(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんの８種の生薬を含む、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物。
【請求項２】
該生薬はいずれも乾燥粉末である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
該生薬の組成は、組成物総量中、人参が１４０±１０質量部、当帰が１６６±１０質量部、黄耆が１８０±１０質量部、甘草が６７±１０質量部、柴胡が１４０±１０質量部、黄連が１２０±１０質量部、天竺黄が１２０±１０質量部、黄ごんが６７±１０質量部である、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
経口投与用製剤に調製される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
乾燥状態の人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される生薬を用いて製造されることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。
【請求項６】
該生薬を磨砕することによって粉末状にして用いることを特徴とする、請求項５に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生薬を含む、抗血小板凝集活性を有する組成物、出血時間延長活性を有する組成物、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物およびその製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
脳血栓または脳塞栓によって引き起こされる各種疾患、例えば脳梗塞の治療または予防には、抗血小板薬、抗凝固薬、血栓溶解薬、脳代謝改善薬などが従来用いられており、そのための様々な合成化合物が開発されている。しかしながら、このような化合物を含む薬剤は、長期にわたり投与すると強い副作用を起こす、安全性が低い、改善効果が低い、特殊な合成方法を用いる場合には製造コストが嵩むため高価である、などの諸問題を有する。
【０００３】
そこで、合成化合物を用いた薬剤より副作用が少ない生薬を上記疾患の治療および予防に適用することが試みられている。このような薬効を有する漢方薬として、抗血小板凝集を抑制したり凝血時間を延長したりする薬理活性を有する漢方薬処方がこれまでにいくつか開発されている。しかしながら、これらはいずれも治療および予防効果が低く、上記合成化合物を用いた薬剤に匹敵する脳動脈閉塞の治療および予防に効果的な処方は未だ見出されていない。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
すなわち本発明の目的は、合成化合物を用いた薬剤に匹敵する薬理効果を有し、かつ、副作用が少なく毒性が低いことを特徴とする、抗血小板凝集活性を有する組成物、出血時間延長活性を有する組成物、および、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物ならびにその製造方法を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、従来見出され使用されている膨大な種類の生薬を多種多様に組み合わせ、多数のそれぞれ異なる組成物を調合し、それらを薬理試験することによってそれぞれの薬効を確かめた結果、抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、および、脳動脈閉塞の治療または予防効果を実現し得る特定の組み合わせを見出すことに成功し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
すなわち本発明は、以下の（１）〜（２０）によって構成される。
【０００７】
（１）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも６種の生薬を含む、抗血小板凝集活性を有する組成物。
【０００８】
（２）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも７種の生薬を含む、（１）に記載の組成物。
【０００９】
（３）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんを含む、（１）または（２）に記載の組成物。
【００１０】
（４）該生薬はいずれも乾燥粉末である、（１）〜（３）のいずれか一項に記載の組成物。
【００１１】
（５）該生薬の組成は、組成物総量中、人参が１４０±１０質量部、当帰が１６６±１０質量部、黄耆が１８０±１０質量部、甘草が６７±１０質量部、柴胡が１４０±１０質量部、黄連が１２０±１０質量部、天竺黄が１２０±１０質量部、黄ごんが６７±１０質量部であり、前記生薬のうち６種または７種を含む場合、該組成物中に含まれない１種または２種の生薬の質量部はゼロである、（１）〜（４）のいずれか一項に記載の組成物。
【００１２】
（６）経口投与用製剤に調製される、（１）〜（５）のいずれか一項に記載の組成物。
【００１３】
（７）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも６種の生薬を含む、出血時間延長活性を有する組成物。
【００１４】
（８）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも７種の生薬を含む、（７）に記載の組成物。
【００１５】
（９）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんを含む、（７）または（８）に記載の組成物。
【００１６】
（１０）該生薬はいずれも乾燥粉末である、（７）〜（９）のいずれか一項に記載の組成物。
【００１７】
（１１）該生薬の組成は、組成物総量中、人参が１４０±１０質量部、当帰が１６６±１０質量部、黄耆が１８０±１０質量部、甘草が６７±１０質量部、柴胡が１４０±１０質量部、黄連が１２０±１０質量部、天竺黄が１２０±１０質量部、黄ごんが６７±１０質量部であり、ただし前記生薬のうち６種または７種を含む場合、該組成物中に含まれない１種または２種の生薬の質量部はゼロである、（７）〜（１０）のいずれか一項に記載の組成物。
【００１８】
（１２）経口投与用製剤に調製される、（７）〜（１１）のいずれか一項に記載の組成物。
【００１９】
（１３）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも６種の生薬を含む、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物。
【００２０】
（１４）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも７種の生薬を含む、（１３）に記載の組成物。
【００２１】
（１５）人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんを含む、（１３）または（１４）に記載の組成物。
【００２２】
（１６）該生薬はいずれも乾燥粉末である、（１３）〜（１５）のいずれか一項に記載の組成物。
【００２３】
（１７）該生薬の組成は、組成物総量中、人参が１４０±１０質量部、当帰が１６６±１０質量部、黄耆が１８０±１０質量部、甘草が６７±１０質量部、柴胡が１４０±１０質量部、黄連が１２０±１０質量部、天竺黄が１２０±１０質量部、黄ごんが６７±１０質量部であり、前記生薬のうち６種または７種を含む場合、該組成物中に含まれない１種または２種の生薬の質量部はゼロである、（１３）〜（１６）のいずれか一項に記載の組成物。
【００２４】
（１８）経口投与用製剤に調製される、（１３）〜（１７）のいずれか一項に記載の組成物。
【００２５】
（１９）乾燥状態の人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される生薬を用いて製造されることを特徴とする、（１３）〜（１８）のいずれか一項に記載の組成物の製造方法。
【００２６】
（２０）該生薬を磨砕することによって粉末状にして用いることを特徴とする、（１９）に記載の製造方法。
【００２７】
【発明の実施の形態】
本発明の抗血小板凝集活性を有する組成物、出血時間延長活性を有する組成物、または、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物は、生薬を含むものであって、いずれも有効成分として人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごん（おうごん）からなる群より選択される少なくとも６種、好ましくは７種、より好ましくは８種全ての生薬を含むことを特徴とする。なお本発明において「生薬」とは、和漢薬や世界各地で古くから用いられた民間薬のうち、理化学的性質が明らかにされ、薬理作用も研究された薬用天然物のことをいう。また、本発明の抗血小板凝集活性を有する組成物、出血時間延長活性を有する組成物、または、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物において、人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんはいずれも共通して含まれ得る成分であるため、以下にまとめて説明する。なおその際、本発明の抗血小板凝集活性を有する組成物、出血時間延長活性を有する組成物、または、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物は単に「本発明の組成物」と言及される。
【００２８】
本発明の組成物は、上述した生薬、すなわち人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも６種を組み合わせることによって、それぞれ単独または６種未満の組み合わせで用いるよりも高い抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、または、脳動脈閉塞の治療または予防効果を奏するものである。６種を用いる場合において、その組み合わせは任意でありいずれの組み合わせでも高い脳動脈閉塞の治療または予防効果を実現することができる。なかでも、人参、当帰、黄耆、甘草、天竺黄および黄ごんの組み合わせが、より高い抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、または、脳動脈閉塞の治療または予防効果を実現することができるため好ましい。同様に、７種を用いる場合もその組み合わせは任意でありいずれの組み合わせでも高い脳動脈閉塞の治療もしくは予防効果を奏することができる。なかでも、人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、天竺黄および黄ごんの組み合わせが、より高い抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、または、脳動脈閉塞の治療または予防効果を奏することができるため好ましい。組み合わせとして最も好ましくは、前記群に記載の８種全ての生薬を用いることであり、さらに高い抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、または、脳動脈閉塞の治療または予防効果を奏することができる。
【００２９】
次に、本発明において用いられる人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんについて詳述する。
【００３０】
まず人参について説明する。本発明において人参とは、ウコギ科の例えばチョウセンニンジン、オタネニンジン、西洋人参（Panax quinquefolium Linnaeusなど）のことでありいずれも使用可能であるが、なかでもオタネニンジンが好ましく用いられる。本発明においてこれら人参は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００３１】
また本発明において上記人参は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、人参を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、先ず蒸籠で乾燥状態の人参を蒸し、アルコールと水との混合液（例えば水３ｋｇと清酒１ｋｇとの混合液である）に入れ、強火で加熱し、沸騰した後、弱火で約１時間３０分煮る。混合液から人参を取り出して冷やし、干した後、切片にする。次に得られた人参の切片をオーブンへ入れて、５０℃で１３時間連続乾燥する。乾燥した切片を磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば、１０００ｇのオタネ人参を乾燥することによって、約９３０ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の人参も使用可能である。
【００３２】
次に当帰について説明する。本発明において当帰とは、セリ科のトウキ、カラトウキ（Angelica sinensis (Oliv.) Diels）、ホッカイトウキ、オオカブトウキなどの根のことでありいずれも使用可能であるが、なかでもカラトウキが好ましく用いられる。これに加えて、本発明における当帰として、セリ科のラビッジ（Levisticum officinale Koch）およびアンジェリカ（Angelica archangelica）も使用可能である（例えば米国特許４８４３０６７を参照）。本発明においてこれら当帰は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００３３】
また本発明において上記当帰は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、当帰を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、まず乾燥状態の当帰を水の濁りが実質的に無くなるまで迅速に水で洗浄し、更に蒸留水で洗浄する。洗浄された当帰２０ｋｇを蒸籠に入れて、内釜にアルコールと水と香附とを含む混合液（例えばＲＯ水３ｋｇと清酒１ｋｇと香附１００ｇを含む混合液である）を入れ、強火で加熱し、該混合液が沸騰した後、弱火で１時間沸騰を持続させる。加熱が終了した後に当帰を取出し、放置して冷却する。冷却された当帰を切片にする。得られた当帰の切片を更に自動オーブンに入れて、５５℃で１０時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの当帰を乾燥することによって、約６００ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の当帰も使用可能である。
【００３４】
次に黄耆について説明する。本発明において黄耆とは、マメ科の例えばキバナオウギ(例えばAstragalus membranaceus (Fisch.) Bunge var. membranaceus)、ナイモウオウギ(例えばAstragalus membranaceus (Fisch.) Bunge var. mongholicus (Bunge) Hsiao)の根、およびその他同属の近縁植物の根でありいずれも使用可能である。これに加えて、本発明における黄耆として、岩黄耆(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)の根であるいわゆる晋耆（しんぎ）も使用可能である。これら列挙したなかでも晋耆が好ましく用いられる。本発明においてこれら黄耆は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００３５】
また本発明において上記黄耆は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、黄耆を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、まず乾燥状態の黄耆を水洗し、切片にする。この切片をオーブンに入れて、５０℃で１６時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの黄耆を乾燥することによって、約６５０ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の黄耆も使用可能である。
【００３６】
次に甘草について説明する。本発明において甘草とは、マメ科の例えばウラルカンゾウ（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）、スペインカンゾウ（Glycyrrhiza glabra L.）、シンキョウカンゾウ（Glycyrrhiza inflata Bat.）、ナンキンカンゾウ（glycyrrhiza glabra L.var.glandulifera Regelet Harder）の根茎であり、なかでもウラルカンゾウが好ましい。本発明においてこれら甘草は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００３７】
また本発明において上記甘草は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、甘草を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、甘草を洗浄し、切片にする。この切片を５０℃で１２時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの甘草を乾燥することによって、約７２０ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の甘草も使用可能である。
【００３８】
次に柴胡について説明する。本発明において柴胡とは、セリ科の例えばマンシュウサイコ（Bupleurum chinensis）、竹葉柴胡(北柴胡)(Bupleurum chinensis DC)、ミシマサイコ（Bupleurum scorzonerifolium、Bupleurum falcatum）、狹葉柴胡（南柴胡、ホソバミシマサイコ）(Bupleurum scorzonerifolium Willd.)、Bupleurum longesadiatum Turcaの根、およびその他同属の近縁植物の根であり、なかでも竹葉柴胡（北柴胡）またはBupleurum longesadiatum Turca.が好ましい。本発明においてこれら柴胡は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００３９】
また本発明において上記柴胡は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、柴胡を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、柴胡を洗浄し、１２時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの柴胡を乾燥することによって、約７１０ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の柴胡も使用可能である。
【００４０】
次に黄連について説明する。本発明において黄連とは、キンポウゲ科の例えばオウレン(Coptis chinensis Franch.)、三角葉黄連(Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao)、雲連黄連(Coptis teetoides C. Y. Cheng)の根茎、およびその他同属の近縁植物の根茎を乾燥したものであり、なかでもオウレン(Coptis chinensis Franch.)が好ましい。本発明においてこれら黄連は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００４１】
また本発明において上記黄連は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、黄連を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、まず黄連を洗浄し、５０℃で１２時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの黄連を乾燥することによって、約７５０ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の黄連も使用可能である。
【００４２】
次に天竺黄について説明する。本発明において天竺黄(Bambusae concretio silicea)とは、イネ科の例えば淡竹(Phyllostachys nigra MUNRO var. henonis STAPF ex RENDLE)や同属の近縁植物の節内に生成した塊状物を意味する。学名でいえば、Bambusa textilis McCluture; Schizostachyum chinense Rendleなどが挙げられ、本発明において好ましく用いられる。本発明においてこのような天竺黄は、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００４３】
また本発明において上記天竺黄は乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、天竺黄を粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、天竺黄を水洗し、水に浮くものを選択する。選択された天竺黄を５５℃で１８時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの天竺黄を乾燥することによって、約８５０ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の天竺黄も使用可能である。
【００４４】
次に黄ごんについて説明する。本発明において黄ごんとは、シソ科のコガネバナ（Scutellaria baicalensis Georgi）の根を乾燥したものである。本発明においてこのような黄ごんは、漢方薬用のグレードを有しているものであればいずれも使用可能であり、漢方薬店などで一般的に流通しているものが簡便である。
【００４５】
また本発明において上記黄ごんは乾燥粉末状のものを用いることが好ましい。粉末化するには、炮製、炙り、オーブン乾燥などで乾燥したのち、乳鉢、グラインダー、ミル等で粉末状にするなど従来周知の方法が用いられる。以下、黄ごんを粉末化する方法の一例をあげる。具体的に説明すると、まず黄ごんを水洗する。黄ごん１０ｋｇを蒸籠に入れて、内釜にＲＯ水３ｋｇおよび山茱萸（サンシュユ）１００ｇを入れ、強火で沸騰させた後、弱火で１時間持続して沸騰させ、黄ごんを取出し、放置し冷卻する。冷却された黄ごんを切片にする。自動オーブンにて、５０℃で１１時間乾燥し、磨砕して粉末にし、本発明で用いられる原料粉末を得る。この方法によれば１０００ｇの黄ごんを乾燥することによって、約７００ｇの粉末を得ることができる。もちろん、すでに粉末状に加工された市販の黄ごんも使用可能である。
【００４６】
なお本発明の組成物を調製するにあたり、上述した人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんの全てが乾燥粉末として用いられることがより好ましい。
【００４７】
上述した人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんの少なくとも６種、好ましくは少なくとも７種、最も好ましくは全８種の生薬の組成物中の合計含有量は、所望の薬理効果を発揮し得る範囲であれば特には限定されないが、組成物中好ましくは８０質量％以上、より好ましくは９０質量％以上、最も好ましくは１００質量％である。
【００４８】
なお上述した人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんの少なくとも６種、好ましくは少なくとも７種、最も好ましくは全８種の生薬の組成は、疾病の種類や重篤度、患者の年齢や体重などに応じて適宜調節され得るので特には限定されないが、組成物総量中、好ましくは人参が１４０±１０質量部、当帰が１６６±１０質量部、黄耆が１８０±１０質量部、甘草が６７±１０質量部、柴胡が１４０±１０質量部、黄連が１２０±１０質量部、天竺黄が１２０±１０質量部、黄ごんが６７±１０質量部の質量比で配合されることによって、良好な抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、および脳動脈閉塞の治療または予防効果を得ることができる。なお本発明の組成物がこれら生薬のうち６種または７種のみを含む場合、含まれない１種または２種の生薬の質量部はゼロである。
【００４９】
また本発明の組成物は、上記範囲で含まれる人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんの少なくとも６種、好ましくは少なくとも７種、最も好ましくは全８種の生薬以外にも、本発明で要求される薬理効果を妨げない限り、他の生薬を含んでいても良い。
【００５０】
このような生薬を含む本発明の組成物は、従来の合成化合物に比べて高い水溶性を有するものであるため、水性製剤をはじめ様々な形態の製剤に容易に調製することができる。従って本発明の組成物は、経口投与、非経口投与いずれの投与経路にも適用することができ、好ましくは経口投与である。
【００５１】
本発明の組成物を経口投与する場合、粉末状のまま服用しても良いが、適当な添加剤、例えば、乳糖、ショ糖、マンニット、トウモロコシデンプン、合成もしくは天然ガム、結晶セルロース等の賦形剤、デンプン、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボシキメチルセルーロースカルシウム、カルボシキメチルセルーロースナトリウム、デンプン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム等の滑沢剤、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム等の充填剤または希釈剤等と適宜混合して、錠剤、散剤、丸剤、および顆粒剤等の固形製剤にすることができる。また、硬質または軟質のゼラチンカプセル等を用いてカプセル剤としてもよい。これらの固形製剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、セルロースアセテートフタレート、メタアクリレートコポリマー等の被覆用基剤を用いて腸溶性被覆を施してもよい。さらに、本発明の組成物を、精製水、生理的食塩水等の一般的に用いられる不活性希釈剤に溶解して、必要に応じて、この溶液に浸潤剤、乳化剤、分散助剤、界面活性剤、甘味料、フレーバー、芳香物質等を適宜添加することにより、シロップ剤、エリキシル剤等の液状製剤とすることもできる。
【００５２】
製剤にする場合の本発明の組成物の濃度は、投与形態、疾病の種類や重篤度や目的とする投与量などによって様々であるが、一般的には、原料の全質量に対して１〜１００質量％、好ましくは５〜９０質量％である。この際、本発明の組成物の濃度が１％未満であると病態改善効果が十分に期待できず好ましくない。
【００５３】
本発明の組成物の投与量は、患者の年齢、体重及び症状、目的とする投与形態や方法、治療効果、および処置期間等によって異なるため、通常、経口投与される場合には、組成物の投与量換算で、好ましくは１０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、２５〜７５ｍｇ／ｋｇ体重／日の投与量の範囲であり、１日１〜３回に分けて投与される。この際、１日当たりの経口投与量が多い場合には、１回に複数個の錠剤等の製剤を投与してもよい。
【００５４】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明の組成物の製剤例、抗血小板凝集活性、出血時間延長活性、または、脳動脈閉塞の治療または予防効果に関する薬理効果、急性毒性、および安全性を詳細に説明する。
【００５５】
製剤例：本発明の組成物（ＢＮＧ−１）の製造
市販品のオタネ人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんを入手した。それぞれの用いた生薬の起源は、オタネ人参はPanax ginseng C. A. Meyer、当帰はAngelica sinensis (Oliv.) Diels、黄耆はHedysarum polybotrys Hand.-Mazz.、甘草はGlycyrrhiza uralensis Fisch.の根茎、柴胡はBupleurum longesadiatum Turca.の根茎、黄連はCoptis chinensis Franch.の根茎、天竺黄はBambusa textilis McCluture; Schizostachyum chinense Rendle、および、黄ごんはScutellaria baicalensis Georgiの根茎であった。上記「発明の実施の形態」にて各生薬の説明中で示した粉末化方法と同様の方法を用いて上記各生薬を粉末化した。粉末化された生薬を篩いにかけ、１０メッシュの粒子サイズのものを選別し得られた粉末を本発明で用いる原料粉末とした。
【００５６】
得られた各生薬の原料粉末は、それぞれ、人参：当帰：黄耆：甘草：柴胡：黄連：天竺黄：黄ごん＝１４０：１６６：１８０：６７：１４０：１２０：１２０：６７の質量比で混合され、乾燥粉末状の組成物（以下、ＢＮＧ−１と称する）を得た。
【００５７】
試験例１：抗血小板凝集活性の試験
１−１．試験物質および投与方式
まず上記製剤例で得られたＢＮＧ−１を蒸留水に溶解し、５０ｍｇ／ｍｌ  ＢＮＧ−１水溶液を製造した。このＢＮＧ−１溶液を、ＢＮＧ−１の最終濃度が１０００、３００または１００μｇ／ｍｌとなるようにサンプルに添加し、それぞれ５分間インキュベートし、アラキドン酸による血小板凝集反応において生じる作用を観察した。
【００５８】
１−２．動物
当該試験において、台湾ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓの動物飼育センター提供の、雄または雌のニュージランド白兎を使用した。全ての動物は、使用する前に、台湾ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓの実験室温度（２２℃〜２４℃）および湿度（６０％〜８０％）の環境で、１２時間の昼夜循環を少なくとも一週間維持させた。
【００５９】
１−３．方法：アラキドン酸による血小板凝集作動／拮抗
体重２．５〜３ｋｇの雄または雌のニュージランド白兎から、静脈血を採取した。採取された静脈血に、該静脈血の体積の１／１０量の０．１３Ｍクエン酸ナトリウム水溶液を混合し、溶液を得た。該溶液を室温にて２２０×ｇで１０分間遠心し、上清を得、これを組織液サンプルとした。該組織液サンプルは、光学凝集計の測定によれば１ｍｌ中に６×１０8個の血小板を含んでいた。この組織液サンプル０.４５ｍｌに、３７℃で最終濃度１００μＭになるようにアラキドン酸を加え、光学血小板凝集計で血小板凝集の程度を観察したところ、５分間で５０％以上の血小板が凝集していることがわかった。このことから、この組織液サンプルにおいてアラキドン酸は、アラキドン酸受容体作動薬として作用することがわかった。次に、組織液サンプルに、最終濃度１０００μｇ／ｍｌ、３００μｇ／ｍｌまたは１００μｇ／ｍｌになるようにＢＮＧ−１溶液を加え、上記と同様にアラキドン酸を加えたところ、ＢＮＧ−１水溶液濃度が３００μｇ／ｍｌ以上の場合、アラキドン酸により誘導される不可逆凝集反応を５０％以上も抑制したことから、ＢＮＧ−１は高い抗血小板凝集活性を有することがわかった。その結果を以下表１に示す。なお、これらの実験はそれぞれ二連で行われており、表１中、「血小板凝集率」欄のパーセンテージにおいて、１００％とは、二連で行った結果、両方とも５０％以上の血小板凝集抑制を示した場合であり、０％とは両方とも５０％以上の血小板凝集抑制を示さなかった場合である。
【００６０】
【表１】
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【００６１】
なお、１００μＭアラキドン酸によって惹起される血小板凝集を５０％抑制するＢＮＧ−１濃度（ＩＣ50）は、１７６.５μｇ／ｍｌであった。
【００６２】
試験例２：出血時間延長活性の試験
２−１．試験物質および投与方式
まず上記製剤例で得られたＢＮＧ−１を蒸留水に溶解し、５０ｍｇ／ｍｌ  ＢＮＧ−１水溶液を製造した。得られたＢＮＧ−１水溶液を、一日２０ｍｌ／ｋｇ体重の量（すなわちＢＮＧ−１は１０００ｍｇ／ｋｇ体重投与される）で、８日間連続で、マウスに経口投与した。
【００６３】
２−２．動物
上記試験において、台湾ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓの動物飼育センター提供の、雄または雌のＩＣＲマウスを使用した。全ての動物は、使用する前に、台湾ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓの実験室温度（２２℃〜２４℃）および湿度（６０％〜８０％）の環境で、１２時間の昼夜循環を少なくとも一週間維持させた。
【００６４】
２−３．方法
１組５匹の雄ＩＣＲマウス（体重２２±２ｇ）を２グループ用意した。一方のグループにはＢＮＧ−１水溶液を１日当たり１０００ｍｇ／ｋｇ体重のＢＮＧ−１投与量で７日間連続して経口投与し、第８日目に１０００ｍｇ／ｋｇ体重のＢＮＧ−１投与量で一回経口投与し、その１時間後に、各マウスの尾の端を約０．５ｍｍ切断した。その後直ちにマウスを頭を上にして垂直に吊り下げ、それぞれの尾の端約２ｃｍを３７℃の生理的食塩水を含む試験管に浸し、止血するまでの時間（以下、止血時間ともいう）を測定した。もう一方のグループ（対照）には何も投与せず、上記同様に処理して止血時間を測定した。評価は、本発明の組成物を経口投与されたグループの止血時間と、対照グループの止血時間とを比較することによってなされた。なお本発明において止血時間は、対照グループの止血時間に対して５０％以上延長されれば優秀と評価した。表２にその結果を示す。
【００６５】
【表２】
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【００６６】
表１の結果を見ればわかるように、投与されたＢＮＧ−１が１０００ｍｇ／ｋｇ体重以上の場合、高い出血時間延長活性を示すことがわかる。
【００６７】
試験例３：各組成の血小板凝集活性の試験
ＢＮＧ−４、ＢＮＧ−５、ＢＮＧ−６およびＢＮＧ−７は、上記ＢＮＧ−１で用いられたのと同じオタネ人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんを用い、これらの組み合わせを変えたことを除いては、上記ＢＮＧ−１と同様に調製された。なおＢＮＧ−４〜７において、含まれない生薬以外は、上記製剤例で示したように、人参：当帰：黄耆：甘草：柴胡：黄連：天竺黄：黄ごん＝１４０：１６６：１８０：６７：１４０：１２０：１２０：６７の質量比で混合された。以下表３に、ＢＮＧ−４〜７の組成と、１００μＭアラキドン酸によって惹起される血小板凝集を５０％抑制するＢＮＧ−４〜７濃度（ＩＣ50）とを、下記表３に示す。ＢＮＧ−４〜７のＩＣ50測定方法は、ＢＮＧ−１と同様にして行われた。
【００６８】
【表３】
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【００６９】
表３の結果をみればわかるように、オタネ人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんのなかからわずか４種類しか配合されていないＢＮＧ−７では、有意な抗血小板凝集活性が得られず、上記生薬のなかから６種類以上を配合したＢＮＧ−１およびＢＮＧ−４〜６では、高い抗血小板凝集活性が得られ、なかでも全種類を配合したＢＮＧ−１が最も高い抑制効果を実現した。
【００７０】
試験例４：脳動脈閉塞の治療または予防効果の試験
４−１．試験物質および投与方式
グループ１（対象）：
対象として、生理的食塩水を投与したラット群（５匹）を以下のように準備した。まず生理的食塩水を、それぞれの中脳動脈閉鎖（ＭＣＡＯ）処理ラットに、０時間（ＭＣＡＯ処理直後）に１０ｍＬ／ｋｇ体重の投与量で経口投与し、さらに、それ以降２４時間ごとにトータル７日間、同投与量で経口投与した。
【００７１】
グループ２（陽性対照）：
陽性対象として、ＮＭＤＡアンタゴニストのＭＫ−８０１（ＲＢＩ社製，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ  ０１７６０−２４４７，ＵＳ）を投与したラット群（５匹）を以下のように準備した。まずＭＫ−８０１の生理的食塩水溶液を、それぞれの中脳動脈閉鎖（ＭＣＡＯ）処理ラットに、０時間（ＭＣＡＯ処理直後）に５ｍＬ／ｋｇ体重（すなわちＭＫ−８０１は０．３ｍｇ／ｋｇ体重の投与量）の投与量で腹腔内注射し、さらに、６、２４、３０、４８および５４時間後にも同様にして腹腔内注射した。
【００７２】
グループ３（ＢＮＧ−１投与群）：
ＢＮＧ−１を投与したラット群（５匹）を以下のように準備した。まず生理的食塩水に上記製剤例で得られたＢＮＧ−１を溶解させ、１００ｍｇ／ｍｌＢＮＧ−１水溶液を得た。続いてラットを中脳動脈閉鎖（ＭＣＡＯ）処理した。該ＢＮＧ−１水溶液を、それぞれのＭＣＡＯ処理ラットに、０時間（ＭＣＡＯ処理直後）に１０ｍＬ／ｋｇ体重（すなわちＢＮＧ−１は１０００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量）の投与量で経口投与し、さらに、それ以降２４時間ごとにトータル７日間、経口投与した。
【００７３】
４−２．動物
本実験において、国立台湾大学医学部動物センターより購入した雄のＳｐｒａｕｇｅ  Ｄａｗｅｌｙラット（体重１８０〜２４０ｇ、１０週齢）を使用した。全ての動物は、使用する前に、台湾ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓの実験室温度（２２℃〜２４℃）および湿度（６０％〜８０％）の環境で、１２時間の昼夜循環（切り替えは、６：００ａ．ｍ．および６：００ｐ．ｍ．）を少なくとも一週間維持させたものが用いられた。
【００７４】
４−３．装置
本実験において、歯科用ドリル（ＵＰＯＷＥＲ  ＵＧ３３，ＳＥＬＥＣＴＯＲ−Ｍ）、イメージアナライザ（Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ＲｅｓｏｕｒｃｅｓＶＩＳＴＡ  Ｖｅｒｓｉｏｎ３．０）、保育器（Ｂｒｉｇｈｔｅｎ  ＬｉｆｅＢＬ−９０−ＳＣ）、立体顕微鏡（ＺＥＩＳＳ，Ｓｔｅｍｉ１０００）、顕微鏡用はさみ（Ａ．Ｈｅｉｓｓ）、マイクロトーム（ＳＨＡＮＤＯＮ，Ｖａｒｉｓｔａｉｎ  ２４−４  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｓｌｉｄｅ，Ｕ．Ｋ．）および直腸サーミスタープローブ（Ｈａｒｖａｒｄ  Ｈｏｍｅｏｔｈｅｒｍｉｃ  Ｂｌａｎｋｅｔ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｕｎｉｔ）が使用された。
【００７５】
４−４．中脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）による脳虚血状態作製方法
上述した各動物に施された中脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）による永久性脳虚血は、抱水クロラール（５００ｍｇ／１０ｍＬ／ｋｇ体重  腹腔内投与）による麻酔下で達成された。以下詳細に説明する。まず側頂頭区域を剃毛し、眼窩および外耳道の側方皮膚を切開した。頭蓋を部分切除した後、耳下腺の上端を側頭筋のように下へ曲げ、中脳動脈の末梢が半透明の頭蓋を透かして見えるようにした。次に、１０倍の立体顕微鏡下で、歯科用ドリルで頭蓋を切開し、細い滑膜切除骨鉗子で切開部位を拡張した。中脳動脈の内頚動脈から分枝する部位を顕微鏡用はさみで切断した後、側頭筋と耳下腺とを置換した。切開部位に少量のカナマイシンを与え、頭蓋を縫合し、局部に１０％ポビドンヨード溶液を与えた。手術中、動物は、直腸サーミスタープローブに連接した恒温器で、直腸温度を生理範囲内（３７．５±１．０℃）に維持された。手術後、動物を３７．５±１．０℃に調節された保育器にて保温すると共に麻酔から１時間かけて回復させてから、ラットを１ケージに５匹の割合で、自由に飼料および水を与え、２３．０±１０℃に調節された清潔な動物室にて飼育された。
【００７６】
４−５．評価方法
上記虚血処理後第８日目に全ての動物を断頭して殺し、脳を迅速に摘出し、直ちに冷凍機（ＮＵＡＩＲTM，ＮＵ−６５１１）で−７０℃に冷凍した。２４時間後、マイクロトーム（ＳＨＡＮＤＯＮ，Ｖａｒｉｓｔａｉｎ  ２４−４  Ａｕｔｏｍａｔｉｃ  Ｓｌｉｄｅ）を使用し全脳の冠状切片を３０片得た。得られた切片のなかから、組織学検査用に、長さ１２ｍｍにわたる梗塞区域を全てカバーした第１３切片（厚さ３９０μｍ）を選んだ。なお全３０切片を２％クレシルバイオレット溶液で染色し、イメージアナライザで定量的に分析することによって、虚血障害の面積を測定した。測定された冠状切片の全虚血面積（ｍｍ2）から、各グループの虚血面積を平均±ＳＥＭ（標準誤差）で表した。
【００７７】
次に、得られた全虚血面積（ｍｍ2）とその厚さ（ここでは３９０μｍ）とをかけることによって、梗塞量（ｍｍ3）を算出し、各グループの梗塞量を平均±ＳＥＭ（標準誤差）で表した。ＢＮＧ−１処理およびＭＫ−８０１処理の効果は、非ペアースチューデントのｔ検定により賦形剤対照組と比較して計算した。＊Ｐ＜０．０５で有意差があった。
【００７８】
また、それぞれの動物に対して、ＢＮＧ−１またはＭＫ−８０１の経口投与前の体温と、投与後３０分の体温を記録した。投与前および投与後の温度比較は、Ｔｕｋｅｙ多項比較試験によってなされた。
【００７９】
４−６．結果
上記実験によれば、ＭＫ−８０１を投与されたグループ２のラットは、脳虚血を４８．３８％減少した。そこで本発明の組成物であるＢＮＧ−１を投与されたグループ３のラットは、単側および永久性中脳動脈閉塞における脳虚血が、上記ＭＫ−８０１と同様に顕著に減少していた（４６．２９％減少）。また連続７日間ＢＮＧ−１投与を行っても、動物が副作用をおこしたり死亡したりすることはなかった。なお、投与前後で動物の体温の顕著な変化も観察されなかった。
【００８０】
試験例５：脳動脈閉塞の治療または予防効果の試験
上述の試験例２と同様の動物、装置、脳虚血状態作製方法および評価方法を用いて、雄のＳｐｒａｎｇｅ  Ｄａｗｅｌｙラットに中脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ）による永久性脳虚血を行い、試験例２と同様の測定を行い、脳動脈閉塞の治療または予防効果を試験した。
【００８１】
５−１．試験物質および投与方式
グループ２（対照）：
対象として、生理的食塩水を投与したラット群を以下のように準備した。まず生理的食塩水を、ＭＣＡＯ前に７日間、１０００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で毎日ラットに経口投与し、さらに、ＭＣＡＯ後３日間、５００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で毎日経口投与した。
【００８２】
グループ３（陽性対照）：
陽性対照として、ＭＫ−８０１（ＲＢＩ，Ｎａｔｉｃｋ，ＭＡ  ０１７６０−２４４７，ＵＳ）を投与したラット群を以下のように準備した。まずＭＫ−８０１を生理的食塩水に溶解させた溶液を、それぞれのラットに、ＭＣＡＯ直後（０時間）、および、６、２４、３０、４８および５４時間に０．３ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で腹腔内投与した。
【００８３】
グループ１（本発明の組成物）：
本発明の組成物を投与したラット群を以下のように準備した。まず生理的食塩水に上記製剤例で得られたＢＮＧ−１を溶解させ、１００ｍｇ／ｍｌＢＮＧ−１水溶液を得た。該水溶液を、ＭＣＡＯ前にＢＮＧ−１が１０００ｍｇ／ｋｇ体重または５００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量になるように７日間毎日ラットに経口投与し、さらに、ＭＣＡＯ後３日間毎日経口投与した。
【００８４】
なお、動物および装置は、上記試験例２と同様のものが用いられたため、ここでの記載を省略する。
【００８５】
５−２．評価方法
断頭して殺す時期を虚血障害後第４日にしたこと以外は、前述した試験例２と同様に処理し、評価を行った。
【００８６】
５−３．結果
上記実験によれば、ＭＣＡＯにより患部脳半球の５０％〜６０％周辺に再生性虚血を起こしており、殆どの部分において、障害の区域は、異なる皮質区域（即ち前頭、感覚運動、聴覚および後頭皮質）に限定されており、基底核の部分の障害はわずかであった。
【００８７】
食塩水で処理したグループ２（対照）に比べて、ＭＫ−８０１で処理したグループ３（陽性対照）は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で６回の腹腔内投与により、全梗塞量が６６．３０±１０．５０％と顕著に減少した。一方、本発明の組成物であるＢＮＧ−１で処理したグループ１は、グループ２（対照）に比べて、１０００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で１０回の経口投与により、全梗塞量が４４．０９±９．０１％と顕著に減少し、５００ｍｇ／ｋｇ体重の投与量で１０回の経口投与により、全梗塞量は１４．１７±１９．４３％の減少を示した。なお、全ての実験例においてラット体温の顕著な変化は見られなかった。
【００８８】
試験例６：ＢＮＧ−１の安全性薬理試験
【００８９】
【表４】
0003930365.tif 000005
【００９０】
以上の安全性薬理試験の結果より、本発明の組成物であるＢＮＧ−１を１ｇ／ｋｇ体重の投与量で経口投与することは、安全性に関して何ら問題はないことがわかった。
【００９１】
試験例７：ＢＮＧ−１の急性毒性試験
雄および雌各６匹のラットに、ＢＮＧ−１含有１％ＣＭＣ溶液を、ＢＮＧ−１投与量が５ｇ／ｋｇ体重になるように経口投与し、対照グループにはＢＮＧ−１を含まない１％ＣＭＣ溶液を投与して、ＢＮＧ−１に対する急性毒性を測定した。ラット１匹毎にそれぞれ２時間間隔で２回ＢＮＧ−１または対照溶液を投与し、１４日間、臨床観察した。その結果、いずれのラットも何の臨床毒性症状はおこらず、解剖したラットの器官や組織を肉眼で検査してもいかなる病変も観察されなかった。また２８日間の同様の試験を行ったところ、同様にいかなる臨床毒性症状や病変が認められなかった。これよりＢＮＧ−１は、５ｇ／ｋｇ体重体重の投与量でラットに投与した場合、いかなる急性毒性および亜急性毒性も示さないことが判明した。従って、ＢＮＧ−１の５ｇ／ｋｇ体重の投与量は、「いかなる影響も与えない剤量」とされ、「実質上無毒性」の物質に分類される。
【００９２】
上記の試験結果より、本発明の組成物であるＢＮＧ−１は、１ｇ／ｋｇ体重の投与量でマウスに投与した場合、脳動脈閉塞の予防および治療効果が認められ、この用量では安全性に対して問題がなく、急性毒性および亜急性毒性もないことがわかった。
【００９３】
また、本発明の組成物であるＢＮＧ−１を、インビトロの実験において、１ｍｇ／ｍｌの投与量でモルモットに投与したところ、気管の自発性緊張に対し６７％弛緩させる活性を示した。すなわち本発明の組成物は、気管支拡張薬として用いることが可能であり、閉塞性呼吸疾患、特に気管支喘息の治療薬として有用である。
【００９４】
さらに本発明の組成物ＢＮＧ−１を、インビトロの実験において、１ｍｇ／ｍｌの投与量でモルモットに投与したところ、モルモット心房正向の収縮力に対し、対照に比べて３１％増強された筋弛緩活性を示した。すなわち本発明の組成物は、筋弛緩薬として用いることが可能であり、麻酔薬、鎮痛薬に用いることができる。
【００９５】
【発明の効果】
本発明の抗血小板凝集活性を有する組成物、出血時間延長活性を有する組成物、および、脳動脈閉塞の治療または予防用組成物は、多種多様な生薬のなかでも、特に、人参、当帰、黄耆、甘草、柴胡、黄連、天竺黄および黄ごんからなる群より選択される少なくとも６種、好ましくは少なくとも７種、最も好ましくは８種全てを配合することにより、従来の合成化合物を用いた薬剤に匹敵する高い薬理効果を獲得したものである。これに加えて、実施例にて示された安全性薬理試験および亜急性毒性試験により明らかなように、本発明の組成物は、連続して投与しても合成化合物でよくみられる深刻な副作用をまったく伴わないことから、脳梗塞の予防や脳梗塞発症後の脳血管閉塞改善のための治療において長期連続投与することができ、高い治療効果を実現し得るものである。