(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１μｇ／ｍｌから１００μｇ／ｍｌのＴＦＰＩを含む、温血哺乳動物における血栓形成を減らすための局所投与用医薬組成物。
【請求項２】
前記温血哺乳動物の微小血管吻合の部位に、微小血管再建と同時に局所的に投与することによって、該微小血管吻合の血栓形成を減らすための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記温血哺乳動物の損傷した血管の部位に局所的に投与することによって、該血管損傷による血栓形成を減らすための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
前記温血哺乳動物の外傷を受けた血管表面部位に局所的に投与することによって、該外傷を受けた血管表面部位での血栓形成を減らすための、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
０．０１から１ｍｌを局所的に投与される、請求項１から４の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項６】
前記ＴＦＰＩと共に、標準食塩水ビヒクルを含む、請求項１から５の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記血栓形成を、前記動物の末梢血ＰＴおよびＡＰＴＴを実質的に影響せずに減らすための、請求項１から６の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項８】
自由弁伝達（free flap transfer）による微小血管再建の間に投与するための、請求項１、２、５、６及び７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項９】
再移植（replantation）による微小血管再建の間に投与するための、請求項１、２、５、６及び７の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記ＴＦＰＩが、２７６個のアミノ酸残基からなる蛋白である、請求項１から９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
前記ＴＦＰＩが、そのＮ末端でアラニン残基を持つ２７７個のアミノ酸残基からなる蛋白である、請求項１から９の何れか１項に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
温血哺乳動物における血栓形成を減らすための１μｍ／ｍｌから１００μｍ／ｍｌのＴＦＰＩを含む局所投与用医薬組成物を製造するための、ＴＦＰＩの使用方法。
【請求項１３】
前記医薬組成物が、前記温血哺乳動物の微小血管吻合の部位に、微小血管再建と同時に局所的に投与することによって、該微小血管吻合の血栓形成を減らすための医薬組成物である、請求項１２に記載の使用方法。
【請求項１４】
前記医薬組成物が、前記温血哺乳動物の損傷した血管の部位に局所的に投与することによって、該血管損傷による血栓形成を減らすための医薬組成物である、請求項１２に記載の使用方法。
【請求項１５】
前記医薬組成物が、前記温血哺乳動物の外傷を受けた血管表面部位に局所的に投与することによって、該外傷を受けた血管表面部位での血栓形成を減らすための医薬組成物である、請求項１２に記載の使用方法。
【請求項１６】
前記医薬組成物が０．０１から１ｍｌを局所的に投与される医薬組成物である、請求項１２から１５の何れか１項に記載の使用方法。
【請求項１７】
前記医薬組成物が、前記ＴＦＰＩと共に、標準食塩水ビヒクルを含む、請求項１２から１６の何れか１項に記載の使用方法。
【請求項１８】
前記医薬組成物が、前記血栓形成を、前記動物の末梢血ＰＴおよびＡＰＴＴを実質的に影響せずに減らすための医薬組成物である、請求項１２から１７の何れか１項に記載の使用方法。
【請求項１９】
前記医薬組成物が、自由弁伝達（free flap transfer）による微小血管再建の間に投与するための医薬組成物である、請求項１２、１３、１６、１７及び１８の何れか１項に記載の使用方法。
【請求項２０】
前記医薬組成物が、再移植（replantation）による微小血管再建の間に投与するための医薬組成物である、請求項１２、１３、１６、１７及び１８の何れか１項に記載の使用方法。
【請求項２１】
前記ＴＦＰＩが、２７６個のアミノ酸残基からなる蛋白である、請求項１２から２０の何れか１項に記載の使用方法。
【請求項２２】
前記ＴＦＰＩが、そのＮ末端でアラニン残基を持つ２７７個のアミノ酸残基からなる蛋白である、請求項１２から２０の何れか１項に記載の使用方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の背景】
本発明は微小血管血栓症を抑制する新規方法、更に詳しく言えば、リポタンパク質関連凝固抑制物質（ＬＡＣＩ）また別の呼称として組織因子経路抑制物質（ＴＦＰＩ）として知られる血液凝固抑制剤の局所投与により、微小血管再建中の微小血管吻合の血栓形成を減らす方法に関する。
【０００２】
微小血管吻合の血栓症は、とりわけ自由弁再建における四肢の外傷の場合に、再建外科医にとって重要な問題である。Ｓａｌｅｍａｒｋ，Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  １２，３０８−３１１（１９９１）による最近の概括は、多くの医療センターが再移植および自由弁伝達に対して全身的凝固防止を日常的に使用していることを示した。しかし、輸血製品から生ずる複雑な危険と共に全身性出血の危険〔Ｌｅｕｎｇ，Ｈａｎｄ  １２，２５〜３２（１９８０）；Ｈｉｒｓｈ，Ｓｅｍｉｎ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈｅｍｏｓｔａｓ．１２，２１〜３２（１９８０）〕が、余り重要でない組織へ血液を供給する小血管中の血流を単に維持するだけのために、大きい全身的な循環を変化させることから来る恩恵への疑問を未解決のまま残した。
【０００３】
簡単な局所適用により投与された抗血栓症薬剤による部位特異的作用の概念がＣｏｏｌｅｙおよびＧｏｕｌｄ，Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ１２，２８１〜２８７（１９９１）により提唱された。血栓症に罹り易い血管を再建作業中に露出させ、吻合修復中内腔表面に接近し易くするので、薬剤を通常の血管潅注の進行中に適用でき、血栓形成部位（複数のことがある）に結合する面を介して
【０００４】
高度に局所化された効果を達成できる可能性がある。事実、Ｃｏｏｌｅｙ等は一つの可能な薬剤、即ちフィブリノゲンの血小板結合領域およびフィブリン重合領域に基づくペプチドを記述し、それがラットのモデルにおいて血栓閉塞の発生を減少させる能力のあることを示した〔第６回年会、Ａｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，トロント、カナダ、９月２１〜２３日、１９９０年〕。
【０００５】
血管損傷により起こる血栓症は、もしそれが主として組織因子で媒介された凝固経路を通って開始されるのでなければ少なくともとも部分的である。
【０００６】
血漿は多価Ｋｕｎｉｔｚ型凝固抑制物質を含み、これを本明細書中では組織因子経路抑制物質（ＴＦＰＩ）と呼ぶ。この名称は１９９１年６月３０日にＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｎ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  ａｎｄＨｅｍｏｓｔａｓｉｓ，アムステルダムにより受け入れられた。ＴＦＰＩはＢｒｏｚｅ  ａｎｄ  Ｍｉｌｅｔｉｃｈ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４，１８８６〜１８９０（１９８７）により記述された通り最初ヒトの肝癌細胞、Ｈｅｐ  Ｇ２から精製され、その後Ｎｏｖｏｔｎｙ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２６４，１８８３２〜１８８３７（１９８９）により報告されたようにヒト血漿から；またＷｕｎ等，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１６０９６〜１６１０１（１９９０）により開示された通りＣｈａｎｇ肝臓およびＳＫ肝癌細胞から精製された。ＴＦＰＩ
【０００７】
ｃＤＮＡはＷｕｎ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３，６００１〜６００４（１９８８）；Ｇｉｒａｒｄ等、Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．５５，３７〜５０（１９８９）により記述されているように胎盤および内皮ｃＤＮＡライブラリーから単離された。ｃＤＮＡ配列順から推論されたＴＦＰＩの一次アミノ酸配列順はＴＦＰＩが高度に負に帯電したアミノ末端、３個のタンデムＫｕｎｉｔｚ型抑制領域、および高度に正に帯電したカルボキシル末端を含むことを示している。ＴＦＰＩの最初のＫｕｎｉｔｚ−領域は因子VII ａ／組織因子複合体の抑制のために必要とされ、ＴＦＰＩの二番目の
【０００８】
Ｋｕｎｉｔｚ領域はＧｉｒａｒｄ等、Ｎａｔｕｒｅ  ３２８，５１８〜５２０（１９８９）によれば因子Ｘａの抑制の原因をなし、他方三番目のＫｕｎｉｔｚ領域の機能は未知のままである。米国特許第５，１０６，８３３号明細書参照。ＴＦＰＩは生体内で不活性な四要素からなる因子Ｘａ：ＴＦＰＩ：因子VII ａ：組織因子複合体を形成することにより凝固開始を制限する働きをすると考えられている。ＴＦＰＩに関するこれ以上の背景情報はＲａｐａｐｏｒｔ，Ｂｌｏｏｄ７３，３５９〜３６５（１９８９）；Ｂｒｏｚｅ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２９，７５３９〜７５４６（１９９０）による最近の論評から得られる。
【０００９】
組換えＴＦＰＩはマウスＣ１２７細胞〔Ｄａｙ等、Ｂｌｏｏｄ  ７６，１５３８〜１５４５（１９９０）により開示〕、幼児ハムスターの腎臓細胞〔Ｐｅｄｅｒｓｅｎ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１６７８６〜１６７９３（１９９０）により報告〕、中国ハムスターの卵巣細胞およびヒトＳＫ肝癌細胞を含めて哺乳動物細胞宿主を使用することによりグリコシル化された蛋白質として発現された。このＣ１２７ＴＦＰＩは
【００１０】
動物研究で使用され、Ｄａｙ等（上記）によると家兎において組織因子で誘発された血管内凝固の抑制に、またＨａｓｋｅｌ等、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ８４，８２１〜８２７（１９９１）により記述されたようにイヌにおいて血栓溶解後の動脈再閉塞の防止に有効であることが示された。
【００１１】
組換えＴＦＰＩはまたＥ．Ｃｏｌｉ宿主細胞を使用し、タンパク質の容器内折りたたみにより高度に活性なＴＦＰＩを得ることにより非グリコシル化タンパク質としても発現された〔１９９２年３月２日提出の「Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｐａｔｈｗａｙ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」と題したＪｕｄｙ  Ａ．Ｄｉａｚ−Ｃｏｌｌｉｅｒ，Ｍａｒｋ  Ｅ．Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ  ａｎｄ  Ｔｚｅ−Ｃｈｅｉｍ  Ｗｕｎによる出願中の特許願連続第０７／８４４，２９７号明細書記載。この開示は参考のため本明細書中に取り入れている〕。
【００１２】
ＴＦＰＩの２７６個のアミノ酸残基のタンパク質をコード化するＴＦＰＩ  ｃＤＮＡのクローン化はＷｕｎ等、米国特許第４，９６６，８５２号明細書に詳しく記載されている。その開示を本明細書中に参考として取り入れている。
【００１３】
【発明の簡単な説明】
本発明によると、微小血管血栓症を抑制する新規方法が提供される。本法は温血動物の微小血管吻合の部位へ、微小血管再建と同時に少量ではあるが微小血管吻合の血栓形成を減らすのに十分な量のＴＦＰＩを局所投与することからなる。
【００１４】
ここで本発明を微小血管修復を受けた圧潰摘出の家兎耳動脈モデルにＴＦＰＩを局所適用することにより例示する。ＴＦＰＩのこの代表的局所適用においては、標準食塩水ビヒクル（対照）を用いる内腔潅注によって処置した外傷を受けた動脈は術後１日および７日でそれぞれ８％および０％の開通率に達した。ヘパリン潅注（１０単位／ml）の結果両評価時で４０％の開通率が得られた。これに対して、ＴＦＰＩは２０μｇ／mlの用量（全体積０．２ml、１０分間暴露）で術語１日において９１％または７日で７３％の開通率（ｐ＜０．０００５対対照）をもたらした。末梢血プロトロムビン時間（ＰＴ）および活性部分トロムポプラスチン時間を用いて全身的抗凝固効果を調べた。これらの血はＴＦＰＩよる局所処理後
【００１５】
で変化しなかった。走査電子顕微鏡はＴＦＰＩ処置をした血管の損傷面で劇的に血栓形成が抑制されることを示した。これらの結果は、臨床微小血管外科において血栓症予防のために局所適用された抗血栓剤として使用したＴＦＰＩの有効性を支持するものである。
【００１６】
本発明方法は同様な方法で他の温血哺乳動物、例えばヒト、に対しても有用である。本法は、例えば自由弁伝達または再移植外科による微小血管再建に対して特に適合する。
【００１７】
本明細書中で定義した通り、ＴＦＰＩはグリコシル化されていても非グリコシル化型でもよい。
【００１８】
【発明の詳細な記述】
本明細書は、本発明を構成するものと見做される主題を特に指摘し明確に主張する特許請求の範囲によって結論づけられてはいるが、図面と共に示した特に適当な具体例についての下記の詳細な説明から本発明を更によく理解できると考えられる。
【００１９】
図１は三つの処置群の各々に対して術後１日および７日で達成された開通率を示すバーグラフである。この場合、家兎の耳のモデルにおける血管外傷の微小血管修復中のＴＦＰＩの局所投与を、ヘパリンの同様な投与あるいはＴＦＰＩあるいはヘパリンのいずれも含まない対照ビヒクル（標準食塩水）の同様な投与と比較する。
【００２０】
図２は図１と同様に微小血管修復およびＴＦＰＩ局所投与の後、再流１時間後の血管の内腔面の幾つかの倍率における走査電子顕微鏡写真を示す。図２Ａ＝３０×；図２Ｂ＝１００×；図２Ｃ＝２０００×。
【００２１】
図３は図１と同様に微小血管修復およびヘパリン局所投与の後、再流１時間後の血管の内腔面の幾つかの倍率における走査電子顕微鏡写真を示す。図３Ａ＝３０×；図３Ｂ＝１００×；図３Ｃ＝２０００×。
【００２２】
図４は図１と同様に微小血管修復および対照ビヒクル（ＴＦＰＩおよびヘパリンのいずれも含まない）局所投与の後、再流１時間後の内腔面の幾つかの倍率における走査電子顕微鏡写真を示す。図４Ａ＝３０×；図４Ｂ＝１００×；図４Ｃ＝２０００×。
【００２３】
本発明を更に詳細に説明するために、ＴＦＰＩ投与を伴なう血管外傷の下記の代表的顕微外科修復を実施した。しかし、本発明はこの範例的仕事に、あるいはこれらの例で述べられた特定の詳細事項に制限されないことは明らかであろう。
【００２４】
【実施例】
〔材料および方法〕
実験動物の処置と使用についてはＮＩＨガイドラインに終始従った。ニュージーランド白家兎（３〜５ポンド）をケタミン（１００mg）およびキシラジン（２０mg）の筋肉内注射で麻酔した。無菌条件下で中央の耳動脈を２０mmの長さにわたり露出させた。Ｃｏｏｌｅｙ  ａｎｄ  Ｈａｎｓｅｎ，Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  ６  ４６−４８（１９８５）の圧潰−摘出損傷の変形を下記のようにつくり出した。２個の
【００２５】
Ｗｅｂｓｔｅｒニードルホルダー（相互に２mm）を動脈に対して固く締め付け、次に動脈を外傷性切断を与えながら近位−遠位の方向に離して動かした。このＷｅｂｓｔｅｒ圧潰部位を越えて一時的な微小血管クランプを施し、内腔を標準食塩水でフラッシュした。動脈の避けた端を最小限に整え、外傷を受けた動脈の本質的に全長を保った。次に１０−０ナイロン縫合８〜１０針を用いて端対
【００２６】
端吻合を実施した。最後の一縫いを結ぶ前に吻合および損傷内腔にまたがって０．２mlの試験溶液を潅流し、血管を液体で満した。これをその位置に１０分間置いておき、次に標準食塩水で洗い出した。３種類の溶液、即ち標準食塩水中ＴＦＰＩ  ２０μｇ／ml濃度、標準食塩水中ヘパリン（１０単位／ml）、または標準食塩水（対照ビヒクル）の一つを目かくし無作為化した方法で一血管当り使用した。
【００２７】
これらの例に用いたＴＦＰＩはＥ．ｃｏｌｉで発現させた組換えＤＮＡクローンから得た。このものはＷｕｎ等。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３，６００１〜６００４（１９８８）および米国特許第４，９６６，８５２号明細書記載の２７６個の残基配列からなる２７７個アミノ酸のタンパク質である〔１９９２年３月２日提出のＤｉａｚ−Ｃｏｌｌｉｅｒ，Ｇｕｓｔａｆｓｏｎ  ａｎｄ  Ｗｕｎ，連続第０７／８４４，２９７号明細書、前記同時出願中の特許願に更に記載されているように、Ｎ−末端で挿入されたもう一つのアラニン残基を有する〕。これは＞９５％純粋である。
【００２８】
上記のように内腔の修復と潅流を終えてから一時的なクランプを解除した。３４個の動脈（家兎１７頭から）について開通を１時間追跡し、次に傷を閉じた。術後１日および７日に開通の再評価のため再麻酔を誘発させた。
【００２９】
また別の実験系列において、９個の動脈（家兎５頭から）を３動脈ずつの３群に分け、前記のようにＴＦＰＩ、ヘパリンあるいはビヒクルを投与した。１時間流した後損傷し修復した血管を採取し、緩衝したグルタルアルデヒドで固定し、走査電子顕微鏡で内腔面を検査するため調製した。動脈損傷の前また再流後１時間に再び（血管採取前）、大腿静脈枝から採血した。標準の市販フィブロメーターを用いてプロトロムビン時間（ＰＴ）および活性化した部分トロムボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）を血漿試料について測定した。
【００３０】
〔結果〕
すべての群の開通率を図１に示す。１日で開通したすべての血管は再流１時間できれいな開通を示した。１日目に血栓症を起こしたことが分かった血管はすべての群に対して７日目でも依然血栓症に罹っていた。対照（ビヒクル処理）動脈に対する開通率は術後１日で８％（１／１３）また７日で０％（０／１３）であった。ヘパリン処置血管は１日および７日の両方とも４０％（４／１０）の開通を達成し、７日目に有意な改善が認められた（ｐ＜０．０２５；Ｆｉｓｈｅｒ精密試験）。ＴＦＰＩ処置は１日および７日で９１％（１０／１１）および７３％（８／１１）の開通率を与え、両期間に対し対照よりも有意に良かった（ｐ＜０．０００５）。ＴＦＰＩ処置血管は、１日目（ｐ＜０．０２）ではヘパリン処置血管よりも有意に高い開通率を示したが７日目（ｐ＞０．１）ではそうでなかった。
【００３１】
ＴＦＰＩ処置した家兎に対する末梢血ＰＴおよびＡＰＴＴ値は正常範囲内であった（ＰＴに対し６〜８．５秒；ＡＰＴＴに対しては１４〜１８秒）。各動物に対する時間は処置前と処置後の値の間に差を示さなかった。
【００３２】
１時間潅流した後採取した開通標品の１５ＫＶにおける走査電子顕微鏡検査は、３０×倍率で対照（図４Ａ）およびヘパリン処理（図３Ａ）血管について、血栓により隠された縫合線を示した。これに対し、ＴＦＰＩ処理血管（図２Ａ）においては、縫合線および周囲の血管内腔は大体きれいで、大きい血栓蓄積はなかった。より高倍率（１００×および２０００×）においては、対照はフィブリンストランドと血小板凝集体の混合した血栓を示した。ヘパ
【００３３】
リン処理血管はフィブリンストランド形成が劇的に少なく、血栓の大部分は血小板凝集体および捕捉された赤血球から構成されていた（図３Ｂおよび図Ｃ）。ＴＦＰＩ処置血管は組織化された血栓要素は殆ど示さず、見られるものは血栓形成に対して比較的不活性な表面であった（図２ＢおよびＣ）。
【００３４】
大きい血管、脳および冠状動脈の血栓症について遭遇する問題と比べて、再建微小血管外科は血栓症に最も罹りやすい血管に近づき易く、しばしば必要な外科的処置ができるという大きい利点をもつ。微小血管修復の間に外科医は血栓形成面の直接露出をなしとげることができる。損傷した血管に対する標準的処置は外傷を受けたすべての部分を確認すること、余りにもひどく損傷を受けたと考えられる血管はそれを切除し取り替える（静脈移植片と）こと、全身的抗血栓材（ヘパリン、アスピリン、ジピリダモルおよび（または）最もしばしばデキストラン）を投与してその後の血栓症の発現を防止することであった。幾つかの問題が存在し、そのすべてを外科医が知っているわけではない。事実、見掛け上正常な血管の表面でも、内皮削剥、微細な内側の裂け目、あるいは恐らくは未損
【００３５】
傷血管の表面上の活性化された凝固経路により、重要な意味をもつ程の血栓形成能をもつことがあり、血管損傷の程度は顕微鏡の助けを借りても外科医が直接見ることができないこともあり、静脈移植片はその入手性に限りがあり、あるいはその選択は理想に届かず、外傷的な病変あるいは予想外の全身的凝血異常がそれぞれ局部化された出血あるいは全身性出血の確率を高めることもある。これら
【００３６】
の理由のため、本発明による手術中の局所潅流によって適用される有効な抗血栓症薬剤の開発は有用であり、非常に実際的である。
【００３７】
ヘパリンは生体内で内皮に対し高い親和性をもつことが示された。〔Ｈｉｅｂｅｒｔ  ａｎｄ  Ｊａｑｕｅｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．８，１９５〜２０４（１９７６）；Ｈｉｅｂｅｒｔ  ａｎｄ  Ｊａｑｕｅｓ，Ａｒｔｅｒｙ  ２，２６〜３７（１９７６）；Ｍａｈａｄｏｏ等、Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｒｅｓ．１２，７９〜９０（１９７７）〕。ヘパリン無添加溶液と比較して局所ヘパリンによる微小血管開通の有意な改善が実験的に示された。Ｒｅｉｃｈｅｌ等、Ｉ．Ｈａｎｄ  Ｓｕｒｇ．１３Ａ，３３−３６（１９８８）は血栓症のラット
【００３８】
圧潰動脈モデルを使用して、ヘパリン、ウロキナーゼおよび他の薬剤が局所投与後にのみ開通性を中程度に（対照レベルの１０％と比較して５５％まで）高めることを実証した。一層劇的な改善はＣｏｏｌｅｙ等によって、フィブノリゲンガンマー鎖のカルボキシ末端に対する２１−残基ペプチド同族体を用いることにより認められた（対照の１７％と比較して８３％開通）。〔第６回年会、Ａｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅ  Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，トロント，カナダ，１９９０年９月２１日〜２３日〕。本発明によれば、実質的に異なる薬剤であるＴＦＰＩを用いることにより、比較的高い水準の成功を収めている。
【００３９】
容器内検定法を用いるＴＦＰＩに関する最近の研究は、これが組織因子、およびファクターVII ＡおよびＸａと複合体を形成し、これらの重要な凝結カスケード酵素を無効にすることを示した。〔Ｂｒｏｚｅ等、Ｂｌｏｏｄ  ７１，３３５（１９８８）〕。本発明によれば、外傷を受けた血管表面へのＴＦＰＩの局所適用は血管損傷により活性化されたこれら酵素と複合体形成を可能にする。血流が再び確立された後、その部位における凝固の外因性経路の可能性は実質的に減少する。ＴＦＰＩは局所的にかつ少量を適用できるので、上記の結果から示されるように全身的効果は実質的に現存しない。
【００４０】
ＴＦＰＩの局所投与は、当業者のよく知る局所的に有効な薬物の通常の投与法により実施できる。例えば、ＴＦＰＩは顕微外科時にヘパリンを局所薬剤として投与する通常の仕方で局所的に投与できる。例えば、Ｃｏｏｌｅｙ  ａｎｄ  Ｇｏｕｌｄ，Ｍｉｃｒｏｓｕｒｇｅｒｙ  １２，２８１〜２８７（１９９１）参照。局所投与の通常の方法については、薬物投与の分野の数多くの図書や論文、例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，編者Ａｒｔｈｕｒ  Ｏｓｏｌ，１６版，１９８０年，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，イーストン、ペンシルバニア州、を引用せねばならない。ＴＦＰＩは
【００４１】
生理学的に容認しうるビヒクルあるいは対照、例えば標準食塩水または緩衝食塩水、例えばリン酸塩で緩衝した食塩水、あるいは他のこのような製薬上容認しうる緩衝剤、例えばＨＥＰＥＳ，中に入れて運ばれる。このものはまた粉末、通常のビヒクル中に加えた塗薬あるいは軟膏の形式で投与することもできる。血管外傷の部位へ投与されるＴＦＰＩの量は非常に少量でよく、そしてこれは一部はその外傷の程度および範囲によって決まる。
【００４２】
１分から数分間の暴露時間にわたり、約０．０１から約１ml容の体積として適用される約１μｇ／mlから約１００μｇ／mlのＴＦＰＩの用量が適当である。
【００４３】
この開示を読んだ後は当業者にとって種々な他の例が本発明の種子と範囲から離れることなく明白となるであろう。すべてのこのような他の例は特許請求の範囲内に包含されることは理解されるであろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】三つの処置群の各々に対して術後１日および７日で達成された開通率を示すバーグラフである。この場合、家兎の耳のモデルにおける血管外傷の微小血管修復中のＴＦＰＩの局所投与を、ヘパリンの同様な投与あるいはＴＦＰＩあるいはヘパリンのいずれも含まない対照ビヒクル（標準／食塩水）の同様な投与と比較する。
【図２】生物の形態を示す写真であって、図１と同様に微小血管修復およびＴＦＰＩ局所投与の後、再流１時間後の血管の内腔面の幾つかの倍率における走査電子顕微鏡写真を示す。図２Ａ＝３０×；図２Ｂ＝１００×；図２Ｃ＝２０００×。
【図３】生物の形態を示す写真であって、図１と同様に微小血管修復およびヘパリン局所投与の後、再流１時間後の血管の内腔面の幾つかの倍率における走査電子顕微鏡写真を示す。図３Ａ＝３０×；図３Ｂ＝１００×；図３Ｃ＝２０００×。
【図４】生物の形態を示す写真であって、図１と同様に微小血管修復および対照ビヒクル（ＴＦＰＩおよびヘパリンのいずれも含まない）局所投与の後、再流１時間後の内腔面の幾つかの倍率における走査電子顕微鏡写真を示す。図４Ａ＝３０×；図４Ｂ＝１００×；図４Ｃ＝２０００×。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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