(57)【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式（ＩＩ）〜式（ＶＩＩ）で表されるカフェ酸アミド誘導体の１種以上を含む化粧料用または皮膚外用剤用組成物。
【化１】
0003934937.tif 000009
【請求項２】
請求項１記載の化粧料用組成物を含むことを特徴とする化粧料。
【請求項３】
請求項１記載の皮膚外用剤用組成物を含むことを特徴とする皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は化粧料用または皮膚外用剤用組成物に関し、特にカフェ酸アミド誘導体を主成分とする化粧料用または皮膚外用剤用組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
人の皮膚は生物学的、化学的、あるいは物理的攻撃に常に曝されている。紫外線は皮膚に対する公知の物理的攻撃の例であり、肌の劣化促進や発ガン性要因となる。また、紫外線は肌の劣化に寄与する活性酸素種を発生させる。活性酸素種の発生を防ぐ酸化防止剤は、植物類から抽出されるフェノール系の酸化防止剤等が知られている。
また、酸化防止剤の一部はメラニン色素の生成過程における生化学反応の第一段階を触媒する酵素チロシナーゼの活性を阻害する物質として知られている。
一方、カフェ酸のエステルおよびイミドは、化粧料または医薬組成物として（特開平５−２７１０４８号、特開平６−２２７９６１号、特開平７−１０７３９号）、また、所定の構造を有するカフェ酸アミド誘導体は動脈硬化等の循環器系疾患の予防ならびに治療に有用な医薬として（特開平５−５８９７８号）知られている。また、化粧料組成物または飲食品へ応用できるフェニルプロパノイド類の一つとして、カフェ酸が開示されている（特開２０００−３１９１５４号）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、カフェ酸自身は酵素チロシナーゼ活性を阻害する効果を示さず、特開平５−５８９７８号に示されるカフェ酸アミド誘導体であっても化粧料用または皮膚外用剤用組成物としての効果は未確認であり、酸化防止や酵素チロシナーゼ活性を阻害する効果についても未確認であった。
本発明は、このような問題に対処するためになされたもので、酸化防止や酵素チロシナーゼ活性を阻害する効果に優れる化粧料用または皮膚外用剤用組成物の提供を目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明に係る化粧料または皮膚外用剤に用いられる組成物は、下記式（ＩＩ）〜式（ＶＩＩ）で表されるカフェ酸アミド誘導体の１種以上を含むことを特徴とする。
【化２】
0003934937.tif 000002
【０００６】
本発明に係る化粧料または皮膚外用剤は、上記式（ＩＩ）〜式（ＶＩＩ）で表されるカフェ酸アミド誘導体の１種以上を含むことを特徴とする。
【０００７】
チロシナーゼ活性抑制効果について検討したところ、式（ＩＩ）〜式（ＶＩＩ）で表されるカフェ酸アミド誘導体は、親水性基を有する化合物を用いたカフェ酸誘導体であり、その誘導体がチロシナーゼ活性抑制効果および酸化防止機能に優れていることを見出した。本発明はこのような知見に基づくものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】
本発明に係る式（ＩＩ）〜式（ＶＩＩ）で表されるカフェ酸アミド誘導体は、α−アミノ酸が生体に含まれるアミノ酸であり親水性基を有するので好ましい。
【０００９】
アミノ酸の一例としてセリンを用いた場合のカフェ酸アミド誘導体を式（ＩＩ）〜式（ＶＩ）に示す。 式（ＩＩ）はＮ−カフェオイルセリン、式（ＩＩＩ）はＮ−カフェオイルセリンメチルエステル、式（ＩＶ）はＮ−カフェオイル−Ｏ−アセチルセリンメチルエステル、式（Ｖ）はＮ−カフェオイルセリンアミド、式（ＶＩ）はＮ−カフェオイル−Ｏ−アセチルセリンアミドの例である。
【００１０】
【化３】
0003934937.tif 000003
【００１１】
セリンに代えてリジンを用いた場合のカフェ酸アミド誘導体の一例としてＮ6−カフェオイルリジンを式（ＶＩＩ）に示す。
【化４】
0003934937.tif 000004
【００１２】
カフェ酸アミド誘導体は、カフェ酸のカルボキシル基とアミノ酸のアミノ基との縮合反応で得られる。また、カフェ酸アミド誘導体の合成方法は公知の方法を採用できる。
【００１３】
カフェ酸アミド誘導体は酸化防止や酵素チロシナーゼ活性を阻害する効果に優れているので、美白クリームなどの化粧料または日焼け止めクリームなどの皮膚外用剤の配合剤として使用できる。配合量は、化粧料または皮膚外用剤全体に対して、有効成分を０．００５〜２重量％含有することが好ましい。０．００５重量％未満では美白や日焼け止めなどの効果がなく、２重量％をこえるとそれら効果の向上が望めなくなる。
【００１４】
化粧料または皮膚外用剤として使用する場合は、他の化粧料または皮膚外用剤原料、たとえばスクワラン、ホホバ油等の液状油、ミツロウ、セチルアルコール等の固体油、各種の活性剤、グリセリン、1,3-ブチレングリコール等の保湿剤や各種薬剤等とを添加してさまざまな剤形に調整することができる。たとえばローション、クリーム、乳液、パック等の目的に応じた利用形態とすることができる。
【００１５】
【実施例】
実施例１
セリンを用いたカフェ酸アミド誘導体の例として、Ｎ−カフェオイルセリン（式（ＩＩ））を以下の方法で得た。
576mg(3.2mmol) のカフェ酸、369mg(3.2mmol) のＮ−ヒドロキシスクシンイミドおよび 657mg(3.2mmol) のＮ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドを溶解した 5.0ml のジメチルホルムアミドに、 700mg(3.2mmol) のＯ3−ｔ−プチルセリン−ｔ−ブチルエステルを溶解したジメチルホルムアミド溶液 2.0ml を氷冷下にて加え、0℃にて 1 時間攪拌したのち、反応混合物をろ過し、ろ過固形物を酢酸エチルで洗浄した。集めたろ液を減圧下にて溶媒留去し得られた粗反応油を 5.0ml のピリジンに溶解し、2.0ml の無水酢酸を添加後、室温にて 5 時間攪拌した。反応終了後、減圧下にて溶媒を留去したのち、得られた粗反応油を酢酸エチルに溶解し、ついで、その溶液を飽和炭酸ナトリウム水溶液および水で洗浄した。有機溶媒層は硫酸ナトリウムで乾燥し溶媒留去した。得られた粗反応油はシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し(φ2.5×50cm；30％ 酢酸エチル−ヘキサン)、中間体１を収率64.5％(964mg) で得た。得られた中間体１に 3ml のトリフルオロ酢酸を添加し、室温下 3 時間攪拌したのち、減圧下にてトリフルオロ酢酸を留去した。得られた残査はシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し(φ2.0×30cm； ５％ メタノール−クロロホルム)、中間体２を収率 82.5％(603mg) で得た。得られた中間体２はＮ−カフェオイルセリンのフェノール性水酸基をアセチル化したものである。この中間体２を 3.0ml の 28％ アンモニア水に溶解し、室温にて 2 時間攪拌したのち、溶媒を留去し、残査を 0.1N 塩酸で溶解した。その酸性溶液はＯＤＳカラム (φ0.5×10cm) に付し、水および 10％ メタノール−水を流した。その結果、10％ メタノール−水画分からＮ−カフェオイルセリン（式（ＩＩ））を 88.2％ の収率( 67mg) で得た。
【００１６】
実施例２
Ｎ−カフェオイルセリンメチルエステル（式（ＩＩＩ））を以下の方法で得た。
実施例１で得られた中間体２を 3.0ml のメタノールに溶解した混合液に、一滴の 36N 硫酸を添加後、室温にて 12 時間攪拌した。反応終了後、溶媒を減圧下にて留去し、得られた残査をＯＤＳクロマトグラフィーにて精製し（φ0.5×10cm；水および 50％ メタノール−水）、50％ メタノール−水画分からＮ−カフェオイルセリンメチルエステル（式（ＩＩＩ）） を収率 73.1％(293mg) で得た。
【００１７】
実施例３
Ｎ−カフェオイル−Ｏ−アセチルセリンメチルエステル（式（ＩＶ））を以下の方法で得た。
100mg のＮ−カフェオイルセリンメチルエステル（式（ＩＩＩ））に 1.0ml の無水酢酸および 2.0ml のピリジンを添加し、室温にて 5 時間攪拌した。反応混合物を減圧乾固し、得られた粗反応油をシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し（φ1.0×20cm；50％酢酸エチル−ヘキサン）、中間体３を収率 82.5％(145mg) で得た。得られた中間体３に 4.5ml のメタノ一ル−アセトン(1/3) および 3.0ml の 1 ％炭酸水素ナトリウム水溶液を添加し、室温にて 3 時間攪拌した。反応終了後、溶媒を留去し、得られた残査を 0.1N 塩酸で溶解した。その酸性溶液はＯＤＳカラム (φ0.5×10cm) に付し、水および 50％ メタノール−水を流した。その結果、50％ メタノール−水画分からＮ−カフェオイル−Ｏ−アセチルセリンメチルエステル（式（ＩＶ））を 65.7％ の収率(76mg) で得た。
【００１８】
実施例４
Ｎ−カフェオイルセリンアミド（式（Ｖ））を以下の方法で得た。
Ｎ−カフェオイルセリンメチルエステル（式（ＩＩＩ））を 3.0ml の 28％アンモニア水に溶解し、室温にて 2 時間攪拌したのち溶媒を留去し、残査を 0.1N塩酸で溶解した。その酸性溶液はＯＤＳカラム (φ0.5×10cm) に付し、水および 20％ メタノール−水を流した。その結果、20％ メタノール−水画分からＮ−カフェオイルセリンアミド（式（Ｖ））を 68.6％ の収率 (98mg) で得た。
【００１９】
実施例５
Ｎ−カフェオイル−Ｏ−アセチルセリンアミド（式（ＶＩ））を以下の方法で得た。
Ｎ−カフェオイルセリンアミド（式（Ｖ））を 1.5ml の無水酢酸−ピリジン（1/2）混合溶液にて処理し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにて精製することにより中間体４が得られ、ついで中間体４を 4.5ml のメタノ一ル−アセトン(1/2) および 3.0ml の 1 ％炭酸水素ナトリウム水溶液で処理することにより、Ｎ−カフェオイル−Ｏ−アセチルセリンアミド（式（ＶＩ））を 81.1％の収率 (40mg) で得た。
【００２０】
実施例６
Ｎ6−カフェオイルリジンを以下の方法で得た。
3.0ml のジメチルホルムアミドにＮ2−ｔ−プトキシカルボニルリシン−ｐ−メトキシベンジルエステル（粗反応油）588mg、Ｎ,Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド 206mg(1.0mmol)、およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド 115mg(1.0mmol)を溶解した混合物に、力フェ酸 180mg(1.0mmol)を添加し反応させた。反応終了後、固形物をろ過し、ジメチルホルムアミドを留去したのち、得られた粗反応油に無水酢酸−ピリジン（1/2）混合溶液を添加しアセチル化した。得られたアセチル化物をトリフルオロ酢酸にて処理し、得られた化合物を 28 ％アンモニア水で処理することにより、Ｎ6−カフェオイルリジン(式（ＶＩＩ））を得た。
【００２１】
得られたカフェ酸アミド誘導体を用いてチロシナーゼ活性抑制効果および酸化防止効果を評価した。
チロシナーゼ活性抑制効果は、マッシュルームチロシナーゼ［ＥＣ１．１４．１８．１］活性をＬ−チロシンまたはＬ−ドーパ（Ｌ−ＤＯＰＡ）を用いてドーパクローム法により測定した。
【００２２】
（１）Ｌ−チロシンを用いたドーパクローム法
Ｌ−チロシン(0.5mmol)と、リン酸塩系緩衝液(PH6.8)(10mmol)と、マッシュルームチロシナーゼ(30ユニット)と、供試試料との混合液(1ml)とを 37℃で 10 分間保持した。供試試料は 85.7μmol と 171.4μmol とをそれぞれ準備した。その後、波長 475nm における混合液の吸光度を測定した。チロシナーゼに対する抑制効果を以下の式で求めた。
チロシナーゼ活性抑制効果（％）＝（［Ａ−（Ｂ−Ｃ）］／Ａ）×１００
ここで、Ａ：供試試料を含まない混合液の吸光度
Ｂ：供試試料を含む混合液の吸光度
Ｃ：供試試料の吸光度
をそれぞれ表す。
なお、比較例としてアルブチン、クロロゲン酸、カフェ酸、Ｄ，Ｌ−セリンを供試試料として用いた。結果を表１に示す。
【００２３】
【表１】
0003934937.tif 000005
【００２４】
表１に示すように、各実施例はカフェ酸、セリン単独よりも優れたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。また、実施例２と実施例３は 85.7μmol 濃度においてアルブチンよりも優れたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。
【００２５】
（２）Ｌ−ＤＯＰＡを用いたドーパクローム法
Ｌ−ＤＯＰＡ(0.85mmol)と、リン酸塩系緩衝液(PH6.8)(19mmol)と、マッシュルームチロシナーゼ(30ユニット)と、供試試料との混合液(1ml)を 25℃で 1.75 分間および 2.75 分間保持した。その後、波長 475nm における混合液の吸光度を測定した。チロシナーゼに対する抑制効果を以下の式で求めた。
チロシナーゼ活性抑制効果（％）＝（［Ａ−Ｂ］／Ａ）×１００
ここで、Ａ：供試試料を含まない混合液の 1.75 分後と 2.75 分後の吸光度の差
Ｂ：供試試料を含む混合液の 1.75 分後と 2.75 分後の吸光度の差
をそれぞれ表す。
なお、比較例としてクロロゲン酸、カフェ酸、Ｄ，Ｌ−セリンを供試試料として用いた。結果を表２に示す。
【００２６】
【表２】
0003934937.tif 000006
【００２７】
表２に示すように、各実施例はカフェ酸、セリン単独よりも優れたチロシナーゼ活性抑制効果を示した。また、特に実施例３は優れたチロシナーゼ活性抑制効果を示し、美白化粧料原料として有用であることを示した。
【００２８】
酸化防止効果は、スーパーオキシドアニオン消去能を和光ＳＯＤテストキットを用いたニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）法により、およびヒドロキシラジカル消去能を電子スピン共鳴（ＥＳＲ）法によりそれぞれ測定した。ヒドロキシラジカルはフェントン反応により発生させた。
【００２９】
（１）スーパーオキシドアニオン消去能
キサンチン−ニトロブルーテトラゾリウム溶液(300μl)と、キサンチンオキシダーゼ溶液(300μl)と、試料溶液(30μl)との混合液を 37℃で 20 分間保持した後、69mmol のドデシル硫酸ナトリウム溶液(300μl)を加えた。その後、波長 560nm における混合液の吸光度を測定した。スーパーオキシドアニオン消去能を以下の式で求めた。なお、試料溶液の濃度は、714μM、143μM、71.4μM とした。
スーパーオキシドアニオン消去能（％）＝（［Ａ−Ｂ］／Ａ）×１００
ここで、Ａ：供試試料を含まない混合液におけるキサンチンオキシダーゼ含有と非含有との吸光度の差
Ｂ：供試試料を含む混合液におけるキサンチンオキシダーゼ含有と非含有との吸光度の差
をそれぞれ表す。
なお、比較例としてクロロゲン酸、アルブチン、コウジ酸、Ｄ，Ｌ−セリンを供試試料として用いた。結果を表３に示す。
【００３０】
【表３】
0003934937.tif 000007
【００３１】
表３に示すように、各実施例はカフェ酸、セリン単独よりも優れたスーパーオキシドアニオン消去能を示した。また、これら実施例は天然の抗酸化剤として知られるクロロゲン酸やカフェ酸と同等の消去能を示し、さらに市販の美白剤であるコウジ酸やアルブチンより効果が高かった。したがって、各実施例のカフェ酸アミド誘導体は従来の美白剤にない効果を有する美白化粧料原料として有用であることを示した。
【００３２】
（２）ヒドロキシラジカル消去能
5mmol の硫酸第一鉄と、2.8mmol のジエチレントリアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ''，Ｎ''四酢酸と、0.1mol の 5,5-ジメチル−１−ピロリン−Ｎ−オキサイドと、供試試料とを含む溶液(145μl)に、0.35％過酸化水素溶液 75μl を加えた 40秒後にＥＳＲを測定した。ヒドロキシラジカル消去能を以下の式で求めた。結果を図２に示す。
ヒドロキシラジカル消去能（％）＝（［Ａ−Ｂ］／Ａ）×１００
ここで、Ａ：供試試料を含まない溶液におけるＭｎＯマーカーの標準シグナル強度に対するラジカル高さ
Ｂ：供試試料を含む溶液におけるＭｎＯマーカーの標準シグナル強度に対するラジカル高さ
をそれぞれ表す。
なお、比較例としてクロロゲン酸、カフェ酸、Ｄ，Ｌ−セリンを供試試料として用いた。結果を表４に示す。
【００３３】
【表４】
0003934937.tif 000008
【００３４】
表４に示すように、実施例２から実施例５はカフェ酸、セリン単独よりも優れたヒドロキシラジカル消去能を示した。
【００３５】
実施例７
カフェ酸アミド誘導体を用いたローションの例について説明する。配合成分と配合量（重量％）を以下に示す。
オリーブ油                                                  ０．５
実施例２のカフェ酸アミド誘導体                              ０．５
ポリオキシエチレン（ 20 E.0 ）ソルビタンモノステアレート    ２．０
ポリオキシエチレン（ 60 E.0 ）硬化ヒマシ油                  ２．０
エタノール                                                １０．０
ヒアルロン酸ナトリウム水溶液（ 1.0重量％）                  ５．０
精製水                                                    ８０．０
【００３６】
精製水におよびヒアルロン酸ナトリウム水溶液加え 70 ℃に加熱調整する。オリーブ油にポリオキシエチレン（ 20 E.0 ）ソルビタンモノステアレートおよびポリオキシエチレン（ 60 E.0 ）硬化ヒマシ油を加え 70 ℃に加熱調整する。この油相を先に調整した水相に加え予備乳化し、さらにミフェプリストンおよびエタノールを加えてホモミキサーにて乳化粒子を均一にした後、脱気、濾過、冷却して実施例７のローションを得た。
【００３７】
実施例８
クリームの例について説明する。配合成分と配合量（重量％）を以下に示す。
Ａ成分：
スクワラン                                                ２０．０
オリーブ油                                                  ２．０
ミンク油                                                    １．０
ホホバ油                                                    ５．０
ミツロウ                                                    ５．０
セトステアリルアルコール                                    ２．０
グリセリンモノステアレート                                  １．０
ソルビタンモノステアレート                                  ２．０
Ｂ成分：
精製水                                                    ４８．４
ポリオキシエチレン（ 20 E.0 ）ソルビタンモノステアレート    ２．Ｏ
ポリオキシエチレン（ 60 E.0 ）硬化ヒマシ油                  １．０
グリセリン                                                  ５．０
実施例２のカフェ酸アミド誘導体                              ０．５
ヒアルロン酸ナトリウム水溶液（ 1.0重量％）                  ５．０
パラオキシ安息香酸メチル                                    ０．１
【００３８】
Ａ成分とＢ成分とをそれぞれ計量し、それぞれ 70 ℃まで加温し、Ｂ成分にＡ成分を攪拌しつつ徐々に加えたのち、ゆっくり攪拌しつつ 30 ℃まで冷却して実施例８のクリームを得た。
【００３９】
実施例７および実施例８で得られたローションおよびクリームは、化粧料または皮膚外用剤として安定して得られた。また、使用テストの結果、カフェ酸アミド誘導体を含有しない化粧料等に比較して、美白効果や日焼け防止が見られた。
【００４０】
【発明の効果】
本発明に係る化粧料用または皮膚外用剤用組成物は、カフェ酸アミド誘導体を含むので、酸化防止や酵素チロシナーゼ活性を阻害する効果を有する。そのため、美白クリームなどの化粧料または日焼け止めクリームなどの皮膚外用剤の配合剤として有用である。