(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（Ｉ）で示される２−（２−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロンを有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤。
【化１】
0003879171.tif 000012
【請求項２】
下記式（ＩＩ）で示される２−（２−ｃｉｓ−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロンを有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤。
【化２】
0003879171.tif 000013
【請求項３】
下記式（ＩＩＩ）で示される２−（２−ｔｒａｎｓ−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロンを有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤。
【化３】
0003879171.tif 000014
【請求項４】
２−（２−ｃｉｓ−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロン又はその塩。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明が属する技術分野】
本発明は，医薬殊に抗ヘリコバクター・ピロリ作用を有する新規発酵生産物，並びにヘリコバクター・ピロリ感染が起因する種々の疾患の治療に有用な抗ヘリコバクター・ピロリ剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ヘリコバクター・ピロリは（Helicobacter  pylori）は，１９８３年に発見された病原性細菌であり，消化性潰瘍（例えば胃潰瘍又は十二指腸潰瘍等），炎症（例えば胃炎等）又は胃ガン等の消化管上部の疾患，もしくは慢性心疾患の病因と言われている。現在，ヘリコバクター・ピロリ感染症の治療に関する研究は活発になされており，該治療法としては，除菌を目的としたもの，再発防止を目的としたもの等下記の如く多数報告されている。例えば，ビスマス，抗生物質，プロトンポンプ阻害剤（ＰＰＩ），抗潰瘍剤等の単剤投与又は前記薬物等を組み合わせた多剤併用法（２剤併用，３剤併用）が挙げられる（内科，特集，７８巻１号（１９９６），南江堂）。しかしながら，上記治療法は，例えば投与回数の頻度の多さ，常用量以上の大量投与を要する場合があること，薬物投与による下痢・便秘等の発症，耐性菌の発生等まだまだ解決しなければならない点が多い。
また，本発明に関連する抗ヘリコバクター・ピロリ剤として有用な下記化合物（ＩＩ）は，公知化合物であり（Chem．Pharm．Bull.，１５（５），７１８−７２０（１９６７），その用途は植物成長促進，又は抗植物病原菌作用であり（Phytochemistry，４２，３６５−３６８，（１９９６））。ヒト病原菌，特にヘリコバクター・ピロリ菌に関する抗菌活性については何ら報告されていない。さらに，該化合物と構造類似の発酵生産物，Pseudonocardia sp．３８４８９株産生物質が報告されている（第  回日本農芸化学会，要旨集，３Ｅａ５（１９９７））。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は，優れた抗ヘリコバクター・ピロリ剤を提供することを目的とし，又抗ヘリコバクター・ピロリ作用を有する新規発酵生産物を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは，上記状況下天然に存在する多くの微生物が生産する物質について鋭意検討した結果，シュードモナス（Pseudomonas）属に属する細菌で，非常に優れた抗ヘリコバクター・ピロリ作用を有する物質を生産する能力を有する微生物を見いだし，該微生物を培養し，培養物から下記公知物質（ＩＩ）及び新規物質（ＩＩＩ）を単離することに成功し本発明を完成した。また，該培養物から単離した下記公知化合物（Ｉ及びＩＩ）の新規用途である優れた抗ヘリコバクター・ピロリ剤を見いだした。該抗ヘリコバクター・ピロリ剤は，選択性が高く，他の細菌に影響を与えないことをも見いだした。
さらに，本発明を詳述する。本発明は，下記式（Ｉ）で示される２−（２−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロンを有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤，
【０００５】
【化４】
0003879171.tif 000002
【０００６】
下記式（ＩＩ）で示される２−（２−ｃｉｓ−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロン（以下Ｑ３３１６０−Ｂという）を有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤，
【０００７】
【化５】
0003879171.tif 000003
【０００８】
下記式（ＩＩＩ）で示される２−（２−ｔｒａｎｓ−ヘプテニル）−３−メチル−４（１Ｈ）−キノロン（以下Ｑ３３１６０−Ａという）を有効成分とする抗ヘリコバクター・ピロリ剤，
【０００９】
【化６】
0003879171.tif 000004
【００１０】
もしくはＱ３３１６０−Ａ又はその塩である。
【００１１】
【発明の実施の形態】
以下本発明につき詳述する。
本発明に包含されるＱ３３１６０−Ａ及びＱ３３１６０−Ｂは，シュードモナス属に属する上記化合物生産菌を栄養培地にて培養し，該化合物を蓄積させた培養物から常法により得られる。本発明の製造方法において使用する微生物は，シュードモナス属に属し，上記化合物の生産能を有する微生物であればいずれも用いることができる。このような微生物としては，具体的には例えば，奄美大島で採取された土壌から分離された微生物シュードモナス  エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｑ３３１６０株を挙げることができる。以下，この菌学的性状を説明する。
【００１２】
シュードモナス  エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｑ３３１６０株の微生物学的性質
１）形態
肉汁寒天培地上で，２８℃，５日間培養した細胞は，０．２〜０．５×０．５〜１．６μｍの桿菌でグラム染色は陰性であり，運動性を有する。また胞子，ミクロシストなどの形成は認められない。
２）各種培地における生育状態
肉汁寒天培地上で，うす黄茶色のコロニーを形成する。コロニーの周辺はスムースで顕著な粘調性及び遊走性は認められない。また，可溶性色素の生成は認められない。肉汁穿刺培養では培地全体が懸濁し，皮膜を形成する。リトマスミルクでの培養では，弱酸性を示す。
３）生理学的性質
【００１３】
【表１】
0003879171.tif 000005
硝酸塩の還元                                  陽性
脱窒反応                                      陰性
ＭＲテスト                                    陰性
ＶＰテスト                                    陰性
インドールの生成                              陰性
硫化水素の生成                                陰性
デンプンの加水分解                            陰性
クエン酸の利用                                陽性
色素の生成                                    陰性
ウレアーゼ                                    陰性
オキシターゼ                                  陽性
カタラーゼ                                    陽性
ゼラチンの液化                                陽性
生育温度範囲                                １０〜３７℃
至適生育温度                                ２０〜３２℃
生育ｐＨ範囲                                ｐＨ５〜９
至適生育ｐＨ                                ｐＨ６〜８
嫌気条件での生育                              陰性
ＯＦテスト                                    酸化型
アルギニン分解反応                            陰性
ポリ−β−ハイドロキシブチレートの            陽性
菌体内蓄積
ＮａＣｌ添加肉汁培地での生育        ３％では生育するが，６％では生育しない
0003879171.tif 000006
【００１４】
４）炭素源の利用性
【００１５】
【表２】
0003879171.tif 000007
Ｌ−アラビノース                                        ＋
Ｄ−キシロース                                          ＋
Ｄ−グルコース                                          ＋
Ｄ−マンノース                                          ＋
シュークロース                                          ＋
イノシット                                              ＋
ラムノース                                              −
ラフィノース                                            ＋
Ｄ−マンニット                                          ＋
Ｄ−ガラクトース                                        ＋
マルトース                                              ＋
トレハロース                                            ＋
ラクトース                                              ±
Ｄ−ソルビット                                          ＋
サリシン                                                ＋
メリビオース                                            ＋
グリセリン                                              ＋
スターチ                                                −
キサンチン                                              ±
キチン                                                  −
0003879171.tif 000008
【００１６】
５）菌体成分の化学分析
菌体イソプレノイド・キノンとして，Ｑ−８を有する。
６）ＤＮＡのＧＣ含量（ＨＰＬＣ法による）
ｍｏｌ％Ｇ＋Ｃ＝６９．３
以上の微生物学的性質をまとめると，本菌株はグラム陰性好気性の桿菌で運動性を有する。生育温度範囲は１０〜３７℃で，オキシターゼ試験，カタラーゼ試験，硝酸塩の還元性は陽性であり，ＯＦテストの結果は酸化型である。また，ポリ−β−ハイドロキシブチレートの菌体内蓄積が認められる。一方，デンプンの分解性，硫化水素の生成，インドールの生成，ＶＰ試験結果は陰性である。菌体イソプレノイド・キノンとして，Ｑ−８を有する。また，ＤＮＡの塩基組成は６９．３ｍｏｌ％である（ＨＰＬＣ法）。このような性質を有する菌をバージーズ・マニュアル・オブ・システマティック・バクテリオロジィ（Bergey'S  Manual  of  Systematic  Bacteriology，1989）及びその他の文献によって検索した結果，本菌株はシュードモナス（Pseudomonas）属に属する細菌であると判断した。
さらに上に記した性質に基づき本菌株とシュードモナス属の既知菌種とを各種文献により比較検討した結果，類似菌種としてシュードモナス  セパシア（Pseudomonas cepacia）があげられる。本菌株とシュードモナス  セパシア（P．cepacia）との文献値を比較した。以下に相違点の概略を示す。
【００１７】
【表３】
0003879171.tif 000009
【００１８】
上記の表に示したように，可溶性色素の産生，４０℃における生育，細胞の大きさの点で本菌株は，シュードモナス  セパシア（P．cepacia）とは異なっていた。従って，本菌株をシュードモナス属の新種と判断し，シュードモナス  エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｑ３３１６０と命名した。
なお，本菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ  Ｐ−１６１７７として寄託されている。
なお，微生物は人工的に，また自然に変異を起こしやすいが，本発明において用いられるシュードモナス  エスピー（Pseudomonas  sp.)  Ｑ３３１６０株は，天然から分離された菌株の他に，これを紫外線，Ｘ線，化学薬剤などで人工的に変異させたもの，及びそれらの天然変異株についても包含するものである。
【００１９】
（製造法）
本発明の新規抗生物質の製造法を実施するに当たり，該物質の生産菌株シュードモナス  エスピー  Ｑ３３１６０株を各種栄養源を含有する培地に接種し，好気的に発育させることにより本発明の新規物質を含む培養物が得られる。
培養に用いられる培地は，使用する微生物が生育可能な培地であればよく，合成培地，半合成培地あるいは天然培地を用いることができる。培地に添加する栄養物としては，細菌の栄養源として公知のものを使用できる。例えば窒素源（炭素源）としては，市販されているペプトン類，肉エキス類，コーンスティープリカー，綿実粕，落花生粉，大豆粉，酵母エキス，ＮＺ−アミン，小麦胚芽，カゼイン類，魚粉，デンプン類，オウギ，及び硝酸ナトリウム，硝酸アンモニウム等の無機又は有機物，炭素源としては市販されている糖蜜，グルコース，マルトース，フルクトース，マンニトール，ポテトスターチ，コーンスターチ，デキストリン，可溶性デンプン等の炭水化物あるいは油脂，脂肪類などが使用できる。
また金属塩としては，Ｎａ，Ｋ，Ｍｇ，Ｃａ，Ｚｎ，Ｆｅ，Ｍｎ，Ｃｏ，Ｃｕ，等の硫酸鉛，塩酸塩，硝酸塩，燐酸塩，炭酸塩等を必要に応じて添加できる。さらに必要に応じてバリン，ロイシン，イソロイシン，フェニルアラニン，トリプトファン，メチオニン，リジン，アルギニン，グルタミン酸，アスパラギン酸等のアミノ酸や，ビタミン類，オレイン酸，オレイン酸メチル，ラード油，シリコン油，海面活性剤等の二次代謝物生産促進物質又は消泡剤を適宜使用できる。これらのもの以外でも，本発明化合物生産菌が利用し，本発明化合物の生産に役立つものであれば，いずれの添加物も使用することができる。
培養法としては，一般の抗生物質などの培養法と同様に行えば良く，その培養方法は固体培養でも液体培養でも良い。液体培養の場合は静置培養，振とう培養，攪拌培養のいずれを実施してもよいが，特に通気攪拌培養が望ましい。培養条件として，培養温度は生産菌が発育し，本発明の抗生物質を生産しうる温度，すなわち１５℃〜３７℃の範囲で適宜適用できるが約２８℃が好ましい。ｐＨは，ｐＨ４〜９の範囲で適宜適用できるが，ｐＨ６〜８が好ましい。培養時間は種々の条件によって異なり，１０時間〜１６８時間であるが，通常２４〜１２０時間程度で培養液中に蓄積される本発明の物質が最高力価に達する。
【００２０】
培養物から目的とする化合物を単離するには，微生物の産生する代謝産物を単離する際に用いる通常の抽出，精製の手段が適宜利用できる。培養物中の該物質は培養液をそのままか，又は遠心分離あるいは培養物に濾過助剤を加えて濾過して得られた培養濾液に酢酸エチル，クロロホルム，ベンゼン，トルエン等の水と混和しない有機溶剤を加えて抽出する。また，培養液を適宜の坦体に接触させ，濾液中の生産物質を吸着させ，次いで適当な溶媒で溶出することにより該物質を抽出することができる。例えば，アンバーライトＸＡＤ−２，ダイヤイオンＨＰ−２０，ダイヤイオンＣＨＰ−２０，又はダイヤイオンＳＰ−９００のような多孔性吸着樹脂に接触させて該物質を吸着させる。
次いでメタノール，エタノール，アセトン，アセトニトリル等の有機溶媒と水の混合液を用いて該物質を溶出させる。このときの有機溶媒の混合比率を低濃度より段階的に又は連続的に高濃度まで上げていくことにより，該物質の含まれる比率のより高い画分を得ることができる。次に，上記の各操作法を用いて得た該物質含有画分は，シリカゲル，ＯＤＳ等を用いたカラムクロマトグラフィー，遠心液々分配クロマトグラフィー，ＯＤＳを用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の常法により，さらに純粋に分離精製することができる。
本発明化合物は，二重結合を有するのでｃｉｓ体，ｔｒａｎｓ体又は互変異性体が存在する。
本発明化合物の塩としては，無機酸若しくは有機酸との酸付加塩，あるいは無機若しくは有機塩基との塩であり，製薬学的に許容しうる塩が好ましい。これらの塩としては，具体的には塩酸，臭化水素酸，ヨウ化水素酸，硫酸，硝酸若しくはリン酸等の鉱酸，又は，ギ酸，酢酸，プロピオン酸，シュウ酸，マロン酸，コハク酸，フマル酸，マレイン酸，乳酸，リンゴ酸，酒石酸，クエン酸，メタンスルホン酸若しくはエタンスルホン酸等の有機酸，又はアスパラギン酸若しくはグルタミン酸などの酸性アミノ酸との酸付加塩，ナトリウム，カリウム，マグネシウム，カルシウム，アルミニウムなど無機塩基，メチルアミン，エチルアミン，エタノールアミンなどの有機塩基，リジン，オルニチンなどの塩基性アミノ酸との塩等を挙げることができる。また，本発明化合物の水和物，各種溶媒和物，また互変異性体等が含まれる。更に，本発明化合物には，結晶多形を有する化合物もあり，それらの結晶形をすべて包含するものである。
以下に本発明化合物の製剤化法，投与方法を詳述する。
式（Ｉ），（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）で示される化合物やその製薬学的に許容される塩の１種又は２種以上を有効成分として含有する医薬組成物は，通常用いられている製剤用の担体や賦形剤，その他の添加剤を用いて，錠剤，散剤，細粒剤，顆粒剤，カプセル剤，丸剤，液剤，注射剤，坐剤，軟膏，貼付剤等に調製され，経口的又は非経口的に投与される。
本発明化合物のヒトに対する臨床投与量は適用される患者の症状，体重，年令や性別等を考慮して適宜決定される。
通常成人１日当り経口で０．１〜５００ｍｇ，非経口で０．０１〜１００ｍｇであり，これを１回あるいは数回に分けて投与する。投与量は種々の条件で変動するので，上記投与量範囲より少ない量で十分な場合もある。
【００２１】
本発明による経口投与のための固体組成物としては，錠剤，散剤，顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては，一つ又はそれ以上の活性物質が，少なくとも一つの不活性な希釈剤，例えば乳糖，マンニトール，ブドウ糖，ヒドロキシプロピルセルロース，微結晶セルロース，デンプン，ポリビニルピロリドン，メタケイ酸，アルミン酸マグネシウムと混合される。組成物は，常法に従って，不活性な希釈剤以外の添加剤，例えばステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤や繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤，ラクトースのような安定化剤，グルタミン酸又はアスパラギン酸のような可溶化乃至は溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要によりショ糖，ゼラチン，ヒドロキシプロピルセルロース，ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの胃溶性あるいは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。
経口投与のための液体組成物は，薬剤的に許容される乳濁剤，溶液剤，懸濁剤，シロップ剤，エリキシル剤等を含み，一般的に用いられる不活性な希釈剤，例えば精製水，エチルアルコールを含む。この組成物は不活性な希釈剤以外に可溶化乃至溶解補助剤，湿潤剤，懸濁剤のような補助剤，甘味剤，風味剤，芳香剤，防腐剤を含有していてもよい。
非経口投与のための注射剤としては，無菌の水性又は非水性の溶液剤，懸濁剤，乳濁剤を包含する。水性の溶液剤，懸濁剤の希釈剤としては，例えば注射剤用蒸留水及び生理食塩水が含まれる。非水溶性の溶液剤，懸濁剤の希釈剤としては，例えばプロピレングリコール，ポリエチレングリコール，オリーブ油のような植物油，エチルアルコールのようなアルコール類，ポリソルベート８０（商品名。ポリオキシエチレンソルビタン高級脂肪酸エステル）等がある。このような組成物は，さらに等張化剤，防腐剤，湿潤剤，乳化剤，分散剤，安定化剤（例えば，ラクトース），可溶化乃至溶解補助剤のような添加剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過，殺菌剤の配合又は照射によって無菌化される。これらは又無菌の固体組成物を製造し，使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００２２】
本発明化合物の溶解性が低い場合には，可溶化処理を施してもよい。可溶化処理としては，医薬製剤に適用できる公知の方法，例えば界面活性剤（ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油類，ポリオキシエチレンソルビタン高級脂肪酸エステル類，ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール類，ショ糖脂肪酸エステル類等）を添加する方法，薬物と可溶化剤例えば高分子（ハイドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ），ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ），ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の水溶性高分子，カルボキシメチルエチルセルロース（ＣＭＥＣ），ハイドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ），メタアクリル酸メチル−メタアクリル酸共重合体（オイドラギットＬ，Ｓ，商品名；ローム・アンド・ハース社製）等の腸溶性高分子）との固体分散体を形成する方法が挙げられる。更に必要により，可溶性の塩にする方法，サイクロデキストリン等を用いて包接化合物を形成させる方法等も採用できる。可溶化の手段は，目的とする薬物に応じて適宜変更できる［「最近の製剤技術とその応用」，内海勇ら，医薬ジャーナル１５７−１５９（１９８３）及び「薬学モノグラフＮｏ．１，生物学的利用能」，永井恒司ら，ソフトサイエンス社，７８−８２（１９８８）］。
このうち，好ましくは，薬物と可溶化剤との固体分散体を形成させ溶解性を改善する方法が採用される（特開昭５６−４９３１４号，ＦＲ２４６０６６７号）。
【００２３】
本発明によれば前記活性化合物を単独ばかりでなく，他の抗菌剤と組み合わせて（好ましくは１〜３種）使用することができる。このような他の抗菌剤とは，例えば，ニトロイミダゾール抗生物質（例えばチニダゾール及びメトロニダゾール），テトラサイクリン系薬剤（テトラサイクリン，ミノサイクリン，ドキシサイクリン），ペニシリン系薬剤（例えばアモキシリン，アンピシリン，タランピシリン，バカンピシリン，レナンピシリン，メズロシリン，スルタミシリン），セファロスポリン系薬剤（例えば，セファクロル，セファドロキシル，セファレキシン，セフポドキシムプロキセチル，セフィキシム，セフジニル，セフチブテン，セフオチアムヘクセチル，セフタメットピボキシル，セフロキシムアクセチル），ペネム系薬剤（例えば，フロペネム，リチペネムアコキシル），マクロライド系薬剤（例えば，エリスロマイシン，オレアンドマイシン，ジョサマイシン，ミデカマイシン，ロキタマイシン，クラリスロマイシン，ロキシスロマイシン，アジスロマイシン），リンコマイシン系薬剤（例えば，リンコマイシン，クリンダマイシン），アミノグリコシド系薬剤（例えば，パロモマイシン），キノロン系薬剤（例えば，オフロキサシン，レボフロキサシン，ノルフロキサシン，エノキサシン，シプロフロキサシン，ロメフロキサシン，トスフロキサシン，フレロキサシン，スパフロキサシン，テマフロキサシン，ナジフォキサシン，グレパフロキサシン，パズフォキサシン）並びにニトロフラントインを上げることができる。また，酸に関連した疾患の治療に用いられる医薬化合物｛例えば，酸ポンプ阻害剤（オメプラゾール及びランソプラゾール）｝又はＨ２アンタゴニスト（例えば，ラニチジン，シメチジン及びファモチジン）と前記活性化合物との組み合わせも，本発明の範囲内に含まれる。
【００２４】
【実施例】
以下，本発明を製造例，試験例により，さらに詳しく説明するが，本発明はもちろんこれらの例に限定されるものではない。
【００２５】
実施例１
グルコース１．０％，ポテトスターチ２．０％，酵母エキス０．５％，ポリペプトン０．５％，炭酸カルシウム０．４％を含む種培地（ｐＨ７．０）を作成し，５００ｍｌの三角フラスコに１００ｍｌずつ分注した。この培地を１２１℃で２０分間滅菌した後，ベネット寒天上に良く生育させたシュードモナス  エスピー（Pseudomonas  sp.）Ｑ３３１６０株の菌体をかき取って接種し，２８℃で７２時間振盪培養を行って種培養液とした。次に生産培地として，グリセロール４．０％，コンスティプリカー３．０％，硝酸ナトリウム０．４％，炭酸カルシウム０．２％，硫酸マグネシウム０．０２％，を含む培地（ｐＨ５．５）を作成し，５００ｍｌの三角フラスコに１００ｍｌずつ分注した。この培地を１２１℃で２０分間滅菌したものに，上記種培養液で得られた培養物を２％の割合で接種し，２８℃で７２時間振盪培養した。
【００２６】
このようにして培養した５ｌの培養液に２０ｌのアセトンを加え，攪拌して一夜放置した後，濾過して上清と沈澱物に分離した。上清を減圧下で濃縮しアセトンを除去した後，得られた濃縮液をｐＨ８．５に調整し，酢酸エチル５ｌで２回抽出した。酢酸エチル層を減圧下で濃縮乾固し，粗抽出物を得た。この粗抽出物を，ＯＤＳ−７５１５−１２Ａ（センシュウ科学社製）を用いたフラッシュクロマトグラフィーに付し，メタノール／水（８：１）及び（９：１）で溶出した活性画分８９．７ｍｇを得た。最終的に，ＳＵＰＥＬＣＯＳＩＬ  ＬＣ  ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ（スペルコ社製）２１．２φ×２５０ｍｍのカラムを用い，メタノール：水（７５：２５）を用いたＨＰＬＣにより精製を行い，３２．７分に溶出されてくる活性画分Ｑ３３１６０−Ａ物質４７．９ｍｇ及び３３．９分に溶出されてくる活性画分Ｑ３３１６０−Ｂ物質１７．７ｍｇを単離した。
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の条件は以下の通りである。
カラム：ＳＵＰＥＬＣＯＳＩＬ  ＬＣ−ＡＢＺ＋ＰＬＵＳ
（スペルコ社製，２１．２φ×２５０ｍｍ）
溶出溶媒：メタノール：水（＝７５：２５）の混合溶液
流出速度：４ｍｌ／ｍｉｎ
検出波長：２１０ｎｍ
上記抽出，分離，精製されたＱ３３１６０−Ａ物質は下記の物理化学的性質を有する。
（１）色及び形状：白色粉末。
（２）酸性，中性，塩基性の区分：中性。
（３）溶解性：メタノール，クロロホルムには溶けるが水，ヘキサンにはほとんど溶けない。
（４）紫外部吸収スペクトル：２１４，２３９，３２３，３３５ｎｍに吸収極大を示し，第１図通りである（溶剤：メタノール）。
（５）分子量：２５５．３６
（６）マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）：２５６［Ｍ＋Ｈ］+，２５４［Ｍ−Ｈ］-
（７）分子式：Ｃ17Ｈ21ＮＯ
（８）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）は，第２図通りである。
（９）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：Ｑ３３１６０−Ａ物質の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは第３図の通りである。
（１０）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：Ｑ３３１６０−Ａ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第４図の通りである。
上記の物理化学的性質からＱ３３１６０−Ａ物質の化学構造式は下記のように決定された。
【００２７】
【化７】
0003879171.tif 000010
【００２８】
上記抽出，分離，精製されたＱ３３１６０−Ｂ物質は下記の物理化学的性質を有する。
（１）色及び形状：白色粉末。
（２）酸性，中性，塩基性の区分：中性。
（３）溶解性：メタノール，クロロホルムには溶けるが水，ヘキサンにはほとんど溶けない。
（４）紫外部吸収スペクトル：２１３，２４１，３２２，３３５ｎｍに吸収極大を示し，第５図通りである（溶剤：メタノール）。
（５）分子量：２５５．３６
（６）マススペクトル（ＦＡＢ−Ｍａｓｓ）：２５６［Ｍ＋Ｈ］+，２５４［Ｍ−Ｈ］-
（７）分子式：Ｃ17Ｈ21ＮＯ
（８）赤外吸収スペクトル（ＫＢｒ）は，第６図通りである。
（９）1Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：Ｑ３３１６０−Ｂ物質の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは第７図の通りである。
（１０）13Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）：Ｑ３３１６０−Ｂ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルは第８図の通りである。
上記の物理化学的性質からＱ３３１６０−Ｂ物質の化学構造式は下記のように決定された。
【００２９】
【化８】
0003879171.tif 000011
【００３０】
前記活性化合物のインビトロ活性は以下の方法により示すことができる。
実施例２
前記物質のインビトロ活性測定は以下の方法により示すことができる。
抗菌活性の測定
抗菌物質含有寒天平板の作製
評価する物質を１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し，２倍系列希釈した。本希釈液を滅菌丸シャーレに入れ，そこに滅菌後５０℃に保温しておいた１０ｍｌのブルセラ寒天培地（０．１％β−サイクロデキストリン）に加え，混和後，固めた。ＤＭＳＯの最終濃度は１％以下となる。
接種材料の調製と結果判定
ブルセラ寒天培地（５％仔牛血清含有）を用いてマルチガスインキュベーター（Ｎ2８０％，ＣＯ2１５％，Ｏ2５％）で３７℃にて３日間培養したヘリコバクター・ピロリ菌，例えばヘリコバクター・ピロリＡＴＣＣ４３５０４を，濁度により約１０8個／１ｍｌになるようにブルセラブロスを用いて調製した。本菌液を，同様にブルセラブロスを用いて１００倍希釈した液を，薬剤を含有する寒天培地に，ミクロプランターを用いて約５μｌを寒天表面に接種した。接種した寒天平板を，上記マルチガスインキュベーターに３７℃で３日間（７２時間）培養する。培養を終了した寒天平板を観察し，増殖の観察されない薬剤濃度をＭＩＣとした。その結果，Ｑ３３１６０−Ａ物質でのＭＩＣは０．００６μｇ／ｍｌ，Ｑ３３１６０−Ｂ物質でのＭＩＣは，０．０２５μｇ／ｍｌであった。
【００３１】
実施例３
通性嫌気性菌，好気性菌に対するインビトロ活性測定は以下の方法により測定する。
抗菌物質含有寒天平板の作製
評価する物質を１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し，２倍系列希釈した。本希釈液を滅菌丸シャーレに入れ，そこに滅菌後５０℃に保温しておいた１０ｍｌのミューラーヒントン寒天培地に加え，混和後，固めた。ＤＭＳＯの最終濃度は１％以下となる。
接種材料の調製と結果判定
ミューラーヒントンブロスを用いて，３７℃に設定したフラン器で終夜培養した菌液を，ミューラーヒントンブロスを用いて約１０6個／１ｍｌになるように希釈調製した。本菌液を，薬剤を含有する寒天培地に，ミクロプランターを用いて約５μｌを寒天表面に接種した。接種した寒天平板を，３７℃のフラン器で１８時間培養した。培養を終了した寒天平板を観察し，増殖の観察されない薬剤濃度をＭＩＣとした。
結果
Ｑ３３１６０−Ａ，Ｑ３３１６０−Ｂは，スタフィロコッカス  アウレウス（Staphylococcus  oureus）ＦＤＡ２０９Ａ，エシェリシア  コリ（Escherichia  colｉ）Ｏ−１，シュードモナス  エルギノザ（Pseudomonas  aeruginosa）ＮＣＴＣ１０４９０のような代表的通性嫌気性菌，好気性菌に対するＭＩＣが５０μｇ／ｍｌよりも大きな値を示した。
【００３２】
実施例４
嫌気性菌に対するインビトロ活性測定は以下の方法により測定する。
抗菌物質含有寒天平板の作製
評価する物質を１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し，２倍系列希釈した。本希釈液を滅菌丸シャーレに入れ，そこに滅菌後５０℃に保温しておいた１０ｍｌのＧＡＭ寒天培地に加え，混和後，固めた。ＤＭＳＯの最終濃度は１％以下となる。
接種材料の調製と結果判定
ＧＡＭブイヨンを用いて，Ｎ2８０％ＣＯ2１０％Ｈ2１０％の混合ガスでガス置換した嫌気性菌培養装置を用いて３７℃にて終夜培養した菌液を，同じＧＡＭブイヨンを用いて約１０6個／１ｍｌになるように調製した。本菌液を，薬剤を含有する寒天培地に，ミクロプランターを用いて約５μｌを寒天表面に接種した。接種した寒天平板を，上記の３７℃に設定してある嫌気性菌培養装置で１８時間培養した。培養を終了した寒天平板を観察し，増殖の観察されない薬剤濃度をＭＩＣとした。
結果
Ｑ３３１６０−Ａ，Ｑ３３１６０−Ｂは，ビフィドバクテリウム  ビフィダム（Bifidobacterium  bifidum）ＣＡＹＡ２１−１，ペプトストレプトコッカス  プロダクタス（Peptostreptococcus  productus）ＣＡＹＡ１２−２，バクテロイデス  フラジリス（Bacteroides  fragiris）ＧＡ１５５６２のような扁性嫌気性菌に対するＭＩＣは５０μｇ／ｍｌより大きな値を示した。
【００３３】
【発明の効果】
本発明は，ヘリコバクター・ピロリに対して抗菌作用を示し，ヒトにおけるヘリコバクター・ピロリ及び動物における関連するヘリコバクター属に属する細菌感染の治療に有効である。また，本発明抗ヘリコバクター・ピロリ剤は，消化性潰瘍（例えば胃及び十二指腸潰瘍），炎症（胃炎，十二指腸炎），胃癌等の消化管上部の疾患，もしくは慢性心疾患等の治療にも有効である。
【００３４】
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｑ３３１６０−Ａ物質の紫外部吸収スペクトルを示す。
【図２】Ｑ３３１６０−Ａ物質の赤外部吸収スペクトルを示す。
【図３】Ｑ３３１６０−Ａ物質の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図４】Ｑ３３１６０−Ａ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図５】Ｑ３３１６０−Ｂ物質の紫外部吸収スペクトルを示す。
【図６】Ｑ３３１６０−Ｂ物質の赤外部吸収スペクトルを示す。
【図７】Ｑ３３１６０−Ｂ物質の1Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図８】Ｑ３３１６０−Ｂ物質の13Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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