(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
１，６−ヘプタジエン、１，７−オクタジエンまたは１，８−ノナジエンから選択される不飽和炭化水素とリン脂質とを含むことを特徴とする脂質膜。
【請求項２】
請求項１記載の脂質膜を用いて物質の膜透過性を測定する工程を含むことを特徴とする測定方法。
【請求項３】
請求項１記載の脂質膜を用いて物質の膜透過性を測定する工程と、所定の膜透過性を有する物質を選択する工程とを含むことを特徴とする物質のスクリーニング方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【技術分野】
【０００２】
本発明は脂質膜に関し、さらに詳しくは、本発明は物質の膜透過性測定に用いることができる脂質膜に関する。
【背景技術】
【０００３】
従来から脂質膜は、センサーあるいは測定装置の検出膜等として使用されており、例えば、金属イオン、シアン化イオン、アルコール、酵素等様々な物質の検出あるいは測定に使用されている。
【０００４】
また、生体においては、生体膜を介して物質やエネルギーの移行、代謝、情報伝達等が行われるが、生体膜の透過性の評価にも脂質膜が使用されている。
例えば、薬物の脂質膜透過性は、経口剤における消化管吸収性や生体内での組織移行性と密接な関係があり、医薬品の開発において重要な性質である。また、薬物に限らず、生体に為害性を有する物質（例えば、毒性物質、発ガン性物質等）等についても膜透過性の評価は重要である。
【０００５】
生体における物質の膜透過性をin vitroで測定する際には、in vivoでの生体膜の物質透過性と相関の高い物質透過性を持つ膜を使用する必要がある。また、こうした膜の産業上の適用に際しては、処理速度およびコストも重要である。例えば、医薬品の開発において薬物の膜透過性評価に使用する場合には、取り扱われる化合物数が非常に多いため、高い処理速度が要求される。
【０００６】
従来、物質の膜透過性のin vitroでの測定には、摘出臓器を用いた測定法、消化管上皮由来細胞を用いた測定法などが知られている。しかしながら、これらの測定法は処理速度が遅いため、数多くの物質を迅速に測定する上で問題がある。
【０００７】
また、９６穴プレートに人工脂質膜を作成して膜透過性を測定する方法（ＫＡＮＳＹ，Ｍａｎｆｒｅｄ，  ＳＥＮＮＥＲ，Ｆｒａｎｋ，  ＧＵＢＥＲＮＡＴＯＲ，Ｋｌａｕｓ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９８，  ４１，１００７−１０１０）などが知られているが、こうした脂質膜としては、脂質と有機溶媒とからなるものが用いられている。この測定法は、同時に多数の物質を測定することができる、使用する物質などが少量ですむためランニングコストが安いなどの特徴がある。しかしながら、この開示技術で用いられている膜は、in vivoでの生体膜の物質の透過性と相関が悪いだけではなく、物質の透過性が低いために低透過性物質の評価が難しく、また、測定時間が長いなどの欠点があった。
【０００８】
物質の膜透過性を測定するための膜としては、ｎ−デカンに、生体（ラット）から採取した膜成分を溶解したものを用いる方法（ＩＮＵＩ，Ｋｅｎ−ｉｃｈｉ，  ＴＡＢＡＲＡ，Ｋａｔｓｕｅ，  ＨＩＲＩ，Ｒｙｏｈｅｉ，  ＫＡＮＥＤＡ，Ａｋｅｍｉ，  ＭＵＲＡＮＩＳＨＩ，Ｓｈｏｚｏ，  ＳＥＺＡＫＩ，Ｈｉｔｏｓｈｉ；  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，  １９７７，  ２９，  ２２−２６）などが知られている。この膜には、生体膜における物質透過性と相関が良いという特徴があるが、物質の透過性が低いために低透過性物質の評価が難しく、また、測定時間が長いなどの欠点があった。
【０００９】
また、ドデカン、ホスファチジルコリン、１，９−デカジエンを用いた膜（ＫＡＮＳＹ，Ｍａｎｆｒｅｄ，  ＳＥＮＮＥＲ，Ｆｒａｎｋ，  ＧＵＢＥＲＮＡＴＯＲ，Ｋｌａｕｓ；Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９８，  ４１，１００７−１０１０）が知られているが、物質の透過性が低いため測定時間が長く、また、低透過性物質間の識別が困難であり、さらには、生体膜の物質の透過性との相関が悪いなどの欠点があった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上述したように、現在までに物質の膜透過性を測定するために使用されてきた膜は、物質の透過性が低いため測定時間が長い、低透過性物質間の識別が困難、生体膜の物質の透過性との相関が悪いなどの欠点があった。本発明は、こうした欠点を克服し、物質の透過性が高く、生体膜の物質透過性と相関が高く、迅速な測定法に適した脂質膜を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、鋭意研究を行った結果、炭素数７から９の不飽和炭化水素を用いることにより、物質の透過性が高く、迅速な測定法に適した脂質膜が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１２】
さらに、炭素数７から９の不飽和炭化水素および中性付近で負電荷を有する物質および／または中性付近で負電荷を有する脂質を用いることにより、薬物の透過性が高く、in vivoでの生体膜の薬物透過性と相関が高く、迅速な測定法に適した脂質膜が得られることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１３】
すなわち、本発明は、炭素数７から９の不飽和炭化水素と脂質とを含むことを特徴とする脂質膜を提供するものである。
前記脂質膜が、中性付近で負電荷をもつ物質をさらに含むことが好ましい。あるいは、前記脂質が中性付近で負電荷を有することが好ましい。
【００１４】
前記炭素数７から９の不飽和炭化水素がヘプタジエン、オクタジエンまたはノナジエンであることが好ましい。１，６−ヘプタジエン、１，７−オクタジエンまたは１，８−ノナジエンであることがさらに好ましい。
【００１５】
本発明の脂質膜に他の要素を加えてもよい。例えば、特定の物質を輸送する担体（特異的な輸送体）を加えてもよい。
また、本発明は、上述の脂質膜を用いて物質の膜透過性を測定する工程を含むことを特徴とする測定方法を提供する。
【００１６】
さらに、本発明は、炭素数７から９の不飽和炭化水素および脂質を含むことを特徴とする膜透過性測定キットを提供する。こうした測定キットは、炭素数７から９の不飽和炭化水素および脂質からなる脂質膜を支持することができる支持体（例えばフィルターペーパー等）をさらに含んでもよい。
【００１７】
本発明は、上述の脂質膜を用いて物質の膜透過性を測定する工程と、所定の膜透過性を有する物質を選択する工程とを含むことを特徴とする物質のスクリーニング方法を提供する。
【００１８】
さらに、本発明は、炭素数７から９の不飽和炭化水素、脂質、および使用説明書を含むことを特徴とするスクリーニングキットを提供する。
また、本発明の測定方法を、膜の能動的輸送を測定する方法と組み合わせてもよく、こうした方法を含むスクリーニング方法およびそれに使用されるキットも本発明の範囲に含まれる。
【００１９】
本発明の脂質膜は、物質の生体膜の透過性を評価するだけではなく、化学物質等のセンサーあるいは測定装置にも適用可能である。
【発明を実施するための好ましい形態】
【００２０】
なお、本出願が主張する優先権の基礎となる出願である特願２０００−８２１７７号および特願２０００−１８４９７３号の開示は全て引用により本明細書の中に取り込まれる。
【００２１】
本発明において用いられる炭素数７から９の不飽和炭化水素としては、直鎖でも分岐鎖でもよく、例えば、ヘプタジエン、オクタジエン、ノナジエンなどがあげられる。
ヘプタジエンとしては、たとえば、（Ｚ）−１，３−ヘプタジエン、（Ｚ）−１，４−ヘプタジエン、（Ｚ）−１，５−ヘプタジエン、１，６−ヘプタジエン、（Ｅ）−１，３−ヘプタジエン、（Ｅ）−１，４−ヘプタジエン、（Ｅ）−１，５−ヘプタジエン、（２Ｚ，４Ｚ）−２，４−ヘプタジエン、（２Ｚ，５Ｚ）−２，５−ヘプタジエン、（２Ｚ，４Ｅ）−２，４−ヘプタジエン、（２Ｚ，５Ｅ）−２，５−ヘプタジエン、（２Ｅ，４Ｚ）−２，４−ヘプタジエン、（２Ｅ，５Ｚ）−２，５−ヘプタジエン、（２Ｅ，４Ｅ）−２，４−ヘプタジエン、（２Ｅ，５Ｅ）−２，５−ヘプタジエン、（３Ｚ，５Ｚ）−３，５−ヘプタジエン、（３Ｚ，５Ｅ）−３，５−ヘプタジエン、（３Ｅ，５Ｚ）−３，５−ヘプタジエン、（３Ｅ，５Ｅ）−３，５−ヘプタジエンがあげられ、１，６−ヘプタジエンが好ましい。
【００２２】
オクタジエンとしては、たとえば、（Ｚ）−１，３−オクタジエン、（Ｚ）−１，４−オクタジエン、（Ｚ）−１，５−オクタジエン、（Ｚ）−１，６−オクタジエン、（Ｅ）−１，３−オクタジエン、（Ｅ）−１，４−オクタジエン、（Ｅ）−１，５−オクタジエン、（Ｅ）−１，６−オクタジエン、１，７−オクタジエン、（２Ｚ，４Ｚ）−２，４−オクタジエン、（２Ｚ，５Ｚ）−２，５−オクタジエン、（２Ｚ，６Ｚ）−２，６−オクタジエン、（２Ｚ，４Ｅ）−２，４−オクタジエン、（２Ｚ，５Ｅ）−２，５−オクタジエン、（２Ｚ，６Ｅ）−２，６−オクタジエン、（２Ｅ，４Ｚ）−２，４−オクタジエン、（２Ｅ，５Ｚ）−２，５−オクタジエン、（２Ｅ，６Ｚ）−２，６−オクタジエン、（２Ｅ，４Ｅ）−２，４−オクタジエン、（２Ｅ，５Ｅ）−２，５−オクタジエン、（２Ｅ，６Ｅ）−２，６−オクタジエン、（３Ｚ，５Ｚ）−３，５−オクタジエン、（３Ｚ，５Ｅ）−３，５−オクタジエン、（３Ｅ，５Ｚ）−３，５−オクタジエン、（３Ｅ，５Ｅ）−３，５−オクタジエンがあげられ、１，７−オクタジエンが好ましい。
【００２３】
ノナジエンとしては、たとえば、（Ｚ）−１，３−ノナジエン、（Ｚ）−１，４−ノナジエン、（Ｚ）−１，５−ノナジエン、（Ｚ）−１，６−ノナジエン、（Ｚ）−１，７−ノナジエン、（Ｅ）−１，３−ノナジエン、（Ｅ）−１，４−ノナジエン、（Ｅ）−１，５−ノナジエン、（Ｅ）−１，６−ノナジエン、（Ｅ）−１，７−ノナジエン、１，８−ノナジエン、（２Ｚ，４Ｚ）−２，４−ノナジエン、（２Ｚ，５Ｚ）−２，５−ノナジエン、（２Ｚ，６Ｚ）−２，６−ノナジエン、（２Ｚ，７Ｚ）−２，７−ノナジエン、（２Ｚ，４Ｅ）−２，４−ノナジエン、（２Ｚ，５Ｅ）−２，５−ノナジエン、（２Ｚ，６Ｅ）−２，６−ノナジエン、（２Ｚ，７Ｅ）−２，７−ノナジエン、（２Ｅ，４Ｚ）−２，４−ノナジエン、（２Ｅ，５Ｚ）−２，５−ノナジエン、（２Ｅ，６Ｚ）−２，６−ノナジエン、（２Ｅ，７Ｚ）−２，７−ノナジエン、（２Ｅ，４Ｅ）−２，４−ノナジエン、（２Ｅ，５Ｅ）−２，５−ノナジエン、（２Ｅ，６Ｅ）−２，６−ノナジエン、（２Ｅ，７Ｅ）−２，７−ノナジエン、（３Ｚ，５Ｚ）−３，５−ノナジエン、（３Ｚ，６Ｚ）−３，６−ノナジエン、（３Ｚ，５Ｅ）−３，５−ノナジエン、（３Ｚ，６Ｅ）−３，６−ノナジエン、（３Ｅ，５Ｚ）−３，５−ノナジエン、（３Ｅ，６Ｚ）−３，６−ノナジエン、（３Ｅ，５Ｅ）−３，５−ノナジエン、（３Ｅ，６Ｅ）−３，６−ノナジエンがあげられ、１，８−ノナジエンが好ましい。
【００２４】
これらのヘプタジエン、オクタジエンおよびノナジエンから選ばれた一種あるいは二種以上を混合して、炭素数７から９の不飽和炭化水素として用いてもよい。本発明の脂質膜は、有機溶媒として、炭素数７から９の不飽和炭化水素のみを含んでもよいが、他の有機溶媒と炭素数７から９の不飽和炭化水素との混合物を含んでもよい。
【００２５】
本発明において用いられる脂質としては、たとえば、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、リン脂質、コレステロールなどがあげられる。
飽和脂肪酸としては、たとえば、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸などがあげられる。
【００２６】
不飽和脂肪酸としては、パルミトレイン酸、リノレン酸、リノール酸、オレイン酸、アラキドン酸などがあげられる。
リン脂質としては、たとえば、ホスファチジルコリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴミエリンなどがあげられる。
【００２７】
これらの脂質の一種あるいは二種以上を混合して用いてもよい。
本発明において用いられる、中性付近で負電荷を有する物質としては、たとえば、ステアリン酸、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールなどがあげられる。これらの一種あるいは二種以上を混合して用いてもよい。
【００２８】
本発明の脂質膜における炭素数７から９の不飽和炭化水素に対する脂質の比率（脂質重量／炭素数７から９の不飽和炭化水素重量）は、好ましくは、０．１〜２０％であり、さらに好ましくは、１〜１０％であり、特に好ましくは、１〜２％である。
【００２９】
本発明の脂質膜が中性付近で負電荷を有する物質を含む場合には、脂質膜全体に対して約０．２ｍｍｏｌ／Ｌ〜約５０ｍｍｏｌ／Ｌの割合で含むことが好ましく、約２ｍｍｏｌ／Ｌ〜約２５ｍｍｏｌ／Ｌの割合で含むことがさらに好ましい。
【００３０】
ここで、「中性付近」とは、一般にｐＨ５．０〜９．０の範囲であり、好ましくはｐＨ５．５〜８．０、さらに好ましくはｐＨ６．０〜７．５である。
また、「中性付近で負電荷をもつ」とは、中性付近の所定の溶媒中において負電荷を有することを意味する。
【００３１】
本発明の脂質膜は、上記以外の成分を含んでもよく、こうした成分は、評価対象となる物質、生体あるいは組織の特徴等を考慮して適宜選択することができる。例えば、特定の物質を輸送する担体（特異的な輸送体）を含んでもよい。
【００３２】
本発明の脂質膜の厚さは、評価対象となる物質、生体あるいは組織の特徴等により適宜選択される。
本発明の脂質膜は何らかの支持体の上に形成されていてもよい。こうした支持体としては、例えばフィルターペーパーのように、多孔性のシート状物あるいは膜状物が好ましい。材質としては、疎水性物質が好ましく、例えば、ＰＴＦＥ（ポリテトラフルオロエチレン）、疎水性ＰＶＤＦ（ポリビニリデンジフルオリド）が使用できるが、好ましくは、疎水性ＰＶＤＦが使用される。ポアサイズが０．０１〜２０μｍ、好ましくは０．０５〜１０μｍ、さらに好ましくは０．１〜５μｍ、特に好ましくは０．１〜１μｍ程度のものが用いられる。
【００３３】
あるいは、直径約０．５〜２ｍｍ、好ましくは約１ｍｍ程度の細孔の開口部を覆うように、本発明の脂質膜を形成してもよい。
本発明の脂質膜は、上記の炭素数７から９の不飽和炭化水素と脂質を通常の方法で混合し、例えば、ＫＡＮＳＹ，Ｍａｎｆｒｅｄ，  ＳＥＮＮＥＲ，Ｆｒａｎｋ，  ＧＵＢＥＲＮＡＴＯＲ，Ｋｌａｕｓ；  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９８，  ４１，  １００７−１０１０に記載された方法等に準じて製造することができる。
【００３４】
また、本発明の測定方法は、本発明の脂質膜を用いて物質の膜透過性を測定する工程を含むものであるが、測定に使用する脂質膜は、測定に先立って形成し保存しておいても、あるいは測定の直前に形成してもよい。脂質膜を形成する際には、好ましくは支持体、さらに好ましくは疎水性の支持体上に、形成する。得られた脂質膜の一方（Ａ側とする）に試験物質を含む溶液をおき、他方（Ｂ側とする）に試験物質を含まない溶媒をおく。このとき、Ｂ側の溶媒は、Ａ側の試験物質溶液の溶媒と同じものであることが好ましい。そして、所定の時間経過後、Ａ側からＢ側へ脂質膜を透過した試験物質の量を測定する。脂質膜を透過した試験物質の量を直接定量するのみでなく、脂質膜を透過しないでＡ側に残った試験物質の量を測定することで、脂質膜を透過した試験物質の量を算出してもよい。
【００３５】
脂質膜の設置方向は、重力に対していずれの方向であってもよく、例えば、重力に対して、平行に設置しても垂直に設置してもよい。また、物質を透過させる方向も特に制限されるものではなく、例えば、重力と同方向であっても逆方向であってもよく、垂直方向であってもよい。
【００３６】
測定に際しては、１つの容器を脂質膜で２つの区画に分けて使用してもよいが、試験物質溶液を入れる容器と、試験物質を含まない溶媒を入れる容器を別々に用意してもよい。例えば、底部にフィルターが付いた筒状の上部容器と、トップが開放された下部容器とを組み合わせて使用することもできる。上部容器の下端部と下部容器の上端部が同じサイズであることが好ましい。下部容器に試験物質を含まない溶媒を満たし、上部容器を下部容器の上に載せ、フィルター上に本発明の脂質膜を形成した後、上部容器に試験物質溶液を入れ、所定時間経過後に下部容器内の試験物質量を測定してもよい。上部容器と下部容器とは、上部容器のフィルターが下部容器の溶媒と接するようにセットする。上部容器と下部容器の間にフィルターを挟んだ状態で、上下容器の間から液が漏れないように固定できればよい。ゴムパッキングなどを利用してもよい。また、フィルターは、必ずしも上部容器の底部に固定されている必要はない。
【００３７】
また、複数の試験物質の膜透過性を迅速に測定するためには、複数のウェルを有するウェルプレートを使用することも好ましい。複数のウェルを有するウェルプレートを下部容器として使用し、各ウェル中に試験物質を含まない溶媒を満たし、その上をフィルターペーパーなどの多孔性膜で覆ってから、各ウェルと適合する位置に貫通孔を有する上部プレート（上部容器として使用）を載せ、各貫通孔内の多孔性膜上に脂質膜を形成し、試験物質溶液を入れてもよい。あるいは、上部プレートの各貫通孔の底部にフィルターが設けられていてもよい。例えば、ケモタキシス測定用などのチャンバープレートなどを利用してもよい。
【００３８】
いずれの場合においても、上部容器に試験物質を含まない溶媒を入れ、下部容器に試験物質溶液を入れてもよい。
脂質膜を透過した物質の定量方法としては、例えば、吸光度測定、ＨＰＬＣ法、ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ）法、ＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフィ−マススペクトル）法、ＬＣ−ＭＳ（液体クロマトグラフィ−マススペクトル）法、蛍光法、ＮＭＲ法、ＩＲ法、ＣＥ（キャピラリー電気泳動）法等を用いることができるが、好ましくは、吸光度、ＨＰＬＣ法、ＬＣ−ＭＳ法が用いられる。
【００３９】
本発明においては、下記の実施例に示したようにして、ＫＡＮＳＹ，Ｍａｎｆｒｅｄ，  ＳＥＮＮＥＲ，Ｆｒａｎｋ，  ＧＵＢＥＲＮＡＴＯＲ，Ｋｌａｕｓ；  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １９９８，  ４１，  １００７−１０１０に記載の方法に準じて物質の膜透過性を測定したが、それ以外にも、例えば、ＴＨＯＭＰＳＯＮ，Ｍｉｃｈａｅｌ，  ＬＥＮＮＯＸ  Ｒ．Ｂｒｕｃｅ，  ＭＣＣＬＥＬＬＡＮＤ，Ｒ．Ａ．，  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，  １９８２，  ５４，  ７６−８１に記載の方法、ＸＩＡＮＧ，Ｔｉａｎ−ｘｉａｎｇ，  ＡＮＤＥＲＳＯＮ，Ｂｒａｄｌｅｙ  Ｄ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｉｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ，１９９４，  ８３，  １５１１に記載の方法等に準じて測定することができる。
【００４０】
本発明の脂質膜を用いて物質をスクリーニングするには、上述のようにして、試験物質の膜透過性を測定し、所定の膜透過性を有する試験物質を選択する。このとき、何らかの基準物質を用いて、その物質よりも膜透過性が高いものまたは低いものを選択してもよい。あるいはその物質と同等の膜透過性を有する試験物質を選択してもよい。
【００４１】
本発明のスクリーニングキットは、こうしたスクリーニング方法を迅速・簡便に行う上で役立つものであり、炭素数７から９の不飽和炭化水素、脂質、および使用説明書を含むものであるが、それ以外に、脂質膜の支持体（例えば、フィルターペーパー、好ましくは疎水性フィルターペーパーなど）、膜透過性の測定に使用するウェルプレート、溶媒、膜透過性測定時の基準物質、特定の物質を輸送する担体（特異的な輸送体）、試験物質溶解用の溶媒等を含んでもよい。また、本発明のスクリーニングキットは、炭素数７から９の不飽和炭化水素と脂質の代わりに、すでに形成された脂質膜を含むものであってもよく、例えば、支持体上に形成された脂質膜を含んでもよい。
【００４２】
以下の実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこの実施例によりなんら限定されるものではない。例えば、調製される脂質膜の厚さ、脂質濃度、緩衝液のｐＨ等は、評価対象となる物質、生体あるいは組織の特徴等に合わせて適宜変更できる。
【実施例】
【００４３】
脂質膜の形成
９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ社平底プレート３０７２）の各ウェル（容積３６０μＬ）を、５％のジメチルスルホキシドを含むｐＨ６．５〜７．０の５０ｍｍｏｌ／Ｌ  リン酸ナトリウム緩衝液（以下、「緩衝液」と記す）で満たした後、フィルタープレート（Millipore社製 Multiscreen filter plate 疎水性PVDF MAIPN4510、厚さ0.45 mｍ）をウェルプレート上にかぶせた。このとき、ウェルプレートの緩衝液とフィルタープレートと間に気泡が存在しないことを確認した。表１（膜の組成を示す）に示す各物質を、表１に記載された割合で１，７−オクタジエンに溶解した。得られた１，７−オクタジエン溶液４〜５μＬを、各ウェルのフィルターに添加することにより、フィルター部に実施例１、２の膜を形成した。
【００４４】
また、ホスファチジルコリン：１，６−ヘプタジエン＝２：９８の溶液４〜５μＬを、各ウェルのフィルターに添加することにより、フィルター部に実施例３の膜を形成した。ホスファチジルコリン：１，７−オクタジエン＝２：９８の溶液４〜５μＬを、各ウェルのフィルターに添加することにより、フィルター部に実施例４の膜を形成した。ホスファチジルコリン：１，８−ノナジエン＝２：９８の溶液４〜５μＬを、各ウェルのフィルターに添加することにより、フィルター部に実施例５の膜を形成した。
【００４５】
また、ホスファチジルコリン：コレステロール：１，９−デカジエン＝２：１：９７の溶液を調製し、その４〜５μＬを、各ウェルのフィルターに添加することにより、フィルター部に比較例１の膜を形成した。ホスファチジルコリン：１，９−デカジエン＝２：９８の溶液４〜５μＬを、各ウェルのフィルターに添加することにより、フィルター部に比較例２の膜を形成した。
【００４６】
【表１】
0003954847.tif 000002
膜透過性の測定
サンプル溶液として、表２および３に示す各化合物の０．５ｍｍｏｌ／Ｌ緩衝液溶液１００〜２００μＬ（添加サンプル溶液の量：Ｖｄｎ）を調製した。このサンプル溶液を、上述のようにして膜を形成された各ウェルに添加し、プレートの蓋をして２〜１５時間（透過時間：ｔ）放置した。フィルタープレートを取り除いた後、下段のウェルプレートの各ウェルから溶液２００μＬを採取し、試験液とした。
【００４７】
得られた試験液（２００μＬ）の吸光度（ＯＤａｃ）を、２５０〜４５０ｎｍ（１０〜２０ｎｍ間隔）の各波長で測定した。また、標準溶液としては、実施例１もしくは実施例３で用いたそれぞれのサンプル溶液（希釈しない標準溶液）、または、サンプル溶液を緩衝液で４．８倍（Ｖ／Ｖ）希釈した溶液（希釈した標準溶液）を使用した。すなわち、希釈しない標準溶液または希釈した標準溶液のいずれか２００μＬを用いて、試験液と同様に吸光度を測定し（ＯＤｒｅｆ）、次式にしたがって透過係数を算出した。
【００４８】
透過係数（Ｐ）＝−２．３０３×（Ｖｄｎ×Ｖａｃ／（Ｖｄｎ×Ｖａｃ））／（Ｓ×ｔ）×ｌｏｇ（１−ｆｌｕｘ％／１００）
Ｆｌｕｘ％＝ＯＤａｃ／ＯＤｒｅｆ×Ａ×１００
ＯＤａｃ：  試験液の吸光度測定値
ＯＤｒｅｆ：標準溶液の吸光度測定値
Ｖａｃ：  下段のプレートの各ウェルの容量（３６０μＬ）
Ｖｄｎ：  添加サンプル溶液量（１００〜２００μＬ）
Ａ：    Ｖｄｎ×Ｖａｃ（希釈しない標準溶液の場合）
１（希釈した標準溶液の場合）
Ｓ：    膜面積（０．２６６ｃｍ２）
ｔ：    透過時間（ｓｅｃ）
表２、３に、得られた透過係数（Ｐ）を示す。
【００４９】
さらに、実施例１、２、及び比較例１については、各化合物のヒトにおける消化管吸収性（Ｆａ）（＊１〜＊４の文献に記載）から得られた下記の近似曲線を用いて、相関係数（Ｒ）を算出した。
【００５０】
近似曲線：Ｆａ（％）＝（１−ｅｘｐ（−ａ×Ｐ））×１００
ｅｘｐ：ｅｘｐｏｎｅｎｔｉａｌ
ａ：係数
＊１：Matthew D. Wessel et al., J. Chem. Inf. Comput. Sci., 38, 1998, 726-735
＊２：Mehran Yazdanian et al., Pharm. Res., Vol. 15, No. 9, 1998, 1490-1494
＊３：Gerald K. McEvoy, AHFS, 1998
＊４：Manfred Kansy et al., J. Med. Chem., Vol. 47, No. 7, 1998, 1007-1010
表２に、得られた相関係数（Ｒ）、各化合物のヒトにおける消化管吸収性（Ｆａ）を示す。
【００５１】
【表２】
0003954847.tif 000003
【００５２】
【表３】
0003954847.tif 000004
産業上の利用の可能性
本発明によれば、物質の透過性が高く、生体膜の物質透過性と相関が高く、迅速な測定に適した脂質膜を提供することができ、極めて有用である。