(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式
【化４】
0003886196.tif 000016
で表されるホルボールエステル誘導体若しくはその薬理学的に許容できる塩またはそれらの水和物。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＴＮＦ産生抑制剤などとして有用なホルボールエステル誘導体またはその薬理学的に許容される塩もしくはそれらの水和物およびそれらからなる医薬に関する。
【０００２】
【従来の技術】
炎症性サイトカインの１つである腫瘍壊死因子（TNF：Tumor Necrosis Factor）は主に単球やマクロファージが分泌するタンパク質で、155〜159個のアミノ酸からなる。Meth A 肉腫の出血性壊死を引き起こす因子として報告され、試験管内のガン細胞に対して直接的且つ強力な障害活性を有する点が注目された。
一方、リンパ球により産生されるリンホトキシン（LT：lymphotoxin）はＬ細胞を障害する可溶性因子として報告されたが、その後の研究で腫瘍細胞障害活性をはじめとして、その生物活性のほとんどをＴＮＦと共通にし、同一のレセプターを介して作用することがわかってきた。そのため、これらの因子はＴＮＦファミリーと呼ばれ、ＴＮＦがＴＮＦ−α、ＬＴがＴＮＦ−βと呼ばれることもある。
【０００３】
このＴＮＦファミリーは腫瘍細胞だけでなく、正常な細胞にも作用し様々な生物活性を示す。細胞障害作用、腫瘍壊死作用、細胞増殖作用、免疫担当細胞に対する作用、血管内皮細胞に対する作用、分化誘導作用、抗ウイルス作用、カケクチン作用、炎症における作用など様々な活性を発揮する。
例えば、炎症におけるＴＮＦの作用を見てみると、ＴＮＦは様々な細胞に作用し、炎症の直接的なメディエーターとして知られているプロスタグランジン（PG：prostaglandin）の産生を亢進する。血管内皮細胞に作用したときは、PGI2を産生させ、関節の滑膜細胞、線維芽細胞、単球、マクロファージなどに作用したときはPGE2を産生させる。さらにＴＮＦは脳の視床下部に直接作用しPGE2の産生を引き起こし、発熱作用を示す。
【０００４】
その他にも、ＴＮＦは炎症反応にとって重要である血管内皮細胞と好中球の接着を高めたり、ＴＮＦと同様にカケクチン作用、炎症作用を有するＩＬ−１の産生を誘導する作用を有することなども知られている。
従って、ＴＮＦの産生を抑制することができれば、炎症反応を押さえることができ非常に有用であるが、有効にＴＮＦの産生を抑制し医薬品として有用な化合物はまだ見いだされていない。
【０００５】
【発明の実施形態】
本発明は、すぐれたＴＮＦ産生抑制作用などを有するホルボールエステル誘導体もしくはその薬理学的に許容できる塩又はそれらの水和物を提供する。さらに、本発明はそれらの化合物からなる医薬を提供する。
【０００６】
本発明者等は、ＴＮＦの産生抑制剤について鋭意研究したところ、中西部ジャワ島において、原住民であるSunda族により、下剤、創傷薬として用いられているトウダイグサ科のJarak Cina (Jatropha curcas L.)の種子より抽出したホルボールエステル誘導体が、優れたＴＮＦ産生抑制作用を有することを見いだし本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は一般式（Ｉ）
【化５】
0003886196.tif 000002
〔式中、C1およびC2は炭素原子を、O1およびO2は酸素原子を、式
【化６】
0003886196.tif 000003
は、C1とO1およびC2とO2の間の結合、またはC1とO2およびC2とO1の間の結合をそれぞれ意味する。〕で表されるホルボールエステル誘導体若しくはその薬理学的に許容できる塩またはそれらの水和物並びにそれらからなる医薬、ＴＮＦ産生抑制剤、免疫疾患の治療剤、抗炎症剤、抗HIV剤、血小板減少症の予防・治療剤、および抗癌剤、並びにＴＮＦ産生抑制作用を有するJarak Cina (Jatropha curcas L.)の種子由来のホルボールジカルボン酸エステルに関する。
【０００８】
以下本願中で使用されている語句について詳細に説明する。
まず、一般式（Ｉ）
【化７】
0003886196.tif 000004
〔式中、C1，C2，O1，O2および式
【０００９】
【化８】
0003886196.tif 000005
は、前記定義に同じである。〕で表されるホルボールエステル誘導体若しくはその薬理学的に許容できる塩またはそれらの水和物中、式
【化９】
0003886196.tif 000006
が、C1とO1およびC2とO2の間の結合を意味するとは、C1とO1およびC2とO2の間の共有結合を意味し、従ってこの場合一般式（Ｉ）は、式
【００１０】
【化１０】
0003886196.tif 000007
で表されるホルボールエステル誘導体若しくはその薬理学的に許容できる塩またはそれらの水和物を表し、C1とO2およびC2とO1の間の結合を意味するとは、C1とO2およびC2とO1の間の共有結合を意味し、従ってこの場合一般式（Ｉ）は、式
【００１１】
【化１１】
0003886196.tif 000008
で表されるホルボールエステル誘導体若しくはその薬理学的に許容できる塩またはそれらの水和物を表す。
【００１２】
ここで薬理学的に許容できる塩としては、特に種類は限定されないがたとえば塩酸塩、硫酸塩、炭酸塩、重炭酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などの無機酸の付加塩；酢酸塩、マレイン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、トリフルオロ酢酸塩などの有機カルボン酸の付加塩；メタンスルホン酸塩、ヒドロキシメタンスルホン酸塩、ヒドロキシエタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、タウリン塩などの有機スルホン酸の付加塩；トリメチルアミン塩、トリエチルアミン塩、ピリジン塩、プロカイン塩、ピコリン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ,Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカミン塩、ジエタノールアミン塩、トリエタノールアミン塩、トリス（ヒドロキシメチルアミノ）メタン塩、フェネチルベンジルアミン塩などのアミンの付加塩；アルギニン塩、リジン塩、セリン塩、グリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などのアミノ酸の付加塩などを挙げることができる。
【００１３】
それらの水和物とは、本発明にかかるホルボールエステル誘導体の水和物だけでなく、ホルボールエステル誘導体の薬理学的に許容できる塩の水和物をも含む。
また、本発明中便宜的に構造式が一定の異性体で記載されていることがあるが、本発明には互変異生体、光学異性体、及び幾何異性体などの全ての異性体を含む。
【００１４】
免疫疾患とは、具体的には例えば虚血再潅流障害、臓器移植拒絶反応などの炎症性免疫疾患、リウマチ、膠原病などの自己免疫疾患などが挙げられる。
【００１５】
本願発明にかかる化合物は、トウダイグサ科の植物より抽出が可能であるが、好ましくはJarak Cina (Jatropha curcas L.)の種子のMeOHエキスの酢酸エチル可溶部のＴＮＦ産生抑制活性を示す画分より得ることが可能である。また、常法の有機合成手段を用いることにより化学合成し、必要により適当なシリカゲル等によるカラムクロマトグラフィー等によって精製し、製造することも可能である。
【００１６】
以下の実験例で示すとおり、本願発明化合物はＴＮＦ産生抑制作用の他、抗炎症作用、抗HIV作用、巨核球系細胞の分化促進作用、前立腺癌細胞の増殖抑制作用などの作用を示し、免疫疾患の治療剤、抗HIV剤、血小板減少症の予防・治療剤、抗癌剤としても非常に有用である。
【００１７】
本発明に係る医薬の投与量は症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態、疾患の種類等により異なるが、通常成人１日当たり１μｇ〜１０ｇであり1〜数回に分けて投与する。
本発明に係る医薬の投与形態は特に限定されず、通常用いられる方法により経口または非経口的に投与することができる。
【００１８】
これら製剤化には通常用いられる賦形剤，結合剤，滑沢剤，着色剤，矯味矯臭剤等，および必要により安定化剤，乳化剤，吸収促進剤，界面活性剤等を使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として用いられる成分を配合して常法により製剤化される。
【００１９】
これらの成分としては例えば、動植物油（大豆油、牛脂、合成グリセライドなど）、炭化水素（流動パラフィン、スクワラン、固形パラフィンなど）、エステル油（ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピルなど）、高級アルコール（セトステアリルアルコール、ベヘニルアルコールなど）、シリコン樹脂、シリコン油、界面活性剤（ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーなど）、水溶性高分子（ヒドロキシエチルセルロース、ポリアクリル酸、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、メチルセルロースなど）、アルコール（エタノール、イソプロパノールなど）、多価アルコール（グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ソルビトールなど）、糖（グルコース、ショ糖など）、無機粉体（無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、ケイ酸アルミニウムなど）、精製水などが挙げられる。ｐＨ調製のためには無機酸（塩酸、りん酸など）、無機酸のアルカリ金属塩（りん酸ナトリウムなど）、無機塩基（水酸化ナトリウムなど）、有機酸（低級脂肪酸、クエン酸、乳酸など）、有機酸のアルカリ金属塩（クエン酸ナトリウム、乳酸ナトリウムなど）、有機塩基（アルギニン、エタノールアミンなど）などを用いることができる。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤などを添加することができる。
【００２０】
以下、本発明の有用性を薬理実験例で示す。
［実験例１］TNF-αの転写活性に対する作用
TNF-α遺伝子の5'-enhancer領域に分泌型のPLAP（Placenta Alkalinephosphatase gene）を結合したplasmidをstableにtransfectしたTR-1細胞(2Ｘ104 cells/96-well)(ヒトのモノサイトであるTHP-1細胞に、TNF-αの5'-enhancer(約1.4Kbase)にPLAPの遺伝子を連結したプラスミドを安定発現させた細胞）をLPS(100ng/ml)刺激し、48時間後培養上清中に分泌されたPLAP活性を発光試薬にて測定し、これをTNF-αの転写活性とした (M. Goto et al., Mol. Pharm., 49, 860-873, 1996)。本願化合物、またはPMA存在下における転写活性の抑制率を表１に示した。
【００２１】
【表１】
0003886196.tif 000009
表１で示されるように本願発明にかかる化合物は優れたTNF転写抑制作用を示した。
【００２２】
なお、ここで比較対照としたPMAとは、式
【化１２】
0003886196.tif 000010
〔式中、Acはアセチル基を意味する。〕で表されるホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）をいい、発ガンプロモーターとして有名なホルボールエステルの中でも、マウスの皮膚発ガンにおける最も強力なプロモーターである。
【００２３】
［実験例２］TNF-αの産生に対する作用
健常成人末梢血より、常法に従いヒト単球を得た。単球(1.2Ｘ106 cells/well)をLPS(10ng/ml)で刺激して15時間後に培養上清に遊離したTNF-αの産生量をELISAにて測定した。本願化合物、またはPMA存在下におけるTNF産生抑制率を表２に示した。
【００２４】
【表２】
0003886196.tif 000011
表２で示されるように本願発明にかかる化合物は優れたTNF産生抑制作用を示し、TNF産生抑制剤として有用である。
【００２５】
［実験例３］巨核球系細胞に対する作用
巨核球系細胞UT-7GMJを1ng/ml GM-CSF、10%FCSを含むIMDM培地で継代培養した。この細胞を新鮮な培地で洗浄後、1.0Ｘ105 cells/mlとし、その250μlを、あらかじめ24穴プレート上で10%FCSを含むIMDM培地にて系列希釈してある検体各250μlに加えた。CO2インキュベータ（37℃、5%CO2）にて３日間培養後、細胞をマイクロチューブに移し、1000rpm５分間遠心して上清を除いた後、FITC標識した抗GPIIb/IIIa抗体（Immunotech社製）0.5μgを添加し、氷上で60分間インキュベーションした。PBS(-)で２回洗浄後、0.2%パラホルムアルデヒドを含むPBS(-)250μlに懸濁させ、30分以上放置した。この細胞液をフローサイトメーター（FACScan、Becton Dickinson）にて解析し、GPIIb/IIIa抗原の発現量を、細胞一個あたりの平均の蛍光強度（相対値）として測定した。この結果を図１に示す。
図１に示すとおり、以下の実施例１により得られた本願化合物は、UT-7GMJの巨核球系分化マーカーであるGPIIb/IIIaの発現量を用量依存的に増加させ、強力な巨核球系細胞の分化誘導作用を有し、血小板減少症の予防・治療剤として有用である。
【００２６】
［実験例４］HIV-1感染細胞の増殖に対する作用
MT-4細胞（１Ｘ105/ml）にＨＩＶ（human immunodeficiency virus：IIIB株）をMOI＝0.1にて感染させ、種々の濃度の以下の実施例１により得られた化合物の存在下にて培養した。抗HIV-1効果は、培養４日後に生細胞数MTT法にて定量することにより求めた。この結果を図２に示す。
本願化合物は、極低濃度にて抗HIV-1効果を示し、抗HIV剤として有用である。
【００２７】
［実験例５］癌細胞に対する作用
ヒト前立腺癌細胞（LNCap）を96穴マイクロプレートに、３日間培養用は2.5Ｘ103 cells/well、６日間培養用は1.25Ｘ103 cells/well播種し、翌日以下の実施例１で得られた化合物を加え、３あるいは６日間培養後、MTT法により細胞増殖に対する効果を判定した。この結果を図３に示す。
PMAは0.32ng/ml以上の濃度で細胞毒性作用を示したが、以下の実施例１により得られた本願化合物は、細胞毒性作用は示さず、1.6ng/ml以上で明確な増殖抑制作用を示した。
【００２８】
以上のように本願化合物、特に本願明細書の実施例１で得られた化合物は、優れたTNF産生抑制作用、巨核球系細胞の分化誘導作用、抗HIV作用、抗癌作用を示すので、これらの作用が有効な疾患の予防・治療剤、すなわちTNF産生抑制剤、免疫疾患治療剤、抗炎症剤、抗HIV剤、血小板減少症の予防・治療剤、抗癌剤として有用である。
以下に本発明を更に詳しく説明するために、本願発明の実施例、製造例を示すが、本発明はこれらのものに限定されるものではない。また、実施例、製造例中 1Ｈ Ｎ. Ｍ. Ｒ.スペクトラム、 13Ｃ Ｎ. Ｍ. Ｒ.スペクトラムは日本電子社 FT NMR(600MHz)で測定した。
【００２９】
【実施例】
実施例１
【化１３】
0003886196.tif 000012
【００３０】
Jarak Cinaの種子210ｋｇをメタノール400ｌを用い、室温で12時間抽出を2回行い、さらに、酢酸エチル400ｌにて12時間抽出を行った。得られた抽出液を合わせ、減圧下溶媒を留去し、乾燥エキス40.5ｋｇを得た。
この乾燥エキスをノルマルヘキサンに溶解し、シリカゲル（Kieselgel60,70-230メッシュ、メルク社製）を使用したカラムクロマトグラフィーに付し、酢酸エチルで溶出したフラクション160ｇを得た。得られたエキスを高速液体クロマトグラフィー＜カラム；YMCpack（RI-055-10 SIL）  50mmφX500mm、移動層；ジクロロメタン：メタノール（99:1〜95:5）、流速60ml/min、検出；UV280nm＞に付し、ジクロロメタン：メタノール（95:5）で溶出したフラクションを減圧下、濃縮した。
さらに、得られた残留物800mgを高速液体クロマトグラフィー＜カラム；YMCpack（ODS-5A）  20mmφX250mm、移動層；アセトニトリル：メタノール：水（60:25:15）、流速12ml/min、検出；UV280nm＞に付した。
保持時間27〜35分に溶出したフラクションを減圧濃縮して白色無晶形粉末の標記化合物311mgを得た。
この白色無晶形粉末の理化学的性質は、以下に示す如くである。
【００３１】
カーボン核磁気共鳴スペクトル (δ ppm in DMSO-d6):9.91(q), 11.47(q), 13.48(q), 18.37(q), 21.97(t), 22.62(d), 24.84(s), 26.20(d), 31.25(t), 31.42(d), 31.82(d), 34.23(t), 35.51(d), 36.96(t), 37.22(t), 37.36(d), 44.03(d), 49.90(d), 50.78(d), 54.93(d), 62.26(s), 65.93(t), 72.77(s), 72.85(t), 75.27(s), 118.03(t), 125.00(d), 126.91(d), 130.19(d), 130.38(d), 130.51(d), 130.64(d), 130.92(d), 132.13(s), 132.24(d), 132.56(d), 133.46(d), 134.07(d), 135.05(d), 141.26(s), 159.47(d), 172.68(s), 174.00(s), 208.18(s)
【００３２】
この化合物のカーボン−プロトン２次元核磁気共鳴スペクトル (δ ppm in CDCl3)のチャートを図４に示す。
【００３３】
プロトン核磁気共鳴スペクトル(δ ppm in DMSO-d6): 0.803(d,J=6.2Hz,3H), 0.875(t,J=7.3Hz,3H), 1.056(t,J=7Hz,1H), 1.082(s,3H), 1.330-1.410(m,3H), 1.503(dd,J=14.7,11.4Hz,1H), 1.665(dd,J=2.9,1.5Hz,3H), 1.715(dd,J=14.7,11.4Hz,1H), 1.795(m,1H), 1.904(m,1H), 2.014(dd,J=15.0,7.2Hz,1H), 2.058(dd,J=14.0,7.2Hz,2H), 2.264(d,J=19.1Hz,1H), 2.355(d,J=19.1Hz,1H), 2.609(dd,J=18.7,9.3Hz,1H), 2.905(dd,J=7.1,4.5Hz,2H), 3.054(m,3H), 3.669(d,J=8.1Hz,1H), 3.774(dd,13.2,12.0Hz,2H), 4.275(d,J=12.0Hz,1H), 5.110(m,2H), 5.179(dd,J=7.3,2.2Hz,1H), 5.278(t,J=10.0Hz,1H), 5.459(m,2H), 5.694(m,2H), 5.852(dd,J=14.3,8.4Hz,1H), 5.976(t,J=10.9Hz,1H), 6.275(m,2H), 6.597(m,2H), 7.485(s,1H)
【００３４】
高分解能マススペクトル：Ｃ44Ｈ54Ｏ8
【００３５】
製造例１
【化１４】
0003886196.tif 000013
【００３６】
実施例１で得た化合物17mgをメタノール2.5mlおよび水2.5mlに溶解し、水酸化カリウム4mg を加え、室温で22時間攪拌した後、反応液を氷水中に放置し、1N塩酸0.5mlを加え酸性とし、酢酸エチル20mlで分配した。
酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下、溶媒を留去することにより得られた残留物をテトラヒドロフラン3mlに溶解し、トリメチルシリルジアゾメタン1mlを加え、室温で1時間攪拌した後、溶媒を留去し、得られた残留物を高速液体クロマトグラフィー＜カラム；YMCpack（SIL-5A）  20mmφX250mm、移動層；ノルマルヘキサン：ジクロルメタン（3:2）、流速12ml/min、検出；UV280nm＞に付した。
保持時間9〜11分に溶出したフラクションを減圧濃縮して式（ＩＩ）で表される白色無晶形粉末2mgを得た。
この白色無晶形粉末の理化学的性質は、以下に示す如くである。
【００３７】
カーボン核磁気共鳴スペクトル (δ ppm in DMSO-d6）：13.483(q), 21.958(t), 22.837(d), 26.611(d), 30.713(d), 34.231(t), 37.017(t), 43.52(d), 48.740(d), 49.422(d), 51.156(q), 51.304(q), 117.732(t), 124.802(d), 130.046(d), 130.301(d), 130.597(d), 130.679(d), 130.827(d), 131.337(d), 132.217(d), 132.348(d), 133.589(d), 134.148(d), 171.181(s), 173.343(s)
【００３８】
プロトン核磁気共鳴スペクトル(δ ppm in DMSO-d6)：0.874(t,J=7.4Hz,3H), 1.378(m,2H), 1.723(m,3H), 2.055(dd,J=14.1,7.2Hz,2H), 2.451(m,1H), 2.962(m,3H), 3.551(s,3H), 3.606(s,3H), 5.097(d,J=10.5Hz,1H), 5.193(m,2H), 5.280(t,J=10.4Hz,1H), 5.446(dt,J=15.1,7.1Hz,1H), 5.694(dt,J=15.1,7.1Hz,1H), 5.833(dd,J=14.1,8.0Hz,1H), 6.053(dd,J=15.1,14.7Hz,1H), 6.136(dd,J=15.1,14.7Hz,1H), 6.265(m,2H), 6.570(dd,16.7,10.5Hz,1H).
【００３９】
EIマススペクトル：４１０（Ｍ+）
【００４０】
製造例２
【化１５】
0003886196.tif 000014
【００４１】
実施例１で得た化合物20mgを乾燥ピリジン5mlに溶解し、パラブロモベンゾイルクロライドを20mg加え、50℃で1時間攪拌後、反応液を氷水中に放置し、酢酸エチル80mlで分配抽出した。
酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下、溶媒を留去することにより得られた残留物を高速液体クロマトグラフィー＜カラム；YMCpack（SIL-5A）  20mmφX250mm、移動層；ジクロルメタン：メタノール（100：0〜98.5：1.5  30min linear）、流速10ml/min、検出；UV280nm＞に付した。
保持時間8〜11分に溶出したフラクションを減圧濃縮して式（ＩＩＩ）で表される白色無晶形粉末15mgを得た。
【００４２】
カーボン核磁気共鳴スペクトル (δ ppm in DMSO-d6):9.92(q), 11.42(q), 13.48(q), 18.34(q), 21.97(t), 22.62(d), 24.86(s), 26.19(d), 31.09(t), 31.15(d), 31.78(d), 34.23(t), 35.53(d), 36.94(t), 37.72(t), 37.87(d), 44.00(d), 49.90(d), 50.74(d), 54.86(d), 62.19(s), 69.91(t), 72.53(s), 72.78(t), 75.23(s), 118.03(t), 125.00(d), 127.42(d), 128.77(s), 130.19(d), 130.38(d), 130.51(d), 130.64(d), 130.92(d), 131.03(d), 131.93(d), 132.13(s), 132.24(d), 132.56(d), 133.46(d), 134.07(d), 135.05(d), 135.51(s), 141.26(s), 159.47(d), 164.70(s), 172.68(s), 174.00(s), 208.18(s)
【００４３】
プロトン核磁気共鳴スペクトル(δ ppm in DMSO-d6): 0.803(d,J=6.2Hz,3H), 0.875(t,J=7.3Hz,3H), 1.056(t,J=7Hz,1H), 1.082(s,3H), 1.330-1.410(m,3H), 1.503(dd,J=14.7,11.4Hz,1H), 1.665(dd,J=2.9,1.5Hz,3H), 1.715(dd,J=14.7,11.4Hz,1H), 1.795(m,1H), 1.904(m,1H), 2.014(dd,J=15.0,7.2Hz,1H), 2.058(dd,J=14.0,7.2Hz,2H), 2.264(d,J=19.1Hz,1H), 2.355(d,J=19.1Hz,1H), 2.609(dd,J=18.7,9.3Hz,1H), 2.905(dd,J=7.1,4.5Hz,2H), 3.054(m,3H), 3.669(d,J=8.1Hz,1H), 4.275(d,J=12.0Hz,1H), 4.690(d,J=12.2Hz,1H), 4.754(d,J=12.2Hz,1H), 5.110(m,2H), 5.179(dd,J=7.3,2.2Hz,1H), 5.278(t,J=10.0Hz,1H), 5.459(m,2H), 5.694(m,2H), 5.852(dd,J=14.3,8.4Hz,1H), 5.976(t,J=10.9Hz,1H), 6.275(m,2H), 6.597(m,2H), 7.485(s,1H), 7.752(d,J=8.8Hz,2H), 7.856(d,J=8.8Hz,2H)
【００４４】
positive FAB マススペクトル：８９４(M+H)+
【００４５】
製造例３
【化１６】
0003886196.tif 000015
【００４６】
リチウムアルミニウムハイドライド2mgをテトラヒドロフラン2.5mlに懸濁させ、テトラヒドロフラン2.5mlに溶解した実施例１の化合物15mgを氷冷下、窒素中加え、30分攪拌した後、4時間加熱還流を行った。反応液に飽和硫酸ナトリウム水溶液を加え、生成した沈殿をセライト濾過し、酢酸エチル50mlで分配抽出した。
酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下、溶媒を留去することにより得られた残留物をピリジン5mlに溶解し、無水酢酸3mlを加え、室温で3時間攪拌した後、反応液を氷水中に放置し、酢酸エチル80mlで分配抽出した。
酢酸エチル層を硫酸ナトリウムで乾燥、減圧下、溶媒を留去することにより得られた残留物を高速液体クロマトグラフィー＜カラム；YMCpack（ODS-5A）  20mmφX250mm、移動層；アセトニトリル：水（90：10）、流速12ml/min、検出；UV280nm＞に付した。
保持時間6〜7分に溶出したフラクションを減圧濃縮して式（ＩＶ）で表される白色無晶形粉末5mgを得た。
【００４７】
プロトン核磁気共鳴スペクトル(δ ppm in DMSO-d6): 0.99(d,J=12.82,3H), 1.11(d,J=12.82,1H), 1.17(s,3H), 1.62(m,3H), 1.64(m,1H), 2.01(m,1H), 2.06(s,3H), 2.07(m,1H), 2.086(s,3H), 2.088(s,3H), 2.17(s,3H), 2.27(s,1H), 2.49(dd,J=17.6,2.2Hz,1H), 2.54(m,1H), 2.67(d,J=17.22Hz,1H), 3.07(br,1H), 4.01(d,J=11.72Hz,1H), 4.11(d,J=11.36Hz,1H), 4.45(d,J=12.85Hz,1H), 4.52(d,J=12.46Hz,1H), 4.95(br,1H), 5.51(d,J=1.46Hz,1H), 5.69(br,1H), 5.85(br.s,1H)
【００４８】
positive FAB マススペクトル：５３５(M+H)+
【００４９】
【発明の効果】
本発明の式（Ｉ）で表されるホルボールエステル誘導体若しくはその薬理学的に許容できる塩またはそれらの水和物は、優れたＴＮＦ産生抑制作用、、抗炎症作用、抗HIV作用、巨核球系細胞の分化促進作用、前立腺癌細胞の増殖抑制作用などを示す。本発明によりＴＮＦ産生抑制剤などとして優れた性質を有する新規化学物質を提供することができた。また、本願化合物からなる優れた医薬、免疫疾患の治療剤、抗HIV剤、血小板減少症の予防・治療剤、および抗癌剤を提供することができた。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１で得られた化合物の巨核球系細胞に対する作用を示す図である。
【図２】実施例１で得られた化合物のＨＩＶ−１感染細胞の増殖に対する作用を示す図である。
【図３】実施例１で得られた化合物のガン細胞に対する作用を示す図である。
【図４】実施例１で得られた化合物のカーボン−プロトン２次元核磁気共鳴スペクトルを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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