(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
0004001913.tif 000093
［式中、
Ｒ1、Ｒ3およびＲ5はすべて水素である；
Ｒ2およびＲ4はそれぞれ独立にＣ3〜Ｃ6分枝鎖アルキル、フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキルである；
Ｒ7は、14ＣＨ3、13ＣＨ3、ＣＤ3、Ｃ3Ｈ3および／または13ＣＤ3で任意に置換されたＣ1〜Ｃ4アルキル、またはＣＨ2ＯＲ8（式中、Ｒ8は水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、任意に置換されたＣ3〜Ｃ7飽和または不飽和シクロアルキル（置換基はＣ1〜Ｃ4アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＲ6、ＮＲ6、ここでＲ6は水素、ＣＦ3、Ｃ1〜Ｃ2アルキルまたはＣ1〜Ｃ2フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキル））である；
Ｒ9はＣ1〜Ｃ4アルキルである；
ＸはＣＯＯＲ16、ＣＯＮＨＲ17またはＣＯＮＲ17Ｒ18（式中、Ｒ16は水素またはＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｒ17およびＲ18はそれぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、または任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリール（置換基はＯＨ、Ｆ、Ｂｒ、ＣｌまたはＩ）である、ただし、Ｒ17とＲ18とは同時にアリールまたはヘテロアリールではない）；
破線は任意の二重結合を示す；
波線はシスまたはトランス配置のいずれかで存在する炭素−炭素結合を示す；
ただし、Ｒ7の隣に二重結合がない場合はＲ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5のうちの最大３つが水素であり得る］
で示される化合物。
【請求項２】
Ｒ2およびＲ4がそれぞれ独立にイソプロピルまたはｔ−ブチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−イソプロピルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ノナ−２，４，６−トリエン酸よりなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
レチノイド化合物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
１００ｎＭ未満の濃度で１またはそれ以上のレチノイド受容体の５０％最大活性化を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
５０ｎＭ未満の濃度で１またはそれ以上のレチノイド受容体の５０％最大活性化を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
２０ｎＭ未満の濃度で１またはそれ以上のレチノイド受容体の５０％最大活性化を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
１０ｎＭ未満の濃度で１またはそれ以上のレチノイド受容体の５０％最大活性化を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項９】
選択的ＲＡＲアゴニストとしての活性を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項１０】
ＲＸＲよりもＲＡＲに対して少なくとも２倍強力なアクチベーターである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ＲＸＲよりもＲＡＲに対して少なくとも５倍強力なアクチベーターである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１２】
ＲＸＲよりもＲＡＲに対して少なくとも１０倍強力なアクチベーターである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１３】
ＲＸＲよりもＲＡＲに対して少なくとも１００倍強力なアクチベーターである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１４】
選択的ＲＸＲアゴニストとしての活性を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項１５】
ＲＡＲよりもＲＸＲに対して少なくとも２倍強力なアクチベーターである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ＲＡＲよりもＲＸＲに対して少なくとも５倍強力なアクチベーターである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１７】
ＲＡＲよりもＲＸＲに対して少なくとも１０倍強力なアクチベーターである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１８】
ＲＡＲよりもＲＸＲに対して少なくとも１００倍強力なアクチベーターである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
ＲＡＲとＲＸＲとの両者のアクチベーターとして汎アゴニスト活性を示す、請求項４に記載の化合物。
【請求項２０】
１μｇ／ｋｇ体重〜５００ｍｇ／ｋｇ体重の化合物を含む投与単位の形態として調合される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２１】
１０μｇ／ｋｇ体重〜２５０ｍｇ／ｋｇ体重の化合物を含む投与単位の形態として調合される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２２】
２０μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の化合物を含む投与単位の形態として調合される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２３】
皮膚関連疾患および状態の治療、癌状態および前癌状態の治療、目の疾患の治療、心血管系疾患の治療、炎症性疾患の治療、神経変性疾患の治療、アポトーシスの変調が関与する疾患の治療、免疫系疾患の治療、異常な下垂体機能の治療、ヒトパピローマウイルスが関与する疾患の治療、損傷治癒または毛髪増殖の回復に有効な、請求項１に記載の化合物。
【請求項２４】
請求項１に記載の化合物と薬理学的に許容しうる担体とを含む医薬組成物。
【請求項２５】
経口、局所、静脈内、坐剤または非経口投与用に調合してある、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
該化合物を１μｇ／ｋｇ体重〜５００ｍｇ／ｋｇ体重含む投与単位として調合される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
該化合物を１０μｇ／ｋｇ体重〜２５０ｍｇ／ｋｇ体重含む投与単位として調合される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
該化合物を２０μｇ／ｋｇ体重〜１００ｍｇ／ｋｇ体重含む投与単位として調合される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
該化合物が、皮膚関連疾患および状態の治療、癌状態および前癌状態の治療、目の疾患の治療、心血管系疾患の治療、炎症性疾患の治療、神経変性疾患の治療、アポトーシスの変調が関与する疾患の治療、免疫系疾患の治療、異常な下垂体機能の治療、ヒトパピローマウイルスが関与する疾患の治療、損傷治癒または毛髪増殖の回復に有効な、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
ＲＡＲおよび／またはＲＸＲの活性に影響を及ぼす医薬を調製するための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項３１】
ＲＡＲ受容体および／またはＲＸＲ受容体により媒体されるプロセスを調節する医薬を調製するための請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項３２】
レチノイド療法を必要とする患者を治療するための医薬を調製するための請求項４に記載の化合物の使用。
【請求項３３】
該化合物が、皮膚関連疾患および状態の治療、癌状態および前癌状態の治療、目の疾患の治療、心血管系疾患の治療、炎症性疾患の治療、神経変性疾患の治療、アポトーシスの変調が関与する疾患の治療、免疫系疾患の治療、異常な下垂体機能の治療、ヒトパピローマウイルスが関与する疾患の治療、損傷治癒または毛髪増殖の回復に有効な、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
レチノイド療法を必要とする患者を治療するための医薬を調製するための請求項２４に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３５】
該組成物が、皮膚関連疾患および状態の治療、癌状態および前癌状態の治療、目の疾患の治療、心血管系疾患の治療、炎症性疾患の治療、神経変性疾患の治療、アポトーシスの変調が関与する疾患の治療、免疫系疾患の治療、異常な下垂体機能の治療、ヒトパピローマウイルスが関与する疾患の治療、損傷治癒または毛髪増殖の回復に有効な、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
請求項１に記載の化合物を１またはそれ以上の未知のレチノイド受容体を含有する試料と混合し、ついで該化合物が該試料中の受容体に結合するか否かを決定することからなる、試料中の１またはそれ以上のＲＡＲ受容体および／またはＲＸＲ受容体の存在の決定方法。
【請求項３７】
請求項１に記載の化合物がＲＡＲ受容体および／またはＲＸＲ受容体に結合することによって形成されるリガンド−レチノイド受容体複合体。
【請求項３８】
請求項１に記載の化合物をＲＡＲ受容体および／またはＲＸＲ受容体を含有する試料と混合し、該化合物を該受容体に結合させ、ついで該化合物と該ＲＡＲ受容体および／またはＲＸＲ受容体との結合体を分離することからなる、レチノイド受容体の精製方法。
【請求項３９】
（ａ）式：
0004001913.tif 000094
（式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7およびＲ9は請求項１と同じ）で示されるトリエノエートアルデヒドをアリールスルホニルヒドラジドと反応させて対応ヒドラゾンを生成させ、ついで
（ｂ）該ヒドラゾンをトリチドで還元して対応トリチウム標識トリエノエートを得る
ことを特徴とする、請求項１に記載のトリチウム標識化合物の製造方法。
【請求項４０】
該トリチウム標識トリエノエートを鹸化して式：
0004001913.tif 000095
（式中、Ｒ1、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ7およびＲ9は請求項１と同じ）で示される対応トリエン酸を得ることをさらに含む、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
発明の技術分野
本発明は、レチノイン酸受容体およびレチノイドＸ受容体に対する活性を有する化合物、および該化合物の治療学的使用方法に関する。
発明の背景
ビタミンＡ代謝産物であるレチノイン酸は、広スペクトルの生物学的作用を誘発することが長い間認められてきている。さらに、レチノイン酸の種々の構造的アナログも合成されており、これらも生物学的活性を有することがわかっている。レチン−Ａ（Ｒetin−ＡR）やアクタン（ＡccutaneR）などの幾つかのものは種々の病理学的状態の処置のための治療剤としての有用性を有することがわかっている。さらに、合成レチノイドはレチノイン酸の薬理作用の多くを模倣することがわかっている。
医学研究者はレチノイドの治療学的応用に多大な興味を抱いている。ＦＤＡによって認可されている用途の中には重篤なアクネおよび乾癬の治療がある。これら化合物が、日光に長期間暴露されて生じる皮膚損傷の効果を阻止し、さらにある程度まで逆行させることを示す莫大な証拠もまた存在する。これら化合物が、種々の癌状態および前癌状態、たとえば黒色腫、子宮頸癌、幾つかの形態の白血病、舌白斑および基底細胞および偏平上皮細胞の癌腫などの治療および予防に有用であるとの他の証拠も存在する。レチノイドはまた、目、心血管系、免疫系、皮膚、呼吸器および消化器の疾患の治療および予防、並びに損傷治癒を容易にし、プログラムされた細胞死（アポトーシス）を調節する薬剤として効力を有することも示されている。
レチノイン酸シグナル伝達の分子メカニズムに対する主な洞察は、１９８８年にステロイド／甲状腺ホルモン細胞内受容体スーパーファミリーの成員がレチノイン酸シグナルを伝達することが示されたときに得られた。エバンス（Ｅvans）、Ｓcience、２４０：８８９〜９５（１９８８）；ジゲール（Ｇiguere）ら、Ｎature、３３０：６２４〜２９（１９８７）；ペトコビッチ（Ｐetkovich）ら、Ｎature、３３０：４４４〜５０（１９８７）。現在では、レチノイドが、２つの異なる細胞内受容体サブファミリーであるレチノイン酸受容体（ＲＡＲ）およびレチノイドＸ受容体（ＲＸＲ）（そのイソ型であるＲＡＲα、β、γおよびＲＸＲα、β、γを含む）の活性を制御していることがわかっている。この点に関し、ＲＡＲの転写活性を調節する内在性の低分子量リガンドは全トランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）であり、一方、ＲＸＲの内在性リガンドは９−シスレチノイン酸（９−シス）である。ヘイマン（Ｈeyman）ら、Ｃell．６８：３９７〜４０６（１９９２）およびレビン（Ｌevin）ら、Ｎature、３５５：３５９〜６１（１９９２）。
ＲＡＲおよびＲＸＲの両者ともＡＴＲＡにインビボで応答するが、ＡＴＲＡの幾つかが９−シスにインビボ変換されるため、これら受容体は幾つかの重要な観点において異なっている。第一に、ＲＡＲとＲＸＲとは一次構造において有意に異なっている（たとえば、ＲＡＲαとＲＸＲαとのリガンド結合ドメインは２７％しかアミノ酸の同一性を有しない）。これら構造上の差異は、種々のビタミンＡ代謝産物および合成レチノイドに対するＲＡＲおよびＲＸＲの相対的応答性の度合いの差異として反映されている。さらに、ＲＡＲとＲＸＲとで組織分布パターンが明らかに異なる。たとえば、内臓組織では高レベルで発現されることのないＲＡＲと対照的に、ＲＸＲαのｍＲＮＡは肝臓、腎臓、肺、筋肉および腸において最も豊富に存在することが示されている。最後に、ＲＡＲとＲＸＲとは異なる標的遺伝子特異性を有する。たとえば、最近、応答要素が、ＲＸＲには応答性を付与するがＲＡＲには付与しない細胞質レチナール結合タンパク質II型（ＣＲＢＰII）遺伝子およびアポリポタンパク質ＡＩ遺伝子において同定されている。さらに、ＲＡＲが、ＣＲＢＰII ＲＸＲ応答要素を通じてＲＸＲ媒体活性化を抑制することもまた最近示されている（マングルスドルフ（Ｍanglesdorf）ら、Ｃell．６６：５５５〜６１（１９９１））。これらデータは、２つのレチノイン酸応答経路が単純に重複するものではなくて複雑な相互作用を呈示することを示している。
これら受容体の関連はしているが明らかに異なる性質に鑑み、ＲＡＲサブファミリーまたはＲＸＲサブファミリーに一層選択性のレチノイドは、ＲＡＲまたはＲＸＲイソ型の１またはそれ以上によって媒体されるプロセスを選択的に制御するうえで多大の価値を有し、ＲＡＲまたはＲＸＲによって媒体される生理プロセスの独立した制御能を与えるであろう。加えて、ＲＡＲおよびＲＸＲの両者の１またはそれ以上のイソ型を活性化する汎アゴニスト（pan-agonist）レチノイドもまた、レチノイド受容体のこれらサブファミリーの両者によって媒体されるプロセスを制御するうえで価値を有するであろう。さらに、受容体イソ型のすべてではないが１またはそれ以上に優先的に作用するレチノイドもまた、治療学的応用に使用したときに治療効能を増大させ、副作用プロフィールを減少させる可能性を提供する。
種々のポリエン化合物が、炎症状態、乾癬、アレルギー反応の治療に、および化粧品調製物において日焼け止め剤として有用であることが開示されている。たとえば、米国特許第４，５３４，９７９号および同第５，３２０，８３３号を参照。加えて、ヘキサジエン酸のトリエンジオレートはレチノイン酸およびノルレチノイン酸の合成に有用であることがわかっている。オーレル（Ｍ．Ｊ．Ａurell）ら、４９ Ｔetrahedron、６０８９（１９９３）を参照。しかしながら、これら化合物についてレチノイド活性は記載されていない。
発明の要約
本発明は、ＲＡＲおよびＲＸＲに対する選択活性またはＲＡＲおよびＲＸＲの各イソ型の１またはそれ以上に対する汎アゴニスト活性を有する新規なトリエン化合物を提供する。本発明はまた、標識レチノイド化合物、これら新規なトリエン化合物を配合した医薬組成物および該化合物および該医薬組成物の治療学的使用方法をも提供する。
本発明を特徴付ける新規性のこれらおよび種々の他の利点および特性は、添付の請求の範囲において詳細に指摘してあり、本発明の一部を構成するものである。しかしながら、本発明、その利点、およびその使用によって得られる対象物を一層理解するためには、本発明の好ましい態様を説明してある添付の図面および記載事項を参照すべきである。
定義
特に断らない限り、本明細書において下記術語は下記意味を有するものとして定義される。
アルキルなる語は、任意に飽和または不飽和の（その結果、アルケニルおよびアルキニル構造となる）直鎖、分岐鎖または環状構造、およびそれらの組み合わせをいう。
アリールなる語は、任意に置換された６員芳香環をいう。
ヘテロアリールなる語は、酸素、窒素および硫黄よりなる群から選ばれた１またはそれ以上のヘテロ原子を含む、任意に置換された５員または６員のヘテロ環をいう。
レチノイドなる語は、１またはそれ以上のレチノイド受容体に結合および／または活性化する化合物であって、それによって該活性化された受容体と該化合物との複合体に結合する標的遺伝子の転写活性に影響を及ぼすものをいう。
汎アゴニストなる語は、ＲＡＲサブファミリー（すなわち、ＲＡＲα、ＲＡＲβ、またはＲＡＲγ）およびＲＸＲサブファミリー（すなわち、ＲＸＲα、ＲＸＲβ、またはＲＸＲγ）の両者の少なくとも１の成員を活性化するレチノイドをいう。そのような汎アゴニストレチノイドは、レチノイド受容体のＲＡＲおよびＲＸＲサブファミリーの両者の全成員を活性化するのが好ましい。
本明細書において同位体標識または放射性標識とは、重水素、トリチウム、炭素１３および／または炭素１４で標識した置換基をいい、14ＣＨ3、13ＣＨ3、ＣＤ3、Ｃ3Ｈ3および13ＣＤ3を含むが、これらに限られるものではない。
本発明の態様の詳細な説明
本発明の第一の側面によれば、本発明者らは式：
0004001913.tif 000002
0004001913.tif 000003
［式中、
Ｒ1、Ｒ2およびＲ4はそれぞれ独立に水素、アリール、ヘテロアリール、ＣＦ3またはＣ2〜Ｃ6アルキル、フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキル（これらは14ＣＨ3、13ＣＨ3、ＣＤ3、Ｃ3Ｈ3および／または13ＣＤ3で任意に置換されている）である；
Ｒ3およびＲ5はそれぞれ独立に水素、ＣＦ3、Ｃ1〜Ｃ3アルキル、Ｃ1〜Ｃ3フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキル、またはＯＲ6（式中、Ｒ6は水素、ＣＦ3、Ｃ1〜Ｃ2アルキルまたはＣ1〜Ｃ2フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキル）である；ただし、Ｒ3がＣＦ3またはアルキル、フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキルである場合はＲ1およびＲ5はＣＦ3またはアルキル、フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキルではありえない；
Ｒ7は、14ＣＨ3、13ＣＨ3、ＣＤ3、Ｃ3Ｈ3および／または13ＣＤ3で任意に置換されたＣ1〜Ｃ4アルキル、またはＣＨ2ＯＲ8（式中、Ｒ8は水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、任意に置換されたＣ3〜Ｃ7飽和または不飽和シクロアルキル（置換基はＣ1〜Ｃ4アルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、ＯＨ、ＣＦ3、ＯＲ6、ＮＲ6、ここでＲ6は上記と同じ））である；
Ｒ9はＣ1〜Ｃ4アルキルである；
Ｒ10〜Ｒ15はそれぞれ独立に水素、Ｃ1〜Ｃ6アルキルまたはＣＦ3である；
ＸはＣＯＯＲ16、ＣＯＮＲ17またはＣＯＮＨＲ17Ｒ18（式中、Ｒ16は水素またはＣ1〜Ｃ6アルキル、Ｒ17およびＲ18はそれぞれ独立にＣ1〜Ｃ6アルキル、または任意に置換されたアリールもしくはヘテロアリール（置換基はＯＨ、Ｆ、Ｂｒ、ＣｌまたはＩ）である、ただし、Ｒ17とＲ18とは同時にアリールまたはヘテロアリールではない）；
ＹはＣ、Ｏ、ＳまたはＮである、ただし、ＹがＯである場合はＲ14とＲ15とは存在せず、ＹがＮである場合はＲ14とＲ15とはＣＦ3ではありえず、ＹがＳである場合はＲ14とＲ15とはそれぞれ独立にまたは一緒になってＯであるかまたはともに存在しない；
ＷはＮまたはＣＲ16（式中、Ｒ16は上記と同じ）である；
Ｒ19は１またはそれ以上の置換基で任意に置換されたアリールまたはヘテロアリール（置換基は、水素、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＩまたはＣ1〜Ｃ6アルキル）である、ここでＸは上記と同じ；
ｎは０、１または２である；
破線は任意の二重結合を示す；
波線はシスまたはトランス配置のいずれかで存在する炭素−炭素結合を示す；
ただしＲ1、Ｒ2、Ｒ4およびＲ5がすべて水素である場合はＲ3はアリールではない］
で示される新規なトリエン化合物を開発した。
好ましくは、Ｒ1、Ｒ2およびＲ4はそれぞれ独立にＣ3〜Ｃ6分岐鎖アルキル、フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキルを示し、さらに好ましくはＲ2およびＲ4はそれぞれ独立にＣ3〜Ｃ6分岐鎖アルキル、フルオロアルキルまたはペルフルオロアルキルを示すが、Ｒ1、Ｒ3およびＲ5はすべて水素であり、最も好ましくはＲ2およびＲ4はイソプロピル、ｔ−ブチルおよびＣＦ3よりなる群から選ばれるが、Ｒ1、Ｒ3およびＲ5はすべて水素である。
本発明の化合物はまた、すべての薬理学的に許容しうる塩、並びにエステル、アミドおよびプロドラッグをも包含する。そのような塩、エステルおよびアミドは、Ｒ16、Ｒ17および／またはＲ18位で形成されるのが好ましい。本明細書での開示において、薬理学的に許容しうる塩としては、ピリジン、アンモニウム、ピペラジン、ジエチルアミン、ニコチンアミド、ギ酸、尿素、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、リチウム、桂皮酸、メチルアミノ、メタンスルホン酸、ピクリン酸、酒石酸、トリエチルアミノ、ジメチルアミノ、およびトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンが挙げられるが、これらに限られるものではない。他の薬理学的に許容しうる塩は当業者に知られている。
本発明の化合物はレチノイド活性を示し、皮膚関連疾患、たとえば紫外線角化症、ヒ素角化症、炎症性および非炎症性アクネ、乾癬、魚鱗癬および皮膚の他の角化および過剰増殖性疾患、湿疹、アトピー性皮膚炎、ダリエ病、偏平苔癬（これらに限られるものではない）の治療、グルココルチコイド損傷（ステロイド性萎縮）の予防および逆行、局所抗菌剤として、皮膚色素沈着剤として、および加齢および写真が皮膚に及ぼす損傷効果を治療および逆行するために特に有用である。本発明の化合物はまた、癌状態および前癌状態、たとえば乳癌、皮膚癌、前立腺癌、子宮頸癌、子宮癌、直腸癌、膀胱癌、食道癌、胃癌、肺癌、喉頭癌、口腔癌およびリンパ系癌などの前癌性および悪性の過剰増殖性疾患、粘膜の化生、異形成、新形成、白斑症および乳頭腫の予防および治療、およびカポジ肉腫の治療に有用である。さらに、本発明の化合物は、目の疾患、たとえば増殖性の硝子体網膜症（ＰＶＲ）、網膜剥離、ドライアイおよび他の角膜症（これらに限られるものではない）の治療剤として、並びに種々の心血管系疾患、たとえば脂血異常症（dyslipidemias）などの脂質代謝に関連する疾患（これに限られるものではない）の治療および予防、再発狭窄症の予防、および循環組織プラスミノーゲンアクチベーター（ＴＰＡ）のレベルを増加させる薬剤として用いることができる。本発明の化合物の他の使用法としては、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）に付随する状態および疾患、たとえば、いぼおよび性器いぼ、種々の炎症性疾患、たとえば肺線維症、回腸炎、大腸炎およびクローン病、神経変性疾患、たとえばアルツハイマー病、パーキンソン病および筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、異常な下垂体機能、たとえば成長ホルモンの不充分な産生、アポトーシスの変調、たとえばアポトーシスの誘発およびＴ細胞により活性化されたアポトーシスの抑制、毛髪増殖の回復（本発明の化合物とミノキシジルRなどの他の薬剤との組み合わせ療法を含む）、免疫系に付随する疾患（免疫抑制剤および免疫刺激剤としての本発明化合物の使用）の予防および治療、臓器移植拒絶反応の調節および損傷治癒の容易化（ケローシス（chelosis）の調節を含む）が挙げられる。本発明のレチノイド化合物はまた、レチノイド（ＲＡＲ選択的レチノイド、ＲＸＲ選択的レチノイドおよび汎アゴニストレチノイドを含む）を適用しうるいかなる治療においても有用であることが確認されるであろうことが当業者により理解されるであろう。
さらに、本発明の化合物（これら化合物を含有する医薬組成物および製剤を含む）を上記状態および疾患を治療するための広範囲の組み合わせ療法に用い得ることが当業者により理解されるであろう。それゆえ、本発明の化合物は、他の療法、たとえば細胞増殖抑制剤や細胞毒性剤などの化学療法剤、インターフェロン、インターロイキン、成長ホルモンその他のサイトカインなどの免疫調節剤、ホルモン療法、外科および放射線療法（これらに限られるものではない）と組み合わせて用いることができる。
本発明の代表的レチノイドとしては、これらに限られるものではないが、以下のものが挙げられる：（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸エチル；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−イソプロピルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−イソプロピルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（４−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，４−ジエチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−３−メチル−７−（３，４−ジエチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−エトキシフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，４−ジ−ｔ−ブチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−シクロヘキシル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ヘプタ−２，４，６−トリエン酸；（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−ノナ−２，４，６−トリエン酸；および（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−３−メチル−７−（３，４−ジエチル−６−メチルフェニル）ノナ−２，４，６−トリエン酸。
本発明の化合物は当業者によって通常の化学合成により、たとえば開示された化合物の修飾によって、または全合成法によって得ることができる。この観点から、本発明の化合物の合成は、ドーソン（Ｍ．Ｉ．Ｄawson）およびオカムラ（Ｗ．Ｈ．Ｏkamura）の「合成レチノイドの化学および生物学」、第３、８、１４および１６章、ＣＲＣプレス、フロリダ（１９９０）；ドーソンおよびホッブス（Ｐ．Ｄ．Ｈobbs）、Ｔhe Ｓynthetic Ｃhemistry of Ｒetinoids、第２章：「レチノイド、生物学、化学および医学」、スポーン（Ｍ．Ｂ．Ｓporn）ら編（第２版）、ラベンプレス、ニューヨーク、ニューヨーク、５〜１７８頁（１９９４）；リウ（Ｒ．Ｓ．Ｈ．Ｌiu）およびアサト（Ａ．Ｅ．Ａsato）、「ビタミンＡの立体異性体の光化学および合成」、４０ Ｔetrahedron、１９３１（１９８４）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）に記載された、確立されたレチノイドの合成反応式および技術に従って行う。本発明の化合物を合成するための一般的な反応式の工程の手順を下記に示す。さらに、本発明の特定の化合物の一層詳細な合成反応式は本明細書中の実施例に示されるであろう。
一般法１
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一般法１において、本発明の化合物の製造は、アリールケトンＡをホスホン酸エステル、たとえばホスホン酸ジエチルシアノメチルで処理してニトリルＢを得、ついでＢ（式中、任意の一重結合または二重結合を破線で示す）を還元剤、たとえば水素化ジイソブチルアルミニウム（Ｄibal）の存在下で還元してアルデヒドＣを得ることにより行うことができる。アルデヒドＣのシスおよびトランス異性体は、この段階で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）または当業者に認識された他の手順により分離することができる。ついで、これら分離したアルデヒドＣをホスホン酸エステル、たとえばトリエチル−３−アルキル−４−ホスホノクロトネートで処理してトリエン酸エスチルＤを得、これを今度は塩基性条件下で鹸化してカルボン酸Ｅを得る。
別法として下記に示す一般法２を用い、アルデヒドＣのシス異性体をアルキンＦから製造することができる。詳しくは、アリールアルキンＦを、アリールアセトフェノンＡを強塩基、たとえばリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の存在下、リン酸化剤、たとえばＣｌＰＯ（ＥｔＯ）2で処理して製造する。ついで、アリールアルキンＦを塩基、たとえばｎＢｕＬｉの存在下、適当なニトリル源、たとえばＰｈＯＣＮで処理してニトリルＧを得、ついでこれを還元的メチル化に供してニトリルＢのシス異性体のみを得る。ついで、ニトリルＢを対応アルデヒドＣに還元し、上記一般法１と同様にして化合物ＤおよびＥを得る。
一般法２
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本発明の化合物の他のアナログは一般法３により、まずニトリルＢ（式中、任意の一重結合または二重結合を破線で示す）の二重結合を還元してニトリルＩを得ることにより製造することができる。その後、ニトリルＩをＤibalの存在下で還元してアルデヒドＪを得、これを今度はホスホン酸エステル、たとえばトリエチル−３−アルキル−４−ホスホノクロトネートで処理してジエン酸エステルＫを得る。このジエン酸エステルＫをたとえばＫＯＨ／ＭｅＯＨで鹸化してジエン酸Ｌを得る。
一般法３
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本発明の化合物の放射性標識ホモログの製造は下記一般法４により行うことができる。詳しくは、化合物Ａを酸化してメチルエステルＢとし、ついでこれを水素化トリチウム源、たとえばＬｉＡｌ3Ｈ4で還元してアルコールＣとする。このトリチウム化アルコールＣをアルデヒドＤに酸化し、ついでトリエチルホスホノクロトネートのイリドと縮合してトリチウム化エステルＥを得る。ついで、エステルＥを鹸化して最終のトリチウム標識した酸Ｆを高収率、高（＞２０Ｃｉ／ミリモル）比活性にて得る。この方法は、ベーム（Ｂoehm）らの「高比活性の［3Ｈ］−９−シス−レチノイン酸の合成および異常な結合特性を有するレチノイドの同定のためのその応用」、３７ Ｊ．Ｍed．Ｃhem．、４０８〜４１４（１９９４）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）に詳細に記載されている。
一般法４：放射性標識ホモログの製造
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当業者であれば、上記方法にある種の修飾を施すことができ、これら修飾方法も本発明の範囲に包含されることを理解するであろう。たとえば、本発明の化合物はまた対応アミドまたはエステルの形態で製造できホスホン酸エステルの代わりに適当なホスホランを用いることができ、上記合成方法においてＬｉＡｌ3Ｈ4以外の還元剤を用いることもできる。さらに、他の同位体標識、たとえば13ＣＨ3、13ＣＤ3などを用いることもできる。これら標識は、反応式Ｉに示すように適当な標識ＭｅＬｉ（たとえば、13ＣＨ3Ｌｉ）を用いて導入することができる。その後の合成の手順は反応式Ｉに示す通りである。
他の側面において、本発明のレチノイド化合物、その薬理学的に許容しうる塩または加水分解可能なエステルは、薬理学的に許容しうる担体と組み合わせることにより、哺乳動物種、さらに好ましくはヒト患者において本明細書に開示した生物学的状態または疾患を治療するのに有用な医薬組成物を提供する。これら医薬組成物に用いる特定の担体は、所望の投与法、たとえば静脈内、経口、局所、坐剤または非経口投与に応じて広範囲の形態をとることができる。
経口液体剤型の組成物（たとえば、懸濁剤、エリキシル剤および液剤）を調製するに際しては、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、保存剤、発色剤などの典型的な製薬媒体を用いることができる。同様に固形の経口剤型（たとえば、散剤、錠剤およびカプセル剤）を調製するに際しては、デンプン、糖、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤などの担体を用いることができるであろう。錠剤およびカプセル剤は投与が容易なため、本発明の医薬組成物のために最も有利な経口剤型である。
非経口投与のためには担体は一般に滅菌水を含むであろうが、溶解性を補助したり保存剤として機能する他の成分を配合することもできる。さらに、注射用懸濁剤を調製することもでき、その場合は適当な液体担体、懸濁化剤などが用いられるであろう。
局所投与のためには、本発明の化合物を軟膏やクリーム剤などの刺激性の低い保湿性のベースを用いて調合することができる。適当な軟膏ベースの例としては、ワセリン、ワセリンと揮発性シリコーン、ラノリン、およびオイセリン（ＥucerinTM）（バイエルスドルフ）などの油中水型エマルジョンがある。適当なクリーム剤ベースの例は、ニベア（ＮiveaTM）クリーム（バイエルスドルフ）、コールドクリーム（ＵＳＰ）、パーポス（Ｐurpose）クリームTM（ジョンソン＆ジョンソン）、親水性軟膏（ＵＳＰ）、およびルブリダーム（ＬubridermTM）（ウォーナー−ランバート（Ｗarner-Ｌambert））がある。
本発明の医薬組成物および化合物は一般に、投与単位の形態（たとえば、錠剤、カプセル剤など）にて、約１μｇ／ｋｇ体重〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重、さらに好ましくは約１０μｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは約２０μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇにて投与する。当業者には理解されるように、患者に投与される本発明による医薬組成物の特定の量は、所望の生物学的活性、患者の状態、および薬剤に対する耐性（これらに限られるものではない）を含む多くの因子に依存するであろう。
本発明の化合物はまた、標識し、ＲＡＲおよびＲＸＲの存在の決定のためのアッセイに用いたときに有用性を有する。本発明の化合物は、ＲＡＲおよびＲＸＲサブファミリーの成員に選択的に結合する能力のために有用であり、それゆえ他のレチノイド受容体または関連細胞内受容体の存在下、ＲＡＲおよびＲＸＲイソ型の存在を決定するために用いることができる。
それゆえ、本発明はまた、同位体標識した化合物および放射性標識した化合物、および重水素、トリチウム、炭素１３および炭素１４標識ホモログを含むその合成法を提供する。好ましい側面において、本発明の標識化合物は少なくとも１５Ｃｉ／ミリモル、さらに好ましくは少なくとも２５Ｃｉ／ミリモル、最も好ましくは少なくとも４０Ｃｉ／ミリモルの比活性を示す。そのような標識化合物はまた、動物代謝研究における化合物代謝産物の同定においても有用であることがわかるであろう。
本発明の化合物はレチノイド受容体に対して選択的な特異性を有するため、インビトロでＲＡＲおよびＲＸＲの試料を精製するために用いることもできる。そのような精製は、レチノイド受容体を含有する試料を本発明の１またはそれ以上の化合物と混合して該化合物を該受容体に結合させ、ついで結合したリガンド／受容体結合物を当業者に知られた分離法により分離することにより行うことができる。これら方法としては、とりわけカラム分離、濾過、遠心分離、標識（tagging）および物理的分離、および抗体複合体形成が挙げられる。
本発明の化合物はまた、ラセミ混合物、個々の立体異性体およびそれらの混合物をも包含する。これら異性体は、ついで分別結晶およびキラルカラムクロマトグラフィーを含む標準分割法により単離する。
本発明の化合物および医薬組成物は、本明細書に記載した疾患および状態の治療に有利に用いることができる。この観点から、本発明の化合物および医薬組成物はとりわけ、皮膚関連疾患および状態、たとえばアクネ、乾癬の治療、および目の写真損傷、癌および前癌状態、および疾患の治療、心血管系の疾患の治療、炎症性および神経変性疾患の治療、ヒトパピローマウイルスに付随する疾患の治療、異常な下垂体機能の治療、アポトーシスの変調の治療、免疫系の疾患の治療、損傷治癒、および毛髪増殖の回復において有用であることが確認されるであろう。
さらに、本発明の化合物および医薬組成物は、これまでに同定されたレチノイド化合物に対して多くの利点を有する。たとえば、下記にさらに詳細に記載する同時トランスフェクションアッセイにおいて示されるように、本発明の化合物はＲＡＲおよびＲＸＲに対する極めて強力なアクチベーターであり、好ましくは１００ｎＭ未満の濃度、さらに好ましくは５０ｎＭ未満の濃度、さらに一層好ましくは２０ｎＭ未満の濃度、最も好ましくは１０ｎＭ未満の濃度で１またはそれ以上のレチノイド受容体の５０％最大活性化（すなわち、ＥＣ50）を示す。また、本発明のＲＡＲおよびＲＸＲ選択化合物は、レチノイド受容体の一つのサブファミリーを、レチノイド受容体の他のサブファミリーに比べて少なくとも２倍、好ましくは少なくとも５倍、さらに好ましくは少なくとも１０倍、最も好ましくは少なくとも１００倍のレベルで活性化する。さらに、本発明の化合物はまた合成が容易であり、優れた安定性およびバイオアベイラビリティーを与え、全−トランスレチノイン酸および９−シスレチノイン酸（それぞれ、公知のＲＡＲおよびＲＸＲ活性化合物である）に比べて催奇形性が少ないと思われる。
本発明を下記非限定的実施例に基づいてさらに説明する。
実施例１〜２
下記反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（９）および（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（１０）
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３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノン（２）
−７８℃の乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の３，５−ジ−ｔert−ブチル安息香酸１（２０ｇ；８５．５ミリモル）に、ＭｅＬｉの２Ｎエーテル溶液（９４．０ｍＬ；１８８．０ミリモル）を加えた。反応混合物をゆっくりと室温に温め、さらに３０分間撹拌し、ついで飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（２００ｍＬ）中に注いだ。有機生成物をヘキサン（２×１００ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、２ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製してケトン２（１５ｇ；６４．７ミリモル）を得た（７５．７％収率）。ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．８：
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３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブト−２−エンニトリル（３）（トランス）および（４）（シス）
乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のホスホン酸ジエチルシアノメチル（２．４３ｇ；１３．７ミリモル）に、ＮａＨ（鉱油中に６０％）（４４０ｍｇ；１０．９６ミリモル）を加えた。反応液を３０分間撹拌し、ついで乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中のケトン２（１．５９ｇ；６．８５ミリモル）を加えた。１２時間撹拌した後、混合物に飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（５０ｍＬ）を加えて反応停止させ、生成物をエーテル（２×５０ｍＬ）で抽出した。このエーテル抽出物を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、分取ＴＬＣ（ＳｉＯ2、２．５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製してトランス異性体３（１．１ｇ；４．４ミリモル）およびシス異性体４（１０４ｍｇ；０．４ミリモル）（７０％合計収率）を得た。トランス異性体３：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．９；
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３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブト−２−エナール（５）（トランス異性体）
−７８℃のＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）中の化合物３（７３６ｍｇ；２．８９ミリモル）に、トルエン中のＤＩＢＡＬの１．５Ｍ溶液（２．３１ｍＬ；３．４７ミリモル）を加えた。−７８℃で１５分間撹拌した後、反応混合物にロシェル塩の飽和水溶液（１０ｍＬ）を加えて反応停止させた。生成物をエーテル（２×２０ｍＬ）で洗浄し、洗浄し（水ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、３％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物５（４６２．３ｍｇ；１．８０ミリモル）を得た（６２％収率）；ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−９０％ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000013
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブト−２−エナール（６）（シス異性体）
上記化合物５について記載したのと同様の方法を用い、対応シス異性体４からシス異性体６を製造した；ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−９０％ヘキサン）Ｒｆ０．５５；
0004001913.tif 000014
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル（７）
−７８℃の乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）中のトリエチル−３−メチル−４−ホスホノクロトネート（７９０ｍｇ；３．０ミリモル）に、ヘキサン中の２．５Ｍ ｎＢｕＬｉ溶液（１．２ｍＬ）を加えた。１５分間撹拌した後、トリエチルホスホノクロトネートのイリドを含有する溶液を、−７８℃の乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）中のトランス異性体５（２５８ｍｇ；１．０ミリモル）に加えた。反応混合物を室温に温め、飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を加えて反応停止させ、生成物をエーテル（２×５０ｍＬ）で抽出した。このエーテル抽出物を洗浄し（水ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物７のＥ，Ｅ，Ｅ異性体（２９４ｍｇ；０．８ミリモル）を得た（４９％収率）；ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．７８；
0004001913.tif 000015
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル（８）
化合物５の代わりに化合物６を用いる他は２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−異性体７と同様にして２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ異性体８を製造した；ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．８２；
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（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（９）
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−エチルエステル７（１８０ｍｇ；０．４９ミリモル）に、ＮａＯＨの５Ｎ水溶液（１ｍＬ）を加えた。この混合物を１０分間加熱還流し、室温に冷却し、２０％ＨＣｌ水溶液で酸性にし、有機物をエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。エーテル層を洗浄し（Ｈ2Ｏ、食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−異性体９（１５７ｍｇ；０．４６ミリモル）を得た（９３％収率）；ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ−９０％ＣＨＣｌ3）Ｒｆ０．６；ｍｐ１９６〜１９８℃；
0004001913.tif 000017
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（１０）
化合物７の代わりに化合物８を用いる他は化合物９と同様にして２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ−異性体１０を製造した；ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ−９０％ＣＨＣｌ3）Ｒｆ０．５７；ｍｐ２２１〜２２２℃；
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実施例３
下記反応式２により製造する（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸（１４）
0004001913.tif 000019
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブタンニトリル（１１）
ＥｔＯＡｃ（５ｍＬ）中の３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−ブト−２−エンニトリル３（３００ｍｇ；１．１８ミリモル）に、１０％Ｐｄ／Ｃ（２０ｍｇ；触媒量）を加えた。混合物を真空下に０．５分間置き、ついでＨ2ガスを加えた。Ｈ2ガス下で２時間撹拌した後、溶液をセライト濾過し、セライトをＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で洗浄し、溶液を濃縮して還元生成物１１（３００ｍｇ；１．１７ミリモル）を得た（９９％収率）：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．８；
0004001913.tif 000020
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブタナール（１２）
−７８℃のＣＨ2Ｃｌ2（５ｍＬ）中のニトリル１１（３００ｍｇ；１．１７ミリモル）に、トルエン中の１．５Ｍ ＤＩＢＡＬ溶液（０．９３ｍＬ；１．４ミリモル）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で反応停止させ、エーテル（２×２０ｍＬ）で抽出し、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィー（ＳｉＯ2、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して所望のアルデヒド１２（１８８ｍｇ；０．７２ミリモル）を得た（６２％収率）；ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．８；
0004001913.tif 000021
（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸エチル（１３）
化合物７について記載したのと同様にして化合物１３を製造した；ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．８８；
0004001913.tif 000022
（２Ｅ，４Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４−ジエン酸（１４）
化合物９について記載したのと同様にして化合物１３から化合物１４を製造した；ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ−９０％ＣＨＣｌ3）Ｒｆ０．５；ｍｐ１２７〜１２８℃
0004001913.tif 000023
実施例４
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（１０）、下記反応式３による化合物（１０）の製造の別法
0004001913.tif 000024
0004001913.tif 000025
１，３−ジ−ｔ−ブチル−５−エチニルベンゼン（１５）
−７８℃のＴＨＦ中の２．５Ｎ ＬＤＡ溶液（９．８６ｍＬ；２４．７ミリモル）に、乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）中のケトン２（実施例１〜２から）（４．７５ｇ；２０．４７ミリモル）を加えた。３０分間撹拌した後、ジエチルホスホニルクロライド（２．９６ｍＬ；２０．４７ミリモル）を加え、反応混合物を室温に１時間温めた。反応混合物を再び−７８℃に冷却し、ついでＴＨＦ中の２．５Ｎ ＬＤＡ溶液（１９．７ｍＬ；４９．２ミリモル）を加え、室温に温めた。水（５０ｍＬ）を加え、混合物をヘキサン（２×４０ｍＬ）で抽出した。コンバインした有機抽出物を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、２％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物１５（３．０２ｇ；１４．１ミリモル）を得た（６９％収率）；ＴＬＣ（ヘキサン）Ｒｆ０．９；
0004001913.tif 000026
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）プロピオニトリル（１６）
−７８℃の乾燥ＴＨＦ（２５ｍＬ）中のプロピン１５（１．６７ｇ；７．８０ミリモル）に、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中に２．５Ｍ；３．７５ｍＬ；９．３８ミリモル）を加えた。１５分間撹拌した後、ＰｈＯＣＮ（１．１２ｇ；９．４１ミリモル）を加え、反応混合物を室温に温めた。混合物にＮａＯＨの６Ｎ水溶液（２５ｍＬ）を加えて反応停止させ、抽出し（ＥｔＯＡｃ、２×２５ｍＬ）、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物１６（１．７１ｇ；７．１６ミリモル）を白色固体として得た（９２％収率）；ＴＬＣ（ヘキサン）Ｒｆ０．４；
0004001913.tif 000027
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブト−２−エンニトリル（４）（シス異性体）
２５０ｍＬ容の炎乾燥させた丸底フラスコに、無水ヨウ化銅（３．２７ｇ；１７．１７ミリモル）および乾燥ＴＨＦ（２５ｍＬ）を入れた。混合物を０℃に冷却し、ついでＭｅＬｉ（エーテル中に１．４Ｍ）（２４．５ｍＬ；３４．３ミリモル）をゆっくりと加えた。溶液が無色透明になった後、−７８℃に冷却し、乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の化合物１６（１．７１ｇ；７．１６ミリモル）の溶液を滴下した。混合物を−７８℃にて４５分間撹拌し、ＭｅＯＨと飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液との１：１混合物（４０ｍＬ）で反応停止させた。生成物をＥｔＯＡｃ（２×４０ｍＬ）で抽出し、洗浄し（２％ＮａＯＨ、ついで飽和ＮＨ4Ｃｌ、ついで水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、短シリカゲルパッドにより精製してシス異性体４（１．６４ｇ；６．８０ミリモル）を得た（９５％収率）；ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．８；
0004001913.tif 000028
化合物６、８および最終生成物１０の残りの合成手順は上記実施例１〜２の記載と同様にして行った。
実施例５〜６
下記反応式４により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸（２７）および（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸（２８）
0004001913.tif 000029
３，５−ジ−ｔ−ブチルベンジルアルコール（１７）
０℃の乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の酸１（１０．０ｇ；４２．７ミリモル）に、ＬＡＨ（ＴＨＦ中に１．０Ｍ；４２．７ｍＬ；４２．７ミリモル）を加えた。反応混合物を５０℃に温め、１５分間撹拌した。反応液を室温に冷却した後、溶液が透明になるまで２０％ＨＣｌ水溶液を加えた。この溶液をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出し、コンバインしたＥｔＯＡｃ抽出物を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮して、化合物１７（８．８ｇ；４０．０ミリモル）を得た（９４％収率）：この生成物を次工程に直接用いた。ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．４；
0004001913.tif 000030
３，５−ジ−ｔ−ブチルベンズアルデヒド（１８）
ＣＨ2Ｃｌ2（２０ｍＬ）中のアルコール１７（８．８ｇ；４０．０ミリモル）に、ＭｎＯ2（５０．０ｇ；５７５ミリモル）を加えた。反応混合物を８時間激しく撹拌し、上層のセライトと下層のシリカとからなるパッドで濾過した。フィルターから生成物が溶出されなくなるまでフィルターをＣＨ2Ｃｌ2の５０ｍＬアリコートで繰り返し洗浄した。得られた化合物１８（８．３ｇ；３８．１ミリモル）は1Ｈ ＮＭＲにより純粋であると決定され、次工程に直接用いた（９５％収率）：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．６；
0004001913.tif 000031
１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブタン−１−オール（１９）
０℃の乾燥エーテル（１０ｍＬ）中のアルデヒド１８（２．０ｇ；９．１７ミリモル）に、塩化プロピルマグネシウム（エーテル中に２．０Ｍ；５．５ｍＬ；１１．０ミリモル）を加えた。反応混合物を室温に温め、水（５０ｍＬ）で反応停止させ、抽出し（エーテル、２×５０ｍＬ）、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮して、アルコール１９（２．３７ｇ；９．０５ミリモル）を得（1Ｈ ＮＭＲにより純粋）、これを次工程に直接用いた（９８％収率）：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000032
１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ブタン−１−オン（２０）
ＣＨ2Ｃｌ2（１８ｍＬ）中のアルコール１９（２．３７ｇ；９．０５ミリモル）に、ＭｎＯ2（７．８６ｇ；９０．４５ミリモル）を加えた。反応混合物を３時間撹拌し、ついで濾過し（セライト／シリカゲルパッド）、パッドをＣＨ2Ｃｌ2の２０ｍＬアリコートで繰り返し洗浄した。濃縮後、ケトン２０をクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、３％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物２０（９４１ｍｇ；３．６２ミリモル）を得た（４０％収率）：ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−９０％ヘキサン）Ｒｆ０．７；
0004001913.tif 000033
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ヘキサ−２−エンニトリル（２１）（トランス）および（２２）（シス）
乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中のホスホン酸ジエチルシアノメチル（６６１ｍｇ；３．７３ミリモル）に、水素化ナトリウム（鉱油中の６０％分散物；１２７ｍｇ；３．１７ミリモル）を加えた。混合物を５分間撹拌し、ついで乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）中のケトン２０（４８４ｍｇ；１．８７ミリモル）を加えた。反応液を３０分間加熱還流し、室温に冷却し、飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）で反応停止させ、エーテル（２×１５ｍＬ）で抽出し、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。クロマトグラフィー（分取ＴＬＣ、ＳｉＯ2、１０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製してトランス異性体２１（３２９ｍｇ；１．１６ミリモル）およびシス異性体２２（７０．５ｍｇ；０．２５ミリモル）を得た（合計収率７５％）。トランス異性体２１ ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−９０％ヘキサン）Ｒｆ０．８；
0004001913.tif 000034
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ヘキサ−２−エナール（２３）（トランス）
−７８℃のＣＨ2Ｃｌ2（４ｍＬ）中のニトリル２１（１６６ｍｇ；０．５９ミリモル）に、ＤＩＢＡＬ（トルエン中に１．５Ｍ；０．５９ｍＬ；０．８８ミリモル）を加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、ロシェル塩の飽和水溶液（１０ｍＬ）で反応停止させた。生成物をエーテル（２×２０ｍＬ）で抽出し、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、クロマトグラフィー（分取ＴＬＣ、ＳｉＯ2、３％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物２３（１４１ｍｇ；０．４９ミリモル）を油状物として得た（８３％収率）：ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−９０％ヘキサン）Ｒｆ０．７；
0004001913.tif 000035
３−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ヘキサ−２−エナール（２４）（シス）
化合物２１の代わりにシス異性体２２を用いる他は化合物２３と同様にして化合物２４を製造した：ＴＬＣ（１０％ＥｔＯＡｃ−９０％ヘキサン）Ｒｆ０．８；
0004001913.tif 000036
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸エチル（２５）
−７８℃の乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中のトリエチル−３−メチル−４−ホスホノクロトネート（３９１ｍｇ；１．４８ミリモル）に、ヘキサン中の２．５Ｍ ｎＢｕＬｉ溶液（０．５９ｍＬ；１．４８ミリモル）およびＤＭＰＵ（２．５ｍＬ）を加えた。１５分間撹拌した後、トリエチルホスホノクロトネートのイリドを含有する溶液を、−７８℃の乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）中の化合物２３（１４１ｍｇ；０．４９ミリモル）に加えた。反応混合物を室温に温め、飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）で反応停止させ、生成物をエーテル（２×２５ｍＬ）で抽出した。このエーテル抽出物を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して全トランス異性体２５（１７１ｍｇ；０．４３ミリモル）を得た（８８％収率）：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000037
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸エチル（２６）
化合物２３の代わりにシス異性体２４を用いる他は化合物２５と同様にして化合物２６を製造した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−９５％ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000038
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸（２７）
ＭｅＯＨ（５ｍＬ）中の化合物２５（１７１ｍｇ；０．４４ミリモル）に、ＮａＯＨの５Ｎ水溶液（１ｍＬ）を加えた。この混合物を１０分間加熱還流し、室温に冷却し、２０％ＨＣｌ水溶液で酸性にし、有機物をエーテル（２×１０ｍＬ）で抽出した。エーテル層を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。クロマトグラフィー（分取ＴＬＣ、ＳｉＯ2、２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して全トランス異性体２７（２８ｍｇ；０．０８ミリモル）を得た（８０％収率）：ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ−９０％ＣＨＣｌ3）Ｒｆ０．８；ｍｐ１４３〜１４４℃；
0004001913.tif 000039
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルデカ−２，４，６−トリエン酸（２８）
化合物２５の代わりにシス異性体２６を用いる他は化合物２７と同様にして化合物２８を製造した：ＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ−９０％ＣＨＣｌ3）Ｒｆ０．８；ｍｐ１６６〜１６９℃
0004001913.tif 000040
実施例７〜８
下記反応式５により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸（３９）および（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸（４０）
0004001913.tif 000041
３，５−ジ−ｔ−ブチル−２−ヒドロキシアセトフェノン（３０）
ジクロロエタン（６０ｍＬ）中の２，５−ジ−ｔ−ブチルフェノール２９（１０ｇ；４８．５ミリモル）および塩化アセチル（４．５６ｇ；５８．１６ミリモル）にＢＦ3・ＯＥｔ2（１１．９ｍＬ；９７．０ミリモル）を加え、この混合物を１０分間加熱還流した。反応液を冷却し、１：１ 氷−２０％ＨＣｌ水溶液に注ぎ、撹拌し、抽出した（ＥｔＯＡｃ、２×１００ｍＬ）。有機抽出物を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮し、精製して（ＳｉＯ2クロマトグラフィー、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）化合物３０（７．０ｇ；２８．２２ミリモル）を油状物として得た（５８％収率）：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−−ヘキサン）Ｒｆ０．１；
0004001913.tif 000042
６，８−ジ−ｔ−ブチル−２−ヒドロキシクロマン−４−オン（３１）
炎乾燥した５００ｍＬ容の丸底フラスコ中の金属ナトリウム（１．８ｇ；７８．２６ミリモル）に、ギ酸エチル（１２０ｍＬ）中のフェノール３０（７．５ｇ；３０．２４ミリモル）を滴下した。添加が完了したら、混合物を４０℃にて１時間撹拌し、ついで室温に冷却し、ＨＣｌの１Ｎ水溶液中に注いだ。混合物が透明になったときに有機物を抽出し（２×１５０ｍＬ、ＥｔＯＡｃ）、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮して化合物３１（７．４ｇ；２６．８１ミリモル）を油状物として得た（およその収率、８９％）。この生成物を次工程に直接用いた：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．４；
0004001913.tif 000043
４Ｈ−６，８−ジ−ｔ−ブチル−ベンゾピラン−４−オン（示していない）
ＭｅＯＨ（２０ｍＬ）中の化合物３０（７．４ｇ、２６．８１ミリモル）に２０％ＨＣｌ水溶液（８ｍＬ）を加え、混合物を２０分間加熱還流した。室温に冷却した後、水（３０ｍＬ）を加え、生成物を抽出し（２×３０ｍＬ、ＥｔＯＡｃ）、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮して４Ｈ−６，８−ジ−ｔ−ブチル−ベンゾピラン−４−オン（約６．０ｇ；２５．００ミリモル）を油状物として得、このものを数時間放置すると固化した（およその収率、９３％）。この生成物を次工程に直接用いた：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000044
６，８−ジ−ｔ−ブチル−クロマン−４−オン（３２）
ＥｔＯＡｃ（８ｍＬ）中の４Ｈ−６，８−ジ−ｔ−ブチル−ベンゾピラン−４−オン（１．０ｇ；３．８７ミリモル）に１０％Ｐｄ／Ｃ（２００ｍｇ）を加えた。混合物を脱気し、ついでＨ2ガスを加え、Ｈ2ガス雰囲気下、室温にて２時間撹拌した。濾過（セライト）後、生成物を濃縮し、精製して（ＳｉＯ2クロマトグラフィー、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）化合物３２（８５７ｍｇ；３．２９ミリモル）を白色固体として得た（８５％収率）：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．７；
0004001913.tif 000045
（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）アセトニトリル（３３）（トランス）および（３４）（シス）
乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）中のホスホン酸シアノメチル（８９１ｍｇ；５．０３ミリモル）にＮａＨ（油中に６０％；１８８ｍｇ；４．６９ミリモル）を加え、混合物を２０分間撹拌した。この溶液に乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）中の化合物３２（４３６ｍｇ；１．８０ミリモル）を加え、反応液を２時間加熱還流した。室温に冷却後、反応液に飽和ＮＨ4Ｃｌ（１０ｍＬ）を加えて反応停止させ、抽出し（２×１０ｍＬ、ＥｔＯＡｃ）、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濃縮し、精製して（ＳｉＯ2クロマトグラフィー、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）トランス異性体３３（３５８ｍｇ；１，３２ミリモル）およびシス異性体３４（９５ｍｇ；０．３５ミリモル）を得た（合計の収率、９３％）：トランス異性体３３：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000046
（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）アセトアルデヒド（３５）（トランス）
−７８℃のヘキサン（５ｍＬ）中のニトリル３３（１００ｍｇ；０．３６ミリモル）に、トルエン中のＤＩＢＡＬの１．５Ｍ溶液（０．３５ｍＬ；０．５３ミリモル）を加えた。この混合物を５分間撹拌し、ついでロシェル塩の飽和水溶液（１０ｍＬ）を加え、室温に温めた。この溶液を抽出し（２×１０ｍＬ、ＥｔＯＡｃ）、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮して比較的純粋なアルデヒド３５（８６ｍｇ；０．３０ミリモル）を得た（８３％収率）：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000047
（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）アセトアルデヒド（３６）（シス）
化合物３３の代わりにシス異性体３４を用いる他は化合物３５と同様にして化合物３６を製造した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．４
0004001913.tif 000048
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸エチル（３７）
−７８℃の乾燥ＴＨＦ（３ｍＬ）中のトリエチル−３−メチル−４−ホスホノクロトネート（２３８ｍｇ；０．９０２ミリモル）に、ヘキサン中の２．５Ｍ ｎＢｕＬｉ溶液（０．３６ｍＬ；０．９０ミリモル）およびＤＭＰＵ（３ｍＬ）を加えた。１５分間撹拌後、トリエチルホスホノクロトネートのイリドを含有する溶液を、−７８℃の１：１ ＴＨＦ−ＤＭＰＵ（４ｍＬ）中の化合物３５（８６ｍｇ；０．３０ミリモル）に移した。反応混合物を室温に温め、飽和ＮＨ4Ｃｌ水溶液（２０ｍＬ）を加えて反応停止させ、生成物をＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）で抽出した。抽出物を洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ2、５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）により精製して化合物３７の２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ−異性体（８５．３ｍｇ；０．２２ミリモル）（７３％収率）および２Ｚ，４Ｅ，６Ｅ−異性体（５．６ｍｇ；０．０１４ミリモル）（５％収率）を得た：化合物３７：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；
0004001913.tif 000049
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸エチル（３８）
化合物３５の代わりにシス異性体３６を用いる他は化合物３７と同様にして化合物３８を製造した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５
0004001913.tif 000050
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸（３９）
１：１ ＴＨＦ−ＭｅＯＨ（６ｍＬ）中のエステル３７（８５．３ｍｇ；０．２２ミリモル）にＫＯＨの５Ｎ水溶液（３ｍＬ）を加えた。この溶液を１０分間加熱還流し、室温に冷却し、酸性にし（２０％ＨＣｌ水溶液）、抽出した（２×６ｍＬ、ＥｔＯＡｃ）。抽出物をコンバインし、洗浄し（水、ついで食塩水）、乾燥させ（ＭｇＳＯ4）、濾過し、濃縮した。分取ＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ3）により精製し、ついで結晶化させて（ＥｔＯＡｃ−ヘキサン、１：４）酸３９（７４．５ｍｇ；０．２０ミリモル）を薄黄色の固体として得た（９４％収率）：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２３７〜２３９℃；
0004001913.tif 000051
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−６−（６，８−ジ−ｔ−ブチルクロマン−４−イリデン）−３−メチルヘキサ−２，４，６−トリエン酸（４０）
化合物３６の代わりにシス異性体３７を用いる他は化合物３９と同様にして化合物４０を製造した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２３３〜２３５℃；
0004001913.tif 000052
実施例９
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（４１）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−トリフルオロメチルアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２２５〜２２７℃；
0004001913.tif 000053
実施例１０
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−イソプロピルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（４２）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−イソプロピルアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ１５７〜１６０℃；
0004001913.tif 000054
実施例１１
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−イソプロピルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（４３）
この化合物は、第一工程において３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−イソプロピルアセトフェノンを用いる他は化合物１０と同様にして合成した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ１７７〜１７９℃；
0004001913.tif 000055
実施例１２
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（４−ｔ−ブチル−フェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（４４）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに４−ｔ−ブチルアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ１９８〜２００℃；
0004001913.tif 000056
実施例１３
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（４５）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２４４〜２４６℃；
0004001913.tif 000057
実施例１４
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−７−（３，５−ジ−トリフルオロメチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（４６）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−トリフルオロメチル−アセトフェノンを用いる他は化合物１０と同様にして合成した：ＴＬＣ（５％ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２２５〜２２７℃；
0004001913.tif 000058
実施例１５
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（４７）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ−５０％ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２１３〜２１６℃；
0004001913.tif 000059
実施例１６
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，４−ジエチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（４８）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，４−ジ−エチルアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．３；ｍｐ１５３〜１５５℃；
0004001913.tif 000060
実施例１７
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−３−メチル−７−（３，４−ジエチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（４９）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，４−ジ−エチルアセトフェノンを用いる他は化合物１０と同様にして合成した：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．３２；
0004001913.tif 000061
実施例１８
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−エトキシフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（５０）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−エトキシアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ−５０％ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２３６〜２３９℃；
0004001913.tif 000062
実施例１９
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−３−メチル−７−（３，４−ジ−ｔ−ブチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（５１）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，４−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．３；ｍｐ１９５〜１９９℃；
0004001913.tif 000063
実施例２０
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−シクロヘキシル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ヘプタ−２，４，６−トリエン酸（５２）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルブタン−１−オンの代わりに３，４−ジ−ｔ−ブチルフェニルシクロヘキシルケトンを用いる他は化合物２７と同様にして合成した：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．３；
0004001913.tif 000064
実施例２１
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）ノナ−２，４，６−トリエン酸（５３）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，５−ジ−ｔ−ブチル−４−メトキシアセトフェノンを用いる他は化合物９と同様にして合成した：ＴＬＣ（５０％ＥｔＯＡｃ−５０％ヘキサン）Ｒｆ０．５；ｍｐ２１３〜２１６℃
0004001913.tif 000065
実施例２２
反応式１により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｚ）−３−メチル−７−（３，４−ジエチル−６−メチルフェニル）ノナ−２，４，６−トリエン酸（５４）
この化合物は、３，５−ジ−ｔ−ブチルアセトフェノンの代わりに３，４−ジ−エチル−６−メチルアセトフェノンを用いる他は化合物１０と同様にして合成した：ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ−８０％ヘキサン）Ｒｆ０．３；
0004001913.tif 000066
実施例２３
下記反応式６により製造する（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（６９）
0004001913.tif 000067
0004001913.tif 000068
５−tert−ブチル−１，３−ベンゼンジメタノール（５６）
ＴＨＦ（２００ｍＬ）中の５−tert−ブチル−１，３−ベンゼンジカルボン酸（５５）（２０．０ｇ；８９．９ミリモル）の溶液を０℃に冷却し、ＴＨＦ（１９０ｍＬ）中のボラン−ＴＨＦ複合体の溶液を激しく撹拌しながら２０分間かけてゆっくりと添加漏斗で加えた。この混合物を室温に温め、さらに９０分間撹拌した。水−ＴＨＦ（１：１、２００ｍＬ）の混合物をゆっくりと加え、ついで水（２００ｍＬ）をさらに加えた。混合物を酢酸エチルで抽出した。水性層をＥｔＯＡｃ（２×１００ｍＬ）で抽出し、コンバインした有機層を水（２×１００ｍＬ）、食塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を蒸発させて純粋なジオールを９８％の収率で得た：
0004001913.tif 000069
５−tert−ブチル−１，３−テレフタルアルデヒド
ジクロロメタン（ＤＣＭ）（５００ｍＬ）中のクロロギ酸ピリジニウム（６６．０ｇ；３０６ミリモル）およびセライト（１３０ｇ）の激しく撹拌した混合物に、５−tert−ブチル−１，３−ベンゼンジメタノール（５６）（２０．０ｇ；１０３ミリモル）を加えた。この混合物を完了するまで（ＴＬＣ）室温にて３時間撹拌した。反応混合物をシリカゲルの短パッド（２"×４"）で濾過し、ＤＣＭ（１Ｌ）で溶出した。溶媒を蒸発させて所望のジアルデヒド（１８．７ｇ）を９４％の収率で得た。
0004001913.tif 000070
（Ｒ，Ｓ）−５−tert−ブチル−１，３−ベンゼン−［２，２'−ジエタノール］（５７）
ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の５−tert−ブチル−１，３−テレフタルアルデヒド（１８．７ｇ；９６．４ミリモル）の溶液を−７８℃に冷却し、臭化メチルマグネシウム（３Ｍ溶液を８０．０ｍＬ）の溶液をゆっくりと加え、反応混合物を室温に温めた。６０分間撹拌した後、溶液を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液（１００ｍＬ）で反応停止させ、ついでＨＣｌ（１Ｎ、５０ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水（２×１００ｍＬ）、食塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を蒸発した。得られた粗製の残渣を熱ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）に溶解し、ペンタン（２００ｍＬ）を加えた。得られた透明な溶液を−４℃の冷蔵庫で３時間冷却した。得られた白色の固体を濾過し、冷ペンタンで濯いだ。固体を真空乾燥して所望の化合物（１５．３ｇ；７０％収率）を得た：
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（Ｒ，Ｓ）−５−ｔert−ブチル−１，３−フェニル−［２−エタノール、２'−エタン−ｔert−ブチルシリルエーテル］（５８）
水素化ナトリウム（６０％鉱油含量混合物を２．７５ｇ）をヘキサン（２×１０ｍｌ）で濯ぎ、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中に懸濁し、５−ｔert−ブチル−１，３−ベンゼン−２，２'−ジエタノール（１２．６９ｇ；５７ミリモル）を激しく撹拌しながら加えた。混合物を室温で４５分間撹拌して白色のスラリーを得、ついでｔert−ブチルジメチルシリルクロライド（８．６１ｇ；５７ミリモル）を一度に加えた。反応混合物を２時間撹拌し、水（２５ｍＬ）を加えた。混合物をＥｔＯＡｃ（３５０ｍＬ）で抽出した。有機層を飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液（１００ｍＬ）、水（２×１００ｍＬ）、食塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーにより精製して所望のモノシリル化生成物（１４．４５ｇ；７５％収率）を油状物として得た（出発物質の２．１４ｇを回収）：
0004001913.tif 000072
（Ｒ，Ｓ）−３−（エチル−２−ｔert−ブチルジメチルシリルエーテル）−５−ｔert−ブチルアセトフェノン（５９）
ＤＣＭ（１００ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−１，３−ベンゼン−（２−エタノール、２'−エタン−ｔert−ブチルジメチルシリルエーテル）（１４．４５ｇ；４４ミリモル）を激しく撹拌して加えながら、ＤＣＭ（５００ｍＬ）中のクロロクロム酸ピリジニウム（１５．０ｇ；６９ミリモル）およびセライト（３０ｇ）を混合した。室温で３時間後、混合物をシリカゲルの短パッド（２"×４"）で濾過し、ＤＣＭ（５００Ｌ）で溶出した。溶媒を蒸発させて所望のケトン（１４．４ｇ；９９％収率）を得た。
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５−ｔert−ブチル−１−（２−エタノール）−３−（２−［２−メチルプロパン−１−アール］）−ベンゼン（６０）
炎乾燥させた３つ首丸底フラスコにＴＨＦ（９０ｍＬ）を入れ、−７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（２Ｍ溶液を１２．０ｍＬ；２４ミリモル）をゆっくりと加え、混合物を１０分間撹拌した。ＴＨＦ（１５ｍＬ）中のＮ−ベンジリデンジエチルアミノメチルホスホネート（６．１４ｇ；２４ミリモル）を加え、得られた混合物を−７８℃で６０分間撹拌した。上記溶液にＴＨＦ（１５ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−３−（エタン−２−ｔert−ブチルジメチルシリルエーテル］アセトフェノン（７．０ｇ、２０．９ミリモル）を加え、混合物を室温に温め、３０分間撹拌し、ついで２時間還流した。混合物を室温に冷却し、溶媒を蒸発させた。ジエチルエーテル（４００ｍＬ）を加え、溶液を塩化ナトリウム（２００ｍＬ）で洗浄した。水性層をエーテル（２００ｍＬ）で抽出し、コンバインした有機層を食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を蒸発させて黄色の残渣を得、これを高真空下（１ｍｍＨｇ）で１時間乾燥させた。この残渣にＴＨＦ（９０ｍＬ）を加え、−７８℃に冷却した。ｎ−ＢｕＬｉ（２Ｍ溶液を１２．０ｍＬ；２４ミリモル）をゆっくりと加え、得られた濃色の溶液を６０分間撹拌した。ヨウ化メチル（６．５２ｍＬ）を加え、混合物を室温に温め、４時間撹拌した。反応混合物をＨＣｌ（３Ｎ；１００ｍＬ）で反応停止させ、この２相溶液を室温にて１６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）を加え、有機層を分離し、水（２×１００ｍＬ）、食塩水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させた。溶媒を蒸発して残渣を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のアルデヒド（３．３ｇ）を６５％の収率で得た：
0004001913.tif 000074
５−ｔert−ブチル−３−（２−メチルプロパン−１−オール］アセトフェノン（６１）
ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−１−（２−エタノール）−３−（２−［２−メチルプロパン−１−アール］）−ベンゼン（１．７７ｇ；７．５３ミリモル）の溶液を０℃に冷却し、ＮａＢＨ4（３００ｍｇ；７．９３ミリモル）を少しずつ加えた。反応混合物を室温に温め、３０分間撹拌した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中に取り、ＨＣｌ（１０％、３×１０ｍＬ）、水（３×２０ｍＬ）および食塩水（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発乾固して所望のジオール（１．７６ｇ；９９％収率）を得た。このジオール（１．６５ｇ；６．７８ミリモル）をＤＣＭ（２０ｍＬ）中に溶解し、ＭｎＯ2（１８．７９；０．１７ミリモル）を一度に加えた。反応混合物を４時間激しく撹拌し、ついでセライトの短パッドで濾過した。溶媒を蒸発させて所望のケトン（１．６３ｇ；９７％収率）を得た：
0004001913.tif 000075
５−ｔert−ブチル−３−（２−［２−メチルプロパン−１−ｔert−ブチルジフェニルシリルエーテル］）アセトフェノン（６２）
ＤＣＭ（３０ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−３−（２−メチルプロパン−１−オール］アセトフェノン（１．６３ｇ；６．９６ミリモル）の溶液に、イミダゾール（５００ｍｇ；７．３５ミリモル）、ＤＭＦ（１滴）およびｔert−ブチルジフェニルシリルクロライド（２．０１ｇ；７．３３ミリモル）を加えた。混合物を室温にて一夜撹拌し、過剰の飽和ＮＨ4Ｃｌで反応停止させた。ＤＣＭ（５０ｍＬ）を加え、有機層を水（３×２０ｍＬ）および食塩水（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、蒸発乾固して残渣を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のエーテル（２．７７ｇ；８３％収率）を得た：
0004001913.tif 000076
５−ｔert−ブチル−３−（２−［２−メチルプロパン−１−ｔert−ブチルジフェニルシリルエーテル］）−１−（２Ｅ）−３−［２−ブテニトリル）ベンゼン（６３）
０℃のＴＨＦ（３０ｍＬ）中のホスホン酸ジメチルシアノメチル（１．７ｇ；９．５５ミリモル）の溶液にｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中の２．０Ｍ溶液を４．６４ｍＬ）を加えた。この溶液を１０分間撹拌し、その後、ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−３−（２−［２，２'−ジメチルプロパン−ｔert−ブチルジフェニルシリルエーテル）アセトフェノンの溶液を加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、飽和ＮＨ4Ｃｌ溶液で反応停止させた。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、有機層を水（３×２０ｍＬ）および食塩水（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、蒸発乾固して残渣を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のニトリルをトランス：シス混合物（1Ｈ ＮＭＲにより〜４：１）として得た。シリカゲルクロマトグラフィーは所望のトランス異性体（１．７０ｇ）を６３％の収率で与えた：
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５−ｔert−ブチル−３−（２−［２−メチルプロパン−１−ｔert−ブチルジフェニルシリルエーテル］）−１−（２Ｅ）−（３−［２−ブテナール）ベンゼン（６４）
無水ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−３−（２−［２−メチルプロパン−１−ｔert−ブチルジフェニルシリルエーテル］）−１−（３−［３−メチル−２−プロペニトリル）ベンゼン（１．７ｇ；３．４２ミリモル）の溶液を−７８℃に冷却し、Ｄibal（トルエン中の１Ｍ溶液を３．５ｍＬ）を滴下した。反応混合物を−７８℃にて６０分間撹拌し、過剰のロシェル塩で反応停止させ、ついで室温に温めた。ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、混合物を水（３×２０ｍＬ）および食塩水（３×２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4で乾燥させ、蒸発乾固して残渣を得、これをシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のアルデヒド（１．２５ｇ）を得た（７４％収率）：
0004001913.tif 000078
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（５−ｔert−ブチル−３−［２−（２−メチルプロパン−１−オール）］−１'−ベンゼン）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル（６６）
無水ＴＨＦ（２０．０ｍＬ）中の３−エトキシカルボニル−２−メチルプロプ−２−エニルホスホン酸ジエチル（１．２０ｇ；４．５２ミリモル）の溶液を０℃に冷却し、無水ＤＭＰＵ（３．５ｍＬ）およびヘキサン中のｎ−ＢｕＬｉ（２．０Ｍ溶液を２．１５ｍＬ；４．５０ミリモル）を加えた。混合物をこの温度で２０分間撹拌し、ついで−７８℃に冷却した。ＴＨＦ（１０．０ｍＬ）中の５−ｔert−ブチル−３−（２−［２−メチルプロパン−１−ｔert−ブチルジフェニルシリルエーテル］）−１−（３−［３−メチル−２−プロペナール）ベンゼン（１．２５ｇ；２．５２ミリモル）の溶液をゆっくりと加え、反応混合物を−７８℃にてさらに６０分間撹拌した。混合物を撹拌しながら１時間かけて２３℃に温めた。塩化アンモニウムの飽和溶液（５ｍＬ）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（２×２５ｍＬ）および食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮した。得られた残渣を短シリカゲルクロマトグラフィーカラムで精製して所望のエステル（６５）（１．３５ｇ；８６％収率）を得た。上記シリルエーテル（１．０５ｇ；１．６８ミリモル）をＴＨＦ（２０ｍＬ）中に溶解し、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液を１７ｍＬ）を加えた。反応混合物を室温にて１２時間撹拌し、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）を加え、ついで水（２×２０ｍＬ）、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を分離し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発乾固させた。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のアルコール（４７９ｍｇ；８０％収率）を得た：
0004001913.tif 000079
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（５−ｔert−ブチル−３−［２−（２−メチルプロパン−１−アール）］−１'−フェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル（６７）
ＤＣＭ（２０ｍＬ）中のクロロクロム酸ピリジニウム（３５０ｍｇ；１．３９ミリモル）およびセライト（７５０ｍｇ）の激しく撹拌した混合物に、ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（５−ｔert−ブチル−３−［２−（２−メチルプロパン−１−オール）］−１'−フェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル（３３０ｍｇ；０．８８９ミリモル）の溶液を加えた。混合物を室温にて３時間撹拌し、シリカゲルの短パッドで濾過した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のアルデヒド（２９０ｍｇ；８７％収率）を得た：
0004001913.tif 000080
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（５−ｔert−ブチル−３−［２−（２−メチルプロパン−１−アール）］−１'−フェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチルｐ−トルエンスルホニルヒドラゾン（６８）
エタノール（５ｍＬ）中の（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（５−ｔert−ブチル−３−［２−（２−メチルプロパナール）］−１'−フェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチル（２５０ｍｇ、０．６７ミリモル）の溶液に、ｐ−トルエンスルホニルヒドラジド（１３７ｍｇ；０．７３ミリモル）および濃ＨＣｌ（〜１０ｍｌ）を加えた。この混合物を４０〜４５℃にて１５分間加熱した。溶媒を蒸発させ、得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して３３０ｍｇ（８９％収率）を得た：
0004001913.tif 000081
（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（３，５−ジ−ｔert−ブチルフェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸（６９）**
酢酸（２．０ｍＬ）中の（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−７−（５−ｔert−ブチル−３−［２−（２−メチルプロパン−１−アール）］−１'−フェニル）−３−メチルオクタ−２，４，６−トリエン酸エチルｐ−トルエンスルホニルヒドラゾン（６８）（８０ｍｇ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム*（８０ｍｇ）を少しずつ加えた。混合物を５０℃にて１時間加熱し、室温に冷却し、氷に加え、周囲温度まで温め、ＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（３×１０ｍＬ）、ＮａＨＣＯ3（２×１０ｍＬ）、水（３×１０ｍＬ）、食塩水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させた。得られた残湾をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望のエステルを得た。このエステル（２０ｍｇ）をＥｔＯＨ中に溶解し、ＫＯＨ １Ｍ（１ｍＬ）を加え、混合物を３時間、加熱還流した。反応混合物を室温に冷却し、ＨＣｌ（１０％）で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水（３×１０ｍＬ）、食塩水（３×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、蒸発させて所望の酸を得た。
当業者であれば上記プロトコールを標識ないし放射性標識したＮａＢnＨ4（ｎ＝１、２、３）を使用することに適合させて、反応式６に示す標識（すなわち、トリチウム標識）化合物を生成させることができることを認識するであろう。
さらに、当業者であれば、ヒドラゾン（６８）をＮａＣＮＢnＨ3（ｎ＝１、２、３）およびＺｎＣｌ2の存在下、メタノール中で８時間加熱した後に鹸化（ＫＯＨ、ＥｔＯＨ）することによって同標識（重水素およびトリチウム）化合物（６９）を得ることができることをも認識するであろう。他の側面において、アルデヒド（６７）を放射性標識ＮａＢnＨ4（ｎ＝１、２、３）で還元し、ついで得られたアルコールを対応トリチウム化アルデヒドに酸化する。かかるアルデヒドのそのトシルヒドラゾンへの変換、ついでメタノール中の水素化シアノホウ素ナトリウムおよびＺｎＣｌ2を用いた還元、および鹸化により対応の酸が得られる（反応式６の化合物６８および６９を参照）。
レチノイド受容体サブファミリー活性の評価
エバンス（Ｅvans）らによって記載された「シス−トランス」または「同時トランスフェクション（co-transfection）」アッセイ（Ｓcience、２４０：８８９〜９５（１９８８年５月１３日）；その開示を本明細書中に参照のため引用する）を用いて本発明のレチノイド化合物を試験したところ、選択的なＲＡＲアゴニスト、選択的なＲＸＲアゴニストとして、またはＲＡＲ受容体とＲＸＲ受容体の両者の汎アゴニストアクチベーターとして、強く特異的な活性を有することがわかった。このアッセイは米国特許第４，９８１，７８４号および同第５，０７１，７７３号（その開示を本明細書中に参照のため引用する）に一層詳細に記載されている。
同時トランスフェクションアッセイは、天然のホルモンの作用を模倣する機能的なアゴニストまたは天然のホルモンの作用を抑制するアンタゴニストを同定し、それらの応答性ＩＲタンパク質に対する活性を定量する方法を提供する。この観点から、同時トランスフェクションアッセイはインビボ系を研究室で模倣するものである。重要なことは、同時トランスフェクションアッセイにおける活性が知られたインビボ活性と非常に優れた相関を示し、同時トランスフェクションアッセイが被験化合物のインビボ薬理学の定性的および定量的予測手段として機能することである。たとえば、バーガー（Ｔ．Ｂerger）ら、４１ Ｊ．Ｓteroid Ｂiochem．Ｍolec．Ｂiol．７７３（１９９２）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）を参照。
同時トランスフェクションアッセイにおいて、構成的プロモーター（たとえば、ＳＶ４０プロモーター）の制御下のＩＲ（たとえば、ヒトＲＡＲα、ＲＡＲβ、ＲＸＲγ）のクローニングｃＤＮＡを、内在性のＩＲを実質的に欠くバックグラウンド細胞（background cell）中にトランスフェクション（細胞による外来遺伝子の取り込みを誘発する手順）により導入する。この導入された遺伝子は受容細胞に当該ＩＲタンパク質を製造することを指令する。第二の遺伝子もまた該ＩＲ遺伝子とともに同細胞中に導入する（同時トランスフェクション）。この第二の遺伝子は、ホルモン応答要素（ＨＲＥ）を含む適当なホルモン応答性プロモーターによって制御された、ホタルルシフェラーゼ（ＬＵＣ）などのリポータータンパク質のｃＤＮＡを含む。このリポータープラスミドは標的ＩＲの転写調節活性のリポーターとして働く。それゆえ、リポーターは、標的受容体およびその天然のホルモンの制御下で遺伝子によって通常発現される産物（ｍＲＮＡ、ついでタンパク質）の代用物として働く。
同時トランスフェクションアッセイは、標的ＩＲの小分子アゴニストまたはアンタゴニストを検出することができる。トランスフェクションした細胞をアゴニストリガンド化合物に曝すとトランスフェクション細胞でのリポーター活性が増大する。この活性は、たとえばルシフェラーゼ産生の増大（化合物依存性でＩＲ媒体されたリポーター転写の増大を反映する）により都合よく測定できる。アンタゴニストを検出するには、同時トランスフェクションアッセイは、所定のリポーターシグナルを誘発することがわかっている一定濃度の標的ＩＲに対するアンタゴニスト（たとえば、ＲＡＲαに対しては全−トランスレチノイン酸）の存在下で行う。アンタゴニストの濃度の増大はリポーターシグナル（たとえば、ホタルルシフェラーゼ）を減少させるであろう。それゆえ、同時トランスフェクションアッセイは、特定のＩＲのアゴニストおよびアンタゴニストの両者を検出するのに有用である。さらに、同時トランスフェクションアッセイは、ある化合物が特定のＩＲと相互作用するか否かを決定するのみならず、この相互作用が標的遺伝子発現に対する天然の制御分子の作用を模倣（作動）または抑制（拮抗）のいずれの働きをするのか、並びにこの相互作用の特異性および強度をも決定する。
本発明のレチノイド化合物の活性を下記実施例２３による同時トランスフェクションアッセイを用いて評価した。
実施例２４
同時トランスフェクションアッセイ
ＣＶ−１細胞（アフリカミドリザルの腎臓線維芽細胞）を１０％活性炭樹脂−除去した（stripped）ウシ胎仔血清を添加したダルベッコ変性イーグル培地（ＤＭＥＭ）の存在下で培養し、トランスフェクションの１日前に９６−ウエルマイクロタイタープレートに移した。
本発明の化合物のＲＡＲおよび／またはＲＸＲアゴニスト活性を決定するため、バーガーらの手順に従い（４１ Ｊ．Ｓteroid Ｂiochem．Ｍol．Ｂiol．７３３（１９９２））、下記受容体発現プラスミドを用いてリン酸カルシウム共沈降法によりＣＶ−１細胞を一過的にトランスフェクションした：ｐＲＳｈＲＡＲα：ジゲールら、３３０ Ｎature、６２４（１９８７）：ｐＲＳｈＲＡＲβおよびｐＲＳｈＲＡＲγ、イシカワ（Ｉshikawa）ら、４ Ｍol．Ｅndocrin．８３７（１９９０）：ｐＲＳｈＲＸＲα、マンゲルスドルフ（Ｍangelsdorf）ら、３４５ Ｎature、２２４（１９９０）：およびｐＲＳｍＲＸＲβおよびｐＲＳｍＲＸＲγ、マンゲルスドルフら、６ Ｇenes＆Ｄevel．、３２９（１９９２）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）。これら各受容体発現プラスミドは５ｎｇ／ウエルの濃度にて、１００ｎｇ／ウエルの基礎リポータープラスミド、５０ｎｇ／ウエルの内部制御プラスミドｐＲＳ−β−Ｇａｌおよび４５ｎｇ／ウエルのフィラー（filler）ＤＮＡ、ｐＧＥＭとともに同時トランスフェクションした。
ウメソノ（Ｕmesono）らによって記載された（３３６ Ｎature、２６２（１９８８）；その開示を本明細書中に参照のため引用する）ＴＲＥ−パリンドローム応答要素を２コピー含有する基礎リポータープラスミドＤ−ＭＴＶ−ＬＵＣ（ホレンバーグ（Ｈollenberg）およびエバンス、５５ Ｃell、８９９（１９８８）；その開示を本明細書中に参照のため引用する）をＲＡＲのトランスフェクションに用い、ＲＸＲＥ（レチノイドＸ受容体応答要素；マンゲルスドルフら、６６ Ｃell、５５５（１９９１）に記載；その開示を本明細書中に参照のため引用する）を含有するリポータープラスミドＣＲＢＰＩＩＦＫＬＵＣをＲＸＲのトランスフェクションに用いた。これらリポータープラスミドは、それぞれ適当なＲＡＲまたはＲＸＲ応答要素を含有する構成的プロモーターのもとにホタルルシフェラーゼ（ＬＵＣ）のｃＤＮＡを含有している。上記のように、大腸菌のβ−ガラクトシダーゼ（β−Ｇａｌ）の構成的発現をコードするｐＲＳ−β−Ｇａｌを、トランスフェクション効率および化合物毒性の評価のための内部対照として含めた。
トランスフェクションの６時間後、培地を除き、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄した。本発明の化合物を１０-12〜１０-5Ｍの範囲の濃度で含有する培地を細胞に加えた。同様に参照化合物である全−トランスレチノイン酸（ＡＴＲＡ）（シグマ・ケミカル）（公知のＲＡＲ選択的化合物）および９−シスレチノイン酸（９−シス）（ヘイマン（Ｈeyman）ら、Cell、６８：３９７〜４０６（１９９２）の記載に従って合成）（ＲＸＲに対する公知の活性を有する化合物）を同様の濃度で加えて本発明の化合物の活性分析の参照点を与えた。レチノイド純度は逆相高速液体クロマトグラフィーにより９９％よりも高く確立した。レチノイドを転写活性化アッセイに使用するためジメチルスルホキシド中に溶解した。３〜４個を各試料に用いた。
４０時間後、細胞をＰＢＳで洗浄し、トリトンＸ−１００ベースの緩衝液で溶解し、それぞれ光度計または分光光度計を用いてＬＵＣおよびβ−Ｇａｌ活性についてアッセイした。各試料について標準化応答（ＮＲ）を
ＬＵＣ応答／β−Ｇａｌ速度（rate）
［式中、β−Ｇａｌ速度＝β−Ｇａｌ・１×１０-5／β−Ｇａｌインキュベーション時間］
として計算した。
ＮＲの平均および平均の標準誤差（ＳＥＭ）を計算した。参照化合物と比較した化合物の応答として用量−応答曲線にわたってデータをプロットした。本発明のアゴニスト化合物については、最大応答の５０％を生成する有効濃度（ＥＣ50）を定量した。
本発明の選択したレチノイド化合物の効能（ｎＭ）を下記表１に示す。
0004001913.tif 000082
表１から明らかなように、化合物９、３９、４１および４７はＲＡＲ活性が極めて強力であり、化合物９はＲＡＲγに対してナノモル以下の活性を示し、化合物４７はＲＡＲβおよびＲＡＲγに対する選択性を示す。事実、これら化合物は公知のＲＡＲ活性化合物であるＡＴＲＡよりもＲＡＲに対する活性が１０〜１００倍強力である。同様に、化合物２８は非常に強力で選択的なＲＸＲ活性化合物である。さらに、汎アゴニスト化合物１０および４３は、公知のＲＸＲ活性な汎アゴニスト化合物である９−シスレチノイン酸よりも優れた効能プロフィールを示す。表１では効能を報告していないが、２０％未満の有効性を示す化合物は、たとえ境界的な効能を示したとしてもレチノイドアクチベーターとしては不活性であると思われる（効能は＞１０，０００として定義される）。この観点から、ＲＡＲβに対する比較化合物Ａを除き、比較実施例の化合物はすべて２０％未満の有効性を示した。
ＲＡＲおよび／またはＲＸＲ受容体に対する本発明の化合物のレチノイド活性は、他の公知の構造的に類似の化合物によっては示されていない。表１においてさらに示されるように、本発明の化合物に構造的に類似すると思われる比較実施例の化合物、たとえば、オーレルら、４９ Ｔetrahedron、６０８９（１９９３）（反応式２、化合物ｄおよびｅ）に記載された（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（３，４−ジメトキシフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（Ａ）および（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メチル−７−（４−メトキシフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（Ｂ）、米国特許第４，５３４，９７９号（実施例１７）に記載された（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−２−メチル−７−（２，３，６−トリメチル−４−メトキシフェニル）ヘプタ−２，４，６−トリエン酸（Ｃ）、および米国特許第５，３２０，８３３号（化合物８０）に記載された（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−３−メトキシ−７−（４−ｔ−ブチルフェニル）オクタ−２，４，６−トリエン酸（Ｄ）は、ＲＡＲおよびＲＸＲのいずれに対しても活性が全くないかまたは実質的な活性がない。
実施例２５
実施例１５の同時トランスフェクションデータに加え、ＲＡＲ受容体およびＲＸＲ受容体に対する本発明の選択した化合物の結合についても、ベーム（Ｍ．Ｆ．Ｂoehm）ら、「新規レチノイドＸ受容体選択的レチノイドの合成および構造−活性相関」、３７ Ｊ．Ｍed．Ｃhem．、２９３０（１９９４）；ベームら、「高比活性［3Ｈ］−９−シスレチノイン酸の合成および異常な結合特性を有するレチノイドの同定のためのその応用」、３７ Ｊ．Ｍed．Ｃhem．、４０８（１９９４）、およびアレグレット（Ｅ．Ａ．Ａllegretto）ら、「哺乳動物および酵母で発現されたレチノイン酸受容体およびレチノイドＸ受容体の特徴付けおよびホルモン結合特性およびトランス活性化特性の比較」、２６８ Ｊ．Ｂiol．Ｃhem．、２２６２５（１９９３）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）に記載された方法に従って調べた。
非特異的な結合は、適当な非標識化合物５００ｎＭの存在下で残留する結合として定義した。インキュベーション期間の後、結合したリガンドを遊離のリガンドから分離した。結合したトリチウム化レチノイドの量を上澄み液またはヒドロキシルアパタイトペレットのアリコート（７００ｍＬ）の液体シンチレーションカウントにより決定した。
非特異的結合について補正した後、ＩＣ50値を決定した。ＩＣ50値は、特異的結合を５０％減少させるのに必要な競合リガンドの濃度として定義する。ＩＣ50値をデータの対数−対数（log-logit）プロットからグラフ上で決定した。Ｋｉ値を、ＩＣ50値、標識リガンドの濃度および標識リガンドのＫｄにチェン−プルソフ（Ｃheng-Ｐrussof）の等式を応用することにより決定した。
本発明の選択したレチノイド化合物および参照化合物であるＡＴＲＡおよび９−シスＲＡの結合活性（Ｋｄ；ｎＭにて）の結果を下記表２に示す。
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表２から明らかなように、本発明の化合物９および１０は、公知のＲＡＲ活性化合物であるＡＴＲＡおよび公知のＲＸＲ活性化合物である９−シスと等しいかまたはそれ以上の結合を示す。対照的に、実施例１４の比較実施例化合物はすべて、いずれのレチノイド受容体に対しても全く結合性を示さず、ＲＡＲαに対して３１２ｎＭの弱い結合を示した比較実施例化合物Ａが例外であった。
実施例２６
本発明の化合物のレチノイド活性のさらに別の容認された測定法は、バーマ（Ｖerma）およびブートウェル（Ｂoutwell）によって最初に記載された（３７ Ｃancer Ｒesearch、２１９６（１９７７）；その開示を本明細書中に参照のため引用する）オルニチンデカルボキシラーゼアッセイである。レチノイン酸を用いたバーマおよびブートウェルの最初の研究では、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）活性がポリアミンの生合成と関連して増大することが確立された。次には、ポリアミン生合成の増大が細胞増殖と関連することが以前に確立された。それゆえ、ＯＤＣ活性を抑制することができるなら細胞の過剰増殖を調節することができるに違いない。ＯＤＣ活性の増大のすべての原因が知られているわけではないが、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−１３−酢酸（ＴＰＡ）がＯＤＣ活性を誘発することが知られている。重要なことには、レチノイン酸はこのＴＰＡによるＯＤＣの誘発を抑制する。
本質的に３５ Ｃancer Ｒesearch、１６６２（１９７５）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）に記載された手順に従ったＯＤＣアッセイを、本発明の化合物によるＯＤＣのＴＰＡ誘発の抑制を示すために用いた。本発明の選択した例示化合物および参照化合物としてＡＴＲＡおよび（Ｅ）−４−［２−（５，６，７，８−テトラヒドロ−５，５，８，８−テトラメチル−２−ナフタレニル）−１−プロペニル］安息香酸（ＴＴＮＰＢ）（公知のＲＡＲ活性化合物）に対して行った本アッセイの結果を下記表３に示す。値はすべて、ＯＤＣのＴＰＡ誘発を８０％抑制するのに必要な所定化合物の濃度（すなわち、ＩＣ−８０；ｎＭにて）として表した。
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化合物７および８（それぞれ、化合物９および１０のエステルである）は、そのようなエステルアナログがレチノイド活性を示すことを示すために含めた。作用理論（theory of operation）に拘泥するわけではないが、そのようなエステルは、おそらくエステルが本発明の化合物の活性な酸の形態に開裂することにより、インビボでプロドラッグとして働いているものと思われる。
実施例２７
容認された癌細胞株であるＲＰＭＩ８２２６、ＭＥ１８０およびＡＭＬ−１９３（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ、ロックビル、メリーランド）より入手）に対する本発明の選択された化合物のインビトロ作用を調べた。
ＲＰＭＩ８２２６は、多発性骨髄腫の患者の末梢血から得られたヒト造血細胞株であり、そのようなものとして多発性骨髄腫および関連悪性腫瘍の容認されたモデルである。マツオカ（Ｙ．Ｍatsuoka）、ムーア（Ｇ．Ｅ．Ｍoore）、ヤギ（Ｙ．Ｙagi）およびプレスマン（Ｄ．Ｐressman）、「多発性骨髄腫の患者から得られた造血細胞株による免疫グロブリンの遊離軽鎖の産生」、１２５ Ｐroc．Ｓoc．Ｅxp．Ｂiol．Ｍed．、１２４６（１９６７）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）。この細胞は、他のヒトリンパ球細胞株のリンパ芽球細胞と似ており、免疫グロブリンのλ−型軽鎖を分泌する。ＲＰＭＩ８２２６細胞を、１０％ウシ胎仔血清、グルタミンおよび抗生物質を添加したＲＰＭＩ培地（ギブコ）で増殖させた。細胞を、空気中の５％ＣＯ2の保湿雰囲気中、３７℃にて増殖した浮遊培養として維持した。細胞を１週間に２回、１×１０5／ｍＬの濃度に希釈した。
ＭＥ１８０は、頸部から得られたヒト類表皮癌腫細胞株であり、そのようなものとして偏平上皮細胞癌腫および関連悪性腫瘍の容認されたモデルである。サイクス（Ｊ．Ａ．Ｓykes）、ホワイトスカーバー（Ｊ．Ｗhitescarver）、ジャーンストローム（Ｐ．Ｊernstrom）、ノラン（Ｊ．Ｆ．Ｎolan）およびバイアット（Ｐ．Ｂyatt）、「ヒト由来の新規上皮細胞株の幾つかの特性」、４５ ＭＨ−Ａdenoviridae Ｊ．Ｎatl．Ｃancer Ｉnst．、１０７（１９７０）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）。この腫瘍は極めて浸潤性の偏平上皮細胞癌腫であり、不規則な細胞塊を形成し、有意のケラチン形成を示さない。ＭＥ１８０細胞を、１０％ウシ胎仔血清、グルタミンおよび抗生物質を添加したマッコイの５ａ培地（ギブコ）中で増殖および維持した。細胞を、空気中の５％ＣＯ2の保湿雰囲気中、３７℃にて増殖した単層培養として維持した。
ＡＭＬ−１９３細胞株は白血病の患者の幼若細胞から確立され、Ｍ５急性単球白血病として分類され、そのようなものとして白血病および関連悪性腫瘍の容認されたモデルである。ロベラ（Ｇ．Ｒovera）ら、１３９ Ｊ．Ｉmmunol．、３３４８（１９８７）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）。これら細胞の７５％以上が骨髄単球抗原ＣＳ１５に対して免疫蛍光により陽性である。細胞を、５μｇ／ｍＬトランスフェリン、５μｇ／ｍＬインスリンおよび２ｎｇ／ｍＬ ｒｈ ＧＭ−ＣＳＦを含有するイスコーブの変性ダルベッコ培地中で増殖させた。細胞を、空気中の５％ＣＯ2の保湿雰囲気中、３７℃にて増殖した浮遊培養として維持した。細胞を１週間に２回、１×１０5／ｍＬの濃度に希釈した。
3Ｈ−チミジンの導入
上記細胞株に導入した放射性標識チミジンレベルの測定により、本発明の化合物の抗増殖活性の直接測定が可能となる。導入した放射性標識チミジンの測定に用いる方法は、シュリバスタブ（Ｓhrivastav）らにより記載された手順（「ヒト固形腫瘍からの細胞に対して化学療法剤を試験するためのインビトロアッセイ法」、４０ Ｃancer Ｒes．、４４３８（１９８０）；その開示を本明細書中に参照のため引用する）から採用した。ＲＰＭＩ８２２６またはＡＭＬ−１９３細胞を、９６ウエル丸底マイクロタイタープレート（コスター）中に１，０００細胞／ウエルの密度にてプレーティングした。レチノイド被験化合物を適当なウエルに１５０μＬ／ウエルの最終容量に対して指示された最終濃度にて加えた。プレートを空気中の５％ＣＯ2の保湿雰囲気中、３７℃にて９６時間インキュベートした。その後、２５μＬの培地中の１μＣｉの［５'−3Ｈ］−チミジン（アマーシャム、英国、４３Ｃｉ／ミリモル比活性）を各ウエルに加え、細胞をさらに６時間インキュベートした。培養液を下記に記載するようにしてさらに処理した。
トリプシン処理によって回収したＭＥ１８０細胞を、９６ウエル平底マイクロタイタープレート（コスター）中に２，０００細胞／ウエルの密度にてプレーティングした。培養液を上記ＲＰＭＩ８２２６の場合と同様に処理したが、以下の点が異なっていた。インキュベーション後、上澄み液を注意深く除き、細胞をリン酸緩衝食塩水中のチミジンの０．５ｍＭ溶液で洗浄した。ＭＥ１８０細胞を５０μＬの２．５％トリプシンで手短に処理して細胞をプレートから外した。ついで、両細胞株を以下のようにして処理した：細胞ＤＮＡを、スカトロン（ＳＫＡＴＲＯＮ）マルチ−ウエルセルハーベスター（スカトロン・インスツルメンツ（Ｓkatron Ｉnstruments）、スターリング、バージニア）を用い、ガラス繊維フィルターマット上に１０％トリクロロ酢酸で沈降させた。ＤＮＡ中に導入された放射能を細胞増殖の直接測定として液体シンチレーションカウントにより測定した。３試料（triplicate）からの導入チミジンの１分間当たりの平均崩壊を測定した。本発明の化合物９および１０並びに参照化合物であるＡＴＲＡおよびＴＴＮＢＰについての細胞株ＲＰＭＩ８２２６、ＭＥ１８０およびＡＭＬ−１９３に対するＩＣ50（観察されたチミジンの最大導入を５０％抑制するのに必要なｎＭ濃度）を、それぞれ下記表４、５および６に示す。
生存度
本発明の選択された化合物はまた、上記細胞株に対する細胞毒性についても測定した。その手順は、モスマン（Ｔ．Ｍosmann）、「細胞増殖および生存のための迅速な比色アッセイ：増殖および細胞毒性アッセイへの応用」、６５ Ｊ．Ｉmmunol．Ｍeth．、５５（１９８３）（その開示を本明細書中に参照のため引用する）に記載されたアッセイと同一であったが、わずかに修飾を施した。ＲＰＭＩ８２２６細胞およびＡＭＬ−１９３細胞を９６ウエル丸底マイクロタイタープレート（コスター）中に１，０００細胞／ウエルの密度にてプレーティングした。レチノイド被験化合物を適当なウエルに１５０μＬ／ウエルの最終容量に対して指示された最終濃度にて加えた。プレートを空気中の５％ＣＯ2の保湿雰囲気中、３７℃にて９６時間インキュベートした。その後、１５μＬのリン酸緩衝食塩水中の濾過滅菌テトラゾリウム染料（プロメガ、マジソン、ウイスコンシン）を各ウエルに加え、細胞をさらに４時間インキュベートした。その後の培養液の操作法を以下に記載する
トリプシン処理によって回収したＭＥ１８０細胞を、９６ウエル平底マイクロタイタープレート（コスター）中に２，０００細胞／ウエルの密度にてプレーティングした。培養液を上記ＲＰＭＩ８２２６の場合と同様に処理した。
４時間のインキュベーションの後、１００μＬの可溶化／停止溶液を各ウエル（プロメガ、マジソン、ウイスコンシン）に加えた。これらプレートを保湿雰囲気中、３７℃で一夜静置した。５７０〜６００ｎｍ波長での吸光度をバイオメック（Ｂiomek）ＥＬＩＳＡプレートリーダー（ベックマン・インスツルメンツ（Ｂeckman Ｉnstruments））を用いて各ウエルについて記録した。本発明の化合物９および１０並びに参照化合物であるＡＴＲＡおよびＴＴＮＢＰについての細胞株ＲＰＭＩ８２２６、ＭＥ１８０およびＡＭＬ−１９３に対するＩＣ５０（ミトコンドリア機能、終局的には細胞の生存度を５０％抑制するのに必要なｎＭ濃度）をも、それぞれ下記表４、５および６に示す。
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実施例２８
下記実施例は医薬組成物の調合例を提供する。下記成分を用いてハードゼラチンカプセル剤を調製する。
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上記成分を混合し、ハードゼラチンカプセル中に２５０ｍｇの量にて充填する。
下記成分を用いて錠剤を調製する。
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上記成分を混練し、圧錠して各３６０ｍｇの重量の錠剤とする。
それぞれ活性成分６０ｍｇを含有する錠剤を下記のようにして調製する。
0004001913.tif 000090
活性成分、デンプンおよびセルロースをＮｏ．４５メッシュＵＳシーブに通し、充分に混合する。この粉末をＰＶＰの溶液と混合し、ついでこれをＮｏ．１４メッシュＵＳシーブに通す。かくして得られた顆粒を５０℃で乾燥させ、Ｎｏ．１８メッシュＵＳシーブに通す。ＳＣＭＳ、ステアリン酸マグネシウムおよびタルク（前以てＮｏ．６０メッシュＵＳシーブに通したもの）を、ついで上記顆粒に加え、混合後、圧錠機で圧錠して各１５０ｍｇの重量の錠剤とする。
それぞれ活性成分２２５ｍｇを含有する坐剤を下記のようにして調製する。
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活性成分をＮｏ．６０メッシュＵＳシーブに通し、最小限必要なだけ加熱して前以て融解させた飽和脂肪酸グリセリド中に懸濁する。ついで、この混合物を通常の２ｇ容量の坐剤モールド中に注ぎ、放冷する。
静脈内調合物を下記のようにして調製できる。
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化合物をグリセリン中に溶解し、ついで溶液を等張食塩水でゆっくりと希釈する。ついで、上記成分の溶液を患者に１分間当たり１ｍｌの速度にて静脈内投与する。