(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式
【化１】
0003909735.tif 000008
（ただし、式中のｎは０〜３の整数であり、Ｘは水素原子を示す）で表されるマルトオリゴ糖誘導体 、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩。
【請求項２】
式中のｎが０又は１であり、Ｘが水素原子である、請求項１記載のマルトオリゴ糖誘導体 、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩。
【請求項３】
下記一般式
【化２】
0003909735.tif 000009
（ただし、式中のｎは０〜３の整数であり、Ｘは水素原子を示す）で表されるマルトオリゴ糖誘導体 、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする、α−アミラーゼ阻害剤。
【請求項４】
式中のｎが０又は１であり、Ｘが水素原子である、請求項３記載のα−アミラーゼ阻害剤。
【請求項５】
下記一般式
【化３】
0003909735.tif 000010
（ただし、式中のｎは０〜３の整数であり、Ｘは水素原子を示す）で表されるマルトオリゴ糖誘導体 、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする過血糖症予防又は治療剤。
【請求項６】
式中のｎが０又は１であり、Ｘが水素原子である、請求項５記載の過血糖症予防又は治療剤。
【請求項７】
過血糖症が糖尿病である、請求項５又は６に記載の過血糖症予防又は治療剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、特定の構造を有するマルトオリゴ糖誘導体及び該誘導体の用途に関するものであり、さらに詳しくは、本発明は前記誘導体を有効成分として含有するα−アミラーゼ阻害剤、及び過血糖症、例えば糖尿病及びその合併症の疾患を予防又は治療するのに有用な医薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
哺乳動物が摂取した炭水化物は、口腔及び胃内で唾液α−アミラーゼによりある程度消化（水解）され、次いで、十二指腸及び空腸内で膵α−アミラーゼにより本格的に消化されてオリゴ糖や二糖類となり、これらが更にグルコアミラーゼ、マルターゼなどのグルコシド加水分解酵素により加水分解され、最終的にはグルコースなどの単糖類となり、腸管膜上の繊毛から吸収される。そして炭水化物の摂取後には、この吸収されたグルコースにより、一次的に血糖値が上昇するいわゆる過血糖症状が起こるが、この症状は、通常生体における恒常性維持システムによって、血糖値が一定の範囲に調整されることによって回復する。
【０００３】
ところが、食餌性過血糖症状が長時間持続したり、血糖値が異常に高値を示すなどの糖代謝異常となると、過血糖症と称される疾患となり、肥満症や糖尿病などの症例をもたらす。この肥満症は、過食による過血糖症状がインシュリンの多量の分泌を促進し、このために脂肪合成の増大及び脂肪分解の減少をもたらし、体内に脂肪が蓄積される結果発症する。一方、糖尿病は、過食による過血糖症状がインシュリンの多量の分泌を促進し、このためにインシュリンレセプターの感度低下や膵臓ランゲルハンス氏島β細胞疲弊をもたらし、発症する。また、肥満症や糖尿病は、高脂血症、高血圧、動脈硬化症、自律神経障害、白内障など多くの重い合併症を引き起こすことが知られている。
【０００４】
このような過血糖症の有力な治療薬として、消化酵素阻害剤、例えばボグリボースを含有させた「ベイスン」（武田薬品工業（株）製）、アカルボースを含有させた「グルコバイ」（バイエル薬品（株）製）などが実際の臨床で用いられている。しかしながら、両化合物とも強力にグルコシダーゼを阻害することから、腹部膨満、鼓腸、放屁増加、軟便、下痢、腹痛などの副作用があるという欠点を有している。また、本発明者らが既に提案しているマルトオリゴ糖誘導体（特開平９−２７８７８９号公報参照）は、そのアミラーゼ阻害活性の強さなどの点で必ずしも満足すべきものではない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、従来の過血糖症の治療及び予防剤が有する前記した欠点がなく、ヒトα−アミラーゼを強く阻害して過血糖症、例えば糖尿病及びこれに起因する疾病などの予防及び治療に有効な成分、その有効成分を含有させたα−アミラーゼ阻害剤及び過血糖症の予防又は治療剤を提供することを目的としてなされたものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、オリゴ糖の還元末端グルコースをヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ−テトロールに変換し、ヘキサヒドロ−１Ｈ−アゼピン−３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ−テトロール残基から数えて３番目のグルコース残基の６位を疎水基に変換した、マルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいはその生理学的に許容される塩が、ヒト膵液由来のα−アミラーゼ（以下、ＨＰＡという）及びヒト唾液腺由来のα−アミラーゼ（以下、ＨＳＡという）を強く阻害し、グルコースの消化吸収を抑制・遅延させること、さらにこれらの化合物を過血糖症の治療及び予防剤として用いることにより、前記した従来技術の欠点を克服できることを見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、次の一般式（１）、
【０００７】
【化４】
0003909735.tif 000002
（ただし、式中のｎは０〜３の整数であり、Ｘは水素原子又は疎水基を示す）
【０００８】
で表されるマルトオリゴ糖誘導体、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩であり、また、前記一般式（１）のマルトオリゴ糖誘導体、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする、α−アミラーゼ阻害剤であり、さらにまた、前記一般式（１）のマルトオリゴ糖誘導体、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有することを特徴とする、過血糖症予防又は治療剤である。以下、本発明について詳細に説明する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明のマルトオリゴ糖誘導体（以下、本発明誘導体という）とは、前記一般式（１）で表され、式中のｎは０〜３の整数であり、またＸは水素原子又は疎水基であるものをいう。前記の疎水基としては、例えばフッ素、塩素、臭素、沃素などのハロゲン原子、あるいは置換若しくは非置換のアルキルオキシ基、置換若しくは非置換のアルキルチオ基、置換若しくは非置換のアルキルスルホニル基、置換若しくは非置換のアルキルカルバモイル基、アジド基などが好ましく挙げられる。
本発明誘導体をα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症予防又は治療剤などとする際には、後述するような理由から、前記一般式（１）中のｎが０〜３であり、Ｘが水素原子又はハロゲン原子であるもの又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩が好ましく、特にｎが０又は１であり、Ｘが水素原子であるものが好ましい。
本発明誘導体を合成するには、いかなる方法を用いてもよく、例えば下記一般式（２）
【００１０】
【化５】
0003909735.tif 000003
（ただし、式中のｎは０〜３の整数であり、Ｘは水素原子又は疎水基を示す）
【００１１】
で表される、６3−修飾マルトオリゴ糖を合成原料とすることにより、効率よ く合成することができる。前記一般式中のｎは、０〜３の整数であり、またＸは水素原子又疎水基である。疎水基としては、例えばフッ素、塩素、臭素、沃素などのハロゲン原子、あるいは置換若しくは非置換のアルキルオキシ基、置換若しくは非置換のアルキルチオ基、置換若しくは非置換のアルキルスルホニル基、置換若しくは非置換のアルキルカルバモイル基、アジド基などが好ましく挙げられる。この６3−修飾マルトオリゴ糖は、いかなる方法で製造してもよいが、例え ば「カルボハイドレート  リサーチ」〔（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）、第３０７巻、第６９〜７６頁、１９９８年〕に記載の方法で合成できる。
【００１２】
前記のようにして合成した６3−修飾マルトオリゴ糖を、例えばピリジン中ｐ −トルエンスルホニルクロライドを反応させ、必要により６1−トシル，６3−修飾マルトオリゴ糖を常法により分離し、これをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中アジ化ナトリウムを反応させ６1−アジド，６3−修飾マルトオリゴ糖が得られる。さらに、この６1−アジド，６3−修飾マルトオリゴ糖を常法により分離し、パラジウムカーボンの存在下、水素ガスを添加して還元し、前記した一般式（１）で表される本発明誘導体を得ることができる。
次いで、上記のようにして得られた本発明誘導体を、常法、例えば適宜の有機溶媒などを用いる析出法、イオン交換樹脂あるいはアミノプロピルシリカゲル、シリカゲル、活性炭などを用いるカラムクロマトグラフィー法などで精製し、精製された本発明誘導体を得ることができる。
【００１３】
上記のようにして得られた、前記一般式（１）で表される本発明誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩は、後述するごとく、ＨＰＡ及びＨＳＡに対して強い阻害作用を有する。本発明者らが既に提案している、式中のＸが無修飾（ＯＨ基）のマルトオリゴ糖誘導体（特開平９−２７８７８９号公報参照）と比べ、Ｘ位に水素原子又は疎水基を導入した本発明誘導体はアミラーゼ阻害活性が顕著に増加する。また、前記のマルトオリゴ糖誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩は、食後の過血糖抑制活性を有するものの、腸管内において分解されやすいため、その活性が大きく減弱化されるが、本発明誘導体はＸが修飾されていることにより、アミラーゼ阻害活性が増強し、腸管内において分解されにくく、その活性が腸管内において長時間持続するので、結果として少ない投与量で食後過血糖抑制効果を得ることができる。そして、前記一般式（１）で表される本発明誘導体は、アミラーゼとの親和の関係上、その式中のｎが０〜３であり、Ｘが水素原子又はハロゲン原子であるもの、又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩が好ましく、特にｎが０又は１であり、Ｘが水素原子であるものが好ましく用いられる。
【００１４】
このように、本発明誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩はα−アミラーゼに対して強い阻害作用を有するので、これを有効成分とすることにより、α−アミラーゼ阻害剤として使用することができる。またそのような阻害作用を有する本発明誘導体は、動物の炭水化物の代謝を抑制するため、血糖上昇を抑制し、過血糖症、例えば糖尿病、肥満症及びこれらに起因する高脂血症、脂肪肝、自律神経障害、動脈硬化症、白内障などの予防又は治療剤、特に糖尿病の予防又は治療剤として有効である。
【００１５】
本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤は、本発明誘導体、又はその水和物、また本発明誘導体を薬学的に許容できる酸もしくは塩基とで通常の方法により反応させて得られる任意の無毒性の塩としたものもまた用いることもできる。前記した酸としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などの無機酸、酢酸、リンゴ酸、クエン酸、アスコルビン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸などの有機酸が用いられ、また塩基としては、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウムなどが用いられる。
【００１６】
本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤は、本発明誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を、それら単一か若しくは必要により２種以上の本発明誘導体を組み合わせ、これを有効成分として含有させることにより得ることができる。また、本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤は、本発明誘導体、その水和物又は塩自体のみか、又はこれに、賦形剤、滑沢剤、希釈剤、安定剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、甘味剤、芳香剤、矯味剤、着色剤、保存剤、乳化剤、粘稠剤、基剤などの調合剤を併用し、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、座剤、注射剤、点滴剤その他の製剤の形とすることができる。これらの製剤の製造は常法により行われる。賦形剤としては、例えば通常用いられるバレイショデンプン、乳糖、結晶セルロース、マンニットなどが、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油などが、また甘味剤、芳香剤、矯味剤としては、例えば食塩、サッカリン、オレンジ油、クエン酸、メントール、リンゴ酸などが用いられる。
【００１７】
本発明のα−アミラーゼ阻害剤、過血糖症の予防又は治療剤、糖尿病の予防又は治療剤の投与量は、投与方法と症状の程度、患者の年齢、体重などにより異なるが、通常、成人１日当たり、本発明誘導体として１０ｍｇ〜３０００ｍｇ、好ましくは１００ｍｇ〜６００ｍｇの範囲が選ばれる。投与方法は、経口的又は非経口的のいずれの方法でもよいが、経口的に投与するのが有利である。また前記した用途のほかに、本発明誘導体は、それ自体又は前記した調合剤などを適宜組み合わせて、これを食品、例えばコーヒー、清涼飲料水、果汁、ジャム、ビスケット、その他の食品に添加されることにより、α−アミラーゼ阻害効果を有する健康保持用の食品とすることもできる。以下に参考例及び実施例を示し、本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は、これらの例によってなんら限定されるものではない。
【００１８】
【実施例】
参考例１〔Ｏ−（６−Ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅの製造〕
６3−デオキシマルトトリオース（１５ｇ，３１ｍｍｏｌ）をピリジン（４５ ０ｍｌ）に溶解し、そこにトシルクロライド（８．８ｇ，４６ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下３時間攪拌しながら反応を行った。反応終了後、蒸留水（７５ｍｌ）を加え反応を停止させた後、濃縮乾固を行い、残渣を少量の蒸留水に溶解し、この溶液をＯＤＳクロマトグラフィー（Ｈ2Ｏ→５０％ＣＨ3ＣＮ，ｇｒａｄｉｅｎｔ）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、無色の粉末（２．８ｇ，４．３ｍｍｏｌ，収率１４％）を得た。
【００１９】
ｍｐ１２５−１２７℃（ｄｅｃ．）、
［α］＋１２７゜（ｃ０．２５，Ｈ2Ｏ）、
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３３０，２９３０，１６５０，１６００，１３６０，ａｎｄ  １０５０、
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１．２９（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），２．４８（ｓ，３Ｈ，−ＳＯ2ＰｈＣＨ3），３．１２−４．０６（ｍ，Ｈ−２−６），４．５９（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，αＨ−１ａ），５．１２（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，βＨ−１ａ），５．２５ ａｎｄ ５．３４（ｄ，ｅａｃｈ １Ｈ，Ｊ＝３．１ ａｎｄ ３．９Ｈｚ，Ｈ−１ｂ−ｃ），７．５３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｈ−３ ａｎｄ Ｈ−５  ｏｆ  −ＳＯ2ＰｈＣＨ3），７．８３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−２ ａｎｄ Ｈ−６ ｏｆ −ＳＯ2ＰｈＣＨ3）、
13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１９．４４（−ＣＨ3），２３．６７（−ＳＯ2Ｐｈ ＣＨ3），９４．７２ ａｎｄ ９８．６９（Ｃ−１ａ），１０２．１７ ａｎｄ  １０３．１１（Ｃ−１ｂ−ｃ），１３０．５１ ａｎｄ １３３．０６（−ＳＯ2 ＰｈＣＨ3）、
ｔＲ（ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０，ｅｌｕｅｎｔ：８：２（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−Ｈ2Ｏ）：７．７ｍｉｎ．、
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ25Ｈ38Ｏ17Ｓ・１．３３Ｈ2Ｏ：Ｃ，４５．０ ４；Ｈ，６．１５．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４５．１５；Ｈ，５．９８．。
【００２０】
参考例２〔Ｏ−（６−Ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−ａｚｉｄｏ−６−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅの製造〕
参考例１で製造した、Ｏ−（６−Ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅ（２．２ｇ，３．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍｌ）に溶解し、そこに ＮａＮ3（１０ｍｏｌｅｑ．）を加え、８０℃で２時間攪拌しながら反応させた。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をＯＤＳクロマトグラフィー（５：９５（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−Ｈ2Ｏ）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い無色粉末（０．６６ｇ，１．３ｍｍｏｌ，収率３８％）を得た。
【００２１】
ｍｐ１３１−１３３℃（ｄｅｃ．）、
［α］＋１７４゜（ｃ０．２５，Ｈ2Ｏ）、
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３４０，２９３０，２１１０，１６５０，１３６０，ａｎｄ １０５０、
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１．２７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），３．１２−４．０１（ｍ，Ｈ−２−６），４．６７（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，αＨ−１ａ），５．２３（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，βＨ−１ａ），５．２９ ａｎｄ ５．４０（ｄ， ｅａｃｈ １Ｈ，Ｊ＝３．０ ａｎｄ ３．６Ｈｚ，Ｈ−１ｂ−ｃ）、
13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１９．３４（−ＣＨ3），５３．７３（−ＣＨ2Ｎ3），９４．７５ ａｎｄ ９８．６６（Ｃ−１ａ），１０２．２６ ａｎｄ １０２．７７（Ｃ−１ｂ−ｃ）、
ｔＲ（ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０，ｅｌｕｅｎｔ：８：２（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−Ｈ2Ｏ）：１２．８ ａｎｄ １４．４ｍｉｎ．、
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ18Ｈ31Ｎ3Ｏ14・Ｈ2Ｏ：Ｃ，４０．６８；Ｈ，６．２６；Ｎ，７．９１．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４０．９７；Ｈ，６．００；Ｎ，８．１２．。
【００２２】
実施例１〔（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−Ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−３，５，６−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−１Ｈ−ａｚｅｐｉｎｅ−４−ｙｌ Ｏ−（６−ｄｅｏｘ ｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（以下、ＤＯＧ２Ａｚという）の製造〕
参考例２で製造した、Ｏ−（６−Ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−ａｚｉｄｏ−６−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅ（０．５０ｇ，０．９７ｍｍｏｌ）を蒸留水（３５ｍｌ）に溶解し、そこに１０％Ｐｄ−Ｃ（０．２７ｇ）を加え、室温で１６時間攪拌しながら常圧下接触還元を行った。反応終了後、触媒をセライト濾過し、濃縮後凍結乾燥を行い無色粉末（０．４０ｇ，０．８５ｍｍｏｌ，収率８８％）を得た。
【００２３】
ｍｐ１３２−１３４℃（ｄｅｃ．）、
［α］＋１３３゜（ｃ０．２５，Ｈ2Ｏ）、
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３４０，２９３０，１６５０，１４２０， ａｎｄ １０５０、
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１．２８（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），２．８５−３．１２（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２ａ ａｎｄ Ｈ−７ａ），３．５５−４．１８（ｍ，Ｈ−２−６），５．１７ ａｎｄ ５．３１（ｄ， ｅａｃｈ １Ｈ，Ｊ＝３．９ ａｎｄ ３．０Ｈｚ，Ｈ−１ｂ−ｃ）、
13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１９．３４（−ＣＨ3），５１．７６ ａｎｄ ５２．０８（−ＣＨ2ＮＨＣＨ2−），１０１．７８ ａｎｄ １０２．６５（Ｃ−１ｂ−ｃ）、
ｔＲ（ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０，ｅｌｕｅｎｔ：６：４（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−ａｍｍｏｎｉｕｍ ｆｏｒｍａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ２５ｍＭ ｐＨ８．５）：１１．３ｍｉｎ．、
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ18Ｈ33ＮＯ13・０．５Ｈ2Ｏ：Ｃ，４５．００ ；Ｈ，７．１３；Ｎ，２．９２．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４４．９５；Ｈ，６．８１；Ｎ，３．００．。
【００２４】
参考例３〔Ｏ−（α−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−ａｚｉｄｏ−６−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅの製造〕
６3−デオキシマルトテトラオース（１５ｇ，２３ｍｍｏｌ）をピリジン（４ ５０ｍｌ）に溶解し、そこにトシルクロライド（８．８ｇ，４６ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下３時間攪拌しながら反応を行った。反応終了後、蒸留水（７５ｍｌ）を加え反応を停止させた後、濃縮乾固を行い、残渣を少量の蒸留水に溶解し、この溶液をＯＤＳクロマトグラフィー（Ｈ2Ｏ→５０％ＣＨ3ＣＮ，ｇｒａｄｉｅｎｔ）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い、Ｏ−（α−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−Ｏ−ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｎｙｌ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅの無色の粉末（２．９ｇ，３．６ｍｍｏｌ，収率１６％）を得た。
【００２５】
次いで上記のトシル誘導体（２．９ｇ，３．６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４０ｍｌ）に溶解し、そこにＮａＮ3（１０ｍｏｌｅｑ．）を加え、８０℃で２時間攪拌 しながら反応させた。反応終了後、溶媒を減圧下留去し、残渣をＯＤＳクロマトグラフィー（５：９５（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−Ｈ2Ｏ）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍結乾燥を行い目的のＯ−（α−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−ａｚｉｄｏ−６−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅ無色粉末（２．０ｇ，３．０ｍｍｏｌ，収率８３％）を得た。
【００２６】
ｍｐ１５２−１５４℃（ｄｅｃ．）、
［α］＋１７９゜（ｃ０．２５，Ｈ2Ｏ）、
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３２０，２９４０，２１１０，１６５０，１３６０，ａｎｄ １０５０；1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１．３３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），３．２５−４．０１（ｍ，Ｈ−２−６），４．６６（ｄ，０．５Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，αＨ−１ａ），５．２１−５．４０（ｍ，３．５Ｈ，βＨ−１ａ ａｎｄ Ｈ−１ｂ−ｄ）、
13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１９．９７（−ＣＨ3），５３．８５（−ＣＨ2Ｎ3），９４．７７ ａｎｄ ９８．７１（Ｃ−１ａ），１０２．２６，１０２．３１  ａｎｄ １０２．６５（Ｃ−１ｂ−ｄ）、
ｔＲ（ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０，ｅｌｕｅｎｔ：６：４（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−Ｈ2Ｏ）：５．６ｍｉｎ．、
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ24Ｈ41Ｎ3Ｏ19・１．３３Ｈ2Ｏ：Ｃ，４１．２０；Ｈ，６．２９；Ｎ，６．０１．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４１．１４；Ｈ，６．１１；Ｎ，５．９２．。
【００２７】
実施例２〔（３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ，６Ｓ）−Ｈｅｘａｈｙｄｒｏ−３，５，６−ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ−１Ｈ−ａｚｅｐｉｎｅ−４−ｙｌ Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌ ｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（以下、ＧＤＯＧ２Ａｚという）の製造〕
参考例３で得たＯ−（α−Ｄ−Ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（６−ｄｅｏｘｙ−α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−Ｏ−（α−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−（１→４）−６−ａｚｉｄｏ−６−ｄｅｏｘｙ−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｅ（１５０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）を蒸留水（２５ｍｌ）に溶解し、そこに１０％Ｐｄ−Ｃ（３０ｍｇ）を加え、室温で１６時間攪拌しながら常圧下接触還元を行った。反応終了後、触媒をセライト濾過し、濾液をイオン交換樹脂（Ｄｏｗｅｘ１×４，ＯＨ-ｆｏ ｒｍ，Ｈ2Ｏ溶出）にて精製し、目的の化合物を含むフラクションを濃縮後、凍 結乾燥を行い目的の無色粉末（１２４ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ，収率８９％）を得た。
【００２８】
ｍｐ１４４−１４６℃（ｄｅｃ．）、
［α］＋１５４゜（ｃ０．２５，Ｈ2Ｏ）、
ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ-1：３３２０，２９１０，１５６０，１４２０， ａｎｄ １０４０、
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：１．３３（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−６ｃ），２．９０−３．１０（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２ａ ａｎｄ Ｈ−７ａ），３．３０−４．１８（ｍ），５．１７，５．３１， ａｎｄ ５．３９（ｄ， ｅａｃｈ １Ｈ，Ｊ＝３．９，４．２， ａｎｄ ３．９Ｈｚ，Ｈ−１ｂ−ｄ）、
13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）δ：２０．０７（−ＣＨ3），５１．６４ ａｎｄ ５１．８９（−ＣＨ2ＮＨＣＨ2−），１０１．７８，１０２．５３， ａｎｄ １０２．５３（Ｃ−１ｂ−ｄ）、
ｔＲ（ＴＳＫｇｅｌ Ａｍｉｄｅ−８０，ｅｌｕｅｎｔ：６：４（ｖ／ｖ）ＣＨ3ＣＮ−ａｍｍｏｎｉｕｍｆｏｒｍａｔｅ ｂｕｆｆｅｒ ２５ｍＭ ｐＨ８．５） ：１３．９ｍｉｎ．、
Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ24Ｈ43ＮＯ18・２Ｈ2Ｏ：Ｃ，４３．０５；Ｈ ，７．０７；Ｎ，２．０９．Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，４２．７１；Ｈ，６．７４；Ｎ，２．００．。
【００２９】
実施例３〔試験管内アミラ−ゼ活性阻害試験〕
（１）ヒトα−アミラーゼ液の調製
市販のＨＰＡ及びＨＳＡに精製水を加え、３５０ＩＵ／ｌの濃度に溶解してα−アミラーゼ液とした。なお、この市販のヒトα−アミラーゼは、「キャリブザイム・ＡＭＹ」（国際試薬（株）製）を使用した。また、α−アミラーゼの活性は、市販α−アミラーゼ測定試薬「ネオ・アミラーゼテスト第一」（第一化学薬品（株）製）の検量線に従った。
（２）阻害液の調製
実施例１により得られたＤＯＧ２Ａｚ、実施例２により得られたＧＤＯＧ２Ａｚ、及び前記した特開平９−２７８７８９号公報に記載の下記式（３）、
【００３０】
【化６】
0003909735.tif 000004
【００３１】
に示す比較例のＧ２Ａｚ（６3−位、非修飾のマルトオリゴ糖誘導体）は、最 終濃度が５ｍＭ〜０．０００１ｍＭとなるように蒸留水で調整した。
（３）阻害液のヒトα−アミラ−ゼ阻害活性（ＩＣ５０値）の測定
ＨＰＡ若しくはＨＳＡ液１００μｌに、蒸留水３．０ｍｌ、阻害液１．０ｍｌ及び「ネオアミラーゼテスト第一」（第一化学薬品（株）製）、ブルースターチ１錠を加えてミキサーで約１０秒間撹拌後、３７℃で３０分間加温した後、０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液１．０ｍｌを加えて撹拌を行い、反応を止め、遠心分離（１，５００Ｇ，５分）を行い、その上清について６２０ｎｍにおける吸光度を測定した。ブランクとして、阻害液の代わりに蒸留水を用いた。その結果を表１に示す。なお、ＩＣ５０値は、ＨＰＡ若しくはＨＳＡ液の活性を５０％阻害するのに必要な阻害物質の最終濃度（ｍＭ）を示す。
【００３２】
【表１】
0003909735.tif 000005
【００３３】
表１より、比較例に示した化合物に比し、本発明のマルトオリゴ糖誘導体が、ＨＰＡ及びＨＳＡに対して顕著な強い阻害作用を有することがわかる。
【００３４】
実施例４（α−アミラーゼ阻害剤の抗糖尿病作用）
（１）使用動物
市販の体重２０．５〜２６．０ｇの健常マウス（Ｃｒｊ：ＣＤ−１(ＩＣＲ)日本チャールス・リバー社製）
（２）実験方法
投与群には、あらかじめ２０時間絶食させたマウス各群５匹に、ＤＯＧ２Ａｚ、Ｇ２Ａｚ、及び糖質として、とうもろこし澱粉コーンスターチを滅菌蒸留水で液状にし、経口投与して強制摂取させた。投与群及び投与量を表２に示す。
【００３５】
【表２】
0003909735.tif 000006
【００３６】
そして、摂取前及び摂取３０分後のマウスの眼窩静脈叢より採血を行い、血中グルコース量を測定し、コーンスターチ摂取後の血糖値上昇に対する抑制効果、すなわち抗糖尿病作用を検討した。その結果を表３に示す。なお、血糖値上昇に対する抑制効果は、ｔ−検定により判定した。また血中グルコース濃度は、血糖値測定機「アントセンス」（バイエル・三共（株）製）を用いて測定した。
【００３７】
【表３】
0003909735.tif 000007
【００３８】
表３からわかるように、本発明誘導体であるＤＯＧ２Ａｚの投与群は、対照群に比して有意に血糖値の上昇を抑制するので、ＤＯＧ２Ａｚが、糖尿病の予防または治療剤として有効であることが分かる。また、本発明誘導体は、比較例に示した６3−位非修飾化合物Ｇ２Ａｚと比較すると、少ない投与量でＧ２Ａｚを越 える優れた活性を示していることが分る。
なお、投与後の各マウスの排便を観察したところ、下痢、軟便などの副作用は、観察されなかった。
【００３９】
実施例５（凍結乾燥粉末製剤）
実施例１と同様にして得たＤＯＧ２Ａｚ  ２４０ｇを１０００ｍｌの生理食塩水に溶解し、メンブランフィルターを用いて無菌的に濾過を行い、濾液を滅菌したガラス容器に１０ｍｌずつ充填し、これを密栓して凍結乾燥し、粉末状のα−アミラーゼ阻害剤とした。
【００４０】
実施例６（経口用錠剤）
先ず、下記（１）〜（４）に示す各成分を調製した。
（１）ＤＯＧ２Ａｚ  ６０ｇ
（２）マンニット  ２００ｇ
（３）バレイショデンプン  ４７ｇ
（４）ステアリン酸マグネシウム３ｇ
次いで、上記（１）と（２）を混合し、これに（３）を１０％デンプン糊として加え、粒状化し、これをＮｏ．６０メッシュ（Ｂ．Ｓ．）のふるいを通し、更にＮｏ．１６メッシュ（Ｂ．Ｓ．）のふるいで選別し、この粒子を（４）と混合した後、打錠機で直径１０ｍｍ、１錠当りの重量が５００ｍｇの錠剤とし、本発明の過血糖症若しくは糖尿病の予防・治療剤（経口用錠剤）とした。
【００４１】
実施例７（カプセル剤）
ＧＤＯＧ２Ａｚ５０ｇ、バレイショデンプン５０ｇ、乳糖５０ｇ及び結晶セルロース１０ｇをよく混和し、カプセルに充填し、１カプセル中に有効成分１００ｍｇを含有する、本発明の過血糖症若しくは糖尿病の予防・治療用のカプセル剤とした。
【００４２】
実施例８（内用液剤）
ＤＯＧ２Ａｚ１０ｇに、安息香酸（４５ｖ／ｖエタノール）１ｍｌ及び精製水を加えて全量を１００ｍｌとし、本発明の過血糖症若しくは糖尿病の予防・治療用の内用液剤とした。
【００４３】
実施例９（注射剤）
滅菌したＤＯＧ２Ａｚ５ｇを注射用蒸留水に溶解して全量を３００ｍｌとし、１アンプルに３．０ｍｌの割合で無菌的に封入し、本発明の過血糖症若しくは糖尿病予防・治療用の注射剤とした。
【００４４】
【発明の効果】
本発明の前記一般式（１）で表されるマルトオリゴ糖誘導体は、α−アミラーゼに対して強い阻害作用を有し、しかも下痢、軟便などの副作用もないので、本誘導体又はその水和物あるいは生理学的に許容される塩を有効成分として含有させれば、α−アミラーゼ阻害剤、又は過血糖症、例えば糖尿病、肥満症及びこれらに起因する高脂血症、脂肪肝、自律神経障害、動脈硬化症、白内障などの予防又は治療剤、特に糖尿病の予防又は治療剤として優れた薬効が得られる。