(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
0003989808.tif 000011
式中、Ｒは
【化２】
0003989808.tif 000012
で示されるゲラニル−糖誘導体。
【請求項２】
請求項１に記載の式（Ｉ）のゲラニル−糖誘導体を有効成分として含有することを特徴とする抗腫瘍剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は新規なゲラニル−糖誘導体及びその抗腫瘍剤としての利用に関する。
【０００２】
【背景技術】
１，５−ジエン構造を持つゲラニル基を含む化合物は生体内に多く存在し、種々の生理活性を示すポリエン構造を持つ物質の生体内における前駆体として知られている。
【０００３】
本発明者は、この１，５−ジエン構造をもつゲラニル酸又はゲラニルアミンに着目し、ゲラニル基を糖類に導入すれば、そのゲラニル基を有する糖質誘導体は、癌化している細胞の糖代謝系に効果的にとりこまれて優れた癌抑制作用を発揮するであろうと考え、ゲラニル酸又はゲラニルアミンの各種糖誘導体を合成し、その抗腫瘍作用および毒性を検討した結果、本発明を完成するに至った。
【０００４】
【発明の開示】
本発明は式
【０００５】
【化３】
0003989808.tif 000002
【０００６】
式中、Ｒは
【０００７】
【化４】
0003989808.tif 000003
【０００８】
で示されるゲラニル−糖誘導体を提供するものである。
【０００９】
上記式（Ｉ）のゲラニル−糖誘導体には、下記の５つの化合物が包含される。
【００１０】
Ｎ−ゲラニルグルクロン酸アミド
【００１１】
【化５】
0003989808.tif 000004
【００１２】
Ｎ−ゲラニルガラクツーロン酸アミド
【００１３】
【化６】
0003989808.tif 000005
【００１４】
Ｎ−ガラクトシルゲラニル酸アミド
【００１５】
【化７】
0003989808.tif 000006
【００１６】
Ｎ−グルコシルゲラニル酸アミド
【００１７】
【化８】
0003989808.tif 000007
【００１８】
Ｎ−フーコースゲラニル酸アミド
【００１９】
【化９】
0003989808.tif 000008
【００２０】
上記式（Ｉ−１）及び（Ｉ−２）の化合物は、例えば、ゲラニルアミンを、ヒドロキシル基がアシル基（例えばアセチル基）等で保護されたグルクロン酸又はガラクツーロン酸の反応性誘導体（例えば、混合酸無水物、活性エステル、ハライドなど）とアミド化反応させることにより製造することができる。
【００２１】
また、上記式（Ｉ−３）ないし（Ｉ−５）の化合物は、例えば、ゲラニル酸の反応性誘導体（例えば、混合酸無水物、活性エステル、ハライドなど）を、ガラクトースアミン、グルコサミン又はフーコースアミンとアミド化反応させることにより製造することができる。
【００２２】
上記アミド化反応は、ペプチド化学の分野におけるアミド化反応の常法に従って行うことができ、通常、適当な不活性有機溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、クロロホルム、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンなど）中又は水中で、約０℃までの冷却下ないし約６０℃までの加温下、好ましくは約０℃ないし室温で行うことができる。
【００２３】
ヒドロキシル基が保護されたグルクロン酸又はガラクツーロン酸の反応性誘導体に対するゲラニルアミンの使用割合は、厳密に制限されるものではないが、通常、該反応性誘導体１モルあたり、ゲラニルアミンを１〜２モルの範囲内で使用することが好ましい。
【００２４】
また、ゲラニル酸の反応性誘導体に対するガラクトースアミン、グルコサミン又はフーコースアミンの使用割合は、厳密に制限されるものではないが、通常、該反応性誘導体１モルあたり、ガラクトースアミン、グルコサミン又はフーコースアミンも１〜２モルの範囲内で使用することが好ましい。
【００２５】
アミド化反応後、ヒドロキシル保護基が存在する場合には、その保護基を例えば加水分解などの脱保護基反応に付することにより、前記式（Ｉ）のゲラニル−糖誘導体を得ることができる。
【００２６】
上記反応により生成する式（Ｉ）のゲラニル−糖誘導体は、通常の手段、例えば、抽出、結晶化、クロマトグラフィー等により反応混合物から単離、精製することができる。
【００２７】
得られる式（Ｉ）の化合物は、下記の抗腫瘍効果の測定結果から明らかなとおり、優れた抗腫瘍活性を有している。
抗腫瘍効果の測定
５週令の雌性ヌードマウス（ＢＡＬＢ／ｃ，Ｎｉｎｏｘ）の背部皮下に移植、継代移植されているＨｕＨ−７細胞（ヒト肝癌の樹立細胞株）の癌腫を無菌的に取り出し、リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）中で５×５ｍｍ2の大きさに破砕した後、その一塊をヌードマウス背部皮下に移植した。
【００２８】
被験物質をコーンオイルに溶解し、その溶液を移植後１週間から３週間マウスの腹腔内に１日１回２５０μｇ／マウスづつ連日投与した。投与終了後癌腫を取り出し、その重量を測定し、下記式に従い抗腫瘍効果及び体重減少を算出する。なお、実験には各群６匹のマウスを用い、溶媒（コーンオイル）のみを投与した群をコントロール群とした。
【００２９】
【数１】
0003989808.tif 000009
【００３０】
抗腫瘍効果及び体重減少の評価は、コントロール群を１００％として次の基準で行った。
抗腫瘍効果
−：〉１００％、＋／−：１００〜７５％、＋：７５〜５０％、
＋＋：５０〜２５％、＋＋＋：２５〜０％
体重減少
−：〉１１０％、＋／−：１１０〜１００％、＋：１００〜９５％、
＋＋：９５〜９０％、＋＋＋：〈９０％
死亡率（実験期間中での死亡割合）
−：死亡例なし
＋／−：高濃度（５００μｇ／マウス）投与の場合に死亡例あり
＋：１〜３匹死亡
＋＋：３〜５匹死亡
＋＋＋：６匹全部死亡
総合評価
−：抗腫瘍効果が弱く、宿主マウスに対する毒性が非常に強い。
【００３１】
＋／−：弱い抗腫瘍効果が認められるが、宿主マウスに対する毒性も認められる。
【００３２】
＋：一定の抗腫瘍効果が認められるが、宿主マウスに対する毒性も強い。
【００３３】
＋＋：強い抗腫瘍効果が認められ、宿主マウスに対する毒性が弱い。
【００３４】
＋＋＋：強い抗腫瘍効果が認められ、宿主マウスに対する毒性がない。
【００３５】
結果を下記表１に示す。
【００３６】
【表１】
0003989808.tif 000010
【００３７】
上記結果から明らかなとおり、本発明の前記式（Ｉ）のゲラニル−糖誘導体は、ＨｕＨ−７細胞に対する優れた抗腫瘍効果を有しており、しかも毒性が殆んどなく、肝臓癌をはじめとする各種固形癌の処置、治療のための抗腫瘍剤として使用することが期待される。
【００３８】
本発明の化合物を抗腫瘍剤などの薬剤として使用する場合、該化合物は経口的又は非経口的（例えば、静注、筋注、皮下注など）に投与することができ、その有効投与量は投与すべき患者の症状、病気の軽重、体重、年令、医師の判断等に依存して広い範囲にわたって変えることができるが、例えば注射の場合には、通常、約１〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日とすることができ、１日１回又は数回に分けて投与することができる。
【００３９】
本発明の化合物を薬剤として使用する場合には、該化合物の有効量を、製薬学的に許容しうる担体又は希釈剤（例えば、賦形剤、溶剤、その他の補助剤など）と共に投与に適した投与単位形態、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、腸溶剤、トローチ、シロップ剤、エリキシル剤、液剤、懸濁剤、エマルジョン剤等の剤形に製剤化することができる。
【００４０】
上記製剤化に使用しうる担体ないし希釈剤としては、例えば、デンプン、乳糖、砂糖、マンニット、カルボキシメチルセルロースなどの賦形剤；ステアリン酸マグネシウム、ラウリン硫酸ナトリウム、タルクなどの滑沢剤；デキストリン、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、アラビアゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチンなどの結合剤；ばれいしょデンプン、カルボキシメチルセルロースなどの崩壊剤；注射用蒸留水、生理食塩水、デキストロース水溶液、注射用植物油、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどの希釈溶剤、等が挙げられ、さらに必要に応じて、矯味矯臭剤、着色剤、等張化剤、安定剤、防腐剤、無痛化剤等を配合することができる。
【００４１】
また、本発明の薬剤には、必要に応じて、他の薬理学的に活性な物質を配合することもできる。
【００４２】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明する。
【００４３】
【実施例】
合成例１：Ｎ−ゲラニルガラクツーロン酸アミドの合成
Ｏ−テトラアセチルガラクツーロン酸（３．６２ｇ、１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（１．０１ｇ、１０ｍｍｏｌ）を加え０℃に冷却した。この溶液にクロロギ酸イソブチル（１．３７ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を０℃で滴下し、３０分撹拌した。この溶液にゲラニルアミン（１．５３ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を滴下し、０℃で１時間、室温で４時間撹拌した。反応終了後１５０ｍｌのクロロホルムを加え、クロロホルム層を５０ｍｌの水で３回洗浄を行った。クロロホルム層を硫酸マグネシウムで乾燥後、クロロホルムを濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用い精製を行った。その結果、ヘキサン−アセトン（３：１）留出液より、Ｎ−ゲラニル−Ｏ−テトラアセチルガラクツローン酸アミドを粘稠な油状物として３．５８ｇ（７３．５％）得た。
【００４４】
1H NMR(CDCl3) δ＝1.58(3H, s)、 1.65(3H, s)、 1.68(3H, s)、 2.01(3H, s)、 2.02(3H, s)、 2.05(3H, s)、 2.15(3H, s)、 2.02-2.11(4H, m)、 3.70-3.83(1H, m)、 3.83-3.96(1H, m)、 5.00-5.17(2H, m)、 5.29(1H, d, J=10.8 Hz)、 5.39(1H, d, J=10.8 Hz)、 6.29-6.46(2H, m)。
【００４５】
上記の生成物３．５８ｇ（７  ｍｍｏｌ）を３０ｍｌのエタノールに溶解させ、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液３５ｍｌを加え室温で２時間撹拌した。その後、１Ｎ塩酸３５ｍｌを反応混合物に加え、減圧下濃縮を行った。残留物にエタノールを１５０ｍｌ加え、析出する食塩をろ過し、ろ液を再び濃縮した。残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて分離を行い、ヘキサン−エタノール（３：１）留出液よりＮ−ゲラニルガラクツーロン酸アミドを粘稠な化合物として１．９５ｇを得た。この生成物にエーテルを加え結晶化を行い、吸引ろ過により結晶の標題化合物を１．０３ｇ得た。収率４５％。
【００４６】
1H NMR(DMSO-d6) δ＝1.50(3H, s)、 1.55(3H, s)、 1.56(3H, s)、 1.86-2.04(4H, m)、 3.48-3.76(2H, m)、 3.80-3.94(2H, m)、 4.07-4.84(3H, m)、 4.99(1H, d, J=9.6 Hz)、 5.06(1H, d, J=9.6 Hz)。
合成例２：Ｎ−ゲラニルグルクロン酸アミドの合成
Ｏ−テトラアセチルガラクツーロン酸の代りにＯ−テトラアセチルグルクロン酸を用いる以外は合成例１と同様にして標題化合物を得た。
【００４７】
1H NMR(DMSO-d6) δ＝1.60(3H, s)、 1.68(3H, s)、 1.73(3H, s)、 2.07-2.09(4H, m)、 3.58-3.62(2H, m)、 3.81-3.95(2H, m)、 4.07-4.86(3H, m)、 5.05-5.09(1H, m)、 5.36-5.40(1H, m)。
合成例３：Ｎ−ガラクトシルゲラニル酸アミドの合成
グラニル酸（０．８４ｇ、５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（０．５１ｇ、５ｍｍｏｌ）を加え０℃に冷却した。そこにクロロギ酸イソブチル（０．６８ｇ、５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（５ｍｌ）溶液を滴下し、０℃で３０分撹拌する。次に、ガラクトースアミン塩酸塩（１．０８ｇ、５ｍｍｏｌ）を１０ｍｌの水に溶解させ、さらに１Ｎ水酸化ナトリウム５ｍｌを加えたものを反応混合物に一気に加える。０℃で１時間、室温で４時間撹拌した後、反応混合物を減圧下濃縮した。得られた残留物にアセトンを１５０ｍｌ加え、析出する食塩をろ過した。ろ液を再び濃縮し、残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで分離した。その結果、ヘキサン−エタノール（２：１）留出液より生成物を粘稠な油状物として得た。そこに少量のエーテルを加え結晶化させ、吸引ろ過により標題化合物を０．７５４ｇ得た。収率４６％。
融点８５−８７℃。
【００４８】
1H NMR(DMSO-d6）δ＝1.53(3H, s)、 1.57(3H, s)、 1.59(3H, s)、 1.95-2.01(4H, m)、 3.63-3.79(7H, m)、 4.25-4.60(3H, m)、 4.85-4.92(1H, m)、 5.00-5.08(1H, m)、 6.25-6.31(1H, m)。
合成例４：Ｎ−グルコシルゲラニル酸アミドの合成
ガラクトースアミン塩酸塩の代わりにグルコサミン塩酸塩を用いる以外は合成例３と同様にして標題化合物を得た。
【００４９】
1H NMR(DMSO-d6) δ＝1.54(3H, s)、1.60(3H,s)、2.03(3H, s)、 1.96-2.20(4H, m)、 3.38-3.61(4H, m)、 4.38-4.66(3H, m)、 5.75(1H, s)、 6.34-6.39(1H, m)。
合成例５：Ｎ−フーコースゲラニル酸アミドの合成
ガラクトースアミン塩酸塩の代りにフーコースアミン塩酸塩を用いる以外は合成例３と同様にして標題化合物を得た。
【００５０】
1H NMR(DMSO-d6) δ＝1.31(3H, d, J=5.4 Hz)、 1.53(3H, s)、 1.60(3H, s)、 1.72(3H, s)、 1.97-2.05(4H, m)、 3.88-3.95(2H, m)、 4.21-4.24(1H, m)、 4.44-4.46(1H, m)、 4.82-4.87(1H, m)、 5.00-5.13(1H, m)。
製剤例１
Ｎ−ガラクトシルゲラニル酸アミド２ｇを常温にて注射用蒸留水１ｌに溶解し、塩化ナトリウムで等張化した後、アンプルに封入した。本注射剤１ｍｌは有効成分２ｍｇを含有する。