(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
試料の表面から蛋白質を移し取る検出媒体と蛋白質と反応し変色する試薬液から構成される蛋白質検出キットにおいて、
支持体上に、検出媒体を収納する検出媒体収納部と試薬液を収納する試薬液収納部とを分けて作製した可撓性部材をヒートシールにより貼り付けてなり、
前記検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分は前記支持体の外縁部より弱いヒートシールを施してなることを特徴とする蛋白質検出キット。
【請求項２】
前記検出媒体が合成ポリマー繊維であり、試薬液中の試薬が蛋白誤差指示薬であることを特徴とする請求項１に記載の蛋白質検出キット。
【請求項３】
前記検出媒体によって移し取った蛋白質を検出媒体上で前記試薬液と接触させ、検出媒体上の変色の度合により前記試料の表面に付着した蛋白質の量を検出することを特徴とする請求項１に記載の蛋白質検出キット。
【請求項４】
前記検出媒体が予め水またはアルコール水によって含浸されていることを特徴とする請求項１または２に記載の蛋白質検出キット。
【請求項５】
前記試薬液が１種類の液からなることを特徴とする請求項１から４の何れか１項に記載の蛋白質検出キット。
【請求項６】
支持体上に、検出媒体を収納する検出媒体収納部と試薬液を収納する試薬液収納部とを分けて作製した可撓性部材をヒートシールにより貼り付けてなり、前記検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分は前記支持体の外縁部より弱いヒートシールを施した蛋白質検出キットを用い、
支持体の外縁部に形成した開口部からヒートシールを剥がして、検出媒体収納部に収納された検出媒体を取り出し、該検出媒体で試料表面を拭った後に、該検出媒体を前記検出媒体収納部に再度収納し、該検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分の弱いヒートシールをとって、手に試薬液を触れることなく、前記試薬液収納部内の試薬液を前記検出媒体と接触させて蛋白質の量を検出しうることを特徴とする蛋白質の検出方法。
【請求項７】
前記試薬液が１種類の液からなることを特徴とする請求項６に記載の蛋白質の検出方法。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は蛋白質検出キット及び蛋白質の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明は汚れ検査（Ｈｙｇｉｅｎｅ  Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ）に属する。衛生管理、特に食品衛生管理における汚れの主成分は蛋白質であり、蛋白質を迅速簡便に汚れ測定できるキットが求められてきた。特開平８−２１８３７号および特開平９−５３３０号において試料表面から検出媒体に移し取った蛋白質の検出方法及び蛋白質検出キットが提案され、「フキトリマスター」という商品名で市販されている。しかし、測定時の試薬調製、操作性、検出感度に難点があり、衛生管理現場で使う上で問題があった。また、反応に時間を要し迅速さにも問題があった。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、上記問題を鑑みなされたもので、衛生管理現場で使う上で操作性が優れ簡便で問題がなく、迅速で、かつ検出感度に優れた蛋白質検出キット及び蛋白質の検出方法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明の上記課題は以下の構成により達成される。
【０００５】
１．試料の表面から蛋白質を移し取る検出媒体と蛋白質と反応し変色する試薬液から構成される蛋白質検出キットにおいて、
支持体上に、検出媒体を収納する検出媒体収納部と試薬液を収納する試薬液収納部とを分けて作製した可撓性部材をヒートシールにより貼り付けてなり、
前記検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分は前記支持体の外縁部より弱いヒートシールを施してなることを特徴とする蛋白質検出キット。
【０００６】
２．前記検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分は前記支持体の外縁部より弱いヒートシールを施してなることを特徴とする蛋白質検出キット。
【０００７】
３．前記検出媒体によって移し取った蛋白質を検出媒体上で前記試薬液と接触させ、検出媒体上の変色の度合により前記試料の表面に付着した蛋白質の量を検出することを特徴とする請求項１に記載の蛋白質検出キット。
【０００８】
４．前記検出媒体が予め水またはアルコール水によって含浸されていることを特徴とする請求項１または２に記載の蛋白質検出キット。
【０００９】
５．前記試薬液が１種類の液からなることを特徴とする前記１〜４の何れか１項に記載の蛋白質検出キット。
【００１０】
６．支持体上に、検出媒体を収納する検出媒体収納部と試薬液を収納する試薬液収納部とを分けて作製した可撓性部材をヒートシールにより貼り付けてなり、前記検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分は前記支持体の外縁部より弱いヒートシールを施した蛋白質検出キットを用い、
支持体の外縁部に形成した開口部からヒートシールを剥がして、検出媒体収納部に収納された検出媒体を取り出し、該検出媒体で試料表面を拭った後に、該検出媒体を前記検出媒体収納部に再度収納し、該検出媒体収納部と試薬液収納部との境界部分の弱いヒートシールをとって、手に試薬液を触れることなく、前記試薬液収納部内の試薬液を前記検出媒体と接触させて蛋白質の量を検出しうることを特徴とする蛋白質の検出方法。
【００１１】
７．前記試薬液が１種類の液からなることを特徴とする前記６に記載の蛋白質の検出方法。
【００１２】
以下、本発明を更に詳細に説明する。
【００１３】
本発明の蛋白質検出キットの一例を示す概略図である図２に基づき、本発明を以下に説明する。
【００１４】
図１に応用例として示した蛋白質検出キットは、検出媒体１を収納した容器３および試薬液２を含有する点眼瓶容器４から構成される。
【００１５】
図２に示した蛋白質検出キットは、支持体となる可撓性部材５の上に、別の可撓性部材６により検出媒体収納部８と試薬液収納部９を分けて作製し、且つ空間を作り各々を収納して支持体に貼りつけたものである。例えば検出媒体１と試薬液２はヒートシールされた検出媒体収納部８と試薬液収納部９中に分離され収納されている。検出媒体収納部８と試薬液収納部９の境界部分は支持体の外縁部より弱いヒートシールが施されている。
【００１６】
図２（ａ）中の開口部７から、ヒートシールを剥がし、検出媒体１を取り出して該検出媒体で試料表面を拭った後、再度、検出媒体収納部に収納し、検出媒体収納部と試料収納部の弱いヒートシールをとれば、試薬液が検出媒体と接触し、手に試薬液を触れることがなく、検出媒体検出部表面１１の蛋白質と反応し、蛋白質の量を検出することができる。
【００１７】
本発明の包装形態である容器は可撓性部材のプラスチックフィルムから形成される。具体的にはポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、塩化ビニリデン、酢酸セルロース等が挙げられる。ヒートシールし易い表面加工を施すこともできる。
【００１８】
検出媒体収納部と試薬液収納部の境界部分は弱いヒートシールをすることが好ましく、このことは、該境界部分に接着性の悪い材料で表面加工したフィルムを使用したり、境界部分の周辺より低温度で溶着することにより達成することができる。
【００１９】
本発明の検出媒体とは試料の表面の蛋白質を移しとれる媒体であり、例えば検出部分と軸とからなる例えば綿棒状のもの、検出媒体全体が同一素材のスティック状のもの、先端にパットを貼りつけた験紙状のものが挙げられる。
【００２０】
材質は親水性の合成ポリマーが好ましく、例えば、アセテート、アクリル、ポリエステル、ポリウレタン等の綿糸を圧縮しフィルター状にしたもの、これら不織布を圧縮したもの等が使用される。
【００２１】
スティック状のものでは、表面上の蛋白質を移し取り易いように検出媒体の先端を斜めにカットすることもできる。また、周囲をフィルムで巻き、ハンドリングによるコンタミを防止することもできる。
【００２２】
上記材質の検出媒体は移し取った蛋白質を保持し、また試薬と反応させた後の残った試薬液をよく吸収するため、反応後の変色が明瞭である。検出媒体は試料表面の蛋白質を効率よく移し取れるように予め水または水アルコールで湿らせておくこともできる。
【００２３】
本発明の試薬液中の試薬は蛋白質に反応し変色する試薬の中でもいわゆる蛋白質誤差指示薬を用いる。具体的には、例えばテトラブロモフェノールブルー（ＴＢＰＢ）、テトラブロモフェノールフタレーン、５′，５″−ジニトロ−３′，３″−ジヨード−３，４，５，６−テトラブロモフェノールスルフォフタレーン（ＤＩＤＮＴＢ）、クマシーブリリアントブルー、ファーストグリーンＦＣＦ、ライトグリーンＳＦ等が挙げられる。これら蛋白質誤差指示薬は尿中の蛋白検出試薬として公知である。（ＵＳＰ−４，０１３，４１６号等に記載）
試薬液の溶剤は試薬が水に不溶なため、有機溶剤が部分的に使用される。例えばアセトン、エチルアルコール、メチルセルソルブ等の含有率が１０〜１００％水溶液として使用されることが好ましい。
【００２４】
試薬液中の試薬濃度は０．０１％〜０．１％の範囲で使用されることが好ましい。試薬は夫々異なったｐＨ領域で変色するため、試薬液は変色域より低いｐＨ領域、通常ｐＨ６以下、好ましくはｐＨ３以下で使用されるが、低ｐＨを保つために塩酸、酢酸、クエン酸等の酸性薬剤が溶剤中に含まれていてもよい。
【００２５】
以下に図１に示した蛋白質検出キットの具体例の使用方法について述べる。
【００２６】
１．検出媒体１を１本引き出す。
【００２７】
２．試料表面（約５ｃｍ四方）を検出媒体１の検出媒体検出部表面で拭き取る。この際に試料表面が乾燥している場合には、水やアルコールで試料表面または検出媒体検出部表面１１を湿らすことが好ましい。
【００２８】
３．検出媒体１の検出媒体検出部表面１１上に点眼瓶容器４中の試薬液２を１滴落す。
【００２９】
４．検出媒体検出部表面１１の濃度を色見本１２と比較する（図３に示す。）
表面濃度計により検出媒体検出部表面１１の濃度測定をすることもできる。
【００３０】
【実施例】
以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明の実施態様はこれらに限定されるものではない。
【００３１】
実施例１
１．試薬液調製
テトラブロモフェノールブルー（和光純薬製）１０ｍｇをエタノール５０ｍｌに溶解した後氷酢酸１ｍｌを加え、黄色の試薬液を調整した。この試薬液を点眼瓶容器に入れた。
【００３２】
２．検出媒体の作製
アセテート繊維を原料とする不織布を１５０℃で加熱しつつ圧縮し、長さ１２ｃｍ、外径８ｍｍの棒状に成形した。さらに２０μｍ厚の白色ＰＥＴフィルムで外周を巻き加熱溶着させた。先端部を６０度の角度にカットし長さ９ｃｍの検出媒体を作製した。
【００３３】
３．蛋白質試料の作製
牛血清アルブミン濃度１ｍｇ／ｍｌ水溶液を調整し、よく洗浄されたステンレス板表面に１００μｇ／１００ｃｍ2の割合で塗布乾燥し、蛋白質試料とした。
【００３４】
４．検出測定結果
上記調製した蛋白質試料表面に蒸留水２滴を滴下した後、本発明の検体媒体により、２×２ｃｍの面積を拭き取った。この検体媒体表面に上記調製した試薬液を点眼瓶容器から１滴滴下した。比較対照とした表面を拭き取らない検出媒体では薄黄色に染まったが、上記拭き取った検出媒体では、表面の一部が青色に変色した。即ち、蛋白の存在が検出媒体検出部表面の変色によって検出可能であった。
【００３５】
実施例２
１．試薬液、検出媒体および蛋白質試料は実施例１と同様にして調製した。
【００３６】
２．包装形態容器の作製とアセンブリー
１００μｍ厚のポリプロピレンフィルムを用いて図２に示す蛋白質検出キットの形状に成形し、上記試薬液４００μｌを図２（ｃ）に示す試薬液収納部９に分注し、１ｍｌの１０％エタノールにより予め吸収させた上記検出媒体１本を設置した後、１００μｍ厚のポリプロピレンフィルムを２５０℃で加熱溶着し本発明の一例である図２に示す蛋白質検出キットを作製した。但し、検体媒体収納部と試薬液収納部の境界部分は１８０℃で弱溶着した。
【００３７】
３．比較対照キット
コニカ（株）製「フキトリマスター」（グンゼ産業株式会社より購入）を比較対照キットとした。
【００３８】
４．検出測定結果
上記包装容器から、検出媒体を取り出し、蛋白質試料の２×２ｃｍ及び１０×１０ｃｍの面積を拭き取った。その後、検出媒体を図２示す検出媒体収納部に戻し、試薬液収納部を押圧し試薬液を押し出し、検出媒体表面と試薬液を接触させた。ただちに表面の一部が薄黄色から青色に変色した。
【００３９】
更に、これら変色した試薬媒体表面濃度（６１３ｎｍ）を反射濃度計により測定した。
【００４０】
一方、「フキトリマスター」について取扱説明書に従い、上記調製した蛋白質試料表面をキットに含まれている拭き取り液を使用し、同様に蛋白質試料表面の２×２ｃｍ及び１０×１０ｃｍの面積を拭き取った。取扱説明書に従い、室温で１０分放置した後、溶液の着色をカラースケールにて判定した。また、溶液の吸光度（５６２ｎｍ）を分光計により測定した。結果を以下の表１に示す。
【００４１】
【表１】
0003949306.tif 000002
【００４２】
上記の結果から本発明の蛋白質検出キット及び蛋白質の検出方法は、比較である蛋白質検出キット「フキトリマスター」に比して、短時間で反応が進み、かつ検出感度が高く、衛生管理現場で使用できる操作性を有していることが分かった。
【００４３】
【発明の効果】
本発明による蛋白質検出キット及び蛋白質の検出方法は、衛生管理現場で使う上で操作性が良好で問題がなく、迅速で、かつ検出感度に優れた効果を有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の蛋白質検出キットの一例を示す概略図である。
【図２】本発明の蛋白質検出キットの一例を示す概略図である。
【図３】本発明の蛋白質検出キットの一例を示す概略図である。
【符号の説明】
１  検出媒体
２  試薬液
３  容器
４  点眼瓶容器
５  可撓性部材
６  可撓性部材
７  開口部
８  検出媒体収納部
９  試薬液収納部
１０  ヒートシール
１１  検出媒体検出部表面
１２  色見本
【図１】
0003949306.tif 000003
【図２】
0003949306.tif 000004
【図３】
0003949306.tif 000005