(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子：
（ａ）以下の配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
（配列番号１）
ＭＦＲＲＳＬＡＳＬＡ ＡＶＡＶＩＳＧＶＶＶ ＡＰＡＮＡＶＴＶＴＶ
ＮＮＭＴＣＴＩＫＬＴ ＰＥＥＴＮＦＩＰＬＳ ＳＰＶＭＬＴＫＥＫＡ
ＡＦＬＫＮＱＹＧＥＴ ＱＬＳＡＬＤＡＥＩＫ ＫＫＥＫＥＬＴＥＬＥ
ＰＮＡＡＧＲＥＭＬＴ ＳＥＬＫＥＫＫＫＲＦ ＴＡＮＫＫＦＳＤＡＬ
ＤＡＣＩＡＧＥＮＹＤ ＳＳＫＰＮＧＰＫＤＰ ＮＧＰＫＫＰＧＤＳＤ
ＱＳＧＧＳＥＫＰＮＧ ＰＫＤＰＧＧＳＥＫＰ ＮＤＰＫＨＰＥＶＥＲ
ＡＬＰＳＴＮＧＡＶＩ ＧＡＩＶＡＶＬＧＩＬ ＡＡＡＬＰＶＩＫＳＩ
ＬＲＡＬＬＰ;
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ジフテリア菌抗原活性を有するタンパク質。
【請求項２】
以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドをコードするＤＮＡ：
（ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるＮ末端より２５〜２１６番目のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ジフテリア菌抗原活性を有するポリペプチド。
【請求項３】
以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドをコードするＤＮＡ：
（ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるＮ末端より１３０〜１９０番目のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ジフテリア菌抗原活性を有するポリペプチド。
【請求項４】
以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡからなる遺伝子：
（ａ）以下の配列番号２に示される塩基配列からなるＤＮＡ
（配列番号２）
ＡＴＧＴＴＣＡＧＧＣ  ＧＴＴＣＡＣＴＣＧＣ  ＧＴＣＣＣＴＣＧＣＴ
ＧＣＣＧＴＣＧＣＴＧ  ＴＣＡＴＣＴＣＴＧＧ  ＴＧＴＴＧＴＴＧＴＴ
ＧＣＧＣＣＡＧＣＧＡ  ＡＴＧＣＣＧＴＧＡＣ  ＴＧＴＣＡＣＧＧＴＣ
ＡＡＴＡＡＴＡＴＧＡ  ＣＣＴＧＣＡＣＣＡＴ  ＴＡＡＧＣＴＣＡＣＴ
ＣＣＴＧＡＡＧＡＡＡ  ＣＴＡＡＴＴＴＴＡＴ  ＡＣＣＣＴＴＧＡＧＴ
ＴＣＧＣＣＧＧＴＡＡ  ＴＧＣＴＣＡＣＣＡＡ  ＧＧＡＡＡＡＡＧＣＴ
ＧＣＴＴＴＴＣＴＣＡ  ＡＡＡＡＴＣＡＡＴＡ  ＣＧＧＡＧＡＡＡＣＡ
ＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧ  ＣＣＣＴＴＧＡＣＧＣ  ＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧ
ＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡ  ＡＧＧＡＡＣＴＧＡＣ  ＴＧＡＧＣＴＣＧＡＡ
ＣＣＴＡＡＣＧＣＧＧ  ＣＧＧＧＧＡＧＧＧＡ  ＧＡＴＧＴＴＧＡＣＧ
ＡＧＣＧＡＧＣＴＧＡ  ＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡ  ＧＡＡＧＡＧＧＴＴＣ
ＡＣＣＧＣＣＡＡＣＡ  ＡＡＡＡＡＴＴＣＡＧ  ＴＧＡＴＧＣＧＣＴＧ
ＧＡＴＧＣＧＴＧＣＡ  ＴＣＧＣＡＧＧＴＧＡ  ＧＡＡＣＴＡＣＧＡＣ
ＴＣＧＡＧＴＡＡＧＣ  ＣＣＡＡＴＧＧＣＣＣ  ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＣ
ＡＡＴＧＧＣＣＣＧＡ  ＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧ  ＴＧＡＣＴＣＧＧＡＴ
ＣＡＧＴＣＣＧＧＴＧ  ＧＣＴＣＧＧＡＧＡＡ  ＧＣＣＣＡＡＴＧＧＣ
ＣＣＡＡＡＧＧＡＴＣ  ＣＣＧＧＴＧＧＣＴＣ  ＧＧＡＧＡＡＧＣＣＣ
ＡＡＴＧＡＣＣＣＧＡ  ＡＧＣＡＴＣＣＣＧＡ  ＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣ
ＧＣＴＣＴＧＣＣＴＴ  ＣＧＡＣＣＡＡＣＧＧ  ＡＧＣＡＧＴＡＡＴＣ
ＧＧＣＧＣＣＡＴＣＧ  ＴＣＧＣＧＧＴＴＣＴ  ＣＧＧＣＡＴＣＴＴＧ
ＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣ  ＴＧＣＣＴＧＴＣＡＴ  ＴＡＡＧＴＣＧＡＴＡ
ＣＴＧＣＧＧＧＣＴＣ  ＴＣＣＴＧＣＣＧＴＡ  Ａ;
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ、ジフテリア菌抗原活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
【請求項５】
以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ：
（ａ）配列番号２に示される塩基配列からなるＤＮＡにおいて、配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるＮ末端より２５〜２１６番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするＤＮＡ；
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ、ジフテリア菌抗原活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ。
【請求項６】
以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡ：
（ａ）配列番号２に示される塩基配列からなるＤＮＡにおいて、配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるＮ末端より１３０〜１９０番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするＤＮＡ；
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ、ジフテリア菌抗原活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ。
【請求項７】
請求項１ないし６のいずれか一項に記載された遺伝子又はＤＮＡにコードされるタンパク質又はポリペプチド。
【請求項８】
請求項１ないし６のいずれか一項に記載された遺伝子又はＤＮＡを含有する発現ビークル。
【請求項９】
請求項８記載の発現ビークルによって形質転換された形質転換体。
【請求項１０】
請求項７に記載のタンパク質又はポリペプチドの調製方法であって、請求項９に記載の形質転換体を培養し、請求項１ないし６のいずれか一項に記載された遺伝子又はＤＮＡを発現させ、該タンパク質又はポリペプチドを回収する、前記調製方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ジフテリア菌抗原遺伝子及びそれにコードされるタンパク質に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ジフテリアはCorynebacterium diphtheriae による感染症予防法第２類の重篤な感染症である。主要な病原因子であるジフテリア毒素を化学変性させたトキソイドワクチンは、ジフテリアのワクチンとして開発された最初のものであり、発症予防に極めて有効であったために、現在でも使われ続けていて成果をあげている。一方で、他の病原因子に関する研究の必要性が薄れてしまい、その結果、従来はこの分野の研究が遅れていた。
【０００３】
又、従来のトキソイドワクチンはジフテリアに感染した人が発症するのを防御することはできても、人がジフテリアに感染するのを防御・予防することはできない。
【０００４】
ジフテリアは重大な感染症であるために迅速な早期診断が要求されるが、ＰＣＲ法の信頼性及び迅速診断法が確立されていないため、現在のジフテリア診断には患部から分離された菌の培養が必須であり、数日を要する。この期間を短縮することが早期治療のために重要である。
【０００５】
尚、ジフテリア感染に関する参考文献として、例えば、「佐藤博子、高橋元秀 "11.ジフテリアトキソイド"  ワクチンハンドブック、国立予防衛生研究所学友会編、丸善、1994年 p.71.」、「Mattos-Guaralde, A., et al. Cell surface components and adhesionin Corynebacterium diphtheriae. Microbes and Infection (2000) 2,1507-1512.」をあげることができる。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、ジフテリアの感染を防御・予防することができるワクチンが開発されれば、その有用性は高い。又、ジフテリア菌に特異的な抗原が特定できれば、ジフテリアの迅速診断薬としての応用が期待できる。新規の迅速診断法が確立されれば、その有用性は高い。更に、ジフテリア菌に特異的な抗原は、ジフテリアの疫学調査の極めて有効なツールとなりうる。実際、ジフテリア毒素に対する抗体価の高い人たちが多く存在するが、これがジフテリア菌感染によるのか、ジフテリアトキソイドを用いたワクチン接種によるのかが、ジフテリア菌に特異的な新規抗原を使えばわかるようになる。
【０００７】
ジフテリア菌の抗原および病原因子は、上に述べたジフテリア毒素以外にはほとんど知られていない。新規の抗原を発見することができれば、上記の課題の解決につながる。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は鋭意研究の結果、以下の発明を完成した。
即ち、本発明は、第一の態様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のタンパク質をコードする遺伝子に係る：
（ａ）以下の配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
（配列番号１）
ＭＦＲＲＳＬＡＳＬＡ ＡＶＡＶＩＳＧＶＶＶ ＡＰＡＮＡＶＴＶＴＶ
ＮＮＭＴＣＴＩＫＬＴ ＰＥＥＴＮＦＩＰＬＳ ＳＰＶＭＬＴＫＥＫＡ
ＡＦＬＫＮＱＹＧＥＴ ＱＬＳＡＬＤＡＥＩＫ ＫＫＥＫＥＬＴＥＬＥ
ＰＮＡＡＧＲＥＭＬＴ ＳＥＬＫＥＫＫＫＲＦ ＴＡＮＫＫＦＳＤＡＬ
ＤＡＣＩＡＧＥＮＹＤ ＳＳＫＰＮＧＰＫＤＰ ＮＧＰＫＫＰＧＤＳＤ
ＱＳＧＧＳＥＫＰＮＧ ＰＫＤＰＧＧＳＥＫＰ ＮＤＰＫＨＰＥＶＥＲ
ＡＬＰＳＴＮＧＡＶＩ ＧＡＩＶＡＶＬＧＩＬ ＡＡＡＬＰＶＩＫＳＩ
ＬＲＡＬＬＰ;
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ジフテリア菌抗原活性を有するタンパク質。
【０００９】
更に、本発明は、以下の（ａ）又は（ｂ）のポリペプチドをコードするＤＮＡに係る：
（ａ）配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるＮ末端より２５〜２１６番目又は１３０〜１９０番目のアミノ酸配列からなるポリペプチド；
（ｂ）ポリペプチド（ａ）において１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換若しくは付加されたアミノ酸配列からなり、ジフテリア菌抗原を有するポリペプチド。
【００１０】
本発明は更に、第二の態様として、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡからなる遺伝子に係る：
（ａ）以下の配列番号２に示される塩基配列（651bpのopen reading frame を有する）からなるからなるＤＮＡ
（配列番号２）
ＡＴＧＴＴＣＡＧＧＣ  ＧＴＴＣＡＣＴＣＧＣ  ＧＴＣＣＣＴＣＧＣＴ
ＧＣＣＧＴＣＧＣＴＧ  ＴＣＡＴＣＴＣＴＧＧ  ＴＧＴＴＧＴＴＧＴＴ
ＧＣＧＣＣＡＧＣＧＡ  ＡＴＧＣＣＧＴＧＡＣ  ＴＧＴＣＡＣＧＧＴＣ
ＡＡＴＡＡＴＡＴＧＡ  ＣＣＴＧＣＡＣＣＡＴ  ＴＡＡＧＣＴＣＡＣＴ
ＣＣＴＧＡＡＧＡＡＡ  ＣＴＡＡＴＴＴＴＡＴ  ＡＣＣＣＴＴＧＡＧＴ
ＴＣＧＣＣＧＧＴＡＡ  ＴＧＣＴＣＡＣＣＡＡ  ＧＧＡＡＡＡＡＧＣＴ
ＧＣＴＴＴＴＣＴＣＡ  ＡＡＡＡＴＣＡＡＴＡ  ＣＧＧＡＧＡＡＡＣＡ
ＣＡＧＣＴＧＴＣＴＧ  ＣＣＣＴＴＧＡＣＧＣ  ＧＧＡＡＡＴＡＡＡＧ
ＡＡＧＡＡＡＧＡＡＡ  ＡＧＧＡＡＣＴＧＡＣ  ＴＧＡＧＣＴＣＧＡＡ
ＣＣＴＡＡＣＧＣＧＧ  ＣＧＧＧＧＡＧＧＧＡ  ＧＡＴＧＴＴＧＡＣＧ
ＡＧＣＧＡＧＣＴＧＡ  ＡＡＧＡＧＡＡＡＡＡ  ＧＡＡＧＡＧＧＴＴＣ
ＡＣＣＧＣＣＡＡＣＡ  ＡＡＡＡＡＴＴＣＡＧ  ＴＧＡＴＧＣＧＣＴＧ
ＧＡＴＧＣＧＴＧＣＡ  ＴＣＧＣＡＧＧＴＧＡ  ＧＡＡＣＴＡＣＧＡＣ
ＴＣＧＡＧＴＡＡＧＣ  ＣＣＡＡＴＧＧＣＣＣ  ＡＡＡＧＧＡＴＣＣＣ
ＡＡＴＧＧＣＣＣＧＡ  ＡＧＡＡＧＣＣＣＧＧ  ＴＧＡＣＴＣＧＧＡＴ
ＣＡＧＴＣＣＧＧＴＧ  ＧＣＴＣＧＧＡＧＡＡ  ＧＣＣＣＡＡＴＧＧＣ
ＣＣＡＡＡＧＧＡＴＣ  ＣＣＧＧＴＧＧＣＴＣ  ＧＧＡＧＡＡＧＣＣＣ
ＡＡＴＧＡＣＣＣＧＡ  ＡＧＣＡＴＣＣＣＧＡ  ＡＧＴＣＧＡＡＣＧＣ
ＧＣＴＣＴＧＣＣＴＴ  ＣＧＡＣＣＡＡＣＧＧ  ＡＧＣＡＧＴＡＡＴＣ
ＧＧＣＧＣＣＡＴＣＧ  ＴＣＧＣＧＧＴＴＣＴ  ＣＧＧＣＡＴＣＴＴＧ
ＧＣＣＧＣＣＧＣＴＣ  ＴＧＣＣＴＧＴＣＡＴ  ＴＡＡＧＴＣＧＡＴＡ
ＣＴＧＣＧＧＧＣＴＣ  ＴＣＣＴＧＣＣＧＴＡ  Ａ;
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ、ジフテリア菌抗原活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
【００１１】
更に、本発明は、以下の（ａ）又は（ｂ）のＤＮＡに係る：
（ａ）配列番号２に示される塩基配列からなるＤＮＡにおいて、配列番号１に示されるアミノ酸配列におけるＮ末端より２５〜２１６番目又は１３０〜１９０番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするＤＮＡ；
（ｂ）塩基配列（ａ）からなるＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ、ジフテリア菌抗原活性を有するポリペプチドをコードするＤＮＡ。
【００１２】
本発明は、更に、これら遺伝子又はＤＮＡにコードされるタンパク質又はポリペプチドに係る。
【００１３】
【発明の実施の形態】
本発明の遺伝子から推定される産物は、配列番号１に示される２１６個のアミノ酸からなる蛋白質（推定分子量22,797）である。Ｎ末端から２４番目のアラニンまでがシグナルペプチドと推定される。シグナルペプチド切断後のＮ末端アミノ酸はバリン、推定分子量は20,345である。
【００１４】
更に、遺伝子解析ソフトウエア"GCG"の"PeptideStructure"という機能を使って解析した結果、上記アミノ酸配列のN末端から１３０〜１９０番目のポリペプチドが最も抗原性の強い部分であるものと推測された。尚、GCGのアルゴリズムについてはJameson and Wolf (1988) CABIOS, 4(1); 181-186を参照されたい。
従って、本発明の配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝子における１若しくは数個のアミノ酸の欠失又は置換は、ジフテリア菌抗原活性を有する上で、該アミノ酸配列のN末端から１３０〜１９０番目以外の部分に起こることが好ましい。尚、本明細書中で、「ジフテリア菌抗原活性」とは、ジフテリア菌血清と有意に特異的結合することができる活性を意味する。
【００１５】
本発明遺伝子又はＤＮＡは以下の実施例に示すように、ジフテリア菌株由来の遺伝子ライブラリー中から、該菌に対するポリクローナル抗体を用いたWestern blotting、PCRクローニング等の方法によりクローニングし、その塩基配列を決定することによって調製することができる。ジフテリア菌株は特に限定されるものではないが、例えば、PW8株等を挙げることができる。
【００１６】
或いは、本明細書で開示された配列情報に基づいて、当該技術分野における周知手段を用いた化学合成等によっても調製することが可能である。当業者であれば、特定のアミノ酸配列における１若しくは数個のアミノ酸を欠失、置換若しくは付加することも、当該技術分野における周知手段を用いて容易に実施することができる。
【００１７】
本明細書において、特定の遺伝子又はＤＮＡとハイブリダイズさせる際のストリンジェントな条件は、当業者が適宜設定することができる。
本発明の遺伝子又はＤＮＡとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、且つ、ジフテリア菌抗原であるタンパク質をコードするＤＮＡの例として、例えば、かかる遺伝子又はＤＮＡと相同性が８０％以上、好ましくは９０％以上、より好ましくは９５％以上であるようなＤＮＡを挙げることができる。
【００１８】
本発明の遺伝子又はＤＮＡに、遺伝子組換え操作において当業者に公知である様々な配列、例えば、プロモーター及びエンハンサーなどの調節因子、制限酵素部位、並びに選択マーカー遺伝子等が適宜結合されたＤＮＡ分子も本発明の範囲である。更に、本発明の遺伝子、ＤＮＡ又は上記ＤＮＡ分子を含有する組換えベクター等の発現ビークル、及び該発現ビークルを含みそれによって形質転換された細菌、真核細胞等の形質転換体も本発明に含まれる。これらのＤＮＡ分子、発現ビークル及び形質転換体は、当該技術分野における公知の手段によって、容易に調製することができる。
【００１９】
本発明のタンパク質又はポリペプチドは、上記の発現ビークル及び形質転換体等を使用して、当該技術分野における公知手段によって、例えば、形質転換体を培養し、本発明の遺伝子又はＤＮＡを発現させ、それを回収することによって、容易に調製することができる。従って、本発明は、かかる調製方法に係る。
更に、本発明は、かかるタンパク質又はポリペプチドに対するポリクローナル抗体、又はモノクローナル抗体にも係る。かかる抗体は当業者に公知の方法によって作成することができる。
【００２０】
【実施例】
以下に実施例に即して本発明を詳述するが、これら実施例は本発明の技術的範囲を如何なる意味でも何ら限定するものではない。
【００２１】
まず、ジフテリア菌に未知の抗原があるかどうかを調べた。ジフテリア菌ワクチン株PW8の全菌体をSDSで溶解してSDS-PAGEとWestern blottingで解析したところ、抗PW8株ポリクローナル抗体（ウサギ抗PW8株全菌体抗血清）に反応する多数のバンドが検出された（図１）。このことから、ジフテリア菌にはジフテリア毒素以外の抗原が多数存在することが明らかになった。尚、SDS-PAGEは、12%ポリアクリルアミドゲルを使い、その他の条件は基本的にLaemmli,U.K. (1970) Nature 227, 680-685に従って行われた。
【００２２】
次に、これらの抗原の遺伝子を単離するために、ＢＨＩ液体培地で２日間培養したPW8株の全ＤＮＡを制限酵素Ｓａｕ３ＡＩで部分分解し、約２−４ｋｂのフラグメントを単離した。これをｌａｃプロモーターを有するｐＵＣ１９ベクターに連結して約５０００のクローンからなる遺伝子ライブラリーを作成した。次に、ウサギ抗PW8株全菌体抗血清を用いて、ライブラリー中から抗PW8株ポリクローナル抗体に反応する４９のクローンを選択した。これらの選択されたクローンの産物は、Western blottingで解析したところ、分子量が20,000 から100,000 のバンドを示した。その中に含まれるPW8株由来のＤＮＡの塩基配列を決定し、そのうちの一つである配列番号１で示されるＤＮＡについてＯＲＦを推定してＰＣＲクローニングしたところ、強い抗原性を有していた（図２）。
【００２３】
Western blottingは、標準的な方法（Harlow, E. and Lane, D. (1988) Antibodies -a laboratory manual, Cold Spring Harvor Laboratory press）に従って行った。尚、一次抗体としては抗PW8株ポリクローナル抗体を５００倍で、二次抗体としてはアルカリホスファターゼ標識ヤギ抗ウサギIgG(Tago社)等を使用した。
【００２４】
塩基配列決定も標準的な方法に従い、Applied Biosystems社のモデル373、377、310、3100シークエンサーを用い、DyeTerminator FSキット及びBigDyeTerminatorキットを使って、これらのキットとシークエンサーの使用説明書に従って操作を実施した。
【００２５】
更に、PCRも標準的な方法に従い、宝酒造のThermal Cycler MP型またはPerkin Elmer社モデル2400を用い、宝酒造ExTaqポリメラーゼを用いてPCRを行った。  PCRの条件は、98℃で２分、次いで、98℃で10秒及び68℃で１分を３０サイクル繰り返した後、４℃に冷却した。
【００２６】
本発明の遺伝子を含むＤＮＡ（clone 1-1 ORF2）は、平成１３年８月２０日付けで、独立行政法人産業技術総合研究所  特許生物寄託センターに寄託され、受託番号ＦＥＲＭ  ＢＰ−７８８５を付与されている。
【００２７】
【発明の効果】
本発明によって、ジフテリア菌に特異的な抗原であるタンパク質又はポリペプチドのアミノ酸配列及び塩基配列が特定された。このタンパク質又はポリペプチドはジフテリア感染予防用ワクチンの有効成分、迅速診断薬、及び、ジフテリアの疫学調査の極めて有効なツールとして有用である。更に、該タンパク質又はポリペプチドに対する抗体は、ジフテリア感染予防の為の医薬組成物の有効成分としても有用である。
【００２８】
【配列表】
0003936158.tif 000002
0003936158.tif 000003
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【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、PW8株の遺伝子ライブラリー中から抗PW8株ポリクローナル抗体を用いたWestern blottingにより解析した結果を示す。図中、左レーンはPW8株は全菌体ライセート、右レーンはPW8株培養上清から得られた結果を示す。
【図２】図２は、PCRクローニングした遺伝子産物（シグナル配列部分を除く）を抗PW8株ポリクローナル抗体を用いたWestern blottingにより解析した結果を示す。
【図１】
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【図２】
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