(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）ミコナゾールまたはビフォナゾールおよび（Ｂ）塩化デカリニウムを配合することを特徴とする抗真菌剤用組成物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、抗真菌剤に関する。さらに、詳しくはイミダゾール系抗真菌剤および４級アンモニウム塩を配合することを特徴とする抗真菌剤用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
世界的に抗真菌剤の主流であるイミダゾール系抗真菌剤はその化学構造中にイミダゾール基を有する薬剤である。主として真菌の細胞膜を障害することにより、抗真菌作用を表すとされている。
【０００３】
イミダゾール系抗真菌剤としてはクロトリマゾール、硝酸ミコナゾール、硝酸エコナゾール、ビフォナゾール、硝酸オキシコナゾール、硝酸スルコナゾール、チオコナゾールなどがスイッチＯＴＣ化された成分として知られている。
【０００４】
クロトリマゾールは外用剤のみに使われ、白癬菌、その他カンジダ等に有効である。健康皮膚に適用した場合ほとんど体内の吸収は認められないが、局所的な副作用は皮膚の刺激感、発赤、発疹などがあるとされ、皮膚に対する直接的な刺激作用やアレルギー作用の関与が考えられている。
【０００５】
硝酸エコナゾールは、白癬菌、その他カンジダ、アスペルギルス、クリプトコッカスなどにも殺菌力を示す。健康皮膚に適用した場合ほとんど体内への吸収は認められず、通常の外用使用では全身性の副作用は殆ど問題ないとされているが局所的にはクロトリマゾールと同様の副作用が認められている。
【０００６】
ビフォナゾールは、クロトリマゾールと同様の作用を示す。ヒト病原真菌の多くに効果が認められている。他のイミダゾール系抗真菌剤に比べ、外用での皮膚浸透性に優れ、皮膚組織での薬剤貯留性が高いといわれている。クロトリマゾールと同様局所的な副作用は皮膚の刺激感、発赤、発疹などがある。
【０００７】
硝酸ミコナゾールは、白癬菌、カンジダをはじめ、小胞子菌、表皮菌、アスペルギルスなどの諸菌種に対して強い殺菌力を発揮し、黄色ブドウ球菌、化膿連鎖球菌をはじめとするグラム陽性菌に対し強い殺菌力を有する。我が国でも現在医薬用として最も繁用されている抗菌剤の一つである。クロトリマゾールと同様局所的な副作用は皮膚の刺激感、発赤、発疹などがある。
【０００８】
４級アンモニウム塩とはカチオン界面活性剤で４級アンモニウム塩に属するものを言う。例えば塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリニウムなどがある。４級アンモニウム塩の陽イオンが菌体の表面に吸着し、さらに細胞内に入って細胞内の蛋白質に影響を与えることにより殺菌力を示すのではないかと言われている。
【０００９】
塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウムは細菌、真菌に殺菌力を示すが、副作用として皮膚に長時間使用すると肌荒れ、発疹、そう痒感などの過敏症状が知られている。
【００１０】
塩化デカリニウムは、細菌（特に黄色ブドウ球菌、溶血連鎖球菌殺菌）、真菌に殺菌力を示すといわれている。主に、口腔内殺菌剤、歯痛、歯槽膿漏剤に配合されている。
【００１１】
イミダゾール系抗真菌剤と４級アンモニウム塩の配合された薬剤は知られていないが、特開昭６４−６６１２１号にイミダゾール系抗真菌剤とサリチル酸または安息香酸を配合した例が知られている。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
一般的に治りにくいといわれている水虫の治療には、長期に薬を塗布しなければ成らず、冬場に水虫の症状が治まるのは完治したのではなく、菌の活動が緩慢になっただけであり、治療効果の高い薬剤の開発が望まれている。更に水虫症状の原因が、白癬菌かカンジダかという区別は専門医が顕微鏡でみるか、菌を培養することによってのみ判別できるものであり、判別が難しいことから双方に効く薬剤が重要である。また前述のごとくイミダゾール系抗真菌剤は局所的な副作用は皮膚の刺激感、発赤、発疹などがあり、これらの薬剤中への配合量を減じて副作用を発祥させない工夫も必要である。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、白癬菌、カンジダの双方に殺菌効力を有する薬剤でかつ使用感の改善を目的とし、イミダゾール系抗真菌剤と有効に作用する薬剤を選択するため種々のスクリーニングを実施した。ある種の４級アンモニウム塩に殺菌力を相乗的に増強する効果があることを見いだし、その知見に基づいて本発明を完成した。
【００１４】
すなわち、本発明は、イミダゾール系抗真菌剤および４級アンモニウム塩を配合することを特徴とする抗真菌剤用組成物である。
【００１５】
イミダゾール系抗真菌剤の内、好ましいものはミコナゾール、エコナゾール、クロトリマゾール、ビフォナゾールなどである。またミコナゾール、エコナゾールはその塩も使用することができる。特に硝酸塩は広く用いられている。
【００１６】
また４級アンモニウム塩とは、カチオン界面活性剤で４級アンモニウム塩に属するものを言い、本発明で好ましいものは、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化デカリニウムなどがある。
【００１７】
イミダゾール系抗真菌剤の配合量は、０．２〜１重量％であり、好ましくは０．５〜１重量％である。
【００１８】
４級アンモニウム塩の配合量は、０．１〜１重量％であり、好ましくは０．５〜１重量％である。例えば塩化ベンゼトニウム配合量は、０．５〜１．０重量％であり、塩化ベンザルコニウムの配合量は０．１〜１重量％であり、好ましくは０．５〜１重量％である。
【００１９】
イミダゾール系抗真菌剤１重量部に対し、４級アンモニウム塩は０．１重量部〜１重量部配合することが好ましく、更には０．１重量部〜０．５重量部配合することが好ましい。
【００２０】
本発明の有効成分は、必要に応じて公知の添加剤などを混合して常法により、液剤、ローション剤、乳剤、チンキ剤、軟膏剤、クリーム剤、水性ゲル剤、油性ゲル剤、エアゾール剤などの外用製剤とすることができる。
【００２１】
水溶性成分としては、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、エタノール、マクロゴール類などが挙げられる。
【００２２】
油性成分としては、アジピン酸ジイソプロピル、ステアリルアルコール、セタノール、スクワラン、中鎖トリグリセライドなどが挙げられる。
【００２３】
高分子としては、カルボキシビニルポリマー、メチルセルロースなどが挙げられる。
【００２４】
ｐＨ調整剤としてはクエン酸、水酸化ナトリウムなどの無機塩基、ジイソプロパノールアミンなどの有機アミン類などが挙げられる。
【００２５】
抗酸化剤としては、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、α−トコフェロール、エリソルビン酸、ピロ亜硫酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００２６】
着色剤としては、酸化チタンなどが挙げられる。
【００２７】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、モノステアリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、モノステアリン酸グリセリド、モノラウリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマー、ポリソルベート類、ラウリル硫酸ナトリウム、ショ糖脂肪酸エステル、レシチンなどが挙げられる。
【００２８】
安定化剤としてはＥＤＴＡ−２Ｎａなどが挙げられる。
【００２９】
【発明の実施の形態】
更に本発明の特に好ましいものはイミダゾール系真菌剤および塩化デカリニウムを配合することを特徴とする抗真菌剤用組成物である。
【００３０】
すなわち、相乗殺菌効果の認められた４級アンモニウム塩類中から更に皮膚刺激性，製剤化などを検討してみると表１に示すごとく塩化デカリニウムが最適であった。
【００３１】
【表１】
0003941132.tif 000002
【００３２】
本発明において、硝酸ミコナゾールの有効配合量は、０．２〜１重量％であり、好ましくは０．５〜１重量％である。
【００３３】
また、塩化デカリニウムの有効配合量は、０．０５〜０．５重量％であり、好ましくは０．１〜０．５重量％である。
【００３４】
硝酸ミコナゾール１重量部に対し、塩化デカリニウムは０．１重量部〜１重量部であり、好ましくは０．１重量部〜０．５重量部である。
【００３５】
【発明の効果】
本発明の薬剤は、殺菌効果が増強された極めて効力の強い抗真菌剤である。
【００３６】
以下、試験例を挙げて本発明の効果を具体的に示す。
【００３７】
試験例１
（１）供試菌株
供試菌株は以下の菌を用いた。
【００３８】
Trichophyton rubrum
Trichophyton mentagrophytes
（２）胞子液の調製方法
1/10サブロー寒天培地が入った試験管のスラントに供試菌を植菌し，28℃で3〜4週間培養した。培養後，滅菌スパーテルで菌体をかき取り，それを滅菌したガラスビーズと10mlの0.1%Tween80含有生理食塩水が入った三角フラスコ(100ｍｌ容)に移し1時間振とうした後，綿栓ろ過し，胞子液とした。胞子液は冷蔵保存し1ヶ月以内に使用した。
【００３９】
（1/10サブロー寒天培地の組成）
グルコース4.0g,ペプトン1.0g,リン酸2水素カリウム(無水)1.5g,硫酸マグネシウム(7水和物)1.0g,硝酸ナトリウム1.0g,寒天20.0g,蒸留水1000ml。
【００４０】
（３）供試薬剤の調製
供試薬剤は硝酸ミコナゾール，塩化ベンザルコニウム，塩化デカリニウム，塩化ベンゼトニウム及びサリチル酸を使用し，溶解，希釈溶媒としてDMSOを用い試験濃度に合わせ２倍希釈系列を作製した。
【００４１】
（４）試験方法
希釈した供試薬剤とサブロー寒天培地（栄研）とを１：９９の割合で混合し固化した後，約105個/mlの胞子液を接種した．28℃で5日間培養し，菌の発育の有無を確認した．
なお，DMSO濃度は胞子の発芽に影響を与えない1％以下になるようにした。
【００４２】
（５）判定および算出式
相乗効果の判定は培養終了時に菌の発育が認められない最小の薬剤濃度（ＭＩＣ：最小発育阻止濃度，μｇ／ｍｌ）からＦＩＣインデックス(Fractional Inhibitory Concentration index)を算出した。
【００４３】
(算出式) ＦＩＣインデックス＝ａ／ａ0＋ｂ／ｂ0
ａ：硝酸ミコナゾールと供試薬剤併用時での硝酸ミコナゾールのＭＩＣ
ａ0：硝酸ミコナゾール単独でのＭＩＣ
ｂ：硝酸ミコナゾールと供試薬剤併用時での供試薬剤のＭＩＣ
ｂ0：供試薬剤単独でのＭＩＣ
(判定)   以下の基準により併用効果の有無を判定した。
【００４４】
＞２                ：  拮抗作用
２以下〜１より大きい  ：  相加作用
１以下              ：  相乗作用
（６）結果
相乗効果を判断するFICインデックス値は静菌的評価であること及び１次スクリーニングであることを考慮し1.0以下を相乗効果があるものと設定した。
【００４５】
その結果，表２に示すようにほとんどの薬剤で相加もしくは相乗効果が認められた。
【００４６】
【表２】
0003941132.tif 000003
【００４７】
試験例２
（１）供試菌株
供試菌株は以下の菌を用いた。
【００４８】
Trichophyton rubrum
Trichophyton mentagrophytes 
（２）胞子液の調製方法
試験例１と同様に調製した。
【００４９】
（３）供試薬剤の調製
供試薬剤は硝酸ミコナゾール，硝酸エコナゾール，クロトリマゾール，ビフォナゾール及び塩化デカリニウムを使用し，溶解，希釈溶媒としてDMSOを用い試験濃度に合わせ２倍希釈系列を作製した。
【００５０】
（４）試験方法
試験例１と同様に行った。
【００５１】
（５）判定および算出式
試験例１と同様に算出，判定した。
【００５２】
（６）結果
結果は表３に示す。
【００５３】
【表３】
イミダゾール系抗真菌剤と塩化デカリニウムの相乗効果
0003941132.tif 000004
【００５４】
その結果，表に示すようにクロトリマゾールのT.mentagrophytes菌に対する効果を除き，塩化デカリニウムと強い相乗効果を示した。
【００５５】
以上の結果から，塩化デカリニウムとの組み合わせによる相乗効果は，硝酸ミコナゾールばかりでなくイミダゾール系抗真菌剤全般で発現することが明らかになった。
【００５６】
試験例３
（１）供試菌株
供試菌株は以下の菌を用いた。
【００５７】
Trichophyton rubrum
Trichophyton mentagrophytes 
（２）胞子液の調製方法
試験例１と同様に調製した。
【００５８】
（３）供試薬剤の調製
供試薬剤は硝酸ミコナゾール(MCZ)サリチル酸，塩化ベンザルコニウム(BAC)及び塩化デカリニウム(DQ)を使用し，溶解，希釈溶媒としてDMSOを用い試験濃度に合わせ２倍希釈系列を作製した。
【００５９】
（４）試験方法
ろ過滅菌した20mMリン酸緩衝液(pH6.5)20mlに各薬剤100μlを添加し混和した後，胞子液を105個/mlになるように加え(通常50〜200μl)攪拌した．30℃に保温し0,1,2及び3日目の生残する胞子数を測定した。なお，DMSO濃度は胞子の発芽に影響を与えない1％以下になるようにした。
【００６０】
（５）生残胞子数の測定方法
胞子液及び試験液中の生残胞子数は滅菌生理食塩水またはLP希釈液（ダイゴ）を用い10倍希釈系列を作製し，各希釈液50μlを予め調製したサブロー寒天培地（栄研）に塗抹し，28℃でT.rubrumの場合４日間以上，T.mentagrophytesの場合３日間以上培養し出現したコロニー数より，胞子液または試験液中の生残胞子数を算出した。
【００６１】
（６）相乗効果の判定
文献(Antimicrobial Agents and Chemotherapy,Feb.1977,p.225-228)より，単独時と併用時の生残胞子数の差が約２オーダー以上あれば相乗効果があると判断した。
【００６２】
〔試験結果〕
（１）硝酸ミコナゾールの殺菌曲線
滅菌生理食塩水(pH6.5)中での硝酸ミコナゾール単独時の殺菌力を確認した。その結果，図１に示す様に殺菌力は濃度依存的に増大した。併用効果の試験は相乗殺菌効果の判定がし易い3.13μg/ml濃度を選択した。
【００６３】
（２）薬剤併用時の殺菌曲線
各薬剤の硝酸ミコナゾールとの基準内最大配合比を表４に示す。
【００６４】
【表４】
0003941132.tif 000005
【００６５】
＊)硝酸ミコナゾールの配合量を１とした場合。
【００６６】
併用時の殺菌力は硝酸ミコナゾール3.13μg/mlに各薬剤をそれぞれ最大配合比で添加して確認した。
【００６７】
図２に示すように併用時の殺菌力はサリチル酸を除き，硝酸ミコナゾール単独時よりも増強されているのが確認された。
【００６８】
次に各薬剤の効果の詳細な検討を行った。
【００６９】
サリチル酸の結果を図３に示す。
【００７０】
サリチル酸単独では全く殺菌力は認められず，併用時の殺菌力も硝酸ミコナゾール単独とほぼ同等かそれ以下であった。１次スクリーニングのFICインデックスの結果からもサリチル酸は静菌的な併用効果と推測される。
【００７１】
塩化ベンザルコニウムの結果を図４に示す。
【００７２】
塩化ベンザルコニウム単独では  T.rub.で同等，T.menta.で硝酸ミコナゾール以上の殺菌力が認められ，併用時では両菌で１日目で検出限界以下となった。
【００７３】
塩化デカリニウムの結果を図５に示す。
【００７４】
塩化デカリニウム単独の殺菌力は硝酸ミコナゾール単独と同等で，併用すると２日目で検出限界以下となった。
【００７５】
殺菌力での相乗効果の判定は文献（Antimicrobial Agents and Chemotherapy,Feb.1977,p.225-228）から単独時と併用時の生残胞子数の差が２オーダー以上あれば効果有りと判断されるため，塩化ベンザルコニウム及び塩化デカリニウムに相乗的な殺菌力があると判断した。
【００７６】
試験例４
（１）供試菌株
供試菌株は以下の菌を用いた。
【００７７】
Candida albicans
Staphylococcus aureus
（２）菌液の調製方法
C.albicansはサブロー寒天培地（栄研）で28℃24時間培養し，約106個/mlになるように滅菌生理食塩水に懸濁したものを菌液とした．S.aureusはミュラーヒントン培地（栄研）で37℃18時間培養し，約106個/mlになるように滅菌生理食塩水に懸濁したものを菌液とした。
【００７８】
（３）供試薬剤の調製
供試薬剤は硝酸ミコナゾール及び塩化デカリニウムを使用し，溶解，希釈溶媒としてDMSOを用い試験濃度に合わせ２倍希釈系列を作製した。
【００７９】
（４）試験方法
希釈した供試薬剤とサブロー寒天培地（栄研）とを１：９９の割合で混合し固化した後，C.albicansの菌液を接種した。30℃で2日間培養し，菌の発育の有無を確認した。
【００８０】
希釈した供試薬剤とミュラーヒントン寒天培地（栄研）とを１：９９の割合で混合し固化した後，S.aureusの菌液を接種した。30℃で24時間培養し，菌の発育の有無を確認した。
【００８１】
（５）判定および算出式
試験例１と同様に算出，判定した。
【００８２】
（６）結果
結果を表５に示した。
【００８３】
【表５】
0003941132.tif 000006
【００８４】
硝酸ミコナゾールと塩化デカリニウム配合による相乗効果はカンジダ及び黄色ブドウ球菌に対しても認められた。
【００８５】
試験例５．
硝酸ミコナゾールと塩化デカリニウム併用時の配合比(1:0.12〜1.00)の影響について試験例３と同様の試験を行い検討した結果を図６に示す。
【００８６】
その結果、併用時の殺菌力は1:0.12以上の配合比で硝酸ミコナゾール及び塩化デカリニウム単独時の殺菌力より強く，相乗効果も認められた。
【００８７】
試験例６．レシチンの影響
クリームの基剤として用いられるレシチンは４級アンモニウム塩等の殺菌剤の不活化剤として知られているため〔石関忠一ら，衛生試験所報告，第91号(1973)〕，硝酸ミコナゾール及び塩化デカリニウムの相乗効果に及ぼす影響について検討した。
【００８８】
レシチン濃度は硝酸ミコナゾール単独の場合，配合比（硝酸ミコナゾール：レシチン＝1:0.5）に合わせ，塩化デカリニウム単独時及び硝酸ミコナゾール併用時の場合，レシチン濃度を1.57μg/mlにして試験例３と同様の試験を行った。
【００８９】
その結果，これらのレシチン濃度での影響は全く認められなかった。
【００９０】
【実施例】
以下実施例を挙げ、本発明を具体的に説明する。
【００９１】
実施例１
（クリーム処方例）
硝酸ミコナゾール                                １００ｇ
リドカイン                                      ２００ｇ
塩化デカリニウム                                  １０ｇ
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート    ４００ｇ
ソルビタンモノステアレート                      ２００ｇ
１，３−ブチレングリコール                  １，５００ｇ
中鎖脂肪酸トリグリセリド                    １，５００ｇ
グリセリンモノステアレート                      ２５０ｇ
ＥＤＴＡ−２Ｎａ                                  １０ｇ
精製水                                  全１０，０００ｇ
（製造方法）
水相成分（１，３−ブチレングリコール、ＥＤＴＡ−２Ｎａ、塩化デカリニウム、精製水）に油相成分（硝酸ミコナゾール、リドカイン、ソルビタンモノステアレート、中鎖脂肪酸トリグリセリド、グリセリンモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート）を加え、それぞれ加温後、通常の方法でクリーム１０，０００ｇを製造した。
【００９２】
実施例２
（液剤処方例）
硝酸ミコナゾール                                １００ｇ
塩化デカリニウム                                  ２０ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム                        ５０ｇ
ＢＨＴ                                              ５ｇ
エタノール                                  ５，０００ｇ
精製水                                  全１０，０００ｍｌ
（製造方法）
エタノールに薬剤を溶解後、精製水を加え全量を１０，０００ｍｌとした。
【００９３】
実施例３
（ゲルクリーム処方例）
硝酸ミコナゾール                                １００ｇ
塩化デカリニウム                                  ２０ｇ
リドカイン                                      ２００ｇ
ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート    １００ｇ
プロピレングリコール                        １，０００ｇ
流動パラフィン                                  ５００ｇ
ステアリルアルコール                            １００ｇ
カルボキシビニルポリマー                          ５０ｇ
ジイソプロパノールアミン                        １００ｇ
精製水                                  全１０，０００ｇ
（製造方法）
油相成分（硝酸ミコナゾール、リドカイン、ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート、流動パラフィン、ステアリルアルコール）を加温溶解後、室温まで冷却した。ついで、水、プロピレングリコールにカルボキシビニルポリマー及び塩化デカリニウムを溶解し、室温で放置し、カルボキシビニルポリマーを膨潤させた。上記油相と水相を室温にて撹拌しゲルクリームを製造した。
【００９４】
0003941132.tif 000007
（製造方法）
エタノール、精製水の基剤に主薬成分を溶解した原液を容器に充填後、バルブを装着し、噴射剤を充填し、エアゾール剤を作成した。
【図面の簡単な説明】
【図１】硝酸ミコナゾールのT.rubrum（Ａ）とT.mentagrophytes（Ｂ）に対する殺菌力を示す。横軸に保存日数、縦軸に生残菌数／mlの対数を示す（すなわち、縦軸の1は１０1個／ml、2は１０2個／ml、3は１０3個／ml、4は１０4個／ml、5は１０5／ｍｌを示す。）。
【図２】各薬剤併用時のT.rubrum（Ａ）とT.mentagrophytes（Ｂ）に対する殺菌力を示す。横軸に保存日数、縦軸に生残菌数／mlの対数を示す。MCZは硝酸ミコナゾール、BACは塩化ベンザルコニウム、DQは塩化デカリニウムを示す。
【図３】サリチル酸併用時のT.rubrum（Ａ）とT.mentagrophytes（Ｂ）に対する殺菌力を示す。横軸に保存日数、縦軸に生残菌数／mlの対数を示す。MCZは硝酸ミコナゾールを示す。
【図４】塩化ベンザルコニウム併用時のT.rubrum（Ａ）とT.mentagrophytes（Ｂ）に対する殺菌力を示す。横軸に保存日数、縦軸に生残菌数／mlの対数を示す。MCZは硝酸ミコナゾール、BACは塩化ベンザルコニウムを示す。
【図５】塩化デカリニウム併用時のT.rubrum（Ａ）とT.mentagrophytes（Ｂ）に対する殺菌力を示す。横軸に保存日数、縦軸に生残菌数／mlの対数を示す。MCZは硝酸ミコナゾール、DQは塩化デカリニウムを示す。
【図６】硝酸ミコナゾールと塩化デカリニウム併用時の配合比の影響についての検討結果を示す。横軸に保存日数、縦軸に生残菌数／ｍｌの対数を示す）。MCZは硝酸ミコナゾールを示す。
【図１】
0003941132.tif 000008
【図２】
0003941132.tif 000009
【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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