(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
（１）フェナシルクロライド、フェナシルブロマイドおよびｐ−ブロモフェナシルブロマイドからなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物でパン酵母に前処理を施した後、
（２）前処理を施したパン酵母を用いて一般式（Ｉ）：
【化１】
0003939833.tif 000010
（式中、Ｒは直鎖状もしくは分岐鎖状の炭素数１〜１０のアルキル基、芳香族基またはハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルケニル基を示す）で表わされる２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを有機溶媒中で少量の水の存在下で還元させることを特徴とする一般式（II）：
【化２】
0003939833.tif 000011
（式中、Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法。
【請求項２】
有機溶媒が水に難溶のエーテルである請求項１記載の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法。
【請求項３】
水に難溶のエーテルがジエチルエーテルである請求項２記載の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法。
【請求項４】
パン酵母１ｇあたりの水の量が１ｍｌ以下である請求項１、２または３記載の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法に関する。さらに詳しくは、パン酵母を用い、立体選択的に、医薬品中間体などに重要な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルを容易にかつ経済的に製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、すべての薬において高い薬理効果を発現させるために、純粋な立体構造を有する化合物が求められてきている。このような純粋な立体構造を有する化合物をうる方法としては、たとえばキラルな出発原料から目的物を調製する方法や、出発物質を化学的にまたは微生物などを用いて立体選択的に反応させ、キラルな化合物をうる方法などがある。
【０００３】
たとえば、α−ヒドロキシエステルはキラルな構造を有し、他の官能基に置換することで医薬品中間体として幅広く有用である。とくに、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルは、種々のアンジオテンシン転化酵素（以下、ＡＣＥと略す）阻害剤の合成のためのすぐれた中間体として重要である。このような医薬品などの例としては、たとえばＨＯＥ  ４９８（ヘキスト社製）、ＣＧＳ  １４８２４Ａ（チバ  ガイギー社製）、ＣＧＳ  １３９２８Ｃ（チバ  ガイギー社製）、ＳＣＨ  ３１８４６（シェーリング社製）、Ｒｏ３１−２８４８（ホフマン−ラ  ロッシュ社製）、Ａｄｅｃｕｔ（武田薬品工業（株）製）などがあげられる。
【０００４】
従来、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルから、光学活性な前記（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルを製造する方法としては、たとえば以下のような方法が提案されている。
【０００５】
（１）（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−Ｏ−（１−フェニルエチリデン）−１，１，４，４−テトラフェニル−１，２，３，４−ブタンテトロールとジクロロジイソプロポキシチタニウム（IV）とを用い、シアノトリメチルシランと３−フェニルプロパナールとを反応させ、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタンニトリルとしたのち、加水分解して（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸とし、これをエステル化させるといった化学的な方法。
【０００６】
かかる方法によれば、純度が５０〜８２％、収率が７０〜９０％と低く、満足しうるものでない［テトラヘドロン：アシメトリー（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ）、２、Ｐ．８４３（１９９１）およびブレチン・オブ・ザ・ケミカル・ソサエティ・オブ・ジャパン（Ｂｕｌｌ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｊｐｎ．）、６１、Ｐ．４３７４（１９８８）参照］。
【０００７】
（２）コリネバクテリウム  グルタミカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）の成長細胞などを用いた生物学的な方法。
【０００８】
かかる方法では、光学純度（ｅｅ：８０〜９９％）および収率（３９〜９２％）の両方の面で満足しうるものがえられていない［アプライド・ミクロバイオロジー・アンド・バイオテクノロジー（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２６、Ｐ．４０９（１９８７）およびアプライド・ミクロバイオロジー・アンド・バイオテクノロジー（Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．）、２５、Ｐ．１７５（１９８６）参照］。
【０００９】
（３）２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを、水性溶媒中にてパン酵母（サッカロマイセス  セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）を用いて懸濁液として還元する方法。
【００１０】
かかる方法では、触媒が変質したり、出発物質および生成物の水性溶媒に対する溶解性が低かったり、安定性の低下がおこるため、満足しうる程度に２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルが還元されえない［バイオケミッシュ・ツェイシュリフト（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｚ．）、６７、Ｐ．１３７（１９１４）参照］。
【００１１】
（４）ダックス  カロータ（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）細胞といった特殊な触媒を用いる方法。
【００１２】
かかる方法では、高い収率（９０％）および高い立体選択性（ｅｅ：（Ｒ）−異性体として９９％以上）にて還元反応が進行するものの、ダックス  カロータ（Ｄａｕｃｕｓ  ｃａｒｏｔａ）細胞が特殊な触媒であることから、その入手が困難であり、不経済であるうえ、スケールの大きな工業的製造には不適切である［テトラヘドロン：アシメトリー（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ）、７、Ｐ．１５７１（１９９６）参照］。
【００１３】
このように、従来、光学活性な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製造方法が種々提案されているものの、いずれの方法にも何らかの欠点があり、未だ満足しうる方法が見出されていないのが実情である。
【００１４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、たとえば医薬品中間体、とくにＡＣＥ阻害剤の合成中間体もしくは製造原料として重要な化合物である光学活性な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの簡便でかつ経済性にすぐれた製造方法を提供することを目的とする。
【００１５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、
（１）フェナシルクロライド、フェナシルブロマイドおよびｐ−ブロモフェナシルブロマイドからなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物でパン酵母に前処理を施した後、
（２）前処理を施したパン酵母を用いて一般式（Ｉ）：
【００１６】
【化３】
0003939833.tif 000002
【００１７】
（式中、Ｒは直鎖状もしくは分岐鎖状の炭素数１〜１０のアルキル基、芳香族基またはハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルケニル基を示す）で表わされる２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを有機溶媒中で少量の水の存在下で還元させることを特徴とする一般式（II）：
【００１８】
【化４】
0003939833.tif 000003
【００１９】
（式中、Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法
に関する。
【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明の製法によれば、
（１）フェナシルクロライド、フェナシルブロマイドおよびｐ−ブロモフェナシルブロマイドからなる群より選ばれた少なくとも１種の化合物でパン酵母に前処理を施した後、
（２）前処理を施したパン酵母を用いて一般式（Ｉ）：
【００２１】
【化５】
0003939833.tif 000004
【００２２】
（式中、Ｒは直鎖状もしくは分岐鎖状の炭素数１〜１０のアルキル基、芳香族基またはハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルケニル基を示す）で表わされる２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを有機溶媒中で少量の水の存在下で還元させることにより、一般式（II）：
【００２３】
【化６】
0003939833.tif 000005
【００２４】
（式中、Ｒは前記と同じ）で表わされる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルがえられる。
【００２５】
本発明においては、オキソ化合物である前記一般式（Ｉ）で表わされる２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを原料とし、これを、安価で汎用性に富むパン酵母を用い、特定の条件下（反応系）にて立体選択的に還元させ、ついで分離、精製することによって、容易に、しかも効率よく、光学活性なアルコールである前記一般式（II）で表わされる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルをうることができる。
【００２６】
前記２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを表わす一般式（Ｉ）において、Ｒは直鎖状もしくは分岐鎖状の炭素数１〜１０のアルキル基、芳香族基またはハロゲン原子で置換されていてもよい炭素数１〜１０のアルケニル基であるが、かかる芳香族基としては、たとえばベンジル基、フェニル基などがあげられ、またアルケニル基の水素原子を置換してもよいハロゲン原子としては、たとえば塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子などがあげられる。
【００２７】
一般式（Ｉ）で表わされる２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの代表例としては、たとえば２−オキソ−４−フェニルブタン酸メチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸プロピル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸ｎ−ブチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸ｔ−ブチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸ベンジル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸プロピレン、２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチレン、２−オキソ−４−フェニルブタン酸ペンテンなどがあげられる。これらのなかでも、本発明の製法によってより立体選択的に望ましい（Ｒ）−異性体である（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルをうることができるという点で、２−オキソ−４−フェニルブタン酸メチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル、２−オキソ−４−フェニルブタン酸プロピルおよび２−オキソ−４−フェニルブタン酸ｎ−ブチルがとくに好ましく用いられる。
【００２８】
本発明に用いられるパン酵母にはとくに限定がなく、たとえば菌株がサッカロマイセス  セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）に属する上面酵母である、通常市販されている圧搾酵母または乾燥酵母を問題なく用いることができる。なお、本発明においては、オリエンタル酵母工業（株）製のパン酵母（商品名：オリエンタル  ドライイースト、菌株：サッカロマイセス  セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、乾燥酵母）を用いた。
【００２９】
パン酵母の量は、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応を充分に進行させるためには、該２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステル１ミリモルに対して５ｇ以上、なかんづく１０ｇ以上であることが好ましい。また、反応の後処理でのろ過工程に負担がかからないようにするためには、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステル１ミリモルに対して５０ｇ以下、なかんづく３０ｇ以下であることが好ましい。
【００３０】
２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルをパン酵母を用いて還元させる反応は、有機溶媒中、少量の水の存在下で行なう。
【００３１】
本発明において、前記還元反応を、有機溶媒のみならず、少量の水の存在下で行なうことに大きな特徴の１つがある。このように少量の水が存在したばあいには、直接有機溶媒とパン酵母とが接触しないようにパン酵母が水で包囲され、該パン酵母の生物活性が高く発現されて２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応がより有意に進行すると考えられる。
【００３２】
前記有機溶媒としては、たとえばベンゼン、シクロヘキサン、四塩化炭素、酢酸エチル、ジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、２，２，５，５−テトラメチルテトラヒドロフラン、２−メチルテトラヒドロフランなどがあげられる。これらのなかでは、反応収率および目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの立体選択性の両面を考慮すると、水に難溶のエーテル、たとえばジエチルエーテル、ジイソプロピルエーテル、２，２，５，５−テトラメチルテトラヒドロフランおよび２−メチルテトラヒドロフランが好ましく、入手が容易であるという点から、ジエチルエーテルがとくに好ましい。
【００３３】
なお、本発明において、前記水に難溶のエーテルとは、水に対する溶解度（２５℃）が１０ｇ／１００ｇ以下のエーテルのことをいう。
【００３４】
前記有機溶媒とともに用いられる水の種類にはとくに限定がなく、通常の精製水、イオン交換水、蒸留水などを用いればよい。
【００３５】
本発明に用いられる水は少量であり、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルのエステル部分が加水分解反応を起こし、目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの収率が低下しないようにするためには、かかる水の量は、パン酵母１ｇに対して１ｍｌ以下、なかんづく０．９ｍｌ以下であることが好ましい。また、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還反応をより有意に進行させる効果を充分に発現させるためには、かかる水の量は、パン酵母１ｇに対して０．３ｍｌ以上、なかんづく０．４ｍｌ以上であることが好ましい。
【００３６】
有機溶媒中、少量の水の存在下で還元反応を行なう際の基質濃度（２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの量）は、釜効率がわるくなって工業的な生産性が低下しないようにするためには、溶媒（有機溶媒および水の合計量）１リットルに対して１ミリモル以上、なかんづく４ミリモル以上であることが好ましい。また、反応収率および目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの立体選択性が低下しないようにするためには、該基質濃度は、溶媒１リットルに対して３０ミリモル以下、なかんづく２０ミリモル以下であることが好ましい。
【００３７】
なお、本発明において、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルおよびパン酵母を、有機溶媒中、少量の水の存在下で撹拌することにより立体選択的な還元反応が進行するが、かかる反応系の温度および撹拌時間にはとくに限定がなく、たとえば反応系を０〜５０℃程度とし、１〜３０時間程度撹拌するなどすればよい。
【００３８】
また、本発明において、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを還元させる前に、あらかじめパン酵母に前処理を施したばあいには、反応収率および目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの立体選択性をより向上させることができるといった利点があるので、好ましい。
【００３９】
パン酵母の前処理に用いられる化合物としては、フェナシルクロライド、フェナシルブロマイドおよびｐ−ブロモフェナシルブロマイドがあげられる。これらのなかでは、反応収率および立体選択性の向上効果がより大きいという点から、フェナシルクロライドがとくに好ましい。
【００４０】
前処理に用いる化合物の量は、反応収率および立体選択性の向上効果を充分に発現させるためには、パン酵母１ｇに対して２ｍｇ以上、なかんづく３ｍｇ以上であることが好ましい。また、経済性を考慮すると、前処理に用いる化合物の量は、パン酵母１ｇに対して１２ｍｇ以下、なかんづく１０ｍｇ以下であることが好ましい。
【００４１】
パン酵母に前処理を施す条件にはとくに限定がないが、あまりにも前処理の時間が短いと、反応収率および立体選択性の向上効果が充分に発現されず、また長すぎてもそれ以上の向上効果を期待することができないので、たとえばパン酵母と前処理に用いる化合物とを、０〜５０℃程度で２〜８時間程度混合して撹拌するなどすればよい。
【００４２】
２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応の経時および終点は、たとえば気層クロマトグラフィ分析装置などを用いた機器分析によって確認することができる。
【００４３】
反応の終了が確認されたのち、反応液をろ過し、パン酵母を分離する。ついで、分離したパン酵母を、たとえば酢酸エチル、ジエチルエーテル、塩化メチレン、トルエン、クロロホルムなどの溶媒で数回洗浄する。この洗浄液とろ液とを合わせて減圧下で濃縮し、目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルをうることができる。
【００４４】
さらに、必要に応じて、前記濃縮物を、たとえば精製水、イオン交換水、蒸留水などの水、飽和食塩水などで数回洗浄したのち、たとえば硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウムなどで乾燥させ、乾燥終了後、たとえばカラムクロマトグラフなどの通常の方法により、乾燥物から目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルを精製し、分取することができる。
【００４５】
なお、本明細書において、反応収率および（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの立体選択性は、前記濃縮物または乾燥後の生成物を気層クロマトグラフィ（ＶＰＣ）分析装置（（株）島津製作所製、ＧＣ−９Ａと１４Ｂ（ＨＲ−２０Ｍ、０．２５ｍｍφ×２５ｍ；ＯＶ−１７０１結合、０．２５ｍｍφ×３０ｍ；ＣＰ−シクロデキストリンＢ−２３６−Ｍ−１９、０．２５ｍｍφ×２５ｍ））を用いて分析し、反応収率（％）は出発原料および生成物の面積から、また立体選択性（ｅｅ：％）は生成物の面積から求めた値をいう。
【００４６】
本発明の製法によれば、光学活性な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルを、高反応収率および高立体選択性にて、簡便にかつ経済的にうることができる。
【００４７】
【実施例】
つぎに、本発明の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルの製法を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００４８】
実施例１〜５および比較例１〜５
パン酵母（オリエンタル酵素工業（株）製、商品名：オリエンタル  ドライイースト、菌株：サッカロマイセス  セレビシア（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、乾燥酵母）１ｇを入れた２５ｍｍφ×１５０ｍｍのガラス管内に、表１に示す有機溶媒１０ｍｌに表１に示す量（パン酵母１ｇに対する量（ｍｌ））の精製水を加えた溶媒と、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル１２ｍｇ（０．０５８ミリモル）とを加え、口にフッ素樹脂製キャップをした。
【００４９】
前記ガラス管内の混合物を３０℃に加温し、２４時間撹拌しながら気層クロマトグラフィ（ＶＰＣ）分析装置（（株）島津製作所製、ＧＣ−９Ａと１４Ｂ（ＨＲ−２０Ｍ、０．２５ｍｍφ×２５ｍ；ＯＶ−１７０１結合、０．２５ｍｍφ×３０ｍ；ＣＰ−シクロデキストリンＢ−２３６−Ｍ−１９、０．２５ｍｍφ×２５ｍ））を用いて分析し、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルの還元反応の終了を確認した。
【００５０】
前記分析の結果、実施例１〜５のいずれにおいても、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルと生成物である２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エチルとについて、気層クロマトグラフでのピーク面積を比べ、経時変化がなくなっていることから、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルの還元反応が終了していることがわかった。
【００５１】
なお、比較例１〜５においては、精製水を加えなかったほかは、それぞれ実施例１〜５と同様にして２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルを還元させようとしたが、還元反応は起こらなかった。
【００５２】
反応終了後、反応液をろ過し、パン酵母を分離した。ついで、分離したパン酵母を酢酸エチル１０ｍｌで４回洗浄し、この洗浄液とろ液とを合わせて減圧下（４０℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、淡黄色の濃縮物である目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エチルをえた。
【００５３】
えられた濃縮物を前記ＶＰＣ分析装置を用いて分析し、出発原料および生成物の面積から反応収率（％）を、生成物の面積から立体選択性（ｅｅ：％）を求めた。その結果を表１に示す。
【００５４】
【表１】
0003939833.tif 000006
【００５５】
表１に示された結果から、実施例１〜５の条件で還元反応を行なったばあいには、いずれもバランスよく高い反応収率および立体選択性で目的物がえられることがわかる。
【００５６】
さらに、実施例４〜５のように、有機溶媒として水に難溶のエーテルを用いたばあい、とくに実施例４のジエチルエーテルを用いたばあいには、より高い反応収率および立体選択性で目的物をうることができることがわかる。
【００５７】
実施例６〜１１
実施例１〜５で用いたものと同じパン酵母１ｇを入れた２５ｍｍφ×１５０ｍｍのガラス管内に、ジエチルエーテル１０ｍｌに表２に示す量（パン酵母１ｇに対する量（ｍｌ））の精製水を加えた溶媒と、表２に示す２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステル０．０６ミリモルとを加え、口にフッ素樹脂製キャップをした。
【００５８】
前記ガラス管内の混合物を３０℃に加温し、２４時間撹拌しながら実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析を行ない、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応の終了を確認した。
【００５９】
前記分析の結果、実施例６〜１１のいずれにおいても、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルと生成物である２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルとについて、気層クロマトグラフでのピーク面積を比べ、経時変化がなくなっていることから、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応が終了していることがわかった。
【００６０】
反応終了後、反応液をろ過し、パン酵母を分離した。ついで、分離したパン酵母を酢酸エチル１０ｍｌで４回洗浄し、この洗浄液とろ液とを合わせて減圧下（４０℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、淡黄色の濃縮物である目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルをえた。
【００６１】
えられた濃縮物を実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析し、反応収率および立体選択性を求めた。その結果を表２に示す。
【００６２】
なお、表２中には、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの種類として、一般式（Ｉ）中のＲで示される基の種類を記載した。
【００６３】
【表２】
0003939833.tif 000007
【００６４】
表２に示された結果から、実施例６〜１１の条件で還元反応を行なったばあいには、いずれもバランスよく高い反応収率および立体選択性で目的物がえられることがわかる。
【００６５】
さらに、実施例６〜８のように、一般式（Ｉ）中のＲがエチル基、プロピル基またはｎ−ブチル基を示す２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルを用いたばあいには、より高い反応収率および立体選択性で目的物をうることができることがわかる。
【００６６】
実施例１２〜２４
実施例１〜５で用いたものと同じパン酵母１ｇを入れた２５ｍｍφ×１５０ｍｍのガラス管内に、ジエチルエーテル１０ｍｌに０．６ｍｌの精製水を加えた溶媒と、表３に示す種類および量（パン酵母１ｇに対する量（ｍｇ））のパン酵母の前処理用の化合物とを加え、口にフッ素樹脂製キャップをして内容物を３０℃で２時間撹拌し、パン酵母の前処理を行なった。こののち、このガラス管内に２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル１２ｍｇ（０．０５８ミリモル）を加え、再び口にフッ素樹脂製キャップをした。
【００６７】
前記ガラス管内の混合物を３０℃に加温し、２４時間撹拌しながら実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析を行ない、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルの還元反応の終了を確認した。
【００６８】
前記分析の結果、実施例１２〜２４のいずれにおいても、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルと生成物である２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エチルとについて、気層クロマトグラフでのピーク面積を比べ、経時変化がなくなっていることから、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルの還元反応が終了していることがわかった。
【００６９】
反応終了後、反応液をろ過し、パン酵母を分離した。ついで、分離したパン酵母を酢酸エチル１０ｍｌで４回洗浄し、この洗浄液とろ液とを合わせて減圧下（４０℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、淡黄色の濃縮物である目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エチルをえた。
【００７０】
えられた濃縮物を実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析し、反応収率および立体選択性を求めた。その結果を表３に示す。
【００７１】
【表３】
0003939833.tif 000008
【００７２】
表３に示された結果から、実施例１２〜２４のように、還元反応の前にパン酵母にあらかじめ前処理を施したばあいには、いずれも収率が約６０％以上、立体選択性が約６０％以上とバランスよく高い状態で目的物がえられることがわかる。
【００７３】
さらに、実施例２４のように、フェナシルクロライドでパン酵母に前処理を施したばあいには、とくに高い反応収率および立体選択性で目的物をうることができることがわかる。
【００７４】
実施例２５
撹拌装置、温度計および還流冷却装置を備えた１００ｍｌ容の３つ口フラスコ内に、ジエチルエーテル１０ｍｌに０．６ｍｌの精製水を加えた溶媒と、実施例１〜５で用いたものと同じパン酵母１ｇと、フェナシルクロライド６．０ｍｇとを加え、内容物を３０℃で６時間撹拌してパン酵母の前処理を行なった。こののち、この３つ口フラスコ内に２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル１０ｍｇ（０．０４９ミリモル）を加え、３つ口フラスコ内の混合物を３０℃に加温し、２４時間撹拌しながら実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析を行ない、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルの還元反応の終了を確認した。
【００７５】
前記分析の結果、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルと生成物である２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エチルとについて、気層クロマトグラフでのピーク面積を比べ、経時変化がなくなっていることから、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチルの還元反応が終了していることがわかった。
【００７６】
反応終了後、反応液をろ過し、パン酵母を分離した。ついで、分離したパン酵母を酢酸エチル１０ｍｌで３回洗浄し、この洗浄後とろ液とを合わせて減圧下（４０℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、濃縮物として黄色い粘稠液をえた。
【００７７】
つぎに、濃縮物を精製水５ｍｌで３回、飽和食塩水５ｍｌで２回および精製水５ｍｌで２回洗浄したのち、硫酸マグネシウムで乾燥させた。
【００７８】
えられた乾燥物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ（溶出液：ヘキサン／酢酸エチル（容積比）＝５／１の混合溶媒）にて精製し、目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エチル８．３ｍｇをえた。単離収率は８３％であった。
【００７９】
えられた生成物を実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析し、立体選択性（ｅｅ）を求めた結果、８２％であった。
【００８０】
実施例２６〜２８
実施例２５において、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エチル０．０４９ミリモルのかわりに表４に示す２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステル０．０４９ミリモルを用いたほかは、実施例２５と同様にして２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応、ＶＰＣ分析を行ない、その終了を確認した。
【００８１】
前記分析の結果、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルと生成物である２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルとについて、気層クロマトグラフでのピーク面積を比べ、経時変化がなくなっていることから、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの還元反応が終了していることがわかった。
【００８２】
反応終了後、実施例２５と同様にして操作を行ない、生成物である目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルをえた。その単離収率を表４に示す。
【００８３】
えられた生成物について、実施例２５と同様にして立体選択性を求めた。その結果を表４に示す。
【００８４】
なお、表４中には、２−オキソ−４−フェニルブタン酸エステルの種類として、一般式（Ｉ）中のＲで示される基の種類を記載した。
【００８５】
また、表４中には前記実施例２５の結果もあわせて示す。
【００８６】
【表４】
0003939833.tif 000009
【００８７】
表４に示された結果から、実施例２５〜２８の条件で還元反応を行なったばあいには、いずれも良好な反応収率および高い立体選択性で目的物がえられることがわかる。
【００８８】
実施例２９
撹拌装置、温度計および還流冷却装置を備えた１０リットル容の３つ口フラスコ内に、ジエチルエーテル１．２リットルに３００ｍｌの精製水を加えた溶媒と、実施例１〜５で用いたものと同じパン酵母５１５ｇと、フェナシルクロライド３．０ｇとを加え、内容物を３０℃で６時間撹拌してパン酵母の前処理を行なった。こののち、この３つ口フラスコ内に２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチル５ｇ（２１．３５ミリモル）を加え、３つ口フラスコ内の混合物を３０℃に加温し、２４時間撹拌しながら実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析を行ない、２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチルの還元反応の終了を確認した。
【００８９】
前記分析の結果、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチルと生成物である２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸イソブチルとについて、気層クロマトグラフでのピーク面積を比べ、経時変化がなくなっていることから、２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチルの還元反応が終了していることがわかった。
【００９０】
反応終了後、反応液をろ過し、パン酵母を分離した。ついで、分離したパン酵母を酢酸エチル１５００ｍｌで３回洗浄し、この洗浄後とろ液とを合わせて減圧下（４０℃、２０ｍｍＨｇ）で濃縮し、濃縮物として黄色い粘稠液をえた。
【００９１】
つぎに、濃縮物を精製水１００ｍｌで３回、飽和食塩水１００ｍｌで２回および精製水１００ｍｌで２回洗浄したのち、硫酸マグネシウムで乾燥させた。
【００９２】
えられた乾燥物をシリカゲルのカラムクロマトグラフ（溶出液：ヘキサン／酢酸エチル（容積比）＝５／１の混合溶媒）にて精製し、目的とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸イソブチル３．６２ｇをえた。単離収率は７２％であった。
【００９３】
えられた生成物を実施例１〜５と同様にしてＶＰＣ分析し、立体選択性（ｅｅ）を求めた結果、９１％であった。
【００９４】
なお、出発物質である２−オキソ−４−フェニルブタン酸イソブチルは、その２２％が未反応のまま回収された。
【００９５】
かかる実施例２９の条件で還元反応を行なったばあいには、バランスよく高い反応収率および立体選択性で目的物がえられることがわかる。
【００９６】
【発明の効果】
本発明の製法によれば、たとえば医薬品中間体、とくにＡＣＥ阻害剤の合成中間体もしくは製造原料をはじめとする種々の有機化学製品の中間体や製造原料として重要な化合物である光学活性な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸エステルを、高反応収率および高立体選択性にて、簡便にかつ経済的に製造することができる。