(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＴＣＣに寄託番号第７２０２２号として寄託されているＮＯＡマウスの受精卵から製造される、幼毛は生育するが一般毛の生育能を欠如することを特徴とする無毛マウス、又は前記特徴を有する前記無毛マウスの子孫。
【請求項２】
湿潤性及び乾燥性の皮膚病変の自然発症率が、２４週齢以降において７０％以上である請求項１に記載の無毛マウス又はその子孫。
【請求項３】
皮膚のマスト細胞数が、２４週齢において約５０個／ｍｍ以上である請求項１に記載の無毛マウス又はその子孫。
【請求項４】
血中ＩｇＥ抗体値が、２４週齢において約３５００ｎｇ／ｍｌ以上である請求項１に記載の無毛マウス又はその子孫。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれかに記載の無毛マウス又はその子孫の皮膚に薬剤を適用して、薬剤の薬効及び／又は皮膚刺激性を試験する方法。
【請求項６】
薬剤が皮膚炎予防及び治療剤である請求項５に記載の方法。
【請求項７】
薬剤が化粧品である請求項５に記載の方法。
【請求項８】
薬剤の薬効及び／又は皮膚刺激性を試験するための、請求項１〜４のいずれかに記載の無毛マウス又はその子孫の利用。
【請求項９】
薬剤が皮膚炎予防及び治療剤である請求項８に記載の利用。
【請求項１０】
幼毛は生育するが一般毛の生育能を欠如することを特徴とする無毛マウスの受精卵であって、ＡＴＣＣに寄託番号第７２０２２号として寄託されている受精卵。
【請求項１１】
ＡＴＣＣ寄託番号第７２０２２号として寄託されている受精卵を用いて、幼毛は生育するが一般毛の生育能を欠如する無毛マウス又はその子孫を製造する方法。
【発明の詳細な説明】
技術分野
本発明は、無毛マウス、より詳しくは幼毛は成育するが、一般毛の成育能を欠損する新しい無毛マウスに関する。
背景技術
従来、皮膚炎治療薬等の研究に利用されてきた動物としては、例えばマウス、ラット、ウサギ等が挙げられるが、之等の動物を研究に用いるためには、予め様々な処置を施さなくてはならない不利があった。例えば抗アレルギー薬のスクリーニングには、ＰＣＡ（passive cutaneous anaphylaxis）反応を起こした動物が使用されることがよく知られているが、動物にこのＰＣＡ反応を起こさせるためには、剪毛した皮膚に同種或は異種の組織感作抗体を含む抗血清を投与しなければならず、この反応を測定するためには、一定時間後（同種ＰＣＡのＩｇＥ抗体で４８〜１６８時間）に抗原と色素又は放射性同位元素でラベルしたアルブミンを静脈内投与しなくてはならない（永井博弌：２−１皮膚炎（１）ＰＣＡ反応、生物薬科学実験講座１２巻炎症とアレルギー（Ｉ−１）（大内和雄編）、廣川書店、東京、１９９３、ｐ．９６−１０９）。これは単に処置操作が必要であるのみならず、之等抗血清等が実験者に影響を与える危険性があることを意味しており、かかる処置を行なわずとも、皮膚炎治療薬等の研究に使用できる病態モデル動物の開発が要望されている。
従って本発明の目的は、上記要望に合致する病態モデル動物を提供する点にある。
本発明者らは、上記目的より鋭意研究を重ねる過程において、突然変異により得られた貧毛のマウスを兄妹交配させることによって、上記目的に合致する皮膚病変の自然発症率が非常に高い無毛マウスを確立するに成功し、ここに本発明を完成するに至った。
発明の開示
本発明は、幼毛は成育するが、一般毛の成育能を欠如することを特徴とする無毛マウス、より詳しくは湿潤性及び乾燥性皮膚病変の自然発症率が、２４週齢以降において７０％以上である上記無毛マウス、皮膚のマスト細胞数が、２４週齢において約５０個／ｍｍ以上である上記無毛マウス、及び血中ＩｇＥ抗体値が、２４週齢において約３５００ｎｇ／ｍｌ以上である上記無毛マウスに係わる。
本発明の無毛マウスは、上記の通り、幼毛は成育するが、一般毛の成育能を欠如することを特徴としており、従来かかる一般毛の成育能を欠如するマウスは確立されておらず、また報告された例もない。
しかも、本発明無毛マウスは、湿潤性及び乾燥性皮膚病変の自然発症率が、２４週齢以降において７０％以上である特徴、皮膚のマスト細胞数が、２４週齢において約５０個／ｍｍ以上である特徴、及び血中ＩｇＥ抗体値が、２４週齢において約３５００ｎｇ／ｍｌ以上である特徴を有している。
しかして、一般的な有毛マウスは、湿潤性及び乾燥性皮膚病変を自然発症することはなく、そのマスト細胞数は、本発明者らの算出で通常１０個／ｍｍ程度であり、血中ＩｇＥ抗体値については、その定量的測定報告は少なく正常値も確認されてはいないが、通常非常に微量である。因みに、本発明者らの測定（後記測定キット使用）によれば、後記表３及び４に示す通り、ＩＣＲマウスの１６週齢で０．０〜１３７．５ｎｇ／ｍｌ、ｄｄＹマウスの１６週齢で０．０〜５．０ｎｇ／ｍｌであった。尚、文献的には、正常動物ではＢＡＬＢ／ｃマウスで＜２０〜６０８ｎｇ／ｍｌ、Ｃ３Ｈマウスで全例が＜２０ｎｇ／ｍｌ、実験的寄生虫（Nippostrongylus brasiliensis）感染動物では、ＢＡＬＢ／ｃマウスで２２４０〜７１６８ｎｇ／ｍｌ、Ｃ３Ｈマウスで１３６５〜３０６８ｎｇ／ｍｌであることが報告されている（平野隆雄、宮島宏明、抗マウスＩｇＥモノクローナル抗体産生ハイブリドーマの確率とその応用、Medical Immunology, 15（2）, 211-216（1988））。
更に、既存のヘアレスマウスでも、湿潤性及び乾燥性皮膚病変を自然発症することはなく、そのマスト細胞数は本発明者らの算出で通常２０個／ｍｍ程度であり、血中ＩｇＥ抗体値については、本発明者らの測定（後記測定キット使用）によれば、後記表２に示す通り、ＨＲＳ／Ｊマウスの２０週齢で、１０２．０〜２５３．０ｎｇ／ｍｌであった。
これに対して、本発明無毛マウスは、上記の通り、２４週齢（又はそれ以降）において、非常に高い皮膚病変自然発症率、皮膚のマスト細胞数及び血中ＩｇＥ抗体値を示す特徴を有しており、之等の点において、一般的な有毛マウス及び既存のヘアレスマウスとは充分に明確に区別される新規性を有している。
本発明無毛マウスは、上記特徴を有することに基いて、皮膚炎の予防及び治療薬のスクリーニングや薬効試験等のための病態モデル動物として非常に有用である。
また本発明無毛マウスは、２４週齢以前においても、既存のヘアレスマウスや除毛等を行なったマウスに比して、際立った無毛状態を安定して呈しており、従って、皮膚病変非発症動物（特に低週齢）は、医薬品、化粧品等の経皮投与される薬剤の皮膚刺激性試験等の試験用動物として、除毛等の手間を要することなく、利用できる利点がある。
従って、本発明は、かかる本発明無毛マウスを用いて、医薬品、化粧品等の経皮適用される薬剤、代表的には皮膚炎の予防及び治療剤、の薬効及び／又は皮膚刺激性を試験する方法をも提供するものである。
本発明に係わる上記試験は、本発明無毛マウスを利用することを必須の要件として、他は通常行なわれているこの種試験と同様にして実施することができる。例えば、代表的には、軟膏剤、貼付剤等の経皮適用に適した形態に賦形した被検物質の適量を、本発明無毛マウスの皮膚に、塗布、貼付等の常法に従い適用し、その経時的作用及び効果を一般的な手段により観察、評価することにより実施できる。
本発明無毛マウスは、本発明者らが雌のＣ３Ｈ／Ｈｅマウスと雄のｄｄＹマウスとの交雑マウスを兄妹交配している過程で、偶然にその発生を確認した突然変異による貧毛個体（雄）を起源としている。上記雄の貧毛個体と同腹仔の雌とを兄妹交配した所、その後２世代までは貧毛個体は雄しか得られなかったが、３世代になって雌雄の貧毛個体が得られ、この雌雄の貧毛個体を兄妹交配することによって、雌の本発明無毛個体が得られ、この雌の無毛個体と同腹仔の雄の貧毛個体を兄妹交配することによって、雌雄の無毛個体を得るに成功した。この雌雄の無毛個体を無毛０世代として、之等を兄妹交配することによって、全ての子孫が無毛個体となり、かくして本発明無毛マウスを固定、確立するに成功したものである。以下、本発明無毛マウスを「ＮＯＡマウス」という。
上記各世代マウスの飼育方法は、通常のマウスのそれと特にことなる必要はなく、例えば、適当なケージにて適当な飼料を与えつつ、バリヤシステム環境下で、温度２３±２℃、湿度５５±５％、照明時間午前７時から午後７時まで１２時間にて行ない得る（例えば、新実験動物学、朝倉書店、１０４頁、１９８６年参照）。上記飼料としては、固型飼料（代表的にはＣＲＦ−１、オリエンタル酵母工業社製）を利用でき、水は水道水を自由摂取させればよい。
上記飼育期間中の、毛の発育状況及び皮膚病変発症は目視観察することができ、皮膚のマスト細胞数及び血中ＩｇＥ抗体値は、それぞれ常法に従い、例えば組織標本のトルイジンブルー染色法及び市販のマウスＩｇＥ測定キットを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法により測定することができる。
かくして固定された、本発明無毛マウス（ＮＯＡマウス）は、本出願人により常に分与可能な状態に維持されており、またその受精卵は１９９７年５月１５日に、アメリカ合衆国  ２０８５２  メリーランド州  ロックビル  パークローン  ドライブ  １２３０１のアメリカン  タイプ  カルチャー  コレクション（ＡＴＣＣ）に、寄託番号第７２０２２号として寄託された。
【図面の簡単な説明】
図１はＮＯＡマウス（５週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図２はＮＯＡマウス（１０週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図３は比較であるＨＲＳ／Ｊマウス（７週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図４は比較であるＨＲＳ／Ｊマウス（２８週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図５は比較であるＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス（７週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図６は比較であるＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス（２８週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図７は湿潤性皮膚病変発症ＮＯＡマウス（２０週齢、雄性）の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図８は図７に示すＮＯＡマウスの４週後の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図９は図７に示すＮＯＡマウスの１２週後の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図１０は図７に示すＮＯＡマウスの１６週後の外貌的特徴を示す図面代用写真である。
図１１はＮＯＡマウス（雄性及び雌性）の乾燥性と湿潤性とを合わせた全皮膚病変発症の有無を各週齢別に調べ、その発症率を求めたグラフである。
図１２は図１１と同様にして求めた湿潤性皮膚病変のみの発症率を示すグラフである。
図１３はＮＯＡマウス並びに比較動物及び対照動物の、加齢に伴う皮膚のマスト細胞数変化を調べたグラフである。
図１４はＮＯＡマウス（雄性及び雌性）の加齢に伴う皮膚のマスト細胞数変化を調べたグラフである。
図１５はＮＯＡマウス（雄性）の背部皮膚の湿潤性及び乾燥性皮膚病変部並びに正常部の、加齢に伴うマスト細胞数変化を調べたグラフである。
図１６はＮＯＡマウス（４８週齢、雄性）の皮膚（背部乾燥性皮膚病変部）のＩｇＥ抗体染色所見（生物の形態）を示す図面代用写真である。
図１７はＮＯＡマウス（２４週齢、雄製）の体表リンパ節（顎下リンパ節）のＩｇＥ抗体染色所見を示す図面代用写真である。
図１８はＮＯＡマウス体表リンパ節（顎下リンパ節）臚胞部（３２週齢、雄性）のＩｇＥ抗体染色所見を示す図面代用写真である。
図１９は比較動物であるＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス（２０週齢、雄性）の皮膚（背部）のＩｇＥ抗体染色所見を示す図面代用写真である。
図２０は比較動物であるＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス（２８週齢、雄性）の体表リンパ節（顎下リンパ節）のＩｇＥ抗体染色所見を示す図面代用写真である。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明を更に詳しく説明するため、実施例を挙げる。
実施例１
Ｃ３Ｈ／Ｈｅ雌性マウスとｄｄＹ雄性マウスを交配して得られた突然変異による雄性貧毛個体を祖先とし、該雄性貧毛個体と同腹仔の雌とを兄妹交配して得られた３世代目の雌雄貧毛個体を兄妹交配して、雌性無毛個体を得た。該雌性無毛個体と同腹仔の雄性貧毛個体を兄妹交配して、雌雄の無毛個体を得、この雌雄の無毛個体を無毛０世代として、之等を兄妹交配することによって、本発明無毛マウス（ＮＯＡマウス）の系列を固定した。
尚、各マウスの飼育は、飼育ケージ（底部１７０×２８０ｍｍ×Ｈ１３０ｍｍ、ポリカーボネイト製、日本クレア社製）にて、最大５頭／ケージの群飼育にて行なった。また飼育は、バリアシステム環境下（温度２３±２℃、湿度５５±５％、照明時間午前７時から午後７時まで１２時間）に行ない、飼育期間中、各マウスには固型飼料（ＣＲＦ−１、オリエンタル酵母工業社製）を自由摂取させ、水は水道水を自由摂取させた。
上記で得られたＮＯＡマウスにつき以下の各項目を観察した。
項目１  脱毛様式…目視観察による。但し、Rhinoマウスについては、文献〔A.Howard, ”Rhino”, an allele of hairless in house mouse, J.Hered., 31, 467-470（1940）; Stanley,J.Mann, Hair loss and cyst formation in Hairless and Rhino mutant mice., ANAT. REC., 170, 485-500（1971）: Kawaji,H., Tsukuda,R. and Nakaguchi,T., Immunopathology of Rhino mouse, An autosomal recessive mutant with murine lupus-like disease., Acta Pathol. Jpn., 30（4）, 515-530（1980）〕により確認した。
項目２  皮膚病変の自然発症…目視観察による。
項目３  皮膚のマスト細胞数…組織標本のトルイジンブルー染色法による。
項目４  ＩｇＥ抗体産生能
１．ＩｇＥ抗体染色…酵素抗体法（ＡＢＣ法）による。
２．血中ＩｇＥ抗体値…サンドイッチＥＬＩＳＡ法による。
得られた結果を、以下に示す。
項目１  脱毛様式
本発明に係わるＮＯＡマウス並びに比較のためＨＲＳ／Ｊ及びＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒの各ヘアレスマウスを５週齢〜４８週齢迄目視により観察した。但し、Rhinoマウスについては、上記文献により調査、確認した。
（１）ＮＯＡマウス
幼毛は成育するが、一般毛の成育能は欠如しており、幼毛が脱落する１０週齢迄に体毛は消失する。更に、吻鼻部及び眼瞼部の剛毛は、短く変形しイレギュラーなものとなっている（５週齢、図１参照）。その後、１２週齢頃迄には吻鼻部及び眼瞼部の剛毛も脱落し、全ての体毛は認められなくなり、非常に滑らかなヘアレススキン状態となる（１０週齢、図２参照）。
（２）ＨＲＳ／Ｊマウス
幼毛の成育に加えて、一般毛の成育能も残存しており、少ないが一般毛が認められる（７週齢、図３参照）。成長に伴い、この一般毛が脱落し、ヘアレススキン（２８週齢、図４参照）となるが、遅いものでは２０週齢以降まで体毛が見られる個体もあり、個体差が著しい。脱毛後の皮膚は、ＮＯＡマウスに比べて深い皺が認められる。
吻鼻部及び眼瞼部の剛毛は、正常に認められる（２８週齢、図４参照）。
（３）ＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス
ＨＲＳ／Ｊマウスとおおむね同様である。即ち、幼毛の成育に加えて、一般毛の成育能も残存しており、僅かであるが一般毛が認められる（７週齢、図５参照）。成長に伴い、この一般毛が脱落し、ヘアレススキン（２８週齢、図６参照）となるが、遅いものでは２０週齢以降まで体毛が見られる個体もあり、個体差が著しい。脱毛後の皮膚は、ＮＯＡマウスに比べて皺が多く、粗造感が認められる。
吻鼻部及び眼瞼部の剛毛は、通常は正常に認められる（２８週齢、図６参照）。
（４）Rhinoマウス
１３〜１４日齢まで外観上正常であるが、その後眼の上から脱毛が始まり、３〜４週齢まで続き、足、尾、耳だけに毛が残る。５週齢まで散在性の毛が背部に残り、後肢には７週齢まで毛が残る〔A.Howard, ”Rhino”, an allele of hairless in house mouse, J.Hered., 31, 467-470（1940）参照〕。
また、次のようにも示されている。即ち、生後１２日迄の被毛の成長は正常であるが、その後、脱毛が進み、２５日齢迄に被毛は脱落する。しかし、６０日齢迄わずかな散在性の被毛が見られる個体があり、この被毛はしばしば異常な毛であるという記載がある（Stanley,J. Mann, Hair loss and cyst formation in Hairless and Rhino mutant mice., ANAT.REC., 170, 485-500（1971））。之等の記載から、Rhinoマウスでは、幼毛の成育に加えて、一般毛の成育能も残存していると推察される。
更に、剛毛は一生涯残るが、老化すると短く、湾曲し、沢山抜ける旨先のA.Howardの文献に記載されており、一方、次の文献には、吻鼻部及び眼瞼部の剛毛は、正常に認められると記載されている（Kawaji,H., Tsukuda,R. and Nakaguchi,T., Immunopathology of Rhino mouse, An autosomal recessive mutant with murine lupus-like disease., Acta Pathol. Jpn., 30（4）, 515-530（1980））。
項目２  皮膚病変の自然発症
本発明に係わるＮＯＡマウス並びに比較のためのＨＲＳ／Ｊ及びＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒの各ヘアレスマウスを５週齢〜４８週齢迄目視により観察した。
（１）ＮＯＡマウス
１０週齢頃から皮膚病変の自然発症が認められる。該皮膚病変は乾燥性（ドライスキン）のものと湿潤性（潰瘍性）のものが認められるが、之等は異なる病変ではなく、表皮が残存しているか否かの違いであると考えられる。
皮膚病変は、初め発赤として認められ、それが乾燥性或は湿潤性へと移行する。湿潤性への移行は、表皮が脱落しやすい状態にあり、それが、自然に或は物理的な原因により脱落して成立するものと考えられる。この時、表皮が脱落せずに残存するものが、乾燥性として認められるものと考えられるが、乾燥性のものの多くは、後に湿潤性へと移行すると推察される。
湿潤性皮膚病変は、低週齢ではそのほとんどが微小なもので、広範なものが認められ始めるのは１６週齢頃からで、更に広範なものが高率に認められるのは２４週齢以降である。
湿潤性皮膚病変が加齢に伴って徐々に拡張していく様子は、図７〜図１０に示される通りである。図７は２０週齢のＮＯＡマウスを、図８はその４週後（２４週齢）を、図９はその１２週後（３６週齢）を、また図１０はその１６週後（４０週齢）をそれぞれ示す。
各図につき詳述すれば、図７（２０週齢）では、左側上眼瞼〜吻鼻部、肩部〜背側部〜腰部に湿潤性皮膚病変が認められる。背部〜腰部には少量の脱鱗形成と粗造感を示す乾燥性皮膚病変が認められる。
図８（２４週齢）では、湿潤性皮膚病変部の拡張が認められる（上眼瞼部と吻鼻部の一部は改善傾向にある）。乾燥性皮膚病変部では皮膚の菲薄化が認められる。
図９（３６週齢）では、湿潤性皮膚病変部で更に病変の拡張が認められる（上眼瞼部と吻鼻部の一部は改善）。乾燥性皮膚病変部では皮膚の菲薄化の進行が認められる。
図１０（４０週齢）では、湿潤性皮膚病変部で更に病変の拡張が認められ、乾燥性皮膚病変部で更に皮膚の菲薄化の進行が認められる。
上記皮膚病変は、重度なものでは体表の２０％以上を占める症例も確認されている。湿潤性皮膚病変は部分的には改善されることもあるが、広範囲の病変が消失した例はいまだ皆無である。
乾燥性皮膚病変は低週齢では粗造として確認されるが、高週齢では脱燐形成が高度となり、表皮の著しい菲薄化が認められる。
上記皮膚病変の発症率を調べた結果は、図１１に示す通りである。
図１１は、ＮＯＡマウスの各週齢雌雄各１０頭の乾燥性と湿潤性とを合わせた全皮膚病変発症の有無を調べ、その発症率を求めたグラフである。
尚、皮膚病変発症の有無は、目視観察により明らかに皮膚病変の観察されるものを発症動物とした。
図において、平均は雌雄の平均を示し、ｎ数は各週齢雌雄それぞれ１０頭であり、検査週齢は１２段階であり、検査動物の合計は雌雄各１２０頭（合計２４０頭）である。
該図１１より、乾燥性と湿潤性とを合わせた皮膚病変発症率は、１６週齢の雌雄平均で９０％に達することが明らかである。
また、図１２には、同様にして求めた湿潤性皮膚病変のみの発症率を示す。
該図から湿潤性皮膚病変の雌雄平均での発症率は１６週齢で３０％、２４週齢では８０％に達することが明らかである。
（２）ＨＲＳ／Ｊマウス及びＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス
飼育期間（５週齢〜４８週齢）を通して、ファイティングによると思われる微小な湿潤性病変（外傷）が数例に見られたが、之等の動物といえども、病変の拡張は認められず、２週間程度で改善、消失した。
項目３  皮膚のマスト細胞数
ＮＯＡマウスの病理組織学的検索において、皮膚病変部には、多数のマスト細胞の集簇が認められた。このことから、ＮＯＡマウスの皮膚ではマスト細胞が増殖していると推察され、このことを確認するため、皮膚のマスト細胞数を以下の通り算出した。
即ち、背部、腰部、胸部及び腹部の各皮膚を約１ｃｍ長採材し、トルイジンブルー染色を施し、それぞれ３箇所（左右両端部及び中央部）について１ｍｍ長当りのマスト細胞数を顕微鏡下に計数し、それらの値を平均して、背部、腰部、胸部及び腹部のマスト細胞数とし、更に之等４ケ所の値を平均してその個体のマスト細胞数とした。
比較としてＨＲＳ／Ｊ及びＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒの各ヘアレスマウス及び対照としてＩＣＲ及びｄｄＹの一般的な有毛マウスについて、同様の試験を行なった。
結果を図１３（縦軸：マスト細胞数、個／ｍｍ及び横軸：マウス週齢）に示す。
尚、各マウスの個体数（ｎ、全て雄）はＮＯＡマウスでは各週齢１０であり（検査週齢は１２段階、検査動物合計は１２０頭）、比較動物及び対照動物群では各週齢５（検査段階は８段階、検査動物合計は各系統３０頭）である。また、ＮＯＡマウスは、皮膚病変発症の有無にかかわらず無作為に選んだ。更に、ＨＲＳ／Ｊマウスの結果をHRS/Jとして、ＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウスの結果をBALB/c-hとして、ＩＣＲマウスの結果をICRとして、更にｄｄＹマウスの結果をddYとしてそれぞれ示す。
図１３より、本発明に係わるＮＯＡマウスの皮膚のマスト細胞数は、１２週齢では２８個／ｍｍ、４０週齢で５７個／ｍｍであり、この値は、比較動物及び対照動物のそれらと対比して明らかに高値であった。事実、ＨＲＳ／Ｊマウスは１２週齢で１５個／ｍｍ、４０週齢で１３個／ｍｍであり、ＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウスは１２週齢で２１個／ｍｍ、４０週齢で２４個／ｍｍであり、ＩＣＲマウスは１２週齢で１０個／ｍｍ、４０週齢で１０個／ｍｍであり、またｄｄＹマウスは１２週齢で１１個／ｍｍ、４０週齢で１１個／ｍｍであった。
更に、ＮＯＡマウスでは、その雌雄の違いにより上記マスト細胞数に若干の差が認められた。このことは同様にして求めた図１４（図１１と同様の個体数について、同様にして表記した）に示す通りである。
また、ＮＯＡマウスでは、皮膚の状態でマスト細胞数に差が認められ、正常部位に比べて皮膚病変発症部位で高値を示した（図１５参照、図中、平均は皮膚病変発症の有無に拘らず算出された平均値であり、湿潤性は湿潤性皮膚病変部を、乾燥性は乾燥性皮膚病変部、正常は正常皮膚部を、それぞれ示す）。尚、皮膚病変発症部位及びその周辺部では著しく高値を示すものも認められ、局所的には３００個／ｍｍ以上を示すものも認められている。
上記図１５において検査された個体数（ｎ）は各週齢１０頭、検査週齢は１２段階、検査動物合計は１２０頭であり、各項目（状態）のｎ数は次の通りである。
５週齢：湿潤性皮膚病変部＝０、乾燥性皮膚病変部＝０、正常部＝１０
７週齢：湿潤性皮膚病変部＝０、乾燥性皮膚病変部＝０、正常部＝１０
１０週齢：湿潤性皮膚病変部＝３、乾燥性皮膚病変部＝１、正常部＝６
１２週齢：湿潤性皮膚病変部＝２、乾燥性皮膚病変部＝２、正常部＝６
１６週齢：湿潤性皮膚病変部＝３、乾燥性皮膚病変部＝１、正常部＝６
２０週齢：湿潤性皮膚病変部＝４、乾燥性皮膚病変部＝５、正常部＝１
２４週齢：湿潤性皮膚病変部＝４、乾燥性皮膚病変部＝４、正常部＝２
２８週齢：湿潤性皮膚病変部＝５、乾燥性皮膚病変部＝５、正常部＝０
３２週齢：湿潤性皮膚病変部＝３、乾燥性皮膚病変部＝３、正常部＝４
３６週齢：湿潤性皮膚病変部＝５、乾燥性皮膚病変部＝３、正常部＝２
４０週齢：湿潤性皮膚病変部＝３、乾燥性皮膚病変部＝５、正常部＝２
４８週齢：湿潤性皮膚病変部＝６、乾燥性皮膚病変部＝４、正常部＝０
以上の結果より、ＮＯＡマウスでは、皮膚のマスト細胞が顕著に増殖していることが明らかとなり、これが皮膚病変発症に関与していることが示唆された。
項目４  ＩｇＥ抗体産生能
（１）ＩｇＥ抗体染色所見
ＮＯＡマウス並びに比較のためＨＲＳ／Ｊ及びＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒの各ヘアレスマウス及び対照としてＩＣＲ及びｄｄＹの一般的な有毛マウスについて、皮膚、体表リンパ節、胸腺及び脾臓のそれぞれを採取し、酵素抗体法（ＡＢＣ法）により、ＩｇＥ抗体を染色し、顕微鏡下に観察した。
各供試マウスは、５週齢〜４８週齢迄上記観察を行なった。
その結果、ＮＯＡマウスでは、１２週齢頃より皮膚のマスト細胞周囲に強い陽性反応が認められ、体表リンパ節に陽性細胞（ＩｇＥ抗体産生形質細胞と考えられる）が多く認められるようになった。ヒの反応は皮膚病変発症動物でより強く、該動物でより多くの陽性細胞が認められた。更に、皮膚病変発症動物では、リンパ節臚胞部の細網樹枝状細胞に陽性反応（ＩｇＥ抗体コンプレックスの沈着と考えられる）が認められるものも見られた。之等は図１６（ＮＯＡマウス４８週齢、背部乾燥性皮膚病変部）、図１７（ＮＯＡマウス２４週齢、湿潤性皮膚病変発症動物の顎下リンパ節）、図１８（ＮＯＡマウス、３２週齢、湿潤性皮膚病変発症動物の顎下リンパ節、臚胞部）に示す通りである。尚、各図は、各部位の顕微鏡撮影写真（倍率×１５０倍）であり、以下の図１９（背部皮膚）及び図２０（顎下リンパ節）も同様である。
図１６によれば、リング状或は点状に染色（黒色）されているのが、ＩｇＥ抗体陽性細胞であり、ここでは全てマスト細胞である。
図１７によれば、点状に染色（黒色）されているのが、ＩｇＥ抗体陽性細胞であり、ここでは全てＩｇＥ抗体産生形質細胞と考えられる。
図１８によれば、中央部の網目状に染色（黒色）されているのが、陽性反応であり、ここでは臚胞部の細網樹枝状細胞にＩｇＥ抗体コンプレックスが沈着しているものと考えられる。
これに対して、比較動物及び対照動物では、図１９及び図２０に示すように、いずれも微弱な反応或は少数の陽性細胞が認められるのみであった。即ち、図１９はＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス、２０週齢の背部皮膚及び図２０はＢＡＬＢ／ｃＡ−ｈｒマウス、２８週齢の顎下リンパ節のそれぞれの顕微鏡写真である。
図１９によれば、リング状に染色（黒色）されている数個の細胞がＩｇＥ抗体陽性細胞であり、ここではマスト細胞である。
図２０によれば、点状に染色（黒色）されている数個の細胞が陽性細胞であり、ここではＩｇＥ抗体産生形質細胞と考えられる。
以上の結果より、ＮＯＡマウスでは、ＩｇＥ抗体の産生が亢進されていることが明らかであり、そのことが皮膚病変発症に関与していることが示唆される。
（２）血中ＩｇＥ抗体値の測定
上記（１）の染色所見により、ＮＯＡマウスでは、ＩｇＥ抗体産生が亢進されていることが明らかにされたので、この事実を以下の血中ＩｇＥ抗体値の測定試験により確認した。
即ち、市販の測定キット（商品名：マウスＩｇＥ測定キット「ヤマサ」ＥＩＡ、ヤマサ醤油株式会社製）を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡ法に従い、血中ＩｇＥ抗体値を測定した。
ＮＯＡマウス（雄性、５週齢〜３２週齢）につき、得られた結果を下記表１に示す。尚、表中、病変重度の表示は以下の記号によった。即ち、「−」は皮膚病変非発症動物を示し、「＋」〜「＋＋＋」はそれぞれ湿潤性皮膚病変発症動物を示し、＋が多いほど病変の広さが広いことを示す。「Ｗ」は乾燥性皮膚病変発症動物を示す。
また、対照としてＨＲＳ／Ｊマウス（雄性、５、２０及び２８週齢）、ＩＣＲマウス（雄性、５、１６及び３２週齢）及びｄｄＹマウス（雄性、５、１６及び３２週齢）について、同様にして求めた血中ＩｇＥ抗体値を、下記表２、表３及び表４にそれぞれ示す。
0003867172.tif 000002
0003867172.tif 000003
0003867172.tif 000004
0003867172.tif 000005
上記表１乃至表４の対比から明らかな通り、ＮＯＡマウスは、ＨＲＳ／Ｊマウス、ＩＣＲマウス及びｄｄＹマウスに比して、遥かに高い血中ＩｇＥ抗体値を示し、このことからもＮＯＡマウスではＩｇＥ抗体の産生が亢進されていることが明らかとなり、これが皮膚病変発症に関与することが示唆された。
【図１】
0003867172.tif 000006
【図２】
0003867172.tif 000007
【図３】
0003867172.tif 000008
【図４】
0003867172.tif 000009
【図５】
0003867172.tif 000010
【図６】
0003867172.tif 000011
【図７】
0003867172.tif 000012
【図８】
0003867172.tif 000013
【図９】
0003867172.tif 000014
【図１０】
0003867172.tif 000015
【図１１】
0003867172.tif 000016
【図１２】
0003867172.tif 000017
【図１３】
0003867172.tif 000018
【図１４】
0003867172.tif 000019
【図１５】
0003867172.tif 000020
【図１６】
0003867172.tif 000021
【図１７】
0003867172.tif 000022
【図１８】
0003867172.tif 000023
【図１９】
0003867172.tif 000024
【図２０】
0003867172.tif 000025