(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
リゾチーム、エタノール、酢酸及び乳酸からなるリゾチーム製剤において、リゾチームの濃度が０．５〜１０％、エタノールの濃度が３〜１２％であり、かつ酢酸を０．０００２〜０．０５％、乳酸を０．０５〜０．１％含有し、酢酸と乳酸の配合比が１：５００〜１：１であることを特徴とするリゾチーム製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、溶液状のリゾチーム製剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
リゾチームは細菌の細胞壁を溶菌する作用を有していることから、従来より、食品等の静菌剤として、また、デンプンの糖化工程等の製造工程における微生物の制御のために使用されている。
【０００３】
しかしながら、リゾチームは、食品等に対し少量添加することで充分な静菌効果等を奏するものの、粉末状のリゾチームをそのまま添加しようとすると均一に分散させることが難しく、ある部分によっては、その効果が十分に得られず、細菌の増殖を招くこと等が問題となっていた。
【０００４】
そこで、リゾチームを食品等に、均一に分散し易くすることを目的として、従来より、溶液状のリゾチーム製剤が使用されている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、従来の溶液状のリゾチーム製剤は、分散性は良いものの、リゾチーム濃度が０．５％以上のものにおいて、光による影響で保管中に褐変する傾向があり、より光安定性に優れたリゾチーム製剤が望まれている。
本発明の目的は、従来のリゾチーム製剤に比べより光安定性に優れたリゾチーム製剤を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記の目的を達成すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、（１）  リゾチーム、エタノール、酢酸及び乳酸からなるリゾチーム製剤において、リゾチームの濃度が０．５〜１０％、エタノールの濃度が３〜１２％であり、かつ酢酸を０．０００２〜０．０５％、乳酸を０．０５〜０．１％含有し、酢酸と乳酸の配合比が１：５００〜１：１であることを特徴とするリゾチーム製剤、である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
以下本発明を詳細に説明する。尚、本発明において「％」はすべて「重量％」を意味する。
本発明において「リゾチーム」とは、グラム陽性菌に対する周知の酵素的殺菌活性を有するヒトのリゾチームに構造的及び機能的に類似することを特徴とする蛋白質をいい、種々の原料、例えば、卵白、イチジク、ヒト、牛、馬、七面鳥、鶏、微生物等から常法により抽出して得られるもので、等電点リゾチームばかりでなく、塩化リゾチーム等のリゾチーム塩を用いてもよい。リゾチームの濃度としては、０．５〜１０％が好ましい。０．５％より少ないと、光による影響でリゾチ−ム製剤が保管中に褐変するという問題はないものの、十分な静菌効果を得るためには、食品等にリゾチーム製剤を多量に添加する必要があり、これでは食感を損なうため好ましくない。一方、１０％より多いと、後述するエタノールと組合わせた場合、リゾチームが溶解し難く、また溶解したとしても、保管中に一部が析出し沈殿してしまい、均一なリゾチーム製剤を得られないため好ましくない。
【０００８】
また、本発明において「エタノール」とは、エチルアルコールのことであり、一般的には工業的に発酵法あるいは合成法で製造されているものを用いることができる。また、各種変性剤を添加した変性エタノールを用いてもよい。エタノール濃度としては、３〜５０％が望ましい。３％より少ないと、リゾチーム製剤自体が細菌的に問題となり日持ちを損なうため望ましくない。一方、５０％より多いと、リゾチームの溶解性を損ない、リゾチームの濃度が０．５〜１０％の安定な製剤を得られないため望ましくない。
【０００９】
また、本発明において「モノカルボン酸」とは、カルボキシル基を有する有機化合物において、１個のカルボキシル基を有する有機酸をいい、例えば、乳酸、酢酸、プロピオン酸、安息香酸、ソルビン酸等が挙げられ、これらの１種又は２種以上のみを有機酸として使用することが好ましい。２個以上のカルボキシル基を有する有機酸、あるいは２個以上のカルボキシル基を有する有機酸とモノカルボン酸とを併用した場合は、光による影響で保管中にリゾチーム製剤が褐変するため好ましくない。
また、モノカルボン酸の内、酢酸及び／又は乳酸を使用すると、より光安定性に優れ、さらに酢酸及び乳酸を使用し、かつ酢酸と乳酸の配合比が１：５００〜１：１であるものは、特に光安定性に優れていた。
【００１０】
本発明のリゾチーム製剤が、なぜ光安定性に優れているかその理由は定かでないが、リゾチーム製剤に従来より使用されているモノカルボン酸以外の有機酸、例えば、クエン酸、フマル酸、アジピン酸等は、２個以上のカルボキシル基を有しており、かつカルボキシル基同志が分子内で近い位置にあるため、光の影響により分子内で脱水反応を起こし、反応性の高い酸無水物が生成され、これがリゾチーム中のアミノ基とアミノカルボニル反応（メイラード反応）を起こし、リゾチーム製剤が褐変したのに対し、モノカルボン酸は、分子内にカルボキシル基が１個しかないため、このような一連の反応が起きにくかったのではないかと推察される。
【００１１】
本発明のリゾチーム製剤を製するには、リゾチームとモノカルボン酸、さらに所望によりカルボキシル基が２個以上の有機酸以外の他の静菌剤を、エタノールと水の混合液に溶解してあれば、特に、限定するものではないが、水溶性のものは水に、水不溶性（脂溶性）のものはエタノールにそれぞれ溶解後、エタノール溶液を水溶液に徐々に添加し溶解させるほうが、短時間に製することができ作業性がよい。
【００１２】
すなわち、リゾチーム、モノカルボン酸及び所望により他の水溶性の静菌剤、例えば、グリシン、ポリリジン、プロタミン等を水に溶解させる。一方、水不溶性（脂溶性）の静菌剤、例えば、グリセリン脂肪酸エステル等をエタノールに溶解させ、先の水溶液に徐々に添加し溶解すれば、目的の溶液状のリゾチーム製剤を得ることができる。
【００１３】
次に本発明を実施例・試験例に基づき、さらに詳細に説明する。
【実施例】
実施例１
精製水８５．８ｋｇに氷酢酸１０ｇ、５０％濃度の発酵乳酸１８０ｇ及びリゾチーム２ｋｇをプロペラ攪拌機で溶解した。この水溶液を攪拌させながらエタノール１２ｋｇを添加し、さらに１０分間攪拌しリゾチーム製剤を得た。
得られたリゾチーム製剤を１Ｌ（リットル）容量の低密度ポリエチレン試薬ビンに充填し密封し、直射日光の当たる南向きの窓際に１４日間静置しても、褐変及び沈殿物の発生はなかった。なお、直射日光の当たる南向きの窓際に１４日間保存することは、３６Ｗ（ワット）の蛍光灯の１ｍ下に約６ヶ月保存したのに相当した。
【００１４】
実施例２
精製水８５．８ｋｇに氷酢酸２０ｇ、５０％濃度の発酵乳酸１００ｇ、リゾチーム３ｋｇ及びグリシン１ｋｇをプロペラ攪拌機で溶解した。この水溶液を攪拌させながらエタノール１０ｋｇを添加し、さらに１０分間攪拌しリゾチーム製剤を得た。
得られたリゾチーム製剤を１Ｌ（リットル）容量の低密度ポリエチレン試薬ビンに充填し密封し、直射日光の当たる南向きの窓際に１４日間静置しても、褐変及び沈殿物の発生はなかった。
【００１５】
【試験例】
試験例１
（測定試料の調製）
表１の配合比率で、実施例１と同様な方法（但し、マグネティクスターラーを攪拌装置として使用した。）によりリゾチーム製剤を得た。得られたリゾチーム製剤を２５０ｍＬ（ミリリットル）容量の低密度ポリエチレン試薬ビンに充填し密封し、直射日光の当たる南向きの窓際に１４日間静置した。
【００１６】
（評価方法）
これらのリゾチーム製剤の保存前及び保存後の３７０ｎｍ（ナノメートル）における吸光度を測定し、保存による吸光度の増加（ΔＡ370nm ) により、褐変の度合いを評価した。また、目視により、その褐変の度合い及び沈澱物の発生の有無を観察した。なお、保存前のリゾチーム製剤はいずれも無色透明であった。
【００１７】
【表１】
0003966580.tif 000002
【００１８】
表１より、リゾチーム濃度が０．５％より少ない系では、カルボキシル基を２個以上有するクエン酸を配合した製剤（対照品１）でも、わずかに褐変している程度であったが、リゾチーム濃度が０．５〜１０％の系では、モノカルボン酸である乳酸を配合した製剤（発明品２〜４）は、褐変していたとしてもわずかなのに対し、クエン酸を配合した製剤（対照品３）は、褐変していた。
また、リゾチーム濃度が１０％より多い系（対照品４）では、エタノール濃度を３％と少ない状態としていても沈澱物が発生していた。
すなわち、リゾチーム濃度が０．５％以上でさらに有機酸及びエタノールを配合したリゾチーム製剤では、リゾチーム濃度を０．５〜１０％の範囲とし、かつ有機酸をモノカルボン酸とすることにより、光安定性に優れ、しかも沈澱物の発生が無い好ましい品位を得られることが理解される。
【００１９】
試験例２
試験方法
（測定試料の調製）
表２の配合比率で、試験例１と同様な方法で調製した。なお、試験例１と同じ原料については、同じ商品のものを使用した。
（評価方法）
試験例１の評価方法でリゾチーム製剤を評価した。なお、保存前のリゾチーム製剤はいずれも無色透明であり、また保存後はいずれも沈澱物は発生していなかった。
【００２０】
【表２】
0003966580.tif 000003
【００２１】
表２より、カルボキシル基を２個以上有する有機酸を配合した製剤（対照品４及び５）は、いずれも褐変しているのに対し、モノカルボン酸を配合した製剤（発明品５〜１３）は、褐変していたとしてもわずかであった。
すなわち、リゾチーム濃度が０．５〜１０％でさらに有機酸及びエタノールを配合したリゾチーム製剤では、有機酸をモノカルボン酸とすることにより、光安定性に優れた好ましい品位を得られることが理解される。
【００２２】
また、モノカルボン酸の内酢酸及び／又は乳酸を配合した製剤（発明品５、６及び８〜１３）は、他のモノカルボン酸であるプロピオン酸を配合した製剤（発明品７）より、褐変の度合いは弱く、さらに酢酸及び乳酸を１：５００〜１：１と配合した製剤（発明品９〜１２）は褐変しておらず、より光安定性に優れた好ましい品位を得られることが理解される。
なお、他の有機酸については、ここでは示していないが、酢酸、乳酸、プロピオン酸以外の他のモノカルボン酸はプロピオン酸と、またカルボキシル基を２個以上有する他の有機酸は、クエン酸あるいはフマル酸と同様な傾向を示した。
【００２３】
【発明の効果】
以上述べたように、本発明のリゾチーム製剤は、光安定性に優れていることより、長期間保管しても化学的に安定なリゾチーム製剤を提供することができる。