(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
血清アルブミンを含有し、かつ、Ｆｉｓｃｈｅｒ比（分岐鎖アミノ酸／［フェニルアラニン＋チロシン］（モル比））が２０以上である分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸および水を含有する、末梢静脈内または中心静脈内等へ経静脈内投与するためのアミノ酸含有アルブミン製剤。
【請求項２】
血清アルブミンの含有量が、０．０１〜１．０ｗ／ｖ％である請求項１記載のアルブミン製剤。
【請求項３】
分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸の含有量が、５〜１０ｗ／ｖ％である請求項１記載のアルブミン製剤。
【請求項４】
全アミノ酸含有量に対する分岐鎖アミノ酸含有量が、３０ｗ／ｗ％以上である請求項１記載のアルブミン製剤。
【請求項５】
血清アルブミンの含有量が、０．０１〜１．０ｗ／ｖ％であり、分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸の含有量が、５〜１０ｗ／ｖ％であり、全アミノ酸含有量に対する分岐鎖アミノ酸含有量が、３０ｗ／ｗ％以上であり、さらにＦｉｓｃｈｅｒ比（分岐鎖アミノ酸／［フェニルアラニン＋チロシン］（モル比））が２０以上である請求項１記載のアルブミン製剤。
【請求項６】
血清アルブミンの含有量が、０．０１〜１．０ｗ／ｖ％であり、分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸の含有量が、５〜１０ｗ／ｖ％であり、全アミノ酸含有量に対する分岐鎖アミノ酸含有量が、３０ｗ／ｗ％以上であり、さらにＦｉｓｃｈｅｒ比（分岐鎖アミノ酸／［フェニルアラニン＋チロシン］（モル比））が２０以上であり、かつ、下記アミノ酸組成を有する末梢静脈内または中心静脈内等へ経静脈内投与するためのアルブミン製剤。
【表】
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【請求項７】
肝疾患治療のために使用される請求項１記載のアルブミン製剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
技術分野
本発明は肝性脳症、肝性昏睡などを含む肝機能不全の治療に使用するアルブミン製剤、特に分岐鎖アミノ酸を多く含有するアミノ酸を含むアルブミン製剤に関する。
【０００２】
背景技術
肝性脳症は、肝硬変や劇症肝炎などの肝機能不全時にしばしばみられる合併症であり、種々の精神神経症状を呈する。脳症の初期症状としては、自制心がなくなったり、睡眠のリズムが乱れ、昼夜が逆転する症状が現れる。次いで、判断力が低下し、錯乱状態となり、最後には完全な昏睡状態に陥り、外来刺激にも反応しなくなる。
【０００３】
肝性脳症の原因については、１つには主に腸内で細菌により産生されたアンモニアが吸収され、肝で解毒されることなく、脳内へ移行することが重視されている。そのため、従来から腸内細菌を除く目的で抗生物質、あるいはアンモニアの吸収抑制の目的でラクツロースの投与などが行われている（特開平１０−１５８１７２号公報など）。しかし、その治療効果は、未だ十分ではない。
【０００４】
また、その他の病因として、重症肝障害時には、血漿中のＬ−フェニルアラニン、Ｌ−トリプトファンおよびＬ−チロシンなどの芳香族アミノ酸の濃度が増加し、一方、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシンおよびＬ−バリンなどの分岐鎖アミノ酸濃度が減少する血漿遊離アミノ酸パターンの不均衡が注目されている。この血漿遊離アミノ酸パターンの不均衡が、血液脳関門を介して、脳内へのアミノ酸輸送に異常をきたし、脳内での神経伝達物質の正常な産生を阻害し、偽性神経伝達物質を産生するなど、脳内のアミノ酸代謝異常をきたす。その結果、肝性脳症が発生するという説がある。
【０００５】
そこで、新しい治療法としては、分岐鎖アミノ酸を多く含み、芳香族アミノ酸を減少させたアミノ酸製剤を投与する治療が行われており（特公平３−２８４０３号公報、特開平１−８３０１７号公報、特開平３−１２７７３７号公報）、このような組成を有する製剤が肝性脳症治療剤として上市されている（ＪＪＰＥＮ，１１（９），１１３７，１９８９）。しかし、このようなアミノ酸製剤も、急性肝不全での脳症の治療効果は約４６％にすぎず、その効果は十分とはいえない（新薬と臨床、３１，１７５−１８５，１９８２）。
【０００６】
一方、本発明者らはこのような肝障害疾患時には血清アルブミンを補給して、血中アルブミン濃度を回復しておけば、アミノ酸製剤として投与されたアミノ酸は血清アルブミン合成に消費されることなく、アミノ酸インバランス状態をスムーズに改善することができ、その結果、肝性脳症時の脳内アミノ酸代謝異常を速やかに改善することができると考えた。
【０００７】
本発明の目的は、従来のアミノ酸製剤における肝性脳症の発症防止と症状の改善効果を増強するアルブミン製剤を提供することにある。
【０００８】
発明の開示
本発明者らは、上記目的を達成するため、種々検討したところ、分岐鎖アミノ酸を含むアミノ酸製剤に血清アルブミンを添加することにより、肝性脳症に対して優れた治療効果を奏することを見い出した。すなわち、補給された血清アルブミンによって、血中血清アルブミン濃度を正常状態に回復すれば、同時に投与されたアミノ酸が肝臓で血清アルブミンなどの蛋白質合成に消費されることなく、アミノ酸不均衡を解消することを見出し、本発明に到達した。
【０００９】
すなわち、本発明は血清アルブミンを含有し、かつ、分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸および水を含有するアミノ酸含有アルブミン製剤である。
【００１０】
本発明において、分岐鎖アミノ酸としては、側鎖に分岐アルキル基を有するアミノ酸、すなわち、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシンがあり、これらのアミノ酸はいずれも使用する。他のアミノ酸としては、脂肪族アミノ酸である直鎖アミノ酸（グリシン、Ｌ−アラニン）、ヒドロキシアミノ酸（Ｌ−セリン、Ｌ−トレオニン）、酸性アミノ酸（Ｌ−アスパラギン酸、Ｌ−グルタミン酸）、アミド型アミノ酸（Ｌ−アルパラギン、Ｌ−グルタミン）、塩基性アミノ酸（Ｌ−リジン、Ｌ−ヒドロキシリジン、Ｌ−アルギニン）、含硫アミノ酸（Ｌ−システイン、Ｌ−シスチン、Ｌ−メチオニン）があり、さらに、芳香族アミノ酸（Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−チロシン）、複素環式アミノ酸（Ｌ−トリプトファン、Ｌ−ヒスチジン）、複素環式イミノ酸（Ｌ−プロリン）などがある。これらのアミノ酸も１種またはそれ以上を使用する。これらのアミノ酸は、例えば、塩酸塩、酢酸塩などの塩として用いることができる。
【００１１】
分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸の含有量は、製剤に対して、５〜１０ｗ／ｖ％である。全アミノ酸含有量に対する分岐鎖アミノ酸含有量は、３０ｗ／ｗ％以上であり、Ｆｉｓｃｈｅｒ比（分岐鎖アミノ酸／［フェニルアラニン＋チロシン］（モル比））が２０以上である。アミノ酸の含有量が５ｗ／ｖ％未満であると、肝疾患に対する治療効果が十分に発揮できない。また、１０ｗ／ｖ％を超えると、アミノ酸量が多くなり、水に溶解しないなど、調製が困難となる。一方、分岐鎖アミノ酸含有量が３０ｗ／ｗ％未満であると、肝不全治療に対する分岐鎖アミノ酸を多く含有するアミノ酸製剤の本来の特長を失ってしまう。また、Ｆｉｓｃｈｅｒ比が２０未満になると、肝不全治療効果が減少し、肝疾患治療用アミノ酸製剤の特長を失ってしまう。
分岐鎖アミノ酸を含む複数のアミノ酸は、下記組成を有することが好ましい。
【００１２】
【表１】
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【００１３】
上記アミノ酸を含む溶液としては、従来から公知である薬剤、例えば、アミノレバン（大塚製薬工場製）、モリヘパミン（ヘキスト・マリオン・ルセル製）などが例示される。これらの製剤の組成は既に公知である。
【００１４】
本発明に使用する血清アルブミンは、動物由来の血清アルブミン、遺伝子工学的に生産される血清アルブミンなど、特に限定されない。しかし、抗原性の面から、ヒト由来のアルブミンが望ましい。ヒト由来のアルブミンとしては、ヒト血清から精製されたアルブミン、遺伝子工学的に生産されたヒト血清アルブミンなどが例示されるが、通常、医療用として用いられる血清アルブミンと同等のものであれば良い。また、ウイルス不活性化のため、加熱処理された血清アルブミンが好ましい。加熱処理する際、熱に対する血清アルブミンの安定性を高めるため、適切な安定化剤を添加することが好ましい。該安定化剤としては、具体的には、Ｎ−アセチルトリプトファンナトリウムやカプリル酸ナトリウムなどが挙げられる。
【００１５】
さらに、本発明においては、ウイルス混入を避ける目的で、遺伝子工学的に生産された血清アルブミンの使用が好適である。遺伝子組換え技術により得られる血清アルブミンの製法については、特に限定されない。通常、血清アルブミンをコードする遺伝子をベクターに挿入し、該ベクターで宿主となる細胞、例えば、酵母、大腸菌あるいは動物細胞などを形質転換し、形質転換された細胞を培養して、遺伝子組換血清アルブミンを採取する。血清アルブミンは培養上清あるいは培養細胞から、単離、精製される。血清アルブミンの純度は総蛋白質の９９％以上であることが好ましい。
【００１６】
本発明に用いる血清アルブミンの量は、その製剤中に０．０１〜３ｗ／ｖ％であり、好ましくは、０．１〜１．０ｗ／ｖ％である。血清アルブミン含有量が０．０１ｗ／ｖ％未満であると、肝疾患に対して治療効果が増強されない。また、血清アルブミン含有量が３ｗ／ｖ％を超える製剤を急速に大量投与すると、心過負荷などの循環障害および肺浮腫を起こす可能性がある。
【００１７】
本発明の製剤は、上記アミノ酸および血清アルブミンを含有する水溶液または用時溶解可能である固形剤であり、無菌水溶液の形態で調製される。通常、注射用蒸留水にこれらの成分を溶解する。したがって、該製剤は、ヒト体液のｐＨを考慮して、ｐＨは、５．０〜７．４、好ましくはｐＨ６．０〜７．４である。ｐＨ調整剤としては、塩酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸などの酸を使用する。
【００１８】
また、本発明のアルブミン製剤には、必要量のビタミン、例えば、ビタミンＡ、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ６、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ニコチン酸、パントテン酸、ビオチン、葉酸などのビタミン類およびビタミン様化合物、ナトリウム、カリウム、カルシウム、クロル、リンなどの電解質、ならびに鉄、亜鉛、マンガン、銅、ヨウ素、セレンなどの微量元素を添加することができる。
【００１９】
さらに糖、例えばマルトース、フラクトース、キシリトールなど、ならびに脂質、例えば、大豆油、綿実油、ゴマ油などの栄養素を添加することができる。
その他、亜硫酸水素ナトリウムなどの安定化剤など、または人体に投与可能な他の物質を添加することができる。
【００２０】
本発明のアルブミン製剤としては、１剤型（例えば、全組成を溶解した１液剤）、または２剤型（例えば、アミノ酸を溶解した液剤とアルブミン製剤との２製剤）などがある。
【００２１】
本発明のアルブミン製剤を収容する容器としては、例えば、１〜２室からなるプラスチック製バッグ、または１〜２個のガラス容器あるいは１室からなるプラスチック製バッグがあり、その他として、プラスチック製バッグとガラス容器の組み合わせがある。その一例として、本発明のアルブミン製剤の全成分を注射用蒸留水に溶解して、プラスチック製バッグの１室に充填してもよいし、その成分を分けて上下の２室に充填してもよい。具体的には、容器は通称ダブルバッグといわれる柔軟なプラスチック製バッグであって、このバッグは手で強く押さえることにより容易に剥離する帯状の熱溶着されたシールにより隔離された上下の２室を有する容器である。各室には薬剤注入口または排出口が設けられている。このバッグの王室にアミノ酸を含む溶液を充填し、血清アルブミンを粉末、固形あるいは溶液として、上室に充填する。その他の容器としては注射筒あるいはプレフィルドシリンジがあり、血清アルブミンの溶液をこれらに充填した剤型と、アミノ酸溶液をバッグに充填した剤型をキット製剤としても用いることができる。
【００２２】
本発明の製剤を製造するには、上記アミノ酸を含む溶液に血清アルブミン、例えば血清アルブミン水溶液あるいは凍結乾燥血清アルブミンを添加する方法がある。
【００２３】
本発明のそれぞれの成分を含有する薬剤は滅菌する必要がある。滅菌法としては、通常の高圧蒸気滅菌法、低温加熱滅菌法、濾過滅菌法などを単独あるいは組み合わせて用いることができる。
なお、本発明のアルブミン製剤は、末梢静脈内または中心静脈内等へ経静脈内投与され、一般には、１日、成人１人当たり、約１００〜２０００ｍｌ、好ましくは約５００〜１０００ｍｌを目安として、これを１日当たり１〜２回に分けて、投与すべき患者の病態、栄養状態、年齢、体重等を考慮して、適宜、増減させて使用する。
【００２４】
発明を実施するための最良の形態
以下、実施例を用いて、本発明を詳細に説明する。
【００２５】
製造例１
下記組成を有するアルブミン製剤を調製した。
アミノ酸溶液（組成は表２に記載） ５００ｍｌ
ラット血清血清アルブミン（ＲＳＡ、シグマ社製） １ｇ
上記処方に従い、溶解後、１．０Ｎ塩酸を用いてｐＨを６．６〜７．４に調製した。浸透圧比は２．８〜３．２であった。この薬液を５００ｍｌ用点滴瓶に注入し、ゴム栓をして、６０℃、１０時間、加熱滅菌した。滅菌後の薬液はｐＨ６．６〜７．４、浸透圧比２．８〜３．３であった。
【００２６】
【表２】
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【００２７】
製造例２
下記アルブミン製剤を調製した。
Ａ．アミノ酸溶液（組成は表３に記載） ９８０ｍｌ
Ｂ．１２．５ｗ／ｖ％市販ヒト血清アルブミン製剤 ２０ｍｌ
上記アミノ酸溶液Ａ．を注射用蒸留水に溶解し、１．０Ｎ塩酸を用いてｐＨ６．６〜７．４に調製し、ダブルバックの下室に充填入し、封入後、１２１℃、３０分間、加熱滅菌した。一方、アルブミン製剤Ｂ．（１２．５ｗ／ｖ％血清アルブミン）をダブルバックの下室に充填し、６０℃、１０時間滅菌した。使用時に、ダブルバックの２液を混合した。混合後の薬液はｐＨ６．６〜７．４、浸透圧比２．８〜３．３であった。
【００２８】
【表３】
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【００２９】
製造例３
アミノ酸溶液（組成は表３に記載）  ５００ｍｌ
ヒト血清血清アルブミン（ＨＳＡ、シグマ社製）  ０．０５、０．５または５．０ｇ
上記処方を注射用蒸留水に溶解し、１．０Ｎ塩酸を用いてｐＨ６．６〜７．４に調製し、口径０．２２μｍのメンブランフィルター濾過により除菌し、プラスチック製バッグに充填した。この製剤を密閉容器内で、遮光して室温で保存した。充填後の薬液はｐＨ６．６〜７．４、浸透圧比２．８〜３．３であった。
【００３０】
試験例１
被験薬は、製造例３に準じ、アミノ酸溶液（組成は表３に記載）に、ラット血清血清アルブミン（ＲＳＡ、シグマ社製）を０．１ｗ／ｖ％および１．０ｗ／ｖ％になるように溶解後、１．０Ｎ塩酸でｐＨ６．６〜７．４に調製し、５００ｍｌ点滴ビンに充填し、ゴム栓をして、６０℃、１０時間、加熱して調製した。比較のために、生理食塩液、アミノ酸溶液（ｐＨ６．６〜７．４）単独を同様に使用した。
【００３１】
部分肝切除ラットの作製は、ＳＤ系雄性ラット（体重２００−２３０ｇ）をエーテル麻酔下に開腹し、外側左葉、内側左葉および内側右葉を切除（６７％）し、閉腹した（Ａｒｃｈｓ．Ｐａｔｈｏｌ．，１９８５；１２：１８６−２０２）。
【００３２】
肝性脳症モデル動物は、部分肝切除した４８時間後、２Ｍ酢酸アンモニウム液を３ｍｌ／ｋｇの割合で、ラット腹腔内に投与して作製した（基礎と臨床、１９８７；２１：２５０９−２５２７）。
【００３３】
被験薬は、アンモニウム液投与の２分前に、ラット尾静脈から投与（１０ｍｌ／ｋｇ）した。その後、昏睡時間（分）を測定するとともに、アンモニウム液投与３０分後に、ラット尾静脈から採血し、アンモニア測定試薬キット（商標名、デタミナーＮＨ３、協和メッデックス社製）を用いて、血漿中のアンモニア濃度を測定した。その結果を表４に示す。
なお、酢酸アンモニウム液投与により、ラットの昏睡が発現したことから、肝性脳症モデル動物が作製できたことを確認した。
【００３４】
【表４】
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【００３５】
表４から明らかなように、ラット血清血清アルブミン（ＲＳＡ）単独では肝性脳症に対して効果はなかった。アミノ酸溶液単独は対照群と比較して血中アンモニア濃度の有意な低下作用と、有意差はないが昏睡時間を短縮する傾向を示した。一方、本発明のアルブミン製剤（アミノ酸溶液＋ＲＳＡ）はアミノ酸溶液単独に比べて、有意な昏睡時間の短縮作用と血中アンモニア濃度低下作用がみられ、肝性昏睡に対する治療効果の増強が認められた。
【００３６】
試験例２
被験薬は、アミノ酸溶液（組成は表３に記載）に、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ、シグマ社製）を所定の濃度（０．００１、０．０１、０．１または１．０ｗ／ｖ％）になるように、製造例３と同様にして、溶解調製した。使用動物はＳＤ系雄性ラット（体重２００−２３０ｇ）を１群６〜１４匹を用い、肝性脳症モデル動物の作製および試験方法は、試験例１と同様に行った。被験薬は１０ｍｌ／ｋｇを尾静脈内に投与した。
【００３７】
【表５】
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【００３８】
表５から明らかなように、アミノ酸溶液は対照群と比較して昏睡時間には有意な短縮効果みられなかったが、血中アンモニア濃度を有意に低下させた。一方、ＨＳＡ単独では昏睡時間および血中アンモニア濃度に対して作用を示さなかった。しかし、アミノ酸溶液に０．０１ｗ／ｖ％以上の濃度のＨＳＡを添加した本発明のアルブミン製剤は、アミノ酸溶液単独と比較して有意な昏睡時間の短縮作用と血中アンモニア濃度の低下作用を認めた。
【００３９】
試験例３
被験薬は、アミノ酸溶液（組成は表３に記載）に、牛血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ社製）を所定の濃度（０．１ｗ／ｖ％または１．０ｗ／ｖ％）になるように、製造例３と同様にして、溶解調製した。肝性脳症モデル動物の作製および試験方法は試験例１と同様に行った。その結果を表６に示す。
【００４０】
【表６】
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【００４１】
表６から明らかなように、本発明のアルブミン製剤は、アミノ酸溶液単独に比べて、有意な昏睡時間の短縮作用を認めた。
【００４２】
試験例４
被験薬は、アミノ酸溶液（組成は表３に記載）に、ヒト血清アルブミンを所定の濃度（０．０１、０．１、１．０ｗ／ｖ％）になるように、製造例３と同様にして、溶解調製した。試験動物はＳＤ系雄性ラット（体重２００〜２３０ｇ）を１群５匹として使用した。アンモニア脳症モデル動物は試験例１と同様に部分肝切除後、２Ｍ酢酸アンモニウム液を投与して作製した。被験薬はアンモニウム液投与２分前に１０ｍｌ／ｋｇの割合で静脈内投与した。アンモニウム液投与１．５時間後にエーテル麻酔下にて腹下大動脈より採血した。血液に等容積の５ｗ／ｖ％トリクロロ酢酸液を速やかに添加し、遠心分離後、アミノ酸分析器（Ｄ−７０００、日立製作所）を用いて、上清について血清中の遊離アミノ酸濃度を測定した。また、血清中のアミノ酸濃度からＦｉｓｃｈｅｒ比を求めた。その結果を表７に示す。
【００４３】
【表７】
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【００４４】
正常なラットの場合のＦｉｓｃｈｅｒ比は３〜４の範囲にある。生理食塩液群は、ヒトの重篤な肝障害疾患、肝硬変の場合と同様に、Ｆｉｓｃｈｅｒ比が著しく低値であった。１ｗ／ｖ％ＨＳＡ群はＦｉｓｃｈｅｒ比の改善はみられないが、アミノ酸溶液群では有意な改善効果がみられた。さらに、本発明のアルブミン製剤（アミノ酸溶液＋０．０１、０．１または１ｗ／ｖ％ＨＳＡ）群は、他のいずれの投与群と比較しても有意な改善効果がみられた。
【００４５】
以上の結果から、肝疾患時に生じる血中アミノ酸濃度低下およびその不均衡に対して、アミノ酸を含有するアルブミン製剤は改善効果を有することが明らかとなった。
【００４６】
産業上の利用可能性
上記したように、本発明のアルブミン製剤はアミノ酸溶液の単独投与に比較して、肝性脳症モデル動物の血中アンモニア濃度をより強く低下させ、また、昏睡時間も短縮させる。したがって、本発明のアミノ酸含有アルブミン製剤は肝性脳症、肝性昏睡などを含む肝機能不全の治療に優れた効果を奏するものと考えられる。