(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ミナリ抽出物を含む、cyclin D1遺伝子の発現を抑制し、ウレタンまたはＮＮＫ[{(４-Ｎ-メチル-Ｎ-ニトロソアミノ)-１-(３−ピリジル)-１-ブタノン}]で誘発され得る肺癌を予防するための組成物。
【請求項２】
前記ミナリ抽出物は、溶媒抽出して調製される、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記ミナリ抽出物は、熱水抽出して調製される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
粉末、液体、錠剤、カプセル、ペレットからなる群から選択される形態の、請求項４に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、癌および癌の転移を予防する成分を含む植物ミナリ抽出物に関する。より詳細には、本発明は、発酵食品およびアルコール飲料中に存在するウレタン（ＥＣ（エチルカルバメート））、またはタバコ煙中に存在する発癌性物質であるＮＮＫ［｛（４−Ｎ−メチル−Ｎニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン｝］により誘発される癌および癌の転移を予防することに有用なミナリ抽出物に関する。
背景技術
ウレタンおよびＮＮＫは、種々の癌の発生に関与していることが知られている。
ウレタンは、マウスにおいて、用量依存様式で、肺癌および肝癌を発生させ、ウレタンのヒトにおける安全用量（ｖｉｒｔｕａｌｌｙ  ｓａｆｅ  ｄｏｓｅ、ＶＳＤ）は、肺癌について１．８×１０−４ｍｇ／ｋｇ体重、肝癌について７．２×１０−５ｍｇ／ｋｇ体重であると計算された（Ｋ．Ｉｎａｉら、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．８２，３８０〜３８５頁、１９９１年４月）。
妊娠および催乳の間にウレタンで処理したマウスの子孫は、胎盤伝達によって有意に増加した胎仔癌、肺癌、および卵巣嚢胞腺腫を発症し、そして親の妊娠マウスにおいても、子宮内膜仮形成および子宮血管腫を発生させた（Ｔ．Ｎｏｍｕｒａ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、３３、１６７７−１６８３頁、１９７３、７月）。
経口投与されたウレタンは、マウスにおいて、肺癌、リンパ腫、肝癌、胃乳頭腫、脂腺腺腫、乳房腫瘍、肺腺腫症、偏平上皮細胞腫瘍、白血病、間葉腫などを発生させる（ＩＡＲＣ  ＭＯＮＯＧＲＡＰＨＳ  ＯＮ  ＴＨＥ  ＥＶＡＬＵＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＴＨＥ  ＣＡＲＳＩＮＯＧＥＭＣ  ＲＩＳＣ  ＲＩＳＫ  ＯＦ  ＣＨＥＭＩＣＡＬＳ  ＴＯ  ＭＡＮ、第７巻、１１１〜１３１頁、ｔｈｅ  ｖｉｅｗｓ  ｏｆ  ｔｗｏ  ＩＡＲＣ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ  Ｒｉｓｋｓ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ｔｏ  Ｍａｎ  ｗｈｉｃｈ  ｍｅｔ  ｉｎ  Ｌｙｏｎ、１９７４年２月４日〜１１日、および１９７４年６月１８日〜２４日）。
また、ウレタンは、アルコール発酵で生成され、ワインなどの醸造製品に所定レベルで含まれることから、カナダでは規制対象となっている（Ｅｔｈｙｌ  Ｃａｒｂａｍａｔｅ  ｉｎ  Ａｌｃｏｈｏｌｉｃ  Ｂｅｖｅｒａｇｅｓ  ａｎｄ  Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｆｏｏｄｓ、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  Ｎｏ．４８４、Ｆｏｏｄ  Ｓａｆｅｔｙ  Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ、Ｊｏｈｎ  Ｗ．Ｆｉｎｌｅｙら編、４１９〜４２８頁、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、１９９２年；Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｖｏｌａｔｉｌｅ  Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  Ｇｒａｐｅｓ、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．、第２４巻、第２号、３２９〜３３１頁、１９７６年；ＲＡＴＩＯＮＡＬＥ  ＦＯＲ  ＴＨＥ  ＥＳＴＡＢＬＩＳＨＭＥＮＴ  ＯＦ  ＧＵＩＤＥＬＩＮＥＳ  ＴＯ  ＬＩＭＩＴ  ＥＴＨＹＬ  ＣＡＲＢＡＭＡＴＥ  ＬＥＶＥＬＳ  ＩＮ  ＡＬＣＯＨＯＬＩＣ  ＢＥＶＥＲＡＧＥＳ、ＢＵＲＥＡＵ  ＯＦ  ＣＨＥＭＩＣＡＬ  ＳＡＦＥＴＹ  ＦＯＯＤ  ＤＩＲＥＣＴＯＲＡＴＥ  ＨＥＡＬＴＨ  ＰＲＯＴＥＣＴＩＯＮ  ＢＲＡＮＣＨ，ＨＥＡＬＴＨ  ＆  ＷＥＬＦＡＲＥ  ＣＡＮＡＤＡ、１〜８頁；Ｅｔｈｙｌｃａｒｂａｍａｔｅ  ｉｎ  Ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ  Ｂｅｖｅｒａｇｅｓ  ａｎｄ  Ｆｏｏｄｓ、Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ  Ｓ．Ｏｕｇｈ、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ．、第２４巻、第２号、３２３〜３２７頁）。
ＮＮＫは、タバコ煙中の潜在的発癌物質の１つである（Ｄｊｏｒｄｉｊｅｖｉｃ，Ｍ．Ｖ．ら、Ａ  Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｉｎｓｔｒｅａｍ  ｓｍｏｋｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｅａｄｉｎｇ  Ｕ．Ｓ．ａｎｄ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ．Ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＯＲＥＳＴＡ  ｓｍｏｋｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、２００〜２１７頁、１９９６年、１１月３日〜８日）。
癌の中でも肺癌の発生は、男性女性を問わず、有意に増加し続けている。肺癌の発症は、喫煙、アルコール摂取に大きく関係している。国際癌研究所（Ｔｈｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ａｇｅｎｃｙ  ｆｏｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）は、喫煙とアルコール摂取が、互いに相乗的に消費されることを示し、喫煙およびアルコール飲料接種により全体的に取り込まれたＮＮＫおよびウレタンが肺癌発症の原因であることが示唆されている。喫煙は、男性の癌による脂肪の４５％に、女性の２１．５％に直接的に寄与していることが示されている。今や、肺癌による死亡は、アメリカにおける喫煙者の死亡の主な原因として心疾患に置き換わったように思われる。
喫煙とアルコール接種による発癌を予防する食餌性成分が求められている。
発明の開示
本発明は、癌の発症とその後の転移を予防するミナリ抽出物の食餌性成分に関する。
セリ科に属する植物ミナリは、湿潤な土壌中または籾中で培養し育成され、伝統的には、解毒剤として知られているものである。これは、アルコール排泄を促進することによりアルコールの毒性を非常に効果的に解毒することが知られている。
中国の漢方薬では、ミナリは、黄疸、消化器疾患、神経症、肥満の治療に用いられている。しかしながら、今までのところ、ミナリが癌の発症を予防し、そしてさらに癌の転移をも阻止することは見出されていない。本発明者らは、ミナリ抽出物の食餌性成分が、潜在的前発癌物質の活性化の阻止、そしてまた、発癌性物質の代謝により生産される潜在的フリーラジカルを除去し、そして化学的発癌物質中のフリーラジカル生産体を直接除去することにより、ミナリ抽出物が癌予防に高度に有効であることを見出し、本発明を完成するに至った。
本発明は、癌および癌の転移を予防する成分を含む、ミナリ抽出物を提供する。
本発明の１つの局面において、上記抽出物は、溶媒抽出して調製される。本発明の別の局面において、上記抽出物は、熱水抽出して調製される。
本発明のさらに別の局面において、上記組成物は、ペルシカリン、ヒペロシド、ルチン、クエルセチン、クロロフィル、キサントフィル、イソハメチン、フェネチルイソチオシアネート、フェナルキルイソチオシアネート、フラボン類、フラボノール類、およびｄ−リモネンからなる群から選択される。
本発明のなお別の局面において、上記癌は、ウレタンまたはＮＮＫ［｛（４−Ｎ−メチル−Ｎ−ニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン｝］で誘発され得る癌である。本発明のさらなる局面において、上記癌は、肺癌であるか、または胎盤伝達される癌もしくは胎児癌である。
本発明はさらに、ミナリ抽出物および薬学的に受容可能なキャリアを含む、癌および癌の転移を予防する組成物を提供する。
本発明の１つの局面において、上記組成物は、粉末、液体、錠剤、カプセル、ペレットからなる群から選択される形態である。
発明を実施するための最良の形態
本発明で用いる用語「ミナリ」とは、セリ科［ｆａｍｉｌｙ  Ａｐｉａｃｅａｅ（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ）］に属する植物であって、代表的には、エナンテ属に属する韓国原産トルミナリ（ｄｏｒ−ｍｉｎａｒｉ）を意味する。
用語「ミナリ抽出物」とは、ミナリ植物体（葉、茎、根）から以下に記載する抽出溶媒、通常、脱イオン水で抽出して得た液体およびそれを凍結乾燥して得た粉末を含む固体を意味する。
ミナリ抽出物は、一般的に広く用いられている方法によって調製される。例えば、最初に、ミナリを洗い、乾燥し、粉末にする。そして種々の溶媒を用いて抽出を行う。一般に、抽出溶媒は、ミナリ粉末に対して２〜１０倍重量添加される。そしてその抽出溶媒としては、水、エタノール、プロパノール、ブタノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、酢酸エチル、ヘキサン、塩化メチレン、メタノールが挙げられる。代表的には、水を用いてミナリ抽出物を調製する。上記溶媒の２種以上を混合して用いてもよい。
ミナリ抽出物と溶媒との混合物は、代表的には、室温で２４時間にわたりマグネティックスターラーなどを用いて（１００〜５００ｒｐｍでの回転数）攪拌しながら抽出を行う。例えば、脱イオン水を用いて、７０℃で２４時間連続攪拌して抽出を行う。その後、脱イオン水を分離して、凍結乾燥する。その凍結乾燥した粉末をミナリ抽出物とする。このように調製されたミナリ抽出物に含まれる成分は、当業者に周知のＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）で分離し、そして分離された成分は、その後、ＮＭＲ法（核磁気共鳴分析法）を用いて同定され得る。
本発明者らは、このようにして得られたミナリ抽出物中には、ペルシカリン（ｐｅｒｓｉｃａｒｉｎ）、ヒペロシド（ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ）、ルチン（ｒｕｔｉｎ）、クエルセチン（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）、クロロフィル（ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｌｌ）、キサントフィル（ｘａｎｔｈｏｐｈｙｌｌ）、イソハメチン（ｉｓｏｈａｍｅｎｅｔｉｎ）、フェンアルキルイソチオシアネート（ｐｈｅｎａｌｋｙｌｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）、フェネチルイソチオシアネート（ｐｈｅｎｅｔｈｙｌｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ）、フラボン類（ｆｌａｖｏｎｓ）、フラボノール類（ｆｌａｖｏｎｏｌｓ）、およびｄ−リモネン（ｄ−ｌｉｍｏｎｅｎｅ）が含まれることをＮＭＲ分光法により確認した。
これら天然物質のいくつかは、抗酸化剤として知られ、これらの成分は、相乗的に作用して発癌を予防すると考えられる。従って、これらの成分を含むミナリ抽出物は、スーパーオキシドおよびヒドロキシフリーラジカルなどの種々のフリーラジカルを捕捉し、それによって、ＮＮＫ（多環式芳香族炭水化物ｐｏｌｙａｒｏｍａｔｉｃ  ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎｓ，アザアレーンａｚａ−ａｒｅｎｅｓ、芳香族アミンａｒｏｍａｔｉｃ  ａｍｉｎｅ、アルキルアルデヒド抱合体ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ａｌｋｙｌａｌｄｅｈｙｄｅ、ホルムアルデヒドｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ、ＮＯ、ウレタンｕｒｅｔｈａｎｅ、およびニコチンｎｉｃｏｔｉｎｅ、ニトロソアミンｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅなどの発癌性化学物質中の潜在的発癌物質））、ウレタン（発酵食品およびアルコール飲料中のエチルカルバメートｅｔｈｙｌ  ｃａｒｂａｍａｔｅ、アルキルカルバメートａｌｋｙｌ  ｃａｒｂａｍａｔｅ）などによって誘発された肺癌および転移性腫瘍を阻止し得る。あるいは、これら成分は、種々の癌遺伝子の発現を阻止し得る。
ミナリ抽出物は、単独で用いてもよいし、Ｏｓｔｅｒｉｃｕｍ  ｃｏｒｅａｎｕｍ、Ｏｅｎａｎｔｈｅ  ｓｔｏｌｉｎｉｆｅｒａ、Ｏｅｎａｎｔｈｅ  ｊａｖａｎｉｃａとの配合により用いてもよい。
ミナリ抽出物は、乾燥粉末剤、食品に添加する添加剤および飲料剤、カプセル剤、錠剤、一般的結合剤を用いて作製されるペレット剤などの剤形として使用することができる。以下に本発明に関する方法論の詳細を、実施例に述べるが、特許請求の範囲を限定することは意図されない。
例えば、本発明は、発酵食品およびアルコール飲料中に存在する発癌性物質および／またはタバコ煙中に存在する潜在的発癌性物質に対する種々の投与剤形におけるミナリ抽出物治療の研究に基づいている。しかし、本発明者および出願人は、この本願発明を他の型の癌および転移性癌（他の発癌性物質により引き起こされた癌を含む）の予防に対しても適用し得る。さらに、実験計画およびそのプロトコルもまた、改変して実施することが可能である。
各濃度のミナリ抽出物を含有する食餌が、ウレタンで処理されたマウスの肺組織中のｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１遺伝子の表現レベルに影響を与えるか否かを調べることにより確認され得る。また本発明のミナリ抽出物の癌および癌の転移を予防する効果は、各濃度のミナリ抽出物を含有する食餌が、発癌性であるウレタンで処理されたマウスの肺組織中のＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）の発現レベルに影響を与えるか否かを調べることにより確認され得る。
さらに、本発明のミナリ抽出物の癌および癌の転移を予防する効果は、各濃度のミナリ抽出物を含有する食餌が、発癌性であるウレタンで処理されたマウスの肺組織中８−ＯＨデオキシグアノシンを測定することにより、ＤＮＡへの酸化的損傷を阻害する程度を調べることにより確認され得る。さらに、本発明のミナリ抽出物の癌および癌の転移を予防する効果は、各濃度のミナリ抽出物を含有する食餌が、タバコの潜在的発癌性物質であるＮＮＫで処理されたマウスの肺癌発生を阻止するか否かを調べることにより確認され得る。
なおさらに、本発明のミナリ抽出物の癌および癌の転移を予防する効果は、各濃度のミナリ抽出物を含有する食餌が、タバコの潜在的発癌性物質であるＮＮＫで処理されたマウスの肺組織中のＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）の発現レベルを抑制する程度を調べることにより確認され得る。
以下、本願発明を、実施例を挙げて説明する。
（実施例１：ミナリ抽出物によるウレタン活性の効果的阻害）
（ステップ１：肺癌予防）
Ａ／Ｊマウスを３群に分け、各群に、ヒトのウレタン曝露レベルの１０，０００、２０，０００、および４０，０００倍（１２５、２５０、および５００ｍｇ／ｋｇ体重）のウレタンを単回胃管栄養法にて投与した。
次いで、各群をさらに２実験群に分けた。一方の群（ミナリ処置群）には乾燥ミナリ抽出物を飼料の５％として添加した飼料を４ヶ月間適宜与え、他方の群（ウレタン対照群）には、通常飼料を与えた。その結果を図１に示したが、肺癌発生率はミナリ処置群において有意に減少した（ｐ＜０．０５）。
（ステップ２：発癌遺伝子ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１発現レベルの抑制）
Ａ／Ｊマウスを対照群およびウレタン投与群に分けた。ウレタン投与群をさらに３群に分け、そして各群に、１２５、２５０、および５００ｍｇ／ｋｇの投与量のウレタンを投与した。ウレタン投与した各群を、さらに２実験群に分けた。一方の群（ウレタン単独投与群）には通常飼料を与え、他方の群（ウレタン＋ミナリ群）には、５％濃度にミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間与えた。実験終了時にｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１発現レベルを測定した（第９１癌学会発表論文Ｎｏ．５３１３：Ｉ．Ｐ．Ｌｅｅ，Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１−ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ  Ｂ１  ｉｎ  Ｆｅｍａｌｅ  Ａ／Ｊ  ｍｉｃｅ，２０００年４月１５日）。結果を図２に示す。ウレタン単独投与群は、ミナリ処置群と比較して、４倍高い結果を示した。
（ステップ３：ＰＣＮＡ発現の阻害）
Ａ／Ｊマウスを対照群およびウレタン投与群に分けた。ウレタン投与群をさらに３群に分け、そして各群に、１２５、２５０、および５００ｍｇ／ｋｇの投与量のウレタンを投与した。ウレタン投与した各群を、さらに２実験群に分けた。一方の群（ウレタン単独投与群）には通常飼料を与え、他方の群（ウレタン＋ミナリ群）には、５％濃度にミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間与えた。実験終了時に細胞周期のＳ期におけるＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）を測定した（（第９１癌学会発表論文Ｎｏ．５３１３：Ｉ．Ｐ．Ｌｅｅ，Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１−ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｂｙ  Ｆｕｍｏｎｉｓｉｎ  Ｂ１  ｉｎ  Ｆｅｍａｌｅ  Ａ／Ｊ  ｍｉｃｅ，２０００年４月１５日））。結果を図３に示す。ウレタン単独投与群のＰＣＮＡレベルは、ウレタン＋ミナリ群と比較して、４倍上昇していた。
（工程４：８−ＯＨデオキシグアニン濃度により示されたＤＮＡ損傷に対する抑制）
Ａ／Ｊマウスを対照群およびウレタン投与群に分けた。ウレタン投与群をさらに３群に分け、そして各群に、１２５、２５０、および５００ｍｇ／ｋｇの投与量のウレタンを投与した。ウレタン投与した各群を、さらに２実験群に分けた。一方の群（ウレタン単独投与群）には通常飼料を与え、他方の群（ウレタン＋ミナリ群）には、５％濃度にミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間与えた。実験終了時に８−ＯＨデオキシグアニン濃度を測定した。結果を図４に示す。ミナリ処置群の８−ＯＨデオキシグアニン濃度は、ウレタン単独処置群と比較して、有意に減少していた。
（実施例２：効果的にＮＮＫ活性化を抑制し、癌を予防するミナリ抽出物）
（ステップ１：肺癌発生の阻止）
タバコ煙の潜在的発癌性物質であるＮＮＫを、ＮＮＫ単独投与（＋通常飼料）群、ＮＮＫ投与＋ミナリ添加飼料（１．２５、２．５、および５％（ｗ／ｗ））の合計４群のＡ／Ｊマウスに投与した。ここで、ＮＮＫの投与量は、タバコ１箱を１００年以上吸い続けた量に相当する（Ｄｊｏｒｄｉｊｅｖｉｃ，Ｍ．Ｖ．ら、Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｅｄ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｍａｉｎｓｔｒｅａｍ  ｓｍｏｋｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｅａｄｉｎｇ  Ｕ．Ｓ．ａｎｄ  Ｊａｐａｎｅｓｅ  ｃｉｇａｒｅｔｔｅｓ．Ｉｎ：Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＣＯＲＥＳＴＡ  ｓｍｏｋｅ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｍｅｅｔｉｎｇ、２００〜２１７頁、１９９６年、１１月３日〜８日）。４ヶ月後、Ａ／Ｊマウスにおける肺癌多重度を測定した。
結果は、図５に示すように、ミナリ抽出物を粉末として２．５ｇおよび５％投与した群の癌発生率は有意に低かった（ｐ＜０．０５）。
（ステップ２：癌遺伝子であるｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１の抑制）
Ａ／Ｊマウスを、水単回腹腔内投与（＋通常飼料）群、ＮＮＫ（４ｍｇ）の単回腹腔内投与（＋通常飼料）群、またはＮＮＫ単回腹腔内投与（＋１．２５％ミナリ抽出物濃度添加飼料）の３実験群に分けた。４ヶ月後、各実験群における癌遺伝子、ｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１発現レベルを測定した。結果は、図６に示すように、ミナリ処理群では、癌遺伝子の１つであるｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１発現レベルが、ＮＮＫコントロール群と比較して、半分以下に減少していることが示された（ｐ＜０．０５）。このことから、ミナリ抽出物はｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１発現の点では、有意にＮＮＫ活性を阻害することが示された。
（ステップ３：ＰＣＮＡ発現の阻害）
Ａ／Ｊマウスを、水単回腹腔内投与（＋通常飼料）群、ＮＮＫ（４ｍｇ）の単回腹腔内投与（＋通常飼料）群、またはＮＮＫ単回腹腔内投与（＋１．２５％ミナリ抽出物濃度添加飼料）の３実験群に分けた。４ヶ月後、各実験群におけるＰＣＮＡ発現レベルを測定した。結果は、図７に示すように、ＰＣＮＡ表現レベルは水単独投与群と比較して、ＮＮＫ処理群において有意に上昇していた。一方、ＮＮＫ投与にミナリ処理（飼料中１．２５％、ｗ／ｗ）を行った群は、水投与群と比較して、有意にＰＣＮＡ発現レベルを阻害した（ｐ＜０．０５）。
産業上の利用可能性
本発明者は、ミナリ抽出物が発癌性食物およびアルコール飲料の中に存在するウレタンによって、そしてタバコ煙中に存在するＮＮＫ［｛（４−Ｎ−メチル−Ｎニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン｝］によって誘発される肺癌を阻止し得ることを確認し、本発明を完成した。ミナリ抽出物による癌予防の考えられるメカニズムとしては、前発癌性物質がより活性のある発癌性物質に活性化される段階を阻止し、またミナリ抽出物中の多くのフリーラジカルスカベンジャーによりタバコ煙中やアルコール飲料中に存在するフリーラジカルを除去することが考えられる。さらに、本発明の目的は、非常に効果的な化学予防物質を含有しているミナリ抽出物の食餌性成分を用いることにより、代表的には、肺を標的にした発癌性物質による肺癌の発症やその結果として起こる癌転移を予防することである。
実施例において詳細に示したように、ミナリ抽出物は、発酵食品、アルコール飲料、タバコ煙中に存在する発癌性物質によって誘発される肺癌あるいは他の癌を潜在的に予防し、医薬産業において、非常に重要である。
【図面の簡単な説明】
図１は、３つのＡ／Ｊマウス実験群に、胃管栄養法でそれぞれ異なる量のウレタンを単回投与して４ヶ月後の、誘発させた肺癌の多重度の違い、およびミナリ抽出物の抑制効果を示す。３つの実験群に、それぞれ、１２５、２５０、５００ｍｇ／ｋｇの用量でウレタンを単回投与し、各々さらに２つの小群に分けた。そして一方の群には、通常飼料を与え（ウレタン対照群）、他方の群には、５％濃度（ｗ／ｗ）でミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間自由摂取させた（ウレタン＋ミナリ）。実験終了後、各群の肺癌多重発生率（癌数／マウス）を観察した。
図２は、３つのＡ／Ｊマウス実験群に、胃管栄養法でそれぞれ異なる量のウレタンを単回投与して４ヶ月後の、癌遺伝子であるｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１の肺組織における発現レベルの違い、およびミナリ抽出物の抑制効果を示す。３つの実験群に、それぞれ、１２５、２５０、５００ｍｇ／ｋｇの用量でウレタンを単回投与し、各々さらに２つの小群に分けた。そして一方の群には、通常飼料を与え（ウレタン対照群）、他方の群には、５％濃度（ｗ／ｗ）でミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間自由摂取させた（ウレタン＋ミナリ）。実験終了後、各群のｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１の発現レベルを測定した。
図３は、３つのＡ／Ｊマウス実験群に、胃管栄養法でそれぞれ異なる量のウレタンを単回投与して４ヶ月後の、肺組織におけるＳ−ｐｈａｓｅ細胞周期のＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）発現レベルの違い、およびミナリ抽出物の抑制効果を示す。３つの実験群に、それぞれ、１２５、２５０、５００ｍｇ／ｋｇの用量でウレタンを単回投与し、各々さらに２つの小群に分けた。そして一方の群には、通常飼料を与え（ウレタン対照群）、他方の群には、５％濃度（ｗ／ｗ）でミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間自由摂取させた（ウレタン＋ミナリ）。実験終了後、各群の肺組織におけるＰＣＮＡレベルを測定した。
図４は、３つのＡ／Ｊマウス実験群に、胃管栄養法でそれぞれ異なる量のウレタンを単回投与して４ヶ月後の、肺組織における単離ＤＮＡの８−ＯＨデオキシグアノシンのレベルおよびミナリ抽出物の抑制効果を示す。３つの実験群に、それぞれ、１２５ｍｇ／ｋｇ（データ示さず）、２５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ（データ示さず）の用量でウレタンを単回投与し、各々さらに２つの小群に分けた。そして一方の群には、通常飼料を与え（ウレタン対照群）、他方の群には、５％濃度（ｗ／ｗ）でミナリ抽出物を添加した飼料を４ヶ月間自由摂取させた（ウレタン＋ミナリ）。実験終了後、各群の肺組織における単離ＤＮＡの８−ＯＨデオキシグアノシンのレベルを測定した。
図５は、４つのＡ／Ｊマウス実験群に対して、それぞれ異なる量の、タバコの煙中の潜在的発癌性物質であるＮＮＫ［｛（４−Ｎ−メチル−Ｎニトロソアミノ）−１−（３−ピリジル）−１−ブタノン｝］を、単回腹腔内投与して４ヶ月後の、誘発肺癌の多重度およびミナリ抽出物の抑制効果を示す。ここで４つの実験群とは、ＮＮＫ対照群（４ｍｇ  ＮＮＫ投与）、ミナリを３種の異なった投与量で（１．２５、２．５、５％、ｗ／ｗでミナリを飼料中に添加）、自由摂取させた３つの群である。
図６は、３群、対照として水を腹腔内接種した後、通常飼料を４ヶ月間自由摂取させた群（ＣＴＬ）、ＮＮＫ単回腹腔内投与（４ｍｇ）した後、通常飼料を４ヶ月間自由摂取させた群（図中０で示される）、およびミナリ抽出物を添加した飼料（１．２５％、ｗ／ｗ）を、４ヶ月間自由摂取させた後の、各群の肺組織における癌遺伝子であるｃｙｃｌｉｎ  Ｄ１の発現レベルおよびミナリ抽出物の抑制効果を示している。
図７は、コントロール群（水）、ＮＮＫコントロール群、ＮＮＫ−ミナリ投与群（１．２５％、ｗ／ｗ）の３つの実験群の肺組織のＳ−ｐｈａｓｅにおけるＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）の発現レベルにおける違いおよびミナリ抽出物の抑制効果を示す。ＮＮＫ群には、４ｍｇのＮＮＫを単回投与した。ＮＮＫ−ミナリ投与群には、ＮＮＫを単回投与した後、１．２５％（ｗ／ｗ）濃度でミナリ抽出物を飼料中に添加し、そして他の群には通常飼料を与え、それぞれ、４ヶ月自由摂取させた。実験終了後、各群の肺組織におけるＰＣＮＡレベルを測定した。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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