(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
相応するＤ，Ｌ−α−アミノカルボン酸から、酢酸中での無水酢酸を用いるアセチル化およびアセチル化混合物からの、生じたＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の単離によるＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の製造方法において、
アセチル化を、アセチル化すべきＤ，Ｌ−α−アミノカルボン酸１モル当たりに１．０〜１．１モルの無水酢酸を用いて、６０〜１５０℃で、酢酸１リットル当たりにα−アミノカルボン酸３モル未満の濃度で実施し、その際、濃度は、圧力および温度の標準条件におけるものであり、
かつＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸は、蒸発濃縮により溶融物または固体として得られることを特徴とする、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の製造方法。
【請求項２】
アセチル化を８５〜１１５℃の間の温度で行うことを特徴とする、請求項１記載の方法。
【請求項３】
酢酸１リットル当たりのアセチル化すべきα−アミノカルボン酸の濃度が、０．５〜２．５モルであり、その際、濃度は、圧力および温度の標準条件におけるものであることを特徴とする、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸は、蒸発濃縮により、その他の単離または精製をすることなく純度９５％以上で得られることを特徴とする、請求項１から３までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
蒸発濃縮により溶融物または固体として得られる生成物１００重量％に対して、５重量％未満のアセチルジペプチドを副生成物として含むＮ−アセチル化されたＤ，Ｌ−α−アミノカルボン酸を得ることを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
アセチルジペプチド２重量％未満を含む生成物が得られることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
アセチル化混合物を、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸を得るために、サンベイ蒸発器を用いて蒸発濃縮させることを特徴とする、請求項１から６までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
濃縮の際に遊離しかつ留去された酢酸が水分を含まず、かつその他の精製を行わなくてもアセチル化に再使用できることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
Ｄ，Ｌ−メチオニン、Ｄ，Ｌ−バリン、Ｄ，Ｌ−フェニルアラニンまたはＤ，Ｌ−ノルバリンをアセチル化することを特徴とする、請求項１から８までのいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
Ｄ，Ｌ−メチオニンをアセチル化することを特徴とする、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
Ｄ，Ｌ−メチオニンのアセチル化を工程の１つに含むＬ−メチオニンの製造方法において、
ａ）請求項１０に記載の方法によりＤ，Ｌ−メチオニンからＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニンを製造する工程、
ｂ）このＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン−ラセミ体を酵素的に分割する工程、
ｃ）母液を回収しつつＬ−メチオニンを分離する工程、
ｄ）母液の変換していないＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニンを加熱し、これに無水酢酸を添加してラセミ化する工程、及び
ｅ）工程ｄ）で得られたラセミ体を工程ｂ）で再利用する工程を含むことを特徴とする方法。
【発明の詳細な説明】
本発明は、酢酸中での無水酢酸を用いるアセチル化および生じたＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸のアセチル化混合物からの単離によって、相応するＤ，Ｌ−α−アミノカルボン酸からＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の製造方法に関する。
Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸は、相応するラセミ体Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸から光学活性α−アミノ酸製造のための方法における中間生成物として特に重要である。
この方法は、実質的にかつ殊には下記の部分工程から構成されていてもよい。
１）ラセミ体Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸からのＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸のラセミ体混合物の製造、
２）ラセミ体混合物中に含まれているＮ−アセチル−Ｌ−α−アミノカルボン酸の酵素分割、
３）Ｌ−α−アミノカルボン酸とＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−α−アミノカルボン酸の分離、および
４）変換していないＮ−アセチル−Ｄ−α−アミノカルボン酸のラセミ化および返送。
アミノ酸のアセチル化のために最も普及した方法は、ショッテン−バウマン（Ｓｃｈｏｔｔｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎ）アセチル化である。このためには、アミノ酸の水溶液に、塩基性条件下で無水酢酸または塩化アセチルが添加される。アセチルアミノ酸の単離は、酸性化の後に濾過または抽出により行われる。
前記の方法の欠点は、水性媒体中で進行する加水分解によって、常により多くの過剰量のアセチル化剤を用いなければならず、かつアセチルアミノ酸１モル当たりに少なくとも２モルの望ましくない塩が生じてしまうことである。
ソ連特許出願公開（ＳＵ−Ａ）第１２９３１７１号明細書中には、４８〜５５℃で、Ｄ，Ｌ−アラニンを、酢酸４．４〜５．０モル当量中の無水酢酸１．２〜１．３モル当量でアセチル化する、アラニンのアセチル化の方法が記載されている。すなわち、ソ連特許出願公開（ＳＵ−Ａ）第１２９３１７１号明細書によると、酢酸１ｌ当たりにアラニン約３．３〜３．８モルの濃度でアセチル化されている。減圧下で酢酸の蒸発、水からの結晶化および乾燥の後に、純度９８．７〜９９％のアセチル−Ｄ，Ｌ−アラニン７８〜８３％が得られている。
これにより、確かに「塩不含の」アセチル化変法は公開されているが、しかし、この方法の欠点は、十分な純度のＮ−アセチル化されたα−アミノ酸を得るために、水を用いる処理を必要とすることである。殊に、水からの結晶化は、比較的煩雑であり、かつコストもかかり、従って、これまでこの方法の工業的な実施の妨げとなっている。
上記の考察された従来技術に鑑み、本発明には、考慮に入れた従来技術に存在する困難を克服し、すなわち殊に「塩不含の」、すなわち塩が必然的に生じることなく、できるだけ水を用いる処理を行わないで高い純度のＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の簡単な取得できる、１つの別のＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の製造方法を提供するという課題が課されている。
上記の要求は、請求項１の特徴部分に記載の特徴を有する冒頭に記載した種類の方法により充足される。本発明の有利な別の実施態様は、請求項１に従属する請求項により保護される。
アセチル化を６０〜１５０℃において、酢酸１リットル当たりにα−アミノカルボン酸３モル未満の濃度で実施し、その際、濃度は、圧力および温度の標準条件で測定され、かつＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸を、蒸発濃縮により溶融物または固体として得ることによって、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸の水を用いる処理を完全に回避することができ、それでもやはりその際に、例えば光学活性α−アミノカルボン酸の製造のための１つの方法の酵素分割に直接使用できる程度に高い品質のアセチルアミノカルボン酸が得られる。
殊に、かつ意外にも、本発明による方法は、目的とする生成物が、水を用いて処理することなく９５％を上回る純度と同時に著しく高い収率で得ることができるように有利に実施できることを見出した。
この場合、ソ連特許出願公開（ＳＵ）第１２９３１７１号明細書から公知の方法とは異なり、アセチル化の際の高い温度が、溶剤としての多量の酢酸の使用と関連して、少なくとも同等の高い収率で、アセチル化した目的生成物を著しく高い純度にすることは、殊に注目すべきであると評価できる。
本発明の重要な実施態様は、アセチル化温度が約６０〜１５０℃へ上昇することにある。その際、選択すべき温度は、アセチル化すべきアミノ酸にもある程度まで依存する。本発明の有利な別の方法の場合、アセチル化は８５〜１１５℃の間の温度で実施される。
アセチル化反応の温度の他に、本発明の第二の重要な実施態様は、変換すべきアミノカルボン酸と溶剤の酢酸との比率にある。希薄な操作方法により、必ずしも予見できたわけではなかったが、副生成物の形成を削減できた。
別の有利な実施態様の場合、本発明の方法は、アセチル化すべきα−アミノカルボン酸の濃度を、酢酸１リットル当たり０．５〜２．５モルにし、その際、濃度は、圧力と温度の標準条件に対するものであることによって特徴付けられている。
さらに、従来技術によると、化学量論的必要量に対して０．２〜０．３モル当量の過剰量のアセチル化剤（無水酢酸）が重要であると考えられているので、いくぶん意外ではあるが、本発明の範囲内で、等モル量の無水酢酸の使用でも完全なアセチル化が行われるということが明らかになった。しかし、完全な変換を保証するために、５〜１０％の過剰量が推奨される。
従って、本発明によると、アセチル化すべきＤ，Ｌ−α−アミノカルボン酸１モルに対して、無水酢酸１．０〜１．１モルを使用する方法が有利である。
最終的に、もう１つの本質的な実施態様では、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸を蒸発濃縮により溶融物または固体として直接、すなわち、殊に水を用いる処理を行わずに得られること、これは特に有利なことであり、その際にすでに記載したように高い純度が得られるということにある。
従って、有利な変法における本発明の方法は、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸を蒸発濃縮によって、その他の単離または精製をすることなく９５％（重量基準）を上回る純度で得られることを特徴とする。
ソ連特許出願公開（ＳＵ）第１２９３１７１号明細書を追試した際に、ソ連特許出願公開（ＳＵ）第１２９３１７１号明細書に記載された条件下では、相応量の副生成物が形成されるが、これはアセチルジペプチドと同定できたことが確認された。反応の実施の際に、アセチルジペプチドの形成は、本発明によると５％未満の値、さらに最適な条件下では２％未満の値に低下させることができる。
従って、本発明によると、蒸発濃縮により溶融物または固体として得られる生成物１００重量％に対して、５重量％未満のアセチルジペプチドを副生成物として含有するＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸が得られることは有利である。
さらに、殊に有利には、２重量％未満のアセチルジペプチドを含む生成物が得られる。
このような副生成物が少ないＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−α−アミノカルボン酸は、特に重要な生成物および中間生成物である。
こうして製造されたアセチルアミノ酸は、さらに生成しなくても、中間体として、種々の方法で使用できる。アセチルアミノ酸の単離は、酢酸溶液を溶融物ならびに固体となるまで濃縮することによって行うことができる。このために好適な装置としては、例えばサンベイ（ｓａｍｂａｙ）蒸発器を使用することができる。留去された酢酸は、無水状態なので、次のバッチ量に直接再使用できる。
本発明によるアセチル化法は、多数のα−アミノカルボン酸に適用できる。有効にアセチル化できるα−アミノカルボン酸には、なかでも式Ｉ
0004001628.tif 000002
〔式中、
Ｒ1は、水素またはＣ1〜Ｃ4−アルカリ、
Ｒ2は、水素、アルキル、置換されているアルキル、アリール、置換されているアリール、ヘテロアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、シクロアルキル−またはシクロアルキルアルキルであり、その際、上記の基は、いずれもさらにそれ自体が置換されていてもよいかおよび／またはヘテロ原子を有していてもよいか、
または
Ｒ1とＲ2は、これらが結合しているＣ−原子と一緒になって３〜７員環の飽和環を形成しており、
Ｒ3は、水素またはＣ1〜Ｃ4−アルカリであるか
または
Ｒ2とＲ3は、これらが結合しているＮ−原子およびＣ−原子と一緒になって４〜７員環の飽和環を形成しており、これは、場合によればヘテロ原子を有していてもよい〕
の化合物が属する。
アルキル基は、直鎖状でも分枝鎖でもよく、有利には、直鎖の場合にはＣ1〜Ｃ12の鎖長、分枝鎖の場合にはＣ3〜Ｃ13の鎖長であり、殊に有利には、直鎖の場合にはＣ1〜Ｃ6の鎖長、分枝鎖の場合にはＣ3〜Ｃ6の鎖長であり、その例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソオクチル、ドデシルである。
これらのアルキル基は、有利には１〜３個のアミノ基、ヒドロキシル基、ハロゲン原子、グアニジノ基、尿素基、カルボキシ基、カルボキシアミド基および／またはアルコキシカルボニル基で置換されている。
アリール基は、有利には、フェニル基または置換されているフェニル基であってもよい。
置換されたアリール基は、有利には、モノハロゲン化フェニル基、ジハロゲン化フェニル基またはトリハロゲン化フェニル基、モノヒドロキシル−フェニル基、ジヒドロキシル−フェニル基またはトリヒドロキシル−フェニル基、モノアルキル−フェニル基、ジアルキル−フェニル基またはトリアルキル−フェニル基であり、その際、ハロゲン原子は、フッ素、塩素または臭素であり、アルキルは、Ｃ1〜Ｃ4−アルキル、有利にはメチルまたはエチルである。
ヘテロアリール基は、有利には、環中に、Ｏ、ＮまたはＳであってもよいヘテロ原子１〜２個を有する５〜６員環系である。
アリールアルキルは、有利にはベンジルである。シクロアルキルおよびシクロアルキルメチルは、有利にはＣ3〜Ｃ7−環系である。
有利には、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、セリン、チロシン、トレオニン、システイン、アスパラギン、グルタミン、ヒスチジン、シスチン、シトルリン、ホモシステイン、ホモセリン、ヒドロキシプロリン、オルニチン、ノルバリンならびに上記のアミノ酸の誘導体である。なかでもＤ，Ｌ−メチオニンをアセチル化するのは特に有利である
本発明による方法は、基本的には、α−アミノカルボン酸のＮ−アセチル化に好適であり、その原料物質には無関係である。その際、アセチル化は、特に光学活性α−アミノ酸の取得のためのプロセスに組み込むことができる。
その際、例えばＤ，Ｌ−メチオニンの取得のために組み込まれた方法は、Ｄ，Ｌ−メチオニンのアセチル化が光学活性α−アミノ酸の取得のために方法の１つの工程であり、その際、Ｄ，Ｌ−メチオニンを、まず、酢酸／無水酢酸を用いてＮ−アセチル化し、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン−ラセミ体を酵素的に分割し、母液を回収しつつＬ−メチオニンを分離し、かつ母液の変換しなかったＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニンを、ラセミ化の後に還流溶液として酵素ラセミ体分割のために再利用することによって際立っている。
このように改善された方法で使用されるＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン−ナトリウム塩およびＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニンは、その際、好ましくは、酵素加水分解の際に完了したＬ−メチオニンの単離の後に生成する母液を、強酸性カチオン交換体上に送り、含まれているカチオンおよび残留Ｌ−α−アミノカルボン酸を吸着させることにより取得できる。これにより、イオン交換体から流出する溶液は、実際的に、水、酢酸およびＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニンから成るにすぎない。これを、例えば温和な条件下、低温で、真空中、例えば、固体取り出し口を有する流下膜蒸発器と薄膜蒸発器との組合せにより、酵素変換を抑制する酢酸の除去のために蒸発濃縮させ、ｐＨ４〜８、有利には４．５〜５．５で苛性ソーダ水溶液中に入れる。また、ＮａＯＨを酢酸の除去の前に加えてもよい。これにより、ｐＨ値を蒸発濃縮の前に高くし、これにより、この例ではＮ−Ａｃ−Ｄ（Ｌ）−メチオニンの加水分解を減少させることができる。
また、Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−α−アミノカルボン酸の溶融のために必要な保持時間は、有利にはできるだけ短いままにしておかなければならない。加熱した押出機中で溶融を行う場合には、完全な溶融のために、一般に１分未満の滞留時間で十分である。この場合、押出機は、加熱した反応管の中に溶融物を供給し、その中で滞留部分の最初に、適当に配置されたポンプにより、連続的に必要量の無水酢酸が混合系を介して供給される。
本発明を下記の実施例で詳しく説明する。すべてのパーセントの記載は、特に断らない限り、重量％である。
実施例１：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニンの製造
種々の量のＤ，Ｌ−メチオニンを酢酸１００ｍｌ中に溶かし、この溶液を油浴中で温度調節し、無水酢酸１．１当量を加えた。５分後に内容物を真空中、浴温度１００℃で濃縮した。Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニル−Ｄ，Ｌ−メチオニン（Ａｃ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ）の含量をＨＰＬＣで測定した。これらの試験の結果は、下記の表にまとめてある：
0004001628.tif 000003
実施例２：工業的条件下におけるＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニンの製造
Ｄ，Ｌ−メチオニン３７３ｇ（２．５モル）を、９０℃で酢酸５ｌ中に溶かし、これに、無水酢酸２８１ｇ（２．７５モル）を添加した。この際、温度が９５℃に上昇した。１０分間の後反応の後に溶液をサンベイ蒸発器により、１７０℃および９ミリバールで濃縮した。粘性の油状物４２７ｇが得られ、これは冷却すると凝固した。ＨＰＬＣ分析により、生成物はアセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン９２．３％およびＡｃ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ３．４％から成っていた。
実施例３：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−バリンの製造
Ｄ，Ｌ−バリン１１．７ｇ（０．１０モル）を酢酸１００ｍｌ中に溶かし、これに、９０℃において無水酢酸１１．２ｇ（０．１１モル）を添加した。１０分後に、１５ミリバールおよび１００℃で濃縮した。ＨＰＬＣ分析により、結晶性残留物はアセチル−Ｄ，Ｌ−バリン９５．６％およびＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−バリル−Ｄ，Ｌ−バリン２．８％から成っていた。
実施例４：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリンの製造
Ｄ，Ｌ−ノルバリン１１．７ｇ（０．１０モル）を実施例３と同様にして反応させた。結晶性の残留物は、ＨＰＬＣ分析によると、Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリン９５．２％およびＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリン−Ｄ，Ｌ−ノルバリン４．１％から成っていた。
実施例５：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニンと酢酸ナトリウムから成る混合物から酢酸の除去
それぞれＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン３８．２ｇ（０．２０モル）と酢酸ナトリウム１６．４ｇ（０．２０モル）を強力に撹拌し、かつ加熱した。約１００℃からの溶融物を形成した。溶融物を１５ミリバールで３０分間加熱して１５０〜１８０℃にし、かつ冷却した後に酢酸の含量を測定した。結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000004
実施例６：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−バリンと酢酸ナトリウムとの混合物からの酢酸の除去
Ｌ−バリン７９．６ｇ（０．５０モル）と酢酸ナトリウム４１．０ｇ（０．５モル）を加熱しつつ水１５０ｍｌ中に溶かし、１００℃および１５ミリバールで濃縮して乾燥物にした。引き続き、固体残留物の部分を、それぞれ３０分間、種々の温度で乾燥させ、酢酸の含量を測定した。結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000005
実施例７：Ｎ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニンと酢酸ナトリウムとの混合物からの酢酸の除去
Ｌ−フェニルアラニン１０３．６ｇ（０．５０モル）と酢酸ナトリウム４１．０ｇ（０．５モル）を加熱しつつ水１５０ｍｌ中に溶かし、１００℃および１５ミリバールで乾燥するまで濃縮した。引き続き、固体残留物の部分をそれぞれ３０分間、種々の温度で乾燥させ、酢酸の含量を測定した。結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000006
実施例８：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリンと酢酸ナトリウムから成る混合物から酢酸の除去
それぞれＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリン３．１２ｇ（０．０２モル）と酢酸ナトリウム１．６４ｇ（０．０２モル）を強力に撹拌して加熱した。約１１０℃から溶融物を形成した。溶融物を１５ミリバールで３０分間加熱して１６０℃にした。冷却した後に試料は酢酸２．２％を含んでいた。
実施例９：Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニンとＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン−ナトリウム塩の耐熱性の比較
Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニンおよびＮ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン−ナトリウム塩それぞれ２０ｇを加熱して１５０℃にした。Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン−Ｄ，Ｌ−メチオニンの形成は、ＨＰＬＣを用いて追跡した。結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000007
実施例１０：溶融物中のＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン−ナトリウムのラセミ化
それぞれＮ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン１０ｇ（０．０５３モル）を、８％の苛性ソーダを用いて種々のｐＨ値に調節し、真空中、５０ミリバールで溶融するまで蒸発濃縮させた。引き続き、溶融物を加熱し、十分に撹拌しつつ無水酢酸を加えた。次いで、この溶融物を一定の時間、前記の温度で保持し、引き続き水の中に入れた。ラセミ化の追跡のために、旋光度（［α］20D、水中でｃ＝１）を測定した。ラセミ化の前に、この旋光度は＋２１．３であった。この試験の結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000008
実施例１１：Ｎ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン−ナトリウム塩のラセミ化
実施例７に従って調製し、１５０℃で、真空中で乾燥させたＮ−アセチル−Ｌ−フェニルアラニン−ナトリウム塩の試料を無水酢酸と混合させ、かつ加熱した。ラセミ化の追跡のために、旋光度（［α］20D、１ＮのＨＣｌ中でｃ＝１）を測定した。ラセミ化の前に、この旋光度は＋２１．６であった。この試験の結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000009
実施例１２：Ｎ−アセチル−Ｌ−バリン−ナトリウム塩のラセミ化
実施例６に従って調製し、１５０℃で、真空中で乾燥させたＮ−アセチル−Ｌ−バリン−ナトリウム塩の試料を無水酢酸と混合させ、かつ加熱した。ラセミ化の追跡のために、旋光度（［α］20D、１ＮのＨＣｌ中でｃ＝１）を測定した。ラセミ化の前に、この旋光度は＋１１．９であった。この試験の結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000010
実施例１３：Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン母液の後アセチル化
母液１００ｇ当たりに、酢酸ナトリウム８．３ｇ（０．１００モル）、Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン−ナトリウム１９．３ｇ（０．０８９モル）およびＬ−メチオニン１．７ｇ（０．０１１モル）を含む、Ｌ−メチオニン分離の後に濾過により得られた母液それぞれ１００ｇに、種々の温度で種々の量の無水酢酸を添加した。それぞれ３０分後に試料を取り出し、メチオニン含量をＨＰＬＣを用いて測定した。結果は、以下の表にまとめてある：
0004001628.tif 000011
実施例１４：Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン−ナトリウム塩−母液の再利用
Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン７１７ｇ（３．７５モル）および水酸化ナトリウム１４０ｇ（３．５０モル）を水中に溶かし、増量して１．５ｌとした。この溶液のｐＨ値を、５０％の苛性ソーダを用いて７に調節した。アシラーゼ（活性３１．０００Ｅ／ｇ）３．６ｇを加えた後、５日間、室温で攪拌した。この懸濁液を冷却して５℃にし、沈殿を濾別し、氷水３００ｍｌを用いて洗浄し、かつ乾燥させた。Ｌ−メチオニン１７４ｇ（１．１７モル）が得られた。Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−メチオニン２１．８重量％の他にＬ−メチオニン２．８重量％を含む濾液（１８００ｇ）を加熱して６０℃にし、かつ無水酢酸６０ｇ（０．６０モル）を添加した。３０分後に溶液中にメチオニンは検出されなかった。Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−メチオニン２２３ｇ（１．１７モル）を加え、真空中で１２００ｇになるまで濃縮した。この溶液をサンベイ蒸発器を用いて１７０℃および１０ミリバールで７５２ｇになるまで濃縮した。まだ温かい溶融物中に無水酢酸１５ｇを攪拌して混入し、１０分間で１４０℃に加熱し、次いで水の中に溶かし、増量して１．５ｌとした。溶液の旋光度は０であった。Ｎ−アセチルジペプチドの含量は、Ｎ−アセチル−メチオニンに対して０．８％であった。ｐＨ値を苛性ソーダを用いて７に調節した後に、この溶液を上記のようにして再びアシラーゼ分離に使用した。Ｌ−メチオニン１６６ｇ（１．１１モル）が得られた。
実施例１５：Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−ノルバリン−ナトリウム塩−母液の再利用
Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリン５９７ｇ（３．７５モル）および水酸化ナトリウム１４０ｇ（３．５０モル）を水の中に溶かし、増量して１．５ｌとした。溶液のｐＨ値を、５０％の苛性ソーダを用いて７に調節した。アシラーゼ（活性３１．０００Ｅ／ｇ）３．０ｇを加えた後、５日間、室温で攪拌した。この懸濁液を冷却して５℃にし、沈殿を濾別し、氷水３００ｍｌを用いて洗浄し、かつ乾燥させた。Ｌ−ノルバリン１５７ｇ（１．３４モル）が得られた。Ｎ−アセチル−Ｄ（Ｌ）−ノルバリン２２．５重量％の他にＬ−ノルバリン３．１重量％を含む濾液（１３９３ｇ）を加熱して６０℃にし、無水酢酸６４ｇ（０．６２モル）と混合させた。３０分後に溶液中にはノルバリンは検出されなかった。Ｎ−アセチル−Ｄ，Ｌ−ノルバリン２１３ｇ（１．４３モル）を加え、真空中で９５０ｇになるまで濃縮した。この溶液をサンベイ蒸発器を用いて１７０℃および１０ミリバール６４４ｇになるまで濃縮した。まだ温かい溶融物中に無水酢酸１３ｇを攪拌混入し、１０分間加熱して１４０℃にし、次いで水の中に溶かし、増量して１．５ｌとした。クロマトグラフィーによるｅｅ（鏡像体過剰率）測定から、Ｄ／Ｌ比は５１．３％対４８．３％であった。Ｎ−アセチルジペプチドの含量は、Ｎ−アセチル−ノルバリンに対して１．２％であった。ｐＨ値を苛性ソーダを用いて７に調節した後に、この溶液を上記のようにしてアシラーゼ分離に再び使用した。Ｌ−ノルバリン１１３ｇ（０．９７モル）が得られた。
その他の本発明の実施態様および利点は、請求項に記載してある。