(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式の化合物、
0003927232.tif 000010
式中Ｒ1は水素、アルキル、アルコキシ、アルキルアミシ及びジアルキルアミンからなる群から選択され、Ｔは下記の群から選択され、
0003927232.tif 000011
式中、Ｒは−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＭｅ、−ＣＨ2ＯＨ、−ＣＨ2ＯＡｃ、または−ＣＨ3である。
【請求項２】
下記の化合物、
0003927232.tif 000012
式中、Ｒ1及びＴは請求項１に記載の基である。
【請求項３】
下記の化合物、
0003927232.tif 000013
式中、Ｒ1及びＴは請求項１に記載の基である。
【請求項４】
下記の化合物、
0003927232.tif 000014
式中、Ｒ1及びＴは請求項１に記載の基であり、Ｒ2は水素又はアルカノイルである。
【請求項５】
前記Ｒ2は水素又はアルカノイルであることを特徴とする請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
下記の化合物、
0003927232.tif 000015
式中、Ｒ1及びＴは請求項１に記載の基であり、Ｒ2は水素又はアルカノイルである。
【請求項７】
前記Ｒ2は水素又はアルカノイルであることを特徴とする請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４−キノン化合物。
【請求項９】
５，８−ジヒドロ−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオール化合物。
【請求項１０】
５，８−ジヒドロ−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオールジアセタート化合物。
【請求項１１】
２−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４キノン及び３−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４キノン化合物。
【請求項１２】
５，８−ジヒドロ−２−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４−キノン及び５，８−ジヒドロ−３−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４キノン化合物。
【請求項１３】
５，８−ジヒドロ−２−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオール及び５，８−ジヒドロ−３−メチル−６−「１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオール化合物。
【請求項１４】
５，８−ジヒドロ−２−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオールジアセタート及び５，８−ジヒドロ−３−メチル−６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオールジアセタート化合物。
【請求項１５】
４ａ、５、８、８ａ−テトラヒドロ−６−メチル−５−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−キノン化合物。
【請求項１６】
６−（４−メチルペント−３−エニル）−ナフト−１，４−キノン化合物。
【請求項１７】
５，８−ジヒドロ−６−（４−メチルペント−３−エニル）−ナフタレン−１，４−ジオール化合物。
【請求項１８】
５，８−ジヒドロ−６−（４−メチルペント−３−エニル）−ナフタレン−１，４−ジオールジアセタート化合物。
【請求項１９】
５，８−ジヒドロ−６−（３，４−エポキシ−４−メチルペンチル）−ナフタレン−１，４−ジオールジアセタート化合物。
【請求項２０】
６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−エポキシ−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１,４−ジオールジアセタート化合物。
【請求項２１】
６−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフタレン−１，４−ジオールジアセタート化合物。
【請求項２２】
２−メチル−５−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４−キノン及び３−メチル−５−［１４−メトキシ−１４−オキソ−drim−８（１２）−en−１１−イル−メチル］−ナフト−１，４−キノン化合物。
【発明の詳細な説明】
本出願は、新しい一連のテルペン−キノン等の一連の新規生成物及びそれを得るための方法の向上に関するものである。
アバロール（avarol）及びそのキノン類似物であるアバロン（avarone）は、ジシデアアバラ（Dysidea avara）という海綿動物から分離され、ある種の細胞毒性作用を有しているメロ（mero）−セスキテルペノイドであって、後になって発見又は調製されたのであるが、キノン部分及び／又はセスキテルペン部分の鎖に相違する様々な置換基を有する一連の類似物のモデルと考えることができる。二環式セルテルペン（serterpene）系を含有するこれらの化合物のうちの相当数は、約１マイクログラム／ミリリットルでＩＣ50の細胞毒性活性を有している。単環式テルペン基を有する他のセスキテルペン−キノンもまた同程度の活性を有している。
現在まで、分子中のキノン及びテルペン基の大きさ及びタイプに関してこれらの化合物の構造−活性度における関係を調査した研究は全く刊行されていない。
それ故、本出願においてはテルペン基を増加、減少、及び官能化すること並びにキノン核をナフトキノンにまで増加することによる効果を分析することを目的としている。
本発明の方法の説明を明確にするために、本出願中においてこれから説明する反応には化学式を併記し、その反応を本発明の一般的形態を表すものとする。本出願において目的とする分子は、Ｒ1がアルキル又はアルコキシ基であり、Ｔがアルキル基又はシクロアルキル基、好ましくはイソプレン、モノテルペン、セスキテルペンタイプ若しくはそれらのタイプの中間の大きさの基である、置換された又は未置換のＡタイプのナフトキノンをキノン系として含有する。
0003927232.tif 000002
同様に、本出願の目的にはＢ及びＣタイプのナフトキノン誘導体並びにＤ及びＥタイプの対応するジヒドロキシナフタレン類似物が含まれる。
これらの化合物の殆どは、触媒の存在下又は非存在下において、適宜置換されたｐ−ベンゾキノンと共役ジエン系を含む化合物とのディールス−アルダー縮合環化反応を基礎反応として用いて合成される。直接生じる付加環化生成物（Ｂ）
の更なる調製、平衡化、化学修飾により以下に示されるＥ、Ｃ，Ｄ、及びＡタイプの化合物を２つの異なる種類のジエン系置換によって続けて生成することが可能である。
第一のジエン系置換は以下に示す通りである。
0003927232.tif 000003
上述した第二のジエン系置換は次の通りである。
0003927232.tif 000004
付加環化に有用な出発化合物は、直鎖又は分枝アルカンの炭素鎖に沿った共役ジエン系を有しており；２，６−ジメチルオクタン、２，６，１０−トリメチルドデカン、２，６，１０，１４−テトラメチルヘキサンデカン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチルテトラコサン又はこれらに生物学的若しくは人工的に関連する他の全ての環式化合物である。
上記の一般的反応に関連する種類の化合物の化学名は以下の通りであるが、そのうち括弧内に示される数字及び言葉はある置換基が占めることの可能な位置及び上記の機能又は構造的修飾の可能性をそれぞれ示すものであり、Ｒ1及びＴに依存してサブタイプに包含されることを考慮されたい。
Ａタイプ化合物：Ｒ1＝水素５（６）−アルキル（アルケニル）−ナフト−１，４−キノン５（６）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフト−１，４−キノン５（６）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフト−１，４−キノンＲ1＝アルキル２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフト−１，４−キノンＲ1＝アルコキシ２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフト−１，４−アルコキシＲ1＝（ジ）アルキルアミン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−ナフト−１，４−キノン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフト−１，４−キノン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフト−１，４−キノンＢタイプ化合物：Ｒ1＝水素５（６）−アルキル（アルケニル）−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン５（６）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフタレン−１，４−ジオン５（６）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフタレン−１，４−ジオンＲ1＝アルキル２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオンＲ1＝アルコキシ２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオンＲ1＝（ジ）アルキルアミン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオン２（���）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−４ａ，５，８，８ａ−テトラヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオンＣタイプ化合物：Ｒ1＝水素５（６）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン５（６）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン５（６）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノンＲ1＝アルキル２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノンＲ1＝アルコキシ２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノンＲ1＝（ジ）アルキルアミン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフト−１，４−キノンＤタイプ化合物：Ｒ1＝水素５（６）−アルキル（アルケニル）−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
５（６）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
５（６）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｒ1＝アルキル２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−アルキル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｒ1＝アルコキシ２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｒ1＝（ジ）アルキルアミン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタ−ト（ジエステル）
２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｅタイプ化合物：Ｒ1＝水素５（６）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
５（６）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
５（６）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｒ1＝アルキル２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルキル−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｒ1＝アルコキシ２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−アルコキシ−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
Ｒ1＝（ジ）アルキルアミン２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−アルキル（アルケニル）−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロアルキル（シクロアルケニル）−アルキル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
２（３）−（ジ）アルキルアミン−５（６）（７）（８）−（ポリ）シクロ（ポリ）イソプレニル−５，８−ジヒドロ−ナフタレン−１，４−ジオール及びそのジアセタート（ジエステル）
このリストで、本発明の明細書で集められている化合物のタイプはより高度な正確さを以て特定されており、前述した説明、化学式、及び反応に従うタイプ及びサブタイプに適合する。
上述の反応及び属する化合物により研究室内で発展された特定の実際的な取り込みの例を測定することが可能であり、これから記述される具体的な化合物を得るために以下の通則が取られた。
例１  無水エーテル中のメチルミルセオコムナート（methyl mirceocomunate）又は化合物１（733ミリグラム又は2.32ミリモル）の溶液に、不活性雰囲気下でｐ−ベンゾキノン（251ミリグラム又は2.32ミリモル）のドライエーテル溶液及び触媒量のＢＦ3−エテラート（etherate）を撹拌しながら加えた。混合物を２４時間室温に保った。水を加え、中和するまで洗浄した。乾燥（Na2SO4）、ろ過、蒸留を行い、得られた茶色の半固形物をシリカゲルのクロマトグラフにかけ、最終的に6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフト-1,4-キノン又は化合物２（127ミリグラム（13％））及び5,8-ジヒドロ-6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフタレン-1,4-ジオール又は化合物３（560ミリグラム（57％））を得た。標準条件下における化合物３のアセチル化は、5,8-ジヒドロ-6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフタレン-1,4-ジオールジアセタートという名称の更なる化合物３ａを生じた。
0003927232.tif 000005
例２  メチルミルセオコムナート又は化合物１（450ミリグラム又は1.42ミリモル）
及び2-メチル-p-ベンゾキノン（175ミリグラム又は1.42ミリモル）から、同一の触媒の存在下、同一の条件の下で２８時間、及びクロマトグラフを行った後に、転位生成物４又は2(3)-メチル-6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフト-1,4-キノン（40ミリグラム（6.5％））を黄色のオイルとして、5,8-ジヒドロ-2(3)-メチル-6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフト-1,4-キノン又は化合物５（170ミリグラム）を赤みを帯びたオイルとして、更に5,8-ジヒドロ-2(3)-メチル-6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフタレン-1,4-ジオール又は化合物６（298ミリグラム（48％））を９７℃の融点を有する茶色の固体として得た。標準条件下における化合物６のアセチル化は、化合物６ａ又は5,8-ジヒドロ-2(3)-メチル-6-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフタレン-1,4-ジオールジアセタートを生じた。
0003927232.tif 000006
例３  メチルトランス−コムナート（comunate）又は反応化合物７（200ミリグラム又は0.63ミリモル）及びｐ−ベンゾキノン（68ミリグラム又は0.63ミリモル）から、例１と同一の触媒、条件、操作の下、クロマトグラフを行った後に、未反応の生成物の大部分を回収し、化合物８又は4a,5,8,8a-テトラヒドロ-6-メチル-5-[14-メトキシ-14-オキソ-drim-8(12)-en-11-イル-メチル]-ナフタレン-1,4-キノン（95ミリグラム（23％））を黄色のオイル状生成物として、及び化合物９ａを生成させる為にアセチル化された微量の化合物９を得た。
0003927232.tif 000007
例４  無水エーテル（150ミリリットル）中のミルセン（mircene）又は化合物１０（１グラム又は7.35ミリモル）及びｐ−ベンゾキノン（0.78グラム又は7.35ミリモル）から、少量のＢＦ3−エテラートの存在下において、反応を例１と同一の条件下で３６時間保ち、例１と同じ手順を用いて赤みを帯びた粘性のある残油を得、その残油からシリカゲルを用いたクロマトグラフにより化合物１１又は6-（4-メチルペント-3-エニル）-ナフト-1,4-キノン（150ミリグラム（8.5％））を黄褐色のオイル状生成物として、それに類似した組成及び外観の化合物１２又は5,8-ジヒドロ-6-（4-メチルペント-3-エニル）-ナフト-1,4-キノン（300ミリグラム（17％））、及び化合物１３又は5,8-ジヒドロ-6-（4-メチルペント-3-エニル）-ナフタレン-1,4-ジオール（825ミリグラム（46％））を１２０℃の融点を有する赤みがかった茶色の固体として分離した。標準条件下における化合物１３のアセチル化は、化合物１３ａ又は5,8-ジヒドロ-6-（4-メチルペント-3-エニル）-ナフタレン-1,4-ジオールジアセタートを精製後７５％の収率で生じた。次に化合物１３ａ（198ミリグラム又は0.6ミリモル）をジクロロメタン（50ミリリットル）に溶かし、メタクロロ過安息香酸（mcpba）（110ミリグラム又は0.6ミリモル）及び塩化ヒドロカルボナート（150ミリグラム又は２ミリモル）を加えた。混合物を乾燥雰囲気中に保ち３０分間撹拌した。有機相を過剰酸化剤が完全に還元されるまで水／Ｎａ2ＳＯ4溶液で洗うことにより反応を終了し、続いて中和するまで水で洗浄し、乾燥、ろ過、蒸留を行って、無色の油状残留物を得た。それをクロマトグラフにかけることにより、化合物１４又は5,8-ジヒドロ-6-（3,4-エポキシ-4-メチルペンチル）ナフタレン-1,4-ジオールジアセタート（120ミリグラム（58％））を得た。
0003927232.tif 000008
生物学的活性  得られたテルペン−キノンの細胞毒性活性を、Ｐ−３８８（ＤＢＡ／２マウスリンパ球系腫瘍の懸濁培養）、Ａ−５４９（ヒト肺カルチノーマの単層培養）、ＨＴ−１９（ヒト結腸カルチノーマの単層培養）及びＭＥＬ−２８（ヒト黒色腫の単層培養）の培養細胞に対して、ベルゲロン（Bergeron）等（1984）により記述された方法に適応させた形態を用いた簡単なスクリーニング手順により測定した。本願中に述べた代表的な化合物に対して観察されたＩＣ50値（ミクロＭ）を以下の表にまとめ、比較の対象としてアバロンの値も示す。
0003927232.tif 000009
Ｐ−３８８細胞を、示された薬物濃度を有する１ミリリットルのＭＥＭ５ＦＣＳ量で、１つのウェルに対して１×１００００の数の細胞を１６ミリメートルのウェルに植えつけた。それとは別に、細胞が対数増殖段階に保たれていることを確実なものとするために、増殖に対するコントロールとして薬物を含まないバッチを培養した。全ての測定は二重にして行った。３７℃、１０％ＣＯ2、９８％湿潤雰囲気下で３日の培養の後、およそのＩＣ50値を薬物ウェルでの増殖とコントロールウェルにおける増殖とを比較することにより測定した。
Ａ−５４９、ＨＴ−２９及びＭＥＬ−２８細胞は、示された薬物濃度を有する１ミリリットルのＭＥＭ１０ＦＣＳ量で、１つのウェルに対して２×１００００の数の細胞を１６ミリメートルのウェルに植えつけた。それとは別に、細胞が対数増殖段階に保たれていることを確実なものとするために、増殖に対するコントロールとして薬物を含まないバッチを培養した。全ての測定は二重にして行った。３７℃、１０％ＣＯ2、９８％湿潤雰囲気下で３日の培養の後、ウェルを０．１％のクリスタルバイオレットで染色した。およそのＩＣ50値を薬物ウェルでの増殖とコントロールウェルにおける増殖とを比較することにより測定した。本出願において指摘した発明方法及び生成物の獲得を十分に記述した故に、他に言及するべきことは、この後に特許請求される特徴のいかなる実質的変更に関与することなく上記の方法を部分的に変更することが可能であるということのみである。