(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）デキストラン
（ｂ）一種またはそれ以上のアミノ酸
（ｃ）シュークロース
（ｄ）一種またはそれ以上の多価アルコール
（ｅ）尿素および／またはアリルウレア、アセトアミド、メチルカルバメートもしくはブチルカルバメートならびに
（ｆ）一種またはそれ以上の緩衝液
を含み動物起源のタンパク質が不含である弱毒生ウイルスワクチンの安定化剤。
【請求項２】
シュークロースが２ないし６％の割合で配合されていることを特徴とする請求項１記載の安定化剤。
【請求項３】
シュークロースが２．５％の割合で配合されていることを特徴とする請求項２記載の安定化剤。
【請求項４】
一種またはそれ以上の多価アルコールがソルビトールおよび／またはマンニトールである請求項１ないし３のいずれか一に記載の安定化剤。
【請求項５】
多価アルコールがソルビトールである請求項４記載の安定化剤。
【請求項６】
ソルビトールが２ないし６％の割合で配合されている請求項４および５のいずれかに記載の安定化剤。
【請求項７】
ソルビトールが５％の割合で配合されている請求項６記載の安定化剤。
【請求項８】
マンニトールが１ないし２．５％の割合で配合されている請求項４記載の安定化剤。
【請求項９】
マンニトールが２．５％の割合で配合されている請求項８記載の安定化剤。
【請求項１０】
一種またはそれ以上の緩衝液がリン酸緩衝液および／またはエチレンジアミン四酢酸である請求項１ないし９のいずれか一に記載の安定化剤。
【請求項１１】
緩衝液がリン酸緩衝液である請求項１０記載の安定化剤。
【請求項１２】
デキストランが１ないし４％の割合で配合されている請求項１ないし１１のいずれか一に記載の安定化剤。
【請求項１３】
デキストランが３％の割合で配合されている請求項１２記載の安定化剤。
【請求項１４】
尿素、および／またはアリルウレア、アセトアミド、メチルカルバメートもしくはブチルカルバメートが０．１２５ないし２％の割合で配合されている、請求項１記載の安定化剤。
【請求項１５】
尿素、および／またはアリルウレア、アセトアミド、メチルカルバメートもしくはブチルカルバメートが０．５％の割合で配合されている、請求項１４記載の安定化剤。
【請求項１６】
ｐＨが７に調整されている請求項１ないし１５の一に記載の安定化剤。
【請求項１７】
請求項１ないし１６のいずれか一に記載の安定化剤を含む、安定化された、弱毒生ウイルスワクチン。
【請求項１８】
少なくとも一種のヘルペス科ウイルスを含む請求項１７記載のワクチン。
【請求項１９】
ヘルペス科ウイルスに水痘ウイルス、サイトメガロウイルスおよび単純ヘルペスウイルスが含まれる請求項１８記載のワクチン。
【請求項２０】
ウイルスが水痘ウイルスである請求項１９記載のワクチン。
【請求項２１】
パラミクソウイルス科（モルビウイルス、ムンプス、１型、２型、３型または４型のパラインフルエンザ、あるいはニューモウイルス）、トガウイルス科（風疹）、およびインフルエンザ（Ａ型、Ｂ型またはＣ型）ウイルスから選択される少なくとも一種のウイルスを含む請求項１７記載のワクチン。
【請求項２２】
麻疹、風疹およびムンプスウイルスを含む請求項２１記載のワクチン。
【請求項２３】
請求項１ないし１６のいずれか一に記載の安定化剤を含む安定化組成物。
【請求項２４】
水痘ウイルスをさらに含む請求項２２記載のワクチン。
【請求項２５】
弱毒生ウイルスを含む安定化ワクチンを調製する方法であって、弱毒生ウイルスを請求項１の安定化剤の適量と接触させることを含む方法。
【請求項２６】
前記の接触が凍結乾燥前に行われる請求項２５記載の方法。
【請求項２７】
前記ウイルスが、ウイルスを収集する前に安定化剤と接触させる請求項２５記載の方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、一価または多価生ワクチンの安定化剤、これらの薬剤を含有する安定化ワクチン、および、該ワクチンを製造する方法に関する。
生ウイルス、特に、弱毒生ウイルスを含むワクチンは、それらが製造され保存される条件にきわめて感受性である。凍結乾燥の段階、保存の間および培養後にウイルスを収集する段階で、実質的なウイルス力価の損失が観察される。ウイルスル力価の免疫化効率に対する重要性を考慮すれば、ウイルス力価を最大限に保護するために、安定化剤を使用することが不可欠であることが判明した。安定化剤は、時々最初に保存されてから数年後であることもできる、ワクチンの効力がそれが使用される際に最大であることを確実にする目的で、それらの製造の異なる段階でワクチンに添加できる化学的および／または生物学的物質である。
多数の化合物が弱毒生ウイルスを含む異なるワクチンを安定化する能力について、試験されている。従来技術（たとえば、ＵＳ３７８３０９８、ＵＳ３９１５７９４およびＥＰ０２８５６３参照）において試験されている化合物は、そのうちの最初の一つはＳＰＧＡであり、主として、ウシまたはヒト血清アルブミン、多少が加水分解されるカゼイン、または、ゼラチン、適当な場合にはグルタミン酸のアルカリ金属塩、糖（グルコース、シュークロースまたはデキストラン）、および、一価金属または二価金属アルカリ金属リン酸塩、または、これらの混合物の一つを含む。ＥＰ０６５９０５には、一群の１１種のアミノ酸から選択される一つまたはそれ以上のアミノ酸、ラクトース、ソルビトールおよびリン酸緩衝液（ＰＢＳ）からなる、黄熱に対するワクチンのための安定化化合物が記載されている。
しかしながら、すべてのこれらの組成物は、重要な欠点を有する。まず第一に、これらは、生物学的に危険性の可能性があり、化学的に定義された成分を構成しない、動物またはヒト起源のタンパク質またはタンパク質加水分解物（アルブミンなど）を含む。さらには、現状の組成物は、弱毒生ワクチンに対し十分な安定性を提供しておらず、そのため該ワクチンの保存の可能性は限定され、それらが保存されまたは輸送される間に、ワクチンが高温に曝され、危険となる可能性がある。かくして、これらのワクチンの活性の損失は、予防接種を非効率とし、それゆえ、実際の感染の場合に防御することのない予防接種となる。加えて、公知の組成物の効力は、種々のウイルスを含む多価ワクチンの異なる価数の安定化が問題となる場合、さらに限定される。かくして、四価ワクチンＭＭＲＶ（麻疹／ムンプス／風疹／水痘）は、現在、４つの価に対する十分な安定剤のない多価ワクチンの一例である。
本発明の安定化剤は、上記の欠点を有さない。組成物、特に一種またはそれ以上の弱毒生ウイルスを含有するワクチン用のこれらの安定化剤は、それぞれ、アミノ酸、二糖類、多価アルコールおよび緩衝液（ただし、二糖類群から選択される一つの成分はシュークロースである）からなる群から選択される一つまたはそれ以上の成分を有してなる。本発明の安定化剤において、二糖類群から選択される成分（複数でも可）は、２ないし６％の割合で配合できる。有利には、二糖類から選択される成分（複数でも可）は、２．５％の割合で配合できる。
本発明の安定化剤の成分である多価アルコール群は、特に、ソルビトールおよびマンニトールを包含することができる。本発明の安定化剤は、ソルビトールおよびマンニトールを含むことができる。本発明の安定化剤がソルビトールを含む場合、それは好ましくは２ないし６％の割合で配合される。本発明の安定化剤がソルビトールを含む場合、有利にはそれは３ないし５％の割合で配合される。特に有利には、ソルビトールは、５％の割合で配合できる。本発明の安定化剤がマンニトールを含む場合、それは好ましくは１ないし２．５％の割合で配合される。本発明の安定化剤がマンニトールを含む場合、有利にはそれは１．５％の割合で配合される。
本発明の安定化剤の一成分である緩衝液群として、特に、リン酸緩衝液およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を挙げることができる。有利には、本発明の安定化剤は、リン酸緩衝液を含む。本発明の安定化剤は、加えてデキストランを含むことができる。本発明の安定化剤がデキストランを含む場合、それは好ましくは１ないし４％の割合で配合される。本発明の安定化剤がデキストランを含む場合、有利には、それは３％の割合で配合される。
本発明の安定化剤は、加えて、尿素、尿素誘導体、またはそれらの混合物を含むことができる。適用可能な尿素誘導体の例は、アリルウレア、アセトアミド、メチルカルバメートまたはブチルカルバメートである。本発明の安定化剤が尿素、尿素誘導体またはそれらの混合物を含む場合、それは、好ましくは０．１２５ないし２％の割合で配合される。本発明の安定化剤が尿素、尿素誘導体またはそれらの混合物を含む場合、それは、有利には０．５％の割合で配合される。
本発明の組成物のｐＨを、好ましくは、安定化すべきウィルス粒子に応じて調節する。ｐＨを７に調節するのが、特に有利である。
本発明の安定化剤は、多数の組成物、特に、基本的に一種のウイルス株または種を含む一価ワクチン、または、数種のウイルス株または種を含む多価ワクチンを安定化するのに用いることができる。本発明はまた、組成物、特に、上記した安定化剤を用いて安定化したワクチンに関する。
本発明にしたがって安定化された該ワクチンは、たとえば、ヘルペスウイルスファミリーの少なくとも一種のウイルスを含むことができる。特に、ヘルペスウィルスファミリーには、水痘ウイルス、サイトメガロウイルスおよび単純ヘルペスウイルスが含まれる。特に、水痘ウイルスは他のウイルスに比べて敏感で熱不安定である。それゆえ、本発明の安定化剤は、水痘ウイルスと同じくらい不安定であるウイルスの安定化が問題となる場合に、特に適切である。
本発明の安定化剤は、特に、パラミクソウイルス（麻疹関連のモルビウイルス、ムンプス、１型、２型、３型および４型のパラインフルエンザウイルス、および、ニューモウイルス）、トガウイルス（風疹）およびインフルエンザ（Ａ、ＢおよびＣ）ウイルスから選択できる他のウイルスに適用可能である。
上記したウイルスまたは他のウイルスから得られる混合物および多価ワクチンを構成する混合物は、有利には本発明の安定化剤を用いて安定化できる。言及され得る考えられる多価ワクチンは、麻疹／ムンプス／風疹ワクチンである。価数の組み合わせの関係において、本発明の安定化剤は、上記した有利性に加え、それぞれの価数を安定化できることでこれらの価数を組み合わせることを可能とする点で有利な特性を示す。それゆえ、異なる疾患に対する感染剤の組み合わせは、一価ワクチンの場合と対照的に、一回の予防的処置により数種の疾患に対して防御するので、経済的かつ実用的な有利性を示す。しかしながら、異なる感染剤の共存は、これらの薬剤間の適合性の本質的な問題を引き起こし、この問題は、効果的な同時多種予防接種を行うことを難しくしている。本発明の安定化剤は、これらの問題に対する解決策を提供する。四価の麻疹／ムンプス／風疹／水痘ワクチンの調製は、組み合わせの３つの価が熱不安定性を示すので、ワクチンの組み合わせのこれらの問題を説明する。本発明の安定化剤が用いられると、十分な感染能力が安定化され、四価の各々が維持される。
好ましくは、可能な場合には、最終ワクチンの安定性をさらに改良する目的で、ワクチンを凍結乾燥する。凍結乾燥された生ワクチンを調製する場合には、好ましくは、該ワクチンを適量の本発明の安定化剤と接触させる。ウイルスは、該ウイルスの収集の前、その間または後で本発明の安定化剤と接触させることができる。有利には、該ウイルスを収集する前に、ウイルスを本発明の安定化剤と接触させる。
本発明をさらに詳細に残りの記載で記述する。説明のつもりで、本発明者等は、本発明を実施する例として、安定化一価水痘ワクチンの製造および安定化多価麻疹／ムンプス／風疹／水痘ワクチンの製造を、安定性および組み合わせの問題が、これらの場合において特に著しいので、選択するものである。
実施例
実施例１：本発明にしたがって安定化された水痘ワクチンの製造
本発明にしたがって安定化されたワクチンを製造するのに用いた弱毒水痘株は、株ＯＫＡである。
安定化剤は、以下の割合で、ｐ．ｆ．ｉ（注射用の調製物）水中で混合される、以下の成分を用いて調製した：
−ソルビトール、              ５％
−マンニトール、              ２．５％
−シュークロース、            ５％
−デキストラン、              ３％
−アミノ酸混合物、
−尿素、                      ０．５％
−ＥＤＴＡ、                  ０．０５％
−グルタミン酸ナトリウム、    ０．０５％
安定化剤中での細胞崩壊（音波処理、せん断、高圧等）によるか、または安定化剤中で自然に、ウイルスを感染細胞から収集または遊離させる。このように、安定化されたウイルス懸濁液を上澄した後に得る。
試験サンプルを、弱毒により力価を調節し、ついで適当なサイクルを用いて凍結乾燥した後、小さなボトルにアリコートする。
得られたワクチンの安定性試験
試験すべき凍結乾燥調製物を再び水和し、力価測定する。サンプルの種々の希釈度で２５ｃｍ2皿において得られた細胞変性効果をカウントすることによる、プラーク−形成単位（ｐｆｕ）の数により活性を測定する。
用いる対照安定化剤は、公知の種類の、たとえば、米国特許第４１４７７７２号に記載されるものに対応する、伝統的な安定化剤である。
0004020431.tif 000002
上記の表中、Ｘは標準力価である。
0004020431.tif 000003
上記の表中に示される値は、３つのサンプルを平均して得た。
本発明の安定化剤は、ワクチンの異なる製造段階の間、ならびに、保存の間（この場合４種の異なる温度において試験する）、ウイルス力価を維持する。
実施例２：本発明にしたがって安定化された多価麻疹／ムンプス／風疹／水痘ワクチンの製造
低温において凍結保存されている濃縮された麻疹、ムンプス、風疹および水痘ウイルス生成物を解凍し、ついでただちに混合する。ついで、この混合物を上記の実施例１において例示したように本発明の安定化生成物を含む異なる試験サンプル間にアリコートする。このように以下の最終溶液割合を得る：麻疹：１．５容積；ムンプス：０．１１容積；風疹：１．０容積および水痘：２．５容積。実施例より示されるこれらの異なる割合は、濃縮されたウイルス生成物の力価に応じて変えることができ、限定されるものではない。
試験サンプルを小さなボトルにアリコートし、ついで、標準的なサイクルにしたがって凍結乾燥する。安定性試験をボトルを３７℃で７日間または２２℃で２１日間または＋４℃で３０ヶ月置いて行う。
0004020431.tif 000004
対応する一価ワクチンの場合に得られるものと有意に異なる損失は観察されない。