(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
0003939354.tif 000051
［式中、
Ｒ1はメチルである；
Ｒ2はメチルである；
Ａはバリル残基である；
ＢはＮ−メチル−バリル残基である；
Ｄはプロリル残基である；
Ｅはプロリル残基である；
Ｘはイソプロピルである；
Ｓは０である；
Ｋは−ＮＨＣ（ＣＨ3）3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ2ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（ＣＨ3）3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ（ＣＨ3）2、−Ｎ（ＣＨ3）Ｏ（ＣＨ2）3ＣＨ3、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣＨ2Ｃ6Ｈ5、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2Ｃ6Ｈ5、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣ（ＣＨ3）（ＣＨ2ＣＨ3）2、ＮＨＣＨ［ＣＨ（ＣＨ3）2］2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＮ、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＯＨ）Ｃ6Ｈ5、−ＮＨ−Ｃ（ＣＨ3）2ＣＨ＝ＣＨ2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＣＨ、−ＮＨＣ（ＣＨ2ＣＨ3）2ＣＣＨ、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2Ｃ6Ｈ5、−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2、−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ2Ｃ6Ｈ5、−Ｎ（ＯＣＨ3）Ｃ6Ｈ5、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣ6Ｈ5、−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、−ＮＨ−シクロヘキシル、−ＮＨ−シクロヘプチル、−ＮＨＣＨ（Ｃ2Ｈ5）2、−ＮＨＣＨ（Ｃ2Ｈ5）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2Ｃ2Ｈ5、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ（ＣＨ3）2、ＮＨＣＨ（Ｃ3Ｈ7）2及びＮＨＣＨ（Ｃ2Ｈ5）Ｃ3Ｈ7、ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2であるか、又は
Ｋは
0003939354.tif 000052
である］のペプチド及び生理学的に認容性の酸とのこれらの塩。
【請求項２】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ1はメチルである；
Ｒ2はメチルである；
Ａはバリル残基である；
ＢはＮ−メチル−バリル残基である；
Ｄはプロリル残基である；
Ｅはプロリル残基である；
Ｘはイソプロピルである；
ｓは０である；
Ｋは−ＮＨＣ（ＣＨ3）3、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ2Ｈ5、−ＮＨＣＨ（Ｃ2Ｈ5）2、−ＮＨＣＨ（Ｃ2Ｈ5）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（ＣＨ3）3、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2Ｃ2Ｈ5、−ＮＨＣＨ［ＣＨ（ＣＨ3）2］2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ（ＣＨ3）2、−ＮＨＣＨ（Ｃ3Ｈ7）2、−ＮＨＣＨ（Ｃ2Ｈ5）Ｃ3Ｈ7、−ＮＨ−シクロヘキシル、−ＮＨ−シクロヘプチル、−Ｎ（ＣＨ3）ＯＣ3Ｈ7、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2Ｐｈ、−ＮＨＣ（ＣＨ3）（Ｃ2Ｈ5）2、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＣＨ、−ＮＨＣ（ＣＨ3）2ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ、−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2及び−Ｎ（ＯＣＨ3）ＣＨ2Ｐｈであるか、又は
Ｋは
0003939354.tif 000053
である、請求項１記載のペプチド。
【請求項３】
式Ｉで示され、その式中、
Ｒ1はメチルである；
Ｒ2はメチルである；
Ａはバリル残基である；
ＢはＮ−メチル−バリル残基である；
Ｄはプロリル残基である；
Ｅはプロリルである；
Ｘはイソプロピルである；
ｓは０である；
ＫはＮＨＣ（ＣＨ3）3である、請求項１記載のペプチド。
【請求項４】
疾患の治療用医薬品の製造における、請求項１記載の式Ｉの化合物又は製薬学的に認容性の塩の使用。
【請求項５】
疾患が癌である、請求項４記載の使用。
【請求項６】
疾患が哺乳動物の固形腫瘍である、請求項４記載の使用。
【請求項７】
腫瘍が、肺、乳房、結腸、前立腺、膀胱、直腸の腫瘍又は子宮内膜腫瘍である、請求項６記載の使用。
【請求項８】
哺乳動物がヒトである、請求項６記載の使用。
【請求項９】
請求項１記載の式Ｉのペプチドの製造方法において、Ｒ1Ｒ2Ｎ−ＣＨＸ−ＣＯを有するペプチドのＣ末端で開始し、Ｃ末端カルボニルとＡ残基とを、引き続きＢ残基とを、Ｄ残基とを、そしてＥ残基とを結合させることによって鎖を段階的に伸長させ、その際、Ｅ残基のＣ末端は結合の前又はその後にＫ基で誘導体化されてよく、又は好適な小さなペプチド断片を結合させることによって（その際、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｘ、Ｒ1及びＲ2は請求項１に定義したものである）、ペプチドをアミノ酸から連続的に構成する方法。
【請求項１０】
溶液合成を含み、かつＺ、Ｂｏｃ及びＦｍｏｃからなる群から選択されるアミノ酸保護基を用いる、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
結合試薬が、ＥＤＣＩ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＥＤＱ、ＰＰＡ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＰｙＢｒｏｐ、ＢＯＰ及びＰｙＢｏｐ、ＤＰＰＡ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＥＰＣＮ、ＨＯＴＤＯ、ＣＤＩ及びピバロイルクロリドからなる群から選択される請求項１０記載の方法。
【請求項１２】
更に、ＤＭＡＰ、ＨＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ、アゾベンゾトリアゾールＨＯＳｕ及び２−ヒドロキシピリジンからなる群から選択される結合試薬を含む、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
溶相合成を含み、かつＺアミノ酸保護基、ＥＤＣＩ及びＨＯＢｔを結合試薬として用い、かつ化合物をＰｄ／Ｃを用いて窒素雰囲気下で脱保護する、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
固相合成を含み、かつＺ、Ｂｏｃ及びＦｍｏｃからなる群から選択されるアミノ酸保護基を用いる、請求項９記載の方法。
【請求項１５】
結合試薬が、ＥＤＣＩ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＥＥＤＱ、ＰＰＡ、ＢＯＰ−Ｃｌ、ＰｙＢｒｏｐ、ＢＯＰ及びＰｙＢｏｐ、ＤＰＰＡ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＤＥＰＣＮ、ＨＯＴＤＯ、ＣＤＩ及びピバロイルクロリドからなる群から選択される、請求項１４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
下記の本発明は、ドラスタチン−１０及び−１５（米国特許第４８７９２７６及び４８１６４４４号明細書）及び国際公開第９３／２３４２４号パンフレットに記載された化合物とを比較して、腫瘍性疾患の治療に対する改良された治療学上の有用性を提供する新規ペプチド及びその誘導体を提供する。
本発明の化合物は
式Ｉ：
0003939354.tif 000002
［式中、Ｒ1は水素、メチル、又はエチルである；
Ｒ2はメチル；又はエチル；又は
Ｒ1-Ｎ-Ｒ2は−緒になってピロリジン環である；
Ａはバリル、イソロイシル、アロ−イソロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル、２−エチルグリシル、ノルロイシル又はノルバリル残基である；
ＢはＮ−メチル−バリル、Ｎ−メチル−ノルバリル、Ｎ−メチル−ロイシル、Ｎ−メチル−イソロイシル、Ｎ−メチル−２−ｔ−ブチルグリシル、Ｎ−メチル−２−エチルグリシル、又はＮ−メチル−ノルロイシル残基である；
Ｄはプロリル、ホモプロリル、ヒドロキシプロリル、又はチアゾリジン−４−カルボニル残基である；
Ｅはプロリル、ホモプロリル、ヒドロキシプロリル、チアゾリジン−４−カルボニル、トランス−４−フルオロ−Ｌ−プロリル、シス−４−フルオロ−Ｌ−プロリル、トランス−４−クロロ−Ｌ−プロリル又はシス−４−クロロ−Ｌ−プロリル残基である；
Ｘはエチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、又はシクロペンチルである；
ＧはＬ−２−ｔ−ブチルグリシル、Ｄ−２−ｔ−ブチルグリシル、Ｄ−バリル、Ｄ−イソロイシル、Ｄ−ロイシル、Ｄ−ノルバリル、１−アミノペンチル−１−カルボニル、又は２，２−ジメチルグリシル残基である；
Ｓは０又は１である：
Ｋは−ＮＨ−Ｃ1〜8アルキル、−ＮＨ−Ｃ3〜8アルケニル、−ＮＨ−Ｃ3〜8アルキニル、−ＮＨ−Ｃ6〜8シクロアルキル、−ＮＨ−Ｃ1〜4アルケン−Ｃ3〜8−シクロアルキル、
0003939354.tif 000003
前記の残基中において１つのＣＨ2基が０又はＳによって、１つのＨがフェニル又はシアノ、又は１つ、２つ又は３つのＨがＦによって置換されていてもよい、ただしＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−ベンジルアミノ、又はＮ−メチル−Ｎ−ベンジルアミノ残基は省く、又はＫは
0003939354.tif 000004
である］の化合物は式Ｉの新規ペプチド及びこれらの生理学的に認容性の酸との塩を含む。
特にＫは：
0003939354.tif 000005
又は前記の特定の環系であってもよい。
置換基Ｒ1、Ｒ2、Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｘ、Ｇ及びＳが次の意味を有する式Ｉの化合物が有利である：
［Ｒ1は水素、メチル、又はエチルであり、特にメチルである；
Ｒ2はメチル又はエチルであり、特にメチルである；
Ａはバリル、イソロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル、２−エチルグリシル、ノルロイシル又はノルバリルであり、特にバリル、イソロイシル、２−ｔ−ブチルグリシル、２−エチルグリシルである、
ＢはＮ−メチル−バリル、Ｎ−メチル−ノルバリル、Ｎ−メチル−イソロイシル、Ｎ−メチル−２−ｔ−ブチルグリシル、Ｎ−メチル−２−エチルグリシル又はＮ−メチル−ノルロイシルであり、特にＮ−メチル−バリル、Ｎ−メチル−２−エチルグリシル、Ｎ−メチル−ノルロイシル、Ｎ−メチル−イソロイシル、又はＮ−メチル−２−ｔ−ブチル−グリシルである；
Ｄはプロリル、ホモプロリル又はチアゾリジン−４−カルボニルであり、特にプロリル又はチアゾリジン−４−カルボニルである；
Ｅはプロリル、ホモプロリル、チアゾリジン−４−カルボニル、トランス−４−フルオロ−Ｌ−プロリル、シス−４−フルオロ−Ｌ−プロリル、トランス−４−クロロ−Ｌ−プロリル又はシス−４−クロロ−Ｌ−プロリルであり、特にプロリル、トランス−４−フルオロ−プロリル、シス−４−フルオロ−プロリル、トランス−４−クロロ−プロリル又はシス−４−クロロ−プロリルである；
Ｘはエチル、プロピル、イソプロピル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル又はシクロプロピルであり特にエチル、イソプロピル、ｓ−ブチル又はｔ−ブチルである；
ＧはＬ−２−ｔ−ブチルグリシル、Ｄ−２−ｔ−ブチルグリシル、Ｄ−バリル、Ｄ−イソロイシル、Ｄ−ロイシル又は２，２−ジメチルグリシル残基である；
Ｓは０又は１である］。
Ｋは次の場合に有利である：
−ＮＨ−Ｃ1〜8アルキル、−ＮＨ−Ｃ6〜8シクロアルキル、−ＮＨ−ＣＨ2−シクロヘキシル、
0003939354.tif 000006
前記の残基中において１つのＣＨ2基がＯによって、１つのＨがフェニルによって、もしくは１つ又は２つのＨがＦによって置換されていてもよい、ただしＮ−メトキシ−Ｎ−メチルアミノ、Ｎ−ベンジルアミノ、又はＮ−メチル−Ｎ−ベンジルアミノ残基は省く、又はＫは
0003939354.tif 000007
である。
更に有利なＫは、
0003939354.tif 000008
である。
特に式Ｉ
［式中、Ｒ1及びＲ2はメチルであり、
Ａはバリル、イソロイシル、又は２−ｔ−ブチルグリシル残基であり、
ＢはＮ−メチルバリル、Ｎ−メチル−イソロイシル、又はＮ−メチル−２−ｔ−ブチルグリシル残基であり、
Ｄはプロリル、又はチアゾリジン−４−カルボニル残基であり、
Ｅはプロリル、シス−４−フルオロ−Ｌ−プロリル、又はシス−４−クロロ−Ｌ−プロリル残基であり、
Ｘはイソプロピル、ｓ−ブチル、又はｔ−ブチル残基であり、
Ｓは０である、ならびに
Ｋは
0003939354.tif 000009
である］の化合物が有利である。
本発明はまた、式Ｉの化合物の製造方法、このような化合物を製薬学的に認容性の担体と共に含有する医薬組成物、及び哺乳動物の癌を治療するために該医薬組成物を使用する方法を提供している。
この新規化合物は生理学的に認容性の酸、例えば塩酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、リン酸、メタンスルホン酸、酢酸、ギ酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、コハク酸、マロン酸、硫酸、Ｌ−グルタミン酸、Ｌ−アスパラギン酸、ピルビン酸、粘液酸、安息香酸、グルクロン酸、シュウ酸、アスコルビン酸、及びアセチルグリシンとの塩として存在してもよい。
新規化合物はペプチド化学の公知の方法により製造することができる。従って、このペプチドはアミノ酸から連続的に構成することができるし、又は適当な小さなペプチド断片を結合することによって構成することができる。連続的に構成することはＣ末端で開始し、このペプチド鎖は毎回１アミノ酸ずつ段階的に伸張する。断片の結合においては、異なる長さの断片を共に結合することは可能であり、かつこれらの断片は順次アミノ酸からのの連続的な構成により、又はこの断片自体を断片結合により得ることができる。
連続的な構成及び断片結合の両方で、アミド結合を形成することによりこれらの単位を結合することが必要である。酵素的及び化学的な方法はこれに対して適当である。アミド結合を形成するための化学的な方法は、Mueller，Methoden der organischen Chemie Vol．XV/2，pp 1 to 364，Thieme Verlag，Stuttgart，1974；Stewart，Young，Solid Phase Peptide Synthesis，pp 31 to 34，71 to 82，Pierce Chemical Company，Rockford，1984；Bodanszky，Klausner，Ondetti，Peptide Synthesis，pp 85 to 128，John Wiley and Sons，New York，1976；The Practice of Peptide Synthesis，M．Bodanszky，A．Bodanszky，Springer-Verlag，1994，及びペプチド化学の他の標準的な研究で詳細に記載されている。特に有利であるのはアジド法、対称無水物法及び混合無水物法（The symmetric and mixed anhydride method）、その場で生成するか、又は前もって形成された活性エステル、ウレタンで保護したアミノ酸のＮ−カルボン酸無水物の使用、及び結合試薬を使用することによるアミド結合の形成、特にジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）、ピバロイルクロリド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣＩ）、ｎ−プロパンリン酸無水物（ＰＰＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス（２−オキソ−３−オキサゾロジニル）−アミドホスホリルクロリド（ＢＯＰ−Ｃ１）、ブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスホン酸塩（ＰｙＢｒｏｐ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）、カストロ試薬（Castro' s reagent；ＢＯＰ、ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−ベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム塩（ＨＢＴＵ）、Ｏ−アザベンゾトリアゾリル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム塩（ＨＡＴＵ）、ジエチルホスホリルシアン化物（ＤＥＰＣＮ）、２，５−ジフェニル−２，３−ジヒドロ−３−オキソ−４−ヒドロキシチオフェンジオキシド（ステグリヒ試薬；ＨＯＴＤＯ）、及び１，１’−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）を使用する。この結合試薬は単独で、又は添加物、例えばＮ，Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン（ＤＭＡＰ）、Ｎ−ヒドロキシ−ベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアジン（ＨＯＯＢｔ）、アザベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）又は２−ヒドロキシピリジンとの組合せで使用することができる。
ところが通常は、酵素によるペプチド合成では保護基なしですますことが可能であるのに対して、アミド結合の形成に関与しない反応基の可逆的な保護は、化学合成中の両方の反応物に対して必要である。以下の３つの従来の保護基の技術は化学的なペプチド合成にとって有利である：ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）技術、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）技術及び９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）技術。
それぞれの場合で同じなのは、鎖伸張単位のα−アミノ基における保護基である。アミノ酸保護基の詳細な概要はMueller，Methoden der organischen Chemie Vol．XV/1，pp 20 to 906，Thieme Verlag，Stuttgart，1974に記載されている。ペプチド鎖を構成するために使用される単位は溶解状態、懸濁状態で、又はMerrifieldによりJ．Amer．Chem．Soc．85（1963）2149に記載されたものと似た方法によって反応させることができる。
溶液状態でのペプチド合成に適当なのは、この反応条件下で不活性である全ての溶媒、特に水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、エチルアセテート、１，４−ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、Ｎ−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）及びこれらの溶媒の混合物である。
ポリマー担体でのペプチド合成は、使用するアミノ酸誘導体が可溶である全ての不活性な有機溶媒中で実施することができる。しかしながら、溶媒は更に樹脂を膨潤させる特性を有しているものが有利である、例えばＤＭＦ、ＤＣＭ、ＮＭＰ、アセトニトリル及びＤＭＳＯ、ならびにこれらの溶媒の混合物である。合成が完了した後、このペプチドをポリマー担体から切り離す。多様な樹脂の型から切り離すことの条件は文献に記載されている。最も普通に使用される開裂反応は、酸及びパラジウムで触媒される、特に液体無水フッ化水素、無水トリフルオロメタンスルホン酸、希釈又は濃トリフルオロ酢酸溶液中での開裂、弱塩基、例えばモルホリン存在下での、ＴＨＦ又はＴＨＦ−ＤＣＭ中でのパラジウムで触媒される開裂、又は酢酸／ジクロロメタン／トリフルオロエタノール混合物中での開裂である。選択された保護基により、この保護基は開裂条件下で結合が維持する場合、又は切り離される場合もある。
一定の誘導体化反応を実施すべき場合、このペプチドの部分的な脱保護は行う価値があるであろう。
Ｎ末端でジアルキル化されたペプチドは溶液中で適当なＮ，Ｎ−ジ−アルキルアミノ酸に、又はポリマー担体上に結合することにより、ＮａＣＮＢＨ3及び適当なアルデヒドと共にＤＭＦ／酢酸１％中で樹脂結合ペプチドの還元的アルキル化によって、アルデヒド又はケトン及びＰｄ／Ｃ存在下の溶液中でのペプチドの水素化によって製造することができる。
ここに示された非アミノ酸部と同様に種々の非天然性のアミノ酸は市販されているものから得てもよく、又この技術において公知の方法を使用して市販の材料から合成してもよい。例えば、Ｒ1及びＲ2部を有するアミノ酸の構成単位はフーベン・ヴァイル（E．Wuensch，Houben Weyl，Meth．d．Org．Chemie，Bd．XV，1，p．306以降，Thieme Verlag Stuttgart，1974）及びその中にある文献により製造することができる。
本発明の化合物は、固形腫瘍（例えば肺、乳房、結腸、前立腺、膀胱、直腸、又は子宮内膜の腫瘍）又は血液学的な悪性腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫）は、この化合物を哺乳動物に投与することにより抑制するため、又は他の方法で治療するために使用される。
この新規化合物は酵素分解に対して非常に抵抗性があり、かつ経口で投与することができることも特に有利である。
投与は医薬的、有利に腫瘍学的な作用剤に慣例的な任意の手段であってよく、経口及び非経口の手段、例えば皮下、静脈内、筋肉内、及び腹腔内を含むいずれかによるものでもよい。
この化合物は単独に投与してもよく、又は式Ｉの化合物と要求される投与経路に適当な製薬的に許容される担体を共に含有する医薬組成物として投与されてもよい。このような医薬組成物は組合せ製剤であってよく、すなわち他の治療学上の活性物質を含有してもよい。
哺乳動物への投与用量は、効果的に腫瘍を抑える活性成分の量を含有する、この量は使用される特別な化合物の生物学的活性、投与方法、年齢、患者の健康状態及び体重、症状の状態及び程度、治療の回数、他の治療の適用、及び要求される効果を含む慣例的な要素に依存する。典型的な１日の投与用量は経口投与で体重１キログラムに対して０．０５〜５０ミリグラム、非経口投与では体重１キログラムに対して０．０１〜２０ミリグラムである。
新規化合物は、慣例的な固形又は液状の薬剤投与形状、例えば被覆した又は被覆していないタブレット錠、カプセル、粉末、顆粒、坐剤又は液状で投与することができる。これらは慣例的な手段で製造される。この目的のために、この活性物質は慣例的な医薬助剤、例えば錠剤結合剤、増量剤、防腐剤、錠剤分解物質、流動調節剤、可塑剤、湿潤剤、分散剤、乳化剤、溶媒、放出持続剤、酸化防止剤及び／又は噴射ガスと共に加工することができる（H．Sucker et al．：Phamazeutische Technologie，Thieme-Verlag，Stuttgart，1978参照）。このこのようにして得られた投与剤形は通常、活性物質１〜９０重量％を含有している。
次の実施例は本発明を説明するためのものである。タンパク質を生ずるアミノ酸は公知の３文字の記号を使用することで、実施例において省略されている。他の使用した省略は：Ｍｅ2ＶａｌはＮ，Ｎ−ジメチルバリン、ＭｅＶａｌはＮ，Ｎ−メチルバリンである。
Ａ．一般的な方法
Ｉ．請求項１記載のペプチドは、上記の標準的Ｚ−法及びＢｏｃ−法を使用する古典的な溶液合成によって、又はＢｏｃ保護基及びＦｍｏｃ保護基の技術を使用する標準的固相合成法によってのいずれかで合成される。
固相合成の場合、Ｎ，Ｎ−ジアルキルペンタペプチド酸又はＮ，Ｎ−ジアルキルヘキサペプチド酸は溶液中で固形担体から遊離し、かつ対応するＣ末端アミンと更に結合する。ＢＯＰ−Ｃｌ及びＰｙＢｒｏｐを、Ｎ−メチルアミノ酸の次のアミノ酸の結合に対する試薬として使用した。この反応時間は相応して増加させた。Ｎ末端の還元的アルキル化のために、このペプチド樹脂をＮ末端で脱保護し、かつその後ＮａＣＮＢＨ3の３当量を添加してＤＭＦ／１％酢酸中で３倍モル過剰量のアルデヒド又はケトンと反応させた。この反応が完了した後（カイゼルテスト：陰性［Negative Kaisertest］）、この樹脂を水、イソプロパノール、ＤＭＦ及びジクロロメタンで数回洗浄した。
溶液合成において、Ｂｏｃで保護されたアミノ酸ＮＣＡｓ（Ｎ−ｔ−ブチルオキシカルボニル−アミノ酸−Ｎ−カルボン酸無水物）、Ｚ−保護したアミノ酸ＮＣＡｓ（Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−アミノ酸−Ｎ−カルボン酸無水物）のいずれかの使用、又は結合試薬としてのピバロイルクロリドの使用はＮ−メチルアミノ酸の次のアミノ酸の結合に対して最も有利である。Ｎ末端の還元的なアルキル化は、例えばＮ末端の脱保護ペプチド又はアミノ酸を、対応するアルデヒド又はケトンとをＮａＣＮＢＨ3又は水素、Ｐｄ／Ｃを使用して反応させることにより、達成することができる。
ＩＩ．このペプチドの製造及び特性。
製造はゲルクロマトグラフィー（SEPHADEX G-10，G-15/10% HOAc，SEPHADEX LH20/MeOH）、中圧クロマトグラフィー（固定層：HD-SIL C-18、２０〜４５ミクロン、１００Å；移動層：Ａ＝０．１％ＴＦＡ／ＭｅＯＨ、Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／水での勾配）、又は分取ＨＰＬＣ（固定層：水Delta-Pak C-18、１５ミクロン、１００Å；移動層：Ａ＝０．１％ＴＦＡ／ＭｅＯＨ、Ｂ＝０．１％ＴＦＡ／水での勾配）によって実施された。
生じた生成物の純度は分析ＨＰＬＣ（固定層：100 2.1mm VYDAC C-18、51，300Å；移動層：４０℃，０．１％のＴＦＡによって緩衝したアセトニトリル−水勾配）で測定された。
特性はアミノ酸分析及び高速原子衝撃質量分析去（fast atom bombardment mass spectroscopy）による。
Ｂ．特定の手順。
実施例１（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）
0003939354.tif 000010
ａ）
0003939354.tif 000011
Ｚ−ＭｅＶａｌ−ＯＨ６６．２５ｇ（２５０ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン中で溶解した。トリエチルアミン３６．４１ｍｌ（２６２．５ｍｍｏｌ）の添加後、この反応混合物を−２５℃に冷却し、かつピバロイルクロリド３２．２７ｍｌ（２６２．５ｍｍｏｌ）を添加した。Ｈ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ×ＨＣｌ４１．８９ｇ（２５０ｍｍｏｌ）をジクロロメタン２５０ｍｌ中で２．５時間撹拌し、０℃でトリエチルアミン３６．４１ｍｌ（２６２．５ｍｍｏｌ）で中和した後、反応混合物に添加した。撹拌を−２５℃で２時間、かつ室温で一夜続けた。この反応混合物をジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で徹底的に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。この残分（９１．２４ｇ）を石油エーテルと一夜撹拌し、かつ濾過した。生成物６２・３ｇが得られた。
ｂ）
0003939354.tif 000012
Ｚ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ４８．９ｇ（１３０ｍｍｏｌ）をメタノール４９０ｍｌ中に溶解した。濃塩酸１０．９ｍｌ（１３０ｍｍｏｌ）及び１０％パラジウム／木炭２．４３ｇを添加後、この反応混合物を水素化した。濾過及び蒸発乾固はこの生成物３６．４３ｇをもたらした。
ｃ）
0003939354.tif 000013
Ｈ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ１８．１ｇ（６５ｍｍｏｌ）、Ｚ−Ｖａｌ−Ｎ−カルボン酸無水物２１．６ｇ（７８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン２２．８ｍｌ（１３０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１１０ｍｌ中で４０℃で、２時間撹拌した。ＤＭＦの蒸発後、ジクロロメタンを添加し、かつ有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。この有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。この生成物（２９．３ｇ）は粘性のオイルとして得られた。
ｄ）
0003939354.tif 000014
Ｚ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ２９．３ｇ（６１．６ｍｍｏｌ）をメタノール２３０ｍｌ中に溶解した。１０％パラジウム／木炭を１．１５ｇ添加後、この反応混合物を水素化した。濾過及び蒸発乾固はこの生成物２１．９６ｇをもたらした。
ｅ）
0003939354.tif 000015
Ｚ−Ｖａｌ−ＯＨ１５．２９ｇ（６１ｍｍｏｌ）とＨ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ２１．９６ｇ（６１ｍｍｏｌ）をジクロロメタン６１０ｍｌ中に溶解し、０℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン８．１６ｍｌ（７３．２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ２．７７ｇ（２０．３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ１１．７４ｇ（６１ｍｍｏｌ）の添加後、この反応混合物を室温で一夜撹拌し、ジクロロメタンで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で徹底的に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固することにより、生成物３１．９６ｇが得られた。
ｆ）
0003939354.tif 000016
Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＭｅ３１．９６ｇ（５７ｍｍｏｌ）をメタノール２５０ｍｌ中に溶解した。１ＮのＬｉＯＨ溶液１０２．６ｍｌを添加し、この混合物を室温で一夜撹拌した。水５００ｍｌ添加後、水相を酢酸エチルで３回洗浄し、０℃でｐＨ２に調節し、かつ酢酸エチルで３回抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固することにより、要求される生成物３０．６２ｇが白い固体物質として得られた。
ｇ）
0003939354.tif 000017
Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ２ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）とＨ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2０．６６４ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン３４ｍｌ中に溶解した。０℃に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリン１．３５ｍｌ（１２．１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ０．１１４ｇ（０．８４ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ０．６４５ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）を添加し、かつこの反応混合物を室温で一夜撹拌した。ジクロロメタン８０ｍｌを添加し、かつ有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液で徹底的に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固することにより、生成物１．９６ｇが得られた、これを次の反応に更なる精製なしに使用した。
ｈ）
0003939354.tif 000018
Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ（ＣＨ3）2１．９６ｇをメタノール１１ｍｌ中に溶解し。１０％Ｐｄ／Ｃ０．０５４ｇを窒素雰囲気下に添加し、かつこの反応混合物を室温で４時間水素化した。３７％ホルムアルデヒド水溶液０．８６ｍｌ（１１．２４ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ０．２８１ｇの添加後、水素化を５時間続けた。濾過及び溶媒の蒸発は粗生成物２．７７ｇをもたらした。更なる製造は水の中にペプチドを溶解し、ｐＨを２に調節し、かつ酢酸エチルで水相を３回抽出することで達成された。次いで水相をｐＨ８〜９に調節し、かつジクロロメタンで４回抽出した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥することにより、要求される製造生成物１．３７ｇが白いフォームとして得られた。この化合物を中圧液体クロマトグラフィー（１０〜５０％Ａ１０分間；５０〜９０％Ａ３２０分間）を使用して更に製造した。この生成物を含む分画を一緒にし、凍結乾燥し、水に再溶解し、かつ１ＮのＬｉＯＨでｐＨを９に調節した。ジクロロメタンで抽出した後、この有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。凍結乾燥は純生成物５００ｍｇをもたらし、これを高速原子衝撃質量分析法（fast atom bombardment mass spectroscopy）によって特徴付けた（［Ｍ＋Ｈ］＋＝５９３）。
実施例２（ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１）
0003939354.tif 000019
ｉ）
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Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−ＯＨ２ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）とＨ−Ｐｒｏ−ＮＨＣ（ＣＨ3）3０．６９２ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）を乾燥ジクロロメタン３４ｍｌ中に溶解した。０℃に冷却した後、Ｎ−メチルモルホリン１．３５ｍｌ（１２．１ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ０．１１４ｇ（０．８４ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ０．６４５ｇ（３．３５ｍｍｏｌ）を添加し、かつこの反応混合物を室温で一夜撹拌した。ジクロロメタン８０ｍｌを添加し、かつ有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水溶液（３×）、水（１×）、５％クエン酸（３×）及び飽和ＮａＣｌ溶液（１×）で徹底的に洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固することにより、生成物１．８ｇが得られた、これを次の反応に更なる精製なしに使用した。
Ｋ）
0003939354.tif 000021
Ｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＭｅＶａｌ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−ＮＨＣ（ＣＨ3）3１．８ｇをメタノール１０ｍｌ中に溶解した。１０％Ｐｄ／Ｃ０．０４９ｇを窒素雰囲気下に添加し、かつこの反応混合物を４時間、室温で水素化した。３７％ホルムアルデヒド水溶液０．８６ｍｌ（１１．２４ｍｍｏｌ）及び１０％Ｐｄ／Ｃ０．２５２ｇの添加後、水素化を５時間続けた。濾過及び溶媒の蒸発乾固は粗生成物１．８２ｇをもたらした。この化合物を中圧液体クロマトグラフィー（１０〜５０％Ａ１０分間；５０〜９０％Ａ３２０分間）を使用して更に製造した。この生成物を含む分画を一緒にし、凍結乾燥し、水に再溶解し、かつ１ＮのＬｉＯＨでｐＨを９に調節した。ジクロロメタンで抽出した後、この有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固した。凍結乾燥は純生成物５４７ｍｇをもたらす、これを高速原子衝撃質量分析法（fast atom bombardment mass spectroscopy）によって特徴付けた（［Ｍ＋Ｈ］＋＝６０７）。
次の化合物を実施例１及び２により製造したか、又は製造することができる：
0003939354.tif 000022
0003939354.tif 000023
0003939354.tif 000024
0003939354.tif 000025
合成された新規化合物の質量分析法特性の例を次の表に示す。
0003939354.tif 000026
0003939354.tif 000027
0003939354.tif 000028
0003939354.tif 000029
略語Ｘａａは次の意味を有する：
0003939354.tif 000030
0003939354.tif 000031
0003939354.tif 000032
0003939354.tif 000033
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0003939354.tif 000035
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0003939354.tif 000039
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本発明の化合物は、例として下記の方法を含む慣例的な方法により抗癌活性を効力検定できる。
Ａ．試験管内の方法
細胞毒性は粘着細胞系に対する標準的な方法、例えばミクロ培養テトラゾリウム検定（ＭＴＴ）を使用して測定した。この検定の詳細は（Alley，MC et al，Cancer Research 48：589-601，1988）で公表されている。指数関数的に増殖している培養腫瘍細胞、例えばＨＴ−２９結腸癌腫又はＬＸ−１肺腫瘍をマイクロタイタープレート培養をメイクするために使用した。この細胞を９６個のくぼみを有するプレートに１つのくぼみにつき３０００細胞数をまき、３７℃で一夜成長させた。試験化合物を、１０-4Ｍ〜１０-10Ｍの間を変動する１０倍の希釈度で添加する。細胞をその後７２時間インキュベートする。それぞれのくぼみ中で生存能力がある細胞数を測定するために、ＭＴＴ色素を添加する（生理的食塩水中の３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド３ｍｇ／ｍｌの溶液を５０μｌ）。この混合物を３７℃で５時間インキュベートし、かつその後に２５％ＳＤＳ（ｐＨ２）５０μｌをそれぞれのくぼみに添加する。一夜インキュベートした後に、それぞれのくぼみでの５５０ｎｍの吸収をＥＬＩＳＡリーダーを使用して読みとる。写し取ったくぼみからのデータの平均＋／−標準偏差の価を次の式％Ｔ／Ｃ（％処理した生存能力がある細胞／コントロール）を使用して算出する。
0003939354.tif 000049
５０％Ｔ／Ｃの成長の抑制を与える試験化合物の濃度をＩＣ50として表す。
Ｂ．生体内での方法。
本発明の化合物を更に、臨床上の有用性を指示する生体内活性に対する予備的な臨床的検定に関してテストした。この検定はヌードマウスを使用し、このヌードマウスに腫瘍組織、有利にヒト由来の組織をこの分野において公知の方法で移植（Xenografted）することにより実施した。試験化合物をこの移植マウスへの投与により抗腫瘍効果に関して評価した。
より特に、無胸腺症のヌードマウス中で成長したヒトの乳房腫瘍（ＭＸ−１）を大きさにおいて約５０ｍｇの腫瘍断片を使用し新規の受容マウスに移植した。移植当日を０日として表した。６〜１０日後、マウスを静脈注射又は経口で与えられた試験化合物で、５〜１０匹のマウスのグループにそれぞれの用量で治療をした。化合物を、体重に対して１〜２００ｍｇ／ｋｇの用量で隔日で３週間にわたり与えた。
腫瘍の直径及び体重を１週間に２回測定した。腫瘍の体積をバーニヤ測径器（Vernier calipers）で測定した直径、及び次の式：
0003939354.tif 000050
を使用し算出した。
平均の腫瘍体積をそれぞれの治療グループに関して算出し、かつＴ／Ｃ値を未治療のコントロールの腫瘍に関連させてそれぞれのグループに関して測定した。
新規化合物は良好な腫瘍抑制の特性を有する。
【配列表】
（１）書誌的事項：
（ｉ）出願人：
（Ａ）名称：BASF Aktiengesellschaft
（Ｂ）町：Carl-Bosch-Strassse 38
（Ｃ）都市：Ludwigshafen
（Ｅ）国：Bundesrepublik Deutschland
（Ｆ）郵便番号：D-67056
（Ｇ）電話番号：0621/6048526
（Ｈ）ファックス番号：0621/6043123
（Ｉ）テレックス：1762175170
（ｉｉ）発明の名称：新規ペプチド、この製造方法及び使用。
（ｉｉｉ）配列の数：４
（ｉｖ）記録方式：
（Ａ）媒体の種類：ディスケット、３．５インチ、２ＤＤ
（Ｂ）コンピューター：IBM AT-compatible，80286 processor
（Ｃ）オペレーティングシステム：MS-DOS version 5.0
（Ｄ）ソフトウェア：WordPerfect
（２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１に関する情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）長さ：５アミノ酸
（Ｂ）型：アミノ酸
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ｉｉ）分子の型：ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：１：Ｘａａ  Ｖａｌ  Ｘａａ  Ｐｒｏ  Ｘａａ
（２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２に関する情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）長さ：６アミノ酸
（Ｂ）型：アミノ酸
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ｉｉ）分子の型：ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：２
Ｘａａ  Ｖａｌ  Ｘａａ  Ｐｒｏ  Ｐｒｏ  Ｘａａ
（２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３に関する情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）長さ：５アミノ酸
（Ｂ）型：アミノ酸
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ｉｉ）分子の型：ペプチド
（ｘｉ）配列の記載：ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：３
Ｘａａ  Ｘａａ  Ｘａａ  Ｐｒｏ  Ｘａａ
（２）ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４に関する情報：
（ｉ）配列の特徴：
（Ａ）長さ：５アミノ酸
（Ｂ）型：アミノ酸
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ｉｉ）分子の型：ペプチド
（ｘｉ）配列の記載；ＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ：４
Ｘａａ  Ｉｌｅ  Ｘａａ  Ｐｒｏ  Ｘａａ