(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
海藻抽出物、カミツレ抽出物、ムクロジ抽出物及びタマサキツヅラフジ抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種と、ユッカ抽出物を含有する細胞賦活剤。
【請求項２】
海藻抽出物が、褐藻類の全藻の水抽出物である請求項１記載の細胞賦活剤。
【請求項３】
カミツレ抽出物が、カミツレの花の水抽出物である請求項１又は２記載の細胞賦活剤。
【請求項４】
ムクロジ抽出物が、ムクロジ（Sapindus mukurossi Gaertner, Sapindaceae）の果皮の水及び／又はエタノール抽出物である請求項１〜３のいずれか１項に記載の細胞賦活剤。
【請求項５】
タマサキツヅラフジ抽出物が、セファランチンを含む請求項１〜４のいずれか１項記載の細胞賦活剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項記載の細胞賦活剤を配合した皮膚外用剤。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項記載のの細胞賦活剤を配合した皮膚洗浄剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は細胞賦活剤に関し、さらに詳しくは、肌荒れの改善や皺形成等の老化防止、あるいは頭髪における抜け毛防止や養毛を促す細胞賦活剤及びこれを配合した皮膚外用剤、洗浄剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来より、肌荒れや皺の形成等の老化防止、あるいは頭髪における抜け毛防止や養毛の目的で様々な細胞賦活成分が利用されてきた。細胞賦活成分の利点は局所の細胞分裂を促すことであり、これによって新陳代謝が高まり、皮膚や頭髪が健常な状態に改善される。
詳細には、皮膚においては表皮の角質細胞や線維芽細胞が活性化され、古い角質が剥がれ落ちると同時に、肌の弾力を司るコラーゲン等の産生が増加するため、肌はみずみずしくハリのある状態となる。一方、頭髪においては発毛を司る毛母細胞や毛乳頭細胞が活性化され、抜けにくいコシのある毛髪が成長する。
このような効果を示す細胞賦活成分としては、数多くの化合物や天然物が知られており、近年では安全性への配慮から植物抽出物が利用される傾向にある。しかしながら、これらの細胞賦活成分の賦活効果は比較的緩和であり、肌荒れの改善の皺形成等の老化防止、あるいは頭髪における抜け毛防止や養毛を促すことを目的とした場合には未だ充分な効果が得られていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、安全性が高く、且つ優れた細胞賦活活性を示す細胞賦活剤を提供することである。さらに、そのような細胞賦活剤を含み、肌荒れの改善や頭髪における抜け毛防止等に有効な皮膚外用剤及び皮膚洗浄剤を提供することである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意検討した結果、海藻抽出物、カミツレ抽出物、ムクロジ抽出物及びタマサキツヅラフジ抽出物からなる群から選ばれる少なくとも１種と、ユッカ抽出物とを併用することにより、優れた細胞賦活効果を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
従って本発明は、海藻抽出物、カミツレ抽出物、ムクロジ抽出物及びタマサキツヅラフジ抽出物から成る群から選ばれる植物抽出物の少なくとも１種と、ユッカ抽出物を含有する細胞賦活剤、及びこれを配合した皮膚外用剤、皮膚洗浄剤に関する。
これらの植物抽出物は極めて毒性の低いものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳細に説明する。
まず本発明で使用する各植物抽出物について述べる。
＜ユッカ抽出物＞
原料のユッカ（Yucca)としては、ユッカ属植物の殆どが使用可能であるが、入手が比較的容易で原料として適当なものは、Yucca arizonica, Yucca brevifolia, Yucca schidigera, Yucca elata, Yucca intermdia, Yucca recurvifolia Salisb, Yucca smalliana Fernald, Yucca aloifolia Linn, Yucca gloriosa Linn, Yucca mohavensis, Yucca peninsularis, Yucca schottii, Yucca whipplei等である。また、これらの１種を用いてもよいし、２種以上を用いてもよい。
【０００６】
ユッカは地下部、地上部（種子を含む）とも抽出原料として使用することができる。原料は適宜適当な大きさに粉砕してから、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合物で抽出処理する。抽出用の親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の低級アルコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール、アセトン等が好ましい。抽出方法は特に制限が無く、一般には常温ないし沸点付近の温度に維持した溶媒中に原料を浸漬しておけばよい。溶剤抽出によらず、ステロイドサポニン含有エキスを得る方法として、新鮮な植物体を原料にして搾汁する方法もある。また、所定の抽出溶媒にて抽出して得た抽出液をそのまま用いる以外に、この抽出液を濃縮してもよいし、乾燥させて固形物（粉末状又は顆粒状）にしてもよい。更に、イオン交換樹脂を充填したカラムにより、水、親水性有機溶媒あるいはこれらの混液を用いて分画を行い、サポニン、フラボノイド、レスベラトロールの１種又は２種以上を主成分とする抽出物を用いてもよい。
本抽出物としては通常食品等に使用されているものが使用でき、それらは市場で一般に入手することができる。本発明においては、そのような市販品を使用することができる。
【０００７】
＜海藻抽出物＞
褐藻類（Phaeophyta, Laminaria digitata等）、紅藻類（Rhodophyta, Ceramium等）及び緑藻類（Chlorophyta)の全藻、めかぶ（胞子葉又は成実葉）を原料とする。
原料は適宜適当な大きさに粉砕してから、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合物で抽出処理する。抽出用の親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の低級アルコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール等が好ましい。抽出方法は特に制限が無く、一般には常温ないし沸点付近の温度に維持した溶媒中に原料を浸漬しておけばよい。更に、所定の抽出溶媒にて抽出して得た抽出液をそのまま用いる以外に、この抽出液を濃縮してもよいし、乾燥させて固形物（粉末状又は顆粒状）にしてもよい。褐藻類（Phaeophyta, Laminaria digitata等）の全藻の水抽出物を好ましく使用することができる。
【０００８】
＜カミツレ（カモミラ）抽出物＞
カミツレ（Matricaria chamomilla Linne, Compositae)の花を原料とする。
原料は適宜適当な大きさに粉砕してから、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合物で抽出処理する。抽出用の親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の低級アルコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール等が好ましい。抽出方法は特に制限が無く、一般には常温ないし沸点付近の温度に維持した溶媒中に原料を浸漬しておけばよい。更に、所定の抽出溶媒にて抽出して得た抽出液をそのまま用いる以外に、この抽出液を濃縮してもよいし、乾燥させて固形物（粉末状又は顆粒状）にしてもよい。中でもカミツレの花の水抽出物を好ましく使用することができる。
【０００９】
＜ムクロジ抽出物＞
ムクロジ（Sapindus mukurossi Gaertner, Sapindaceae）の果皮を原料とする。
原料は適宜適当な大きさに粉砕してから、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合物で抽出処理する。抽出用の親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等の低級アルコール、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール等が適当である。特に水、エタノール、及び水とエタノールの任意の割り合いの混液を好ましく使用することができる。抽出方法は特に制限が無く、一般には常温ないし沸点付近の温度に維持した溶媒中に原料を浸漬しておけばよい。更に、所定の抽出溶媒にて抽出して得た抽出液をそのまま用いる以外に、この抽出液を濃縮してもよいし、乾燥させて固形物（粉末状又は顆粒状）にしてもよい。
上記した海藻抽出物、カミツレ抽出物及びムクロジ抽出物としては、通常化粧料に使用されているものが使用でき、それらは市場で一般に入手することができる。本発明においては、そのような市販品を使用することができる。
【００１０】
＜タマサキツヅラフジ抽出物＞
タマサキツヅラフジ（Stcphania cepharantha Hayata) の塊根を原料とする。原料は上記のカミツレやムクロジの抽出方法に準じて抽出し、抽出物を得ることができる。タマサキツヅラフジ抽出物としては、セファランチンを含むものが好ましく使用でき、セファランチンの精製画分を使用することができる。
タマサキツヅラフジより含有成分中のセファランチンを主たる抽出物とする場合、具体的に次の方法を用いることができる。
原料を適当な大きさに切り、４０℃で一昼夜乾燥した後の粗末とする。これをメタノールで４８時間浸漬し、得られた浸漬液を減圧濃縮して粘稠なエキスを製する。このエキスに希塩酸を加えて抽出し、抽出液をろ過した後、ろ液にアンモニア水を加えてpH９〜１０とし、ｎ−ヘキサンを加え、振り混ぜて放置する。放置後、ｎ−ヘキサン層を分取し、これを２Ｎ水酸化ナトリウム液で洗浄する。次いで、ｎ−ヘキサン層に希塩酸を加えてよく振り混ぜ、その後水層を分取する。この水層に攪拌しながら徐々に水酸化ナトリウム液を加え、pH９〜１０として放置する。放置後、エーテルを加えてよく振り混ぜる。エーテル層を分取し、水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで脱水する。このエーテル層を水浴上で蒸発乾固し、乾固物を得る。この乾固物は主にセファランチンを含有する。
本抽出物の場合も、通常育毛剤に使用されているものが使用でき、それらは市場で一般に入手することができる。
【００１１】
本発明の細胞賦活剤は、海藻抽出物、カミツレ抽出物、ムクロジ抽出物及びタマサキツヅラフジ抽出物からなる群から選ばれる植物抽出物の少なくとも１種と、ユッカ抽出物とを含有するものであり、個々の抽出物は１種又は２種以上を含有することができる。本発明で言う細胞賦活剤は、特に限定されるものではないが、外用による適用が好ましく、その形状は液状、固形状、半固形状である。また、本発明の細胞賦活剤を配合した製剤の用途は任意であり、医薬品、医薬部外品、化粧品、トイレタリー製品等に広く用いられる。例えば皮膚外用剤として化粧水、クリーム・乳液、パック、化粧油、軟膏、ジェル、防臭消臭剤、養毛トニック、ヘアミスト、ヘアジェル等が、皮膚洗浄剤としてヘアシャンプー、ヘアリンス、洗顔料、ボディソープ等が挙げられる。
【００１２】
本発明の細胞賦活剤並びにこれを配合した皮膚外用剤、皮膚洗浄剤には、目的に応じて一般に化粧品等に用いられる基剤成分並びに薬効成分を配合することができる。具体的には、鉱物油、動植物油、ワックス、脂肪酸、脂肪アルコール、エステル油、界面活性剤、湿潤剤、高分子化合物、動植物抽出物、アミノ酸類、溶剤、ビタミン類、消炎剤、防腐剤、紫外線吸収剤、金属イオン封鎖剤、酸化防止剤、pH調整剤、色素・顔料、香料などが挙げられ、本発明の効果を損なわない範囲で配合することができる。
本発明の皮膚外用剤、皮膚洗浄剤はその種類に応じて、常法に従って製造することができる。
なお、使用する各植物抽出物が、例えば濃縮液の形態又は粉末、顆粒といった固形状であると、皮膚外用剤や皮膚洗浄剤に配合するのにそのままの形状では扱い難い場合があるので、適宜溶剤を使って希釈あるいは溶解してから配合することもできる。
【００１３】
上記の各種添加物の具体例を以下に挙げる。
鉱物油
流動パラフィン、流動イソパラフィン等
動植物油
スクワラン、オリブ油、ツバキ油、コムギ胚芽油、ホホバ油、アボカド油、カロット油、シア脂、パーム油、硬化油、馬油、ラノリン類、卵黄油、チョウジ油、ローズヒップ油、ラベンダー油、ハッカ油、スペアミント油、ローズマリー油等
ワックス
マイクロクリスタリンワックス、固形パラフィン、ミツロウ等
脂肪酸
ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸等
【００１４】
脂肪アルコール
ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セタノール、セトステアリルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、オレイルアルコール、ヘキシルデカノール、ベヘニルアルコール、オクチルドデカノール、ラノリンアルコール等
エステル油
トリカブリル酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸セテル、トリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、オクタン酸イソセチル、イソノナン酸イソノニル、ジオクタン酸エチレングリコール、トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソセチル、パルミチン酸セチル、炭酸ジアルキル等
【００１５】
界面活性剤
ラウリル硫酸塩、アルキル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキル硫酸塩、テトラデセンスルホンラウリル硫酸塩、アルキル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキル硫酸塩、テトラデセンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルスルホコハク酸塩、ラウロイルサルコシン塩、アルキルメチル−β−アラニン塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸塩、脂肪酸石けん、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、ラウリン酸ジエタノールアミド、ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド、アルキルジメチルアミンオキシド、アルキルメチルタウリン塩、アルキルアミノプロピオン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテルカルボン酸塩、アルキルリン酸塩、アルキルグルコシド、ポリエーテル変性シリコン等
塩化アルキルトリメチルアンモニウム、臭化アルキルトリメチルアンモニウム、アミドアミン、塩化ジアルキルジメチルアンモニウム
アルキルジメチル酢酸ベタイン、アルキルアミドプロピルベタイン、アルキルカルボキシメチルヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン
レシチン（大豆又は卵黄）誘導体、プロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテルリン酸・リン酸塩
【００１６】
＜湿潤剤＞
プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、イソプレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビット、マルチトール、トレハロース、キシリット等
＜高分子化合物＞
メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カチオン化セルロース、カチオン化グァガム、ヒアルロン酸ナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、キサンタンガム、カラギーナン等
＜アミノ酸類＞
Ｌ−アラニン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン、Ｌ−システイン、Ｌ−セリン、Ｌ−チロシン、Ｌ−プロリン、ピロリドンカルボン酸塩、グリシン等
＜溶剤＞
精製水、常水、エタノール、イソプロパノール、ベンジルアルコール等
【００１７】
＜消炎剤＞
グリチルリチン酸、グリチルリチン酸ジカリウム、グリチルリチン酸モノアンモニウム、グリチルレチン酸、グリチルレチン酸ステアリル、グアイアズレン、グアイアズレンスルホン酸ナトリウム、アラントイン、ε−アミノカプロン酸等
＜防腐剤＞
メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、イソブチルパラベン、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、安息香酸、安息香酸ナトリウム、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、ウンデシレン酸、ピオニン、１−メントール、ｄ−カンフル等
【００１８】
＜紫外線吸収剤＞
パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメチルアミノ安息香酸２−エチルヘキシル、オキシベンゾン、ジヒドロキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム、ヒドロキシメトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム、サリチル酸オクチル等
＜金属イオン封鎖剤＞
エデト酸、エデト酸塩、エチレンジアミンヒドロキシエチル三酢酸三ナトリウム、ジエチレントリアミン五酢酸、ジエチレントリアミン五酢酸五ナトリウム、エチレンジアミンテトラキス（２−ヒドロキシイソプロピル）ジオレイン酸塩、ヒドロキシエタンジスルホン酸、ヒドロキシエタンジスルホン酸四ナトリウム、フィチン酸等
＜酸化防止剤＞
ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、エリソルビン酸、没食子酸プロピル、没食子酸オクチル、ｄ−δ−トコフェロール等
【００１９】
本発明の細胞賦活剤において、海藻抽出物、カミツレ抽出物、ムクロジ抽出物及びタマサキツヅラフジ抽出物からなる群から選ばれる植物抽出物の少なくとも１種（Ａ）と、ユッカ抽出物（Ｂ）との配合比率（Ａ：Ｂ）は重量で、９：１〜１：９が適当であって、好ましくは３：７〜８：２である。ユッカ抽出物の割合が９：１よりも小さくなると殆ど細胞賦活活性がみられなくなり、１：９より大きい場合もまた細胞賦活活性が乏しくなる。
また、本発明の細胞賦活剤の皮膚外用剤、皮膚洗浄剤への配合量は、皮膚外用剤あるいは皮膚洗浄剤の全重量に基づいて0.０１重量％（以下、％）〜５０％が好ましく、更に好ましくは0.１〜２０％である。0.０１％未満では細胞賦活活性に乏しく、また５０％を越えるとコスト的に不利である。
【００２０】
【実施例】
次に実施例により本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明はこれによって限定されるものではない。
以下の抽出物を用いて、各実施例及び比較例の細胞賦活剤を調製した。なお、細胞賦活剤を組成する抽出物に従って各例に略号を付す。
実施例１：タマサキツヅラフジ抽出物（セファランチン，丸善製薬（株）製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン８０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［T+Y1]
実施例２：カミツレ抽出物（カミツレ抽出液Ｗ，丸善製薬（株）製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン８０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［K+Y1]
実施例３：ムクロジ抽出物（ムクロジエキスパウダー，丸善製薬（株）製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン８０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［M+Y1]
実施例４：海藻抽出物（Phycostimulant ARL：Phyco ARL EDTA，codif 社製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン８０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物，略号［S1+Y1]
【００２１】
実施例５：海藻抽出物（Concentre phycostimulant：C.Phyco ，codif 社製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン８０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［S2+Y1]
実施例６：ムクロジ抽出物（ムクロジエキスパウダー，丸善製薬（株）製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン５０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［M+Y2]
実施例７：カミツレ抽出物（カミツレ抽出液Ｗ，丸善製薬（株）製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン５０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［K+Y2]
実施例８：海藻抽出物（Phycostimulant ARL：Phyco ARL EDTA，codif 社製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン５０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［S1+Y2]
実施例９：海藻抽出物（Concentre phycostimulant：C.Phyco ，codif 社製）とユッカ抽出物（ユッカサラサポニン５０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）の等濃度（w/v%) 等容量混合物、略号［S2+Y2]
【００２２】
比較例１：タマサキツヅラフジ抽出物（セファランチン，丸善製薬（株）製）、略号［T]
比較例２：カミツレ抽出物（カミツレ抽出液Ｗ，丸善製薬（株）製）、略号［K]
比較例３：ユッカ抽出物（ユッカサラサポニン８０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）、略号［Y1]
比較例４：ユッカ抽出物（ユッカサラサポニン５０−Ｍ，ミツバ貿易（株）製）、略号［Y2]
比較例５：ムクロジ抽出物（ムクロジエキスパウダー，丸善製薬（株）製）、略号［M]
比較例６：海藻抽出物（Phycostimulant ARL：Phyco ARL EDTA, codif 社製）、略号［S1]
比較例７：海藻抽出物（Concentre phycostimulant：C.Phyco, codif社製）、略号［S2]
【００２３】
細胞賦活活性の試験
上記実施例及び比較例の細胞賦活剤を使用して、２種の細胞賦活活性試験を実施した。その手法及び試験結果を以下に示す。
（１）正常ヒト皮膚線維芽細胞（以下、ＮＢ１ＲＧＢ）における細胞賦活活性の試験
ＮＢ１ＲＧＢ（理化学研究所より購入）を予め10％ＦＢＳ加ＲＩＴＣ80-7培地にて５％ＣＯ2 、37℃の条件下で６日間培養した。この培養細胞は、その後ＰＢＳ（−）で洗浄し、0.02％ＥＤＴＡ二ナトリウム加 0.25 ％トリプシン処理にて細胞を剥がし、５％ＦＢＳ加ＲＩＴＣ80-7培地で５×104 細胞／ml細胞浮遊液に調製した。これを96穴マイクロプレートに0.2 mlずつ分注し、
同培養条件下で前培養（24時間）を行った。
各試料はそれぞれの溶解性に応じて、超純水，ＰＢＳ（−）又はジメチルスルフォキシド（和光純薬工業（株）より購入）を溶剤として溶解し、最終濃度が10，20，40，80 ppmとなるように試料５μl ずつを添加して48時間培養した。なお、バックグラウンドは各々に用いた溶剤のみを５μl 添加した。
【００２４】
（２）正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞（以下、ＮＨＥＫ（Ｆ））における細胞賦活活性の試験
ＮＨＥＫ（Ｆ）（倉敷紡績（株）より購入）を予め無血清培養基質：ＨｕＭｅｄｉａ- ＫＧ2 （倉敷紡績（株）より購入）にて５％ＣＯ2 、37℃の条件下で６日間培養した。この培養細胞は、その後ＰＢＳ（−）で洗浄し、0.02％ＥＤＴＡ二ナトリウム加 0.25 ％トリプシン処理にて細胞を剥がし、同培養基質で５×104 細胞／ml細胞浮遊液に調製した。これを96穴マイクロプレートに0.2 mlずつ分注し、同培養条件下で前培養（24時間）を行った。
各試料はそれぞれの溶解性に応じて、超純水，ＰＢＳ（−）又はジメチルスルフォキシド（和光純薬工業（株）より購入）を溶剤として溶解し、最終濃度が10，20，40，80 ppmとなるように試料５μl ずつを添加して48時間培養した。なお、バックグラウンドは各々に用いた溶剤のみを５μl 添加した。
【００２５】
上記（１）、（２）の細胞賦活活性は、テトラカラーワン（生化学工業（株）より購入）を添加し、２時間後に分光光度計を用いて波長 450 nm 及び 620 nm における吸光度を測定し、450 nmの吸光度から620 nmの吸光度を差し引いた値：Δabs で比較した。Δabs が大きいほど細胞賦活活性が高いことを意味する。本試験においては同濃度において個々の抽出物のΔabs よりもそれらの混合物のΔabs の方が高い場合に優れた細胞賦活活性があると判断した。
以下、表１及び２に試験結果（Δabs 値）を纏める。
【００２６】
【表１】
（１）ＮＢ１ＲＧＢにおける細胞賦活活性
0003904336.tif 000002
【００２７】
【表２】
（２）ＮＨＥＫ（Ｆ）における細胞賦活活性
0003904336.tif 000003
【００２８】
上記表の結果から明らかなように、実施例の細胞賦活剤は、ＮＢ１ＲＧＢ及びＮＨＥＫ（Ｆ）において優れた細胞賦活活性を発揮した。各植物抽出物単独（比較例１〜７）による効果と比べて、実施例におけるユッカ抽出物との併用は相乗効果を発揮することが判る。
【００２９】
使用試験
（１）肌質・小ジワ改善効果（モニターテスト）
カミツレ抽出物とユッカ抽出物との組み合わせからなる細胞賦活剤を配合した化粧水（実施例１０）及び比較のための化粧水（比較例８及び９）を表３に示す組成（単位は重量部）にて調製し、以下の試験を実施した。
健常な成人女性（２５〜３５歳）１０名を被験者とし、各例の化粧水を顔面の皮膚に連日（朝夕使用）１ヶ月間使用した後、ａ）肌にハリを与える効果、ｂ）くすみ，しみの改善効果、ｃ）小ジワの改善効果を調査した。これらの効果は全て皮膚の状態を目視にて観察し、以下の判定基準に準じて評価した。各判定を下した人数を表４に纏める。
＜判定基準＞
Ａ：非常に効果があった。
Ｂ：効果があった。
Ｃ：変化がなかった。
Ｄ：少し悪くなった。
Ｅ：悪くなった。
【００３０】
【表３】
0003904336.tif 000004
上記１）〜６）を均一に混合溶解し化粧水とした。
【００３１】
【表４】
モニターテストの結果
0003904336.tif 000005
表中の数値は人数を表す。
上記の表から明らかなように、実施例１０の化粧水を使用すると、肌のハリが良くなり、くすみ・しみ及び小ジワが改善されることがわかる。なお、モニターテスト中に皮膚に異常が生じた被験者は１名もなかった。
【００３２】
（２）頭皮・頭髪の改善効果（モニターテスト）
タマサキツヅラフジ抽出物とユッカ抽出物との組み合わせからなる細胞賦活剤を配合したヘアトニック（実施例１１）及び比較のためのヘアトニック（比較例１０及び１１）を表５に示す組成（単位は重量部）にて調製し、以下の試験を実施した。
健常な成人男性（２５〜４５歳）１０名を被験者とし、各例のヘアトニックを頭皮に連日（朝夕使用）１ヶ月間使用した後、ａ）抜け毛の減少効果、ｂ）コシ・ツヤの改善効果、ｃ）フケ・痒みの軽減効果を調査した。これらの効果は全て以下の判定基準に準じて評価した。各判定を下した人数を表６に纏める。
＜評価基準＞
Ａ：非常に効果があった。
Ｂ：効果があった。
Ｃ：変化がなかった。
Ｄ：少し悪くなった。
Ｅ：悪くなった。
【００３３】
【表５】
0003904336.tif 000006
上記１）〜６）を均一に混合溶解しヘアトニックとした。
【００３４】
【表６】
モニターテストの結果
0003904336.tif 000007
表中の数値は人数を表す。
【００３５】
上記の表６から明らかなように、実施例１１のヘアトニックを使用すると、抜け毛が減少し、頭髪のコシ・ツヤが改善され、フケ・痒みが軽減されることがわかる。なお、モニターテスト中に頭皮・頭髪に異常が生じた被験者は１名もなかった。
【００３６】
実施例１２
化粧水の調製
以下の組成（単位：重量部）により化粧水を調製した。なお、精製水により全量１００とした。
１．ポリオキシエチレン(60)硬化ヒマシ油      ０．８
２．グリセリン                              ３．０
３．ジプロピレングリコール                  ２．０
４．エタノール                              ５．０
５．細胞賦活剤                              ０．１
( ムクロジ抽出物／ユッカ抽出物＝１／９)
６．メチルパラベン                          ０．２
７．精製水                                  残  部
製法：成分１〜７を均一に混合溶解して化粧水とする。
【００３７】
実施例１３
クリームの調製
以下の組成（単位：重量部）によりクリームを調製した。なお、精製水により全量１００とした。
１．ポリオキシエチレン(10)アルキルエーテルリン酸ナトリウム    ４．５
２．ポリオキシエチレン(3) アルキルエーテル                    ２．０
３．親油型モノステアリン酸グリセリン                          ２．０
４．セタノール                                                ２．０
５．スクワラン                                                ５．０
６．流動パラフィン                                          １０．０
７．1,3-ブチレングリコール                                    ５．０
８．加水分解大豆タンパク                                      ０．５
９．ヒアルロン酸ナトリウム液（１％）                          １．０
10．メチルパラベン                                            ０．２
11．プロピルパラベン                                          ０．１
12．細胞賦活剤                                                ０．０１
( 海藻抽出物／ユッカ抽出物＝７／３)
13．精製水                                                    残  部
製法：成分１〜７及び10，11を80℃にて加熱混合し、これに同温度に加熱した13を徐々に加えて乳化する。40℃まで冷却し、成分８、９及び12を加えて攪拌し、さらに室温付近まで冷却してクリームとする。
【００３８】
実施例１４
乳液の調製
以下の組成（単位：重量部）により乳液を調製した。なお、精製水により全量１００とした。
１．ポリオキシエチレン(20)ベヘニルエーテル            １．２
２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレン(60)ソルビット  １．２
３．親油型モノステアリン酸グリセリン                  １．０
４．セトステアリルアルコール                          ０．５
５．1,3-ブチレングリコール                            ６．０
６．流動パラフィン                                    ８．０
７．植物性スクワラン                                  ３．０
８．ミリスチン酸イソセチル                            ２．０
９．フェノキシエタノール                              ０．５
10．メチルパラベン                                    ０．３
11．プロピルパラベン                                  ０．１
12．カルボキシビニルポリマー                          ０．１
13．キサンタンガム（１％水溶液)                     １０．０
14．水酸化カリウム（10％水溶液）                      ０．４７
15．細胞賦活剤                                      ２０．０
( カミツレ抽出物／ユッカ抽出物＝２／８)
16．精製水                                            残  部
製法：成分１〜11を80℃にて均一に加熱混合し、同温度の成分16を徐々に加えて乳化する。これに成分12を加え混合した後、成分14を加えて均一にする。次いで50℃まで冷却し、成分13及び15を加え、室温付近まで冷却して乳液とする。
【００３９】
実施例１５
洗顔フォームの調製
以下の組成（単位：重量部）により洗顔フォームを調製した。なお、精製水により全量１００とした。
１．ミリスチン酸                                    ２０．０
２．パルミチン酸                                      ５．０
３．ラウリン酸ジエタノールアミド                      ３．５
４．ジステアリン酸ポリエチレングリコール(140)         １．０
５．ポリエチレングリコール４００                      ５．０
６．N-ラウロイルメチルタウリンナトリウム液            ８．０
７．グリセリン                                      ２０．０
８．ソルビット液                                      ３．０
９．エデト酸ニナトリウム                              ０．０５
10．ジブチルヒドロキシトルエン                        ０．０５
11．水酸化カリウム                                    ５．３
12．イソプロピルメチルフェノール                      ０．２
13．香料                                              ０．１
14．細胞賦活剤                                        １．０
( 海藻抽出物／ユッカ抽出物＝９／１)
15．精製水                                            残  部
製法：成分１〜10及び12を80℃にて均一に加熱混合し、これに成分11を成分15に溶解した液を徐々に加える。十分攪拌した後45℃まで冷却し、成分13及び14を加え、さらに室温付近まで冷却して洗顔フォームとする。
【００４０】
実施例１６
ヘアシャンプーの調製
以下の組成（単位：重量部）によりヘアシャンプーを調製した。なお、精製水により全量１００とした。
１．ポリオキシエチレン(3) ラウリルエーテル硫酸ナトリウム  ２０．０
２．ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン液                １０．０
３．ラウリン酸ジエタノールアミド                          ３．５
４．ジステアリン酸エチレングリコール                      １．０
５．ラウロイルサルコシンナトリウム液                      ８．０
６．ホホバ油                                              ０．２
７．グリセリン                                            １．０
８．メチルパラベン                                        ０．２
９．エデト酸ニナトリウム                                  ０．１
10．酢酸トコフェロール                                    ０．０５
11．クエン酸                                              適  量
12．カチオン化セルロース（１％水溶液）                  ２０．０
13．香料                                                  ０．２
14．細胞賦活剤                                            ０．５
( ムクロジ抽出物／ユッカ抽出物＝５／５)
15．精製水                                                残  部
製法：成分１〜10を75℃にて均一に混合し、これに同温度に加熱した成分15を徐々に加える。次いで成分11及び12を加え均一に混合した後、50℃まで冷却し成分13及び14を加え、さらに室温付近まで冷却してシャンプーとする。
【００４１】
実施例１７
育毛剤の調製
以下の組成（単位：重量部）により育毛剤を調製した。なお、精製水により全量１００とした。
１．ポリオキシエチレン(60)硬化ヒマシ油                  ０．３
２．プロピレングリコール                                ３．０
３．グリチルレチン酸                                    ０．２
４．パントテニルアルコール                              ０．５
５．ニンジン抽出液                                      ２．０
６．ショウキョウチンキ                                  ０．５
７．酢酸トコフェロール                                  ０．１
８．エタノール                                        ３０．０
９．細胞賦活剤                                        ５０．０
( タマサキツヅラフジ抽出物／ユッカ抽出物＝１／９)
10．メチルパラベン                                      ０．２
11．精製水                                              残  部
製法：成分１〜11を均一に混合溶解して育毛剤とする。
【００４２】
実施例１２〜１７の皮膚外用剤・洗浄剤は、いずれも通常の使用条件下で、肌荒れの改善やシワ形成等の老化防止、あるいは頭髪における抜け毛防止や養毛を促す効果に優れていた。
【００４３】
【発明の効果】
本発明の細胞賦活剤の有効成分は、植物由来で安全性が高く、ヒト由来の線維芽細胞及び角化細胞に対し、優れた細胞賦活活性を有する。さらに、この細胞賦活剤を含有する皮膚外用剤及び洗浄剤は、頭皮を含む皮膚の活性が乱れて生ずる肌荒れやシワ形成、あるいは頭髪の脱毛や生育不良に対し、極めて有効である。