(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＲＲＦ（リボソーム再生因子）のαヘリックス構造のドメインＩを回転軸として、これに連結するβシート構造のドメインIIの水平回転の動きを、ＮＭＲで核磁気緩和時間を測定し、
Ｊ（ωN）／Ｊ（0）（ここで、Ｊ（ωN）はスペクトル密度関数であり、
【数１】
0003936855.tif 000007
と定義される。相関時間τjは回転拡散テンソルの主値に依存し、係数Ａjは回転拡散テンソルの主軸系に対する15Ｎ−1Ｈベクトルの向きに依存する。）
を観測値とフィットすることでＲＲＦ分子の各ドメインについて回転拡散テンソルを算出し、
ＲＲＦの立体構造データを用いてドメインの相対配置をドメインごとに算出された回転拡散テンソルの主軸系に座標変換することでドメインIおよびドメインIIの配置を求め、
スペクトル密度関数を次式
【数２】
0003936855.tif 000008
で表される拡張モデルフリー関数に当てはめ局所的な速い運動に関するオーダーパラメータＳ2fの値を一般的に２次構造領域で観測される値に固定しドメイン運動に関するオーダーパラメータＳ2Sの値は残基ごとに求め、
求められたＳ2Sの大きさから各ドメインの運動を評価することを特徴とするＲＲＦの分子内ドメイン運動の評価方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この出願の発明は、ＲＲＦ（リボソーム再生因子）の分子内ドメイン運動の評価方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術と発明の課題】
リボソーム再生因子（ＲＲＦ）は伸長因子Ｇ（ＥＦ−Ｇ）とともにリボソーム再生過程において中心的な役割を果たす分子量２１ｋＤaのタンパク質であり、タンパク質の生合成装置であるリボソームに作用して、使用済みリボソームを分解・再生する役割を果たしていることが知られている。タンパク質生合成の終結反応後には、７０Ｓリボソーム、脱アシル化ＲＮＡ、およびｍＲＮＡからなるポストターミネーションコンプレックスが残っている。ＲＲＦは次のタンパク質生合成サイクルにむけてそれを解離・再生するために必須である。
【０００３】
そして、このＲＲＦは古細菌を除く全ての生物に存在するが、バクテリアの生存には必須である。このことから、ＲＲＦの作用を阻害する薬剤は新しい抗菌剤、抗生物質になる可能性がある。特に、ＲＲＦについては、ヒトなどの真核生物に副作用を及ぼさず、バクテリア（原核細菌）にのみ自殺的に働く薬剤を設計し、スクリーニングするための標的分子になることが注目されている。
【０００４】
以上のようなＲＲＦについては、その構造の解明が大きな課題であったが、最近、Thermotoga maritima （高度好熱菌）、Escherichia coli（大腸菌）、Thermus thermophilus（好熱菌）、およびAquifex aeolicus（高度好熱菌）由来ＲＲＦの立体構造がＸ線結晶構造解析法およびＮＭＲ法によって決定された。その結果ＲＲＦはαヘリックスバンドルからなるドメインＩと、β／α／βサンドイッチのβシート構造からなるドメインIIからなっていることが判明した。また、大腸菌ＲＦＦを除き、ドメインの配置はＬ字型であった。大腸菌ＲＲＦの結晶構造ではドメイン間の角度が広がっていた(open L-shape)が、これはおそらく結晶化の際に界面活性剤がドメインを接続している領域に結合してしまっているためである。特徴的なＬ字型によってＲＲＦはｔＲＮＡとその形状およびサイズが非常に似たものとなっている。このことはＲＲＦがｔＲＮＡのミミックとしてリボソームのＡ部位に結合することを示唆している。そして、ＥＦ−ＧはＧＴＰ依存的にＲＲＦをＡ部位からＰ部位に動かして脱アシル化ｔＲＮＡを脱離させるものと考えられている。このような機構については、ＲＲＦのドメインＩとドメインIIをつなぐヒンジ領域の役割が注目されている。たとえば梶らはT. maritima ＲＲＦが大腸菌ＲＲＦを阻害することを報告した。彼らはＲＲＦの働きにドメインの配置が変化することが必須であると仮定し、T. maritima ＲＲＦの阻害活性の原因として、そのヒンジ領域は常温で十分な可動性を持たないことを示唆している。また中村らは大腸菌の系で活性を持たないT. thermophilus ＲＲＦのヒンジ領域に変異を導入する実験をおこなったところ、ヒンジ領域の可動性を変化させるような変異によってT. thermophilus ＲＲＦが活性を獲得することを示している。
【０００５】
このような状況において、この出願の発明者らは、先にA. aeolicus ＲＲＦの立体構造をＮＭＲによって決定した。そこで得られた立体構造の集団は全て特徴的なＬ字型構造をとっていたが、一方でドメイン間の角度とのゆらぎには分布があることが見出されている。このような角度のゆらぎは結晶構造間においてもみられている。しかし、これまでのところ実際にドメインの配置が揺らいでいるという直接の証拠は報告されていない。
【０００６】
また、ドメインの配置についての評価方法も確立されていないし、この配置のゆらぎについての有意性が判断されていないのが実情である。さらには、ＲＲＦの作用を阻害する薬剤の開発と、この構造のゆらぎについての関連も提示されていない。
【０００７】
そこで、この出願の発明は、以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであって、二つのドメイン間の配置とそのゆらぎについての評価方法と、この評価の有意性の観点からのＲＲＦ阻害剤の設計とスクリーニングのための方法を提供することを課題としている。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
この出願の発明は、上記の課題を解決するものとして、ＲＲＦ（リボソーム再生因子）のαヘリックス構造のドメインＩを回転軸として、これに連結するβシート構造のドメインIIの水平回転の動きを、ＮＭＲで核磁気緩和時間を測定し、
Ｊ（ωN）／Ｊ（0）（ここで、Ｊ（ωN）はスペクトル密度関数であり、
【００１０】
【数３】
0003936855.tif 000002
【００１１】
と定義される。相関時間τjは回転拡散テンソルの主値に依存し、係数Ａjは回転拡散テンソルの主軸系に対する15Ｎ−1Ｈベクトルの向きに依存する。）
を観測値とフィットすることでＲＲＦ分子の各ドメインについて回転拡散テンソルを算出し、
ＲＲＦの立体構造データを用いてドメインの相対配置をドメインごとに算出された回転拡散テンソルの主軸系に座標変換することでドメインIおよびドメインIIの配置を求め、
スペクトル密度関数を次式
【００１２】
【数４】
0003936855.tif 000003
【００１３】
で表される拡張モデルフリー関数に当てはめ局所的な速い運動に関するオーダーパラメータＳ2fの値を一般的に２次構造領域で観測される値に固定しドメイン運動に関するオーダーパラメータＳ2Sの値は残基ごとに求め、
求められたＳ2Sの大きさから各ドメインの運動を評価することを特徴とするＲＲＦの分子内ドメイン運動の評価方法を提供する。
【００１５】
【発明の実施の形態】
この出願の発明は上記のとおりの特徴をもつものであるが、以下にその実施の形態について説明する。
【００１６】
この出願の発明の特徴は、発明者によるＮＭＲでの立体構造の解析によりドメインＩとドメインIIの間の角度がはっきりと求められたことと、溶液中のゆらぎの解析から、実際にＲＲＦが機能する際には、ドメインIIが水平に回転し得ることが明らかにされたことに基づいている。
【００１７】
ＲＲＦには、リボソームでｍＲＮＡの塩基配列情報を基にタンパク質の翻訳が完了した後に、リボソームをｍＲＮＡから外して次の翻訳に使えるようにする働きがあるが、この作用において、ドメインＩを回転軸としてドメインIIが水平に回転し、リボソームをｍＲＮＡから外すことが判明したのである。このことから、ＲＲＦ阻害剤を、ドメインIIの水平回転の評価を踏まえて開発することが可能になったのである。
【００１８】
たとえば、発明者は、好熱細菌Aquifex aeolicusのＲＲＦについてＮＭＲによる溶液中の立体構造を解明し、これを報告している（Biochemistry vol.40, No.8, pp2387-2396）が、この報告において示されている構造は、たとえば図１にも他の細菌との比較として例示したように、αヘリックス構造のドメインＩとβシート構造のドメインIIとの間の垂直方向の角度（θ）と、ドメインIIの水平方向の回転角度（φ）との関係を有している。この図１より、好熱細菌においては、垂直方向の角度（θ）はほぼ一定であっても、水平回転角度（φ）には変化（差異）があり、ゆらぎがあることがわかる。
【００１９】
このようなゆらぎについては、この出願の発明によって、ＮＭＲの測定から導いて評価することが可能となる。ＮＭＲ測定では、1Ｈ−15Ｎ−ＨＳＱＣスペクトルが観察されることになる。ＨＳＱＣは、タンパク質を構成するアミノ酸一つについて一個のシグナルを与え、シグナルの位置は対応するタンパク質の各部分の構造や環境を反映している。
【００２０】
そこで、16Ｎの緩和時間の具体的な算出方法について例示説明すると、緩和時間は1Ｈ−15Ｎ  ＨＳＱＣ法を応用した２Ｄ−ＮＭＲ法を用いて測定することができる。後述のＴ1およびＴ2測定に用いられるパルス系列中にはパラメータとして待ち時間Ｔがある。つまりＴ時間分だけ縦（Ｔ1）あるいは横（Ｔ2）緩和した磁化を測定することができる。従って観測された２Ｄスペクトル上でのピーク強度のＴに対する変化が、15Ｎの緩和の様子を示すことになる。ピーク強度Ｉは、 exp（-Ｔ／Ｔ1）あるいは exp（-Ｔ／Ｔ2）に比例するので、数点の異なるＴについてＩを測定し、非線型最小自乗法によってＴ1あるいはＴ2を求めることができる。
【００２１】
そして、このＨＳＱＣのスペクトルからのスペクトル密度関数により求められる回転拡散テンソルと、ドメインＩおよびドメインIIの実効回転相関時間の差異とから、ドメインIIの回転運動やその大きさが評価されることになる。
【００２２】
ここで回転拡散テンソルについて説明すると以下のとおりである。
すなわちまず、球状物体の回転拡散は等方的でありその大きさを一つの回転拡散係数で表すことができる。しかし一般的には回転が３次元的な現象であり角速度がベクトル量になることに対応して、回転拡散の大きさを記述するためには２階のテンソル量Ｄが必要となる。これを回転拡散テンソルという。回転拡散テンソルは対称テンソルなので、適当な座標系で対角化できる。そのような座標系のｘ，ｙ，ｚ軸を主軸と呼び、残った３つの対角成分（Ｄｘｘ，Ｄｙｙ，Ｄｚｚ）を主値という。後述の表１のτｃ，ｅｆｆは実効回転相関時間であり、０．５／（Ｄｘｘ＋Ｄｙｙ＋Ｄｚｚ）に等しい。Ｎは独立な観測値の数である。またＥはフィッティングの平均残差である。Ｆはフィッティングの有意さを検定するＦ検定でもちいられる統計量であり、Ｎ，Ｅから計算される。パラメータ数を増やしたことによる残差の減少が偶然起こる確立ｐをＦ値から計算することができる。
【００２３】
回転拡散テンソルの求め方としては、前記の数式などに登場するＡｊは、回転拡散テンソルの主軸系におけるＮ−Ｈベクトルの向きに依存している。またτｊは回転拡散テンソルの主値に依存する。つまり、理論的には回転拡散テンソルをパラメータとして計算することによって、観測データを再現することができる。従って、Simplex 法やPowell法などの最適化アルゴリズムを使用して、回転拡散テンソルの主軸および主値を変化させ、観測データともっとも適合する値を求めることができる。
【００２４】
また、ドメインの配置の決定方法に関連して、回転拡散テンソルをそれぞれのドメインに属するデータのみを使って求めることができる。回転拡散テンソルは本来分子全体について一つだけ定義されているものであるから、使用した座標データが正しければ、どちらのドメインのデータを用いても同じ主軸を与えるはずである。もし使用したドメインによって得られた主軸の向きが異なっていれば、それは使用した座標データにおいて、ドメインの配置が実際と異なっていることを示している。その場合、得られた主軸の向きを一致させるようにドメインの配置を決定することができる。
【００２５】
そして、ドメインIIの運動の範囲については、ドメイン運動を、制限された円錐内での自由拡散(diffusion in cone)とみなすと、前記数式におけるオーダーパラメータＳS2は円錐の頂角の1/2であるcone semi-angle θによってＳ32＝｛(0.5cos θ（１＋cos θ）)と表せる。この式に従い、ＳS2からθを求めることができる。
【００２６】
ＲＲＦ阻害剤は、本来的なＲＲＦの回転運動を阻害、たとえば停止、縮小等の働きの有無により、実際に阻害効果を有するかどうかが評価されることになる。このことにより、ＨＳＱＣスペクトルによる構造解析の結果との対応から、ＲＲＦ阻害剤の分子設計が可能となり、またＲＲＦ阻害剤のスクリーニングが可能となる。
【００２７】
そこで以下に実施例を示し、さらに詳しくこの出願の発明について説明する。もちろん、以下の例によって発明が限定されることはない。
【００２８】
【実施例】
この出願の発明の実施例として、ドメインIIの運動の評価方法の手順の流れ図について図２に示す。
（試料調製）
大腸菌ＲＲＦおよびT. maritima ＲＲＦを、ｐＥＴベクターを用いて大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）株内で発現させた。15Ｎ標識のために15Ｎ塩化アンモニウムのみを窒素源とするＭ９最小培地で大腸菌を培養した。大腸菌ＲＲＦの精製は公知の方法に従った。また、T. maritima ＲＲＦの精製は次のようにおこなった。回収した菌体をバッファーＡ（２０ｍＭトリス−塩酸，ｐＨ８．０，１０ｍＭ  ＭｇＣｌ2  ，２ｍＭ  ２−mercaptoethanol ，１ｍＭ  ＰＭＳＦ）に懸濁し、超音波破砕した。それを８０℃で１５分処理した後遠心した。上澄をバッファーＡで平衡化したＨｉＴｒａｐＯカラムに流し、T. maritima ＲＲＦを含む通りぬけ画分を集めてセントリプラスを用いて濃縮した。その後Superdex７５ｐｇカラムによるゲルろ過をおこない精製ＲＲＦを得た。ＮＭＲ測定用試料は１０％重水を含む１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳバッファー（ｐＨ７．４，５０ｍＭ  ＮａＣｌ）に溶解し、タンパク質濃度は０．５ｍＭとした。
（ＮＭＲ測定）
ＮＭＲ実権にはバリアン社製ＩＮＯＶＡ６００を用いた。測定温度は３０℃とし、標準メタノール及びグリコールで校正した。1Ｈおよび15Ｎの観測中心は４．７６および１１９．０ｐｐｍとした。１Ｈの化学シフトはＤＳＳによって校正した。15Ｎの化学シフトは磁気回転比に従って間接的に校正した。
【００２９】
主鎖15Ｎの緩和データはＨＳＱＣタイプのパルス系列を用いて測定した。緩和時間Ｔ1  は（３０，１０８，２０４，４２０，７２０，１０５０ｍｓ）の６点をサンプルした。Ｔ1  ρはスピンロック磁場強度を２．４ｋＨｚとし、（１２，２４，３６，４８，６０，７２ｍｓ）の６点をサンプルした。15Ｎ−（1Ｈ）ＮＯＥは３．５秒間アミド  1Ｈを飽和した場合としていない場合について測定した２スペクトルから求めた。NOE (Nuclear Overhauser Effect)とは、磁気的な相互作用がある２つの核スピンのうち、片方の核スピンの遷移を飽和させると、もう片方の核スピン由来のNMRシグナルの強度が変化する現象であり、核間ベクトルの距離、およびその方向揺らぎを表すスペクトル密度関数に依存する。ここでは、その距離が固定されている1H-15NについてNOEを測定し、その方向揺らぎに関する情報を得ている。装置のドリフトの影響を抑えるため、データはインターリーブモードで測定した。全ての実権は再現性を確認するため２回おこなった。データはNmrPipe を用いて処理し、ＰＩＰＰ及び自作プログラムを用いて解析した。Ｔ1およびＴ1ρの値はピーク強度を指数関数に非線型最小自乗法でフィットすることによって求めた。誤差はモンテカルロ法によって算出した。緩和時間Ｔ2  の値はＴ1  、Ｔ1ρ、化学シフト及びスピンロック磁場強度から計算した。ピークの帰属は文献に従った。
（緩和時間の解析）
スペクトル密度関数をＴ1，Ｔ2，ＮＯＥ値から求めた。15ＮのＣＳＡ値としては１７０ｐｐｍを用いた。ＲＲＦ分子は非等方的な形状をしているため、スペクトル密度関数の値は回転拡散テンソルの主軸系に対する15Ｎ−1Ｈスペクトルの向きとその揺らぎに依存する。分子内運動が無い非対称的な分子の場合スペクトル密度関数は次のようになる。
【００３０】
【数５】
0003936855.tif 000004
【００３１】
ここで相関時間τjは回転拡散テンソルの主値に依存し、係数Ａjは回転拡散テンソルの主軸系に対する15Ｎ−1Ｈベクトルの向きに依存する。Ｊ（ωN）／Ｊ（0）は良い近似で分子内運動に依存しない。結晶構造から計算されるＪ（ωN）／Ｊ（0）を観測値とフィットすることによって、ＲＲＦ分子の各ドメインについて回転拡散テンソルを求めた。構造の座標としてT. maritima ＲＲＦについてはＰＤＢ中の１ＤＤ5を用いた。報告されている大腸菌ＲＲＦの結晶構造である１ＥＫ８は界面活性剤との複合体構造であり、ドメインIIの構造が変化している可能性があるため、代わりに大腸菌ＲＲＦのＲ１３２Ｇ変異体の結晶構造を用いた。計算には２次構造をとっている部位のデータを用いた。ドメインの相対配置は、各ドメインを算出した回転拡散テンソルの主軸系に座標変換することによって得た。
【００３２】
次に各ドメインの運動を見積もるため、スペクトル密度関数を以下のようなモデルに当てはめた。
【００３３】
【数６】
0003936855.tif 000005
【００３４】
この解析においては先に求めたドメインの相対配置に会わせて変換した座標を用いた。分子全体の回転拡散に関する相関時間は分子全体で一組のパラメータを使用した。それぞれのドメインは全体としてτ5で表されるタイムスケールで運動していると考えた。局所的な速い運動に関するオーダーパラメータＳ2fの値は一般的に２次構造領域で観測される値である０．８５に固定した。ドメイン運動に関するオーダーパラメータＳ2Sの値は残基ごとに求めた。
（結果）
1Ｈ−15ＮＨＳＱＣスペクトル上ではほとんど全てのピークが期待通り観測されていた。大腸菌ＲＲＦについては９２残基のピークを、またT. maritima ＲＲＦについては７１残基のピークを解析に用いた。得られたスペクトル密度関数のグラフを図３に示す。スペクトル密度関数はA. aeolicus ＲＲＦの際に観測されたのと同様に明確な二峰性の分布を示していた。これは大腸菌ＲＲＦおよびT. maritima ＲＲＦが溶液中において２ドメイン構造をとっており、さらに各ドメインが固有の運動性を持っていることを示している。
（ドメインの配置）
表１は求められた回転拡散テンソルである。
【００３５】
【表１】
0003936855.tif 000006
【００３６】
大腸菌ＲＲＦの場合完全非対称モデルが軸対称モデルに対して統計的に有意であることがＦ検定の結果示された。よってドメインの相対配置を各ドメインの主軸を一致させることで求めることができた。数学的には４通りの解が存在するが、立体的な制限からそのうちの１つのみが可能な配置である（図４）。この配置は大腸菌ＲＲＦのＲ１３２Ｇ変異体の結晶構造に似ており、報告されている大腸菌ＲＲＦの結晶構造である１ＥＫ８（図５）とは大きく異なっている。つまり大腸菌ＲＲＦは他のＲＲＦと同様に溶液中ではｔＲＮＡをミミックする特徴的なＬ字型構造をとっている。ドメインＩおよびドメインIIの実効回転相関時間はそれぞれ１７．７ｎｓ及び１３．０ｎｓであった。両者の比が１ではないということは、溶液中で２つのドメインが一体となって振舞っているのではなく、ドメインごとにナノ秒オーダーの時間スケールで運動していることを示唆している。一方T. maritima ＲＲＦの場合、ドメインＩについてはＦ検定の結果から完全非対称モデルの有意性を示すことができなかった。従ってドメインの相対配置は１軸についてのみ決定できた。ＲＲＦのドメインＩはヘリックスバンドルであるため、15Ｎ−1Ｈベクトルの角度分布が狭い。よってドメインＩの回転拡散テンソルの非対称性を決定することが容易ではない。T. maritima ＲＲＦでは大腸菌ＲＲＦに比べて解析に用いることができたデータが少なく、またT. maritima ＲＲＦの結晶構造はその温度因子が大きいといった困難があったため、ドメインＩの回転拡散テンソルを完全非対称モデルで決定することができなかったと考えられる。ドメインＩおよびドメインIIの実効回転相関時間の比は１．２６であった。この値は大腸菌ＲＲＦのそれに比べて小さく、このことは大腸菌ＲＲＦと比べてT. maritima ＲＲＦのほうがドメインどうしの束縛が大きいことを示唆している。
（ドメインの運動）
各ドメインでの実効回転相関時間の違いは、それぞれのドメインが運動していると仮定すれば説明できる。Clore らによって導入された拡張スペクトル密度関数に分子の非等方性による補正を加えたものでドメイン運動を解釈することを試みた。その結果は図６に示している。このモデルでは分子全体の実効回転相関時間として２０ｎｓ程度の値が、またドメイン運動の相関時間として２ｎｓ程度の値が得られた。ドメイン運動に関するオーダーパラメータＳ25の平均値はドメインＩについては大腸菌ＲＲＦ、T. maritima ＲＲＦともに０．９であった。これはドメインＩが分子全体に対してほとんど固定されていることを示している。ドメインIIのＳ25の平均値はドメインＩより小さかった。これはドメインIIがドメインＩよりフレキシブルであることを示している。またドメインＩの場合と異なり、ドメインIIでは大腸菌ＲＲＦのＳ25はT. maritima ＲＲＦのＳ25より０．１小さい値を示した。つまり大腸菌ＲＲＦのドメインIIはT. maritima ＲＲＦのドメインIIに比べて動きやすいということを示している。
【００３７】
ドメインIIが円錐状の領域を拡散運動しているとすると、その範囲は大腸菌ＲＲＦで２８度、T. maritima ＲＲＦで２２度となる。前記の式（２）のスペクトル密度関数は度運動の異方性を考慮していないので、運動の向きについての情報を得ることは困難である。さらに、式（２）では分子全体の回転拡散とドメイン運動が独立と仮定しているが、両者のタイムスケールはそれほど大きく異なっていないので、この仮定は厳密ではない部分もある。しかしながら、見積もられたドメイン運動の範囲は、A. aeolicus ＲＲＦの溶液構造や結晶構造間においてもみられているドメイン配置の揺らぎとよく一致している。
【００３８】
ＲＲＦのドメイン運動は生物学的に重要な意味を持つものである。興味深いことにT. maritima ＲＲＦは大腸菌のリボソームに結合することができるが、結合した大腸菌のリボソームをリサイクルすることはできない。この事実は、ドメインIIの運動性がＲＲＦのリボソームリサイクル活性に重要であることを示唆している。したがって、ＲＲＦはｔＲＮＡミミックとしてリボソームのＡ部位に結合すると考えられる。
【００３９】
以上より、ドメインIIの動きはリボソーム結合後に起こる現象に必要なものであると考えられ、この出願の発明であるＲＲＦの分子内ドメイン運動の評価方法によりドメインIIの運動性を把握することは、ＲＲＦ阻害剤の設計に大いに役立つものと期待される。
【００４０】
【発明の効果】
以上詳しく説明したとおり、この出願の発明によって、ＲＲＦのドメインＩとドメインIIの構造において、ドメインIIの回転運動としてのゆらぎを適切に評価することが可能とされ、またこれによって、ＲＲＦ阻害剤の分子設計とスクリーニングが効果的に進められることになる。
【図面の簡単な説明】
【図１】細菌ＲＲＦについてのドメインＩとドメインIIとの間の垂直方向の角度（θ）と、ドメインIIの水平方向の回転角度（φ）との関係を例示した図である。
【図２】この出願の発明の実施例において、この出願の発明であるＲＲＦの分子内ドメイン運動の評価方法の手順について示した流れ図である。
【図３】スペクトル密度関数の結果を例示した図である。
【図４】ドメインの相対配置として可能なものを例示した図である。
【図５】報告されている大腸菌ＲＲＦの結晶構造である１ＥＫ８について示した図である。
【図６】拡張スペクトル密度関数に分子の非等方性による補正を加えた結果を例示した図である。
【図１】
0003936855.tif 000009
【図２】
0003936855.tif 000010
【図３】
0003936855.tif 000011
【図４】
0003936855.tif 000012
【図５】
0003936855.tif 000013
【図６】
0003936855.tif 000014