(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
タキサン型ジテルペン産生植物の細胞を培養するにあたって、液体培地に対する酸素の物質移動容量係数（kLa）が10 h-1以上である酸素供給条件下で当該細胞の前培養を行い、得られた細胞をタキサン型ジテルペンの生産を目的とした本培養に供し、培養後得られた培養物からタキサン型ジテルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペンの製造方法。
【請求項２】
前培養において、kLaを15〜50 h-1の範囲にすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前培養におけるkLaを本培養におけるkLaよりも高くすることを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
タキサン型ジテルペンが、タキソール、10-デアセチルタキソール、7-エピタキソール、バッカチンIII 、10-デアセチルバッカチンIII 、7-エピバッカチンIII 、セファロマニン、10-デアセチルセファロマニン、7-エピセファロマニン、バッカチンVI、タキサン1a、キシロシルセファロマニン、キシロシルタキソール、タキソールC、10-デアセチルタキソールC、タキシシンＩ、タキシシンII、タキシンＩ、タキシンII、タキサギフィンから選ばれる少なくとも１種以上である請求項１〜３に記載の方法。
【請求項５】
タキサン型ジテルペンを産生する植物がイチイ属植物である請求項１〜４に記載の方法。
【請求項６】
タキサン型ジテルペンを産生する植物がTaxus mediaまたはセイヨウイチイ（Taxus baccata）である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
本培養において、タキサン型ジテルペンの生産促進剤として、ジャスモン酸誘導体またはコロナチン誘導体を使用する請求項１〜６に記載の方法。
【請求項８】
ジャスモン酸誘導体が、ジャスモン酸、ジャスモン酸のアルキルエステル、ジャスモン酸のイミノまたはアミノ誘導体から選ばれる少なくとも1種以上である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
コロナチン酸誘導体が、コロナチンおよび／またはコロナファシック酸である請求項７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、卵巣癌、乳癌、肺癌等の治療薬として有用であるタキソールを含むタキサン型ジテルペンの製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
卵巣癌、乳癌、肺癌等の治療薬として有用であるタキソール(Taxol)は、イチイ科イチイ属植物であるタイヘイヨウイチイ(Taxus brevifolia NUTT)より単離同定されたタキサン型ジテルペンであり、活性と関連する複雑なエステルグループを有している。タキソールはタイヘイヨウイチイ植物体中のどの部位にも存在し、その含量は樹皮で最も高いことが報告されている。現在、タキソールは天然のまたは栽培された植物体中から採取されているが、イチイ属植物は地上20 cmの高さに成長するのに10年以上かかる生育の遅い植物であり、また樹皮を剥ぐと木が枯れてしまうことから容易に大量のタキソールを得ることは困難である。もし、タキソールおよびタキソールの前駆物質であるバッカチンIII 等のタキサン型ジテルペンの合成が細胞培養を利用して行うことができれば、樹木を伐採する事なく、大量のタキソールを容易に得ることができるので有利である。
【０００３】
一方、タキソール生産法の先行技術としては、タキソール生合成前駆体であるバッカチンIII または10-デアセチルバッカチンIII からの半合成法がHoltonらの米国特許(US Patent 5,015,744)明細書に開示されており、すでに欧米ではこの半合成由来のタキソールが認可され、臨床に使用されている。植物の細胞培養法を用いれば、バッカチンIII 等の半合成原料の生産も可能であり、前記半合成法によるタキソール生産にも利用できる。
【０００４】
これまでの植物の培養細胞を利用したタキソール生産方法については、タイヘイヨウイチイ（Taxus brevifolia NUTT)培養細胞によるタキソール生産が米国で特許(US Patent 5,019,504) になっているが、そのタキソール生産量は1 〜3 mg/lと記載されており、工業的生産には不十分である。また、細胞培養によるタキソールの生産性は不安定であり、選抜で一次的には生産性の高い細胞が得られるが、継代培養してその含量を維持することは難しい[E.R.M.Wickremesine et al., World Congress on Cell and Tissue Culture (1992)]。
【０００５】
かかる状況の下、タキソールの生産性を向上させるために数々の方法が試みられており、それらの例として、タキソールの含有量が高い中国イチイTaxus chinensis の培養細胞を用いる方法(US Patent 5,407,816)、連続培養プロセスを用いる方法 (特開平7-255495)、情報伝達物質であるジャスモン酸メチルを培地に添加する方法 (EP 683232)などをあげることができる。しかし、上記いずれの方法も実用化には結びついておらず、一層の生産性向上が望まれている。
【０００６】
また、上記のいずれの方法においても、実際の工業的な培養プロセスを考えた場合、細胞の増殖を目的とした培養（前培養）とタキソールなど目的とするタキサン型ジテルペンの生産を目的とした培養（本培養）とを別個の条件で実施する、いわゆる二段培養の採用によって、最終的に得られるタキサン型ジテルペンの生産性を高めうることが期待される。従来知られている細胞培養法によるタキサン生ジテルペンの生産においては、上に例示したタキソール生産性の向上に関する３件の特許に見られるように、エリシターや情報伝達物質の添加、培養プロセスの改良など、本培養の条件を改善することにウエートが置かれており、前培養に関しては、目的化合物の最終的な生産性向上にとって好ましい条件は、具体的には知られていないのが実状である。
【０００７】
前培養に要求される役割としては、第一に本培養にできるだけ多くの細胞を供給できるよう、その増殖速度を速めることが挙げられるが、それと同時に、本培養において移植された細胞が効率よくタキサン型ジテルペンを生産するよう、その生産の潜在能力を高めることが挙げられる。しかし、この潜在能力を高めるという意味での前培養条件の重要性は、先にも述べたとおり全く認識されていなかった。
【０００８】
一般に、植物細胞等の懸濁培養において、細胞への酸素供給を管理または制御するためのパラメーターとしては、物質移動容量係数（kLa）、溶存酸素濃度（DO）などが挙げられる。振盪速度やガスの送気速度は、簡便に測定できる利点はあるが、培養器の形状や培地量などの影響を受けるため、普遍的には使用できず、培養工学的には全く意味のないパラメーターである。従来、本培養における目的物質の生産性（細胞あたりの蓄積量）がkLaやDOの影響を受けることは知られていたが[Y. Fujita & Y. Hara, agric. Biol. Chem., 49, pp. 2071-2075 (1985)]、前培養の際のこれらのパラメーターの影響については全く検討されていなかった。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、植物細胞培養によるタキサン型ジテルペンの生産性を向上させることにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究の結果、タキサン型ジテルペンを産生する植物の細胞を培養するにあたって、当該細胞を潤沢な酸素供給条件下で前培養することによって、得られる細胞のタキサン型ジテルペン生産の潜在能力を高め、ひいては本培養におけるタキサン型ジテルペンの生産性が向上することを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１１】
すなわち、本発明は、タキサン型ジテルペン産生植物の細胞を培養するにあたって、液体培地に対する酸素の物質移動容量係数（kLa）が10 h-1以上である酸素供給条件下で当該細胞の前培養を行い、得られた細胞をタキサン型ジテルペンの生産を目的とした本培養に供し、培養後得られた培養物からタキサン型ジテルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペンの製造方法である。
本発明はまた、タキサン型ジテルペン産生植物の細胞を培養するにあたって、液体培地の溶存酸素濃度（DO）を培養時の温度における飽和酸素濃度の30%以上に保持する条件下で当該細胞の前培養を行い、得られた細胞をタキサン型ジテルペンの生産を目的とした本培養に供し、培養後得られる培養物からタキサン型ジテルペンを回収することを特徴とするタキサン型ジテルペンの製造方法である。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明の製造方法に用いられるタキサン型ジテルペンを産生する植物としては、イチイ属植物、例えば、セイヨウイチイ(Taxus baccata LINN)、イチイ(T. cuspidata  SIEB.et ZUCC) 、キャラボク(T. cuspidata SIEB.et ZUCC var. nana REHDER)、タイヘイヨウイチイ(T. brevifolia NUTT)、カナダイチイ(T. canadiensis MARSH) 、中国イチイ(T. chinensis) 、ヒマラヤイチイ(T. wallichiana ZUCC) 、T.media等が挙げられる。これらの中でもセイヨウイチイおよびT.mediaが特に好ましい。
【００１３】
先ずイチイ属に属する植物の植物体、例えば根、生長点、葉、茎、種子などから採取される植物片を殺菌処理後、ゲランガムで固めたウッディー・プラント・メディウム（以下、WP培地と略記する）の固体培地上に置床し、10〜35℃で14〜60日程度経過させて組織片の一部をカルス化させる。このようにして得られたカルスを継代培養すると生育速度が漸次高まり安定化したカルスが得られる。ここで、安定化したカルスとは、培養中にカルスの一部がシュートや根に分化しないでカルスの状態を保持する性質をもち細胞の生育速度が均質であるものをいう。この安定化したカルスを増殖に適した液体培地、例えば液体WP培地に移して増殖させると更に生育速度が高められる。
【００１４】
本発明では、この安定化した細胞から、タキサン型ジテルペン生産の潜在能力を高めた種細胞を得るための培養を行い、それをタキサン型ジテルペンの生産を目的とした培養に供する。本発明では、前者のタキサン型ジテルペン生産の潜在能力を高めた種細胞を得るための培養を前培養といい、後者のタキサン型ジテルペンの生産を目的とした培養を本培養という。
また、本発明において、生産の潜在能力とは、細胞を新しい培地に移植した際、より多くのタキサン型ジテルペンを生産し得る能力を意味し、換言すれば種細胞としての性能を意味する。
【００１５】
タキサン型ジテルペン生産の潜在能力を高めた種細胞にするための培養は、潤沢な酸素供給条件下で行う。
潤沢な酸素供給条件は、具体的には、液体培地に対する酸素の物質移動容量係数（以下kLaと標記する）が10 h-1以上、好ましくは15〜50 h-1の範囲に設定することによって達成される。
kLaが50 h-1を越える条件でも種細胞の性能向上の効果は得られるが、通気速度や撹拌速度を大きくすることによってkLaを上昇させると、細胞の培養液面上方への吹き上げや細胞へのダメージが問題となり、実用面で好ましくない。
【００１６】
kLaの値を求めるには、例えば以下の方法がある。すなわち、細胞等を用いない以外は本発明で用いられる液体培地と同じ液体培地を用い、本発明の培養方法と同じ温度、攪拌条件等の条件下において、該液体培地にCuSO4 を加え、一定の酸素濃度を有する酸素含有ガスを送入して飽和の溶存酸素濃度(Cs)を求めた後、次にNa2SO3水溶液を適量加えるか、窒素ガス等の無酸素ガスを通気して溶存酸素濃度を0 〜1ppmに調節し（窒素ガス等の無酸素ガスを通気する場合にはCuSO4 を加えなくてもよい) 、上記酸素含有ガスを一定の通気速度で再び送入して溶存酸素濃度を増大させて、酸素含有ガスの再送入後の経過時間t1、t2それぞれの時点における溶存酸素濃度C1、C2を測定し（C1、C2はいずれも３から5ppmの範囲にある場合のデータを用いる) 、下記式:
【００１７】
【数１】
0003897267.tif 000002
【００１８】
からある培養条件下におけるkLaを求めることができる。kLaの値は、一般に通気速度、攪拌速度等に依存する。
kLaの制御方法としては、フラスコ培養においては、培養液量の増減、振盪方式（旋回型であるか往復型であるか）の変更、振盪速度の増減などが例示され、タンク培養においては、タンクの形状変更、通気量の増減、スパージャー位置やガス噴出孔口径変更、バッフルの取り付け、撹拌翼の形状や回転速度変更などが例示される。これらの中でも、タンク培養におけるkLaの制御方法としては、通気量の増減および撹拌翼の回転速度の変更が好ましい。
【００１９】
従来採用されているkLaは、フラスコ培養、タンク培養とも10 h-1未満であり、例外的に10 h-1を越えるkLaが採用されることもあるが、これらはすべて本培養においてであり、本発明のように、前培養におけるkLaを上記範囲に設定することによって得られる効果が、本培養に遅延して現れる例は知られていない。
また、前培養におけるkLaは本培養におけるkLaよりも高く設定することが好ましい。
【００２０】
潤沢な酸素供給条件の第二は、具体的には、細胞を培養する液体培地の飽和酸素濃度（以下、DOと表記する) を30〜90%、好ましくは50〜75%に保持することによって達成される。DOは、kLaに加えて細胞の呼吸速度の影響を受けるため、通気速度や撹拌速度だけで単純に制御することはできないが、培養液中のDOを酸素電極などでモニターしながら、自動的に通気速度を増減したり、また通気ガス中の酸素濃度を増減することによって制御することができる。
【００２１】
本発明において、種細胞の性能向上を目的としてkLaおよび／またはDOを上記の範囲に設定して実施する前培養は、本培養から遡って、通常10代前以降なら効果を発揮するが、本培養に近いほどその効果が大きく、直前の培養（前培養）時が最適である。
【００２２】
本発明の製造方法の対象となるタキサン型ジテルペンとしては、タキサン骨格を有するジテルペンであれば特に制限はなく、具体的には、タキソール、10-デアセチルタキソール、7-エピタキソール、バッカチンIII 、10-デアセチルバッカチンIII 、7-エピバッカチンIII 、セファロマニン、10-デアセチルセファロマニン、7-エピセファロマニン、バッカチンVI、タキサン1a、キシロシルセファロマニン、キシロシルタキソール、タキソールC、10-デアセチルタキソールC、タキシシンＩ、タキシシンII、タキシンＩ、タキシンII、タキサギフィン等を例示できる。
【００２３】
本発明の細胞培養に使用される培地としては、従来から知られている植物の細胞培養に用いられる培地、例えばムラシゲ・スクーグ(1962年)〔Murashige & Skoog〕の培地、リンスマイヤー・スクーグ(1965年)〔Linsmaier Skoog〕の培地、ウッディー・プラント・メディウム(1981年) 〔Woody Plant Medium〕、ガンボルグ〔Gamborg〕のB-5培地、藤田らのM-9培地等が挙げられる。
これら培地に植物ホルモンを添加し、更に必要に応じて炭素源、無機成分、ビタミン類、アミノ酸等を添加することもできる。
炭素源としては、シュクロース、マルトース、ラクトース等の二糖類、グルコース、フルクトース、ガラクトース等の単糖類、デンプンあるいはこれら糖源の２種類以上を適当な比率で混合したものを使用できる。
【００２４】
無機成分としては、例えばリン、窒素、カリウム、カルシウム、マグネシウム、イオウ、鉄、マンガン、亜鉛、ホウ素、銅、モリブデン、塩素、ナトリウム、ヨウ素、コバルト等が挙げられ、これらの成分は例えば硝酸カリウム、硝酸ナトリウム、硝酸カルシウム、塩化カリウム、リン酸一水素カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸第一鉄、硫酸第二鉄、硫酸マンガン、硫酸亜鉛、ホウ酸、硫酸銅、モリブデン酸ナトリウム、三酸化モリブデン、ヨウ化カリウム、塩化コバルト等の化合物として添加できる。
【００２５】
植物ホルモンとしては、例えばインドール酢酸(IAA)、ナフタレン酢酸(NAA)、2,4-ジクロロフェノキシ酢酸(2,4-D)等のオーキシン類、カイネチン、ゼアチン、ジヒドロゼアチン等のサイトカイニン類が用いられる。
ビタミン類としては、例えばビオチン、チアミン（ビタミンB1）、ピリドキシン（ビタミンB6）、パントテン酸、イノシトール、ニコチン酸等が用いられる。
アミノ酸類としては、例えばグリシン、フェニルアラニン、ロイシン、グルタミン、システイン等を添加できる。
一般に前記の各成分は、無機成分が約0.1 M〜100 mM、炭素源が約1〜約30 g/l、植物ホルモン類が約0.01〜約10M、ビタミン類およびアミノ酸類がそれぞれ約0.1〜約100 mg/lの濃度で用いられる。
【００２６】
本発明の細胞培養においては、上記植物の根、生長点、葉、茎、種子、花粉、葯、がく等の組織片または細胞、あるいはこれらを上記培地あるいは他の従来の培地によって細胞培養して得られる培養細胞を使用することができる。
以上のようにして得られた培養組織または培養細胞および／または培地から、メタノール等の有機溶媒による抽出によってタキサン型ジテルペンを分離することができる。また、培地中に適当な吸着剤や有機溶媒を共存させ、連続的にタキサン型ジテルペンを回収することもできる。
【００２７】
また、本培養では、生産促進剤としてEP 683232 明細書に記載されるジャスモン酸やジャスモン酸メチルなどのジャスモン酸誘導体の他、EP 727492 明細書に記載されるジャスモン酸のイミノまたはアミノ誘導体、EP 727492 明細書に記載されるコロナチンやコロナファシック酸などのコロナチン誘導体、EP 683232 に記載される重金属を含む化合物および／または重金属イオン、EP 683232 明細書に記載されるアミン類、EP 727492 明細書に記載されるサイクロデキストリンなどの環状多糖類を添加することにより、タキサン型ジテルペンの生産性をさらに高めることができる。
【００２８】
本発明の細胞培養における培養温度としては、通常は約10〜約35℃、特に23〜28℃が増殖速度が大きいので好適である。また、培養期間としては、7〜42日間が好適である。
本発明の培養方法において液体培地を用いた場合には、培養終了後に培養細胞をデカンテーションまたは濾過等の方法によって培地から分離し、培養細胞および／または培地から目的とするタキサン型ジテルペンを有機溶媒による抽出等の方法によって分離することができる。
さらに、本発明の効果を高める方法として、EP 683232 明細書に開示されている、細胞を比重の違いにより複数の層に分け、少なくとも一つの層に含まれる細胞を培養する方法との併用が挙げられる。
【００２９】
また、本発明は、EP 683232 明細書に記載されている本培養条件、すなわち培養器内の気相中の酸素濃度を培養初期より大気中の酸素濃度未満の条件下に制御して培養を行うか、或いは組織および／または細胞と接する流動性の培地中の溶存酸素濃度を培養初期よりその温度に於ける飽和溶存酸素濃度未満である条件下に制御して培養する方法と併用することによって生産性向上を図ることもできる。
【００３０】
【実施例】
以下、実施例および比較例により本発明を更に具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定されるものではない。
〔実施例１〕
(1) 前培養
2％アンチホルミン溶液または70％エタノール溶液等で滅菌処理したTaxus mediaの種子から無菌的に胚を取り出し、その一部をα−ナフタレン酢酸を10-5 Mの濃度になるように添加し、オートクレーブ殺菌した固体WP培地（ゲランガム0.25重量％）に置床し、25℃で暗所にて静置培養してカルスを得た。次にこのカルス4 g（新鮮重）を、α−ナフタレン酢酸を上記と同濃度で添加し、オートクレーブ殺菌した液体WP培地100ml入りの300 ml三角フラスコに移し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅25 mm、100 rpm）し、14日毎に植えつぎ、該カルスの生育速度を速めた（こうして得られた細胞を標準細胞という）。以下、特にことわらない限り振盪培養条件は上記と同様である。
【００３１】
得られた標準細胞を、液体WP培地15 mlおよび20 mlを含む100 mlの三角フラスコに、細胞密度が40 mg新鮮重／mlになるように移植し、14日間培養した（前培養）。
なお、上記の各培地量におけるkLaを前記の方法で測定した結果、培地15 ml では21 h-1、20 mlでは16 h-1であった。
各々のフラスコから吸引濾過によって細胞を回収し、一部を本培養の種細胞とした。残りを凍結乾燥して細胞の乾燥重量を測定し、液体培地１リットル当たりの培養細胞の生育重量を求め細胞収量を算出した。
また、得られた細胞の一部を取って、凍結乾燥した後、メタノール等を用いてタキサン型ジテルペンを抽出し、高速液体クロマトグラフィーを用いて標準品と比較定量することによってタキソールおよびバッカチンIII 収量を測定した。さらに、培地からジクロルメタンを用いてタキサン型ジテルペンを抽出し前記と同様の方法で定量し、前記の細胞からのタキサン型ジテルペン抽出量に加えた。結果を表１に示す。
【００３２】
(2) 本培養
以下の手順で本培養を実施した。まず、ヌンク社製のヌンクマルチディッシュ6に、1ウェル当たり、100 μM のジャスモン酸メチル（JA-Me）を含む液体WP培地4 mlと500 mg新鮮重の前記種細胞を添加し、前記と同様に14日間振盪培養した（本培養）。また、JA-Meを含まない培地についても同様に実施した。
培養終了後、培地をピペットで回収し、ウェル中に残った細胞を凍結乾燥して乾燥重量を測定し、液体培地１リットル当たりの培養細胞の生育重量を求め細胞収量を算出した。また、上記と同様の方法で、タキサン型ジテルペンを抽出し、定量した。結果を表２に示す。なお、本培養のkLaは５ h-1であった。
【００３３】
〔比較例１〕
標準細胞を最初に移植する前培養時の培地液量が、100 mlのフラスコ当たり30 mlおよび40 mlであること以外は、すべて実施例1と同様に操作した。結果を表２に示す。なお、kLaを前記の方法で測定した結果、培地30 ml では9 h-1、40 mlでは6 h-1であった。
【００３４】
【表１】
0003897267.tif 000003
【００３５】
【表２】
0003897267.tif 000004
【００３６】
表１に示すように、前培養終了時に得られる細胞量（細胞収量）やタキサン型ジテルペン生産性（タキソールおよびバッカチンIII 収量）に対する、前培養におけるkLa の影響は認められなかった。
一方、表２に示すように、本培養終了時に得られる細胞量（細胞収量）に対しては前培養におけるkLaの影響は認められないものの、タキサン型ジテルペン生産性（タキソールおよびバッカチンIII 収量）に対しては顕著な影響が認められた。すなわち、実施例１ではタキサン型ジテルペン生産性（タキソールおよびバッカチンIII 収量）が顕著に増加し、JA-Meを含む培地ではさらに増加した。
【００３７】
〔実施例２〕
(1) 前培養
撹拌速度を70 rpmに設定した変型パドル型撹拌翼付きジャーファーメンターに、液体WP培地1.6リットルおよび標準細胞64 g（新鮮重）を移植し、1%の炭酸ガスを含む空気を0.05 vvmおよび0.1 vvmの速度で通気しながら、25℃、暗所で14日間培養した。
得られた培養物から吸引濾過によって細胞を回収し、全量を本培養の種細胞として用いた。
【００３８】
(2) 本培養
本培養は、前記と同じジャーファーメンターに100 μM のジャスモン酸メチルを含む液体WP培地1.5リットルを添加し、前記前培養と同じガスを0.05 vvmの速度で通気しながら行った。その他の培養条件および培養期間は前記前培養と同じである。
得られた細胞および培地中に含まれるタキサン型ジテルペンは、実施例１に記載の方法に従って定量した。各通気条件でのkLaは、前記の方法で測定した。なお、同じ通気速度であっても、前培養ではジャーファーメンター当たりの培地量が多いため、液深が大きくなりkLaは高くなる（通気速度 0.05 vvm ; 前培養時のkLa 22 h-1, 本培養時のkLa 19 h-1) 。得られた結果を表３に示す。
【００３９】
〔比較例２〕
実施例２において、前培養時のジャーファーメンターへの通気速度が、0.02 vvmであること以外は実施例２と同様に操作した。結果を表３に示す。
【００４０】
【表３】
0003897267.tif 000005
【００４１】
表３に示すように、本培養終了時におけるタキサン型ジテルペン生産性（タキソールおよびバッカチンIII 収量）に対しては、前培養におけるkLaの顕著な影響が認められた。すなわち、実施例２ではタキサン型ジテルペン生産性（タキソールおよびバッカチンIII 収量）が顕著に増加した。
以上より、前培養においては、kLaやDOは培養終了時に得られる細胞量（細胞収量）やタキサン型ジテルペン生産性（タキソールおよびバッカチンIII 収量）には影響せず、それらが細胞の潜在生産能力に特異的に影響することは予想外のことであった。
【００４２】
【発明の効果】
本発明によれば、タキサン型ジテルペン産生植物の細胞培養において、タキサン型ジテルペンの生産性を向上させることが可能になる。