−オキシドを触媒として添加して(Reese, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1993, 2291ff）反応させ、その際カップリング試薬の調製は容器内で行なうか、または、別途行い、そして、活性化された物質（カップリング試薬と組み合わせた式(Ｘ)の化合物）の溶液を適当な溶媒中で添加して式XIII
【化３７】
0003917680.tif 000018
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を得；
ｇ1)  式XIIIの化合物を出発物質とし、所望の鎖長になるまで工程ｅ1）およびｆ1）を反復し、式XIV
【化３８】
0003917680.tif 000019
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″、Ｙおよびｎは前に定義した通りであである〕の化合物を得；
ｈ1)  保護基Ｓ1、Ｓ2およびＳ3およびＢPR上の保護基を知られた方法（例えばGreene, Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley & Sons, New York 1991）に従って除去する、即ち、例えば、工程ｅ1）に記載した保護基Ｓ1保護基Ｓ2またはＳ3を、これら２−（４−ニトロフェニル）エチルである場合は、室温でピリジンまたはアセトニトリル中０.５Ｍ １,８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕ウンデク−７−エン（ＤＢＵ）で処理することにより、Ｓ2またはＳ3がフェニルである場合は、水性アンモニアで処理することにより、Ｓ2またはＳ3がアリルである場合は、ＤＣＭ中Ｐｄ〔Ｐ（Ｃ6Ｈ5）3〕4およびトリフェニルホスフィンで処理することにより(Hayakawa等, J. Org. Chem. 58（1993）5551）、Ｓ2またはＳ3が２−シアノエチルである場合は、ピリジン中のトリエチルアミンで処理することにより、またはＳ2またはＳ3が２,２,２−トリクロロ−１,１−ジメチルエチルである場合は、トリブチルホスフィンで処理することにより、そしてＢPR上の保護基は、例えばＲ14がｐ−ニトロフェニルエチルオキシカルボニルである場合は、ピリジン中０.５Ｍ ＤＢＵで、Ｒ14がイソブチリルまたはベンゾリルまたはｐ−メトキシベンゾイルである場合は、２０〜６０℃の濃水酸化アンモニアで、Ｒ13が２−（４−ニトロフェニル）エチルである場合は、ピリジンまたはアセトニトリル中０.５Ｍ  ＤＢＵで処理することが望ましく、Ｓ1がモノメトキシトリチルであり、Ｓ2が２−（ｐ−ニトロフェニル）エチルである場合は、好ましくは、モノメトキシトリチル基をまずｅ1）に記載の通り除去し、次にＳ2を記載した通り除去し、次に例えばヌクレオ塩基上の残りの保護基を除去し；
そして、場合により、当該分野で知られた方法で基ＱおよびＱ′を導入し（例えばUhlmann & Peyman, Chem. Rev. 90（1990）543；M. Manoharan, “Antisense Reserch and Applications", CrookeおよびLebleu編、CRC Press, Boca Raton, 1993, 17章, p. 303ff；EP-A 0 552 766；S. Agrawal, Methods in Molecular Biology, 26巻, p. 93ff, Humana Press, Totowa 1994参照）、そして、場合により得られた化合物をWang, Nucl. Acids Res. 22（1994）2326に従って環化して式Ｉの化合物を得る
ことからなる、式Ｉを有する化合物の調製方法に関する。
【００３９】
あるいは、コンジュゲートＱ′は当該分野で知られる方法（J. March, “Advanced Organic Chemistry", 第４版，J. Wiley & Sons, 1992）で式XIIのモノマー単位に組み込むこともでき、そしてその後、記載した方法に従って、式Ｉの化合物に組み込む。
【化３９】
0003917680.tif 000020
【００４０】
式XXIIの化合物は、例えばＱ′＝アルキルの場合は、式XXIIIの化合物を式VIａまたはVIｂの化合物と反応させ、更に式ＶａおよびＶｂに関して記載した方法と同様にして反応ささせることにより調製できる。
【化４０】
0003917680.tif 000021
【００４１】
式XXIIの化合物はまた、式IXの化合物から、知られた方法により保護基Ｓ1を除去し、基Ｑ′を導入することにより調製することもできる（J. March, “Advanced Organic Chemistry", 第４版, J. Wiley & Sons, 1992）。
【００４２】
あるいは、コンジュゲートＱおよびＱ′はまた、当該分野で知られた方法（J. March, “Advanced Organic Chemistry", 第４版, J. Wiley & Sons, 1992）により式XXIVのモノマー単位に組み込むこともでき、これを次に記載した方法に従って式Ｉの化合物に組み込む。
【化４１】
0003917680.tif 000022
【００４３】
ペプチド結合の連結（ｃ1)参照）のためのカップリング試薬は、例えば、Houben-Weil, Methoden der organischen Chemie（有機化学の方法）15/2巻、Georg Thieme Verlag Stuttgart 1974に記載されており、そして、その他の試薬、例えば、BOP(B. Castro, J. R. Dormoy, G. EvinおよびC. Selve, Tetrahedron Lett. 1975, 1219〜1222）、PyBOP(J. Coste, D. Le-NguyenおよびB. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 205〜208）、BroP(J. Coste, M. -N. Dufour, A. PantaloniおよびB. Castro, Tetrahedron Lett. 1990, 669〜672）、PyBroP(J. Coste, E. Frerot, P. LouinおよびB. Castro, Tetrahedron Lett. 1991, 1967〜1970）、およびウロニウム試薬、例えばHBTU(V. Dourtoglou, B. Gross, V. Lambropoulou, C. Zioudrou, Synthesis 1984, 572〜574）、TBTU, TPTU, TSTU, TNTU(R. Knorr, A. Trzeciak, W. BannwarthおよびD. Gillessen, Tetrahedron Letters 1989, 1927〜1930), TOTU(EP-A 0 460 446), HATU(L. A. Carpino, J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397〜4398)、HAPyU, TAPipU(A. Ehrlich, S. Rothemund, M. Brudel, M. Beyermann, L. A. CarpinoおよびM. Bienert, Tetrahedron Lett. 1993, 4781〜4784), BOI(K. Akaji, N. Kuriyama, T. Kimura, Y. FujiwaraおよびY. Kiso, Tetrahedron Lett. 1992, 3177〜3180）または酸クロリド類またはフロリド類（L. A. Carpino, H. G. Chao, M. BeyermannおよびM. Bienert, J. Org. Chem. 56（1991）2635；J.-N. Bertho, A. Loffet, C. Pinel, F. ReutherおよびG. SennyeyによるE. GiraltおよびD. Andreu(Eds.)Peptides 1930, Escom Science Publishers B. V. 1991, pp. 53〜54；J. GreenおよびK. Bradley, Tetrahedron 1993, 4141〜4146）、２,４,６−メシチレンスルホニル−３−ニトロ−１,２,４−トリアゾリド（ＭＳＮＴ）（B. Blankemeyer-Menge, M. NimitsおよびR. Frank, Tetrahedron Lett., 1990, 1701〜1704）、２,５−ジフェニル−２,３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチオフェンジオキシド（ＴＤＯ）（R. Kirstgen, R. C. Sheppard, W. Strglich, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1987, 1870〜1871)または活性化エステル（D. Hudson, Peptides Res. 1990, 51〜55）が各文献に記載されている。
【００４４】
カルボジイミド、例えばジシクロヘキシルカルボジイミドまたはジイソプロピルカルボジイミドの使用は、更に好ましい。ホスホニウム試薬、例えばＰｙＢＯＰまたはＰｙＢｒｏＰ、ウロウニウム試薬、例えばＨＢＴＵ、ＴＢＴＵ、ＴＰＴＵ、ＴＳＴＵ、ＴＮＴＵ、ＴＯＴＵまたはＨＡＴＵおよびＢＯＩも好ましく使用される。この場合、カップリングは活性化試薬を用いて、そして、場合により１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）(W. Koenig, R. Geiger, Chem. Ber, 103, 788（1970)）または３−ヒドロキシ−４−オキソ−３,４−ジヒドロベンゾトリアゾール（ＨＯＯｂｔ）（W. Koenig, R. Geiger, Chem. Ber, 103, 2034（1970）)のような添加剤を加えて、式VIIIの化合物を添加することにより直接行なうかほかに活性エステルとしての単位の前活性化を別途行い、そして適当な溶媒中の活性化物質の溶液を添加することもできる。
【００４５】
本発明は更に、式XVおよびXVI
【化４２】
0003917680.tif 000023
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りであり、ｏおよびｐは相互に独立して０〜５０、好ましくは０〜２０であり、そしてｏ＋ｐ＋１＝ｎである〕の化合物において；
ａ2)  式XVの化合物の場合は、ｅ1）において記載した通り保護基Ｓ1を除去し、
ｂ2)  式XVIの化合物の場合は、ｄ1）において記載した通り保護基Ｓ3を除去し、そして
ｃ2)  ｆ1）において記載した通り得られた化合物を相互にカップリングさせて、式XIV：
【化４３】
0003917680.tif 000024
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｓ3、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″、Ｙおよびｎは上に定義した通りである〕の化合物を得；
ｄ2)  そしてｈ1）において記載した通りこれらを反応させることにより式Ｉの化合物を得る
ことからなる、ｎが１〜１００である式Ｉの化合物の調製方法に関する。
【００４６】
本発明は更に、
ａ3)  式Ｘ
【化４４】
0003917680.tif 000025
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物を知られた方法でＳＰＡＣＥＲを介して固体支持体にカップリングさせて、式XVII
【化４５】
0003917680.tif 000026
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りであり、ＳＳは固相合成にて適する固体支持体、例えばアミノプロピル−ＣＰＧ（ＣＰＧ＝RControlled Por GlassまたはRTentagelであり、そして、
ＳＰＡＣＥＲは当該分野で知られているような(Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14（1986），274ff）合成後に支持体から除去できるような基、例えばＥＰ−Ａ ０ ５５２ ７７６（ＨＯＥ ９２／Ｆ０１２）に記載のようなビス（ヒドロキシエチル）スルホニル基であるか、
または、ＳＰＡＣＥＲは知られた除去可能な基を介して固体支持体に連結される２官能性のコンジュゲート分子Ｑであり、例えば、コハク酸基を介して固体支持体に結合しているヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド(Sonveaux, Bioorganic Chemistry 14,（1986）274ff）またはコハク酸基を介して固体支持体に結合しているポリ−またはオリゴエチレングリコール（Jaeschke, Tetrahedron Lett. 34（1933）301）または、例えば、コハク酸基を介して固体支持体に結合しているコレステロール誘導体(MacKellar, Nucl. Acids Res. 20（1992）3411）である〕の化合物を得；
ｂ3)  ｅ1）において記載の通り、式XVII：
【化４６】
0003917680.tif 000027
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、ＳＳ、ＳＰＡＣＥＲ、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物から保護基Ｓ1を除去し；
ｃ3)  ｆ1）において記載の通り、得られた化合物を、式Ｘ
【化４７】
0003917680.tif 000028
〔式中、Ａ、ＢPR、Ｄ、Ｇ、Ｌ、Ｒ5、Ｒ6、Ｓ1、Ｓ2、Ｘ、Ｘ′、Ｘ″およびＹは前に定義した通りである〕の化合物と反応させ；
ｄ3)  所望の鎖長が得られるまで工程ｂ3)〜ｃ3)を反復し；
ｅ3)  場合により知られた方法でコンジュゲートＱ′をカップリングする（例えばUhimann & Peyman, Chem. Rev. 90（1990）543；M. Manoharan in “Antisense Research and Applications", Crooke and Lebleu, Eds., CRC Press, Boca Raton, 1993, Chapter 17, p. 303ff；EP-A 0 552 766；S. Agrawal in “Methods in Molecular Biology", Vol. 26, p.93ff, Humana Press, Totowa 1994参照）；
ｆ3)  知られた方法で、例えばビス（ヒドロキシエチル）スルホニルリンカーの場合はＥＰ−Ａ ０ ５５２ ７６６（ＨＯＥ ９２／ＦＯ１２）に記載の通りＤＢＵで処理することにより、コハク酸リンカーの場合は水性アンモニアおよび工程ｈ1）に記載した保護基を用いた処理により、固体支持体から上記の通り得られた化合物を分離し、その際保護基の除去は支持体からの分離の前に行なうこともでき、そして、場合により知られた方法でコンジュゲートＱをカップリングし、これによりＱおよびＱ′のカップリング〔ｅ3)、ｆ3)〕の順序を変更してもよく、そして、場合により得られた化合物を環化する
ことからなる、式Ｉを有する化合物の調製方法に関する。
【００４７】
式Ｉの化合物は遺伝子発現の抑制剤として使用する。従って本発明は、更に、薬剤の製造のための本発明の治療活性化合物の使用、および、生理学的に許容される賦形剤、および、適切には、添加剤および／または補助剤と本発明の化合物を混合することからなる製剤の製造方法に関する。
【００４８】
治療活性化合物とは、一般的に、ヌクレオ塩基に相当する単位Ｂの配列に応じて、アンチセンスオリゴヌクレオチド、３重螺旋形成オリゴヌクレオチド、アプタマー(aptamer)、特定の標的分子、例えば蛋白または受容体に結合できるＲＮＡまたはＤＮＡ分子、（例えばL. C. Bock等、Nature 1992, 355, 564参照）またはリボザイム（触媒ＲＮＡ、例えばCastanetto等、Critical Rev. Eukar. Gene Expr. 1992, 2, 331参照）の類縁体として、特に、アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび３重螺旋形成オリゴヌクレオチドの類縁体としての機能を有するものを指すものとする。
【００４９】
更に本発明はまた、診断薬として、例えば生物学的試料中の特定の２重鎖または１重鎖の核酸分子の存在、非存在またはその量を検出するための本発明の化合物の使用に関する。
【００５０】
本発明を使用するためには、本発明の化合物は約６〜１００、好ましくは約１０〜４０、特に好ましくは約１２〜３１ヌクレオチドの長さ（ｎ−１）を有する。そのほか、前述したような好ましい範囲、修飾方法またはコンジュゲート形成方法を同様に適用できる。
【００５１】
本発明の製剤は、例えばウィルス、例えばＨＩＶ、ＨＳＶ−１、ＨＳＶ−２、インフルエンザ、ＶＳＶ、Ｂ型肝炎またはパピローウィルスにより誘発される疾患の治療のために用いることができる。
【００５２】
この種の標的に対して活性を示す本発明の配列（塩基配列）を以下に例示する。
0003917680.tif 000029
【００５３】
本発明の製剤はまた、癌または再狭窄の治療のためにも適している。例えば、この場合、発ガン性またはガン生長に関与する標的に対するような配列（塩基配列）を使用することができる。このような標的の例を以下に示す。
１）  核オンコ蛋白、例えばｃ−ｍｙｃ、Ｎ−ｍｙｃ、ｃ−ｍｙｂ、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｆｏｓ／ｊｕｎ、ＰＣＮＡ、ｐ１２０
２）  原形質／膜関連オンコ蛋白、例えばＥＪ−ｒａｓ、ｃ−Ｈａ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、ｒｒｇ、ｂｃｌ−２、ｃｄｃ−２、ｃ−ｒａｆ−１、ｃ−ｍｏｓ、ｃ−ｓｒｃ、ｃ−ａｂｌ
３）  細胞受容体、例えばＥＧＦ受容体、ｃ−ｅｒｂＡ、レチノイド受容体、蛋白キナーゼ調節サブユニット、ｃ−ｆｍｓ
４）  サイトカイン、生長因子、細胞外マトリックス、例えばＣＳＦ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ｂＦＧＦ、ミエロプラスチン、フィブロネクチン。
【００５４】
この種の標的に対して活性を有する本発明の配列（塩基配列）を以下に例示する。
0003917680.tif 000030
【００５５】
本発明の製剤は更に、例えばインテグリンまたは細胞−細胞付着受容体、例えば、ＶＬＡ−４、ＶＬＡ−２、ＩＣＡＭまたはＥＬＡＭによって影響を受ける疾患の治療に適している。
【００５６】
この種の標的に対して活性を有する本発明の配列（塩基配列）を以下に例示する。
0003917680.tif 000031
【００５７】
本発明の製剤は更に、例えばＴＮＦαのような因子により誘発された疾患の治療に適している。この種の標的に対して活性を示す本発明の配列（塩基配列）を以下に示す。
0003917680.tif 000032
【００５８】
製剤は例えば局所または経口投与できる製剤の形態、例えば、錠剤、コーティング錠剤、ハードまたはソフトゼンチンカプセル、溶液、乳液または懸濁液の形態で使用できる。これらはまた例えば座薬の形態で直腸投与または例えば注射用溶液の形態で非経腸投与できる。製剤の調製のためには、これらの化合物を、治療上不活性な、有機および無機の賦形剤中で処理することができる。錠剤、コーティング錠剤およびハードゼンチンカプセルのためのこのような賦形剤には、乳糖、トウモロコシ澱粉、またはその誘導体、タルクおよびステアリン酸またはその塩である。溶液の調製に適する賦形剤は、水、ポリオール、スクロース、転化糖およびグルコースである。注射用溶液に適する賦形剤は、水、アルコール、ポリオール、グリセロールおよび植物油である。座薬に適する賦形剤は、植物油および硬化油、ワックス、油脂および半液体ポリオールである。製剤はまた、保存料、溶媒、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、フレーバー剤、浸透圧調節用塩、緩衝剤、コーティング成分、抗酸化剤を含有してよく、そして更に、適切には、その他の治療活性化合物も含有してよい。
【００５９】
好ましい投与方法は経口投与である。更に好ましい投与形態は注射による投与である。このためには、アンチセンスオリゴヌクレオチドを液体溶液中、好ましくは、生理学的に許容される緩衝液中、例えばHank溶液またはリンゲル液中に製剤する。しかしながら、本発明の治療活性化合物はまた、固体形態に製剤し、使用前に溶解または懸濁することもできる。前身投与のための好ましい用量は、一日当たり、約０.０１mg／kg〜約５０mg／kg体重である。
【００６０】
0003917680.tif 000033
0003917680.tif 000034
【００６１】
【実施例】
(１)  Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−ｐ−ニトロフェニル）エチル）
(１ａ)  Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−２−アミノエタノール
２−アミノエタノール８.６１ｇ（０.１４１モル）を、ジオキサン２５０mlおよびＨ2Ｏ １５０mlに溶解した。１５〜２０℃でＮａＨＣＯ3 １７.７９ｇ（０.２１２モル）をはじめに加え、それからフルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−サクシンイミド５０ｇ（０.１４８モル）を小量ずつ加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、それからそれを蒸発乾固した。残留物をジクロロメタン（ＤＣＭ）とＨ2Ｏとの間に分配し、有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥しそして溶剤を真空中で蒸発した。残留物を、エーテル１００mlと一緒に撹拌しそして生成物を吸引濾去しそしてエーテルでよく洗浄した。収量は、３８.７７ｇ（９７％）であった。
MS（ES＋）：284.2(M＋H)+；1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝3.05(dd, 2H, CH2OH)；3.39(dd, 2H, N＝CH2)；4.25(m, 3H, Ar-CH-CH2)；4.61(t, 1H, OH)；7.14-7.98(m, 15H, Ar-H, NH)。
【００６２】
(１ｂ)  Ｎ−フルオレニルメトキシカルボニル−２−アミノ−１−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エタン
無水のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００mlに溶解したＮ−フルオレニルメトキシカルボニル−２−アミノエタノール（実施例１ａから）１０ｇ（３５.３ミリモル）を、０℃で、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）５.９３ｇ（４５.９３ミリモル）および４−メトキシトリフェニルメチルクロライド１０.９１ｇ（３５.３ミリモル）で処理しそしてはじめに０℃で１時間、それから室温で１時間撹拌した。反応混合物を蒸発しそしてＤＣＭと飽和ＮａＨＣＯ3水溶液との間に分配した。有機相をＨ2Ｏで洗浄しそしてＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、そして溶剤を真空中で蒸発した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（はじめに、７０：２９：１のｎ−ヘプタン／酢酸エチル（ＥＡ）／トリエチルアミン（ＴＥＡ）、それから９９：１のＥＡ／ＴＥＡ）した。収量は、１４.４ｇ（７３％）であった。
MS（FAB）：562.3(M＋Li)+；1H-NMR（200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.95(t, 2H, CH20-MMTr)；3.21(dd, 2H, N-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3)；4.25(m, 3H, Ar-CH-CH2)；4.61(t, 1H, OH)；6.80-7.96(m, 23H, Ar-H, NH)。
【００６３】
(１ｃ)  ２−アミノ−１−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エタン
無水のＤＭＦ ５０mlに溶解したＮ−フルオレニルメトキシカルボニル−２−アミノ−１−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エタン（実施例１ｂから）５.０ｇ（９ミリモル）を、室温でジエチルアミン６.５５ｇ（９０ミリモル）で処理しそして混合物を２時間撹拌した。それを精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（はじめに５０：４９：１のｎ−ヘプタン／ＥＡ／ＴＥＡ、それから７９：２０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、２.９６ｇ（９８.７％）であった。
MS（ES＋）：340.3(M＋Li)+；1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.75(t, 2H, CH2O-MMTr)；2.93(dd, 2H, N-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3)；6.83-7.47(m, 14H Ar-H)。
【００６４】
(１ｄ)  ２−メチルイミノ−１−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エタン（三量体）
メタノール１０mlに溶解した２−アミノ−１−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エタン（実施例１ｃから）２.９６ｇ（８.９ミリモル）を、氷冷しながら、３７％ホルムアルデヒド１.０８ｇ（１３.２２ミリモル）で処理しそして室温で４時間撹拌した。粘稠な沈澱が形成された。反応混合物を蒸発しそして残留物を、シリカゲル上でクロマトグラフィー処理（５０：４９：１のｎ−ヘプタン／ＥＡ／ＴＥＡ）してそれを精製した。収量は、１.７ｇ（５５％）であった。
MS（FAB）：1042.8(M＋Li)+；1034.8(M-H)+。1H-NMR（200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.60(t, 6H, 0-CH2)；2.99(t, 6H, N-CH2)；3.69(s, 9H, OCH3)；6.78-7.42(m, 42H, Ar-H)。
【００６５】
(１ｅ)  亜燐酸ジ（２−（４−ニトロフェニル）エチル）
亜燐酸ジフェニル２３.４２ｇ（０.１モル）を、アルゴン下で１００℃で、ｐ−ニトロフェニルエタノール３３.４３ｇ（０.２モル）と一緒に１４時間加熱しそしてそれを精製するために、混合物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（５０：５０のｎ−ヘプタン／ＥＡ、それから８０：２０のＥＡ／メタノール）した。収率：５５％
MS（FAB）：403.1(M＋Na)+；381.1(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝3.03(t, 4H, Ar-CH2)；4.20(4H, dt, O-CH2)；6.71(d, J=140Hz, 1H, PH)；7.52(d, 4H, Ar-H)；8.17(d, 4H, Ar-H)。
【００６６】
(１ｆ)  Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ−（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル
２−メチルイミノ−１−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エタン（三量体）（実施例１ｄから）３４１mg（０.３２９ミリモル）を、無水のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）２mlに溶解した亜燐酸ジ（２−（４−ニトロフェニル）エチル）（実施例１ｅから）５００mg（１.３２ミリモル）に加えそして混合物を８０℃で３時間撹拌した。溶剤を蒸発しそして残留物をさらに３０分１００℃で撹拌した。それを精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（はじめに９９：１のＥＡ／ＴＥＡ、それから９０：９：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：８３％。
MS（FAB）：732.3(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.64-3.06(m, 10H, Ar-CH2＋P-CH2＋CH2-OMMTr＋N-CH2)；3.73(s, 3H, OCH3)；4.16(dt, 4H, PO-CH2)；6.78-8.08(m, 22H, Ar-H)。
【００６７】
(２)  Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
(２ａ)  Ｎ−エチルモルホリン（ＮＥＭ）０.９５２ｇ（８.２７ミリモル）、（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−酢酸０.８３４ｇ（２.７６ミリモル）およびＯ−（７−アザ）ベンゾトリアゾール−１−イルテトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、L. Carpins、J. Am. Chem. Soc. 1993, 115, 4397）１.１５３ｇ（３.０３ミリモル）を、無水のＤＭＦ ６０mlに溶解したＮ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例１ｆから）２.００ｇ（２.７６ミリモル）に加えそして混合物を、室温で１２時間撹拌した。それから、同量のＨＡＴＵを再び加えそして混合物を室温でさらに３時間撹拌した。それを精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９５：４：１のＤＣＭ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、２.７ｇ（９７％）であった。
MS（ES＋）：1012.0(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.94(t, 4H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.06(t, 2H, MMTr-O-CH2)；3.23-3.63(m, 4H, P-CH2＋N-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3)；3.83(s, 3H, OCH3)；4.10(dt, 4H, P-O-CH2)；4.79(s, ブロード, 2H, CO-CH2)；6.80-8.18(m, 28H, Ar-H, シトシニル-H)；11.03(s, ブロード, 1H, NH)。
【００６８】
(２ｂ)  ＨＡＴＵの代りに、Ｏ−（シアノ（エトキシカルボニル）メチレンアミノ）−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＯＴＵ、ＥＰ ０４６０４４６）を使用する以外は実施例２ａにおけるような混合物。収率は５７％であった。分光データ：実施例２ａ参照。
【００６９】
(３)  Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）モノエステル（トリエチルアンモニウム塩）
Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例２から）１ｇ（０.９９ミリモル）を、無水のアセトニトリル中の１,８−ジアザビシクロ〔５.４.０〕ウンデク−７−エン（ＤＢＵ）の０.１Ｍ溶液２０mlに溶解しそして混合物を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、ＤＣＭとＫＨ2ＰＯ4水溶液（pH７）との間に分配し、有機相をＮａ2ＳＯ4上で乾燥しそして溶剤を真空中で蒸発した。残留物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：２９：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、５４０mg（５７％）であった。
MS（FAB）：906.5(M-H＋2Na)+；884.6(M＋Na)+；862.5(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝3.00(m, 4H, P-O-CH2-CH2-Ar＋MMTr-O-CH2)；3.38-3.60(m, 4H, P-CH2＋N-CH2)；3.73(s, 3H, OCH3)；3.82(s, 3H, OCH3)；4.01(dt, 2H, P-O-CH2)；4.79および5.03(それぞれの場合において s, ブロード, 2H, CO-CH2)；6.78-8.20(m, 24H, Ar-H, シトシニル-H)；11.00(s, ブロード, 1H, NH)。
【００７０】
(４)  Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノ−メタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例２から）１.００ｇ（０.９９ミリモル）を、８０％水性酢酸８０mlに溶解しそして溶液を室温で４時間撹拌した。溶剤を蒸発しそして残留物をトルエンと一緒に２回共蒸発した。それを精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５：１４：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、５２２mg（７１％）であった。
MS（FAB）：761.2(M＋Na)+；739.3(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.98(t, 4H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.38-3.67(m, 4H, N-CH2CH2-OH)；3.80-3.89(m, 2H, P-CH2)；3.91(s, 3H, OCH3)；4.12(dt, 4H, P-O-CH2)；4.78および4.87(それぞれの場合において s, ブロード, 2H, CO-CH2)；6.98-8.19(m, 14H, Ar-H, シトシニル-H)；11.02(s, ブロード, 1H, NH)。
【００７１】
(５)  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例７と同様にして、Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）モノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例３）およびＮ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例４）から実施した。それを精製するために、化合物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５／１４／１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：７３％。
MS（FAB）：1605(M＋Na)+；1583(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.94-3.18(m, 6H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.26-3.95(m, 10H)；3.75(s, 3H, OCH3)；3.85(s, 6H, OCH3)；3.99-4.36(m, 8H, P-O-CH2)；4.75-4.92(m, ブロード, 4H, CO-CH2)；6.83-8.18(m, 38H, Ar-H, シトシニル-H)；10.98および11.03(それぞれの場合において s, ブロード, 2H, NH)。
【００７２】
(６)  ５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2”（実施例５）から実施した。それを精製するために、化合物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５／１４／１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は７４％であった。
MS（FAB）：1332.4(M＋Na)+；1310.3(M＋H)+
【００７３】
(７)  Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル
合成は、亜燐酸ジエチルを使用する以外は、実施例１ｆと同様にして実施した。収率：８７.５％
MS（FAB）：490.2(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.22(t, 6H, CH2-CH3)；2.80(t, 2H, N-CH2)；2.91(d, J=12.5Hz, 2H, P-CH2)；3.02(t, 2H, CH2-OMMTr)；3.75(s, 3H, OCH3)；4.01(dq, 4H, PO-CH2)；6.84-7.45(m, 14H, Ar-H)。
【００７４】
(８)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル
ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）５７０.３mg（４.２２ミリモル）、ＮＥＭ ９７２.１mg（８.４４ミリモル）、チミジン−１−イル−酢酸７７７mg（４.２２ミリモル）およびジイソプロピルカルボジイミド６３９mg（５.０６ミリモル）を、無水のＤＭＦ ５０mlに溶解したＮ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例７）２.０４ｇ（４.２２ミリモル）に加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し、溶剤を蒸発し、残留物をＤＣＭに溶解しそして溶液を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄し、それからＮａＣｌ溶液で洗浄した。抽出液を硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして溶剤を蒸発した。それを精製するために、残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９８：２：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、２.４７ｇ（９０％）であった。
MS（FAB）：662.3(M＋Na)+；656.3(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.12-1.32(m, 6H, CH2-CH3)；1.68および1.75(それぞれの場合において s, 3H, T-CH3)；3.10-3.40(m, 2H, CH2-OMMTr)；3.53-3.70(m, 4H, P-CH2＋N-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3)；3.83-4.16(m, 4H, PO-CH2)；4.62および4.72(それぞれの場合において s, 2H, CO-CH2)；6.83-7.42(m, 15H, Ar-H, T-H)；11.28(s, 1H, NH)。
【００７５】
(９)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）−エチルアミノメタンホスホン酸モノエチルエステル（トリエチルアンモニウム塩）
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例８）８１１mg（１.２５ミリモル）を、１Ｎ ＮａＯＨ ３.７５mlに懸濁した。混合物を室温で３時間、それから５０℃で６時間撹拌した。反応混合物を真空中で濃縮しそして残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（１００：１０：１０のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ、それから１００：４０：１０のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、８９７mg（９９.５％）であった。
MS（ES−）：620.4(M-H)-。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.18(t, 9H, N-CH2-CH3)；1.68および1.74(それぞれの場合において s, 3H, T-CH3)；2.96-3.08(q, 6H, N-CH2-CH3)；3.35(m, 2H, N-CH2)；3.43-3.70(d, J=11Hz, 2H, P-CH2)；3.63(t, 2H, CH2-OMMTr)；3.75(s, 3H, OCH3)；3.78(dq, 2H, PO-CH2)；4.60および4.86(それぞれの場合において s, 2H, CO-CH2)；6.82-7.41(m, 15H, Ar-H, T-H)；11.24(s, 1H, NH)。
【００７６】
(１０)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル
合成は、実施例４と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例８）から実施した。それを精製するために、生成物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０のＥＡ／メタノール）した。収率：８０％。
MS（FAB）：400.1(M＋Na)+；378.1(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.17-1.32(m, 6H, CH2-CH3)；1.78(s, 3H, T-CH3)；3.40-3.69(m, 4H, CH2-OH＋N-CH2)；3.89(d, J=11Hz, 2H, P-CH2)；3.92-4.19(m, 4H, PO-CH2)；4.70(s, 2H, CO-CH2)；4.98(t, 1H, OH)；7.22および7.30(それぞれの場合において s, 1H,
T-H)；11.25(s, 1H, NH)。
【００７７】
(１１)  Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジフェニル
合成は、亜燐酸ジエチルを使用する以外は、実施例１ｆと同様にして実施した。収率：１００％。
MS（FAB）：58.2（M＋Li）+
【００７８】
(１２)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸モノフェニルエステル（トリエチルアンモニウム塩）
合成は、実施例８１と同様にしてＮ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジフェニル（実施例１１）およびチミジン−１−イル−酢酸から実施した。それを精製するために、生成物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：５：０.５のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ／Ｈ2Ｏ）した。収率：４７％。
MS（FAB）：682.3(M＋2Li-H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.16(t, 9H, N-CH2-CH3)；1.67および1.72(それぞれの場合において s, 3H, T-CH3)；2.96-3.70(m, 12H, N-CH2-CH3＋N-CH2＋P-CH2＋CH2-OMMTr)；3.75(s, 3H, OCH3)；4.58および4.88(それぞれの場合において s, 2H, CO-CH2)；6.74-7.46(m, 20H, Ar-H, T-H)；11.23(s, 1H, NH)。
【００７９】
(１３)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸フェニル４−ニトロフェニルエチル
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸モノフェニルエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１２）３８５.４mg（０.５ミリモル）および４−ニトロフェニルエタノール９２mg（０.５５ミリモル）を、無水ピリジンと一緒に３回共蒸発し、それから無水ピリジン１５mlに溶解した。３−ニトロ−１−（ｐ−トルエンスルホニル）−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール（ＴＳＮＴ）４０３.４mg（０.１５ミリモル）を０℃で加え、それから混合物を０〜５℃で１６時間撹拌し、ピリジンを真空中で溜去し、残留物をＥＡにとりそして溶液を連続的に飽和ＮａＨＣＯ3水溶液それからＮａＣｌ溶液で洗浄した。それを精製するために、生成物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（１００：２のＥＡ／ＴＥＡ）した。収量は、１６２mgであった。
MS（FAB）：831.3(M＋2Li-H)+；(M＋Li)+
【００８０】
(１４)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
合成は、実施例８と同様にして、Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ−（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例１ｆ）およびチミジン−１−イル−酢酸から実施した。収率：６３％。
MS（ES＋)：898.4(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.65および1.72(それぞれの場合において s, 3H, T-CH3)；2.96(t, 4H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.06(t, 2H, N-CH2)；3.67(d, J=11Hz, 2H, P-CH2)；3.70(m, 2H, MMTr-O-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3)；3.83(s, 3H, OCH3)；4.10(dt, 4H, P-O-CH2)；4.59および4.62(それぞれの場合において s, ブロード, 2H, CO-CH2)；6.83-8.18(m, 23H, Ar-H, T-H)；11.30(s, ブロード, 1H, NH)。
【００８１】
(１５)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）
(１５ａ)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸フェニル４−ニトロフェニルエチル（実施例１３）３０mgから
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸フェニル４−ニトロフェニルエチル（実施例１３）３０mgを、ＴＥＡ １ml、ジオキサン１mlおよびｐ−ニトロベンズアルドキシム８０mgの混合物に溶解しそして溶液を室温で３時間撹拌した。溶剤を真空中で蒸発しそして残留物をピリジンと一緒に３回およびトルエンと一緒に２回共蒸発した。残留物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（１００：２のＥＡ／ＴＥＡ、それから６０：４０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、２３mgであった。
MS（FAB）：755.3(M＋2Li-H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.15(t, 9H, N-CH2-CH3)；1.60および1.79(m, 3H, T-CH3)；2.80-3.60(m, 14H, N-CH2-CH3＋N-CH2＋P-CH2＋CH2-OMMTr＋Ar-CH2)；3.73(s, 3H, OCH3)；4.01(dt, 2H, P-O-CH2)；4.58-4.92(m, 2H, CO-CH2)；6.82-8.18(m, 19H, Ar-H, T-H)；11.30(s, 1H, NH)。
【００８２】
(１５ｂ)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル（実施例１４）から
合成は、溶剤としてピリジンを使用する以外は、実施例３と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例１４）から実施した。収率：８２％。分光データ：実施例１５ａ参照。
【００８３】
(１６)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸
合成は、実施例１５ｂと同様に実施した。副生成物としてＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸を１８％の収率で得た。
MS（ES−）：592.2(M-H)-
【００８４】
(１７)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（Ｏ−エチル）−Ｔ−Ｐ−（Ｏ−エチル)2
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸モノエチルエステル（トリエチルアンモニウム塩）（９）３６１mg（０.５ミリモル）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（１０）１８８.７mg（０.５ミリモル）を、無水のピリジンと一緒に２回共蒸発し、それから無水のピリジン１０mlに溶解した。ＴＳＮＴ １.５ミリモルを５〜１０℃で加えそして混合物を室温で１６時間撹拌した。ピリジンを真空中で蒸発し、残留物をＥＡに溶解しそして溶液を連続して飽和ＮａＨＣＯ3水溶液それからＮａＣｌ溶液で洗浄した。それをＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮しそして残留物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９２：８：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、２２３mg（４６％）であった。
MS（FAB）：987.5（M＋Li)+。1H-NMR(200MHz, DMSO, TMS)
特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：6.82-7.43(m, 16H)；CO-CH2：4.59-4.78(m, 4H)；チミン−CH3：1.63-1.80(m, 6H)。
【００８５】
(１８)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（Ｏ−エチル）−Ｔ−Ｐ−（Ｏ−エチル)2
合成は、実施例４と同様にして、５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（Ｏ−エチル）−Ｔ−Ｐ−（Ｏ−エチル)2（実施例１７）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５：１５：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ、それから１００：５０：１.５のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、９５％であった。
MS（FAB）：731.2(M＋Na)+：709.1(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：チミン−Ｈ：7.21-7.36(m, 2H)；CO-CH2：4.60-4.76(m, 4H)；チミン−CH3：1.63-1.79(m, 6H)。
【００８６】
(１９)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（Ｏ−フェニル）−Ｔ−Ｐ−(Ｏ−エチル)2
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例１０）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸モノフェニルエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１２）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９３：７：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：５８％。
MS（FAB）：1051.4(M＋Na)+；1029.5(M＋H)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：6.82-7.53(m, 21H)；CO-CH2：4.52-4.82(m, 4H)；チミン−CH3：1.62-1.80(m, 6H)。
【００８７】
(２０)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミノメタンホスホン酸ジ（４−ニトロフェニルエチル）
合成は、実施例４と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例１４）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０のＥＡ／メタノール）した。収率：８５％。
MS（ES＋）：620.3(M＋H)+。1H-NMR(500 MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.73(s, 3H, T-CH3)；2.97(t, 4H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.41(m, 2H, N-CH2)；3.59(m, 2H, CH2-OH)；3.83(d, 2H, J=11Hz, P-CH2)；4.08-4.30(m, 4H, P-O-CH2)；4.54および4.78(それぞれの場合において s, ブロード, 2H, CO-CH2)；4.99(t, 1H, OH)；7.14-8.19(m, 9H, Ar-H, チミジニル-H)；11.30(s, ブロード, 1H, NH)。
【００８８】
(２１)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（Ｏ−エチル)2
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例１０）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。ＴＳＮＴの代りに、３−ニトロ−１−（２,４,６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール（ＴＩＰＳＮＴ）を、カップリングに対して使用した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９５：５：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ、それから９０：１０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：＞９０％。
MS（ES＋）：1109.0(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：6.82-8.18(m, 20H)；CO-CH2：4.51-4.76(m, 4H)；チミン−CH3：1.61-1.78(m, 6H)。
【００８９】
(２２)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例２１と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例１０）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。ＴＳＮＴの代りに、３−ニトロ−１−（２,４,６−トリイソプロピルフェニルスルホニル）−１Ｈ−１,２,４−トリアゾール（ＴＩＰＳＮＴ）をカップリングに対して使用した。収率：＞９０％。
分光データ：実施例２１参照。
【００９０】
(２３)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２２）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ、それから８０：２０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、７５％であった。
MS（ES＋）：836.3(M＋Li)+。1H-NMR(200 MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：7.11-8.22(m, 6H)；CO-CH2：4.55-4.77(m, 4H)；チミン−CH3：1.71(s, ブロード, 6H)。
【００９１】
(２４)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（Ｏ−エチル)2
“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２３）１０mg（０.０１２ミリモル）を、ピリジン中のＤＢＵの０.５Ｍ溶液１mlに溶解しそして、はじめに４℃で２４時間、それから室温で２４時間撹拌した。溶剤を真空中で蒸発しそして残留物をペンタンで２回、それからエーテルで２回処理し、それから生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９：１：０.２それから７０：３０：２それから６０：４０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量：１０.２mg。
MS（FAB）：725.3(M＋2Na-H)+；703.3(M＋Na)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：チミン−Ｈ：7.15-7.70(m, 2H)；CO-CH2：4.67-4.92(m, 4H)；チミン−CH3：1.67-1.81(m, 6H)。
【００９２】
(２５)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、４−メトキシ−ピリジン−Ｎ−オキシドの１.５当量（実施例２３を基にして）を加えて、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２２）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：２それから８５：１５：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：６１％。
MS（ES＋）：1555.8(M＋H)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：6.83-8.20(m, 25H)；CO-CH2：4.52-4.75(m, 6H)；チミン−CH3：1.61-1.78(m, 9H)。
【００９３】
(２６)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、８９％であった。
MS（ES＋）：1283.1(M＋H)+；1305.0(M＋Na+)。
【００９４】
(２７)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、４−メトキシ−ピリジン−Ｎ−オキシドの１.５当量（実施例２３を基にして）を加えて、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２６）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：２それから８０：２０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：１５％。
MS（ES＋）：2007(M＋H)+；2029(M＋Na)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：6.79-8.21(m, 30H)；CO-CH2：4.53-4.87(m, 8H)；チミン−CH3：1.58-1.89(m, 12H)。
【００９５】
(２８)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２７）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、５５％であった。
MS（FAB）：1735(M＋H)+；1757(N＋Na)+
【００９６】
(２９)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）アミノメタンホスホン酸ジ（４−ニトロフェニルエチル（実施例２０）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（１００：１０：１それから９０：１０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：８７％。
MS（FAB）：1356.2(M＋2Li-H)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：6.82-8.18(m, 28H)；CO-CH2：4.50-4.71(m, 4H)；チミン−CH3：1.59-1.78(m, 6H)。
【００９７】
(３０)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ)2”（実施例２９）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５：１５：１それから８０：２０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は７８％であった。
MS（ES＋）：1072.7(M＋H)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）特有のシグナル：Ar-Hおよびチミン-H：7.08-8.20(m, 14H)；CO-CH2：4.52-4.80(m, 4H)；チミン−CH3：1.70（s, ブロード, 6H)。
【００９８】
(３１)  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ(ＯＮＰＥ)−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸２−（ｐ−ニトロフェニル）エチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例３）および“５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ(ＯＮＰＥ)2”（実施例６）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：１９：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：６６％。
MS（FAB）：2155(M＋H)+；2161(M＋Li)+；2177(M＋Na)+。
【００９９】
(３２)  ５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ(ＯＮＰＥ)−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ(ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2”（実施例３１）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５：１５：１それから８０：２０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、７０％であった。
MS（FAB）：1882(M＋H)+；1904(M＋Na)+。
【０１００】
(３３)  Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸２−（ｐ−ニトロフェニル）エチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例３）およびアリルアルコールから実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９５：５：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。
MS（ES＋）：902.1(M＋H)+；924.1(M＋Na)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）：δ＝2.94-3.70(m, 8H, P-O-CH2-CH2-Ar＋MMTr-O-CH2＋N-CH2＋P-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3；3.86(s, 3H, OCH3)；4.10-4.60(m, 4H, P-O-CH2)；4.79および4.84（それぞれの場合において s, ブロード, 2H, CO-CH2）；5.09-5.39(m, 2H, H2C=CH-)；5.71-6.00(m, 1H, H2C=CH-)；6.83-8.19(m, 24H, Ar-H, シトシニル−Ｈ)；11.03(s, ブロード, 1H, NH)。
【０１０１】
(３４)  Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル
合成は、実施例４と同様にして、Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル（実施例３３）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９４：５：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、８３％であった。
MS（ES＋）：630.2(M＋H)+。1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）：δ＝3.02(t, 2H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.37-3.72(m, 4H, HO-CH2-CH2)；3.86(s, 3H, OCH3)；3.91(d, J=11Hz, 2H, P-CH2)；4.22(dt, 2H, P-O-CH2-CH2-Ar)；4.40(dd, 2H, O-CH2-CH=CH2)；4.78および5.01(m, 2H, CO-CH2)；5.11-5.33(m, 2H, H2C=CH-)；5.71-6.00(m, 1H, H2C=CH-)；6.99-8.21(m, 14H, Ar-H, シトシニル−Ｈ)；11.03(s, ブロード, 1H, NH)。
【０１０２】
(３５)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）およびアリルアルコールから実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９７：３：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、１００％であった。
MS（FAB）：805.3(M＋Na)+。
【０１０３】
(３６)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル
合成は、実施例４と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル（実施例３５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、８６％であった。
MS（ES＋）：511.1(M＋H)+。
【０１０４】
(３７)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ(ＯＮＰＥ)−Ｔ−Ｐ(ＯＮＰＥ)(Ｏ−アリル）
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル（実施例３６）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：９０％。
MS（FAB）：1257.3(M＋Na)+
【０１０５】
(３８)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２８）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：５７％。
MS（FAB）：2460(M＋H)+；2482(M＋Na)+
【０１０６】
(３９)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例３８）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、５５％であった。
MS（FAB）：2209(M＋Na)+
【０１０７】
(４０)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例３９）４.０mg（０.００１８３ミリモル）を、ピリジン中のＤＢＵの０.５モル溶液１.１mlに溶解しそして室温で２４時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発しそして残留物をトルエンと一緒に数回撹拌した。溶剤を注射器を使用して除去し、残留物を再びペンタンと一緒に撹拌しそして溶剤を再び注射器を使用して除去した。生成物を真空中で乾燥した。収量は、高い吸湿性の粉末４mgであった。
MS（ES−）：1589.7(M-H-)-；1611.8(M＋Na-2H)-
【０１０８】
(４１)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
(ａ)  合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例３９）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２それから７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。
MS（FAB）：2934(M＋Na)+, 2957(M＋2Na-H)+, 2978(M＋3Na-2H)+。
【０１０９】
(ｂ)  合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２８）および“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例４２）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２それから７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。標的フラクションを真空中で蒸発し、それからペンタンおよびエーテルとともにすりつぶした。ＭＳ 上述した通り。
【０１１０】
(４２)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）(ＯＨ)
“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏ−アリル）”（実施例３７）２４.７mg（０.０２ミリモル）を、炭酸水素ジエチルアンモニウム１６.２mg（０.１２ミリモル）と一緒に、無水のＤＣＭ ２mlに溶解した。１５〜２０℃で、無水のＤＣＭ ２ml中のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）１３.９mg（０.０１２ミリモル）およびトリフェニルホスフィン２.１mg（０.００８ミリモル）の溶液を、２分の間に滴加した。混合物を室温で３０分撹拌した。生成物を精製するために、反応混合物をシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：１それから６０：４０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発しそして残留物をペンタンそれからＥＡ／エーテルそれから再びペンタンと一緒にすりつぶしそして真空中で乾燥した。収率：５７％。
MS（ES−）：1193.6(M-H)-。
1H-NMR（200MHz, DMSO, TMS）：特有のシグナル：δ＝1.67および1.72（それぞれの場合において s, 3H, T-CH3）；4.60および4.82（それぞれの場合において s, 2H, C0-CH2）；6.83-8.19(m, 24H, Ar-H, T-H)。
【０１１１】
(４３)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例４１）から実施した。反応が行われた後、反応混合物を濃縮しそして残留物をトルエンと一緒に３回共蒸発しそしてそれからはじめにＥＡ／エーテル、それからペンタンと一緒に撹拌した。残留物を真空中で乾燥した。
MS（FAB）：2662(M＋Na)+
【０１１２】
(４４)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ)(Ｏ−アリル)
合成は、実施例４と同様にして、５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏ−アリル）（実施例３７）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：１それから８０：２０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、８７％であった。
MS（FAB）：963.0(M＋H)+；985.1(M＋Na)+
【０１１３】
(４５)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）(ＯＨ)
(ａ)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−（Ｏ−アリル）
合成は、実施例１７と同様にして、“５−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏ−アリル）”（実施例４４）およびＮ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：１それから８５：１５：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：５５％。
【０１１４】
(ｂ)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）
“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏ−アリル）”（実施例４５ａ）を、実施例４２に記載したように、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）と反応させた。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２それから７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発しそして残留物をペンタンおよびエーテルと一緒にすりつぶした。収率：９８％。
MS（ES＋；LiCl）：1654.1（M＋Li+）
【０１１５】
(４６)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例１０）および“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例４５ｂ）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０：２、それから８０：２０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。実施例２７におけるように処理し、精製しそして特徴づける。
【０１１６】
(４７)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２６）および“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例４５ｂ）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発し、トルエンと一緒に共蒸発しそして分取用ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）：RP8 LiChrospher 60、水／アセトニトリル: １：１；０.１％酢酸アンモニウム；１ml／分。Ｒf＝１２.９７分によって精製した。
【０１１７】
(４８)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
(ａ)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例４７）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：３０：２それから６０：４０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発しそして残留物を、はじめにペンタンそれからエーテルと一緒に撹拌しそして真空中で乾燥した。収率：１００％。
MS（FAB）：2662(M＋Na)+、2684(M＋2Na-H)+、2706(M＋3Na-2H)+
【０１１８】
(ｂ)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例４８ａ）を、実施例４０と同様にＤＢＵと反応させそして処理した。
MS（ES−）：1892(M-H-)；1915(M＋Na-2H)-
【０１１９】
(４９)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２８）および“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例４５ｂ）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２それから７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発し、トルエンと一緒に共蒸発しそして分取用ＨＰＬＣ：RP8 LiChrospher 60、水／アセトニトリル: １：１；０.１％酢酸アンモニウム；１ml／分。Ｒf＝１５.２４分によって精製した。
MS（FAB）：3386(M＋Na)+、3409(M＋2Na-H)+
【０１２０】
(５０)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例４９）から実施した。生成物を精製するために、それを真空中で蒸発しそしてトルエンと一緒に３回共蒸発しそして残留物を、はじめにペンタンそれからエーテルと一緒に撹拌しそして真空中で乾燥した。収率：＞９０％
MS（FAB）：3114(M＋Na)+
【０１２１】
(５１)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例５０）を、実施例４０と同様に、ＤＢＵと反応させそして処理した。
MS（ES−）：2196(M-H-)-；2218(M＋Na-2H)-
【０１２２】
(５２)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例４８ａ）および“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例４５ｂ）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：３０：２それから６０：４０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発し、トルエンと一緒に共蒸発しそして分取用ＨＰＬＣ：RP8 LiChrospher 60、水／アセトニトリル: １：１；０.１％酢酸アンモニウム；１ml／分。Ｒf＝２３.９５分によって精製した。
【０１２３】
(５３)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
(ａ)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例５２）から実施した。生成物を精製するために、それを真空中で蒸発しそしてトルエンと一緒に３回共蒸発しそして残留物を、はじめにペンタンそれからエーテルと一緒に撹拌しそして真空中で乾燥した。収率：＞９０％。
【０１２４】
(ｂ)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2
“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例５３ａ）を、実施例４０におけるように、ＤＢＵと反応させそして処理した。
MS（ES−）：2802(M＋H-)-；2825(M＋Na-2H)-
【０１２５】
(５４)  ２−（Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
(ａ)  １−メチルイミノ−２−（Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エタン（三量体）
メタノール８mlに溶解した２−アミノ−１−（Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エタン２.０ｇ（１２.５ミリモル）を、氷冷しながら、３７％ホルムアルデヒド１.５２ml（１８.７２ミリモル）で処理しそして混合物を室温で１時間撹拌した。残留物をＥＡにとり、飽和ＮａＨＣＯ3溶液で２回それからＮａＣｌ溶液で洗浄し、乾燥し、濾過しそして真空中で蒸発した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（１００：０.２のＥＡ／ＴＥＡ、それから９０：１０：０.２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収量は、０.８ｇであった。
MS（FAB／LiCl）523.4(M＋2Li-H)+。1H-NMR(200MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.38(s, 27H, tBu-H)；2.40(t, 6H, N-CH2)；2.99(t, 6H, N-CH2)；3.25(t, 6H, N-CH2)；6.81(t, ブロード, 3H, NH)。
【０１２６】
(ｂ)  ２−（Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノメタンホスホン酸２−ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
１−メチルイミノ−２−（Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エタン（三量体）（実施例５４ａ）を、実施例１ｆと同様に、亜燐酸ジ（２−（４−ニトロフェニル）エチル）（実施例１ｅ）と反応させた。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（はじめに２０：８０：０.２のトルエン／ＥＡ／ＴＥＡ、それから１００：０.２のＥＡ／ＴＥＡ、それから０.５：５：０.２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：２５％。
MS（ES＋／LiCl）553.3(M＋H)+, 559.3(M＋Li)+。1H-NMR(200MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.37(s, 9H, tBu-H)；2.83(d, J=12Hz, 2H, P-CH2)；2.55(t, 4H, Ar-CH2)；2.90-3.09(m, 4H, N-CH2-CH2-N)；4.16(dt, 4H, PO-CH2)；7.52および8.15（それぞれの場合において d, 8H, Ar-H）。
【０１２７】
(５５)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ−（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
合成は、実施例８と同様にして、２−（Ｎ′−第３ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例５４ｂ）およびチミジン−１−イル−酢酸から実施した。収率：８６％。
MS（FAB／LiCl）725.3(M＋Li)+。1H-NMR(200MHz, DMSO, TMS)：δ＝1.42(s, 9H, tBu-H)；1.91(s, 3H, T-CH3)；2.99-3.58(m, 8H, P-O-CH2-CH2-ArおよびN-CH2-CH2-N)；3.75(d, J=12Hz, 2H, P-CH2)；4.06-4.38(m, 4H, PO-CH2)；7.37および8.15（それぞれの場合において d, 8H, Ar-H）。
【０１２８】
(５６)  ＤＮＡとの相互作用：ＵＶ融解曲線
相補核酸と本発明による化合物との相互作用を、（ｄＡ)9と“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例５３ｂ）とのＵＶ融解曲線による例によって証明した。これをなすために、それぞれの場合における“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”および（ｄＡ)9の０.３ＯＤを緩衝液（１ＭのＮａＣｌ、２０mMのＭｇＣｌ2、１０mMのＨＥＰＥＳ、pH７.５）１ml中で製造しそして２６０nmにおける吸光度の変化を温度（０〜８０℃）の関数として記録した。結果は、図１において見ることができる。約２３℃のＡＴｍ値を、得られた融解曲線から測定した。
【０１２９】
(５７)  ＤＮＡとの相互作用：ゲル移動（shift）実験
相補核酸と本発明による化合物との相互作用を、ゲル移動実験における（ｄＡ)9と“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例５３ｂ）とのハイブリダイゼーションの例によって証明した。これをなすために、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例５３ｂ）および（ｄＡ)9を、それぞれの場合において、それら自体でおよび１：１、１：２、１：５および１：１０の比に混合して、非変性ポリアクリルアミドゲル（２０％、流動緩衝液（running buffer）１×ＴＢＥ、１０mMのＭｇＣｌ2）に適用しそして流動（running）行動を測定した。結果は、図２において見ることができる。（ｄＡ)9は、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”より急速に流動しそして１：１の混合物においては、両方弱く見られるにすぎず、その代りに、２つの成分間の複合体に相当する緩慢なバンドが形成される。２：１の混合物においては、（ｄＡ)9はもはや見ることができず、その代りに、新しいバンドがより明瞭である。同じことは５：１または１０：１の混合物に対して適用される。この場合においては、追加的に、“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”のはっきりした過剰を検出することができる。
【０１３０】
(５８)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（Ｏ−エチル)2〔また、実施例２１参照、代替合成〕
(ａ)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）８.４４mg（１０μモル）、Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジエチル（実施例１０）３.７７mg（１０μモル）およびＮ−エチルジイソプロピルアミン（ＤＩＰＥＡ）６４.６mg（５００μモル）を、無水のＤＭＦ ０.３mlに溶解した。これに、ベンゾトリアゾリルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）４４.２mg（１００μモル）を加えた。混合物を室温で２４時間撹拌した。ＴＬＣ（１００：２０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ；Ｒf＝０.５）によって、約７０％の収率が得られた。
【０１３１】
(ｂ)  ＢＯＰ １００μモルの代りにＨＡＴＵ（Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ′,Ｎ′−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート）３０μモルを使用する以外は実施例５８ａと同様にして、ＴＬＣによって約６５％の収率を得た。
【０１３２】
(５９)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル５′−（３′−レブロイル）チミジン
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸４−ニトロフェニルエチルモノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例１５）および３′−レブロイルチミジンから実施例１７によって合成した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９８：２：０.２５のＤＣＭ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、４６％であった。
MS（FAB／LiCl）：1071.4(M＋Li)+
【０１３３】
(６０)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル５′−チミジンジエステル
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル５′−（３′−レブロイル）チミジン（実施例５９）６４mg（０.０６ミリモル）を、ジオキサン０.５mlに溶解した。水０.１２ml中のＮａＢＨ4 ９mg（０.２３ミリモル）を加えそして混合物を室温で２０分撹拌した。溶剤を真空中で蒸発し、残留物をＤＣＭにとりそして溶液を水で抽出しそして乾燥した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９２：８：０.５のＤＣＭ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、７２％であった。
MS（FAB／LiCl）：973.4(M＋Li)+, 979.4(M＋2Li-H)+, 985.4(M＋3Li-2H)+
【０１３４】
(６１)  Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ)エチルアミノメタンホスホン酸２−(ｐ−ニトロフェニル）エチル５′−チミジン−３′−(シアノエチル−Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルホラホラミダイト）
Ｎ−チミン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル５′−チミジンジエステル（実施例６０）３１mg（０.０３２ミリモル）を、無水のＣＨ3ＣＮと一緒に２回共蒸発しそして無水のＴＨＦ ０.４mlに溶解した。はじめにジイソプロピルエチルアミン１２.４mg（０.０９６ミリモル）、それからシアノエチルクロロジイソプロピルホラホラミダイト９.８mg（０.０４５ミリモル）を加えた。混合物を３時間撹拌し、濾過しそして真空中で蒸発した。収率は、６３％であった。
MS(FAB／LiCl)：1173.3(M＋Li)+, 1180.4(M＋2Li-H)+, 1186.4(M＋3Li-2H)+
【０１３５】
(６２)  Ｎ−〔Ｎ９−（Ｏ６−ジフェニルカルバモイル−Ｎ２−アセチルグアニン〕アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
合成は、実施例２と同様にして、Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例１ｆ）およびＯ６−ジフェニルカルバモイル−Ｎ２−アセチルグアニン酢酸から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９８：２のＥＡ／ＴＥＡ）した。収率：８７％。
MS(FAB／LiCl)：1154.8(M＋H)+, 1160.7(M＋Li)+
【０１３６】
(６３)  Ｎ−〔Ｎ９−（Ｎ４−アニソイルアデニン〕アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
合成は、実施例２と同様にして、Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例１ｆ）およびＮ４−アニソイルアデニン酢酸から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９５：４：１のＤＣＭ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：８２％。
MS（ES＋）1035.7(M＋H)+。1H-NMR(200MHz, DMSO, TMS)：δ＝2.93(t, 4H, P-O-CH2-CH2-Ar)；3.09(t, 2H, MMTr-O-CH2)；3.23-3.75(m, 4H, P-CH2＋N-CH2)；3.75(s, 3H, OCH3)；3.87(s, 3H, OCH3)；4.08(dt, 4H, P-O-CH2)；5.28-5.42(m, 2H, CO-CH2)；6.81-8.20(m, 28H, Ar-H, A-H)；11.00(s ブロード, 1H, NH)。
【０１３７】
(６４)  Ｎ−〔Ｎ９−（Ｎ４−アニソイルアデニン〕アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸モノ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）エステル
合成は、実施例３と同様にして、Ｎ−〔Ｎ９−（Ｎ４−アニソイルアデニン〕アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（実施例６３）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（６５：３５：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、５２％であった。
MS（FAB／LiCl）：874.3(M＋2Li-H)+
【０１３８】
(６５)  Ｎ−チミン−１−アセチル−Ｎ−（２−メトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）
合成は、実施例２と同様にして、Ｎ−（２−メトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸ジ（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）（ホルムアルデヒドおよび亜燐酸ジ（２−（４−ニトロフェニル）エチル）との反応によって２−メトキシエチルアミンから出発して実施例１と同様にして製造した）およびチミジン−１−イル−酢酸から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（９０：１０のＥＡ／メタノール）した。収率：６４％。
MS（FAB／LiCl）：640.3(M＋Li)+
【０１３９】
（６６）  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏアリル）
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）モノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例３）およびＮ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ）エチルアミノメタンホスホン酸アリル２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル（実施例３４）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８５：１４：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：３６％。
MS（FAB）：1474(M＋H)+；1496(M＋Na)+
【０１４０】
(６７)  ５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ(ＯＮＰＥ)−ＣAn−Ｐ(ＯＮＰＥ)(Ｏアリル）
合成は、実施例４と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏアリル）”（実施例６６）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：１９：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率は、５５％であった。
MS（FAB）：1201.3(M＋H)+, 1223.3(M＋Na)+
【０１４１】
(６８)  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏアリル）
合成は、実施例１７と同様にして、Ｎ−（Ｎ6−アニソイル）シトシン−１−イル−アセチル−Ｎ−（４−メトキシトリフェニルメトキシ）エチルアミノメタンホスホン酸（２−（ｐ−ニトロフェニル）エチル）モノエステル（トリエチルアンモニウム塩）（実施例３）および５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏアリル）（実施例６７）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：１のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：５８％。
MS（FAB）：2046(M＋H)+；2068(M＋Na)+
【０１４２】
(６９)  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）
合成は、実施例４２と同様にして、５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（Ｏアリル）（実施例６８）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（６０：３８：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：６６％。
MS（FAB）：2027(M＋Na)+；2049(M＋2Na-H)+
【０１４３】
(７０)  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例６９）および“５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2”（実施例３２）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。収率：５８％。
MS（FAB）：3892(M＋Na)+；3914(M＋2Na-H)+
【０１４４】
(７１)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例４５）および“５′−ＨＯ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2”（実施例３２）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（６０：４０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションを真空中で蒸発しそして分取用ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）：RP8 LiChrospher 60、水／アセトニトリル: １：１；０.１％酢酸アンモニウム；１ml／分、Ｒf＝１６.６分によって精製した。
MS（FAB）：3534(M＋Na)+；3556(M＋2Na-H)+
【０１４５】
(７２)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−ＣAn−Ｐ（ＯＨ）−ＣAn−Ｐ（ＯＨ）−ＣAn−Ｐ（ＯＨ)2
合成は、実施例４０と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ)2”（２mg）（実施例７１）から実施した。
MS（ES−）：2466.4(M-H)
【０１４６】
(７３)  ５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ)2
“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−ＣAn−Ｐ（ＯＨ）−ＣAn−Ｐ（ＯＨ）−ＣAn−Ｐ（ＯＨ)2”（実施例７２）約１mgを、３３％水性ＮＨ4ＯＨ ３mlで処理しそして室温で２４時間撹拌した。反応混合物を真空中で蒸発した。収量：約０.６mg（１９OD）。
MS（ES−）：2064.5(M-H)-
【０１４７】
(７４)  ５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ)2
“５′−ＭＭＴｒ−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｔ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ）−Ｃ−Ｐ（ＯＨ)2”（実施例７３）８ODを水０.５mlに溶解しそしてPoly PakTM（Glen Research, ＃60-1100-10）に加えた。ＭＭＴｒ基は、製造業者の指示（Glen Research User Guide）によって除去した。収量：約０.３５mg（１１OD）。
MS（ES−）：1792.6(M-H)-
【０１４８】
(７５)  ５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ)2
合成は、実施例１７と同様にして、“５′−ＭＭＴｒ−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）−ＣAn−Ｐ（ＯＮＰＥ）（ＯＨ）”（実施例６９）および“５′−ＨＯ−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＮＰＥ）−Ｔ−Ｐ（ＯＥｔ)2”（実施例２６）から実施した。生成物を精製するために、それをシリカゲル上でクロマトグラフィー処理（８０：２０：２、それから７０：３０：２のＥＡ／メタノール／ＴＥＡ）した。生成物フラクションをトルエンと一緒に共蒸発し、真空中で蒸発しそしてペンタンと一緒にすりつぶした。収率：４８％。
MS（FAB）：3744(M＋Na)+；3766(M＋2Na-H)+
【０１４９】
【配列表】
0003917680.tif 000035
【０１５０】
0003917680.tif 000036
【０１５１】
0003917680.tif 000037
【０１５２】
0003917680.tif 000038
【０１５３】
0003917680.tif 000039
【０１５４】
0003917680.tif 000040
【０１５５】
0003917680.tif 000041
【０１５６】
0003917680.tif 000042
【０１５７】
0003917680.tif 000043
【０１５８】
0003917680.tif 000044
【０１５９】
0003917680.tif 000045
【０１６０】
0003917680.tif 000046
【０１６１】
0003917680.tif 000047
【０１６２】
0003917680.tif 000048
【０１６３】
0003917680.tif 000049
【０１６４】
0003917680.tif 000050
【０１６５】
0003917680.tif 000051
【０１６６】
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【０１６７】
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【０１６８】
0003917680.tif 000054
【０１６９】
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【０１７０】
0003917680.tif 000056
【０１７１】
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【０１７２】
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【０１７３】
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【０１７４】
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【０１７５】
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【０１７６】
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【０１７７】
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【０１７８】
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【０１７９】
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【０１８０】
0003917680.tif 000066
【０１８１】
0003917680.tif 000067
【図面の簡単な説明】
【図１】１当量の（ｄＡ）9の存在下における〔ＰＭＥＮＡ−ｔ９〕の温度対ＵＶ吸収の状況を示す図である。
【図２】相補核酸と本発明の化合物（実施例５３ｂ）との混合物を非変性ポリアクリルアミドゲルを用いるゲルクロマトグラフィーに付して得られるクロマトグラムを示す写真である。
【図１】
0003917680.tif 000088
【図２】
0003917680.tif 000089